Brevet FR2691153A1 — publié le 19931119

DODECAPEPTIDES NONOXERE ET DIZERE, UTILISATION EN TANT QU'AGENTS ANTI-ZEGACARYOCYTAIRES DOXATRE DE L'INVENTION La présente invention concerne en tant que produit industriel nouveau, le peptide monomère de formule 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 Asn-Gly-Arg-Lys -I le-Cys-Leu-Asp-Leu-Glu-Ala-Pro (I) qui est constitué de 12 aminoacides, son dimère de formule (II) Asn-Gly-Arg-Lys-Ile-Cys-Leu-Asp-Leu-Glu-Ala-Pro (II) et leurs mélanges. Elle concerne également l'utilisation de ces nouveaux produits en tant qu'inhibiteurs de la mégacaryo cytopoïèse et agents anti-mégacaryocytaires. Elle concerne également un procédé de préparation du dodécapeptide monomère dans lequel on limite substantiellement la formation du peptide dimère de formule II. ARRIERE PLAN DE L 'INVENTION On sait que la mégacaryocytopoièse concerne l'engagement des cellules-souches hématopoïétiques vers la lignée mégacaryocytaire, la prolifération des progéniteurs mégacaryocytaires et la maturation des mégacaryocytes pour donner naissance aux plaquettes ; voir à cet effet les articles de E.M. NAZUR, Exp.Hematol., (1987), 15, 340-350, de R. HOFFMAN, Blood, (1989) 74, 1106-1212, et de Z.C. HAN et al., Int. J. Hematol., (1991), 54, 314. On sait par ailleurs que les plaquettes sanguines jouent un rôle très important dans certains processus physiologiques, notamment dans les mécanismes de l'hémos- tase ; voir à cet effet l'ouvrage de J.P. CAEN et al., intitulé "Platelet Physiology and Pathology", Stratton International, New York, 1977. La moëlle hématoporétique est un système complexe formé de cellules de nature et de fonction différentes. Son organisation peut se concevoir en cinq compartiments cellulaires : les cellules-souches de toute la lignée hématopoïétique, les cellules progénitrices hématopoiétiques, les cellules hématopoïétiques matures, le microenvironnement et les cellules accessoires. Les cellulessouches par une série de différenciations et de maturations donnent naissance aux cellules progénitrices dont font partie les progéniteurs mégacaryocytaires, et ces derniers donnent naissance à leur tour aux plaquettes comme indiqué ci-dessus. La thrombocytémie est un état pathologique dont la multiplication excessive atteint la lignée mégacaryocyto-plaquettaire. Elle est présente dans plusieurs maladies, à savoir en particulier la thrombocytémie essentielle, la polyglobulie, la leucémie myeloide, la splénomégalie myéloide et la leucémie mégacaryocytaire. La persistance de la thrombocytémie pose des problèmes de thromboses et d'hémorragies. ART ANTéRIEUR L'art antérieur le plus proche est constitué par l'article de A.M. GEWIRTZ et al., intitulé : "Inhibition of Human Megakaryocytopoiesis in Vitro by Platelet Factor 4 (pF4) and a Synthetic COOH-terminal pF4 Peptide" et publié dans Clin. J. Invest., (1989), 83, 1477-1486.Cet article fait état d'essais in vitro avec un pF4 hautement purifié et deux peptides synthétiques (désignés ici par commodité "C-13 et "C-24") correspondant à des fragments du pF4, à savoir - le peptide court C-13 constitué par les 13 der niers aminoacides (i.e. 58-70) de l'extrémité C terminale du pF4, et - le peptide long C-24 constitué par les 24 der niers aminoacides (i.e. 47-70) de l'extrémité C terminale du pF4, en vue d'apprécier leur éventuel effet sur la mégacaryo cytopoïèse. Cet article enseigne que (i) le peptide C-13 n'a aucun effet sur la mégacaryocytopoïèse, (ii) le pF4 hautement purifié et le peptide C-24 inhibent in vitro la mégacaryocytopoièse humaine quand ils interviennent à une dose relativement élevée (environ 25 lug/ml), et (iii) les résultats des essais réalisés in vitro ne sont pas automatiquement applicables aux mécanismes d'action in vivo. Il se trouve que le dodécapeptide de formule I selon l'invention et son dimère de formule II se différencient de l'enseignement dudit article de A.M. GEWIRTZ et al., par le fait que les composés selon l'invention, utilisés in vitro, inhibent la mégacaryocytopoièse à des doses beaucoup plus faibles (notamment à 5 pg/ml voire à 0,1 lug/ml), l'inhibition de la mégacaryocytopoièse se manifestant par un effet anti-prolifération des cellules HEL sans action sur la maturation desdites cellules HEL, alors que le peptide C-24 et le pF4 hautement purifié limitent la maturation desdites cellules HEL mais n'agissent pas sur leur prolifération. De plus, les composés selon l'invention exercent des propriétés anti-mégacaryocytopoïèse in vivo, en ce sens qu'ils régulent négativement la mégacaryocytopoi'èse in vivo. On sait par ailleurs que le pF4, ses analogues, ses mutants et leurs fragments, notamment le peptide court C-13 précité, peuvent présenter des propriétés anti-angiogénèse. Voir à cet effet l'article de M.B. ZUCKER et al., intitulé "Immunoregulatory activity of peptides related to platelet factor 4" et publié dans Proc. Natl. Acad. Sci. USA, (1989), 86, 7571-7574 ; l'article de T.E. MAIONE et al., intitulé : "Inhibition of Angiogenesis by Recombinant Human Platelet Factor-4 and Related Peptides" et publié dans Science, (1990), 247, 77-79 ; et les publications EP-A-0 378 364 et EP-A-O 407 122 de la société REPLIGEN CORPORATION.Or, il se trouve que les propriétés anti-mégacaryocytopoi'èse, qu'exercent le composé dodécapeptide et son dimère selon l'invention, sont différentes des propriétés anti-angiogénèse préci tées. Enfin, il convient de remarquer que la structure 1-12 des aminoacides du composé dodécapeptide de formule I selon l'invention est nouvelle quoique voisine de la séquence 47-58 des aminoacides du pF4. L'aminoacide en position 10 (i.e. Glu) dudit dodécapeptide est différent de l'aminoacide en position 56 (i.e. Gln) du pF4. BUT DE L'INVENTION Il existe du point de vue technique un double besoin, à savoir, d'une part, un moyen inhibiteur de la mégacaryocytopoïèse pour le traitement des thrombocytémies, et d'autre part, un outil biologique pour tester et mesurer la mégacaryocytopoièse. On se propose de satisfaire ce double besoin en faisant appel à une nouvelle solution technique mettant en oeuvre un moyen anti-mégacaryocytaire qui soit efficace et non-cytotoxique in vivo. OBJET DE L'INVENTION La nouvelle solution technique que l'on préconise selon l'invention, fait appel à un composé peptidique à chaine linéaire constitué par 12 aminoacides d'une part, et à son dimère, d'autre part. Suivant un premier aspect de l'invention, l'on préconise, en tant que produit industriel nouveau, un matériau peptidique caractérisé en ce qu'il est choisi parmi l'ensemble constitué par (a) le dodécapeptide de formule Asn-Gly-Arg-Lys-Ile-Cys-Leu-Asp-Leu-Glu-Ala-Pro (I) (b) son dimère de formule Asn-Gly-Arg-Lys-Ile-Cys-Leu-Asp-Leu-Glu-Ala-Pro (II) Asn-Gly-Arg-Lys-Ile-$ys-Leu-Asp-Leu-Glu-Ala-Pro et (c) leurs mélanges. De préférence, ledit matériau peptidique sera essentiellement constitué du dodécapeptide de formule I. Suivant un second aspect de l'invention, l'on préconise un procédé de préparation du composé dodécapeptide de formule I par synthèse peptidique. Ce procédé est caractérisé en ce qu'il comprend l'incorporation dans le milieu réactionnel d'une substance choisie parmi l'ensemble constitué par (i) les agents réducteurs, (ii) les agents clivant le pont disulfure -S-S-, et (iii) leurs mélanges, afin d'empêcher ou de limiter substantiellement la formation d'un pont disulfure entre les Cys de deux peptides monomères. Suivant un troisième aspect de l'invention, l'on préconise l'utilisation du matériau peptidique précité en tant qu'inhibiteur de la mégacaryocytopolèse . Suivant un quatrième aspect de l'invention, l'on préconise une composition utile tant en thérapeutique humaine que vétérinaire (chez les animaux à sang chaud, en particulier les animaux mammifères), qui est caractérisée en ce qu'elle renferme, en association avec un excipient physiologiquement acceptable, au moins un matériau peptidique selon l'invention en tant qu'ingrédient actif. ABREVIATIONS Par commodité, on a utilisé dans la présente description les abréviations suivantes (a) en ce qui concerne les aminoacides ou leurs restes Ala = alanine Arg = arginine Asn = asparagine Asp = acide aspartique Cys = cystéine Gln = glutamine Glu = acide glutamique Gly = glycine Ile = isoleucine Leu = leucine Lys = lysine Pro = proline (b) en ce qui concerne les autres abréviations C-13 = peptide court constitué par les 13 derniers aminoacides (i.e. 58-70) de l'extrémité C-terminale du pF4, C-24 = peptide long constitué par les 24 derniers aminoacides (i.e. 47-70) de l'extrémité C-terminale du pF4, CFU = unité formant colonie (de l'anglais "colony-forming unit") CFU-MK = progéniteur mégacaryocytaire (de l'anglais "megakaryocyte colony-stimulating unit") HEL = érythroleucémie humaine HPLC = chromatographie liquide de haute performance MEM = milieu essentiel minimal MK = mégacaryocyte pF4 = facteur plaquettaire 4 (de l'anglais : "plate- let factor 4") PMA = myristate/acétate de phorbol RT = température ambiante (15-20 C) SDS-PAGE = électrophorèse sur gel dodécylsulfate de sodium-polyacrylamide (de l'anglais : "sodium dodecylsulphate-polyacylamide gel électropho phoresis") DESCRIPTION DETAZLLEE DE L'INVENTION Dans le composé monomère dodécapeptide de formule I, l'extrémité C-terminale, qui se trouve sur l'aminoacide en position 12 (i.e. Pro), présente une terminaison -COOH, et l'extrémité N-terminale, qui se trouve sur l'aminoacide en position 1 (i.e. Asn) présente une terminaison -NH2. I1 en est de même du composé dimère de formule II, qui résulte de la formation d'un pont disulfure -S-S- entre les Cys de deux chaînes monomères. A l'exception de Gly, tous les autres alphaaminoacides des molécules du composé monomère de formule I et du composé dimère de formule II comportent un atome de carbone asymétrique, et sont chacun de configuration L ou D. D'un point de vue pratique, l'on préfère selon l'invention que (i) tous les alpha-aminoacides différents de Gly et présents dans les structures de formule I et de formule II soient de configuration L, ou (ii) tous les alpha-aminoacides de la séquence 3-12 soient de configuration L et l'alpha-aminoacide en position 1 (i.e. Asn) soit de configuration D. La dimérisation de I en II par formation d'un pont disulfure entre les Cys de 2 chaînes monomères, s'initie spontanément en milieu aqueux à RT. Pour éviter cette dimérisation en milieu aqueux, on a intérêt à introduire dans ledit milieu aqueux un moyen antioxydant, un moyen bloquant la fonction latérale -SH de Cys ou un moyen clivant le pont du sulfure selon le mécanisme Le composé dodécapeptide de formule I à l'état sec, notamment obtenu par lyophilisation après purifica tion, est nettement moins sensible à ladite dimérisation que le même composé en milieu aqueux, voire même substantiellement insensible à ladite dimérisation. Selon un mode avantageux pour la préparation du composé dodécapeptide de formule I, l'on fait appel à un procédé, qui met en oeuvre une synthèse peptidique séquentielle dans un milieu réactionnel hétérogène et une étape de purification, comprenant l'utilisation d'un agent réducteur (i) dans le milieu réactionnel à partir de l'ins tant où Cys intervient dans la synthèse dudit peptide monomère, ou ultérieurement (ii) avant et/ou après purification, afin de réduire substantiellement ou d'empêcher la production du peptide dimère de formule II qui résulte de la formation d'un pont disulfure -S-S- entre les Cys de deux peptides monomères. De façon préférée, ledit agent réducteur sera introduit dans le milieu réactionnel à partir de l'instant où Cys intervient dans la synthèse du peptide monomère, d'une part, et sera présent dans ledit milieu au moins jusqu'à l'étape de purification. D'un point de vue pratique, ledit agent réducteur sera choisi parmi l'ensemble constitué par les substances clivant le pont disulfure -S-S-, les substances proté- geant l'extrémité -SH du groupe latéral de Cys et leurs mélanges. De préférence, ledit agent réducteur sera choisi parmi l'ensemble constitué par (1) le dithiothréitol qui est utilisé à partir de l'instant où Cys intervient dans la synthèse, avant et/ou après purification, et (2) les composés iodoacétiques qui sont utilisés après purification, notamment l'acide iodoa cétique ou l'iodoacétamide. Selon un mode particulier, que l'on recommande pour la préparation du composé dodécapeptide de formule I, le procédé que l'on préconise comprend en outre l'utilisation, avant et/ou après purification, d'un agent antioxydant, notamment un composé ascorbique (notamment l'acide ascorbique, ou un ascorbate de métal alcalin, de métal alcalino-terreux ou d'ammonium) et de préférence un tampon acide ascorbique/ascorbate de sodium ou acide ascorbique/ ascorbate de potassium. Le matériau peptidique selon l'invention, qu'il soit sous forme nomomère de formule I, sous forme dimère de formule II ou sous la forme d'un mélange monomère/dimère, est utile en tant que substance anti-mégacaryocytaire, notamment in vivo. On préconise donc en premier lieu, une utilisation qui est caractérisée en ce que l'on fait appel à un matériau peptidique selon l'invention, en tant que substance anti-mégacaryocytaire pour l'obtention d'un médicament anti-thrombocytémie ou d'un outil pour le diagnostic des thrombocytémies. On préconise en second lieu une utilisation qui est caractérisée en ce que l'on fait appel à un matériau peptidique selon l'invention, en tant que substance antimégacaryocytaire dans des tests biologiques concernant la détermination de la mégacaryocytopoièse. En thérapeutique humaine et vétérinaire (c'est-àdire chez l'homme et les animaux à sang chaud, notamment les animaux mammifères), le matériau peptidique intervient in vivo en tant que régulateur négatif (i.e. inhibiteur) de la mégacaryocytopoièse, et s'est révélé particulièrement efficace vis-à-vis du traitement des thrombocytémies. Les thrombocytémies comprennent en particulier - la thrombocytémie dite essentielle, - la thrombocytémie d'autres types de syndromes myéloprolifératifs (notamment la polyglobulie, la leucémie myéloïde chronique et la splénomégalie myéloide), - la leucémie mégacaryocytaire, et - les thrombocytoses observées dans un certain nombre de cancers et d'autres états pathologiques. Le matériau peptidique convient notamment par voie injectable (en particulier par voie intraveineuse, intramusculaire ou sous-cutanée) suivant une posologie quotidienne de 40 pg/kg à 1 mg/kg, et par voie orale suivant une posologie. quotidienne de 40 pg/kg à 10 mg/kg (sous forme de comprimés, gélules, manoparticules, le cas échéant en association avec des liposomes), dans le traitement desdites thrombocytémies. De façon pratique, on utilisera par voie injectable une dose unitaire quotidienne de 40 pg/kg à 1 mg/kg, et par voie orale sous une forme gastrorésistante une dose unitaire quotidienne de 40 jug/kg à 10 mg/kg. Comme indiqué ci-dessus, ledit matériau peptidique est également utile, en tant qu'inhibiteur spécifique de la mégacaryocytopoïèse, dans des tests biologiques et diagnostiques concernant la mégacaryocytopoièse. ZEIlLvK MODE Le meilleur mode de mise en oeuvre de l'invention consiste à faire appel à un matériau peptidique qui essentiellement pur est constitué par le composé dodécapeptide de formule I, c'est-à-dire à un matériau qui contient au moins 95 % en poids de monomère, et mieux au moins 99 % en poids de monomère. On préfère plutôt le monomère de formule I essentiellement pur pour la standardisation de la posologie anti-thrombocytémie, d'une part, et la mise en oeuvre des tests biologiques concernant la mégacaryocytopoïèse, d'autre part. En effet, si du point de vue de la structure, une molécule du composé dimère de formule II est équivalente à deux molécules du compose monomère de formule I, les résultats des essais in vivo en pathologie dont on dispose ne permettent pas d'affirmer que le dimère est strictement équivalent à deux monomères sur le plan de 1' activité anti-mégacaryocytaire. D'autres avantages et caractéristiques de l'invention seront mieux compris à la lecture qui va suivre d'exemples de préparation, d'une part, et d'essais pharmacologiques et biologiques, d'autre part. Bien entendu, l'ensemble de ces éléments n'est nullement limitatif mais est fourni à titre d'illustration. EXEMPLE 1 Préparation d'un dodécapeptide de formule I où les aminoacides en position 1 et 3-12 sont de configuration L. Ce produit est préparé selon la méthode classique de synthèse peptidique en phase hétérogène avec fixation sur un support solide. Au moment où l'aminoacide Cys va intervenir dans la synthèse, on introduit dans le milieu réactionnel une substance réductrice, dans le cas d'espèce, le dithiothréitol. Cette substance réductrice est présente dans le milieu réactionnel jusqu'à ce que le dernier aminoacide ait été fixé sur la chaîne peptidique. On ajoute alors un antioxydant, le tampon acide ascorbique/ascorbate de potassium. On procède à la séparation du peptide formé de son support en présence dudit tampon. Le peptide ainsi séparé de son support est purifié par HPLC ou SDS-PAGE en présence dudit tampon acide ascorbique/ascorbate de potassium ; il est ensuite obtenu à l'état sec par lyophilisation. Le matériau peptidique ainsi obtenu renferme plus de 99 % en poids du peptide monomère désiré. EXEMPLE 2 Préparation d'un dodécapeptide de formule I où l'aminoacide en position 1 est de configuration D et les aminoacides en positions 3-12 sont de configuration L. On procède comme indiqué à l'exemple 1 en rempla çant L-Asn par D-Asn et en incorporant dans le produit purifié de l'acide iodoacétique avant lyophilisation. Le matériau peptidique ainsi obtenu renferme plus de 99 % en poids du peptide monomère désiré. EXEMPLE 3 Préparation du composé dimère de formule II où les aminoacides en position 1 et 3-12 sont de configuration L. On procède, comme indiqué à l'exemple 1 avec la différence que l'on procède au clivage du peptide de son support en l'absence du tampon antioxydant acide ascorbique/ascorbate de potassium puis effectue la purification par HPLC ou SDS-PAGE toujours en l'absence dudit tampon. Le matériau peptidique ainsi obtenu renferme plus de 85 % en poids du peptide dimère désiré. PARTIE EXPERI NTALE (a) Culture de mégacaryocytes et de leurs progéniteurs L'effet du matériau peptidique selon l'invention sur la mégacaryocytopoièse in vitro a été examiné en utilisant un système de culture de progéniteurs mégacaryocytaires [selon les modalités décrites par HAN et al. dans les articles Exp. Hematol., (1989), 17, 46-52, et C.R. Acad. Sci. Paris, (1991), 313, Série III, 553-558]. Dans ce système de culture, les cellules mononucléées murines de moelle de fémur sont prélevées chez les souris Balb/c (IFFA CREDO) et les cellules mononucléées médullaires humaines sont prélevées chez des individus normaux. 2 x 105 cellules médullaires sont ajoutées, au moins en triple, dans un volume de 1 ml d'un milieu de base conte nant 10 % (v/v) de plasma bovin citraté, 1 % (v/v) d'albumine bovine, 10 % de 2-mecaptoéthanol (concentration finale de 10-4M) et 0,34 mg/ml de CaCl2 avec ou sans 10 % (v/v) de sérum d'aplasie. Le sérum d'aplasie de porc est utilisé pour les culture de moelle murine et le sérum d'aplasie humaine est utilisé pour des cultures de moelle humaine.Les colonies mégacaryocytaires murines sont identifiées par la coloration d'acétylcholinestérase [selon la méthode de C.W. JACKSON, Blood, (1973), 42, 413-421]. Les colonies mégacaryocytaires humaines sont identifiées par la coloration d'immunoperoxydase en utilisant un anti-corps monoclonal dirigé contre la glycoprotéine IIb/IIIa plaquettaire humaine [voir HAN et al., Exp. Hematol., (1989), 17, 46-52 précité]. (b) Culture des cellules HEL Les cellules HEL sont des cellules leucémiques qui expriment différents phénotypes mégacaryocytaires. Elles ont déjà été utilisées comme modèle pour étudier la régulation de la mégacaryocytopoïèse [voir LONG et al., J. Clin. Invest., (1990), 85, 186-195]. La formation des colonies de cellules HEL est réalisée selon la méthode décrite par PIAO et al., Biochem. Biophys. Res. Commun., (1990), 167, 27-32, avec quelques modifications. 4 x 105 cellules sont cultivées dans un volume de 1 ml contenant 10 % (v/v) de sérum de veau foetal, 10 % (v/v) de PMA 10-7M, 10 % (v/v) de plasma bovin, 0,34 mg/ml de CaCl2 et complété par du milieu i -MEM (commercialisé par la so- ciété EUROBIO).Les cellules sont incubées en atmosphère humide à 37"C avec 5 % de CO2 pendant 4 jours, puis elles sont comptées au microscope inverse, une colonie HEL contenant un nombre de cellules supérieure à 20. (c) Protocole L'effet du dodécapeptide de l'exemple 1 sur la mégacaryocytopoièse in vivo a été testé sur des souris normales selon une méthode décrite par HAN et al., dans l'article C.R. Acad. Sci. Paris, (1991), 313, Série III, 553-558 précité. Chaque groupe contient 5-10 souris Balb/c. Le peptide est injecté par voie sous-cutanée deux fois par jour pendant 4 jours aux concentrations de 1 Fg et 5 pg par souris pour chaque administration. Les échantillons de morelle et/ou de sang ont été prélevés au jour J2 qui suit la dernière injection. Les souris ont été tuées par dislocation cervicale. Les cellules médullaires ont été obtenues à partir des fémurs et le sang a été obtenu par ponction cardiaque. Les cellules médullaires à la concentration de 2 x 105 cellules mononucléées par ml ont été remises en culture en cinq exemplaires en présence de sérum de porc aplasique pendant une semaine pour tester le nombre de progéniteurs mégacaryocytaires (CFU-MK). Le nombre des mégacaryocytes a été évalué sur des cellules médullaires non cultivées mais ensemencées dans des boites de culture après obtention à partir des fémurs. Le nombre de plaquettes, de globules blancs et le taux d'hémoglobine ont été mesurés en utilisant un compteur hématopolétique automatique. (d) Résultats Expérimentation in vitro L'effet du dodécapeptide de l'exemple 1 sur la mégacaryocytopoièse humaine a été testé sur deux types de cellules : les cellules médullaires normales et les cellules HEL. - Sur les cellules médullaires normales (voir figure 1A), les doses testées ont été de 0,1 Fg/ml, 1 Fg/ml, 5 Fg/ml et 10 Fg/ml. La méthode utilisée est celle du caillot plasmatique. Les résultats rapportés représentent la moyenne + SEM du nombre de colonies MR à partir de 2 expériences. On constate que le dodécapeptide de l'exemple 1 inhibe la formation des colonies mégacaryocytaires dans les cul tures de moëlle normale en présence de sérum aplasique humain. Dans la figure lA, on a représenté la variation de colonies MK/2 x 105 cellules en ordonnées (C) en fonction de la teneur en peptide (P) exprimée eng/ml, en abscisses. L'astérique * indique que le résultat tel qu'observé est statistiquement significatif (p Student). - Sur les cellules HEL (voir figure lB), les doses du dodécapeptide de l'exemple 1 qui ont été testées varient de 0 à 10 fig/ml. Les résultats sont calculés à partir de 3 expériences. On constate que ledit dodécapeptide de l'exemple 1 inhibe de façon significative la formation des colonies HEL dans ce test. Dans la figure lB, on a représenté la variation de colonies HEL/103 cellules en ordonnées (C) en fonction de la teneur en peptide (P) exprimée en Fg/ml, en abscisses. L'astérique * indique que le résultat tel qu'observé est statistiquement significatif (p Student). - L'effet du dodécapeptide de l'exemple 1 sur la mégaca ryocytopoilèse murine a été examiné à des doses variant de 0,1 à 10 pg/ml. Les résultats (voir figure 2) représentent la moyenne + SEM du nombre de colonies pour 2 x 105 cellules à partir de 3 expériences séparées faites en triple. Dans la figure 2, on a représenté la variation de colonies MK murins/2 x 105 cellules en ordonnées (C) en fonction de la teneur en peptide (P) exprimée en pg/ml, en abscisses. L'astérique * indique que le résultat tel qu'observé est statistiquement significatif (p Expérimentation in vivo Le dodécapeptide de l'exemple 1 a été injecté par voie sous-cutanée à des souris Balb/c deux fois par jour pendant 4 jours à des concentrations de 0, 40 et 200 pg/kg. Les échantillons de moelle et de sang ont été prélevés le deuxième jour suivant la dernière injection. Les résultats obtenus, qui sont consignés dans le tableau I ci-après, représentent la moyenne + SEM de trois expériences, chaque groupe de souris contenant chacun au moins 5 animaux. TABLEAU I Dose Moelle Sang CFU-MK MK L H P (Rg/kg) (2 x 105 (10/}il) (g/100 ml) (103/lux) cellules) 0 53+5 308+18 2,67+0,6 15,0+0,7 937+53 40 41+4* 289+12 2,80+0,4 15,2+0,8 946+49 200 38+3* 233+13* 2,30+0,5 14,8+0,9 785+53* Notes L: : leucocytes H : hémoglobine P : plaquettes * : statistiquement significatif (p Student). On constate que le nombre de CFU-MK médullaires, de mégacaryocytes (MK) isolés et de plaquettes diminue de façon significative deux jours après la dernière injec tion du dodécapeptide de l'exemple 1 à la dose de 200 pg/kg. On constate également que le nombre de leucocytes et le taux d'hémoglobine ne sont pas affectés. Les résultats des essais analogues entrepris avec les matériaux peptidiques des exemples 2 et 3 sont similaires tant in vitro que in vivo. On a également observé que, sur les cellules HEL, l'inhibition de la mégacaryocytopoièse par les peptides des exemples 1, 2 et 3 selon l'invention se traduit essentiellement par l'inhibition de la prolifération des cellules et non par l'inhibition de la maturation desdites cellules, à la différence du pF4 hautement purifié et du C-24 de l'article de A.M. GEWIRTZ et al. précité. REVENDICATIONS 1. Matériau peptidique caractérisé en ce qu'il est choisi parmi l'ensemble constitué par (a) le dodécapeptide de formule Asn-Gly-Arg-Lys-Ile-Cys-Leu-Asp-Leu-Glu-Ala-Pro (I) (b) son dimère de formule et (c) leurs mélanges. 2. Matériau peptidique suivant la revendication 1, caractérisé en ce qu'il est essentiellement constitué du dodécapeptide de formule I. 3. Procédé de préparation du peptide monomère de formule I selon la revendication 1, ledit procédé, qui met en oeuvre une synthèse peptidique séquentielle dans un milieu réactionnel hétérogène et une étape de purification, étant caractérisé en ce qu'il comprend l'utilisation d'un agent réducteur (i) dans le milieu réactionnel à partir de l'ins tant où Cys intervient dans la synthèse dudit peptide monomère, ou ultérieurement (ii) avant et/ou après purification, afin de réduire substantiellement ou d'empêcher la production du peptide dimère de formule II qui résulte de la formation d'un pont disulfure -S-S- entre les Cys de deux peptides monomères. 4. Procédé suivant la revendication 3, caractérisé en ce qu'il comprend en outre l'utilisation, avant et/ou après purification, d'un agent antioxydant, notamment un composé ascorbique et de préférence un tampon acide ascorbique/ascorbate de sodium ou acide ascorbique/ ascorbate de potassium. 5. Procédé suivant la revendication 3, caractérisé en ce que ledit agent réducteur est choisi parmi l'ensem ble constitué par les substances clivant le pont disulfure -S-S-, les substances protégeant l'extrémité -SH du groupe latéral de Cys et leurs mélanges. 6. Procédé suivant la revendication 3 ou la revendication 5 , caractérisé en ce que ledit agent réducteur est choisi parmi l'ensemble constitué par (1) le dithiothréitol qui est utilisé à partir de l'instant où Cys intervient dans la synthèse, avant et/ou après purification, et (2) les composés iodoacétiques qui sont utilisés après purification, notamment l'acide iodoa cétique ou l'iodoacétamide. 7. Utilisation caractérisée en ce que l'on fait appel à un matériau peptidique selon la revendication 1, en tant que substance antimégacaryocytaire pour l'obtention d'un médicament antithrombocytémie ou d'un outil pour le diagnostic des thrombocytémies. 8. Utilisation caractérisée en ce que l'on fait appel à un matériau peptidique selon la revendication 1, en tant que substance antimégacaryocytaire dans des tests biologiques concernant la détermination de la mégacaryocytopoièse. 9. Composition thérapeutique, caractérisée en ce qu'elle renferme, en association avec un excipient physiologiquement acceptable, au moins un matériau peptitique selon la revendication 1 en tant qu'ingrédient actif.