Brevet FR2690839A1 — publié le 19931112

Ensemble de vaccination contre l'entérotoxémie du lapin et vaccin conditionné pour être utilisé dans cet ensemble. La présente invention a trait à un ensemble pour la vaccination contre l'entérotoxémie du lapin. Elle a également trait à un vaccin contre ltentérotoxémie du lapin susceptible d'être mis en oeuvre dans cet ensemble, ainsi qu a un procédé de vaccination du lapin contre ltentérotoxémie du lapin. L'entérite du lapin constitue encore une cause majeure de mortalité en engraissement. La brutalité de la mortalité, la présence inconstante de diarrhée, un caecum au contenu très liquide, très distendu par les gaz, on conduit à décrire une véritable entérotoxémie du lapin. On a pensé à une étiologie impliquant Clostridium perfringens type E et on a déjà proposé, dans le brevet FR-A-2.455.896, un vaccin constitué d'une anatoxine de cette bactérie, adjuvé à l'alun et administré par voie sous-cutanée. En fait R.J. Carman et al (Veterinary, Microbiology, 9 (1984) 497-502) ont démontré le rôle de Clostridium spiroforme dans l'étiologie de cette maladie. F. Milward et B. Bancillon, dans une communication aux Sèmes Journées de la Recherche Cunicole, 12, 13 décembre 1990, PARIS, ont démontré la possibilité d'une prévention vaccinale à l'aide de vaccins à base d'anatoxine de Cl. spiroforme administrés par injection sous-cutanée. T.M. Ex lis et al (Veterinary Microbiology, 28, 1991, 93-102) ont également décrit un vaccin contre l'entérotoxémie du lapin constitué par une anatoxine de Cl. spiroforme cultivé en milieu Tryptone Soja, inactivé au formol et adjuvé à l'alun, à administration sous-cutanée sous dose de 1 ml. La présente invention se propose de fournir un ensemble de vaccination permettant d'effectuer une vaccination de l'entérotoxémie du lapin, à l'échelle industrielle, de façon efficace et économique. Un autre objectif de l'invention est de réaliser une telle vaccination avec une probabilité extrêmement élevée de protection de chaque animal individuel. L'invention a pour objet un ensemble de vaccination permettant la vaccination par voie parentérale contre l'entérotoxémie du lapin à l'aide d'un vaccin à base d'anatoxine de Clostridium spiroforme adjuvée, caractérisé en ce qu'il comporte un appareil d'administation par jet agencé pour la distribution par voie intradermique de doses individuelles d'un volume de l'ordre de 0,2 ml de vaccin1 associé à une source d'alimentation contenant un vaccin contre l'entérotoxémie en adjuvant huileux et conditionné pour présenter un titre protecteur dans ledit volume de dose. L'ensemble de vaccination selon l'invention permet ainsi de vacciner le lapin par voie intradermique à l'intérieur du pavillon de l'oreille et ceci à une cadence industrielle. Par appareil d'administration par jet, on entend un appareil permettant l'administration parentérale, sans aiguille, par formation d'un jet à haute pression. Selon une forme de réalisation extrêmement efficace de l'invention, on préfère utiliser un appareil ayant une tête à buses ou canaux multiples, permettant l'administration de la dose par plusieurs jets, le nombre de jets étant de préférence au moins égal à trois. Les appareils d'administration de vaccins ou de préparations médicamenteuses par jet sont en eux-mêmes connus et l'homme de l'art pourra facilement s'en procurer et les adapter pour la mise en oeuvre dans l'ensemble selon l'invention. Un appareil utile est par exemple celui vendu par la société Béarn Mécanique Aviation, Billère, France, sous la marque MESOFLASH ou la marque SANIJET. La pression des jets est de préférence de l'ordre de 90 à 110 bar. Par volume de doses de l'ordre de 0,2 ml, on entend un volume qui est de préférence de 0,2 ml mais qui peut également être un peu différent et par exemple être compris entre 0,1 et 0,3 ml. La dose peut être administrée en une seule fois ou au contraire en plusieurs fois, par exemple deux injections multijets successives de 0,1 ml chacune. L'invention a également pour objet un vaccin adjuvé à base d'anatoxine de C1. spiroforme adjuvé et conçu pour la mise en oeuvre de l'ensemble précité, caractérisé en ce qu'il comporte un titre protecteur sous un volume de l'ordre de 0,2 ml (défini comme précédemment) et contenant un adjuvant huileux. Par adjuvant huileux, on entend, de façon particulièrement préférée, un adjuvant comprenant, par ml de vaccin, 600 à 800 mg de paraffine liquide légère, 10 à 100 mg d'ester d'acide gras de polyol et de 1 à 33 mg d'ester-éther d'acide gras de polyol. Le vaccin est préparé de fason à présenter un titre de préférence de l'ordre de 50 à 500 TCP/ml. L'invention a également pour objet un procédé de vaccination contre l'entérotoxémîe du lapin, caractérisé en ce que l'on administre en une ou plusieurs fois, par jet intradermique dans l'oreille du lapin, une dose vaccinale de l'ordre de 0,2 ml sans aiguille, et notamment par pluralité de jets, d'un vaccin à base d'anatoxine de Cl. spiroforme contenant un adjuvant huileux. D'autres avantages et caractéristiques de l'invention apparaitront à la lecture de raz la description suivante, faite à titre d'exemple non limitatif et se référant au dessin annexé dans lequel la figure unique représente une vue schématique d'un ensemble selon l'invention. 1. Préparation du vaccin. Une souche de Clostridium spiroforme (par exemple référence 85202-15991 ou 11493 du laboratoire NTC) est cultivée pendant une durée de tordre 12-24 h en fermenteur dans un milieu peptone trypsique de caséine; peptone papaïnique de soja permettant une bonne expression de la toxine. En fin de phase de croissance, la culture est inactivée par ajout de formol jusqu'à une concentration de 1,6 mg/ml. Les corps bactériens sont séparés par centrifugation. Le surnageant est filtré, puis concentré. Il constitue l'anatoxine formant le principe actif du vaccin. Ce surnageant est concentré et mélangé à une concentration suffisante dans un adjuvant huileux de façon à obtenir les proportions suivantes anatoxine de Cl. spiroforme 50 à 500 TCP formaldéhyde libre (au maximum) 1,6img . mercurothiolate sodique (au maximum) 0,1 mg adjuvant huileux paraffine liquide légère 600 à 800 mg esters d'acides gras de polyols 10 à 100 mg esters-ethers d'acides gras de polyols 1 à 33 mg 2. Ensemble selon l'invention. L'ensemble selon l'invention comporte d'une part un appareil d'administration par jet et d'autre part la source d'alimentation en vaccin de l'appareil. L'appareil, d'un type tout à fait classique, comporte une poignée 1 au-dessus de laquelle se trouve disposé un corps 2 à l'extrémité antérieure de laquelle se trouve disposée une chambre 3 d'un volume de 0,2 ml. Par l'intermédiaire d'un filtre 4, la chambre 3 se poursuit par une pluralité de buses d'éjection 5 extrêmement fines traversant la tête multi-injection 6 de l'appareil. Le mécanisme permettant d'éjecter la dose contenue dans la chambre en formant des jets à haute pression et qui comprend un piston 7 pénétrant dans la chambre peut être d'un type quelconque et de multiples mécanismes ont été décrits dans l'art antérieur. Les mécanismes de ce genre comportent généralement un ressort propulsant le piston 7 vers l'avant et un moyen moteur, électrique, pneumatique ou manuel, permettant de ramener le piston en arrière dans une position où il est bloqué pour être libéré lorsque l'on appuie sur une gâchette 8. L'alimentation de la chambre de l'appareil en vaccin s'effectue à l'aide d'un récipient multidoses 9, fixé à la partie supérieure de l'appareil et relié par un canal convenable à la chambre 3 de façon que, lors du mouvement d'expulsion du piston 7 vers l'avant, la communication avec cette source est fermée pendant que le contenu de la chambre de 0,2 ml est expulsé sous forme de jet, alors qu'au contraire le retour en arrière du piston après l'administration de la dose entraîne l'aspiration et le remplissage de la chambre par le vaccin provenant du récipient 9. La pression de chaque jet est de préférence de l'ordre de 100 bar. 3. Exemple de mise en oeuvre. Pour procéder à la vaccination l'opérateur prend en main l'ensemble selon l'invention par la poignée et procède à la vaccination de chaque lapin dans le pavillon interne de l'oreille. La dose délivrée est de 0,2 ml. L'opérateur peut vacciner les lapins à la cadence de 300 lapins à l'heure 4. Etude comparative de différents ensembles et vaccins On prépare deux formulations de vaccins. Le vaccin I est préparé conformément à l'exemple 1. Le vaccin II diffère du vaccin I par l'adjuvant. Le vaccin I est administré soit à la seringue par voie intradermique, soit par l'ensemble selon l'exemple 2. Le contrôle est fait par placebo. Le vaccin II est administré soit par voie intra-dermique à la seringue, soit à l'aide d'un appareil d'administration à un seul jet vendu dans le commerce sous la dénomination Dermojet. Les vaccins sont administrés à l'âge de 4 et 8 semaines et les lapins sont éprouvés 2 semaines plus tard. La méthode d'épreuve consiste en l'administration d'un antibiotique (clindamycine) et d'une souche bactérienne Cl. spiriforme (selon R.J. Carman et al, Vet. Microbiol (1984) 9 : 497-502). Les résultats sont les suivants VACCIN ADMINISTRATION RESULTATS (lapins protégés/ éprouvés) I seringue 4/5 I Sanijet multicanaux 5/5 Placebo Sanijet multicanaux 0/5 II seringue 4/5 II Dermojet monocanal 2/5 Témoins Dermojet monocanal 2/5 Une vaccination présentant une certaine efficacité peut être obtenue par administration à la seringue. Cependant, ce procédé est inapplicable dans les conditions pratiques de l'élevage. L'ensemble selon l'invention résout le problème et assure une vaccination efficace et sûre avec un coût en main-d'oeuvre réduit. REVENDICATIONS 1. Ensemble de vaccination permettant la vaccination par voie parentérale contre l'entérotoxémie du lapin à l'aide d'un vaccin à base d'anatoxine de Clostridium spiroforme adjuvée, caractérisé en ce qu'il comporte un appareil d'administration par jet agencé pour la distribution intradermique, en une ou plusieurs fois, de doses individuelles d'un volume de l'ordre de 0,2 ml de vaccin, associé à une source d'alimentation contenant un vaccin contre l'entérotoxémie en adjuvant huileux et conditionné pour présenter un titre protecteur dans ledit volume de dose. 2. Ensemble selon la revendication 1, caractérisé en ce que l'appareil d'administration comportent une tête à buses multiples permettant l'administration simultanée d'une pluralité de jets. 3. Ensemble selon l'une des revendications 1 et 2, caractérisé en ce que la pression des jets est de l'ordre de 90 à 100 bar. 4. Vaccin destiné à être utilisé dans l'ensemble selon l'une des revendications 1 à 37 caractérisé en ce qu il comporte une anatoxine de Clostridium spiroforme en adjuvant huileux et présentant un titre protecteur dans un volume de dose de 0,2 ml. 5. Vaccin selon la revendication 4, caractérisé en ce que le titre du vaccin est de 50 à 500 TCP/ml. 6. Vaccin selon la revendication 5, caractérisé en ce que l'adjuvant huileux comporte, par ml de vaccin, 600 à 800 mg de paraffine liquide légère, 10 à 100 mg d'ester gras de polyol et de 1 à 33 mg d'ester-éther d'acide gras de polyol.