Brevet FR2688226A1 — publié le 19930910

DISPOSITIF DE FIXATION D'UNE NAPPE ADAPTEE A LA CULTURE DE CELLULES La présente invention a trait à un dispositif de fixation d'une nappe, telle qu'un film, formant support ou substrat pour la culture de cellules, notamment en plaques multipuits. On sait maintenant procéder à la culture de cellules, ou à la reconstitution de tissus biologiques (tels que l'épithélium cutané), sur des nappes ou films de matériaux-poreux, notamment de collagène, sous lesquels est disposé du milieu de culture qui peut diffuser à travers la nappe et ainsi nourrir les cellules cultivées à sa surface. Pour les besoins de la culture en plaques multipuits, on fixe la nappe sur le rebord inférieur d'une chambre ou nacelle susceptible d1être introduite dans le puits de la plaque. On a déjà proposé de fixer la nappe sous le bord inférieur de la chambre ou nacelle en serrant sa périphérie entre ledit bord et une pièce inférieure de blocage. Cependant, le rebord formé par la pièce de blocage constitue un piège facilitant la retenue de bulles d'air sous la nappe, qui interrompent localement la diffusion du milieu de culture à travers la nappe de matériaux poreux. Pour remédier à cet inconvénient, on a alors mis au point des systèmes de collage des matériaux sur le rebord inférieur de la chambre, par exemple dans le cas des chambres vendues sous la marque TRANSWELL de la société COSTAR. Cette solution présente cependant un certain nombre d'inconvénients. Tout d'abord, le collage ne s'applique pas à tous les matériaux envisageables pour former les nappes de support de culture de cellules. De plus, les matériaux tels que -les biomatériaux de collagène présentent l'inconvénient de gonfler de plus d'une fois leur épaisseur lors de la réhydratation, ce qui complique le collage. Ce dernier doit pouvoir durer plusieurs semaines et, en outre, ne doit pas être toxique pour les cellules. En outre, à moins d'utiliser une technique très lourde, le collage ne permet pas la fixation dans des conditions stériles. Il est donc nécessaire de procéder à une stérilisation des nacelles après collage du film de biomatériau par irradiation stérilisante. L'irradiation provoque, à son tour, un jaunissement et des risques de fragilisation mécanique des chambres ou nacelles réalisées dans certains matériaux synthétiques, notamment les polycarbonates, dont la biocompatibilité et les propriétés mécaniques semblent par ailleurs intéressantes. L'invention se propose de remédier à ces inconvénients et de fournir un dispositif de fixation de nappe sur les chambres ou nacelles, qui soit simple, d'une grande souplesse d'emploi, peu onéreux et susceptible d'être mis en oeuvre dans des conditions stériles. Un autre objectif de l'invention est de fournir un tel dispositif susceptible de s'appliquer à n'importe quel type de matériaux de nappe tels que films, filtres, ou autres matériaux, aussi bien à l'état sec qu'à l'état hydraté. L'invention a pour objet un dispositif de fixation d'une nappe adaptée à la culture de cellules, notamment en plaques multipuits, sous le bord inférieur d'une chambre ou nacelle, caractérisé en ce qu'il comporte un organe de serrage susceptible d'entourer la partie inférieure de la chambre ou nacelle à un niveau qui n' est pas inférieur, et qui est de préférence supérieur, à celui de son bord inférieur de façon à serrer, entre ledit organe de serrage et la surface extérieure de ladite partie inférieure de chambre ou de nacelle, une partie périphérique rabattue vers le haut, de ladite nappe. De fçon particulièrement avantageuse, ledit organe de serrage peut être un joint en un matériau élastique, par exemple un élastomère, ce joint ayant de préférence une forme torique. Les dimensions et la dureté du matériau élastique sont choisies de façon qu'il soit suffisamment souple pour permettre facilement le montage et suffisamment rigide pour bien solidariser le matériau au plastique de la chambre ou nacelle. Le joint peut avantageusement être en silicone de qualité alimentaire ou de préférence en éthylène propylène alimentaire, par exemple de dureté 70 à 80 shores. Le montage d'une nappe sur une chambre ou nacelle est ainsi facilité et peut parfaitement être effectué en conditions stériles. La solution la plus aisée consiste à placer ladite nappe sur le joint posé sur une surface plane, après quoi on vient mettre en place la nacelle que l'on pousse vers le bas, ce qui provoque, en même temps, la tension du matériau formant la nappe et lui donne ainsi une parfaite planéité, les risques de piégeage de bulles d'air étant pratiquement éliminés. En outre, on peut, selon un perfectionnement de l'invention, mettre avantageusement à profit la présence du joint, qui forme ainsi un bourrelet annulaire périphérique, pour réaliser une fixation étanche de la nacelle dans le puits de la plaque multipuits, emprisonnant alors le milieu de culture de façon hermétique sous le matériau, ce qui permet en outre le transport de l'ensemble sans aucun préjudice pour les cultures de cellules ou d'épiderme qui sont à l'air dans la face supérieure mais qui doivent être continuellement nourries par la face inférieure du film ou de la nappe. On peut avantageusement donner à la partie inférieure du puits une forme conique facilitant l'obtention de l'étanchéité, soit par blocage de forme, soit en variante, en rendant solidaire, quoique de façon amovible, la nacelle d'avec la chambre, par exemple par un encliquetage maintenant une certaine pression de déformation du joint contre le rebord complémentaire d'étanchéité de la chambre. D'autres avantages et caractéristiques de l'invention apparaîtront à la lecture de la description suivante faite à titre d'exemple non limitatif et se référant au dessin annexé dans lequel la figure 1 représente une vue en élévation d'un dispositif selon l'invention, la figure 2 représente une vue en perspective du dispositif, les figures 3 et 4 représentent les phases de la mise en place, la figure 5 représente une vue du dispositif dans un puits cylindrique de plaque de culture, les figures 6 et 7 représentent deux vues de l'insertion du dispositif dans un puits de plaque de culture modifié. Exemple 1 : fixation d'un biomatériau collagénique. Les nappes se présentent sous forme de pastilles rondes de 20 mm de diamètre et de 150 à 250 > d'épaisseur à l'état sec d'un biomatériau fait de collagène III + I recouvert en surface de collagène IV sur lequel on fait pousser des cellules épidermiques humaines. Le biomatériau est destiné à être fixé sous le rebord inférieur d'une nacelle 2 présentant une partie inférieure cylindrique 3 avec un bord inférieur formant une embouchure. Vers le haut, cette partie cylindrique 3 se prolonge par une paroi tronconique 4 qui s'évase vers le haut et qui est munie de deux échancrures diamétralement opposées 5 destinées d'une part aux échanges gazeux entre le milieu nutritif et l'air enrichi en gaz carbonique de l'incubation, d'autre part, au passage des pipettes ou autres instruments pour renouveler le milieu nutritif sans retirer la nacelle de son puits .A la partie supérieure de ces tronçons tronconiques se trouve disposé un rebord de forme annulaire 6 orienté vers 1' extérieur. Pour mettre en place la nappe comme le montrent les figures 3 et 4, il suffit de centrer la nappe de biomatériau 1 en forme de disque sur un joint torique en éthylène propylène de 14 mm de diamètre intérieur et de 2,5 mm de diamètre de tore. En exerçant une légère pression sur la nacelle, celle-ci coince le biomatériau en force dans le joint 7, le tendant ainsi de façon régulière comme on le voit sur la figure 4. I1 suffit ensuite de disposer le montage ainsi réalisé dans une plaque de culture multipuits 8 dans laquelle a été introduit le milieu nutritif 9 pour réaliser les cultures de l'épiderme en phase d'immersion ou en phase d'émersion selon le niveau de milieu liquide choisi. Le montage peut être réalisé stérilement avec la nappe de biomatériau préalablement irradiée puis réhydratée ou non au moment du montage, la nacelle et le joint étant également stérilisés par irradiation ou autoclavage. Cependant le montage peut également être effectué dans des conditions non stériles, l'ensemble étant stérilisé par irradiation après le montagne. Exemple 2 : fixation de la nappe de façon étanche dans le puits pour l'expédition de cultures d'épiderme. En se référant aux figures 6 et 7, on voit une forme de réalisation de l'invention dans laquelle le puits 10 d'une plaque est conformé de façon à présenter, à sa partie supérieure près de l'embouchure, une gorge périphérique 11 et, à sa partie inférieure, une partie tronconique 12 se prolongeant vers le bas par un fonds cylindrique dans lequel on dispose le milieu de culture liquide 9. Lors de l'insertion de la nacelle 2 dans le puits 10, l'organe de serrage constitué par le joint torique élastique 7 vient s'appuyer contre la surface 12 et il reste maintenu appliqué avec une certaine pression, contre cette surface, après l'encliquetage des rebords 6 dans la gorge il qui immobilise la nacelle dans le puits. On conçoit que dans ces conditions le liquide 9 reste emprisonné de façon hermétique, et que l'on peut transporter la plaque avec ses puits 10 et ceci sans risquer ni perte de liquide ni formation de bulles sous la nappe de collagène 1. La plaque multipuits peut être operculée par un film adhésif ou thermosoudé. A réception, l'utilisateur n'a qu'à désoperculer la plaque et dégager la nacelle par ses ouvertures à l'aide de pinces. Le cas échéant, la nacelle peut comporter une collerette périphérique 13 vers le sommet de sa partie cylindrique 3 pour former une butée empêchant une remontée du joint 7 risquant une perte d'étanchéité. Cette collerette pourrait également être remplacée par une bague rapportée autour de la partie 3 ou encore un relief similaire pourrait être formé directement par moulage de la paroi de la nacelle en suivant un décrochement latéral. Bien que l'invention ait été décrite à propos d'une forme de réalisation particulière, il est bien entendu qu'elle n'y est nullement limitée et qu'on pourrait lui apporter diverses modifications de forme ou de matériaux sans pour cela s'éloigner ni de son cadre ni de son esprit. REVENDICATIONS 1. Dispositif de fixation d'une nappe (1) adaptée à la culture de cellules, notamment en plaques multipuits, sous le bord inférieur d'une chambre ou nacelle (2), caractérisé en ce qu'il comporte un organe de serrage (7) susceptible d'entourer la partie inférieure (3) de la chambre ou nacelle à un niveau qui n'est pas inférieur à celui de son bord inférieur, de façon à serrer, entre ledit organe de serrage (7) et la surface extérieure de ladite partie inférieure (3), une partie périphérique rabattue vers le haut de ladite nappe (1). 2. Dispositif selon la revendication 1, caractérisé en ce que l'organe de serrage (7) est un joint en un matériau élastique. 3. Dispositif selon la revendication 2, caractérisé en ce que le joint présente une forme torique. 4. Dispositif selon l'une des revendications 2 et 3, caractérisé en ce que le joint possède une dureté de 70 à 80 shores. 5. Dispositif selon l'une quelconque des revendications 2 à 4, caractérisé en ce que le joint est agencé pour s'appliquer contre une surface d'étanchéité (12) d'un puits de plaques multipuits. 6. Dispositif selon la revendication 5, caractérisé en ce que ladite surface d'étanchéité tronconique (12) présente une forme tronconique. 7. Dispositif selon l'une quelconque des revendications 5 et 6, caractérisé en ce que la nacelle ou chambre (2) présente des moyens d'encliquetage ou de fixation (6) coopérant avec des moyens complémentaires (11) du puits pour maintenir le joint appliqué sous pression contre la surface d'étanchéité (12). 8. Dispositif selon l'une quelconque des revendications précédentes, caractérisé en ce que la nacelle comporte une bague ou collerette (13) située vers le sommet de la partie inférieure (3) pour former une butée limitant la remontée du joint (7).