Brevet FR2690445A1 — publié le 19931029

ALGINATE OLIGOSACCHARIDE ET SON PROCEDE DE FABRICATION Cette invention porte sur un alginate oligo- saccharide, tel qu'un alginate oligosaccharide calcique ou un alginate oligosaccharide potassique, et plus particulièrement sur un alginate oligosaccharide ayant une action antihypertensive, et sur son procédé de fabrication. La présente invention porte encore sur un aliment antihypertenseur contenant l'alginate oligosaccharide mentionné ci-dessus. Les algues sont d'une manière générale utilisées depuis longtemps en tant que denrées de tous les jours et estimées être efficaces pour maintenir la santé et prévenir l'hypertension et le vieillissement Il est connu que des algues brunes, telles que la laminaire digitée, parmi les algues, contribuent en particulier à la réduction de la pression sanguine grâce aux actions de l'acide alginique et des acides aminés qu'elles contiennent. Cependant, il est généralement difficile dans notre régime alimentaire quotidien de prendre en continu une grande quantité d'algues. En conséquence, il est souhaitable de rendre les algues faciles à prendre, par exemple, en ajoutant aux aliments des produits d'algues traités. L'acide alginique (alginate de potassium ou algi- nate de sodium), qui est un mucopolysaccharide intercel- lulaire majeur, contenu dans les algues brunes, comprend l'acide Dmannuronique et l'acide L-guluronique en tant que molécules constitutives majeures On considère que les alginate oligosaccharides peuvent être obtenus en abaissant la masse moléculaire de cet acide alginique. Cependant, il est connu que l'acide alginique est très difficilement décomposable, étant donné qu'une solution aqueuse d'acide alginique est très visqueuse et que l'acide alginique forme un sel métallique conjointement avec, par exemple, le calcium contenu dans ladite solution aqueuse, et prend ainsi en gel. En ce qui concerne les traitements de l'acide alginique, des tentatives ont été réalisées pour décomposer cette substance à l'aide d'une alginate lyase produite par un microorganisme Divers exemples d'une telle lyase ont été rapportés au niveau du laboratoire. Les oligosaccharides obtenus à l'aide de la lyase mentionnée ci-dessus comprennent l'alginate oligosaccharide sodique et 1 ' alginate oligosaccharide potassique L' alginate oligosaccharide potassique contient une quantité importante de sodium en plus du potassium, apparemment en raison de la pureté de l'alginate de potassium des polysaccharides employés en tant que matière de départ Par ailleurs, il n'a pas été présenté de rapport sur l'alginate oligosaccharide calcique De plus, il n'a été rapporté ni aucune activité physiologique, telle qu'une action antihypertensive de ces oligosaccharides, ni aucune application de ceux-ci aux aliments. C'est le premier objectif de la présente invention que de proposer un alginate oligosaccharide (alginate oligo- saccharide calcique ou alginate oligosaccharide potassique enrichi en potassium), qui est obtenu à partir d'alginate de sodium et/ou d'alginate de potassium, et qui est efficace pour maintenir la santé, par exemple, en prévenant l'hyper- tension, ainsi qu'un procédé de fabrication dudit alginate oligosaccharide. C'est le second objectif de la présente invention que de proposer un aliment antihypertenseur qui est efficace pour prévenir l'hypertension. Afin d'atteindre le premier objectif de la présente invention, il est proposé un alginate oligosaccharide calcique, caractérisé par le fait que l'ion potassium ou l'ion sodium dans l'alginate oligosaccharide potassique ou l'alginate oligosaccharide sodique, qui est obtenu par traitement de l'alginate de potassium et/ou de l'alginate de sodium par une enzyme de décomposition des polysaccharides (alginate lyase) produite par un microorganisme, est remplacé par l'ion calcium. Conformément à la présente invention, il est encore proposé un alginate oligosaccharide potassique, caractérisé par le fait que l'ion potassium ou l'ion sodium dans l'algi- nate oligosaccharide potassique ou 1 'alginate oligosaccharide sodique, qui est obtenu par traitement de l'alginate de potassium et/ou de l'alginate de sodium par une enzyme de décomposition des polysaccharides (alginate lyase) produite par un microorganisme, est remplacé par l'ion potassium, pour augmenter ainsi le rapport de la teneur en ion potassium à la teneur en ion sodium dans ledit oligosaccharide (ce qui est désigné ci-après simplement par enrichissement en ion potassium). Afin d'atteindre le second objectif de la présente invention, il est proposé un aliment antihypertenseur contenant l'alginate oligosaccharide mentionné ci-dessus, tel que l'alginate oligosaccharide calcique ou l'alginate oligo- saccharide potassique. Afin d'atteindre les objectifs mentionnés ci- dessus, conformément à la présente invention, il est encore proposé un procédé de fabrication d'alginate oligosaccharide calcique, caractérisé par le fait que l'on traite de l'algi- nate de potassium et/ou de l'alginate de sodium par une enzyme de décomposition des polysaccharides (alginate lyase) produite par un microorganisme, que l'on désionise l'alginate oligosaccharide potassique et/ou l'alginate oligosaccharide sodique ainsi obtenu, que l'on traite le produit résultant par un hydroxyde de calcium, puis que l'on déminéralise et purifie l'alginate oligosaccharide calcique ainsi obtenu. De plus, conformément à la présente invention, il est proposé un procédé de fabrication d'alginate oligo- saccharide potassique caractérisé par le fait que l'on traite l'alginate de potassium et/ou l'alginate de sodium par une enzyme de décomposition des polysaccharides (alginate lyase) produite par un microorganisme, que l'on désionise l'alginate oligosaccharide potassique et/ou l'alginate oligosaccharide sodique ainsi obtenu, que l'on traite le produit résultant par un hydroxyde de potassium, puis que l'on déminéralise et purifie l'alginate oligosaccharide potassique ainsi obtenu. Comme microorganisme devant être utilisé dans les procédés mentionnés cidessus pour la fabrication d'alginate oligosaccharides, l'un parmi ceux appartenant au genre Alteromonas peut être choisi Le microorganisme appartenant au genre Alteromonas est la souche Alteromonas sp n 1786. BREVE DESCRIPTION DES DESSINS La Figure 1 est un graphique montrant l'action anti- hypertensive de l'alginate oligosaccharide calcique conforme à la présente invention dans un essai d'action antihypertensive décrit à l'Exemple 5 tel qu'il sera donné ci-après, dans lequel des rats présentant une hypertension spontanée (SHR spontaneous hypertensive rats) ont été utilisés. La Figure 2 est un graphique montrant l'action anti- hypertensive de l'alginate oligosaccharide potassique conforme à la présente invention dans un essai anti- hypertenseur décrit à l'Exemple 6 tel qu'il sera donné ci-après, dans lequel des SHR ont été utilisés. La Figure 3 donne une courbe d'étalonnage représentant la relation entre le degré de polymérisation de chaque oligosaccharide, tel que l'alginate oligosaccharide sodique, et la mobilité relative de celui-ci en chromatographie sur couche mince. La Figure 4 (a) représente un diagramme d'élution de l'alginate oligosaccharide sodique en HPLC, alors que la Figure 4 (b) représente un chromatogramme sur couche mince d'alginate oligosaccharide sodique. La Figure 5 est une vue schématique des structures d'alginate oligosaccharide calcique, d'alginate oligo- saccharide sodique et d'alginate oligosaccharide potassique. L'alginate oligosaccharide calcique ou l'alginate oligosaccharide potassique enrichi en potassium (ci-après désignés collectivement comme alginate oligosaccharides) de la présente invention vont maintenant être décrits plus en détail, sur la base de leur procédé de fabrication conforme à la présente invention. Comme exemples de l'alginate de potassium ou de l'alginate de sodium devant être utilisé en tant que matière de départ pour la fabrication des alginate oligosaccharides de la présente invention, l'alginate de potassium et l'algi- nate de sodium issus de la laminaire digitée et de wakeme (Undaria pinnatifida) peuvent être cités. L'enzyme de décomposition des polysaccharides (alginate lyase) devant être utilisée dans le procédé de la présente invention pour la fabrication de l'alginate oligo- saccharide est une enzyme produite par un microorganisme. Comme exemples du microorganisme capable de produire l'algi- nate lyase mentionnée ci-dessus, ceux appartenant au genre Alteromonas peuvent être cités, et la souche Alteromonas sp. n'1786 est particulièrement préférable comme tel micro- organisme. Le microorganisme mentionné ci-dessus (souche Alteromonas sp N O 1786) est obtenu à partir des intestins de limules par le criblage des intestins et de leur contenu à l'aide d'alginate de sodium en tant que source de carbone. Les caractéristiques morphologiques et physiologiques de ce microorganisme sont énumérées dans le Tableau 1 suivant. lTableau 1 l Caractéristiques de la souche La teneur en guanine et cytosine dans la composition totale de bases d'acides nucléiques Sur la base des caractéristiques de cette souche, telles que données dans le Tableau 1 ci-dessus, des tenta- tives ont été réalisées pour l'identifier Comme résultat, il a été découvert que ce microorganisme (la souche) appartient au genre Alteromonas Cette souche a été déposée auprès de l'Institut de Recherche sur la Fermentation de l'Agence de la Science Industrielle et Technologie sous le no de dépôt FERM BP Il 685. En conséquence, l'alginate lyase produite par le microorganisme mentionné ci-dessus est celle obtenue par incubation de la souche ayant les caractéristiques telles qu'énumérées dans le Tableau 1 ci-dessus par le Procédé d'Incubation tel qu'il sera donné dans les Exemples ci-après. Les propriétés enzymologiques de cette alginate lyase sont les suivantes. ( 1) Action: Lorsque de l'alginate de sodium (alginate de potassium) employé en tant que substrat est traité par l'alginate lyase produite par le microorganisme mentionné ci-dessus, on observe une augmentation de l'absorbance à 230 nm correspondant à la longueur d'onde d'absorption spécifique attribuable à la double liaison Caractéristiques morphologiques Caractéristiques physiologiques ( 1) Coloration de Gram: (-) ( 1) Essai O-F: type oxydation ( 2) Forme de la cellule * bacille ( 2) Essai à l'oxydase (+) ( 3) Couleur de la colonie: blanc laiteux ( 3) Liquéfaction de la gélatine: (+) ( 4) Motilité: oui ( 4) Digestion de l'ADN: (+) ( 5) Flagelle: flagelle polaire ( 5) Caractère basophile: (+) Teneur en GC: 49,1 % en moles dans l'alginate oligosaccharide sodique (alginate oligo- saccharide potassique), c'est-à-dire, le produit de réaction et une augmentation du pouvoir réducteur dû à l'oligosaccharide ainsi formé. ( 2) p H optimum: L'alginate lyase produite par le micro- organisme mentionné ci-dessus présente une activité relativement élevée dans une plage de p H de 7,0 à 7,5. La valeur optimale du p H est de 7,0, valeur pour laquelle l'activité relative maximale est obtenue. ( 3) Température optimale et stabilité thermique: L'alginate lyase produite par le microorganisme mentionné ci-dessus présente une activité relative élevée à l'intérieur d'une plage de température de 45 à 550 C La température optimale est de 50 C, température à laquelle l'activité relative maximale est obtenue En ce qui concerne sa stabilité à la chaleur, elle reste stable sous la forme d'une enzyme brute jusqu'aux environs de 50 C, tempé- rature à laquelle l'activité relative maximale est observée Aucune diminution de l'activité enzymatique n'est observée même lorsqu'elle est concentrée à température ambiante. Lorsque l'alginate lyase produite par le microorganisme mentionné cidessus doit être utilisée dans le procédé de fabrication de l'alginate oligosaccharide potassique de la présente invention, la réaction avec l'alginate de potassium et/ou l'alginate de sodium est, de préférence, effectuée à une température de 45 à 550 C, étant donné que l'activité enzymatique de ladite alginate lyase est maintenue à un niveau élevé dans une plage de tempé- rature de 45 à 550 C. ( 4) Activité enzymatique L'activité enzymatique de l'alginate lyase peut être mesurée par utilisation d'un mélange réactionnel ayant la composition telle que décrite ci- dessous, réaction de l'alginate de sodium (alginate de potassium) avec l'alginate lyase à 50 C pendant 10 minutes, et détermination de l'oligo- saccharide ainsi formé par la méthode de Nelson-Somogyi. On exprime cette activité enzymatique en prenant la quantité d'enzyme capable de former l'alginate oligosaccharide sodique (alginate oligosaccharide potassique) correspondant à 1 pmole d'acide mannuronique en tant que 1 unité (U). (Composition du Mélange Réactionnel) Solution tampon de phosphate de sodium 0,05 M (p H 7,0) contenant 0,5 % d'alginate de sodium (produit de Wako Pure Chemical Industries, Ltd) 0,45 ml Suspension d'enzyme 0,05 ml Dans le procédé de fabrication de l'alginate oligosaccharide de la présente invention, on peut utiliser l'alginate lyase obtenue par incubation d'une souche, qui est un mutant obtenu par traitement de la souche mentionnée ci- dessus par un moyen classique de mutation et capable de produire l'alginate lyase. Dans le procédé de fabrication de l'alginate oligosaccharide de la présente invention, un exemple du procédé d'élimination de l'ion potassium ou de l'ion sodium (désionisation) à partir de l'alginate oligosaccharide potassique et/ou de l'alginate oligosaccharide sodique est celui comprenant le dépôt dudit oligosaccharide sur une colonne garnie avec un support, tel qu'une résine échangeuse de cations fortement acide, pour assurer ainsi une mise en contact avec ledit support, puis l'élution par de l'eau déminéralisée. Dans le procédé de fabrication de l'alginate oligosaccharide de la présente invention, l'hydroxyde de calcium peut être cité en tant qu'exemple de l'hydroxyde devant être utilisé dans le traitement de l'alginate oligo- saccharide calcique par le calcium après élimination de l'ion potassium ou de l'ion sodium (désionisation) à partir de l'alginate oligosaccharide potassique et/ou de l'alginate oligosaccharide sodique mentionné ci-dessus Par ailleurs, dans le cas de l'alginate oligosaccharide potassique, l'hydroxyde de potassium peut être cité en tant qu'exemple de l'hydroxyde de potassium. Le procédé mentionné ci-dessus de fabrication d'alginate oligosaccharide potassique conforme à la présente invention rend possible de fabriquer un alginate oligo- saccharide potassique enrichi en potassium qui contient peu de sodium Etant donné que le sodium en tant que tel est un facteur se rapportant à l'élévation de la pression sanguine, c'est un procédé idéal de fabrication de l'alginate oligo- saccharide potassique devant être utilisé en tant que médi- cament antihypertenseur tout en réduisant le sodium qui y est contenu. L'alginate oligosaccharide potassique ainsi obtenu, contient, de préférence, 10 % ou davantage, de façon encore davantage préférée, de 10 à 20 %, d'ion potassium sur la base du poids total de l'oligosaccharide entier. L'alginate oligosaccharide calcique ainsi obtenu, contient, de préférence, 5 % ou davantage, de façon encore davantage préférée, de 5 à 15 %, d'ion calcium sur la base du poids total de l'oligosaccharide entier. Des exemples du procédé de déminéralisation/purification devant être utilisé dans le procédé de fabrication de 1 'alginate oligosaccharide conforme à la présente invention comprennent la filtration sur gel et le relargage Dans le cas d'un traitement à une petite échelle de quelques grammes, par exemple, l'oligosaccharide mentionné ci-dessus est versé sur une colonne garnie d'un support de filtration sur gel de fractionnement de l'oligosaccharide, puis élué par de l'eau déminéralisée (on se reportera au brevet japonais mis à la disposition du public no 169 188/1992). Comme supports de filtration sur gel de fractionnement de l'oligosaccharide mentionnés ci-dessus, ceux permettant une séparation des masses moléculaires comprises dans une plage allant de 100 à 1800 daltons sont préférables Comme exemples particuliers de ceux-ci, on peut citer le Bio-Gel P-2 et le Bio-Gel P-6 DG (chacun fabriqué par Bio- Rad Laboratories). Dans le cas d'un traitement à une grande échelle de quelques centaines de grammes ou au-dessus, il est préférable d'utiliser un appareil d'électrodialyse (par exemple, Micro Acylizer, fabriqué par Asahi Chemical Industry, Co, Ltd). Lorsqu'il est ajouté aux aliments, l'alginate oligosaccharide de la présente invention exerce une action antihypertensive et contribue ainsi à prévenir l'hypertension et à maintenir la santé Le degré de polymérisation de l'alginate oligosaccharide mentionné ci-dessus présentant l'action antihypertensive est de 2 à 5. Lorsque l'alginate oligosaccharide de la présente invention doit être utilisé dans des aliments, il peut être ajouté aux aliments courants, tels que jus, confiseries, gommes à mâcher et glaces, par des procédés classiques, dans une quantité telle qu'elle ne détériore pas les goûts des aliments De façon plus particulière, la teneur peut, de préférence, se situer dans une plage allant de 1 à 10 % en poids, de façon encore davantage préférée, de 2,5 à 5 % en poids. Pour illustrer encore 1 'alginate oligosaccharide de la présente invention plus en détail, les Exemples suivants seront donnés Cependant, il doit être entendu que le domaine technique de la présente invention n'est pas limité à ceux-ci Le Procédé d'Incubation tel que spécifié ci- dessous désigne un procédé d'incubation du microorganisme mentionné cidessus (la souche) pour obtenir l'alginate lyase devant être utilisée dans la présente invention. L 1 Procédé d'Incubation (Composition du milieu) Alginate de sodium 10 g Eau de mer artificielle*' 1000 ml Source de Fe* 2 1ml Source de Pi* 3 2 ml Source de NH 4 * 4 5 ml Tampon tris-HC 1 1 M (p H 7,8) 50 ml : eau de mer artificielle: chlorure de sodium 300 m M, chlorure de potassium 10 m M, sulfate de magnésium (heptahydrate) 50 m M, chlorure de calcium (déshydraté) m M. * 2 * 2: Source de Fe: 10 g de citrate d'ammonium et de fer/ ml d'eau dessalée. * 3: Source de Pl: 7,5 g d'hydrogéno phosphate dipotassique (trihydrate)/100 ml d'eau dessalée. * 4 4 Source de NH 4: 20 g de chlorure d'ammonium/100 ml d'eau dessalée. En utilisant un milieu de la composition telle que spécifiée ci-dessus, une souche-mère lyophilisée d'Alteromonas sp n 1786 a été préincubée deux fois ( 20 C, 1 jour), puis l'incubation principale ( 25 C, 1 jour) a été effectuée Comme résultat, une culture d'alginate lyase présentant une activité enzymatique de 0,84 U/ml de bouillon de culture a été obtenue. Les cellules ont été retirées du bouillon de culture mentionné ci-dessus à l'aide d'une membrane d'ultra- filtration ayant un seuil de coupure de 500 000 (fabriquée par Romicon B V), et, ainsi, une solution d'alginate lyase brute a été obtenue. (Exemple 1) Fabrication d'alginate oligosaccharide potassique et d'alginate oligosaccharide sodique: 439 g d'alginate de potassium ont été dissous dans 8000 ml d'eau dessalée Puis 2350 U du concentré d'alginate lyase produit par le Procédé d' Incubation mentionné ci- dessus y ont été ajoutés, et le mélange a été amené à réagir à 400 C pendant 24 heures, sous agitation On a ainsi obtenu de l'alginate oligosaccharide potassique. La procédure ci-dessus a été répétée, excepté que l'alginate de potassium a été remplacé par de l'alginate de sodium On a ainsi obtenu de l'alginate oligosaccharide sodique Ensuite, un mélange d'alginate oligosaccharide potassique et d'alginate oligosaccharide sodique a été obtenu en utilisant un mélange d'alginate de potassium et d'alginate de sodium. (Exemple 2) Préparation d'alginate oligosaccharide calcique: L'alginate oligosaccharide potassique produit dans l'Exemple 1 ci-dessus a été déposé sur une colonne ( 8 cm de diamètre x 30 cm), garnie de Dowex 50 W (une résine échangeuse de cations fortement acide, fabriquée par Dowex) et élué par de l'eau déminéralisée, pour éliminer ainsi l'ion potassium. L'alginate oligosaccharide, à partir duquel l'ion potassium a été éliminé, a été fractionné sur un collecteur de fractions et des fractions de p H 2 ou au-dessous, et présentant une absorption à 230 nm, ont encore été recueillies. Une quantité en excès d'hydroxyde de calcium a été ajoutée à ces fractions, et le mélange a été agité à la température ambiante toute une nuit On a ainsi obtenu de l'alginate oligosaccharide calcique. Le mode opératoire mentionné ci-dessus a été répété deux fois Ainsi 358 g d'alginate oligosaccharide calcique ont été préparés à partir de l'alginate oligosaccharide potassique préparé dans l'Exemple 1 ci-dessus. L'alginate oligosaccharide calcique ainsi préparé a été neutralisé par de l'acide chlorhydrique, lyophilisé et dessalé (voir Exemple 4) ou traité directement dans un appareil d'électrodialyse (fabriqué par Asahi Chemical Industry Co Ltd). Ensuite, l'alginate oligosaccharide sodique préparé dans l'Exemple 1 cidessus a été traité par le même procédé que celui décrit ci-dessus, et on a ainsi obtenu de l'alginate oligosaccharide calcique. (Exemple 3) Préparation d'alginate oligosaccharide potassique enrichi en potassium: L'alginate oligosaccharide potassique produit à l'Exemple 1 ci-dessus a été déposé sur une colonne ( 8 cm de diamètre x 30 cm) garnie de Dowex 50 W (une résine échangeuse de cations fortement acide, fabriquée par Dowex) et élué par de l'eau déminéralisée pour éliminer ainsi l'ion potassium. L'alginate oligosaccharide, à partir duquel l'ion potassium a été éliminé, a été fractionné sur un collecteur de fractions, et des fractions de p H 2 ou au-dessous et présentant une absorption à 230 nm, ont encore été recueillies. Une quantité en excès d'hydroxyde de potassium a été ajoutée à ces fractions, et le mélange a été agité à température ambiante, pendant toute une nuit On a obtenu ainsi de l'alginate oligosaccharide potassique. Ainsi, 510 g d'alginate oligosaccharide potassique enrichi en potassium ont été préparés à partir de 1000 g de l'alginate oligosaccharide potassique préparé dans l'Exemple 1 ci-dessus. L'alginate oligosaccharide potassique ainsi préparé a été neutralisé par de l'acide chlorhydrique, lyophilisé et déminéralisé (voir Exemple 4) ou traité directement dans un appareil d'électrodialyse (fabriqué par Asahi Chemical Industry Co, Ltd), pour éliminer ainsi l'hydroxyde de potassium en excès, et il a été purifié. Ensuite, l'alginate oligosaccharide sodique préparé à l'Exemple 1 cidessus a été traité par le même procédé que celui décrit ci-dessus, et on a obtenu ainsi de l'alginate oligosaccharide potassique. (Exemple 4) Purification de l'alginate oligosaccharide calcique: Environ 20 g de l'alginate oligosaccharide calcique préparé à l'Exemple 2 ci-dessus ont été déminéralisés par dépôt sur une colonne ( 15 mm de diamètre x 30 cm) garnie avec Bio-Gel P-6 DG (support de filtration sur gel, fabriqué par Bio-Rad Laboratories), puis élution par de l'eau déminéralisée L'alginate oligosaccharide calcique ainsi déminéralisé a été fractionné sur un collecteur de fractions, et des fractions d'une conductance électrique de 1 m mho ou au-dessous, et présentant une absorption à 230 nm, ont été recueillies et lyophilisées A l'aide de cette colonne, environ 10 g d'alginate oligosaccharide calcique ont pu être isolés et purifiés. Le mode opératoire ci-dessus a été répété pour isoler et purifier ainsi l'alginate oligosaccharide calcique préparé à partir de l'alginate oligosaccharide sodique dans l'Exemple 2 ci-dessus. Le Tableau 2 suivant montre les résultats d'une analyse élémentaire de l'alginate oligosaccharide calcique ainsi préparé, bien que les données de l'analyse élémentaire mentionnée ci-dessus ne soient pas limitées à ceux-ci. lTableau 2 l Analyse élémentaire de l'alginate oligosaccharide de calcium En ce qui concerne l'alginate oligosaccharide potassique de l'Exemple 3 ci- dessus, l'oligosaccharide obtenu simplement par traitement de l'alginate de potassium par l'enzyme a été comparé avec un autre oligosaccharide obtenu par décompo- sition par l'enzyme, désionisation et addition de l'ion potassium à nouveau à hauteur de l'analyse élémentaire Le Tableau 3 suivant présente les résultats Comme le Tableau15 3 l'indique, l'oligosaccharide obtenu par désionisation et traitement par le sel de potassium à nouveau présentait une teneur en potassium élevée. lTableau 3 l Analyse élémentaire de l'alginate oligosaccharide potassique (Exemple 5) Essai sur l'action antihypertensive I: Des rats présentant une hypertension spontanée (SHR), en groupes comprenant chacun 6 animaux, ont été Matière de départ Ca K Na Alginate de potassium 8,7 % 0,8 % 0,4 % Alginate de sodium 4,9 % 0,7 % 1,4 % K Na Traitement d'un alginate oligosaccharide par l'enzyme 5,1 % 4,5 % Traitement de l'alginate de potassium par l'enzyme, désionisation et 12,1 % 1,2 % addition de potassium nourris avec des aliments ayant les compositions telles que spécifiées ci-dessous, en continu, pendant 4 semaines. De façon spécifique, un groupe de traitement par l'alginate oligosaccharide calcique a été nourri avec un aliment formulé en poudre MF lfabriqué par Oriental Yeast Co., Ltd l, auquel 2,5 % d'alginate oligosaccharide calcique et 1 % de Na Cl avaient été ajoutés Par ailleurs, un groupe témoin a été nourri avec un aliment formulé en poudre MF lfabriqué par Oriental Yeast Co, Ltd l, auquel 1 % de Na Cl avait été ajouté. Après avoir commencé l'essai, la pression sanguine de chaque SHR a été mesurée à des intervalles d'l semaine à l'aide d'un appareil de mesure, sans épanchement de sang, au niveau de l'artère caudale lfabriqué par Riken Kaihatsu K K l. La Figure 1 présente les résultats Comme la Figure 1 l'indique clairement, l'augmentation de la pression sanguine moyenne du groupe nourri avec de l'alginate oligo- saccharide calcique a été remarquablement diminuée dans la troisième semaine suivant le démarrage de l'essai, par comparaison avec le groupe témoin, montrant ainsi une action antihypertensive. (Exemple 6) Essai sur l'action antihypertensive II: Des rats présentant une hypertension spontanée (SHR), en groupes comprenant chacun 6 animaux, ont été nourris avec des aliments ayant des compositions telles que spécifiées ci-dessous, en continu, pendant 5 semaines. De façon spécifique, un groupe de traitement par l'alginate oligosaccharide potassique a été nourri avec un aliment formulé en poudreMF lfabriqué par Oriental Yeast Co., Ltd J, auquel 2,5 % d'alginate oligosaccharide potassique et 1 % de Na Cl ont été ajoutés Par ailleurs, un groupe témoin a été nourri avec un aliment formulé en poudre MF lfabriqué par Oriental Yeast Co, Ltd l, auquel 1 % de Na Cl avait été ajouté. Après le démarrage de l'essai, la pression sanguine de chaque SHR a été mesurée à des intervalles d'l semaine à l'aide d'un appareil de mesure, sans épanchement de sang, au niveau de l'artère caudale lfabriqué par Riken Kaihatsu K K I. La Figure 2 présente les résultats Comme la Figure 2 l'indique clairement, l'augmentation de la pression sanguine moyenne du groupe nourri avec de l'alginate oligo- saccharide potassique a été remarquablement diminuée dans la seconde semaine suivant le démarrage de l'essai, par compa- raison avec le groupe témoin, montrant ainsi une action antihypertensive. Les Exemples suivants présenteront des exemples de fabrication d'aliments. (Exemple 7) Fabrication de jus contenant de l'alginate oligosaccharide calcique ou de l'alginate oligosaccharide potassique enrichi en potassium (ci-après désigné par alginate oligosaccharide): Un jus ayant la composition suivante a été préparé: Jus ( 1000 ml au total) Alginate oligosaccharide 25 g Sucre liquide 80 ml Miel 10 ml Vin 10 ml Parfum 2 ml Vitamine C 2 ml Eau 896 ml. (Exemple 8) Fabrication d'une confiserie contenant de l'alginate oligosaccharide: Une confiserie ayant la composition suivante a été fabriquée: Confiserie ( 100 g au total) Alginate oligosaccharide 2,5 g Sucre 37,5 g Sirop d'amidon 60, 0 g (Exemple 9) Fabrication de gomme à mâcher contenant de l'alginate oligosaccharide: Une gomme à mâcher ayant la composition suivante a été fabriquée: Gomme à mâcher ( 100 g au total) Alginate oligosaccharide Gomme de base Sucre Glucose Sirop de maïs Parfum 2,5 37,5 43,0 ,0 ,0 2,0 g g g g g g (Exemple 10) Fabrication d'une glace l'alginate oligosaccharide: contenant Un glace ayant la composition suivante a fabriquée: Glace ( 100 g au total) Alginate oligosaccharide Poudre de lait dégraissée Graisse végétale Sucre Stabilisant 2,5 g 8,0 g ,0 g 13,0 g 0,3 g de été Emulsifiant 0,3 g Parfum vanille 0,1 g Jaune d'oeuf 7,5 g Eau 58,3 g (Exemple 11) Dans cet Exemple, on décrira un exemple de l'analyse sur le degré de polymérisation de l'alginate oligo- saccharide calcique de la présente invention. Le degré de polymérisation a été déterminé par chromatographie sur couche mince (CCM). En premier lieu, une substance standard a été préparée par hydrolyse de l'alginate de sodium par de l'acide trifluoroacétique 1 N, à 100 C, pendant 24 heures En variante, l'alginate de potassium peut être utilisé en tant que substance standard. La CCM a été effectuée dans les conditions suivantes: Plaque de couche mince: plaque HPTLC 60 de gel de silice (fabriquée par Merck & Co, Inc). Solvant de développement: butanol-1/acide acétique/eau ( 5/2/3). Réactif de coloration: réactif diphénylamine aniline - acide phosphorique. L'hydrolysat d'alginate de sodium mentionné ci- dessus (la substance standard) a été soumis à une CCM Comme résultat, six taches ont été obtenues Parmi ces six taches, celle montrant la plus grande mobilité était en accord avec celle de l'acide D- mannuronique lobtenu par traitement de la lactone d'acide D-mannuronique (fabriquée par Sigma) par un alcali, pour éliminer ainsi le cycle lactone; valeur de Rf: 1,00, DP = 1 l Ensuite, les taches présentant des valeurs de Rf de 0,74 et 0,69 ont été soumises à une filtration sur gel à l'aide de Bio-Gel P-2 l 1,5 x 46 xm, élution par une solution tampon d'acétate 0,1 M (p H 4,0)l, pour donner ainsi des oligosaccharides purifiés La teneur en acide uronique et la teneur en sucre réducteur dans ces oligosaccharides purifiés ont été déterminées respectivement par le procédé à l'orcinol fer chlorhydrate lvoir Brown; Arch Biochem, 11, 269-278 ( 1946)l et par le procédé de Somogyi-Nelson lvoir Somogyi; J Biol Chem, 195, 19-23 ( 1952 >, Nelson; J Biol Chem 153, 375-380 ( 1944)l et les degrés de polymérisation (DP) ont été calculés sur la base du rapport de l'acide uronique au sucre réducteur Comme résultat, les degrés de polymérisation de ces taches étaient de respectivement 1,93 et 3,04 Puis on a tracé une courbe représentant la relation entre la mobilité relative (Rf/1 - Rf) et le degré de polymérisation (DP) en utilisant ces deux oligosaccharides purifiés, l'acide D-mannuronique, et les trois autres taches, et une courbe d'étalonnage a été tracée. Comme résultat, ces six taches présentaient une linéarité. La Figure 3 présente cette courbe d'étalonnage. Ensuite, l'alginate oligosaccharide sodique préparé par le procédé décrit dans l'Exemple 1 ci-dessus a été soumis à une chromatographie liquide haute performance sous un gradient d'élution de Na Cl 0-2 M, à l'aide de Verre DEAE (fabriqué par Nacalai Tesque, Inc) puis, fractionné sur un collecteur de fractions (voir brevet japonais mis à la disposition du public n 266 896/1992) La Figure 3 (a) présente le diagramme d'élution ainsi obtenu Parmi les fractions P-1 à P-8 présentant une absorption à 230 nm, les fractions majeures (P-2, P- 3, P-5 et P-8) ont été recueillies Chacune de ces fractions a été dessalée (voir brevet japonais mis à la disposition du public n 169 188/1992) à l'aide d'une colonne garnie avec Bio-Gel P-2 (fabriquée par Bio-Rad Laboratories), lyophilisée, puis soumise à une CCM Ainsi, un chromatogramme sur couche mince tel que présenté sur la Figure 4 (b) a été obtenu Sur la Figure 4 (b), O représente le point de départ, M représente l'acide D-mannuronique, S représente un oligosaccharide obtenu par la décomposition enzymatique de l'alginate de sodium, 2 représente la fraction P-2, 3 représente la fraction P-3, 5 représente la fraction P-5 et 8 représente la fraction P-8 De plus, a, b, c et d représentent chacun une tache d'une valeur de Rf calculée. Comme le chromatogramme sur couche mince de la Figure 4 (b) le montre, aucun des échantillons n'a donné une seule tache Puis, les valeurs de Rf des taches principales ont été déterminées et reportées sur la courbe d'étalonnage donnée sur la Figure 3, pour examiner ainsi le degré de polymérisation Comme résultat, il a été prouvé que les degrés de polymérisation des oligosaccharides fractionnés (P-2, P-3, P-5 et P-8) se situaient principalement dans une plage allant de 2 à 5. Ainsi, l'alginate oligosaccharide sodique est un mélange ayant un degré de polymérisation de 2 à 5 On a supposé que le degré de polymérisation de l'alginate oligo- saccharide potassique, qui a été obtenu par élimination de l'ion sodium ou de l'ion potassium dans l'alginate oligosaccharide sodique ou l'alginate oligosaccharide potassique, puis par substitution de celui- ci par l'ion potassium, pourrait être un mélange ayant un degré de polymé- risation de 2 à 5, également. La Figure 5 est une vue schématique des structures d'alginate oligosaccharide calcique, d'alginate oligo- saccharide sodique et d'alginate oligosaccharide potassique conformes à la présente invention La structure (a) montre un oligosaccharide ayant un degré de polymérisation de 2, la structure (b) en montre un ayant un degré de polymérisation de 3, la structure (c) en montre un ayant un degré de polymérisation de 4, et la structure (d) en montre un ayant un degré de polymérisation de 5 Les sucres constitutifs de ces oligosaccharides sont l'acide D-mannuronique et l'acide L-guluronique qui peuvent être n'importe lequel des types homo et hétéro R dans le groupe COOR est un élément choisi parmi H, Na, K et Ca. En conséquence, l'alginate oligosaccharide de la présente invention contribue au maintien de la santé, par exemple, en prévenant l'hypertension. REVENDICATIONS 1 Alginate oligosaccharide calcique, caractérisé par le fait que l'ion potassium ou l'ion sodium dans l'algi- nate oligosaccharide potassique ou 1 'alginate oligosaccharide sodique, qui est obtenu par traitement de l'alginate de potassium et/ou de l'alginate de sodium par une enzyme de décomposition des polysaccharides (alginate lyase) produite par un microorganisme, est substitué par l'ion calcium. 2 Alginate oligosaccharide potassique, caractérisé par le fait que l'ion potassium ou l'ion sodium dans l'alginate oligosaccharide potassique ou l'alginate oligosaccharide sadique, qui est obtenu par traitement de l'alginate de potassium et/ou de l'alginate de sodium par une enzyme de décomposition des polysaccharides (alginate lyase) produite par un microorganisme, est substitué par l'ion potassium, pour augmenter ainsi la teneur en ion potassium dans ledit oligosaccharide. 3 Aliment antihypertenseur contenant un alginate oligosaccharide tel que défini à l'une des revendications 1 et 2. 4 Procédé de fabrication d'alginate oligo- saccharide calcique, caractérisé par le fait que l'on traite de l'alginate de potassium et/ou de l'alginate de sodium par une enzyme de décomposition des polysaccharides (alginate lyase) produite par un microorganisme, que l'on désionise l'alginate oligosaccharide potassique et/ou l'alginate oligosaccharide sodique ainsi obtenu, que l'on traite le produit par un hydroxyde de calcium et que l'on déminéralise et purifie l'alginate oligosaccharide calcique ainsi obtenu. 5 Procédé de fabrication d'alginate oligo- saccharide potassique, caractérisé par le fait que l'on traite de l'alginate de potassium et/ou de l'alginate de sodium par une enzyme de décomposition des polysaccharides (alginate lyase) produite par un microorganisme, que l'on désionise l'alginate oligosaccharide potassique et/ou l'alginate oligosaccharide sodique ainsi obtenu, que l'on traite le produit par un hydroxyde de potassium et que l'on déminéralise et purifie l'alginate oligosaccharide potassique ainsi obtenu. 6 Procédé de fabrication d'alginate oligo- saccharide potassique selon l'une des revendications 4 et 5, caractérisé par le fait que ledit microorganisme est celui appartient au genre Alteromonas. 7 Procédé de fabrication d'un alginate oligo- saccharide selon la revendication 6, caractérisé par le fait que ledit microorganisme appartenant au genre Alteromonas est la souche Alteromonas sp n 1786.