Brevet FR2691463A1 — publié le 19931126

La présente invention a pour objet des dérivés nucléotidiques, leur préparation et leur application en thérapeutique. Les composés de l'invention répondent à la formule générale I, donnée en annexe 1, dans laquelle R est un radical -CH2-CH2-S-S-X où X est un radical (CH2)n Y, n étant égal à 1 à 4 et Y étant H, OH, SH, NH2, ou tout radical dérivé, et Nu est un radical de nucléoside naturel, d'analogue de nucléoside, ou de dérivé de nucléoside Dans le radical X n est de préférence égal à 2. Nu est plus particulièrement . la ddU ou dideoxyuridine, . 1'AZT ou azidothymidine, . la 9-(méthoxyéthyl)adénine (dérivé du PMEA) dont les formules sont données en annexe 2. La préparation des composés de l'invention sera décrite ciaprès dans les exemples. Les exemples suivants illustrent l'invention. Les chromatographies sur couche mince ont été réalisées sur plaques de silice Merck 60F 254 (art.5554). Les chromatographies sur colonne de gel de silice ont été effectuees avec de la silice Merck 60 H (art. 7736) ou avec de la silice silanisée RP2 Merck (art 77191- Avant analyse ou lyophilisation, les solutions ont eté filtrées sur filtre Millex HV-4 (Millipore). Les spectres UV ont été enregistrés sur un spectrophotomètre UVIKON 810. Les spectres de masse ont été pris sur un appareil JEOL JMS DX 300 par la méthode d'ionisation FAB en mode positif ou négatif dans une matrice de glycérol (G), glycérol/thioglycérol (GT) ou d'alcool 3 nitroberwylique (NBA). Les spectres RMN du proton ont été enregistrés sur un appareil Varian EM 360 ou sur appareil Bruker AC 250. Les deplacements chimiques sont exprimés en ppm par rapport au signal du tétreméthylsilane (TMS). La multiplicité et l'allure des signaux observés par RMN sont indiquees par une (ou plusieurs) lettre(s) : s (singulet), d (doublet), t (triplet), m (multiplet), 1 (large). Les spectres RMN du phosphore ont été enregistrés sur un appareil Brûler WP 200 SY avec découplage du proton. Les déplacements chimiques sont exprimés en ppm par rapport au signal de H3PO4 pris comme référence externe. Exemple 1: O,O'-Bis (S-(2-hydroxyéthylsulfidyl) 2-thioéthyl) O-(2',3'-didésoxy uridin-5'-yl) phosphate (1). (schéma en annexe 3) 1.1. O,O'-Bis (S-(O-(4-méthoxytrityl) 2-oxéthylsulfidyl) 2 thioéthyl) phosphate (5) A une solution de 0,910 g (13.4 mmoles) d'lmidazole dans 18 ml de pyridine à 0 C sont ajoutes 0,406 ml (4,45 mmoles) d'oxychlorure de phosphore. Le mélange est agité 30 minutes à température ambiante puis ajoute à 3,80 g (8.91 mmoles) de mono-O (4-méthoxytrityl) dithiodiéthanol (4). Après 18 heures, le mélange réactionnel est traité avec une solution 1 M d'acétate de triéthylammonium. Les produits de la réaction sont extrait avec du dichlorométhane et la phase organique est lavée avec de l'eau, séchée sur sulfate de sodium, concentrée sous pression reduite et coévaporée avec du toluène.Une purification sur colonne de gel de silice (éluant: méthanol (0- 10%) dans le dichlorométhane) conduit à 2,2 g (48%) de 5 sous forme de sel de triéthylammonium. 5: SM (FAB négatif, NBA): 913 (M-). RMNlH (DMSO-d6) : l,l4 (t, 9H, (CH3CH2)3NH+, J =7.3 Hz); 2,78 (t, 4H, 2 SCH2CH2OP, J = 6,4 Hz). 2,86 (t, 4H 2 SCH2CH2OMTr. J = 6 Hz); 2s99 (q, 6H, (CH3CH2)3NH+, J = 7,3 Hz); 3,21 (t, 4H, 2 CH2OMTr, J = 5,9 Hz); 3,71 (s. 6H, 2 CH30); 3,87 (m, 4H, 2 CH2OP); 6,82-7,45 (m, 28H, 2 Tr) ppm. RMN31P (DMSO-d6): : -2,70 ppm. 1.2. O,O'-Bis (S-(s-hydroxyéthylsufidyl) 2-thioéthyl) O-(2',3'-didésoxyuridin-5'-yl) phosphate (1). Un melange de 666 mg (0,655 mmoles) de 5 et de 139 mg (0,656 mmoles) de 2',3'-didésoxyuridine dans 5 ml de pyridine est traité avec 486 mg 1.64 mmoles) de 1-(2-mésitylènesulfonyl) 3-nitro 1,2,4-triazole. Après 30 heures, le melange réactionnel est dilue avec du dichlorométhane, lavé avec une solution aqueuse 1M d'acétate de triéthylammonium, puis avec de l'eau. La phase organique est séchée sur sulfate de sodium, concentrée sous pression réduite, coévaporée avec du toluene et chromatographiee sur colonne de gel de silice (éluant: méthanol (0-4%) dans le dichloromethane). Le phosphotriester protégé partiellement purifie est traité avec 5 mi du melange acide acétique/eau/méthanol (8:1:1) pendant 24 heures.Les solvants sont chassés par évaporation sous pression réduite et l'huile obtenue est coévaporée avec du toluène. Une purification sur colonne de gel de silice (éluant methanol (0-6%) dans le dichloromethane) suivie d'une purification sur colonne de silice silanisée (éluant méthanol (0-40%) dans l'eau) conduit à 52 mg (14%) du compose 1 après lyophilisation dans le dioxanne. 1: UV (EtOH);# max 261 nm (# 9900) min 231 nm (E 3100). SM (FAB positif, GT) : 565 (M+H)+; 489 (M-SCH2CH2OH+2H)+; 429 tM- HOCH2CH2SSCH2CH2+2H)+. RMN1H (DMSO-d6) : 1,63-1,9 (m, 1H, H-3'); 1,9-2,10 (m, 2H, H-2',3"); 2,33-2,40 (m, 1H, H-2"); 2,80 (t, 2H, HOCH2CH2S, J = 6,4 Hz); 2,81 (t, 2H, HOCH2CH2S, J = 6,4 Hz); 3,00 (t, 4H, 2 SCH2CH20P, J = 6,3 Hz); 3,61 (pseudo q, 4H, 2 HOCH2, J = 6 Hz), 4,07-4,32 (m, 7H, H-4',5',5" et 2 CH2CH2OP); 4,89 (t, 2H, 2 HO, J = 4.9 Hz); 5,598 (d, 1H, H-5, J = 8,1 Hz); 5,604 (d, 1H, H-5, J = 8,1 Hz); 6,00 (dd, 2H, 2 H-1', J = 4,1 et 7,9 Hz); 7,65 (d, 2H, 2 H-6, J = 8,0 Hz); 11,31 (sl, 1 H, NHCO) ppm. RMN P(DMSO-d6): - 0.880 ppm. ExemPle 2 O,O'-Bis (S- (2-hydroxyéthylsufidyl) 2-thioéthyl) O- (3' -azido 3'désoxythymidin-5'yl) phosphate (2). (schéma en annexe 3) Un mélange de 666 mg (0,655 mmoles) de 5 et de 193 mg (0,722 mmoles) de 3'-azido 3'-désoxythymidine dans 5 ml de pyridine est traité avec 486 mg ( 1,64 mmoles) de 1-(2-mésitylènesulfonyl) 3-nitro 1,2,4-triazole. Après 24 heures, 194 mg (0,656 mmoles) de 1-(2-mésitylènesulfonyl) 3-nitro 1,2,4 triazole sont rajoutes et la réaction est laissée 24 heures supplémentaires.Le mélange réactionnel est alors dilué avec du dichlorométhane, lavé avec une solution aqueuse 1M d'acétate de triéthylammonium, puis avec de l'eau-La phase organique est séchée sur sulfate de sodium, concentrée sous pression réduite, coevaporée avec du toluène et chromatographiee sur colonne de gel de silice (éluant: méthanol (0-2%) dans le dichlorométhane). Le phosphotriester protégé partiellement purifié est traite avec 5 ml du mélange acide acétique/eau/méthanol (8:1:1) pendant 24 heures. Les solvants sont chassés par évaporation sous pression réduite et l'huile obtenue est coévaporée avec du toluène. Une purification sur colonne de gel de silice (éluant : méthanol (0-6%) dans le dichlorométhane) conduit à 130 mg (29%) du composé 2 apres Iyophilisation dans le dioxanne. 2: UV (EtOH): # max 264 nm (# 9600) min 234 nm ( 2100). SM (FAB positif. GT) : 620 (M+H)+; 544 (M-SCH2CH2OH+2H)+ RMN1H (DMSO-d6): 1,80 (s, 3H, CH3); 2,26-2,5 (m, 2H,H-2',2"); 2,796 (t, 2H, HOCH2CH2S, J = 6,4 Hz); 2,802 (t, 2H, HOCH2CH2S, J = 6,4 Hz); 2,99 (t, 4H, 2 SCH2CH2OP. J = 6,3 Hz); 3,61 (pseudo q, 4H, 2 HOCH2, J =6 Hz); 4.02 (m, 1H, H-4'); 4.09-4.44 (m, 6H, H-5',5" et 2 CH2CH2OP); 4.48 (m, 1H, H-3'); 4.90 (t, 2H, 2 HO, J = 5.3 Hz); 6.14 (t, 1H, H-1', J = 6.6 Hz); 7.49 (s, 1H, H-6); 11.37 (s1, 1H, NHCO) ppm. RMN31P (DMSO-d6): : -0,954 ppm. Exemple 3: 9-(2-(O,O'-Bis (S-(2-hydroxyéthylsufidyl) 2-thioéthyl) phosphonylméthoxy ethyl) adénine (3), (schéma en annexe 4) 3.1. N6-(4-Méthoxytrityl) 9-(2-diéthoxyphosphonyl méthoxyéthyl) adénine (Z). Une solution de 3,93 g (11,9 mmoles) de 9 (diéthoxyphosphonylméthoxyéthyl) adénine (6) (A. Holy et coll., Collection Czechoslovak Cherry Commun. 52 2792, 1987) et de 146 mg (1,19 mmoles) de 4-diméthylaminopyridine dans 50 ml de dichlorométhane est traitee avec 3,31 ml (23,8 mmoles) de triéthylamine et 7,35 g (23,8 mmoles) de chlorure de 4-méthoxytrityle pendant 4 heures. Le mélange réactionnel est ensuite dilué avec du dichlorométhane et lavé avec une solution aqueuse d'hydrogénocarbonate de sodium puis avec de l'eau. La phase organique est séchée sur sulfate de sodium et concentrée sous pression réduite.Une chromatographie sur colonne de gel de silice (éluant : méthanol (0-3%) dans dichIoromethane) permet d'isoler 5,43 g (84%) du composé 7. 7: UV (EtOH): # max 275 nm (# 27200) # min 246 nm (# 11200). SM (FAB négatif, GT): 601 (M-H); 406 (AMTr)-; 328 (M-MTr) RMN1H (DMSO-d6); 1,10 (t, 6H, 2 CH3CH2, J = 7.0 Hz); 3,71 (s, 3H, CH30), 3,80-3,98 (m, 4H, PCH2 et CH2CH2); 3,88 (q, 4H, 2 CH3CH2, J = 8 Hz); 4t33 (t, CH2CH2 J = 4,8 Hz); ( 6,80-7.37 (m, 14H, Tr); 7,91 (s, 1H, H-8); 8,18 (s, H-2) ppm. RMN31P (DMSO-d6): 21,35 ppm. 3.2 N6-(4-Méthoxytrityl) 9-(2-phosphonylméthoxyéthyl) adénine (8). Une solution de 5,00 g (8,31 mmoles) de 7 dans 29 ml d'acetonitrile est traitée avec 3,29 ml (24,9 mmoles) de bromure de triméthylsilyle pendant 14 heures. L'excès de réactif et le solvant sont chassés par évaporation sous pression réduite. L'huile obtenue est repnse avec du bicarbonate de triéthylammonium et concentre sous pression reduite. La purification est réalisée par chromatographie sur colonne de gel de silice (éluant méthanol (0-50%) dans le dichiorométhane). Après filtration en solution dans du dichlorométhane, 3,4 g (63%) de 8 sont isoles sous forme de sel mixte d'acide et de triéthylammonium (1:1). 8: SM (FAB négatif, GT): 544 (M-H); 272 (M-MTr)-. RMN1H (DMSO-d6): 1,11 (t. 9H, (CH3CH2)NH+, J = 7,3 Hz); 2,96 (q, 6H, (CH3CH2)NH+, J = 7,3 Hz); 3.34 (d, 2H, PCH2, J = 8.4 Hz); 3,68 (s, 3H, CH3O); 3.8 (m, 2H, CH2CH2); 4.27 (t, CH2CH2, J = 4.5 Hz); 6.65-7.35 (m, 14H, Tr); 7,83 (s, 1H, H-8); 8,31 (s, 1H, H-2) ppm. RMN P (DMSO-d6): 11,00 ppm. 3.3. N6-(4-Méthoxytrityl) 9-(2-(O,O'-Bis (S-(O-(4méthoxytrityl) 2-oxéthylsufidyl) 2-thioéthyl)) phosphonylméthoxyéthyl) adénine (9) Un mélange de 296 mg (0.458 mmoles) de 8 avec 977 mg (2,29 mmoles) de mono-O (4-méthoxytrityl) dithiodiéthanol (4) dans 5 ml de pyridine est traité avec 341 mg ( 1,15 mmoles) de 1-(2-mésytylènesulfonyl) 3-nitro 1,2,4 triazole.Après 3 jours, le mélange reactionnel est dilué avec du dichlorométhane, lavé avec une solution aqueuse saturée d'hydrogenocarbonate de sodium, puis avec de l'eau. La phase organique est séchée sur sulfate de sodium, concentrée sous pression réduite, coévaporée avec du toluène et chromatographiée sur colonne de gel de silice (éluant: méthanol (0-5%) dans le dichlorométhane) pour donner 330 mg (53%) de 9. 9: UV (EtOH): # max 275 nm (# 28200) min 253 nm ( 18300). SM (FAB négatif, NBA): 1360 (M-H)-; 952 (M-MTrOCH2CH2SSCH2CH2)-. RMN1H (DMSO-d6) : 2.75 (t. 4H, 2 SCH2CH2OP J = 6.3 Hz), 2,86 (t, 4H, 2 SCH2CH2OMTr, J = 5,9 Hz); 3,19 (t, 4H, 2 CH2Or J=6.0 Hz); 3.68 (s, 3H, CH3O); 3,69 (s. 6H, 2 CH30); 3.83 (m, 4H, PCH2 et CH2CH2); 4,05 (m, 4H, 2 CH2OP); 4,28 (t, 2H, CH2CH2. J = 4,6 Hz); 6.87-7.45 (m, 42H, 3 Tr); 7,88 (s, 1H, H-8); 8,12 (s. 1H, H-2) ppm. RMN P (DMSO-d6): 22.09 ppm. 3.4. 9-(2-(O,O'-Bis (S-(2-hydroxyéthylsufidyl) 2-thioéthyl) phosphonylméthoxyéthyl) adénine (3). Le phosphotriester 9 (290 mg, 0,213 mmoles) est traite avec 15 ml du melange acide acétique/eau/méthanol (8:1:1) pendant 15 heures. Les solvants sont chassés par évaporation sous pression réduite et l'huile obtenue est coévaporée avec du toluène. Une purification sur colonne de gel de silice (éluant: méthanol (0-8%) dans le dichlorométhane) conduit à 116 mg (90%) du composé 3 après lyophilisation dans le mélange eau/dioxanne. 3: UV (EtOH): # max 260 nm (# 14700) min 228 nm (E 3600). SM (FAB positif, GT) : 545 (M+H)+. RMN1H (DMSO-d6): 2,80 (t, 4H, 2 SCH2CH2OP. J = 6,4 Hz); 2,91 (t, 4H, 2 SCH2CH2OH, J = 6,4 Hz); 3,61 (pseudo q, 4H, 2 CH2OH, J = 6 Hz); 3,91 (t, 2H, CH2CH2, J = 5,1 Hz); 3,95 (d, 2H, PCH2. J = 8,2 Hz); 4,15 (m, 4H, 2 CH2OP); 4,32 (t, 2H, CH2CH2, J = 5,0 Hz); 7,20 (sI, 2H, NH2); 8,08 (s. 1H, H-8); 8.14 (s, 1H, H-2) ppm. RMN P (DMSO-d6): 22.24 ppm. Les composés de l'invention ont été soumis à des essais pharmacologiques montrant leur interêt dans le traitement de maladies virales. - Evaluation de l'activiste anti-VIH 1 sur les cellules CEM VIH = virus de l'immunodéficience humaine CEM = cellule lymphoblastoïde T humaine. La réplication du VIH-1 (isolat LAI) dans les cellules CEM est mesurée par un dosage de la réverse transcriptase (RTase) dans le surnageant de culture après 5 jours d'infection. Cette activité traduit la présence de virus libéré par les cellules. Après l'adsorption du virus, les composés testés sont ajoutés à différentes concentrations dans le milieu de culture. L'activité antivirale est exprimée par la concentration la plus faible de composé qui diminue la production de RTase d'au moins 50 (ED50). L'effet toxique sur les CEM non infectées est apprécié par une réaction colorimétrique basée sur la capacité des cellules vivantes à réduire le bromure de 3-(4,5 diméthylthiazol-2-yl)-2,5 diphényltetrazolium en formazan après 5 jours d'incubation en présence de différentes concentrations des composés. Les résultats sont exprimés par la concentration la plus faible de composé qui provoque une inhibition d'au moins 50 % de la formation de formazan (CD50). Les composés de l'invention ont une ED50 allant de 10 M à 10-4M pour une CD50 de 10-5M à 10-4M. ANNEXE l Formule I ANNEXE 2 ANNEXE 3 ANNEXE 4 REVENDICATIONS 1. Dérivés nucléotidiques répondant à la formule générale (I) dans laquelle R est un radical -CH2-CH2-S-S-X où X est un radical (CH2)n Y, n étant égal à 1 à 4 et Y étant H, OH, SH, NH2, ou tout radical dérivé, et Nu est un radical de nucléoside naturel, d'analogue de nucléoside, ou de dérivé de nucléoside. 2. Dérivés selon la revendication 1, caractérisés par le fait que Nu est . la ddU ou dideoxyuridine, . l'AZT ou azidothymidine, . la 9-(méthoxyéthyl)adénine (dérivé du PMEA). 3. Dérivés selon la revendication 2, caractérisés par le fait que n dans le radical (CH2)n Y est égal à 2. 4. Médicament caractérisé en ce qu'il contient un composé selon l'une quelconque des revendications 1 à 3. 5. Composition pharmaceutique caractérisée en ce qu'elle contient un composé selon lune quelconque des revendications 1 à 3 en association avec tout excipient approprié.