Brevet FR2694570A1 — publié le 19940211

PROCEDE ET APPAREIL D'ENSEMENCEMENT DE SOLUTIONS SUR UN MILIEU DE CULTURE POSSEDANT DES POSSIBILITES DE PROGRAMMATION DU TYPE DE DEPOT DE LA SOLUTION. La présente invention est relative à un procédé et à un appareil destiné à ensemencer des solutions bactériennes ou des substances ayant des effets sur la croissance de micro-organismes sur un milieu de culture. Une méthode et des appareils pour ensemencer et compter des bactéries aérobies ont été développés et sont connus. Cette méthode et cet appareil permettent d'ensemencer un milieu de culture avec une solution contenant un nombre inconnu de bactéries dont on veut déterminer la concentration. Cette méthode et cet appareil permettent, dans ce but, de déposer une solution contenant un nombre inconnu de bactéries sous la forme d'une spirale avec un volume décroissant de solution, cette solution étant déposée par un stylet se déplaçant radialement par rapport au milieu de culture de forme circulaire qui est typiquement une boîte de Pétri. Comme on dépose un volume total identique sur chaque milieu de culture, on peut calculer le volume de solution déposé sur un secteur de la surface ensemencée.Comme le volume de solution déposé dans un secteur de la surface du milieu de culture est connu ou peut être déterminé, la concentration bactérienne peut être déterminée en comptant le nombre de bactéries dans un secteur de la surface et en divisant ce nombre par le volume de solution déposé dans ce même secteur. Les milieux de culture ensemencés avec des solutions de bactéries de concentrations inconnues peuvent alors être comparées avec une collection de milieux de culture ensemencés de façon standard, en faisant correspondre la surface totale du milieu de culture ou bien n'importe lequel des secteurs comparables. Le nombre de colonie peut aussi être compté électroniquement en utilisant une source lumineuse, comme par exemple un faisceau laser, pour éclairer les colonies bactériennes incubées, qui ne laissent pas passer la lumière et ainsi peuvent être détectées et comptées par un cellule photosensible. Le faisceau lumineux se déplace suivant une spirale identique au dépôt de la solution et ainsi on peut compter les colonies dans n'importe quel secteur. Ces ensemenceurs de solutions comportent un système mécanique qui actionne à une vitesse constante une table tournante sur laquelle est disposée le milieu de culture et à une autre vitesse constante le stylet qui dépose la solution bactérienne sur le milieu de culture selon une spirale de forme prédéterminée. Ce système fonctionne à une vitesse fixe qui ne peut pas être modifiée par des réglages de l'appareil et donc on ne peut pas obtenir des spirales de formes différentes. La manière dont est déposée la solution bactérienne est caractérisée en ce qu'elle comporte une came ayant une forme caractéristique qui permet de contrôler le débit de solution bactérienne sur le milieu de culture. La quantité de solution déposée sur le milieu est contrôlée par une roulette qui glisse le long de la surface totale de la came ou bien sur une portion seulement de celle-ci. Si une portion seulement de la came est utilisée, un volume moindre que celui entièrement contenu par la seringue est déposé sur le milieu de culture. Pour obtenir la plus grande précision possible dans la détermination de la concentration en bactéries d'une solution les paramètres de réglage doivent être précisément contrôlés. Comme le milieu de culture possède un fort pourcentage d'eau, il est nécessaire que la vitesse de rotation de la table tournante n'excède pas la vitesse à laquelle la force centrifuge risque de déplacer, lors du dépôt, une spire de la spirale sur une autre rendant ainsi la lecture de la bote impossible. En outre les erreurs de coïncidences qui consistent en la probabilité qu'il y ait plus d'une bactérie déposée sur le même point du milieu de culture doivent être minimisées. Pour minimiser les erreurs de coïncidence il faut faire tourner la table à une plus grande vitesse. Cependant, comme il a été vu plus haut la vitesse de la table est limité par les conséquences de la force centrifuge. Une plus grande sensibilité lors du comptage sera alors obtenu en ensemençant un plus grand volume de solution sur Le milieu de culture. Les ensemenceurs connus déposent la solution bactérienne de façon toujours identique. Le moteur qui détermine l'avance radiale du stylet qui dépose la solution sur le milieu de culture et le moteur qui met en mouvement la table tournante sont dans un rapport constant de vitesse. Comme la vitesse des moteurs ne peut être modifiée, le manière de déposer la solution n'est pas programmable. De plus la came utilisée pour contrôler la quantité de solution déposée sur le milieu de culture ne permet pas le dépôt de volumes variables de solution. La longueur de la spirale le long de laquelle est déposée la solution n T est pas elle non plus variable. Les ensemenceurs et la méthode mentionnés ci-dessus ont un certain nombre d'inconvénients. En premier lieu, la quantité de solution déposée ne peut être modifiée que par un changement de came. La quantité de solution déposée ne peut donc pas être modifiée par une entrée de données via un système de contrôle. On ne peut programmer le volume de solution bactérienne déposé. La forme sous laquelle la solution bactérienne est déposée est fixée en conséquence de la vitesse fixée du moteur de la table tournante et de la vitesse du moteur actionnant radialement le stylet au dessus du milieu de culture. Cette forme fixée empêche de modifier l'espace compris entre deux spires de la spirale et donc la longueur de la ligne de cette spirale contenant la solution de bactéries déposée sur le milieu de culture est elle aussi fixée depuis son point central jusqu'à son extrémité à la périphérie du milieu de culture. Cette impossibilité de faire varier la longueur de cette ligne empêche d'ajuster la sensibilité du système. On peut aussi noter que la position verticale du stylet par rapport au milieu de culture est actionnée manuellement ce qui empêche d'avoir un dépôt discontinus d'échantillons qui soit automatique et programmé . Les ensemenceurs et la méthode mentionnés ci-dessus n'utilisent seulement qu'une seule variable de contrôle indépendante pour contrôler le mode de dépôt de la solution, qui est la position à partir de laquelle la seringue injecte la solution sur le milieu de culture à travers le stylet et qui est sous le contrôle du réglage mécanique de la position sur la came. D'autre part des filtres à bactéries sont couramment utilisés pour concentrer et dénombrer des bactéries. Une méthode d'analyse des eaux recommande une procédure qui consiste à filtrer de grands volumes d'eau afin de déterminer le nombre total de bactéries ou le nombre de bactéries coliformes autorisées présentes. Cette méthode utilise des filtres de 0,22 ou 0,45 micron qui ont une grille hydrophile à la surface du filtre. La grille a la forme d'un écran et possède approximativement 1500 cases. Après filtration, le filtre est positionné sur de l'agar nutritif. Les nutriments migrent de l'agar sur le filtre par contact liquide. Chaque bactérie qui se multiplie et forme une colonie peut alors être comptée dans un trou de la grille 26. La connaissance du nombre de trou, du volume filtré et du nombre de colonie permet de déterminer la concentration en bactéries. Une autre méthode pour dénombrer des bactéries est connue sous le nom de détermination du nombre le plus probable. La méthode du nombre le plus probable (NPP) consiste à réaliser des dilutions que l'on met dans des fioles de milieu stérile. La moindre bactérie présente va se développer et troubler la solution qui était limpide, on considère alors la fiole comme positive. La connaissance de la dilution de l'échantillon, du volume de solution utilisé à partir de la solution et du ratio de fioles à croissance positive ou négative permet de déterminer la concentration. Cette méthode est peu précise sauf si on réalise un grand nombre de réplications pour chaque dilution qui est utilisée pour déterminer la concentration. D'autres méthode et appareil ont été développés pour permettre de teste des interactions entre des solutions bactériennes et des substances actives sur la croissance en les ensemençants et les cultivant sur un milieu de culture. Cette interaction peut permettre par exemple de déterminer la concentration minimale nécessaire d'un antibiotique pour inhiber la croissance microbienne sur le milieu de culture. La présente invention concerne un appareil et une méthode pour ensemencer des solutions sur un milieu de culture ou sur un filtre à bactéries qui possède un système de dépôt programmable par l'entrée de données par l'intermédiaire d'un contrôleur. On entend ici par milieu de culture, soit un milieu de culture pour bactéries soit un filtre à bactéries. Grâce à l'invention le dépôt programmable d'une solution peut être de type continu avec une variation de la quantité déposée suivant une fonction du rayon du milieu de culture ou bien de type discontinu avec une serie de cercles concentriques, chaque cercle ayant des gouttes de solution discontinus ou des lignes radiales de gouttes possédant un volume identique de solution.L'espace entre les spires de la spirale peut être modifié en choisissant une vitesse différente pour l'un quelconque des deux moteurs, celui de la table tournante ou bien celui qui permet de translater le stylet ensemenceur sur le milieu de culture. La vitesse de rotation de la table tournante et/ou la vitesse de translation du stylet peuvent être choisis comme constantes afin de produire une spirale de dépôt de solution avec un espace constant entre ses spires, ou bien elle peut être choisit comme variable afin de produire une spirale dont l'espace entre les spires est variable. Le choix d'une vitesse de rotation de la table et d'une vitesse de translation du stylet, quels soient constantes ou variables permet de rendre le système de dépôt plus souple et les applications du système plus nombreuses. La position de l'extrémité du stylet est contrôlée pour permettre un déplacement de celui-ci de sa position en contact avec le milieu de culture qui est utilisée pour ensemencer le milieu à une seconde position pour laquelle le stylet n'est pas en contact avec le milieu de culture. Le programme de contrôle de la position du stylet entre la première position et la seconde grace à l'entrée de données permet d'obtenir un dépôt discontinu de la solution sur le milieu de culture qui peut être réalisé sous la forme d'une série de cercles concentriques, de gouttes discontinues de solution d'une spirale ou de rayons de gouttes. La présente invention utilise un programmateur de contrôle qui contrôle la vitesse de rotation de la table tournante et la vitesse de translation du stylet en réponse aux données entrées dans le contrôleur afin de choisir un mode de dépôt d'une ligne de solution sur le milieu de culture parmi différents modes possibles. En outre, le programmateur de contrôle permet de réguler la quantité de solution déposée par le stylet sur le milieu de culture en réponse à une entrée de données. La présente invention utilise un programmateur de contrôle qui en réponse aux données qui lui sont transmises contrôle la position de l'extrémité du stylet afin que celui-ci puisse toucher le milieu de culture ou bien ne pas le toucher et ainsi rendre le dépôt intermittent. Pour déposer des gouttes de volume variable ou bien des segments précis de solution on peut programmer la position de l'extrémité du stylet et le volume déposé. Le contrôle du dépôt de la solution sur le milieu de culture grâce au programmateur de contrôle permet de réaliser des dépôts variés et d'obtenir efficacement des modifications de la quantité déposée. Les données peuvent être transmises au système par un programme qui permet de contrôler le système par un clavier ou tout autre moyen d'entrée de données adéquat, en réponse à des questions transmises via un écran de contrôle associé à un ordinateur programmé pour travailler avec le programmateur du système. Il résulte de cette faculté de programmer le système que l'utilisateur dispose d'au moins quatre variables indépendantes pour choisir la forme du dépôt de la solution.L'utilisateur peut choisir grâce à l'entrée de données, la quantité de solutions à déposer pour déposer un volume spécifié de solution ce qui permet de contrôler la sensibilité de dénombrement des micro-organismes présents dans la solution. En outre, la quantité de solution déposée peut être choisi par l'entrée de données ce qui élimine l'obligation d'avoir recourt à un changement de came mécanique comme dans les appareils antérieurs et rend ainsi beaucoup plus facile et plus efficient le passage d'une quantité à une autre. De plus la longueur totale de la ligne de solution déposée peut être choisie en entrant la valeur des données correspondantes et l'espace entre les tours adjacents des lignes est ajustable de façon fixe ou variable grâce au système des deux moteurs indépendants, d'une part pour mettre la table tournante en rotation, d'autre part pour mouvoir en translation le stylet au dessus du milieu de culture. La sélection d'une vitesse de rotation de la table tournante, cette vitesse étant choisie de manière à être inférieure à celle qui risque d'altérer la qualité du dépôt de solution à cause de la force centrifuge, permet une réduction des erreurs de coïncidence grâce à l'augmentation de la vitesse autant que possible, mais en la maintenant toujours à une valeur inférieure à la valeur critique qui risquerait de causer une superposition de deux cercles adjacents.La vitesse de rotation de la table et le mouvement en translation du stylet peuvent aussi être ralentis pour augmenter la quantité de solution déposée sur le milieu de culture, ce qui accroit la sensibilité de l'appareil pour compter le nombre de micro-organismes par unité de volume. Pour des solutions avec une très forte concentration en bactéries la quantité de solution déposée peut être réduite en augmentant la vitesse de rotation de la table tournante tout en choisissant la vitesse de translation du stylet de telle façon que les spires soient plus espacées afin d'augmenter la plage de comptage des bactéries. L'appareil pour déposer une solution sur un milieu de culture en accord avec l'invention comprend une table tournante pour supporter le milieu de culture ; un distributeur de solution pour distribuer un quantité programmée de solution sur le milieu de culture, un stylet, en liaison avec le distributeur par un tuyau, qui se déplace radialement par rapport à la table tournante grâce à un mécanisme de translation du stylet qui translate le stylet radialement afin de déposer la solution radialement au point de contact du stylet avec le milieu. Un moteur de stylet pour actionner le mécanisme de translation du stylet afin de contrôler l'avancement du stylet par rapport à la table tournante afin de permettre de sélectionner l'espacement entre les spires adjacentes de solution déposés sur le milieu de culture.Un moteur de table tournante afin de mouvoir en rotation la table tournante pendant le dépôt de la solution afin de tracer une ligne de solution sur le milieu de culture ; et un programmateur de contrôle qui contrôle au moins le moteur du stylet et le moteur de la table tournante en accord avec les données transmises au programmateur afin de sélectionner un mode de déposition de la solution déposée sur le milieu de culture, plus d'un mode de déposition étant possible. Au moins l'un des deux moteurs du stylet ou de la table tournante est un moteur à vitesse variable et le programmateur de contrôle commande la vitesse de l'un au moins des deux moteurs du stylet ou de la table tournante pendant le dépôt afin de produire le mode de dépôt sélectionné. L'invention comprend aussi un moteur de levage du stylet qui permet de positionner sélectivement le stylet à une première position où le stylet est en contact avec le milieu de culture ou bien à une seconde position où le stylet n'est pas en contact avec le milieu de culture. Le programmateur de contrôle commande le moteur de levage du stylet afin de positionner le stylet à la première ou à la seconde position en accord avec les données transmises au contrôleur afin de contrôler le temps durant lequel le stylet est en contact avec le milieu de culture ce qui permet de contrôler la longueur de dépôt de la solution quand le stylet est en contact avec le milieu de culture. L'invention comprend aussi un vérin qui contrôle le distributeur de solution afin que celui-ci produise le dépôt de solution préalablement programme. Le programmateur de contrôle commande ce vérin en accord avec les données transmises à ce programmateur afin de déposer grâce au stylet la quantité de solution spécifiée par les données. De préférence, ce vérin et chacun des autres moteurs sont des moteurs pas à pas. Ces moteurs sont contrôlés par le programmateur de contrôle afin de produire la forme de dépôt de solution sélectionnée sur le milieu de culture. Le programmateur de contrôle permet de déposer de nombreux groupes de gouttes de solution en des lieux distincts sur le milieu de culture. Les différents groupes de gouttes déposés peuvent avoir des volumes distincts en contrôlant de manière répétitive le système de levée du stylet afin de positionner le stylet dans sa deuxième position puis d'actionner le moteur de la table tournante afin de faire tourner la table tournante selon un angle prédéterminé contrôlé par le programmateur de contrôle, puis d'actionner à nouveau le moteur du système de levage du stylet afin de positionner le stylet à sa première position (sur le milieu de culture) et d'actionner le vérin de la seringue afin de distribuer un volume prédéterminé de solution et d'obtenir une goutte sur le milieu appartenant au premier groupe et après avoir obtenu au moins une goutte du premier groupe, un autre volume peut être sélectionné pour obtenir les gouttes du deuxième groupe. Les groupes de gouttes peuvent être déposés sur le milieu de culture selon des cercles concentriques, selon une spirale ou bien selon des lignes radiales. Le programmateur de contrôle permet de faire varier la vitesse du moteur du stylet pendant le dépôt de la solution pendant que le moteur de la table tournante actionne la table tournante. Le programmateur de contrôle permet au moteur du stylet de varier en fonction de la position radiale du stylet par rapport à la table tournante. Le programmateur de contrôle permet de faire varier la vitesse de la table tournante pendant le dépôt de la solution alors que le moteur du stylet actionne le stylet en translation. Le programmateur de contrôle permet de faire varier la vitesse de la table tournante en fonction de la position radiale du stylet par rapport à la table tournante. La méthode pour déposer une solution sur un milieu de culture correspondant à l'invention comprend le dépôt grâce à un distributeur contrôlé par un programmateur de contrôle d'au moins une goutte de solution dans un premier groupe sur le milieu, chacune des gouttes du premier groupe étant séparée des autres gouttes du premier groupe et ayant un volume spécifié par le programmateur de contrôle ; et déposant aussi au moins une goutte dans un deuxième groupe sur le milieu de culture grâce au distributeur contrôlé par le programmateur de contrôle , chacune des gouttes du deuxième groupe étant séparée de toutes les autres gouttes et ayant un volume spécifié par le programmateur de contrôle. Chaque groupe peut être déposé sur le milieu de culture selon des cercles concentriques, selon une spirale ou bien selon des lignes radiales. L'invention sera décrite plus en détail en regard des dessins annexés à titres d'exemple nullement limitatifs et sur lesquels La figure 1 représente une vue perspective de l'invention. La figure 2 représente une vue perspective alternative partielle de l'invention ayant une table tournante modifiée. La figure 3 représente une première forme de dépôt d'une spirale de solution sur un milieu de culture. La figure 4 représente une deuxième forme de dépôt d'une spirale de solution sur un milieu de culture. La figure 5 représente une troisième forme de dépôt d'une spirale de solution sur un milieu de culture. La figure 6 représente une série de spots déposés selon un grand nombre de cercles concentriques, les spots de chaque cercle concentrique ayant un volume différent de solution. La figure 7 représente une série de spots déposés selon des lignes radiales sur le milieu de culture. La figure 8 représente un schéma électrique du contrôleur utilisé pour contrôler les moteurs électriques de l'invention. La figure 1 est une représentation de la présente invention, qui est un appareil pour déposer une solution sur un milieu de culture selon différentes formes de dépôt sélectionnées grâce à un programmateur de contrôle 1. Un bâti 2 comprend deux plaques verticales 3 qui servent de support aux parties mobiles de l'invention. Plusieurs tiges métalliques horizontales 4 sont attachées à ces plaques verticales 3 afin de servir de support et de guide à un plate-forme mobile 5 qui est mue en translation le long de ces tiges métalliques par un moteur de stylet 6 qui actionne une vis sans fin 7 sous le contrôle du programmateur de contrôle 1 ainsi qu'il est décrit plus loin en lien avec la figure 8. La présente invention comprend une seringue 8 ayant un piston creux (non dessiné ici) qui est contrôlé par un vérin 9 sous le contrôle du programmateur de contrôle 1 décrit plus loin. Ce moteur est lié à la plate forme mobile. Lorsque le vérin 9 est actionné sous le contrôle du programmateur de contrôle 1 cela provoque le mouvement ascendant et descendant de la tige fileté 10 afin de mouvoir le piston de la seringue.Le piston a un mouvement ascendant ou descendant en relation avec un système de guidage 11 afin que le piston aspire ou éjecte une quantité contrôlée de solution qui peut contenir des bactéries ou des substances affectant la croissance et qui est déposée selon des formes variées comme il sera décrit plus loin, sur une table tournante 12 sur laquelle est posée un milieu de culture bactérien 13 comme par exemple de l'agar. L'extrémité supérieure de la seringue est raccordée à une source de vide 14.Un stylet 15 est relié par un tube à la seringue 8 qui se déplace radialement par rapport à la table tournante 12 et au milieu de culture 13 quand le moteur de stylet 6 est actionné, le vérin 9 est alors actionné après que le stylet ait été abaissé de sa deuxième position haute, comme dessiné sur la figure 1, à sa première position basse où l'extrémité du stylet 16 touche la surface supérieure du milieu de culture. Un moteur de relevage du stylet 17 contrôle le déplacement de l'extrémité 16 du stylet 15 de la première à la seconde position. Ce moteur 17 est sous le contrôle du programmateur de contrôle 1 comme il sera décrit plus loin.Ce moteur 17 déplace le bras 18 depuis une position haute qui correspond à la seconde position de l'extrémité 16 du stylet jusqu a une position basse (non représentée) qui correspond à la première position de l'extrémité du stylet. Le stylet 15 repose sur le bras 18 et pivote autour de l'axe 19. Le moteur de la table tournante 20 actionne la table tournante 12 ou bien par l'intermédiaire d'une courroie 21 (représentée sur la figure 2) et de poulies 22 et 23 ou bien directement sur l'axe 24 de la table tournante 12. La figure 2 représente une disposition alternative de la présente invention qui comprend un filtre bactérien 25 qui peut être par exemple en papier et qui est supporté par un support de filtre 26 qui peut être une grille. Le filtre papier circulaire 25 est maintenu en place par une source de vide 27 afin de permettre le dépôt de solution sur le filtre 25 au lieu de la déposer sur le milieu de culture 13. Le dépôt de solution sur un filtre permet de déposer de plus grande quantité de solution sans courir le risque que la solution soit éparpillée comme dans le cas d'un milieu de culture bactérien ordinaire comme par exemple de l'agar. La courroie 21 relie les poulies 22 et 23 afin de transmettre le mouvement de rotation du moteur 20 à la table tournante 12. Les roulements 28 maintiennent l'axe 24 de la table tournante 12 en position verticale. Le programmateur de contrôle 1, en réponse aux données entrées, sélectionne une forme de dépôt de la solution sur le milieu de culture 13, une grande variété de formes de dépôts pouvant être sélectionnée. Des exemples non limitatif de telles formes sont représentés sur les figures 3 ; 4 ; 5 ; 6 et 7. Le programmateur de contrôle 1 contrôle quatre variables indépendantes qui sont la quantité de solution que la seringue 8 distribue en réponse à l'activation du vérin 9 ; la vitesse de la table tournante 12 par l'intermédiaire de la vitesse du moteur 20 ; la vitesse auquel le stylet 15 se déplace en translation sous l'action du moteur de stylet 6 ; et la position de l'extrémité du stylet 16 du stylet 15 grâce au moteur 17. Le système grâce auquel on entre les données est décrit plus loin en rapport avec la figure 8. La combinaison des quatres variables précédemment mentionnées permet à l'utilisateur de la présente invention de contrôler la forme de déposition continue ou discontinue de la solution sur le milieu de culture comme cela est présenté plus loin en relation avec les figures 3 à 7 et ce qui n'était pas possible avec les appareils connus. Chacun des moteurs 6, 17 , 20 et le vérin 9 peuvent être contrôlés de façon numérique en mode pas à pas. Le contrôle indépendant de chacun de ces moteurs et vérin permet la sélection de formes variées de dépôt de la solution grâce à une entrée de données comme il sera décrit plus loin en relation avec la figure 8, un tel dépôt de formes variées n' était pas possible dans les appareils connus sans modification mécanique ou échange de la came, des moteurs ou des éléments de transmission des moteurs. Le moteur de stylet 6 peut être programmé pour avoir un mouvement de rotation constant lors du dépôt de la solution sur un milieu de culture 13 ou sur le filtre 25, ou bien être programmé pour avoir une série de vitesses qui peuvent être aussi bien continues que discontinues, les pas étant dans ce cas spécifiés tout au long du dépôt de la solution.La programmation d'une vitesse constante ou d'un programme de vitesses afin de faire varier la vitesse du moteur de stylet 6 est en relation avec l'entrée des données dans le programmateur de contrôle 1 comme il sera décrit plus loin en relation avec la figure 8. Si la vitesse est constante, l'espace radial entre deux tours adjacents du dépôt de la solution est fixe. Par contre si la vitesse d'avance radiale du stylet 15 est accrue ou décrue grâce à un programme de vitesses pour le moteur 6, l'espace entre des tours adjacents du dépôt de la solution seront plus ou moins grands. La vitesse de rotation de la table tournante 12 grâce au moteur 20 peut aussi bien être constante ou variée en relation avec un programme de vitesses pendant le dépôt de la solution sur le milieu de culture 13 ou 25. Il existe de nombreuses possibilités pour faire varier la longueur totale du dépôt déposé par l'extrémité 16 du stylet 15 et pour faire varier l'espace entre des tours adjacents de ce dépôt en conséquence de la variation d'au moins une des vitesses du moteur de stylet 6 ou du moteur de la table tournante 20. Par exemple, la vitesse de la table tournante peut être accrue en fonction de l'augmentation du rayon mesuré du centre du milieu de culture 13 ou 25 à l'extrémité 16 du stylet 15 afin d'obtenir plus de lignes de dépôt avec un espace réduit entre les lignes radiales quand on se rapproche de la périphérie du milieu de culture.L'augmentation de la vitesse de rotation de la table tournante 12 tout en maintenant constante l'avance radiale de l'extrémité 16 du stylet 15, en maintenant constante la vitesse du moteur de stylet 6, permet de réduire le risque d'erreurs de coïncidence entre deux ou plus de deux bactéries déposées à la même position sur le milieu de culture 13 ou 25 ce qui est un des problèmes rencontré avec les appareils connus. De plus la vitesse de rotation de la table tournante 12 peut être programmée à une vitesse juste inférieure à celle à laquelle la force centrifuge interfère avec le dépôt de la solution sous la forme d'une spirale, de cercles continus de gouttes ou de cercles discontinus de gouttes. Aussi longtemps que la vitesse de rotation de la table tournante 12 est réglé à une vitesse juste inférieure à celle qui provoque une action de la force centrifuge sur le dépôt de la solution, le risque d'erreurs de coïncidence est minimisé. De plus le contrôle d'au moins la vitesse du moteur de stylet 6 ou du moteur de la table tournante 20 afin de faire varier la longueur du dépôt effectué peut être utilisé pour augmenter la quantité totale de solution déposée sur le milieu. Le releveur de stylet 17 permet le dépôt discontinu de la solution par l'extrémité 16 du stylet 15 sur le milieu de culture 13 ou 25. Si le moteur de la table tournante 20 est arrêté en un point quelconque du milieu de culture, on peut déposer une goutte de solution sous le contrôle du vérin 9 .Si la table tournante 20 tourne d'un secteur d'angle prédéterminé alors que l'extrémité 16 du stylet 15 est en contact avec le milieu de culture 13 ou 25 dans sa première position, on obtient un dépôt sous forme de segment circulaire ou de segment spiral. La figure 3 représente un premier dépôt spiralé qui est produit par la présente invention lorsque à la fois le moteur de stylet 6 et le moteur de la table tournante 20 ont une vitesse de rotation constante tout au long du dépôt de la solution sur le milieu de culture 13 ou 25. Pendant le dépôt, la quantité de solution déposée est contrôlée par le vérin 9 afin de produire un volume décroissant de solution déposée sur la surface du milieu de culture 13 ou 25 par 11 extrémité 16 du stylet 15, cette extrémité se déplaçant radialement du centre du milieu de culture à la périphérie de celui-ci. La figure 4 représente une seconde spirale de dépôt de solution où les tours adjacents de la spirale sont plus espacés que sur la figure 3 mais sont séparés par un espace constant qui est obtenu par la présente invention quand la vitesse du moteur de stylet 6 et la vitesse du moteur de la table tournante 20 sont constantes, et que la vitesse du moteur de stylet 6 est plus grande que celle utilisée lors du dépôt de la figure 3 ou bien que la vitesse de rotation du moteur de la table tournante 20 est plus faible que celle utilisée lors du dépôt de la figure 3 ou bien que simultanément la vitesse du moteur de stylet soit plus grande et la vitesse de rotation de la table tournante plus faible que lors du dépôt de la figure 3.Pendant le dépôt, la quantité de solution déposée est contrôlée par le vérin 9 afin de produire un volume décroissant de solution déposée sur la surface du milieu de culture 13 ou 25 par l'extrémité 16 du stylet 15 alors que le stylet 15 se déplace radialement du centre à la périphérie du milieu de culture. La figure 5 représente une spirale de solution déposée par la présente invention dans laquelle la vitesse du moteur de stylet 6 est réduite et/ou la vitesse de rotation du moteur de la table tournante 20 est accrue afin d'obtenir un espace décroissant entre les tours adjacents du dépôt. Pendant le dépôt, la quantité de solution déposée est contrôlée par le vérin 9 afin de produire un volume décroissant de solution déposée sur le milieu de culture 13 ou 25 par l'extrémité 16 du stylet 15 alors que cette extrémité se déplace radialement du centre à l'extérieur du milieu de culture. La figure 6 représente le dépôt d'un volume variable de solution afin d'obtenir des groupes de gouttes qui sont déposés selon des cercles concentriques. Le volume de solution déposé sur chaque cercle concentrique est de plus en plus grand à mesure que le rayon par rapport au centre du milieu de culture augmente comme on peut le voir sur le dessin. Pour obtenir la forme de dépôt de la figure 6, le moteur de la table tournante est mu d'un angle puis est arrêté. Pour chacune des positions angulaires le moteur de la table tournante 20 est arrêté, le moteur de levage du stylet 17 est actionné afin d'abaisser l'extrémité 16 depuis sa seconde position haute jusqu'à sa première position en contact avec le milieu de culture 13 ou 25. Le vérin 9 est alors actionné afin de déposer un volume fixe prédéterminé de solution. Lorsque un cercle de gouttes est finis, le moteur de stylet 6 est actionné afin de déplacer radialement l'extrémité 16 du stylet un peu plus loin par rapport au centre du milieu de culture et de procéder au dépôt d'autres gouttes de même volume ou d'un volume différent. La forme de dépôt représentée sur la figure 6 peut être utilisée pour la méthode de comptage du Nombre le Plus Probable (NPP). Chaque goutte appartenant à un groupe de gouttes sur un cercle concentrique peut avoir par exemple pour volume le tiers du volume des gouttes du cercle concentrique voisin. L'incubation du milieu de culture ensemencé de cette façon permet en comptant le nombre de gouttes où se sont développées des colonies de déterminer la concentration bactérienne de l'échantillon. Cette méthode est utilisée de façon manuelle comme on l'a présentée précédemment, en plus de l'automatisation de la méthode, l'utilisation de l'invention permet d'augmenter la précision de cette méthode grâce à l'augmentation des répétitions représentées ici par les gouttes d'un même cercle concentrique. Une autre méthode qui peut être utilisée avec la présente invention est obtenue en déposant la solution de façon continue en une série de cercle concentriques avec un volume décroissant de solution dans chacun des cercles en fonction ae l'augmentation du rayon du milieu de culture. Chaque cercle peut être obtenu en actionnant le moteur de stylet 6 afin de déplacer l'extrémité 16 du stylet 15 vers une nouvelle position radiale. Le moteur de la table tournante 20 tourne à une vitesse constante, le moteur du levage de stylet 17 ayant été actionné pour abaisser le stylet à la première position. quand le rayon par rapport au centre du milieu de culture s'accroit, chaque cercle concentrique successif a un plus faible volume de solution par unité de longueur que le cercle précédent. Après incubation de la solution déposée, la comparaison des colonies bactériennes obtenus avec des milieux ensemencés avec des solutions de concentrations connues permet de faire une estimation de la concentration inconnue. La figure 7 représente le dépôt d'une série de gouttes radiales selon des lignes radiales du milieu de culture, chaque goutte déposée ayant le même volume. Les gouttes radiales peuvent être déposés sur un milieu de culture sur lequel on a préalablement déposé une solution de substance affectant la croissance selon une spirale dont le volume de solution déposé décroît. L'interaction de la substance affectant la croissance avec les gouttes contenant les bactéries peut alors être observé. On peut programmer la quantité de solution déposée de façon que celle-ci varie en plus de faire varier la quantité de gouttes si l'on veut étudier des différences de concentration de bactéries. Comme il a été présenté à la figure 2, un filtre pour bactérie en papier ou un autre type de filtre avec des pores plus petits que les bactéries peut être utilisé comme milieu de culture. Les modes de dépôts variés présentés ci-dessus peuvent être utilisés avec le filtre bactérien 25. La programmation du vérin 9 qui contrôle la quantité de solution distribuée permet de contrôler le volume de solution qui est filtré à travers chaque partie du filtre bactérien. En connaissant le volume qui est filtré à travers chaque partie du filtre bactérien 25, le dénombrement des bactéries sur cette partie du filtre bactérien peut être utilisée pour déterminer la concentration bactérienne d'une manière analogue à celle utilisée avec le milieu de culture 13. Habituellement, le filtre bactérien 25 est placé sur de l'agar nutritif qui permet aux nutriments de l'agar d'être accessible à travers les pores du papier filtre afin de permettre aux bactéries de se multiplier et de devenir des colonies visibles sur le papier filtre que l'on peut compter. La table présentée ci-dessous est un exemple de réalisation de la programmation pouvant être utilisée pour actionner le moteur de stylet 6, le vérin 9, le moteur de relevage du stylet 17 et le moteur de la table tournante 20. Les moteurs pas à pas peuvent être actionnés grâce aux réglages suivants. La présente invention n'est bien sur pas limitée à cette information donnée à titre d'exemple. Commandes des vitesses des moteurs pas à pas PROGRAMME SERINGUE TABLE STYLET POSITION STYLET (Dépôt) (9) (20) (6) haut/bas (17) Lignes radiales constante arrêt constant bas (Fig. 7) Log décroissant log - croissant constant bas (spirale Log croissant log + décroissant constant bas (spirale) Constant croissant constant constant bas (plus rapide) NPP pas à pas constant pas à pas haut/bas dessin pas à pas arrêt/ arrêt/ haut/bas (Fig. 6) constant marche marche Un exemple de formule permettant de déterminer les actions des moteurs est expliqué ci-dessus. Une formule générale pour réaliser un dépôt selon un log décroissant est y = A- A(l/B)X où y = volume distribué A = Volume total B = facteur de division x = distance linéaire (par rapport au centre du milieu de culture) Dans l'exemple suivant le facteur de division est 3 et A=l00microlitres. x=0 y = 100-100(1/3)0 = O x=0 1 y = 100-100(1/3) ,1 =10,41 microlitres x=1 y = 100-100(1/3)1 = 66,67 microlitres x=2 y = 100-100(1/3)2 = 88,99 microlitres Le vérin pas à pas 9 possède 100 pas par révolution et une révolution déplace le piston de la seringue de 0,5 millimètres. Pour distribuer 250 microlitres de solution le piston de la seringue se déplace de 60 mm. On dépose un total de 4,16 microlitres/mm de solution pour 200 pas ce qui correspond à 0,0208 microlitres/pas. Cette formule peut être entrée dans le programmateur de contrôle 1 grâce aux techniques de programmation connues. Il est évident que ces formules et ces modes de commandes des moteurs sont donnés à titre d'exemple et ne représentent qu'une des formes de dépôts réalisable avec la présente invention. La présente invention possède aussi la possibilité de nettoyer automatiquement la seringue 8 entre deux dépôts de solutions différentes. Le moteur de stylet 6 est alors actionné pour déplacer l'extrémité 16 du stylet 15 depuis le milieu de culture 13 ou 25 jusqu'à l'emplacement où la solution résiduelle présente dans la seringue après un ensemencement peut être expulsée de la seringue dans un récipient prévu à cet effet. quand l'ancienne solution a été expulsée, on peut rincer la seringue en aspirant un liquide nettoyant puis expulser celui-ci dans un récipient prévu à cet effet. La nouvelle solution peut alors être aspirée de la même manière que la précédente l'a été grâce à une source de vide.Le moteur de stylet est alors actionné de nouveau afin de déplacer l'extrémité 16 du stylet 15 vers sa position antérieure sur le milieu de culture et permettre le dépôt de la solution qui vient d'être aspirée. Cette procédure automatique de nettoyage du stylet n'est pas réalisable avec les ensemenceurs connus. De plus il est évident que la présente invention n'est pas limitée au dépôt d'une solution de façon radiale depuis le centre du milieu de culture vers l'extérieur de celui-ci, mais qu'on peut tout aussi bien déposer la solution depuis la périphérie du milieu de culture vers le centre en inversant le sens de rotation du moteur de stylet 6. La figure 8 représente le mode de contrôle électrique 29 de l'appareil représenté sur la figure 1. Les parties identiques sont identifiées par des références identiques dans les figures 1 à 8. Le programmateur de contrôle 1 est connecté de préférence avec un ordinateur personnel qui comprend un clavier et un écran. Le programmateur de contrôle 1 est programmé avec un programme qui permet de visualiser sur l'écran un menu de programmation qui indique à l'utilisateur les paramètres qui doivent être entrés dans le système par l'intermédiaire du clavier ou d'un autre moyen d'entrée des données. afin de sélectionner le mode de dépôt sur le milieu de culture 13 ou sur le filtre bactérien 25.Le menu de programmation qui est visualisé de façon séquentielle sur l'écran demande à l'opérateur d'insérer les données relatives à l'actionnement du moteur de stylet 6, du vérin 9, du moteur de levage du stylet 17 et du moteur de la table tournante 2 O. Le moteur de stylet 6 grâce aux données entrées dans le programmateur de contrôle 1 peut être programmé en vue d'obtenir une vitesse constante ou bien une vitesse croissante ou bien une vitesse décroissante ou bien une vitesse discontinue avec des intervalles de temps sélectionnés entre chaque arrêt, ou bien une vitesse nulle.Le vérin 9 grâce aux données entrées dans le programmateur de contrôle 1 peut être programmé en vue d e distribuer différentes quantités de solution telle que, c elle utilisée dans les ensemenceurs connus et en plus celles permettant d'obtenir les dépôts présentés précédemment ainsi que ceux représentés par les figures 3 à 7. Contrairement aux ensemenceurs connus où seul la quantité de solution distribuée était variable grâce à un réglage mécanique fastidieux et donc constituait la seule variable indépendante modifiable, la présente invention possède en plus du vérin de distribution 9 trois autres variables indépendantes programmable, ces quatres variables étant utilisées pour obtenir aisément des dépôts variés grâce à l'entrée de données dans le programmateur de contrôle 1.Le moteur de relevage du stylet 17 grâce aux données entrées dans le programmateur de contrôle 1 peut être programmé en v u e de contrôler la position de l'extrémité 16 du stylet 15 et de permettre son déplacement depuis sa première position où il est en contact avec le milieu de culture 13 ou le filtre bactérien 25 vers sa seconde position haute où le dépôt est interrompu.Le moteur de la table tournante 20 est programmé de façon à obtenir soit une vitesse de rotation constante de la table tournante 12, soit une progression angulaire pas à pas de la table tournante, soit une vitesse progressivement croissante e n fonction de l'augmentation de la distance séparant l'extrémité 16 du stylet 15 par rapport au centre du milieu de culture 1 3, soit une vitesse progressivement décroissante en fonction de l'augmentation de la distance séparant l'extrémité 16 du stylet 15 par rapport au centre du milieu de culture 13. Chacun des moteurs et vérin sont de préférence de type pas à pas ce qui permet au programme enregistré dans le programmateur de contrôle 1 de commander précisément chaque incrémentation angulaire des mouvements des différents moteurs et vérin. L'exécution du programme par le programmateur de contrôle 1 résulte des commandes envoyés aux différentes interfaces associées aux moteurs et vérin. Chaque commande spécifie soit un incrément angulaire isolé, soit un certain nombre d'incréments afin de mouvoir le rotor des moteurs ou la pièce en déplacement linéaire du vérin qui est sélectionné. De nombreux moteurs pas à pas possèdent au moins deux niveaux de résolution. La présente invention peut grâce au programmateur de contrôle 1 utiliser plus d'un niveau de résolution grâce aux commandes envoyés par ce programmateur 1 en vue de sélectionner un niveau de résolution déterminé en fonction des données entrées préalablement dans ce programmateur 1. Chacun des moteurs et vérins possède une interface associée qui inclue les composants électroniques qui permettent de commander ces moteurs et vérins.Chacune des interfaces peut être une interface séparée ou bien les différentes interfaces peuvent être inclues dans une carte d'interface unique contrôlant les moteurs et le vérin et possédant un seul microprocesseur. La présente invention peut être réalisée avec n'importe quel mode de contrôle conventionnel des moteurs. I1 va de soi que de nombreuses modifications peuvent être apportées à l'appareil et à la méthode décrits et représentés sans sortir du cadre de l'invention. Par exemple, le dépôt de la solution peut être commencé sur la circonférence extérieure du milieu de culture 13 ou du filtre bactérien 25 et la solution déposée en décrivant une spirale vers l'intérieur de ce milieu de culture d'une manière opposé à ce qui est réalisé avec les ensemenceurs connus. De plus bien que des exemples de formes de dépôt non réalisable avec les appareils connus aient été décrits, il va de soit que la combinaison des quatres variables indépendantes programmables de la présente invention permettent de réaliser de nombreuses autres formes de dépôts de solution bactérienne ou de substances affectant la croissance sur un milieu de culture 13 ou un filtre bactérien 25. REVENDICATIONS 1. Appareil destiné au dépôt de solutions sur un milieu de culture (13) ou (25), caractérisé en ce qu'il comprend une table tournante (12) supportant le milieu de culture (13) ou (25) en rotation un distributeur de solution (8) afin de distribuer un volume programmé de solution qui est déposé sur le milieu de culture (13), un stylet (15) connecté grâce à un tuyau au distributeur de solution (8) ce stylet (15) se déplaçant radialement par rapport à la table tournante (12) grâce à un mécanisme de translation du stylet (5) qui translate le stylet (15) radialement et permet de déposer la solution radialement sur le milieu de culture, un moteur de stylet (6) qui actionne le mécanisme de translation du stylet (5) afin de contrôler la vitesse d'avancement radiale du stylet (15) par rapport à la table tournante (12) et de permettre la sélection de l'espace entre les tours adjacents de solution déposée sur le milieu de culture, un moteur de table tournante (20) qui permet de mouvoir la table tournante (12) en rotation pendant le dépôt de la solution sur le milieu de culture, et un programmateur de contrôle (1) qui permet de contrôler au moins le moteur de stylet (6) et le moteur de la table tournante (20) en réponse aux données entrées dans ce contrôleur afin de sélectionner une forme de dépôt de la solution sur le milieu de culture (13) ou (25), plus d'une forme de dépôt étant sélectionnable. 2. Appareil selon la revendication 1, caractérisé en ce que au moins l'un des deux moteurs (6) et (20) respectivement du stylet (15) ou de la table tournante (12) est un moteur à vitesse variable et que le programmateur de contrôle (1) fait varier la vitesse de l'un des deux moteurs (6) et (20) du stylet (15) ou de la table tournante (12) pendant le dépôt de la solution afin d'obtenir la forme de dépôt sélectionnée. 3. Appareil selon l'une des revendications 1 et 2, caractérisé en ce que le stylet (15) est actionné par un moteur de relevage du stylet (17) afin de positionner le stylet (15) soit en une première position où le stylet (15) est en contact avec le milieu de culture (13) ou (25) soit en une seconde position où le stylet (15) n'est pas en contact avec le milieu de culture (13) ou (25) et en ce que le programmateur de contrôle (1) contrôle le moteur de relevage du stylet (17) afin de positionner le stylet (15) à la première ou à la seconde position en réponse aux données entrées dans ce programmateur de contrôle (1), et le temps durant lequel le stylet (15) occupe chacune de ces positions. 4. Appareil selon l'une des revendications précédentes, caractérisé en ce que le distributeur de solution (8) est actionné par un vérin (9) afin de contrôler la distribution de solution et en ce que le programmateur de contrôle (1) contrôle le vérin (9) conformément aux données entrées dans le programmateur de contrôle (1) afin de contrôler la quantité de solution déposée par le stylet (15). 5. Appareil selon l'une des revendications précédentes, caractérisé en ce que le moteur (20) de la table tournante (12) et le moteur (6) du stylet (15) sont des moteurs pas à pas contrôlés par le programmateur de contrôle (1). 6. Appareil selon la revendication 4, caractérisé en ce que le programmateur de contrôle (1) permet de déposer de nombreux groupes de gouttes de solution en des lieux distincts du milieu de culture (13) ou (25) chaque goutte d'un groupe de gouttes différent étant déposée avec un volume différent en actionnant le moteur (17) de relevage du stylet (15) afin de positionner le stylet (15) à sa seconde position, puis en actionnant le moteur (20) de la table tournante (12) afin de faire tourner la table tournante (12) d'un angle prédéterminé contrôlé par le programmateur de contrôle (1), puis en actionnant à nouveau le moteur (17) de relevage du stylet (15) afin de positionner le stylet (15) à sa première position et puis en actionnant le vérin (9) afin de distribuer une goutte de solution sur le milieu de culture (13) ou (25) dans le premier groupe et après avoir déposé au moins une goutte dans le premier groupe en changeant le volume de solution déposée pour les gouttes du premier groupe pour un volume destiné à déposer au moins une goutte dans le second groupe. 7. Appareil selon la revendication 6, caractérisé en ce que les groupes de gouttes sont disposés en cercles concentriques sur le milieu de culture (13) ou (25). 8. Appareil selon la revendication 6, caractérisé en ce que les groupes de gouttes sont disposés selon des lignes radiales sur le milieu de culture (13) ou (25). 9. Appareil selon la revendication 2, caractérisé en ce que le programmateur de contrôle (1) permet de faire varier la vitesse du moteur de stylet (6) pendant le dépôt de la solution sur le milieu de culture (13) ou (25) alors que le moteur (20) de la table tournante (12) actionne la table tournante (12) en rotation. 10. Appareil selon la revendication 9, caractérisé en ce que le programmateur de contrôle (1) permet de faire décroître la vitesse du moteur de stylet (6) en fonction de la distance séparant le stylet (15) du centre de la table tournante (12). 11. Appareil selon la revendication 9, caractérisé en ce que le programmateur de contrôle (1) permet de faire varier la vitesse du moteur (20) de la table tournante (12) pendant le dépôt de la solution sur le milieu de culture (13) ou (25). 12. Appareil selon la revendication 11, caractérisé en ce que le programmateur de contrôle (1) permet de faire décroître la vitesse du moteur (20) de la table tournante (12) en fonction de la position radiale du stylet (15) par rapport à la table tournante (12). 13. Procédé pour le dépôt de solutions sur un milieu de culture (13) ou (25), caractérisé en ce qu'il comprend le dépôt d'au moins une goutte de solution, grâce à un distributeur (8) contrôlé par un programmateur de contrôle (1), dans un premier groupe sur le milieu de culture, chaque goutte de solution du premier groupe étant séparée de toutes les autres gouttes du premier groupe et ayant un volume spécifié grâce au programmateur de contrôle (1), et en ce qu'il comprend le dépôt d'au moins une goutte de solution grâce au distributeur (8) contrôlé par le programmateur de contrôle (1), dans au moins un second groupe sur le milieu de culture, chaque goutte de solution du second groupe étant séparée de tout autre goutte et ayant un volume spécifié grâce au programmateur de contrôle (1). 14. Procédé selon la revendication 13, caractérisé en ce que chaque groupe est disposé selon des cercles concentriques sur- le milieu de culture (13) ou (25) et en ce que les gouttes de différents groupes ont des volumes différents. 15. Procédé selon la revendication 13, caractérisé en ce que chaque groupe de gouttes est disposé selon une ligne radiale sur le milieu de culture (13) ou (25).