Brevet FR2693656A3 — publié le 19940121

FR 2693656 A3 19940121 FR 9307787 A 19930625 La confirmation du succès de la significance claire de mon innovation précedente doit être ma recommendation pour l'élec tion à l'Academie des Sciences par le Président de l'Academie des Sciences Professeur Jean Hamburger SEULEMENT pour l'inno- vation incluant la base pour le procédé révolutionnaire de la structure générale de l'action des récepteurs (V-3E). Les origines de cette innovation étaient établies par Zagyansky et Nezlin (Academie des Sciences, Moscou, ex-URSS) (Refs./505/: Adv.Immunol.-1990). Pour ma lettre, accompagnant l'innovation, avec le texte: "Après l'amas des découvertes, je vous' demand une chose simple: la petite lettre de la recommendation pour l'élection cette année à l'Academie des Sciences Française, mais seulement dans le cas si pendant au moins 5 ans, vous ne trouvez pas quelque chose plus importante dans toute l'immunologie Mondiale..", j'ai reçu la réponse du Président de l'Academie des Sciences:: "Je vous remercie des documents que vous avez déposé dans ma boîte à lettres. (Publication d'Application Française N 2609398-Y.Z.) Les éléctions de membres de l'Academie des Sciences n'ont lieu que tous les trois ans et elles viennent de se terminer cette année. J'ajoute, pour votre information, que la sélection dans notre domaine est très difficile puisqu'en moyenne nous n'avons que deux postes chaque année et que les illustrés sont, vous le devinez, innombrables. J'éspère que ces informations vous seront utiles et Je vous demande de croire, mon cher Confrère, à l'assurance de mes meilleurs sentiments.' Liste des abrevations principales. li- acide arachidonique (AchR)- récepteur de l'acetylcholine AchE- acetylcholinestarase CL cathépsine L CMH- complexe majeur de l'histocompatibilité ConA- Concanavaline A CSPG- chondroitine sulfate protéoglycane D- distance "stragger" égale à 67 nm DG- diacylglycérol DPH- dihydropyridine DSPG- dermatine sulfate protéoglycane EGF- facteur de croissance epidermique EPG- courant de plaque motrice (end- plate current) ER- réticulum endoplasmique b(a)FGF- facteur de croissance des fibroblastes basique-(acide) (bFGFR)- récepteur de bFGF FN- fibronectine GAG- glycoseaminoglycane GuCl- guanidine de chlorure EA- acide hyaluronique HSPG- héparane sulphate protéoglycane IP3- inositol I,4,5- triphosphate IP4- inositol I,3,4,5- tétraphosphate LB- lame basale LD- lamina densa LDL- lipoprotéine de basse densité LL- lamina lucida IN- laminine MEC- matrice extracellulaire MP- membrane plasmique MTJ- jonction de myotendon NGF- facteur de croissance nerveux Nd-~nidogène NMJ- jonction neuromusculaire PA- acide phosphatidique PAF facteur d'activation des plaquettes ph - phospholipase A2 phC- phospholipase C PI- phosphatidylinositol PIP- phosphatidylinositol 4-phosphate PIP2- phosphatidylinositol 4s5-biphosphate PEC- protéine kinase C RER- réticulum endoplasmique rugueux RNP- particles de ribonucléoprotéines SR- réticulum sarcoplasmique TGF- ss -facteur de croissance transformant-f facteur de tumeur nécrosée TT- tubules T TTX- tétrotoxine VN- vitronectine I.Confirmations postérieures de la structure générale de l'action des récepteurs. Les développèments postérieurs de la structure générale de l'action des récepteurs proposée par moi plus tôt /I,2/ aussi bien que la file récente et croissante des confirmations indiscutables des parties essentielles de cette structure générale multipas dans le monde de la literature (qui inclut les parties- clés de la physiologie cellulaire) doivent avoir l'influence appréciable sur le développement de la biologie cellulaire et générale. Je mentionnerai ci-dessous quelques développements récents de la physiologie cellulaire qui confirment ma structure générale. Les données concenrnant les réseaux des glycoprotéines et glycolipides particuliers pour chaque signal (glycorécepteur Fgangli- osides -cérébrosidesor ) ) /I,2/ ont été confirmées récemment: les modeles différents des complexes membranaires des glycoprotéines /associés avec les récepteurs IgM membranaires (immunoglobuline M) et IgD/ leur permettant de transmettre les signaux différents /3/. En outre, on a confirmé que telles structures des glycolipides et des glycoprotéines se changent réelement pendant le signal /4,5/, et les interactions spécifiques (in situ) entre (par exemple) les gangliosides des structures similaires ont lieu réelement /6/: une structure pour l'interaction du ganglioside (gangliotriaosylcéramide) était identique (dans la grande partie) à un autre ganglioside (GM3) pour les superpositions de la "chaise" hydrophobe avec l'aide des liaisons hydrogène /I,2/. Tels carbohydrtates (appartenant au réseau: glycorécepteur#gangliosides#cérébrosides# ...) participent réelement dans la création du site actif optimal adapté pour le ligand /7/. Une importance du déplacement de l'eau pour la stabilisation de la superposition des "chaises" (anneaux) carbohydrates, superposées pendant l'action du signal selon /I,2/, était confirmée après un échange de la solution de l'eau pour les solutions avec diméthylsulfoxide ou saccharose /8,9/: il y a un ralentissement et une interruption de l'endocytose comme le résultat. Évidemment, une modulation de tels complexes des carbohydrates par les charges fortes doit perturber l'activité cellulaire et on l'a confirmé parce que pendant une augmentation de la concentration du calcium extérieur il y avait une suppresion de la sécrétion et de la croissance de la glande parathy roïde /IO/ (reg. ci-dessous).Un rôle proposé des channes très longues des acides gras pendant la transmission du signal dans la couche mëmbranaire intérieure pour la création des niches pour les molécules cellulaires intérieures était confirmé aussi /II/ Une création des zones de la motilité latérale restreinte pendant le signal, comme une conséquence de la structure générale, proposée par Zagyansky et Jard (Collège de France,Paris) /I2,I3/ par les mesures (avec l'interprétation imativement proposée mais uniquement correcte) des mazes ligands sur les mêmes cellules par les deux méthodes dynamiques physiques dif férentes (recuperation de la fluorescence après photodécoloration- proposée par Edidin et Zagyansky /Johns Hopkins University -USA/ /I4/ et le champ électrique /I5/- les deux méthodes concernent une cellule isolée vivante) ET avec la méthode de photodécolorations successives /I2,I6/. La création de telles zones était confirmée avec la variation de la valeur de la surface de la tache du laser huit années plus tard /I7,I8/. La création de telles zones lipidiques pendant l'action du signal avec la parti cipation du choléstérol était confirmée avec l'antibiotique polyenoïque qui interagit spécifiquement avec le cholestérol /I3/. Récemment, le dernier fait était confirmé aussi /I9/. En outre la mobilité des trois récepteurs différents marqués par le ligand et par les anticorps était observée directe- ment par l'analyse à l'échelle des nanomètres. Elle était limitée à la petite région de la membrane /20/ confirmant encore la structure générale de l'action des récepteurs /I,2/. Le rôle proposé de l'endocytose comme le moyen de régulation (mais pas de transduction du signal "direct" /I,2/) était con firmé aussi clairement /2I/. (Il n'y avait pas d'initiation de la synthèse de l'ADN stimulé par le facteur de croissance pendant une inhibition de la tyrosine kinase ET pendant l'endo- cytose normale).Aussi, selon la structure faite /I,2/, on a confirmé que l'endocytose fasse la régulation négative du signal "direct" (une inhibition d'une production du second messager était enrégistrée, justement seulement dans les cellules où on a observé ltendocytose des récepteurs et l'analyse cinetique /de telle régulation par sensibilité diminuée/ de tel récepteur EGF a démontré la compatibilité de tels événements) /22/. La preuve, que le courant soutenu de Ca2+ (apparant après 5 secondes) n'implique pas des protéines G /23/, confirme la structure spéciale micellaire rotatoire du courant soutenu de Ca proposée par moi /I 2/. Mais tel développement est encore loin d'être achevé. Je présente ici l'amas des découvertes- les conséquences dévelopuées de ma structure générale qui renversent plus loin les fondations de la biologie cellulaire et générale et de la médicine par conséquence. Les principaux moyens nouveaux et pratiques contre les maladies comme athérosclerose,diabète, rachitisme,dystrophie sont les conséquences radicales de ce développement. ÉvIDrMMiNT LA COMPRÉHENSION DE CES NOUVELLES DECOUVERTES EST BASEE SUR LA CONNAISSANCE DE LA STRUCTURE G- NÉRALE /I,2/. II.La structure principale complète de la matrice extracel lulaire et le rôle de sa structure pour le signal "direct". La matrice extracellulaire (MEC) a le rôle important dans la différentiation cellulaire, les communications intercellulaires, le développement et la vie des tissus, des organes et des orga nismes. Mais sa réele structure complète était inconue /24, 25/. Prenant en considération: I)la loi de régles des interactions intercarbohydrates /I,2/ des protéoglycanes (qui sont les glycoprotéines au meame temps), des collagènes et des fibronectines dans la région essentielle de la structure de MEC-les noeuds de support de leurs interactions mutuelles; 2) l'importance des localisations des charges lourdes dans la MEC pour la modulation du réseau des liaisons intercarbohydrates et interlipidiques hydrogène pendant le signal cellulaire /I,2/ pour la fonction cellulaire et 3) les autres données, je propose la structure principale complète de la matrice extracellulaire qui doit avoir un rôle apprécié dans la biologie cellulaire et générale et dans la Médicine par conséquence. I.Le rôle fondamentale des carbohydrates dans la fonction du collagène. On peut voir que les carbohydrates jouent le rôle dans la structure du collagène et le rôle important dans l'interaction du collagène avec les composants de MEC: protéoglycanes (PG) et fibronectines (FN). La resolution de la structure compliquée des interactions du collagène, ayant la partie essentielle dans la MEC, aidera de resoudre la structure générale de la construction de MEC. Le collagène, qui est le composant de la MEC peut former la microfibre /26,27/, la fibre /28/ou meame le brin contenant une simple triple hélice (comme le collagène IY dans la matrice mesangliale /29/). Les données nombreuse montrent que les carbohydrates participent dans les liaisons croisées du collagène. Le collagène I, II et III ont les quatre principaux points des liaisons croisées /30/ (Fig.I). I1 y a les deux liaisons dedans des sites télopeptidiques (grâce aux lysines formant les aldéhydes: une près de chaque extrémité de la molécule) et les deux liaisons sont situées dedans des sites de la triple hélice /hydroxylysines: situées symétriquement à 0.4D (où D=67 nm) de chaque extremité du monomère de collagène de p.m. 300 kDa/ /30/.Ces deux ou une hydroxyllysines (qui participent dans la liaison croisée du collagène) sont glycosylées et, logiquement, aident à la liaison croisée /31,32/. En outre, on peut conclure que ces carbohydrates jouent la partie essen tielle dans cette liaison croisée avec l'interaction selon la structure des superpositions homologues des structures "chaises" /I,2/:I)La présence usuelle des carbohydrates du collagène est près de la région de "trou" des contacts entre les triples hélices ( "0,6D- espaces")des fibres /32,33/; 2).L'anlèvement ou l'oxidation du collagène (tendon) conduissent à l'augmentation du désordre /34/ et un délai de la polymérisation des brins monomères /35/; 3).Avec la déhydratation des fibres dans l'huile ou dans le glycérol il y a une augmentation du désordre en comparaison avec les solutions d'eau (justement conformant la structure des superpositions carbohydrates homologue avec le déplacement de l'eau /I,2/) /34/; 4).Il y a une inhibition de la formation.de la fibre (fibre apparaît plus fine) après le lien avec les protéoglycanes (PG) (les PG sont, aussi, les glycoprotéines contenant les chaînes des oligosaccharides:O et N- liées) /36,25/, après telles interactions avec PO, la capacité du collagène de contracter pendant l'interaction avec la cellule est reduite: apparemment, les carbohydrates homologues du collagène et ceux de la cellule font 11 interaction et éliminent l'eau intercalée provoquant la contraction du collagène avec la déhydratation /36/; 5)oEn regardant plus précisement, on voit qu'il n'y a pas. de codistribution parfaite entre PG-2 (protéoglycane) et les microfibres du collagène NI (3050 i diamétre) /3.7/ (reflétant le fait qu'une partie de carbohydrates du collagène participe dans l'interaction intracollagène (Fig.I) et une autre partie est libre pour l'interaction avec PG-2 (Fig.2). Le schéma principal de l'arrangement et de la liaison croisée, assemblant les micrifibres du collagène avec 5 triple hélices, est aussi illustré (Fig.I). En outre, tels carbohydrates de collagène (galactose- monosaccharide et galactose-glucose- disaccharide), qui ne participent pas à la formation des fibres, doivent jouer le rôle important dans les interactions du collagène parce que, par exemple, le résidu de galactose du facteur- protéine de Willebrand est essentiel pour l'interaction avec le collagène (justement confirmant les interactions homologues: galactose-galactose dans ce cas) /38/ et l'oxidaticn du collagène avec periodate conduit à l'inhibition de la réaction de la libération des plaquettes pour leur adhésion /35/ /logiquement,il n'ya plus d'interaction entre les collagènes et les PG par les carbohydrates (Fig02)/. On voit bien la première fois dans une preuve exceptionelle de cette structure que la quantité des brins dans le microfibre ne doive entre que 5 (!) parce que la longueur (avec le "trou") des chaînes du collagène dans le brin est aussi 5 (!) D et le déplacement des brins est égal à 11). C'est-à-dire ce déplacement (ID) garantit l'interaction entre les extremités des brins pour l'assemblage et le nombre 5 de ces brins garantit l'interaction dans le microfibre (évidemment, spécifique) entre le brin"N01"et ',N05". De plus cette "céleste" unité (ID x 5 =5D) (nommée microfibrile) de 5 brins doit être la partie fondamentale de plus hautes hiérarchies des ensembles du collagène cadrant ces interactions (Fig.I) parfaites.Les bonnes interactions (sans déplacement) entre les microfibres doivent être garanties par leurs carbohydrates encore libres (strictement localisés) et les protéoglycanes unifiantes (Fig. 2).Dans ce sens, la création de l'épaisseur de l'agglomération du collagène ("fibrille","fibre") par les moyens des interactions peut être dictée par les circonstances courantes (in situ) de MEC ou de LB (lame basale). 2.Interactions mutuelles: collagène-P;-FN sont les noeuds vitals de MEC. Il est possible même de caractériser plus précisément la structure de ltinteraction de PG avec le collagène. Selon /39/, la petite molécule de dermatane sulfate PG (1)SP) du tendon bovin fait l'inhibition de la flbrogenèse du collagène I (Tendon bovin) et de collagène Il (cartilage bovin). La digestion avec la chondroitinase ne change pas telle inhibition /39/ et cette enzyme ne change pas l'interaction entre PG-2 et collagène VI /37/. La dernière interaction est, aussi, resistante au traitement avec la solution de détergent non ionique NP4O (I%) et SDS (o,%) (temperature ambiante) soulignant la partie néglegeante des interactions hydrophobes.Mais le traitement avec l'alcali faible (O,I NaOH, 2 C) élimine cette inhibition /39/. Évidemment, pendant tel traitement, tous carbohydrates /glycosaminoglycanes (GAG) et chaînes N et O- liées/ étaient enlevés. Donc, les faits ci-dessus doivent signifier que ce soitent les carbohydrates de chaînes N et 0- liées (mais pas GAG) qui participent dans l'interaction de PG avec le collagène.La dissociation de la liaison PG-2 - collagène dans la solution de NP4O (I) et SDS (0,5%) pendant le bouillonnement prouve la haute valeur de l'énergie des interactions homologues intercarbohydrates /I, 2/o Aussi selon /39/, les autres PG des tissus différents ne font pas de telles inhibitions étant spécifiques pour le tissu /Refs. 40/ parce qu'il y a une haute spécificité de la glycosylation pour les tissus (et les espèces) /41/ quoique les "résidus" protéiniques de PG (de type analoques) sont semblables entre les tissus (et espèces) différents /Refs.42;43/0 Ce fait important m'aide de développer la nature des interactions entre PG, collagène et FN.Un autre fait confirme cette position: les zones de la liaison périodique de P&commat; PG (D=67 nm) au collagène sont situées (généralement) entre les bandes périodiques d et a4 /28,44,45/. La région établie de la présence des carbohydrates (reg. ci-dessus) est dans la même région' L'origine de telle périodicité hautement ordonnée (jusquau 20 ordres /27/) des fibres (et microfibres) du collagène (démontrée par les investigations de microscopie électronique et des rayons X) est basée dans la structure primaire des chaînes de collagène /46/ (notamment, dans la séquence des acides aminés polaires et hydrophobes /26/). I1 y a l'invariabilité des locations ("domaines") des interruptions (en majorité) dans la triple hélice de la molécule de collagène parmi des espèces différentes /47,48/.Ce fait confirme l'importance d'une particularitd de la séquence des acides aminés dans la fonction du collagène. I1 y a un certain nombre des expériences montrant que la présence de composants majeurs de MEC (EN, PG ou collagène) soit nécessaire pour la création de la matrice ZEC-semblable dans l'éprouvette /49-52/. Visiblement, les interactions coopératives de GAG facilitent leurs interactions avec FN /53/. Cette forte facilitation de l'interaction coopérative est basée sur l'autoagrégation (intra et intermoléculaire) et bien démontrée par Fransson avec collaborateurs et les autres auteurs /54-57/.Et la désintérgation de PG avec l'alcali (qui sépare les chaînes GAG et les chaînes carbohydrates) ou avec la papaine (qui digère la protéine en fragments avec le nombre réduit des chaines carbohydrates) produit telle capacité de PG de précipiter le collagène et FN pour faire la MEC dans l'éprouvette /58/. La présence des sites dans la molécule FN pour l'interaction avec GAG est bien connue/53/. Donc, je conclus qu'il ait l'interaction entre PG, le collagène et FN dans le noeud avec l'aide de la ',bivalence" de PG: ses chaînes glycosylées font les interactions homogènes avec les résidus de sucre du collagène et ses chaînes de GAG font l'interaction avec les sites spéciales de FN, logiquement, avec l'aide des charges (Fig.2). L'interaction coopérative de plusieures chaînes de GAG conduit à l'augmentation forte de leurs interactions avec FN /53/. 3. L'arrangement principal spatial de MEC. Toutes les MEC développées (sauf la lame basale) conteniront la FN avec le temps à cause de la déposition de PN synthétisée (plus tard) par les cellules (pendant la formation des contacts focals) (V). Les travaux immunohistochimiques, qui montrent l'interaction entre la EN et le collagène, m'aide faire le tableau principal et général de la structure de MEC. La localisation histochimique de EN dans la culture des fibroblastes montre la FN pendant son interaction avec le collagène dans la MEC comme le nombre de lignes des filaments de FN avec la distance répétée de 70-IOQ nm /59/ (Fig.3). Cette périodicité peut correspondre bien à la longueur des monomères de FN /60/. La microscopie électronique des microfibres du collagène avec le diamètre 40 nm (par le metal de contrecoloration) montre l'arrangement périodique des molécules de EN avec la périodicité 70 nm (bien correspondant à la valeur de la distance "stragger" périodique du collagène- D=67 nm) /6 La longueur de la zone occupée par FN sur les fibres du collagène est égale approximativement, à la zone inoccupée (Fig.8 de /6I/. (Cela signifie qu'elle s'étend à près de 35 nm).On peut voir aussi que le collagène (qui décore la FN) et le collagène "libre" aient la coloration semblable avec les anticorps contre le collagène. Ce fait indique, visiblement, la présence des PG dans les zones du collagène qui sont nécessaires pour l'at-tachement de EN (reg. ci-dessus) où les PG occupent ainsi près de la moitié de la longueur (zones d-a47 du collagène dans une structure périodique. De plus, selon /28/, les zones périodiques d-a4 (les sites établis d'un attachement de PG) cor respondent au sites de l'interconnection avec le réseau des tissus conjonctifs, ctest-à-dire à la FN. Alors, on peut conclure: l'axe ylang de la molécule de FN avec la longueur approximativement 60-70 nm /60/ est situé perpendiculairement à l'axe long de la molécule de collagène.D'après la vue plus précise (Fig.8 de /6I/) (reg.aussi Figo4), on peut voir que tels filaments des molécules de FN sont semblables aux ceux dans /59/ décrits ci-dessus (Fig.3). On observe que telles (Figs.3,4) fibres extérieures de FN aillent souvent dans la direction perpendiculaire à la membrane et elles sont associées etroitement avec les fibres cellulaires (stationnaires) cytoplasmiques de l'actine (diamètre 5 nm). Le diamètre des fibres de PN varie avec les conditions /59, 6I,62/ parce que la FN a la conformation très dynamique avec la flexibilité segmentale profonde /63,64/. Par exemple, après un attachement du peptide du collagène il y a une augmentation de la flexibilité de la chaîne de FN /65/ Cela donne à la FN la meilleure adaptation pendant le dévelopoement de MEC. Aussi, la réduction de la liaison disulfure de FN conduit au dépliage de sa structure /66/. Les sites des interactions entre les dimères de FN sont for més à- partie-NE2 de la molécule (près du site de l'attachement du collagène) /67/. Le développement de la matrice est inhibé par les anticorps contre le domaine-NH2- terminal ou contre le domaine voisin de l'attachement du collagène /68/. Même les fragments des domaines NH2-terminals sont inhibiteurs pour tel développement /69/. Quoiqu'il y a les deux groupes SH libres dans chaque monomère de FN /70/ mais la liaison croisée a place avec l'échange disulfure par le réarrangement des liaisons disulfures intramoléculaires (dans les domaines NH2-terminals des molécules de FN adjacentes) en liaisons intermoléculaires /69/. Par conséquence, ces liaisons S-S croisées sont les premières (et seules responsables) candidates pour la création des filaments de FN dans la direction perpendiculaire à la surface cellulaire /59,6I/ (Figs.3,4) dans la partie de MEC péricellulaireO Les liaisons échangeables disulfures (établies entre les do maines-NH2 des dimères libres de FN attachés à la membrane) peuvent insolubiliser la FN /53,69,7I/. Cela doit entre le mécanisme de la création de tels filaments de FN perpendiculaires: pas à pas avec l'échange des liaisons S-S entre les domaines -NH2 ("tête à tenez entre les dimères).Parce que ces liaisons réagissent sans les enzymes spéciales (activables) le signal pour telle réaction doit commencer avec le changement de conformation du domaine-NH2 de la molécule de FN réageant avec la membrane cellulaire. 4.Ltorganisation de MEC sur la surface cellulaire avec l'aide de la transglutaminase membranaire activée. L'organisation de la MEC ("FN") doit être différente près de la surface cellulaire. Elle commence par l'interaction de FN avec ses récepteurs membranaires (signal) /53,24/. Le meilleur candidat pour la participation dans tel signal, suivi par la connection entre les dimères de FN près de la membrane de la surface cellulaire, est la transglutaminase. Le fait de la création des liaisons croisées des FN en présence de la transglutaminase avec le dithiothreitol réduisant /66/ confirme la validité de telle thèse parce que les domaines des FN attachées à la cellule, doivent participer dans l'interaction avec la FN située sur la cellule ("têt à têt"). La MEC avec le réseau organisé, généralement,ne peut pas être crée avec l'enzyme comme la transglutaminase qui peut faire les liaisons croisées (normalement) chaotiques des glutamines et des lysines.Mais justement dans le domaine-NH2 il y a seulement un site pour la. liaison- croisée activée par la transglutaminase /53,72/c En outre, seulement les molécules situées près de la surface cellulaire peuvent être connectées avec la transglutaminase attachée à la membrane /73-77/-et cette transglutaminase membranaire doit etre activée avec le signal parce Telle est activée par l'activation de la protéine kinase C (activée elle-même par l'zester phorbol) /78/. I1 y a aussi très forte augmentattion de son activité avec une augmentation de la densité cellulaire /74/ et avec la différentation /75/ (justement quand la MEC dense doit eAtre crée). I1 y a aussi l'augmentation de l'activité de la transglutaminase avec la concentration de Ca2+ en milieu /74,79/ importante pour l'action dll signal optimal /I,2/. Le fait que les domaines-NH2 libres de FN peuvent aussi être inhibiteurs pour l'interaction initiale de FN avec les cellules /53,69/ prouve l'exactitude de tel "scénario" parce que les domaines-NH2 de FN n'ont nas de sites de l'intera ction avec les récepteurs de la surface cellulaire et ils peuvent être attachés et croisés seulement par la transglutaminase membranaire activée.En outre, la FN est le substrat pour la transglutaminase membranaire /8G/ Par conséquence, comme la conclusion, je peut deduire qu'auprès l'action du signal (interaction du dimère de FN avec la surface cellulaire par ses récepteurs membranaires qui activent la protéine kinase C (PKO) /78/) il y ait une activation de la transglutaminase membranaire qui fait la liaison croisée des dimères de FN par les régions-NH2 ("têt à têt) faisant la chaîne des dimères de FN sur la surface cellulaire.Je pense que telles interactions aient lieu entre une molécule de FN qui a réagi déjà avec ses récepteurs membranaires immobilisant la FN (après la réaction avec les intégrines mobiles qui sont devenues immobiles) et une autre molécule de FN du milieu extérieur. Il est évident que la liaison croisée de deux dimères de FN immobiles et suffisamment distants ne soit pas possible (de plus la liaison croisée des fibres de FN ordonnées sur la surface cellulaire)..Cela doit etre la raison que les FN de la surface soitent, déjà, organisées en formes ordonnées comme les filaments aux fibroblastes normals (avec les densités faibles où il nty a pas de nombreux récepteurs des intégrines qui sont, quand même, mobiles /81/) ayant la quantité très faible des molécules extracellulaires /82/o Par conséquence, une régulation du réseau de FN a lieu plutôt par les interactions dirigées près de la surface cellulaire que par les interactions entre les FN qui peuvent avoir lieu en solution pure /83/. Cela doit entre la raison pourquoi la EN du plasma, nouvellement ajoutée, fait la connection,préférablement, dans les régions où la FN cellulaire est déposée déjà /84/. Logiquement, c'est justement la base de la disfonction des cellules cancéreuses parce que une addition de la FN cellulaire de l'extérieur peut rétablir les complexes transmembranaires contenant la FN /85/ et les cellules SV-40 transformées ont les molécules de FN détectées sporadiquement sur la membrane plasmique quoique il n'y a pas de matrice filamenteuse continue /82/. Les interactions des récepteurs de FN avec domaines de FN font l'activation du signal, et comme le résultat il y a une immobilisation de ces récepteurs mobiles avec le cytosquelette /86S87/. Normalement, ces récepteurs sont de deux types: le récepteur avec le site de l'interaction "RGD" (intégrine) et le récepteur chargé avec le site de l'interaction "BBXB" (B-est l'acide aminé basique, X-est n'importe quel acide aminé) qui réagit avec le récepteur "RGD" coopérativement /88-90/o 5. Les intégrines comme les complexes membranaires impor tants dans la transmission du signal. Le complexe d'un groupe particulier des récepteurs avec les deux unités semblables (; etJB) joue le rôle important pas seulement dans une connection (simple) des cellules avec MEC (Fig.5) mais aussi, comme je montre ici, dans l'action de (presque) n'importe quel signal cellulaire, supportant la strategie cellulaire principallement nouvelle de la transmission du signal qui doit ouvrir un grand champ viergerdes récherches nouvelles. Mais l'état contemporain de la connaissance de leur fonction a un large morceau des "taches blanches". La partie essentielle de ces larges "taches blanches" existe à cause du fait que telles structures importantes comme les interactions intercarbohydrates et interlipidiques, qui repandent dans tous les organismes vivants, ne soitent pas connues. A. La création du site actif de l'intégrine avec l'aide des carbohydrates. Il y a des données persistantes qui indiquent la participation des carbohydrates dans l'action des intégrines. Selon /91/, la glycosylation des intégrines est nécessaire pour leur activité biologique- et les oligosaccharides cellulaires sont impliquées dans l'adhérence cellulaire avec la laminine (-IN) et le collagène IV /92/.Le fait d'une présence d'un grand nombre des chaînes carbohydrates dans les intégrines et dans les protéines de MEC (reg. ci-dessus) et les résultats concernant de nonestimables mais communs types générals des carbohydrates, participant dans la transmission du signal avec les chaînes irtercarbohydrates présentes autour des récepteurs intégrines, indiquent une importance de telle présence des carbohydrates, très intensive, pour l'action des récepteursintégrines.Une influence de la composition des lipides (autour des récepteurs- intégrines) sur l'activité de la liaison de ces récepteurs /93/ indique aussi la création des complexes membranaires intercarbohydrate-interlipidique: glycorécepteur gangliosides -cérébrosidesF ../I,2/. En outre, ces récépteurs intacts peuvent être obtenus pendant une élùtîon avec l'EDTA /94,95/ soulignant la nécessité des iones bivalents de Ca2+ et de Mg2+ /96,97/. Ce fait indique la participation des interactions intercarbohydrates avec la déhydratation /I,2,97/. (Tel traitement ne détruit pas une nativité-des récepteurs in vivo -for instance /98/). La même interaction avec l'EDTA (avec le peptide "RGD") provoque la dissociation du peptide "RGD" naturel (glycosylé) de- glycointégrine sur la surface cellulaire in situ /96,99,100/, montrant la présence du caractère intercarbohydrate des interactions dans le site actif de l'intégrine /100/ and l'absence des autres interactions. Mais ce traitement ne provoque pas la dissociation des molécules de FN (entière) (comme substrat) et de fibrinogène où les autres types de liaison doivent avoir lieu (liaison avec la force de la charge électrique avec les sites pour les GAG) /IOO/. En outre seulement 1'EDTA est suffisant pour déranger l'interaction initiale de l'intégrine des cellules (épithéliales) /100/ prouvant l'importance du site entier de l'interac- tion de l'intdgrine avec les-interactions carbohydrate /I,2/. Le fait clair de l'adhérence réduite des cellules au domaine de l'interaction avec la cellule de FN ou de la laminine /IOI/ et, en plus, l'adhérence très réduite de l'întegrine au domaine de l'interaction de FN avec la cellule /IOI,I02/ grâce à la glycosylation réduite de l'intégrine montrent l'exactitude de la thèse ci-dessus. D'autre part il y a le domaine de recherche, très intensif aujourd'hui, concernant l'exactitude non expliquée de la structure réele et de la "dégénération" de la spécificité de cesrécepteurs /99,103/. Selon ces résultats, le même intégrinerécepteur peut réagir avec les molécules différentes de MEC avec, même, les peptides-ligands différents: pour le cas des récepteurs &alpha; &alpha;Vss3, tels agents réageants étaient la laminine avec le peptide-ligand actif "non-RGD" /104/ ou BGD" /I05/; et aussi la vitronectine (VN), le facteur von Willebrand, la thrombospondine, et la FN (tous avec le ligand "RGD").Dans le cas de récepteur IIb/IIIa (oIIIb?i), les agents étaient: la FN, la VN, le facteur von Willebrand et la trombospondine /I09,IIO/ ou le fibrinogène avec les ligands "RGD" ou "non RGD" /III, II2/. Dans le cas de l'intégrine dvf5sles agent-s réageants étaient la FN et la VN mais pas le fibrinogène et la laminine /95,113-115/. Les intégrines &alpha;3ssI ont le collagène, la FN et laminine comme les agents réageants /116,117/o Aussi on peut voir de ces données nombreuse que la même molécule de MEC puisse réagir avec les molécules différentes des intégrines.En outre, "le paradoxe va plus loin: le meme récepteur-intégrine reconnaît le ligand "RGD" de la protéine dematrice et ne reconnait pas le même ligand "RGD" dans une autre partie de la même protéine de matrice et aussi les autres intégrines reconnaissent le ligand "RGD" d'une molécule de MEC et ne reconnaissent pas les autres ligands "RGD" de la même molécule de MEC et reconnaissent le ligand "non RGD" de la molécule de MEC /I04 et les Refs.104/. Cette absence apparent du sens signifie clairement que le niveau de la connaissance d'aunoud'hui n'ait pas auelque chose très essentielle dans le domaine de la fonction de ces récepteurs. Donc, en prenant dans la considération le fait de la présence des nombreux (insistement) carbohydrates dans les intégrines et les autres molécules de MEC et les autres argumentations (de ci-dessus), on peut conclure que ce soit la partici parce des carbohydrates dans tel site actif des interactions et des actions (comme ils font pour les autres récepteurs /I,2/) qui peut expliquer raisonablement ces données nombreuse. Puisque la structure de la glycosylation de la protéine est spécifique pour les tissus /41/, les carbohydrates doivent être, évidemment, différents en confirmant une énnorme quantité des carbohydrates présents spécialement dans ces protéines. Ces carbohydtrates participent dans les interactions homologues "chaise" (en addition aux interactions possibles entre les protéines suffisamment faibles).Les carbohydrates du"site actif" de l'intégrine réagissent avec ceux du "ligand" de MEC, Par exemple, la laminine a 74 (!) sites potentiels de la glycosylation (N-liés) /47/ et 40 sites (!) (de 74) peuvent être occupés in situ /It & -120/. Telles variations énnormes de la glycosylation sont évidentes. La mobilité électrophorétique différente de sous-unités de l'intégrine oL'3, des cellules ayant un attachement différent au collagène IV (reflétant leur différence dans les modifications après la translation) /I2I/ confirme la différence dans leur structure carbohydrate. B. Les glycolipides sont les composants essentials dans l'action des intégrines. Selon le schéma semblable avec la participation des glycorécepteurs et des glycolipides /I,2/, les gangliosides participent aussi dans les complexes récepteur-ligand pendant l'action du signal avec les intégrines. La quantité des protéines et des phospholipides,situées à la plaque d'adhésion, est près de I de leur quanité membranaire mais la quantité des carbohydrates est de 5-I5 (!) /I22/. Les gangliosides ajoutés de ltextérieur sont suffisants pour provoquer une organisation des brins de PN sur la surface cellulaire des cellules mutantes qui ne synthétisent pas de gangliosides /I23-I25/. Une importance de la partie carbohydrate des gangliosides dans telle interaction est évidente parce que la toxine de choléra qui attache à la surface entière du ganglioside GMI détruit l'attachement de la-FN /I23/. Mais le traitement avec la sialidase ne détruit pas l'attachement, prouvant l'impor tance des interactions-particulières des carbohydrates. Les données prouvent la participation des gangliosides GD2 et GD3 dans l'attachement des intégrines à la MEC /I26;I27/. Au même temps il y a des polysialogangliosides qui inhibent l'adhérence à FN et aux autres substituantes /I28/o Ce fait peut être clair seulement d'après ma structure parce que les glycolipides, participant dans la structure générale /I,2/, doivent être très spécifiques dans la chaîne des interactions. Ces gangliosides n'inhibent pas l'attachement de FN au colla-gène selon la Fig*2 mais ils empêchent l'attachement des cellules au complexe EN collagène /128/. Une addition de l'EDTA (avec la chélation de Ca2+ et Mg2+) provoque la dissociation du ganglioside GD2 de récepteurs confirmant la nature homologue intercarbohydrate "chaise" /1,2,97/ des interactions des gangliosides avec la glycointégrine (et peut-etre, glycoprotéines de MEC) /99/.La participation de ganglioside (de; plus d'une interaction avec la glycointegrine) dans l'interaction directe avec les molécules de MEC n'est pas, prouvée' Par exemple,-dans la FN ou dans la IN il n'y a pas de sites de l'interaction avec les gangliosides /53,47/. Logiquement, '1l1état-postérieur" des gangliosides (après l'interaction avec le ligand) facilite pour l'intégrine faire la confor mation convenable "d'état postérieur" avec le site actif correspondant plus affin, incluant ses carbohydrates, pour interagir avec ce peptide naturel avec l'affinité augmente /I29/.La présence du nouveau déterminant de l'intégrine après l'interaction avec le ligand sans l'interruption de la liaison du ligand argumente pour la réele présence de tel état postérieur de l'intégrine. (Ces anticorps contre l'intégrine dans l'état nouveau même inhibent l'action du signal) /I29/. C.Les protéoglycanes sont la partie nécessaire des inte ractions membranaires avec les molécules de MEC. Une interaction des chaînes des protéoglycanes membranaires intégrales (syndecanes avec les chaînes de HSPG et CSPG) a lieu avec les sites de liaison de FN "BBXB" (ou "3BBXXB") (B- acide aminé basique, X- n importe quel acide aminé) /24,88,89/. Comme on peut voir, l'amas de 3-4 acides aminé, chargés positivement, du site réactif du FN et l'amas des charges effectives négatives de HS de la syndecyne (PG) (sur un autre site) doivent réelement signifier que la force majeure de cette interaction soit électrostatique. Gënzrale- ment, la force électrostatique est la force de la liaison de GAG à la carcasse- des protéines différentes des molécules de MEC, des molécules de l'adhérence intercellulaire, des facteurs de croissance /53,I30-I33/. Et les GAG, plus chargées (avec ltexcédent des sulfates) souvent attachent mieux /50, I34/o Avec l'addition des chaînes HS, l'affinité des FN à ces récepteurs de surface augmente /I35-I37/ parce que l'autoagrégation des polysaccharides de GAG doit avoir lieu /1,2,54 57/. Cette autoagrégation doit augmenter la force de l'attachement entre les chaînes HS (héparane sulfate) (CD'-chondroitine sulfate) de PG membranaire intégrale et' les sites héparine de FN avec "le pont" des chaînes HS;(CD) devenant plus épais.Logiquement, ce "pont épais" doit jouer un rôle impor- tant in vivo pour la modulation des interactions dlectrosta- tiques parce que l'attaehement de l'héparine au domaine de FN correspondant peut ne pas se produire aux concentrations phy siologiques des sels /I38/. Telles chaînes de HS peuvent participer seulement dans les interactions homologues "chaise" /I, 2/ et, par exemple, tels carbohydrates numereux de la LN ne participert pas dans l'attachement de l'héparine /139/. te fait de la présence dans l'espace péricellulaire des chaînes libres de HS /mais l'absence (presque) des autres types de chaînes de GAG/ /I40,I41/ confirme leur rôle ci-dessus0 Evi- demment les molécules de PG avec les plusieures channes de ES fixées sont plus importantes- pendant telle modulation et les molécules de HSPG solubles non intégrales ont les sites de l'attachement sur la FN de la partie réricellulaire de MEC) (Fig.5)0 L'importance de telle HSPG soluble pendant l'adhérence de la matrice tN-) est bien soulignée /I42/. Au même temps, la présence de CSPG fait la corrélation avec la faible diminution de l'adhérence cellulaire (reg. aussi ci-dessus) et la DSPG (dermatane sulfate protéoglycane) inhibe l'attachement /I42/o D. La cooperativité des interaction des intégrines et des récepteurs "BXBB " de P;. Comme il était indiqué, les deux récepteurs membranaires (intégrine et "BgBB") déterminent les interactions de la surface cellulaire avec MEC. Justement, dans le cas de- FN (molécule ayant, normalement, les interactions directes avec les récepteurs membranaires cellulaires de MEC-Fig.5), il est clair que les sites différents de l'attachement cellulaire sont réconnus par les récepteurs séparés qui peuvent fonctionner cooperativement pour faire l'attachement cellulaire /I43 I45/.En outre, selon les données récentes, il y a les sites multiples, chaqu'un ayant les deux types de mécanismes: héparane-sensitif et héparane-insensitif (intégrine) /150,151/o Quand la FN est protéolysée (évidemment dans les sites des connections entre les domaines /60/) in situ, sur la surface cellulaire, le récepteur de HSPG (aligné aux fibres contraintes du cytosquelette /I52/) reste sur la place0 Ce fait indique que, vraiment, in situ, ces récepteurs agissent coopérativement, parce que (logiquement pour le "statuquo" des fibres du cytosquelette) il est nécessaire de supporter le "statu-quo" de la cause de l'apparition de telles fibres qui sont le résultat des interactions des récepteurs coonératives /I49/. Et par exemple, la diminution forte de la concentration du Ca extérieur pendant le "capping" des récepteurs (aussi le produit des intéractions ligned-récepteur conduisant aux changements de conformation suffisants /I,2,I3/ avec les interactions des microfilaments de 1 r actine) mène à la dissociation des complexes des récepteurs et des microfilaments /I53-I55/.Et la force de l'extention des neurites (ayant le mécanisme semblable avec l'adhérence cellulaire,reg. ci-dessous)peut entre augmentée ou par le récepteur intégral faisant ltaction coopérative avec I'intégrine où par HSPG non intégrale exogène réageant avec les molécules de FN participant dans MEC péricellulaire (noeuds: FN-PG-collagène) (Fig.5) ou avec les molécules de FN (sites héparine) se trouvant près de la membrane et attachées déjà à l'intégrine et des récepteurs "BBXB" de PG XI42/. La dissociation, grâce aux protéoglycanes comme serglycine /contenant les chaînes CD (DS) / après un attachement de FN et de l'intégrine /24/, souligne l'exacti- tude de la dernière thèse. Cette coopération birécepteur doit être nécessaire pour le changement de conformation fort, conduisant aux fonctions de l'effecteur du récepteur, parce que les constantes de liaison des récepteurs intégri-ne sont suffisamment faibles /I56/. Ces faits montrent que la système de l'adhésion cellulaire sur FN (de IF'itC) contienne les deux récepteurs (pour le changement de conformation suffisant) et les gangliosides /I57/ étant le système particulier de l'action générale des récepteurs par la création des complexes: glycorécepteur#gangliosides#céré- brosides /I,2/ avec le système général des récepteurs de la transduction des signaux par la rmC /I,2/.Les nombreux exemples, donnés ci-dessus de l'action des molécules de MEC comme le signal de la différention, confirme cette conclusion. E.La fonction effecteur des intégrines (microfilaments et les signaux-messengers). Comme le résultat de l'interaction de MEC dans la cellule stationnaire,les intégrines sont organisées dans les complexes immobiles associés avec les terminaisons des fibres extracellulaires (Fig.5) proches au "cordons" intracellulaires des microfilaments de l'actine associant avec l'actinine- et/ou autour des contacts focals /I58-I63/. Logiquement, cela est une raison d'une immobilité du réseau moléculaire de MEC entier sur la surface cellulaire, de plus ce réseau avec FN et le collagène ne peut pas même etre"aggloméré forcément" par les anti corps contre eux /I64/. Et les intégrines, qui sont distribuées diffusement peu de temps après le placage, deviennent concentrées sur la surface ventrale dans les ponts des contacts de FN quand l'attachement cellulaire se produit /I65/. Telle concentration des intégrines reflète la transduction des signaux avec l'activation de la PKC /I66/ et l'activation veritable où probable des tyrosine-kinases, protéines G,cou- rants de Ca2+. Leurs éléments et des traces sont concentrés dans les contacts focals /I67/ et leur établissement représente (lui-mebme) le résultat de l'action du signal après les interactions:- intégrines-molécules de MEC. le nombre des autres résultats argumentent pour les conclusions ci-dessus: action de l'antiport Na+/H+ (partie de chaque signal /I,2/) /I86/, partcipation des protéines G /I69/, l'induction de la transcription du gène après l'interaction de l'integrine avec les molécules de MEC /I70,I7I/. A partir de la connaissance ci-dessus, on peut deduire pouquoi les anticorps contre un type de l'intégrine bloquent l'attachement cellulaire avec un autre type des intégrines /I04/. Selon ma deduction, ces an,ti- corps doivent provoquer le changement de conformation fort dans la molécule de l'intégrine et "prendre" avec elles les "résidus" -effecteurs communs de la cellule bloquant leur (de "résidus"- effecteurs communs) accès aux autres intégrines dans le cas' de leur action suivante.Le fait que les anticorps contre les sous-unités Ales intégrines puisse induire une agrégation de la taline /I72/ confirme cette thèse. A même temps, ces anticorps bloquent stériquement une interaction de "leur" intégrine avec les molécules de matrice. D'autre part il y a des autres types des anticorps anti-intégrine (contre épitopes situés différement) qui bloquent aussi stéri- quement "leurs" intégrines mais ne bloquent pas les actions suivantes des autres intégrines /I73/. Dans ce cas il n'y a pas d'activation du système effecteur de la cellule et les autres intégrines peuvent contunuer leur action. 6.La structure générale de MEC. Par conséquence, je peut deduire la structure principale générale de MEC contenant comme les éléments principaux: collagène, PC, FN et intégrines. Selon cette structure dans l'espace péricellulaire, le collagène et FN font le réseau péricellulaire "réctangulaire" où le collagène (microfibres,fibres ou brins simples) est situé en direction parallèle à la surface cellulaire et les filaments de FN sont situés en direction perpendiculaire à la longueur des fibres du collagène et de la surface cellulaire (la largeur des microfibres du collagène est moins que la longueur du monomère de FN ce qui s'accord bien avec la Fig05).Mais dans le cas des fibres du collagène larges, le lecteur doit résouvenir qu'il ait la structure tridimentionelle où la fibre du collagène touche les molécules de FN par la partie de son périmètreOOn peut voir (fige5) que les tailles des molécules de FN et du collagène doivent être en accord.Il est connu qu'il y ait la diminution de la longueur de la périodicité du collagène pendant l'embryogenèse et l'ontogenèse jusqu'à 20% de sa longueur /174/.Visiblement l'pissage alternatif de FN pendant l'embryogenèse doit correspondre à tels changements du collagène,la possibilité de tel épissage différent de FN pendant l'embryogenèse est aussi connu /I75/.Ces variations peuvent être très importantes pour l'embryogenèse (où une matrice est détruite et une autre, lui succédant, est crée,parce que cela peut permettre aux molécules de FN et du collagène de se distinguer entre les matrices "propres" et "non-propres".La protection des molécules de collagène par la FN contre l'action de la collagénase, par la fixation aux sites sensibles à l'enzyme /I76/ confirme cette thèse. La PG est bien concentrée dans les noeuds du collagène et de FN faisant l'interaction avec les deux (Pig.2):avec le collagène par ses chaînes glycosylées et avec la FN par ses chaînes de GAG. Généralement, les molécules de PG doivent être nombreuse et capables s'agréger renforçant les interactions entre la FN et le collagène /58/.Les molécules de EN de l'espace péricellulaire sont situées dans les filaments comme les dimères.Leurs axes longs coincident. Les dimères de FN sont connectés têt à têt" par leurs domaines avec les liaisons disulfures croisées (l'attachement aux dimères de FN sur la surface cellulaire est inclu aussi) (Fig.5). Ces derniers sont ordonnés comme les fibres avec l'aide de la transglutaminase membranaire activée après l'interaction de FN avec les récepteurs de l'action coopérative:les intégrines et les récepteurs "BBXB" de HSPG (syndecane) membranaire.L'at tachement de FN (et PG) au collagène ayant lieu avec les distances régulières /28,44,45,6I/ et colocalisation des PG avec les FN près de la surface cellulaire /24,25,I77/ (établis expérimentalement) confirment cette structure0 70La nature principale de l'action de MEC::modulations des siSnaux cellulaires par charges et carbohydrates. On peut voir les concentrations fortement localisées des charges négatives gracie à la présence des amas des PG agrégées près de la surface cellulaire et la présence des récepteurs membranaires intégrales des PG (contenant les chaînes HS)o Cette charge est la plus efficace quand la matrice contient les chaînes HS (GAG) parce que ces molécules ont les charges lourdes négatives et ses charges sont plus effectives grce à la flexibilité accrue de leurs residus iduroniques /I78, I79/.Cette flexibilité fonctionelle doit permettre aux chaînes HS faire la meilleure adaptation avec le réseau modulé des liaisons et des chartes et aussi elle doit permettre faire l'amas des positions des molécules capables s'agréger /54-57/ par ses supernositions de la structure "chaise" /I.2 et ci-dessous/ ayant la meilleure densité des charges xrès du réseau modulé des liaisons et des charges, notamment pendant la transmission du signal cellulaire.Dans tel cas du signal cellulaire, c'est le réseau des liaisons hydrogène (dépendant des charges) et des charges,pendant l'action du signal selon le schéma: ré cepteur#gangliosides#cérébrisides.. ,qui sont modulés (detruits) par telles charges. Et on sait que pendant la saturation cellulaire il y a le développement de MEC dense ayant les PG avec les chaînes HS /180/ ce qui arrête la division cellulaire /I8I-I83/.Aussi avec la densité augmentant dans la monocouche d'un type cellulaire (fibroblastes de l'embryon de souris),les autres cellules présentes (mastocytes) changent graduellement la synthèse des PG de CSPG à HSPG /I84/. Et c'est le nouveau mécanisme de l'inhibition de contact. Les cellules cancéreuses /185,186/ n'ont pas de telle matrice développée,de plus leurs PG ont, en majorité, les chaînes CD avec les charges moins effectives.Par conséquence,telles cellules peuvent continuer leur division /I30,I87-I94/.La transféction du récepteur de FN (&alpha;5ssI) dans les cellules transformées conduit à la densi- té saturante réduite de ces cellules grâce à une augmentation de la densité de MEC /I94/ (Fig.5). Particulièrement,l'activation de la transglutaminase peut être aussi augmentée avec la transféction de ce récepteur (reg. ci-dessus).Aussi la MEC peut moduler les signaux cellulaires par une influence de très fort content de ces carbohydrates /47,53,195,196/ conduisant au changement cellulaire /I97-208/.Le fait que les segments de FN exprimés de alternativement aient les sites nouveaux de la glycosylation /209-2II/ (incluant les FN oncofétales) /2I2/ et le fait qu'il ait les changements forts des carbohydrates de PN pendant le développée ment embryonnaire /213,2I4/ confirme une importance des carbohydrates de MEC.Telles charges intensives,couplées avec les molécules spécifiques (comme les anticorps) ou non couplées étaient proposées comme les medicaments très effectifs contre les virus, bactéris, insectes, protozoaires /I,2/ ou pour faire la tolérance par une élimination des cellules B et/ou T qui produisent les anticorps anti-SIDA pour "immuniser" contre le SIDA /2I5/. 8. La structure du signal de l'intégrine est la partie-clé de la création des récepteurs imobilisées pour le sig nal direct. Donc, on peut voir ci-dessus que les intégrines aient "leur" propre système des glycolipides /I,2/ permettant la transduction de leurs signaux particuliers .Mais cette innovation va beaucoup plus loin ouvrant le point de vue nouveau sur la strategie de l'action du signal:le système de l'intégrine a la connection spéciale avec la large majorité des signaux cellulaires donnant les moyens pour l'immobilisation forte des récepteurs actifs cellulaires avec même la transmission "directe" des signaux correspondants à la région périnucléaire avec la création de la machinerie du signal. Un nombre des données expérimentaux montrent la connection entre les deux systèmes des signaux /2I6-2I9/. Il est connu déjà que le nombre des récepteurs (ou corécep- teurs) contiennent la quantité mineure des récepteurs qui ont les chaînes GAG-chondroitine sulfate et héparane sulfate: le récepteur de transférrine,les récepteurs "homing" des lymphocytes de types différents,les chaînes invariables de hétérodi mère de CME (Ia), le chromatogranine A /220-223/. Telles quantités peuvent être manquées chez beaucoup des autres récepteurs observés sans telle proposition spéciale, mais ces chaînes doivent être trouvées en évidence selon ma position. En outre,cette petite quantité (produisant l'hétérogéneité des récepteurs) correspond bien à une hétérogéneité fonctionnelle des récepteurs pendant la transduction du signal /I,2/: les quantités des récepteurs immobilisés,transmettant le signal "direct" /1,2/, correspondent à ces quantités mineures et, mêmes expliquent parfaitement une apparence de telle différence dynamique pendant l'action du récepteur. Justement,ces chaînes CS et HS doivent être le matériel cément lequel ces quantités mineures des récepteurs "choisissent" pour leur fixation par la chaîne spéciale des molécules pour immobilisation et fonctionnement. Après une interaction entre les parties homologues des chaînes de CS et de HS des récepteurs mineurs mais principals avec celles des IG (Fig.6) il y a l'interaction de telles molécules de PG agrégées avec les molécules de syndecane immobilisées dans le système de l'intégrine.Ces molécules de syndecane universelles (pour les interactions des chaînes CS et HS) doivent être monovalentes parce qu'elles ont seulement une chaîne CS et une chaîne HS (une autre chaîne HS doit avoir le contenu très spécial et la position permettant une interaction unique avec le site de FN fixant l'hérapine) /224/. Visiblement,les larges déhydratations, grâce aux interactions polyvalentes facilitent telles interactions avec la syndecane monovalente.La présence des chaînes CS du même type et des chaînes HS (avec une autre chaîne HS agissant seulement avec la FN /142/) chez les récepteurs syndecane "BBXB" pour EN de MEC /224/ montre une bonne véracité de telle thèse.les interactions homologue intercarbohydrate /I.2/ entre les réce teurs principals avec les chaînes CS ou HS (rédistribuées ar- rés le signal principal) avec les protéoglycanes ayant les chaînes de CS et de HS représentant les réservoirs DIFFERENTS dans la membrane cellulaire /225/ et avec les molécules CS/HS de syndecane unifieront ces complexes (Fig.6c).Rn confirmation, il y a la présence intensive des protéoglycanes CS et ES dans la membrane cellulaire /40,226/, notamment, dans la zone du matériel attaché au substrat /227/o La variation des chaînes GAG de syndecane (le nombre et la taille) avec le tissu particulier et l'état cellulaire /224/ confirme une importance potentielle de telles interactions pour la spécificité du signal particulier.Ces interactions intercarbohydrate ont lieu après une interaction du ligand avec le récepteur suivies par le changement de conformation avec les complexes récepteur-glycolipides comnruns::récepteur ,~gangliosides rcérébrosides .avec la déhydratation entourante /I,2/ ce qui doit faciliter une interaction entre les chaînes GAG de récepteur et les PG,La présence des chaînes CS (GAG) (comme les chaînes unifiantes /mais/ qui n'ont pas, elles-mêmes,de bonne agrégation /I79/) confirme telle facilitation nécessaire de l'agrégation après le déclenchement par le ligand.De plus il y a une augmentation de la synthèse des chaînes de CS (conjugées avec les PG) et une augmentation de leurs longueurs avec le signal /228/ confirmant l'importance des interactions (qui deviennent plus sûres) entre les molécules suffisamment éloignées dans les complexes ci-dessus. Les molécules de syndecane agrégées /avec le système de l'intégrine (Figs.5; 6B)/ provoquent l'attachement des microfilaments à ces molécules /224/.Selon /22.4,229/, dans les cellules des mammifères étudiées il y a les trois types de molécules de PG sur la surface cellulaire: (I) ayant la mobilité libre dans la membrane (c'est-à-dire les PG libres incluant les molécules libres de syndecane) (Fig.6A); (2) attachées dans la membrane avec quelques forces dépendant des ions /cela peut inclure les PG agissant dans les complexes avec quelques récepteurs /Fig.6B(I)/ avec liaisons intercarbohydrate hydrogène dépendant des charges/; (3) les PG attachées fortement au cytosquelette et les détergents ne les extraient pas (cela doit être les molécules de syndecane complexées avec le système de l'intégrine) /Pig.6B(2)/ /224/.Les molécules de PG de la surface agrégées avec les anticorps attachent au cytosquelette /229/ et ne peuvent plus etre extraites /229/,ce qui signifie qu'elles fassent aussi l'interaction avec le complexe de la LN avec le système de l'intégrine.Cela signifie que justement le complexe des PG agrégées (370C) (avec la déhydratation large de la surface correspondante) provoque leur interaction avec la syndecane les immobilisant et empêchant leur extraction /229/.Une importance de telle déhydratation peut être conclue de l'absence de telle agrégation large avec les anticorps à 400 ce qui doit signifier une importance de l'entourement des lipides ayant le fort changement quantitatif entre ces temperatures parce qu'une diminution de la vis- cosité est graduelle dans tel diapason des temperatures /230/o Par conséquence,on peut argumenter qu'après une interaction du ligand extérieur avec son récepteur principal il y a, pre mièrement. la synthèse des PG membranaires nouvelles qui interagissent avec la partie mineure de récepteurs principaux //Fig.6B(I)/ et aussi avec les molécules de syndecane (système de l'intégrine) /Fig.6B(2)/.Il doit avoir lieu l'agrégation de telles PG avec la déhydratation conséquente de la zone près de la membrane plasmique (grâce aux interactions entre les GAG et les carbohydrates des gangliosides et des cérébrosides ce qui facilit la 2éme étape: l'immobilisation du système du signal principal avec le système de l'intégrine (Fig.6C). Par conséquence, justament les PG de tel type des complexes ne peuvent pas être extraites avec le détergent /229/ en différence avec les autres molécules de PG membranaire. Il doit êtrè les trois réservoires des intégrines dans les états différents sur la membrane cellulaire (avec leurs signaux particuliers) en présence de FN (Fig.7).Dans les réservoirs (I) et (2),l'intégrine est occupée par la FN mais le site héparine de FN est libre /dans ces cas similairs,les intégrines de reservoir (2) sont soumises à l'endocytose/; une existance de ces deux réservoirs a une analogie avec les autres récepteurs /I,2/ excepté la présence des connections moins stables des intégrines avec FN /réservoir (I)/ qui peuvent être endommagées /comme dans le réservoir (2)/;;dans le réservoir (3), la FN est aussi attachée à la syndecane (Fig.7). Dans le dernier cas, elle peut être "représentée" même par son fragment soluble avec n'importe quel site de la liaison d'héparine (avec le fragment de FN avec le site de la liaison de l'intégrine):tels systèmes sont immobilisés et stabilisés avec les MF /I49/ et ces interactions doivent produire le signal particulier avec une entrée de Ca2+ dans le cas de FN,meme après les interactions de deux sites voisins separés:le site de la liaison de l'intégrine, comme le substrat, et le site de la liaison de l'héparine (même soluble) Fig.7). Ces réservoirs doivent être dans quelque équilibre comme dans le cas des autres récepteurs cellulaires avec le ligand (et même sans ligand) dans le site actif /I 2/. Des autres résultats expérimentaux confirment aussi cette structure.Se- lon /23I/,les cellules cultivées en suspension avec FN ont les deux réservoirs des récepteurs intégrine (15fI) mobiles (Fig7): (i) les récepteurs non internalisables; (2) les récepteurs internalisables; et, apparemment, il y a aussi le 3eme réservoir: les intégrines immobiles (3) qui peuvent être éliminées de la surface cellulaire (mais à l'extérieur), par exemple,pendant le procès de la motilité cellulaire /232/.En outre selon /232/, les cellules mobiles attachées au substrat ont le réservoir (2) limité circulant pendant l'endocytose et ayant (selon î'électrophorèse) les intégrines (fixant FN) indiscernables de celles du réservoir principal (3) concentré,et la proportion de réservoir (3) est plus importante. La présence de la propre famille des glycolipides et des phospholipides des intégrines (reg. ci-dessus) qui détermine l'exista,nùe de t Les données expérimentaux nombreuse confirment bien la structure démontrée (Figs.6 et 7) I). Le signal "principal" (long) provoque une présence des récepteurs intégrine immobilisés /233-236/; 2) .L'adhérence des intégrines 'cellulaires différentes augmente après le signal de l'activation de la cellule /237-240/.Cela peut entre facilement expliqué avec les Figs.6 et 7: le signal principal provoque la synthèse et l'agrégation de molécules de P; et la syndecane et les PG agrégées peuvent renforcer les interactions de FN (ou LN) avec la surface cellulaire. Aussi plusieurs types de récepteurs intégrine pour les parties différentes de FN (de MEC) aident faire les structures de MEC différentes pour les signaux différents /89/. La présence des protéoglycanes CS avec, par exemple, les oligosaccharides 0- liés contenant les unités conventionelles Gal-(ss-3- GalNAc (type III des structures communes d'interaction des glycolipides-glycoprotéines /24I/ et leurs dérivés mono- et disia- lyl /223/, doivent permettre leurs interactions indépendantes homologues avec les gangliosides.Ces interactions doivent aider de créer la déhydratation de la surface environnant près de cette zone des complexes initiés avec le signal dans la zone autour des récepteurs principals. Le signal principal et le signal de l'intégrine déclenchent, justement, la synthèse et la sécrétion de ces PG (Figs.6B, 8). Comme il était mentionné, on peut voir, par exemple, telle synthèse pour les récepteurs intégrine à partir des données concernant l'étalement (adhésion) cellulaire (V) (sans, en évidence, le signal principal) où les nouvelles molécules de PG doivent stabiliser ltétalement. En confirmation claire,telle adhérence,méditée par les intégrines /237240/ et la synthèse de PG /228/ augmentent après le signal principal0 Il doit avoir lieu une sécurité importante pour choisir seulement les récepteurs mineurs /ayant les chaînes GAG (CS ou HS)/sles olizosaccharides N- et O- liés des protéoglycanes PG-I et PG-2 sont différents des chaînes carbohydrate des Z coprotéines (récepteurs) /223/, et par conséquence ces PG ne font pas des interactions directement avec les récepteurs par les forces intercarbohydrate homologue /I,2/. La présence de ces chaînes GAG en quantité mineure sur les protéines de chromatogranine (granule chromaffine) /223/ et une ressemblance des leurs CSPG avec telles de la membrane Plasmique (MP-) des cellules du système nerveux /226/ confirment la thèse qu'il ait le genre veritable du signal dans le granule chromaffine::Il est connu que le signal pour l'exocytose de tels granules (préexistés) est une augmentation des concentrations de Ca2+ locales /242/ (reg.V). Ces ions de Ca2+ doivent aider pour la déhydratation pendant les interactions intercarbohydrate "chaise" entre les glycoprotéines et glycolipides de la membrane de granule.Pendant une agrégation consécutive des glycoprotéines avec les glycolipides, l'interaction connue peut avoir lieu entre les PG et le système cytosquelette /224Pigs.67/. (Telle situation peut resemble la réversibilité facile de 11 agrégation des récepteurs sur la surface cellulaire avec les ions de Ca2+ /I53-I55/)r.On peut appliquer cette procédé des interactions des vésicules intracellulaires (granules) avec le cytosquelette pour établir le procès du transport "or données vésicules dans la cellule (IV). 9.Regulation des fonctions cellulaires par PG avec les ions de Ca2+ comme la conséquence de la modulation des dignaux cellulaires par les charges de MEC. I1 y a plusieures populations de PG dans la région cellulaire (Fig.8):(I) les populations des PG dans (et sur) la membrane plasmique de la surface (a), et dans la MEC (b) /inclu- ant la syndecane dans la membrane plasmique et les PG près de la surface cellulaire servant comme le pont entre le collagène et la FN (Figs.2 et 5)/; (2) la population de PG dedans de la cellule qui peut recycler entre la surface cellulaire et les compartiments intracellulaires; et (3) la population de PG sécrétée à l'extérieur /220,243,244/.Be nombre des molécules régulatrices et des enzymes comme la lipase lipoprotéine, thrombine, thrombospondine, bFGF, diaminooxidase, antithrombine, transférrine peuvent entre liées aux molécules de PG et suivre internalisation (PG meditée) qui influencent la distribution des PG entre ces populations /245 avec Refs/O De plus la valeur de la concentration du Ca2+ extérieur (Ca2+) ex peut régulariser telles distributions et le transport de HSPG dans les cellules parathyroide /244/ qui contiennent la majorité des HSPG dans leur famille des PG /246/.En conséquence de la concentration du (Caex2+) augmentée, les fonctions cellu- laires comme la croissance, et l'exocytose sont stoppées.Je propose que cela doive avoir lieu comme une conséquence de la structure proposée par moi /I,2 et IV/ où il y a une agrégation (connue plus haut) des molécules de HSPG de l'extérieur avec l'aide des ions de Ca2+ /réservoir (3)/ (Fig.8) conduisant ces molécules au réservoir (Ib) de MEO0Cela ne contredit par les travaux éxpérimentaux des données de la méthode "pulsechase" /244/. Par conséquence,l'augmentation des charges négatives sur la surface cellulaire stoppe le nombre des activité cellulaire /I.2/. On peut voir la confirmation claire de cette thèse dans les actions de la vitamine I,25 (OH)2D3 /247,248/0Selon ces travaux, cette vitamine inhibe la différentiation terminale des chondrocytes in vivo (et in vitro) avec une augmentation de la concentration de l'acide uronique et de Ca2+ dans le sang des rats rachitiques.Une augmentation de l'acide uronique doit caractériser une augmentation de PG (HSPG notamment) incluant cet acide dans ces PG.Par conséquence,on peut conclure que tel traitement avec vitamine D3 (I,25 (OH)2D3) stoppe la différentiation terminale selon la structure décrite*Le fait qu'une autre substance 24,25 (OH)2D3 (qui augmente le niveau de Ca mais ne change pas le niveau de l'acide uronique) ne stoppe pas la différentiation terminale,met des modulations des fonctions cellulaires (avec l'aide de Ca plus HSPG en corrélation avec la structure ci-dessus. I1 est connu que les plaques rachitiques ont la zone plus large que les chondrocytes hypertrophiques /247 avec Refs./. On peut expliquer cette zone plus large des chondrocytes hypertrophiques d'après cette structure comme une inhibition diminuée par la MEC de ces cellules à cause d'une insuffisance de l'action de la charge inhibante de HSPG/Ca2+. Avec une bonne convergerce des faits, je dois noter que dans la région des osteoblastes,en différence avec une large majorité des autres cellules /249/, le niveau de CSPG et DS(CS)pG (biglycane) (mais pas de H3PG) augmente dramatiquement aux stades derniers de la croissance et ces cellules (pendant la maturation) arrivent vers la confluence en se chevau- chant /249a/.Quand ces cellules normales créent les multi- couches,leur vitesse de la prolifération diminue seulement et on peut voir à partir de la structure établie ci-dessus (Fig.5) que cela ait lieu parce que l'inhibition par les charges avec les protéoglycanes CS(DS) est beaucoup plus faible que avec celles de HSPG et par conséquence la densité finale est très forte après la prolifération dans le cas de l'os. 10. La matrice cellulaire "dégénéré" dans le cas des ce llules cancéreuses et cellules de la densité faible. Les cellules cancéreuses transformées n'ont pas de KE: développée.Il y a plusieurs raisons pour tel phénomène.Chaque de ces raisons contribue à la dégénération de MEC:I). Généra- lement il y a la synthèse globàlement diminuée des molécules de MEC comme le collagène et FN par les cellules cancéreuses /250/; 2).Il y a le changement de la structure des molécules de MEC avec la transformation.Ces molécules de FN ont l'echa- ntillon nouveau et spécifique de la glycosylation avec la sialylation plus forte /251,252/et il y a la synthèse du hyaluronate et de la quantité large de CSPG /40,I93,253,257/; 3).Même ces molécules de HSPG (ayant les quantités augmentées) ont moins des groupes sulfate (dans la matrice péricellulaire et sur la surface) /250,259-26I/; 4).Les cellules transformées ne sont pas capables d'assembler la matrice péricellulaire /258,262/. La quantité diminuée de HSPG et de la charge totale avec la transformation conduisent,logiquement, à leur remplace- ment par CS(DS)PG dans les contacts-clés de MEC:collagène-FR- -PG (Figs.2J5)(ce qui doit donner le complexe moins stable mais encore réel avec quelque quantité limitée des molécules de HSPG redtantes) et au remplacement des HSPG dans les molécules de la surface PN,complexées avec leur récepteur (de FN) de la surface "BBXBt' (syndecane- semblable)."C'est comme s'il y a une liaison simple des chaînes DS de DSPG aux domaines de la liaison de HS sur la FN fixée à la matrice" /263/.Ce dernier événement doit conduire à la dissociation des molécules de EN de la surface cellulaire.Ce effet est augmenté par un obstacle stérique du site "RGD" de FN par ce type (CS/DS) de PG /24,130/.Le fait de l'effet inhibiteur prononcé de ces molécules de GSPG aux stades initials de l'attachment des cellules /264/ indique leur intervention au niveau des récepteurs intégrine de FN. De plus la nouvelle HSPG cancéreuse ne s' agrège pas, en différence avec les HSPG des cellules normaux /263/ ce qui doit déstabiliser les noeuds de MEC: FN -collagène-PG (Figs.2,5). La quantité très diminuée des HSPG et leur charge diminuée sont très essentielles pour l'absence de l'inhibition de con-, tact des cellules cancéreuses et une addition des GAG isolées du foie normal à la culture des cellules hépatoma induit l'inhibition de contact /264/.L'inhibition de contact n'est pas observée dans les cellules nombreuse de sarcome entourées par EN /265/ et les cellules cancéreuses adhérent presque normalement à la FN. Aussi, les cellules normalles peuvent incorporer la FN de cellules cancéreuses dans leur matrice /266/. Ces faits soulignent une importance de HSPS,les molécules bien chargées de MEC, pour une inhibition de la prolifération à la densité très forte. De point général de vue,il est difficile d'imaginer que les cellules cancéreuses (primaires ou métastatiques) aient le contact direct étroit avec MEC de la couche des cellules normaux parce que cela doit stopper leur division.Il est difficile d'imaginer aussi la déstruction de MEC des cellules normaux par la machinerie des cellules cancéreuses parce que dans ce cas les cellules normaux peuvent commencer de se diviser.Par conséquence de ce point général de quelle meilleur chemin est de supposer la création de la couche "neutre" autour des cellules cancéreuses sans les molécules bien chargées. 'Justement en réalité, on peut voir cette situation Comme il était mentionné, les cellules cancéreuses synthétisent la quantité large d'hyaluronate et de CSPG.Ces molécules d'hyaluronate font un complexe avec la FN qui doit être justement associé avec ces molécules de CSPG /267/. L'hyaluronate attaché à la protéine de la surface doit moduler la prolifération cellulaire /268/.Ce large microenvironnement,qui est faiblement fibreux,fortement hydraté et faiblement chargé /,,269/ (Fig.9) substituera la MEC bien chargée et orientée (Fig.5) et facilitera l'accélération observée abnormale de la croissance cellulaire /269/ des cellules cancéreuses.De plus les cellules cancéreuses doivent avoir une autre séquence des liaisons H intercarbohydrate pendant le signal /I,2/ car elles ont une autre structure des carbohydrates des glycolipides et des glycoprotéines /270/ incluant les intégrines /271/.Ce type du signal,par exemple, peut leur permettre de pousser presque sans support comme les lymphocytes normaux. Par conséquence, les données nombreuse prouvent la grosse différence entre les cellules cancéreuses et normaux concernant la dégénération de MEC des cellules cancéreuses.Le point essentiel de cette dégénération est une absence du "manteau" très bien chargé des molécules spéciales de PG près de la surface cellulaire placées dans les positions-clés de MEC (Fig.9) qui perturbent la fonction du réseau des liaisons H intercarbohydrate et interlipide nécessaires pour la prolifération des cellules. On peut voir la matrice analogue dans le cas des cellules de la densité faible quand il n'y a pas aussi de l'inhibition de la division cellulaire et les cellules qui se divisent vite ont le niveau de FN très diminué /Refs.272/.Comme les cellules cancéreuses,les cellules embryonnaires ne s'arreAtent pas leur division étant entourées par leurs voisines bien distan citées quique grâce à la charge neutralisant positive des molécules de bFG? (iii-2).Aussi comme dans le cas des cellules cancéreuses, elles ont la quantité augmentée de l'hyalu- ronate /273-275/ (Fig.9).Etant fortement hydratées et en créant les éspaces extracellulaires, l'hyaluronate donne aux cellules une bonne possibilité pour la continuation de la division cellulaire et à la motilité /273,276/ et "la quantité et la distribution de l'hyaluronate peut être un des facteurs contribuants" /277/. Il n'y a pas de MEC ordonnée avec les charges effectives fortes de PG (HSPG) parce que la quantité de HSPG, qui est nécessaire pour la création de telle matrice (Fig.5) est très faible et, de plus, les GAG ont moins des sulfates (moins chargées) pendant le cours de l'embryogenèse /273/.Une élimination du hyaluronate conduit à la compaction des cellules embryonnaires du mésenchyme, rétraction des prolongements cellulaires et une apparition des jonctions intercellulaires /273/. L'embryon entier développant doit avoir des régions accomplies où la division cellulaire doit s'arrêter et des autres régions où elle doit apparaître. les différences régionales dans la production de la matrice peuvent être distinguées avant la claire histodifférentiation /278/.Cela aussi doit être la raison de l'expression inégale des P; différentes (avec la sulfatation) pendant l'embryo- genèse /279f280/ parce que la présence, par exemple, de laquantité augmentée de HS inhibe (stoppe) le procès de la formation des organes /279/ (Reg. aussi III). ll. Lagénéralisation des le déclenchement de lasyn- thèse intracellulaire de FN conduit toute les MEC. "handicapées" à la matrice "classique":FN-PG-collagène (le cas seul de LB est le cas spécial). Onpeut voir clairement qu'après l'établissement de la matrice initiale d'après l'adhésion cellulaire il ait une création de la matrice avec FN grâce à la synthèse de la FN par la cellule,elle,même /281/.Telle synthèse et la création de telle matrice sont accompagnées par l'établissement des contacts focaux forts des cellules avec le substrat (V-10,Figs. 38, 42). On peut constater aussi que les cellules cancéreuses qui n:ont par de vraie matrice (et des vrais contacts focaux) n'ont pas de synthèse importante de FN /250,272/ et aussi leur capacité de retenir la FN est plus faible /Refs.272/. Mais en ajoutant la EN cellulaire de l'extérieur, on peut voir l'établies sement de la matrice extracellulaire ressemblant telle des cellules normaux /272,85/.Les cellules qui se divisent rapidement n'ont plus de synthèse importante de FN parce que le niveau de FN dans leur matrice est faible /Refs.272/.Ou,par exemple, les cellules musculaires (muscle strié) dans le début de leur développement (bien étudié) doivent avoir la matrice "handicapée" avec HA (et PN sporadique) (Fig.IO) mais après leurs divisions (avant la fusion), en approchant à la confluence, les cellules ont la matrice développée "classique" avec la FN (ITI-I)o C'est-à-dire, normalement, tous ces types des cellules dans l'état de confluence peuvent avoir cette MEC (FN) développée avec laquelle il y a l'arrêt de la division cellulaire. Et toutes cellules cancéreuses n'ont pas de telle matrice où la synthèse forte de FN doit être la responsable majeure.Mais on sait qu'il ait des nombreuse causes des changements moléculaires des transformations cellulaires comme les récepteurs membranaires des facteurs de croissance; les molécules responsabîes pour le transport des vésicules, les protéines kinases, les facteurs nucléaires et toutes ces causes différentes arrivent à la même "destination": le rangement du-système de FN.Mais comment? Dans la présente découverte, j'établis (IV) que,nustement,toutes ces causes soitent bien situées sur le chemin de l'action desvésicules "PKC". Et avec l'arrêt des divisions,cette circulation des vésicules "PKC" (avec la machinerie du signal accompagnante) doit s'arrêter, Par conséquence, on peut attendre que cette arrêt doive déclencher le signal pour la synthèse de la FN et la création des unités de-l'attachement fort de FN à la cellule par l'intégrine et la syndecane et les MF (Figs.5 et 38).Et on peut voir les autres confirmations de tette thèse inconvenante mais globale de la fonction cellulaire.I).Pendant l'application de lester phorbol (qui imite l'activation de la PKC du signal et l'augmentation de pH intracellulaire, ce qui est très important pour l'activation des gènes -IV) il y a une perte revérsible de la FN /Ref.272/; 2).ren- dant la mitose,le niveau de FN est dégradé /Refs.272/ (logi quement à cause du signal de la mitose avec PKC /I,2/ qui in hibe l'activation du gène de FN et inactive des intégrines); 3).Logiquement, l'activation cyclique de la machinerie du signal active les protéine kinases (IV) qui font la phosphorylation des intégrines "pour" la FN justement /27I/ et justement les intégrines près des sites focaux /282/.Et cette phosphorylation (à la tyrosine) diminue l'affinité des intégrines pour FN avec la perte de la liaison avec la taline /27I/ et par conséquence avec les NF (V-IO)O Le rôle de la région cytoplasmique pour l'affinité "extracellulaire" des intégrines pour FN est confirmé par les expériences quand les anticorps ("directs") contre la partie cytoplasmique des intégrines diminuent aussi l'affinité des intégrines /283/. Par conséquence, l'affinité de l'intégrine "pour" FN doit augmenter et la matrice (MEC-FN) doit se développer après la diminution de l'activation des protéines kinases (pendant l'action des vésicules "PKC"; (îv) dans une rétroaction positive.Cela doit conduire à l'établissement de MEC (FN) et l'arrêt des divisions cellulaires. III.La résolution de la structure fondamentale de la lame basale universelle avec 14 aide de la structure con crète du développement de la lame basale pendant l'in nervation du muscle. I.Le stade initial de l'innervation du nerf avec lemyo- tube avec l'aide des molécules d'agrine. L'axone pousant du neurone peut bouger dans la direction des concentrations de bFGF (facteur de croissance des fibroblastes basique) servant pour le neurone comme le facteur neurotropique /284w?85/ (Fig.IOA). Pendant la myogenèse initiale (les densités cellulaires faibles), la matrice HA-FN (acide hyaluronique- FN) (II-1O,Fig.9) est présente (Fig.IOA),où la distribution pointillée de EN et de l'agrine est aussi présente /286/.Les myoblastes synthétisent et accumulent la FN pendant leur division /287,288/ transformant l'espace extracellulaire dans la matrice-?N (II-6) /ce qui potentialise, logiquement, la fusion des myoblastes/ /288-290/.Le fait que le HA inhibe la fusion des myoblastes /29I/ confirme le changement inévitable de MEC de la matrice "HA-FN" à la matrice "FN" (Fig.IOA et B). Pendant ces périodes il y a aussi la synthèse du bFGF qui provoque,généralement, la plus forte concentration des cellules dans leur état de la saturation (confluence) (III-2) parce que cette molécule avec une forte Charge positive (en différence avec tous les autres facteurs de croissance) neutralise la dense charge négative de MEC aux densités plus fortes (cette forte charge arrente la division cellulaire /It2/).Au même temps le bFGF reste comme le signal mitogène /292,293/. Justement, pendant ces périodes initiales de la myogenèse (Fig.IOA) pendant la division des cellules myoblastes (progéniteures) (densité faible), une quantité (généralement) diminuée des HSPG mais la quantité augmentée des CSPG doivent entre présentes (11-10,Fig.9),ce qui permet,justement,aux molécules de bFGF (qui attachent fortement aux molécules de HSPG dans la matrice développée) de quitter l'espace extracellulaire des myoblastes pendant cette période (Fig.IOA) parce que,avec un bon accord,il n'y a pas de liaison,justement,entre CSPG (HA ou KSPG- kératine sulfate PG) et le bFGF (en différence "exceptionelle" avec la HSPG) /294,295/.Aussi, en accord parfait,ltaxone du neurone fait presque tout son chemin long vers le muscle pendant la période quand telles molécules de bRGF sont relachées et libérées avançant loin à l'extérieur et faisant le gradient de la concentration nécessaire pour le chimiotactisme du neurone:le nerf est déjà en point de pous- ser.tout prés du muscle "justement" le jour quand les myotubes commencent apparaltre /296,297/ Les molécules de EN sont organisées sans les brins dans le mésenchyme pendant les stades initials de la croissance de l'axone /298/ confirmant une dominance de la matrice HA-FN chaotique (FigoIOA) pendant ce stade /299,288/.On a trouvé que les cellules musculaires avac l'extrait embryonnaire ajouté spécialement (où les mo lécules de l'agrine doivent être présentes, logiquement, ce qui doit stimuler la libération de bFGF- reg. lll-4) libèrent les substances (dans le milieu conditionnel) guidant l'axone /300/. Ces molécules guidantes doivent être justement les molécules de bFGF. De plus, les cellules différentes, comme cellules du muscle strié, les cellules de Schwann et les cellules épithéliales de la cornée (toutes produisant les molécules de LB) produisent le milieu conditionnel où le facteur, guidant le neurone est la molécule(s) qui associe avec la LN. mais ce n'est pas la LN, elle-même /301,302 Ces résultats (pour tel medium) peuvent être aussi précisés parce que les molécules de HSPG asso-cient avec la IN ZRefs.30I/ et, justement,ces molécules de bFGF associent fortement avec les HSPG,c'est-à-dire avec la LN /294. Mlssi,la IN influence l'excroissance de ltaxone /268-270/ incluant le chemin de l'allongement du neurone vers le muscle où il y a les brins du substrat de IN /298, 307,308/ créée par les cellules gliales attachées à la 13 autour des axones développants /307-3TO/.Telle croissance de la neurite est semblable à la motilité cellulaire (V-Fig.32) et elle doit dépendre de (I) un accord des sucres entre les carbohydrates du substrat cellulaire et des récepteurs (molécules) de la surface cellulaire et (2) une présence des systèmes de l'intégrine et de leurs substrats (ll-5, Fig. 6).Les faits que (I) la IN nonglycosylée ne stimule pas l'excroissance du neurone (et l'étalement cellulaire) /3II/;; (2) la molécule de ConA (Concanavaline A) inhibe l'étalement cellulaire /3I2/; et (J) le peptide de la chaîne A de EN contenant le site "RGD" stimule l'excroissance da la neurite (et l'etaement cellulaire) seulement après la conjugation avec les glycoprotéines (transférrine ou hémocyanine) /313, 314/ confirmant tel rôle général des carbohydrates /1,2/ dans ce cas particulier de la INo La nécessité absolue du fragment E8 de IN (avec le site "RGD" de la liaison de l'intégrine -II-5) comme le site de l'activité biologique /314, Refs. 315/ doit avoir lieu grâce à son action comme le substrat de l'intégrine.Les anticorps contre les protéines attachant à la IN (p.m. IIO kDa et I80 kDa) (qui s'attachent au fragment E8 aidant à la liaison adéquate aux récepteurs cellulaires avant l'action de l'intégrine) (Figs IOC, D, II et I2) bloquent l'excroissance de la, neurite /3I6/ temoignant aussi pour une importance de tel système de fraction de l'intégrine.Aussi, le fragment 3, ayant le site de liaison avec lthéparine (le site de liaison de la syndecane- Figs.IOC,D, II et I2), est absolument nécessaire pour ltexcroissance de la neurite /317/.Cette situation avec les deux sites cellulaires de liaison de EN (les sites de liaison de l'intégrine et de lthéparine) est identique au système de l'action de l'intégrine sur la matrice FN (11-5, Fig.5) confirmant la généralité et la validité des structures données.La situation contraire est trouvée avec le peptide contenant le site YIGSR situé dans le fragment PI (la partie intérieure de la région de la croix de IN sans le bras long) (Fig.12): (I) le fragment PI ne stimule pas l'excroissance de la neurite (et l'étalement) /3I4/; (2) les anticorps contre la protéine de liaison de IN (32/67 kDa) (au peptide YIGSR) ne bloque pas l'excroissance de la neurite /3I6/.Par conséquence, ce site YIGSR ne représente pas le site d'attachement de l'intégrine.D'autre part, cette protéine de liaison de IN au site YIGSR (67 kDa) est très répondue aux environs des cellules différentes /316,317/.De plus, la sécrétion de IN et la sécrétion du nidogène (Nd) n'ont pas de corrélation pendant, par exemple,le début de ltembryogenèse:la IN est sécrétée mais la sécrétion du nidogène est absente /3I8/. Pourtant, le site d'attachement de Nd (à la LN) a la position voisine avec le site criptique YIGSR (yztglr à la chaîne s-LN BI /319/). Par conséquence, on peut supposer leur nature concurentielle et attendre une importance biologique de ce site YIGSR et de la protéine de liaison de IN (32/67 kDa) pour les cellules différentes, for instance, en garantissant (en LB) la structure particulière des carbohydrates en voisinage qui sont présents très fortement dans la protéine 32/67 (!) kDa /3I7,320/. Après la création des myotubes, le niveau de FN est diminué dramatiquement dans les régions miogéniques /289,290,287,321, 322/.Le fait que la FN inhibe la myogenèse ultérieure (et le développement de LB) /323/ confirme ces résultats. Mais aussi le neurone contacte clairement la MEC de la cellule myotube, ce qui est nécessaire pour le développement de la synapse. Aussi pendant ce contact il y a une inhibition spécifique de l'élongation ultérieure du neurone avec l'aide dufragment LRE de aLN /324, 325/ (Figs. IOD,ll et 12 ).Cette séquence amincacidique est située à la région des acides aminés C-terminaIs (vI0% de la longueur totale) de la chaîne de IN BIs (dans le fragment /25 kDa/ distal au fragment E8) /324-326/ justement très proche au site de liaison de l'intégrine (Fig. I2).Cette chaîne BIs doit être présent dans cette région synapse tique en complexe avec les chaînes A et B2 produisant la molécule s-LN native parce que ces chaînes BI isolées sont absentes dans la MEC synaptique mais les chaînes BIs (et A) sont concentrées fortement ici /327/.La spécificité claire de telle interaction est confirmée par le fait que seulement les mot o- neurones attachent à telle séquence "ERE" /324-326/ et même les substrates UTRRw abondants peuvent inhiber l'excroissance de tels neurones promus par IN /324,325/.La nature de ces interactions est différente de celles avec la participation des intégrines parce que les cellules restent rondes sur le fragment contenant ERE /324,325/.Cela signifie que telles interactions contiennent les forces de liaison sans interactions avec syndecane et microfilaments comme dans le cas d'intégrine (TIL Si faire une dénervation d'une jonction du nerf formée à nouveau avec un muscle,les conséquences (par exemple, phosphorylation de la tyrosine) du signal (agrine > bGF) (reg. II-3,4) disparaissent avec le temps /328/ et les agrégats de AchR se dispersent /329/. Aussi l'agrégation des récepteurs de l'acetylcholine (AchR) a lieu à la région de contact entre l'axone et les my.tubes /329a/.Les molécules d'agrine jouent le rôle important dans le développement de la synapse et spécialement dans sa phase initiale.Les molécules d'agrine sont présentes dans la MEC des myotubes avant et indépendamment de la présence du nerf /329b-329h/ étant présentes aussi dans la région future de l'extrajonction /329c/, ce qui doit signifier que la région future de contact ne soit pas prédéterminée par la structure des myotubes mais elle doit dépendre de la place précise où l'axone s'approche au, myotube. Le fait que l'agrine peut s'associer avec la EN /329i/ montre le chemin de l'attachement de l'agrine à la MEC. Aussi les molécules d'agrine doivent être présentes au lamellipode de l'axone des neurones moteurs /329c,3291-331/.De plus, ces molécules apparaissent sur les neurones justement pendant le stade de l'innervation (ou de la réparation) /329k,332,330/.I1 n'y a pas d'agrine à la surface du neurone normal mais sa synthèse et son transport vers le lamellipode apparaissent quand l'axone subit une ligature /330/. In vivo,le gène de l'agrine est exprimé seulement dans le nerf et dans le muscle embryonnaire (ce qui doive signifier naturellement /329k,329f,330/ que pendant le stade de l'innervation) /329k/. Les faits suivants: (I) la présence semblable de mêmes molécules d'agrine à la surface de toutes les deux cellules (d'interaction); (2) la présence (prédite) des carbohydrates /329k/ (3) la structure domaine de l'agrine /329k/ qui prédit sa flexibilité segmentale /333,334/ et (4) la dépendance de l'action de l'agrine de la présence des ions de Ca2+ (ions de Mg2+ au degré moins important) /335,336,332/ (ce qui est nécessaire pour les interactions intercarbohydrate homologue /1,2 V-33/)temoignent pour les interactions carbohydrate homologue qui sont importantes aussi pour les autres procès de la réconnaissance (V-3).Le fait-que les molécules chargées comme l'hréparine sulfate et les autres polyanions inhibent l'agrégation des AchR par les molécules d'agrine où une effectivité de l'inhibition était proportionnelle à la charge /337/ temoignent en faveur de telles interactions entre les molécules d'agrine (et entre les autres composants de NEC /LB/ participant dans le signal) /I,2/. Une apparence nouvelle des molécules d'agrine justement après la dénervation et l'endommagement /338/ quand on a besoin de répéter (en partie) encore ces procès de la réconnai- sance (Figs.IOC,D, II et I2) confirme l'importance des agrines, notamment, pour tels procès. Par conséquence, l'agrine doit être concentrée principalement dans les régions de la synapse /329i/. De plus, le fait qu'une addition des molécules d'ag- rine (seulement) dans la culture cellulaire contenant les cellules du myotube est suffisante pour l'agrégation des AcER,ar- gue pour une importance essentielle des interactions entre les agrines dans ce procès /329/.Je conclue que l'agrégation spontanée (sans le signal apparent, comme innervation) des AchR dans la culture /334,340/ et in vivo /329b/ est initiée par la libération des molécules d'agrine des myotubes dans la solution (reg. ci-dessus). Les interactions des molécules d'agrine déclenchent les changements de conformation dans la MEC avec le signal de bFGP- avec la création consécutive de la synapse. Le déclenchement des changements par l'agrine est un stade très important dans ces événements de "chaîne": le blocage de l'agrine par les anticorps stoppe l'agrégation des AchR /34I/. Suant présente sur les myotubes du muscle avant le signal de l'innervation, l'agrine se localise avec les amas initials des AchR /329b/.Il y a des isoformes différentes (quoique semblables) de l'agrine mais seulement quelques-unes font l'agrégation avec les AchR /329i/. 2. Le Changement de conformation de bFGF aprés les interac tions avec HS et la nature des interactions de bFGF avec MEC et avec la MP. Le bFG? sert aussi pour les myoblastes (progéniteurs) /aux densités plus faibles et par conséqunce avec la MEC sous-déve- loppée/ comme le facteur de prolifération et de différentia- tion /ReFS.342;343, 285/, Les anticorps (anti-bFGF) neutralisants bloquent la prolifération soutenue par le bFGF /292, 293/. Les autres mitogènes purifiés (E;FSinsuline- tous sont chargés moins) (aux concentrations actives dans les autres systèmes) n'étaient pas actifs dans la prolifération ou le delai de la différentiation terminale /344/.La régulation (par le mitogène) de la synthèse de l'ADN et la différentiation terminale ont lieu exclusivement pendant la phase GI mais le bFGF inhibe le déclenchement de la différentiation terminale indépendement de la réplication cellulaire approchante /345/. Après la rencontre avec l'axone grandissant (ayant les mo cules de l'agrine sur la surface- reg. ci-dessus) avec la MEC du muscle (myotube) il doit avoir lieu le changement de conformation des molécules de bFGF attachées aux molécules de MEC: par conséquence, le bFGF fait l'interaction avec son rece- pteur sur les myotubes fusionnés /346/.Ce approchement (très' voisin)de l'axone (neurone moteur-#) au muscle aqueletique a lieu quand les myotubes primaires sont justement formés /285/ dans ce cas spécial de la création de la Jonction neuromusculaire (NMJ).Telle présentation locale de ce facteur de croissance,se trouvant en MEC près du myotube,donne les moyens pour la stimulation de la cible postsynaptique /346/.Le bFGF (seulement) concentré localement avec l'aide des bancs (mais pas le bF;F en solution) fait l'agrégation des AchR au site du contact du muscle avec le banc (contenant le bFGF concentré) comme le résultat final /346/. Ce fait prouve la nécessité de la présence de tel bFGF avec sa concentration localement forte pendant la synaptogenèse /346/.Certaiment , cette concentration de bFGF,localement augmentée,est nécessaire pour la concentration augmentée des récepteurs de bFGF correspondants sur la surface des myotubes conduisant à la création de la région augmentée de la déhydratation près de MP grâce auxinteractions intercarbohydrate pendant la transmission du signal /I,2,V-3B/.La présence des carbohydrates sur le récepteur de bFGF (bFGER) confirme cette conclusion /347/.Aussi,les ondulations (nrufflesn) réversibles membranaires (souvent asso ciées avec,visiblement,le cycle des vésicules "PKC"- IV) étaient trouvées à la majorité des cellules après une application de bNF /348,349/,ce qui caractérise telle déhydratation et la fonte dela membrane (V-3B)OCela doit entre le composant nécessaire de la création de la machinerie cellulaire pendant le signal et aussi de la motilité cellulaire justement confirmant le rôle double de l'action de bFGF et des autres ligands (V): (I) comme le signal classique de la transduction et (2) comme le signal du chimiotropisme pour la motilité cellulaire /350/. Le déclenchement du signal est plus complexe dans ce cas (Figs.II et I2) queue interaction simple du ligand avec le récepteur correspondant.Après l'interaction des molécules du lamellipode de l'axone (avec l'agrine intégrée dans l'axone de MP) avèc l'agrine attachée à la MEC (IN), le changement de conformation des molécules de IN (!ig.II) (bien adaptées pour telles fonctions) doit avoir lieu /35I,3I5/. le fait clair que seulement une irradiation simple par la lumière UV Ssoit suffisant pour le changement de conformation de IN et le chan- gement de l'interaction de IN avec l'intégrine supporte fortement la conclusion ci-dessus.La flexibilité segmentale évidente de LN (comme et de FN) aussi soutient la présence des changements de conformation de ces molécules /353/.Le fait que la IN et l'agrine puissent être copurifiées /329i/ reflète leur interaction directe.Les molécules d'agrine se localisent avec la IN dans la majorité des membranes basales embryon,- naires /286/ ce qui doit confirmer le mécanisme de l'action géneralisée (Figs. 10, ll). De plus,les molécules d'agrine condensent (dans amas) ensemble avec les molécules de IN mais pas avec les agrégats consécutifs de HSPG et du collagène IV /354/ (Justement avant la fusion des myoblastes /286/ ou-avant l'innervation des cellules Schwann /286,355/) permettant aux axones d'atteindre leur cible (FN ne peut pas faire cela) /356/ où l'axone peut choisir,logiquement,entre les amas d'agrine-LN pointus,voisins et uniformes /286/ (fig.10C,D) arrivant à la position la plus prédéterminée.Naturellement, la IN doit associer avec les amas initials des AchR /357/.La présence de IN à la majorité des amas de la surface près du site de l'inner vation et aux autres régions de la surface des myotubes /354, 358,359/ confirme cette conclusion et aussi quelque présence de l'agrine aux régions hors de la jonction des cellules musculaires /33I/.Après l'addition de l'agrine, les amas vieux de LN peuvent coincider avec agrégats nouveaux de AchR /354/.Les LN potemtialement l'action de l'agrine pour l'agregation des AchR (mais pas des molécules de fibronectine) /331/.Oes données reflètent le fait que la MEC des myoblastes n'a pas de quantité ramarquable de IN mais celle des myotubes en a /360/.Aussi les amas riches en IN (seulement) (mais sans les AchH) apparaissent souvent et plutôt dans les cultures plus denses /354/. Les molécules de IN (avec la conformation changée) sont présentes aux concentrations fortes à la majorité des amas de la surface des AchR (et aux autres régions de la surface cellulaire du myotube) /354,358,359/. logiquement,la condensation des molécules de IN /avec quelques molécules de HSPG+ bFGF attachées à elles (Figs. ll,12)/ à la surface cellulaire a lieu initialement avec une aide simple des protéines de liaison Justement existant pour la IN /317,316,361/ Figs.10C,D, II et 12).Justement, ces protéines attachées "simplement" à la IN comme la protéine de liaison de 67 kDa (chargée très négativement avec 33 aspartates qui est différente d'une autre protéine de 67 kDa qui attache au, site YIGSR dans le fragment PI) et le nombre des autres protéines de liaison avec la LN attachent (ou attachent logiquement) Justement au bras long de EN /317, 316, 362.362-364/. De plus, cette protéine de 67 kDa attache précisement à l'extrémité distale du bras: le domaine E3 (Fig12) /362/. Le fait que le bFGF (synthétisé ou ajout6) reste attaché dans telle culture cellulaire prouve l'existance de tel complexe IN-HSPG préexisté (avant le déclenchement du signal par l'axone) (lll-l). Ces interactions des protéines de liaison avec IN, conduisant à la condensation. de IN, doivent être concentrées avec l'aide des forces intercarbohydrates (largement repandues) parce que les deux types de ces molécules ont une quantité ennorme des carbohydrates /47/. Le fait que (même après la création de LB) les protéines de 65 kDa sont distribuées seulement à la surface basale des cellules épithéliales de la cornée /365/ et aussi le fait que la protéine de liaison avec LN (67 kDa) (pas celle qui attache au site YIGSR) colocalise avec la IN à la LB près de MP /362/ confirment clairement une importance de leurs interactions (spécialement avant le changement de conformation des molécules conduisant à leur site d'attacement nouveau).Les expériences ci-dessus' /365/ doivent concerner la protéine de liaison de LN (65 kDa) (mais pas la protéine de liaison avec lesite YIGSR) parce que: (I) il y a des anticorps qui bloquent un attachement de LN à la membrane cellulaire qui sont faits avec l'aide des bras longs de EN (Fig.I2) et (2).sa liaison avec la IN est éliminée avec les concentrations élevées du détergent glycoside et de NaCl. Après le- changement de conformation décrit ci-dessus, les molécules de LN doivent réagir avec ces intégrines correspondantes sur la surface du myotube (Figs.IO ,II et 12) par son site actif-' ("RGD" semblable) avec l'aide aussi des interactions carbohydrate (V-3) /1,2/. Cette interaction entre les LN agrégées initialement et leur intégrine est absolument né cessaire pour la différentiation du muscle /366 et les Refs./ parce que l'intégrine participe dans la trandsduction du signal /367ç368/. Beaucoup de réponses cellulaires conduisant à la participance du cytosquelette sont provoquées réelement par l'inter-action de LN (située sur les amas initials de LN-agrine) avec cers intégrines sur la surface cellulaire /323, 369/. Comme le résulatat,la coloration des intégrines dans tels systèmes est parallèle aux fibres des MF /367,368,370/ et les intégrines aident pour l'attachement des cellules musculaires au substrat /370/.De plus, seulement une addition des molécules de LN (dans le système analogue de cellules épithéliales de la cornée sIII-8) conduit à la réorganisation du réseau de l'actine cytosquelettique /Refs.365/ et induit une augmentation de l'agrégation des AchR /371/. Comme la conséquence, évidemment, les intégrines présentent intensivement à la LB contenant la LN et la distribution des intégrines coincide avec les amas de IN /370/o La différence entre la distribution des intégrines et la FN ou le collagène /37P/ confirme l'interaction de LN avec les intégrines correspondantes0 I1 est confirmé aussi par le fait que la stN et la LN ont, généralement, des récepteurs différents /372,373/ et il n'y a que la petite quantité de FN.après la fusion (Fig.IOC) mais la LN est localisée aux myotubes principalement /368/ et aussi près des autres cellules produisant les molécules de LB (endothéliales, épithéliales) /368,360/. De plus, la LN est un facteur de l'adhésion pour les musc:les squelettiques (et aussi des cellules endothéliales -reg. 111-8) /Refs.354;374/. Ces molécules activées de l'intégrine déclenchent les interactions de la syndecane de la surface cellulaire (contenant les chaînes GAG-HS et GAS-CS -#ll-5) avec les microfilaments (Figs.7,11,12) qui (la syndecane) a les interactions spécifiques sur la surface cytoplasmique membranaire avec les filaments de l'actine (11-5, Figs.5,7,II). Telle apparence précoce (avant l'agrégation des AchR) des microfilaments de l'ac- tine dans la région des agrégats futurs des AchR est claire- ment observée /37-5/.Le nombre des autres faits- temoignent en faveur de la participation de l'intégrine obligatoire dans ce signal de l'agrégation des ÀchR /comme l'agrégration pour les autres signaux incluant la motilité cellulaire (Fig.3'Y clairement prouvée par moi plus toAt- II-5, Figs. 5,7/. Le "patching" (agrégation relativement faible) des récepteurs AchR dans les myotubes cultivés a lieu seulement sur la surface ventrale adjacente au substrat /376-379,354/ (le signal principal dans un myotube simple doit entre 1 'agrine libérée en solution au stade dernier de la formation du myotube- reg, 'c' cidessus).Quoique il y a quelques amas sur le coté-dorsal 354/, ils apparaissent seulement comme les excroissances courtes, ce qui doit signifier qu'ils a'pparaissent pendant le mouvement. cellulaire où l'etalement (V). Le fait qu'ils n'aparaissent pas encore sur le côté dorsal après la dispersion ré versible des agrégats des AchR /379/ supporte cette conclusion.Le fait (I) ci-dessous aussi supporte cette conclusion: ces agrégats à la surface dorsale ont la structure différente où les LN sont melangées avec les AchR /354/ ce qui correspond bien à l'agrégation non sélectée des protéines à la surface dorsale pendant la motilité cellulaire(étallement) (#V) A la surface ventrale, la LN est trouvée en concentration la plus- haute aux bords des amas des AchR /354/, ce qui montre l'action du transport par la machinerie localisée /Figs.I9,24/ (#lV). (2)Ces agrégats des AchR sont concentrés entre les points des contacts les plus proches entre la cellule et le substrat /376/. (3) Les molécules de vinculine, actinine-; , filamine, spectrine, taline et intégrine, qui doivent être placées où attachées à ce système avec l'action des molécules de l'intégrine (V), sont mélangées entre elles avec les AcHR dedans les amas /376, 380,Refe.381/. (4) Les molécules du Ca2+ sont nécesaires-en solution pour tel attachement /376/ parce que (aussi) les intégrines doivent faire les interactions avec l'aide des ions de Ca2+ divalents (ll-5).L'attachement aux MF conduit-à l'immobilisation future du système intégrinesyndecane (Figs.'5,6,7,8) nécessaire pour la création consécutive de la machinerie du signal avec l'aide de l'interaction bivalente "classique"de IN avec l'intégrine (Figs.II,I2) et la syndecane (Figs.II,I2) par le site de liaison d'héparine du fragment E3 DE LN/315/ /comme lastructure de MEC-FN (11-5, Figs.5,6,7,8) resolue par moi globalement avant/.De plus l'ac- tivation de l'intégrine doit produire la libération des molécules de HSPG (incluant les syndecanes) pour la MEC et aussi pour MP (Fgs.II,I2) ce qui est la caractéristique générale de l'attachement cellulaire et de l'étalement (V).Telles molécules de HSPG fournissent une activité biologique au bFGF /376,382,350/ au moment' quand les molécules de HA,CS et DS sont inactivées /376 294,/. 11 doit avoir lieu aussi (Figs.II, 12 une interaction des récepteurs de l'affinité faible pour bFGF de ces HS de syndecane avec le bFGF. Telles interactions syndecane-bFGF ont lieu réelement même dans la colone /383/. En outre, plus l'expression de la syndecane dana-la cellule (transféctée avec le ADNc)j plus la liaison de bFGF à telles cellules/384/. La syndecane.est-nécessaire comme une molécule accessoire au récepteur de l'affinité forte de bFGF /385, 386/ (Fig.II). Par cosequemnce, les molécules de bFGF, conjugées avec les molécules différentes de HSPG, sont présentes dans la MEC (et EP) /383,387/. Si prévenir un attachement de la PG de la surface cellulaire (syndecane) au bFGF il y a la liaison, essentiellement moins forte, de bFGF à son récepteur et il y a une induction de la différentiation terminale des cellules du muscle squelettique /344,345 et ci-dessous lll-7/ à cause de l'absence complète des signaux bFGF-récepteur.Si les cel lules- mutantes ne synthétisent pas d'héparine, le bFGF lie à son récepteur seulement avec l'aide de l'héparine exogène /382/ et par conséquence cela signifie que la HS participe directe ment à la liaison de bFGF à son récepteur /383,385/. La base de telle interaction induite de bF;F avec son récepteur membranaire de l'affinité forte (Fig.II) est le changement de conformation de bFGF après sa liaison aves les HS /383,j9I, 392/. Après la liaison de l'héparine au bFGF il y a une apparence du déterminant antigénique nouveau sur la molécule de bFGF qui posède l'activité biologique dans cet état /39I,392/. La liaison de bF;F positif à l'héparine négative peut être détruite seulement en solution de NaCl de I,6M (!) /394/. Logiquement, les interactions carbohydrate participent dans l'interaction de bFGF avec son récepteur parce que: (I) sans ses propres carbohydrates, le récepteur ne peut pas lier le bFGF; (2) le domaine de la liaison de bFGF à son récepteur a les carbohydrates /395/. De plus, les 2 peptides de bFGF qui peuvent lier au récepteur (et aussi les mêmes peptides lient à l'héparine!) peuvent être les substrats de l'adhésion cellulaire /395/ ce qui signifie clairement que chaque tel peptide a ses propres carbohydrates (V). 3.Le bFGF est le ligand typique sur le signal faisant l'agré gation des AchR. Certainement, il doit avoir lieu le signal "classique" /1,2/ (IV) avec l'aide des molécules b?GF subies le changement de conformation après leur interaction avec les récepteurs de bFGF correspondants conduisant au nombre des procès incluant l'agrégation des AchR induite par le bFGF. Par exemple, le bFGFR est la tyrosine kinase /396/ activée avec tel ligand bFGF et ses inhibitions conduisent à l'inhibition de l'agrégation des AchR /346/. Une formation de IP3(inositol I,4,5-triphosphate) et de DG (diacylglycérol) après l'action de bFGF /397399/ confirme aussi l'action du signal de bFGF et une très forte concentration des facteurs de croissance (b et a FG?) diminue la stimulation -mitogénique 397-399,394/. Aussi, la phO (phospholipase O) est le substrat majeur du récepteur FGF /400/. 11 y a la similarité entre les bFGF et aFGF (FGF acidique), et les récepteurs du facteur de croissance liés à l'héparine (clonés) réagissent avec ces deux molécules (a et b FGF) /400/. Et aussi (in situ) les molécules de b et a FGF réagissent avec le mAme récepteur /284,40I/. Les autres facteurs de croissance comme 1ssEGF (ayant leur action avec l'activation de la tyrosine kinase)produisent aussi le signal avec le cycle de l'inositol phosphate /400/. Aussi le bFGF /comme et EGF (facteur de croissance épider- mique)/ activent la phC avec l'AlF4 et avec la thrombine /40I/. Aussi comme pour signal "classique" avec le transport des vésicules de "PKC" (IV-6), les molécules de ras 21 sont nécessaires (elles agissent après l'action des molécules src (tyrosine kinase) /396/. Une apparence de mitichondrie (IV-6) et des larges vésicules claires dedans des cellules musculaires et nerveusesdans les régions de leurs contacts (semblables à leur apparence aux régions des connes de l'excroissance) temoigne aussi en fa- veur de l'interaction bFGF-bFGFR (au myotube) comme le signal "classique" /1,2/ (IV) ce qui doit être la partie du système du transport des vésicules "PKC" portant les substances de la "construction" pour la machinerie du signal (IV-6) produisant les densités membranaires dans telles régions de contact /402/. .De plus le fait que le procès de l'agrégation des AchR soit le procès de l'agrégation focale où les petits agrégats agissent comme les centres pour les agrégats ultérieurs /380/, confirme la présence de la nature du "train" transportant les vésicules dans la machinerie du signal (lV,Figs 19,20,24). 4. La construction de la machinerie du signal et la libéra tionde la HSPG et du bFGF de la cellule. lé début de la création de lame basale intense à la région de NMJ. comme le résultat du signal "clasique" de bFGF il y'a la construction de la machinerie du signal (IV). Si arrêter, par exemple, la machinerie cytosquelettique du transport des vésicules (avec "le matériel de la construction") à la région future de NMJ par les anticorps injectés contre la tropoymisine /403/, ou en faisant la mutante cellulaire sans la synthèse de la tropomyosine /404/ (qui n'est pas trouvée à la NMJ /!/) /375/ il n'y a pas d'agrégation des AchR après l'action de l'agrine. Aussi,si bloquer la synthèse des protéines (évidemment nécessaire pour les substances de la machinerie du signal) plusieures heures avant le signal de l'agrine il n'y a pas d'agrégation de HSPG et,par conséquence, l'agrégation des AchE (qui l'accompagne) doit être aussi completement éliminée /405/. La diminution de l'inhibition de ces agrégations avec la diminution de temps entre le début de l'inhibition et le début du signal de l'agrine /405/ prouve que les substances nécessaires dès le début pour la machinerie du signal (IV) soitent déjà produites et stockées dans la cellule avant le signal.Aussi l'agrégation des AchR est inhibée avec les substances qui inhibent le métabolisme de l'énergie /335/, ce qui doit prouver la structure du movement des vésicules avec la participation du cycle IP3, de Ca2+ et de la mitochondrie (Fig. 20, IV) et aussi le besoin de 1'ATP nécessare pour l'activité de la pompé H pour tel mouvement des vésicules (IV, Figs0I8,20).Les molécules de bFGF modulent la synthèse et la sécrétion des molécules de MEC /348,406/ incluant la HSPG /406, 407/.Eh arrivant à la confluence (sans'bFGF),les cellules ont les phenotypes différents (et les GAG aussi).Mais avec le bFGF, leurs phenotypes sont suffisamment précis /407a,348/ quand il y a la libdration des PG (avec GAG) (de plus) en quantités fortes (avec les densités des cellules aussi plus fortes) en créant la LB dans ce cas avec ce type des cellules et le content particulier de MEC (principalement: collagène IV,LN et HSPG /3I5,408/). C'est un procès autocrine: le bFGF activé (Fig.II) stimule la sécrétion des molécules de bFGF nouvelles. La libération des molécules de bFGF sécrétées à nouveau (qui n'ont pas de séquence du signal /409,410/) a lieu par la voie spéciale (reg. IV) et ces molécules (ayant la forte charge positive /411/) doivent former le complexe avec les amas- des HSPG en MEC (ayant la forte charge négative) /3I5/ (et aussi avec les protéines intégrales dans la MP contenant les charges de HS /4I2/). Comme le résultat, toutes les molécules de bFGF doivent être liées à la MEC cellulaire et il n'y a pas de bFGF libre dans le milieu conditionek/413-419,343, 350/. Seulement telles molécules de bFGF attachées à la MEC (la HSPG dans la MEC) sont activées dans le cas des cellules musculaires et aussi des cellules endocrines ou cellules osseuses /4I9,420,293/. Les molécules de bFGF,qui ne sont pas encore sécrétées, "attendement" le signal de bFGF extérieur (de MEC), étant- dans les fortes concentrations à l'extérieur des cellules correspondantes /42I/. Le métabolisme autocrine de l'action de bFGF est aussi confirmé par le fait que la quantité de récepteurs de bFGF par une cellule soit inversement proportionelle aux concentrations de bFGF intracellulaires /4I7,4IO/. Par conséquence, les molécules de bFGF prennent une partie importante dans le développement de la synaptogenèse avant et après le signal de l'innervation avec l'agrine. La déposition des HSPG nouvelles commence au stade premier de l'agrégation des AchR des synapses, développantes après l'innervation, et ces molécules sont accoumulées constamment pendant la myogenèse /326,422,423/. Les molécules de HSPG "nou velles" et "vieilles" sont différentes et ont la distribution différente: les HSPG synthétisées (après l'innervation) sont accumulées à la région de NMJ /423/o Comme le résultat, la concentration de HSPG est 5 fois plus forte à la T;B de la région NMJ que aux autres régions /422/. Sauf les cellules musculaires /422/, cette couche nouvelle intensive des molécules de HSPG est aussi déposée à la région MEC (LB) par les extrémités de l'axone du nerf. Mais avant cette déposition,les extrémités du nerf provoquent une nation de n'importe quelles molécules de HSPG de l'extrajono- tion déja présentes sur la voie des contacts cellulaires par la libération ou l'activation des protéinases /423-426/. Cette intensification de MEC initialement faible a lieu après un attachement du nerf au contact de la synapse /402,427, 428/ au stade premier de l'agrégation des AchR des synapses développantes/329g,422,423/ (reg.ci-dessous). Par consèquece, la présence intensive de bFGF en MEC (après le procès autocrine) conduit à la création de la couche moléculaire intensive de la LB /429,4I8,430,348/ où le début de la-création de LB est déclenche par l'attachement de.l'axone nerveux/402, 428, 427/. Les 13, semblables sont créées dans le nombre des autres systemes(lll-8). De plus, dans telles régions de LB il y a la synthèse des autrs molécules specifiques comme, par exemple, s-laminine /43I/. Ces molécules attachent spécifiquement justement seulement aux -neurones moteurs, en différence avec la IN qui attache à n'importe quel type de neurones /43I/. Ces molécules de s-laminine ont la localisation unique à la région de la synapse étant réstreintes à O,I% de la fraction de la LB du fibre musculaire /43I/.Les neurones moteurs doivent-réagir spécifiquement avec ces molécules de sLN avec l'aide de la séquence des acides aminés "LRE" /43I/ (Figs.IOD, II et 12 Les agrégats des molécules de LN, ayant une bonne interaction avec les neurones (reg. ci-dessus), présentent aussi à la région NMJ (comme et aux autres régions quand même) de LB/329g,432/. Les molécules de FN sont présentes rarement et à l'extérieur des amas des AchR /428,432/ parce que, visiblement, les axones neuronals dégradent les molécules de FN à la région située au-dessous de l'excroissance de la neurite /426/. 5.La création et la structure de la lame basale. Comme il était mentionné, pendant les interactions nerfmuscle (comme aussi et dans le nombre des autres interactions /433/) il y a la construction de la LB. A cause de l'importance extrème de la structure réele de la membrane basale, je développe sa structure précise séparement dans cette chapitre. Après une interaction des chaînes des HS de la syndecane avec le domaine E3 des bras longs de LN (Figs. 11,12), le changement de conformation continue(seconde consécutive") de LN (le "Ier" changement de conformation de IN conduisait à son interaction avec l'intégrine- Bigs.IO,II). Le fait, que le HS (des HSPG des LB) soit beaucoup moins effectif dans tel procès que l'hé- parine /434/ confirme l'origine syndecane de tel effet parce que la structure de l'héparine est plus proche à la structure de la chaîne HS de la syndecane.Cette interaction conduit à la régulation spécifique des IN augmentant la macrostructure de LN en créant l'assemblée supramoléculaire de IN /434/. I1 y a le changement de conformation de LN entière de l'extrémité du bras long (fragment E3) jusqu'aux autres domaines /434/ conduisant à l'agrégation de IN partielle (Ierstade de 1'agrégation) /435/ transmit par les chaînes longues de IN (sans Ca) /435/ (Fig .13). Les anticorps anti-E3 inhibent le procès similaire de l'autoassemblée de IN /436/. La dimérisation des domaines E3 (facilement protéolysables) au bras long de la chaîne A comme aussi et autoagrégation de la partie distale du domaine E8 (fragment 25 kDa) /438/, confirme telle structure.La présence claire de 2 cordes parallèles ("traces") /surtout dans la lamina lucida (LL)/ marquées aussi par les anticorps-anti-IN (comme aussi avec les anticorps anti-HSPG et anti-collagène) séparées par un espace suffisamment transparent /438S439/ et réduites par la plasmine aux filaments plus fins /440/ prouve insistement telle structure. Malgré la distribution commune du collagène IV,LN et PG dans la membane basale, leur distribution dans les "traaces" doubles ne se coincide pas. On peut expliquer la situation en acceptant l'action (comme le cément) des chalnes-GAG: quand les PG dissocient de la IN il n'y a plus des "traaces" doubles, et aussi le marquage des PG coincide avec les "traaces" doubles, mais ce n'est plus le cas avec la LN et le collagène IV /438,439/. Ce procès de la dimérisation de LN est transformé en association (dépendante de Ca2+) des domaines des extrémités globulaires des bras courts /434,441,442/ (Figs.I4,I5). Mais telle assemblée supramoléculaire de LN est clairement absente dans le froid /443/, ce qui doit refléter l'existance de deux états "primaire" de conformation de IN où le déclenchement de la transition d'un état à un autre dtat permit à la EN de réagir avec l'intégrine, premièrement (Fig.II). Déjà, ces faits fondamentaux permettent de désigner la structure générale de la LB (Figs.I4,I5) où les bras longs agrégés sont trouvés (où plus précisement: représentent) dans la couche LL. Et la couche lamina densa (LD) est déterminée principalement par le réseau des structures des bras courts tétragonals faisant les cycles divalents construits par les quatre bras courts- les 2 bras de chaque molécule de EN (Figs. 14, 15), La largeur de LL (I5-65 nm) /44I/ correspondbien à la taille des bras longs des molécules de EN /47.,3I7,438/ qui présentent seulement dans la ID /444/.De plùs des bras périodiques des filaments traversant la LL /445/ (Fig.14) correspondent bien à tels bras longs de LN entre les récepteurs membranaires de l'intégrine et la LD. La présence des segments centraux de LN (domaine I), des molécules de nidogène (Nd) liées à eux et des extrémités des bras courts (domaine .4) dans le segment étroit de ID à la région de la jonction avec la LL /434/ confirment aussi telle structure.Le fait de l'existance de la LB riche en IN sans le collagène IV (fait par le tumeur en tissus) /435/ et des LB des capillaires (formées à nouveau) aussi riches en IN et sans le collagène IV /447/ confirment confortablement le rôle primaire de IN dans la construction des 13. La taille (N I4 nm) des espaces qui séparent les cordes dans la LD correspond bien au réseau structurelle proposé (Figs.14,I5). Les molécules de HSPG produites et exocytées après le signal de bFGF (Pig.II) doivent faire une interaction avec la EN. Elles étaient déjà présentes (conjugées avec le bFGF) logiquement près de la extrémité du bras long des molécules de LN avant l'interaction du nerf avec la sLN (et l'agrine). I1 y a la formation du complexe direct entre ces molécules /448/. Cette interaction est guidée principalement par les interactions interprotéine hydrophobe qui peuvent être détruites par la solution de GuHCl (guanîdine chlorhydrique ) concentrée /448,449/. La partie de HSPG est encore liée à la IB même en solution de Na de 0,5M /448/ (aussi les chaînes de GAG /HS/ peuvent réagir avec les parties différentes de LN avec les domaines globulaires intérieurs et au-dessous de la région de croix /3I7,-450,45I/). Telles interactions HSPG-LN sont particulièrement intensives dans la région des bras longs- de LN /452,438/ (Fig.12). Le signal de bFGF "furnit" justement telles molécules de HSPG (Fig.II). Justement, comme le résultat de telles interactions HSPG-EN à côté des deux lignes parallèles ("traces") faites avec les 2 molécules de LN /438,446/, on peut observer les densités succesives des petites molécules de HSPG /439/ qui doivent représenter les protéines de HSPG de la densité forte ayant la taille similaire /448,453,454/.Je voudrais souligner la différence entre les molécules d'HSPG différentes des origines différentes /Refs.nombreuse 454;455-457/ et aussi souligner une importance de petites molécules de HSPG de la densité forte pour les protéines qui représentent, par exemple, une classe singulière de HSPG dans la membrane glomérulaire basale /453/. Aussi, il est très difficile d'imaginer les distributions similaires de 'N, HSPG et collagène IV (Fig.14) dans les LB /438,446,445,3I5/ avec tellement large protéine du coeur (80 nm) de HSPG'de la densité faible /3I5/. La structure tétragonale quasirégulière des amas de HSPG (sa périodicité de 60 nm justement correspond à la Pig.I4) est révelée insistement à la IL avec-l'aide des molécules cationiques comme la ferritine ou le cytochrome C et aussi avec le colorant ruthenium rouge /452,45.8-460/. Ce fait établi (comme et les autres faits, reg., par exemple, Fig.2 de /3I7/) aide de déterminer la structure démontrée aux Figs.I4 et I5, de plus je ne vois pas réelement des autres possibilités d'exécuter telle distribution des amas de HSPG. Les régions avec les amas de HSPG(particulièrement dans la LD) participent dans tels procès importants comme la filtration de l'urine. I1 est bien connu que les colonnes différentes remplises avec les polymères de carbohydrates(et de GAG notamment) (Sephadex et Sepharose inclus) contiennent les canaux hydratés où les macromolécules et la solution passent /455,461/. Si introduire les molécules de ferritine cationisées, ces molé cules vont à travers des canaux étroits crées par les procès de "pieds" épithélials dans un espace urinaire faisant la continuation avec la décoration des groupes des particules de HSPG dans la LI extérieure /455,462/. De plus, la neutralisation des charges où l'élimination des molécules de HS stimulent une augmentation de la sécrétion dans un espace urinaire des molécules différentes (comme la molécule d'albumine négative où l'IgG positif). Toutes ces faits prouvent que le chemin de la filtration de l'urine passe par ces canaux, particulièrement, dans la ID (Figs.I6,I7) avec les molécules de HSPG agglomérées (et aussi les agrégats de IN et du collagène IV- Fig.I5). La distribution du collagène IV dans les cordes de LB (~5nm) aussi (!) coincide avec celle de LN et de HSPG (et Nd) /438, 464/ et les projections du collagène IV à travers de IL ont la structure semblable avec celle de la HSPG /445/. Mais le collagène IV ne réagit pas directement avec la EN /465/(où la IN est bien purifiée avec l'aide de Gu-HCl ce qui doit signifier: sans HSPG et Nd). La liaison du collagène IV avec l'agglomérate de IN avec la HSPG (Fig.15) a lieu par la liaison de HSPG: Comme il était démontré avant (#ll-2,Fig. 2), telle liaison est accomplie par les interactions intercarbohydrate homologue entre les carbohydrates du collagène et'de HSPG. Dans la publication /448/, la formation du complexe du collagène IV avec la HSPG est établie pour l'hélice et la partie NCI du collagène IV et tel complexe peut entre perturbé par molécules chargées comme le sulfate de dextrane, CS ou NaCl en solution de 0,I-0,2M confirmant la nature des interactions dépendant de la charge (des carbohydrates). Aussi, seulement la partie de RSPG (#55%) peut être extraite de la LB par la solution de Gu-HCl de 4M mais l'autre partie de la HSPG avec les mêmes GAG (#45%) précipite dans les mêmes conditions /449/. Prenant en considération la solubilité totale à ces conditions de IN et de Nd, on peut confirmer la présence des interactions collagène IV-HSPG nonhydrophobe, aussi en accord avec la conclusion ci-dessus.Le fait que après la rupture de telles interactions intercarbohydrate homoloque (entre HSPG et collagène IV) avec l'EDTA, on peut obtenir seulement deux types des complexes définis: les oligomères du collagène et EN-nidigbne /466,465,467,441/ (où le collagène IV ne se lie pas directement à la IN purifiée /465/),aussi confirme telle conclusion.Seulement le collagène IV (mais pas les autres collagènes) peut réagir avec les bras longs et courts de LN (quoique par les autres molécules !) /465/.Premièrement, les tétramères du collagène IV font les interactions noncovalentes par les-régions 75 /468/ devenant comme l'échafaudage initial du collagène (par les 2 molécules se recouvrant"tête à tête"/469/). Cette interaction noncovalente prend la place aussi avec l'aide des sucres /II-I, 433/ par les interactions intercarbohydrate homologue /I,2/. Le collagène IV a les 6 disaccharides dans la partie 7s (NH2) de la molécule et aussi un hétérosaccharide N-lié avec une biantenne /443,470/.Logiquement, justement les sucres"additionnels"(ctest-z-dire qui "restent" après les interactions intracollagène-Fig.I) permettent faire telle tétramértsation aux régions 75 (NH2) /471, 469/ et après telle tétramérisation il y a une spiralisation de telles 4 molécules du collagène (connectées aux régions NH2) autour des agrégats LN-HSPG (Fig.14) permettant la rencontre et une interaction noncovalente des régions NCI (COOH) aux extrémités des bras courts de IN (Figs.I3,I4,I5) de deux brins (triple hélice) différents -"tete à tête". Ces positions du collagène avancées permettent plus tard faire les croisées covalentes S-S à la longueur entière de la molécule de collagène /468,472,473/ (initiglement aux extrémités NH2 et plus tard aux extrémités COOH /468/). D'après ces interactions du collagène IV avec le complexe (LN-HSPG), le collagène IV (aussi) doit avoir les interactions avec la MP du myotube parce que les résultats nombreux montrent cette capacité nouvelle du collagène IV dans ces conditions /3I5/ (les contradictions partielles entre ces résultats, on peut facilement expliquer par la présence /ou absence/ des molécules de HSPG avec la LN). Comme le résultat, la distance maximale entre les deux parties 7s (ou les deux parties NCI) du collagène IV est égale à~800 nm (c'est-à-dire à 2 longueurs du collagène IV /47I/).Le réseau semblable peut être obtenu in vivo et aussi in vitro /474/, ce qui temoigne pour la prédétermination de cette molécule à telle structure générale.Telle pér formance très spéciale et originale des molécules de collagène IV peut avoir lieu seulement à cause de la flexibilité supérieure de ce type du collagène /475/. Cette flexibilité pro noncée est achevée par 26 irrégularités avec l'hélice triple du collagène IV avec la flexibilité augmentée dans la partie NH2(c'est-à-dire la partie qui doit s'enrouler autour de l'agrégat LN-HSPG dans LL-Fig0I4) /3I7/o Ces irrégularités ont les positions invariantes dans l'évolution étant, évidemment, importantes fonctionnellement.La confirmation de la spiralité du trimère du collagène IV (mentionnée ci-dessus), on peut voir in situ (dans la LB) où le filament monovalent (diamètre I,7 nm) (semblable à un trimère du collagène IV -/469/) souvent enroule autour d'un autre (le long de l'axe du filament)/474,434/ Une extraction avec le sel fait une action semblable au traitement par la molécule de plasmine produsant telle structure du monomère du collagène /474,434/ en confirmant une élimination des ponts de HSPG (et aussi EN) dans la structure de LB (Fig.14) par chaque traitement.La confirmation excellente de telle structure, on peut voir aussi dans le fait indépendant quand le diamètre mesuré du tétramère du collagène dans la LB était 6 nm et celui du monomère était I,6nm pour les LB différentes /474, 476,477/. I1 est évident que pour composer le diamètre 6 nm, les quatre filaments (I,6 nm) doivent produire une région vide à l'intérieur. Justement, cette région peut être remplie en justesse par la IN (et HSPG) (Fig.14). Cette structure fait une explication excellent du mécanisme de la maladie diabète . Il est établi que pendant le diabète il y a l'apaississement de la LB à la IL et SD et ce procès a lieu grâce à la quantité augmentée du collagène IV avec sa glycosylation augmentée par la liaison d'un ou de deux carbohydrates à la hydroxyllysine /478/. (C'est la conséquence claire du mécanisme établi de l'agrégation du collagène avec une aide des interactions carbohydrate homologue- II-I,Fig.I).Par conséquence, les molécules du collagène IV sont situées dehors (encore) des agrégats IN-HSPG (Figs.I4,I5). La voie effective et excellent peut être. proposée: la blocage de cette association particulière de carbohydrate(s)-hydroxyllysine par les anticorps (ou lectines) correspondants. Le besoin des injections permanents de l'insuline est éliminé comme la conséquence. L'ère nouvelle arrive pour la guérison du diabète. La petite molécule du nidogène (ayant les 3 domaines globulaires et un domaine bâton entre eux) /44t/ lie à la IN avec l'aide des forces hydrophobe (le domaine bâton-semblable d'un de bras court de IN- fragment I) dans une proportion I:I /467, 44I/.Cette molécule de Nd a aussi l'interaction directe avec le collagène IV à la région particulière de la hélice triple à 80 nm de la région NCI (quoique moins forte que celle de lN-Nd)/465,479/. Cette interaction localisé-e (Nd-collagène IV) doit aider à la molécule de collagène IV avoir une localisa- tion précise dans le réseau de INe Par conséquence, le Nd peut être trouvé (généralement) seulement à la partie extérieure de LB (ED) mais la IN peut être trouvée aux deux parties de LB:LL et LD /480,481/. Quoique logiquement, le rôle principal de Nd doit concerner la stabilisation du réseau parce que seulement les molécules de Nd sont croisées par transglutaminase (après l'agrégation de LN induite par Ca2+) /482/.Cette localisation extracellulaire de la transglutaminase est semblable à celle de Nd (mais pas de FN) /482/. Le bras court de la longue chaîne A de LN (lequel on ne trouve pas dans la couche extérieure la plus proche de LB- lamina récticularis ou pars fibroreticularis qui est souvent absente /440/), logiquement, doit étre aussi présente à la LD. Cette partie de la chaîne A libre du réseau des interactions principales (Figs. 14, 15), doit servir (logiquement, par les molécules de HSPG- reg. Fig.2) pour le contact avec la couche des éléments dispersés des fibres du collagène de la lamina réticularis qui ancre les fibres ou les microfibres /440,483/o #6. L'agregation des récepteurs de Ach avec la création des specialisation cytoplasmitques. Le dévelaoppement continu de LB et desrégions de NMS. Une de conséquences principales du dignal de bFGF est une agrégation des AchR. Pourtant cette agrégation ne commence que après plusieures heures /484,380/. Ce fait, et aussi le fait que seulement une molécule d'agrine peuve induire une agrégation de I60 molécules des AchR /329h/,prouvent qu'il n'y ait pas d'agrégation directe de ces récepteurs par les molécules d'agrine et l'agrégation des AchR est étroitement dirigée par un autre événement. On peut déduire qu'il doit entre la LB spécifique à la NMJ développée à nouveau (reg. ci-dessus #lll-5) qui détermine un attachement consécutive des AchR, généralement, déjà présents à la MP /485,329g,340/.Les arguments suivants prouvent cela. Premièrement, seulement la LB (sauvée après la création de la NMJ) peut diriger l'agrégation des Ach0/329d-329f, 486,329h/.Deuxièmement, les agrégats des molécules de HSPG sont présents dans tous les agrégats des AchR avec une congruence remarquable/329g,486/ mais il y a quelques agrégats avec les molécules de HSPG (à la LB) comme la cause de l'agglomération des AchR mais pas au contraire. Trosièmement, si utiliser la collagènase (participant dans l'établissement du réseau de LB /408/) il y a le blocage de l'agrégation des AchR.Quatrièmement, une création des agrégats des AchR apparaît de concert avec la formation de la LB /329Une synthèse et une libération des composants de LB: la HSPG, la IN et le collagène sont brusquement intensifiées après le signal de 1' agrine /329g,487,488/. Cette nouvelle LB créée à la NMJ fait une influence sur le développement du nerf (qui a déclenché sa création) et il est démontré que un autre nerf peuve arriver à l'état semblable (après la dénervation par la liaison à la LB restant /332,386/ si la LB n'est pas cassée /489/. L'axone, après le contact avec la LB pure (quand le muscle était éliminé) est normal par les critères différents /490/. Je déduis que les forces majeures (qui gouvernent finiment telles interactions) soitent les interactions universelles intercarbohydrate homologue découvertes et décrites par moi avant /I,2/. La spécificité, de la distribution des carbohydrates dans la, synapse /486/ supporte telle conclusion. Par exemple, les carbohydrates avec la terminaison Gal-NAc sont révélés sélectivement mais régulièrement dans les synapses des poissons aux mammifères /49I/.Cette propriété du porteur de ces terminaisons est attribuée aux glycolipides de MP et à la forme asy-, métrique de l'acetylcholinestérase .(AchE) située spécifiquement à la région synaptique (en différence avec la forme globulaire qui n' a pas de tels carbohydrates)/492/. Comme il était mentionné, la LB dans I'es-pace.intercéllulaire de la connection synaptique est traversée par les fibres liant les deux membranes cellulaires /402/. Une association des AchR à l'actine cytosquelettique (après les interactions intégrine-MEC ('N)- III-2,Figs.IOD,II) a lieu par les interactions de la sous-unité-9 de AchR avec les protéines subsynaptiques de 43 kDa /493-495/. Ces protéines agrègent avec les AchR et les HSPG après l'action de l'agrine avec la dépendance semblable de la doze /405/.Justement, cette sousunité de AchR est phosphorylée après le déclenchement du signal par l'agrine avec la cinétique aussi semblable à l'agrégation des AchR et cette phosphorylation est bloquée par les inhibiteurs de l'agrégation des AchR induite par l'agrine /329i/. Comme il était mentionné, la dénervation conduit à la diminution de la quantité de la tyrosine-phosphate avec le temps /328/. Cet attachement au cytosquelette de l'actine (et aussi à son complexe successif avec les autres protéines du cytosquelette- reg.V-6) mène à l'agglomération des AchE /332,405, 484,498/.Comme il était mentionné, après le procès autocrine avec une augmentation de la concentration de bFGF dans la MEC (Fig.I7) il y a la synthèse de la LB à la cellule myotube entiere (et aussi les cellules des autres systèmes analogues comme les cellules endothéliales et épithéliales) /499,402,429, 4I8,348,430/. Après la création de la LB à la NMJ (la cause) avec l'agrégation des AchR (la conséquence) /500/ (Fig.II) il y a le développement ultérieur de la LB de la surface /302/. Les régions de la LB à la NMJ.sont différentes principalement des autres régions de 13 /499,4'02/. Telle LB apparue à nouveau doit aider à gouverner finement le développement de la mosaique très spéciale-des molécules sur la surface des cellules musculaires (IV-8,Fig.29) comme les canaux de voltage différents (Ra,E et Ca) et les récepteurs différents pour la conductivité de la"vague" (Ca'?+K+ ) séparés régulèrement en espace (IV, Fig. 18). Par exemple la LB aide à diriger la distribution des canaux de Na des fibres du muscle squelettique dans les zones nonsynaptiques et les plis de la jonction) ce qui n' a pas de corrélation avec la distribution de l'agrine /500/.Aussi, la distribution de la molécule N-CAM chevauche celle des AchR du muscle squelettique (développant et adulte) /50I/. Ces molécules N-CAM apparaissent en quantité-forte dans les myotubes développants et leur quantité diminue brusquement après la formation du signal avec les niveaux plus faibles chez l'adulte/488, 50I/. De plus, leur concentration augmente encore d'après la dénervation à la région extérieure de NMJ et diminue encore d'après la réinnervation /488,50I/. Mais leur concentration dedans de la région NMJ diminue pendant la dénervation /488/. Mais, justement, ces molécules N-CAM déterminent la position des canaux de Na+ (IV-8). Par conséquence, on peut voir le comportement des canaux de Na pendant le développement du muscle d'après ces expériences avec les molécules N-CAM. Avant la-fin de la synaptogenèse, les molécules N-CAM sont situées à la surface entière du myotube aux concentrations fortes. Plus tard, seulement les molécules N-CAM, qui trouvent leur position après 1'interaction avec la LB et aussi avec les canaux de Na (et le cytosquelette- Fig.39), restent sur la surface.Par conséquence, la distribution des molécules N-CAM doit coincider avec la distribution des canaux de Na+ après la synaptogenèse ce qui correspond aux données expérimentaux ci-dessus /50I,488/: c'est justement les jonctions postsynap- tiques dans la région NMJ et c'est les régions TT à l'extérieur de la région NMJ (IV-8,Fig.29). Les autres molécules N-CAM qui ne sont pas stabilisées avec les canaux de Na+ (la LB et le cytosquelette cortical- IV-8) doivent disparaître après la synaptogenèse. Pendant la déinervation , les molécules libres de N-CAM sont synthétisées et apparaissent encore à la région NMJ. Aussi les canaux de Na stables (avec les molécules N-CAM) à la jonction postsynaptique quittent cette région pendant la dénervation.La coincidence de ces faits est bonne. En évidence, les mêmes forces des interactions intercarbohydrate homologue /I,2,III-4/ font la mosaïque moléculaire de la surface du myotube comme l'empreinte digitale de la structure moléculaire de LB. Par conséquence, toute la membrane de la surface du myotube représente les zones permanentes de la mobilité restreinte /5022 (reg. aussi /I2/) qui sont stabilisées aussi paroles structures cytosquelettiques sous-jacentes. Comme dans le cas des agrégats des AchR /499/, une apparence des spécialisations cytoplasmatiques fait la corrélation avec une apparence de la S;B /499/. Logiquement, comme dans le cas de ces agrégats, il doit avoir lieu une interaction dans quel ques places spéciales des molécules d'intégrine avec les molécules de EN (ou FN) conduisant à une apparence de la syndecane stabilisant les MF adjacents (II, Figs.5,6 et Figs.II,I2). Plus tard, les autres molécules cytosquelettiques comme vinculine ou actinine doivent stabiliser ce complexe dans la structure cellulaire entière /375/ ce qui peut être vu (comme il était mentionné), par exemple, de la diminution de la sensitivité des agrégats des AchR à l'élimination de Ca2+ /496/ ou à la dénervation /497/ avec l'age. 7.L'est quasi-stable: l'éliminationde la parte essentielle de bFGF et de la MEC avec les ezymes protéolitiques par la protéolyse limitée de la LN et du collagéne. Ces concentration de bFGF (augmentée aprés la rétroaction positive -Fig .17) liées à la HSPG dans la MEC (LB) (et à la HSPG intégrale-de la surface cellulaire) induisent la synthèse de l'activateur de plasminogène (PA) et de la collagénase (Fig. I7). Le complexe bFGF-HS (HSPG), libéré après telle action de plasmine-PA et de la collagenase, ne lie pas à la MEC /350/ et quitte la région de la matrice ,(Fig.17). Cette rejection "spéciale" du complexe bFGF-HS (HSPG) qui doit, généralement, lier à la MEC (reg. ci-dessus- III-2) doit être très particulière. Regardons. La HSPG doit s'attacher à la LB avec une aide de l'association avec la IN et le collagène IV /335,284, 302, Refs.315/(Fig.14). L'héparine attache substantiellement à la IN seulement à la région E3 à l'extrémité de son bras long /284/.Et justement, la région de la connection de cette région E3 à le reste de la molécule de IN a une très forte sensitivité et est occupée initialement par les protéases neutre serine testées (élastase, cathépsine G, trypsine, chymotrypsine, subtilysine) /503,44I,504/ et justement cette région a les domaines globulaires; distincts très visibles en microscopie électronique /351% ce qui temoigne aussi pour sa sensitivité protéolytque forte comme dans le cas de l'igG (la région"charnère" entre les fragments Fab et Fc /333,505, 506/).La digestion analogue (avec les échnntillions sem- blables)était aussi obtenue avec les ;protéases neutre serine différentes (plasmine, inclus) traitant les molécules de FN /497 avec les Refs./ Justement les deux de ces molécules de MEC (FN et LN) réagissent spécifiquement avec le t-PA (et probablement u-PA) et aussi avec le plasminogène /507,508/ en stockant ces molécules protéolytiques près de la surface cellulaire en attendant le signal de l'activation pour la protéolyse locale de IN (EN) pour libérer le complexe bFGF-HS (HSPG). La collagènase (une autre enzyme activée par le bFGF) extrait aussi la HSPG et la LB /448/ parce que la HSPG réagit avec le collagène IV /448 et Refs.315/. Parallèlement, le bGFG induit une augmentation du nombre des récepteurs de PA (urokinase) sur la surface cellulaire /4II/. Une activité de PA est lo calisée à la surface cellulaire grâce à la liaison à tels ré cepteurs spécifiques de la surface /509/. Comme le résultat, la molécule de plasmine activée libère le complexe bFGF-HS (HSPG) soluble /4II,4I9,5IO-5I3/. On peut voir ici la rétroaction négative aux concentrations picomolaires de bFGF /4II/. Mais au même temps, cette molécule de plasmine commence produire le facteur de croissance transformant-ss (TGF-ss) /5II, 514,507,411,513/ qui a, généralement, les effets opposés avec b (et a) FGF et aussi elle a la distribution très répandue /5I4/. Le TGF-ss est fait du LUGF-9 (produit toujours non actif) qui attache à la surface cellulaire (avec l'aide de sa mannose) au récepteurs mannose-6-phosphate. Les molécules de TGF-ss ac tives (sans mannose) induisent une apparition de la molécule PAI-I active qui inhibe le PA. Comme ça, la libération du complexe bFGF-HS est diminuée /4II/. Les molécules de HSPG libérées, qui étaient jadis près du site protectif avec l'amas des charges négatives des complexes de HSPG /315/ de LB, peuvent être coupées par les molécules de plasmine qui peuvent être activées /350,441,419,515/. Telle protéolyse peut être augmentée par la possibilité de l'activation de l'héparinase qui se libère de son complexe avec le bF,GF /4I9, 5I6/. Mais, généralement, l'activation de l'héparinase pendant l'action du signal bBGF n'était pas trouvée /4II/. Aussi, les molécules de TGF-ss controlent l'expression des gènes, (qui développent la MEC) de leurs cellules-cibles /5I7, 5I8/ (avec l'expression des molécules de HSPG /5I9/ tellement important pour la modilation de MEC /III-7/). Cette MEC intensive, en evidence, doit arrêter la prolifération cellulaire selon III-7 ce qu'on, justement, observe aux concentrations de TGF-ss élevées /5I7-5I9/. C'est-à-dire d'après l'élimination de la partie de MEC avec le bFGF d'après l'action des enzymes protélitique (plasmine, collagénase) (Fig.17), le TGF-ss apparessant doit encore résynthétyser la partie de MEC, mais déjà sans le bFGF. Les concentrations faibles de TGF-ss stimulent la migration cellulaire vers la place de l'application de TGF-ss (selon gradient) /520/ /simplement par le mécanisme de l'action du ligand attrayant chimique (V)/. Evidemment, cette migration cellulaire (vers endroit précis ) doit conduire à l'augmentation de la densité cellulaire locale et arriver la division des cellules normales (les auteurs doivent faire seulement un extra contrôle à 4 heures dans ce travail interessant). 8.1mortance de la lame basale, Les principles communs de la création de toutes LB. (1) On a vu (#11) que les cellules normales ne peuvent pas avoir les contacts plus proches à cause de la MEC entourant les cellules bien chargée (charge négative localisée des molécules de HSPG). Et justement,la concentration des molécules de bFGF (bien chargées positivement, c'est-à-dire neutralisantes) augmentée à cette période permettent avoir la densité des cellules plus importante nécessaire pour la formation des organes. -Dans le cas des cellules normales, cette neutralisation (Fig.IOB) aide d'avoir l'interaction directe entre les molécules de l'adhérence cellulaire (N-CAM et N-cadhérine) /52I/ conduisant à la fusion des cellules musculaires. Dans le cas des cellules épithéliales, cette neutralisation doit aider aux cellules voisines faire l'interaction par leurs surfaces latérales avec les interactions directes des molécules de l'adhérence cellulaire /Refs.522/. (2) Aussi la LB, qui est bien repandue dans les tissus des organismes multicellulaires (représentante la couche relativement fine entre le tissu conjonctif et les cellules du parenchyme de l'épithélium, endothélium, muscle,nerf), doit servir avec sa collection des carbohydrates spécifiques comme la matrice pour la structure mosaique des glycoprotéines et dans des glycolipides qui sont adjacentes à cette LB (III-4,5,6). Et ces membranes ont toujours la structure particulière et mosaique qui est distincte même des autres parties de MP de la cellule. 'apparition des rides sur le visage humaine a comme l'origine la perte du contact entre la LB et les cellules épithéliales de l'épidermus /523/. Cette élimination des contacts doit avoir lieu grfice à la disconnection de la IN avec la MP, c'est-à-dire l'élimination des contacts des intégrines et des syndecanes avec la LB (Figs.I2,I4). Pour enforcer la liaison entre la IN et la MP, des moyens de l'introduction des protéines correspondantes: des syndecanes (Pig.8) et des protéines de liaison de LN sont proposés par moi. L'utilisation de ces préparations avec la vitamine A acide avec les dozes qui provoquent quelque lyse cellulaire /523/ facilitera leur application in situ. Les organes doivent, en évidence, avoir les mêmes défauts qui peuvent causer même la morte. Par exemple, chacun sait que le scorbut est développé pendant des années à cause de l'absence de l'ascorbate /524/.Mais l,asco- rbate, justement fait l'induction de la synthèse des molécules du collagène IV (la forme justement IV !) /525/ qui sont la partie essentielle de la LB (Fig.I4). Avec le temps (pendant le développement du scorbut), les LB doivent s'affaiblir et on voit les premiers signes du scorbut comme le crépitement des gencives (évidemment, c'est le premier signe qui n'est pas mortel) /524/ et il doit refléter la déstruction de la LB du épiderme. Mais plus tard, évidemment, les autres LB, plus essentielles, doivent être détériorées , ce qui doit conduire l'organisme à la morte /524/.On voit aussi la preuve de 1'importance des LB pour l'intégrité de la structure membranaire sous-adjécante dans le fait que après la dénervation il y a la dissociation (avec le temps) des molécules membranaires subsynaptiques dans le plan de la membrane (III-6), ce qui prouve encore que les structures cytosquelettiques sont seulement auxilaires pour la LB avec ses HSPG /qui sont libérées périodiquement avec les synaptosomes pendant l'action nerveuse/. (3) Évidemment, les LB servent pour la filtration des substances /433/ (et plus particulièrement les LB épithéliales et endothéliales- Fig.16). Dans II-5, j'ai démontré la structure générale de la IB (Figs.13,I4,IS) pour toutes LB simples. Cette structure (in vivo) est développée comme le résultat du procès spécial et compliqué qui a abouti à la construction de la LB. J'ai detaillement suivi et établi ce procès pendant la formation de la NMJ (II-I-IV,6,7) (Figs,IO,II,I2,I7) (en utilisant aussi les résultats obtenus avec les autres procès de la formation de LB, en évidence). Logiquement, les procès semblables doivent méner à la formation de la même (principalement) LB. Je souligne ici les caractéristiques communes de ces procès établies de facto: Les molécules de IN et de l'agrine colocalisent dans la majorité des MB (les cellules de Schwann et des cellules endothéliales inclues) /286/ avant l'innervation des cellules Schwann /286,355/ où la IN se trouve dans les petits amas /526,286/ (reg. pour l'analogie Pig,IO C,D).Et seulement le neurone (le stimulus "extérieur") (interactions agrineagrine) stimule la synthèse de tout les composants de LB (collagène IV, HSPG,Nd et LN en concentartion plus forte) dans le cas des cellules Schwan /526/ (reg. pour l'analogie Figs.II et 12). Dans le cas des autres cellules, l'inducteur de l'interaction agrine-agrine représente, visiblement, les agrégats après la sécrétion de l'agrine comme dans le cas clair des cellules des muscles striés en culture. Cette IN peut entre, justement, synthétisée par les cellules produisant la LB /368,360/. Et, justement, la IN est le facteur de l'adhérence des cellules endothéliales et épithéliales /Refs. 354;374/ et le cytosquelette participe dans l'interaction des cellules épithéliales (de la cornée) avec la LN /Refs.365/, ce qui aussi prouve l'interaction des intégrines avec la LN dans le signal pour les autres LB (reg. pour l'analogie Figs. IOD,II,I2). Et justement la chaîne A localisée à la surface de MP (du cible) (reg.aussi Fig.12) joue le roule essentielle dans la polarisation des cellules épithéliales des tubules de rein /527/ et la synthèse et l'expression de cette chaîne A de IN (et seulement de cette chaîne) est restreinte justement pour le temps de la polarisation du épithélium /528/. Pour l'orientation correcte de LN (la molécule avec la f-orme très spéciale) sur la MP-cible, les protéines de liaison avec la LN sont aussi concentrées aux cellules de l'épithélium de la cornée /365/ (reg. pour l'analogie Fig 12). Comme dans le cas des cellules musculaires, les molécules de FN sont partout pendant- la division des cellules endothéliales (reg. pour l'analogie Fig.IOB), mais la EN disparaît pendant la confluence cellulaire /343/ et la FN n'aide pas à l'axone d'arriver à sa cible (la cellule Schwann) /356/.La synthèse et ltexocytose de bF&commat;F sont stimulées par le bFGF extérieur (le procès autocrine) par le signal N 1 (Fig.17) pour les cellules endothéliales et osseuses /4I4 et III-4/ et après cette rétroaction positive de l'augmentation de la concentration de bFGF il y a la synthèse de la LB sur la cellule entière (les cellules endothéliales,,épithéliales avec celles de la rétine inclus) (III-5). Mais cet excès de bFGF inhibe le déclenchement de la différentiation terminale /345/. Et c'est seulement après le seuil des concentrations de bFGF dans la matrice péricellulaire il y a le déclenchement du "signal II (reg.Fig.I7) où il y a une forte augmentation de l'activité des enzymes-proteolitiques (plasmine et collagénase) qui conduisent à la forte diminution de la concentration de bFGF dans la MEC (LB) et par conséquence, la différentiation terminale des cellules adjacentes aux LB peut être achevée (reg. Fig.17) comme dans le cas des cellules endothéliales /343/. Le procès du dommage de la LB, semblable à la dénervation, peut conduire à la réparation dans toutes les LB. Ce procès de dommage de LB doit diminuer la charge négative de LB avec les HSPG, ce qui doit provoquer le signal spécial avec l'exo- cytose de bFGF, la rétroaction positive et les autres procès démontrés à la Fig.I7. La réparation de la blessure est un de tels procès. IV.Les structures moléculaires profondes de l'action du signal. #I. L'action de la phospholipase A2, lliberation de l'acide arachidonique. La séparation des phases avec la participation des glyco et de phospholipides et du cholestérol et une activation de la phospholipase A2 (phA2) sur la surface cellulaire doit avoir lieu pendant le signal "clasique" typique /1,2,529/ et après le signal de l'intégrine parce que normalement l'interaction des récepteurs "RGD"-semblable des intégrines avec le substrat provoque la chaîne des interactions en partie semblable à cellesdes récepteurs "classiques" /I,2,II-8/. Le cholestérol, ajouté à la temperature de transition des micelles pures des phospholipides, quand l'activité de la phA2 est maximale /530;;53I/, élimine telle activité de la phA2 induite pendant la séparation des phases et la filipine (agent spécifique pour le cholestérol) réduit cet effet inhibiteur /530, 53I/. La participation du choléstérol dans les signaux cellulaires /I3/ était encore confirmée /532,533/. Une importance de la phA2 pour la transduction du signal peut être conclue de la série des expériences avec le nombre des signaux où le blocage de la PhA2 mène à'l'activation du signal /534/. De plus, une importance de telle enzyme peut être vu du fait de sa régulation avec l'inhibiteur spécial coordoné par les kinases différentes: tyrosine kinase, PKC et aussi. protéine kinase A /535/ ce qui peut être utilisé par les phospholipases de la couche extérieure/I,2,536,537/ et aussi par les phospholipases de la couche intérieure/538/. Une addition simple de la phh2 en solution augmente la vitesse de la motilité cellulaire /539/. Telle augmentation elégante de la vitesse de la motilité cellulaire,où l'action de la phA2 extérieure doit coîncider avec "la phase" adéquate de la motilité (v), confirme la présence de la séparation des phases dans le signal cellulaire (et c'est très difficile d'imaginer que le procès de la diffusion des produits de l'action de la phA2 à travers de la MP peut conserver tel rythme parfait de la motilité).Ici (et dans le moment precis de telle séparation des phases !), la phA2 doit faire sa meilleure action de l'extérieur /1,2,536,537/ ce qui est confirmé dans les expériences avec une action de la PhA2 extérieure sur la surface cellulaire justement pendant le signal cellulaire /540-543/. Telle facilitation de l'action de la phA2 extérieure est confirmée dans les expériences avec une absence du métabolisme de l'acide arachidonique (AA) après une application en solution de la PhA2 exogène (avec les neutrophiles) pedant l'absence du signal. Et il y avait la présence du métabolisme de AA (de l'action de la phA2) pendant l'interaction avec les complexes immunes (signal) /544/.Les expériences "bizarres" (où le signal avec le AMP-c module différemment le chimiotropisme du neutrophile pour les molécules de fMLP et de LTB4) peuvent donner une réponse pour "le but" de 1'action de la phA2 dans ce cas /545/o Une inhibition du chimiotropisme vers les molécules de fMLP et aussi vers les molécules de LTB4 avec l'isoprotérenol et avec PGEI a lieu parce que les protructions-asymétriques (faisant comme le résultat l'etablisement du lamellipode et de "la queue") faites par le gradient de fMLP et de LTB4 (V) sont superposées par les protructions symétriques des autres signaux sans gradient des concentrations du ligand (isoprotérenol et PGE1).Dans le cas des molécules de folklorine (qui activent directement l'adénylate-cyclase, évidemment, sans la création des protructions extérieures) il y a quand même une inhibition du chimiotropisme de fMLP parce que justement une activation de l'action de la lipocortine avec la protéine kinase A (PKA) (activée par folk lorine) conduit à l'inhibition de la PhA2 extérieure /535/ (une action intensive de la phA2 doit être obligatoire, généralement, pour le signal cellulaire comme fmlp). Mais dans le cas de LTB4 il n'y a pas d'inhibition du chimiotropisme avec la folklorine: Le chimiotropisme doit avoir lieu parce que dans le dernier cas il n'y a pas besoin pour l'action de la phA2 qui doit conduire à l'apparence de LTB4. Ce Chinioterapeme !commence" déjà à partir du stade prochain: LTB4.La preuve, que les récepteurs pour le ligand et les récepteurs pour l'activation de la phC sont différents /546,547/, doit confirmer cette structure. On peut voir la présence des enzymes pour la transformation consécutive des eicosanoids sur la surface cellulaire parce que le milieu conditionnel avec l'inhibiteur de la cyclooxigénase (isomérase PGE)inhibe tels récepteurs in situ, sur la surface cellulaire /548/. Cette loi fondamentale nouvelle de la biologie et de la farmacologie: l'action de tous les récepteurs avec le signal "complet" (except le cas spécial des récepteurs activé avec la tyrosine kinase pour les facteurs de croissance particuliers /549,550/) doit conduire aussi à la branche du signal avec l'activation de la phA2 extérieure qui produit les molécules des eicosanoides différentes.Certaines molécules des eicosanoides activent toujours la PKC /1, 2/ seulement par cette voie et la Chaîne:phC#DG#PKC et phC#...#IP3#... /la dernière chaîne est dans la ligne de la libération de l'inositol pour l'interaction avec PA-CTP sur les vésicules spéciales pour avoir: PI#PIP#PIP2 sur les mêmes vésicules qui doivent aller (avec les mêmes contractions des microfilaments corticals avec l'aide des micritubules) vers les calcisomes spécials près du réticulum endoplasmique (Golgi) pour libérar le Ca avec l'aide de la phO sur les mêmes vésicules/. Le meme cas doit être observé aussi avec la motilité cellulaire (et l'étalement) (V). #2. Lchaîne des évennments produtits par les eilosnoides: l'action dela phC,DG,IP3, PKC et l'augmenttion de Ca1+ intérieur. Onpeut voir ce ci-dessus que les ligands différements, en induisant les eikosanoides, peuvent produire les parties semblables de l'action du signal (incluant le signal du chimiotropisme) en activation de la phC avec la chaîne des évenements suivants /55I/: selon /552-560/ les molécules de leikotriene B4 (L?B4) sont chimiotropiques (en stimulant aussi l'adhésion:), ce qui doit encore souligner l'action extérieur de LTB4 à cause du caractère spécial de la création de la polarisation cellulaire: le lamellipode et la "queue" (V).Le fait,que après quelque désensibilisation du récepteur LEB4 il y ait la réponse conservée aux autres stimules complets /553/ (logiquement utilisant les autres eicosanoides), conforme telle posi tion "indépendante"(exceptionelle dans la nature) des molécules des eikosanoides différentes dans la provocation de la chaîne spéciale Qes événements. Les eikosanoides font l'action seulement par les seconds messagers /560/ avec l'aide des protéines G connues déjà pour le nombre. des récepteurs des prostaglandines (PG), des tromboxanes (TB) et aussi des récepteurs des leucotriènes (LT) /56I/ quand ces molécules sont appliquées de 11 extérieur /562/.Une inhibition de la polymérisation de l'actine dans les neutrophiles après l'action de LTB4 (ce qui est une partie essentielle de son action pendant la motilité cellulaire- V) avec la toxine pertussis /563, 564/, confirme (généralement) la participation des protéines G dans l'action-de LTB4. Les inhibiteurs spécials (antagonistes) pour les récepteurs LTB4 de la surface stoppent la polymérisation de l'actine et l'augmentation de la concentration de Ca2+ intérieur Loi et leurs occillations /565/, ce qui prouve aussi l'action des eicosanoides de la surface cellulaire dans la motilité cellulaire. Une augmentation du pH à l'intérieur de la cellule après l'action de LTB4 /563/ montre la participation de PKC dans son action directe /I,2/. est interessant de noter qie dans le cas de cellules cancéreuses, les données nombreuse montrent que (dans ce cas,) ce soit les molécules des prostaglandines (PGE2) qui augmentent la motilité cellulaire /560-574/ et la présence des récepteurs des eicosanoides dépend des facteurs différents /575,576/ (le facteur de malignité inclus). Par exemple, les molécules des prostaglandines (PGE,) (et AMPc) inhibent la motilité cellulaire induite par LTB4 pour les neutrophiles normals /545/. Tout ces événements font une corrélation avec l'action de la phC: l'hydrolyse de PîÊ2 (phosphatidylinositol 4, 5-biphosphate) avec la libération de DG et,IP3 et l'augmentation de la concentration de [aii ont lieu immediatement:avant l'étalement /577,578/. Évidemment, l'activation de la PRC est la séquence de l'augmentation des concentrations de DG et de [Cii /1,2/. 3.La structure principale du mécanisme de la propagation dela "vague" Ca2±K+ pendant le signal. Aprés la contraction locale des microfilaments corticals (en complexe, principalement avec le système des microtubules), l'activation locale de la phA2 doit avoir lieu. On peut conclure la présence de cette activation parce que pendant telle contraction (près du bord de la zone de la contraction) il y ait une augmentation de la tension de surface (selon la loi de Hook: F=kal où F-est la force,Al-changement de longueur du matériel,k- est la constante de Hook.D'autre part, une augmentation de la surface de telle région cellululaire doit avoir lieu pendant telle contraction et l'activité de la PhA2 (qui limite son action justement sur la surface cellulaire /I,2/) augmente avec les deux facteurs ce qui découle de la contraction ci-dessus: (I) la facilité de la pénétration pour la dans la couche lipidique; (2) la valeur de la tension de surface /579,580/. La phA2 spécifique pour le PA (acide phosphatidique) (une de phospholipases activées de la surface /I,2/ produit l'acide lysophosphatidique qui transmet (conduit) le Ca2+ (avec l'aide obligatoire de l'acyltransférase) par la structure "roue" à travers de la membrane plasmique /I,2/. Ces ions de Ca2+ vont à la surface intérieure de la MP ensemble avec les molécules de PA réacylées.Justement, ce Ca2+ exterieur apparaît à l'intérieur du bord de la MP plus tôt que les molécules de 1P3 comme il était établi dans l'expérience des subsecondes 2+ /581/.Et évidemment,justement ce Ca2+ de l'exterieur est responsable pur la Ière phase rapide obligatoire (avec le delai de I40 ms) de l'augmentation de Ca à l'intérieur après. le signal (avec la 2ème phase plus lente grâce à la libération de Ca de compartiments intérieurs /582/). Ce Ca2+ du signal (de la surface) doit servir à l'activation de PKC /Fig.18(6)/. Les AA produits par la phA2 sont transformés sur la surface cellulaire dans les molécules de eicosanoides différentes /particulières pour les cellules (et les signaux) différentes/ qui réagissent avec leurs récepteurs de la surface (IV-2) pour activer la pho de la surface cellulaire (logiquement, typesJ3ou). Cette phC fait l'hydrolyse de PIP2 de la couche membranaire intérieure, ce qui sert pour 3 but principals dans la structure de la "vague" Ca2-K+: (I) la libération de DG pour l'activation de la PKCM (de MP); (2) la libération des molécules de IP3 avec leur partie qui ouvre les canaux du 2+ récepteur de IP3 pour Ca situé à l'intérieur des vésicules et avec leur autre partie transformée en 1P4 (inotitol 1,3,4,5- tétraphosphate) et servant pour le courant de K+ vers extérieur /dépendant de Ca et ageant selon Fig.18 (II)/ (reg.IV-4); (3) les parties différentes de 1P3 sont transformées en inositol à la fin de la chaîne des réactions, ce qui sert pour le cycle des dérivés de PI (phosphatidylinositol) sur les vésicules (IV-6'). L'action (faible, jusqu'à l'arrivée des vésicules aux ca- lcisomes") de phCv (V-vésiculaire) est induite principalement 2+ par Ca libéré de ces vésicules spéciales avec l'aide des récepteurs de 1P3 vésiculaires: l'activité de la phC (spéci figure pour PI) augmente avec la concentration des phospholipides négatives (comme PA ou PIP2) et avec le Ca (ce qui joue le rôle principal) /583,584/ et aussi la liaison de 1P3 /produit de phCM et phCv/ à son récepteur augmente au pH faiblement alcalines /585/.Cette augmentation de pH a lieu obligatoirement après chaque signal /1,2/. Tout cela doit provoquer le courant de Ca à l'extérieur de la vésicule (en augmentant le pH de la vésicule) et la désagrégation des chaînes de GAG (HS) des chromatogranines intégrales vésiculaires sur la surface vésiculaire (Fig.22) agrégées avant ce signal 2+ avec le Ca au PH acide à l'intérieur des vésicules. Comme il était démontré avant (ll), les MF corticals attachent à ces chaînes de HS quand elles sont agrégées. Ce courant de Ca2+à l'extérieur de vésicules ne doit pas être grand parce que la KD de la chromatogranine est seulement (2-4)I0 3M /586/ (reg. aussi IV-6).Au pH normal, le calcium est attaché aux chromatogranines ~2 fois plus faiblement /587/ et ne les agrège pas quoique le Ca agrège les chromatogranines (seulement) au pH acides /588,589/. C'est-à-dire d'après l'interaction des molécules de IP3 avec leurs récepteuers IP sur les vésicles il y a les deux procès principaux (avec l'augmentation de pH intérieur des vésicules ): (I) détachement de Ca des chromatogranines; (2) désagrégation des chromatogranines et, par conséquence, leur détachement des MF. Pendant la désagrégation des chromatogranines et leurs chaînes HS /Fig. 18(9)/ il doit avoir lieu l'activation de la caséine kinase II (CK ll) parce que l'héparine (HS) inhibe l'activité de la CK-II et cela est une de propriétés la plus charactéristique de la CE-II /Refs;589a/. Mais justement, cette enzyme active la pompe H (IV-7), c'est-à-dire il aura l'activation de la pompe H+ vésiculaire /Fig.18(II)/. Le courant de K+ à ltextérieur (K) ext /Fig.I8(II)/, peut aussi aider à l'activation de la pompe H+ qui induit (avec quelque durée) le courant de Ca actif à l'intérieur de la vésicule /586,590/et l'agrégation nouvelle des chromatogranines au pH acide de la vésicule avec une apparence des chaînes GAG (HS) sur la surface de la vésicule extérieure et l'attachement nouveau consécutif des vésicules à la prochaine couche des MF corticals le long de la voie des vésicules. On peut voir quelque dépendance de l'activation de la pompe de de ce courant de K+ du fait que, sans (K+)ext' il n'y a pas de création des vésicules récouvertes et de l'endocytose /59I/ qui sont dépendantes directement de l'action de la pompe H+. La PKC (activée avec le signal ci-dessus de Ca et les molécules de PIP2 sur la surface de la vésicule)/592-595/ fait une libération des molécules de CaM (calmoduline) du complexe avec la protéine GAP-43 sur les vésicules "PKC" spéciales (-IV-7B). Les molécules de CaM, ayant une forte affinité pour Ca, prennent le Ca de son complexe moins affin avec le PA et servent pour la nouvelle contraction des MF corticals, en semble avec la gelsoline et le courant de (K+) (à l'extér- ext ieur) (dépendant de Ca selon ces événements prouvés-Fig.I8). Avec l'aide de cette séquence de la contraction, les vésicules "PKC't avancent par telle voie "péristaltique" de la région des Récepteurs immobiles (ou le lamellipode dans le cas de la motilité) vers la région du "calcisome" des membranes intérieures "situées" "spécifiquement" plus proche de la membrane plasmique (Fig.19) Laconcentrtion augmentée de CaM/Ca2+ fair l'ctivation de la pompe de Ca2+/Ca-ATPase (type P) de laMP/ comme aussi de molécules de PA /595a/ (qui vont dans la couche intérieure de MP après le stade 3-Fig.18), justement commençant de pomper les ions de Ca2+ à l'extérieur de la cellule (Fig.18, stades IO-I2) (phase III-IV -Fig.23). L'activation de cette Ca-ATPase est coopérative et la région des concentrations de Ca faisant l'activité de l'enzyme maximale est étroite parce qu'il faut occuper toutes les quatre places de Ca de la molécule de CaM pour son efficacité /595b/. Logiquement, c'est justement le maximum des concentrations de Ca correspondantes au pic de la phase III de Fig.23. #4. La preuvre dela présence dela "vague" Ca2±K+ et de sa structure. Le nombre des expériences confirment la structure des cou rants Ca2±K+ (Fig.18). On peut voir la présence de telle interdépendence ionique à partir des faits où une inhibition des canaux de Conduit à l'absence de la libération du Ca par 1P3 /596/ /parce que une absence de tels courants de Ca2± K doit détruire le transport des vésicules vers le stock du Ca2+dans les "calcisomes" (Golgi) (IV-6)/.Et il n'y a pas de libération analogue du Ca2+ par les molécules de 1P3 dans le milieu sans Ca /596/. Tel courant prolongé de K+ (dans l'espace et, en conséquence, dans le temps) (dépendant de Ca) apparaît toujours après l'action de l'agoniste /597/ mais il peut être initié aussi par la coinjection de 1P3 et 1P4 avec la présence obli gatoire des ions de Ca à l'éxtérieur de la cellule Ca ext D'une autre part, une injection de 1P3 provoque seulement l'activation transitoire des canaux de K+ /597. Telle cré- ation /tellement nécessaire pour le courant de E+(Ca2+)/ est faite avec l'aide de(IP3)-kinase qui a la régulation par la CaM unique très spéciale et sensible.Cette enzyme a l'affi- nité 10 fois plus forte à Ca2+/CaM que n'importe quelle autre enzyme qui fixe le Ca/CaM /598,599/, et même la petite augmentation de Ca2+ /et, par conséquence, une action de PKCV libé rant. CaM de GAP-43 (IV-7) (Fig.I8-8)/ accelère une formation de 1P4 par cette 3-kinase /598,599/. Naturellement, c'est aussi la-raison de l'activité augmentée de cette enzyme avec le signal de Ca2+ ou de l'ester phorbol /600/ ce qui doit ac tiver PKC sur les vésicules complexées avec la GAP-43 (Fig.18). La transformation en 1P4 à partir de 1P3 doit expliquer le fait que le courant de K apparaisse seulement dans 200 msec après la création de 1P3 /60I/. Le pH optimal alcalin de telle 3-kinase /602/ confirme son activation après l'activation de la PKCM qui augmente le pH pendant le signal /I,2/. Si augmenter la concentration de Ca2+ dans la cellule par son injec- tion ou par l'augmentation de son flux à travers de la MP, le pic de la concentration augmentée du Ca apparaît dans une région et s'étale dans la cellule /603/. Selon la structure proposée (fig18). on peut expliquer une augmentation de l'intensité de la "vague" Ca2±K+ dans ces deux cas (ci-dessus) par les raisons suivants : (I) l'augmentation de la concentration de Ca/CaM; (2) l'augmentation de l'activité de phCM et, par conséquence, des concentrations de 1P3 et de IP4; (3) l'augmentation de l'activité de PKCM qui augmente une activité de la phC de la couche intérieure membranaire spécifique pour PC (phosphatidylcholine) et PE (phosphatidylét'hanolamine) en augmentant la phosphorylation de leurs protéines G /I,2/ donnant la possibilité pour la création de la meilleure interaction (parce que le DG est moins volumeux) entre le HS de syndecane dans la MP et les vésicules sur la MP )IV-7F).Aussi dans le 2eme cas (flux à travers de MP), il doit être une augmentation d'une activité de la phcM grâce au complexe PA-Ca2+ /I,2/. L'action des molécules de somatostatine, inhibant la sécrétion provoquée par les autres hormones par l'ouverture de ses "propes" canaux de (dépendant de Ca2+) /604/, peut être facilement expliquée avec la perturbation des "vagues" Ca2±K+ nécessaires pour la sécrétion de l'hormone par ses "vagues" "propres" (IV-6B). Encore, la structure de la "vague" Ca2±K+ depend de CaM et les mutants avec la CaM modifiée n'ont pas de courant de E+ dépendant de Ca2+ /605/. zones formes particulières de la associent avec les vésicules spéciales ou avec la MP. Selon les expériences nombreuse il y a une expression concomitante des isoformes différentes /606/. De plus les cellules seules peuvent avoir les deux (ou plus) isoformes de la phC /607/. Par conséquence, on peut supposer les fonctions différentes de telles formes des phC dans la cellule et leurs associations spécifiques avec les parties différentes des cellules comme MP ou les vésicules intramembranaires /607,606/. seulement les formes ss,# et#(des isoformes de la phC répandues) ont les deux régions très consérvées /608/. De plus, aucune des isoformes de la phC contient la séquence pour le traversement de la membrane sauf (à l'exception ) la forme phC-oL /607/. Originalement, cette isoforme- nontypique était isolée des vésicules seminales /607,609/. Les autres données(indiquant que la forme de la phC qui lie aux vésicules soit la forme ) sont des données fonctionelles: la même forme phC-# est déphosphorylée pendant les signaux des types différents: l'hormone de libération de l'hormone lutéinisante et l'estrogène 610/.Cette activation de la phC- conduit à une activation de la PKC /6IO/. logiquement, c'est la forme de la phC située au cytoplasme parce que les récepteurs de l'hormone stéroide estrogène sont déjà situés dedans, à l'intérieur de la cellule. Justement, la forme vésiculaire de la phC doit activer la PKC vésiculaire pendant la libération intracellulaire de Ca selon ma structure (Figs. I8,20). Aussi les isoformes phC-ss et phC- g ne sont pas en- dogènes: une injection de phC-ss ou# dans les cellules conduit déjà à la synthèse de l'ADN, quoique le content de la phC cellulaire augmente seulement de 15% au dessus du niveau endogène /607/o Cela signifie que la phC-ss ou doit être différente de la phO endogène- logiquement la forme d5. La rélation des isoformes de la phC avec l'hydrolyse pendant la présence ou l'absence du Ca doit être très importante pour la fonction de la cellule (Fig.20). Pour la phC-Cr, la vitesse de l'hydrolyse pendant l'absence du Ca n'est pas négligeable en comparaison avec celle observée avec le Ca dans la rangée des M /6II,6I2/.Mais pour les isoformes 9 et # , la vitesse de l'hydrolyse est négligeable en absence du Ca /Refs.611/ A partir des données ci-dessus, pourtant, on ne peut pas exclure que la forme phC-# soit aussi intracellulaire liée aux vésicules. Au même temps, il est bien établi que la forme-# de la phC est celle qui fait l'interaction sans les protéines G avec les récepteurs de MP des facteurs de croissance avec I'activité de la tyrosine kinase subitant la phosphorylation dans la MP /608/. Et logiquement, la forme # (ss1)réagit aussi avec le récepteur dans la MP mais avec l'aide de la protéine G.Pour cette forme de la phC, la sous-unité G q (sensible à la toxine pertussis qui réagit spécifiquement seulement avec cette isoforme) était isolée /613,614/. Logiquement, ces formes # servent pour les autres signaux nonprolifératifs (quoique cela ne doit pas être une régle stricte) avec l'aide des récepteurs de la surface pour les eicosanoides (IV-2) activant ces phC avec l'aide des protéines G (souvent sensitives à la toxine pertussis). La présence des isoformes g dans la majorité (et peut-être toutes) de lignes des cellules de culture /608/ doit refléter sa propriété fondamentale dans la transmission du signal prolifératif pour n'importe quelle cellule. Une injection de la phC-# ou / peut influencer la cel lule de quitter la phase Go et entrer dans ) R phase S (comme avec la stimulation par le sérum) et retourner à l'état normal dans 26-30 heures /615,66/. Malgré l'existance évidente (comme le fait le plus important) des isoformes de la phC liées à la MP (reg. ci-dessus), on doit être prudent sur la distribution exacte des formes de la phC. 6. La structure principale du transport cyclique des vé sicules entre la MP et "calcisones" avec le cycle des dérivés de PI situés sur la vésicule:PIP2#DG (+IP3)# #PA#PA#CMP#PIP#PIP2#: libération du calcium des "calcisemes"avecl'aide dela phC située sur les vésicules du transport (vésicule "PKC"). A. Les preuves de l'existance des vésicules du transport avec la probe phC (et PKC) et avec les sublstanes nécessaires pour la modification de la cellule pendant le signal. En observant les cellules des invertèbres (cellules de la vision du crabe)/6I7/, on peut voir que lle membranes intérieures soitent situées près de la MP et Agrès le signal (la lumière) il y a un pic du Ca qui diminue pendant les 2 secondes. Visiblvement, par analogie avec les cellules des vertèbres typiques, ce pic doit contenir plusieurs (au moins 3) courants de Ca Flux de Ca à travers de la MP et l'augmentation de Ca in via 1P3 des vésicules "PKC" et via le Ca des "calcisomes" (#lV-6B) /I,2,618/.Mais à cause de la proximité des membranes mentionnée pour le signal de la lumière,le courant du Ca à travers de la membrane intérieure I(Ca)in /etimulé par 1P3 libérée par la phC 'phCM de la membrane plasmique/ décline avec la rapidité du courant du Ca à travers la MP et sans le (Ca)ext. Lcourant de Ca (du signal) vraiment existe justement dans le cas plartliculier de ces cellules invertèbres (reg. pour la comparaison /6I9/) quoique l'amplitude est de 50% /6I7/. Mais dans le cas normal des cellules des vertebrées typiques, le nombre des phases est évident /IV-6B,619,620/. Par exemple, dans le cas du signal par les molécules de bradikinine. le preier pic du Ca /I(Ca)in/, appareît dans I-2 secondes, mais le second pic, grâce à l'apparence de 1P3 (aux ème concentrations plus fortes, la 2 fois) doit apparaître au moins I7-20 secondes plus tard /620/. Un autre cas de la "difusion" directe du messager (Ca2+) a lieu aussi dans le cas de la position très proche entre les stocks du Ca2+ dans le réticulum endoplasmique /avec les canaux de Ca sensitifs à caféine ) dépendant de Ca/ et la membrane des tubules T des muscles striés avec les canaux particuliers d'hydropyridine avec la transduction des ions du Ca presque. directe (ltextérieur Fcytoplasme) /62I et aussi 587/.Quoique, même dans ce cas il y a aussi des récepteurs du réticulum sarcoplasmique (SR) modulant situés aussi près de la MP (IV-8),. Telle différence entre les deux systèmes doit être expliquée par la distance réele plus longue entre les MP et les stocks intracellulaires du Ca2+dans le cas des cellules typiques des vertèbres /622/.Et il est impossible d'imaginer l'évolution avancée vers les systèmes moins effectifs avec la diffusion nonprecise, très couteuse et à la distance très longue où la nonefficacité de la survie augmente avec (au moins) le carré de la distance.De plus, dans les cellules stimulées par l'agoniste il y a une accumulation de lfinositol 1,3,4-triphosphate mais pas de l'inositol I,4,5triphosphate (reg.,par exemple /623/) qui ne libère pas de Ca2+. Cela signifie: plus longue la distance entre latrégion de la libération de 1P3 et de ces récepteurs, plus petite quantité de ces molécules peut atteindre le récepteur, ce qui n'est pas effectif et très peu probable apriori. Par conséquence, le système,qui garantit le transport precis du second messager (ou de son producteur) aux stocks du Ca intérieur, doit exister.De plus tel système du transport ordonné peut porter aussi des substances (comme dans le cas des granules avec les transmetteurs ou avec les hormones) nécessaires pour la translation primaire du signal dans la machinerie du signal (reg. ausii V-9) comme les molécules de tubuline, actine, clathrine ou gelsoline synthétisées (généralement) dans les systèmes ribosomals intérieurs et fournies dans la région de la MP. Le système IP3-Ca est subordonné, généralement,à ce but principal. Tel système des vésicules fonctionne pendant la durée du signal où la PKC joue le rôle central et je les nomerai comme les vésicules "PKC". Leur comportement et le mécanisme de l'action sont très semblables à ceux des granules ou ies vésicules synaptiques différentes. La différence principal entre eux est: (I) la région de la libération des substances /à l'intérieur (Fig.2IA) et à l'extérieur (Fig. 2IB) de la MP/ et (2) le mécanisme correspondant à telle libération. Les faits nombreux prouvent l'existance de telles vésicules spéciales "PKC", initialement découvertes et développées ici, avec leurs propres phC (et aussi PKC) transportées sur-ces vésicules (IV-5) jusqu'au stocks intérieurs du Ca2+ (où les molécules de IP3 sont libérées déjà très près des récepteurs de IP3) comme dans le cas considéré plus haut des cellules spéciales des invertèbres /6I7/. Une existance de telle phC située sur les vésicules intérieures était confirmée: pendant la sécrétion de l'insuline induite par le glucose, l'hydrolyse forte de PI était localisée dans les membranes des granules /624/. Aussi les agonistes cholinérgiques stimulent l'hydrolyse de PI dans réticulum endoplasmique rugueux (RER) /625/. On peut voir un autre type de telle preuve du fait que la transféction des protéines G ras 21 augmente la décomposition de PI après Itaction des facteurs de croissance /626/: il est connu que la phC (phC-y) est activée directement, sans protéines G, par les récepteurs des facteurs de croissance /607/ ét de plus les protéines ras 21 associent avec les vésicules intérieures (IV-7C).Par conséquence, on peut conclure que la phC, activée après la transféction ci-dessus,n 'appartient pas à la MP, mais elle doit associer avec les vésicules. Une allgmentation des concentrations de DG après telle transféc- tion dep2I et la transformation /627/ aussi confirment les faits ci-dessus. B.Lastructure générale du cycle vésiculaire "PKC"(Fig.20) on peut conclure que pendant le temps entre les signaux, les vésicules "PKC" (avec les molécules de PIP sur leur surface) "attendent" le nouveau signal ("stades" II,I-Fig. 20) avec les substances de la construction de la "machinerie" du signal à l'intérieur, ce que la cellule doit utiliser immediatement après le signal pour la création de la "machinerie" du signal (qui i'est pas encore prêt) servant aussi pour le transport des substances de la construction à partir de Golgi et de ER à la MP. Comme il était prouvé avant (II- 8), pendant le signal il y a la création de la quantité mineure des récepteurs immobiles complexés avec les molécules de syndecane agrégées ayant plusieures chaînes des GAG (HS et CS) (Fig.6sII-8).Dt-autre part sur la surface des vésicules intérieures il y -a piusieures enzymes: PI-kinase ,PIPkinase, phC et aussi les récepteurs IP3 qui réagissent avec une affinité forte avec l'héparine (GAG)/628-632,587,588/. Par conséquence,on peut déduiré que au début du signal il y ait un attachement des vésicules préexistantes à la MP /avec l'aide des "ligands" des GAG (HS) agrégés sur la surface intérieure de la MP pour ces (plus haut) protéines affines sur la surface de la vésicule/.Le fait,que pendant l'endocytose des granules induite par signal il y a les 2 pas (où le ler pas est un attachement de ces granules à la MP (IV-7)/, confirme tel attachement induit par le signal.Après tel attachement il y a des événements conduisant à la fusion des vésicules avec la MP et avec la création des pores très spécials entre l'espace intérieure des vésicules et le cytoplasme dans le cas des vésicules "PKC" grâce aux lesquelles les substances de la vésicule peuvent être transportées dans le cytoplasme près de la MP à partir des régions de ER et au contraire. Après la rentrée de ces substances dans la vésicule, elle détache de la MP, la pompe H+ continue de fonctionner, les ions de Ca vont à l'intérieur en échange pour les ions H+ faisant une agrégation des chromatogranines de la vésicule et provoquant encore un attachement de la vésicule aux MF avec la couche suivante des MFs corticals transversals étant la partie de la"machinerie"du signal créees spécialement (V-9), analogue à celle créee pendant la motilité cellulaire (V). Ces vésicules bougent vers la région Golgi-ER ("stades" 3,4) où (pas loin de MP) il y les régions spéciales remplies par Ca2+ /633/ (nommées par quelques auteurs comme les "calcisomes" /622/). Tel,mouvement a lieu avec l'aide des "vagues" Ca2±K+ (IV-3,4). Ce mouvement unidirectionel de la vésicule s'arrête près de cette région des "calcisomes" ("stade" 5). Cette région dela libération de Ca(IP3-induite)n'est pas la prtide d'une organelle. Cette llibération est effectuèe par les portions spécialisées, logiquement dérivées de Golgi ou de ER lisse /634/. Ces régions spécialisées ("calcisomes") doivent former les structures fermées isolées de Golgi (ou de ER) avec leurs propres concentrations des ions de Ca2+ et de H+ variables pendant leur fonctionnement (Fig.22). Mais au même temps, il doit avoir lieu la communication avec les organelles membranaires intracellulaires pour avoir des substances particulières synthétisèes.On doit conclure que ce ne puisse être que la communication (de la distance courte) avec l'aide des vésicules entre les organelles intracellulaires avec les citernes et les "calcisomes". Ces régions sont aussi trouvées dans le terminal de l'axone /635/ soulignant le mécanisme commun avec la croissance d'axone (et la motilité cellulaire) (V). Comme le résultat de tel arrêt de la vésicule il y a une augmentation de la concentration des molécules IP3 produites à partir de PIP2 par les phC vésiculaires /type (ou (IV-5)/ qui peuvent fonctionner ;(quoique plus faiblement) même en absence des ions de Ca2+ en différence avec la phCM. Comme dans"le stade 2" (Fig.20) il doit être la quantité relativement faible du Ca libéré de la vésicule (Fig.22). Les propriétés du récepteur IP3 de la vésicule doivent être clairement différentes des canaux des récepteurs IP3 "des calcisomes". Selon le nombre des données, dans'la cellule il y a les deux réservoirs (IP3 sensibles) des stocks du Ca2+: un réservoir a la Ca-ATPase et le pH normal (sans la pompe H+) et un autre réservoir a la pompe H+, le pH acide et les canaux de échange HtCa2+ /590,636,6I9,637/ (Fig.22). Malheureusement, les auteurs attribuent ces stocks existants -aux structures fausses /590,636/.Après une analyse réele des données ci-dessus, on peut facilement attribuer les stocks du Ca2+ avec le pH acide aux vésicules "PKC" et ceux avec le pH normal aux"calcosomes" (Fig.22). Et, par exemple, pendant l'application de l'ionophore A 23I87 il y a un flux des ions de, Ca dans les vésicules mais, en différence avec ces vésicules, il y a la libération du Ca2+ des microsomes (les stocks du Ca de "calcisomes" en majorité) /586/ Au même temps, pendant l'application de IP3, onpeut observer (dans le cas de vésicule) le courant de Ca opposé (à l'extérieur des vésicules I(Ca)ext).De plus, la libération de Ca était rapide /586/ et, apparemment, coopérative /638/ parce que dans les cellules des leukocytes perméabilisées utilisées aux concentrations plus faibles de IP3, la libération induite de Ca des vésicules "PKC"doit avoir lieu parce que la valeur du seuil des récepteurs de IP3 des "calcisomes" est deux ordres plus grande-reg.ci-dessus. On peut expliquer tel comportement différent du flux directionnel du Ca, dans le cas des vésicules, avec l'effondrement rapid du gradient du pH après l'action de IP3 sur ces récepteurs: dans la présence dé NH4CL qui effondre aussi le gradient de pH il y a aussi la diminution analogue du flux du Ca dans les granules (vésicules) pendant l'application de A 23I87 /639/. (Cela aide établir clairement les événements sur' Fig.22A-I). Ces propriétés spéciales ioniques des membranes des vésicules et des "calcisomes" et des récepteurs doivent avoir lieu avec l'equilibrium mutuel des charges avec laide des ions différents (Fig.22). Par exemple, pendant les injections de 1P3 dans la céllule il y a le courant de Cl à travers de la MP /640/.De plus il est difficile d'expliquer tel comportement des vésicules avec n'importe quelle autre raison, except une: ;justement seulement avec l'augmentation de pH il y a une augmentation de la quantité des ions libres du Ca dans la vésicule à cause du changement particulier des propriétés avec le pH des molécules de chromatogfanine A qui peuvent fixer presque tous les ions de Ca dans la vésicule /639/: les ions de Ca agrègent les molécules de chromatogranine A seulement aux pH acides (5,2-5,5) et ces molécules fixent à ces pH deux fois plus des ione de Ca que aux pH normaux (7,5) /64I,587/.En confirmant ces données encore, on peut clairement constater que dans les cas des interactions de mêmes récepteurs 1P3 et des ligands IP3 dans les "calcisomes" /où il n' y a pas de gradient de pH (Fig.22B)/ (reg. ci-dessus),la direction extérieure du courant de Ca2+ dans le cas de l'inophore A 23I87 et de IP3 est la même. Les différences contrastées ci-dessus des propriétés des récepteurs IP3 dans les vésicules et des "calcisomes1, doivent être reflétées dans le mécanisme de l'échange des ions avec une equivalence NETTE des charges(Fig.22).On ne peut pas exclure la différence dans la structure primaire entre ces récepteurs parce qu'il existe les transcriptions différentes du recepteur IP3 dans les mêmes cellules avec la régulaation visiblement différente /643a/. Dans le cas de la de Ca des vésicules, l'échange dépendant de pH: Ca2+ 2H+ a lieu /642/. De plus les propriétés du courant du Ca à l'extérieur par les récepteurs IP3 du "calcisome" sont très spéciales. La base moléculaire de ces propriétés particulières des "calcisomes" pour Ca peut être reflétée dans la structure particulière de la protéine calréticuline fixant le Ca qui est codistribuée avec les récepteurs 1P3 situés à la proximité de citerne de ER dans la partie nonacidique du réticulum /644,645/ (mais pas directement dans ER.Golgi, mitochondrie ou MP-/633,646,587/) et colocalisé aussi avec la forme parti culière- de l' 2Pase /647/.la calréticuline(adsorbeur) n'a pas de conformation dépendante du Ca, en différence avec la cal séquestrine /ER(SR) des muscles striés/ /648/ et aussi la chromatogranine a(reg. ci-desus).La calréticuline n'a pas aussi de l'homologie dans la séquence commune et aussi de la réactivité croisée avec la calséquestrine /649,650/ à l'exception d'un type seulement des anticorps'communs /649, 650/.Le fait,que les doses mi-maximales de 1P3 pour la libération de Ca des microsomes ont l'outre 2 fois de plus- que célles pour lier au récepteur 1P3 /652/ confirme le niveau haut du seuil pour la libération du Ca des "calcisomes". De tout façon, le fait ci-dessus reflète les propriétés coopératives /638/ des récepteurs 1P3,multimères /653/ dans ces"calcisomes". Les structures ci-dessus s'accordent bien avec les résultats phénomenologiques expérimenataux, faits co rrectement et mesurant la cinétique du courant cellulaire du Ca.Bien sur, on peut prendre en consideration les sources différentes des erreurs dans un nombre des autres travaux /654,655/: (I)le surchargement des cellules avec le colorant qui me-sure la concentration de Ca; (2) l'utilisation des co lorants (comme l cquorine) qui sont peu sensitifs aux changements faibles de Ca; (3) les difficultés extrèmes pour mesurer l'élévation lente de Ca parce que les expérimentateurs, géné ralement, enrégistrent les concentrations du Ca moyennes sur la cellule entière /654/.On a démontré que la présence du Ca2+ extérieur soit essentielle pour la cinétique des changements du [Ca] in et ce Ca extérieur (dans le courant du Ca soutenu /I,2/)'doit être essentiel pour une partie de l'élévation lente initiale du Ca (Fig.23) et aussi pour quelque niveau de l'intensité de Ca in du signal consécutif /619/. On peut aussi bien distinguer la modulation consistante périodique claire de cette élevation lente initiale de Ca avec un nombre de petits pics /654,656,619.655/.Ces petits pics doivent justement refléter la libération répétée du Ca de vésicules transportantes (Figs.20,23) accompagnée par l'aug- mentation générale des concentrations du Ca in parce que tout ce Ca ne, peut pas entre éliminé immédiatement. Le degré de la rentrée du Ca est controlé par le degré de la plénitude des stocks intérieurs de Ca /657/. Cela doit signifier: plus petite est la concentration du Ca dans la partie intérieure de "roue" membranaire Ca-lysoPA-PA /1,2/, plus grande quantité du Ca peut se tourner et entrer dans la cellule par la structure "roue'1. Ce type de la cinétique du Ca (Fig.23) est observé aux concentrations de l'hormone faibles et quelques cellules vraiment montrent le gradient des concentrations du Ca in seulement sur un pôle après ltapplica- tion de l'hormone /658/ Avec l'élévation des concentrations appliquées de l'hormone, la fréquence (0 ) de telles oscillations augmente /654,659/ mais la hauteur et la largeur de chaque pic restent constantes /654/. En utilisant la structure de Fig.19, on peut voir qu'avec l'élévation de la quantité du ligand appliqué il y ait la création de plusieures structures cycliques indépendantes démontrées à'la Fig.20. On peut déduire que leurs positions mutuelles dans l'espace doivent entre semblables à la Fig.I de /1349/. Bvidemment, telle superposition des structures différentes cycliques de Fig.20 peut être particulière pour chaque ligne cellulaire et en conséquence l'échantillion unique des pics du Ca pour chaque cellule dans la ligne cellulaire particulière était trouvé /660/o Il y a une localisation stricte dans les memes régions de la cellule (près du pôle avec ER, mais proche aux sites de l'exocytose dans la région au-dessous de la MP) des pics majeurs du Ca bien visibles (Fig.23) avec la propagation dans une même direction pendant les osci- llations spontanées consécutives ou après l'application des ligands différents /654,661/. Telles vagues du gradient du [Ca] in dans l'espace sont accompagnées par la propagation des concentrations locales (Fig19) /662,603/. Parce que tel procès concerne aussi les vésicules (granules) de l'exocytose (la différence essentielle est dans le mécanisme pour la sécrétion à l'extérieur- Fig.2I), la quan tité de l'hormone sécrétée par les vésicules (granules) est aussi augmentée pendant telle élévation de la fréquence des oscillation/654,663, 659,664/, Naturalement,l'amplitude de telles oscillations est proportionelle à la quantité de cette hormone libérée /664/o De plus, le fait que la fréquence de l'oscillation est proportionelle à la ligne de base du Ca2+ pendant les oscillations/664/, confirme bien cette structure parce que, évidemment, tout Ca libéré pendant la fréquence haute ne peut pas être pompé du cytoplasme.Le rôle du Ca extérieur dans le développement de telles structures (Figs.I8,20) peut être vu du fait que la fréquence de l'oscillation diminue avec une addition du La extérieur /659/ qui doit inhiber le courant soutenu du Ca /665/. De plus, on peut voir la coordination entre la "vague" de la surface: Ca2±K+ et telles oscillations de [Ca]in (donnant les vagues du Ca intérieur) à partir de la corrélation entre la valeur du maximum de la production des PG et des TX /nécessaires pour la "vague" Ca-K (Fig.18)/ et la valeur du maximum des oscillations/654,666,667/.La variation cyclique dans la concentration de IP4, qui est aussi nécessaire pour la la "vague" Ca-K (Fig.I8),~doit aussi refléter les oscillations du [Cajin /668/. Évidemment, une utilisation de la somatosta tine, qui a ses propres "canaux" Ca-K à la MP /604/ (pendant l'application d'une autre hormone sécréteuse), doit conduire à la déstruction des "vagues" Ca-K de l'hormone sécréteuse (elle-même) et, par conséquence, à la diminution de la sécrétion par l'hormone /664/. I1 est accepté aujourd'hui que ces vagues de Ca propagent avec l'aide du procès de la libération du Ca induite par Ca /603/ mais il est évident de toutes mes structures ci-dessus (Figs.I8-23) que ce ne soit pas le cas et il y a le nombre des adaptations très spéciales qui, seulement en partie, suivivent cette régle (Pigs.I8,I9, 20). Avec une augmentation ultérieure de la concentration du ligand (à la doze maximale-on dit) tous les pics fusent pour donner LCajin élevé continument. La diminution de la production de PG à telle doze maximale doit signifier la déstruction des "vagues" Ca-K (étant corrélative avec une app?- rence de [Cadin élevé continûmentr) /656,654/. Par conséquence, seulement telle quantité accumulée (seuil) de IP (mais pas n'importe quelle activité faible permanente 3 de la phC sur la surface des vésicules) peut ouvrir les ca- naux du Ca des "calcisomes" /669,655/. Et après le début de ce procès il y a la rétroaction positive forte (pour la production nouvelle) de l'activité de la PhCV activée avec le Ca du courant. à travers de la MP /Fig.23 (I,IT)/ et le Ca des "calcisomes" (IV-3). Cela conduit à la libération rapide de la quantité large du Ca 654,656,6I9- reg plus bas/.Pendant tel procès (avec la présence obligatoire du Ca) il y a la transformation des récepteurs IP3 de "calcisome" de l'état de l'affinité faible à l'état de l'affinité forte /670/. Cette transformation était observée dans les hépatocytes perméabi- lisés et aussi avec les "calcisomes" (purifiés avec la contamination de la MP) /670/. Seulement la moitié deys récepteurs subit cette transformation dans le cas des cellules permé,a- bilisées (où les récepteurs de la vésicule doivent être aussi présents) en différence avec les récepteurs des "calcisomes" (purifiés avec la B2) où les transformations ont lieu avec la majorité des récepteurs pendant l'expérience /670/.Encore, ce fait prouve la différence démontrée dans les propriétés de ces récepteurs de IP3 membranaires. La réalité de telle transformation in vivo peut être vu de l'augmentation du nombre des récepteurs de l'affinité forte dans les cellules après le prétraitement avec les hormones /670-672/ On peut expliquer aussi la différence large de 2 ordres (entre les mi-concentrations maximales de la liaison de IP3 et la libération du Ca) avec la transformation ci-dessus des récepteurs IP3 de "calcisome" (dans l'état de l'affinité forte) par la "rétroaction" augmentant continuellement. Pourtant, quand à l'extérieur des "calcisomes" il n'y a pas de Ca, telle liaison de 1P3 est réversible et elle est inhibée par le ligand nonmarqué aux concentrations fortes /673/.Mais immediatement un autre procès de la désensibilisation des canaux 1P3 de "calcisome" (aux concentrations du Ca augmentées) commence qui conduit à la fermeture des canaux de Ca /670,643,674/ et l'irréversibilité de la liaison IP3. De plus, la cinétique de l'inhibition du canal est concordante avec la période des oscillations/603/. Toutes ces conditions doivent conduire au pic rapid et large des concentrations du Ca suivi par sa diminution /603/ grâce à l'activation de la pompe Ca-ATPase dans les "calcisomes". De plus il doit encore avoir lieu la modulation, conduisant au pic brusque du Ca2+. Naturellement, après le seuil ci-dessus pour la transformation des récepteurs IP3 de "cal cisome dans un état avec l'affinité forte, avec le calcium, conduisant à la libération large du Ca, il y a un autre procès conduisant à l'inhibition de la liaison 1P3 à ces récepteurs avec la protéine spéciale de la liaison du Ca (calmedine) /675/. (Cette inhibition n'est pas trouvée pour les récepteurs purifiés /676/). Quand le Ca quitte le cytoplasme entourant (avec l'aide~des pompes du Ca), les récepteurs 1P3 sont libres pour le cycle suivant des interactions.Cette inhibition "finale" doit être importante pour la synchronisation de la portion suivante /Pig.20(7-II)/ de la "vague": 1'oscillation-transport. I1 y a un fait clair /677,678/ concernant la présence de la période de réfraction pour une augmentation du Ca intérieur après les applications successives de 1P3 à ses- récepteurs (les récepteurs les plus visibles dans la mésure sont les canaux de "calcisome") /654,656,6I9/). Telle libération pulsative du Ca intracellulaire a lieu même si la concentration de IP3 ?a l'intérieur de la cellule est constante /679/; ce qui signifie qu'il ne doive pas y être périodiquement des récepteurs nonoccupés et-actifs des canaux IP3.Ce fait de l'apparence périodique des récepteurs de IP, de "calcisome" actifs peut indiquer qu il doit avoir lieu le mécanisme spatial pour l'élimination des "calcisomes des complexes désensibilisés de l'affinité forte des molécules de 1P3 et de ces récepteurs et leur synthèse nouvelle et l'échange pour ses récepteurs nouveaux dans ces "calcisomes". Ces conclusions doivent signifier, en conséquence, qu'après le signal cellulaire, la synthèse augmentée de l'inositol dans la cellule doive aussi avoir lieu /680/ (et ci-dessous). I1 y a aussi un autre procès résponsable pour un pic très large et brusque du Ca /654,656,6I9/ aux "stades" 5 et 6 (Figs.20,23). I1 fonctionne avec le Ca de la mitochondrie. On a trouvé clairement la présence des mitochondries situées très proche (jusqU'à 5 nm!) aux vésicules se trouvant près de la MP /68I/. I1 est démontré que le flux du Ca dans la mitochondrie fasse la corrélation avec sa respiration /Refs. 58I,682/ avec les coefficients stoechiométriques entre ce flux du Ca et la transfère de électron /683,682/ et comme le résultat, le potentiel membranaire (A9 ) (pour la membrane intérieure de la mitochondrie) augmente, avec la quantité des ions Ht situés entre les membranes de la mitochondrie /682/. Mais quand le- seuil de l'accumulation du Ca est atteint il y a la libération du Ca accumulé /684 avec Refs;683,682/ avec la liquidation de##/685,686,682/.Pendant cette période il y a aussi une libération concomitante de 1ATP /687/ (évidemment en corrélation avec sa synthèse par l'ATP-synthétase pendant le procès ###o quand les ions de H entrent dans la matrice). Par conséquence on peut voir que les conditions pour le pic du Ca brusaue soitent très améliorées aussi avec cette action de la mitochondrie. Premièrement, il y a une nette partie (étroite avec le temps) du Ca de la mitochondrie participant dans le procès de la rétro action positive pendant la libération des ions du Ca des vésicules et des "calcisomes". Deuxièmement, l'AUP,libère concomitantement, sert pour le fonctionnement intensive de l'ATPase de la pompe de Ca2+, justement située aux mêmes "calcisomes" /622/.Le premier procès de l'accumulation du Ca par la mitochondrie n'est pas bloqué par les inhibiteurs de la phosphorylation oxidative--(comme l'azide ou le cyanure) /688/ mais il est inhibé (et aussi la respiration inséparée) avec la cyclosporine /689/ ce qui doit inhiber justement l'accumulation du Ca, où le procès resemble clairement le procès du courant de Ca soutenu à travers de la MP avec l'activation de la phospholipase A2 et l'acyltransférase /I,2/ qui est justement inhibe par le cyclosporine /I,2/. Mais le procès de la libération du Ca après le seuil de l'accumulation est inhibé par les inhibiteurs de la phosphorylation oxidative /687/ confirmant le but séparé de ces procès. Aussi la partie des molécules de l'ATP,formées et libérées, doit etre transformée en GTP: ATP+GTP=ADP+GTP, ce qui doit provoquer une ouverture des vésicules (granules) /690,69I/ et la rentrée de 1'ATP (et des autres molécules se trouvant dans cette région pour être transportés à la région de la. "destination" près des récepteurs de MP immobiles) à l'intérieur des vésicules /692/ nécessaire pour leur transport à la MP. Ce procès doi-t aussi apporter les molécules de GTP aux protéines G membranaires. Par conséquence, on peut aussi voir (de ci-dessus) la voie excellente de la régulation de la production de l'ATP et de la disponibilité de l'ATP avec le changement de la concentration cellulaire du Ca. Cette voie peut être aussi modulée avec les ions cellulaires de Na parce que la partie des mitochondries déclenchent la production et la disponibilité de l'ATP avec la concentration des ions de Na+ /Refs.682/ qui sont tellement importants pour les déclenchements des événements, encore mystérieux, pour les signaux cellulaires"longs" comme la mitose /693,694/. On peut voir une bonne véracité de tels procès dans le fait de la proximité entre les mitochondries et les vésicules qui ne"se transforment"jamais par la fusion de ces membranes /68I,695/ Après l'hydrolyse des molécules PIP2 sur les vésicules ("stades" 5,6- Fig.20) il doit avoir lieu la résynthèse de PIP2 sur les vésicules. La corrélation entre l'augmentation du métabolisme du phosphate de di et triphosphoinositides et la sécrétion du médiateur /696/ montre l'interdépendance de ces procès.Les molécules de PIP2 (PI) sont synthétisées sur les granules et les vésicules et aussi sur la MP /Refs.697; 698/. Et encore il y a la synthèse "classique" de PI dans ER lisse (-de novo d'après la-glycolyse) et la synthèse "demi" de novo de PI près de la MP: DG-MAG FlysoPA-CMP wPA oPI - (MAG- monoacylglycérol') /I,2/ (Fig24).L'inositol nécessaire pour telles synthèses doit être synthétisé de novo ou pinocyté du plasma/699/ dans la cellule et cette synthèse (pinocytose) doit s'augmenter pendant le signal parce que 1' activité de la PI-synthétase dans le ER augmente pendant le signal 2-3 fois /700/ Ou l'inositol est réutilisé d'après une série des réactions à partie de 1P3 (près de la MP) /623/. Le fait du marquage le plus rapide des granules (même dans les conditions stationaires) par l'inositol /624/ montre ltutilisation(cyclique) préférable des dérivés de PI sur les granules (vésicules). Selon /701/, aussi la PI-synthétase se trouve dans la MP (et ER) mais pas sur les membranes de la densité faible (vésicules) comme aussi l'enzyme CTP:PA cytidyltransférase /70I/ faisant l'accord encore entre ces résultats. La publication /iOI/brillamment confirme cette stru cture (Fig.24): (I)la synthèse de PI est, en majorité, dans le ER et aussi dans la MP (plus faible) et il y a le transport de PI: ER#MP: (2) les molécules des dérivés de PI (PIP et PIP2) se trouvent, en grande majorité, dans la MP. Aussi la synthèse de PI dans les microsomes est stimulée par les ions de Mg2+ /70I/ (la concentration locale de ces ions reflète le transport vésiculaire-reg. ci-dessous-Fig.25). Les enzymes qui sont nécessaires pour telle synthèse de PIP2 sont souvent situées sur la surface des vésicules (garnules). La résynthèse a les pas suivants ("classiques"): DG#PA-CMP#PIP#PIP2#("stades"7-ll, Fig20). L'enzyme DG-kinase est trouvée dans les membranes avec la densité faible (vraisemblablement participant dans ce transport membranaire) /70I/ et aussi "directement" elle est trouvée dans la fraction des vésicules synaptiques /70I/ où dans le ER /702/ (et aussi dans la MP /703, I, 2/). De plus l'activité de cette enzyme depend de la concentration de Mg /703/, ce qui signalise que (déjà) après la libération du Mg des mitochondries (reg. ci-dessous) il y a l'activation de cette enzyme.Logiquement, l'activation de la DG-kinàse doit faciliter la,fusion des vésicules avec les"calcisomes" (ER) grace à la charge répulsive du phosphate (du PA) ce qui a la tendance à augmenter le radius des vésicules (IV-7). Mais il y a les-vésicules (comme les vésicules avec le transporteur de glucose) qui n'ont pas de cette enzyme /704/.Cela doit signifier que cette phosphorylation (DG#PA) doit avoir lieu près de la MP facilitant la fusi.on de ce type des vésicules avec la MP(ces vésicules ont absolument besoin de la fusion avec la MP et de la libération du glucose dans le cytoplasme sans la fusion avec la "calcisome"). De plus, l'incorporation stimulée du phosphate dans PI (c'est-à-dire dans PA) est trouvée dans la fraction microsomale dérivée principallement de la MP invaginé /705/. Le PI est synthétisé à partir de PA-CMP de novo au ER /698,702/ et la quantité augmentée de PI après le signal (quand la synthèse de PI de novo augmente /698/) arrive logiquement dans la MP. Mais le PI est aussi synthétisé "demi" de novo /I,2/, logiquement, près de MP (Fig.24-2), et 1' activité de la PI-synthétase membranaire augmente aussi pendant le signal. Mais il y a aussi la synthèse de PI sur les vésicules (granules) /698/. Et la source de l'inositol pour cette synthèse (comme aussi pour la synthèse de PI "demi" de novo près de la MF) est le produit de la MP /623/ (parce que la partie de ces réactions consécutives se trouve clairement près de la membrane).De plus, la PKC et le Ca/CaM (activés pendant le signal) potentialisent cette chaîne des réactions "IF3I" /680,706/. Cela doit signifier que pendant cette "stade" 9 (et 8 aussi) (Fig.20), les vésicules (granules) sont près de la MP (Fig.24). Enfin, les "calcisomme", eux aussi, ne sont pas loin de la MP et le mouvement des vésicules se passe plutôt en direction parallèle à la MP). On peut en confirmer par les expériences suivantes. Selon /699 avec les Refs./, l'inhibition de cette chaîne des réactions (par Li) pendant le signal n'a pas des effets (pendant le temps relativement court) sur la formation des IP3,mais l'inhibition prolongée diminue la formation des IP3. En prenant en considération-que la quantité des molécules de PIP2 soit seulement de (1-10)% de celle des molécules des PI /606/, on peut facilement accepter l'absence des effets pendant l'inhibition courte en sachant que le réservoir des molécules des PI soit beaucoup plus grand que celui des molécules de PIP2.Mais le fait de l'inhibition avec la stimuler tion prolongée /Refs.699/ montre la dépendance de la présence des PI de la source de l'inositol formé à partir des IP3 (Fig.24-2). En prenant en considération le métabolisme plus accéléré des dérivés des PI sur les granules (vésicules) /624/, on peut conclure que les vésicules (granules) utilisent l'inositol (pour la résynthèse de PI) qui se trouve près de la MP d'après la chaîne des réactions "IP3 > -I" (Fig. 20). Le "stade" IO (Fig.20): la transformation "PI#PIP" a lieu aussi sur la vésicule parce que l'enzyme PI-kinase (PI-4P kinase)se trouve directement sur les vésicules (granules) participant dans le transport membranaire/707-710/. De pius, l'enzyme semblable (qui peut être identique) se trouve sur la MP /708,7II,627,7I2/ (logiquement) pour la phosphorylation de PI de la MP (Fig.24-8). Mais la majorité de l'activité de cette enzyme de la fraction membranaire se trouvent sur les membranes de la densité faible, logiquement, participant dans le transport membranaire /70I,708/. La PI-kinase est inhibée aux concentrations faibles du Ca in /707/, ce qui signifie l'activation limitée de cette enzyme.Cela fait une bonne corrélation avec le fait de la présence bien limitée des molécules des PIP2 en comparaison avec les PI /606/. La PIP-kinase-doit faciliter l'ouverture des vésicules à la région près des "calcisomes" (et de la MP)à cause de l'augmentation des charges répulsives avec le phosphate /709, CIV-7F/, ce qui confirme son action à cette région (reg. ci-dess-ous). La dernière enzyme de ce cycle ("stade" II, Fig,20) est la PIP-kinase (PI-4P -5 kinase). Mais elle se trouve sur la MP , comme la protéine périphérique, qui peut être libérée par l'extraction avec le sel /708,713,714,709,710). On trouve cette enzyme dans la fraction du cytosol (logiquement) à cause de la dissociation pendant la purification avec le sel. L'activité de cette enzyme est localisée dans la membrane plasmique, ce qui signifie qu'il n'y a que une seule protéine périphérique (avec une seule isoforme) de la MP qui "représente" la PIP-kinase /708/.Ce fait souligne que'la vésicule ne doive être que dans une position déterminée près de la MP et de cette enzyme pour que les molécules des PIP puissent être phosphorylées confirmant la phosphorylation restreinte des PI (logiquement, fondamentalement important pour le fonctionnement normal du signal cellulaire). Cette activité de la phosphorylation de la PIP-kinase est révélée sur la surface extérieure des granules /712/. De plus, quand les vésicules approchent à la MP pendant leur ouverture ("stades" 1,2 -Fig.20) pendant l'attachement aux chaînes HS à la syndecane agrégée, il ne doit pas avoir lieu de telle activité de la PIP-kinase parce que l'héparine (HS) inhibe son activité /629/ et aussi l'activité de la PI-kinase /628,715/o De plus, l'héparine n'est pas une simple inhibitrisse de ces enzymes mais il y a une forte affinité entre les enzymes et l'héparine /628,7I5,629/, ce qui doit garantir mieux leurs interactions.Encore, l'enzyme PI-kinase peut être inhibée sur les vésicules par les chaînes HS des chromatogranines A agrégées, c'est-à-dire pendant, par exemple, l'interphase très longue entre les signaux (avec le pH acide à l'intérieur des vésicules), spécialement sur les granules des cellules sécrétantes-. L'enzyme PI-kinase est activée d'après le signal /708, 7I6,7I7/. De plus le GTP (S-GTP) active l'enzyme PîF-kinase (quoique sur les fragments membranaires)/7I8-720/. Et l'activation des protéines Gras conduit au métabolisme augmenté des phosphoinositols /RefsO7I9/. De plus, la microinjection des gènes ras dans les cellules mène à l'élévation temporaire des molécules PIP2 ce qui confirme l'interaction des PIP- kinases avec les protéines ras vésiculaires /72I/o Le fait que cette enzyme soit spéc-ifiquement bien activée par la FA /722/ (qui s'augmente fortement sur la couche intérieure de la MP pendant le début du signal- Fig.18 /I,2/) confirme son activation après le déclenchement du signal.Logiquement, cette enzyme facilite encore l'ouverture de la vésicule. et sa fusion possible avec la MP parce que le phosphate /additionnel (PIP wPIP2) augmente la répulsion de ces molécules (IV-7F) . De plus, on trouve les enzymes du cycle de l'inositophos- phate: PI- kinase, PIP- kinase et DG- kinase associées avec le cytosquelette particulèrement après le signal /7I70723, 724/, ce qui confirme la participation du cytosquelette dans le mouvement vésiculaire et la structure de l'action de la PIP-kinase. Si éliminer le ATP on peut attendre que le transport vésiculaire ne fonctionne pas /sans la pompe H et la pompe de Ca (Fig.20,22) qui sont les"consommatrises" majeures de l'ATP/ et par conséquence le niveau des phosphoinositides (sur les vésicules,évidement-Fig.24)diminue, ce qui est observé. Enconfirmatjion, on démontre que la sécrétion (dépendante de Ca) ait la corrélation avec la valeur de la somme des molécules des PIP et deys PIP2 dans la cellule /725/. A partir de cela, on peut expliquer le rôle du Mg2+ dans le procès-clé, le procès-coeur, du fonctionnement cellulaire, L'activité de la PI-kinase, l'enzyme-clé, ("stade" IO- Fig. 20) est très réduite par toutes concentrations physiologiques du 0Cajin et c'est le changement de la concentration des ions de Mg2+ qui peut augmenter cette activite /707,726,727/. Par conséquence, les concentrations (excessives et diminuées) des ions du Mg2+ doivent influencer ces procès du transport vésiculaire. Et il est bien connu que, par exemple, les concentrations faibles du Mg fassent la corrélation avec l'insuffisance du coeur /728/: si on a moins du Mg (qu'il faut), la quantité des PIP diminue, le rhytme du cycle du transport des vésicules diminue et les contractions des muscles du coeur sont réduites(IV-8). Et pendant telles contractions anormales, l'arrytmias doit avoir lieu/729/ Ce type de l'arrytmias peut avoir lieu même avec les concentrations du Mg normales dans le sang ce qui doit signifier que la pénétration du Mg dans la cellule diminue.En "renforsant", par exemple, "la vague" Ca-K (Fig.I8) /par l'introduction dans le sérum des molécules de lysoPA ('1stade" 2,3- Fig.18)/, on a la nouvelle préparation contre ce type de l'insuffisance du coeur. De plus, on peut déduire lé mécanisme de la pénétration et de la distribution des ions du Mg dans la cellule. I1 est connu que les ions du Mg n'ont pas de canaux spécieux dans dans la MF /730/ et ils ont la perméabilité passive à travers la MP très faible /73I/. Mais les concentrations des ions du Mg dans les cellules sont proches aux celles à l'extérieur même si ces ions ne sont pas en équilibre avec l'éxtérieur /730/, en différence avec les autres ions importants: K, Ca, Na,Cl. Je doit déduire que les ions du Mg pénétrent (en majorité) dans la cellule par la voie des vésicules qui font la fusion avec la MP et vont vers la région des "calcisomes" où les vésicules s'ouvrent.Et ces ions du M pénétrent dans le cytoplasme par les vésicules "PKC" près de ER (Golgi) et aussi par la voie de l'endocytose avec ou sans les "puits récouverts" (V-3G) comme dans le cas de l'incorporation des autres substances du p.m. faible /732/o Cela doit être la raison que la majorité des résultats soitent interprétées par la présence de la pompe énérgétique: pour le transport du Mg /730/, mais on ne trouve pas, évidemment, cette pompe. Et en inhibant le fonctionnement du cycle vésiculaire (Fig0 I8,20) avec l'élimination de 1'A9P (par les ions de KCN) ou par l'inhibition des "vagues" Ca-K (par[K]ext élevé) /733/ on élimine le transport du Mg. Et ces ions du Mg arrivent vers la MP en libérant les ions du Mg à l'extérieur où à l'intérieur avec les vésicules "PKC" (Fig.2I). Le fait qu'il y a des concentrations élevées des ions du Mg dans les vésicules synaptiques /734/ confirme cette conclusion. Logiquement, les ions du Mg doivent avoir les concentrations élevées dans la région du "départ" dans le-cytoplasme- près de "calcisomes1, et des mitochondries où les vésicules "PKC" (et les vésicules synaptiques) s'ouvrent (avec l'aide de GTP) dans ie cytoplasme, quoique les concentrations du Mg dans le cytoplasme aussi difficile à changer rapidement /730/ et,par conséquence, on doit attendre que les concentrations des petits ions du Mg soitent rapidement equilibrées dans tout le cytoplasme /735/ (comme les ions H± VI) (mais pas comme les ions du Ca /7I7a/). Pour resoudre cette contradiction, on doit savoir que la majorité des ions du Mg dans la cellule soit accumulée dans les organelles /730/ et la mitochondrie absorbe très larges quantités du Mg /736/. De plus, on sait que la valeur de [Mg]in augmente avec l'augmentation de [Ca] in (avec la participation obligatoire de Mg ext mais sans la participation obligatoire de Mg in /737,738,73I/. Mais la diminution de pa]in ne depend pas de changement de[Mg]in /73I/ (justement, selon ma structure de Fig.18,20). De plus, les molécules différntes chargées (de p.m. faible), qui ne peuvent pas aussi traverser la MP, font rapidement le marquage des mitochondries à partir de l'extérieur /739/.C.à.d. avec la libération locale de Ca, la libération (de l'extérieur des mitochondries) des ions du Mg doit avoir lieu. Mais c'est justement le cas de la libération des substances différentes (ATP et Ca inclus) de la mitochondrie après l'élévation du Ca in (Fig.20, 23-III, 25).C'est-à-dire, justement, pendant l'ouverture des vésicules il y a la libération des ions du Mg de la mitochondrie destinés en partie pour les vésicules ouvertes à ce moment grâce à l'ATP (et GTP) qu'i peuvent faire l'augmentation locale des ions du Mg près de la MP aussi. Le fait que l'incorporation des ions du Mg et leur libération de la mitochondrie dépendent de la respiration et du couplement avec la synthèse de l'ATP /740,73I/, confirme cette structure.De plus, même l'incorporation et la libération des ions du K+ (les deux procès!) de la mitochondrie sont couplées avec la respiration (et le couplage avec la synthèse de 1'AXP) /741,742/ en aidant à la propagation de la "vague" Ca-K (Fig.18) en changeant les concentrations des ions du K+ (en phase) avec le "besoin" de la "vague": au début De "vague" quand le pHin augmente les ions de E+ sont (plutôt) libérés de la mitochondrie (par l'uni- porte) et à la fin de la "vague" (quand le pH diminue et la concentration des ions de phosphate augmente à cause de la pompe H et de la pompe Ca) les ions de K sont incorporés dans la mitochondrie (échange H+= K+) /741,7427. Evidemment, les signaux (les hormones, les activateurs, le phorbol) augmentent les fluxes du Mg (les deux: incorporation et libération) /731, 743/ parce que le cycle du transport des vésicules s'intensifie (Figs, 18,20,25). Le fait,que la concentration des ions du Mg à l'intérieur de la cellule soit plus bas qu'å l'extérieur, peut être expliqué par l'exocytose /type des vésicules s'ouvrant au cytoplasme et faisant la fusion avec la MP (IV-7P, Fig.2I)/confirmant aussi l'existance de tel type des vésicules "PKC" analogues aux vésicules synaptiques. Ce transport est constitutif /I,2/ et la cellule fait plus vite extrusion du Mg in (à partir de la concent-ration momentalement plus élévée) que son augmentation à cause de la pinocytose-endocytose) parce que (aussi) les ions du Mg endocytés à la même région ,de la mitochondrie ( près de "calcisome") sont absorbés par elles /736/, prémierement(Fig.25). Mais ce qui est important, c'est l'explication de l'activation limitée de l'enzime PI-kinase pendant le cycle vésiculaire (Fig.20). Et c'est justement dans ces zones de la libération du Mg /près de la mitochondrie et du "calcisome" (Fig.20-5,6) et près de la MP (Fig.20-2/ et seulement pendant ce temps, l'activation de cette enzyme doit avoir lieu. Et cela doit être la raison de la quantité limitée des dérivés phosphorylés de PI. L'activité majeure de la PI-kinase de la cellule se trouve dans les membranes de la densité faible /701/ ('appartenantes aux vésicules) parce que l'endroit principal de cette activité doit se trouver près des mitochondries au moment de la libération du Mg, et aussi près de la MP pendant l'ouverture des vésicules avec les ions du Mg à l'intérieur. Et on peut expliquer l'action du venin du cobra d'après ce mécanisme. Selon /744/, la cardiotoxine augmente l'activité (justement) de cette enzyme en 2-3 fois. Avec cette augmentation, la ma Jorité des PI des vésicules (et de MP) doivent être phospho rylée et, justement, cela doit être la raison de la contraction forte musculaire sans la participation des impulsions nerveuses. Et après l'hydrolyse consécutive de toutes molécules de PIP2, il ne reste plus des PI. Et cela est la raison que les muscles ne peuvent plus se contracter (les antimuscles inclus). Et dans cet état contracté (justement) l'activité de la phA2 augmente (IV-8) et cela est la raison de la potentialisation de la lyse membranaire (MP musculaire) par la PhA2 /744/.A partir de ces faits, je propose le remède actif contre le venin du cobra: l'injection (ou des pilules comme celles avec le cyanîde pour les agents secrets) de l'inositol avec les doses fortes. La diminution de l'activité de la PIkinase dans le cas des mutants des levures /la mutation des gènes de ras1 et de ras2, qui participent dans l'action des vésicules (IV-7C)/ montre que cette activité soit associée avec le mouvement des vésicules /745/. On peut voir l'importance de ce cycle pour la fonction de la cellule dans le fait que pendant la transformation cellulaire, la somme des molécules de PIP et de PIP2 dans la cellule et l'activité des enzymes la PI-kinase et la PIP-kinase augmentent /746/. 7.Production de PAF, l'activation des caséines kinases membranaires et vésiculaires et l'activation des Sompes H vésiculaires. A. Les caséines kinases. La structure: PAF#caséines kinases# #ponpes H. Les caséines(CK) jouent le rôle très important dans le fonctionnement du cycle vésiculaire (Figs.18-23). On sait, principalement, que elles soitent inhibées par les chaînes HS (Refs.589A). Elles font son action sur les protéines-clés comme CaM,tropotine T,tubuline, MAP-IB,chaînes légères et lourdes de la myosine, spéctrine /Refs.747/. Selon le grand nombre des publications /Refs.747/, la majorité des CK (généralement CK-ll) sont situées au cytosol mais selon la structure que je développe (et après leur extraction, généralement, sans les détergents, comme pour les protéines périphériques membranaires, par exemple /748,749/), elles se trouvent sur la surface des vésicules et des granules. De plus il y a des formes (qui sont extractées plus rarement) de cette enzyme qui ont les différences avec la forme classique cytoplasmique (12g2 mles 'et#-sont les sous-unités de p.m. total I30 kDa /747/). Ces formes se trouvent dans la MP et leur p.m. varie essentiellement. La CK-II, qui attache au récepteur LDL, a le p.m. égal à 500 kDa /750/, la CK-II attachée au récepteur Fc##2aR a le p.m. égal à 37 kDa /751/, les CK-II de la MP des levures ont le p.m. égal à I50 kDa /752/ et à 75 kDa /753/ et les CK-II de la MP des érythrocytes ont les p.m. égal à 100 kDa et à 30 kDa /754/. Ces CK-II membranaires ont quelques propriétés différentes des CK-II vésiculaires: la polylysine ne change pas leur activité /753,750/, elles sont sensibles aux ions de 1 /753, 751/ et elles peuvent être dénaturées plus facilement /753, 752/. Cela indique que:(I) logiquement, elles soitent activées près de la MP d'après l'ouverture des vésicules avec les ions du gg (Fig.24) mais (2) leur activité ne soit pas influencée par les petites protéines G vésiculaires ras p2I qui ont le segment de la séquence semblable à la polylysine et qui font l'activation des CK-II /755,748/ vésiculaires. Mais toutes ces CK-II sont aussi activables par les molécules de PAF (platelet activation factor-le facteur d'activation des plaquettes) qui sont récréées pendant chaque signal cellulaire, ce 'qui est la partie essentielle du chaque signal (Fig.25). D'après l'activation des phA2 sur la surface cellulaire (il y a les phA2 hautement sélectives pour les plasmogènes /756,757/ et spécialement sélectives pour 1'AA faisant la régulation de la synthèse de PAF /758/) il y a la création de AA libre qui est transformé en eicosanoides (et cela doit être leur source majeure) (Fig-18b-2,4). I1 y a aussi la création de lysoPAF selon le chemin de "remainement", activé pendant les stimulations différentes /759/.Justement, les ions de Ca2+ sont nécessaires pour ce chemin de "remainement" de PAF /759/: (I) l'activation de la phA2 (Fig.I8B-2) et (2) le transfert du lyso précurseur de PAF à la couche interieure de la MP (reg. plus bas). Et justement, ces ions de Ca inhibent les enzymes de la synthèse de PAF de novo /759/. Et l'acetylation de lysoPA? doit permettre de produire la molécule de PAF à la couche intérieure de MP. Le bon synérgisme de la formation de PAF avec la formation des eicosanoides (avec le signal) confirme cette structure /760,76I/. Et ces nouvelles molécules de PAF activent l'enzyme CK-ll dans la MP qui active les pompes H+. Les arguments suivants confirment cette nouvelle conclusion. Selon /751 avec les Refs./, l'activité de la PhA2 et de la CK-II membranaire sont parallèles pendant l'action du récepteur Fcg2aR. En sachant que le PAF soit le résultat de l'action de la PhA2, on confirme la thèse de 11 activation de l'enzyme CK-II par PAF. Selon /762-764; les molécules de PAF activent une protéine kinase (PK) à la couche intérieure de la MP (des plants ) et aussi il y a une stimulation parallèle de l'activité de la pompe H+ des microsomes de la MP et des tonoplastes qui (l'activité de la PK et l'activation de la pompe) ont la dépendance semblable des lipides différents. De plus,il y a une très rapide activation de la CK-II après l'action de l'insuline (même avec les concentrations faibles) /747,765/ qui provoque aussi la fusion rapide des vésicules intracellulaires avec la MP /766-768/ pour transporter le glucose et, évidemment, ces vésicules ont la pompe H+. On a démontré que (dans le cas des levures) la protéine kinase semblable à la CE (et c'est, justement, doit être la CK-II membranaire- reg. ci-dessus) fait aussi l'activation de la pompe K+ /753/. Et encore, les molécules de PAF ont un site de l'affinité forte dans la MP synaptique /769/ (correspondant à -la CK-II membranaire) et elles ont les deux sites de l'affinité forte 'dans les membranes microsomales /769/ correspondant aux CK-II des vésicules "PKC" et des vésicules endocytotiques- reg0 ci-dessous). La présence de la pompe H+ "membranaire" sur la MP plasmique /769a/ (qui doit être endocytées avec-les vésicules endocytotiques ayant leur propre CK-II) et la présence de la pompe H+ spéciale aux tonoplastes(vésicules) aident à expliquer la présence de ces deux sites de l'affinité forte de PAF aux membranes microsomales /769/. De plues, en comparaison de ces deux sites de l'affinité de PAF, on voit que le site pour les vésicules (analoque des vésicules "FKC") est de mille (!) fois plus forte, ce qui confirme le rôle plus principal et actif de ces types des vésicules. De plus, on peut conclure logiquement que la CK-II est responsable pour l'activation de la pompe H parce que c'est justement la CK-II qui est inhibée par les chaînes HS (agrégies) (ce qui se passe quand le pH à l'intérieur des vési cules est acide, c'est-à-dire quand il faut arrêter la pompe) et, au contraire, quand le pH à l'intérieur des vésicules est normal, les chaînes de HS ne sont plus agrégées (Fig.18) et il n'y a plus de telle inhibition de la pompe E+. Et encore, la CK-II est inhibée par les ions de phosphate /747/ et c'est (encore) justement la rétroaction négative pour arrêter la pompe H+ qui décompose l'ATP (phosphate+ADP). Et en activant la pompe H qui utilise l'énergie, la CK-II (justement) augmente le métabolisme de l'énergie en activant ses enzymes-clés /747/.Et (logiquement) en stimulant le transport par ce cycle vésiculaire "PKC" (qui apporte les protéines et les autres substances vers leur "destination" cellulaire), la CK-II active aussi la synthèse (logiquement) de ces substances transportées en stimulant la synthèse des protéines au niveau de l'activit-é de l'ARN polymérase /75I/. La présence des quantités anormallement fortes des récepteurs de IDI (low density lipoprotein- lipoprotéine de basse densité) dans les cônes de croissance des neurones /770/ /ce qui est un analogue clair du signal (V)/ montre l'importance de la CK-II membranaire (qui attache justement à ce récepteur /750/) dans le signal. On voit toujours dans cette innovation que tout les facteurs (qui augmentent l'intensité de ce cycle vésiculaire "PKC") conduissent -au cancer et à la croissance intensifiée. Et ici aussi encore, les concentrations de la CK-II augmentent aux cellules cancéreuses, aux cellules proliférantes rapide'ment pendant le développement embryonnaire ou dans la culture /747,77I/. B.Bes caractéristiques Sarticuliers des vésicules condui sant à leur ouverture. L'activité des caséines kinases, la structure de la protéine GAP-43 avec les chaînes polymères (isoprène inclu ) et la structure de petites protéines G de la famille Ras jouent le rôle important dans le procès de l'ouverture des vésicules "PKC" à l'intérieur de la cellule. Un facteur global (dans le fait de l'ouverture des vésicules, spécialement avec les molécules GTP /690,69I/) est l'aide des chaînes des acides gras. Tout cela doit permettre produire "les trous" par lesquels les substances passent à travers de la membrane vésiculaire. I.Les petites protéines G. La superfamille des protéines G (sauf les facteurs de translation et la tubuline) inclut:(I) les protéines G hétérotrimériques se situant dans la Ex;(2) les protéines Ras protooncogène (protéines Ras) et (3) les autres petites protéines G ayant une seule chaîne de p.m. faible: rab,rp,rho,rac, smg 2I,smg 2,SEC 4,YPT,APF) qui ne peuvent pas provoquer la division cellulaire ininterrompue /772/. A partir de cela, on peut déjà considérer ces protéines ras comme les participants du fonctionnement du cycle vésiculaire "PKC" parce que beaucoup des protéines, justement participant dans ce cycle, provoquent la division cellulaire ininterrompue selon cette. intérprétation. Justement, les cellules -mutantes (où le protooncogène Ras p2I a l'activité de GTPase réduite ou l'échange GDP/GTP est augmenté) ont la transformation cancéreuse /Refs.773; 774,772,775/ et même une expression simple élévée des gènes Ras p2I (protooncogène) conduit à la transformation /774,776/. Même une injection simple des protéines normales Ras p2I mène à la transformation morphologique temporaire et à la prolifération cellulaire /776/.La conservation de la structure des protéines ras (présentes très largement dans les cellules) pendant l'évo- lution /777/ confirme leur importance vitale. Toutes (presque) les protéines G prennent la partie dans le trafique membranaire vésiculaire (exocytose, fusion membranaire et la fonction de Golgi inclues) se concentrant le long de sentiers endocytotiques et exocytotiques /775,779-782/ et on les trouve (même) directement sur les granules (vésicules) différentes /,783-785/. Evidemment, ces chaînes aident aux petites protéines G d'attacher à la membrane de ces vésicules et granules /786,787/.Mais je déduis que le role principal des chaînes isoprène (ayant la structure très différente des chaînes lipidiques entourantes) soit de faciliter la création des "trous" dans la membrane à la zone de leur agglomération pour faire l'échange des substances avec le cyto plaste (Figs.20-2,2IA,25) (Cela, évidemment, n'exclut pas le rôle de ces chaînes particulières pendant la fusion membranaire où les petites protéines G souvent présentent /780/). Le fait,que les protéines GAP-43 (aussi présentes dans les vésicules "PKC"- Fig.18, reg. ci-dessous) ont aussi les chaînes isoprène /788/, confirme cette conclusion. Et on peut comprendre justement le rôle du changement de conformation de ces petites protéines G par les molécules de GTP régulatrices (la propriété la plus caractéristique de petites protéines G /772/).Et après le signal, l'apparence (justement) des molécules de PA dans la couche intérieure de la MP (Fig. I8) fait l'inhibition des protéines GAP (GTPase activating protéines- protéines d'activation de GTPase) /789/. Les mutants, où les molécules Ras p2I (oncogène) n'ont pas de sites d'acylation, deviennent, évidemment, normals /790/. Dans ce sens (la Ras p21 comme la protéine-clé du traffique des substances pour la machinerie du signal), clest naturel que l'injection de ces protooncogènes Ras p2I augmente le nombre des protractions sur la surface cellulaire (la caractéristique très particulier de la création de la machinerie du signal -IV-6, V-6) des cellules mastocytes /79I/ et la dégranulation de la majorité des granules- stockés, sans le signal cellulaire /78I/. Aussi, dans les autres formes du signal cellulaire (plus spécialisées et approfondies), la participation de Ras,p2I est cruelle: (I) l'injection de Ras p2I provoque l'ondulation ("raffling") dans la région du lanallipode, la pinocytose accélérée et l'apparition dans la même région du lamellipode des molécules de phA2/79I,-792,793/ et (2) d'après l'action de NGF (facteur de croissance nerveuse ) -provoquant la formation des neurites, le rôle de Ras p2I est fondamentalç /794, 795/.L'injection des anticorps anti-ras arrêtel'ondulation, la pinocytose et la formation de neurite /795/ ou la prolifération des cellules induite par les signals /796/. Les molécules de ras et de la phA2 sont associées (ensemble) aux vésicules intracellulaires /797/. Le fait, que la transformation par les oncogènes Ras p2I des cellules PI2 (cellules chromaffine) (devenant comme les neurones avec les cônes de croissance) déclenche la même morphoginèse comme les molécules du signal NGF, confirme mes conclusions /798/. Pour fonctionner cycliquement (normalement ) /799/, les protéines G doivent avoir les deux états et l'introductibn des molecules GTP#S nonhydrolysables attête les procès du traffique /780/. Logiquement, l'état (de petites protéines G) "GTP-lié" est nécessaire pour la fusion /800,799/ et lthydrolyse de GTP est nécessaire pour le procès du bourgeonnement/80I,799/. Ces conclusions s'accordent bien avec la structure établie quand, justement le procès de la libération de ATP/GTP des vésicules doit être suivi par le procès de la fusion avec la MP (IV-6C). Une contradiction apparente, quand l'inhibition de l'activité de la GTPase (conduisant à l'état unique des protéines G "GTP-lié ) mène à la transformation (c.à.d. au traffique accéléré) peut être facilement résolue. Dans l'état cellulaire sans le signal extérieur, la grande majorité des protéines G sont dans un état "GDP-lié" /801a/ et l'état "GTP-lié" doit être "l'endroit étroit" du procès, et cet état doit devenir plus fréquent après l'inhibition de l'activité GTPase des protéines G.Mais,évidemment, les molécules de GDP doivent rester à la cellule (parce que ce n'est pas le GTP-gS nonhydrolysable de tout ) comme l'état "GDP-lie" (de plus la vitesse de la libération de -GDP,est très faible d'ans le cas des protéines Ras p2I /772/). Un autre "problème": l'ouverture longue des vésicules d'après l'état "GTP-lié" intensifié ne doit pas avoir lieu parce que la déstabilisation (c.à.d. désouverture) est considérablement plus rapide (souvent) que le procès de l'hydrolyse dè GTP, comme dans le procès de la vision /802/. 2.Les protéines GAP-43 (B-50), S-IOO et Go. La protéine GAP-43 (B-50), qui transporte la CaM- protéine clé (Fig.18) n'est trouvée que dans les neurones /803/ mais récemment elle est trouvée aussi dents les cellules embryonnaires d'origine nonneuronale (1a ligne des cellules musculaires inclue ) /80,4/. De plus, après la transféction des protéines GAP-43 dans les cellules nonneuronales,les filop-odes sont induits dans les cellules /805/. -Après la transféction de GAP-43 dans la ligne P12 il y a des des effets forts sur l'extention des neurites qui font la croissance en repondant aux concentrations de NGF.beaucoup plus faibles /806/. La chara.ctéristique très particulière de GAP-43 est la rigidité très faible de cette protéine: alle a #78% de l'enroulement chaotique /807/ et les anticorps doivent avoir une faible réactivité avec telle protéine .Même dans les cellules nerveuses (en état normal ), ces protéines sont très mal visibles /808/. Les molécules de GAP-43 sont trouvées directement sur les vésicules (les vésicules du transport transparantes) /811-815/ ayant souvent la distribution pointue sur la longueur des neurites /816-818/ et dans concentrations élévéee dans le filopode (lamellipode) du cone de croissance 819,1816,818,811, 8I2/. On trouve les GAP-43 près de la MP (dans le lamellipode) /820,805,816,811/ mais il n'y a pas d'enrichissement des concentrations de GAP-43 sur la MP avec le temps /8I2/ ce qui fait la révélation du transport cyclique. De plus il y a la co loration avec les anticorps anti-GAP43 de la région de Golgi /813,814/ et du corps du neurone (d'après la synthèse) /8I6/. Tous ces résultats font la similarité forte entre les proté ines GAP-43 et Ras p2I montrant que ces protéines GAP-43 aussi ' servent à la formation des vésicules "PKC" (séléctivement!) (IV-6). Le fait de la diminution des concentrations de GAP-43 pendant le développement du neurone et de l'accumulation des concentrations de la synapsine p65 /809/ aux vésicules synap tiques montre la séléctivité de la distribution de GAP-43 sur les vésicules "PKC". On voit aussi que la protéine GAP-43 pré sente sur les vésicules "PKC": d'après le signal spécial (4-. aminopyridine) il y a la libération du neurotransmetteur (dé pendant de Ca) et la phosphorylation de la protéine GAP-43 /82I/. En prenant en considération l'induction de la" vague" Ca2±K+ pour ce type du signal présynaptique (Fig.30) et la propagation de cette "vague" avec l'aide des vésicules "PKC" (Fig.18), on peut constater le fonctionnement des protéines GAP-43 sur les vésicules "-PKC". Une autre confirmation de ce type (GAP-43 est sur les vésicules "PKC") est le fait que la liaison de CaM à la protéine GAP-43 soit la nécessité phy siologique de la libération du neurotransmetteur /82I/.Et encore, le transfert du gène de GAP-43 accélère la différen tiation induite par l'acide rétinoique /822/ très visiblement à cause du transport accéléré des vésicules "PKC" des proté ines comme le matériel pour cette différentiation. Encore, le phorbol induit la phosphorylation de GAP-43 /ce qui amplifie la "vague" Ca2±K+(Fig.18)/ et la libéra tion du neurotransmetteur /823/. La GAP-43 est une très bonne "éponge" de la CaM /803,824,825/ et elle adsorbe toute (!) la CaM cellulaire /824,803,826/ ayant un fort changement de la conformation /807/ et en libérant la CaM après l'action de la PKC vésiculaire (Fig.18) /826,825,803/.Mais cette phosphory lation de la GAP-43 par le PKCv se passe seulement en présence des ions de Ca2+/826/ en bon accord avec la structure globale de Fig.I8. Cela signifie que les procès dépendants de Ca2+ doivent se passer au début par l'activation de la PKC /825/. (Avec la rétroaction négative de ce procès, la CaM libérée inhibe la phosphorylation de GAP-43 par la PKC faisant ce procès bien spécifique pour l'activation réele de la PKC /826,827/ ce qui a le sens encore plus général pour les substrats de la protéine kinase C /828/. La structure de cette molécule vitale GAP-43 est très spéciale. Elle a la région NH2 de l'attachement pour la membrane vésiculaire (bien consérvé pendant l'évolution) avec le segment hydrophobe court /829/ et les sites pour l'acylation (et isoprénylation /788/) /830,83I/ avec aussi le site pour la CaM et la phosphorylation- par -PKC /830/. La structure de la partie COOH est moins conservée, elle a la conformation du bâton avec la charge négative /830/. Généralement,cette molécule est très hydrophile (sans les sites de la glycosylation) /829/ et c'est des ions de Ca (ou de Zn) qui neutralisent ces charges pendant les interactions de GAP-43 /832, 833/. Le fait qu'il ait la formation du complexe de la protéine S-IOO (qui, comme la CaM, a l'affinité spéciale pour le Ca) avec la 'protéine GAP-43, absolument dépendant de la présence des ions du Ca /834/, mène à la conclusion de l'existance des' événements spécials faisant la corrélation avec l'augmentation des ions de Cain (Fig. 18,20). Logiquement, le 2eme domaine-de GAP-43 (acides aminés I60- I75) serve à l'interaction avec l'autre membrane pendant l'.aug- mentation de la concentration des ions de Ca neutralisants /833/ (pendant la fusion possible avec les membranes de la surface cellulaire ou la région des "calcisomes" et des mitochondries). La similarité intrigante de la structure entre la queue COOH de GAP-43 et la structure des neurofilaments /830/ rélève ltimitation par la GAP-43 des neurofilaments, ce qui doit servir (comme le moyen direct) pour l'interaction de GAP-43 avec le réseau des protéines du cytosc',uelette /835/. Logiquement, cette interactibn (avec le cytosquelette) est perturbée par la protéine S-100 au moment de l'augmenta- tion de[Cajin parce que la S-IOO augmente l'interaction avec la GAP-43 pendant l'augmentation de[Cajin /834/ et cette protéine diminue ltinteraction avec la tubuline avec ltaugmenta tion de Ca et de pHin /836,837/ (reg.aussi Fig.26C). logiqu- ement, cette protéine S-IOO (qui adsorbe ces ions de Ca augmentant la concentration locale de Ca) se trouve avec les molécules GAP-43 sur la surface des vésicules (dans l'échantill- ion granulaire /838/) et avec ces vésicules et la GAP-43, la protéine S-IOO peut associer avec le réseau cortical du cytosquelette (Fig.18). De plus, cette protéine doit aider à la fusion (association) (IV-7F) des vésicules avec ces membranes (comme plasmique, mitochondriale) se trouvant dans la position submembranaire /837; et aussi 838,840/. Le fait, que les protéines S-IOO aident à la fusion de-s vésicules avec la cardiolipine /841,842/, supporte la thèse ci-dessus. Un autre fait concernant l'augmentation justement des protéines S-IOO avec le cancer /843/ confirme clairement leur rôle dans le fonctionnement dans le transport des vésicules "PKC". La protéine Go (hétérotrimère) est la protéine G très répandue et même est la plus répandue dans le cône de croissance /84+/. Justement, les protéines ras p21 et GAP-43 sont aussi repandues dans ce cône (reg. ci-dessus), ce qui indique déjà la participation de cette protéine dans le fon ctionnement-des vésicules "PKC" très actives pendant le signal (le mouvement cellulaire, l'étalement et la croissance du cône du axone'inclus).De plus, cette protéine Go fait (justement) l'interaction avec la protéine GAP-43 et cette GAP-43 fait la stimulation de la liaison de GTP à la protéine Go /845,846/ (logiquement, même avant l'ouverture des vésicules-Fig.20-1) Logiquement, cette protéine Go (la partie de la MP) aide à la fusion des vésicules "PKC" ayant l'ouverture à l'extérieur (Fig.26) avec la D2. Cette liaison de GAP-43 avec la G est o très particulère /847/ et la GAP-43 a l'interaction avec la Go en solution (sans la MP) /ce qui, justement, doit se passer entre la Go (MP) et la GAP-43 (vésicules)/. De plus, l'interaction de GAP-43 est la même avec la sous-unité&alpha;o et avecle complexe &alpha;osso&gamma;o /347/ ce qui peut signifier qu'il n'y ait pas de dissociation de sso&gamma;o d'après cette interaction de Go avec la GAP-43 et GTP. Mais cela doit être important pour les vésicules "PKC" qui font la fusion avec la MP parce que les sous-unités /0 ont les chaînes polysopyrène qui doivent déstabiliser la MP dans la zone de la fusion (Fig.26A-3P45. Le fait que (après le marquage avec les anticorps) cette protéine soit révélée au cône et au corps du neurone sans la présence le long des neurites /835/ (c.à.d. à l'endroit de la synthèse et à la MP), prouve Quíl n'ait pas de cette protéine Go sur les vésicules. C. La CK-11 de la MP et des vssesicules. les protéines GAP-43, Ras p21 et G dans le fonctionement des vésicules "PKC". D'aprés la Description des propiétés ces protéines (reg. des références de IV-7A et. B), on peut préciser le fonctionnement des vésicules "PKC" (et des granules ae la sécrétion) pendant leur fusion avec les membranes (Fig.26) et le mécanisme de l'action des pompes H+ pendant ce cycle. Après l'activation de la phA2 de la couche extérieure de la MP à cause de la séparation des phases près du récepteur principal /1,2/ il y a,l'hydrolyse de PE (plus precisement: de PE -plasmogène- #IV-7E) qui est acylé avec le AA. Cet-AAest immediatement transformé en eicosanoide qui (par son récepteur) active la phCM ayant la protéine G (hétérotrimère), généralement (Fig.26-I). Mais le lysoPE sur la couche extér ieure de la MP se transforme en PAF sur la couche intérieure de MP-qui active la CK-IImembranaire (IV-7A) (Fig.25-A). Cette CK-llM fait la phosphorylation des protéines GAP-43 sur les vésicules "PKC"(Fig.26-2). En différence avec la CK-llV qui ne peut pas phosphoryler la GAP-43 quand il y a la CaM associée avec cette protéine /848/, cette CK-II fait la phosphorylation de, la GAP-43 dans ce cas de la CaM associée avec la GAP-43. Et on sait que la CaM soit associée avec la GAP-43 ct la PKCV ne soit pas activée parce que, par exemple, il n'y a pas de contraction du cytosquelette et après le signal il y a la dégranulation des vésicules sans l'ATP /703/, c.à.d. sans cette contraction qui demande l'activation de la PKCV (Fig.I8). On voit le fait de la présence de la phosphorylation spéciale de GAP-43 justement près de la MP, par le fait qu'il ait une forme de GAP-43 phosphorylée justement au cone de la croissance mais pas dans le corps de l'axone /832/. I1 y a un autre fait de la phosphorylation particulière de GAP-43 justement dans le cône de croissance /849/. Dans le nombre des tissus, cette phosphorylation ne peut pas etre imitée par le phorbol, ce qui doit être, en évidence, la propriété universelle si l'origine de cette phosphorylation était la PKC, ce qui n'est pas, évidemment, le cas.De plus, l'acide okadaique (qui fait l'inhibition de la phosphatase calcineurîne /850)faisent la déphosphorylation de la GAP-43 phosphorylée par PKC /850/ n'inhibe pas cette phosphorylation /832/ rélévant la présence de la phosphorylation par la CK-111M La CK11v (vésiculaire) doit faire son action seulement après la dissociation de la CaM /848/ (Fig.18) et cette action doit être présente, aussi pendant le cycle (Fig18,20). Et encore, la molécule de NGF fait l'augmentation de cette phosphorylation justement dans le cône de croissance seulement d'après l'interaction avec les récepteurs principals /If2/ qui, justement, font la création de la machinerie du signal avec la participation des vésicules "PKC" (IV-6,V-6). De plus, cette forme de la CKIIM augmente son activité avec l'augmentation de la concentration du Mg2+ (justement) (IV-7A) et justement la phosphorylation par cette kinase de la GAP-43/conduisant (avec la rétroaction positive) à la fragilité des vésicules "PKC" qui e'ouvrent au cytoplasme en libérant à nouveau des ions de Mg/ fait une bonne concordance de tous faits (Fig.26). Logiquement, cette phosphorylation de la GAP-43 par la CK-11m membranaire (dans la région COOH /85I,852/) doit stimuler (par la charge de phosphate complimentaire) la répulsion (dissociation) des molécules GAP-43 qui font les complexes hydrophiLiques,dans les systèmes nondénaturants /853,854,827/.Au meme temps, ces protéines GAP43 (dissociées) font la meilleure interaction avec les protéines Go provoquant ie changement de leur conformation en stimulant l'attachement de GTP aux protéines G0 (hétérotrimères). La fuite (à cause de plus grande fragilité) de ATP/GTP de ces vésicules "PKC" provoque le changement de conformation des protéines Ras p2I avec les chaînes isoprène, ce qui stimule une ouverture des vésicules "PKC" au cytoplasme (Fig. 26A-3). Les ions de MgF Ca, les molécules de l'ATP et les autres substances sortent des vésicules pour participer dans la construction de la machinerie du signal. Logiquement, les chaînes isoprène de GAP-43 aident à cette ouverture. Comme la conséquence il y a l'augmentation du pH à l'intérieur des vésicules. et désagrégation des chaînes HS conduisant au détachement du cytoKsquelette. Aussi, pendant cette augmentation de[Ca]in' les protéines S-IOO (pII) (absorbeurs de Ca) s'attachent à la GAP-43 plus fortement avec les ions de Ca ) se détachent (au même temps) du cytosquelette en stimulant le détachement plus complet des vésicules du cytosquelette (reg. aussi Fig.26C). La même CK-llM (qui depend des ions du Mg et le maximum de l'activité de laquelle est au pH 8 justement (!) après le signal) diminue l'association des protéines du cytosquelette avec le recepteur /75I/ en faisant ia phosphorylation de la spectrine /754/, de' la tubuline /748,855/, des protéines MAP-IA et MAP-IB /856/ et des autres protéines du cytosquelette /751,747/. I1 est très interessant que la CK-11M fasse la phosphorylation de la tubuline seulement dans la forme polymérisée et la'colcemide prévient la phosphorylation de lass-tubuline /855/. De plus il y a la phosphorylation seulement de #I mofécule de la tubuline sur IO /748/ (où les molécules de'protéine NP-185, en associant'avec''la tubuline et la CK-II, aide à maintenir les molécules de la tubuline, "I sur 10", dissociées du microtubule, dans le cytoplasme /748/)Cette phosphorylation n'est pas augmentée par le segment "la queue polylysine" des protéines ras p2I parce que c'est l'activitélde" la CK-ll vésiculaire Qui s'augente normalement avec la polylysine /748/.) De plus, la CK-II fait la phosphorylation des protéines MAP-IA et MAP-IB (mais pas la MAP-2 qui est -ltob- jet des autres kinas'es) qui associent mieux avec les protéines des microtubules dans ce forme phosphorylée /856/ et ces protéines (MAP-IB phosphorylée) sont enrichies dans 'la fraction des microtubules les plus resistants à la dissociation /Refs. 856/. Cela confirme clairement ma structure de la dissociation partielle des microtubules (en éliminant les petits fragments périodiquement) pendant la contraction du cytosquelette cortical où les microtubules, servant comme les ressorts qui retienne la contraction des microfilaments corticales se situant autour de la surface cellulaire justement au dessous de la MP (V-7). Grâce aux ions de Ca /759/ il y a une activation de la phA2 sur la surface des vésicules qui hydrolyse le AA à partir de PC (plasmogène) commençant le cycle de "remaniement" de PAF /759/ (reg. ci-desus- Fig.27B) Ces ions de Ca, sortant déjà de la vésicule, déclenchent "la 2eme partie" des interactions des vésicules près de la MP: qui (elle-même) est le même procès de la "vague" Ca2±K+ (Fig.I8) (à partir de "pas" N07- Fig.18) avec (déjà) l'activation de PKCV qui fait la dissociation de la CaM avec le procès de la contraction musculaire (Fig.26A-4). Mais en différence du procès "au milieu" du cycle vésiculaire (Fig.20) il y -a ici la présence justement (et seulement) de la PIP-kinase sur la couche intérieure de la MP qui fait la transformation PIP FPIP2 dans 1' endroit unique du cycle (Fig.20). Cette activité doit être limitée et après l'activation de la PKCV et par conséquence après la phosphorylation de la GAP-43 par PECV, cette protéine phosphorylée inhibe l'enzyme PIP-kinase /857-859/.Cette transition (en augmentant la charge répulsive des phosphoinositols) tend à élargir le radius de la vésicule, ce qui doit être important pour telles vésicules "PKC", qui ont la fusion avec la, MP (ou pour les vésicules de sécrétion). Dans le cas des vésicules "PKC" qui s'ouvrent à l'extérieur ou des vésicules de sécrétion, la fusion avec la MP doit avoir lieu. Ces vésicules n'ont pas d'ouverture à l'intérieur avant la fusion avec la MP (le pas N03) quoique telle ouverture (en excès des molécules de ATPA TP et ions de Mg et de Ca près des "calcisomes" et mitochondries) doit avoir lieu parce que, même in vitro, les molécules de ATP (ajoutées de l'extér- ieur) induisent la:libération des catécholamines, de 1'ATP endogène et des protéines solubles des granules chromaffins /705a/0 Le nombre des facteurs favorisent ce procès.Premièrement, avant, il doit avoir lieu l'ouverture du type des vésicules "PKC" à l'intérieur avec aussi ces molécules de l'ATP et des ions du Mg et du Ca parce que si on élimine 1'ATP de la région de la fusion des granules chromaffins in vivo, il n'y a pas de l'exocytose des granules /860/.De plus, les autres facteurs favorisent ce procès: la présence des protéines Go avec la chaîne isoprène, qui fait l'interaction avec les protéines GAP-43 (aussi isoprénylées) des vésicules; la présence des ysophospholipides /861/ à cause des phA2 vésiculaires activées à cause de l'augmentation de Ca in qui doit être présent en concentration augmentée après l'ouverture des vé sicules "PKC" qui s'ouvrent à l'intérieur (le pas N03); la présence de l'augmentation des charges de PA à la couche in- térieure des vésicules "FKC" à cause de l'augmentation de pH pendant le début de- l'ouverture des vésicules; la présence des charges additionelîes à la couche intérieure grâce aux transformations:PIP oPIP2 et PI FLIP /860,705a/ (avec l'aug mentation de Mg après 11 ouverture des autres vésicules "PKC" à l'intérieur); la présence des chaînes isoprène sur les pro téines G vésiculaires Ras p2I avec le GTP grâce à l'ouverture des autres vésicules "PKC" à l'intérieur. La synthèse de PAF sur les vésicules se passe après l'activation de la (dépendant de Ca et spécifique pour le plasmogène avec AA /758,759/) et de l'acetyltransférase dépendant de CAM/759, 862/, c-.-à-d. après l'activation de la FKCV (reg. aussi Fig.18) (sentier de "remaniement"- strictement vésiculaire- IV-7D). Les molécules de PAF (qui activent la CKIIV) et aussi les molécules de Ras p2I (imitant le segment de la polylysine qui active justement la CK-II vésiculaire mais pas CK-II membra naître, logiquement, dans un état avec le GUP) et le facteur de la Désagrégation des molécules HS (au pH normal) activent la pompe H vésiculaire (Fig.26A-5 et aussi Fig.I8-II). Les ions de Ca aussi activent la PKCV et le procès continue selon Fig.18. Logiquement, les procès analogues au procès près de la MP se passent près des mitochondries et le rôle de la CK-11M (de la MP)$ est joud par les caséines kinases de la membrane des mitochondries /863/.Tels procès périodiques conduissent vers les activities périodiques des CK-II pendant les cycles du transport vésiculaire d'après le signal (Figs.18,20,26) ce qui était réelement énrégistré après le signal /864/. Je regarderai ici plus précisement la phosphorylation double par la PKC et la CK-II des molécules GAP-43 et leurs déphosphorylations (Fig.'26B)0 La phosphorylation de GAP-43 par la CK-11M doit se passer (avec la rétroaction négative) pendant l'augmentation de la concentration du MGin près de la MP grâce à l'ouverture à l'intérieur des vésicules "PKC" (Fig.26A-1,2).En évidence, c'est une CK-II différente de la CK-IIV laquelle (CK-11v) ne peut pas phosphoryler la GAP-43 en présence de la CaM sur la surface /865/.: (11 reste juste ment un site de la phosphorylation le plus spécifique sur la GAP-43 après sa purification du tissu et selon la structure primaire /85I/, ce qui doit signifier que ce soit la CK-IIM qui n'est pas inhibée par la CaM.) Pendant le début du procès près de la MP, la FKCV n'est pas activée et la CaM est sur la surface des vésicules (Fig.26A). La phosphatase doit déphosphoryler cette action de la CKIIM pour assurer le procès démontré à la Fig.26A-5. Telle phosphatase doit (logiquement) être indépendante des ions du Mg et du Ca (type PP-t ou PP-2A /867/) et ces phosphatases (indépendantes des ions du Mg et du Ca) sont réelement trouvées dans la MP (synaptique) /868/o L'action de la PKCV (Fig. I8-8, Fig.26-BI) sur la GAP-43 est très importante fonctionnellement parce qu'elle provoque la dissociation de la CaM et cette dissociation de la CaM provoque: I).La rétroaction négative de l'action de la phosphatase calcineurine qui demand la CaM et le Ca pour son action /869,868/ faisant le complexe commun avec la PKC /Refs.868/ (Fig.26-2). 2).L'activation de la CK-IIV /865/ qui fait la phosphorylation de la GAP-43 justement après cette dissociation de la CaM.Cette phosphorylation (en ajoutant la charge négative à la séquence de GAP-43 /825/) fait la' répulsion additionnele des molécules de GAP-43 /qui sont connectées avec les MF avant le procès démontré à la Fig.18-8,9 avec l'aide des protéines S-IOO (7-2B)/ completant leur séparation des MF (FigI8-9)o La présence- de la phosphatase indépendante du Ca dans les mêmes échantillons /865/ logiquement indique la déphosphorylation consécutive par cette phosphatase de GAP-43 phosphorylée par CK-IIV (Fig. 26B-3). La présence' de la phosphatase des vésicules, dépendante des ions de Mg /870/-doit réfléter leur participation dans le procès de la phosphorylation d'après l'action des kinases (CK-II) des mitochondries /863/ pendant le transport vésiculaire0 Les Figs.I8,20,25 et 26 donnent la structure des procès biochimiques et biophysiques qui changent l'action des vesi- cules "PKC" (et des vésicules de sécrétion). D. Le role de la calpaine (lipocortine II, p36) dans le fon ctionement des vésicules: la regulation de la fusion avec la MP et la régulation de I'activité de la ShAa sur les vésicules. Les molécules de la calpactine I (lipocortine II,p36) se trouvent dans le grand nombre des cellules /870a,Refs.870b/ et servent (avec les molécules des acides gras et le Ca) au procès de la fusion des vésicules avec la MP /870c/. Logiquement, elles servent comme le pont temporaire entre les molécules S-IOO (pII) (qui s'attachent aux molécules de GAP-43 sur les vésicules et les molécules du cytosquelette cortical. les molécules de calpactine I attachent aux molécules de fodrine et de l'actine /870d,870b/. La localisation dense et régulière- submembranaire au côté cytoplasmique de la MP des molécules p36+pII dans le nombre des cellules /Refs. 870e/ confirme telle liaison. D'un autre côté, les molécules de pII (famille des protéines S-I00 qui se lient aux ions de Ca) existent in vivo comme le complexe hétérotétramère avec les molécules p36 (p362pII2) /870e,870f/ où ces molécules de S-I00 s'attachent aux vésicules par les molécules de GAP43 (Fig.26A-2). Avant la fusion mais après la phosphorylation par la PKCM exitée après le signal il n'y a plus de liaison entre les molécules p36 et pII /870f/,c-a-d. de cette 12 aison entre la vésicule et le cytosquelette /870c/- (Fig.26c). le fait de la phosphorylation précise de la calpactine I (serine 25) par la PKCM in vivo (et aussi in vitro) /870c,870g/ confirme telle action importante régulatrice de la PKC. Mais il y a une autre fonction importante de la protéine p36 largement répandue. Elle inhibe la PhA2 /870a/.Au même temps cette protéine p36 est un objet de la phosphorylation precise (tyrosine-23) in vivo et in vitro par la tyrosine kinase /870h,870b,870i,870j/ qui se trouve sur les granules /870j/ en association avec la protéine de 38 kDa /870k/. Logiquement, par l'analogie avec l'inhibiteur de la PhA2 de la structure semblable /Refs.870i/ (p35, calpactine II, lipocortine I), il doit avoir lieu une élimination de l'inhibition de la PhA2 après l'action de la tyrosine kinase /535/. Mais ce fait doit justement bien s'accorder avec la production des molécules de PAF sur les vésicules (avec l'augmentation de la concentration de Ca) (Fig.27B) pour l'activation de la pompe H+ (FigoI8B) pendant la propagation de la "vague" Ca2± K+. E.Lesfondations moléculaires~et~cellulaires des origines de 1'athérosclerose comme la conséquence des structures établies. Les structures établies ci-dessus permettent d'expliquer le développement de l'athérosclerose. I1 est établi que 1'LDL fasse une action double sur les cellules: (I) elle induit le le signal avec le métabolisme de phosphoinositides; (2) elle fait la délivrance du choléstérol à l'intérieur /87I/. La première réponse est fait avec l'aide des récepteurs de l'affinité forte /871/ et c'est évident parce qu'il y ait le développement de la machinerie du signal seulement près des récepteurs avec une affinité forte /I,2/ et la CK-IIM qui attache justement et spécifiquement au récepteur LDI est un facteur important pour le nombre des signaux. Et justement, à cause de cela, 1'XDS sensibilise les cellules pour les autres agonistes /87I,872/.C.à.d. l'occupation des récepteurs IDL de l'affinité forte doit provoquer (potentialiser) le cycle du transport des vésicules "PKC" et par conséquence la pinocytose intensive. Le fait que le cancer fasse la corrélation avec le niveau faible du cholestérol dans le sérum /873/ confirme bien cette thèse parce que justement pendant le cancer il y a une intensification du cycle des vésicules "PKC" et de la pinocytose (IV-7A)O Pour le développement de l'athérosclérose, le niveau de IDI dans le sérum doit être élévé (pour pinocyter plus des parti cules!)0 Mais indépendement, l'apparence des lésions doit avoir lieu à la couche intérieure des artères Les macrophages (évi- demment)vont tôt à l'endroit des lésions /871,874,875/ comme aussi des plaquettes /874/. Ces cellules produis sent les facteurs deScroissanc-e comme PDGF (facteur de croissance dérivé des plaquettes) et EGF /874/ et aussi les macrophages-activés produissent et sécrétent la quantité augmentée des molécules ApoE /876-878/. Cette production des protéines ApoE (par les macrophages) est beaucoup plus générale et a lieu pendant le développement /879/ et on trouve cette synthèse- au nombre destissus /879,874;Refs.880/, évidemment pour sensibiliser les signaux cellulaires comme la régénération de l'axone nerveux /88I,877/ bien établie.Ce facteur de croissance PDGF (et la PKC, en particulier) augmente aussi le nombre des récepteurs de LDL /882,883/ pour mieux sensibiliser la cellule. Au même temps, lè PDGF (et EGF) provoquent la division des cellules des muscles vasculaires lisse et stimulent leur chimiotropisme vers un endroit des lésions (facilité par les molécules ApoE) /874/. D'après le blocus des récepteurs IDI par les molécules "libres" ApoE, le niveau de LDL dans le sérum doit encore augmenter à la régibn de la lésion /874/. De plus, on trouve la quantité enrichie des molécules IDI modifées, oxydées dans cette région des lésions in situ /884,885/ (comme les molécules LDL acetylées ou modifiées avec la malonyldialdehyde) et ces molécules- de LDL modifiées ne peuvent pas se lier au récepteur LDL normal /884/. Et toutes ces molécules de LDL (aux concentrations élévées) font la voie- des vésicules "PKC" (la voie de la pinocytose intensifiée) à l'intérieur des cellules (macrophages., muscles lisse et même les cellules endothéliales-). La sensibilisation de ces cellules par les molécules de ApoE (en augmentant l'activité de la CK-II qui est la partie importante dans le cycle du transport des vésicules "PKC"- Fig.26) doit augmenter cette pinocytose à cause aussi de l'absence de l'endocytose des ré oepteurs LDL, parce que l'endocytose stimulée doit diminuer fortement la pinocytose: par exemple, avec la perturbation du gradient des ions H+, on élimine la voie de l'endocytose ("spécifique") en augmentant le transport des molécules qui sont transportées à l'intérieur de-s cellules- par la voie des vésicules "PKC1; comme le bFGF ou IB-2 (VI). C'est la raison que même les concentrations très fortes de IDI ne peuvent pas provoquer 1a création des- cellules ecumées à partir des macrophages (qui n'était pas près des lésions) /884/.Le fait, que toutes les modifications des molécules LDL (conduisant logiquement aux interruptions des interactions avec le récepteur LDL) mènent aux interactions nouvelles avec un autre"récepteur" ("boueur") qui ("étonnement") ne peut pas être endocytés ("down regulation") mais qui subit la régulation "up" avec la PKC /884/ sans être saturé pour introduire LDL dans la cellule /870/, confirme clairement encore que ce soit le procès de la pinocytose (avec toutes ces caractéristiques des vésicules "PKC"). Mais les molécules de EDX cationisées (logiquement, aussi privées de l'interaction avec ces récepteurs) vont par la pinocytose dans les cellules (muscle lisse et fibroblaste) qui accumulent le cholestérol oléate et triacylglycérol progressivement (!) dans le cytoplasme (justement, réfletant le contenu de 1'LDL) et comme le résultat, les cellules re semblent les cellules ecumées /886,887/. Logiquement ces cellules de IDI chargées positivement ne peuvent pas rentrer dans "le train de retour" (vésicules "PKC") parce que les nombreuse molécules des HS situant sur la surface des vésicules sont aussi chargées bien positivement. Par conséquence, ces molécules de LDL subitent une protéolyse plus lente dans les lysosomes /887a/. Les molécules d'albumine- chargées positivement ont le même destin d'être dégradées même dans les fibroblastes (qui ne sont pas présents dans les lésions) où les amines portant cette charge (eux-mêmes) n'ont pas d'influence sur la dégradation de 1'LDL dans les fibroblastes /887a/. Les molécules de LDL oxydées qui aussi ne peuvent pas réagir avec leurs récepteurs quand leur injection conduit à la formation des- cellules ecumées (cellules endothéliales et muscles lisse dans les lésions in situ!) /888/. Tel procès est réversible naturellement (au départ) avec la diminution des concentrations des molécules de LDL dans le sérum /875/ Cette activation du cycle du transport des vésicules "PKC1, pendant le développement de l'athérosclerose est confirmée par le fait que les antagonistes du Ca (qui est absolument indispensable pour la fonction des vésicules "PEC"- Fig.18) fait la prévention complète de l'athérosclérose /889/ et aussi par le fait que pendant le développement de l'athérosclerose il ait l'augmentation de la concentration du Ca dans les murs artériels /889/. De plus, un absence étrange de la saturation pour une élimination des molécules LDL de l'extérieur /87-I/ montre que ce soit la pinocytose augmentée après la saturation des récepteurs -'avec l'affinité forte. Enfin, on voit que pour le développement des cellules ecumées, il faut la présence de plusieurs facteurs: (I) la concentration de 1'LDL augmentée: a)à cause de la présence des molécules-LDS qui ne peuvent pas réagir avec leur récepteur; b)à cause du blocus des récepteurs de LDS par les mo lécules ApoE, (2) la sensibilisation stable des cellules par ApoE conduisant à l'activation stable de la CE-ISM près des récepteurs ApoE intensifiant le cycle du transport des vésicules "PKC" (pinocytose inclue).De plus, la présence des lés- ions doit être augmentée s'il y a la LB (près des cellules endothéliales)périmée, ce qui doit se passer pendant le dia bète développé (II). Et c'est le fait bien établi concernant la corrélation entre le diabète et l'athérosclerose /889a/. les moyens qui diminuent le transport des vésicules "PKC" (pinocytose!) comme l'analogue nonhydrolysable de GTP (GTP-&gamma;S) doivent etre efficace contre l'atherosclerose. Aussi les moyens,qui diminue la migration des macrophages vers la région des lésions comme les molécules de HSPG qui réagissent avec les molécules de bFGF servant comme le chemioattractant (111) pour les macrophages, doivent être efficace contre l'atherosclerose. F. Les structures nouvelles des sentiers du métabolisme de PAF aux régions de la MP et sur les vesicules "PKC", Le role nouveau de la méthylation des phospholipides: PUE FIC Selon la structure établie /I,2/ pendant la séparation des phases des lipides la couche extérieure après le signal, c'est les molécules moins affines au cholestérol qui se trouvent à l'extérieur des réseaux des glycoprotéines et des glycolipides dans la phase plus fluide (la frontière entre les phases inclue) et c'est les molécules des PE qui ont l'affinité minimale pour le cholestérol /Refs.I,2/. De plus, la phA2 fait son action(préférablement) à la frontière des phases /Refs.I,2/.Encore, l'hydrolyse par la phA2 du AA à la couche extérieure de la MP est un procès indispensable pour la production synchronisée des eicosanoides à l'ex- térieur (Fig.18) et les PE ont la moitié des AA de la couche extérieure XRefs.I,2/. Toutes ces considérations conduisent à la conclusion que la phA2 fasse son action à la couche extérieure de la MP sur les molécules de PE ce qui était enrégistré /Refs.I,2/. De plus, presque tous les AA des PE (et PC aussi!) sont aux plasmogènes /890/ et il y a la phA2 spéciale pour le plasmogène, pour AA /758/.D'un autre côté, la production de PAF et la production du AA avec les eicosanoides vont parallèlement après le signal /862,759,89I/ et il y a un site de la liaison de PAF à la partie intérieure de la MF /89I/. De plus, selon Axelrod et collaborateurs /892/, il y a la transmission de la molécule de PE pendant la transformation (méthylation:: PE#PC à la couche intérieure de la MP et cette transformation (tellement négligeable en quan tité) est quand même si important pour le signal que son inhibition mène à l'inhibition des nombreux signaux /892/ ce qui est très étonnant parce qu'il y a jusqu'à #50% des PC dans la MP! Á partir de tout cela, je fait la conclusion que après le signal, avec l'activation de la phA2 à la couche extérieure il y ait l'hydrolyse de AA du plasmogène PE et ce lysoplasmo gène peut plus facilement (évidemment) traverser la MP avec la méthylation accompagnante (Fig.27). Alors, la molécule de lysoPAF (lysoPC) arrive à la couche intérieure de la MP où elle doit être rapidement acétylée et se transformer en molécules de PAF /759/ (Fig.27).Et on peut voir les traces de telle transformation des résulatats expérimenaux: en préten dant mesurer l'inclusion de la groupe mdthyl dans le PE, on trouve (en permanence, avec plusieurs systèmes des cellules) NIO% de lysoPC avec ces groupes méthyl inclues quoique il y a NI4 fois plus de PC que de lysoPC dans les MP nontraitées /893,894/. Le fait que après l'injection de la protéine ras p2I (avec une intensification du cycle du transport des vésicules "PKC" accompagnant avec l'activation de la pompe H+ et par conséquence avec la production de PAF- IV-7A,Figs.18,20) il y a la production des molécules de lysoPE (comme et lysoFC) /79I/, confirme aussi cette conclusion. Ces molécules de PAF font l'activation de la CK-IIM près de la MF (Fig.26A) après 'laquelle elles doivent être hydre lysées avec l'enzyme ac-etylhydrolase très active /895-897/ qui ne depenp pas des ions de Ca /896,897/. Logiquement, l'inser- tion des molécules nouvelles de plasmogène PE dans la couche extérieure de la MP doit avoir lieu avec le transport vésicu- laire et la fusion des vésicules avec ce plasmogène synthéti- sé avec la MP (Fig.27)0 Mais pendant l'activation de la CK-II vésiculaire le cycle du métabolisme de PAF doit être différent. Apriori: il ne doit pas avoir lieu la propulsion du plasmogène à travers de la membrane. En réalité, le sentier de "remaniement" établi pour le métabolisme de PAF /759/ est le cycle qui se passe pour les molécules de PAF (et des lipides) située à la mcm- brane des vésicules, ce que j'ai établi dans cette innovation (Figo27B)o Cela correspond au "2eme" endroit de la liaison de PAF dans les cellules: les membranes intracellulaires /891/. On voit /d'après ces deux cycles (Fig.27A,3)/ que le ré sidu principal des molécules qui doit rester inchangeant pendant le métabolisme de PAF doive être la groupe alkyl. En sachant, que les molécules des CK-II (CK-IIM et CK-IIV) activées par ces molécules de PAS, soitent différentes, on peut attendre que ces alkyles des PAF doivent aussi être différents. Et on voit la confirmation de cela en fait que la grande majorité des plasmogènes (PC) est des alkylacyles et la grande majorité des plasmogènes PE est des alkenacyls /888900/. Cela doit clairement signifier (Fig.27A,B) que la molécule de PAF pour la CK-II membranaire est l'alkenacyl (la nouvelle substance établie dans cette invention) et pour la CK-II vésiculaire, la molécule de PAF est l'alkylacetyl. On peut voir facilement pourquoi les molécules de PAF priment les cellules pour les stimulations consécutives /90I, 902/ (Figs.26,I8) en facilitant le fonctionnement du transport vésiculaire et la construction de la machinerie du signal. De plus, les molécules de PAF ajoutées provoquent le chimiotropisme, le métabolisme des phosphoinositides, la mobilisation de Ca in /862,8go/. Dans les derniers cas, ces molécules de PAF augmentent l'activité du transport des vésicules "PEC" et de la construction périodique de la machinerie du signal plus intensif que le niveau basal existant pour chaque cellule vivante /1,2/o G.La régulation de la fusion et du borgeonnement membranaire avec l'aide du changement de la tension de la surface. Je montre ici une nouvelle loi de la fusion des vésicules et de leur bourgeonnement avec l'aide du changement de la tension de surface. Bye groupe phosphate distal sur les phospholipides change sa charge près de pH 6 /902a/. (Aucune autre groupe fonctionel des phospholipides ne se change pas entre pH 5 et 7).Cela doit signifier: (I) la diminution de pH (moins de pH 6) à l'intérieur des vésicules doit provoquer la diminution des charges des molécules de PA,PIP,PIP2 et, par conséquence, la diminution de leurs répultions, clà-d, la diminution de la tension de surface à la couche intérieure des vésicules, ce qui doit faciliter le bourgeonnement;(2)-l'ad- dition ou l'élimination du groupe phosphate changent aussi la tension de surface provoquant les procès des remaniements vésiculaires. Ces deux procès sont clairement utilisés par la cellule dans son fonctionnement. La pompe H+, qui se situe temporairement dans la NIP, provoque le changement du pH /par exemple, dans le cas de ltendocytose allant vers les "endosomes" d'après l'action du ligand sur les récepteurs de l'affinité faible (Fig.2IB,35)/. Et au contraire, l'augmentation du pH dans la vésicule près de la MF aide à la fusion pendant l'exo- cytose ( Fig.26A). On peut voir "l'application" du 2eme changement de la tension par une addition ou une élimination du groupe phosphate dans une mystérieuse encore succesion compliquée du métabolisme des molécules de DG,PA,PIP,PIP2. Par exemple, j'ai établi que le développement de la machinerie du signal des vésicules "PKC" joue le role exclisiv. On peut expliquer, par exemple, que une apparence du 2eme pic (plus tardif) de DG /d'après l'hydrolyse de PC (PE) dans la couche intérieure de la MP/ /902,903/ serve pour la pression nécessaire pour la création des vésicules de l'endocytose des récepteurs ("down régulation"). Encore, on peut suivre la même jeu dans le rôle de l'hydrolyse avec les 2 pas: par la phospholipase D et par la phosphomonoesterase ou dans l'action de la DG-kinase pendant le signal /903,I,2/.Le fait de l'augmentation du niveau de DG à partir de PC (principalement) avec la transféction des cellules par les gènes de ras p2I /904-907/ confirme telle utilisation de DG pour la création des vésicules "PKC" du transport. 8. La nouvelle structure fonctionelle de l'action des muscles: muscle squelettique, muscle cardiaque et muscle lisse. A. La structure de la dystrophine comme la molécule du ressort et sa participation-clé dans le mécanisme du mouvement~cellulaire . - La dystrophine sert comme la partie universelle du système cellulaire évolutif parfait supportant le mouvement universelle des vésicules (V-9)0 Sa structure bien étudiée: grâce à une importance de ce problème dans la recherche médicale permet d'aider de conclure tel.mécanisme universel du mouvement vésiculaire.Selon des données physico-chimiques, la molécule de dystrophine resemble la baguette avec la longueur de I30-I70 nm /908-909/. Cette baguette a les 4 segments charnières avec la quantité de la proline augmentée et elle doit avoir la 5éme charniére qui correspond a la région de l'action des enzymes protéolytiques /9IO/ comme pour le cas établi des immunoglobulines /505/.La longueur de la molécule de dystrophine correspond au baril de l'hélice triple connecté par les régions courtes /908/ comme les autres molécules du cortexe cytosquelettique: la spectrine et l'actinine-#/Refs.908/. En outre, la structure primaire des régions NH2 (#250 acides aminés) de la dystrophine correspond bien a la region- NH2 de l'actinine-# te de la spect rine-#/9II-9I3/ qui attache aux molécules d'actine. Logiquement, la dystrophine réagit aussi avec cette région avec les filaments de l'actine. La présence de cette interaction était démontrée directement /9I4/. Aussi, la région COOH de la dystrophine (avec les "mains" liant le Ca) est semblable à celle de la spectrine et de l'actinine- /9I3w9II,9IO/. La dystrophine lie sa extrémité COOH avec les glycoprotéines qui sont les protéines intégrales dans la membrane plasmique /9I5,9I6/ Un attachement de la dystrophine à la partie intérieure de la MP est bien établi /9I7 et ci-dessous/. Par conséquence, on peut voir que la dystrophine est connectée avec la MP d'un côté et avec les filaments corticals d'actine d'un autre. La distribution de la dystrophine dans beaucpup des tissus /9I8/ peut confirmer la caractère universelle de sa fonction.Dans les cellules du muscle lisee (où le système du transport vésiculaire avec les micro filaments transversals corticals est permanent et bien observable), la dystrophine est trouvée dans la région avec une forte concentration des- vésicules, quelquefois même en association avec elles près de la surface cellulaire /9I9/. Justement, on peut déduire que pendant la contraction des filaments corticals (Figs.39,4I), la molécule de dystrophine (la baguette- semblable) ayant la flexibilité segmenatle, plie en diminuant la distance initiale de I30-I50 nm entre la MP et les microfilaments corticals /920/. Selon /520/, la MF et les MF corticals sont interconnectés avec les molécules de la dystrophine ayant la distance entre eux égale à la longueur de cette molécule! La nouvelle distance plus courte égale à la longueur des dystrophines pliées doit être établie entre la MP et les microfilaments corticals pendant la contraction d'une des ceintures 'des microfilaments corticals. Le mouvement en avance des vésicules doit être facilité avec tels moyens. De plus, telle contraction (quand les MF tirent les molécules de dystrophine à l'intérieur) réduira le chevauchement entre les hélices voisines du type H1 et dissociera les hélices H2 de l'-enroulement triple et la force opposante appa paîtra à partir du pli des hélices HI pour rédévelopper leur chevauchement maximal /92I/. Cela signifie clairement que telle molécule de dystrophine sera comme le ressort après la contraction et quand la force du tirage disparaîtra, la molécule de dystrophine retournera doucement dans son état original baguette-semblable. De plus, la répétition 20 est fortement hydrophobe et elle est située justement près de la région charnière/921/0 Visiblement, pendant le plissement, ce site (répétition 20) lie aux autres protéines /92I/ comme l'actine en stabilisant le nouveau état plié. Il y a seulement une autre répétition (N04) avec l'hélice H2 étendue qui est située aussi près de la région charnère /92I/. De plus, une autre région second daire (pour quelque stabilisation de la liaison à l'actine dans l'état nouveau du plissement) doit avoir lieu parce que la répétition 15 est semblable au domaine du caldesmone /922,923/ et justement cette région est située près de la région charnère. Ce fait argumente pour la présence de- la dystrophine comme une colonne de la longueur variable (2 états discrets) dans la zone des MF avec la myosine (caldesmone!) du mouvement vésiculaire (Fig.38). Les mutations différentes des molécules de dystrophine conduisant aux dystrophies différentes confirment telle structure. L'absence de chaque de quatre de ces charnières situées dans le domaine central baguette-semblable (domaine II) (entre les répétitions 3 et 4, entre le domaine I et la répétition I du domaine II, entre les répétitions 15 et I6 et entre les répétitions I9 et 20) mène à la forme BD de la dystrophie (ou même aux formes moins sevères) et l'absence de la charnière entre la répétition 24 (du domaine II) et le domaine III mène aux maladies plus sevères /924/.La délétion commune de la forme de la dystrophie BMD dans la répétition 20(avec la charnière et le site "secondaire" de la liaison de l'actine) touche seulement N5 de la longueur de la molécule /925/ quoi que elle est moins lourde que la délétion dans le domaine COOH conduisant à la forme DMD sevère /926,927/ parce que, visiblement, telle "disconnection" entre les MF corticals et la MP, selon la structure ci-dessus, doit conduire à l'ab- sence de la force opposante du ressort et le dérangement de la voie "standardisée" du passage des vésicules.Aussi, même les délétions larges (~50%) de la baguette de la dy- strophine jusqu'aux répétitions I6-I7 et aussi la mutation conduisant à la dublication des répetitions N0 3-17 mènent à la dystrophie douce /928,929/o Comme il était décrit (Fig.39), la dystrophine est la partie de la machine cellulaire parfaite avec les autres protéines du cytosquelette comme la spectrine, la vinculine, la taline. La périodicité de la distribution de la dystrophine dans la MP (semblable à celle de la spectrine) confirme tel rôle de la dystrophine /930,93I/.Aussi la distribution de la dystrophine dans les projectures multiples autour du périmètre de chaque cellule du muscle lisse comme aussi la distribution de la taline et de la vinculine /9I9/ confirme le rôle ci-dessus de la dystrophine. Le rôle de la dystro- phone pour la .perfection de- l'exécution du transport, on peut voir dans le fait que seulement après l'injection de la dystrophine dans la souris mdx, le noyau est trouvé dans la position périphérique /932/ comme dans le cas de la motilité cellulaire, du transport axonal ou du transport vecroriel des vésicules. Par conséquence, cette structure permet d'expliquer le mécanisme moléculaire de la dystrophie. Telle structure ci-dessus et la structure de l'action du muscle squelettique (Fig. 29) permettent d'expliquer l'origine moléculaire de la dystrophie. Pour telle tache, je développerai la structure de l'innervation ménant le signal du nerf du muscle squelettique dans la jonction neuromusculaire déclenchant la contraction musculaires Après l'action du courant Na(K) à travers du canal des récepteurs Ach situés dans la membrane postsynaptique il y a la dépolarisation de la membrane postsynaptique et l'apparition de, on dit, courant de plaque motrice (end-plate current EPC). Ce courant EPC provoque le potentiel classique de l'action Na/K/Ca sur la membrane musculaire /933/ semblable aux événements ayant lieu à la synapse entre les neurones /934/. Cela doit conduire au signal de lsexitation par les canaux de Na (tétrotoxine-sensitifs) et de K (voltage- sensitifs) /et Ca(L)/des plis synaptiques /935/ vers les membranes des tubules T (TT) /936/. Les fibres rapides ont le système très développé des plis synaptiques /935/ qui représentent le réseau très développé.Le potentiel d'action doit aller au même temps (approximativement) vers les fibres rapides diverses pour garantir la propagation synchronisée de la contraction du muscle des fibres rapides répondant rapidement et synchroniquement pour chaque impulsion du nerf moteur malgrè l'innervation seulement à un point au long de la longueur de fibre /935/o Pour tel réseau développé des plis synaptiques avec les canaux voltiques Na/K/Ca il y a, dans les fibres rapides, aussi le réseau bien développé concentré et régulier du système TT /935/ où ce potentiel de l'action du réseau des plis svnap- tiques continue jusqu'au réseau du système TT pour garantir la coordination snrnchronisée de ces réseaux.Telle coordination est supportée par le système spécial incluant lessrangs orthogonaux /938-94I/. Le potentiel de l'action à partir de système TT doit prendre son action à la zone des lignes Z /936/ qui sont aussi concentrées à la région des plis postsy naptiques de jonction /935/ pour executer la synchronisation nécessaire de la contraction musculaire. On sait que la vitesse de la propagation du signal au long des axones (potentiel d'action B:/Na/Ca)est beaucoup plus rapide que la vitesse du signal au long du muscle (strié) (qui doit être synchronisée avec la propagation de la contraction musculaire) où le potentiel d'action K/Na/Ca alterne avec les courants Ca/K(Ca) plus lents (IV-3). Justement, le temps de la contraction rapide des unités motrices détermine la vitesse de la réaction de réponse après la stimulation /942/, ce qui doit signifier que tous les pas avant la contraction musculaire (qui commence à partir de système UT) soitent conduits par les canaux Na/K/Ca rapides avec le potentiel d'action classique qui confirme la présence de ces canaux rapides entre la jonction postsynaptique et le système TT. Et au contraire, la structure des fibres lentes a les systèmes irréguliers épars des TT et des lignes Z et les plis postjonctionels éparpillés aussi et ces fibres ne contractent pas synchroniquement et il y a les terminaisons multiples sur le même fibre /935/.Comme la conséquence,elles n'ont pas de système spécialisé mentionné pour la coordination de la contraction avec les rangs orthogonaux/935,938-940/. La résistance du sarcolemma des fibres lentes augmentée plusieures fois prouve la présence du nombre diminué des canaux ioniques, particulièrement, des canaux de K+ et de Na+ dépendant du voltage qui ont leur conductivité spécifique (un ordre plus grande dans les fibres rapides) /935/. La résistance générale de lentes fibres est aussi beaucoup plus grande que celle des fibres rapides /935/. Les vitesses de la contraction des fibres rapides et lentes chez les rats néonatals sont identiques et elles deviennent différentes seulement à partir de IOeme jour /943/justement au même temps quand seulement une prise" neuronale reste à chaque site postsynaptique /944/ en garantant la contraction synchronisée des fibres rapide:3. Ce temps coincide avec la période quand le développement du réseau des rangs orthogonaux commence /939/. Tout ces faits confirment aussi le fait que la raison principale de la vi- teste augmentée de l'activation des fibres rapides soit la synchrpnisation et la mise en ordre de leur contraction. Ces rangs orthogonaux (le réseau de la connection) (temoi gnant pour un établissement du réseau des canaux de conduction entre les plis de jonction et les TT) sont stimulés en association avec les plis de jonction /941/ et ils ne sont pas trouvés à la région des récepteurs Ach, des TT et de SR /939,945/. Mais ils sont formés toujours dans la région des "puits" /940, 938,946/,(logiquement)- crées aussi par le système des TT. Encore, la création du réseau avec les rangs orthogonaux (incluant les canaux de voltage Na/K/Ca) a la corrélation avec l'innervation: les muscles rapides dénérvés perdent leur amas des rangs /947/ et, au contraire, dans le cas des fibres lentes il y a l'apparence des rangs orthogonaux aux distances relativement faibles de NMJ après l'innervation par le nerf rapide /940/. Une dégradation du réseau ci-dessus avec la dénervation (et, au contraire, sa création avec l'innervation correspondante) touche aussi le réseau TT qui transmet le signal plus loin: après la dénervation du muscle, on peut voir quelque agglomération à la région de telle dégradation /948, 949/. (Les auteurs interprètent erronément la concentration locale augmentée des TT comme leur prolifération soudaine). Ces faits prouvent encore que la création du réseau avec les rangs orthogonaux est connectée avec la propagation du signal du nerf par la synapse avec les plis de jonction vers le réseau de TT (Pig.28). Mais comment telle synchronisation de la contraction des muscles striés rapides avec seulement un site de l'innervation à chaque fibre est accomplie?! On sait que les neurones moteurs fassent l'innervation des muscles correspondants pas loin du tendon /934,950/ et on peut supposer naturellement que telle innervation synchronisée doit aller en direction de la région du pôle des fibres musculaires: le tendon.Le fait interessant, qu'il n'y ait pas de l'actinine-# justement au sarcolemma entre les disques- Z aux parties extrêmes des plis de jonction du myotendon /qui est nécessaire pour la contraction corticale d'actine et le mouvement des vésicules (IV-tS,V-6)/ /951/,logiquement,"derr- iére" du début de l'innervation synaptique, montre la crédibilité de telle position. Il y a aussi la quantité diminuée /jusqu'au zero/ de 1 'actinine- J aux lignes-Z extrêmes /95I/. Aussi il y a la résistance spécifique très forte detla MP à la région extrême du tendon /942/ et par conséquence seulement le courant faible peut traverser la région de ces lignes ce qui absolument nécessaire pour la contraction /courant Ca-K,(Ca)/, confirmant encore cette thèse malgré la la grande quantité du matériel dense dans le sarcolemma ici /95I/. Ewidemment, cet matériel dense du sarcolemma a la fonction structurelle pour la transmission passive de la tension au tendon. Cela doit signifier que la meilleure position des synapses différentes et des plis de jonctions peut être la direction perpendiculaire à l'axe principal du muscle près du tendon.Et on sait que près de tendon, la direction de l'axe longue des cellules musculaires multinucléaires fasse l'angle aigu avec le plan principal au tissu conjonctif du tendon /942,95I/. Par conséquence, quelques plis de jonction doivent être situés dans ce cas plus loin et quelques autres plus proche à l'extrémité du fibre. Reflétant cette situation, on voit que le réseau des plis de jonction aient aussi les longueurs très différentes étendues pénétrantes à la partie intérieure du muscle (jusqu'à IO ym de facto /952/) en corrélation évidente de la présence de l'angle aigu de la plaque du tendon avec l'axe longue du muscle /942/. La morphologie des plis postsynaptiques et des plis du myotendon sont semblables /953/. De plus, ces"deux" types de plis ont le nombre augmenté des protéines cytosquelettiques différentes,particulièrement, la dystrophine et aussi la vinculine, la taline et l'actine /954,955,957/. Une distribution de la dystrophine est la plus remarquable: elle est trouvée aux concentrations augmentées aux jonctions neuromusculaires: autour de la région des récepteurs Ach, dans les régions profondes des plis de jonction /958,959,953/ et aussi aux plis de jonction du myotendon /953,960/ (cette concentration, justement dans les "deux"(!) types des plis est essentiellement plus forte que celle dans le sarcolemma). De plus, les données indépendantes avec l'acetylcholinestérase (AchE) confirment "l'interférention" commune entre les plis de jonction postsynaptiques et du myotendon. I1 est connu que la zone large intersynaptique entre les plusieures synapses voisines aient une activité de l'acetylcholinestérase /96I/. L'activité AchE est aussi a lieu au jonction de myotendon (MICA) /962/. De plus, il y a le rôle décisif de l'innervation moteur dans l'accumulation de l'activité AchE aux MTJ /952/ et il n'y a pas de telle activité pendant la naissance /962/ quand il n'y a pas encore des rangs orthogonaux et des plis développés postsynaptiSques et du myotendon. Cette activité AchE a les valeurs submaximales (2-IO fois moins que la valeur maximale à la région située pas loin de la NMJ) aussi près de MTJ /96I/. Confirmant la thèse ci-dessus, on peut voir que pendant la dénervation il y a la réduction des plis de jonction de la région de la surface de la jonction du myotendon /963/. Par conséquence, les plis postsynaptiques doivent fuser avec les parties proximales des plis de jonction du myotendon pour faire le réseau général de l'activation (dans l'espace de 3 dimentions). Il y a aussi un excès des mitochondries autour des plis postsynaptiques /96I/ et aussi autour des plis de jonction du myotendon /964,96I,965/. Cela doit refléter l'absorbsion du Ca et l'activité de "relachement" ayant lieu près des lignes Z concentrées dans cette région (IV-8). On peut voir qu'un de premiers signes des dystrophies musculaires soit les ouvertures dans la MP et les lésions focales (on dit, lésions # ) dans la MP /966,967/ à la région des lignes Z /968/ où les myofibrilles de la région voisine soit bien concentrées /966/. Le procès semblable avec la même histopathologie comme la dystrophie peut etre obtenu chez les aminaux sains après la stimulation des muscles artificielle répétée intensivement dans la position raccourcie des myofibrilles /969/. Visiblement, la dissolution de la MP était observée dans la même position raccourcie pendant l'utilisation de la stimulation électrique périodique en utilisant les inhibiteurs de la phosphorylation oxidative /970/.Et dans les deux cas: "la dystrophie" chez l'homme et animaux sains et dans le cas de la dystrophie réele il y a un flux intensifié des enzymes à travers la MP (aussi) par les trous dans la MP /969-974/. Les faits ci-dessus de la lyse de la MP et aussi une inhibition de ce procès par les inhibiteurs de la phA2- /970/ ou inhibiteurs du métabolisme de l'acide arachidonique /975/ ou l'augmentation de la quantité des prostaglandines chez la sou-. ris dystrophique mdx /976,977/ prouvent l'activité de la phA2 dans tel procès. De plus,en accord avec la structure générale de la contraction du muscle strié (IV-8) il y a l'activation nécessaire pour la contraction /précisément: pour la "vague!' Ca-K(Ca)/ de la pliA2 de la MP à la membrane de TT (près de la ligne Z) avec le raccourcissement des segments musculaires. O.-à-d. pendant le développemènt de telle déstruction de la MP, les connetotions des lames étaient cassés et détruites. Cela était observé clairement in situ /9787. k partir de cette structure, je propose l'utilisation systematique des inhibiteurs de la pliA2 comme lipocortines, les analogues des acides gras, monoalides, monoalogues, quinacrine, DEDA,2EYA,ODYA,BPB /978a/ pour la prévention du développement des dystrophies plutôt aux moments nécessaires pour arrêter l'état continue des muscles accourcies comme la chute et pour l'inhibition du développement de la fatigue pendant le travail intensif ou pendant les excercices sportifs. Comme la conséquence de la structure de la "vague" Oa-K(Ca) et du movement des vésicules (comme vésicules "PKC"), on peut établir la structure de l'action musculaire. B.La structure nonhomogéne "discréte" des musculs squelette tiques et cardiaques. I1 est (quand même) connu que la vague de la contraction des cellules musculaires a la vitesse de la propagation beaucoup plus lente (20-I00 fois!) que celle du potentiel de l'action 2 /979,980/ quoique la quantité des charges par cm de la mem- brane entière du muscle squelettique est N3 fois plus grande que celle de l'axone de calmar /980/. La nature discontinue de la propagation du signal de l'exitation, dépendant de l'angle avec l'orientation cellulaire fixée est aussi démontrée /981,982/. De plus il est établi que les canaux de Na dépendants de voltage soitent concentrés aux replis postsynaptiques de sarcolemma (au jonction neuromusculaire-NMJ) /983-986/ et à la région des tubules transversals /987/ des muscles squelettiques et cardiaques quoique, avant l'innervation, ces canaux se trouvent dans l'état diffuse dans la membrane plasmique du muscle /986/.On peut voir une asymétrie frapant de la distribution des canaux de Na dans les muscles squelettiques et cardiaques d'après les faits suivants: I) ces canaux sont situés seulement sur la face innervée de I'électroplaque d'anguille /988/; 2) les molécules de l'ankyrine qui servent pour un attachement des canaux de Na (V) sont très concentrées dans NMJ /989/ et aussi 3) les canaux de Na (comme et l'ankyrine) sont situés dans les cavités (logiquement les TU) et dans la membrane périjonctionnelle (logiquement, les replis postsynaptiques) /990/. Dans ces dernières régions /990/ il y a (justement) les plaques discontinues de la matière dense submembranaire et la conductivité diminue fortement avec la distance de la région riche des récepteurs AchR sur la membrane du muscle squelettique /990/, ce qui signifie que la quantité des canaux diminue fortement (disparait) avec la distance de la synapse. Mais dans la région des replis postsynaptiques, cette quantité des canaux diminue beaucoup plus faiblement /990/, logiquement parce que les canaux (situés avec une densité forte) sont rémplacés par les autres canaux ioniques (Na,K,Ca) dépendant de voltage dans ces replis postsynaptiques (Fig.28).Les canaux de Ca dépendant de voltage (canaux DPH ou C) sont-aussi concentrés dans les régions des TT /99I- 993/. Évidemment, la distribution des TT conduit au changement des propriétés électriques de la MP /994,995/. C.-à-d. dans la membrane des muscles squelettiques et cardiaques il y a les régions discrètes des TT qui ont les canaux de Na, Ca et, évidemment, K dépendants de voltage. Mais aussi cette membrane, ayant la conductivité "Ca-E(Ca)" (Figs.I8,29) de la "vague" Ca-E(Ca), doit avoir l'appareil suffisamment complexe. Les résultats montrent clairement qu'il ait la "vague" Ca-K(Ca) dans ces cellules encore plus spécialisées: (I) avec. l'appareil localisé en permanence; (2) ce type de vague est connecté (par les alternances succesives) avec la conductivité du potentiel de l'action (conductivité Na/K/Ca située dans les zones TT) (Fig.29).Dans ce sens, cette structure principale de la contraction des muscles squelettiques et cardiaques est la conséquence de la structure de "vague" Ca-K(Ca) (Figs.I8-20). Les canaux de Ca dépendant de voltage (canaux DPH) sont aussi concentrés principalement dans la région des TT /991-993/. ividemment,la destruction des TT conduit au changement des propriétés électriques de la MP /994, 995/. C.-à-d. dans la membrane des muscles squelettiques et cardiaques il y a des régions discrètes des TT qui ont les canaux de Na,Ca et, évidemment, K dépendant de voltage. Mais dans les membranes musculaires il y a aussi la conductivité Ca-K(Ca) (Fig.29). Ce type de "vague" doit avoir l'appareil suffisamment complexe. Les résultats montrent clairement qu'il y ait ce type de "vague" Ca-K(Ca) mais elle est- particulièrement spécialisée: (I) avec l'appareil localisé en- permanence et (2) avec connection très bien spécialisée et l'alternance successive avec les régions de la conductivité du potentiel de l'action (con ductivité Na/K/Ca dans les zones des TT) (Fig.29). Dans ce sens, cette structure principale de la contraction des muscles squelettiques et cardiaques est la conséquence de la structure de "vague" Ca-K(Ca) (Figs.18,20). Selon la structure de la Fig.29, les"vagues" Ca-E(Ca) font la propagation du signal entre les TT discrets situés un après autre au long du muscle près de la ligne Z, c.-à-d. au long du signal de la contraction musculaire.Si on élimine les ions du Ca2+ de l'extérieur il n'y a plus de contraction desmuscles /992/ initée par l'augmentation de la concentration dés ions de K+ a l'extérieur, meme s'il y a dans les TT encore l'induction locale isolée (naturellement dans les régions iso lées des TT) du potentiel de l'action /992/. (Cette induction du potentiel de l'action local a lieu parce que il y a la diminution du gradient des concentrations de K servant au potentiel négatif de la cellule, et par conséquence il y a la diminution de la différence des potentiels négatifs et l'ac- tivation du courant du Na+). Dans le même sens, la destruction des UT conduit à l'apparition du potentiel de l'action sans la contraction musculaire /994,995/. Cette "vague" Ca-K(Ca) fait son action avec les moyens de la machinerie correspondante: le cytosquelette cortical près de la MP et les vésicules qui sont propulsées avec l'aide du cytosquelette (III, Figs.18-20). Ces caractéristiques de la présence de la "vague" Ca-K(Ca) dans les cellules des muscles squelettiques et cardiaques sont réelement présentes.Près de la MP il y a le cytosquelette cortical /996,997/.Ce cytosquelette (associé avec la MP) contient l'actine I qui est différente de l'actine des sarcomères /997/ et aussi, il contient, par exemple, la spectrine (comme dans les autres cellules) /996/. I1 y a aussi l'attachement avec le cytosquelette spécial (contenant la vinculine) des lignes Z (et M) à la MP (et à ces invaginations, notamment) /998-IOOI/, ce qui reflète 'la position fixée entre le système de contraction grâce aux "vagues" Ca-K(Ca) et le système de la contraction musculaire des sarcomères. Près des sites de l'attachement de ces lignes à la MP il y a la présence des vésicules nombreuse unifiées par les éléments fibreux ou réticulaires /1000,1002,1003/.Ces petites vésicules sont associées avec la MP (le système des TT inclu) /I004/ (reg. aussi Fig.29). I1 y a un arrangement longitudinal (en majorité) de ces vésicules près de la surface cellulaire /1003/. On voit même que ces vésicules sont striées /1003/ (logiquement, par le cytosquelette cortical qui aide à leur propulsion). De plus, dans les poches de MP sur les deux côtés des lignes Z /I005-I009,I002/ il y a la présence (sur la MP) des nombreuse vésicules pinocytotiques ("caveolae"). Ces vésicules pinocytotiques ("caveolae") ont la communication avec l'espace extracellulaire /I005,I006/ faisant le transport spécial des ions /I007/. Elles sont les structures constitutionnelles mais leur nombre ne depend pas de l'état de la stimulation électrique, de l'état de la contraction ou de l'état de repos /I008/.Logiquement, ces vésicules pinocytotiques ("caveolae") dans la MP servent pour les vésicules transportées par les "vagues" Ca-K(Ca) par le cytosquelette cortical comme le moyen de retour de 'ces vésicules (Fig.29) en différence, par exemple, avec le cercle fermé des vésicules "PKC" de Fig-19. le nombre de ces vésicules pinocytotiques ("caveolae") est constant et ne depend pas de la longueur du sarcomère /IOIO/ Mais avec la diminution de la longueur du sarcomère, le "caveola" devient plus proéminent /1010,1002/, Cela, justement, doit fortement aider faire le bourgeonnement du "caveola" coincidant parfaitement avec la contraction du sarcomère particulier (Fig.29B). Les molécules de IP3 et leurs récepteurs sont aussi présents dans la membrane de la "vague" Ca-K(Ca) (Fig.18,20) Et on les voit aussi pendant le fonctionnement des muscles squelettiques et cardiaques. Les molécules de IP3 ne font pas l'effet direct par la libération de Ca (de SR) /IOII,IOI2/ (Fig.29B) et par conséquence, elles ne font pas l'effet direct sur la contraction /IOII/. Logiquement, les molécules de IP3 font leur action dans ces cellules musculaires par les moyens "classiques" (Fig.18,25). Les molécules de IP3 sont produites par la phC dans les cellules de muscles squelettiques et cardiaques /1013-1015/.La phC est activée sur la MP et sur les vésicules (Figs.I8-25) et les molécules de IP3 (le résultat de cette action) réagissent avec leurs récepteurs- qui se situent sur les vésicules /Refs.IOI3/ et dans le SR (mais seulement dans la citerne terminale)/IOI3,IOI4,IOI6/ (visiblement purifiée avec les vésicules). Ces récepteurs de IP3 sont proches à la zone active du muscle /IOI7/.En confirmation de telle localisation stricte des récepteurs de IP3, on ne trouve pas- toujours les récepteurs de IP3 dans le SR de ces muscles /IOI3/. Ces récepteurs des cellules musculaires ont les propriétés semblables aux ceux des autres cellules: il y a l'optimum des concentrations de Ca pour l'activation des récepteurs IP3 de SR /Refs.IOI3/ (qui peut inclure les vésicules) et la structure des ces récepteurs resemble celle des récepteurs ryanodine /1018,1017/.Une autre confirmation de la présence de la grosse machinerie de "vague Ca-K(Ca) dans les cellules musculaires et une confirmation de la servitude des TT comme la distination vésiculaire peuvent être vues des faits de la présence de l'enzyme-clé PI-4P -kinase seulement dans la membrane de TT (comparez Pigs.20,26, IV-6) et de l'enzyme PI-kinase (justement) sur les membranes de SR et des TT /Refs.IOI3/ (comparez la similarité- IV-6).De plus les molécules de IP3 (et aussi STP) dans les cellules musculaires provoquent des oscillations de [Ca] in /IOI2,IOII/ comme dans les cellules normales et la stimulation titanique courte augmente la concentration des molécules IP3 à l'intérieur /IOI5/. On voit que le schéma général de la contraction musculaire comme, premièrement, la libération de Ca pour les canaux Ca (DPH) dans les TT (d'après le courant du potentiel d'action local) et,deuxièment, -cette libération de Ca à travers de la MP module la libération de Ca plus massive par les canaux (récepteur ryanodine-caffeine) de SR qui provoque la contraction du sarcomère local /IOI9-I02I/ (Fig.29A). La protéine qui adcorbe le Ca à l'intérieur de SR des cellules des muscles cardiaques est la calséquestrine/1022-1025/. La conformation de cette protéine est modulée par les ions de Ca /1022,1023/ et elle fait (à son tour) la modulation du récepteur ryanodine par la modulation de la conformation des protéines voisines des pieds de jonction (junctional feet) /1022-1024/. Telle modulation (par les autres protéines membranaires) resemble la modulation des récepteurs IP3 dans les cellules. nonmusculaires /I026,I027/ et comme dans le dernier cas, il y a la concentration du Ca cytoplasmique optimale pour la meilleure efficacité de ces récepteurs ryanodines /I02 /I022/.Mais dans les cellules des muscles cardiaques et squelettiques, on trouve aussi la protéine calréticuline (qui réside normalement dans. les "calcisomes" des cellules nonmuscu- laires) mais avec les quantités beaucoup plus petites que celles de la calséquestrine /I025/ et,justement, la cisterne terminale (logiquement, avec les vésicules voisines copurifiées) est enrichie avec la calréticuline (protéine des"calcisomes"!) /I028/. C.-à-d. les "vagues" Ca-K(Ca) transmettent le signal d'une zone TT à une autre zone TT avec l'aide du métabolisme de l'inositol (phosphate) et à partir de la zone TT particulière il y a le déclenchement (avec l'aide du potentiel de l'action local) de l'augmentation de Ca dans le cytoplasme (premièrement, par les canaux Ca, de la MP-TT et, deuxièmement, par les récepteurs ryanodine de SR) près du sarcomère adjacent (Fig.29) provoquant la contraction ("sliding") musculaire, ce qui était enrégistrée expérimentalement::la vague de la libération du Ca dans le cytosol coincide avec la vague de la contraction musculaire /979/ et l'activation (par des- électrodes) du muscle squelettique peut avoir lieu seulement à, partir de la zone Z /1029/.- Mais comment ont lieu les connections permanentes entre les"vagues" Ca-K(Ca) et Na/K/Ca ? I1 y a un bon accord des résultats avec ces explications. I1 y a beaucoup des travaux sur l'échange Na/Ca dans les muscles mais, justement, on n'a pas isolé la protéine responsable pour cet échange /I030/. D'après la structure de Fig.29A,B il y a l'exocytose des ions de Ca des vésicules à l'extérieur, ce qui doit provoquer le changement du potentiel de l'action membranaire /I03I/, c.-à-1 la domination de la charge négative de la MP à l'intérieur et par conséquence le courant de Na à l'intérieur. Et cela doit représenter "l'échange" ou "l'échangeur" de Ca et de Na pendant l'action de ces muscles. Justement, après cette extra tion de Ca il y a la relaxation mécanique (c.-à-d. la contraction locale) du muscle /I032/ (et Fig.29A,B). Le potentiel négatif favorise cette extraction du Ca /I032. I034/. Ce potentiel négatif favorable doit signifier le courant de K à l'extérieur, c.-à-d. ce procès passe /pendant la "vague"-aa-K(Ca)/ quand il y a justement la contraction du cytosquelette cortical (Fig.18-11,12) De plus, cet "échange"Ca/Na n'est pas identique au système du transport de Ca et de Na /I034/ (c.-à-d. aux canaux classiques). Et encore, le découvert des vésicules striées /1003/ argue pour cette propulsion et fusion des vésicules pendant la contact tion du cytosquelette cortical.Cet "échange" est favorisé par les phospholipides anioniques (notamment PA!) /Refs.1030/ et par l'augmentation du pH intracellulaire (ce qui stimule l'activité de 1 t enzyme PI-4P -kinase situant justement dans la-membrane des TT). Ces deux facteurs, justement, potentialisent la fusion (IV-7) confirmant encore le procès de la fusion comme l'ori- gine de"l'échangeur" Ca/Na introuvable dans les muscles. Et encore, selon Sig.29A,B, après "l'échange" (effectif!) Ca/Na il y a (enfin!) la libération de Ca à l'intérieur de la cellule /I030/. De plus, le fait que pendant"l'échange" Ca/Na, la quantité importante de Ca /I035/ (avec la rapidité immediate après la diffusion de Ca vers la MP /I036/) va à l'ex- térieur de la cellule (et, comme le résultat, cet "échange" a la capacité de l'action forte /1030/),montre encore la validité de cette structure de la fusion des vésicules avec les ions de Ca pour l'efflux du Ca à l'extérieur. Mais ce qui est encore très important, c'est justement la présence dans les muscles cardiaques des canaux spécials de calciumCa? (avec Ca;) /I030/ qui,justement, doivent avoir la plus grande importance pour l'initiation du potentiel de l'action /I037/ grâce à leur plus facile activation aux potentiels plus négatifs /I037-I039/. Cela s'accorde bien avec la nouvelle structure de Fig.29B ou ces canaux servent justement pour la connection des "vagues" Ca-K(Ca) avec "vagues" Na/E/Ca. Le fait que pendant"l'échange" Ca/Na il ait l'augmentation du flux du Ca à l'extérieur et à l'intérieur /I030/, confirme encore cette structure. Les mitochondries participent dans la fonction des "vagues" Ca-K(Ca) (Fig.20,25). On les voit clairement au long du chemin naturel du mouvement des vésicules /grâce à la "vagues" Ca E(Ca)/ (justement autour des myofibres) dans les muscles cardiaques /I040/ et (autour des myofibres) au niveau des bandes I dans les muscles squelettiques /I04I/ (ces mitochondries doivent participer dans le fonctionnement de ces muscles (aussi) pour la régulation des courants de Ca entre les mitochondries, le cytoplasme, les vésicules et le SR (Fig.25) parce que même après l'élimination de 1'ATP il y a encore le flux du Ca dans les mitochondries, et la perte (plus petite) de Ca par le SR provoque la contraction musculaire /I042/ (.Fig.29A). À cause du fait que les mitochondries (leur partie) peuvent libérer 1e Ca en réponse aux ions de Na (IV-6), on peut expliquer que le courant de Na (à travers des canaux dépendants de voltage) provoque la libération de Ca de SR /I043/ par la chaîne (I) le flux de Na à l'intérieur à travers la MP; (2) l'échange Na Et si éliminer seulement l'échange CaNa des mitochondries il n'aura pas du blocage des canaux de Na (TTX) dépendant de voltage qui sont aussi indispensables pour le rythme cardiaque. Heureusement, il y a de telles préparations spécifiques pour le blocage de tel échange comme diltiazem /I0458/. Une autre connection très capitale entre les "vagues" Na/K/Ca et Ca/K(Ca) /mais dans le séquence: Na/K/Ca#Ca-K(Ca) doit aussi avoir lieu dans les muscles squelettiques et cardiaques. Cette activation est bien garantie par les canaux activés par la contraction /1046-1048/. L'activation locale des canaux de Ca /Fig.29B) doit être la conséquence de l'activation de la pha2 de la couche extérieure (Figs.I8,26-I). Cette contraction locale est bien garantie après la libération locale de Ca pour les canaux Ca1 des TT (Fig.29B) et la libération conséquente decca de SR par le récepteur ryanodine. La pinocytose du "caveola" de la MP au cytoplasme (Fig.29B) grâce à l'aide de son extention après la contraction locale fait la garantie additionnelle nécessaire pour le début "sui- vant" de la "vague" Ca-K(Ca). Les canaux K(Ca) et le AchR ne sont pas affectés par les contractions /1050/. La cause de la déstruction membranaire dans le cas des dystrophies (IV-8A) (ou' des dysfonctions résiduelles d'après les exercices intensifs des muscles de l'homme normal !) justement dans l'état contracté confirme l'activation excessive de la phA2 de la couche extérieure de MP normalement nécessaire pour le signal de la contraction musculaire. On voit ici la cause et l'explication des nombreuse maladies musculaires d'un homme sain qui s'exercise excessivement. Un autre- cas de la transformation des "vagues" du potentiel d'action dans la "vague" CaK(Ca) est physiologiquement très important: c'est la libération des neurotransmetteurs dans l'axone terminal (Fig.30). Près de l'endroit de la libération du neurotransmetteur il y a la "transformation" des courants Na/K/Ca dans les courants Ca/K/(Ca) qui,justement, conduisent à la libération des neurotransmetteurs (Fig.30) comme dans le cas de la sécrétion (IV-6). Cette transformation, conduisant à la libération du neuro transmetteur, se passe automatiquement après le potentiel de l'action imité, par exemple, par la dépolarisation du nerf dans la solution forte de K+/1O51/. Le courant de Ca(K) est démontré dans le nombre des cellules d'origine neuronale /I05I/. Les neurotransmetteurs, qui inhibent l'action de la libération des neurotransmetteurs du terminal nerveux, doivent faire leur action, logiquement, comme la somatostatine: par l'interférence de leurs "vagues" Ca-K(Ca) (1V-ci-dessus) avec celles du signal principal.Et on voit clairement que ces "vagues" inhibitrices ont les courants CaK(Ca) comme la base: (I) il y a la transformation IP3tIP4 stimulant le cou + rant de K ext de la cellule; (2) la protéine Go et les molé- cules de GTP amplifient l'inhibition montrant la participation des vésicules qui sont propulsées par la "vague" Ca-K(Ca); (3) l'inhibiteur ne peut pas faire son action s'il est appliqué dehors de la pipette pour "patch-clamp recording" à cause de l'impossibilité pour les"vagues" (courants) de la surface de passer entre la pipette et la MP; (4) cette conductivité K(Ca) est plus forte aux potentiels négatifs, ce qui doit avoir lieu après l'augmentation de la concentration de Ca à l'intérieur /I052/. De plus il y a un amas large des canaux CaN dans la région présynaptique près (mais pas sur) des sites de la libération du neurotransmetteur /I05I-IO55/. Les molécules de DHP n 'in- hibent pas la libération du neurotransmetteur /I056/ mais le nombre des agents qui inhibent la libération du neurotrans- metteur sont les inhibiteurs des canaux CaN et le flux du Ca à l'interieur par les; canaux CaNdéclenche la libération du neurotransmetteur /I05.2/. Cela reflète clairement le fait que près du terminal nerveux il y ait le flux de Ca qui est beaucoup plus fort que célui de l'axone /I058/ qui ne joue pas le rôle indispensable dans la propagation du potentiel de l'action /I05I/. C.-à-d. les canaux de Cal;,(DHP) sont situés aux zones de l'axone jusqu 1au amas des canaux CaN /I055/. Ces canaux, justement, ont l'activatin plus facilitée que celle des canaux de Ca1 /I038/. Èvidemment, la présence de ces canaux plus exitables et fortement groupés facilite la création de la "vague" Ca-K(Ca) (par la diminution du potentiel négatif membranaire aussi) et la contraction du cytosquelette corti cal provoque le déplacement locale des vésicules synaptiques (comme aussi des vésicules et des granules de sécrétion-IV-6) et leur exocytose (Fig.30). Le fait de la présence de l'endosome ("calcisome") /qui est nécessaire pour le cycle de la "vague" Ca-E(Ca) (Fig.20)/ près de la région de la synapse /I058/ confirme élégamment cette structure (Fig.30). À partir de cette structure (Figs.29,30), on peut facile ment expliquer le mécanisme principal de la modulation du rythme cardiaque par ltepinephrine (adrénaline) et l'acetyl- choline. I1 est connu que la structure des récepteurs adrénérgiques (fi ) peut provoquer une augmentation du courant à travers des canaux CaL (ICa,L) /Refs.1059/ faisant l'augmentation de l'intensité de la libération du Ca dans le cytoplasme et la contraction (Fig.29) conduisant à l'augmentation du rythme et de la pression cardiaques /I059/. Cette modulation des canaux Ca1 est provoquée par leur phosphorylation directe par PKA activée par le récepteur adrénergique (ss)/1059/.Ce qui est important ici, c'est l'absence de l'apparence des "vagues" Ca-K(Ca) (évidemment,interférentes). Mais on explique la diminution du rythme cardiaque avec l'acetylcholine'(qui fait son action avec l'activation du métabolisme de l'inositol (phosphates) /I059/) par la création des "vagues" interférentielles dans ce cas (comme dans la Fig.30). C-La structure de la contraction du muscle lisse. On régistre dans le muscle lisse les pics de Ca pures mais dans le. muscle squelettique il y a deux types de pics: de Ca et de Na /I058/. Ce fait montre une absence du potentiel de l'action dans le muscle lisse et l'importance de "vague" Ca-K(C'a). Le fait que le récepteur IF soit le canal de Ca le plus important dans le muscle lisse /1060/ et aussi beaucoup plus forte efficacité des molécules IP3 dans la contraction de, muscle lisse que de muscle~ squelettique /1061/, con- firme clairement cette thèse.La libération de Ca des vésicules et même la contraction du muscle lisse après l'action de GTP-yS confirme aussi la présence dominante de la "vague" Ca-K(Ca). I1 y a aussi le groupement des vésicules de la surface qui ont les alternances avec les corps denses /I063,695/. Ces corps denses doivent représenter la partie du cytosquelette cortical et ils contiennent les protéines du cytosquelette comme la vinculine, l'actinine- et ils servent pour l'attachement des filaments contenant l'actine cortical /I064/. Les molécules de 1P3 sont les sources des vagues des courants: après l'injection de 1P3 il y a le courant du K(Ca) à travers de la MP comme après l'application de l'ago- niste carbachola Et l'héparine injectée avec IP3 arrête cette "vague" /I065/ ce qu'on peut attendre d'après la Fig.26. Logiquement, le courant de K(Ca) a une autre origine (plutôt comme un fait artificiel, peut-être à cause de la contamination fréquente avec les fragments des nerfs) parce que l'hé- parine n'inhibe pas le courant de K(Ca) /I065/ La structure du muscle lisse doit être encore très particulière: pas loin de la MP il y a les tubules atypiquement longs avec les groupes des vésicules et la distance de la MP de IO nm avec la périodicité (20-25 nm) grâce à l'intervention des corps denses (la partie du cytosquelette cortical) /695/.Logiquement ces tubules longs représentent les structures générales situant près de la surface cellulaire et servant pour la pression et la propulsion des vésicules avec le cytosquelette cortical (V) Le fait qu'il n'y ait que ""2 régions principales près de la MP, avec la concentration du Ca augmentée, dans le muscle lisse /1066/, 'confirme bien cette structure (Fig.3I) De plus, les structures musculaires corticales des muscles lisse sont présentes en permanence et il y a justement deux types des systèmes des myofibrilles contractiles chacun avec l'angle particulier avec l'axe long /I067,I068/. C.-à-d. on doit considérer un système des microfibres comme le"muscle"et un autre comme le "contremuscle". Logiquement, le passage des vésicules au long d'un chemin dans la direction d'un pôle cellulaire provoque la contraction d'un système des myofibres. Et le passage au long d'un autre chemin (dans la direction contraire) fait la contraction d'un autre système et la décontraction du système premier (Fig.3I). Le fait mentionné de la présence de deux pôles avec la concentration du Ca augmentée /I066/ près de la MP (c.-à-d. des "calcisomes", parce que le SR des muscles lisse avec la synthèse des protéines existe à l'intérieur de la cellule /695/) confirme bien cette nouvelle structure originelle et importante. D'après ces structures des muscles on peut généraliser les mécanismes de la contraction cellulaire (Table I). Un élément essentiel est l'absence principal de la décontraction (après la contraction) rar le muscle lui-même. Dans tous les cas des muscles il y a toujours un autre système qui fait la décontraction (Table I). Mais dans le cas des cellules nonmusculaires après la contraction il y a la dissociation des élé- ments essentiels de la contraction et ls construction de la nouvelle machinerie de la contraction, la plus visible pendant le mouvement cellulaire (6V). Table I.Généralisation Universelle des contractions muscu laires des cellules des être vivants sur la Terre. Type cellulaire Longevité du sys- Mécanisme de contrac tème contractil tion Muscle squelettique Permanent Contraction avec contremuscle Muscle cardiaque Permanent Contraction avec l'autre véntricule Muscle lisse Permanent Contraction avec l'autre système des faisceaux Cellules nonmuscu- Temporaire Contraction, dissolu- laires (motilité, tion et réconstructim cône du neurone,étalement ,machinerie du signal, sécrétion) V.La résolution complète des origines-~de la motilité cellulaire et le développement de la structure générale du signal.La'structure universelle de la contraction cellulaire. Le nombre des données indiquent le mécanisme commun de la motilité cellulaire dans le nombre de ses révélations: la migration et la locomotion cellulaire, l'étalement cellulaire, la croissance du cone du neurone, la cytokinèse, le "capping", la phagocytose, la locomotion des protozoaires /I069/. Mais malgré des données expérimenataux très nombreuse et detailées (quoique pas toujours strictement methodiquées à cause de leur, à la fin, caractère phénoménologique) il n'y a pas de bonnes explications nhzrsiques satisfaisantes du tout et il n'y a pas même de résultats (globaux) avec la structure générale correspondante et des bases moléculaires malgré le nombre des structures particulières existantes /I070/. De plus, je voudrais clairement souligner que la structure correcte même ne puisse pas être créées principalement parce que les lois fondamentaux se trouvant à la base des mécanismes physico-chimiques de la motilité cellulaire n'étaient pas globalement connues et, bizarrement, on n'a pas même bien souligné qu'elles étaient absolument inconnues dans nos efforts quelquefois d'expliquer tout et dans n importe quel cas d'après une obligation de publier.Grace aux structures les plus compréhensives et fondamentales: (i) la nouvelle structure physico-chimique des interactions intercarbohydrates homologues /I,2/ était la base NOI de l'étalement cellulaire (et de la motilité); (2) la nouvelle structure principale physique de la fluidité membranaire augmentée et de la destabilisation dans les régions avec la déhydratation locale (reg. ci-dessous) conduisant à l'extention en avance de la membrane cellulaire; (3) les nouvelles propriétés fondamentales de la contraction universelle cellulaire-des microfilaments et leurs interactions spécifiques avec les microtubules et les filaments intermédiaires comme la base de la machinerie contractile "produisant" la motilité; (4) la structure développée de l'action de l'intégrine (II-5); (5) la structure universelle de l'ace tion des modulateurs cellulaires (parahormones) comme les prostaglandines, tromboxanes, leikotriènes; (6) la structure du transport intracellulaire dirigé des vésicules avec le contenu particulier des molécules, faisable avec l'aide du système cytosquelettique cortical bien coordoné avec la "vague" universelle Ca-K(Ca),(IV); (7) les autres structures pas si globales mais encore importantes- je resouds telle structure de la mobilité compliquée qui unit les interactions complexes des composantes nombreux des constructions cellulaires en espace et en temps. La motilité cellulaire est le procès avec le récyclage et en conséquence (pour la comodité) je considérerai la création des contacts focals pendant la progression du lamellipode avancé, premièrement. I.La morphologie de la progression du lamellipode avancé et la création des contacts focals. Approximativement, on peut considerer que l'adhésion á la matrice (et aussi la motilité cellulaire) comprend les 3 stades: l'attachement initial (création des contacts focals temporaires), l'étalement et la formation des adhésions focales /I07I/, Les contacts focals sont de la nature intérimaire et existent pendant des minutes /I072/. En considérant les structures compréhensives mentionnées ci-dessus, je peut resoudre les vieilles données morphologiques de la microscopie éléctronique de Abercrombie et al /1073,I074/ avec les cellules motiles dans le sens d'une existence de la région spéciale lamellipode avancé qui fait (par le mécanisme absolument inconnu avant) ces nouveaux contacts focals avec la séquence des événements suivants (Fig.32): (I) il y a le ressort du lamellipode du bord du lamellipode avancé au 60-900 relativement la ligne horisontale; (2) il y a le coude succesif de tel lamellipode avec l'aide des entortillements; (3) après un allongement ultérieur du lamellipode il y a un attachement focal de la région, postèrieure au bout, au substrat (le lamellipode n'a pas des autres régions d'attachement).Après un cycle il y.a le début d'un autre etc. En confirmant la structure développé ci-dessus (Fig.32), on observe que la formation de tels contacts soit precedée par le développement de la structure linaire représentant la fibre cytoplasmique associée typiquement avec le contact focal /1075/. Pendant l'étalement, tels contacts focals (comme l'initial attachement stable des cellules pendant l'étalement ou la motilité) coincident avec les extrémités périphériques des fibres cytpplasmiques observées et le lamellipode "frais" a une distance près de I00 nm ou plus du substrat (Fig.32)-/I076, I077/. L'épaisseur du lamellipode est seulement IIO-I60 nm /I073-I075/ ce qui est conservé en point de vue des propriétés membranaires spéciales de tel épaisseur faible même pendant le mouvement cellulaire dans les gels tridimentionels du collagène /I078/. Le lamellipode avancé large de la cellule en mouvement est dispersé avec les petits contacts focals discrets du substrat /I080/ et tout ce mouvement en avance fait la ressemblance avec la vague large de la mer /1081/c (En décrivant ces travaux anciens, je j e fait spécialement mon interprétation dy- namique dans le sens de l'extention en avance de la membrane cellulaire qui a les distances radicals avec les points de vue très différents de très grand nombre des travaux consécutifs, reg. par exemple /1069,1070,1082-1087/). Telles propriétés spéciales du lamellipode peuvent être conclues aussi du, fait que après les déstabilisations artificielles locales différentes de la MP, on voit les prostrutions seulement au lamellipode avancé des cellules motiles ce qu'on ne peut -pas voir sur les cellules stabilisées /I088/. (Évidemment, la structure du cytosquelette cortical nécessaire pour telles prostrutions ne peut pas être créée par telles déstabilisations). Telles extrémités focales du lamellipode s'attachent (pen dant la motilité et aussi l'étalement) au substrat généralement avec l'aide des récepteurs de l'intégrine. Les faits différents prouvent cette structure. Les anticorps particuliers contre les intégrines peuvent bloquer l'attachement initial de la cellule et aussi l'extension de la neurite /I089-I094/. Aussi un attachement initial de la cellule au substrat du collagène a lieu avec une aide des récepteurs du collagène qui représente une forme des intégrines /I095/. Les récepteurs du collagène font (aussi) l'interaction dépendant du Mg avec la séquence Ar-Gly-Asp dans le collagène ce qui est essentiel (toujours) pour les événements initials /I096/. Les ligands peptidiques (comme Arg-Gly-Asp) pour les interactions des in tégrines ménant à l'attachement initial peuvent être crées par les glyçoprotéines du' sérum. Par exemple, les globulines cet et aussi les globulines-#, purifiées du sérum, sont suffisan,tes pour l'adhésion cellulaire sur le substrat solide /I097/.Aussi, la séquence Arg-Gly-Asp dans la thrombine est suffisante pour 1' attachement cellulaire quoique cette région a une instable configuration générale changeable et l'atta- chement au substrat de thrombine peut être observé seulement après une exposition de la thrombine à 370C avant son utilise sation comme le substrat. Comme il était mentionné, les carbohydrates peuvent participer dans les attachements grâce aux interactions intercarbohydrates homologue /I,2/ faisant les contacts "proches" (V-3) et par conséquence l'EDTA peut détruire telles interactions initiales /I098/.D'après cela, jindroduis le milieu nouveau synthétique (sans sérum) avec tels carbohydrats particuliers des glycoprotéines qui servent pour un étalement normal de telles ou telles cellules avec des contacts "proches".Dans le gamma des glycoprotéines du sérum, on peut toujours ajouter les séquences "Arg-Gly-Asp" ou leurs semblables) quoique toutes les cellules attachent en présence du sérum à un substrat, c.-á-d. le problème principal est de trouver les glycoprotéines avec les carbohydrates nécessaires à l'étalement (avec les contacts"proches"de telles ou telles cellules).La mystère de l'action du sérum sur la vivacité des cellules était dans les carbohydrates de ses glycoprotéines! Et par conséquence, on peut les doser avec le content et les propriétés déserables indépendamment du sérum nour le milieu cellulaire synthétique Cependant pas tous les carbohydrates cellulaires peuvent participer dans telles interactions parce que, par exemple, le traitement du substrat laminine avec la glyeanase-N ne fait pas l'influence sur l'attachement /I098/. Les intégrines ayant l'état de la diffusion préférablement libre dans la membrane des cellules motiles /1099/, ce qui peut faciliter la trouvaille du substrat immobile, doivent devenir aussi imo- biles /1091/.Grâce à la large vague avancée du lamellipode, telles intégrines immobilisées doivent être rangées (ayec les amas de leurs molécules corréspondantes à chaque individuel contact focal)en rangs pendant la motilité cellulaire. Cela signifie: les rangs des contacts focals correspondent aux rangs des amas des intégrines immobiles confirmant leur formation synchronisée /1100/o Je dois préciser que ce ne soit pas les mêmes amas qui sont crées après la liaison croisée mais ils représentent seulement les zones avec les intégrines immobilisées concentrées. Tels rangs extérieurs des intégrines immobilisées initialement'et aussi les rangs concentriques intérieurs) sont bien visibles, spécialement dans la couche finc de la cellule pendant l'étalement (~I heure après le placage /99/).Les rangs semblables (visibles comme les rangs linairs par la microscopie fluorescente), créés aussi avec les récepteurs diffuses, sont observés pour le récepteur de laminine de 69 kDa (le satellite de l'intégrine important pour l'étalement) grâce à leur interaction dans le complexe commun sur le substrat de la laminine /1089/. 2. Les signal crée comme le résultat de l'interaction initiale l'intégrine-substrat. A. Les interactions initiales entre l'intégrine, taline, vin culine,fibuline. La protéolyse de la taline. La-conséquence importante de l'interaction entre l'intégrine et le substrat, contenant les peptides semblables à "Ar-Gly- -Asp" pendant un attachement initial, est le développement du signal cellulaire: avant l'étalement cellulaire il y a la libération de 1'AA et de DG montrant l'action de la phA2 et de la phC /I095,IIOI/. Une autre preuve que tel signal particulier existe réelement est le fait que la synthèse de la vinculine soit proportionelle à l'étalement /II02,II03/ mais la vinculine apparaît seulement après 90 sécondes dans les contacts focals (après leur création).Justement, ce signal général doit activer la glycosyltransférase pour glycosyler les molécules particulières/1098/ qui sont destinées à être dans le complexe avec le cytosquelette (comme-la syn-, - decane /II04/ et l'intégrine) pour provoquer les interactions intercarbohydrates homologue avec le substrat pour l'étalement (V-3). Ou plus précisement: parce que le signal de molécules de LTB4 est suffisant pour provoquer l'adhésion des leukocytes /554/, l'activation de la glycosyltransférase de la surface cellulaire doit avoir lieu à partir de ce "subsignal". Logiquement, il y a une interaction particulière des molécules de taline situées au site intérieur de la MP avec l'in- tégrine dans le lamellipode avancé. Les molécules de taline sont présentes intensivement le long des marges distales du lamellipode: elles sont concentrées encore comme la série des noeuds aux, bouts de chaque précurseur contenant l'actine-F et entre les précurseurs /II05,II06/. Cette distribution de la taline "préexistée" avant un établissement des contacts focals, n'a pas le changement visible, après la formation des contacts focals /II05/. I1 apparat que la taline fonctionne comme la protéine stabilisant la membrane intérieure dans les sites de "l'arrivée" des filaments de l'actine dans le lamellipode développant (Fig.32) à la MP /II05/ et tel noyau structurel du lamellipode précurseur fournit la carcasse structurelle qui aide à la fixation prédéterminée et I'immob'ilisation des intégrines diffuses aux régions spéciales des bouts du lamellipode avancé déjà avant une interaction avec le site immobile du substrat. Cela signifie que le réseau des dimères de taline concentré "attrape" les molécules d'intégrine déjà dans le lamellipode avançant et balançant (Fig.32- I). La taline est dimérisée aux concentrations fortes /II07/ Justement présentes dans le lamellipode en développement ce qui peut conduire à la liaison croisée des intégrines à cause de la conformation flexible du dimère /II07/. La protéine spéciale (insérine), qui aide à l'insértion des monomères de l'actine entre l'extrémité barbue des filaments de l'actine (le cas ci-dessus) et la membrane /II08/, correspond justement au cas du lamellipode en développement (Fig.32-I). Analogiquement, dans le cas de l'acrosome du spérme du concombre de mer, la protrusion grandit, logiquement, avec les concentrations augmentées des monomères d'actine grâce à leur dissociation du complexe avec la profi- line qui attache le monomère d'actine /1109/. La polymérisation de l'actine retardée peut aider pour suivre l'avancement de la membrane fluidifiée et la restriction pour l'entrée dans le lamellipode avancé pour les protéines avec le poid moléculaire plus fort (que les monomères d'actine ou de son complexe avec la petite profiline /IIIO/) correspond bien à la structure ci-dessus. Le fait, que la cytochalasine B (qui généralement seulement gène une addition des monomères d'actine à l'extrémité barbue) provoque le détachement des filaments de l'actine du bord du lamellipode avancé /IIII/, confirme aussi telle structure. le fait direct expérimental (obtenu par le moyen de la récupération de la fluorescence après photodécoloration) que l'actine marquée s'incorpore à l'extrémité du filament située proche à la MF /III2/, confirme encore cette structure. I1 est démontré (dans les plusieurs systèmes: directement dans les acrosomes du sperme du concombre de meret dans les microvillo- sités du bord brossé intestinal et dans les fibroblastes) que la polymérisation de l'actine ait lieu au bout du procès supposant que les sous-unités de l'actine sont aidées proximalement à la MP /III3~III5/ Justement, la même conclusion était conclue à partir des travaux morphologiques optiques /III6/: la liaison transmembranaire des toutes molécules de la surface (intégrines inclues) doit avoir lieu déjà avant le contact initial. La structure beaucoup plus dense du bord avancé du lamellipode aussi confirme cette structure /III7, II86/. Une absence de la taline à la base de l'ondulation membranaire /II05/ confirme sa protéolyse après le signal du contact focal. Apparemment, pour la stabilisation des intégrines qui restent sur la place après le signal du contact focal /99sI089/ il y a la liaison de la fibuline à l'intégrine aux sites du contact 'du substrat qui a besoin justement du Ca2+ pour sa liaison /III8/.Une autre conséquence de ce signal est l'apparence de la vinculine après 90 sécondes /II0S,II19, II20/ aux contacts focals qui est absente au précurseur du contact focal au début /II05,II20/, De plus, la distribution de la taline et de la vinculine est différente dans la membrane de l'ondulation (en différence avec les plaques de l'ad- hésion!) /1121/. Telle différence dans la distribution (dans la membrane de l'ondulation) doit avoir lieu grâce à la localisation frappante de la vinculine dans les contacts focals à la zone de l'intégrine initiale /II22*II24/ quoique la taline (spécialement après la protéolyse locale après le signal de l'inégrine) peut être encore présente au bout extrème du lamellipode /Fig.32(3Y mais seulement au voisinage avec les microfilaments.Visiblement,la vinculine apparaissant au nouveau aide de guider le développement des microtubules dans la zone derière du bord avancé du lamellipode (aux zones où l'activité de l'ondula- tion a commencé au moins 40-60-90 sec avant -reg. aussi cidessus) parce que les extrémités libres des microtubules (trouvée ici) montrent une accociation préférée avec des sites larges de la vinculine dans cette surface /II22,II23, II25/. De plus, la vinculine doit être présente dans la région de la connection de tels microtubules avec les MF parce que les anticorps contre la vinculine changent la morphologie spatial du sys,tème des MF /II24/. Les ions de Ca doivent participer dans les plusieures parties du signal créé pendant l'attachement de l'intégrine du lamellipode au substrat et une élimination simple du Ca de la solution extérieure doit conduire à la perturbation des interactions suivantes: (I) les interactions carbohydratecarbohydrate accompagnant l'interaction de ces intégrines avec leurs récepteurs provoquant la séparation des phases locale pendant la création des complexes: récepteurEglyco- sphingolipides wphospholipides (II-8); (2) l'activité de la phA2 extérieure (elle-même) /I,2/ avec les conséquences très importantes; (3) le courant du Ca à l'intérieur nécessaire pour les enzymes dépendant de Ca comme la protéase pour la taline dans le lamellipode ou la propagation du signal de la contraction dépendant du Ca pour le cytosquelette cortical le long de la surface membranaire du lamellipode au noyau et aussi incluant l'exécusion de la contraction elle-même. Plusieurs expériments permettent de provoquer exceptionnellement le besion de Ca pour chaque proposition: le fait que seulement pendant la présence des ions du Mg (quand les ions du Ca étaient exclus) il y a l'arrêt de la libération de 1'AA dans la solution (in situ) pendant une action des récepteurs de Concavaline A (Con A) /II26/ (c.-à-d. une activité de la PhA2 extérieure /I,2/ et 1V-I) prouve le besoin du Ca2+ pour l'activité de la phA2 (reg.aussi /II27/) parce que la déhydratation des carbohydrates homologue a lieu avec une aide des ions différents divalents comme le Mg2+ /97,II28 et les ions de Mg (visiblement, avec les petites quantités des ions de Ca) peuvent provoquer l'étalement complet de la cellule /1096/.Le fait,que l'application locale du Ca avec la micropipette fait la formation de la voile seulement près de la pipette /II29/, argumenté pour la déhydratation locale, carbohydrate-carbohydrate conduisant à la déstabilisation locale membranaire (V3B). Les expériences avec le courant soutenu du Ca /î,2/ avea les ions divalents et trivalents larges comme Co,La, (en présence des ions du Ca qui peuvent encore activer la PhA2 montrent que tel courant est indispensable pour l'extension du lamellipode de la neurite (Fig.32) /1129,1130/. les ions de Ba2+, qui n'arrêtent pas tel courant ne stoppe non plus de l'extention de la''neurite /II29/. De plus,tel blocage du courant ne stoppe pas l'adhésion initiale /II30/ (Fig.32). Naturellement, une augmentation de tel courant du Ca mène à la croissance de la neurite plus rapide /II3I/. Pendant la réduction de l'élimination du Ca du milieu extérieur il ya une inhibition de la motilité ou de l'étalement /II32,II33/, ce qui doit confirmer la présence de trois propositions cidessus de l'action du Ca extérieur pendant ces procès compliqués. 3.L'adhésion cellulaire (comme la conséquence de la loi des interactions intercarbohydrate homologue) et la nouvelle loi~Ehysique membranaire en application à la motilité cellulaire. A. La création du chemin du transport polarisé. D'aprés le signal des interactions des intégrines avec les ligands du substrat (comme "RGD") (ce qui peut être même les glycoprotéines du sérum) et aussi une interaction des ligands (même"classiques" comme les facteurs de croissance /II34/ mais appliqués avec un gradient des concentrations en espace) avec leurs récepteurs il y a le développement périodiqué de la machinerie du signal analogue à la machinerie du signal "classique" (IV). Le développement de la machinerie de la motilité doit commencer après l'application nonsymétrique (polarisée) des ligands.Le cas de la motilité spontanée resemble aussi la création du niveau basique des signaux /I,2/ dans la cellule stationnaire.On a établi, au départ de la tran- information de la cellule immobile à la cellule mobile, la réorientation rapide de Golgi et de TOC (microtubule organizing center- le centre de l'organisation des microtubules) vers la direction du gradient de l'agent chimiotactique /II35/. Logiquement, cela doit refléter le déplacement asymétrique du noyau avec, évidemment, le ER par les éléments corticals préexistants qui doivent commencer à s'accumuler comme dans le cas de la mitose (rayon cortical) /Refs.II36/ Logiquement, il y a la connection entre Golgi et MTOC /II35/ et ER.Le développement du transport des vésicules "PKC" et les autres parties de la machinerie du signal (IV) avec l'échange "des produits" entre Golgi (ER) et les zones plus près de l'extér- ieur commence avec les matérieux préexistants0 C.-á-d. il n'y a pas de différence principale entre le chemin des vésicules "PKC" dans le cas du signal cellulaire et dans le cas de la motilité. Mais seulement le chemin des vésicules "PKC" avec la machinerie du signal est beaucoup plus polarisé et visible dans le cas de la motilité(ou de la migration du cône de croissance) et, par exemple, le transport de la protéine G du virus se dirige de Golgi vers le lamellipode par les vésicules/Refs.II35/. B.La nouvelle loi de la déstabilisation et du fondrement local de la membrane aprés l'interaction des carbohy drates homoloçe près de la surface. L'énergie de l'interaction des phospholipides charges de la couche membranaire avec l'eau polaire est forte, évidemment. C.-à-d. si l'on élimine l'eau de la surface, par exemple, avec l'aide des interactions des carbohydrates homologue /1,2/, de plus avec l'aide des ions de Ca /97/, il doit avoir lieu la déstabilisation locale et stable de la membrane (Fig.33A,B) Cette nouvelle propriété membranaire se rélève à la base de la fonte: pendant le signal et la motilité cellulaire, l'avancement du cône de croissance et l'éta- lement, le mouvement de l'amibe et la fusion cellulaire.A partir de ce fait nouveau fondamentalement important, on peut conclure que les interactions intercarbohydrate homogène servent pour ce propose de la déstabilisation membranaire locale et durée On peut conclure d'après les expériences /II37,II38/ que pendant l'étalement il y ait une élimination de l'eau près du substrat. Evidemment, la fluidité membranaire augmente après une application de l'éthanol (moins polaire) à la cellule /il39/ I1 est accepté généralement que les carbohydrates simples se réagissent en solution aqueuse faisant la carcasse semblable au tétraèdre avec les molécules de l'eau où les liaisons entre les molécules des carbohydrates et de l'eau sont semblables aux celles entre les molécules de l'eau, entre elles. I1 apparat même que ces complexes (entre les molécules de solvant et de substance dissouse)soitent ordonnés mieux que ceux de l'eau pure: autrement, les liaisons hydrogènes des interactions: "carbohydrate-ea" et "eau-eau" (en solution aqueuse des carbohydrates) sont même plus nombreuse et/ou plus fortes que celles entre les molécules d'eau (dans l'eau pure) pour le même volume comparable /II40-II43/. Évidemment, la présence des interactions hydrogène les plus fortes des carbohydrates avec le solvant (eau) est dépendante des configurations optimales des carbohydrates: une orientation de leurs groupes hydroxyles (équatorials contre axials) qui forment les liaisons hydrogène avec l'eau où la meilleure interaction est attribuée au plus grand nombre des groupes OH équatorials /II42,II44,II45/. Telle stéréodensité des carbohydrates "compatible avec l'eau" favorise les interactions des carbohydrates avec l'eau. Les molécules de glucose peuvent remplacer l'hexagone des oxygènes d'eau pendant "l'embalage" des molécules d'eau ressemblant la structure de SiO2. I1 y a seulement les petites distorsions:: le remplace ment de l'hexagone avec le côté 2,90 i (H20) par celui avec le côté 2,86 ss (la distance entre les oxygènes adjacents des hydroxyles de glucose-D) /II43/. Mais à cause de la présence des anneaux hydrophobe de glycopyranose ("chaise"), la molécule de carbohydrate doit avoir les propriétés'amphipathiques. Cela signifie que les condit ions- puissznt être créées quand les superpositions proches des structures "chaises" des anneaux de glycopyranose permetteront d'éliminer les molécules entourantes de solvant (eau) qui sont exclues, normalement, de ces interactions. Les liaisons intramoléculaires hydrogène peuvent exister quand les molécules, avec la distance semblable entre les groupes hydroxyle adjacants dans l'anneau de cyclohexane, sont dans la solution CC14 /II46/. Mais il apparaît de. la petite valeur du décolage dans la fréquence que les liaisons intramoléculaires sont très faibles en comparaison avec les liaisons fortes intermoléculaires hydrogène- "dans les systèmes des carbohydrates ayant les liaisons fortes hydrogène" /I,2/. Par conséquence, logiquement,les hydroxyles des carbohydrates sont orientés à l'extérieur des atomes de l'oxygène des molécules superposantes adjacantes des carbohydrates en détruisant (par telles orientations) les liaisons hydrogène. intramoléculaires entre les hydroxyles.(L'élimination semblable des liaisons-H intramoléculaires a lieu dans la solution d'eau /II43/). On peut déduire pour les systèmes biologiques que dans les interactions entre les carbohydrates différents sur la surface des cellules relativement ennormes (ayant le mouvement de Brown lent), les chaînes des oligosacharides peuvent maintenir la position relativement stable en espace (et même dans le cas des molécules de protéines et des lipides sans cellu les). Récemment, on a prouvé plus directement que telles chaînes ont les positions fixées même relativement des molécules des glycoprotéines en solution d'eau pour quelque temps /I147/. En analysant le fait d'une présence des similarités fortes des structures des carbohydrates terminals des glycoprotéine s mêmbranaires avec la structure carbohydrate des glycolipides et, notamment, le fait très spécial que la séquence des carbohydrates distals des protéines est semblable à la séquence des carbohydrates distals des gangliosides et le fait bien concordant que les parties (restantes) proximales des gangliosides sont semblables aux carbohydrates des cérébrosides (ensemble avec les autres faits de la biologie moléculaire cellulaire) /1,2/, j'ai conclu que la meilleure structure optimale (qui satisfait aux données ci-dessus) doit être créée par les structures "chaise" qui doivent avoir les superpositions correspondantes avec les groupes hydroxyles des carbohydrates ayant les liaisons fortes /I,2/. En considérant les conformations des résidus carbohydrates individuels, il est nécessaire de souvenir que seulement les conformations "chaise" soitent normalement préférées (de toutes les conformations possibles: 2 "chaises" et 6 "bateaux") /II48/. Et la tendance des groupes hydroxyles d'occuper les positions équatoriales gagne (logiquement) "le terrain" contre la préférence normale pour la conformation "chaise" pure. Dans le cas du glucose-/-D et du xylose-D, la conformation normale ("chaise") CI reste sans problème (selon leur structure) /II48/. Mais, par exemple, le lactose (4-0-ts-D-galactopyranosyl/ D~glucose) (oufi -D-galactopyranose) "achète" telle tendance de son hydroxyle axial (au C4) d'être plus équatorial par quelque aplatissement de sa conformation CI (qui est le résultat de la distorsion de sa conformation CI normale) comme il était observé expérimentalement par la diffraction des rayons-X /Ref's'.II43/. Par conséquence, on peut voir que les carbohydrates typiques terminals cellulaires /II48a/ auront la conformation CI normale avec(tous!) les groupes équatorials hydrohyles (et les groupes substitutifs) /II44/ (comme N-acetylglucoseamine ou acide sialique) ou la conformation derivée de CI quelque applanie grâce à la tendance du groupe axial hydroxyle restant (selon leur structure "chaise" normale) de devenir équatorial (comme le galactose-, ou l'acetylgalactoseamine-N). Les glycolipides et les glycoprotéines peuvent avoir les résidus carbohydrate identiques ou completement différents ou, comme il est indiqué ci-dessus, ils peuvent avoir les parties de leurs chaînes carbohydrates communes /1149-Il 52/, ce qui est nécessaire, comme j'ai déduit /1,2/, pour leurs interactions s'accordant bein avec leurs distributions spéciales /I,2,II49/. Les disaccharides (justement) sont les parties communes caractéristiques des glycolinides et des glyconroté- ines /II49,II5I-II54/ et ils peuvent être présents meme plusieures fois dans la chaine oligosaccharide /II53, II54, II48a/ soulignant naturellement qu'ils représentent l'unité fonctionelle.De plus, on a démontré tel rôle fonctionnel de ces structures oligosaccharide (poly-N-acetyllactoseamine) dans la compaction de la morula de l'embryon de souris /II53 II55/ à cause des superpositions "chaise" de ces unités carbohydrates /I,2/. Selon leurs oligosaccharides communs pour les glycolipides et les glycoprotéines, les chaînes carbohydrates sont désignées comme type I (contenant Galss(I#3) GlcNAc/, type 2 (contanant Galss(I#4)GlcNAc) et type 3 (contenant Galss(I#3)GalNAc) /II51-II54, II49/. I1 y a la convergence très remarquable de ces données biologiques et chimiaues: les résidus carbohydrates hexagonales comme le lactose et le maltose ont un bon accord avec le treillis de l'eau et comme le résultant, "l'émbalage" des molécules d'eau (dans ces cas) seront très semblables à celui de glucose /II43/. Par conséquence, il doit avoir lieu le reflet de ce fait dans la distribution équatoriale préférable de tous groupes hydroxyles dans leur structure "chaise".De plus, je dois mentionner (dans convergence accrue) que les glycosyltransférases, qui peuvent moduler la présence de telles unités fonctionelles structurelles de ces 3 types, soitent trouvées sur la surface cellulaire (reg. ci-dessous) /II55a/, faisant les conditions favorables pour la modulation des interactions péricellulaires intercarbohydrates qui sont tellement importantes pour la fonction cellulaire /I,2/ et aussi pour la compactiop de la morulalde l'embryon /II56/. Telles interactions homologue intracarbohydrate "chaise" avec les liaisons hydrogène fortes, ltélimination de l'eau intercalée (dans les systèmes biologiques) et l'absence de la possibilité des liaisons H-intramoléculaires sont démontrées pour N-acetyllactoseamine (Gaîj3(I4)GlcNAcI) à la Fig.34 Evidemment, les ions divalents, comme le Ca2+, potentialisent telles interactions /I,2/, justement à cause de leur capacité de faire la déhydratation permettant aux surfaces réageantes faire le contact /97-,II57/. C'était la première structure des interactions carbohydrates (réele) dans la structure fonctionelle, totalement nouvelle, des interactions pendant le signal cellulaire: glyco récepteur#gangliosides#cérébrosides#/I,2/. En I978 il y avait la bizarre proposition très inconcrète de la liaison croisée et de la condensation des "groupes-têtes des gangli osides par la liaison avec les groupes carboxyle de l'acide sialique" /II58/ qui n a pas eu (évidemment) le développement aepuis ce temps. in I984 il W avait 1linvestiga- tion des glucosides octyl (&alpha; et ss) formant les crystaux liquides organiques carbohydrate (ayant la viscosité anormalement forte et l'augmentation de l'opacité dans la solution) et on a proclamé que les résidus carbohydrates se chevauchent comme la bicouche "tête-à-tête" (où les groupes alkyle sont "queus-à-queue" avec les chaînes interdigitales) pour produire les structures avec les liaisons hydrogènes extensives (structures "chaise" pour carbonhydrates &alpha; et ss) dans les couches /II59/. Un autre type des interactions entre les carbohydrates et les protéines, utilisant les propriétés amphopathiques cidessus, était trouvé pour le complexe du glucose et de la protéine du chimiorécepteur de la bactérie où les résidus des acides aminés du coté polaire des chaînes forment les liaisons-H avec les hydroxyles des carbohydrates et l'oxygène et les résidus aromatiques réagissent avec l'anneau de pyranose /II60/. Les propriétés analogues amphirathiques étaient décou- vertes pendant les interactions des déterminants du groupe du sang avec -leur anticorps /II61/. Cette loi découverte, très importante, de telles interactions carbohydrate n'est pas connu jusqu'à aujourd'hui: par exemple, dans la revue compréhensive et volumeuse-récente /41/ concernant la Glycobiologie contemporaire- écrite par le spécialiste d'Oxford (physiste, Chef du groupe spécialisé de Glycobiologie de niveau mondial) il n'y a aucune information pour cette loi quoique ils ont étudié intensivement la structure de l'action des interactions carbohydrate homologue et ils ne leur ont pas trouvé comme telles. Seule information disponible aujourd'hui du fonctionnement des carbohydrates est leur influence sur "les changements de la stabilité des protéines, la vitesse de protéolyse, la stabilité thérmique etc" /41/. Un autre'grand spécialiste mondial dans ce domaine S.-i. Hakomori a écrit dans une de ses récentes revues: "La base physique de l'interaction Lex-Lex (oligosaccharides homologues) n'est pas connues /II55/. C.LLajustement des cairbohydrates des surfaces nour l'in teraction maximale. Dans le cas de la motilité cellulaire, si les carbohyd- rates du substrat coincident avec ceux de la surface cellulaire, la motilité (ou le mouvement de cône de croissance) peut, visiblement avoir lieu avec une très grande vitesse comme dans le cas quand le substrat est les molécules de N-cadhérine /II62/. Dans la majorité des cas, quand il n'y a pas de tels "couplage s" exacts, les glycosyltransférases de la surface doivent faire leur action pour le meilleur ajustement d'après l'interaction des intégrines avec leur substrate.Ce fait d'un ajustement parfait était établi encore en 1971 par S.Roth et collaborateurs /1I63/ quand ils ont démontré la synthèse des molécules des carbohydrates justement homologues aux ceux du substrat (même exotique) par les cellules Logiquement, le mécanisme tellement sélectif, et universel au même temps, est le suivant. I1 y a, avec les signaux (le substrat inclu), une augmentation de l'exocytose des glycosyltransférases différentes, comme sialyltransférase, galacto- syltransférase, fucosyltransférase, N-acetylgalactoseamine transférase /II63-II66/.Et au même temps il y a une augmentation de l'activité des glycosyltransférases sur la surface cellulaire /II65-II67/.Logiquement, justement les transfé- rases, qui ont l'interaction maximale sur la surface cellulaire, sSattachent et font leur action. Mais cela doit être les glycosyltransférases qui ont les deux propriétés: (I) leur Ier substrat, justement, doit être présent sur cette surface et (2)le carbohydrate de la surface complémentaire (un substrat ou une autre cellule) doit attirer le carbohydrate homologue qui justement doit être le 2ème substrat (distal dans la chaîne) de cette glycosyltransférase. Le fait de la liaison de la protéine ZP3 (de la membrane de l'oeuf) par ses oligosaccharides à la galactosyltransférase de la surface de sperme /II69/ coincide avec cette conclusion.Un autre moyen d'adaptation pour l'ajustement est la synthèse des molécules nouvelles (protéines, lipides) avec les carbohydrates /comme les cadhérines et CAM (cell adhesion molecule- molécule d'adhésion cellulaire)/.Par exemple, les axones font la synthèse des molécules de la famille des immu noglobulines CAM pendant la motilité sur un substrat et ne font pas sur un autre substrat /1170/. Cette molécule (atts- chée par la liaison glycosylphosthoînositol) est libéree aussi à l'environnement extracellulaire /II70/, ce qui doit confirmer l'importance de leur interaction par les carbohydrates homologues sur la surface cellulaire. Ce procès doit etre bien répandu pendant l'évolution /II71 avec Refs/. Dans le nombre des cas il n'y a pas de production des molécules de N-CAM justement pendant la migration /II60-II63/, logiquement, pour mieux adapter un accord des carbohydrates de la cellule avec ceux de substrat et il y a l'apparence de N-CAM pendant les états compacts dans l'embryogénèae /II72- II75/ (généralement, les molécules de N-CAM servent à la recognition et l'agrégation des cellules). Les glycoprotéines avec les carbohydrates spécifiques, servant pour l'adhésion, sont synthétisées après une activation des neutrophiles par la peptide chimiotactique /II76/.Les spéciales (polyvalentes) glycoprotéines (on dit-lectines), réagissent avec les carbohydrates identiques de deux cellules /II65/ et font l'adhésion de ces cellules avec le pont plus long (en éliminant les autres interactions génantes) et les interactions plus 'denses, c.-à-d. plus fortes. C'est les interactions intercarbohydrate homologue dans ce cas, comme dans les autres, qui doivent être présentes ici participant dans les liaisons homologues CAM-CAM de ces glycoprotéines /Refs.II78/. D.Lescas particulier d'embryogénèse avec les interactions des cellules avec l'aide des carbohydrates homologues. La création des nombreux "jumaux" de même génotype Aussi le content des carbohydrates sur la surface cellulaire peut être modulé pendant l'embryogénèse. La présence des glycosyltransférases (par exemple) sur la surface des cellules embryonnaires /II63/ était prouvée au stade de la compaction de la morule /II79/. De plus, les molécules de CAM sont les accepteurs pour les glycosyltransférases exocytées à la surface (reg. encore ci-dessus) et elles font le complexe commun /II80/ confirmant le procès de la glycosylation sur la surface cellulaire avec les glycosyltransférases et les carbohydrates particuliers (reg. ci-dessus). La confirmation du caractère mentionné des interactions intercarbohydrates homologues des molécules de cadhérines et de CaM, on peut voir d'après les interactions des liposomes et des surfaces plastiques couvertes par les détérminants carbohydrates identiques /II8I/. les interactions (et aussi les adhésions entre les cellules dans l'embryon /II66/ étaient observées seulement en présence des ions de Ca2+ confirmant clairement la structure des interactions des carbohydrates homologuees démontrée plus haut. Telle structure doit refléter les preuves nombreuse de la participation des carbohydrates de la surface dans les interactions intercellulaires entre les cellules embryonnaires /II82-II85/.De plus, même au stade après la Ière division de l'oeuf, les interactions principales, qui unissent des cellules, sont des interactions entre les carbohydrates /II82/. D'après un établissement de cette nouvelle loi des interactions intercarbohydrates dans l'embryon, je propose les moyens très efficaces pour obtenir un très grand nombre des embryons avec le génotype identique. Pour cela, on doit détruire ces forces intercarbohydrates qui unissent les cellules de l'embryon au stades initials (Ier, 2eme, 3eme, 4eme) avec la solution d'EDTA (EGTA) et, en faisant le développement nouveau de la partie des cellules obtenues, on peut répéter cette procedurè. (Evidemment. on peut faire in vitro ces divi sions initiales). De plus, on peut obtenir les enfants (chez les animaux inclus )-3umeaux directement: pour cela on doit introduire directement dans le vagin la solution d'RDTA (RAGUA) d'après ère le moment de la I division cellulaire /1186/. les problèmes de la multiplication.ultrarapide du meilleur bétail et de la démographie doivent être résolus facilement avec ce moyen révolutionnaire. E.Les interactions des chalnes homologues des immunoglo bulines et le procédé inconnu de l'action des récepteurs I1 est bien connu que les immunoglobulines G ont les 2 chaînes carbohydrate presque identiques dans leur fragment Fc /II60/. Ces chaînes ferment l'accès à une grande plaque hydrophobe dans le fragment Fc qui est "gardée" par la petite protéine associée avec l'IgG /II87/. Après une interaction de l'antigène avec les anticorps et le changement de conformation des derniers (structure "scorpion "), cette petite pro téine dissocie /II88sII89,II87/ et c'est le changement de la conformation des carbohydrates qui provoque, enfin, cette dissociation /1188,1189/ conduisant à la libération de place pour le fragment CIq du complément (avec l'activation) /II87/. Après cette nouvelle structure, on peut éclairsir encore le rôle des carbohydrates. La force des interactions de deux chaînes carbohydrates semblables des molécules IgG (situant dans le fragment Fc) représente l'interaction intercarbohydrate homologue qui doit être bien affaiblie après le changement de conformation (pendant le déplacement des chaînes) après l'interaction des anticorps avec l'antigène.Le fait très bizarre de l'activation du complément par l'IgG agrégé (par exemple, avec la chaleur)(par les interactions des fragments Fc) confirme clairement cette structure: cette agrégation a lieu grâce aux interactions intercarbohydrate analogue entre les molécules d'IgG différentes et elle conduit a la même dissociation de la petite protéine menant à la même activation du complément! Évidémment, l'utilisation des sucressemblables à ceux de l'IgG doit prévenir l'activation du complément nonspécifique. Dë plus cette structure de l'activation du complément après une interaction des antigènes (ligands!) avec les anticorps doit conduire à la structure importante de l'activation des récepteurs membranaires et explique, par exemple, le fait aussi bizarre de la provocation de la mitose des cellules des animaux par les lectines des plants exotiques. Le fait que l'IgG peuve être aussi le récepteur membranaire, aide à l'établissement de cette structure. Je déduis que l'interaction du ligand avec le récepteur conduisse (après le changement de conformation du récepteur) à la dissociation de petites protéines (qui se situent sur le récepteur) provoquant la changement de conformation du récepteur profond (avec un nouveau état fixé) pour la création du réseau des carbohydrates du signal des glycoprotéines et des glycolipides /I,2/ à cause de la perte de la petite protéine. Évidemment, la dissociation du ligand (au temps du début du signal réversible) conduit au rétablissement réversible du statu quo permettant à la petite protéine de prendre sa place, Cela doit être la raison pouquoi les lectines exotiques (qui doivent déclencher analogiquement la dis sociation de cette petite protéine) peuvent provoquer la mitose. De plus, cette structure est finement confirmée d'après ma nouvelle structure de l'exocytose (VI). Naturellement la dysfonction (comme autoactivation) de la fonctionement nor- . mal des récepteurs à cause de la dissociation spontané de cette petite protéine peut être évitée après une application de ces petites protéines des récepteurs particuliers. F.La spécificité stricte des bactéries, des protozoaires et des virus pour les espéces est detérminée par l'ajuste ment de leurs carbohydrates de surface. La nouvelle loi de l'adhésion cellulaire par les forces intercarbohydrates homologues permet à établir la raison de telle spécificité stricte et étonnant des bactéries, des virus et des protozoaires.Parmi molécules, qui coma sent la structure de la membrane, c'est les carbohydrates qui ont la plus large diversité entre les espèces. Par exemple, même chez les primates,il y a la différence entre les glycosphingo lipides et des glycoprotéines concernant les terminales: les terminals Gal;I-3Gal sont absent chez les singes de vieux monde, les apes et l'Homo Sapius mais ils sont présents chez les autres mammifères /II90/.Je conclus que cette forte diversité des chaînes des carbohydrates présents sur la surface des cellules des organismes justement détermine cette étonnant spécificité des bactéries,des protozoaires et des virus envers leur hôte malgré la similarité souvent étonnant we leurs protéines et lipides. On sait que les carbohydrates servent pour l'adhésion des bactéries, des virus et des protozoains: par exemple, les séries lacto et ganglio sont les récepteurs d'adhésion pour les bactéries de gonorrhea et les oligosaccharides contenant ces sucres inhibent l'adhésion de ces bactéries aux cellules d'homme /II9I/. Dans le cas des parasites protozoaires de leischmania, leptomonas et tripanosoma, les oligosaccharides de la surface jouent le rôle important pour l'attachement à leur hôte /Refs. II92, II92-II97/. De plus les cart-ohydretes font l'inhibition de l'attachement des parasites et de leurs glycoprotéines, responsables pour un attachement, aux cellules de leur hôte /II92,II97,II98/. On a trouvé encore le même sentier de la glycosylation alternative chez les parasites et aussi chez les mammifères /II99/ et les glycoprotéines (réageant avec la lectine ricine) sont localisées exclusivement sur (ou près) la zone de l'attachement du parasite /II98/. Les adhésines bactériennes (ayant les affinités polyvalentes spécifiques pour les carbohydrates) servent aussi pour l'adhésion des bactéries (quoique!) avec l'aide des sités protéiniques affins aux carbohydrates particuliers: elles font le pont entre les glycoprotéines de la surface cellulaire de l'hôte et les carbohydrates de la surface bactérienne /I200,I20I/ en approchant les carbohydrates homologues. On voit clairement qué même les variations faibles dans la séquence des carbohydrates de la surface cellulaire de l'hôte provoquent l'adhésion différente des bactéries et les conséquences biologiques (l'inféction) différentes /Refs.1202/ et les pathogènes comme les virus, les bactéries ou les protozoaires ~ayant la spécificité pour les oligosaccharides diffé- rentes, ont le tropisme différent envers les espèces différentes /Refs.I202/ Évidemment, on peut utiliser contre les bactéries et les autres parasites ces chaînes des carbohydrates.Aussi, on peut utilise les ions de fluor contre les bactéries pathogènes dans l'organisme (et contre les autres parasites) par l'application avec l'eau potable ou le répas. Ces ions (en concentration 0,75-I,-5 mg/l dans l'eau minérale) font diminuer la carie et peuvent éliminer la contamination par les staphilocoques (non publié). G.La fusion entre les cellules cet, par conséquence, la pé- nétration des virus dans la cellule sont déterminées par l'accord des sucres. La structure principal de la pénétration des toxines et de l'endocytose. La loi de la déstabilisation membranaire d'après l'interaction des carbohydrates près de la surface conduisant à la déhydratation locale et permanente, permet à expliquer l'origine de la fusion membranaire comme la fusion des myoblastes. Il est établi que la quantité des cadhérines des myoblastes augmente avant la fusion /1203/. Les cadhérines,représentant a sur perfamille des glycoprotéines de la surface, participent à l'adhésion intercellulaire /I204/.Evidemment, d'après l'in téraction des carbohydrates homologues des cadhérines (glycoprotéines) des myoblastes (avec la densité augmentée), il doit avoir lieu la déstabilisation des membranes prés de leur contact et la fusion facilitée. les anticorps contre les Qadhé- rines bloquement,telle fusion /I203/. Evidemment, cette fusion dépend aussi des ions de Ca2+ /I204,I205/. Et par conséquence, on a pu voir pendant le procès de. la fusion des myoblastes (après 1'approchement étroit des MF correspondantes justement pendant la fusion) la création des projections discrètes des membranes des myotubes /I206/ ce qui doit caractériser la déstabilisation et la fonte locale de facto des membranes des myoblastes au moment de la fusion. Les virus enveloppés peuvent entrer dans la cellule par la fusion directe au pH neutre ou par l'endocytose /I207/. De plus, le même virus peut entrer dans la cellule par la fusion directe avec la MP ou par l'endocytose dépendant du type de cellule ou de la souche du virus /I208,Refs.I207/. Et glycoprotéines virales responsables pour la fusion peuvent provoquer la fusion des cellules transféctées avec ces protéines (souvent avec la diminution du pH extérieur quoique dans les autres cas, au contraire, il n'y a plus de la fusion avec la diminution du pH) /Refs.I207,I209/. Naturellement, la fusion directe' est provoquée par l'interaction homologue des carbohydrates des protéines du virus avec ceux de la cellule faisant la déhydratation locale des membranes comme dans le cas de la fusion des myoblastes Mais si cette déstabilisation n'est pas suffisante pour faire la' fusion directe "in situ" il y aura la zone des glycoprotéine s membranaires uni par les glycoprotéines du virus incluant les protéines- récepteurs (quand les virus servent comme des lectines provoquant le fort changement de conformation- reg.ci-dessus). Evidemment, dans ,ce cås-là il aura la séparation des phases avec le réseau des glycoprotéines et des glycolipides correspondants /I,2/.Et les microagrégates des virus avec les complexes des glycolipides et des glycoprotéines feront l'agrégation déstabilisante et "fondrante" sur la MP en créant le "puits" concave avec ltendocytose consécutive. Logiquement, la situation semblable de l'adhésion et de la pénétration des virus a lieu même avec les virus sans enveloppe (seulement, les carbohydrates doivent se trouver sur les protéines de la capsule déjà'extérieure)0 Par exemple, les nombreux virus importants de la famille "Picornvidae" (avec les virus polio, hépatitis A,rhinovirus) n'ont pas d'enveloppe. Mais le nombre des données /I2IO/ font convaincre qu'ils ont la structure de l'adhésion et de la pénétration semblable. Les virus ont la pénétration directe à l'endroit de leur interaction avec les glycoprotéines de MP ou ils sont exocytés. Les ions divalents (Ca ou Mg) sont nécessaires (généralement) pour l'adhésion. Les accepteurs de ces virus sur la cellule hôte sont les molécules des glycoprotéines participant aux interactions intercarbohydrates homologues (reg. ci-dessus): ICAM-I. Les molécules (VP4) de la capsule sont conjugées avec l'acide myristique et justement le même acide gras sert aux protéines cytoplasmiques d'être introduites à la couche intérieur de la MP (modulée par la couche extérieure ! /I,2/) près de ltendroit de l'action du signal /I,2/.Seulement #I% des ARN viral peuvent pénétrer et être "déstabilisés" productivement dans le cas de la pénétration directe (parce que il n'y a pas de fusion membranaire et la pénétration dirécte à travers de la membrane déstabilisée) avec l'aide seulement de l'acide myristique, quand la protéine VP-4 avec l'aideide l'acide myristique doit "tenir" le reste de la capsule à l'intérieur mais pas laisser à l'extérieur, ce qui est plus que 90% des cas. Les nouveaux virions quittent la cellule par sa lyse "parce que" il nty- a pas des glycoprotéines à la surface intérieure de la membrane pour faire le même chemin en retour. Toutes ces argumentations font convaincre de telle adhésion et pénétration des virus sans enveloppe et on est très loin devoir les autres. Mais de plus, universalisant cette structure révolutiànairé de la pénétration à travers de la MP, on peut déduire aussi la structure de la pénétration des toxines bactériennes à travers de la MP. Il est établi que les récepteurs connus des toxines bactériennes sur l'hôte soitent les carbohydrates spécifiques (ou glycoprotéines) /12II,I2I2/. Et quoique dans le cas des toxines bactériennes, c'est les sites protéiques actifs polyvalents des toxines ("vraie léctines") qui réagissent avecles carbohydrates de la MP des cellules eucaryotes (comme dans le cas des adhésines bactériennes) pour faire unir (déclenchant le signal) et se réagir ces carbohydrates homologues (entre eux), l'effet de la déhydratation de la MP est le même. Et encore, on a ici les cas mixtes: (I) il y a les toxines qui pénétrent directement à travers de la MP (choléra, pértussis) et (2) il y a les toxines qui pénétrent par l'endocytose (diphtérie, shiga) /I2I3,I2I4/. Logiquement, comme dans le cas des virus, cela doit refléter la différence de la déstabilisation de la MF d'après l'attachement de ces toxines à la MP. La structure des toxines choléra et pértussis correspond bien à telle pénétration. Les cinq sous-unités B font l'oli- gomère circulaire qui réagit en unifiant (déclenchant le signal) avec les oligosaccharides de la MP et la sous-unité A ("enzymatique"), pénétrant à l'intérieur, se trouve au centre /I2I2/: à la zone du fondrement maximal de la MP. La structure de la pénétration de la toxine diphtérie n' a pas de telle avantage /1214/. La question de la "choix" cellulaire de faire la fusion directe (ce qui resemble la création des "puits découverts" /I2I5/) ou faire créer un agrégat large /exactement comme l'amas ("patch") sans la participation encore du cytosquelette dans le procès de "capping",( qui doit être endocyté avec l'aide des "puits récouverts", ne dépend que du profondeur de la déstabilisation membranaire ce qui dépend de l'intensité et de la largeur des interactions intercarbohydrate homogènes. La CK-II dans le 2eme cas /exitée justement près du site de l'activation du récepteur immobile tFigs.35,26)/ fait l'activation de la pompe H+ dans ce "puits" qui doit se trouver à le voisine, ce qui precède le transport "classique" de l'en- docytosevers les endosomes et liposomes /I216/. Évidemment, ces "vésicules de l'endocytose" (avec le virus) "attendent" la phase appropriée de la contraction du cytosquelette certical des vésicules "PKC" (Figs. 35, 18, 19) pour se faire transporter à l'intérieur "sur le pic de la vague". Le fait que les molécules' de l'actinine- font une interaction avec la clathrine qui, encore, s'augmente avec les ions de Ca /1217/, confirme cette structure. Dans le cas du virus (logiquement), l'acidification du milieu à l'intérieur des vésicules "ex-recouvertes" conduit au changement de conformation des protéines virales et l'augmentation des superpositions des carbohydrates homologues entre le virus et la vésicule ce qui mène à la déstabilisation des membranes et la fusion à intérieur de la cellule déjà. 4. Construction du lamellipode (ou de la zone du signal principal des ligands) avec la membrane déstabilisée par la déhydratation locale sont les causes du flux membranaire en avance. D'après cette loi de la déstabilisation membranaire, on peut naturellement comprendre la cause principale de l'avancement de la cellule (Fig.32).La raison de l'application de tels prolongements cellulaires en direction de la motilité doit être la pression exercée sur une extrémité distale de la MF déstabilisée (lamellipode avancé) d'après une interaction des carbohydrates du substrat avec ceux de la MP (V-3B) transformés pour la meilleure interaction par les glycosyltransférases (V-3C). Et en fait, la pression (près du substrat, en avance du lamellipode) était enrégistrée expériementalement /1218,1219/. Telle pression (et par conséquence l'avancement de la membrane avec ses lipides et ses glycoprotéines doit avoir lieu périodiquement avec le mouvement en avance correspondant aux protéines intactes et aux lipides) était aussi enrégistré /I220-I222/.Avec une augmentation de la contractilité cellulaire (avec nicodazole) il y a une augmentation des forces exercées par les fibroblastes mobiles /1223/. I1 y a la corrélation entre la formation du cytosquelette cortical (les arcs de l'actine) et de l'activité protractile /I224/ Les arcs representent des régions du fourreau dorsal où les mi crofilaments sont regroupés et concentrés /I224/ (Fig.35). Avec les microfilaments de la partie ventrale (près du substrat) situés parallèlement au substrat (en faisceaux) /I225,I226/, les arcs se font un cercle qui, justement, doit exercer cette pression pendant sa contraction "avec" la plus universelle nouvelle loi musculaire (V-9) étant, de facto, demi-sphérique près du lamellipode avancé /I227/.Le fait que la translocation du cône de croissance est détérminée par le lamellipode avec les ondulations mais pas par le filopode /I228/ confirme bien cette conclusion. De plus il y a la coincidence (servant bien à la fonction de la contraction effective) entre la location des faisceaux circulaires des MF avec les sites de l'attachement au substrat /I229/. Ces sites de l'attachement doivent représenter, en particulier, les groupes des intégrines situés en rangs à partir du lamellipode /I230,I23I/ (Fige36) reflétant la synchronisation et la cinétique de la formation des contacts avec le substrat ,/1230/. Les zones /où le substrat (servant à l'étalement!) est accessible de l'extérieur (par les anticorps)/ sont aussi semblables aux cabales d'actine de la partie ventrale et aussi les zones du substrat (logiquement) coincident avec les traces de la projection des MF corticals sur le substrat /I232,I229/. Dans ces contacts "proches" /281,1075,1076/, les zones de l'attachement droit avec le substrat "quadrillent" les figures avec les 4 angles et, justement, les molécules des carbohydrates identiques (entre la cellule et le substrat) doivent faire leurs interactions déhydratantes où la MP de la cellule doit se trouver uniformément opposé à 20-40 nm du substrat /28I,1075,1076/c Evidemment, cette justesse remarquable des zones de la pression effective avec l'aide du substrat facilite la pression exercée pendant la contraction musculaire. On voit que le mouvement en avance de l'amibe sur le substrat coincide avec la série des contractions du cercle musculaire. Mais quand l'amibe est suspendue sur l'eau, cette série des contractions (avec le comportement très différent déjà) ne peut pas propulser l'amibe en avance /I233/ (en accord avec la 3eme loi de Newton). Comme il était mentionné, les mêmes ligands peuvent provoquer la motilité cellulaire et aussi le signal (hormonal) (V). Cela signifie (comme aussi d'après la création des complexes intercarbohydrates homologues dans les deux cas /1,2/) que dans un cas comme dans un autre cas il y aura la création des zones sur la MP avec l'ondulation intensive (qui s'appelé le lamellipode dans le cas de la motilité où de l'avancement du cône). Par exemple, après une ápplication "homogène" du ligand hormonal PDGF il y a la création des plusieures ondulations avec l'organisation du cytosquelette /I234/. Avec le gradient des concentrations, cette molécule fait son action comme un agent chimiotactique avec la seule ondulation /I220/.Justement, dans telle zone fondrée (ce qui facilite la fusion et le bourgeonnement sans les molécules de clathrine), les vésicules "PKC" doivent arriver /notamment, qui s'ouvrent à l'intérieur et qui apportent les molécules comme l'actine, la tubuline, la gelsoline dans le cytoplasme près de la MP (Fig. 19)/, ce qui était enregistré après l'action de l'hor- mone -(vasopressine) /I235/. À la base de la microvillosité il y a la fusion intensive des vésicules /I235,I236/ qui augmente après une applîcation de l'hormone (d'après le niveau de base) /I236/. Tels procès (avec la même position de la fusion) sont trouvés /Refs.I235/.En réalité, tout l'appareil de la machinerie des vésicules "PKC" doit être récréé après l'action du signal: la création du lamellipode (avec les microvillosités) ou la réorganisation du cytosquelette avec l'apparition des molécules de fimbrine et de l'actinine-l, de l'ezrine (4.I) et de fodrine dans le lamellipode et avec la phosphorylation particulière, la réorganisation de la myosine avec l'échantillon strié /I237/. Mais il y a la preuve très élégante de la création de la zone ressemblante les ondulations (lamellipode) pendant l'action classique du signal. C'est la palmature de la création de MP fondue avec le cytosquelette cortical. Par conséquence, la ressemblance entre cette palmature (web) terminale et le lamellipode est frappante. Ces prolongements de la palmature terminale ressemblent les ondulations cytoplasmatiqueståuste- ment après la constriction (Fig.32) et les chaînes de l'actine à l'intérieur de ces ondulations sont aussi très semblables /I238-I24O/.Laprésence du faisceau des microfilaments circonvoisins dans le bord brossé ressemble le premier cercle des MF corticals du lamellipode.De plus, la région de la -palmature (web) terminale est la région active ou les vésicules arrivent et partent en fusant avec la MP /I240/, comme pendant la motilité cellulaire et justement comme pendant le transport des vésicules "FKa" ($IV, Figs. 20, 21). Le fait de l'atta- chement (souvent) des cellules du bord brossé aux positions apicales aux jonctions d'adhésion /I24I/ montre aussi la présence du procès récent de la constriction. Encore, une "exception" foudroyante montre leur similarité: la taline est clairement absente dans les contacts focals (le premier contact formé de la cellule avec le substrat et les MF pendant la motilité) (Fig.32-3). Mais justement la taline est aussi exceptionnellement absente dans le contact des câbles de l'actine avec la MP dans le cas du bord brossé /I242,I243/. La vinculine est présente dans les deux cas de l'adhésion (Fig.32) /I242, I243/. Mais les autres adhésions des câbles des MFs avec le substrate (adhésions focales) contient les molécules de taline /1243/. Les protéines présentes dans cet "organe" (bord brossé) sont souvent aussi "bizarrement" exce ptionnelles et se trouvent souvent dans le lamellipode, ce qui leur dévoile comme les participants de la constriction de la machinerie des vésicules "PKC". La fimbrine est la protéine de la palmature (web) terminale et des ondulations /1238/. La forme spéciale de la fodrine (spectrine): TW 260/240, rétrouvée seulement dans le bord brossé, a les propriétés particulières et n'a pas, par exemple, d'affinité pour l'ankyrine /I238/. La protéine par ticulère ezrine (de la famille de protéines 4.1) se trouve dans la palmature (web) terminale dans la partie avec les microvillosités /Refs.I239 et aussi dans les villosités (des ondonations) d'après le signal du ligand /I237 avec les Refs./. De plus, les molécules "mystérieuses" de la myosine I sont trouvées seulement dans la membrane de la palmature terminale /1237,1238/ et dans les régions associées avec l'activité de la motilité (lamellipode, cône de croissance) /I244 avec Refs: I245/. Logiquement, cette forme de la myosine, se trouvant comme la protéine périphérique de la couche intérieure de la MF et faisant l'interaction avec l'actine /1248,, I249, I245/, attache les fibres initiales de l'actine dans les prolongements de la palmature -terminale à la MF ayant seulement la fonction structurelle et la myosine I (normalement) ne participe pas dans la transformation de l'énergie chimique en énergie mécanique.Un attachement-de la protéine ponticuline de la MP-au *filaments de- l'actine V1246/ est le cas analogue. D'après ces données, on peut voir qu'il y doit être au moins deux familles des protéines auxiliaires du cytosquelette /I247, I248/: (I) protéines participant au stade initial de la création de la machinerie "PKC" (par chance, se fixant à la structure-du bord brossé) et se trouvant à la "réception" des vésicules; (2) protéines participant à la translocation des vésicules- "FKC" avec le cytosquelette cortical en utilisant la nouvelle loi de la contraction musculaire (V-9). Les types des tissus (sauf, principalement, le bord brossé et, évidemment, les érythrocytes où il nty a pas de telle machinerie complète) doivent avoir l'importance secondaire et les déterminations par les déterminants antigéniques, leur accessibilité et la sensibilité de la détermination ne sont pas parfaites. 5. Le début du dévelloppement du réseau des faisceaux radials de l'actine et du cytosquelette cortical commence par le lamellipode. Après la développement des protractions initiales ( et établies) avec les ficelles radiales de l'actine (Fig.32) qui doivent être uni /comme dans le cas de la palmature (web) terminale/ par les protéines spéciales pour la formation des faisceaux de filaments de l'actine comme la fimbrine et la villine /I239/ et qui doivent être attachées à la MP avec les protéines comme le complexe IIOkDa,calmoduline (myosine I) /1238,1239/, le développement du réseau du cytosquelette à partir du lamellipode doit avoir lieu (ou, en évidence, à partir du récepteur immobile principal dans le cas du signal). Ce cytosquelette contient les faisceaux des MF radials et les faisceaux corticals avec les MF circonférentiels. Le cytosquelette radial est construit principalement des faisceaux de l'actine qui ont la longueur du noyau au lamel- lipode avancé /I249/, qui ont la périodicité sur toute la longueur à cause des protéines qui leur modifient /I250/ en accord avec le développement fonctionnel démontré à la Fig.32. En particulier, les molécules de l'actinine- s'attachent périodiquement sur les faisceaux radials des cellules après l'étalement complet /1251/. Les molécules de l'actinine-&alpha; d'après le signal de l'intégrine (et près de ces molécules /1252/) commencent 'à intercaler entre la MP et l'actine avec l'aide des molécules des DG /1253,1254/. Le complexe supramoléculaire entre les molécules de l'actinine- et l'actine est formé à la présence des molécules de DG (et des l'acide gras palmitique) in vitro ayant les caractéristiques semblables aux celles des faisceaux des MF in vivo.Le même complexe MP-DG-actinine-M-actine peut être trouvé et pendant l'action du signal classique /I253,I254/. l'actinine-èt la taline (qui est présente pendant le contact de l'intégrine au début- Fig.32) font aider à l'attachement de la vinculine (protéine-clé des adhésions) qui s'attache à la couche intérieure de la MP avec l'aide du résidu acylique /I255/ et la vinculine peut même rester sur la MP sans les molécules d'actine et d'actinine- /I256/. Le fait, que la mutation avec la perte de l'acylation de la vinculine mène à la transformation cellulaire /I255,I257/ confirme tel mécanisme et son importance. De plus, la vinculine peut s'agréger avec la coopérativité positive /I258, I257/ faisant les grands amas in situ sur la MP /1259, 1260, II25/. Ces contacts directs avec la taline /I258,I26I,I262/ et l'actinine-&alpha; /I263,I264/ et les contacts directs avec l'actine P (mais pas l'actine G) /1122,1245/ et aussi son agrégation indépendante /I257/ donnent à la vinculine la place centrale dans les adhésions cellulaires (Figs. 37-39), ce qui transforme la vinculine en "colle" dans la couche lipidique pour faire la meilleure connection entre les intégrines et les faisceaux de l'actine /I260/. Après la protéolyse de la taline dans le contact focal (Fig.32), ces contacts situés au long de la "courbe" parallèle au bord extérieur du lamellipode de la cellule (rang N I- Fig. 36) continuent de fonctionner (Fig.37) en attachant les ME aux intégrines /II22, 28I, I075, I076/. Mais les autres "rangs" des "contacts" focals n'ont par leur fonction de la confection des ME aux intégrines à cause, logiquement, de la phosphorylation precédentè des intégrines /I265/ qui conservent bien leur tyrosine phosphorylable dans l'évolution /I266/. Logiquement, la différence-entre le Ier "rang" et les "rangs" postérieurs est suivante: le cytosquelette cortical correspondant au Ier rang des intégrines est la plus récemment ère crée et n'a pas fait encore sa I contraction, mais les cy- tosquelettes corticals de tous les rangs suivivants ont fait déjà leur contraction et ils sont récréé9 (!) (V-9). Logiquement, pendant telle activation d'après la "vague" contractile (V-IO), la tyrosine kinase fait la phosphorylation des intégrines conduisant à l'éclipse des nouveaux contacts focals /I267/. Le fait de l'activation rapide de la tyrosine kinase pp60e-srC par les protooncogènes tumorals (qui activent la FKC) /1268,1269/ confirme bien telle thèse. Comme le résultat de telle vague de la contraction (et de la phosphorylation de l'intégrine), les molécules de l'acti nine- et de la vinculine doivent rester sur place en contact avec les faisceaux radials d'actine (reg. ci-dessus), mais sans contact avec les intégrines, ce qui prouve encore la po sition claire des câbles d'actines au long du substrat (reg. aussi /I24I, I270/). La colocalisation des petits amas de la vinculine avec les filaments d'actine après l'étalement /I27I, I272/ et leur bien meilleure visibilité après l'application de la cytochalasine B /I272/ (qui, évidemment, ne leur produit pas, mais c'est le problème de l'accesibilité) confirme cette conclusion. le fait de la proportionalité de la synthèse de la vinculine à l'étalement cellulaire /I273/ et à la motilité cellulaire /I274,I275/ confirme le rôle-cld de la vinculine. Tel rôle analogue de la vinculine /I276/ et de la taline /I277/ est confirmé et d'après le signal classique. Logiquement, c'est les amas des molécules de vinculine qui provoquent le début de la création des microtubules. L'interac- tion des molécules de tubuline avec l'actine in situ, in vivo est bien prouvée /1259,1125/. De plus, on a démontré que la vinculine apparaisse plus tôt que l'extrémité périphérique des MT /II25/. Le temps de l'apparition des molécules de vinculine et des extrémités des MT coincide avec le temps quand les fibres de l'actine corticale commencent à apparaître /I227/. Mais la structure de ce type des MF (corticals) est basée sur le contact de la vinculine avec l'actinine- et sans taline -Pig.39- (c.-à-d. la base du contact focal- Fig.37). C.-à-d. la partie extrème des microtubules est aussi basée sur le même type de contacts focals (V-7). Et logiquement, ils ont les mêmes noyau des agrégats avec la vinculine in situ (!), ce qui explique bien que la partie des MT soit trouvée parallèle aux fibres des MT corticals au bord avancé de la cellule /I227/, mais, logiquement, les MT sont moins bien resolus dans les régions intérieures de la cellule. 6. L'assemblage des protéines du cytosquelette cortical La structure périodique des microfilaments corticals. La création des contacts focals avec les amas de la vinculine doit provoquer aussi la création de l'adhésion (à partir des amas se trouvant à la frontière avec le substrat) semblable à celle du bord brossé (reg. ci-dessus) avec les cadhérines à l'extérieur de la cellule (avec l'aide des molécules de catenines) /I243,I278/. Cette structure d'adhésion intracellulaire n'est pas très stable: après une élimination des ions de Ca (et Mg) à l'extérieur (ce qui doit détruire les interactions intercarbohydrates homologue d'adhésion- IV-3), les filaments d'actine et même les molécules de la vinculine du bord brossé sont détachés de la MP /I24I/, ce qui signifie clairement que les interactions des cadhérines (extracellu- laires) étaient à l'origine basique de leur établissement, parce que seulement les interactions extérieures des cadhérines étaient détruites. Mais ces interactions avec une aide de la récognition homologue sucre-sucre sur les mêmes cellules déjà doivent gouverner l'établissement de leur réseau et, par conséquence, de leurs contacts au-dessous de la MP et l'établissement du réseau des molécules du cytosquelette initial près de la MP (Fig.39). Le même type de la mosan'que des molécules à partir des interactions intercarbohydraté extracellulaires a lieu pour la structure de la MP près de la synapse (III). La transféction simple des molécules de l'uvomoruline provoque la réorganisation du cytosquelette membranaire ! /I278/. C'était justement les molécules du cytosquelette avec la fodrine et la catenine et les molécules de Na+/k+ATPase (Fig.39) qui étaient rédistribuées avec la cadhérine /I278/. Les interactions intercarbohydrates entre les cadhérines des molécules de l'adhésion qui font les interactions avec la fodrine (logiquement, par les protéines spécialisées qui attachent la fodrine à la MP: la protéine 4.1 et l'ankyrine) /I279/ doivent être très essentielles pour l'établissement du réseau sérré du cytosquelette cortical. Et aussi la cadhérine sans la queue cytoplasmique (c.-à-d. sans une interaction finale avec la vinculine) ne fait pas ces actions /1278/, ce qui signifie que à partir de la vinculine il y a l'attachement de la ceinture des microfilaments de l'ae tine. Telles interactions ("au-dessus") doivent être accompagnées par l'assemblage des fibres corticals d l'actine à partir des molécules de l'actinine- (se trouvant à la même frontière que et la vinculine avec le substrat qui déclenche les interactions carbohydrates) Le fait, que justement à partir du début du développement des faisceaux des MF (après le stade initial du développement des faisceaux radials) il y a la diminution du nombre des MF /I280/, clairement signifie qu'ils commencent à s'unir (par les molécules de la filamine et de l'actinine-&alpha;) d'un côté et à se séparer (avec la distance fixée) (comme les faisceaux plus larges) par les molécules de la fodrine (Fig.37). On peut distinguer les 2 zones périodiques sur la longueur des microfilaments circonférentiels corticals. Dans la 1ère zone il y a les corps denses avec l'actinine-; /I28I-I284/, la fimbrine /I28I,I284/, la vinculine /I262,I286,I287/ et la dystrophine /I288/ où les molécules de ltactinine-; et de la vinculine forment l'adhésion du cytosquelette circonfdrentiel cortical avec la MP (Fig.39). Ces protéines créent la zone Z (zone I) analogue à la ligne Z des cellules des muscles striés et cardiaques /Refs.I28I I282/ qui ont aussi le cytosquelette cortical avec les contractions correspondant à la "vague" Ca-K(Ca) (#IV). Les molécules de la fodrine font la connection avec la distance précise de ces lignes Z de deux faisceaux des actines (Fig.39). Ces contacts ont lieu grâce aux interactions directes entre la fodrine et l'actine /I289,I248,I240/ et aussi les molécules de '4.1 de l'adducine aident à ces contacts /I289,I248, 1240, I247/. Logiquement, la même fonction de tenir la distance fixée entre les filaments de l'actine existe pour 'ces molécules de la fodrine aux muscles striés (contraction musculaire spécialisée): la fodrine (avec l'ankyrine) est présente à la région adjacente à la ligne Z /I290/. Les molécules de l'adhésion de la MP et les protéines intégrales comme Na/K ATFase s'attachent aux molécules de 4.1 et de l'ankyrine /1248, I240, I279, I289, I291/, et leurs interactions intercarbohydrate, permettent à faire un réseau bien défini en espace des molécules du cytosquelette. Aussi les molécules de dystrophine, se trouvant dans la zone près de la ligne Z /I288/, doivent servir comme les ressorts pendant la contraction (IV-8), servant comme les colonnes verticales de la gutta-percha entre la MP et le plan (surface) horisontal crée par le cytosquelette cortical dans les cellules des cellules-cheveux de l'oreille /I292/. Les molécules de la myosine, de la tropomyosine et du caldesmone se font la 2eme bande périodique des microfilaments corticals (Fig.37). La quantité de l'actinine- varie entre les jonctions différentes d'adhésion /I243/ et la quantité augmentée de l'actinine- dans les fibres radials (à cause de la quantité augmentée des molécules de DG- "récepteurs" de l'actinine-; -reg.ci-dessus) doit empêcher aux molécules de tropomyosine de contacter avec ces fibres /I293,I294/. Logiquement en cas des fibres corticals, l'échantillon des molécules de l1actinine- doit permettre telle interaction de la tropomyosine avec l'actine. La tropomyosine préserve l'interaction actine-myosine avec l'activation de l'ATPase en alignant les molécules d'actine.Les molécules de caldesmone cimentent les interactions entre l'actine, la myosine et la tropomyosine en faisant les interactions directes avec ces molécules /I294, I295/, Elles stimulent la liaison de la tropomyosine à l'actine /I296/. Et on voit la périodicité des molécules de caldesmone avec les molécules de tropomyosine complémentaire à celle de l'actinine-&alpha;/I283, I296/. Evidemment, la périodicité des molécules de la myosine bipolaire doit coincider avec celle de la tropomyosine et caldesmone dans les fibres circonférentiels /I284, I297/, I227/. (La myosine aussi trouvée dans les villosités dans~le lamellipode /I227/ est, logiquement, la myosine I qui attache les villosités à la MF- V-I,2). Les microtubules (par les protéines MAP- protéines associées aux microtubules: MF-I, MAP-2 et tau) font l'interaction directe avec la foerine (Fig. 39) /I298, I299, Refs. I248/, qucique seulement les molécules tau dissociées des oligomères peuvent le faire /I298/. Les molécules d'ankyrine peuvent aussi faire l'interaction avec les molécules de MAP (microtubules) /Refs. I248/ (Fig. 39). -Le fait mentionné, que les microtubules suivent les MF circonférentiels /I214A/, bien s'accorde avec ces expériences (Fig. 39) (reg.aussi ci-dessous). 7. Les microtubules comme les garants dynamiques des con tractions adequates des microfilaments et de leurs re stitutions. La localisation de la partie des MT parallèlement au faisceaux circonférentiels corticals de l'actine /I227,I300/ (Fig. 39) permet de répondre à la question de la participation' des MT dans la contraction "actine-myosine" des microfilaments. Il est démontré (dans le cas des cellules des plants ) que les MU sont nécessaires pour la formation des microfilaments corticals /I30I/, ce qui confirme leur voisinage autrement. De plus les microtubules des neurites sont sous la pression des MT et les MT résistent à cette pression qui change après la déstruction des MF /I302/. Le fait de la compression "cerclée" visiblement par les microfilaments circonférentiels corticals dans les macrophages après la destruction des MT par la colchicine /I303/ doit confirmer le rôle des MT pour la préservation de la pression des MF. Mais le rôle des MT et de leur dépolymérisation pendant la contraction des MF est très particulier: ils dissocient seulement aux endroits plus dynamiques et moins stables situés périodiquement où les molécules des MAP s'attachent (Fig. 38). Il est démontré que les molécules de MAP-2 ont l'ass-ociation périodique sur les MT du tissu /I304/. Il est démontré aussi que le taxol, qui stabilise les MT, fait son action avec l'attachement fort des lLAP aux MT /I305/, ce qui indique les endroits "plus"(+) des MT: quand les MT sont dépolymérisés par le froid, les nombreux endroits avec les extrémités positives (et négatives, évidemment) apparaissent /I306/.Ce désassemblage est la condition nécessaire pour le procès du "capping" ce qui ne peut être que le désassem- blage partiel /I307/. Une autre 'preuve des propriétés périodiques des MT est l'alternance périodique des régions avec la tubuline tyro= sinée (avec la tyrosine sur l'extrémité COOH) et des régions non tyrosynées /I308/ et après la dépolymérisation partielle, les extrémités "plus" (nonstable) /I309/ sont occupées par les tubulines tyrosinées et les extrémités moins (stable) par les tubulines non tyrosinées /I308,I3IO/. Tel échantillon avec la présence des extrémités positives avec la tubuline tyroslné est aussi présent dans le domaine central du cytosquelette neuronal du cône de croissance /1311/' (cytosquelette cortical- Fig. 39). Mais les expériences montrent que la tyrosination de la tubuline comme telle n'ait pas d'influence sur la stabilité des MT /I3I2, I3I3/. Et c'est la phosphorylation de la tubuline tyrosinée par la protéine tyrosine kinase (src) qui est présente, par exemple, dans le cône de croissance /I3I4/ qui fortement déstabilise l'assemblée des tubulines tyrosinées /I30I/. Cette phosphorylation sur le résidu de la tyrosine des tubulines des MT in situ est bien trouvée /1316,1312/o Après la dissociation locale de telles tubulines, déstabilisées par la phosphorylation sur leur tyrosine, la nouvelle association justement de tubulines tyrosinées peut se passer rapidement à cause de la présence des tubulines tyrosinées /I3I3/.Naturellement, telle association locale des tubulines et leur réassociation sur le même endroit de MT était observée /I3I7/. Mais telle dissociation, locale et périodique en espace, des MT est bien aidée aussi par la déstabilisation de la connection MAP-MT avec la phosphorylation des JALAP quand la phosphorylation des MAF parles kinases différentes diminue leur association avec les MT et les MF /I3I8/. Généralement, les MAF représentent une famille des protéines qui ont les propriétés suivantes: (I) assembler les MU in vitro; (2) avoir grand poid moléculaire; (3) être massivement phosphorylées, ce qui est important pour l'inhibition de la polymérisation des tubulines; (4) avoir la structure d'un baton; (5) s'agréger; (6) avoir les connections avec les MF /I3I8,I3Ig Les MAP (tau) font la liaison avec les MT, premièrement, mais pas avec les actines et les MF /I320/.Il y a deux famille des EP: MAP-I et MAP-2/tau et justement la présence de deux familles coincide avec les deux types des protéines faisant deux fonctions différentes: (I) faire la machinerie ("le d part" et "l'arrivée" des vésicules- "la gare") du signal près des extentions (la fonte membranaire comme lamellipode) et (2) faire la machinerie de la "vague" Ca-K(Ca) de la propulsion des vésicules ("le chemin de fer") (reg.ci-dessus). Une apparition et une augmentation des MAP-I ont la corrélation avec la prolifération et le début de la différentiation /I32I/, avec la régénération des axones /I322/ et avec la croissance de cône du neurone /I323/ et encore cette molécule est phosphorylée dans les cônes du neurone /I323/. Mais une augmente tion essentielle de la quantité des protéines tau coincide avec la présence des cellules différentiées /I32I/. De plus, une augmentation de la phosphorylation des MAP-I par la CK-II et l'activité de la CK-II dans la cellule coincide avec la prolifération et le début de la différentiation /I32I/ et avec la croissance du neurone /Refs.I324/0 La phosphorylation excessive de la MAP-I par la protéine kinase CK-II in vivô (mais pas par les autres) est prouvée /I325, I32I/. Logiquement, c'est la CK-II membranaire qui est présente au lamellipode sur les récepteurs LDL synthétisés dans la concentration augmentée.Mais la protéine tau (ou MAP-2) est phosphorylée (in vivo) logiquement par la protéine kinase Ca/CaM dans la région de l'interaction avec les MT /I326/ mais clairement pas par la CK-II /I325/. Telle phosphorylation (par la protéine kinase Ca/CaM) doit justement passer avant la contraction des microfilaments corticals. Avec l'action du signal de NGF qui provoque la croissance du neurone il y a une augmentation de ces deux familles des MAP /I327-1329/ parce que les deux fonctions sont nécessaires pour la machinerie du signal quoique "la gare" est construite à nouveau. Mais la phosphorylation des MAP-IB se passe pendant les minutes déjà /I330/. Tel "noeud" du gouvernement du fonctionnement des contractions comme MAP unit les connections aussi avec les IF (filaments intermédiaires) (par la protéine plectine /I33I/), les MF' les MT, la fodrine et la vinculine (Fig. 40). La dernière interaction avec la vinculine doit être plus eloignée et cela doit être la "raison" fonctionnelle de la longueur de cette molécule (MAP) et, justement, cette fonction explique pouquoi les molécules de MAF,-IB sont trop longues pour faire le croisement des MT /I332/, De plus, le croisement de la partie-des MT radials, qui n'ont pas de telle fonction, doit (logiquement) être fait par les autres molécules /I305/. 8. La face double de la molécule de gelsoline elle prépare la contraction cellulaire. Comme il était décrit (V-I) le complexe gelsoline-actine G est dissocié près de la MP avec les molécules de PIP2 /I333/ en libérant l'actine G pour la construction des MF (V-5). Et la gelsoline reste attachée aux molécules de PIP2 membranaires aux régions des faisceaux des MF colocalisant avec l'actinine- /1334/. Cette attachement de la gelsoline est fait avec le domaine qui fait la liaison avec l'actine ou avec les molécules PIP2 /I335/.Une augmentation de la quantité des molécules PIP2 avec le signal se passe pas" à cause"du fonctionnement de la phC /I336/ mais à cause (principalement) de l'augmentation de la concentration des ions de Mg à intérieur de la cellule près de la MP après une ouverture des vésicules "PKC" qui s'ouvrent à l'intérieur (#IV). Ces ions de Mg2+ augmentent les transformations: PI#PIP et PIP#PIP2 (#IV). Plus tard, les molécules de PIP2 /PI-(4,5)P2/ se transforment en molécules de PI-(3,4,5)P3 /et aussi les molécules de PI-4P se transforment en molécules de PI-(3,4)P2/: plusieurs signaux cellulaires avec plusieurs types cellulaires font une augmentation rapide et transitoire des concentrations de PI-(3,4,5)P3 et de PI-(3,4)P2 après le signal /Refs.606,I337/. Logiquement, ces complexes n'ont pas d'affinité pour la gelsoline parce qu'on voit après le signal les complexes gelso line-PIP2 à la couche intérieure de la MP et plus tard on voit les molécules de gelsoline complexées avec les fragments courts de l'actine-F au cytoplasme /I338,I339/, ce qui doit signifier que les molécules de gelsoline dissocient des molécules PIP2 pour un accepteur (actine) qui n'est plus forte que les molécules de PIP2 d'après les événements du début du signal, ce qui confirme la situation quand les molécules.de PIP3 ne sont pas affines à la gelsoline comme la seule situation envisageable.Et encore, il est difficile d'hydrolyser les phosphates de PIP3 (en plus rapidement) quand ils sont dans le site actif de la gelsoline). t Mais la gelsoline (qui fragmente les filaments de l'actine), enfin libéréè, doit faire son action (avec la concentration augmentée du Ca) /I340-I342/ sur les microfilaments corticals périodiques, spëcifiquement aux endroits où il n'y a pas de molécules de filamine sur lectîne-F (c.-à-d. à la région de la myosine) parce que la gelsoline augmente l'activité de l'ATPase de l'actomyosine mais l'ATPase est inhibée par les molécules de filamine dans une concentration élévée (cet effet est aussi potentialisé par la tropomyosine) /I343,I344/ (il est connu que,généralement, la filamine se trouve à la zone des fibres de l'actine avec l'actinine-&alpha; -Fig.39, #V-6). Enfin la gelsoline injectée provoque l'activité de "capping" /I345/ et elle participe dans le procès de la sécrétion /I34 ce qui confirme telle action de la gelsoline (Fig. 4I). 9.La nouvelle loi universelle de la contraction musculaire sans "contrecontraction": Le signal cellulaire prépare la machinerie contractile: "la gare" avec "le chemin de fer" avec les molécules stockées dans les vésicules ou préassemblées à la région de la MP (IV) /I347/. Comme le résultat, le rang des MF circonféren- tiels au-dessous de la MP /I348/ avec les autres protéines cytosquelettiques (Fig.39) /I349/ est prêt pour le transport des vésicules(av'ec les substances nécessaires) entre l'intérieur de la cellule et la MP (et l'extérieur).Par exemple, il y a une apparition de la distribution polaire (future "chemin de fer" des vésicules "FKC") des molécules de spectrine au-dessous de la MP /I347,I350,I35I/ même avec l'enregistrement de l'apparition des microvillosités /I352/ de la fonte membranaire (future). Les apparitions des subagrégats des molécules de fodrine, actine, myosine, actinine-L après le signal /1353,1354/ reflète la même concentration élevée de ces éléments du signal (Fig.39= La présence de la gelsoline dans cette rédistribution submembranaire des protéines est aussi démontrée /I349/. Pour ne pas avoir la contraction spontanée il y a plusieurs obstacles (Fig.39): (I) la connection des groupes des faisceaux différents par les molécules de la fodrine (spectrine); (2) les molécules de filamine qui font lier les molécules de l'actine en empêchant l'activité actomyosine; (3) les molécules des'MF qui avec les molécules de MAP empêchent la contraction des MF et encore (4) il est difficile de com- prendre comment cette contraction du cercle fermé de l'actine se fait. Tout cela signifie qu il faut traverser ces 4 obstacles. Pour faire du cercle fermé de- l'actine avec la distribution périodique de la myosine une machine produisant la force, les molécules de gelsoline doivent découper les morceaux de l'iactine près de la déposition de la myosine (Fig.41) où les molécules de l'actinine- sont absentes. Après cela, ce cercle commence ressembler le muscle squelettique avant la contraction. Les molécules de CaM dissociées de GAP-43 (avec le Ca) font activer la protéase calpaine I qui coupe spécifiquement les molécules de fodrine /I355-I357,I232/. Les anticorps anti-fondrine qui, logiquement, empêchent la protéolyse de la fodrine, inhibent la sécrétion /I358/ (c.-à-d. la contraction; Les mêmes molécules de la calpaine coupent aussi les molécules de filamine /I359 avec Refs/ qui justement empêche l'activité de l'actomyosine /I343/. L'action de la gelsoline (avec le Ca obligatoirement) passe en présence de la filamine avant l'action de la calpaine I (avec la CaM!) parce que la libération de CaM de GAP-43 passe plus tard (Fig. I8). Les molécules de CaM (avec Ca) provoquent aussi la phosphorylation du caldesmone faisant le détachement du caldesmone de la tropomyosine et de la myosine /I360-I362,I294/. Comme il était démontré, les MT sont détruits localement dans les régions de l'attachement des protéines MAP, avec la dissociation aussi des MAP phosphorylées par la kinase. Ces molécules de UP, logiquement, doivent rester dans cette région grâce à leur attachement aux molécules de plectine qui sont aussi présentes dans ces zones avec les filaments intermédiaires /I363,I33I/. le fait de la présence de la vin culmine (comme le composant des IF) dans le "cap" avec les autres protéines cytosquelettiques après le signal (lympho- cytes) /I364/ et le fait de la coprésence de la vinculine avec les IF/I358/ (Figs. 39,4I)/logiquement avec les molécules des MAP) confirment cette conclusion. C.-à-d. les molécules des IP, restant sur leur place avec les plectines attachées et les MAP, servent pour réparer les dissociations locales des MT dans le même endroit (V-7) ou ces ME servent pour réconstituer le cercle des MF. Pendant la contraction, il doit avoir lieu un approchement des molécules de l'actine et de la myosine grâce à l'activité té de l'ATPase des chaînés legères de la myosine avec la superposition augmentée de l'actine avec la myosine /I365/ et avec l'échantillon périodique de llactine avant la contraction et celui non périodique après la contraction (d'après les figures de Les molécules de l'actinine-&alpha; n'empêchent pas d'activation /I367, I368/.Après la contraction, la nouvelle, plus etroite, ceinture circulaire fermée de l'actine supporte la nouvelle conformation cellulaire et elle disparaît plus tard (logiquement en dépendence de besoin) /I365, I369, I349/ comme aussi les filaments de la myosine /I365/ quand leurs monomères font le cycle/I369/ pour la construction des microfilaments corticals nouveaux. Après les contractions syste- matiques pendant la sécrétion (C8-à-d. pendant un certain temps) il y a la collection de la fodrine protéolysée agglomérée /I369/. Telles contractions circulaires synchronysées (comme la "vague" observée in situ par J.Heath /I334/) font la propulsion des vésicules par les canaux spéciaux qui doivent se trouver entre la MP et les citernes laterales comme dans les cellules de cheveu de l'oreile /1292-Fig.5/. Il y a encore tel système développé dans les cellules musculaires lisse (IV-8). Ces canaux, naturelement, doivent se situer au-dessus des régions des MF avec la myosine (Fig.39). Les contacts des vésicules (granules) avec le cytosque- lette doivent avoir lieu avec une aide des sites de la liaison des vésicules (granules) pour les protéines du cytoplasme-: fodrine (visiblement indirect), caldesmone et actinine-l /r349/. Justement, pendant la contraction des microfilaments circonférentiels, les molécules de fodrine et de caldesmone sont protéolysées et détachées et les molécules de l'acti nine- /en bougeant avec l'actine d'un côté et en étant attaché à l'endroit de l'adhésion avec la MP d'un autre côté (Figs.39,4I)/ doivent aussi supporter le changement de conformation et perdre le contact avec la vésicule. Évidemment, cette vésicule (ou plutôt le groupe des vésicules) va s'atta- cher aux autres contacts sur le MF cortical plus avancé. Après la dépolymérisation des microfilaments de l'actine et de la myosine, ces molécules vont être encore utilisées pour la constitution des nouveaux MF. La réconstruction des MF dans le même endroit est garantie par les IF et les MF. Les IF avec la protéine plectine et la MAP attache à cetteprotéine restent intactes et aident à réparer les MU (reg. ci-dessus). Logiquement, les MU et les MAF font l'interac- tion avec les fodrines et les ankyrines (Figs.39,4I) pour les mettre sur place à nouveau. Et justement, d'après les interactions intercarbohydrates des protéines membranaires intégrales (qui s 'attachent aux akkyrines et aux protéines 4.I) avec les uvomorulines, les-vinculines (avec l'aide de l'uvomoruline- Fig.39) doivent aider à s'établir sur leur place aux molécules de l'actinine- et les actines. La proté ine-4.I avec la fodrine d'après une interaction directe avec l'actine aident à ce rétablissement.Le fait que après une agrégation de la fodrine, les faisceaux des MT restent intacts mais la distribution de la vinculine change /I370/, confirme la structure décrite. J' I0. Etablissement des adhésions focales comme la consé quence de la différentiation (ou comme le moyen spécial pour la motilité) déclenchée par la tension et en con séquence par la synthèse et l'exocytose de la FN. La déstruction des adhésions focales et des contacts proches. La queue comme l'élément obligatoire de la motilité. Si l'on suive l'évolution de l voisinage des intégrines pendant la motilité cellulaire, on constate que au départ (Fig. 32), l'intégrine conduit le signal "RGD-like" comme lé récepteur "classique" /1,2/ avec le compexe des gangîlo- sides, cérébrosides, phospholipides /I,2/ et aussi avec les protéoglycanes (Fig.6B-2). Et cela doit être la raison que la solution d'EDDA détruisse tous les contacts cellulaires avec le substrat pendant le procès de l'étalement /I37I/. Après la phosphorylation (d'après la vague des contractions -V-9 /I348/) des intégrines quand elles sont présentes dans les contacts proches (sans l'attachement au cytosquelette) (reg. ci-dessus) il y a la quantité augmentée des molécules des PG autour des intégrines, /28I-Fig.2/ (coloration claire avec le ruthenium rouge). Et les chaînes de ces PG sont,plu- tôt des CS; Cès chaînes ont la longueur augmentée /I372- I374/, ce qui supporte la présence des agrégats larges des PG autour de l'intégrine phosphorylée attachée au substrat des contacts proches sans l'attachement au cytosquelette /28I/. MaisAavec le temps, pendant la différentiation, les cellules changent leur MEC pour la MEC-FN développée (Fig.5) par leur propre synthèse et l'exocytose de la FN /28I/. Dans le cas de la motilité cellulaire, telle adhésion plus forte peut être nécessaire poun mieux tenir la queue à la fin du cycle et cette adhésion n'est pas nécessaire dans tous les cas de la motilité où par conséquence il n'y a pas de telle déposition de FN /I375/. Le domaine de FN qui attache les molécules de HSPG est nécessaire pour l'adhésion focale /I49/. C'estla raison qu'on trouve dans ces adhésions les molécules de PG de type HSPG /I376/, et logiquement à cause de cela, l'élimination des ions divalents de la solution extérieure (pour éliminer les interactions intercarbohydrates) n'est pas suffisante pour la détachement parce que l'interac- tion:"syndecane-FN"est une intéraction électrostatique, principalement. Après ces interactions bivalentes des cellules avec la FN (Fig.5) il y a des "restaurations" des contacts particu- liers de l'intégrine avec le cytosquelette avec les molécules de -vinculine et de l'actinine- déjà présentes sur la place et les molécules de taline /I075, I075, I076, 281/. Logiquement, cette interaction bivalente (plus forte) de la EN avec l'integrine et la syndecane (PG) déclenche l'activation de la tyrosine phosphatase /I377/ qui élimine la phosphorylation des intégrines par la tyrosine kinase présente dans les adhésions focales /I378-I380/. Les adhésions focales des cellules cancéreuses sont caractérisées par une activité de la tyrosine kinase forte -et de la tyrosine phosphatase faible. Mais la situation est opposée dans les cellules normales avec les adhésions focales fortes: comme le résultat il y a beaucoup plus des phosphotyrosines dans -les cellules cancéreuses que dans les cellules normales /1381,1382/. Il y a une activité réele forte de la tyrosine phosphatase dans les cellules normales parce que linhibiteur de la tyrosine phosphatase augmente fortement la présence de la phosphotyrosine dans les adhésions focales des cellules normales /I383/.C.-à-d. le rôle principal de FN (comme le- -substrat) soit d'activer la tyrosine phosphatase et de former -une adhésion focale entre l'in- tégrine,, la vinculine, l'actinine- , la taline et les mi- crofilaments /I075, I076, I243, 28I/ (Fig. 38). De plus, les molécules de HSFG s'agrègent fortement aussi à cette région /I49,28I/. Logiquement, l'avancement de la partie cellulaire en avant du noyau grâce au cytosquelette cortical (arcs) (se trouvant jusqu'au front du noyau /I224/) doit provoquer la tension accrue dans le "début" de là' zone derière le noyau où les arcs disparaissent. Et cette tension accrue doit provoquer l'activation de la phA2 de la MP (IV-8), ce qui doit provoquer le courant de Ca à l'intérieur ("la roue") /1,2/ (Fig.I8a) en activant les protéases (calpaine II) activables par les ions de Ca /I384, I385, I385a/ (Fig.42).Ces événements conduisent à la diminution forte de l'adhésivité de I'intégrine aux FN et doit provoquer la présence accrue des des phosphotyrosines dans"l'adhésion focale" (avec vinculine et taline) parce que la FN n'inhibe pas la tyrosine phosphatase et les intKégrines sont éliminées de la surface cellulaire /I386/. Evidemment, cette phosphorylation affablie les interactions entre les protéines de l'adhésion focale /I387/. La présence du "capping" sur la surface dorsale /I079/(ce qui est justement doit être possible seulement dans cette situation) confirme cette conclusion. Logiquement, la meme augmentation de la tension provoque le signal de l'étalement des adhésions focales et l'exocytose des molécules de EN synthétisées parla cellule. Evidemment, si la tension n'est pas suffisante pour le dernier signal (c.-à-d. la cellule peut arriver de tenir la queue sans ces adhésions focales) il n'y a pas des adhésions focales dans le cas de ces cellules. Mais dans le cas des cellules sans motilité, l'apparition de telles adhésions (d'après une augmentation de la tension membranaire) doit être stimulée par une augmentation de la masse cellulaire-à l'intérieur de la cellule où les frontiéres membranaires établies après la fin de l'étalement sont les mêmes. Le détachement des contacts proches près de l'arrière cellulaire continue aussi à la partie ventrale de la cellule a Ce détachement doit être fait avec les enzymes qui modifient l'échantil,lon des carbohydratés de la MP avec les glycosidases. La présence des glycosidases différentes: sialidase, galactosidase, fucosidase, glucoronidase,N-acetylgalactoseaminidase, N-acetylgluc o s eaminidas e - sur la surface cellulaire est bien établie /I)88-I394/. De plus, les sites de l'affin nité forte des glycosidases sur la surface cellulaire ne sont pas les sucres correspondants /I345/, Logiquement, les glycosydases correspondantes doivent être activées à l'arrière'cèl- lulaire.Le transport des agrégats des protéines grâce à lå vague des contractions est bien établi /1348/. Le fait que les particules, comme celles de charbon, qui doivent être transportées par cette voie à l'arrière sur la surface cellulaire, inactivent justement l'enzyme glycosidase (sialidase) /I388/ qui doit aussi (!) être transporté à l'arrière (ce qui empêche justement le chimiotropisme)/I396- I398/ confirme bien ce transport des glycosidases à l'arrière cellulaire. L'activation des enzymes doit se passer pendant les changements forts de la tension cellulaire, grâce à la tenue de la queue par la "vague" en commençant par l'endroit près du noyau (sans arcs) et jusqu'à l'extremité de la queue (Fig.42).Le changement de l'activité des glycosidases après le changement de la surface de l'attachement est démontré /I399/. La corrélation entre la quantité de la sialidase sur la MP et la quantité de l'acide sialique sur la MP est rapportée /Refs.1388/. le procès du transport des agrégats des protéines du la mellîpode à la région du noyau ressemble le procés du "capping" (Fig.43). Pendant ce procès, les amas des protéines avec les protéoglycanes (syndicane inclue!) qui (protéogly- canes) s'attachent aux complexes classiques" /I,2/: récep- , teur#ganglioside#cérébroside par les interactions des carbohydrates homologues entre les gangliosides du complexe et protéoglycanes (syndecane inclue) (Ces sucres entre les'gan- gliosides, participant au complexe avec le récepteur, et les protéoglycanes (syndecane inclue) sont semblables /223/). D'après une certaine grandeur, ces amas s'attachent aux MF parce que il y a la concentration suffisante des'syndecanes qui attachent les MF (#II), sans l'intégrine dans ce cas./Les intégrines ne peuvent pas participer dans ces complexes et les immobiliser à cause de"l'affluence" à la région des gangliosides en'différence avec le complexe principal où le récepteur a la chaîne longue de GAG (Fig.6C)/. D'après la "vague" des contractions du cytosquelette cortical, ces complexes sont transmis d'une ceinture circonférentiele des MF à une autre ceinture jusqu'à l'arrivée à l'arrière cellulaire. VIOLA structure de la transmission du signal au noyau. Une élévation du pH dans le cytoplasme après une action de la PKC était trouvée pratiquement dans tous les signaux cellulaires /I,2 et ci-dessus/.Comme il était mentionné /I, 2/, l'élévation a lieu parce que l'action de la PKC mène à l'activité d'échangeur Na/H /1400/. Cette élévation du pH grâce à l'activation de l'échangeur Na+/H+ peut être obtenue même seulement après une action d'ester phorbol /I40I/. L'échangeur Na+/H+ est rapidement activable déjà dans 30 secondes avec la rétroaction positive après le signal et le procès est complet dans IO minutes /I40I/. Tel pH élevé est présent en permanence pendant plusieurs heures de la présence du ligand qui a déclenché le signal /I40I/.La valeur critique du pH pour la prolifération de la cellule est près de 7,2, c.-à-d.- il augmente pour O,I-0,3 unités quoique l'énergie stockée grâce au gradient des ions de Na à la MP est suffisante pour augmenter le pE pour une unité! Le pH augmenté controle la vitesse de la synthèse des protéines, ce qui était démontrée clairement dans le nombre des publications avec la synthèse des protéines augmentée pendant la fértilisation et l'embryogénèse initiale /I402-I406/. De plus, seulement une augmentation du pH stable par la solution de l'extérieur, est suffisante pour faire la croissance cellulaire plus intensive avec la densité 2-4 fois plus forte /I404/. Ces faits (notamment, une suffisance de l'application du phorbol ou une augmentation du pH à partir de la solution de l'extérieur) prouvent logiquement qu'une augmentation du pH persistante a lieu à travers le cytoplasme cellulaire avec une aide de la diffusion simple pour tels petits ions H Telles conditions avec le pH augmenté doivent ménertlogi- quement à quelque augmentation du niveau basal de la synthèse de toutes les protéines concernées avec une aide de leurs ARN-m existants complexes avec les ribosomes dans le cytoplasme. Généralement, cette addition ne doit pas changer la situation.Mais dans un cas de l'enzyme protéolytique cathépsine L (MEP) (qui doit avoir justement le ARN-m vivant pendant longtemps /I407/ et doit avoir une forme latente et très stable au pH normal avec la taille longue /I40-8,I409/), la si tuatlon est très spéciale. De plus, ce cas ouvre une grande loi de l'évolution cellulaire des eucaryotes: comment le signal est traduite (en principale) du cytoplasme au noyau. Cette loi est découverte et prouvée la première fois plus bas. Pour cette propose, je montrerai encore la large étendue de la méthylation-N des protéines et plus tard je présentai la première fois la significance importante de telle méthylation. Par exemple, il est démontré clairement que le bFGF a les acides aminés N-méthylés /I4IO-I4I2/. De plus; le bFGF a plusieures formes avec la longueur différente /I4II-I4I4/ et seulement les formes avec le poid moléculaire plus fort sont méthylées /I4II,I4I2,I4I5/ quoique elles sont actives toutes /I4I6/ et il est démontré que les formes méthylées avec le poid moléculaire plus fort sont situées dans le noyau et aux ribosomes /14I2, I4II/ mais la forme de I8 kDa est cytoplasmique /1412/. Si transfécter la cellule avec seulement les formes ADN-o de 22 et de 24 kDa on peut trouver dans le médium aussi la forme de I8 kDa /I4I2/ ce qui montre clairement la présence de la protéolyse.Après la perméation de la cellule avec la saponine il y a la libération des molécules de bFGF indiquant aussi la présence de ces molécules dans le cytoplasme /I4I2/! De plus, telles interactions des acides aminés méthylés des formes plus longues avec le noyau et les ribosomes sont suffisamment spécifiques et elles ne peuvent pas être détachées avec les interventions fortes comme le détergent ou le sel bien concentrée /I4I2, I4I7/. C.-à-d. après la synthèse,des formes du poid moléculaire fort sont attachées aux ribosomes dans le cytoplasme ou elles sont au noyau attachées au RNP (ribonucleoprotein particlesparticules de ribonucléoprotéines) (plus précisement au AISN /1418/), logiquement, avec une aide de leurs acides aminés méthylés /I4I2/.Cette méthylation peut avoir lieu pendant la translation /I4I9/ avec une aide des méthylases situées dans le :cytosol /I420/. I1 y a un grand nombre des autres protéines N-méthylées: beaucoup des protéines ribosomales /1417, I4I9,I4I2/, le facteur de l'élongation- EF-I (qui ne associe pas avec~les membranes ou lipides /I42I/), l'actine et la myosine /I422/, la partie de CaM (qui'apparaît notamment pendant la transformation, la prolifération, le développement fétal et néonatal) /I423/, les protéines attachant au noyau (qui lient au ARN en proportions stoechiométriques) /I4I8/ "les protéines chauffées de choc " (heating chock protéines) /I424/, les histones /I425/, la protéine basique de myéline /I426/ et le nombre des protéines non-déterminées encore (qui sont liées aux ribosomes) /I427,I4I7/. Logiquement, le récepteur de EN appartient aussi à ces protéines parce que la protéine cytoplasmique P40 est indentique au récepteur de IN.Cette protéine de "visage double" associe avec les protéines de RNP /I428;296/ aussi comme le bFG? (logiquement) avec une aide des acides aminés méthylés quand cette récepteur se trouve au cytoplasme et aussi (comme le bFGF) il n'a pas de séquence du signal /I429,3I9/.De plus,elle est traduite seulement après le signal spécial dans les myoblastes mais pas dans les myotubes /I430/, ce qui correspond bien à la création de la structure de la IB (III). La cathépsine B (CL) doit aussi être méthylée par telle manière parce que (comme le bFGF méthylé /I4I2/ ou comme la protéine basique de myéline /I426/) elle a plusieures formes de la longueur différente /1431,1432/ et comme le bFGF /I433/ sa sécrétion est même augmentée après une alcanisation des vésicules intracellulaires /I432,I434,I435/, ce qui signifie clairement que cela arrive sans la participation des stocks de Golgi mais justement avec la structure décrite ci-dessous. De plus, la monensine (un ionophore carboxylique qui lie les ions H+) diminue la quantité de la forme active de CL dans le cytoplasme et fait une accumulation de la forme latente /I434/ ce qu'on peut expliquer à cause de l'augmentation de pH dans le cytoplasme (accompagnant le changement relativement plus forte du pH dans-des vésicules intracellulaires): une autolyse (la production des formes actives) doit être moins importante aux pH plus alcalins /I408/ mais la synthèse de CL (formes latentes) doit entre plus importante confirmant la conclusion du début de ce chapitre. Justement, à la partie finale du signal de la division (PDGF) il y a une accumulation des molécules de Cl dans la cellule (la--synthèse sans sécrétion) /I436/ et aussi l'accumulation des autres protéines spéciales méthylées avec les polysomes à la confluence cellulaire /I427/ quand la division de la cellule et aussi le nombre des autres signaux s'arrêtent (II) (et quand la concenttration de AMP-c augmente dans 3-4 fois /I427/, ce qui caractérise aussi la fin des signaux cellulaires- reg. ci-dessous). Comme il était mentionné, cette forme synthétisée de la procathépsine (et liée logiquement aux ribosomes et aussi au noyau /I43I/) est aussi très stable aux pH neutre /I408,I409/ et, par conséquence, elle peut "attendre" le signal pendant longtemps. D'après l'apparence des molécules de cathépsine synthétisées au pH plus alcaline au nouveau et libérées (parce que les places "vacantes" aux sites dlattachement sont occupées!). l'autolyse de ces molécules à tel pH encore neutre doit avoir lieu (Fig.44). Logiquement, les molécules de cathépsine I n'ont pas le peptide du signal /I437/. Dès la forme mature et active de CL est géné rée, la procathépsine B est activée rapidement /I438/. Gela est le point essentiel de l'activation du signal. Seulement une augmentation du pH au milieu extérieur est suffisante pour la sécrétion de CL /1438/c Par la suite, ces formes actives autoprotéolysées (p.m. plus faible) de CL doivent libérer les molécules de CL (accumulées au temps final du signal précédent /1436/ ou, logiquement, pendant le temps entre les signaux) attachées avec une aide des acides aminés méthylés aux ribosomes (et visiblement au noyau) (Fig.44). Au même temps, les formes actives de CL doivent libérer, avec une aide de la protéolyse, les autres protéines des ribosomes (et visiblement du noyau). Le spectre large de la spécificité pour les acides aminés de CL /I439; Refs.I440/ .et, par conséquence, la protéolyse par CL du grand nombre des protéines /I44I/ supportent telle structure (Fig.44g).De plus, pendant tel procès il y a la libération des protéines ribosomiques bien méthylées (sans leur synthèse!), ce qui doit~méner à l'apparence rapide des ribosomes nouveaux sans la synthèse des protéines. Parce que ces protéines sont synthétisées et libérées dans le cytoplasme /I442-I444/, elles sont transportées par les vésicules "PKC" avec la libération partielle à l'extérieur de la cellule (Figs0I8,20,21A) ce qui n'a pas besoin du gradient-fort du pu pour la fonction du bourgeonnement (avec l'aide des molécules de clathrine) (Fig. 21B), parce que cette membrane plasmique (près des vésicules "PEC") est fondue déjà par les interactions intercarbohydrates (#IV). Cela est la raison que la monensine et aussi le NH4Cl ne diminuent pas une sécrétion de CL (de plus, même, ces substances l'augmentent) /1434, I435/.Logiquement, cette augmentation a lieu à cause d'une intensification de tel type de l'activité vésiculaire comme la conséquence de l'arrêt des autres procès vésiculaires de la cellule ayant le pas (bourgeonnement) qui dépend du gradient du pH. Pendant les transformations différentes comme la trans formation chimique, viral /virus SV-40, virus ARN, rétrovirus (ras-transformation)/ et aussi après une action des promoteurs tumorals et des facteurs de croissance, la sécrétion de CL (procathépsine, forme latente) augmente fortement /I435, I445,I442,1446,1432,I434,I435,1444/o Le bFGF et les autres facteurs de croissance aussi font telle augmentation de la sécrétion de CL /1447-I 449/. Cela a lieu parce que le cycle "PKC" (qui sert à l'activation du chaque signal, qui est activé d'après l'action du ligand, ou qui est activé chaotiquement avec quelque niveau zéro de sa fréquence pendant l'état normal sans ligand) a son niveau maximal qui reflète la sécrétion de CL. (La sécrétion de CL comme telle est seulement la réfléction de ltintensité de tel cycle "PKC" sans la significance biologique). Par conséquence, la monensine n'augmente plus la sécrétion de CL pour telles cellules transformées /I434/ avec déjà l'activité des vésicules "PKC" augmentée #IV). Une importance de telle activation de CL pour le cycle cellulaire reflète le fait que telle CL sécrétée: soit liée à l'acquisation de la "compétence" cellulaire d'entrer dans la mitose- (I450, I45I/. Le fait, que la CL est la protéine la plus sécrétée pendant les événements cellulaires différente-s comme 1'activation du signal ou la transformation /I452,I436, I445/ confirme une importance unique de cette protéine cathépsine î (on dit aussi: MEF-major excreted protein- protéine majeure excrétée).Aussi sa concentration dans la cellule (dans les zones périnucléaires et submembranaires) augmente fortement pendant le procès qui (pendant quelque déstruction de la membrane basale -1II) active les signalisations cellulaires (IV): aux myopathies différentes (incluant la souris mdx dystrophique justement au stade de la dystrophie- près de 20 jours d'age) /I443, I444, I453 avec les Refs./. Et aussi pendant quelques procès analogues"de la tentomie (III,IV) il y a une augmentation de la concentration de CL justement à la partie du muscle avec'plusieurs tendons.Pendant l'ichimia (aussi tel type des procès- #III, IV) il y a aussi une sécrétion du bFGF augmentée proportionelle à la sécrétion de la molécule cytoplasmique (créatine phosphate) /I454/. Cette: sécrétion de bFGF doit coincider avec la sécrétion de CL selon Fig. 44f. Aussi le bFGF sécrétée fait (par la rétroaction) la sécrétion de CL /I447.I449/. les autres confirmations de telle importance extrème de CL pour le signal cellulaire peuvent être trouvées de la corrélation entre la motilité cellulaire (qui a le nombre des propriétés communes avec les signaux cellulaires- CIV,V) et la synthèse et la sécrétion de CL augmentées /I455, I456/. De plus, pendant les dystrophies (comme Duchenne) il y a l'aug- mentation significative de la diméthylarginine dans l'urine /I457/ qui signifie une augmentation de la protéolyse des protéines méthylées pendant tel procès de l'activation bien confirmant la-structure du signal de l'activation proposée (Fig.44). Aussi la régulation forte (inhibition) de la sécrétion et de la production de CL /I458, I459, I445/ par le TGF-9ss (inhibiteur universel du signal /I460/) confirme telle importance de CL pour l'activation du signal cellulaire. Cette structure aide à résoudre la structure prin.cipale important de l'action du virus et de la mobilisation du ri bosome. de l'hôte- pour la synthèse de ses propres protéines virales. Ls deux choses principales sont nécessaires pour telle mobilisation: (I) le signal viral augmente le pH et, par conséquence, la libération des protéines ribosomiques (Fig.44g); (2) l'association du ARN viral avec le cytosquelette /I428,1461-I464/ avec une aide de son extrémité- 3' /1461/ avec l'attachement consécutive des protéines ri'boso- miques libérées à tel ARN-m viral.Selon /I428/, seulement les ribosomes /avec ARN-m viral (étudié)/ attachés au cyto- squelette- font la translation /I463,I464/. Quantitativement. #80% du ARN-m étaient attachés éléments avec la liaison de l'actine /I46I/. Généralement, le ARN-m attache beaucoup de protéines de I5-220 kDa (RNP) et il attache seulement une extra protéine après la liaison avec les ribosomes /I465/. Par conséquence, on peut distinguer les 3 types de l'attachement des,ribosomes qui correspondent à la localisation consécutive des protéines synthétisées: (I) les ribosomes libres pour les protéines cytoplasmiques comme la lactate déhyrogénase; (2) les polysomes liés au cytosquelette logiquement pour les protéines qui doivent être transportées avec la machinerie du cytosquelette cortical (Pigs.I8-20,39) et (3) les polysomes liés à la membrane, où les protéines sont sécrétées ou doivent être intercalées dans la MF à travers le ER et le Golgi /I461/. Par exemple, il est bien établi que les ARN-m de l'actine, de la tubuline et de la vinculine soitent situés au réseau du cytosquelette (aux polysomes liés au cytosquelette) /I46I,I466/. Quoique il y a une particularité importante du signal:pas toutes les protéines sont transportées avec l'aide des vésicules "PKU" pendant le signal. Et il y a la présence des protéines différentes (plutôt du cytosquelette) près de la MP. Par exemple, dans le cas très clair de la motilité cellulaire avec le transport continu utilisant la machinerie du signal, les RNA-m de l'actine, tubuline et vinculine sont trouvés dans la partie distale du lamellipode avancé /I467,I468/. Aussi les RNA-m de telles protéines du cytosquelette (actine, tubuline, protéines des neurofilaments) doivent être présents dans les axones et dans les dendrites des neurones (un autre type de la motilité cellulaire) /I469/. Le ARN-m d'une autre protéine du cytosquelette MAP-2 est trouvé dans les dendrites /I470/. Aussi les ARN-m de TGF-ss/I47I/ et aussi de la petite protéine basique de myéline /1472/ sont trouvés près de la MP. Ces ARN-m sont transportés à cette destination submembranaire (de lamellipode) /1471,'1468/'avec une aide du cytosquelette /1471/. Naturellement, ce ARN-m associe avec les protéines desribosomes (transportées ici et formant les polysomes) /I473 avec Refs.,I474/. Dans le cas du muscle en développement, tels ribosomes pour la translation de la myosine sont aussi trouvés près de la MP /1475/ (et aussi près des myofibres dans ce cas spécial /I476, I475/). La production de la CL libre et active avec une augmentation du jH cytoplasmique pendant le signal cellulaire conduit au pas très important: la transmission du signal au noyau vers l'ADN'. Cette' molécule protéolytique, activée par le signal, fait-la protéolyse analogue des facteurs nucléaires les plus essentiels situés dans le cytoplasme qui déclenche le début de la chaîne de l'activation (sans la sythèse des protéines). Récemment, on a trouvé que la protéine NF-jun soit présente dans le cytoplasme /I477/. Cette protéine NF-jun a le site spécial pour la liaison~au ADN et l'activation de la transcription du ARN c-jun /I477/. Cette transcription est activée par tels signals comme NF-L et phorbol et aussi par les substances chimiques comme le formamide ou DOC (sodium deoxycholic acide - acide deoxycholique de sodium).On peut voir des données expérimentaux /I477/ que après l'action de TNF-J ou le phorbol il y a plusieurs formes de ce facteur NF-jun mais après l'application du DOC/formamide il y a seulement une forme avec le p.m. plus fort /I477/. Logiquement, on peut voir que après l'action des agents dissociants (DOC/formamide) il y ait la libération simple du NF-jun entier mais après le signal cellulaire (TNF-; ou phorbol) il y a l'apparence de plusieures formes de NF-jun. Le fait, que seulement le phorbol est suffisant pour indroduire telle activation du ADN, confirme l'action de CL parce que cette activation du phorbol est aussi suffisante pour l'activation forte de CL (reg. cidessus).Comme le résultat, la transcription de la protéine c-jun n'a pas besoin de la synthèse des protéines /I478,I479/, On peut voir la situation analogue par un autre facteur nucléaire NF-kE. Aussi il y a la localisation cytoplasmique de ce facteur (représentant avant le signal la protéine pI05 avec l'inhibiteur IkB+ la protéine p65) /1480/. Après une action du signal cellulaire (et même du phorbol) il y a clairement la protéolyse de la protéine pI05 avec la protéase soluble dans le cytoplasme /I480/.Telle protéolyse semblable (la production de la protéine de 45 kDa de la protéine pI05) a lieu aussi pendant la contamination par le virus HIV'(dans la culture) /I48I/ De plus il y a un autre type de telle protéolyse (la production de la protéine de 49 kDa de pI05) qui provoque, comme le complexe (p49+p65), l'activation de rehausseur du virus HIV /1482/. Comme le résultat, le complexe protéinique NEkB: (p50+p65) va au noyau et réagit avec les motifs kB correspondants du ADN /I483/. L'interaction entre le complexe NS-kB et les motifs kB a lieu aussi-",-sans la synthèse des protéines /I484/O Par conséquence, telle protéase doit être la molécule de CL activée. Comme dans le cas de NF-jun, le phorbol produit plusieurs complexes NF-kB de tailles différentes mais le détachement avec le NaDOC produit seulement un /I484/. Par conséquence, le signal cellulaire pénètre dans le noyau par ce chemin et la série des activations des gènes particuliers avec le signal commence0 Evidemment, ces protéines (c-jun et NF-kB) ont les positions dominantes dans la chaîne des événements du signal. La protéine c-jun fait l'activation du gène synthétisant la protéine c-fos /I485/. La transcription du gène c-fos est un de les plus premièrs effets de la transcription après l'action du facteur de croissance /1486/. Premièrement, il doit être activé avec le dimère c-jun et après avec l'hétérodimère (c-jun/c-fos) ayant la liaison plus forte avec l'ADN /I485/. Il n'y a pas de dimères c-fos /I485/ et la protéine c-fos n'associe pas avec l'ADN seul /I485/. Ce gène c-fos est ac tivé temporairement /I487/ parce qu'il est réprimé avec ses propres produits /1488/. De plus, l'ARN-m de c-fos a la vie courte mais la protéine c-jun a la vie plus longue /I485/. Les dimères des protéines jun et fos réagissent avec les sites spécials du ADN (on dit les sites AP-I) situées à la partie promoteur des gènes différents /I485/. Les cibles des sites de la liaison d'AP-I sont les gènes du nombre des pro téines qui participent dans le transport des vésicules in cluant les protéines du cytosquelette /I489/. Les complexes NF-kB font aussi l'activation des gènes les plus premiers (quoique leur activation est plus tardive que celle du gène c-fos) et l'activation des gènes initials avec le site kB incluant c-mys /I490, I491/. Cet hétérodimère NF-kB (p50+p65) transactive le gène kB et le dimère p50 le déprime /I492/. Le gène de la protéine pI05 peut être activé avec le complexe NF-kB (c.-à-d. directement avec le phorbol ou le TNF-) et moins fortement par p50 ou p65 séparément /I493/. Il est intéressant de noter que le -AMP-c fait son rôle du stoppeur universel du signal. Le AMP-c induit (à la fin) la protéine'jun-B (avec la chaîne des événements: c-AMP #protéine CREB#(CREB/c-jun)#jun-B#jun-B/c-jun#répression des sites AP-I) (CRE signifie: aAMP-response element - AMP-c élément de la résponse). Le CREB réagit avec le c-jun mais pas avec le c-fos /I478/, ce qui signifie que le AMP-c "attend" (dans n'importe quel cas) son "propre" temps quand la pro téine c-fos est éliminée pendant le signal supportant la syn chronisation automatique du signal. Il doit être une autre protéinase faisant sont action dans le cytoplasme (métalloprotéinase) mais sa transcription doit être activée pendant le signal cellulaire parce que la protéine c-jun réagit avec le promoteur de cette protéinase /I494/. Par conséquence, cette protéinase est aussi séc'rétée après l'action des promoteurs de tumeur, des facteurs de croissance, des onco- gènes et des virus /I494/. La métalloprotéinase doit justement participer dans les évenements qui sont régularisés avec l'aide du site hPz /1489/:: elle est nécessaire pour l'exocytose /I494/ de l'histamine et des granules avec l'adrénaline /I495/ et pour la libération du neurotransmetteur /I496SI497/ Une nécessité de la métalloprotéinase pour la motilité cellulaire /1498-1501/ sert comme une autre confirmation de leur rôle indispensable pour le signal cellulaire. Le TGF-ss augmente la synthèse de l'inhibiteur de la méta Iloprotéinase /I494/O Elle est nécessaire aussi pour la fusion des myoblastes /I502,I503/ où la métalloprotéinase soluble joue le rôle fonctionel nécessaire /I503/. VII.Les interactions intercarbohydrates homologues sont à la base de la loi principale de l'exocytose. On voit que la nouvelle loi des interactions intercarbohydrates homologues soit encore plus universelle: l'exocytose cellulaire est aussi subordonnée à cette loi. Il est bien connu que le transport des glycoprotéines à travers le ER et lé Golgi soit c-ouplé avec leur glycosylation /I504,I505/. Les enzymes faisant-la transformation des chaînes carbohydrates: glycosyltransférases et glycosidases (formes endocellulaires) /1504,1505/ ont la localisation bien précise dans les régions particulières de ER et du Golgi /cis, trans,médial, TGN (trans Golgi network- réseau de trans Golgi)/ /Refs.1506/. Ces en- zymes transforment aussi les glycosphingolipides qui font le chemin semblable à travers le ER et le Golgi /I507/.De plusy ces glycosphingolipides font la ségrégation latérale /I507/ grâce aux interactions interlipidiques /I,2/. Ils doivent le faire à chaque "niveau" du chemin: ER#Golgi#MP. Ces interactions sont justement possibles parce qu'il y a beaucoup moinsdu cholestérol dans le Golgi et le ER que dans la MP I509/ ce qui permet avoir telle séparation des phases (segrégation latérale) sans le signal du ligand parce que, logiquement, les protéines intégrales (futures récepteurs) n'ont pas (encore) de petites protéines (V-3E) et elles sont toujours prêtes à réagir avec ces glycosphinolipides (par les carbohydrates homologues !) faisant aussi la séparation latérale /I507,I5IO/. Le "signal" pour telle séparation latérale avec la déhydratation et déstabilisation de la surface membranaire (V-3B) (conduisant au bougeonnement des vésicules avec les glycolipides et glycoprotéines avec l'aide des protéines différentes de la récouverture /I489/) est justement la glycosy- latiqn (couplée obligatoirement au transport): (I) des glyco lipides et (2) des glycoprotéines. Évidemment, pour le succès de telle structure, le transport du cholestérol de l'endroit de sa synthèse du ER vers la MP /(en différence avec le transport des glycosphingolipides et des phospholipides (en majorité)/ doit être séparé, Justement, il y a les vésicules spéciales pour tel transport /I5II,I5I2/ qui ne passe pas par le Golgi /I5I3,I5I4/. Logiquement, le transport de ces vésicules doit avoir lieu avec une aide du transport des vésicules "PKC" avec les MF corticals et les MT (IV,V) parce que ce transport est bloqué par les agents qui détruissent les MF et les MT /Refs.I508/ et il dépend de l'énergie /I5I3/. References I. Zagyansky Y. "The fundamental structure of the action of the hormones, the neurotransmitters and the growth factors in the transmission of a signal in the cell and its important consequences" Bulletin-of European Patent Office N052, Publication N00347526, 2.Zagyansky Y "La structure fondamentale de l'action des récepteurs et ses conséquences pratiques radicalement importantes contenant le gamma des préparations contre virus, can- cer, sphingolipidoses, bactéries, insectes, protozoiares, hélminthes et anesthésie Bulletin Officielle de la Propriété Industrielle N 7, Publication N02635266, Paris, 1990 3. Chan J, et al EMBO J. 9, 2II7, I990 4. Gillard B.K. et al Arch. Biochem. Biophys. 279, I22, I990 5.Piller V. et al J. Biol.Chem. 265, 9264, I990 6.Kojima N. et al J.Biol,Chem. 264,20I59,I989 7. Santer R. et al Biochim. Biophys. Acta I051, 78, I990 8.Vestal D.J. et al Arch. Biocchem.Biophys, 276,'278,1990 9. Oka J.A et al J. Cell.Biochem. 36, I69, I988 10. Takeuchi Y. et al J. Biol. Chem. 265, I366I, I990 II.Pan D.A. et al Exp. Cell. Res. I9I,141,1990 I2. Zagyansky Y. & Jard S. Nature 25I, 59I, I979 13.Zagyansky Y. & Jard S. Exp.Cell Res. I32, 387, I98I I4.Edidin M.,Zagyansky Y. & Lardner T, Science T91, 466, I976 15. Poo M.-M et al J. Cell.Biol. 76, 483, I978 16. Deugnier M.A. et al Biochem. Biophys.Res.Comm.I03, 490, I98I I7.Yechiel E. et al J.Cell.Biol. I05,755,I987 I8. Henis Y.I. Trends.Pharm,Sci. I0, 95, I989 I9.Rothberg K.G. et al J.Cell Biol. III, 293I, I990 20.Sako Y. et al J.Cell Biol, III, 88a, I990 21. Hill T.D. et al aI Science 248, I660, I990 22. Gilligan A. et al Exp. Cell Res. I87, I34, I990 23. Milne J.L. et al J.Cell Biol. II2, I03, I99I 24. Ruoslahti R. J.Biol.Chem.264, I3369, I989 25.Border W.A. et al Sem.Nephrol. 9,307,I989 26. Feitzer P.P, et al Molsec. Cell. Biochem. 8,I4I, I975 27.Veis A. Biochim.Biophys.Acta 576,88,I979 28.Nakao K. et al Exp.Mol.Pathol.I7,6,I972 29. Mene F. et al Physiol. Rev. 69, I347, I989 30. Eyre D.R. Annu.Rev.Biochem. 503, 7I7, I984 3I.Eyre D.R. et al Biochem.Biophys.Res.Comm. 52,663,1973 32.Robins S.R. et al FEBS Lett.38, 334, I974 33.Yamauchi M. et al Proc.Natl.Acad.Sci.USA 79,7684,1982 34. Vidal B.C. Cell. Mol. Biol. 32, 527, I986 35.Bruss L.F. et al Biochim.Biophys.Acta 444,43,1976 36. Guidry C. et al J. Cell Biol. I04, I097, I987 '37.Stallcap W.B. et al J.Cell Biol. III,3I77,I990 38. Kassler C.M. et al Throm. Res. 57, 59, I990 39. Vogel K.G. et al Biochem.J. 223,587,I984 40. Hook M. et ak Annu.Rev.Biochem.53,847,I984 41. Rademacher T.W. et al Anu.Rev.Biochem. 57,785,I988 42.Dodge G.R. et al J.Biol.Chem. 260,I8023,I990 43.Iozzo R.L. et al Arch.Biochem.Biophys. 269,239,I989 440Torp S. et al Proc. of the I974 Colston Symp., Univ. Bristol. Butterworth, London, p.197 45. Scott J.E. et al Biochem. J. I97, 2I3, I98I 46. Doyle B.B. et al J. Mol. Biol. 9I, 79,I975 47. Timpl R. Eur. J. Biochem. I80m 487, I989 48.Yurchenko P.D. et al FASEB J. 4,I577,I990 49. Kleinman H.K. et al Biochemietry 20, 2325, I98I 50. Ruoslanti E. et al Biochim.Biophys.Acta 63I,350,I980 5I. Jilak F. et al Hoppe Seyler's Z.Phys.Chem.360, 597, I979 52. Jonansson S. et al Biochem. J. 187, 52I, I980 53.Ruoslahti E. Annu.Rev.Biochem. 57,375,I988 54. Fransson L0. et al J.Biol.Chem. 256,I3039,I98I 55.Gallagher J.T et al Biochem.J. 236, 3I3, I986 56.Van Kuppevelt T.H.M.S.M. et al Biochim.Biophys.Acta 926,296, I987 57. Deudon E. et al Int.J.Biochem.20, 397, I988 58.Odberg.A. et al J.Biol. Chem.257, 4859, 1982 59.Irish P.S. et al J.Histochem.Cytochem. 31,69, 1983 60.Mosher D. et al Biopolymers 24,199,1985 6I.Purcht L.T. et al J.histochem, Cytochem. 28,I3I9,I980 62. Singer l.l. Cell 16, 675, 1979 630Alexander S.S. et al J.Biol.Chem. 254, 1501, 1978 64. Odermaff E. et al J.Mol.Biol..159,109,1982 65. Williams E.C.et al J. Biol.Chem. 257, 14973,1982 66.Williams E.C.et al J.Biol.Chem. 258,59II,I983 67.Homadberg G.A. et al Biochemistry 25, 6917 1986 68. McDonald J.A. et al J.Biol. Chem. 262, 2957 1987 69. McKeown-Longo P.J. et al J.Biol. Chem.259, 12210. 1984 70. Skorstengaard K. et al Eur.J.Biochem. 161, 441, 1986 71. McDonald J.A. Annu. Rev.Cell Biol. 4.183, 1989 72.Petersen T.E. et al Proc.Natl.Acad.Sci.USA 80,137,1983 73.Thacher S.M. et al Cell 40, 685, 1985 74.Jetten A.M0 et al J.Biol.Chem. 26I,I5097,I986 75. George M.D. et al J.Biol.Chem, 265, 11098, 1990 76.Reiss M. et al Exp.Cell Res. I83,IOI,I989 77.Martinez J.et al J.Biol.Chem. 264, 20502, 1989 78.Yuspa S.H. et al Cancer Res. 42,2344,I982 79. Hennings H. et al Biochem.Biophys.Res.Comm.I02,739,I98I 80.Tyrrel D.J. et al J.Biol.Chem. 263, 8464,1988 8I.Giancotti F.G.. et al Exp.Cell Res. 163, 47, 1986 82.Rurcht L.F. et al Cancer Res. 38,46I8,I978 83.Darribère T. et al J.Cell.Biol. IIO,I8I3,I990 84. Pesciotta-Peres L.M. et al J.Cell Biol. 111, 249,1990 85. Chen W.T. et al J.Cell Biol. 103 1649, 1986 86.LE baron R.G. et al J.Cell Biol. 106, 945. 1988 87.Woods A. et al Exp.Cell Res. I77,272,I988 88.Cardin A.D. et al Arteriosclerosis 9,21.1989 89.Guan J.L. et al Cell 60,53,1990 90.Couchman J.R. et al j.Cell.Physiol. 136, 226, 1988 9I.Akijama S.K. et al J.Biol.Chem. 262,I7536,I987 92.Dennis J.W. et' al J.Cell Biol. 99,I4I6,I984 93.Confati G. et al J.Biol. Chem.265, 4011, 1990 94.Forsberg E. et al J.Biol.Chem. 265, 6776. 1990 95.Ignatius M.J. et al Neuron 713. 1988 96.Grinnell F. Int.Rev.Cytol. 53,65,I978 97.Crowe L.M. et al dans "physiological Regulation of Mem brane Fluidity", R.C. Alcia, C.C. Curtain & L.M.Gordon Eds., A.R.Ldss, Inc New York, I988,pp.75-99 98.Tranqui Li et cal J.Cell Biol. III,299a,I990 99. Akijama S.K.et al Biochim.Acta HO31, 91 1990 IOO.Busson C.-T. et al J.Cell Biol. II0,789,1990 101. Oz. O.K. al Int.J.Cancer 44, 343, 1989 102. Tao T.W. et al J. Cell. Biochem. 14A, 244, 1990 103. Hamphries M.J. J.Cell.Sci. 97,585,1990 104. Kramer R.H. et al J.Cell Biol. lll, 1233, 1990 105. Grant. D.S. et al Cell 58, 993, 1989 I06.Pytela R. et al Cell 40,I9I,I985 107. Cheresh D.A. et al J.Biol. Chem. 262, 17703, 1987 108.Lawler Jet al J.Cell Biol. 103, 2351, 1988 I09.Ginsberg M.H. et al Thromb.Haemostasis 59,1,I988 IIO.Phillips D.R. et al Blood 7I,83I,I988 111. Cheresh D.A. et al Cell 58,945, 1989 112. Tranqui L. et al J.Cell Biol. 108, 2519, 1989 113. Kramer R.H. et al J.Biol. Chem. 264, 15642,1989 114. Languno L.R. et al J.Cell Biol. 109, 2455, 1989 115.Kirchhofer D. et al J.Biol.Chem. 265,6I5,I990 116. Wayner E.E. et al J.Cell Biol. 105, 1873, 1987 II7.Gehlsen K.R. et al Science 241,1228,1988 II8.Arumugham R.G. et al Biochim.Biophys.Acta 883,112,1986 119.Fudjiwaia S. et al Biochem.J. 252,453,I988 I20.Knibbs R.N et al Biochemistry 28,6379,1989 121. Gehlesen K.R. et al J.Biol. Chem. 264. 19034. 1989 122. Culp L.A.J.Cell Biol. 63, 71, 1974 123. Spiegel S. et al J.Cell Biol. 102, 1898, 1986 124. Spiefel s. et al J. Cell Biol. 100, 721, 1985 125. Yamada K.M.et al Exp. Cell Res. 143, 295, 1983 126. Cheresh D.A et al J.cell Biol. 102, 688, 1986 127. Burras G.F. et al J.Biol.Chem. 107, 1225, 1988 128. Kleiman H.K.et al Proc.Natl.Acad.Sci.USA 76, 3367, 1979 129. Freilinger A.L. 111 et al J.Biol. 265, 6346, 1990 I30.Ruoslahti E. Annu.Rev.Cell Biol. 4,229,1988 I3I.Kaesberg P.R. et al J.Clin.Inv. 83,994,I989 132. Cole G.J et al Neuron 2,II57,I989 133. Gospadorowicz D. et al Endocrinol. Rev. 8, 95, 1987 134. Klebe R.J.et al J.Cell Physiol. 112, 5, 1982 135. Johansson S. et al J.Cell Biol. 98,8Ib,I984 136.Hörmann H. Klin.Wochenschr. 60,I265,I982 137.Hörmann H. et al Hoppe-Seyler's Z.Physiol.Chem.364,IOII, I983 I38.Hayashi M. et al J.Biol.Chem. 257,5263,I980 I39.Howe C.C. Mol.Cell.Biol. 4,1,1984 I40.Rolins B.J-. et al Biochemistry 18, 5621,1979 141. Thomas G.J. et al Arch. biochem. Biophys. 278,11, 1990 142. Culp L.A. et al Ann.N.Y.Acad.Soi. 556, 194. 1989 143. Humphries M.J.et al J.Cell Biol. 103, 2637, 1986 144. Humphries M.J. et al J.Biol.Chem. 262,6886,I987 145. Dufor S. et al Embo J. 7,2661, 1988 146. Aumailley M. et al J.Biol.Chem. 262,II532,I987 147. Godman S.L. et al J.Cell Biol. 105, 589, 1987 I48.Latérra J. et al J.Cell Biol. 96,II2,I983 I49.Woods A. et al EMBO J. 5,665, 1986 150. Haugen P.K. et al J.Cell Biol. III,2733,I99O I5I.Iida 3. et al J.Cell Biol. III,397a,I990 152.Woods A. et al J.Cell Biol. 99,I743,I984 I53.Bourguignion B.Y.W. et al Int. Rev. Cytol. 87,I95,1984 I54.Bourguignion L.Y.W. et al J.Membr.Biol. 75, 65, 1983 155.Kerrich W.G.L.et al Proc. Natl.Acad. Sci. USA 81, 165, 1984 I560Woods A. et al EMBO J. 5,665,I986 157. Mungnai G.E. et al Exp. Cell.Ress.175, 229,1988 158. Chen W.T. et al J.Cell Biol. 103, 1073, 1986 159. Chen W.T. et al J.Cell Biol. 100, 1103. 1985 160, Chen W.T. et al J.Cell Biol. 103, 1649. 1986 I6I.Damsky C.H. et al J.Cell Biol. 100, 1528, 1985 162. Nef N.T. et al J.Cell Biol. 95m 654m 1982 163. ruoslahti E. et al Sciene 238, 491, 1987 164.Bornstein P. et al Proc.Natl. Acad.Sci. USA 74,2480,1977 165. Chen W.T. et al J.Hisochem. Cytochem.33, 576, 1985 I66.Woods A. et al J.Cell.Biol. III,I9a,I990 167. Burridge E. Cancer Rev. 4,18,1984 I68.Ingber D.E. et al J.Cell Biol. 110, 1803, 1990# 169. Walker G. et al FASEB J.4,2924, 1990 170. Caron J.M. Mol. Cell. Biol. 10,1239, 1990 171. Werb Z. et al J.Cell Biol. 109, 877, 1989 172. Mueller S.C. et al J.Cell Biol, 109, 3455, 1989 173. Maeda T. et al J.Cell Biol. III,398a,I990 174.Scott J.E. et al Biochem.J. 195. 573.1981 I75.Oyama P. et al Biochemistry 28, 1428,1989 I76.Kleinman H.K. et al J.Biol.Chem. 253, 5643, 1978 177. Buoslahty E.et al Arteriosclerosis 5,581. 1985 178.Casu B. et al Trends Biochem.Sci. 13, 221, 1988 I79.Gallagher J.T. et al Biochem. Soc. Trame. 18,207,1990 I80.Piepkorn M. et al J.Invest.Dermatol. 94, 107m 1990 181, Castelct J.J. et al J.Biol. Chem. 257, 11256, 1982 I82.Groggel G.C. et al Amer. J.Physiol. 258, F259, 1990 183. Adler S. et al Kidney Int. 35,339, 1989 184. Davidson s. et al J.Biol.265. 12324, 1990 185. Vaheri a. et al Proc. Natl. Acad. Sci. USA 75. 4944, 1978 186. Hynes R.C. et al J.Cell Biol. 95., 369, 1982 187.Höök M. et al Annu.Rev.Biochem. 53,847,I984 188, Underline C.B. et al Biochem, Biophyl. REs. Comm. 63, 448, 1975 I89.Winterbourne D.J. et al Dev.Biol. 129,565, 1988 190. Hayman E.G. et al J.Cell Biol. 94, 28m 1982 191. Shanley D.L et al J.Biol. Chem. 258, 810, 1983 192. Chiarugi v.P. Anticancer Res 2,275, 1982 193. Lozzo R.V.J.Biol.Chem. 260,7464,I985 194. Adany P, et al J. Biol. Chem, 265, 11389, 1990 195. Slotstengaard K.et al Eur. J.Biochem, 154,15, 1986, 196. Bergson R.E. Annu. Rev. Call. Biol. 4,551. 1983 197, Bergson R.E. Annu. Rev.Cell Biol. 4,551, 1988 198. Breuer D. et al Exp. Cell. Res. 182, 659, 1989 199. Scwrtz M.A. et al Proc. Satl. Natl. Acad. USA 86,4525. 1989 200.Giuère B. et al J.Cell.Physiol. II0,72,I982 201. Podléski T. et al Exp. Cell. Ress. 122, 317, 1979 202.Pennypacher J.P. et al Exp.Cell Res. 121,ll,1979 203. West C.M.et al J.Cell Physiol.134.460. 1988 204. Montesano R. st al J.Cell Physiol. 134, 460, 1988 205.Alitalo K. et al Adv.Cancer Res. 37?III,I982 206. Lse E.Y.H.P.et al Proc. Natl. Acad, 85, 1419, 1985 207.Ingber D.E. et alCell 59,803 1989 208.Aznavoorian S. et al J.Cell Biol. 110,1427, 1990 209. Skorstengaard K.et al Eur. J. Biochem.161, 441, 1986 210. Scwarzbauer J.E. et al EMBO J. 6,2573, 1987 211. Zardi L. et al EMBO J. 6,2337,I987 212. Manatura H. et al J.Biol. Chem. 263, 3314, 1968 213. Zhu B.C.-R. et al J.Biol. Chem. 259,3962. 1984 2I4.Krusius T. et al J.Biol.Chem. 260, 4110. 1985 215.Zagyansky Y. "Evidence pour le développement de SIDA (la deuxième contamination est obligatoire, la première est nécessaire pour la création des anticorps): la vaccination par tolérance contre le virus est la conséquence" Bull. Officielle Propriété Industrielle N 38, Paris, 1990 216. Shatil S.J. et al J.Biol. Chem. 260, 11107,1985 217. Dustin M.L. et al Nature 341, 619, 1989 218. Cheung E. et al J.Cell. Physiol. 130, 118, 1987 219. Danilov Y.N. et al J.Cell. biol. 108, 1925. 1989 220. FRannson L.A. TRends BioChem. Sci. 12, 406, 1987 221. Sant A.J. et al J.Exp. Med. 162, 1916, 1985 222. Jlkanen S.et al J.Immunol. 141. 1615. 1988 223. Gowda D.C. et al Arch. Biochem. Biophys. 281, 219,1990 224. BErnfield m. et al Phil. Trans. R. Soc. Lond. B 327, 171, 1990 225.Edwards T.Jo et al 3.Cell Biol'. III,ISIa,1990 226. Margolis R.U. et al Dev.Neurosci. II,276,I989 227. Lark M.W. et al Fed. Proc. 44, 394, 1985 228. Sandelle L.J. et al J.Cell Biol.lll,152a. 1990 229.Rapraeger A. et al J.Cell bBiol. 103,2683, 1986 230. Shintisky M, et al Biochim, Biophys. Acta 515, 367, 1978 231. Sczekan M.M. et al J.Cell. Physiol. 142, 574, 1990 232.Bretcher M.S. EMBO J. 8,I34I,I989 233, Dedhar S. Exp. Cell Ress. 183, 207,1989 234.Matsuyama T. et al J.Exp. Med. I70,II33,I989 235.Davis B.S. et al J.Immunol. 145,785,1990 2360Dedhar S. et al J.Cell Biol. 105, 1175, 1987 237. Ruoslhti E. J.Clin. Inv. 87,1.1991 238. Shimizu Y.et al Nature 345, 250, 1779, 1989 239. Lo S.K. et al J.Exp.Med. 169,1779,1989 240.Shitizu Y. et al Immunol. Rev. II4,IO9,I990 241. Ahdeff J.A. CRC Oncology/Hematology 9,37,1989 242. Ozawa S. et al Physiol.Rev. 66, 887, 1986 243. Omoto E. et al Exp.Cell Res. 187, 85, 1990 244. Takeukí Y. et al J.Biol. Chem, 265, 13661, 1990 245.saxema U. et al J.biol. Chem. 265, 12880, 1990 246.Yanagishida M. et al J.Biol.Chem, 264, 15714, 1989 247.Kato Y. et al Proc. Natl. Acad. USA 87,6522,1990 248.Hale L.V. et al J.Bone Miner.Res. I, 489,1986 249.Schmidt G. et al J.Cell Biol. 104, 1683, 1987 249a.Fedarko N.S. et al J.Biol.Chem.265,12200,T990 250.Alitaro K. et al Adv.Cancer Res. 37,IIIwI982 251,Wagner D.D. et al J.Biol.Chem. 256,II708,I98I 252. Pande H. et al Biochem, Biops. Res. Comm.101, 265, 1981 253. Underhile C.B. et al biochem. Bophys. res. Comm. 63, 448, 1975 254. Wirterbourne D.J. et al J.Biol. Chem, 256, 4310, 1981 255.Hayman E.G. et al J.Cell Biol. 94,28,I982 256.Shanley D.J. et al j.Biol. Chem, 58, 810, 1983 257.Chîarugi V.P. Anticancer Res. 2,275, 1982, 2580Hynes R.O. et al J.Cell Biol. 95, 369, 1982 259.Gallagher J.T. et al Biochem.J. 236, 313, 1986 260. David G. et al J.Biol.Chemm258, 7338, 1983 261. Robinson J. et al J.Cell Biol. 98, 946, 1984 262. Vaheri A. et al Proc. Natl. Acad. USA 75, 4944, 1979 263. Fransson L.A. et al J. Biol. Chem. 256, 1304, 1981 264. Kawakami H. et al Biochim. Biophys. Acta 646, 161, 1981 265.Stenman S. et al Int.J.Cancer 27,427,I98I 266. Ruoslahti E. et al Cancetr Cells 1,119, 1989 2670Yamagata M.H. et al J.Biol.Chem. 261, 13526,1986 268. Yoneda M, et al J.Biol.Chem. 265, 5247, 1990 269.Knudson W. et al Ciba Found.Symp. 143, 150, 1989, 270.Singhali A. et al Bioessays I2,223,I990 271. Tapley P. et al Oncogene 4,325,I989 272.Yamada K.M. et al Nature 275, 179, 1978 273. Harrison F. Int. Dev. Biol. 33, 417, 1989 274. manasek F.J. Curr. Top. biol. 166, 35, 1975 275. Soluresh M. Dev. Biol. 50,525.1976 276.Perris R. et al Dev.Biol. 137, 1 1990 277. Toole B.P. et al Proc. Natl. Acad. Sci. USA 76, 6299, 1979 278, Johnston P.M. et al J.Bipohys. Biochem. Cytol. 3,231, 1957 279. Pratte J.L. et al Dev. Bicl. 139, 338, 1990 280. Solursh M. et al Dev. biot 140, 83, 1990 281. Woods A. et al Eur. J. Biochem,. 32, 108, 1983 282.Burridge K. Cancer Rev. 4,18, 1986 283.Guan J.L. e-t al Cell 60,53,I990 284. Neufeld G. et al J. Cell. Phisyol, 131,1987 285.Bloch R.J. et al Am.J.Physiol. 254, 0345. 1988 286. Godfrey E.W. et al Dev. Biol. 130. 471, 1988 2870Walsh F.S. et al DevOBiol. 84,I2I,I98I 288. Lurcht L.T. et al Cell 13, 263, 1978 289.Tomasek J.J. et al Dev.Biol. 90,SI8,I982 290. Chiquet M. et al Dev. Biol. 88, 220, 1981 291. Kujawa M.J. et al Dev. Biol. 113, 10, 1986 292.Rogalj S. et al J.Cell Biol. I09,823,I989 293.Globus R. et al Endocrynology 124,1539,1989, 294.Bashkin P. et al Biochemistry 28,1737,1989 295.Pittman R.N. et al J.Neurosci. 9,4269,1989 269.Dennis M.J. et al Dev.Biol. 81, 266, 1981 297.Anderson M.J. et al J.Cell Biol. 95,I20a,I982 298.Riggott M.J. et al J.Comp.Neurol.258,580,I987 299. Toole B.P. Dev. Biol. 29, 321, 1972 300. Gunderson R.W. et al Dev.Biol. 104, 18, 1984 301. lander A.D et al Proc. Natl. Acad. Sci, USA 82, 2183, 1985 302. Dewis G.E. et al J.Neurosci, 5,2662,1985 303. Rogers S.L. et al Dev. Biol. 98, 212, 1983 304. Hammarback J.A. et al J.Neurosci. Res. 13, 213, 1985 305. EDgar D. et al EMBO J. 3,I463,I984 306.Sephel G.C. et al Dev. Neurosci. ll, 313, 1989 307. Singer M.et al J.Compar.Neuol. 185, 1,1979 308. Krayanek S. et al Dev. Bol. 84, 41, 1981 309. Coernbrooks C.J. et al Proc. Natl. Acad. Sci. USA 80, 3850, 1983 310. Liesi P. et al J.Cell Biol. 96,920,I983 311.Dean J.W.lll et al J.Biol. Chem, 265, 12553, 1990 312. Dean J.W.lll et al Biochem. Biophhys.Res.Comm.156, 411,1988 3I3.ashiro K.I. et al'J.Cell Physiol. 146, 451, 1991 314. Kleinman H.K. et al Ann. NY. Acad. Sci. 580,302.1990 315. Paulsson M. Crit. Rev. Biochem. Mol. Biol. 27, 93,1992 316. Kleinman H.K. et al Proc. Natl. Acad Sci USA 84, 1282, 1988 317. Mecham R.P. FASEB J.5,2538,1991 3I8.Dziadek M. et al Dev.Biol. III,372,I985 319. Hunter D.D. et al Nature 338,229, 1989 320. Grosso L.E. et al Biochemistry 30, 3346, 1991 321. Ghen L.B. Cell 10. 393, 1977 322. Damsky C.H. et al JCell Biol. 100, 1528, 1985 323. Podelsky T.R et al Exp.Cell Res. 122, 317, 317, 1979 324. Hunter D.D. et al J.Neurosci. ll,3960. 1991 325. Weis J.et al Soc. Neurosci. Abstr. 15, 161, 1989 326. Hunter D.D. et al Cell 59.905. 1989 327. Sanes J.R. et al J.Cell Biol. lll. 1685, 1990 328. Qu nZ. et al NEuron 4.367, 1990 329. Ruiz i Altaba A. et al Trends Gen. 6, 57, 1990 329a. Anderson MJ. et alJ.Phisiol. 268, 757, 1977 329b. Fullon J.R. et al J.Cell biol. 108-1527.1989 329c.Magill-Solc C. et al J.Exp.Biol. I53,I,I990 329d.Burden S.J. et al J.Cell Biol. 82,4I2,I979 329e.McMahan U.J.et al J.Cell Biol. 98,I453,I984 329f.Anglister L. et al J.Cell Biol. 101, 735 1085 329g.Bayne F.Kb et al J.Cell Biol. 99,I486,I984 329h.Wallace B.C. PHil. trans .Roy. soc.Lond. B331,273,1991 329i.Godfrey E.W.Exp.Cell Res. 195, 89. 1991 329k.Bupp E. et al Neuron 6,811,1991 330.Magill-solc C.et alJ.Physiol.(paris)84.78.1990 331.Godfrey E.W.et al J.Cell Biol. 106.1263.1988 332.Mc.Mahan U.J-et al Dev. Neurosci. 11. 27,1989 333.Tumerman L.A. & Zagyansky Y.A. Résumés de Symposium International de Chimie des Produits Naturels ,Riga,1970 334.Polyanovsky O.L.,Zagyneansky Y.A & Tumerman L.A. Moolec.Biol. (URSS) 4,458, 1970 335.Wallace B.G. J.Cell Biol. 107,267.19988 336.Henderson L.P.et al J Neurosci.4,3140.1984 337.Wallace B.G. J.Neurosci. I0,3576,I990 338.Reist N.E. et al J.Cell Biol. 105, 2457, 1987 339.Smith M.A. et al J.Neurocytol. 12, 993, 1983 340.Axelrod De et al Biochim.Biophys.Acta 518, 23, 1978 341, Reist N.E. et alySoc. Neurosci.Abstr.16, 455 1990 342.Sud J. et al Dev.Biol. 128, 40, 1988 343. Gospodarowicz D. Curr. Top. Dev. Biol. 24, 47 1990 344. Idnkhart T.A. et al Dev. Biol. 86, 19, 1981 345. Clegg C.H. et al J.Cell Biol. 105, 949, 1987 346.Peng H.B. et al Neuron 6, 237, 1991 347.Feige J.J. et al J.Biol. Chem. 263, 14023, 1988 348. Gospodarowicz D. et al Cela. Different. I9-,R,I986 349.Gospodarowicz D. et al Proc. Natl. Acad.Sci.USA 71, 4648, 1974 350.Rifkin D.B. et al J.Cell Biol. I09,I,I989 35I.Beck K. et al FASEB J. 4,148, 1990 352. Hammerback J.a. et alDev. biol. 126., 29 1988 353. Engel J. et al J.Mol.Biol. biol.150, 97, 1981 354. Daniels M.P. et alINt.j.Dev. Neurosci.2, 87, 1984 3550Clark M.B. et cal Dev.Biol. I33,393,I989 356. Riggot M.J.et al J.comp. Neuro. 258, 580. 1987 357. Chiu A.Y et al Dav: Biol. 103, 456, 1984 358.Daniels M.P. et al Abst.Soc.Neurosci.'7,I43,I98I 359.Bayne E.K. et al J.Cell Biol. 95,II7a,I982 360. Couchman J,.R et al Arch. Dermatol. Res 266, 295.1979 36I.Clegg D.O. et al J.Cell Biol. I07,699,I988 362.Hall D.E. et al J.Cell Biol. 107,687, 1988 363.Smalheiser N.R. et al Proc.Ntl.scad.Dci.usa 84,645,1987 364.ClémentB,et alJ.cell Biol. llo,185,1990 365.Sugrue S. Differentiation 38,69,1968 366.Godfrey E.W. et al Dev.Boil.I30 47I, 1968 367.Menko A.S. et al Cell 5I,5i,1987 368. Damsky C.H.et alJ.Cell Biol.100,1528,1985 369. Geiger B, et alCell Diff.Dev. 32,343,1990 370.Neff N.T. et al J.Cell Biol. 95,654,I982 37I.Vogel Z. et al J.neurosci. 3,I058,I983 372.Johnson S.et al J.cell Biol. 90,260,1981 373.Surgue S.P. et al Dev.Biol. 92,97,1982 374.Terranova V.P. et al Cell 2,719,1980 375. Bloch R.J. et al Exp.cell Res.182,582,1982 376. Bloch R.J. et al Cell 121,25,1985 377. Axelrod D.et alproc.Natl.Acad.Sci.USA 73,4594.1976 378. Bloch R.J. J.Cell Biol.82,626,1979 379.Bloch R.J. et al Cell 2I,25, 1980 380.Shadiack A.M. et al J.Neurobiol. 22,6I7,I98I 381.Cunor E.A. et al J.Neuroctyl 20,323,1991 382.Thenton S.C. et alScieence 222.623,1963 383.Rapraeger A.C. et al Science 252, 1705.1991 384.Kiefer M.C. et al Proc. Natl.Acad.Sci. 87,6985,1990 385.Yayon A. et al Cell 64,84I,I99I 386. Krufka A. et al J.Cell Biol. lll,223a,1990 387. Moscatelli D. J.Cell.Physiol. 131.123,1987 388. Magnetti P.et al J.Cell. Biochem.47,201,1991 389.Olwin B.B. et al J.Cell Biol. 107, 1988, 390.Moore J.W. et al Development lll,741,1991 39I.Maciag T. et al Science 225,932,1984 392.Schreiber A.B. et al Proc.Natl.Acad.Sci.USA 82,6I38,I985 393.Gospodarowcz D.et alProc.Natl.Acad.Sci.USA 81, 963, 1984 394.Burgess W.X. et al Annu.Rev.Biochem. 58,575-,I989 395. Baird A.et al Proc,Natl.Csi,USA 85,2324,1988 386. Kremer N.E. et alJ.Cell Biol:115,809,1991 397. Brown K.D. et alFEBS Lett.247,227,1989 398.Tsuda I. et al FEBS Lett. I9I,205,I985 399.Kaibuchi E. et al J.Biol.Chem. 261.1187,1986 400.Burgess W.H. et al Mol.Cell.Biol. 10,4770,1990 40 I. Neufeld G. et al J.Biol. Chem. 261, 5631, 1986 40Ia.Paris S. et al J.Biol Stock-Daurence-Pernoud, Paris, 1991 524."Anderson's Pathology" Ed. Kissane J.M. The C.V. Mosby Company, St.Louis, 1990, pp.560-562 525.Bunge R.P. et al Annu.Rev.Neurosci. 9,305,1986 526.Bunge R.P. et al ProgOBrain Res. 71,143,1987 5270Klein G.et al Cell 55,33I,I988 528.Ekblom M. et al Cell 60,337,1990 529.Ramirez F. & Jain M.K. Proteins: structure,function,genetics 9,229,1991 530.Vigo C. et al Biochem.Pharmacol. 29,623,1980 531.Biltonen R.L. Abst.pap. ACS 199, Biol.22 532.Rothberg K.G. et al J.Cell Biol. III, 2931,1990 533.Mehta U. et al Biochem.Inter. 2I,I07,I99O 534.Hirata F. et al Science 209,1082,1980 535.Hirata F. et al Proc.Natl.Acad.Sci.USA 81,4717,1984 536.Hattori T. et al Biochem.Biophys.Res.Comm. III, 551,1983 537.Daidson F.F. et al J.Biol.Chem.265,5602,1990 538.Saris C.J.M. et al Cell 46,201,1986 539.Lackie J.M.J.Cell.Sci. 89,449,1988 540.Abayasekara D.R.E. et al Mol.Cell. Endocrynol. 70,147,1990 541.Vadas P. et al Am.J.Pathol. 107,285, 1982 542.Traynon J.R. et al Biochim.Biophys.Acta 665,571,1981 543.Movat H. et al Nature 293,583,1981 544.Langholz E. et a,l Prostaglandins, leukotriens and essential fatty acids 39,227,I990 545.Harwath L. et al J.Immunol. I46,224,I99I 546.Felder C.C. et al Prod.Natl.Acad.Sci.USA 87,2187,1990 547.Le Gouvello S. et al J.ImmunolO I44,2359,I990 548.Goppelt-Staebe M. et al Br. J. Pharm. 98,1287,1989 549.Goldgerg H. et al Biochemical J. 267,461,1990 550.Margolis B.et al Mol.CeIl.Biol.IO,435,1990 551.Siess W.Physiol:Rev. 69,58,1989 552.Ford-Hutchinson A.W. et al Nature 286,264,1980 553.Hirusumi J. et al Atheriosclerosis 64,243 I987 554.Palmblad J. et al Blood 58,658,1981 555.Dahlén S.E. et al Proc.Natl.Acad.Sci. USA 78,3887,1981 556. Lindbom L. et al Acta Physicl.Scand, 116,105,1982 557.Malmsten C.L. et al Acta Phisiol. Scand. 110, 449, 1980 558. Goetzl E.J et al J.Immunol. 125, 1789, 1980 559.Ford-Hutchinson A.W. et al Nature 286,164,1980 560.Brain S B. et al Pharm: ther.46, 57, 1990 561. Birnbaumer L. Annu. Rev. Pharmacol. Toxicol. 30, 675, 1990 562.O'Flahetry J.T. et al J.Cell. Physicol. I42,299,1990 563.Omann G.M. et al J.Biol.Chem. 264,I6355,I989 564.Naccache P.H.et al Biomed:Pharmacother. 41, 297, 1987 565.Bengtsson T. et al Proc. Natl Acad. Sci. USA 87,292I,I990 566.Young MtR. et al Cancer Res. 47,36791I987 567. Falton A.M. Prostagandins 35, 413, 1988 568. Young M.R. et al Cancer Res. 46, 160, 1986 569.Young M.R. et al Invasion Metastasis 11,48, 1991 570.Young MR. et al Cancer Res. 50, 2973, 1990 57I.Young M.R. et al Int.J.Cancer 49,I50,I99I 572.Bassalyk L.S. et al Vopr.Oncol. 35,I30I,I989 573.Favalii C.et al J.Immunol.125, 897, 1980 575.Giles H. Trends Chem.Sci 11,301.1990 576.Loesberg C. et al Exp.Cell Res. I60,II7,I989 577.Kruskal B.a. et al Proc. Natl. Acad.Sci.USA 83, 2919, 1986 578.Chen J.-S. et al J.Cell Biol. 111,143a,1990 579.Van den Bosch H. Biochim, Byophys. Acta 604, 191 1980 580. Van den Bosch H. et al Biochem:Soc.trans.18, 781,1990 581. Hanley H.R. et al Phil. Trans. R. Soc. Lond. B 320, 381, 1988 582. Hanley H.R. et al Biochem. J. 243, 305, 1987 583. Hoffmann S. L. et al J. Biol. Chem. 257, 14359, 1982 584.Irvine R.F. et ai Eur.J.Biochem: 99,925,1979 585. Worley P.F. et al J.Biol: Chem. 262, 12132, 1987 586. Yoo S.H. et al J.Biol: Chem. 265, 13446, 1990 587. Yoo S.H. et al J. Biol.Chem. 266, 7740, 1991 588.Ehr7ich B.E. et al Nature 336,583,1988 589.Ferris C.D. et al Nature 342,87,I989 590.Wakui M. et al Cell 63,I025,I990 591. Larkin J.M, et al Cell 33, 273, 1983 592.Chuhan V.P.S. et al Biochem.Biophys.Res.Comm.I55,I8,I988 593.Lee M.H. et al Biochemistry 30, 1041, 1991 594. ONO Y. et al Proc. Natl. Acad. Sci.USa 86, 3099, 1989 595.Bell R.M. et al J.Biol:Chem. 266,466I,I99I 596. Downes C.P. et al J.Biochem: 193, 1, 1990 597.Morris A.P. et al Nature 330,653.1987 598.Tokazawa K. et al Biochemical J. 261,483,1989 599.Li G. et al Biochem.J. 260,77I,I989 600.Imboden J B. et al J.Clin.Invest. 79,1538,1987 601.Ogden D. Nature 336.17,1988 602.Johanson R.A. et al J.Biol.Chem.263,7465,1988 603.Berridge M.J.J.Biol.Chem.265,9583,1990 604.White R.E. et al Nature 351,570,1991 605.Preston R.R. et al Annu.Rev.Physiol.53,309,1991 606.Homma Y. et al Biochem.Biophys.Res.Comm.164,406,1989 607.Majerus P.W. et al Celî 63,459,1990 608.Wahl Ma et al Bioessays 13,107,1991 609.Wilson D.Bç et al J.Biol.Chem. 259,II7I8,I984 610.Hobbs C.V. et al Science 247,477,1990 611.Rhes S.G. et al Science 244,546,1989 612.Bennett C.F. et al J.Biol.Chem. 262,13789,1987 613.Strathmann M. et al Proc.Natl.Acad.Sci.USA 87,9113,1990 6I4.Smroka A.V. et al Science 25I,804,I99I 615.Smith M.R. et al Proc.Natl.Acad.Sci.USA 86,3659,1989 6I6.Smith M.R. et al Science 247,1074,1990 617.Payne R. et al Phil.Trans.R.Soc.Lond.B 320,359,1988 618.Barrett P.Q. et al Endocrine Rev. 10,496,1989 6I9.Jacob R0 J.Physiol. 424,298,1990 620.Hanley H.R. et al Proc.Trans.R.Soc.Lond.B 320,381,1988 62I.Gill D.L. Nature 342,16,1989 622.Rossier M.F. et al Trends Neurosci. 14,310,1991 623.Catt K.J. et al J.Bioenerg.Biomembr. 23,7,1991 624.Clements R.S. et al Diabets 26,1109,1977 625.Hokin-Heaverson M0, Adv.Exp.Biol.Med. 83,429,I977 626.Wekelam M.J.O. et al Nature 323,173,1986 627.Lacal J.C. et al Nature 330,269,1987 6280Walker D.H. et al Biochemistry 27,6504,1988 629.Cochet C. et al Biochem.J. 234,25,1986 630.Supattapone S. et al J.Biol.Chem. 263,I530,I988 631.Ghost T. et al J.Biol.Chem. 263,11075,1988 632.Worley P.F. et al J.Bilo.Chem. 262,I2I32,I987 633.Volpe P. et al Proc.Natl.Acad.Sci.USA 85,1091,1988 634.Ross C.A. et al Nature 339,468,1989 635.Mignery G.A. et al Nature 342,192,1989 636.?hévenod F. et al J.Membr.Biol. IO9,I73,I989 637.Hashimoto S. et al J.Cell Biol. 107,2523,1988 638.Meyer T. et al Biochemistry 29,32,1990 639.Bulenda D. et al Biochemistry 24,7760,1985 640,De Lisle S. et al J.Biol.Chem.265,II726,1990 641.Gerdes H.-H. etal J.Biol.Chem. 264,12009,1989 642.Wakui M. et al Cell 63,1025,1990 643.Parker I. et al Proc.Natl.Acad.Sci.USA 87,260,1990 644.Schwartz A.L. et al EMBO J. 4,899,1985 645.Anderson R.G.W. et al Proc.Natl.Acad.Sci.USA 81,4838,1984 646.Smith M.J. et al EMBO J. 8,3581,1989 647.Pozzan T. et al J.Exp.Biol. 139,181,1988 648.Ostwald T.J. et al J.Biol.Chem. 249,5867,1974 649.Treves S. et al Biochem.J. 271,473,1990 650.Fliegel L. et al Biochim.Biophys.Acta 982,1,1989 651.Trevens S. et al Biochem.J. 271,473,1990 652.Spät A. et al Biochem.J. 244,493,1987 653.Suppatapon S. et al J.Biol.Chem. 263,1530,1988 654.Jacob R. Biochim.Biophys.Acta 1052,457,1990 655.Rink T.J. et al Trends Neurosci. 12,43,1989 656.Jacob R. et al Nature 335,40,1988 657.Jacob R. J. Physiol. 421,55,1990 658.Connor J.A. et al J.Biol.Chem. 262,2919,1987 659.Rapp P.E. et al- J..Exp.Biol. 93,119,1981 660.Prentki M.C. et al J.BiolChem. 263,11044,1988 661.O'Sullnan A.J. et al EMBO J. 8,401,1989 662.Wier W.G. et al Science 235,325,1987 663.Hill R.W. et al J.Biol.Chem. 263,9682,1988 664.Thorner M.O. et al J.Exp.Biol. 139,169,1988 665.Pasternack C.A. et al Biochem.Soc.Symp. 50,247,1985 666.Resnick T.J. et al Biochem.Biophys.Res.Comm. 144,438,1987 667.Baenziger N.L. et al Biochem.Biophys.Res.Comm. 92,1435, 1980 668.Berridge M. et al Nature 341,197,1989 669.Meyer T. et al Proc.Natl.Acad.Sci.USA 85,5051,1988 670.Pietri F. et al J.Biol.Chem. 265,17478,1990 671.Mauger J.P. et al J.Biol.Chem. 264,8821,1989 672.Pietri F. et al Gastroenterol.Clin.Biol. 14,710,1990 673.Guillemette G. et al J.Biol.Chem. 263,454I,I988 674.Gray P.T.A.J.Physiol. 406,35,1988 675.Danoff S.K. et al Biochem.J. 254,701,1988 676.Suppatopone S. et al J.Biol.Chem. 263,I530,I988 677.Hansen C.A. et alAdv.Sec.Mess. 24,128,1990 678.DeLisle S. et al J.Biol.Chem. 265,11726,1990 679.Wakui M. et al Nature 339,317,1989 680.Connolly T.M et al Cell 46,951,1986 681.Somlyo A.P. et al J.Cell.Biol. 51,723,1974 682.Nicolis D. et al Biochim.Biophys.Acta 683,57,1982 683.Saris N.E. et al Curr.Top.Bioenerg. 10,103,1980 684.Saris N.E. et al J.Bioenerg.Biomembr. 20,749,1988 685.Al-Nassar I. et al Biochem.J. 239,19,1986 686.Bernardi P. et al FEBS Lett. 139,9,1982 687.Zoccarato B. et al Eur.J.Biochem. II4,I95,I98I 688.De Luca H.F. et al Proc.Natl.Acad.Sci.USA 47,1744,1961 689.Fournier N. et al J.Bioenerg. 19,297,1987 690.Kobayashi S. et al Biochem.Biophys.Res.Comm. 153,625,1988 691.Cullen P.G. et al FEBS Lett. 228,57,1988 692.Winkler H. et al Neuroscience 5,I803,I980 693.Berridge M.J. Ann.N.Y.Acad.Sci. 494,39,1987 694.Rozengurt E. et al Ciba Found.Symp. 116,66,1985 695.Devine C.E. et al J.Cell.Biol.52,690,1972 696.Kurosawa M. et al Biochem.Pharmacol. 38,431,1989 697.Muller T.W. et al J.Neurochem.24,1155,1975 698.Hawthorne J.N. et al Adv.Exp.Med.Biol. 83,419,1977 699.Berridge M.J. et al Cell 59,411,1989 700.Imai A. et al Nature 325,726,1987 701.Lundberg G.A. etal FEBS Lett. 240,171,1988 702.Kanch A. et al Eur.J.Biochem. 85,225,1978 703.Lundberg G.A. et al Biochim.Biophys.Acta 1123,177,1992 704.Del Vecehio L.R. et al J.Biol.Chem. 266,I3278,I99I 705.Redman C.M. et al J.Biophys.Biochem.Cytol. 6,207,I959 706.Shears S.B. Biochem.J. 260,313,1989 707.Husseye E.S. et al Biochim.Biophys.Acta 968,261,1988 708.Downes C.P. etal Eur.J.Biochem. 193,1,1990 709.Trifaro J.M. et al Can.J.Physiol.Pharmacol. 53,479,1975 710.Campbell C.R. et al J.Biol.Chem. 260,10948,1985 711.Porter F.D. et al J.Biol.Chem. 263,8989,I988 712.Kurosawa M. et al J.Allergy Clin.Immunol. 84,118,1989 713.Ling L.E. et al J.Biol.Chem. 264,5080,1989 714.Moritz A. et al J.Neurochem. 54,351,1990 715.Vogel S. et al Eur.J.Biochem. 154,253,1986 716.Pike M.C. et al J.Biol.Chem. 265,1866,1990 717.Pike M.C. et al J.Immunol.147,2270,1991 718.Urumov T. et al FEBS Lett.207,253,1986 719.Smith C.D. et al J.Biol.Chem. 264,3206,1989 720.Strosznajder J. et al J.Neurochem.Res. 14,717,1989 721.Lacal K. et al Science 233,533,1987 722.Moritz A. etal J.Biol.Chem. 267,7207,1992 723.Payrastre B. et al J.Cell. Biol. 115,121,1991 724.Nahas N. et al FEBS Lett. 246,30,1989 725.Rans R.S. et al Physiol. Rev. 70,115,1990 726.Hegewald H. et al Biochem.3. 244,183,1987 726.Tooke N.E. et al Biochem.J. 219,471,1984 727.Campbeli C.Rt et al J.Biol.Chem.260,10948,1985 728.Gottlieb S.S. Am.J.Cardiol. 63,39G,I989 729.Reden D.M.Am.J.Card. 63,436,1989 730.Flatmen P.W. Annu-Rev.Physiol. 53,269,1989 731.Brierley G.P. Arch.Biochem.Biophys. 253,322,1987 732.Hendey B. et al Science 258,296,1992 733.Murphy E. et al Proc.Natl.Acad.Sci.USA 86,2991,1989 734.Whittaker V.P.Biochem.Soc.Transact. 12,361,1984 735.Baker P.F. et al J.Physiol. 227,855,1972 736.Corkey B. et al J.Biol.Chem. 261,2567,1980 737.Murphy E.et alProc.Natl.Acad.Sci.USA 86,2981,1989 738.Binet A. et al Arch.Biochem.Biophys. 164,756,1974 739.Shabarchin E.I.,Panasenco O.M.,Hendel L.Y. & Kruglikova K.E. Biol.Bull.Acad.Sci.USSR 6,101,1979 740.Brierley G.P. et al Arch.Biochem.Bophys. 253,322,1987 741.Chavez E. et al Arch.Biochem.Biophys. 183,460,1977 742.Jung D.W. et al Arch.Biochem.Biophys. 183,452,1977 743.Henquin J.C. et al Nature301,73,1983 744.Walker D.H. et al Biochim.Biophys.Acta. 1055,295,1990 745.Kato H. et al J.Biol.Chem. 264,3II6,I989 746.Takenawa T. et al Adv.Sec.Messenger Phosph.Res. 24,317,1990 747.Tuazon P.T. et al Adv.Mess.Phosph.Res. 23,123,1991 748.Kohtz D.S. et al J.Neurochem. 52,285,I989 749.Bar-Zvi D. et al J.Biol.Chem. 261,9614,1986 750.Kishimoto A. etal J.Biol.Chem. 262,1344,1987 75I.Suzuki T. FASEB J. 5,I87,I99I 752.Meggio F. et al Eur.J.Biochem. 159,31,1986 753.Yanagita Y. et al Proc.Natl.Acad.Sci.USA 84,925,I987 754.Simkovski K.W. et al J.Biol.Chem. 255,6456,I980 755.Gattica M. et al Proc.Natl.Acad.Sci.USA 84,324,1987 756.Wolf R.A. et al J.Biol.Chem. 260,7295,1985 757.Hazen S.L. et al J.Biol.Chem. 266,5629,I99I 758.Suga K.et al J.Biol.Chem. 265,12363,1990 759.Snyder F. et alAnn.N.Y.Acad.Sci. 629,168,1991 760.Stewart A.G. et al Proc.Natl.Acad.Sci.USA 87,3215,1990 761:Tanizawa H. et al Biochem.Pharmacol.38,2559,1989 762.Martiny-Baron G. et al J.Biol.Chem. 264,I8052,I989 763.Nickel R. et al J.Plant.Physiol. 139,205,1991 764.Martiny-Baron G. et al Plant.Physilo. 99,1635,1992 765.Someroorn J. et al Proo.Natl.Acad.Sci.USA 84,8834,1987 766.Zorzapo A. et al J.Biol.Chem. 264,12358,1989 767.Jamus D.EO -et al Nature 333,183,1988 768.Slot J.W. et al Proc.Natl.Acad.Sci. 88,88I5,I99I 769.Marchesselli V.L. etal J.Biol.Chem. 265,9140,1990 769a.Johannes E. et al Bioessays 13,331,1991 770.Ignatius M.J. et al Proc.Natl.Acad.Sci.USA 83,II25,I986 77I.Meiri K.F. et al J.Neurosci. 10,256,1990 772.Kaziro Y. et al Annu.Rev.Biochem. 60,349,1991 773.Bar-Sagi D. Anticancer Res. 9,I427,I989 774.Sweet R.W. et al Nature 311,273,1984 775.James G.et al Biochemistry 29,2623,1990 776.Barbacide M. Annu.Rev.Biochem. 56,779,1987 777.Hale A. Science 249,635,1990, 778.Hannock J.F. et al Cell 57,1167,1989 779.Segev N. et al Cell 52,915,1988 780.Good B. et al Curr.Biol. 3,626,1991 78IOBar-Sagi D. et al Oncogene 3,463,1988 782.Kelly R.B. Curr.Biol. 3,654,1991 783.Philipis M.R. et al J.Biol.Chem. 266,1289,1991 784.Fisher von Mollard G.R.et al Proc.Natl.Acad.Sci.USA 87, 1988,1990 /(%:Fischer von Mollard G.F. et al Nature 349,79,1991 786.Spiegel A.M. et al Trends Biochem.Sci. I6,338,I99I 787.Willumsen B.M. et al Nature 310,583,1984 788.Coggins P.G. et al J.Neurocem. 56,1095,1991 789.Downward J. Nature 359,273,1992 790.Dolphin A.C.Trends Neurosci. 7,287,1988 791.Bar-Sagi D. et al Science 233,1061,1986 792.Myrdal S.E. et al J.Cell Biol. 102,1224,1986 7930Bar-Sagi Do et al J.Cell.Physiol. Suppl.5,69,I987 794.Bar-Sagi D. et al Cell 42,84I,I985 795.Hagag N. et al Nature 3I9,680,I986 796.Mulcahy L.S. et al Nature 3I3,24I,I985 797.Bar-Sagi D. et al Cell 42,84I,I985 798.Walworth N.C. et al EMBO J. 8,I685,I989 799.Mayorga L.S. et al Cell Regul.I,II3,I989 800.Donaldson J.G. et al J.Cell Biol. II2,579,I99I 80I.NakakafuM. et al J.Biol.Chem. 267,I9448,I992 802.Freissmuth M. et al FASEB Je 3,2I25,I989 803.Skene J.H.P. Neu9rosci.Res. Suppl.I3,EII2,I990 804.Stoker K.M. et al Dev.Biol.I49,406,I992 805.Zuber M.x. et al Science 244,II93,I989 806.Yankner B.A. et al Mol.Brain Res. 7,39,1990 807.Masure HmR. et al Biochemistry 25,7553,I986 808.Doster S.K. et al Neuron 6,635,I99I 809.Burry R.W. et al J.Neurocytol. 20,I33,I99I 810.Etienne R.A. et al Biochem.Biopys.Res.Comm. I87,839,I992 811.Van Lookeren Campagne M. et al Neurosci.Lett. I37,I29, I992 8I2.Van Lookeren Campagne M. et al Neuroscience 50,35,I990 8I3.Meiri K.F. et al J.Neurosci. 8,2571,1988 814.Hoof C.O.M. et al J.Cell Biol. I08,III5,I989 815.Janssen U. et al Brain Res. 570,2I,I992 816.Meiri K.F. et al J.Neuroschi. I0,256,I990 817.Oeistreicher A.B. et al Brain Res. 375,267,I986 818.Goslin K. et al J.Neuroschi.I0,588,I990 819.Allsopp T.E. et al J.Neurosci. 9,I13,I989 820.Heemskerk F.M.J. et al J.Mol.NEUROSCHI. 2,II,I990 821.De Grasn P.N:e. et al J.Neurosci. 55,2I39,I990 822.Morton A.J. et al Eur.J.Neurosci. 4,9I0,I992 823.Dekker L.V. et al Eur.J.Pharmacol. I88,II3,I990 824.Skene J.H.P. Neurosci.Res.Suppl.I3,SII2,I990 825.Spencer S. et al Exp.Neurol-II5,I67,I99I 826.Alexander K.A. et al J.Biol.Chem. 262,6I08,I987 827.Chan S.Y. et al J.Neurosci. 6,36I8,I986 828.Albert K.A. et al Proc.Natl.Acad.Sci.USA. 8I,3622,I984 829.Basi G.S. et al Cell 49,785,I987 830.Labate M.E. et al Neuron 3,299,I989 831.Zuber M.X. et al Nature 34I,345,I989 832.Skene J.H.P. et al J.Cell Biol.I08.6I3,I989 833. Rosenthal A. et al EMBO J. 6, 3641, 1987 834. Baudier J. et al J. Biol. Chem. 264, 1824, 1989 835. Moss D.J. et al J.Neurochem. 54, 729, 1990 8360Donalto R. et al J.Neurochem. 53, 566, 1989 837. Rambotti M.G. et al J. Histochem. Cytochem. 38. 1583, 1990 838. Haimoto H. et al J.Neurochem. 48,917,1987 839.Meiri K.R. et al Proc.Natl.Acad.Sci.USA 83, 3537, 1986 840.Fano G. et al FEBS Lett. 255, 381, 1989 841. Zolese G. et al Cell Calcium II,35,I990 842.Zolese G. et al Cell Calcium 9, 149, 1988 843.Huang J.-W. et al Anticancer Res. 12; 1107, 1992 844. Boege F. et al Eur. J. Biochem. 199, 1, 845. Strittmatter S.M. et al Nature 344, 836, 1990 846. Sudo Y. et al EMBO J. II,2095,I992 847. Strittmatter S.M. et at J. Biol. Chem. 266, 22465, 1991 848. Apel E.D. et al J. Biol. Chem. 266, 10544, 1991 849. Meiri K.F. et al J.Neurosci. 11, 3155, 1991 850.Han X.-f. et al J. Neurochem. 57,I325,I99I 851. Pizano M.R. et al Biochem. Biophys. Res. Comm. 155, 1207, 1988 852. Myrdal S.E. et al J. Cell. Biol. 102, 1244, 1986 853.3enowitz L.I. et al Trends Neurosci. I0,527,I987 854.Benowitz L.I. et al J.Neurochem. 48. 1640, 1987 855.Serruno 1. et al J.Cell Biol. 105, 1731, 1987 856. Diaz-Nido J. et al J. Cell Biol. 106, 2057, 1988 857. Jolles J. et al Nature 286, 623, 1980 858. Aloyo V.J. et al J. Neurochem. 41, 649, 1983 859. Van Dongen C.J. et al Biochem. Biophys. Res. Comm. 128, 1219, 1985 860. Eberhardt D.A. et al Biochem. J. 268, 15, 1990 861. Westhead E.W. Annu. N.Y. Acad. Sci. 493, 92, 1987 862. Shimizu T. et al J. Biochem. 44, 1001, 1992 863. Kitagawa Y. et al J. Biol.Chem. 257, 4547, 1982 864.Carroll D. et al J.Biol.Chem. 264, 7345, 1989 865.Apel E. et al J.Biol.Chem. 266,I0544,I99I 866.Dokas L.A. et al Progr.Brain Res. 89, 27, 1991 867. Lichtifield D.W. et al FEBS Lett. 261, 117, 1990 868.Han Y.F. et al J.Neurochem. 59,364,I992 869.Liu Y. et al J.Biol.Chem. 264, 12800, 1989 870.Pauloin A. et al J. Biol. Chem. 26I,I2568,I986 871. Block L.H. e al Trends Pharm. Sci. 9, 214, 1988 872. Sugya I.I. et al Biochim. Biophys. Acts 1165, 19, 1992 873.Katan M.B. Lancet i, 607, 1986 874. Ross R.N. Engl. J. Med. 314, 488, 1986 875. Braunwald E. "Heart Disease" W.B.Sanders Company, Phila delphia,1992 (4th Edition) 876.Basu S.H. et al J. Biol. Chem. 257,9788,I982 877. Werb Z. er al J. Biol. Chem. 258, 10642, 1983 878.Anwerx J.H. et al Biochemistry 27, 2651, 1988 879. Davignon J. et al Arteriosclerosis 8, 1, 1988 880. Repe M.G. et al J. Immunol. 136, 3716, 1986 881. Ignatius M.J. et al Science 236, 959, 1987 882. Roth M. et al Proc. Natl. Acad. Sci. USA 88, 1888, 1991 883. Anwerx J.H. et al Mol. Cell. Biol. 9, 2298, 1989 884. Pitas R.E. J. Biol. Chem. 265, 12722, 1990 885.Steinberg D. et al N. Engl. J. Med. 320,915,1989 886. Goldstein J.L. et al Annu. Rev. Biochem. 46, 897, 1977 887. Hajjar D.p. et al FASEB J. 6, 2933, 1992 887a.Basu S.K. et al Proc. Natl. Acad. Sci. USA 73,3I78,I976 886. Boyd H.C. et al Am. J. Pathol. 135, 815, 1989 889.Laragu J.H. & Brenner B.M. "Hypertension" Raven Press, N.Y., 1990 889a.Schonfeld G.Bioch.Soc.Transac. 17, 53, 1989 890.Datorre SD. et al J.Lipid Res. 32,II59,I99I 891. Hwang S.B. J. Lipid. Med. 2, 123, 1990 892.Hirata F. et al Science 209, 1082, 1980 893. Meij J.T.A. et al Mol. Cell. Biochem. 90, 137, 1989 894. Panagia V. et al Am. J. Physiol. 253, H8, 1987 895. Braquet P. et al Physiol. Rev. 39, 98, 1987 896.Snyder P. et al Ann. N.Y. Acad. Sci. 629,I68,I99I 897. Suga K. et al J. Biol. Chem. 265, 1263, 1990 898. Sugiura T. et al J Biochem. 94,I7I9,I983 8990Sugiura T. et al Lipids 25,775,I990 900.Sugiura T. et al Lipids 18, 125, 1983 901. Dewald B. et al Biochem. Biophys. Res. Comm. 128, 297, 1985 902.Worthen G.W. et al J.Immunol. 140, 3553, 1983 903.Nichizuka Y. Science 258, 607, 1992 904.Price B.D. et al J.Biol.Chem. 264,I6638,I989 905. Farischman F. et al Science 231, 407, 1986 906. Diaz-Laviada Io et al EMBO J. 9,3907,I990 907.Lacal J.C. et al Nature 330, 269, 1987 908. Pons F. et al Proc. Natl. Acad. Sci. USA 87, 7851, 1990 909. Arahata K.A. Nature 333, 861, 1988 910. Koeng M. et al J. Biol. Chem. 265, 4560, 1990 911. Byers T.J. et al J. Cell. Biol. 109, 1633, 1989 912. Hammonds R.G. Cel 51, 1, 1987 913. Koeng M. et al Cell 53, 219, 1988 914. Ohlendieck K. et al J. Cell Biol. 112, 135, 1991 915.Ervasti J.M. et al Nature 345,3I5,I990 9I600hlendieck K. et al J.Cell Biol. II2,I35,I99I 9I70Gross R.A. et al FEBS Lett. 262, 87, 1990 9I8.Chelly J. et al Nature 333, 858, 1988 919. Byers T.J. et al J.Cell Biol. 115, 411, 1991 920. Wakayama Y. et al Acta Neuropathol. 80, 618, 1990 921. Murayama T. et al Proc. Japan Acad. Sci. 668, 96, 1990 922.Leszyk J, et al Biochem.Biophys.Res.Comm. 160, 210, 1989 923. Lager J.J. et al M/S-Medicine, Sciences 7, 805, 1991 924.Beggs A.H. et al Am.J.Hum.Gen. 49, 54, 1991 925. Love D.R. et al Br. Med. Bull. 45, 659, 1989 926.Arahata,K. et al J.Neurol.Sci. 101, 148, 1991 927. Bulman D.E. et al Am. J. Hum. Gen. 48, 295, 1991 928. England S,B. et al Nature 343,I80,I990 929.Angelini C. et al Neurology 70,808,1990 9300Watkins S.C. et al Nature 333,863,I988 931. Cullin M.J. et al Proc. Roy. Soc. Lond.B 240, 197, 1990 932.Ascadi G. et al Nature 352,8I5,I99I 933.Peper K. et al Phys.Rev. 62,I27I,I982 934. Kandel E.R., Schwartz J.H. & Jessell T.M. "Principles of neural science", 3th Ed., Elsvier, N.Y., 1991 935. Morgan D.L. et al Physiol. Rev. 64, 103, 1984 936.Huxley A.F. Ann.N.Y.Acad.Sci. 8I,446,I959 937. Stevens C.F. Sci. Amer. 241, 54, 1979 938. Ellisman M.H. et al J. Cell Biol. 68, 752, 1976 939.Schamalbruch H. Nature 281, 195, 1979 940.Ellisman M.H. et al Exp.Neurol.58,59,I978 941. Heuser J.E. et al J. Neurocytol. 3, 108, 1974 942.Ereund H.J. Physiol.Rev. 63,387,1983, 943.Close R. J.Physiol. 173,74,1964 944.Redfern P.A. J.Physiol. 209,70I,I970 945. Francini-Armstrong C. Fed.Proc. 34,I382tI975 946.Wakayama Y. et al Neurology 34, 1313, 1984 974. Sirken S.M. et al Exp. Neurol. 44, 147, 1989 948. Engel A.G. et al International Congress series N 149, p. 71, 1990 949. Pellegrino C. et al J. Cell Biol. 17, 327, 1963 950.Wheater P.R., Burkitt H.G. & Dumids V.G "Functional histology" 2nd Ed.,Longeman group Lim. Edinbourg,I987 951. Tidball J.G. Exp. Cell. Res. 170, 469, 1987 952.Tidball J.G. et al Am.J.Pathol. I38,I7,I99I 953. Shimizu T. et al Biomed. Res. 10, 405, 1989 954. Frochner S.C. J. Cell Biol. 114, 1, 1991 955. Bloch R.J. et al J. Cell Biol. 97, 217, 1983 956. Tidballl J.G. et al J.Cell Biol. I03,I465,I986: 957.Shear C.R. et al J. Cell Biol. IoI,240,1985 958. Sealock R. et al J. Cell Biol. 113, 1133, 1991 959. Miike T. et al Brain Dev. II, 344, 1989 960.Sammito C.E. et al Muscle, Nerve 13, 493, 1990 961. Rash J.E. et al J.Cell Biol. 63,567,I974 962. Zelena J. Nature 205, 295, 1965 963. Tidball J.G. Exp. Mol. Pathol. 40, 1, 1984 964.Eisenberg B.R. et al Am. J. Anat. I7I,273,I984 965. Ovalle W.K. Anat. Embryol. 176, 281, 1987 966. Mokki B. et al Neurology 25, 1111, 1975 967.Watkins S.G. et al J.Neurol.Sci. 82, 181, 1987 968. Torres L.F.B. et al Brain 110, 269, 1987 969. Stauber W.T. et al J. Neurol. Sci. 82, 181, 1987 970.Jackson H.J. et al Eur.J.Clin.Inv. 14,369,1984 971. Florence J.M. et al Neurology 35, 758, 1985 972. Valentine B.A. et al Annal. Neurol. 26, 588, 1989 973. Newham D.J. et al Muscle, Nerve 9, 59, 1896 974.Nuttal F.Q. et al J. Lab. Clin.Med. 7I,847,I968 -975.Jackson M.J. et al Biochem.J. 241, 403, 1987 976.McArdle A. et al Clin.Sci. 80,367,I99I 977.Turner P.R. et al Nature 335, 735, 1988 978.Huard J. et al Synapse 7, 135, 1991 978a. Glaser K.B. et al Adv. Exp. Med. Biol. 275, 1, 1990 979oLakatta E. Persp.Biol.Med. 32,42I,I989 980.Schneider M.F. et al Nature 242,244,I973 981. Spach M.S. et al Circ. Res. 48, 39, 1981 982. Spach M.S. et al Ann. N.Y. Acad.Sci. 591, 62, 1990 983.Betz W.J. et al J.Physiol. 352,I89,I984 984.Beam K.G. et al Nature 3I3,588,I985 985. Caldwell J.H. et al J. Gen. Physiol. 87, 407, 1986 986.Angelides K.J. Nature 321, 63, 1986 987. Haimovich B. et al J.Neurosci: 7, 2957, 1987 988.Gordon R.D. et al J.Neurosci. 8, 3742, 1988 989. Bloch R.J. et al Am. J. Physiol. 254, C345, 1988 990. Flucher B.E. et al Neuron 3, 163, 1989 991. Fosset M. et al Eur. J. Pharmacol. 86, 141, 1983 992. Almers, W. et al J. Physiol. 312, 177, 1981 993. Siri L.N. et al J. Physiol. 305, 87, 1980 994.Gage P.W. et al Science 158, 1700, 1967 995. Eisenberg R.S. et al Science 158, 1702, 1967 996. Repasky E.A. et al Cell 29, 821, 1982 997. Lubit B.W. et al J. Cell Biol. 86, 891, 1980 998. Padro J.V. et al Proc. Natl. Acad. Sci. USA 80, 1008, 1983 999. Padro J.V. et al J. Cell Biol. 97, 1081, 1983 1000. Garamvolgyli N. J. Ultrastr. Res. 13, 435, 1965 1001. Bergman R.A. Bull. Johns Hopkins Hosp. 103, 267, 1958 1002. Levin K.R. et al Circ. Res. 46, 244, 1980 1003. Frank J.S. et al Am. J. Physiol. 231, 555, 1976 1004. McNutt N. Circ. Res. 37, 1, 1975 1005.Masson-Pevet M. et al Circ. Res. 45, 621, 1979 1006. Frank J.S. dans "Calcium and the heart", Ed.Langer G.A., Raven Press Ltd, N.Y., 1990 p.I I007.Gatella Go J.Ultrastr.Res. 65, 125, 1978 1008. Poulos, A.C. et al J. Ultrastr. Res. 96, 114, 1986 1009. Severs, N.J. J. Cell Sci. 90, 341, 1988 1010. Dulhunty A.F. et al J. Physiol. 250, 513, 1975 1011. Noser, T.M. et al Am. J. Physiol. 250, C807, 1991 1012. Zhu Y. et al Pflügers Arch. 418, 1, 1991 1013. Hidalgo C. et al J. Bioenerg. Biomembr. 21, 267, 1989 1014. Volpe P. et al Nature 316, 347, 1985 1015. Vergara J. et al Proc. Natl. Acad. Sci. USA 82, 6352, 1985 1016. Suarez-Isla B.A. e al Biophys. J. 54, 737, 1988 1017. Mignety G.A. et al Nature 342, 192, 1989 IOI8.Furuichi T. et al Nature 342, 32, 1989 1019. Meissner G. et al Adv. Exp. Med. Biol. 304, 241, 1991 1020. Nabauer M. et al Science 244, 800, 1989 1021. Hymel B. et al Ann.N.Y.Acad.Sci. 560,I85,I989 I022.Ikemoto N. et al Biochemistry 28, 6764, 1989 1023. Ikemoto N. et al Biochemistry 28, 6764, 1989 1024. Franzini-Armstrong C. et al J. Cell Biol. 105, 49, 1987 1025.Michalak M. et al J.Biol.Chem. 255, 1317, 1980 1026. Hingorani S.R. et al Analitical Biochem. 194, 204, 1991 I027.Shears S.B. Cancer Celas 3,97,1991 1028. Lau Y.H. et al J. Biol. Chem. 252, 5562, 1977 1029. Huxley A.F. Brit. M. Bull. 12, 167, 1956 I030.Philipson K.D. dans "Calcium and the heart" Ed.Langer G.A. Raven Press Ltd. N.Y., 1990 1031. Hilgemann D.W. et al Proc. R. Soc. Lond. B 230, 163, 1987 1032. Bridge J.H.B. et al Science 241, 823, 1988 1033. Bers D.M. et al Am. J. Physiol. 258, C944, 1990 1034. Lipp P. et al J. Physiol. 397, 601, 1988 I035.Barcenas-Ruiz B. et al Science 238,I720,I987 1036. Hilgemann D.W. Prog. Biophys. Mol. Biol. 51, 1, 1988 1037. Nilius B. et al Nature 3I6,443,1985 1038. Miller R.J. Science 235, 46, 1987 1039. Carbone E. et al J. Physiol. 386, 547, 1987 1040. Sommer J.R. & Jennings R.B. dans "Heart and Cardiovascular System. Scientific foundations". Eds.Pozzard H.A. et al Raven:Press, 2nd Ed., N.Y., I992 p.3 1041. Rash J.E. et al J. Cell Biol. 63, 567, 1974 1042. Winegard S: J. Gen Physiol. 62, 693, 1973 1043.Leblanc N. et al Science 248, 372, 1990 1044. Fry C.H. et al Mol. Cell. Biochem, 89, 127, 1989 1045. Sheu S.S. et al Circ. Res. 57, 578, 1985 1046. Brehm P. et al J. Physiol. 350, 631, 1984 I047.Guhargy F0 et a; J. Physiol. 363,II9,I985 I048.Lansman J.B. et al Nature 325, 811, 1987 1049. Morris C.E. et al Science 243, 807, 1989 1050. Guharay et al J. Physiol. 352, 685 1051. Vincent A. et al Trends Neuroasci, 12, 496, 1989 1052. Miller R.J. FASEB J. 4, 3291, 1990 I053.Kunze D.I. et al Science 244, 1189, 1989 1054. Zucker R.S. et al Proc. Natl. Acad. Sci. USA 83, 3032, 1986 1055. Miller R.J. et al Ann. N.Y. Acad. Sci. 522, 269, 1988 1056. Burges J. et al Ann. N.Y. Acad. Sci. 560, 297, 1989 I057.Pelzer D. et al Rev. Physiol. Biochem.Pharmacol. 114, 107, I990 1058. Hagiwara S. et al Ann. Rev. Neurosci. 4, 69, 1981 1059. Pelzer D. et al dans "The heart and cardiovascular system. Scientific foundations", Eds. Fozzard H.A. et al, Raven Press, 2nd Ed., N.Y., 1992. p. 1049 1060. Somlyo A.P. & Somlyo A.V. dans "The heart and cardiovascular system. Scientific foundations". Eds. Fozzard H.A. et al, Raven Press, 2nd Ed., N.Y., 1992, p. 1295 I06I.Walker J.W. et al Nature 327,249,I987 1062. Somlyo A.P. et al Phil. Trans. Roy. Soc. Lond. B 320, 399, 1988 1063. Devine C.E. et al J. Cell Biol. 52, 690, 1972 1064. Somlyo A.P. Circ. Res. 57, 497, 1985 1065. Komori S. et al J. Physiol. 433, 495, 1991 1066. Bona M. et al J. Physiol. 355, 677, 1984 1067. Moreland R.S. et al Adv. Exp. Med. Biol. 304, 61, 1991 1068.Alberts B. et al "Molecular Biology of the cell", 2nd Ed., Garland Publ., N.Y. 1989 1069.Bray D. et ai Science 239, 883, 1988 1070. Mitcheson T. et al Neuron 1, 761, 1988 1071. Woods A. et al J. Cell Biol. 111, 19a, 1990 1072. Coucheman J.R. et al J. Cell Sci. 39, 149, 1979 1073. Abercrombie M. et al Exp. Cell Res. 59, 393, 1970 1074. Abercrombie M. et al Exp. Cell Res. 67, 359, 1971 1075. Izzard C.S. et al J. Cell Sci. 42, 81, 1980 1076. Izzard C.S. et al J. Cell Sci. 21, 129, 1976 1077. Hayssan J.E.M. et al Exp. Cell. Res. 140, 85, 1982 1078. Heath J.P. et al Cell Motil. Cytoskel. 14, 382, 1989 1079. Dann G.A. Exp. J. Cancer 16, 6, 1980 1080. Woods A. et al Collag. Res. 8, 155, 1988 I08I.Haemmerli G. Exp. Cell. Med I0,89,I985 1082. Oliver J.M. et al Phil. Trans. R. Soc. Lond. B 299, 215, 1982 1083. Singer J. et al Annu. Rev.Cell Biol. 2, 337, 1986 1084. Bretschner M.S. Sci. Amer. 257, 72, 1987 1085. Abercrombie M. et al Exp. Cell. Res. 62, 389, 1970 1086. Abercrombie M. et al Exp. Cell. Res. 73, 536, 172 1087. Heath J.P. Nature 302, 532, 1983 1088. Margolis L.B. et al Biomembrani 7, 514, 1990 1089. Yannariello-Brown J. Cell Biol. 106, 1773, 1988 1090.Gehlsen K.R. et ai J. Biol. Chem. 264,I9034,I989 1091. Boryczko D. et al J. Neurosci. 6, 1241, 1986 1092. Takada Y. et al Nature 326, 607, 1987 1093. Wayner E.A. et al J. Cell Biol. 105, 1873, 1987 I094. Tomaseli K.J. et al J.Cell Biol. I05,2347,I987 I095. Chun J.-S. et al J.Cell Biol. III,I43a,I990 Io96. Beacham D.A. et al Exp.Cell Res. I80,69,I990 I097. Bignold L.P. et al Eur.J.Cell Biol. 53,27,I990 I098. Runyon R.B. et al J.Cell Biol. I07,I863,I988 I099. Duband J.L. et al J.Cell Biol. I07,I385,I988 II00.Regan C.M. et al J.Cell Biol. III,289a,I990 II0I. Leytin V.L. et al Thromb.Res. 55,395,I989 II02. Ungar F. et al Nature 3I9,787,I986 II03. Zieske J.D. et al J.Cell Biol. I09,57I,I989 II04. Eckstein D.J. et al Exp.Cell.Res. 20I,83,I992 II05. Izzard C.S. Cell Motil.Cytoskel. I0,I37,I989 II06. Hoch R.S. et al Cell Motil.Cytoskel. I4,27I,I989 II07. Molony L. et al J.Biol.Chem. 262,7790,I987 II08. Ruhnan K. et al J.Mol.Biol. 2I0,I4I,I989 II09. Tilney L.G. et al J.Cell Biol. 77,536,I978 III0. Dibiasic R.L. et al J.Cell Biol. I07,263I,I988 IIII. Forscher P. et al J.Cell Biol. I07,I505,I988 III2. Wang Y.l. J.Cell Biol. I0I,597,I985 III3. Tilney L.G. et al J.Cell Biol. 93,820,I982 III4. Mooseker M.S. et al J.Cell Biol. 95,223,I982 III5. Okabe S. et al J.Cell Biol. I09,I58I,I989 III6. Izzard-C.S. et al Exp.Biol.Med. IO.II985 III7. Aberorombie M. et al Exp.Cell Res. 60,437,I970 III8.Argraces W.S. et al Cell 58,623,I989 III9. Beckerle M.C. et al Cell Motil.Cytoskel. I6,7,I990 II20.Pasquale J.A. et t, al J.Cell Biol. I05,2803,I987 II2I. Burridge K. et al J.Cell Biol. 97,359,I987 II22. Bershadsky A.D. et al Exp.Cell Res. I58,433,I985 II23.Small J.V. et ai Exp.Biol.Med. I0,54,I985 II24.Geiger B. et al J.Cell Biol. 99,83s,I984 II25.Rinnerthaler G. et al J.Cell Biol. I06,747,I988 II26. Hoffman T. et al J.Imminol. I46,692,I99I II27. Axelrod J. et al Trands Neurosci. II,II7,I988 II28. Parsegian V.A. et al Ciba Found.Symp I03,9,I984 II29.Goldberg D.J. J.Neurosci. 8,2596,I988 II30.Suarez-Isla B.A. et al Dev.Brain Res. I984 II3I. Alister L. et al Dev.Biol. 94,35I,I982 II32. Marks P.W. et al J.Cell Biol. II0,43,I990 II33. Jaconi M.E.E. et al J.Cell Physiol. II2,I249.I99I II34. Stracke M.L. et al J.Biol.Chem. 264,2I544,I989 II35.Singer J. et al Annu.Rev.Cell Biol. 4,337,I989 II36. Bray D. et al Science 239,883,I988 II37.Gullberg D. et ai Exp.Cell Res. I86,264,I990 II38. Harris A. Exp.Cell Res. 77,285,I973 II39. Silberman S. et al Exp.Cell Res. I89,64,I990 II40 Walrafen C.E. J.Chem.Phys. 44,3726,I966 II4I. Taylor J.B. et al Trans. Faradey Soc. 5I,II83,I855 II42.Barone G0 et al Carbohydr.Res. 9I,I0I,I98I II43. Kabayama M.A. et al Can.J.Chem. 36,563,I958 II44. Franks F. Phil.Trans.Roy.Soc.Lond. B 278,33,I977 II45. Baron G. et al J.Solut.Chem. I3,209,I984 II46. Kahn L.P. J.Am.Chem.Soc. 74,2492,I952 II47. Edge C.J. et al Biochemistry 29,I972,I990 II48. Reevs R.E. Adv.Carbohydr.Chim. 6,I08,I95I II48a. Paulsson J.C. Trends Biochem.Sci. I4,272,I989 II49.Järnefelt J. et al Trends Biochem.Sci. 3,II0,I978 II50.Singhai A. et al Bioessays I2,223,I990 II5I. Feizi T. et al Nature 3I4,53,I985 II52. Adheff J.A. CRC Oncology/Hematology 9,37,I989 II53. Rastan S. et al J.Embryrol.Exp.Morph. 87,II5,I985 II54. Loveless W. et al Developement Io8,97,I990 II55 Fenderson B.A. et al Bioessays I2,I73,I990 II5a.Shur B.D. Biochim.Biophys.Acta 988,389,I989 II56.Bayna E.M. et al Cell 53,I45,I988 II57. Parsegian V.A. et al Ciba Found.-Symp. I03,9,I984 II58. Sharom F.J. et al Biochem.Biophys.Acta 507,280,I978 II59. Goodby J.M. Mol.Cryst.Liq.Cryst. II0,205,I984 II60.Vyas N.K. et ai Science 242,I290,I988 II6I. Lemieux R.U. et al Carbohydr.Res. I78,293,I988 II62. Bixby J.L. et al J.Cell Biol. II0,I253,I990 II63. Roth S. et al J.Cell Biol. 5I,536,I97I II64. Liu C.K. et al J.Clin.Inv. 65,I365,I980 II65.Erikstein B.K. et al Eur.J.Immunol. 22,II49,I992 II66. Balsamo J. et al J.Biol.Chem. 265,2923,I990 II67.Kaplan H.A. et al J.Biol.Chem. 258,II505,I983 II68. Eckstein D.J. et al J.Cell Biol. I08,2507,I989 II69. Miller D.J. et al Nature 357,589,I992 II70. Farley A.J. et al Cell 6I,I57,I990 II7I. Hortsch M. et al J.Biol.Chem. 265,I5I04,I990 II72. Le Douarin N.M. Cell 38,353,I984 II73. Newgreen D.E. et al Cell Tiss.Res 2II,269,I980 II74. Duband J.L. et al Dev.Biol. 93,308,I982 II75. Thiery J.P. et al Dev. Biol. 93,324,I982 II76.Stocks S.CO et Biochem.JO 268,275,I990 II77. Lehmann S. et al Proc.Natl.Acad.Sci.USA 87,6455,I990 II78. Tingström A. et al J.Cell Sci. 96,I7,I990 II79. Sato M. et al Dev.Biol.I02,5I4,I984 II80. Edelman G. Sci.Amer 260,44,I989 II8I. Eggens I. et al J.Biol.Chem. 264,9476,I989 II82.Fenderson B.A. et al Bioessays I2,I73,I990 II83. Bourrillon R. et al Int.Rev.Cytol. II6,257,I989 II84. Rastan S. et al J.Embryrol.Exp.Morphol. 87,II5,I985 II85. Bird et al Dev.Biol. I04,449,I984 II86.Gasser R.F. "Atlas of human embryos" Harper & Row Publishers, Hagerstown, Maryland, I975 II87, Zagyansky Y. Gazette of PCT N 28, Publication WO/06837 (I988) "Structure of IgG plus antigen and complement, its mechanisms and its important consequences" II88. Dudich I.V. et al Mol. Immunol. I2,I273,I983 II89. Dudich E.I. et al Dokl.Acad.Sci.USSR 260,I259,I98I II90. Galili U. et al J.Biol.Chem 263,17755,I988 II9I. Deal C.D. et al J.Biol.Chem. 265,I2774,I990 II92. Olafson R.W. et al J.Biol.Chem 263,I2240,I990 II93. Dwyer D.M. Exp.Parasitol. 4I,34I,I977 II94. Chang K.-P. Mol.Biochem.Parasitol. 4,67,I98I II95. Handman E. et al EMBO J. 4,329,I985 II96. Blackwell J.M. et al J.Exp.Med. I62,324.I985 II97. Russel D.G. et al J.Immunol. I36,26I3,I986 II98. Channon J.Y. et al Immunology 53,345,I984 II99. Brickman M.J. et al J.Protozool. 37,219,I990 I200. Cassels F.J. et al J.Biol.Chem. 265,I4I27,I990 I20I. Relman D. et al Cell 6I,I375,I990 I202. Strömberg N. et al EMBC J. 9,200I,I990 I203. Pouliot Y. et al Dev.Biol. I5I,292,I990 I204. Takeichi M. Annu.Rev.Biochem. 59,237,I990 I205. Wahelem M.J. Biochem. J. 228,I,I985 I206.Shimada Y. J.Cell Biol. 48,I28,I97I I207. Butcher M. et al J.Biol.Chem. 265,5862,I990 I208. Nemeron G.R. et al Virology I32,I86,I984 I209.Field B.N. & Knipe D.M. "Virology", Raven Press Ltd, N.Y.,I990 I2IO.Rueckert R.R. dans "Virology" Field B.N. & Chipe D.M. Raven Press Ltd,N.Y.,I990 p.507 I2II. Lanéelle G. & Asselineau J. "Biochimie bactérienne" Hermann, Paris, I990 I2I2.Karlsson K'.A. et al dans "Sourcebook of bacterial protein toxins" Ed.Alouf J.E. & Freer J.H., Acad.Fress, London, I99I,p.435 I2I3.Montecucco C0 et al dans "Sourcebook of bacterial protéin toxins" Ed. Aleuf J.E. & Freer J.H., Acad.Press., London, I99I, p.45 12I4.Sandvig E. & Olsnes S. dans "Sourcebook of bacterial protein toxins", Ed. Alouf J.E. & Freer J.H., Acad.Press, London,I99!, p.57 I2I5. Rothberg K.G. et al J.Cell Biol. II0,637,I990 I2I6. Basu S.K. Biochem.Pharnmacol. 40,I94I,I990 I2I7. Meriske E.M. et al J.Biol.Chem 263,I5705,I988 I2I8. Harris A.K. et al Science 208,I77,I980 I2I9. Bray D. Dev.Biol. I02,379,I984 I220.Kucik D.F. et al Nature 340,3I5,I989 I22I. Sheetz M.P. et al Cell 6I,23I,I990 I222. Lee G. et al Science 247,I229,I990 I223. Danovski B.A. et al J.Cell Biol. III,422a,I990 I224. Heath J.P. J.Cell Sci. 60,33I,I983 I225. Couchman J.P. et al J.Cell Sci. 39,I49,I979 I226. Kaiho M. et al Exp.Cell Res. II3,222,I978 I227. Conrad P.A. et al Cell.Methyl.Cytoskel. I4,527,I989 I228. Kleitman N. et al Cell Motyl.Cytoskel. I3,288,I989 I229. Lazarides E. J.Histochem.Cytochem. 23,507,I975 I230. Regan C.M. et al J.Cell Biol. III,289a,I990 1231.Basson C.T. et ai J.Cell Biol. 110,789,1990 I232. Yannariello-Brown J. et al J.Cell Biol. I06,I773,I988 I233. Grebecki A. Protoplasma I23,II6,I984 I234. Nister M. et al Cell 52,79I,I988 I235. Hartwig J.H. et al Am.J.Physiol. 253,6707,I987 1236. Hays R.M. et al Cell TissReas. 240,433, I985 I237.Bretscher A.J.Cell Biol. I08,92I,I989 I238. Moeseker M.S. Annu.Rev.Cell Biol.I,26I,I985 I239.Condrier E. et al Protoplasma I45,99,I988 I240. Willard M. et al Brain Res. Bull. I8,8I7,I987 I24I.Volberg T. et al J.Cell Biol. I02,I832,I986 I242.Geiger B. et al J.Cell Biol. I0I,I523,I985 I243.Geiger B. et al Cell Diff.Dev. 32,343,1990 I244.Wagner M.G. et al J.Cell Biol. II9,I63,I992 I245. Korn E.D. et al Curr.Opin.Cell Biol. 2,57,I990 I246. Shariff A. et al J.Cell Biol. II0,691,I990 I247.Mangeat P.H. Biol.Cell 64,26I,I988 I248.Coleman T.R. et al Cell Motil.Cytoskel. I2,225,I989 I249.Heath J.P. et al J.Cell Sci. 29,I97,I978 I250. Amato P.A. et al J.Cell Biol. I02,I047,I986 I251. Lazarides E. et al Cell 6,289,I975 I252. Buband J.L. et al J.Cell Biol.I02,I60,I986 I253.Repasky E.A. et al Cell 29,28I,I982 I254.Burn P. et al Nature 3I4,469,I985 I255.Burn P.M. et al Science 235,476,I987 I256.Avnur Z. et al J.Cell Biol. 96,I622,I983 I257. Otto J.J.Cell Motil.Cytoskel. I6,I,I990 I258. Bendori R. et al J.Cell Biol. I08,2383,I989 I259. Bershadsky A.D. et al Cell Motil.Cytoskel. 8,274,I987 I260. Meyer R.K. Eur.J.Cell Biol. 50,49I,I989 I261.Burridge K. et al Nature 308,744,I983 I262. Otto J.J. J.Cell Biol. 97,I283,I983 I263. Belkin A.M. et al FEBS Lett. 220,29I,I987 I264. Wachstock D.H. et al Biochem.Biophys.Res.Comm. I46,554, I987 I265. Dahl S.C. et al J.Cell Biol.I08,I83,I989 I266.Fitzgerald X.A. et al J.Biol.Chem. 262,3936,1987 I267.Lochner B. et al J.Cell Biol. 59,I99a,I973 I268.Barnekow A. et al EMBO J. 5,70I,I986 I269. Gee C.E. et al Proc.Natl.Acad.Sci.USA 83,5I3I,I986 I270. Grove B.D. et al AmJ.Anat. I88,44,I990 I271. David-Pfeuty P. WEur.J.Cell Biol. 36,I95,I985 I272. Rosioli N.A. et al Eur. J.Cell Biol. 58,522,I988 I273. Ungar F. et al Nature 3I9,787,I985 I274. Zieske J.D. et al J.Cell Biol. I09,57I,I989 I275. Duband J.L. et al Developement I08,42I,I990 I276. Bruin T. et al Thromb.Haem. 65,206,I99I I277. Greenberg S. et al J.Exp.Med I72,I853,I990 I278.McNeil H. et al Cell 62,309,I990 1279. Pollenberg G.E. at al Call Tiss. Res. 250, 227,1987 1280. Hogland A.S. Tiss.Cell 17,649,1985 1281.Langanger G. et al J.Cell Biol. 99,I324,I984 I282. Isobe Y. et al Proc. Natl. Acad. Sci. USA 85,6758,1988 I283. Bretscher A. et al J.Cell Biol. I00,I656,I988 I284. Langanger G. et al J.Cell Biol. I02,200,I986 I285. Volberg T. et al Differention 32,34,I986 I286. Small J.V. EMBO J. 4,45,I985 I297. Tokuyasu K.T. J.Cell Biol. I08,43,I989 I288. Masuda T. et al J.Cell Biol. II9,5543,I992 I289. Bennett V. Gurr.Opin.Cell Biol. 2,5I,I990 I290. Nelson W.J. et al Proc.Natl.Acad.Sci. USA 8I,3292,I984 I291. Morrow J.S. et al J.Cell Biol. I08,455,I989 I292. Holley M. Bioessays I3,II5,I99I I293. Endo T. et al J. Biochem. (Tokyo) 92,I457,I982 I294. Vandekerckhove J. Curr.Opin.Cell Biol. 2,4I,I990 I295. Sobue K. et al J.Biol.Chem. 266,I2II5,I99I I296. Yamashiro-Matsumara S. et al J.Cell Biol. I06,I973,I988 I2997. DeBiasio R.L. et al J.Cell Biol.I07,263I,I988 I298. Curlier M.-F. et al Biochimie 66,305,I984 I299. Glenney J.R. et al Cell 34,503,I983 I300. Staiger C.J. et al Curr.Opin.Cell Biol. 3,33,I99I I30I. McCurdy D.W. et al Cell Motil.Cytoskel. I5,76,I990 I302. Dennerel T.J. et al J.Cell Biol. I07,655,I988 I303. Walter R.J. et al J.Cell Biol. 86,I99,I980 I304. Kim H. et al J.Cell Biol. 80,266,I979 I305. Valee R.B. et al Proc.Natl.Acad,Sci.USA 80,6259,I983 I306. Joshi H.C. et al Exp.Cell Res. I63,233,I986 I307. Bourgiguignon L.Y.W. et al Int.Rev.Cytol. 87,I95,I984 I308. Baas P.W. et al J.Cell Biol. III,495,I990 I309. Okabe S. et al J.Cell Biol. I07,65I,I988 I310. Mitchison T. et al Neuron I,76I,I988 I3II.Sherwin T. et al Cell 57,211,1989 I3I2. Gordon-Weeks P.R. Bioessays P.R. Bioessays I3,235,I99I I3I3. Bulinski J.C. et al Bioessays I3,285,I99I I3I4. Matten W.T. et al J.Cell Biol. III,I959,I990 I3I5. Wandosell F. et al J.Biol.Chem. 262,8268,I987 I3I6. Cheng N. et al J.Biol.Chem. 263,3935,I988 I3I7.Schulze E. et al Nature 334,356,I988 I3I8.Wiche G. Biochem.J. 259,I,I989 I3I9.Matus A. J.Cell Sci.Suppl. I5,6I,I99I I320.Drubin D.G. et al J.Cell Biol. I03,2739,I986 I32I.Diaz-Nido J. et al J.Cell Sci.Suppl. I5,5I,I99I I322.Vierck G. et al Braian Res. 508,257,I990 I323.Gordon-Weeks P.R. J.Cell Sci.Suppl. I5,49,I99I I324.Diaz-Nido J. et al J.Neurochem. 54,2II,I990 I325.Diaz-Nido J. et al J.Cell Biol. I06,2057,I988 I326.Steiner B. et al EMBO J. 9 3539 I990 I327.Brugg B. et al J.Cell Biol. I07,643,I988 I328.Drubin D.G. et al J.Cell Biol. I0I,I799,I985 I329.Greene L.A. et al J.Cell Biol. 96,76,I983 I330.Aletta J.M. et al J.Cell Biol.I06,I573,I988 I331.Wiche G. CRC Rev.Biochem.Mol.Biol. 24,4I,I990 I332.Olmsted J.B. Curr.Opin.Cell Biol. 3,52,I99I I333.Janmey P.A. et al J.Biol.Chem. 262,I2228,I987 I334.Wang E. et al J.Cell Biol. 98,76I,I984 I335.Yin H.L. et al J.Cell Biol. I06,805,I988 I336.Lassing I. et al Exp. Cell Res. I74,I,I985 I337.Kucera J.L. et al J.Biol.Chem. 265,5345,I990 I338.Hartwig J.H. et ai J.Cell Biol. I08,467,I989 I339.Polard T.D. et al Annu.Rev.Cell Biol. 55,987,I986 I340.Kwiatkowski D.J. et al J.Cell Biol. I08,I717,I989 I34I.Matsudaira P. et al Cell 54,I39,I988 I342.Onji T. et al Biochem.Biophys.Res.Comm. I55,9I,I988 I343.Onji T. et al Biochem.Biophys.Res.Comm. I32,307,I985 I344.Dabrowska R. et al J.Muscl.Res.Comm. 6,29,I985 I345.Cooper J.A. et al J.Cell Biol. I04,49I,I987 I346.Sakurai T. et al Neuroscience 38,743,I990 I347.Mercier F. et al J.Cell Biol.I08,44I,I989 I348.Heath J.P. Nature 302,532,I983 I349.Aunis D. et al J.Exp.Biol. I39,253,I988 I350.Lee J.K. et al J.Cell Biol. I05,2IIa,I987 I351.Perrin D. et al Nature 3I5,589,I985 I352.Black J.D. et al J.Cell Biol. I06,97,I988 I353.Levine J. et al Proc.Natl.Acad.Sci.USA 80,I9I,I983 I3540Nelson W.J. et al Proc.Natl.Acad.Sci.USA 80,I626,I983 I355.Burridge K. et al J.Cell Biol. 95,478,I982 I356.Seubert P. et al Synapse I,20,I987 I357.Harris A.S. et al J.Biol.Chem. 264,I740I,I989 I358.Perrin D. et al Nature 326,498,I987 I359.Onji 2. et al Biochim.Biophys.Acta 9I2,283,I987 I360.Sutherland C. et al J.Biol.Chem. 264,578,I989 I361.Ngai P.K. et al Biochem.J. 244,4I7,I987 I362, Scott-Woo G.C. et al Biochem. J. 252,463, 1988 1363. Magle A.T. et al Curr.Opin.Cell Biol. 3,854,1991 I364.Dellagi K. et al Nature 298,284,1982 1365.Kollega J. et al J. Cell. Biol. 114,993,1991 1366.Guiliano K.A. et al Cell.Motil.Cytoskel. 16,14,1990 1367.Seraydarian K. et al Biochim.Biophys.Acta 133,399,1967 I368.Briskey E.J. et al Biochim.Biophys.Acta I33,4I2,I967 1369.McKenna N.M. et al J.Cell Biol. 109,1163,1989 1370.Mangeat P.H. et al J.Cell Biol. 98,1363,1984 1371.Rosen J.J. et al Exp.Cell Res. 107,139,1977 I372.Rolins B.J. et al Biochemistry 18,5651,1979 I373.Rolins B.J. et al Biochemistry 18,141,1979 1374.Lark M.W. et al Fed.Proc. 18,141,1979 1375.Duband J.L. et al J.Cell Biol. 102,160,1986 I376.Woods A. et al J.Bioi.Chem. 260,I0872,I985 1377.Bilen J.B. Cell Growth.Diff. 2,409,1991 1378.Rohrschneider L.R.Proc.Natl.Acad.Sci.USA 77,3514,1980 1379.Rohrschneider L.R. et al J.Virol. 51,547,1984 1380.Gentry L.E. et al J.Virol.51,539,1984 1381.Maher P.A. et al EMBO J. 3,483,1984 1382.Maher P.A. et al Proc.Natl.Acad.Sci.USA 82,6576,1985 1383.Yonemoto W. et al Mol.Cell.Biol. 7,905,1987 1384.Turner C.E. et al J.Biol.Chem. 264,11938,1989 1385.Beckerle M.C. et al Cell Motil.Cyteskel. 16,7,1990 1385a.Beckerle M.C. et al Cell 51,569,1987 1386.Adams J.C. et al Cell 63,425,1990 1387.Hirst R. et al Proc.Natl.Acad.Sci.USA 83,6470,1986 1388.Terzidie-Trabelsi H. et al Environ.Health.Persp. 97,103, 1992 1389Mack S. et al Biol.Repr. 28,1032,1983 1390.Majumder G.C. et al Biochemistry I3,2857,I974 1391.Chapman.D.A. et al Biol.Reprod. 31,627,1984 1392.Hoshi M.Adv.Exp.Med.Biol. 207,251,1986 1393.Tulsiani D.R.P. et al J.Cell Biol. 109,1257,1989 1394.Nikolajozyk B.S. et al Biol.Reproduc. 46,366,1992 1395.Sosa M.A. et al J.Repr.Fert. 93,279,1991 1396.Brown G.M. et al Env.Health Persp. 97,91,1992 1397.Dauber J.H. et al Env.Res. 27,226,1982 1398.Warheit D.B. et al Am.Rev.Resp.Dis. 129,301,1984 1399.Edwards R.A. et al Biochem.Cell.Biol. 70,63,1992 1400.Rozengurt E. Science 234,I6I,I986 1401.Moolenaar W.H.Annu.Rev.Physiol. 48,463,1986 1402.Grainer J.L. et al Dev.Biol. 68,396,1979 I403.Winkler M.M. et al Nature 297,558,I980 1404.Busa W.B. et al Am.J.Physiol. 246,R409,1984 1405.Swann K. et al Nature 314,274,1985 1406.Whitawer M.J. et al Quart.Rev.Biophys. 15,593,1982 1407.Rabin M.S. et al Proc.Natl.Acad.Sci.USA 83,357 1408.Recklies A.D. et al Biochem.Biophys.Res.Comm.131,402,1985 1409.Mason R.W. et al Biochem.J. 248,449,1987 1410.Muscatelli D. et al J.Cell Biol.109,2519,1989 1411.Burgess W.H. et al Cell Regul. 2,87,1991 1412.Renko M. et al J.Cell.Physiol. 144,108,1990 1413.Florkiewicz R.Z.Proc.Natl.Acad.Sci.USA 86,3978,1989 I4I4.Prats H. et al Proc.Natl.Acad.Sci.USA 86,1836,I989 1415.Sommer A. et al Biochem.Biophys.Res.Comm. 160,1267,1989 1416.Moscatelli D. et al Proc.Natl.Acad.Sci.USA 84,5778 1417.Chang F.N. et al Arch.Biochem.Biophys. 172,627,1976 1418.Karn J. et al J.Biol.Chem. 252,7307,1977 1419.Alix J.H. Adv.Exp.Med.Biol. 231,371,1988 1420.Paik W.K. et al Yosei Med.J. 27,159,1986 1421.Dever T.E. et al J.Biol.Chem.264,20518,1989 1422.Reporter M. et al Biochem.Biophys.Res.Comm. 43,644,1971 1423.Siegel F.L.Adv.Exp.Med.Biol. 231,341,1988 1424.Wang C. et al Proc.Natl.Acad.Sci.USA 78,3531,1981 1425.Geraci G. et al Adv.Exp.Med.Biol. 231,327,1988 1426.Kim S. et al Adv.Exp.Med.Biol. 231,327,1988 1427.Reporter M. et al J.Gen.Physiol. 57,244,1971 1428.Makrides S. et al Nucl.Acid.Res. 16,2349,1988 1429.Yow H. et al Proc.Natl.Acad.Sci.USA 85,6394,1988 I430.Meadus W.J. et al Exp.Ceîl Res. I87,25,I987 1431.Gal S. et al J.Cell Biol. 100,535,1985 1432.Sahagian G.G. et al J.Biol.Chem. 257,11145,1982 1433.Rubartelli A. et al Biochem.Soc.Trans. 19,255,1991 1434.Achkor C. et al J.Biol.Chem. 265,13650,1990 1435.Dong J. et al J.Biol.Chem. 264,7377,1989 1436.Prence E.M. et al J.Cell Biol. 110,319,1990 1437.Erickson A.H.J.Cell Biochem. 40,31,1989 1438.Salminen A. et al Biochem.J. 272,39,1990 1439.Gal S et al Biochem.Biophys.Res.Comm. 139,156,1986 1440.Goretzki L. et al FEBS Lett. 297,112,1992 1441.Katunuma N. et al Curr.Top.Cell Regul. 22,71,1983 1442.Gottesman M.M. Proc.Natl.Acad.Sci.USA 75,2767,1978 1443.Kominini E. et al Am.J.Patho. 127,461,1987 1444.Jimi T. et al Brain 115,249,1992 1445.Hamilton R.T. et al Curr.Top.Dev.Biol. 24,193,1990 1446.Rabin M.S. et al Proc.Natl.Acad.Soi.USA 83,357,1986 1447.Nilsen-Hamilton M. t al Mol.Cell.Endocrinol. 77,115, 1991 1448.Nilsen-Hamilton M. et al Biochem.Biophys.Res.Comm. 101,411,1981 1449.Nilsen-Hamilton M. et al Cell 20,19,1980 1450.Pledger W.J. et al Proc.Natl.Acad.Sci.USA 74,4481,1977 1451.Lee S.L. et al J.Biol.Chem. 263,3521,1988 1452.Stearns N.A. et al Arch.Biochem.Biophys. 283,447,1990 1453.Katunuma N. et al Rev.Physiol.Biochem.Pharmacol. 108,1, 1987 1454.Gallownay A.C. et al Surgery 96,435,1984 1455.Gingras M.C. et al Cancer Res. 50,4061,1990 1456.Denhardt D.T. et al Oncogene 2,55,1987 1457.Inoue R. et al Metabolisme 28,801,1979 1458.Thalacker F.W. et al J.Biol.Chem. 262,2283,1987 1459.Chiang C.-P. et al J.Biol.Chem. 261,10478,1986 1460.Moses H.S. et al J.Cell Physiol.Suppl. 5,1,1987 1461.Hesketh J.E. et al Biochem.J. 277,1,1991 I462.Cervera M. et al Cell 23,113,1981 1463.Van Venrooij W.J. et al Exp.Cell Res. 135,79,1981 1464.Bonneau A.M. et al J.Biol.Chem. 100,1209,1985 1465.Bag J. et al Biochem.Cell.Biol. 65,565,1987 1466.Lawrence J.B. et al Cell 45,407,1986 1467.Singer R.H. et al J.Cell Biol. 108,2343,1989 1468.Sundell C.L. et al J.Cell Biol. 111,2397,1990 1469.Black M.M. et al J.Neurosci. 6,1004,1986 1470.Garner C. et al Nature 336,674,1988 1471.Yierseli J.K. et al Development 108,289,1990 1472.Mentaberry A. et al Proc.Natl.Acad.Sci.USA 83,1111,1986 1473.Steward O. et al J.Neurosci. 6,412,1986 1474.Davis L. et al Nature 330,477,1987 1475.Horne Z. et al Biochem.J. 268,231,1990 I476.Isaacs W.B. et al Proc.Natl.Acad.Sci.USA 84,6I74,I987 I477.Brach M. et al EMBO J. 11,1479,1992 1478.Angel P. et al Biochim.Biophys.Acta 1072,129,1991 1479.Sherman M.L. et al J.Biol.Chem. 265,3320,1990 1480.Fan C.-M. et al Nature 352,733,1991 I48I.Riviere Y. et al Nature 350,625,1991 1485.Angel P. et al Nature 352,733,1991 1483.Blank V. et al Trends Biochem.Sci. 17,135,1992 1484.Baeuerle P. et ai Cell 53,2II,I988 1485.Angel P. et al Biochim.Biophys.Acta 1072,129,1991 1486.Greenberg M.E. et al Nature 311,433,1984 1487.Kruijer W. et al Nature 312,711,1984 1488.Sassone-Corsi P. et al Nature 334,314,1988 1489.Sheng M. et al Neuron 4,477,1990 1940.Lenardo M.J. et al Cell 58,227,1989 1491.Baeuerle P.A.Biochim.Biophys.Acta 1072,63,1991 I492.Schmitz M.L. et al EMBO J. I0,3805,I99I 1493.Ten R.M. et al EMBO J. 11,195,1992 1494.Lennarz W.J. et al Biochim.Biophys.Acta 1071,149,1991 1495.Mundy D. et al Cell 40,645,1985 1496.Frederick J.M. et al J.Neurosci. 4,3112,1984 1497.Barter D.A. et ai Proc.Natl.Acad.Sci.USA 80,4I74,I983 1498.Tryggvasen K. et al Biochim.Biophys.Acta 907,191,1987 1499.Khokhar R. et al Science 243,947,1989 1500.Hicks N.J. et al Int.J.Cancer 33,835,1984 1501.Hulaka A.N. et al J.Neurosurg. 59,461,1983 1502,Couch C.B. et al Cell 32,257,I983 1503.Couch C.B. et al J.Biol.Chem. 259,5396,1984 1504.Rothman J.E. et al Nature 355,409,I992 1505.Mellan I. et al Cell 68,829,1992 1506.Kornfeld R. et al Annu.Rev.Biochem. 54,631,1985 1507.Van Meer G.Annu.Rev.Cell Biol. 5,247,1989 1508.Liscum L. et al J.Lipid.Res. 33,1239,1992 1509.Lange Y. J.Lipid Res. 33,315,1992 1510.Gueze H.J. et al J.Cell Biol. I04,I7I5,I987 1511.Lange Y. et al J.Biol.Chem. 260,15592,1985 1512.Kaplan M.R. et al J.Cell Biol. 101,453,1985 1513.Urbani L. et al J.Biol.Chem. 265,1919,1990 1514.Lange Y. et al J.Biol.Chem. 263,9366,1988 Legends pour les figures. Fig.I. Le schéma principal de l'arrangement et des liaisons croisées dans la microfibre du collagène contenant les cinq brins de triple hélice N N 1-5) avec la distance "stragger" D=67 nm. Les quatre loci des liaisons croisées principales sont situées symétriquement à deux extrémités terminales (N et C) des brins. Les deux hydroxyllysines (Hyl) avec les carbohydrates attachés sont à 0,4D ae chaque extrémité et les deux allysines (AL) sont situées à N09 (acide aminé de terminaison N) et N 16 -(de terminaison C) dans les télopeptides flexibles.Notez qu'une partie des chaînes des carbohydrates /glucose-galactose (glu-gal) et galactose (gal)/ participe dans les interactions intercarbohydrate homologue /1,2/ entre les brins et une autre partie est libre pour les interactions intercollagènes (reg. Figs. 2,3 et 4). La longueur de chaque brin est 4,4D et la longueur de chaque "trou"- est 0,6D. La réaction de Schiff entre les allysines (C=0) et les hydroxyllysines (NH2) produit les liaisons ketamines (-N=C-), interactions entre lesquelles doivent conduire aux liaisons croisées intracolla- gènes hydroxypyridinium (pas bien expliqées) /30/. On voit bien la première fois, dans une preuve excellente de cette structure, que la quantité des brins dans la microfibre ne doit être que 5 (!!) parce que la longueur (avec "le trou" des chaînes du collagène dans le brin est aussi 5D (!!) et--le déplacement des brins (entre eux) est égal à ID. C'est-à-dire ce déplacement (ID) garantit l'interaction entre les extrémités des brins pour l'assemblage et le nombre 5 des brins garantit l'interaction dans la microfibre (évidemment symétrique) entre le brin "N Ii' et "N05". A.La vue de la microfibre du collagène perpendiculaire à son axe long (la microfibre est déroulée). B.La vue parallèle a l'axe long de la microfibre du collagène (in situ). Il y a jusqu' aux vingt ordres sur chaque longueur D avec la périodicité méridionale. La distance intermoléculaire équatoriale est près de 12 et le diamètre de l'emballage des microfibres est égal à 35-40 . Fig.2. La structure des connections dans les noeuds: collagène-PG-FN avec les PG comme les sonts. Les chaînes oligosaccharides des PG font les interactions avec les sucres homologues des collagènes et les chaînes des GAG des PG font les interactions avec leurs sites correspondants (où les charges jouent le rôle majeur) créant par tels moyens les noeuds c ollagène-PG-FN. Fig.3. La structure de la famille des filaments de FN (in situ) en MEC selon la localisation immunochimique de FN. Le schéma principal d'après l'interprétation de /59/ corrigée.La partie des FN de MEC est éloignée de la membrane reg Fig.5. La distance entre les filaments de FN est arbi- taisre. Fig.4. lie schéma des interactions de collagène-FN en MEC. La partie (#la moitié) des microfibres du collagène est occupée par les FN (les échelles sont approximativement selon la-Fig.8 /60/). (ab- les anticorps contre le collagène). Fig. 5. La structure générale de la--matrice extracellulaire (MEC). Les deux récepteurs membranaires de la fibronectine (FN) : "RGD" et "BBXA" réagissent avec le même monomère FN (du dimère) pour activer la liaison du microfilament et de la transglutaminase membranaire qui commence à entrecroiser les dimères dans la première couche autour de la membrane ("N-C" -entrecroisement) (avec activation de la phosphatase' #V-10). Via liaison conséquente de FN est située perpendicolairement à la cellule par l'échange de S-S:: #. L'héparane sulfate PG péricellulaire (ou chondroitin sulfate protéoglycane) s'agrège à la surface de FN au niveau de deux- sites de liaison de l'héparine sur la FN en induisant une interaction forte avec la création de noeuds de MEC: FN-PG-Collagène. La conséquence de ces interactions est la colocalisation de PG avec FN dans la MEC. Prenez attention aux carges négatives fortes # de HS en position-clef de la MEC. Fig. 6. Les interactions entre les récepteurs "principals", le système intégrine et les MF pendant le signal "principal". A.La situation avant le signal: récepteurs et intégrines libres dans la membrane cellulaire. On voit aussi le système intégrine immobilisée participant au contact avec le substrat (s'il en a) /le substrat est la FN ou une autre mo lécule avec le site "RGD" (semblable)/. B.Les complexes intermédiaires après le début des interac tions: récepteur-ligand: (I) Complexe des récepteurs "principals" (mineurs, avec la chaîne GAG) avec les nouvelles protéoglycanes membranaires ayant les interactions des GAG homologues (au moins bivalentes synthétisées après le signal). Les carbohydrates de ces PG (d'après le signal) leur-permettent aussi réagir avec les gangliosides et cérébrosides du signal /I,2/ facilitant la création de tels complexes avec la déhydratation près de la surface membranaire. (2) Complexe de l'agrégation de la syndecane /aussi synthétisé (en majorité) d'après le signal/ (avec ces PG) immobilisée par les MF en conséquence de cette agrégation sans, généralement, des molécules de MEC (les dégrés de l'agrégation des PG sont différents). L'intégrine mobile fait l'interaction conséqutive avec les MF près de la région spéciale de l'attachement des MF aux agrégats de syndecane stabilisant ce complexe. (3) Fin des interactions: récepteur-ligand. L'immobilisation du complexe (I) du récepteur "principal" mineur par le complexe (2) des agrégats de syndecane , des PG, des intégrines et des MF avec l'aide des interactions G AG-G AG homologues. Fig.7. Les états des molécules de l'intégrine dans la mem brane cellulaire dépendant de la présence de FN dans le mi- lieu: (I)- le complexe de FN "monovalent" avec l'intégrineétat mobile diffuse; (2) le complexe de FN "monovalent" avec l'intégrine- état endocytable sans la diffusion libre (il y a quelques connections par les protéines spéciales avec les ME- V);'(3) le complexe de FN "bivalent" avec l'intégrine et la syndecane- état immobile/le dépouillement ("sheding") à l'extérieur peut avoir lieu/. Fig.8. Les populations des PG dans la région cellulaire (MEC développée): (I) protéoglycanes sur la surface cellulaire: (a) dans la membrane plasmique, (b) dans la MEC incluant la syndecane dans la membrane plasmique et les PG dans la région de la surface cellulaire servant comme le pont entre le collagène et la FN; (2) protéoglycanes à l'intérieur de la cellule récyclant entre les compartiments intracellulaires et la surface cellulaire; (3) proéoglycanes sécrétées à l'ex- térieur. (L-îysosomes). Fig.9. La structure de l'espace Sericellulaire près des cellules cancéreuses. La quantité de lthyaluronate synthétisé par les cellules cancéreuses est grande. La très petite quantité de la FN fait le complexe avec l'hyaluronate avec l'aide des protéoglycanes de chondroitine sulfate synthétisées à nouveau. Il y a la zone (autour de la surface de ces cellules) très hydratée et peu fibrilaire, sans les charges concentrées. Fig.IO. Le développement du contact synaptique cholinér gique (nicotinique) entre le neurone (motoneurone- &alpha;) et le muscle squelettique. A.Le stade initial (la densité des myoblastes est faible): les myoblastes (les cellules progéniteures) se divisent avec le bFGP comme le mitogène et l'axone éloigné s'allonge dans la direction du gradient ( V) de bFGF (la CSPG de la matrice des myoblastes ne lie pas le bFGF li- béré). La matrice est dégénérée avec la dominance de l'hya- luronate.B.La concentration des myoblastes augmentée:le changement de la matrice HA-FN (#II-IO, Fig.9) pour la matrice FN (11-6, Fig.5) avec la HSPG et le collagène /le bFGF s'attache aux molécules de HSPG en concentration augmentée) avec la densité augmentée des cellules/.Il y a le nombre augmentée des charges négatives de HSPG près de la surface cellulaire (#11-6, Fig.5) et il y a le nombre des charges positives (dans ce cas-là) des molécules de bFGF qui neutralisent les charges négatives.La neutralisation des charges potentialisent la fusion des myoblastes. C.Le moment après la fusion: les molécules de FN disparaissent de la MEC, les axones "doivent" choisir entre les amas voisins LN-agrine.Les molécules de IN sont attachées à la MF du myotube avec l'aide des protéines de la liaison de LN. Le nerf pousse tout près du muscle le jour quand les myotubes commencent à apparaître. D.Le moment du rencontre direct entre le neurone et le myotube. Le neurone (avec l'aide de l'agrine sur sa surface ) réagit directement avec l'agrine liée à la LN sur la MP du myotube produisant les changements de conformation: I) de EN qui conduit aux interactions EN-intégrine; 2)du complexe bFG?-HSPG lié à la IN qui conduit au signal bFGF-bFGER (Fig.II). Au même temps, l'interaction directe du neurone avec le fragment LRE de sLN inhibe l'elongation du neurone. Fig.II. Le déclenchement du signal après l'interaction de l'axone du nerf avec la MEC dumyotube. A. L'inhibition de l'excroissance du neurone après une interaction avec le site "LRE" inhibant de IN (la région du domaine E8). B. La transi tion du changement du conformation aux molécules de LN de la MEC après l'interaction interagrine (intercarbohydrate). C. L'interpositions des interactions neurone-LN-memdu domaine E8) avec les intégrines correspondantes sur la surface des myotubes (le début de la dimérisation de IN- Fig. I2). D. L'interaction des intégrines avec les MF (avec l'aide des autres protéines comme l'actinine-L et la vinculine. E. L'agrégation des molécules de la syndecane près des intégrines avec l'aide des MF. F. L'interaction de la IN (le site de la liaison de i'héparine du fragment E3) avec la syndecane et l'activation du signal de l'intégrine pendant les interactions déjà bivalentes : I) N-intégrine et 2) IN-syndecane (la chaîne de l'héparane sulfate): G. La libération des HSPG (incluant les nouvelles molécules de syndecane) après l'activation des intégrines (#II, Fig.8) dans la MEC pour: I) la potentialisation de l'action de bFGF; 2) L'interconnection entre les syndecanes et les molécules de (bFGF)R; 3) la création de la LB initiale.H. l'interaction de bFGF avec les récepteurs (bFGF)R créant,avec le signal de l'intégrine,la machinerie du signal avec la création de la LB. Fig.12. Les interpositionbs des interactions neurone-LN-membrane musculaire (de Fig.II).(E8,E3,FI- les fragments de LN, "YIGSR"- site de IN, Nd-nidogène, "LRE"- site donnant le sig nal négatif, W -interactions intercarbohydrate homologue entre M les agrines de l'axone et de la MEC sur la IN; il y a le lamellipodium de l'axone) Fig.13. Le développement de la création de la lame basale. (Il doit avoir lieu aussi la présence des molécules de HSPG de la densité faible avec les chaînes GAG qui doivent garder les dimères de EN d'une manière très proche, mais avec quelque distance, par leurs interactions GAG homologue intercarbohydrate /I,2/).A.Après l'interaction des intégrines avec le domaine E8 de LN (site "RGD" semblable) et après l'interaction de la syndecane avec le domaine E3 de LN (site héparine) (Fig.12) il y a la dimérisation des bras de LN longs conduisant par le changement de conformation des molécules de LN entières de l'extrémité distale des bras longs (E3) jusqu'aux autres domaines (procès indépendent de Ca2+). B. L'association consécutive des domaines globulaires des bras courts (procès dépendant de Ca2+). Fig.14.La structure générale de la membrane basale. A. Lamina lucida (LL) est représenté par les bras longs de EN agrégés et le lamina densa (LD) est représenté par le réseau des bras courts connectés. Les PG sont liées aux bras de IN par les forces hydrophobes autour du "squelette" EN-PG avec les interactions homologues entre les carbohydrates du collagène et des PG. Près de la région croix de IN, les chaînes du collagène se separent continuant leur "chemin" "en solitaire" autour des bras courts en créant les interconnections des monomères ("têt à têt") aux régions NCI près des domaines distals globulaires. Le nidogène aide pour l'allongement correct du collagène au bras courts de IN. Fig.15. Le schéma principal de l'espace occupé (en plan) par le réseau des bras courts dans le LD. Les molécules de LN s'agrègent comme les dimères (Figs.I3,I4) (designés comme et chaque dimère a un voisin semblable. (Ce desin résemble ceux de /3I7,438 et 439/). La "vue" est perpendiculaire au plan de LB (LD). Telle structure reflète la présence des "traces" doubles aussi dans le LD /438,439/. Fig.I6.La voie moléculaire de la filtration de l'urine a travers des capilaires glomérulaires des reines. Il y a deux, couches adjacentes de LD (le réseau des bras courts- Fig.15) avec les polarités opposées et il y a deux couches correspondantes de LL de deux côtés de ces ID. On peut voir comment le LD fait la filtration de l'urine /(pp) pertubrances-pieds des cellules épithéliales (EF);(eu)- espace urinaire/. Fig.I7.Le résumé de l'action des molécules de bFGF Sendant le développement du contact du nerf avec le muscle. On peut distinguer les deux signaux majeurs différents consécutifs de bFGF. I). Le procès de l'augmentation de la concentration des molécules de bFGF à la MEC (lob) (avec la rétroaction positive - le procès autocrine). 2).D'après le seuil des concentrations des molécules de bFGF il y a un autre signal de bFGF qui déclenche les procès de l'élimination des molécules de bFGF de MEC (LB) et,par conséquence, le procès de la différentiation terminale du muscle (et du nerf). Fig.I8La structure de la "yae" C a-K( C a) servant à la propagation synchronisée de la contraction musculaire corticale /sauf les stades "terminals" à la MP et aux "calcisomes" où il n'y a pas d'activation de PKCV. -Fig.26/. A. Le schéma sim plifié de la propagation de "vague" Ca2+K+ (Ca) à la région de la surface membranaire.B.Ies stades principals de la "vague" Ca-K: (I) contraction à la zone A; (2) activation de la pHA2 sur la surface membranaire entre la zone A et B; (3) pénétration du Caext par la structure "roue" à l'intérieur (courant de Ca à l'intérieur) en complexe final avec le FA; (4) la création des eicosanoides (à partir de AA libéré par la phA2) et leur interaction avec le récepteur sur la surface cellulaire; (5) l'activation de la phC membranaire par le récepteur activé de l'eicosanoide (en produsant IP3 et DG);(6) l'activation de la FKCM par (Ca2++ DG) et l'élévation 2+ du pHin par conséquence; (7) la libération du Ca des vési- cules "PKC" par IP3 avec l'aide de l'élévation du pin intracellulaire, l'activation de la PKCV et l'élévation du pH dans la vésicule; (8) la libération de CaM de son complexe avec la GAP-43 sur la vésicule avec l'aide de la PKCV activée; (9) la désagrégation des chromatogranines avec les chaînes HS et le détachement des vésicules des MF par conséquence; (IO) l'action de la CaM (+Ca) libérée: a) activation de la Ins(I,4,5)P3-kinase pour la production de IP4, b)activation de la gelsoline, 3)activation de l'appareil contractile; (II) l'activation du courant de K par les molécules IP4 (courant de K+ à l'extérieur), l'activation de la caséine kinase 11. vésiculaire et le déclenchement de la pompe H+ des vésicules, la diminution de pH intravésiculaire, l'agrégation des chromatogranines et l'attachement des vésicules à la prochaine couche des MF corticals de cette zone B; (I2) l'agrégation de la myosine corticale (d'après la diminution de la concentration de K intracellulaire) et le début de la contrac tion nouvelle à la zone B "pour" déclencher le cycle nouveau. -(pendant les stades (IO-I2,I) il y a l'activation de la Ca hUPase transportant les ions de Ca à l'extérieur. C.La struc tura "roue" pour le courant soutenu de Ca extérieur à travers de la MP. La micelle "inverse" est créée avec les molécules de lysoPA (d'après l'action de la phA2 spécifique pour le PA sur la surface cellulaire). Les cations bivalents du Ca font la connection des lysophospholipides; Les phaspholipides (avec Ca) quittent" la roue" dans la couche intérieure de la MP d'après l'action de l'acyltransférase à la couche intérieure. Fig.19. Le sentier du cycle vésiculaire entre le"calcisome" (C) et la MP avec les ceintures successives des microfilaments corticals (une après autre). Fig.20. La structure du cycle des vésicules "PKC". /La structure analogue du cycle (sauf, principalement, les régions de la libération des substances des vésicules) ont les granules et les vésicules synaptiques/. Le but du cycle est le transport des substances par la machinerie du signal de la région des "calcisomes" (ER) (de cytoplasme entourant) à la région de la construction de la machinerie du signal à partir du récepteur principal. Pendant ce cycle vésiculaire et le déplacement des vésicules en espace il y a le cycle du métabolisme de PIP2 sur la surface des vésicules absolument nécessaire pour son fonctionnement.Les numéros du cycle (I-II) ne correspondent pas exactement à la position ou l'avancement de la vésicule, mais correspondent fortement à la stade du mé métabolisme de PIP2, quoique il faut souvenir que les dérivés lipidiques phosphorvlés des PI sont en proportion mineure relativement la quantité totale des PI. Ce cycle peut se répéter le nombre des fois pendant le signal (ce qui correspond bien à la périodicité enrégistrée des concentrations du Ca. In (intracellulaire) pendant le signal. Mais quand le signal starrêt, les vésicules (avec les substances déjà apportées à la zone des récepteurs) s'arrêtent aussi au, stade IO, pour avoir la possibilité sans les contractions cellulaires (!!!) (d'un système de la machinerie du signal qui n'existe pas encore) avoir l'accès aux stades I et 2 et libérer son contenu "à la zone de l'arrivée". L'ouverture des vésicules est aussi au stade (6) près des r'calcisomes" (Fig.18). Pendant les stades (1-5), c'est les molécules de PIPt qui sont sur la sur- face des vésicules. Pendant le stade 5, ces molécules sont découpées par PhCV en DG et IP3. Le stade (6): la transformation DG#PA, le stade (7): la transformation PA -PA-CMP; le stade (8): la transformation PA-CMP#PI, le stade (9): la ère phosphorylation: PI#PIP, le stade (IO): l'interpose entre les signaux, le stade (II): la 2ème phosphorylation PIP#PIP2. Fig.21.A.L'interaction des vésicules "PKC" (s'ouvrant à l'intérieur) avec la MP.La vésicule s'attache à la MP, à la région de l'action du récepteur principal aux agrégats de HS de la syndecane (Fig.6C). Il doit avoir lieu l'apparition des canaux à l'intérieur de la vésicule grâce (particulièrement) aux changements de conformation induits par le GTP aux protéines G (comme ras 21) (IV-7,Fig.26) ayant les chaînes isoprènes perturbant (à cause de ces conformations individuelles) la couche de la membrane vésiculaire. La communication avec l'extérieur ne doit pas avoir lieu.La situation différente doit avoir lieu pendant les interactions à liin- térieur, près de ER, mais où les vésicules 'tPKC" doivent être différentes: ou elles s'ouvrent (avec l'aide de GTP) dans le cytoplasme (comme aussi les vésicules synaptiques doivent faire) ou elles font la fusion avec la partie spéciale de ER (C.-à-d. avoir la situation "inverse" aux vésicules synaptiques qui s'ouvrent à l'intérieur dans le cytoplasme et qui font la fusion avec la MP à l'intérieur partie de la cellule- Fig.30). B.l'interaction des granules de la sécrétion (ou des vésicules synaptiques) avec la MP. Il y a la fusion du granule avec la MP. L'exocytose du content a lieu à l'extérieur. Les "puits recouverts" sont nécessaires seulement pour le détachement du granule de MP. Les molécules de clathrine apparaissent seulement quand le granule fait l'espace fermé avec son propre l'interieur et quand la pompe H fonctionne accumulant les ions H dans cet espace fermé Fig.22. Le flux sommaire des ions pendant l'ouverture et le relax des récepteurs de IP dans: les vésicules (les~granules) et les "calcisomes".A Les vésicules: I.Le détachement des vé- sicules des MF /Fig.I8 (7,9)/: I)libération de Ca par les canaux des récepteurs IP3 (et Cl ) (le pH est acide à l'intérieur des vésicules); 2)échange entre les ions de Ca2+ et quelque remplissage des vésicules avec Ca et l'élévation du pH; 3) désagrégation des chromatigranines A avec ses chaînes HS et le détachement des vésicules des MF, par conséquence. 2.Réattachement des vésicules aux MF /Fig.I8(II)/: I)déclenchement de la pompe H (à cause de PAF (Fig.27B) et de la diminution de[K]in- intérieur) avec le cotransport des ions de O1 2)diminution du pH dans les vésicules et l'échange contre la partie des ions H et les ions de Ca; 3)agrégation des chromatogranines A (avec leurs chaînes HS) et le rétachement des vésicules à la couche nouvelle des MF corticals. B.Les "caicisomes": I.L'action des "calcisomes" pendant le rap prochement des vésicules /Fig.20(5)/: I)libération de Ca par les canaux du récepteur 1P3 (différents); 2)échange entre les ions de Ca2+ et de H d'après la diminution du pH autour des vésicules quand elles sont près des "calcisomes" /Fig.20(5) et I8(7)/ (ce procès est sécondaire).2.Le retour des "calcisomes" dans leur état "d'origine" d'après le détachement des vésicules /Sig.20(i)/: l'action de la pompe Ca (Ca-ATPase) (avec les contreions H qui peuvent être aussi dans le "calcisome" à cause de l'interaction avec les vésicules plus acides- Fig.20(6)/. En résumant, on voit que ces procès (I et II) des vésicules "PKC" sont efficaces avec les pas doubles (avec quelque rétroaction positive), parce que pour mettre plus de Ca à l'extérieur de la vésicule (I), il faut aussi augmenter le pH dans la vésicule. C'est les ions du Ca, qui conduisent le procès.Et à la fin de ce procès, les ions de Ca sont à l'ex-- térieur de la vésicule et le pH est neutre à son intérieur. Dans la situation inverse (II), c'est les ions de H+ (avec sa pompe) qui conduisent les procès: le pH est acide et plus faible quantité des ions de Ca sont à l'intérieur de la vésicule à la fin. Dans le cas des "calcisomes" il n'y a pas detelles rétroactions parce que s6n"pH est toujours proche au pH normal et la' valeur de la capacité potentielle de l'absorbtion du Ca ne change pas à l'intérieur du "calcisome". Fig.23.La courbe hypothétique approximative des change ments des contactions intégrales des ions de Ca dans la région de cytoplasme contenant le circuit du transport des vésicules "PKU" (granules) d'après la Fig.20. Cette courbe resemble la courbe expérimentale de /655, Fig.IB/. Les concentrations du Cain pendant les stades 1 et 2 (Fig.20) sont marquées par I, pendant les stades 3 et 4 - par II,-pendant les stades 5 et 6 par- III et pendant les stades 7-II- par IV. On voit que pendant la partie I (stades I et 2- Fig.20) il y a l'augmentation continue de[Ca]in grâce au courant avec l'aide de la structure "roue" (Fig.18B3, Fig.18C). Pendant les stades I et 2 (Fig.20) il n'y a pas de contractions musculaires et du mouvement directionnel des vésicules. Cette augmentation continue pendant la partie II de la courbe (grâce à ce courant continu),mais elle est modulée par les courants de Ca grâce à plusieurs cycles des "vagues" Ca-K(Ca) (Fig.18). Le grand pic III correspond à l'augmentation forte du [Cajin grâce au courant du Ca de la mitochondrie et du "calcisome" (stades 5,6-Fig.20) avec la diminution forte du Ca grâce à l'absorbtion du calcium. La partie IV de la courbe correspond aux stades 7-II où il y a les pics du Ca grâce à plusieurs cycles du "vague" Ca-K(Ca) et il y a ici la diminution générale de [Ca]in à cause de l'activation du courant du Ca à l'extérieur de la cellule /Fig.18 (IO-I2,I)/. Fig.24.Le résumé des parchemins principals des dérivés des phosphoinositols (PI) et de l'inositol (I): I-synthèse de PI de "demi"- de novo; 2-métabolisme de la transformation de Ine(1,4,5)P3 en inositol; 3-cycle vésiculaire (granulaire) avec son propre cycle des PI; 4- synthèse de l'inositol de novo à partir de glucose-6-phosphate; 5- synthèse de PI de novo dans ER; 6- incorporation de l'inositol du plasma; 7- incorporation des FI synthétisés de novo à la MP; 8- transformation PI#PIP#PIP2 sur la MP. /Les transformations IP2#IP4 pour fe courant K(Ca) et PIP2PIP3 (pour la libération de la gelsoline- Fig.41) avec leurs métabolismes consécutives ne sont pas indiquées/. Fig.25.La rédistribution des ions de Ca et de Mg près des "calcisomes" et des mitochondries pendant leur interaction avec les vésicules: (I) la protéolyse de PIP sur les vésicules avec la création de IP3 et l'ouverture des canaux pour le Ca des vésicules; (2) la collection des ions de Ca par les mitochondries (ions H vont parallèlement à l'extérieur de la membrane intérieur des mitochondries); (3) après un seuil, l'extraction des ions de Mg, de Ca et de l'ATP de la mitochondrie; (4,5) la phosphorylation des phospholipides sur la surface des vésicules, l'interaction de GTP avec les protéines ras et l'ouverture des vésicules; (6) une ouverture des canauax de Ca des "calcisomes" (après un seuil) et une accumulation des ions de Mg et de Ca et des molécules de l'ATP et de GTP et des substances différentes aux vésicules encore ouvertes. Fig.26 .La~structure caractéristique des interactions des vésicules. A.L'activation des pompes H et la phosphorylation de la protéine GAP-43 près de la MF. I).La synthèse de PAF ("remaniement") : a) phA2 produit le lyso-precurseur de PAF à la couche extérieure de la MP; b) ce lyso-precurseur va à la couche intérieure de la MP avec la triméthylation; c) l'acetyltransférase produit le PAF qui active la CK-IIM. 2).La phosphorylation de la GAP-43 par la CK-II (qui augmente encore son activité avec l'augmentation de la concentration du Mg (reg. A3) avec la rétroaction positive et après l'interaction avec "la queue" polylysine des protéines ras p2I/ et la désagrégation des molécules GAP-43 (augmentation de la fragilité de la vésicule en différence avec les pas intermediers du mouvement vésiculaire- Fig.18) (le pH intravésiculaire est acide). La connection de Go (à la MP) avec la GAP-43 où la GAP-43 faci- lite l'interaction de Go avec le GTP. Molécules de S-IOO s'-'attachent à la GAP-43 et au cytosquelette (CT). 3A).Le changement de conformation des protéines Ras p2I par le GTP avec la rétroaction positive de la libération de l'ATP/GTP, Ca et Mg de la vésicule: l'ouverture maximale de la vésicule avec l'aide des chaînes isoprène appartenant aux protéines G et aux molécules GAP-43 (augmentation de pH intravésiculaire, désagrégation des chaînes HS, activation de la phA2 de la couche extérieure des vésicules grâce aux ions de Ca (pH intravésiculaire devient normal).A partir de ce Ca' il y a le déclenchement du procès (des pas intermédiairs du cycle des vésicules "PEC") établi à la Fig.18 (à partir du pas N 7): l'activation de la PKCv consécutive et la continuation "indépendante" de ces procès (N07-I2) (sauf: la phC est activée selon la Fig.25-1 et l'activation de la PKCM et l'augmentation de pH ont lieu d'après le signal principal /I,2/). 3B).L'activation de la PIP-kinase située à la MP grâce aux ions de Mg (l) (transformation PIP -PIP2 tend à augmenter le radius de la vésicule comme aussi la transformation: PI#PIP aussi dépendant de Mg). 3*).(facultatif) La fusion avec la MP dans le cas des vésicules de sécrétion ou des vésicules "PKC" (seulement) qui font la fusion avec la MP, avec l'aide des protéines Go hétérotrimère /ayant 1' interaction avec la GAP-43 et grâce (aussi) aux ions de Mg/ présentes dans la forme de trimère où la sousunité g est isoprénylée, avec l'aide des lysophospholipides d'après l'activation de la PhA2 et d'après l'augmentation des charges de PA pendant la transition de pH acide au pH normal à l'intérieur des vésicules. (Mais l'ouverture des vésicules /le pas N03/ dans le cytoplasme est absente dans ce cas). 4). synthèse de PAF sur les vésicules (lysoPAF -PAF); b)deminution de la concentration du Mg près des vésicules et l'activation de la phosphatase vésiculaire ("contre" la phosphorylation de la CK-IIM) dépendant de Mg et de l'agrégation (encore) de GAP-43 déphosphorylée. 5).L'activation de la CK-IIV grâce aux molécules PAF (alkyl, sur les vésicules) et grâce aux chaînes HS désagrégées (au pH normal et l'activation de la pompe Hv+ par la CK-IIV, l'activation de la PKCV qui, en phosphorylant la GAP-43, arrêt l'action de la PIP-kinase, l'agrégation des chaînes HS, l'attachement de la vésicule aux MF ou au cytosquelette généralement (reg. Fig.18). On voit que la différence essentielle des operations qui se deroulent pendant l'arrêt de la vésicule près de la MP (en différence avec les operations pendant le "chemin" des vésicules- Fig.18) est dans la participallce de la CK-IIM qui change l'état des molécules de GAP-43 sur la vésicule (Fig.26-2) et la prepare pour l'ouverture pour les substances intérieures (comme ATP,Mg, les protéines, les amines). La structure analogue (en principle) doit avoir lieu près des mitochondries ayant "la fonction" des GK-II de la MP. /Fig.26A2- la vésicule est dessignée plus loin de la MP pour la commodité de dessin, Les molécules GAP-43 avec S-IOO et molécules ras p21 présentent sur les vésicules dans tous les dessins, en évidence. ves- vésicule, HS-héparane sulfate, G0(ag)- égal à B.Les pas intermédiaires du cycle des vésicules "PKC" (Fig. I8) avec la phosphorylation double de GAP-43 par PKCV et par CK-IlV. I). La phosphorylation par la PEGV activée de la GAP-43 provoque la'dissociation de CaM. 2).La dissociation de la mo lécule de CaM provoque: a)l'activation de la phosphatase (anti- PKC) calneurine; b)l'activation de la CK-IIV et sa phosphorylation des molécules de GAP-43 ce qui provoque leur répulsion. 3).L'association de CaM et la déphosphorylation de GAP (d'après l'action de CK-IIV) par la phosphatase indépen- dant de Ca. C.LA régulation par la PKCM de l'attachement de la vésicule (par GAP-43) à la fodrine avec l'aide du hétérotétra- mère p362pII2. I). Avant la phosphorylation par la PKCM: Ce tétramère est le pont entre la GAP-43 (vésicule) et là fod-rine (cytosquelette). 2). Après la phosphorylation par la PKCM: les interactions entre les pII et les p36 sont affaiblies. La vésicule n'a plus de contact avec le cytosquelette avant la fusion. Fig.27. La production de PAF. A. Dans la MP. B. Sur les vésicules (reg. texte). Fig.28.La transmission du signal à travers de la NMJ. Après le courant des ions de Na par les récepteurs de Ach il y a les courants de potentiel d'action Na/K/Oa au long de JF et des rangs orthogonaux avec la rentrée aux muscles squelettiques par le réseau des TT. Fig.29.La structure principale périodique de la contraction des muscles squelettiques et cardiaques. La direction des "vagues" Ca-K(Ca) et de la contraction est à gauche. Les "vagues" Ca-K(Ca) (Fig.I8) et Na+/K+/Ca2+ sont situées en alternance. Les courants Na/tiCa (potentiel d'action) se situent dans les TT. Quand ces courants passent près de la citerne terminale (pieds de jonction), le courant à travers des canaux CaL provoque la libération massive de Ca de SR par les canaux ryanodines. Ce Ca provoque (à son tour) la contraction locale du sarcomère musculaire. La "vague" Ca-K(Ca) se situe à la MP et au bord de la partie extérieure des TT. La MP de la zone extérieure des TT fait le bourgeonnement à la partie extérieure des TT avec l'aide de la contraction locale qui fait l'apparition des plis nouveaux dans la zone voisine de la MP et la proéminence plus profonde de "caveola". La même contraction du sarcomère fait l'apparition des canaux de Ca "de tension" grâce à la sensibilité de la phA2 de la surface membranaire à la pression mécanique et l'apparition nouvelle de la "vague" Ca-K(Ca) (Fig.18). La fusion des vésicules permanentes avec la MP provoque la sécrétion intensive des ions de Ca à l'extérieur avec la diminution du potentiel négatif de la MP et l'activation du canai de Na ("échange Ca/Na") avec l'activation consécutive des canaux de CaT (plus sensibles) faisant l'initiation facilitée de la "vague" Na/K/Ca. Fig.30.La sécrétion des neurotransmetteurs de l'axone. Les courants Na/K/Ca (potentiel d'action) arrivent à la zone distale de l'axone avec l'amas des canaux de CaN qui provoquent l'apparition de la "vague" Ca-K(Ca) et la contraction du cytosquelette cortical pour le cycle permanent des vésicules synaptiques. L'intervention de l'inhibiteur est grâce à la création de ses propres "vagues" Ca-K(Ca) qui font l'interférence avec celles de l'activateur de la sécrétion. Fig.31.La structure de la contraction des muscles lisse. La "vague" Ca-S(Ca) fait la propagation de la contraction des faisceaux permanents des myofilaments corticals faisant le changement de l'état du muscle-lisse. Le retour du muscle dans l'état original se fait par la propagation de la "vague" Ca-K(Ca) dans une autre direction et la contraction d'un autre système des faisceaux. Les endroits avec la concentration du Ca augmentée ("'calcisomes") sont situés, justement, aux pôles du muscle, Il y a un système permanent bien spécialisé des structures près de la lYIP permettant la propulsion des vésicules. La propagation du signal de la contraction entre les muscles lisse se fait grâce aux "récepteurs de tension", c-à-d. grâce à l'activation de la phA2 membranaire par la pression mécanique du muscle voisin (les muscles lisse ont les contractions mécaniques) et l'ouverture du "canal" du Ca (Fig.29) conduisant à la "vague" Ca-K(Ca) (Fig.18). Fig.32.L'avancement du lamellipode sur le substrat. I.Le saut du lamellipode du bord aux angles des 60-90 degrés avec "le coude" conséquent. L'insértion des monomères d'actine dans les fibres cytoplasmiques d' actine a lieu à la proximité de la MP avec une aide de la protéine insertine. Les dimères de taline sont concentrés au bout extrème du lamellipode avancé avant un établissement du contact focal et ils immobilisent l'intégrine dans le bout du lamellipode avancé avant le contact avec le substrat. Ce saut du lamellipode du-bord se passe à cause de la pression (et la fondation de la MP) après la contraction du cytosquelette cortical. 2.Un établissement du contact focal entre les molécules de l'intégrine du lamellipode du bord et leurs ligands sur le substrat. Le début du signal de l'intégrine. Les "trains" des vésicules /grâce au système des "vagues" Ca-K(Ca) et le cytosquelette cortical (actine et myosine inclues) -Figs.I8-20/ transportent les molécules du cytosquelette comme les complexes gelsoline-actine et profiline-actine. 3.Le développement du signal (spécial) de l'intégrine (connectée avec la taline) avec l'activation de la phA2, phC, création des eicosanoides, cycle des inositol phosphates, courant du Ca, création des PIP3 qui libère des monomères de l'aF tine pour la création des fibres cytoplasmiques. L'initiation de la contraction de la machinerie de la contraction du cytosquelette cortical (qui fonctionne avec la "vague" Ca-K(Ca) à partir des sites du contact focal. La protéolyse de la taline, la liaison de la fibuline à l'intégrine avec l'aide du Ca. 4.Une interaction des carbohydrates modifiés par la glyco syltransférase avec ceux (homologues) du substrat (l'étaie- ment!) conduisant à la déhydratation locale, déstabilisation et la fondation de la MP. Une apparence de vinculine (avec l'actinine-&alpha;) aux sites des contacts focals initials et la guidance d'un développement des microtubules (par ces molécules de vinculine) derière la zone avancée du lamellipode: L'arrivée de la vague de la contraction corticale au contact focal modifié et le début du saut du lamellipode du bord comme la structure principale de l'avancement de la cellule. Figs33.La meilleure structure des suzrpositions fortes des structures "chaises" des Nacetyllactoseamines (GalssI,4 GlacNàcssI#) terminals homologues. Tous les groupes OH et les groupes substitutifs sont dans les positions équa toriales.Notez le groupe OH équatorial sur l'atome C4 du galactose- le résultat de la tortion de sa conformation CI (--) conduisant à l'aplatissement de la conformation (reg. le texte, s.v.p.). Fig.34. La création des liaisons hydrogène interlipidiques intercarbohydrates pendant l'action du signal. A. La transition des glycolipides avec le signal de l'état hydraté non agrégé à l'état métastable (état spécial particulier pour sphingolipides) avec des liaisons hydrogène intermoléculaires conduisant à leur régroupement et déhydratation. B. Les interactions intercarbohydrates hydrogène avec la superposition des structures- "chaise" conduisant à la chaîne: protéines #gangliosides#cérébrosides#(sphingomyéline#cholestérol# ,-phospholipides) présentés dans chaque signal cellulaire. (Notez la structure commune réele entre les parties distales des gangliosides et des récepteurs glycoprotéiniques et entre les parties proximales des gangliosides et des cérébrosides qui sont indispensables pour un tel réseau des liaisons H du signal) (R-récepteur, G-ganglioside, C-cérebroside, S-sphingo rnyéline, CH-cholestérol, PH- phospholipide). lPig.35.Les chemins générals de la fusion directe ("puits non recouverts") et de l'endocytose ("puits recouverts") (avec l'exemple du virus). A.La fusion directe: la déstabilisation de la membrane est suffisante pour la fusion (avec le virus) ou pour la pénétration directe à travers de la MP dé stabilisée. B.L'endocytose: la déstabilisation de la MP n'est pas suffisante, il y a une agrégation d'après la séparation des phases et laKcréation des complexes des glycoprotéines avec des glycolipides /I,2/, l'activation de la pompe H7F par la CK-IIV grâce à la proximité au récepteur principal (Figs. 26,27), la couverture de grands"puits" avec les molécules de clathrine, le détachement de la vésicule avec, logiquement, l'aide aussi du cytosquelette cortical ("en phase") et le détachement de la clathrine (CC- cytosquelette cortical). FigO36.Le réseau global des MF de la cellule motile et des régions de l'attachement de la cellule au substrat. Le moment de la contraction de la queue et de la contraction des MF corticals avancés.(îP -lamellipode avancé; DC- contacts directs du substrat avec la cellule: il y a la projection des MF corticals sur le substrat coincidant avec les DC correspondants;FR- fibres radiales, leurs projections coincident aussi (approximativement) avec les contacts directs du substrat avec la cellule;( * )- un rang des contacts focals (vinculine, actinine-&alpha;, intégrine); (e) les endroits da l'absence des contacts focals des NE avec la MP mais de la présence des intégrines phosphorylées, de la vinculine et de l'actinine-&alpha;(le cas sans adhésions focales comme dans le cas du mouvement rapide); N- noyau. Fig.37. La structure du contact focal. Notez l'abscence de la taline et la similarité des contacts sans la taline: vin culine-sétinine-&alpha;-MF avec ceux de l'adhésion des MF corticals (Fig.39) V- vinculine, I- intégÀne, DG- diacylglycérol. A- actinine-&alpha;. Fig.38. La structure de l'adhésion focale. Notez une interaction double de la FN avec l'intégrine (I) et la syndecane (SN) et la liaison des MF avec la MP par la syndecane et par l'intégrine avec la taline (T), la vinculine (V) et l'acti nine-&alpha; (A'). L'actinine-&alpha; fait l'interaction avec le DG près de l'intégrine. Fig.39.La structure des microfilaments et des microtubules corticals avec leur attachement à la MP. Les faisceaux circonférentiels représentent lss groupements des MF. Les molécules longues de la fodrine (FD) font la connection de ces faisceaux avec l'aide des molécules de 4.1. et d'adducine (AD). Les molécules de l'ankyrine (ANK) et de 4.1 font la connection de la fodrine avec la MP avec l'aide des glycoprotéines intégrales (INT.PR.) comme i'ATPase (K±Na+) ou les molécules d'adhésion. la vinculine (V) agrégée s'attache à la MP avec l'aide de ses acides gras et de l'uvomoruline (U) (indirectement).L'uvomoruline et les autres molécules d'adhésion font (par les interactions intercarbohydrates) large réseau serré et structuré qui se raccorde avec la mosaïque du cytosquelette cortical. La vinculine et l'actinine- (A) /qui s'attache aussi aux molécules du diacylglycérol (DG)/ attachent les microfilaments corticals à la MP. La structure périodique des MF corticals inclut la vinculine, l'actinine-&alpha;, la filamine (FL) en imitant la zone de la ligne Z ("2-LN") d'un côté et la myosine (MY) avec la tropomyosine (TM) et le caldesmone (CAL) d'un autre. Les protéines MAF attachent la vinculine aux microtubules (MT) et aux microfilaments.Les MAP font aussi les interactions avec la a fodrine et les filaments intermédiaires (IF) (par la protéine plectine) (Fig.40). Les microtubules corticals sont situés parallèlement aux MF corticals ayant le contact aussi avec l'ankyrine. Les molécules de dy strophine s'attachent aux MF aux régions du chemin des vési- cules (près du caldesmone) (pas marquées) et elles gardent (comme la colonne) la distance variable entre les W? et la MP. Les groupes des vésicules passent au-dessus de la zone avec la myosine ayant les sites d'attachement aux molécules de caldesmone, de fodrine et d'actinine-&alpha;. Fig.40. La MAP est le centre actif du cytosquelette cortical. Notez la forme du baton de MAP où d'un côté il y a la la vinculine (V) et d'un autre: les MT, les MF, la fodrine (FD) et la plectine (PL): La plectine a aussi les contacts avec la fodrine et les filaments intermédiaires (IF), ce qui est important pour la reconstruction identique des MT et par conséquence celle des MF. La séquence de la reconstitution après la contraction: IFMTMF Fig.41.La structure du type universel de la contraction culaire.Les molécules ded gelsoline (G) libérées de leur accepteur PIP2 de la MP par la transformation (PIP2#PIP2) coupent les fragments de l'actine (ACT) des MF au-dessus de la myosine (MY). Les contractions circulaires par la force du déplacement actine-myosine font la diminution du diamètre du cercle des MF corticals. La dissociation partielle des MT à la zone de l'attachement des protéines MAp permet telle contraction des microfilaments. Fig.42. Le destin des intégrines et des adhésions pendant le cycle de la motilité. A.L'établissement des intégrines (I) nouvelles dans le lamellipode (#er rang) créant les contacts focals (-o) (liés aux câbles radials) avec la vinculine et l'actinine- (le cytosquelette cortical au-dessus de ces intégrines n'a eu jamais les contractions!); la phosphoryla- tion des intégrines (I-P) après la Iere contraction (tous les rangs suivants). B.La présence des filaments corticals jusqu'au noyau mène à l'avancement de la partie cellulaire avante et le retard de la partie arrière avec la tension (TN) augmentée entre ces régions.Cette tension conduit aux: I.L'exocytose de la FN aux régions spécifiques des futures adhésions focales, ce qui provoque l'activation de la tyrosine phosphatase, déphosphorylation et l'établissement des adhésions focals entre le substrat (FN), l'intégrine et les câbles radials avec la taline, la vinculine et l'actinine-&alpha; 2.L'activation de la phA2 et le courant du Ca+ à l'intérieur ("roue"), ce courant du Ca+ provoque l'activation de la protéase calpaine II (CALP II) qui élimine (avec la phosphorylation des protéines de l'adhésion focale grâce à l'élimination de l'activation de la tyrosine phosphatase située au contact avec la FN après la perte- du contact avec la FN) les adhésions focales;; 3.L'ac- tivation de la glycosidase (Gl-se) sur la MP qui change l'écha- ntillon des carbohydrates ménant à la déstruction des contacts proches, Cette vague de la tension (TN) se propage vers l'extrémité arrière de la cellule (avec l'entrée du Ca2+) en activant la calpaine II et la glycosidase et en détachant la cellule jusqu'à la libération de la queue. Fig.43.La structure de capping: (le transport des agrégats pendant la motilité cellulaire) (la vue au-dessus de la MF).- A.Les molécules de syndicane (S) attachent aux gangliosides /de leurs complexes avec les récepteurs: récepteur(R)gan- gliosides(G)c'érébrosides(C)/ par leurs liaisons intercarbohydrates homologues (justement /223/). B.D'après "une masse critique" après l'agrégation des récepteurs dans un agrégat (AG), la concentration des syndecanes est suffisante pour s'atw tacher (avec l'agrégat) sur les MF (Fig.6). C.Après cela, le transport direct des agrégats (qui s'augmentent jusqu'au cap) depend des contractions des MF corticals (Fig.39). Fig.44. Le procès de la libération des facteurs nucléaires d'après l'élévation du pH intracellulaire après le signal /par l'autoactivation des molécules procathepsine L (CL)/. A.L'échangeur Na+/H+ est activé en permanence; B.Le pH intracellulaire augmente aux O,I-0,3 unités; C. Par conséqunece, la - synthèse des protéines sur les polysomes du cytoplasme augmente grace a l'augmentation de la vitesse de la synthèse avec l'augmentation du pH (synthèse de cathepsine L inclue!) (il y a la parie de la forme de OS preprocathépsine synthétisée avant et attachée avec l'aide des acides aminés méthylés aux ribosomes et aux ARN du noyau); D.Quelque excès de la procathépsine B dans le cytoplasme qui n'est pas liée avec l'aide des acides aminés (et au noyau) (logiquement sans la peptide du signal /I423/); E.Une faible autolyse de la procathépsine L et la libération des molécules de la cathépsine B (synthé- tisées jadis) des complexes avec les ribosomes (et des complexes nucléaires) ce qui déclenche l'analyse nouveau avec les formes de la cathépsine I actives au pH neutre; F.La libération avec l'aide de la cathépsine B des protéines différentes (NF-kB et NF-jun ou bFGF inclues) Revendications. I.N'importe quel procédé, composition ou utilisation qui peuvent être développés du dispositif "La suite du développement de la structure générale de l'action des récepteurs: la profondeur gigantesque basique des structures universelles mais inconnues des sciences de la vie et leurs applications medicinales: athérosclerose, diabète, dystrophie, cancer, scorbut, rachitisme, coeur, rides" expliqué où il comprend les procédés nouveaux et les structures nouvelles ayant lieu comme la suite de la structure générale de l'action des récepteurs. .2.Les anticorps (de n'importe quelle origine ou classe) (monoclonals ou polyclonals) ou les lectines contre les carbohydrates (galactoses glucose ou galactose-glucose) unifiant les chaînes des collagènes avec les protéoglycanes de la lame basale selon la revendication I caractérisés en ce qu'ils em pochent le grandissement hypertrophique de la lame basale dans le cas du diabète. 3.B'utilisation des protéoglycanes, des syndecanes et des protéines de liaison de la laminine (comme celles avec le p.m. 67 kD,a, IIO ka, I80 kDa) de n'importe quelle origine selon la revendication I caractérisés en ce qu elles renforcent la liaison entre la laminine de la lame basale avec la membrane plasmique des cellules épithéliales dans le cas des rides. 4.L'u'tilisation des molécules de l'inositol selon la revendication I caractérisées en ce quelles remplissent le niveau des molécules de phosphatidylinositol-4,5-biphosphate nécessaire pour le fonctionnement de la machinerie du signal dans le cas du poison du cobra. 5.L'utilisation des molécules nonhydrolysables de GTP (comme GUP-gS) selon la revendication I caractérisées en ce qu'elles diminue la pinocytose (à partir du transport des vésicules "PKC") dans le cas de l'athéroscîerose. 6.L'utilisation des bloqueurs de l'échange NaSCa de la mi mitochondrie (comme le diltiazene) selon la revendication I caractérisé en ce qu'ils diminuent l'augmentation de la concentration intérieure de Ca "parasitiqueH grâce à la rentrée excessive des ions de Na (canaux servant au potentiel d'action) dans le cas de l'arythmie cardiaque. 7.L'utilisation des inhibiteurs de la phospholipase A2 selon la revendication I caractérisés en ce qu'ils arrêtent la dégradation des muscles dans le cas des dystrophies différentes et dans le cas des exercices physiques excessives. 8.L'utiiisation des molécules de HSPG et du Ca (avec ou sans molécules de TGF-ss) selon la revendication I caractérisés en ce qu'ils provoquent le développement des couches osseuses plus rigides dans le cas du rachitisme. 9.Le milieu synthétique sans serum avec les carbohydrates particuliers des glycoprotéines et des glycolipides selon la revendication I caractérisés en ce qu'ils servent pour l'éta- lement cellulaire. IO.Le procédé de l'obtention des jumeaux de l'homme et des animaux selon la revendication I caractérisé en ce que: -(moyen in vitro) après la dissociation des cellules de l'embryon aux stades initials (unifiées in situ par les interactions intercellulaires intercarbohydrates) avec la solution comme EDT & (détruisant ces interactions intercarbohydrates), on effectue le clonage (avec la dissociation des cellules de l'embryon nouveau) répétitif de ces cellules en ayant enfin le nombre illimité des zygotes identiques. -(moyen in vivo) au moment de l'apparition des 2 cellules (4 ou 8 cellules) de l'embryon, on introduit la solution comme EXTA-en vagin qui dissocie in situ les cellules de cet embryon pour le développement in vivo du nombre correspondant des jumeaux.