Brevet FR2692900A1 — publié le 19931231

L'invention a pour objet une séquence peptidique constituant un épitope présentant la propriété d'induire une immunoprotection chez l'hôte, animal ou homme, contre Trypanosoma cruzi ainsi que les applications thérapeutiques ou diagnostiques de cette séquence peptidique et des séquences nucléotidiques codant pour cette séquence peptidique. La maladie de Chagas provoquée par le protozoaire parasite Trypanosoma cruzi (T. cruzi) est une affection qui atteint l'homme et l'animal, en particulier le chien et les rongeurs. Cette maladie sévit en Amérique Centrale et en Amérique du Sud, où elle affecte 16 â 18 millions de personnes. Le traitement des patients atteints de cette infection repose sur l'utilisation de drogues telles que le Nifurtimox OR ou le benznidazole. Cependant, ces produits présentent une certaine toxicité chez l'homme et ne permettent de guérir qu'un nombre limité de malades chroniques. Ainsi, la recherche d'un vaccin efficace contre cette maladie est toujours à l'ordre du jour. Différentes stratégies ont été élaborées afin d'identifier les composants du parasite susceptibles de constituer des candidats pour un éventuel vaccin. L'utilisation de parasites inactivés, de fractions d'un extrait parasitaire ou de trypomastigotes de T. cruzi irradiés et non infectieux a permis d'induire une protection partielle chez la souris contre une infection létale ultérieure par T. cruzi. En raison de la réactivité croisée entre certains composants du parasite et de l'hâte, et la toxicité de certaines molécules parasitaires, l'identification et l'isolement d'antigènes qui induisent un mécanisme immunoprotecteur est nécessaire pour le développement d'un vaccin efficace et utilisable en pratique. A cet égard, l'utilisation d'antigènes de surface parasitaires définis a révélé la possibilité d'induire une protection partielle contre une infection létale avec des taux de parasites réduits. En outre, différentes études expérimentales utilisant la souris comme modèle, tel que le transfert passif d'anticorps polyclonaux anti-T.cruzi spécifiques, de différentes classes d'anticorps anti-T.cruzi ou d'anticorps monoclonaux dirigés contre la fraction flagellaire de T. cruzi ont démontré l'importance de la réponse humorale dans la défense de l'hôte contre une infection ultérieure par T. cruzi. Les rats Fischer se sont également avérés être sensibles à une infection par T. cruzi et peuvent constituer un modèle expérimental pour l'étude de la réponse immune susceptible d'être impliquée dans la résistance contre l'infection par T. cruzi. On a également décrit la signification biologique des antigènes d 'excrétion-secrétion et on a démontré dans le cas de T. cruzi que le transfert passif d'anticorps polyclonaux anti-T. cruzi pouvait conférer une protection contre une infection ultérieure par des T. cruzi virulents. On a également démontré (Cerban et al., 1991, Int. Arch. Allergy App. Immunol. 96:35) que des antigènes excrétés de T. cruzi pouvaient être utilisés pour induire une diminution significative du taux de parasites pendant la phase aigüe d'une maladie de Chagas expérimentale. Les présents inventeurs ont découvert maintenant en utilisant des anticorps dirigés contre les antigènes d'excrétion-secrétion de T. cruzi pour cribler une banque d'ADNc trypomastigote de T. cruzi obtenue à partir d'ARN messager total, une séquence peptidique dérivée de la séquence primaire d'un antigène polypeptidique excrété de 24kDA antérieurement décrit, constituant un épitope susceptible d'induire chez l'hôte une protection efficace contre une infection par T. cruzi. La présente invention a pour objet une séquence peptidique issue de cet antigène de 24 kDa qui est immunogène et apte à induire une immunoprotection contre une infection par Trypanosoma cruzi, caractérisée par la séquence d'aminoacides suivante NH2-GLY-SER-GLU-ASP-PHE-VAL-GLU-PHE-LEU-GLU-PHE-ARG-LEU- MET-LEU-(CYS)-COOH, comportant éventuellement cinq résidus supplémentaires LYS à l'extrémité NH2 terminale, ou une séquence dérivée de celle-ci. On entend par séquence dérivée une séquence modifiée par insertion et/ou délétion et/ou substitution d'un ou plusieurs aminoacides, pour autant que les propriétés antigèniques desdites séquences ne soient pas modifiées ou soient équivalentes à celles obtenues avec l'immunisation de l'hôte par la séquence peptidique ou un fragment de celle-ci, ou une séquence peptidique comprise entre 20 et 60 aminoacides et comportant ladite séquence selon l'invention.On entend aussi par variantes les séquences dans lesquelles la liaison peptidique (-CO NH-) est remplacée par les groupes -CO-N(CH3)-, -CH2-CH2-, -CO-CH2-, ou encore les séquences dans lesquelles le squelette peptidique présente un ou plusieurs groupes intercalés tels que les groupes -CH2-, -NH-, -O-, ou encore les séquences pour lesquelles les extrémités NH2 et COOH sont modifiées, par exemple par acétylation ou introduction d'un groupe carboxamide, respectivement. L'invention envisage également les peptides dans lesquels les acides aminés présentant un carbone asymétrique sont sous forme D ou L. Les séquences peptidiques selon l'invention peuvent être obtenues par des méthodes de synthèse classique, par exemple dans un synthétiseur automatique de peptides, ou par application de techniques de génie génétique comprenant l'insertion d'une séquence d'ADN codant pour une séquence peptidique selon l'invention dans un vecteur d'expression tel qu'un plasmide ou un virus vecteur, par exemple le baculovirus ou le virus de la vaccine, et la transformation de cellules avec ce vecteur d'expression et culture de ces cellules eucaryotes ou procaryotes. Les séquences d'aminoacides définies cidessus peuvent en outre être répétées dans la séquence peptidique immunogène selon l'invention ou dérivée de celle-ci, par exemple de 2 à 15 fois. La présente invention a également pour objet des anticorps monoclonaux ou polyclonaux spécifiques d'une séquence peptidique selon l'invention. Les anticorps monoclonaux selon l'invention peuvent être préparés selon une technique classique. A cet effet, les polypeptides peuvent être couplés si nécessaire à un agent immunogène, tel que l'anatoxine tétanique, par un agent de couplage, par exemple le glutaraldéhyde ou une benzidine bis diazotée. La présente invention englobe également les fragments et les dérivés d'anticorps monoclonaux selon l'invention. Ces fragments sont notamment les fragments F(ab' )2 qui peuvent être obtenus par clivage enzymatique des molécules d'anticorps avec la pepsine, les fragments Fab' qui peuvent être obtenus par réduction des ponts disulfure des fragments F(ab' )2 et les fragments Fab qui peuvent être obtenus par clivage enzymatique des molécules d'anticorps avec la papaïne en présence d'un agent réducteur. Ces fragments, ainsi que des fragments Fc, peuvent être également obtenus par génie génétique. Les dérivés d'anticorps monoclonaux sont par exemple des anticorps ou des fragments de ces anticorps auxquels sont liés des marqueurs tels qu'un radioisotope. Les dérivés d'anticorps monoclonaux sont également des anticorps ou des fragments de ces anticorps auxquels sont liées des molécules thérapeutiquement actives, par exemple le Nifurtimox &commat;3 ou le benznidazole. L'invention a également pour objet des hybridomes produisant des anticorps monoclonaux spécifiques de la séquence peptidique décrite ci-dessus. Ces hybridomes peuvent être obtenus par les techniques classiques de fusion cellulaire entre des cellules spléniques activées in vitro par l'antigène ou provenant d'un animal immunisé contre la séquence peptidique de l'invention, et des cellules d'une lignée myélomateuse. L'invention a également pour objet un procédé de détection in vitro de la présence de T. cruzi dans un prélèvement biologique, notamment un échantillon de sang ou de liquide ascitique, caractérisé en ce que l'on met en présence le prélèvement biologique pouvant contenir une séquence peptidique décrite ci-dessus avec un anticorps ou un fragment d'anticorps tel que défini cidessus, et on met en évidence la présence d'une réaction immunologique éventuelle par le complexe immunologique formé selon les méthodes physiques ou chimiques, ainsi qu'un kit de diagnostic comprenant un anticorps ou un fragment d'anticorps pour la mise en oeuvre du procédé. L'invention a également pour objet un procédé de détection in vitro de la présence de T. cruzi dans un prélèvement biologique par mise en évidence des anticorps spécifiques dirigés contre une séquence peptidique telle que décrite ci-dessus dans le prélèvement biologique pouvant contenir lesdits anticorps, dans lequel on met en contact le prélèvement biologique avec une séquence peptidique selon l'invention, et on met en évidence la présence d'une réaction immunologique éventuelle par le complexe formé, ainsi qu'un kit de diagnostic pour la détection d'anticorps spécifiques, comprenant une séquence peptidique telle que définie précédemment. Ces procédés peuvent être basés sur une méthode radioimmunologique de type RIA, RIPA ou IRMA ou une méthode immunoenzymatique de type WESTERN-BLOT sur bandelettes ou de type ELISA. Pour la mise en oeuvre de ces procédés de détection, on utilise des peptides froids non marqués ou marqués à l'aide d'un marqueur adéquat qui peut être la biotine ou ses dérivés, une enzyme comme la peroxydase, un marqueur fluorescent comme la fluorescéine, un marqueur radioactif, etc... Ces procédés de détection comprennent par exemple les étapes suivantes - dépôt d'une quantité déterminée d'une composition contenant au moins une séquence peptidique selon l'invention ou un conjugué d'une telle séquence peptidique ou encore un anticorps selon l'invention, dans les puits d'une plaque de microtitration ou sur un autre support tel que des billes ou une membrane de nitrocellulose, - dépôt dans les puits du prélèvement biologique à tester, ou incubation de celui-ci avec les billes ou la membrane, en présence d'agents saturant ou après saturation préalable des supports activés, - après incubation et rinçage des microplaques ou des billes, dépôt dans les puits ou incubation avec les billes d'un système de révélation du complexe peptide-anticorps éventuellement formé. Les kits pour la mise en oeuvre du procédé de diagnostic de l'invention comprennent - au moins un peptide selon l'invention, ou ce peptide conjugué à une molécule porteuse, ou un anticorps selon l'invention, - des réactifs pour la constitution d'un milieu propice à la réalisation d'une réaction immunologique entre le ou les peptides et les anticorps éventuellement présents dans un échantillon biologique, - un ou plusieurs réactifs éventuellement marqués aptes à réagir avec le ou lesdits peptides pour la détection des complexes peptide-anticorps formés. L'invention a également pour objet une composition thérapeutique comprenant des anticorps monoclonaux ou des fragments d'anticorps monoclonaux ou des dérivés d'anticorps monoclonaux tels que définis précédemment. Avantageusement, les dérivés d'anticorps monoclonaux sont des anticorps monoclonaux ou des fragments de ces anticorps liés à une molécule thérapeutiquement active. L'invention a également pour objet une composition immunogène comportant une séquence peptidique telle que définie précédemment. Cette séquence peptidique peut être liée à une protéine porteuse. Comme protéines porteuses, on peut utiliser des anatoxines telles que l'anatoxine tétanique ou une particule constituée d'antigène de surface de l'HBV telle que décrite dans le brevet européen n" 0 038 765. En variante, on peut également utiliser des immunogènes constitués selon la technique du MAP (Multiple Antigenic Peptide). Outre la séquence peptidique immunogène, la composition immunogène peut contenir un adjuvant doué de propriétés immunostimulantes. Parmi les adjuvants que l'on peut utiliser figurent les sels minéraux tels que l'hydroxyde d'aluminium, des composés hydrophobes ou des agents tensioactifs tels que l'adjuvant incomplet de Freund, le squalène ou des liposomes, des polynucléotides synthétiques, des microorganismes ou composants de microorganis mes tels que le murabutide, le pimélautide, le triméxautide et leurs dérivés, des molécules artificielles synthétiques telles que l'imuthiol ou le lévamisole, ou encore des cytokines telles que les interférons a, p, y ou des interleukines. L'adjuvant préféré est constitué par Bordetella pertussis additionné d'Alun (BpA1). Avantageusement, la composition immunogène selon l'invention ne comporte pas de protéine porteuse, et comporte un oligomère comprenant de 2 à 15, notamment 8 monomères ("octopus"), chaque monomère étant constitué d'une séquence peptidique telle que définie ci-dessus, comportant éventuellement de 1 à 5 résidus d'aminoacides supplémentaires. Les monomères sont avantageusement associés au niveau des chaînes latérales des résidus lysine et comportent des résidus supplémentaires polaires, de préférence au moins deux résidus basiques, par exemple de lysine, à l'extrémité NH2 terminale afin de permettre une meilleure solubilisation des oligomères. Avantageusement, les monomères ne comportent pas de résidu cystéine à l'extrémité COOH, afin d'éviter la formation de pont de disulfures défavorables. Avantageusement encore, la composition immunogène comprend une séquence peptidique telle que définie ci-dessus ou un oligomère, notamment un "octopus" associé à un résidu lipidique, par exemple un résidu palmytoyle en position C terminale ou sur la chaîne latérale d'un résidu de lysine, ou à des résidus de pimélautide ou du triméxautide à l'extrémité NH2 et/ou l'extrémité COOH terminale de la (des) chaîne(s) peptidique(s). La composition immunogène selon l'invention peut être utilisée comme vaccin en médecine humaine ou vétérinaire pour conférer à l'homme ou à l'animal, notamment le chien, une protection efficace contre une infection par T. cruzi par induction d'une réponse immunitaire de type cellulaire et/ou de type humoral. L'invention a également pour objet un procédé de dosage d'une séquence peptidique selon l'invention comprenant l'utilisation d'un anticorps monoclonal spécifique de cette séquence et la détermination quantitative de la réaction immunologique qui a lieu, par exemple à l'aide d'un marqueur enzymatique, radioactif ou fluorescent. L'invention a également pour objet une séquence nucléotidique codant pour une séquence peptidique telle que définie précédemment. La séquence nucléoditique peut être une séquence d'ADN ou d'ARN. Avantageusement, la séquence nucléotidique est la suivante GGC TCC GAG GAC TTT GTT GAA TTT CTG GAG TTC CGT CTG ATG CTG. Les séquences nucléotidiques codant pour une séquence peptidique selon 1 invention peuvent avantageusement être synthétisées par la technique Applied Bio System. Les séquences nucléotidiques selon l'invention, ou des fragments de celles-ci, ou des séquences complémentaires de ceux-ci, correspondant aux séquences peptidiques dérivées de celles-ci selon l'invention, peuvent être utilisés comme sondes nucléiques pour détecter de maniere spécifique et directe la présence de matériel génétique de T. cruzi dans un échantillon biologique. Les séquences non marquées peuvent être utilisées directement comme sondes, cependant les séquences d'acide nucléique sont généralement marquées par un élément radioactif (32p, 35S 3HI 125I) ou par une molécule non-radioactive (biotine, acétylaminofluorène, digoxigénine, 5-bromo-désoxyuridine) pour obtenir des sondes utilisables pour de nombreuses applications. Dans ce dernier cas, on pourra utiliser l'une des méthodes de marquage décrites dans FR 2 422 956 et FR 2 518 755. La technique d'hybridation peut être réalisée de diverses manières (Matthews, J.A. et Kricka, L.J., Anal. Biochem. 1988, 169, 1-25). La méthode la plus usitée consiste à immobiliser l'acide nucléique extrait des cellules mycobactériennes sur un support (nitrocellulose, nylon, polystyrène...) et à incuber, dans des conditions bien définies, l'acide nucléique cible immobilisé avec l'acide nucléique sonde. Apres l'hybrida- tion, l'excès de sonde est éliminé et les molécules hybrides formées sont détectées par la méthode appropriée (mesure de la radioactivité, de la fluorescence ou de l'activité enzymatique liée à la sonde...). Dans une autre application, les sondes d'acide nucléique décrites ici peuvent être utilisées comme sondes de capture. Dans ce procédé, la sonde est immobilisée sur un support et sert à capturer par hybridation spécifique l'acide nucléique cible de T. cruzi. Si nécessaire, le support solide est séparé de l'échantillon et le duplex formé entre la sonde de capture et l'acide nucléique cible est ensuite détecté grâce à une seconde sonde de détection marquée par un élément facilement détectable. Lorsqu'une quantité suffisante d'acide nucléique de T. cruzi peut être extraite à partir des prélèvements à analyser, les séquences objet de la présente demande de brevet sont utilisables pour détecter et identifier T. cruzi directement dans ces prélèvements. Dans le cas contraire, une culture rapide en milieu liquide peut être réalisée avant l'extraction de l'acide nucléique de T. cruzi, ou bien, la petite quantité d'acide nucléique de T. cruzi extrait du prélèvement peut être soumise à la technique d'amplification génique, par exemple la technique dite PCR (Polymerase Chain Reaction). La présente invention a également pour objet une méthode de détection de la présence de T.cruzi dans un échantillon biologique, caractérisée par les étapes suivantes i) mise en contact de l'échantillon biologique avec un couple de fragments d'acide nucléique, dits amorces, l'acide nucléique contenu dans l'échantillon ayant été, le cas échéant, préalablement rendu accessible à l'hybridation et dans des conditions permettant une hybridation des amorces à l'acide nucléique de T. cruzi ii) amplification de l'acide nucléique de T. cruzi ;; iii) mise en évidence de l'amplification de fragments d'acide nucléique correspondant au fragment encadré par les amorces iv) vérification éventuelle de la séquence du fragment amplifié, par exemple par hybridation de sonde spécifique à l'aide d'une sonde telle que définie cidessus, par séquençage ou par analyse de site de restriction. La présente invention a en outre pour objet un nécessaire pour la détection de la présence de T. cruzi dans un échantillon biologique, caractérisé en ce qu'il comporte les éléments suivants - un couple de fragments d'acide nucléique amorces ; - les réactifs nécessaires pour effectuer une amplification d'acide nucléique de T.cruzi T. cruzi - et une sonde nucléique telle que définie précédemment. Ce nécessaire contient plus avantageusement la sonde marquée ou non. Celle-ci peut être en solution ou immobilisée sur un support. Le nécessaire peut également contenir les réactifs nécessaires pour la lyse des cellules de T. cruzi et l'extraction des acides nucléiques cibles, ainsi que les solutions d'hybridation et de lavage correspondant à la méthode choisie. On décrira ci-apres un exemple de préparation du peptide ayant la séquence d'aminoacides : NH2-GLY-SER-GLtJ-ASP-PHE-VAL-GLU-PHE-LEU-GLU-PHE-ARG-LEU- MET-LEU-COOH, ainsi que les propriétés immunologiques d'un tel peptide, en se référant à la figure annexée décrivant les résultats d'immunisation obtenus avec le peptide de l'invention. 1. Préparation du peptide selon l'invention Le peptide a été synthétisé par un procédé par étapes en phase solide dans un synthétiseur automatique de peptide (modèle 430A, Applied Biosystems, Zinc.), selon le protocole au butyloxycarbonyle / acide trifluoroacétique, sur une résine de phénylacétamidométhyle (PAM-resjn, Applied Biosystems, Inc.). Les aminoacides tri fonctionnels ont été protégés de la manière suivante : Arg (p-toluenesulfonyle (Tos)), Asp (O-cyclohexyle (OChx)), Cys (p-méthylbenzyle (pMeBzl)), Glu (OChx), Lys (2-chloro-benzyloxycarbonyle (2-Clz)), Met (sulfoxide (O)), Ser (O-benzyl (Obzl)), Trp (frmyl). Les aminoacides ont été introduits en utilisant le protocole d'activation au dicyclohexylcarbodiimide / hydroxybenzotriazole dans la N-méthyl-2pyrrolidinone. A la fin de la synthèse, le peptide obtenu a été clivé et déprotégé par la technique au fluorure d'hydrogène à concentrations faible et forte. Le peptide clivé dêprotégé a été précipité à l'éther diéthylique froid puis dissous dans de l'acide acétique à 5% et lyophylisé. Le peptide brut a été purifié par HPLC en phase inversée sur une colonne Nucléosil C18, 300 A (Macherey Nagel, Düren, RFA), de 5 mm. Le peptide synthétique purifié a été conjugué à de l'ovalbumine (OVA) (Miles Research, Elkhart, IN.) au moyen du glutaraldéhyde (Fluka, Buchs, Suisse). Le peptide (8 mmoles) a été dissous dans un tampon phosphate de sodium 0,1 M, pH8 (2 ml) et ajouté à une solution d'ovalbumine (10 mg) dans un tampon phosphate de sodium 0,1 M pH8 (8 ml). Une solution de glutaraldéhyde à 2,5* (100 p1) a été ajoutée progressivement sous agitation continue. Après deux jours, le mélange résultant a été dialysé intensivement contre une solution de phosphate de sodium 0,1 M pH7. 2. Propriétés immunologigues du peptide selon l'invention Des souris BALB/c de sexe masculin agées de cinq semaines ont été inoculées à trois reprises par voie intrapéritonéale avec des intervalles de deux semaines, à l'aide du peptide selon l'invention, en association avec 30 pl de Bordetella pertussis et d'Alun (BpA1) en tant qu'adjuvant (VAXICOQ, Institut Mérieux, Lyon, France : 4 U.I. de Bortedella pertussis et 1,25 mg d'hydroxyde d'aluminium / 500 pl). Les groupes témoins comprenaient des souris non traitées et des souris immunisées avec la protéine porteuse (ovalbumine) mélangée à du BpA1. Deux semaines après la derniere immunisation; les souris ont été infectées par voie intrapéritonéale avec 2 x 103 trypomastigotes circulants (T. cruzi souche Y). A titre de comparaison, on a en outre inoculé un groupe de souris à l'aide d'un peptide de 21 aminoacides contenant les aminoacides des positions 20 à 40 du peptide de 24 kDA (peptide 20-40) ayant la séquence suivante NH2-ASP-GLY-LYS-ASN-ALA-LYS-ASP-ARG- LYS-GLU-ALA-TRP-GLU ARG-ILE-ARG-GLN-ALA-ILE-PRO-ARG-COOH. La figure annexée représente les résultats d'immunisation des différents groupes, exprimés en % de souris ayant survécu. représente les souris témoins non immunisées (12), représente les souris immunisées avec OVA-BpA1 (11), représente les souris immunisées avec le peptide 20-40 en association avec BpAî et représente les souris immunisées avec le peptide selon l'invention (11). Les résultats obtenus montrent que 75 à 84% des souris témoins (non traitées et immunisées avec OVA BpA1 respectivement) sont mortes 53 jours après l'infection. Le peptide 20-40 conjugué à l'OVA ne permet pas d'induire de protection. Le peptide selon l'invention couplé à l'OVA permet de protéger les souris contre une infection létale par T. cruzi avec 55% de survie. REFERENCES 1 W.H.O. 1988. Chagas disease. in : Tropical Disease Research Ninth Programme Report. World Health Organization. Genèse. 79. 2. Morello, A. 1988. The biochemistry of the mode of action of drugs and the detoxification mechanisms in Trypanosoma cruzi. Comparative Biochem and Physiol. 19:1. 3. Andrews, N.W., M.J.M. Alves, R.I. Schumacher, and W. Colli. 1985. Trypanosoma cruzi : Protection in mice immunized with 8-Methoxypsoralen inactivateci trypomastigotes. Exp. Parasitol. 60:255. 4. Gonzalez Cappa, S.M., A. Bronzina, A.M. Katzin, H. Golfera, G.W. De Martini, and E.L. Segura. 1981. Antigens of subcellular fractions of T. cruzi. III. Humoral immune response and histopathology of immunized mice. J. Protozool. 27:467. 5. Zweerink, H.J., H.D. Weston, O.F. Andersen, S.S. Garber, and E.C. Hayes. 1984. 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Séquence peptidique immunogène apte à induire une immunoprotection contre une infection par Trypanosoma cruzi, caractérisée par la séquence d'aminoacides suivante NH2-GLY-SER-GLU-ASP-PHE-VAL-GLU-PHE-LEU-GLU-PHE-ARG-LEU- MET-LEU-COOH, ou une séquence dérivée de celle-ci. 3. Séquence peptidique immunogène apte à induire une immunoprotection contre une infection par Trypanosoma cruzi, caractérisée par la séquence d'aminoacides suivante NH2-GLY-SER-GLU-ASP-PHE-VAL-GLU-PHE-LEU-GLU-PHE-ARG-LEU MET-LEU-CYS-COOH, comportant éventuellement cinq résidus supplémentaires LYS à l'extrémité NH2 terminale. 4. Séquence peptidique immunogène apte à induire une immunoprotection contre une infection par Trypanosoma cruzi, caractérisée en ce qu'elle comprend une séquence répétitive d'aminoacides selon l'une des revendications 1 à 3. 5. Anticorps monoclonaux ou polyclonaux spécifiques d'une séquence peptidique selon l'une des revendications 1 à 4. 6. Fragments Fab, Fab', F(ab')2 ou Fc d'anticorps monoclonaux selon la revendication 5. 7. Dérivés d'anticorps monoclonaux comprenant des anticorps monoclonaux selon la revendication 5 ou des fragments d'anticorps monoclonaux selon la revendication 6, auxquels sont liés des marqueurs ou des molécules thérapeutiquement actives. 8. Hybridomes produisant des anticorps monoclonaux selon la revendication 5. 9. Procédé de détection in vitro de la présence de Trypanosoma cruzi dans un prélèvement biologique, caractérisé en ce que l'on met en présence le prélèvement biologique ayant une séquence telle que définie à l'une des revendications 1 à 3 avec un anticorps ou un fragment d'anticorps tel que défini à la revendication 5 ou 6, et on met en évidence la présence d'une réaction immunologique éventuelle. 10. Procédé de détection in vitro de la présence de Trypanosoma cruzi dans un prélèvement bioLogique, caractérisé en ce que l'on met en présence le prélèvement biologique pouvant contenir des anticorps dirigés contre une séquence peptidique selon l'une des revendications 1 à 3 avec une telle séquence, et on met en évidence la présence d'une réaction immunologique éventuelle. 11. Kit de diagnostic pour la détection d'une infection par Trypanosoma cruzi caractérisé en ce qu'il comprend un anticorps ou fragment d'anticorps tels que définis à la revendication 5 ou 6 ou une séquence peptidique telle que définie à l'une des revendications 1 à 3. 12. Composition immunogène comprenant une séquence peptidique selon l'une des revendications 1 à 3. 13. Composition immunogène selon la revendication 12, caractérisée en ce qu'elle comprend un oligomère comprenant de 2 à 15, notamment 8 monomères, lesdits monomères étant constitués d'une séquence d'aminoacides selon l'une des revendications 1 à 3, comportant éventuellement de 1 à 5 résidus d'aminoacides supplémentaires. 14. Composition immunogène selon la revendication 12, caractérisée en ce qu'elle comprend une séquence selon l'une des revendications 1 ou 3 ou un oligomère tel que défini à la revendication 13, associés à une chaîne lipidique. 15. Procédé de mise en évidence d'une séquence peptidique selon l'une des revendications 1 à 3, caractérisé en ce qu'il comprend la mise en contact d'une telle séquence ou d'un dérivé de celle-ci avec un anticorps monoclonal selon la revendication 5 et la détermination quantitative du complexe formé. 16. Séquence nucléotidique codant pour une séquence peptidique selon l'une des revendications 1 à 3, et séquence nucléotidique complémentaire de ladite séquence codante. 17. Séquence nucléotidique selon la revendication 16, caractérisée par la séquence nucléotidique suivante GGC TCC GAG GAC TTT GTT GAA TTT CTG GAG TTC CGT CTG ATG CTG. 18. Sonde nucléique caractérisée en ce qu'elle comprend tout ou partie d'une séquence nucléotidique selon la revendication 16 ou 17. 19. Procédé de détection in vitro d'une infection par Trypanosoma cruzi, caractérisé en ce qu'il consiste à réaliser une amplification génique d'une fraction nucléique comprenant la séquence nucléotidique selon la revendication 16 ou 17 de Trypanosoma cruzi contenue dans un prélèvement biologique, et à mettre en évidence la séquence nucléique de Trypanosoma cruzi éventuellement amplifiée à l'aide d'une sonde nucléique selon la revendication 18. 20. Procédé de détection in vitro d'une infection par Trypanosoma cruzi, caractérisé en ce qu'il consiste à réaliser une amplification génique d'une fraction nucléique de Trypanosoma cruzi contenue dans un prélèvement biologique par PCR en utilisant un couple d'amorces dont l'un des membres est une séquence nucléotidique selon la revendication 16 ou 17, et à mettre en évidence la séquence nucléique de Trypanosoma cruzi éventuellement amplifiée à l'aide d'une sonde nucléique. 21. Kit de diagnostic in vitro d'une infection par Trypanosoma cruzi, caractérisé en ce qu'il contient une sonde nucléique selon la revendication 18. 22. Kit de diagnostic in vitro d'une infection par Trypanosoma cruzi, caractérisé en ce qu'il contient une ADN ou ARN polymérase, les quatre désoxynucléosides triphosphates ainsi qu'un couple d'amorces, l'un des membres du couple étant une séquence nucléotidique selon la revendication 16 ou 17.