Brevet FR2695929A1 — publié le 19940325

L'invention concerne le domaine des cultures agricoles dans lesquelles on utilise des semences, des plants et tous autres supports de culture connus. Sous un autre aspect l'invention fait partie de la technique générale du traitement des sols en agriculture. Elle est applicable avec beaucoup d'avantages aux cultures de légumineuses. Dans la technique antérieure, on a déjà proposé de mettre en oeuvre des inoculums microbiens en agriculture. Le but de cette technique est d'apporter au moment de la mise en place dans le sol des graines ou des plants, les bactéries utiles ou indispensables pour la croissance de la plante. Les inoculums utilisés à cet effet--peuvent être des cultures microbiennes liquides, ou sur support solide. I1 peut s'agir également de cultures microbiennes déshydratées, sous forme de gel ou de lyophilisat. Les inoculums actuellement mis en oeuvre et devant faire l'objet d'une homologation sont des cultures pures, exemptes de contaminant, afin de faciliter le contrôle de qualité, améliorer la survie et empêcher toute introduction autre que le microbe autorisé. On connaît plusieurs techniques différentes d'utilisation de tels inoculums. Par exemple, dans le cas des légumineuses, une première techniques consiste à apporter l'inoculum au moment du semis par mise en contact avec la graine. Une variante consiste à mettre en oeuvre des graines préinoculées. Une autre technique prévoit l'inoculation du lit de semences : l'inoculum est alors apporté dans la raie de semis, soit sous forme liquide, soit sous forme de microgranulés, ceux-ci étant pratiquement épandus à l'aide de dispositifs connus à cet effet pour distribuer les produits phytosanitaires. Cette dernière technique est souvent préférée par les agriculteurs, car les quantités de produit à manipuler sont plus faibles que dans le cas de l'inoculation des semences. Par exemple, il suffit d'inoculer environ 10 kg par hectare de microgranulés au lieu de 80 à 150 kg de graines dans le cas de l'inoculation des semences. Les résultats déjà enregistrés dans la pratique montrent que l'efficacité de la technique d'inoculation du lit de semences est aussi bonne. A titre illustratif, on connaît actuellement une technique qui consiste à mélanger au moment de l'emploi, à sec, une certaine quantité d'inoculum bactérien sur support solide, tel que de la tourbe, avec des microgranulés minéraux d'origine industrielle, tels que des argiles, des carbonates ou autres, dont la taille est appropriée pour l'épandage. Dans la pratique, la granulométrie est d'environ 0,2 à 0,8 mm. Une telle technique a l'avantage d'utiliser des microgranulés peu coûteux, en combinaison avec des faibles quantités d'inoculums, lesquels peuvent être facilement conservés à part. Dans une telle technique, on ne se préoccupe pas vraiment de la fixation de l'inoculum sur les microgranulés, ceux-ci ne servant en fait qu'à diluer l'inoculum.La nature de tels microgranulés peut être très variée et en dehors des matériaux argileux et minéraux déjà cités, on peut mentionner la tourbe, le sable, les billes de polyéthylène et autres matières analogues susceptibles d'être épandues par les engins agricoles. Une autre technique connue consiste à inoculer à l'avance et lors de la fabrication des granulés de nature diverse, de manière à réaliser des microgranulés prêts à l'emploi. On connaît ainsi des granulés contenant le ou les micro-organismes à inoculer, à base d'argile, de tourbe, d'alginates, de vermiculite, de perlite, de gels de divers polysaccharides, de silice, de sulfate de calcium. Ont été également décrits des microgranulés comportant des associations de constituants, par exemple de la calcite enrobée de tourbe, des gels de polysaccharides et de silice, des mélanges tourbe-argile et de sulfate de calcium, des argiles et alginates, entre autres.Cette technique de réalisation à l'avance des microgranulés inoculés est séduisante, mais il est très difficile de fabriquer ces produits en conditions stériles et d'assurer un stockage à basse température compte tenu des volumes impliqués, la quantité de produit à utiliser étant de l'ordre de 10 kg par hectare par exemple. Par ailleurs, si l'on introduit aussi des substances nutritives avec le support des microgranulés inoculés, il y a un risque accru de développement de germes contaminants dans le milieu ainsi enrichi. La présente invention appartient à la technique générale d'inoculation microbienne à l'aide de microgranulés à inoculer extemporanément. Elle a principalement pour objet d'utiliser des microgranulés qui, après enfouissement dans les sols, permettent d'améliorer la survie et d'obtenir une multiplication des microorganismes de l'inoculum. Sous un premier aspect, l'invention concerne des microgranulés comprenant un support solide et au moins une substance capable de favoriser la croissance des germes d'un inoculum microbien avec lequel les micro-granulés sont mis en contact au moment de l'emploi. Les microgranulés selon l'invention ne sont pas inoculés à l'avance. Ils sont mis en oeuvre, au moment de l'emploi, conjointement avec l'inoculum microbien. Sous un autre aspect, l'invention a aussi pour objet un procédé pour améliorer le rendement des cultures agricoles, dans lequel on utilise un inoculum contenant au moins une culture microbienne et des microgranulés, ledit procédé étant caractérisé en ce que les microgranulés comprennent au moins une substance capable de favoriser la croissance des germes de l'inoculum. Le procédé de l'invention consiste donc à utiliser des microgranulés contenant une substance, notamment un substrat nutritif, capable de favoriser la croissance des germes de l'inoculum, lesdits microgranulés pouvant être préparés à l'avance et stockés à l'état sec, et à les inoculer au moment de l'emploi par un inoculum microbien, afin d'obtenir dans le sol une meilleure survie et une croissance de cet inoculum. Selon une variante, le procédé de l'invention n'utilise pas de tels microgranulés préparés à l'avance mais consiste à ajouter à des microgranulés connus, au moment de l'emploi, conjointement ou non avec l'inoculum microbien, au moins une substance, par exemple un substrat nutritif, capable de favoriser la croissance des germes de I'inoculum. Pour les besoins de la présente invention, on peut utiliser tout type de microgranulés obtenus par broyage ou granulation, qu'il s'agisse de microgranulés de nature minérale ou organique, ou des mélanges de tels granulés. Parmi les granulés d'origine minérale, on peut citer les argiles industrielles et les mélanges argileux, qui ont donné de bons résultats pratiques. Quant aux microgranulés d'origine organique, on peut citer divers substrats granulés ou broyés, à base de tourbe, compost, résidus végétaux et autres. La littérature technique contient de nombreux exemples de microgranulés utilisables ainsi que des indications sur la granulométrie souhaitable. Il convient de choisir des dimensions de grains qui conviennent à l'épandage avec les engins agricoles usuels, et on sait qu'une dimension appropriée pour la taille des microgranulés est de l'ordre de 0,2 à 0,8 mm, à titre indicatif et non limitatif. Selon la caractéristique essentielle de 1'invention, les microgranulés en cause sont enrichis, soit à l'avance, soit au moment de l'emploi, par mise en contact des microgranulés proprement dits et du substrat d'enrichissement, lequel consiste en au moins une substance capable de favoriser la croissance des germes de l'inocuîum bactérien. Dans la pratique, l'enrichissement des microgranulés à l'avance peut être réalisé par imbibition, immersion ou pulvérisation des microgranulés et séchage ultérieur, par granulation d'une suspension de matériau solide et du substrat d'enrichissement ou par mélange des microgranulés avec les substrats d'enrichissement finement broyés. Selon ce mode de réalisation, les microgranulés préparés à l'avance peuvent être stockés secs, de façon à ne pas permettre le développement des micro-organismes durant le stockage. Dans un autre mode de réalisation, l'enrichissement des microgranulés n'est pratiqué qu'au moment de l'emploi, par l'une quelconque des techniques déjà citées (imbibition, immersion ou pulvérisation ou encore mélange à l'étant sec). Le substrat d'enrichissement peut alors être mis en oeuvre seul ou en mélange avec 1'inoculum microbien. Pour ce qui est des substances ou substrats d'enrichissement, on peut utiliser tout produit capable de favoriser la survie et la multiplication du germe à inoculer, soit directement en permettant ou stimulant sa croissance, soit en limitant la croissance des germes compétiteurs du sol. On peut notamment utiliser des substrats carbonés comme le glucose, le glycérol et toute autre source de carbone convenant à la croissance de la plupart des micro-organismes ou bien au contraire faire appel à des substrats carbonés spécifiques du germe à favoriser. I1 est également possible d'utiliser d'autres produits, notamment azotés ou phosphorés et plus généralement tout nutriment susceptible de permettre la croissance du germe à inoculer.Mais, selon le concept inventif présentement décrit, on peut aussi utiliser des biocides compatibles avec le germe à inoculer mais susceptibles d'inhiber la croissance des compétiteurs ou de la ralentir, tels que des produits actifs dans le sol contre les bactéries, les champignons et les protozoaires. Ces types de produits sont connus de l'homme du métier et peuvent être notamment choisis parmi les antibiotiques, les fongicides et plus généralement tout produit phytosanitaire. I1 a été indiqué précédemment que dans le procédé de l'invention on pouvait utiliser un inoculum contenant au moins une culture microbienne. De fait, l'inoculation peut faire appel à un ou plusieurs germes, qui peuvent être apportés successivement ou en mélange. Les microgranulés sont inoculés par l'utilisateur, au moment de l'emploi ou peu de temps avant celui-ci. Tous les types d'inoculum peuvent être utilisés, quels que soient leur support et leur conditionnement, par exemple des inoculums sur support solide, tel que la tourbe, des inoculums liquides, des inoculums en gel ou des inocuîums lyophilisés Dans le cas où l'enrichissement des microgranulés est réalisé au moment de l'emploi, l'inoculation peut se pratiquer avant ou après l'enrichissement ou encore en mélange avec les produits d'enrichissement.Ces techniques d'inoculation sont connues de l'homme du métier et n'ont pas à être décrites plus en détail. L'invention peut être appliquée avec un ou plusieurs micro-organismes susceptibles d'être utilisés dans l'inoculation des semences, des plants, des supports de culture et des sols. I1 s'agit notamment de tous les microorganismes utilisables pour favoriser directement la croissance des plantes, tels que ceux appartenant aux genres Rhizobium, Bradyrhizobium, Azospirillum, ainsi que les champignons ecto- et endomycorhizogènes. Des résultats probants ont été obtenus avec le micro-organisme Bradyrhizobium japonicum.Entrent également dans le cadre de l'invention les micro-organismes utilisables en lutte biologique contre les maladies des plantes et les ravageurs, comme les bactéries antagonistes des bactéries et des champignons phytopathogènes (P.G.P.R. : Plant Growth Promoting Rhizobacteria, Pseudomonas, Agrobacterium, Bacillus et autres genres similaires), les champignons antagonistes des champignons phytopathogènes (Fusarium, Trichoderma, et autres espèces similaires) et les bactéries et champignons entomopathogènes (Bacillus thuringiensis, Beauveria, et autres espèces similaires). On peut encore citer les micro-organismes utilisables dans la dépollution et la bioremédiation des sols. L'invention procure des avantages par rapport à l'utilisation traditionnelle d'inoculum. On sait en effet que l'efficacité des inoculations microbiennes dans l'agriculture dépend directement du nombre de germes vivants et efficaces apportés. I1 est également connu que les pertes immédiates à l'inoculation sont généralement très importantes et sont dues principalement à la mortalité des germes apportés par dessication. On s'efforce donc à l'heure actuelle de trouver des procédés qui permettent d'augmenter la dose possible de micro-organismes à inoculer. Mais il faut aussi limiter les pertes de microorganismes lors de l'utilisation aux champs, tout en tenant compte des limites physiques, les quantités possibles à inoculer étant limitées par le poids de graines ainsi que par les équipements disponibles, aussi bien qu'économiques (coûts de production, stockage).Pour cette raison, on a déjà proposé dans la technique antérieure de réaliser la croissance du micro-organisme inoculé dans les sols, mais seulement après inoculation. Certaines tentatives ont été faites pour ajouter des substrats nutritifs directement dans le sol, par exemple un substrat carboné. Mais il faut alors ajouter au sol, par exemple dans le cas du traitement d'un lit de semences, entre 20 et 200 kg de substrat carboné par hectare, ce qui correspond à des quantités totalement irréalistes en grandes cultures. L'invention permet d'obtenir une croissance dans le sol des germes apportés en augmentant leur nombre, ce qui se traduit soit par un effet amélioré de l'inoculation, soit par un effet de sécurité au cas où des conditions difficiles sont présentes lors du traitement d'inoculation, ce qui peut être le cas d'un inoculum partiellement déficient ou d'une mortalité anormale à l'inoculation. Grâce à l'invention, la dose de micro-organismes mise à la disposition de la semence ou de la plante peut être augmentée ou maintenue dans d'excellentes conditions de sécurité. On a déjà dit précédemment que l'on connaissait dans la technique antérieure l'utilisation de microgranulés, et plus particulièrement de microgranulés préinoculés c'est-àdire inoculés à l'avance lors de la fabrication. Par rapport à une telle technique de microgranulés préinoculés, la présente invention procure de nombreux avantages, en particulier les suivants - l'invention permet d'utiliser des microgranulés du commerce, généralement peu coûteux, - l'enrichissement en substrat nutritif peut être réalisé sans exigence de stérilité et est donc moins coûteux, - risques nuls ou très réduits de développement de germes contaminants dans les microgranulés au stockage (stockage sec), alors que de tels risques apparaissent sur des microgranulés préinoculés, - stockage possible à température ordinaire sur une longue durée, les propriétés du microgranulé n'étant pas liées au nombre de germes qu'il contient et à leur survie, alors qu'on connaît l'effet défavorable de la température pour la survie d'un inoculum et des microgranulés préinoculés, - stockage au froid possible de l'inocuîum microbien en petit emballage séparé des microgranulés, lesquels peuvent être conditionnés en emballage volumineux, - possibilités variées de jouer sur la nature et la concentration des substrats, l'adaptation de la nature et de la spécificité du substrat au germe à inoculer, - possibilité d'addition de biocides défavorisant les compétiteurs, sans risques de toxicité par contact prolongé entre l'inoculum et le microgranulé. L'invention sera maintenant illustrée sans être aucunement limitée par des exemples de mise en oeuvre au laboratoire et au champ, qui utilisent tous la bactérie Bradyrhizobium japonicum désignée par l'abréviation B. japonicum, la culture choisie étant celle du soja. On sait que, pour cette plante, la nodulation (nombre de nodosités, poids des nodosités) croît quand la dose de B. japonicum apportée augmente. Par ailleurs, le rendement est lié à la nodulation. On exposera d'abord tous les moyens et modes de réalisation de l'expérimentation et ensuite les résultats de celle-ci. SOUCHES Tous les essais en serre et au champ sont réalisés avec la souche G49 commerciale (IARI SB16, New Delhi) de B. j aponicum. Pour suivre l'évolution de populations introduites dans les sols, on a utilisé une souche de B. japonicum résistante à des antibiotiques. Au laboratoire, a été isolé sur boîte de Pétri contenant des antibiotiques un mutant spontané de G49 résistant à la rifampicine (100 mg/ml) et à la kanamycine (200 mg/ml), dont la stabilité a été vérifiée et qui a été dénommé G49RfKm. Cette nouvelle souche a été déposée à la collection CNCM de l'institut Pasteur sous le N I-1264 le 11 septembre 1992. MICROGRANULES I1 s'agit de produits commerciaux répondant aux critères suivants - densité suffisamment élevée pour permettre une bonne descente dans le microgranulateur, - granulométrie : assez fine et homogène, comprise entre 0,2 et 0,8 mm, - pH compatible avec la survie des bactéries, - absence de toxicité vis-à-vis des bactéries inoculées, - mélange avec un inoculum facile à réaliser, retenant suffisamment la tourbe, et donnant un produit homogène. On a utilisé des granulés ayant une porosité suffisante et ne se déstructurant pas dans liteau, afin de conserver toutes leurs propriétés lors des phases d'imprégnation (par la solution d'enrichissement) et de séchage. Cette procédure n'altère pas la facilité de distribution des microgranulés par microgranulateur. Deux types de microgranulés répondant à ces exigences ont été mis en oeuvre, l'un appelé K, à base de cristoballite, et l'autre M, formé de montmorillonite calcinée. Le tableau 1 donne les caractéristiques essentielles de ces microgranulés. Tableau 1 : Caractéristiques essentielles des iicrogranulés K et M utilisés dans les expérimentations K N Composition cristoballite montmorillonite (silice) calcinée illite Teneur en eau a pF 2,5 (point de) ressuyage d'un sol) 0,64 0,39 à pF 4,2 (point de flétrissement) 0,48 0,21 pH 5,5 7,8 Granulojétrie : > 0,8 mm 1,0 t 1,4 % 0,8 - 0,25 mm 98 % 98 % Densité :: humidité O % 0,57 1,0 humidité 13 % 1,0 humidité 30 t 0,70 Nombre de particules par kg 13 à 17x106 5 à 8x106 Déstructuration par l'eau non non SUBSTRATS D'ENRICHISSEMENT Ils sont formés essentiellement d'une source de carbone, d'une source d'azote, et d'éléments minéraux. Les produits retenus pour l'enrichissement sont dissous dans liteau. Le volume ne doit pas être excessif, de façon à être absorbé entièrement par la porosité des microgranulés. Mais il doit être suffisamment élevé pour, d'une part entraîner une dissolution complète des produits, d'autre part permettre une homogénéisation du mélange avec les microgranulés avant son absorption complète. Cette solution est apportée sur les microgranulés secs, l'ensemble étant brassé immédiatement afin d'obtenir un mélange uniforme. Elle est absorbée par la porosité. Un séchage ultérieur permet de laisser le substrat nutritif sec dans cette porosité, autorisant une conservation longue, même dans des conditions non stériles. Les concentrations utilisées pour les expérimentations varient de 16 à 96 g de matières organiques (exprimées en carbone organique), par kg de microgranulés secs. FONGICIDES ASSOCIES Après un test sur leur efficacité contre les champignons du sol et leur innocuité vis-à-vis des souches inoculées, les produits retenus sont ajoutés dans la solution d'enrichissement, avant leur incorporation dans les microgranulés. SOLS ET SUPPORTS DE CULTURE UTILISES Essais au champ L'essentiel du travail a été conduit sur un sol argileux du domaine de 1'INRA - Dijon, et une partie secondaire a concerné un sol sableux de la même région. Ces sols étaient au départ dépourvus de B. japonicum. Les caractéristiques essentielles sont données dans le tableau 2. Tableau 2 : Caractéristiques des sols utilisés pour les essais au champ Caractéristiques Sol argileux Sol sableux Granulométrie en g/kg argile 382 75 lijon 562 227 sable 56 698 Humidité équivalente en p 100 28.1 9.9 Carbone organique méthode Anne en g/kg 16.0 6.9 Ratières organiques en g/kg 27.5 11.9 Azote organique total en g/kg 1.56 0.67 (Méthode Kjeldahl) pH eau 7.0 7.3 Calcaire total 0 0 Capacité d'échange cationique Hetson en meq p 100 21.7 4.3 Essais au laboratoire Ils ont été réalisés pour leur presque totalité avec le même sol argileux que celui utilisé pour les essais au champ. Ce sol est dépourvu de B. japonicum. PLANTE Tous les essais ont été réalisés avec la variété de soja Maple Arrow, de type indéterminé et appartenant au groupe de précocité 00. INOCULUMS En cas d'utilisation de la souche G49 normale, l'inoculum, tourbe ou liquide, est un produit commercial ("Biodoz", de la société LIPHA-). L'inoculum de la souche G49 résistante (G49RfKm) est produit au laboratoire. Une fiole contenant un milieu de culture liquide, à base d'extrait de malt, est inoculée stérilement à partir d'un tube gélosé contenant la souche. Elle est ensuite placée sur une table d'agitation (200 rpm) à 28 C pendant 6 à 7 jours. La culture obtenue alors constitue l'inoculum liquide utilisé, qui peut être conservé plusieurs mois à 4 C. Pour la production d'inoculum tourbe, on part d'une tourbe stérile de même origine que celle de l'inoculum commercial. Dans un flacon contenant 30 g de ce produit, à 12 % d'humidité, on ajoute 12 ml d'inoculum liquide. Apres homogénéisation et maturation 2 à 3 semaines à température ambiante, on obtient un produit qui a sensiblement les mêmes propriétés que la tourbe commerciale : humidité de 55-60 %, richesse de l'ordre de 109 germes par gramme de tourbe. TECHNIQUES D'INOCULATION DES MICROGRANULES On a retenu une proportion correspondant à celle de l'inoculation au champ, soit 4 % d'inoculum pur par rapport aux microgranulés. Compte tenu des quantités nécessaires pour l'introduction dans le sol, des facilités de manipulation et de la précision espérée, on a travaillé sur des lots de 25 g de microgranulés (mesurés secs et sans enrichissement), en flacons de 250 ml. Pour l'utilisation avec l'inocuîum tourbe, les microgranulés sont d'abord humidifiés au niveau voulu. Ensuite, chaque lot est inoculé avec 1 à 1,3 g d'inoculum, le tout étant homogénéisé, puis utilisé dans les minutes suivantes. Lorsqu'ils sont employés avec un inoculum liquide, les microgranulés, secs au départ, reçoivent un inoculum préalablement dilué de façon à apporter simultanément 1 ml d'un inoculum pur pour 25 g de microgranulés, mais aussi la quantité d'eau nécessaire pour être à l'humidité voulue (7,5 ml pour K et 3,25 ml pour M dans la plupart des expérimentations). Après agitation pour homogénéisation, les microgranulés sont utilisés rapidement. Techniques d'introduction dans les sols et d'incubation Après tamisage à 4 mm ou à 2 mm, les sols sont introduits dans des flacons en verre, soit à raison de 50 g de sol sec dans un flacon de 500 ml, soit de 20 g dans 250 ml. L'humidité est ajustée 24 h à l'avance, en général au niveau de 80 % de la capacité de rétention en eau. Dans ces flacons, sont introduits respectivement 300 mg et 120 mg de microgranulés, ce qui représente respectivement environ 4500 et 1800 microgranulés pour K, 2100 et 800 pour M. Les flacons sont ensuite agités manuellement de façon à répartir les microgranulés dans tout le volume de sol. Les flacons inoculés sont mis à incuber en les fermant avec un film plastique, destiné à empêcher la perte d'eau tout en permettant les échanges respiratoires Ils sont ensuite placés à l'obscurité, en général à 20 C, mais aussi à 15 C ou à 28 C pour certains essais. Les dénombrements sont réalisés sur la totalité d'un flacon après plusieurs jours d'incubation. Dénombrements en boîtes de Pétri L'essentiel des mesures consiste en des dénombrements de populations de B. japonicum capables de former des colonies sur boites de Pétri contenant un milieu de culture gélosé. Ces dénombrements sont réalisés à plusieurs stades de l'inoculation - inoculums eux-mêmes, avant utilisation, sur des quantités généralement de 1 ml ou 1 g, - microgranulés après inoculation, en travaillant soit sur la totalité d'un lot, soit sur des aliquotes, - sols ayant reçu des microgranulés inoculés, en travaillant sur la totalité du contenu d'un flacon. Les produits à dénombrer pour leur richesse en B. japonicum sont introduits dans 100 ml d'une solution d'extraction et placés sur une table d'agitation (200 rpm) pendant 30 minutes. Des dilutions successives sont ensuite réalisées au 1/10, et les suspensions bactériennes obtenues sont étalées sur les milieux de dénombrement par l'une des deux méthodes suivantes. En absence de sol, un appareil (Spiral System) dépose un volume connu de la suspension sur le milieu gélosé d'une boîte de Pétri. Celle-ci est ensuite mise à incuber à 28 C, puis les colonies présentes sont dénombrées à 5 ou 6 douros, d'où un comptage en uf c (unités formant une colonie). Un calcul à partir des dilutions utilisées permet de déterminer la richesse du produit à analyser. En présence de sol, l'appareil précédent est inutilisable, et les dénombrements sont réalisés par la méthode appelée "double couche". Un faible volume, 0,1 ou 0,2 ml, d'une suspension à dénombrer est introduite dans un tube à hémolyse contenant 3 ml de solution gélosée à 0,7 % en surfusion (43 C). Après homogénéisation, ce mélange est étalé sur une boîte de Pétri contenant le milieu de culture gélosé, ainsi que les antibiotiques et fongicides auxquels la souche G49RfKm est résistante. Après incubation 7 jours à 280 C, les colonies présentes sur les boîtes sont dénombrées, les dilutions étant réalisées de façon à compter entre 30 et 300 colonies par boîte. Tous les dénombrements sont réalisés avec 3 répétitions pour chaque traitement, et les résultats sont donnés avec les écarts-type calculés. Essais au champ Les essais mis en place sur les sols précédemment décrits sont des dispositifs à & blocs complets. Le semis est effectué fin Avril-début Mai, l'objectif étant d'apporter 600 000 graines par hectare (variété Maple Arrow) inoculées à la dose agronomique, soit 10 kg de microgranulés par hectare, en lignes espacées de 30 cm. Ceux-ci sont enrichis et inoculés dans les mêmes conditions que pour les travaux au laboratoire, en lots de 1 kg, l'inoculation ayant lieu au champ quelques minutes avant le semis. L'irrigation est réalisée en cours de saison, en fonction des besoins de la culture. RESULTATS Les résultats des expérimentations sont rapportés ciaprès. La Figure unique du dessin annexé résume les résultats obtenus lors d'essais de laboratoire, comparant des microgranulés enrichis (E) ou non enrichis (M), inoculés par un inoculum liquide et incubés dans un sol non stérilisé, maintenu humide (H) ou soumis à la dessication (S). Nombre de germes B. japonicum récupérés après inoculation en liquide sur micrograulés et introduction dans le sol, en fonction du temps et selon le déssèchement du sol en cours d'incubation. Les légendes de la Figure sont : N = microgranulés non enrichis, E = microgranulés enrichis GLY3C, H = sol maintenu humide (82% de la capacité de rétention en eau) pendant les 21 jours, S = sol soumis à un déssèchement naturel après 7 jours d'incubation. D'après les résultats illustrés sur la Figure, on voit que - après 7 jours, les microgranulés enrichis permettent d'obtenir une multiplication de B. japonicum d'un facteur supérieur à 10 par rapport aux microgranulés non enrichis, - après 21 jours, les microgranulés enrichis maintiennent le nombre de B. japonicum à un niveau 10 fois supérieur à celui obtenu avec les microgranulés non enrichis quand le sol est maintenu humide et à un niveau plus de 100 fois supérieur quand le sol se déssèche. Les tableaux 3 à 7 résument les résultats obtenus lors d'essais au champ. Pour chaque tableau, les données d'une même colonne suivies de la même lettre ne sont pas statistiquement différentes au seuil de 5% suivant le test de Newman et Keuls. Dans les tableaux 3 et 4, sont rassemblés les premiers résultats obtenus au cours d'essais au champ en 1988 et 1989 respectivement. Ils montrent un effet significatif de l'enrichissement sur la nodulation. Les tableaux 5, 6 et 7 concernent des essais effectués en 1990 et 1991 avec diverses conditions de traitement, telles qu'indiquées en bas de chaque tableau. Dans le tableau 5, les traitements correspondant à l'invention (microgranulés enrichis inoculés par un inoculum tourbe) sont les traitements 3, 6, 8, 10. On peut constater une augmentation du nombre de nodosités par plantes au stade V3, générale pour tous les traitements, comparé au témoin microgranulés non enrichis (traitement 2). Cette augmentation est significative seulement pour les traitements 6 et 10. De même, on obtient une augmentation du taux d'azote des graines pour les traitements 3, 6, 8, 10, significative seulement pour les traitements 8 et 10. Dans le tableau 6, les traitements 2, 6, 9 et 10 correspondent à l'invention (microgranulés enrichis inoculés par inoculum tourbe (2 et 6), ou par inoculum liquide (9 et 10)). Avec un inoculum tourbe (2 et 6 comparés à 1), on constate une augmentation du nombre de nodules, non significative au stade V3, mais significative au stade R4 pour le traitement 6 (ajout d'un fongicide dans l'enrichissement). Avec un inoculum liquide (10 comparé ~à 9), on obtient une augmentation significative de la nodulation à V3 et R4, ainsi qu'une augmentation significative du taux d'azote des graines. Dans le tableau 7, les traitements 2, 3, 4, 5, (inoculés avec un inoculum tourbe) et 10 (inoculé avec un inocuîum liquide) correspondent à l'invention. Avec l'inoculum tourbe (2, 3, 4, 5 comparés à 1), on obtient des augmentations non significatives de la nodulation aux stades V3 et R4, mais des augmentations significatives du taux d'azote des graines. A noter que ce dernier effet est obtenu avec différents substrats carbonés. Avec l'inoculum liquide (10 comparé à 9), on obtient une augmentation significative importante de la nodulation (V3 et R4) et du taux d'azote des graines. Tableau 3: Résultats des essals 1988 d'inoculation du soja par des microgranulés enrichis Inoculation Inoculation Inoculation Inoculation Inoculation des graines par microgranulés par microgranulés liquide liquide enrichis (106 germes vivants (107 germes vivants par graine) par graine Nodosités par plante à V3 10,2el 14,6de 23,6 bc 24,7bc 37,9a M.S. des nodosités à V3 26,8de 32,9bcde 42,5ab 32,5bcde 45,1a (en mg par plante) Nodosités par plante à R4 14,0c 22,1b 25,1b 29,7b 38,7a M.S. des nodosités à R4 240a 261a 299a 301a 270a (en mg par plante) Teneur en azote des 2,45bc 2,45bc 2,68ab 2,57abc 2,75a plantes à R4 (% de la matière séohe) M.S. des plantes à R4 4520bc 5049abc 5571ab 5635ab 4929abc (en mg par plante) Rendement 33,39ab 38,10ab 39,01a 36,38ab 36,35ab (en q/ha à 14 % humidité) Tableau 4:Résultats des essals 1989 d'inoculation du soja par des microgranulés enrichis Inoculation Inoculation Inoculation Inoculation Inoculation des graines par microgranulés par microgranulés liquide liquide enrichis + fongicide (106 germes vivants par graine) Nodosités par plante à V3 15,7 bcde 20,7 bcd 24,3 b 31,7 a 15,2 bcde M.S. des nodosités à V3 18,8 abc 334 a 272 ab 280 ab 137 bc (en mg par plante) Nodosités par plante à R4 21,4 bc 26,5 bc 33,1 b 52,8 a 29,7 bc M.S. des nodosités à R4 1430 1654 1641 1764 1610 (en mg par plante) Teneur en azote des 2,88 abc 2,65 bcd 2,91 ab 3,00 a 2,78 abcd plantes à R4 (% de la matière séche) M.S. des plantes à R4 5140 4800 5530 5320 5510 5510 (en mg par plante) Rendement 45,7 ab 41,9 b 46,1 a 46,0 a 45,4 ab (en q/ha à 14 % humidité) *Fongicide: bénomyl (pour la définition du bénomyl, voir Merk Index-Edition 1989, composé 1053, page 162) Tableau 5: ESSAI MICROGRANULES EPOISSES 1990 Nombre de M.S. de Nombre de M.S. de M.S. à R4 nodosités nodosités nodosités nodosités des parties par plante par plante par plante par plante aériennes à V3 à V3 à R4 àR4 en g par Traitements en mg en mg plante 0.68 c 6.42 b 5.07 c 40.00 b 6.78 b 2 10.60 b 114.38 a 46.23 a 373.59 a 11.12 a 3 14.63ab 127.28 a 48.32 a 383.11 a 10.31 a 4 14.38ab 181.48a 47.15a 372.44a 10.69a:: 5 16.05 ab 160.98 a 45.40 a 334.83 a 9.60 a 6 18.73 a 126.38 a 50.45 a 410.08 a 10.95 a 7 12.23ab 107.35a 41.83a 369.57a 11.03a 8 16.45ab 135.55a 51.88a 367.20a 10.40a 9 16.98ab 149.27a 52.28a 331.00a 9.37a 10 18.15 a 141.75 a 52.35 a 355.33a 10.23a 11 17.02ab 123.55a 42.85a 327.44a 9.59a 12 2.47 c 44.50 bc 18.70 b 252.64 bc 9.84 a test N.K.S S S S S C.V.: 21,2% 48,5% 17,8% 11,6% 10,9% traitement taux quantité rendement taux quantité d'azote d'azote net d'azote d'azote des parties des parties en q/ha des des aériennes aériennes à 14% graines graines à R4 à R4 en qx/ha en g/plante 1 29.6 5.62 1.66 2 34.2 a 6.53 c 2.23 a 3 32.7a 6.62abc 2.17ab 4 32.3a 6.70abc 2.16ab 5 33.7 a 6.56 bc 2.20 a 6 31.3a 6.66abc 2.08ab 7 32.6 a 6.76 ab 2.20 a 8 31.2 a 6.77 ab 2.11 ab 9 33.3 a 6.77ab 2.26 a 10 30.3a 6.84a 2.07ab 11 34.2a 6.78ab 2.32a 12 31.1 a 6.28 d 1.95 b test N.K.NS S S C.V.: 51% 1,6% 4,8% Traitements: 1 - témoin non inoculé 2 - témoin M non enrichi 3 - M enrichi glucose 2C 4 - M enrichi glucose 2C + bénomyl 5 - M bénomyl 6 - M enrichi glycérol 2C 7 - M enrichi glycérol 2C + bénomyl 8 - M enrichi glucose 6C 9 - M enrichi glucose 6C + bénomyl 10- M enrichi glycérol 6C 11- M enrichi glycérol 6C + benomyl 12- Microgranulé du commerce Tableau 6:ESSAI MICROGRANULES EPOISSES 1991 Nombre de M.S. de Nombre de M.S. de M.S. à R4 Couleur nodosités nodosités nodosités nodosités des parties des par plante par plante par plante par plante aériennes plantes à V3 à V3 à R4 à R4 en g par à R4 Traitements en mg en mg plante 1 17.7 bcd 19.0abc 29.7 cd 259abc 7.24 5.0 2 19.1 bcd 15.4 bc 33.8 c 243 bc 8.26 5.0 3 20.1 bc . 19.0 abc 32.6 cd 283 ab 8.60 4.9 4 15.8 cde 16.1 bc 32.3 cd 245 bc 7.83 4.9 5 23.5 bc 19.7abc 30.6 cd 286 ab 7.67 5.0 6 27.3 b 23.8 ab 45.3 ab 285 ab 8.11 5.0 7 6.7 e 8.1 c 12.6 e 183 c 7.94 4.0 8 9.7 de 10.2 c 19.5 de 207 bc 8.04 4.6 9 9.8 de 12.5 bc 19.8 de 225 bc 7.76 4.5 10 38.0a 28.0a 53.6a 336a 8.68 5 11 9,5 de 10.3 c 26.7 cd 251 bc 7.30 4,6 14 0 0 0.1 3 6.51 2.8 test N.K.S S S S NS C.V.: 24.8% 32.4% 19.3% 14.1% 11.3% traitement taux quantité rendement taux quantité d'azote d'azote net d'azote d'azote des parties des parties en q/ha des des aériennes aériennes à 14% graines graines à R4 à R4 en en qx/ha en g/plante 1 2.74 ab 195.7 ab 36.01 6.49 b 2.34 ab 2 2.75 ab 226.3 ab 36.95 6.54 b 2.42 ab 3 2.81 ab 242.7 a 36.59 6.53 b 2.39 ab 4 2.80 ab 219.1 ab 35.58 6.52 b 2.32 ab 5 2.67 ab 205.4 ab 37.16 6.54 b 2.43 ab 6 2.94 a 238.7 ab 35.15 6.56 b 2.31 ab 7 2.28 c 181.2 b 34.98 6.26 d 2.19 b 8 2.48 bc 199.3 ab 36.43 6.39 bcd 2.33 ab 9 2.49 bc 193.2ab 34.68 6.30 cd 2.18 b 10 2.88 ab 249.6 a 37.36 6.72 a 2.51 a 11 2.70 ab 197.1 ab 35.76 6.43 bc 2.30ab 14 1.65 108.0 19.50 5.14 1.00 test N.K. S S NS S S C.V.: 6,4% 11,3% 5.0% 1.3% 5.0% Traitements: 1 - K non enrichi 2 - K enrichi GLYCEROL 3C 3 - K enrichi GLUCONATE DE SODIUM 3C 4 - K enrichi GALACTOSE 3C 5 - K enrichi MANNITOL 3C 6 - K enrichi GLYCEROL 3C + quintozène 7 - K non enrichi, tourbe pauvre 108 8 - K enrichi GLYCEROL 3C, tourbe pauvre 108 9 - K non enrichi, inoculum liquide dilue 10 - K enrichi GLYCEROL 3C, inoculum liquide dilué 11 - LIPHA (temoin inoculation classique) 14 - non inoculé (non pris en compte dans l'analyse de variance) Le microgranulé K est utilisé à une humidité de 20 % et sauf précision contraire, il est inoculé avec un inoculum BIODOZ LIPHA. Tableau 7: ESSAI MICROGRANULES PAGNY 1991 Nombre de M.S. de Nombre de M.S. de M.S. à R4 Couleur nodosités nodosités nodosités nodosités des parties des par plante par plante par plante par plante aériennes plantes à V3 à V3 à R4 à R4 en g par à R4 Traitements en mg en mg plante 1 21.5 bc 13.6 39.9 ab 170.6 6.12 3.5 2 32.9 ab 12.0 58.3 a 187.6 5.91 4.0 3 24.4 bc 12.2 50.2 ab 167.5 5.76 4.0 4 28.6abc 10.8 54.6a 187.1 5.75 4.0 5 21.5bc 12.7 39.3ab 162.8 5.56 4.0 6 28.3abc 16.9 55.7a 195.1 5.38 4.0 7 21.6bc 10.3 45.8ab 167.2 5.67 3.9 8 26.1 abc 15.5 49.9 ab 178.3 5.76 4.0 9 18.4 bc 11.9 40.4ab 179.3 6.09 4.0 10 38.4 a 16.9 56.0 a 175.1 5.32 4.0 11 23.1 bc 14.1 37.7 ab 175.8 5.80 4.0 12 16.0 c 11.2 33.1 b 138.5 5.48 4.0 13 17.9 bc 11.8 44.4ab 165.2 5.31 4.0 14 0 0 0.1 0.7 5.56 3.0 test N.K.S NS S NS NS C.V.: 26.4% 23.2% 18.0% 15.6% 13.1% traitement taux quantité rendement taux quantité d'azote d'azote net d'azote d'azote des parties des parties en q/ha des des aériennes aériennes à 14% graines graines à R4 à R4 en qx/ha en g/plante 1 3.18 194.6 29.8 6.56 c 1.95 2 3.24 191.3 29.4 6.87 ab 2.02 3 3.20 184.1 29.7 6.84 ab 2.03 4 3.24 185.6 29.6 6.83 ab 2.02 5 3.14 175.0 28.8 6.85 ab 1.97 6 3.29 176.3 29.0 6.93 a 2.01 7 3.26 184.0 28.6 6.71 abc 1.92 8 3.22 185.6 30.4 6.73 abc 2.05 9 3.15 191.9 29.7 6.66 bc 1.98 10 3.26 173.0 29.3 6.91 a 2.02 11 3.10 179.8 30.5 6.60 c 2.01 12 3.10 169.7 29.1 6.50 c 1.89 13 3.24 171.8 29.5 6.57 c 1.93 14 2.31 127.8 15.5 4.65 0.72 test N.K NS NS NS S NS C.V.: 3,3% 13.0% 6.6% 1.6% 6.7% Traitements: 1 - K non enrichi 2 - K enrichi GLYCEROL 3C 3 - K enrichi GLUCONATE DE SODIUM 3C 4 - K enrichi GALACTOSE 3C 5 - K enrichi MANNITOL 3C 6 - K enrichi GLYCEROL 3C + trifusol 7 - K enrichi GLYCEROL 1C 8 - K enrichi GLYCEROL 1C, inoculum liquide dilué mélangé à l'enrichissement lors de l'inoculation 9 - K non enrichi, inoculum liquide dilué 10 - K enr GLYCEROL 1C (enrichissement préalable) inoculum liquide dilué 11 - LIPHA (témon inoculation classique) 12 - SFM non enrichi 13 - SFM enrichi GLUCONATE DE SODIUM 3C à sec 14 - non inoculé (non pris en compte dans l'analyse de variance) Le microgranulé K est utilisé à 20 % d'humidité et sauf précision contrainre, il est inoculé avec un inoculum BIODOZ LIPHA. REVENDICATIONS 1. Procédé pour améliorer le rendement des cultures agricoles, dans lequel on utilise un inoculum contenant au moins une culture microbienne et des microgranulés, ledit procédé étant caractérisé en ce que les microgranulés comprennent au moins une substance capable de favoriser la croissance des germes de l'inoculum. 2. Procédé selon la revendication 1, caractérisé en ce qu'on utilise des microgranulés préparés à l'avance, lesdits microgranulés contenant une substance, notamment un substrat nutritif, capable de favoriser la croissance des germes de l'inoculum, lesdits microgranulés étant inoculés au moment de l'emploi par un inoculum microbien. 3. Procédé selon la revendication 1, caractérisé en ce qu'on ajoute à des microgranulés, au moment de l'emploi, conjointement ou non avec un inoculum microbien, au moins une substance, par exemple un substrat nutritif, capable de favoriser la croissance des germes de l'inoculum. 4. Procédé selon l'une quelconque des revendications 1 à 3, caractérisé en ce qu'on utilise des microgranulés de nature minérale ou organique ou des mélanges de tels granulés, obtenus par broyage ou granulation. 5. Procédé selon la revendication 4, caractérisé en ce qu'on utilise des granulés d'origine minérale, tels que des argiles industrielles et les mélanges argileux. 6. Procédé selon la revendication 4, caractérisé en ce qu'on utilise des microgranulés d'origine organique, par exemple à base de tourbe, compost, résidus végétaux et autres. 7. Procédé selon l'une quelconque des revendications 1 à 6, caractérisé en ce que les microgranulés ont une dimension de grain convenant à l'épandage avec les engins agricoles usuels, notamment une granulométrie de l'ordre de 0,2 à 0,8 mm. 8. Procédé selon la revendication 2, caractérisé en ce que l'enrichissement des microgranulés à l'avance est réalisée par imbibition, immersion ou pulvérisation des microgranulés et séchage ultérieur, par granulation d'une suspension de matériau solide et du substrat d'enrichissement ou par mélange des microgranulés avec les substrats d'enrichissement finement broyés. 9. Procédé selon la revendication 3, caractérisé en ce que l'enrichissement des microgranulés est réalisé au moment de l'emploi par imbibition, immersion ou pulvérisation ou encore mélange à l'état sec avec le substrat d'enrichissement, celui-ci pouvant être mis en oeuvre seul ou en mélange avec l'inoculum microbien. 10. Procédé selon l'une quelconque des revendications 1 à 9, caractérisé en ce que, à titre de substance ou substrat d'enrichissement, on utilise tout produit capable de favoriser la survie et la multiplication du germe à inoculer soit directement, en permettant ou stimulant sa croissance, soit en limitant la croissance des germes compétiteurs du sol. 11. Procédé selon la revendication 10, caractérisé en ce qu'on utilise des substrats carbonés comme le glucose, le glycérol et toute autre source de carbone convenant à la croissance des micro-organismes ou bien des substrats carbonés spécifiques du germe à favoriser. 12. Procédé selon la revendication 10, caractérisé en ce qu'on utilise d'autres produits, notamment azotés ou phosphorés et, d'une manière générale, tout nutriment susceptible de permettre la croissance du germe à inoculer. 13. Procédé selon la revendication 10, caractérisé en ce qu'à titre de substance ou substrat d'enrichissement, on utilise des biocides compatibles avec le germe à inoculer, mais susceptibles d'inhiber la croissance des compétiteurs ou de la ralentir, tels que des produits actifs dans le sol contre les bactéries, les champignons et les protozoaires, ces produits pouvant notamment être choisis parmi les antibiotiques et les fongicides. 14. Procédé selon l'une quelconque des revendications 1 à 13, caractérisé en ce que l'inoculation met en oeuvre un ou plusieurs germes qui peuvent être apportés successivement ou en mélange. 15. Procédé selon l'une quelconque des revendications 1 à 1t, caractérisé en ce qu'on utilise des inoculums sur support solide, tel que la tourbe, des inoculums liquides ou des inoculums en gel ainsi que des inoculums lyophilisés. 16. Procédé selon la revendication 3, caractérisé en ce que l'inoculation est pratiquée avant ou après l'enrichissement ou encore en mélange avec les produits d'enrichissement. 17. Procédé selon l'une quelconque des revendications 1 à 16, caractérisé en ce que, à titre de-micro-organismes pour l'inoculation, on utilise un ou plusieurs des microorganismes destinés à favoriser directement la croissance des plantes, tels que Rhizobium, Bradyrhizobium, Azospirillum, ainsi que les champignons ecto et endomycorhizogènes, ainsi que les micro-organismes utilisables en lutte biologique contre les maladies des plantes et les ravageurs, comme les bactéries antagonistes des bactéries et des champignons phytopathogènes (P.G.P.R. : : Plant Growth Promoting Rhizobacteria, Pseudomonas, Agrobacterium, Bacillus et autres genres similaires), les champignons antagonistes des champignons phytopathogènes (Fusarium, Trichoderma, et autres espèces similaires) et les bactéries et champignons entomopathogènes (Bacillus thuringiensis, Beauveria, et autres espèces similaires) et les micro-organismes utilisables dans la dépollution et la bioremédiation des sols. 18. Microgranulés comportant un support solide et au moins une substance capable de favoriser la croissance des germes d'un inoculum microbien avec lequel les microgranulés sont mis en contact au moment de l'emploi. 19. Microgranulés selon la revendication 18, préparés à l'avance et stockés séparément, notamment à l'étant sec.