Brevet FR2690444A1 — publié le 19931029

PROCEDE DE PREPARATION D'UNE SOLUTION D'ALBUMINE PLASMATIQUE PURIFIEE. L'invention concerne la purification des solutions d'albumine obtenue à partir du plasma sanguin, notamment humain, par voie chromatographique. I1 est bien connu de séparer à partir du sang, par centrifugation, d'une part, les globules et, d'autre part, le plasma sanguin. On sait depuis de nombreuses années que le plasma contient, outre l'albumine qui constitue la majeure partie des matières dissoutes, toute une série d'autres molécules, notamment des protéines, dont l'extraction est particulièrement intéressante compte tenu de leurs utilisations thérapeutiques. On a donc proposé des procédés de précipitation fractionnée par un agent de précipitation à des pH, forces ioniques et température variables. La méthode la plus largement utilisée à l'heure actuelle est celle de Cohn (voir COHN J. et autres J. Am. Chem. Soc. 72,465-474/1950) ou des variantes de cette méthode où l'agent de précipitation utilisé est ltéthanol. Selon ladite méthode de Cohn, le plasma est refroidi à - 30 C puis réchauffé à + 2" C, d'où il en résulte un cryo-précipité contenant le facteur Vffi anti-hémophilique, le fibrinogène et la fibronectine. Le surnageant, dit "surnageant I", est séparé du précipité susmentionné; ; on abaisse son pH à 5,85 + 0,05 et on ajoute de ltéthanol jusqu'à ce que la concentration éthanolique soit de 19 % en volume, la température étant abaissée, au fur et à mesure de l'addition d'éthanol, jusqu'à - 5 C.On obtient ainsi un précipité, dit "précipité (IA + III)", contenant notamment les gamma-globulines et un surnageant, dit "surnageant (11 + III)" contenant l'albumine et des impuretés. On reprend le surnageant ainsi obtenu et on augmente le taux d'alcool jusqu'à obtenir une concentration éthanolique de 40 % en volume, la température étant abaissée à environ - 8" C. On obtient ainsi un précipité, dit "précipité IV", et un surnageant, dit "surnageant IV", qui contient l'albumine à un degré de pureté d'environ 94 à 97 % en poids de protéines.Le surnageant W sert de matière première pour les solutions d'albumine désirées, mais il contient une grande quantité d'éthanol; selon une première technique on peut dialyser directement le surnageant IV contre du sérum physiologique, mais il faut alors utiliser une très grande quantité d'eau et le procédé est donc lent et coûteux; selon une autre technique, on abaisse le pH du surnageant IV à 4,80 + 0,05 ce qui fait précipiter l'albumine: on sépare ce précipité, dit "précipité V", et on le remet en solution dans du sérum physiologique, le reste de l'méthanol étant extrait par dialyse. Pour compléter la purification de l'albumine, on a déjà proposé d'utiliser des techniques chromatographiques, notamment par échange d'ions (voir notamment Curling J.M., Methods of Plasma Protein Fractionation, Ed. J. Curling, Acad. Press, 77-91(1980); Tayot J.L. et autres, Methods of Plasma Protein Fractionation, Ed. J. Curling, Acad. Press, 149-160 (1980); Saint-Blancard J., Nouveaux échangeurs d'ions Trisacryl, Ann. Pharm. Fr. 39, 403-409 (1981)). Le principe de ces méthodes est de fixer l'albumine sur un support spécifique, en fonction du pH et de la force ionique, et d'éliminer ainsi dans l'effluent certaines des impuretés qui se trouvent dans la solution d'albumine traitée par chromatographie. Malheureusement, si ces techniques permettent d'améliorer de façon sensible la qualité des solutions d'albumine obtenues, par contre, elles sont difficiles à mettre en oeuvre et onéreuses. En effet, les solutions d'albumine traitées contiennent approximativement 4 % d'impuretés diverses à extraire. Etant donné que l'on fixe l'albumine sur le remplissage de la colonne de chromatographie, il faut fixer 96 % de la matière traitée et comme la fixation d'albumine par gramme de remplissage est limitée, de l'ordre de grandeur de 10 mg environ, cela implique la mise en oeuvre d'un très gros volume de lit de remplissage dans les colonnes. Etant donné que le remplissage est très volumineux, la mise en oeuvre exige une grande quantité d'eau pour assurer d'une part, le prééquilibrage de la colonne et d'autre part, le passage du produit sur la colonne ; en outre, la nature des remplissages utilisés exigent généralement, pour le prééquilibrage, l'utilisation de tampons spéciaux.Par ailleurs, lorsque l'albumine a été retenue dans le lit de remplissage, il faut, pour la récupérer, procéder à son solution de la colonne au moyen de solutionstampons appropriées, de sorte que l'albumine se retrouve ensuite mélangée à ces tampons et qu'il convient de redialyser les solutions d'albumine pour faire disparaître les sels des solutions-tampons et obtenir finalement un produit injectable. La présente invention a pour but de proposer un procédé de purification par voie chromatographique en phase liquide, qui utilise comme matière première les mêmes solutions d'albumine que les procédés chromatographiques de l'état de la technique, c'est-à-dire des solutions contenant environ 4 % d'impuretés par rapport au poids d'albumine.Selon l'invention, on effectue une chromatographie, qui retient les impuretés et laisse passer l'albumine dans l'effluent ; cette chromatographie s'effectue donc à l'inverse des chromatographies par absorption puis solution de l'albumine de l'état de la technique, ce qui permet de bénéficier de nombreux avantages en premier lieu, seulement 4 % des produits organiques contenus dans la solution, doivent être retenus dans le lit de remplissage, ce qui permet d'utiliser des lits de remplissage de volume beaucoup plus réduit que dans ltétat de la technique ; en deuxième lieu le volume d'effluent contenant l'albumine est beaucoup plus réduit, en effet il est de l'ordre du volume de charge initiale; en troisième lieu, le prééquilibrage des colonnes ne nécessite ainsi que des quantités de liquide réduites; en quatrième lieu, il n'y a pas à laver les lits de remplissage de façon précautionneuse et complète pour la récupération de l'albumine et en cinquième lieu il suffit de régénérer les colonnes de chromatographie par simple lavage, sans besoin de grandes précautions pour les méthodes de lavage. La présente invention a, en conséquence, pour objet un procédé de préparation, à partir du plasma sanguin, notamment humain, d'une solution d'albumine purifiée, dans lequel, selon les procédés connus, on fractionne ledit plasma par des traitements thermiques et par action d'un agent de précipitation successifs pour aboutir, notamment après séparation au moins partielle des facteurs VIII et IX et des gamma-globulines, à des solutions d'albumine contenant l'agent de précipitation, que l'on dialyse pour extraire l'agent de précipitation et obtenir une solution aqueuse brute d'albumine, solution que l'on purifie ensuite par chromatographie en phase liquide, procédé caractérisé par le fait que l'on soumet la solution aqueuse brute d'albumine à au moins une chromatographie dans au moins une colonne remplie d'un matériau particulaire apte à retenir la majeure partie des protéines contaminantes et que l'on recueille, comme effluent, la solution d'albumine purifiée. Dans un mode préféré de mise en oeuvre, on utilise pour alimenter la (les) colonne(s) de chromatographie une solution aqueuse d'albumine de concentration comprise entre 50 et 300 grammes par litre et de pH compris entre 6,5 et 7,8. On choisit avantageusement, comme matériau particulaire apte à retenir les protéines contaminantes, un support particulaire neutre, dont les particules ont une dimension moyenne inférieure à 200 microns et sont chargées d'un composé comportant des radicaux alkyIe, en particulier C3-Cg, hydrophobes, de façon à réaliser une "chromatographie hydrophobe" ; on peut choisir, comme composé chargeant les particules du support, un composé comportant des radicaux butyle, le lit de remplissage étant notamment constitué du produit commercialisé par la société "MERCK" sous la dénomination commerciale "FRACTOGEL TSK BUTYL-650". On préfère, avant ou après la chromatographie hydrophobe susmentionnée, soumettre la solution aqueuse d'albumine à une chromatographie sur gel polysulfaté dans au moins une colonne contenant un support particulaire neutre, dont les particules ont une dimension moyenne inférieure à 200 microns et sont chargées d'un composé comportant des groupes sulfates. Avantageusement, on soumet la solution d'albumine à traiter, d'abord, à une chromatographie sur gel polysulfaté, puis à une chromatographie hydrophobe. On peut également faire subir à la solution aqueuse d'albumine une chromatographie hydrophobe avant et après une chromatographie sur gel polysulfaté. On peut avantageusement utiliser directement les effluents d'une première chromatographie pour alimenter la (les) colonne(s) mettant en oeuvre la chromatographie suivante. Le débit de chromatographie est généralement compris entre 10 et 20 cm/heure et la température de chromatographie entre 2 et 25 C. On ajuste le pH de la solution aqueuse d'albumine obtenue comme effluent final de chromatographie à une valeur comprise entre 6,9 et 7,1 puis on la soumet, si nécessaire, à une filtration stérile. Avant de soumettre la solution d'albumine à une chromatographie hydrophobe, on équilibre la (les) colonne(s) correspondante(s) avec une solution aqueuse saline ayant au plus 10 fois la force ionique de la solution d'albumine à traiter. De la même façon, avant de soumettre la solution d'albumine à une chromatographie sur gel polysulfaté, on équilibre la (les) colonne(s) correspondante(s) avec une solution saline au plus isotonique par rapport à la solution d'albumine. De préférence, on utilise pour l'équilibrage de la (des) colonne(s) de chromatographie une solution de chlorure de sodium. Dans le procédé selon l'invention, l'albumine ne se fixe pas sur le lit de remplissage : ce qui importe est la fixation des impuretés. Pour saturer un litre de ces gels de chromatographie, il faut généralement passer environ 400 g d'albumine et si l'on compte environ 26 g d'albumine par litre de plasma fractionné, on constate qu'un litre de lit de remplissage correspond au traitement d'environ 15 litres de plasma, soit 4 à 10 fois moins de lit de remplissage que pour les procédés chromatographiques de l'état de la technique (où l'albumine est fixée sur le lit de remplissage).Dans le mode préféré de réalisation qui comporte deux ou trois chromatographies en série, le procédé selon l'invention ne nécessite aucun changement de tampon en cours de manipulation ni aucun changement de pH, les deux étapes chromatographiques se faisant en série. L'albumine obtenue par le procédé selon l'invention est stable à la chaleur, ne forme pratiquement pas de polymères et ne présente qu'une très faible coloration, ce qui correspond à la disparition des traces d'hémoglobine et d'héme dont on constate la présence dans la solution aqueuse brute d'albumine obtenue, selon l'état de la technique, par la méthode de Cohn ou une méthode dérivée. Pour mieux faire comprendre l'objet de l'invention, on va en décrire maintenant, à titre d'exemple purement illustratif et non limitatif, un mode de mise en oeuvre, les caractéristiques du produit obtenu étant représentées sur le dessin annexé. Sur ce dessin: - la figure 1 représente les profils de coloration après électrophorèse sur acétate de cellulose pour une albumine obtenue selon l'invention et une albumine de l'état de la technique (selon la méthode deCohn); - la figure 2 représente les courbes d'absorption de densité optique obtenues par filtration sur gel pour une albumine obtenue selon l'invention et une albumine de l'état de la technique (selon la méthode deCohn); - la figure 3 représente le spectre de densité optique obtenu pour une albumine obtenue selon l'invention et une albumine de l'état de la technique (selon la méthode de Cohn);; - la figure 4 représente la variation de la turbidité en fonction du temps de chauffage à 60 C pour une albumine obtenue selon l'invention et une albumine de l'état de la technique (selon la méthode de Cohn). On utilise, comme matière première de départ, un plasma humain fractionné selon le procédé dont par KISTLER et NrrscHMAN (Vox Sang. 7, 414-424 (1962)); ce procédé reprend l'essentiel de la méthode de Cohn précédemment décrite: les fractions de départ contenant l'albumine sont, soit le surnageant IV, soit le précipité V. Lorsque l'on part du surnageant IV, qui comprend 40 % (en volume) d'éthanol et a un pH de 5,85 i 0,05, on dilue de moitié le surnageant avec une solution de NaCl à 7 g/l. Le pH est ajusté à 7,45 + 0,05 avec une solution de soude 1N. On pré-concentre l'albumine jusqu'à 90 g/I dans une cassette d'ultra filtration de type "Oméga" (Filtron) mise en oeuvre dans un système d'ultra-filtration "Minisette SS Cell NPT Cell" (Filtron Techn. Corp.). Cette cassette a une surface filtrante de 0,07 m2 et un seuil de rétention de 30 KDa. La circulation est assurée par une pompe péristaltique à une pression qui varie de 2 x 105 Pa au début de l'operation à 5 x 105 Pa vers la fin.Lorsque l'on a atteint la concentration de 90 g/l en albumine, on ajoute à la solution d'albumine une solution de NaCl à 9 g/I et on continue à dialyser à volume constant jusqu'à obtenir un taux d'éthanol inférieur à 0,1 % en volume. Lorsque l'méthanol a été ainsi éliminé, on poursuit la dialyse pour concentrer la solution jusqu'à 200 g d'albumine par litre. On ajuste le pH à 7,10 + 0,05 avec une solution d'acide chlorydrique 1N. Lorsque l'on part du précipité V, on remet ledit précipité en suspension dans du sérum physiologique (solution de NaCl à 9 g par litre) en utilisant 4 litres de sérum physiologique par kilogramme de précipité. On filtre pour éliminer les grumeaux de précipité non remis en suspension au cours de l'agitation; on ajuste le pH à 7,45 + 0,05 avec une solution de soude 1N et on concentre la solution ainsi obtenue jusqu'à 90 g de protéines par litre en utilisant le même système de dialyse que précédemment dont pour le surnageant IV. On poursuit alors la dialyse en rajoutant du sérum physiologique et en travaillant à volume constant jusqu'à obtenir un taux final d'éthanol inférieur à 0,1 % en volume. Lorsque ltéthanol a été ainsi éliminé, on poursuit la dialyse pour concentrer la solution jusqu'à 200 g de protéines par litre. On ajuste le pH à 7,1 + 0,05 avec une solution d'acide chlorhydrique 1N. La solution d'albumine ainsi préparée à partir du surnageant IV ou du précipité V est alors filtrée stérilement (filtre "Millex-GS" de 0,2 micron (Millipore)). On obtient ainsi la solution aqueuse brute d'albumine qui sera ensuite traitée par le procédé selon l'invention. La solution aqueuse brute d'albumine subit d'abord une chromatographie sur gel polysulfaté. Cette chromatographie est réalisée dans une colonne de 50 ml (2,5 cm x 10 cm) (Biorad), chargée avec un matériau particulaire vendu par la société "SIGMA" sous la dénomination commerciale "DEXIRAN BEADS SULFATED" La colonne est préalablement équilibrée en faisant passer dans le lit 3 volumes de colonne de sium physiologique. La solution d'albumine est alors envoyée sur cette colonne et l'effluent est envoyé directement sur une deuxième colonne de "chromatographie hydrophobe". La chromatographie hydrophobe est réalisée dans une colonne identique à la précédente, dont le lit de chromatographie est constitué d'un matériau particulaire vendu par la société MERCK sous la dénomination commerciale "FRACTOGEL TSK BUTYL-650". Avant d'être utilisée, cette colonne est équilibrée en faisant passer dans le lit de chromatographie 3 volumes de colonne de sérum physiologique. Lorsqu'elle a été équilibrée, la colonne de chromatographie hydrophobe est branchée directement en série sur la sortie de la colonne de chromatographie sur gel polysulfaté. L'équilibrage des deux colonnes peut également être effectué en série. Le déroulement de la chromatographie est suivi en mesurant la densité optique à 280 nm des fractions en sortie de colonne. L'effluent des deux colonnes de chromatographie en série est récupéré puis concentré par dialyse à 200 g d'albumine par litre ou dilué, dans du sérum physiologique, à 40 g d'albumine par litre suivant l'usage auquel on le destine ; le pH est ajusté à 7,00 + 0,05 et l'effluent est filtré stérilement sur des filtres "Millex-GS" de 0,2 micron (Millipore). Le débit dans les deux colonnes montées en série est de 16 cm/heure; les chromatographies sont effectuées à 20 C.En suivant le déroulement de la chromatographie, on constate que l'on peut charger jusqu'à 400 g d'albumine par litre de lit de chromatographie dans la première ou dans la deuxième colonne sans diminuer sensiblement l'efficacité de la séparation. Le lit de la colonne de chromatographie sur gel polysulfaté est régénéré par un lavage avec deux volumes de colonne d'une solution de chlorure de sodium à 2 moles par litre, suivi d'un lavage avec deux volumes de colonne d'eau distillée et enfin suivi par un lavage avec deux volumes de colonne d'une solution de chlorure de sodium à 1 mole par litre à pH 9. La régénération du remplissage de la colonne de chromatographie hydrophobe s'effectue par lavage avec deux volumes de colonne d'une solution de soude 0,1 N. On a constaté que la capacité de fixation des lits de chromatographie n'était pas affectée par 40 cycles successifs fixation/régénération. On a évalué certaines caractéristiques de l'albumine obtenue par le procédé selon l'invention dont ci-dessus et l'on fournit ci-après les résultats expérimentaux correspondants. On a comparé les propriétés de la solution aqueuse d'albumine avant passage sur les deux colonnes de chromatographie sur gel polysulfaté et hydrophobe et après passage sur ces deux colonnes. La solution avant passage est donc une albumine de l'état de la technique et la solution après passage est une albumine chromatrographiée selon l'invention. On prépare un échantillon à partir de l'albumine de ltétat de la technique et un échantillon à partir de l'albumine préparée selon l'invention. On ajoute à ces échantillons 10 mg de caprylate de sodium par gramme d'albumine et on chauffe l'échantillon à 60"C pendant 10 heures. 1- Immunoélectrophorèse: On a utilisé la méthode de GRABAR (Grabar P. et autres, Biochem. Biophys. Acta, 17, 67-75 (1955)). L'anti-sérum total a été préparé en immunisant un cheval avec du plasma humain complet. Pour l'albumine de l'état de la technique, on constate la présence d'une ligne de précipitation autour du réservoir de dépôt, ce qui correspond à la présence de néo-antigènes constitués de protéines dénaturées ; au contraire, cette ligne de précipitation n'existe pas pour l'albumine chromatographiée selon l'invention, ce qui démontre que le procédé selon l'invention permet de séparer de l'albumine des protéines contaminantes constituant des impuretés. 2 - Electrophorèse sur membrane d'acétate de cellulose: On a testé des solutions à 5 % de protéines comme dont dans l'article ROELANDS J.F. et autres, Vox Sang., 26, 415-424 (1974). Les échantillons ont été testés sous 220 volts pendant 35 minutes avec un tampon "TRIS-VERONAL" à pH 9,2 à une force ionique de 0,05. Les membranes ont été révélées avec le colorant "PONCEAU S" et la quantification a été faite par densitométrie. Les courbes résultantes sont fournies sur la figure 1 : sur le graphique marqué A, on constate, à côté du pic principal P1 qui correspond à l'albumine, un pic secondaire P2 qui correspond à des impuretés, alors que sur le graphique B qui correspond à l'albumine selon I'invention, le pic P1 se retrouve à l'identique mais le pic P2 a disparu, ce qui montre ltefficacité du procédé de purification selon l'invention. 3 - Filtration sur gel: On a utilisé une colonne "Biorad" (1,5 x 50 cm) avec un remplissage de "SEPHACRYL S 400 HR" vendu par la société "PHARMACIA LKB BIOTECHNOLOGY". Cette colonne est préalablement équilibrée avec un tampon phosphate à pH 7. On passe ensuite 20 mg d'albumine de chaque échantillon sur la colonne préparée; le débit est de 1 ml par minute. On suit l'absorption optique à 280 nnl sur les fractions chromatographiques (1,2 ml par fraction) au moyen d'un spectrophotomètre "Uvicon 810". Les courbes expérimentales obtenues sont représentées sur la figure 2. La courbe en trait continu correspond à l'albumine de l'état de la technique et montre, à côté du pic P3 correspondant à l'albumine, un pic P4 correspondant à des impuretés contaminantes. Au contraire, la courbe en pointillés correspond à l'albumine obtenue selon l'invention et, sur cette courbe, le pic P'3, très voisin de P3, correspond à l'albumine mais il n'y a pas de pic voisin ce qui démontre l'absence d'impureté contaminante. 4 - Spectre de densité optique: On a étudié le spectre de densité optique entre 350 et 500 nm pour un échantillon d'albumine de l'état de la technique et un échantillon d'albumine obtenu selon l'invention (respectivement courbes 1 et 2 de la figure 3). On constate que, pour l'albumine obtenue selon l'invention, il y a absence d'absorption à 403 nm contrairement à ce qui se passe pour l'autre échantillon. On sait que l'hémoglobine absorbe à une longueur d'ondes lambda égale à 403 nm. On constate donc que l'albumine de l'état de la technique contient des traces d'hémoglobine, qui ne se retrouvent pas dans l'albumine obtenue selon l'invention ; cette dernière a effectivement une couleur moins intense, même après chauffage pendant 10 heures à 60 C avec un additif de stabilisation. 5 - Variation de turbidité: On a étudié la variation de la turbidité en fonction du temps de chauffage à 600 C pour l'albumine de l'état de la technique et l'albumine obtenue selon l'invention. Les deux échantillons ont subi une addition de 1 % en poids de caprylate de sodium par rapport au poids d'albumine. La figure 4 montre que l'échantillon d'albumine de ltétat de la technique (courbe C1) a une turbidité, qui évolue assez rapidement au cours du temps contrairement à l'échantillon d'albumine selon le procédé (courbe C2). Cette variation de turbidité correspond à la formation de polymère. On constate donc que l'élimination des contaminants de l'albumine entraîne la réduction de la formation des polymères, qui apparaissent après le chauffage à 60 C pendant 10 heures et pendant le stockage prolongé des solutions d'albumine malgré l'addition de stabilisants, tels que le caprylate de sodium. Le procédé de préparation selon l'invention conduit à une solution d'albumine formant beaucoup moins de polymères, ce qui est particulièrement intéressant sur le plan commercial. REVENDICATIONS 1 - Procédé de préparation, à partir du plasma sanguin, d'une solution d'albumine purifiée, dans lequel, de façon connue, on fractionne ledit plasma par des traitements thermiques et par action d'un agent de précipitation successifs pour aboutir, notamment après séparation au moins partielle des facteurs Vffi et IX et des gammaglobulines, à des solutions d'albumine contenant l'agent de précipitation que l'on dialyse pour extraire l'agent de précipitation et obtenir une solution aqueuse brute d'albumine, solution que l'on purifie ensuite par chromatrographie en phase liquide, caractérisé par le fait que l'on soumet la solution aqueuse brute d'albumine à au moins une chromatographie dans au moins une colonne de chromatographie remplie d'un matériau particulaire apte à retenir la majeure partie des protéines contaminantes et que l'on recueille, comme effluent, la solution d'albumine purifiée. 2 - Procédé selon la revendication 1, caractérisé par le fait que l'on utilise pour alimenter la (les) colonnes de chromatographie, une solution d'albumine de concentration comprise entre 50 et 300 g par litre et de pH compris entre 6,5 et 7,8. 3 - Procédé selon l'une des revendications 1 ou 2, caractérisé par le fait que l'on choisit, comme matériau particulaire apte à retenir les protéines contaminantes, un support particulaire neutre dont les particules ont une dimension moyenne inférieure à 200 microns et sont chargées d'un composé comportant des radicaux alkyle C3-Cg hydrophobes de façon à réaliser une "chromatographie hydrophobe". 4 - Procédé selon la revendication 3, caractérisé par Ie fait que l'on choisit, comme composé chargeant les particules du support, un composé comportant des radicaux butyle. 5 - Procédé selon l'une des revendications 3 ou 4, caractérisé par le fait qu'avant ou après la chromatographie hydrophobe de la solution aqueuse d'albumine, on fait subir à ladite solution une chromatographie sur gel polysulfaté dans au moins une colonne contenant un support particulaire neutre, dont les particules ont une dimension moyenne inférieure à 200 microns et sont chargées d'un composé comportant des groupes sulfate. 6- Procédé selon l'une des revendications 3 à 5, caractérisé par le fait que l'on fait subir à la solution aqueuse d'albumine une chromatographie hydrophobe avant et après une chromatographie sur gel polysulfaté. 7 - Procédé selon l'une des revendications 5 ou 6, caractérisé par le fait que l'on utilise directement l'effluent d'une première chromatographie pour alimenter la (les) colonne(s) mettant en oeuvre la chromatographie suivante. 8 - Procédé selon l'une des revendications 1 à 7, caractérisé par le fait que le débit de chromatographie est compris entre 10 et 20 cm/heure. 9 - Procédé selon l'une des revendications 1 à 8, caractérisé par le fait que la température de chromatographie est comprise entre 2 et 25C C. 10 - Procêd selon l'une des revendications 3 ou 4, caractérisé par le fait qu'avant de soumettre la solution aqueuse d'albumine à une chromatographie hydrophobe, on équilibre la (les) colonne(s) correspondante(s) avec une solution aqueuse saline ayant au plus 10 fois la force ionique de la solution d'albumine à traiter. 11 - Procédé selon l'une des revendications 5 à 7, caractérisé par le fait qu'avant de soumettre la solution d'albumine à une chromatographie sur gel polysulfaté, on équilibre la (les) colonne(s) correspondante(s) avec une solution saline au plus isotonique par rapport à la solution d'albumine à traiter. 12 - Procédé selon l'une des revendications 9 ou 11, caractérisé par le fait que l'on utilise pour l'équilibrage de la (des) colonne(s) de chromatographie une solution de chlorure de sodium. 13 - Procêd selon l'une des revendications 5 à 7, caractérisé par le fait que l'on soumet la solution d'albumine brute d'abord à une chromatographie sur gel polysulfaté puis à une chromatographie hydrophobe. 14 - Procédé selon l'une des revendications 1 à 13, caractérisé par le fait que l'on ajuste le pH de la solution aqueuse d'albumine obtenue comme effluent final de chromatographie à une valeur comprise entre 6,9 et 7,1. 15 - Procédé selon l'une des revendications 1 à 14, caractérisé par le fait que l'on soumet la solution aqueuse d'albumine obtenue comme effluent final de chromatographie à une filtration stérile.