Brevet FR2696187A1 — publié le 19940401

La présente invention a pour objet de nouvelles souches hybrides d'Agaricus bisporus dont les fructifications présentent un caractère majoritairement tétrasporé et/ou trisporé dans les conditions standard de culture, et permettent d'obtenir des homocaryons en grande quantité. L'invention concerne également un procédé de préparation de telles souches hybrides et/ou l'utilisation de ces souches hybrides dans un procédé d'obtention et de sélection de souches d'Agaricus bisporus améliorées. L'invention concerne en outre l'utilisation de tels hybrides à fructifications majoritairements tétrasporées et/ou trisporées dans l'obtention de quantités notables d'homocaryons et/ou dans un procédé d'obtention d'une souche d'Agaricus bisporée améliorée par croisement(s) et sélection. Dans la présente demande, lorsqu'on parle d'une "souche", sans autre précision, il s'agit d'une souche d'Agaricus bisporus ou d'une souche interfertile avec Agaricus bisporus. Par ailleurs, l'expression "tétrasporé" sans autre précision, peut signifier, par exemple, "majoritairement tétrasporé et/ou trisporé, et faiblement bisporé'1, en particulier lorsqu'il est évident que le but recherché est de pouvoir disposer d'un grand nombre d'homocaryons. L'expression "spore homocaryotique" désigne ici des spores dont la germination fournit des mycéliums homocaryotique (ou homocaryons). On sait que les espèces du genre Agaricus présentent des basides normalement tétrasporées. Le champignon cultivé (ou champignon de couche) représente une exception notable, avec des basides majoritairement bisporées (généralement dans une proportion au moins égale à 90%). De Il résulte l'appellation de cette espèce : Agaricus bisporus. Les spores d'Agaricus bisporus contiennent normalement deux noyaux non frères issus de la méiose et leur germination en culture monospore conduit à l'obtention de myceliums hétérocaryotiques fructifères, ctest-à-dire capables de fructifier sans confrontation avec un mycélium compatible. Agaricus bisporus est donc une espèce bisporée homothallique secondaire, selon la définition de J.R. RAPER, "Genetics of Sexuality in Higher Fungi", The Remaid Press Cy, New York, 1966. Sa sexualité est de type bipolaire, ce qui peut être exprimé par le fait que chacun des mycéliums issus d'une des quatre spores d'une des rares basides tétrasporées est compatible avec deux des mycéliums issus des trois autres spores. Compte tenu de son caractère homothallique, il est difficile d'obtenir de grandes quantités d'homocaryons d'Agaricus bisporus qui seraient nécessaires pour réaliser des plans de sélection par croisements. C'est en partie pour ces raisons que la variabilité génétique parmi les souches traditionnellement cultivées est actuellement restreinte à six classes génotypiques, deux de ces classes présentant le caractère blanc provenant de mutants apparus en culture, l'un en 1926, l'autre en 1960. Une septième classe dite "hybridett résulte d'un croisement effectué entre les deux souches blanches. Par ailleurs, il existe des souches sauvages d'Agaricus bisporus, mais ces souches présentent un caractère brun dominant qui rend difficile leur utilisation dans la réalisation d'hybrides. Sur toutes ces questions, on peut citer par exemple G.Fritsche et A.S.M. Sonnenberg, "The cultivation of Mushrooms Van Griensven Ed. (1988), pp.101-123. Les méthodes existantes d'obtention d'homocaryons d'Agaricus bisporus sont difficiles à mettre en oeuvre et surtout ne fournissent que de faibles quantités d'homocaryons différents. Ces méthodes consistent soit à mettre en germination des spores et à isoler et repérer des myceliums provenant de spores des rares basides tétrasporées, soit à isoler par micromanipulation des spores issues de basides tétrasporées, soit encore à isoler des protoplastes par lyse enzymatique de la paroi des cellules plurinucléées hétérocaryotiques constituant le mycélium ; voir par exemple G.Fritsche et A.S.M. Sonnenberg, article cité ci-dessus. On sait que pour repérer des myceliums homocaryotiques et les distinguer des myceliums hétérocaryotiques, on peut utiliser diverses méthodes, par exemple 'oberVation de la croissance du mycelium, généralement moins vigoureuse chez les myceliums homocaryotiques - les essais de confrontation avec des homocaryons possédant différents allèles d'incompatibilité ; - les essais de fructification - l'utilisation d'un ou de préférence plusieurs marqueurs biochimiques, notamment enzymatiques, en particulier des alloenzymes (May et Royse, Experimental Mycology, Vol. 6, pp 283-292, 1982 - ou encore l'utilisation d'un ou plusieurs marqueurs moléculaire(per exemple marqueurs RFLP ou RAPD) ; voir par exemple "Ganetics and Breeding of Agaricus", Proceedings of the First International Seminar on Mushroom Science, Horst (Pays-Bas), 14-17 Mai 1991, L.J.L.D. Van Griensven Ed, PUDOC Wageningen 1991, en particulier pp 62-72 (P.A. Horgen et al.) et pp 73-77 (R.S. Khush et al.). Les marqueurs biochimiques et moléculaires peuvent être utilisés de deux façons : ou bien on sait que la souche-mère est hétérozygote, et par exemple la perte de lthétérozygotie chez le mycelium testé montre qu'il doit être homocaryotique, ou bien on confronte un mycelium M supposé homocaryotique avec un homocaryon intercompatible porteur d'un allèle différent pour le marqueur étudié, et si le mycelium résultant est hétéroallélique, c'est que le mycelium M était bien homocaryotique, et dans ce dernier cas l'utilisation d'un seul marqueur est suffisante pour conclure. On a maintenant découvert qu'il existe des souches d'Agaricus sauvages très faiblement bisporées, dont par exemple au moins 80% des basides ont plus de deux spores (notamment quatre spores), qui sont interfertiles avec les souches sauvages et les souches commerciales d'Agaricus bisporus, et dont les hybrides avec Agaricus bisporus sont majoritairement tétrasporés et/ou trisporés, sans prendre de mesures spéciales à cet effet. Autrement dit, ce caractère tétrasporé et faiblement bisporé est dominant dans une telle hybridation. En outre, lesdits hybrides sont eux-mêmes interfertiles avec Agaricus bisporus. De telles souches sauvages peuvent être trouvées notamment en californie, dans le désert Sonoran. Une de ces souches est distribuée sous le n ARP 61 par l'Agaricus Recovery Program (en abrégé : ARP) Post Office Box 461, Worthington PA 16262, USA. D'autres souches analogues faiblement bisporées, telles que 1'ARP 15 et éventuellement certaines souches choisies parmi les souches ARP 116 à 167 peuvent également être acquises auprès de 1'ARP. En raison du fait que le phénotype tétrasporé de ces souches sauvages est, de façon surprenante, transmissible aux produits d'hybridation de façon dominante, il est possible d'utiliser de telles souches sauvages, dont les fructifications portent des spores en majorité homocaryotiques, pour réaliser des croisements avec des souches d'Agaricus bisporus conduisant à des hybrides dont le caractère tétrasporé et/ou trisporé (une majorité de spores est donc homocaryotique) permet d'obtenir, pour la première fois en quantités notables, des homocaryons dont on sait qu'ils sont nécessaires pour la réalisation ultérieure de croisements par hybridation en vue d'obtenir par sélection des variétés hybrides améliorées. I1 faut rappeler que les rares cas connus de souches dont un nombre important de basides portent plus de deux spores résultaient des conditions particulières (environnement) de la culture et non dTun caractère génétiquement transmissible ; voir par exemple J.Pelham, Mushroom Science 7, pp.49-64 (1965) et S.F.Song et al., Mushroom Science 8, 295-303 (1972). I1 convient de noter ici que chez les souches tétrasporées utilisées et/ou obtenues selon la présente invention, le caractère tétrasporé est transmissible et est observé dans les conditions standard de culture, qui peuvent être par exemple les suivantes : compost à base de fumier de cheval et de paille ; étape d'envahissement du compost par le mycelium : 24-25"C terre de gobetage : mélange de tuffeau et de tourbe ; température après gobetabe : 15-18"C ; humidité relative 85-95%. L'invention permet donc de développer des schémas de sélection classiques qui n'étaient applicables auparavant qu'aux seules souches de champignons hétérothalliques. Les méthodes d'interfécondation contrôlée sont considérablement facilitées et les méthodes d'interfécondation libre sont rendues possibles. Des méthodes de mutagénèse sur spores de souches tétrasporées et éventuellement des méthodes de tri sur fructifications homocaryotiques peuvent aussi être envisagées. On donne ci-après quelques exemples permettant de mieux comprendre l'intérêt de l'invention. Soit une souche X dtAgaricus bisporus, bisporée. On peut isoler, selon les méthodes classiques rappelées ci-dessus, un homocaryon. Cet homocaryon de X est confronté avec un homocaryon compatible provenant dlune souche interfertile tetrasporée Y, telle que ARP 61, ou telle qu'une souche hybride tétrasporée issue de ARP 61, une telle souche permettant de disposer facilement de nombreux homocaryons. On obtient ainsi une souche hybride XY dont certaines fructifications seront tétrasporées, et dot il sera possible d'obtenir de nombreux homocaryons puisque la grande majorité des spores formées par les fructifications dTune telle souche XI sont homocaryotiques. Dans la souche hybride XI, de m?me que dans les spores et les homocaryons qui en sont issus, la moitié du génome provient de la souche X. Par une série de rétro croisements (ou "backcrosses") avec X, on peut incorporer chez les hybrides obtenus une proportion croissante du génome de X. Grâce aux hybrides tétrasporés obtenus à chaque rétrocroisement, on peut obtenir finalement en grande quantité des homocaryons dans lesquels on a incorporé au moins un caractère intéressant d'une souche X connue bisporée. Grâce à l'invention, il est même possible d'obtenir facilement des souches tétrasporées isogéniques, dans la proportion désirée (par exemple à plus de 90% ou à plus de 95%), d'une souche bisporée X d'Agaricus bisporus. On peut alors disposer notamment de grandes quantités d'homocaryons dont la plus grande partie du génome peut provenir de toute souche d'Agaricus bisporus (normalement bisporée) considérée comme intéressante, y compris de toute souche commerciale existante. On peut en particulier isoler et identifier deux mycéliums homocaryotiques intercompatibles X1 et X2, issus d'une souche X d'Agaricus bisporus bisporée, par exemple par la méthode des protoplastes. On confronte l'un des deux homocaryons, par exemple X1, avec un homocaryon d'une souche Y interfertile tétrasporée, par exemple telle que définie précédemment. On obtient une souche hybride XI dont les fructifications fournissent un fort pourcentage de basides tétrasporées et/ou trisporées. On peut alors obtenir facilement des homocaryons de XI dont la moitié du génome provient de la souche X.Par une série de rétro croisements avec la souche X, en utilisant à chaque fois l'homocaryon Xl comme partenaire de croisement, et en sélectionnant à chaque étape les hybrides tétrasporés, on peut obtenir successivement des hybrides, notamment tétrasporés, dont des proportions croissantes du génome proviennent de X, ou plus précisément de X1. En théorie, comme il est facile de le déterminer, ces proportions sont de l'ordre de 75%, 87,5%, 93,75% et 96,9% après 1, 2, 3 ou 4 rétrocroisements, respectivement. Lorsque le taux d'isogénie souhaité est atteint, on peut même confronter un homocaryon du dernier hybride tétrasporé issu des rétrocroisements, avec lthomocaryon X2 dont on sait qu'il est compatible avec Xl. On obtient ainsi des hybrides X' dont une proportion importante du génome provient de X et qui possèdent en outre l'hétérozygotie caractéristique de X grâce au croisement final avec X2. Un hybride isogénique X' tétrasporé pourra être la source d'un grand nombre d'homocaryons permettant le croisement de la souche X avec d'autres souches Z intéressantes, notamment à l'aide d'homocaryons de souches Z' rendues tétrasporées et rendues au moins partiellement bogeflIques de Z, par la méthode qui vient d'être exposée. La souche Z est par exemple une souche provenant d'un site éloigné du site d'origine de la souche X (ou des parents de X). On peut ainsi faire de nombreux essais de croisement de X' et Z ou Z', en particulier dans le but de tirer parti de la vigueur généralement caractéristique des hybrides issus de parents génétiquement éloignés. L'un des-avantages obtenus grâce au fait que les homocaryons deviennent facilement disponibles en grandes quantités, est que l'on peut opérer sur un grand nombre d'homocaryons choisis au hasard, sans le risque d'une contre-sélection inhérent au petit nombre d'homocaryons obtenus par les voies classiques. Toutefois, lors des différents rétrocroisements conduisant aux souches tétrasporées au moins partiellement isogéniques de X (ou de Z), on peut en outre trier, parmi les homocaryons, ceux dont les performances, lors de croisements avec le partenaire d'hybridation finale (Z dans le cas de X), sont en moyenne satisfaisantes ou même, le cas échéant, très intéressantes. I1 devient également facile, grâce à l'invention, d'introduire un caractère récessif intéressant d'une souche bisporée à une autre. En effet, soit par exemple un caractère intéressant monogénique récessif a, présent dans une souche bisporée Xaa(b), homozygote pour l'allèle récessif a. L'indication (b) désigne ici le phénotype bisporé. On souhaite transférer a dans une souche bisporée ZAA(b) homozygote pour l'allèle dominant A. Pour cela, on peut procéder de la façon suivante. Dans un premier temps, on réalise un hybride XYAa(T) entre un homocaryon a(b) de X obtenu par voie classique (tri de myceliums issus de spores ou de protoplastes) et un homocaryon A(T) provenant de la germidation d'une spore d'une souche tétrasporée YAA(T). L'indication (T) désigne ici le phénotype tétrasporé dominant. Cet hybride XYAa(T) est tétrasporé et ses spores produisent de nombreux homocaryons dont certains sont de type a(T), c'est-à-dire portent à la fois l'allèle a et le caractère tétrasporé. Ces homocaryons a(T) sont repérables car ce sont les seuls qui, rétrocroisés avec l'homocaryon a(b) de X, donnent des hybrides à la fois tétrasporés et présentent le caractère a souhaité.Dans un deuxième temps, on introduit par rétrocroisements l'allèle a porté par l'un des homocaryons a(T), dans la souche ZAA(b). Pour cela, on peut d'abord obtenir, par exemple par la méthode des protoplastes, deux homocaryons intercompatibles Z1A(b) et Z2A(b). En croisant Z1A(b) avec un homocaryon a(T) issu de XYAa(T), on peut obtenir un hybride tétrasporé, et parmi les homocaryons issus des spores de cet hybride, on peut de nouveau repérer, comme indiqué précédemment, ceux qui sont a(T), c'est-à-dire porteurs de l'allèle a et du caractère tétrasporé. Ces nouveaux hautocaryons a(T) Sont rétrocroisés plusieurs fois de suite avec Z1A(T) jusqu'à obtenir un homocaryon Z'la(T) fortement isogénique à Z1A(b), mais portant l'allèle a et le caractère tétrasporé. Les memes types de croisements sont effectués parallèlement à partir de Z2A(b) et d'un homocaryon a(T) issu de XYAa(T) pour aboutir à un homocaryon Z'2a(T) fortement isogénique à Z2A(b). Les deux homocaryons Z'la(T) et Z'2a(T) sont finalement croisés pour obtenir un hétérocaryon Z'aa(T) fortement isogénique à Z (en particulier l'hétérozygotie présente-dans Z se retrouve dans Z') mais tétrasporé et présentant le caractère souhaité. Si désiré, les deux homocaryons Z'1 et Z'2 obtenus à l'issue de chaque série de rétrocroisements peuvent aussi être choisis porteurs du caractère bisporé. Dans ce cas, l'hybride final Z'aa(b) est bispore. Bien entendu, la méthode qui vient autre décrite est applicable, avec les adaptations nécessaires, dans d'autres cas, y compris lorsque le caractère étudié est gouverné par deux à trois gènes à loci indépendants. Lorsque le caractère étudié, ou le caractère que l'on désire incorporer dans une souche hybride, est gouverné par un nombre important de gènes, par exemple un nombre égal ou supérieur à 3, il est généralement plus facile de faire une sélection massale. Dans un tel cas, on pourra encore tirer facilement profit de la présente invention en opérant par exemple de la façon décrite ci-après. On multiplie sur un substrat approprié un mycélium primaire obtenu à partir d'un homocaryon d'une souche mère intéressante X, et l'on ensemence ledit substrat portant ce mycélium primaire avec une pluralité de spores ou de mycéliums majoritairement homocaryotiques issus dtun champignon Y majoritairement tétrasporé et/ou trisporé interfertile avec Agaricus bisporus1 Y étant par exemple tel que défini précédemment. On cultive alors les mycéliums secondaires obtenus, dans des conditions qui permettent la fructification, et on sélectionne les carpophores susceptibles de présenter le caractère recherché. Les méthodes de sélection qui ont été exposées ci-dessus peuvent éventuellement être combinées entre elles. Grâce à l'invention, on peut également étudier le déterminisme d'un caractère phénotypique donné, selon des méthodes classiques qui ne pouvaient pas être utilisées auparavant : par exemple hybridation par croisement de deux souches parentes, avec obtention d'une première génération d'hybrides dite F1, suivie soit de rétrocroisement avec une des souches parentes, soit de l'obtention d'une génération d'hybrides (dite F2) obtenue par croisement entre homocaryons, issus d'un hybride F1, et enfin étude des hybrides ainsi obtenus. En outre, grâce à l'invention, qui permet d'obtenir des hybrides tétrasporés fournissant un grand nombre d'homocaryons, il est possible d'effectuer des opérations de mutagénèse, selon les méthodes connues, sur les spores homocaryotiques obtenues en grand nombre. Dans ce cas, l'ensemble du mycélium obtenu à partir de spores monocaryotiques mutés est mutant. Si on peut obtenir des fructifications homocaryotiques (ce qui semble être possible chez Agaricus bisporus), on peut alors observer le caractère muté sur les carpophores, même s'il est récessif. La présente invention a pour objet de nouvelles souches hybrides, ctest-à-dire obtenues par croisement(s), d'Agaricus, interfertiles avec Agaricus bisporus, dont les fructifications se caractérisent par le fait qu'une faible proportion des basides qu'elles portent sont bisporées. Généralement les autres basides (non bisporées) sont tétrasporées et/ou trisporées. Il est admis que les spores issues de basides bisporées sont le plus souvent hétérocaryotiques, que les deux tiers des spores issues de basides trisporées sont homocaryotiques, et que la totalité des spores issues de basides tétrasporées sont homocaryotiques. Les souches hybrides de l'invention obtenues à la première génération (par croisement avec une souche telle que llARP 61) sont majoritairement tétrasporées, la proportion des basides bisporées étant inférieure à 8% et le plus souvent à 2%.Chez les hybrides obtenus lors des croisements ultérieurs, on peut observer un "type tétrasporé" dont moins de 15% (en général moins de 7%) des basides sont bisporées, les autres basides étant essentiellement tétrasporées et trisporées, et un "type bisporé" dont plus de 25% des basides (et en général plus de 45%) sont bisporées et moins de 15% (en général moins de 7%) sont tétrasporées. Bien entendu, de telles souches de type bisporé ne font pas partie de l'invention. Une des caractéristiques remarquables des souches hybrides de l'invention faiblement bisporée (moins de 15% de basides bisporées) est donc que la majorité des spores sont homocaryotiques. On peut calculer aisément que par exemple une souche contenant 15% de basides bisporées, 40% de basides tétrasporées et 45% de basides trisporées donnera en principe plus de 75% de spores homocaryotiques. L'invention a donc pour objet de nouvelles souches hybrides d'Agaricus, présentant les caractéristiques suivantes - elles sont interfertiles avec Agaricus bisporus, - leurs fructifications portent des basides dont moins de 15% sont bisporées, - la majorité des spores sont homocaryotiques, lesdites caractéristiques étant génétiquement transmissibles. L'invention a notamment pour objet des souches hybrides telles que définies précédemment, dont les fructifications portent des basides dont au moins 40% sont tétrasporées. Généralement, les autres basides (c'est-à-dire autres que bisporées et tétrasporées) ont au moins trois spores et sont le plus souvent trisporées. Bien entendu, on ne tient pas compte ici des rares basides erratiques monosporées. L'invention concerne en particulier les souches telles que définies ci-dessus dont moins de 8% des basides sont bisporées, ainsi que les souches dont plus de 45%, et en particulier plus de 50% des basides sont tétrasporées. L'invention s' étend bien entendu à toutes les formes homocaryotiques ou hétérocaryotiques de ces nouvelles souches hybrides, et en particulier aux carpophores, aux spores, aux homocaryons et aux myceliums homocaryotiques obtenus notamment par germination desdites spores ou obtenus à partir de protoplastes. L'invention s'étend, en particulier, à ces nouvelles souches hybrides présentant au moins un caractère phénotypique et/ou génotypique intéressant. Les caractères phénotypiques intéressants incorporés dans la souche hybride peuvent être en particulier ceux qui sont habituellement recherchés, dans les opérations de sélection, dans le domaine des champignons de couche, et notamment choisis parmi un ou plusieurs des caractères suivants : forme, taille et couleur (notamment couleur blanche) des carpophores, rendement, aptitude à fructifier dans des conditions et/ou sur un substrat donné, résistance à certaines maladies (virales, bactériennes ou fongiques) ou à certains produits de traitements, fructification en volées plus ou moins marquées, voire absentes, absence de rochers, type d'ancrage (par exemple solidité de l'ancrage) et/ou caractères organoleptiques, nutritionnels ou toxicologiques (par exemple faible taux d'agaritine et/ou de ses dérivés). Les caractères génotypiques intéressants conférés à la souche hybride sont par exemple ceux résultant de l'incorporation d'une partie, ou d'une proportion importante, du génome d'une souche connue choisie pour ses propriétés particulières ou choisie pour son origine particulière (notamment de façon à exploiter, dans ce dernier cas, la vigueur des hybrides ainsi obtenus, comme déjà indiqué précédemment). Les souches hybrides de l'invention peuvent donc etre caractérisées par le fait qu'elles ont incorporé de tels caractères phénotypiques et/ou génotypiques. L'invention concerne en particulier une souche hybride telle que définie précédemment, qui possède au moins un caractère phénotypique et/ou génotypique non présent chez les souches sauvages d'Agaricus, à basides majoritairement tétrasporés, interfertiles avec Agaricus bisporus. Les souches hybrides selon l'invention sont notamment celles qui présentent au moins un caractère phénotypique et/ou génotypique intéressant présent dans une souche parentale bisporée ou dans une souche parentale issue d'une souche bisporée. L'invention concerne également un procédé d'obtention d'une telle souche hybride dont une majorité de spores sont capables de produire des homocaryons, ce procédé comprenant au moins une étape de croisement d'un d'un premier homocaryon issu d'une souche d'Agaricus bisporus avec un second homocaryon intercompatible, caractérisé :: - par le fait que l'on choisit ledit premier homocaryon parmi ceux issus d'une souche d'Agaricus bisporus présentant un caractère phénotypique et/ou génotypique intéressant, - par le fait que l'on choisit ledit second homocaryon parmi ceux issus d'une souche d'Agaricus interfertile avec Agaricus bisporus et dont les fructifications portent des basides dont les spores sont majoritairement homocaryotiques, - par le fait que ledit procédé comporte une étape de sélection des souches hybrides, produite par ledit croisement, dont les fructifications portent moins de 15% de basides bisporées, - et par le fait que, si désiré, on recueille les spores desdites rLuttificstions et/ou isole des homocaryons issus desdites spores. Dans des modes de réalisation particuliers, le procédé de l'invention peut encore présenter les caractéristiques suivantes, prises isolément ou, le cas échéant, en combinaison - dans ladite étape de sélection, on sélectionne les produits de croisement dont les caractéristiques sont celles définies précédemment pour les souches hybrides de l'invention ;; - ladite souche d'Agaricus bisporus dont est issu ledit premier homocaryon est bisporée - ledit second homocaryon est issu d'une souche sauvage d'Agaricus ou bien ledit second homocaryon provient d'une souche hybride issue d'au moins un croisement d'une souche d'Agaricus bisporus bisporée avec une souche d'Agaricus interfertile dont les fructifications portent des spores majoritairement homocaryotiques - en outre, on soumet la souche hybride obtenue à au moins un rétrocroisement avec une souche parentale, c'est-à-dire avec l'une des souche dont est issu ledit premier homocaryon, ou éventuellement ledit second homocaryon ; on peut en particulier soumettre ladite souche hybride à un nombre de rétrocroisements successifs suffisant pour incorporer au moins une proportion prédéterminée du génome de ladite souche parentale et/ou pour introduire chez l'hybride final au moins un caractère phénotypique de ladite souche parentale ; on peut en outre avantageusement, à l'issue de chacun des rétrocroisements successifs, sélectionner pour la suite des croisements, des souches hybrides dont les fructifications portent des basides dont moins de 15% sont bisporées ; dans un mode de réalisation particulier, on isole deux homocaryons X1 et X2 intercompatibles (provenant par exemple de protoplastes), issus de ladite souche parentale, et l'on effectue au moins un croisement avec X1 et au moins un croisement avec X2 ; par exemple, on effectue une pluralité de rétrocroisements successifs avec lthomocaryon X1, à l'exception du dernier croisement qui est effectué avec lthomocaryon X2 - ladite souche parentale étant une souche X ayant un phénotype récessif pour un caractère prédéterminé, l'on effectue un croisement entre ladite souche X et ledit second homocaryon, et l'on isole chez les hybrides issus de ce croisement un homocaryon H portant un allèle dudit caractère récessif ; en outre, éventuellement, on confronte ledit homocaryon H avec un homocaryon d'une seconde souche Z d'Agaricus bisporus bisporée ayant un phénotype dominant pour ledit caractère et, si désiré, on effectue un ou plusieurs rétrocroisements avec ladite souche Z, en isolant à chaque étape des homocaryons portant l'allèle récessif ; dans un mode de réalisation particulier, on isole deux homocaryons intercompatibles Zi et Z2 de Z, on effectue ladite confrontation suivie éventuellement de rétrocroisements, d'une part entre H et Z1, dans une première série d'étapes, et d'autre part entre H et Z2, dans une seconde série d'étapes, et on recroise entre eux des homocaryons, portant l'allèle récessif, des hybrides obtenus respectivement à l'issue de la première et de la seconde séries d'étapes ; bien entendu, à l'issue de chaque étape intermédiaire de croisement ou de rétrocroisement, on isole de préférence des homocaryons qui non seulement portent l'allèle récessif, mais aussi qui proviennent des hybrides, obtenus à cette étape, dont les fructifications portent moins de 15% de basides bisporées. Toutefois, l'hybride final pourra être choisi à fructifications bisporées si on ne souhaite pas poursuivre le programme de sélection. L'invention a également pour objet des souches hybrides (ou spores ou homocaryons) pouvant notamment être obtenues selon l'un des procédés mentionnés ci-dessus ; et leurs produits de croisement(s). L'invention a également pour objet l'utilisation d'une souche hybride telle que définie précédemment, comme produit de départ pour l'obtention de souches d'Agaricus bisporus modifiées, bisporées ou non. On peut mettre en oeuvre cette utilisation par exemple selon une ou plusieurs des méthodes suivantes - on effectue au moins un croisement, à l'aide d'homocaryons, de ladite souche hybride avec une souche d'Agaricus bisporus, et l'on sélectionne les produits de croisement obtenus, possédant un caractère phénotypique ou génotypique de ladite souche d'Agaricus bisporus ;; - ou on multiplie sur un substrat approprié un mycélium primaire obtenu à partir d'un homocaryon d'une souche d'Agaricus bisporus, et l'on ensemence ledit substrat portant ce mycélium primaire avec une pluralité de spores ou de mycéliums issus d'une souche hybride selon l'invention - ou l'on effectue des opérations de mutagénèse sur les spores homocaryotiques d'une souche hybride selon l'invention - ou T on insère au moins un gène ou fragment de gène dans le génome d'un homocaryon, d'un hétérocaryon ou d'un protoplaste issu d'une souche hybride selon l'invention. Les exemples suivants illustrent l'invention. EXEMPLE 1 On a utilisé comme souche parentale la souche ARP 61. Cette souche est brune. Environ 90% des basides observées sur les exemplaires obtenus en culture portent quatre spores ou plus, et 2% environ sont bisporées. Son profil électrophorétique en alcool déshydrogénase (ADH) correspond à l'allèle 149 (selon D.J. Royse et May, Agric. Biol. Chem. 53(11), 2861-2866, 1989). Cet allèle 149 est également présent dans des souches commerciales telles que Somycel 611 (Somycel) ou Royal 5A (Royal Champignon). Son profil en estérase montre un allèle que l'on trouve également chez la souche canadienne Ag 89 (réf. : Agaricus Genetics Research Collection, Erindale College, Université de Toronto (Canada) ; souche décrite par D.Mallock, Mycologia 79(6) pp.839-846, 1987), et dans des souches commerciales telles que C45 (Le Lion). 274 cultures mono spores ont été obtenues à partir des spores de ARP 61. Les confrontations intra-souche ont permis de montrer que plus de 90% de ces cultures mono spores sont des homocaryons et que la souche est bipolaire. Les confrontations intersouches entre d'une part la souche tétrasporée ARP 61 et d'autre part des souches d'Agaricus bisporus sauvages, américaines ou françaises, ou des souches commerciales, ont permis d'établir les résultats suivants - les homocaryons issus de la souche ARP 61 sont intercompatibles avec tous les homocaryons avec lesquels ils ont été confrontés, provenant de diverses souches d'Agaricus bisporus sauvages françaises, de la souche sauvage américaine Wc 240 (Pennsylvania State University Mushroom Culture Collection, souche décrite par May et Royse, Mushroom Science, N XI, pp799-8î7, Australie 1981), et des souches commerciales U1 (Somycel), X1 (Le Lion), 30A (Royal Champignon), 191 (Somycel). Dans tous les cas, des souches hybrides ont été isolées, qui présentent un profil hétérozygote en ADH alors que tous les homocaryons utilisés pour ces croisements présentent un profil à une seule bande. Cela confirme le caractére hétérocaryotique des hybrides. Les souches hybrides ont été mises en culture et ont, pour la plupart fructifié. Dans tous les cas étudiés, sauf un, tous les carpophores hybrides présentent plus de 50% (généralement entre 65 et 85%) de basides à quatre spores ou plus, et moins de 8% de basides à deux spores. Les spores mises en cultures germent normalement. L'interfertilité entre la souche ARP 61 tétrasporée et les souches classiquement bisporées a donc été démontrée. La souche ARP 61 peut être considérée comme appartenant à l'espèce Agaricus bisporus. Le caractère tétrasporé est de plus dominant sur le caractère bisporé. EXEMPLE 2 Un croisement a été effectué entre un homocaryon issu d'une spore de ARP 61 et un homocaryon provenant d'un protoplaste de la souche commerciale U1 qui donne des fructifications blanches. Les homocaryons issus des spores de l'hybride obtenu ont été croisés avec un second homocaryon provenant d'un protoplaste de U1 et intercompatible avec le premier homocaryon de U1. Le génome des hybrides obtenus après ce rétrocroisement provient donc pour 75% du génome de U1 et pour 25% du génome de ARP 61. Chez les hybrides obtenus I la première génération, sur 43 hybrides étudiés, tous sont de caractère bisporé (moins de 7%, et en général moins de 2% de basides bisporées et plus de 50%, et en général plus de 60%, de basides tétrasporées), à l'exception d'un hybride qui était plutôt de type bisporé, cette exception étant actuellement inexpliquée. Pour ce qui concerne le nombre de spores, sur 39 hybrides, obtenus après rétrocroisement, qui ont été étudiés, 22 sont de type bisporé (plus de 25%, et en général plus de 45%, de basides bisporées et moins de 15%, en général moins de 7%, de basides tétrasporées), et 17 sont de type tétrasporé (moins de 15% et en général moins de 7% de basides bisporées, et plus de 40%, en général plus de 45%, de basides tétrasporées). Sur les 39 hybrides étudiés, plus d'un quart donnent des fructifications blanches et de type tétrasporé. REVEND ICATIONS 1. Souche hybride d'Agaricus présentant les caractéristiques suivantes - elle est interfertile avec Agaricus bisporus, - ses fructifications portent des basides dont moins de 15% sont bisporées, - et la majorité des spores portées par lesdites fructifications sont homocaryotiques, et dont ces caractéristiques sont génétiquement transmissibles. 2. Souche hybride selon la revendication 1, caractérisée par le fait que lesdites fructifications portent des basides dont moins de 8% sont bisporées. 3. Souche hybride selon l'une quelconque des revendications précédente, caractérisée par le fait qu'au moins 40% desdites basides sont tétrasporées. 4. Souche hybride selon la revendication 3, caractérisée par le fait qu'au moins 45%, et en particulier au moins 50% desdites basides sont tétrasporées. 5. Souche hybride selon l'une quelconque des revendications précédentes, caractérisée par le fait qu'elle possède au moins un caractère phénotypique et/ou génotypique non présent chez les souches sauvages d'Agaricus, à basides majoritairement tétrasporées, interfertiles avec Agaricus bisporus. 6. Souche hybride selon l'une quelconque des revendications précédentes, caractérisée par le fait qu'elle présente au moins un caractère phénotypique et/ou génotypique intéressant présent dans une souche parentale bisporée ou dans une souche parentale issue d'une souche bisporée. 7. Souche hybride selon la revendication précédente, caractérisée par le fait qu'elle produit des fructifications de couleur blanche. 8. Procédé d'obtention d'une souche hybride telle que définie dans la revendication 1, comportant au moins une étape de croisement d'un premier homocaryon issu d'une souche d'Agaricus bisporus avec un second homocaryon intercompatible, caractérisé : - par le fait que l'on choisit ledit premier homocaryon parmi ceux issus d'une souche d'Agaricus bisporus présentant un caractère phénotypique et/ou génotypique intéressant, - par le fait que l'on choisit ledit second homocaryon parmi ceux issus d'une souche d'Agaricus interfertile avec Agaricus bisporus et dont les fructifications portent des basides dont les spores sont majoritairement homocaryotiques, - par le fait que ledit procédé comporte une étape de sélection des souches hybrides, produites par ledit croisement, dont les fructifications portent moins de 15% de basides bisporées, - et par le fait que, si désiré, on recueille les spores desdites fructifications et/ou isole des homocaryons issus desdites spores. 9. Procédé selon la revendication 8, caractérisé par le fait que, dans ladite étape de sélection, on sélectionne les produits de croisement dont les caractéristiques sont telles que définies dans l'une quelconque des revendications 2 à 7. 10. Procédé selon l'une quelconque des revendications 8 et 9, caractérisé par le fait que ladite souche d'Agaricus bisporus est bisporée. 11. Procédé selon l'une quelconque des revendications 8 à 10, caractérisé par le fait que ledit second homocaryon est issu d'une souche sauvage d'Agaricus. 12. Procédé selon l'une quelconque des revendications 8 à 10, caractérisé par le fait que ledit second homocaryon provient d'une souche hybride issue d'au moins un croisement d'une souche d'Agaricus bisporus bisporée et d'une souche d'Agaricus interfertile dont les fructifications portent des spores majoritairement homocaryotiques. 13. Procédé selon l'une quelconque des revendications 8 à 12, caractérisé par le fait que l'on soumet la souche hybride obtenue à au moins un rétrocroisement avec une souche parentale. 14. Procédé selon la revendication précédente, caractérisé par le fait que l'on soumet ladite souche hybride à un nombre de rétrocroisements successifs suffisant pour incorporer au moins une proportion prédéterminée du génome de ladite souche parentale et/ou pour introduire chez l'hybride final au moins un caractère phénotypique de ladite souche parentale. 15. Procédé selon la revendication précédente, caractérisé par le fait qutà l'issue de chacun des rétrocroisements successifs on sélectionne pour la suite des croisements des souches hybrides dont les fructifications portent des basides dont moins de 15% sont bisporées. 16. Procédé selon l'une quelconque des revendications 13 à 15, caractérisée par le fait que l'on isole deux homocaryons X1 et X2 intercompatibles, issus de ladite souche parentale, et l'on effectue au moins un croisement avec X1 et au moins un croisement avec X2. 17. Procédé selon la revendication précédente, caractérisé par le fait que lTon effectue une pluralité de rétrocroisements successifs avec l'homocaryon X1, à l'exception du dernier croisement qui est effectué avec l'homocaryon X2 18. Procédé selon l'une quelconque des revendications 13 à 15, caractérisé par le fait que l'on effectue un croisement entre ladite souche X et ledit second homocaryon, et l'on isole chez les hybrides issus de ce croisement un homocaryon H portant un allèle dudit caractère récessif, qu'en outre, éventuellement, on confronte ledit homocaryon H avec un homocaryon d'une seconde souche Z d'Agaricus bisporus bisporée ayant un phénotype dominant pour ledit caractère et que, si désiré, on effectue un ou plusieurs rétrocroisements avec ladite souche Z, en isolant à chaque étape des homocaryons portant l'allèle récessif. 19. Procédé selon la revendication précédente, caractérisé par le fait que l'on isole deux homocaryons intercompatibles Z1 et Z2 de Z, on effectue ladite confrontation suivie éventuellement de rétrocroisements, d'une part entre H et Z1, dans une première série d'étapes, et d'autre part entre H et Z2, dans une seconde série d'étapes, et on recroise entre eux des homocaryons, portant l'allèle récessif, des hybrides obtenus respectivement à l'issue de la première et de la seconde séries d'étapes 20. Souches hybrides pouvant être obtenues selon le procédé de l'une quelconque des revendications 8 à 19 ; et leurs produits de croisement. 21. Utilisation d'une souche hybride telle que définie dans l'une quelconque des revendications 1 à 7 et 20, comme produit de départ pour l'obtention de souches d'Agaricus bisporus modifiées, bisporées ou non. 22. Utilisation selon la revendication 21, caractérisée par le fait qu'elle comprend la mise en oeuvre d' au moins une des méthodes suivantes - on effectue au moins un croisement, à l'aide d'homocaryons, de ladite souche hybride avec une souche d'Agaricus bisporus, et l'on sélectionne les produits de croisement obtenus, possédant un caractère phénotypique ou génotypique de ladite souche d'Agaricus bisporus - ou on multiplie sur un substrat approprié un mycélium primaire obtenu à partir d'un homocaryon d'une souche d'Agaricus bisporus, et l'on ensemence ledit substrat portant ce mycélium primaire avec une pluralité de spores ou de mycéliums issus de ladite souche hybride - ou l'on effectue des opérations de mutagénèse sur les spores homocaryotiques de ladite souche hybride - ou l'on insère au moins un gène ou fragment de gène dans le génome d'un homocaryon, d'un hétérocaryon ou d'un protoplaste issu de ladite souche hybride.