Brevet FR2696749A1 — publié le 19940415

NOUVEAUX POLYPEPTIDES AYANT UNE ACTIVITE DE RECEPTEUR SEROTONINERGIOUE. ACIDES NUCLEIOUES CODANT POUR CES POLYPEPTIDES ET UTILISATtONS La présente invention concerne de nouveaux polypeptides et le matériel génétique permettant leur expression. Plus particulièrement, elle concerne de nouveaux polypeptides ayant une activité de récepteur sérotoninergique. La sérotonine est un neuromodulateur capable d'induire et de moduler une grande variété de comportements tels que le sommeil, l'appétit, la locomotion, 1' activité sexuelle ou encore la contraction vasculaire. I1 est admis que l'activité de la sérotonine est médiée par son interaction avec des récepteurs, désignés récepteurs sérotoninergiques ou récepteurs 5-HT (pour 5-hydroxytryptamine). Des études de biologie moléculaire ainsi que des études pharmacologiques ont révélé qu'il existait un grand nombre de sous-types de récepteurs 5-HT. Les récepteurs 5-HT qui ont été décrits jusqu'à aujourd'hui appartiennent soit à la famille des- récepteurs liés à des canaux ioniques (récepteurs 5-HT3), soit à la famille des récepteurs qui interagissent avec des protéines G et qui possèdent sept domaines transmembranaires.Par ailleurs, l'analyse des séquences d'acides aminés a montré que les récepteurs 5-HT interagissant avec des protéines G peuvent être sous-divisés en deux groupes distincts: Les récepteurs 5HT1, comprenant les sous-types mammifères 5HTlA, 5HT1B et 5HT1D ainsi que trois récepteurs 5HT de drosophile; et les récepteurs 5HT2 comprenant les sous-types 5HT2 et 5HT1C. Ces récepteurs ne sont sans doute pas les seuls récepteurs 5HT existant, dans la mesure où des études pharmacologiques ont révélé d'autres sous-types tels que les récepteurs 5HT4 ainsi que certains récepteurs apparentés au sous-type 5HT1 (récepteurs "5HT1 like"). De plus, des études supplémentaires de biologie moléculaire ont également révélé des hétérogénéités au sein des sous-types 5HTlB/lD. Aujourd'hui, au contraire des autres sous-types, les récepteurs 5HT2 n'ont été que très peu étudiés. Les récepteurs 5HT2 agissent par l'intermédiaire de la phospholipase C, et sont responsables de nombreuses activités physiologiques de la sérotonine au niveau central et périphérique. Au niveau cardiovasculaire, ils interviennent dans la contraction des vaisseaux sanguins et dans les changements de morphologie des plaquettes; au niveau du système nerveux central, ils agissent sur la sensibilisation des neurones aux stimuli tactiles et sur la médiation des effets hallucinogènes de l'acide diethylamide lysergique et des phénylisopropylamines apparentées. De nombreuses études montrent que les récepteurs 5HT2 décrits à ce jour ne rendent pas compte de toutes les propriétés qui leur sont attribuées. Notamment, certains effets de type 5HT2 de la sérotonine sur les muscles lisses périphériques sont classés comme des effets atypiques, dont les effets seraient médiés par des récepteurs inconnus. La présente invention résulte de la mise en évidence de nouveaux polypeptides ayant une activité de récepteur sérotoninergique. Bien qu'appartenant à la famille des récepteurs qui interagissent avec des protéines G, ces nouveaux polypeptides diffèrent des récepteurs sérotoninergiques déjà décrits (5HT1, 5HT2, 5HT3 et 5HT4) du point de vue structural comme du point de vue pharmacologique. Plus particulièrement, l'invention résulte de l'isolement et de la caractérisation de ces nouveaux polypeptides, désignés 5HT2C, ainsi que du matériel génétique permettant leur expression ou leur identification. L'étude pharmacologique de ces récepteurs montre qu'ils pourraient rendre compte des effets atypiques de la sérotonine observés antérieurement. Un premier objet de l'invention réside donc dans des polypeptides comprenant tout ou partie de la séquence peptidique SEQ ID nO 2 ou d'un dérivé de celle-ci. Au sens de la présente invention, le terme dérivé désigne toute molécule obtenue par modification de nature génétique et/ou chimique de la séquence peptidique SEQ ID n" 2. Par modification de nature génétique et/ou chimique, on peut entendre toute mutation, substitution, délétion, addition etlou modification d'un ou plusieurs résidus. De tels dérivés peuvent être générés dans des buts différents, tels que notamment celui d'augmenter l'affinité du peptide pour son(ses) ligand(s), celui d'améliorer ses niveaux de production, celui d'augmenter sa résistance à des protéases, celui d'augmenter et/ou de modifier son activité, ou celui de lui conférer de nouvelles propriétés pharmacocinétiques et/ou biologiques.Parmi les dérivés résultant d'une addition, on peut citer par exemple les polypeptides chimères comportant une partie hétérologue supplémentaire liée à une extrêmité. Le terme dérivé comprend également les polypeptides homologues au polypeptide SEQ ID n" 2, issus d'autres sources cellulaires et notamment de cellules d'origine humaine, ou d'autres organismes, et possédant une activité de même type. De tels polypeptides homologues peuvent être obtenus par des expériences d'hybridation comme décrit dans les exemples. Préférentiellement, les polypeptides de l'invention sont des polypeptides possédant la capacité de lier la sérotonine. Encore plus préférentiellement, il s'agit de polypeptides ayant une activité de récepteur sérotoninergique. Toujours selon un mode préféré, les polypeptides de l'invention sont susceptibles d'être reconnus par des anticorps reconnaissant la séquence peptidique SEQ ID n" 2 complète. Un mode de réalisation particulier de l'invention est représenté par le polypeptide 5HT2C comprenant toute la séquence peptidique SEQ ID nO 2. Comme indiqué dans les exemples, ce polypeptide peut être exprimé dans différents types cellulaires pour former un récepteur sérotoninergique fonctionnel. Ce polypeptide comprend 504 acides aminés, et possède un poids moléculaire calculé de 56 508 Daltons. Les polypeptides de l'invention peuvent être obtenus par expression dans un hôte cellulaire d'une séquence nucléotidique telle que décrite ci-dessous, par synthèse chimique, sur la base de la séquence SEQ ID n" 2 en utilisant les techniques connues de l'homme du métier, ou par une combinaison de ces techniques. Dans ce qui suit, les polypeptides de l'invention tels que définis cidessus sont désignés par polypeptides 5HT2C. La présente invention a également pour objet toute séquence nucléotidique codant pour un polypeptide 5HT2C. Plus préférentiellement, il s'agit d'une séquence choisie parmi: (a) tout ou partie de la séquence nucléotidique SEQ ID nO 1 ou de son brin complémentaire, (b) toute séquence hybridant avec une séquence (a) et codant pour un polypeptide tel que défini précédemment, et, (c) les séquences dérivées des séquences (a) et (b) en raison de la dégénérescence du code génétique. Les différentes séquences nucléotidiques de l'invention peuvent être d'origine artificielle ou non. 1l peut s'agir de séquences génomiques, d'ADNc, d'ARN, de séquences hybrides ou de séquences synthétiques ou semi-synthétiques. Ces séquences peuvent être obtenues par exemple par criblage de banques d'ADN (banque d'ADNc, banque d'ADN génomique) au moyen de sondes élaborées sur la base de la séquence SEQ ID n" 1. De telles banques peuvent être préparées à partir de cellules de différentes origines par des techniques classiques de biologie moléculaire connues de l'homme du métier.Les séquences nucléotidiques de l'invention peuvent également être préparées par synthèse chimique, notamment selon la méthode des phosphoramidites, ou encore par des méthodes mixtes incluant la modification chimique ou enzymatiqe de séquences obtenues par criblage de banques. Les séquences nucléotidiques de l'invention peuvent être utilisées pour la production des polypeptides 5HT2C tels que définis précédemment. Dans ce cas, la partie codant pour ledit polypeptide est généralement placée sous le contrôle de signaux permettant son expression dans un hôte cellulaire. Le choix de ces signaux (promoteurs, terminateurs, etc) peut varier en fonction de l'hôte cellulaire utilisé. A cet effet, les séquences nucléotidiques de l'invention peuvent faire partie d'un vecteur, qui peut être à réplication autonome ou intégratif. Plus particulièrement, des vecteurs à réplication autonome peuvent être préparés en utilisant des séquences à réplication autonome chez l'hôte choisi.S'agissant des vecteurs intégratifs, ceux-ci peuvent être préparés par exemple en utilisant des séquences homologues à certaines régions du génome de l'hôte, permettant, par recombinaison homologue, l'intégration du vecteur. Les hôtes cellulaires utilisables pour la production des polypeptides 5HT2C de l'invention par voie recombinante sont aussi bien des hôtes eucaryotes que procaryotes. Parmi les hôtes eucaryotes qui conviennent, on peut citer les cellules animales, les levures, ou les champignons. En particulier, s'agissant de levures, on peut citer les levures du genre Saccharomyces, Kluyveromyces, Pichia, Schwanniomyces, ou Hansenula. S'agissant de cellules animales, on peut citer les cellules COS, CHO, Cl27, NIH-3T3, etc. Parmi les champignons, on peut citer plus particulièrement Aspergillus ssp. ou Trichoderma ssp. Comme hôtes procaryotes, on préfère utiliser les bactéries suivantes E. coli, Bacillus, ou Streptomyces. Les séquences nucléotidiques de la présente invention sont également utilisables dans le domaine pharmaceutique, soit pour la réalisation de séquences antisens utilisables dans le cadre d'une thérapie génique, soit encore pour la réalisation de sondes permettant la détection, par des expériences d'hybridation, de l'expression de récepteurs sérotoninergiques dans des échantillons biologiques et la mise en évidence d'anomalies génétiques (polymorphisme, mutations) ou d'expressions aberrantes. L'inhibition de l'expression de certains gènes par des séquences antisens s'est avérée être une stratégie prometteuse dans le contrôle de l'activité d'un gène. Les séquences antisens sont des séquences d'ADN codant pour des ARN complémentaires et, de ce fait, capables d'hybrider spécifiquement avec un ARNm donné, inhibant sa traduction en protéine. L'invention a ainsi pour objet les séquences antisens capables d'inhiber au moins partiellement la production de polypeptides 5HT2C tels que définis précédemment. De telles séquences peuvent être constituées par tout ou partie des séquences nucléotidiques définies ci-avant. n s'agit généralement de séquences ou de fragments de séquences complémentaires de séquences codant pour des peptides de l'invention.De telles séquences peuvent être obtenues à partir de la séquence SEQ ID n" 1, par fragmentation, etc, ou par synthèse chimique. Comme indiqué ci-dessus, l'invention permet également la réalisation de sondes nucléotidiques, synthétiques ou non, capables de s'hydrider avec les séquences nucléotidiques définies ci-avant qui codent pour des polypeptides 5HT2C de rinvention, ou avec les ARNm correspondant. De telles sondes peuvent être utilisées in vitro comme outil de diagnostic, pour la détection de l'expression d'un récepteur sérotoninergique 5HT2C, ou encore pour la mise en évidence d'anomalies génétiques (mauvais épissage, polymorphisme, mutations ponctuelles, etc). Compte tenu des activités multiples de la sérotonine, les sondes de l'invention peuvent ainsi permettre d'identifier des affections neurologique, cardiovasculaire ou psychiatrique comme étant liées aux récepteurs 5HT2C.Ces sondes peuvent également être utilisées pour la mise en évidence et l'isolement de séquences d'acides nucléiques homologues codant pour des polypeptides 5HT2C tels que définis précédemment, à partir d'autres sources cellulaires et préférentiellement de cellules d'origines humaines, ainsi qu'illustré dans les exemples. Les sondes de l'invention comportent généralement au moins 10 bases, et elles peuvent comporter jusqu'à l'intégralité de la séquence SEQ ID n" 1 ou de son brin complémentaire. Préférentiellement, ces sondes sont, préalablement à leur utilisation, marquées. Pour cela, différentes techniques connues de l'homme du métier peuvent être employées (marquage radioactif, enzymatique, etc).Les conditions d'hybridation dans lesquelles ces sondes peuvent être utilisées sont indiquées dans les techniques générales de clonage ci-après ainsi que dans les exemples. Un autre objet de l'invention concerne les cellules recombinées capables d'exprimer à leur surface un polypeptide 5HT2C tel que défini ci-avant. Ces cellules peuvent être obtenues par introduction d'une séquence nucléotidique telle que définie cidessus codant pour un polypeptide de l'invention, puis culture desdites cellules dans des conditions d'expression de ladite séquence. Les cellules recombinées selon l'invention peuvent être aussi bien des cellules eucaryotes que procaryotes. Parmi les cellules eucaryotes qui conviennent, on peut citer les cellules animales, les levures, ou les champignons. En particulier, s'agissant de levures, on peut citer les levures du genre Saccharomyces, Kluyveromyces, Pichia, Schwanniomyces, ou Hansenula. S'agissant de cellules animales, on peut citer les cellules COS, CHO, C127, NIH-3T3, etc. Parmi les champignons, on peut citer plus particulièrement Aspergillus ssp. ou Trichoderma ssp. Comme cellules procaryotes, on préfère utiliser les bactéries suivantes Ecoli, Bacillus, ou Streptomyces. Les cellules ainsi obtenues peuvent être utilisées pour mesurer la capacité de différentes molécules à se comporter comme ligand ou comme modulateur de l'activité des polypeptides de l'invention.Plus particulièrement, elles peuvent ainsi être utilisées dans un procédé de mise en évidence et d'isolement de ligands ou de modulateur de l'activité des polypeptides de l'invention, et, plus préférentiellement, d'agonistes et d'antagonistes de la sérotonine. Un autre objet de l'invention concerne donc un procédé de mise en évidence et/ou d'isolement de ligands des polypeptides 5HT2C de l'invention, selon lequel on réalise les étapes suivantes: - on met en contact une molécule ou un mélange contenant différentes molécules, éventuellement non-identifiées, avec une cellule recombinée telle que décrite ci-dessus exprimant à sa surface un polypeptide de l'invention dans des conditions permettant l'interaction entre ledit polypeptide de l'invention et ladite molécule dans le cas où celle-ci possèderait une affinité pour ledit polypeptide, et, - on détecte et/ou isole les molécules liées au dit polypeptide de l'invention. Dans un mode particulier, ce procédé de l'invention est adapté à la mise en évidence et/ou l'isolement d'agonistes et d'antagonistes de la sérotonine pour les polypeptides 5HT2C. Un autre objet de l'invention concerne un procédé de mise en évidence et/ou d'isolement de modulateurs des polypeptides 5HT2C de l'invention, selon lequel on réalise les étapes suivantes: - on met en contact une molécule ou un mélange contenant différentes molécules, éventuellement non-identifiées, avec une cellule recombinée telle que décrite ci-dessus exprimant à sa surface un polypeptide de l'invention, en présence de 5HT, dans des conditions permettant l'interaction entre ledit polypeptide de l'invention et le 5HT, et, - on détecte et/ou isole les molécules capables de moduler l'activité du 5HT sur ledit polypeptide de l'invention. Un autre objet de l'invention concerne l'utilisation d'un ligand ou d'un modulateur identifié et/ou obtenu selon le procédé décrit ci-avant comme médicament De tels ligands ou modulateurs peuvent en effet permettre de traiter certaines affections neurologique, cardiovasculaire ou psychiatrique liées aux récepteurs 5HT2C. L'invention concerne également tout médicament comprenant comme principe actif au moins une molécule agissant sur un polypeptide 5HT2C de l'invention. Préférentiellement la molécule est un ligand ou un modulateur identifié et/ou isolé selon le procédé décrit précédemment. D'autres avantages de la présente invention apparaîtront à la lecture des exemples qui suivent, qui doivent être considérés comme illustratifs et non limitatifs. Légende des figures Figure 1: : Courbe Scatchard des résultats des expériences de liaison à saturation du [l25I]-DOI aux membranes des cellules Cos-7 exprimant le récepteur 5HT2C. Figure 2: : Mise en évidence de séquences homologues par PCR sur des ARN totaux (10 pg) de différents tissus de souris: ligne 1 : ARN de la lignée cellulaire LMTK, ligne 2: ARN d'embryons de 10 jours, ligne 3 : ARN de testicules, ligne 4: ARN de la lignée cellulaire 3T6, ligne 5 : ARN de la lignée cellulaire MBK, ligne 6 : ARN de foie, ligne 7 : ARN de cerveau, ligne 8 : ARN de coeur, ligne 9 : ARN d'intestin, ligne 10 : ARN de rate, ligne 11: ARN de rein, ligne 12: ARN de cerveau total. Table 1: : Profil pharmacologique du récepteur 5HT2C. Les résultats correspondent à des expériences de compétition pour la liaison du [125I]-DOI aux membranes des cellules Cos-7 exprimant le récepteur 5HT2C. Les valeurs, exprimées en pKD (-log mol/l) sont le résultat d'au moins trois expériences séparées, effectuées en triple. Techniques générales de clonage Les méthodes classiquement utilisées en biologie moléculaire telles que les extractions préparatives d'ADN plasmidique, la centrifugation d'ADN plasmidique en gradient de chlorure de césium, l'électrophorèse sur gels d'agarose ou d'acrylamide, la purification de fragments d'ADN par électroélution, les extractions de protéines au phénol ou au phénol-chloroforme, la précipitation d'ADN en milieu salin par de méthanol ou de l'isopropanol5 la transformation dans Escherichia coli, etc, sont bien connues de l'homme de métier et sont abondament décrites dans la littérature [Maniatis T. et al., "Molecular Cloning, a Laboratory Manual", Cold Spring Harbor Laboratory, Cold Spring Harbor, N.Y., 1982;Ausubel F.M. et al. (eds), "Current Protocols in Molecular Biology", John Wiley & Sons, New York, 1987]. Les enzymes de restriction, la transcriptase inverse AMV, l'ADN polymérase I, la polynucléotide kinase T4, l'ADN ligase T4, et les ARN polymérases T3 ou T7 ont été fournies par New England Biolabs (Biolabs), Bethesda Research Laboratories (BRL), Boehringer-Mannheim ou Stratagene et sont utilisées selon les recommandations des fournisseurs. Pour les ligatures, les fragments d'ADN sont séparés selon leur taille par électrophorèse en gels d'agarose ou d'acrylamide, extraits au phénol ou par un mélange phénol/chloroforme, précipités à l'éthanol puis incubés en présence de RADON ligase du phage T4 selon les recommandations du fournisseur. Le remplissage des extrémités 5' proéminentes est effectué par le fragment de Klenow de l'ADN Polymérase I d'E. coli selon les spécifications du fournisseur. La destruction des extrémités 3' proéminentes est effectuée en présence de l'ADN Polymérase du phage T4 utilisée selon les recommandations du fabricant. La destruction des extrémités 5' proéminentes est effectuée par un traitement ménagé par la nucléase S1. La mutagénèse dirigée in vitro par oligodéoxynucléotides synthétiques est effectuée selon la méthode développée par Taylor et al. [Nucleic Acids Res. Il (1985) 8749-8764]. L'amplification enzymatique de fragments d'ADN par la technique dite de PCR Lolymérase-catalyzed Çhain Reaction, Saiki R.K. et al., Science a (1985) 1350-1354; Mullis KB. et Faloona F.A., Meth Enzym. 1 (1987) 335-350] est effectuée en utilisant un "DNA thermal cycler" (Perkin Elmer Cetus) selon les spécifications du fabricant. La vérification des séquences nucléotidiques est effectuée par la méthode développée par Sanger et al. [Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 74 (1977) 5463-5467]. Pour les expériences d'hybridation, les conditions de stringence normales sont généralement les suivantes : hybridation: 5 x SCC en présence de 5 x Denhart's à 65"C; lavage: 0,5 x SSC à 65"C. 1. Isolement du récepteur 5IIT2C Les comparaisons de séquences entre les différents récepteurs sérotoninergiques connus font apparaître une certaine conservation. Dans le but de mettre en évidence et d'isoler un nouveau récepteur, trois oligonucléotides dégénérés correspondant aux régions transmembranaires VI et VII ont été préparés, puis utilisés dans une série de réactions de PCR sur une préparation d'ADN génomique de souris. La séquence des oligonucléotides dégénérés est la suivante: Oligonucléotide (i) TACCTCGAGGTCGACGGTIATGTGGTG (C,T) CCITT(C,T)TT(C,T) AT Oligonucléotide (ii) AGkACTAGTGGTACCCA(G,A) IGT(G,A) TAIACIA(G,A)IGG(G, A) TT Oligonucléotide (iii) AGAACTAGTGGTACCC(G,C) (A,T) (G,A) CAIAC (G,A)TAICC (G,A,T) ATCCA Un multisite de clonage a été ajouté à l'extrémité 5' des oiligonucléotides, pour permettre le sous-clonage ultérieur du fragment amplifié. Les réactions de PCR ont été réalisées de la manière suivante: 1 pg d'ADN génomique de souris a été dénaturé pendant 1 minute à 94"C, maintenu 2 minutes à 55"C, puis soumis à 20 cycles d'amplification à 720C en présence de 10 unités de polymérase Taq (Cetus), de MgC12 3 mM, et de 1 ,ug de chacun des oligonucléotides (i) et (ii). 1/10e du produit de cette réaction a ensuite été soumis à 20 cycles d'amplification supplémentaires dans les mêmes conditions, en présence de 1 ,ug de chacun des oligonucléotides (i) et (iii). Les produits ainsi obtenus ont été digérés avec les enzymes SpeI et XhoI, insérés aux sites correspondant du plasmide Bluescript (Stratagène), et séquences.L'un des fragments ainsi obtenus, présentant une certaine homologie avec les récepteurs sérotoninergiques 5HT2, a été synthétisé in vitro et marqué à son extrémité 5' par la polynucléotide kinase, puis utilisé comme sonde pour cribler une banque de cDNA de cerveau de souris. Un clone positif a été sélectionné. Ce clone a été désigné NP75. L'insert porté par le clone NP75 a été séquencé sur les 2 brins en utilisant la technique des dideoxynucléotides au moyen d'oligonucléotides synthétiques. L'analyse de la séquence obtenue révèle la présence d'une phase ouverte de lecture codant pour une protéine de 504 acides aminés (SEQ ID n"l et 2). Par ailleurs, l'analyse d'hydrophobicité montre que cette protéine porte sept domaines hydrophobes, une particularité rencontrée chez les membres de la famille des récepteurs couplés à des protéines G. L'extrémité N-terminale contient par ailleurs 1 site potentiel de Nglycosylation, et le domaine cytoplasmique présumé contient les sites consensus de phosphorylation par les protéines kinases C et A.En outre, la présence de 19 résidus sérine ou thréonine dans les 121 acides aminés C-terminaux semble indiquer que cette région est impliquée dans la désensibilisation du récepteur par les kinases. 2. Etude d'homologies de séquence La séquence du récepteur 5HT2C isolé ci-dessus a été comparée avec les séquences des récepteurs couplés à des protéines G suivants : 5HT1A, 5HT1B, 5HT1C et 5HT2. Ces expériences ont révélé une homologie dans les domaines transmembranaires I à VII avec les récepteurs 5HT1C et 5HT2, supérieure à l'homologie rencontrée avec les récepteurs 5HT1A et 5HT1B. Ces résultats suggèrent que les récepteurs de l'invention appartiennent au sous-type 5HT2. Ceci est d'ailleurs en accord avec la présence de 2 introns dans le gène codant pour le récepteur 5HT2C (non montrés sur la séquence). 3. Expression du récepteur 5HT2C dans les cellules Cos-7 et caractérisation pharmacologique Le fragment d'ADNc isolé dans l'exemple 1 a été inséré dans un vecteur d'expression eucaryote, qui a été utilisé pour transfecter des cellules Cos-7. Les membranes des cellules transfectées obtenues ont ensuite été préparées et testées pour leur capacité à lier certains ligands sérotoninergiques marqués. L'ADNc codant pour le récepteur 5HT2C a été isolé sous forme d'un fragment XbaI-EcoRI de 1372 pb, puis inséré aux sites correspondants du vecteur p513. Le vecteur p513 dérive du vecteur pSG5 [Green et al., Nucl. Acids Res. 16 (1988) 369] par addition d'un multisite de clonage. Le vecteur recombinant ainsi obtenu, désigné p513NP75 a ensuite été utilisé (10 pg par plaque de 10 cm) pour transfecter les cellules Cos-7 en présence de phosphate de calcium. 48 heures après la transfection, les cellules recombinantes sont récoltées et les membranes sont préparées selon la technique décrite par Amlaiky et Caron [J. Biol. Chem. 260 (1985) 1983]. Des expériences de liaison à saturation et de compétition ont ensuite été réalisées sur ces membranes en présence de [125I]-DOI (2200 Ci/mmole; New England Nuclear) et de différents composés test. Le [125I]-DOI (dimethoxyphenyl isopropylamine) a tout d'abord été utilisé seul, pour détecter l'expression du gène codant pour les récepteurs de l'invention dans les membranes des cellules recombinantes. Pour cela, 100 jil de suspension membranaire (50 Mglml de protéines) ont été incubés 30 minutes à 300C en présence du ligand radioactif (50 ili) et de 50 p1 de tampon Tris-HCl 50 mM (pH 7,4), NaCI 150 mM, MgC12 10 mM, volume final: 200 p1. La réaction est ensuite stopée par addition d'une solution glacée iso-osmotique, puis par filtration sur filtres Whatman GF/B, suivie de 4 rinçages dans 5 ml du tampon ci-dessus glacé.Les filtres sont ensuite séchés et la radioactivité est mesurée par comptage (compteur y). La liaison non-spécifique, déterminée en présence de 10 FM de DOI froid, représentait environ 30% de la laison totale. Les résultats obtenus montrent que le DOI se lie spécifiquement aux membranes des cellules transfectées, et non aux membranes des cellules témoin (transfectées avec le plasmide pSGS). Ces cellules expriment donc bien un récepteur sérotonine fonctionnel. De plus, l'affinité du DOI pour les cellules transfectées est élevée et la liaison est saturable (figure 1). Le KD apparent est de 25,8+1- 0,54 nM, et le Bmax apparent varie entre 14,8 et 21,0 pmollmg de protéine, selon l'efficacité de transformation. Pour déterminer le profil pharmacologique de ce récepteur, le [125IJ-DOI lié aux membranes a été déplacé en présence de différentes drogues sérotoninergiques (table 1). Pour cela, les membranes cellulaires sont incubées dans les conditions décrites ci-dessus, avec, à la place des 50 jI de tampon, des concentrations croissantes des composés à tester. Ces différentes drogues montrent l'ordre d'efficacité de déplacement suivant: ritansérine > N-acétyl 5-HT > methysergide > sétoperone = cyproheptadine > spiperone > kétansérine > tryptamine > 5-HT > 8 OH-DPAT (table 1).La faible affinité (relative) de ce récepteur pour la sérotonine confirme son appartenance au sous-type 5HT2. De plus, l'absence de compétition par les composés ICS 205-930, MDL 72222 et quipazine, qui sont spécifiques des récepteurs 5HT3, écarte la possibilité que les récepteurs de l'invention appartiennent à ce sous-type. 4. Recherche de séquences homologues dans d'autres tissus La séquence nucléotidique SEQ ID n" 1 a ensuite été utilisée pour la mise en évidence de séquences homologues à partir d'autres tissus par PCR. Les tissus utilisés pour la recherche de séquences homologues sont les suivants d'origine murine: intestin, coeur, cerveau, rein, rate et foie. Les sondes suivantes ont été utilisées: Sonde (iv) :5' -GATCCTGACTAACCGTTaG GA-3' Sonde (v) 5'-TGCCTA1TGAAATTAACCATACCA-3' La sonde (iv) correspond à la position 85 sur la SEQ ID nO 1 et la sonde (v) à la position 547 (brin complémentaire). Les ARN totaux ont été préparés à partir des tissus indiqués cidessus selon la technique décrite par Cathala et al. (DNA 2(4) (1983). 10 g de ces ARN ont été soumis à une transcription inverse en présence de 13 unités de transcriptase inverse AMV, de 5 unités de polymérase Taq et de 1 ,ug des sondes (iv) et (v), pendant 15 minutes à 50"C, puis amplifiés (20, 25 et 30 cycles) (Maroteaux et al., Proc.Natl.Acad.Sci. USA 89 (1992) 3020). Comme standard interne, les amorces correspondant à l'ARNm du facteur d'élongation ribosomal EF1A on été utilisées, dans les mêmes conditions que les sondes (iv) et (v). Les produits ainsi obtenus ont ensuite été transférés sur filtres de nitrocellulose et hybridés dans les conditions suivantes : La sonde utilisée pour l'hybridation avait la séquence suivante: Sonde (vi) : 5'-TGCCTGGTrAITCCTCGATGTTC-3' correspondant à la position 398 sur la séquence SEQ ID n" 1. L'hybridation a été réalisée dans des conditions de stringence élevées : 50"C, dans un tampon phosphate de sodium 20 mM (pH 6,5) contenant 5 x SSC, 1 x Denhardt's, 0,1 % de SDS et 100 pglml d'ARNt. Les lavages ont été effectués à 500C dans un tampon 1 x SSC, 0,1 % SDS. Cette étude a permis de mettre en évidence des fragments d'ADN spécifiques homologues dans l'intestin, le coeur, les reins et le cerveau (figure 2). I1 est entendu que les même expériences peuvent être répétées en utilisant d'autres tissus et notamment des tissus d'origine humaine, d'autres sondes, et d'autres techniques (hybridation in situ; Northern blot, etc). Par ailleurs, les séquences homologues mises en évidence lors de ces expériences peuvent évidemment être ensuite isolées et/ou amplifiées par les techniques classiques de biologie moléculaire. TABLE 1 Composés Liaison aux cellules 5-HT2 5-HTîC COS Agonistes 5-HT 5.90 5.5 7.5 2-Me-5-HT 5.18 5.2 5.8 Tryptamine 6.70 6.0 7.2 1-ME-5-HT 5.60 6.3 8.4 NNdiMe-5-MeOT 5.13 6.2 7.0 8-OH-DPAT 5.19 5.0 5.2 Quipazine 5.18 6.2 6.7 Histamine 4.0 4.0 4.0 Antagonistes Ritanserine 8.44 9.3 8.6 Methysergide 7.90 8.6 8.6 Setoperone 7.61 8.6 7.3 Cyproheptadine 7.65 8.5 7.9 Spiperone 7.30 8.8 5.9 Ketanserine 6.69 8.9 7.0 ICS 205-930 5.30 5.3 4.6 MDL 72222 4.62 6.7 5.0 Chlorpromazine 4.0 4.0 4.0 LISTE DE SEOUENCES (1) INFORMATION GENERALE: (i) DEPOSANT: (A) NOM: INSERM (B) RUE: 101 rue de Tolbiac (C) VILLE: PARIS (E) PAYS: France (F) CODE POSTAL: 75654 (ii) TITRE DE L' INVENTION: NOUVEAUX POLYPEPTIDES AYANT UNE ACTIVITE DE RECEPTEUR SEROTONINERGIQUE, ACIDES NUCLEIQUES CODANT POUR CES POLYPEPTIDES ET UTILISATIONS. (iii) NOMBRE DE SEQUENCES: 2 (iv) FORME LISIBLE PAR ORDINATEUR: (A) TYPE DE SUPPORT: Tape (B) ORDINATEUR: IBM PC compatible (c) SYSTEME D' EXPLOITATION: PC-DOS/MS-DOS (D) LOGICIEL: PatentIn Release #1.0, Version #1.25 (OEB) (2) INFORMATION POUR LA SEO ID NO: 1: (i) CARACTERISTIQUES DE LA SEQUENCE: (A) LONGUEUR: 1533 paires de bases (B) TYPE: acide nucléique (C) NOMBRE DE BRINS: double (D) CONFIGURATION: linéaire (ii) TYPE DE MOLECULE: ADNc (iii) HYPOTHETIQUE: NON (vi) ORIGINE: (A) ORGANISME: Souris (F) TYPE DE TISSUE: CERVEAU (vii) SOURCE IMMEDIATE: (B) CLONE: NP75 (ix) CARACTERISTIQUE ADDITIONELLE: (A) NOM/CLE: CDS (B) EMPLACEMENT: 19.1533 (xi) DESCRIPTION DE LA SEQUENCE:SEQ ID NO: 1: TGAGTCACCA AAAGGCGA ATG GCT TCA TCT TAT AAA ATG TCT GAA CAA AGC 51 Met Ala Ser Ser Tyr Lys Met Ser Glu Gln Ser 1 5 10 ACA ACT TCT GAG CAC ATT TTA CAG AAG ACA TGT GAT CAC CTG ATC CTG 99 Thr Thr Ser Glu His Ile Leu Gln Lys Thr Cys Asp His Leu Ile Leu 15 20 ' 25 ACT AAC CGT TCT GGA TTA GAG ACA GAC TCA GTA GCA GAG GAA ATG AAG 147 Thr Asn Arg Ser Gly Leu Glu Thr Asp Ser Val Ala Glu Glu Met Lys 30 35 40 CAG ACT GTG GAG GGA CAG GGG CAT ACA GTG CAC TGG GCA GCT CTC CTG 195 Gln Thr Val Glu Gly Gln Gly His Thr Val His Trp Ala Ala Leu Leu 45 50 55 ATA CTC GCG GTG ATA ATA CCC ACC ATT GGT GGG AAC ATC CTT GTG ATT 243 Ile Leu Ala Val Ile Ile Pro Thr Ile Gly Gly Asn Ile Leu Val Ile 60 65 70 75 CTG GCT GTT GCA CTG GAG AAA AGG CTG CAG TAC GCT ACC AAC TAC TTT 291 Leu Ala Val Ala Leu Glu Lys Arg Leu Gln Tyr Ala Thr Asn Tyr Phe 80 85 90 TTA ATG TCC TTG GCG ATA GCA GAT TTG CTG GTT GGA TTG. TTT GTG ATG 339 Leu Met Ser Leu Ala Ile Ala Asp Leu Leu Val Gly Leu Phe Val Met 95 100 105 CCG ATT GCC CTC TTG ACA ATC ATG TTT GAG GCT ATA TGG CCC CTC CCA 387 Pro Ile Ala Leu Leu Thr Ile Met Phe Glu Ala Ile Trp Pro Leu Pro 110 115 120 CTG GCC CTG TGT CCT GCC TGG TTA TTC CTC GAT GTT CTC TTT TCA ACT 435 Leu Ala Leu Cys Pro Ala Trp Leu Phe Leu Asp Val Leu Phe Ser Thr 125 130 135 GCC TCC ATC ATG CAT CTC TGT GCC ATT TCC CTG GAC CGC TAT ATA GCC 483 Ala Ser Ile Met His Leu Cys Ala Ile Ser Leu Asp Arg Tyr Ile Ala 140 145 150 155 ATC AAA AAG CCA ATT CAG GCC AAT CAG TGC AAC ACC CGG GCT ACT GCA 531 Ile Lys Lys Pro Ile Gln Ala Asn Gln Cys Asn Thr Arg Ala Thr Ala 160 165 170 TTC ATC AAG ATT ACA GTG GTA TGG TTA ATT TCA ATA GGC ATC GCC ATC 579 Phe Ile Lys Ile Thr Val Val Trp Leu Ile Ser Ile Gly Ile Ala Ile 175 180 185 CCA GTC CCT ATT AAA GGA ATC GAG ACT GAT GTG ATT AAT CCA CAC AAT 627 Pro Val Pro Ile Lys Gly Ile Glu Thr Asp Val Ile Asn Pro His Asn 190 195 200 GTC ACC TGT GAG CTG ACA AAG GAC CGC TTT GGC AGT TTT ATG GTC TTT 675 Val Thr Cys Glu Leu Thr Lys Asp Arg Phe Gly Ser Phe Met Val Phe 205 210 215 GGG TCA CTG GCT GCT TTC TTC GTA CCT CTC ACC ATC ATG GTA GTC ACT 723 Gly Ser Leu Ala Ala Phe Phe Val Pro Leu Thr Ile Met Val Val Thr 220 225 230 235 TAC TTT CTC ACC ATT CAC ACT TTA CAG AAG AAA GCT TAC TTG GTC AAA 771 Tyr Phe Leu Thr Ile His Thr Leu Gln Lys Lys Ala Tyr Leu Val Lys 240 245 250 AAT AAG CCA CCT CAA CGC CTA ACA CGG TGG ACT GTG CCC ACA GTT TTC 819 Asn Lys Pro Pro Gln Arg Leu Thr Arg Trp Thr Val Pro Thr Val Phe 255 260 265 CTA AGG GAA GAC TCA TCC TTT TCA TCA CCA GAA AAG GTG GCA ATG CTG 867 Leu Arg Glu Asp Ser Ser Phe Ser Ser Pro Glu Lys Val Ala Met Leu 270 275 280 GAT GGG TCT CAC AGG GAT AAA ATT CTA CCT AAC TCA AGT GAT GAG ACA 915 Asp Gly Ser His Arg Asp Lys Ile Leu Pro Asn Ser Ser Asp Glu Thr 285 290 295 CTT ATG CGA AGA ATG TCC TCA GTT GGA AAA AGA TCA GCC CAA ACC ATT 963 Leu Met Arg Arg Met Ser Ser Val Gly Lys Arg Ser Ala Gln Thr Ile 300 305 310 315 TCT AAT GAG CAG AGA GCC TCG AAG GCC CTT GGA GTC GTG TTT TTC CTT 1011 Ser Asn Glu Gln Arg Ala Ser Lys Ala Leu Gly Val Val Phe Phe Leu 320 325 330 TTT CTG CTT ATG TGG TGC CCC TTT TTT ATT ACA AAT CTA ACT TTA GCT 1059 Phe Leu Leu Met Trp Cys Pro Phe Phe Ile Thr Asn Leu Thr Leu Ala 335 340 345 CTG TGT GAT TCC TGC AAT CAG ACC ACT CTC AAA ACA CTC CTG GAG ATA 1107 Leu Cys Asp Ser Cys Asn Gln Thr Thr Leu Lys Thr Leu Leu Glu Ile 350 355 360 TTT GTG TGG ATA GGC TAC GTT TCC TCG GGG GTG AAT CCT CTG ATC TAT 1155 Phe Val Trp Ile Gly Tyr Val Ser Ser Gly Val Asn Pro Leu Ile Tyr 365 370 375 ACA CTC TTC AAT AAG ACA TTT CGG GAA GCA TTT GGC AGG TAC ATC ACC 1203 Thr Leu Phe Asn Lys Thr Phe Arg Glu Ala Phe Gly Arg Tyr Ile Thr 380 385 390 395 TGC AAT TAC CGA GCC ACA AAG TCA GTA AAA GCA CTT AGG AAG TTT TCC 1251 Cys Asn Tyr Arg Ala Thr Lys Ser Val Lys Ala Leu Arg Lys Phe Ser 400 405 410 AGT ACA CTT TGT TTT GGG AAT TCA ATG GTA GAA AAC TCT AAA TTT TTC 1299 Ser Thr Leu Cys Phe Gly Asn Ser Met Val Glu Asn Ser Lys Phe Phe 415 420 425 ACA AAA CAT GGA ATT CGA AAT GGG ATC AAC CCT GCC ATG TAC CAG AGC 1347 Thr Lys His Gly Ile Arg Asn Gly Ile Asn Pro Ala Met Tyr Gln Ser 430 435 440 CCA ATG AGG CTC CGA TGT TCA ACC ATT CAG TCC TCA TCA ATC ATC CTC 1395 Pro Met Arg Leu Arg Cys Ser Thr Ile Gln Ser Ser Ser Ile Ile Leu 445 450 455 CTC GAT ACC CTT CTC ACT GAA AAC GAT GGC GAC AAA GCG GAA GAG CAG 1443 Leu Asp Thr Leu Leu Thr Glu Asn Asp Gly Asp Lys Ala Glu Glu Gln 460 465 470 475 GTC AGC TAC ATA TTG CAG GAA CGG GCC GGC CTC ATC TTG AGA GAG GGT 1491 Val Ser Tyr Ile Leu Gln Glu Arg Ala Gly Leu Ile Leu Arg Glu Gly 480 485 490 GAT GAG CAG GAC GCA CGC GCA CCA TGG CAG GTT CAA GAG TG 1533 Asp Glu Gln Asp Ala Arg Ala Pro Trp Gln Val Gln Glu 495 500 505 (2) INFORMATION POUR LA SEO ID NO: 2: (i) CARACTERISTIQUES DE LA SEQUENCE: (A) LONGUEUR: 504 acides aminés (B) TYPE: acide aminé (D) CONFIGURATION: linéaire (ii) TYPE DE MOLECULE: protéine (xi) DESCRIPTION DE LA SEQUENCE: SEQ ID NO: 2: Met Ala Ser Ser Tyr Lys Met Ser Glu Gln Ser Thr Thr Ser Glu His 1 5 10 15 Ile Leu Gln Lys Thr Cys Asp His Leu Ile Leu Thr Asn Arg Ser Gly 20 25 30 Leu Glu Thr Asp Ser Val Ala Glu Glu Met Lys Gln Thr Val Glu Gly 35 40 45 Gln Gly His Thr Val His Trp Ala Ala Leu Leu Ile Leu Ala Val Ile 50 55 60 Ile Pro Thr Ile Gly Gly Asn Ile Leu Val Ile Leu Ala Val Ala Leu 65 70 75 80 Glu Lys Arg Leu Gln Tyr Ala Thr Asn Tyr Phe Leu Met Ser Leu Ala 85 90 95 Ile Ala Asp Leu Leu Val Gly Leu Phe Val Met Pro Ile Ala Leu Leu 100 105 110 Thr Ile Met Phe Glu Ala Ile Trp Pro Leu Pro Leu Ala Leu Cys Pro 115 120 125 Ala Trp Leu Phe Leu Asp Val Leu Phe Ser Thr Ala Ser Ile Met His 130 135 140 Leu Cys Ala Ile Ser Leu Asp Arg Tyr Ile Ala Ile Lys- Lys Pro Ile 145 150 155 160 Gln Ala Asn Gln Cys Asn Thr Arg Ala Thr Ala Phe Ile Lys Ile Thr 165 170 175 Val Val Trp Leu Ile Ser Ile Gly Ile Ala Ile Pro Val Pro Ile Lys 180 185 190 Gly Ile Glu Thr Asp Val Ile Asn Pro His Asn Val Thr Cys Glu Leu 195 200 205 Thr Lys Asp Arg Phe Gly Ser Phe Met Val Phe Gly Ser Leu Ala Ala 210 215 220 Phe Phe Val Pro Leu Thr Ile Met Val Val Thr Tyr Phe Leu Thr Ile 225 230 235 240 His Thr Leu Gln Lys Lys Ala Tyr Leu Val Lys Asn Lys Pro Pro Gln 245 250 255 Arg Leu Thr Arg Trp Thr Val Pro Thr Val Phe Leu Arg Glu Asp Ser 260 265 270 Ser Phe Ser Ser Pro Glu Lys Val Ala Met Leu Asp Gly Ser His Arg 275 280 285 Asp Lys Ile Leu Pro Asn Ser Ser Asp Glu Thr Leu Met Arg Arg Met 290 295 300 Ser Ser Val Gly Lys Arg Ser Ala Gln Thr Ile Ser Asn Glu Gln Arg 305 310 315 320 Ala Ser Lys Ala Leu Gly Val Val Phe Phe Leu Phe Leu Leu Met Trp 325 330 335 Cys Pro Phe Phe Ile Thr Asn Leu Thr Leu Ala Leu Cys Asp Ser Cys 340 345 350 Asn Gln Thr Thr Leu Lys Thr Leu Leu Glu Ile Phe Val Trp Ile Gly 355 360 365 Tyr Val Ser Ser Gly Val Asn Pro Leu Ile Tyr Thr Leu Phe Asn Lys 370 375 380 Thr Phe Arg Glu Ala Phe Gly Arg Tyr Ile Thr Cys Asn Tyr Arg Ala 385 390 395 400 Thr Lys Ser Val Lys Ala Leu Arg Lys Phe Ser Ser Thr Leu Cys Phe 405 410 415 Gly Asn Ser Met Val Glu Asn Ser Lys Phe Phe Thr Lys His Gly Ile 420 425 430 Arg Asn Gly Ile Asn Pro Ala Met Tyr Gln Ser Pro Met Arg Leu Arg 435 440 445 Cys Ser Thr Ile Gln Ser Ser Ser Ile Ile Leu Leu Asp Thr Leu Leu 450 455 460 Thr Glu Asn Asp Gly Asp Lys Ala Glu Glu Gln Val Ser Tyr Ile Leu 465 470 475 480 Gln Glu Arg Ala Gly Leu Ile Leu Arg Glu Gly Asp Glu Gln Asp Ala 485 490 495 Arg Ala Pro Trp Gln Val Gln Glu 500 REVENDICATIONS 1. Polypeptide comprenant tout ou partie de la séquence SEQ ID n" 2 ou d'un dérivé de celle-ci. 2. Polypeptide selon la revendication 1 caractérisé en ce qu'il possède la capacité de lier la sérotonine. 3. Polypeptide selon la revendication 2 caractérisé en ce qu'il possède une activité de récepteur sérotoninergique. 4. Polypeptide selon l'une des revendications 1 à 3 caractérisé en ce qu'il peut être reconnu par des anticorps reconnaissant la séquence SEQ ID nO 2 complète. 5. Polypeptide selon l'une des revendications 1 à 4 caractérisé en ce qu'il comprend toute la séquence peptidique SEQ ID nO 2. 6. Séquence nucléotidique codant pour un polypeptide selon l'une des revendications 1 à 5. 7. Séquence selon la revendication 6 caractérisée en ce qu'elle est choisie parmi: (a) tout ou partie de la séquence nucléotidique SEQ ID nO 1 ou de son brin complémentaire, (b) toute séquence hybridant avec une séquence- (a) et codant pour un polypeptide selon l'une des revendications 1 à 5, et, (c) les séquences dérivées des séquences (a) et (b) en raison de la dégénérescence du code génétique. 8. Séquence selon la revendication 7 caractérisée en ce qu'elle est choisie parmi les séquences génomiques, d'ADNc, d'ARN, les séquences hybrides ou les séquences synthétiques ou semi-synthétiques. 9. Séquence selon l'une des revendications 6 à 8 caractérisée en ce que la partie codant pour ledit polypeptide est placée sous le contrôle de signaux permettant son expression dans un hôte cellulaire. 10. Séquence antisens capable d'inhiber au moins partiellement la production de polypeptide selon l'une des revendications 1 à 5. 11. Séquence selon la revendication 10 caractérisé en ce qu'elle est constituée par tout ou partie d'une séquence nucléotidique selon la revendication 7. 12. Sonde nucléotidique capable de s'hydrider avec une séquence selon la revendication 6 ou avec l'ARNm correspondant. 13 Sonde selon la revendication 12 caractérisée en ce qu'elle comporte au moins 10 bases. 14. Sonde selon la revendication 13 caractérisée en ce qu'elle comporte l'intégralité de la séquence SEQ ID n" 1 ou de son brin complémentaire. 15. Sonde selon la revendication 13 caractérisée en ce qu'elle est choisie parmi les sondes (i), (ii), (iii), (iv), (v) et (vi). 16. Utilisation d'une sonde selon l'une des revendications 12 à 15 pour la détection de l'expression d'un récepteur sérotoninergique 5HT2C; ou pour la mise en évidence d'anomalies génétiques (mauvais épissage, polymorphisme, mutations ponctuelles, etc); ou pour identifier des affections neurologique, cardiovasculaire ou psychiatrique comme étant liées aux récepteurs 5HT2C; ou encore pour la mise en évidence et l'isolement de séquences d'acides nucléiques homologues codant pour des polypeptides 5HT2C. 17. Cellule recombinée capable d'exprimer à sa surface un polypeptide selon l'une des revendications 1 à 5. 18. Cellule selon la revendication 17 caractérisée en ce qu'elle est choisie parmi les cellules eucaryotes ou procaryotes. 19. Procédé de mise en évidence et/ou d'isolement de ligands des polypeptides tels que définis dans les revendications 1 à 5, caractérisé en ce que l'on réalise les étapes suivantes: - on met en contact une molécule ou un mélange contenant différentes molécules, éventuellement non-identifiées, avec une cellule recombinée selon la revendication 17 exprimant à sa surface un polypeptide tel que défini dans les revendications 1 à 5 dans des conditions permettant l'interaction entre ledit polypeptide et ladite molécule dans le cas où celle-ci possèderait une affinité pour ledit polypeptide, et, - on détecte et/ou isole les molécules liées au dit polypeptide. 20. Procédé selon la revendication 19 pour la mise en évidence et/ou l'isolement d'agonistes ou d'antagonistes de la sérotonine. 21. Procédé de mise en évidence et/ou d'isolement de modulateurs des polypeptides tels que définis dans les revendications 1 à 5, caractérisé en ce que ron réalise les étapes suivantes: - on met en contact une molécule ou un mélange contenant différentes molécules, éventuellement non-identifiées, avec une cellule recombinée selon la revendication 17 exprimant à sa surface un polypeptide tel que défini dans les revendications 1 à 5, en présence de 5HT, dans des conditions permettant l'interaction entre ledit polypeptide et le 5HT, et, - on détecte et/ou isole les molécules capables de moduler l'activité du 5HT sur ledit polypeptide. 22. Ligand ou modulateur d'un polypeptide tel que défini dans les revendications 1 à 5, susceptible d'être obtenu selon les procédés des revendications 19 à 21. 23. Utilisation d'un ligand ou modulateur identifié et/ou obtenu selon les procédés des revendications 19 à 21 comme médicament. 24. Médicament comprenant comme principe actif au moins une molécule agissant sur un polypeptide selon l'une des revendications 1 à 5. 25. Médicament selon la revendication 24 caractérisé en ce que la molécule est un ligand ou un modulateur identifié et/ou isolé selon le procédé des revendications 19 à 21.