Brevet FR2692279A1 — publié le 19931217

La présente invention est relative à des séquences nucléotidiques issues du virus de l'immunodéficience féline (virus VIF), à des oligonucléotides compris dans lesdites séquences, aux produits de transcription de L'ART génomique dudit virus, à l'utilisation desdites séquences comme sondes ou comme amorces et pour l'expression de peptides immunogènes et/ou neutralisants, aux plasmides utiles pour ladite expression ainsi qu'à un procédé de détection, de différenciation et d'identification de souches de VIF à l'aide d'au moins l'une desdites séquences nucléotidiques. L'immunodéficience féline est due à un lentivirus, le virus de l'immunodéficience féline (VIF), qui présente une structure génétique similaire à celle des lentivirus des primates (VIH et VIS). L'immunodéficience féline pose un problème important de santé vétérinaire, dans la mesure où un nombre important de chats infectés par le VIF a été décelé aux Etats-Unis, au Japon et en Europe (5 à 25 % des animaux). A l'heure actuelle, l'immunodéficience féline est essentiellement diagnostiquée lors de l'apparition des signes cliniques (lymphadénopathie généralisée et survenue d'infections opportunistes), alors qu'un diagnostic très précoce aurait des avantages importants tant dans le traitement que dans la prévention de cette maladie. Plusieurs isolats viraux indépendants ont été mis en évidence à travers le monde et un certain nombre de travaux pour mettre en évidence la structure des souches isolées ont été réalisés, notamment en ce qui concerne la souche américaine Petaluma [R.L. TALBOTT et al. (Natl. Acad. Sci. USA, 1989, 86, 5743-5747) T.R. PHILIPPS et al. (J. Virol., 1990, 64, 10, 46054613)], les souches japonaises (souches TM1 et TM2) [T. MIYAZAWA et al. (Arch. Virol., 1989, 108, 59-68)] ou les isolats suisses (FIVZ1 et FIVZ2) [S. MORIKAWA et al., (Virus Research, 1991, 21, 53-63)]. Les séquences nucléotidiques de trois clones proviraux, dérivés des isolats de VIF américains (souche Petaluma) ont été décrites (clones FIV34TF10, FIV14 et isolat PPR) [R.A. OLMSTED et al., (Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 1989, 86, 2448-2452) ; T.R PHILIPPS et al., 1990 R.L. TALBOTT et al., (Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 1989, 86, 5743-5747) et comparées aux deux isolats suisses (S. MORIKAWA et al.). Cette comparaison a conduit S. MORIKAWA et al. à préciser la présence de certaines régions conservées et de certaines régions variables dans le gène env du VIF. Des souches françaises ont également été isolées (souches WO et ME) [MORAILLON A. et al., 1992, Vet. Mic., 31, 41-45, In vitro properties and experimental pa thogenic effect of three feline immunodeficiency vu ruses isolated from cats with terminal diseases]. Toutefois, en vue de mettre au point des outils de diagnostic plus performants et des moyens de production de vaccins spécifiquement protecteurs, il était important de sélectionner, à partir de ces souches, des séquences aptes à être performantes dans le diagnostic différentiel précoce de l'immunodéficience féline et aptes à produire des produits dérivés par génie génétique, à fin de vaccination, ou à choisir une immunothérapie adaptée à la souche infectante. La présente invention s'est en conséquence donné pour but de pourvoir à des séquences nucléotidiques issues du VIF et à leurs fragments sélectionnés notamment pour leur spécificité de souche. La présente invention a pour objet des séquences nucléotidiques issues de 1'ARN génomique du virus de l'immunodéficience féline (VIF), caractérisées en ce qu'elles comprennent au moins un fragment d'un gène présentant des zones hypervariables, choisi dans le groupe constitué par le gène codant pour la protéine env de la souche WO du VIF et le gène codant pour la protéine gag de la souche WO du VIF. Selon un mode de réalisation avantageux de ladite séquence, celle-ci comprend la séquence en nucléotides et la séquence déduite en amino-acides de formule I ci-après, qui correspond au gène env du VIF, souche WO 1/1 31/11 atg gca gaa ggg ttt gca gct aat aga caa tgg ata ggg cca Met ala glu gly phe ala ala asn arg gln trp ile gly pro 61/21 gaa gaa gct gaa gag cta tta gat ttt gat ata gca ata caa glu glu ala glu glu leu leu asp phe asp ile ala ile gln 91/31 121/41 atg aat gaa gaa ggg cca cta aat cca gga gta aac cca ttt met asn glu glu gly pro leu asn pro gly val asn pro phe 151/51 agg gta cct gga ata aca gaa gca gaa aag caa gaa tat tgt arg val pro gly ile thr glu ala glu lys gln glu tyr cys 181/61 aac ata tta caa ccc aag tta caa gat cta aag ggg aaa att asn ile leu gln pro lys leu gln asp leu lys gly lys ile 211/71 241/81 caa gag gta aaa ctg gaa gaa gga aat gca ggt aag ttt aga gln glu val lys leu glu glu gly asn ala gly lys phe arg 271/91 aga gca aga ttt tta aga tac tct gat gaa aca gta ttg 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gln glu trp glu asp 2311/771 2341/781 tgg gta gga tgg ata gga aat att cca caa tat tta aag gga trp val gly trp ile gly asn ile pro gln tyr leu lys gly 2371/791 cta ttg gga ggt atc ttg gga ata gga tta gga atg tta tta leu leu gly gly ile leu gly ile gly leu gly met leu leu 2401/801 2431/811 ttg atc tta tgt tta cct aca ttg gtt gat tgt ata aga aat leu ile leu cys leu pro thr leu val asp cys ile arg asn 2461/821 tgt atc cac aag ata ctg gga tac aca gta att gca atg cct cys ile his lys ile leu gly tyr thr val ile ala met pro 2491/831 gaa gta gaa gaa gaa gaa ata caa cca caa atg gaa ttg agg glu val glu glu glu glu ile gln pro gln met glu leu arg 2521/841 2551/851 aga aat ggt agg caa tgt ggc atg tct gaa aaa gag gag gaa arg asn gly arg gln cys gly met ser glu lys glu glu glu tga tga OPA OPA (I) Une telle séquence correspond à l'ADNc de l'ARNm de la protéine env de la souche WO du VIF. Selon un autre mode de réalisation avantageux de ladite séquence, celle-ci comprend la séquence en nucléotides et la séquence déduite en amino-acides de formule II ci-après, qui correspond au gène gag du VIF, souche WO 1/1 31/11 ATG GGG AAC GGA CAG GGG CGA GAT TGG AAA ATG GCC ATT AAG Met gly asn gly gln gly arg asp trp lys met ala ile lys 61/21 AGA TGC AGT AAT GGT GCT GTA GGA GTA GGG GGG AAG AGT AAA arg cys ser asn gly ala val gly val gly gly lys ser lys 91/31 121/41 AAA TTT GGA GAA GGG AAT TTC AGA TGG GCC ATC AGA ATG GCT lys phe gly glu gly asn phe arg trp ala ile arg met ala 151/51 AAC GTA TCT ACA GGA CGA GAA CCT GGT GAT ATA CCA GAG ACT asn val ser thr gly arg glu pro gly asp ile pro glu thr 181/61 TTA GAT CAA CTA AGG TTG GTT ATT TGC GAT TTA CAA GAG AGA leu asp gln leu arg leu val ile cys asp leu gln glu arg 211/71 241/81 AGA GAA AAA TTT GGA TCT AGT AAA GAA ATT GAC ATG GCA ATT arg glu lys phe gly ser ser lys glu ile asp met ala ile 271/91 GCT GCA TTA AAA GTC TTT GCA GTA GTG GGA CTT TTA AAT ATG ala ala leu lys val phe ala val val gly leu leu asn met 301/101 331/111 ACA GTG TCT ACT GCT GCT GCA GCT GAA AAT ATG TAT ACT CAG thr val ser thr ala ala ala ala glu asn met tyr thr gln 361/121 ATG GGT TTA GAC ACC AGA CCA TCT ACA AAA GAG GCA GGA GGA met gly leu asp thr arg pro ser thr lys glu ala gly gly 391/131 AAA GAG GAA GGC CCT CCA CAG GCA TAT CCT ATT CAA ACA GTA lys glu glu gly pro pro gln ala tyr pro ile gln thr val 421/141 451/151 AAT GGA ACA ACA CAA TAT GTA GCA CTT GAC CCA AAA ATG GTG asn gly thr thr gln tyr val ala leu asp pro lys met val 481/161 TCC ATT TTT ATG GAA AAG GCA AGA GAA GGA TTA GGA GGT GAG ser ile phe met glu lys ala arg glu gly leu gly gly glu 511/171 541/181 GAA GTT CAA TTA TGG TTT ACA GCC TTC TCT GCA AAT TTA ACA glu val gln leu trp phe thr ala phe ser ala asn leu thr 571/191 CCT ACT GAC ATG GCC ACA TTA ATA ATG GCT CGA CCA GGG TGC pro thr asp met ala thr leu ile met ala arg pro gly cys 601/201 GCT GCA GAT AAA GAA ATA TTG GAT GAA AGC TTA AAG CAA TTA ala ala asp lys glu ile leu asp glu ser leu lys gln leu 631/211 661/221 ACA GCA GAA TAT GAT CGC ACG CAT CCC CCT GAT GGT CCT AGA thr ala glu tyr asp arg thr his pro pro asp gly pro arg 691/231 CCA TTA CCC TAT TTT ACT GCA GCA GAA ATC ATG GGT ATA GGA pro leu pro tyr phe thr ala ala glu ile met gly ile gly 721/241 751/251 TTA ACT CAA GAA CAA CAA GCA GAA GCA AGA TTT GCA CCA GCT leu thr gln glu gln gln ala glu ala arg phe ala pro ala 781/261 AGG ATG CAG TGT AGA GCA TGG TAT CTC GAG GCA TTA GGA AAA arg met gln cys arg ala trp tyr leu glu ala leu gly lys 811/271 TTG GCT GCC ATA AAA GCT AAA TCT CCT CGA GCT GTG CAG TTA leu ala ala ile lys ala lys ser pro arg ala val gln leu 841/281 871/291 AGA CAA GGA GCC AAA GAA GAT TAT TCA TCC TTT ATA GAT AGA arg gln gly ala lys glu asp tyr ser ser phe ile asp arg 901/301 TTG TTT GCC CAA ATA GAT CAA GAA CAA AAT ACA GCT GAA GTT leu phe ala gln ile asp gln glu gln asn thr ala glu val 931/311 961/321 AAG TTA TAT CTA AAA CAG TCA TTA AGC ATA GCT AAT GCT AAT lys leu tyr leu lys gln ser leu ser ile ala asn ala asn 991/331 GCA GAC TGC AAA AAG GCA ATG AGT CAT CTT AAG CCA GAA AGT ala asp cys lys lys ala met ser his leu lys pro glu ser 1021/341 ACC CTA GAA GAA AAG TTG AGA GCT TGT CAA GAG ATA GGA TTC thr leu glu glu lys leu arg ala cys gln glu ile gly phe 1051/351 1081/361 CCA GGA TAT AAG ATG CAG CTC TTA GCA GAA GCC CTT ACA AAA pro gly tyr lys met gln leu leu ala glu ala leu thr lys 1111/371 GTT CAA GTA GTA CAA TCA AAA GGA CCA GGA CCA GTG TGT TTT val gln val val gln ser lys gly pro gly pro val cys phe 1141/381 1171/391 AAT TGT AAA AGA CCA GGG CAT CTA GCA AGA CAG TGC AGA GAT asn cys lys arg pro gly his leu ala arg gln cys arg asp 1201/401 GTG AAA AAA TGT AAT AAA TGC GGA AAG CCT GGT CAT TTA GCT val lys lys cys asn lys cys gly lys pro gly his leu ala 1231/411 GCC AAA TGT TGG CAA GGT GGT AAA AAG AAT TCG GGA AAC TGG ala lys cys trp gln gly gly lys lys asn ser gly asn trp 1261/421 1291/431 AAG GCG GGA CGA GCT GCA GCC CCA GTG AAT CAA GTG CAG CAA lys ala gly arg ala ala ala pro val asn gln val gln gln 1321/441 GCA GTA ATG CCA TCT GCA CCT CCA ATG GAG GAG AAA CTA TTG ala val met pro ser ala pro pro met glu glu lys leu leu GAT TTG asp leu (Il) Une telle séquence correspond à l'ADNc de l'ARNm de la protéine gag de la souche WO du VIF. La présente invention a également pour objet un produit de transcription du VIF, caractérisé en ce qu'il est constitué d'un fragment correspondant aux nucléotides 1-2562 de la séquence de formule I. La présente invention a également pour objet un produit de transcription du VIF, caractérisé en ce qu'il est constitué d'un fragment correspondant aux nucléotides 1-1350 de la séquence de formule Il. La présente invention a également pour objet des fragments ou des combinaisons de fragments d'une séquence nucléotidique conforme à l'invention, codant pour un peptide ou un fragment de peptide de la souche WO du VIF, comprenant un épitope apte à induire une réponse immune, i.e. soit produisant une réponse cellulaire, soit produisant des anticorps (neutralisants et/ou protecteurs), lesquels fragments sont spécifiques de souche, du fait de leur variabilité. Parmi lesdits fragments, elle englobe entre autres - un fragment de 141 paires de bases, qui correspond aux nucléotides 76-216, de la séquence de formule I, fragment produisant un peptide dénommé V1 (aminoacides 26-72) - un fragment de 236 paires de bases, qui correspond aux nucléotides 286-522 de la séquence de formule I, fragment produisant un peptide dénommé V2 (aminoacides 96-174) - un fragment de 186 paires de bases, qui correspond aux nucléotides 1081-1266 de la séquence de formule I, fragment produisant un peptide dénommé V3 (aminoacides 361-422) - un fragment de 38 paires de bases, qui correspond aux nucléotides 1354-1491 de la séquence de formule I, fragment produisant un peptide dénommé V4 (aminoacides 452-497) - un fragment de 90 paires de bases, qui correspond aux nucléotides 1621-1710 de la séquence de formule I, fragment produisant un peptide dénommé V5 (aminoacides 541-570) - un fragment de 81 paires de bases, qui correspond aux nucléotides 1756-1836 de la séquence de formule I, fragment produisant un peptide dénommé V6 (aminoacides 586-612) - un fragment de 27 paires de bases, qui correspond aux nucléotides 2128-2154 de la séquence de formule I, fragment produisant un peptide dénommé V7 (aminoacides 710-718) - un fragment de 61 paires de bases, qui correspond aux nucléotides 2293-2334 de la séquence de formule I, fragment produisant un peptide dénommé V8 (aminoacides 765-778) - un fragment de 33 paires de bases, qui correspond aux nucléotides 2494-2526 de la séquence de formule I, fragment produisant un peptide dénommé Vg (aminoacides 832-842). La présente invention a également pour objet des sondes nucléotidiques, caractérisées en ce qu'elles comprennent une séquence nucléotidique ou un fragment de celle-ci conforme à l'invention, éventuellement marqué à l'aide d'un marqueur tel qu'un isotope radioactif, une enzyme appropriée ou toute autre substance non radioactive appropriée. La présente invention a également pour objet des paires d'amorces pour la synthèse d'un ADNc ou d'un ARN de VIF de souche WO, caractérisé en ce que chaque amorce comprend une séquence homologue ou complémentaire d'une séquence nucléotidique conforme à l'invention. De telles amorces permettent notamment la synthèse d'une séquence d'ADN ou d'ARN ou d'un fragment de celle-ci conforme à l'invention et/ou de son brin complémentaire. Au sens de la présente invention, séquence homologue englobe non seulement les séquences identiques aux séquences (I) et (II) ou à un segment de celles-ci, mais également celles n'en différant que par la substitution, la délétion ou l'addition d'un petit nombre de nucléotides, à condition que les séquences ainsi modifiées aient une spécificité d'hybridation équivalente à celle de ces séquences (I) et (II) ou du segment considéré. Au sens de la présente invention, séquence homologue englobe également les séquences dont la position est homologue. De même, on entend par séquence complémentaire, non seulement les séquences strictement complémentaires aux séquences (I) et (Il) ou de leurs segments, mais également des séquences modifiées comme indiqué précédemment, possédant une spécificité d'hybridation équivalente à celle desdites séquences strictement complémentaires. La présente invention a également pour objet des fragments peptidiques, caractérisés en ce qu'ils sont codés par une séquence ou un fragment de séquence nucléotidique conforme à l'invention et en ce qu'ils constituent des zones variables des protéines du VIF. Parmi lesdits fragments peptidiques, elle englobe, comme précisé ci-dessus (voir séquence de formule I) - un fragment incluant un segment de 47 aminoacides, dénommé V1 ; - un fragment incluant un segment de 79 aminoacides, dénommé V2 - un fragment incluant un segment de 62 aminoacides, dénommé V3 - un fragment incluant un segment de 46 aminoacides, dénommé V4 - un fragment incluant un segment de 30 aminoacides, dénommé VS - un fragment incluant un segment de 27 aminoacides, dénommé V6 - un fragment incluant un segment de 9 aminoacides, dénommé V7 - un fragment incluant un segment de 14 aminoacides, dénommé V8 - un fragment incluant un segment de 11 aminoacides, dénommé V9. Lesdits peptides peuvent avantageusement être obtenus soit par clonage, soit par synthèse, notamment par synthèse de Merrifield. Les peptides Vl-V9, conformes à l'invention, permettent notamment de bien différencier les zones variables des zones conservées et autorisent ainsi une différenciation fine des différentes souches de VIF. Au sens de la présente invention le terme fragment peptidique comprend tous les fragments incluant un segment de peptide conforme à l'invention ainsi que les peptides homologues ; on entend par peptide homologue, les fragments peptidiques dont la position et la fonction sont équivalents, au sein de l'enveloppe du VIF (même localisation que celle définie ci-dessus, sur le génome du VIF). La présente invention a également pour objet un vecteur recombinant de clonage et/ou d'expression, caractérisé en ce qu'il comprend une séquence nucléotidique conforme à l'invention. On entend, au sens de la présente invention, par vecteur recombinant, aussi bien un plasmide, un cosmide, qu'un phage. Selon un mode de réalisation avantageux dudit vecteur, il est constitué par un plasmide approprié comprenant une origine de réplication, au moins un marqueur de sélection et une séquence nucléotidique conforme à l'invention, lequel vecteur est un vecteur de clonage. Selon une disposition avantageuse de ce mode de réalisation, ledit vecteur de clonage est constitué par un plasmide capable de se répliquer dans E. coli, dans lequel est inséré une séquence nucléotidique conforme à 1' invention. Dans le cas où l'on introduit la séquence de formule I dans un vecteur Bluescripts SK+, ledit vecteur est dénommé pKSeî Ledit vecteur a été déposé auprès de la Collection Nationale de Microorganismes tenue par l'Institut Pasteur, le 12 juin 1992 sous le n I-1220. Lorsque ladite séquence est introduite dans un vecteur BluescriptX KS+, ledit vecteur est dénommé pKSe. Selon un autre mode de réalisation dudit vecteur, il est constitué par un vecteur recombinant approprié comprenant, en particulier, une origine de réplication dans un microorganisme hôte approprié, notamment une bactérie ou une cellule eucaryote, au moins un gène dont l'expression permet la sélection soit des bactéries, soit des cellules eucaryotes ayant reçu ledit vecteur, un promoteur permettant l'expression des gènes dans lesdites bactéries ou cellules eucaryotes, et dans lequel est insérée une séquence nucléotidique conforme à l'invention, lequel vecteur est un vecteur d'expression d'un peptide, d'un fragment de peptide ou d'une combinaison de fragments de peptides du VIF de souche WO (protéine env ou protéine gag), ayant les propriétés desdites protéines. Avantageusement, ledit vecteur d'expression est constitué par un phage kgtll dans lequel est inséré, en phase au niveau de son site, EcoRI, des fragments de digestion à la DNAse du plasmide pKSeî. La présente invention a, en outre, pour objet un procédé de détection d'une infection à VIF, caractérisé en ce qu'il consiste à détecter un VIF, à l'aide d'au moins une sonde nucléotidique ou un fragment de sonde nucléotidique conforme à l'invention, en mettant en présence l'échantillon à analyser avec ladite/lesdites sondes nucléotidiques, à laquelle/auxquelles se lie 1'ARN génomique ou les produits de transcription du virus d'immunodéficience féline, si de tels produits sont présents dans l'échantillon, la lecture du résultat étant révélée par un moyen approprié, notamment EA, RA, fluorescence. Selon un mode de mise en oeuvre préféré de ce procédé, préalablement à l'hybridation avec lesdites sondes, on amplifie la séquence nucléique à détecter (ARN génomique ou ARN messager du VIF WO) par la méthode d'amplification dite PCR (réaction de polymérisation en chaîne à l'aide d'une polymérase appropriée, notamment la Taq polymérase) en utilisant une paire d'amorces conforme à l'invention. La méthode PCR est notamment décrite par SAIKI et al. dans Science, 1988, 239, 487 ainsi que dans les Demandes de Brevet européen CETUS n 200 362 et n 201 184. La présente invention a, de plus, pour objet un kit, prêt à l'emploi, pour la mise en oeuvre du procédé de détection d'une infection à VIF, caractérisé en ce qu'il comprend outre des quantités utiles de tampons appropriés pour la mise en oeuvre de ladite détection, des doses appropriées d'au moins une sonde et/ou fragment de sonde nucléotidique conforme à l'invention et éventuellement des doses appropriées d'au moins deux amorces conformes à l'invention. La sélection de fragments nucléiques cidessus, définissant des zones variables permet de différencier les souches de VIF, ce qui permet de choisir le vaccin le plus proche de la souche infectante, en cas d'immunothérapie active ou passive, ou de déterminer les souches présentes dans une région, pour le choix d'un vaccin préventif le mieux adapté. La présente invention a en outre pour objet un réactif de différenciation de souche de VIF, caractérisé en ce qu'il est choisi dans le groupe constitué par les fragments V tels que définis ci-dessus. La présente invention a également pour objet un procédé de différenciation de souche de VIF, caracté risé en ce qu'il met en oeuvre au moins un réactif de différenciation tel que défini ci-dessus. Outre les dispositions qui précèdent, l'invention comprend encore d'autres dispositions, qui ressortiront de la description qui va suivre, qui se réfère à des exemples de mise en oeuvre du procédé objet de la présente invention. I1 doit être bien entendu, toutefois, que ces exemples sont donnés uniquement à titre d'illustration de l'objet de l'invention, dont ils ne constituent en aucune manière une limitation. EXEMPLE 1 : séquençage du gène env du virus de 1'immuno- déficience féline WO. a) Echantillons d'ADN Des cellules mononucléaires de sang périphérique (PBMC), obtenues à partir de chats infectés naturellement par l'isolat français WO, présentant un syndrome d'immunodéficience acquise féline, sont co-cultivées avec des cellules mononucléaires de sang périphérique, obtenues à partir de chats dits contrôle négatif (chats SPF), en présence dtinterleukine-2 humaine recombinante (Genzyme, Boston, USA) et de concanavaline A (Sigma) (MORAILLON A. et al., 1992, Vet. Mic., 31, 41-45, In vitro properties and experimental pathogenic effect of three feline immunodeficiency viruses isolated from cats with terminal diseases). L'activité réverse transcriptase (RT) dépendante de Mg++ est plus particulièrement surveillée. Après 15 jours, l'ADN cellulaire total est extrait au phénol (SAMBROOK et al., 1989, Molecular cloning, a laboratory manual), à partir de cultures RT positives et utilisé comme matériel de départ pour l'amplification des gènes du VIF. Ceci permet d'éviter les passages multiples in vitro et l'adaptation à des lignées cellulaires CD4 négatives. b) PCR Les gènes env et gag de la souche WO du virus de l'immunodéficience féline sont respectivement amplifiés en trois et deux fragments chevauchants, en utilisant des amorces synthétiques correspondant à des régions conservées dans les séquences de VIF, isolat Petaluma (TALBOTT et al, 1989) et isolat PPR (PHILIPPS et al., 1990) Les séquences des amorces et les positions (conformément à la numérotation utilisée pour le VIF 34TF10), sont comme suit * env - pour le premier fragment env, dénommé E1, on utilise comme amorce 5', le fragment 5'-GCAACAATAAGAATGG CAGAAGC-3' (6251-6274) et comme amorce 3', le fragment 5' -GTTTAGGGTGACTAGTTAATATGTAAACC-3' (7236-7263) - pour le second fragment env, dénommé E2, on utilise comme amorce 5', le fragment 5'-CAAATCCCACTGAT CAATTATACATTTGG-3' (7236-7263), et comme amorce 3', le fragment 5'-CGTAGTTCATGATCATTATCCTAATTTTC-3' (82698298) - en ce qui concerne le fragment dénommé E3, on utilise comme amorce 5', le fragment 5'-GCATCAAGTAC TAGTAATAGGATTAAAAG-3' (8269-8298), et comme amorce 3', le fragment 5' -CTTTTTCTCCTCCTTACTACTTC-3' (8809-8833) * gag - pour le premier fragment gag, dénommé G1, on utilise comme amorce 5', le fragment 5'-GGAGAGATTCTACAG CAACATGGGG-3' (608-632) et comme amorce 3', le fragment 5' -GCCAATTTTCCTAATGCCTCGAGATACCATGC-3' (1398-1429) - pour le second fragment gag, dénommé G2, on utilise comme amorce 5', le fragment 5'-GCATGGTATCTCGAGG CATTAGGAAAATTGGC63' (1398-1429) et comme amorce 3', le fragment 5' -AATTTACAAATCCAATAGTTTCTCCTCC-3' (1954-2123). Les oligonucléotides correspondant à l'amorce 5' du fragment E2 contiennent un site de restriction BclI et l'oligonucléotide correspondant à l'amorce 3' du fragment E2 contient un site SpeI, qui permet la reconstruction d'un clone env complet. Cette PCR comprend 38 cycles, incluant chacun une dénaturation à 94 C pendant une minute, une hybridation à 55 C pendant une minute et une élongation à 72 C pendant une minute, avec 1 Rg d'ADN génomique total, 150 pmol de chaque amorce et 20 nmol de chaque désoxynucléotide triphosphate dans un tampon comprenant du Tris 10 mM, du KC1 50 mM et du MgC12 2 mM. c) Clonaae et sécuencape Un vecteur M13mp8 est digéré par l'enzyme SmAI, de manière à pouvoir y insérer les fragments PCR obtenus ci-dessus [par exemple, pour le gène env frag ments de la séquence de formule I, E1 (nucléotides 1977), E2 (978-2016) et E3 (2017-2562)]. Le vecteur recombinant obtenu est utilisé pour transformer des E. coli JM101 compétents. Les clones recombinants sont détectés par une hybridation in situ avec les fragments PCR correspondants, marqués au phosphore 32. Le séquençage de 1'ADN simple brin à partir de phages recombinants est réalisé par la méthode enzymatique par les didésoxynucléotides, avec un kit de séquen çage Séquenases 2.0 DNA, utilisant, comme amorces, des oligonucléotides complémentaires au vecteur (17 mers, amorce universelle) ou l'insert VIF. Pour reconstituer le gène env complet, les trois fragments (E1, E2 et E3) sont préparés à partir du vecteur recombinant M13mp8 tel que défini ci-dessus, en utilisant les sites de restriction présents dans la séquence de liaison multisites du M13mp8 ou dans les amorces d'amplification : E1, HindIII-BclI ; E2, BclI SpeI ; E3, SpeI-EcoRI. Les trois fragments sont ligaturés dans un vecteur KS+ Bluescripte (Stratagène), digéré par les enzymes HindIII et EcoRI, en aval du promoteur T3. La construction obtenue est dénommée pKSe. Lesdits fragments peuvent également être ligaturés dans un vecteur SK+ Bluescripts (Stratagène), digéré par les enzymes HindIII et EcoRI, en aval du promoteur T7. Cette dernière construction, dénommée pKSel, permet la transcription du gène env dans des cellules de mammifère exprimant le gène de 1'ARN polymérase du phage T7, alors que la construction pKSe permet la transcription du gène env dans des cellules de mammifère exprimant le gène de l'ARN polymérase du phage T3. d) Analvse des séquences d'aminoacides corresondantes : L'analyse des séquences est réalisée sur ordinateur avec le programme "Salsa". Les multiples alignements comparant la séquence VIF WO avec d'autres séquences de VIF et notamment VIF34TF10 (USA) (TALBOTT et al., 1989), VIF 14 (USA) (OLMSTED et al., 1989), VIF PPR (USA) (PHILLIPS et al., 1990), VIF TM2/GVEPX (JAPON) (KIYOMASU et al., 1991 MIYAZAWA et al.), VIF Z1 et VIF Z2 (SUISSE) (MORIKAWA et al., 1991), VIF l9Kl et VIF l9K2 (Pays Bas) (SIEBELINK K.M.J. et al., J.Virol., 1992, 66, 1091-1097) obtenus à partir de la banque de gènes "GenBank", sont illustrés à la figure la et lb, dans lequelles il apparaît que les variations sont, pour la plupart, situées sur le gène env et sont, en référence auxdites séquences en aminoacides - séquence FIV WO/séquence FIVZ2 : 8,9 % - séquence FIV WO/séquence isolat Petaluma : 10,2-10,9 % - séquence FIV WO/ séquence FIVl9 : 10,8 % - séquence FIV WO/séquence FIVZ1 : 11 % - séquence FIV WO/séquence FIVPPR : 13,6 % - séquence FIV WO/séquence FIVGVEPX : 19 %. Les séquences variables conformes à linven- tion sélectionnées (V1 à Vg, en référence à leurs séquences en aminoacides) sont récapitulées dans le Tableau ci-après ; de manière avantageuse, la sélection de ces fragments permet de définir, par déduction, des zones conservées chez l'ensemble des VIF, et permet de bien mettre en valeur les zones variables et les zones conservées ; ce qui permet de définir des réactifs universels de détection du VIF, des réactifs sélectifs et de faire bénéficier les animaux de la meilleure protection possible Séquence Séquence acides nucléiques aminoacides V1 76- 216 26- 72 V2 286- 522 96-174 V3 1081-1266 361-422 V4 1354-1491 452-497 V5 1621-1710 541-570 V6 1756-1836 586-612 V7 2128-2154 710-718 V8 2293-2334 765-778 Vg 2494-2526 832-842 e) Transcription et traduction in vitro Pour la synthèse in vitro de 1'ARN, les deux constructions pKSe et pKSel sont utilisées, la transcription étant effectuée dans le premier cas, par la polymérase T3 et dans le deuxième cas, par la polymérase T7, comme précisé ci-dessus. 1 Rg d'ADN des plasmides pKSel et pKSe est linéarisé, en utilisant le site de restriction EcoRI, présent dans la séquence de liaison multisites du vecteur, en aval du gène inséré. Le plasmide linéarisé et traité à la protéinase K est transcrit, en utilisant 1'ARN polymérase T3 pour pKSe et 1'ARN polymérase T7 pour pKSel, conformément au protocole fourni par le fabricant (Stratagène). Après traitement à la DNase et extraction au phénol, le produit de transcription est précipité à méthanol, en présence de 5 g dARNt dE. coli, remis en suspension dans 15 W1 d'eau traitée au DEPC et stocké à -70'C. La taille des transcrits est évaluée par électrophorèse sur gel d'agarose à 1 % dans un tampon phosphate 10 mM, pH 7, après une dénaturation au glyoxal /diméthyl sul foxide. Environ 10 ng de I'ARN transcrit in vitro est traduit pendant 30 minutes à 30'C, dans un volume final de 12,5 ig contenant 6 Fg de lysat de réticulocytes de lapin (RRL) (Promega), 0,25 1 d'un mélange d'aminoacides dépourvus de méthionine (Promega) et 1,75 W1 de méthionine marquée au soufre 35 en l'absence (-M) ou en présence (+M) de membranes microsomales (1 ou 2 1), pour permettre la glycosylation des protéines (figure 2A). Les 1 ou 2 1 de membranes microsomales pancréatiques de chien (Promega) sont ajoutés par 12,5 A1 de mélange de réaction.Pour les essais de cinétique, 3 1 d'aliquots sont prélevés à des moments différents (15, 30, 60 et 90 minutes, 4 heures). Les échantillons sont stockés à -70 C. Les études d'inhibition en présence de castanospermine, sont réalisées en incubant le mélange de traduction contenant les membranes microsomales (2 1 pour 12,5 1 de mélange) avec de la castanospermine 5 mM (concentration finale) (Sigma), préparée extemporanément dans de l'eau traitée au DEPC, à 30'C pendant 15 minutes, avant l'addition d'ARN. Les produits de traduction sont dénaturés par ébullition dans un tampon de Laemmli et évalués par électrophorèse (SDS-PAGE, gradient 5-10 %). Des marqueurs du poids moléculaire sont également utilisés (BIORAD H.M.W. ou marqueurs Rainbow). Après l'électrophorèse, les gels sont fixés, traités et autoradiographiés sur un film Kodak XAR-5. Dans ces conditions, 1'ARN transcrit in vitro à partir du plasmide pKSe (contenant le gène env de VIF WO complet) migre, dans un gel d'agarose dans des conditions dénaturantes, en une seule bande d'approximativement 2,5 kb, correspondant à la dimension attendue. Après traduction de ce transcrit dans un lysat de réticulocytes de lapin (RRL), le produit obtenu en plus grande quantité, a un poids moléculaire apparent de 90 kDa (figure 2A), compatible avec le poids moléculaire calculé du polypeptide codé, déduit de la séquence (98,079 kDa). La traduction de 1'ARN en présence de microsomes pancréatiques de chien, qui permet une N-glycosylation de la chaîne polypeptidique obtenue, fournit deux produits de poids moléculaires élevés, respectivement de 150 et 130 kDa (figure 2A). Pour analyser la relation entre les deux produits glycosylés obtenus, on réalise des expérimentations étalées dans le temps ; on réalise également, comme précisé ci-dessus, la traduction en présence de castanospermine, un inhibiteur de lla-glucosi- dase I du réticulum endoplasmique rugueux, de manière à déterminer si le produit de poids moléculaire le plus bas pourrait dériver de la glycoprotéine de 150 kDa par coupure des sucres pendant la glycosylation.La cinétique de la maturation de l'enveloppe protéinique montre l'apparition, au bout de 15 minutes, des deux produits glycosylés, qui augmente quantitativement jusqu'à 90 minutes d'incubation (figure 2B). En présence de castanospermine, les deux molécules migrent à un poids moléculaire plus élevé, respectivement de 160 et 145 kDa, et restent non modifiées pendant les expérimentations étalées dans le temps (figure 2B). Ces expériences montrent qu'en l'absence de membranes microsomales qui permettent la glycosylation, on observe un produit de poids moléculaire apparent de 90 kDa, correspondant ainsi au précurseur d'enveloppe non glycosylé. Après addition de membranes microsomales, on observe deux espèces glycosylées de poids moléculaires respectifs 150 kDa et 130 kDa, confirmant la glycosylation importante de ce peptide. La séquence env de WO contient 21 sites N-glycosylation potentiels, qui sont probablement utilisés complètement comme le suggère les poids moléculaires des produits de traduction, en présence de membranes microsomales. f) Immunocrécloltatlon : Des anti-sérums de VIF sont obtenus à partir de deux chats SPF (chats dépourvus de pathogènes spécifiques), inoculés avec des isolats WO ou Petaluma et à partir également de deux chats infectés naturellement, mais séronégatifs vis-à-vis du virus de la leucémie féline. Des sérums de contrôle sont obtenus à partir des deux chats SPF. Pour l'étape de la préabsorption, un stock de sérums de chats SPF est utilisé. Des anticorps polyclonaux de lapin dirigés contre des peptides synthétiques tels que décrits dans la Demande de Brevet fran çais n"90 14519 sont également utilisés, à des concentrations de 20 mg/ml.Le premier de ces anticorps (P100), d'une longueur de 21 aminoacides, est situé à l'extrémité C terminale de la glycoprotéine de surface du VIF et inclut le site de coupure entre la glycoprotéine de surface (SU) et la glycoprotéines transmembranaire (TM) ; le deuxième anticorps (P102), d'une longueur de 25 aminoacides, correspond à l'extrémité C terminale de la glycoprotéine TM du VIF. Des sérums de lapin préimmunisés sont utilisés pour l'étape de préabsorption et comme contrôle négatif dans les essais d'immunoprécipitation. Des aliquots de produits de traduction in vitro (approximativement 100 000 cpm, déterminés après précipitation à l'acide perchlorique) sont dilués dans 200 1 d'un tampon RIPA (Triton X-100 1 %, sodium désoxycholate 0,5 %, NaCl 150 mM, EDTA 2 mM dans Tris-HCl pH 7,5, 50 mM). Les réactions sont réalisées à 4C. Les échantillons sont préabsorbés pendant 30 minutes avec 4 1 d'un pool de sérums de chats SPF ou avec un sérum de lapin préimmunisé et précipités avec 50 1 de protéine A Sépharose CL-4B (PrA, Pharmacia).Les surnageants sont alors incubés pendant une nuit avec 4 1 de sérum de chats infectés, de sérum de chats SPF ou d'anticorps po lyclonaux de lapin anti-peptide synthétique tel que défini ci-dessus. 50 1 de PrA sont ajoutés et incubés pendant 1 heure. Après 4 lavages dans un tampon RIPA, les culots des immunocomplexes-PrA sont élués par ébullition pendant 5 minutes dans 50 > 1 de tampon Laemmli. Les échantillons sont analysés sur un gradient SDS-PAGE 510 %. Des cellules FL-4, dérivées des cellules mononucléaires de sang périphériques (PBMC) infectées par une souche étal puma et produisant spontanément le VIF (Yamamoto,l991), sont lavées dans du PBS froid et lysées dans un tampon RIPA. Les lysats cellulaires sont clarifiés par centrifugation à 17000g pendant 30 min. Les produits de traduction env mature obtenus in vitro, sont soumis à une immunoprécipitation (figure 3) avec les différents sérums d'animaux précités (sérums SPF, inoculés expérimentalement avec des isolats WO et Petaluma (bandes 1 et 4), sérums de chats infectés naturellement (bandes 2 et 5), sérums de chats SPF non infectés, comme contrôle négatif (bande 3)). Cette figure 3 illustre les résultats obtenus ; les deux produits glycosylés (150 kDa et 130 kDa) sont immunoprécipités par les sérums de chats infectés, le produit de 130 kDa étant le produit majeur. La bande de 90 kDa représente probablement un matériel non glycosylé résiduel. Le produit de poids moléculaire le plus bas, peut être considéré comme un produit de transcription ou de traduction partielle. Aucune bande n'est détectée dans les sérums de chats SPF et non infectés La figure 3b illustre, en comparaison, l'immunoprécipitation de protéines VIF marquées métaboliquement, obtenues à partir de cellules FL-4. Les bandes a, b et c représentent le résultat obtenu avec des sérums de chats SPF non infectés, des sérums de chats infectés avec une souche Petaluma et des sérums de chats infectés par le VIF WO. Les bandes d, e et f correspondent à un sérum de lapin préimmune, des sérums de lapin polyclonaux dirigés contre le peptide C-terminal de la protéine SU (de l'aminoacide 6 à la portion TM(P100)) et des sérums de lapin polyclonaux dirigés contre un peptide C-terminal de la protéine TM (P102).Les bandes b et c permettent la détection de deux protéines (150 kDa et 115-125 kDa), qui correspondent à la protéine précurseur d'enveloppe et à la glycoprotéine SU, respectivement, comme le confirme l'immunoprécipitation avec les deux anticorps de lapin dirigés contre les peptides incluant le site de clivage SU-TM ou correspondant à la partie C-terminale du précurseur env (bandes e et f). EXEMPLE 2 : Test de dépistage d'une infection à VIF. On hybride in situ les fragments d'acide nucléique isolés à partir d'un échantillon à tester et transféré sur un filtre de nitrocellulose, avec un fragment d'acide nucléique conforme à l'invention (sonde marquée avec du dATP 32P), à 58 C pendant une nuit, après blocage des liaisons non spécifiques, avec une solution de Denhardt. Un tel procédé, mis en oeuvre avec un pool de fragments dits variables (Vl-V9) permet une différenciation spécifique de souche de VIF. Ainsi que cela ressort de ce qui précède, l'invention ne se limite nullement à ceux de ses modes de mise en oeuvre, de réalisation et d'application qui viennent d'être décrits de façon plus explicite ; elle en embrasse au contraire toutes les variantes qui peuvent venir à l'esprit du technicien en la matière, sans s'écarter du cadre, ni de la portée de la présente invention. REVENDICATIONS 1) Séquences nucléotidiques issues de 1'ARN génomique du virus de l'immunodéficience féline (VIF), caractérisées en ce qu'elles comprennent au moins un fragment d'un gène présentant des zones hypervariables, choisi dans le groupe constitué par le gène codant pour la protéine env de la souche WO du VIF et le gène codant pour la protéine gag de la souche WO du VIF. 2 ) Séquence selon la revendication 1, caractérisée en ce qu'elle comprend la séquence en nucléotides et la séquence déduite en amino-acides de formule I ciaprès, qui correspond au gène env du VIF, souche WO 1/1 31/11 atg gca gaa ggg ttt gca gct aat aga caa tgg ata ggg cca Met ala glu gly phe ala ala asn arg gln trp ile gly pro 61/21 gaa gaa gct gaa gag cta tta gat ttt gat ata gca ata caa glu glu ala glu glu leu leu asp phe asp ile ala ile gln 91/31 121/41 atg aat gaa gaa ggg cca cta aat cca gga gta aac cca ttt met asn glu glu gly pro leu asn pro gly val asn pro phe 151/51 agg gta cct gga ata aca gaa gca gaa aag 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asn cys ser leu gln asn gly phe 1531/511 act atg aag gta gat gac ctt atc atg cat ttt aat aag aca thr met lys val asp asp leu ile met his phe asn lys thr 1561/521 1591/531 aaa gct gta gag atg tat aac att gct gga aat tgg tct tgt lys ala val glu met tyr asn ile ala gly asn trp ser cys 1621/541 aaa tct gac ttg cca cca aca tgg ggg tat atg aat tgt aat lys ser asp leu pro pro thr trp gly tyr met asn cys asn 1651/551 tgt aca aat agt aca aat agt ggt act ggt ata agg atg gca cys thr asn ser thr asn ser gly thr gly ile arg met ala 1681/561 1711/571 tgt ccc aga aat caa ggc atc tta aga aat tgg tat aac cca cys pro arg asn gln gly ile leu arg asn trp tyr asn pro 1741/581 gta gca gga tta aga caa tcc tta gaa aag tat caa gtt gta val ala gly leu arg gln ser leu glu lys tyr gln val val 1771/591 1801/601 aaa caa cca gat tat tta gtg gta cca ggg gaa gtc atg gaa lys gln pro asp tyr leu val val pro gly glu val met glu 1831/611 tat aaa cct aga agg aaa aga gca gct att cat gtt atg tta tyr lys pro arg arg lys arg ala ala ile his val met leu 1861/621 gct ctt gca aca gta tta tct atg gct gga gca ggg acg ggg ala leu ala thr val leu ser met ala gly ala gly thr gly 1891/631 1921/641 gct act gct ata ggg atg gta aca caa tat caa caa gtg ctg ala thr ala ile gly met val thr gln tyr gln gln val leu 1951/651 gca act cat caa gaa gct ata gaa aag gtg act gaa gcc tta ala thr his gln glu ala ile glu lys val thr glu ala leu 1981/661 2011/671 aag ata aac aac tta aga tta gtt aca tta gag cat caa gta lys ile asn asn leu arg leu val thr leu glu his gln val 2041/681 cta gta ata gga tta aaa gta gaa gct atg gaa aaa ttt tta leu val ile gly leu lys val glu ala met glu lys phe leu 2071/691 tat aca gct ttc gct atg caa gaa tta gga tgt aat caa aat tyr thr ala phe ala met gln glu leu gly cys asn gln asn 2101/701 2131/711 caa ttc ttc tgt aaa gtc cct tct gca ttg tgg gaa cgg tat gln phe phe cys lys val pro ser ala leu trp glu arg tyr 2161/721 aat atg act ata aat caa aca ata tgg aat cat gga aat ata asn met thr ile asn gln thr ile trp asn his gly asn ile 2191/731 2221/741 act ttg ggg gaa tgg tat aac caa aca aaa gat tta caa caa thr leu gly glu trp tyr asn gln thr lys asp leu gln gln 2251/751 agg ttt tat gaa ata ata atg gac ata gaa caa aat aat gta arg phe tyr glu ile ile met asp ile glu gln asn asn val 2281/761 caa ggg aaa aaa ggg cta caa caa ctc cag gag tgg gaa gat gln gly lys lys gly leu gln gln leu gln glu trp glu asp 2311/771 2341/781 tgg gta gga tgg ata gga aat att cca caa tat tta aag gga trp val gly trp ile gly asn ile pro gln tyr leu lys gly 2371/791 cta ttg gga ggt atc ttg gga ata gga tta gga atg tta tta leu leu gly gly ile leu gly ile gly leu gly met leu leu 2401/801 2431/811 ttg atc tta tgt tta cct aca ttg gtt gat tgt ata aga aat leu ile leu cys leu pro thr leu val asp cys ile arg asn 2461/821 tgt atc cac aag ata ctg gga tac aca gta att gca atg cct cys ile his lys ile leu gly tyr thr val ile ala met pro 2491/831 gaa gta gaa gaa gaa gaa ata caa cca caa atg gaa ttg agg glu val glu glu glu glu ile gln pro gln met glu leu arg 2521/841 2551/851 aga aat ggt agg caa tgt ggc atg tct gaa aaa gag gag gaa arg asn gly arg gln cys gly met ser glu lys glu glu glu tga tga OPA OPA (I) 3 ) Séquence selon la revendication 1, caractérisée en ce qu'elle comprend la séquence en nucléotides et la séquence déduite en amino-acides de formule II ciaprès, qui correspond au gène gag du VIF, souche WO 1/1 31/11 ATG GGG AAC GGA CAG GGG CGA GAT TGG AAA ATG GCC ATT AAG Met gly asn gly gln gly arg asp trp lys met ala ile lys 61/21 AGA TGC AGT AAT GGT GCT GTA GGA GTA GGG CGC AAG AGT AAA arg cys ser asn gly ala val gly val gly gly lys ser lys 91/31 121/41 AAA TTT GGA GAA GGG AAT TTC AGA TGG GCC ATC AGA ATG GCT lys phe gly glu gly asn phe arg trp ala ile arg met ala 151/51 AAC GTA TCT ACA GGA CGA GAA CCT GGT GAT ATA CCA GAG ACT asn val ser thr gly arg glu pro gly asp ile pro glu thr 181/61 TTA GAT CAA CTA AGG TTG GTT ATT TGC GAT TTA CAA GAG AGA leu asp gln leu arg leu val ile cys asp leu gln glu arg 211/71 241/81 AGA GAA AAA TTT GGA TCT AGT AAA GAA ATT GAC ATG GCA ATT arg glu lys phe gly ser ser lys glu ile asp met ala ile 271/91 GCT GCA TTA AAA GTC TTT GCA GTA GTG GGA CTT TTA AAT ATG ala ala leu lys val phe ala val val gly leu leu asn met 301/101 331/111 ACA GTG TCT ACT GCT GCT GCA GCT GAA AAT ATG TAT ACT CAG thr val ser thr ala ala ala ala glu asn met tyr thr gln 361/121 ATG GGT TTA GAC ACC AGA CCA TCT ACA AAA GAG GCA GGA GGA met gly leu asp thr arg pro ser thr lys glu ala gly gly 391/131 AAA GAG GAA GGC CCT CCA CAG GCA TAT CCT ATT CAA ACA GTA lys glu glu gly pro pro gln ala tyr pro ile gln thr val 421/141 451/151 AAT GGA ACA ACA CAA TAT GTA GCA CTT GAC CCA AAA ATG GTG asn gly thr thr gln tyr val ala leu asp pro lys met val 481/161 TCC ATT TTT ATG GAA AAG GCA AGA GAA GGA TTA GGA GGT GAG ser ile phe met glu lys ala arg glu gly leu gly gly glu 511/171 541/181 GAA GTT CAA TTA TGG TTT ACA GCC TTC TCT GCA AAT TTA ACA glu val gln leu trp phe thr ala phe ser ala asn leu thr 571/191 CCT ACT GAC ATG GCC ACA TTA ATA ATG GCT CGA CCA CGC TGC pro thr asp met ala thr leu ile met ala arg pro gly cys 601/201 GCT GCA GAT AAA GAA ATA TTG GAT GAA AGC TTA AAG CAA TTA ala ala asp lys glu ile leu asp glu ser leu lys gln leu 631/211 661/221 ACA GCA GAA TAT GAT CGC ACG CAT CCC CCT GAT GGT CCT AGA thr ala glu tyr asp arg thr his pro pro asp gly pro arg 691/231 CCA TTA CCC TAT TTT ACT GCA GCA GAA ATC ATG GGT ATA GGA pro leu pro tyr phe thr ala ala glu ile met gly ile gly 721/241 751/251 TTA ACT CAA GAA CAA CAA GCA GAA GCA AGA TTT GCA CCA GCT leu thr gln glu gln gln ala glu ala arg phe ala pro ala 781/261 AGG ATG CAG TGT AGA GCA TGG TAT CTC GAG GCA TTA GGA AAA arg met gln cys arg ala trp tyr leu glu ala leu gly lys 811/271 TTG GCT GCC ATA AAA GCT AAA TCT CCT CGA GCT GTG CAG TTA leu ala ala ile lys ala lys ser pro arg ala val gln leu 841/281 871/291 AGA CAA GGA GCC AAA GAA GAT TAT TCA TCC TTT ATA GAT AGA arg gln gly ala lys glu asp tyr ser ser phe ile asp arg 901/301 TTG TTT GCC CAA ATA GAT CAA GAA CAA AAT ACA GCT GAA GTT leu phe ala gln ile asp gln glu gln asn thr ala glu val 931/311 961/321 AAG TTA TAT CTA AAA CAG TCA TTA AGC ATA GCT AAT GCT AAT lys leu tyr leu lys gln ser leu ser ile ala asn ala asn 991/331 GCA GAC TGC AAA AAG GCA ATG AGT CAT CTT AAG CCA GAA AGT ala asp cys lys lys ala met ser his leu lys pro glu ser 1021/341 ACC CTA GAA GAA AAG TTG AGA GCT TGT CAA GAG ATA GGA TTC thr leu glu glu lys leu arg ala cys gln glu ile gly phe 1051/351 1081/361 CCA GGA TAT AAG ATG CAG CTC TTA GCA GAA GCC CTT ACA AAA pro gly tyr lys met gln leu leu ala glu ala leu thr lys 1111/371 GTT CAA GTA GTA CAA TCA AAA GGA CCA GGA CCA GTG TGT TTT val gln val val gln ser lys gly pro gly pro val cys phe 1141/381 1171/391 AAT TGT AAA AGA CCA GGG CAT CTA GCA AGA CAG TGC AGA GAT asn cys lys arg pro gly his leu ala arg gln cys arg asp 1201/401 GTG AAA AAA TGT AAT AAA TGC GGA AAG CCT GGT CAT TTA GCT val lys lys cys asn lys cys gly lys pro gly his leu ala 1231/411 GCC AAA TGT TGG CAA GGT GGT AAA AAG AAT TCG GGA AAC TGG ala lys cys trp gln gly gly lys lys asn ser gly asn trp 1261/421 1291/431 AAG GCG GGA CGA GCT GCA GCC CCA GTG AAT CAA GTG CAG CAA lys ala gly arg ala ala ala pro val asn gln val gln gln 1321/441 GCA GTA ATG CCA TCT GCA CCT CCA ATG GAG GAG AAA CTA TTG ala val met pro ser ala pro pro met glu glu lys leu leu GAT TTG asp leu (Il) 4 ) Produit de transcription du VIF, caractérisé en ce qu'il est constitué par un fragment correspondant aux nucléotides 1-2562 de la séquence de formule I selon la revendication 2. 5 ) Produit de transcription du VIF, caractérisé en ce qu'il est constitué par un fragment correspondant aux nucléotides 1-1350 de la séquence de formule II selon la revendication 3. 6 ) Fragments ou combinaisons de fragments d'une séquence nucléotidique selon l'une quelconque des revendications 1 à 5, caractérisé en ce qu'il code pour un peptide ou un fragment de peptide de la souche WO du VIF, comprenant un épitope ayant la capacité d'induire une réponse immune, lesquels fragments sont spécifiques de souche. 7 ) Fragment selon la revendication 6, caractérisé en ce qu'il comprend 141 paires de bases et en ce qu'il correspond aux nucléotides 76-216, de la séquence de formule I. 8 ) Fragment selon la revendication 6, caractérisé en ce qu'il comprend 236 paires de bases et en ce qu'il correspond aux nucléotides 286-522 de la séquence de formule I. 9 ) Fragment selon la revendication 6, caractérisé en ce qu'il comprend 186 paires de bases et en ce qu'il correspond aux nucléotides 1081-1266 de la séquence de formule I. 10-) Fragment selon la revendication 6, caractérisé en ce qu'il comprend 38 paires de bases et en ce qu'il correspond aux nucléotides 1354-1491 de la séquence de formule I. 11') Fragment selon la revendication 6, caractérisé en ce qu'il comprend 90 paires de bases et en ce qu'il correspond aux nucléotides 1621-1710 de la séquence de formule I. 12 ) Fragment selon la revendication 6, caractérisé en ce qu'il comprend 81 paires de bases et en ce qu'il correspond aux nucléotides 1756-1836 de la séquence de formule I. 13') Fragment selon la revendication 6, caractérisé en ce qu'il comprend 27 paires de bases et en ce qu'il correspond aux nucléotides 2128-2154 de la séquence de formule I. 14-) Fragment selon la revendication 6, caractérisé en ce qu'il comprend 61 paires de bases et en ce qu'il correspond aux nucléotides 2293-2334 de la séquence de formule I. 15-) Fragment selon la revendication 6, caractérisé en ce qu'il comprend 33 paires de bases et en ce qu'il correspond aux nucléotides 2494-2526 de la séquence de formule I. 16-) Sondes nucléotidiques, caractérisées en ce qu'elles comprennent une séquence nucléotidique ou un fragment de celle-ci selon l'une quelconque des revendications 1 à 15, éventuellement marqué à l'aide d'un marqueur tel qu'un isotope radioactif, une enzyme appropriée ou toute autre substance non radioactive appropriée. 17-) Paires d'amorces pour la synthèse d'un ADNc ou d'un ARN de VIF de souche WO, caractérisé en ce que chaque amorce comprend une séquence homologue ou complémentaire d'une séquence nucléotidique selon l'une quelconque des revendications 1 à 15. 18-) Fragments peptidiques, caractérisés en ce qu'ils sont codés par un fragment de séquence nucléotidique sqelon l'une quelconque des revendications 1 à 3 et en ce qu'ils constituent des zones variables des protéines du VIF. 19 ') Fragment selon la revendication 18, caractérisé en ce qu'il inclut un segment de 47 aminoacides, dénommé V1, et correspondant aux positions d'amino-acides 26-72 de la séquence de formule I. 20') Fragment selon la revendication 18, caractérisé en ce qu'il inclut un segment de 79 aminoacides, dénommé V2, et correspondant aux positions d'amino-acides 96-174 de la séquence de formule I. 21-) Fragment selon la revendication 18, caractérisé en ce qu'il inclut un segment de 62 aminoacides, dénommé V3, et correspondant aux positions d'amino-acides 361-422 de la séquence de formule I. 22 ) Fragment selon la revendication 18, caractérisé en ce qu'il inclut un segment de 46 aminoacides, dénommé V4, et correspondant aux positions d'amino-acides 452-497 de la séquence de formule I. 23 ) Fragment selon la revendication 18, caractérisé en ce qu'il inclut un segment de 30 aminoacides, dénommé V5, et correspondant aux positions d'amino-acides 541-570 de la séquence de formule I. 24 ) Fragment selon la revendication 18, caractérisé en ce qu'il inclut un segment de 27 aminoacides, dénommé V6, et correspondant aux positions d'amino-acides 586-612 de la séquence de formule I. 25 ) Fragment selon la revendication 18, caractérisé en ce qu'il inclut un segment de 9 aminoacides, dénommé V7, et correspondant aux positions d'amino-acides 710-718 de la séquence de formule I. 26 ) Fragment selon la revendication 18, caractérisé en ce qu'il inclut un segment de 14 aminoacides, dénommé V8, correspondant aux positions d'aminoacides 765-778 de la séquence de formule I. 27 ) Fragment selon la revendication 18, caractérisé en ce qu'il inclut un segment de 11 aminoacides, dénommé V9, et correspondant aux positions d'amino-acides 832-842 de la séquence de formule I. 28 ) Vecteur recombinant de clonage et/ou d'expression, caractérisé en ce qu'il comprend une séquence nucléotidique selon l'une quelconque des revendications 1 à 15. 29 ) Vecteur selon la revendication 28, caractérisé en ce qu'il est constitué par un plasmide comprenant une origine de réplication, au moins un marqueur de sélection et une séquence nucléotidique selon l'une quelconque des revendications 1 à 15, lequel vecteur est un vecteur de clonage. 30') Vecteur selon la revendication 29, caractérisé en ce que ledit vecteur de clonage est constitué par un plasmide capable de se répliquer dans E. coli, dans lequel est inséré une séquence nucléotidique selon l'une quelconque des revendications 1 à 15. 31-) Vecteur selon la revendication 30, caractérisé en ce qu'il a été déposé auprès de la Collection Nationale de Microorganismes tenue par l'Institut Pasteur, le 12 juin 1992 sous le n I-1220 et est dénommé pKSel. 32 ) Vecteur selon la revendication 28, caractérisé en ce qu'il est constitué par un vecteur recombinant comprenant une origine de réplication dans un microorganisme hôte approprié, notamment une bactérie ou une cellule eucaryote, au moins un gène dont l'expression permet la sélection soit des bactéries, soit des cellules eucaryotes ayant reçu ledit vecteur, un promoteur permettant l'expression des gènes dans lesdites bactéries ou cellules eucaryotes, et dans lequel est insérée une séquence nucléotidique selon l'une quelconque des revendications 1 à 15, lequel vecteur est un vecteur d'expression d'un peptide, d'un fragment de peptide ou d'une combinaison de fragments de peptides du VIF de souche WO (protéine env ou protéine gag), ayant les propriétés desdites protéines 33 ) Vecteur selon la revendication 32, caractérisé en ce qu'il est constitué par un phage kgtll dans lequel est inséré, en phase au niveau de son site, EcoRI, des fragments de digestion à la DNAse du plasmide pKSeî. 34 ) Procédé de détection d'une infection à VIF, caractérisé en ce qu'il consiste à détecter un VIF, à l'aide d'au moins une sonde nucléotidique ou un fragment de sonde nucléotidique selon la revendication 16, en mettant en présence l'échantillon à analyser avec ladite/lesdites sondes nucléotidiques, à laquelle/ auxquelles se lie 1'ARN génomique ou les produits de transcription du virus d'immunodéficience féline, si de tels produits sont présents dans l'échantillon, la lec ture du résultat étant révélée par un moyen approprié, notamment EA, RA, fluorescence. 35 ) Procédé selon la revendication 34, caractérisé en ce que préalablement à l'hybridation avec lesdites sondes, on amplifie la séquence nucléique à détecter (ARN génomique ou ARN messager du VIF WO) par la méthode d'amplification dite PCR (réaction de polymérisation en chaîne à l'aide d'une polymérase appropriée, notamment la Taq polymérase) en utilisant une paire d'amorces selon la revendication 17. 36 ) Kit, prêt à l'emploi, pour la mise en oeuvre du procédé de détection d'une infection à VIF selon la revendication 35, caractérisé en ce qu'il comprend outre des quantités utiles de tampons appropriés pour la mise en oeuvre de ladite détection, des doses appropriées d'au moins une sonde et/ou fragment de sonde nucléotidique selon la revendication 16 et éventuellement des doses appropriées d'au moins deux amorces selon la revendication 17. 37 ) Réactif de différenciation de souche de VIF, caractérisé en ce qu'il est choisi dans le groupe constitué par les fragments V selon l'une quelconque des revendications 18 à 27. 38 ) Procédé de différenciation de souche de VIF, caractérisé en ce qu'il met en oeuvre au moins un réactif de différenciation selon la revendication 37.