Brevet FR2677250A1 — publié le 19921211

La présente invention a pour objet des compositions pharmaceutiques contenant de 1 t adenosine-5-triphosphate disodique (ATP) utiles pour le traitement des affections des voies aériennes et de la mucoviscidose. Plusieurs types cellulaires, notamment les cellules épithéliales, expriment des récepteurs pour l'ATP extracellulaire. L'activation de ces récepteurs s'accompagne de modifications du taux de calcium intracellulaire, médiateur et régulateur de multiples fonctions cellulaires épithéliales. Ainsi, des concentrations micromolaires d'ATP sont capables d'entraîner une stimulation rapide de la fréquence des battements ciliaires des cellules épitheliales bronchiques (Girard P. Kennedy J. Calcium regulation of ciliary activity in rabbit tracheal epithelial explants and outgrowth. Eur. J. Cell Biol., 1986, 40 : 203-205). Cette action semble être liée à une augmentation du Ca++ intracellulaire (Villalon M., Hinds T.R. and Verdugo P. Intracellular Ca++ increases in respiratory ciliated cells following purinergic stimulation. J. Cell Biol., 1990, 2 : 170a). Récemment, l'équipe du Professeur Boucher (Stutts M.J., Chinet T., Boucher R.C. Receptors for extracellular ATP are tighly coupled to outward rectifying Cl- channels in human airway epithelium. Presented to the N. Am. CF Conference Arlington - Oct. 1990) a rapporté que l'ATP extracellulaire est capable de provoquer l'ouverture des canaux chlore de l'épithélium bronchique et de stimuler la sécrétion intraluminale de chlore. Si comme l'évoque l'équipe de Boucher, l1ATP extracellulaire est capable de provoquer l'ouverture des canaux chlore, les cellules épithéliales en culture devraient etre stimulables par cet ATP extracellulaire qui en augmentant, de façon active, la sécrétion intraluminale de chlore, augmenterait la sécrétion d'eau intraluminale. Pour étudier cette sécrétion d'eau par les cellules épithéliales respiratoires, la Demanderesse a utilisé un système de culture en chambre bicompartimentale récemment développé par elle (Dupuit F., Jacquot J., Benali R., Hinnrasky J. and Puchelle E. Polarized secretion of proteins by human tracheal gland cells culturel on a permeable substrate. Am. Rev. Resp. Dis., 1991, 143 : A147). Les cellules épithéliales respiratoires de surface sont obtenues à partir de polypes nasaux humains par digestion enzymatique selon une technique développée par la Demanderesse (Chevillard M., Hinnrasky J., Pierrot D;, Zahm J.M., Klossek J.M., Puchelle E. Differenciation of human surface upper airway epithelial cells in primary culture on a flotting collagen gel. Biol. Cell, 1990, 69 : 13a). Les cellules épithéliales sont cultivées sur une membrane semiperméable recouverte de collagène de types I et II en présence d'un milieu de culture sans serum supplémenté en hormones et en facteurs de croissance. La culture des cellules sur cette membrane semi-permeable permet d'accéder séparément aux surfaces apicales et basolatérales des cellules (fig.1). L'effet de l'ATP sur la sécrétion d'eau est étudié lorsque les cellules parviennent à confluence. L'état de confluence des cellules qui engendre une imperméabilité de la couche cellulaire est contrôlé par la mesure de la résistance cellulaire. L'ATP est apporté par le milieu apical. Après deux heures d'incubation en présence d'ATP à la concentration de 1x104M, la variation du volume d'eau dans le compartiment apical est evaluee. La Demanderesse a réalisé deux études La première étude a été effectuée sur des cellules dissociées à partir d'un polype nasal mucoviscidosique AF 508 homozygote et la deuxième étude a été effectuée sur des cellules dissociées à partir d'un polype obtenu chez un sujet sain. Pour chaque étude, deux essais sur témoins sans ATP et trois essais avec ATP ont été réalisés. Les résultats de ces études préliminaires sont regroupés dans le tableau ci-dessous a volume apical ATP/témoin (n=3) Cellules mucoviscidosiques + 14,33 + 1,05 Cellules normales + 8,66 + 2,49 On constate que l'ATP induit une augmentation de volume du compartiment apical par rapport au témoin. Cette augmentation est due à une sécrétion d'eau par les cellules épithéliales respiratoires sous l'effet de l'ATP. Dans la deuxième étude, la Demanderesse a aussi effectue des mesures d'osmolarité des milieux apicaux sans ATP (témoins) et avec ATP (essais) après 24 heures d'incubation. Les résultats ont montré que l'ATP induit une augmentation d'osmolarité du milieu apical (+ 13,3 % + 5,15). Cette augmentation d'osmolarité qui est due à une sécrétion d'ions par les cellules épithéliales respiratoires explique bien la sécrétion d'eau par ces cellules sous l'effet de l'ATP. L'ATP extracellulaire est donc capable de provoquer l'ouverture des canaux chlore au niveau de l'épithélium respiratoire, de stimuler la sécrétion de chlore et d'eau par cet épithélium, et donc d'augmenter l'hydratation de l'épithélium respiratoire et du mucus des bronches ou des voies aériennes supérieures. Chez les patients dont l'épithélium respiratoire est altéré par diverses pathologies (mucoviscidose, infections ou inflammations bronchiques ou ORL), les sécrétions sont fréquemment déshydratées. Or, au cours de ces pathologies, l'élimination des sécrétions repose essentiellement sur la clearance à la toux qui dépend de l'adhésivité du mucus. La diminution de l'adhésivité du mucus est obtenue en particulier par son hydratation. L'ATP, qui peut augmenter l'hydratation du mucus, est donc un agent de traitement potentiel de toutes les affections bronchiques où il existe une deshydratation de l'épithélium et une hyperadhesivité du mucus (rhinites inflammatoires, infectieuses, allergiques, bronchites inflammatoires, infectieuses, allergiques ou toxiques, emphysème). Les compositions pharmaceutiques de l'invention contenant de 1'ATP, en association avec tout excipient approprié, peuvent donc être utilisées pour le traitement de ces affections. Les compositions pharmaceutiques de l'invention peuvent être administrées par instillations ou sous forme de sprays pour les affections du domaine otorhinolaryngologique ; elles peuvent l'être sous forme de sprays ou par nébulisations pour les pathologies bronchiques. Les compositions contiennent I'ATP en solution dans des solvants tels que l'eau additionnée de propylèneglycol. L'ATP peut également être inclus dans des liposomes. La posologie quotidienne peut aller de 1 mg à 100 mg. Revendications 1. Compositions pharmaceutiques contenant de l'adénosine-5triphosphate disodique, en association avec tout excipient approprié, pour le traitement des affections des voies respiratoires (ORL ou bronchiques) où il existe une deshydratation de l'épithélium et une hyperadhésivité du mucus. 2. Utilisation de l'adénosine-5-triphosphate disodique pour la fabrication de moyens destinés à traiter les affections des voies respiratoires (ORL ou bronchiques) où il existe une deshydratation de l'épithélium et une hyperadhésivité du mucus.