Brevet FR2682107A1 — publié le 19930409

QUINOLEINES 2-SUBSTITUEES POUR LE TRAITEMENT DES LEISHMANIOSES L'Invention est relative à des quinoléines 2-substituées pour le traitement des Leishmanioses. Les Leishmanioses sont des affections parasitaires dues à des zoo flagellés de la famille des Trypanosomidés regroupés dans le genre Leishmania. Les Leishmania parasitent le système réticulo-endothélial, en provoquant des atteintes cutanées, cutanéo-muqueuses ou viscérales. Les traitements proposés jusqu'à présent contre les Leishmanioses font essentiellement appel à des sels d'antimoine. Le plus utilisé est l'antimoniate de N-méthyl glucamine (GLUCANTIMER). Différents traitements à base de plantes sont également utilisés par les populations indigènes dans les régions d'endémie de la Leishmaniose [FOURNET et al. J. Ethnopharmacol., 24, 337 (1988)]. Ces plantes sont en général utilisées en applications locales, sur les lésions. Les plantes utilisées de la sorte sont plus ou moins bien identifiées sur le plan botanique, et aucune évaluation sérieuse de leur efficacité réelle n'a été effectuée jusqu'à présent. Les Inventeurs ont entrepris l'étude de différentes plantes préconisées dans la pharmacopée traditionnelle des populations indiennes d'Amérique du Sud pour le traitement de la Leishmaniose. Ils sont de la sorte parvenus à démontrer l'action effective sur les Leishmania, d'extraits de Galipea longiflora Krause. Galipea longiflora [KRAUSE, Notizbl. K. Bot. Gart. Berlin, i, 143, (1914)] appartient au genre Galipea de la famille des Rutacées. C'est un arbuste de 10 à 15 mètres de haut, présent en Bolivie, et dans les régions limitrophes du Brésil au Nord Est de la Bolivie. Son écorce fraîche réduite en pâte, est utilisée par la médecine traditionnelle locale en cataplasmes pour le traitement des Leishmanioses dues à Leishmania braziliensis, ainsi qu'en décoction pour le traitement des dysenteries amibiennes. Certaines espèces du genre Galipea ont fait l'objet d'études chimiques ; il s'agit de Galipea officinalis Hancock [MESTER, Fitoterapia, 123 123, (1973)], et récemment de Galipea bracteata [VIERA et LUBO, Phytochem. 29, 813, (1990)] et Galipea longiflora [FOURNET et al., Can. J. Chem., lui, 2116 (1989)]. Bien que ces études aient permis de mettre en évidence de nombreux constituants de ces plantes, y compris des alcaloides quinoléiques, aucun de ces constituants n'a été décrit comme possédant une activité anti-leishmanienne. Toutefois, les Inventeurs ont poursuivi leurs recherches sur Galipea longiflora, dans le but d'identifier les substances responsables de l'activité anti-Leishinanienne. Leurs travaux ont maintenant abouti à la mise en évidence de différents alcaloldes quinoléiques dont certains présentent une activité anti-leishmanienne comparable ou supérieure à celle de l'antimoniate de N-méthyl glucamine, pris comme produit de référence. La présente Invention a pour objet des quinoléines substituées, de formule générale (I) dans laquelle R1, R4 et R5 représentent un atome d'hydrogène, ou un groupe méthoxy ; et R2 repré sente un groupe alkyle, alkényle ou époxyalkyle en C3 à C5, ou bien un groupe phényle, un groupe phénéthyle, méthylène-dioxyphénéthyle, diméthoxyphénéthyle, ou bien R2 et R3 forment ensemble un cycle furane, ainsi que leurs sels et leurs dérivés, pour l'utilisation comme médicament. Selon un mode de réalisation préféré de la présente invention, lesdites quinoléines sont extraites d'une plante du genre Galipea. En particulier, l'invention englobe des quinoléines nouvelles qui sont la 4-méthoxy-2-n-propyl-quinoléine, dénommée chimanine A, et la 2-(1',2'-trans-époxypropyl)-quinoléine, dénommée chimanine D. L'Invention englobe également, pour l'utilisation comme médicament, des quinoléines connues en elles-mêmes, mais dont aucune propriété thérapeutique, et en particulier antileshmanienne, n'était connue ou suggérée jusqu'à présent. Dans ce cadre, l'invention a en particulier pour objet la 2-n-propylquinoléine [VIEIRA et KUBO, publication précitée] ainsi que la 2-propénylquinoléine, qui est mentionnée dans une énumération de produits cités dans une publication d'ordre général traitant de la synthèse des quinoléines substituées, [ISHIKURA et al., Heterocycles, 23, 2375 (1985)], mais dont aucune propriété particulière n'a été mentionnée dans cette publication. La présente invention a en outre pour objet des compositions pharmaceutiques pour le traitement des Leishmanioses, caractérisées en ce qu'elles comprennent, en tant que principe actif, au moins une quinoléine telle que définie ci-dessus. La présente Invention sera mieux comprise à l'aide du complément de description qui va suivre, qui se réfère à des exemples de préparation de quinoléines conformes à l'invention, et de démonstration de leur activité anti-Leishmanienne. il va de soi toutefois que ces exemples sont donnés uniquement à titre d'illustration de l'objet de l'invention, dont ils ne constituent en aucune manière une limitation. I. - OBTENTION DE OUINOLEINES A PARTIR DE GALIPRA DONGIFLORA Les extractions ont été effectuées à partir de différents organes (feuilles, écorces des racines et du tronc) de Galipea longiflora, séchés et broyés. L'activité des produits obtenus à chaque étape de purification est testée sur trois souches de Leshmania et 3 souches de Trypanosoma cruzi, selon le protocole décrit plus loin à l'exemple 5. EXEMPLE 1 - EXTRACTION ET ISOLEMENT DES PRINCIPES ACTIFS DES ECORCES DE RACINES DE GADIPRA LONGIPLORA Le schéma d'extraction est représenté à la figure I. Légende de la Figure I (Act biol. = activité biologique Leish. = Leishmania T.c = Trypanosoma cruzi +++ = Lyse des parasites à 25 Rg/ml ++ = Lyse des parasites à 50 Rg/ml + = Lyse des parasites à 100 Rg/ml 0 = Aucune activité). Les conditions précises d'extraction et de chromatographie sont les suivantes - Extraction à l'éther de pétrole - Extraction au chloroforme. Le marc résultant de l'extraction par l'éther de pétrole est alcalinisé par l'ammoniaque au 1/2 (150 ml d'ammoniaque pour environ 350 mg de marc) puis extrait par le chloroforme dans un extracteur de type SOXHLET. Après évaporation à sec de l'extrait, le résidu (26,3 g) est repris par le chloroforme. - Chromatographie sur colonne de silice H (MERCK) des principes actifs des écorces de racines. Les conditions de chromatographie sont les suivantes La composition alcaloidique des extraits éthéropétrolique et chloroformique apparaissant qualitativement identique en chromatographie couche mince, ces extraits sont réunis et chromatographiés sur une colonne de silice H (Merck) avec une pression de 0,35 bar. L'élution est réalisée par un mélange hexane-acétate d'éthyle 80/20 et tous les alcaloides sont élués dans ces conditions. Les alcaloides sont sép-arés dans l'ordre suivant - la 2-phénylquinoléine - la 2-n-pentylquinoléine - la 4-méthoxy-2-phénylquinoléine - la 2-(3',4'-méthylènedioxyphénéthyl) quino léine - la 4-méthoxy-2 - (3', 4'-méthylènedioxy phénéthyl) quinoléine ou cusparine - la 4,7, 8-triméthoxy-(2, 3-furoquinoléine) ou skimmianine EXEMPLE 2 - EXTRACTION PAR L'ETHER DE PETROLE ET ISOLEMENT DES PRINCIPES ACTIFS DES ECORCES DU TRONC DE GALIPEA L ONGIFLORA Le schéma d'extraction est représenté à la figure II. Les conditions d'extraction et de chromatographie sont les suivantes L'extraction à l'éther de pétrole est effectuée dans les mêmes conditions que précédemment (extracteur SOXHLET). La première chromatographie sur colonne de silice H est effectuée dans les conditions suivantes 1ère colonne 40 g d'extrait total, sur les 75 g récupérés au cours de l'extraction éthéropétrolique, sont chromatographiés sur une colonne de silice H Merck montée au mélange hexane-acétate d'éthyle 80/20. L'élution est réalisée avec une pression du solvant de 0,35 bar. Cette chromatographie permet de séparer l'alcaloide majoritaire, la 2-phénylquinoléine. Le reste des alcaloldes est réuni puis chromatographié dans les mêmes conditions opératoires (voir 2ème colonne). La deuxième chromatographie sur colonne de silice H est effectuée dans les conditions suivantes 2ème colonne Le mélange alcaloidique est chromatographié sur une colonne H Merck. L'élution au mélange hexaneacétate d'éthyle 80/20 permet d'isoler dans l'ordre suivant - la 2-phénylquinoléine - la 2-n-pentylquinoléine - la 2 -n-propylquinoléine. EXEMPLE 3 - EXTRACTION PAR LE CHLOROFORME ET ISOLEMENT DES PRINCIPES ACTIFS DES ECORCES DU TRONC DE GALIPER LONGIFLORA Le schéma d'extraction est représenté à la figure III. Les conditions d'extraction et de chromatographie sont les suivantes L'extraction au chloroforme est effectuée dans les mêmes conditions que précédemment (extracteur SOXHLET). La première chromatographie sur colonne de silice H est effectuée dans les conditions suivantes 1ère colonne 50 g d'extrait total , sur les 97 récupérés au cours de l'extraction chloroformique, sont chromatographiés sur une colonne de silice H. L'élution est réalisée avec une pression du solvant (hexane-acétate d'éthyle 80/20 de 0,35 bar. Avec ce solvant les alcaloïdes sont séparés dans l'ordre suivant - la 2-phénylquinoléine - la 4-méthoxy-2-phénylquinoléine - la 2-(3',4'-méthylènedioxyphénéthyl) quino léine - un mélange de plusieurs alcaloïdes (Mélange I sur la Figure III) La deuxième chromatographie sur colonne de silice H est effectuée dans les conditions suivantes 2ème colonne Le mélange I est chromatographié sur une colonne de silice H montée au mélange hexane-acétate d'éthyle 80/20).Avec ce solvant, les alcaloides sont élués dans l'ordre suivant - la 4-méthoxy-2-phénylquinoléine - la 2-(3',4'-méthylènedioxyphénéthyl)quino léine - la 4-méthoxy-2 -n-pentylquinoléine - la 4-méthoxy-2-n-propylquinoléine ou chima nine A - la 4-méthoxy-2-(3',4'-méthylènedioxy phénéthyl)quinoléine ou cusparine - la 2-(3',4'-diméthoxyphénéthyl)quinoléine EXEMPLE 4 - EXTRACTION PAR LE CHLOROFORME ET ISOLEMENT DES PRINCIPES ACTIFS DES FEUILLES DE GALIPHA DONGIFLORA Le schéma d'extraction est représenté à la figure IV. Les conditions d'extraction et de chromatographie sont les suivantes L'extrait est concentré de moitié, puis extrait dans une ampoule à décanter par de l'acide chlorhydrique à 3%. L'extrait aqueux acide de sels d'alcaloides obtenu est alcalinisé par l'ammoniaque au 1/2, puis extrait par le chloroforme. Après évaporation du solvant organique, et séchage sous vide de l'extrait, il est obtenu 24 g d'alcaloides totaux. Les alcaloides totaux sont chromatographiés sur une colonne H (Merck). L'élution commence au mélange hexane-acétate d'éthyle 80/20 et se fait sous une pression de 0,35 bar. Les alcaloïdes sont élués dans l'ordre suivant avec ce solvant - la 2-phénylquinoléine - la 2-propénylquinoléine ou chimanine B - la 2-n-propylquinoléine - la 4-méthoxy-2-propénylquinoléine ou chimanine C - la 2-(1',2'-trans-époxypropyl)quinoléine ou chimanine D - un mélange d'alcaloides actifs à 100 Fg/ml - un mélange d'alcaloides non actifs à 100Rg/ml - la 4,7,8-triméthoxy-(2,3-furoquinoléine) ou skimmianine. STRUCTURES DES DIFFERENTS ALCALOIDES ISOLES Les alcaloides isolés aux exemples 1 à 4 sont récapitulés ci-dessous. Leurs structures chimiques ont été déterminées par analyse des spectres ultra-violet, infrarouge, de masse, et de RMN. Les formules chimiques respectives des différents alcaloïdes sont les suivantes Alcaloïde I : 2-phénylquinoléine Alcaloïde II : 2-n-pentylquinoléine Alcaloïde III : 2-n-propylquinoléine Alcaloïde IV : 4-méthoxy-2-phénylquinoléine Alcaloïde V : 2-(3',4'-méthylènedioxyphénéthyl) quinoléine Alcaloïde VI : 4-méthoxy-2-n-pentylquinoléine Alcaloïde VII : 4-méthoxy-2-n-propylquinoléine ou chimanine A Alcaloïde VIII: 4-méthoxy-2-(3',4'-méthylènedioxy phénéthyl) -quinoléine ou cusparine Alcaloïde IX : 2-(3',4'-diméthoxyphénéthyl) quinoléine Alcaloïde X : 4,7,8-triméthoxy-(2,3-furo) quinoléine ou skimmianine Alcaloïde XI : 2-propénylquinoléine ou chimanine B Alcaloïde XII : 2-(1'2'-trans-époxypropyl)-quinoléine ou chimanine D Alcaloïde XIII: 4-méthoxy-2-propénylquinoléine ou chimanine C. Les alcaloïdes VII, XII et XIII n'ont jamais été décrits auparavavant. II. - ACTIVITE BIOLOGIQUE DES ALCALOIDES OUINOLEI0UES EXTRAITS DE GALIPZA LONGIFLORA EXEMPLE 5 - ACTIVITE BIOLOGIQUE IN-VITRO Les tests biologiques ont été effectués sur des promastigotes de Leishmania braziliensis (souches M 2903 ou M 2904), Leishmania amazonensis (souches PH 8 ou H 142) et Leishmania donovani (souche M 2682) et sur les épimastigotes de Trypanosoma cruzi (souches Tulahuen, C 8CL1, et Tehuentepec). a) Culture in vitro des Leishmania au stade promast igote La forme promastigote des différentes souches de Leishmania ssp. est maintenue en culture in vitro par repiquages successifs (tous les 7 à 15 jours selon les souches) en boites de culture de type "Corning" de 25 ml ou en tubes de culture. Pour obtenir une meilleure croissance des parasites on ajoute 2 ml du milieu de culture NNN liquide (Novy, Mac Neal, Nicoll) dans une boîte, puis 50 W1 de milieu de culture contenant environ 8 x 106 parasites/ml, soit environ 400.000 parasites par boîtes. Cet inoculum est prélevé dans un tube dont la présence de promastigotes a été observée au microscope. Ces parasites sont en grande partie des formes jeunes. On laisse 48 heures à l'étude à 28 C, et on ajoute de nouveau 2 ml de milieu NNN. b) Culture in vitro de Txypanosoma cruzi au stade épimastigote La forme épimastigote des différentes souches de Trypanosoma cruzi est maintenue en culture in vitro par repiquages successifs chaque semaine environ en boîtes de culture "Corning" de 25 ml ou en tubes de culture. Les parasites sont cultivés en milieu liquide LIT complet (Yager's Liver Infusion Tryptose) à pH 7,2, supplémenté par 1% de sérum foetal de veau (SVF) inactivé à 56 C pendant 30 minutes et une solution d'antibiotiques contenant 0,25 mg/ml de streptomycine et 250 U/ml de pénicilline. c) Essais biologiques in ritro Les tests biologiques sont réalisés dans des microplaques stériles de type "Limbro" ou "Falcon" avec couvercle de 96 puits à fond plat. La capacité de chaque puits est d'environ de 0,35 ml. Le solvant employé pour dissoudre les extraits de plantes ou les alcaloldes purifiés à tester est en général le DMSO (diméthylsulfoxide). Avant d'entreprendre les essais avec les extraits de plantes ou les alcaloldes, la cytotoxicité du DMSO a été évaluée. I1 apparaît que ce solvant employé à des concentrations inférieures ou égales à 0,5* n'a aucun effet sur la croissance des parasites. 2 mg d'extrait de plante ou d'alcaloïde sont dissous dans 40 CL1 de DMSO sous agitation (Vortex). A cette préparation est additionnée la quantité nécessaire de milieu NNN (ou bien de milieu LIT dans le cas de T. cruzi) pour obtenir la concentration désirée. Les tests destinés à vérifier l'activité des extraits après chaque étape de purification sont effectués à la concentration finale de 100 Rg.ml~1 d'extrait de plante. Si l'extrait est actif à 100 Rg.ml~1, on recherche la dose minimale qui inhibe complètement les parasites, en préparant des solutions à 50 Rg, 25 Fg, 5 Rg et 1 Ag.ml~1, selon les besoins. Les parasites sont pris en phase de croissance exponentielle. Le comptage des parasites s'effectue généralement en diluant 10 fois l'inoculum. Un aliquot de la solution contenant les parasites est prélevé puis compté à la cellule de Thoma. Après ce comptage on ajuste la concentration parasitaire à 106 parasites par ml à l'aide d'une micropipette, puis on dépose 100 1 de parasites dans chaque puits de la microplaque, soit l'équivalent de 100.000 parasites. Ensuite on ajoute la même quantité de milieu de culture (100 1) contenant l'extrait de plante à la concentration de 200 Fg.ml~1. Chaque extrait de plante est testé en triplicate sur chaque souche de parasites et à chaque concentration.Dans les puits témoins contenant les parasites seuls on additionne 100 Cil de milieu sans parasite pour arriver à 200 1. Des puits comprenant des parasites seuls sont également préparés avec le milieu de culture contenant la même quantité de DMSO (40 1) que pour dissoudre les extraits de plantes, afin de contrôler un éventuel effet du solvant. Les plaques sont refermées par un couvercle préalablement passé à la flamme afin d'éviter les contaminations, et sont mises à l'étuve à 28 C pendant 48h ou 72h suivant les nécessités de l'expérimentation. Après ce stockage en étuve, les plaques sont examinées au microscope inversé. Chaque puits est observé en le comparant aux puits témoins de culture. Après 48 ou 72 heures de contact avec les extraits de plantes, on observe au microscope les change ments intervenus. Les appréciations sont notées de la même manière suivante +++ Lyse totale des parasites ++ Parasites immobiles ou modifiés + Parasites moins mobiles que les témoins 0 Parasites identiques aux témoins ou plus nombreux d) Résultats Les alcaloides I, II, V, VI, VIII, IX, X provoquent la lyse totale des cultures de parasites (Leishmania et Trypanosoma) à la concentration de 100 Fg/ml. Les alcaloïdes III, IV et XII ont la même action à la dose de 50 Rg/ml, et l'alcaloïde XI à la dose de 25 Rg/ml. EXEMPLE 6 - ACTIVITE IN VIVO DES ALCALOIDES CONFORMES A L'INVENTION MESURE DE LA TOXICITE DES PRODUITS (DL 50) Avant d'effectuer les essais sur les souris avec les alcaloïdes isolés à partir des plantes, le degré de toxicité de ces produits a été déterminé. La méthode choisie est la mesure de la dose léthale 50% (DL50) à dose unique. La DL50 correspond à la dose capable de tuer dans des conditions déterminées, la moitié des animaux mis en expérience dans une même espèce animale. La courbe représentative de la mortalité en fonction du logarithme des doses étant supposée être une droite entre les deux doses qui encadrent la DL50, celleci est calculée par interpolation comme suit log DL50 = log.B + 0.5-N log Y M-N B = dose immédiatement inférieure à la DL50 N = mortalité provoquée par la dose B (pourcentage exprimé en fraction décimale par rapport à 1) M = mortalité provoquée par la dose immédiatement supérieure à la DL50 (pourcentage exprimé en fraction décimale de 1) y = raison de la progression. Les conditions opératoires suivantes ont été choisies - Animaux d'expérimentation : les souris Balb/c - Nombre d'animaux par concentration de produit : 6 souris de même sexe, de même poids et de même âge - Doses d'expérimentation en mg.kg-l 400, 200, 100, 50, 25, 12,5 (raison de la progression 2). - voie d'inoculation des produits : intrapéritonéale - Calcul de la DL 50 : à temps 0, après 24h, 48h et 72h. Toutes les quinoléines testées ont une DL 50 supérieure à 400 mg/kg 72 après l'inoculation des produits. Pour la suite de l'expérimentation, la dose de DL 50/4 a été généralement employée. 1. Protocole expérimental Chaque groupe expérimental comprend 10 souris Balb/c de même sexe, de même poids et de même âge. Pour chaque expérimentation plusieurs lots expérimentaux sont constitués - un lot témoin parasite (Tém.) ne recevant aucun traitement - un lot témoin parasite recevant pendant la durée du traitement une solution de PBS (Tém. + PBS), le milieu qui contient les parasites - un lot recevant comme traitement le médicament de référence, l'antimoniate de N-méthyl-glucamine ou GLUCANTIMER (commercialisé par SPECIA FRANCE) à raison de 200 mg.kg-l - un lot de souris traitées avec une quinoléine isolée de Galipea longiflora, comme décrit à l'un des exemples 1 à 4, à une concentration sensiblement égale à la DL50/4 du composé. 2. Souris Les animaux d'expérimentation sont des souris Balb/c de 18-24 g, mâles ou femelles âgées de 8 semaines environ. Les souris Balb/c ont été choisies à cause de leur grande sensibilité aux Leishmania ssp. et à Trypanosoma cruzi. 3. Maintien des parasites Au départ, les formes amastigotes de L. amazonensis ont été obtenues par inoculation sous cutanée de promastigotes des souches IFLA/BR/67/PH8 ou MHOM/GF/84/CAY H-142 au niveau de la face dorsale des pattes arrières de hamsters (Charles Rivers, USA) pesant 120 - 130 grammes. Les granulomes apparaissent au bout de 8 à 12 semaines suivant la virulence de la souche. Pour la suite de l'expérimentation, les hamsters sont infectés par les formes amastigotes récupérées dans les granulomes. Par cette méthode les granulomes se développent plus rapidement. 4. Préparation des parasites et infection Pour obtenir des amastigotes, on choisit un hamster présentant un granulome non ulcéré, de taille suffisante. L'animal est tué au chloroforme. La patte arrière infectée par les parasites est nettoyée à l'alcool iodé, puis à l'éthanol à 70'C. A l'aide d'une pince et d'un bistouri stériles, on résèque le granulome. Le granulome est alors haché au-dessus d'un mortier contenant du sable stérile et 5 ml de chlorure de sodium à 0,9%. Le tout est homogénéisé au pilon et la suspension est recueillie à la pipette et centrifugée à 2000 t/mn pendant 10 mn à 4 C. On obtient trois couches, le surnageant contenant les débris de parasites et de cellules, le fond avec le sable et les gros débris du granulome, et la couche intermédiaire composée de parasites et de globules rouges. Cette couche intermédiaire est prélevée et mise dans un tube, rincée au chlorure de sodium à 0,9% et centrifugée à nouveau pour séparer les globules rouges des parasites qui se présentent sous forme d'une couche blanche. Les parasites sont repris dans un milieu nutritif MEM (Minimum Essential Medium) avec 10% de SVF (sérum de veau foetal), 2% de L-Glutamine et 1% d'antibiotiques. Ils sont dilués et comptés à la cellule de Thoma. Un granulome permet d'obtenir environ 108 parasites. La concentration est ajustée à 106 parasites par ml. Les parasites ainsi obtenus servent à infecter les souris Balb/c et à réaliser les essais biologiques in vivo des produits isolés à partir des plantes. Cette technique d'isolement des parasites est la même pour toutes les souches de Leishmania utilisées pour ce travail [L. amazonensis (H8 et H-142) et de L. venezuelensis (H-3), Bonfante-Garrido, 1983)]. 5. Infection avec Leishmania amazonensis et L. venezuelensis Les souris infectées par des amastigotes de Leishmania amazonensis, des souches de référence IFLA/BR/67/PH8 soit MHOM/GF/84 CAY H 142 ou de Leishmania venezuelensis (Référence MHOM/VE/74/PM-H3) provenant de Barquisimeto, Venezuela (hôte : Homme), par voie sous-cutanée au niveau du coussinet ventral de la patte arrière droite, la patte gauche servant de témoin. La quantité d'amastigotes inoculée est de 106 dans 0,2 ml de PBS pour les souches Leishmania amazonensis (pH 8) et Leishmania venezuelensis (H-3) et de 3 x 106 amastigotes pour la souche de Leishmania amazonensis (H-142) dans le même volume de PBS. Cette concentration de parasites a été préalablement déterminée par des essais à différentes concentrations de parasites. 6. Traitement avec les principes actifs isolés des plantes Les traitements commencent 24 heures après l'inoculation des amastigotes de Leishmania ssp et durent 14/j consécutifs. L'antimoniate de N-méthyl glucamine est dissous dans de l'eau distillée, et injecté à la dose de 200 mg.kg-l dans 200 1. Le produit à tester est solubilisé dans 40 ml de polysorbate (Tween 80, Prolabo) complété avec du milieu PBS pour obtenir la concentration désirée. Ensuite, 200 A1 de la solution obtenue sont inoculés par voie sous-cutanée au niveau dorsal. La concentration du produit dépend de sa toxicité. Peu de problèmes ont été rencontrés lors de l'injection des produits. I1 a été observé chez toutes les souris traitées une inflammation locale à l'endroit des piqûres, qui en général disparait à la suspension du traitement. Des essais d'inoculation locale des médicaments au niveau de la patte infectée ont également été réalisés. Les souris sont infectées de la manière décrite ci-dessus, mais le traitement s'effectue 14 jours après l'infection parasitaire, et en une seule injection au niveau du coussinet plantaire de la patte arrière infectée par les parasites. Pour ces essais d'inoculation locale, les concentrations de médicaments administrées sont multi pliées par deux. Les médicaments sont préparés de la même manière que lors des traitements par voie générale. 7. Paramètres étudiés Les diamètres des lésions de la patte infectée et de la patte témoin sont mesurés chaque semaine pendant 8 semaines, en commençant les premières mesures 48 heures avant l'inoculation des parasites à l'aide d'un micromètre gradué en 1/10 mm. Le calcul de la différence des deux mesures donne l'épaisseur de la lésion, ou Indice Leishmanien (I.L.). Les résultats sont exprimés par le calcul de la moyenne arithmétique des Indices Leishmaniens, et le calcul de l'intervalle de confiance de la moyenne observée, au risque a à 5% qui est calculé avec la formule suivante Intervalle de confiance = XS 4n x = 2,23 si n(nombre de souris) = 10 au risque a = 5% x = 2,45 si n = 6 au risque a = 5% s = la moyenne observée n = le nombre d'animaux par lot expérimental (10 dans nos expérimentations) Un produit est considéré comme actif lorsque la moyenne des diamètres des lésions des souris traitées avec ce produit est égale ou inférieure à la moyenne des diamètres des lésions des souris traitées avec l'antimoniate de N-méthyl glucamine (GLUCANTIMER). Les résultats obtenus sur des souris Balb/c infectées par L. amazonensis sont représentés sur les figures V à VIII. La figure V(a) illustre l'action de l'alcaloïde III (2-n-propylquinoléine) en traitement général à la dose de 100 mg/kg/jour La figure V(b) illustre l'action de l'alcaloïde III en traitement local (une injection unique, 14 jours après l'infection, au niveau de la patte infectée) à la dose de 200 mg/kg (O), comparée à celle du GLUCANTIMER 400 mg/kg (+) dans les mêmes conditions de traitement ; 0 = témoins. La figure VI illustre l'action de l'alcaloïde VII (4-méthoxy-2-n-propylquinoléine ou chimanine A). Les figures VII(a) et VII (b) illustrent l'action de l'alcaloïde XI ( chimanine B) respectivement en traitement général à la dose de 100 mg/kg/jour (-) comparée à celle du GLUCANTIME (+) à la dose de 200 mg/kg/jour pendant 14 jours consécutifs (début de traitement 24h après infection) ; = témoins ; l'action de lralcaloïde XI (2-n-propylquinoléine ou chimanine B), en traitement général à la dose de 100 mg/kg/jour (1) comparée à celle du GLUCANTIME (+) à la dose de 200 mg/kg/jour pendant 14 jours consécutifs (début de traitement 24h après infection) ; # = témoins ; et en traitement local (une injection unique, 14 jours après l'infection, au niveau de la patte infectée) à la dose de 200 mg/kg (+), comparée à celle du GLUCANTIMER 400 mg/kg (+) dans les mêmes conditions de traitement. La figure VIII illustre l'action de l'alcaloïde XII (chimanine D ou 2-(1'2'-trans-époxy-pro- pylquinoléine) en traitement général à la dose de 100 mg/kg/jour (1) comparée à celle du GLUCANTIMER (+) à la dose de 200 mg/kg/jour pendant 14 jours consécutifs (début de traitement 24h après infection) ; # = témoins. REVENDICATIONS 1') Quinoléines substituées, de formule générale (I) dans laquelle R1, R4 et R5 représentent un atome d'hydrogène, ou un groupe méthoxy ; et R2 représente un groupe alkyle, alkényle ou époxyalkyle en C3 à C5, ou bien un groupe phényle, un groupe phénéthyle, méthylènedioxyphénéthyle, diméthoxyphénéthyle, ou bien R2 et R3 forment ensemble un cycle furane, ainsi que leurs sels et leurs dérivés, pour l'utilisation comme médicaments. 2 ) Quinoléines substituées, pour l'utilisation comme médicament selon la Revendication 1, caractérisées en ce qu'elles sont extraites d'une plante du genre Galipea. 3 ) Quinoléine substituée de formule (I) dans laquelle - R1 est un groupe méthoxy - R2 est un groupe -propyle 4 ) Quinoléine substituée de formule (I) dans laquelle - R1 est un atome d'hydrogène - R2 est un groupe trans-époxypropyle 5 ) Quinoléine substituée de formule (I) dans laquelle - R1 est un atome d'hydrogène - R2 est un groupe propyle pour l'utilisation comme médicament. 6 ) Quinoléine substituée de formule (I) dans laquelle - R1 est un atome d'hydrogène - R2 est un groupe propényle pour l'utilisation comme médicament. 7 ) Compositions pharmaceutiques pour le traitement des Leishmanioses, caractérisées en ce qu'elles comprennent, en tant que principe actif, au moins une quinoléine selon l'une quelconque des Revendications 1 à 6.