Brevet FR2680005A1 — publié le 19930205

Utilisation de collagène comme support solide de fixation d'un capteur capable de réagir spécifiquement avec un élément à détecter dans un milieu biologique, réactif et procédé de mise en oeuvre. La présente invention concerne essentiellement l'utilisation de collagène comme support solide de fixation d'un capteur capable de réagir spécifiquement avec un élément à détecter dans un milieu biologique, réactif et procédé de mise en oeuvre. Le déposant a déjà décrit dans le document FR-B12 642 329 l'utilisation de solutions d'atélocollagène et de glycosaminoglycannes pour la fabrication de microcapsules ainsi que des compositions cosmétiques ou pharmaceutiques ou alimentaires en contenant. Les présents inventeurs ont maintenant découvert que le collagène, et de préférence de l'atélocollagène, et encore mieux un mélange d'atélocollagène et de polyholosides, constitue un support solide remarquable de fixation d'un capteur capable de réagir spécifiquement avec un élément à détecter dans un milieu biologique pour former un complexe spécifique qui peut alors être détecté par tout moyen de détection. La présente invention a pour but de résoudre le nouveau problème technique consistant en la fourniture d'un support solide de fixation d'un capteur spécifique d'un élément à détecter dans un milieu biologique qui soit capable de permettre un mélange rapide avec le milieu biologique ainsi qu'une séparation aisée de ce milieu biologique, afin d'aboutir à un gain de temps appréciable dans le cadre des analyses médicales en vue d'un diagnostic médical. L'invention résoud donc ce problème technique d'une manière simple, aisée, fiable, peu coûteuse, utilisable à l'échelle industrielle et médicale. Ainsi, selon un premier aspect, la présente invention concerne l'utilisation de collagène, de préférence l'atélocollagène, et encore mieux un mélange d'atélocollagène et de po-lyholoside comme support solide de fixation d'un capteur, dénommé ligand ou affinant, capable de réagir spécifiquement avec un élé- ment à détecter dans un milieu biologique pour former un complexe spécifique pouvant ensuite être détecté par tout moyen de détection. Selon une caractéristique avantageuse de cette utilisation, le collagène utilisé sous forme de particules, billes, ou capsules, de préférence de diamètre compris entre environ 5 et 500 jjm (micromètres). On préfère les capsules et en particulier des microcapsules. Selon une caractéristique avantageuse de l'invention, le collagène comprend de l'atélocollagène, de préférence combiné à un polyholoside, par exemple un glycosaminoglycanne, du dextrane, ou du chitosane. Ce support solide, lorsqu'il est préparé à partir de collagène natif, peut être fabriqué sous forme de particules par coagulation de gouttes. Lorsqu'il s'agit d'atélocollagène, il peut être opéré de la même manière. Lorsqu'il s'agit d'un mélange d'atélocollagène et d'un polyholoside, les particules solides sont de préférence obtenues par réticulation interfaciale comme décrit dans le brevet précédent du déposant FR-Bl-2 643 329. Dans ce cas, la proportion relative de polyholoside par rapport à l'atélocollagène varie avantageusement entre 15 et 50% en poids. Selon une autre caractéristique avantageuse de l'invention, les particules de collagène contiennent un oxyde magnétique, de préférence un oxyde magnétique de fer. Avantageusement, la concentration d'oxyde magnétique est comprise entre 0,1 et 10% en poids par rapport au poids total des particules. Selon une autre caractéristique particulière de l'invention, le capteur précité est fixé de manière covalente par un agent chimique sur les particules de collagène formant support solide de fixation. Le support solide selon l'invention présente l'avantage de présenter des fonctions chimiques de surface telles que les fonction aminées (-NH2), carboxyliques (-C02H) ou alcooliques (-OH), qui permettent de réaliser le couplage du capteur formant ligand ou affinant. Dans le cas des fonctions aminées C-NH2), on utilisera de préférence comme agent chimique de couplage entre le capteur et le support solide, un réactif de type NHS (N-hydroxysuccinimide) dont l'un peut réagir avec le groupement aminé du support solide et l'autre avec le capteur formant ligand ou affinant. Ce couplage est effectué de préférence en deux étapes, la première étape consistant à fixer le réactif à la surface des particules solides du support, puis, après avoir éliminé l'excès de réactif chimique de couplage, de réaliser le couplage du capteur formant ligand ou affinant avec les particules de support solide obtenues après la première étape ci-dessus. Les agents chimiques de couplage sont dits homobifonctionnels si le deuxième groupement réactif est également de type NHS ou hétérobifonctionnels si ce dernier est différent. Un exemple de deuxième groupement réactif différent est un groupement maléimide pouvant fixer une molécule par une fonction thiol (-SH). Dans le cas des fonctions carboxyliques, les réactifs chimiques de couplage utilisent de préférence des agents du type carbodiimide hydrosolubles. Leur utilisation se fait également par un procédé en deux étapes. Les carbodiimides sont des agents hétérobifonctionnels donnant une liaison d'une fonction carboxylique (-COOH) et aminée (-NH2). Dans le cas des fonctions alcooliques, la technique utilisée de préférence comprend une oxydation de la fonction alcool en un aldéhyde (CHO) par un agent d'oxydation douce, tel que le périodate de sodium (NalO4). L'aldéhyde peut ensuite réagir avec une fonction aminée (-NH2) en formant une base de Schiff. Ainsi, ce couplage se fait encore par un procédé en deux étapes, la première étape consistant à réaliser l'oxydation de la fonction alcool en aldéhyde, la deuxième étape consistant à réaliser le couplage proprement dit de l'agent formant ligand ou affinant avec les particules solides du support obtenu à la fin de la première étape. Il est à noter que grâce à l'emploi comme support solide de collagène, d'atélocollagène ou de mélange atélocollagène- polyholoside, on obtient la presence de diverses fonctions de surface sur les particules du support solide, en quantité importante, ce qui rend aisé un couplage de populations moléculaires différentes sur la même surface, par exemple un anticorps et une enzyme. Pour ce faire, on pourra utiliser deux méthodes, à savoir : - le mélange de populations moléculaires différentes lors de la phase de couplage ce qui donnera lieu à la fixation à la surface des particules du support solide d'une partie variable de ces populations en fonction de la réactivité propre de chaque population et de leur concentration respective. Le résultat sera alors une fixation en une quantité déterminée de chaque population et ceci de manière reproductible si les conditions de réaction sont reproduites. D'autre part, l'activation successive des différentes fonctions disponibles sur la surface des particules solides, suivie du couplage séquencé des différentes populations moléculaires, ce qui permet alors d'obtenir un support solide à spécificité multiple. On observera par ailleurs que dans le cadre de l'invention, le support solide est fabriqué à partir de substances naturelles extraites de tissus animaux. Ceci est le cas du collagène et de l'atélocollagène, qui sont des protéines à longue chaîne extraites du tissu dermique, ainsi que du polyholoside, en particulier un glycosaminoglycanne. Grâce à l'utilisation selon l'invention de collagène, de préférence d'atélocollagène et encore mieux d'un mélange d'atélocollagène-polyholoside, par fixation d'un capteur formant liant ou affinant, on obtient ainsi un réactif de détection qualitative et de mesure quantitative d'un élément quelconque d'un milieu d'origine biologique. La notion d'élément recouvre ici dans le cas de la présente description et des revendications toute espèce d'anticorps ou d'antigènes, sous forme soluble ou particulaire, ainsi que toutes les espèces moléculaires pouvant donner lieu à des com- plexes spécifiques pour lesquels la constante d'affinité est suffisamment forte pour déplacer la réaction dans le sens de la formation du complexe. Ce réactif peut être utilisé de manière classique dans le cadre des procédés de détection qualitative et de mesure quantitative d'élément d'un milieu d'origine biologique, dans le cadre des analyses médicales en vue d'un diagnostic médical. La manipulation est aisée et aboutit à un gain de temps appréciable grâce à un mélange rapide avec le milieu biologique et une séparation aisée des particules solides de ce milieu biologique. Ce réactif permet de mettre en oeuvre des procédés classiquement dénommés "immuno-essais" en phase hétérogène. Le réactif selon l'invention permet de détecter des éléments présents en quantité infinitésimale dans un milieu complexe d'origine biologique grâce à la capacité d'extraction et de séparation de l'élément recherché par le capteur formant ligand ou affinant fixe sur la phase solide. Le milieu d'origine biologique est habituellement une phase liquide constituée par un liquide d'origine biologique tel que sang, urine, liquide céphalo-rachidien, etc. ; ou un extrait de tissu nécessitant la mise en oeuvre d'un moyen d'extraction de nature physique tel que chaleur, rayonnement, etc. ; ou chimique tel qu'enzyme, détergent, acide, base, etc. Le capteur formant agent, liant ou affinant fixé sur la phase solide ou support solide selon l'invention est spécifique de l'élément recherché et de tels capteurs sont bien connus de l'homme de l'art. Ces capteurs peuvent donner lieu dans des conditions physico-chimiques adéquates à la formation de complexe stable notamment par des réactions de type immunitaire, qui sont fixés à la surface de la phase solide, complexe que l'on peut ainsi isoler des autres populations moléculaires en présence par un procédé quelconque aboutissant à la séparation de la phase solide comportant le complexe lié à celle-ci. La révélation de la présence du complexe peut être ensuite effectuée par mesure de la consommation par exemple par une technique de compétition, ou de la quantité proportionnellement fixé d'un traceur marqué qui donnera un signal spécifique mesurable à l'aide d'un procédé chimique ou physique tel que comptage isotopique, spectrophotométrie, luminométrie, ampérométrie, etc. Toutes ces techniques sont bien connues à l'homme de l'art. Selon un deuxième aspect, l'invention couvre ainsi à titre de produits nouveaux, un réactif biologique caractérisé en ce qu'il comprend comme support ou phase solide, des particules de collagène, de préférence atélocollagène, et encore mieux un mélange d'atélocollagène et de polyholoside. Diverses variantes de réalisation de ce réactif résultent de la description précédente faite en relation au premier aspect de l'invention, et résulteront également de la description qui va suivre en référence à divers exemples non limitatifs de l'invention. Selon un troisième aspect, la présente invention couvre encore un procédé de détection dans un milieu biologique d'un élément à détecter. Des variantes de réalisation de ce procédé sont également apparentes de la description précédente, ainsi que de la description suivante faite en référence aux exemples ci-après donnés simplement à titre d'illustration. Comme polyholosides, on utilise en particulier des glycosaminoglycannes qui sont avantageusement des g lycosami nog lycannes de structure en particulier choisis parmi le groupe consistant de chondroitine-4-sulfate, de chondroitine-6-sulfate, de dermatanesulfate, d'héparane-sulfate et de kératane-sulfate, ainsi que de l'héparine ainsi que ses dérivés, en particulier les dérivés de bas poids moléculaire dont le poids moléculaire peut varier entre 2 000 et 10 000. Comme polyholosides, on peut également citer le chitosane et le dextrane. Le polyholoside est en particulier utilisé sous forme de solution aqueuse à 0,5 à 4% et de préférence 0,5 à 2% et encore de préférence environ 1%, en poids, par rapport à la solution de polyholoside. Le collagène, ou de préférence l'atélocollagène est de préférence utilisé en solution aqueuse ayant une concentration en collagène ou en atélocollagène comprise entre 0,5 et 2% en poids. Cette solution de collagène ou d'atélocollagène peut être obtenue en dissolvant des fibres de collagène ou d'atélocollagène dans une solution aqueuse légèrement acide. Cette solution aqueuse légèrement acide peut être de préférence une solution d'acide aqueuse d'acide acétique 0,1 M. L'atélocollagène peut être obtenu par digestion enzymatique de collagène bien connu à l'homme de l'art. Pour la préparation du mélange collagène, de préférence atélocollagène, polyholoside, la solution de polyholoside est avantageusement introduite dans la solution de collagène, de préférence d'atélocollagène. Ensuite, pour la préparation de particules solides, en particulier des microcapsules, on utilise un procédé de fabrication par réticulation interfaciale tel que décrit dans le document FR-B1-2 642 329. Selon ce procédé, après avoir mélangé la solution de collagène, de préférence d'atélocollagène, avec la solution de polyholoside, de manière homogène, on disperse une phase huileuse contenant un agent de réticulation sous forme de phase dispersée dans la phase continue formée par la solution d'un mélange de collagène, de préférence atélocollagène, et de polyholoside, sous agitation pendant le temps nécessaire pour réaliser un degré approprié de réticulation interfaciale, ce qui permet de produire des microcapsules dont la paroi est une paroi mixte de collagène, de préférence atélocollagène, et de polyholoside réticulé. Les microcapsules sont séparées de manière appropriée par une décantation naturelle après un ou plusieurs lavages éventuels. On peut également procéder par une extrusion laminaire au travers d'une buse d'extrusion, l'écoulement laminaire étant soumis à des vibrations de manière à former des gouttelettes individuelles qui tombent ensuite dans un bain de réticulation contenant l'agent réticulant. Comme agent de réticulation, on utilise avantageusement du chlorure d'acide, un anhydride d'acide, ou un acide carboxylique dibasique ou polybasique. Un agent de réticulation préféré est choisi parmi le groupe consistant de chlorure de téréphtaloyle, un chlorure de phtaloyle, un chlorure de sébacoyle, un chlorure de succinyle, un chlorure d'un acide tricarboxylique tel que l'acide citrique ou un anhydride d'acide tel que l'anhydride succinique. Comme solvant de l'agent de réticulation, on utilise un liquide hydrophobe dans lequel le collagène, de préférence l'atélocollagène et/ou le polyholoside, sont insolubles. On utilise encore de préférence du cyclohexane ou du chloroforme. Grâce à l'emploi d'un procédé de réticulation interfaciale, on peut ainsi préparer des microcapsules qui peuvent encapsuler un principe actif quelconque. En particulier, il est avantageux d'encapsuler dans les microcapsules une particule magnétique telle qu'un oxyde de fer, ce qui permet de faciliter la séparation du support solide des solutions dont on veut réaliser l'analyse, ce qui constitue un avantage technique important de l'invention. En effet, on obtient un temps de séparation inférieur à 5 s sur 1 cm de distance en présence d'un simple aimant permanent. Ceci est dû à leur masse relativement importante liée à une densité voisine de 1 ne nécessitant qu'une faible charge en oxyde magnétique de l'ordre de 1% en poids, pour obtenir ce résultat. L'agitation magnétique devient alors possible. Le support solide selon l'invention présente un volume relativement important ce qui lui apporte une insensibilité aux forces d'agrégation qu'elles soient hydrophobes ou ioniques. Cela permet encore la séparation rapide en cours de fabrication par centrifugation à basse vitesse, par exemple de l'ordre de 800 g pendant 2 min, et une remise en suspension sous forme non agrégée par simple agitation. Les particules de support solide selon l'invention peuvent être obtenues en détail intermédiaire par exemple de l'ordre de 50 pm, grâce au procédé de fabrication utilisé, en particulier la réticulation interfaciale, ce qui permet d'obtenir des surfaces 2 réactives suffisantes lors d'un immuno-essai (par exemple 625 mm pour 50 ,ul de particules de support solide en suspension à 10% en poids). Cette surface extérieure est en permanence en contact avec le- liquide réactionnel. C'est donc une surface extrêment efficace. Les particules du support solide selon l'invention sont par nature hydrophiles en raison de sa constitution chimique. On sait que les polyholosides sont des enchaînements de sucres possé dant dans leur structure de nombreuses fonctions hydrophiles. Par ailleurs, on peut également incorporer, comme polyholoside, du chitosane, ce qui permet d'obtenir des particules solides ioniquement peu chargées. Par ailleurs, le couplage chimique covalent selon l'invent permet aussi d'obtenir des greffages fortement liés stables et fixés dans un sens choisi, par exemple et avantageusement pour la fixation de peptides, ce qui permet d'obtenir une efficacité de réaction maximale. D'autres buts, caractéristiques et avantages de l'invention apparaîtront clairement à la lumière de la description explicative qui va suivre faite en référence à plusieurs exemples de réalisation de l'invention donnés simplement à titre d'illustration et qui ne saurait donc en aucune façon limiter la portée de l'invention. Dans les exemples, tous les pourcentages sont donnés en poids sauf indication contraire. Exemple 1 selon l'invention Couplage d'anticorps polyclonaux à des particules solides magnétiques par l'EDC (1-éthyl-3-(3-diméthylaminopropyl)carbodiimide) : application à la détection du rotavirus humain dans les selles. 1. Préparation des particules solides (sous forme de microcapsuLes) Principe : Des particules solides de taille moyenne de 50 um environ ont été préparées et réticulées après émulsion d'une solution aqueuse d'atélocollagène et de chitosane dans une phase huileuse. Cette préparation a été effectuée selon le procédé décrit dans l'exemple 1 de FR-B1-2 642 329 (89-01221). L'incorporation d'oxyde de fer magnétique (FE304) permet l'obtention d'une phase solide séparable par action d'un champ magnétique. Mode opératoire A une solution d'atélocollagène à 1,6% est ajoutée 10% d'une solution de KITAN à 3% dans l'acide lactique. L'atélocollagène est préparé selon la méthode décrite dans le brevet français o n 8901221. Le TITAN" est fourni par la Société ABER TECHNOLOGIES, Prat Menau 29880 Plouguerneau France. Le KITAN est un chitosane de masse moléculaire 1 200 000 daltons, possédant un taux de désacétylation de 2,4%. Au mélange atélocollagène - Kitan est ajoutée une concentration de 5% de carbonate de sodium. Le pH est alors ajusté à 8,0 par HCl N/10. Dans cette préparation, 1% d'oxyde de fer Fe304 est introduit. 100 g du mélange ainsi obtenu sont émulsionnés dans 300 ml de DRAGOXAT vendu par la Société allemande DRAGOCO et contenant 5% de SPAN 85 vendu par ICI COMPANY. L'émulsion est obtenue par agitation rapide à l'aide d'un système agitateur Ultra Turax R tournant à 15 000 tr/min (rpm) pendant 2 min. 400 Ml de DRAGOXATe renfermant l'agent réticulant, soit 2,5% de chlorure d'acide téréphtalique sont ajoutés à l'émulsion maintenue sous agitation de 15 000 tr/min pendant 30 min. L'agent réticulant est éliminé grâce à une centrifugation à 1 500 g pendant 10 min et par rejet du surnageant obtenu. Trois lavages successifs sont effectués avec 400 ml de DRAGOXAT , les capsules collagéniques étant récupérées par centri guation dans les mêmes conditions que précédemment. Six lavages mettant en oeuvre chaque fois 600 ml d'éthanol sont réalisés afin d'éliminer le DRAGOXAT résiduel. Deux lavages par 60 ml d'une solution de soude à pH 9 et trois lavages par de l'eau désionisée permettent d'eliminer les agrégats de capsules. Un culot de particules solides est ainsi obtenu après centrifugation à 1 500 g pendant 10 min. Ce culot est alors dispersé dans un volume égal d'eau désionisée renfermant à 0,01% de mercurothiolate de sodium Cette dispersion de particules solides sera celle mise en oeuvre lors des détections et dosages décrits ci-dessous. 2 Preparation d'un réactif spécifique pour un dosage par immuno essai On utilise des anticorps antirotavirus du type gamma G qui sont purifiés à partir d'un sérum de lapin hyperimmunisé par une suspension de rotavirus bovin. La présence d'anticorps antiantigène de groupe du virus permet la détection du virus humain. La pureté des gamma globulines est vérifiée par électrophorèse. Le dosage protéique en poids/volume est effectué selon la technique de Lowry. Le couplage des anticorps sur les particules solides magnétiques obtenues à l'étape 1 ci-dessus est effectué en utilisant les fonctions carboxyliques (-COOH) du collagène. Les particules solides sont au préalable lavées dans un tampon de pH voisin de la neutralité (compris entre 7 et 7,5) de faible force ionique et exempt d'amine (par exemple : tampon Hepes 10 mM). L'activation des particules solides est effectuée par une carbodiimide soluble (par exemple l'EDC (1-éthyl-3-(3-diméthylaminopropyl)carbodiimide) à une concentration comprise entre 5 et 100 mM (par exemple 20 mM) diluée dans le tampon Hepes 10 mM. La proportion sera de 1 volume de particules solides magnétiques pour 1 volume d'EDC. L'activation sera faite sous agitation modérée (par exemple sur agitateur rotatif) de la suspension o pendant 1 h entre 20 et 25 C. L'excès d'EDC est ensuite éliminé par lavage des particules solides en tampon Hepes 10 mM (4 lavages successifs par ajout de 9 volumes de tampon) et récupération des particules solides par centrifugation ou par magnétisme. Le couplage des gamma G de lapin (au préalable dialysé en solution de Na 0,15 M) est effectué en ajoutant au dernier culot de centrifugation 1 volume de tampon carbonate-bicarbonate 0,1 M et 1 mg de gamma G par ml de culot. Le couplage est effectué à température ambiante sur agitateur rotatif durant une heure. Le blocage des fonctions résiduelles est effectué par ajout de 10% du volume total d'une solution d'éthanolamine 1 M pH 9,0 et agitation durant 1 h entre 20 et 250C. Une série de 4 lavages avec un tampon Tris 50 mM en final permet d'éliminer l'excès d'anticorps n'ayant pas réagi et la remise en suspension à 10% dans ce tampon permet d'obtenir la suspension définitive du réactif spécifique recherché. 3. Détection d'un élément spécifique (formant réactif obtenu à L'étape 2 ci-dessus) Cette préparation a pu être testée vis-à-vis des selles humaines étiquetées positives et négatives pour la recherche du rotavirus. Cette classification préalable a pu être réalisée à l'aide d'un coffret réactif de type ELISA classique disponible sur le marché. Le protocole de la réaction immunologique avec le réactif de particules solides magnétiques ci-dessus est le suivant : - dilution des selles au 3/30 en tampon Tris 50 mM - pH 7,4.Homogénéisation par agitation puis centrifugation 5 min pour décanter la matière fécale - mise en présence de 400 pl de surnageant et 40 jjl de réactif de particules solides magnétiques à 10% ; - agitation 20 min sur agitateur oscillant ; - lavages rapides par 1 ml de tampon PBS (Phosphate Buffer Saline) - Tween et séparation de la phase solide par aimantation ; - mise en contact du réactif de particules solides récupéré avec 500 ijl d'un anticorps monoclonal ainsi rotavirus dit "révélateur" car conjugué à la peroxydase ; - agitation 20 min sur agitateur oscillant ; - lavages rapides par 1 ml de tampon PBS - Tween, séparation des phases par aimantation ; - révélation de l'activité enzymatique par un substrat chromogène : H2O2/orthophénylènediamine. La lecture est effectuée visuellement, l'intensité de la coloration appréciée en +, cf. le tableau I ci-dessous. Tableau I Selle Coloration Interprétation A 0 négative B ++++ positive C ++++ positive D 0 négative Exemple 2 selon L'invention Couplage d'anticorps polyclonaux à des particules solides magnétiques par l'EDC : application au titrage de l'HCG (Human Chorionic Gonadotrophin) dans le sérum. Les anticorps anti HCG utilisés sont du type gamma G et sont purifiés à partir de sérum de lapin hyperimmunisé par l'HCG purifiée totale. Cet antisérum comporte donc des anticorps de spécificité Oc et B. Le couplage a été effectué selon le meme protocole que dans l'exemple 1,1 et 1,2. La préparation formant réactif a pu être testée vis-å-vis de sérums humains de femmes enceintes classés au préalable à l'aide d'un coffret ELISA classique du commerce. Deux sérums de donneurs masculins servent de témoin négatif. Le protocole de la réaction immunologique avec les particules solides magnétiques sensibilisées est le suivant : - mise en présence de 50 u1 de sérum non dilué et 40 u1 de réactif de particules solides magnétique à 10% ; - agitation 15 min sur agitateur oscillant ; - ajout de 100 pl d'un anticorps monoclonal anti HCG (spécificité ) conjugué à la peroxydase ; - agitation 15 min sur agitateur oscillant - lavages rapides par 1 ml de tampon PBS - Tween, séparation des phases par aimantation ; - révélation de l'activité enzymatique par l'H202/ortho- phénylènediamine. La lecture est effectuée sur un spectrophotomètre à 492 nm après blocage de la réaction enzymatique par 1 ml d'acide sulfurique, cf. tableau II ci-dessous : Tableau II Dosage de l'HCG dans les sérums humains II-A Sérums de femmes enceintes DO (492 nm) 1 0,544 2 0,900 3 1,454 4 0,139 5 0,443 II-B Sérums de donneurs masculins a 0,096 b 0,106 * Sérums étalon 5 mUI (seuil de positivité) 0,153 mUI = milli unité internationale ConcLusion La DO des 5 sérums positifs est proportionnelle à la concentration de l'HCG présente. Les serums de donneurs masculins sont bien négatifs ( Les particules solides magnétiques sont utilisables dans le cadre d'une détermination quantitative. REVENDICATIONS 1. Utilisation du collagène, de préférence de l'atélocollagène, encore mieux d'un mélange atélocollagène-polyholoside, comme support solide de fixation d'un capteur, dénommé ligand ou affinant, capable de réagir spécifiquement avec un élément à detecter dans un milieu biologique, pour former un complexe spécifique, pouvant être détecté par tout moyen de détection. 2. Utilisation selon la revendication 1, caractérisée en ce que le collagène est sous forme de particules, billes ou microcapsules, de préférence de diamètre compris entre 5 et 500 pm. 3. Utilisation selon la revendication 1 ou 2, caractérisée en ce que le collagène de préférence l'atélocollagène, est combiné à un polyholoside. 4. Utilisation selon l'une des revendications 1 à 3, ca ractérisée en ce que les particules de collagène contiennent un oxyde magnétique, de préférence un oxyde magnétique de fer. 5. Utilisation selon la revendication 4, caractérisée en ce que la concentration en oxyde magnétique est comprise entre 0,1 et 10% en poids. 6. Utilisation selon l'une des revendications 1 à 5, caractérisée en ce qu'un capteur est fixé de manière covalente par un agent chimique, au support solide. 7. Utilisation selon la revendication 6, caractérisée en que la fixation est réalisée avec des fonctions aminées et/ou avec des fonctions carboxyliques et/ou avec des fonctions alcooliques du collagène et/ou du polyholoside. 8. Utilisation selon l'une des revendications 1 à 7, caractérisée en ce que le polyholoside est un glycosaminoglycanne, avantageusement de structure, choisi parmi le groupe consistant de chondroitine-4-sulfate, chondroitine-6-sulfate, dermatane-sulfate, heptarane-sulfane, kératane-sulfate et d'héparine et ses dérivés, en particulier les héparines bas poids moléculaire ayant un poids moléculaire compris entre 2 000 et 10 000 ; et le chitosane et le dextrane. 9. Réactif biologique, caractérisé en ce qu'il comprend comme support solide du collagène, de préférence de l'atélocollagène, et encore mieux un mélange d'atélocollagène et de polyholoside, sur lequel est fixé un capteur formant ligand ou affinant, spécifique d'un élément à détecter dans un milieu biologique. 10. Réactif selon la revendication 9, caractérisé en ce que le support solide est défini selon l'une quelconque des revendications 2 à 8. 11. Procédé de détection d'un élément présent dans un milieu biologique, caractérisé en ce qu'on utilise comme réactif biologique un réactif biologique selon la revendication 9 ou 10.