Brevet FR2673540A1 — publié le 19920911

La présente invention concerne un procédé de décontamination "in situ" d'une enceinte étanche, après un cycle de dessiccation sous vide d'un produit actif, notamment lors d'une lyophilisation. Parmi les procédés de conservation de produits labiles, la lyophilisation (sublimation de la glace sous pression réduite) constitue le moyen actuel le plus sûr de conserver à un produit son activité lors du stockage. L'industrie pharmaceutique applique largement cette technique à tous les principes actifs susceptibles d'encourir une dénaturation lorsque la teneur en eau est trop importante. La lyophilisation est d'autant plus appropriée aux produits pharmaceutiques que cette technique s'applique en fin de production, au niveau du récipient final. Si les procédés de préparation du lyophilisateur sont bien codifiés, notamment en ce qui concerne le nettoyage par les procédés NEP et la stérilisation à la vapeur, il n'en va pas de même pour le déchargement de la cuve de dessiccation. En effet, en cours de sublimation, des particules de produit actif ont pu être entraînées par le flux de vapeur d'eau et se retrouver de façon aléatoire dans l'atmosphère de la cuve. L'opérateur chargé de recueillir la fabrication est ainsi exposé au contact de ces aérosols, ce qui peut entraîner un risque important pour sa santé: absorption de principes actifs en doses non connues par voies d'introduction non validées : tractus respiratoire, zone oculaire, exposition cutanée. Ces situations dangereuses sont particulièrement redoutables lorsque le produit lyophilisé contient des substances biologiques à potentiel réplicatif, telles que des bactéries, des virus, ou des acides nucléiques isolés. C'est le cas, par exemple, de préparations vaccinales lyophilisées ou de souches pathogènes de virus ou de bactéries destinées à la constitution de collections ou encore de vecteurs viraux ou bactériens préparés en vue d'une application vétérinaire ou agricole (parasitage ciblé d'agents nuisibles pour les animaux ou les plantes). Le risque existe également lors de la lyophilisation de produits pouvant contenir des virus infectieux, comme par exemple HIV ou HBV, potentielle ment présents dans le sang humain et ses dérivés, lorsque les contrôles de virémie ne sont pas assez sensibles ou donnent de faux négatifs ou ne sont pas fiables. Les substances médicamenteuses lyophilisées présentent également un risque, dans la mesure où elles ont, à une concentration assez faible, une activité pharmacodynamique puissante : antibiotiques, anticancéreux, anti-inflammatoires stéroldiens, immunodépresseurs, hormones. Les risques sont très importants lorsque le récipient contenant ces substances est brisé à l'intérieur de l'enceinte du lyophilisateur, par suite d'un défaut de résistance toujours possible ou à l'occasion du bouchage automatique. Grâce à la présente invention, la Demanderesse propose de diminuer ces risques par un nouveau moyen de décontamination "in situ" des produits nocifs libres ou libérés dans l'enceinte du lyophilisateur au cours du procédé de cryodessiccation lui-même. La présente invention concerne donc un procédé de décontamination d'une enceinte étanche sous vide dans laquelle se trouvent un ou plusieurs récipients contenant des agents pathogènes et/ou des produits dangereux, caractérisé en ce que avant l'ouverture de l'enceinte étanche pour prélever un récipient, on a introduit dans l'enceinte un gaz ou un liquide susceptible de se vaporiser dans les conditions régnant dans l'enceinte, et présentant des propriétés biocides à l'égard du pathogène et/ou neutralisantes à l'égard du produit dangereux. Les récipients peuvent être clos ou bien ouverts. Selon une des caractéristiques de l'invention, l'agent pathogène et/ou le produit dangereux est déshydraté, en particulier par lyophilisation, atomisation ou séchage sous vide. Le traitement de décontamination prend place de préférence après le cycle de lyophilisation que subit le produit. En effet, ce procédé permet de bénéficier du vide créé dans l'enceinte et de la possibilité de réfrigérer ou de chauffer les produits contenus dans l'enceinte. La température des mélanges décontaminants peut s'échelonner entre -SOOC et +1500C. Lorsque le cycle de lyophilisation normal d'un produit à risque est terminé, les récipients de produit sec sont bouchés en automatique dans la cuve. L'enceinte est remise sous vide, si le bouchage a été effectué sous atmosphère inerte, ceci afin d'éviter les fuites vers l'extérieur et le système de refroidissement peut être maintenu en fonction, de façon à créer des surfaces de condensation.L'existence de cette dépression permet alors aisément la décontamination par vaporisation d'un liquide ou introduction d'un gaz, la réfrigération de l'enceinte permet la condensation sur les surfaces froides à décontaminer. Le liquide destiné à être vaporisé doit bien entendu être adapté au pathogène à détruire ou au toxique à neutraliser. I1 peut s'agir de solutions aqueuses ou organiques. Parmi les solutions ou gaz utilisables, il faut citer celles présentant des propriétés biocides notamment bactéricides et/ou virucides et les compositions oxydantes. Notamment on peut utiliser des solutions aqueuses d'acide peracétique, de peroxyde d'hydrogène ou d'alcool ou des mélanges, notamment d'acide peracétique et d'H202 ou d'alcool et d'H202. Parmi les mélanges utilisant des solutions organiques il faut citer - les mélanges de solvants hydrophiles/lipophiles tels que le méthanol/chloroforme - ou les mélanges de solvants lipophiles (diethyl éther par exemple) inertés par de l'azote, du C02 ou des fréons ou des substituts des fréons. L'injection d'un gaz préalablement généré fait également partie de l'invention, dans la mesure où ce gaz est doté notamment de propriétés oxydantes et virucides. Parmi ces gaz, il faut citer - les mélanges gazeux constitués d'oxygène et d'ozone ou d'oxygène, d'ozone et de dioxyde de carbone - ou les mélanges gazeux dans un solvant volatil, par exemple de l'oxygène/ozone en solution dans un fréon (F22, F11, F113) ou des substituts des fréons. L'injection des phases liquides s'effectue à travers un injecteur disperseur qui provoque l'atomisation du mélange sous forme d'aérosol dans l'enceinte. La pression à l'intérieur de l'enceinte est maintenue à une valeur suffisamment basse pour 1/ rester en dépression par rapport à la pression atmosphérique extérieure, pour éviter les fuites d'agent inactivant. 2/ conserver une tension de vapeur suffisante pour obtenir une phase gazeuse du/des solvant/s injecté/s. Le traitement dure de préférence de 30 minutes à 10 heures, selon la nature de la décontamination recherchée. Pendant la durée du traitement, la modulation thermique de l'enceinte est ajustée selon l'effet recherché ; les températures négatives et les températures positives sont réglées en fonction de la stabilité du produit à décontaminer. La méthode de décontamination selon l'invention s'applique à des produits biologiques potentiellement dangereux pouvant présenter un risque pour l'environnement s'ils ne sont pas confinés de façon hermétique et étanche dans un récipient : virus, bactéries (sporulées ou non), champignons, levures, acides nucléiques. L'invention s'applique également à des produits pharmacologiquement actifs pour la médecine humaine ou vétérinaire, notamment lorsqu'il est connu que le produit à traiter est sensible à l'oxydation. C'est le cas de certaines classes de médicaments - Antibiotiques Oligomycine, comportant une double liaison C = C et un diène. Pénicilline, comportant un noyau aromatique, ou une double liaison ou un atome de souffre dans la molécule. - Immunodépresseurs: Clyclosporine, comportant une double liaison. - Anti-cancereux Melphalan, comportant un noyau aromatique. - Corticoides Dexamethasone, comportant une double liaison. - Hormone : GHRH. - Agents chélateurs: Dimercapiol - Prostaglandines. Toutes ces substances sont capables de réagir avec l'ozone, puis éventuellement avec l'acide péracétique ou performique, pour donner des dérivés inactifs au plan pharmacologique. L'invention s'applique également à l'élimination de composés indésirables- pouvant accidentellement se trouver dans des produits actifs tels que le formol ou les endotoxines par exemple. Les avantages et les applications possibles de la présente invention apparaîtront mieux dans les exemples suivants, donnés à titre d'illustration de l'invention, sans limiter son champ d'application. Exemple I Une suspension de virus de la famille des bactériophages Microviridiae e X 174 est congelée et lyophilisée. La suspension contient au départ 107 particules infectieuses par ml, exprimées en PFU/ml. Le système de titration est effectué à l'aide d'une colonie uniforme d'E. Coli croissant sur gélose. Par dilutions successives de 10 en 10 de la suspension virale, on obtient le titre de départ lorsque le nombre de plages de lyse apparues après incubation 18h à 37"C de la gélose ensemencée est compris entre 30 et 300. Après lyophilisation, on injecte 500 ml d'alcool éthylique à 70% dans l'enceinte et on laisse en contact 30 minutes. Les plateaux du lyophilisateur sont réglés à - 40"C. Résultats témoin lyophilisé bouché sous vide : 106 PFU/ml flacon ouvert en contact avec l'alcool 70% : 2,1 x 1o2 PFU/ml Soit une réduction de 3,7 Log Exemple II Dans les mêmes conditions que dans l'exemple I, on injecte du peroxyde d'hydrogène à 30 volumes à raison de 500 ml. On maintient en contact pendant 10 minutes. La suspension virale témoin, bouchée sous vide, contenait après lyophilisation 105 PFU/ml. La flacon ouvert, en contact avec le peroxyde d'hydrogène, ne présente plus que 30 PFU/ml. La réduction de titre viral obtenue est de 4,5 Log. Exemple III Dans les mêmes conditions que dans l'exemple I, on injecte successivement après lyophilisation, d'abord 500 ml de peroxyde d'hydrogène à 30 volumes ; on laisse en contact 10 minutes ; puis on injecte 500 ml d'alcool éthylique 70%, qu'on laisse en contact pendant 30 minutes. Dans cet exemple, la lyophilisation a été volontairement mal conduite, de façon à laisser une humidité résiduelle importante ( > 20%) dans le produit traité. Dans ce cas, la réduction de titre viral obtenue par le traitement n'est que de 1,1 Log (témoin bouché sous vide = 4 x PFU/ml; flacon en contact avec les agents inactivants = 3 x 104 PFU/ml). Cet exemple démontre que le produit à traiter doit être préalablement desséché, afin d'absorber en lieu et place d'eau, l'agent inactivant. Exemple IV Dans les mêmes conditions que dans l'exemple I, on injecte successivement 500 ml de peroxyde d'hydrogène à 30 volumes et 500 ml d'alcool éthylique à 70%. Le flacon témoin lyophilisé contient 5 x 103 PFU/ml. Le flacon en contact avec les agents inactivants ne contient plus de particule infectieuse détectable. La réduction de titre viral obtenue est a 3,7 Log. Exemple V Une suspension de virus bactériophages 25 x 174 est lyophilisée dans son milieu de conservation comme dans l'exemple I. Après le cycle de dessiccation, on injecte dans la cuve du lyophilisateur une solution d'acide peracétique à 10% (vol/vol). Le flacon témoin bouché sous vide contient 1,85 x 104 PFU/ml. Le flacon en contact avec l'agent inactivant ne contient aucune particule infectieuse détectable. La réduction de titre viral est3 4,3 Log. Exemple VI Dans le but d'appliquer le procédé d'inactivation à un produit potentiellement infectieux, on a mélangé une suspension de virus bactériophages x 176 à une solution d'immunoglobulines extraites de plasma humain : 100 ml de solution d'immunoglobulines humaines contiennent 20 ml de suspension de ( x 174 à 1,52 x 107 PFU/ml. Après lyophilisation du produit, on injecte successivement dans la cuve du lyophilisateur 500 ml d'hydroxyde d'hydrogène à 30 volumes, puis après 10 minutes de contact, 500 ml d'alcool éthylique à 70%. Le taux de réduction observé est de 1,52 Log. Exemple VII Une solution d'immunoglobulines extraite du plasma humain est additionnée de virus bactériophage O x 174 comme dans l'exemple VI: 100 ml de solution d'immunoglobulines contiennent 20 ml de O x 174 à 3,7 x 108 PFU/ml. La solution finale contient encore 4,5 x 104 PFU/ml ; la réduction de titre viral est attribuable à la présence d'anticorps spécifiques dans la préparation d'immunoglobulines utilisée. Après lyophilisation, on injecte dans la cuve du lyophilisateur un mélange constitué d'alcool absolu 100%, dilué par du peroxyde d'hydrogène à 10 volumes, de telle façon que le titre alcoolique final soit de 70%. Le flacon en contact avec l'agent inactivant ne contient aucune particule infectieuse détectable. La réduction du titre viral est > , 4,65 Log. Exemple VIII 50 ml de solution d'albumine injectable extraite du plasma humain et contenant 50 g/l d'albumine est additionnée de 10 ml d'une suspension de virus bactériophage Qj x 174 titrant 6,55 x 108 PFU/ml. Après lyophilisation de la solution, on injecte dans l'enceinte un mélange gazeux contenant de l'oxygène et de l'ozone. L'ozone est obtenu par décharge électrique à haute tension dans un courant d'oxygène pur ; la quantité générée est de 40 llg/ml d'ozone. L'injection est effectuée jusqu'à obtenir une pression de - 0,2 bar dans l'enceinte. Le mélange est maintenu dans le lyophilisateur pendant 30 minutes. Le gaz est ensuite aspiré à travers un agent neutralisant constitué d'une solution d'iodure de potassium. La cuve est ensuite remise à pression atmosphérique. Aucun flacon traité dans le lyophilisateur ne contient de particules infectieuses détectables. La réduction de titre viral obtenu est > 8,8 Log. Exemple IX Une solution d'immunoglobulines extraites de plasma humain s'est révélée non conforme lors des essais préconisés par la Pharmacopée, notamment en ce qui concerne la mesure de l'effet pyrogène sur lapins. Ce produit non conforme lyophilisé est placé dans l'enceinte du lyophilisateur et mis sous vide. On injecte alors le mélange alcool éthylène/peroxyde d'hydrogène tel qu'il est décrit dans l'exemple VII. Après un temps de contact de 30 minutes, la cuve est purgée et les flacons traités sont bouchés sous vide. L'essai des substances pyrogènes sur lapins montre une élévation de température de 1 45 pour 3 lapins à l'injection du produit non traite. L'injection du produit traité selon les modalités de l'exemple X ne provoque plus qu'une élévation de température minime de 0,7"C pour 3 lapins. Le produit traité est ainsi conforme aux prescriptions relatives à l'essai des substances pyrogènes. Exemple X Une solution de facteur de la coagulation FVIII extraite du plasma humain a été accidentellement contaminée par des endotoxines d'origine bactérienne. Les flacons lyophilisés sont placés dans la cuve du lyophilisateur et évacués sous vide. On injecte alors un mélange gazeux d'oxygène et d'ozone obtenu selon le même procédé que dans l'exemple VIII. Le mélange est maintenu au contact du produit pendant 30 minutes. Après remise à pression atmosphérique, les flacons sont titrés pour leur teneur en endotoxine par un test spécifique (Limulus Amebocyte Lysate : LAL). Les concentrations sont exprimées en Endotoxin Units/ml (EU/ml) par rapport à une endotoxine de référence. Le flacon non traité contient 327 EU/ml ; le produit traité selon l'exemple X contient 116 EU/ml, soit une réduction de 64,5% du taux d'endotoxine. REVENDICATIONS 1. Procédé de décontamination d'une enceinte étanche sous vide dans laquelle se trouvent un ou plusieurs récipients contenant des agents pathogènes et/ou des produits dangereux, caractérisé en ce que avant l'ouverture de l'enceinte étanche pour prélever un ou les récipients, on introduit dans l'enceinte un gaz ou un liquide susceptible de se vaporiser dans les conditions régnant dans l'enceinte, et présentant des propriétés biocides à l'égard du pathogène et/ou neutralisantes à l'égard du produit dangereux. 2. Procédé selon la revendication 1 caractérisé en ce que les récipients dans l'enceinte peuvent être fermés ou bien ouverts. 3. Procédé selon les revendications 1 et 2 caractérisé en ce que l'agent pathogène et/ou le produit dangereux est sous forme déshydratée. 4. Procédé selon la revendication 3 caractérisé en ce que l'agent pathogène ou le produit dangereux a été déshydraté par lyophilisation, atomisation ou séchage sous vide. 5. Procédé selon l'une des revendications I à 4 caractérisé en ce que le liquide susceptible de se vaporiser est choisi parmi les solutions de péroxyde d'hydrogène, d'acide peracétique et l'alcool et leurs mélanges. 6. Procédé selon l'une des revendications I à 5 caractérisé en ce que le liquide susceptible de se vaporiser est de l'acide peracétique dans l'eau distillée. 7. Procédé selon l'une des revendications 1 à 5 caractérisé en ce que le liquide susceptible de se vaporiser est choisi parmi les solutions de produit biocide ou neutralisant les produits toxiques dans un solvant organique. 8. Procédé selon l'une des revendications 1 à 5 caractérisé en ce que le liquide susceptible de se vaporiser est un mélange de solvants hydrophiles/lipophiles ou un solvant contenant un gaz. 9. Procédé selon l'une des revendications 1 à 5 caractérisé en ce que le liquide susceptible de se vaporiser est un éther. 10. Procédé selon l'une des revendications 1 à 5 caractérisé en ce que le gaz généré est un mélange d'oxygène et d'ozone. 11. Procédé selon l'une des revendications 1 à 8 caractérisé en ce que le liquide susceptible de se vaporiser est introduit dans l'enceinte par l'intermédiaire d'un injecteur/dis perseur. 12. Procédé selon l'une des revendications 1 à Il caractérisé en ce que l'enceinte étanche sous vide est une enceinte de lyophilisation. 13. Procédé selon 1 à 12 caractérisé en ce que la pression à l'intérieur de l'enceinte est maintenue à une valeur suffisamment basse pour rester en dépression par rapport à la pression extérieure et pour conserver une tension de vapeur suffisante pour obtenir une phase gazeuse du liquide susceptible de se vaporiser ou du gaz. 14. Procédé selon 1 à 13 caractérisé en ce que les mélanges décontaminants sont maintenus au contact des substances à décontaminer de 30 minutes à 6 heures. 15. Procédé selon 1 à 14 caractérisé en ce que les mélanges décontaminants peuvent être portés à des températures comprises entre -50 C et +1500C dans l'enceinte à traiter. 16. Dispositif d'injection et de contrôle des mélanges décontaminants permettant la mise en oeuvre du procédé selon les revendications 1 à 15.