Brevet FR2684299A1 — publié le 19930604

La présente invention a pour objet des compositions pharmaceutiques contenant en association de l'adénosine-5triphosphate disodique (ATP) et de l'amiloride utiles pour le traitement de la mucoviscidose. Pour étudier cette sécrétion d'eau par les cellules épithéliales respiratoires, la Demanderesse a utilisé un système de culture en chambre bicompartimentale récemment développé par elle (Dupuit F., Jacquot J., Benali R., Hinnrasky J. and Puchelle E. Polarized secretion of proteins by human tracheal gland cells culturel on a permeable substrate. Arn. Rev. Resp. Dis., 1991, 143 : A147). Les cellules épithéliales respiratoires de surface sont obtenues à partir de polypes nasaux humains par digestion enzymatique selon une technique développée par la Demanderesse (Chevillard M., Hinnrasky J., Pierrot D;, Zahm J.M., Klossek J.M., Puchelle E. Differenciation of human surface upper airway epithelial cells in primary culture on a flotting collagen gel. Biol. Cell, 1990, 69 : 13a). Les cellules épithéliales sont cultivées sur une membrane semiperméable recouverte de collagène de types I et II en présence d'un milieu de culture sans sérum supplémenté en hormones et en facteurs de croissance. La culture des cellules sur cette membrane semi-perméable permet d'accéder séparément aux surfaces apicales et basolatérales des cellules (fig.1). Les effets de l'ATP seul, de l'amimloride seul et de l'association ATP + amiloride sur la sécrétion d'eau sont étudiés lorsque les cellules parviennent à confluence. L'état de confluence des cellules qui engendre une imperméabilité de la couche cellulaire est contrôlé par la mesure de la résistance cellulaire. L'étude a été réalisée en double aveugle sans incubation et après incubation des cellules pendant 30 minutes en présence d'amiloride à la concentration de 104M. L'ATP est apporté par le compartiment apical dans un volume de 100 pl de milieu de culture. Après 2 heures d'incubation en présence de 3 concentrations différentes d'ATP (10-5M, 104M, 10-3M)(effet dose), la variation du volume du compartiment apical est évaluée par pesée. Les résultats montrent que l'association ATP + amiloride augmentent de façon significative le volume apical du milieu de culture par rapport au témoin. Cette augmentation est due à une sécrétion d'eau par les cellules épithéliales respiratoires sous l'effet de l'association ATP + amiloride. Chez les patients dont l'épithélium respiratoire est altéré par diverses pathologies (mucoviscidose, infections ou inflammations bronchiques ou ORL), les sécrétions sont fréquemment déshydratées. Or, au cours de ces pathologies, l'élimination des sécrétions repose essentiellement sur la clearance à la toux qui dépend de l'adhésivité du mucus. La diminution de l'adhésivité du mucus est obtenue en particulier par son hydratation. L'association ATP + amiloride, qui peut augmenter l'hydratation du mucus, est donc un agent de traitement potentiel de toutes les affections bronchiques où il existe une deshydratation de l'épithélium et une hyperadhésivité du mucus (rhinites inflammatoires, infectieuses, allergiques, bronchites inflammatoires, infectieuses, allergiques ou toxiques, emphysème). Les compositions pharmaceutiques de l'invention contenant une association d'ATP et d'amiloride, en association avec tout excipient approprié, peuvent donc être utilisées pour le traitement de ces affections. Les compositions pharmaceutiques de l'invention peuvent être administrées par instillations ou sous forme de sprays pour les affections du domaine otorhinolaryngologique ; elles peuvent l'être sous forme de sprays ou par nébulisations pour inhalation pour les pathologies bronchiques. Revendications 1. Compositions pharmaceutiques contenant de l'adénosine-5triphosphate disodique et de l'amiloride, en association avec tout excipient approprié, pour le traitement des affections des voies respiratoires (ORL ou bronchiques) où il existe une deshydratation de l'épithélium et une hyperadhésivité du mucus. 2. Utilisation de l'association d'adenosine-5-triphosphate disodique et d'amiloride pour la fabrication de moyens destinés à traiter les affections des voies respiratoires (ORL ou bronchiques) où il existe une deshydratation de l'épithélium et une hyperadhésivité du mucus.