Brevet FR2680798A1 — publié le 19930305

La présente invention concerne un procédé d'obtention d'arôme naturel de vanille par traitement des gousses de vanille vertes. Elle concerne également l'arôme obtenu par le procédé. L'arôme de vanille comprend principalement comme constituants, la vanilline, l'acide vanîllique, l'acide para-hydroxybenzoique et l'aldéhyde p ara-hydroxyb enzoique. Ces constituants sont pratiquement absents de la gousse verte, même mature, et ne se forment que lentement dans la gousse après la cueillette. Sur un plan industriel, les extraits de vanille (comprenant notamment les différents constituants énumérés ci-dessus) sont obtenus à partir de gousses ayant subit successivement de façon habituelle un échaudage, c'est-à-dire une immersion pendant 3 minutes dans l'eau à 65"C, un étuvage, pendant lequel les gousses perdent leur eau et prennent leur couleur brune, et une étape de maturation finale. Un tel traitement s'étale sur une période d'environ 9 mois pendant lesquels de nombreux contrôles de la qualité des gousses sont éffectués, ce qui entraîne une augmentation de son coût (Mémento de l'agronome, 4è édition, Ministère de la coopération et du développement). Un tel procédé permet d'obtenir entre 20 et 30 g d'arôme de vanille par kilo de matière séche de gousses. L'apparition de l'arôme de vanille au cours de ce traitement est dû en partie à l'hydrolyse d'un précurseur glucosilé, la glucovanilline qui se trouve dans la gousse verte à une teneur telle que, 50 g de vanilline pourraient être obtenus par hydrolyse. (Arana. F.E, 1943, Food Research, vol 8, pages 343-351). Une décomposition microbienne ou enzymatique de la vanilline est probablement responsable de la perte importante observée durant ce traitement. Afin de pallier les inconvénients liés à ce procédé, il a déjà été proposé par le brevet FR-A-2 634 979 de congeler à une température comprise entre -5 C et -300C les gousses vertes, puis de les réchauffer avant d'en extraire les constituants de l'arôme. Ce procédé permet de reccourcir la maturation. L'objet de la présente invention est de proposer un nouveau procédé qui permet de libérer la vanilline et les autres constituants aromatiques, contenus sous forme de glucosides dans la gousse verte. Un autre objet de la présente invention est de proposer un procédé permettant d'obtenir un arôme de vanille avec un excellent rendement. Selon la présente invention, le procédé d'obtention d'arôme naturel de vanille est caractérisé en ce que l'on traite un broyat de gousses de vanille vertes, au moyen d'un système enzymatique capable de détruire les systèmes membranaires des cellules végétales et dthydrolyser les glucosides. Le fait d'utiliser un broyat permet de faciliter l'attaque enzymatique des membranes des cellules. Il est donc clair que plus le broyage sera fin, plus l'attaque enzymatique en sera facilitée, compte tenu naturellement des contraintes liées à la mise en oeuvre industrielle d'un tel procédé Par gousses vertes de vanille, on entend des gousses mures qui ont été fraîchement récoltées. En général, le procédé doit être mis en oeuvre quelques jours après la récolte, généralement entre l et 12 jours après celle-ci. Par système enzymatique capable de détruire les systèmes membranaires des cellules végétales, on entend tous les systèmes qui peuvent liquéfier les fruits, les légumes et en général toutes les cellules végétales pouvant servir d'aliment. Avantageusement, on utilisera les systèmes enzymatiques particulièrement efficaces pour liquéfier les gousses de vanille verte. De façon générale, on pourra utiliser une ou plusieurs préparations enzymatiques choisies parmi les pectinases, les cellulases, les hémicellulases ou les celliobiases, présentant une ou plusieurs activités glucosidases. Ces enzymes peuvent être utilisées seules ou en mélange. De préférence, le système enzymatique devra comprendre une ou plusieurs enzymes possédant une activité glycosidase et notamment béta-glucosidase. Ces enzymes sont bien connues de Ithomme de métier et de nombreux systèmes à base de celles-ci sont commercialement disponibles. D'une façon générale, il est bien entendu, que l'invention couvre tous les systèmes enzymatiques et notamment ceux ayant une activité glucosidase qui permettent de libérer l'arôme de vanille potentiellement contenu dans les gousses vertes de vanille. L'homme de métier sera à même par des manipulations simples (comme celles par exemple illustrées dans les exemples qui seront décrits à la suite de la présente description), de choisir les systèmes enzymatiques qui conviennent. Selon une caractéristique avantageuse du procédé selon l'invention et afin de faciliter le broyage, les gousses vertes sont hydratées puis broyées. Généralement sans que cela soit une condition essentielle de la présente invention la quantité d'eau que l'on pourra ajouter, sera équivalente au poids de matériel végétal. Le système enzymatique comprend avantageusement 10 à 1000 unités d'activité béta-glucosidase par gramme de gousses de vanille vertes, et de préférence de 20 à 500 unités d'activité enzymatiques béta-glucosidase. On a constaté qu'un intervalle compris entre 40 et 400 unités d'activité enzymatique était encore plus avantageux pour la mise en oeuvre du procédé selon l'invention. L'incubation est réalisée à un pH qui est avantageusement compris entre 3 et 7, et de préférence 4 et 6 et encore plus avantageusement aux environs de 5. Le pH naturel du broyat obtenu étant égal à 5, ce broyat est donc naturellement à la valeur optimale. De préférence également, le procédé est mis en oeuvre sous agitation pendant une durée suffisante pour permettre la libération de l'arôme de vanille. Avantageusement, cette durée sera supérieure à 2 heures à température ambiante. Cette température pourra être augmentée ou diminuée tout en prenant garde d'une part, à ne pas dépasser une température limite pouvant conduire à une dégradation de l'arôme de vanille, et d'autre part à ne pas abaisser de manière trop sensible la température risquant alors de bloquer les réactions souhaitées. Elles sera comprise généralement entre 10 et 600C, de préférence entre 30-40"C. De façon avantageuse, la durée de l'incubation sera comprise entre 3 et 30 heures. On a constaté néanmoins, que la libération était généralement totale après quelques heures d'incubation, celle-ci pouvant être appréciée par l'homme de métier au moyen d'analyses en chromatographie liquide haute pression. il est normalement conseillé de ne pas aller au delà de 24 heures. Après incubation, la phase liquide contenant l'arôme de vanille, est séparée de la phase solide contenant notamment les résidus cellulaires insolubles. Cette séparation peut être effectuée par exemple, par filtration et/ou par centrifugation. La phase liquide contenant l'arôme naturel de vanille peut ensuite être utilisée soit directement soit après concentration de l'extrait aromatique. Cette concentration peut être effectuée par évaporation, éventuellement sous vide puis filtration. Elle peut également être effectuée par extraction au solvant et évaporation subséquente de celui-ci. Les exemples ci-dessous illustrent l'invention sans toutefois la limiter Selon un mode opératoire général, les gousses vertes, après la récolte, sont broyées au mixeur après addition d'une quantité d'eau équivalente au poids de matériel végétal. L'incubation avec les enzymes est réalisée au pH naturel du broyat obtenu, c'est-à-dire à un pH de 5 environ sous agitation. A la fin de la réaction, de l'alcool à 96 % est ajouté de façon à obtenir un milieu hydroalcoolique à 50 %. L'échantillon est ensuite filtré. EXEMPLE I : ESSAIS SUR DIFFERENTS SYSTEMES ENZYMATIQUES Plusieurs types de préparations enzymatiques industrielles ont été testées de façon à en sélectionner une ou plusieurs possédant une activité glucosidase importante et dont la spécificité pouvait permettre de libérer la vanilline et les autres constituants volatils. Les essais sont effectués avec les systèmes enzymatiques suivants (le symbole u est l'unité d'activité glucosidase) A : sans système enzymatique (témoin) B :pectinase et béta-glucosidase 50 u/mg C :pectineglucosidase et cellulase 17 u/mg D :pectineglucosadase 79 u/mg E :pectinase et hémicellulase 4455 u/mg Après incubation, le broyat est centrifugé. L'analyse et la détermination de la quantité de vanilline sont réalisées par chromatographie en phase liquide (HPLC) sur le surnageant. Les résultats obtenus sont présentés dans le tableau ci-après Type d'enzyme Témoin A B C D E sans enzyme Quantité Vanilline en 0,35 0,3 1,3 3,2 1,5 6,5 g/kg de mati - re végétale L'enzyme E est une pectinase utilisée habituellement pour la liquéfaction des jus de fruit, celle-ci est la mieux adaptée à notre procédé. En effet, ses propriétés liquéfiantes permettent de détruire les systèmes membranaires de la cellule végétale libérant ainsi le contenu cytoplas mique permettant ainsi a l'activité glucosidase qu'elle contient de s'exprimer. EXEMPLE 2 : NOMBRE D'UNITES D'ENZYMES On a déterminé la quantité de préparation enzymatique optimum pour la libération de l'arôme. Cette activité est déterminée à 30"C en milieu tamponné citrate phosphate pH = 5 à partir du p.nitrophenyl glucoside comme substrat, sur le système enzymatique E, une unité d'activité correspondant à l'hydrolyse d'une micromole de substrat par mlnute. Les résultats sont indiqués dans le tableau ci-dessus Quantité d'en- zymes en unit activité /kc 0 90 220 310 450 de gousses vertes x Quantité de Vanilline en g/kg de goussets s 1,5 2,9 3,5 3,6 3,5 vertes obtenu après 20 h d'incubation Ce tableau montre que l'activité optimum se situe autour de 220 unités d'activité enzymatique pour l g de gousse verte mis en oeuvre. EXEMPLE 3 : DUREE D'INCUBATION Différents prélèvements au cours du temps ont été effectués de façon à déterminer le temps d'incubation nécessaire à l'obtention d'une teneur maximale en vanilline libre dans le milieu. A 50 g de gousses vertes broyées dans 50 cc d'eau, sont ajoutées 12 x 103 unités d'activité glucosidase (système E). Les résultats ci-dessous montrent que la quantité maximum de vanilline libre dans le milieu est atteinte après environ 7 heures d'incubation. Incubation à 30"C Temps d'incu- bation TO 1H 2H 4H 8H 10H 25H Quantite de vanilline en 1,1 1,4 1,7 2,2 2,9 3,2 3,4 g/kg Incubation à 370C Temps d'incu- bation TO 1H 2H 4H 6H 25H Quantité de vanilline en 1,1 2,3 1 2,9 3,6 3,9 4 g/kg Les figures 1 et 2 annexées illustrent pour le dernier exemple, le chromatogramme obtenu après 20 heures sans système enzymatique (figure l) et avec système enzymatique (figure 2). Les méthodes d'analyse ont été les suivantes pour les exemples ci-dessus De l'alcool à 96 % est ajouté de façon à obtenir un milieu hydroalcooloqie à 50 %. L'échantillon de milieu est filtré et injecté directement en HPLC. Appareil : Hewlett Packard 1090, détecteur UV Colonne Hewlett Packard ODS Hypersil Solvant A: Tampon citrate phosphate pH : 4,66 Solvant B acétonitrlle Débit : 0,3 ml/min. Absorption à 300 nm Gradient : TO : 0 % de solvant B 10': 15 % " " " " " " 15' : 80 % " " " " " " 20': 10 % " " " " " " Les figures 1 et 2 annexées sont des chromatogrammes de broyat de gousses vertes. Figure l: Chromatogramme à 300 nm du broyat de gousses vertes, témoin sans enzyme. G: Glucovanilline, V: Vanilline P : Parahydroxy benzaldehyde. Figure 2: Chromatogramme à 300 nm du broyat de gousses vertes, après 20 H d'incubation en présence d'enzymes: G: Glucovanilline, V: Vanilline P : parahydroxy benzaldehyde. REVENDICATIONS 1. Procédé d'obtention d'arôme naturel de vanille, caractérisé en ce que l'on traite un broyat de gousses de vanille vertes au moyen d'un système enzymatique, capable de détruire les systèmes membranaires des cellules végétales et d'hydrolyser les glucosides. 2. Procédé selon la revendication 1, caractérisé en ce que le système enzymatique est constitué d'une ou plusieurs enzymes possédant une activité glucosidase. 3. Procédé selon la revendication 2, caractérisé en ce que les enzymes sont choisies parmi le groupe suivant : les pectinases, les cellulases, les hémicellulases, les celliobiases ou les béta-glucosidases. 4. Procédé selon l'une des revendications précédentes, caractérisé en ce que l'on utilise 20 à 500 unités d'activité enzymatiques glucosidase par gramme de gousse de vanille vertes. 5. Procédé selon l'une des revendications précédentes caractérisé en ce que le pH est compris entre 3 et 7, de préférence environ 5. 6. Procédé selon l'une des revendications précédentes, caractérisé en ce que la durée d'incubation du mélange de broyat et du système enzymatique est supérieure à deux heures, de préférence entre 3 et 30 heures. 7. Procédé selon l'une des revendications précédentes, caractérisé en ce que les gousses vertes so nt hydratées avant broyage. 8. Procédé selon l'une des revendications précédentes, caractérisé en ce que la phase liquide est séparée de la phase solide, la phase liquide étant ensuite récupérée, l'extrait aromatique étant éventuellement isolé. 9. Arôme naturel de vanille obtenu selon la procédé de l'une des revendication 1 à 8