Brevet FR2684997A1 — publié le 19930618

La présente invention a pour objet des dérivés de la 9-(ss-D- xylofurannosyl)adénine et de la 1-(ss-D-xylofurannosyl)cytosi- ne, leur préparation et leur application en thérapeutique. Les composés de l'invention répondent à la formule générale (I) dans laquelle R1 représente un atome d'hydrogène, un groupe (C2-4)alcanoy- le, un groupe aroyle ou un groupe nitro, R2 représente un atome d'hydrogène, un groupe (C2-4)alcanoy- le, un groupe aroyle ou un groupe nitro, R3 représente un atome d'hydrogène, un groupe (C2~4)alcanoyle, un groupe aroyle ou un groupe nitro, B représente un radical de formule ou dans lequel R' représente un atome d'hydrogène ou un groupe (C2-4)alcanoyle. Les composés dans lesquels - R1 = acétyle, R2 = R3 = acétyle et B = adénine, - R1 = H, R2 = R3 = benzoyle et B = adénine, - R1 = H, R2 = R3 = acétyle et B = adénine, - R1 = acétyle, R2 = R3 = benzoyle et B = adénine ou cytosine, - R1 = R2 = R3 = H et B = adénine ou cytosine ne font toutefois pas partie de l'invention. Les composés préférés de l'invention sont ceux pour lesquels le groupe (C2-4) alcanoyle est le groupe acétyle et le groupe aroyle est le groupe benzoyle. Les composés des exemples sont préparés selon les schémas donnés en annexe. Les composés pour lesquels R1, R2 et R3 représentent un groupe NO2 sont préparés a partir des composés correspondants dans lesquels R1, R2 et R3 représentent un atome d'hydrogène par réaction avec de l'acide nitrique en présence d'anhydride acétique et d'urée. Les exemples suivants illustrent en détail la préparation de quelques composés selon l'invention. Les numéros indiqués entre parenthèses dans les titres des exemples correspondent à ceux du tableau donné plus loin. Les microanalyses élémentaires et les spectres U.V., RMN et de masse confirment les structures des produits obtenus. ExemPle 1 (composé nO 1). 9-(2,5-di-acétyl-ss-D-xylofurannosyl)adénine. a) 9-(5-0-tert-butyldiméthylsilyl-ss-D-xylofurannosyl)adénine. A une suspension de 3,2 g (11,97 mmoles) de 9-(B-D-xylofurannosyl)adénine dans 24 ml de pyridine anhydre, on ajoute 2,3 g (15,26 mmoles) de chlorure de tert-butyldiméthylsilyle. Le mélange réactionnel est agité à l'abri de l'humidité durant 14 heures, puis dilué avec 200 ml de chloroforme. La solution résultante est lavée successivement avec une solution aqueuse saturée d'hydrogénocarbonate de sodium et avec de l'eau (deux fois 100 ml pour chaque lavage). La phase organique est ensuite séchée sur sulfate de sodium, filtrée et évaporée à sec et coévaporée avec du toluène. Le résidu est purifié par chromatographie sur colonne de gel de silice. On obtient 3 g de 9-(5-0-tert-butyldiméthylsilyl-B-D- xylofurannosyl)adénine pur. F = 201-2020C (cristallisé dans le méthanol). b) 9-(2,3-di-O-acétyl-5-O-tert-butyldiméthylsilyl-ss-D-xylofu- rannosyl)adénine. A une solution de 2,9 g (7,6 mmoles) de 9-(5-O-tert-butyl diméthylsilyl-ss-D-xylofurannosyl-)adénine dans 38 ml de pyridine anhydre, on ajoute, à OOC, 1,58 ml (16,76 mmoles) d'anhydride acétique. Le mélange réactionnel est agité à température ambiante durant 40 heures, puis dilué avec 200 ml de chloroforme. La solution résultante est lavée successivement avec une solution aqueuse saturée d'hydrogénocarbonate de sodium et de l'eau (deux fois 100 ml pour chaque lavage). La phase organique est ensuite séchée sur sulfate de sodium, filtrée et évaporée à sec et coévaporée avec du toluène. Le résidu est purifié sur colonne de gel de silice. On obtient 1,8 g de composé pur. F = 133-1340C (cristallisé dans un mélange chloroforme - éther isopropylique). c) 9-(2,5-di-O-acétyl-ss-D-xylofurannosyl)adénine. A une solution de 1,7 g (3,65 mmoles) de 9-(2,3-di-O-acétyl 5-O-tert-butyldimethylsilyl-B-D-xylofurannosyl) adenine dans 44 ml de tétrahydrofuranne, on ajoute 0,31 ml (5,4 mmoles) d'acide acétique et 11,2 ml d'une solution 1N de fluorure de tétrabutylammonium dans le tétrahydrofuranne. Après 3 heures d'agitation à température ambiante, le mélange réactionnel est évaporé sous pression réduite, puis coévaporé avec du toluène. Le résidu est purifié sur colonne de gel de silice. On obtient 1,1 g de composé pur. F = 117-119 C (cristallisé dans l'acétate d'éthyle). Exemple 2 (composé n 6). 9-(3-O-nitro-ss-D-xylofurannosyl)adénine. A 6 ml (143 mmoles) d'acide nitrique fumant refroidi à -300C, on ajoute, par portion et sous forte agitation 218 mg (3,63 mmoles) d'urée. On laisse la température progressivement remonter jusqu'à 100C afin d'éliminer l'acide nitreux, puis on refroidit à nouveau à -300C. On ajoute alors goutte à goutte 0,55 ml (5,82 mmoles) d'anhydride acétique puis, par portions, 0,5 g (1,42 mmole) de 9-(2,5-di-O-acétyl-ss-D-xylo- furannosyl)adénine. On laisse la température progressivement remonter jusqu'à 200C et l'agitation est poursuivie pendant 40 minutes. Le melange réactionnel est refroidi à -200C, puis versé goutte à goutte et sous agitation sur 200 ml d'une solution aqueuse saturée de sulfate d'ammonium, mélangée à de la glace (pH = 6,7).On vérifie que le pH est supérieur ou égal à 1 et on ajoute rapidement une solution aqueuse saturée d'hydrogénocarbonate de sodium, jusqu'à ce que le pH soit égal à 6,5. La phase aqueuse est extraite avec du chloroforme et les phases organiques, rassemblées, sont lavées trois fois avec de l'eau, puis séchées sur sulfate de sodium et évaporées à sec. Le résidu est dissout sous agitation dans 45 ml de méthanol ammoniacal (préalablement saturé à -100C et hermétiquement fermé), et l'agitation est poursuivie pendant 6 heures, à température ambiante. Le mélange réactionnel est évaporé à sec et coévaporé trois fois avec de l'éthanol absolu. On obtient directement 0,27 g de 9-(3-O-nitro-ss-D-xylofurannosyl)adénine pur par cristallisation dans l'éthanol. F = 220-2230C. ExemPle 3 (composé n 18). N4-acétyl-1-(2,3,5-tri-O-acétyl-ss-D-xylofurannosyl)cytosine. A une suspension de 0,5 g (2,06 mmoles) de 1-(ss-D-xylofuran- nosyl)cytosine dans 6,5 ml de pyridine anhydre, on ajoute goutte à goutte, à 0 C et sous agitation, 1,2 ml (12,7 mmoles) d'anhydride acétique. Le mélange réactionnel est agité durant 1 heure à OOC, puis durant 48 heures à température ambiante. 100 ml d'eau et 100 ml de chloroforme sont ensuite ajoutés. La phase organique est séparés, séchée sur sulfate de sodium, évaporée à sec et coévaporée avec du dioxanne. Le résidu est dissout dans du dioxanne et lyophili sé pour donner 0,64 g de N4-acétyl-1-(2,3,5-tri-O-acétyl-ss-D- xylofurannosyl)cytosine pur. F = 94-970C. Exemple 4 (composés n 10 et n 11). 1-(3,5-di-O-acétyl-ss-D-xylofurannosyl)cytosine et 1-(5-O-acétyl-ss-D-xylofurannosyl)cytosine. A une solution de 1,3 g (3,16 mmoles) de N4-acétyl-1-(2,3,5tri-O-acétyl-ss-D-xylofurannosyl)cytosine (composé n 18) dans 100 ml de pyridine, on ajoute 0,65 ml (13,1 mmoles) d'hydrate d'hydrazine. Le mélange réactionnel est agité durant 1 heure à température ambiante et 0,65 ml (13,1 mmoles) d'hydrate d'hydrazine est à nouveau ajouté. On poursuit l'agitation durant 5 heures et ajoute 20 ml d'acétone. Après 2 heures d'agitation, le mélange est évaporé à sec, et coévaporé trois fois avec du toluène. Le résidu est purifié par chromatographie sur colonne de gel de silice et donne, par ordre d'élution, 0,50 g de composé n 10 et 0,30 g de composé n 11 n 10 : F = 144-146 C (cristallisé dans l'acétate d'éthyle) n 11 : F = 103-1060C (lyophilisé dans l'eau). Le tableau ci-après illustre les structures et propriétés physiques de quelques composes de l'invention. Tableau Composé B R1 R2 R3 F( C) 1 A Ac H Ac 117-119 2 A H H H Ac 234-236 3 A NO2 NO2 NO2 137-140 4 A H NO2 NO2 83-185 (décomp.) 5 A NO2 H H 168-172 6 A H NO2 H 220-223 7 A H H @NO2 103-105 8 C H Bz Bz 184-185 9 C H H Bz 120-124 10 C H Ac Ac 144-146 11 C H H Ac 103-106 12 C NO2 NO2 NO2 136-140 13 C NO2 H NO2 89-94 14 C H H NO2 108-112 15 C H NO2 H 149-151 Tableau (suite) Composé B R1 R2 R3 F( C) 16 C NO2 H H 152-155 17 CN4-Ac H H H 137-138 18 CN4-Ac Ac Ac Ac 94-97 19 CN4-Ac H Ac Ac 96-101 20 CN4-Ac Ac H Ac 204-206 A = adénine C = cytosine Ac = acétyle = CH3CO Bz = benzoyle = C6H5CO Les composés de l'invention ont été soumis à une série d'essais pharmacologiques qui ont mis en évidence leur intérêt comme substances à activités thérapeutiques. 1) Etude de l'activiste anti VIH 1. La multiplication du VIH 1 (souche HTLV III B) dans les cellules MT4 (cellules T4 transformées par HTLV-1) est suivie par l'effet cytopathogène induit par le virus. Les cellules sont infectées avec une dose de VIH 1 produisant après 4 jours une diminution de 90 % du nombre de cellules vivantes. Les composés testés sont ajoutés, après l'adsorption du virus, dans le milieu de culture à différentes concentrations. La viabilité des cellules est mesurée par une réaction colo rimétrique basée sur leur capacité à réduire le 3-(4,5 diméthylthiazol-2-yl)-2,5 diphényl-tétrazolium bromide en formazan, propriété due aux deshydrogénases mitochondriales. La quantité de formazan produite (D.O. à 540 nm) est proportionnelle au nombre de cellules vivantes. Le pourcentage de protection des cellules infectées par le traitement avec les composés est calculé en appliquant la formule proposée par Pauwels et col. D.O. 540 des cellules infectées traitées - D.O. 540 des cellules infectées D.O. 540 des cellules non infectées - D.O. 540 des cellules infectées Par cette méthode, on met en évidence que les concentrations limites donnant un effet anti VIH 1 vont de 10- 3M à 10- 5M. 2) Etude des activités anti HSV1, anti HSV2 et antivaccine. Sur des cellules de singe lignée Vero, on teste l'activité antivirale des composés de l'invention, en mesurant l'inhibition de l'effet cytopathogène induit par 100 TICD 50 (quantité de virus capable de nécroser 50 % des cellules). Les virus utilisés sont l'herpès simplex type 1 (HSV1), souche F, l'herpès simplex type 2 (HSV2), souche G, et le virus de la vaccine, souche Copenhague. Les essais sont effectués en microplaques de 96 godets sur des cellules agées de 48 heures. Pour tous les virus, on ajoute successivement - 100 TCID 50* de virus dans un volume de 0.1 ml - et 0,1 ml de chaque substance à une concentration de 2 10-3M, de 2 10-4M, de 2 10-5M et de 2 10- 6M. La concentration finale des substances est donc de 10-3M, de 10-4M, de 10 5m et de 10-6M. Les dilutions de virus et des substances sont effectuées dans du milieu Dulbecco contenant 2 % de sérum de veau foetal (SVF). Chaque concentration de substance est testée en quadruple. Les microplaques sont centrifugées à 3000 g pendant 45 minutes à température ambiante. Après avoir éliminé le virus, on rajoute 0,2 ml de milieu de culture (MBE + 10 % de SVF) contenant les substances à tester à des concentrations de 10-3M, de 10-4M, de 10-5M et de 10-6M. Les microplaques sont incubées à 370C dans une atmosphère contenant 5 % de CO2. L'effet antiviral des substances est mesuré en comparant l'effet cytopathogène observé dans les cupules contenant les produits à celui observé dans les cupules temoin virus. L'effet antiviral est obtenu pour des concentrations allant de 10-4M à 10-5M. Dans un deuxième temps, les produits ayant montré une activité antivirale sont repris selon le même protocole, mais en utilisant des dilutions finales de 5.10-5, 2,5.10-5, 1.105, 5.10-6, 2,5.10-6 et 10-5. Les résultats des essais pharmacologiques montrent que les composés de l'invention sont actifs vis-à-vis des virus H1V1, HSV1, HSV2 et vaccine. Ils ont également été testés à titre d'exemple sur les virus suivants : cytomégalovirus humain (CMV) souche AD 169, virus Sindbis, virus coxsackie B3 (CoxB3), poliovirus type I (Polio I), souche Mahoney, virus respiratoire syncytial (RSV), souche A2, paramyxovirus type III (Para III). Les composés de l'invention peuvent donc être utilisés pour leur activité antiproliférative et herpétique et dans le traitement topique d'infections cutanées à HSV1 et HSV2. ANNEXE i R- / HO Bz TBDMSCI TBDMSO À I G R-C$ OH ÊÉ o OH OH. O À Il TBDMSOa o ~~~~~~~~~~~ -CO ty/ x ~ (bu) 4N ,F 0 HN03 /AC2orNH2-C-NH2 /AC,O,NH,-C-NH, - C-R t O O R À A R-C-O o A NH3/CH30H HO v 0h1021 OC-R OH If O o A = Adénine R = C1-C4 alkyle ou aryle TBDMS = tertiobutylméthylsilyle ANNEXE 2 o R-À Off rNs COR HO C R-C R-Cb R .çp 1 xx OCCR I ocR OH If O O C O NH2-NH2,H20 R-C R -cgwe puis séparation par chromatographie 1 1 OH OH C = cytosine R = C1- C4 alkyle Revendications 1. Composés répondant à la formule générale (I) dans laquelle R1 représente un atome d'hydrogène, un groupe (C24)alcanoy- le, un groupe aroyle ou un groupe nitro, R2 représente un atome d'hydrogène, un groupe (C2-4)alcanoy- le, un groupe aroyle ou un groupe nitro, R3 représente un atome d'hydrogène, un groupe (C2-4)alcanoy- le, un groupe aroyle ou un groupe nitro, B représente un radical de formule ou dans lequel R' représente un atome d'hydrogène ou un groupe (C2-4)alcanoyle, à l'exception des composés pour lesquels - R1 = acétyle, R2 = R3 = acétyle et B = adénine, - R1 = H, R2 = R3 = benzoyle et B = adénine, - R1 = H, R2 = R3 = acétyle et B = adénine, - R1 = acétyle, R2 = R3 = benzoyle et B adénine ou cytosine, - R1 = R2 = R3 = H et B = adénine ou cytosine. 2. Composés selon la revendication 1, caractérisés par le fait que B représente l'adénine. 3. Composés selon la revendication 1, caractérisés par le fait que B représente la cytosine. 4. Composé selon la revendication 2, caractérisé en ce que R2 représente un atome d'hydrogène et R1 et R3 représentent chacun un groupe acétyle. 5. Composé selon la revendication 2, caractérisé en ce que R1 et R3 sont des atomes d'hydrogène et R2 est NO2. 6. Composé selon la revendication 3, caractérisé en ce que R1 est un atome d'hydrogène et R2 et R3 représentent chacun un groupe acétyle 7. Médicament caractérisé en ce qu'il contient un composé selon l'une quelconque des revendications 1 à 6. 8. Composition pharmaceutique caractérisée en ce qu'elle contient un composé selon l'une quelconque des revendications 1 à 6 en association avec tout excipient approprié. 9. Composition pharmaceutique antivirale caractérisée en ce qu'elle contient un composé selon l'une quelconque des revendications 1 à 6 en association avec tout excipient approprié. 10. Composition pharmaceutique ayant une activité à l'égard des virus à ADN, caractérisée en ce qu'elle contient un composé selon l'une quelconque des revendications 1 à 6 en association avec tout excipient approprié. 11. Composition pharmaceutique à activité antiherpétique caractérisée en ce qu'elle contient un composé selon l'une quelconque des revendications 1 à 6 en association avec tout excipient approprié.