Brevet FR2673841A1 — publié le 19920918

La présente invention concerne des compositions cosmétiques ayant un effet réparateur sur l'épiderme et, comme conséquence, un effet ralentissant le vieillissement de la peau. Plus particulièrement, la présente invention se rapporte à des compositions cosmétiques qui ralentissent le vieillissement de la peau, à base de protéines de transfert d'origine animale, végétale ou microbiologique, qui permettent le transfert des phospholipides vers l'épiderme avec un effet réparateur. Il est bien connu que dans le cytoplasme il existe des protéines, appelées protéines de transfert de membrane et ci-après désignées "protéines de transfert", qui sont capables de transférer des phos- pholipides d'une membrane à une autre Cette propriété a été mise en évidence pour la première fois par Wirtz et al, J Biol Chem, 1968, 243, 3956-3602, qui ont observé le phénomène du transfert des phospholipides entre des microsomes et des mitochondries de foie de rat. De nombreuses protéines ont été purifiées et caractérisées à par- tir de différents tissus animaux ou végétaux, ainsi qu'à partir de cellules procaryotiques ou de micro-organismes eucaryotiques. Les phospholipides qui sont transférés d'une membrane à l'autre grâce à l'action des protéines de transfert sont notamment la phosphatidylcholine, la phosphatidyléthanolamine et le phosphatidyl- inositol La protéine de transfert peut être spécifiques pour le transport d'un seul phospholipide, ou aspécifique, favorisant ainsi le transport de deux ou de tous les phospholipides membranaires. Il est également connu que l'action desdites protéines sur le transfert des phospholipides a lieu également in vitro à partir des phospholipides contenus dans des membranes naturelles, par exemple celles des érythrocytes humains ou celles des micro-organismes eucaryotiques ou procaryotiques, ou dans des membranes artificielles, par exemple les liposomes, synthétiques ou naturels. On a maintenant trouvé que lors qu'on applique sur la peau une composition à base de protéines de transfert, celles-ci provoquent un enrichissement des cellules de l'épiderme en phospholipides Lesdits phospholipides peuvent être ceux déjà présents au niveau de la peau ou bien ils peuvent être associés, tels quels ou sous forme de liposomes, aux protéines de transfert Cet enrichissement comporte un effet réparateur rallentissant le vieillissement cutané. Ainsi, la présente invention concerne des compositions cosmétiques contenant au moins une protéine de transfert dans un excipient cosmétique. Les protéines de transfert peuvent être d'origine animale, végétale ou issues de micro-organismes et peuvent âtre utilisées à l'état pur ou, de préférence, en solution après purification éven- tuelle. Parmi les protéines de transfert on peut citer celles d'origine animale, éventuellement modifiées, par exemple les protéines extraites de foie de bovin comme celles décrites par Wirtz et al, Biochim Biophys Acta 1972, 274, 606-617 et Kamp et al, Biochim Biophys Acta 1973, 318, 313-325 Moonen et al, Eur J Biochem 1980, 106, 279-290 À Akeroyd et al, Eur J Biochem 1982, 121, 391-394 Kamp et al, Methods Enzymol 1974, 32, Part B, 140-146 Kamp et al, Biochim Biophys Acta 1975, 398, 416-423 À Moonen et al, Eur J Biochem 1979, 99, 439-445 Wirtz et al, Eur J Biochem 1979, 94, 215-221 À Westerman et al, Methods Enzymol 1983, 98, 581-586 Crain et al, Biochemistry, 1980, 19, 1433-1439; _ les protéines extraites de cerveau de bovin comme celles décrites par Helmkamp et al, J Biol Chem 1974, 249, 6382- 6389 et Biochim Biophys Acta 1976, 424, 168-182 À Demel et al, Biochim Biophys Acta 1977, 466, 10-22; les protéines extraites de coeur de bovin comme celles décrites par Ehnholm et al, J Biol Chem 1973, 248, 1719-1724 Johnson et al, Blochim Biophys Acta 1975, 375, 165-175; les protéines extraites de foie de rat comme celles décrites par Lumb et al, Eur J Biochem 1976, 69, 15-22 À Poorthuis et ai, Biochim Biophys Acta 1980, 600, 376-386 Poorthuis et al, Biochim Biophys Acta 1981, 665, 256-261; les protéines extraites de poumon de rat comme celle décrite par Read et al, Biochim Biophys Acta 1983, 752, 118-126. Parmi les protéines de transfert on peut également citer celles d'origine végétale, éventuellement chimiquement modifiées, par exem- ple: les protéines extraites de graines de mais (Zea mays) comme celle décrite par Douday et ai, Biochim Biophys Acta 1982, 710, 143-153; les protéines extraites du ricin comme celle décrite par À Watanabe et ai, Biochim Biophys Acta 1986, 876, 116-123; et caractérisée par À Takishima et ai, Biochim Biophys Acta 1986, 870, 248-255; les protéines extraites des épinards (Spinacia oleracea L) comme celle décrite par À Kader et al, Eur J Biochem 1984, 139, 411-416 À Julienne et al, C R Acad Sc Paris 1983, 296, Série III, 617- 620 et caractérisée par Bouillon et al, Eur J Biochem 1987, 166, 387-391. Parmi les protéines de transfert on peut également citer celles provenant de champignons, par exemple les protéines extraites de champignons filamentaux comme celle obtenue de Mucor mucedo décrite par Chavant et al, Biochemistry and Metabolism of Plant lipids, 1982, Ed J F G M Wintermans, P J C Kuiper, Elsevier Biomedical Press B V, 125-128. D'autres protéines de transfert qui peuvent être utilisées sont celles provenant de micro-organismes, notamment de bactéries et de levures, par exemple les protéines présentes dans des extraits de Bacillus subtilis comme celles décrites par Frehel et al, Biochim Biophys Acta 1970, 223, 292 Bureau et al, FEBS Letters 1974, 39, 332-336; les protéines présentes dans des extraits de Rhodopseudomonas sphaeroides obtenus comme décrit par Cohen et al, J Biol Chem 1979, 254, 721-728; les protéines présentes dans des extraits de Saccharomyces cerevisiae obtenues comme décrit par * Cobon et al, Biochim Biophys Acta 1976, 441, 255-259 * Daum et al, Biochim Biophys Acta 1984, 794, 385-391 * Bozzato et ai, Biochem Cell Biol 1987, 65, 195-202. Les protéines de transfert sont préparées selon des méthodes classiques de la littérature telles que celles décrites dans les publi- cations citées ci-dessus. En général, on arrive à un mélange protéique qui contient la protéine de transfert désirée dans des proportions différentes Si nécessaire ou convenable, la préparation ainsi obtenue est purifiée de façon plus ou moins poussée en donnant des préparation enrichies en protéine de transfert qui, à leur tour, peuvent être purifiée ultérieurement jusqu'à l'obtention de préparations constituées essen- tiellement de protéine de transfert. L'activité spécifique d'une quelconque de ces préparations, contenant une protéine de transfert, est convenablement exprimée comme l'activité de transfert des phospholipides, en nmoles de phospholipides transférés par heure, rapportée à la quantité de protéine totale de la préparation Cette activité de transfert de phospholipides est analysée selon un dosage qui met en évidence le transfert de phospholipides entre une membrane donneuse (constituée par des liposomes unilamellaires obtenus par extrusion à partir de phosphatidylcholine d'oeuf contenant un lipide neutre marqué avec du 14 C et un phospholipide marqué avec du 3 H) et une membrane receveuse constituée par des mitochondries de foie de rat Le test consiste à incuber à 300 C pendant 30 minutes l'échantillon à analyser en présence des deux types de membranes, éliminer les membranes donneuses par centrifugation et évaluer le pourcentage de phospholipides transférés dans les membranes receveuses par comptage de la radioactivité due au tritium La mesure de la radioactivité due -5 au 14 C sert à évaluer le transfert non spécifique et la contamination résiduelle des membranes receveuses par les membranes donneuses. L'activité de transfert dans l'échantillon est exprimée en nmoles de phospholipides transférés par heure et l'activité spécifique de l'échantillon est l'activité de transfert rapportée à la quantité de protéines totales dans l'échantillon. Les compositions cosmétiques selon la présente invention compren- nent au moins une protéine de transfert dans des proportions, en pourcentage poids/poids, qui dépendent de l'activité spécifique de la préparation contenant la protéine qu'on utilise Plus l'activité spécifique de la préparation de protéine de transfert utilisée est élevée, plus la quantité, en poids, nécessaire pour obtenir l'effet réparateur désiré est faible, et vice-versa. Pour obtenir des compositions cosmétiques selon l'invention, on peut convenablement utiliser des préparations de protéines de trans- fert ayant une activité spécifique aussi faible que par exemple 25 n M/ng/h, une activité spécifique d'au moins environ 250 n M/mg/h étant préférée. En pratique, les compositions cosmétiques de la présente inven- tion comprennent au moins une protéine de transfert en proportions comprises entre 0,0001 et 10 % en poids, et de préférence entre 0,001 et 5 % en poids. De préférence, les protéines de transfert des compositions cosmétiques de la présente invention sont celles provenant de micro- organismes, notamment de levures. Les levures, notamment Saccharomyces cerevisiae, sont cultivés come dkrit dans la littératui 'e et l'extrait contenant la protéine de transfert est obtenu de préférence par choc osmotique ou en utilisant un désintègrateur aux ultrasons. Selon un des aspects préférentiels de l'invention, les protéines de transfert sont associées, dans les compositions cosmétiques de la présente invention, à un ou plusieurs phospholipides Les phospholipides qui peuvent être associés aux protéines de transfert dans les compositions selon l'invention comprennent notamment la phosphatidylcholine, la phosphatidyléthanolamine et le phosphatidylinositol. Selon un aspect encore plus avantageux, les protéines de trans- fert sont associées dans les compositions de l'invention à un ou plu- sieurs phospholipides sous forme de liposomes ou de mélange de liposomes. Les liposomes sont des vésicules lipidiques bilamellaires, rap- pelant la structure des membranes cellulaires, qui peuvent être formées à partir de divers phospholipides. Des substances liposolubles peuvent être fixées au niveau des couches lipidiques, et des substances solubles dans l'eau dans les cou- ches aqueuses. Différents phospholipides peuvent être utilisés et, selon les cas, les liposomes peuvent être solides ou liquides Ces phospholi- pides sont de préférence: la phosphatidyléthanolamine, la lécithine d'oeuf (phosphatidyl-choline), éventuellement en mélange avec la phosphatidyl-sérine, le phosphatidyl-inositol, _ la dipalmitoylphosphatidyl-choline. Ces phospholipides, auxquels on ajoute du cholestérol, sont dis- sous dans le chloroforme, lequel est ensuite évaporé par rotation sous pression réduite La charge électrique des liposomes peut être modifiée par l'ad- jonction de certaines substances: acide phosphatidique (charge négative), stéarylamine (charge positive) En l'absence de ces sub- stances les vésicules sont neutres. Par liposome on entend toute vésicule phospholipidique naturelle ou synthétique, neutre, basique ou acide telle que décrite ci-dessus et cis la littératue (Liposomes, Ed M Ostro, Marcel Dekker, New york, 1983). Selon le nombre de leurs compartiments, leur taille et leur mode d'obtention, on peut distinguer au moins quatre types de liposomes: les vésicules multilamellaires, qui présentent plusieurs compar- timents aqueux concentriques et dont le diamètre peut atteindre de 0,1 à 2 hum; elles sont généralement préparées par déposition d'une solution organique des lipides sous forme d'un film suivie par l'hydratation des lipides en les dispersant dans une solution aqueuse tamponnée; les petites vésicules unilamellaires, qui comportent une seule paroi et une seule cavité aqueuse et ont un diamètre de l'ordre de 25 nm; elles peuvent être obtenues par l'action des ultra-sons (sonication), par injection rapide d'une solution éthanolique des phospholipides dans l'eau ou dans une solution tamponnée, par l'élimination de détergent à partir de micelles mixtes détergent/phospholipide, par extrusion à haute pression à travers la presse de French, ou encore par formation spontanée à partir de dispersions contenant les acides phosphatidiques, en augmen- tant rapidement le p H de la dispersion; les grosses vésicules unilamellaires, qui sont des vésicules ayant un diamètre de 0,2 à 1,M, mais entourées d 'une seule bicouche lipidique; elles peuvent être préparées par infusion dans l'éther ou par fusion induite par le calcium, selon des techniques bien connues sous ces dénominations, ou par leur mo- difications également connues; et les vésicules obtenues par évaporation de phase, qui sont de grosses vésicules unilamellaires obtenues en deux étapes: par dispersion d'une solution organique d'un phospholipide avec for- mation d'une émulsion, suivie par l'évaporation du solvant sous pression réduite. Tous ces types de liposomes sont appropriés pour l'utilisation dans les compositions cosmétiques de la présente invention. Les phopholipides ou les liposomes à associer aux protéines de transfert dans les compositions cosmétiques de la présente invention peuvent être choisis de façon à faire correspondre le phospholipide ou le phospholipide utilisé pour la préparation des liposomes avec la capacité de transfert des protéines Ainsi, par exemple, lorsqu'on utilise de la phosphatidylcholine ou des liposomes à base de phosphatidylcholine, il peut être utile de leur associer une protéine de transfert spécifique pour la phosphatidylcholine Par contre, lorsqu'on utilise un mélange de différents phospholipides ou des liposomes à base de différents phospholipides, on peut leur associer une protéine de transfert aspécifique ou plusieurs protéines de transfert spécifiques pour chaque phospholipide présent. Lorsque, selon un aspect préféré de la présente invention, les protéines de transfert sont associées à un ou plusieurs phospholipides, lesdits phospholipides sont généralement présents dans des proportions comprises entre 0,001 et 50 % et de préférence entre 0,01 et 20 %. Lorsque, selon un aspect encore plus préféré, les phospholipides associés aux protéines de transfert sont sous forme de liposomes ou de mélanges de liposomes, ils sont contenus dans les compositions de la présente invention dans des proportions comprises entre 0,01 et % et, de préférence, entre l et 20 % en poids. Elles peuvent contenir de l'eau et/ou des solvants ou des di- luants compatibles avec la peau ainsi qu'avec les ingrédients actifs de la composition même. Ces compositions contiennent habituellement des excipients ou des additifs choisis parmi les ingrédients communs utilisés dans des com- positions destinées à une application topique, selon la nécessité des formulations particulières envisagées. Elles peuvent contenir par exemple des agents épaississants, des mouillants, des adoucissants, des surgraissants, des émollients, des stabilisants, des agents anti-mousse, des tensio-actifs, des filtres solaires, des anti-oxydants, des colorants et/ou des pigments, et des parfums Evidemment, lorsque les compositions cosmétiques de la présente invention contiennent des liposomes, il faudra choisir les additifs, en particulier les tensio-actifs, de façon qu'ils soient compatibles avec les liposomes mêmes. Elles peuvent également contenir d'autres substances actives ayant un effet sur le veillissement de la peau, soit un système de protection ou d'inhibition des agressions extérieures (par exemple un produit filmogène ou un agent antiradicalarie) soit un mécanisme de régénération et/ou restructuration de l'épiderme (des stimulateurs de -9 la synthèse du collagène, des inhibiteurs de la collagénase ou de l'élastase). La forme des compositions cosmétiques selon l'invention peut être une crème dans laquelle le constituant ou le mélange de constituants, avec un stabilisant éventuel, est associé aux excipients couramment utilisés dans la cosmétologie et compatibles avec lesdits consti- tuants, tels que la lanoline ou les huiles végétales, minérales ou synthétiques. Les compositions cosmétiques de l'invention peuvent être également présentées sous forme de gel dans les excipients appropriés tels que les esters de cellulose ou d'autres agents gélifiants comme les dérivés acryliques. Les compositions cosmétiques suivant l'invention peuvent aussi prendre la forme d'une lotion ou d'une solution dans laquelle le mélange des constituants est dissous ou microdispersé. La forme des compositions cosmétiques suivant l'invention peut donc être une microdispersion dans un liquide contenant de l'eau, ainsi qu'un ou plusieurs agents tensioactifs compatibles, éventuellement avec les liposomes Ces dispersions présentent les caractères des microémulsions et ont pratiquement l'aspect de solu- tions vraies Elles peuvent également être préparées extemporanément. Ces compositions jouissent d'une bonne stabilité et peuvent être conservées pendant le temps nécessaire pour l'utilisation à des températures comprises entre O et 60 'C sans qu'il y ait sédimentation des constituants ou séparation de phases. Les tensioactifs de la composition sont choisis parmi les agents de surface utilisables en cosmétologie, et, le cas échéant, compati- bles en général avec les liposomes à faible concentration. Lorsque l'on souhaite maintenir le p H à une valeur voisine de la neutralité, on peut ajouter à la composition un agent de neutrali- sation L'agent neutralisant éventuel peut être constitué par un mélange tampon par exemple un tampon phosphate, ou tout simplement par une amine biocompatible telle que la mono-, la di ou la tri- éthanolamine. Les compositions cosmétiques de la présente invention sont très bien tolérées, elle ne présentent aucune phototoxicité et leur appli- cation sur la peau pour des périodes de temps prolongées n'implique aucun effet secondaire En général, après trente jours d'application or note une amélioration de l'aspect de la peau et un ralentissement dans la formation des rides. Les exemples suivant illustrent l'invention sans toutefois la li- miter. EXEMPLES D'OBTENTION DES PROTEINES TRANSMEMBRANAIRES Exemples 1 à 3 On suit essentiellement le même protocole, qui est décrit ci- dessous, pour la préparation de solutions enrichies en protéines de transfert de phospholipides à partir de souches de la levure Saccharomyces cerevisiae et pour la mise en évidence de cette activité. Protocole d'obtention de la biomasse (a) Fermentation La biomasse de Saccharomyces cerevisiae est obtenue par un procédé classique de culture en "fed-batch". A partir d'un lot de semence, on multiplie les cellules dans un erlenmeyer contenant du milieu YNBG (Yeast Nitrogen Base + Glucose) On incube cette préculture à 30 C sous agitation pen- dant environ 24 heures La préculture sert à incuber, à un taux de 5 % (v/v), un fermenteur Biolafitte équipé de 3 turbines Rushton, contenant du milieu nutritif de Kappeli La culture est conduite pendant 60 à 70 heures avec les points de consigne sui- vants: température: 300 C agitation: 150 à 350 rpm en fonction de la biomasse pression: 0,4 bar p H: 4 p O 2: 50 % de la saturation. L'apport régulièrement contrôlé (fed-batch) de milieu nutritif comprenant du glucose permet d'obtenir une concentration en biomasse d'environ 60 g de matière sèche par litre. Protocole d'extraction (b) Récupération et lavage des cellules Les cellules sont alors récupérées par centrifugation à 5 000 g pendant 10 minutes dans une centrifugeuse Beckman J 2 21 réfrigérée à 4 C. Après élimination du milieu de culture, on lave la biomasse par une série de centrifugations et de resuspensions dans de l'eau glacée, puis dans du tampon d'extraction: tris (i e tris (hydroxyméthyl)- aminométhane)/H Cl, p H 7,5, 100 m M contenant lm M d'EDTA (acide éthylènediaminotétraacétique), 400 m M de saccharose, 8 m M de 2- mercaptoéthanol et 4 m M de chlorhydratede cystéine. (c) Broyage Après ajustement de la concentration en matière sèche à environ 15 g/l, les cellules sont cassées en continu dans un broyeur à billes Dyno Mill Kds, réfrigéré à 4 C par circulation d'eau glycolée, équipé d'une cellule de 0,6 1 de volume utile contenant 510 ml de billes de 0,25-0,5 mm de diamètre, préalablement équilibrée dans du tampon d'extraction Le temps de séjour moyen dans la cellule est compris entre 4 minutes et 10 minutes, le vo- lume traité est de 290 ml à 800 ml de cellules lavées concentrées à 15 % (P/V) de matière sèche, les cellules cassées sortant du broyeur sont récoltées dans une éprouvette maintenue dans un bain de glace fondante Le p H du broya, est ajusté â 1,5 avec du tris 1 M. (d) Clarification Le broyat obtenu est clarifié par centrifugation à 10 000 g pen- dant 20 minutes dans une centrifugeuse Beckman J 2 21 réfrigérée à 4 C, équipée d'un rotor JA 10 Le surnageant obtenu est soumis à une deuxième centrifugation à 45 000 g pendant 20 minutes ou à 12.000 g pendant 2 heures dans une centrifugeuse Jouan PR 20 réfrigérée à 4 C, équipée d'un rotor 6 x 250 ml. (e) Précipitation Le surnageant clarifié maintenu à 4 C est soumis à une précipitation à p H 5,1 par ajout d'acide chlorhydrique à 37 %. Après élimination du précipité par centrifugation et réajustement du p H à 7,5 avec du tris 1 M, le surnageant est soumis à une deuxième précipitation avec du sulfate d'ammonium à 60 % de satu- ration. Alternativement, le surnageant clarifié est soumis à précipitation directement avec du sulfate d'ammonium à 60 Z de sa- turation sans précipitation acide préalable. (f) Purification Les précipités obtenus sont récupérés après élimination des sur- nageant et remis en suspension dans du tampon de chromatographie tris/H Cl, p H 7,5, 20 m M contenant 2 % de glycérol et contenant ou non 8 m M de 2-mercaptoéthanol, de façon à obtenir une concen- tration en protéines comprise entre 20 et 30 mg/ml Les précipités repris sont ensuite filtrés sur filtre 0,45 um (Sartorius). Des volumes de 50 à 75 ml de la solution obtenue sont ensuite injectés sur une colonne de chromatographie d'exclusion remplie avec du gel Sephacryl S 200 HR (Pharmacia) de 1,6 1 de volume ( O = 50 mm, h = 81,5 cm), préalablement équilibrée avec du tampon de chromatographie Les effluents de la colonne sont récoltés en fractions de 15 ml. La concentration en protéines à chaque étape de l'extraction est évaluée selon la méthode de Bradford en utilisant un kit de do- sage Biorad avec la sérum albumine bovine comme standard. Pour l'analyse de l'activité de transfert de phospholipides dans les fractions issues de la chromatographie d'exclusion on consti- tue des pools des fractions les plus riches en activité. Exemple 1 Dans les étapes d'extraction des protéines de transfert on utilise, comme produit de départ, 290 ml de cellules lavées avec une concen- tration en matière sèche de 15 Z Après l'étape de broyage, caracté- riséepar un temps de séjour dans le broyeur de 4 minutes, on obtient 700 ml de broyat contenant 5,65 g de protéines totales, correspondant à 131 mg de protéines extraites par g de matière sèche On clarifie le broyat en conduisant la deuxième centrifugation à 45 000 g pendant minutes, ce qui porte à 540 ml de surnageant contenant 3,2 g de protéines totales On soumet le surnageant clarifié à une précipitation directe avec du sulfate de sodium et on obtient 2,1 g de protéines qui sont purifiées par chromatographie d'exclusion comme décrit dans le protocole en mettant en suspension 1,6 g de protéines dans 55 ml de tampon de chromatographie tris/H Cl, 20 m M, p H 7,5, contenant 2 % de glycérol et 8 m M de 2-mercaptoéthanol, et filtrant sur filtre 0,45 )um. On obtient ainsi deux pools: PT 1 contenant 162 mg de protéines totales ayant une activité spécifique de 1 500 n M/mg/h, et PT 2 contenant 12 mg de protéines totales ayant une activité spécifique de 15 700 n M/mg/h. Exemple 2 On soumet à broyage, pendant 4 mn 30 ', 800 ml de cellules lavées avec une concentration en matière sèche de 15 % On obtient 1050 ml de broyat contenant 25,2 g de protéines totales, correspondant à 200 mg de protéines extraites par g de matière sèche, et on le clarifie se- lon le protocole en conduisant la deuxième centrifugation à 12 000 g pendant 2 h On obtient ainsi 565 ml de surnageant clarifié, conte- nant 11,3 g de protéines totales, qui est soumis à une précipitation en deux étapes comme décrit au point (e) du protocole, donnant 4,03 g de protéines totales. On purifie une partie des protéines ainsi obtenues par chromatogra- phie d'exclusion comme décrit dans le protocole en mettant en suspension 1,8 g de protéines dans 75 ml de tampon de chromatographie tris/HC 1, 20 m M, p H 7,5, contenant 2 % de glycérol et 8 m M de 2-mercaptoéthanol, et filtrant sur filtre 0,45 PM. On obtient ainsi un pool: PT 3 contenant 875 mg de protéines totales ayant une activité spécifique de 920 n M/mg/h. Exemple 3 On purifie une autre partie des protéines précipitées, obtenues dans l'Exemple 2, par chromatographie d'exclusion en suspendant 1,15 g de protéines dans 50 ml de tampon de chromatographie tris/HC 1, 20 m M, p H 7,5, contenant 2 % de glycérol, et filtrant sur filtre 0,45 On obtient ainsi un pool: PT 4 contenant 440 mg de protéines totales ayant une activité spécifique de 1 500 n M/mg/h. Les fractions obtenues sont stables et peuvent donc être utilisées pour la préparation de crèmes ou lotions. On a étudié leur stabilité à -20 C, + 8 C, + 20 C et l'activité de transfert à été mesurée régulièrement Afin d'éviter toute contamination microbienne on peut ajouter dans les tampons de chromatographie, de l'azide de sodium ( 0,2 Z). Aucune perte d'activité de transfert des phospholipides n'est observée pendant au moins 7 semaines aux températures de -20 C, + 8 C et + 20 C dans les préparations obtenues dans les Exemples 1 et 2 et pendant au moins une semaine dans la préparation obtenue dans l'Exem- ple 3. EXEMPLES DE PREPARATION DES COMPOSITIONS COSMETIQUES Dans un souci de simplification, certains constituants des compo- sitions ont été désignés par leur dénomination commerciale dont voici les significations: Acrysol: copolymère acrylates/méthacrylates, commercia- Finsolv TN Solutol HS 15 Cetiol HE Labrafac hydrophile Abil 8851 B Carbopol 934 Carbopol 940 EDTA lisé par SEPPIC : benzoates d'alcools contenant 12-15 atomes de carbone, commercialisé par WITCO : 12-hydroxystéarate de polyéthylèneglycol 600, commercialisé par BASF :polyéthylèneglycol-7 glycéryl cocoate,commercialisé par HENKEL : triglycérides contenant 7-8 atomes de carbone polyoxyéthylénés, commercialisé par GATTEFOSSE : diméthicone copolyol, commercialisé par GOLDSCHMIDT ) carboxypolyméthylène, commercialisés par ) GOODRICH : acide éthylènediaminotétracétique Filtre UVB Sepicide HB Pemulen TR 2 Sepigel 305 Hypan SA-100 H Coviox T 50 : 4-méthoxycinnamate d'éthyle- 2 hexyle (marque PARSOL MCX), commercialisé par GIVAUDAN : mélange de conservateurs (phénoxyéthanol esters de l'acide parahydroxybenzoique) commercialisé par SEPPIC :acrylate C 10/C 30 alkyl acrylate cross polymer commercialisé par GOODRICH :mélange de polyacrylamide, d'isoparaffine et de dodécanol éthoxyle, commercialisé par SEPPIC :copolymère d'acrylamide neutralisé par la tri- éthanolamine, commercialisé par LIPO CHEMICALS :mélange d'isomères de tocophérols commercalisé commercialisé par HENKEL EXEMPLE 4 On prépare un gel traitant aux liposomes en utilisant les composés suivants: eau déminéralisée q s p 100,000 glycérine 3,000 hyaluronate de sodium 0,020 Carbopol 940 0,500 polyglycérylméthacrylate 5,000 triéthanolamine 0,500 butylène glycol 5,000 parfum 0,100 imidazolidinyl urée 0,500 parahydroxybenzoate de méthyle 0,200 liposomes de phosphatidyléthanolamine 10,000 volume de la préparation de protéine de transfert de l'Exemple 2 (PT 3) contenant une quantité de protéine totales de 1, 000 EXEMPLE 5 On prépare la composition suivante, utilisable sous forme de lait fluide: eau q s p 100,000 butylène glycol 3,500 palmitate d'éthyl-2-hexyle Finsolv TN propylène glycol dicaprate dicaprylate huile de vaseline Pemulen TR 2 triéthanolamine Sepicide HB parfum EDTA liposomes de phosphatidyléthanolamine volume de la préparation de protéine de transfert de l'Exemple 3 (PT 4) contenant une quantité de protéine totales de EXEMPLE 6 On prépare la composition suivante, utilisable en gel anti-âge eau q s p. EDTA tétrasodique Hypan SA 100 H huile de vaseline palmitate d'éthyl-2-hexyle dipélargonate de propylène glycol Pemulen TR 2 triéthanolamine Sepigel 305 butylène glycol Sepicide HB Coviox T 50 liposomes de phosphatidyléthanolamine volume de la préparation de protéine de transfert de l'Exemple 1 (PT 2) contenant une quantité de protéine totales de EXEMPLE 7 On prépare la composition suivante, utilisable en gel protectrice: 3, 000 3,000 3,000 3,000 0,200 0,200 0,500 0,200 0,100 ,000 0,500 tant qu'émulsion ,000 0,100 0,200 ,000 ,000 ,000 0,250 0,600 2,000 ,000 0,500 0,050 ,000 0,500 tant qu'émulsion eau q s p 100,000 EDTA trisodique 0,100 butylène glycol 5,000 Sepicide HB 0,500 Sepigel 305 3,000 C I 2 C i 4 alcool lactate 2,000 monolaurate de sorbitan éthoxylé 0,500 Coviox T 50 0,500 Parsol MCX 2,000 liposomes de phosphatidylcholine 10,000 volume de la préparation de protéine de transfert de l'Exemple 1 (PT 1) contenant une quantité de protéine totales de 0,500 EXEMPLE 8 On prépare la composition suivante, utilisable comme crème de nuit: eau déminéralisé q s p 100,000 butylène glycol 5,000 palmitate d'isopropyle 5,000 alcool cétylique 2, 000 stéarine TP 2,500 huiles végétales 3,000 monostéarate de glycérol 5,000 huile de vaseline 4,000 huile de silicone 0,500 triglycérides végétaux 2,000 conservateurs 1,000 triéthanolamine 1,000 EDTA tétrasodique 0,100 phosphatidylcholine 1,000 volume de la préparation de protéine de transfert de l'Exemple 2 (PT 3) contenant une quantité de protéine totales de 1,000 EXEMPLE 9 On prépare la composition suivante, utilisable comme base de ma- quillage: eau déminéralisée q s p 100,000 stérols de soja éthoxylés 4,000 stérols de soja 0,500 monostéarate de glycérol 1,000 huile végétale 1,500 palmitate d'éthyl-2-héxyle 4,000 alcool cétylique 0,500 triglycérides d'acides gras courts 1,500 huile de vaseline 1,800 huile de silicone 1,000 alcools de lanoline 0,200 dipelargonate de propylène glycol 3,000 propylène glycol 4,000 conservateurs 1,000 Carbopol 941 0,200 triéthanolamine 0,200 alpha-tocophérol 0,020 EDTA tétrasodique 0,100 parfum 0,200 phosphatidylcholine 0,100 volume de la préparation de protéine de transfert de l'Exemple 3 (PT 4) contenant une quantité de protéine totales de 1,000 EXEMPLE 10 En utilisant les composés suivants: eau déminéralisée q s p 100,000 Solutol HS 15 1, 000 Labraphac hydrophile 0,250 Cetiol HE 0,200 Abil 8851 0,050 propylène glycol 12,500 éthanol 12,500 Carbopol 940 0,400 parfum 0,300 conservateurs 0,500 triéthanolamine 0,400 volume de la préparation de protéine de transfert de l'Exemple i (PT 2) contenant une quantité de protéine totales de 0,100 on obtient une composition sous forme de microémulsion. REVENDICATIONS 1 Composition cosmétique caractérisée en ce qu'elle comprend au moins une protéine de transfert de phospholipides dans un excipient cosmétique. 2 Composition selon la revendication 1 caractérisée en ce que comme protéine de transfert de phospholipides on utilise une protéine extraite de Saccharomyces cerevisiae. 3 Composition selon les revendications 1 et 2, caractérisée en ce que ladite protéine de transfert est présente à raison de 0,0001 à 10 % en poids. 4 Composition selon la revendication 3, caractérisée en ce que la- dite protéine de transfert est présente à raison de 0,001 à 5 % en poids. Composition selon l'une quelconque des revendications 1 à 4, caractérisée en ce que la protéine de transfert est introduite sous forme de préparation la contenant, ayant une activité spécifique de transfert d'au moins 25 n M/mg/h. 6 Composition selon la revendication 5, caractérisée en ce que la protéine de transfert est introduite sous forme de préparation la contenant, ayant une activité spécifique de transfert d'au moins 250 u N/mg/h. 7 Composition selon l'une quelconque des revendications 1 à 6, caractérisée en ce qu'elle contient aussi un phospholipide ou un mélange de phospholipides. 8 Composition selon la revendication 7, caractérisée en ce que les phospholipides sont présents à raison de 0,001 à 50 % en poids. 9 Composition selon la revendication 8, caractérisée en ce que les phospholipides sont présents à raison de 0,01 à 20 Z en poids. Composition selon la revendication 7, caractérisée en ce que le ou les phospholipides associés aux protéines de transfert sont sous forme de liposomes ou de mélange de liposomes. 11 Composition selon la revendication 10, caractérisée en ce que les liposomes ou les mélanges de liposomes sont présents à raison de 0,01 à 50 % en poids. 12 Composition selon la revendication 11, caractérisée en ce que les liposomes ou les mélanges de liposomes sont présents à raison de 1 à 20 % en poids. 13 Utilisation d'une protéine de transfert de phospholipides pour la préparation de compositions cosmétiques. Erratum Brevet no C.U A 3 Demande de l*wt no 91 02985 No de Publication: 2 673 841 Classification internationale:CLASST 5 A 61 K 7/48. E RRATUM A la rubrique 12 de la page de garde du fascicule de la demande de brevet, la nature du document est erronée. Il faut lire: DEMANDE DE BREVET Al