Brevet FR2683454A1 — publié le 19930514

La présente invention concerne des compositions pharmaceutiques bactéricides, actives sur la plupart des espèces bactériennes habituellement rencontrées chez l'homme, la tolérance de ces compositions étant en outre améliorée. On sait en effet que la flore bactérienne présente chez l'homme, au niveau de la peau ou des différentes muqueuses comprend un grand nombre espèces, habituellement saprophytes. Un déséquilibre dans les proportions respectives des différentes souches ou une augmentation globale de la quantité de germes présents, pouvant résulter de la baisse temporaire ou durable des défenses immunitaires, provoqueront l'apparition d'une pathologie plus ou moins grave. De nombreux antiseptiques, que Iron peut définir comme des agents chimiques qui s'opposent à la prolifération des bactéries et les détruisent, ont été proposés en thérapeutique. On peut citer notamment les halogènes, les sels de métaux lourds, les ammoniums quaternaires, l'acide salicylique et ses dérivés. Ces antiseptiques sont administrés à titre prophylatique ou curatif. Cette administration, lorsqu'elle est répétée, peut conduire à l'apparition d'effets secondaires indésirables du type irritation ou sensibilisation par idiosyncrasie. On cherche donc à obtenir des produits ayant une efficacité satisfaisante sur la plupart des souches responsables des pathologies rencontrées en dermatologie ou en stomatologie, tout en permettant de réduire les doses administrées, et donc les effets secondaires. La Demanderesse a trouvé de manière surprenante qu'une composition pharmaceutique renfermant une association de deux antiseptiques particuliers permet de remplir ces objectifs. C'est pourquoi la présente invention a pour objet une composition pharmaceutique bactéricide, caractérisée en ce qu'elle comporte une association synergique de chlorhexidine et d'eugénol. La chlorhexidine, ou l,l'-hexaméthylènebis[5-(p-chlorophényl) biguanidej, est un antiseptique local décrit dans le brevet US 2 684 924, et largement utilisé en application topique, notamment en ORL, ou utérine, et comme désinfectant. Ce composé peut être mis sous forme de différents sels ; le(s) sel(s) utilisé dans la composition pharmaceutique sera choisi en fonction de sa solubilité dans les excipients et de sa non toxicité. Par le terme chlorhexidine, il est entendu, tout au long de la description, aussi bien la base que l'un de ses sels pharmaceutiquement acceptables, tels que les digluconate, diglucohéptonate, di-iséthionate, diacétate ou dichlorhydrate de chlorhexidine. Toutefois, les applications de chlorhexidine peuvent présenter un certain nombre d'inconvénients comme l'idiosyncrasie, le risque d'effets systémiques par pénétration cutanée lors d'applications répétées et, dans le cas de l'administration sous forme de bain de bouche, le noircissement des dents. L'eugénol est une molécule utilisée en parfumerie, pour son arôme de clou de girofle et en dentisterie pour ses propriétés analgésiques, associées à une légère action antiseptique. L'association de l'eugénol avec la chlorhexidine conduit à une potentialisation mutuelle du pouvoir antibactérien, particulièrement du pouvoir antibactérien de l'eugénol. Cette synergie s'observe pour une gamme de concentrations très inférieures aux concentrations couramment utilisées pour les produits seuls et présentant un optimum variable en fonction de la souche bactérienne considérée. Elle se manifeste par une diminution des concentrations maximales bactéricides (CMB), dans un rapport de 4 à 16 pour la chlorhexidine et de 4 à 32, et même de 4 à 256 pour l'eugénol. Ce caractère est exprimé par la mesure d'un index FBC qui indique l'activité bactéricide d'un produit. I1 est également mis en évidence sur des courbes indiquant la limite de bactéricidie pour des compositions dans lesquelles les concentrations en chlorhexidine et en eugénol sont indiquées respectivement en ordonnées et en abcisses ; ces courbes présentent une forme nettement incurvée par rapport à la droite qui correspondrait à une association simplement additive. De façon inattendue, l'association chlorhexidine-eugénol faisant l'objet de la présente invention, manifeste cependant une activité cytotoxique très inférieure à celle pouvant être observée pour d'autres associations d'antiseptiques. Cette caractéristique présente un intérêt majeur in vivo, où les cellules impliquées dans le système de défense immunitaire se trouvent en contact avec l'antiseptique administré. Ceci est particulièrement vrai dans le cas des affections parodontales et dentaires où ces cellules sont appelées sur le site d'infection. Une composition présentant une cytotoxicité réduite (exprimée par un FCC index relativement élevé) se montrera moins traumatisante pour le sujet et entrainera donc moins d'effets secondaires. La composition renfermant une association chlorhexidine/ eugénol se distingue des autres compositions pouvant être envisagées, en ce qu'elle présente à la fois une forte synergie des effets bactéricides, et une faible synergie cytotoxique, ce qui se traduit par un écart entre FCC et FBC élevé, en moyenne de 0,194. Plus particulièrement, une composition pharmaceutique selon l'invention comportera de la chlorhexidine, présente à une concentration comprise entre 0,01 96 p/v et 0,5 96 p/v, et de l'eugénol, présent à une concentration comprise entre 0,05 % p/v et 1 % p/v. De préférence, la concentration en chlorhexidine pourra être comprise entre 0,02 96 p/v et 0,2 % p/v. De façon également préférée, la concentration en eugénol dans la composition est comprise entre 0,08 96 p/v et 0,64 % p/v. Des compositions comprenant une association de chlorhexidine et d'eugénol dans les limites de concentrations indiquées, présenteront une bonne activité bactéricide, sans qu'il soit nécessaire d'augmenter les doses de chacun de ces produits. En particulier, dans le cas de compositions administrées dans la cavité buccale, une concentration trop importante en eugénol conduit à un goût prononcé de clou de girofle qui n'est pas satisfaisant pour le patient. Les concentrations en eugénol retenues de manière préférée dans la présente invention pallient cet inconvénient tout en assurant une activité bactéricide synergique permettant de diminuer considérablement les concentrations en chlorhexidine. C'est ainsi que dans les compositions selon la présente invention, le rapport chlorhexidine/eugénol sera de manière préférée compris entre 2/1 et 1/32, ce qui permet d'observer de bons FBC index (très inférieurs à 0,75). Ceci pour des concentrations en chlorhexidine comprises entre 200 et 2000 ug/ml, et des concentrations en eugénol comprises entre 800 et 6400 llg/ml. De manière préférée, ce rapport chlorhexidine/eugénol sera inférieur à 1. Une bonne activité bactéricide de type synergique sur l'ensemble des souches susceptibles d'être rencontrées, est obtenue pour des compositions pharmaceutiques selon l'invention dans lesquelles, le rapport chlorhexidine/eugénol est de préférence égal à environ 1/4. Selon l'un de ses aspects, la présente invention a donc pour objet une composition renfermant une association synergique de chlorhexidine et d'eugénol, la concentration en chlorhexidine étant comprise entre 200 et 1000 llg/ml, et la concentration en eugénol étant comprise entre 800 et 4000 llg/ml, avec un rapport chlorhexidine/eugénol égal à environ 1/4. Une composition pharmaceutique telle qu'elle est définie dans la présente invention peut plus particulièrement avoir une activité qui s exerce sur les souches bactériennes responsables d'affections de la cavité buccale telles que les caries, les maladies parodontales et les mycoses. Parmi les souches présentes, on note les espèces Streptococcus mutans, Actinomyces viscosus, Lactobacillus acidophilus, Actinobacillus actinom ycetemcom itans, Capnocyto phaga ochracea, Eikenella corro dens. Selon les cas, la prolifération de ces souches au sein de la plaque dentaire provoque l'apparition de caries ou de parodontites. In vivo, dans le cas des parodontopathies, le microenvironnement des bactéries subgingivales est un milieu complexe, principalement composé de fluide créviculaire, riche en protéines, diminuant l'activité bactéricide de la chlorhexidine. Candida albicans est le plus souvent responsable des mycoses buccales, et également sensible aux compositions selon l'invention. Selon l'un des aspects de l'invention, la composition pharmaceutique est caractérisée en ce qu'il s'agit d'une composition stomatologique destinée à être administrée localement dans la cavité buccale, en particulier sous forme de bain de bouche. Elle peut également se présenter sous toute forme appropriée à ce type d'administration, tel que dentifrice, comprimé à sucer, baume gingival ou solution pour irrigation des poches parodontales. Elle comprend évidemment tous les excipients nécessaires à sa formulation ainsi que des conservateurs, colorants, etc. Toutes ces administrations pourront être effectuées à titre préventif ou curatif, de manière unique ou réitérée. Selon un autre de ses aspects, la présente invention a pour objet une composition pharmaceutique renfermant une association bactéricide synergique telle qu'elle a été définie, et caractérisée en ce que son activité s'exerce sur les souches de bactéries cutanées. Plus particulièrement, la présente invention a donc pour objet une composition dermatologique, destinée à être appliquée localement, en particulier sous forme de lotion, de crème ou d'onguent. Outre les véhicules pharmaceutiques adaptés et les adjuvants connus de l'homme de métier, de telles compositions peuvent également comporter d'autres principes actifs comme par exemple des antiinflammatoires dont l'action sera avantageusement complémentaire de l'activité bactéricide. D'autres caractéristiques et avantages de la présente invention apparaîtront à la lecture des exemples qui suivent, et qui ne sont nullement destinés à en limiter la portée. Dans ce qui suit, on se référera aux figures suivantes Figure 1 : Représentation en coordonnées logarithmiques et décimales, de l'activité des associations chlorhexidine/eugénol sur une souche de Capnocytophaga ochracea. Figure 2 : Représentation en coordonnées logarithmiques et décimales, de l'activité des associations chlorhexidine/eugénol sur une souche de Streptococus mutans. EXEMPLE 1 Le type d'interaction entre la chlorhexidine et l'eugénol a été recherché sur des germes des principales affections de la cavité buccale, caries, parodontites et mycoses. Trois souches bactériennes de chaque espèce ont été testées, deux sont d'origine parodontale (souche 2 et 3), les troisièmes souches portent les références suivantes - Streptococcus mutans IPP (S. mutans 1) - Actinomyces viscosus IPP 100655 (A. viscosus I) - Lactobacillus acidophilus IPP 7613 (L. acidophilus 1) - Actinobacillus actinomycetemcomitans IPP 52106 (A. ac 1) - Capnocytophaga ochracea IPP 8210 (Capnocytophaga 1) - Eikenella corrodens IPP 7075 (E. corodens 1) En ce qui concerne les souches de Candida albicans, une souche est d'origine buccale (C. albicans 3), les deux autres sont référencées - Candida albicans ATCC 2091 (C. albicans 1) - Candida albicans ATCC 10231 (C. albicans 2). La méthode utilisée est une microméthode par dilutionneutralisation (selon la norme AFNOR NF T 72-150), adaptée à la technique de l'échiquier. Grâce à l'utilisation de microplaques de 96 puits, cette méthode consiste en la réalisation d'une association complète de deux gammes de dilution sériées de deux antimicrobiens, de façon à ce que chaque concentration d'un antimicrobien se trouve en présence de toutes les concentrations de la gamme de l'autre antimicrobien, et inversement. Les résultats peuvent être exprimés par le calcul du FBC index. Le FBC index rend compte du type d'interaction entre deux produits A et B, il est défini comme suit CMB du produit A seul CMB du produit B seul FBC = + CMB du produit A associé CMB du produit B associé Un FBC index Z 0,75 définit une association synergique. Sa valeur est donc inversement proportionnelle au degré de synergie entre les deux antiseptiques. Le tableau 1 rapporte, pour chaque souche testée, les valeurs des FBC index minimum ainsi que les CMB des produits associés lui correspondant, et les CMB des produits non associés. Les associations chlorhexidine/eugénol se sont révélées synergiques sur l'ensemble des souches testées. Les FBC index déterminés sont tous très inférieurs au FBC index correspondant à la limite de synergie (0,75) puisque le maximum obtenu est de 0,531. Les CMB des produits associés sont divises - par 2 à 16 pour la chlorhexidine, - par 4 à 256 pour lteugénol. Ces résultats montrent donc une potentialisation mutuelle importante des activités bactéricides des 2 produits. Les résultats peuvent également être exprimés sous forme de représentation graphique - la première est une représentation en coordonnées logarithmiques et "simule" la microplaque d'association. Pour chaque coordonnée sont reportées les concentrations de chaque produit associé ou seul (intersection avec les axes). Les courbes en gras relient les points limites de bactéricidie. Pour chaque association, les limites théoriques de synergie ont été représentées en même temps que la courbe expérimentale. - La deuxième est l'isobologramme de l'association, représenté en coordonnées décimales. Les figures 1 et 2 illustrent les résultats obtenus respectivement pour Capnocytophaga 1 et Streptococcus mutans 3. Tableau 1 : FBC index et CMB des produits seuls ou associes (exprimees en g/ml) souche CMB CHX CMB Eugenal FBC Index CMB CHX ass CMB Eugenol ass S. mutans 1 12,5 1600 0,375 1,56 400 S. mutans 2 6,25 3200 0,375 1,56 400 S. mutans 3 3,12 3200 0,313 0,78 200 A. viscosus 1 200 1600 0,313 12,5 400 A. viscosus 2 800 3200 0,258 200 25 A. viscosus 3 50 800 0,313 3,12 200 Lactobacillus 1 800 3200 0,313 200 200 50 800 Lactobacillus 2 800 3200 0,313 200 200 50 600 Lactobacillus 3 800 3200 0,5 200 800 E. corrodons 1 100 1600 0,313 6,25 400 E. corrodens 2 200 3200 0,188 12,5 400 E. corrodens 3 100 3200 0,375 12,5 800 25 400 A. ac 1 50 800 0,315 12,5 50 A. ac 2 50 800 0,375 6,25 200 A. ac 3 25 1800 0,313 1,56 400 Capnocytophaga 1 200 1600 # 0,531 100 50 Capnocytophaga 2 50 1600 0,25 6,25 200 Capnocytophaga 3 50 1600 0,281 12,5 50 C. albicans 1 50 3200 0,5 25 12,5 12,5 600 C. albicans 2 50 3200 0,5 25 12,5 12,5 800 C. albicans 3 100 3200 0,25 12,5 400 EXEMPLE 2 Différentes associations d'antimicrobiens ont été testées selon la méthode décrite à l'exemple 1. On a associé deux à deux le digluconate de chlorhexidine (CHX), le chlorure de cétylpyridinium (CCP), la polyvinylpyrrolidone iodée (PVPI), l'héxétidine, lteugénol, et l'hexamidine. Le tableau 2 montre la moyenne des FBC index minimum obtenue sur 1' ensemble des souches. On constate que certaines combinaisons conduisent à des associations simplement additives, ou même antagonistes (FBC > 2) le meilleur FBC index est obtenu avec l'association chlorhexidine/eugénol. Tableau 2 CHX CCP Hexetdne Eugenol I PVPI examidin Syn Syn Syn Syn Add Ant (0.545 > (0,337) {1,005) ( > 2) ) ( Add Add Add Ind CCP CX (0,938) (0,947) (1,048) (1,212) HRxBtidinejl Syn Ant Ant L a f(069) 2, 2, Eugfind X X X X X (o 606) EugBnol f Syn Hexamidiiu - Syn = Synergie (FBC indexC 0,75) - Add = Additivite (0,75 2) - ( ) = Moyenne des FBC index minimum obtenus sur l'ensemble des souches EXEMPLE 3 L'activité toxique des associations synergiques définies à l'exemple 2 a été testée sur les principaux éléments cellulaires impliqués dans les mécanismes de défense immunitaire (polynucléaires et macrophages), ainsi que sur les cellules épithéliales de la bouche. Le tableau 3 montre que les associations les plus synergiques en bactéricidie se montrent également synergiques vis-à-vis des polynucléaires. Cette caractéristique est définie par le calcul d'un FCC index. Tableau 3 Association FCC index FBC index FCC-FBC CHX/CCP 0,312 0,492 - 0,18 CHX/Hexetidine 0,625 0,545 + 0,08 CHX/Eugénol 0,531 0,337 + O,194 Les FCC obtenus ne suivent cependant pas les valeurs des FBC index puisque l'association chlorhex idine-eugénol, très synergique en bactéricidie, présente en cytotoxicité, une synergie beaucoup plus modérée. En outre, l'association chlorhexidine-eugénol présente le plus grand écart entre FCC et FBC (idéalement, on recherche FCC - FBC le plus grand possible). EXEMPLE 4 I1 a été montré qu'une association de 250 ug/ml de chlorhexidine et de 1000 lug/ml d'eugénol avait la même activité qu'une solution de bain de bouche connue, dosée à 1000 ,ug/ml de chlorhexidine. Ces résultats sont exprimés dans le tableau 4. Tableau 4 Formule DB 8453 de base DB 8454 Digluconate de clorhexidine Solution a 20 % (p/V)........ 0,125 ml 0,500 ml 0,500 ml Eugenol........ 0,100 g - 0,400 g Chlorbutol ... 0.500 g 0,500 g 0,500 g Poloxalkol ..... 1 g 1 g 1 g Alcool éthylique à 95 ... 35 ml 35 ml 35 ml Néosorb 70/70 8. Solution ... 44 g 44 g 44 g Menthol naturel .... 0,150 g 0,150 g 0,150 g Parahydroxybenzoate de methyle..... 0,090 g 0,090 g 0,090 g Parahydroxybenzoate de propyle..... 0,045 g 0,045 g 0,045 g Essence de menthe 1/200..... 1,5 ml 1,5 ml 1,5 ml Colorant rouge coccine ... 0.003 g 0,003 g 0,003 g Eau stérilisée , qsp ...... 100 ml 100 il 100 il CMB (dilution active) vis-a-vis de 4 souches : Lactobacillus acidophilus 7 ..... 1/16 1/16 1/32 Actinomyces viscosus R 1/16 1/16 1/32 Actinomyces viscosus (NTCC 1095) , 1/8 1/8 1/16 Actinomyces naeslundii R ........ 1/8 1/8 1/16 La solution DB 8453 présente la même activité pour une concentration en chlorhexidine 4 fois moindre, donc moins d'effets secondaires (du type noircissement des dents). La solution DB 8454 présente une augmentation nette de l'activité bactéricide pour une concentration en chlorhexidine identique. EXEMPLE 5 Différentes formulations ont été réalisées selon la présente invention. Formulation 1 - Digluconate de chlorhexidine 0,02 g - Eugénol 0,08 g - Chlorobutanol 0,5 g - Poloxamer 188 1 g - Alcool éthylique à 95" 35 ml - Sorbitol 44 g - Menthol nature 0,150 g - Parahydrobenzoate de méthyle 0,090 g - Parahydrobenzoate de propyle 0,045 g - Essence de menthe 1/200 1,5 ml - Colorant rouge coccine 0,003 g - Eau stérilisée qsp 100 ml Formulation 2 (DB 8453) - Digluconate de chlorhexidine 0,025 g - Eugénol 0,1 g - Chlorobutanol 0,5 g - Poloxamer 188 1 g - Alcool éthylique à 95" 35 ml - Sorbitol 44 g - Menthol nature 0,150 g - Parahydrobenzoate de méthyle 0,090 g - Parahydrobenzoate de propyle 0,045 g - Essence de menthe 1/200 1,5 ml - Colorant rouge coccine 0,003 g - Eau stérilisée qsp 100 ml Formulation 3 (DB 8454) - Digluconate de chlorhexidine 0,1 g - Eugénol 0,4 g - Chlorobutanol 0,5 g - Poloxamer 188 1 g - Alcool éthylique à 95" 35 ml - Sorbitol 44 g - Menthol nature 0,150 g - Parahydrobenzoate de méthyle 0,090 g - Parahydrobenzoate de propyle 0,045 g - Essence de menthe 1/200 1,5 ml - Colorant rouge coccine 0,003 g - Eau stérilisée qsp 100 ml Formulation 4 - Digluconate de chlorhexidine 0,2 g - Eugénol 0,4 g - Chlorobutanol 0,5 g - Poloxamer 188 1 g - Alcool éthylique à 95" 35 ml - Sorbitol 44 g - Menthol nature 0,150 g - Parahydrobenzoate de méthyle 0,090 g - Parahydrobenzoate de propyle 0,045 g - Essence de menthe 1/200 1,5 ml - Colorant rouge coccine 0,003 g - Eau stérilisée qsp 100 ml REVENDICATIONS 1. Composition pharmaceutique bactéricide, caractérisée en ce qu'elle comporte une association synergique de chlorhexidine et d'eugénol. 2. Composition pharmaceutique selon la revendication 1, caractérisée en ce que la chlorhexidine est présente à une concentration comprise entre 0,01 % p/v et 0,5 % p/v, et en ce que lteugénol est présent à une concentration comprise entre 0,05 % p/v et 1 96 p/v. 3. Composition pharmaceutique selon l'une des revendications 1 et 2, caractérisée en ce que la chlorhexidine est présente à une concentration comprise entre 0,02 96 p/v et 0,2% p/v. 4. Composition pharmaceutique selon l'une des revendications 1 à 3, caractérisée en ce que l'eugénol est présent à une concentration comprise entre 0,08 96 p/v et 0,64 % p/v. 5. Composition pharmaceutique selon l'une des revendications 1 à 4, caractérisée en ce que la chlorhexidine est présente à une concentration comprise entre 0,02 96 p/v et 0,1 96 p/v et l'eugénol est présent à une concentration comprise entre 0,08 % p/v et 0,4 96 p/v. 6. Composition pharmaceutique selon l'une des revendications 1 à 4, caractérisée en ce que le rapport chlorhexidine/eugénol est compris entre 2/1 et 1/32. 7. Composition pharmaceutique selon l'une des revendications 1 à 6, caractérisée en ce que le rapport chlorhexidine/eugénol est égal à environ 1/4. 8. Composition pharmaceutique selon l'une des revendications 1 à 7, caractérisée en ce que son activité s exerce sur les souches bactériennes responsables d' affections de la cavité buccale telles que les caries, les maladies parodontales et/ou les mycoses. 9. Composition pharmaceutique selon la revendication 8, caractérisée en ce qu'il s'agit d'une composition stomatologique destinée à être appliquée localement dans la cavité buccale, en particulier sous forme de bain de bouche. 10. Composition pharmaceutique selon l'une des revendications 1 à 7, caractérisée en ce que son activité s'exerce sur les souches de bactéries cutanées. Il. Composition pharmaceutique selon la revendication 10, caractérisée en ce qu'il s'agit d'une composition dermatologique, destinée à être appliquée localement, en particulier sous forme de lotion, de crème ou d'onguent.