Brevet FR2684301A1 — publié le 19930604

i La présente invention a pour objet une composition pharmaceutique contenant de l'EGF utile pour le traitement des pathologies bronchopulmonaires s'accompagnant de lésions de l'épithélium bronchique (intoxications accidentelles, infections bronchopulmonaires, bronchites chroniques, emphysèmes, syndrome de détresse respiratoire). Le facteur de croissance EGF (Epidermal Growth Factor) est un polypeptide synthétisé dans de nombreux organes et dont l'action stimulante sur la prolifération cellulaire a été démontrée sur des cellules gliales, des cellules mésenchymateuses et des cellules épithéliales en culture Au niveau de l'épithélium respiratoire, St George et al (Am J. Respir Cell Mol Biol, 1991, 4, 95-101) ont montré que l'EGF est impliqué dans le développement foetal du système sécrétoire trachéo-bronchique du singe Stahlman et al (Lab. Invest, 1989, 60, 539-547) ont mis en évidence par immunocytochimie, la présence d'EGF dans le tissu respiratoire au cours du développement foetal chez l'homme. Par contre chez l'animal, il a été montré que l'EGF n'a pas d'effet sur la prolifération de cellules épithéliales de trachée de chien en culture mais qu'il favorise la réponse de ces mêmes cellules à une stimulation par des béta- adrénergiques (Van Scott, Am J Physiol, 1988, 255, C 237- C 245) A l'opposé, Wu et al (Am Rev Respir Dis, 1985, 132, 311-320) ont rapporté que l'omission d'EGF dans le milieu de culture induit une diminution de la prolifération de cellules épithéliales nasales humaines. La Demanderesse a étudié l'effet de l'EGF sur la croissance, la différentiation et l'activité fonctionnelle de cellules respiratoires humaines en culture De plus, à partir de modèles in vitro de lésions de l'épithélium respiratoire, la Demanderesse a mis en évidence un effet potentiel de l'EGF sur la réparation de ces lésions. Des cultures de cellules épithéliales respiratoires sont obtenues à partir de polypes nasaux, selon la technique des explants (croissance des cellules autour de l'explant) et selon la technique de cellules dissociées mises en culture dans une matrice de collagène tri- dimensionnelle (lattis de collagène). Les explants sont mis en culture en présence de différentes concentrations ( 0, 5, 10 et 20 ng/ml) d'EGF (EGF de glandes5 sous-maxiliaires de souris, réf E 4127, Sigma) La surface de la croissance autour des explants est quantifiée après 3 et 4 jours de culture Le pourcentage de la surface de la croissance couverte par des cellules ciliées, ainsi que la fréquence de battement ciliaire ont été mesurés après 3 jours10 de culture Dans la technique de culture en lattis de collagène, le nombre de cellules en culture a été quantifié jusqu'à 11 jours après la mise en culture, et ceci en absence et en présence d'EGF ( 10 ng/ml). Les résultats obtenus montrent que l'augmentation de concentration en EGF dans le milieu de culture (jusqu'à 20 ng/ml) se traduit par une augmentation significative de la surface de la croissance (p cellulaire bi-dimensionnel. En ce qui concerne l'activité fonctionnelle des cellules ciliées, on note un pourcentage plus important ( 43 %) de surface de croissance couverte par des cellules ciliées en présence d'EGF à 2 Ong/ml, comparé au pourcentage obtenu lors de la culture en absence d'EGF ( 30 %) La fréquence de battement ciliaire est également significativement plus élevée ( 14,5 Hz) en présence d'EGF à 20 ng/ml, comparativement à la fréquence ciliaire mesurée en absence d'EGF ( 12,6 Hz). L'étude de la réparation de lésions de l'épithélium respiratoire a été effectuée sur un modèle in vitro Trente à5 50 cellules sont détachées de la culture à l'aide d'un micromanipulateur, de façon à mettre à nu la matrice de collagène sur laquelle les cellules épithéliales prolifèrent. L'évolution de cette zone lésée est suivie en fonction du temps sur des cultures en présence d'EGF ( 10 ng/ml) ou en10 absence d'EGF Dans la technique de culture de cellules dissociées dans un lattis de collagène, l'effet de l'EGF sur la rétraction du lattis de collagène a été étudié, après 8 jours de culture Cette rétraction est quantifiée par la mesure de la surface du lattis de collagène.15 En présence d'une concentration d'EGF de 10 ng/ml, les lésions réparent plus rapidement qu'en absence d'EGF (avec EGF, pente de la droite de régression = -71,8; sans EGF, pente de la droite de régression =-42,3). En ce qui concerne la rétraction des lattis de collagène par les cellules épithéliales respiratoires de surface on constate qu'en présence d'EGF, après 8 jours de culture, la surface du lattis est significativement plus faible ( 660 mm 2 que la surface obtenue sans EGF ( 800 mm 2) Il est admis que ce processus de rétraction d'un lattis de collagène par des cellules en culture est représentif des phénomènes de cicatrisation de lésions in vivo (Ehrlich, Tissue and Cell, 1990) Cette rétraction par des cellules respiratoires n'a jamais été montrée jusqu'à présent. L'EGF stimule la croissance et la différentiation des cellules épithéliales respiratoires humaines et ceci suivant un effet dosedépendant: augmentation de la prolifération cellulaire et de l'activité fonctionnelle des cellules ciliées L'EGF favorise la cicatrisation de lésions de l'épithélium respiratoire. L'EGF favorise le développement de tubules observé au cours de la morphogénèse glandulaire bronchique. L'EGF stimule l'activité ciliaire in vitro. L'EGF peut donc favoriser la réparation de l'épithélium bronchique après toute agression de celui-ci par un toxique, une infection, un oxydant etc. Les compositions pharmaceutiques de l'invention qui contiennent de l'EGF peuvent être administrées par voie intraveineuse ou par inhalation et se présenter sous la forme de solutions, solutions pour nébulisations, sprays, etc Revendications 1 Composition pharmaceutique contenant de i 1 'EGF (Epidermal Growth Factor) utile pour le traitement des pathologies bronchopulmonaires s'accompagnant de lésions de l'épithélium bronchique. 2 Utilisation de l'EGF (Epidermal Growth Factor) pour la fabrication de moyens destinés à traiter les pathologies bronchopulmonaires s'accompagnant de lésions de l'épithélium bronchique.