Brevet FR2683724A1 — publié le 19930521

La présente invention concerne de nouvelles substances bactéricides, possédant un spectre d'activité étendu. Parmi les substances bactéricides connues, on distingue notamment un certain nombre d'antibiotiques, et les antiseptiques. Les antiseptiques sont des agents chimiques qui s'opposent à la prolifération des microorganismes et les détruisent. On peut citer par exemple la chlorhexidine, les halogènes, les sels de métaux lourds, les ammoniums quaternaires, l'acide salicylique et ses dérivés. Les antibiotiques sont définies à l'origine comme des substances chimiques produites par des microorganismes et ayant le pouvoir d'inhiber ou de détruire les bactéries et d'autres microorganismes, en solution diluée. Un grand nombre de ces molécules sont actuellement préparées par hémisynthèse ou synthèse chimique. Ces molécules peuvent avoir une action bactériostatique ou bactéricide. On distingue plusieurs grandes familles d'antibiotiques, en fonction de leur structure et de leur mode d'action. Les principales sont les béta-lactamines (pénicillines et céphalosporines), les aminosides, les cyclines, les phénicolés, les macrolides, les polymyxines et les quinolones. Les sulfamides constituent un autre groupe de produits antibactériens. Cependant, l'émergence constante de souches présentant une résistance aux substances bactéricides connues et la propagation rapide de ce caractère, conduisent à rechercher en permanence de nouveaux produits actifs. En outre, on recherche de plus en plus des antibiotiques présentant des spectres limités ou destinés à des applications spécifiques, de façon à ne pas bouleverser, notamment au niveau digestif, l'équilibre microbiologique naturel. L'un des intérêts du produit selon la présente invention, est de présenter une activité intéressante sur des bactéries impliquées dans les désordres du système digestif, en particulier les Clostridium. La présente invention a pour objet un produit bactéricide, caractérisé en ce qu'on peut le préparer par incubation d'un substrat contenant de l'hémoglobine avec un mélange enzymatique contenant au moins une protéase, puis récupération de la solution du produit obtenue. Le produit bactéricide peut être obtenu à partir de différents substrats contenant de l'hémoglobine, notamment à partir de sang total, de globules rouges, du contenu érythrocytaire ou d'hémoglobine purifiée. On fait agir sur ce substrat un mélange enzymatique contenant au moins une protéase, notamment de la trypsine ; toutefois, de meilleurs résultats sont obtenus en associant la trypsine à d'autres enzymes, tels que ceux trouvés dans le suc pancréatique ou dans les surnageants de fecès d'animaux axé niques. Les conditions de l'incubation dépendront de l'activité du mélange enzymatique et de l'origine du substrat, mais la digestion est conduite de préférence à 37 C pendant environ 24 heures, mais il est possible d'utiliser des températures inférieures jusqu'à 20 C, et des durées de l'ordre de 3 heures à 72 heures. Après incubation, le produit est récupéré en solution après élimination des éléments solides résiduels. Il est possible de concentrer le produit par ultrafiltration, ou par toute autre technologie permettant de séparer un produit ayant une masse moléculaire supérieure à 3000. Le produit selon la présente invention peut être préparé notamment par le procédé suivant a) on centrifuge un échantillon de sang total de mammifère, et on recueille le culot contenant les érythrocytes, b) après lavage (par exemple avec une solution tampon isotonique), on met le culot en présence d'eau distillée pour provoquer l'hémolyse des érythrocytes, c) on centrifuge, d) on fait incuber le surnageant obtenu à l'issue de l'étape c) avec du suc pancréatique, e) après filtration, notamment après filtration stérilisante (0,45 um), on récupère la solution de produit bactéricide. Le sang peut provenir de différents mammifères, et sera de préférence du sang humain. Il est recueilli sur un anticoagulant comme l'héparine. Les érythrocytes sont isolés, par exemple par centrifugation à 2000 rpm, 10 mn à +4 C, puis lavés dans le même volume de tampon, de préférence du tampon PBS ; ils sont ensuite hémolysés par addition du même volume d'eau distillée, et les débris cellullaires sont séparés du contenu érythrocytaire par centrifugation, par exemple à 13000 rpm, 10 mn à +4 C. Après filtration sur 0,45 pm, l'extrait obtenu peut être conservé à +4 C ou congelé à -20 C, s'il n'est pas soumis immédiatement à l'action des enzymes. L'incubation en présence du mélange enzymatique est plus particulièrement effectuée à 37 C pendant 24 heures, en aérobiose, après dilution du substrat dans la préparation enzymatique. Selon un autre des aspects de l'invention, le produit bactéricide peut être obtenu par incubation d'hémoglobine purifiée avec du suc pancréatique, suivi par une filtration, notamment une filtration stérilisante, et récupération de la solution de produit bactéricide. Dans le cas où l'incubation est réalisée avec du suc pancréatique, on utilisera de préférence du suc pancréatique de porc, dilué à 2 %. L'action d'un mélange enzymatique tel qu'il a été défini ci-dessus, sur le sérum issu de la coagulation, le plasma des sangs héparinés séparé par centrifugation, ou les parois érythrocytaires séparées après hémolyse, conduit à un produit dépourvu d'acitivité bactéricide. De même, l'incubation du mélange enzymatique avec la globine seule conduit à un produit inactif, démontrant la nécessité de la présence de l'hème lors de la réaction. L'action du mélange enzymatique sur le sang total conduit à un produit bactéricide ayant une activité inférieure à celle du produit obtenu à partir du contenu érythrocytaire. Le produit bactéricide obtenu après incubation du substrat avec le mélange enzymatique n'est pas ultrafiltrable. Dans ces conditions, on peut donc conclure que le poids moléculaire du produit bactéricide selon l'invention est supérieur à environ 3000. Le produit selon l'invention est un dérivé peptidique ayant une masse moléculaire supérieure à 3000, résistant 24 heures à 37 C à la protéase K, ayant une activité bactéricide sur les bactéries C. perfringens et C. butyricum. Ce produit est sans doute dérivé de l'hémoglobine comportant tout ou partie de l'hème. Le produit bactéricide selon l'invention est un produit ayant une partie substantielle de nature peptidique pouvant provenir de la globine. Cependant, le produit obtenu est certainement constitué par un mé lange. Il s'agit d'un produit résistant, dont l'activité persiste après un traitement à 60 C, pendant 15 heures. Ce produit est donc lyophilisable. I1 résiste en outre à l'action de la protéase K, 24 heures à 37o C. Le produit bactéricide selon l'invention est actif sur des bactéries gram anaérobies strictes, en particulier sur des bactéries du genre Clostridium, tel que Clostridium perfringens, Clostridium butyricum, et des sporulés isolés de la flore humaine. Il n'est pas actif sur plusieurs souches de Clostridium difficile. I1 est actif sur d'autres souches de la flore dominante de l'homme adulte, tel que bifides, les peptostreptocoques, et Eubacterium. Son activité s'exerce également sur les bactéries du genre Bacillus. Ce produit est donc particulièrement intéressant puisqu'il s'agit d'un produit d'origine naturelle, actif sur des germes responsables d'infections particulièrement dangereuses ; par exemple Clostridium butirycum est impliqué dans l'enté rocoly te ulcéronécrosante du nouveau-né. Ce produit donne donc naissance à une nouvelle génération de substances inhibitrices, lyophilisables, stérilisables par filtration. Ce produit purifié pourra être utilisé notamment comme additif alimentaire, par exemple pour éviter les troubles observés lors du sevrage du porcelet. La présente invention concerne donc des compositions médicamenteuses comportant à titre de principe actif un produit selon la présente invention avec un excipient compatible avec une application thérapeutique notamment par voie orale. Il pourra s'agir notamment de compositions telles que des tablettes, comprimés, poudre ou autre forme administrable per os. La présente invention concerne également des comprimés destinés à l'alimentation, notamment animale, contenant soit des concentrés du produit selon l'invention destinés à être ajoutés aux aliments proprement dits, soit à l'eau de boisson ou bien des pré-mélanges d'aliments animaux contenant le produit selon l'invention. D'autres caractéristiques et avantages de la présente invention apparaitront à la lecture des exemples qui suivent. EXEMPLE 1 : PREPARATION DE LA SUBSTANCE BACTERICIDE Du sang humain total provenant de donneurs adultes sains, recueilli sur héparine, est centrifugé à 2000 t pendant 10 mn à +4" C. Le culot de centrifugation est lavé quatre fois dans le même volume de surnageant avec du PBS 0,01M, puis hémolysé dans le même volume d'eau distillée. Après centrifugation, à 13 000 t, pendant 10 mn à +4" C, on recueille le surnageant, qui est l'hémolysat. I1 est conservé congelé à -20" C après filtration (0,45 pm). Préparation du suc pancréatique Le suc pancréatique lyophilisé de porc (S) est préparé extemporanément à raison de 2 gIlOOmI de PBS 0,01 M. Il est utilisé filtré à 0,45 pm. Fabrication de l'antibiotique Les hémolysats décongelés sont dilués au 1/10 dans le suc pancréatique préparé comme indiqué ci-dessus. Les mélanges sont incubés en aérobiose, à 37"C, pendant 24 heures. Après incubation, ils sont filtrés à 0,45 pm. Ils sont utilisés extemporanément ou conservés congelés ou lyophilisés. EXEMPLE 2 : COMPARAISON DES ACTIVITES SUR BACILLUS SUBTILIS, DES PRODUITS OBTENUS AVEC DIFFERENTS SUBSTRATS On utilise les substrats sanguins obtenus à partir de cinq donneurs - le sang total, - le sérum issu de la coagulation, - le plasma des sangs héparinés séparé par centrifugation à 2000 t, 10 mn à +40 C, - les globules rouges lavés en PBS (culot des sangs héparinés), - le contenu érythrocytaire, - les parois obtenues après hémolyse dans l'eau distillée des globules rouges lavés centrifugés (13000 t, 10 mn à +4 C). Ces substrats sanguins sont incubés après dilution au l/10è et au 1/20è dans les préparations enzymatiques. Les préparations enzymatiques : on utilise le surnageant de fèces de souris axéniques (sans germes) diluées au 1/10è. Le suc pancréatique lyophilisé de porc est dilué à 2 S, la trypsine purifiée de bovins (Sigma) à 5 mg/ml. Toutes les dilutions sont effectuées en PBS. Les substrats sanguins sont incubés avec les préparations enzymatiques pendant 24 heures à 37 C. Le test de bactéricide est réalisé de la façon suivante 108 cellules viables d'une souche de Bacillus subtilis sont ensemencées en masse dans le milieu coeur-cervelle gélosé (Difco) et coulées en boite de Pétri. Des puits ouverts dans l'épaisseur de la gélose sont remplis avec 40 pl des divers substrats sanguins préparés ci-dessus. Après 18 heures d'incubation à l'air et à température ambiante, l'activité bactéricide est mesurée par le rayon en millimètre de la plage de lyse développée autour des puits. Ces résultats sont indiqués dans le tableau 1, dans lequel les nombres représentent le rayon moyen, en millimètres, de la zone d'inhibition de croissance de Bacillus subtilis, les traits l'absence de zone, entre parenthèse le nombre de réponse positives dans le cas de reponses différentes dans le groupe 5 donneurs. TABLEAU 1 EFFET BACTERICIDE SUR BACILLUS SUBTILIS DES SUBSTRATS SANGUINS INCUBES AVEC DES ENZYMES DIGESTIVES SUBSTRATS SANGUINS Sang sérum Globules plasma Parol de Contenus total rouges globules érythro lavés rouges cytaires 1/10 1/20 1/10 1/20 1/10 1/20 1/10 1/20 1/10 1/20 1/10 1/20 Surnageant 0,4 1,7 - - 3,4 3,6 - - - - 4,9 3,6 de féces d'axéniques (3/5) (4/5) Suc pancréatique - 0,5 - - 3,5 3,1 - - - - 5,1 3,5 (2/5) Trypaine - - - - 0,7 0,5 - - - - 2,8 2,5 (4/5)(1/5) L'incubation de sang humain total, d'un culot de globules rouges lavés ou de la fraction soluble de globules rouges hémolysés avec les enzymes pancréatiques, génère in vitro une activité sur des espèces aérobies et anaérobies strictes de genre différent. La production des susbtances inhibitrices est le résultat d'un processus enzymatique : les témoins substrats sanguins et enzymes seules sont sans effet. Les substrats ne sont pas les constituants du sérum et du plasma. L'activité enzymatique s exerce sur les globules rouges, non pas sur la paroi, mais sur le contenu érythrocytaire. L'effet bactéricide est moins fort avec le sang total ; ceci est sans doute lié à la présence d'inhibiteurs trypsiques. L'activité bactéricide est plus forte après l'action de mélanges enzymatiques comme ceux présents dans les féces des animaux axéniques ou dans le suc pancréatique qu avec la trypsine seule. EXEMPLE 3 : TEST DE BACTERICIDIE SUR BACILLUS FR Des hémolysats préparés comme dans l'exemple I sont dilués au l/10è dans le suc pancréatique préparé comme précédemment. Ces hémolysats appelés HI, H2, H3, proviennent de différents donneurs. Hui : hémolysat obtenu par addition d'eau distillée au sang d'un hyperglobulinémique. H2 : hémolysat obtenu par addition d'eau distillée au sang d'un hyperglobulinémique, et maintien à +4 C pendant 72 heures. H3 : hémolysat obtenu à partir de sang normal traité comme HI. Les mélanges sont incubés en aérobiose à 37C C pendant 24 heures. Après incubation, ils sont filtrés à 0,45 pm. Les antibiotiques produits à partir des différents hémolysats (H1, H2, H3) sont définis comme suit : H1-S, H2-S, et H3-S. Le test de bactéricidie est effectué sur le milieu de culture ayant la composition suivante - milieu coeur cervelle (Difco 0037) 37 g/l - extrait de levure (Difco 0127) 5 g/l - solution d'hémine (0,5 mg/ml -Sigma H2250) 10 ml/l - gélose Biteck agar (Difco 0138) 14 g/l. Réalisation du test : îo8 cellules viables d'une souche de Bacillus FR sont ensemencées en masse dans 15 ml de milieu et coulées en boîte de Pétri de 9 cm de diamètre (Greiner). Des puits ouverts dans l'épaisseur de la gélose sont remplis avec 40 ul de l'antibiotique à tester. Après 24 heures d'incubation en aérobiose et à 22 C, l'activité bactéricide est mesurée par le rayon (mm) de la plage de lyse totale développée autour des puits. Les résultats sont indiqués dans le tableau 2. TABLEAU 2 PRODUCTION D'ANTIBIOTIQUE A PARTIP DE DIFFERENTS TYPES DE CONTENUS ERYTHROCYTAIRES TYPES DE CONTENU ERYTHROCYTAIRE ADDITION RAYON DE LA ZONE DE SUC D'ANTIBIOSE(mm) PANCREATIQUE SUR BACILLUS FR Hémolysat = extrait obtenu par addition d'eau distillé + 2.5 {CMI=1/8} au sang d'un hyperglobulinémique H1-S H1 Hémolysat = = extrait obtenu par addition d'eau distillée + 5,5 (CMI = 1/64) au sang d'un hyperglobulinémique et maintien á +4 C H2 3 pendant 72 heures H2 Hémolysat = sang normal traité comme H1 + 5,5 H3 H3-S Témoins hémolysats = H1, H2, H3 - 0,0 Hémoglobine purifiée(15g/100mlPRS)-(Sigma n H7379) + 5.0(CMI=1/64) Globine purifiée(15g/100ml PBS)-(Sigma n G3633) + 0,0 H3 + CM sephadex C30-batch 1 heure-non retenu - 0,0 H3 + CM sephadex C50-batch 1 heure-non retenu + 0,0 H3 + CM sephadex C50-retenu-éluat - 0,0 H3 + CM sephadex C50-retenu-éluat + 5,0 EXEMPLE 4 : EFFET DE DIFFERENTS TRAITEMENTS SUR L'ACTIVITE DU PRODUIT BACTERICIDE Les produits préparés comme indiqués dans l'exemple 3, sont soumis à différents traitements pour tester la modification éventuelle de leur activité sur Bacillus FR, mesurée comme dans l'exemple 3. Les résultats sont indiqués dans le tableau 3. TABLEAU 3 EFFET DE DIFFERENTS TEAITMENTS SUR L'EFFICACITE DE L'ANTIBIOTIQUE TYPES DE TRAITMENT DE L'ANTIBIOTIQUE RAYON DE LA ZONE D'ANTIBIOSE(mm) SUR BACILLUS FR H3-S 5,5 H3-S 15heurs á 60 C 2,5 H3-S ultrafiltré-ultrafiltrat H3-S ultrafiltré-retenu sur la membrane 5,5 H3-S dans 1,5% TCA-surnageant H3-S dans 17,5% TCA-précipité H3-S dans acétone 50% 2,0 H3-S sur PEG 4000 20% 3,5 H3-S sur PEG 4000 40% 3,5 H2-S 5,5 H2-S 100 C 10 mn 5,5 H2-S maintenu 8 j á 4 C 4,5 H2-S maintenu 24 h á 22 C 5,0 H2-S lyophilisé concentré 10 fois 8,0 H2-S pH2 pH9 pH7 4,0 H2-S+protéase K(1mg/ml) 1 h á 37 C 5,5 H2-S+protéase K(10mg/ml) 24 h á 37 C 4,5 EXEMPLE 5 :TEST DE SENSIBILITE DES SOUCHES BACTERIENNES Origine des souches A l'exception des souches de collection ou en provenance de Belgique, toutes les souches ont été isolées au laboratoire de la microflore dominante de l'intestin d'enfants et d'adultes. Les prélèvements d'enfants viennent du service de néonatologie de l'hôpital A. Beckler : les enfants prématurés étaient agés de l à 2 mois et n'avaient pas de trouble pathologique intestinal. Les prélèvements d'adultes concernent des individus sains non hospitalisés ou malades (pouchite ou colite). Caractérisation des souches isolées au laboratoire Elles sont classées par leur morphotype. Un certain nombre ont été caractérisées sur 20 réactions biochimiques différentes (API 20A) et sur les produits finaux de leur métabolisme fermentaire (acides fixes et acides gras volatils). Techniques du test de bactéricidie sur les souches bactériennes Les souches anaérobies facultatives sont testées comme la souche témoin Bacillus FR dans l'exemple 3. Pour les souches anaérobies strictes, deux techniques ont été utilisées - les souches très sensibles à l'oxygène (EOS) sont cultivées dans une chambre anaérobie (Freter). Elles sont ensemencées à la surface de la gélose et incubées 48 heures à 37 C dans la chambre anaérobie. - les souches anaérobies moins sensibles à l'oxygène sont ensemencées à l'extérieur dans la masse de la gélose. Elles sont incubées 48 heures à 37 C en jarre anaérobie (Gaspack system). Les résultats sont indiqués dans le tableau 4. TABLEAU 4 TEST DE SENSIBILITE DE DIFFERENTES SOUCHES BACTERIENNES A L'ANTIBIOTIQUE PRODUIT GENRE ou N API TOXINE ORIGINE RAYON DE LA ZONE TYPE type D'ANTIBIOSE(mm) NOM DE LA SOUCHE H1-S H2-S H2-S CLOSTRIDIUM C. perfringes IS1.C10 40006002 - enfants(19 j) 3. 0 3. 0 Poul5.3(Cp?) 46326002 pouchite adulte 3. 0 3. 5 CpFR type A - adulte 3. 5 + Pou4 2.11 type # 46125022 pouchite adulte 1. 0 C.p. 8.6 ent+ + col.Inst.Past. 3.0 DG2.H8 type A 46124422 + enfant(58 j) 2,5 LGK2.F4 type A 46124002 - enfant(46 j) 2.0 DG3.C3 47777322 - enfant(65 j) 2.0 C.p.91 adulte(Belg.) 2.0 C.difficile LS3.1 41044103 + enfant(40 j) 0.0 0.0 LGKf.BS - enfant(39 j) 0.0 0.0 DG3.A6 41246103 - enfant(65 j) 0.0 0.0 SBCl.D6 41666123 - enfant(18 j) 0.0 0.0 LS1.2 41444123 + enfant(19 j) 0.0 0.0 MUS1.2 41044103 - enfant(19 j) D. 0 0. 0 VPL10463 + collection 0.0 0.0 Mara + adulte(colite) 0.0 0.0 DG1.A10 41646123 - enfant(51 j) 0.0 C.paraputrificum LGK2.B6 46346023 enfant(46 j) 1.5 6.0 LS1.A3 42346001 enfant(19 j) 2.0 4.0 DC3.B5(Cpa?) 46446001 enfant(30 j) 0.0 0.0 67 patho(Belg.) 0.0 97 ad.salp.(Belg.) 0. 0 C.butyricum DR2.B6 46757223 enfant(49 j) 0.5 2,5 MUS.C10 46756202 enfant(33 j) 0.0 4.5 Ch 1002.5 enterocolite P + 1.0 DG3.H11 47757733 enfant(65 j) 1.5 4.5 SBG1.H9 46747223 enfant(18 j) 1.5 3.5 LGK1.F4 46747223 enfant(39 j) 3.5 NCTC 7423 collection 2.0 105 bémocult(Belg) 3.0 TABLEAU 4 (SUITE) Autres Clostridium C.sordelliff VPI 9048 collection + 2,5 60 (Belg) 0,0 C.bif/sordellil NCTC 87-80 coll(Belg) + NCTC 6927 coll(Belg) 0,0 NCTC 2914 coll(Belg) 0,0 C bifermentas NCTC 506 coll(Belg) 0,0 98 pus.gyneco 4,0 C.ramosum Belg.) LGK3.H7 47346222 enfant(53j) 2,5 4,0 LS3.D5 47346232 enfant(40j) 4,0 C.hystoliticum NCTC 503 coll(Belg) 4,0 66 (Belg) 3,0 C. septicum 90 (Belg) 4,0 C.tertium NCTC 541 coll(Belg) 0,0 114 copro(Belg) 0,0 LS3,2 47348122 enfant(40j) 1,0 3,0 C.subterminale 92 bémoc)Belg) 5,0 C.sporogenes NCTC 532 coll(Belg) 3,0 107 (Belg) 4,0 C.symbiosum LS2A7 41010001 enfant(28j) 1,5 6,0 TABLEAU 4 (SUITE) AUTRES SPORULES TW1.5(Clos) 46756220 enfant(16 j) O 0 4. 5 IGK3.E4(Plec) 45342003 enfant(53 j) 4,0 dg1,b2(Clost) 47756223 enfant(51 j) 3,5 SPR ch H9 (Parapl) - adulte sain 5,0 6,0 SPR ch C7(endosp) 47757731 adulte sain 1. 0 2, 5 SPR ch A9(endosp) 44514733 adulte sain 1,0 0,0 + SPR ch D3(pepto) 45404002 adulte sain 3,5 3,0 SPR ch D3(pepto) 44414401 adulte sain 5,0 PR CH Al(plec) adulte sain 1,0 PR ch A2(plec) adulte sain 0,0 PR ch BlO(plec) adulte sain 2.5 PR ch C3(plec) adulte sain 0,0 PR ch D12(inflab) adulte sain 0,0 PR ch Ess(inflab) adulte sain 0,0 PR ch B1(endoBOS) adulte sain 4,0 PR ch B3(endoBOS) adulte sain 5,0 PR ch D1(infBOS) adulte sain 2,0 PR ch D4(infBOS) adulte sain 2,5 PR CH D5(infBOS) adulte sain 2,5 PR ch D6(infBOS) adulte sain 3,0 PR ch 3D(closBOS) adulte sain 3,5 PR ch E2(plecEOS) adulte sain 3,5 BACTEROIDES B.oralis ABG11 46146200 adulte sain 1,5 0,0 B.cascas 51 patho(Belg) 0,0 0,0 B.ruminiPoul3E2 47104600 pouchite adulte 0,0 0,0 B.fragilis AED2 46144240 adulte sain 1,0 0,0 B.melanAEE2 46104200 adulte sain 0,0 0,0 B.splanch 41 patho(Belg) 0,0 1,0 B.unif. Poul12D6 56556210 pouchite adulte 0,0 0,0 B.merdae Pou42A10 46544200 pouchite adulte 4,5 4,0 B.preacutus 35 46716210 patho(Belg) 1,5 + B.distas FRF3 46746370 adulte sain 0,0 0,0 H.vulg.GCE7 46514210 adulte sain 0, 0 0, 0 B.ovatus FRF4 56556330 adulte sain 0. O 0. 0 GCD5(B####) adultesain + O, 0 PS3C4 46756330 enfant 0,0 B.gingiv.Poul3B9 46554220 pouchite adulte 0,0 B.bivius 58colol patho(Belg) 0,0 B.hivius 58(colo2 patho(Belg) 3,5 BIFIDOBACTERIUM B.bifidum B536 enfant 4 VEILLONELLA DEIC9 - enfant + TABLEAU 4 (SUITE) AUTRES SOURCES ANAEROBIES type Peptosterpto PRC8 46750216 adulte sain + MCM G7(EOS) 47510606 adulte sain 3,0 4,0 FREI 46710216 adulte sain 1,0 2,5 LGK3 D12 47101626 enfant 0,0 2,0 LS2 D6(EOS) 44656218 enfant 1,0 5,0 MCM D6(EOS) 46516616 adulte sain 4,0 6,5 PSB A12(EOS) 46710218 enfant 2,0 3,0 MCM D12(EOS) 47510606 adulte sain 6,0 MCM F7(EOS) 47756616 adulte sain 6,5 FR F6 adulte sain 5,0 FR A7 adulte sain 4,5 FR E5 adulte sain 4,5 FR D9 adulte sain 5,0 FR F9 adulte sain 4,5 FR D10 adulte sain 0,0 adulte sain adulte sain type Eubacterium MCM C6 46346002 adulte sain + 4,5 MCM A5 47710402 adulte sain + 2,0 MCM C4 46142222 adulte sain 8,0 GC F10 adulte sain 5,0 GC F6 adulte sain 4,5 FR E10 adulte sain 6 typs byfide GC G6 adulte sain + GC A3 adulte sain 0,0 3,5 GC D10 adulte sain + 3,5 GC D9 adulte sain 0,0 4,0 GC H10 adulte sain 0,0 3,0 GC G6 adulte sain 2,5 GC HB adulte sain 3,0 GC EB adulte sain 0,0 2,0 GC D6 adulte sain 0,0 + type bacter/fuso Pou 13B6 pouchite adulte 3,0 + GC E2 adulte sain 0,0 GC E7 adulte sain 0,0 TABLEAU 4 (SUITE) autres GC A2(bat cocc) adulte sain + 7,0 5,5 GC C6(bat pal) adulte sain 0,0 GC C10(bat pal) adulte sain 0,0 0,0 GC C3(bat eff) adulte sain 3,0 GC D2(bat poly) adulte sain 0,0 GC B2(bat cocc) adulte sain 0,0 GC A10(bat cocc) adulte sain 0,0 GC G1(bat cocc) adulte sain 0,0 ANAEROBIES FAC Lacto fermentPA4 enfant(5j) + E. coli 5148 porc adulte 0,0 E.coliEMD adulte sain 0,0 sgrpto GCC adulte sain 0,0 entern GCA1 adulte sain 0,0 str fecallisSFR10 adulte sain 0,0 TEMOIN BACILLUS Bacillus FR 2,5 5,5 5,0 CMI de BFR 1/6 1/64 1/64 Conclusions sur le spectre d'activité de l'antibiotique L'antibiotique est actif sur le genre clostridium en particulier C. perfringens (9/9), C. butyricum (8/8) et des sporulés non caractérisés isolés de la flore dominante de l'homme adulte : types bifides (7/9), types peptostreptocoque (14/15) et type eubacterium (6/6). L'antibiotique n'est pas actif sur les souches de C. difficile testés (0/9). REVENDICATIONS l. Produit bactéricide, caractérisé en ce qu'on peut le préparer par incubation d'un substrat contenant de l'hémoglobine avec un mélange enzymatique contenant au moins une protéase, puis récupération de la solution du produit obtenue. 2. Produit selon la revendication l, caractérisé en ce que le mélange enzymatique contient au moins la trypsine ou une enzyme équivalente. 3. Produit selon l'une des revendications t et 2, caractérisé en ce que le mélange enzymatique est le suc pancréatique. 4. Produit selon l'une des revendications l et 3, caractérisé en ce que le substrat est constitué par le contenu érythrocytaire. 5. Produit bactéricide selon l'une des revendications t à 4, caractérisé en ce qu'on peut le préparer par les étapes suivantes a) on centrifuge un échantillon de sang total de mammifère, et on recueille le culot contenant les érythrocytes, b) après lavage, on met le culot en présence d'eau distillée pour provoquer l'hémolyse des érythrocytes, c) on centrifuge, d) on fait incuber le surnageant obtenu à l'issue de l'étape c) avec du suc pancréatique, e) après filtration, on récupère la solution de produit bactéricide. 6. Produit bactéricide selon l'une des revendications l à 4, caractérisé en ce que l'on peut le préparer par incubation d'hémoglobine avec du suc pancréatique, suivie par une filtration et récupération de la solution de produit bactéricide. 7. Produit bactéricide selon l'une des revendications t à 6, caractérisé en ce que l'incubation avec le mélange enzymatique est effectuée à 37C C, pendant 24 heures. 8. Produit bactéricide selon l'une des revendications 1 à 6, caractérisé en ce que la solution de produit bactéricide est récupérée après filtration sur 0,45 um. 9. Produit bactéricide selon l'une des revendications 1 à 8, caractérisé en ce qu'il s'agit d'un dérivé peptidique ayant une masse moléculaire supérieure à 3000, résistant 24 heures à 37 C à la protéase K et ayant une activité bactéricide sur les bactéries C. perfringens et C. butyricum. 10. Produit selon la revendication 9, caractérisé en ce qu'il comporte au moins une partie de l'hème. 11. Produit selon l'une des revendications 1 à 10, caractérisé en ce qu'il est sous forme lyophilisée. 12. Composition pharmaceutique, caractérisée en ce qu'elle comporte au moins un produit selon l'une des revendications l à l l. 13. Composition pharmaceutique selon la revendication 12, caractérisée en ce qu'elle est destinée à l'administration par voie orale. 14. Additif alimentaire, caractérisé en ce quril contient un produit selon l'une des revendications l à 11.