Brevet FR2677022A1 — publié le 19921204

La présente invention concerne de nouveaux dérivés de la vitamine D, un procédé de préparation de ces dérivés et leurs applications thérapeutiques. La vitamine D représente un des régulateurs biologiques les plus importants du métabolisme du calcium et du phosphore minéral et osseux. En association avec deux hormones peptidiques, la calcitonine et l'hormone parathyroïdienne (PTH), la vitamine D est responsable du contrôle et de la maintenance de l'homéostasie minérale et osseuse. La vitamine D est considérée aujourd'hui comme une hormone stéroidienne à part entière, et plus précisément comme une prohormone qui, après métabolisation successive entre autres dans le foie et les reins, donne naissance à un composé biologiquement actif, la l alpha,25-dihydroxy-vitamine D. Cette dernière hormone est l'élément majeur d'un système endocrinien complexe. Elle joue un rôle, non seulement dans le métabolisme phospho-calcique en agissant sur les tissus cibles classiques (intestin, os, reins et parathyroide), mais également dans le contrôle d'importants processus cellulaires (croissance, différenciation et fonctions biologiques diverses) au niveau d'un grand nombre d'autres tissus, normaux ou cancéreux [1-3]. Le terme général de vitamine D s'applique à la fois à la vitamine D2 (ergocalciférol) d'origine végétale et à la vitamine D3 (cholecalciférol) présente naturellement chez les animaux. Chez l'homme, ces deux formes de la vitamine D ont un rôle biologique très similaire. Il est donc peu significatif de les considérer séparément. Les vitamines D sont définies comme séco-stéroîdes, à savoir des molécules caractérisées chimiquement par un noyau stéroïde à 4 cycles et dont le cycle B est ouvert au niveau des carbones C-9 et C-10. Dans la présente demande, on entend donc par vitamine D aussi bien la vitamine D3 que la vitamine D2. Chez l'homme, la principale source de vitamine D est endogène et sous forme de vitamine D3. La vitamine D3 est produite à partir du 7-déhydrocholestérol, un précurseur synthétisé au niveau de trépiderme, sous l'action des rayonnements ultraviolets de la lumière solaire. Une insuffisance d'exposition solaire peut être compensée par un apport exogène en vitamines D2 et D3. STRUCTURE DE LA VITAMINE D Vitamine D3 ou Cholecalciférol Vitamine D2 La vitamine D subit une première hydroxylation en position 25, la première transformation métabolique, générant la 25-hydroxyvitamine D (ci-après 25-(OH)D), une des formes principales de la vitamine D circulante. Ce métabolite présente une haute affinité pour une protéine plasmatique porteuse, dénommée la DBP ("vitamin D binding protein"), mais une faible affinité pour le récepteur intracellulaire de la vitamine D. Après hydroxylation en position 1 alpha au niveau rénal, la 25-hydroxy-vitamine D est transformée en 1 alpha,25-dihydroxy-vitamine D, ou en abrégé 1 alpha,25-(OH)2D3, qui est la forme biologiquement active de la vitamine D. Ce métabolite a une faible affinité pour la DBP et une forte affinité pour le récepteur intracellulaire. Son taux sanguin est régulé dans des limites très étroites. Le métabolisme de la vitamine D produit toute une série d'autres métabolites dont le rôle physiologique, s'il existe, est encore mal défini. La l alpha-hydroxylase, l'enzyme responsable de l'activation de la 25-(OH)D, est également présente dans le placenta, l'intestin, le sein, l'épiderme (kératinocytes), les cellules osseuses (embryonnaires et normales), certaines cellules hématopoiétiques (macrophages et monocytes), ainsi que les tissus granulomateux lors de maladies granulomateuses, telle la sarcoïdose). Le premier rôle pharmacologique de la vitamine D est la régulation du métabolisme du calcium et du phosphore au niveau des tissus cibles classiques. Elle stimule l'absorption intestinale et rénale du calcium et du phosphore, la mobilisation osseuse de ces mêmes minéraux (résorbtion ou minéralisation), alors qu'elle régule la sécrétion de l'hormone parathyroidienne contrôlant la 1 alpha-hydroxylase rénale. Ainsi, une production excessive de vitamine D (accompagnée d'hypercalcémie, d'hypercalciurie, et de leurs conséquences) est observée dans les cas d'hyperparathyroïdies. Le récepteur de la vitamine D a été identifié dans de nombreux tissus normaux, comme la peau, les muscles, le pancréas, le cerveau, la thyroïde, le placenta, le colon, l'os (ostéoblastes), le thymus, et les cellules du système immunitaire (monocytes, macrophages, lymphocytes B et T activés). Un grand nombre de cellules cancéreuses de toutes origines possèdent des récepteurs de la vitamine D ; on peut citer les cellules leucémiques d'origine monocytaire (myéloïde) ou lymphocytaire (lymphome), les mélanomes et les carcinomes du colon, de l'os et du sein.Au niveau de ces tissus, la vitamine D joue un rôle important dans le contrôle de la prolifération et de la différenciation cellulaire, et dans la régulation et la modulation du système immunitaire au même titre que les oestrogènes et glucocorticoïdes, et plus récemment la vitamine A. Elle règle la croissance et la différenciation des cellules normales (embryogénèse) et cancéreuses (arrêt de la prolifération et/ou induction de la différenciation cellulaire). Elle se comporte également comme une substance immuno-modulatrice (par exemple stimulation de l'immunité non spécifique par les monocytes, inhibition de l'immunité spécifique lymphocytaire). La vitamine D joue un rôle fondamental dans de nombreux processus biologiques naturels. Toute anomalie dans l'apport ou la régulation du métabolisme de la vitamine D se traduit par des pathologies plus ou moins importantes. Actuellement, les pathologies associées à la vitamine D se classent en déficiences ou en excès de vitamine D. Les déficiences ou carences en vitamines D sont dues à un ensoleillement insuffisant associé à un déficit d'apport exogène par la nourriture ou lors de syndrome de malabsorbsion, à des anomalies du métabolisme de la vitamine D, ou lorsque les tissus sont résistants à son action. Les anomalies du métabolisme sont associées à des troubles liés (a) à la production de 25-(OH)D (maladies hépatiques, utilisation prolongée d'anticonvulsifiants ou de corticoïdes) (b) à la production de la l alpha,25-(OH)2D3, par absence ou déficience de l'hydroxylation en position 1 alpha (cas du rachitisme vitaminorésistant de type I), ou (c) à son action biologique, par l'absence ou une déficience des récepteurs cellulaires de la vitamine D (cas du rachitisme vitaminorésistant de type II). Le rachitisme vitaminorésistant est héréditaire. Le métabolisme de la vitamine D peut également être perturbé au cours de différentes pathologies, et en particulier, le rachitisme familial hypophosphatémique (déficit tubulaire rénal dans le transport du phosphate), l'insuffisance rénale chronique (ostéodystrophie rénale), le diabète sucré (augmentation de l'incidence de l'ostéopénie, de l'osteoporose et des fractures), l'hypoparathyroïdie et certains cancers (myélome multiple), ou par des interactions pharmacologiques, notamment avec des médicaments antiépileptiques et des corticoïdes. Les manifestations cliniques de ces déficiences en vitamine D apparaissent le plus clairement au niveau osseux : rachitisme de l'enfant et ostéomalacie de l'adulte, et peut-être participation aux phénomènes d'ostéoporose. Il existe d'autres troubles associés plus discrets, par exemple un déficit immunitaire chez les enfants rachitiques, une incidence plus élevée de certains cancers, notamment du colon, associée à une déficience en calcium et vitamine D, ou de troubles vasculaires et endocriniens. Les excès en vitamine D se rencontrent essentiellement lors d'intoxications par la vitamine D ou lors d'une production ectopique de métabolites actifs, par exemple au cours de maladies ganulomateuses (sarcoïdose). Il en est de même lors de l'hyperparathyroidie, stimulant la production excessive de 1 alpha25-(OH)2D3. Les déficiences habituelles en vitamine D sont aisément corrigées par l'apport exogène en vitamine D. Les dérivés actifs de la vitamine D et en particulier la 1 alpha,25-(OH)2D3, doivent être administrés si le métabolisme est anormal, notamment dans l'insuffisance rénale. Ceux-ci ont un indice thérapeutique très étroit, de sorte que des intoxications vitaminiques sont fréquentes lors de leur administration. La 1 alpha,25(OH)2D3 a d'autre part une demie vie courte qui justifie souvent deux prises quotidiennes. De plus, les traitements prolongés sont accompagnés d'hypercalcémie, d'hypercalciurie, et de leurs conséquences, notamment au niveau hépatique et rénal. La recherche de dérivés ayant un profil pharmacocinétique différent et un indice thérapeutique plus favorable reste donc toujours d'actualité. Le rôle régulateur particulier de la vitamine D, notamment au niveau de la prolifération et de la différenciation cellulaire, peut être mis à profit afin de contrôler certaines pathologies qui ne relèvent pas directement d'un trouble du métabolisme de la vitamine D. Le développement de nouveaux analogues de la vitamine D ouvre des perspectives dans le domaine d'applications reconnues, tel I'hyperparathyroïdisme secondaire [4-6], les pathologies de la peau, entre autres le psoriasis [7-12], les dyskératoses et l'acné, l'ostéoporose, entre autres l'ostéoporose postménopausale, sénile ou due à un excès de corticoïdes [13,14], ou d'applications potentielles en endocrinologie, tel la régulation de la sécrétion d'insuline par le pancréas, en immunologie, tel les maladies autoimmunes ou l'immunorégulation, par exemple lors de greffes d'organes [15,16], ou encore en cancérologie, tel la leucémie, les lymphomes, les syndromes myélodysplasiques [17-19]. Le potentiel biomédical d'un analogue de la vitamine D dépendra essentiellement de la possibilité de distinguer ou de dissocier les différentes formes d'activités biologiques, notamment entre l'effet calcémiant et l'effet cellulaire. Un but de la présente invention est d'apporter certaines modifications à la chaîne latérale de la vitamine D de manière à obtenir une telle distinction, notamment en conservant une activité biologique similaire, voire supérieure à celle de l'hormone naturelle, tout en réduisant l'effet calcémiant, en particulier sur le tissu osseux. La 1 alpha,25-(OH)2D3 et son précurseur, la 1 alpha-OH-D3 sont utilisés dans l'insuffisance rénale et l'ostéoporose [13,14]. Le calcipotriol, ou 22-ène-24-cyclopropyl-1 alpha,24-(OH)2D3 de Leo Pharmaceutica [11,12], a également été proposé pour le traitement du psoriasis. D'autres dérivés sont en cours de recherche et développement. Leur utilisation thérapeutique souligne l'intérêt grandissant porté aux analogues de la vitamine D en médecine humaine. Si les résultats obtenus à ce jour avec les premiers analogues de synthèse de la vitamine D, mentionnés ci-dessus, sont intéressants et encourageants, leur efficacité thérapeutique reste toutefois encore limitée. Un but de la présente invention est de fournir de nouveaux analogues de la vitamine D permettant d'améliorer la sélectivité biologique et l'indice thérapeutique d'analogues de la vitamine D. Plus particulièrement, un but de la présente invention est de fournir de nouveaux analogues permettant de moduler ou dissocier les différentes activités biologiques de la vitamine D sur les cellules cibles et, par exemple, fournir des composés actifs sur la différenciation cellulaire mais peu actifs sur le métabolisme phospho-calcique permettant d'augmenter les doses administrables et l'index thérapeutique pour l'indication thérapeutique concernée. La présente invention a donc pour objet des dérivés de la vitamine D ou d'un de ses analogues, possédant une chaîne latérale greffée en position 17 sur le cycle D de la vitamine D, ladite chaîne latérale comportant un groupe époxyde, en particulier le composé répondant à la formule dans laquelle - V représente un reste de la vitamine D ou d'un de ses analogues dont la position 17 est vacante - X greffé en position 17 de V représente une chaîne hydrocarbonée, notamment alkylée, de O à 15 atomes de carbone éventuellement substituée ou modifiée, notamment pouvant comporter, en une ou plusieurs positions, un ou des groupe(s) hydroxyle, méthyle, éthyle, halogène, de préférence fluor, ester, notamment un groupe RlCOO avec R1 qui représente un alkyle ou alcoxy en C1 à C7 linéaire ou branché, saturé ou insaturé, éventuellement substitué notamment par un ou des groupe(s) hydroxy ou halogène de préférence fluor, éther, notamment un groupe R1 -o avec R1 qui représente un alkyle ou alcoxy en C1 à C7 linéaire ou branché, saturé ou insaturé, éventuellement substitué par un ou des groupe(s) hydroxy ou halogène, oxo sous forme cétonique, . un cycle ou hétérocyle, notamment cycloalkyle saturé ou insaturé, aromatique ou hétéroaromatique pouvant porter tous les groupes et modifications mentionnés ci-dessus, et/ou - ladite chaîne X pouvant comporter à la place d'un ou plusieurs de ses atomes de carbone, un atome d'oxygène, d'azote ou de soufre, - ladite chaîne X pouvant être insaturée, avec une ou plusieurs double(s) ou triple(s) liaison(s) carbone-carbone, cette chaîne insaturée pouvant porter tous les groupes et modifications mentionnés ci-dessus, et - ladite chaîne et les différents groupes situés sur la chaîne pouvant adopter toutes les formes isomériques, - le groupe époxyde pouvant être greffé sur l'un quelconque des 15 atomes de carbone de X, notamment à son extrémité, groupe époxyde dans lequel R1, R2 et R3, qui peuvent être identiques ou différents, représentent un hydrogène, un groupe alkyle en C1 à C10, linéaire ou branché, saturé ou insaturé, éventuellement substitué avec un (ou des) groupement(s) halogène, hydroxy, cycloalkyle, également éventuel lement substitué avec des groupements halogène ou hydroxy R1 et R2 peuvent faire partie d'un même cycle, tel que carbocycle ou hétérocycle, et dans ce cas R3 a la même signification que ci-dessus. . R2 et R3 peuvent faire partie d'un même cycle, tel que carbocycle ou hétérocycle, et dans ce cas R1 a la même signification que ci-dessus . les différentes formes isomériques au niveau de l'époxyde étant possibles. On entend par reste de la vitamine D ou analogues de la vitamine D (V) un composé dont le squelette structurel de base a pour formule et dont la formule complète peut avoir des substitutions dans toutes les positions autre que la position 17 du cycle D. En particulier, V peut représenter un reste - des analogues possédant une dérivation en C qui ont été décrits par la demanderesse dans EP 341158 - des dérivés possédant une double liaison entre C16-C17 décrits dans U.S. 199167 et EP 050325 - des composés avec un hétérocycle entre C6 et C10 qui ont été décrits dans EP 81793, EP 78704 - des dérivés possédant diverses dérivations en C3 et C1 qui ont été décrits dans WO 90/10620. Les composés selon l'invention répondront le plus souvent à la formule dans laquelle X, Rl à R3 ont les significations données ci-dessus et représente une simple liaison ou une double liaison ; - A représente un hydrogène, un méthyle ou le groupe méthylène =CH2j - Y identique ou différent représente H, OH, un groupe ester, notamment R1COO, ou éther, notamment R1O, avec R1 qui a la signification donnée ci-dessus. Parmi ceux-ci on préfère les composés dans lesquels X représente une chaîne alkylée de 0 à 6 atomes de carbone dont éventuellement un atome de carbone est remplacé par un atome d'oxygène, éventuellement substituée, notamment par un ou plusieurs groupe(s) méthyle, hydroxyle, éther, notamment un groupe R O, et/ou insaturée avec une double ou triple liaison carbone-carbone, le groupe époxy étant greffé à l'extrémité de la chaîne alkylée X, R1, R2 et R3, pouvant être identiques ou différents, représentant un hydrogène, un hydroxy, un groupement alkyle, notamment un méthyle ou éthyle ou un hydroxyalkyle.. En particulier, on peut citer les composés qui répondent à la formule Il et notamment aux quatre formes isomériques pures ou en mélange dans lesquelles Z représente une chaîne alkyle saturée ou insaturée de 0 à 3 atomes de carbone, éventuellement substituée ou modifiée comme mentionné pour X précédemment, en particulier substituée par un hydroxy, un alkyl, tel que méthyl ou éthyl, sur l'un ou plusieurs des atomes de carbone, et R1 à R3 et R1 ont les significations données ci-dessus, le groupe époxyde étant greffé à l'extrémité de 7. Parmi ces derniers figurent les composés suivant la formule IIa ou IIb avec R1 R2 R3 Z CH3 H H -CH2-CH2 CH3 H H -CH2-CHOH H CH3 CH3 -CH2 H H H -C(CH3)2 CH3 H H Les composés selon l'invention peuvent être préparés par des procédés connus de l'homme de l'Art. La présente invention a également pour objet un procédé de préparation d'un composé selon l'invention, caractérisé en ce que l'on fait réagir l'anion obtenu à partir d'un composé dont le squelette structurel de base a pour formule IV et du n-butyllithium, avec un composé dont le squelette structurel de base a la formule III dans lesquels les fonctions réactives greffées sur les squelettes de III et IV sont éventuellement protégées et X, R1, R2, R3, dont les fonctions réactives sont éventuellement protégées, ont les significations données précédemmment, puis l'on déprotège éventuellement lesdites fonctions réactives notamment de X, R1, R2, R3 et hydroxyle en positions 1 et 3. Ce type de couplage est décrit dans la littérature [28]. De même la synthèse de dérivés de formule IV a été décrite [29]. En particulier, les dérivés de formule Ib dans lesquels Y représente OH ou OR1 peuvent être obtenus à partir de Le composé de structure III' peut être obtenu par plusieurs voies, notamment celles reprises dans le schéma la ci-après. Une première séquence comprend les étapes suivantes a) l'on fait réagir un composé dont le squelette structurel de base a pour formule VI dans laquelle Tos est le groupe tosylate, R2 est hydrogène ou un groupement protecteur de l'alcool, et X a la signification donnée précédemment avec éventuellement les groupements réactifs notamment hydroxy sous forme protégée, et W et Z' représentent des chaînes hydrocarbonées qui sont des parties de X, telles que -X représente -W-Z', la chaîne X étant donc constituée par les chaînes W et Z' assemblées à une de leurs extrémités, W et Z' ayant donc des significations données pour X, notamment Z' pouvant représenter Z, dont le cas échéant les groupes réactifs, tels que hydroxy, sont protégés, avec un dérivé organométallique de formule VII dans laquelle Met est le lithium ou halogénomagnésium, b) puis on époxyde l'oléfine ainsi obtenue, et c) après déprotection éventuelle du dérivé dont le squelette structurel de base a pour formule VIII, on oxyde la fonction hydroxy en cétone. Une seconde séquence comprend les étapes suivantes : a) l'on fait réagir le composé de squelette VI avec un dérivé organomé tallique de formule IX, suivi de l'hydrolyse qui libère la fonction cétonique, b) que l'on fait ensuite réagir avec des ylures sulfurés (sulfurylides), et c) après déprotection éventuelle du dérivé VIII, on oxyde comme ci-dessus. I1 est aussi possible d'utiliser l'une ou l'autres des séquences suivantes, où l'on fait réagir un dérivé organométallique de formule X avec le tosylate XI ou XII et de procéder ensuite aux époxidations respectives telles qu'elles ont été décrites précédemment. Cette dernière voie sera avantageuse lorsque W (et donc X) est une chaîne hydrocarbonée où un atome de carbone est remplacé par un oxygène, soufre ou azote. Dans ce cas le dérivé organométallique X sera préparé de préférence à partir de Xa, où l'hydrogène marqué H est lié à l'oxygène, soufre ou azote, par déprotonation. Sinon X peut être préparé au départ d'un dérivé halogéné Xb par transmétallation. I1 est à noter qu'à la place d'un tosylate dans les dérivés décrits précédemment (VI, XI et XII) un autre groupe partant, par exemple iodure, peut être utilisé. R, R. t gRz Yg R2 QaO VIII III R, R1 R, A( z' R( R TosO R2 R1 VII Ri Xl W,Mlt A Z';O Rt 4 A1 ~~À È À 51s Dans VII, IX, XI et XII, les groupes peuvent être greffés sur toute position de la chaîne Z', notamment à son extrémité. Différentes voies alternatives de préparation des composés apparaîtront à la lumière des exemples qui vont suivre La présente invention a également pour objet l'utilisation à titre de médicament de composés selon l'invention. Les analogues de la vitamine D selon l'invention, caractérisés par la présence d'une fonction époxyde au niveau de la chaîne latérale, constituent le premier groupe de modifications de ce type apportées à la vitamine D. La fonction époxyde substitue avantageusement le groupe hydroxyle caractéristique de la forme active de la vitamine D, et situé en position 25. En effet, jusqu'à la présente invention, tous les analogues biologiquement actifs de la vitamine D possédaient au moins une fonction hydroxyle dans la chaîne latérale, notamment en position 25. On a découvert selon la présente invention que la fonction époxyde située sur la chaîne latérale de la vitamine D permet d'obtenir un analogue biologiquement actif sans la présence obligatoire d'une fonction hydroxyle au niveau de la chaîne latérale.Par ailleurs, la fonction époxyde confère des propriétés biologiques particulièrement intéressantes aux produits correspondants, ne présentant pas cette fonction. I1 apparaît, en effet, que le groupe époxy confère en lui-même une activité biologique et que cette activité est différente de celle conférée par le groupe hydroxy. D'une part, la fonction époxyde confère à la 1 alpha-hydroxyvitamine D, un métabolite inactif de la vitamine D, des activités biologiques propres et caractéristiques à la forme active, la 1 alpha,25-(OH)2D3. Par exemple, le dérivé 1 alpha hydroxy 25,26-époxy-1-vitamine D3 (composé 24) augmente de plus de 100 fois la capacité de la 1 alpha-OHD3 à différencier les cellules leucémiques humaines (HL-60). D'autre part, la fonction époxyde confère une propriété biologique dissociée par rapport aux analogues habituels de la vitamine D, possédant une fonction hydroxyle en position 25 de la chaîne latérale. Au niveau des propriétés cellulaires de type différenciation, les analogues époxydes se comportent d'une façon générale comme le métabolite actif de la vitamine D. Ils se montrent aussi actifs à nettement plus actifs que la l-alpha,25-(OH)2D3. On peut citer notamment la différenciation des cellules leucémiques humaines et des cellules épidermiques (kératinocytes humains) ainsi que l'effet anti-prolifératif sur les cellules tumorales, par exemple MCF-7. En ce qui concerne le métabolisme phospho-calcique, l'effet calcémiant des analogues est considérablement réduit (activité marginale) voire inexistant dans le modèle du poulet rachitique. Ils se montrent également beaucoup moins aptes à stimuler la sécrétion d'ostéocalcines par les cellules ostéoblastiques humaines en culture. Cette diminution des effets secondaires de type hypercalcémiant, observés dans le cas des analogues époxydes, n'empêche pas l'efficacité des composés dans le cadre de ltostéoporose. En effet, l'effet thérapeutique dans ces circonstances -indépendant de l'effet calcémiantrésulte alors de l'effet de différenciation sur les cellules de type osseuses. Ainsi, la dérivation époxyde permet de bien dissocier l'effet calcémiant des autres formes d'activités biologiques. Par exemple, les analogues époxydes et notamment le dérivé 26a : (245,25R)-1 alpha 24 dihydroxy c 25,26-époxy, Vitamine D3 sont capables de stimuler la différenciation des cellules leucémiques ou épidermiques sans toutefois induire un effet calcémiant. La réduction notable de l'effet calcémiant confère à ces analogues des avantages certains par rapport à la vitamine D ou à son métabolite actif, notamment d'accroître la concentration en composé pouvant être administré sans influencer le métabolisme phosphocalcique, et par là d'augmenter l'indice thérapeutique dans de nombreuses applications. La présente invention a donc également pour objet l'application des composés selon l'invention à titre de médicament. La présente invention a donc plus précisément pour objet l'utilisation de ce médicament notamment pour le traitement et/ou la prophylaxie - des pathologies de la peau, entre autres du psoriasis, des dyskératoses, de l'acné, l'alopécie et le vieillissement de la peau incluant l'effet des rayonnements solaires et lumineux - de l'hyperparathyroïdisme secondaire - de cancers incluant les leucémies, lymphomes, syndromes, syndromes myélo-dysplasiques, mélanomes, cancers du sein, du poumon ou du colon et leurs métastases - des maladies autoimmunes incluant des endoscinopathies telles le le diabète "mellitus" ; des pathologies neurologiques, telles la sclérose en plaque et des maladies systémiques, telles le lupus érythémateux, les glomérulonéphrites - des processus inflammatoires, tels que le rhumatisme articulaire, l'arthrite et l'asthme - de I' ostéoporose, y compris l'ostéoporose sénile, celle qui accompagne le du diabète sucré ou de traitement aux corticoîdes - de l'hypertension artérielle. - la modulation du système immunitaire (suppression de la prolifération des lymphocytes, différenciation des monocytes, etc...) utiles pour le traitement et la prophylaxie dans le cas par exemple des maladies autoimmunes, des processus inflammatoires, ainsi que dans le cas de transplantation d'organes. On peut en effet utiliser les composés selon l'invention pour prévenir les rejets de greffes en usage seul ou en association avec d'autres composés, tels que la cyclosporine, le FK 506, etc... l'insuffisance rénale ; D'autres caractéristiques et avantages de l'invention apparaîtront à la lumière de la description et des exemples qui vont suivre. Dans les exemples qui suivent les dérivés de formule V ont notamment été obtenus suivant une des voies mentionnées de façon générale dans le schéma lb suivant Schéma 1b L'on peut distinguer trois stades (a) l'introduction d'un fragment de la chaîne latérale contenant une fonction, éventuellement protégée, qui doit permettre l'introduction de l'époxyde ; l'introduction du fragment se fait avantageusement par substitution du groupement tosylate en lc, méthode décrite dans la littérature [30] (b) l'introduction de l'époxyde qui peut se faire au départ d'une oléfine de type A' par une des méthodes d'époxydation conventionnelles ou au départ d'un cétone de type A en utilisant par exemple des ylures auquel cas l'introduction d'une partie de la chaîne donne conjointement l'époxyde (c) après déprotection éventuelle du groupement hydroxyle sur le cycle, oxydation de ce dernier en cétone. I1 est à noter, qu'en général, l'époxyde formé sera présent sous deux formes isomériques qu'il peut être utile de séparer. Les formes isomériques en C-20 (voir structure IIc, IId) sont préparées de la même façon mais au départ du tosylate que l'on obtient à partir de l'alcool primaire isomérique correspondant lb. Ce dernier peut être obtenu au départ de la par la séquence suivante (a) oxydation de l'alcool primaire en la par exemple par le pyridinium hydrobromide perbromide (b) isomérisation de l'aldéhyde 2a avec une base telle que diazabicyloundecene (c) réduction du mélange des aldéhydes 2a et 2b par le borohydrure de sodium et séparation des alcools la et lb. Dans les exemples et le Schéma 2 ci-après est explicitée la synthèse des précurseurs V de dérivés de la vitamine D3 selon l'invention. L'époxyde 5, obtenu sous forme de mélange de diastéréomères 5a et 5b, est obtenu à partir du tosylate lc. Ce dernier est préparé au départ de l'alcool la avec le chlorure de tosyle dans la pyridine. L'alcool la résulte de l'ozonolyse, suivi de la réduction par le borohydrure de sodium, de la vitamine D2 ou de l'acétate de la vitamine D2 selon un procédé décrit dans la littérature [31]. Le tosylate lc est ensuite couplé avec l'organomagnésien dérivé du 4-chloro-2-méthyl-l-butène en présence de Li2CuCl4 suivant le procédé décrit pour ce dérivé dans la littérature [32]. L'époxidation de l'oléfine 3 ainsi obtenue s'effectue de façon conventionnelle par l'acide m-chloroperbenzoïque dans le dichlorométhane à température ambiante.Le mélange des deux époxydes 4a et 4b ainsi obtenus est oxydé avantageusement par la pyridinium dichromate dans le dichlorométhane. L'époxyde lIa, possédant une fonction supplémentaire dans la chaîne latérale, peut être préparé de façon sélective à partir de l'oléfine 3. Après protection de l'alcool secondaire sous forme d'éther timéthylsilylique, la position 24 dans la chaîne latérale est oxydée par le dioxyde de sélénium en présence de tert-butyle hydropéroxide dans le dichlorométhane. Le mélange des alcools diastéréomères 7a et 7b qui en résulte n'est pas séparé à ce stade. Schéma 2 a mCPBA, CH2Cl2. 25 C; b PDC. CH2Cl2. 25 C; c N.trimethylsilylimidazole. CH2Cl2, 25 C; d SeO2. tBuOOH. CH2Cl2. 25 C; e (+)-DIPT, Ti(OiPr)4. tBuOOH, CH2Cl2; e (-)-DiPT, Ti(OiPr)4, tBuOOH, CH2Cl2; f nBu4NF, THF. 255C; f Me2S; HCl, acetone; h (Li2CuCl4, THF; h DMSO, Et3N; i H2SO4, dioxane-H2O; j Me3S-l-, KOH, CH3CN En effet l'époxydation selon la méthode de Sharpless [33] permet dans le cas présent, en utilisant en présence de (+)-diisopropyl-L tartrate du tert-butylhydropéroxyde et du Ti(i-PrO)4, la transformation sélective de l'alcool 7a en époxyde 8a, laissant l'alcool 7b inchangé. Ce dernier peut éventuellement être utilisé ensuite dans une époxydation telle que décrite pour l'oléfine 3.Après déprotection de l'alcool secondaire, le diol 9a est oxydé sélectivement à l'hydroxyle attaché au cycle. Enfin la fonction hydroxyle dans la chaîne latérale de la cétone 10a est protégée sous forme d'éther triméthylsilylique (1 la) en vue de son couplage. D'une façon analogue l'époxy-cétone protégé 15b, un stéréoisomère de Ila, est préparé au départ de l'oléfine 6. Après l'oxydation allylique, le mélange des alcools 7a, 7b est déprotégé. L'oxydation de Sharpless cette fois s'effectue sur le mélange des diols 12a, 12b. En présence de (-)-diisopropyl-D-tartrate, de tert-butylhydroperoxide et de Ti(IV)isopropoxide l'époxydation s'effectue sélectivement sur 12b, laissant 12a inchangée. L'époxyde 13b est ensuite oxydé et le groupement hydroxy libre dans la cétone 14b est protégé sous forme d'éther triméthylsilique en vue du couplage de 15b.La synthèse des époxydes 18a, 18b, ainsi que 18'a et 18'b s'effectue également au départ du tosylate lc. Lorsque ce dernier est traité avec le dérivé de Grignard obtenu à partir du chlorure d'isopentényle dans le tétrahydrofurane en présence de Li2Cu(II)C14 l'on obtient un mélange de l'oléfine attendue 16 et d'une oléfine isomérique 16'. Cette dernière n'est pas un produit important lorsqu'on utilise dans l'étape décrite le iodure comme groupement partant au lieu d'un tosylate. Après époxydation classique le mélange d'époxydes est obtenu qui peut être séparé. De cette sorte l'époxydation de l'alcool secondaire peut s'effectuer sur tes dérivés 17a, 17b d'une part, et sur les dérivés 17'a, 17'b, d'autre part. Les cétones 18a, 18b et 18'a, 18'b peuvent être utilisés directement dans l'étape de couplage. Enfin l'acétylène 22a, 22b est obtenu au départ du tosylate par substitution avec le dérivé lithié obtenu au départ de l'acétal de la 3-butyn-2-one. Après déprotection de l'acétal en 19, la cétone est traitée avec une ylure obtenue à partir du iodure de triméthylsulfonium. L'époxyde sous forme diastéréomérique 21a, 21b est oxydé et les cétones correspondantes 22a, 22b peuvent être couplées directement. La synthèse des dérivés II de la vitamine D3 par couplage des dérivés V avec l'anion du dérivé IV est effectué selon le schéma 3: Schèma 3 v ll II II Sa + zb -CH2CH2- CH3 H H -CH2CH2- SitBuMe2 23a 1 23b CH3 H H -CH2CH2- H 24a + 24b TMSO. H TMSO., H lia sCH22 CH3 H H XCHK SitBuMe2 25a CH2 \CH\ CH2 CH3 H H HO. H H N CH2 H OTMS H OTMS iSb N OTMS CH3 H H CH2 SitBUMe2 27b CH2 CH2 CH3 H H N H 0K H 2Sb CH' + 18b -CH2- H CH3 CH3 -CH2- SitBUMe2 29a + 29b H CH3 CH3 -CH2 - H 30a + lOb 181a + 18'b -C(CH3- H H H -C(CH3)2- SitBuMZ2 29't + 29'b H H H -C(CH3)2- H 30'a + 30'b 22a + 22b -C-C- CH3 H H -C=-C- SitBUMe2 31a + 31b CH3 H H -0=-C- H 32r+ 32b Le couplage des cétones possédant la fonction époxyde dans la chaîne latérale telle que 5a/5b et 1 la avec l'anion du dérivé IV conduit aux dérivés protégés tels que 23a/23b et 25a, respectivement. L'élimination des groupements protecteurs des dérivés de couplage conduit enfin à l'obtention des alcools dérivés de formule II. Un exemple est la condensation du sel de lithium, obtenu à partir du phosphonate IV avec le n-butyllithium dans le THF à -78 C avec le mélange des diastéréomères 5a et 5b, conduisant au mélange des triènes 23a et 23b. La déprotection des groupements éthers silylés s'effectue avantageusement avec le fluorure de tétrabutylammonium. Dans le cas de l'époxyde 1 la le couplage analogue mène à 25a et, après déprotection, au triol 26a. De façon tout à fait analogue l'époxyde 15b mène via 27b au triol 28b. La réaction des mélanges des diastéréomères 18a et 18b, 18'a et 18'b, ainsi que 22a et 22b, mènent après couplage et déprotection aux mélanges des diols 30a et 30b, 30'a et 30'b, et 32a et 32b, respectivement. EXEMPLE 1 : Synthèse des époxy-alcools 4a,4b A une solution de 3 (0,16 g, 0,61 mmole) dans du dichlorométhane anhydre (7 ml) on a ajouté de l'acide m-chloroperbenzo ique (mCPBA, 0,235 g, 1,36 mmole, 2,2 équivalent) et la solution a été agitée pendant une heure à la température ambiante sous atmosphère d'argon. Du carbonate de potassium a été ajouté, l'agitation a été poursuivie pendant 10 minutes et le mélange de réaction a été filtré à travers un lit de Merck Kieselgel 60 et de célite en utilisant le mélange n-hexane/acétate d'éthyle (7:3). Le filtrat a été concentré sous pression réduite et le résidu huileux a été purifié par HPLC sur une colonne de silice 10 um avec du n-hexane/ acétate d'éthyle (8:2) comme éluant.Ceci a donné le mélange de diastéréoisomères 4a et 4b (0,146 g, 0,52 mmole, 86 %) sous forme d'un solide blanc. Caractéristiques : Rf (n-hexane/acétate d'éthyle, 7:3) : 0,31. Données spectroscopiques de 4a,4b : IR (KBr-film) : 3424 (s), 2943 (s), 2872 (s), 2285, 1461, 1444, 1390, 1373, 1266, 1170, 1066, 995, 943, 898, 887, 858, 835, 802, 737 et 702 cm ; 1H NMR (CDCl3, 360 MHz) : 4,07 (1H, q, 2,6 Hz), 2,61 (1H, dd, 4,9, 2,9 Hz), 2,57 (1H, d, 4,9 Hz), 1,99 (1H, m), 1,82 (3H, m), 1,30 (3H, s), 0,92 (3H, s) et 0,90 (3H, d, 6,5 Hz) ppm ; MS : m/z à 262 (1), 247 (2), 234 (1), 180 (1), 179 (4), 162 (4), 151 (9), 136 (14), 125 (16), 111 (100), 96 (27), 81 (40), 67 (36) et 55 (75). EXEMPLE 2 : Synthèse des époxy-cétones 5a,5b A une solution de 4a,4b (0,146 g, 0,52 mmole) dans du dichlorométhane anhydre (9 ml) on a ajouté du dichromate de pyridinium (PDC, 0,494 g, 1,31 mmole, 2,5 équivalent) et une quantité catalytique de para-toluènesulfonate de pyridinium (PPTS) et la suspension a été agitée pendant 4 heures à température ambiante sous atmosphère d'argon. De l'éther a été ajouté (à partir de 10 ml) et l'agitation poursuivie pendant 5 minutes, le mélange de réaction a été filtré à travers un lit de Merck Kieselgel 60 et de célite en utilisant de l'éther, et les précipités de sels de chrome ont été lavés plusieurs fois avec de l'éther puis filtrés.Les filtrats mélangés ont été concentrés sous pression réduite et le résidu a été purifié par HPLC sur une colonne de silice 10 um avec comme éluant du n-hexane/acétate d'éthyle (85:15). On a obtenu ainsi le mélange de diastéréoisomères 5a et 5b (0,139 g, 0,5 mmole, 96 %) sous forme d'huile. Caractéristiques : Rf (n-hexane/acétate d'éthyle, 7:3) : 0,35. Données spectroscopiques de 5a,5b: IR (KBr-film) : 3034, 2956 (s), 2873 (s), 1714 (s), 1456, 1378, 1307, 1255, 1234, 1187, 1152, 1107, 1056, 943, 902, 838, 795, 737 et 703 cm 1 1H NMR (CDCl3, 360 MHz) : 2,61 (1H, dd, 4,9, 2,8 Hz), 2,58 (1H, d, 4,9 Hz), 2,44 (1H, dd, 11,6, 7,5 Hz), 2,26 (2H, m), 2,12 (1H, ddd, 12, 4,1, 2,5 Hz), 2 (1H, m), 1,90 (2H, m), 1,78 (1H, m), 1,31 (3H, s), 0,96 (3H, d, 6,1 Hz), et 0,63 (3H, s) ppm ; MS : m/z à 278 (M-+, 1), 263 (2), 250 (2), 235 (2), 204 (2), 177 (4), 159 (4), 125 (24), 111(36), 85 (24), 81(52), 67 (39) et 55 (100). EXEMPLE 3 : Synthèses de 25(S)-1 alpha-hydroxy-25,26-époxy-vitamine D3 (24a) et 25R-1 alpha-hydroxy-25,26-époxy-vitamine D3 (24 b). Une solution de IV (0,053 g, 0,091 mmole, 1,3 équivalent) dans du tétrahydrofurane anhydre (0,5 ml) a été placée sous atmosphère d'argon (1,1 bar), refroidie à -70"C et du n-butyllithium (solution 2,41 M dans du n-hexane, 0,037 ml, 0,087 mmole) a été ajouté. La solution foncée résultante a été agitée pendant 30 minutes. On a ensuite ajouté les cétones 5a et 5b goutte à goutte (0,02 g, 0,072 mmole) dissous dans du tétrahydrofurane anhydre (0,9 ml). Le mélange a été agité à -70"C pendant 1 heure et demie puis laissé revenir à la température ambiante sous une période de deux heures et demie. Deux ou trois gouttes d'eau ont été ajoutées à la solution rouge et la plupart des solvants ont été éliminés sous flux d'argon.Une solution de bicarbonate de sodium saturée (2 ml) a été ajoutée et extraite trois foisavec du diéthyle éther (2 ml), les extraits mélangés ont été filtrés à travers un lit de Merck Kieselgel 100 (35-70 mesh) et le solvent a été éliminé sous pression réduite. Le résidu a été chromatographié rapidement sur une colonne HPLC de silice 10 um avec du n-hexane/acétate d'éthyle (85:15) comme éluant. L'huile obtenue (mélange de 23a et 23b) a été immédiatement reprise dans du tétrahydrofurane anhydre (0,3 ml), du fluorure de tétrabutylammonium (TBAF, solution 1 M dans du tétrahydrofurane 0,255 ml) a été ajouté et la solution a été agitée pendant 15 heures à température ambiante sous atmosphère d'argon, protégée de la lumière.Le solvent a été éliminé sous flux d'argon et le résidu chromatographié sur Merck Kieselgel 60 avec du dichlorométhane/ méthanol (9:1) comme éluant. Une purification supplémentaire par HPLC (10 pm de silice, dichlorométhane/méthanol (92,5:7,5)) a permis d'obtenir le mélange de diastéréoisomères 24a et 24b (0,019 g, 0,046 mmole, 64 %). Caractéristiques : Rf (dichlorométhane/méthanol 9:1) : 0,41. Données spectroscopiques de 24a,24b: UV (MeOH)2 max = 261 nm; IR (KBrfilm): 3380 (s), 3048, 2946 (s), 2870 (s), 1644, 1446, 1377, 1266, 1218, 1148, 1055, 957, 898, 799, 737 et 703 cm ; 1H NMR (CDCl3, 360 MHz) : 6,38 (1H, d, 11,2 Hz), 6,01 (IH, d, 11,2 Hz), 5,32 (1H, m), 5 (1H, m), 4,44 (1H, dd, 7, 4,3 Hz), 4,22 (1H, ddd, 10, 7, 4 Hz), 2,82 (1H, dd, 11,5, 3,5 Hz), 2,61 (1H, dd, 4,8, 2,3 Hz), 2,57 (lH, d, 4,8 Hz), 2,31 (1H, dd, 13,4, 6,6 Hz), 1,81-2,05 (4H, m), 1,31 (3H, s), 0,93 (3H, d, 6,4 Hz) et 0,54 (3H, s) ppm ; MS : m/z à 415 (M-+, 1, 2), 397 (2), 378 (2), 287 (1), 267 (2), 251 (3), 197 (3), 171 (5), 152 (24), 134 (60), 105 (31), 91 (42), 81 (40), 79 (40), 67 (35) et 55 (100). EXEMPLE 4 : Synthèse des alcools 7a et 7b A une solution de 3 (600 mg, 2,27 mmole) et N-(triméthylsilyl)-imidazole (953 mg, 6,81 mmol, 997 p1) dans du CH2C12 anhydre (8 ml) a été agitée à température ambiante sous atmosphère d'azote pendant 3 heures. Après concentration, on a obtenu un résidu qui était directement chromatographié (hexane/EtOAc, 16:1) pour donner 6 sous forme d'huile (672 mg, 88 %). Caractéristiques : Rf (hexane/EtOAc 8:2) : 0,95. Données spectroscopiques de 6 : 1H NMR (CDCl3, 360 MHz) : 0,05 (9H, s), 0,88 (3H, s), 0,89 (3H, d, 6,64 Hz), 1,71 (3H, s), 3,99 (1H, m), 4,66 (1H, bs), 4,68 (1H, bs) ppm. Un mélange de dioxyde de sélénium (33 mg, 0,30 mmol), t-butylhydropéroxyde (90 %, 90 mg, 0,90 mmol) et de CH2 Cl2 anhydre (4 ml) a été agité à 25 C pendant une demi-heure. Une solution de 6 (200 mg ; 0,60 mmol) dans du CH2Cl2 anhydre (4 ml) a été ajoutée pendant plusieurs minutes. Le mélange résultant a été agité à 25 C sous azote pendant une demi-heure. L'agitation a été poursuivie à environ -20 C pendant 22 heures. La réaction s'est effectuée jusqu'à atteindre la température ambiante, du sulfure de méthyle (1 ml) a été ajouté, le mélange résultant a été agité à 25-30 C pendant 5 heures. Le mélange réactionnel a été filtré à travers un petit gel de silice, la concentration du filtrat a donné un résidu qui était directement chromatographié (hexane/EtOAc 16:1) pour donner 6 (9 mg, 4,5 %) et un mélange de diastéréisomères 7a et 7b sous forme d'huile (63 mg, 30 %), Caractéristiques : Rf (hexane/EtOAc, 9:1) : 0,36. [a]26D + 45,83 (c 1,857, CHCl3). Données spectroscopiques de 7a et 7b : 1H NMR (CDCl3, 360 MHz) : 0,04 (9H, s), 0,87 (3H, s), 0;90 (3H, d, 6,51 Hz), 1,72 (SH, s), 4 (2H, m), 4,83 (1H, d), 4,92 (1H, m) ppm. EXEMPLE 5 : Synthèse de l'alcool 7b et de l'époxyde 8a A une solution de 7a, 7b (90 mg, 0,256 mmol) et (+)-diisopropyltartrate (9 mg, 0,038 mmol) dans du CH2C12 anhydre (1,5 ml) ont été ajoutés des tamis de 4 en poudre réactivée (27 mg). Le mélange agité, maintenu sous atmosphère d'azote, a été refroidi de -10 à -20 C, traité avec de l'isoproproxyde de titanium (IV) (7,4 mg, 0,026 mmol) et maintenu sous agitation pendant 30 minutes à -20 C. La réaction a été ensuite traitée avec une solution de tert-butyle hydropéroxyde dans de l'isooctane (7 M, 0,179 mmol, 26 p1, séché avec des pellets de 3 R activés fraîchement pendant 30 minutes avant l'addition) et versée à l'aide d'une seringue.La réaction a été maintenue sous agitation à environ -20 C pendant 27 heures. Une solution aqueuse de sulfate ferreux et d'acide tartrique (2 ml) a été refroidie à 0 C et traitée goutte à goutte avec le mélange de réaction. Le mélange biphasé a été agité pendant 10 minutes et la solution aqueuse extraite avec deux portions d'éther (4 ml). La phase organique a été traitée avec 2 ml de solution pré-refroidie à 0 C de NaOH 30 % dans de la saumure saturée. Le mélange biphasé a été agité vigoureusement pendant 1 heure à 0 C et, après dilution avec de l'eau (3 ml), les phases ont été séparées et la couche aqueuse a été extraite avec de l'éther (2 x 10 ml). La phase organique mélangée a été lavée avec de la saumure, puis séchée sur MgSO4. Après filtration et concentration on a obtenu un résidu qui a été séparé par HPLC (hexane/EtOAc, 9:1) pour donner une huile de 7b pure (27 mg) et du produit brut 8a. Ce dernier a été purifié par HPLC (hexane/EtOAc, 9,5:1) pour donner du produit pur 8a sous forme de cristaux blancs (38 mg). Composé 7h Caractéristiques : Rf (hexane/EtOAc, 8:3)=0,72 ; [a]22D + 56,05 (c 1,140, CHCl3). Données spectroscopiques : IR (KBr-Film): 3360 (s, br), 3072 (w), 1650, 908 (s) cm 1 1H NMR (360 MHz, CDCl3) : 0,05 (9H, s), 0,88 (3H, s), 0,90 (3H, d, 6,53 Hz), 1,72 (3H, s), 3,99 (2H, m), 4,83 (1H, t), 4,93 (1H, t) ppm; MS : m/z 334 (2), 309 (3), 262 (1), 223 (8), 197 (12), 183 (75), 73 (100). Composé 8a Caractéristiques : Rf (hexane/EtOAc, 8:3) = 0,55 ; [a]20D + 46,81 (c 1,177, CHCl3) ; mp : 65-66 C. Données spectroscopiques : IR (KBr-Film) : 3479 (s, br), 1250 (s), 839 (s), 745 cl 1 ; 1H NMR (360 MHz, CDC13): 0,04 (9H, s), 0,87'(3H, s), 0,91 (3H, d, 6,57 Hz), 1,34 (3H, s), 2,61 (1H, d, 4,77 Hz), 2,89 (1H, d, 4,77 Hz), 3,56 (1H, m), 3,99 (1H, m) ppm ; MS : m/z 368 M+; 1), 295 (2), 223 (3), 197 (11), 183 (66), 73 (100). EXEMPLE 6 : Synthèse du diol 9a Une solution de 8a (34 mg, 0,02 mmol) et de fluorure de tétrabutylammonium (solution 1M dans du THF, 0,46 mmol, 460 ,ul) dans du THF (2 ml) a été agitée à température ambiante pendant 2 heure et demie. Après élimination du THF sous pression réduite, le résidu a été traité avec de l'éther et le mélange lavé avec de la saumure puis séché sur MgSO4. Après filtration et concentration, on a obtenu un résidu qui a été chromatographié (hexane/EtOAc, 6:4) pour donner un composé huileux et visqueux 9a (26 mg, 96 %). Caractéristiques : Rf (hexane/EtOAc, 6:4) = 0,38. Données spectroscopiques de 9a : 1H NMR (360 MHz, CDC13): 0,92 (3H, d, 6,26 Hz), 0,92 (3H, s), 1,34 (3H, s) 2,60 (1H, d, 4,78 Hz), 2,88 (1H, d, 4,78 Hz), 3,55 (1H, m), 4,07 (1H, m) ppm. EXEMPLE 7 : Synthèse de l'époxycétone 10a Un mélange de 9a (25 mg, 0,084 mmol), de dichromate de pyridinium (47 mg, 0,125 mmol) et de CH2C12 anhydre (2 ml) a été agité à température ambiante sous azote pendant 2 heures. Le mélange a été chromatographié (hexane:EtOAC/CH3COCH3, 6:4:0,5) pour donner le produit brut 10a qui a été purifié par HPLC (hexane/EtOAc, 6:4) pour donner de l'huile pure 10a (20 mg, 81 %). Caractéristiques : Rf (hexane/EtOAc, 6:4) = 0,36. Données spectroscopiques de 10a : IR (KBr-Film) : 3444 (s, br), 1709 (s), 1236, 906, 812 cm-1 ; 1H NMR (500 MHz, CDCl3) : 0,63 (3H, s), 0,97 (3H, d, 6,22 Hz), 1,34 (3H, s), 2,45 (1H, dd, 7,45 Hz, 11,70 Hz), 2,60 (1H, d, 4,81 Hz), 2,87 (1H, d, 4,81 Hz), 3,55 (1H, d, 8,36 Hz) ppm. EXEMPLE 8 : Synthèse de l'époxycétone protégé 1 la Une solution de 10a (18 mg, 0,061 mmol) et N-(triméthylsilyl)-imidazole (26 mg, 0,186 mmol, 27 p1) dans du CH2Cl2 anhydre (1,5 ml) a été agité à température ambiante sous atmosphère d'azote pendant 2 heures. Le mélange a été chromatographié (hexane/EtOAc, 9:1) pour donner du composé lia sous forme d'huile (20 mg, 89 %). Caractéristiques : Rf (hexane/EtOAc, 8:2) = 0,48. Données spectroscopiques de lia : 1H NMR (360 MHz, CDCl3) : 0,09 (9H, s), 0,63 (3H, s), 0,96 (3H, d, 6,06 Hz), 1,28 (3H, s), 2,44 (1H, dd, 7,48 Hz, 11,64 Hz), 2,56 (1H, d 5,12 Hz), 2,65 (1H, d, 5,12 Hz), 3,17 (1H, dd, 3,29 Hz, 8,88 Hz) ppm. EXEMPLE 9 : Synthèse du (24S,25R)-1 alpha124-dihydroxy-25,26-époxy- vitamine D3 (26a) A une solution agitée d'oxyde de phosphine IV (57 mg, 0,098 mmol) dans du THF anhydre (0,8 ml) à -80 C sous atmosphère d'argon on a ajouté du n-BuLi (une solution 2,46 M dans de l'hexane, 0,098 mmol, 40 ul), donnant une solution orange foncée. Le mélange a été à nouveau agité pendant 1 heure. On a ensuite ajouté à la solution goutte à goutte du composé lia (18 mg, 0,049 mmol) du THF anhydre (0,8 ml). Le mélange a été agité à -80 C pendant 2 heures. La solution a été réchauffée lentement à température ambiante, pendant ce temps la couleur virait au jaune pâle et devenait éventuellement presque incolore.Le mélange a été chromatographié (hexane/EtOAc, 12:1) pour donner le produit brut qui a été purifié par HPLC (hexane/EtOAc, 14:1) pour donner le produit pur 25a sous forme d'huile (32 mg, 89 %). Caractéristiques : Rf (hexane/EtOAc, 9:1) = 0,78. Une solution de 25a (32 mg, 0,044 mmol) et de fluorure de tétrabutylammonium (0,44 mmol, 440 ,ul, solution 1M dans du THF), dans du THF (2 ml), a été agitée à température ambiante sous azote, dans le noir, pendant 3 heures et demie. Du fluorure de tétrabutylammonium (440 ,ul d'une solution 1M 0,44 mmol) a été ajouté et le mélange résultant agité pendant 6 heures. De l'éther a été ajouté, le mélange a été lavé avec de la saumure et la phase aqueuse extraite deux fois avec de l'éther. Les phases organiques combinées ont été séchées sur MgSO4.Après filtration et concentration, on a obtenu un résidu qui a été filtré à travers une petite colonne de gel de silice par élution avec 100 ml de 5 % CH3OH dans du CH2 Cl2. La concentration du filtrat donnait un résidu qui a été purifié par HPLC (CH2C12/CH3OH 95:5) pour donner le produit pur 26a (16 mg, 85 %). Caractéristiques : Rf (CH2C12/CH3OH 9,5:0,5) = 0,30. Données spectroscopiques pour 26a : UV (CH3OH): max = 263 nm ; IR (KBr-Film) : 3379 (s, br), 1643 (br), 1059 (s) 896, 800, 736 chez ; 1H NMR (500 MHz, CDC13): 0,54 (3H, s), 0,95 (3H, d, 6,52 Hz), 1,34 (3H, s), 2,60 (1H, d, 4,78 Hz), 2,88 (1H, bs), 5,32 (1H, bs), 6,01 (1H, d, 11,26 Hz), 6,37 (1H, d, 11,26 Hz) ppm ; MS : m/z 431 (M+. +1, 2), 394 (1), 382 (2), 355 (2), 337 (2), 285 (1), 251 (4), 227 (3), 197 (5), 134 (100). Exemple 10. Synthèse des diols 12a, 12b On agite à environ 25 C sous azote pendant 0,5 heure un mélange de 31 mg (0,28 mmol) de dioxyde de sélénium, 83 mg (0,93 mmol) d'hydroperoxyde de tert-butyle (90 %) et 5 ml de dichlorométhane. On ajoute en plusieurs minutes une solution de 1,85 mg (0,55 mmol) de 6 dans 5 ml de dichlorométhane, On agite le mélange obtenu à environ 25 C pendant 0,5 heure. On poursuit l'agitation à -200C pendant 22 heures. On ajoute 1 ml de sulfure de méthyle, puis on agite le mélange à 25-300C pendant 4 heures. On chasse le dichloromethane avec un évaporateur rotatif. On ajoute 4 ml d'acétone au résidu, on ajoute goutte à goutte de l'acide chlorhydrique à 10 % jusqu'à pH 3.On agite le mélange à 250C pendant 1 heure, puis on neutralise avec du NaHCO3 aqueux saturé, on extrait avec de l'éther et on sèche sur MgSO4- On concentre pour obtenir un résidu que l'on soumet à une chromatographie éclair (hexane/EtOAc 10/3) pour obtenir 63 mg (41 %) de 12a, 12b sous forme de cristaux blancs. Rf (hexane/EtOAc : 7/3) : 0,38 ; [&alpha;]D18 + 35,820 (c = 1,329 ; CHC13) ; pf 94-1080C. Valeurs spectrales de 12a, 12b : IR (KBr-film) : 3 408 (F, large), 3 072 (f), 1 650, 899 cm1. 1H-RMN (360 MHz, CDC13) : 0,91 (d, 6,56 Hz, 3H), 0,93 (s, 3H), 1,72 (s, 3H), 4,01 (t, 1H), 4,07 (s large, 1H), 4,83 (d, 1H), 4,92 (m, 1H) ppm. Exemple 11. Synthèse de l'alcool 12a et de l'époxyde 13b A une solution à la température ordinaire de 90 mg (0,32 mmol) de 12a, 12b et 11,23 mg (0,048 mmol) de (-)-tartrate de diisopropyle dans 2 ml de dichlorométhane anhydre, on ajoute 27 mg de tamis 4A pulvérisé et activé. On refroidit le mélange agité maintenu sous azote entre -10 et -200C, on traite avec 9,09 mg (0,032 mmol) de Ti(o-i-Pr)4 et on poursuit l'agitation pendant 30 minutes à -200C.On traite ensuite le mélange reactionnel avec une solution d'hydroperoxyde de tert-butyle dans l'isooctane (7,00 M ; 0,224 mmol ; 32 Zl, séchée avec des pastilles de 3A fraîchement activé pendant 30 minutes avant l'addition), que l'on ajoute à l'aide d'une seringue étanche au gaz. On agite le mélange reactionnel à environ -200C à l'aide d'un bain maintenu à température constante pendant 23 heures. On refroidit à environ 0 C à l'aide d'un bain d'eau glacée 3 ml d'une suspension aqueuse de sulfate ferreux et d'acide tartrique.On laisse le mélange de la réaction d'époxydation se réchauffer à environ OOC, puis on le verse lentement dans un becher contenant la solution de sulfate ferreux refroidie agitée (un refroidissement externe n'est pas indispensable pendant ou apres cette addition). On agite le mélange à deux phases pendant environ 10 minutes, puis on transfère dans une ampoule à décanter. On separe les phases et on extrait la phase aqueuse avec deux portions de 6 ml d'éther. On traite les couches organiques combinées avec 3 ml d'une solution préalablement refroidie (0 C) de NaOH à 30 % dans de l'eau salée saturée.On agite énergiquement le mélange à deux phases pendant 1 heure à OOC. Après transfert dans une ampoule à décanter et dilution avec 3 ml d'eau, on sépare les phases et on extrait la couche aqueuse avec deux portions de 15 ml d'éther. On lave les couches organiques combinées avec du NaCl aqueux saturé et on sèche sur MgS04. On filtre et on concentre pour obtenir un résidu que l'on sépare par CLHP (hexane/EtOAc : 7/4) pour obtenir 32 mg de 13b optiquement pur sous forme de cristaux blancs, 4 mg d'un stéréo-isomère de 13b (caractérisé par H-RMN) et 55 mg de 12a brut sous forme de cristaux blancs contenant encore l'isomère 24-(R) (selon la 1H-RMN à 500 MHz). On soumet le produit 12a brut à un second dédoublement cinétique Sharpless pour obtenir 33 mg de 12a optiquement pur. Pour 12a : Rf (hexane/EtOAc : 1/1) : 0,61 ; [1D18 + 32,580 (c = 1,016 ; CHCl3) ; pf 121,5-123,50C. Valeurs spectrales : IR (KBr-film) : 3 374 (F, large), 3 073 (f), 1 651 (f), 899 cm-1. 1H-RMN (500 MHz, CDCl3) : 0,91 (d, 6,56 Hz, 3H), 0,93 (s, 3H), 1,72 (s, 3H), 4,02 (t, 1H), 4,07 (s large, 1H), 4,83 (t, 1H), 4,92 (t, 1H) ppm. SM : m/z 280 (M+ : 0,04), 262 (10,8), 247 (5,8), 229 (5,7), 190 (6,3), 163 (15,9), 135 (43,2). Pour 13b : Rf (hexane/EtOAc : 1/1) : 0,44 ; [D20 + 40,890 (c = 1,010 ; CHCL3) ; pf 97-980C. Analyse théorique pour C18H32o3 : C = 72,97 ; H = 10,81 ; trouvée C = 72,83 ; H = 10,85. Valeurs spectrales : IR (KBr-film) : 3 440 (F, large), 1 267, 942, 756 cm1. 1H-RMN (500 MHz, CDCl3) : 0,93 (s, 3H), 1,34 (s, 3H), 2,60 (d, 4,78 Hz, 1H), 2,89 (d, 4,78 Hz, 1H), 3,61 (m, 1H), 4,07 (e large, 1H) ppm. SM : m/z 278 (0,7), 263 (1,3), 260 (0,7), 245 (0,7), 193 (2), 177 (4,7), 161 (7,3), 135 (17,4), 111 (100). Exemple 12. Synthèse de l'époxycétone 14b On agite à 0 C sous azote pendant 4 heures un mélange de 25 mg (0,084 mmol) de 13b, 63 mg (0,168 mmol) de dichromate de pyridinium (DCP) et 2,5 ml de dichlorométhane. On rajoute 16 mg (0,043 mmol) de DCP, puis on laisse le mélange réactionnel revenir à la température ordinaire et on agite pendant 2 heures. On soumet directement le mélange à une chromatographie éclair (hexane/EtOAc 6/4) pour obtenir 20 mg de 14b sous forme de cristaux blancs (80 %). Rf (hexane/EtOAc : 6/4) : 0,33 ; pf 84-850C. Valeurs spectrales de 14b : IR (KBr-film) : 3 446 (F, large), 1 711 (F), 1 266, 942, 814 cm-1. 1H-RMN (360 MHz, CDCl3) : 0,64 (s, 3H), 0,97 (d, 5,53 Hz, 3H), 1,34 (s, 3H), 2,45 (dd, 11,64 Hz, 7,48 Hz, 1H), 2,60 (d, 4,75 Hz, 1H), 2,89 (d, 4,75 Hz, 1H) 3,61 (d, 1H). Exemple 13. Synthese de l'époxycétone 15b On agite sous azote à la température ordinaire pendant 1 heure une solution de 20 mg (0,068 mmol) de 14b et 19 mg (0,136 mmol ; 20 pl) de N-(triméthylsilyl)imidazole dans 2 ml de CH2C12. On soumet ensuite directement le mélange à une chromatographie éclair (hexane/EtOAc : 9/1) pour obtenir 22 mg de 15b sous forme d'une huile (88 %). Rf (hexane/EtOAc : 8/2) : 0,49. Valeurs spectrales de 15b : 1H-RMN (500 MHz, CDCl3) : 0,09 (s, 9H), 0,63 (s, 3H), 0,96 (d, 5,98 Hz, 3H), 1,28 (s, 3H), 2,45 (dd, 11,61 Hz, 7,49 Hz, 1H), 2,56 (d, 5,12 Hz, 1H), 2,67 (d, 5,12 Hz, 1H), 3,22 (dd, 8,56 Hz, 3,62 Hz, 1H) ppm. Exemple 14. Synthèse de la (34R,25S)-1&alpha;,24-dihydroxy-25,26-époxy- vitamine D3 (28b) A une solution agitée de 54 mg (0,093 mmol) d'oxyde de phosphine IV dans 0,6 ml de THF anhydre sous azote à -800C, on ajoute du n-BuLi (solution 2,5 M dans l'hexane ; 0,093 mmol ; 37 pl) pour obtenir une solution orange foncé. On agite le mélange dans ces conditions pendant 1 heure. On ajoute lentement goutte à goutte à la solution 17 mg (0,046 mmol) de 15b dans 0,8 ml de THF anhydre. On agite le mélange obtenu à -800C pendant 2 heures. On laisse la solution revenir lentement à la température ordinaire, tandis qu'elle vire au jaune pâle et finalement devient presque incolore.On soumet directement le mélange à une chromatographie éclair (hexane/EtOAc : 12/1) pour obtenir 27b brut que l'on purifie encore par CLHP (hexane/EtOAc : 18/1) pour obtenir 28 mg (82 %) de 27b pur sous forme d'une huile. Rf (hexane/EtOAc : 9/1) : 0,74. On protège de la lumière une solution de 28 mg (0,038 mmol) de ce dernier composé et du (n-Bu)4NF (solution 1 M dans le THF ; 0,75 mmol ; 760 l) dans 1 à 5 ml de THF et on agite à la température ordinaire sous azote pendant 9 heures. On filtre directement le mélange à travers une colonne courte de gel de silice en éluant avec 100 ml de CH30H à 10 8 dans CH2C12. Par concentration, on obtient un résidu que l'on sépare par CLHP (CH2C12/CH3OH : 95/5) pour obtenir 12 mg de 28b pur sous forme d'un solide blanc (73 %). Rf (CH2Cl2/CH3OH : 9,5/0,5) : 0,29 ; [&alpha;]D18 = 32,37 (c = 1,035, CHCl3). Valeurs spectrales de 28b : W (CH30H) : 4 ax = 262 nm. H-RMN (500 MHz, CDCl3) : 0,55 (s, 3H), 0,94 (d, 6,50 Hz, 3H), 1,34 (s, 3H), 2,31 (dd, 13,43 Hz, 6,63 Hz, 1H), 2,60 (d, 4,77 Hz, 1H), 2,89 (d, 4,77 Hz, 1H), 3,61 (m, 1H), 4,22 (s large, 1H), 4,43 (s large, 1H), 5,00 (s large, 1H), 5,32 (t, 1H), 6,02 (d, 11,27 Hz, 1H), 6,38 (d, 11,27 Hz, 1H) ppm. SM : m/z 394 (2), 336 (2), 251 (3). Exemple 15. Synthèse des alcenols 16 et 16' A une solution de 0,47 g (1,28 mmol) de 16 dans 5,0 ml de tétrahydrofuranne à -780C sous argon, on ajoute goutte à goutte 6,0 ml d'une solution 1,25 M de chlorure d'isopenténylmagnésium (7,5 mmol ; 6 équivalents), puis 6,4 ml d'une solution 0,1 M de tétrachlorure de dilithiumcuivre (II) (0,64 mmol ; 0,5 équivalent) dans le tétrahydrofuranne. On laisse le mélange réactionnel revenir à la température ordinaire, on agite pendant encore 16 heures, puis on verse dans 50 ml d'une solution saturée de chlorure d'ammonium. On extrait la couche aqueuse plusieurs fois avec de l'éther diéthylique, puis on lave les couches d'éther combinées avec une solution saturée de chlorure de sodium, on sèche sur sulfate de magnésium anhydre et on concentre sous pression réduite.On chromatographie le résidu sur du gel de silice et sur une colonne de CLHP de silice de 10 m avec comme éluant un mélange d'isooctane/acétate d'éthyle (9/1), dans les deux cas pour obtenir les alcools isomères 16 et 16' (0,31 g ; 92 %) sous forme d'un mélange (3/7 selon les valeurs du spectre de 1H-RMN). Rf (isooctane/acétate d'éthyle : 9/1) : 0,20. Valeurs spectrales de 16 : IR (KBr-film) : 3 403 (F), 2 936 (F), 2 867 (F), 1 641, 1 445, 1 376, 1 268, 1 234, 1 165, 1 118, 1 065, 1 035, 990, 942, 912, 886, 858, 822, 787, 725, 698 et 668 cm~1. 1H-RMN (CDCl3 : 360 NHz ) : 5,09 (1H, t, 7,1 Hz, LR 1,4 Hz), 4,07 (1H, s large), 2,01 (2H, m), 1,83 (4H, m), 1,68 (3H, s large), 1,60 (3H, s large), 0,93 (3H, s) et 0,91 (3H, d, 6,5 Hz) ; SM : m/z à 264 (N+ : 2), 249 (3), 246 (3), 231 (4), 179 (7), 161 (12), 151 (26), 133 (22), 125 (11), 111 (28), 95 (21), 84 (43), 69 (46), 55 (44) et 49 (100). Valeurs spectrales de 16' (pour un mélange 3/7 de 16/16') : IR (KBr-film) : 3 420 (F), 3 081 (F), 2 868 (F), 1 656, 1 638, 1 546, 1 453, 1 413, 1378, 1 361, 1 268, 1 234, 1 165, 1 066, 1032, 991, 959, 941, 908, 885, 858, 820, 785, 725 et 692 cm1. 1H-RMN (CDCl3, 360 MHz) : 5,79 (1H, dd, 17,8, 10,4 Hz), 4,89 (1H, m), 4,85 (1H, m), 4,05 (1H, s large), 0,98 (3H, s), 0,97 (3H, s), 0,93 (3H, s) et 0,91 (3H, d, 6,5 Hz). SM : m/z à 264 (M+ : 2), 249 (4), 246 (4), 231 (5), 179 (9), 161 (15), 151 (34), 133 (27), 125 (18), 111 (60), 95 (34), 81 (39), 69 (74), 55 (82) et 43 (100). Exemple 16. Synthese des époxyalcools 17a, 17b et 17'a, 17'b A une solution de 0,29 g (1,1 mmol) d'un mélange 3/7 de 16 et de 16' dans 13 ml de dichloromethane anhydre, on ajoute 0,43 mg (2,1 mmol) d'acide m-choroperbenzoïque (AmCPB) et on agite la solution pendant 3 heures à la température ordinaire. On ajoute 0,5 g de carbonate de potassium, on poursuit l'agitation pendant 15 minutes, on filtre le mélange réactionnel et on lave la matière solide restante avec du dichlorométhane et on filtre. On concentre les filtrats combinés sous pression réduite et on purifie le résidu sur gel de silice et sur une colonne de CLHP de silice de 10 pm avec comme éluant un mélange 3/2 d'isooctane/acétate d'éthyle, dans les deux cas, pour obtenir 0,21 g (68 *) de 17a, 17b et de 17'a, 17'b sous forme d'un mélange. Rf (isooctane/acetate d'éthyle : 8/2) : 0,18. La chromatographie de ce mélange sur une colonne de CtHP en phase inverse constituée de RSilC18HL de 10 pm avec comme éluant un mélange 8/2 de méthanol/eau fournit 0,131 g des diastéréo-isomères 17'a et 17'b. Une purification additionnelle de la matiere restante sur une colonne de CtHP de silice de 10 iil avec comme éluant un mélange 8/2 d'isooctane/acétate d'éthyle fournit 0,025 g des diasteréo-isomères 17a et 17b. Rf (isooctane/acétone : 9/1) : 17a, 17b : 0,19 ; 17'a, 17'b : 0,23. Valeurs spectrales de 17a, 17b : IR (KBr-film) : 3 465 (F), 2 933 (F), 1 455, 1 378, 1 327, 1 266, 1 251, 1 180, 1 166, 1 118, 1 066, 1 035, 992, 943, 899, 859, 792, 737, 701 et 680 cm-1. 1H-RMII (CDC13, 360 NHz) : 4,07 (1H, s large), 2,68 (1H, t, 6,0 Hz), 1,99 (1H, dm, 11,9 Hz), 1,93-1,75 (3H, m), 1,30 (3H, s), 1,26 (3H, s), 0,93 (3H, s) et 0,91 (3H, d, 6,5 Hz). SM : m/z à 280 (M+ : 1), 265 (3), 262 (5), 247 (3), 229 (4), 219 (4), 179 (5), 161 (10), 151 (20), 133 (20), 125 (16), 111 (60), 95 (32), 81 (41), 67 (38), 55 (72) et 43 (100). Valeurs spectrales de 17'a, 17'b : IR (KBr-film) : 3 454 (F), 2 930 (F), 2 870 (F), 1 472, 1 403, 1 375, 1 362, 1 267, 1 167, 1 067, 1 033, 1 018, 992, 942, 913, 886, 859, 835, 784, 722, 688, 668 et 658 cm 1H-RMN (CDCl3, 360 MHz) : 4,06 (1H, s large), 2,74 (1H, dd, 4,0, 3,0 Hz), 2,62 (2H, m), 2,00 (1H, dm, 13,2 Hz), 1,92 (1H, m), 1,81 (2H, m), 0,99 + 0,97 (3H, 2 x d, 6,2 Hz), 0,96 (3H, s), (0,89 + 0,87 (3H, 2 x s) et 0,83 + 0,81 (3H, 2 x s). SM : m/z à 262 (1), 247 (2), 219 (1), 203 (1), 191 (2), 179 (4), 162 (6), 151 (8), 135 (15), 125 (19), 111 (66), 95 (34), 81 (37), 69 (45) et 55 (100). Exemple 17. Synthèse des époxycétones 18a, 18b A une solution de 0,021 g (0,075 mmol) de 17a, 17b dans 2,0 ml de dichlorométhane anhydre, on ajoute 0,079 g (0,21 mmol ; 2,8 équivalents) de dichromate de pyridinium (DCP) et une quantité catalytique de p-toluènesulfonate de pyridinium (PTSP) et on agite la suspension pendant 4,5 heures à la température ordinaire sous argon. On ajoute 3 ml d'éther diethylique, on poursuit l'agitation pendant 5 minutes, on filtre le mélange réactionnel à travers un lit de Célite/gel de silice en utilisant de l'éther et on lave plusieurs fois les sels de chrome précipités avec de l'éther et on filtre. On concentre les filtrats combinés sous pression réduite et on purifie le résidu par CtHP sur une colonne de silice de 10 m avec comme éluant un mélange 9/1 d'isooctane/acétone. On obtient ainsi 0,017 g (80 8 du mélange des diastéréo-isomères 18a et 18b sous forme d'une huile). Rf (isooctane/acetone : 9/1) : 0,25. Valeurs spectrales de 18a, 18b : IR (KBr-film) : 2 958 (F), 2 875 (F), 1 714 (F), 1 462, 1 378, 1 324, 1 308, 1 242, 1 223, 1 191, I 172, 1 120, 1 056, 943, 900, 867, 837, 794 et 680 cm-1. 1H-RHN (CDCl3, 360 MHz) : 2,67 (1H, t, 6,0 Hz), 2,45 (1H, ddd, 11,5, 7,2, 2,9 Hz), 2,32-2,16 (2H, m), 2,11 (1H, dm, 13,2 Hz), 2,05-1,82 (3H, m), 1,73 (1H, m), 1,30 (3H, s), 1,26 (3H, s), 0,97 (3H, d, 6,0 Hz) et 0,64 (3H, s). SM : m/z à 278 (M+ : 2), 260 (3), 235 (3), 205 (6), 192 (6), 177 (8), 149 (24), 135 (10) 124 (20), 111 (40), 96 (36), 81 (48), 67 (36), 55 (72) et 41 (100). Exemple 18. Synthèse de la 24(S)-1-&alpha;-hydroxy-24,25-époxyvitamine D3 (30a) et de la 24(R)-24,25-époxy-1-&alpha;-OH-vitamine D3 (30b) On place sous une atmosphère de 1,1 bar d'argon une solution refroidie à -700C de 0,06 g (0,103 mmol ; 2,05 équivalents) de IV dans 1,0 ml de tetrahydrofuranne anhydre et on ajoute 0,039 ml d'une solution 2,5 M de n-butyllithium dans le n-hexane (0,096 mmol). On agite pendant 30 minutes la solution rouge foncé obtenue. On ajoute goutte à goutte 0,014 g (0,05 mmol) des cétones 18a, 18b dissoutes dans 0,5 ml de tétrahydrofuranne anhydre.On agite le mélange à -700C pendant 1,5 heure, puis on laisse revenir à la température ordinaire en une période de 2,5 heures. On ajoute 2 à 3 gouttes d'eau à la solution encore rouge et on chasse la majeure partie des solvants sous un courant d'argon. On ajoute 2,0 ml d'une solution saturée de bicarbonate de sodium que l'on extrait plusieurs fois avec 2,0 ml d'éther diéthylique. On filtre les extraits combinés à travers un lit de Kieselgel 60 de Merck et on chasse le solvant sous pression réduite. On chromatographie rapidement le résidu sur une colonne de CLHP de silice de 10 pin avec comme éluant un mélange 85/15 de n-hexane/acétate d'éthyle.On reprend immédiatement l'huile obtenue (mélange de 29a et 29b) dans 0,4 ml de tétrahydrofuranne anhydre, on ajoute 0,2 ml d'une solution 1 M de fluorure de tétrabutylammonium (FTBA) 1 M dans le tétrahydrofuranna et on agite la solution pendant 19 heures à la température ordinaire sous argon à l'abri de la lumière. On chasse le solvant sous un courant d'argon et on chromatographie le résidu sur du Kieselgel 60 de Merck avec comme éluant un mélange 9/1 de dichlorométhane/méthanol. Une purification additionnelle par CLHP (silice de 10 pin ; mélange 95/5 de dichlorométhane/méthanol) fournit 0,018 g (86 %) du mélange des diastéréo-isomères 30a et 30b sous forme d'une matière vitreuse. Rf (dichlorométhane/méthanol : 9/1) : 0,36. Valeur spectrale de 30a, 30b : W (MeOH) Nax = 263 nm. IR (KBr-film) : 3 409 (F), 2 951 (F), 2 298 (F), 1 647, 1 447, 1 379, 1 266, 1 056, 958, 896, 800, 738 et 703 cm-1. H-RMN (CDCl3, 360 MHz) : 6,37 (1H, d, 11,2 Hz), 6,01 (1H, d, 11,2 Hz), 5,32 (1H, m), 5,00 (1H, m), 4,43 (1H, m), 4,22 (1H, m), 2,82 (1H, dd, 11,8, 3,7 Hz), 2,68 (1H, t, 6,0 Hz), 2,59 (1H, dd, 13,2, 3,5 Hz), 2,31 (1H, dd, 13,2, 6,5 Hz), 2,05-1,85 (5H, m), 1,31 (3H, s), 1,26 (3H, s), 0,94 (3H, d, 6,3 Hz) et 0,55 (3H, s). SM : m/z à 414 (M+ : 7), 396 (45), 378 (34), 269 (5), 251 (9), 195 (6), 181 (5), 171 (7), 169 (6), 161 (8), 159 (9), 157 (12), 155 (16), 152 (19), 134 (61), 105 (28), 91 (27), 81 (24), 71 (22), 55 (41) et 43 (100). Exemple 19. Synthèse des époxycétones 18'a, 18'b A une solution de 0,096 g (0,34 mmol) de 17'a, 17'b dans 8,0 ml de dichiorométhane anhydre, on ajoute 0,36 g (0,95 mmol ; 2,8 équivalents) de dichromate de pyridinium (DCP) et une quantité catalytique de p-toluènesulfonate de pyridinium (PTSP) et on agite la suspension pendant 4,5 heures à la température ordinaire sous argon. On ajoute 10 ml d'éther diéthylique, on poursuit l'agitation pendant 5 minutes, on filtre le mélange réactionnel à travers un lit de Célite/gel de silice en utilisant de l'éther et on lave plusieurs fois avec de l'éther les sels de chrome précipités et on filtre. On concentre les filtrats combinés sous pression reduite et on purifie le résidu par CLHP sur une colonne de silice de 10 pai avec comme éluant un mélange 95/5 d'isooctane/acétone. On obtient 0,070 g (74 %) d'un mélange des diastéréo-isomères 18'a et 18'b sous forme d'une huile. Rf (isooctane/acétone : 95/5) : 0,16. Valeur spectrale de 18'a, 18'b IR (KBr-film) : 2 960 (F), 2 348 (F), 2 282 (F), 1 714 (F), 1 470, 1 379, 1 308, 1 246, 1 225, 1 057, 943, 913, 840 et 733 cm-1 H-RMN (CDCl3, 360 MHz) : 2,73 (1H, t, 3,5 Hz), 2,61 (2H, m), 2,44 (1H, dd, 11,7, 7,5 Hz), 2,31-2,16 (2H, m), 2,13 (1H, dm, 13,2 Hz), 2,04-1,81 (3H, m), 1,71 (1H, m), 1,30 (2H, m), 1,09 (1H, ddd, 14,1, 10,8, 8,3 Hz), 1,04 + 1,02 (3H, 2 x d, 6,7 Hz), 0,87 + 0,85 (3H, 2 x s), 0,84 + 0,82 (3H, 2 x s) et 0,66 + 0,65 (3H, 2 x s). SM : m/z à 278 (M+ : 1), 248 (1), 193 (12), 178 (8), 163 (7), 149 (14), 135 (14), 124 (22), 111 (36), 95 (30), 81 (43), 69 (36) et 55 (100 > . Exemple 20. Synthèse de la 24(S)-1&alpha;-hydroxy-24,25-époxy-25,25-dinor- 23,23-diméthylvitamine D3 (30'a) et de la 24(R)-24,25 epoxy-25,25-dinor-23,23-dimethyl-l2-OH-vitamine D3 (30'b) On place sous une atmosphère de 1,1 bar d'argon une solution de 0,085 g (0,146 mmol ; 2,03 équivalents) de IV dans 1,4 ml de tétrahydrofuranne anhydre et on ajoute 0,056 ml d'une solution de n-butyllithium 2,5 M dans le n-hexane (0,14 mmol). On agite la solution rouge foncé obtenue pendant 30 minutes. On ajoute goutte à goutte 0,02 g (0,072 mmol) des cétones 18'a, 18'b dissoutes dans 0,8 ml de tétrahydrofuranne anhydre. On agite le mélange à -700C pendant 1,5 heure puis on laisse revenir à la température ordinaire en une période de 2,5 heures.On ajoute 2 à 3 gouttes d'eau à la solution encore rouge et on chasse la majeure partie des solvants sous un courant d'argon. On ajoute 2,0 ml d'une solution saturée de bicarbonate de sodium, puis on extrait plusieurs fois avec 2,0 ml d'éther diéthylique. On filtre les extraits combinés à travers un lit de Kieselgel 60 de Merck et on chasse le solvant sous pression réduite. On chromatographie rapidement le résidu sur une colonne de CLHP de 10 pin avec comme eluant un mélange 85/15 de n-hexane/acétate d'éthyle.On reprend immédiatement l'huile obtenue (melange de 29'a et 29'b) dans 0,5 ml de tétrahydrofuranne anhydre, on ajoute 0,025 ml d'une solution 1 M de fluorure de tétrabutylammonium (FTBA) dans le tétrahydrofuranne et on agite la solution pendant 30 heures à la température ordinaire sous argon à l'abri de la lumière. On chasse le solvant sous un courant d'argon et on chromatographie le résidu sur du Kieselgel 60 de Merck avec comme éluant un mélange 9/1 de dichlorométhane/méthanol. Une purification additionnelle par CLHP (silice de 10 pm ; mélange 95/5 de dichlorométhane/méthanol) fournit 0,023 g (77 %) d'un mélange des disastéréo-isomères 30'a et 30'b sous forme d'une matiere vitreuse. Rf (dichlorométhane/méthanol : 9/1) : 0,41. Valeur spectrale de 30'a, 30'b : UV (MeoH) #max = 263 nm. IR (KBr-film) : 3 404 (F), 2 950 (F), 2 250, 1 642, 1 444, 1 378, 1 054, 958, 910, 833, 800 et 735 cm1. 1H-RMN (CDCl3, 360 NHz) : 6,37 (1H, d, 11,2 Hz), 6,02 (1H, d, 11,2 Hz), 5,32 (1H, s large), 4,99 (1H, s large), 4,42 (1H, m), 4,22 (1H, m), 2,81 (1H, dd, 11,8, 3,8 Hz), 2,75 (1H, dd, 4,0, 3,0 Hz), 2,61 (3H, m), 2,31 (1H, dd, 13,4, 6,4 Hz), 2,05-1,87 (5H, m), 1,07 (1H, ddd, 14,1, 11,9, 8,3 Hz), (1,02 + 1,00 (3H, 2 x d, 6,5 Hz), 0,89 + 0,87 (3H, 2 x s), 0,83 + 0,81 (3H, 2 x s) et 0,58 + 0,57 (3H, 2 x s). SM : m/z à 414 (M+ : 7), 396 (64), 378 (36), 367 (6), 352 (5), 285 (6), 269 (7), 251 (10) 209 (10), 195 (9), 152 (27), 134 (83), 105 (38), 95 (27), 91 (34), 81 (31), 69 (51) et 55 (100). Exemple 21. Synthese de la cétone 20 A partir du tosylate 1c, la réaction avec le dérivé lithien obtenu à partir de l'acétal de la 3-butyne-2-one fournit l'acétal 19 selon le mode opératoire d'Uskokovic décrit pour un produit analogue dans la réf. 32. IR (KBr) : 3 475, 2 935, 2 867, 2 207, 1 675 cl 1. On effectue l'hydrolyse dans du dioxanne aqueux en présence d'acide sulfurique. La cétone 20 présente les valeurs spectroscopiques suivantes IR (KBr-film) : 3 475, 2 935, 2 867, 2 207, 1 675 cm-1. 1H-RMN (360 MHz, CDCl3) : 4,09 (m, 1H), 2,41 (1H, dd, 17,2, 3,6 Hz), 2,33 (3H, s), 2,21 (1H, dd, 17,2, 7,6 Hz), 1,05 (3H, d, 6,6 Hz), 0,93 (3H, s) ppm. Exemple 22. synthèse des époxydes 21a, 21b On agite à 600C sous azote pendant 5 minutes un mélange de 131 mg (0,642 mmol) d'iodure de trimethylsulfonium, 54 mg (0,964 mmol) d'hydroxyde de potassium en poudre et 1 ml d'acétonitrile. On ajoute une solution de 50 mg de 20 (0,160 mmol) dans 1 ml d'acétonitrile, ce qui produit une couleur orange. On agite le mélange obtenu pendant 1 heure et 40 minutes. La couleur vire au jaune. On filtre directement le mélange à travers une colonne courte de gel de silice en éluant avec 220 ml d'EtOAc à 50 t dans l'hexane. Par concentration, on obtient un résidu que l'on sépare par CLHP (hexane/EtOAc : 8/2) pour obtenir 13 mg (30 %) de 21a, 21b sous forme d'une huile. Rf (hexane/EtOAc : 8/2) : 0,31. Valeurs spectrales pour 21a, 21b : IR (KBr-film) : 3 456 (F, large), 3 047 (f), 2 240 (f), 1 271 (F), 943 (F), 760 cm-1. H-RMN (360 MHz, CDCl3) : 0,93 (s, 3H), 1,04 (d, 6,58 Hz, 3H), 1,54 (s, 3H), 2,02 (m, 1H), 2,25 (m, 1H), 2,72 (d, 5,55 Hz, 1H), 2,97 (d, 5,55 Hz, 1H), 4,08 (s large, 1H) ppm. SM : m/z 261 (1,7), 243 (2,1), 163 (10,3), 95 (40,2), 81 (60,3). Exemple 23. Synthèse des époxycétones 22a, 22b On agite sous azote pendant 4 heures un mélange de 25 mg (0,091 mmol) de 21a, 21b, 103 mg (0,274 mmol) de DCP et 2 ml de dichlorométhane. On filtre directement le mélange à travers une colonne courte de gel de silice en éluant avec 200 ml d'EtOAc à 25 % dans l'hexane. Par concentration, on obtient un résidu que l'on purifie par CLHP (hexane/EtOAc : 8/2) pour obtenir 19 mg (76 %) de 22a, 22b sous forme d'une huile. Rf (hexane/EtOAc : 8/2) : 0,33. Valeurs spectrales de 22a, 22b : IR (KBr-film) : 2 239 (f), 1 712 (F), 1 271, 857, 763 cm-1. H-RMN (360 MHz, CDCl3) : 0,63 (s, 3H), 1,09 (d, 6,20 Hz, 3H), 1,54 (s, 3H), 2,47 (dd, 11,61 Hz, 7,51 Hz, 1H), 2,73 (d, 5,55 Hz, 1H), 2,97 (d, 5,55 Hz, 1H) ppm. Exemple 24. Synthèse des dérivés de vitamine D3 32a, 32b A une solution agitée de 77 mg (0,132 mmol) d'oxyde de phosphine IV dans 1 ml de THF anhydre sous azote à -800C, on ajoute 53 iii d'une solution 2,5 M de n-BuLi dans un mélange d'hexanes, ce qui fournit une solution orange foncé. On agite le mélange dans ces conditions pendant 1 heure. On ajoute lentement goutte à goutte à la solution 18 mg (0,066 mmol) de 22a, 22b dans 0,8 mi de THF anhydre. On agite le mélange obtenu à -800C pendant 2 heures. On laisse la solution revenir lentement à la température ordinaire tandis qu'elle vire au jaune p & e et finalement devient presque incolore. On soumet le mélange directement à une chromatographie éclair (hexane/EtOAc 9/1) pour obtenir un produit brut que l'on purifie par CLHP (hexane/ EtOAc : 18/1) pour obtenir 37 mg (88 %) de 31a, 31b complètement purs sous forme d'une huile. Rf (hexane/EtOAc : 9/1) : 0,64. On protege de la lumière une solution de 37 mg (0,058 mmol) de 31a, 31b et 700 111 d'une solution 1 M de (n-Bu)4NF 1 M dans le THF (0,70 mmol) dans 1,5 ml de THF, puis on agite sous azote pendant 8 heures. On filtre directement le melange sur une colonne courte de gel de silice en éluant avec 100 ml de CH3OH à 8 % dans CH2Cl2. Par concentration, on obtient un résidu que l'on sépare par CLHP (CH2Cl2/ CH3OH : 96/4) pour obtenir 19 mg (80 %) de 20 pur sous forme d'un solide blanc. Rf (CH2Cl2/CH3OH : 9,5/0,5) : 0,38 Valeurs spectrales pour 32a, 32b : UV (CH3OH) : #max = 262 nm. IR (KBr-film) : 3 304 (F, large), 2 239 (f), 1 647 (large), 1 271, 1 054 (F), 911, 863, 800, 737 cm-1. H-RMN (360 MHz, CDCl3) : 0,54 (s, 3H), 1,06 (d, 6,51 Hz, 3H), 1,54 (s, 3H), 2,28 (m, 2H), 2,59 (m, 1H), 2,73 (d, 5,56 Hz, 1H), 2,83 (m, 1H), 2,97 (d, 5,56 Hz, 1H), 4,22 (m, 1H), 4,42 (m, 1H), 4,99 (s large, 1H), 5,32 (s large, lH), 6,01 (d, 11,25 Hz, 1H), 6,37 (d, 11,25 Hz, 1H) ppm. SM : m/z 410 (M+ : 16), 392 (28), 374 (25), 359 (3), 315 (3), 297 (4), 279 (3), 134 (100). Exemple 25. Synthèse du diol lb On oxyde le diol la par le dichromate de pyridinium (DCP) en présence de p-toluenesulfonate de pyridinium dans le dichlorométhane. L'oxydation n'est pas sélective et on obtient un mélange d'hydroxycétone, de cétoaldéhyde, d'hydroxyaldéhyde 2a. Après purification de ce dernier (Rf : 0,22 ; acétate d'ethyle/hexane : 1/1) sur gel de silice, on le traite avec une quantité catalytique de diazabicyclo-undécène dans le dichlorométhane. Apres 3 heures, on traite à l'éther On lave la solution éthérée avec 2 ml d'acide chlorhydrique à 5 %. Apres séchage sur Na2SO4, filtration et concentration, on obtient un mélange des aldéhydes 2a et 2b (respectivement 36/64 selon la H-RMH). Rf (ether/hexane : 1/1) : 0,28.On dissout 101 mg (0,48 mmol) de ce mélange dans 10 ml de méthanol et on traite à 0 C avec 90 mg (2,38 mmol) de borohydrure de sodium. Après 30 minutes, on concentre sous vide et on ajoute de la glace et 20 ml d'éther. Après lavage de la phase organique avec l ml d'acide chlorhydrique 5 % et de l'eau, on seche (Na2SO4) et on purifie le résidu obtenu par concentration sous vide par chromatographie sur gel de silice (benzène/hexane/éther : 3/2/5). On obtient ainsi 62 mg (0,293 mmol) de l'isomère lb ayant un Rf de 0,18 à côté de l'isomère la (Rf : 0,16). Valeurs spectrales de 2a : 1H-RMN (500 MHz, CDC13) : 9,57 (1H, d, 3,18 Hz), 4,11 (1H, m), 1,10 (3H, d, 6,83 Hz) et 0,98 (3H, s) ppm. Valeurs spectrales de 2b : 9,53 (1H, d, 4,96 Hz), 4,09 (1H, m), 1,02 (3H, d, 6,82 Hz) et 0,95 (3H, s) ppm. Valeurs spectrales de lb : 4,08 (1H, m), 3,72 (1H, dd, 3,5, 10,7 Hz), 3,45 (1H, dd, 6,9, 10,6 Hz), 0,955 (3H, s), 0,954 (3H, d, 6,6 Hz) ppm. EXEMPLE 26 : Modèles expérimentaux pour l'évaluation biologique 1) Etude de la différenciation des cellules leucémiques Les cellules leucémiques humaines HL-60 (lignée promyélocytaire) sont cultivées dans des flacons T-25 à la densité de 1.2 x 105 cellules par ml de milieu RPMI 1640 (contenant 10 % de sérum de veau foetal inactivé par la chaleur et des antibiotiques) et en présence de concentrations croissantes en 1 alpha,25-(OH)2D3 ou en analogues.Les cellules sont alors cultivées 4 jours à 37"C sous une atmosphère de 5 % en CO2 dans l'air. La maturation cellulaire, à savoir la différenciation des cellules promyélocytaires en macrophages, est évaluée par le test de réduction du NBT (sel de Tétrazolium Nitro Bleu), selon la méthode de Ostrem et al [23]. Le pourcentage de cellules contenant des granules de formazan (noir) est déterminé par comptage des cellules à l'aide d'un hématocytomètre. 2) Etude de la différenciation des cellules épidermiques humaines La propriété pharmacologique de différenciation cellulaire est également étudiée sur les cellules épidermiques humaines ou kératinocytes, en culture primaire. Les kératinocytes sont isolés à partir de fragments de peau (biopsies, résection chirurgicale), selon la méthode décrite par Matsumoto et al [24]. Les fragments de peau sont incubés une nuit à 40C en pérsence d'une solution saline tamponnée, (150 mM PBS, pH 7,4), contenant 100 U de dispase par ml. L'épiderme est ensuite séparé du derme, puis traité 10 minutes en présence d'une solution de trypsine 0,25 %, EDTA 0,02 %, à température ambiante. La réaction est stoppée par addition de PBS contenant 10 % de sérum de veau. Les cellules sont ensuite lavées 2 fois par centrifugation, resuspendues dans le milieu de culture complet, puis cultivées à 37"C et à 5 % en CO2 dans l'air, dans des flacons T-25. Le milieu de culture complet est le milieu MCDB 153 modifié (Gibco) sans sérum et contenant de Itextrait pituitaire de boeuf et le facteur épidermique de croissance [24]. Après 24 heures, les cellules épidermiques adhèrent au support et vont se multiplier progressivement. Pour l'étude de l'activité biologique des composés, les cellules obtenues après le second passage, sont cultivés dans des plaques multipuits (24 ou 96 puits) à la densité cellulaire de 5 à 8 x 104 cellules/cm2. Après 24 heures, des concentrations croissantes en 1 alpha,25-(OH)2D3 et en analogues sont ajoutées au milieu de culture.Après différents temps d'incubation, la croissance et la différenciation cellulaire sont déterminées au moyen des paramètres d'évaluation suivants (a) viabilité cellulaire [test MTT ou sel de tétrasolium selon le protocole de Bio-Rad ; mesure de la LDH] (b) protéines totales [méthode de BCA ou l'acide bicinchoninique de Pierce] ; (c) croissance cellulaire [incorporation de thymidine tritiée] (d) différenciation épidermique [coloration différentielle des cytokératines au Bleu de Rhodanile, détection cytochimique de la kératine 67 k, de la filaggrine et l'involucrine au moyen d'anticorps monoclonaux spécifiques (Biosoft ; Biomedical Technologies)]. 3) Effet sur la prolifération des cellules lymphocytaires Ce test détermine la capacité d'un composé, en l'occurence un analogue de la vitamine D, d'inhiber la multiplication (prolifération) de cellules lymphocytaires, préalablement stimulées par la phytohémagglutinine. Les cellules de la lignée blanche sont isolées par centrifugation de sang humain héparinisé sur du Ficoll-Paque (technique du buffy coat). Les cellules du buffy coat sont traitées à la phytohémagglutinine, puis cultivées en présence de concentrations croissantes en composés et de thymidine tritiée, selon un protocole décrit précédemment [25]. A la fin de l'incubation, la radioactivité associée aux cellules est mesurée. La prolifération cellulaire est définie comme le rapport entre la radioactivité associée aux cellules en présence de composés et celle des cellules contrôles, exprimé en pourcent. 4) Etude de l'effet antiprolifératif sur des cellules tumorales humaines Différentes lignées cellulaires tumorales sont utilisées afin de déterminer les propriétés antitumorales des analogues de la vitamine D. I1 s'agit notamment des lignées de cellules humaines provenant d'adénocarcinome du sein (MCF-7, T-47D), du colon (CXl), du poumon (LXl) ou de mélanomes (MM-96). Au cours du test, les cellules sont cultivées dans des plaques multipuits à 96 puits. La densité cellulaire initiale est de 2 à 5 000 cellules par puits selon la lignée envisagée, afin de maintenir les cellules en phase logarithmique de croissance durant toute la durée de l'expérience. Après 24 heures, les cellules sont incubées en présence de concentrations croissantes en vitamine D et en ses analogues, pendant différentes périodes de temps. A la fin de chaque incubation, on détermine la concentration en protéine (méthode au BCA de Pierce), l'incorporation de thymidine tritiée et la viabilité cellulaire (test MTT et LDH). Ses différents paramètres permettent d'évaluer la croissance cellulaire et l'effet cytotoxique des composés. L'activité antitumorale est exprimée en pourcentage d'inhibition de croissance par rapport aux cellules contrôles. 5) Effet calcémiant chez le poulet rachitique Le modèle du poulet rachitique permet d'évaluer l'effet pharmacologique de la vitamine D sur le métabolisme phospho-calcique, et en particulier au niveau de l'intestin (absorption calcique) et du tissu osseux (minéralisation). Il était d'étudier dans ce modèle l'effet calcémiant de la vitamine D [26]. Les poulets rachitiques sont obtenus en élevant des poussins, dès leur naissance, en l'absence de lumière et sous un régime pauvre en calcium. Après trois semaines, les animaux sont traités durant 10 jours avec de la vitamine D ou ses analogues, à raison d'une injection intramusculaire quotidienne. A la fin du traitement, les animaux sont sacrifiés ; le sérum, l'intestin et le tissu osseux sont alors prélevés. La teneur sérique et osseuse en calcium est mesurée par absorption atomique ; l'ostéocalcine sérique et la protéine intestinale calbindin-28k, deux protéines vitamine D-dépendantes sont déterminées par un test radioimmunologique RIA, à l'aide d'anticorps spécifiques. Les paramètres mesurés reflètent bien le métabolisme phosphocalcique. Le calcium sérique et la présence de la cabindin intestinale témoignent de l'effet de la vitamine D sur l'absorption intestinale du calcium. La teneur en calcium de l'os et en ostéocalcine sérique est représentative de la minéralisation et de la formation osseuse. 6) Etude de la différenciation in vitro sur ostéosarcome humain La lignée cellulaire MG-63 dérive d'un ostéosarcome d'origine humaine et présente les caractéristiques des ostéoblastes (cellules de la matrice osseuse). Les cellules de cette lignée sont utilisées pour l'évaluation de l'effet hypercalcémiant ou ostéocalcique de la vitamine D sur le tissu osseux. Dans ce test, les cellules sont incubées en présence de concentrations croissantes en composés. Après 48 heures d'incubation, on détermine la concentration en calcium intracellulaire (spectromètre à flamme) et en ostéocalcine (RIA). L'ostéocalcine est une protéine spécifique, produite par les ostéoblastes lors de la formation osseuse ; ce paramètre reflète bien Iteffet stimulateur sur les cellules osseuses. 7) Etude de la formation de cellules plurinucléées à partir de moëlle osseuse en culture Au niveau de l'os, la vitamine D influence la résorption osseuse et augmente le nombre de cellules ostéoclastiques. Diférents systèmes ont été décrits afin d'évaluer l'activité de la vitamine D sur les cellules osseuses in vitro. Un système particulièrement efficace consiste à déterminer la formation de cellules multinucléées à partir de culture de moëlle osseuse, sous l'effet inducteur de la vitamine D et de ses analogues. Les cellules multinucléées formées dans ces conditions présentes toutes les caractéristiques fonctionnelles et morphologiques des ostéoclastes. La méthode utilisée est celle décrite par Ishizuka et al. [27]. Brièvement, la moëlle osseuse est prélevée à partir de fémurs de souris et resuspendue dans du milieu de culture MEM (Minimum Essential Medium) contenant 10 % de sérum de veau foetal, préalablement inactivé à la chaleur. La suspension cellulaire est ensuite placée dans des plaques multipuits à 24 puits, à raison de 106 cellules par puits (1 ml). Les cellules sont incubées à 37"C sous une atmosphère de 5 % de CO2 dans l'air. Après un jour de culture, le milieu de culture est remplacé par du milieu complet frais (culture contrôle) ou du milieu contenant différentes concentrations de vitamine D et ses analogues (culture test). Le milieu est renouvelé tous les trois jours.Au cours de la culture, le nombre de cellules multinucléées ( > 3 noyaux/cellule) est déterminé par comptage à l'aide d'un microscope inversé à contraste de phase. Au jour 8, les cellules sont fixées au méthanol et colorées au Giemsa pour permettre l'étude morphologique des cellules. EXEMPLE 27 : Propriétés biologiques des analogues de la vitamine D selon l'invention A) La fonction époxyde confère à l'analogue 1 alpha-hydroxy-vitamine D les propriétés caractéristiques du métabolite actif de la vitamine D. A titre d'exemple, l'activité biologique des dérivés époxydes de la vitamine D et de la 1 alpha-hydroxy-vitamine D a été comparée dans le test d'induction de la différenciation des cellules leucémiques HL-60. Dans ce test, la prolifération cellulaire n'est que faiblement inhibée par la l-alpha-OHD3. L'effet inhibiteur 50 % (ED50) de la l alpha-OHD3 est obtenu pour une concentration extracellulaire élevée de 3 x l0 6 M. L'addition d'un groupement époxyde à la 1 alpha-OHD3, par exemple en position 25 comme dans le cas du composé 24 (1 alpha-hydroxy 25,26-époxy, vitamine D3) permet l'inhibition et la différenciation complète des cellules leucémiques, et ce pour des concentrations nettement plus faibles. Ainsi, l'effet biologique est obtenu à la concentration de 3 x 10 8 M, soit 100 fois moindre. Ainsi, la présence d'une fonction époxyde dans la chaîne latérale de la 1 alpha-hydroxy-vitamine D, lui confère des propriétés biologiques, en l'occurence de différenciation cellulaire, propres au métabolite actif de la vitamine D hydroxylé dans la chaîne latérale (1 alpha,25-(OH)2D3). B) Les analogues époxydes de la vitamine D présentent des activités biologiques clairement dissociées par rapport au métabolite naturel actif de la vitamine D, hydroxylé en position 25. A titre d'exemple, l'activité biologique des analogues époxydes est comparée à celle de la 1 alpha,25-(OH)2 D3 dans les tests in vitro, sur les cellules humaines épidermiques (kératinocytes), ostéoblastiques et leucémiques, et in vivo dans le modèle du poulet rachitique. 1. Différenciation des cellules leucémiques Dans le test d'induction de la différenciation des cellules leucémiques HL-60, la prolifération cellulaire est remarquablement inhibée par la l alpha,25-dihydroxy-vitamine D3 et par les analogues époxydes de la vitamine D. L'effet inhibiteur 50 % de la I alpha,25-(OH)2D3 est obtenu pour une concentration extracellulaire de 1,24 x l0 M. Les dérivés époxydes montrent également une inhibition remarquable de la prolifération des cellules HL-60. Par exemple, la concentration inhibitrice du composé 32 (1 alpha-hydroxy-23,24-didéhydro-25,26-époxy vitamine D3) est de 1,34 x 10-8 M. Ainsi, la propriété de différenciation cellulaire de la vitamine D est conservée par les analogues époxydes, caractérisés par la présence d'une fonction époxyde dans la chaîne latérale de la 1 alpha-hydroxy-vitamine D et ceci même en l'absence du groupe hydroxyle en position 25. 2. Différenciation des cellules épidermiques humaines L'effet comparatif des analogues époxydes de la 1 alpha-OHD3 sur la croissance des cellules épidermiques a été étudiée sur des cultures primaires de kératinocytes humains. A la concentration extracellulaire de 10 7 M, les analogues époxydes testés jusqu'ici, inhibent la croissance d'au moins 45 % des kératinocytes en culture. L'effet inhibiteur 50 % de la croissance des kératinocytes est obtenue, par exemple, pour des concentrations extra cellulaires de 6,2 x 10 7 M et 2,8 x 10 7 M pour les composés 30 (1 alpha hydroxy-24,25-époxy-vitamine D3) et 32 respectivement. Dans le même test, le métabolite actif de la vitamine D, la 1 alpha,25-(OH)2D3, a nettement moins d'effet sur la croissance des cellules épidermiques avec une ED50 de 3,0 x 10 6 M. Un effet inhibiteur significatif des analogues époxydes est déjà observé à la concentration de 10 8 M, alors que la 1 alpha,25-(OH)2D3 ne montre qu'un effet marginal.Par exemple, le composé 26a ((24S,251)-1 alpha,24-dihydroxy-25,26-époxy-vitamine D3) produit une inhibition de l'ordre de 35 % à 10 8 M. Les résultats obtenus montrent l'excellent pouvoir inhibiteur des analogues époxydes sur les kératinocytes humains en culture, et nettement supérieur à celui de la I alpha,25-(OH)2D3, par exemple d'un facteur 5 et 10 respectivement pour les composés 30 (1 alpha hydroxy24,25-époxy vitamine D3) et 32 (1 alpha hydroxy-23,24-didehydro, 25,26-époxy vitamine D3). 3. Effet de différenciation in vitro sur ostéosarcome humain Les cellules ostéoblastiques humaines MG-63, issues d'un ostéo-sarcome, sont incubées en présence de différentes concentrations en 1 alpha,25-(OH)2D3 et en analogues époxydes. Après 48 heures, la sécrétion en ostéocalcine est mesurée dans le milieu de culture. Dans des conditions normales de culture, les cellules MG-63 ne produisent pas ou peu d'ostéocalcine. La 1 alpha,25-(OH)2D3 induit rapidement la sécrétion d'ostéocalcine par les cellules (ED50 = 1,6 x 10 M) ; l'effet optimal est obtenu à la concentration de 10-9 M. Les analogues époxydes se montrent nettement moins actifs que la 1 alpha,25-(OH)2D3. L'activité biologique 50% des analogues époxydes est donc observée à des concentrations extracellulaires bien supérieures. A titre d'exemple, le composé 28b (24R, 25S)-l alpha,24-dihydroxy-25,26-époxy-vitamine D3) induit seulement 50 % de la sécrétion maximale en ostéocalcine par les cellules MG-63 à la concentration de 4,2 x 10 9 M. Ainsi, la propriété de stimulation des cellules ostéoblastiques de la vitamine D est affectée par la dérivation époxyde de la chaîne latérale de la 1 alpha-OHD3. L'effet biologique des analogues époxydes est obtenu à des concentrations nettement plus élevée (au moins un e) ; aux concentrations élevées, les analogues se comportent comme la 1 alpha,25-(OH)2D3. I1 y a donc une dissociation entre les effets sur les cellules d'origine osseuse, où l'effet est diminué, et les autres cellules telles les kératinocytes ou les cellules leucémiques où l'effet est conservé ou plus souvent considérablement augmenté. 4. Effet calcémiant chez le poulet rachitique L'activité biologique in vivo de la vitamine D et ses dérivés a été étudiée dans le modèle du poulet rachitique. Les concentrations sériques en calcium et en ostéocalcine ont été déterminées après 10 jours de traitement des poulets rachitiques avec la 1 alpha,25-(OH)2D3 ou les analogues époxydes de la 1 alpha-OHD3. Dans le cas de la 1 alpha,25-(OH)2D3, la concentration en calcium dans le sang augmente proportionnellement à la dose administrée, pour atteindre les valeurs normales chez le poulet non rachitique à la dose journalière de 80 ng/kg. Le calcium sérique reflète l'absorption calcique de l'intestin induite par la vitamine D. Dans le cas des analogues époxydes, l'effet pharmacologique est particulièrement réduit. Par exemple, aucune résorbtion calcique de l'intestin n'est observée pour le dérivé 26a (24S, 25R)-1 alpha,24-dihydroxy 25,26-époxy-vitamine D3) à la dose journalière de 160 ng/kg. L'ostéocalcine est produite spécifiquement par les cellules osseuses, et représente un excellent paramètre du métabolisme de l'os. La 1 alpha,25-(OH)2D3 stimule de façon notable le métabolisme osseux I'effet maximal sur l'ostéocalcine sérique est obtenu à la dose journalière de 40 ng/kg. Les dérivés époxydes montrent peu ou pas d'effets pharmacologiques sur le tissu osseux. A titre d'exemple, le composé 32 (1 alpha-hydroxy-23,24-didehydro-25,26-époxy-vitamine D3) est totalement inactif (testé jusqu'à 160 ng/kg) alors que le composé 24 ((24S,25R)-1 alpha,24-dihydroxy-25,26-époxy-vitamine D3) possède une activité marginale seulement à la concentration de 160 ng/kg.Ainsi les modifications apportées à la chaîne latérale de la 1 alpha-hydroxy-vitamine D, affectent considérablement la principale propriété pharmacologique de la 1 alpha,25-dihydroxy-vitamine D, à savoir le métabolisme phospho-calcique. L'effet calcémiant des analogues est marginal à inexistant. C) Les propriétés biologiques des analogues époxydes de la vitamine D peuvent être modulées par leurs isoméries respectives. Dans le cas des analogues époxydes de la l-alpha-hydroxyvitamine D, différentes formes isomériques sont possibles tant au niveau de la fonction époxyde qu'au niveau de la chaîne latérale. Aussi, l'impact de l'isométrie des analogues époxydes sur les propriétés biologiques a été étudié. A titre d'exemple, les composés 26a et 28b ont été comparés au niveau de leurs propriétés de différenciation des cellules épidermiques et de leurs effets antiprolifératifs sur des cellules tumorales humaines. Au niveau des cellules épidermiques humaines, le composé 26a inhibe 50 % de la croissance des kératinocytes à la concentration extra cellulaire (ED50) de 3,1x 10 7 M. Le composé 28b, quant à lui, se montre deux fois moins actif, avec une ED50 de 6,4 x 10 .7 M. A la concentration de 10 8 M, un effet inhibiteur significatif est obtenu avec le composé 26a (+ 35 %) alors que le composé 28b ne montre qu'un effet marginal. En ce qui concerne l'effet antiprolifératif sur les cellules tumorales humaines, le composé 26a inhibe la croissance de près de 50 % des cellules MCF-7 après 7 jours d'incubation à la concentration de 10 7 M. A cette même concentration, l'effet antiprolifératif du composé 28b est réduite d'au moins un facteur trois. Ainsi l'isomérie de la chaîne latérale des analogues époxydes de la vitamine D, et particulièrement au niveau de la fonction époxyde, est à même d'influencer significativement leurs activités biologiques au niveau cellulaire. Ces résultats montrent également l'intérêt de considérer les formes isomériques pures des analogues époxydes plutôt que sous formes de mélange. D) L'activité biologique des analogues époxydes de la 1 alpha-hydroxyvitamine D peut être supérieure à celle de la 1 alpha,25-dihydroxyvitamine D. Parmi les propriétés biologiques intéressantes de la vitamine D et des analogues époxydes, les effets sur la différenciation des cellules épidermiques humaines d'une part, et les effets antiprolifératifs sur les cellules tumorales MCF-7 d'autre part, ont été considérés. A titre d'exemple, le composé 32 montre un excellent pouvoir inhibiteur de la croissance cellulaire par rapport à celui du métabolite actif de la vitamine D, la 1 alpha,25-(OH)2D3. Sur les cellules épidermiques humaines, le composé 32 se trouve être au moins 10 fois plus efficace à différencier les kératinocytes que la 1 alpha,25-(OH)2D3, avec une ED50 respectivement de 2,8 x 10 7 M et 3,0 x 10 6 M. D'autre part, sur les cellules MCF-7 en culture, l'effet antiprolifératif est également en faveur de l'analogue époxy. A la concentration de 10 8 M, la 1 alpha,25-(OH)2D3 est inactive alors qu'environ 20 ,6 d'inhibition des cellules est obtenu dans le cas du composé 32. L'activité biologique 50 % de cet analogue est observée à la concentration extracellulaire de 5,9 x 10 8 M. Comme illustré avec cet analogue époxyde, l'addition d'une fonction époxyde dans la chaîne latérale de la 1 alpha-hydroxy-vitamine D est à même non seulement de conserver les propriétés biologiques cellulaires propres à la 1 alpha,25-dihydroxy-vitamine D (cf. B)), mais également d'accroître certaines propriétés cellulaires caractéristiques de la vitamine D. E) Propriétés biologiques générales des analogues époxydes de la 1 alpha-hydroxy-vitamine D. Les analogues de la vitamine D, caractérisés par la présence d'une fonction époxyde au niveau de la chaîne latérale, possèdent des propriétés biologiques in vitro et in vivo particulièrement intéressantes. La fonction époxyde substitue avantageusement la fonction hydroxyle caractéristique du métabolite actif et des analogues de la vitamine D. Elle confère des propriétés biologiques particulières, permettant de distinguer notablement les dérivés époxydes de la l-alpha,25-(OH)2D3 et de ses principaux analogues. Ainsi, la fonction époxyde rend possible la dissociation entre l'effet calcémiant et les autres formes d'activités biologiques. Les analogues époxydes de la l-alpha-hydroxy-vitamine D possèdent d'une façon générale les propriétés cellulaires caractéristiques de la vitamine D. Citons notamment la différenciation des cellules leucémiques et épidermiques, l'effet antiprolifératif sur les cellules cancéreuses et les cellules leucocytaires. Les analogues époxydes se montrent particulièrement efficaces sur les cellules épidermiques et les cellules cancéreuses; toutefois, ils ne stimulent que faiblement la sécrétion d'ostéocalcine par les cellules d'origine ostéoblastique. En ce qui concerne le métabolisme phospho-calcique, l'effet calcémiant des analogues est considérablement réduit (activité marginale), voire inexistant dans le modèle du poulet rachitique. Ainsi, la réduction notable de l'effet calcémiant confère aux analogues époxydes des avantages certains par rapport à la vitamine D ou à son métabolite actif, notamment d'accroître la concentration en composé pouvant être administré sans influencer le métabolisme phospho-calcique. Cette dissociation d'activité rend possible, par exemple, de stimuler la différenciation des cellules leucémiques ou épidermiques sans toutefois induire un effet calcémiant délétère toxique. Les résultats obtenus permettent d'envisager l'application thérapeutique des analogues époxydes dans le traitement des affections cutanées, telles le psoriasis, de l'hyperparathyroîdisme secondaire (maladie rénale chronique), et de certains cancers (leucémie, lymphome, syndrome myélodisplasique, mélanome, sein, etc...), ou comme immunomodulateurs (suppression de la prolifération des lymphocytes T, différenciation des monocytes, etc...), notamment dans les maladies autoimmunes, les processus inflammatoires et lors de transplantation de peau, de moëlle ou d'organes. REFERENCES 1. Reichel, H., Koeffler, H.F., et Norman, A.W. (1989) New Engl. J. Med. 320,980-991. 2. Manolagas, S.C. (1987) Anticancer Res. 7, 625-638. 3. Rigby, W.F.C. (1988) Immunol. Today 9, 54-58. 4. Delmez, J., Tindira, C., Grooms, P., Dusso, A. Windus, D. W. et Slatopolsky, E. (1989) J. Clin. Invest. 83, 1349-1355. 5. Slatopolsky, E., Weerts, C., Thielan, J., Horst, R., Harter, H., et Martin, K.J. (1984) J. Clin. 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Matsumoto, K., Hashimoto, K., Kiyoki, M., Yamamoto, M. et Yoshikawa, K. (1990) J. Dermatol. 17, 97-103. 25. Vanham, G., Van Baelen, H., Tan, B. K., et Bouillon, R. (1988) J. Steroid Biochem.29, 381-386. 26. Bouillon, R., Van Baelen, H. et De Moor, P. (1980) J. Steroid Biochem. 13, 1029-1034. 27. Ishizuka, S., Kurihara, N., Hakeda, S., Maeda, N., Ikeda, K., Kumegawa, M., et Norman, A.W. (1988) Endocrinol. 123, 781-786. 28 Lythgoe B., Moran T., Nambudiry M., Tideswell J., Wright P.; 3. Chem. Soc., Perkin 2, 590-595 (1978). 29 Baggiolini E., Lacobelli J., Hennessy B., Uskokovic M.; J. Am. Chem. Soc. 104, 2945-2948 (1982). 30 Partridge J., Faber S., Uskokovic M.; Helv. Chim. Acta, 57, 764-771 (1974). 31 Lythgoe B., Roberts D., Waterhouse I.; J. Chem. Soc. Perkin 1, 2608-2612 (1977). 32 Barrack S.A., Gibbs R.A., Okamura W.H.; J. Org. Chem. 53, 1790-1976 (1988). 33 Gao Y., Hanson R.M., Klunder J.M., Ko S.Y., Masamune H., Sharpless K.B.; J. Am. Chem. Soc. 109, 5765-5780 (1987). REVENDICATIONS 1. Composés dérivés de la vitamine D ou d'un de ses analogues possédant notamment une chaîne latérale greffée en position 17 sur le cycle D de la vitamine D, caractérisés en ce qu'ils comportent un groupe époxyde greffé sur ladite chaîne latérale. 2. Composés dérivés de la vitamine D ou d'un de ses analogues, possédant une chaîne latérale greffée en position 17 sur le cycle D, ladite chaîne latérale comportant un groupe époxyde, répondant à la formule dans laquelle - V représente un reste de la vitamine D ou un de ses analogues dont la position 17 est vacante - X, greffé en position 17 de V, représente une chaîne hydrocarbonée, notamment alkylée, de 0 à 15 atomes de carbone éventuellement substituée ou modifiée, notamment pouvant comporter, en une ou plusieurs positions, un ou des groupe(s) . hydroxyle, méthyle, éthyle, halogène, de préférence fluor, .ester, notamment un groupe RlCOO avec R1 qui représente un alkyle ou alcoxy en C1 à C7 linéaire ou branché, saturé ou insaturé, éventuellement substitué notamment par un ou des groupe(s) hydroxy ou halogène de préférence fluor, . éther, notamment un groupe R1-O avec R1 qui représente un alkyle ou alcoxy en C1 à C7 linéaire ou branché, saturé ou insaturé, éventuellement substitué par un ou des groupe(s) hydroxy ou halogène, . oxo sous forme cétonique, . un cycle ou hétérocycle, notamment cycloalkyle saturé ou insaturé, aromatique ou hétéroaromatique pouvant porter tous les groupes et modifications mentionnés ci-dessus, et/ou - ladite chaîne X pouvant comporter à la place d'un ou plusieurs de ses atomes de carbone, un atome d'oxygène, d'azote ou de soufre, - ladite chaîne X pouvant être insaturée, avec une ou plusieurs double(s) ou triple(s) liaison(s) carbone-carbone, cette chaîne insaturée pouvant porter tous les groupes et modifications mentionnés ci-dessus, et - ladite chaîne et les différents groupes situés sur la chaîne pouvant adopter toutes les formes isomériques, - le groupe époxyde pouvant être greffé sur l'un quelconque des 15 atomes de carbone de X, notamment à son extrémité, groupe époxyde dans lequel . R1, R2 et R3, qui peuvent être identiques ou différents, représentent un hydrogène, un groupe alkyle en C1 à C10 > linéaire ou branché, saturé ou insaturé, éventuellement substitué avec un ou des groupement(s) halogène, hydroxy, cycloalkyle, également éventuellement substitué avec des groupements halogène ou hydroxy . R1 et R2 peuvent faire partie d'un même cycle, tel que carbocycle ou hétérocycle, et dans ce cas R3 a la même signification que ci-dessus .R2 et R3 peuvent faire partie d'un même cycle, tel que carbocycle ou hétérocycle, et dans ce cas R1 a la même signification que ci-dessus . les différentes formes isomériques au niveau de l'époxyde étant possibles. 3. Composés selon la revendication 2, caractérisés en ce qu'ils répondent à la formule dans laquelle X, R1 à R3 ont les significations données dans la revendication 1 et A représente un hydrogène, un méthyl ou le groupe méthylène CH2 représente une simple ou double liaison, Y représente H ou OH ou un groupe ester, notamment R1COO, ou éther, notamment R1 O, avec R1 qui a la signification donnée dans la revendication 1. 4. Composé selon la revendication 2 ou 3, caractérisé en ce que X représente une chaîne alkylée de 0 à 6 atomes de carbone, dont un atome de carbone peut être remplacé par un atome d'oxygène et éventuellement substituée, notamment par un ou plusieurs groupes méthyle hydroxyle et/ou - éther, notamment par un groupe R1-O, et X pouvant être insaturée avec une double ou triple liaison carbone-carbone, - le groupe époxyde étant greffé en extrémité de X, et R1, R2 et R3 représentent un hydrogène, un hydroxyl, un groupement alkyl, tel que méthyl ou éthyl ou un hydroxyalkyle. 5. Composés selon Itune des revendications 2 à 4, caractérisés en ce qu'ils répondent à la formule dans laquelle Z représente une chaîne alkyl saturée ou insaturée de 0 à 3 atomes de carbone, éventuellement substituée par un hydroxy, un alkyl tel que méthyl ou éthyl sur l'un ou plusieurs desdits atomes de carbone, le groupe époxyde étant greffé à l'extrémité de Z. 6. Composés selon la revendication 5, caractérisés en ce qu'ils répondent aux formules isomériques lia ou IIb avec R1 R2 R3 Z CH3 H H -CH2-CH2 CH3 H H -CH2-CHOH- H CH3 CH3 -CH2 H H H -C(CH3)2 CH3 H H -C-C 7. Procédé de préparation d'un composé selon l'un revendications précédentes, caractérisé en ce que l'on fait réagir I @@@@@ obtenu à partir d'un composé dont le squelette structurel de base formule IV et du n-butyllithium avec un composé dont le squelette structurel a pour formule III dans lesquels les fonctions réactives greffées sur lesdits squelettes de III et IV sont éventuellement protégées et X, R1, R2, R3, dont les fonctions réactives sont éventuellement protégées, ont les significations données dans les revendications 1 à 5, puis l'on déprotège éventuellement lesdites fonctions réactives notamment de X, R1, R2, R3 et hydroxyle en positions 1 et 3. 8. A titre de médicament, un composé selon l'une des revendications 1 à 6. 9. Composé selon l'une des revendications 1 à 6 pour la mise en oeuvre d'une méthode de traitement et/ou de prophylaxie du cancer, incluant les leucémies, les lymphomes, les syndromes myélodisplasiques, les mélanomes, les cancers du sein, du poumon et du colon, ainsi que leurs métastases. 10. Composé selon l'une des revendications 1 à 6 pour la mise en oeuvre d'une méthode de traitement et/ou de prophylaxie du psoriasis et des dyskératoses. Il. Composé selon l'une des revendications 1 à 6 pour la mise en oeuvre à titre d'immunomodulateur pour prévenir les rejets de greffes, en usage seul ou en association avec d'autres composés tel la cyclosporine ou le FK 506. 12. Composé selon l'une des revendications 1 à 6 pour la mise en oeuvre d'une méthode de traitement et/ou de prophylaxie des maladies autoimmunes. i3. Composé selon l'une des revendications 1 à 6 pour la mise en oeuvre dd'une méthode de traitement et/ou de prophylaxie de l'ostéoporose. 14. Composé selon l'une des revendications 1 à 6 pour la mise en oeuvre d'une méthode de traitement et/ou de prophylaxie de l'hyperparthyroidie notamment secondaire et l'insuffisance rénale.