Brevet FR2679229A1 — publié le 19930122

Procédé de préparation du cis-inosito L, du méso-ino- sito L, de L'Api-inosito L et/ou du cis-quercito L éventuel Lement deutérés. La présente invention a pour objet un procédé de préparation du cis-inositol qui permet en outre d'obtenir du méso-inositol, de l'épi-inosi- tol et du cis-quercito L. Elle concerne également l'obtention de ces composés entièrement deutérés ainsi que L'utili- sation du cis-inositol, deutéré ou non, pour préparer du cis-inositol, de l'épi-inositol et/ou du cis- quercitol spécifiquement deutérés sur des atomes de carbone particuliers. Le cis-inositol est l'un des isomères du cyclohexanehexol de formule: OH HO OH ZOH HO OH OH Dans cette formule, on a six groupes hydroxyle qui peuvent être disposés de part et d'autre du plan moyen de la molécule Si l'on tient compte de tous Les arrangements possibles, on consta- te donc que Le cyclohexanehexo L peut exister sous neuf formes diastéréoisomères dont deux seulement sont optiquement actives et énantiomères Ces diasté- réoisomères sont représentés sur la figure 1 annexée dans leur forme chaise. Le premier inosito L connu fut découvert par Scherer en 1850 qui L'iso La d'extraits de viande d'o son nom de myo-inositol (méso-inosito L) Dans Les quelques années qui suivirent, sept autres inositols étaient décrits, soit préparés par synthè- se, soit iso Lés à partir de substances nature L Les. Un seul des diastéréoisomère était alors manquant, il s'agissait du cis-inositol qui n'avait jamais pu être obtenu malgré un grand nombre de tentatives pour préparer ce composé, et qui n'avait pas non plus été découvert dans la nature Au cours des décennies qui suivirent, toutes les tentatives pour préparer ce composé se soldèrent par un échec et il fallut attendre 1957 pour qu'Angial obtienne enfin ce composé par un procédé comprenant une hydrogénation catalytique de L'hexahydroxybenzène ou de la tétrahydroxybenzoquinone, suivie d'une séparation des produits obtenus par chromatographie sur poudre de cellulose et cristallisation fraction- née, comme il est décrit dans J Chem Soc, 1957, p 3682-3691. Avec ce procédé, la quantité de cis-inosi- to L produite est très faible (rendement de 1,7 %) et l'isolement du cis-inostol par chromatographie sur poudre de cellulose est long et difficile à réaliser On peut toutefois améliorer le rendement de La réaction d'hydrogénation en utilisant un catalyseur palladium-carbone, mais l'emploi d'un tel catalyseur ne peut être envisagé pour la produc- tion de cis-inositol à une échelle dépassant celle du laboratoire, en raison du prix élevé de ce cata- lyseur qui est perdu après la réaction d'hydrogéna- tion Par ailleurs, la séparation du cis-inositol des produits de la réaction nécessite toujours plusieurs étapes de chromatographie sur la colonne de cellulose. On connaît un autre procédé de préparation du cis-inositol décrit par Angyal et a L dans Carbo- hydr Res, 20, 1971, p 97-104 Ce procédé qui consiste à synthétiser le cis-inositol par épimérisa- tion de l'érpi-inositol, permet d'atteindre un rende- ment supérieur et conduit au seul diastéréoisomère cis sans poser de problème de séparation d'isomères. Cependant, cette synthèse nécessite huit étapes, ce qui est beaucoup trop long et trop coûteux, d'autant plus que le produit de départ, l'épi-inosi- to L, est lui-même un produit cher d'un accès diffici- le. Ainsi, aucun des procédés connus ne permet de produire, à un coût raisonnable, du cis-inositol en quantité suffisante étant donné la demande crois- sante en cis-inositol, notamment dans le domaine pharmaceutique. La présente invention a précisément pour objet un procédé de préparation du cis-inositol qui permet d'obtenir des rendements intéressants en étant plus facile à mettre en oeuvre et moins coûteux que les procédés décrits ci-dessus. Selon l'invention, le procédé de prépara- tion du cis-inositol se caractérise en ce que l'on soumet à une hydrogénation catalytique de la tétra- hydroxybenzoquinone en utilisant un catalyseur à base de palladium et en ce que l'on récupère ensuite le cis-inositol en séparant les produits obtenus lors de la réaction d'hydrogénation, par chromatographie sur une résine échangeuse de cations comportant des cations bivalents ou trivalents ayant un rayon ionique supérieur à 0,6 A A titre d'exemples de tels cations, on peut citer les cations de métaux alcalino- terreux, d'yttrium et de lanthanides, comme La 3 +, Eu 3 +, Pr 3 +, ainsi que Mn 2 +, Fe 3 +, Ni 2 +, Co 2 +, Cu 2 +, Zn 2 +, et Mg 2 +. Ce procédé peut être également mis en oeuvre pour produire du cis-inositol complètement deutéré en utilisant du deutérium au lieu d'hydrogène pour l'hydrogénation catalytique de la tétrahydroxy- benzoquinone. La réaction d'hydrogénation correspond au schéma réactionnel suivant: OH OH OH OH \ 1 O H 2/Pd OH 0 O _ HO OH D 2 OH OH HO OH Elle est généralement effectuée en solution aqueuse, à la pression et à la température ambiantes. Après cette réaction, on sépare les diffé- rents inositols produits par chromatographie sur une résine échangeuse de cations, en utilisant de l'eau ou une solution Aqueuse pour l'élution. Ceci permet de séparer en particulier les isomères suivants: cis-inositol méso-inositol épi-inositol ainsi que du cis- quercitol de formule: , cis-quercitol Le cis-inositol étant très retenu par la résine sort dans les dernières fractions, dans un état suffisamment pur pour cristalliser spontané- ment lorsque l'on concentre les fractions qui le contiennent. Les résines échangeuses de cations uti- lisées peuvent être de n'importe quel type, organi- ques ou inorganiques, et on les met sous la forme voulue par mise en contact avec une solution aqueuse d'un sel du cation choisi. L'utilisation pour cette chromatographie d'une résine échangeuse de cations comportant des cations bivalents ou trivalents, par exemple de métaux alcalino-terreux, permet donc de séparer facile- ment le cis-inositol des autres isomères, en raison de la capacité plus élevée du cis-inositol de former des complexes avec les cations, capacité qui est due à sa configuration "tout cis". Les métaux formant les cations de la résine échangeuse de cations sont ainsi des métaux facilement complexés par le cis- inositol Parmi les métaux mentionnés ci-dessus, on peut utiliser en particulier des métaux alcalino-terreux comme le calcium, le strontium et le baryum. De préférence, on utilise une résine échangeuse de cations sous forme Ca 2 +. Dans le procédé de l'invention, le fait de partir de la tétrahydroxybenzoquinone est très intéressant car ce produit est beaucoup plus stable que l'hexahydroxybenzène utilisé précédemment. Par ailleurs, la tétrahydroxybenzoquinone est un produit commercial bon marché que l'on peut obtenir faci Lement,par exemple par oxydation nitrique du méso-inositol qui est lui-même un produit commer- cial très bon marché car il est extrait en grande quantité de graines de céréales. Selon l'invention, on peut de plus amélio- rer les conditions de la réaction d'hydrogénation, en particulier la vitesse et le rendement de la réaction en utilisant au moins au début de celle- ci un catalyseur constitué de palladium qui a été préréduit en milieu neutre. En effet, si l'on utilise dans l'invention un -catalyseur classique au palladium, c'est-à-dire de l'oxyde-hydroxyde de palladium, qui est réduit "in situ" dans le mélange réactionnel, la réaction d'hydrogénation a lieu plus lentement et son rende- ment est plus faible En effet, la tétrahydroxybenzo- quinone ayant en solution aqueuse un p H acide, la réduction du palladium en milieu acide conduit à un autre type de catalyseur (palladium gris) qui catalyse la réduction de la tétrahydroxybenzoqui- none en hexahydroxybenzène seulement et non en inositols; de plus l'hexahydroxybenzène est peu soluble dans l'eau, il précipite de ce fait à l'intérieur du catalyseur et le désactive complètement. Selon l'invention, on évite cette réduction en tétrahydroxybenzène, en utilisant tout au moins au début de la réaction un catalyseur de palladium préréduit en milieu neutre. De préférence, encore, on réalise l'hydro- génation catalytique en utilisant comme catalyseur, au début de la réaction, du palladium pré réduit en milieu neutre, puis de l'oxyde-hydroxyde de palladium réduit "in situ". En effet, lorsque la tétrahydroxyquinone a complètement disparu du mélange réactionnel, il n'est plus nécessaire d'utiliser du palladium préréduit en milieu neutre, et on préfère alors poursuivre la réaction avec du palladium réduit "in situ" dans le milieu réactionnel car ce cataly- seur est plus actif que le palladium préréduit. Le procédé de préparation du cis-inositol de l'invention est donc particulièrement avantageux car il est simple, rapide, facile à mettre en oeuvre et peu coûteux Il ne nécessite ni réactifs chers, ni équipements sophistiqués; il ne présente pas de danger particulier et n'utilise aucun produit toxique. En effet, le produit le plus cher est le palladium, mais il n'est pas consommé, peut donc être récupéré en fin de réaction et réutilisé. Il en est de même pour la résine échangeuse de ca- tions qui peut être réutilise indéfiniment. De plus, ce procédé permet d'obtenir, facilement des composés complètement deutérés. D'autres caractéristiques et avantages de l'invention apparaîtront mieux à la lecture de la description qui suit d'exemples de réalisation de l'invention donnés bien entendu à titre illustra- tif et non limitatif. La figure 1 déjà décrite représente les 9 diastéréoisomères de l'inositol. les figures 2 à 5 représentent diverses réactions qui peuvent être mises en oeuvre à partir du cis-inositol obtenu par le procédé de l'invention. Exemple I: Préparation de cis-inositol. 1) Hydrogénation catalytique. a) Préparation du catalyseur. On dissout à chaud, dans un mélange de 14 m L d'acide nitrique concentré et de 9 ml d'acide chlorhydrique concentré ( 11 N), 3 g de palla- dium métallique sous forme de fil, de plaquette ou de mousse On évapore ensuite la solution à sec et on issout le résidu rouge brun de chlorure de palladium ( 3,5 g) dans 18 ml d'acide chlorhydrique concentré ( 11 N). On dilue la solution à 1800 ml avec de l'eau distillée et on y ajoute lentement 46 ml d'une solution de soude à 40 % On porte à l'ébullition la solution jaune ainsi obtenue Il se forme un léger précipité brun qui se décante lentement, et on sépare celui-ci de la solution par centrifuga- tion car le précipité est si ténu qu'il passe à travers tous les filtres, mais cet état de division est nécessaire à l'activité du catalyseur. On lave plusieurs fois le précipité à l'eau bouillante jusqu'à ce que les eaux de lavage soient neutres (même p H que l'eau distillée) en réalisant une centrifugation entre chaque lavage pour récupérer le précipité. On met Le précipité (mélange d'oxyde et d'hydroxyde de palladium) en suspension dans de l'eau distillée et on le réduit par l'hydrogène à la pression atmosphérique en poursuivant l'hydrogé- nation jusqu'à ce que l'absorption d'hydrogène cesse (environ 18 h) Au cours de la réduction, la suspension de palladium redevient basique On lave alors le palladium réduit (palladium noir) à l'eau distillée jusqu'à ce que la liqueur surna- geante soit neutre (p H identique à celui de l'eau distillée). On obtient ainsi du palladium préréduit en milieu neutre qui doit être utilisé le plus rapidement possible car son activité décroît avec le temps On conserve celui-ci dans l'eau distillée car son activité diminue si l'eau est évaporée à sec. b) Hydrogénation de la tétrahydroxybenzo- quinone. Dans une suspension de 2 g du palladium préréduit obtenu précédemment dans 100 ml d'eau distillée, on introduit goutte à goutte une solution de 3 g de tétrahydroxybenzoquinone (en partie dissou- te) dans 250 ml d'eau distillée, sous atmosphère d'hydrogène, en agitant vigoureusement Après intro- duction de la tétrahydroxybenzoquinone, on poursuit l'hydrogénation jusqu'à ce que l'absorption d'hydro- gène cesse On ajoute alors une nouvelle quantité de catalyseur correspondant à environ lg de palladium sous forme d'oxyde, c'est-à- dire lg du précipité brun obtenu précédemment, et on poursuit l'hydrogéna- tion jusqu'à ce que l'absorption d'hydrogène cesse (environ 1 Oh). On sépare alors le palladium de la solu- tion; à ce stade, il n'est plus pulvérulent, il s'est aggloméré en particules plus grosses et peut être séparé aisément par filtration ou centrifuga- tion On le Lave trois fois à l'eau bouillante et on joint les eaux de lavage au filtrat Si la solution est encore trouble, on peut la clarifier par filtration sur un filtre millipore de 0,5 ljm. On évapore ensuite la solution sous pression réduite, ce qui donne 2,9 g d'un résidu semicristallin incolo- re. 2 Séparation par chromatoqraphie. a) Préparation de la colonne de chromato- graphie. On introduit dans une colonne de chromato- graphie de 2,5 cm de diamètre, une suspension dans une solution de Ca CL 2 à 20 % d'une résine échangeuse de cations, commercialisée sous la marque DOWEX AG 50 W-X 2 de 100-200 mesh ( 0,152 à O,076 mm) sous forme hydrogène, en quantité suffisante pour que la colonne de résine atteigne une hauteur de 10 cm environ après décantation de la résine On lave ensuite la colonne de résine par une solution de Ca C 12 à 20 % en quantité égale à 2 fois son volume, puis on la lave à l'eau distillée jusqu'à ce que l'eau de lavage à la sortie de la colonne ne contien- ne plus d'ions Ca 2 + On vérifie l'absence d'ions Ca 2 + dans les eaux de lavage à l'aide d'une solution de C 03 Na 2qui, normalement précipite du C 03 Ca en présence d'ions calcium. b) Chromatoqraphie. On dissout les 2,9 g du résidu semicristal- lin incolore obtenu précédemment dans l'étape 1 b) dans 20 ml d'eau distillée et on introduit cette solution au sommet de la colonne Lorsque la solution a entièrement pénétré dans la colonne, on élue celle-ci par de L'eau distillée et on collecte à la sortie de la colonne des fractions de 15 ml. On détecte dans les fractions recueillies, la présen- ce du cis-inositol, de l'épi-inositol, du cis-querci- tol et des autres inositols par chromatographie sur couche mince sur gel de silice sans réaliser d'élution On récupère les produits obtenus dans chaque fraction par cristallisation en concentrant les fractions. Les produits obtenus sont répartis dans les fractions de la façon suivante: 1 1 fractions 3 à 9: 1,2 g d'un mélange d'inositols dont le méso (majoritaire) fractions 10 à 13: pas de produits fractions 14 à 18: 0,8 g d'un mélange d'épi-inositol et de cis-quercitol fractions 19 à 60: pas de produits fractions 61 à 70: 0,9 g de cis-inositol pur. On obtient ainsi 0,9 g de cis-inositol pur que l'on recristallise dans un mélange eau- éthanol, ce qui correspond à un rendement de 30 %. On identifie le cis-inositol par mesure de son point de fusion et par spectrométrie à réso- nance magnétique nucléaire (RMN). Point de fusion. On observe une fusion pâteuse à 375-390 C, qui correspond à la destruction progressive des liaisons hydrogène Ce point de fusion très caracté- ristique car il est anormalement éLevé pour un composé organique, est dû au fait que les mo Lécules sont fortement liées par des liaisons hydrogène intermo Léculaires, conséquence de la configuration "tout "cis", formant ainsi des édifices cristallins très stables. Si l'on transforme le cis-inositol produit en hexaacétate par réaction avec l'anhydride acétique dans la pyridine, on observe une fusion franche à 210-212 C caractéristique de cet hexaacétate de cis-inositol. Spectrométrie RMN. A la température ambiante, le spectre est très caractéristique car il présente une seule raie extrêmement large due à l'inversion de la forme chaise, trop rapide pour pouvoir séparer les protons axiaux et équatoriaux, trop lente pour que ces protons soient équivalents. Si C'on refroidit à -2 C, la conformation ne s'inverse plus et on observe deux signaux, l'un pour les protons axiaux et l'autre pour les protons équatoriaux. Si l'on chauffe à 80 C, la conformation s'inverse rapidement, ce qui rend les protons équiva- lents et l'on observe une seule raie fine. Exemp Le 2: Préparation de cis-inositol deuté-ré. On procède comme dans l'exemple 1, sauf que l'on utilise du deutérium pour réaliser dans l'étape la) la réduction du palladium et dans l'étape lb) d'hydrogénation catalytique de la tétrahydroxy- benzoquinone. Dans ces conditions, on obtient également 0,9 g de cis-inositol complètement deutéré, c'est- à-dire dans lequel subsistent uniquement les atomes d'hydrogène des groupements hydroxyle, tous les autres atomes d'hydrogène étant des atomes de deuté- rium. On obtient également du méso-inositol, de l'épi-inositol et du cisquercitol complètement deutérés. Le cis-inositol obtenu dans L'exemple I 1 peut être utilisé pour préparer du cis-inositol, de l'épi- inositol ou du cis-quercitol partiellement et spécifiquement deutérés en utilisant des réactions connues. Ainsi, on peut obtenir du cis-inositol ou de l'épi-inositol sélectivement deutéré sur une seule position en soumettant le cis-inositol à une oxydation ménagée pour produire une monocétone que l'on réduit ensuite par un réactif deutéré tel que Na BD 4, ce qui conduit au cis ou à l'épi-ino- sitol sélectivement deutéré Ceci correspond au schéma donné sur la figure 2. Le cis-inositol conduit à une seule monocé- tone car les groupes hydroxyle du cis-inositol sont disposés sur des liaisons alternativement axiale et équatoriale, si bien qu'il existe sous une seule conformation chaise qui s'inverse rapide- ment à la température ambiante rendant ainsi tous les hydroxyle équivalents. A partir de La monocétone, on peut aussi produire du cis-quercitol par réaction avec de l'acide chlorhydrique en présence de zinc Le schéma réactionnel est illustré également sur la figure 2. On peut effectuer le même type de réaction en partant du cis-inositol complètement deutéré, en le soumettant à une oxydation ménagée pour obtenir la monocétone complètement deutérée que l'on réduit ensuite par un réactif hydrogéné tel que Na BH 4 pour obtenir le cis et l'épi- inositol contenant un seul proton qui sont intéressants comme produits marqués, notamment en RMN Si l'on réalise la réac- tion de réduction avec Na BD 4 on obtient le cis ou l'épi-inositol complètement deutéré Ces réactions sont illustrées sur la figure 3. De la même façon, on peut produire du cis-quercitol complètement deutéré par réaction avec l'acide chlorhydrique en présence de zinc. Le schéma réactionnel est donné également sur la figure 3. On peut aussi faire réagir la monocétone avec de l'eau lourde en milieu légèrement basique pour échanger les deux protons en alpha et obtenir ainsi à partir de cette monocétone des inositols et du quercitol sélectivement marqués sur deux ou trois positions comme il est indiqué sur les schémas réactionnels de La figure 4 qui font appel aux mêmes réactions que celles des figures 2 et 3. Si L'on effectue Les mêmes réactions en partant de la monocétone complètement deutérée et en La soumettant à un échange avec de l'eau en milieu légèrement basique, on obtiendra des inositols ou du quercitol comportant trois ou quatre atomes de deutérium Ces réactions sont données sur La figure 5. REVENDICATIONS. 1 Procédé de préparation du cis-inositol, caractérisé en ce que L'on soumet à une hydrogénation catalytique de La tétrahydroxybenzoquinone en uti- lisant un catalyseur à base de palladium et en ce que l'on récupère ensuite le cis-inositol en séparant les produits obtenus lors de la réaction d'hydrogénation, par chromatographie sur une résine échangeuse de cations comportant des cations biva- lents ou trivalents ayant un rayon ionique supérieur o à 0,6 A 2 Procédé de préparation du cis-inositol deutéré, caractérisé en ce que l'on soumet à une hydrogénation catalytique au moyen de deutérium de la tétrahydroxybenzoquinone en utilisant un catalyseur à base de palladium et en ce que l'on récupère ensuite le cis-inositol deutéré en séparant les produits obtenus lors de la réaction d'hydrogéna- tion, par chromatographie sur une résine échangeuse de cations comportant des cations bivalents ou o trivalents ayant un rayon ionique supérieur à 0,6 A. 3 Procédé selon l'une quelconque des revendications 1 et 2, caractérisé en ce que la résine échangeuse de cations est sous forme Ca 2 +. 4 Procédé selon l'une quelconque des revendications 1 à 3, caractérisé en ce que l'on réalise l'hydrogénation catalytique en utilisant comme catalyseur du palladium qui a été préréduit en milieu neutre. 5 Procédé selon l'une quelconque des revendications I à 3, caractérisé en ce que l'on réalise l'hydrogénation catalytique en utilisant comme catalyseur du palladium préréduit en milieu neutre au début de la réaction, puis de l'oxyde de pa L Ladium qui est réduit "in situ". 6 Procédé selon l'une quelconque des revendications 1 à 5, caractérisé en ce que l'on récupère en outre le méso-inositol, l'épi-inositol et/ou le cis-quercitol séparés sur la résine échan- geuse de cations. 7 Utilisation du cis-inositol produit par le procédé selon l'une quelconque des revendica- tions 1 à 5 pour la préparation de cis-inositol partiellement deutéré, d'épi-inositol partiellement deutéré ou de cis-quercitol partiellement deutéré.