Brevet FR2683721A1 — publié le 19930521

" Composition lipidique polaire permettant de véhiculer un agent actif et/ou de le faire pénétrer dans une cellule cible La présente invention concerne une composition lipidique polaire permettant de véhiculer un agent actif et/ou de le faire pénétrer dans une cellule cible. Les biologistes savent, depuis déjà de nombreuses années, que toutes les cellules du règne animal sont entourées de membranes plasmiques qui constituent des barrières à perméabilité sélective ces cytomembranes dont la texture est largement constante, sont essentiellement constituées par une double couche continue de molécules lipidiques disposées parallèlement entre-elles et réunies par leurs groupes hydrophobes, dans laquelle diverses protéines membranaires sont encastrées. Différents constituants entrent dans la composition de ces doubles couches lipidiques de la membrane plasmique et, notamment, des huiles non polaires, ou des constituants polaires dont il existe trois classes principales : les phospholipides tels que la lécithine, le cholestérol et les glycolipides ou galactolipides dans lesquels on peut classer en particulier les céramides et les sphingolipides. Chaque type de cellule a une composition en constituants lipidiques polaires qui lui est particulière, et les spécialistes ont pu établir des gammes de compositions propres à chaque type de cellule. Le tableau ci-dessous donne à titre d'exemple les compositions lipidiques approximatives de différentes membranes cellulaires. Lipides Membrane Membrane Myéline Mitochondrie Réticulum E. Coli (% en poids) plasmique plasmique des (membranes endoplasmique hépatique érythrocytes interne et externe) Cholestérol 17 23 22 3 6 0 Phosphatidyléthanolamine 7 18 15 35 17 70 Phosphatidylsérine 4 7 9 2 5 traces Phosphaticylcholine 24 17 10 39 40 0 Sphingomyéline 19 18 8 0 5 0 Glycolipides 7 3 28 traces traces 0 Autres 22 13 8 21 27 30 Les chercheurs ont pu prouver que les constituants polaires des cytomembranes lipidiques ont un rôle déterminant sur la perméabilité cellulaire et donc influent sur les possibilités de pénétration des agents actifs à l'intérieur des cellules. L'idée à la base de l'invention est d'utiliser cette propriété en proposant une composition dans laquelle on reconstitue la formule lipidique des cytomembranes lipidiques pour véhiculer un agent actif ou faciliter sa pénétration dans une cellule cible. A cet effet, l'invention se rapporte à une composition lipidique polaire caractérisée en ce qu'elle est constituée par une émulsion aqueuse injectable topique ou ingérable d'un mélange lipidique dont la composition est essentiellement identique à celle des cytomembranes lipidiques des cellules. Cette composition, qui peut être pharmaceutique, cosmétique ou encore diététique peut revêtir des formes variées sans pour cela sortir du cadre de l'invention et, dans certains cas, la composition peut même constituer l'agent actif proprement dit. A titre d'exemple, il est connu qu'un excès de cholestérol peut provoquer le dépôt, sur la paroi interne des artères, d'une plaque d'athérome constituée par un mélange de cellules chargées de graisse et de cristaux de cholestérol. La réaction de la paroi en regard de la plaque d'athérome est variable : elle commence par une sclérose (athérosclérose) et est suivie de calcifications (médiacalcose). I1 peut s'ensuivre des thromboses (coagulation du sang dans l'artère) et des anévrismes (distension de la paroi). Or, on a déjà pu mettre en évidence que les mélanges lipidiques conformes à l'invention et en particulier les céramides sont des émulsifiants du cholestérol : l'injection dans le circuit sanguin d'un patient dont les artères sont porteuses de nombreuses plaques d'athérome d'une composition, conforme à l'invention peut permettre de faciliter l'élimination de ces dépôts ; ce mélange lipidique va en effet extraire le cholestérol puis faciliter son évacuation dans le circuit sanguin. Plus précisément, pour choisir la composition réellement mise en oeuvre conformément à l'invention, on utilise la notion de HLB ou "hydrophile-lipophile Balance" qui correspond à un classement des émulsifiants selon leur hydrophilie ou leur lipophilie. Une HLB faible (3 à 5) caractérise une émulsion à phase continue huileuse, une HLB plus élevée (10 à 12) une émulsion à phase continue aqueuse et au-delà une solubilisation. Or, à partir de cette notion, on a développé de nombreuses méthodes tant théoriques qu'expérimentales pour déterminer dans chaque cas particulier la composition d'un système de tensio-actifs donnant l'émulsion la plus fine et donc le couplage optimum de plusieurs tensio-actifs. Selon l'invention, pour déterminer in vitro la composition optimale pour l'émulsification du cholestérol on a utilisé un processus expérimental basé sur la recherche par mesure de la conductivité de la quantité d'eau provoquant l'inversion de phase d'une émulsion. On a ainsi obtenu un HLB de 8 à 10. Conformément à une variante particulièrement avantageuse de l'invention, l'émulsion a une composition essentiellement identique à celle des cytomembranes lipidiques d'une cellule cible et renferme un agent actif enrobé dans une gaine du mélange lipidique. Une telle composition peut, à titre d'exemple, renfermer un agent d'hydratation associé, le cas échéant, à des additifs tels que des vitamines A ou E et enrobé dans une gaine ayant une composition identique à celle des cytomembranes lipidiques des cellules de l'épiderme et en particulier du stratum corneum ; les agents d'hydratation présents dans ces compositions peuvent être des agents humectants ou hygroscopiques liposolubles tels que par exemple la lanoline, des acides gras polyinsaturés notamment la vitamine F, l'acide linoléique, l'acide gammalinolénique ou l'acide eicosapentaenoique ou encore des agents hydrosolubles tels que la glycérine, les mucopolysaccharides, les dérivés d'allantoïne, les acides aminés, l'urée, le sodium, le potassium.. Dans de telles compositions, qui peuvent être utilisées pour la lutte contre le vieillissement ou le traitement des brûlés, le mélange lipidique agit en fait à deux niveaux : il améliore la perméabilité membranaire vis-à-vis de l'agent actif, mais, parallèlement contribue lui-même à l'hydratation des cellules ; on a, en effet, récemment pu mettre en évidence le rôle dans les mécanismes d'hydratation de la peau des phospholipides et surtout des céramides qui sont susceptibles de contribuer à une meilleure rétention de l'eau, de restructurer l'épiderme et notamment le ciment intercornéocytaire et d'améliorer la résistance de la peau aux agressions extérieures. La composition conforme à l'invention peut également revêtir la forme d'une composition médicamenteuse destinée à divers classes thérapeutiques et dont l'agent actif peut revetir des formes variées et notamment être choisi dans le groupe formé par les antibiotiques, les anti-inflammatoires et les corticoïdes. A titre d'exemple, on peut plus précisément citer la possibilité de véhiculer les agents actifs suivants Classe thérapeutique Agents actifs Cardio-angéiologie Rutine Dermatologie Vitamine A acide Endocrinologie et Testosterone hormones Métabolisme Huiles riches en acide gamma linoléique acide eicosapentaenoique acide docosahexaenoique Rhumatologie Hydrocortisone AINS (anti-inflammatoires non stéroïdiens) Immuno allergologie Allergènes Grâce au choix d'un mélange lipidique dont la composition correspond à celle des cytomembranes lipidiques des cellules cibles que l'on désire traiter, il est ainsi possible d'injecter l'agent actif directement sur le site voulu où il va "attaquer" sélectivement les cellules cibles permettant ainsi, pour un effet et un rendement améliorés, de diminuer sa concentration et donc d'éviter autant que possible les effets secondaires. Les exemples susmentionnés ne sont, bien entendu, pas limitatifs et on peut envisager de nombreuses autres applications de l'invention, consistant notamment à faire rentrer un élément tel que du sodium dans une cellule déficiente. Dans tous les cas, la gaine lipidique constitue, grâce à sa composition sélective, un vecteur permettant d'améliorer la perméabilité de la cellule cible pour le produit actif. Il est également possible, selon une autre caractéristique de l'invention, d'incorporer dans la composition, en tant qu'agent actif, non pas un composé à proprement parler "traitant" mais une substance toxique sélective pour un agent pathogène, notamment un virus. Dans ce cas particulier, la gaine lipidique fait office de "leurre" pour piéger l'agent pathogène et faciliter son élimination. On pourrait utiliser cet aspect de l'invention pour la lutte contre le sida en enrobant de l'AZT dans dans une gaine lipidique dont la composition correspondrait à celle des cytomembranes lipidiques des leucocytes : le virus du sida pourrait en effet reconnaître les lipides constitutifs de la gaine qui correspondent à sa voie de pénétration normale dans les cellules et venir ainsi en contact avec l'AZT de façon à favoriser sa destruction. Le système lipidique du présent brevet peut être également utilisé comme véhicule de composants de vaccins nécessaires au renforcement de l'immunité humorale et cellulaire. Le mélange lipidique peut, bien entendu, être obtenu de manière quelconque sans pour cela sortir du cadre de l'invention, mais, il est particulièrement avantageux d'utiliser des lipides exclusivement d'origine végétale. En effet, et pour des raisons écologiques, on cherche actuellement à protéger au maximum les animaux et à éviter autant que possible de les utiliser au niveau du laboratoire : cette tendance actuelle, encouragée par les diverses ligues pour la protection des bêtes, fait que les produits d'origine animale sont de plus en plus mal acceptés. Indépendamment de ces préoccupations d'ordre philosophique, le développement des produits provenant du règne animal pourrait se trouver freiné dans l'avenir compte tenu de la reconnaissance actuelle chez les ruminants de nouveaux agents infectieux se développant au niveau du cerveau et des tissus nerveux et qui sont notamment responsables de la maladie dite des "vaches folles". Ces virus semblent en effet actuellement s'adapter à d'autres espèces, et il n'est pas exclu qu'ils puissent également se propager et se développer chez les humains, ce qui pourrait avoir des conséquences dramatiques. Le risque susmentionné a amené les chercheurs à utiliser de plus en plus les matières premières végétales ou les produits d'origine marine en remplacement de produits animaux, et ce, malgré des difficultés accrues liées au fait que les produits animaux se trouvent déjà dans un état partiellement ou totalement synthétisé tandis que l'utilisation de produits végétaux exige toujours des manipulations complémentaires pouvant s'avérer longues et coûteuses. Ces recherches ont, à titre d'exemple, et selon la demande FR 91 06 336 non publiée, permis l'obtention, notamment à partir de farine de céréales, d'un composé riche en glycolipides, lysophospholipides, sphingolipides, et céramides d'origine végétale. Or, on s'est rendu compte de manière surprenante que le produit obtenu à l'issue de la première variante de purification décrite dans ce document a une composition largement identique aux couches lipidiques présentes dans toutes les cellules de l'organisme humain, et donc peut avantageusement être utilisé conformément à l'invention. La formule de ce produit est, en effet, la suivante Céramides 90 % Lécithines 5 % Galactolipides 5 * à partir de ce produit, on a, à titre d'exemple, fabriqué une composition cosmétique ayant la formule suivante Vitamine E acétate 0,5 % Lécithine hydrogénée 0,5 % Céramides 0,5 % Vitamine A 0,1 % (1 000 000 UI/g) Conservateurs + Eau Cette composition s'est avérée particulièrement stable et a un toucher particulier qui plaît aux utilisatrices. REVENDICATIONS 1") Composition lipidique polaire permettant de véhicule un agent actif et/ou de le faire pénétrer dans une cellule cible, caractérisée en ce qu'elle est constituée par une émulsion aqueuse injectable topique ou ingérable d'un mélange lipidique dont la composition est essentiellement identique à celle des cytomembranes lipidiques des cellules. 2") Composition selon la revendication 1, caractérisée en ce que le mélange lipidique constitue l'agent actif. 3") Composition selon la revendication 2, destinée à faciliter l'élimination des plaques d'athérome caractérisée en ce qu'elle renferme, en tant qu'agent actif, un mélange lipidique dont le HLB est essentiellement compris entre 8 et 10. 4") Composition selon la revendication 1, caractérisée en ce que l'émulsion a une composition essentiellement identique à celles des cytomembranes lipidiques d'une cellule cible et renferme un agent actif enrobé dans une gaine du mélange lipidique. 5") Composition selon la revendication 4, caractérisée en ce que l'agent actif est un agent d'hydratation associé, le cas échéant, à des additifs tels que des vitamines A ou E. 6") Composition médicamenteuse selon la revendication 4, caractérisée en ce que l'agent actif est choisi dans le groupe formé par les antibiotiques, les anti-inflammatoires et les corticoïdes. 7") Composition médicamenteuse selon la revendication 4, caractérisée en ce que l'agent actif est une substance toxique sélective pour un agent pathogène notamment un virus. 8 ) Composition selon l'une quelconque des revendications 1 à 5, caractérisée en ce que le mélange lipidique est d'origine végétale. 9 ) Composition selon l'une quelconque des revendications 1 à 8, plus spécialement destinée au domaine de l'immuns allergologie, caractérisée en ce que l'allergène est véhiculé par le système glycolipidique pour stimuler la défense immunitaire. 10 ) Composition selon l'une quelconque des revendications 1 à 9, caractérisée en ce qu'elle constitue un système vecteur de composants de vaccins pour renforcer l'immunité humorale et cellulaire.