Brevet FR2671562A1 — publié le 19920717

La présente invention a pour objet un procédé de diagnostic d'un état dtinflammation ou de vieil:sseilent cellulaire des kératinocytes, ou de I'efficacité d'un traitement destiné à combattre ledit vieillissement cellulaire ou ladite inflammation. On sait que l'épiderme est constitué de cellules appelées kératinocytes qui se renouvellent constamment par division au niveau de la couche basale et qui se différencient progressivement et évoluent pour former une couche de cellules kératinisées et donner finalement le Stratum Corneum, formé de cellules mortes constituant la couche la plus externe de ltépiderme. On sait également que les cheveux sont produits dans des follicules pileux formés de gaines épithéliales d'origine épidermique et d'un bulbe (matrice) contenant des kératinocytes bullaires en état de division permanent pendant les phases de croissance du cheveu (phase anagène), ces phases de croissance alternant avec des phases de repos au cours desquelles le cheveu cesse de croître et '4tombe" alors naturellement. A la suite de cette chute naturelle du cheveu, la papille sous-jacente fabrique un nouveau follicule pileux, et le cycle recommence. Cn constate, principalement chez les hommes, que dans la zone constituant le sommet du crâne (verte), les cycles de production du cheveu s'arrêtent parfois précocement. C'est le phénomène de l'alopécie, qui n'est pas observé pour les zones du pourtour du crâne, et en particulier de la nuque On sait que ces phénomènes d'alopécie 5t accompagnent de diverses modifications des kératinocytes du follicule pileux, en particulier de la teneur en glutathion ou de la teneur en glutathion peroxydase, qui sont en diminution chez les sujets ayant une alopécie établie; voir notamment M.Kermici et al., Congrès IFSCC, New York, Octobre 1990. Cn a maintenant découvert que ces mlodifications, qui correspondent à un état de vieillissement cellulaire, sont déjà présentes chez les sujets non encore alopéciques, ou encore faiblement alopéciques. Il en va de même pour l'activité de catalase, présente dans les kératinocytes des follicules pileux, qui est augmentée dans les follicules pileux situés dans la "zone alopécique" des sujets alopéciques ou pré-aiopéciques. En dosant l'activité de ces divers marqueurs du vieillissement cellulaire, par comparaison avec la teneur en ces marqueurs des kératinocytes de follicule pileux situés dans les zones non alopéciques (nuque), il est possible de détecter les états pré-alopéciques permettant de prédire si un individu donné sera susceptible de "perdre ses cheveux précoceent. On sait par ailleurs que l'alopécie ut être combattue notamment gracie à l'utilisation du Minoxidil. Cependant, le traitement au Minoxidil n'est pas efficace chez certains individus non répondeurs (environ 40 % des cas traités). te Minoxidil a notamment pour effet de rétablir l'équilibre des activités enzymatiques entre les follicules pileux du vertex et de la nuque. Cependant, ce rétablissement n'est observé que chez certains sujets (répondeurs) tandis que chez d'autres sujets, (non répondeurs), on n'observe pas un tel rétablissement. Ces mcdifications de l'activité enzymatique, notamment chez les sujets prédisposés à l'alopécie, sont réversibles par le traitement avec le Minoxidil, généralement au bout de trois à six mois de traitement environ. On a cependant découvert que cet effet souhaitable, à savoir notamment le rétablissement, par le traitement au Minoxidil, de 11 équilibre de l'activité de glutathion peroxydase ou de la concentration de glutathion dans les follicules pileux de la zone du vertex, n'était possible que si cette activité ou cette concentration n'est pas déjà trop perturbée avant le traitement, car alors le rétablissement de l'équilibre par le Minoxidil ne peut plus autre obtenu.Ainsi, lorsque le rapport des concentrations ou activités de ces marqueurs du vieillissement dans la zone testée et dans la zone témoin non pathologique, est supérieur ou, selon les cas, est inférieur à un certain seuil (qui peut être déterminé préalablement par des expériences de routine), il devient alors possible, grâce au procédé de l'invention, de prévoir si le traitement au Minoxidil sera efficace chez un individu donné. Dans le cas de la catalase, au contraire, c' est lorsque l'activité de catalase est suffisamment augmentée, dans les follicules pileux du vertex par rapport à la nuque, que le traitement au Minoxidil sera efficace. Cette possibilité de prédiction est intéressante car les traitements au Minoxidil sont longs et coûteux. On a en outre découvert que des perturbations analogues, dans les teneurs des divers marqueurs mentionnés ci-dessus sont également présentes chez les kératinocytes de la peau, dans divers états pathologiques ou pré-pathologiques, ainsi que dans les états inflammatoires, ou encore dans des cas de vieillissement précoce des cellules de la peau non liés à une pathologie précise. Ici encore, en comparant la teneur en marqueurs du v1ei:J ssement cellulaire des kératinocytes de la zone testée avec celle des kératinocytes prélevés dans une zone de peau non pathologique, on obtient des informations permettant d'aider au diagnostic et de prescrire éventuellenier.t tLfl traitement adéquat. Le procédé de l'invention permet d'ailleurs également d'étudier les effets d'un tel traitement. En effet, ce procédé permet de vérifier si ledit traitement conduit à un retour à l'équilibre des teneurs en marqueurs dans la zone de peau traitée. I1 convient encore de remarquer que, dans certains cas, la comparaison des teneurs en marqueurs des kératinocytes de la zone étudiée ou traitée pourra être comparée avec des valeurs moyennes relevées, après étude préalable, chez un nombre représentatif d'individus comparables représentant des échantillons de populations pathologiques et non pathologiques. La présente invention a donc pour objet un procédé de diagnostic d'un état de vieillissement cellulaire ou d'inflammation de kératinocytes chez un individu, ou de l'efficacité d'un traitement destiné à combattre ledit vieillissement ou ladite inflammation, caractérisé par le fait que, d'une part, on prélève un échantillon de kératinocytes dans une zone soupçonnée d'être pathologique (susceptible de souffrir d'un état de vieillissement cellulaire ou dtun état inflammatoire), ou dans la zone traitée, que d'autre part, on prélève des kératinocytes dans une zone témoin non pathologique, ou dans une zone non traitée, que l'on détermine, selon des méthodes connues en soi, les teneurs en un agent marqueur dudit état de vieillissement cellulaire ou dudit état d'inflammation dans lesdits kératinocytes et que l'on compare lesdites teneurs entre les kératinocytes de la zone pathologique avec celles de la zone saine ou de la zone non traitée, et par le fait que ledit marqueur est choisi parmi la catalase, le glutathion et la glutathion peroxydase, étant entendu que l'augmentation de l'activité de catalase, ou la diminution de la teneur en glutathion ou de l'activité de glutathion peroxydase pour les kératinocytes de la zone pathologique, ou de la zone traitée, par rapport aux kératinocytes de la zone non pathologique, ou de la zone non traitée, constitue le signe d'un état de vieillissement ou d'un état inflammatoire. Selon un mode de réalisation du procédé, pour déterminer l'activité de catalase, on met en contact lesdits kératinocytes avec une quantité prédéterminée de peroxyde d'hydrogène ou d'hydroperoxyde, et on détermine à l'aide d'un système révélateur approprié si, après un temps prédéterminé (au bout duquel le révélateur5 au contact des kératinocytes de la zone témoin, permet de mettre en évidence la présence de peroxyde d'hydrogène ou d'hydroperoxyde), le peroxyde d'hydrogène ou lthydroperoxyde est présent, absent ou diminué dans les kératinocytes examinés, étant entendu que l'absence ou la diminution du peroxyde d'hydrogène ou de l'hydroperoxyde, par rapport aux kératinocytes de la zone témoin, est le signe d'une augmentation de l'activité de catalase, et inversement. Selon un mode de réalisation particulier, pour déterminer l'activité de la catalase, on met en contact les kératinocytes avec un agent révélateur susceptible d'être décoloré par le peroxyde d'hydrogène ou par un hydroperoxyde, que l'on ajoute une quantité prédéterminée de peroxyde d'hydrogène ou d'un hydroperoxyde, ou d'un système générateur de peroxyde d'hydrogène, et l'on détermine si au bout dudit temps prédéterminé, le réactif révélateur reste coloré, auquel cas l'activité de catalase dans les kératinocytes étudiés est augmentée, par rapport aux kératinocytes de la zone témoin, ce qui est le signe d'un état inflammatoire ou d'un état de vieillissement cellulaire ou d'une inefficacité du traitement. En particulier, pour déterminer l'activité de catalase, on met en contact lesdits kératinocytes avec un agent révélateur coloré susceptible d'être décoloré par le peroxyde d'hydrogène, et avec une oxydase et un substrat pour ladite oxydase, et on détermine si, après un temps prédéterminé, au bout duquel le réactif au contact des kératinocytes non pathologiques est décoloré, le réactif révélateur au contact des kératinocytes testés reste coloré, auquel cas l'activité de catalase dans les kératinocytes étudiés est augmentée, ce qui est le signe d'ure état inflammatoire ou d'un état de vieillissement cellulaire, ou d'une inefficacité dudit traitement. Le système générateur de peroxyde d'hydrogène peut être constitué par toute oxydase produisant du peroxyde d'hydrogène en présence d'un substrat adéquat (par exemple glucose dans le cas de la glucose oxydase). L'oxydase est par exemple la glucose oxydase ou la cholestétol oxydase. L'agent révélateur est notamment constitué par une peroxydase et par un agent coloré susceptible d'être décoloré par le peroxyde d'hydrogène ou par un hydroperoxyde en présence d'une peroxydvse. l'agent coloré est par exemple le 2,6-dichloroindophénol. Pour déterminer l'activité de la glutathion peroxydase, on met en contact lesdits kératinocytes avec une quantité prédéterminée de peroxyde d'hydrogène ou d'un hydroperoxyde, on ajoute du glutathion (forme réduite), de la glutathion réductase et son cofacteur (NADPH), et l'on mesure la quantité de NADPH consommée, qui est proportionnelle à l'activité de glutathion peroxydase. Pour déterminer la teneur en glutathion, on met en contact les kx.aLinocytes broyés avec un excès d'un agent oxydant capable de transforner le glutathion-forme réduite en glutathion-forme oxydée, et avec de la glutathion réductase et son cofacteur (NADPbt), et que l'on mesure soit la consommation de NADPH soit la quantité apparue de la forme réduite de l'oxydant. Dans le procédé de détermination du glutathion, l'agent oxydant est par exemple l'acide dithiobis-2-nitrobenzolque dont la forme réduite est l'acide 5-thio-2-nitrobenzoique. Les kératinocytes étudiés peuvent être ceux des bulbes pileux, en particulier ceux des cheveux. Selon ce mode de réalisation, on prélève les kératinocytes sous la forme d'un follicule pileux en phase anagène (obtenu par arrachage des cheveux). Dans des modes de réalisation particuliers - on compare les résultats obtenus entre un follicule pileux prélevé sur une zone alopécique ou potentiellement alopécique, et un follicule pileux prélevé sur une zone non potentiellement alopécique (nuque). - on calcule le rapport r de l'activité de catalase (cl) présente dans le follicule prélevé sur le vertex à l'activité de catalase (c2) dans le follicule prélevé sur la nuque, et l'on détermine si ce rapport est supérieur à une valeur prédéterminée rl, auquel cas si r est supérieur à rl, on peut prédire que le traitement de l'alopécie par le Minoxidil, chez l'individu examiné, sera efficace tandis qu'il sera inefficace si r est inférieur à rl ; la valeur rl peut être déterminée par des expériences de routine ; - on calcule le rapport r' de la concentration en glutathion ou de l'activité de glutathion peroxydase (cul) dans le follicule prélevé sur le vertex et la concentration en glutathion ou de l'activité de glutathion peroxydase (c'2) dans le follicule prélevé sur la nuque, et l'on détermine si ce rapport r' est situé dans un intervalle prédéterminé expérimentalement, auquel cas le traitement de l'alopécie par le Minoxidil, chez l'individu examiné, sera efficace, et sera inefficace dans le cas contraire. L'invention a également pour objet un nécessaire pour la mise en oeuvre du procédé décrit ci-dessus, caractérisé par le fait qutil comprend - du peroxyde d'hydrogène, ou un hydroperoxyde, ou des moyens capables de produire du peroxyde d'hydrogène in situ, ou un agent oxydant capable de transformer le glutathion-forme réduite en glutathion-forme oxydée, et/ou un agent réducteur (NADPH) capable de transformer le glutathion-forme oxydée en glutathion-forme réduite - des moyens pour déterminer la teneur ou l'activité en glutathion, glutathion peroxydase ou catalase - et éventuellement des supports ou conteneurs pour ledit échantillon. Dans des modes de réalisation particuliers, ledit nécessaire peut encore présenter les caractéristiques suivantes, prises isolément ou éventuellement, le cas échéant, en combinaison - lesdits moyens pour produire du peroxyde d'hydrogène in situ comprennent une oxydase. - lesdits moyens pour déterminer l'activité de catalase comprennent un réactif révélateur coloré susceptible d'être décoloré par le peroxyde d'hydrogène ; ledit réactif révélateur coloré peut comprendre une peroxydase et un agent coloré susceptible d'être décoloré par le peroxyde d'hydrogène en présence d'une peroxydase ; ledit agent coloré et ladite peroxydase peuvent être déposés sur ledit support, sous la forme d'un film à base d'un matériau polymère tel que la gélatine ; ledit film peut contenir également une oxydase - ledit nécessaire peut contenir en outre, dans un conteneur approprié, un substrat pour ladite oxydase - ledit nécessaire peut contenir en outre, dans des conteneurs appropriés, du glutathion, de la glutathion réductase et du NADPH - ou bien ledit nécessaire peut contenir en outre, dans des conteneurs appropriés, un agent oxydant capable de transformer le glutathion-forme réduite en glutathion-forme oxydée, de la glutathion réductase et du NADPH. On va maintenant décrire les méthodes utilisées pour établir les résultats exposés ci-dessus qui sont à la base de l'invention. ABREVIATIONS GSH : Glutathion GSSG : Glutathion oxydé * GSH-PX : Glutathion Peroxydase * GSSG-RD : Glutathion Réductase * F.P. : Follicule pileux * Activité enzymatique. MATERIELS et METHODES Les prélèvements Les prélèvements ont été réalisés sur des sujets volontaires. Après arrachage d'une vingtaine de cheveux, l'observation à la loupe binoculaire permet la sélection des follicules pileux en phase anagène. L'homogénéisation est effectuée 24 heures après le prélèvement dans 100 ul de tampon PBS Dulbecco pH 7.4. Les activités sont déterminées directement sur I' homo gé5rat. C'est essentiellement sur les cellules de la gaine épithéliale externe d'origine épidermique que les dosages sont effectués. Dosage de la glutathion peroxydase (GSE-PX) 10 jil d'homogénat sont dilués dans 200 p1 de tampon comprenant EH2P04 10 mM, EDTA I mM NaN3 1 mM, NaCl 10 mM et glucose 5 mM, pH 7,0. 30 pl d'un mélange contenant du NADPH 0,2 mM, du GSH 1 mM, de la GSSGRD 1 unité/ml sont ajoutés. Après 5 minutes de préincubation à 37 C, 30 ul d'une solution de tert-butyl-hydroperoxyde 0,25 mM ou H202 O,G9 mM sont ajoutés pour initier la réaction. L'auto-oxydation du NAPPE en présente de tert-butyl-hydroperoxyde est mesurée en parallèle, selon la méthode décrite par Paglia et Valentine, J. Lab. Clin. Med. (1967), 70, 158. Dosage du glutathion (oxydé et réduit) Sur un aliquot de l'homogénat, les protéines sont précipitées par une solution diacide 5-sulfosalicylique à 5 . Après centrifugation, le dosage du GSH est effectué selon la méthode enzymatique de Griffith et Meister, P.N.A.S., USA (1979), 76, 268. Le GSH est oxydé par l'acide 5,5'-dithiobis-2 nitrobenzoique (DTNB) avec formation stoechiométrique d'acide 5-thio-2-nitrobenzoique (TNB). Le glutathion oxydé est réduit en COSSE spécifiquement par la glutathion réductase en présence de NADPH. La formation de TNH est suivie spectrophotométriquement à 412 nm et est proportionnelle à la somme glutathion oxydé et réduit.En parallèle, une gamme de GSH est dosée dans les mêmes conditions (étalonnage). Les résultats sont exprimés en GSH/g dtADN. Dosage de l'ADN par la méthode au DApI(4-6-diamidino-2- phénylindole) La méthode d'extraction de l'ADN et le dosage sont décrits par Mener et Grudmann, Arch. Dermatol. Res. (1984), 276, 52. Le dosage s'effectue sur 10 pl d'échantillon et le complexe fluorescent ADN-DAPI est détermine avec lexc 360 nm etl ém 453 nm. Dosage de la CATALASE Ce dosage est effectué selon la méthode décrite par Hugo Aebi in "Methods of Enzymatic Analysis", l'ans Ulrich Bergmeyer Ed, Verlag Chemie Internat. Deersield Beach, Florida, Vol.2, pp.673-684 (1974). Mesure de la diminution de H202 (pH : 7 à 250C) à 240 nm ; (activité exprimée en pmoles H202 détruites par minute et par pg d'ADN). EXEMPLES DE REALISATION D1UN TEST On a réalisé un kit de diagnostic comprenant a) un système révélateur fixé dans un support de gélatine, b) un réactif (glucose), c) une échelle de référence adaptable à l'observation visuelle directe ou un système de lecture optique (photomètre, réfractomètre). Le système colorant révélateur est le 2-6 dichloroindophénol. Ce colorant est utilisé à une concentration de 10 à 200 mg.l La concentration usuelle est de 16 mg/l dans une solution de gélatine dans du tampon phosphate (pH = 7,4). La gélatine contient des enzymes - la glucose oxydase (0,2 unité/ml) - la peroxydase de raifort (0,16 unité/ml). Le complexe gélatine-colorant-enzymes est étalé sur lame de verre et séché de façon à avoir un film homogène. Le substrat de la glucose oxydase est du glucose (0,50 g/litre). Le dosage steffectue ainsi - Prélèvement d'un follicule pileux par arrachage près de la zone alopécique et/ou d'un follicule pileux par arrachage au niveau d'une zone non alopécique (nuque par exemple). Les follicules choisis sont en phase anagène. - Le follicule pileux est déposé sur la lame de verre (ou un autre support) contenant le film gélatine-enzymes. Une goutte de solution de glucose (20 pl) est déposée sur le follicule ainsi que sur une autre zone témoin. La lecture s 'effectue après 5 minutes à température ambiante (2C à 25au). La zone témoin stest décolorée en totalité. Au niveau de la racine du follicule pileux, la décoloration est plus ou moins inhibée. Dans le cas le plus simple, une référence à une gamme de bleu, et une gamme de taille calibrée, peut être faite grâce à un système de grossissement. Moins la décoloration du 2-6 dichloroindophénol est importante, plus le risque alopécique est grand. En effet, le système glucose oxydase/glucose produit "in situer de I'H2O2. Celui-ci décolore le colorant (2-6 dichloroindophénol) en présence de peroxydase. Le follicule pileux, par l'activité catalase élevée, décompose 1'X202 produit. REVENDICATIONS 1. Procédé de diagnostic d'un état de vieillissement cellulaire ou d'inflammation de kératinocytes chez un individu, ou de l'efficacité d'un traitement destiné à combattre ledit vieillissement ou ladite inflammation, caractérisé par le fait que, d'une part, on prélève un échantillon de kératinocytes dans une zone soupçonnée d'être pathologique (susceptible de souffrir d'un état de vieillissement cellulaire ou d'un état inflammatoire), ou dans la zone traitée, que d'autre part, on prélève des kératinocytes dans une zone témoin non pathologique, ou dans une zone non traitée, que l'on détermine, selon des méthodes connues en soi, les teneurs en un agent marqueur dudit état de vieillissement cellulaire ou dudit état d'inflammation dans lesdits kératinocytes, et que lton compare lesdites teneurs entre les kératinocytes de la zone pathologique avec celles de la zone saine ou de la zone non traitée, et par le fait que ledit marqueur est choisi parmi la catalase1 le glutathion et la glutathion peroxydase, étant entendu que l'augmentation de l'activité de catalase, ou la diminution de la teneur en glutathion ou de l'activité de glutathion peroxydase pour les kératinocytes de la zone pathologique, ou de la zone traitée, par rapport aux kératinocytes de la zone non pathologique, ou de la zone non traitée, constitue le signe d'un état de vieillissement ou d'un état inflammatoire. 2. Procédé selon la revendication 1, caractérisé par le fait que, pour déterminer l'activité de catalase, on met en contact lesdits kératinocytes avec une quantité prédéterminée de peroxyde d'hydrogène ou d'hydroperoxyde, et on détermine à l'aide d'un système révélateur approprié si, après un temps prédéterminé (au bout duquel le révélateur, au contact des kératinocytes de la zone témoin, permet de mettre en évidence la présence de peroxyde dthydrogène ou d'hydroperoxyde), le peroxyde d'hydrogène ou lthydroperoxyde est présent, absent ou diminué dans les kératinocytes examinés, étant entendu que l'absence ou la diminution du peroxyde dthydrogène ou de lthydroperoxyde, par rapport aux kératinocytes de la zone témoin, est le signe d'une augmentation de l'activité de catalase, et inversement. 3. Procédé selon la revendication 2, caractérisé par le fait que, pour déterminer l'activité de catalase, on met en contact les kératinocytes avec un agent révélateur susceptible d'être décoloré par le peroxyde d'hydrogène ou par un hydroperoxyde, que l'on ajoute une quantité prédéterminée de peroxyde d'hydrogène ou d'un hydroperoxyde, et que l'on détermine si au bout dudit temps prédétermine, le réactif révélateur reste coloré, auquel cas l'activité de catalase dans .c kératinocytes étudiés est augmentée, par rapport aux kératinocytes de la zone témoin, ce qui est le signe d'un état inflammatoire ou d'un état de vieillissement cellulaire, ou d'une inefficacité du traitement. 4. Procédé selon la revendication 1, caractérisé par le fait que, pour déterminer l'activité de catalase, on met en contact lesdits kératinocytes avec ur. agent révélateur coloré susceptible d'être décoloré par le peroxyde d'hydrogène, et avec une oxydase et un substrat pour ladite oxydase, et on détermine si, après un temps prédéterminé, au bout duquel le réactif au contact des kératinocytes non pathologiques est décoloré, le réactif révélateur au contact des kératinocytes tests reste coloré, auquel cas l'activité de catalase dans les kératinocytes étudiés est augmentée, ce qui est le signe d'un état inflammatoire ou Q un état de vieillissement cellulaire, ou d'une inefficacité dudit traitement. 5. Procédé selon la revendication 4, caractérisé par le fait que ladite oxydase est la glucose oxydase. 6. Procédé selon l'une quelconque des revendications 3 à 5, caractérisé par le fait que ledit système révélateur est constitué par une peroxydase et par ur: agent coloré susceptible d'être décoloré par le peroxyde d'hydrogène ou par un hydroperoxyde en présence d'une peroxydase. 7. Procédé selon la revendication 6, caractérisé par le fait que l'agent coloré est le 2,6-dichloroindophénol. 8. Procédé selon la revendication 1, caractérisé par le fait que pour déterminer l'activité de la glutathion peroxydase, on met en contact lesdits kératinocytes avec une quantité prédéterminée de peroxyde d'hydrogène ou d'un hydroperoxyde, on ajoute du glutathion (forme réduite), de la glutathion réductase et son cofacteur (NsADPH), et l'on mesure la quantité de NAPPE consommée, qui est proportionnelle à l'activité de glutathion peroxydase. 9. Procédé selon la revendication 1, caractérisé par le fait que pour déterminer la teneur en glutathion, on met en contact les kératinocytes broyés avec un excès d'un agent oxydant capable de transformer le glutathion-forme-réduite en glutathion-forme oxydée, et avec de la glutathion réductase et son cofacteur (NADPH), et que l'on mesure soit la consommation de NAPPE soit la quantité apparue de la forme réduite de l'oxydant. 10. Procédé selon la revendication 9, caractérisé par le fait que ledit agent oxydant est l'acide dithiobis-2-nitrobenzo-que. dont la forme réduite est l'acide 5-thio-2-nitrobenzoique. Il. Procédé selon l'une quelconque des revendications 2, 3 et 6 à 8, caractérisé par le fait que ledit hydroperoxyde est choisi parmi le tert-butyl hydroperoxyde, le cumène hydroperoxyde, ou un hydroperoxyde lipidique éventuellement présent dans ltéchantillon de kératinocytes. 12. Procédé selon l'une quelconque des revendications précédentes, caractérisé par le fait que lesdits kératinocytes sont prélevés sous la forme d'un follicule pileux en phase anagène. 13. Procédé selon la revendication 12, caractérisé par le fait que l'on comparue les résultats obtenus entre un follicule pileux prélevé sur une zone alopécique ou potentiellement alopécique (vertex), et un follicule pileux prélevé sur une zone non potentiellement alopécique (nuque). 14. Procédé selon la revendication 13, caractérisé par le fait que l'on calcule le rapport r de l'activité de catalase (cl) présente dans le follicule prélevé sur le vertex, à l'activité de catalase (c2) dans le follicule prélevé sur la nuque, et l'on détermine si ce rapport est supérieur à une valeur prédéterminée rl, auquel cas si r est supérieur à r1, on peut prédire que le traitement de l'alopécie par le Minoxidil, chez l'individu examiné, sera efficace tandis qu'il sera inefficace si r est inférieur à r1. 15. Procédé selon la revendication 8 ou 9, caractérisé par le fait que l'on calcule le rapport r' de la concentration en glutathion ou de l'activité de glutathion peroxydase (cul) dans le follicule prélevé sur le vertex à la concentration en glutathion ou l'activité de glutathion peroxydase (c' ) dans le follicule prélevé sur la nuque2 et l'on détermine si ce rapport r' est situé dans un intervalle prédéterminé expérimentalement, auquel cas le traitement de l'alopécie par la Minoxidil, chez l'individu examiné, sera efficace, et sera inefficace dans le cas contraire. 16. Nécessaire pour la mise ers oeuvre du procédé selon l'une quelconque des revendications précédentes, caractérisé par le fait qu'il comprend - du peroxyde d'hydrogène, ou un hydroperoxyde, ou des moyens capables de produire du peroxyde d'hydrogène in situ, ou un agent oxydant capable de transformer le glutathion-forme réduite en glutathion-forme oxydée, et/ou un agent réducteur capable de réduire le glutathion-forme oxydée en glutathion-forme réduite ; - des moyens pour déterminer la teneur ou l'activité en glutathion, glutathion peroxyda se ou catalase - et éventuellement des supports ou conteneurs pour ledit échantillon. 17. Nécessaire selon la revendication 16, caractérisé par le fait cue lesdits moyens pour produire du peroxyde d'hydrogène in situ comprennent une oxydase. 18. Nécessaire selon l'une quelconque des revendications 16 et 17, caractérisé par le fait que lesdits moyens pour déterminer l'activité de catalase comprennent un réactif révélateur coloré susceptible d'être décoloré par le peroxyde d'hydrogène. 19. Nécessaire selon la revendication 18, caractérisé par le fait que ledit réactif révélateur coloré comprend une peroxydase et un agent coloré susceptible d'être décoloré par le peroxyde d'hydrogène en présence d'une peroxydase. 20. Nécessaire selon la revendication 19, caractérisé par le fait que ledit agent coloré et ladite peroxydase sont déposés sur ledit support, sous la forme d'un film à base d'un matériau polymère tel que la gélatine 21. Nécessaire selon la revendication 20, caractérisé par ie fait que ledit film contient également une oxydase. 22. Nécessaire selon l'une quelconque des revendications 17 à 21, caractérisé par le fait qu'il contient en outre, dans un conteneur approprié, un substrat pour ladite oxydase. 23. Nécessaire selon l'une quelconque des revendications 16 et 17, caractérisé par le fait qu'il contient en outre, dans des conteneurs appropriés, du glutathion, de la glutathion réductase et du NADPH. 24. Nécessaire selon la revendication 16, caractérisé par le fait qu'il contient en outre, dans des conteneurs appropriés, un agent oxydant capable de transformer le glutathion-forme réduite en glutathion-forme oxydée, de la gluthation réductase et du NADPH.