Brevet FR2663851A1 — publié le 19920103

-.1- La présente invention se rapporte au domaine de la médecine et plus précisément à un protecteur de la cornée ainsi qu'à un procédé pour son obtention et elle peut être utilisée en chirurgie ophtalmique dans le cas5 de l'extraction de cataractes de différentes étiologies, d'implantation de cristallin artificiel et de kératoplastie. On utilise actuellement, à titre de protecteur de la cornée, des substances visqueuses dont l'une est un dérivé de cellulose, la méthylcellulose. On connait un protecteur de la cornée ainsi que le procédé pour son obtention (British Journal of Ophtalmology, 1983, 67, 259-263) formé d'une solution à 2 % de méthylcellulose dans une solution aqueuse à 0, 85 % de chlorure de sodium ou dans une solution de Ringer, sans conservateur Le procédé d'obtention du protecteur indiqué consiste à dissoudre la méthylcellulose dans un solvant bouillant, à refroidir la solution obtenue, à y ajouter un solvant glacé, à20 congeler la solution préparée et à l'abandonner pour la nuit à une température comprise entre moins 100 C et 00 C Ensuite, on filtre la solution (dimension des pores de 16 pm à 0,5 Fm), on l'emballe dans des flacons et on la soumet à une stérilisation Le protecteur indiqué25 est caractérisé par une haute concentration de la solution de méthylcellulose ce qui rend difficile son évacuation de l'oeil après l'opération et favorise une hypertension durable ( 24 heures et plus), une iridocyclite en conséquence d'un long séjour (plus de30 6 jours) des résidus de préparation dans la chambre antérieure de l'oeil et de leur élution indispensable après l'opération. En outre, le protecteur indiqué a une dimension des globules qui dépasse la dimension physiologique 3, des pores ( 0,67 micron), ce qui rend difficile son j w -2- évacuation par les voies naturelles. On s'est donc proposé, par des modifications qualitatives et quantatives de la base du protecteur, d'obtenir un protecteur de la cornée diminuant le traumatisme de celle-ci, réduisant les complications opératoires et postopératoires, permettant son évacuation accélérée de l'oeil par les voies naturelles et d'élaborer un procédé pour son obtention. Selon l'invention, le protecteur de la cornée à base d'un dérivé de cellulose contient, en tant que dérivé de cellulose, du Tylose (Marque déposée)et il est constitué d'une solution à 0,7-0,8 % de Tylose dispersé ayant une dimension des globules ne dépassant pas 0,4 um, dans un mélange d'une solution aqueuse à 0,85 % de chlorure de sodium et d'une solution tampon à p H = 7,2-7,4. Dans le proçédé d'obtention du protecteur de la cornée selon l'invention qui comprend la préparation d'une solution du dérivé de cellulose, la filtration de la solution obtenue, selon l'invention, on utilise, à titre de dérivé de cellulose, du Tylose et on prépare sa solution à 0,7- 0,8 % dans un mélange d'une solution aqueuse à 0,85 % de chlorure de sodium et d'une solution tampon à p H = 7,2-7,4, à partir de la solution obtenue par centrifugation, avec une séparation subséquente de la solution qui surnage et sa filtration, on isole une fraction contenant le Tylose une dimension des globules ne dépassant pas 0,5 um. Le protecteur selon l'invention a une concentration en dérivé de cellulose ou Tylose qui est plus faible que celle du protecteur connu, ce fait contribuant à son évacuation de l'oeil après l'opération. En outre, les dimensions de ses globules (ne dépassant pas 0,4 um sont inférieures aux dimensions physiologiques des pores, ce qui favorise leur -3- filtration naturelle et leur évacuation accéléré de l'oeil par voie naturelle L'utilisation du protecteur selon l'invention permet de diminuer le traumatisme de la cornée et de réduire les complications opératoires et postopératoires. Le protecteur selon l'invention a été essayé dans des expériences portant sur des animaux et en clinique sur des êtres humains. Le protecteur, selon l'invention contient, comme base, le Tylose ou cellulose méthylique qui est un dérivé de cellulose. La toxicologie des éthers et des esters de cellulose est méticuleusement étudiée et ces éthers et esters sont largement utilisés dans la pratique pharmaceutique Pour la caractéristique toxico-hygiénique du protecteur selon l'invention,son action éventuelle sur les tissus de l'oeil a été étudiée dans des conditions d'utilisation clinique Une attention particulière a été attribuée à une action locale et à l'immunogénicité du protecteur, étant donné que cette dernière peut se manifester en doses atoxiques. Les recherches ont été réalisées selon un programme fondé sur les critères toxico-hygiéniques de réglementation des matériaux polymères pour une utilisation intraoculaire. Les études ont été réalisées sur 25 lapins ( 5 animaux servant de témoins) 9 séries d'essais ont été effectuées. La détermination des indices (p H, pouvoir de bromuration, oxydabilité et spectroscopie infra-rouge de Fourier) du protecteur selon l'invention a montré qu'il possédait des niveaux atoxiques des indices. Le protecteur selon l'invention est caractérisé par une faible hausse du niveau d'oxydabilité, ce qui est dû aux caractéristiques physicochimiques de cette -4- préparation et, dans le cas de son court séjour dans la chambre antérieure de l'oeil avec une élution subséquente, il ne peut provoquer d'action toxique. L'absence de toxicité est confirmée par les résultats du test des "cellules vivantes": le protecteur selon l'invention n'influence pas le métabolisme des cellules du sperme de boeuf La durée de survie des cellules dans l'essai ne se différencie pas de celle des témoins.10 Des instillations du protecteur non dilué selon l'invention ont été réalisées sur 3 lapins à raison d'une goutte trois fois par jour, pendant trois jours, ce qui correspond à l'exigence à laquelle doit répondre l'étude de la substance utilisée une seule fois.15 Aucune réaction inflammatoire ni indice d'irritation n'a été observée La conjonctive fut calme, sans injection des vaisseaux du sac conjonctival et de l'épisclérotique La cornée fut transparente, brillante, de glace Les secteurs profonds de la20 chambre antérieure ne furent pas modifiés. On a réalisé la biomicroscopie de l'oeil du lapin. 12 yeux ont été étudiés chez 7 lapins. Les délais de l'étude étaient respectivement de 1 heure, 24 heures, 48 heures, 72 heures, 7 jours, 1 mois Le tableau biomicroscopique a été évalué selon la classification des degrés de réaction que nous avons élaborée: O degré développement aréactif: l'oeil est calme, les milieux sont transparents, l'iris est en relief, le matériau implanté est intact; 1 er degré réaction faiblement exprimée: oedème de l'épithélium de la cornée dans le domaine de la chambre antérieure, fibrine ou précipitation sur l'implantat, oedème, hypérémie du bord pupillaire de35 l'iris, ou faible irritation de tout l'iris; 2 ème degré réaction de gravité moyenne: oedème -5- de l'épithélium de la moitié de la cornée, rares plis de la membrane de Descemet, fibrine dans l'humidité de la chambre antérieure, exsudat sur la lentille, oedème exprimé, dilatation vasculaire de l'iris;5 3 ème degré réaction très manifeste: oedème de toute la cornée, épaississement du stroma, descemétite rude, exsudat, hypopoyon, hypohémie dans la chambre antérieure, exsudation exprimée sur l'implantat, synéchies jusqu'à son soudage, exsudat sur l'iris,10 vaisseaux nouveaux formés. Dans tous les cas, sur le tableau biomicros- copique, on a observé une réaction nulle de la cornée, y compris de l'endothélium, de l'humidité de la chambre antérieure, de l'iris, ce qui correspond complètement à15 une atoxicité du protecteur selon l'invention introduit à une dose de 0,1 ml d'une façon adéquate à la dose d'introduction en clinique. L'étude de l'endothélium de la cornée après argentage d'après Smoline a été réalisée au moyen d'une classification qui a été élaborée auparavant: 1-2 degré coloration non uniforme des cellules, conservation de la forme et des dimensions, disposition de rangées, présence de lésions zonales, conservation de la densité des cellules au centre et à la25 périphérie, état des composés intercellulaires les modifications suivant ces paramètres sur une surface pouvant atteindre 50 %. 3-4 degré lésion rude des cellules de type paranécrose (augmentation brusque de la perméabilité du protoplasme, sa coloration diffuse, violation de la structure) et nécrose (rétraction, décomposition,résorption des noyaux et lysis de toute la cellule) sur une surface de plus de 20 %, ou 1-2 degré plus de 50 %.35 Dans tous les cas étudiés dans le groupe témoin, la réaction était de moins de 1 degré, dans les essais -6- avec tous les délais, y compris 1 mois, on a observé une réaction de 1-2 degré sur une surface de moins de % de la cornée, ce qui témoigne de l'absence de toxicité du protecteur d'après le test donné. L'étude pathohistologique a été réalisée sur 4 yeux d'essai et 4 yeux témoins dans des délais de 2, 3 et 7 jours La solution tampon et la solution de Hanks ont servi de témoins. L'état des yeux dans tous les délais de l'étude fut identique. Outre l'endroit de piqûre de l'aiguille d'injection pour l'introduction du protecteur selon l'invention,il n'y a pas eu d'autres lésions de la cornée et de l'iris L'humidité de la chambre antérieure fut transparente, au délai le plus court, elle était plus éosinophile que chez les témoins. Les milieux plus profonds étaient également transparents, l'uvée, la rétine, le nerf optique, sans modifications L'étude de l'immunigénicité du protecteur selon l'invention a donné un résultat négatif En effet, les recherches portant sur l'étude de l'action de lésions locale et générale, ainsi que de l'immunigénicité du protecteur selon l'invention ont montré son inertie et la possibilité de son utilisation25 sur une courte durée dans des opérations ophtalmochirurgiques au secteur antérieur du globe oculaire. Les recherches cliniques du protecteur selon l'invention ont été réalisées sur plus de 10000 malades soumis à une opération ophtalmique concernant l'extraction de la cataracte de différentes étiologies, l'implantation d'un système artificiel et une kératoplastie. Le protecteur selon l'invention est utilisé comme suit:lors de l'extraction de cataractes, on réalise une incision cornéosclérale de 3 mm de dimension, on -7- prélève le liquide de la chambre antérieure de l'oeil. Ensuite, on introduit dans la chambre antérieure, à l'aide d'une seringue, une solution à 0,7-0,8 % de Tylose ayant une dimension des globules ne dépassant5 pas 0,4 pm Au moyen d'un cystotome, la capsule antérieure du cristallin est détruite, on évacue le noyau et les masses du cristallin Le protecteur de la chambre antérieure n'est pas sorti, on applique les sutures à l'incision cornéosclérale.10 Dans le cas d'une kératotomie, avant l'opération, on applique, à la zone optique centrale de la cornée de l'oeil, goutte à goutte, une solution à 0,7-0,8 % de Tylose ayant une dimension des globules ne dépassant pas 0,4 pm et on effectue l'opération.15 Les études cliniques ont montré que, ni durant l'opération, ni après celle-ci (de 24 heures jusqu'à 6 jours), on a observé chez les malades une augmentation de la pression intra-oculaire, ni complications. Le procédé d'obtention du protecteur selon l'invention est le suivant. On prépare une solution à 0,7-0,8 % de Tylose dans un mélange d'une solution aqueuse à 0,85 % de chlorure de sodium et d'une solution tampon à p H = 7,2-7,4 La concentration de Tylose ne peut être inférieure à 0,7 %25 étant donné que, dans ce cas,la viscosité de la solution est plus faible quel OGO c St,la possibilité d'un approfondissement mécanique de la chambre antérieure est alors perdue lors de l'opération intra-oculaire Une valeur de concentration supérieure30 à 0,8 % peut aboutir à une augmentation de la viscosité de la solution et de la pression intra-oculaire. La grandeur du p H de la solution tampon entre 7,2 et 7,4 est importante pour la conservation du système tampon normal de la chambre antérieure de l'oeil de35 l'homme et du fonctionnement de l'endothélium, un p H inférieur à 7,2 conduisant à un aigrissement de -8- l'humidité de la chambre et à une acidose de l'endothélium, une augmentation du p H au delà de 7,4 conduisant à une alcalose et à un déplacement du métabolisme des cellules La dissolution du Tylose et toutes les opérations subséquentes sont réalisées à une température de 40 C, étant donné que l'augmentation de la température conduit à une altération de la qualité du protecteur. On poursuit la dissolution pendant 24 heures puis on brasse le Tylose pendant au moins 10 minutes pour un passage complet de toute la masse à l'état dissous La masse est soumise à une centrifugation pour la précipitation des gros agrégats de Tylose Après la centrifugation, la solution qui surnage est coulée et brassée pour obtenir une concentration uniforme d'agrégats dans tout le volume de la solution La durée du brassage est d'au moins 1 heure Ensuite, la solution est soumise à une filtration successive sur des membranes de filtre ayant un diamètre de pores ne dépassant pas 0,4 um, étant donné qu'une plus grande dimension des agrégats conduit à l'obstruction de Shlemov du canal de la chambre antérieure de l'oeil La solution obtenue subit une stérilisation. D'autres caractéristiques et avantages de l'invention ressortiront de la lecture de la description qui suit d'exemples d'obtention du protecteur selon l'invention ainsi que d'essais cliniques. Exemple 1. On ajoute 1 g de Tylose pulvérulent à 100 ml de mélange d'une solution aqueuse à 0,85 % de chlorure de sodium et d'une solution tampon à p H 7, 2-7,4 Au bout de 24 heures de dissolution dans un réfrigérant à la température de + 40 C, on brasse la solution de Tylose pendant 1 heure, portant la concentration de la solution jusqu'à 0,7 % en poids. -9- La solution de Tylose obtenue est placée dans une centrifugeuse o elle subit une centrifugation pendant 1 heure à une vitesse de 28000 t/mn La solution qui surnage est coulée au froid à une température de + 4 %C et elle est brassée 10-15 minutes La solution de Tylose est prélevée au moyen d'une seringue et elle est filtrée sur une membrane ayant un diamètre de pores de 0,4 um. Le protecteur obtenu a été essayé en clinique. Le malade A, âgé de 34 ans, était en observation pour une cataracte mûre de l'oeil gauche, dont l'acuité visuelle était, avant opération: photosensation avec projection correcte Le malade a subi l'opération de l'extraction extracapsulaire de la cataracte avec implantation d'une lentille intra-oculaire La solution à 0,7 % de Tylose ayant une dimension des globules de 0,2 um à 0,4 um a servi de protecteur L'acuité visuelle après l'opération était de 0,7 On n'a pas observé de complications opératoires ni post- opératoires. Exemple 2. On a ajouté 1 g de Tylose pulvérulent à 100 ml d'un mélange d'une solution aqueuse à 0,85 % de chlorure de sodium et d'une solution tampon de phosphate à p H = 7,2-7,4 Au bout de 24 heures de dissolution dans un réfrigérant à une température de 40 C,on a brassé 1 heure la solution de Tylose, en portant sa concentration à 0,75 % en poids On a placé la solution de Tylose obtenue dans une centrifugeuse o elle a subi une centrifugation pendant 1 heure à 28000 t/m. Ensuite, la solution surnageante de Tylose a été coulée et mélangée à froid ( 40 C) durant 10-15 minutes La solution de Tylose a été prélevée au moyen d'une seringue et filtrée sur une membrane ayant un diamètre membrane des pores de 0,4 um Le protecteur obtenu a été essayé en clinique. -10- Le malade B, âgé de 60 ans, était en observation pour une cataracte mûre de l'oeil droit dont l'acuité visuelle avant l'opération était une photosensation avec projection correcte Le malade a subi une opération d'extraction extracapsulaire de la cataracte suivie d'une implantation d'une lentille intra-oculaire Une solution à 0,75 % de Tylose ayant une dimension des globules de 0,2 à 0,4 um a servi de protecteur Le protecteur est resté dans la chambre antérieure L'acuité visuelle de l'oeil droit, après opération, était de 0,5 On n'a pas observé de complications opératoires ni postopératoires. Exemple 3 On ajoute 1 g de Tylose pulvérulent à 100 ml d'une solution aqueuse à 0,85 % de chlorure de sodium et d'une solution de tampon de phosphate avec p H = 7,2-7,4 Au bout de 24 heures de dissolution du Tylose dans un réfrigérant (température de 4 C), la solution de Tylose obtenue est brassée pendant 1 heure, en portant sa concentration à 0,8 % en poids La solution de Tylose est placée dans une centrifugeuse et est soumise à une centrifugation pendant 1 heure à 28000 t/mn Ensuite,la solution surnageante est coulée au froid et est brassée pendant 10-15 minutes La solution de Tylose est prélevée à l'aide d'une seringue et filtrée sur une membrane ayant un diamètre des pores de 0,4 um. Le protecteur obtenu a été essayé en clinique. Le malade C, âgé de 59 ans, était en observation à propos d'une cataracte mûre de l'oeil gauche avec pour acuité visuelle: photosensation avec projection correcte L'opération de l'extraction extracapsulaire a été réalisée avec implantation d'une lentille intra- oculaire. La solution à 0,8 % de Tylose avait une dimension des agrégats globulaires de 0,2 à 0,4 um Le protecteur -11- est resté dans la chambre antérieure L'acuité visuelle de l'oeil gauche, après opération, était de 0,2 On n'a observé ni complications opératoires ni postopératoires.5 Le protecteur selon l'invention a une faible concentration en Tylose, ce qui favorise son évacuation accélérée de l'oeil après l'opération En outre, les dimensions des globules de Tylose (ne dépassant pas 0,4 pm) sont inférieures aux dimensions physiologiques des pores, ce qui contribue à une filtration naturelle et à une évacuation accélérée de l'oeil par les voies naturelles L'utilisation du protecteur selon l'invention permet de diminuer le traumatisme de la cornée et de réduire les complications opératoires et15 postopératoires. 4 k -112- REVENDICATIONS 1 Protecteur de la cornée à base d'un dérivé de cellulose, caractérisé en ce qu'il contient, à titre de dérivé de cellulose, du Tylose et est constitué d'une solution à 0,7-0,8 % de Tylose dispersé ayant une dimension des globules ne dépassant pas 0,4 um, dans un mélange d'une solution aqueuse à 0,85 % de chlorure de sodium et d'une solution tampon à p H = 7,2 à 7,4. 2 Procédé d'obtention du protecteur de la cornée selon la revendication 1, comprenant la préparation de la solution du dérivé de cellulose ainsi que la filtration de la solution obtenue, caractérisé en ce qu'on utilise du Tylose en tant que dérivé de cellulose et on prépare une solution à 0,7-0,8 % de Tylose dans un mélange d'une solution aqueuse à 0,85 % de chlorure de sodium et d'une solution tampon à p H = 7,2-7,4, en ce que la solution obtenue est soumise à une centrifugation avec séparation de la solution surnageante,avec filtration subséquente et isolement d'une fraction contenant du Tylose avec une dimension des globules de 0,4 um au plus.