Brevet FR2664594A1 — publié le 19920117

-1 i 2664594 La présente invention a pour objet des polyméthylène-imines disubstituées, leur procédé de préparation et les compositions pharmaceutiques les renfermant. Elle concerne particulièrement les, polyméthylène-imines de formule générale I: R 1 N |_ R 2 (I) R (Y)m R N X R 4 R 4 t (Y')n dans laquelle: a) X représente le groupe CH ou un atome d'azote; b) A représente un groupe polyméthylène- imine de formule: (CH 2) B- q -N dans laquelle: B est un hétéroatome oxygène ou soufre ou un radical NR' dans lequel R' représente un atome d'hydrogène ou un radical alkyle ou alkényle contenant jusqu'à 5 atomes de carbone, et q est un nombre entier de 1 à 3; -2 2664594 c) R 1, R 2, R 3, R 4 qui sont identiques ou différents, représentent chacun un atome d'hydrogène, un radical alkyle contenant de 1 à 6 atomes de carbone en chaîne droite ou ramifiée, éventuellement substitué par un atome d'halogène, un ou plusieurs radicaux hydroxy ou un radical aminé: -N (R 5 R 6) dans lequel R 5 et R 6, identiques ou différents, représentent chacun un atome d'hydrogène ou un radical alkyle contenant de 1 à 6 atomes de carbone en chaîne droite ou ramifiée ou R 5 et R 6 forment ensemble avec l'atome d'azote auquel ils sont liés un hétérocycle contenant de 4 à 6 atomes de carbone et éventuellement un autre hétéroatome: oxygène ou soufre; un radical alkényle ou alkynyle contenant chacun de 2 à 6 atomes de carbone ou un radical cycloalkyle contenant de 3 à 6 atomes de carbone ou chacun des couples Rj, R 2 et/ou R 3, R 4 forment ensemble avec l'atome d'azote auquel ils sont liés un hétérocycle contenant de 4 à 6 atomes de carbone et éventuellement un autre hétéroatome: oxygène ou soufre d) Z représente un radical hydrocarboné contenant de 1 à 5 atomes de carbone en chaîne droite ou ramifiée; e) R représente un atome d'hydrogène, un radical alkyle contenant de 1 à atomes de carbone en chaine droite ou ramifiée, un radical alkényle contenant de 2 à 5 atomes de carbone en chaîne droite ou ramifiée, ou un radical phényle éventuellement substitué par (Y)m ou (Y')n; f) Y et Y', qui sont identiques ou différents, représentent chacun un atome d'hydrogène ou d'halogène, un radical trifluorométhyle ou un radical alkyle ou alkoxy contenant chacun de 1 à 5 atomes de carbone; -3- g) m et n, qui sont identiques ou différents, représentent chacun les nombres entiers 1 ou 2. L'état antérieur de la technique est illustré notamment par le brevet français n 2 524 467 qui a pour objet les polyméthylène-imines de formule: NH A' N X' (CH 2)n, A' HN A N " N C Y" -CH B R' dans laquelle: A' est un radical alkényle de C 3 à C 5 éventuellement substitué par un ou plusieurs OH; X' représente CH ou N; n' représente zéro, un ou deux; Y" représente O ou N-R'IlR'l étant hydrogène, (C 1 C 5) alkyle ou hydroxyalkyle, (C 2 C 5) alkényle, ou (C 3 C 7) cycloalkyle ou cycloalkénylel; R' est hydrogène, (C 1 C 5) alkyle, (C 5 C 7) cycloalkyle ou phényle éventuellement substitué, et -4- B est notamment (C 1 C 5) alkyle, (C 2 C 5) alkényle, phényle, naphtyle, benzofurannyle, benzothiényle, benzodioxolyle, benzodioxannyle, benzodioxinnyle, A 3 chroményle, thio-chroményle ou chromanyle; lesquelles polyméthylène-imines favorisent la captation d'oxygène et peuvent ainsi être utilisées dans le traitement du déclin cérébral. Des modifications importantes de structure ont conduit aux dérivés de formule I de la présente invention, lesquels présentent une activité pharmacologique et thérapeutique particulièrement intéressante et totalement différenciée de celle des dérivés proches antérieurement connus, comme le prouve l'étude pharmacologique décrite dans l'exemple 26. La présente invention a également pour objet le procédé de préparation des dérivés de formule générale I caractérisé en ce que l'on condense: soit une polyméthylène-imine de formule générale II: / Rl N R> (II) R 3 N X NM N A H R 4 / dans laquelle X, A, R 1, R 2, R 3 et R 4 ont les significations précédemment définies, sur un dérivé de formule générale III R 1 JY)M T Z C (III) 2664594 dans laquelle Z, R, Y, Y', m et N ont les significations précédemment définies et T représente un atome d'halogène tel que par exemple un atome de chlore ou de brome ou un reste tosyloxy soit un dérivé halogéné de formule générale IV: R 1 N R 2 tR 2 (IV) N X N C 1 R./ R 4 N dans laquelle X, R 1, R 2, R 3 et R 4 ont les significations précédemment définies, sur une polyméthylène-imine de formule générale V: R H-A-Z-C (Y)m (V) (Y')n dans laquelle A, Z, R, Y, Y', m et N ont les significations précédemment i O définies. La condensation des dérivés II et III s'effectue de préférence dans un solvant choisi parmi les alcools contenant 4 ou 5 atomes de carbone, le diméthyl formamide, le déméthylacétamide, l'acétonitrile ou le tétrahydrofuranne. :1 5 Il est avantageux d'opérer à une température comprise entre 80 et C en présence d'un accepteur de l'acide formé au cours de la réaction Cet accepteur peut être choisi parmi les carbonates alcalins comme le carbonate de potassium, la triéthylamine ou un excès du dérivé II utilisé pour la condensation. D'autre part, dans le cas o B représente un atome d'oxygène ou de soufre (ce qui entraîne BH = OH ou SH) il est judicieux d'employer de l'hydrure de sodium pour soder préalablement le dérivé II. La condensation des dérivés IV et V s'effectue de façon particulièrement adéquate dans un solvant choisi parmi les alcools contenant 4 ou 5 atomes de carbone tel que le butanol ou le pentanol, et les amides aliphatiques comme le diméthylformamide ou le diméthylacétamide Il est recommandé d'opérer à une température comprise entre 120 et 150 WC en présence d'un accepteur de l'hydracide formé au cours de la réaction Cet accepteur peut être choisi parmi les carbonates alcalins comme le carbonate de potassium, la triéthylamine ou un excès du dérivé V utilisé pour la condensation. Dans le cas o B représente un atome d'oxygène ou de soufre (ce qui entraine BH = OH ou SH) il est judicieux d'employer de l'hydrure de sodium pour soder le dérivé V. La présente invention a aussi pour objet le procédé de préparation des dérivés I dans le cas o B représente le radical NR', c'est à dire plus spécifiquement des dérivés de formule générale I' R 1 N R 2 N X R (Y)n R 3 / R 4 NI - (Y')m -6 - dans laquelle X, Z,R, R 1, R 2, R 3, significations précédemment définies polyméthylène-imine de formule: R 4, Y, Y', m et N ont les et A' représente un groupe X (CH 2)q N- N > R' dans laquelle q et R' ont les significations précédemment définies. caractérisé en ce que l'on traite par le mélange de: cyanoborohydrure de sodium un la cétone de formule générale VI: R 1 N |\ R 2 R 3, N X R 1 1 R 4 (VI) (CH 2)q dans laquelle X, R 1, R 2, R 3, R 4 et q ont les significations précédemment définies, et de l'amine de formule générale VII: R I H N Z C l l (Y)m (VII) R' -7- -8 2664594 dans laquelle R', Z, R, Y, Y', m et N ont les significations précédemment définies. Il est particulièrement avantageux d'opérer dans un solvant approprié comme les alcools à bas poids moléculaire tel que par exemple le méthanol ou l'éthanol, ou le tétrahydrofuranne, à une température comprise entre 20 et 25 WC à un p H voisin de 6. Les matières premières utilisées dans les procédés précédemment décrits sont soit des produits connus, soit des produits préparés à partir de substances connues, selon des procédés décrits pour préparer des produits analogues comme indiqué dans les exemples suivants. Les dérivés de formule générale I peuvent être transformés en sels d'addition avec les acides, sels qui font, à ce titre, partie de l'invention Comme acides utilisables pour la formation de ces sels, on peut citer, par exemple, dans la série minérale les acides chlorhydrique, bromhydrique, sulfurique, phosphorique et dans la série organique, les acides acétique, propionique, maléique, fumarique, tartrique, nitrique, oxalique, benzoïque, méthane sulfonique et iséthionique. D'autre part, dans le cas o Z est une chaine ramifiée et ou Y et Y' sont différents l'un de l'autre et différents d'un atome d'hydrogène, les dérivés (I) peuvent se présenter sous forme de diastéréoisomères ou d'énantiomères qui font, à ce titre, également partie de l'invention. Les nouveaux dérivés (I) peuvent être purifiés par des méthodes physiques telles que cristallisation des bases, chromatographie (en particulier chromatoflash sur silice 35-70 li, sous une pression de 0,5 à 1 atmosphère d'azote, avec comme système d'élution: CH 2 C 12 méthanol ou acétate d'éthyle), ou chimiques telles que formation de sels d'addition avec des acides et décomposition de ces sels par des agents alcalins. Les dérivés de formule générale I et leurs sels d'addition physiologiquement tolérables possèdent des propriétés pharmacologiques et thérapeutiques intéressantes, qui permettent de les utiliser pour supprimer la résistance des cellules tumorales aux agents anticancéreux et pour supprimer la résistance des parasites aux agents anti- parasitaires. -9- La présente invention a également pour objet les compositions pharmaceutiques contenant comme principe actif, un dérivé de formule générale I ou un de ses sels physiologiquement tolérable, mélangé ou associé à un excipient pharmaceutique approprié. Les compositions pharmaceutiques ainsi obtenues se présentent généralement sous forme dosée Elles peuvent par exemple revêtir la forme de comprimés, dragées, gélules, suppositoires, solutions injectables ou buvables et être administrées par la voie orale, rectale ou parentérale. La posologie peut varier notablement selon l'âge et le poids du patient, la voie d'administration, la nature de la maladie et les traitements associés et s'échelonne de 0,1 à 7 g par prise. Les exemples suivants illustrent l'invention Les points de fusion sont déterminés au tube capillaire (cap) ou à la platine chauffante de kofler (K). Exemple 1: (bis allylamino-4,6 s triazinyl-2)-1 l(bis p fluorophényl)-2, 2 éthyll amino-4 pipéridine. NH CH 2 CH _ CH 2 -, N N H 2 C = HCH 2 C HN ' N N NH CH 2 CH ( F N A) Première méthode: A une solution de 4,6 g de cyanoborohydrure de sodium dans 150 ml de méthanol contenant 20 g de tamis moléculaire 3 A, on ajoute successivement, à une température de 15 à 20 C, 17 g de bis(p fluorophényl)-2,2 éthylamine (Eb/7 mm = 158-160 C) puis 23,7 g de chlorhydrate de (bis allylamino -4,6 triazinyl-2)-1 pipéridone -4, fondant (cap) à 219-222 C. -10 2664594 On ajuste de p H à 6 par addition de méthanol chlorhydrique et laisse agiter pendant 24 heures à température ambiante. Au bout de ce temps, on filtre l'insoluble et évapore le filtrat sous pression réduite. On reprend le résidu par de l'éther, lave à l'eau puis avec une solution à 10 % de Na HC 03. On sèche sur mg SO 4 Après évaporation, le résidu est chromatographié sur Si O 2 en éluant avec CH 3 COO C 2 H 5 Après évaporation des éluats, on recristallise le résidu critallin dans l'éthanol à 90 % On obtient 5,3 g de monohydrate fondant (cap) à 66-68 C. Le chlorhydrate de bis(allylamino-4,6 triazinyl-2)-1 pipéridone-4 de départ, a été préparé par condensation de la diallylamino-4,6 chloro- 2 triazine avec la diéthoxy-4,4 pipéridine, puis hydrolyse du dérivé diéthoxylé ainsi obtenu, au moyen d'H Cl dilué, en pipéridone correspondante. B) Deuxième méthode: On chauffe pendant 8 heures à 120 C une solution de 2,9 g de bis allylamino -4,6 (amino-4 pipéridino)-2 triazine 1, 3, 5, fondant (cap) à C et de 3 g de (bis p fluorophényl)-2,2 bromo-1 éthane dans 50 ml de diméthylformamide, en présence de 1,2 g de triéthylamine. Lorsque la réaction est terminée, on évapore le solvant sous pression réduite et le résidu est repris dans l'éther puis lavé à l'eau Après évaporation de l'éther, le résidu huileux est chromatographié sur Si O 2 en éluant avec CH 3 COO C 2 H 5. L'évaporation des éluats laisse un résidu cristallin que l'on cristallise dans l'éthanol à 90 % On obtient 1,9 g de cristaux de monohydrate fondant (cap) à 66-68 C. -11 2664594 La bis allylamino-4,6 (amino-4 pipéridino)-2 triazine-1, 3, 5 de départ a été préparée par condensation de l'acétamido-4 pipéridine avec la bis allylamino-4,6 chloro-2 triazine dans le diméthylformamide, suivie d'une hydrolyse du composé résultant au moyen d'une solution d'hydroxyde de sodium dans l'éthanol. Exemple 2: (bis allylamino-4,6 s triazinyl-2)-1 (diphényl-3,3 propyl)thio-4 pipéridine. NH CH 2 CH = CH 2 N N H 2 C = HCH 2 C HN N S-CH 2 CH 2-CH ( i N On chauffe à reflux, pendant 10 heures, une solution de 3,6 g de bis allylamino-4,6 chloro-2 triazine et de 5 g de (diphényl-3,3 propylthio)-4 pipéridine dans 100 ml de butanol, en présence de 4,4 g de K 2 C 03 Lorsque la réaction est terminée, on filtre le sel et évapore le solvant sous pression réduite On reprend le résidu par l'éther On obtient 9 g d'huile dont le fumarate, préparé au sein de l'éthanol donne 7,8 g de cristaux fondant (K) à 1680 C. La pipéridine de départ, dont le fumarate fond (K) à 160 C, a été préparée par hydrolyse, au moyen de (CH 3)3 Si Cl, du dérivé N-carbéthoxylé correspondant. Exemple 3: (bis allylamino-4,6 s triazinyl-2) amino-4 (diphényl-2,2 éthyl)-1 pipéridine. NH CH 2 CH CH 2 N N H 2 C HC H 2 C HN NH N CH 2 CH N On chauffe, pendant 10 heures, à reflux, une solution de 2,3 g de diallylamino-4,6 chloro-2 triazine 1, 3, 5 et de 2,8 g d'amino-4 (diphényl-2,2 éthyl)-1 pipéridine en présence de 1,4 ml de triéthylamine, dans 50 ml de butanol Lorsque la réaction est terminée, on évapore le butanol sous pression réduite, et reprend le résidu avec de l'éther. La solution éthérée est lavée à l'eau puis l'éther est évaporé Le résidu huileux est purifié par chromatographie sur Si O 2 en éluant avec CH 3 COO C 2 H 5. Après évaporation des éluats, on obtient 2,6 g d'un produit sous forme de résine. L'amino-4 (diphényl-2,2 éthyl)-l pipéridine de départ, P.F (cap):41-45 C, a été préparée par réduction alkylative, au moyen de Na BH 3 CN dans le méthanol, d'un mélange de diphénylacétaldéhyde et d'acétamido-4 pipéridine, suivie d'une hydrolyse, avec H Cl 4 N, de la diphényl-éthyl-1 acétamido-4 pipéridine formée. Exemple 4: (bis allylamino-4,6 s triazinyl-2)-1 lN-(diphényl-2,2 éthyl) N-méthylamino l-4 pipéridine. NH CH 2 CH = CH 2 N N H 2 C = HC H 2 C HN N N CH 2 CH & I CH 3 On chauffe pendant 8 heures à 130 C une solution de 2,3 g de diallylamino- 4,6 chloro-2 triazine-1, 3, 5, fondant (cap) à 206-208 C, et de 3 g de lN- (diphényl-2,2 éthyl) N-méthylaminol-4 pipéridine dans 50 ml de diméthylformamide, en présence de 1,4 g de K 2 CO 3 Lorsque la réaction est terminée, on filtre le sel et évapore le solvant sous pression réduite. -12- -13- Le résidu est chromatographié sur Si 02 en éluant avec CH 2 C 12-CH 30 H( 95-5). On obtient 3,2 g d'un produit huileux, dont le difumarate fond (cap) à 172-1760 C. La pipéridine de départ (huile) a été préparée par réduction alkylative, au moyen de Na BH 3 CN dans ie méthanol, de l'acétyl-1 pipéridone-4 avec la N-(diphényl-2,2 éthyl) N-méthyl aminelP F (cap) de l'oxalate = 215 Cl suivie d'une hydrolyse alcaline avec Na OH-C 2 H 5 OH. La (bis allylamino-4,6 s triazinyl-2)-llN-(diphényl éthyl)N-méthyl aminol-4 pipéridine a également été préparée selon le procédé décrit dans l'exemple 1 méthode B). Exemples 5 à 25: En appliquant un ou plusieurs des procédés de préparation décrits dans les exemples 1 à 4, ont été préparés les dérivés suivants: 5) (bis allylamino-4,6 s triazinyl-2)- ll(diphényl-2,2 éthyl)aminol-4 pipéridine, P F (cap): 69-72 C. 6) (bis allylamino-4,6 s triazinyl-2)-ll(diphényl-3,3 propyl)aminol- 4 pipéridine, P F (cap): 88-92 C. 7) (propylamino-4 allylamino-6 s triazinyl-2)-1 l(diphényl-2,2 éthyl) aminol-4 pipéridine, P F (cap): 56-58 C. 8) (propylamino-4 allylamino-6 s triazinyl-2)-ll(diphényl-3,3 propyl) aminol-4 pipéridine, P F (cap): 78-83 C. -14- 9) (bis allylamino-2,4 pyrimidinyl-6)-ll(diphényl-3,3 propyl)aminol- 4 pipéridine, P F (cap) du fumarate: 209-211 C. ) (bis allylamino-4,6 s triazinyl-2)-ll(diméthoxy-3,5 phényl)-2 (méthyl- 2 phényl)-2 éthyl aminol-4 pipéridine, P F (cap) du difumarate: 178-184 C. 11) l(allylamino-4 propylamino-6 s triazinyl-2)aminol-4 (diphényl-2,2 éthyl)-1 pipéridine. 12) (bis allylamino-4,6 s triazinyl-2)-llbis(diméthoxy-3,4 phényl)-3, 3 propyl aminol-4 pipéridine, P F (cap) du fumarate: 180-182 C. 13) lbis (diallylamino)-4,6 s triazinyl-2 l-ll(diphényl-2,2 éthyl)aminol4 pipéridine, P F (cap) du fumarate: 206-210 C. 14) l(bis allylamino-4,6 s triazinyl-2)thiol-4 (diphényl-2,2 éthyl)-1 pipéridine. ) l(bis allylamino-4,6 s triazinyl-2)oxyl-4 (diphényl-2,2 éthyl)-1 pipéridine. 16) (bis allylamino-4,6 s triazinyl-2)-l(diphényl-3, 3 propyl oxy)-4 pipéridine. 17) (bis allylamino-4,6 s triazinyl-2)ll(triphényl-2,2,2 éthyl)aminol-4 pipéridine. -15- 18) (allylamino-4 amino-6 s triazinyl-2)-ll(diphényl-2,2 éthyl) aminol-4 pipéridine. 19) lbis (diméthyl-3,3 allylamino)-4,6 s triazinyl-2 l-ll(diphényl-2,2 éthyl)aminol-4 pipéridine. ) lbis (méthyl-3 allylamino)-4,6 s triazinyl-2 l-ll(diphényl-2,2 éthyl)aminol-4 pipéridine. 21) lbis (hydroxy-2,2 éthyl amino)-4,6 s triazinyl-2 l-1 l(diphényl-2,2 éthyl) aminol-4 pipéridine. 22) lbis (chloro-3 allylamino)-4,6 s triazinyl-2 l-1 l(diphényl-2,2 éthyl) aminol-4 pipéridine. 23) (bis cyclopropylamino-4,6 s triazinyl-2)-ll(diphényl-2,2 éthyl) aminol-4 pipéridine. 24) lbis (diméthylamino-2,2 éthyl amino)-4,6 s triazinyl-2 l-1 l(diphényl- 2,2 éthyl) aminol-4 pipéridine. ) lbis (N-allyl N-méthyl amino)-4,6 s triazinyl-2 l-1 l(diphényl-2,2 éthyl) aminol-4 pipéridine. -16- Exemple 26 Etude pharmacologique La résistance aux agents anticancéreux est un obstacle majeur à l'efficacité des drogues antitumorales Les cellules tumorales lorsqu'elles sont exposées in vitro ou, in vivo à un agent anticancéreux deviennent résistantes, à divers degrés à ces composés. De nombreux mécanismes d'acquisition par une cellule de résistance aux agents anticancéreux ont été décrits Parmi les différents types de résistance, la "Multidrug Resistance" (MDR) est particulièrement intéressante Le phénomène de résistance est dû à l'action d'une protéine membranaire inductible, la g P 170, dont le rôle est d'augmenter l'efflux du cytotoxique, donc de diminuer sa concentration intracellulaire, d'o la perte de sensibilité de ces cellules à la drogue. Des médicaments, utilisés dans d'autres pathologies, sont connus pour reverser, partiellement ou totalement cette résistance (Int J Cancer Res ( 1988) + 9 pp 285-296; I N C I ( 1989) 81 PP 907-910; Trends Pharmacol Sci ( 1989) 9 pp 54-58; Annu Rev Biochem ( 1989) 58 pp 137-171. L'agent modulateur, lorsqu'il est ajouté en même temps que le cytotoxique, diminue ou supprime totalement la résistance de type MDR. Certains médicaments utilisés pour le traitement d'autres maladies comme l'amiodarone, le verapamil ou la ciclosporine, ont été utilisés en clinique pour lever cette résistance, mais leurs propriétés pharmacologiques intrinsèques (agents hypotenseurs, ou immunosuppresseurs) souvent indésirables lors du traitement du cancer et leurs toxicités, limitent considérablement leur utilisation. De plus le mécanisme de la résistance à la chloroquine, développée par le Plasmodium falciparum est similaire Le verapamil restaure la sensibilité d'une lignée résistante, ce qui démontre l'intérêt potentiel de composés reversant le phénotype MDR des cellules tumorales, pour une utilisation en parasitologie (Science ( 1987), 238, pp 1283- 1285; Science ( 1987), 235, pp 899-901). Les tests ci-après décrits montrent que les dérivés de la présente invention réversent la résistance acquise aux différents médicaments. -17- A) Evaluation de l'augmentation de la cvtotoxicité de l'adrianmvoine sur la lignée P 388/ADR-10 in vitro Lors de cette étude, on a mesuré la cytotoxicité de l'adriamycine, en absence et en présence du composé reversant Pour cet essai, on a utilisé la leucémie murine P 388/ADR-10 dont la résistance a été induite par l'adriamycine Son facteur de résistance est de 260 par rapport à la lignée sensible (résistance moyenne). Les cellules sont cultivées dans un milieu de culture (RPMI 1640) complet, contenant 10 % de serum de veau foetal, 2 n M de glutamine, l O 50 UI/ml de pénicilline, 50 pg/ml de streptomycine, 10 m M de Hepes et n M de bêta-mercaptoéthanol. Les cellules sont réparties dans des microplaques et exposées à l'adriamycine à 9 concentrations différentes. Les produits testés pour leur capacité à reverser la MDR sont ajoutés en même temps que le cytotoxique Les cellules sont ensuite incubées pendant 48 heures. Le nombre de cellules viables est ensuite quantifié par un essai colorimétrique, le Microculture Tetrazolium Assay (Cancer Res ( 1987), 47, pp 936-942). Les résultats sont exprimés en IC 50, concentration en cytotoxique qui inhibe à 50 % la prolifération des cellules témoins Les résultats sont exprimés en Facteur de Reversion (FR). FR = IC 50 Cytotoxique seul I Co 50 Cytotoxique en présence du composé reversant Le tableau I donne les valeurs des facteurs de reversions obtenus avec les différents composés de formule I et les produits de référence, et démontre l'activité très intéressante des composés de formule I. Concernant la reserpine (un des produits de référence), ce composé a une très bonne activité in vitro mais in vivo, il est inutilisable à cause de sa grande toxicité. -18- TABLEAU I PRODUITS 2,5 p M 5 PM 10 p M PRODUITS DE REFERENCE PHENOTHIAZINE 9 4 23 1 - PROGESTERONE 1 7 2 5 FLUNARIZINE 25 QUINIDINE 6 17 4 QUININE 14 5 VERAPAMIL 13 5 36 3 67 2 AMIODARONE 37 7 104 7 TOX RESERPINE 215 5 189 CICLOSPORINE 149 4 TOX TOX PRODUITS DES EXEMPLES EXEMPLE 1 110 8 244 4 170 7 EXEMPLE 2 15 4 65 1 86 4 EXEMPLE 3 39 70 134 8 EXEMPLE 4 34 7 32 3 171 1 EXEMPLE 5 100 189 277 4 EXEMPLE 6 54 4 TOX TOX EXEMPLE 7 102 8 135 6 TOX EXEMPLE 8 75 9 TOX TOX EXEMPLE 9 80 4 TOX TOX EXEMPLE 10 125 1 75 3 TOX EXEMPLE 11 87 65 2 TOX EXEMPLE 12 1 4 8 TOX Rli Puv 1 i,:Firrn di= 1 Icï,mn Ft Fin J sur la lignée de poumon de hamster chinois, DC-3 F/AD Le protocole utilisé pour cette étude est identique à celui utilisé pour l'essai décrit dans l'exemple 1 mais le milieu de culture ne contenait pas de bêta-mercaptoéthanol et les cellules ont été incubées pendant 4 jours au lieu de 48 heures Le cytotoxique utilisé était l'actinomycine D. La lignée DC-3 F/AD est une lignée extrêmement résistante Son facteur de résistance est supérieur à 10 000. tigre In didu1 n -19- Les résultats de cette étude sont donnés dans le tableau II: Les résultats du tableaux II démontrent que les composés de formule I diminuent de manière significative ou suppriment la résistance au cytotoxique. TABLEAU II PRODUITS 2,5 p M 5 p M 10 p M 20 p M PRODUITS DE REFERENCE PHENOTHIAZINE CHLOROPROMAZINE YOHIMBINE NIFEDIPINE PROGESTERONE QUININE DILTRIAZEM FLUNARIZINE DIPYRIDAMOLE QUINIDINE __ *QUINACRINE TRIFLUOPERAZINE VERAPAMIL -2 AMIODARONE 1 _ 298 388 TOX 1 PIMOZIDE 129 388 PIMOZIDE RESERPINE 258 1085 1649 2024 CICLOSPORINE PRODUITS DES EXEMPLES EXEMPLE 1 171 905 2575 TOX EXEMPLE 2 17 171 EXEMPLE 3 38 104 240 EXEMPLE 4 218 1256 EXEMPLE 5 658 1504 TOX EXEMPLE 6 EXEMPLE 7 992 2339 EXEMPLE 8 16 5 TOX TOX TOX EXEMPLE 9 94 472 TOX - EXEMPLE 10 259 1347 TOX - EXEMPLE 11 281 926 - EXEMPLE 12 C) Cytométrie en flux Certains composés anticancéreux comme l'adriamycine (ADR) ont la propriété d'être fluorescents après excitation par une source lumineuse de longueur d'onde connue. -20- Par la mesure de cette fluorescence, il est possible de mesurer de façon relative la concentration intracellulaire en ADR La cytométrie en flux (CMF) est un outil de choix pour effectuer ce type de mesure et ainsi déterminer rapidement si certains composés actifs agissent en augmentant la concentration intracellulaire en adriamycine. Les cellules ( 500 103) par ml ont été exposées simultanément à l'adriamycine à une concentration fixe ( 50 p M) et aux composés testés, aux concentrations de 2,5, 10 et 20 p M Après 5 heures d'incubation, l'uptake de l'adriamycine intra-cellulaire a été évalué par CMF. Les analyses ont été réalisées sur un cytomètre en flux ATC 3000 (Bruker France) équipé d'un laser argon 2025 (Spectra-Physics-France ) optimisé à 488 nm pour une puissance de 600 m W. L'analyse de chacun des échantillons a été effectuée sur un total de 10.000 cellules à une vitesse de 1000 cellules/sec. Les résultats ont été collectés sous forme d'histogrammes linéaires de la fluorescence de l'ADR intra-cellulaire. Expression des résultats: Pour chacun des histogrammes, le canal moyen (MEAN) de fluorescence a été déterminé par le système informatique de l'appareil. Pour toutes expériences: Un contrôle négatif (cellules sans ADR) a fixé le seuil d'auto- fluorescence. Un contrôle positif (cellules avec ADR) a déterminé la valeur MEAN = MN 1. Les tubes "tests" (cellules avec ADR et avec produit) ont déterminé pour chacun des produits et à chacune des concentrations, les valeurs MEAN = MN 2. Les résultats sont exprimés sous forme de variation de la moyenne de fluorescence obtenue pour chacun des tubes "tests" (MN 2) par rapport à la moyenne de la fluorescence obtenue avec le contrôle positif (MN 1): VAR-MEAN = MN 2 MN 1 Le paramètre exprimé est donc l'augmentation de la fluorescence de l'adriamycine en présence des composés testés. -21 - Le tableau III donne l'augmentation de la fluorescence de l'ADR obtenue avec les différents composés sur la lignée DC-3 F/AD et le tableau IV sur la lignée P 388/ADR-10. TABLEAU III PRODUITS 2 p M 5 p M 10 p M 20 p M PRODUITS DE REFERENCE VERAPAMIL 2 00 2 60 7 55 11 45 AMIODARONE 8 80 16 65 21 55 26 35 PIMOZIDE 5 85 8 85 15 65 21 60 RESERPINE 26 18 29 43 31 73 29 95 CICLOSPORINE 1 90 3 20 8 05 15 10 QUINACRINE 2 00 10 5 19 1 25 8 TRIFLUOPERAZINE 0 00 0 00 4 10 13 40 PRODUIT DES EXEMPLESEXEMPLE 1 18 27 26 13 35 57 43 63 EXEMPLE 2 0 2 10 4 25 1 35 0 EXEMPLE 3 8 O 19 9 21 6 19 3 EXEMPLE 4 12 3 24 1 41 9 49 0 EXEMPLE 5 15 5 31 3 34 65 37 9 EXEMPLE 6 3 9 21 5 29 75 TOX EXEMPLE 7 14 47 26 O 34 17 36 63 EXEMPLE 8 4 5 17 85 27 15 TOX EXEMPLE 9 7 2 15 1 16 3 26 2 EXEMPLE 10 14 8 24 7 26 5 28 2 EXEMPLE 11 12 6 18 9 29 9 40 5 EXEMPLE 12 6 1 3 8 5 5 9 6 -22- TABLEAU IV PRODUITS 2 p M 5 p M 10 p M 20 p M PRODUITS DE REFERENCE PHENOTHIAZINE 0,00 0,00 0,00 0,00 CHLOROPROMAZINE 3,30 5,15 4,60 6,20 YOHIMBINE 2,30 0,05 4,70 3,45 NIFEDIPINE 0,00 0,80 5,95 3,40 PROGESTERONE 1,85 1,00 6,85 11,80 QUININE 4,85 5,40 12,00 18,90 DILTIAZEM 3,10 6,65 13,45 23,15 FLUNARIZINE 7,35 10,10 19,90 41,00 DIPYRIDAMOLE 2,35 7,55 21,75 40,00 QUINIDINE 6,65 12,80 22,00 29,90 QUINACRINE 11,83 15,73 27,73 52,77 TRIFLUOPERAZINE 11,45 14,75 34,55 51,05 VERAPAMIL 9,89 21,90 39,62 56,50 AMIODARONE 33,40 65,25 76,33 95,85 PIMOZIDE 25,60 49,42 73,13 73,64 RESERPINE 73,46 80,48 91,90 85,39 CICLOSPORINE 79,43 97,63 96,68 90,27 PRODUITS DES EXEMPLES EXEMPLE 1 53 1 74 7 85 49 78 5 EXEMPLE 3 29 9 46 2 66 0 73 1 EXEMPLE 5 45 25 60 7 79 47 76 25 EXEMPLE 6 32 9 60 1 55 8 TOX EXEMPLE 7 48 75 72 6 80 9 87 3 EXEMPLE 8 38 9 60 1 TOX TOX EXEMPLE 9 39 2 55 8 65 8 TOX EXEMPLE 10 52 0 75 3 84 0 78 0 -23- REVENDICATIONS 1) Les polyméthylène-imines de formule générale I: R 1 N | 'R 2 (I) R (Y)m N X R 3 " N N_ Rit R 4X (Y')n dans laquelle: a) X représente le groupe CH ou un atome d'azote; b) A représente un groupe polyméthylène- imine de formule: (CH 2) B- q -N dans laquelle: B est un hétéroatome oxygène ou soufre ou un radical NR' dans lequel R' représente un atome d'hydrogène ou un radical alkyle ou alkényle contenant jusqu'à 5 atomes de carbone, et q est un nombre entier de 1 à 3; -24- c> Rj, R 2, R 3, R 4 qui sont identiques ou différents, représentent chacun un atome d'hydrogène, un radical alkyle contenant de 1 à 6 atomes de carbone en chaine droite ou ramifiée, éventuellement substitué par un atome d'halogène, un ou plusieurs radicaux hydroxy ou un radical aminé: -N (R 5 R 6) dans lequel R 5 et R 6, identiques ou différents, représentent chacun un atome d'hydrogène ou un radical alkyle contenant de 1 à 6 atomes de carbone en chaine droite ou ramifiée ou R 5 et R 6 forment ensemble avec l'atome d'azote auquel ils sont liés un hétérocycle contenant de 4 à 6 atomes de carbone et éventuellement un autre hétéroatome: oxygène ou soufre; un radical alkényle ou alkynyle contenant chacun de 2 à 6 atomes de carbone ou un radical cycloalkyle contenant de 3 à 6 atomes de carbone ou chacun des couples Rj, R 2 et/ou R 3, R 4 forment ensemble avec l'atome d'azote auquel ils sont liés un hétérocycle contenant de 4 à 6 atomes de carbone et éventuellement un autre hétéroatome: oxygène ou soufre d) Z représente un radical hydrocarboné contenant de 1 à 5 atomes de carbone en chaine droite ou ramifiée; e) R représente un atome d'hydrogène, un radical alkyle contenant de 1 à atomes de carbone en chaine droite ou ramifiée, un radical alkényle contenant de 2 à 5 atomes de carbone en chaine droite ou ramifiée, ou un radical phényle éventuellement substitué par (Y)m Ou (Y')n; -25- f) Y et Y', qui sont identiques ou différents, représentent chacun un atome d'hydrogène ou d'halogène, un radical trifluorométhyle ou un radical alkyle ou alkoxy contenant chacun de 1 à 5 atomes de carbone; g) m et n, qui sont identiques ou différents, représentent chacun les nombres entiers 1 ou 2; et, les diastéréoisomères et énantiomères correspondants. 2) Les sels d'addition acides des dérivés de la revendication 1. 3) Les sels selon la revendication 2 qui sont physiologiquement tolérables. 4) La (bis allylamino-4,6 s triazinyl-2)-1 l(bis p fluorophényl)-2,2 éthyll amino-4 pipéridine. ) La (bis allylamino-4,6 s triazinyl-2)-1 l(diméthoxy-3,5 phényl)-2 (méthyl-2 phényl)-2 éthyl aminol-4 pipéridine. 6) Le procédé de préparation des dérivés de la revendication 1, caractérisé en ce que l'on condense: soit une polyméthylène-imine de formule générale II: /R 1 N R 2 R 3 N X N ASA-H /4 N R 4 / -26- dans laquelle X, A, R 1, R 2, R 3 et R 4 ont les significations définies dans la revendication 1, sur un dérivé de formule générale III: (Y)m T -Z -C (Il) dans laquelle Z, R, Y, Y', m et N ont les significations définies dans la revendication 1 et T représente un atome d'halogène tel que par exemple un atome de chlore ou de brome ou un reste tosyloxy soit un dérivé halogéné de formule générale IV: Rl N | R 2 (iv) N X N I M 3A S C 1 R 4 N dans laquelle X, R 1, R 2, R 3 et R 4 ont les significations définies dans la revendication 1, sur une polyméthylène-imine de formule générale V: R J (Y)m H A z C (V) dans laquelle A, Z, R, Y, Y', m et N ont les significations définies dans la revendication 1. 7) Le procédé de préparation des dérivés de la revendication 1 répondant à la formule générale I': R 1 N R 2 R 3 X R Ny A' Z C R 4 /1 N |, 1 (Y)n (I') dans laquelle X, Z,R, R 1, R 2, R 3, R 4,Y, Y', m et N ont les significations définies dans la revendication 1 et A' représente un groupe polyméthylène-imine de formule: (CH 2)q N- -N R' dans laquelle q et R' ont les significations définies dans la revendication 1, caractérisé en ce que l'on traite par le oyanoborohydrure de sodium un mélange de: -28- la cétone de formule générale VI: / R N R 2 R 3 XX (CH 2)q O R 4 / (VI) dans laquelle X, R 1, R 2, R 3, R 4 et q ont les significations définies dans la revendication 1, et de l'amine de formule générale VII: R HN -Z CI -H N Z C (Y)m (VII) R' R'. dans laquelle R', Z, R, Y, Y', m et N ont les significations définies dans la revendication 1. 8) Les compositions pharmaceutiques contenant comme principe actif un dérivé selon les revendications 1 et 3 à 5, avec des excipients pharmaceutiques appropriés. 9) Les compositions pharmaceutiques selon la revendication 8 présentées sous une forme convenant notamment pour supprimer la résistance des cellules tumorales aux agents anti-cancéreux et pour supprimer la résistance des parasites aux agents anti-parasitaires. h