Brevet FR2672615A1 — publié le 19920814

D'une façon générale, la présente invention concerne des anticorps monoclonaux et leur interaction avec des déterminants antigéniques spécifiques, et concerne une lignée cellulaire d'hybridomes produisant un anticorps monoclonal qui se lie spécifiquement à un récepteur de surface cellulaire de lymphocytes T humains. Plus particulièrement, l'anticorps monoclonal faisant l'objet de l'invention se lie à un épitope unique du récepteur de surface de cellule T humaine, codé par un gène réarrangé gamma de cellule T. Dans ce domaine technique, il est bien connu que le système immunitaire humain est composé d'éléments cellulaires et d'éléments solubles dans le sang, conjointement avec divers organes du système lympho-réticulaire. En pénétrant dans l'organisme, une substance étrangère, dénommée "anti gène", provoque une réponse ou réaction du système immunitaire lorsque l'antigène est identifié. La réaction peut prendre la forme d'une inflammation localisée ou d'une réaction de phagocytose, ou elle peut prendre la forme d'une réaction spécifique humorale ou à médiation cellulaire. Ces réactions spécifiques requièrent l'interaction de lymphocytes pour la production d'anticorps dirigés contre la substance étrangère, qui peut être une cellule, un virus ou une bactérie.Les éléments essentiels de la réponse immunitaire sont les cellules T provenant du thymus et les cellules B provenant de la moelle osseuse. Les cellules T agissent mutuellement avec les cellules B pour provoquer la formation d'anticorps dirigés contre la substance étrangère, dans ce que l'on appelle "l'immunité à médiation cellulaire". La réponse humorale ne demande que la présence d'un lymphocyte B présensibilisé, conjointement avec une substance étrangère. Leur interaction provoque la prolifération de cellules B et fait qu'elles commencent à synthétiser des immunoglobulines ou une protéine anticorps dirigée contre l'antigène. Les éléments cellulaires du sang périphérique circulatoire comprennent les globules rouges ou érythrocytes, les globules blancs ou leucocytes et les plaquettes. Les leucocytes sont divisés en cinq populations principales dénommées neutrophiles, éosinophiles, basophiles, monocytes et lymphocytes. Les lymphocytes se subdivisent en cellules T dérivées du thymus et en cellules B dérivées de la moëlle osseuse. Les lymphocytes T et B sont en outre divisés chacun en de nombreux sous-groupes, tels que cellules inductrices, cellules suppressives et cellules tueuses, entre autres, des nombres croissants de sous-groupes étant identifiés dans les efforts actuels de recherche. La technologie des anticorps monoclonaux, dérivant des travaux de Kohler et Milstein, Nature, 256 : 495-497 (1975), a donné une grande poussée à la recherche scientifique sur les fonctions des leucocytes et leur implication en physiologie humaine. On a mis au point des anticorps monoclonaux dirigés contre des antigènes de surface ou épitopes de lymphocytes B et lymphocytes T humains à leurs divers stades de développement et de maturation, et afin de classer des affections à cellules B et à cellules T, telles que des leucémies et lymphomes à cellules T et à cellules B. La disponibilité d'anticorps monoclonoaux, reconnaissant diverses structures moléculaires de surfaces fonctionnellement importantes de cellules T et B, permet une caractérisation détaillée à la fois du processus d'activation des cellules T et des sous-groupes distincts de cellules T. En outre, on a mis au point des anticorps monoclonaux qui se lient à des cellules tumorales solides, à des glycoprotéines de surface des globules rouges, et à des sites inflammatoires de tissus humains infectés par des virus, comme par exemple dans des maladies de type SIDA, pour n'en nommer que quelques uns. L'étude de cellules humaines, à la fois normales et anormales, en ce qui concerne leur fonction et leur impact sur le système immunitaire humain, s'accroît de façon spectaculaire, à mesure que de nouveaux anticorps monoclonaux sont mis au point pour des applications diagnostiques et thérapeutiques, à la fois in vitro et in vivo. Dans US-A-4.550.085, portant le titre "Anticorps Monoclonaux reconnaissant des cellules T humaines", l'attention est portée sur la définition de molécules de surface exprimées sur les lymphocytes T et d'autres cellules, telles que les structures dénommées : "T3,, "T4" et "tu". L'anticorps monoclonal dénommé "anti-T3 contre T3" était capable de bloquer l'aptitude de tout clone de cellules T fonctionnelles à reconnaître son antigène cible. Il était enseigné que chaque clone distinct de cellules natures a une structure moléculaire unique de protéines qui permet à chaque cellule T de reconnaître sont antigène cible.Toutefois, le brevet enseigne que bien que les clones de cellules T puisse différer dans leur dite "structure de reconnaissance", ils semblent avoir certaines caractéritiques en commun. Une caractéristique commune de tous les clones de cellules T est constituée par la présence de glycoprotéines T3 et d'un dimère composé de deux molécules de protéines différentes, telles qu'identifiées dans ledit brevet. L'anticorps monoclonal décrit dans le brevet reconnait spécifiquement le complexe récepteur de surface de cellules T. L'anticorps monoclonal faisant l'objet de la présente invention reconnaît une sous-population de cellules T périphériques humaines représentant approximativement 1 15 % des cellules sanguines mononucléées circulantes et une valeur moyenne d'environ 3 % de ces lymphocytes. Les lymphocytes de cette sous-population expriment un récepteur de surface de cellule T de la "seconde famille', codé par des gènes de la classe gamma (r) et delta (d) qui réarrangent spécifiquement dans les cellules T. L'anticorps monoclonal de la présente invention se lie à une glycoprotéine à la surface de lymphocytes T humains, ayant généralement une masse moléculaire d'environ 85 000 daltons lorsqu'on la détermine dans des conditions non réductrices, et d'environ 42 000 et 46 000 daltons lorsqu'on la détermine dans des conditions réductrices.L'épitope unique caractérisé par cet anticorps monoclonal permet la caractérisation d'une sous-population de lymphocytes T humains de façon beaucoup plus définie que précédemment. L'anticorps monoclonal de la présente invention identifie un nouveau sous-groupe parmi les lymphocytes exprimant un récepteur T gamma/delta. L'anticorps monoclonal est dénommé "anti-TiGammaA. 1" (anti-TiyA. . 1). (L'anticorps monoclonal de la demande nO 07/232.235 est TiGammaA (anti Tiyk)). L'anticorps monoclonal anti-TiGammaA.1 peut être marqué avec un marqueur approprié, tel qu'un marqueur radioactif ou un marqueur fluorescent, pour identification et définition de la sous-population de lymphocytes T humains dans le sang circulant prélevé sur des individus sains, des individus malades ou des individus ayant été soumis à une greffet d'organe ou à une transplantation de moelle osseuse. Cet anticorps est généralement utile pour la caractérisation de l'état de différenciation de lymphocytes T humains dans le sang circulant. En outre, l'anticorps monoclonal anti TiGammaA.1 peut être appliqué thérapeutiquement par d'éventuelles manipulations in vitro, ex vivo ou in vivo de lymphocytes T humains portant ltépitope TiGammaA.l. L'objet de l'invention est une lignée de cellules d'hybridomes produisant un anticorps monoclonal qui se lie spécifiquement à un épitope unique du récepteur de surface de cellules T humaines, de lymphocytes T dans du sang périphérique, codé par un gène réarrangé gamma de cellule T. L'épitope est situé dans une structure glycoprotéique à la surface de lymphocytes T humains du sang circulant, ayant généralement une masse moléculaire d'environ 85 000 daltons lorsqu'on la détermine dans des conditions non réductrices, et d'environ 42 000 et 46 000 daltons lorsqu'on la détermine dans des conditions réductrices. L'anticorps monoclonal de la présente invention est dénommé "anti-TiGammaA.1" (anti-TiyA.1) et appartient à la sous-classe des IgM.Cet anticorps monoclonal permet la caractérisation de lymphocytes T humains du sang circulant, qui expriment ltépitope ou déterminant antigénique TiGammaA.1. La différence entre l'anticorps monoclonal anti TiGammaA.1 de la présente invention et l'anticorps anti TiGammaA de la demande nO 07/232.235 est mise en évidence par des expériences d'immunofluorescence en deux couleurs dans lesquelles les épitopes réels reconnus par les deux anticorps sont distincts car ils ne se bloquent pas mutuellement en ce qui concerne la liaison à la cellule cible. Les Figures la-le représentent une analyse comparative par immunofluorescence en deux couleurs de l'anticorps monoclonal anti-TiGammaA avec l'anticorps monoclonal anti TiGammaA.l sur des lymphocytes de sang périphérique (LSP) de cinq donneurs sains. Les Figures 2a-21 représentent une analyse par immunofluorescence de co-modulation d'épitopes TiGammaA et TiGammaA.1 par le complexe CD3 sur la lignée cellulaire clonale T1.2G8. Les Figures 3A et 3B repréentent des autoradiogrammes de SDS-PAGE, de matériel immunoprécipité provenant de la lignée cellulaire polyclonale TiGammaACl. NS est un anticorps non spécifique analysé dans des conditions réductrices (R) (3B) et non réductrices (NR) (3A) à côté des anticorps monoclonaux anti-TiGammaA et anti-TiGammaA.l. PM = masse moléculaire, kd = kilodaltons. Une lignée cellulaire hybride produisant l'anticorps monoclonal anti-TiGammaA.1 faisant l'objet de la présente invention a été déposée à l'American Type Culture Collection, 12301 Parklawn Drive, Rockville, MD 20852 et a reçu le numéro ATCC HB 10610. L'anticorps monoclonal anti-TiGammaA.1 (TirA.1) se lie à un déterminant antigénique du récepteur de lymphocyte T humain et spécifiquement au complexe Ti de la structure Ti/T3 du récepteur de surface de cellule T humaine. La structure moléculaire Ti comprend la chaîne gamma et l'anticorps monoclonal anti-TiGammaA.1 est spécifique de la chaîne gamma, de sorte que l'invention permet la détection, la quantification et la caractérisation poussée du complexe Ti de la "seconde famille" du récepteur de surface de cellule T. L'épitope apparaît sur une sous-population de lymphocytes T dans le sang périphérique et dans des organes lymphoïdes humains, tels que le thymus, la rate, les ganglions lymphatiques et la moelle osseuse. Des exemples des avantages qui peuvent être dérivés des applications diagnostiques et thérapeutiques de cet anticorps monoclonal sont donnés ici. L'anticorps monoclonal anti-TiGammaA.1 de la présente invention a été mis au point comme décrit ci-après. Les modes expérimentaux décrits dans les publications citées sont incorporés ici. On prépare selon Nowill et coll., J. Exp. Med., 63 1061 (1986) une suspension de cellules d'un clone de lymphocytes humains de phénotype CD3+, WT31-. Ces cellules n'expri ment pas le récepteur T a/ p à leur surface. Elles expriment toutefois une activité fonctionnelle dénommée "activité cytotoxique naturelle". On injecte la suspension à une souris Biozzi. On effectue l'immunisation au moyen de deux premières injections intrapéritonéales de 4 x 1010 cellules dans de l'adjuvant de Freund, suivies d'une injection intraveineuse de 4 x 106 cellules sans adjuvant. Trois jours plus tard, on sacrifie l'animal, on prélève la rate et on récupère les cellules spléniques. On effectue ensuite l'hybridation par fusion des cellules spléniques et d'une lignée de cellules de myélome murin NS-1. La fusion cellulaire a été effectuée selon le procédé décrit par P. Moingeon et coll., Nature, 323 : 638 (1986). Les cellules hybrides obtenues après fusion ont été cultivées dans un milieu HAT (hypoxanthine, amnioptérine, thymidine) contenant 10 % de sérum de veau foetal et 10 % de sérum de cheval. Les hybridomes ont été ensuite sélectionnés. On a effectué le criblage en testant l'aptitude des surnageants d'hybridomes à bloquer des réactions cytotoxiques exercées par le clone immunisant, contre une lignée de cellules leucémiques maintenue en culture. L'hybridome produisant l'anti-TiGammaA a été identifié le premier. On a ensuite identifié un hybridome produisant l'anticorps de la présente invention, anti-TiGammaA.1. L'hybridome produisant l'anticorps monoclonal antiTiGammaA.l a été cloné par la technique de dilution limitante. On a produit finalement des ascites immunes contenant l'anticorps. L'anticorps monoclonal anti-TiGammaA.1 préparé par ce procédé appartient à la sous-classe des IgM et peut fixer des protéines du complément. La réactivité de l'anticorps monoclonal anti TiGammaA.1, l'étendue de son action et sa spécificité d'épitope par rapport à l'anticorps anti-TiGammaA, ont été déterminées avec des lymphocytes humains, par analyse par immunofluorescence et lecture à l'aide de méthodes cytofluorométriques. Une analyse comparative par immunofluorescence des anticorps monoclonaux anti-TiGammaA et anti-TiGammaA.1, sur des lymphocytes de sang périphérique provenant de 9 donneurs, est indiquée dans le Tableau 1. Tableau 1 Analyse comparative d'anti-TiyA~et anti-TiyA. 1 % de cellules positives Donneurs Anti-TiyA Anti-TiyA.l BM 10,1 8,8 Sy 5,4 6,7 DM 18,3 19,9 NC 5,1 5,0 GD 8,0 8,5 DA 1,2 0,7 MP 1,7 1,3 BF 1,6 1,7 BC 1,2 1,3 Cette population a été purifiée par une technique de centrifugation sur gradient de Ficoll, suivie de deux étapes d'adhérence. Des échantillons de 3,0 x 105 cellules ont été marqués par des techniques d'immunofluorescence, et analysés sur un cytofluoromètre de flux tel qu'un cytomètre de flux "EPICSO C" fabriqué par Coulter Corporation, Hialeah, Floride, USA. Les réactifs témoins sont FITC-IgG et PE-IgG. Pour l'analyse par immunofluorescence en deux couleurs, les lymphocytes non adhérents sont traités pendant environ 30 minutes par l'anticorps monoclonal de l'invention, anti-TiGammaA.l couplé à un marqueur vert fluorescent, à savoir de la fluorescéine, en présence d'un autre anticorps connu qui est au couplé au marqueur rouge fluorescent phycoérythrine (PE). Les autres anticorps connus sont : anti CD2, -CD3, -CD4, -CD5, -CD8, NKH1 et les anticorps déterminant les molécules codées par des gènes dénommés "les gènes de classe II du complexe majeur d'histocompatibilité". Ces anticorps connus sont fournis par Coultronics, Margency, France. L'anticorps monoclonal anti-TiGammaA qui a été mis au point par le présent inventeur a été également testé. Les résultats d'une analyse comparative par immunofluorescence en deux couleurs, de lymphocytes de sang périphérique provenant de cinq donneurs, sont représentés sur les Figures la-le. L'axe des x donne le log1O de fluorescence verte obtenue au moyen de l'anti-TiGammaA.1 de fluorescéine. L'axe des y représente le log10 d'intensité de fluorescence rouge obtenue avec un anticorps anti-TiGammaA plus du sérum de chèvre spécifique des IgG2a de souris conjugué à la phycoérythrine. Les figures montrent que les deux anticorps ne se bloquent pas mutuellement et que pratiquement toutes les cellules reconnues sont doublement positives. La conclusion est que les deux anticorps, tout en reconnaissant le même antigène, reconnaissent des épitopes distincts. Les réactivités comparées d'anti-TiGammaA et d'anti-TiGammaA.1 avec des lignées cellulaires clonales représentatives sont également décrites dans l'essai 3 (tableaux 2 et 3). Les résultats obtenus à partir de l'anticorps selon la présente invention permettent la caractérisation de lymphocytes T humains exprimant le déterminant antigénique TiGammaA.1. La grande majorité de lymphocytes TiGammaA.1 + expriment des glycoprotéines CD2, et tous expriment les glycoprotéines CD3. Une majorité de lymphocytes TiGammaA.1+ expriment également les protéines CD5. On a constaté que lorsque les protéines CD5 étaient présentes, la densité de l'antigène CD5 par cellule était plus faible dans le sousgroupe TiGammaA.1+ que dans la population des lymphocytes classiques exprimant le récepteur T a/fi. L'expression de CD8 dans la sous-population TiGammaA.l+ varie largement d'individu à individu.Chez la plupart des individus, seule une minorité de lymphocytes TiGammaA.1+ expriment la protéine CD8 avec une faible densité d'antigène. Au repos, les lymphocytes TiGammaA.1+ n'expriment pas les protéines CD4, la structure NKH1 ni les molécules codées par des gènes de la classe II du complexe majeur d'histocom- patibilité. D'autres analyses comparatives de la réactivité de l'anticorps monoclonal auti-TiGammaA.l, effectuées au moyen de techniques d'immunofluorescence, ont permis la détection, d'une part, des cellules exprimant les complexes CD3/TCR7/, et, d'autre part, des cellules exprimant le récepteur T a/fi, au moyen d'un anticorps monoclonal spécifique de T3 et de l'anticorps monoclonal BMA 031 (Behring Co.). Ces anticorps particuliers ont été choisis car ils donnent des signaux optimaux dans l'analyse par immunofluorescence indirecte. Les résultats indiquent que la sous-population TiGammaA.1+ représente la majorité des lymphocytes circulants qui expriment le complexe y/d TCR CD3, tandis que ltépitope TiGammaA.1 n'est pas exprimé sur des lymphocytes T a/fi+ classiques. On a également étudié certains effets fonctionnels induits par l'interaction entre l'anticorps monoclonal anti TiGammaA.1 et les lymphocytes qui expriment le déterminant antigénique correspondant. En présence d'interleukine 2 exogène (environ 50 U/ml), l'interaction de l'anticorps monoclonal avec le déterminant antigénique conduit à l'activation et la prolifération des lymphocytes circulants non stimulés. Lorsque des lymphocytes TiGammaA.1+ sont pré-activés avec un mitogène tel que la phytohémagglutinine (environ à 2 mg/ml), et cultivés et stimulés avec de l'anticorps monoclonal anti-TiGammaA.1 qui est couplé à des billes de Sepharose activées au bromure de cyanogène, on constate nettement une prolifération de lymphocytes T 48 heures après la stimulation. Ces lymphocytes T sont également capables de sécréter de l'interleukine 2. L'activité cytotoxique des lymphocytes a été observée plus précisément dans des expériences supplémentaires. La cytotoxicité a été mesurée au cours d'une expérience de 3 heures, après marquage des cellules cibles avec 51Cr. Normalement, les cellules TiGammaA.1+ déterminées par l'anticorps monoclonal de la présente invention, apparais sent, lorsqu'elles sont au repos, comme une population très homogène de lymphocytes granuleux. Cependant, elles ne provoquent qu'une activité cytotoxique spontanée faible ou nulle contre les cibles classiques du système dénommé "système cytotoxique naturel", comme par exemple la lignée K562 qui dérive d'une effusion pleurale de leucémie myéloïde chronique. En conséquence, cette sous-population ne contribue pas de façon importante à l'activité cytotoxique naturelle du sang périphérique, et cela est compatible avec l'absence d'expression à la surface du marqueur NRHI, comme expliqué précédemment. Par contre, lorsque les lymphocytes TiGammaA.1+ sont activés au moyen de mitogènes et par de l'interleukine2 exogène, ils deviennent très cytotoxiques à l'égard de nombreuses cellules tumorales, et en particulier les cellules de la lignée K562. Cette cytotoxicité peut être induite en une très courte durée de 3 à 5 jours. Les lymphocytes TiGammaA.1+ ainsi activés peuvent ensuite participer au phénomène connu en tant que "fonction tueuse activée par lymphokine" (qui correspond au "phénomène LAK" britannique). En outre, après l'interaction entre des lymphocytes TiGam maza.1 activés et l'anticorps monoclonal anti-TiGammaA.1, on constate une importante modification des fonctions cytotoxiques. On note ici une différence importante entre l'anti TiGammaA et l'anti-TiGammaA.1. En utilisant de l'anti TiGammaA, qui est un anticorps d'isotype IgG2a, et une cellule cible relativement résistante exprimant le récepteur Fc d'immunoglobulines, à savoir la lignée hystiocytaire humaine U937, l'action de l'anticorps a pour résultat un net accroissement de la cytotoxicité cellulaire. L'expérience correspondante qui est dépendante de récepteurs Fc sur des cellules telles que celles de la lignée U937, ne fonctionne pas avec des anticorps IgM, tels que lanti-TiGammaA.l de la présente invention. Si l'on utilise une cellule cible, telle que la lignée leucémique dénommée "jurkat", l'action de l'anticorps a pour résultat une virtuelle suppression de la fonction cytotoxique. L'interaction de l'anticorps et de ltépitope induit une modulation du complexe moléculaire CD3-TiGammaA.1, les molécules de CD3 et de TiGammaA.l étant liées de façon non covalente à la surface de la cellule. Ce phénomène a pour résultat une diminution importante de la lyse cellulaire. Il faut noter que tous les résultats décrits cidessus conduisent à l'hypothèse que TiGammaA.1 représente une partie d'un récepteur fonctionnel intervenant dans des mécanismes de cytotoxicité cellulaire qui n'est pas restreinte par les gènes du complexe majeur d'histocompatibilité. Certaines expériences d'immunoprécipitation, effectuées avec l'anticorps monoclonal anti-TiGammaA.l, ont montré que la structure du récepteur caractérisé par l'anticorps est en fait un complexe moléculaire associé aux protéines CD3. Ce complexe est en général lié par une liaison disulfure. Ces essais d'immunoprécipitation permettent également la détermination de la masse moléculaire du déterminant antigénique défini par l'anticorps monoclonal anti-TiGammaA.1. On a effectué les essais de détermination de la masse moléculaire avec une lignée polyclonale de cellules humaines connues sous la dénomination de TiyACl. On marque à leur surface ces cellules TiyACl à l'aide de 125I, en utilisant une méthode classique à la lactopéroxydase, décrite par P. Moingeon, Nature, 323 : 638 (1986). On effectue d'abord plusieurs étapes de pré-clarification avec une suspension de staphylocoques A et d'autres anticorps.Les réactions de précipitation ont ensuite lieu pendant une durée d'environ 46 heures, à une température de 40C, avec de l'anticorps monoclonal anti-TiGammaA.l couplé à des billes de Sepharoseprotéine A. On effectue ensuite une électrophorèse SDS-PAGE sur un gel de polyacrylamide à 10 %, à la fois dans des conditions non réductrices et dans des conditions réductri ces. (Les conditions réductrices demandent l'application préliminaire de 5 % de 2-ME). Les résultats de l'analyse d'électrophorèse indiquent que la molécule TiGammaA migre et produit généralement une bande homogène à 85 000 daltons (Figure 3A) dans des conditions non réductrices. Dans des conditions réductrices, la molécule a été dissociée en deux bandes principales se chevauchant, centrées aux environ de 46 000 daltons (chaîne TCRG) et aux environs de 42 000 daltons (chaîne TCRy). Le chevauchement des bandes et la séparation entre les deux sont indiqués par une légère indentation, comme représenté sur la Figure 3B. Ces autoradiogrammes d'immunoprécipitation sont très reproductibles d'une cellule à l'autre, exprimant des récepteurs à liaison disulfure. Des différences mineures de mobilité électrophorétique d'une cellule à l'autre correspondent probablement à des différences de glycosylation.Ces essais montrent que les deux bandes à 46 000 et 42 000 daltons immunoprécipitées par l'anticorps monoclonal anti TiGammaA.l correspondent à des protéines qui sont codées par les gènes réarrangés delta et gamma, respectivement, de cellule T. Le gène réarrangé codant pour la protéine TiGammaA.1 à la surface de la cellule est caractérisé plus précisément par des analyses Southern blot et Northern blot au moyen de sondes moléculaires appropriées, telles que les sondes du type C-gamma, J-gamma et V-gamma. Plusieurs lignées cellulaires clonales représentatives, caractérisées pour l'expression des épitopes TiGammaA et TiGammaA.1 ont été testées (Tableaux 2 et 3). Les résultats de ces expériences mènent à la conclusion que le réarrangement spécifique résultant dans la transcription de l'ARN messager fournissant la protéine TiGammaA.1, fait intervenir le gène V-gamma-9 généralement joint au gène J-gamma-P.Ce réarrangement est transcrit en outre avec la région constante c-gamma-l, dans la plupart des lymphocytes périphériques y/d, car la protéine exprimée à la surface de la cellule est un dimère lié par pont disulfure. Ainsi, l'anticorps monoclonal anti-TiGammaA.1 reconnaît une glycoprotéine V-gamma-9 qui est fréquemment associée à un segment J-gamma-P dans les chaînes gamma de TCR. Expérience 1 Immunoprécipitation d'anti-GammaA et d'anti-TiGammaA.1 Les anticorps monoclonaux ont été couplés à du Sepharose 4B activé au CNBr, à raison de 2 mg d'anticorps/ml de gel. 30 x 106 cellules TiGammaACl (une lignée cellulaire polyclonale exprimant à la fois les épitopes TiGammaA et TiGammaA.l) ont été marquées à la surface avec 125I, au moyen de lactoperoxydase. On a ensuite lysé les cellules avec un agent de lyse tamponné contenant 1,0 % de Triton X-100 et des inhibiteurs de protéases. Après élimination des noyaux et des matières insolubles par centrifugation, on a pré-clarifié plusieurs fois le lysat de celluls avec S. aureus fixé au formol et un anticorps non spécifique couplé à du Sepharose 4B activé au CNBr.Le lysat pré-clarifié a été séparé en deux parties et ensuite soumis à des immunoprécipitations spécifiques, en parallèle, par les anticorps anti-TiGammaA et anti TiGammaA.1. Les matériels immunoprécipités ont été lavés avec une série de tampons et dissociés des billes pendant 3 minutes à 1000C dans une solution tampon contenant du SDS. Pour l'analyse des matériels immunoprécipités, on a effectué une électrophorèse en gel de polyacrylamide-SDS selon la méthode de Laemmli, en utilisant un gel de polyacrylamide à 10 %, dans des conditions réductrices et des conditions non réductrices. Les molécules radio-iodées sur le gel de polyacrylamide ont été décelées par autoradiographie. Dans l'autoradiogramme (Figures 3A et 3B), les molécules immunoprécipitées par anti-TiGammaA et TiGammaA.1 présentent exactement la même migration sur polyacrylamide SDS à la fois dans des conditions réductrices et dans des conditions non réductrices. Dans des conditions non réductrices, l'hétérodimère TCR y/d, lié par une liaison disulfure, est apparu sous forme d'une bande de forte intensité aux environs de 85 000 daltons (Figure 3A). Les deux bandes mineures apparaissant aux environs de 46 000 et 42 000 daltons (Figure 3A) sont des chaînes TCRô et TCRy, respectivement, non liées par des ponts disulfure.Cela donne à penser que les anticorps monoclonaux anti-TiGammaA et anti TiGammaA.1 peuvent aussi bien reconnaître des hétérodimères y/d de TCR non liés par liaison disulfure (Cy2) que des hétérodimères y/d de TCR liés par liaison disulfure (Cyl). La coupure des liaisons disulfure a été réalisée par addition de 2-mercaptoéthanol (ME) aux échantillons et électrophorèse dans des conditions réductrices. La bande à 85 000 daltons a été dissociée en deux bandes principales à 42 000 daltons (chaîne y de TCR) et 46 000 daltons (chaîne ô de TCR). Une bande mineure à 38 000 daltons représente une chaîne y de TCR qui n'est pas totalement glycosylée. Expérience 2 Co-modulation de l'épitope TiGammaA.l avec les molécules CD3 par traitement par un anticorps anti-CD3 Les anticorps monoclonaux utilisés étaient anti TiGammaA, anti-TiGammaA.1, OKT3 (anti-CD3), TCRG-1 (chaîne d'anti-TCRô-1), NKTa (un anti-TCR clonotypique utilisé en tant que contrôle négatif) et XC3 (anti-CD2 utilisé en tant que témoin positif). Les cellules utilisées étaient Tl.2G8, une lignée cellulaire clonée TiGammaA. Les phénotypes sont OKT3 = 96 %, TCRô-1 = 96 %, anti-TiGammaA = 97 %, anti TiGammaA.1 = 96 % et XC3 = 96 %. L'immunofluorescence indirecte a été effectuée sur des cellules TiGammaA+ clonées (Tl.2G8) traitées par un anticorps monoclonal dirigé contre le complexe CD3 (OKT3). On a mis les cellules à incuber dans un incubateur à CO2 (370C, 10 % de CO2) pendant une nuit dans du milieu contenant 8 % de sérum AB humain plus de l'ascite OKT3 (1/100 = 30 Ag d'IgG/ ml), à une concentration de 1 x 106 cellules/ml. Après plusieurs lavages avec le même milieu, on a soumis les cellules à l'analyse par immunofluorescence indirecte pour chaque anticorps, et on a analysé 5000 cellules à l'aide d'un cytofluoromètre. Les résultats sont représentés sur les Figures 2a-21. Comme représenté sur les Figures, les anticorps monoclonaux anti-TiGammaA (Figure 2d), anti-TiGammaA.1 (Figure 2e), OKT3 (Figure 2b), TCRG-1 (Figure 2c) et XC3 (Figure 2f) étaient positifs sur les cellules non traitées. Sur les cellules traitées par OKT3, ces anticorps, à l'excep- tion de XC3, réduisaient leur pic moyen de fluorescence (Figure 2g-21). Les épitopes TiGammaA et TiGammaA.l qui sont exprimés à la surface des cellules sont l'un et l'autre comodulés (co-internalisés) avec les molécules CD3 (et également la chaîne TCRd) par traitement par l'anticorps OKT3. Cela donne à penser que les molécules reconnues par les anticorps monoclonaux anti-TiGammaA et anti-TiGammaA.1 sont associés physiquement au complexe TCR/CD3 à la surface des cellules. Expérience 3 Réactivité comparée d'anti-TiyA et d'anti- TiyA.l~sur~des~lignées~cellulaires clonales représentatives choisies On a testé dans des essais d'immunofluorescence une série de lignées cellulaires clonales y/d, pour comparer les réactivités d'anti-TiGammaA et anti-TiGammaA.l. On a choisi des cellules clonées exprimant différents types de chaînes gamma ou delta. Les structures quaternaires du TCR (struct. quat. TCR y/d) indiquent l'utilisation d'une chaîne gamma comprenant soit la région constante gamma-Cl pour des récepteurs à liaison disulfure (S-S), soit une chaîne gamma comprenant la région constante C-gamma-2 pour des récepteurs non liés par liaison disulfure (non S-S). Les attributions de réarrangements gamma sont indiqués (NI : non identifié, G lignée germinale). Les réarrangements delta sans spécification (R) sont sur Jôl ; NlF9 présente un réarrangement Vdl- Jô2 ; F6C7 présente un réarrangement V61-Jb3 et F6G6 présente un réarrangement V#2-J#3. Les résultats donnés dans les Tableaux 2 et 3 indiquent que les deux anticorps ont la même réactivité sur toutes les lignées cellulaires clonales testées.Toutefois, l'intensité de TiyA.l est légèrement plus faible que celle de TiGammaA. Cela peut être dû à une plus faible interaction du FITC anti-souris de chèvre avec l'isotype IgM. Tableau 2 Phénotypes Clone CD3 BMA031 TCRd1 A13 TiVô2 TiyA TiyA.1 &alpha;/ss C# V#1 V62 Vy9 NlC3 + - + - - - NlF9 + - + - - - Ab + - + - + + + Bg + - + - + + + Bl + - + - + + + Br + - + - + + + F6C7 + - + T - + + F6G6 + - + - + - - Tableau 3 Réarranqements du gène TCR Clone Struct. locus y locus d quat. ch.l ch.2 V2 V#1 TCR &gamma;;/# NlC3 non S-S V8-JP2 NI-J2 G G G G NlF9 non S-S V3-J2 V4-J2 D G R* G Ab S-S V9-JP V10-JP1 R G G G Bg S-S V9-JP V10-JP1 R G G G Bl S-S V9-JP V10-JP1 D R G G Br S-S V9-JP V10-JP1 D R G G F6C7 S-S V9-JP V3-J1 D R R* G F6G6 S-S V4-J1 G R* G G G Toutes les expériences et résultats décrits plus haut caractérisent l'anticorps monoclonal anti-TiGammaA.1 et la structure du récepteur des lymphocytes T qui est associé aux protéines CD3 et impliqué dans les fonctions cellulaires, en particulier les fonctions cytotoxiques. L'anticorps monoclonal selon la présente invention peut être utilisé pour l'identification de lymphocytes T humains portant un récepteur codé par le gène gamma. On peut également l'utiliser pour caractériser l'état de différenciation de ces cellules T. En outre, l'anticorps monoclonal anti-TiGammaA.1 peut être utilisé thérapeutiquement contre des maladies auto-immunes, des carcinomes et des infections virales. L'anticorps monoclonal, utilisé ex vivo, pourrait permettre la réduction de populations de lymphocytes correspondantes, avant des greffes d'organes ou de moelle osseuse. L'utilisation de l'anticorps monoclonal après des opérations de greffe/transplantation pour agir contre, soit le rejet de greffe/transplantation, soit une maladie de greffe/transplantation contre hôte, à condition qu'il soit établi que les cellules exprimant TiGammaA.1 jouent un rôle dans ces phénomènes biologiques. La présente invention a donc pour objet des médicaments contenant au moins l'anticorps précédemment décrit. Elle concerne en outre des compositions pharmaceutiques contenant une quantité efficace de l'anticorps précédemment décrit en association avec un ou plusieurs diluants ou adjuvants compatibles et pharmaceutiquement acceptables. REVENDICATIONS 1. Lignée cellulaire d'hybridomes produisant un anticorps monoclonal du type anti-TiGammaA.1 qui reconnaît un récepteur des lymphocytes T de la seconde famille, codé par des gènes dénommés gamma qui réarrangent spécifiquement dans les cellules T. 2. Lignée cellulaire d'hybridomes portant le numéro de dépôt ATCC HB 10610. 3. Anticorps monoclonal du type anti-TigammaA.1, caractérisé en ce que ledit anticorps monoclonal est de l'isotype IgM et reconnaît un récepteur des lymphocytes T de la seconde famille, codé par des gènes dénommés gamma qui réarrangent spécifiquement dans les cellules T. 4. Anticorps monoclonal selon la revendication 3, caractérisé en ce que ledit anticorps monoclonal reconnaît une structure glycoprotéique à la surface de lymphocytes T humains, ayant généralement une masse moléculaire d'environ 85 000 daltons dans des conditions non réductrices, et ladite glycoprotéine étant dissociée en deux fragments d'environ 42 000 daltons et d'environ 46 000 daltons dans des conditions réductrices. 5. Anticorps monoclonal selon la revendication 3, caractérisé en ce que ledit anticorps monoclonal reconnaît une structure de glycoprotéine codée par le segment V-gamma9 qui est le plus fréquemment réarrangé avec le segment Jgamma-P dans des lymphocytes périphériques. 6. Anticorps monoclonal selon la revendication 3, caractérisé en ce qu'il porte un marqueur décelable. 7. Anticorps monoclonal selon la revendication 3, caractérisé en ce que ledit anticorps porte un marqueur fluorescent ou radio-isotopique conjugué à celui-ci. 8. Anticorps monoclonal selon la revendication 3, caractérisé en ce que ledit anticorps monoclonal immunoprécipite des molécules ayant une structure de récepteur de cellules T associée à des protéines CD3. 9. Anticorps monoclonal selon la revendication 3, caractérisé en ce que ledit anticorps monoclonal immunoprécipite des molécules de membranes ayant des masses moléculaires d'environ 42 000 et 46 000 daltons dans des conditions réductrices, et immunoprécipite une molécule de membrane ayant généralement une masse moléculaire d'environ 85 000 daltons dans des conditions non réductrices. 10. Anticorps monoclonal produit par la lignée cellulaire d'hybridomes portant le numéro de dépôt ATCC HB 10610. 11. Médicament contenant au moins un anticorps selon l'une des revendications 3 à 10. 12. Composition pharmaceutique, caractérisée en ce qu'elle contient une quantité efficace d'au moins un anticorps selon l'une des revendications 3 à 10, en association avec un ou plusieurs adjuvants ou diluants compatibles et pharmaceutiquement acceptables.