Brevet FR2665362A1 — publié le 19920207

-1- La présente invention concerne l'application d'une substance contenant, comme principe actif, une adénosine substituée en N 6, pour l'obtention d'un médicament destiné au traitement de l'hyperlipémie et de l'hypertriglycéridémie. On a décrit dans le brevet FR-A-8419047 l'action particulièrement forte, hypotensive ou anti- hypertensive, anti-inflamatoire, analgésique, d'une adénosine substituée, de formule I OR 2 )3-i-NH 3 * -N 2 (I) dans laquelle R 1, R 2 l'hydrogène (Agr 529) ou et R 3 représentent chacun CH 3 CH 2 il -C Or on a trouvé que l'administration de l'Agr 529 (N 6- carboxamido-3-propyl)adénosine et de sa prodrogue Agr 540 l(carboxamido-3-propylamino)-6-(tripropionyl 2 ',3 ' 5 ', D ribosyl)-9 purinel provoque chez les animaux normaux une hypolipémie (baisse des acides gras, des phospholépides des triglycérides et du cholestérol) et entraîne une normalisation de l'hypertriglycéridémie provoquée. (Agr 540). 2 - L'invention propose donc l'application d'Agr 529 et d'Agr 540, comme ingrédient actif pour l'obtention d'un médicament destiné au traitement de l'hyperlipémie et de l'hypertriglycédémie. L'expérimentation a donc porté, d'une part, sur des animaux sur lesquels une hypertriglycéridémie a été provoquée, d'autre part, sur des animaux normaux. TEST D'HYPERTRIGLYCERIDEMIE PROVOQUEE. L'expérimentation porte sur deux espèces d'animaux: lapins Fauve de Bourgogne d'un poids moyen de 2 kg (EGAV). rats blancs mâles Sprague-Dawley, Iffa Credo, d'un poids moyen de 260-270 g. L'hypertriglycéridémie est obtenue par injection intraveineuse (iv) de Triton WR 1339 (tyloxapol), à la dose de 600 mg kg-1, provenant des Etablissements Sigma Chemical Company, N T 8761 (veine marginale de l'oreille sur le lapin, veine jugulaire ou veint du pénis sur le rat, sous anesthésie légère à l'éther, le pentobarbital qui se fixe sur les récepteurs Al pouvant interagir avec les molécules utilisées (Lhose et al, 1985) Tous les animaux utilisés sont à jeûn depuis quinze heures Le sang est collecté sur héparine, centrifugé vingt minutes ( 3000 RPM, à 4 degrés C) Dans le sérum recueilli, les TG (triglycérides) sont dosés suivant la méthode GPO-PAP Kit Boeringher Peridochrom(R), référence: 701-882. Chez les animaux normaux, les acides gras, les triglycérides, le cholestérol sont dosés par réactions enzymatiques automatisées. -3 - 1 Expérimentation sur le lapin. Les animaux sont divisés en deux lots un lot témoin ( 6 animaux) recevant en iv du soluté salé isotonique sous un volume de 0,5 ml kg-1, deux heures avant l'injection de Triton et la même dose de soluté salé que précédemment. un lot traité ( 7 animaux) recevant en iv 2 mg kg-1 d'Agr 529 sous un volume de 0,5 ml kg, deux heures avant l'injection du Triton et d'une nouvelle dose d'Agr 529 ( 2 mg kg-1). Un prélèvement de sang artériel, deux heures après l'injection du Triton, permet le dosage des TG. 2 Expérimentation par voie intrapéritonéale sur le rat. Les animaux sont divisés en deux lots: un lot témoin ( 4 animaux) recevant du soluté salé isotonique sous un volume de 0,2 ml/100 g rat en injection intrapéritonéale (ip), vingt minutes avant l'injection du Triton (iv). un lot traité ( 5 animaux) recevant 2 mg kg-1 d'Agr 529 en ip, dans les mêmes conditions que les témoins. Deux heures après, les animaux sont sacrifiés par décapitation; le sang est recueilli suivant la méthode précédemment décrite, pour le dosage des TG. 3 Expérimentation per os sur le rat. Les animaux sont divisés en six lots un lot témoin-témoin recevant, per os, du soluté salé isotonique sous un volume de 0,2 ml/100 g rat, trente minutes avant l'injection IV de soluté salé isotonique. un lot témoin-Triton recevant per os du soluté salé isotonique, trente minutes avant l'injection IV du Triton. 4- un lot Agr 529 ( 3 mg kg-1 sous un volume de 0,2 ml/100 g rat), trente minutes avant l'injection IV du Triton. un lot recevant dans les mêmes conditions 30 mg kg-1 d'Agr 529, per os. deux lots recevant dans les mêmes conditions que précédemment 3 et 30 mg kg-1 d'Agr 540 per os. EXPERIMENTATION CHEZ LES ANIMAUX NORMAUX. 1 Administration intraveineuse: Les animaux sont répartis en six lots de cinq animaux: un lot témoin recevant le placebo (soluté salé isotonique à 0,9 %). cinq lots traités recevant respectivement 0,03, 0,1, 0,3, 1 et 3 mg kg-1 d'Agr 529 par voie intraveineuse. Les animaux sont sacrifiés deux heures après l'injection du produit. 2 Administration intrapéritonéale: Les animaux sont répartis en cinq lots de cinq animaux: un lot témoin. quatre lots traités recevant 0,1, 0,3, 1 et 3 mg kg-l. Les animaux sont sacrifiés deux heures après l'administration de l'Agr 529. 3 Significativité. L'étude statistique est réalisée à l'aide du test du t de Student avec: * P et ** P - RESULTATS HYPERTRIGLYCERIDEMIE PROVOQUEE. 1 Chez le lapin en intraveineux. Chez les animaux témoins, le Triton provoque une augmentation significative (a**) des TG de 196,5 %, alors que chez les animaux ayant reçu préalablement de l'Agr 529 ( 2 mg kg-1, iv), l'augmentation est de 45 % (*) Comparés aux témoins Triton et au temps 4, les animaux ayant reçu l'Agr 529 ont un taux de TG de 150 % inférieur à celui des témoins (voir tableau I). 2 Chez le rat. a) L'Agr 529 en injection intrapéritonéale. L'injection d'Agr 529 en ip provoque une diminution de 54 % du taux circulant des TG Cette action de l'Agr 529 est significative (**) (voir tableau II). b) L'Agr 529 en administration per os. Per os, l'Agr 529 et l'Agr 540 s'opposent significativement à l'augmentation des TG circulants. L'action la plus importante est obtenue avec 30 mg kg-1 ( 51 % d'inhibition; voir tableau III) On notera que l'action de l'Agr 529 est sensiblement la même que celle de l'Agr 540, malgré le fait que ce dernier soit mieux absorbé per os (Rapport communiqué sur l'Agr 529) Sans doute, cela est-il dû au fait que de petites doses (nanomolaires) soient suffisantes à l'action sur les A 1 récepteurs On peut envisager d'utiliser des doses plus faibles des deux composés dans le modèle développé, puisqu'on ne fait pas varier significativement l'action obtenue en augmentant la dose de 3 à 30 mg kg-1, tout au moins en ce qui concerne l'Agr 529. 6 - B RATS NORMAUX. a) L'Agr 529 en intraveineux. Dans la gamme des doses utilisées, l'effet hypolipémiant ne se manifeste qu'à partie de 0,1 mg kg-1 A 3 mg kg- on note une diminution significative, deux heures après l'injection, des taux de triglycérides, de cholestérol total, d'acides gras, de phospholipides plasmatiques. b) L'Agr 529 en intrapéritonéale. On retrouve les mêmes actions que par voie iv mais l'effet hypolipémiant ne commence à être significatif qu'à partir de 0,3 mg kg-1 (figures I, II, III, IV). c) Etude cinétique de l'Agr 529 à 3 mg kg-1 iv (figures V, VI, VII, VIII). L'administration de 3 mg kg-1 d'Agr 529 entraîne une baisse significative des taux d'acides gras, de triglycérides, de cholestérol total, de phospholipides. L'effet commence à se manifester trente minutes après l'injection et s'accentue dans le temps La baisse est maximale au bout de deux heures Huit heures après l'administration, il y a une tendance de retour aux taux de base Ce qui indique que l'action de l'Agr 529 est de longue durée et que celui-ci n'est pas détruit par l'adénosine déaminase. En résumé, utilisant un modèle d'hypertriglycéridémie provoquée par l'injection intraveineuse de Triton WR 1339, on a constaté que l'Agr 529 lchlorhydrate de N(amido-3-propyl-adénosinel à 2 mg kg-1 par voie intraveineuse chez le lapin d'une part et par voie intrapéritonéale d'autre part normalisait le taux plasmatique des triglycérides circulants. -7 - Par ailleurs l'Agr 529 et sa prodrogue, l'Agr 540 l(carboxamido-3propylamino)-6-(tripropionyl) 2 ', 3 ', ', , D ribosyl)-9-purinel administrés per os aux doses de 3 et 30 mg kg-1 chez le rat ramènent à la normale les concentrations plasmatiques de triglycérides. L'administration intraveineuse d'Agr 529 à des rats normaux provoque en fonction des doses une diminution des taux plasmatiques des acides gras, des phospholipides, des triglycérides, du cholestérol total. La diminution débute à la dose de 0,1 mg kg-1 et devient hautement significative à 3 mg kg-1, dose à laquelle on note par ailleurs une hyperglycemie Dans les mêmes conditions, l'administration intrapéritoneale d'Agr 529 entraîne également en fonction des doses une hypolipémie Cependant à 0,3 mg kg-1, on ne retrouve plus d'hyperglycémie Aucune action n'est à signaler sur les taux de cholestérol et de triglycérides des lipoprotéines à haute densité (HDL). Une étude cinétique montre que l'action hypolipémiante de l'Agr 529 à 3 mg kg-1 en injection intraveineuse se manifeste trente minutes après l'injection avec un effet maximum à deux heures L'effet persiste pendant les huit heures qui suivent l'injection. Une étude in vitro sur fraction microsomique de foie révèle que l'Agr 529 n'a aucune action sur l'activité de la HMG Co A réductase ( J - hydroxy P -méthylglutaryl Co A réductase: enzyme clef de la synthèse du cholestérol). Il en est de même sur l'activité de l'ACAT (cholestérol- 0-acyl transférase), enzyme de l'estérification du cholestérol. En conclusion, on démontre que l'administration d'Agr 529 et d'Agr 540 provoque chez les animaux normaux 8 - une hypolipémie (baisse des acides gras, des phospholipides, des triglycérides et du cholestérol) et entraîne une normalisation de l'hypertriglyvéridémie provoquée. Les doses actives pour observer les effets objets de la présente demande sont inférieures par plusieurs facteurs à celles qui produisent les effets objets du brevet FR 84 19 047 Ces derniers ne sont pas observés ou sont négligeables aux doses hypolipémiantes. Tableaux I, II, III Figures I à VIII TABLEAU I Action de l'Agr 529 à la dose de 2 mg kg-1, administré par voie intraveineuse (iv) sur l'hypertriglycéridémie provoquée par l'injection par la même voie de 600 mg kg-1 de Triton chez le lapin Fauve de Bourgogne (n: nombre d'animaux). Dosage Triglycérides Produit injecté Latence Triglycérides Produit injecté Latence Triglycérides mmole/litre (heures) mmole/litre (heures) mmole/litre Animaux temps= O temps= 2 temps= 4 Témoins 1,74 0,16 Solvant 2 2,98 + 0,40 Solvant 2 8,83 1,13 n= 6 Na Ci 0,9 % Na Cl 0,9 %, iv iv + Triton + 196,5 % *** Essais 1,95 0,34 Agr 529 2 3,19 0,38 Agr 529 2 4,65 0,44 n= 7 2 mg kg-1 2 mg kg-1 iv iv + Triton 600 mg kg-1 iv + 45 % ** (n I \. -10- TABLEAU II Action de l'Agr 529 ( 2 mg kg-1), ip) sur l'hypertriglycéridémie provoquée par l'injection intraveineuse de 600 mg kg-1 de Triton chez le rat (n: nombre d'animaux). Témoins Essais Animaux Soluté Na Ci 0,9 % Agr 529 2 mg kg-1 + + Dosages Triton 600 mg kg- 1 Triton 600 mg kg-1 n= 4 n= 5 Triglycérides 6,32 + 0,92 2,90 + 0,26 mmoles/litre > 54 % ** TABLEAU III on de l'Agr 529 aux doses de 3 et 30 mg kg-1 per os et de l'Agr 540 aux doses de 3 et 30 mg kg-1 per os sur l'hypertriglycéridémie oquée par 1 'injection intraveineuse de 600 mg kg-1 de Triton, chez le rat (n: nombre d'animaux). Dosage Témoins Témoins Essais Agr 529 Essais Agr 529 Essais Agr 540 Essais Agr 540 Na Cl 0,9 % Triton 3 mg kg-1 P O 30 mg kg P O 3 mg kg-1 P O, 30 mg kg-1 P O. Animaux 600 mg kg-l + Triton + Triton + Triton + Triton 600 mg kg-1 iv 600 mg kg-1 iv 600 mg kg-1 iv 600 mg kg-1 iv n= 8 n= 13 n= 4 n= 5 n= 6 n= 8 riglycérides 0,52 0,10 7,53 0,49 4,87 0,69 4,64 0,74 5,65 + 0,46 3,67 0,59 imoles/litre 35 % ** 38 % ** -25 % * -51 % *** Kg w Kg -12- Revendications 1 Application d'une substance contenant, comme principe actif, une adénosine substituée en N 6 de formule I Hv,(H 2)3 2 H, CH 2)3-C,-NH 2 (I) OR 2 un 1 dans laquelle R 1, R 2 et R 3 représentent chacun l'hydrogène (Agr 529) ou CH 3 CH 2 -C - (Agr 540) pour l'obtention d'un médicament destiné au traitement de l'hyperlipémie. 2 Application d'une substance contenant, comme ingrédient actif, une adénosine substituée en N 6 de formule I OR 2 (I) R 3 dans laquelle R 1, R 2 et R 3 l'hydrogène (Agr 529) ou représentent chacun -13- o il CH 3 CH 2 -C - (Agr 540) pour l'obtention d'un médicament destiné au traitement de l'hypertriglycéridémie. 3 Application de la substance selon la revendication 1 ou 2 dans laquelle R 1, R 2, R 3 représentent chacun l'hydrogène. 4 Application de la substance selon la revendication 1 ou 2 dans laquelle R 1, R 2, R 3 représentent chacun le reste CH 3-CH 2-C- i o