Brevet FR2666088A1 — publié le 19920228

La présente invention concerne des composés chimiques potentiellement cytotoxiques présentant la propriété de dégrader l'ADN au niveau de séquences de paires de bases riches en A+T à la suite d'une irradiation par la lumière visible. La netropsine et la distamycine possèdent une structure polypyrrolecarboxamide et sont des agents cytotoxiques et antiviraux d'origine naturelle. Ces molécules semblent détenir leurs propriétés pharmacologiques et leur propriété d'interaction particulière avec l'ADN double brin. Ces composés se fixent, en effet, avec des constantes d'associations élevées au niveau du petit sillon de 1'ADN et présentent une extrême sélectivité pour les séquences riches en paires de bases A+T et en particulier la séquence AATT (Wartell et al., 1974 ; Kopka et al., 1985). De ce fait, la netropsine et la distamycine sont capables de perturber un certain nombre de fonctions biologiques impliquant dans leur mecanisme la reconnaissance de ce type de séquence. La présente invention se rapporte à des composés chimiques caractérisés en ce qu'ils sont constitués d'une molécule de netropsine ou de distamycine ou d'une molécule dérivée de la netropsine ou de la distamycine couplée à une structure chromophore, notamment des composés chimiques hybrides constitués d'une molécule apparentée à la netropsine ou à la distamycine couplée chimiquement par l'intermédiaire d'un radical alkylényl, notamment d'une chaîne polyméthylénique ayant de 1 à 10 atomes de carbone, à un chromophore flavinique. Par "molécule dérivée de la netropsine ou de la distamycine" il faut entendre des composés présentant la structure polypyrrolecarboxamide de type où n est un nombre entier de 1 à 4, ladite structure pouvant comporter d'autres substituants. Le chromophore flavinique ayant la structure d'une isoalloxazine est particulièrement intéressant pour les propriétés qu'il présente de pouvoir subir une photoactivation qui libère des radicaux oxygène en milieu aqueux aérobie en présence de lumière visible. L'activation photochimique du chromophore flavinique se traduit en présence d'oxygène moléculaire par la génération de radicaux dérivés de l'oxygène (anion superoxyde et radical hydroxyle) (Massey et al., 1978). De plus, la riboflavine présente la propriété d'induire une dégradation oxydative de 1'ADN à la suite d'une irradiation lumineuse (Koryka-Dahl & Richardson, 1980). Parmi les composés présentant les propriétés indiquées ci-dessus, on mentionnera tout particulièrement les composés répondant aux formules générales suivantes I et Il dans lesquelles n est un nombre entier de 1 à 4, n' est un nombre entier de 1 à 6, X représente un anion associé pharmaceutiquement acceptable, de préférence un anion chlorure. Parmi les structures décrites ci-dessus, on citera plus particulièrement les composés pour lesquels n' = 4 dans la série des composés de type I et n' = 5 dans la série des composés de type II et où X est un anion chlorure. La présente invention se rapporte également au procédé de préparation desdits composés, caractérisé en ce qu'on effectue le couplage d'une molécule de netropsine ou de distamycine ou dérivée de la netropsine ou de la distamycine à une structure chromophore par l'intermédiaire d'un élément de liaison. Dans un mode de mise en oeuvre préféré, le procédé comprend le couplage d'une molécule de netropsine ou de distamycine ou des dérivés de la netropsine ou de la distamycine à un chromophore flavinique par l'intermédiaire d'une chaîne alkylényle, notamment polyméthylénique. En particulier, il s'agit d'un procédé dans lequel on effectue le couplage d'un composé de structure avec où R représente H ou CH3 et A représente un radical alkylényle ayant de 1 à 10 atomes de carbone, notamment une chaîne polyméthylénique, et n est un nombre entier de 1 à 4, et X est un anion pharmaceutiquement acceptable. Plus particulièrement, la présente invention propose des procédés de couplage correspondant notamment aux schémas ci-après: n=2 k n-3 a n=2 b n=3 en particulier, le couplage d'un composé de formule III avec un composé de formule IV, dans lesquelles n et n' ont les significations donnes précédemment, ou le couplage d'un composé de formule VI avec un composé de formule IV ou des dérivés de ces composés, dans lesquelles n et n' ont les significations données précédemment. Le couplage est effectué notamment grâce à des composés assurant la création d'une liaison amide qui sont notamment largement utilisés dans la synthèse de peptides par exemple. Les composés selon l'invention, notamment de structure I et II, sont caractérisés en ce qu'il présente les propriétés suivantes 1) Fixation préférentielle sur de l'ADN double brin au niveau de séquences riches en paires de base A+T. 2) Production de radicaux oxygénés, anion superoxyde ( 2 et radical hydroxyle (OH") par irradiation en présence de lumière visible. 3) Aptitude à couper de 1'ADN double brin naturel, par exemple un ADN plasmidique supertorsadé fermé, dans les conditions citées précédem ment (irradiation lumineuse). 4) Aptitude à couper l'ADN double brin dans les conditions précédemment citées, préférentiellement au niveau ou à proximité de séquences riches en bases A+T. C'est pourquoi, la présente invention concerne également des compositions caractérisées en ce qu'elles comportent un composé selon l'invention et un support compatible avec l'utilisation dans des milieux contenant de l'ADN, ainsi que l'application des composés selon l'invention pour la coupure des ADN double brin au niveau de séquences d'ADN riches en paires de bases A+T, caractérisée en ce quton met ces composés en présence desdits ADN double brin et d'oxygène moléculaire et que l'on irradie l'ensemble avec un rayonnement en lumière visible. D'autres caractéristiques et avantages de la présente invention apparaîtront à la lumière des exemples ci-après et des dessins annexés dans lesquels - La figure 1 représente les spectres RPE du diméthylpyrrolidone N-oxyde (DMPO) obtenus à température ambiante par irradiation lumineuse polychromatique d'une solution composée de tampon phosphate pH 8,0 contenant 50 mM de DMPO, 1 mM EDTF. Le spectre a a été obtenu en présence de 2 M du composé 7b, le spectre b en présence de 5 pM du composé 7b et le spectre c en présence de 5 pM du composé 7b et 10 ug de SOD. Le temps d'irradiation a été de 2 minutes. Un tracé équivalent à c est obtenu en présence du composé 7b sans irradiation et à la suite d'une irradiation sans composé 7b. Fréquence de la micro-onde 9,670 GHz, modulation 1,25 G et puissance de la micro-onde 100 mM. La figure 2 montre la cinétique de la réduction du cytochrome c par le composé 7b dans une solution irradiée par une lumière blanche polychromatique. Le milieu réactionnel était composé de tampon phosphate pH 8,0 contenant 1 mM EDTA et 50 uM de cytocrome c. indique la présence de 10 I1M de composé 7b, 5 uM de composé 7b, et 10 uM de composé 7b plus 10 ijg de SOD. L'énergie de la radiation lumineuse était d'environ 150 W/cm2. La figure 3 montre l'électrophorèse en gel d'agarose d'ADN de pBR322 soumis à l'action de concentration croissante du composé 5a et irradiation lumineuse. Les milieux réactionnels étaient composés de tampon phosphate pH 7,X0 contenant 1 mM EDTA, 30 uM de pBR322 et des concentrations croissantes (de gauche à droite, 0, 0,5, 1, 2, 3 pM) de composé 5a. Le temps d'irradiation par la lumière polychromatique (150 W/cm2) a été de 10 min. L'ADN a ensuite été soumis à une électrophorèse en gel d'agarose à 0,7 %. Les bandes ont été révélées au BET et détectées par fluorescence. La figure 4 représente l'induction de coupures simple brin sur le plasmide pBR322 par la riboflavine et le composé 5a. Les milieux réactionnels étaient composés de tampon phosphate 0,05 M (pH 7,40) contenant 1 mM EDTA, 30 pM de pBR322 (exprimé en phosphate) et 1 ,uM de composé 5a (net-flavine) ou de riboflavine. Les solutions ont subi une irrédiation lumineuse par une lumière blanche polychromatique (150 W/cm2). Les formes I et II de l'ADN ont été séparées par électrophorèse en gel d'agarose à 7 % et quantifiées par enregistrement densitométrique après coloration par le BET. La figure 5 montre l'enregistrement densitométrique d'une séparation électrophorétique en gel d'agarose en conditions dénaturantes. Le milieu réactionnel était composé de tampon phosphate 0,05 M (pH 7,40) contenant 1 mM EDTA, 30 uM de pBR322 et 2 CIM de composé 5a. Le temps d'irradiation a été de 10 minutes. Après irradiation l'échantillon a été traité par l'endonucléase de restriction EcoRI puis la nucléase SI selon les modalités décrites par Barton et api., 1985. Les différents fragments d'ADN ont été séparés par électrophorèse sur gel d'agarose à 1 % puis colorés par le BET. Les tailles des fragments ont été déterminées par rapport à des ADN marqueurs. Les chiffres correspondent à la position des nucléotides sur le plasmide en utilisant la convention usuelle (origine au site EcoRI). EXEMPLE a) Préparation du 5-(7, 8, 10-triméthylisoalloxaxine-3-yl) pentanoate d'éthyle 2 Une suspension de 10 g (39 mmoles) de lumiflavine il, 27 g (195 mmoles) de carbonate de potassium sec, 31 ml (195 mmoles) de 5 bronopentanoate d'éthyle dans 800 ml de DMF sec est chauffée à 400 C pendant 48 h. Après élimination du DMF et addition de 600 ml d'eau, le produit est extrait par du dichlorométhane. ADrès élimination du solvant, le résidu est trituré avec de l'éther de pétrole, essoré puis lavé avec ce solvant. Le produit est purifie par flash chromatographie sur gel de silice (Lichroprep Si60, 40-63 microm), solvant : dichlorométhane-acétate d'éthyle 9-1. 2 : 6,33 g (42 %), PF = 1870C (C2H5OH) RMN (CDCl3): 1,19(3H,t,CH2-CH3); 1,68(4H,m,CH2-(CH2)2-CH2; 2,30 (2H,t,CH2-CO); 2,40(3H,s,7-CH3); 2,50(3H,s,8-CH3); 4,04(7H,m, NCH2,NCH3 et OCH2); 7,35(1H,s,9-H); 8,0(1H,s,6-H) IR(KBr) : 1695, 1730 cm-1 (vCO) S.M. (ionisation chimique): 385(M+H)+ Analyse : C% th : 62,48 ; tr : 62,59 ; H% th : 6,29 ; tr 6,39; N% th : 14,57, tr : 14,76. b) Préparation de l'acide 5-(7,8,10-triméthylisoalloxazine-3- yl) pentanoïque 3 Une suspension de 1 g (2,6 mmoles) d'ester 2 dans 10 ml d'HCl 2N est chauffée à reflux pendant 2,5 h. Aorès refroidissement, le précipité est essoré et lavé à l'eau. I1 est purifié par dissolution dans une solution saturée d'hydrogénocarbonate de sodium et précipitation par addition d'ECl 6N jusqu'à pH 1. 3 : 0,853 g (92 %), PF = 250 C RMN(DMSO d6): 1,52(4H,m,CH2-(CH2)2-CH2); 2,18,q(2H,t,CH2-CO); 2,35(3H,s,7-CH3); 2,47(3H,m,8-CH3) et DMSO), 3,81(2H,t,NCH2); 3,93 (3R,s,NCH3), 7,72 (îH,s,9-E) ; 7,88(1H,s,6-H); 11,92 (1H, s, COOH). IR(KBr) : 1710 et 1720 (vCO) ; 3500 (#OH) cm-1. S.M. (ionisation chimique : 357(M+H)+ Analyse : Ci th : 60,66, tr : 60,44 ; E% th : 5,65, tr : 5,72; N% t : 15,72, tr : 15,28. EXEMPLE 2 a) Préparation du chlorure de 3-[1-méthyl-4-[1-méthyl-4-[4- (7,8,10-triméthylisoalloxazine-3-yl)butylcarboxamido]pyrrole-2carboxamido] pyrrole-2-carboxamido]propionamidinium 5a A une solution de 400 mg (1,12 mmole) de 3 dans 15 ml de DMF, sont ajoutés successivement 461 mg (2,24 mmoles) de dicyclohexylcarbodii=ide (DCC) et 445 mg (1,12 mmole) d'amine 4a (Lown et al, 1985). Après 4 jours d'agitation a 200C, le DMF est éliminé sous vide. Le résidu est repris par de l'éther éthylique sec. Le précipité obtenu après filtration est dissous dans un minimum de méthanol sec.L'addition d'éther éthylique sec permet d'isoler un précipité qui est purifié par flashchromatographie sur silice (Lichroprep Si60, 40-63 microm) en utilisant le méthanol comme solvant. Des impuretés et un produit secondaire sont éliminés dans les premières fractions. 5a : 122 mg (15 %), PF = 210-211 C. RMN(DMSO-d6) : 1,47(4H, m, CH2-(CH2)2-CH2); 2,20(2E, t,CH2-CO); 2,34(3H,s,7-CH3); 2,47(m,8-CH3,CH2-C(=+NH2)NH2 et DMSO); 3,42(2H,quint,NH-CH2); 3,73(6H,s,NCH3 pyrroliques); 3,87(2H,t, NCH2); 3,93(3H,s,10-CH3); 6,80, 6,83, 7,07, 7,13 (4xlH, 4s, H pyrroliques); 7,77(1H,s,9-H); 7,90(1H,s,6-H); 8,16(1H,t,NH CH2); 8,80(4H,s,large,C(=+NH2); 9,73(1H,s,CONH); 9,81 (1H,s,CONH). IR(KBr) : 1580, 1640 (vCO) ; 2950, 3300 (#NH). S.M. (FAB) : 670,42 (M-Cl) b) Préparation du chlorure de 3-[1-méthyl-4[1-méthyl-4-[1- méthyl-4-[4-(7,8,10-trimethylisoalloxazine-3-yl) butylcarboxa mido ] pyrrole-2 -carboxamido i pyrrole-2 -carboxamido i pyrrole-2- carboxamido]propioamidinium 5b A une solution de 400 mg (1,12 mmole) de 3 dans 28 ml de DMF sec, sont ajoutés successivement 461 mg (2,24 mmoles) de DCC et 550 mg (1,12 mmole) d'amine 4b (Lown et al., 1985). Après 90 heures d'agitation à la température ambiante, 50 mg (0,1 mmole) d'amine 4b sont ajoutés de nouveau, l'agitation est maintenue pendant 24 heures. Après filtration, le DMF est éliminé sous pression réduite. Le résidu est dissous dans 20 ml de méthanol. Le précipité obtenu par addition d'éther éthylique sec est essoré puis lavé à l'éther. il est séparé d'impuretés et d'un produit secondaire par flash-chromatographicue sur silice (Lichroprep Si60, 40-63- m) en utilisant le méthanol comme solvant. 5b : 156 mg (17 %), PF = 262-2640C (déc). RMN (DMSO-d6) : 1,57(4H,m,CH2-(CH2)2-CH2); 2,23(4H,m,CH2-CO et CH2-C(=+NH2) NH2; 2,35(3H,s,7-CH3) ; 2,45(8-CH3 avec le DMSO); 3,36(2H,m,NHCH2); 3,77(6H,s,2 NCH3 pyrroliques); 3,80(3H,s,NCH3 pyrrolique); 3,86(2H,t,NCH2) ; 3,93(3H,s,10-CH3); 6,80(2H,s,H pyrroliques); 6,97, 7,07, 7,13, 7,16 (4x1H,4s,4H pyrroliques); 7,75(îR,s,9-H); 7,88(1H,s,6-E); 8,1(2H,m,2 CONE); 9,73 (1H, m, CONH); 9,83(1H,m,CONH). IR(KBr) : 1585, 1640(vCO) ; 3320 (#NH) cm-1 @ EXEMPLE 3 a) Préparation du chlorure de 3-[1-méthyl-4-[1-méthyl-4-[5- (7,8-diméthyiscalloxazine-10-yl)pentylcarboxamido]pyrrole-2carboxamido] pyrrole-2-carboxamido] propionamidinium 7a Le composé 7a est obtenu par le mème procédé que celui décrit pour 5a à partir de 356 mg (1 mmole) d'acide 6-(7,8 diméthyllsoalloxazine-10-yl) hexanoïque 6 (Fory et al., 1968), 406 mg (2 mmoles) de DCC et 397 mg (1 mmole) d'amine 4a (Lown et al., 1985). Après 2 jours d'agitation à 20 C, le produit obtenu est traité et purifié de la meme façon que a. 7a : 240 mg (34 %), PF = 225-227oC. RMN (DMSO-d6): 1,45(2H,m,(CH2)2-CH2-(CH2)2); 1,80(4H,m,CH2-CH2 CH2-CH2-CH2); 2,28(4H,m,CH2-C(=+NH2)NH2 et CH2-CO); 2,33(3H, s, 7-CH3); 2,45(8-CH3 avec le DMSO) ; 3,36(NH-CH2 avec 3,75 (6H,s,NCH3); 4,51(2H,t,NCH2); 6,77, 6,84, 7,09, 7,15 (4xlH,4s,4H pyrroliques); 7,71(1H,s,9-H); 7,84 (1H,s,6-H); 8,08 (2H,s,2NH); 9,78(2H,m,2NH). IR(KBr): 1580, 1640 (#CO); 3290 (#NH) cm-1. S.M. (FAB): 670,43 (M-Cl)+. b) Péparation du chlorure de 3-[1-méthyl-4-[1-méthyl-4-[1- méthyl-4-[5-(7,8-diméthyliscalloxazine-10-yl) pentylcarboxamido] pyrrole-2-carboxamido] pyrrole -2-carboxamido]pyrrole-2 carboxamidol propionami- dinium 7b Le composé 7b est obtenu par le même procédé que celui décrit pour 5b à partir de 400 mg (1,12 mmole) d'acide 6, 461 mg (2,24 mmoles) de DCC et 550 mg (1,12 mmole) d'amine 4b (Lown et al., 1985). Après 3 jours d'agitation,46 mg (0,22 mmole) de DCC et 54 mg (0,11 mmole) d'amine 4b sont ajoutés, l'agitation est maintenue pendant 3 jours. Le composé 7b est traité et purifié d'une façon identique à celle utilisée pour 5b. 7b : 138 mg (15 %), PF = 246-2480C (déc). RMN(DMSO-d6): 1,42(2H,m,(CH2)2-CH2-(CH2)2); 1,60(4H,m,CH2-CH2 CH2-CR2-CH2); 2,22(4H,m,CH2CO et CH2-C(=+NH2)NE2); 2,31(3H,s,7 CH3); 2,45(8-CH3 avec le DMSO); 3,36(NHCH2 avec H2O); 3,69(9H, m,3 NCH3); 4,44(2H,t,NCH2); 6,69, 6,75, 6,89, 6,99, 7,04, 7,09 (6x1H,6s,6H pyrroliques); 7,62(1H,s,9-H); 7,72(1H,s,6-H), 8,01 (2H,m,2 NH); 9,69(2H,m,2 NH). IR(KBr): 1580, 1640 (#CO); 3290 (#NH) cm-1. S.M. (FAB): 793,2 (M-Cl+H)+ EXEMPLE 4 PROPRIETES BIOCHIMIQUES Interaction des composés selon l'invention avec les polynucléotides synthétiques. La mesure de la constante d'association apparente (Kapp) pour les polynucléotides synthétiques poly d(A-T) et poly d(G-C) donne des informations concernant la sélectivité de liaison des molécules sur des séquences soit riches en A+T soit en G+C. Poly d(A-T) Poly å(G-ç) 5a S1 1,7 107 Sl 3,9 106 S2 1,8 105 S2 7,8 7a 1,5 109 3,5 101 5b Sl 8,1 107 1,3 106 S2 3,3 106 7b SI 8,2 108 9,0 S2 1,2 108 Tableau I. Constantes d'association exprimées en M~1 l des composés hybrides selon l'invention avec le poly d(A-T) et le poly d(G-C). Les constantes d'association ont été mesurées oar la technique d'exclusion du Bromure d'Ethidium selon les modalités opératoires décrites par Baguley et al. (1981). Milieu réactionnel: Tampon cacodylate pH 7,0 contenant 1 microM de polynucléotide (exprimé en phosphate), 1,26 microM de BET et 10 mM NaCl. Les molécules préparées selon l'invention présentent dans leur structure soit une partie bis-pyrrole-carboxamide apparentée à la netropsine, soit une partie ter-pyrrolecarboxamide apparentée à la distamycine. En regard des nombreux travaux publiés, il apparaît que les structures de type polypyrrole-carboxamide se fixent préférentiellement au niveau du petit sillon de l'ADN sur des séquences riches en paires de base A+T. Les résultats du tableau I montrent que les composés présentent une affinité très supérieure pour le poly d(A-T) comparée au poly d(G-C). Dans la plupart des cas il existe deux sites de fixation sur les polynucléotides. On remarquera la très forte affinité pour le poly d(A-T) du composé 7b possèdant une chaîne ter-pyrrole de type distamycine. il apparaît donc que la présence du chromophore flavinique ne modifie as de façon notable les propriétés de fixation sélective e la partie pyrrolique sur les séquences A+T. EXEMPLE 5 Production d'anion superoxyde (O2.-) par des composés selon la présente invention. La production d'anion superoxyde a été mise en évidence I) d'une manière qualitative par résonance paramagnétique électronique (RPE) en utilisant la technique du piègage radicalaire par le DMPO (spin trapping) selon inkelstein et al. (1979), 2) d'une manière quantitative oar la mesure de la réduction du cytochrome c en présence et en absence de superoxyde dismutase (SOD) selon la technique décrite par Mi et Fridovich (1977) - Détection de la production d'O2. par RPE La figure 1 montre à titre d'exemple les spectres RPE obtenus à la suite de l'irradiation par une lumière blanche polychromatique de solutions aqueuses contenant 50 microM de DMPO, 2 ou 5 microM du composé 7b. Sur la figure I les spectres obtenus sont caractéristiques de l'adduit DMPO-O résultant de l'addition du radical OH0 sur le DMPO. L'absence de spectre observé en présence de 10 microg de SOD ajouté avant irradiation dans un milieu contenant 50 microM de DMP'O et 5 microM du composé 7b indique que la production de radical OHO résulte de la production initiale d'O2.-. - Quantification de la production d'O2.- par la réduction du cytochrome c La figure 2 montre à titre d'exemple la cinétique de la réduction du cytochrome c à la suite de l'irradiation par une lumière blance polychromatique d'une solution aqueuse contenant 50 microM de ferricytochrome c, et 5 microM ou 10 microM du composé 7b. L'addition de 10 microg de SOD avant irradiation du mileu réactionnel contenant 50 microM de ferricytochrome c et 10 microM du composé 7b inhibe pratiquement totalement la réduction du cytochrome c indiquant que cette réduction est essentiellement due à la production d'anion superoxyde. n utilisant un coefficient d'extiction moléculaire de 22500 m-1 cm-1 pour le ferrocytochrome c il est possible de quantifier la production d'Oz en sachant que la réaction se produit de la manière suivante: O2.- + cyt c FeIII 2 + cyt c FeII Les résultats obtenus avec divers composés selon l'invention sont indiqués dans le tableau II. production de Production d'O2-- DMPO-OH- nmole/min/nmole 5a + 0.73 7a + 1.67 Sb + 0.88 7b + 4.1 Tableau II. Détection et mesure de la production d'O2.- par les composés selon l'invention à la suite d'une irradiatïon par une lumière blanche polychromatique. Les conditions opératoires étaient celles décrites dans les légendes des figures 1 et2 Les résultats indiqués dans le tableau II montre que l'irradiation lumineuse des solutions contenant n des composés selon l'invention se traduit par la formation d'un spectre RPE caractéristique de L'adduit DMPO- OH qui est le reflet de la production d'O2.-.La réduction du cytochrome c inhibable par la SOD confirme la réalité de la production d'O2.-. EXEMPLE 6 Coupure de 1'ADN de plasmide pBR322 par un composé netropsineflavine selon la présente invention. Sous sa forme native le DNA plasmidique de pBR322 se présente sous une forme supertorsadée fermée (forme I). Une coupure simple brin donne naissance à une forme circulaire fermée (forme II). Une deuxième coupure sur le brin opposé au niveau de la coupure simole brin initiale conduit à l'apparition de la forme linéaire (forme III). Ces trois formes peuvent être séparées par électrophorèse en gel d'agarose et quantifiées par l'intensité de fluorescence de chaque bande après coloration du gel par le BET (Figure3 ). La figure 9 montre à titre d'exemple l'apparition d'une coupure simple brin en présence de concentrations croissantes du composé 5a au cours de l'irradiation de la solution par une lumière blanche monochromatique. Aucune coupure n'est détectée à la suite de l'irradiation de l'échantillon ne contenant pas le composé 5a. La figure 4 montre à titre d'exemple les effets comparés du composé 5a et de la riboflavine. On constate pour les temps d'irradiation courts une efficacité de coupure du composé Sa supérieure à-la riboflavine. EXEMPLE 7 Coupure sélective sur des séquences définies par un composé netropsine-fiavine selon la présente invention. La mise en évidence de l'induction de coupures au niveau de séquences d'ADN particulières est effectuée selon les modalités suivantes: On fait agir comme indiqué précédemment le composé testé sur l'ADN de plasmide pBR322 ce qui a pour effet d'induire dans les conditions opératoires utilisées des coupures simple brin. On fait agir ensuite l'enzyme de restriction EcoRI qui donne une molécule d'ADN linéaire présentant les coupures simple brin précédemment induites. On fait ensuite agir la nuoléase S1 qui produit sélectivement une deuxième coupure sur le brin opposé au niveau des coupures simole brin donnant ainsi des fragments d'ADN linéaire. Ces fragments sont ensuite soumis a une électrophorèse sur gel d'agarose en conditions dénaturantes et leur taille déterminée par rapport à des maraudeurs appropriés après enregistrement densitomètrique du gel coloré par le BET. La figure 5 montre à titre d'exemple ltenregistrement densitomètrique d'un gel d'électrophorèse effectue à partir d'une solution d'ADN de plasmide pBR322 traité comme orédémment décrit après induction de coupures simple brin par le composé 5a et irradiation lumineuse. Il apparaït clairement que les coupures apparaissent préférentiellement au niveau de séquences d'ADN riches en paires de base A+T. REFERENCES BIBLIOGRAPHIQUES Baguley B.C., Denny W.A., Atwell G.J., Cain B.F. J. Med. Chem. 1981, 24, 520. Barton J.K., Raphael A. Proc. Natl. Acad. Sci. USA 1985, 82, 6460. Beauchamp C.O., Fridovich I. Anal.? Biochem. 1971, 44, 276. Finkelstein E.G., Rosen M. Rauckman E.J., Paxton J. Mol. Pharmac. 1979, 16, 676. Fory W. Mac Kenzie R.E., Mac Cormick D.B. J. Het. Chem., 1968, 5, 625. Grande H.J., Van Schagen, C.G., Jarbandhan T., Muller F., Helv. Chim. Acta, 1977, 60, 348. Kopka M.L., Yoon C., Goodsell D., Pjura P., Dickerson R.E. (1985) Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 82, 1376. 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REVENDICATIONS 1) Composé chimique caractérisé en ce qu'il est constitué d'une molécule de netropsine ou de distamycine ou d'une molécule dérivée Se la netropsine ou de la distamycine couplée à une structure chromophore. 2) Composé selon la revendication 1, caractérisé en ce que la structure chromophore comprend la structure d'une isoalloxazine. 3) Composé selon la revendication 2, caractérisé en ce que la structure chromophore isoalloxazine libère des radicaux oxygénés en milieu aqueux aérobi par photoactivation. 4) Composé selon l'une des revendications 1 à 3, caractérisé en ce que la molécule de netropsine ou de distamycine ou dérivée de la netropsine ou de la distamycine est couplée au chromophore isoalloxazine par un radical alkylényle ayant de 1 à 10 atomes de carbone. 5) Cornposé selon l'une des revendications I à 4, caractérisé en ce qu'il répond aux formules générales I ou Il dans lesquelles n représente un nombre entier de 1 à 4, n' représente un nombre entier de 1 à 6, X représente un anion associé pharmaceutiquement acceptable, de préférence un anion chlorure. 6) Composé choisi parmi - le chlorure de 3-[ 1 -méthyl-4-[ 1 -méthyl-4-[4-(7,8, 1 0-triméthylisoallo- xazine-3-yl) b utylcarboxamido]pyrrole- 2-carboxam id D]pyrrole-2-carbox- amido]proprionamidinium, - le chlorure de 3-[1-méthyl-4[1-méthyl-4-[1-méthyl-4-[4(7,8,10-triméthyl- isoalloxazine-3-yl)butylcarboxamido]pyrrole-2-carboxamido]pyrrole-2- carboxa7lido]pyrrole-2-carboxam ido]proprioam idinium, - le chlorure de 3-[1-méthyl-4[1-méthyl-4-[5-(7,8-diméthylisoalloxazine- 10-yl)pentylcarboxamido]pyrrole-2-carboxamido]pyrrole-2-carboxamido] propioamidinium, - le chlorure de 3-[1-méthyl-4-[1-méthyl-4-[1-méthyl-4-[5-(7,8-diméthyl- isoalloxazine-10-yl)pentylcarboxamido]pyrrole-2-carboxamido]pyrrole-2 carboxamido]pyrrole-2-carboxamido]proprionamidinium. 7) Procédé de préparation d'un composé selon l'une des revendications 1 à 6, caractérisé en ce qu'on effectue le couplage d'une molécule de netropsine ou de distamycine ou des dérivés de la netropsine et de la distamycine à un chromophore flavinique par l'intermédiaire d'une chaîne alkylényle, de préférence polyméthylénique. 8) Procédé selon la revendication 7, caractérisé en ce qu'on effectue le couplage d'une molécule de netropsine ou de distamycine ou d'un dérivé de netropsine ou de distamycine à un chromophore isoalloxazine par l'intermédiaire d'une chaîne alkylényle. 9) Procédé selon la revendication 8, caractérisé en ce qu'on effectue le couplage d'un composé de structure avec où R représente H ou CH3, -A- est une chaîne alkylényle ayant de 1 à 10 atomes de carbone, n est un nombre entier de 1 à 4 et X représente un anion associé pharmaceutiquement acceptable, de préférence un anion chlorue, et en ce que t'on sépare le composé de couplage obtenu. 10) Composition caractérisée en ce qu'elle comporte un composé selon l'une des revendications 1 à 6 et un support compatible avec l'utilisation dans des milieux contenant de l'ADN. 11) Application des composés selon l'une des revendications 1 à 6 pour la coupure des ADN double brin au niveau des séquences d'ADN riches en paires de bases A+T, caractérisée en ce qu'on met des composés en présence desdits ADN double brin et d'oxygène moléculaire et que l'on irradie l'ensemble avec un rayonnement en lumière visible.