Brevet FR2663505A1 — publié le 19911227

La présente invention est du domaine de l'hématologie et elle a pour objet de préparer des moyens d'obtention d'une suspension aqueuse de leucocytes humains conservés dans leur état naturel. On connut une technique d'analyse hématologique comprenant l'étape consistant à séparer les leucocytes des hématies par hémolyse de ces dernières en milieu acétique, par exemple afin de permettre l'examen des leucocytes par des méthodes optiques notamment. La présente invention a pour Dut d'obtenir une suspension aqueuse des leucocytes permettant leur conservation dans leur état naturel en vue d'examens différés. Suivant l'invention, un procédé d'obtention d'une suspension aqueuse de leucocytes humains permettant leur conservation dans leur état naturel, consiste, dans sa généralité, à traiter un sang humain par une solution hémolysante d'acide acétique CH3COOH à une concentration voisine de 25.10-3 mole/l additionnée d'un produit tensioactif polyhydroxylé à une concentration voisine d'environ 1 gr/l, puis à arreter l'action hémolysante par addition d'un sel basique qui toujours selon l'invention sera le phosphate trisodique Na3 Po4. L'effet du produit tensioactif est de provoquer une dislocation des stromas g-lobulaires équivalente, vis-à-vis des méthodes optiques, à leur dissolution. A titre indicatif, on pourra utiliser un tensioactif naturel tel que la saponine, ou encore des tensioactifs élaborés tels que TRITON, BRIJ, TWEEN (marques déposées). Le traitement du sang constituera à introduire, ou à mélanger, une très petite quantité de sang (goutte ou micro-goutte) dans une quantité surabondante (par exemple 10 cm3) de solution hémolysante. La quants= de phosphate trisodique nécessaire sera la quantité suffisante pour amener le milieu à pH = 7 ; ce sel produit un effet tampon tout à fait favorable à la conservation. Le pH pourra être amené à 7 (neutralité) soit à la burette en suivant son évolution au pHmètre, soit par l'adjonction d'une quantité prédeter- minée de solution neutralisante. REVENDICATIONS I.- Procédé d'obtention d'une suspension aqueuse de leuco cytes, consistant à traiter du sang par une solution d'acide acétique, caractérisé : en ce que l'on met en présence une très petite quantité de sang et une quantité sur abondante d'une solution d'acide acétique CH3COOH ad ditionnée d'un produit tensioactif, de façon à provoquer l'hémolyse des hématies du sang et la dissolution des stromas, puis en ce que l'on arrête I'hémolyse par l'adjonction d'une solution de phosphate trisodique Na3 P04 sur quantité nécessaire pour amener le milieu à pH7, d'où il résulte que la suspension des leucocytes ainsi obtenue permet la conservation de ces derniers dans leur état naturel. 2.- Procédé d'obtention d'une suspension aqueuse de leu cocytes selon la revendication 1, caractérisé : en ce que la concentration de la solution d'acide acétique est d'environ 25.10-3 mole/ 1. 3.- Procédé d'obtention d'une suspension aqueuse de leu cocytes selon la revendication 2, caractérisé en ce que le produit tensioactif est un tensioactif polyhydroxylé à la concentration d'environ 1 gr/l.