Brevet FR2672602A1 — publié le 19920814

I L'invention se rapporte à des nouveaux composé dérivés des P- carbolines ligands du récepteur des benzodiazépines ayant un effet agoniste inverse et antagoniste vis-à-vis des benzodiazépines, et aux compositions pharmaceutiques contenant ces composés. Elle concerne également les procédés de préparation desdits composés et les nouveaux composés éventuellement utilisables pour mettre en oeuvre ces procédés de préparation. Les benzodiazépines-1,4 (par exemple, le Valium) constituent une classe de médicaments largement prescrits à cause de leurs activités anxiolytique, anticonvulsivante, sédative-hypnotique et myorelaxante Le mécanisme d'action des benzodiazépines est resté longtemps méconnu jusqu'à la mise en évidence de sites de fixation (ou "récepteurs") spécifiques pour ces molécules sur les membranes neuronales du système nerveux central L'importance physiologique de ces récepteurs a été démontrée par l'existence d'une bonne corrélation entre, d'une part, la valeur de l'affinité des différentes benzodiazépines pour le récepteur (mesurée par dépla- cement d'une benzodiazépine radioactive) et, d'autre part, leur efficacité thérapeutique. De même, on a trouvé que certaines p- carbolines se comportaient comme agonistes du récepteur et des benzodiazépines. Ainsi, l'Abécarnil, développé par les laboratoires Schering comme anxiolytique, (t v 13 o o z -H, 0-0 I CH, Io N N ZN i N N H NCF H Abecarnhl O O ZK 93423 N C óEt N H ZK 91926 est en cours d'essais cliniques D'autres {-carbolines apparentées telles que le ZK 93423 et le ZK 91296 possèdent également des propriétés analogues à celles du diazépam in vivo (anxiolytique, anticonvulsivante). En recherchant un ligand endogène du récepteur des benzodiazé- pines, Braestrup et coll (Proc Natl Acad Sci, USA, 77, 2288-2292, 1980) ont mis en évidence une molécule, l'ester éthylique de l'acide I-carbo- line-3-carboxylique (la g-CCE,), extraite de l'urine humaine, qui se fixe avec une très bonne affinité aux récepteurs centraux des benzodiazépines (CI 50 = 4 n M, in vitro, cerveau de rat) Par contre, la ?-CCE possède in vivo des effets pharmacologiques opposés à ceux des benzodiazé- pines Ainsi, la P-CCE est proconvulsivante chez la souris, facilitant les convulsions provoquées par d'autres agents tels que le pentylènetétrazole. CCO Et N H Le terme "agoniste inverse" est maintenant utilisé pour désigner ces ligands du récepteur des benzodiazépines qui possèdent des activités complètement ou partiellement opposées à celles des benzodiazépines. L'intérêt thérapeutique des p-carbolines se situe à plusieurs niveaux Ainsi, l'équipe, auteur de la présente invention, a été la première à démontrer que de telles molécules (par exemple, la p-CCM ci-dessous), I H agonistes inverses du récepteur des benzodiazépines, ont un effet positif sur l'apprentissage et la mémorisation (Venault et coll, Nature, 321, 864-866, 1986) Bien que la -CCM n'ait pu être testée chez l'homme pour ses effets promnésiants dus à son activité fortement convulsivante, d'autres analogues (par exemple, le ZK 93426, ont montré leur aptitude à améliorer l'apprentissage et la rétention des informations chez l'homme (Duka et coll. Psychopharmacology, 93, 421-427, 1987) ^ 3 C^, CH C Iaf coza I N H ZK 93426 Il a également été décrit des -carbolines comportant un cycle ou 5lactone ou Y ou b -lactame Ces composés présentent une affinité moyenne pour le récepteur des benzodiazépines (Neef G et coil J Chem. Soc Chem Comm, 366, 1982 et Neef, G et coll Heterocycles, 20, 1295-1312, 1983). En conséquence, un des buts de la présente invention est de proposer de nouveaux composés présentant une affinité avec le récepteur des benzodiazépines tout en ayant un effet agoniste inverse et antagoniste. Un autre but de la présente invention est de proposer de nouvelles compositions thérapeutiques utiles notamment dans le traitement de troubles nerveux. Un autre but de la présente invention est de proposer de nouvelles compositions thérapeutiques ayant un effet positif sur l'appren- tissage et la mémorisation et pouvant être utilisables pour le traitement des problèmes cognitifs comme par exemple, dans la maladie d'Alzheimer. L'invention concerne donc en premier lieu les composés de formules: Ri N N 3 \X F N X I I O r H dans lesquelles X est l'atome d'oxygène, de soufre ou un radical divalent NR 5, R ou bien le radical C-X représente le radical -N(R 6)-C-CH 2-X-, R 5 est choisi parmi les radicaux hydroxy, alcoxy, les radicaux alkyl substitués par un radical hydroxy ou alcoxy, R 2 est un atome d'hydrogène ou un radical choisi parmi les radicaux alkyl, hydroxy, alcoxy, acyloxy, benzyloxy, lesdits radicaux pouvant être éventuellement substitués, R 3, R 4, R 5 et R 6 sont choisis parmi l'atome d'hydrogène ou le radical alkyle éventuellement substitué par un radical hydroxy, alcoxy, alkoxy- carbonylmethyle, ainsi que les tétrahydro dérivés de P-carboline correspondants et les sels ou dérivés d'ammonium quaternaires de ces composés pharmaceutiquement acceptables. Dans la présente description, les radicaux alkyle, alkoxy ou acyloxy ont de préférence de I à 6 atomes de carbone et peuvent être linéaires ou ramifiés (de préférence linéaires). Par ailleurs, certains composés présentent un ou plusieurs centres d'asymétrie Ils peuvent donc exister sous une ou plusieurs formes optiquement actives Dans ce cas, l'invention comprend lesdites formes optiquement actives de ces composés. Parmi les sels, on peut citer: les chlorures, les chlorhydrates, tartrates, fumarates. Selon une première variante préférée, les composés selon l'invention répondent à la formule I dans laquelle: R Iet R 2 ont la même signification que précédemment et X est l'atome d'oxygène ou un radical divalent N R Avantageusement, R 1 est un radical alkyle substitué en ô( par un radical hydroxy, alcoxy ou R 1 est un radical hydroxy ou alcoxy et/ou R 2 est l'atome d'hydrogène Encore plus avantageusement, R 1 est un radial hydroxyméthyle. Selon une seconde variante préférée, les composés répondent à la formule II dans laquelle: R 1 et R 2 ont la même signification que précédemment, R 3, R 4 sont l'atome d'hydrogène et X est l'atome d'oxygène ou un radical divalent N R 5 De préférence encore R 1 est un radical alkyle substitué en t est un radical hydroxyméthyle. Selon une troisième variante préférée, les composés répondent à la formule on R 2 4 3 N,CNN dans laquelle R 2, R 5, R 6 ont la même signification que précédemment indiqué. De préférence R 5, R 6 sont choisis parmi l'atome d'hydrogène ou un radical alkyle et/ou R 2 est l'atome d'hydrogène. Selon une quatrième variante, l'invention concerne les composés de formule ( 1) tétrahydro des premières et troisièmes variantes. De préférence, les composés selon l'invention sont choisis parmi les composés suivants sous forme optiquement active ou racémique: Dihydro-1, 12 méthyl-2 indolo l 3 ',2 ':4,5 l pyrido l 2,3-fl 1 H, 3 H, 6 H diazépine-1,4 dione-3,12; Ethoxy-10 butanolide ( 2,3-b)- p-carboline, Méthoxy-10 butanolide ( 2,3-b)-p-carboline, Hydroxy-10 oxo- 2 pyrrolidine-2 one l 3,4-bl À-carboline carboxylate-5 d'éthyle, Hydroxyméthyl-10 butanolide ( 2,3-b) carboline, 3-hydroxyméthyl-4-( 5-benzyloxy-3-indolyl)-5-amino-gamma-lactone. L'invention concerne également les médicaments consistant en un des composés selon l'invention, tels qu'ils viennent d'être décrits ci-avant et les compositions pharmaceutiques contenant au moins un de ces médicaments et un support acceptable Ces médicaments et compositions sont utiles pour le traitement médical ou vétérinaire de certains troubles liés au fonctionnement du système nerveux. Ces médicaments et compositions sont particulièrement destines à être utilisés en combinaison avec des benzodiazépines afin de compenser les effets néfastes dus à l'emploi de ces dernières Ces composés eux-mêmes favorisent également l'apprentissage et la rétention d'infor- mation chez l'homme. Ces médicaments et compositions peuvent ainsi être avantageu- sement destinés à participer à une thérapie efficace contre les maladies dégénératives du système nerveux en particulier des démences du type Alzheimer. Les compositions pharmaceutiques sont notamment formulées pour être ingérées oralement ou pour être injectées Néanmoins, d'autres présentations peuvent également être envisagées dans le cadre de la présente invention. La posologie dépendra pour partie de la maladie à traiter ainsi que de sa gravité et également du type de l'individu (poids, âge). Il pourra être avantageusement envisagé une posologie allant de 0,1 mg/kg à 20 mg/kg. L'invention concerne également les procédés de préparation permettant d'obtenir les composés selon l'invention. Un procédé de préparation de composés de formule (I) dans laquelle X est l'atome d'oxygène, R 2 a la même signification que précédemment, RE est un radical hydroxy ou alcoxy consiste à transéthé- rifier et débloquer en une seule étape un composé de formule: III R 2 2 R 7 CO 2 R 7 R 7 étant un radical C 1-C 6 alkyle, en présence de l'alcool correspondant ou d'eau Cette étape s'effectue de préférence en présence d'un métal réducteur comme le sodium. Le composé de formule III peut être obtenu selon le schema suivant: R 2 Co)2 R 7 III 03 /02 > solvant polaire protique -80 C O 40 C IV R 5 différent de H, R 8 étant un radical C 1-C 6 alkyle Le composé de formule IV peut être obtenu selon le schéma suivant: NI V 1 e C 02 i accepteur d'acide) solvant ' A N -,polaire chloroformiate Tr rd 'alkyle R 9, R 10 étant choisis parmi les radicaux alkyle, A étant le reste du squelette I-carboline de I. Ainsi, l'invention a également pour objet une préparation originale des composés de formule V et VI selon le schéma ci-dessus. Un procédé de préparation de composés de formule I dans laquelle X est l'atome d'oxygène R 2 a la même signification que précédemment, R 1 est un radical méthyle substitué par un radical hydroxy ou alcoxy consiste à oxyder un composé de formule IV ou de formule: O VIII Ra C 02 R 7 R 9 étant un radical alkyle, par exemple par le tétroxyde d'osmium, suivi par un déblocage de l'atome d'azote et éventuellement par une éthéri- fication au moyen de l'alcool correspondant ou vice versa. C c \ Ri 0 ^^H > Q VII A V IV La synthèse du composé de formule VIII est obtenu par traitement du composé de formule VII (Neef et coll Heterocycles 20, 1295 ( 1983) par un alkyle chloroformiste et de la triéthylamine dans le THF: VII CICO 27 VIII Et 3 N,THF Un autre procédé consiste à faire réagir un composé de formule VII ou de formule: rie o R 2 IX N I H avec le tétroxyde d'osmium et éventuellement d'éthérifier au moyen de l'alcool correspondant. Les composés de départ se préparent de la même façon que précédemment par exemple par déblocage de l'azote du noyau pyrrole. Un procédé de préparation des composés de formule (I) dans laquelle X est un radical divalent N-R 5, R est un radical hydroxy ou alcoxy consiste à transformer un composé de formule IV (avec R 5 est l'atome d'hydrogène) en composé de formule: H o,25 HO 5 N I c C 02-P 7 par ozonolyse, échange éventuel du groupe CH 2 CO 2 R 8 du lactame par un 2 28 radical R 5 = alkyle, puis à débloquer l'atome d'azote du pyrrole par action d'un alcool en présence de sodium et puis éventuellement à éthérifier le composé obtenu. Le composé de formule IV est obtenu comme indiqué précédemment. Un procédé de préparation de composés de formule (I) dans le cas o X est N(R 6)-C(=O)-CH 2-N-R 5, R 2 a la même signification que précédemment, consiste à cycliser en milieu acide un composé de formule: RG 'Ilr R r-, C- H C Oz RI i I N O Rz Xi: N I C Oz RS: R 10 ' R 1 l étant choisis parmi les radicaux alkyle (de préférence t-Bu pour Rio), puis à effectuer l'étape de déblocage selon le procédé précédent Le produit de départ de formule XI peut être obtenu selon le schéma suivant: CHO v: ,_ ? CH 2 co 2 l I 2 2 8 CF C 93 /ua IV solvant polaire > -go B étant le reste de 15-carboline de IV. La réaction de IV en XIX est analogue à celle conduisant au composé III et le plus souvent conduit à un mélange des deux espèces qu'une séparation subséquente permet de purifier. 1 11 Un procédé de préparation des composés de formule (II) dans laquelle X est l'atome d'oxygène, R 1 est un radical akyle substitué en par un radical hydroxy ou alcoxy, R 2, R 3, Rt ont la même signification que précédemment consiste à chauffer un composé de formule: Q,,\ _/R 12 C Ho-i MCO 2 LR R 2 N H l 3 XIV R 12 ' R 3 R 14 étant choisis parmi l'atome d'hydrogène ou les radicaux alkyle en milieu acétique aqueux. Le composé de formule XIV peut être obtenu selon le procédé, donné à titre d'exemple, suivant: X O c 13 CH=N-CH(CH 3)2 XVII AE 1 H Toluène XVI C>î,,/ \R g O /R 1 3 " NCH(CH 3)2 H N -i O\ /R 12 NO 2 CI-CO 2 RC\ 112xylène, A * i, o-3 R XIV N-alkylatiorn Iv Ni Raney/H 2 N H NXV Xv Un procédé de préparation des composés de formule (I) dans laquelle il s'agit des dérivés de e-carboline tétrahydro avec R 1 est un méthyle substitué par un hydroxy ou alcoxy et X = O consiste à faire réagir les composés de formule II avec le formaldéhyde en présence d'un solvant polaire aprotique. De même, il est possible d'atteindre ces composés en faisant réagir les composés de formule: R 12 / R 13 O O R 10 ie X C 02 R 15 xv N l R 15 étant un radical alkyle en milieu acétique aqueux. Les composés de formule XVIII sont obtenus par réaction du formaldéhyde, dans le toluene en chauffant, avec le composé de formule XIV (o R 3, R 4 sont l'atome d'hydrogène). Il est également possible d'obtenir les composés de formule (I) o X = O, et R est un radical alkyle substitué en l( par un radical hydroxy par aromatisation du composé de formule XVIII précédemment décrit puis cyclisation en milieu acétique aqueux On peut également atteindre cette famille de composés par aromatisation des composés tétrahydro correspon- dant. L'invention concerne également les procédés de préparation stéréosélectifs permettant d'obtenir des composés selon l'invention présentant un ou plusieurs carbones asymétriques. Ces procédés sont particulièrement intéressants dans le cas des composés de formule ( 1) dans laquelle X = O, R 1 est un alcoxy, hydroxy, hydroxyméthyle, alcoxyméthyle. On donne ci-après à titre d'exemple un tel procédé. SYNTHESE STEREOSELECTIVE DES ISOMERES R ET S DE L'HYDROXY- METHYL-10 BUTANOLIDE ( 2,3-b) l CARBOLINE La synthèse est illustrée par la suite de réaction suivante: L'aldimine réagit sur le noyau indolique en présence d'acide acétique à 5 C dans le toluène pour conduire à la gramine attendue (Schéma 4) Le déplacement du groupement isopropylamine est réalisé par action du nitroacétate d'éthyle dans le xylène à reflux Le dérivé nitré est isolé avec un rendement de 75 % après chromatographie. Schéma 4 c H 2 \ /CHF C o CH CH=N-CH(CH 3)2 R Uf Ac 1,Toluène R=H (a) ou R=Benzyloxy (b) H O/ CH 3 CH X "NCH(CH 3)2 H N Rdl H C Hc /3 r 3 * C,OHo q/Cc H 3 _B R /"CO 2 Et Ni Raney/H 2 N Et OH (a) ou Ac O Et (b) H NO Et OH (a) ou Ac O Et (b) H NO 2 CH 2 CO 2 Et xylène à Rdt: 71 % 4 Rdt= 80 % (a) 60 % (b) La réduction du groupement nitro a pu être effectuée en présence de nickel de Raney, sous atmosphère d'hydrogène dans l'acétate d'éthyle, sélectivement, sans débenzylation dans le cas du dérivé benzyloxy. Les amines résultant ont ensuite été cyclisées en aminolactone 2 ou transformées en tétrahydro-l'-carboline 3 selon un mécanisme décrit connu (schéma 5). oe- C\ & o e / i NH 2 t:75 % Q-i II Schéma 5 R Ac OH/H 20 A N H NH 2 NH 2 Rdt:45 % CH 20/Toluène A Rdt:1 8 % 3 À: R=H b: R=Benzyloxy L'aminolactone 2 peut être transformée en P-carboline 4 selon des conditions douces connues. CH R o THF/CH 3 CN 2 CH 20 o Les tétrahydro-p-carbolines 2 et 4 sont aromatisées en présence de soufre au reflux du DMSO O Dans le cas de 2, on obtient la P-carboline 3 que l'on cyclise en présence d'acide acétique et d'eau pour former les lactones souhaitées 5 (R=H) et 6 (R=OCH 2 C 6 H 5) de façon stéréosélective. La tétrahydro O -carboline 4 donne, dans ces conditions, directement la lactone optiquement pure désirée (isomère R). f-."O\ C a% 0/ CH 3 Schéma 6 r-cCH, N. C 2 Et Soufre/DMSO A Rt Rdt:l 0 % Ac MGH/H 20 A Rdt:75 % y Soufre/DMSO Rdt:65 % Rdt:65 % Cli; -,o CF R / CC 2 EC J'NN 3 H Ac OH/H 20 a Rdt:60 % R O O H 5 (R=H) 6 (R=Benzytoxy) L'isomère S de l'hydroxyméthyl-10 butanolide ( 2,3-b)-pcarboline ( 5-5) a été obtenu à partir du L-glycéraldéhyde-acétonide 7 selon les voies de synthèse décrites ci-dessus Le composé 7 est lui- même synthétisé à partir de l'acide L-ascorbique 8 selon un procédé "one- pot" (en une seule phase) connu. Schéma 7 a-I Acide L-Ascor Dique 8 -O CH 2 ''\ /CH 3 Ac CI Na BH 4 Pb(O Ac)4,2 /CH b b 7 li,,/C "j CH 3 Acetone ECH Ac O Et C Q-D Rdt:30 % L-Glycéraldéhyde- acetoniae 7 (i O HN H Certains autres composés, dont le procédé de préparation n'est pas explicitement décrit, sont obtenus de façon connue pour un homme de métier. Les exemples qui suivent illustrent les procédés de préparation de quelques uns des composés selon l'invention. Exemple I: Ethoxy-10 butanolide l 2,3-bl j-carboline (composé n 1) On dissout 285 mg ( 0,70 mmol) de l S-carboline de formule IV dans laquelle R 2 = H, R 5 =Me, R 7 =R 8 =Et dans un mélange de dichlorométhane ( 15 ml) et de méthanol ( 5 ml) anhydre Le mélange réactionnel est refroidi à 78 C à l'aide d'un bain d'éthanol et de carboglace On y introduit alors un mélange d'oxygène et d'ozone pendant 1 h 50 mn (disparition complète du produit de départ sur C C M) puis on y fait buller un courant d'azote pendant 5 mn On introduit ensuite 0,4 ml ( 3,38 mmol) de triméthylphos- phite et on laisse l'ensemble au repos, pendant I heure à température ambiante Après évaporation des solvants sous pression réduite, on purifie le résidu huileux de couleur jaune par chromatographie liquide à haute performance (silice greffée: méthanol-eau; 7:3) On isole un solide beige ( 96 mg; 0,29 mmol) qui est le composé N-éthoxycarbonyl méthoxy-10 butanolide l 2,3-bl 5-carboline fondant à 180 C avec décomposition (rendement 42 %) et un aldéhyde ( 15 mg, 0,036 mmol) qui est le N-éthyl- éthoxycarbonyl N-methyl (éthoxycarbonyl-9 formyl-4) -carboline carbo- xamide-3 fondant à 113-114 C, avec un rendement de 5 %. La r-lactone obtenu ( 37 mg, 0,112 mmol) est déprotégée en présence de 5 ml d'éthanol, 1,3 mg de sodium à température ambiante sous agitation, neutralisée avec une petite quantité d'acide acétique puis les réactifs et solvant sont évaporés sous pression réduite Le résidu huileux est repris au dichlorométhane; le précipité résultant est filtré puis rincé à l'eau pour éliminer les sels inorganiques On isole, après séchage 26,8 mg ( 0,10 mmol du composé n 1). Rendement: 88 O; F > 310 C avec décomposition. Exemple 2: Préparation de la méthoxy-10 butanolide ( 2,3-b) carboline (composé n 2). A partir de 8,7 mg du composé n I protégé ( 0,03 mmol) et de 4 ml de méthanol contenant 0,4 mg de sodium, on isole, dans les mêmes conditions expérimentales que celles décrites à l'exemple 1, 5,2 mg ( 0, 02 mmol) du composé déprotégé n 2; Rendement: 63 %; F = 314-315 C avec décomposition. Exemple 3: Hydroxyméthyl-10 butanolide ( 2,3-b)e-carboline (composé n 3) On dissout 700 mg ( 1,71 mmol) du composé de formule IV précédent dans un mélange de dioxanne ( 75 ml) et d'eau ( 30 ml) et on y ajoute une quantité catalytique de tétroxyde d'osmium solide Le mélange est agité pendant 30 mn puis on y introduit 2 g ( 9,35 mmol) de périodate de sodium L'ensemble est placé sous agitation, à température ambiante et à l'abri de la lumière, pendant 21 heures Les sels inorganiques formés en cours de réaction sont alors filtrés et rincés à l'aide de dioxanne Le solvant est ensuite évaporé sous pression réduite, le résidu repris à l'acétate d'éthyle et lavé avec une solution saturée de chlorure de sodium. Après séchage sur sulfate de sodium, évaporation et purification sur colonne de silice ldichlorométhane-éthanol ( 8:0,2)l on isole 20 mg ( 0, 06 mmol) du composé protégé fondant entre 202 et 204 C (rendement 5 %), 382 mg ( 0,93 mmol) d'aldéhyde décrit à l'exemple 1, 88 mg ( 0,21 mmol) de produit de départ n'ayant pas réagi. A partir de 11,7 mg de ce composé ( 0,036 mmol) et de 2,5 ml d'éthanol contenant 0,6 mg de sodium, on isole, dans les mêmes conditions expérimentales que celles décrites dans l'exemple 1, 6,6 mg ( 0,026 mmol) du composé déprotégé (n 3). Rendement: 72 96; F= 278-280 C avec décomposition. Exemple 4: N-éthyléthoxycarbonyl hydroxy-10 oxo-2 pyrrolidine-2 one l 3, 4-bl P-carboline (composé n 4) On dissout 75 mg ( 0,19 mmol) de tcarboline de formule IV dans laquelle R 2, R 5 =H et R 7, R 8 =Et dans un mélange de dichlorométhane ( 6 ml) et de méthanol ( 2 ml) anhydre Le mélange réactionnel est refroidi à -78 C à l'aide d'un bain d'acétone et de carboglace On y introduit alors un mélange d'oxygène et d'ozone pendant 5 mn (la solution prend une teinte bleutée) puis on y fait buller un courant d'azote pendant 2 mn On introduit ensuite 100 pl ( 0, 84 mmol) de triméthylphosphite et on laisse l'ensemble au repos, pendant 2 h 30 mn, en laissant la température remonter vers 20 Les solvants sont évaporés sous pression réduite pour donner un résidu huileux que l'on chromatographie sur silice ldichlorométhane-éthanol ( 8:0,2)l On isole le composé tétracyclique 3 ( 65 mg; 0,16 mmol) sous la forme de cristaux blancs. Rendement: 86 %; F = 194-196 C. A partir de 17,4 mg du composé obtenu ( 0,044 mmol) et de 3 ml d'éthanol contenant 0,5 mg de sodium, on isole, dans les mêmes conditions expérimentales que celles décrites à l'exemple 1,7 mg ( 0,021 mmol) du composé déprotégé. Rendement: 49 96; F 240 C (composé n 4) Exemple 5 Dihydro-l,12 méthyl- 2 indolo l 3 '2 ': 4,5 l pyrido l 2,3-fl IH,3 H, 6 H diazépine-l,4 dione3,12,10 (composé n 5) Etape I: Préparation du N-méthyl N-éthyléthoxycarbonyl-(éthoxy- carbonyl-9 acide carboxylique-4) t-carboline carboxamide-3. Voie A: Oxydation à l'acide métachloroperbenzoïque La formyl-4 Icarboline de l'exemple I ( 27 mg; 6,57 mmol) est dissoute dans un mélange de tétrahydrofuranne et d'eau ( 5:1) La solution est portée à basse température à l'aide d'un bain d'eau glacée et placée sous courant d'azote On introduit alors 14,5 mg d'acide métachlo- roperbenzoîque dans le mélange réactionnel, et on place l'ensemble sous agitation à 4 C pendant 24 heures Les solvants sont ensuite évaporés sous pression réduite et le résidu chromatographié sur silice (toluène- éthanol 8:3) On récupère 10,8 mg ( 2,54 mmol) d'acide carboxylique. Rendement 39 %; Rf: 0,06 lSi O 2, toluène-éthanol ( 8:2)l. Voie B: Oxydation au permanganate de potassium On dissout 145 mg ( 0,353 mmol) de formyl-4 P -carboline précédente dans un mélange contenant 30 ml d'acétone et 6 ml d'eau On additionne 139 mg ( 0,879 mmol) de permanganate de potassium préalable- ment dissous dans 2 ml d'eau et on place l'ensemble sous agitation, à température ambiante pendant 3 heures On ajoute alors un léger excès de formaldéhyde dans le mélange réactionnel et on agite jusqu'à disparition complète de la couleur violette du permanganate Le dioxide de manganese formé et éliminé par filtration sur filtre de verre, rincé à l'acétone et le filtrat évaporé sous pression réduite Le résidu de couleur jaune est repris avec du dichlorométhane et placé à 4 C pendant 2 heures Le solide blanc qui a précipité dans ce milieu est filtré puis lavé à l'éthanol On isole ainsi 127 mg ( 0,297) d'acide carboxylique attendu sous la forme d'une poudre blanche très fine. Rendement 84 o. Etape 2: Préparation du N-méthyl N-éthyléthoxycarbonyl-(éthoxy- carbonyl-9 N-tert butoxycarbonyl-4) P-carboline carboxamide-3. L'acide de l'étape I ( 127 mg; 0,30 mmol) est mis en suspension dans 20 ml de tertiobutanol distillé L'ensemble est placé sous courant d'azote puis on y introduit 53 pl de triéthylamine distillée ( 0,39 mmol) et 77 pl de diphénoxyphosphorylazide ( 0,36 mmol) Le mélange réactionnel est alors porté à ébullition pendant 9 heures et agité à température ambiante pendant 20 heures Après évaporation des réactifs et solvants sous pression réduite et chromatographie du résidu sur silice (toluène- éthanol, 8:1), on isole 38,2 mg ( 0,08 mmol) du produit attendu. Rendement: 25 O; Rf: 0,29 lSi O 2, toluène-éthanol ( 8:1)l. Etape 3: préparation de la N-éthyléthoxycarbonyl-(éthoxycarbonyl-9 amino-4) ê-carboline-carboxamide La -carboline obtenue à l'étape 2 ( 50 mg: 0,1 mmol) est dissoute dans 3 ml de dichlorométhane anhydre On ajoute 19 pl ( 0,2 mmol) d'acide trifluoroacétique à la solution et on place l'ensemble sous agitation, à température ambiante pendant 18 heures Après cette période, on neutralise l'excès d'acide trifluoroacétique à l'aide de bicarbonate de sodium solide Le mélange réactionnel est alors filtré et évaporé sous pression réduite Le résidu chromatographié sur silice (toluène-éthanol, 8:0,2) conduit à l'amine attendue ( 6 mg) sous la forme d'un solide blanc. Rendement: 15 %; Rf: 0,10 lSi O 2, toluène-éthanol ( 8:1)l. Etape 4: Préparation du dihydro-l,12 éthoxycarbonyl-6 méthyl-2 indolo l 3 ',2 ': 4,5 l pyrido l 2,3-fl 1 H, 3 H diazépine-1,4 dione-3,12 L'acide obtenue à l'étape I ( 68 mg: 0,16 mmol) est mis en suspension, sous azote, dans 6 ml de toluène sec et l'ensemble est placé sous agitation à température ambiante On y introduit 45 pl ( 0,21 mmol) de diphénoxyphosphorylazide, 33 pl ( 0,24 mmol) de triéthylamine distillée et on maintient l'agitation jusqu'à disparition complète du produit de départ (C.C M: Si O 2, toluène-éthanol, 8:2) Les réactifs et solvants sont alors évaporés sous pression réduite et le résidu solide, repris dans un mélange d'acide acétique ( 3 ml) et d'eau ( 3 ml) Le mélange réactionnel est porté à reflux pendant I h 30 mn Après cette période, on dilue le milieu à l'acétate d'éthyle et on le neutralise à l'aide d'une solution aqueuse de bicarbonate de sodium ( 10 "O) Après extraction, la phase organique estséchée, filtrée puis évaporée pour conduire à une huile ( 50 mg) que l'on chromatographie sur silice (toluène-éthanol, 8:2) On obtient la P-carbolinodiazépinone attendue ( 10,4 mg: 0,03 mmol) sous la forme d'un solide blanc. Rendement: 12 %; Rf: 0,30 lSi O 2, toluène-éthanol ( 8:2). Etape 5: préparation du dihydro-1,12 méthyl-2 indolo l 3 ',2 ': 4,51 pyrido l 2,3-fl IH, 3 H, 6 H diazépine-l,4 dione-3,12 (composé n 5). L'hybride obtenu à l'étape 4 ( 10 mg; 0,028 mmol) est dissous dans 2 ml d'éthanol contenant une quantité catalytique de sodium La solution réactionnelle est placée sous agitation, à température ambiante, pendant 2 h 30 mn (disparition totale du produit de départ) Le mélange est alors neutralisé avec une petite quantité d'acide acétique puis les réactifs et solvants sont évaporés sous pression réduite Le résidu huileux est repris au dichlorométhane; le précipité résultant est filtré puis rincé à l'eau pour éliminer les sels inorganiques On isole, après séchage, 5 mg ( 0,018 mmol) de l'hybride déprotégé (composé n 5) sous la forme d'un solide blanc. Rendement: 64 ; F = 260 -270 C avec décomposition. Les exemples ci-dessous illustrent les propriétés biologiques des composés selon l'invention. *ACTIVITE BIOLOGIQUE L'affinité de ces nouveaux ligands vis-à-vis du récepteur des benzodiazépines a été déterminée par des tests de liaison in vitro en utilisant des préparation de membranes corticales de cerveaux de rats (selon la méthode de Rehavi et coll Eur J Pharmacol 78, 353, 1982 Ces affinités, indiquées par les CI 50 (la concentration de substance nécessaire pour déplacer 50 06 du 3 H-flunitrazépam de ses sites de reconnaissance sur le récepteur des benzodiazépines), se situent à des concentrations proches de la nanomole (cf tableau ci-après) Toutefois, une molécule se distingue, l'hydroxyméthvl 6-lactone 5, qui possède une affinité de 0,18 n M Cette affinité est 20 fois supérieure à celle de la '-CCE ( 4 n M) et 100 fois supérieure à celle du diazépam ( 20 n M) La lactone précitée représente donc la p-carboline la plus affinée pour le récepteur des benzodiazépines connue à ce jour. Le profil pharmacologique a ensuite été déterminé. L'effet de la lactone sur le récepteur des benzodiazépines exprimé a d'abord été exprimé, à partir de l'ARN messager correspondant, dans l'oocyte de Xénope On a observé que, lorsque la lactone ( 10-6 M) est administrée simultanément avec une solution d'acide gammaaminobutyrique (GABA) à 10 5 M, il n'y a ni augmentation ni diminution du courant provoqué dans l'oocyte par cette dernière molécule La lactone se comporte donc, dans ce test, comme un antagoniste du récepteur des benzodiazépines. De plus, la lactone ( 10-6 M) inhibe, de façon significative, l'augmentation du courant provoquée par un agoniste du récepteur tel que le diazépam ( 10-6 M). Les propriétés antagonistes de la lactone ont également été vérifiées in vivo chez la souris Administré aux souris, le dérivé ( 5 mg/kg, sc) ne produit aucun effet sur leur comportement, n'étant ni convulsivant ni sédatif Par contre, la sédation provoquée par le diazépam ( 7,5 mg/kg, sc) est complètement empêchée par l'administration du composé ( 5 ou 10 mg/kg sc). TABLEAU Affinités des différentes molécules synthétisées pour le récepteur des benzodiazépines in vitro (cervau de rat, déplacement du 3 H- flunitrazépam a 0 C). Compose CI 50 n M i / I I icoa N H R Ir H EH C:'A 02 N F Ii N Hi O N-C-I o " -,,' R=CH 3 R=C 2 H 5 R 25- 0,18 ({Axol Azue 1 b 3 H 4 HN N \, LL o'- {XOIAZUUSE HH -à HNA H 00 ú -E I: 0 Mt I J' i -s C Og L -S H 000 ' l -E o I 0-4 ASG, o OH -o L -s HD (sains) fivsqgvl REVENDICATIONS 1 Composés de formule I I N II H H I dans lesquelles X est l'atome d'oxygène, de soufre ou un radical divalent NR 5, ou R O il Il ou bien le radical C-X représente le radical -N(R 6)-C-CH 2-X, R 1 est est choisi parmi les radicaux hydroxy, alcoxy, le radical alkyl substitué par un radical hydroxy ou alcoxy, R 2 est un atome d'hydrogène ou un radical choisi parmi les radicaux alkyl, hydroxy, alcoxy, acyloxy, benzyloxy, lesdits radicaux pouvant être éventuellement substitués, R 3, R 4, R 5 et R 6 sont choisis parmi l'atome d'hydrogène ou un radical alkyle éventuellement substitué par un radical hydroxy, alcoxy, alkoxy- carbonylmethyle, ainsi que les dérivés tétrahydro de 13-carboline correspondants et les sels ou dérivés d'ammonium quaternaires de ces composés pharmaceutiquement acceptables. 2 Composés selon la revendication 1, caractérisé en ce qu'ils répondent à la formule 1: dans laquelle X est l'atome d'oxygène ou le radical divalent)N-R 5 et Ri, R 2 ont la même signification que dans la revendication 1. 3 Composés selon la revendication 2, caractérisés en ce que R est un radical alkyle substitué en o( par un radical hydroxy, alcoxy ou R 1 est un radical hydroxy ou alcoxy, 4 Composés selon la revendication 3, caractérisés en ce que RI est le radical hydroxyméthyle. Composés selon la revendication 2 ou 3, caractérisés en ce que R 2 est l'atome d'hydrogène. 6 Composés selon la revendication 1, caractérisés en ce qu'ils répondent à la formule II dans laquelle les radicaux R 3 et R sont l'atome d'hydrogène et X est l'atome d'oxygène ou un radical divalent -N- R 5, R et R 2 ont la même signification que dans la revendication 1. 7 Composés selon la revendication 6, caractérisés en ce que RI 1 est un radical alkyle substitué en ( par un radical hydroxy ou alcoxy ou R est un radical hydroxv ou alcoxy. 8 Composés selon la revendication 7, caractérisés en ce que R est le radical hydroxyméthyle. 9 Composés selon la revendication 7 ou 8, caractérisés en ce que Rl 2 est l'atome d'hydrogène. Composés selon la revendication 1, caractérisés en ce qu'ils répondent à la formule o l N R s Ra N X H dans laquelle R 2 a la même signification que dans la revendication 1, R 5, R 6 sont choisis parmi l'atome d'hydrogène ou un radical alkyle. I 1 Composés selon la revendication I ou 10, caractérisés en ce que R 2 est l'atome d'hydrogène. 12 Composés tétrahydro de formule: Ri e I N dans laquelle les substituants Rl, R 2, X ont la même signification que dans l'une des revendications 1, 2 à 5, 10, 11. 13 Composés selon l'une des revendications précédentes, caractérisés en ce qu'ils sont choisis parmi les composés suivants: Dihydro-1,12 méthyl-2 indolo l 3 ',2 ':4,5 l pyrido l 2,3-fl 1 H, 3 H, 6 H diazépine-1,4 dione-3,12; Ethoxy- 10 butanolide ( 2,3-b)-3-carboline, Méthoxy-10 butanolide ( 2,3-b)-i 3 -carboline, Hydroxy-10 oxo-2 pyrrolidine-2 one l 3,4-bl-03-carboline carboxylate-5 d'éthyle, Hydroxyméthyl-l O O butanolide ( 2,3-b)e -carboline, 3-hydroxyméthyl-4-( 5-benzyloxy-3-indolyl)-5-amino-gamma-lactone. 14 Médicament consistant en un composé de formule I ou Il selon l'une des revendications I à 13. Composition pharmaceutique contenant au moins un médicament selon la revendications 14 et un support acceptable.