Brevet FR2671728A1 — publié le 19920724

i La présente invention concerne l'utilisation d'un poly- peptide ayant l'activité de l'interleukine 2 humaine pour la préparation de compositions pharmaceutiques destinées au traitement des pneumothorax. 5 L'IL 2 qui est une lymphokine produite par les lympho- cytes T activés, possède une activité immunomodulatrice et une activité antitumorale décrites par exemple par Fletcher, M et al (Lymphokine Research 6 1987 47-57), activités qui comprennent en particulier la capacité d'initier la proliféra-10 tion des lymphocytes T et l'induction de la cytotoxicité des cellules NK (natural killer) et des cellules LAK (lymphokine activated killer) Les nombreuses études pharmacologiques qui ont montré l'efficacité potentielle de 1 'IL 2 seule ou associée avec des cellules LAK et éventuellement d'autres agents théra-15 peutiques dans la thérapie du cancer ou des maladies infec- tieuses sont passées en revue par Winkelhake J, L et al. (Pharmacol Reviews 1990 42 1-28). L'utilisation de l'IL 2 comme agent anticancéreux ou anti- infectieux chez le malade a été réalisée et les résultats cliniques décrits ont montré l'efficacité de l'administration de l'IL 2 soit seule à haute dose, soit associée avec des cel- lules LAK et éventuellement à d'autres agents thérapeutiques, dans certains types de cancers ou de maladies infectieuses. Or la demanderesse vient d'obtenir de façon inattendue des résultats montrant que 1 'IL 2 présente une activité dans le traitement du pneumothorax. Le pneumothorax est une affection caractérisée par une irruption d'air dans la cavité pleurale c'est-à-dire dans l'espace compris entre les plèvres pariétale et viscérale Il30 comprend essentiellement les pneumothorax spontanés compli- quant éventuellement l'évolution d'une pneumopathie ou d'une bronchopathie sous-jacente et les pneumothorax provoqués, par exemple un pneumothorax compliquant les suites d'une thoracos- copie, les pneumothorax d'origine traumatique ou ceux surve-35 nant comme complication de biopsies pleurales ou pulmonaires. Ces différents types de pneumothorax évoluent de façon fré- quente vers la chronicité. Parmi les pneumothorax spontanés qui sont la cause la plus fréquente de pneumothorax chroniques, on peut distinguer les pneumothorax bénins qui surviennent généralement sur un poumon antérieurement sain et qui ont souvent une tendance à la récidive et les pneumothorax symptomatiques de désordres 5 broncho-pulmonaires localisés ou généralisés. Il n'existe pas de traitement unique établi, notamment dans le cas du pneumothorax spontané, en particulier en raison d'une variabilité de l'estimation du risque de rechute spon- tanée qui est compris entre 20 et 50 % et qui augmente ensuite10 généralement à chaque épisode Selon 72 séries de patients dont les résultats publiés ont porté sur plus de 1100 cas de pneumothorax spontanés, les traitements capables de rétablir l'adhérence (ou symphyse) pleurale qui sont décrits avec un taux de récidive associé comprennent: le repos au lit (taux15 de rechute à 28 %), le drainage (taux de rechute à 21 %), l'administration de tétracycline (taux de rechute 20,8 %), la pulvérisation d'une colle de fibrine (taux de rechute à 15,2 %), le talcage pleural (taux de rechute à 6 %) et la thoracotomie (taux de rechute à 1,5 %) Parmi ces traitements, le talcage comporte un risque théorique de carcinogénicité dans le cas d'un traitement prolongé ou répété La thoraco- tomie demeure par conséquent le traitement de référence étant donné son faible taux de récidive, mais elle est parfois associée à des complications par exemple infectieuses et à un25 certain taux de morbidité. La présente invention concerne donc l'utilisation d'un polypeptide ayant l'activité de l'interleukine 2 humaine pour préparer une composition pharmaceutique destinée au traitement des pneumothorax.30 On entend par polypeptide ayant l'activité de l'IL 2 humaine, l'IL 2 humaine naturelle, l'IL 2 humaine recombinante c'est-à-dire obtenue par la technologie de l'ADN recombinant, par exemple comme cela est décrit par Taniguchi, T et al. Nature 1983 302 305-310 ou dans le brevet EP 91539 B, des35 allèles ou des dérivés de ces produits tels que décrits par exemple par Ju, C et al J Biol Chem 1987 262 5723-5731. Les pneumothorax que concerne l'invention comprennent les pneumothorax spontanés et les pneumothorax provoqués par un traumatisme ou un geste invasif, diagnostiqués par radiogra- phie du thorax. L'invention a notamment pour objet l'utilisation caractérisée en ce que le pneumothorax est un pneumothorax chronique. Le pneumothorax chronique concerné par l'invention est, soit un pneumothorax spontané tel qu'un pneumothorax spontané bénin, notamment un pneumothorax spontané récidivant, ou tel qu'un pneumothorax spontané symptomatique, par exemple de pneumopathies ou bronchopathies chroniques, éventuellement10 diagnostiqué au cours d'une radiographie thoracique de routine chez un malade ayant des antécédents variés souvent graves, soit un pneumothorax provoqué. Dans tous les cas, le caractère chronique est affirmé par exemple par la persistance d'un bullage après dix jours de drainage pleural ou d'un décollement après ce même délai. La demanderesse décrit ci-après l'utilisation d'IL 2 humaine dans le traitement de 4 malades atteints de pneumo- thorax chroniques dont l'efficacité est montrée par l'obten- tion d'une symphyse pleurale complète stable.20 L'invention a particulièrement pour objet l'utilisation caractérisée en ce que le polypeptide ayant l'activité de 1 IL 2 humaine est une IL 2 recombinante pure Les compositions pharmaceutiques préparées selon l'invention renferment une IL 2 humaine recombinante, des allèles ou des dérivés de celle-ci,25 telle que décrite ci-dessus, pour laquelle on utilise des techniques de purification connues de l'homme de métier, qui permettent de préparer des produits purs. L'invention a plus particulièrement pour objet l'utilisa- tion caractérisée en ce que '1 IL 2 est une IL 2 recombinante non glycosylée sous forme réduite L'IL 2 non glycosylée utilisée est notamment celle ayant la séquence de '1 IL 2 naturelle à 133 aminoacides avec éventuellement une méthionine N- terminale supplémentaire, dont les 3 cystéines en position 58, 105 et 125 sont sous la forme réduite, manifestant une activité biologique comparable à celle de '1 IL 2 oxydée ayant la même séquence comportant un pont disulfure en position 58-105. Cette IL 2 sous forme réduite est décrite dans la demande de brevet européen EP 0353150 Par forme réduite, on entend que les restes cystéines que contient l'IL 2 renferment un groupe- ment sulfhydryle libre dont la détermination est faite, par exemple, par spectrophotométrie avec la dithiodipyridine comme réactif des thiols L'activité biologique est déterminée par 5 mesure de la prolifération de lignées cellulaires leucémiques de souris dépendantes de l'IL 2 CTLL-2, avec un test colorimé- trique au sel de tétrazolium (Mossmann, T J Immunol Meth 1983 65 55- 63) L'activité spécifique des IL 2 recombinantes utilisées dans l'invention est au moins égale à 0,5 x 107 U BRMP/mg, de préférence lx 107 U BRMP/mg L'unité d'activité IL 2 est définie comme la quantité qui produit 50 % de la réponse maximum dans le test On utilise comme standard un échantillon "Biological Response Modifier Programm (BRMP) reference agent human IL 2 (jurkat)" fourni par National Cancer Institute (NCI). L'invention a spécialement pour objet l'utilisation caractérisée en ce que l'IL 2 est administrée par voie intra- pleurale à la dose de 1 x 106 U à 3 x 106 U par injection et plus spécialement celle caractérisée en ce que l'IL 2 est adminis-20 trée à la dose de 0,5 à 1 x 106 U. L'invention a tout spécialement pour objet l'utilisation caractérisée en ce que l'IL 2 est administrée de façon répétée au moins 1 fois, de préférence au moins 3 fois, à intervalle d'au moins 1 jour.25 La dose administrée, la fréquence de l'injection et la durée du traitement varient en fonction de l'état du'malade et en particulier de l'obtention de la symphyse pleurale et de l'absence de récidive immédiate du pneumothorax. L'IL 2 est comprise dans une composition pharmaceutique, de préférence lyophilisée en flacon-dose contenant de 0,05 à 2 mg de principe actif et que l'on reconstitue avec de l'eau distillée pour injection La solution obtenue est immédiate- ment diluée à l'aide d'un soluté, par exemple le glucose à 5 % pour l'administration en perfusion intrapleurale.35 Selon l'utilisation préférée de l'invention, l'IL 2 est l'IL 2 recombinante réduite ci- dessus dont un exemple de prépa- ration pharmaceutique est donnée plus loin, la dose journa- lière est d'environ 1 x 106 U en perfusion lente intrapleurale que l'on répète à intervalle d'au moins 1 jour, de préférence au moins 3 fois, jusqu'à obtention d'une symphyse complète La dose administrée au total au malade représente une quantité d'IL 2 inférieure à 1 mg, soit inférieure de plus de 10 fois 5 aux quantités d'IL 2 habituellement administrées dans le trai- tement par exemple de cancers. Les exemples suivants illustrent l'invention sans toute- fois la limiter: EXEMPLE 1: composition pharmaceutique pour perfusion. On a réalisé une préparation pour injection par voie intraveineuse en perfusion de formule: IL 2 réduite 0,5 mg acide citrique 5,0 mg mannitol 50,0 mg eau stérile 1 ml glucose à 5 t 50 ml EXEMPLE 2: étude clinique dans le traitement de pneumothorax. L'étude inclut 4 malades ayant un pneumothorax chronique radiologiquement diagnostiqué: les malades A, C et D sont atteints de pneumothorax spontané récidivant et le malade B est atteint de pneumothorax accidentel, pour lesquels un drai- nage pleural pendant au moins 9 jours, éventuellement de façon répétée sur une période allant jusqu'à 2 mois, a été pratiqué25 avec un suivi de la radiographie pulmonaire qui a montré l'échec de la symphyse ou la récidive du pneumothorax Au décours du drainage sans efficacité, un traitement par 1 'IL 2 a été initié. Les compositions d'IL 2 préparées selon l'invention per- mettent d'injecter de faibles doses d'IL 2 que l'on augmente éventuellement de 200 000 unités à 1,2 millions d'unités (U) par jour et que l'on répète à intervalle d'au moins 1 jour, selon la réponse observée, en perfusion lente par exemple comprise entre 1 et 4 heures à travers un, éventuellement35 deux, drain intrapleural On utilise la préparation décrite à l'exemple 1 selon les protocoles décrits ci-dessus Les résul- tats sont jugés sur la cessation du bullage et la disparition de l'épanchement gazeux sur la radiographie du thorax. Malade A. Le patient, âgé de 13 ans, est porteur d'une mucoviscidose et a un pneumothorax avec un décollement du poumon sur toute la périphérie, survenu lors d'un effort à la toux au cours d'une infection bronchique: Durée antérieure de drainage 2 mois Dose d'IL 2 (U/j our) JI 200 000 J 3 400 000 Réponse observée à la radiographie J 4 symphyse partielle J 7 200 000 symphyse totale Le pneumothorax n'a pas récidivé après 2 mois de suivi. Malade B. La patiente, âgée de 22 ans, est atteinte d'une fibrose pulmo- naire pour laquelle la réalisation d'une biopsie pulmonaire, à visée diagnostique, a entrainé l'apparition d'un pneumotho- rax: Durée antérieure de drainage jours Dose d'IL 2 (U/j our) J 1 500 000 Réponse observée à la radiographie J 3 800 000 symphyse partielle J 5 symphyse totale Le pneumothorax n'a pas récidivé après 14 jours de suivi. Malade C. La patiente, âgée de 73 ans, est hospitalisée pour une poussée30 évolutive d'angiosarcome et dont une radiographie pulmonaire révèle un pneumothorax avec décollement droit du poumon: Durée antérieure de drainage 19 jours Dose d'IL 2 (U/j our) Jl 1 000 000 J 3 1 000 000 J 6 Réponse observée à la radiographie symphyse partielle symphyse totale Malade D. Le patient est âgé de 22 ans, avec de nombreux antécédents dont une maladie de Hodgkin au stade IIIB Une radiographie pulmonaire a révélé un pneumothorax avec décollement gauche 5 partiel du poumon: Durée Dose Réponse antérieure d'IL 2 observée à la de drainage (U/jour) radiographie 11 jours J 1 850 000 J 3 1 200 000 J 5 symphyse totale J 9 rechute avec bulles Jll 1 000 000 J 16 1 000 000 J 17 1 000 000 J 18 symphyse totale J 20 1 000 000 J 22 1 000 000 J 23 symphyse totale J 24 1 000 000 J 27 symphyse totale Les résultats montrent une réponse complète chez l'ensemble des malades traités par l'IL 2 ( 4/4). REVENDICATIONS 1) Utilisation d'un polypeptide ayant l'activité de l'inter- leukine 2 humaine pour préparer une composition pharmaceutique destinée au traitement des pneumothorax. 5 2) Utilisation selon la revendication 1 caractérisée en ce que le pneumothorax est un pneumothorax chronique. 3) Utilisation selon la revendication 2 caractérisée en ce que le polypeptide ayant l'activité de '1 IL 2 humaine est une IL 2 recombinante pure.10 4) Utilisation selon la revendication 3 caractérisée en ce que 1 'IL 2 est une IL 2 recombinante non glycosylée sous forme réduite. ) Utilisation selon la revendication 3 ou 4 caractérisée en ce que la composition pharmaceutique d'IL 2 est adaptée à être administrée par voie intrapleurale à la dose de 1 x 106 U à 3 x 106 U par injection. 6) Utilisation selon la revendication 5 caractérisée en ce que la composition pharmaceutique d'IL 2 est adaptée à être admi- nistrée à la dose de 0,5 à 1 x 106 U.20