Brevet FR2669637A1 — publié le 19920529

La présente invention concerne de nouveaux dérivés de pyridobenzoindole de formule générale le cas échéant leurs hydrates, leurs sels d'addition avec les acides, leur préparation et les compositions pharmaceutiques qui les contiennent. Dans la demande de brevet européen 239 476 ont été décrits des dérivés de y-carboline de formule générale dans laquelle R1 et R5 sont entre autres des atomes d'hydrogène, R2 peut représenter un atome d'hydrogène, un radical hydroxy ou alcoyloxy, R3 et R4 sont notamment des radicaux alcoyle et n égale 2 à 4, qui présentent une activité anti-tumorale. Par ailleurs, les dérivés du pyridoindole non substitués en position -4 sont décrits dans la littérature [J. Med. Chem., 31, 398 (1988)] comme des composés inactifs. Les nouveaux dérivés du pyridobenzoindole de formule générale (I) dans laquelle: R représente un atome d'hydrogène ou un radical alcoyle contenant 1 ou 2 atomes de carbone, alk représente un radical alcoylène droit ou ramifié contenant 2 à 4 atomes de carbone, R1 représente un atome d'hydrogène ou un radical alcoyle contenant 1 ou 2 atomes de carbone et R2 représente un radical hydroxy ou méthoxy, présentent des propriétés anti-tumorales particulièrement intéressantes. Selon l'invention, les produits de formule générale (I) peuvent être obtenus à partir du dérivé chloré de formule générale dans laquelle R1, est défini comme précédemment par action d'une amine de formule générale H2N - alk - N(R)2 (lui) dans laquelle alk et R sont définis comme précédemment, suivie le cas échéant de la transformation du produit méthoxylé ainsi obtenu, de formule générale dans laquelle R, R1 et alk sont définis comme ci-dessus, en un dérivé hydroxy-9 pyrido[4,3-b]benzo[e]indole. La réaction de l'amine de formule générale (III) sur le dérivé chloré de formule générale (II) s'effectue en présence d'un excès de l'amine, de préférence sous azote, éventuellement dans un solvant organique inerte, ou sans solvant, à une température comprise entre la température de reflux du mélange réactionnel, et 2500C (autoclave). La déméthylation s'effectue par toute méthode connue qui n'altère pas le reste de la molécule. Le dérivé chloré de formule générale (II) pour lequel R1, est un atome d'hydrogène peut être préparé à partir de la pyridone correspondante, de formule par action d'un agent de chloration. On opère généralement au moyen d'un agent de chloration choisi parmi l'oxychlorure de phosphore ou les dérivés halogénés du phosphore en présence d'une base tertiaire (diéthylaniline, diméthylaniline par exemple) dans un solvant organique tel qu'un un nitrile (acétonitrile par exemple), à une température comprise entre 75 et 900C (température de reflux du mélange réactionnel). De préférence, la réaction s'effectue sous azote. Le produit de formule générale (II) pour lequel R1 est un radical alcoyle peut-être obtenu par alkylation du produit pour lequel R1 est un atome d'hydrogène par exemple par action du dérivé halogéné convenable, en présence de carbonate de potassium. Le produit de formule (IV) peut être préparé à partir de l'hydrazone de formule par réaction de Fisher thermique, par analogie avec la méthode décrite par C.H. NGUYEN et E. BISAGNI, Tetrahedron, 42 (8), 2203 (1986). L'hydrazone de formule (V) est préparée par condensation d'hydrazino-4-1H-pyridone-2 avec la méthoxy-6 tétralone-2. La réaction s'effectue généralement dans un solvant organique tel qu'un alcool (éthanol par exemple), à la température de reflux du mélange réactionnel. La méthoxy-6 tétralone peut être obtenue selon la méthode décrite dans J. Am. Chem. Soc., 82, 2573 (1960). L'hydrazino-4-1H-pyridone-2 peut être préparée selon la méthode décrite par C.H. NGUYEN et E. BISAGNI, Tetrahedron, 42 (8), 2203 (1986). Les dérivés de pyridobenzoindole de formule générale (I) peuvent être purifiés par cristallisation ou par chromatographie. Les nouveaux dérivés de pyridobenzoindole selon l'invention peuvent être transformés en sels d'addition avec les acides, par action d'un acide dans un solvant organique. Le sel précipite, éventuellement après concentration de sa solution, il est séparé par filtration ou décantation. Comme sels pharmaceutiquement acceptables, on peut citer les sels d'addition avec les acides minéraux tels que chlorhydrates, bromhydrates, sulfates, nitrates, phosphates, ou organiques tels que acétate, propionates, succinates, maléates, fumarates, méthanesulfonates, p.toluènesulfonates, iséthionates ou des dérivés de substitution de ces composés. Les dérivés de pyridobenzoindole, selon l'invention et leurs sels peuvent exister à l'état d'hydrates, il est entendu que ces formes hydratées entrent aussi dans le cadre de la présente invention. De plus lorsque le symbole alk est un radical alcoylène ramifié, les dérivés du pyridobenzoindole présentent des formes isomères. Il est entendu que ces formes isomères entrent aussi dans le cadre de l'invention. Les dérivés de formule générale (I) sont particulièrement intéressants comme agents anti-tumoraux. Leurs propriétés anti-tumorales ont notamment été mises en évidence in vitro à une concentration voisine de 15 à 1,5 pg/disque dans le test de cytotoxicité différentielle, selon la technique décrite par T.H. Corbett et coll., Investigational new drug, 4, 207-220 (1986), et in vivo sur les tumeurs greffées de la souris, plus particulièrement sur leucémie P388, le produit étudié s'est montré actif à la dose de 20 mg/kg par voie intrapéritonéale. Leur toxicité chez la souris exprimée par leur dose maximale tolérée est supérieure à 20 et 40 mg/kg par voie intrapéritonéale. D'un intérêt particulier pour leur activité anti-tumorale sont principalement les dérivés du pyridobenzoindole de formule générale (I), pour lesquels: R est un radical méthyle, alk est un radical alcoylène droit ou ramifié contenant 2 à 4 atomes de carbone, R1 est un atome d'hydrogène ou un radical méthyle, et R2 est un radical hydroxy, ainsi que leurs sels et le cas échéant leurs hydrates. Notamment le [(diméthylamino-3) propyl] amino-1 hydroxy-9 SH-pyrido[4,3-b]benzol[e]indole, ainsi que ses sels et ses formes hydratées, Les exemples suivants donnés à titre non limitatif illustrent la présente invention. EXEMPLE 1 Le [(diméthylamino-3) propyl] amino-1 méthoxy-9 5H-pyrido [4,3-b] benzo [e] indole (base libre) est libéré par l'ammoniac en excès à partir de 1,8 g du bimaléate correspondant puis extrait et séché. Le produit ainsi obtenu est placé dans un ballon réactionnel de 250 cm3 muni d'un agitateur sous argon, avec 66 cm3 d'acide bromhydrique (d = 1,47; 47%).Ce mélange, devenu homogène à l'ébullition, est chauffé à reflux pendant 6 heures et concentré à sec sous pression réduite. Le résidu solide est dissous dans l'eau (200 cm3) alcalinisé par l'ammoniaque à 28% (20 cm3) que l'on ajoute goutte à goutte, pour former un précipité gommeux. Au mélange résultant, on ajoute 200 cm3 d'acétate d'éthyle et agite l'ensemble pendant une heure. La phase organique est décantée et les eaux mères saturées par le chlorure de sodium sont extraites deux fois avec 100 cm3 d'acétate d'éthyle. La phase organique est séchée sur sulfate de sodium, filtrée, traitée avec 5 g de charbon animal pour la décolorer, puis filtrée et concentrée à sec. Le résidu solide est repris dans 40 cm3 d'éthanol, et traité avec 2,5 g d'acide maléique en solution dans 20 cm3 d'éthanol à l'ébullition. Le bimaléate du [(diméthylamino-3) propyl] amino-1 hydroxy-9 5H-pyrido [4,3-b] benzo [e) indole hydraté avec 0,25 H20 (1,25 g, Rdt = 70%) est ainsi obtenu, sous forme de microcristaux; F = 195-2000C (décomposition). Le bimaléate de [(diméthylamino-3) propyl] amino-1 méthoxy-9 5H-pyrido [4,3-b] benzo [e] indole peut être obtenu de la manière suivante Le chloro-1 méthoxy-9 5H-pyrido [4,3-b] benzo [e] indole (1,8 g) est placé dans un ballon de 250 cm3 contenant 50 cm3 (large excès) de diméthylamino-3 propylamine et chauffé à reflux (1500C), sous azote et sous agitation, pendant 48 heures (disparition totale du dérivé chloré, contrôlé sur plaque de silice). L'excès de la diamine est évaporé au bain-marie sous pression réduite et le résidu est repris dans l'eau puis alcalinisé par l'ammoniaque. Le solide formé est filtré, lavé à l'eau, repris dans le chlorure de méthylène et lavé avec 150 cm3 d'eau et 10 cm3 d'ammoniaque. Après chromatographie sur alumine et salification par l'acide maléique dans les conditions usuelles, on obtient 2,56 g (R = 69 %) de bimaléate de [(diméthylamino-3) propyl]amino-1 méthoxy-9 5H-pyrido [4,3-b] benzo [e] indole attendu, fondant à 204-2060C avec décomposition. Le chloro-1 méthoxy-9 5H-pyrido [4,3-b] benzo [e] indole peut être obtenu de la manière suivante: Dans un ballon de 1 litre, muni d'un agitateur magnétique, d'une ampoule à addition, d'un réfrigérant et maintenu sous azote, on introduit 4 g de méthoxy-9-2H,5H-pyrido [4,3-b] benzo [e] indolone-1 repris dans l'éthanol bouillant et soigneusement séché, 14,1 g (4 équivalents) de chlorure de benzyl triéthylammonium, 3,6 g (4 équivalents) d'acétamide, 40 cm3 d'acétonitrile et 9,12 g (4 équivalents) de diéthylaniline fraichement rectifiée. Par l'ampoule, on ajoute progressivement 70 cm3 d'oxychlorure de phosphore rectifié, et observe une réaction exothermique. Le mélange est chauffé à reflux pendant 20 heures, tandis qu'après être passé par une phase homogène, un précipité apparaît. On concentre à sec, au bain marie chauffé à 700C et sous pression réduite (15 mm de Hg). Au résidu obtenu, on ajoute 300 cm3 d'eau glacée et le mélange, bien agité pendant 2 heures, est chauffé à 700C pendant 20 minutes. On complète à 600 cm3 par de l'eau, chauffe à ébullition pendant 5 minutes et laisse refroidir à température ambiante sous agitation. Après avoir refroidi, on obtient un précipité jaune, que l'on filtre à froid et lave ensuite à l'eau froide. Ce précipité est repris dans 500 cm3 d'eau distillée et le mélange est alcalinisé, à froid, par l'ammoniaque. L'ensemble est laissé sous agitation pendant 1 nuit et le précipité est filtré et lavé à l'eau. Il est recristallisé dans l'alcool en donnant 2,6 g d'aiguilles jaunes de chloro-1 méthoxy-9 5H-pyrido [4,3-b] benzo [e] indole; F > 2600C; Rendement 60%. La méthoxy-9-2H,5H-pyrido [4,3-b] benzo [e] indolone-1 peut être obtenue de la manière suivante: Dans un tricol de 1 litre, on mélange la N-(1H-pyridone-2 yl)-4 N' - (méthoxy-6 tétrahydro-1,2,3,4-naphtalènylidène)-2 hydrazine (18 g) et le diphényléther (700 cm3) puis chauffe à reflux pendant 30 minutes, en maintenant l'ensemble sous bonne agitation et sous azote. Le mélange devient homogène et se décolore. Le chauffage est interrompu pour laisser refroidir à 2000C et contrôler que le composé de départ est entièrement transformé: plaque de silice Merck, éluant chlorure de méthylène-éthanol 8/2 en volumes, (rf hydrazone = 0,5, rf composé intermédiaire = 0,8).En continuant à agiter, le charbon palladié à 10% (4g) en suspension dans le diphényléther (20 cm3) est ajouté progressivement, avec précaution (mousses et dégagement d'hydrogène), et le nouveau mélange est chauffé à reflux pendant 30 minutes (disparition du composé intermédiaire) (rf = 0,35 silice-acétate d'éthyle pur; produit attendu: rf = 0,58). Le mélange est alors repris dans 600 cm3 d'éthoxy-2 éthanol bouillant, filtré pour éliminer le charbon palladié et concentré à sec. Le solide obtenu est additionné de 70 cm3 d'éthanol absolu, agité pendant 18 heures, filtré et séché pour donner 11 g (R = 68%) de microcristaux jaunâtres (F > 2600C) correspondants à la méthoxy-9-2H,5H-pyrido [4,3-b] benzo [e] indolone-1. La N-(1H-pyridone-2 yl)-4 N' - (méthoxy-6 tétrahydro-1,2,3,4 naphtalènylidène)-2 hydrazine peut être obtenue de la manière suivante: Le mélange de l'hydrazino-4-1H-pyridone-2 (9,8 g) dans l'éthanol absolu (150 cm3) est chauffé à reflux. A la solution, devenue homogène à l'ébullition, on ajoute la méthoxy-6 tétralone-2 (16,6 g) et le mélange, devenu rapidement hétérogène, est chauffé à reflux pendant 2 heures (disparition de l'hydrazine contrôlée par CCM sur plaque de silice Merck, éluant chlorure de méthylène-éthanol 1/1 en volumes).Le précipité formé est filtré, repris dans l'éthanol dans lequel l'hydrazone est peu soluble puis filtré à froid pour donner (19,3 g (83%)) de microcristaux jaunes de N- (1 H-pyridone-2 yl)-4 N' - (méthoxy-6 tétrahydro-1,2,3,4naphtalènylidène)-2 hydrazine, F = 220 - 2250C, avec décomposition. L'hydrazino-4-1H-pyridone-2 peut être obtenue selon la méthode décrite par E. Bisagni et C.H. Nguyen, Tetrahedron, 42, 2303 (1986). La présente invention concerne également les compositions pharmaceutiques qui contiennent comme produit actif au moins un produit de formule générale (I) à l'état pur (sous forme libre ou sous forme de sel) ou en association avec un ou plusieurs adjuvants pharmaceutiquement acceptables. Ces compositions peuvent être utilisées par voie parentérale. Les compositions pour administration parentérale, peuvent être des solutions stériles aqueuses ou non aqueuses, des suspensions ou des émulsions. Comme solvant ou véhicule, on peut employer le propylèneglycol, un polyéthylèneglycol, des huiles végétales, en particulier l'huile d'olive et des esters organiques injectables, par exemple l'oléate d'éthyle. Ces compositions peuvent également contenir des adjuvants, en particulier des agents mouillants, émulsifiants ou dispersants. La stérilisation peut se faire de plusieurs façons, par exemple à l'aide d'un filtre bactériologique, en incorporant à la composition des agents stérilisants, par irradiation ou par chauffage. Elles peuvent également être préparées sous forme de compositions solides stériles qui seront dissoutes au moment de l'emploi dans de l'eau stérile ou tout autre milieu stérile injectable. En thérapeutique humaine, les médicaments selon la présente invention sont particulièrement utiles dans le traitement des cancers digestifs, des cancers pulmonaires, des cancers des testicules ou des ovaires ainsi que dans les traitements des cancers de la tête et du cou. D'une façon générale, le médecin déterminera la posologie qu'il estime la plus appropriée en fonction de l'âge, du poids et de tous les autres facteurs propres au sujet à traiter. Le mode d'administration préféré est la voie intraveineuse. A titre indicatif, les médicaments selon l'invention peuvent être administrés chez l'homme à raison de 30 à 200 mg/m2 par traitement, par voie intra-veineuse. L'exemple suivant, donné à titre non limitatif, illustre une composition selon la présente invention EXEMPLE On prépare une solution contenant 8,54 g de bimaléate du [(diméthylamino-3) propyl] amino-1 hydroxy-9 5H-pyrido [4,3-b] benzo [e] indole hydraté (0,5 H2O), en dissolvant ce produit dans du soluté physiologique apyrogène en quantité suffisante pour obtenir 100 cm3. La solution obtenue est répartie aseptiquement en ampoules, à raison de 2 cm3 par ampoule. Les ampoules sont scellées et contiennent chacune 100 mg de [(diméthylamino-3) propyl] amino-1 hydroxy-9 5H-pyrido [4,3-b] benzo [e] indole. REVENDICATIONS 1 - Un nouveau dérivé de pyridobenzoindole de formule générale dans laquelle R représente un atome d'hydrogène ou un radical alcoyle contenant 1 ou 2 atomes de carbone, alk représente un radical alcoylène droit ou ramifié contenant 2 à 4 atomes de carbone, R1 représente un atome d'hydrogène ou un radical alcoyle contenant 1 ou 2 atomes de carbone, et R2 représente un radical hydroxy ou méthoxy, ainsi que ses sels d'addition avec les acides, et le cas échéant ses hydrates et ses formes isomères et leurs mélanges. 2 - Un nouveau dérivé du pyridobenzoindole selon la revendication 1 pour lequel: R est un radical méthyle, alk est un radical alcoylène droit ou ramifié contenant 2 à 4 atomes de carbone, R1 est un atome d'hydrogène ou un radical méthyle, et R2 est radical hydroxy ainsi que ses sels et le cas échéant ses hydrates et ses formes isomères et leurs mélanges. 3 - Le [(diméthylamino-3) propyl] amino-1 hydroxy-95H-pyrido [4,3-b] benzo [e] indole, ainsi que ses sels et ses formes hydratées. 4 - Un procédé de préparation d'un dérivé de pyridobenzoindole selon la revendication 1, caractérisé en ce que l'on fait agir une amine de formule générale H2N - alk - N(R)2 dans laquelle alk et R sont définis comme dans la revendication 1, sur un dérivé chloré de formule dans laquelle R1 est défini comme dans la revendication 1, puis transforme le cas échéant le produit méthoxylé obtenu, de formule générale: dans laquelle R1 est défini comme dans la revendication 1, en un dérivé hydroxy-9 pyrido [4,3-b] benzo [eJ indole et transforme éventuellement le produit obtenu en un sel d'addition avec un acide. 5 - Composition pharmaceutique caractérisée en ce qu'elle contient un produit selon la revendication 1 à l'état pur ou sous forme d'association avec tout diluant ou adjuvant compatible et pharmaceutiquement acceptable.