Brevet FR2665449A1 — publié le 19920207

Procédé de fabrication de Facteur von Willebrand ayant une très haute pureté, dépourvu en majeure partie de Facteur antihémophi- lique (FVII Ic), et Facteur von Willebrand ainsi obtenu, ainsi qu'une composition pharmaceutique le contenant. L'invention concerne essentiellement un procédé de fabri- cation de Facteur von Willebrand ayant une très haute pureté, le Facteur von Willebrand ainsi obtenu ainsi qu'une composition pharmaceutique le contenant. On connaît déjà dans l'état antérieur de la technique divers procédés de fabrication du Facteur von Willebrand Ces procédés sont en général axés principalement sur l'obtention de Facteur VII Ic de haute pureté, le Facteur von Willebrand étant obtenu à titre secondaire Par exemple, le document EP-A-O 359 593 (CRTS Lille) décrit un procédé de séparation de protéines à partir d'une fraction de plasma humain ou animal selon lequel on obtient un concentré de Facteur VII Ic de haute pureté utilisable pour le traitement de l'hémophilie A, ainsi que des concentrés de fibrino- gène, de Facteur von Willebrand et de fibronectine Selon ce procédé antérieur, le Facteur VII Ic obtenu est seulement partielle- ment débarrassé du Facteur von Willebrand, ce qui constitue un inconvénient de ce procédé. Dans le document FR-89 02 136 du déposant, il a été décrit un procédé de fabrication de Facteur antihémophilique (FVII Ic) ayant une très haute pureté, permettant d'obtenir comme constituants secondaires du Facteur von Willebrand dont la méthode de purification n'était pas décrite. La présente invention a pour but principal d'obtenir du Facteur von Willebrand de très haute pureté à partir de ce procédé antérieurement décrit par le déposant dans le document FR-89 02 136. La présente invention a pour but de fournir un Facteur von Willebrand de très haute pureté, par un procédé de fabrication simple, permettant une bonne reproductibilité, ainsi que de traiter des quantités très importantes à l'échelle industrielle, tout en étant relativement peu coûteux. La présente invention permet de résoudre ce nouveau problème technique pour la première fois d'une manière satisfai- sante, reproductible, simple, et donc utilisable à l'échelle indus- trielle, en permettant de traiter des grandes quantités sans limi- tation de volume contrairement aux techniques antérieures qui sont limitées au laboratoire. En outre, l'invention réalise une inactivation virale. Ainsi, selon un premier aspect, la présente invention fournit un procédé de fabrication de Facteur von Willebrand ayant une très haute pureté, dépourvu en majeure partie du Facteur anti- hémophilique (FVII Ic), comprenant une étape de purification par chromatographie d'échange d'ions à l'aide d'une première colonne de chromatographie contenant un gel, comprenant une étape d'adsorption seulement du Facteur antihémophilique sur le gel de ladite première colonne, qui sera plus tard désorbé en vue de son obtention sous forme purifiée, tandis que le Facteur von Willebrand dépourvu en majeure partie du Facteur VII Ic est contenu dans la fraction non retenue puis est traité pour son obtention sous une forme purifiée, caractérisé en ce qu'on traite la fraction non retenue contenant le Facteur von Willebrand de manière à diminuer la force ionique de la solution non retenue jusqu'à obtention d'une force ionique corres- pondant à celle qui est obtenue avec une solution 0,1 à 0,15 M en Na Cl puis on adsorbe sélectivement le Facteur von Willebrand sur le gel d'une deuxième colonne en éluant ladite solution non retenue de force ionique réduite avec une première solution d'élution qui présente une force ionique sensiblement identique à celle de la solution non retenue à force ionique diminuée; puis on désorbe le Facteur von Willebrand adsorbé sur le gel de la deuxième colonne grâce à une deuxième solution d'élution de force ionique plus élevée que la première solution d'élution, en obtenant ainsi une solution purifiée de facteur von Willebrand de très haute pureté, dépourvue en majeure partie du facteur antihémophilique VII Ic, des inactivateurs tels que Tween et TNBP, ainsi que des principaux contaminants plasmatiques. Selon une variante de réalisation avantageuse du procédé selon l'invention, on réduit la force ionique de la solution non retenue en procédant à une diafiltration, de préférence précédée d'une concentration Cette diafiltration est avantageusement réali- sée contre une troisième solution tampon, de préférence permettant une injection intraveineuse Une telle troisième solution tampon pour la diafiltration peut présenter la composition suivante: Na Cl 100 mmol, Tris 20 mmol, Ca C 12,2 H 20 10 mmol, L- arginine 17 mmol, L-lysine-H Cl 20 mmol. Cette solution est également amenée à p H 7, avec de l'H Cl concentré 12 N. Selon une caractéristique particulière de l'invention, la concentration de la solution diafiltrée est réalisée de manière à obtenir entre 30 et 40 unités de Facteur von Willebrand: RCO (co-facteur de RISTOCETINE). Selon une variante de réalisation préférée du procédé selon l'invention, la première solution d'élution qui permet d'adsorber sélectivement le Facteur von Willebrand sur le gel de la deuxième colonne présente la composition suivante: Na Cl 100 150 mmol, Tris 20 mmol. Cette solution est amenée à p H 6,6 avec de l'H Cl concen- tré 12 N. Selon une autre caractéristique particulière du procédé selon l'invention, on utilise comme deuxième solution d'élution, qui permet de désorber le Facteur von Willebrand de la deuxième colonne, une solution de composition suivante: Na Cl 350 mmol, Tris 20 mmol. Cette composition est amenée à p H 6,6 avec de l'H Cl concentré 12 N. Selon une autre caractéristique avantageuse du procédé selon l'invention, le gel de purification qui est utilisé dans la deuxième colonne de chromatographie par échange d'ions, pour adsor- ber sélectivement le Facteur von Willebrand, est un gel présentant les caractéristiques essentielles suivantes: un gel d'échange d'ions de type anionique à base d'agarose réticulé en particulier à environ 6 % sous forme de billes Ce gel est de préférence de type amine quaternaire, notamment en bout d'un petit bras espaceur, par exemple de type alkylène en C -C, relié aux billes d'agarose. Un gel qui correspond à ces caractéristiques et qui est disponible commercialement est connu sous le nom commercial Q Sépharose fast floj g et commercialisé par la société suédoise Pharmacia, dont les billes ont un diamètre de 45-165,/1 m à l'état humide. Il est à noter que ce gel présente une bonne affinité relativement au Facteur von Willebrand, de l'ordre de 50 unités de Facteur von Willebrand: Rag par litre de gel. Selon une caractéristique particulière du procédé selon l'invention, on utilise comme source de Facteur von Willebrand un cryoprécipité, extrait de plasma humain que l'on met en solution, de préférence par dissolution dans de l'eau avantageusement additionnée d'héparine La solution ainsi obtenue est traitée avec de l'hydroxyde d'aluminium La proportion d'incorporation d'hydroxyde d'aluminium n'est pas critique et peut varier dans de larges limites On préfère cependant utiliser une proportion supérieure à 10 % en volume par rapport au volume total de la solution de départ Des proportions actuellement préférées sont de l'ordre de 15 % en volume. Avantageusement, on procède également à une centrifuga- tion pour séparer l'hydroxyde d'aluminium de la solution de départ, afin de la débarrasser des facteurs vitamines K dépendants Cepen- dant, selon une variante de réalisation avantageuse du procédé selon l'invention, on peut ensuite inactiver viralement la solution contenant initialement le Facteur VII Ic ainsi que le Facteur von Willebrand à l'aide d'une solution tampon contenant un mélange solvant/détergent comme décrit dans le document EP-A-O 131 740 ou US-A-4 540 573. La solution brute ainsi obtenue, inactivée viralement, est ensuite débarrassée du Facteur VII Ic selon la méthode décrite dans le document antérieur du déposant FR-89 02 136 qui est incor- poré ici par référence. On notera simplement que, avant de passer à une étape d'adsorption sur une première colonne de chromatographie par échange d'ions contenant un gel de fixation du Facteur VII Ic, on procède à une diafiltration de la solution brute à l'aide d'une solution tampon identique à celle servant à l'élution de la première colonne servant à fixer le Facteur VII Ic. On procède à l'adsorption sélective du Facteur VII Ic sur cette première colonne tandis que le Facteur von Willebrand est présent dans la solution éluée non retenue, qui est ensuite traitée selon le procédé de la présente invention qui vient d'être décrit. Le Facteur VII Ic est ensuite récupéré comme décrit dans le document précité du déposant FR-89 02 136. En ce qui concerne l'étape de diafiltration préférée de la solution éluée non retenue contenant le Facteur von Willebrand, on utilise une membrane ayant un pouvoir de coupure à 100 000, par exemple une membrane type millipore référence 4 PTHK de la société Millipore. Par ailleurs, en vue de la conservation de la solution de Facteur von Willebrand éluée de très haute pureté obtenue par le procédé selon l'invention, dépourvue en majeure partie de Facteur antihémophilique VII Ic, et présentant une activité spécifique supé- rieure à 50 en terme de Facteur von Willebrand RCO par mg de protéines, on procède à une filtration stérilisante sur filtre stérilisant ayant une dimension de pores de diamètre 0,22 Mm, puis on introduit cette solution de Facteur von Willebrand purifiée, stérilisée, dans des flacons classiques. Selon un second aspect, la présente invention fournit également du Facteur von Willebrand de très haute pureté caracté- risé en ce qu'il a été obtenu par le procédé précédemment décrit. L'invention couvre également le Facteur von Willebrand de très haute pureté caractérisé en ce qu'il est dépourvu en majeure partie de Facteur VII Ic, de préférence à une teneur inférieure à 2 % en Facteur VII Ic De préférence, l'activité spécifique du Facteur von Willebrand selon l'invention est d'au moins 50 unités von Willebrand RC 0/mg de protéines. Selon un troisième aspect, la présente invention couvre encore une composition pharmaceutique, caractérisée en ce qu'elle contient du Facteur von Willebrand tel qu'obtenu par le procédé selon l'invention ou tel que précédemment défini De préférence, cette composition pharmaceutique contient le Facteur von Willebrand sous forme lyophilisée qui permet de préparer une préparation injectable extemporanément. L'invention couvre encore un procédé de fabrication d'une composition pharmaceutique, caractérisé en ce qu'on utilise comme principe actif du Facteur von Willebrand dépourvu en majeure partie de Facteur VII Ic, avantageusement à une teneur inférieure à 2 % en Facteur VII Ic De préférence, ce Facteur von Willebrand est sous forme lyophilisée qui permet de préparer une préparation injectable extemporanément. L'invention couvre enfin un procédé de traitement de mammifères, incluant l'homme, sous forme de la maladie von Willebrand, caractérisé en ce qu'on administre auxdits mammifères, incluant l'homme, une quantité thérapeutiquement efficace du Facteur von Willebrand dépourvu en majeure partie de Facteur VII Ic, avantageusement ayant une teneur inférieure à 2 % en Facteur VII Ic. Selon un mode de réalisation particulier, l'activité spécifique du Facteur von Willebrand est d'au moins 50 unités von Willebrandr RC 0/mg de protéines Ce Facteur von Willebrand est selon une variante de réalisation particulière sous forme d'une préparation injectable préparée extemporanément à partir d'une forme lyophi- lisée, par voie parentérale Avec le Facteur von Willebrand obtenu selon la présente invention, la dose d'administration sera habi- tuellement de 30 à 40 unités de v W: R Co/kg de poids du corps/j. D'autres buts, caractéristiques et avantages de l'inven- tion apparaîtront clairement à la lumière de la description expli- cative qui va suivre faite en référence à un exemple de réalisation donné simplement à titre d'illustration et qui ne saurait donc en aucune façon limiter la portée de l'invention Dans cet exemple, les pourcentages sont donnés en poids, sauf indication contraire. Exemple de l'invention 3 kg de cryoprécipité de plasma sanguin humain, issu de 300 1 de plasma humain sont mis en solution dans 3,2 fois son volume de solution d'eau osmosée, limulus négatif, additionnée d'héparine à raison de 3 unités internationnales par ml de solution, à la température du laboratoire et sous agitation pendant 2 h de manière à réaliser une dissolution complète. Après mesure du volume final, on additionne à cette solu- tion de l'hydroxyde d'aluminium à raison de 15 % en volume par rapport au volume total de cette solution afin d'éliminer les Facteuis Vitamine K dépendant On laisse sous agitation pendant min pour réaliser cette adsorption des Facteurs Vitamine K dépen- dants sur l'hydroxyde d'aluminium. On centrifuge à 6 000 G pour séparer l'hydroxyde d'alu- minium de la solution. Ensuite, on traite la solution brute contenant du Facteur VII Ic ainsi que le Facteur von Willebrand recherché selon le procédé décrit dans le document EP-A-O 131 740 ou US-A-4 540 573 de manière à réaliser une inactivation virale. Ensuite, on procède à une diafiltration de la solution brute contenant le Facteur VII Ic ainsi que le Facteur von Willebrand contre une solution tampon qui sera ensuite utilisée pour l'équilibration et l'élution de la première colonne de chroma- tographie utilisée pour adsorber sélectivement le Facteur VII Ic, ayant la composition suivante: Na C 1 250 mmol, Tris 20 mmol, Ca C 12,2 H 20 10 mmol. Cette solution a été amenée à p H 6,6 avec de l'H Cl con- centré 12 N. Cette diafiltration est réalisée avec 2 fois le volume de la solution brute contenant le Facteur VII Ic ainsi que le Facteur von Willebrand, inactivée en éliminant ainsi la majeure partie des produits ayant servi à l'inactivation virale La membrane servant à la diafiltration est une membrane millipore référence 4 PTHK à pouvoir de coupure à 100 000 On obtient ainsi une solution brute contenant le Facteur VII Ic ainsi que le Facteur von Willebrand, inactivée, diafiltrée et concentrée à 10 1 de solution totale. On vérifie que cette solution concentrée à 10 1 présente sensiblement la même force ionique que la solution tampon d'élution de la première colonne de chromatographie servant à adsorber sélec- tivement le Facteur VII Ic La colonne de chromatographie est par exemple une colonne de 25 cm de hauteur sur un diamètre de 40 cm dans laquelle on introduit 32 1 de gel de chez Phamacia Q-Sépharose fast flo Le gel a été équilibré par la solution d'élution avant de procéder à l'injection des 10 1 de solution brute contenant le Facteur VII Ic et le Facteur von Willebrand, à raison de 25 1/h pour une injection au même débit de la solution tampon d'élution jusqu'à ce qu'on n'observe plus en sortie de colonne de pic protéique, par vérification avec un spectrophotomètre 280 nm, correspondant principalement au Facteur Willebrand, au fibrinogène, à l'albumine et auxy-globulines que l'on désire recueillir séparé- ment, en vue de récupérer le Facteur von Willebrand. Après élution de la colonne avec la solution tampon d'élution, on a ainsi adsorbé sélectivement sur cette colonne le Facteur VII Ic Par ailleurs, la solution éluée, non retenue, contient le Facteur von Willebrand, le fibrinogène, l'albumine et les -globulines ainsi que les inactivateurs plasmatiques et présente un volume de 80 à 100 litres. On sépare sélectivement le Facteur von Willebrand par le procédé selon l'invention, de la manière suivante: on procède tout d'abord à une diafiltration de la solu- tion éluée non retenue contenant le Facteur von Willebrand, contre une première solution tampon de composition suivante: Na Cl entre 100 et 150 mmol, de préférence environ 120 mmol, Tris 20 mmol. Cette solution est amenée à un p H égal à 6,6 par de l'H Cl concentré 12 N. Cette solution est diafiltrée avec la membrane millipore référence 4 PTHK à pouvoir de coupure à 100 000, dans des conditions réalisant une concentration simultanée jusqu'à obtention d'un volume de 10 1 en solution totale. On vérifie que cette solution concentrée de Facteur von Willebrand à 10 1 présente sensiblement la même force ionique que la première solution tampon d'élution de la deuxième colonne de chromatographie servant à l'adsorption sélective du Facteur von Willebrand. On procède ensuite à l'adsorption sélective du Facteur von Willebrand sur cette deuxième colonne de chromatographie conte- nant le même gel que la première colonne de chromatographie ayant servi à l'adsorption sélective du Facteur VII Ic, mais qui a été ici équilibrée à une force ionique correspondant à celle de la solution von Willebrand, qui est entre 100 et 150 mmol en Na Cl. La partie éluée et non fixée sortant de cette deuxième colonne contient essentiellement le fibrinogène, la fibronectine, de l'albumine et des y-globulines ainsi que les inactivateurs plas- matiques, que l'on met de côté. Par ailleurs, on recueille le Facteur von Willebrand adsorbé sur la colonne par élution avec une deuxième solution d'élution présentant une force ionique plus élevée, de composition suivante: Na Cl entre 300 et 350 mmol, de préférence environ 350 mmol, Tris 20 mmol. Cette solution a été amenée à p H 6,6 avec de l'H Cl con- centré 12 N. Dans cette deuxième colonne de chromatographie spécifique pour la fixation de Facteur von Willebrand, il suffit d'utiliser 8 1 de gel Q-Sépharose fast flo de Pharmacia, en raison de l'affinité beaucoup plus élevée de ce gel vis-à-vis du Facteur von Willebrand. Cette solution éluée et contenant le Facteur von Willebrand purifié est maintenant concentrée en la diafiltrant contre une troisième solution tampon présentant la composition sui- vante: Na Cl environ 100 mmol, Tris 20 mmol, -Ca Cl 2,2 H 20 10 mmol, Larginine 17 mmol, L-lysine-H Cl 20 mmol, cette solution étant amenée à un p H égal à 7 par de l'H Cl concentré 12 N. Cette manière de procéder permet de diminuer la propor- tion de sodium à 100 mmol/l et à concentrer entre 30 et 40 unités internationnales de Facteur von Willebrande RCO par ml de solution. La membrane de diafiltration qui est utilisée à cette étape est une membrane millipore, référence 4 PTHK ayant un pouvoir de coupure à 100 000. On procède ensuite à une filtration stérilisante de la solution de Facteur von Willebrand sur une membrane stérilisante par exemple de chez Millipore référence Millidisk à diamètre de pore de 0,22 P Im. On obtient ainsi une solution de Facteur von Willebrand de très haute pureté, stérilisée, que l'on peut répartir dans des flacons pour le stockage des produits, notamment en vue de la lyophilisation que l'on peut réaliser ensuite de manière tout à fait classique On obtient ainsi un Facteur von Willebrand ayant il une activité spécifique d'au moins 50 unités von Willebrandf RC 0/mg de protéines. Ce Facteur von Willebrand constitue ainsi une composition pharmaceutique de très grande valeur qui permet de n'injecter au patient souffrant de la maladie de von Willebrand que les quantités de produit nécessaires à traiter cette maladie, ce qui constitue un progrès technique déterminant. En effet, par l'invention, le rendement du procédé par litre de plasma est de l'ordre de 350 unités internationnales de Facteur von Willebrandi RC O et est de 600 unités internationnales de Facteur von Willebrand: R Ag. Il est encore à observer que ce produit présente une très grande stabilité dans le temps En particulier, l'activité du Facteur von Willebrand baisse de moins de 5 % après reprise du lyophilisat au bout de 24 h. REVENDICATIONS 1 Procédé de fabrication de Facteur von Willebrand ayant une très haute pureté, dépourvu en majeure partie du Facteur anti- hémophilique (FVII Ic), comprenant une étape de purification par chromatographie d'échange d'ions à l'aide d'une première colonne de chromatographie contenant un gel, comprenant une étape d'adsorption seulement du Facteur antihémophilique sur le gel de ladite première colonne, qui sera plus tard désorbé en vue de son obtention sous forme purifiée, tandis que le Facteur von Willebrand dépourvu en majeure partie du Facteur VII Ic est contenu dans la fraction non retenue puis est traité pour son obtention sous une forme purifiée, caractérisé en ce qu'on traite la fraction non retenue contenant le Facteur von Willebrand de manière à diminuer la force ionique de la solution non retenue jusqu'à obtention d'une force ionique corres- pondant à celle qui est obtenue avec une solution 0,1 à 0,15 M en Na Cl puis on adsorbe sélectivement le Facteur von Willebrand sur le gel d'une deuxième colonne en éluant ladite solution non retenue de force ionique réduite avec une première solution d'élution qui présente une force ionique sensiblement identique à celle de la solution non retenue à force ionique diminuée; puis on désorbe le Facteur von Willebrand adsorbé sur le gel de la deuxième colonne grâce à une deuxième solution d'élution de force ionique plus élevée que la première solution d'élution, en obtenant ainsi une solution purifiée de facteur von Willebrand de très haute pureté, dépourvue en majeure partie du facteur antihémophilique VII Ic, des inactivateurs tels que Tween et TNBP, ainsi que des principaux contaminants plasmatiques. 2 Procédé selon la revendication 1, caractérisé en ce qu'on réduit la force ionique de la solution non retenue en procé- dant à une diafiltration, de préférence précédée d'une concentration. 3 Procédé selon la revendication 2, caractérisé en ce que la diafiltration précitée est réalisée contre une troisième solu- tion tampon, de préférence permettant une injection traveineuse. 4 Procédé selon la revendication 3, caractérisé en ce que la troisième solution tampon pour la diafiltration présente la composition suivante: Na Cl 100 mmol, Tris 20 mmol, Ca C 12,2 H 20 10 mmol, L-arginine 17 mmol, L-lysine-H Cl 20 mmol. Cette solution est également amenée à p H 7, avec de l'H Cl concentré 12 N. Procédé selon l'une des revendications 2 à 4, caracté- risé en ce que la concentration de la solution diafiltrée est réalisée de manière à obtenir entre 30 et 40 unités de Facteur von Willebrand: RC 0. 6 Procédé selon l'une des revendications 1 à 5, caracté- risé en ce que la première solution d'élution qui permet d'adsorber sélectivement le Facteur von Willebrand sur le gel de la deuxième colonne présente la composition suivante: Na Cl 100 150 mmol, Tris 20 mmol. Cette solution étant amenéee à p H 6,6 avec de l'H Cl concentré 12 N. 7 Procédé selon l'une des revendications 1 à 6, caracté- risé en ce qu'on utilise comme deuxième solution d'élution, qui permet de désorber le Facteur von Willebrand de la deuxième colonne, une solution de composition suivante: Na Cl 350 mmol, Tris 20 mmol. Cette composition étant amenée à p H 6,6 avec de l'H Cl concentré 12 N. 8 Procédé selon l'une des revendications 1 à 7, caracté- risé en ce que le gel de purification qui est utilisé dans la deuxième colonne de chromatrographie par échange d'ions, pour adsorber sélectivement le Facteur von Willebrand, est un gel présentant les caractéristiques essentielles suivantes: un gel d'échange d'ions de type anionique à base d'aga- rose réticulé en particulier à environ 6 % sous forme de billes, ce gel étant de préférence de type amine quaternaire, notamment en bout d'un petit bras espaceur, par exemple de type alkylène en C - C, relié aux billes d'agarose. 9 Procédé selon l'une des revendications 1 à 8, caracté- risé en ce qu'on utilise comme source de Facteur von Willebrand un cryoprécipité, extrait de plasma humain que l'on met en solution, de préférence par dissolution du cryoprécipité dans de l'eau avan- tageusement additionnée d'héparine puis traitée avec de l'hydroxyde d'aluminium. Procédé selon la revendication 9, caractérisé en ce qu'on procède à une centrifugation pour séparer l'hydroxyde d'alu- minium de la solution de départ, afin de la débarrasser des facteurs vitamines K dépendants. 11 Procédé selon la revendication 9 ou 10, caractérisé en ce qu'on inactive viralement la solution contenant initialement le Facteur VII Ic ainsi que le Facteur von Willebrand à l'aide d'une solution tampon contenant un mélange solvant/détergent. 12 Procédé selon l'une des revendications 1 à 11, carac- térisé en ce que, avant de passer à une étape d'adsorption sur une première colonne de chromatographie par échange d'ions contenant un gel de fixation du Facteur VII Ic, on procède à une diafiltration de la solution brute à l'aide d'une solution tampon identique à celle servant à l'élution de la première colonne servant à fixer le Facteur VII Ic. 13 Procédé selon une des revendications 2 à 12, carac- térisé en ce que, pour l'étape de diafiltration de la solution éluée non retenue contenant le Facteur von Willebrand, on utilise une membrane ayant un pouvoir de coupure à 100 000. 14 Procédé selon une des revendications 1 à 13, caracté- risé en ce qu'on procède à une filtration stérilisante sur filtre stérilisant ayant une dimension de pores de diamètre 0,22 m avant d'introduire la solution de Facteur von Willebrand purifiée, stéri- lisée, dans des flacons classiques. Facteur von Willebrand de très haute pureté, caracté- risé en ce qu'il est obtenu par le procédé selon l'une quelconque des revendications i à 14. 16 Facteur von Willebrand de très haute pureté, caracté- risé en ce qu'il est dépourvu en majeure partie de Facteur VII Ic, de préférence à une teneur inférieure à 2 % en Facteur VII Ic, l'activité spécifique du Facteur von Willebrand étant d'au moins unités von Willebrand: RCO/mg de protéines. 17 Composition pharmaceutique, caractérisée en ce qu'elle contient du Facteur von Willebrand tel qu'obtenu par le procédé selon l'une quelconque des revendications 1 à 14 ou tel que défini aux revendications 15 ou 16. 18 Composition pharmaceutique selon la revendication 17, caractérisée en ce que le Facteur von Willebrand est sous forme lyophilisée qui permet de préparer une préparation injectable extemporanément.