Brevet FR2670361A1 — publié le 19920619

La présente invention concerne un procéde d'activation de la mobilité des femelles d'un insecte parasitolde oophage agissant par recherche de son hôte et destruction de ce dernier. Un tel processus est notamment appliqué à la lutte biologique contre la pyrale du mais Ostrinia nubilalis HUBNER, par l'intervention de Trichogramma brassicae BEZDENKO (appelé antérieurement maidis). Pour la mise en oeuvre de la lutte biologique ci-dessus, on a été amené à produire en masse, à conserver et à conditionner des oeufs d'un insecte des denrées, tel que Ephestia kuehniella parasité par le trichogramme, en vue de lâchers au champ. L'ensemble -de ces dispositions est notamment décrit dans les brevets français n" 79 17 774, 79 17 904, 85 09 251 et 85 12115. Or dans le cas du trichogramme, les Deiiandeurs ont trouvé que l'élevage sur hôte de substitution entra me une certaine accoutumance du trichogramme à ce dernier et que, de ce fait, le parasite réagit moins à la ponte de la pyrale du mals lors du lâcher au champ, car il se déplace moins et détecte moins rapidement les pontes de la pyrale. L'efficacité parasitaire par individu au champ en est donc réduite et elle doit être compensée à l'heure actuelle par un accroissement des doses pouvant atteindre un facteur 10, particulièrement coûteux, chaque dose unitaire consistant en une capsule renfermant des oeufs frais d'Ephestia et un inoculum d'oeufs parasités par le trichogramme. Les Demandeurs ont donc cherché à activer la mobilité de femelles d'insectes entomophages, en particulier du trichogramme, en vue d'aboutir à un procédé permettant d'obvier à l'accoutumance évoquée ci-dessus. On sait que les kairomones jouent un rôle très important dans la communication inter-specifique chez les insectes. Dans le cas d'un parasitoide, elles peuvent intervenir à différentes étapes de la recherche de l'hôte, à savoir, localisation de l'habitat de l'hôte, recherche et reconnaissance de l'hôte. Des études antérieures ont permis de mettre en évidence un effet d'activation de la mobilité des femelles de Trichogramma brassicae en présence des effluves libérés par la dévagination artificielle de la glande phéromonale de femelles vierges d'Ostrinia nubilalis testées en photophase ou en scotophase lors de l'émission phéromonale (Frenoy et al., 1990). La réponse des parasitoîdes dans cette dernière situation est plus rapide et plus importante qu'en présence des femelles vierges testées en photophase. Cette mise en évidence a été réalisée en olfactomètre lineaire (Renou et al. 1989) constitué de deux branches indépendantes mises en parallèle afin de comparer l'activité induite par un stimulus chimique à celle induite par de l'air pur en tant que témoin.Ce type d'olfactomètre ne permettant cependant pas de déterminer le rôle précis de ces stimuli chimiques sur le comportement de recherche de l'hôte par les trichogrammes, les Demandeurs ont conçu un autre type d'olfactomètre qui permet d'étudier ce comportement, traduit par le temps de recherche et la variabilité des réponses en fonction des stimuli chimiques proposés. Ce type de micro-olfactomètre est constitué d'une enceinte où passe un air purifié balayant une source odorante ou agissant directement en tant que témoin. En amont du flux d'air est déposée une ooplaque d'Ostrinia nubilalis afin de donner une cible biologique à l'insecte, tandis que le comportement des parasitoldes peut être observé, enregistré et analysé à l'aide d'un moniteur et d'un magnétoscope. Le parasitoide a été soumis à différentes sources odorantes telles que le mélange phéromonal libéré par les femelles vierges de pyrales vivantes, pendant les deux dernières heures de la scotophase, élevées en photopériode 16L/8D, ou bien des émanations libérées par la dévagination de la glande phéromonale des femelles vierges testées en photophase (après la huitième heure du début de cette phase), élevées en photopériode 16L/8D. Ces activités ont été comparées à celles obtenues en présence de deux types de témoins, à savoir, un flux d'air pur balayant l'ooplaque cible, ainsi que les émanations de femelles vierges élevées en photophase continue, ayant l'extrémité abdominale dévaginée, effluves qui n'induisent pas de changement comportemental particulier. A partir de l'introduction du parasitolde dans l'enceinte du micro-olfactomètre, on a donc mesure le tempS que met la femelle parasitolde~à retrouver la ponte-hôte et à commencer à la parasiter. Ces tests comportementaux ont été répétés 30 fois et seront explicités plus loin en regard du tableau reporté ci-apres. Sur la base de ce mode opératoire, on a trace un histogramme de fréquences de réponse des trichogrammes aux différentes sources odorantes proposées, comme illustre sur les graphiques des figures 1 et 2 des dessins annexés, relatifs respectivement au témoin (T), aux femelles vierges en scotophase (I), en photophase (II), en photophase continue (III) et aux ooplaques (IV). Sur ces graphiques, on a porté en abscisses le nombre N d'individus par essai, donnant une réponse pour le temps en secondes porté en ordonnées. On peut voir qu'en présence du mélange phéromonal les trichogrammes retrouvent beaucoup plus rapidement l'ooplaque-cible, en comparaison avec le témoin et les effluves émis par la glande dévaginée des femelles élevées en photophase continue. Par chromatographie et spectrographie de masse, on a alors pu identifier la substance responsable de l'activation de la mobilité et de l'orientation des trichogrammes, comme étant l'acide oléique. Les Demandeurs ont en outre découvert qu'en plus de la mise en présence directe des trichogrammes en développement et des adultes émergés avec l'acide oléique, l'application d'acide oléique au cours de l'élevage de l'hôte Ephestia kuehniella afin de laisser une trace de ce composé dans ou sur les oeufs parasités peut permettre aux trichogrammes produits à partir de tels oeufs de présenter les mêmes caractéristiques que ceux directement soumis audit composé. Conformément à l'invention le procédé d'activation consiste donc à mettre en présence d'acide oléique les femelles de trichogramme issues d'un oeuf-hôte, notamment d'Ephestia kuehniella, par imprégnation préalable dudit oeuf-hôte ou de son environnement immédiat au moyen d'acide oléique. TABLEAU TEMOIN FEMBLLES VIHRGES PRMELLES VIERGES FEMELLES VIERGES ACIDE OLEIQUE PHOTOPHASE CONTINUE EN PHOTOPHASE EN APPEL N MOYENNE ECART- N MOYENNE ECART- N MOYENNE ECART- N MOYENNE ECART- N MOYENNE ECART TYPE TYPE TYPE TYPE TYPE 30 6mn47 4mn49 30 7mn12 5mn04 30 4mn42 2mn49 30 2mn34 1mn48 30 2mn11 1mn35 Ces résultats montrent tres nettement que les molécules libérées par les femelles vierges en période d'émission phéromonale accélèrent le processus de recherche de l'hôte en diminuant de façon importante le temps que met l'insecte à retrouver la pontehôte. En effet, il est de 2mn34 en moyenne, temps trois fois plus court que celui du témoin "air pur" qui est de 6 mn47. Par contre, le temps mis par les trichogrammes soumis aux effluves de femelles vierges en photophase (4mn42) est intermédiaire entre celui mis par le témoin et celui induit par les stimuli émanants des femelles vierges en appel. Les effluves de femelles vierges élevées en photophase continue, l'extrémité abdominale dévaginée, n'induisent pas de changement comportemental particulier par rapport au témoin. On remarque que l'acide oléique en tant que source odorante se traduit par une mobilité similaire à celle induite par les femelles vierges en appel . Le profil de reponse en présence d'acide oléique (série V) est similaire à celui obtenu en présence du mélange phéromonal libéré par les femelles vierges en appel (série I). L'imprégnation de l'oeuf-hôte mentionné ci-dessus peut être effectuée au stade de l'oeuf frais stérilisé ou bien après parasitisme par le trichogramme, cette imprégnation pouvant être réalisée au moyen d'une solution d'immersion, d'une pulvérisation ou d'un enrichissement de l'atmosphère d'une enceinte convenable contenant les oeufs. Dans le cas de l'imprégnation de l'environnement immédiat de l'oeuf-hôte, on peut effectuer une pulvérisation d'acide oléique ou d'une solution convenable sur les supports des oeufs en cours d'élevage ou conditionnés en vue du lâcher au champ. Il y a lieu de noter que la présence d'acide oléique, pendant le processus d'obtention en masse de ltoeuf-hôte, peut intervenir avantageusement pendant le stade du parasitisme en augmentant la mobilité des parasites, ce qui a pour effet une meilleure répartition et donc un taux de parasitisme supérieur sans superparasitisme. L'effet de mobilité accrue s'assortit en outre d'un effet d'apprentissage, tendant à apprendre aux trichogrammes à reconnaître l'effluve convenable et donc à être plus efficaces dans la recherche des oeufs. Dans le cas des capsules destinées au lâcher au champ et renfermant un moculum d'oeufs parasités et des oeufs frais, l'application d'acide oléique peut avoir lieu à différentes périodes, par exemple par pulvérisation de la surface interne ou externe des capsules avant ou après leur paraffinage, pendant le stockage ou pendant l'induction d'arrêt du développement, ou encore par imprégnation de l'aiguille servant à ménager les trous dans les capsules, donc par imbibition des parois des trous dans le carton. Il est clair que l'application d'acide oléique peut être envisagée en de nombreuses occasions dans la chaîne de production de Trichogramma brassicae, soit pour sa production, soit pour son utilisation au champ. Les effets bénéfiques pourraient aussi s'observer sur d'autres espèces de trichogrammes ou d'autres parasitoîdes et, éventuellement, sur des prédateurs nourris avec les oeufs d'Ephestia enrichis en acide oléique. Il est bien entendu que la présente invention n'a été décrite qu'à titre explicatif mais nullement limitatif et qu'on pourra y apporter toute modification utile, notamment dans le domaine des équivalences techniques, sans sortir de son cadre. 'REVESICATIO1NS 1. Procédé d'activation de la mobilité de femelles d'un insecte parasitoîde oophage agissant par recherche de son hôte et destruction de ce dernier, en particulier la recherche dé la pyrale du mals Ostrinia nubilalis par Trichogramma brassicae, issu d'un oeuf-hôte, caractérisé par le fait qu'on met en présence d'acide oléique les femelles de trichogramme issues de l'oeuf hôte,par imprégnation préalable dudit oeuf-hôte ou de son environnement immédiat. 2. Procédé selon la revendication 1, caractérisé par le fait qu'on effectue l'imprégnation au stade de ltoeuf-hte, avantageusement après parasitisme par le trichogramme. 3. Procédé selon l'une des revendications 1 ou 2, caractérisé par le fait qu'on effectue l'imprégnation au moyen d'une solution pour immersion, d'une pulvérisation ou d'un enrichissement de l'atmosphère d'une enceinte renfermant les oeufs. 4. Procédé selon la revendication 3, caractérisé par le fait qu'on effectue l'imprégnation par pulvérisation sur les supports des oeufs en cours d'élevage ou conditionnés en capsules de lâcher au champ.