Brevet FR2671724A1 — publié le 19920724

La présente invention a pour objet l'obtention d'extraits de feuilles d'Hamamélis, leur préparation et leurs applications. L'Hamamélis, Hamamélis virginiana L, est un arbre de 3 à 4 mètres de haut Les feuilles sont entières et petiolées Le limbe est ovale, aigu au sommet, nettement asymétrique à la base. La composition chimique des feuilles est la suivante: huiles essentielles choline acides phénoliques: acide gallique acide caféique phénols dont le catéchol hétérosides flavoniques du kaempférol, de la quercétine et de la myricétine tanins galliques: B-hamamélitanin et esters galliques du glucose. Selon l'invention, ou soumet les feuilles d'Hamamélis sèches ou fraîches, broyées ou pulvérisées, à une extraction par un solvant tel que l'eau, un alcanol en C 1-C 4, l'acétone ou le propylèneglycol, ou un mélange de ces solvants Par exemple, on peut utiliser un mélange alcanol Cl-C 4/eau ou un mélange acétone/eau en proportions de 96/4 à 30/70 en volume On peut également utiliser un mélange propylèneglycol/eau dans des proportions de 100/10 à 40/60 en volume. La quantité de solvant d'extraction utilisée est égale à 4 à 20 fois le poids de feuilles d'Hamamélis On effectue l'extraction éventuellement sous agitation à une température située entre 10 C et l'ébullition du solvant La durée de l'extraction est de 2 à 80 heures. On concentre éventuellement les solutions extractives Les concentrats obtenus sont éventuellement séchés, soit en étuve sous vide, soit par nébulisation, soit par lyophilisation, soit par séchage à l'aide d'un sécheur-réacteur cylindrique. Les extraits de feuilles d'Hamamélis obtenus selon le procédé de l'invention sont caractérisés par la présence de flavonoides tels que le kaempférol, la quercétine et la quercitrine, et par la présence d'acides phénoliques tels que l'acide gallique. On caractérise ces constituants à l'aide des expériences suivantes: On soumet une solution éthanolique d'extraits de feuilles d'Hamamélis obtenue selon l'invention à la réaction à la cyanidine selon SHIBATA (Shibata K, Nagai I, Kishida M, 1916, Journ Biol Chem 28, p 93). Cette réaction de référence, caractéristique des flavonoïdes à l'exception des chalcones et des isoflavones, s'effectue sur les extraits en solution à 5,0 % dans l'éthanol à 96 % v.v Après agitation et filtration, on ajoute 3 ml d'acide chlorhydrique concentré à 5 ml du filtrat L'addition de tournure de magnésidum provoque l'apparition d'une coloration rouge et d'un dégagement d'hydrogène caractéristiques des flavonoides Cette coloration s'intensifie par ajout d'alcool amylique. On met en présence une solution hydroalcoolique d'extraits de feuilles d'Hamamélis selon l'invention et une solution de cyanure de potassium (KCN) La solution se colore alors en orange, coloration caractéristique de l'acide gallique La même solution donne ensuite un précipité caractéristique des tanins. Une solution hydroalcoolique d'extraits de feuilles d'Hamamélis obtenue selon l'invention et contenant 10,0 % de chlorure ferrique (Fe 2 C 16) précipite Ce précipité, de couleur bleu-noir, est caractéristique des tanins galliques. Les flavanoides et l'acide gallique sont identifiés par chromatographie couche mince sur silice La phase mobile est alors constituée d'un mélange de n-pentanol, d'hexane, d'acide acétique glacial et d'eau, dans une proportion 35-10 à 35-15 Après migration, la révélation par une solution de chlorure d'aluminium ou de chlorure ferrique à 2,0 % dans l'alcool permet d'identifier le kaempférol, la quercétine, la quercitrine et l'acide gallique. On dose les tanins par spectrophotométrie après réaction avec l'acide phosphotungstique, avant et après adsorption sur poudre de peau Cette technique de dosage est développée dans la Pharmacopée française Xème édition pour le dosage des tanins dans les racines de ratanhia Les teneurs en tanins dans les extraits obtenus selon l'invention varient de 25 à % par rapport à la poudre pour un extrait sec, et par rapport au résidu sec pour un extrait liquide. L'acide gallique est dosé par chromatographie liquide haute performance La colonne utilisée est de type silice phase greffée C 18, la phase mobile est composée de proportions variables d'eau, méthanol et acide acétique, le débit est de 1 millilitre par minute, la détection s'effectue à 254 nm. Les teneurs en acide gallique varient de 0,3 à 5,0 % selon la nature des extraits obtenus selon l'invention. Les exemples suivants illustrent l'invention. Exemple 1. On introduit dans un réacteur 1 kg de feuilles d'Hamamélis préalablement broyées et 10 litres d'eau On porte le mélange à ébullition pendant 3 heures On filtre, puis on concentre le filtrat sous vide à 60 'C jusqu'à ce que l'on obtienne un concentrat de 1 kg On sèche ce concentrat à l'étuve sous vide à 80 'C, puis on le broie On obtient une poudre marron foncé. On met en évidence les flavono des tels que le kaempférol, la quercétine et la quercitrine par chromatographie sur couche mince On agit de même pour les acides phénoliques tels que l'acide gallique et l'acide caféique On caractérise également ces substances par une réaction d'identification. Les tanins sont dosés par spectrophotométrie Leur teneur moyenne est de 30 % La teneur moyenne en acide gallique est de l'ordre de 5 %. Exemple 2. On introduit 500 grammes de feuilles d'Hamamélis préalablement broyées dans un réacteur agité avec 2,5 1 d'éthanol à 30 % On maintient l'agitation pendant 2 heures. Par filtration, on récupère la solution éthanolique, de couleur brune Dans cette solution, on identifie par chromatographie sur couche mince les flavonoides et les5 acides phénoliques On dose la teneur en tanins par dosage spectrophotomètrique: elle est de 40 % en moyenne par rapport au résidu sec de la solution La teneur moyenne en acide gallique est de 4,0 % par rapport au résidu sec de la solution. On a testé l'activité des extraits de feuilles d'Hamamélis selon l'invention pour mettre en évidence une activité filtre U.V B et une activité anti-radicalaire. L'activité filtre U V B des extraits obtenus selon l'invention est démontrée à partir des observations suivantes: le spectre U V des extraits secs ou concentrés de feuilles d'Hamamélis solubilisés dans une solution aqueuse ou hydroalcoolique, ainsi que des extraits liquides, présente une zone d'absorption située entre 200 et 340 nm avec 2 maxima Le premier situé entre 200 et 220 nm, le second entre 260 et 290 nm. Ce dernier pic se situe dans la zone U V B Les extraits obtenus selon l'invention absorbent donc dans la zone U V B. Ils peuvent donc être utilisés comme filtres U V B. Les extraits obtenus selon l'invention présentent également des activités anti-radicalaires Ces activités ont pu être démontrées in vitro par deux méthodes de dosage. La première méthode d'évaluation a été réalisée sur un radical libre, le diphénylpicrylhydrazine hydrate qui absorbe dans le violet à 513 nm (Lamaison J L, Petitjean-Freytet C., Carnat P, Carnat A, 1988, Plantes Médicinales et Phytothérapie, 22, ( 4), p 231-234). Un composé anti-radicalaire, piégeur de radicaux libres entraîne une diminution de la densité optique: l'activité anti-radicalaire d'une substance est exprimée en pourcentage de l'absorbance du diphénylpicrylhydrazine hydrate. Dans ces conditions de test, un extrait de feuilles d'Hamamélis a une activité anti-radicalaire comparable à la vitamine E qui est la substance de référence la plus utilisée. Témoins Concentration (mg/ml) Vitamine E % Atténuation 0,01 0,05 0,1 0,5 Cynarine Extrait hydroalcoolique atomisé d'hamamélis _ _ _ _ _ _ __ 20 _ _ 0,01 0,05 0,1 0,5 0,01 0,05 0,1 0,5 On a pu également évaluer l'activité anti-radicalaire sur l'anion superoxyde généré par la réaction du NADH (Nicotinamide Adénine Dinucléotique) sur le PMS (Phénazine Méthosulfate) (Roback J, Grylewski RJ, Biochemical Pharmacology, 1988, 37, ( 5), p 837-841) L'anion superoxyde provoque la réduction du NBT (Nitrobleu de Tétrazolium) en diformazan, de coloration bleue intense On dose celui- ci par spectrophotométrie On exprime l'activité anti-radicalaire d'une substance en pourcentage d'inhibition du développement de coloration due au diformazan Par cette méthode de dosage, les extraits de feuilles d'Hamamélis présentent une activité anti-radicalaire marquée, deux fois supérieure en moyenne aux témoins testés, comme la quercétine ou l'acide rosmarinique. Témoins Concentration (mg/ml) % Inhibition Quercétine 0,01 1 0,05 31 0,1 69 0,5 91 1 98 Acide rosmarinique 0,01 2 0,05 28 0,1 59 0,5 90 1 99 Extrait hydroalcoolique atomisé d'hamamélis 0,01 17 0,05 62 0,1 87 1 95 Au vu de ces activités filtre U V et anti-radicalaires, il est donc particulièrement intéressant d'utiliser les extraits obtenus selon l'invention, à des fins cosmétiques, en particulier pour la protection de la peau exposée à un ensoleillement prolongé, et pour le ralentissement du processus radicalaire de vieillissement. Les tanins contenus dans les extraits de feuilles d'Hamamélis selon l'invention confèrent à ces extraits des propriétés antiprurigineuses, cicatrisantes, adoucissantes et émollientes pour lesquelles les feuilles d'Hamamélis sont utilisées traditionnellement en usage externe De telles activités peuvent être revendiquées pour les extraits effectuées selon l'invention. L'activité véinotonique des feuilles d'Hamamélis est l'application la plus fréquente Cette activité est due aux substances phénoliques (tanins, flavonoïdes) contenues dans la plante Ces substances sont présentes dans les extraits selon l'invention qui possèdent donc également une activité veinotonique. Les extraits de feuilles d'Hamamélis selon l'invention peuvent être utilisés sous forme de pommade avec des excipients comme le monooléate de glycérol, la vaseline, la lanoline, la cire blanche, les huiles d'amande, de paraffine, l'eau réunis dans une même formule ou encore l'huile d'arachide, la lanoline anhydre, la glycérine, l'amidon de blé, la cire blanche et l'eau Ils peuvent également rentrer dans la composition de crème dermique avec la cire d'abeilles, la paraffine liquide légère, l'eau, la vaseline ou la lanoline, la cire blanche d'abeilles liquide légère, le glycérol. Pour des formules de produits solaires, ces extraits peuvent également être incorporés dans des émulsions classiques H/E ou E/H ou plus simplement dans des supports huileux pour rechercher les effets protecteurs des filtres U V B ou pour les effets de soins des substances anti-radicalaires. Revendications 1 Extrait de feuilles d'Hamamélis, caractérisé en ce qu'il contient des tanins galliques, des acides phénoliques et des flavono des. 2 Extrait de feuille d'Hamamélis selon la revendication 1, caractérisé en ce qu'il contient des acides phénoliques tels que l'acide gallique et l'acide caféique. 3 Extrait de feuilles d'Hamamélis selon l'une des revendications 1 et 2, caractérisé en ce qu'il contient des flavonoides tels que le kaempférol, la quercétine ou la quercitrine. 4 Extrait de feuilles d'Hamamélis selon l'une des revendications 1 à 3, caractérisé en ce que la teneur moyenne en tanins galliques par rapport au résidu sec de la solution extractive est de 30 à 40 %. Extrait de feuilles d'Hamamélis selon l'une quelconque des revendications 1 à 4, caractérisé en ce que la teneur moyenne en acide gallique par rapport au résidu sec de la solution extractive est de 0,3 à 5 %. 6 Procédé d'obtention d'un extrait de feuilles d'Hamamélis selon l'une quelconque des revendications 1 à 5, procédé caractérisé en ce que l'extrait est obtenu par extraction avec un solvant tel que l'eau, l'acétone, un alcanol en C 1- C 4, le propylèneglycol ou un mélange de ces solvants. 7 Procédé selon la revendication 6, caractérisé en ce que l'extraction est effectuée à l'aide d'un mélange alcanol en C 1-C 4/eau ou acétone/eau, mélange de 96/4 à 30/70 en volume. 8 Procédé selon l'une quelconque des revendications 6 et 7, caractérisé en ce que l'extraction est effectuée à l'aide d'un mélange propylèneglycol/eau, mélange de 100/10 à 40/60 en volume. 9 Procédé selon l'une quelconque des revendications 6 à 8, caractérisé en ce que l'extraction est effectuée pendant une durée de 2 à 80 heures. 10 Procédé selon l'une quelconque des revendications 6 à 9, caractérisé en ce que l'extraction est statique ou agitée. 11 Procédé selon l'une quelconque des revendications 6 à 10, caractérisé en ce que la quantité de solvant utilisée égale 4 à 20 fois le poids de feuilles d'Hamamélis. 12 Composition cosmétique caractérisée en ce qu'elle contient un extrait selon l'une quelconque des revendications 1 à 5, associé à un ou plusieurs excipients tels que le monooléate de glycérol, le glycérol, la vaseline, la lanoline, éventuellement anhydre la cire blanche, la cire d'abeilles, les huiles d'amande, de paraffine, l'huile d'arachide, la glycérine, l'amidon de blé et l'eau.