Brevet FR2668714A1 — publié le 19920507

LAVAGE DES CELLULES La présente invention se rapporte au lavage des cellules et en particulier au lavage des hématies qui ont été formées en une couche fluide en centrifugeuse. On connaît le procédé consistant à recueillir le sang d'un patient par aspiration, à le centrifuger pour former une couche d'hématies, à laver la couche sous cen- trifugation au moyen d'une solution saline ou physiologique pour enlever le plasma et les impuretés telles que l'hépa- rine et à réadministrer ce sang au même patient (il s'agit en l'occurrence de la récupération dite "autologue") La cuve centrifugeuse servant à cette récupération est décrite dans le brevet U S "Centrifugeuse" N O 4 684 361 délivré à Feldman et al le 4 Août 1987 et cité ici à titre de réfé- rence Un ensemble de tubage servant à ce processus de récupération sanguine et comprenant une cuve de centrifu- geuse de façon générale réalisée en conformité avec Feldman et al, est commercialisé par Cobe Laboratories, Inc, cessionnaire de la présente, sous le nom de marque déposée BRAT. Nous avons trouvé qu'il était possible d'améliorer le lavage des cellules en les amenant, à l'étape intermé- diaire de la centrifugation, sous une forme dispersée avec un volume de liquide de lavage. Dans des modes de réalisation préférés, on forme une couche centrifugée d'hématies que l'on lave sous cen- trifugation avec une solution physiologique pour enlever le plasma et d'autres matières centrifugées que l'on transfère dans un récipient avec un volume de solution de lavage su- périeur au volume de la couche d'hématies, et de préfé- rence avec un volume de solution de lavage égal à quatre fois le volume de la couche d'hématies, cette solution de lavage étant une solution diluée de chlorure de sodium dans laquelle l'étape de mélange comprend le déplacement des hématies à partir de cette couche dans un récipient destiné à la solution de lavage; on procède à l'agitation et l'on retransfère le mélange ainsi formé pour séparer par centri- fugation le liquide de lavage de ce mélange, on ajoute une quantité supplémentaire de solution physiologique sous centrifugation, puis l'on transfère à la poche de retrans- fusion. On va maintenant examiner le mode de réalisation actuellement préféré de l'invention en se référant au dessin dans lequel: la figure unique est une vue schématique par- tielle d'un appareil pour la mise en oeuvre de l'invention. La figure montre une cuve centrifugeuse 140 avec un ensemble de tubage désigné de façon générale par 12 (non à l'échelle), utile pour l'invention. La cuve centrifugeuse 140 fait partie de l'ensemble de tubage 12 L'ensemble de tubage tel qu'il est décrit ainsi que les équipements permettant de l'assembler et de l'utiliser selon un procédé de l'art antérieur et selon le procédé de la présente invention est commercialisé par le cessionnaire du demandeur, Cobe Laboratories, Inc, sous la marque déposée BRAT L'ensemble de tubage 12 comprend des collecteurs 14 qui communiquent avec la conduite 22 du réservoir de recueil du sang, la conduite 24 de la poche de la solution physiologique, et la conduite 26 de la poche de retransfusion sanguine Le collecteur 14 est relié par le tubage 28 à l'entrée de la centrifugeuse 122 Les vannes , 32, 34 destinées à l'ouverture et à la fermeture sélec- tives du tubage 22, 24 et 26 sont montées sur les équipe- ments coopérants dont il est fait état ci-dessus, équipe- ments dans lesquels l'ensemble de centrifugation 12 est assemblé lors du fonctionnement. L'ensemble 12 comprend également une poche de recueil de déchets 36 qui est alimentée par l'ouverture 128 de la centrifugeuse 110 et qui est accrochée lors de l'uti- lisation dans les équipements précités; ces équipements entraînent également la cuve 140 en rotation Les vannes , 52 sont des pinces coulissantes bien connues dans l'art. Dans sa forme de livraison, l'ensemble 12 ne com- prend pas en fait le réservoir 38 et la poche de solution physiologique 42; de même, la poche de retransfusion 44 n'est pas raccordée mais est incluse dans l'ensemble des équipements livrés. Selon le mode de réalisation actuellement préféré, la cuve 140 qui contient un volume d'environ 250 ml dans ses portions non occupées par l'élément de séparation 150 et la goulotte d'admission 142, est mise en rotation à vide sur l'appareil BRAT précité jusqu'à une vitesse rotatoire de 4 400 tours/minute; après quoi, on introduit le sang à récupérer provenant d'un réservoir de recueil sanguin 38 (en polycarbonate rigide, d'un volume de 3 litres, dans lequel se trouve le sang récupéré du patient et qui est traité comme cela est connu dans l'art) acheminé par les équipements mentionnés ci-dessus par la vanne 30, la con- duite 22, le collecteur 14, la pompe péristaltique 40 et les conduites 28 jusque dans l'admission 122 et la cuve 140 jusqu'à la formation d'une couche fluide d'hématies sur la surface intérieure de la cuve 140 jusqu'à une épaisseur telle à maintenir, de façon contiguë à la périphérie exté- rieure de l'élément de séparation 150, un espace radial vide d'environ 0, 317 cm ( 1/8 de pouce) Dans le mode de réalisation préféré, la dimension de l'espace vide est surveillée automatiquement par le biais d'un détecteur de couleur réfléchissante qui détecte la position de la surface de la couche d'hématies Pendant cette période, le plasma et les impuretés telles que l'héparine et l'hémo- globine pénètrent dans la poche 36 par la sortie 128 de la cuve de centrifugation En fonction de l'hématocrite du sang dans le réservoir de recueil alimentant la centrifu- geuse, on introduit par exemple 700 ml de sang dans celle- ci pour produire une couche d'environ 150 ml de fluide, constituée de façon prédominante par des hématies, la plus grande partie du volume restant de sang centrifugé allant dans la poche 36. La couche d'hématies est alors lavée à l'aide d'une solution physiologique de 200 ml (dans le mode de réalisa- tion préféré, une solution Na Cl dans l'eau à 0,9 %) qui est pompée par la conduite 24 (la vanne 32 régulant le débit à travers cette conduite est maintenant ouverte et la vanne régulant le débit à travers la conduite 22 est maintenant fermée), le collecteur 14, la conduite 28, la pompe 40, et l'entrée 122 provenant de la poche de solution physiologi- que 42 montée sur les équipements mentionnés ci-dessus. Cette poche 42 possède une capacité de 1 000 ml; cepen- dant, avant le pompage des 200 ml de la portion de lavage que l'on vient de mentionner, elle ne contient que 800 ml de solution physiologique, le pompage et le lavage s'ef- fectuant tandis que la cuve continue à tourner à pleine vitesse, une partie de l'effluent liquide de lavage étant alors transférée dans la poche 36. La pompe à direction réversible 40 montée sur les équipements précités coopère avec la conduite 28 de façon à pomper sélectivement dans l'une ou l'autre direction. La cuve de centrifugation 140 est alors immobili- sée, la direction de pompage de la pompe 40 est inversée et le matériau d'hématies fluide qui ne forme plus une couche au moment de l'arrêt de la centrifugeuse, descend dans le fond de la cuve 140 qui a alors un volume d'environ 150 ml. Ce matériau d'hématies fluide est pompé avec environ 100 ml de solution physiologique se trouvant encore dans la cuve, par la conduite 28, le collecteur 14, la conduite 24 et la vanne 32 jusque dans la poche de solution physiologique 42, à un débit provoquant une turbulence, pour le mélange. L'agitation pour le mélange est de plus assurée par pom- page, à la suite des hématies, de 100 ml d'air. La cuve 140 est alors de nouveau mise en rotation à 4 400 tours/minute et la totalité du contenu de la poche de solution physiologique est introduite dans celle-ci, la direction de pompage de la pompe 40 ayant de nouveau été inversée Il se forme une nouvelle couche liquide d'héma- ties et la partie excédentaire, plus légère, de nouveau fluide, passe dans la poche 36. La poche de solution physiologique 42 maintenant vide est remplacée par une nouvelle poche à solution phy- siologique 42 contenant la quantité totale de 1 000 ml de solution physiologique Avec la cuve toujours en rotation, on obtient un volume de lavage supplémentaire de 200 ml pour l'extérieur de la couche d'hématies, l'effluent s'écoulant dans la poche 36. La vanne 32 est alors fermée; la rotation de la cuve de centrifugation 140 est alors stoppée; la vanne 34 est ensuite ouverte et la direction de la pompe 40 est de nouveau inversée et la couche d'hématies tombe dans le fond de la cuve et elle est pompée par le collecteur 14, la con- duite 26 et la vanne 34 pour être amenée dans la poche de retransfusion 44 qui peut alors être remise au personnel médical pour réadministration au patient. L'ensemble de centrifugation 12 peut, si cela est nécessaire, être utilisé en séquences multiples selon l'invention La poche de déchets 36 peut de façon judi- cieuse avoir un volume de 10 litres et servir pour plu- sieurs séquences Cette poche de retransfusion 44 (volume 1 litre dans le mode de réalisation préféré) peut, si on le souhaite, être remplacée et, comme cela a été indiqué de façon préférentielle, par la poche de solution physiolo- gique 42 Dans le mode de réalisation préféré, le tubage a de préférence un diamètre intérieur de 0,635 cm ( 1/4 de pouce), sauf la portion de tubage allant vers et revenant de la poche de déchets 36 en aval de la vanne 50 qui est de préférence d'un diamètre intérieur légèrement plus grand. Le procédé selon l'invention permet d'obtenir un sang mieux lavé des impuretés indésirées par rapport au procédé de l'art antérieur et vise à purifier des couches centrifugées d'hématies. D'autres modes de réalisation de l'invention appa- raîtront à l'homme de l'art Ainsi, à titre d'exemple simplement, il n'est pas nécessaire que la récupération sanguine soit autologue De même, il n'est pas obligatoire que l'étape de lavage non centrifugé intermédiaire se fasse dans la poche de la solution physiologique Par ailleurs, l'espace radial vide contigu à la surface de la couche d'hématies peut être régulé manuellement. REVENDICATIONS 1 Procédé pour l'extraction d'impuretés d'hématies caractérisé en ce qu'il comprend les étapes consistant à: centrifuger le sang contenant les impuretés pour former une couche d'hématies contenant également les impu- retés, arrêter la centrifugation, mélanger les hématies provenant de cette couche avec une solution pendant l'immobilisation, et centrifuger le mélange obtenu pour enlever la solution de lavage. 2 Procédé selon la revendication 1, caractérisé en ce qu'il comprend l'étape supplémentaire consistant à laver la couche avec une solution de lavage avant d'arrêter la centrifugation. 3 Procédé selon la revendication 1, caractérisé en ce qu'il comprend l'étape supplémentaire consistant à laver une seconde couche d'hématies obtenue à partir de la cen- trifugation du mélange résultant avec une solution de lavage tout en centrifugeant la seconde couche d'hématies. 4 Procédé selon la revendication 1, caractérisé en ce que le volume de la solution de lavage est supérieur au volume de la couche d'hématies. 5 Procédé caractérisé en ce qu'il comprend les opérations selon les revendications 1 à 4. 6 Procédé selon la revendication 4, caractérisé en ce que le volume de la solution de lavage est égale à quatre fois le volume de la couche d'hématies. 7 Procédé selon la revendication 1, caractérisé en ce que la solution de lavage est une solution diluée de chlorure de sodium et dans laquelle l'étape de mélange comprend le déplacement des hématies à partir de cette cou- che dans un récipient destiné à la solution de lavage. 8 Procédé selon la revendication 7, caractérisé en ce que l'étape de mélange comprend l'agitation des cellules par rapport à la solution de lavage.