Brevet FR2661612A1 — publié le 19911108

De nombreux végétaux comportent des composants doués de propriété dites antioxydantes;tels par exemple,le thym,le le café vertu > 1 e gingko biloba, le ginzeng, l'ail etc.. or de telles propriétés ne peuvent être définies qu'à partir de critères précis, qui permettent d'avoir une appréciation sur: 1)-leur efficacité relative à l'évolution de l'indice de peroxyde d'un corps gras sensible à l'oxygène. 2)-leur efficacité relative à l'évolution de l'indice de peroxyde d'un corps gras sensible au processus d'oxydation enzymatique. 3)- leur influence concernant la malonedialdéhyde (MDA) qui indique le niveau de dégradation oxydatif. C'est ainsi que selon la nature des végétaux, de la partie du végétal (racines, tige, feulles), que selon la nature des solvants d'extraction utilisés et de leur technique d'emploi, on pourra constater de très grandes variations des proprités antiradicalaires et anti-malondialdéhyde. En effet, certaines fractions seront faiblement antioxygène mais douées d'une activité anti-malonedidéhyde (MDA), d'autres auront une activité anti 02, mais n'auront pas d'action sur la MDA, aussi bien pour ce qui concerne le processus oxydatif chimique qu' enzymatique. Enfin, certaines fractions extraites pourront ètre pro-oxydantes et pro-MDA, et même contenir des hydroperoxydes, tel par exemple, l'hydroperoxyisonobiline. En conséquence, un extrait végétal antiraditalaire doit en fait, comporter trois propriétés: - Avoir une activité sur le processus oxydatif chimique. - Avoir une activité sur le processus oxydatif enzymatique. - Avoir une activité inhibitrice de la MUA, La présente invention a pour objet de réaliser des extraits végétaux caractérisés en ce qu'ils répondent aux propriétés cidessus définies. Pour réaliser de tels extraits,on aura recours à un choix de solvants qui permettront d'éliminer les fractions pro-oxydantes et pro-MDA, ce qui ne peut ètre réalisé par le procédé ci- après décrit: A- Détermination de l'activité antioxygène d'origine chimique: Dans une émulsion contenant 10% d'une huile riche en poly-insaturés telle à titre d'exemple l'huile de foie de morfue, on i ntrodui t 1 'extrait a essayer, D'autre part on réalise deux émulsions témoins, ne comportant pas d'extrait végétal, l'une étant sans huile, la deuxieme comportant 10% d'huile. 24 heures après, on mesure les indices de peroxydes par les méthodes classiques; puis une foie par mois, durant une periode de trois mois, on effectue les mesures. Cette technique permet de vérifier l'activité antioxydante réelle de l'extrait expérimenté. B- Determination de l'activité antioxygène d'origine enzymatique: Dans une émulsion contenant 10% d'une huile végétale ou 10% d'acide oléique, on introduit 1 mg de xanthine oxydase (E C I I 3 22) Une partie de l'emulsion est utilisée comme témoin, le reste de l'émulsion est additionnée de l'extrait. Aprés 48 heures, on détermine l'indice de peroxyde selon la technique classique à l'ioduré de potassium et à 1 'hyposulfite de soude N/200. Un ois après la préparation, on vérifie 1 'évolution de 1 'indice de peroxyde c Détermination de l'activité anti-malonedialdéhyde: On prélève 2 gr de chacune des émulsions qu'on dissout dans l'acide acétique. On filtre.On détermine la MDA dans le filtrat par 1 action de l'acide thiobarbiturique; on effectue les mesures spectro-photocolorimétriques, conformément à la technique indiquée dans la littérature. On trace les courbes en fonction de la densité optique et de la longueur d'onde.Les hauteurs de pics permettent de faire les comparai sons avec la MDh des émulsions témoins, dont 1 'absorption maximal e se situe à .532 nm. En pratiquant comme indiqué préalablement, céla permet de connaitre les propriétés anti 02 et Anti MDA des végétaux étudiés, en fonction de l'agent d'extraction et de la technique d'extraction, en déterminant d'une part leur pourcentage d ' i n- hibition des peroxydes et de la MDh, par rapport à une émulsion témoin se peroxydant par les processus oxydai fus chimiques et enzymatiques. Comme exemples non limitatifs, d'extraits anti-radicalaires obtenus par extraction sélective de solvants, principalement à la température ambiante, citons: GINSENG (racines): 1 ) traitement à chaud par du glycol ,1 ' extrait obtenu est Pro-MDA, l'indice de peroxyde est réduit de 35%. Z)Extrait glycolique après traitement du végétal au chlorofornie: inhibition des peroxydes: 40t - inhibition de la MDA: 40% 3) Extrait chloroformique repris par l'ethanol:inhibition des peroxydes: 15%-inhibition de la MDA 5)Après traitement par acétone/eau 50/50, distillation du solvant et reprise par 1 'éthanol: inhibition de la MDA: nulle. Peroxydes: lors 6) L'extrait acétone/eau est traité par le chloroforme: on décante l'extrait acétone/ eau qui est éliminé par distillation sous pression réduite. Reprise par l'éthanol: inhibition de la MDA: 60%, des peroxydes : 50%; inhibition totale de la Xanthine oxydase. De ces six traitements on retiendra l'exemple N06 qui assure les meilleurs résultats. 2-GINGKO BILOBA (feuilles) Comme pour le ginseng, le traitment par le glycol à chaud stimule le formation de MDA. 1) Après traitement chloroformique, le végétal est séché puis traité par le glycol. Cet extrait réduit la MDA de 40% et les peroxydes de 57% 2) Après extraction glycolique, traitement du végétal par l'éthanol. Réduction de la MDA: 50%- Indice de peroxyde réduit de 51% Inhibition complète de la Xanthine oxydase. 3) le chloroforme de l'extrait obtenu est élimié, la substance est traitée par l'éthanol: MDA 4) Après traitement par acétone/eau 50/50, l'extrait est traité par le chloroforme, on sépare les deux fractions, la fraction hydroacétonique est éliminée, la substance est reprise par l'éthanol. Réduction de la MDA: 50%- Reduction de l'indice de peroxyde: 60% Inhibition totale de la xanthine-oxydase. 5) Après traitement par acétone/eau 50/50, élimination du solvant, reprise par l'éthanol, inhibition de la MDA: 22%- inhibition des peroxydes 20% De ces cinq traitements, on choisira l'exemple n 4 qui assure les meilleurs résultats. ROMARIN (feuilles) 1)-Le végétal est traité par le chloroforme. Le solvant du filtrat est éliminé obtient une masse poudreuse soluble en grande partie dans l'éthanol. Cet extrait conduit à une chute de MDA de l'ordre de 40%, mais est dénué de toute activité antiradicalaire. 2) La partie végétale traitée par le chloroforme est séchée et reprise par l'ethanol à 50%. On filtre l'insoluble. Après élimination du solvant du filtrat, la substance est reprise par le glycol, on obtient un extrait caractérisé par une inhibition de la MDA de l'ordre de 60 à 65% et par une chute des peroxydes d'environ 45% De plus, par emploi de la xanthine-oxydase, cet extrait capte 80% de l'oxygène radicalaire d'origine enzymatique et inhibe totalement la formation de MDA. 3) On traite la poudre végétale par le mélange méthanolchloroforme 50/50. AprÈs filtration la solution chloroformométhanolique est éliminés sous vide. On obtient une poudre en partie soluble dans l'ethanol. Cette partie soluble conduit à une réduction de la MDA de l'ordre de 60%, mais est dépourvue d'activbité anti-radicalaire. La fraction en partie insoluble dans l'alcool est pro-oxydante at est dépourvue de toute activité anti-MDA. Le filtrat distillé pour obtenir une poudre soluble dans le glycol à 50%, conduit à une chute des peroxydes d'environ 30% et de 50% pour la MDA. Ce dernier extrait conduit à une inhibition anti-radicalaire totale de la xanthine oxydase. De ces trois exemples, on choisira l'essai N 2 qui assure le meilleur résultat. ::IL (bulbe) Différents solvants utilisés conduisent à des extraits dépourvus de toute activité antiradicalaire chimique et anti MDA. Par contre ils protègent l'oxydation de l'acide oléique, de oa xanthine oxydase. Cette inhibition est totale pour ce qui concerne les peroxydes d'origine enzymatique, mais n'a pas d'activité sur la MDA. PROPOLIS Cette substance végétale véhiculée et modifiée par l'intervention des abeilles est en grande partie soluble dans le chloroforme. Après filtration de l'insoluble (moins de 5%) le solvant est éliminé sous pression réduite, une partie est dissoute dans l'éthanol, l'autre partie dans du propylèneglycol, dans ce dernier cas, on sépare un insoluble. I-Le traitement par l'éthanol conduit aux résultats suivant: Réduction de l'indice de peroxyde; 50% Réduction de la MDA: 90% inhibition de l'oxydation enzymatique: totale. Inhibition de la MDA lors de l'action de la xanthine-oxydase: 50% 2-Le traitement par le propylèneglycol, conduit après filtration d'une faible partie insoluble aux résultats ci-après: Réduction de l'indice de peroxyde chimique: 80% Réduction de la MDA 90% Inhibition des peroxydes enzymatiques: totale.Inhibition de la MDA lors de l'action de la xanthine-oxydase: 70% Cette fraction insoluble dans le glycol, mais soluble dans l'alcool montre une certaine inhibition de l'activité antiradicalaire d'origine chimique, puisque son élimination par le glycol conduit à une augmentation cette activité de l'ordre de 30% Comme en peut en juger, dans le cas de la propolis, on aura recours préférentiellement au glycol dont les résultats d'inhibiteurs antiradicalaires sont nettement plus élévés que ceux obtenus à partir de l'extrait éthanoliqe. THYM La poudre végétale est traitée à froid durant deux heures sous agitation par le mélange hexane-isopropanol:1/1 afin d'éliminer les fractions pro-oxydantes et hydroperoxydes. 1-la fraction hexane-isopropanol révèle la présence d'hydro -peroxydes, étant donné que les indices de peroxyde aussi bien chimiques qu'enzymatiques sont entre 1 .5 et 2,5 fois plus élevés que les indices des émulsions témoins. 2-Pour ce qui concerne la peroxydation du type chimique l'extrait alcoolique après traitement à l'hexane et l'isopropanol, conduit à une réduction de 82% de la MDR;par contre-la réduction de l'indice de peroxyde n'est que de 32% 3-Quant à l'extrait glycolique après traitement par le premier solvant, on observe une diminution de la MDÀ de l'ordre de 26% et une faible diminution de l'indice de peroxyde qui n'est que de 12% Grace à ce procédé on voit ainsi que les extraits de thym ne sont que faiblement anti-radicaliares et de ce fait ne présentent qu'un intéret limité, la réduction importante de la MDA ne suffit pas par elle mème pour qualifier les extraits de thym, d'anti-radicalaires. REVENDICATIONS 1-Procédé d'obtention d'extraits végétaux antiradi cal aires et antimalondialdéhyde, caractérisé en ce que les végétaux feuilles racines ou tiges) sont finement broyés traités par des solvants polaires et apolaire; les extraits obtenus sont introduits dans des milieux très sensibles à l'oxydation chimique et enzymatique, afin de déterminer leur coefficient de protection antiradi cal aire et anti-malondialdéhyde 2-Procédé selon la revendication I caractérisé en ce que la poudre végétale est traitée à température ambiante par des solvants polaires:alcools, acétone,; butanone, glycols ou glycérol en présence de 50% d'eau. :3-Procédé selon la revendication 1 ,caractérisé en ce que les extraits obtenus par des solvants polaires sont traités a température anibiante par des solvants apiol aires aliphatiques, halogénés ou non afin d'éliminer les substances lipophiles indésirables. 4 Procédé selon les revendications 1,2 et 3,caractérisé en ce que les extraits sont introduits à la teneur de 1 à 10 dans une émulsion contenant 10% d huile riche en polyinsaturés, telle e l'huile de foie de morue. 5-Procédé selon les revendication 1,2 et 3 caractérisé en ce que les extraits sont introduits dans une émulsion contenant de l'acide ol éique ou une huile végétal e moyennement insaturée en présence de Xanthine oxydase. 6-Procédé d'obtention d'extraits végétaux, selon la revendication 1 caractérisé en ce que l'on détermine les coefficients de protection anti -peroxydes et anti-malondialdéhyde, an fonction du tenlps par 1 a différence avec des témoins ne contenant pas d'extraits.