Brevet FR2665769A1 — publié le 19920214

DETERNINATION DES TKRONBOPENIES DOMAINE DE L'INVENTION La présente invention concerne l'utilisation d'une substance antigénique particulière dans la détermination des thrombopénies (également dénommées thrombocytopénies). Elle concerne aussi un procédé amélioré pour la détermination de ces maladies, notamment celles induites par diverses drogues inductrices, en particulier par la quinine/quinidine (c'est-à-dire induites par la quinine, son diastéréoisomère la quinidine, et leurs mélanges) et surtout par l'héparine. ART ANTERIEUR On sait, notamment de l'article de M.C. BERNDT et al., Blood Reviews 1, pages 111-118, (1987), que les thrombopénies peuvent être induites par de nombreux médicaments, et que les plus fréquentes sont provoquées par la quinine/quinidine et surtout l'héparine. On sait que lton administre l'héparine, en tant que moyen anticoagulant, aux personnes hospitalisées pour prévenir tout risque de thrombus veineux ou artériel. Statistiquement, on sait que (i) au moins 50 Z des patients hospitalisés recoivent de l'héparine par injection, et que (ii) 1 à 5 Z des patients soumis à une héparino-thérapie sont atteints de thrombopénies pouvant se développer de façon particulièrement sévère entre le 5ème et le 15ème jours de l'héparino-thérapie. Voir à cet effet les articles de - J.G. KELTON et al., Blood 72 (No 2), pages 925-930, (1988) - B.H. CHONG et al., British Journal of Haematology 49, pages 531-540, (1981) - B.H. CHONG, Blood Reviews 2, pages 108-114, (1986) - D. SHERIDAN et al., Blood 67 (No 1), pages 27-30, (1986) - Y. GRUEL, Sang Thrombose Vaisseaux, 1 (No 4), pages 233-236, (1989) - M. SAMAMA et al., Journal des Maladies Vasculaires 7, pages 237-242, (1982) ; et - J.CONARD et ai., intitulé : "Les thrombopénies à l'héparine" et publié dans l'ouvrage "Progrès en Hématologie 4, Les Plaquettes Sanguines", pages 107-118, Doin Editeurs, Paris (1983). Chez les patients bénéficiant d'une héparinothérapie et développant des thrombopénies, on connaît deux formes - les thrombopénies dites légères ou modérées qui sont asymptomatiques, et - les thrombopénies dites sévères fréquemment accompagnées de complications thromboemboliques artérielles ou veineuses résultant de l'apparition d'anticorps dirigés contre les plaquettes en présence d'héparine. Cette apparition d'anticorps est notamment illustrée par l'article de D.M. LYNCH et al., Blood 66 (No 5), pages 1176-1181, (1985) et par les articles précités de M.C. BERNDT et al., J.G. KELTON et al., B.H. CHONG et ai., B.H. CHONG, D. SHERIDAN et ai., et J. CONARD et al. (voir en particulier le mécanisme des thrombopénies induites par lthéparine présenté dans le tableau III, page 115 dudit article de J. CONARD et al.). Le problème de la prophylaxie des accidents thrombopéniques n'est pas encore résolu. I1 existe néan moins le besoin d'une méthode de dosage rapide et fiable permettant d'apprécier le risque de développement de thrombopénies afin de stopper sufisamment tôt l'administration du médicament inducteur. A l'heure actuelle, les méthodes utilisées pour le diagnostic des thrombopénies sont celles qui comportent (1) la recherche de l'absence d'une étiologie différente des thrombopénies (infections, autres thérapies, etc...) qui est longue et fastidieuse, (2) la numération des plaquettes sanguines avant, pendant et après traitement, qui est longue et peu spécifique, ou (3) les tests biologiques (énoncés ci-après) recherchant l'apparition d'anticorps dirigés contre les plaquettes en présence du médicament inducteur ou de la drogue inductrice. I1 se trouve que les examens biologiques les plus fréquemment utilisés sont les tests d'agrégation plaquettaire, qui nécessitent un appareillage adapté et mettent en oeuvre des modalités opératoires longues et manquant dans certains cas de sensibilité. Les autres méthodes visées au point (3) cidessus, qui ont été décrites (voir en particulier les articles de J.G. KELTON et al., B.H. CHONG et al., B.H. CHONG, D. SHERIDAN et al., D.M. LYNCH et al. et Y. GRUEL précités), mettent en oeuvre l'étude de la fixation plaquettaire des IgG sériques, la libération de la sérotonine 14C-radiomarquée à deux concentrations différentes d'héparine, la disponibilité du facteur plaquettaire 3, la fixation du complément, l'inhibition de la lyse du complément, et l'agglutination d'hématies (notamment de mouton) sensibilisées. Il se trouve que ces méthodes d'essais biologiques sont ou bien peu sensibles ou peu fiables, ou bien, si elles sont sensibles, longues à réaliser. BUT DE L'INVENTION Selon un premier aspect de l'invention, on propose une nouvelle solution technique pour la détermination des thrombopénies induites par une drogue inductrice (Z). Cette nouvelle solution technique repose sur la détection, (i) au moyen d'une substance antigénique (Ag) spécifique, (ii) d'un matériau immunologique anticorps contenu dans le plasma du sujet à tester et choisi parmi l'ensemble constitué par les anticorps anti(Y) (où Y est notamment Z ou les complexes Z-Ag) dirigés notamment contre la drogue inductrice Z et ses complexes avec Ag. Eu égard aux résultats des travaux entrepris par la Demanderesse, il a été trouvé que, chez les animaux à sang chaud, notamment l'homme et les mammifères, l'administration d'une drogue inductrice de thrombopénie produit des anticorps anti(Z), anti(Z-plaquette), anti(Z Ag) et anti(Z-Ag-plaquette) conduisant à une agrégation ou une activation des plaquettes sanguines provoquant la thrombophénie. La nouvelle solution technique selon l'invention pour la détermination des thrombophénies met en oeuvre une substance antigénique (Ag) obtenue notamment par le clivage ou la lyse de plaquettes sanguines et ayant une forte affinité vis-à-vis de la drogue inductrice, ladite substance antigénique étant destinée à réagir avec un anticorps anti(drogue inductrice), suivant le mécanisme Agl + anti() Agl-anti(Z) (1) où Agl désigne ladite substance antigénique Ag ou les complexes contenant ladite substance antigénique, anti(Y) désigne un matériau anti-corps contenu dans le plasma à tester et dirigé contre la drogue inductrice Z et les complexes la contenant (notamment les complexes Z-Agl, Z- plaquette, Z Agl-plaquette) produisant une agrégation ou une activation des plaquettes sanguines provoquant la thrombophénie. Cette nouvelle solution technique offre l'avantage, à la différence des solutions antérieurement connues, d'être fiable, très sensible et rapide de mise en oeuvre. Le résultat de la réaction (1) ci-dessus peut être détecté, signalé ou amplifié selon une méthode connue en soi (notamment par agglutination, EIA, RIA ou FIA). Selon un second aspect de 1 invention, on préconise un procédé pour la détermination fiable et rapide des thrombopénies induites par toute drogue inductrice, en particulier la quinine/quinidine et surtout l'héparine. OBJET DE L'INVENTION Suivant l'invention, on propose donc une utilisation d'une substance antigénique dans la détermination des thrombopénies induites par une drogue inductrice (Z), ladite utilisation étant caractérisée en ce que ladite substance antigénique est choisie parmi l'ensemble constitué par les fractions qui (i) sont présentes dans les plaquettes sanguines et libérées desdites plaquettes sanguines par clivage ou lyse, et (ii) ont une forte affinité vis-à-vis de la drogue inductrice (Z) et/ou des complexes de ladite drogue inductrice avec les plaquettes; et en ce que ladite substance antigénique est destinée à réagir avec un matériau anticorps anti(Y) contenu dans le plasma à tester et dirigé contre la drogue inductrice, ses fragments ou les produits contenant ladite drogue inductrice ou l'un de ses fragments. Une telle utilisation convient pour toute drogue inductrice (Z) de thrombopénies d'origine immune notamment le paracétamol, l'acétazolamide, l'aspirine, l'allylisopropylcarbamide, l'alprénolol, l'amrinone, l'antazoline, les bléomycines, la carbamazépine, la céphalothine, le chlorothiazide, le chlorpropamide, la cimétidine, le clonazépam, les sulfonamides (notamment le sulfaméthoxazole, la sulfaméthazine, la sulfaméthoxypyridazine, etc.) les associations sulfonamidetriméthoprim (notamment l'association sul faméthoxaz ole- trimé thoprim dans le rapport pondéral 5/1), le DDT, la désipramine, le diazépam, la digitoxine, la diphénylhydantoine, le fénoprofen, l'héroine, l'hydrochlorothiazide, 1 'isoniazi- de, le L-(-)-tétramisole, la lévodopa, la lignocaine, le méprobamate, la méthicilline sodique, le minoxidil, la morphine, la novobiocine, les dérivés organiques de l'arsenic, l'oxyphenbytazone, l'oxprénolol, l'acide paminosalicylique, les pénicillines, le procainamide, la prochlorpérazine, le propylthiouracil, la rifampicine, la spironolactone, le stibophen, le sulindac et le tolbutamide. Cette utilisation est particulièrement intéressante dans la détermination des thrombopénies les plus fréquentes qui sont induites par la quinine/ quinidine et surtout l'héparine. On préconise un procédé pour la détermination des thrombopénies induite par toute drogue inductrice (Z), ledit procédé étant caractérisé en ce qu'il comprend la réaction (1) précitée, dans laquelle le matériau anticorps anti(Y) est dirigé contre - la drogue inductrice Z, - les substances contenant ladite drogue induc trice (notamment less complexes Z-Agl, Z-plaquette ou Z-Agl-plaquette et les polymères de Z), - les substances dérivant ou analogues à Z (no tamment les fragments de Z et les métabolites de Z), - les produits contenant lesdites substances dé rivant ou analogues à Z (notamment leurs com plexes), ou - leurs mélanges. Selon l'invention on propose enfin des nécessaires, trousses ou kits de dosage pour la détermination des thrombopénies caractérisés en ce qu'ils comprennent au moins un échantillon de ladite substance antigénique précitée ou l'un de ses complexes, et, le cas échéant, des milieux de dilution appropriés et/ou d'autres réactifs. ABREVIATIONS Dans ce qui suit, par commodité les abréviations suivantes ont été utilisées. Ag désigne la substance antigénique selon l'invention ayant une forte affinité vis-à-vis de la drogue inductrice Z Agl désigne ladite substance antigénique Ag et les complexes la comprenant; anti(Z) désigne un anticorps généré contre la drogue inductrice (Z) ; anti(X) désigne tout anticorps généré contre la substance X, ainsi anti(Z), anti(Ig), anti (IgA), anti(IgG) et respectivement anti (IgM) désignent tout anticorps généré contre la drogue inductrice Z, les immuno globulines Ig, les IgA, les IgG et respec tivement les IgM; EIA désigne un essai enzymo-immunologique (en anglais :: enzyme immunoassay"); ELISA abréviation de l'expression anglaise "enzyme-linked immunosorbent assay", désigne une technique EIA particulière F(ab) désigne un premier fragment d'un anticorps obtenu par clivage dudit anticorps par la papaine; F(ab')2 désigne un second fragment d'un anticorps obtenu par clivage dudit anticorps par la pepsine; Fc désigne tout fragment d'anticorps, séparé du fragment F(ab) par clivage au moyen de la papaine ou séparé du fragment F(ab')2 par clivage au moyen de la pepsine ; les dits fragments Fc sont homologues mais légèrement structurellement différents selon qu'ils ont été clivés par la papaine ou la pepsine (la structure et le mode d'obtention du F(ab), du F(ab')2 et des Fc est illustré dans la demande de brevet français No 89 04 589 déposée le 7 avril 1989) FIA désigne un essai fluoroimmunologique (en anglais : "fluorescent immunoassay") FR désigne le Facteur Rhumatoide ; Hep désigne l'héparine, ses dérivés ou ses analogues (y compris leurs complexes avec les plaquettes) HRGP désigne une glycoprotéine riche en histidine (en anglais : "histidine-rich glycoprotein") Ig désigne toute immunoglobuline IgA désigne toute immunoglobuline A IgG désigne toute immunoglobuline G IgM désigne toute immunoglobuline M ; LA-pF4 désigne un précurseur de BTG (en an glais : "low-affinity pF4") OD désigne la densité optique (mesurée notam ment à une longueur d'onde de 492 nm) OPD désigne 1' ortho-phénylènediamine PBP désigne le précurseur du LA-pF4, à savoir la protéine basique de plaquette (en an glais : "platelet basic protein") pF3 désigne le facteur plaquettaire 3 pF4 désigne le facteur plaquettaire 4 PM désigne le poids moléculaire POD désigne la peroxydase Qn/Qnd désigne (i) la quinine, la quinidine, leurs mélanges, les dérivés ou analogues correspondants R désigne un moyen de marquage RIA désigne un essai radio-immunologique (en anglais : "radio immunoassay") RT désigne la température ambiante (15-250C) pTG désigne la béta-thromboglobuline et résulte de la dégradation ou du clivage partiel de LA-pF4 Y désigne la drogue inductrice Z, les pro duits la contenant et ses dérivés et/ou analogues; Z désigne la drogue inductrice de thrombopé nies. DESCRIPTION DETAILLEE DE L'INVENTION La présente invention concerne la détermination de thrombopénies d'origine immune. La substance antigénique Agl selon l'invention englobe le matériau antigénique Ag qui est constitué par des fragments plaquettaires (y compris les parois), des fractions intraplaquettaires libérables des plaquettes sanguines par clivage ou lyse, et éventuellement des substances plasmatiques ou sanguines, d'une part, et les complexes desdits fragments plaquettaires, desdites fractions intraplaquettaires et desdites substances plasmatiques ou sanguines, d'autre part. Par l'expression "ayant une forte affinité vis-àvis de la drogue inductrice Z" appliquée à la substance antigénique, on entend le fait que la substance antigénique Ag réagit aisément avec la drogue inductrice Z, les dérivés de Z, les analogues de Z et les produits contenant Z. Eu égard à l'affinité de Ag pour la drogue inductrice Z, les dérivés de Z (notamment les métabolites), les analogues de Z (notamment les héparinoides quand Z est Hep), et les produits contenant Z, on obtient l'ensemble des produits et complexes inclus dans la définition de Agl. On préconise en particulier pour la détermination des thrombopénies les plus fréquentes, une nouvelle utilisation d'une substance antigénique dans la détermination des thrombopénies induites par une drogue inductrice telle que (a) l'héparine ou (b) la quinine/quinidine, ladite utilisation étant caractérisée en ce que ladite substance antigénique est choisie parmi l'ensemble constitué par les fractions qui (i) sont des fractions plaquettaires notamment obtenues par clivage ou la lyse de plaquettes sanguines et (ii) ont une forte affinité vis-à-vis (a) de Hep ou (b) de Qn/Qnd et en ce que ladite substance antigénique est destinée à réagir avec un matériau anticorps (a) anti-héparine ou respectivement (b) anti-quinine/quinidine contenu dans le plasma à tester et dirigé contre (a) Hep, les complexes Hep-plaquette, Hep-substance antigénique et/ou Hepsubstance antigénique-plaquette, ou respectivement (b) Qn/Qnd, les complexes Qn/Qnd-plaquette, Qn/Qnd-substance antigénique et/ou Qn/Qnd-substance antigénique-plaquette, où Hep représente l'héparine, les composés qui dérivent de l'héparine, les composés analogues à lthéparine ou leurs mélanges, Qn/Qnd représente la quinine/quinidine, les composés qui dérivent de la quinine/ quinidine, les composés analogues à la quinine/quinidine ou leurs mélanges, ledit matériau anticorps produisant une agrégation ou une activation des plaquettes sanguines provoquant la thrombopénie. Compte tenu des définitions données ci-dessus, lorsque la drogue inductrice Z est l'héparine, le terme Hep englobe tout produit choisi parmi l'ensemble constitué par - l'héparine proprement dite ayant un PM moyen de 6 000-30 000 daltons et un pou voir rotatoire [ D20 d'environ + 550; - les dérivés de l'héparine, notamment les héparinates métalliques (Ca2+, Li+, Na+ Mg2+, etc...) et les fragments d'hépari ne; - les analogues de l'héparine, notamment les héparinoides (héparamine et ses sels, les chondroitines et leurs sels, etc...), et les héparines ayant un poids moléculaire moyen inférieur à 6 000 dal tons; - les substances contenant l'héparine, ses dérivés et analogues, notamment les com plexes de l'héparine et de ses dits dé rivés et analogues; et - leurs mélanges. Comme indiqué plus haut, le procédé selon l'invention pour la détermination des thrombopénies induites par une drogue inductrice (Z), est caractérisé en ce qu'il comprend la réaction (A) d'une substance antigénique (Agl) choisie parmi l'ensemble constitué par (i) les fractions (Ag) qui ont une forte affinité vis-à-vis de l'ensemble cons titué par (a) la drogue inductrice, (b) ses dérivés, (c) ses analogues, (d) les produits contenant Z, ses dérivés ou analogues, ou (e) leurs mélanges, et qui sont notamment obtenues par le clivage ou la lyse des plaquettes sanguines; et (ii) les substances renfermant au moins un complexe Ag-Z, avec (B) un matériau anticorps anti(Y), où anti(Y) représente un matériau anticorps dirigé contre (a) Z, (b) les dérivés de Z, (c) les analogues de Z, (e) les produits contenant Z, ses dérivés ou ses analogues, ou (e) leurs mélanges. De façon préférée, le matériau anticorps anti(Y) sera choisi parmi l'ensemble constitué par les anticorps anti(Z), anti(Z-plaquette), anti(Z-Ag) et anti(Z-Agplaquette); en pratique on utilisera le plasma du patient à tester comme source de matériau anti(Y) qui contient en général les anti(Z) et surtout les anti(Z-Ag). Pour la mise en oeuvre de la réaction (1) précitée, on préparera d'abord le complexe Ag-Z par réaction de Ag-Z avec Z, puis on mettra en oeuvre la réaction Ag-Z + anti(Y) ---- > Ag-Z-anti(Y) On a par ailleurs, constaté que lorsqu'on part d'une substance antigénique Agl comprenant le complexe Ag-Z, on améliore la sensibilité du dosage en ajoutant au dit complexe une quantité appropriée de la drogue inductrice Z. Pour la détermination des thrombopénies induites par (a) l'héparine ou respectivement (b) la quinine/quinidine, on préconise selon l'invention un procédé, qui comporte la réaction d'un antigène (1) spécifique de l'auto-anticorps (2) généré par la drogue inductrice après administra tion de celle-ci, avec ledit auto-anticorps (2), ledit procédé étant caractérisé en ce que ledit antigène (1) est une substance antigénique (Agl) choisie parmi l'ensemble constitué par (i) les fractions (Ag) qui ont une forte activité vis-à-vis de l'ensemble constitué par (a) lthépa- rine, (b) ses dérivés, (c) ses analogues, (d) les produits contenant l'héparine, ses dérivés ou analogues, ou (e) leurs mélanges, ou respective ment vis-à-vis de l'ensemble constitué par (a) la quinine/quinidine, (b) ses dérivés, (c) ses analogues, (d) les produits contenant la quinine/ quinidine, ses dérivés ou analogues, ou (e) leurs mélanges, et qui sont notamment obtenus par le clivage ou la lyse des plaquettes sanguines; et (ii) les substances renfermant au moins un com plexe de ladite fraction (Ag) avec Hep ou respec tivement Qn/Qnd, où Hep et Qn/Qnd sont définis comme indiqué ci-dessus. Dans ce procédé particulier relatif à la détermination des thrombopénies induites par l'héparine ou la quinine/quinidine, l'auto-anticorps (2) est comme indiqué ci-dessus choisi parmi les anticorps anti(Hep), anti(Hepplaquette) anti(Hep-Agl) et anti(Hep-Agl-plaquette) ou respectivement parmi les anticorps anti(Qn/Qnd), anti(Qn/ Qnd-plaquette), anti(Qn/Qnd-Agl) et anti(Qn/Qnd-Agl-pla- quette), les préférés étant les auto-anticorps dirigés contre au moins un complexe de la drogue inductrice avec le moyen Ag. Pour la détermination des thrombopénies induites par l'héparine ladite substance antigénique Ag sera choisie parmi l'ensemble constitué par (A) le facteur plaquettaire 4 (pF4), (B) les fractions contenant le pF4, (C) les fractions contenant au moins une sub stance éluée en même temps que le pF4, (D) le protéoglycan, (E) les complexes protéoglycan-pF4, et (F) leurs mélanges. Parmi les fractions contenant le pF4 visées en tant que moyen (B) ci-dessus, on peut mentionner notamment les polymères du pF4 comprenant plusieurs chaînes parallèles du pF4 monomère. Parmi les fractions contenant au moins une substance éluée en même temps que le pF4, qui sont visées en tant que moyen (C) ci-dessus, on peut notamment mentionner les substances PBP, LA-pF4, ssTG et leurs mélanges. Parmi les complexes protéoglycan-pF4 visés en tant que moyen (E) ci-dessus, on peut notamment citer le complexe constitué par le protéoglycan dimère dans lequel chaque groupe protéoglycan est lié à quatre groupes pF4 tétramère et ayant un poids moléculaire moyen de 368 000 daltons, ledit complexe étant également dénommé "forme native du pF4" et présentant une forte affinité pour l'héparine.Ledit complexe peut être représenté par la formule suivante - --- apF4 tétramère j PM moyen = 32 000 daltons) protéoglycan monomère !PM {PM moyen = 56 000 daltons) Les substances antigéniques Ag particulièrement préférées pour la détermination des thrombopénies induites par l'héparine sont choisies parmi l'ensemble constitué par - le pF4 monomère ayant un poids moléculaire moyen de 8 000 daltons, - le pF4 polymère, notamment le pF4 tétramère ayant un poids moléculaire moyen de 32 000 daltons, - le protéoglycan ayant un poids moléculaire moyen de 56 000 daltons, - les complexes protéoglycan-pF4, notamment le complexe constitué par le protéoglycan dimère dans lequel chaque groupe protéoglycan est lié à 4 groupes pF4 tétramère et ayant un poids moléculaire moyen de 368 000 daltons, et - leurs mélanges. Selon le meilleur mode de mise en oeuvre de 1 invention, on préfère avantageusement utiliser des substances antigéniques Agl qui sont des complexes desdites substances Ag sus-visées avec Hep. Dans le cadre de la détermination des thrombopénies induites par l'héparine, la mise en oeuvre de la réaction (1) précitée comprend 10) la formation et/ou l'activation de la substance antigénique selon le mécanisme Ag + Hep Ag-Hep (2) 20) l'une des réactions correspondantes Ag-Hep + anti(Hep) Ag-Hep-anti(Hep) (3) Ag-Hep + anti(Hep-Ag) Ag-Hep-anti(Hep-Ag) (4) Ag-Hep + anti(Hep-Ag-plaquette) Ag-Hep-anti(Hep-Ag-plaquette) (5) où Hep est défini comme indiqué ci-dessus, et Ag est pF4, un de ses polymères, le protéoglycan, un complexe protéoglycan-pF4 ou un de leurs mélanges. Pour l'obtention des moyens A-F sus-visés, on procède au clivage ou à la lyse de plaquettes sanguines. De façon avantageuse, le pF4, ses polymères et les complexes protéoglycan-pF4 sont recueillis à partir de plaquettes sanguines lysées, par fixation sur gel d'héparine-agarose puis élution dudit gel à une température de 15-250 C, au moyen d'un éluant aqueux ayant, à un pH de 6,5-7,5, une force ionique supérieure ou égale à 0,60. Selon l'invention, la formation du complexe résultant de la réaction de ladite substance antigénique avec ledit matériel anticorps est détectée par une méthode choisie parmi l'ensemble constitué par les méthodes EIA, RIA, FIA et agglutination. Pour la révélation de la réaction (1) ou, dans le cas spécifique de la détermination des thrombopénies induites par l'héparine, des réactions (3)-(5), on peut mettre en oeuvre une méthode EIA dite de compétition ou encore une méthode EIA dite sandwich, selon un mécanisme qui comprend la réaction de ladite substance antigénique (1) avec ledit matériau anticorps (2), puis la réaction du complexe ainsi formé avec un anticorps anti(Ig) marqué, notamment un anticorps anti(IgA) marqué, anticorps anti(IgG) marqué ou anticorps anti(IgM) marqué. A titre d'exemple, pour la détermination des thrombopénies induites par l'héparine, l'on fera réagir selon la méthode sandwich le produit des réactions (3) (5), à savoir Ag-Hep-anti(Hep), Ag-Hep-anti(Hep-Ag) ou Ag-Hep-anti(Hep-Ag-plaquette), avec un anticorps de formule anti(Ig)-R*, où le moyen de marquage R* comprend un enzyme détectable par un substrat approprié; ainsi R peut être POD et le substrat approprié correspondant peut être OPD. A titre d'exemple pour la détermination des thrombopénies induites par I'héparine ou l'une des autres drogues inductrices, l'on fera réagir selon la méthode dite de compétition la substance antigénique Ag1 selon l'invention (avantageusement fixée sur un support approprié) avec un mélange constitué par l'anticorps anti(Y) provenant du plasma à étudier et un anticorps anti(Agl)-R, où le moyen de marquage R comprend un enzyme détectable par un substrat approprié, R pouvant être POD et le substrat approprié correspondant pouvant être OPD comme indiqué ci-dessus. Egalement à titre d'exemple pour la détermination des thrombopénies induites par l'héparine ou toute autre drogue inductrice, l'on pourra utiliser une méthode d'agglutination selon laquelle l'on fait réagir la substance antigénique Agl fixée sur un support approprié (particule de latex, liposome, fragment de liposome, bentonite, charbon, or colloidal ou toute autre particule inerte connue en immunochimie) avec le plasma du malade contenant l'anticorps anti(Y). L'agglutination peut être mesurée par photométrie ou lue directement sur lame ou en tube. En variante, le complexe antigène/anticorps ainsi obtenu, dans lequel l'antigène est fixé sur un support approprié (de préférence une paroi), pourra être révélé par réaction avec un anticorps marqué convenable (anticorps marqué par un enzyme, un moyen fluorogène, un radio-isotope, une particule de latex colorée, de l'or colloidal, etc...). D'un point de vue pratique, le milieu de dilution utilisé pour la mise en oeuvre de la réaction (1) et sa révélation, quand on mesure au moyen d'un photomètre la variation de densité optique, est un milieu aqueux ayant, pour un plasma normal, une densité optique inférieure ou égale à 0,2 et mieux inférieure ou égale à 0,1. De préférence, une telle densité optique initiale est obtenue avec un milieu de dilution du plasma qui est un tampon phosphate contenant du sérum de chèvre, les conditions utilisées étant une dilution du plasma de sujet normal et du plasma pathologique à étudier de 1/50 à 1/100 (v/v) et une quantité de sérum de chèvre de 5 à 10 % en volume par rapport audit milieu de dilution. En d'autres termes, pour une détermination selon une méthode photométrique, l'on fera appel à un milieu de dilution pour le plasma à étudier qui a une densité optique inférieure ou égale à 0,2 et mieux inférieure ou égale à 0,1. Avec les milieux de dilution classiques, on obtient dans les mêmes conditions une densité optique pour le plasma normal supérieure ou égale à 0,6 qui ne permet pas d'apprécier correctement l'augmentation de la variation de densité optique lors de l'analyse relative aux plasmas pathologiques. Les anticorps anti(Ig) et anti(Agl) qui interviennent dans la mise en oeuvre de l'invention peuvent être des anticorps polyclonaux ou monoclonaux. Quand on utilise des anticorps monoclonaux, on peut (si on le souhaite mais cela n'est pas essentiellement nécessaire dans la pratique de la présente invention) faire appel à leurs fragments F(ab) ou F(ab')2 pour éviter toute interaction possible avec FR dès lors que ledit FR est très sensible vis-à-vis des fragments Fc. Selon l'invention, on propose enfin un nécessaire pour la détermination des thrombopénies induites par l'héparine, caractérisé en ce qu'il comprend au moins un échantillon de ladite substance antigénique choisie parmi l'ensemble constitué par - le pF4 monomère ayant un poids moléculaire moyen de 8 000 daltons, - le pF4 polymère, notamment le pF4 tétramère ayant un poids moléculaire moyen de 32 000 daltons, - le protéoglycan ayant un poids moléculaire moyen de 56 000 daltons, - les complexes protéoglycan-pF4, notamment le complexe constitué par le protéoglycan dimère dans lequel chaque groupe protéoglycan est lié à 4 groupes pF4 tétramère et ayant un poids moléculaire moyen de 368 000 daltons, ou au moins un échantillon d'un complexe de ladite substance antigénique avec l'héparine, et, le cas échéant, des milieux de dilution et d'autres réactifs. D'autres avantages et caractéristiques de l'invention seront mieux compris à la lecture des exemples de réalisation et des dessins qui suivent. L'ensemble de ces éléments n'est nullement limitatif mais est donné à titre d' illustration. Dans les dessins - la figure 1 représente un chromatogramme de la séparation de fractions plaquettaires pour l'obtention du pF4; et - la figure 2 représente les OD de plasmas thrombopéniques et normaux dilués au 1/50è (partie A) ou au 1/lOOè (partie B) et montre l'intérêt de l'addition de sérum de chèvre dans le milieu de dilution desdits plasmas. EXEMPLE 1 Obtention de pF4 On part d'un lysat plaquettaire qu'on lave et décongèle trois fois de suite. Le lysat ainsi traité est mis en contact avec une solution aqueuse contenant du sulfate d'ammonium (60 S p/v); il se forme un précipité. On recueille le surnageant et on le soumet à une opération de dialyse. Le dialysat est déposé sur une colonne de gel d'héparine-agarose puis élué à RT au moyen d'un éluant aqueux (gradient de sel) ayant, à un pH de 6,57,5, une force ionique supérieure ou égale à 0,60. L'élution avec un gradient de sel, à l'aide d'un analyseur-séparateur automatique, fournit le chromatogramme (1) de la figure 1 ci-après dans le système OD (e ordonnées) à 280 nm volume élué exprimé en ml (en abscisses) dans lequel a désigne le volume "mort"; b désigne un premier pic pour 30 ml (injec tion du gradient de sel); c désigne une première fraction de 60 à 90 ml relative à des glycoprotéines et des traces de thrombospondine, présentant un pic maximal pour 70 ml; d désigne une seconde fraction de 90 à 132 ml relative principalement à la thrombos pondine, présentant un pic maximal pour 100 ml (thrombospondine + glycoprotéine) et un pic maximal pour 112 ml (thrombos pondine);; e une troisième fraction de 132 à 180 ml re lative principalement à pTG comprenant un pic maximal pour 142 ml (glycoprotéine) et un pic maximal pour 170 ml (BTG), et f une quatrième fraction relative au pF4. Les fractions des pics 70 (i.e. 70 ml), 100, 112, 142, 170 et pF4 ont été testées avec le surnageant avant dépôt et le volume mort après revêtement ("coating") sur les parois ou fonds de microcuvettes, vis-à-vis de plasmas pathologiques de sujets atteints de thrombopénies bien caractérisées induites par l'héparine, l'héparinate de calcium ou l'héparinate de magnésium et de plasmas de sujets normaux, lesdits plasmas étant dilués au l/50è 1/lOOè au moyen d'un milieu de dilution (tampon phosphate additionné de 10 % v/v de sérum de chèvre). Un immunoconjugué, un anticorps anti(Ig) marqué à la peroxydase [notamment anti(IgA)-POD, anti(IgG)-POD et anti(IgM)-POD], a été utilisé pour la révélation (technique EIA sandwich) puis développement de la coloration au moyen du couple OPD/H202. La réactivité comparée des plasmas normaux et des plasmas pathologiques a mis en évidence que la fraction contenant le pF4 était la plus efficace pour fixer l1auto-anticorps anti(Y) responsable de la thrombopénie. EXEMPLE 2 Détermination des thrombopénies induites par l'héparine On préconise le protocole suivant pour la détermination des thrombopénies induites par l'héparine et ses sels métalliques. On procède directement sur plasma selon une technique EIA sandwich. Les auto-anticorps générés par Hep (désignant ici l'héparine et/ou ses sels métalliques) et contenus dans le plasma, sont fixés par l'antigène d'origine plaquettaire en présence d'héparine (pF4-Hep) et révélés par un anticorps anti(Ig humaine)-POD [notamment anti(IgA)-POD, anti(IgG)-POD ou anti(IgM)-POD] puis développement de la coloration au moyen du couple OPD/H202. Réactifs Le nécessaire, kit ou trousse de dosage comprend les réactifs suivants - plaque préenduite ("precoated") : plaque séca ble en 6 blocs ("ships") de 16 cupules chacun, revêtue par l'antigène pF4 en présence d'Hep, selon une proportion de 2 à 8 eg/ml (de préfé rence 5 Fg/ml) de pF4 pour 0,02 à 1 UI/ml (de préférence 0,1 UI/ml) de Hep; - anti(Ig) marqué : immunoglobulines de chèvre anti(IgA, G ou M humaines) couplées à la pero xydase [à savoir : anti(IgA)-POD, anti(IgG)-POD ou anti(IgM)-POD; - milieu de dilution : tampon phosphate contenant 10 % (v/v) de sérum de chèvre; - solution de lavage : solution aqueuse contenant un agent tensioactif TWEENR20, 20 fois concen tré (à diluer au moment de l'emploi); - substrat OPD : 5 à 10 comprimés renfermant cha cun 2 mg de OPD; et - le cas échéant, des échantillons de référence standardisés pour étalonnage, et une source de H202. Principes opératoires - Les plasmas à tester, qu'ils soient pathologi ques ou normaux sont recueillis et traités comme suit : prélèvement du plasma sur citrate trisodique 0,109 M, centrifugation pendant 10 minutes à 3000 tours/minute et récupération du surnageant. - L'échantillon de plasma à tester doit être dilué au l/50è-1/lOOè au moyen du milieu de di lution. Procédure 1. "Coating" La fixation de la substance antigénique pF4-Hep est réalisée dans chaque cupule au moyen de 5 eg/ml de pF4 et de 0,1 UI/ml d'Hep. 2. Addition de l'anticorps On ajoute 200 1 du milieu de dilution contenant le plasma à tester (dans lequel est présent le matériau auto-anticorps responsable de la thrombopénie induite par Hep) par cupule. 3. Incubation/lavage On incube pendant 2 h à RT, puis procède à 3 lavages successifs au moyen de la solution de lavage après avoir diluée celle-ci. 4. Addition de l'immunoconjugué On introduit dans chaque cupule 200 1 d'immunoconjugué marqué à la peroxydase. 5. Incubation/lavage On incube le milieu réactionnel résultant pendant 2 h à RT, puis procède à 3 lavages successifs au moyen de la solution de lavage diluée. 6. Coloration On ajoute 200 l du couple OPD/H202 par cupule; incube pendant 3 minutes à RT; stoppe la réaction par addition de 50 H1 de H2S04 3M par cupule; et lit la valeur de OD à 492 nm. EXEMPLE 3 Corrélation Des essais cliniques ont été réalisés en parallèle selon le protocole de l'exemple 2 par comparaison avec la technique antérieure faisant appel à l'agglutination des plaquettes sanguines par l'héparine. Dans cette optique, le plasma de chaque patient hospitalisé présumé atteint de thrombopénie induite par l'hépa rine, a été séparé en deux lots, un pour chaque technique. Les résultats obtenus sont consignés dans le tableau I ci-après. Ces résultats mettent en évidence que (i) quand le test d'agrégation des plaquettes à l'héparine est douteux, la détermination se lon l'invention permet de lever le doute thrombopénie pour les patients No 4 et 15, absence de thrombopénie pour les patients No 2 et 25; (ii) la détermination selon l'invention permet de pallier les erreurs de diagnostic du test d'agrégation pour les patients No 14 et 16 qui n'avaient manifestement pas de thrombopé nie induite par l'héparine) et les patients No 17 et 22 (qui étaient manifestement at teints de thrombopénie induite par l'hépari ne); et (iii) il existe une bonne corrélation pour les ré sultats obtenus pour le reste des autres pa tients. Ces essais cliniques mettent en évidence l'intérêt de la détermination des thrombopénies selon 1 invention, en ce qui concerne la rapidité et la fiabilité, par rapport à la technique antérieure d'agrégation des plaquettes. EXEMPLE 4 Autres essais cliniques Une seconde série d'essais cliniques a été réalisée selon le protocole de l'exemple 2 sur un lot de plasmas de patients atteints de thrombopénie induite par l'héparine par rapport à un lot de plasma de sujets normaux. Dans cette seconde série d'essais on a utilisé les plasmas de 21 patients thrombopéniques et de 32 sujets normaux, avec comme substance antigène un complexe pF4héparine élaboré à partir des proportions suivantes : 5 g/ml de pF4 et 0,1 UI/ml d'héparinate de calcium. Les résultats consignés dans la figure 2 ci-après où la partie A concerne une dilution au 1/50è de chaque plasma à tester, et la partie B une dilution au l/100è de chacun desdits plasmas, montrent l'intérêt de l'addition de 10 % v/v de sérum de chèvre dans le milieu de dilution pour avoir une OD toujours inférieure à 0,1 pour les plasmas normaux. Lorsque l'OD des plasmas normaux dilués au l/50è ou au l/lOOè est supérieure à 0,3 voire 0,6, il devient difficile d'apprécier les OD des plasmas thrombopéniques avec un photomètre. TABLEAU I Patient Détermination test d'agrégation selon l'invention à l'héparine (a) (b) (c) 1 1 0,65 0,45 A 2 2 0,20 0,10 B 3 0,11 0,09 C 4 0,24 0,15 B 5 0,81 0,52 A 6 0,59 0,34 A 7 7 0,88 0,60 A 8 8 0,60 0,39 A 9 9 0,73 0,74 A t 10 1,58 0,93 A 11 11 1,65 1,12 A 12 1,17 1,03 A 13 0,79 0,60 A 14 0,17 0,10 A 15 j 0,70 0,32 B 16 16 0,20 0,13 A (d) 17 0,67 0,44 C 18 0,80 0,53 A 19 0,57 0,46 A 20 0,15 0,10 C 21 0,72 0,38 A 22 0,62 0,42 C 23 0,51 0,31 A TABLEAU I (fin) Patient Détermination test d'agrégation selon l'invention à l'héparine j (a) (b) (c) 24 1,64 1,30 A 25 0,13 0,10 B Contrôlez 0,12 0,08 (e) (0,06-0,21) (0,04-0,13) Notes (a) avec plasma dilué au 1/50è; (b) avec plasma dilué au 1/100è; (c) avec la notation suivante : A résultat positif; i B résultat douteux; C C résultat négatif; (d) résultat évalué à tort positif (erreur due à la grossesse de la patiente); (e) effectué sur plasma de sujet normal valeur moyenne et intervalle. REVENDICATIONS 1. Utilisation d'une substance antigénique dans la détermination des thrombopénies induites par une drogue inductrice (Z), ladite utilisation étant caractérisée en ce que ladite substance antigénique est choisie parmi l'ensemble constitué par les fractions qui (i) sont présentes dans les plaquettes sanguines et libérées desdites plaquettes sanguines par clivage ou lyse, et (ii) ont une forte affinité vis-à-vis de la drogue inductrice (Z) et/ou des complexes de ladite drogue inductrice avec les plaquettes; et en ce que ladite substance antigénique est destinée à réagir avec un matériau anticorps anti(Y) contenu dans le plasma à tester et dirigé contre la drogue inductrice, ses fragments ou les produits contenant ladite drogue inductrice ou l'un de ses fragments. 2. Utilisation suivant la revendication 1 d'une substance antigénique dans la détermination des thrombopénies induites par une drogue inductrice telle que (a) l'héparine ou (b) la quinine/quinidine, ladite utilisation étant caractérisée en ce que ladite substance antigénique est choisie parmi l'ensemble constitué par les fractions qui (i) sont des fractions plaquettaires notamment obtenues par le clivage ou la lyse de plaquettes sanguines et (ii) ont une forte affinité visà-vis (a) de Hep ou (b) de Qn/Qnd et en ce que ladite substance antigénique est destinée à réagir avec un matériau anticorps (a) anti-héparine ou respectivement (b) anti-quinine/quinidine contenu dans le plasma à tester et dirigé contre (a) Hep, les complexes Hepplaquette, Hep-substance antigénique et/ou Hep-substance antigénique-plaquette, ou respectivement (b) Qn/Qnd, les complexes Qn/Qnd-plaquette, Qn/Qnd-substance antigénique et/ou Qn/Qnd-substance antigénique-plaquette, où Hep représente l'héparine, les composés qui dérivent de l'héparine, les composés analogues à l'héparine ou leurs mélanges, Qn/Qnd représente la quinine/quinidine, les composés qui dérivent de la quinine/ quinidine, les composés analogues à la quinine/quinidine ou leurs mélanges, ledit matériau anticorps produisant une agrégation ou une activation des plaquettes sanguines provoquant la thrombopénie. 3. Utilisation suivant la revendication 2, caractérisée en ce que, pour la détermination des thrombopénies induites par l'héparine, ladite substance antigénique est choisie parmi l'ensemble constitué par (A) le facteur plaquettaire 4 (pF4), (B) les fractions contenant le pF4, (C) les fractions contenant au moins une sub stance éluée en même temps que le pF4, (D) le protéoglycan, (E) les complexes protéoglycan-pF4, et (F) leurs mélanges, ladite substance antigénique étant activée par réaction avec Hep tel que défini ci-dessus. 4. Utilisation suivant la revendication 3, caractérisée en ce que la substance antigénique est choisie parmi l'ensemble constitué par les complexes (A) du facteur plaquettaire 4 (pF4), (B) des fractions contenant le pF4, (C) des fractions contenant au moins une sub stance éluée en même temps que le pF4, (D) du protéoglycan, (E) des complexes protéoglycan-pF4, et (F) de leurs mélanges, avec Hep tel que défini ci-dessus. 5. Utilisation suivant l'une quelconque des revendications 3 et 4, caractérisée en ce que Hep est choisi parmi l'ensemble constitué par - l'héparine proprement dite ayant un PM moyen de 6 000-30 000 daltons et un pou voir rotatoire D20 d'environ + 550; - les dérivés de l'héparine, notamment les héparinates métalliques (notamment Ca2+, Mg2+, Li+ et Na+), et les fragments d'héparine; - les analogues de l'héparine, notamment les héparinoîdes (héparamine et ses sels, les chondroitines et leurs sels), et les héparines ayant un poids molécu laire moyen inférieur à 6 000 daltons; - les substances contenant l'héparine, ses dérivés et analogues, notamment les com plexes de l'héparine et de ses dits dé rivés et analogues; et - leurs mélanges. 6. Utilisation suivant la revendication 3, caractérisée en ce que ladite substance antigénique a été recueillie, à partir de plaquettes sanguines lysées, par fixation sur gel d'héparine-agarose puis élution dudit gel à une température de 15-25 C, au moyen d'un éluant aqueux ayant, à un pH de 6,5-7,5, une force ionique supérieure ou égale à 0,60. 7. Procédé pour la détermination des thrombopénies induites par une drogue inductrice (Z), ledit procédé, qui comporte une réaction du type antigène/anticorps, étant caractérisé en ce qu'il comprend la réaction (A) d'une substance antigénique (Agl) choisie parmi l'ensem- ble constitué par (i) les fractions (Ag) qui ont une forte affinité vis-à-vis de l'ensemble cons titué par (a) la drogue inductrice, (b) ses dérivés, (c) ses analogues, (d) les produits contenant Z, ses dérivés ou analogues, ou (e) leurs mélanges, et qui sont notamment obtenues par le clivage ou la lyse des plaquettes sanguines; et (ii) les substances renfermant au moins un complexe Ag-Z, avec (B) un matériau anticorps anti(Y) où anti(Y) représente un matériau anticorps dirigé (a) contre Z, (b) les dérivés de Z, (c) les analogues de Z, (e) les produits contenant Z, ses dérivés ou ses analogues, ou (e) leurs mélanges. 8. Procédé suivant la revendication 7, caractérisé en ce que le matériau anticorps anti(Y) est choisi parmi l'ensemble constitué par les anticorps anti(Z), anti(Zplaquette), anti(Z-Ag), anti(Z-Ag-plaquette) et leurs mélanges. 9. Procédé suivant l'une quelconque des revendications 7 et 8, pour la détermination des thrombopénies induites par (a) l'héparine ou respectivement (b) la quinine/quinidine, ledit procédé, qui comporte la réaction d'un antigène (1) spécifique de l'auto-anticorps (2) généré par la drogue inductrice après administra tion de celle-ci, avec ledit auto-anticorps (2), étant caractérisé en ce que ledit antigène (1) est une substance antigénique (Agl) choisie parmi l'ensemble constitué par (i) les fractions (Ag) qui ont une forte activité vis-à-vis de l'ensemble constitué par (a) l'hépa rine, (b) ses dérivés, (c) ses analogues, (d) les produits contenant l'héparine, ses dérivés ou analogues, ou (e) leurs mélanges, ou respective ment vis-à-vis de l'ensemble constitué par (a) la quinine/quinidine, (b) ses dérivés, (c) ses analogues, (d) les produits contenant la quinine/ quinidine, ses dérivés ou analogues, ou (e) leurs mélanges, et qui sont notamment obtenus par le clivage ou la lyse des plaquettes sanguines; et (ii) les substances renfermant au moins un com plexe de ladite fraction (Ag) avec Hep ou respec tivement Qn/Qnd, où Hep et Qn/Qnd sont définis comme indiqué ci-dessus. 10. Procédé selon la revendication 9 pour la détermination des thrombopénies induites par l'héparine, caractérisé en ce que ladite substance antigénique (Ag) est choisie parmi l'ensemble constitué par (A) le facteur plaquettaire 4 (pF4), (B) les fractions contenant le pF4, (C) les fractions contenant au moins une sub stance éluée en même temps que le pF4, (D) le protéoglycan, (E) les complexes protéoglycan-pF4, et (F) leurs mélanges. 11. Procédé suivant la revendication 9 pour la détermination des thrombopénies induites par l'héparine, ledit procédé étant caractérisé en ce que la substance antigénique est choisie parmi l'ensemble constitué par les complexes (A) du facteur plaquettaire 4 (pF4), (B) des fractions contenant le pF4, (C) des fractions contenant au moins une sub stance éluée en même temps que le pF4, (D) du protéoglycan, (E) des complexes protéoglycan-pF4, et (F) de leurs mélanges, avec Hep tel que défini ci-dessus. 12. Procédé suivant la revendication 10 ou 11, caractérisé en ce que ladite substance antigénique est choisie parmi l'ensemble constitué par (A) - le pF4 monomère ayant un poids moléculaire moyen de 8 000 daltons, - le pF4 polymère, notamment le pF4 tétramère ayant un poids moléculaire moyen de 32 000 daltons, - le protéoglycan ayant un poids moléculaire moyen de 56 000 daltons, - les complexes protéoglycan-pF4, notamment le complexe constitué par le protéoglycan dimère dans lequel chaque groupe protéoglycan est lié à 4 groupes pF4 tétramère et ayant un poids moléculaire moyen de 368 000 daltons, - leurs mélanges; et (B) - les complexes de ces produits avec Hep, où Hep est défini comme indiqué ci-dessus. 13. Procédé suivant l'une quelconque des revendications 9 à 12, caractérisé en ce que la formation du complexe résultant de la réaction de ladite substance antigénique (1) avec ledit matériau anticorps (2) est détectée par une méthode choisie parmi l'ensemble constitué par les méthodes EIA, RIA, FIA et agglutination. 14. Procédé suivant l'une quelconque des revendications 9 à 13 pour la détermination des thrombopénies induites par l'héparine, caractérisé en ce qu'il comprend la réaction de ladite substance antigénique (1) avec ledit matériau anticorps (2) pour l'obtention d'un complexe substance antigénique-matériau anticorps, puis la réaction du complexe, ainsi formé, avec un anticorps anti(Ig) marqué. 15. Procédé suivant la revendication 14, caractérisé en ce que 11 anticorps anti(Ig) marqué est choisi parmi l'ensemble constitué par les anticorps anti(IgA), anti(IgG) et anti(IgM) marqués à la peroxydase. 16. Procédé suivant l'une quelconque des revendications 9 à 13, pour la détermination des thrombopénies induites par l'héparine, caractérisé en ce qu'il comprend la réaction de ladite substance antigénique (1) avec un mélange contenant ledit matériau anticorps (2) et un anticorps anti(substance antigénique) marqué. 17. Procédé suivant l'une quelconque des revendications 9 à 16 pour la détermination selon une méthode photométrique des thrombopénies induites par l'héparine, caractérisé en ce que le milieu de dilution du plasma à étudier est tel qu'il présente, pour un plasma de sujet normal à une concentration de 1/50-1/100 (v/v) dans ledit milieu, une densité optique inférieure ou égale à 0,2 et mieux inférieure ou égale à 0,1. 18. Procédé suivant la revendication 17, caractérisé en ce que ledit milieu de dilution du plasma est un tampon phosphate contenant du sérum de chèvre. 19. Procédé suivant l'une quelconque des revendications 9 et 10 pour la détermination des thrombopénies induites par l'héparine, caractérisé en ce que ladite substance antigénique est mise en réaction en présence d'Hep, où Hep est tel que défini ci-dessus. 20. Nécessaire pour la détermination des thrombopénies induites par l'héparine, caractérisé en ce qu'il comprend au moins un échantillon de ladite substance antigénique choisie parmi l'ensemble constitué par - le pF4 monomère ayant un poids moléculaire moyen de 8 000 daltons, - le pF4 polymère, notamment le pF4 tétramère ayant un poids moléculaire moyen de 32 000 daltons, - le protéoglycan ayant un poids moléculaire moyen de 56 000 daltons, - les complexes protéoglycan-pF4, notamment le complexe constitué par le protéoglycan dimère dans lequel chaque groupe protéoglycan est lié à 4 groupes pF4 tétramère et ayant un poids moléculaire moyen de 368 000 daltons, ou au moins un échantillon d'un complexe de ladite substance antigénique avec l'héparine, et, le cas échéant, des milieux de dilution et d'autres réactifs.