Brevet FR2665701A1 — publié le 19920214

Aqents de blocage neuromusculaire. La présente invention concerne un composé de l'isoquinoléine utile comme agent de blocage neuromusculaire. Les agents de blocage neuromusculaire sont d'usage courant en anesthésie chirurgicale pour la relaxation des muscles du squelette afin de faciliter le travail du chirurgien Ces agents sont abondamment utilisés aussi dans les unités de soins intensifs (USI) des hôpitaux pour assurer la relaxation musculaire à long terme des patients maintenus par intubation sous ventilation assistée. Le bésylate d'atracurium (ou dibésylate de 2 ',2 '-( 3,11-dioxo-4,10-dioxatridécylène)-bis-( 1,2,3,4- tétrahydro-6,7-diméthoxy-2-méthyl-1-vératrylisoquinoléinium) est un agent de blocage neuromusculaire non dépolarisant qui est devenu disponible pour les besoins de la chirurgie humaine pour la première fois au Royaume-Uni en décembre 1982 et un an plus tard aux USA Ce composé est décrit dans le brevet anglais n 1 579 822 et dans le brevet USA n 4 179 507 Ce médicament est actuellement d'usage courant en chirurgie et en thérapeutique dans les unités de soins intensifs Le principe actif a été conçu spécialement pour subir la dégradation spontanée par élimination d"'Hofmann" au p H et à la température physiologiques et par hydrolyse de la fonction ester qui a lieu indépendamment des fonctions hépatiques et rénales Pour l'application en chirurgie humaine, le bésylate d'atracurium est administré sous la forme d'un mélange de dix isomères optiques et géométriques Eur J Med Chem -Chim, Ther 1984-19, n 5, pages 441- 450, concerne les isomères géométriques et optiques du bésylate d'atracurium. Les agents de blocage neuromusculaire tels que le bésylate d'atracurium agissent en bloquant le récepteur de l'acétylcholine à la jonction neuromusculaire Toutefois, ils peuvent également bloquer la transmission cholinergique dans le système nerveux autonome et exercer des effets secondaires cardio-vasculaires non souhaités Par exemple, le blocage parasympathique provoque la tachycardie et l'hypertension, tandis que le blocage des ganglions sympathiques induit la bradycardie et l'hypotension Les agents de blocage neuromusculaire ont également une propension à libérer l'histamine qui peut provoquer des réactions anaphylactiques mortellement dangeureuses chez certains patients Le radical antigénique des agents de relaxation des muscles du squelette est la structure ammonium quaternaire ou tertiaire qui confère aussi les propriétés de blocage neuromusculaire à ces agents Sous ce rapport, l'atracurium est un agent de libération peu puissant de l'histamine et comme pour d'autres agents de blocage neuromusculaire, des réactions anaphylactiques attribuées au principe actif ont, à l'occasion, été mentionnées. La Demanderesse a découvert à présent que les sels d'atracurium dans lesquels la partie atracurium a une configuration isomère géométrique et optique particulière présentent une combinaison spécialement avantageuse de propriétés pharmacologiques qui rendent ces sels exceptionnellement précieux comme agents de blocage neuromusculaire. La configuration isomère géométrique et optique particulière pour la partie atracurium dont il est question ci-dessus est la configuration 1 R-cis,l'R-cis Les sels d'atracurium ayant cette configuration peuvent être appelés sels de l R-cis,l'R-cis-2 ',2 '-( 3,11-dioxo-4,10-dioxatri- décylène)-bis-( 1,2,3,4-tétrahydro-6,7-diméthoxy-2-méthyl-1- vératrylisoquinoléinium) Ces sels sont dits ci-après sels de 1 R-cis,l'R-cis-atracurium. Suivant une particularité, la présente invention a pour objet un sel de l R-cis,l'R-cis-atracurium sensiblement exempt de ses autres isomères géométriques et optiques. Les sels de 1 R-cis,l'R-cis- atracurium conformes à l'invention sont sensiblement exempts d'autres isomères géométriques et optiques dans la mesure o ils sont, en général, en mélange avec moins de 5 % p/p, de préférence moins de 2 % p/p, de ces autres isomères, sur la base du poids total du mélange en question En particulier, les sels de l R-cis,l'R-cis-atracurium ci-dessus conformes à l'invention contiennent avantageusement (a) moins de 1 % p/p des isomères cis,trans correspondants et/ou moins de 0,5 % p/p des isomères trans,trans correspondants et/ou (b) en général, moins de 5 % p/p, de préférence moins de 2 % p/p, des isomères S correspondants. Pour l'administration à l'être humain, par exemple en thérapeutique chirurgicale ou médicale, par exemple en anesthésie, les sels de 1 Rcis,l'R-cis-atracurium conformes à l'invention doivent comprendre un anion physiologiquement acceptable, les anions préférés étant notamment les anions halogénure, par exemple chlorure, bromure ou iodure, sulfate, phosphate, hydrogénophosphate, acétate, propionate, succinate, maléate et organosulfonate, par exemple méthanesulfonate (mésylate), benzènesulfonate (bésylate), p-toluènesulfonate (tosylate) et naphtalène- sulfonate, les anions mésylate et bésylate étant spécialement préférés Ces sels contenant un anion physiologiquement acceptable sont dits ci-après sels de 1 R-cisl'R-cis-atracurium physiologiquement acceptables. Les sels dont l'anion n'est pas physiologiquement acceptable peuvent être utilisés pour la synthèse d'un sel physiologiquement acceptable correspondant. En ce qui concerne la combinaison spécialement avantageuse de propriétés pharmacologiques dont il est question ci-dessus, la Demanderesse a découvert par des expériences sur des animaux que les sels de l R-cis,l'R-cis- atracurium ont une activité de blocage neuromusculaire sensiblement plus grande que celle du bésylate d'atracurium sous la forme d'un mélange des isomères géométriques et optiques, tout en ayant une durée d'action semblable. Les sels de l R-cis,l'R-cis-atracurium ont aussi à un degré plus faible des effets défavorables potentiels sur le système nerveux autonome, notamment de blocage sympathique et de blocage parasympathique, avec une moindre probabilité d'exercer aux doses thérapeutiques des effets cardio-vasculaires analogues à ceux de l'histamine, offrant ainsi une plus grande sécurité pour le patient, par comparaison avec le bésylate d'atracurium sous la forme d'un mélange des isomères géométriques et optiques. Un avantage résultant des sels de l R-cis,l'R-cis- atracurium conformes à l'invention est qu'ils exercent un blocage neuromusculaire plus efficace en formant des produits de dégradation en concentration plus faible que le mélange précité et isomères de bésylate d'atracurium Cet avantage est particulièrement souhaitable pour les interventions chirurgicales de longue durée et les usages en unités de soins intensifs nécessitant de fortes doses et/ou de longues durées de traitement. La présente invention a aussi pour objet a) les sels de l R-cis, l'R-cis-atracurium physiologiquement acceptables conformes à l'invention à l'usage de la thérapeutique chirurgicale ou médicale, par exemple en anesthésie, spécialement pour induire le blocage neuromusculaire chez un animal, par exemple un mammifère tel que l'être humain; b) l'utilisation des sels de l R-cis,l'R-cis- atracurium physiologiquement acceptables conformes à l'invention pour la fabrication d'une composition pharmaceutique propre à induire le blocage neuromusculaire; c) un procédé pour induire le blocage neuromusculaire chez un animal, par exemple un mammifère tel que l'être humain, qui comprend l'administration à cet animal, en quantité efficace pour le blocage neuromusculaire, d'un sel de l R-cis,l'R-cis-atracurium physiologiquement acceptable conforme à l'invention. Les sels de l R-cis,l'R-cis-atracurium physiologiquement acceptables conformes à l'invention sont généralement utilisés en thérapeutique chirurgicale ou médicale, par exemple en anesthésie, par administration des sels au sujet en question, par exemple l'être humain, par une voie appropriée et en une dose propre à exercer l'effet souhaité de blocage neuromusculaire Les sels sont administrés en règle générale par injection par voie intraveineuse ou intramusculaire ou bien, si nécessaire, par perfusion intraveineuse continue La dose précise à laquelle les sels sont administrés varie avec le degré de blocage neuromusculaire souhaité, l'âge et l'état du sujet. Néanmoins, en administration par voie intraveineuse, les sels sont généralement pris en une dose de 0,1 à 0,6 mg par kg, de préférence de 0,2 à 0,4 mg par kg Dans le cas de l'administration par perfusion, les sels sont généralement pris en une dose 0,1 à 0,6 mg par kg et par heure, de préférence de 0,2 à 0,4 mg par kg et par heure. Les sels de l R-cis,l'R-cis-atracurium conformes à l'invention sont généralement utilisés en thérapeutique chirurgicale ou médicale sous la forme d'une composition pharmaceutique comprenant un tel sel conjointement avec un excipient pharmaceutiquement acceptable Ces compositions sont de préférence adaptées à l'administration par injection ou perfusion, par exemple sous la forme d'une solution, émulsion ou suspension du sel dans un liquide aqueux ou non aqueux pharmaceutiquement acceptable, par exemple de l'eau stérile, qui peut contenir de surcroît, si la chose est souhaitée, un ou plusieurs autres excipients convenables, comme des agents bactériostatiques, des antioxydants, des tampons, des épaississants ou des agents de mise en suspension Ces compositions liquides contiennent généralement le sel en une quantité de 5 à 15 mg par ml, de préférence de 5 à 10 mg par ml En variante, les sels peuvent être présentés sous la forme de solides lyophilisés à reconstituer avec de l'eau pour injection ou avec des solutions physiologiques de dextrose ou de sel Les compositions conformes à l'invention sont généralement présentées en formes dosées unitaires telles que des ampoules ou dispositifs pour injection jetables ou bien en formes multidoses telles qu'un flacon dont la dose appropriée peut être prélevée; toutes ces compositions doivent être stériles Ces formes dosées unitaires contiennent généralement 10 à 250 mg, de préférence 25 à mg d'un sel conforme à l'invention en solution ou à l'état de solide lyophilisé. Les sels de l R-cis,l'R-cis-atracurium conformes à l'invention peuvent être préparés en exposant les sels de l R-cis,l'R-cis-atracurium correspondants aux conditions ou réactants servant à opérer l'isolement de l'isomère 1 R-cis,l'R-cis des isomères géométriques correspondants contenus dans ce sel de l R,1 'R-atracurium. L'isolement du sel de l R-cis,l'R-cis-atracurium souhaité suivant le procédé ci-dessus est exécuté avantageusement par chromatographie, en particulier par chromatographie liquide à haute performance (hplc), bien que la chromatographie liquide à contre-courant, la chromatographie sur colonne ou la chromatographie par échange d'ions puisse être appliquée aussi Un isolement particulièrement efficace du sel souhaité a été obtenu par hplc avec une colonne garnie de silice ou d'alumine et avec une phase mobile comprenant un mélange approprié de solvants, par exemple un mélange d'un hydrocarbure chloré tel que le chlorure de méthylène ou d'acétonitrile, d'un alcool, comme un alcool aliphatique à chaine courte tel que le méthanol, l'éthanol ou le propanol, et d'un acide fort tel que l'acide benzènesulfonique, l'acide méthanesulfo- nique, l'acide p-toluènesulfonique et l'acide phosphorique. Un mélange chlorure de méthylène:méthanol:acide méthanesulfonique, de préférence dans un rapport de 80:20:0,5, s'est révélé spécialement avantageux et conduit à éluer le méthanesulfonate (mésylate) de la colonne De même, pour l'élution du benzènesulfonate (bésylate), un mélange chlorure de méthylène:méthanol:acide benzènesulfonique ( 4000:500:0,25) est préféré La solution du sel élué peut être ensuite lavée pour éliminer les solvants tels que le méthanol et l'excès éventuel d'acide et le sel peut être isolé par évaporation de l'hydrocarbure chloré Le sel souhaité peut être obtenu sous la forme d'un solide par lyophilisation d'une solution aqueuse du sel ou par dissolution dans un solvant tel qu'un éther, puis par précipitation due à l'addition d'un solvant non polaire tel que l'éther de pétrole ou le cyclohexane. Le sel de l R,l'R-atracurium de départ pour le procédé ci-dessus peut être préparé à partir de la (R)-1,2,3,4-tétrahydropapavérine de façon classique, par exemple par le procédé décrit dans Eur J Med Chem -Chim. Ther 1984-19, n 5, pages 441-450. Les exemples suivants illustrent la présente invention. EXEMPLE 1 - a) Diacrylate de 1,5-pentaméthylène. On chauffe du 1,5-pentanediol ( 15,6 g) dans du toluène au reflux ( 500 ml) avec de l'acide 3-bromopropionique ( 50,5 g) et une trace d'acide p-toluènesulfonique pendant 4 heures Ensuite, on lave la solution toluénique refroidie avec une solution aqueuse d'acétate de sodium et on la fait réagir avec de la triéthylamine ( 50 ml) au reflux On lave le mélange de réaction refroidi soigneusement avec de l'eau pour éliminer la triéthylamine et le bromhydrate de triéthylamine, puis on chasse le toluène sous pression réduite. On obtient le produit, qui est le diacrylate de 1,5-pentaméthylène ( 24, 0 g, rendement de 75 %), sous la forme d'un liquide pale par distillation sous haut vide (P Eb 90 à 95 C/0,1 mm Hg). b) (R)-Tétrahydro Dapavérine. On dissout du chlorhydrate de ( )-tétrahydro- papavérine ( 105 g) dans de l'eau et on alcalinise la solution avec de l'ammoniaque aqueuse diluée On dissout la ( )-tétrahydropapavérine base précipitée dans du toluène, puis on évapore le solvant pour obtenir la base sous la forme d'une huile jaune pâle On dissout l'huile dans du méthanol ( 1575 ml) et on l'additionne de N-acétyl-L-leucine ( 47,5 g) On ajoute de l'éther diéthylique ( 274 ml) à la solution de laquelle le N-acétyl-L-leucinate de (S)-tétrahydropapavérine ( 35,5 g) se sépare graduellement en cristaux Apres avoir séparé les cristaux par filtration, on évapore la liqueur mère à petit volume pour obtenir un solide ( 100 g) qu'on recristallise ensuite dans l'acétone à l'ébullition ( 50 volumes) Apres refroidissement, il se forme des cristaux l 74 g, 83 % du diastéréoisomère (R) et 17 % du diastéréoisomère (S)l qu'on sépare par filtration On recristallise le solide une fois encore dans l'acétone à l'ébullition ( 50 volumes) pour obtenir 58,7 g de N-acétyl-L- leucinate de (R)-tétrahydropapavérine l 97 % d'isomère (R) et 3 % d'isomère (S)l. c) Dioxalate de (l R,l'R)-2,2 '-( 3,11-dioxo-4,10-dioxatri- décaméthylène)-bis-( 1,2,3,4-tétrahydro-6,7-diméthoxy-1- vératrylisoquinoléine). On dissout du N-acétyl-L-leucinate de (R)-l,2,3,4-tétrahydropapavérine ( 58,7 g) dans de l'eau et on y ajoute de l'ammoniaque aqueuse On extrait la base précipitée dans du toluène ( 600 ml) et après évaporation du solvant, on l'isole sous la forme d'une huile ( 39,0 g) On chauffe la (R)-l,2,3,4- tétrahydropapavérine base avec du diacrylate de 1,5-pentaméthylène ( 10, 7 g) et de l'acide acétique glacial ( 3,0 ml) à 70 C pendant 4 heures On dissout le mélange de réaction dans du toluène ( 400 ml) et on l'agite avec du gel de silice 60 (Merck, qualité pour colonne chromatographique, n 70 à 230), on filtre le tout et on évapore le liquide pour obtenir une huile jaune On dissout le produit dans de l'acétone ( 600 ml) et on y ajoute de l'acide oxalique ( 9,3 g) qui fait précipiter le dioxalate de (l R, 1 'R)-2,2 '-( 3,11-dioxo-4,10-dioxatridécaméthylène)- bis-( 1,2,3,4-tétrahydro-6,7-diméthoxy-l-vératryliso- quinoléine) sous la forme d'un solide blanc ( 54,2 g, rendement de 99 %), P F 125 C, hplc -97,8 %. d) Benzènesulfonate de (l R,l'R)-2,2 '-( 3,11-dioxo-4,10- dioxatridécaméthylène)-bis-( 1,2,3,4-tétrahydro-6,7- diméthoxy-2-méthyl-l-vératrylisoquinoléinium) lbésylate de (l R-l'R)-atracuriuml. On dissout du dioxalate de ( 1 R,l'R)-2,2 '-( 3,11- dioxo-4,10-dioxatridécaméthylène)-bis-( 1,2,3,4-tétrahydro- 6,7-diméthoxy-l-vératrylisoquinoléine) ( 54,0 g) dans de l'eau ( 1,6 litre) et on y ajoute du bicarbonate de sodium pour amener le p H à 7,0 On extrait la base précipitée dans du toluene ( 600 ml), puis on évapore le solvant pour recueillir une huile jaune très visqueuse ( 42,7 g) On fait réagir l'huile avec du benzènesulfonate de méthyle ( 75 ml) à la température ambiante jusqu'au lendemain On isole le produit, qui est le benzènesulfonate de (l R, l'R)-2,2 '-( 3,11- dioxo-4,10-dioxatridécaméthylêne)-bis-( 1,2,3,4-tétrahydro- 6,7-diméthoxy-2-méthyl-1-vératrylisoquinoléinium), par partage entre de l'eau et du toluène On lave la phase aqueuse encore avec deux aliquotes de toluène, puis on la soumet à la lyophilisation On obtient le produit ( 49,7 g, rendement de 80 %) sous la forme d'un solide jaune pâle. Le produit est un mélange d'isomères du bésylate de ( 1 R, 1 'R) -atracurium, à savoir l R-cis, 1 'R, R-cis 1 R-cis,1 'R- trans et l R-trans,l'R-trans dans un rapport de 58:34:6, respectivement. e) Méthanesulfonate de 1 R-cis, l'R-cis-2,2 ' ( 3,11-dioxo-4,10- dioxatridécaméthylène)-bis-( 1,2,3,4-tétrahydro-6,7-dimé- thoxy-2-méthyl-1-vératrylisoquinoléinium) lmésylate de (l R-cis,l'R-cis-atracurium) l. On dissout un mélange d'isomères de bésylate de (l R,l'R)-atracurium ( 10 g) obtenu au stade d) dans du dichlorométhane ( 50 ml) et on le pompe sur une colonne de chromatographie de 500 mm sur 50 mm en compression axiale garnie de 520 g de silice irrégulière de 20 à 45 dm, puis on élue la colonne avec un mélange de dichlorométhane, de méthanol et d'acide méthanesulfonique ( 80:20:0,5) On recueille les fractions de l'éluat de la colonne et on combine les fractions contenant l'isomère 1 R-cis,l'R-cis recherché qu'on lave avec de la saumure à 10 % On évapore la solution dans le dichlorométhane jusqu'à siccité, on dissout l'huile incolore résiduelle dans de l'eau et on ajuste le p H de la solution à 4, 0 avec de l'acide méthanesulfonique On lyophilise la solution aqueuse pour obtenir le composé annoncé au titre ( 5 g) se présentant sous la forme d'un solide qu'on identifie comme étant sensiblement exempt d'autres isomères géométriques et optiques du composé, à savoir sous la forme d'un mélange avec moins de 5 % p/p de ces isomères, en particulier moins de 3 % p/p de l'isomère l R-cis,l'S-trans correspondant et moins de 0,3 % p/p de l'isomère l R-cis,l'R- trans correspondant. EXEMPLE 2 - Benzènesulfonate de l R-cis,l'R-cis-2,2 '-( 3,11-dioxo-4,10- dioxatridécylène)-bis-( 1,2,3,4-tétrahydro-6,7-diméthoxy-2- méthylvératrylisoquinoléinium) lbésylate de (l R-cis,l'R-cis- atracurium) 1 l. On répète les stades a), b), c) et d) de l'exemple 1 On isole le produit obtenu au stade d) soit comme décrit, soit par chromatographie de la façon précisée ci-après. On dissout un mélange d'isomères de bésylate de (l R,l'R)-atracurium l 1,5 g des isomères recueillis au stade d) ou 3,5 g du mélange de réaction du stade d)l dans du dichlorométhane ( 10 ml) et on le pompe dans une colonne de chromatographie de 300 mm sur 25 mm en compression axiale garnie de 80 g de silice sphérique de 10 Am, puis on élue la colonne avec un mélange de dichlorométhane, de méthanol et d'acide benzènesulfonique 4000:500:0, 25 On collecte les fractions de l'éluat de la colonne et on combine les fractions contenant l'isomère l R-cis,1 'R-cis souhaité qu'on lave avec de la saumure à 10 % ou de l'eau On évapore la solution dans le dichlorométhane à siccité, on dissout l'huile ou le semi-solide résiduel incolore dans de l'eau et on ajuste le p H de la solution à environ 4, 0 avec une solution aqueuse d'acide benzènesulfonique On lyophilise la solution aqueuse pour obtenir le composé annoncé au titre ( 0,5 g) se présentant sous la forme d'un solide blanc qu'on identifie comme étant sensiblement exempt d'autres isomères géométriques et optiques du composé, à savoir sous la forme d'un mélange avec moins de 5 % p/p de ces isomères, en particulier moins de 3 % p/p de l'isomère 1 R-cis,l'S- trans correspondant et moins de 0,3 % p/p de l'isomère l R-cis,l'R- trans correspondant. Le produit donne l'analyse suivante à la 1 H RMN (CDC 13): S 1,52 (m, 7 CH 2-tridéca), 1,63 (m, 6 CH 2-tridéca, 8 CH 2-tridéca), 2,84 (m, 1/2-4 CH 2, 1/2-CH 2-vératryle), 3,15 (m, 1/2-4 CH 2), 3,22 (s, NCH 3), 3, 26 (m, 2 CH 2-tridéca, 12 CH 2-tridéca), 3,34 (s, OCH 3), 3,47 (m, 1/2-3 CH 2, 1/2-CH 2- vératryle), 3,58 (s, OCH 3), 3,73 ( 2 s, OCH 3, OCH 3), 3,84 (m, 1/2-3 CH 2), 3,95-4,24 (m, 5 CH 2-tridéca, 9 CH 2-tridéca, 1 CH 2- tridéca, 13 CH 2-tridéca), 4,86 (dd, J= 3,8 Hz, 1 H), 5,87 (s, 8 H), 6, 36 (dd, J= 8,2 Hz, 6 H-vératryle), 6,42 (d, J= 2 Hz, 2 H-vératryle), 6, 48 (s, 5 H), 6,59 (d, J= 8 Hz, 5 H-vératryle), 7,24 (m, méta & para-bésylate), 7,78 (m, ortho-bésylate). Tous les exemples suivants illustrent des compositions pharmaceutiques conformes à l'invention dans lesquelles le "constituant actif" est le bésylate de l R-cis,l'R-cis-atracurium conforme à l'invention. EXEMPLE 3 - Dose unitaire de solution injectable. Constituant actif Acide benzènesulfonique5 Eau pour injections q.s pour p H pour faire On dissout le constituant actif dans l'eau pour injections et on ajuste le p H de la solution résultante suivant les besoins avec l'acide On stérilise la solution par filtration et on l'introduit dans des ampoules stériles de 5 ml. EXEMPLE 4 - Solution injectable multidose. Constituant actif Acide benzènesulfonique Alcool benzylique Eau pour injections q.s pour p H pour faire On dissout le constituant actif et l'alcool benzylique dans l'eau pour injections et on ajuste le p H de la solution résultante suivant les besoins avec l'acide On stérilise la solution par filtration et on l'introduit dans des ampoules stériles de 10 ml. EXEMPLE 5 - Solution injectable lyophilisée. Constituant actif Acide benzènesulfonique Mannitol Eau pour injections q.s pour p H pour faire On dissout le constituant actif et le mannitol dans l'eau pour injections et on ajuste le p H de la solution résultante suivant les besoins avec l'acide On stérilise mg 3 à 4 ml mg 3 à 4 mg ml mg 3 à 4 62,5 mg 2,5 ml la solution par filtration et on l'introduit dans des fioles stériles, puis on la lyophilise. Evacuation pharmacologique. On a évalué le mésylate de l R-cis,l'R-cis- atracurium (dit ci-après composé A) de la façon décrite ci-dessous par comparaison avec le mélange habituel d'isomères géométriques et optiques (dit ci-après bésylate d'atracurium) pour déterminer l'activité de blocage neuromusculaire et l'effet sur le blocage sympathique et parasympathique. a) Méthodes et matériaux. On anesthésie des chats bâtards mâles (Southeastern Laboratories Animal Farm), d'un poids de 2,2 à 4,25 kg, à l'aide d'un mélange de pentobarbital sodique, 7 mg par kg i p, et d'alpha- chloralose, 80 mg par kg i p. On entretient des degrés appropriés d'anesthésie avec des doses supplémentaires d'alpha-chloralose administrées par voie intraveineuse suivant les besoins On canule la trachée et on ventile les animaux avec 20 ml par kg d'air ambiant au moyen d'une pompe respiratoire Harvard Apparatus réglée à 20 coups par minute On mesure la tension artérielle à l'aide d'une canule dans l'artère fémorale droite raccordée à un transducteur Statham P 23 On détermine le rythme cardiaque d'après un électrocardiogramme au moyen d'un tachographe Grass On dégage le nerf sympathique cervical droit, on le tranche à environ 5 cm depuis le ganglion cervical supérieur et on l'adapte à une électrode en platine bipolaire blindée On dégage le nerf vague droit, on l'écrase à environ 2 cm en direction du ganglion nodal et on l'adapte à une électrode en platine bipolaire blindée. On stimule le nerf sympathique cervical et le nerf vague * pendant 10 secondes toutes les 5 minutes avec un stimulateur Grass 588 en prenant les paramètres suivants: 20 Hz, durée 0,5 ms, tension supramaximale ( 10 à 15 volts) On enregistre les contractions isométriques de la membrane nictitante sous une tension de repos de 5 g avec un transducteur à déplacement de force Grass FT 03 et un appareil polygraphique Grass La tension de repos sur la membrane nictitante est de 5 g. On assujettit fermement la patte arrière gauche et on dégage le tendon du tibia qu'on attache à un transducteur à déplacement de force Grass FT 03 Après avoir tranché le tronc du nerf sciatique, on adapte le nerf péronier à une électrode en platine bipolaire blindée On applique ensuite des stimuli d'une durée de 0,2 ms sous un voltage supramaximal au nerf à une allure de 0,15 Hz avec un stimulateur Grass 588 On enregistre la tension de contraction dans le nerf sciatique poplité contre une tension de repos de 50 g. On dissout les composés expérimentaux dans de la solution physiologique salée tamponnée à un p H de 3,0 et on les conserve sur glace, puis on les administre avec une canule insérée dans la veine fémorale droite On surveille la température à l'oesophage avec une sonde à thermistance Yellow Springs et on maintient la température centrale entre 37 et 380 C au moyen d'un rayonnement calorifique On effectue tous les enregistrements sur un appareil polygraphique Grass modèle 7 Au terme des expériences, on euthanasie les chats par administration intraveineuse de KC 1 saturé ou de pentobarbital sadique. b) Résultats. On calcule la DE,, pour l'activité de blocage neuromusculaire d'après les courbes dose-réponse. On calcule de façon analogue la DE, et la DE 25 pour l'effet inhibiteur des composés, respectivement sur la stimulation parasympathique (nerf vague) et sympathique Les résultats sont résumés au tableau suivant. TABLEAU Composé DE 95 Rapport de Rapport de calc * l'inhibition l'inhibition (mg/kg) de 50 % du sympathique nerf vague à de 25 % à la la DE 95 DE 95 Bésylate 0,092 0,010 17 34 d'atracurium Composé A 0,062 0,008 27 60 * DE 95 calculée en mg/kg de base libre, sur la base du poids du cation atracurium. R E V E N D I C A T IONS 1 Sel de 1 R-cis, 1 'R-cis-atracurium sensiblement exempt de ses autres isomères géométriques et optiques. 2 Sel de l R-cis,l'R-cis-atracurium suivant la revendication 1, en mélange avec moins de 5 % p/p de ses autres isomères géométriques et optiques. 3. Sel de l R-cis,l'R-cis-atracurium suivant la revendication 2, en mélange avec moins de 2 % p/p de ses autres isomères géométriques et optiques. 4. Sel de 1 R-cis,l'R-cis-atracurium physiolo- giquement acceptable suivant l'une quelconque des revendications précédentes. 5. Mésylate ou bésylate de l R-cis,l'R-cis- atracurium suivant l'une quelconque des revendications 1 à 3. 6. Sel de 1 R-cis,l'R-cis-atracurium physiolo- giquement acceptable suivant l'une quelconque des revendications précédentes, à utiliser en thérapeutique chirurgicale ou médicale. 7. Sel de 1 R-cis,l'R-cis-atracurium physiolo- giquement acceptable suivant la revendication 6 pour induire le blocage neuromusculaire chez un animal. 8. Utilisation d'un sel de l R-cis,l'R-cis- atracurium physiologiquement acceptable suivant l'une quelconque des revendications 1 à 5 pour la fabrication d'un médicament pour induire le blocage neuromusculaire. 9. Composition pharmaceutique comprenant un sel de l R-cis,l'R-cisatracurium physiologiquement acceptable suivant l'une quelconque des revendications 1 à 5, conjointement avec un excipient physiologiquement acceptable. 10. Composition pharmaceutique suivant la revendication 9, adaptée à l'administration par injection ou perfusion. 11. Procédé de préparation d'un sel de l R-cis,l'R-cis- atracurium suivant la revendication 1, qui comprend l'exposition d'un sel de l R,l'R-atracurium correspondant à des conditions ou réactants servant à opérer l'isolement de l'isomère 1 R-cis,l'R-cis des isomères5 géométriques correspondants contenus dans ce sel de 1 R, l'R- atracurium.