Brevet FR2669338A1 — publié le 19920522

La présente invention est relative à des fragments peptidiques issus de la protéine externe du VIF (virus de l'immunodéficience féline) et à leur application dans le diagnostic de l'immunodéficience féline ; la présente invention est également relative à des anticorps anti-fragments peptidiques ainsi qu'à leurs applications au diagnostic et au traitement de l'immunodéficience féline. L'immunodéficience féline est due à un lentivirus, le virus de l'immunodéficience féline (VIF), qui présente une structure génétique similaire à celle des lentivirus des primates (VIH et VIS). L'étude de l'immunodéficience féline, notamment dans les populations de chats domestiques, peut permettre, d'une part un diagnostic rapide de cette maladie chez ces animaux et d'autre part, un traitement vis-à-vis de cette maladie ainsi qu'un modèle d'évaluation d'immunoconjugués vis-à-vis de cellules infectées par le VIF. En effet, à l'heure actuelle, l'immunodéficience féline est essentiellement diagnostiquée lors de l'apparition des signes cliniques (lymphadénopathie généralisée et augmentation de la survenue d'infections opportunistes), alors qu'un diagnostic très précoce aurait des avantages importants tant dans le traitement que dans la prévention de cette maladie chez les chats domestiques, qui représentent une population très importante. R.L. TALBOTT et al . (Natl. Acad. Sci. USA, 1989, 86, 5743-5747) ont décrit la séquence nucléotidique d'une souche du VIF, la souche Petaluma, et précisent que le provirus intégré a une longueur totale de 9 472 paires de bases et possède la capacité de codage pour plusieurs protéines ; en particulier il est précisé que la région gag code pour les antigènes du coeur du virus, la région pol code pour une protéase, une transcriptase réverse et une endonucléase et la région env code pour les glycoprotéines majeures et mineures de l'enveloppe virale. R.A. OLMSTED et al. (Proc. Natl. Acad. Sci. USA, vol. 86, p. 8088-8092, octobre 1989) ont, par ailleurs, décrit la séquence d'un clone d'ADN proviral infectieux (VIF-14), du VIF. T. MIYAZAWA et al. (Arch. Virol., 1989, 108, 59-68) ont décrit deux souches de VIF, d'origine japonaise, dénommées VIF TM 1 et VIF TM 2 ; les protéines structurales de TM 1 et de TM 2 ont été comparées en analyse par immunoblotting avec celles de la souche Petaluma ; les souches TM 1 et TM 2 présentent un certain nombre de protéines de structure communes avec la souche Petaluma (bandes 48, 44, 40, 28 et 17 kDa) et deux protéines de structure distinctes (bandes à 130 kDA et à 13 kDa). T. MIYAZAWA et al. (Arch. Virol., 1989, 108, 131-135) ont mis au point une lignée cellulaire permettant la réplication du VIF ; il s'agit de cellules lymphoblastiques T félines, dépendantes de l'interleukine 2 et dénommées cellules MYA-1. Bien qu'un certain nombre d'études aient été réalisées, notamment en ce qui concerne la souche Petaluma du VIF, le diagnostic précoce de l'immunodéficience féline est actuellement fort coûteux ; de plus, les kits existants sont très peu sensibles et leur manipulation comporte des risques biologiques pour l'utilisateur, par exemple le kit "PETCHECK" (AGRITECH SYSTEMS INC.), dans lequel les plaques de microtitration sont recouvertes de FIV inactivé chimiquement. La présente invention s'est en conséquence donné pour but de pourvoir à des fragments peptidiques, issus de la protéine externe du VIF qui répondent mieux aux besoins de la pratique, notamment en permettant la mise au point de tests diagnostics hautement spécifiques ne comportant pas de risques pour l'utilisateur, per mettant un diagnostic préclinique de l'immunodéficience féline et peu coûteux, ainsi que la préparation d'anticorps à visée thérapeutique et/ou préventive et/ou diagnostique, également hautement spécifiques d'un épitope immunodominant de l'immunodéficience féline due au VIF. La présente invention a pour objet un fragment peptidique, caractérisé en ce qu'il comprend une portion d'une protéine externe du virus de l'immunodéficience féline (VIF), en ce qu'il comprend entre 5 et 50 aminoacides et en ce qu'il est reconnu au moins par les anticorps produits lors d'une infection et/ou lors d'une inoculation par l'une quelconque des souches de VIF. Selon un mode de réalisation avantageux dudit fragment peptidique, lesdites souches sont notamment choisies dans le groupe qui comprend la souche Petaluma, la souche FIV-14 issue d'un clone moléculaire, les souches françaises M.E ou W.O et les souches japonaises TM 1 ou TM 2. Selon une disposition avantageuse de ce mode de réalisation, ledit peptide comprend au moins une portion de la séquence de la protéine externe d'un VIF de souche Petaluma comprise entre l'aminoacide 66 et l'aminoacide C-terminal. Selon une modalité avantageuse de cette disposition, ledit fragment peptidique comprend 19 aminoacides, contient au moins un épitope immunogène de ladite protéine externe du VIF et présente la formule I suivante Asn-Gln-Thr-Cys-Met-Trp-Asn-Thr-Ser-Gln-Ile-Gln-Asp-Pro Glu-Ile-Pro-Lys-Cys. (I). Ce fragment peptidique de formule I est dénommé ci-après peptide 99. Selon une autre modalité avantageuse de cette disposition, ledit fragment peptidique comprend 22 aminoacides, contient au moins un épitope immunogène de ladite protéine externe du VIF et présente la formule II suivante Tyr-Leu-Val-Val-Pro-Glu-Glu-Val-Met-Glu-Tyr-Lys-Pro-Arg Arg-Lys-Arg-Ala-Ala-Ile-His-Val. (11). Ce fragment peptidique de formule II est dénommé ci-après peptide 100. Selon une autre modalité avantageuse de cette disposition, ledit fragment peptidique comprend 25 aminoacides, contient au moins un épitope immunogène de ladite protéine externe du VIF et présente la formule III suivante Val-Ile-Ala-Met-Pro-Glu-Val-Glu-Gly-Glu-Glu-Ile-Gln-Pro- Gln-Met-Glu-Leu-Arg-Arg-Asn-Gly-Arg-Gln-Cys (III). Ce fragment peptidique de formule III est dénommé ci-après peptide 102. Selon une autre modalité avantageuse de cette disposition, ledit fragment peptidique comprend 26 aminoacides et présente la formule IV suivante Leu-Arg-Asn-G1u- I le-Gln-Glu-Val-Lys-Leu-Glu-Glu-Gly-Asn- Ala-Gly-Lys-Phe-Arg-Arg-Ala-Arg-Phe-Leu-Arg-Tyr (IV) Ce fragment peptidique de formule IV est dénommé ci-après peptide 101. Selon une autre modalité avantageuse de cette disposition, ledit fragment peptidique comprend 28 aminoacides et présente la formule V suivante Leu-Gln-Gly-Lys-Ile-Asn-Ile-Ser-Leu-Cys-Leu-Thr-Gly-Gly- Lys-Net-Leu-Tyr-Asn-Lys-Val-Thr-Lys-Gîn-Leu-Ser-Tyr-Cys (V) Ce fragment peptidique de formule V est dénommé ci-après peptide 103. On entend, au sens de la présente invention, par fragment peptidique aussi bien les séquences d'aminoacides telles que définies ci-dessus, que ces mêmes séquences modifiées (sites potentiels de glycosylation, acylation notamment). Ces différents fragments peptidiques peuvent notamment être obtenus par synthèse, en particulier par la méthode de Merrifield (Science, 1965, 150, 178-184). Lesdits fragments peptidiques peuvent également être préparés par génie génétique (expression du gène approprié chez les procaryotes ou les eucaryotes). La présente invention a également pour objet des anticorps dirigés contre les fragments peptidiques conformes à l'invention, caractérisés en ce qu'ils sont obtenus par immunisation d'un animal approprié avec au moins un fragment peptidique conforme à l'invention, lesquels anticorps présentent une affinité pour ledit peptide, et sont aptes à reconnaître la protéine externe du VIF, le VIF et/ou les cellules exprimant le VIF ou ladite protéine externe du VIF. Selon un mode de réalisation avantageux desdits anticorps, ce sont des anticorps polyclonaux. Selon un autre mode de réalisation avantageux desdits anticorps, ce sont des anticorps monoclonaux. Les anticorps monoclonaux anti-fragment peptidique sont avantageusement obtenus, d'une manière connue en elle-même, par fusion de cellules spléniques de souris immunisées par un antigène constitué par un fragment peptidique tel que défini ci-dessus, avec des cellules myélomateuses appropriées. Selon un autre mode de réalisation, les fragments peptidiques sont avantageusement ceux qui comprennent un épitope immunogène et notamment les fragments 99, 100 ou 102 tels que décrits ci-dessus. La présente invention a également pour objet un réactif immunologique utilisable pour la détection, le diagnostic et le suivi de l'immunodéficience féline, caractérisé en ce qu'il est choisi dans le groupe qui comprend les fragments peptidiques et les anticorps antipeptide conformes à l'invention, ou un fragment de ceux ci, éventuellement associé à une autre substance, notamment une enzyme. La présente invention a également pour objet un procédé de détection et/ou de diagnostic de l'immunodéficience féline, caractérisé en ce qu'il consiste à détecter les anticorps éventuellement présents dans un fluide biologique tel que le sang, en mettant en présence ledit fluide avec au moins un fragment peptidique approprié conforme à l'invention, auquel se lient les anticorps anti-VIF, si de tels anticorps sont présents dans l'échantillon biologique à contrôler, la lecture du résultat étant révélé par un moyen approprié, notamment RIA, EIA ou cytométrie en flux. Le procédé conforme à l'invention, utilisant les fragments peptidiques ci-dessus définis, permet d'une part d'obtenir une sensibilité nettement améliorée par rapport aux procédés de l'Art antérieur, dans la mesure où l'on peut obtenir un résultat facilement interprétable avec des sérums dilués jusqu'au 1/200ème et d'autre part, d'effectuer les dosages à partir de très petites quantités d'échantillons. La présente invention a également pour objet un kit ou trousse de diagnostic pour la détection, le diagnostic ou le suivi de l'immunodéficience féline, caractérisé en ce qu'il comprend - un support solide approprié revêtu d'un fragment peptidique conforme à l'invention, - des quantités ou doses appropriées de conjugué choisi dans le groupe qui comprend les conjugués enzyme appropriée-anticorps anti-Ig félins appropriés et les conjugués enzyme appropriée-anticorps anti-peptide conforme à l'invention, - des quantités ou doses appropriées d'une substance de révélation convenable. On peut citer notamment comme substance de révélation appropriée, notamment l'ABTS. On peut citer comme support approprié, notamment des plaques de microtitration "NUNC-IMMUNO PLATE MAXISORP" toutefois d'autres supports tels que des billes, des sticks, des bandelettes pourraient également être utilisés. On peut citer comme enzyme appropriée, notamment la peroxydase, la phosphatase alcaline ou toute autre enzyme utilisable comme marqueur dans un test ELISA. Dans le cas d'une méthode directe, par exemple, les anticorps anti-VIF du chat se fixent au peptide conforme à l'invention, préalablement fixé au support solide et des conjugués enzyme appropriée-anticorpsanti-Ig félins appropriés par exemple, et ce de manière non limitative, de la peroxydase liée à l'anticorps de chèvre anti-IgG (H+L) de chat (KIRKEGAARD & PERRY LABORATORIES) sont introduits, se lient avec les Ig du chat et sont ensuite révélés de manière appropriée. Dans le cas d'une méthode indirecte, par exemple, des conjugués enzyme appropriée-anticorps antipeptide conforme à l'invention entrent en compétition avec les anticorps du chat infecté, pour se lier au support solide revêtu d'un peptide conforme à l'invention. La présente invention a, de plus, pour objet un procédé d'identification de souche de VIF, caractérisé en ce que l'on met en contact un échantillon à analyser, notamment un fluide biologique avec un panel de fragments peptidiques conformes à l'invention, et en ce que l'on détermine par tout moyen approprié le/les fragments peptidiques qui se sont éventuellement liés aux anticorps produits par la souche à détecter. La présente invention a également pour objet des agents à visées thérapeutiques et/ou préventives, caractérisés en ce qu'ils sont constitués par, ou comprennent en tant que constituant actif, un peptide conforme à l'invention et/ou leurs fragments, seuls ou conjugués ou associés à d'autres substances. La présente invention a également pour objet des agents à visée thérapeutique et/ou préventive, caractérisés en ce qu'ils sont constitués par, ou comprennent en tant que constituant actifs, des anticorps anti-peptide conforme à l'invention et/ou leurs fragments, seuls ou conjugués avec d'autres substances. Selon un mode de réalisation avantageux desdits agents, ils sont associés à une enzyme oxydative. Selon une disposition avantageuse de ce mode de réalisation, lesdites enzymes sont choisies dans le groupe qui comprend les enzymes oxydatives générant de l'oxygène actif et les enzymes oxydatives dont le substrat est de l'oxygène actif et un halogénure. Selon une modalité avantageuse de cette disposition, les enzymes oxydatives générant de l'oxygène actif sont choisies dans le groupe qui comprend la glucose oxydase (GO), la NADPH oxydase, la xanthine oxydase, notamment la xanthine oxydase du lait, la cholestérol oxydase, la choline oxydase, l'acide lactique oxydase, la pyruvate oxydase. Selon une autre modalité avantageuse de cette disposition, les enzymes oxydatives dont le substrat est de l'oxygène actif et un halogénure sont choisies dans le groupe qui comprend la lactoperoxydase (LPO), la myéloperoxydase, notamment la myéloperoxydase des neutrophiles, la peroxydase des éosinophiles, et la peroxydase salivaire. Le terme conjugué signifie que l'enzyme et le ligand sont connectés par des liaisons covalentes. Ceci est accompli par des moyens connus en soi et généralement appliqués aux anticorps marqués avec des enzymes pour les tests ELISA, typiquement en utilisant des réactifs de liaison bifonctionnelle tels que le SDDP, et le 2-iminothiolane. De tels immunoconjugués peuvent également être obtenus en couplant, par génie génétique, les gènes VH et VL des anticorps avec les gènes de l'enzyme appropriée. De tels immunoconjugués et notamment une utilisation en tandem (anticorps-enzymes oxydatives générant de l'oxygène actif, GO par exemple et anticorps-enzymes oxydatives dont le substrat est de l'oxygène actif et un halogénure, LPO par exemple) permet de détruire spécifiquement les cellules infectées par le VIF, tout en réduisant la destruction de cellules non ciblées, tant in vitro qu'in vivo. Dans le cas du tandem anticorps-GO/anticorps LPO, par exemple, le principe de base de l'utilisation de ces immunoconjugués est qu'en présence de glucose, la glucose oxydase produit 1'H202 qui est le substrat de la lactoperoxydase. Cette enzyme catalyse ensuite l'oxydation du Nal (ajouté au milieu au même titre que le glucose) en radicaux libres. Les radicaux libres étant hautement toxiques pour les cellules, ils détruisent un grand nombre d'espèces moléculaires indispensables au fonctionnement et à la multiplication des cellules. La présente invention a, de plus, pour objet un modèle d'évaluation de l'efficacité d'immunoconjugués, caractérisé en ce qu'il comprend - des cellules de chat aptes à développer le VIF et/ou infectées ou inoculées par ledit virus, et - des immunoconjugués comprenant des enzymes oxydatives couplées à des anticorps choisis dans le groupe qui comprend les anticorps anti-VIF et les anticorps anti-peptide conformes à l'invention. Conformément à l'invention, les cellules aptes à développer le VIF et/ou infectées ou inoculées par ledit virus sont notamment des cellules mononucléaires de chats infectés, des cellules lymphoïdes primaires et des lignées lymphoblastiques T félines, notamment les lignées MYA-1, telles que décrites par T. MIYAZAWA et al.. Un tel modèle est notamment utilisable pour évaluer l'efficacité desdits immunoconjugués vis-à-vis notamment du virus de l'immunodéficience humaine (VIH). La présente invention a également pour objet un procédé d'évaluation de l'efficacité d'immunoconjugués, caractérisé en ce que des immunoconjugués comprenant des enzymes oxydatives couplées à un anticorps approprié choisi dans le groupe qui comprend les anticorps anti-VIF et les anticorps anti-peptide conformes à l'invention sont mis en contact avec des cellules de chat aptes à développer le VIF et infectées ou inoculées par ledit virus et en ce que la toxicité desdits immunoconjugués vis-à-vis desdites cellules, dites cellules cibles, est mesurée par tout moyen approprié. Un tel procédé est notamment applicable à l'évaluation de l'efficacité desdits immunoconjugués visà-vis notamment du VIH. Outre les dispositions qui précèdent, l'invention comprend encore d'autres dispositions qui ressortiront de la description qui va suivre, qui se réfère à des exemples de mise en oeuvre du procédé objet de la présente invention. Il doit être bien entendu, toutefois, que ces exemples sont donnés uniquement à titre d'illustration de l'objet de l'invention, dont ils ne constituent en aucune manière une limitation. EXEMPLE 1 : Test témoin : ELISA réalisé sur des sérums de chats non infectés. a. Protocole opératoire 50 Al contenant 0,25 Rg d'un peptide contenant un épitope immunodominant de la protéine externe du VIF (peptides 99, 100 ou 102) ou d'un peptide dit témoin négatif, c'est-à-dire ne contenant pas d'épitope immunodominant de la protéine externe du VIF (peptides 101 et 103), dans du carbonate de sodium 0,1 M, pH 9,6 sont adsorbés sur les puits d'une plaque de microtitration "NUNC-IMMUNO PLATE MAXISORP" contenant 96 puits pendant une nuit à 4"C. Les puits sont lavés 3 fois avec un tampon phosphate à pH 7,4 (PBS). Les sites d'adsorption résiduels sur les plaques de microtitration sont saturés par incubation avec 100 1 de PBS contenant 1 % de lait et du Tween 20 (0,1 %) pendant 1 heure. 50 1 de sérum à tester dilué du 1/20ème au 1/200ème (pour la présence éventuelle d'anticorps anti-VIF) est incubé dans les puits pendant 1 heure à température ambiante. Après 3 lavages avec un mélange de PBS, lait 1 % et Tween 20 0,1 %, on ajoute dans les puits un conjugué peroxydase-anticorps de chèvre anti-IgG (H+L) de chat dilué 1000 fois et on incube 1 heure à température ambiante.Après lavage de la plaque de microtitration deux fois avec du PBS, le conjugué peroxydase adsorbé est visualisé avec un substrat consistant en 2,2'-azino-bis(3-éthylbenzthiazoline-6-acide sulfonique) (ABTS) 0,4 mM final dans un tampon acétate 0,6 % final, pH 4,7 et 10 Wl d'H202 à 30 % par 10 ml de milieu de réaction. Lorsque enzyme du conjugué est de la glucose oxydase, la visualisation est réalisée directement avec un substrat consistant en 300 Rl de glucose (18 %), de L'ABOTS 0,4 mM final dans un tampon acétate 0,6 % final, pH 4,7 et 2 g de peroxydase. Le produit de réaction est mesuré à l'aide d'un colorimètre, à 405 nm. Le test ELISA lui-même est mis en oeuvre comme spécifié dans l'article paru dans Immunoenzym. Techn., 1983, p. 307, au nom de HOEBEKE J. et al. (S. AVRAMEAS et al. Editeurs). b. Résultats TABLEAU I SERUMS Peptide Peptide Peptide Peptide Peptide 99 100 101 102 103 Chats non infectés par le VIF (témoins) CTD 28652 - - - - CTD 28629 - - - - CTD 28632 - - - - CTD 28632 - - - - CTD 29409 - - - - CTD 29498 - - - - CTD 29920 - - - - CTD 29925 - - - - CTD 29939 - - - - CTD 29941 - - - - CTD 29944 - - - - l Chat diagnostiqué 2 numéro de sérum Il ressort de ce Tableau que les chats non infectés, ne produisent pas d'anticorps anti-VIF dans leur sérum ; il n'y a donc aucune liaison avec les différents fragments peptidiques EXEMPLE 2 : Test ELISA réalisé chez des chats infectés par le VIF. a. Protocole opératoire Le protocole opératoire est identique à celui de l'exemple 1. b. Résultats TABLEAU II SERUMS Peptide Peptide Peptide Peptide Peptide 99 100 102 103 104 Chats infectés naturelle ment par le VIF CTD1 282612 - + - + - CTD 28518 - + - + CTD 28256 - + - - CTD 28554 + + - - CTD 28565 + + - + CTD 28646 + + - + CTD 29376 + + - + CTD 29290 + + - + CTD 29494 + + - - CTD 29536 + + - - CTD 29459 + + - - CTD 29463 + + - + CTD 29412 + + - + CTD 29590 + + - + CTD 29542 + + - + CTD 29576 + + - - CTD 29560 + + - + CTD 28888 + + - + CTD 28889 + + - - CTD 28905 + + - + CTD 28912 + + - + CTD 28797 + + - + CTD 28827 + + - - CTD 28845 + + - + CTD 28921 + + - + CTD 28933 + + - + CTD 28943 + + - + CTD 29029 + + - + CTD 29864 + + - + CTD 29940 + + - - CTD 29942 + + - - CTD 29945 + + - - 1 Chat diagnostiqué 2 numéro de sérum Il ressort de ce Tableau que les chats infectés naturellement, quelle que soit la souche et la phase de l'infection, produisent des anticorps anti-VIF dans leur sérum, lesquels anticorps reconnaissent les fragments peptidiques 99, 100 et 102 conformes à l'invention. EXEMPLE 3 : Chats inoculés par la souche française de VIF, dénommée M.E a. Protocole opératoire Le protocole opératoire est identique à celui de l'exemple 1. b. Résultats TABLEAU III SERUMS Peptide Peptide Peptide Peptide Peptide 99 100 101 102 103 Chats inoculés par la souche M.E : CTF1 PLUa2 - + - + CTF PLUB - + - + CTF PIA - + - + CTF MAN - + - + CTF BIAa - - - + CTF BIAb - - - + Chats avant inoculation:: CTF PLUo - - - - CTF BIAo - - - - CTF MANo - - - - CTF PIAo - - - - Chats, souches françaises 2 Initiales du chat : o, a, b correspondent à des durées d'infection différentes, pour un même chat. EXEMPLE 4 : Chats inoculés par la souche française de VIF, dénommée W.O a. Protocole opératoire Le protocole opératoire est identique à celui de l'exemple 1. b. Résultats TABLEAU IV SERUMS Peptid Peptide Peptide Peptid Peptide 99 100 101 102 103 Chats inoculés par la souche W.O: CTF1 SOU2 - + - + - CTF VRI - + - + + + - + Chats avant inoculation: CTF VRI - - - - Chats, souches françaises 2 Initiales du chat EXEMPLE 5 : Chats inoculés par la souche Petaluma. TABLEAU V SERUMS Peptide Peptide Peptide Peptide Peptide 99 100 101 102 103 Chats ino culés par la souche Petaluma : 2 mois après inoculation (7G) : - + - + 6 mois après inoculation (4 D) : - + - + 6 mois après inoculation (10 J) : - + - + 1 an après inoculation (140) : - + - + Les Tableaux III à V ci-dessus suggèrent les commentaires suivants - les anticorps produits par les chats inoculés par les différentes souches se lient aux peptides 100 et 102 conformes à l'invention, - le peptide 99, conforme à l'invention, n'est pas reconnu par les anticorps produits contre des souches du VIF inoculés, alors qu'il est reconnu par des anticorps de sérums de chats infectés naturellement par le VIF. Cette différence semble refléter le stade ou la nature de l'infection et/ou de l'inoculation. EXEMPLE 6 : Titrations des premiers sérums (saignée après le premier rappel) de lapins immunisés avec les peptides P99 et P100 conjugués à la KLH ou à la BSA, les plaques de microtitration étant sensibilisées avec les peptides P99 et P100 libres. a. Protocole opératoire Le protocole opératoire est identique à celui de l'exemple 1, à l'exception du fait que le conjugué est, en ce cas, un conjugué peroxydase-anticorps de chèvre anti-Ig de lapin. b. Résultats TABLEAU VI DILU- P99- P99- P100- P99- TEMOIN TEMOIN TIONS KLH6a KLH5b KLH4 BSA P99 P100 1-10 0,597 0,309 0,817 0,423 0,479 0,069 1/20 0,595 0,367 0,926 0,469 0,482 0,044 1/40 0,671 0,507 0,891 0,438 0,299 0,028 1/80 0,703 0,561 0,897 0,338 0,286 0,031 1/160 0,685 0,542 0,711 0,255 0,202 0,025 1/320 0,540 0,331 0,520 0,121 0,137 0,016 1/640 0,248 0,176 0,364 0,032 0,099 0,005 1/1280 0,091 0,085 0,266 0,023 0,065 0,003 1/2560 0,086 0,060 0,138 0,006 0,040 0,012 1/5120 0,044 0,000 0,097 0,000 0,035 0,011 1/10240 0,020 0,000 0,079 0,000 0,036 0,010 1/20480 0,004 0,000 0,041 0,000 - 1/40960 0,000 0,000 0,027 0,000 - Sensibi lisation des pla ques ELISA avec : P99 P99 P100 P99 P100 P99 libre libre libre libre libre libre 1 Test ELISA sur un lapin immunisé par le peptide 100 et sensibilisation de la plaque par le peptide 99. 2 Test ELISA sur un lapin immunisé par le peptide 99 et sensibilisation de la plaque par le peptide 100. 3 Lapin immunisé avec le peptide 99 couplé par le N-succinimidyl 4-maléimidobutyrate (GMBS) à la protéine porteuse BSA. 4 Lapin immunisé avec le peptide 100 couplé par ie glutaraldéhyde à la protéine porteuse KLH. 5 Deuxième lapin immunisé avec le peptide 99 couplé par le glutaraldéhyde à la protéine porteuse KLH. 6 Premier lapin immunisé avec le peptide 99 couplé par le glutaraldéhyde à la protéine porteuse KLH. La figure 1 représente les résultats obtenus au Tableau VI ci-dessus, à savoir les titrations des premiers sérums de lapins immunisés avec les peptides P99 et P100 conjugués à la KLH ou à la BSA, les plaques de microtitration étant sensibilisées avec les peptides P99 et P100 libres. Cette figure comprend en ordonnée les densités optiques à 405 nm et en abscisse les dilutions des sérums (échelle log). Les courbes (1) et (2) correspondent aux témoins P99 et P100, la courbe (3) fournit les titrations d'un sérum de lapin immunisé avec le conjugué P99-BSA, la courbe (4) fournit les titrations d'un sérum de lapin immunisé avec le conjugué P100-KLH et les courbes (5) et (6) fournissent les titrations d'un sérum de lapin immunisé avec le conjugué P99-KLH. EXEMPLE 7 : Titrations des premiers sérums (saignée après le premier rappel) de lapin immunisés avec les peptides P99 et P100 conjugués à la KLH ou à la BSA, les plaques de microtitration étant sensibilisées avec les peptides P99 et P100 conjugués. TABLEAU VII ~~~ DILU- P99- P99- P99 P100- TEMOIN TEMOIN TIONS BSA KLH a6 KLH b5 KLH4 P99 P100 1/10 0,608 0,804 0,483 0,808 0,147 0,210 1/20 0,598 0,729 0,624 0,726 0,062 0,199 1/40 0,608 0,783 0,515 0,760 0,050 0,125 1/80 0,581 0,832 0,754 0,702 0,056 0,125 1/160 0,599 0,802 0,694 0,685 0,057 0,073 1/320 0,421 0,813 0,635 0,517 0,032 0, 051 1/640 0,242 0,632 0,318 0,443 0,028 0,027 1/1280 0,208 0,436 0,315 0,297 0,015 0,030 1/2560 0,178 0,361 0,290 0,175 0,001 0,026 1/5120 0,101 0,197 0,214 0,125 - 0,013 1/10240 0,095 0,144 0,152 0,123 - 0,005 1/20480 0,045 0,048 0,151 0,049 - 1/40960 0,026 0,034 0,043 0,037 - 1/81920 0,023 0,020 0,041 0,027 - - 1/163840 0,024 0,018 0,047 0,022 - 1/327680 0,026 0,025 0,031 0,021 - Sensibi lisation des plaques avec : P99- P99- P99- P100- P1OQ- P99 KLH a7 BSA8 BSA8 BSA9 BSA BSA8 1, 2, 3, 4, 5 et 6 ont la même signification qu'au Tableau VI ci-dessus. 7 Peptide 99 couplé par le glutaraldéhyde à la protéine porteuse KLH. 8 Peptide 99 couplé par le N-succinimidyl 4maléimidobutyrate (GMBS) à la protéine porteuse BSA. 9 Peptide 100 couplé par le glutaraldéhyde à la protéine porteuse BSA. La figure 2 représente les résultats obtenus au Tableau VII ci-dessus, à savoir les titrations des premiers sérums de lapins immunisés avec les peptides P99 et P100 conjugués à la KLH ou à la BSA, les plaques de microtitration étant sensibilisées avec les peptides P99 et P100 conjugués. Cette figure comprend en ordonnée les densités optiques à 405 nm et en abscisse les dilutions des sérums (échelle log). Les courbes (1) et (2) correspondent aux témoins P99 et P100, la courbe (3) fournit les titrations d'un sérum de lapin immunisé avec le conjugué P99-BSA, la courbe (4) fournit les titrations d'un sérum de lapin immunisé avec le conjugué P100-KLH et les courbes (5) et (6) fournissent les titrations d'un sérum de lapin immunisé avec le conjugué P99-KLH. EXEMPLE 8 : Titrations des deuxièmes sérums (saignée après le deuxième rappel des mêmes lapins que ceux des Exemples 6 et 7) de lapins immunisés avec les peptides P99 et P100 conjugués à la KLH ou à la BSA, sensibilisés avec les peptides P99 et P100 libres. TABLEAU VIII DILU- P99- P99- P100 P99- TEMOIN TEMOIN TIONS KLH a6 KLH B5 KLH4 BSA P99 P100 1/10 0,815 0,700 0,817 0,423 0,127 0,240 1/20 0,812 0,725 0,978 0,666 0,11, 0,133 1/40 0,820 0,732 0,952 0,626 0,065 0,092 1/80 0,775 0,708 0,960 0,593 0,05 0,063 1/160 0,752 0,702 0,879 0,584 0,06 0,049 1/320 0,750 0,689 0,801 0,573 0,045 0,035 1/640 0,535 0,565 0,739 0,498 0,045 0,031 1/1280 0,434 0,459 0,697 0,350 0,085 0,035 1/2560 0,298 0,350 0,590 0,325 0,080 0,034 1/5120 0,201 0,302 0,468 0,178 0,05 0,026 1/10240 0,156 0,189 0,363 0,110 0,027 0,021 1/20480 0,103 0,110 0,173 0,079 - 1/40960 0,089 0,071 0,142 0,055 - 1/81920 0,058 0,046 0,111 0,053 - - 1/163840 0,045 0,047 0,082 0,051 - - 1/327680 0,033 0,046 0,062 0,050 - Sensibi lisation des plaques ELISA avec : P 99 P 99 P 100 P 99 P 100 P 99 libre libre libre libre libre libre 1, 2, 3, 4, 5 et 6 ont la même signification qu'au Tableau VI ci-dessus. La figure 3 représente les résultats obtenus au Tableau VIII ci-dessus, à savoir les titrations des deuxièmes sérums de lapins immunisés avec les peptides P99 et P100 conjugués à la KLH ou à la BSA, les plaques de microtitration étant sensibilisées avec les peptides P99 et P100 libres. Cette figure comprend en ordonnée les densités optiques à 405 nm et en abscisse les dilutions des sérums (échelle log). Les courbes (1) et (2) correspondent aux témoins P99 et P100, la courbe (3) fournit les titrations d'un sérum de lapin immunisé avec le conjugué P99-BSA, la courbe (4) fournit les titrations d'un sérum de lapin immunisé avec le conjugué P100-KLH, les courbes (5) et (6) fournissent les titrations d'un sérum de lapin immunisé avec le conjugué P99-KLH. EXEMPLE 9 : Titrations des deuxièmes sérums (saignée après le deuxième rappel des mêmes lapins que ceux des Exemples 6 et 7) de lapins immunisés avec les peptides P99 et P100 conjugués à la KLH ou à la BSA, sensibilisés avec les peptides P99 et P100 conjugués. TABLEAU IX DILU- P99- P99- P99 P100- TEMOIN TEMOIN TIONS BSA KLH a6 KLH b5 KLH4 P99 P100 1/10 0,835 0,804 1,057 0,859 0,492 0,292 1/20 0,861 0,879 0,950 0,881 0,488 0,258 1/40 0,829 0,902 0,970 0,731 0,520 0,205 1/80 0,825 0,924 0,980 0,856 0,330 0,189 1/160 0,789 0,960 1,021 0,836 0,258 0,112 1/320 0,785 0,904 0,956 0,779 0,201 0,088 1/640 0,658 0,879 0,837 0,669 0,196 0,066 1/1280 0,528 0,751 0,805 0,571 0,140 0,038 1/2560 0,415 0,735 0,742 0,510 0,098 1/5120 0,284 0,645 0,573 0,480 0,035 1/10240 0,249 0,482 0,568 0,350 0,020 1/20480 0,158 0,335 0,445 0,174 - 1/40960 0,101 0,184 0,425 0,092 - 1/81920 0,078 0,135 0,298 0,069 - 1/163840 0,115 0,102 0,245 0,065 - 1/327680 0,080 0,065 0,244 0,061 - Sensibi lisation des plaques ELISA avec : P99- 7 P99- P99- P 10- Pl0- P99 KLH a7 BSA8 BSA8 BSA BSA BSA8 1, 2, 3, 4, 5 et 6 ont la même signification qu'au Tableau VI ci-dessus. 7, 8, et 9 ont la même signification qu'au Tableau VII cidessus. La figure 4 représente les résultats obtenus au Tableau IX ci-dessus, à savoir les titrations des deuxièmes sérums de lapins immunisés avec les peptides P99 et P100 conjugués à la KLH ou à la BSA, les plaques de microtitration étant sensibilisées avec les peptides P99 et P100 conjugués. Cette figure comprend en ordonnée les densités optiques à 405 nm et en abscisse les dilutions des sérums (échelle log). Les courbes (1) et (2) correspondent aux témoins P99 et P100, la courbe (3) fournit les titrations d'un sérum de lapin immunisé avec le conjugué P99-BSA, la courbe (4) fournit les titrations d'un sérum de lapin immunisé avec le conjugué P100-KLH et les courbes (5) et (6) fournissent les titrations d'un sérum de lapin immunisé avec le conjugué P99-KLH. EXEMPLE 10 : Préparation drimmunoconjugués comportant un anticorps antipeptide. De tels immunoconjugués ont comme cibles à la fois les cellules infectées par le VIF et le VIF luimême. a) Préparation de glucose oxydase conjuguée à un anticorps antipeptide conforme à l'invention Un anticorps polyclonal conforme à l'invention purifié à partir du sérum de lapin immunisé comme spécifié aux Exemples 6 à 9 ou un anticorps monoclonal conforme à l'invention, préparé de manière connue en soi, par immunisation d'un mammifère approprié, notamment et ce de manière non limitative, des souris Balb/c, avec un fragment peptidique conforme à l'invention, puis fusion des cellules spléniques avec des cellules myélomateuses appropriées conformément au protocole décrit par KOHLER et MILSTEIN, lequel anticorps monoclonal est couplé à de la glucose oxydase en utilisant du N-succinimidyl 3(2pyridyl-dithio)propionate (SPDP) (PIERCE) et du 2iminothiolane (PIERCE) selon le protocole suivant a.l.Modification de la glucose oxydase La glucose oxydase (4 mg/ml) dans un tampon potassium phosphate 0,1 M (PB), pH 6,8 est mise en contact avec du SPDP en excès molaire d'un facteur 20. Après 30 min d'incubation à 30"C, l'échantillon est dialysé contre un tampon PB 0,1 M et de 1'EDTA lmM, pH 7,2. Dans les conditions ci-dessus, il n'y a pas de perte d'activité enzymatique. a.2 : Modification de l'anticorps Un anticorps conforme à l'invention est mis en contact avec du 2-iminothiolane en excès molaire d'un facteur 250 pendant 1 heure à une température entre 0 et 4"C. Pour retirer le 2-iminothiolane en excès, l'échantillon est passé sur une colonne "SEPHADEX" G25 équilibrée avec un tampon acétate de sodium 5 mM, NaCl 0,15 M et EDTA 1 mM, pH 5,2. a.3. : La conjugaison est réalisée en mélangeant l'anticorps avec un poids égal d'enzyme modifiée. Les solutions sont ensuite saturées avec de l'azote et incubées entre 40 et 70 heures à 4"C. On arrête la réaction par l'addition d'acide iodoacétique en excès molaire d'un facteur 100 et incubation pendant 30 min à 0 C. Les conjugués sont séparés des protéines non couplées par une filtration sur gel FPLC "SUPEROSE-12" (10 , 10 x 300 mm, Pharmacia) dans un tampon PBS. b) Préparation de peroxydase conjuguée à un anticorps antipeptide conforme à l'invention On procède comme en a) à l'exception du fait que la peroxydase est modifiée en présence de SPDP en excès molaire d'un facteur 5. c) Activité cytotoxique d'un mélange des deux immunoconjugués précités L'effet des immunotoxines en combinaison sur la viabilité des cellules infectées ou inoculées est étu dié en utilisant trois tests différents : le test de libération 51Cr, le test colorimétrique MTT et la clonogénicité in vitro. A titre d'exemple non limitatif, les exemples c.l, c.2 et c.3 montrent l'effet sur la viabilité cellulaire des immunotoxines anticorps-GO et anticorps-LPO selon l'Exemple 10 a) ou b), vis-à-vis de cellules lymphoïdes primaires infectées ou inoculées. c.l : test de libération 51Cr. - Des cellules lymphoïdes primaires infectées ou inoculées sont cultivées in vitro dans du DMEM supplémenté avec 7 % de sérum de cheval décomplémenté. - Les conjugués (anticorps-GO et anticorps LPO) sont préparés conformément aux protocoles de l'Exemple 10 a) et b) - Test proprement dit : 1 à 5.106 cellules infectées sont marquées avec 100 RCi de 51chromate de sodium dans du DMEM-HS 10 % pendant une heure à 37 C dans un incubateur à C02 humide. Environ 1 500 à 4 500 cpm sont incorporés /104 cellules.Les cellules sont lavées et incubées pendant 20 min à 37"C dans du sérum de lapin normal décomplémenté (RNS), dans un milieu à raison de 10.106 cellules/ml dans des tubes de Falcon n 2 001, comprenant une solution saline équilibrée de Dulbecco tamponnée au bicarbonate et du HS à 2,5 % décomplémenté (BBSS-HS 2,5 %). Les cellules sont lavées et 50 Al (1.105 cellules) sont distribuées dans les puits d'une microplaque, puis on incorpore 50 Al de différentes dilutions des immunotoxines (anticorps-GO mélangé avec anticorps LPO), lesdites dilutions étant réalisées dans du BSS-HS 2,5 %. Après 20 min d'incubation à 22"C, suivie de deux lavages, les cellules sont mises en suspension dans 100 Wl de milieu complet (CM) : BBSS-HS ou -FBS 2,5 % supplémenté avec 4 g/l de dextrose et 0,1 mM NaI, transférées dans des tubes Falcon n 2054 et placées à 37"C dans un incubateur à CO2 humide pour réaliser la réaction cytotoxique. Les tubes sont retirés à des moments différents, centrifugés et la radioactivité libérée est déterminée sur un échantillon de surnageant de 50 Al. Le pourcentage de 51Cr libéré est déterminé à partir de la formule suivante coups/min ds surnag. (50 1) - coups/min B.F.(*) x100 coups/min ds surnag. - coups/min B.F. (cell. mises en susp. ds sol. HCl 4N) et correspond au pourcentage de coups/min relargués spécifiquement. (*) B.F. = bruit de fond. c.2 : essai MTT Des cellules lymphoïdes primaires infectées ou inoculées sont incubées dans des microplaques de microculture à une concentration de 1.106/mol avec différentes dilutions d'anticorps-GO et d'anticorps-LPO, lesdites dilutions étant réalisées dans du BSS-HS 2,5 % ou du BSS HS 2,5 % tamponné Hepes (HBSS) ou du BSS-FBS 2,5 %. On utilise comme contrôle des cellules lymphoïdes primaires incubées avec des immunotoxines ne réagissant pas avec lesdites cellules. Après 20 min à 22C, puis lavage, 1.105 cellules sont transférées sur d'autres microplaques et mises en suspens ion dans 100 1 de CM et placées à 37"C dans un incubateur à CO2 humide.Après 45 min à deux heures d'incubation à 37"C, les cellules sont lavées dans du DMEM-HS 2,5 %, mises en suspension dans 100 jil de DMEM-HS 2,5 % et 10 Al de colorant MTT tetrazolium (5 mg/ml) est ajouté à chaque puits. Après une nouvelle incubation de deux heures à 37"C, les microplaques sont centrifugées et 100 C11 de DMSO sont ajoutés à chaque puits. La couleur développée est estimée spectrophotométriquement à 540 nm dans un appareil approprié. La densité optique des cellules infectées non-traitées (100 % de viabilité) est comprise entre 0,8 et 1,4 de densité optique.Les résultats sont exprimés comme le pourcentage de l'absorbance-controle comme suit DO des cellules traitées - DO de la ligne de base x100 DO des cellules non-traitées - DO de la ligne de base c.3 : essai de clonogénicité Des cellules lymphoïdes primaires Infectées ou inoculées sont incubées comme décrit dans l'exemple c.l (test au 51Cr), la concentration cellulaire étant de 0,6.106/ml. Après une incubation de 20 min à deux heures à 37"C dans du CM, les cellules sont lavées deux fois, mises en suspension dans du DMEM-HS 10 % et sont distribuées à des concentrations de 104, 103, 102 et 10 cellules par puits dans des plaques de microculture à fond plat comprenant 95 puits.Les plaques sont cultivées à 37"C pendant 6 jours ; au sixième jour les cellules sont supplémentées avec 100 Wl de milieu frais et au douzième jour de 100 Wl de milieu est retiré et est remplacé par 100 Wl de milieu frais. Les microplaques sont observées au microscope et les résultats sont exprimés par la fréquence de cellules survivantes. Le nombre de cellules lymphoïdes primaires qui ne sont pas détruites est estimé au moyen du test de clonogénicité. Ainsi que cela ressort de ce qui précède, l'invention ne se limite nullement à ceux de ses modes de mise en oeuvre, de réalisation et d'application qui viennent d'être décrits de façon plus explicite ; elle en embrasse au contraire toutes les variantes qui peuvent venir à l'esprit du technicien en la matière, sans s'écarter du cadre, ni de la portée, de la présente invention. REVENDICATIONS 1") Fragment peptidique, caractérisé en ce qu'il comprend une portion d'une protéine externe du virus de l'immunodéficience féline (VIF), en ce qu'il comprend entre 5 et 50 amino-acides et en ce qu'il est reconnu au moins par les anticorps produits lors d'une infection et/ou lors d'une inoculation par l'une quelconque des souches de VIF. 2") Fragment peptidique selon la revendication 1, caractérisé en ce que lesdites souches sont notamment choisies dans le groupe qui comprend la souche Petaluma, la souche FIV-14 issue d'un clone moléculaire, les souches françaises M.E ou W.O et les souches japonaises TM 1 ou TM 2. 3 ) Fragment peptidique selon ia revendication 1 ou la revendication 2, caractérisé en ce qu'il comprend au moins une portion de la séquence de la protéine externe d'un VIF de souche Petaluma comprise entre l'aminoacide 66 et l'aminoacide N terminal. 4 ) Fragment peptidique selon l'une quelconque des revendications 1 à 3, caractérisé en ce qu'il comprend 19 amino-acides, contient au moins un épitope immunogène de ladite protéine externe du VIF et présente la formule I suivante Asn-Gln-Thr-Cys-Met-Trp-Asn-Thr-Ser-Gln-Iîe-Gln-Asp-Pro- Glu-Ile-Pro-Lys-Cys. (I). 5 ) Fragment peptidique selon l'une quelconque des revendications 1 à 3, caractérisé en ce qu'il comprend 22 aminoacides, contient au moins un épitope immunogène de ladite protéine externe du VIF et présente la formule II suivante Tyr-Leu-Val-Val-Pro-Glu-Glu-Val-Met-Glu-Tyr-Lys-Pro-Arg- Arg-Lys-Arg-Ala-Ala-Ile-His-Val. (Il). 6 ) Fragment peptidique selon l'une quelconque des revendications 1 à 3, caractérisé en ce qu'il comprend 25 aminoacides, contient au moins un épitope immunogène de ladite protéine externe du VIF et présente la formule III suivante Val-Ile-Ala-Met-Pro-Glu-Val-Glu-Gly-Glu-Glu-Ile-Gln-Pro Gln-Met-Glu-Leu-Arg-Arg-Asn-Gly-Arg-Gln-Cys (III). 7 ) Fragment peptidique selon l'une quelconque des revendications 1 à 3, caractérisé en ce qu'il comprend 26 amino-acides et présente la formule IV suivante Leu-Arg-Asn-Glu-Ile-Gln-Glu-Val-Lys-Leu-Glu-Glu-Gly-Asn Ala-Gly-Lys-Phe-Arg-Arg-Ala-Arg-Phe-Leu-Arg-Tyr (IV) 8 ) Fragment peptidique selon l'une quelconque des revendications 1 à 3, caractérisé en ce qu'il comprend 28 amino-acides et présente la formule V suivante Leu-Gln-Gly-Lys-Ile-Asn-Ile-Ser-Leu-Cys-Leu-Thr-Gly-Gly Lys-Met-Leu-Tyr-Asn-Lys-Val-Thr-Lys-Gln-Leu-Ser-Tyr-Cys (V) 9 ) Anticorps anti-fragment peptidique, caractérisés en ce qu'ils sont obtenus par immunisation d'un animal approprié avec au moins un fragment peptidique selon l'une quelconque des revendications 1 à 8, lesquels anticorps présentent une affinité pour ledit peptide, et sont aptes à reconnaître la protéine externe du VIF, le VIF et/ou les cellules exprimant le VIF ou ladite protéine externe du VIF. 10 ) Anticorps selon la revendication 9, caractérisés en ce qu'ils sont des anticorps polyclonaux. 11") Anticorps selon la revendication 9, caractérisés en ce qu'ils sont des anticorps monoclonaux. 12e) Anticorps selon l'une quelconque des revendications 9 à 11, caractérisé en ce que les fragments peptidiques sont ceux qui comprennent un épitope immunogène et notamment les fragments 99, 100 ou 102 selon l'une quelconque des revendications 4 à 6. 13 ) Réactif immunologique utilisable pour la détection, le diagnostic et le suivi de l'immunodéficience féline, caractérisé en ce qu'il est choisi dans le groupe qui comprend les fragments peptidiques selon l'une quelconque des revendications 1 à 8 et les anticorps anti-peptide selon l'une quelconque des revendications 9 à 12, ou un fragment de ceux-ci, éventuellement associé à une autre substance, notamment une enzyme. 14") Procédé de détection et/ou de diagnostic de l'immunodéficience féline, caractérisé en ce qu'il consiste à détecter les anticorps éventuellement présents dans un fluide biologique tel que le sang, en mettant en présence ledit fluide avec au moins un fragment peptidique selon l'une quelconque des revendications 1 à 8, auquel se lient les anticorps anti-VIF, si de tels anticorps sont présents dans l'échantillon biologique à contrôler, la lecture du résultat étant révélé par un moyen approprié, notamment RIA, lA ou cytométrie en flux. 15 ) Kit ou trousse de diagnostic pour la détection, le diagnostic ou le suivi de l'immunodéficience féline, caractérisé en ce qu'il comprend - un support solide approprié revêtu d'un fragment peptidique selon l'une quelconque des revendications 1 à 8, - des quantités ou doses appropriées de conjugué choisi dans le groupe qui comprend les conjugués enzyme appropriée-anticorps anti-Ig félins appropriés et les conjugués enzyme appropriée-anticorps anti-peptide selon l'une quelconque des revendications 9 à 12, - des quantités ou doses appropriées d'une substance de révélation convenable. 16 ) Procédé d'identification de souche de VIF, caractérisé en ce que l'on met en contact un échantillon à analyser, notamment un fluide biologique avec un panel de fragments peptidiques selon l'une quelconques des revendications 1 à 8, et en ce que l'on détermine par tout moyen approprié le/les fragments peptidiques qui se sont éventuellement liés aux anticorps produits par la souche à détecter. 17 ) Agents à visées thérapeutiques et/ou préventives, caractérisés en ce qu'ils sont constitués par, ou comprennent en tant que constituant actif, un peptide selon l'une quelconque des revendications 1 à 8 et/ou leurs fragments, seuls ou conjugués ou associés à d'autres substances. 18 ) Agents à visée thérapeutique et/ou préventive, caractérisés en ce qu'ils sont constitués par, ou comprennent en tant que constituant actifs, des anticorps anti-peptide selon l'une quelconque des revendications 9 à 12 et/ou leurs fragments, seuls ou conjugués avec d'autres substances. 19 ) Agents selon la revendication 18, caractérisés en ce qu'ils sont associés à une enzyme oxydative. 20 ) Agents selon la revendication 18 ou la revendication 19, caractérisés en ce que l'enzyme oxydative est choisie dans le groupe qui comprend les enzymes oxydatives générant de l'oxygène actif et les enzymes oxydatives dont le substrat est de l'oxygène actif et un halogénure. 21 ) Agents selon l'une quelconque des revendications 18 à 20, caractérisés en ce que les enzymes oxydatives générant de l'oxygène actif sont choisies dans le groupe qui comprend la glucose oxydase (GO), la NADPH oxydase, la xanthine oxydase, notamment la xanthine oxydase du lait, la cholestérol oxydase, la choline oxydase, l'acide lactique oxydase, la pyruvate oxydase. 22 ) Agents selon l'une quelconque des revendications 18 à 20, caractérisés en ce que les enzymes oxydatives dont le substrat est un halogénure sont choisies dans le groupe qui comprend la lactoperoxydase (LPO), la myéloperoxydase, notamment la myéloperoxydase des neutrophiles, la peroxydase des éosinophiles, et la peroxydase salivaire. 23 ) Modèle d'évaluation de l'efficacité d'immunoconjugués, caractérisé en ce qu'il comprend - des cellules de chat aptes à développer le VIF et/ou infectées ou inoculées par ledit virus, et - des immunoconjugués comprenant des enzymes oxydatives couplées à des anticorps choisis dans le groupe qui comprend les anticorps anti-VIF et les anticorps anti-peptide selon l'une quelconque des revendications 9 à 12. 24 ) Modèle d'évaluation selon la revendication 23, caractérisé en ce que les cellules aptes à développer le VIF et/ou infectées ou inoculées par ledit virus sont notamment des cellules mononucléaires de chats infectés, des cellules lymphoïdes primaires et des lignées lymphoblastiques T félines, notamment les lignées MYA-i. 25 ) Procédé d'évaluation de l'efficacité d'immunoconjugués, caractérisé en ce que des immunoconjugués comprenant des enzymes oxydatives couplées à un anticorps approprié choisi dans le groupe qui comprend les anticorps anti-VIF et les anticorps anti-peptide selon l'une quelconque des revendications 9 à 12 sont mis en contact avec des cellules de chat aptes à développer le VIF et/ou infectées ou inoculées par ledit virus et en ce que la toxicité desdits immunoconjugués vis-à-vis desdites cellules, dites cellules cibles, est mesurée par tout moyen approprié. 26 ) Application du modèle d'évaluation selon la revendication 24 au virus de l'immunodéficience humaine. 27 ) Application du procédé d'évaluation selon la revendication 25 au virus de l'immunodéficience humaine.