Brevet FR2660863A1 — publié le 19911018

La présente invention concerne l'utilisation d'un polypeptide ayant l'activité de l'interleukine 2 humaine pour la préparation de compositions pharmaceutiques destinées au traitement de cancers primitifs de la plèvre. L'IL 2 qui est une lymphokine produite par les lymphocytes T activés possède une activité immunomodulatrice et une activité antitumorale décrites par exemple par Fletcher, M et al (Lymphokine Research 6 1987 4757), activités qui comprennent en particulier la capacité d'initier la proliféra- tion des lymphocytes T et l'induction de la cytotoxicité des cellules NK (natural killer) et des cellules LAK (lymphokine activated killer) On a observé que l'administration de 1 'IL 2 soit seule à haute dose soit associée avec des cellules LAK est capable d'induire la régression de certains cancers établis chez la souris et chez des patients ayant des cancers métastatiques tel que le mélanome, le cancer du rein, le cancer colorectal ou le lymphome non Hodgkinien (Rosenberg,S A et al N Eng J Med 1987 316 889-897). Les cancers primitifs de la plèvre comprennent essentiel- lement les mésothéliomes diffus et plus rarement les sarcomes pour lesquels les traitements existants de chirurgie, de chimiothérapie ou de radiothérapie seuls ou associés entre eux ne présentent pas d'efficacité reconnue Ainsi le mésothéliome malin dont l'association avec l'exposition à l'amiante a été suggérée puis confirmée (Antman, KH N Eng J Med 1980 303 -202) dans 10 à 70 % des cas (Antman, KH et al Am J Med. 1980 68 356- 362) et localisé dans la plèvre, de façon plus fréquente que dans le péritoine (rapport environ 2,5/1), a une évolution mortelle en quelques mois, en l'absence de traite- ment efficace. Il a été montré in vitro sur des lignées cellulaires ou sur des cellules fraiches de mésothéliome malin humain que les cellules de mésothéliome sont résistantes (> 99,9 %) à la lyse par les cellules NK, mais relativement sensibles ( 58 %) à la lyse par des cellules LAK (Manning L S et al Am Rev Respir. Dis June 1989 139 1369-1374). Des études cliniques ont été conduites, notamment avec un analogue de l'IL 2 associé avec une immunothérapie adoptive chez des patients porteurs de tumeurs variées Une activité antitumorale objective n'a été rapportée que dans le cancer du rein, le mélanome, le cancer du colon et le lymphome Le mésothéliome est cité dans la liste des tumeurs étudiées qui auraient présenté une régression (Bradley E C et al Third International Conference on Malignant Lymphoma June 10-13 Lugano 1987 p 26). Aucun résultat clinique n'a montré l'efficacité de la thérapie dans les cancers primitifs de la plèvre avec 1 'IL 2 seule, notamment chez 3 patients atteints de mésothéliome ayant reçu une administration par voie intraveineuse (Thatcher N et al Cancer Treatement Reviews 16 Suppl A 161162 June 1989). Or la demanderesse vient d'obtenir des résultats montrant que '1 IL 2 présente une activité sur les cancers de la plèvre. L'invention concerne donc l'utilisation d'un polypeptide ayant l'activité de l'interleukine 2 humaine pour préparer une composition pharmaceutique destinée au traitement de cancers primitifs de la plèvre. On entend par polypeptide ayant l'activité de '1 IL 2 humaine, '1 IL 2 humaine naturelle, 1 '1 IL 2 humaine recombinante, c'est-à-dire obtenue par la technologie de l'ADN recombinant, par exemple comme cela est décrit par Taniguchi, T et al. (Nature ( 1983) 302 305-310) ou dans le brevet EP 91530 B, des allèles ou des dérivés de ces produits tels que décrits par exemple par Ju, C et al (J Biol Chem ( 1987) 262 5723- 5731). Les cancers primitifs de la plèvre que concerne l'inven- tion comprennent des cancers tel que le mésothéliome pleural et le sarcome, généralement caractérisés cliniquement par un épanchement pleural. L'invention a notamment pour objet l'utilisation caractérisée en ce que le cancer de la plèvre est un mésothé- home. Le mésothéliome pleural est généralement caractérisé cliniquement par des douleurs de la poitrine ou des dif- ficultés respiratoires associées à un épanchement pleural et son diagnostic le différencie de la pleurésie inflammatoire, du cancer primitif du poumon ou de métastases provenant d'un autre cancer primitif L'invention décrit l'utilisation d'IL 2 humaine dans un traitement dont l'efficacité est montrée par un taux de réponse d'environ 50 % chez des malades atteints de mésothéliome pleural, ayant éventuellement subi une chirurgie d'exérèse mais pas de traitement antérieur de chimiothérapie ou de radiothérapie. L'invention a particulièrement pour objet l'utilisation caractérisée en ce que le polypeptide ayant l'activité de '1 IL 2 humaine est une IL 2 recombinante pure. Les compositions pharmaceutiques préparées selon l'inven- tion renferment une IL 2 humaine recombinante, des allèles ou des dérivés de celle-ci, telle que décrite ci-dessus, pour laquelle on utilise des techniques de purification connues de l'homme de métier, qui permettent de préparer des produits purs. L'invention a plus particulièrement pour objet l'utilisa- tion caractérisée en ce que '1 IL 2 est une IL 2 recombinante non glycosylée sous forme réduite L'IL 2 non glycosylée utilisée est notamment celle ayant la séquence de 1 'IL 2 naturelle à 133 aminoacides avec éventuellement une Méthionine N-terminale supplémentaire, dont les 3 cystéines en position 58, 105 et sont sous la forme réduite, manifestant une activité biologique comparable à celle de 1 'IL 2 oxydée ayant la même séquence comportant un pont disulfure en position 58-105. L'IL 2 réduite est décrite dans la demande de brevet européen EP 0353150 Par forme réduite, on entend que les restes cysté- ines que contient 1 'IL 2 renferment un groupement sulfhydryle libre dont la détermination est faite, par exemple, par spectrophotométrie avec la dithiodipyridine comme réactif des thiols L'activité biologique est déterminée par mesure de la prolifération de lignées cellulaires leucémiques de souris dépendantes de '1 IL 2, CTLL-2, avec un test colorimétrique au sel de tétrazolium (Mossmann, T J Immunol Meth ( 1983) 65 55-63) L'activité spécifique des IL 2 recombinantes utilisées dans l'invention est au moins égale à 0,5 x 106 U BRMP/mg, de préférence au moins égale à 1 x 107 U BRMP/mg L'unité d'activité IL 2 est définie comme la quantité qui produit 50 % de la réponse maximum dans le test On utilise comme standard un échantillon "Biological Response Modifier Programm (BRMP) reference agent human IL 2 (jurkat)" fourni par le National Cancer Institute (NCI). L'invention a spécialement pour objet l'utilisation cara- ctérisée en ce que 1 'IL 2 est administrée par voie intrapleu- rale à la dose de 2 à 25 x 106 U/M 2 par injection, et plus spécialement celle caractérisée en ce que 1 'IL 2 est admi- nistrée à la dose de 15 106 U/M 2 par jour. L'invention a tout spécialement pour objet l'utilisation caractérisée en ce que 1 'IL 2 est administrée par cycle de 5 jours consécutifs et caractérisée en ce que 1 'IL 2 est admi- nistrée de façon répétée pendant au moins deux cycles non consécutifs. La dose administrée, la fréquence de l'injection et la durée du traitement varient en fonction de l'état du malade. L'IL 2 est comprise dans une composition pharmaceutique, de préférence lyophilisée en flacon-dose contenant de 0,1 à 2 mg de principe actif et que l'on reconstitue avec de l'eau distillée pour injection La solution obtenue est immédiate- ment diluée à l'aide d'un soluté, par exemple le glucose à 5 % pour l'administration en perfusion intrapleurale. Selon l'utilisation préférée de l'invention, l'IL 2 est 1 'IL 2 recombinante réduite ci-dessus dont un exemple de prépa- ration pharmaceutique est donnée plus loin, la dose est de x 1 06 U/M 2 par jour, selon un cycle de 5 jours consécutifs répété 2 fois de façon espacée sur une période d'environ 5 semaines, représentant environ 225 x 106 U/M 2 et environ 21 mg d'IL 2 administrés au total chez le malade en perfusion continue par voie intrapleurale. Les exemples suivants illustrent l'invention sans toutefois la limiter. Exemple 1: Composition pharmaceutique pour perfusion. On a réalisé une préparation pour injection par voie intraveineuse en perfusion de formule: IL 2 réduite 0,5 mg acide citrique 5 mg mannitol 50 mg eau stérile 1 cm 3 glucose à 5 % 50 cm 3 Exemple 2: Etude clinique dans le traitement de mésothé- liome pleural. L'étude inclut des malades ayant un mésothéliome pleural histologiquement confirmé, confiné à la plèvre, éventuellement étendu au poumon, au thorax ou aux ganglions lymphatiques (stades I, II, III ou IV selon la classification de Butchart) et n'ayant eu aucun traitement antérieur par chimiothérapie ou radiothérapie. Les malades peuvent avoir éventuellement subi un traite- ment par chirurgie d'exérèse et présenter une récurrence de la maladie. Les compositions d'IL 2 préparées selon l'invention permettent d'injecter des doses de 3 à 24 x 106 U/M 2 par jour, selon le malade, en perfusion continue par voie intrapleurale pendant un cycle de 5 jours pendant la première semaine, répété pendant la troisième semaine, puis la cinquième semaine du traitement. Les malades qui présentent une rechute ultérieure ou seulement soit une réponse partielle soit une stabilisation de la maladie sont à nouveau traités par voie intrapleurale comme décrit ci-dessus. Les lésions tumorales des malades sont évaluées avant et à la fin du traitement par la mesure des lésions macrosco- piques au scanner thoracique et à la thorascopie Une confir- mation histologique est obtenue par biopsies multiples des zones précédemment envahies et biopsies au hasard des plèvres pariétale et diaphragmatique. Sur il malades réévalués, les réponses suivantes ont été obtenues: PATIENT Age Dose de RU 49637 Stade Réponse I| (ans) ( 106 U/m 2/jour) l l MOU 64 3 I RC CAS 64 3 III Pg GER 60 6 II Pg RAG 50 10 I RC CHI 60 10 III Pg CHA 65 10 IV Pg LLI 42 15 IA RC REY 59 21 II Pg SEB 62 21 I RP POI 51 21 II RP BER 59 24 II RC I i Les résultats montrent 4 réponses complètes (RC) et 2 réponses partielles (RP), soit un taux de réponse d'environ % Une progression (Pg) de la maladie n'est observée que chez des malades de stade II à IV. REVENDICATIONS 1) Utilisation d'un polypeptide ayant l'activité de l'interleukine 2 humaine pour préparer une composition pharma- ceutique destinée au traitement de cancers primitifs de la plèvre. 2) Utilisation selon la revendication 1 caractérisée en ce que le cancer de la plèvre est un mésothéliome. 3) Utilisation selon la revendication 2 caractérisée en ce que le polypeptide ayant l'activité de 1 'IL 2 humaine est une IL 2 recombinante pure. 4) Utilisation selon la revendication 3 caractérisée en ce que 1 'IL 2 est une IL 2 recombinante non glycosylée sous forme réduite. ) Utilisation selon la revendication 3 ou 4 caractérisée en ce que 1 'IL 2 est administrée par voie intrapleurale à la dose de 2 à 25 x 106 U/M 2 par injection. 6) Utilisation selon la revendication 5 caractérisée en ce que '1 'L 2 est administrée à la dose de 15 106 U/M 2 par jour. 7) Utilisation selon la revendication 6 caractérisée en ce que 1 'IL 2 est administrée par cycle de 5 jours consécutifs. 8) Utilisation selon la revendication 7 caractérisée en ce que 1 'IL 2 est administrée de façon répétée pendant au moins deux cycles non consécutifs.