Brevet FR2672616A1 — publié le 19920814

La présente invention concerne de nouvelles séquences nucléotidiques codant pour des régions variables des chainesodes récepteurs des cellules T, les segments peptidiques correspondants et les applications diagnostiques et thérapeutiques. Il est connu que les récepteurs reconnaissant les antigènes à la surface des lymphocytes T matures (désignés ci-après récepteurs des cellules T) possèdent une structure ayant une certaine analogie avec celles des immunoglobulines. Ainsi, ils comprennent des structures hétérodimériques comportant des chaînes glycoprotéiquesdet des chaînes glycoprotéiques (2), Brenner et al. (3), Bank et a-l. (4)). Le répertoire des récepteurs des cellules T doit pouvoir faire face à l'immense diversité des déterminants antigéniques. Ceci est obtenu par recombinaison génétique des différents segments discontinus des gènes qui codent pour les différentes régions structurales des récepteurs des cellules T. Ainsi, les gènes comprennent des segments V (segments variables), éventuellement des segments D (segments de diversité), des segments J (segments de jonction) et des segments C (segments constants). Pendant la différenciation des cellules T, des gènes spécifiques sont créés par recombinaison des segments V, D et J pour les locusp et f et des segments V et J pour les locus A et Ces combinaisons spécifiques ainsi que l'appariement des deux chaînes créent la diversité combinatoire. Cette diversité est fortement amplifiée par deux mécanismes supplémentaires, à savoir la réunion imprécise des segments V-D-J ou V-J et l'addition de nucléotides correspondant à la région N (Davis et al. (5)). On connaît déjà un certain nombre de segments géniques V. Ces segments ont été groupés en sous-familles en fonction de la similarité des séquences. Par définition, les segments qui présentent plus de 75 % de similarité dans la séquence nucléotidique ont été considérés comme des membres de la même sous famille (-Crews et al. 6)). Les segments géniques V g connus ont ainsi été classés en. 22 sous familles dont 14 avec un seul membre (voir. Concannon et al. (7), Kimura et al. (8), -Wilson et al. (9)). Par ailleurs, environ 60 segments géniques J ont été décrits (9). On a par ailleurs décrit récemment dans WO 90/06758 des anticorps monoclonaux dirigés contre des segments spécifiques des parties variables des récepteurs des cellules T, notamment des caines/J et r. Ces anticorps monoclonaux sont utiles non seulement comme outils de diagnostic mais également comme outils thérapeutiques, par exemple vis-à-vis de l'arthrite rhumatoïde. On a également décrit l'utilisation de peptides synthétiques correspondant à des régions variables des chaînes g ou ss dans le traitement des maladies auto-immunes (23 et 24). Il est connu par ailleurs qu'il existe des variations d'un individu à un autre dans l'expression des différents segments variables du récepteur T chez l'homme (27 et 28). La présente invention vise à enrichir le répertoire des segments géniques codant pour des régions variables de chaînes La présente invention a ainsi pour objet des séquences nucléotidiques codant pour des régions variables de chaînes &alpha;; des récepteurs des lymphocytes T humains, correspondant à des ADNc comprenant des séquences nucléotidiques choisies parmi l'un quelconque a - des segments V b - des segments J correspondant à l'une des séquences SEQ ID N 12 à 20, et les séquences qui en diffèrent par un ou plusieurs nucléotides. La présente invention a plus particulièrement pour objet : - des séquences codant pour des régions variables des chaînes &alpha; des récepteurs des lymphocytes T humains, correspondant à des ADNc comprenant des séquences nucléotidiques choisies parmi l'un quelconque des segments V b( correspondant à l'une des séquences SEQ ID N 1 à 10, et les séquences qui en diffèrent par un ou plusieurs nucléotides. - des séquences codant pour des régions variables des chaînes &alpha; des récepteurs des lymphocytes T humains, correspondant à des ADNc comprenant des séquences nucléotidiques choisies parmi l1un quelconque des segments J Par l'expression "et les séquences qui en diffèrent par un ou plusieurs nucléotides", on englobe les allèles qui présentent jusqu'à 8 nucléotides de différence, mais le plus souvent 1 ou 2 nucléotides de différence ou qui peuvent différer par la délétion ou l'addition d'un ou deux codons. La présente invention a également plus particulièrement pour objet - des séquences nucléotidiques codant pour des régions variables des chaînes &alpha; des récepteurs des lymphocytes T humains correspondant à des ADNc correspondant à tout ou partie des séquences nucléotidiques choisies parmi l'un quelconque des segments V &alpha; cor- respondant à l'une des séquences SEQ ID N' 1 à 5, et les séquences qui en diffèrent par un ou deux nucléotides, - des séquences nucléotidiques codant pour des régions variables de chaînes 4 des récepteurs des lymphocytes T humains correspondant à des ADNc correspondant à tout ou partie des séquences nucléotidiques choisies parmi l'un quelconque des segments corres- pondant à l'une des séquences 1 à 467 de SEQ ID N 6 1 à 77 de SEQ ID N 7 1 à 151 de SEQ ID N' 8 291 à 386 de SEQ ID N 9 1 à 260 de SEQ ID N' 10 et les séquences qui en diffèrent par un ou deux nucléotides, - des séquences nucléotidiques codant pour des régions variables de chaînes Q( des récepteurs des lymphocytes T humains correspondant à des ADNc correspondant à tout ou partie de la séquence nucléotidique correspondant à la SEQ ID N' 11 et qui comprennent le nucléotide 108, - des séquences nucléotidiques codant pour des régions variables de chaînesdes récepteurs des lymphocytes T humains correspondant à des ADNc correspondant à tout ou partie des séquences nucléotidiques choisies parmi l'un quelconque des segments JA corres- pondant à l'une des séquences SEQ ID N 12 à 20 et les séquences qui en diffèrent par un ou deux nucléotides. Par l'expression "séquences nucléotidiques correspondant à des ADNc correspondant à tout ou partie des séquences nucléotidiques", on désigne aussi bien les séquences complètes que des fragments de ces séquences y compris des fragments courts (oligonucléotides) qui trouvent des applications en tant que sondes (comportant généralement au moins 10 nucléotides) ou en tant qu'amorce (comportant généralement au moins 15 nucléotides). D'une manière générale, l'invention englobe l'ensemble des nouveaux oligonucléotides qui sont des fragments des séquences V et selon 1' invention. Quant aux séquences qui diffèrent par un ou deux nucléotides, elles correspondent à des variations que l'on a observé expérimentalement lors de la détermination de la séquence nucléotidique de plusieurs ADNc. La présente invention a également pour objet les peptides codés par des séquences nucléotidiques selon l'invention ainsi que les allèles et les dérivés de ceux-ci qui possèdent la même fonction. La présente invention a également pour objet les peptides constitués ou comprenant une séquence peptidique codée par tout ou partie de la séquence 108 à 364 de SEQ ID N 11. D'une manière générale, la présente invention englobe les peptides constitués par ou comprenant une séquence peptidique codée par les séquences nucléotidiques selon l'invention ainsi que les fragments de ces peptides. Elle englobe également les peptides qui diffèrent de ceux-ci d'un ou plusieurs amino-acides et qui possèdent la même fonction. Ces peptides peuvent correspondre à des modifications telles que celles connues avec les mutéines ou à des variations allèliques. Il a été en effet montré en particulier que certains segments géniques codant pour des régions variables de chaînes du récepteur T chez l'homme étaient soumis à un phénomène de polymorphisme génétique appelé variation allèlique (25). La présente invention englobe les peptides provenant de ce phénomène. Les séquences nucléotidiques selon l'invention ont été obtenues selon les étapes suivantes - isolement des ARN de lymphocytes périphériques d'un individu - obtention de l'ADN complémentaire à l'aide de reverse transcriptase et d'une amorce A spécifique de la région C - amplification génique (par Anchored Polymerase Chain Reaction ou A-PCR) à l'aide d'une ADN polymérase, d'une amorce poly C (SEQ ID N' 22) et d'une amorce B spécifique de la région Co((SEQ ID N' 23) - nouvelle amplification par A-PCR à l'aide de ADN polymérase et d'une amorce C spécifique de la région C &alpha;(SEQ ID N' 24) - insertion dans un vecteur plasmidique - transformation d'un hote bactérien avec le vecteur recombinant ;; - criblage des colonies bactériennes recombinantes avec un oligonucléotide D spécifique de (SEQ ID N" 25) marqué - extraction des plasmides des colonies positives, - et séquencage des fragments d'ADN contenant la région C. La présente invention peut être reproduite notamment par amplification génique bispécifique (polymerase chain reaction ou PCR) en partant des lymphocytes périphériques expriment les ARNm incluant les segments variables ou jonctionnels correspondant aux séquences ID Ne 1 à 20 de l'invention ou alternativement en appliquant cette technique de PCR à de l'ADN génomique de toute cellule somatique d'un individu pris au hasard. L'invention peut aussi bien être reproduite en préparant les séquences géniques ci-dessus par synthèse chimique d'oligonucléotides. Les peptides selon l'invention peuvent être obtenus par synthèse peptidique classique. Ils peuvent être également obtenus par application des techniques connues de génie génétique comprenant l'insertion d'une séquence d'ADN codant pour un peptide selon l'invention dans un vecteur d'expression tel qu'un plasmide et la transformation de cellules avec ce vecteur d'expression. La présente invention a donc également pour objet des plasmides et des vecteurs d'expression comprenant une séquence d'ADN codant pour un peptide selon l'invention ainsi que des hotes transformés avec ce vecteur. La présente invention a également pour objet des anticorps, et notamment des anticorps monoclonaux, dirigés contre un déterminant antigénique appartenant à ou comprenant un peptide selon l'invention. Les anticorps monoclonaux peuvent être obtenus par toutes les techniques qui permettent la production de molécules d'anticorps à partir de culture de lignée cellulaire. Ces techniques comprennent les différentes techniques utilisant des hybridomes. La production d'anticorps peut être obtenue chez l'animal pa:r immunisation des animaux par injection des peptides ou des fragments selon l'invention, qu'ils soient naturels, recombinants ou synthétiques, éventuellement après couplage à un agent immunogène tel que l'anatoxine tétanique, ou encore par injection des lymphocytes T humains exprimant les séquences correspondantes à leur surface, y comprises cellules recombinantes transfectées avec les séquences codantes correspondantes. La présente invention a également pour objet des hybridomes produisant des anticorps monoclonaux dirigés contre les polypeptides selon l'invention. La présente invention englobe également les fragments et les dérivés d'anticorps monoclonaux selon l'invention qui sont réactifs avec des régions variables définies des récepteurs des cellules T. Ces fragments sont notamment les fragments F(ab')2 qui peuvent être obtenus par clivage enzymatique des molécules d'anticorps avec la pepsine, les fragments Fab' qui peuvent être obtenus par réduction des ponts disulfure des fragments F(ab')2 et les fragments Fab qui peuvent être obtenus par clivage enzymatique des molécules d'anticorps avec la papaine en présence d'un agent réducteur. Ces fragments peuvent être également obtenus par génie génétique. Les dérivés d'anticorps monoclonaux sont par exemple des anticorps ou des fragments de ces anticorps auxquels sont liés des marqueurs tel qu'un radioisotope. Les dérivés d'anticorps monoclonaux sont également des anticorps ou des fragments de ces anticorps auxquels sont liées des molécules thérapeutiquement actives, notamment des composés cytotoxiques. Les produits de l'invention trouvent plusieurs types d'application dans le domaine du diagnostic et dans le domaine de la thérapeutique. 1 - Les applications dans le domaine du diagnostic Les oligonucléotides contenus dans les séquences nucléotidiques selon l'invention peuvent être utilisés pour constituer des sondes de détection (généralement au moins 10 nucléotides) -capables de s'hybrider à une région variable de chaine Les oligonucléotides trouvent ainsi une application dans le diagnostic des désordres immunitaires en détectant la présence de séquences d'acides nucléiques homologues d'un gène codant pour des régions variables de chaînes Ondes récepteurs des cellules T dans l'ARNm d'un échantillon d'un patient. Différentes méthodes peuvent être utilisées pour établir un lien entre l'expression des gènes des cellules T et une maladie. Ces méthodes comprennent a - la production et l'analyse de banques d'expressions d'ADNc obtenu à partir de cellules T liées à la maladie pour déterminer la fréquence de gènes dominants b - l'analyse d'échantillons d'ADN génomique par Southern blot pour déterminer s'il existe des polymorphismes génétiques ou des réarrangements des gènes codant pour les récepteurs des cellules T c - l'analyse d'échantillons par obtention d'ADNc, amplification pâr PCR et hybridation avec des sondes marquées d - l'hybridation in situ de cellules T sans culture préalable des cellules T. Les amorces trouvent une application dans des réactions de PCR dans une méthode telle que celle définie sous c ci-dessus. Les anticorps monoclonaux, les fragments ou les dérivés de ces anticorps selon l'invention, notamment les anticorps anti Vg , peuvent être utilisés pour étudier des réponses immunitaires de type T, par exemple dans le domaine des maladies auto-immunes de la cancérologie, de l'allergie, de la transplantation et des maladies infectieuses. En particulier, le répertoire des différents segments variables i du récepteur T peut être étudié, qu'il s'agisse de cellules T du sang ou des tissus. D'une manière générale, les techniques utilisées peuvent être des méthodes in vitro ou in vivo. Dans les méthodes in vitro, les échantillons utilisés peuvent être des échantillons de fluides corporels ou des échantillons de tissus. Les techniques utilisées peuvent inclure notamment la cytofluorimétrie de flux pour analyser les lymphocytes T du sang ou des marquages par immunopéroxydase sur coupe anatomopathologique pour étudier les lymphocytes infiltrant les tissus. Dans les méthodes in vivo, les anticorps, leurs fragments ou leurs dérivés sont administrés par les voies habituelles, par exemple par la voie intraveineuse, et l'on détecte les liaisons immunospécifiques. Ceci peut être obtenu par exemple dans le cas où l'on utilise un anticorps marqué par un radioisotope. 2 - Les applications dans le domaine thérapeutique Les oligonucléotides contenus dans les séquences nucléotidiques selon l'invention peuvent être utilisés en thérapeutique comme oligonucléotides antisens. On sait-en effet qu'il est possible in vitro d'inhiber l'expression d'un gène transcript dans des lymphocytes humains en incubant ces lymphocytes avec un oligonucléotide antes en spécifique du gène en question (26). Ces oligonucléotides antisens comprennent généralement au moins 10 et, de préférence, au moins 16 nucléotides. Ces oligonucléotides antisens peuvent être notamment les séquences inversées et complémentées correspondant aux 20 nucléotides en amont du site d'initiation de la traduction (ATG). L'intérêt d'une utilisation in vitro d'oligonucléotides antisens spécifique d'un segment génique Zou J g est d'abolir (ou de diminuer fortement) I'expression d'un récepteur T comprenant ce segment V ou J et donc d'obtenir un phénomène de délétion clonale au niveau de la réactivité spécifique des lymphocytes T. Les oligonucléotides antes en peuvent non seulement être utilisés in vitro sur des lymphocytes T humains qui sont ensuite réinjectés, mais également in vivo par injection locale ou systémique de préférence après modification- pour augmenter la stabilité in vivo et la pénétration à l'intérieur des lymphocytes T de ces oligonucléotides. Les anticorps monoclonaux selon l'invention, notamment les anticorps anti V T.Les anticorps monoclonaux selon l'invention peuvent être utilisés en thérapeutique à des concentrations faiblement mitogéniques de façon à activer de façon spécifique certains sous-ensembles de cellules T ou peuvent être utilisés à des concentrations beaucoup plus élevées pour se fixer aux récepteurs concernés et ainsi marquer ces sous-ensembles en vue de leur élimination par le système réticulo-endothélial. Un critère important pour le traitement dlune maladie est l'aptitude à moduler des sous-ensembles de cellules T liées à une maladie. La nature exacte de cette modulation thérapeutique, à savoir bloquer ou supprimer un sous-ensemble particulier de cellules T ou au contraire stimuler et activer un sous-ensemble particulier, dépendra de la maladie en question et du sous-ensemble spécifique de cellules T concerné. Ce type de traitement présente un avantage par rapport aux traitements actuels utilisant des anticorps tels que le traitement par des anticorps anti CD3 chez des-patients ayant subi une transplantation rénale et ayant un problème de rejet, étant donné que grâce à l'invention il n'y aura pas de modulation de la -totalité de la population des cellules T mais seulement du sous-ensemble de cellules T exprimant la sous-famille T. Par ailleurs, la réponse des cellules T étant souvent oligoclonale, il convient généralement d'utiliser en thérapeutique des # cocktails de plusieurs anticorps. On peut en outre utiliser les anticorps anti V g pour sélectionner in vitro des lymphocytes T, par exemple par passage sur une colonne contenant des billes portant l'anticorps. Cette séparation de certains lymphocytes T peut être utilisée en vue d'une mise en culture de ces lymphocytes avant de les réinjecter au patient. En outrez on peut utiliser en thérapeutique tout ou partie des séquences peptidiques selon l'inventionr c'est-à-dire les séquences peptidiques codées par les séquences nucléotidiques selon l'invention ou les fragments de ces séquences (comprenant généralement au moins 8 à 10 aminoacides). Ces séquences ou ces fragments, administrés à l'homme ou à l'animal, peuvent agir en tant que leurre, c'est-à-dire qu'ils vont se fixer sur l'épitope porté par l'antigène néfaste et empêcher la réaction des cellules T normales avec l'antigène, en empêchant ainsi le développement d'une maladie agressive contre les déterminants du soi. Ils peuvent aussi être utilisés en tant qu'immunogènes dans la fabrication de vaccins (éventuellement après couplage à des porteurs protéiques). On décrira ci-après plus en détail l'obtention des séquences nucléotidiques selon l'invention, en se reportant aux Fig. annexées sur lesquelles - les Fig. 1 A à E donnent en alignement à la fois une séquence V i connue et une séquence partielle d'une extension selon l'invention pour les séquences respectives SEQ ID N 6 à 10, notées IGRa 08 à IGRa 12. Sur ces Figures, la numérotation des nucléotides commence au codon ATG d'initiation (qui est souligné). Les points indiquent les nucléotides identiques. Les séquences qui sont supposées être des séquences leader sont surlignées. - La Fig. 2 donne en alignement les nouvel les séquences J'(SEQ ID NO 12 à 20) notées IGR & O1 à IGRJa 09. Dans ces séquences-les signaux de recombinaison -de la lignée germinale sont soulignés. Les aminoacides correspondant aux codons hautement conservés sont marqués au-dessus des séquences. Les codons correspondant à une substitution en une position d'un aminoacide conservé sont doublement soulignés. - La Fig. 3 donne les analyses par Southern blot de l'ADN génomique traité par une enzyme de restriction en utilisant des sondes spécifiques des séquences SEQ ID N 1 à 5. Les enzymes de restriction utilisées sont EcoRI (colonne R), Hind III (colonne H) et Bam III (colonne B). Sur cette Figure, les triant gles marquent la position des fragments d'ADN s'hybridant de façon spécifique avec C. I - Obtention de l'ADNc et amplification par PCR On a utilisé comme source d'ARN des lymphocytes périphériques d'un individu. L'ARN total a été préparé selon la méthode à l'isothiocyanate de guanidinium et au chlorure de césium (Chirgwin (10)) ou selon la méthode en une seule étape par extraction avec de l'isothiocyanate de guanidinium, du phénol et du chloroforme (Chomczynski (11)). Le premier brin d'ADNc a été synthétisé dans un volume final de 50 microlitres à une température de 42" C pendant 1 heure en utilisant 5 microgrammes d'ARN total, la reverse transcriptase et une amorce A spécifique de la région C 4 constituée par la séquence 5'-GTTGCTCCAGGCCACAGCACTG (SEQ ID N 21). Ce matériau a été ensuite purifié par extraction au phénol/chloro forme et précipitation à l'acétate d'ammonium. Après sélection d'une fraction 0,45/1 kb sur gel d'agarose, on a réalisé l'addition d'une extrémité dG sur l'hétéro duplex ARN/ADNc dans un tampon d'addition CoCl2 avec 14 unités de terminal désoxynucléotidyl transférase (Tdt) pendant 30 mn à 37 C. La réaction a été stoppée par maintien à 70 C pendant 10 mn.NaOH IN (1l3 de volume) a été ajouté et l'échantillon a été mis à incuber à 50 C pendant 1 heure pour hydrolyser l'ARN puis a été neutralisé avec du Tris HCl 2M pH 8 et HCl 1N. Après extraction par un mélange phénol/ chloroforme le premier brin d'ADNc à extrémité G a été précipité avec de l'éthanol et soumis à une amplification en utilisant la technique PCR (Polymerase Chain Reaction décrite par Saiki et al. (12)) dans un volume final de 100 microlitres contenant 50 mM de KCl, 10 mM de Tris-Cl pH 8.3, 1,5 mM de MgCl2, 0,1 % (poids/ volume) de gélatine, 200 micromoles de dNTP, 2,5 unités de Taq polymérase et 100 picomoles de deux amorces.Les deux amorces utilisées sont, d'une part, une amorce poly-C (5'-GCATGCGCGCGGCCGCGGAGG-14C) (SEQ ID N 22) décrite par Loh et al. (13) ainsi qu'une amorce B spécifique de la région C O( (5'-GTCCATAGACCTC ATGTCCAGCACAG) (SEQ ID Ne 23). On effectue 25 cycles d'amplification suivis par une période de 15 mn d'élongation finale à 72 e C. Chaque cycle comprend une étape de dénaturation à 92 C pendant 1 minute, une étape d'hybridation à 55" C pendant 2 mn et une période d'élongation à 72 C pendant 4 mn. Les produits amplifiés sont ensuite précipités par de l'éthanol, remis en suspension dans de l'acétate de sodium 30 mM pH5, NaCl 50 mM, ZnCl2 1 mM, glycérol 5 % en volume, et 1/10 de ce matériau est purifié en fonction de la taille sur un gel d'agarose à bas point de fusion 1 %. Une seconde phase d'amplification est ensuite réalisée directement sur approximativement 10 % de la bande contenant l'agarose en suivant les mêmes conditions que précédemment, sauf qu'on utilise comme amorce C spécifique de la région C II - Clonaae et séquence des ADNc 1/3 du produit de la seconde amplification est mis à digérer avec Sac II, séparé sur gel d'agarose 1 % et purifié par absorption sur des billes de verre. Le matériau est inséré dans le vecteur Bluescript SK (Stratagene, La Jolla, U.S.A.) et les recombinants obtenus sont utilisés pour transformer des souches XL1-bleu de E. Coli (Stratagene). Après dépôt en présence de X-galactosidase et IPTG, on fait un test sur les colonies blanches en utilisant une technique "dot blot" et comme sonde un troisième oligonucléotide spécifique de la région C c4(5l-GTCACTGG ATTTAGAGTCT) (SEQ ID N- 25) marqué au 32p, On extrait l'ADN plasmidique des colonies positives et on séquence sous les deux brins par le procédé par terminaison de chaîne didésoxy (Sanger et al. (14)) avec de la Sequenase 2,0 (United States Biochemicals, Cleveland , Etats-Unis) en suivant les recommandations du fournisseur. Sauf pour la séquence SEQ ID N 5 5, toutes les séquences nucléotidiques ont été déterminées sur les deux brins en utilisant au moins deux clones distincts d'ADNc. Les séquences obtenues ont été comparées aux séquences publiées V i et J i en utilisant la méthode développée par Lipman et Pearson (15). Les codons de départ présumés ont été identifiés en recherchant la présence de la séquence consensus Kozak pour les sites d'initiation des traductions dans les cellules eucaryotes (Kozak (16)). La présence de séquences leader hydrophobes du côté N-terminal a été décelée par analyse de l'hydrophobicité selon la méthode décrite par Kyte (17!. III - Analvse Par Southern blot L'ADN a été extrait de la lignée cellulaire érythroleucémique humaine K562 et mis à digérer avec l'une des enzymes de restriction suivantes : Eco RI, Bam HI ou Hind III. L'ADN (15 microgrammes) a été soumis à une électrophorèse sur agarose 0,7 % et a été transféré sur des membranes de Nylon comme décrit par Triebel et al. (18). Les hybridations ont été réalisées à 65' C avec 6 X SSC, 0,5 % de SDS, 5 X Denhardt's et 100 microgrammes d'ADN de sperme de saumon dénaturé pendant 16 heures. Les membranes ont été lavées à 65 C avec 2 X SSC, 0,2 % % de SDS. On a utilisé comme sondes V &alpha; spécifiques des sondes obtenues par amplification d'ADNc V-J-C ( > 500 bp) comprenant des fragments V &alpha; correspondant aux séquences SEQ ID N 1 à 5 en utilisant comme amorce l'amorce poly-C et l'amorce C. Les sondes ont été purifiées sur gel d'agarose 1 %. Des sondes d'ADN marquées au 32 ont été préparées à partir des fragments purifiés sur agarose par la méthode de Feinberg (19). IV - Résultats En utilisant la méthode A-PCR, 308 ADNc qui hybrident avec la sonde C&alpha; ont été clonés, puis séquencés. Parmi ceux-ci, 172 ADNc correspondent à des régions variables V-J-Co & uniques. Les séquences Met J&alpha; de l'invention figurent dans la liste des séquences respectivement sous les SEQ ID N 1 à 11 et SEQ ID N' 12 à 20. tes séquences SEQ ID Ne 1 à 5 correspondent à des sous familles nouvelles tandis que les séquences SEQ ID N' 6 à 11 correspondent à des extensions de segments V &alpha; connus. 1. Séquences V&alpha; correspondant à. des sous-familles nouvelles Les analyses par Southern blot d'ADN de lignée germinale soumis à une digestion par les endonucléases, en utilisant des sondes V-J-C&alpha; compre- nant des fragments V&alpha; correspondant aux séquences SEQ ID N 1 à 5 ont été réalisées dans des conditions d'hybridation de "faible stringence" pour identifier le nombre de segments géniques V appartenant à chaque famille et pour caractériser des fragments de restriction d'ADN portant ces segments geniques V&alpha; Des résultats représentatifs sont reportés sur la Figure 3. Ces analyses montrent que la sous famille correspondant à la séquence SEQ ID N 3 comprend au moins deux segments géniques alors que les autres séquences (SEQ ID N 1, N 2, N 4 et N 5) correspondent probablement à des membres uniques. Les tailles des fragments de restriction de l'ADN germinal sont les suivantes SEQ ID N 1 : Eco RI 4,7 kb, Hind III 3,7 kb SEQ ID N0 2 : Eco RI 2,2 kb, Hind III 4,8 et 5,7 kb, Bam HI 25 kb SEQ ID N- 3 : Eco RI 4,6 et 7,5 kb, Hind III 4,2 et 6,4 kb, Bam HI 23 et 4,5 kb SEQ ID N 4 4 : Eco RI 7,6 kb, Hind III 18 kb, Bam HI 9 et 0,9 kb SEQ ID N0 5 : ECO RI 5,9 et 4,8 kb, Hind III 6,6 kb, Bam HI 6,5 kb. 2. Séquences correspondant à des extensions de séquences V&alpha; connues SEQ ID N 6 (IGR a 08) : Cette séquence correspond à une extension du côté 5' de la séquence du clone V&alpha; 1 AE1f (Klein et al. (21)). Les deux séquences alignées sont représentées sur la Figure 1A. SEQ ID N 7 (IGR a 09) : Cette séquence correspond à une extension codant pour l'extrémité NH2 terminale de la séquence V 4 2 AFîlO (Klein déjà cité). Les deux séquences alignées sont représentées sur la Fig. 1B. La séquence ID N' 7 correspond à une séquence consensus. On a observé en position 206 l'existence d'un T au lieu d'un C. SEQ ID N' 8 (IGR a 010) : Cette séquence correspond à une extension de la région 5' du clone V&alpha; HAP 35 (Yoshikai (22)). Les deux séquences alignées sont représentées sur la Fig. 1C. La séquence ID N' 8 correspond à une séquence consensus. On a observé en position 307 l'existence d'un G au lieu d'un A et en position 360 l'existence d'un T au lieu d'un C. SEQ ID N- 9 (IGR a 11). Cette séquence correspond à une extension du côté 3' de la séquence V&alpha; 7 HAP 12 (Yoshikai déjà cité). L'alignement des séquences est représenté sur la Fig. 1D. La séquence ID N 9 correspond à une séquence consensus. On a observé en position 86 l'existence d'un C au lieu d'un T. SEQ ID N 10 (IGR a 12) : Cette séquence comprend la région codante complète d'un gène de la sous famille V&alpha; 22 qui précédemment avait été identifié par la séquence partielle 113 bp AC9 (Klein déjà cité). Les deux séquences alignées sont représentées sur la Fig. 1E. SEQ ID N- 11 (IGRa 13) : Cette séquence correspond pour une partie aux clones HAVT 32 et HAVT 35 (appartenant à la sous-famille V i 16 (8) et qui ont été décrits comme des pseudogènes. En fait, par suite de l'addition d'un nucléotide en position 108, la SEQ ID N 11 code pour une région variable originale d'un récepteur des lymphocytes T. 3. Séquences J i On a représenté sur la Fig. 2 l'ensemble des nouvelles séquences J g . Parmi les 9 segments J , la plupart d'entre eux présentent une séquence d'aminoacides hautement conservée FGXGT des segments comme décrit par Yoshikai déjà cité. Cependant, pour le segment IGRJa 07 le résidu thréonine est remplacé par un résidu isoleucine. De plus, à la place du résidu phénylanine, on a trouvé un résidu cystéine dans IGRJa 02G. REFERENCES 1. Meuer, S.C., et al., J. Exp. Med. 1983. 157:705. 2. Moingeon, P., et al., Nature 1986a, 323:638. 3. Brenner, M.B., et al., Nature 1986. 322:145. 4. Bank, I., et al., Nature 1986. 322:179. 5. Davis, M.M., et al., Nature 1988.334:395. 6. Crews, S., et al., Cell 1981. 25:59. 7. Concannon, P., et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA 1986. 83:6598. 8. Kimura, N., et al., Eur. J. Immunol. 1987. 17:375. 9. Wilson, R.K., et al., Immunological Reviews 1988c. 101:149. 10. Chirgwin, J.M., et al., Biochemistry 1979. 18:5294. 11. Chomczynski, P. et al., Anal. Biochem. 1987, 162:156. 12. Saiki, R.K., et al.-, Science 1988. 239:487. 13. toh, E.Y., et al., Science 1989. 243:217. 14. Sanger, F., et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA 1977. 74:5463. 15. Lipman, D.J., et al., Science 1985. 227:1435. 16. Kozak, M., Nucl. Acids Res. 1984. 12:857. 17. Kyte, J., et al., R.F., J. Mol-. Biol. 1982. 157:105. 18. Triebel, F., et al., J. Immun. 1988. 140:300. 19. Feinberg, A.P., et al., Anal. Biochem. 1983. 132:6. 20. Mengle-Gaw, L., et al., The EMBO Journal, 1987. 6:2273. 21. Klein, M.H., et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA 1987. 84:6884. -22. Yoshikai, Y., et al., J.-Exp. med. 1986. 164:90 23. Naudenbark A., et al., Nature, 341, 541. 24. Janeway C., Nature, 341, 482. 25. Lin Y., J. Exp. Med., 171, 221. 26. Acha-Orbea H., -EMBO Journal, 1990,9, 12, 3815. 27. Kappler J., Science, 244, 811 28. Choi, Y., PNAS, 86, 8941. LISTE DES SEQUENCES I - INFORMATION GENERALE (1) DEMANDEUR : Société dite ROUSSEL UCLAF (2) TITRE DE L'INVENTION Séquences nucléotidiques codant pour des régions variables des chaînes &alpha; des récep teurs des lymphocytes T humains, segments peptidiques correspondants et les applica tions diagnostiques et thérapeutiques. (3) NOMBRE DE SEQUENCES : 25 II - INFORMATION POUR SEQ ID N 1 CARACTERISTIQUES DES SEQUENCES TYPE : nucléotide et sa protéine corres pondante LONGUEUR : 371 paires de bases NOMBRE DE BRINS : simple CONFIGURATION : linéaire TYPE DE MOLECULE : ADNc pour ARNm ORIGINE ORGANISME : humain LIGNEE CELLULAIRE : lymphocytes T humains CARACTERISTIQUES NOM DE L'ADN :- IGR a 02 SEQUENCE V&alpha; DESCRIPTION DE LA SEQUENCE AGTCAACTTC TGGGAGCAGT CTCTGCAGAA TAAAA ATG AAA AAG CAT 47 Met Lys Lys His 1 CTG ACG ACC TTC TTG GTG ATT TTG TGG CTT TAT TTT TAT AGG GGG AAT 95 Leu Thr Thr Phe Leu Val Ile Leu Trp Leu Tyr Phe Tyr Arg Gly Asn 5 10 15 20 GGC AAA AAC CAA GTG GAG CAG AGT CCT CAG TCC CTG ATC ATC CTG GAG 143 Gly Lys Asn Gln Val Glu Gln Ser Pro Gln Ser Leu Ile Ile Leu Glu 25 30 35 GGA AAG AAC TGC ACT CTT CAA TGC AAT TAT ACA GTG AGC CCC TTC AGC 191 Gly Lys Asn Cys Thr Leu Gln cys Asn Tyr Thr Val Ser Pro Phe Ser 40 45 50 AAC TTA AGG TGG TAT AAG CAA GAT ACT GGG AGA GGT CCT GTT TCC CTG 239 Asn Leu Arg Trp Tyr Lys Gln Asp Thr Gly Arg Gly Pro Val Ser Leu 55 60 65 ACA ATC ATG ACT TTC AGT GAG AAC ACA AAG TCG AAC GGA AGA TAT ACA 287 Thr Ile Met Thr Phe Ser Glu Asn Thr Lys Ser Asn Gly Arg Tyr Thr 70 75 80 GCA ACT CTG GAT GCA GAC ACA AAG CAA AGC TCT CTG CAC ATC ACA GCC 335 Ala Thr Leu Asp Ala Asp Thr Lys Gln Ser Ser Leu His Ile Thr Ala 85 90 95 100 TCC CAG CTC AGC GAT TCA GCC TCC TAC ATC TGT GTG 371 Ser Gln Leu Ser Asp Ser Ala Ser Tyr Ile Cys Val 105 110 III - INFORMATION POUR SEQ ID N 2 CARACTERISTIQUES DES SEQUENCES TYPE : nucléotide et sa protéine corres pondante LONGUEUR : 400 paires de bases NOMBRE DE BRINS : simple CONFIGURATION : linéaire TYPE DE MOLECULE : ADNc pour ARNm ORIGINE ORGANISME : humain LIGNEE CELLULAIRE : lymphocytes T humains CARACTERISTIQUES NOM DE L'ADN :IGR a 03 SEQUENCE V&alpha; DESCRIPTION DE LA SEQUENCE GACTCTAAGC CCAAGAGAGT TTCTTGAAGC AAAAAAAAAA 40 AAAACCCATT CAGGAAATAA TTCTTTGCTG ATAAGG ATG CTC CTT GAA CAT TTA 94 Met Leu Leu Glu His Leu 1 5 TTA ATA ATC TTG TGG ATG CAG CTC ACA TGG GTC AGT GGT CAA CAG CTG 142 Leu Ile Ile Leu Trp Net Gln Leu Thr Trp Val Ser Gly Gln Gln Leu 10 15 20 AAT CAG ACT CCT CAA TCT ATG TTT ATC CAG GAA GGA GAA GAT GTC TCC 190 Asn Gln Ser Pro Gln Ser Met Phe Ile Gln Glu Gly Glu Asp Val Ser 25 30 35 ATG AAC TGC ACT TCT TCA AGC ATA TTT AAC ACC TGG CTA TGG TAC AAG 238 Met Asn Cys Thr Ser Ser Ser Ile Phe Asn Thr Trp Leu Trp Tyr Lys 40 45 50 CAG GAC CCT GGG GAA GGT CCT GTC CTC TTC ATA GCC TTA TAT AAG GCT 286 Gln Asp Pro Gly Glu Gly Pro Val Leu Leu Ile Ala Leu Tyr Lys Ala 55 60 65 70 GGT GAA TTC ACC TCA AAT GGA AGA CTC ACT CCT CAG TTT GGT ATA ACC 334 Gly Glu Leu Thr Ser Asn Gly Arg Leu Thr Ala Gln Phe Gly Ile Thr 75 80 85 AGA AAG GAC AGC TTC CTG AAT. ATC TCA GCA TCC ATA CCT AGT GAT GTA 382 Arg Lys Asp Ser Phe Leu Asn Ile Ser Ala Ser Ile Pro Ser Asp Val 90 95 100 GGT ATC TAC TTC TGT GCT 400 Gly Ile Tyr Phe Cys Ala 105 IV - INFORMATION POUR SEQ ID N 3 CARACTERISTIQUES DES SEQUENCES TYPE . nucléotide et sa protéine corres pondante LONGUEUR : 339 paires de bases NOMBRE DE BRINS : simple CONFIGURATION : linéaire TYPE DE MOLECULE : ADNc pour ARNm ORIGINE ORGANISME : humain LIGNEE CELLULAIRE : lymphocytes T humains CARACTERISTIQUES NOM DE L'ADN :IGR a 04 SEQUENCE V DESCRIPTION DE LA SEQUENCE AGCTAAGGG ATG GAG ACT GTT CTG CAA GTA CTC CTA GGG ATA TTG GGG 48 Met Glu Thr Val Leu Gln Val Leu Leu Gly Ile Leu Gly 1 5 10 TTC 'GAA GCA GCC TGG GTC AGT AGC CAA GAA CTG GAG CAG AGT CCT CAG 96 Phe Gln Ala Ala Trp Val Ser Ser Gln Glu Leu Glu Gln Ser Pro Gln 15 20 25 TCC TTG ATC GTC CAA GAG GGA AAG AAT CTC ACC ATA AAC TGC ACG TCA 144 Ser Leu Ile Val Gln Glu Gly Lys Asn Leu Thr Ile Asn Cys Thr Ser 30 35 40 45 TCA AAG ACG TTA TAT GGC TTA TAC TGG TAT AAG CAA AAG TAT GGT GAA 192 Ser Lys Thr Leu Tyr Gly Leu Tyr Trp Tyr Lys Gln Lys Tyr Gly Glu 50 55 60 GGT CTT ATC TTG TTG ATG ATC CTA CAG AAA GGT GGG GAA GAG AAA AGT 240 Gly Leu Ile Phe Leu Met Met Leu Gln Lys Gly Gly Glu Glu Lys Ser 65 70 75 CAT GAA AAG ATA ACT GCC AAC TTC GAT GAG AAA AAG CAG CAA AGT TCC 288 His Glu Lys Ile Thr Ala Lys Leu Asp Glu Lys Lys Gln Gln Ser Ser 80 85 90 CTG CAT ATC ACA GCC TCC CAG CCC AGC CAT GCA GGC ATC TAC CTC TGT 336 Leu His Ile Thr Ala Ser Gln Pro Ser His Ala Gly Ile Tyr Leu Cys 95 100 105 GGA 339 Gly 110 V - INFORMATION POUR SEQ ID N 4 CARACTERISTIQUES DES SEQUENCES TYPE : nucléotide et sa protéine corres pondante LONGUEUR : 335 paires de bases NOMBRE DE BRINS : simple CONFIGURATION : linéaire TYPE DE MOLECULE : ADNc pour ARNm ORIGINE ORGANISME : humain LIGNEE CELLULAIRE : lymphocytes T humains CARACTERISTIQUES NOM DE L'ADN :IGR a 05 SEQUENCE V&alpha; DESCRIPTION DE LA SEQUENCE AGAAAAAAAA AATGAAGAAG CTACTAGCAA TGATCCTGTG GCTTCAACTA 50 GACCGGTTAA GTGGAGAGCT GAAAGTG GAA CAA AAC CCT CTG TTG 95 Glu Gln Asn Pro Leu Phe 1 5 CTG AGC ATG CAG GAG GGA AAA AAC TAT ACC ATC TAC TGC AAT TAT TCA 143 Leu Ser Met Gln Glu Gly Lys Asn Tyr Thr Ile Tyr cys Asn Tyr Ser 10 15 20 ACC ACT TCA GAC AGA CTG TAT TGG TAC AGG CAG GAT CCT GGG AAA AGT 191 Thr Thr Ser Asp Arg Leu Tyr Trp Tyr Arg Gln Asp Pro Gly Lys Ser 25 30 35 CTG GAA TCT CTC TTT GTG TTG CTA TCA AAT GGA GCA GTG AAC CAG GAG 239 Leu Glu Ser Leu Phe Val Leu Leu Ser Asn Gly Ala Val Lys Gln Glu 40 45 50 GGA CGA TTA ATG GCC TCA CTT GAT ACC AAA GCC CGT CTC AGC ACC GTG 287 Gly Arg Leu Met Ala Ser Leu Asp Thr Lys Ala Arg Leu Ser Thr Leu 55 60 65 70 CAC ATC ACA GCT GCC GTG CAT GAC CTC TCT GCC ACC TAC TTC TGT GCC 335 His Ile Thr Ala Ala Val His Asp Leu Ser Ala Thr Tyr Phe Cys Ala 75 80 85 VI - INFORMATION POUR SEQ ID N 5 CARACTERISTIQUES DES SEQUENCES TYPE : nucléotide et sa protéine corres pondante LONGUEUR : 361 paires de bases NOMBRE DE BRINS : simple CONFIGURATION : linéaire TYPE DE MOLECULE : ADNc pour ARNm ORIGINE ORGANISME : humain LIGNEE CELLULAIRE : lymphocytes T humains CARACTERISTIQUES NOM DE L'ADN :IGR a 07 SEQUENCE V&alpha; DESCRIPTION DE LA SEQUENCE GAAGCTGACT GGATATTCTG GCAGGCCAAG G ATG GAG ACT CTC CTG 46 Met Glu Thr Leu Leu 1 Es AAA CTG CCT TCA GGC ACC TTC TTC TGG CAG TTC ACC TGG GTG GGA AGC 94 Lys Val Pro Ser Gly Thr Leu Leu Trp Gln Leu Thr Trp Val Gly Ser 10 15 20 CAA CAA CCA GTG CAG AGT CCT CAA GCC GTG ATC CTC CGA GAA GGG GAA 142 Gln Gln Pro Val Gln Ser Pro Gln Ala Val Ile Leu Arg Glu Gly Glu 25 30 35 GAT GCT GTC ACC AAC TGC AGT TCC TCC AAG GCT TTA TAT TCT GTA CAG 190 Asp Ala Val Thr Asn Cys Ser Ser Ser Lys Ala Leu Tyr Ser Val His 40 45 50 TGG TAC AGG CAG AAG CAT GGT GAA GCA CCC GTC TTG CTG ATG ATA TTA 238 Trp Tyr Arg Gln Lys His Gly Glu Ala Pro Val Phe Leu Met Ile Leu 55 60 65 CTG AAG GGT GGA GAA CAG ATG CGT CGT GAA AAA ATA TCT GCT TCA TTT 286 Leu Lys Gly Gly Glu Gln Met Arg Arg Glu Lys Ile Ser Ala Ser Phe 70 75 80 85 AAT GAA AAA AAG CAG CAA AGC TCC CTG TAC CTT ACG GCC TCC CAG CTC 334 Asn Glu Lys Lys Gln Gln Ser Ser Leu Tyr Leu Thr Ala Ser Gln Leu 90 95 100 AGT TAC TCA GGA ACC TAC TTG TGC GGG 361 Ser Tyr Ser Gly Thr Tyr Phe Cys Gly 105 110 VII - INFORMATION POUR SEQ ID N 6 CARACTERISTIQUES DES SEQUENCES TYPE : nucléotide et sa protéine corres pondante LONGUEUR : 569 paires de bases NOMBRE DE BRINS : simple CONFIGURATION : linéaire TYPE DE MOLECULE : ADNc pour ARNm ORIGINE ORGANISME : humain LIGNEE CELLULAIRE : lymphocytes T humains CARACTERISTIQUES NOM DE L'ADN :IGR a 08 SEQUENCE V&alpha; 1 DESCRIPTION DE LA SEQUENCE TCAGTTTCTT 10 CTTCCTGCAG CTGGTTGAGT TCTTTCCAGA CAAAGACAAG TGACAAGAAT TAGAGGTTTA 70 AAAAGCAACC AGATTCATCT CAGCAGCTTT TGTAGTTTTA AATAAGCAAG GAGTTTCTCC 130 AGCGAAACTT CCTCACACCT CTTGGTCTTG GTCTCTTCAG ACACTTTCCT TCCTGTTCTC 190 TGGAGATCTT GCAGAAAAGA GCCTGCAGTG TTTCCCTTGC TCAGCC ATG CTC CTG 245 Met Leu Leu 1 GAG CTT ATC CCA CTG CTG GGG ATA CAT TTT GTC CTG AGA ACT GCC AGA 293 Glu Leu Ile Pro Leu Leu Gly Ile His Phe Val Leu Arg Thr Ala Arg 5 10 15 GCC CAG TCA CTG ACC CAG CCT GAC ATC CAC ATC ACT GTC TCT GAA GGA 341 -Ala Gln Ser Val Thr Gln Pro Asp Ile His Ile Thr Val Ser Glu Gly 20 25 30 35 GCC TCA CTG GAG TTG AGA TGT AAC TAT TCC TAT GGG GCA ACA CCT TAT 389 Ala Ser Leu Glu Leu Arg Cys Asn Tyr Ser Tyr Gly Ala Thr Pro Tyr 40 45 50 CTC TTC TGG TAT GTC CAG TCC CCC GGC CAA GGC CTC CAG CGT CTC CTG 437 Leu Phe Trp Tyr Val Gln Ser Pro Gly Gln Gly Leu Gln Leu Leu Leu 55 60 65 AAG TAC TTT TCA GGA GAC ACT CTG GTT CAA GGC ATT AAA GGC TTT GAG 485 Lys Tyr Phe Ser Gly Asp Thr Leu Val Gln Gly Ile Lys Gly Phe Glu 70 75 80 GCT GAA TTT AAG AGG AGT CAA TCT TCC TTC AAC CTG AGG AAA CCC TCT 533 Ala Glu Phe Lys Arg Ser Gln Ser Ser Phe Asn Leu Arg Lys Pro Ser 85 90 95 GTG CAT TGG AGT GAT GCT GCT GAG TAC TTC TGT GCT 569 Val His Trp Ser Asp Ala Ala Glu Tyr Phe Cys Ala 100 105 110 VIII - INFORMATION POUR SEQ ID N 7 CARACTERISTIQUES DES SEQUENCES TYPE : nucléotide et sa protéine corres pondante LONGUEUR : 330 paires de bases NOMBRE DE BRINS : simple CONFIGURATION : linéaire TYPE DE MOLECULE : ADNc pour ARNm SEQUENCE CONSENSUS ORIGINE ORGANISME : humain LIGNEE CELLULAIRE : lymphocytes T humains CARACTERISTIQUES NOM DE L'ADN :IGR a 09 SEQUENCE V&alpha; 2 DESCRIPTION DE LA SEQUENCE AAA TGG TTC AGA GTT TTA CTA GTG ATC CTG TGG CTT CAG GTC AGC CGG 48 Lys Ser Leu Arg Val Leu Leu Val Ile Leu Trp Leu Gln Leu Ser Arg 1 5 10 15 GTT TGG AGC CAA CAG AAG GAG GTC GAG CAG AAT TCT GCA CCC GTG AGT 96 Val Trp Ser Gln Gln Lys Glu Val Glu Gln Asn Ser Gly Pro Leu Ser 20 25 30 GTT CCA GAG GGA GCC ATT GCC TCT CTC AAC TGC ACT TAC AGT GAC CGA 144 Val Pro Glu Gly Ala Ile Ala Ser Leu Asn Cys Thr Tyr Ser Asp Arg 35 40 45 GGT TGG CAG TCC TTG TTG TGG TAC AGA CAA TAT TCT GGG AAA AGC CCT 192 Gly Ser Gln Ser Phe Phe Trp Tyr Arg Gln Tyr Ser Gly Lys Ser Pro 50 55 60 GAG TTG ATA ATG TCC ATA TAC TCC AAT GGT GAC AAA GAA GAT GGA AGG 240 Glu Leu Ile Met Ser Ile Tyr Ser Asn Gly Asp Lys Glu Asp Gly Arg 65 70 75 80 TTT ACA GCA CAG CTC AAT AAA GCC AGC CAG TAT GTT TCT CTG CTC ATC 288 Phe Thr Ala Gln Leu Asn-Lys Ala Ser Gln Tyr Val Ser Leu Leu Ile 85 90 95 AGA GAC TCC CAG CCC AGT GAT TCA GCC ACC TAC CTC TGT GCC 330 Arg Asp Ser Gln Pro Ser Asp Ser Ala Thr Tyr Leu Cys Ala 100 105 110 IX - INFORMATION POUR SEQ ID N 8 CARACTERISTIQUES DES SEQUENCES TYPE : nucléotide et sa protéine corres pondante LONGUEUR : 400 paires de bases NOMBRE DE BRINS : simple CONFIGURATION : linéaire TYPE DE MOLECULE : ADNc pour ARNm SEQUENCE CONSENSUS ORIGINE ORGANISME : humain LIGNEE CELLULAIRE : lymphocytes T humains CARACTERISTIQUES NOM DE L'ADN :IGR a 10 SEQUENCE V&alpha; 5 DESCRIPTION DE LA SEQUENCE GCCAAACAGA ATGGCTTTTT GGCTGAGAAG GCTGGGTCTA CATTTCAGGC 50 CACATTTGGG GAGACGA ATG GAG TCA TCC CTG GGA GGT GTT TTG 94 Met Glu Ser Ser Leu Glv Glv Val Leu 1 5 CTG ATT TTC TCC CTT CAA GTG GAC TGG GTG AAG AGC CAA AAC ATA GAA 142 Leu Ile Leu Trp Leu Gln Val Asp Trp Val Lys Ser Gln Lys Ile Glu 10 15 20 25 CAG AAT TCC GAG GCC CTG AAC ATT CAG GAG GGT AAA ACG GCC ACC CTG 190 Gln Asp Ser Glu Ala Leu Asn Ile Gln Glu Glv Lys Thr Ala Thr Leu 30 35 40 ACC TGC AAC TAT ACA AAC TAT TCT CCA GCA TAC TTA CAG TGG TAC CGA 238 Thr Cys Asn Tyr Thr Asn Tyr Ser Pro Ala Tyr Leu Gln Trp Tyr Arg 45 50 55 CAA GAT CCA GGA AGA GGC CCT GTT TTC TTG CTA CTC ATA CGT GAA AAT 286 Gln Asp Pro Glv Arg Glv Pro Val Phe Leu Leu Leu Ile Arg Glu Asn 60 65 70 GAG AAA GAA AAA AGG AAA GAA AGA CTG AAG GTC ACC TTT GAT ACC ACC 334 Glu Lys Glu Lys Arg Lys Glu Arg Leu Lys Val Thr Phe Asp Thr Thr 75 80 85 CTT AAA CAG AGT TTG TTT CAT ATC ACA GCC TCC CAG CCT GCA GAC TCA 382 Leu Lvs Gln Ser Leu Phe His Ile Thr Ala Ser Gln Pro Ala Asp Ser 90 95 100 105 GCT ACC TAC CTC TGT GCT 400 Ala Thr Tyr Leu Cys Ala 110 x - INFORMATION POUR SEQ ID N 9 CARACTERISTIQUES DES SEQUENCES TYPE : nucléotide et sa protéine corres pondante LONGUEUR : 386 paires de bases NOMBRE DE BRINS : simple CONFIGURATION : linéaire TYPE DE MOLECULE : ADNc pour ARNm SEQUENCE CONSENSUS ORIGINE ORGANISME : humain LIGNEE CELLULAIRE : lymphocytes T humains CARACTERISTIQUES NOM DE L'ADN :IGR a 11 SEQUENCE V&alpha;7 DESCRIPTION DE LA SEQUENCE GCCTTCTGCA GACTCCAATG GCTCAGGAAC TGGGAATGCA GTGCCAGGCT 50 CGTGGTATCC TGCAGCAG ATG TGG GGA GTT TTG CTT CTT TAT GTT 95 Met Trp Gly Val Phe Leu Leu Tyr Val 1 5 TCC ATG AAG ATG GGA GGC ACT ACA GGA CAA AAC ATT GAC CAG CCC ACT 143 Ser Met Lys Met Gly Gly Thr Thr Gly Gln Asn Ile Asp Gln Pro Thr 10 15 20 25 GAG ATG ACA GCT ACG GAA GGT GCC ATT GTC CAG ATC AAC TGC ACG TAC 191 Glu Met Thr Ala Thr Glu Gly Ala Ile Val Gln Ile Asn Cys Thr Tyr 30 35 40 CAG ACA TCT GGG TTC AAC GGG CTG TTC TGG TAC CAG CAA CAT GCT GGC 239 Gln Thr Ser Gly Phe Asn Gly Leu Phe Trp Tyr Gln Gln His Ala Gly 45 50 55 GAA GCA CCC ACA TTT CTG TCT TAC AAT GTT CTG GAT GGT TTG GAG GAG 287 Glu Ala Pro Thr Phe Leu Ser Tyr Asn Val Leu Asp Gly Leu Glu Glu 60 65 70 AAA GGT CGT TTT TCT TCA TTC CTT AGT CGG TCT AAA GGG TAC AGT TAC 335 Lys Gly Arg Phe Ser Ser Phe Leu Ser Arg Ser Lys Gly Tyr Ser Tyr 75 80 85 CTC CTT TTG AAG GAG CTC CAG ATG AAA GAC TCT GCC TCT TAC CTC TGT 383 Leu Leu Leu Lys Glu Leu Gln Met Lys Asp Ser Ala Ser Tyr Leu Cys 90 95 100 105 GCT 386 Ala XI - INFORMATION POUR SEQ IN N 10 CARACTERISTIQUES DES SEQUENCES TYPE : nucléotide et sa protéine corres pondante LONGUEUR : 383 paires de bases NOMBRE DE BRINS : simple CONFIGURATION : linéaire TYPE DE MOLECULE : ADNc pour ARNm ORIGINE ORGANISME : humain LIGNEE CELLULAIRE : lymphocytes T humains CARACTERISTIQUES NOM DE L'ADN :IGR a 12 SEQUENCE V&alpha;22 DESCRIPTION DE LA SEQUENCE TGTGACTTCT TCATGTTAAG GATCAAGACC ATTATTTGGG TAACACACTA 50 AAG ATG AAC TAT TCT CCA GGC TTA GTA TCT CTG ATA GTG TTA CTC 95 Met Asn Tyr Ser Pro Gly Leu Val Ser Leu lie Leu Leu Leu 1 5 10 CTT GGA AGA ACC CGT GGA GAT TCA GTG ACC CAG ATC GAA GGG CCA GTG 143 Leu Gly Arg Thr Arg Gly Asp Ser Val Thr Gln Met Glu Gly Pro Val 15 20 25 30 ACT GTG TCA GAA GAG GCC TTC CTG ACT ATA AAC TGC ACG TAC ACA GCC 191 Thr Leu Ser Glu Glu Ala Phe Leu Thr Ile Asn Cys Thr Tyr Thr Ala 35 40 45 ACA GGA TAC CCT TCC CTT TTG TGG TAT GTC CAA TAT CCT GGA GAA GGT 239 Thr Gly Tyr Pro Ser Leu Phe Trp Tyr Val Gln Tyr Pro Gly Glu Gly 50 55 60 CTA CAG GTG GTG CTG AAA GCC ACG AAG CGT GAT GAC AAG GGA AGC AAC 287 Leu Gln Leu Leu Leu Lys Ala Thr Lys Ala Asp Asp Lys Gly Ser Asn 65 70 75 AAA GGT TTT GAA GCC ACA TAC CGT AAA GAA ACC ACT TCT TTC CAC TTC 335 Lys Gly Phe Glu Ala Thr Tyr Arg Lys Glu Thr Thr Ser Phe His Leu 80 85 90 GAG AAA GGC TCA GTT CAA GTG TCA GAC TCA GCG GTG TAC TTG TGT CGT 383 Glu Lys Gly Ser Val Gln Val Ser Asp Ser Ala Val Tyr Phe Cys Ala 95 100 105 .110 XII - INFORMATION POUR SEQ ID N' 11 CARACTERISTIQUES DES SEQUENCES TYPE : nucléotide et sa protéine corres pondante LONGUEUR : 364 paires de bases NOMBRE DE BRINS : simple CONFIGURATION : linéaire TYPE DE MOLECULE : ADNc pour ARNm ORIGINE ORGANISME : humain LIGNEE CELLULAIRE : lymphocytes T humains CARACTERISTIQUES NOM DE L'ADN :IGR a 13 SEQUENCE V&alpha;16 DESCRIPTION DE LA SEQUENCE AATCCCGCCC GCCGTGAGCT TAGCTGGAGC C ATG GCC TCT GCA CCC 46 Met Ala Ser Ala Pro 1 5 ATC TCG ATG CTT GCG ATG CTC TTC ACA TTG AGT GGG CTG AGA AGA GCT CAG 94 Ile Ser Met Leu Ala Met Leu Phe Thr Leu Ser Gly Leu Arg Ala Gln 10 15 20 TCA GTG CGT CAG CCG GAA GAT CAG GTc AAC GTT GCT GAA GGG AAT CCT 142 Ser Val Ala Gln Pro Glu Asp Gln Val Asn Val Ala Glu Gly Asn Pro 25 30 35 CTG ACT GTG AAA TGC ACC TAT TCA GTC TCT GGA AAC CCT TAT CTT TTT 190 Leu Thr Val Lys CYS Thr Tyr Ser Val Ser Gly Asn Pro Tyr Leu Phe 40 45 50 TGG TAT GTT CAA TAC CCC AAC CGA GGC GTG CAG TTG CTT CTG AAA TAC 238 Trp Tyr Val Gln Tyr Pro Asn Arg Gly Leu Gln Phe Leu Leu Lys Tyr 55 60 65 ATC ACA GGG GAT AAC CTG GTT AAA GGC AGC TAT GGC TTT GAA GCT GAA 286 Ile Thr Gly Asp Asn Leu Val Lys Gly Ser Tyr Gly Phe Glu Ala Glu 70 75 80 85 TTT AAC AAG AGC CAA ACC TCC TTC CAC CTG AAG AAA CCA TCT GCC CTT 334 Phe Asn Lys Ser Gln Thr Ser Phe His Leu Lys Lys Pro Ser Ala Leu 90 95 100 GTG AGC GAC TCC GCT TTG TAC TTc TGT GCT 364 Val Ser Asp Ser Ala Leu Tyr Phe Cys Ala 105 110 XIII - INFORMATION POUR SEQ ID N 12 CARACTERISTIQUES DES SEQUENCES TYPE : nucléotide et sa protéine corres pondante LONGUEUR : 264 paires de bases NOMBRE DE BRINS : simple CONFIGURATION : linéaire TYPE DE MOLECULE : ADNc pour ARNm ORIGINE ORGANISME : humain LIGNEE CELLULAIRE : lymphocytes T humains CARACTERISTIQUES NOM DE L'ADN :Ja 01 SEQUENCE DESCRIPTION DE LA SEQUENCE CCTTCAAGGA AAATTAAGGC AAATAGAATT GGGCTGGGGA GTTGCTACTT ATTAGTATTC 60 CTCCCACGTT CTAACCTAAT TATAAGGAGG TTGTTTTGGC CATGGGCAGT CATCTCAGGT 120 TTTGTTTTCC TGCTTTCCTC CCTAACCTCC ACCTGTCTTC CTAGAGGCCT GAGTCAAGGT 180 TATTGCAATA GCACTAAAGA CTGTGT AAC ACC AAT GCA GGC AAA TCA ACC TTT 233 Asn Thr Asn Ala Gly Lys Ser Thr Phe 1 5 GGG GAT GGG ACT ACG CTC ACT GTG AAG CCA 264 Gly Asp Gly Thr Thr Leu Thr Val Lys Pro 10 15 XIV - INFORMATION POUR SEQ ID N 13 CARACTERISTIQUES DES SEQUENCES TYPE : nucléotide et sa protéine corres pondante LONGUEUR : 277 paires de bases NOMBRE DE BRINS : simple CONFIGURATION : linéaire TYPE DE MOLECULE : ADNc pour ARNm ORIGINE ORGANISME : humain LIGNEE CELLULAIRE : lymphocytes T humains CARACTERISTIQUES NOM DE L'ADN : Ja 02 SEQUENCE J&alpha; DESCRIPTION DE LA SEQUENCE AAGGACACAG ACTGCCTGCA TGAAGGCTGG AGCTGGGCCC AGGATGAGGA AAGGCCTCAG 60 GAAGGAAGGG CTGACACGAA ATAAGGAATA CCATGGCATT CATGAGATGT GCGTCTGAAT 120 CCTCTCTCTT GCCTGAGAAG CTTTAGCTTC CACCTTGAGA CACAAAACAT GTGGTTATGA 180 AGAGATGACA AGGTTTTTGT AAAAGAATGA GCCATTGTGG ATA GGC TTT GGG AAT 234 Ile Gly Phe Gly Asn i 5 GTG CTG CAT TGC GGG TCC GGC ACT CAA GTG ATT GTT TTA CCA 277 Val Leu His Cys Gly Ser Gly Thr Gln Val Ile Val Leu Pro 10 15 -XV - INFORMATION POUR SEQ ID.N 14 CARACTERISTIQUES DES SEQUENCES TYPE : nucléotide et sa protéine corres pondant LONGUEUR : 58 paires de bases NOMBRE DE BRINS : simple CONFIGURATION : linéaire TYPE DE MOLECULES : ADNc pour ARNm ORIGINE ORGANISME : humain LIGNEE CELLULAIRE : lymphocytes T humains CARACTERISTIQUES NOM DE L'ADN : Ja 03 SEQUENCE J&alpha; DESCRIPTION DE LA SEQUENCE AA ACC AGT GGC TCT AGG TTG ACC TTT GGG GAA GGA ACA CAG CTC ACA 47 Thr Ser Gly Ser Arg Leu Thr Phe Gly Glu Gly Thr Gln Leu Thr I 5 10 15 GTG AAT CCT GA 58 Val Asn Pro XVI - INFORMATION POUR SEQ ID N- 15 CARACTERISTIQUES DES SEQUENCES TYPE : nucléotide et sa protéine corres pondante LONGUEUR : 60 paires de bases NOMBRE DE BRINS : simple CONFIGURATION : linéaire TYPE DE MOLECULE : ADNc pour ARNm ORIGINE ORGANISME : humain LIGNEE CELLULAIRE : lymphocytes T humains CARACTERISTIQUES NOM DE L'ADN :Ja 04 SEQUENCE J&alpha; DESCRIPTION DE LA SEQUENCE TA GAT ACT GGA GGC TTC AAA ACT ATC TTT GGA GCA GGA ACA AGA CTA 47 Asp Thr Gly Gly Phe Lys Thr Ile Phe Gly Ala Gly Thr Arg Leu 1 5 10 15 TTT GTT AAA GCA A 60 Phe Val Lys Ala XVII - INFORMATION POUR SEQ ID N- 16 CARACTERISTIQUES DES SEQUENCES TYPE : nucléotide et sa protéine corres pondante LONGUEUR : 59 paires de bases NOMBRE DE BRINS : simple CONFIGURATION : linéaire TYPE DE MOLECULE : ADNc pour ARNm ORIGINE ORGANISME : humain LIGNEE CELLULAIRE : lymphocytes T humains CARACTERISTIQUES NOM DE L'ADN :Ja 05 SEQUENCE J&alpha; DESCRIPTION DE LA SEQUENCE C CTA AGT GGG GCA AAC AAC GTC TTG TTT GGG ACT GGA ACG AGA GTG 46 L'eu Tht Oiy Ala Asn Asn Val Phe Phe Gly Tht Gly Tht Atg L'eu i 5 10 15 ACC GTT CTT CCC T 59 Thr Val leu Pro XVIII - INFORMATION POUR SEQ ID N 17 CARACTERISTIQUES DES SEQUENCES TYPE : nucléotide et sa protéine corres pondante LONGUEUR : 60 paires de bases NOMBRE DE BRINS : simple CONFIGURATION : linéaire TYPE DE MOLECULE :ADNc pour ARNm ORIGINE ORGANISME : humain LIGNEE CELLULAIRE : lymphocytes T humains CARACTERISTIQUES NOM DE L'ADN : Ja 06 SEQUENCE J&alpha; DESCRIPTION DE LA SEQUENCE AT GGA GGA AGC CAA GGA AAT CTC ATC TTT GGA AAA GGC ACT AAA CTC 47 Gly Gly Ser Gln Gly Asn Leu Ile Phe Gly Lys Gly Thr Lys Leu i 5 10 15 TGT GTT AAA CCA A 60 Ser Val Lys Pro XIX - INFORMATION POUR SEQ ID N- 18 CARACTERISTIQUES DES SEQUENCES TYPE : nucléotide et sa protéine corres pondante LONGUEUR : 56 paires de bases NOMBRE DE BRINS : simple CONFIGURATION : linéaire TYPE DE MOLECULE : ADNc pour ARNm ORIGINE ORGANISME : humain LIGNEE CELLULAIRE : lymphocytes T humains CARACTERISTIQUES NOM DE L'ADN :Ja 07 SEQUENCE J&alpha; DESCRIPTION DE LA SEQUENCE GGA GCC AAT AGT AAG CTG ACA TTT GGA AAA GGA ATA ACT CTG AGT GTT 48 Gly Ala Asn Ser Lys Leu Thr Phe Gly Lys Gly Ile Thr Leu Ser Val 1 5 10 15 AGA CCA GA 56 Arg Pro XX - INFORMATION POUR SEQ ID-N 19 CARACTERISTIQUES DES SEQUENCES TYPE : nucléotide et sa protéine corres- pondante LONGUEUR : 57 paires de bases NOMBRE DE BRINS : simple CONFIGURATION : linéaire TYPE DE MOLECULE : ADNc pour ARMm ORIGINE ORGANISME : humain LIGNEE CELLULAIRE : lymphocytes T humains CARACTERISTIQUES NOM DE L'ADN :Ja 08 SEQUENCE J&alpha; DESCRIPTION DE LA SEQUENCE GT GGT GGC TAC AAT AAG CTG ATT TTT GGA GCA GGG ACC AGG CTG GCT 47 Ciy Oly Tyr Asn Lys L'eu île Phe Oiy Ala Gly Tht Arg L'eu Ala i 5 10 15 GTA CAC CCA T 57 Val His Pro XXI - INFORMATION POUR SEQ ID N- 20 CARACTERISTIQUES DES SEQUENCES TYPE : nucléotide et sa protéine corres pondante LONGUEUR : 50 paires de bases NOMBRE DE BRINS : simple CONFIGURATION : linéaire TYPE DE MOLECULES : ADNc pour ARNm ORIGINE ORGANISME : humain LIGNEE CELLULAIRE : lymphocytes T humains CARACTERISTIQUES NOM DE L'ADN : Ja 09 SEQUENCE Jd DESCRIPTION DE LA SEQUENCE T GGA AAC AAG CTG GTC TTT GGC GCA GGA ACC ATT CTG AGA GTC AAG 46 Gly Asn Lys Leu Val Phe Gly Ala Gly Thr Ile Leu Arg Val Lys 10 15 i 5 10 15 TCC T 50 Ser XXII - INFORMATION POUR SEQ ID N 21 à 25 TYPE OLIGONUCLEOTIDES DESCRIPTION DES SEQUENCES Ne 21 A (5'-GTTGCTCCAGGCCACAGCACTG) N- 22 poly C (5'-GCATGCGCGCGGCCGCGGAGG-14C) N 23 B (5'-GTCCATAGACCTCATGTCCAGCACAG) N 24 C (5'-ATACACATCAGAATTCTTACTTTG) N 25 D (5'-GTCACTGGATTTAGAGTCT) REVENDICATIONS 1. Séquences nucléotidiques codant pour des régions variables de chaînes &alpha; des récepteurs des lymphocytes T humains, correspondant à des ADNc comprenant des séquences nucléotidiques choisies parmi l'un quelconque a - des segments Vi correspondant à l'une des séquences SEQ ID N 1 à 11, et b - des segments Jd correspondant à l'une des séquences SEQ ID N' 12 à 20 et les séquences qui en diffèrent par un ou plusieurs nucléotides. 2. Séquences selon la revendication 1 codant pour des régions variables des chaînes des récepteurs des lymphocytes T humains, corespondant à des ADNc comprenant des séquences nucléotidiques choisies parmi l'un quelconque des segments V g correspondant à l'une des séquences SEQ ID N 1 à 10, et les séquences qui en diffèrent par un ou plusieurs nucléotides. 3. Séquences selon la revendication 1 codant pour des régions variables des chaînes des récepteurs des lymphocytes T humains, correspondant à des ADNc comprenant des séquences nucléotidiques choisies parmi l'un quelconque des segments J i correspondant à l'une des séquences SEQ ID N 12 à 20, et les séquences qui en diffèrent par un ou plusieurs nucléotides. 4. Séquences nucléotidiques codant pour des régions variables de chaînes &alpha; des récepteurs des 'lymphocytes T humains correspondant à des ADNc correspondant à tout ou partie des séquences nucléotidiques choisies parmi l'un quelconque des segments V&alpha;corres- pondant à l'une des séquénces SEQ ID N 1 à 5, et les séquences qui en diffèrent par un ou deux nucléotides. 5. Séquences nucléotidiques codant pour des régions variables de chaînes A des récepteurs des lymphocytes T humains correspondant à des ADNc correspondant à tout ou partie des séquences nucléotidiques choisies parmi l'un quelconque des segments Vi corres- pondant à l'une des séquences 1 à 467 de SEQ ID N 6 1 à 77 de SEQ ID N 7 1 à 151 de SEQ ID N 8 291 à 386 de SEQ ID N 9 1 à 260 de SEQ ID N 10 et les séquences qui en diffèrent par un ou deux nucléotides. 6. Séquences nucléotidiques codant pour des régions variables de chaînes des récepteurs des lymphocytes T humains correspondant à des ADNc correspondant à tout ou partie de la séquence nucléotidique correspondant à la SEQ ID N 11 et qui comprennent le nucléotide 108. 7. Séquences nucléotidiques codant pour des régions variables de chaînes Q( des récepteurs des lymphocytes T humains correspondant à des ADNc correspondant à tout ou partie des séquences nucléotidiques choisies parmi l'un quelconque des segments JOtcorres- pondant à l'une des séquences SEQ ID N 12 à 20 et les séquences qui en diffèrent par un ou deux nucléotides. 8. Peptides codés par l'une quelconque des séquences nucléotidiques telles que définies à l'une quelconque des revendications 1 à 7, ainsi que les allèles et les dérivés de ceux-ci qui possèdent la même fonction. 9. Peptides constitués par ou comprenant une séquence peptidique codée par tout ou partie de la séquence 108 à 364 de SEQ ID N- 11. 10. Vecteurs. d'expression comprenant une séquence d'ADN codant pour l-'un des peptides tel que défini à la revendication 8 ou à la revendication 9. 11. Hotes transformés avec un vecteur selon la revendication 10. 12. Anticorps dirigés contre un déterminant antigénique d'un des peptides définis à la revendication 8 ou à la revendication 9. 13. Anticorps selon la revendication 12 qui est un anticorps monoclonal ou un fragment de celui-ci. 14. Fragment Fab, Fab' .ou (Fab')2 d'un anticorps monoclonal selon la revendication 13 et dérivés de celui-ci. 15, -Dérivés d'un anticorps monoclonal ou d'un fragment de celui-ci selon la revendication 13 ou 14 auxquels sont liés un marqueur détectable et/ou au moins une molécule thérapeutique. 16. Hybridomes produisant un anticorps selon la revendication 13. 17. Composition de diagnostic comprenant un ou plusieurs anticorps monoclonauxr fragments ou dérivés de ceux-ci tels que définis à l'une quelconque des revendications 13 à 15. 18. Composition thérapeutique comprenant un ou plusieurs anticorps monoclonaux, fragments ou dérivés de ceux-ci tels que définis à l'une des revendications 13 à 15. 19. Composition selon la revendication 18 comprenant des dérivés contenant une molécule cytoto xique ou un radioisotope. 20. Composition thérapeutique comprenant au moins l'un des peptides définis à la revendication 8 ou à la revendication 9. 21. Composition thérapeutique comprenant des oligonucléotides antisens correspondant à l'une quelconque des séquences d'un segment V i ou dans l'une quelconque des séquences d'un segment J i telles que définies à ltune quelconque des revendications 4 à 7. 22. Utilisation, en tant qu'amorces pour l'amplification d'ADN, de séquences nucléotidiques d'environ au moins 17 nucléotides comprises dans l'une quelconque des séquences d'un segment V O( ou dans l'une quelconque des séquences d'un segment J&alpha;telles que définies à l'une quelconque des revendications 4 à 7. 23. Utilisation, en tant que sonde de détection, de séquences nucléotidiques d'environ au moins 10 nucléotides comprises dans l'une quelconque des séquences d'un segment V ou dans l'une quelconque des séquences d'un segment J&alpha;telles que définies à l'une quelconque des revendications 4 à 7.