Brevet FR2663039A1 — publié le 19911213

DESCRIPTION La présente invention concerne un procédé et une installation de culture de germes anaérobies stricts dans un récipient, comportant l'étape préliminaire, avant incubation des germes, de créer dans le récipient contenant les germes et un catalyseur au palladium, une atmosphère gazeuse exempte d'oxygène et comprenant de l'anhydride carbonique et de l'hydrogène. Les procédés connus d'obtention de conditions d'anaérobiose dans de tels récipients mettent en oeuvre des sachets générateurs de gaz sous la forme de comprimés effervescents libérant, dans le récipient, de l'anhydride carbonique et de l'hydrogène dans des conditions initiales en excès et créant dans le récipient une atmosphère gazeuse non contrôlée et dont la composition varie considérablement dans le temps D'autre part, l'utilisation systématique de sachets avant chaque phase d'incubation rend cette technique relativement onéreuse. Il a également été proposé une technique dite d'évacuation et de remplissage selon laquelle le récipient est soumis à un certain nombre (au minimum 6 et pouvant atteindre 12) de cycles successifs de mise sous vide partielle du récipient puis d'introduction d'un gaz constitué d'azote ou d'un mélange contenant de l'anhydride carbonique et de l'hydrogène Cette technique se rélève également onéreuse dans la mesure o, outre la mise en oeuvre nécessaire d'une pompe à vide, les cycles successifs entraînent une consommation notable de gaz et prennent un temps certain. La présente invention a pour objet de proposer un nouveau procédé obviant aux inconvénients des procédés connus, qui soit rapide à mettre en oeuvre, de prix de revient notablement réduit et garantissant des conditions d'anaérobiose contrôlées propices aux cultures bactériennes, et convenant de ce fait plus particulièrement pour les laboratoires d'analyses médicales indépendants, et les laboratoires de contrôle microbiologiques, notamment dans les industries agro-alimentaires ou de cosmétologie. Pour ce faire, selon une caractéristique de l'invention, le procédé comprend les étapes de faire circuler dans le récipient, pendant un temps Tl, un mélange de gaz comportant environ 5 % d'anhydride carbonique, entre 3 et 10 % -typiquement entre 3,5 et 5 %- d'hydrogène, le complément étant de l'azote, puis d'isoler de façon étanche le récipient contenant le dit mélange gazeux. De façon plus spécifique, pour un récipient ayant une capacité d'environ 3,5 litres, le débit de circulation du mélange gazeux est d'environ un litre par minute, le temps T 1 étant supérieur ou égal à 13 minutes, typiquement compris entre 14 et 17 minutes. La présente invention a également pour objet une installation pour la mise en oeuvre de ce procédé, de conception simple et de faible coût et permettant une automatisation poussée de la phase de création d'atmosphère gazeuse contrôlée dans le récipient. Pour ce faire, selon une autre caractéristique de l'invention, l'installation, du type comprenant: un récipient obturable de façon étanche par un couvercle muni d'un embout d'amenée de gaz à clapet antiretour et d'un embout de sortie de gaz à clapet anti-retour, équipé d'une structure de rangement de conteneurs de germes et d'un logement pour un sachet de catalyseur, et une bouteille de mélange gazeux comprenant de l'anhydride carbonique et de l'hydrogène, connectable à l'embout d'amenée de gaz via un robinet détendeur de distribution, comprend en outre un ensemble de distribution et de commande comportant une ligne d'amenée de gaz connectable entre le robinet détendeur et l'embout d'amenée de gaz du récipient et munie d'une première électrovanne, et des moyens de commande pour actionner automatiquement la première électrovanne. D'autres caractéristiques et avantages de la présente invention ressortiront de la description suivante d'un mode de réalisation, donné à titre illustratif mais nullement limitatif, faite en relation avec le dessin annexé sur lequel: la figure unique représente schématiquement une installation selon l'invention. On reconnaît sur le dessin un récipient pour anaérobiose 1, classiquement appelé "jarre", hermétiquement obturable par un couvercle 2 verrouillable par au moins une pince 3, le couvercle étant muni d'un embout d'amenée de gaz 4 équipé d'un clapet anti-retour donnant passage uniquement dans la direction vers l'intérieur du récipient, et d'un embout de sortie de gaz 5 équipé d'un clapet anti-retour donnant passage uniquement dans le sens vers l'extérieur du récipient Ce dernier comporte également une structure ou panier 6 pour le logement de conteneur de germes, typiquement des boîtes de Petri empilables 7 ou des tubes à essai Selon l'invention le panier 6 est pourvu, au voisinage de sa base, d'un logement 8 pour un sachet 9 d'un catalyseur au palladium favorisant, à basse température, la combinaison de l'hydrogène et de l'oxygène et transformant donc en eau les traces d'oxygène résiduaire dans le récipient clos L'embout d'amenée de gaz 4 est prolongé vers l'intérieur par un conduit flexible 40 s'étendant jusqu'au voisinage du fond du récipient 1. L'installation selon l'invention comprend un ensemble de distribution et de commande comportant une ligne d'amenée de gaz A-B connectable entre un robinet détendeur 10 d'une bouteille de mélange gazeux 11 et l'embout 4 La ligne A-B comprend, de l'amont vers l'aval, un robinet de réglage de débit 12, et une première électrovanne 13 L'ensemble de distribution et de commande comporte en outre une ligne de retour de gaz C-D connectacle à l'embout 5 et débouchant en D dans l'atmosphère ou connectacle à une enceinte de récupération La ligne C-D comprend, de l'amont vers l'aval, un manomètre 15, une seconde électrovanne 16 et un débimètre 14 L'ensemble est complété par un boîtier de commande électronique 17 couplé aux électrovannes 13 et 16 et, éventuellement à un manomètre 15 du type manostat, et incorporant un programme actionnant sélectivement les électrovannes 13 et 16, la première électrovanne 13 étant typiquement du type normalement fermé et la seconde électrovanne 16 étant typiquement du type normalement ouvert L'ensemble de distribution et de commande est avantageusement intégré dans un boîtier E comprenant des raccords rapides au niveau des interfaces A à C. Selon un aspect de l'invention, la bouteille Il contient un mélange gazeux comportant environ 5 % d'anhydride carbonique, entre 3,5 et 5 %, typiquement 4,5 % d'hydrogène, le complément étant de l'azote. La mise en oeuvre du procédé selon l'invention est la suivante: le récipient 1, contenant le catalyseur 9 et une série de conteneurs de germes 7, est fermé hermétiquement par le couvercle 2 au moyen des pinces 3 Les lignes A-B et D-C sont alors reliées, par exemple par des raccords de type à branchement rapide, aux embouts 4 et 5 Le robinet 10 de la bouteille Il est ouvert et, le robinet 12 et les électrovannes 13 et 16 étant ouvertes, on fait circuler dans le récipient 1 le mélange gazeux contenu dans la bouteille Il pendant un temps T 1 suffisant pour effectuer un balayage convenable de la capacité intérieure du récipient 1 et en chasser ainsi la quasi- totalité de l'air s'y trouvant initialement Au bout du temps T 1, le boîtier de commande 17 actionne la fermeture de l'électrovanne 16 pendant un temps T 2 ce qui entraîne une pressurisation progressive du récipient 1, après quoi le boîtier 17 actionne la fermeture de l'électrovanne 13 Une alarme se déclenche alors, signalant la fin du conditionnement Le récipient 1 étant ainsi isolé de la source de gaz sous pression 11 et de l'atmosphère, les lignes A-B et C-D sont déconnectées des embouts 4 et 5 et le récipient 1 ainsi conditionné peut être placé dans une étuve, typiquement pour une durée de 24 heures. Pour un récipient 1 conventionnel, d'une capacité interne de 3,5 litres, le robinet 12 est réglé de façon à autoriser un débit de circulation de gaz d'environ un litre par minute pendant un temps T 1 non inférieur à 13 minutes, typiquement compris entre 14 et 17 minutes, de préférence pendant 16 minutes On notera ici que, pour garantir de bonnes conditions d'anaérobiose, le temps et le débit de circulation doivent être très précisément appariés. Le détendeur 10 délivre un mélange gazeux sous une faible pression typiquement de 2 x 105 Pa ( 2 bars) absolus, pour donner, en raison des pertes de charge de la ligne A-B, au niveau de l'embout 4 une légère surpression, typiquement de l'ordre de 6 x 104 Pa ( 0,6 bar) A la fin du temps Tl, l'électrovanne 16 est fermée pendant un temps T 2, de l'ordre de 50 à 60 secondes, suffisant pour créer dans le récipient 1 une surpression de sécurité entre 150 et 250 h Pa, typiquement de l'ordre de 200 h Pa, contre des risques de fuite au niveau du couvercle 2. Quoique l'invention ait été décrite en relation avec un mode de réalisation, elle ne s'en trouve pas limitée, mais est au contraire susceptible de modifications et de variantes qui apparaîtront à l'homme de l'art, notamment selon les formes et capacités des récipients 1. REVENDICATIONS 1 Procédé de culture de germes anaérobies stricts dans un récipient ( 1), comportant l'étape préliminaire, avant incubation, de créer dans le récipient contenant les germes ( 7) et un catalyseur au palladium ( 9), une atmosphère gazeuse comprenant de l'anhydride carbonique et de l'hydrogène, caractérisé en ce qu'il comprend les étapes suivantes: faire circuler dans le récipient ( 1), pendant un temps Tl, un mélange de gaz comportant environ 5 % d'anhydride carbonique, entre 3 et 10 % d'hydrogène, le complément étant de l'azote; puis d'isoler de façon étanche le récipient ( 1) contenant le dit mélange gazeux. 2 Procédé selon la revendication 1, caractérisé en ce que le mélange gazeux comprend entre 3,5 et 5 % d'hydrogène. 3 Procédé selon la revendication 2, caractérisé en ce que, pour un récipient ( 1) de capacité d'environ 3,5 litres, le débit de circulation du mélange gazeux est d'environ un litre par minute, le temps T 1 étant supérieur ou égal à 13 minutes. 4 Procédé selon la revendication 3, caractérisé en ce que le temps T 1 est compris entre 14 et 17 minutes. 5 Procédé selon l'une des revendications précédentes, caractérisé en ce qu'il comprend l'étape, avant fermeture étanche du récipient ( 1), de créer dans ce dernier une surpression du dit mélange gazeux comprise entre 150 et 250 h Pa. 6 Installation selon la mise en oeuvre du procédé selon l'une des revendications précédentes, comprenant: un récipient ( 1) obturable de façon étanche par un couvercle ( 2) muni d'un embout d'amenée de gaz ( 4) à clapet anti-retour et d'un embout ( 5) de sortie de gaz à clapet anti-retour, équipé d'une structure ( 6) de rangement de conteneurs de germes ( 7) et d'un logement ( 8) pour un sachet de catalyseur ( 9), et une bouteille ( 11) de mélange gazeux comprenant de l'anhydride carbonique et de l'hydrogène, connectacle à l'embout d'amenée de gaz ( 4) via un robinet détendeur ( 10), caractérisé en ce qu'elle comprend un ensemble de distribution et de commande (E) comportant: une ligne d'amenée de gaz (A-B) connectacle entre le robinet détendeur ( 10) et l'embout ( 4) d'amenée de gaz du récipient et muni d'une première électrovanne ( 13); et des moyens de commande ( 17) pour actionner automatiquement la première électrovanne ( 13). 7 Installation selon la revendication 6, caractérisée en ce que l'ensemble de distribution et de commande (E) comprend une ligne de retour de gaz (C-D) connectacle à l'embout ( 5) de sortie de gaz du récipient ( 1) et munie d'une seconde électrovanne ( 16) actionnable automatiquement par les moyens de commande ( 17). 8 Installation selon la revendication 7, caractérisée en ce que la ligne de retour de gaz (C-D) est munie de moyens de contrôle de pression ( 15) et de débit ( 14). 9 Installation selon l'une des revendications 6 à 8, caractérisée en ce que l'embout ( 4) d'amenée de gaz du récipient ( 1) est relié à une conduite d'amenée ( 40) s'étendant dans le récipient ( 1) jusqu'au voisinage du fond de celui-ci, le logement ( 8) du catalyseur ( 9) étant prévu dans la partie inférieure du récipient ( 1). Installation selon l'une des revendications 6 à 9, caractérisée en ce que la bouteille ( 11) contient un mélange gazeux ternaire, constitué de 5 % d'anhydride carbonique, et d'entre 3,5 et 5 % d'hydrogène, le complément étant de l'azote.