Brevet FR2670683A1 — publié le 19920626

La présente invention concerne de façon générale l'électrophorèse sur gel et plus précisément elle concerne un système de commande d'électrophorèse à champ électrique homogène verrouillé à son contour. Le procédé classique utilisé pour la séparation, l'identification et la purification de l'acide désoxyribo- nucléique (appelé ADN dans la suite du présent mémoire) et d'autres molécules est l'électrophorèse sur des gels d'agarose Cette technique permet la résolution efficace et rapide de mélanges de fragments d'ADN qui ne peuvent pas être séparés convenablement par d'autres technologies de purification Un gel contenant un échantillon d'ADN est soumis à un champ électrique Ceci provoque la migration des macromolécules individuelles de l'ADN dans le gel. Comme les différents fragments d'ADN migrent à des vitesses différentes, des "bandes" visibles d'ADN se forment-dans le gel L'emplacement des fragments individuels d'ADN dans le gel peut être lu directement à partir des bandes. Des caractéristiques particulières de l'ADN, notam- ment sa taille, sa charge et sa conformation, influencent sa vitesse de migration et donc la séparation qui peut être obtenue Par exemple, des molécules d'ADN linéaires et doubles se déplacent dans des matières gélifiées à des vitesses qui sont par exemple inversement proportionnelles au logarithme à base dix de leur masse moléculaire Néan- moins, les macromolécules d'ADN de masses moléculaires identiques mais de conformations différentes, par exemple de forme circulaire fermée, circulaire rétrécie et linéaire, migrent dans un gel d'agarose à des vitesses différentes. En plus des caractéristiques de l'ADN, les para- mètres d'électrophorèse ont aussi une influence sur la vitesse de migration (mobilité) des macromolécules Les fragments d'ADN de taille donnée migrent à des vitesses différentes dans des gels contenant des concentrations différentes d'agarose La variation de la concentration permet la résolution d'une large gamme de tailles de fragments d'ADN L'intensité du champ appliquée (gradient de tension), la concentration ionique de la solution tampon, et la densité des torsions superhélicoïdales dans la forme circulaire fermée de l'ADN ont aussi une influence sur la migration Aux faibles tensions, la mobilité (cm/h) des fragments d'ADN linéaire est proportionnelle à la tension appliquée Cependant, cette relation linéaire n'existe plus au potentiel le plus élevé pour des fragments de masse moléculaire élevée Ainsi, la plage efficace de séparation pour des gels déterminés d'agarose diminue lorsque la tension augmente. On peut obtenir une meilleure séparation des macro- molécules par optimisation de certains paramètres Par exemple, l'électrophorèse sur gel en champ pulsé (PFGE), un progrès récent, permet une meilleure résolution des frag- ments d'ADN pour une tension donnée Schwartz et Cantor indiquent qu'il est possible d'assurer la résolution de gros fragments d'ADN dans un gel d'agarose soumis en alternance à deux champs électriques pulsés à 9 Q O environ. (Schwartz D et Cantor C "Separation of Yeast Chromosome- sized DN As by Pulsed-field Gradient Gel Electrophoresis", Cell, 37:67, 1984) De plus longs fragments d'ADN peuvent être séparés des fragments plus courts par déplacement à force des molécules afin qu'elles se réorientent elles- mêmes entre les impulsions Cependant, le champ électrique induit n'est pas uniforme dans le gel avec cette technique. Les macromolécules ont tendance à migrer dans le gel avec une mobilité et une trajectoire qui dépendent de l'endroit o les échantillons sont chargés dans le gel Cette distor- sion qui dépend de la position et qui est due au défaut d'uniformité du champ électrique, empêche la comparaison voie à voie des bandes. Carle et al décrivent une variante simple de l'élec- trophorèse PFGE qui est l'électrophorèse sur gel à inver- sion de champ (FIGE) dans laquelle les champs qui alternent sont à 1800 La polarité est inversée à des intervalles avec un plus long temps d'impulsion dans le sens direct qu'en sens inverse, si bien qu'une migration résultante de l'échantillon vers l'avant est obtenue Cette technique donne une résolution acceptable jusqu'à 800 kilobases (kb). Dans le cas des fragments dépassant une certaine taille cependant, les molécules grosses et petites d'ADN ont tendance à migrer ensemble La modification progressive (par effet de rampe) de la tension au cours de l'électro- phorèse permet un étalement de la plage de séparation avant que ce phénomène ne se produise Cependant, un jeu de paramètres convenant à la taille de la molécule à séparer doit être sélectionné au départ (voir Carle G, Frank M. et Olson M, "Electrophoretic Separations of large DNA Molecules by Periodic Conversion of the Electric Field", Science 232:65, 1986). Gardiner et Patterson décrivent une électrophorèse à champ alternatif transversal (TAFE) dans laquelle le gel est orienté verticalement et la matrice habituelle de quatre électrodes n'est pas placée dans le plan du gel mais en avant et en arrière de celui-ci (Gardiner K, Laas W. et Patterson D, "Fractionation of Large Mammalian DNA Restriction Fragments Using Vertical Pulsed-Field Gradient Gel Electrophoresis", Som Cell Molecular Genetics 12:185, 1986). Chu et al indiquent que le facteur critique pour la résolution des gros fragments d'ADN est le maintien de l'angle entre les deux directions du champ alternatif à une valeur supérieure à 90 (Chu G, Vollrath D et Davis R, "Separation of Large DNA Molecules by Contour- clamped Homogeneous Electric Fields", Science 234:1582, 1986) Un système à champ électrique homogène verrouillé au contour ou système CHEF utilise une matrice hexagonale ayant des paires d'électrodes placées à 1200 L'utilisation de transistors destinés à mettre les électrodes à leurs tensions idéales assure le verrouillage du champ Une résolution accrue est obtenue sans migration simultanée des échantillons CHEF-DR II (BIO-RAD, Richmond, Californie) utilise cette technique et celle-ci est utilisée de façon très importante pour la séparation des grosses molécules d'ADN (Brevet des Etats-Unis d'Amérique N O 4 878 008). Les systèmes actuels nécessitent cependant que l'utilisateur détermine manuellement et saisisse les paramètres de l'opération d'électrophorèse Cette technique est peu efficace car elle nécessite beaucoup d'essais empiriques par l'utilisateur Plus précisément, cette approche empêche de tirer avantage d'une base de connais- sances qui peut être construite à partir de la séparation par électrophorèse de références d'ADN dans diverses conditions établies L'invention concerne de nouvelles techniques et de nouveaux appareils qui donnent ces avantages. L'invention concerne un système assurant la sépara- tion par électrophorèse de macromolécules, à l'aide d'un ordinateur Le système conserve une base de connaissances dérivée de données d'étalonnage obtenues par séparation de macromolécules, en particulier d'ADN, de taille connue, dans diverses conditions planifiées choisies pour l'optimi- sation des séparations Dans un mode de réalisation pré- féré, la base de connaissances est incorporée sous forme de constantes, de fonctions et de tables faisant partie du programme de représentation CHEF. Lors du fonctionnement, l'utilisateur saisit la plus petite et la plus grande taille d'ADN qui doivent être résolues A partir de cette information, le système éta- lonne automatiquement un dispositif d'électrophorèse avec les paramètres optimaux de gradient de tension, d'angle, de temps initial de commutation, de temps final de commuta- tion, de gradient de tension dans le sens direct et de gradient de tension dans le sens inverse, si bien que la résolution de l'électrophorèse est accrue. D'autres caractéristiques et avantages de l'inven- tion ressortiront mieux de la description qui va suivre, faite en référence aux dessins annexés sur lesquels: la figure LA est un diagramme synoptique du système selon l'invention; la figure 1 B est un schéma du programme de représen- tation et de l'appareil d'électrophorèse; la figure 2 est un ordinogramme du programme de représentation CHEF; la figure 3 est un ordinogramme dans le cas 1; les figures 4 A et 4 B sont un ordinogramme destiné à la détermination des temps de commutation pour le cas 1; la figure 5 est un ordinogramme du sous-programme de formation de la moyenne de mobilité; la figure 6 est un ordinogramme illustrant le cas 2; la figure 7 est un ordinogramme illustrant la détermination des temps initiaux de commutation dans le cas 2; la figure 8 est un ordinogramme de la détermination des temps finaux de commutation dans le cas 2; les figures 9 A et 9 B représentent un ordinogramme de détermination de mobilité dans le cas 2; la figure 10 est un ordinogramme du cas 2; les figures l A et ll B sont un ordinogramme du cas 4; et la figure 12 est un ordinogramme de la détermination des temps de commutation initiaux dans le cas 4. Généralités La présente invention concerne des procédés et des appareils qui sont utilisés avec un dispositif d'électro- phorèse afin que la séparation et la purification de macromolécules, notamment d'ADN, soient améliorées Selon l'invention, un utilisateur saisit des informations rela- tives à l'échantillon macromoléculaire qui doit être séparé Des paramètres qui optimisent la séparation sont alors déterminés Enfin, le dispositif d'électrophorèse est étalonné avec ces paramètres. On se réfère d'abord à la figure l A; la présente invention peut être mise en oeuvre dans un système tel que le système 100 qui comprend un ensemble 150 à ordinateur, un ensemble 150 de représentation CHEF, et un dispositif ou appareil d'électrophorèse 130 L'ensemble 150 à ordinateur comporte en outre un processeur central 108, une mémoire 107 du système, un clavier ou dispositif de saisie 103, une souris 102, un disque fixe 104, un moniteur d'affichage 101, une interface externe 105, une imprimante 109 et un organe de commande d'entrée-sortie 106 Les éléments de l'ensemble 150 d'ordinateur sont couplés à un bus 115 du système qui forme une liaison entre tous les éléments Dans un mode de réalisation préféré, un ordinateur personnel10 compatible IBM programmé de façon convenable est utilisé (International Business Machines, Armonk, New-York) tra- vaillant sous "Windows" de Microsoft (Microsoft, Redmond, Washington). On se réfère à la figure 1 B; l'ensemble 120 de représentation CHEF et l'appareil 130 d'électrophorèse sont représentés plus en détail L'ensemble 120 est couplé au dispositif 130 et peut donc directement étalonner le dispositif 130 avec des paramètres optimisés Dans un mode de réalisation préféré, l'appareil 130 est un dispositif d'électrophorèse mettant en oeuvre les techniques CHEF Des échantillons de macromolécules, qui sont placés initiale- ment dans des cavités, migrent dans le gel sous l'action d'un champ électrique Plus précisément, les échantillons migrent sous l'action d'un vecteur champ électrique créé par plusieurs électrodes. Dans un mode de réalisation, l'ensemble 120 est aussi couplé à une interface externe 105, par exemple une voie série RS-232, permettant à l'ensemble 120 de recevoir les signaux de sortie de l'ensemble 150 qui est utilisé lui-même pour l'étalonnage de l'appareil 130 d'électropho- rèse Dans un autre mode de réalisation, l'ensemble 120 est couplé à son propre dispositif de saisie, tel qu'un clavier 121 et/ou un lecteur de code à barres 122, si bien que l'ensemble 120 peut recevoir des informations directement de l'utilisateur, avec différents formats de saisie, ou à partir d'autres ensembles Comme l'indique la figure l A, l'ensemble 120 peut aussi être couplé à une interface externe 105 et au clavier 121 et au lecteur de code à barres 122, simultanément. L'installation 100 travaille en mode totalement automatique; l'utilisateur saisit les tailles des frag- ments le plus petit et le plus gros (exprimées en kilo- bases) des macromolécules (par exemple d'ADN) dont on prévoit la séparation Une base de connaissances comprenant les relations découvertes par les Demandeurs est donnée et permet au système 100 de déterminer automatiquement les paramètres optimaux que sont le gradient de la tension dans le sens direct, le gradient de la tension dans le sens inverse, le gradient de tension, l'angle, le temps initial de commutation, le temps final de commutation et la durée de l'essai, ainsi que la meilleure technique d'électro- phorèse Ainsi, une séparation maximale des macromolécules peut être réalisée. Dans une variante, le système 100 travaille en mode semi-automatique; l'utilisateur peut spécifier des para- mètres supplémentaires, notamment le type de l'agarose, la concentration de l'agarose, le type du tampon, la concen- tration du tampon et la température Ces valeurs sont alors utilisées, avec les tailles de l'ADN, pour la détermination des paramètres optimaux. Les paramètres individuels du système 100 sont maintenant décrits plus en détail Le gradient de tension dans le sens direct exprime la différence de tension par unité de distance (V/cm) qui est utilisée pendant l'impul- sion dans le sens direct de l'électrophorèse FIGE Le gradient de tension en sens inverse d'autre part et la différence de tension par unité de distance (V/cm) de l'impulsion inverse Le gradient de tension est simplement la différence entre les gradients de tension dans le sens direct et dans le sens inverse. Le temps de commutation est la durée pendant laquelle l'appareil 130 d'électrophorèse reste à un état particulier (avant nouvelle commutation) Ainsi, il s'agit de la période pendant laquelle le système garde un jeu particulier de vecteurs (gradients de tension pour un angle particulier) Le temps de commutation varie progressivement (rampe) au cours de l'électrophorèse De préférence, le temps de commutation varie de manière croissante De préférence, le temps de commutation varie d'une manière croissante et non linéaire Dans un mode de réalisation préféré, le temps de commutation varie logarithmiquement afin qu'il croisse Dans une variante, le temps de commuta- tion varie hyperboliquement Dans un autre mode de réalisa- tion, l'utilisateur spécifie la variation progressive par détermination d'une courbe dans un système de coordonnées, par exemple un système de coordonnées cartésiennes dans lequel X est la durée normalisée de l'essai et Y est la différence normalisée entre les temps initiaux et finaux de commutation Indépendamment de la technique de variation progressive utilisée, il est préférable de diviser le temps de commutation en temps initiaux et finaux de commutation indiquant les limites supérieure et inférieure de la variation du temps de commutation. L'angle et la durée de l'essai gardent leur signifi- cation habituelle L'angle est l'angle maintenu entre les champs alternatifs et l'échantillon Historiquement, le sens direct ou vers le bas est défini comme un angle égal à 0 et le sens inverse ou vers le haut correspond à un angle de 180 Enfin, la durée de l'essai est la période pendant laquelle l'électrophorèse est réalisée par l'appareil 130 d'électrophorèse. Comme un utilisateur peut être familier d'un jeu particulier de terminologies, trois types différents de programmes sont utilisés dans un mode de réalisation préféré: 1) FIGE, 2) CHEF à deux états, et 3) CHEF à plusieurs états Ce groupement aide l'utilisateur par exemple pour l'observation des paramètres de l'essai. L'électrophorèse FIGE n'a qu'une seule impulsion dans le sens direct (angle = O ) et en sens inverse (angle = 1800). Dans le type de programme CHEF à plusieurs états, le traitement dans le sens direct se produit lorsque l'angle est égal à O , mais il existe aussi des décalages, positif ou négatif Par exemple, 600 d'un côté donne un décalage correspondant de 60 si bien que la charge résultante s'effectue dans le sens direct La technique CHEF à deux états est analogue à la technique CHEF à plusieurs états, mais elle utilise un angle inclus Ainsi, pour des angles de 600 et 600, il existe un angle inclus de 120 . Les trois types de programmes présentent des rela- tions entre les infrastructures et les superstructures. Tous les types de programmes peuvent être décrits par le type de programme CHEF à plusieurs états Ce type de programme peut comprendre jusqu'à huit blocs, chaque bloc étant capable de contenir jusqu'à quinze états (vecteurs). Le type de programme à deux états comprend un bloc avec deux états symétriques Toutes les valeurs pour chaque paramètre dans les deux vecteurs sont identiques, à l'ex- ception de l'angle Les angles sont symétriques si bien que leur somme est nulle (sens direct). L'électrophorèse FIGE est aussi un cas particulier de la technique CHEF à plusieurs états Elle comprend aussi un bloc avec deux vecteurs Cependant, ces vecteurs ne sont pas symétriques Un vecteur a toujours un angle O (direct) et l'autre un angle de 1800 (inverse). Dans les conditions normales en mode totalement automatique, les valeurs suivantes sont supposées pour les petites tailles d'ADN ( de données d'étalonnage obtenues par séparation de molé- cules d'ADN de taille connue dans diverses conditions planifiées choisies pour l'optimisation des séparations. Dans un mode de réalisation préféré, la base de connais- sances est sous forme de constantes, de fonctions et de tables faisant partie du programme de représentation CHEF. Les fonctions ont été obtenues par régressions polynomiales et curvilignes Les surfaces engendrées ont été adaptées à une procédure de déplacement suivant les moindres carrés pondérée par la distance, exécutée sur des données norma- lisées (voir Lancaster, Peter et Salkauskas, "Curve and Surface Fitting: an Introduction", Academic Press, 1974, et Mac Lain, "Drawing Contours from Arbitrary Data Points", Comput J, 17:318-324, 1974) Les fonctions et les sur- faces adaptées sont utilisées pour l'interpolation et dans certains cas, pour l'extrapolation. Effet de la taille de l'ADN Le fonctionnement totalement automatique du système 100 est divisé en quatre cas différents, le cas réel étant déterminé par les tailles maximale et minimale d'ADN saisies par l'utilisateur Dans un mode de réalisation préféré, trois plages de tailles d'ADN sont déterminées: ( 1) 1-50 kb, ( 2) 50-2 200 kb et ( 3) plus de 2 500 kb. Chaque plage a son propre jeu particulier de caractéris- tiques macromoléculaires qui peuvent être exploitées pour l'optimisation de la séparation. Pour les fragments d'ADN de 1 à 50 kb par exemple, le mouvement dans un champ pulsé est une fonction loga- rithmique de la taille Ceci diffère des plus gros frag- ments d'ADN qui ont une mobilité qui est linéaire en fonction de la taille Des fragments de tailles différentes n'ont pas une réponse identique à des champs d'intensités différentes Les fragments relativement gros, par exemple de 30 à 50 kb, se déplacent relativement plus vite à 9 V/cm que les fragments d'environ l à 25 kb Différentes intensi- tés du champ peuvent être utilisées pour la réduction de il l'espacement important (distance entre les bandes d'ADN) obtenu avec les plus petites bandes (inférieures à 10 kb). En conséquence, un espacement plus uniforme se produit sur toute la plage Ainsi, un mode de réalisation préféré utilise une technique d'inversion du champ à l'aide de tensions différentes pour les champs dans le sens direct et dans le sens inverse, pour les fractions inférieures à kb de manière que les fragments soient dispersés d'une façon plus uniforme (par rapport aux champs pulsés de tensions identiques). L'ADN entre 50 et 2 500 kb représente la plage qui a été décrite initialement par Schwartz et Cantor La plupart des séparations sur gel en champ pulsé sont destinées à séparer l'ADN dans cette plage. Pour la séparation des gros fragments d'ADN, l'in- tensité du champ doit être réduite afin que les grosses molécules ne puissent pas s'emmêler ou se rompre dans le gel Cependant, ces faibles intensités de champ nécessitent des temps d'essai extrêmement longs Comme l'angle entre les deux champs a une influence sur la mobilité de l'ADN, les temps des essais peuvent être réduits par réduction de l'angle entre les champs. Fonctionnement du système On décrit maintenant en détail le fonctionnement du système 100 La figure 2 représente de façon générale le programme 200 de représentation CHEF qui est un ensemble de procédures ou d'étapes conservé dans une mémoire 107 du système destiné à donner des instructions au processeur central 108 Dans un autre mode de réalisation, le pro- gramme 200 est conservé dans un microprogramme, par exemple dans une mémoire morte ROM, et est couplé au bus 115 du système ou directement à l'ensemble 120. Lors du début du programme 200, au pas 201, l'utili- sateur saisit les paramètres de saisie avec le clavier 103 et/ou la souris 102; si le programme 200 est directement couplé à l'ensemble 120, les paramètres sont saisis de préférence avec le clavier 121 ou le lecteur 122 de code à barres En mode automatique, l'utilisateur doit seulement saisir la taille minimale d'ADN et la taille maximale d'ADN de l'échantillon à séparer En mode non automatique, l'utilisateur saisit aussi le type d'agarose, la concentra- tion d'agarose, le type du tampon, la concentration du tampon et la température Indépendamment du mode, les paramètres saisis sont conservés dans une table sous forme Input Parms, chargée dans la mémoire 107 et/ou sur un disque fixe 104. Au pas 202, si la taille maximale d'ADN saisie ("High") est inférieure ou égale à 50 kb, la procédure passe au pas 203 pour l'exécution du cas 1 Par ailleurs, la procédure passe au pas 204 Si la valeur High est inférieure ou égale à 2 500 kb au pas 204, la procédure passe au pas 205 et exécute le cas 2 Par ailleurs, la procédure passe au pas 206 Si la valeur High est infé- rieure ou égale à 6 000 kb au pas 206, la procédure passe au pas 208 qui détermine si la taille minimale d'ADN saisie ("Low") est inférieure ou égale à 2 000 kb Si la réponse est positive, le sous-programme exécute le cas 4 au pas 210 Dans le cas contraire, la procédure passe au cas 3 du pas 209. Cependant, si la valeur High n'est pas inférieure ou égale à 6 000 kb au pas 206, le pas 207 met toutes les valeurs de sortie à 0 Après cette étape ou après l'exécu- tion des cas 1 à 4, la procédure passe au pas 211 et sauvegarde toutes les valeurs de sortie dans une table Output Parms Au pas 212, ces valeurs sont transmises à l'ensemble 120, soit directement par le programme 200 soit par l'interface externe 105 L'ensemble 120 étalonne alors l'appareil d'électrophorèse 230 avec les paramètres opti- maux d'angle, de temps initial de commutation, de tension, de durée de l'essai, de tension dans le sens direct et de tension dans le sens inverse. Cas individuels Les cas individuels du programme 200 de représenta- tion CHEF qui forment la base de connaissances sont maintenant décrits La figure 3 représente les étapes du cas 1, c'est-à-dire lorsque la valeur High est inférieure ou égale à 50 kb Au pas 301, la technique d'électrophorèse sur gel à inversion de champs (FIGE) est sélectionnée Au pas 302, le gradient de tension dans le sens direct est réglé à 9 V/cm Au pas 303, le gradient de tension inverse est réglé à 6 V/cm Au pas 304, l'angle est réglé à 1800 et la distance de déplacement est réglée à 10 cm Au pas 305, les temps de commutation sont déterminés. Le figures 4 A et 4 B représentent un ordinogramme illustrant les étapes de détermination des temps de commu- tation Au pas 401, si la valeur Low est inférieure à kb, le pas 402 règle le temps initial de commutation à 1,2 s Par ailleurs, la procédure passe au pas 403 qui calcule le temps initial de commutation avec la relation suivante: (fonction 1 L) Y = 0,0 + 0,015797 X + 0, 001365 x 2 X étant la valeur Low et Y le temps de commutation en secondes Au pas 404, si le temps initial de commutation est compris entre 0,0 et 0,05 s, le temps initial de commutation est réglé à 0,05 S au pas 405 Dans le cas contraire, le pas 405 est sauté Au pas 406, le temps final de commutation est déterminé d'après la relation suivante (fonction l U) Y = 0,0 + 0,009166 X + 0,000137 x 2 X étant la valeur High et Y le temps de commutation en secondes Le résultat Y est multiplié par 1,15, un facteur d'ajustement déterminé empiriquement Au pas 407, si le temps final de commutation est compris entre 0,0 et 0,05 s, le pas 408 règle ce temps final à 0,05 s Dans le cas contraire, le pas 408 est sauté Au pas 409, si le temps initial de commutation est supérieur au temps final de commutation, le pas 410 inverse les temps initial et final de commutation (remplacement de l'un par l'autre) Dans le cas contraire, le pas 410 est sauté Le sous-programme revient et termine le pas 305. Au pas 306, si la valeur Low est comprise entre 1 et 6 kb ou est égale à l'une ou l'autre de ces valeurs, au pas 308, la mobilité (en cm/h) est déterminée d'après la relation suivante (fonction 2) Y = 0,65426181 0, 0838514428 X + 0,0060879216 x 2 X étant la valeur Low Cependant, si cette valeur n'est pas comprise dans la plage du pas 306, le pas 307 détermine la mobilité (cm/h) dans le tableau 1 (appendice) et le sous- programme de formation de la moyenne de la mobilité. La figure 5 représente les étapes du sous-programme de formation de la moyenne de mobilité Au pas 501, la plage de temps de commutation est déterminée d'après les temps initial et final de commutation Au pas 502, le nombre N d'itérations est déterminé par division de la plage de temps de commutation par 5 et arrondissement à l'entier le plus proche Au pas 503, le temps delta de commutation est déterminé par division de la plage de temps de commutation par N Au pas 504, les constantes suivantes sont déterminées: somme = 0,0, i = 0, temps actuel de commutation = temps initial de commutation Au pas 505, i est testé pour le comptage de N Si i n'est pas inférieur ou égal à N + 1, le sous- programme divise la somme par N au pas 506 et s'arrête puis revient au pas 307 Dans le cas contraire, le sous-programme continue au 507 pour calculer une mobilité àpartir de la table 1 ou de la table 2 (appendice) par utilisation de la valeur Low comme valeur de taille d'ADN, le temps actuel de commutation comme temps de commutation, et par interpolation bilinéaire Au pas 508, la mobilité est ajoutée à la somme Au pas 509, le temps actuel de commutation progresse Au pas 510, i progresse, et la procédure boucle sur le pas 505. Après la fin du sous-programme de formation de la moyenne de mobilité au pas 307, le temps de l'essai est déterminé au pas 309 par division de la distance de dépla- cement par la mobilité et par multiplication par un facteur d'étalonnage De légères variations de l'un quelconque de plusieurs facteurs, par exemple la qualité de l'eau et la technique du laboratoire, peuvent affecter notablement le fonctionnement du système 100 Pour que ces variations soient réduites au minimum, l'utilisateur ajuste le facteur d'étalonnage d'après son expérience du système Le signal de sortie du programme 200 est ajusté en conséquence Le sous-programme du cas 1 se termine par retour au pas 203. La figure 6 illustre les étapes du cas 2 Au pas 601, l'angle est réglé à 1200, et la distance de déplace- ment est réglé à 10 cm Au pas 602, le gradient de tension est réglé à 6 V/cm Au pas 603, les temps initiaux de commutation pour le cas 2 sont déterminés La figure 7 représente les pas exécutés Au pas 701, si la valeur Low est inférieure à 25 kb, au pas 702, le temps initial de commutation est déterminé avec la relation suivante (fonction 22) Y = 0, 0 + 0,072277 X 0,008314 x 2 + 0,000581 X 3 X étant la valeur Low et Y le temps de commutation La procédure saute alors au pas 706 Cependant, si la valeur Low n'est pas inférieure à 24 kb au pas 701, au pas 703, la valeur Low est examinée afin que le fait qu'elle est inférieure à 50 kb soit déterminé Si la réponse est positive, le pas 704 détermine le temps initial de commuta- tion à l'aide de la relation suivante (fonction 21 U) Y = 0,0701979 + 0,074324119 X + 0,000007336094 x 2 X étant la valeur Low et Y le temps de commutation Le sous-programme continue au pas 706 Cependant, si la valeur Low n'est pas inférieure à 50 kb au pas 707, le pas 705 détermine le temps initial de commutation à l'aide de la relation suivante (fonction 21 L) Y = 0,95604 + 0,11662974 X 0,00000574226 x 2 X étant la valeur Low et Y le temps de commutation Au pas 706, si le temps initial est compris entre 0,0 et 0,05 s, le pas 707 inverse les valeurs du temps initial et du temps final de commutation Le sous- programme se termine, et conclut le pas 603 du sous-programme appelant. Au pas 604, le temps final de commutation est déterminé La figure 8 représente les étapes de ce procédé. Au pas 801, si la valeur Hig H est inférieure à 80 kb, le pas 802 détermine le temps final de commutation avec la relation suivante (fonction 21 U) Y = 0,0701979 + 0,074324119 X + 0,000007336094 x 2 X étant la valeur High et Y le temps de commutation. Cependant, si la valeur High est inférieure à 80 kb au pas 801, la procédure passe au pas 803 qui calcule le temps final de commutation avec la relation suivante (fonction 20) Y = 0,0 + 0,007605 x + 0,000686 x 2 X étant la valeur High et Y le temps de commutation (en s). La procédure passe au pas 804 ou le temps final de commuta- tion est multiplié par 1,15 Au pas 805, si le temps final est compris entre 0,0 et 0,05 s, le pas 806 inverse les valeurs des temps initial et final La procédure se termine et conclut le pas 804 du sous-programme appelant. Au pas 605, si le temps initial de commutation est supérieur au temps final, le pas 606 inverse les valeurs des temps initial et final Autrement, le pas 606 est sauté Au pas 607, la mobilité du cas 2 est déterminée. La figure 9 représente le processus mis en oeuvre au pas 607 Au pas 901, si la valeur Low est inférieure à kb, le pas 902 détermine la mobilité (en cm/h) à l'aide de la relation suivante (fonction 23) Y = 1,0124518 X-0,4094122386 X étant la valeur Low et Y la mobilité Au pas 903, si la valeur Low est inférieure à 169 kb et le temps final de commutation est inférieur à 110, 0, la mobilité (cm/h) est déterminée au pas 904 avec la table 2 (appendice), les temps initial et final de commutation, la valeur Low constituant la taille de l'ADN et le sous-programme de formation de la moyenne de mobilité (figure 5) La procé- dure se termine ensuite par un retour. Cependant, si le pas 904 donne une réponse négative, la procédure passe au pas 905 qui détermine si la valeur Low est inférieure à 2 500 kb Si la réponse est positive, le pas 906 détermine le temps initial de commutation pour voir s'il est compris entre 110,0 et 300,0 s Si la réponse est positive, le pas 907 détermine la mobilité (cm/h) à l'aide du tableau 3 (appendice), la valeur Low comme taille d'ADN et par interpolation linéaire Ensuite, la procédure se termine et conclut le pas 607 du sous-programme appelant. Cependant, si la taille connue d'ADN n'est pas inférieure à 2 500 kb au pas 905, les pas 906 et 907 sont sautés En outre, si le pas 906 donne une réponse négative, le pas 907 est sauté Au pas 908, la valeur Low est lue pour déterminer si elle est inférieure à 1 169 kb Si la réponse est positive, le pas 909 détermine si le temps initial de commutation est inférieur à 110,0 S et le temps final supérieur à 110,0 s, et la procédure passe au pas 910 pour calculer la mobilité à l'aide du tableau 2 (appen- dice), des temps initial et final de commutation, de la valeur Low comme taille d'ADN et de la procédure de forma- tion de la moyenne de la mobilité Le sous-programme se conclut alors par un retour. Cependant, si la valeur Low n'est pas inférieure à 1 169 kb au pas 908, les pas 909 et 910 sont sautés En outre, si le pas 909 donne une réponse négative, le pas 910 est sauté Dans ces conditions, le sous- programme arrive au pas 910 auquel il met toutes les valeurs de sortie à O avant de conclure au pas 607. Au pas 608, le temps d'essai est réglé à une valeur égale au facteur d'étalonnage multiplié par la distance de déplacement et divisé par la mobilité La procédure du cas 2 se termine et termine ainsi le pas 205. La figure 10 représente les pas de la procédure du cas 3 qui est appelée au pas 209 (figure 2) Au pas 1001, l'angle est réglé à 1060 Au pas 1002, le gradient de tension est réglé à 2 V/cm Au pas 1003, le temps initial de commutation est déterminé avec l'équation suivante (fonction 50) Y = 8,6 + 0,0053 X X étant la valeur High multipliée par 60 et Y le temps de commutation Au pas 1004, si le temps initial de commuta- tion est compris entre 0,0 et 0,05 s, au pas 1005, le temps initial est réglé à 0,05 s Dans le cas contraire, le pas 1005 est sauté Au pas 1006, le temps final de commutation est réglé à une valeur égale au temps initial Au pas 1007, la mobilité (cm/h) est déterminée à l'aide de la relation suivante: (fonction 51) Y = 0,047 + 0,00000251 X 1,56 10-9 x 2 X étant Low et Y la mobilité Au pas 1008, la distance de parcours est réglée à 3 cm Au pas 1009, le temps de parcours est réglé au facteur d'étalonnage multiplié par la distance de parcours et divisé par la mobilité Le pas 3 se termine et conclut le pas 209. Les figures ll A et 11 B représentent les pas du cas 4 appelés au pas 210 (figure 2) Au pas 1101, l'angle est réglé à 1060 Au pas 1102, le gradient de tension est réglé à 2 V/cm Au pas 1103, le temps de parcours est réglé au facteur d'étalonnage multiplié par 72 h Au pas 1104, le temps initial de commutation est réglé à 20 min Au pas 1105, le temps final de commutation est déterminé avec la relation suivante (fonction 50) Y = 8,6 + 0,0053 X X étant la valeur High multipliée par 60 et H la mobilité. Au pas 1106, le temps final est multiplié par 1,15 Au pas 1107, si le temps final est compris entre 0,0 et 0,05 s, le pas 1108 règle le temps final à 0,05 s Dans le cas con- traire, le pas 1108 est sauté Au pas 1109, les valeurs de sortie du bloc 1 sont sauvegardées. Aux pas 1110 et 1111, l'angle est réglé à 1200 et le gradient de tension à 6 V/cm Au pas 1112, le temps final de commutation est réglé à 3 min Au pas 1113, les temps initiaux de commutation sont déterminés. La figure 12 illustre le procédé de détermination des temps initiaux de commutation pour le cas 4 Au pas 1201, si la valeur Low est inférieure à 24 kb, le pas 1202 détermine le temps initial de commutation avec la relation suivante: (fonction 22) Y = 0,0 + 0,072277 X 0,008314 x 2 + 0,000581 X 3 X étant la valeur Low et Y le temps de commutation Le sous-programme continue au pas 1206 Cependant, si la valeur Low n'est pas inférieure à 24 kb au pas 1201, la procédure passe au pas 1203 qui détermine si la valeur Low est inférieure à 50 kb Lorsque la réponse est positive, le pas 1204 détermine le temps initial de commutation avec la relation suivante (fonction 21 U) Y = 0,0701979 + 0,074324119 X + 0,000007336094 x 2 X étant la valeur Low et Y le temps de commutation La procédure continue au pas 1206 Cependant, si la valeur Low n'est pas inférieure à 50 kb au pas 1203, le temps initial de commutation est déterminé au pas 1205 par utilisation de la relation suivante (fonction 21 L) Y = 0,95604 + 0,11662974 X 0, 00000574226 x 2 X étant la valeur Low et Y le temps de commutation. La procédure se poursuit au pas 1206 qui détermine si le temps initial de commutation est compris entre 0,0 et 0,05 s Si la réponse est positive, le pas 1207 rend le temps initial égal à 0,05 s Dans le cas contraire, le pas 1207 est sauté Le pas 1208 détermine si le temps initial de commutation est supérieur au temps final Si la réponse est positive, le pas 1209 inverse les valeurs des temps initial et final de commutation Le sous-programme se conclut et termine le pas 1113. Au pas 1114, la mobilité (cm/h) est déterminée de la même manière que pour le cas 2 (figure 9) Au pas 1115, la distance de parcours est réglée à 4 cm Au pas 1116, le temps de parcours est déterminé par multiplication du facteur d'étalonnage par la distance de parcours et par division par la mobilité La procédure se conclut par un retour. Appendice Tableau 1 La première colonne (X) donne la taille minimale d'ADN (Low) (en kilobases). La seconde colonne (Y) donne le temps de commutation *(en secondes). La troisième colonne (Z) donne la mobilité d'élec- trophorèse (en centimètres par heure). Données X Y Z 8,14 0,2 0,273 8,14 0,5 0,338 8,14 0,8 0,384 ,18 0,2 0,245 ,18 0,5 0,315 ,18 0,8 0,362 12,20 0,2 0,217 12,20 0,8 0,351 ,00 0,2 0,180 ,00 0,5 0,281 ,00 0,8 0,348 17,00 0,2 0,157 17,00 0,5 0,262 17,00 0,8 0,339 19,40 0,2 0,138 19,40 0,5 0,236 19,40 0,8 0,332 22,60 0,3 0,177 22,60 0,5 0,216 22,60 0,8 0,318 24,80 24,80 24,80 29,90 29,90 29,90 33,50 33,50 33,50 38,40 38,40 38,40 48,50 48,50 La première colonne (X) est la taille minimale d'ADN (Low) (en La kilobases). seconde colonne (Y) est le temps de commutation (en secondes). La troisième colonne (Z) est la mobilité d'élec- trophorèse. Surface adaptée X Y Z 8,1400 e+ 000 8,1400 e+ 000 8,1400 e+ 000 8,1400 e+ 000 8,1400 e+ 000 8,1400 e+ 000 8,1400 e+ 000 8,1400 e+ 000 8,1400 e+ 000 8,1400 e+ 000 8,1400 e+ 000 2,0000 e-001 2,3000 e-001 2,6000 e-001 2,9000 e-001 3,2000 e-001 3,5000 e-001 3,8000 e-001 4,1000 e-001 4,4000 e-001 4,7000 e-001 ,0000 e-001 2,7129 e-001 2,8031 e-001 2, 8722 e-001 2,9268 e-001 2,9759 e-001 3,0269 e-001 3,0842 e-001 3,1486 e- 001 3,2185 e-001 3,2911 e-001 3,3611 e-001 0,3 0,5 0,8 0,3 0,5 0,8 0,3 0, 5 0,8 0,3 0,5 0,8 0,5 0,8 0,158 0,191 0,306 0,128 0,177 0,274 0,144 0, 156 0,245 0,105 0,126 0,210 0,095 0,146 8,1400 e+ 000 8,1400 e+ 000 8, 1400 e+ 000 8,1400 e+ 000 8,1400 e+ 000 8,1400 e+ 000 8,I 400 e+ 000 8, 1400 e+ 000 8,1400 e+ 000 8,1400 e+ 000 1,0158 e+ 001 1,0158 e+ 001 1, 0158 e+ 001 1,0158 e+ 001 1,0158 e+ 001 1,0158 e+ 001 1,0158 e+ 001 1, 0158 e+ 001 1,0158 e+ 001 1,0158 e+ 001 1,0158 e+ 001 1,0158 e+ 001 1, 0158 e+ 001 1,0158 e+ 001 1,0158 e+ 001 1,0158 e+ 001 1,0158 e+ 001 1, 0158 e+ 001 1,0158 e+ 001 1,0158 e+ 001 1,0158 e+ 001 1,2176 e+ 001 1, 2176 e+ 001 1,2176 e+ 001 1,2176 e+ 001 ,3000 e-001 ,6000 e-001 ,9000 e- 001 6,2000 e-001 6,5000 e-001 6,8000 e-001 7,1 OO Oe-001 7,4000 e-001 7, 7000 e-001 8, OOO Oe-001 2,OO Oe-001 2,3000 e-001 2,6000 e-001 2,9000 e- 001 3,2000 e-001 3,5000 e-001 3,8000 e-001 4,1000 e-001 4,4000 e-001 4, 7000 e-001 , OOO Oe-001 ,3000 e-001 ,6000 e-001 ,9000 e-001 6,2000 e-001 6,5000 e-001 6,8000 e-001 7,10 l OO Oe-001 7,4000 e-001 7,7000 e-001 8, OOO Oe-OO 1 2,0000 e-001 2,3000 e-001 2,6000 e-001 2,9000 e-001 3,4220 e- 001 3,4727 e-001 3,5142 e-001 3,5486 e-001 3,5794 e-001 3,6108 e-001 3, 6467 e-001 3,6903 e-001 3,7423 e-001 3,7958 e-001 2,4379 e-001 2,5399 e- 001 2,6236 e-001 2,6923 e-001 2,7539 e-001 2,8155 e-001 2,8814 e-001 2, 9523 e-001 3,0264 e-001 3,1004 e-001 3,1720 e-001 3,2401 e-001 3,3004 e- 001 3,3519 e-001 3,3968 e-001 3,4383 e-001 3,4795 e-001 3,5227 e-001 3, 5690 e-001 3,6177 e-001 3,6691 e-001 2,1715 e-001 2,2861 e-001 2,3852 e- 001 2,4691 e-001 1,2176 e+ 001 1,2176 e+ 001 1,2176 e+ 001 1,2176 e+ 001 1,2176 e+ 001 1,2176 e+ 001 1,2176 e+ 001 1,2176 e+ 001 1,2176 e+ 001 1,2176 e+ 001 1,2176 e+ 001 1,2176 e+ 001 1,2176 e+ 001 1,2176 e+ 001 1,2176 e+ 001 1,2176 e+ 001 1,2176 e+ 001 1,4194 e+ 001 1,4194 e+ 001 1,4194 e+ 001 1,4194 e+ 001 1,4194 e+ 001 1,4194 e+ 001 1,4194 e+ 001 1,4194 e+ 001 1,4194 e+ 001 1,4194 e+ 001 1,4194 e+ 001 1,4194 e+ 001 1,4194 e+ 001 1,4194 e+ 001 1,4194 e+ 001 1,4194 e+ 001 1,4194 e+ 001 1,4194 e+ 001 1,4194 e+ 001 3,2000 e-001 3,5000 e-001 3,8000 e-001 4, 1000 e-001 4,4000 e-001 4,7000 e-001 , OOO Oe-001 ,3000 e-001 ,6000 e- 001 ,9000 e-001 6,2000 e-001 6,5000 e-001 6,8000 e-001 7,1000 e-001 7, 4000 e-001 7,7000 e-001 8,0000 e-001 2, OOO Oe-001 l 2,3000 e-001 2,6000 e-001 2,9000 e-001 3,2000 e-001 3,5000 e-001 3,8000 e-001 4,1000 e-001 4, 4000 e-001 4,7000 e-001 ,000 Oe-001 ,3000 e-001 ,6000 e-001 ,9000 e-001 6,2000 e-001 6,5000 e-001 6,8000 e-001 7,1000 e-001 7,4000 e-001 2,5435 e-001 2,6154 e-001 2,6893 e-001 2,7663 e-001 2,8453 e-001 2,9237 e-001 2, 9990 e-001 3,0694 e-001 3,1339 e-001 3,1930 e-001 3,2481 e-001 3,3013 e- 001 3,3540 e-001 3,4071 e-001 3,4605 e-001 3,5132 e-001 3,5688 e-001 1, 9194 e-001 2,0479 e-001 2,1642 e-001 2,2635 e-001 2,3494 e-001 2,4292 e- 001 2,5084 e-001 2,5893 e-001 2,6725 e-001 2,7564 e-001 2,8362 e-001 2, 9064 e-001 2,9722 e-001 3,0374 e-001 3,1026 e-001 3,1678 e-001 3,2333 e- 001 3,2989 e-001 3,3643 e-00 @ 1,4194 e+ 001 1,4194 e+ 001 1,6212 e+ 001 1,6212 e+ 001 1,6212 e+ 001 1,6212 e+ 001 1,6212 e+ 001 1,6212 e+ 001 1,6212 e+ 001 1,6212 e+ 001 1,6212 e+ 001 1,6212 e+ 001 1,6212 e+ 001 1, 6212 e+ 001 1,6212 e+ 001 1,6212 e+ 001 1,6212 e+ 001 1,6212 e+ 001 1, 6212 e+ 001 1,6212 e+ 001 1,6212 e+ 001 1,6212 e+ 001 1,6212 e+ 001 1, 8230 e+ 001 1,8230 e+ 001 1,8230 e+ 001 1,8230 e+ 001 1,8230 e+ 001 1, 8230 e+ 001 1,8230 e+ 001 1,8230 e+ 001 1,8230 e+ 001 1,8230 e+ 001 1, 8230 e+ 001 1,8230 e+ 001 7,7000 e-001 8, OOO Oe-001 2, OOO Oe-001 2, 3000 e-001 2,6000 e-001 2,9000 e-001 3,2000 e-001 3,5000 e-001 3,8000 e- 001 4,1000 e-001 4,4000 e-001 4,7000 e-001 ,0000 e-001 ,3000 e-001 ,6000 e-001 ,9000 e-001 6,2000 e-001 6,5000 e-001 6,8000 e-001 7,10 l OO Oe- 001 7,4000 e-001 7,7000 e-001 8,0000 e-001 2,0000 e-001 2,3000 e-001 2, 6000 e-001 2,9000 e-001 3,2000 e-001 3,5000 e-001 3,8000 e-001 4,1000 e- 001 4,4000 e-001 4,7000 e-001 ,0000 e-001 ,3000 e-001 3,4295 e-001 3, 4960 e-001 1,6937 e-001 1,8355 e-001 1,9689 e-001 2,0824 e-001 2,1764 e- 001 2,2594 e-001 2,3394 e-001 2,4202 e-001 2,5029 e-001 2,5870 e-001 2, 6677 e-001 2,7406 e-001 2,8112 e-001 2,8842 e-001 2,9598 e-001 3,0371 e- 001 3,1154 e-001 3,1938 e-001 3,2717 e-001 3,3486 e-001 3,4240 e-001 1, 5044 e-001 1,6570 e-001 1,8059 e-001 1,9314 e-001 2,0283 e-001 2,1081 e- 001 2,1834 e-001 2,2594 e-001 2,3368 e-001 2,4146 e-001 2,4922 e-001 2, 5704 e-001 2,6504 e-001 2,7333 e-001 2,8195 e-001 2,9082 e-001 2,9982 e- 001 3,0883 e-001 3,1773 e-001 3,2641 e-001 3,3472 e-001 1,8230 e+ 001 1, 8230 e+ 001 1,8230 e+ 001 1,8230 e+ 001 1,8230 e+ 001 1,8230 e+ 001 1, 8230 e+ 001 1,8230 e+ 001 1,8230 e+ 001 ,6000 e-001 ,9000 e-001 6,2000 e- 001 6,5000 e-001 6,8000 e-001 7,10 O Oe-001 7,4000 e-001 7,7000 e-001 8, 00 00 e-001 2,00 00 e-001 2,3000 e-001 2,6000 e-001 2,9000 e-001 3,2000 e-001 3,5000 e-001 3,8000 e-001 4,10 O Oe-001 4,4000 e-001 4,7000 e-001 , 00 00 e-001 ,3000 e-001 ,6000 e-001 ,9000 e-001 6,2000 e-001 6,5000 e- 001 6,8000 e-001 7,10 O Oe-001 7,4000 e-001 7,7000 e-001 8,00 00 e-001 1, 3526 e-001 1,5140 e-001 1,6750 e-001 1,8085 e-001 1,9028 e-001 1,9738 e- 001 2,0406 e-001 2,1092 e-001 2,1793 e-001 2,2507 e-001 2,3254 e-001 2, 4068 e-001 2,4943 e-001 2,5864 e-001 2,6823 e-001 2,7808 e-001 2,8806 e- 001 2,9805 e-001 3,0790 e-001 3,1746 e-001 3,2646 e-001 2,0248 e+ 001 2, 0248 e+ 001 2,0248 e+ 001 2,0248 e+ 001 2,0248 e+ 001 2,0248 e+ 001 2, 0248 e+ 001 2,0248 e+ 001 2,0248 e+ 001 2,0248 e+ 001 2,0248 e+ 001 2, 0248 e+ 001 2,0248 e+ 001 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7,4000 e-001 7,7000 e-001 8,0000 e-001 2,0000 e- 001 2,3000 e-001 2,6000 e-001 2,9000 e-001 3,2000 e-001 3,5000 e-001 3, 8000 e-001 4,10 l OO Oe-001 4,4000 e-001 4,7000 e-001 ,0000 e-001 ,3000 e-001 ,6000 e-001 ,9000 e-001 6,2000 e-001 6,5000 e-001 6,8000 e-001 7, 1000 e-001 7,4000 e-001 7,7000 e-001 1,8443 e-001 1,9091 e-001 1,9707 e- 001 2,0335 e-001 2,0988 e-001 2,1711 e-001 2,2534 e-001 2,3461 e-001 2, 4457 e-001 2,5490 e-001 2,6547 e-001 2,7617 e-001 2,8689 e-001 2,9749 e- 001 3,0776 e-001 3,1732 e-001 1,1872 e-001 1,3323 e-001 1,4694 e-001 1, 5821 e-001 1,6653 e-001 1,7291 e-001 1,7873 e-001 1,8449 e-001 1,9016 e- 001 1,9584 e-001 2,0242 e-001 2, 11 O Oe-001 2,2091 e-001 2,3134 e-001 2, 4208 e-001 2,5303 e-001 2,6411 e-001 2,7523 e-001 2,8625 e-001 2,9696 e- 001 2,4284 e+ 001 2,6302 e+ 001 2,6302 e+ 001 2,6302 e+ 001 2,6302 e+ 001 2,6302 e+ 001 2,6302 e+ 001 2,6302 e+ 001 2,6302 e+ 001 2,6302 e+ 001 2,6302 e+ 001 2,6302 e+ 001 2,6302 e+ 001 2,6302 e+ 001 2,6302 e+ 001 2,6302 e+ 001 2,6302 e+ 001 2,6302 e+ 001 2,6302 e+ 001 2,6302 e+ 001 2,6 * 02 e+ 001 2,6302 e+ 001 2,8320 e+ 001 2,8320 e+ 001 2,8320 e+ 001 2,8320 e+ 001 2,8320 e+ 001 2,8320 e+ 001 2,8320 e+ 001 2,8320 e+ 001 2,8320 e+ 001 2,8320 e+ 001 2,8320 e+ 001 2,8320 e+ 001 2,8320 e+ 001 8, OO Oe-001 2, OO Oe-001 2,3000 e-001 2,6000 e-001 2,9000 e-001 3, 2000 e-001 3,5000 e-001 3,8000 e-001 4,10 l OO Oe-001 4,4000 e-001 4, 7000 e-001 , OO Oe-001 ,3000 e-001 ,6000 e-001 ,9000 e-001 6,2000 e-001 6,5000 e-001 6,8000 e-001 7,10 l OO Oe-001 7,4000 e-001 7,7000 e-001 8, 0000 e-001 2,0000 e-001 2,3000 e-001 2,6000 e-001 2,9000 e-001 3,2000 e- 001 3,5000 e-001 3,8000 e-001 4,1000 e-001 4,4000 e-001 4,7000 e-001 , 0000 e-001 ,3000 e-001 ,6000 e-001 3,0691 e-001 1,1480 e-001 1,2723 e- 001 1,3835 e-001 1,4760 e-001 1,5520 e-001 1,6171 e-001 1,6764 e-001 1, 7329 e-001 1,7881 e-001 1,8440 e-001 1,9087 e-001 1,9924 e-001 2,0889 e- 001 2,1913 e-001 2,2979 e-001 2,4074 e-001 2,5188 e-001 2,6306 e-001 2, 7413 e-001 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l OO Oe-001 7,4000 e-001 7,7000 e-001 8,OO Oe-001 2,0000 e- 001 2,3000 e-001 2,6000 e-001 2,9000 e-001 3,2000 e-001 3,5000 e-001 3, 8000 e-001 2,0770 e-001 2,1791 e-001 2,2859 e-001 2,3952 e-001 2,5052 e- 001 2,6142 e-001 2,7204 e-001 2,8211 e-001 1,1966 e-001 1,2721 e-001 1, 3283 e-001 1,3844 e-001 1,4414 e-001 1,4922 e-001 1,5416 e-001 1,5954 e- 001 1,6574 e-001 1,7260 e-001 1,7974 e-001 1,8762 e-001 1,9651 e-001 2, 0623 e-001 2,1649 e-001 2,2707 e-001 2,3774 e-001 2,4835 e-001 2,5880 e- 001 2,6883 e-001 1,0830 e-001 1,1739 e-001 1,2552 e-001 1,3183 e-001 1, 3551 e-001 1,3826 e-001 1,4147 e-001 3,2356 e+ 001 3,2356 e+ 001 3,2356 e+ 001 3,2356 e+ 001 3,2356 e+ 001 3,2356 e+ 001 3,2356 e+ 001 3,2356 e+ 001 3,2356 e+ 001 3,2356 e+ 001 3,2356 e+ 001 3,2356 e+ 001 3,2356 e+ 001 3,2356 e+ 001 3,4374 e+ 001 3,4374 e+ 001 3,4374 e+ 001 3,4374 e+ 001 3,4374 e+ 001 3,4374 e+ 001 3,4374 e+ 001 3,4374 e+ 001 3,4374 e+ 001 3,4374 e+ 001 3,4374 e+ 001 3,4374 e+ 001 3,4374 e+ 001 3,4374 e+ 001 3,4374 e+ 001 3,4374 e+ 001 3,4374 e+ 001 3,4374 e+ 001 3,4374 e+ 001 3,4374 e+ 001 3,4374 e+ 001 4,10 l OO Oe-001 4,4000 e-001 4,7000 e- 001 ,0000 e-001 ,3000 e-001 ,6000 e-001 ,9000 e-001 6,2000 e-001 6,5000 e-001 6,8000 e-001 7,10 l OO Oe-001 7,4000 e-001 7,7000 e-001 8, OOO Oe- 001 2,0000 e-001 2,3000 e-001 2,6000 e-001 2,9000 e-001 3,2000 e-001 3, 5000 e-001 3,8000 e-001 4,1000 e-001 4,4000 e-001 4,7000 e-001 ,0000 e- 001 ,3000 e-001 ,6000 e-001 ,9000 e-001 6,2000 e-001 6,5000 e-001 6,8000 e-001 7,1000 e-001 7,4000 e-001 7,7000 e-001 8,0000 e-001 1,4534 e-001 1, 5000 e-001 1,5559 e-001 1,6197 e-001 1,6897 e-001 1,7670 e-001 1,8526 e- 001 1,9458 e-001 2,0443 e-001 2,1456 e-001 2,2478 e-001 2,3490 e-001 2, 4477 e-001 2,5437 e-001 1,0519 e-001 1,1328 e-001 1,2088 e-001 1,2710 e- 001 1,3004 e-001 1,3144 e-001 1,3352 e-001 1,3648 e-001 1,4031 e-001 1, 4517 e-001 1,5108 e-001 1,5789 e-001 1,6554 e-001 1,7396 e-001 1,8297 e- 001 1,9241 e-001 2,0207 e-001 2,1176 e-001 2,2134 e-001 2,3072 e-001 2, 4001 e-001 3,6392 e+ 001 3,6392 e+ 001 3,6392 e+ 001 3,6392 e+ 001 3, 6392 e+ 001 3,6392 e+ 001 3,6392 e+ 001 3,6392 e+ 001 3,6392 e+ 001 3, 6392 e+ 001 3,6392 e+ 001 3,6392 e+ 001 3,6392 e+ 001 3,6392 e+ 001 3, 6392 e+ 001 3,6392 e+ 001 3,6392 e+ 001 3,6392 e+ 001 3,6392 e+ 001 3, 6392 e+ 001 3,6392 e+ 001 3,8410 e+ 001 3,8410 e+ 001 3,8410 e+ 001 3, 8410 e+ 001 3,8410 e+ 001 3,8410 e+ 001 3,8410 e+ 001 3,8410 e+ 001 3, 8410 e+ 001 3,8410 e+ 001 3,8410 e+ 001 3,8410 e+ 001 3,8410 e+ 001 3, 8410 e+ 001 3,8410 e+ 001 2, OOO Oe-001 2,3000 e-001 2,6000 e-001 2,9000 e-001 3,2000 e-001 3,5000 e-001 3,8000 e-001 4,10 l OO Oe-001 4,4000 e- 001 4,7000 e-001 , OOO Oe-001 ,3000 e-001 ,6000 e-001 ,9000 e-001 6,2000 e-001 6,5000 e-001 6,8000 e-001 7,10 l OO Oe-001 7,4000 e-001 7,7000 e- 001 8,0000 e-001 2,000 Oe-001 2,3000 e-001 2,6000 e-001 2,9000 e-001 3, 2000 e-001 3,5000 e-001 3,8000 e-001 4, 10 O Oe-001 4,4000 e-001 4,7000 e-001 ,0000 e-001 ,3000 e-001 ,6000 e-001 ,9000 e-001 6,2000 e-001 1, 0050 e-001 1,0656 e-001 1,1172 e-001 1,1606 e-001 1,1962 e-001 1,2243 e- 001 1,2490 e-001 1,2749 e-001 1,3057 e-001 1,3449 e-001 1,3975 e-001 1, 4654 e-001 1,5436 e-001 1,6275 e-001 1,7151 e-001 1,8054 e-001 1,8970 e- 001 1,9884 e-001 2,0783 e-001 2,1667 e-001 2,2561 e-001 9,5101 e-002 9, 9338 e-002 1,0269 e-001 1,0589 e-001 1,0962 e-001 1,1328 e-001 1,1622 e- 001 1,1875 e-001 1,2134 e-001 1,2447 e-001 1,2905 e-001 1,3577 e-001 1, 4370 e-001 1,5198 e-001 1,6040 e-001 o 00-g Os O' I loo-a 990 o'I ZOO-e T'86 L'6 ZOO-e S Et T' 6 ZOO-9 TLEZ'6 ZOO-e 9066 '8 ZOO-859 L '8 ZOO T 66 T '8 TOO-98 Pi 86 'T -LO 06 '1 TOO-8618 'T OO 0-e T 8 L 'I T 00-a ZL 99 T OO 0-a ZLLSI T 00-a Z 86 T 'I Too-0 ooz T'IT -96 Zt E'8 I 0 oo-a 69 Z' T 0-e LLOZ I -18891 'I OO 0-a LZT 'I T 00-l L 9 Oi 'I -9 T 80 i ' OO 0-El ZSO'I 0-8 ss TO 'TI 0 ZOO-e 6 P 8 ' 6 ZOO-a 8699 '6 ZOO-9 TT 08 '6 ZOO-e T 586 '8 T 00-a 6 TTT 'Z T 00-L 6 ZO 'Z T 00-e 99 t 6 'I T 00-LT 98 'T T 00-; 9 LL'IT T 00-et 689 'I -0 OOOI 't -90008 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7,7000 e-001 8,00 00 e-001 7,1639 e-002 7,2801 e- 002 7,3961 e-002 7,5246 e-002 7,6755 e-002 7,8571 e-002 8,0784 e-002 8, 3490 e-002 8,6750 e-002 9,0536 e-002 9,4723 e-002 9,9123 e-002 1,0356 e- 001 1,0791 e-001 1,1220 e-001 1,1657 e-001 1,2123 e-001 4,8500 e+ 001 4, 8500 e+ 001 4,8500 e+ 001 4,8500 e+ 001 4,8500 e+ 001 4,8500 e+ 001 4, 8500 e+ 001 4,8500 e+ 001 4,8500 e+ 001 4,8500 e+ 001 4,8500 e+ 001 4, 8500 e+ 001 4,8500 e+ 001 4,8500 e+ 001 4,8500 e+ 001 4,8500 e+ 001 4, 8500 e+ 001 2,00 00 e-001 2,3000 e-001 2,6000 e-001 2,9000 e-001 3,2000 e-001 3,5000 e-001 3,8000 e-001 4,10 O Oe-001 4,4000 e-001 4,7000 e-001 , 00 00 e-001 ,3000 e-001 ,6000 e-001 ,9000 e-001 6,2000 e-001 6,5000 e- 001 6,8000 e-001 4,8500 e+ 001 4,8500 e+ 001 4,8500 e+ 001 4,8500 e+ 001 7,l OO Oe-001 7,4000 e-001 7,7000 e-001 8,0000 e-001 1,2643 e-001 1,3232 e-001 1,3894 e-001 1,4621 e-001 Tableau 2 La première colonne (X) donne la taille minimale d'ADN (Low) (en kilobases). La seconde colonne (Y) donne le temps de commutation (en secondes). La troisième colonne (Z) donne la mobilité d'élec- trophorèse. Données X Y Z 48,5 30 0,3056 48,5 75 0,3150 48,5 90 0,3200 97,0 5 0,1540 97,0 10 0,2100 97,0 15 0,2719 97,0 30 0,2819 97,0 45 0,2790 97,0 70 0,2950 97,0 90 0,3067 97,0 105 0,3155 ,5 15 0,2256 145,5 30 0,2588 ,5 45 0,2605 ,5 60 0,2857 ,5 75 0,2918 ,5 90 0,2942 145,5 105 0,3060 194,0 15 0,1677 194,0 30 0,2356 194,0 45 0,2437 194,0 60 0,2714 194,0 75 0,2767 194,0 90 0,2834 194,0 105 0,2960 0,1157 0,1600 0,2119 0,2260 0,2571 0,2666 0,2726 0,2860 0,0925 0,1863 0,2084 0,2452 0,2541 0,2618 0,2759 0,0690 0,1528 0,1907 0,2310 0,2440 0,2510 0,2660 0,1183 0,1714 0,2190 0,2314 0,2414 0,2583 0,0932 0,1479 0,2048 0,2214 0,2317 0,2508 0,0789 0,1176 0,1905 242,5 242,5 242,5 242,5 242,5 242,5 242,5 242,5 291,0 291,0 291,0 291,0 291,0 291,0 291,0 339,5, 339,5 339,5 339,5 339,5 339,5 339,5 388,0 388,0 388,0 388,0 388,0 388,0 436,5 436,5 436,5 436,5 436,5 436,5 485,0 485,0 485,0 485,0 75 0,2098 485,0 90 0,2215 485,0 105 0,2408 533,5 40 0,0750 533,5 45 0,0924 533,5 60 0,1762 533,5 75 0,1987 533,5 90 0,2101 533,5 105 0,2333 582,0 40 0,0550 582,0 45 0,0748 582,0 60 0,1595 582,0 75 0,1887 582,0 90 0,2011 582,0 105 0,2257 630,5 40 0,0400 *630,5 45 0,0639 630,5 60 0,1333 630,5 75 0,1786 630,5 90 0,1931 630,5 105 0,2157 679,0 60 0,1095 679,0 75 0,1660 679,0 90 0,1863 679,0 105 0,2057 727,5 60 0,0881 727,5 75 0,1459 727,5 90 0,1766 776,0 60 0,0714 776,0 75 0,1233 776,0 90 0,1647 832,0 60 0,0620 832,0 75 0,0950 832,0 90 0,1425 832,0 105 0,1800 832,0 120 0,1837 915,0 75 0,0705 0,1070 0,1650 0,1782 La première colonne (X) donne la taille minimale d'ADN (Low) (kilobases). La seconde colonne (Y) donne le temps de commutation (en secondes). La troisième d'électrophorèse. Surface adaptée X Y colonne (Z) donne la mobilité z 4,8500 e+ 001 4,8500 e+ 001 4,8500 e+ 001 4,8500 e+ 001 4,8500 e+ 001 4,8500 e+ 001 4,8500 e+ 001 4,8500 e+ 001 4,8500 e+ 001 4,8500 e+ 001 4,8500 e+ 001 4,8500 e+ 001 4,8500 e+ 001 4,8500 e+ 001 4,8500 e+ 001 4,8500 e+ 001 4,8500 e+ 001 4,8500 e+ 001 4,8500 e+ 001 4,8500 e+ 001 4,8500 e+ 001 ,0000 e+ 000 1,0750 e+ 001 1,6500 e+ 001 2,2250 e+ 001 2,8000 e+ 001 3,3750 e+ 001 3,9500 e+ 001 4,5250 e+ 001 ,1000 e+ 001 ,6750 e+ 001 6,2500 e+ 001 6,8250 e+ 001 7,4000 e+ 001 7,9750 e+ 001 8,5500 e+ 001 9,1250 e+ 001 9,7000 e+ 001 1, 0275 e+ 002 1,0850 e+ 002 1,1425 e+ 002 1,2000 e+ 002 2,1572 e-001 2, 4990 e-001 2,7524 e-001 2,8992 e-001 3,0062 e-001 3,0761 e-001 3,0930 e- 001 3,0986 e-001 3,1237 e-001 3,1459 e-001 3,1518 e-001 3,1519 e-001 3, 1607 e-001 3,1763 e-001 3,1890 e-001 3,1923 e-001 3,1973 e-001 3,2037 e- 001 3,1918 e-001 3,1534 e-001 3,0926 e-001 915,0 915,0 915,0 9,1825 e+ 001 9,1825 e+ 001 9,1825 e+ 001 9,1825 e+ 001 9,1825 e+ 001 9,1825 e+ 001 9,1825 e+ 001 9,1825 e+ 001 9,1825 e+ 001 9,1825 e+ 001 9,1825 e+ 001 9,1825 e+ 001 9,1825 e+ 001 9,1825 e+ 001 9,1825 e+ 001 9,1825 e+ 001 9,1825 e+ 001 9,1825 e+ 001 9,1825 e+ 001 9,1825 e+ 001 9,1825 e+ 001 1,3515 e+ 002 1,3515 e+ 002 1,3515 e+ 002 1,3515 e+ 002 1,3515 e+ 002 1,3515 e+ 002 1,3515 e+ 002 1,3515 e+ 002 1,3515 e+ 002 1,3515 e+ 002 1,3515 e+ 002 1,3515 e+ 002 1,3515 e+ 002 1,3515 e+ 002 1,3515 e+ 002 , OOO Oe+ 000 1,0750 e+ 001 1,6500 e+ 001 2,2250 e+ 001 2,8000 e+ 001 3,3750 e+ 001 3,9500 e+ 001 4,5250 e+ 001 ,100 l OO Oe+ 001 ,6750 e+ 001 6,2500 e+ 001 6,8250 e+ 001 7,4000 e+ 001 7,9750 e+ 001 8,5500 e+ 001 9,1250 e+ 001 9,7000 e+ 001 1,0275 e+ 002 1,0850 e+ 002 1,1425 e+ 002 1,2000 e+ 002 , OOO Oe+ 000 1,0750 e+ 001 1,6500 e+ 001 2,2250 e+ 001 2,8000 e+ 001 3,3750 e+ 001 3,9500 e+ 001 4,5250 e+ 001 ,100 l OO Oe+ 001 ,6750 e+ 001 6,2500 e+ 001 6,8250 e+ 001 7,4000 e+ 001 7,9750 e+ 001 8,5500 e+ 001 1,8147 e-001 2,2043 e-001 2,4968 e-001 2,6541 e-001 2, 7712 e-001 2,8517 e-001 2,8790 e-001 2,9026 e-001 2,9533 e-001 2,9984 e- 001 3,0209 e-001 3,0310 e-001 3,0507 e-001 3,0742 e-001 3,0899 e-001 3, 0997 e-001 3,1170 e-001 3,1344 e-001 3,1302 e-001 3,0986 e-001 3,0448 e- 001 1,5246 e-001 1,9044 e-001 2,2009 e-001 2,3880 e-001 2,5327 e-001 2, 6321 e-001 2,6808 e-001 2,7284 e-001 2,7968 e-001 2,8586 e-001 2,8994 e- 001 2,9233 e-001 2,9471 e-001 2,9725 e-001 2,9905 e-001 1,3515 e+ 002 1, 3515 e+ 002 1,3515 e+ 002 1,3515 e+ 002 1,3515 e+ 002 1,3515 e+ 002 1, 7848 e+ 002 1,7848 e+ 002 1,7848 e+ 002 1,7848 e+ 002 1,7848 e+ 002 1, 7848 e+ 002 1,7848 e+ 002 1,7848 e+ 002 1,7848 e+ 002 1,7848 e+ 002 1, 7848 e+ 002 1,7848 e+ 002 1,7848 e+ 002 1,7848 e+ 002 1,7848 e+ 002 1, 7848 e+ 002 1,7848 e+ 002 1,7848 e+ 002 1,7848 e+ 002 1,7848 e+ 002 1, 7848 e+ 002 2,2180 e+ 002 2,2180 e+ 002 2,2180 e+ 002 2,2180 e+ 002 2, 2180 e+ 002 2,2180 e+ 002 2,2180 e+ 002 2,2180 e+ 002 9,1250 e+ 001 9, 7000 e+ 001 1,0275 e+ 002 1,0850 e+ 002 1,1425 e+ 002 1,2000 e+ 002 , OOO Oe+ 000 1,0750 e+ 001 1,6500 e+ 001 2,2250 e+ 001 2,8000 e+ 001 3, 3750 e+ 001 3,9500 e+ 001 4,5250 e+ 001 ,100 l OO Oe+ 001 ,6750 e+ 001 6, 2500 e+ 001 6,8250 e+ 001 7,4000 e+ 001 7,9750 e+ 001 8,5500 e+ 001 9, 1250 e+ 001 9,7000 e+ 001 1,0275 e+ 002 1,0850 e+ 002 1,1425 e+ 002 1, 2000 e+ 002 , OOO Oe+ 000 1,0750 e+ 001 1,6500 e+ 001 2,2250 e+ 001 2, 8000 e+ 001 3,3750 e+ 001 3,9500 e+ 001 4,5250 e+ 001 3,0058 e-001 3, 0308 e-001 3,0533 e-001 3,0552 e-001 3,0318 e-001 2,9867 e-001 1,2463 e- 001 1,5894 e-001 1,8783 e-001 2,1054 e-001 2,2902 e-001 2,4163 e-001 2, 4907 e-001 2,5618 e-001 2,6458 e-001 2,7215 e-001 2,7777 e-001 2,8143 e- 001 2,8420 e-001 2,8702 e-001 2,8921 e-001 2,9123 e-001 2,9419 e-001 2, 9677 e-001 2,9744 e-001 2,9582 e-001 2,9215 e-001 9,3584 e-002 1,2529 e- 001 1,5495 e-001 1,8200 e-001 2,0457 e-001 2,2010 e-001 2,3015 e-001 2, 3953 e-001 2,4955 e-001 2,5853 e-001 2,6543 e-001 2,7011 e-001 2,7355 e- 001 2,7685 e-001 2,7947 e-001 2,8193 e-001 2,8525 e-001 2,8811 e-001 2, 8917 e-001 2,8816 e-001 2,8526 e-001 6,2018 e-002 9,3450 e-002 1,2447 e- 001 1,5449 e-001 1,8017 e-001 1,9835 e-001 2,11 O Oe-001 2,2266 e-001 2, 3443 e-001 2,4496 e-001 2,5313 e-001 2,5872 e-001 2,6291 e-001 2,6678 e- 001 2,6980 e-001 2,7268 e-001 2,7636 e-001 2,7948 e-001 2,8090 e-001 2, 8045 e-001 2,7824 e-001 ,1000 e+ 001 ,6750 e+ 001 6,2500 e+ 001 6,8250 e+ 001 7,4000 e+ 001 7,9750 e+ 001 8,5500 e+ 001 9,1250 e+ 001 9,7000 e+ 001 1,0275 e+ 002 1,0850 e+ 002 1,1425 e+ 002 1,2000 e+ 002 ,0000 e+ 000 1,0750 e+ 001 1,6500 e+ 001 2,2250 e+ 001 2,8000 e+ 001 3,3750 e+ 001 3, 9500 e+ 001 4,5250 e+ 001 ,1000 e+ 001 ,6750 e+ 001 6,2500 e+ 001 6,8250 e+ 001 7,4000 e+ 001 7,9750 e+ 001 8,5500 e+ 001 9,1250 e+ 001 9,7000 e+ 001 1,0275 e+ 002 1,0850 e+ 002 1,1425 e+ 002 1,2000 e+ 002 2,2180 e+ 002 2,2180 e+ 002 2,2180 e+ 002 2,2180 e+ 002 2,2180 e+ 002 2,2180 e+ 002 2,2180 e+ 002 2,2180 e+ 002 2,2180 e+ 002 2,2180 e+ 002 2,2180 e+ 002 2,2180 e+ 002 2,2180 e+ 002 2,6512 e+ 002 2,6512 e+ 002 2,6512 e+ 002 2,6512 e+ 002 2,6512 e+ 002 2,6512 e+ 002 2,6512 e+ 002 2,6512 e+ 002 2,6512 e+ 002 2,6512 e+ 002 2,6512 e+ 002 2,6512 e+ 002 2,6512 e+ 002 2,6512 e+ 002 2,6512 e+ 002 2,6512 e+ 002 2,6512 e+ 002 2,6512 e+ 002 2,6512 e+ 002 2,6512 e+ 002 2,6512 e+ 002 3,2160 e-002 3,0845 e+ 002 ,0000 e+ 000 3,0845 e+ 002 3,0845 e+ 002 3,0845 e+ 002 3,0845 e+ 002 3,0845 e+ 002 3,0845 e+ 002 3,0845 e+ 002 3,0845 e+ 002 3,0845 e+ 002 3,0845 e+ 002 3,0845 e+ 002 3,0845 e+ 002 3,0845 e+ 002 3,0845 e+ 002 3, 0845 e+ 002 3,0845 e+ 002 3,0845 e+ 002 3,0845 e+ 002 3,0845 e+ 002 3, 0845 e+ 002 3,5178 e+ 002 3,5178 e+ 002 3,5178 e+ 002 3,5178 e+ 002 3, 5178 e+ 002 3,5178 e+ 002 3,5178 e+ 002 3,5178 e+ 002 3,5178 e+ 002 3, 5178 e+ 002 3,5178 e+ 002 3,5178 e+ 002 3,5178 e+ 002 3,5178 e+ 002 3, 5178 e+ 002 3,5178 e+ 002 1,0750 e+ 001 1,6500 e+ 001 2,2250 e+ 001 2, 8000 e+ 001 3,3750 e+ 001 3,9500 e+ 001 4,5250 e+ 001 ,1000 e+ 001 ,6750 e+ 001 6,2500 e+ 001 6,8250 e+ 001 7,4000 e+ 001 7,9750 e+ 001 8,5500 e+ 001 9,1250 e+ 001 9,7000 e+ 001 1,0275 e+ 002 1,0850 e+ 002 1,1425 e+ 002 1,2000 e+ 002 ,0000 e+ 000 1,0750 e+ 001 1,6500 e+ 001 2,2250 e+ 001 2,8000 e+ 001 3,3750 e+ 001 3,9500 e+ 001 4,5250 e+ 001 ,1000 e+ 001 , 6750 e+ 001 6,2500 e+ 001 6,8250 e+ 001 7,4000 e+ 001 7,9750 e+ 001 8, 5500 e+ 001 9,1250 e+ 001 6,4833 e-002 9,6914 e-002 1,2816 e-001 1,5563 e-001 1,7604 e-001 1,9140 e-001 2,0546 e-001 2,1909 e-001 2,3130 e-001 2, 4079 e-001 2,4729 e-001 2,5228 e-001 2,5676 e-001 2,6022 e-001 2,6352 e- 001 2,6760 e-001 2,7103 e-001 2,7281 e-001 2,7288 e-001 2,7128 e-001 3, 8103 e-003 3,7852 e-002 7,0912 e-002 1,0275 e-001 1,3090 e-001 1,5313 e- 001 1,7123 e-001 1,8771 e-001 2,0332 e-001 2,1738 e-001 2,2831 e-001 2, 3579 e-001 2,4 i 64 e-001 2,4680 e-001 2,5074 e-001 2,5451 e-001 2,5907 e-001 2,6291 e-001 2,6510 e-001 2,6562 e-001 2,6453 e-001 O,0000 e+ 000 1,2028 e-002 4,6202 e-002 7,8499 e-002 1,0673 e-001 1,3022 e-001 1,5045 e-001 1,6909 e-001 1,8689 e-001 2,0309 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001 8,3563 e-002 1, 0154 e-001 1,1797 e-001 1,3372 e-001 1,4977 e-001 1,6402 e-001 1,7369 e- 001 1,7917 e-001 1,8264 e-001 8,7168 e+ 002 8,7168 e+ 002 8,7168 e+ 002 8,7168 e+ 002 8,7168 e+ 002 8,7168 e+ 002 8,7 I 68 e+ 002 8,7168 e+ 002 8,7168 e+ 002 7,4000 e+ 001 7,9750 e+ 001 8,5500 e+ 001 9,1250 e+ 001 9, 7000 e+ 001 1,0275 e+ 002 1,0850 e+ 002 1,1425 e+ 002 1,2000 e+ 002 O, 0000 e+ 000 O,0000 e+ 000 O,0000 e+ 000 O,0000 e+ 000 0,0000 e+ 000 O, 0000 e+ 000 O,0000 e+ 000 O,0000 e+ 000 O,0000 e+ 000 4,5448 e-003 2, 7759 e-002 4,7768 e-002 6,7301 e-002 8,5817 e-002 1,0198 e-001 1,1834 e- 001 1,3704 e-001 1,5430 e-001 1,6588 e-001 1,7281 e-001 1,7788 e-001 , 0000 e+ 000 1,0750 e+ 001 1,6500 e+ 001 2,2250 e+ 001 2,8000 e+ 001 3, 3750 e+ 001 3,9500 e+ 001 4,5250 e+ 001 ,1000 e+ 001 ,6750 e+ 001 6,2500 e+ 001 6,8250 e+ 001 7,4000 e+ 001 7,9750 e+ 001 8,5500 e+ 001 9,1250 e+ 001 9,7000 e+ 001 1,0275 e+ 002 1,0850 e+ 002 1,1425 e+ 002 1,2000 e+ 002 9,1500 e+ 002 9,1500 e+ 002 9,1500 e+ 002 9,1500 e+ 002 9,1500 e+ 002 9,1500 e+ 002 9,1500 e+ 002 9,1500 e+ 002 9,1500 e+ 002 9,1500 e+ 002 9,1500 e+ 002 9,1500 e+ 002 9,1500 e+ 002 9,1500 e+ 002 9,1500 e+ 002 9,1500 e+ 002 9,1500 e+ 002 9,1500 e+ 002 9,1500 e+ 002 9,1500 e+ 002 9,1500 e+ 002 O,0000 e+ 000 O,0000 e+ 000 O,0000 e+ 000 O,0000 e+ 000 O,0000 e+ 000 9,5832 e+ 002 9,5832 e+ 002 9,5832 e+ 002 9,5832 e+ 002 9,5832 e+ 002 1,0750 e+ 001 1,6500 e+ 001 2,2250 e+ 001 2,8000 e+ 001 3,3750 e+ 001 9,5832 e+ 002 9,5832 e+ 002 9,5832 e+ 002 9,5832 e+ 002 9,5832 e+ 002 9,5832 e+ 002 9,5832 e+ 002 9,5832 e+ 002 9,5832 e+ 002 9,5832 e+ 002 9,5832 e+ 002 9,5832 e+ 002 9,5832 e+ 002 9,5832 e+ 002 9,5832 e+ 002 1,0017 e+ 003 1,0017 e+ 003 1,0017 e+ 003 1,0017 e+ 003 1,0017 e+ 003 1,0017 e+ 003 1,0017 e+ 003 1,0017 e+ 003 1,0017 e+ 003 1,0017 e+ 003 1,0017 e+ 003 1,0017 e+ 003 1,0017 e+ 003 1,0017 e+ 003 1,0017 e+ 003 1,0017 e+ 003 1,0017 e+ 003 1,0017 e+ 003 1,0017 e+ 003 1,0017 e+ 003 1,0017 e+ 003 3,9500 e+ 001 4,5250 e+ 001 ,100 l OO Oe+ 001 ,6750 e+ 001 6,2500 e+ 001 6,8250 e+ 001 7,4000 e+ 001 7,9750 e+ 001 8,5500 e+ 001 9,1250 e+ 001 9,7000 e+ 001 1,0275 e+ 002 1,0850 e+ 002 1,1425 e+ 002 1,2000 e+ 002 ,0000 e+ 000 1,0750 e+ 001 1,6500 e+ 001 2,2250 e+ 001 2,8000 e+ 001 3,3750 e+ 001 3,9500 e+ 001 4,5250 e+ 001 , 100 l OO Oe+ 001 ,6750 e+ 001 6,2500 e+ 001 6,8250 e+ 001 7,4000 e+ 001 7,9750 e+ 001 8,5500 e+ 001 9,1250 e+ 001 9,7000 e+ 001 1,0275 e+ 002 1, 0850 e+ 002 1,1425 e+ 002 1,2000 e+ 002 0,0000 e+ 000 0,0000 e+ 000 0, 0000 e+ 000 0,0000 e+ 000 7,9093 e-003 2,9880 e-002 ,0797 e-002 7,0155 e- 002 8,7281 e-002 1,0473 e-001 1,2446 e-001 1,4313 e-001 1,5665 e-001 1, 6548 e-001 1,7204 e-001 0,0000 e+ 000 0,OOO Oe+ 000 0,0000 e+ 000 0, OOO Oe+ 000 0,0000 e+ 000 0,0000 e+ 000 0,0000 e+ 000 0,0000 e+ 000 0, OOO Oe+ 000 0,0000 e+ 000 0,0000 e+ 000 1,2092 e-002 3,4260 e-002 ,4766 e- 002 7,3684 e-002 9,2561 e-002 1,1232 e-001 1,3101 e-001 1,4604 e-001 1, 5707 e-001 1,6537 e-001 1,0450 e+ 003 1,0450 e+ 003 1,0450 e+ 003 1,0450 e+ 003 1,0450 e+ 003 1,0450 e+ 003 1,0450 e+ 003 1,0450 e+ 003 1,0450 e+ 003 1,0450 e+ 003 1,0450 e+ 003 1,0450 e+ 003 1,0450 e+ 003 1,0450 e+ 003 1,0450 e+ 003 1,0450 e+ 003 1,0450 e+ 003 1,0450 e+ 003 1,0450 e+ 003 1,0450 e+ 003 1,0450 e+ 003 1,0883 e+ 003 1,0883 e+ 003 1,0883 e+ 003 1,0883 e+ 003 1,0883 e+ 003 1,0883 e+ 003 1,0883 e+ 003 1,0883 e+ 003 1,0883 e+ 003 1,0883 e+ 003 1,0883 e+ 003 1,0883 e+ 003 1,0883 e+ 003 1,0883 e+ 003 1,0883 e+ 003 ,0000 e+ 000 1,0750 e+ 001 1,6500 e+ 001 2,2250 e+ 001 2,8000 e+ 001 3,3750 e+ 001 3,9500 e+ 001 4,5250 e+ 001 , 1000 le+ 001 ,6750 e+ 001 6,2500 e+ 001 6,8250 e+ 001 7,4000 e+ 001 7, 9750 e+ 001 8,5500 e+ 001 9,1250 e+ 001 9,7000 e+ 001 1,0275 e+ 002 1, 0850 e+ 002 1,1425 e+ 002 1,2000 e+ 002 , OOO Oe+ 000 1,0750 e+ 001 1, 6500 e+ 001 2,2250 e+ 001 2,8000 e+ 001 3,3750 e+ 001 3,9500 e+ 001 4, 5250 e+ 001 ,1000 e+ 001 ,6750 e+ 001 6,2500 e+ 001 6,8250 e+ 001 7,4000 e+ 001 7,9750 e+ 001 8,5500 e+ 001 0, OOO Oe+ 000 0, OOO Oe+ 000 0000 e+ 000 0,0000 e+ 000 0,0000 e+ 00 0,0000 e+ 000 0, OOO Oe+ 000 0,0000 e+ 000 0, OOO Oe+ 000 0,0000 e+ 000 0, OOO Oe+ 000 0, OOO Oe+ 000 1,7765 e- 002 3,9637 e-002 6,0243 e-002 8,0373 e-002 1,0032 e-001 1,1906 e-001 1, 3510 e-001 1,4793 e-001 1,5797 e-001 0, OOO Oe+ 000 0, OOO Oe+ 000 0, OOO Oe+ 000 0, OOO Oe+ 000 0, OOO Oe+ 000 0, OOO Oe+ 000 0, OOO Oe+ 000 0, OOO Oe+ 000 0, OOO Oe+ 000 0, OOO Oe+ 000 0000 e+ 000 0000 e+ 000 1, 2775 e-003 2,4559 e-002 4,6608 e-002 1,0883 e+ 003 1,0883 e+ 003 1,0883 e+ 003 1,0883 e+ 003 1,0883 e+ 003 1,0883 e+ 003 1,1316 e+ 003 1,1316 e+ 003 1,1316 e+ 003 1,1316 e+ 003 1,1316 e+ 003 1,1316 e+ 003 1,1316 e+ 003 1,1316 e+ 003 1,1316 e+ 003 1,1316 e+ 003 1,1316 e+ 003 1,1316 e+ 003 1,1316 e+ 003 1,1316 e+ 003 1,1316 e+ 003 1,1316 e+ 003 1,1316 e+ 003 1,1316 e+ 003 1,1316 e+ 003 1,1316 e+ 003 1,1316 e+ 003 1,1750 e+ 003 1,1750 e+ 003 1,1750 e+ 003 1,1750 e+ 003 1,1750 e+ 003 1,1750 e+ 003 1,1750 e+ 003 1,1750 e+ 003 9,1250 e+ 001 9,7000 e+ 001 1,0275 e+ 002 1,0850 e+ 002 1,1425 e+ 002 1,2000 e+ 002 ,0000 e+ 000 1,0750 e+ 001 1,6500 e+ 001 2,2250 e+ 001 2,8000 e+ 001 3,3750 e+ 001 3,9500 e+ 001 4, 5250 e+ 001 ,100 l OO Oe+ 001 ,6750 e+ 001 6,2500 e+ 001 6,8250 e+ 001 7, 4000 e+ 001 7,9750 e+ 001 8,5500 e+ 001 9,1250 e+ 001 9,7000 e+ 001 1, 0275 e+ 002 1,0850 e+ 002 1,1425 e+ 002 1,2000 e+ 002 ,0000 e+ 000 1, 0750 e+ 001 1,6500 e+ 001 2,2250 e+ 001 2,8000 e+ 001 3,3750 e+ 001 3, 9500 e+ 001 4,5250 e+ 001 6,7829 e-002 8,8271 e-002 1,0735 e-001 1,2423 e-001 1,3843 e-001 1,5002 e-001 0,00 Oe+ 000 0, OOO Oe+ 000 0,0000 e+ 000 0,OOO Oe+ 000 0,0000 e+ 000 0, OOO Oe+ 000 0, OOO Oe+ 000 0,0000 e+ 000 O, 0000 e+ 000 0, 0000 e+ 00 0, O 0000 e+ 000 0, OOO O e+ 000 O, 0000 e+ 000 9,3618 e-003 3,2700 e-002 ,4944 e-002 7,6071 e-002 9,5729 e- 002 1,1341 e-001 1,2876 e-001 1,4168 e-001 0,0000 e+ 000 O, 0000 e+ 000 0, OOO Oe+ 000 O, 0000 e+ 000 0, OOO Oe+ 000 0000 e+ 000 0,0000 e+ 000 0, OOO Oe+ 000 1,1750 e+ 003 1,1750 e+ 003 1,1750 e+ 003 1,1750 e+ 003 1, 1750 e+ 003 1,1750 e+ 003 1,1750 e+ 003 1,1750 e+ 003 1,1750 e+ 003 1, 1750 e+ 003 1,1750 e+ 003 1,1750 e+ 003 1,1750 e+ 003 ,100 e+ 001 ,6750 e+ 001 6,2500 e+ 001 6,8250 e+ 001 7,4000 e+ 001 7,9750 e+ 001 8,5500 e+ 001 9,1250 e+ 001 9,7000 e+ 001 1,0275 e+ 002 1,0850 e+ 002 1,1425 e+ 002 1,2000 e+ 002 O,000 e+ 00 O 0, OOO Oe+ 00 O O, OO Oe+ 00 O 0, OOO Oe+ OOO 0, OOO Oe+ 00 O 0, OOO Oe+OOO 1,8498 e-002 4,1753 e-002 6,3685 e-002 8,4069 e-002 1,0238 e-001 1,1896 e-001 1,3308 e-001 Tableau 3 La première colonne (X) donne la taille d'ADN (en kilobases). La seconde colonne (Y) donne la mobilité (en centi- mètre par heure). X Y 260 0,280 335 0,269 427 0,260 581 0,243 681 0,233 774 0,219 832 0,209 913 0,200 1051 0,173 1600 0,129 2200 0,100 2500 0,085 REVENDICATIONS 1 Procédé d'amélioration de la séparation de macromolécules, dans un système d'électrophorèse, à l'aide d'un ordinateur, caractérisé en ce qu'il comprend les étapes suivantes: la saisie d'une première taille représentant la plus petite macromolécule à résoudre, la saisie d'une seconde taille représentant la plus grosse macromolécule à résoudre, la mémorisation d'une base de connaissances repré- sentative de données d'étalonnage obtenues par séparation de macromolécules de taille connue dans des conditions qui optimisent les séparations, l'utilisation de la première taille et de la seconde taille pour l'interrogation de la base de connaissances avec création d'un jeu de paramètres optimisés, et l'étalonnage du système avec les paramètres opti- misés, si bien que la séparation des macromolécules est optimisée. 2 Procédé selon la revendication 1, caractérisé en ce que l'étape d'utilisation des tailles comprend l'utili- sation de la première et de la seconde taille pour l'accès à la base de connaissances, de manière qu'un angle, une distance de parcours, un gradient de tension, un temps initial de commutation, un temps final de commutation et un temps de parcours soient sélectionnés. 3 Procédé selon la revendication 2, caractérisé en ce que l'étape d'étalonnage comprend l'étalonnage du système afin qu'il assure une séparation optimale par utilisation de l'angle, de la distance de parcours, du gradient de tension, du temps initial de commutation, du temps final de commutation et du temps de parcours. 4 Procédé selon la revendication 1, caractérisé en ce que l'étape de mémorisation d'une base de connaissances comprend: la mémorisation d'un premier ensemble de relations entre les tailles de macromolécules et des temps de commu- tation, la mémorisation d'un second ensemble de relations entre les tailles des macromolécules et leur mobilité, et la mémorisation d'un troisième ensemble de relations entre des tailles minimales de macromolécules, des temps de commutation et des mobilités. Système d'électrophorèse destiné à améliorer la séparation de macromolécules, caractérisé en ce qu'il comprend: un dispositif ( 130) d'électrophorèse, un ordinateur ( 150) ayant une mémoire ( 107) et un processeur ( 108), l'ordinateur étant couplé sélectivement au dispositif d'électrophorèse, un dispositif de saisie ( 102, 103) couplé à l'ordi- nateur et destiné à la saisie d'une première taille repré- sentative de la plus petite macromolécule qui doit être résolue et à la saisie d'une seconde taille représentative de la plus grosse molécule qui doit être résolue, une base de connaissances ( 120), couplée à la mémoire et destinée à conserver des informations représen- tatives de données d'étalonnage obtenues par la séparation de molécules de taille déterminée dans les conditions qui optimisent les séparations, un dispositif de programmation couplé à la mémoire et destiné à indiquer au processeur d'utiliser la première taille et la seconde taille pour l'accès à la base de connaissances avec création d'un jeu de paramètres opti- misés, et un dispositif d'étalonnage du dispositif d'électro- phorèse avec les paramètres optimisés de manière que la séparation des macromolécules soit optimisée. 6 Système selon la revendication 5, caractérisé en ce que le dispositif de programmation comporte un dispo- sitif couplé à la mémoire ( 107) et destiné à indiquer au processeur ( 108) d'utiliser la première taille et la seconde taille pour l'accès à la base de connaissances ( 120) et de sélectionner ainsi un angle, une distance de parcours, un gradient de tension, un temps initial de commutation, un temps final de commutation et un temps de parcours. 7 Système selon la revendication 6, caractérisé en ce que le dispositif d'étalonnage comporte un dispositif destiné à étalonner le système afin qu'il assure une séparation optimale par utilisation de l'angle, de la distance de parcours, du gradient de tension, du temps initial de commutation, du temps final de commutation et du temps de parcours. 8 Système selon la revendication 5, caractérisé en ce que la base de connaissances ( 120) comporte un dispo- sitif de mémorisation couplé à la mémoire et destiné à conserver un premier ensemble de relations entre des tailles de macromolécules et des temps de commutation, un second ensemble de relations entre des tailles de macromo- lécules et des mobilités, et un troisième ensemble de relations entre des tailles minimales de macromolécules, des temps de commutation et des mobilités. 9 Système selon la revendication 5, caractérisé en ce qu'il comporte en outre un dispositif de représentation destiné à recevoir les paramètres optimisés et couplé sélectivement à l'ordinateur par une interface externe. 10 Système selon la revendication 7, caractérisé en ce que le dispositif d'électrophorèse ( 130) est un dispo- sitif d'électrophorèse du type à champ électrique homogène verrouillé au contour (CHEF).