Brevet FR2661187A1 — publié le 19911025

PROTEINE ASSOCIEE A LA PANCREATITE AIGUE. MOYENS POUR LE DIAGNOSTIC DE LA PANCREATITE AIGUE. La présente invention concerne des protéines associées à la pancréatite aiguë et des moyens pour le diagnostic de cette maladie. La pancréatite aiguë est une affection inflammatoire du pancréas qui, sur le plan anatomopathologique, va de la simple forme oedémateuse à la nécrose hémorragique totale de la glande. La pancréatite nécro-hémorragique est une affection très grave, puisque l'estimation de sa mortalité varie de 30 % à 70 % selon les auteurs. Il est dans certains cas, très difficile d'établir avec certitude le diagnostic de pancréatite aiguë (Sarner, M. et al, Gastroenterol. (1984), 13 : 865-870). Ce diagnostic repose avant tout sur l'examen clinique (douleur abdominale aiguë) sur le dosage d'un certain nombre de substances dans le plasma ou dans le liquide péritonéal (Bradley, J. et al, Br. J. Surg. (1981), 68 : 245-246 ; et Dubick, M. et al, Dig. Dis. Sci. (1987), 32 : 305-312). Parmi les dosages employés, on trouve ceux de l'amylase, de la lipase, de la trypsine, de l'élastase, de la ribonucléase, de la phospholipase A2, de 1'a2 macroglobuline, du calcium, de la LDH, des inhibiteurs de protéases et d'autres encore. Aucun d'entre eux ne s'avère pourtant spécifique, pratique, ni surtout discriminatif. On se contente donc en général de doser l'amylasémie. Récemment, l'échotomographie et la tomodensitométrie ont paru, dans certains cas, pouvoir faciliter le diagnostic de la pancréatite sans que le progrès ait été décisif (Silverstein, W. et al,Am.J. Roentgenol, (1981), 137 : 497-502). Keim et al ont publié en 1984 (Digestion, (1984);, 29 : 242-249), des résultats sur les conséquences d'une cannulation du canal pancréatique et de l'induction d'une pancréatite sur la composition protéique du suc pancréatique de rat, cet animal étant utilisé comme modèle expérimental. Après l'opération de cannulation (1 à 2 jours après), les auteurs ont observé une chute du taux d'amylase dans le suc pancréatique, puis 3 à 4 jours après l'opération, un retour au niveau normal d'amylase. Une séparation par électrophorèse en gel de polyacrylamide (PAGE) des protéines du suc pancréatique pendant cette période de rémission, montrait une bande protéique supplémentaire, apparemment au plus tôt 12 heures après l'opération, et au plus tard, 3 à 4 jours après l'opération. Cette bande protéique n'existait pas chez le rat contrôle non traité. Cette protéine secrétoire a été appelée PAP ("pancréatitis associated protein"). Par la suite, Keim et al ont effectué des mesures de la quantité de PAP présente dans le tissu pancréatique du rat après induction d'une pancréatite, au moyen de tests de détection de la fixation du complément. Ces tests n'ont cependant pas permis jusqu'à présent de mettre en évidence l'existence de la PAP dans le sérum du rat chez lequel une pancréatite a été induite. Les moyens proposés jusqu'à présent dans l'art antérieur n'avaient ainsi pas pu conduire à une identification suffisante de la protéine PAP chez le rat pour que le problème de l'intérêt d'une investigation chez l'homme, afin de rechercher si une telle protéine pouvait être détectée, soit posé. De plus, les résultats disponibles jusqu'à présent, n'auraient pas permis d'envisager l'intérêt de la PAP pour réaliser un diagnostic d'une pancréatite. Les inventeurs ont constaté que des anticorps polyclonaux de rat, reconnaissant la protéine PAP de rat, ne reconnaissaient pas de façon significative une protéine du sérum humain. Après cette constatation, les inventeurs ont donc recherché une identification plus adéquate de la protéine PAP de rat, en vue de définir des outils d'investigation chez l'homme : les inventeurs ont maintenant clairement identifié la protéine PAP chez le rat et ils ont établi sa séquence en acides aminés. A partir de ces connaissances, ils ont élaboré des moyens qui pourraient permettre de détecter et d'identifier s'il existe une protéine correspondant à la PAP du rat, chez l'homme. Le clonage et le sequençage de l'ARN messager PAP à partir d'une bibliothèque cDNA pancréatique de rat a aussi permis de démontrer sans ambiguïté que la PAP est bien synthétisée par le pancréas. Les inventeurs ont aussi montré que la protéine était très faiblement exprimée en l'absence d'inflammation pancréatique et fortement exprimée au cours de la pancréatite. Compte tenu de la fragilité des malades atteints de pancréatite, il n'était pas concevable d'envisager de recueillir le suc pancréatique de ces malades, pour y rechercher la présence éventuelle d'une protéine PAP humaine (PAP-H). Les inventeurs ont criblé une banque de cDNA pancréatique humaine, à l'aide d'un clone cDNA préalablement obtenu et correspondant à la PAP du rat. Les inventeurs sont parvenus à isoler différents clones contenant des fragments d'ADNc susceptibles de s'hybrider avec 1'ADNc de la PAP de rat, ainsi qu'il est décrit ci-dessous. La présente invention concerne donc des fragments d'ADNc capables de coder pour la protéine PAP de rat, ainsi que des fragments d'ADNc susceptibles de coder pour les protéines de la famille de la PAP humaine. L'invention vise aussi les protéines codées par ces fragments d'ADNc. Elle se rapporte aussi à des vecteurs modifiés par intégration des susdits fragments d'ADNc, notamment pour l'expression de ces fragments. L'invention vise aussi des anticorps polyclonaux ou monoclonaux dirigés contre la protéine PAP notamment la PAP humaine, ainsi que leur utilisation dans des procédés faisant appel à l'imagerie médicale, ou comme moyen pour le diagnostic de la pancréatite aiguë dans des kits et des procédés de diagnostic in vitro. Une première famille de fragments d'ADN selon l'invention comprend donc les fragments d'ADNc codant pour la PAP de rat. Appartiennent à cette famille, des fragments d'ADNc caractérisés en ce qu'ils répondent à la séquence nucléotidique S1 suivante codant pour la protéine PAP de rat, à une partie ou à une variante de cette séquence dès lors que cette partie ou variante code pour une protéine ou un peptide reconnu par des anticorps dirigés contre la protéine PAP de rat, ou qu'elle hybride avec la séquence S1 dans une solution d'hybridation contenant 6 x SSC, 5 x Denhart, 0,5 % SDS, 10 mM EDTA, 200 yg ADN de sperme de saumon, pendant 18 heures à 68"C et après un rinçage dans les conditions suivantes : 6 x SSC, O,l % SDS, 2 fois 15 minutes à 65 . Séquence S1 : 10 20 30 40 50 60 AAAACCATCC AAATCGCCCG CAAGACAGCT AAGGAGGAGC AGAAAGATGA TGAGAGTTAA 70 80 90 100 110 120 TATGTTGCAT CGCTTGGCCT TCCCAGTCAT GTCCTGGATG CTGCTCTCCT GCCTGATGCT 130 140 150 160 170 180 CTTATCACAG GTGCAAGGAG AAGACTCTCC GAAGAAAATA CCCTCTGCAC GCATTAGTTG 190 200 210 220 230 240 CCCCAAAGGC TCCCAGGCAT ATGGCTCCTA CTGCTATGCC CTGTTTCAGA TACCACAGAC 250 260 270 280 290 300 CTGGTTTGAT GCAGAACTGG CCTGCCAGAA GAGACCTGAA GGACACCTTG TATCTGTGCT 310 320 330 340 350 360 CAATGTAGCT GAAGCTTCAT TCTTGGCATC CATGGTCAAG AACACTGGAA ACAGCTACCA 370 380 390 400 410 420 ATATACCTGG ATTGGACTCC ATGACCCCAC TCTTGGTGGA GAACCCAATG GAGGTGGATG 430 440 450 460 470 480 GGAGTGGAGT AACAATGACA TAATGAATTA TGTCAACTGG GAGAGGAACC CATCTACTGC 490 500 510 520 530 540 CTTAGACCGC GGATTCTGTG GCAGCTTGTC AAGATCTTCT GGATTTCTAA GATGGAGAGA 550 560 570 580 590 600 TACCACATGT GAAGTTGAAG TTGCCCTACG TCTGCAAATT TACAGGTTAA AATTACCAGA 610 620 630 640 650 660 CAGCAAACAG CTTTAGTTTG TCCTGAAGCA CATCCTGTCA AGGGGCAAAA TATGAAGACT 670 680 690 700 710 720 TGCGTAGAAA AAGTGTATTC TATCTACAGT CCATATTGGA GCTCTAATCA TTCTTTAGCC 730 740 750 760 770 780 AATTTTGTAT AAGTTGTGTC CTCATGTCTT GGAAAGCAGT AATAAACCTC AGTCTCTCTT 790 800 810 820 830 840 CGAAAAAAAA AAA I1 est précisé que les abréviations ci-dessus ont les significations suivantes : 1 x SSC = 150 mM NaCl, 15 mM citrate de sodium ; 50 x Denhart = 5g Ficoll, 5g polyvinylpyrrolidone, 5g sérum albumine bovine dans 500 ml d'eau ; SDS : dodecylsulfate de sodium ; EDTA ethylène diamine tétraacétate de sodium. Des anticorps polyclonaux dirigés contre la PAP de rat sont produits selon les techniques classiques de tels anticorps ont par exemple été décrits par Keim et al (Clin. Physiol. Biochem., 4 : 136-142 (1986)). Un fragment d'ADNc appartenant à la première famille d'acides nucléiques de l'invention, est encore caractérisé en ce qu'il code pour une protéine répondant à une des séquences d'acides aminés Al (séquence d'acides aminés de la protéine comprenant le peptide signal) ou A2 (séquence d'acides aminés de la protéine mature) suivantes ou pour une séquence d'acides aminés ayant une homologie de 40 à 80 % de préférence de 50 à 60 % avec au moins un enchaînement d'environ 25 acides aminés des séquences Al ou A2. Séquence Ai MetLeuHisArgLeuAlaPheProValMetSerTrpMetLeuLeuSerCysLeuMetLeuLeuSerGlnValGln GlyGluAspSerProLysLysIleProSerAlaArgIleSerCysProLysGlySerGlnAlaTyrGlySerTyr CysTyrAlaLeuPheGlnIleproGlnThrTrpPheAspAlaGluLeuAlaCysGlnCysArgProGluGlyHis LeuValSerValLeuAsnValAlaGluAlaSerPheLeuAlaSerMetValLysAsnThrGlyAsnSerTyrGln TyrThrTrpIleGlyLeuHisAspProThrLeuGlyGlyGluProAsnGlyGlyGlyTrpGluTrpSerAsnAsn AspIleMetAsnTyrValAsnTrpGluArgAsnProSerThrAlaLeuAspArgGlyPheCysGlySerLeuSer ArgSerSerGlyPheLeuArgTrpArgAspThrThrCysGluValGluValAlaLeuArgLeuGlnIleThrArg LeuLysLeuProAspSerlysGlnLeu Séquence A2 GluAspSerProLysLysIleProSerAlaArgIleSerCysProLysGlySerGlnAlaTyrGlySerTyr CysTyrAlaLeuPheGlnIleproGlnThrTrpPheAspAlaGluLeuAlaCysGlnCysArgProGluGlyHis LeuValSerValLeuAsnValAlaGluAlaSerPheLeuAlaSerMetValLysAsnThrGlyAsnSerTyrGln TyrThrTrpIleGlyLeuHisAspProThrLeuGlyGlyGluProAsnGlyGlyGlyTrpGluTrpSerAsnAsn AspIleMetAsnTyrValAsnTrpGluArgAsnProSerThrAlaLeuAspArgGlyPheCysGlySerLeuSer ArgSerSerGlyPheLeuArgTrpArgAspThrThrCysGluValGluValAlaLeuArgLeuGlnIleThrArg LeuLysLeuProAspSerlysGlnLeu Une seconde famille de fragments d'ADN selon l'invention comprend des fragments d'ADNc d'une protéine PAP humaine, tel qu'obtenus par la mise en oeuvre des étapes suivantes - un premier criblage d'une bibliothèque d'ADNc pancréatique humaine, ledit ADNc humain étant inséré dans un vecteur de clonage approprié, comprenant l'hybridation avec des sondes constituées par 1'ADNc de la protéine PAP du rat, dans une solution constituée par : 6 x SSC, 5 x Denhart, 0,5 % SDS, 10 mM EDTA, 200 g ADN de sperme de saumon, pendant 18 heures à 68"C suivie d'un rinçage dans les conditions suivantes : 6 x SSC, 0,1 % SDS, 2 fois 15 minutes à 65"C, - la sélection des clones positifs d'ADNc humain ayant hybridé lors du criblage avec l'ADNc de la protéine PAP de rat, ces clones étant dits positifs, - un deuxième criblage avec une séquence d'ADNc d'une protéine PSP dans les conditions d'hybridation cidessus avec un rinçage en présence de 0,1 x SSC, 0,1 % SDS, pendant 2 heures à 65"C, afin d'éliminer les clones non spécifiques de l'ADNc de PAP humaine ayant cependant hybridé avec 1'ADNc de PAP de rat et - la récupération des clones n'ayant pas hybridé avec l'ADNc PSP, - la récupération des fragments d'ADNc des clones positifs obtenus. Un vecteur de clonage particulièrement avantageux pouvant être modifié par l'ADNc humain pour la réalisation de la bibliothèque d'ADNc pancréatique humaine, est le vecteur AgtlO. La PSP est une protéine qui présente certaines analogies structurales avec la PAP de rat. Cette protéine a été décrite par Giorgi et al, J. Clin. Invest. (1989), 84, 100-106. Les fragments d'ADNc ainsi définis sont caractéristiques de la famille de protéines comprenant la protéine PAP humaine. Selon un mode de réalisation particulier de l'invention, des fragments préférés d'ADNc sont tels qu'obtenus par la mise en oeuvre des étapes précédentes auxquelles est ajoutée l'étape suivante, avant la récupération des fragments d'ADNc des clones positifs obtenus : criblage avec l'ADNc de PAP de rat dans des conditions d'hybridation telles que celles décrites ci-dessus, avec un rinçage pendant 2 heures à 65"C. Selon une autre définition, des fragments d'ADNc de la deuxième famille, un fragment d'ADNc selon l'invention est caractérisé en ce qu'il comprend une séquence nucléotidique présentant une homologie d'au moins 60 %, de préférence d'au moins 70 % avec au moins un enchaînement d'environ 100 nucléotides, compris dans la séquence S2 suivante caractéristique de 1'ADNc de la PAP mature de rat. 10 20 30 40 50 60 GAAGACT CTCCGAAGAA AATACCCTCT GCACGCATTA GTTGCCCCAA AGGCTCCCAG 70 80 90 100 110 120 GCATATGGCT CCTACTGCTA TGCCCTGTTT CAGATACCAC AGACCTGGTT TGATGCAGAA 130 140 150 160 170 180 CTGGCCTGCC AGAAGAGACC TGAAGGACAC CTTGTATCTG TGCTCAATGT AGCTGAAGCT 190 200 210 220 230 240 TCATTCTTGG CATCCATGGT CAAGAACACT GGAAACAGCT ACCAATATAC CTGGATTGGA 250 260 270 280 290 300 CTCCATGACC CCACTCTTGG TGGAGAACCC AATGGAGGTG GATGGGAGTG GAGTAACAAT 310 320 330 340 350 360 GACATAATGA ATTATGTCAA CTGGGAGAGG AACCCATCTA CTGCCTTGAG CCGCGGATTC 370 380 390 400 410 420 TGTGGCAGCT TGTCAAGATC TTCTGGATTT CTAAGATGGA GAGATACCAC ATGTGAAGTT 430 440 450 460 470 480 GAAGTTGCCC TACGTCTGCA AATTTACAGG TTAAAATTAC CAGACAGCAA ACAGCTT L'invention vise aussi des fragments d'ADNc codant pour la PAP humaine caractérisés par leur capacité d'hybridation avec la séquence nucléotidique S1 caractéristique de 1'ADNc de la PAP de rat, et/ou avec la séquence nucléotidique S2 caractéristique de l'ADNc de la PAP mature de rat, dans une solution d'hybridation contenant 6 x SSC, 5 x Denhart, 0,5 % SDS, 10 mM EDTA, 200 g ADN de sperme de saumon, pendant 18 heures à 68 C et avec un rinçage dans une solution comprenant 6 x SSC, 0,1 % SDS, 2 fois pendant 15 minutes à 65 C. Un fragment d'ADNc de la PAP humaine particulièrement préféré dans le cadre de la présente demande, est caractérisé en ce qu'il comprend la séquence nucléotidique suivante: 10 20 30 40 50 60 TTTGTTAAGG ATTCCCTTGA GAATTATGTA AAAGTTTTAC AAGAGTCCAT CTCATTCTCT 70 80 90 100 110 120 TTGTCCCCCT CAAAGCTGGC TTGCCAGAAG CGGCCCTCTG GAAAACTGGT GTCTGTGCTC 130 140 150 160 170 180 AGTGGGGCTG AGGGATCCTT CGTGTCCTCC CTGGTGAGGA GCATTAGTAA CAGCTACTCA 190 200 210 220 230 240 TACATCTGGA TTGGGCTCCA TGACCCCACA CAGGTGCGAG TATATCCTCC CCTCTCTGTT 250 260 270 280 290 300 ACCTCTCAAG GTACTGTTGT TGCCCAGGCG CACTCCCTGT CCCCAGTCCC TGCCCAGGAA GTACTT Les inventeurs ont constaté que la séquence protéique déduite de cette séquence nucléotidique humaine présente certaines homologies avec la séquence codant pour la protéine PAP de rat, bien que la seule connaissance jusqu'à présent des anticorps dirigés contre la PAP de rat ne permettait pas de détecter la protéine PAP humaine dans un échantillon biologique donné. L'identification d'un fragment d'ADNc codant pour la protéine PAP humaine permet maintenant d'envisager la production de cette protéine, notamment par voie de génie génétique, ainsi que l'obtention d'anticorps, utilisables en tant que moyens de diagnostic d'une pancréatique aiguë. L'invention concerne également un fragment d'acide nucléique caractérisé en ce qu'il s'agit du fragment d'ADN complémentaire des fragments d'ADNc ci-dessus définis, ou encore en ce qu'il s'agit du fragment d'ARN correspondant à ces ADNc. L'invention vise aussi tout fragment de séquence nucléotidique codant pour la PAP humaine, susceptible d'être utilisé comme sonde, après un marquage approprié dudit fragment, en vue de réaliser la détection l'acide nucléique caractéristique de la PAP humaine dans un échantillon biologique. L'invention concerne également la protéine PAP humaine telle qu'obtenue par l'expression d'un fragment d'ADNc de la PAP humaine, tel que défini cidessus, au moyen d'un système d'expression adapté, par exemple un hôte cellulaire transformé par un vecteur d'expression, lui-même modifié par l'insertion du susdit fragment d'ADNc de la PAP humaine. Une protéine PAP humaine particulière selon l'invention est une protéine telle qu'obtenue par l'expression d'un fragment d'ADNc de la PAP humaine, inséré en phase dans un vecteur pEX, dans E.coli, notamment dans E.coli souche pop2136. Des protéines PAP humaines selon l'invention sont aussi caractérisées en ce que leurs séquences d'acides aminés présentent une homologie d'au moins 50%, de préférence d'au moins 60% et de façon tres préférée d'au moins 70 % avec au moins un enchaînement d'environ 25 acides aminés, compris dans la séquence A2 suivante de la protéine PAP de rat mature PA:: GluAspSerProLysLysIleProSerAlaArgIleSerCysProLysGlySerGlnAlaTyrGlySerTyr CysTyrAlaLeuPheGlnIleproGlnThrTrpPheAspAlaGluLeuAlaCysGlnCysArgProGluGlyHis LeuValSerValLeuAsnValAlaGluAlaSerPheLeuAlaSerMetValLysAsnThrGlyAsnSerTyrGln TyrThrTrpIleGlyLeuHisAspProThrLeuGlyGlyGluProAsnGlyGlyGlyTrpGluTrpSerAsnAsn AspIleMetAsnTyrValAsnTrpGluArgAsnProSerThrAlaLeuAspArgGlyPheCysGlySerLeuSer ArgSerSerGlyPheLeuArgTrpArgAspThrThrCysGluValGluValAlaLeuArgLeuGlnIleThrArg LeuLysLeuProAspSerlysGlnLeu La protéine PAP humaine peut être produite par les techniques du génie génétique ou encore par purification, par exemple par chromatographie, à partir d'un échantillon biologique la contenant Selon une définition particulière de l'invention, la protéine PAP humaine répondant aux définitions précédentes, comprend la séquence d'acides aminés suivante 39 Phe Val Lys Asp Ser Leu Glu Asn Tyr Val Lys Val Leu 13 78 Gln Glu Ser Ile Ser Phe Ser Leu Ser Pro Ser Lys Leu 26 117 Ala Cys Gln Lys Arg Pro Ser Gly Lys Leu Val Ser Val 39 156 Leu Ser Gly Ala Glu Gly Ser Phe Val Ser Ser Leu Val 52 195 Arg Ser Ile Ser Asn Ser Tyr Ser Tyr Ile Trp Ile Gly 65 234 Leu His Asp Pro Thr Gln Val Arg Val Tyr Pro Pro Leu 78 273 Ser Val Thr Ser Gln Gly Thr Val Val Ala Gln Ala His 91 306 Ser Leu Ser Pro Val Pro Ala Gln Glu Val Leu 102 Entre également dans le champ de la presente invention, la protéine PAP de rat caractérisée en ce qu'elle répond à l'enchaînement diacides aminés A2 ci-dessus, ou une variante ou une partie de cette séquence dès lors que cette partie ou cette variante est reconnue par des anticorps dirigés contre la protéine PAP de rat ou qu'elle présente une homologie d'au moins 50 %, de préférence d'au moins 60 % avec la séquence A2 de PAP de rat ci-dessus. L'invention vise aussi la protéine PAP de rat, répondant à la séquence Al suivante ou à une variante de Al présentant les caractéristiques définies cidessus vis-à-vis de la séquence d'acides aminés A2. Séquence A1 MetLeuHisArgLeuAlaPheProValMetSerTrpMetLeuLeuSerCysLeuMetLeuLeuSerGlnValGln GlyGluAspSerProLysLysIleProSerAlaArgIleSerCysProLysGlySerGlnAlaTyrGlySerTyr CysTyrAlaLeuPheGlnIleproGlnThrTrpPheAspAlaGluLeuAlaCysGlnCysArgProGluGlyHis LeuValSerValLeuAsnValAlaGluAlaSerPheLeuAlaSerMetValLysAsnThrGlyAsnSerTyrGln TyrThrTrpIleGlyLeuHisAspProThrLeuGlyGlyGluProAsnGlyGlyGlyTrpGluTrpSerAsnAsn AspIleMetAsnTyrValAsnTrpGluArgAsnProSerThrAlaLeuAspArgGlyPheCysGlySerLeuSer ArgSerSerGlyPheLeuArgTrpArgAspThrThrCysGluValGluValAlaLeuArgLeuGlnIleThrArg LeuLysLeuProAspSerlysGlnLeu Chez le rat la PAP est présente en très faible quantité au niveau d'un pancréas humain normal, et sa synthèse peut être considérablement augmentée en cas de pancréatique aiguë jusqu'à un niveau d'environ 50 à 100 fois supérieur à celui qui existe dans le pancréas normal. La protéine PAP de rat subit une augmentation de son taux dans le suc pancréatique lors d'une pancréatique aiguë, alors que le taux des autres enzymes diminue. De plus, dans la pancréatite, toutes les protéines secrétoires pancréatiques passent dans le sang. Par conséquent, la mise en oeuvre dans le sang ou dans un autre échantillon biologique d'un patient humain (par exemple l'urine ou le liquide péritonéal), du dosage de la protéine PAP dont la synthèse est considérablement augmentée en cas de pancréatite, laisse supposer que l'on aura un différentiel normal/pathologique, beaucoup plus important que lors des tests habituellement utilisés pour la détection, et donc beaucoup plus facilement décelable. L'invention se rapporte aussi dans ce but à des anticorps caractérisés en ce qu'ils reconnaissent la protéine PAP humaine précédemment définie, ces anticorps pouvant être soit polyclonaux soit monoclonaux. Des anticorps monoclonaux sont par exemple des anticorps tels que produits par un hybridome préalablement formé par fusion d'une cellule de myélome avec une cellule splénique d'un animal préalablement immunisé avec une protéine PAP humaine. L'invention concerne aussi les hybridomes formés par fusion de cellules de myélome et de cellules spléniques d'animal préalablement immunisé avec la protéine PAP humaine. D'autres anticorps selon l'invention sont des anticorps monoclonaux qui reconnaissent la protéine PAP de rat. Un protocole d'immunisation d'animaux choisis, notamment de souris ou de lapins, pour la mise en oeuvre de l'invention, est le protocole décrit par Kohler et Milstein, Nature (1975), 256, 495-497. Entre également dans le cadre de l'invention, un vecteur d'expression et/ou de clonage, caractérisé en ce qu'il comprend un fragment d'ADN choisi parmi les fragments précédemment définis. Des vecteurs d'expression et/ou de clonage particulièrement avantageux pour la mise en oeuvre de l'invention comprennent le plasmide d'expression pEX capable d'exprimer l'ADNc de la protéine PAP humaine dans une bactérie, par exemple E.coli. D'autres vecteurs sont choisis en fonction de l'hôte chez lequel on recherche l'expression. A cet égard, il peut s'agir pour les cellules de mammifères, d'un vecteur de type baculovirus. L'invention se rapporte également à un hôte cellulaire transformé par un vecteur d'expression tel que précédemment défini, dans des conditions permettant l'obtention de la protéine ou du peptide codé par le fragment d'ADN de l'invention, inséré dans ce vecteur. A titre d'exemple, des hôtes cellulaires formant un système d'expression adéquat pour les fragments d'ADN de l'invention, sont des bactéries telles que E.coli, notamment la souche pop2136. L'invention concerne également le produit d'expression de l'hôte cellulaire transformé selon ce qui précède. Avantageusement on choisira d'exprimer le fragment d'ADN selon l'invention dans un hôte procaryote ou eucaryote en fonction du produit que l'on souhaite avoir s'agissant notamment de sa glycosylation. A titre d'exemple, des hôtes cellulaires intéressants pour la mise en oeuvre de l'invention, sont des bactéries, par exemple E.coli, des levures, des cellules d'insectes ou de mammifères, par exemple des cellules CHO. La présente invention concerne également des compositions, caractérisées en ce qu'elles comprennent au moins un anticorps choisi parmi ceux qui ont été précédemment définis, dirigés contre la protéine PAP humaine. Une telle composition peut être une composition pour le diagnostic in vitro, pour la mise en oeuvre sur un échantillon biologique tel que le sang, l'urine ou le liquide péritonéal d'un patient manifestant des symptômes de la pancréatique aiguë. Les anticorps utilisés seront le cas échéant marqués par des marqueurs chimiques adaptés. L'invention vise aussi un kit pour le diagnostic in vitro de la pancréatique aiguë à partir d'un échantillon biologique déterminé, caractérisé en ce qu'il comprend: - au moins un anticorps choisi parmi les précédents capable de détecter la présence d'un antigène de type PAP humaine dans ledit échantillon biologique, lesdits anticorps étant marqués, - selon la nature du marquage, un réactif pour détecter la présence d'un complexe du type antigèneanticorps spécifique, - un témoin négatif. Pour effectuer le marquage des anticorps selon l'invention, on pourra avoir recours par exemple à des radioisotopes, à des marqueurs chimiques ou enzymatiques, à des marqueurs chimioluminescents. L'invention se rapporte par ailleurs à un procédé pour détecter in vitro une pancréatite aiguë à partir d'un échantillon biologique comprenant les étapes de: - mise en contact de l'échantillon biologique susceptible de contenir la PAP humaine avec des anticorps dirigés contre la PAP humaine, - détection de la réaction antigène-anticorps entre les susdits anticorps et la PAP humaine. L'invention vise aussi l'utilisation des anticorps dirigés contre la PAP le cas échéant sous forme de composition comprenant plusieurs anticorps marqués, pour la visualisation en imagerie médicale de la glande pancréatique, l'anticorps étant au préalable marqué à l'aide d'un radioisotope ou d'un marqueur chimique ou enzymatique. La visualisation peut permettre de déceler la présence de PAP humaine. A cet égard, l'invention vise un procédé d'observation de la glande pancréatique caractérisé par - l'injection à un patient d'une composition cidessus, dans des conditions physiologiquement acceptables, - l'observation d'une réaction entre les anticorps contenus dans la susdite composition et la PAP humaine lorsqu'elle est présente. D'autres caractéristiques et avantages de l'invention apparaîtront dans les exemples et la figure qui suivent - figure 1 : Expression de la PAP et de l'amylase au cours de la pancréatite aiguë expérimentale du rat. Analyse par "Northern blot" - charge par piste : 30 pg ARN total, le même filtre a été utilisé successivement pour PAP et Amylase. Sondes : cDNA PAP (environ 800 bp) et Amylase (environ 1100 bp), marquées au 32P avec une activité spécifique d'environ 2x109 cpm/mg. - on a observé les phénomènes suivants : induction de l'expression du gène pap (12 heures -48 heures) (phase aiguë) ; suppression de l'induction durant la récupération (5-10 jours) ; au contraire, l'amylase baisse durant la phase aiguë. - figure 2 : Séquence nucléotidique codant pour la PAP de rat, et la séquence d'acides aminés correspondante. - figure 3 : Fragment de la séquence nucléotidique codant pour la PAP humaine, et la séquence d'acides aminés correspondante. 1. Construction d'une bibliothèque DNAc pancréatique de rat dans le vecteur A gtll. Préparation de 1'ARN pancréatique de rat : la préparation a été réalisée en suivant exactement la technique de Chirgwin, J.M., et al, Biochemistry (WASH) (1979), 19, 5294-5299. La fraction des ARN messagers de cet ARN total a été séparée par chromatographie sur colonne d'oligo-dT cellulose selon la technique de Aviv, H. et Leder, P., Proc. Natl. Acad. Sci., USA, (1972), 69, 1408-1412. Préparation du cDNA : l'ADNc prancréatique a été synthétisé à l'aide du kit commercialisé par Amersham France S.A. (code RPN 1256), en suivant exactement les recommandations du fabricant. Construction de la bibliothèque : la bibliothèque a été construite dans le vecteur d'expression Agtll à l'aide du kit commercialisé par Amersham France S.A. (code RPN 1280), en suivant exactement les recommandations du fabricant. 2. Construction d'une bibliothèque d'ADNc pancréatique humaine dans le vecteur AgtlO. Préparation d'ARN pancréatique humain et synthèse de l'ADNc correspondant aux ARN messagers : des fragments de pancréas normal provenant de donneurs d'organe en coma dépassé ont été traités comme décrit ci-dessus pour le pancréas de rat. Construction de la bibliothèque : la bibliothèque a été construite dans le vecteur de clonage AgtlO à l'aide du kit commercialisé par Amersham France S.A. (code RPN 1257), en suivant les recommandations du fabricant. 3. Criblage de la bibliothèque d'ADNc pancréatique humaine avec un clone exprimant la PAP de rat. A partir de la bibliothèque d'ADNc pancréatique de rat construite selon la méthode ci-dessus, on a sélectionné un clone reconnu par des anticorps polyclonaux dirigés contre la PAP de rat. L'ADNc de ce clone de PAP de rat a été isolé et utilisé en tant que sonde pour cribler la banque d'ADNc pancréatique humaine obtenue dans AgtlO, telle que décrite ci-dessus. Dans un premier temps, le criblage a été réalisé dans les conditions de stringence suivantes 6 x SSC, 5 x Denhart, 0,5 % SDS, 10 mM EDTA, 200 pg ADN de sperme de saumon, 18 heures à 68"C avec un rinçage dans 6 x SSC, 0,1 % SDS, 2 fois pendant 15 minutes à 65"C. Ceci permet d'obtenir environ 80 clones d'ADNc humain. Ensuite on a réalisé un criblage avec l'ADNc PSP, dans le but d'éliminer les clones non caractéristiques de la PAP humaine, qui étaient cependant capable d'hybrider avec 1'ADNc de la PAP de rat dans les conditions ci-dessus: on a récupéré environ 50 clones qui comportent donc un fragment d'ADNc codant pour une protéine ou un polypeptide appartenant à la famille de la protéine PAP humaine. Parmi ces clones on a sélectionné ceux dont l'ADNc présente la plus forte homologie avec la protéine PAP de rat, en réalisant un second criblage au moyen de l'ADNc de PAP de rat dans des conditions de stringence suivantes 6 x SSC, 5 x Denhart, 0,5 % SDS, 10 mN EDTA, 200 pg ADN de sperme de saumon, 18 heures à 68 avec un rinçage dans 6 x SSC, 0,1 % SDS, pendant 2 heures à 65"C. On a ainsi sélectionné 9 clones positifs. 4. Séquençage des clones sélectionnés Les insertions des clones intéressants ont été sous-clonées dans les phages M13mpl8-M13mpl9 comme décrit dans "Molecular Cloning, a laboratory manual" Sambrook , J., Fritsch, E.F., et Maniatis T. eds, Cold Spring Harbor Laboratory Press (1990). Le séquençage des phages M13 recombinants a été réalisé par la technique décrite par Sanger F. et al, Proc. Natl. Acad. Sci. (USA) (1977), 74, 5463-5467, en utilisant l'amorce universelle commercialisée par Amersham (code N4511). 5. Expression d'un fragment de PAP dans E.coli à l'aide du plasmide d'expression pEX et préparation d'anticorps contre la protéine hybride. Un kit d'expression faisant appel au plasmide pEX dans E. coli, commercialisé par la société Genofit sous la référence G2104, a été utilisé en suivant les recommandations du fabricant. Des fragments de restriction correspondant à la séquence codante de la protéine ont été insérés dans le plasmide pEX. Les plasmides recombinants ont servi à transformer des bactéries (E. coli souche pop 2136). Les protéines des bactéries recombinantes ont été analysées par électrophorèse en gel de polyacrylamide à 7,5 %. La bande protéique correspondant à la PAP hybride a été découpée, homogénéisée dans de l'adjuvant de Freund et injectée à des lapins à raison de 3 injections par lapin à 3 semaines d'intervalle, chaque injection contenant environ 20 Ag de protéine hybride. Le sang des lapins a ensuite été prélevé et les immunoglobulines G purifiées sur colonne de protéine A-Sepharose (Pharmacia-France). REVENDICATIONS 1. Fragment d'ADNc caractéristique d'une protéine PAP humaine, tel qu'obtenu par la mise en oeuvre des étapes suivantes - un premier criblage d'une bibliothèque d'ADNc pancréatique humaine, ledit ADNc humain étant inséré dans un vecteur de clonage approprié, comprenant l'hybridation avec des sondes constituées par l'ADNc de la protéine PAP du rat, dans une solution constituée par : 6 x SSC, 5 x Denhart, 0,5 % SDS, 10 mM EDTA, 200 Ag ADN de sperme de saumon, pendant 18 heures à 68"C, suivie d'un rinçage dans les conditions suivantes : 6 x SSC, 0,1 % SDS, 2 fois 15 minutes à 650C, - la sélection des clones positifs d'ADNc humain ayant hybridé lors du criblage avec l'ADNc de la protéine PAP de rat, ces clones étant dits positifs, - un deuxième criblage avec une séquence d'ADNc d'une protéine PSP dans les conditions d'hybridation cidessus avec un rinçage en présence de 0,1 x SSC, 0,1 % SDS, pendant 2 heures à 65"C afin d'éliminer les clones non spécifiques de l'ADNc de PAP humaine ayant cependant hybridé avec l'ADNc de PAP de rat et - la récupération des clones n'ayant pas hybridé avec l'ADNc PSP, - la récupération des fragments ADNc des clones positifs obtenus. 2. Fragment d'ADNc caractéristique d'une protéine PAP humaine selon la revendication 1, caractérisé en ce que l'étape de criblage avec l'ADNc PSP est suivie d'une étape de criblage avec 1'ADNc de PAP de rat, dans une solution d'hybridation contenant 6 x SSC, 5 x Denhardt, 0,5 % SDS, 10 mM EDTA, 200 pg d'ADN de sperme de saumon, pendant 18 heures à 68"C, suivi d'un rinçage pendant 2 heures à 65"C. 3. Fragment d'ADNc caractéristique d'une protéine PAP humaine selon la revendication 1 ou la revendication 2, caractérisé en ce qu'il comprend une séquence nucléotidique présentant une homologie d'au moins 60 %, de préférence d'au moins 70 % avec au moins un enchaînement d'environ 100 nucléotides, compris dans la séquence S2 suivante caractéristique de l'ADNc de la PAP mature de rat. 10 20 30 40 50 60 GAAGACT CTCCGAAGAA AATACCCTCT GCACGCATTA TGGTCCCCAA AGGCTCCCAG 70 80 90 100 110 120 GCATATGGCT CCTACTGCTA TGCCCTGTTT CAGATACCAC AGACCTGGTT TGATGCAGAA 130 140 150 160 170 180 CTGGCCTGCC AGAAGAGACC TGAAGGACAC CTTGTATCTG TGCTCAATGT AGCTGAAGCT 190 200 210 220 230 240 TCATTCTTGG CATCCATGGT CAAGAACACT GGAAACAGCT ACCAATATAC CTGGATTGGA 250 260 270 280 290 300 CTCCATGACC CCACTCTTGG TGGAGAACCC AATGGAGGTG GATGGGAGTG GAGTAACAAT 310 320 330 340 350 360 GACATAATGA ATTATGTCAA CTGGGAGAGG AACCCATCTA CTGCCTTAGA CCGCGGATTC 370 380 390 400 410 420 TGTGGCAGCT TGTCAAGATC TTCTGGATTT CTAAGATGGA GAGATACCAC ATGTGAAGTT 430 440 450 460 470 480 GAAGTTGCCC TACGTCTGCA AATTTACAGG TTAAAATTAC CAGACAGCAA ACAGCTT 4.Fragment d'ADNc caractéristique d'une protéine PAP humaine selon selon l'une quelconque des revendications 1 ou 2, caractérisé en ce qu'il est capable d'hybrider avec la séquence nucléotidique S1 suivante caractéristique de l'ADNc de la PAP de rat, et/ou avec la séquence nucléotidique S2 suivante caractéristique de l'ADNc de la PAP de rat mature dans une solution d'hybridation contenant 6 x SSC, 5 x Denhart, 0,5 % SDS, 10 mM EDTA, 200 g ADN de sperme de saumon, pendant 18 heures à 68"C et avec un rinçage dans une solution comprenant 6 x SSC, 0,1 % SDS, 2 fois pendant 15 minutes à 650C. 10 20 30 40 50 60 AAAACCATCC AAATCGCCCG CAAGACAGCT AAGGAGGAGC AGAAAGATGA TGAGAGTTAA 70 80 90 100 110 120 TATGTTGCAT CGCTTGGCCT TCCCAGTCAT GTCCTGGATG CTGCTCTCCT GCCTGATGCT 130 140 150 160 170 180 CTTATCACAG GTGCAAGGAG AAGACTCTCC GAAGAAAAAA CCCTCTGCAC GCATTAGTTG 190 200 210 220 230 240 CCCCAAAGGC TCCCAGGCAT ATGGCTCCTA CTGCTATGCC CTGTTTCAGA TACCACAGAC 250 260 270 280 290 100 CTGGTTTGAT GCAGAACTGG CCTGCCAGAA GAGACCTGAA GGACACCTTG TATCTGTGCT 210 320 330 340 350 360 CAATGTAGCT GAAGCTTCAT TCTTGGCATC CATGGTCAAG AACACTGGAA ACAGCTACCA 370 380 390 400 410 420 ATATACCTGG ATTGGACTCC ATGACCCCAC TCTTGGTGGA GAACCCAATG GAGGTGGATG 430 440 450 460 470 480 GGAGTGGAGT AACAATGACA TAATGAATTA TGTCAACTGG GAGAGGAACC CATCTACTGC 490 500 510 520 530 540 CTTAGACCGC GGATTCTGTG GCAGCTTGTC AAGATCTTCT GGATTTCTAA GATGGAGAGA 550 560 570 580 590 600 TACCACATGT GAAGTTGAAG TTGCCCTACG TCTGCAAATT TACAGGTTAA AATTACCAGA 610 620 630 640 650 660 CAGCAAACAG CTTTAGTTTG TCCTGAAGCA CATCCTGTCA AGGGGCAAAA TATGAAGACT 670 680 690 700 710 720 TGCGTAGAAA AAGTGTATTC TATCTACAGT CCATATTGGA GCTCTAATCA TTCTTTAGCC 730 740 750 760 770 780 AATTTTGTAT AAGTTGTGTC CTCATGTCTT GGAAAGCAGT AATAAACCTC AGTCTCTCTT 790 800 810 820 830 840 CGAAAAAAAA AAA 10 20 30 40 50 60 GAAGACT CTCCGAAGAA AATACCCTCT GCACGCATTA TGGTCCCCAA AGGCTCCCAG 70 80 90 100 110 120 GCATATGGCT CCTACTGCTA TGCCCTGTTT CAGATACCAC AGACCTGGTT TGATGCAGAA 130 140 150 160 170 180 CTGGCCTGCC AGAAGAGACC TGAAGGACAC CTTGTATCTG TGCTCAATGT AGCTGAAGCT 190 200 210 220 230 240 TCATTCTTGG CATCCATGGT CAAGAACACT GGAAACAGCT ACCAATATAC CTGGATTGGA 250 260 270 280 290 300 CTCCATGACC CCACTCTTGG TGGAGAACCC AATGGAGGTG GATGGGAGTG GAGTAACAAT 310 320 330 340 350 360 GACATAATGA ATTATGTCAA CTGGGAGAGG AACCCATCTA CTGCCTTAGA CCGCGGATTC 370 380 390 400 410 420 TGTGGCAGCT TGTCAAGATC TTCTGGATTT CTAAGATGGA GAGATACCAC ATGTGAAGTT 430 440 450 460 470 480 GAAGTTGCCC TACGTCTGCA AATTTACAGG TTAAAATTAC CAGACAGCAA ACAGCTT 5. Fragment d'ADNc caracéristique d'une protéine PAP humaine selon la revendication 1 ou la revendication 2, caractérisé en ce qu'il comprend la sequence nucleotidique suivante: 10 20 30 40 50 60 TTTGTTAAGG ATTCCCTTGA GAATTATGTA AAAGTTTTAC AAGAGTCCAT CTCATTCTCT 70 80 90 100 110 120 TTGTCCCCCT CAAAGCTGGC TTGCCAGAAG CGGCCCTCTG GAAAACTGGT GTCTGTGCTC 130 140 150 160 170 180 AGTGGGGCTG AGGGATCCTT CGTGTCCTCC CTGGTGAGGA GCATTAGTAA CAGCTACTCA 190 200 210 220 230 240 TACATCTGGA TTGGGCTCCA TGACCCCACA CAGGTGCGAG TATATCCTCC CCTCTCTGTT 250 260 270 280 290 300 ACCTCTCAAG GTACTGTTGT TGCCCAGGCG CACTCCCTGT CCCCAGTCCC TGCCCAGGAA GTACTT 6. Fragment d'ADNc caractérisé en ce qu'il répond à la séquence nucléotidique S1 suivante codant pour la protéine PAP de rat, à une partie ou à une variante de cette séquence dès lors que cette partie ou variante code pour une protéine ou un peptide reconnu par des anticorps dirigés contre la protéine PAP de rat ou qu'elle hybride avec la séquence S1 dans une solution d'hybridation contenant 6 x SSC, 5 x Denhart, 0,5 % SDS, 10 mM EDTA, 200 g ADN de sperme de saumon, 18 heures à 68 C et après un rinçage dans les conditions suivantes : 6 x SSC, 0,1 % SDS, 2 fois 15 minutes à 65 C. 10 20 30 40 50 60 AAAACCATCC AAATCGCCCG CAAGACAGCT AAGGAGGAGC AGAAAGATGA TGAGAGTTAA 70 80 90 100 110 120 TATGTTGCAT CGCTTGGCCT TCCCAGTCAT GTCCTGGATG CTGCTCTCCT GCCTGATGCT 130 140 150 160 170 180 CTTATCACAG GTGCAAGGAG AAGACTCTCC GAAGAAAAAA CCCTCTGCAC GCATTAGTTG 190 200 210 220 230 240 CCCCAAAGGC TCCCAGGCAT ATGGCTCCTA CTGCTATGCC CTGTTTCAGA TACCACAGAC 250 260 270 280 290 100 CTGGTTTGAT GCAGAACTGG CCTGCCAGAA GAGACCTGAA GGACACCTTG TATCTGTGCT 210 320 330 340 350 360 CAATGTAGCT GAAGCTTCAT TCTTGGCATC CATGGTCAAG AACACTGGAA ACAGCTACCA 370 380 390 400 410 420 ATATACCTGG ATTGGACTCC ATGACCCCAC TCTTGGTGGA GAACCCAATG GAGGTGGATG 430 440 450 460 470 480 GGAGTGGAGT AACAATGACA TAATGAATTA TGTCAACTGG GAGAGGAACC CATCTACTGC 490 500 510 520 530 540 CTTAGACCGC GGATTCTGTG GCAGCTTGTC AAGATCTTCT GGATTTCTAA GATGGAGAGA 550 560 570 580 590 600 TACCACATGT GAAGTTGAAG TTGCCCTACG TCTGCAAATT TACAGGTTAA AATTACCAGA 610 620 630 640 650 660 CAGCAAACAG CTTTAGTTTG TCCTGAAGCA CATCCTGTCA AGGGGCAAAA TATGAAGACT 670 680 690 700 710 720 TGCGTAGAAA AAGTGTATTC TATCTACAGT CCATATTGGA GCTCTAATCA TTCTTTAGCC 730 740 750 760 770 780 AATTTTGTAT AAGTTGTGTC CTCATGTCTT GGAAAGCAGT AATAAACCTC AGTCTCTCTT 790 800 810 820 830 840 CGAAAAAAAA AAA 7. Fragment d'ADNc caractérisé en ce qu'il code pour une protéine répondant à l'une des séquences d'acides aminés Al ou A2 suivantes, ou pour une séquence d'acides aminés ayant une homologie de 40 à 80 % de préférence de 50 à 60 % avec au moins un enchaînement d'environ 25 acides aminés des séquences Al ou A2. Al MetLeuHisArqLeuAlaPheProValMetSerTrpMetLeuLeuSerCysLeuMetLeuLeuSerGlnValGln GlyGluAspSerProLysLysIleProSerAlaArgIleSerCysProLysGlySerGlnAlaTyrGlySerTyr CysTyrAlaLeuPheGlnIleProGlnThrTrpPheAspAlaGluLeuAlaCysGlnLysArgProGluGlyHis LeuValSerValLeuAsnValAlaGluAlaSerPheLeuAlaSerMetValLysAsnThrGlyAsnSerTyrGln TyrThrTrpIleGlyLeuHisAspProThrLeuGlyGlyGluProAsnGlyGlyGlyTrpGluTrpSerAsnAsn AspIleMetAsnTyrValAsnTrpGluArgAsnProSerThrAlaLeuAspArgGlyPheCysGlySerLeuSer ArgSerSerGlyPheLeuArgTrpArgAspThrThrCysGluValGluValAlaLeuArgLeuGlnIleTyrArg LeuLysLeuProAspSerLysGlnLeu A2 GluAspSerProLysLysIleProSerAlaArgIleSerCysProLysGlySerGlnAlaTyrGlySerTyr CysTyrAlaLeuPheGlnIleProGlnThrTrpPheAspAlaGluLeuAlaCysGlnLysArgProGluGlyHis LeuValSerValLeuAsnValAlaGluAlaSerPheLeuAlaSerMetValLysAsnThrGlyAsnSerTyrGln TyrThrTrpIleGlyLeuHisAspProThrLeuGlyGlyGluProAsnGlyGlyGlyTrpGluTrpSerAsnAsn AspIleMetAsnTyrValAsnTrpGluArgAsnProSerThrAlaLeuAspArgGlyPheCysGlySerLeuSer ArgSerSerGlyPheLeuArgTrpArgAspThrThrCysGluValGluValAlaLeuArgLeuGlnIleTyrArg LeuLysLeuProAspSerLysGlnLeu 8. Fragment d'acide nucléique caractérisé en ce qu'il s'agit d'un fragment d'ADN complémentaire du fragment d'ADNc selon l'une quelconque des revendications 1 à 7 ou encore en ce qu'il s'agit du fragment d'ARN correspondant à cet ADNc. 9. Proteine PAP humaine, telle qu'obtenue par l'expression d'un fragment d'ADNc de la PAP humaine, tel qu'obtenu selon la revendication 1 ou la revendication 2, au moyen d'un système d'expression adapte, par exemple un hôte cellulaire transformé par un vecteur d'expression, lui-même modifie par l'insertion du susdit fragment d'ADNc de la PAP humaine. 10. Proteine PAP humaine selon la revendication 9, telle qu'obtenue par l'expression d'un fragment d'ADNc de la PAP humaine, inséré en phase dans un vecteur pEX, dans E.coli, notamment dans E.coli souche pop2136. 11. Protéine PAP humaine caractérisée en ce que sa sequence d'acides aminés présente une homologie d'au moins 50%, de préférence d'au moins 60% et de façon très préférée d'au moins 70 % avec au moins un enchaînement d'environ 25 acides amines, compris dans la séquence A2 suivante de la protéine PAP de rat mature. Séquence A2 GluAspSerProLysLysIleProSerAlaArgIleSerCysProLysGlySerGlnAlaTyrGlySerTyr CysTyrAlaLeuPheGlnIleProGlnThrTrpPheAspAlaGluLeuAlaCysGlnLysArgProGluGlyHis LeuValSerValLeuAsnValAlaGluAlaSerPheLeuAlaSerMetValLysAsnThrGlyAsnSerTyrGln TyrThrTrpIleGlyLeuHisAspProThrLeuGlyGlyGluProAsnGlyGlyGlyTrpGluTrpSerAsnAsn AspIleMetAsnTyrValAsnTrpGluArgAsnProSerThrAlaLeuAspArgGlyPheCysGlySerLeuSer ArgSerSerGlyPheLeuArgTrpArgAspThrThrCysGluValGluValAlaLeuArgLeuGlnIleTyrArg LeuLysLeuProAspSerLysGlnLeu 12.Protéine PAP humaine selon la revendication 11, caractérisée en ce qu'elle comprend l'enchaînement d'acides aminés suivant 39 Phe Val Lys Asp Ser Leu Glu Asn Tyr Val Lys Val Leu 13 78 Gln Glu Ser Ile Ser Phe Ser Leu Ser Pro Ser Lys Leu 26 117 Ala Cys Gln Lys Arg Pro Ser Gly Lys Leu Val Ser Val 39 156 Leu Ser Gly Ala Glu Gly Ser Phe Val Ser Ser Leu Val 52 195 Arg Ser Ile Ser Asn Ser Tyr Ser Tyr Ile Trp Ile Gly 65 234 Leu His Asp Pro Thr Gln Val Arg Val Tyr Pro Pro Leu 78 273 Ser Val Thr Ser Gln Gly Thr Val Val Ala Gln Ala His 91 306 Ser Leu Ser Pro Val Pro Ala Gln Glu Val Leu 102 13.Protéine PAP de rat caractérisée en ce qu'elle répond à l'enchaînement d'acides aminés suivant, ou une variante ou une partie de cet enchaînement dès lors que cette partie ou cette variante est reconnue par des anticorps dirigés contre la protéine PAP de rat ou qu'elle présente une homologie d'au moins 50 %, de préférence d'au moins 60% avec la séquence A2 de PAP de rat ci-dessous. GluAspSerProLysLysIleProSerAlaArgIleSerCysProLysGlySerGlnAlaTyrGlySerTyr CysTyrAlaLeuPheGlnIleProGlnThrTrpPheAspAlaGluLeuAlaCysGlnLysArgProGluGlyHis LeuValSerValLeuAsnValAlaGluAlaSerPheLeuAlaSerMetValLysAsnThrGlyAsnSerTyrGln TyrThrTrpIleGlyLeuHisAspProThrLeuGlyGlyGluProAsnGlyGlyGlyTrpGluTrpSerAsnAsn AspIleMetAsnTyrValAsnTrpGluArgAsnProSerThrAlaLeuAspArgGlyPheCysGlySerLeuSer ArgSerSerGlyPheLeuArgTrpArgAspThrThrCysGluValGluValAlaLeuArgLeuGlnIleTyrArg LeuLysLeuProAspSerLysGlnLeu 14. Anticorps caractérisés en ce qu'ils reconnaissent la protéine PAP humaine selon l'une quelconque des revendications 9 à 12 et en ce qu'il s'agit d'anticorps polyclonaux ou monoclonaux. 15. Anticorps monoclonaux tels qu'obtenus à partir d'un hybridome, précédemment formé par fusion d'une cellule de myélome et d'une cellule splénique d'un animal préalablement immunisé avec une protéine selon l'une quelconque des revendications 9 à 13. 16. Hybridome tel qu'obtenu à partir de la fusion d'une cellule de myélome avec une cellule splénique d'un animal préalablement immunisé avec une protéine PAP humaine selon l'une quelconque des revendications 9 à 13. 17. Vecteur d'expression et/ou de clonage caractérisé en ce qu'il comprend un fragment d'ADN selon l'une quelconque des revendications 1 à 8. 18. Hôte cellulaire transformé par un vecteur d'expression selon la revendication 17, dans des conditions permettant l'obtention de la protéine ou du peptide codé par le fragment d'ADN inséré dans le vecteur, ledit hôte cellulaire étant par exemple choisi parmi les bactéries, notamment en ce qu'il s'agit de E.coli, parmi les levures, les cellules d'insectes ou de mammifères. 19. Produit d'expression de l'hôte cellulaire transformé selon la revendication 18. 20. Composition pour le diagnostic in vitro de la pancréatite aiguë ou pour l'observation de la glande pancréatique en imagerie médicale, dans un échantillon biologique tel que le sang, caractérisée en ce qu'elle comprend au moins un anticorps selon la revendication 14 ou la revendication 15 le cas échéant marqué, capable de former un complexe du type anticorpsantigène avec la protéine PAP humaine. 21. Kit pour le diagnostic in vitro de la pancréatite aiguë, à partir d'un échantillon biologique caractérisé en ce qu'il comprend: - au moins un anticorps selon l'une quelconque des revendications 14 ou 15 capable de détecter la présence de la PAP humaine dans ledit échantillon biologique, lesdits anticorps étant le cas échéant marqués, - selon la nature du marquage, un réactif pour détecter la présence d'un complexe du type antigèneanticorps spécifique, - un témoin négatif. 22. Procédé pour détecter in vitro une pancréatite aiguë, à partir d'un échantillon biologique comprenant les étapes de: - mise en contact de l'échantillon biologique susceptible de contenir la PAP humaine, avec des anticorps selon l'une quelconque des revendications 14 ou 15, - détection de la réaction antigène-anticorps entre les susdits anticorps et la PAP humaine. 23. Procédé d'observation de la glande pancréatique caractérisé par - l'injection à un patient d'une composition selon la revendication 20, dans des conditions physiologiquement acceptables, - l'observation notamment par les techniques d'imagerie médicale d'une réaction entre les anticoprs contenus dans la susdite composition et la PAP humaine lorsqu'elle est présente.