Brevet FR2661179A1 — publié le 19911025

Prodrogues gem-diphosphoniquesd'améthoptérine(méthotrexate) et de dérivés déaza- N-10 améthoptérine, compositions pharmaceutiques contenant de tels prodrogues, procédés d'obtention et produits intermédiaires. La présente invention a pour objet la synthèse d'analogues gem-diphosphoniques d'améthopténne (méthotrexate), et leur utilisation à titre de compositions pharmaceutiques, pour différentes applications thérapeutiques. L'invention concerne également les voies de préparation de tels composés. Le méthotrexate est un agent antinéoplasiqueimportant. On a montré qu'il possède à la fois des propriétés immuno-dépressives et anti-inflammatoires bien que son mécanisme d'action dans ces affections ne soit pas connu de façon précise. A faibles doses, il est couramment employé dans le traitement de rhumatismes psoriasiques rebelles, des polymyosites, de la maladie de Reiter et plus récemment des polyarthrites rhumatoïdes. A fortes doses, il est également indiqué dans le traitement de certains cancers, notamment les leucémies de l'enfant, tumeurs trophoblastiques, cancers du sein, de la tête et du cou. Cependant, l'intérêt comme agent anticancéreux est sous la dépendance limitante des importants effets secondaires que son action entraîne sur l'ensemble de l'organisme. Ceci a conduit plusieurs équipes de chercheurs à élaborer de nombreux analogues du méthotrexate dans le but de définir de meilleures relations structure-activité. Dans cet esprit, le déposant a été amené, il y a quelques années, à développer un concept original de vectorisation pharmacologique d'agents antinéoplasiquesvis à vis de carcinomes osseux, par des acides diphosphoniques. Le tropisme osseux des acides diphosphoniquesest en effet une caractéristique physiologique connue dans certaines applications thérapeutiques ou de diagnostic médical. (SIRIS,E.S.; ; CANFIELS,RE.; JACOBS,T.P.; STODDART,KE.; SPECTOtP.J. Met. Bone Dis. rel. Res. 1981,4-5, 301). Outre leur action remarquable dans la maladie de Paget (EISENHUT,M., BARDER,J., TAYLOR,D.M. Appl. radiat. Isot. 1978, 7, 535), ou dans l'arthrite rhumatoïde (BRELIERE > .C, EDMONDS-ALT,X, GARCLA,G. (Sanofi) Eur. Pat. Appl.), certains d'entre eux sont également utilisés en scintigraphie osseuse (GASTRONOVO,F.P.; CALLAIMN, RJ. J.Nucl.Med. 1972, 13,823). Dans le cadre de l'étude de validité de ce concept, le déposant a décrit dans la demande de brevet française n" 2611203 du 20.02.87 (inventeurs cités: STURTZ et VOISIN) la préparation et l'activité biologique des analogues diphosphoniques d'améthoptérine 3a et 3b: avec: 3a : X = avec R1 = H, alkyles inférieurs (C1 à C6) 3b : X = avec avec R1 = H, allyles inférieurs (C1 à C6) Les résultats préliminaires des tests biologiques obtenus pour ces composés sur des modèles de cancer des os laissant apparaître un intérêt certain pour ces composés, le déposant a eu l'idée, à l'origine de la présente invention, d'associer ce concept de vectorisation à celui de prodrogue. D'une manière générale, l'aspect prodrogue est recherché, de façon à favoriser l'atteinte sélective de la cellule cible, en évitant d'éventuels effets toxiques de la substance active sur d'autres sites du corps. A cette fin, et selon l'invention, il a été synthétisé des composés gem-diphospho niques d'améthoptérine (méthotrexate) et de déaza-N-10 améthoptérine se présentant sous la forme d'une prodrogue d'améthoptérinedont le groupement gem-diphosphoniqueest relié au groupement ptéroylglutamiquepar une liaison peptidique. Ces composés nouveaux présentent ainsi notamment l'avantage que la liaison peptidique peut être facilement rompue par hydrolyse. En conséquence, lorsqu'ils sont utilisés à titre de compositions pharmaceutiques, ces composés combinent l'effet de vectorisation des composés diphosphoniquesavec l'avantage d'obtenir directement l'acide ptéroylglutamiquepar simple hydrolyse de la prodrogue. Ceci favorise ensuite notamment la formation de dérivés polyglutamiques du méthotrexate, qui interviennent dans les effets cytotoxiques vis à vis des cellules tumorales ciblées. Les composés diphosphoniquesde l'invention répondent à la formule générale avec: n 2 0, préférentiellement n = 0, 1, 2, 3 R étant soit absent, soit constitué par un groupement R1, R3, R4, R5 = H, ou alkyles inférieurs (C1 à C6) R2 = H, ou alkyles inférieurs (C1 à C6) et benzyle quand R présent ainsi que les sels et les esters dérivés desdits composés. Les composés diphosphoniques 1,2 suivants ont notamment été préparés: x R R1 la I -N 1 - CH - (CO2H) - CH2 - CH - p(O)(C H)2J2 lb -CH 2a ÉÉÉÉRl; CH2CHLP(O)(OH)202 avec R1 = H, alkyles inférieurs (C1 à c6). L'utilisation de ces composés pourra également aisément être effectuée tant au niveau des esters ou des sels des acides correspondants. On notera qu'il est attendu notamment une bonne efficacité du composé 1 du fait de la présence du groupement carboxyméthyle, fréquent dans les enchaînements peptidiques, et susceptible de jouer un rôle favorable dans la fragilisation de la liaison peptidique du composé. Sans exclure que ces composés, et l'ensemble de ceux de la famille générale définie plus haut présentent d'autres applications avantageuses, l'invention vise notamment à leur application en tant que constituants de compositions pharmaceutiques. De telles compositions sont notamment utilisables en cancérologie, notamment pour le traitement de tumeurs ou métastases notamment osseuses, et/ou en rhumatologie, notamment pour le traitement de rhumatismes psoriasiques rebelles, de polymyosites, de la maladie de Reiter et de polyarthrites rhumatoïdes. L'invention porte également sur des modes de préparation préférentiels des structures la,b et 2a,b, ainsi que sur les produits intermédiaires intéressants obtenus. Certains de ces produits intermédiaires, référencés ci-après 4a, 4b, Sa, Sb, 6a, 7a, 9 et 10 sont en outre susceptibles de présenter des propriétés intrinsèques intéressantes, hormis leur rôle dans la synthèse des prodro gues de l'invention. Les molécules de types a et b ont fait l'objet d'une approche synthétique différente dans leur phase finale de préparation et sont donc présentées séparément ci-après. Ils sont obtenus, in fine, souks forme de sels de sodium. En ce qui concerne les composés la 2a leur obtention résulte de l'action sur les formes 4a et Sa: - premièrement soit du bromure de triméthylsilylesuivie d'une méthanolyse, soit encore par exemple d'une action de coupure par l'acide bromhydrique dans l'acide acétique; - deuxièmement de la soude. Hz o 0 .(oR3)2 ( CH2 ) 2CNHCH- CH2CH I 3 R1 CO R4 P(oR 2 I' 2 o 2 N CH Ir 1 N Ne gxCH2-N-C-CN- | co22 P 011 3 M P(oR (CH2)2CNHcH2cH p(OR3) R1 = H, alkyles inférieurs (C1 à C6) R3= alkyles inférieurs (C1 à C6) R2 = alkyles inférieurs (C1 à C6) R2 = benzyle pour 4a R4 = alkyles inférieurs (C1 à C6) Le dérivé bromé intermédiaire 8 est isolé en traitant la 2,4diamino-6-hydroxyméthylptéridine préparée selon un protocole décrit par ROSOWSKY dans le Journal of Medicinal chemistry 28, 660-667 (1985) par le bromotriphénylphosphorane selon PIPER et MONTGOMERY (Journal os HQTQ- rocyclic Chemistry, 11 , 279-280, (1974). Ces esters diphosphoniques 4a et 5a sont purifiés par recristallisation dans un mélange chloroforme/éther avec un rendement de l'ordre de 70 %. L'étape précédente qui, suivant l'invention, permet d'obtenir les composés 6a et 7a consiste en la condensation d'un acide p-N(alkylamino) benzoique sur les dérivés diphosphoniques 9 et 10, synthons communs aux dérivés la,b et 2a,b R = alkyles inférieurs (C1 à C6) pour 10 R = benzyle pour 9 R3 = alkyles inférieurs (C1 à C6) R4 = alkyles inférieurs (C1 à C6). Le procédé de l'inv ention pour la préparation de composés de types 6a et 7a propose, dans une première étape, de protéger l'acide p-N(alkyl amino) benzoique par le 2,2,2-trichloroéthoxycarbonyle puis d'activer sa fonction acide par le chlorure de thionyle pour former intermédiairement les composés R1 = H, alkyles inférieurs (G1 à C6) La deuxième étape permet, par condensation de dérivés de types 9 et 10 dans le tétrahydrofurane en présence de triéthylamine, sur le chlorure d'acide benzoique N-protégé, suivie d'une chromatographie sur colonne de gel de silice d'obtenir après libération de la fonction amine par la poudre de zinc, les dérivés de types Ga et 7a. Les dérivés 7b et 2b , comme les composés la et 2a. sont issus de leurs analogues esters diphosphoniques 4b et 5b , après une hydrolyse des esters phosphoniques par le bromure de triméthylsilyle suivie d'une méthanolyse et une hydrolyse des esters carboxyliques par action de la soude. Rl = H, alkyles inférieurs (C1 à C6) R2 = alkyles inférieurs (Cl à C6) pour 5b R2 = benzyle pour 4b R3 = R4 = alkyles inférieurs (C1 à C6). En ce qui concerne les composés 4b et 5b ci-dessus, l'invention propose de les obtenir par une stratégie de synthèse totalement différente de celle utilisée pour les dérivés aza N-10 diphosphoniques de types a. Le procédé de l'invention pour la préparation de composés déaza-lO aminoptérine repose en effet sur la condensation peptidique entre l'acide 4-amino-4-déoxy déaza N-lO-ptéroique 20 ou de ses dérivés alkylés en 10, dont les modes d'accès ont été décrits par exemple par PIPER t al, dans Journ. Med.Chem. 1980, 23, 320-321, et les synthons diphosphoniques de formules générales 9 et 10. 10 0 NH2\ P(OR )2 NH2 jl NgH2 Rl C02R CO R4 OR3)2 N X N tCH2-CHOC-OH O 20 N O cO2R2/CH(CH2)2CIIjNHCcIlolRHLt2 N 9 NH2-CH / P(OR )2 I o H2)2CNHCH,-CHP( 2)2CNHCH2 C02R gPI(OR )2 10 ) 10 0 Condensation 5 / P(OR )2 g 2 Condensati O o Il 3 il P(OR 20 1 -(CH2)2c-NHcH-cH -CH I 3 R ru O 4b CO2R ll(oR3)2 NH-CH- o N R2 o N a NX O P11(OR3) H N ~ P(OR )z 2 -(CH2)2CNHcH2-cH M 5b P(OR 2 5b p(OR3) R1 = H, alkyles inférieurs (C1 à C6) R2 = alkyles inférieurs (Cl à C6) pour 10 et 5b R2 = alkyles inférieurs (C1 à C6) pour 9 et 4b R4 = alkyles inférieurs (Cl à C6) La littérature propose l'utilisation de différents agents de couplage pour réaliser ce type de condensation peptidique. La méthode classique dite à "l'anhydride mixte" fait intervenir par exemple le chlorocarbonate d'isobutyle comme agent de couplage. La réaction a lieu, à 50"C, en présence de triéthylamine dans le N-N-diméthylformamide. L'invention utilise cette méthode de couplage et l'applique, avec le chlorocarbonate d'isobutyle, à la synthèse des dérivés analogues diphosphoniques et de prodrogues déaza N-10 et déaza N-10 alkyles du Méthotrexate. Il est également possible d'utiliser toute méthode connue de l'homme du métier. On notera que cette méthode de couplage est autant utilisable pour l'obtention des composés 4b, 5b, que pour l'obtention des composés a, 5a. Dans ce dernier cas, la condensation peptidique est effectuée entre les synthoms diphosphoniques 9 et 10 et l'acide 4 amino 4 déoxy aza-ptéroSque ou ses dérivés alkglés en 10. Pour atteindre les composés de types 9, la présente invention propose de reprendre les travaux de SACHS et BRAND qui obtiennent dans le OLLJLR o te American Chemical Soceety, 75, 4610-4611, (1953), l'ester a-benzylique de l'acide glutamique 12, après acidolyse selective, en présence d'acide iodhydrique, du diester benzylique. Avant de procéder au couplage peptidique de cet amino acide avec les dérivés 2-amino-4,4-bis(dialkylphosphono)butyrate d'alkyles 11 en présence d'un des différents agents de couplage proposés dans la littérature, par exemple le dicyclohexylcarbodiimide, la fonction amine du composé 12 est protégée sous forme d'uréthane, par action du dicarbonate de tertiobutyle, par exemple. STURTZ et VOISIN ont décrit dans le brevet français Fr 87 02449 fév. 1987 la synthèse des 2-amino-4,4-bis (dialkylphosphono) butyrate d'alkyles 11. R = R3 = alkyles inférieurs (C1 à C6). La coupure et la décarboxylation du groupement carbamique est réalisées par acidolyse dans l'acide trifluoroacétique.(TFA) o 'I (CH ) ------j cocNHcH-(cH2)2cO2H NH2-cH-(CH2)2cO2H 3 3 i [(cH3)3coc1]2o cO2Bz O CH2 ) 2CO2H + C02Bz 12 19 O O Il 3 POB31)2 agent Il Hz 11 3 O o P(OR) de H2N ,P( OR)2 Il Il j 2 agent (cH3)3cocNH-cH-(cH2)2cNHCH-cH2-CH cH-cH2-CH 1 2 1 2 \ 3 couplage \p(oR3\ CO2Bz CO R4 P( OR) CO2R 2 2 o o 17 il TFA O H2N 11 o )2 CH- (1 CH2) --CNHCH-( CH2) -CH C02- BZ C02R P(OR )2 2 z CO2R Il o 9 R2 = R3 = alkyles inférieurs (C1 à C6). Les composés de type 10 sont obtenus selon l'invention par addition nucléophile, de type Michaël, de dérivés de la glutamine 13 sur les éthylidène bis(phosphonates) d'alkyles 14, suivie d'une déprotection de la fonction amine par l'acide trifluoroacétique. Le composé 13 est avantageusement obtenu selon le mode opératoire décrit notamment par TARBELL et al, Proc. Nat. Acad. Sci. 1972, 69, 730. R2 = R3 = alkyles inférieurs (C1 à Dans l'invention, les éthylidènes bis(phosphonates) de dialkyles 14 sont issus-d'une isomérisation d'ARBUSOV entre un trialkyl phosphite et un l-bromovinylphosphonate de dialkyle, lui-même obtenu à partir d'un vinylphosphonate de dialkyle suivant le mode opératoire utilisé par BELBEOC'H, Thèse Doctorat Sciences Physiques, Université de Bretagne Occidentale, Brest. EXEMPLE 1 Synthèse des composés la et lb (où R1 = CH3) a) N [(4( N-tertiobutyloxycarbonyl)amino-4-benzyloxycarbonyl) butanoyl] -2 amino-4, 4 bis ( diéthylphosphono ) butyrate d'éthyle. Dans un tricol de 100 ml, muni d'un thermomètre à alcool, on place 2 g (5,9 mmoles) d'ester a-benzylique de l'acide N(tertiobutyloxycarbonyl)-L-glutamique dans 100 ml de chloroforme. A cette solution refroidie à 0-50C est additionné 2,5 g (6.2 mmoles) de 2-amino-4,4-bis(diéthylphosphono)butyrate d'éthyle dilué dans 10 ml de CHCl3. Le mélange résultant est alors additionné goutte à goutte pendant 15 mn par une solution de 1.2 g (6.2 mmoles) de dicyclohexylcarbodiimide dans 20 mi de CHCl3. A la fin de I'addition, le bain de glace est enlevé et un important précipité de dicyclohexylurée apparait. L'agitation à température ambiante est maintenue pendant 2 heures environ avant que le solvant ne soit évaporé sous pression réduite. Le résidu est repris dans quelques ml d'acétate d'éthyle puis filtré sur cellite. Le filtrat est récupéré, dilué puis lavé successivement par NaOH 5 %, HCI 1N et H2O. La phase organique finale, conduit, après séchage sur Na2SO4 et évaporation, à une huile visqueuse incolore (3,3 g ; 78 %). RMN 31P : gp = 23.2, s. b) N- [ ( 4-ami no-4-ben zyloxycarbonyl ) butanoyl]-2-amino-4,4-bis (diéthylphosphono) butyrate d'éthyle. Une solution de 17 (2.17 g ; 3 mmoles)dans 10 ml de CH2Cl2 sont additionnés goutte à goutte 15 ml d'acide trifluoroacétique, sans que ne soit décelée d'élévation de température. La fin de la réaction est détectée après 20 mn, par la fin du dégagement de C02. Les solvants sont éliminés par évaporation et le résidu repris dans 25 ml d'acétate d'éthyle. La solution résultante est alors additionnée par une solution aqueuse de NaHCO3 (jusque pH = 8-9), décantée puis extraite. La phase organique est lavée à l'eau, séchée sur Na2SO4 et finalement évaporée pour donner le produit déprotégé attendu sous forme d'une huile incolore (1.7 g ; 90 %). L'absence en RMN du H du singulet à 1.5 ppm (/TMS) correspondant aux protons du groupement tertiobutyloxycarbonyle confirme la forme amine libre du composé désiré. RMN 31P : #p = 22.9, d, (Jp,p = 2.5 Hz). c) N F4( N-tertiobutyloxycarbonyl } -amino-4-éthyloxycarbonyl] -2 amino-1,1-bis (diéthylphosphono)éthane 15 Dans un tricol de 100 mi, muni d'un réfrigérant ascendant et d'un thermomètre à mercure, on dissout à 500C 0,1 g de tBuOK dans 50 mi de tBuOH. 2.74 g (0,01 mole) du composé 13 sont alors ajoutés en un seul pot. L'agitation est maintenue à 500C jusqu'à totale dissolution. On additionne ensuite 3.1 g (0,0103 mole) de 14 goutte à goutte et l'agitation est conservée pendant 1 heure à cette température. L'évolution de la réaction est contrôlée par RMN du 31P. Le pH est enfin ajusté à 7 par addition d'une solution saturée de chlorure d'ammonium puis extraite par du chlorure de méthylène (2 fois). Les phases organiques sont rassemblées, séchées sur Na2SO4 et évaporées sous pression réduite pour donner 5.2 g (90 9 de rendement) d'un solide blanc. RMN 31P dP = 18.9, s. d) N ( 4-amino-4-éthyloxycarbonyl ) -2-amino-1 , 1 -bis( diéthylphos phono) éthane 10. A 2.0 g (3.5 mmoles) de 15 dissous dans 15 ml de CH 2Cl2 sont additionnés goutte à goutte 15 ml de TFA. L'agitation du mléange réactionnel est maintenue pendant 20 mn à température ambiante puis les solvants sont évaporés. Le résidu visqueux est repris par une solution aqueuse de NaHCO3 (jusqu'à pH = 8-9) puis cette solution est extraite 2 fois par l'acétate d'éthyle. Les phases organiques sont séchées puis évaporées pour conduire à une huile visqueuse incolore (1.2 g, 70 %). RMN 31P : dP = 19.6, s. e) Con.densation du chlorure de l'acide [N,N[(2,2,2-trichloro- éthyloxycarbonyl)méthyl ]-4-amino ] benzoique avec les composés 9 et 10. Une solution de 9 (9.85 g ; 0.016 mole) dans 100 ml de THF, contenant 25 ml de triéthylamine distillée, est agitée à 0-50C pendant que 6.5 g (0.018 mole) du chlorure d'acide benzoïque N-protégé sont ajoutés goutte à goutte durant 15 mn. A la fin de l'addition, l'agitation est maintenue à température ambiante pendant 1 heure eviron. Après filtration du mélange réactionnel et évaporation du chloroforme, I'huile- visqueuse résultante est extraite par un mélange H2O/CH2CI2. Après séchage sur Na2SO4 et évaporation, le résidu est purifié sur colonne de gel de silice (solvant d'élution : AE/E : 20/1). Les fractions intéressantes sont rassemblées et évaporées pour donner un produit sirupeux incolore (10.4 g ; 70 %). RMN 31P : dP = 23.1 ppm, s. Nous avons repris le même protocole expérimental pour condenser le composé 10 avec le dérivé benzoïque N-protégé. Après chromatographie sur colonne de gel de silice, le produit désiré est obtenu avec un rendement de 68 %. RMN 31P : dP = 23.2 ppm, s. f) Elimination du groupement protecteur de la fonction amine. Composé 6a 8.4 g (0.0091 mole) du composé résultant de la condensation entre le produit 9 et le dérivé chloré benzoique sont dissous dans 80 ml de THF puis 1.3 g de KH2PO4 dissous dans 13 ml d'eau distillée sont additonnés, suivis de 8 g de poudre de zinc (préalablement activé par HCI 5 %). L'agitation est maintenue à la température du laboratoire pendant une journée. L'évolution de la réaction est contrôlée par CCM de gel de silice (solvant d'élution : AE). Après filtration du zinc et évaporation du solvant, le résidu est extrait par un mélange eau/chloroforme. La phase organique est décantée, séchée sur Na2SO4 et évaporée sous pression réduite pour donner quantitativement une huile incolore. RMN 31P : #P = 23.7 ppm, q, (Jp-p = 2.4 Hz). Composé 7a Le mode opératoire est identique à celui décrit ci-dessus. RMN : dP = 23.1 ppm, s. g) Préparation des composés 4a et 5a 3.4 g (0.01 mole) de 8 . HBr et 8.3 g (0.011 mole) de 6a sont agités dans 40 ml de DMA à 500-550C pendant 4 heures (la solubilisation est obtenue après 1 heure). Après évaporation du DMA, le résidu marron foncé est repris dans l'eau et extrait au chloroforme (2 fois). Les phases organiques sont rassemblées et séchées sur Na2SO4. Après évaporation du chloroforme, le résidu semi-solide est recristallisé dans un mélange CHCI3/Et2O pour conduire au composé 4a sous forme d'une poudre jaune clair avec un rendement de 61- %. RMN 31P : dP = 23.2 ppm, s. Composé 5a II a été obtenu avec un rendement de 65 % par le même protocole expérimental que celui développé ci-dessus. RMN 31P : dP = 23.5 ppm, d. Ces 2 poudres jaunes ont été étudiées par CCM de gel de silice (CHCl3ICH3OH : 411). Les analyses spectroscopiques en RMN 1H, 31P et 13C in- diquent une pureté tout-à-fait satisfaisante pour ces composés et ne nécessitant pas d'étapes supplémentaires de purification. h) Hydrolyse des composés 4a et 5a Dans un ballon de 100 ml, on dissout 4,6 g (0.005 mole) de 4a dans 50 ml de CH2CI2. Après ajout en une seule fois de 5.4 ml (0.04 mole) de BrSi(CH3)3, le mélange réactionnel est agité pendant deux jours à température ambiante, puis les solvants sont éliminés. Le résidu solide orangé est repris dans 100 ml de méthanol puis agité durant 30 mn. Après évaporation du solvant, le résidu est dissous dans quelques ml de méthanol puis précipité par ajout d'éther. Après refroidissement, la poudre jaune est filtré, lavé à l'éther puis séché sur P205 à 500C (rendement : 90 %). L'hydrolyse du composé 5a est réalisée dans les mêmes conditions opératoires. i) saponification des composés 4a et 5a. Composé la A une solution méthanolique du composé 4a portée à reflux est additionnée goutte à goutte une solution aqueuse de soude (4 éq.). Un précipité jaune clair apparait dès que le pH atteint une valeur de 7. L'agitation est ensuite conservée pendant 4 heures à cette température. Après une nuit de réfrigération, le précipité est filtré, lavé par de petites quantités de méthanol, et d'éther pour être finalement séché sur P205 à 50 C. RMN 31P : dP = 22.2 ppm, s. Composé 2a Même mode opératoire que pour le composé la. RMN 31P #P = 22.7 ppm, b, (Jp-p = 12.2 Hz). EXEMPLE 2 Synthèse des composés lb et 2b (où R1 = H). a) Couplage peptidique entre les composés 9 et 10 et l'acide déa zaptéroîque 16. Dans un tricol de 100 ml, muni d'une agitation magnétique, on place 1.55 g (0.005 mole) d'acide déazaptéroique lb, 1 .4 ml (0.01 mole) d'Et3N fraichement distillée dans 50 ml de DMA anhydre. On additionne dans un premier temps, 0.65 ml (0.005 mole) de chloroformate d'isobutyle pour former l'anhydride mixte. Après 15 mn d'agitation à température ambiante, on ajoute 3.1 g (0.005 mole) d'aminoester 9 et une minute plus tard à nouveau 0.33 ml de chloroformate d'isobutyle. Au bout de 15 mn, 1.6 g (0.0025 mole) de 9 sont additionnés, suivis de 0.16 ml de chloroformate d'isobutyle. Après un délai de 15 mn, on ajoute à nouveau 0.8 g de 9 puis une minute plus tard 0.16 ml de réactif de couplage. 0.8 g d'ester 9 sont finalement ajoutés au bout d'un quart d'heure. Un suivi de la réaction par chromatographie sur couches minces de gel de silice (solvant d'élution : CHC13/CH30H : 4/1) montre l'apparition quasi-immédiate d'un pic différent de l'acide déazaptéroique introduit. La solution marron foncée est agitée à 500C pendant 4 heures environ avant que le DMA ne soit évaporé, sous pression réduite (P Le résidu marron sirupeux est repris dans l'eau (50 ml) et extrait par du chloroforme (2 x 100 ml). Les phases organiques sont rassemblées, séchées sur Na2SO4 puis évaporées. Le semi-solide résultant est recristallisé dans un mélange chloroforme/éther. Après quelques heures de refroidissement, les cristaux jaunes sont filtrés, lavés à l'éther puis séchés sur P 205 à l'étuve sous vide à 600C pour donner le composé désiré 4b avec un rendement de 65 %. RMN 31P : dp = 23.4, s. Composé 5b Le couplage peptidique du composé 16 avec l'amino ester 10 est réalisé dans les mêmes conditions opératoires que celles développées ci-dessus. Le composé 5b est obtenu avec un rendement de 60 % sous forme d'une fine poudre ocre claire. b) Hydrolyse des fonctions esters carboxyliques et phosphoniques des composés 4b et 5b Le bromotriméthylsilane est utilisé pour hydrolyser les esters phosphoniques (voir EXEMPLE 1 ; h) et la saponification est réalisée par une solution de soude dans le méthanol (voir EXEMPLE 1 ; i). Composé lb RMN 31P : dP = 21.4, s. Composé 2b RMN 31P : dP = 19.8, s. REVENDICATIONS 1. Composés gem-diphosphoniquesd'améthoptérine (méthotrexate) et de déaza N-10 améthoptérine caractérisés en ce qu'ils se présentent sous la forme d'une prodrogue d'améthoptérine dont le groupement gem-diphosphoniqueest relié au groupement ptéroylglutamiquepar une liaison peptidique. 2. Composés selon la revendication 1 de formule avec: n 2 0, préférentiellement n = O, 1, 2, 3 R étant soit absent, soit constitué par un groupement R > , R3, R4, R5 = H, ou alkyles inférieurs (C1 à C6) R2 = H, ou alkyles inférieurs (C1 à C6) et benzyle quand R présent; ainsi que les sels et les esters dérivés desdits composés. 3. Composés selon la revendication 2 dans lesquels X signifie 4. Composition pharmaceutique, caractérisée en ce qu'elle contient comme ingrédient actif, au moins un composé selon l'une quelconque des revendications 1 à 3. 5. Composition pharmaceutique selon la revendication 4 utilisable en cancérologie, notamment pour le traitement de tumeurs ou métastases notamment osseuses, et/ou en rhumatologie, notamment pour le traitement de rhumatismes psoriasiques rebelles, de polymyosites, de la maladie de Reiter et de polyarthrites rhumatoïdes. 6. Composés gem-diphosphoniquesutilisables notamment comme produits intermédiaires, de formule: o 3 P(oR ) 2 (cH2)2NHH-cH2-cH O CO2R4 Pf(OR5)2 NH2 O Forme X-/~CNH~CH~ Formé Forme 4 CH - X Mi- CH H N AN C 2R lol 3 CO R2 0 (CH2)2- C-NH-CH2- CH O ,P(OR 2 O Forme 5 avec: R1 = H, ou alkyles inférieurs (C7 à C6) R2 = alkyles inférieurs (C7 à C6) pour la forme 5; benzyle pour la forme 4; R3, R4, R5: alkyles inférieurs (C1 à C6); ainsi que leurs acides et sels dérivés. 7. Composés gem-diphosphoniques,utilisables notamment comme produits intermédiaires, de formule: avec: R1 = H, ou alkyles inférieurs (C1 à C6) R3, R4, R5 = alkyles inférieurs (C7 à C6) R2 = allyles inférieurs (C1 à C6) pour 7a, benzyle pour 6a; ainsi que leurs acides et sels dérivés. 8. Composés gem-diphosphoniques, utilisables notamment comme produits intermédiaires, de formule: avec: R = absent ou R2 = H, ou alkyles inférieurs (C1 à C6) ; benzyle quand R présent R3, R4, R5: alkyles inférieurs (C1 à C6); ainsi que leurs acides et sels dérivés. 9. Procédé d'obtention d'un composé (9), selon la revendication s, dans le cas où R R caractérisé en ce qu'il consiste à: - protéger la fonction amine de l'ester a - benzylique de l'acide glutamique, sous forme d'uréthane - procéder au couplage peptidique dudit amino-acide avec des dérivés 2-amino-4,4-bis (dialkylphosphono)butyrate d'alkyles (11) en présence d'un agent de couplage tel que le dicyclohexyloerbodiimide, - déprotéger la fonction amine par acidolyse dans l'acide trifluoracétique. 10. Procédé d'obtention d'un composé (10) selon la revendication 8, dans le cas où R est absent, caractérisé en ce qu'il consiste à réaliser une addition nucléophilede type Michaël d'un amide primaire (13) sur le vinylidène disphophonatede tétraalkyle (14). 11. Procédé d'obtention d'un composé (4a, Sa; 4b, 5b) selon la revendication 6 caractérisé en ce qu'il consiste à réaliser une condensation peptidique entre les synthons diphosphoniques de la revendication8 et l'acide 4-amino-4- déoxy aza-ptéroique ou ses dérivés alkylés en 10; ou l'acide 4-amino-4 déoxy déaza-N-1O ptéroïque ou ses dérivés alkylés en 10 respectivement. 12. Procédé d'obtention d'un composé (4a,5a) selon la revendication 6, avec X = caractérisé en ce qu'il consiste à réaliser une substîtutionnucléophileen présence de solvant sur un compose selon la revendication 7 avec le 6-bromométhyl-2,4-diaminoptéridine(8). 13. Procédé d'obtention d'un composé selon la revendication 3 caractérisé en ce qu'il consiste à obtenir au moins un des produits intermédiaires des revendications 6 à 8 en utilisant au moins un des procedes des revendications 9 à 12.