Brevet FR2660323A1 — publié le 19911004

i La présente invention est relative à un dispo- sitif de culture cellulaire ou bioréacteur en masse et en continu permettant notamment l'obtention améliorée des produits desdites cultures. On connaît actuellement plusieurs méthodes et dispositifs de culture cellulaire. Les cellules peuvent être mises en culture sur une surface lisse telle que verre ou plastique approprié (boîtes ou tubes) De telles cultures ne permettent pas de réaliser une croissance cellulaire importante et nécessitent de grandes quantités de nutriments. En particulier, les Brevets US 3 883 393 (USA), 3 997 396 (MONSANTO Co), 4 087 327, 4 201 845 (MONSANTO Co), 4 220 725 -(USA) et 4 391 912 décrivent des systèmes dans lesquels les cellules sont cultivées sur ou à proximité de fibres creuses. Le Brevet 4 201 845 (MONSANTO Co) décrit notamment un réacteur de culture cellulaire comprenant une chambre de culture dans laquelle une couche de fibres creuses pour l'alimentation gazeuse est prise en sandwich entre une membrane microporeuse pour la distribution du milieu de culture et une membrane microporeuse servant de barrière à la diffusion des cellules à l'extérieur de ladite chambre Le flux de milieu est dirigé vers le haut et transversalement au plan des fibres. Ce dispositif présente cependant un certain nombre d'inconvénients et notamment des risques de colma- tage de la membrane distributrice de milieu de culture, en raison de l'attaque frontale de ladite membrane, lequel colmatage entraîne des inégalités locales de débit et une non homogénéité de la distribution des nutriments. Dans certains de ces dispositifs, et notamment dans le dispositif MONSANTO, la distribution et la répar- tition du milieu vers les cellules n'est pas réalisée de façon homogène sur toute la surface de la plaque, pouvant entraîner des disparités difficiles à maîtriser dans le métabolisme des cellules, suivant leur position dans le dispositif et des difficultés d'extrapolation de taille du dispositif, notamment dans le cadre d'une réalisation industrielle. La Demanderesse s'est en conséquence donné pour but de pourvoir à un bioréacteur ou dispositif de culture cellulaire qui répond mieux aux besoins de la pratique que les dispositifs de l'Art antérieur, notam- ment en ce qu'il permet la production de produits de cul- ture, en continu et en masse, à partir de cultures main- tenues à haute concentration cellulaire supérieure à 5.108/cm 3, sur une longue période sans entraîner de col- matage c'est-à-dire sans diminution du débit de nutri- ments dans tout l'espace cellulaire et l'utilisation d'un espace cellulaire de dimension importante, mieux adapté à l'échelle industrielle. La présente invention a pour objet un disposi- tif de culture cellulaire ou bioréacteur notamment pour la production de métabolites, du type comprenant un es- pace de culture cellulaire dans lequel les cellules sont confinées dans un milieu liquide, -ledit espace étant dé- limité par des parois dont au moins trois sont sélective- ment perméables, la première au milieu nutritionnel frais, la seconde aux fluides gazeux et la dernière au milieu nutritionnel usé et des moyens de circulation des fluides dans ledit dispositif, caractérisé en ce que la première paroi est constituée par une nappe de tubes à paroi perméable au milieu nutritionnel frais, lesdits tubes étant montés en parallèle entre un collecteur d'entrée et un collecteur de sortie dans un circuit en boucle fermée incluant des moyens d'apport dudit milieu nutritionnel frais et étant parcourus chacun de bout en bout par un débit de milieu frais plusieurs fois supé- rieur à celui traversant sa paroi. On entend, au sens de la présente invention, par milieu frais, un milieu riche en nutriments, fourni aux cellules, pour leurs besoins et leur croissance. On entend par milieu usé, un milieu appauvri en nutriments et contenant les métabolites excrétés par lesdites cellules. Selon une caractéristique avantageuse de ce dispositif, le débit du milieu parcourant chaque tube correspond à une vitesse d'écoulement, de l'ordre du dm/s, qui garantit la filtration tangentielle du milieu frais à travers la paroi desdits tubes. Selon une autre caractéristique dudit disposi- tif, lesdits tubes sont rigides et de diamètre de l'ordre du centimètre, leur paroi ayant des pores d'un diamètre permettant le passage des molécules de nutriments et notamment le passage des molécules d'un poids moléculaire supérieur à 150 k Da et présentent une perte de charge à travers la paroi d'environ 200 mbars. De tels tubes ont l'avantage d'être stérili- sables et permettent d'obtenir une homogénéité de distri- bution des nutriments, avec une dispersion maximale de l'ordre de 10 %. Selon encore une autre caractéristique avanta- geuse de ce dispositif, le circuit en boucle est maintenu sous une pression appropriée, calculée de telle sorte, qu'elle permette d'obtenir le rapport recherché entre le débit circulant et le débit traversant et de vaincre la pression capillaire. Selon une autre caractéristique avantageuse de ce dispositif, la seconde paroi est constituée par un en- semble de capillaires à paroi perméable aux gaz, disposés à intervalle sensiblement égaux pour former, de l'un et/ou de l'autre côté de la nappe de tubes, un/plusieurs sous-ensembles à distribution homogène pour les échanges gazeux avec les cellules. Lesdits sous-ensembles de capillaires peuvent être simples, c'est-à-dire sous la forme d'une seule couche ou bien être eux-même formés de plusieurs couches superposées de capillaires parallèles entre eux, les ca- pillaires d'une couche régnant au droit des intervalles entre capillaires des deux couches adjacentes. Les cellules qui peuvent être mises en culture dans le dispositif de la présente invention sont notam- ment les microorganismes et les cellules animales ou vé- gétales procaryotes et eucaryotes Elles peuvent éven- tuellement avoir été modifiées; elles peuvent éventuel- lement être fixées sur un support. Lesdits capillaires diffusent le gaz qui les traversent (air, 02, N 2, CO, CO 2 etc) de manière homo- gène à l'intérieur de l'espace de culture cellulaire. Selon une disposition préférée de cette carac- téristique, lesdits capillaires sont des fibres creuses de diamètre de l'ordre du millimètre, à paroi hydrophobe. La multiplication de la surface de distribu- tion des gaz et notamment de l'oxygène entraîne une dimi- nution des distances de diffusion et permet ainsi, grâce à une oxygénation plus intense et plus homogène sans stress mécanique, une viabilité nettement améliorée des cellules ainsi qu'une évacuation du C 02 produit par les cellules. De manière inattendue, le mode d'alimentation par filtration tangentielle au travers de tubes poreux évite les problèmes de colmatage, assure une distribution homogène du milieu dans l'espace de culture, entraînant ainsi une meilleure productivité et homogénéité de l'ensemble des cellules. De plus, l'apport de nutriments à l'aide de tubes permet de simplifier et de maîtriser l'hydrodynami- que globale du bioréacteur et la mise en place d'un réseau de fibres d'aération permet d'apporter directement l'oxygène au milieu des cellules dans un espace cellu- laire important et ainsi de commander, de façon indépen- dante l'apport de nutriments, l'oxygénation et l'extraction des produits de la culture cellulaire. Selon une autre caractéristique avantageuse de ce dispositif, la troisième paroi comprend au moins un tamis micronique constituant chaque paroi aval de l'espace de culture cellulaire, pour assurer le confine- ment des cellules en permettant la sortie du milieu usé. Selon une disposition préférée de cette carac- téristique, ledit tamis micronique recouvre au moins chaque face libre aval de l'ensemble des capillaires. Selon une autre disposition préférée de cette caractéristique, ladite troisième paroi est une membrane poreuse comprenant des pores d'un diamètre compris entre 1 et 10 pm et avantageusement sélectionnée parmi les mem- branes organiques et les membranes métalliques. Selon une autre caractéristique avantageuse d'un dispositif conforme à l'invention, les capillaires sont orientés parallèlement au plan de la nappe des tubes. Selon une disposition préférée de cette carac- téristique, les capillaires sont parallèles aux tubes. Selon une modalité préférée de cette disposi- tion, lesdits capillaires sont aussi répartis dans l'espace cellulaire libre entre les tubes. Selon une autre caractéristique avantageuse d'un dispositif conforme à l'invention, la nappe de tubes et chaque ensemble ou sous-ensemble de capillaires sont séparés par un tamis micronique semblable au tamis micro- nique formant la troisième paroi dudit dispositif. Selon une autre caractéristique avantageuse d'un dispositif conforme à l'invention, il constitue un module unilatéral, comprenant un seul ensemble de capil- laires situé d'un côté de la nappe de tubes et au moins un tamis micronique aval ou de sortie. Selon encore une autre caractéristique avanta- geuse d'un dispositif conforme à l'invention, il consti- tue un module bilatéral ou symétrique, comprenant au moins deux sous-ensembles de capillaires s'étendant res- pectivement de chaque côté de la nappe de tubes et au moins un tamis micronique aval ou de sortie, recouvrant chaque sous-ensemble de capillaires. Selon encore une autre caractéristique avanta- geuse d'un dispositif conforme à l'invention, il comprend au moins deux modules symétriques superposés, les espaces de sortie et tamis microniques intermédiaires étant éven- tuellement supprimés. Ledit dispositif peut également comprendre une enceinte traversée par au moins deux jeux de nappes de tubes, l'espace entre les tubes et les tamis microniques d'extrémité étant empli de capillaires parallèles auxdits tubes. En variante, le dispositif conforme à l'invention comprend une enceinte traversée par au moins deux nappes de tubes, formant en alternance des parois d'entrée et de sortie du milieu et dont l'espace entre les tubes est empli de capillaires parallèles auxdits tubes, les tubes de sortie du milieu ayant les propriétés d'un tamis micronique. Le bioréacteur conforme à l'invention permet de résoudre un certain nombre de problèmes: cellules augmentation de productivité et bonne utilisation du volume de l'espace cellu- laire; diminution des risques d'endommagement; augmentation de la viabilité et concen- tration cellulaire augmentée et plus homogène, par diminution de la distance de diffusion de l'oxygène et par un apport homogène denutriments; possibilité de cultiver des cellules fi- xées ou des cellules libres. nutriments diminution des besoins en sérum, du fait de la forte concentration cellulaire, ce qui entraîne une diminution du coût; boucle de recirculation des nutriments; limitation des risques de colmatage à l'alimentation, par l'application d'une filtration tangentielle. production le dispositif conforme à l'invention a l'a- vantage d'être particulièrement bien adapté aux applications industrielles, nécessitant des facilités d'extrapolation en taille. Outre les dispositions qui précèdent, l'invention comprend encore d'autres dispositions, qui ressortiront de la description qui va suivre, qui se ré- fère aux dessins annexés dans lesquels: la figure 1 représente une vue schématique d'ensemble d'un bioréacteur conforme à l'invention; la figure 2 représente une vue schématique du bioréacteur en coupe orthogonale par rapport aux tubes; la figure 3 représente une vue en coupe du bioréacteur selon la ligne 3-3 de la figure 2; la figure 4 est une vue en coupe de la zone d'alimentation selon la ligne 4-4 de la figure 2; les figures 5 a à 5 g représentent schémati- quement des modes de réalisation différents du bioréac- teur conforme à l'invention. Il doit être bien entendu, toutefois, que ces dessins et les parties descriptives correspondantes, sont donnés uniquement à titre d'illustration de l'objet de l'invention, dont ils ne constituent en aucune manière une limitation. On se réfère d'abord aux figures 1 à 4, qui illustrent des modes de réalisation du bioréacteur conforme à l'invention. La figure 1 représente une vue schématique d'un bioréac- teur conforme à l'invention, comprenant dans un carter D délimité par un espace de culture cellulaire X: un premier tamis micronique Ml qui assure le confi- nement des cellules dans l'espace X mais permet le passage du milieu usé à récupérer, un premier sous-ensemble de capillaires C qui assu- rent le passage des fluides gazeux et qui sont dispo- sés entre le tamis Ml et une nappe de tubes T, paral- lèles entre eux et qui assurent le passage du milieu nutritif frais vers les cellules, un second tamis micronique M 2 qui assure le confi- nement des cellules dans l'espace X, à l'autre extré- mité dudit espace et un deuxième sous-ensemble de capillaires C, disposé entre le tamis M 2 et la nappe de tubes T. Les tubes T sont montés en parallèle entre deux collecteurs 42 et 43 (figure 4) alimentés suivant un circuit en boucle fermée incluant une tubulure d'entrée 10 (figure 1), 40 (figure 4) d'apport du milieu nutri- tionnel frais et une tubulure 11 (figure 1), 41 (figure 4) de sortie dudit milieu frais à recycler, lesquelles tubulures sont reliées entre elles par une canalisation 16 (figure 1). Des conduits 12, et 122 de sortie du milieu usé (figures 1 et 3), débouchant en aval des tamis M 1 et M 2 permettent d'extraire ledit milieu usé collecté entre les tamis et le carter D. Des moyens d'entrée Ge et de sortie Gs des fluides gazeux (figure 2) sont reliés respectivement à un volume d'alimentation 45 des capillaires C et un volume 46 d'échappement des capillaires. Dans la réalisation illustrée à la figure 1 les capillaires C sont, dans le même plan, perpendiculaires aux tubes T et sont disposés en deux sousensembles, de part et d'autre de la nappe de tubes T; le dispositif comprend en outre, associé à la canalisation 16 de circulation de milieu frais, des moyens de mise sous pression 14, 15 dudit milieu frais. Le milieu frais sous pression circulant dans les tubes T, entre l'entrée 10 et la sortie 11, est recyclé en perma- nence dans une boucle alimentée à partir d'un réservoir 13 branché sur la canalisation 16; une filtration tangentielle dudit milieu frais à travers lesdits tubes T dans l'espace de culture cellulaire X peut ainsi être as- surée. Dans une réalisation avantageuse du dispositif de l'invention, le moyen 14 est réalisé par une vanne d'étranglement introduisant une perte de charge et le moyen 15 est ménagé par une pompe. Dans une variante, le bioréacteur conforme à l'invention peut également comprendre les moyens sui- vants, non représentés à la figure 1: en amont de l'entrée gazeuse Ge, on peut trouver un filtre stérile; l'espace de culture cellulaire X peut être associé à un dispositif de régulation de la température; la boucle de recirculation de milieu frais (tubulures 10 et 11) et les conduits d'évacuation de milieu usé (moyens 12, et 122) peuvent être associés à des réservoirs appropriés. Le fonctionnement de tels bioréacteurs est le suivant Après stérilisation du carter D et réglage de la température, du p H, de la concentration en oxygène, du débit en milieu approprié additionné en sérum, on inocule une quantité appropriée de cellules dans l'espace de cul- ture cellulaire X et l'on introduit le milieu frais par le moyen d'apport 40 vers le collecteur 42 (figure 4) On surveille quotidiennement la concentration en nutriments du milieu frais ainsi que les paramètres précisés ci- dessus (température, p H, concentration en 02) Le milieu frais s'écoule à travers les tubes T à une vitesse qui garantit la filtration tangentielle du milieu frais à travers les parois desdits tubes et assure ainsi une ho- mogénéité de l'alimentation des cellules inoculées situées dans l'espace de culture cellulaire X Le milieu frais non utilisé et récupéré à la sortie 41, par l'intermédiaire du collecteur 43, est recyclé en perma- nence dans une boucle sous pression alimentée à partir d'un réservoir 13 branché sur la canalisation 16 et ali- mente à nouveau les cellules Le milieu usé est, pour sa part, récupéré avec les métabolites produits par les cel- lules au niveau des conduits de sortie 12, et 122 (figure 3) et traité ultérieurement de manière appropriée. Simultanément, les cellules sont alimentées en oxygène par l'intermédiaire des capillaires C, répartis uniformément dans l'espace laissé libre par les tubes T, dans l'espace délimité par les tamis microniques d'extrémité, à partir d'une arrivée gazeuse Ge (figure 2) Les capillaires diffusent le gaz de l'intérieur de chaque capillaire vers les cellules mais s'opposent à la diffusion de liquide à l'intérieur des- dits capillaires La sortie Gs des gaz permet également l'évacuation du C 02 produit par les cellules en culture. il la sortie de gaz Gs permet d'évacuer l'oxygène non utilisé et le C 02 produit par les cellules en culture. Un tel bioréacteur d'un volume qui peut varier de 200 cm 3 à 10 1, permet de réaliser des cultures en continu sur une période de plusieurs mois. Dans une réalisation préférée mais non limita- tive dudit bioréacteur: l'espace de culture cellulaire X a 25 mm de haut et est délimité par deux tamis microniques (Ml et M 2, figure 1) de 250 x 400 mm. les tubes T d'alimentation en milieu frais, sont d'un diamètre de l'ordre de 1 cm, sont rigides et ont des pores d'un diamètre permettant le passage de molécules de nutriments d'un poids moléculaire supérieur à 150 k Da Ces tubes sont dans la réalisation représentés et ce de manière non limitative, en graphite compacté recouvert d'une couche sensible permettant le contrôle du diamètre des pores, ont été préalablement stérilisés et la mise sous pression du milieu frais entraîne une perte de charge, lorsque le milieu frais traverse les parois des tubes T, supérieure à 200 mbars. les capillaires C d'alimentation en fluides gazeux, sous la forme d'une pluralité de fibres creuses poreuses espacées régulièrement dans l'espace cellulaire X, d'un diamètre de 2,6 mm dans la réalisation représen- tée, sont situés de part et d'autre desdits tubes T, orientés parallèlement au plan des tubes T et perpendicu- laires à ceux-ci dans ledit plan. Après stérilisation du carter D, on inocule, par exemple et ce de manière non limitative, 2 106 d'hybridomes murins V 0208 qui produisent un anticorps monoclonal de type Ig Gl/ml de volume utile Les condi- tions expérimentales sont alors les suivantes p H de croissance 7,2; p H de production d'anticorps 7,05; concentration en 02 dissous, environ 40 %; température 370 C. Le milieu frais est ensuite introduit par la tubulure d'entrée 40 vers le collecteur 42 (figure 4) et comprend par exemple du glucose (concentration résiduelle toujours supérieure à 0,8 g/l), de la glutamine ( 2 à 4 %), des acides aminés ( 1 % dans le bioréacteur), un mi- lieu RPMI 1640 (on diminue le taux de recirculation lorsque la concentration en lactate est supérieure ou égale à 18 m M) et du sérum de veau foetal à 10 % dont on diminue le taux à partir du 20 ème ou du 25 ème jour jusqu'à moins de 2 % On dose quotidiennement le glucose et le lactate et régulièrement on dose la glutamine et les acides aminés et on mesure le p H Ce milieu s'écoule dans les tubes T à une vitesse qui garantit la filtration tangentielle du milieu frais ci-dessus défini à travers les parois desdits tubes à une vitesse de l'ordre de gm/s et assure une homogénéité de l'alimentation des cellules situées dans l'espace de culture cellulaire X. De manière préférée, la vitesse d'écoulement à l'intérieur des tubes est de l'ordre de 1 dm/s et la pression est choisie de manière à obtenir le rapport recherché (par exemple 10:1) entre le débit circulant et le débit traversant la paroi du tube. Le milieu usé est récupéré aux sorties 12, et 122 et comprend notamment dans la réalisation représentée les anticorps monoclonaux produits par lesdits hybri- domes. On se réfère maintenant aux modes de réalisa- tion illustrés aux figures 5 a à 5 g. La figure 5 a illustre un mode de réalisation du bioréacteur conforme à l'invention, comprenant un car- ter D qui enferme une nappe de tubes T Entre la nappe de tubes T et le tamis micronique M, est disposé un ensemble de capillaires, disposés perpendiculairement aux tubes T, dans le même plan et formant ainsi un "module unilaté- rai". La figure 5 b illustre un autre mode de réa- lisation du bioréacteur conforme à l'invention, pour un "module bilatéral" ou symétrique, qui comprend deux sous- ensembles de capillaires C s'étendant respectivement de chaque côté de la nappe de tubes T, deux tamis micro- niques d'extrémité Ml et M 2 et deux tamis microniques M'1 et M'2 semblables aux tamis microniques Ml et M 2 et sépa- rant chaque sous-ensemble de capillaires C de la nappe de tubes T. Les membranes M'1 et M'2 permettent le confi- nement des cellules dans l'espace o la distribution d'oxygène est homogène (près des capillaires et évitent le colmatage des tubes). La figure 5 c illustre un mode de réalisation d'un bioréacteur conforme à l'invention dans lequel deux modules symétriques sont superposés entre deux tamis d'extrémité Mi et M 2, lequel bioréacteur comprend suc- cessivement un premier sous-ensemble de capillaires C, un tamis micronique M'1, une nappe de tubes T, un tamis micronique M'2, un deuxième sous-ensemble de capillaires C, un tamis micronique Mia, un espace de sortie intermé- diaire puis un autre module symétrique tel que décrit ci- dessus. La figure 5 d illustre un mode de réalisation dans lequel on trouve un empilement de plusieurs modules symétriques comme visible à la figure 5 c et dont l'espace de sortie intermédiaire est supprimé. Aux figures 5 a à 5 d ci-dessus, les capillaires C sont perpendiculaires aux tubes T dans le plan de ceux- ci, alors qu'aux figures 5 e à 5 g ci-après, les tubes et les capillaires sont parallèles. La figure 5 e illustre schématiquement un module bilatéral ou symétrique qui comprend un ensemble de capillaires C emplissant tout l'espace laissé libre par la nappe de tubes T, entre les tamis microniques Mi et M 2 d'extrémité. La figure 5 f illustre schématiquement un mode de réalisation dans lequel une enceinte E est traversée par plusieurs nappes de tubes T, T' Les nappes de tubes T sont inclus dans les boucles fermées de recirculation du milieu frais. Ces nappes de tubes T' permettent l'évacuation du milieu usé, les tubes T' ayant les propriétés d'un tamis micronique M L'enceinte E comprend en outre un ensemble de capillaires C parallèles aux tubes T, T', qui emplissent l'ensemble de l'espace de culture cellulaire X entre les tubes T et T' Les entrées 50 et les sorties 51 sont reliées aux tubes T et les sorties 52 sont reliées aux tubes T'. La figure 5 g illustre un mode de réalisation dans lequel une enceinte E est traversée par plusieurs nappes de tubes T 1, T 2, T 3, T 4 dans lesquels circule en boucle fermée le milieu nutritif frais et est emplie d'un ensemble de capillaires C parallèles auxdits tubes et comprend en outre deux tamis microniques M 1 et M 2 d'extrémité. Comme le montrent les figures 5 f et 5 g et comme cela est prévu pour toutes les variantes, la ou les nappes de tubes T sont alimentées en milieu frais et les capillaires C sont alimentés en gaz approprié. Ainsi que cela ressort de ce qui précède, l'invention ne se limite nullement à ceux de ses modes de réalisation et d'application qui viennent d'être décrits de façon plus explicite; elle en embrasse au contraire toutes les variantes qui peuvent venir à l'esprit du technicien en la matière, sans s'écarter du cadre, ni de la portée de la présente invention. REVENDICATIONS 1 ) Dispositif de culture cellulaire ou bio- réacteur pour la production de métabolites, du type com- prenant un espace de culture cellulaire (X) dans lequel les cellules sont confinées dans un milieu liquide, ledit espace étant délimité par des parois dont au moins trois sont sélectivement perméables, la première au milieu nutritionnel frais, la seconde aux fluides gazeux et la dernière au milieu nutritionnel usé et des moyens de cir- culation des fluides dans ledit dispositif, caractérisé en ce que la première paroi est constituée par une nappe de tubes (T) à paroi perméable au milieu nutritionnel frais, lesdits tubes étant montés en parallèle entre un collecteur d'entrée ( 42) et-un collecteur de sortie ( 43) dans un circuit en boucle fermée ( 10,11,16), incluant des moyens d'apport ( 10; 40) dudit milieu nutritionnel frais et étant parcourus chacun de bout en bout par un débit de milieu frais plusieurs fois supérieur à celui traversant sa paroi. 2 ) Dispositif selon la revendication 1, ca- ractérisé en ce que le débit du milieu parcourant chaque tube (T) correspond à une vitesse d'écoulement, de l'ordre du dm/s, qui garantit la filtration tangentielle du milieu frais à travers la paroi desdits tubes. 3 ) Dispositif selon la revendication 1 ou la revendication 2, caractérisé en ce que lesdits tubes (T) sont rigides et de diamètre de l'ordre du centimètre, leur paroi ayant des pores d'un diamètre permettant le passage des molécules de nutriments. 4 ) Dispositif selon l'une quelconque des re- vendications 1 à 3, caractérisé en ce que le circuit en boucle ( 10,11,16) est maintenu sous une pression appro- priée, calculée de telle sorte, qu'elle permette d'obtenir le rapport recherché entre le débit circulant et le débit traversant et de vaincre la pression capil- laire. ) Dispositif selon l'une quelconque des re- vendications 1 à 4, caractérisé en ce que la seconde paroi est constituée par un ensemble de capillaires (C) à paroi perméable aux gaz, disposés à intervalle sen- siblement égaux pour former, de l'un et/ou de l'autre côté de la nappe de tubes (T), un/plusieurs sous- ensembles à distribution homogène pour les échanges gazeux avec les cellules. 6 ) Dispositif selon la revendication 5, caractérisé en ce que lesdits sous-ensembles de capil- laires peuvent être simples, c'est-à-dire sous la forme d'une seule couche. 7 ) Dispositif selon la revendication 5, caractérisé en ce que lesdits sous-ensembles de capil- laires peuvent être eux-même formés de plusieurs couches superposées de capillaires parallèles entre eux, les capillaires d'une couche régnant au droit des intervalles entre capillaires des deux couches adjacentes. 8 ) Dispositif selon l'une quelconque des revendications 5, 6 ou 7, caractérisé en ce que lesdits capillaires sont des fibres creuses de diamètre de l'ordre du millimètre, à paroi hydrophobe. 9 ) Dispositif selon l'une quelconque des revendications 1 à 8, caractérisé en ce que la troisième paroi comprend au moins un tamis micronique constituant chaque paroi aval de l'espace de culture cellulaire, pour assurer le confinement des cellules permettant la sortie du milieu usé. ) Dispositif selon l'une quelconque des revendications 5 à 8 et 9, caractérisé en ce que ledit tamis micronique (M) recouvre au moins chaque face libre aval de l'ensemble des capillaires. 11 ) Dispositif selon l'une quelconque des revendications 1 à 10, caractérisé en ce que ladite troi- sième paroi est une membrane poreuse comprenant des pores d'un diamètre compris entre 1 et 10 pm. 12 ) Dispositif selon l'une quelconque des re- vendications 1 à 11, caractérisé en ce que les capil- laires (C) sont orientés parallèlement au plan de la nappe des tubes (T). 13 ) Dispositif selon la revendication 12, caractérisé en ce que les capillaires (C) sont parallèles aux tubes (T). 14 ) Dispositif selon la revendication 13, caractérisé en ce que lesdits capillaires (C) sont aussi répartis dans l'espace cellulaire libre entre les tubes (T). ) Dispositif selon l'une quelconque des re- vendications 1 à 13, caractérisé en ce que la nappe de tubes (T) et l'ensemble ou sous-ensembles de capillaires (C) sont séparés par un tamis micronique (M'1, M'2) sem- blable au tamis micronique (M) formant la troisième paroi dudit dispositif. 16 ) Dispositif selon l'une quelconque des re- vendications 1 à 15, caractérisé en ce qu'il constitue un module unilatéral, comprenant un seul ensemble de capil- laires (C) situé d'un côté de la nappe de tubes (T) et au moins un tamis micronique aval (ou de sortie) (M). 17 ) Dispositif selon l'une quelconque des re- vendications 1 à 15, caractérisé en ce qu'il constitue un module bilatéral ou symétrique, comprenant au moins deux sous-ensembles de capillaires (C) s'étendant respec- tivement de chaque côté de la nappe de tubes (T) et au moins un tamis micronique aval (ou de sortie) (Ml, M 2), recouvrant chaque sous-ensemble de capillaires (C). 18 ) Dispositif selon la revendication 17, ca- ractérisé en ce qu'il comprend au moins deux modules sy- métriques superposés, avec suppression éventuelle des es- paces de sortie et tamis microniques intermédiaires. 19 ) Dispositif selon la revendication 17, ca- ractérisé en ce qu'il comprend une enceinte (E) traversée par au moins deux jeux de nappes de tubes (T,T'), formant en alternance des parois d'entrée et de sortie et dont l'espace entre les tubes est empli de capillaires (C) pa- rallèles auxdits tubes, les tubes (T') ayant les pro- priétés d'un tamis micronique (M). 20 ) Dispositif selon la revendication 17, caractérisé en ce qu'il comprend une enceinte (E) tra- versée par au moins deux nappes de tubes (T) et dont l'espace entre les tubes (T) est empli de capillaires (C) parallèles auxdits tubes, entre deux tamis microniques (Ml, M 2) d'extrémité.