Brevet FR2656331A1 — publié le 19910628

PROCEDE DE CULTURE CELLULAIRE PERMeTTAetT puzzle LE TEST NOTAMMENT DE SUBSTANCES LIPOSOLUBLES ET DE PRODUITS FINIS La présente invention concerne un procédé permettant d'évaluer la cytotoxicité et/ou l'efficacité de substances ou de préparations notamment pharmaceutiques, cosmétiques ou chimiques les contenant, indépendamment de leur forme galénique et de leurs caractéristiques physico-chimiques sur des cellules en culture. Depuis quelques années, les cultures cellulaires connaissent un développement important en toxicologie et en pharmacologie. Les raisons sont à la fois d'ordre éthique et technologique. Cependant, une des limites les plus importantes à l'emploi des cultures cellulaires, réside dans le fait que, sans l'aide d'artifices de solubilisation adaptés aux produits, donc sans valeur générale, seules les substances hydrosolubles peuvent être testées, compte tenu des techniques habituelles de culture (monocouche cellulaire baignant dans une phase aqueuse). D'où la quasi impossiblité d'étudier des substances liposolubles ou des produits finis, notamment lorsqu'il s'agit d'émulsions. La présente invention a pour but de résoudre ce problème technique en proposant un procédé permettant d'appliquer un produit, soit directement sous sa forme définitive (produit cosmétique fini par exemple, soit en solution dans un véhicule lipidique approprié, soit directement dans l'eau. A cet effet, l'invention a pour objet un procédé de culture cellulaire caractérisé en ce qu'il consiste, en un premier temps, à mettre en incubation un milieu de culture approprié aux cellules à cultiver en plaçant le milieu inoculé dans une chambre de culture dont la partie inférieure est constituée d'une membrane plane poreuse et en mettant en contact la face externe de la membrane avec un milieu de suture identique, la durée de mise en contact étant déterminée de façon à obtenir dans la chambre de culture une monocouche cellulaire recouvrant de préférence la totalité de la surface de ladite membrane, puis, en un second temps, à tester le produit à étudier en mettant en contact la face externe de la membrane avec ledit produit, quelles que soient sa forme galénique et ses caractéristiques physico-chimiques. La chambre de culture est une chambre traditionnelle et on peut utiliser comme membrane l'une de celles employées communément en laboratoire. Le milieu de culture choisi en fonction des cellules humaines ou animales à cultiver et du produit à tester est disposé dans la chambre de culture et inoculé et la chambre est placée par exemple dans une cupule réceptrice contenant le même milieu de culture. L'unité de culture constituée par la chambre et la cupule est mise en incubation jusqu'à ce que l'on obtienne de préférence une monocouche cellulaire recouvrant la totalité de la surface de la face interne de la membrane. La chambre de culture est alors retirée de la première cupule et transférée dans une seconde cupule contenant le produit à étudier, ce dernier étant en contact avec la face externe de la membrane. Ainsi, les cellules développées sur la face interne de la membrane se trouvent en contact, à travers la membrane et par leur pôle basal, avec la substance à étudier et, par leur pôle apical, avec du milieu de culture assurant des conditions normales de croissance. La substance à étudier peut avoir une forme galénique et des caractéristiques physico-chimiques quelconques. Ainsi, la substance peut revêtir sa forme galénique définitive et/ou être en solution dans un véhicule lipidique approprié, ou bien encore en solution dans de l'eau. Le procédé de l'invention permet d'étudier l'action des substances, soit en déterminant des courbes effet/temps en faisant varier le temps de contact dans le cas de produits finis dont il est important de ne pas modifier la composition finale, soit en déterminant des courbes dose/action dans le cas de principes actifs en solution dans un véhicule lipidique ou aqueux. REVENDICATION Procédé de culture cellulaire caractérisé en ce qu'il consiste, en un premier temps, à mettre en incubation un milieu de culture approprié aux cellules à cultiver en plaçant le milieu inoculé dans une chambre de culture dont la partie inférieure est constituée d'une membrane plane poreuse et en mettant en contact la face externe de la membrane avec un milieu de culture identique, la durée de mise en contact étant déterminée de façon à obtenir dans la chambre de culture une monocouche cellulaire recouvrant de préférence la totalité de la surface de ladite membrane, puis, en un second temps, à tester le produit à étudier en mettant en contact la face externe de la membrane avec ledit produit, quelles que soient sa forme galénique et ses caractéristiques physico-chimiques.