Brevet FR2652001A1 — publié le 19910322

La présente invention concerne l'utilisation de l'acide rosmarinique pour la préparation d'une composition dermato-cosmétique agissant en particulier à la fois comme filtre solaire et comme anti-inflammatoire et présentant par elle-même des propriétés de conservation. L'acide rosmarinique est un ester de l'acide caféique et de l'acide phényl lactique, dont la formule générale déterminée par cristallisation est C18H16 8, 2H20. On peut ltextraire de nombreuses plantes de la famille des Lamiaceae, en particulier des genres : Melissa, Mentha, Salvia, Lavandula, Satureia, Prunella, Lycopus, Origanum, Thymus, Rosmarinus, Perilla, Glechoma.... Ces plantes en renferment 1 à 3 % dans la matière sèche. On en trouve également chez des Ombellifères, des Boraginaceae, des Hydrophyllaceae, des Acanthaceae et chez certaines fougères. L'intérêt pharmacologique de l'acide caféique (ou acide 3,4-dihydroxycinnamique) et de plusieurs dérivés naturels de celui-ci a déjà fait l'objet de nombreuses études. Ainsi Kimura et al (Planta Medica, 1984, 473-477) ont étudié l'effet de divers tanins et en particulier de dérivés de l'acide caféique et caféoylquinique extraits de plantes de l'espèces Artemisia et ont montré leur effet inhibiteur sur la peroxydation des lipides dans les mitochondries et les microsomes de foie de rat. L'action inhibitrice de ces molécules sur les lipoxygénases participant au métabolisme des leucotriènes et de l'acide arachidonique et leur utilisation potentielle dans le traitement d'affections inflammatoires comme l'asthme ont aussi été publiées par Kimura et Okuda (J. of natural Products, 1987, 50, 392-399). L'activité de différents dérivés de tanins caféiques étant multiple et variable en fonction de leur structure, il est intéressant de rechercher de nouvelles molécules de cette famille, dans les plantes médicinales ou autres, et de rechercher de nouvelles activités pharmacologiques ou des performances supérieures ou de nouvelles applications, pour les dérivés déjà connus. Ainsi le Demandeur a mis en évidence un certain nombre de propriétés de l'acide rosmarinique qui permettent de lui trouver une application particulièrement intéressante en dermato-cosmétologie. Le Demandeur a en effet observé que le spectre d'absorption des rayons U.V.de l'acide rosmarinique correspond a la zone la plus nocive pour le peau des UV-B du rayonnement solaire (297-308 nm). D'autre part les propriétés anti-inflammatoires de l'acide rosmarinique dues à llinhibition des lipoxygénases dans le métabolisme des leucotriènes et de l'acide arachidonique sont bien connues et font déjà l'objet d'applications thérapeutiques. En plus de ces propriétés, le Demandeur a mis en évidence, dans plusieurs modèles in vitro, l'action protectrice de l'acide rosmarinique contre l'action toxique de diverses substances, toxicité qui est généralement attribuée à la libération de radicaux libres. En particulier sur des hépatocytes de lapin en culture primaire, en présence de générateurs de radicaux libres et par comparaison avec des molécules connues comme "piégeurs" efficaces de ces radicaux libres, comme l'a-tocophérol et les flavonoides, l'acide rosmarinique apparaît comme particulièrement efficace. La présente invention concerne donc une composition dermato-cosmétique comprenant comme principe actif l'acide rosmarinique ou un de ses dérivés physiologiquement acceptable, en association avec un excipient inerte et éventuellement d'autres substances actives. Selon un mode préféré de l'invention l'excipient sera constitué de liposomes, ceux-ci pouvant favoriser la résorption des substances actives. On choisira comme dose efficace placide rosmarinique une concentration comprise entre 0,1 et 5 %. La composition dermato-cosmétique selon la présente invention devrait être particulièrement efficace dans la prévention du vieillissement de la peau et dans le traitement des états inflammatoires qui accompagnent souvent l'érythème solaire. En effet, on sait que dans certaines conditions métaboliques ou perturbations d'origine externe comme l'exposition aux rayons ultra-violets, la réduction de l'oxygène est incomplète et aboutit à la formation de radicaux libres pouvant détériorer les phospholipides des membranes cellulaires. La production de radicaux libres entraine diverses manifestation physiopathologiques qui participent au vieillissement cellulaire et peut être à la cancérogénèse, aux phénomènes inflammatoires et au processus d'intoxication hépatique, ce qui justifie l'utilisation des hépatocytes comme système-modèle in vitro. Le Demandeur a également mis en évidence des propriétés antibactériennes et antifongiques de l'acide rosmarinique. Ainsi la préparation dermato-cosmétique dans laquelle sera utilisé ce composé pourra ne pas être additionnée d'agent conservateur antimicrobien. De plus, les remarquables propriétés de l'acide rosmarinique comme inhibiteur de la peroxydation rendent inutile l'addition d'un agent protecteur du rancissement de l'excipient qui peut être de nature- lipidique en dermatocosmétique, le principe actif jouant lui-même ce rôle. L'exemple suivant illustre l'invention sans toutefois en limiter la portée. Les deux figures illustrent les résultats expérimentaux. La figure 1 représente l'inhibition du radical O2C dans la réaction xanthine-xanthine oxydase la : en présence d'acide rosmarinique (A.R) ou d'acide chlorogénique (A.Cl) lb : en présence d'acide rosmarinique et de myricétine (Myr.). La figure 2 représente la lipoperoxydation par les microsones d'hépatocytes de lapin (dosage du malonyldialdéhyde-MDA). 2a : dans les conditions standard 2b : après action de CC14 2c : après action de H2O2 (T = TéMOIN ; A.C. = acide caféique ; Vit.E = vitamine E ou a-Tocophérol ; A.R. = acide rosmarinique). EXEMPLE A. Extraction et purification de l'acide rosmarinique. Les plantes (par exemple Melissa) sont réduites en poudre demi-fine, dégraissée et dépigmentée par extraction à l'éther de pétrole pendant 72 heures. (Les " eaux-mè re s " de distillation des huiles essentielles de certaines Labiées comme la mélisse et les sauges peuvent aussi être utilisées comme matériau de départ). Cette poudre est mise à macérer dans un mélange éthanol-eau (80:20%) à 500C. Cet infusé est concentré par évaporation de l'alcool, dans un évaporateur rotatif sous vide à 35"C. L'extrait est passé sur colonne de chromatographie sur cellulose et élué avec de l'eau. Les fractions aqueuses contenant l'acide rosmarinique sont rassemblées puis concentrées et décolorées sur du charbon activé, en milieu aqueux. L'extrait est purifié par chromatographie sur résine Séphadex LH20 (Pharmacia). Les fractions éluées contenant l'acide rosmarinique sont rassemblées et concentrées puis mises à cristalliser à 4"C. B. Etude du spectre d'absorption UV de l'acide rosmarinique purifié. Le spectre UV est mesuré sur une solution d'acide rosmarinique dans l'éthanol "pour spectrophotométrie UV". Les résultats suivant sont enregistrées X maximum : g2227 - g2347 - 290 - 330 minimum : 264. C. Etudes des propriétés antibactériennes et antifoncicues. Un certain nombre de dérivés de l'acide caféique présentent des propriétés antimicrobiennes. Ceci a été confirmé pour l'acide rosmarinique qui apparaît comme un des dérivés les plus efficaces. La concentration minimale inhibitrice (CMI) est comprise entre 0,06 et 0,25 mg/ml en milieu gélosé pour les souches bactériennes (d'origines hospitalière) suivantes Staphylococcus aureus (29 souches testées), Streptococcus (3s), Escherichia coli (5s), Klebsiella pneumoniae (6s), Proteus (6s), Providencia (2s), Serratia marescens (ils), Enterobacter cloacae (2s), Pseudomonas aeruginosa (23s), Salmonella (2s). L'activité antifongicide de l'acide rosmarinique a déjà été publiée par le Demandeur (Andary et al. 1981, Cryptogamie, Mycologie 2, 119 - 130) . Des résultats complémentaires montrent que la CMI est de 0,12 mg/ml en milieu gélosé, pour les dermatophytes (d'origine hospitalière) suivantes Microsporum gyspeum, canis et audouini, Trichophyton mentagrophytes, soudanense et rubrum, Epidermophyton floccosum. D. Etude de l'action antiradicalaire de l'acide rosmarinique D.1. Le premier modèle expérimental choisi est l'étude de effet protecteur sur les hépatocytes de lapin intoxiqués au nitroxynyl (10-4 à 10-5 M) ou au tétrachlorométhane (10-5M). L'examen au microscope des hépatocytes intoxiqués montre une dégénérescence des membranes cytoplasmiques et une perte de la morphologie cellulaire qui ne se manifestent pas quand les cellules sont traitées précocément avec l'acide rosmarinique (5.10-5 M). D'autre part, quand on mesure la libération dans le milieu de culture de lactate déshydrogénase (LDH) qui est un marqueur de dégradation des hépatocytes, on observe une inhibition significative en présence d'un excès d'acide rosmarinique. D2. L'activité antioxydante de l'acide rosmarinique a été mise en évidence dans un test d'inhibition du radical superoxyde 020- (réaction xanthinexanthine oxydase) - en comparaison avec un autre dérivé de l'acide caféiquer l'acide chlorogénique : la figure la montre que l'acide rosmarinique est plus efficace - en comparaison avec le flavonoïde considéré comme le plus action, la myricétine (Rafat Husein et al., 1987, Phytochem. 26, 2489 - 2491) : la figure lb montre que l'acide rosmarinique a pratiquement la même efficacité. D.3. L'activité antiradicalaire de l'acide rosmarinique est particulièrement bien mise en évidence dans le test d'inhibition de la lipoperoxydation à partir des microsones hépatiques de lapin. Une réaction de lipoperoxydation se produit lorsqu'on incube des microsomes hépatiques de lapin en présence de NADPK. Les microsomes sont récupérés après traitement des hépatocytes aux ultra-sons. La lipoperoxydation est évaluée par la formation de malonyldialdéhyde (MDA) selon la méthode de Placer et al. (1966, Analyt. Biochem. 16, 359 - 364) . La réaction est effectuée en absence (témoin) et en présence d'acide caféique ou d'acide rosmarinique à la concentration de 5.10-5M ou en présence d'a-tocophérol (Sigma) 5.10-5M (référence d'activité inhibitrice connue). L'oxydation des lipides membranaîres peut être potentialisée par l'addition dans le- milieu réactionnel de molécules productrices de radicauxx libres comme le CC14 (tétrachlorure de carbone) et l'H2O2 (eau oxygénée). Même dans ces conditions, l'activité inhibitrice de l'acide rosmarinique est nettement plus forte que celle de lsa- tocophérol. REVENDICATIONS 1.- Utilisation de l'acide rosmarinique ou d'un de ses dérivés physiologiquement acceptable pour la préparation d'une composition dermato-cosmétique. 2.- Composition dermato-cosmétique obtenue par l'utilisation de l'acide rosmarinique ou d'un de ses dérivés selon la revendication 1, caractérisée en ce qu'elle contient 0,1 à 5 % d'acide rosmarinique ou d'un de ses dérivés en association avec un excipient pharmaceutiquement inerte. 3.- Composition dermato-cosmétique selon la revendication 2, caractérisée en ce que l'excipient est constitué de liposomes. 4.- Composition dermato-cosmétique selon la revendication 2 ou 3, caractérisée en ce qu'elle n'est pas additionnée d'agents conservateurs antibactériens ou antifongiques. 5.- Composition dermato-cosmétique selon l'une quelconque des revendications 2 à 4, caractérisée en ce qu'elle n'est pas additionnée d'agents conservateurs antioxydants. 6.- Composition dermato-cosmétique selon l'une quelconque des revendications 2 à 5, caractérisée en ce qu'elle a un effet protecteur contre l'érythème dû à l'exposition aux rayons ultra-violets B. 7.- Composition dermato-cosmétique selon l'une quelconque des revendications 2 à 6, caractérisée en ce qu'elle a un effet protecteur contre les réactions inflammatoires dues à la libération de radicaux libres, provoquées par l'exposition aux rayons ultra-violets.