Brevet FR2649719A1 — publié le 19910118

PROCEDE DE PROTECTION ET DE CONSERVATION DE MICRO-ORGANISMES NOTAMMENT DE BACTERIES. La présente invention a pour objet un procédé de protection et de conservation de micro-organismes notamment de bactéries. Les microorganismes comme les levures ou les bactéries sont aujourd'hui couramment utilisés dans le domaines de l'agronomie et de l'agro-alimentaire. Il est donc nécessaire de disposer de moyens efficaces permettant de conserver leurs activités biologiques et de les protéger contre les actions extérieures lors d'un stockage en vue de leur utilisation ultérieure. Actuellement les techniques de protection et de conservation les plus utilisées sont la congélation et la lyophilisation. Ces deux procédés donnent des résultats très satisfaisants, mais soumettent les bactéries à des variations de pression ou de température susceptibles de nuire à leur intégrité, et présentent en outre l'inconvénient de nécessiter un équipement coûteux. Le brevet français N 76/32722 décrit un procédé de protection et de conservation des micro-organismes avec des argiles, en vue d'application en agronomie pour le traitement des sols. Cette technique n'est pas applicable dans le domaine agro-alimentaire o les bactéries doivent être incorporées à l'alimentation. En effet, les activités enzymatiques de certaines bactéries en font des additifs biologiques présentant une efficacité zootechnique particulièrement intéressante, notamment au niveau du tractus gastro-intestinal pour l'utilisation optimale de la ration alimentaire chez les animaux. La présente invention a donc pour but de proposer un procédé de protection et de conservation de bactéries peut onéreux, aisé et permettant la consommation des bactéries directement par les animaux. Le procédé de l'invention consiste à effectuer au moins les trois étapes successives suivantes: 2 2649719 - une première étape de reproduction des bactéries, - une deuxième étape de tamponnage, consistant à mettre en contact les bactéries après reproduction avec un milieu nutritif absorbeur d'eau, - une troisième étape de stabilisation consistant à mettre en contact le produit obtenu à la deuxième étape avec un milieu pauvre en eau. Les bactéries, après reproduction, sont ainsi déshydratées progressivement en présence d'un milieu nutritif. Selon une forme particulière de mise en oeuvre de l'invention, l'étape de reproduction des bactéries est effectuée pendant une durée de 12 à 48 heures. L'étape de reproduction permet l'obtention d'une population mixte de bactéries stables dans laquelle se trouvent toutes les bactéries importantes pour le mélange probiotique. Ainsi, en fin de reproduction, on dispose d'un nombre de bactéries lactiques supérieur ou, égal à 107 par ml et un nombre de levures supérieur ou égal à 104 par ml. Selon une autre forme particulière de mise en oeuvre de l'invention, l'étape de tamponnage est réalisée par mise en contact des bactéries, après l'étape de reproduction, avec une poudre de lait enrichie en minéraux. Parmi les minéraux préférés on peut citer les catalyseurs. De manière avantageuse l'étape de tamponnage est effectuée pendant une durée de 18 à 24 heures. L'étape de tamponnage assure une premi.ère absorption de l'eau contenue dans les bactéries, ce qui les préparent au choc osmotique auquel elles seront soumises à l'étape de stabilisation, tout en leur apportant les éléments nutritifs nécessaires à leur métabolisme. Selon une forme préférée de mise en oeuvre de l'invention, l'étape de stabilisation est réalisée par mise en contact du produit obtenu à la deuxième étape avec au 3 2649719 moins un extrait de céréale tels que le maïs, le blé, le soja, le riz ou un mélange de ceux-ci. Avantageusement, l'étape de stabilisation est effectuée par des rafles de maïs broyées, extrudées ou floconnées, pendant une durée de 45 minutes. Selon une forme avantageuse de mise en oeuvre de l'invention, les trois étapes sont réalisées dans des conditions non stériles. L'invention sera bien comprise à la lecture de la description qui suit, donnée uniquement à titre d'illustration du procédé selon l'invention. Les bactéries sont sélectionnées à partir de familles ou souches bactériennes dont les activités enzymatiques sont connues et choisies en fonction de l'utilisation biologique qui est envisagée. Ces familles et souches bactériennes peuvent être issues de collection et donc être bien identifiées et répertoriées ou obtenues par des techniques classiques de prélèvement dans la nature, dilution, ensemencement et culture sur milieu nutritif. On peut utiliser un mélange de bactéries constitué à la fois de bactéries issues de collections telles que: - Lactobacillus plantarum Lactobacillus acidophilus (ces souches sont des bactéries lactiques, hôtes habituels du tube digestif des mammifères), et de bactérie obtenues par des prélèvements dans la nature lesquelles présentent souvent, suite à des mutations naturelles, une résistance accrue contre les actions extérieures. L'étape de reproduction des bactéries est effectuée à partir d'un litre de bactéries mélangées dans 20 litres d'eau avec 5 kilos de poudre de lait enrichie en bio- catalyseur et minéraux. Le mélange est laissé au repos pendant une durée de 24 heures à 37 degré Celsius. La multiplication des bactéries entraîne une baisse du pH qui 4 2649719 passe de environ 5,7 à 4. L'utilisation de bactéries obtenues par prélèvement dans la nature et donc protégées génétiquement contre des infestations et des contaminations extérieures permet d'opérer dans des conditions non stérile durant les trois étapes du procédé. Le mélange contenant les bactéries, obtenu après l'étape de reproduction, est ensuite mis en contact avec 25 kilos de poudre de lait enrichie en bio- catalyseur et minéraux, pour l'étape de tamponnage. Le mélange est laissé au repos pendant une durée de 24 heures à une température de 37 degré Celsius. On observe une première absorption d'eau qui permet de préparer les bactéries du mélange au choc osmotique de l'étape de stabilisation. On observe durant l'étape de tamponnage une baisse du pH qui passe d'environ 5,2 à 4,3. Le produit obtenu aprè.s l'étape de tamponnage est ensuite mélangé avec des rafles de maïs extrudées pour l'étape de stabilisation, les proportions sont d'environ 600 kilos de rafles de maïs pour 100 kilos du produit obtenu après l'étape de tamponnage. Le mélange ainsi préparé est laissé au repos pendant une durée de 45 minutes à une température de 37 degré Celsius. Durant cette étape, on observe une augmentation du PH qui passe d'environ 4,3 à ,3. Le mélange de départ dans lequel les bactéries se sont reproduites contenait 70 % d'eau, le produit d'arrivée, obtenu après l'étape de stabilisation, ne contient plus que 12 % d'eau, il peut être conservé pendant une durée 3 mois dans un lieu sec à 37 degré Celsius. Le produit obtenu par le procédé selon l'invention peut être incorporé directement dans l'alimentation des animaux pour lesquels il constitue un additif biologique d'efficacité zootechnique tout-à-fait intéressant. En effet, la symbiose microbienne, gr&e à des géniteurs d'enzymes, tels que les cellulases et amylases, renforce le potentiel de l'animal pour une meilleure utilisation de la ration alimentaire; il est possible, 2649719 ainsi, de favoriser la lactation, la croissance, la digestion ou l'appétit des animaux. A titre d'exemple, chez les bovins l'utilisation d'un produit obtenu selon le procédé de l'invention, incorporé dans la ration alimentaire de l'animal à raison d' environ 17 à 50 grammes par jour, permet notamment une meilleure digestion de la ration, une croissance améliorée, une orientation métabolique vers la production de protéine, une amélioration de l'état sanitaire. Le produit obtenu par le procédé de l'invention peut constituer également, selon la nature des bactéries utilisées, un additif biologique pour le traitement des lisiers; il permet entre autre d'améliorer l'homogénéité du lisier, une diminution de dégagement d'ammoniac, une réduction des odeurs. Le procédé de l'invention est facile à mettre en oeuvre et ne nécessite pas un équipement coûteux et sophistiqué, le produit obtenu est facile d'emploi et trouve des applications diverses, il peut être stocké pendant une longue période sans nuire aux activités biologiques des micro-organismes qu'il contient. 6 2649719 REVENDICATIONS 1 - Procédé de protection et de conservation de bactéries caractérisé en ce que l'on effectue au moins les trois étapes successives suivantes: une première étape de reproduction des bactéries, - une deuxième étape de tamponnage par mise en contact des bactéries avec un milieu nutritif absorbeur d'eau, - une troisième étape de stabilisation par mise en contact du produit obtenu à la seconde étape avec un milieu pauvre en eau. 2 - Procédé de protection et de conservation de bactéries selon la revendication 1, caractérisé en ce que l'étape de reproduction est effectuée pendant une durée de 12 à 48 heures. 3 - Procédé de protection et de conservation de bactéries selon l'une quelconque des revendications 1 ou 2, caractérisé en ce que l'étape de tamponnage est réalisée par mise en contact des bactéries, après l'étape de reproduction, avec de la poudre de lait enrichie en bio- catalyseur et minéraux. 4 - Procédé de protection et de conservation de bactéries selon l'une quelconque des revendications 1 à 3, caractérisé en ce que l'étape de tamponnage est effectuée pendant une durée de 18 à 24 heures. - Procédé de protection et de conservation de bactéries selon l'une quelconque des revendications 1 à 4, caractérisé en ce que l'étape de stabilisation est réalisée par mise en contact du produit obtenu à la deuxième étape avec au moins un extrait de céréale. 6 - Procédé de protection et de conservation de bactéries selon la revendication 5, caractérisé en ce que l'étape de stabilisation est réalisée par mise en contact du produit obtenu à la seconde étape avec des rafles de maïs broyées, extrudées ou floconnées. 7 649719 7 - Procédé de protection et de conservation de bactéries selon l'une quelconque des revendications 1 à 6, caractérisé en ce que l'étape de stabilisation est effectuée pendant une durée de 18 à 24 heures. 8/ Procédé de protection et de conservation de bactéries selon l'une quelconque des revendications 1 à 7, caractérisé en ce que les étapes de reproduction, tamponnage et stabilisation sont réalisées dans des conditions non stériles.