Brevet FR2660192A1 — publié le 19911004

La présente invention concerne l'introduction d'une substance à activité antibactérienne et/ou antifongique et/ou anti-inflammatoire dans un véhicule à haut pouvoir de diffusion dans la matrice conjonctive et destiné à l'administration locale et vaginale. Les liposomes sont connus depuis longtemps comme vecteurs potentiels de substances pharmacologiquement actives et leur emploi dans le domaine de la chimiothérapie fait l'objet de nombreux brevets et publications Dans quelques cas, par exemple celui de la mépartricine (WO 89/03677), l'adoption d'un vecteur liposomial a permis d'obtenir une amélioration importante de l'indice thérapeutique de la substance active administrée par voie parentérale L'application des liposomes dans le domaine thérapeutique concerne surtout les formes d'administration parentérale On a également proposé récemment l'administration topique de formulations liposomiales de divers agents thérapeutiques (WO 89/03679) Le principal intérêt de ce type de transport est une amélioration de l'indice thérapeutique due à une réduction de la toxicité résultant de l'englobement du principe actif, ainsi qu'à une augmentation de l'efficacité du médicament résultant de son passage facile à travers la membrane cellulaire. Les liposomes sont des sphérules de dimensions sous- micrométriques, constituées de couches concentriques de matières phospholipidiques alternées avec des espaces aqueux discrets et isolés La composition de ces vésicules liposomiales dont les principaux constituants sont des substances amplement présentes dans les membranes biologiques influence et détermine non seulement la stabilité physico- chimique de la structure produite, mais également leur profil pharmacocinétique et donc leur potentiel de vectorisation. Le problème de la thérapie parentérale et la principale raison pour laquelle l'efficacité de ce type d'administration peut être réduite résident dans la stimulation du système réticulo-endothélial, et en particulier des macrophages circulants: en effet, ces derniers sont responsables de la capture de ces particules vectrices sousmicrométriques et de la destruction de la structure phospholipidique qui les constitue sous l'action, principalement, des enzymes lysosomiales. Cet événement défavorable peut cependant être mis à profit dans le cas d'une thérapie antibactérienne et/ou antifongique et/ou antiinflammatoire locale entretenue par une série d'applications locales du produit véhiculé au moyen d'un gel liposomial. On a maintenant découvert que l'efficacité de médicaments à action antifongique et/ou antibactérienne et/ou anti-inflammatoire dans une formulation liposomiale pour usage topique peut être améliorée en ayant recours à des liposomes dotés d'une charge globale positive. Sous un autre aspect de l'invention, il est fourni des formulations liposomiales à charge globale nulle ou positive convenant pour l'administration par voie vaginale de médicaments anti-inflammatoires, antifongiques et/ou antibactériens. La formulation faisant l'objet de la présente demande consiste en une suspension liposomiale, préparée par des méthodes connues, qui peut être utilisée telle quelle ou après introduction d'un modificateur de consistance généralement choisi parmi les épaississants de type synthétique, comme par exemple les dérivés cellulosiques, acryliques ou vinyliques, ou de type semi- synthétique ou naturel comme les alginates ou les pectines. On préfère en particulier l'utilisation d'un polymère carboxyvinylique (Carbomer(R)) à des concentrations de 0,1 à 3 %, de préférence d'environ 1 %, avec salification subséquente jusqu'à un p H compris entre 4 et 7,5, de préférence entre 4 et 5. Les formulations liposomiales de l'invention sont constituées de: 1 une ou plusieurs substances de nature phospholipidique ou lipidique polaire exerçant une fonction plastique de structure portante du véhicule liposomial grâce à leur faculté naturelle de prendre une disposition en "bicouche" sous l'effet d'une hydratation; 2 une ou plusieurs substances ayant pour fonction de modifier la température de transition particulière de chaque phospholipide; des exemples de cette classe de substances sont des stérols comme le cholestérol et ses esters, des alcools aliphatiques, aromatiques, leurs mélanges ou esters; 3 une ou plusieurs substances portant des groupes ionisables qui, au p H de la préparation, se trouvent partiellement ou totalement dissociés et servent donc de porteurs de charge capables de conférer au liposome une charge globale superficielle de type positif Des exemples de cette classe de substances sont le phosphate de dicétyle, un acide phosphatidique, une phosphatidylsérine, une phosphatidyléthanolamine, l'octadécylamine, le cardiolipide; 4 facultativement, une ou plusieurs substances à activité anti-oxydante, capables de contrecarrer la tendance des substances lipidiques à la formation de peroxydes en correspondance avec les insaturations des acides gras qui les composent Des exemples de cette classe de substances sont les tocophérols et leurs esters, le butylhydroxyanisole, le butylhydroxytoluène, le 3- carotène; 5 facultativement, une ou plusieurs substances à activité chélatante dans le but de complexer ou fixer, par l'intermédiaire de liaisons de coordination, les ions métalliques polyvalents qui peuvent agir comme des centres d'agrégation des structures liposomiales ou comme des catalyseurs de réactions de dégradation du type oxydatif; 6 une phase dissolvante capable de disperser la structure liposomiale sans en affecter l'intégrité et de solubiliser les autres constituants de la formulation; 7 une ou plusieurs substances pharmacologiquement actives qui peuvent trouver place, selon leur coefficient de partage, dans la phase lipidique liposomiale ou dans la phase aqueuse qui sert de milieu de séparation pour celle- ci; 8 facultativement, une ou plusieurs substances capables de conférer à la formulation les caractéristiques spécifiques de résistance à la corruption bactérienne qui conviennent à un produit pharmaceutique non exclusivement présenté sous forme monodose Des exemples de telles substances sont les esters méthylique, éthylique, propylique et butyrique de l'acide para-hydroxybenzoïque, l'acide benzoïque et ses sels, l'acide sorbique et ses sels, l'acide déshydroacétique et ses sels; 9 d'autres substances facultativement nécessaires en vertu d'une qualité fonctionnelle précise, par exemple des humectants, des parfums et huiles essentielles, des colorants ou autres. Des exemples de principes actifs qui peuvent être convenablement formulés selon l'invention comprennent des médicaments antibactériens, antifongiques ou anti- inflammatoires connus tels que la ciclopiroxolamine, la benzydamine, le miconazole, l'éconazole, la tétridamine, le tolciclate, le tolnaftate, le clotrimazole, l'amphotéricine B, la polymyxine, le nifuratel et analogues. Ce type de structure permet d'atteindre des objectifs importants au point de vue thérapeutique: en effet, des modèles de produit qui se rapportent aux Exemples 1 à 6 et contenant comme principe actif un antifongique-antibactérien tel que la ciclopiroxolamine, ont été évalués du point de vue de la diffusibilité par la technique de mesure des plages d'inhibition dans la gélose de Sabouraud (Difco) ensemencée avec des souches de Candida albicans, en comparaison avec une préparation analogue sous forme de crème Chacun des six modèles manifeste une diffusibilité supérieure à celle de la crème; les meilleurs résultats sont obtenus avec les formulations No 1 et 2, suivies respectivement par 5, 6, 3 et 4. Un essai de tolérance vaginale chez la rate avec les formulations 1 et 2 comparativement à une formulation analogue en crème a mis en évidence une meilleure réponse avec les deux préparations liposomiales après application locale de 0,4 ml/animal pendant 14 jours. Un essai d'activité antifongique topique chez le rat infecté par Trichophyton menthagrophytes a montré que la préparation liposomiale de nistatine (Exemple 7) est nettement plus active qu'une préparation analogue en crème. Ces exemples d'activité biologique démontrent la meilleure diffusibilité des préparations liposomiales faisant l'objet de l'invention, la meilleure tolérance locale et surtout la meilleure activité locale. De fait, on s'est également rendu compte, dans une expérience "in vitro", à quel point la charge globale de ces vecteurs constitue aussi un élément important à considérer du point de vue formulatif: une expérience conduite avec des liposomes à charge globale positive et négative en comparaison avec des liposomes dépourvus d'une charge globale superficielle a montré que le médicament contenu dans les liposomes à charge globale positive était capable, à concentration égale, d'exercer une activité antifongique plus efficace vis-à-vis de Candida albicans. L'ordre d'efficacité s'est révélé être: charge positive > charge globale nulle > charge négative, et cet ordre est exactement analogue à la progression de la viscosité des préparations utilisées Après avoir mesuré la diffusion du médicament par les véhicules liposomiaux dans le milieu de la culture solide de l'espèce de levure précitée, il apparaît clairement que la plus grande viscosité de la préparation constitue un obstacle majeur à la migration de l'espèce chimique active, obstacle qui peut néanmoins être compensé par une pénétration facilitée dans la cellule grâce à la présence du vecteur liposomial D'autres avantages résultent de l'adoption d'une formulation liposomiale pour application topique ou localisée d'un médicament antifongique et/ou antibactérien et/ou anti-inflammatoire, en considérant que: a) les cellules se trouvant au site d'application sont mieux protégées vis-à-vis d'un contact massif avec des concentrations locales élevées de principe actif qui, en raison d'un manque de spécificité, peut endommager également les cellules de l'hôte; b) il est possible de réaliser une association de substances à administrer insuffisamment compatibles, en ne réservant qu'à certaines d'entre elles l'englobement à l'intérieur de la structure liposomiale; c) il est ainsi possible de faire varier la durée d'action du médicament; d) la pénétration dans les couches profondes de l'agent chimiothérapique véhiculé dans les liposomes peut contribuer efficacement à abaisser la fréquence statistique de récidive. Les exemples suivants illustrent l'invention. EXEMPLE 1 On dissout 2 g de ciclopiroxolamine dans une solution obtenue en dissolvant 7,15 g de lécithine, 2,4 g de cholestérol, 0,43 g d'octadécylamine et 0,15 g d'acétate de tocophérol dans une quantité minimale d'éthanol. Cette solution est dispersée sous agitation dans ml d'une solution aqueuse contenant 0,1 % d'édétate de sodium et 0,15 % de para- hydroxybenzoate de sodium Après élimination du solvant par évaporation jusqu'à une concentration résiduelle inférieure à 3 % en poids/volume, le p H de la suspension liposomiale s'est révélé être de 9,0 et la charge globale superficielle positive. EXEMPLE 2 A 100 ml de la suspension de l'Exemple 1, on ajoute 1 g de Carbomer(R) et 0,3 g d'hydroxyde de sodium, en laissant gonfler le polymère et en assurant ensuite sa dispersion au moyen d'un homogénéisateur à turbine; on obtient ainsi un gel ayant une bonne aptitude à l'étalement et de consistance appropriée pour une administration vaginale. EXEMPLE 3 En opérant comme décrit à l'Exemple 1 et avec les quantités suivantes: 2 g de ciclopiroxolamine, 100 g d'alcool éthylique, 68 g de lécithine, 23 g de cholestérol, 9 g de phosphate de dicétyle, 1,5 g d'acétate de tocophérol et 6,2 g d'acide lactique par litre de solution contenant 0,15 % de para-hydroxybenzoate de sodium et 0,1 % d'édétate sodique, on obtient une suspension liposomiale à charge globale négative et ayant un p H de 4,7. EXEMPLE 4 On gélifie 100 ml de la suspension liposomiale décrite à l'Exemple 3 en ajoutant 1 % en poids/volume de Carbomer(R) salifié par l'hydroxyde de sodium On obtient un gel ayant une bonne aptitude à l'étalement et de consistance appropriée pour une administration vaginale au moyen d'un applicateur spécifique. EXEMPLE 5 En opérant comme décrit à l'Exemple 3 et avec les mêmes quantités de substances auxiliaires à l'exception du phosphate de dicétyle, supprimé de la composition, on formule et prépare une suspension liposomiale dépourvue de charge globale spécifique et ayant un p H de 4,8. EXEMPLE 6 On gélifie 100 ml de la suspension liposomiale obtenue comme décrit à l'Exemple 5 en ajoutant 1 % en poids/volume de Carbomer( R) salifié par l'hydroxyde de sodium On obtient un gel ayant une bonne aptitude à l'étalement et de consistance appropriée pour l'administration à la dose voulue par voie vaginale ou par application cutanée. EXEMPLE 7 On dissout 40 000 000 U I de nistatine dans environ 100 ml d'alcool éthylique dans lequel on a préalablement dissous 50 g de lécithine, 12 g de cholestérol et 1 g de l'agent anti-oxydant connu sous la marque commerciale Anoxid SBN( R) On prépare séparément une suspension en dispersant 100 g de nifuratel dans 950 ml d'une solution aqueuse contenant 0,25 % en poids/volume d'édétate de sodium, 0,2 % en poids/volume de benzoate de sodium et 3 % en poids/volume de glycérine. On rassemble la solution alcoolique et la suspension aqueuse sous agitation énergique et on laisse l'alcool s'évaporer par un léger chauffage jusqu'à un taux résiduel non supérieur à 3 % en poids/volume La suspension liposomiale ainsi obtenue est gélifiée jusqu'à une consistance appropriée pour l'administration vaginale par addition d'un dérivé cellulosique connu sous la marque commerciale Natrosol HR(R). EXEMPLE 8 Dans une quantité minimale d'éthanol, on dissout g de maléate de tétridamine, 70 g de lécithine, 22 g de cholestérol, 3 g d'octadécylamine et 1,5 g d'acétate tocophérol. On disperse cette solution par tourbillonnement dans 1 litre d'une solution aqueuse contenant 0,1 % d'édétate de sodium et 0,2 % de parahydroxybenzoate de méthyle sodique. On place la suspension ainsi obtenue sous pression réduite afin d'éliminer une partie du solvant alcoolique et l'on ajuste le p H à 7. A une partie de la suspension liposomiale ainsi obtenue, on ajoute 1,5 % en poids/volume d'hydroxyéthylcellulose ayant été préalablement mis à gonfler dans de l'eau pendant une nuit; on obtient ainsi un gel translucide dont la viscosité est appropriée pour son dosage à l'aide d'un applicateur vaginal spécial. La partie restante de la suspension liposomiale est diluée à une concentration finale de 0,134 % en poids/volume de maléate de tétridamine avec la même solution aqueuse que celle utilisée pour disperser la phase alcoolique. La suspension diluée ainsi obtenue est distribuée dans des flacons à dose unique comportant une canule pour application vaginale. EXEMPLE 9 Dans 100 ml d'éthanol contenant un pourcentage réduit d'eau, on dissout 10 g de chlorhydrate de benzydamine, 75 g de lécithine, 20 g de cholestérol et 1,5 g d'acétate de tocophérol. On disperse cette solution par tourbillonnement dans 1 litre d'une solution aqueuse contenant 0,1 * d'édétate de sodium et 0,2 % de parahydroxybenzoate de méthyle sodique. On place la suspension ainsi obtenue sous pression réduite afin d'éliminer une partie du solvant alcoolique et l'on ajuste le p H à 5. A une partie de la solution liposomiale ainsi obtenue, on ajoute 1,1 % en poids/volume de polymère carboxyvinylique ayant été préalablement mis à gonfler dans de l'eau pendant une nuit; on obtient ainsi un gel translucide dont la viscosité est appropriée pour son emploi à l'aide d'un applicateur vaginal spécial. La partie restante de la suspension liposomiale est diluée à une concentration finale de benzydamine de 0,1 % en poids/volume avec la même solution aqueuse que celle utilisée pour disperser la phase alcoolique. La suspension diluée ainsi obtenue est distribuée dans des flacons à dose unique comportant une canule pour application vaginale. REVENDICATIONS 1 Formulations liposomiales pour l'administration topique de médicaments antibactériens et/ou antifongiques et/ou anti-inflammatoires, caractérisées en ce qu'elles sont constituées de: a) lipides polaires ou phospholipides d'origine naturelle ou leurs mélanges ou dérivés; b) un agent capable de modifier la température de transition des phospholipides, choisi parmi les alcools aliphatiques et aromatiques, les stérols, leurs mélanges et esters; c) un solvant de dispersion de nature principalement aqueuse; d) une substance porteuse de charge; e) facultativement, agents anti-oxydants, chélateurs et autres excipients appropriés; et f) un ou plusieurs principes actifs. 2 Formulations liposomiales pour l'administration vaginale de médicaments antibactériens et/ou antifongiques et/ou anti-inflammatoires, caractérisées en ce qu'elles sont constituées de: a) lipides polaires ou phospholipides d'origine naturelle ou leurs mélanges ou dérivés; b) un agent capable de modifier la température de transition des phospholipides, choisi parmi les alcools aliphatiques et aromatiques, les stérols, leurs mélanges et esters; c) un solvant de dispersion de nature principalement aqueuse; d) facultativement, une substance porteuse de charge; e) facultativement, agents anti-oxydants, chélateurs et autres excipients appropriés; et f) un ou plusieurs principes actifs. 3 Formulations liposomiales selon la revendication 1 ou 2, caractérisées en ce qu'elles sont transformées en un gel par addition d'une substance épaississante. il 4 Formulations selon la revendication 3, caractérisées en ce que la substance épaississante est un polymère carboxyvinylique (Carbomer( R)) à une concentration comprise entre 0,1 et 3 %, de préférence de 1 %. Formulations selon l'une quelconque des revendications précédentes, caractérisées en ce qu'elles sont sous forme de liquide de lavage ou sous forme de gel. 6 Formulations selon l'une quelconque des revendications précédentes, caractérisées en ce que le principe actif ou l'un des principes actifs est constitué par la ciclopiroxolamine à une concentration comprise dans l'intervalle de 0,1 à 10 %, de préférence de 1 %. 7 Formulations selon l'une quelconque des revendications précédentes, caractérisées en ce que le principe actif ou l'un des principes actifs est constitué par la nistatine à une concentration comprise dans l'intervalle de 0,1 à 10 %, de préférence de 1 %. 8 Formulations selon l'une quelconque des revendications précédentes, caractérisées en ce que le principe actif ou l'un des principes actifs est constitué par le maléate de tétridamine à une concentration comprise dans l'intervalle de 0,1 à 10 %, de préférence de 1 %. 9 Formulations selon l'une quelconque des revendications précédentes, caractérisées en ce que le principe actif ou l'un des principes actifs est constitué par le chlorhydrate de benzydamine à une concentration comprise dans l'intervalle de 0,1 à 10 %, de préférence de 1 %.