Brevet FR2656220A1 — publié le 19910628

La présente invention concerne de nouveaux agents bloquants du facteur relaxant dérivé de l'endothéline (EDRF) pour le traitement de chocs variés tels que, par exemple, les stress, les chocs septiques ou les chocs traumatiques. La septicémie et l'endotoxémie sont encore les causes principales de mort dans les unités de soins chirurgicaux intensifs malgré l'emploi de grandes quantités d'antibiotiques spécifiques et malgré des interventions actives et soigneusement conduites Les patients qui n'ont pas survécu tendent à avoir une résistance vasculaire périphérique plus basse décrite comme de l'hypotension "sans rémission" En fait, les patients présentent une profonde vasodilatation spécialement dans la phase préterminale et meurent d'une défaillance vasculaire périphérique plutôt que d'un arrêt cardiaque De plus, la vasodilatation persistante chez ces patients est seulement temporairement sensible aux catécholamines perfusées (ou autres agents vasoconstric- -teurs) et ne peut pas généralement être compensée en raison de la trop faible réponse vasculaire à ces agents, ce qui est l'élément principal provoquant la mort. La présente invention concerne le traitement de l'absence de réponse vasculaire dans des états de chocs variés comme la septicémie, l'endotoxémie et autres maux menant à une vasodilatation systémique, persistante et profonde Le traitement consiste en l'administration d'une quantité effective d'un agent bloquant de l'effet ou la production du facteur relaxant dérivé de l'endothéline (EDRF) ou oxyde nitrique. 2 - Selon l'invention, on a trouvé que les agents bloquants de l'action ou de la formation de 1 'EDRF, par exemple, les dérivés de la L-arginine comme la L-N-monométhyle arginine-ou L-NMMA-, la L-iminoéthylorni- -thine-ou L-NIO-et le L-nitroarginine méthyle ester-ou L-NAME-sont capables de rétablir une réaction de réponse aux catécholamines et d'inhiber effectivement l'hyporéac- -tivité vasculaire. Ces dérivés sont les L-isomères des composés de la formule suivante: R 2 N\%> o ONH 2 /2 C-NH (CH 2)3-CH 3 R 3 COOR 1 dans laquelle: R 1 et R 4 représentent H ou CH 3 ou C 2 H 5, R 2 représente H ou NO 2 et R 3 représente CH 3, ou C 2 H 5 ou NHR 4 L'invention concerne donc des compositions thérapeutiques contenant une quantité effective d'au moins un des composés ci-dessus mentionnés, associé avec un excipient et un diluant convenables pour l'administration par injection. L'état de la technique peut être illustré par la demande de brevet EP86117895 2 en date du 22 12 86 qui décrit des agents cytoprotecteurs et cite la (D) N-méthyle arginine Cependant, d'une part, ce composé ne présente aucune activité dans le domaine de la présente invention et, d'autre part les composés de la présente invention ne présentent aucune action cytoprotectrice. 3 - Pour la démonstration expérimentale de cette action, de nombreuses expériences ont précédemment montré que des animaux, expérimentés au choc in vivo et in vitro sont des modèles représentatifs de la baisse de réponse vasculaire humaine aux neurotransmetteurs de pression ou aux hormones (Wichterman K A, Baue A E, Chaudry T H Sepsis and septic shock A review of laboratory models and a proposal J of Surgical Res 29, 189-201 ( 1980), Parrat J.R Alteration in vascular reactivity in sepsis and endotoxemia In: Vincent J L (Ed) Update in intensive care and emergency medicine Springer vol 8, 299-308, 1989) Cette baisse de réponse vasculaire ainsi que l'action des agents bloquants de 1 'EDRF peuvent être bien démontrés sur des fragments de tissus vasculaires prélevés sur des animaux en état de choc. Pour les composés selon l'invention, cette démonstration a été fournie par les expériences suivantes: Des rats Sprague Dawley ( 220-330 g) ont reçu une injection intrapéritonéale de 10 mg/kg d'endotoxine d'Escherichia Coli ( 0114 B 4 Sigma) Après 3 heures, les rats sont tués par dislocation cervicale et l'aorte thoracique est retirée et débarassée des tissus qui l'entourent Des anneaux d'aorte de 2 mm de large sont suspendus sous tension de 2 g à 37 C dans un bain d'organes contenant 10 ml de solution physiologique de Krebs Henseleit et oxygénés par barbotage d'un courant gazeux avec 02: 95 %/CO 2: 5 % Des réactions contractiles sont mesurées, utilisant transducteurs de force de déplacement (Auguet M, Delaflotte S, P E Chabrier, P. Braquet Comparative effects of endotelin and phorbol 12-13 dibutyrate in rat aorta Life Sci 45, 21, 2051-2059, 1989). Dans certaines expériences, l'endothélium a été progressivement rompu (-E) La contraction provoquée par 4 - la phénylephrine (PE) était stable dans le temps pour les anneaux des animaux témoins recevant de la solution saline ( 0,9 % Na Cl) avec (E+) ou sans (E-) endothélium Les dérivés arginine ( 10, 30 ou 100 MM) n'ont pas d'action significative par euxmêmes. A l'inverse, les anneaux d'animaux traités à l'endotoxine, malgré un effet contractile similaire vis-à-vis du PE, montrent une perte de tonicité dans le temps que l'on attribue à l'hyporéactivité vasculaire Ce phénomène a été souligné avec la présence d'endothélium intact (E+) Les composés de l'invention à 10, 30 ou p M) ont pu renverser la perte de tonicité, indiquant que ces composés pourraient inhiber la réponse vasculaire dans des préparations avec ou sans endothélium. L'effet des composés de l'invention a été spécifique à l'inhibition de la formation d'EDRF alors que la L-arginine, le précurseur naturel de l'oxyde nitrique, a accru la perte de tonicité dans la préparation traitée à l'endotoxine. Dans certaines expériences, les composés de l'invention ont été introduits dans le bain 105 mn après le PE quand le tissu possède sa tonicité intégrale Dans ces conditions, les composés de l'invention, seuls, ont pu totalement et d'une manière curative restaurer la contraction et, par conséquent, contribuer considérable- -ment à la restauration de la réponse vasculaire aux agents vasoconstricteurs chez les sujets en état de choc. On a également trouvé que l'action des composés de l'invention pouvait être fortement augmentée si elle était associée à des bloqueurs de la cyclooxygenase comme l'aspirine et l'indométacine , par exemple La démonstration a été fournie par l'expérimentation in vivo suivante. - Des rats mâles Sprague Dawley ( 280-320 g) ont été démyélinisés et mis sous perfusion permanente avec de l'endotoxine (EDTX, Escherichia Coli lipopolysaccharide OIII: B 4; 300 pg/kg/h) pendant 60 min Cette expérience a résulté en une hypotension systémique (chute de la pression sanguine diastolique) de 40 %, une hyporéactivité vasculaire à la stimulation des agents vasopresseurs, accompagnée d'hémoconcentration et de leukocytopénie La réponse vasculaire a été mesurée à la méthoxamine (un agoniste-al) par la construction de courbes doses-réponses cumulées et en calculant la DE 50 (Dose effective 50 %) Les valeurs de la DE 50 pour la méthoxine ont été respectivement 79 + 9 Mg/kg et 278 + 34 pg/kg pour les témoins non traités et les rats traités à 1 'EDTX (n = 24 animaux) Différents lots d'animaux (six par lots) ont été perfusés avec chacun des différents composés pendant 60 min Les résultats sont reportés dans le tableau suivant Une perfusion de 60 min d'endotoxine lipopolysaccharide ( 300 #g/kg/h) à des rats démyélinisés conduit à l'hypotension et affaiblit la réactivité vasculaire aux agents vasopresseurs comme on l'a observé dans le choc septique et endotoxinique chez l'homme Cette hyporéactivité vasculaire peut être inhibée d'une manière dose-dépendante par les bloqueurs d'EDRF comme le L-NMMA, L-NAME ou L-NIO, confirmant les résultats in vitro Leurs effets sur la pression sanguine sont cependant moins marqués L'association des bloqueurs de la cyclooxygenase (Aspirine , Indométacine@, par exemple) et des bloqueurs de l'EDRF ont un effet synergétique et protecteur hautement significatif, sur l'hyporéactivité vasculaire et la baisse de pression sanguine provoquée par le choc. Cette invention concerne donc aussi des compositions thérapeutiques dans lesquelles les composés décrits ci-dessus sont associés à des bloqueurs de la cyclooxygenase L'association des deux sortes de composés 6 - résulte en une activité beaucoup plus importante que celle qui correspond à l'addition pure des activités des deux composants. TOXICITE Une étude de toxicité aigue des composés de cette invention a été conduite sur des rats et des souris mais aucune mort n'a été constatée aux doses maximum administrables. POSOLOGIE Pour le traitement du choc, la posologie usuelle comprend l'administration par perfusion de 10 à 500 mg/heure du composé sélectionné selon l'invention, quand celui-ci est administré seul, dissous ou mis en suspension dans du sérum La durée du traitement doit être déterminée dans chaque cas par rapport a un rétablissement suffisant de la tension du patient En cas de co-administration d'un des composés selon l'invention avec un bloqueur de la cyclooxygenase, la dose pour une heure de perfusion contient 10 à 100 mg du composé sélectionné selon l'invention, associé avec 0,1 à 1 mg, si l'indométacine est utilisée, ou 2 à 200 mg, si l'aspirine est utilisée, ou les quantités correspondantes d'autres bloqueurs de la cyclooxygenase. 7 - Réactivité vasculaire Dose (méthoxamine) en mg/kg/h DE (mg/kg) Contrôle 79 + 9 animaux traités à I'EDTX 278 + 34 L-NMMA 12,5 246 + 31 L-NMMA 50 189 + 15 L-NMMA 100 I 130 + 8 L-NAME 10 238 + 26 L-NAME 30 121 + 111 L-NAME 100 105 + 7 L-NIO 50 200 + 10 L-NIO 400 138 + 12 ASPIRINE ' 3,75 248 + 24 ASPIRINE 150 136 + 29 ASPIRINE 300 107 + 10 INDOMETACINE 0,5 254 + 22 INDOMETACINE 20 128 + 16 ASPIRINE 3,75 + L-NMMA 50 76 + 15 ASPIRINE 3,75 + L-NAME 30 79 + 12 ASPIRINE 150 + L-NMMA 50 58 + 5 ASPIRINE 150 + L-NAME 30 62 + 4 INDOMETACINE 0,5 + L-NMMA 50 80 + 8 INDOMETACINE 0,5 + L-NAME 30 74 + 7 8 - REVENDICATIONS 1 Composition thérapeutique pour le traitement par perfusion des états de choc comprenant comme ingrédient essentiel une quantité effective d'un composé de formule: R 2 N\% o NH 2 C_NH (CH 2) -CH/H 2 3 coo l R 3 COOR 1 dans laquelle: R 1 et R 4 représentent H ou CH 3 ou C 2 H 5, R 2 représente H ou NO 2 et R 3 représente CH 3 ou C 2 H 5 ou NHR 4 2 Composition de la revendication 1 contenant, en quantité effective, pour une perfusion d'une heure, de 10 à 500 mg du composé sélectionné. 3 Composition thérapeutique pour le traitement par perfusion des états de choc comprenant comme ingrédient essentiel une quantité effective d'un mélange d'un composé de formule: R 2 N\% o NH 2 RNN CNH (CH 2)_-CH 2 R 3 COOR 1 dans laquelle: R 1 et R 4 représentent H ou CH 3 ou C 2 H 5, R 2 représente H ou NO 2 et R 3 représente CH 3, ou C 2 H 5 ou NHR 4 avec un bloqueur de la cyclooxygenase choisi parmi l'indométacine et l'aspirine . -9 - 4 Composition de la revendication 2 contenant, comme quantité effective du mélange, pour une heure de perfusion, de 10 à 100 mg du composé sélectionné associé avec 0,1 à 1 mg d'indométacine , ou avec 2 à 200 mg d'aspirine ou avec les quantités correspondantes d'autres bloqueurs de la cyclooxygenase.