Brevet FR2659235A1 — publié le 19910913

Application du facteur tumoral de nécrose au traitement des troubles de démyélinisation, de l'uvéite ou des troubles de l'hôte qui a reçu une greffe. La présente invention est relative à un procédé de traitement de troubles inflammatoires chroniques graves, tels que les troubles de démyélinisation, l'uvéite, ou les troubles de l'hôte qui a reçu une greffe, en administrant le facteur tumoral de nécrose ou "TNF" en une quantité efficace pour lutter contre les troubles inflammatoires chroniques graves, à un malade souffrant de ces troubles. Les troubles inflammatoires chroniques graves sont un nom générique d'une catégorie de troubles qui n'ont pas essentiellement de remèdes, parce que le mécanisme de leur apparition n'a pas été élucidé, et sont caractérisés par des symptômes inflammatoires chroniques localisés et généralisés. Parmi les troubles inflammatoires chroniques graves, figurent les troubles de démyélinisation, l'uvéite, les troubles de l'hôte qui a reçu une greffe et analogue. La principale cause morbigène des troubles de démyélinisation est une destruction de la gaine de myéline d'un nerf ou de nerfs On distingue, en général, entre une sclérose multiple et une encéphalomyélite aiguë diffuse les troubles de démyélinisation englobent également une sclérose diffuse, une leucodystrophie et analogue On a considéré que des réactions allergiques à la gaine de myéline sont liées à l'apparition de troubles de démyélinisation Mais la cause de ces réactions n'a pas encore été élucidée La sclérose multiple diffère de l'encéphalomyélite aiguë diffuse et d'autres troubles de démyélinisation, parce que la sclérose multiple est caractérisée par des rémissions et des exacerba- tions récurrentes persistantes L'encéphalomyélite aiguë diffuse peut se transformer en sclérose multiple. Les symptômes des troubles de démyélinisation sont des désordres neurologiques qui consistent principalement en une ataxie et en des paresthésies Les troubles de démyélini- sation sont parfois fatals dans la période aiguë En dépit de cette gravité, il n'existe pas de médicaments efficaces. Comme médicaments efficaces pour la sclérose multiple, on utilise des agents analogues à l'hormone cortico-surrénale pendant la période d'exacerbation Pendant la période de rémission, on utilise une rééducation médicale et un traite- ment médical préventif contre l'infection Mais les troubles de démyélinisation ne peuvent pas être soignés par ces traitements Comme médicaments pour l'encéphalomyélite aiguë diffuse, on utilise efficacement des agents semblables à l'hormone cortico-surrénale dans certains cas Mais, après le traitement, il subsiste certains problèmes tels que des troubles neurologiques et un transfert en une sclérose multiple. L'uvéite est une inflammation de l'oeil qui est due à divers troubles, sous la forme d'un trouble d'origine, tel que la maladie de Behcet, le syndrome de Vogt-Koyanagi- Harada, la sarcoidose ou la toxoplasmose Les symptômes de l'uvéite antérieure sont l'iridocyclite et l'hypopyon Les symptômes de l'uvéite postérieure sont l'opacité du corps vitreux, l'hémorragie et l'extravasation du fond de l'oeil, l'oedème et l'opacification de la rétine et la neuropapil- lite L'uvéite postérieure entraîne une diminution ou une perte de l'activité visuelle par une cataracte compliquée ou par un glaucome Le mécanisme d'apparition de l'uvéite et la relation aux troubles d'origine n'ont pas été élucidés La cause, ou les causes, de la maladie de Behcet, du syndrome de Vogt-Koyanagi-Harada, de la sarcoidose ou de la toxoplasmose ne l'ont pas été non plus. Comme médicaments contre l'uvéite, il est connu d'instiller des agents mydriatiques et des stéroïdes et l'administration générale de stéroïdes a été utilisée de manière classique L'utilisation de stéroïdes et d'agents immunodépresseurs pour une administration de longue durée a été utilisée en vue de la prophylaxie et de l'adoucissement de l'uvéite, parce que l'uvéite est souvent récurrente -et tend à être chronique Mais des stéroïdes et des agents immunodépresseurs tels qu'une cyclosporine sont connus pour leurs effets secondaires importants et il est connu qu'une administration de longue durée peut être mortelle En outre, les effets de ces agents n'ont pas été justifiés La réduc- tion de la dose et l'interruption de l'administration, dans les cas o il n'y a pas d'amélioration, font souvent que les troubles deviennent chroniques. Le trouble de l'hôte qui a reçu une greffe (désigné ci-après "GVHD") s'observe souvent chez des malades ayant des transplantations de moelle osseuse Les symptômes principaux sont la fièvre, la lésion, la diarrhée et les troubles hépatiques GVHD est une maladie mortelle On effectue la transplantation de la moelle osseuse chez les malades qui sont déficients ou qui manquent de cellules d'origine hémato- poiétique et de cellules immunochargeantes dans des cas tels que l'anémie aplastique, la déficience immune grave et la leucémie On l'effectue également chez des malades dont la fonction myélopoiétique a été détruite par une thérapie par rayonnement ou par une chimiothérapie Mais il y a de nombreux problèmes à résoudre dans l'utilisation d'une trans- plantation de moelle osseuse, y compris l'apparition de troubles tels que GVHD, de cirrhose pulmonaire, de réappari- tion et d'infection GVHD peut provoquer parfois une cirrhose pulmonaire Le taux d'apparition de GVHD est très grand quand on met en oeuvre une transplantation de moelle osseuse, ce qui fait que GVHD est l'un des obstacles principaux à la transplantation de moelle osseuse. On distingue entre GVHD aigu et GVHD chronique en fonction du début de GVHD Il y a également des différences entre GVHD aigu et GVHD chronique, du point de vue clinique. GVHD aigu survient dans les 100 jours après la greffe Les cibles principales de GVHD aigu sont la peau, le foie et le tractus gastrointestinal Les symptômes cliniques de GVHD aigu sont l'érythème, la bulle, l'érosion de la peau, l'ictère et la diarrhée, qui sont dus aux troubles des organes mentionnés ci-dessus GVHD chronique survient 100 jours après la greffe Les cibles de GVHD chronique sont plus larges que celles de GVHD aigu C'est pourquoi les symptômes de GVHD chronique prennent des formes variées On distingue, pour GVHD chronique entre GVHD localisé et GVHD généralisé, suivant les constations cliniques Les symptômes principaux de GVHD localisé sont des lésions qui incluent un dessèche- ment, un changement analogue au lichen plan, une pigmenta- tion, une dépigmentation et un érythème accompagné de détachement Ils s'accompagnent parfois de troubles hépatiques Le syndrome de GVHD généralisé consiste en infec- tion de la membrane muqueuse, de la glande salivaire, de la bouche et de l'oesophage, des glandes lacrymales, du poumon, des bronches, des muscles et des articulations Ces symptômes entraînent une réversion des autoanticorps et sont analogues aux symptômes d'un trouble autoimmun. Comme médicaments pour lutter contre GVHD, on utilise des agents immunodépresseurs, tels que le métho- trexate, des stéroïdes, l'azathioprine et la cyclosporine A. Mais cela pose des problèmes avec des effets secondaires qui n'ont pas encore été résolus. Le facteur tumoral de nécrose, ou "TNF", a été découvert à l'origine dans le sérum de souris, après injec- tion intraveineuse d'endotoxine bactérienne à des souris amorcées par Mycobacterium bovis viable, souche de bacilles Calmette-Guerin (BCG) Voir, Proc Nat Acad Sci E U A, 72 ( 9), 3666-70 ( 1975) Du sérum contenant du TNF et provenant de souris est cytotoxique ou cytostatique vis-à-vis d'un grand nombre de lignées cellulaires transformées de la souris et de l'homme, mais l'est moins vis-à-vis de cellules normales in vitro Il provoque la nécrose de tumeurs trans- plantables chez la souris TNF se produit également dans les sérums du rat, du lapin et du cobaye Il est en outre connu que TNF peut être produit par des phagocytes mononucléaires, par des fibroblasts, par des cellules B, et analogue prove- nant d'un mammifère dans certaines conditions On trouvera, à cet égard, de nombreux articles dans la littérature qui ont été résumés par Lloyd J Old dans Scientific American, 258 ( 5), 59-75 (mai 1988). TNF est maintenant soumis à des essais cliniques en vue d'être utilisé comme agent anti-tumoral On a également indiqué que TNF a un effet antiinflammatoire et un effet anodzne ldemande de brevet japonais publié sous le No 62- 292727 l On a également indiqué que TNF a un effet de suppression du trouble autoimmun défini comme un trouble complexe immun lbrevet européen 254647 l et a un effet théra- peutique vis-à-vis des inflammations de la peau, telles que la dermatite atopique lWO 90/05532 l Mais il n'est pas décrit que TNF est efficace visà-vis d'un trouble inflammatoire chronique grave, tel qu'un trouble de démyélinisation, l'uvéite, ou un trouble de l'hôte ayant reçu une greffe Au contraire, on mentionne que TNF peut être l'une des substances liées à la destruction de la gaine de myéline dans le trouble de démyélinisation lHofman et collaborateurs, J. Exp Med 170, 607-612, ( 1989)l On a indiqué également qu'une administration intravitreuse de TNF provoque une réaction d'inflammation de l'oeil antérieur lRosembaum et collaborateurs, Am J Pathol 133, 47-53 ( 1988)l On a également indiqué que TNF peut être l'une des substances liées aux troubles de la peau et du tractus gastrointestinal dans GVHD aigu lPiguet et collaborateurs, J Exp Med 166, 1280-1289 ( 1987)l. En considérant les articles mentionnés ci-dessus, on aurait pu s'attendre à ce que TNF ne soit pas utile pour traiter les troubles de démyélinisation, une uvéite ou les troubles de l'hôte ayant subi une greffe. Or, d'une manière inattendue, les données expéri- mentales, c'est-à-dire les données in vivo et les données à des doses différentes de celles des articles mentionnés ci- dessus, montrent que TNF peut être utile pour traiter les troubles de démyélinisation, l'uvéite ou les troubles de l'hôte ayant reçu une greffe. L'invention vise donc l'application de TNF pour traiter les troubles de démyélinisation, l'uvéite et les troubles de l'hôte ayant reçu une greffe. On a trouvé, en effet, que lorsqu'on administre le facteur tumoral de nécrose ou "TNF" à des animaux atteints de troubles de démyélinisation, d'uvéite ou de troubles de l'hôte ayant reçu une greffe, les symptômes de la maladie sont supprimés Ces résultats reposent sur un nouveau type d'activité du TNF qui est différent des activités connues et mentionnées ci-dessus. Une composition pharmaceutique suivant l'invention, destinée au traitement du trouble de démyélinisation comprend du TNF et au moins un excipient, diluant ou véhicule accep- table pharmaceutiquement. Une nouvelle composition pharmaceutique destinée au traitement de l'uvéite comprend du TNF et au moins un véhicule, diluant ou excipient acceptable pharmaceutiquement. Une nouvelle composition pour le traitement des troubles de l'hôte ayant reçu une greffe comprend du TNF et au moins un véhicule, excipient ou diluant acceptable pharma- ceutiquement. Dans la présente invention, TNF obtenu à partir du sérum ou de cellules dérivées d'un mammifère peut être utilisé comme ingrédient actif Mais en vue d'utiliser l'invention chez l'homme, on préfère utiliser des composi- tions pharmaceutiques comprenant du TNF humain du point de la compatibilité immunologique. On peut préparer du TNF humain, qui convient en vue d'être utilisé suivant l'invention, par des techniques d'ADN recombiné En variante, on peut également préparer du TNF humain en cultivant des cellules provenant de l'homme. Des procédés convenables de préparation de TNF humain par des techniques d'ADN recombiné sont décrits, par exemple, dans Shirai T et collaborateurs, Nature, 313, 803- 806 ( 1985) et à la demande de brevet japonais publiée sous le No 60252496 (qui correspond à la demande de brevet européen No O 158 286) A titre d'illustration, on peut obtenir du TNF humain en cultivant E Coli jusqu'à homogénéité. L'activité du TNF humain pendant la purification est surveillée par la toxicité sur les cellules L de la souris, en utilisant une variante du procédé de Williamson et collaborateurs utilisant des cellules L-M (American Type Culture Collection, CCL 1,2) Voir, Moss B, Proc Nat Acad. Sci E U A, 80, 5397-401 ( 1983) Le nombre des cellules survivantes est déterminé par le procédé photométrique de Ruff et Gifford, publié dans J Immun, 125, 1671-1677 ( 1980). On peut également préparer le TNF humain par d'autres procédés connus, y compris ceux décrits par Diane Pennica et collaborateurs, Nature, 312, 2027 (décembre 1984) dans EP-A-168214; dans EP-A-155549; et analogue. Le nombre des motifs d'acides aminés constituant le TNF humain varie en fonction du procédé de préparation utilisé pour obtenir le TNF C'est ainsi, par exemple, que le TNF humain préparé par des techniques d'ADN recombiné, décrites dans EP-A-0158286, consiste en 155 motifs d'acides aminés, tandis que le TNF humain préparé par le procédé de Pennica et collaborateurs, voir ci-dessus, consiste en 157 motifs d'acides aminés en la même séquence que dans le TNF ayant 155 motifs d'acides aminés et ayant, en plus, 2 acides aminés attachés à son azote terminal 2 acides aminés. Le TNF humain préparé par la technique d'ADN recom- biné comprend également un polypeptide ayant un radical méthionine fixé à l'azote terminal de la séquence d'acides aminés mentionnée ci-dessus, et un intermédiaire ayant un peptide signal partiel ou entier pour le TNF humain fixé à l'azote terminal de la séquence d'acides aminés mentionnée ci-dessus Il est possible de modifier une partie de la structure d'un ADN codant pour un polypeptide par une mutation naturelle ou artificielle, sans modification signi- ficative de l'activité du polypeptide. Le TNF humain qui peut être utilisé suivant l'invention comprend un polypeptide ayant une structure correspondant à des variantes homologues du polypeptide ayant la séquence d'acides aminés mentionnée ci-dessus Comme exemples de variantes homologues, on peut citer des polypep- tides décrits aux brevets des Etats-Unis d'Amérique 4 677 063 et 4 677 064 Tous ces polypeptides physiologiquement actifs sont également dénommés, ci-après, "TNF humain". Le TNF humain naturel subit probablement une modification biochimique ou une modification chimique et s'agrège probablement pour former un multimère, tel qu'un dimère ou un trimère Ces polypeptides de TNF produits dans la nature sont également dénommés, ci-après, "TNF humain", et peuvent être utilisés comme ingrédient actif des compositions pharmaceutiques suivant l'invention. Des compositions pharmaceutiques suivant l'invention peuvent être formulées en diverses préparations, adaptées par exemple à l'administration par voie intravei- neuse, intramusculaire, sous-cutanée, à l'injection intrader- mique, à l'administration orale, rectale ou externe et à l'instillation. Lorsqu'on prépare les compositions pharmaceutiques suivant l'invention, on peut inclure divers additifs conve- nables tels qu'un ou plusieurs véhicules, diluants, excipients, agents de fluidisation, agents de fixation, stabilisants, épaississants, agents de réglage du p H, etc. Parmi les véhicules, diluants et excipients qui conviennent, on peut citer des amidons et leurs dérivés, tels que l'amidon de pommes de terre, l'amidon de maïs, la dextrine et l'amidon de blé et l'hydroxypropylamidon; des sucres, tels que le lactose, le glucose, le saccharose, le mannitol et le sorbitol; des celluloses, telles que la méthylcellulose, la carboxyméthylcellulose, et l'hydroxypropylcellulose; des composés minéraux, tels que le chlorure de sodium, l'acide borique, le sulfate de calcium, le phosphate de calcium et le carbonate de calcium précipité, etc. Parmi les agents de fluidisation qui conviennent, on peut citer l'oxyde de magnésium, le silicate d'aluminium synthétique, l'acide métasilicique, l'oxyde de magnésium et d'aluminium, l'acide silicique hydraté, l'acide silicique anhydre, le talc, le stéarate de magnésium, le kaolin et analogue. Comme agents de fixation qui conviennent, on peut citer le polyéthylèneglycol, la polyvinylpyrrolidone, l'alcool polyvinylique, la gomme arabique, la gomme adra- gante, l'alginate de sodium, la gélatine, le gluten et analogue. Comme agents stabilisants qui conviennent, on peut citer des protéines telles que l'albumine, la protamine, la gélatine et la globuline; des acides aminés et leurs seuls et analogue. Comme agents de réglage du p H qui conviennent, on peut citer l'acide chlorhydrique, l'hydroxyde de sodium, des phosphates, des citrates, des carbonates et analogue. On peut administrer les compositions pharmaceu- tiques suivant l'invention à un malade en une quantité telle que la dose journalière de TNF pour un adulte soit comprise, en général, entre 50 et 100 000 000 d'unités environ, et de préférence entre 50 et 500 000 unités environ dans le cas d'une administration locale, entre 1 000 et 10 000 000 d'unités dans le cas d'une injection générale, telle qu'une injection par voie intraveineuse et une injection par voie intramusculaire, et de 10 000 à 100 000 000 d'unités environ dans le cas d'une administration par voie orale. Par l'expression "unité", on entend la quantité de TNF pour laquelle 50 % de 1 x 105 cellules de L-M/ml (Ameri- can Type Culture Collection CCL 1,2) sont tuées On mesure cette quantité de la manière suivante: comme récipient de culture, on utilise des plaques de microtitrage à 96 puits, fabriquées par Flow Laboratories, Inc (Etats-Unis d'Amérique) On cultive des cellules L-M dans un milieu essentiel minimum de Eagle contenant 1 % en volume par volume de sérum fétal de veau lla composition de ce milieu est décrite, par exemple, dans Tissue Culture, édité par Junno- suke Nakai et collaborateurs, Asakura Shoten, Japon ( 1967)l. On mélange un échantillon ( 0,1 ml), dilué en série avec un milieu et la suspension de cellules L-M ( 0,1 ml, 1 x 105 cellules/ml) dans chaque puits des plaques et on fait incuber les plaques à 37 C pendant 48 heures dans de l'air contenant 5 % de dioxyde de carbone A la fin de la durée de la culture, on ajoute 20 pl de glutaraldéhyde pour fixer les cellules Après fixation, on lave les plaques à l'eau distil- lée et on laisse sécher puis on ajoute ( 0,1 ml) de bleu de méthylène à 0, 05 % pour colorer les cellules viables On lave à fond les plaques à l'eau distillée pour éliminer le colo- rant en excès et on laisse sécher On ajoute de l'acide chlorhydrique ( 0,36 N) à chaque puits pour extraire le colo- rant des cellules colorées On mesure l'absorbance de chaque puits à 665 nm par l'appareil Titertek Multiskan fabriqué par Flow Laboratories, Inc (Etats-Unis d'Amérique) L'absorbance il est proportionnelle au nombre de cellules viables La quan- tité mentionnée ci-dessus du polypeptide actif physiologique- ment, suivant l'invention, pour laquelle 50 % de 1 x 105 cellules L-M/ml sont tuées est obtenue en portant l'absorbance en fonction de la dilution. La posologie de traitement d'un malade par la composition pharmaceutique suivant l'invention varie en fonction de l'âge et des symptômes du malade Comme mentionné ci-dessus, on peut en général administrer la composition pendant plusieurs jours à plusieurs semaines, à une dose journalière de 50 à 108 unités On peut administrer la dose journalière à un malade d'un coup ou en plusieurs fois. L'administration de la composition pharmaceutique suivant l'invention peut être effectuée chaque jour ou, en variante, l'administration peut être effectuée par intervalles Des exemples représentatifs de la posologie sont donnés ci- dessous: (a) administration quotidienne pendant 1 à 4 semaines; (b) administration quotidienne pendant 1 à 6 jours, en alternance avec un arrêt pendant un jour à plusieurs semaines; (c) administration un jour par semaine; et (d) administration quotidienne pendant 5 jours, alternant avec un arrêt d'un mois. Les exemples suivants illustrent l'invention. EXEMPLE 1 L'encéphalomyélite allergique expérimentale (EAE) a été étudiée pendant de nombreuses années en tant que modèle sur l'animal de troubles de démyélinisation lTahira et colla- borateurs, Experimental Allergic Encephalomyelitis (EAE). lMultiple Sclerosis -basic and clinical-l Shiokoigakushup- panska 241 ( 1985)l On injecte, par voie sous-cutanée, une certaine quantité ( 0,1 ml) d'une émulsion de protéine basique de myéline de boeuf et de l'adjuvant complet de Freund à la patte d'un cobaye Hartley femelle de 5 semaines, pour induire l'EAE Après l'injection, on injecte, par voie intrapérito- néale, 1 300 000 unités de TNF humain obtenu par la technique de recombinaison suivant le procédé décrit à la demande de brevet européen No O 158 286, à chacun des 8 cobayes et chaque jour, jusqu'au douzième jour On injecte à chacun de 8 cobayes d'un groupe-témoin une solution- tampon de phosphate contenant 0,1 % de gélatine, suivant le même rythme et par le même procédé que ceux pour le groupe auquel on injecte du TNF On observe les symptômes neurologiques et on les enre- gistre chaque jour pour déterminer l'apparition de la maladie Les constatations sont confirmées par l'examen histologique du cerveau et de la moelle épinière 21 jours après l'injection. La durée d'observation est fixée à 21 jours après l'injection On compare statistiquement le nombre de cobayes qui présentent des symptômes cliniques graves pendant la durée enregistrée Comme le montre le tableau 1, on observe dans le groupe ayant subi une injection de TNF une suppres- sion statistiquement significative de l'apparition de l'EAE sur la base du test somme de rang de Wilcoxon En outre, 2 des 8 cobayes du groupe- témoin meurent d'encéphalomyélite aiguë En revanche, aucun cobaye ne meurt dans le groupe ayant reçu une injection de TNF. TABLEAU 1 Nombre de cobayes évalués/ Nombre de cobayes testés + ++ Témoin 1/8 1/8 2/8 2/8 2/8 TNF 3/8 3/8 0/8 2/8 0/8 La différence entre le groupe-témoin et le groupe ayant reçu une injection de TNF est significative dans le test somme de rang de Wilcoxon (p Les animaux sont évalués de la manière suivante: : normal 1: faiblesse des membres ++: ataxie +++: paralysie, tremblement mort. Ces résultats démontrent que TNF supprime les troubles de démyélinisation. EXEMPLE 2 On examine une uvéite du lapin induite par l'endotoxine, comme modèle sur l'animal d'une uvéite antérieure par le procédé général de Rosenbaum et collaborateurs lAm J Pathol 133, 47-53 ( 1988)l On anesthésie des lapines blanches de Nouvelle-Zélande par voie intramusculaire, par une association de cétamine ( 30 mg/kg) et de xylazine ( 5 mg/ml) On injecte une certaine quantité ( 1 ng) d'endotoxine d'Escherichia coli, par une aiguille de 0,0124 mm, dans le corps vitreux pour induire une uvéite antérieure On détermine l'apparition de la maladie par l'examen histologique de sections du bloc de l'oeil, enrobées de paraffine, en quantifiant la fuite de protéine dans l'humeur aqueuse et le nombre de cellules ayant subi une extravasation dans l'humeur aqueuse, quand on sacrifie les lapines 24 heures après l'injection On quantifie la protéine par la fixation du bleu brillant, comme décrit par Bradford. On décompte les nombres de cellules par un hémocytomètre 24 heures et 1 heure avant l'injection, on injecte par voie intraveineuse, par la veine de l'oreille de chacune de 4 lapines, 300 000 unités/kg de TNF humain obtenu par le procédé décrit à l'exemple 1 On injecte à chacune des 4 lapines une solution-tampon au phosphate contenant 0,1 % de gélatine qui est utilisée pour diluer le TNF humain dans le groupe-témoin, en suivant le même protocole et par le même procédé que ceux décrits pour le groupe ayant subi une injection de TNF. Par examen histologique on observe, dans le groupe- témoin, une infiltration de nombreux monocytes et de neutrophiles dans l'iris dans l'épithélium ciliaire En revanche, le traitement par du TNF se traduit par une diminution significative du nombre de cellules infiltrées. Comme le montre le tableau 2, la fuite de protéine et le nombre de cellules ayant subi une extravasation dans l'humeur aqueuse, qui servent d'indice à une inflammation antérieure, sont plus petits dans le groupe ayant reçu une injection de TNF que dans le groupe-témoin. TABLEAU 2 Protéine (mg/ml) Cellules (x 106/ml) TNF 14,9 5,8 1,52 0,63 Témoin 2,0 1,1 0,21 0,14 N = 4 pour chaque groupe. Les moyennes sont exprimées en moyenne l'écart- type. Ces résultats indiquent que le TNF supprime l'uvéite induite par l'endotoxine. EXEMPLE 3 On examine l'uvéorétinite autoimmune expérimentale (EAU) du rat comme modèle sur l'animal d'une uvéite incluant une uvéite postérieure par le procédé général de Nussenblatt et collaborateurs, lArch Ophtaimol, 100, 1146-1149 ( 1982)l. On administre à une rate de Lewis âgée de 5 semaines, par la patte arrière, en vue d'induire l'EAU, une certaine quantité ( 0,05 ml) d'une émulsion mixte d'antigène S de boeuf ( 20 Mg/rate) préparée par Dorey et collaborateurs lOphtalmic res. 14, 249 ( 1982)l et de l'adjuvant complet de Freund On détermine l'apparition de la maladie par l'examen histologique de sections enrobées de paraffine du globe oculaire quand les rats sont sacrifiés, 14 jours après l'administration On injecte par voie intrapéritonéale une certaine quantité ( 100 000 unités/kg) de TNF humain obtenu par le procédé décrit à l'exemple 1 à chacune des 4 rates chaque jour après l'administration de l'antigène S, jusqu'au quatorzième jour On injecte, à chacune des 4 rates du groupe-témoin, suivant le même calendrier et par le même procédé que celui décrit pour le groupe ayant reçu une injection de TNF, une solutiontampon au phosphate contenant 0,1 % de gélatine. Par examen histologique, on observe dans le groupe- témoin une infiltration de nombreux monocytes et de neutrophiles dans toute la zone de la rétine et du choroïde. En revanche, le traitement par TNF se traduit par un nombre significativement moindre de cellules infiltrées. Les résultats des exemples 2 et 3 indiquent que le TNF supprime l'uvéite. EXEMPLE 4 On examine le GVHD aigu chez la souris en tant que modèle sur l'animal pour un GVHD par le procédé de Piguet et collaborateurs lJ Exp Med 166, 1280-1289 ( 1987)l On irradie ( 800 rad) une souris Fl (B 10 x CBA) âgée de 3 mois et on lui injecte, par voie intraveineuse dans la veine caudale, 2 x 1 o 6lymphocytes préparés à partir de ganglions lymphatiques inguinauxet axiliaires de souris C 57 BL/10 et 2 x 106 cellules de moelle épinière provenant de souris C 57 BL/10 qui ont été appauvries en lymphocytes T en utilisant des anticorps anti-Thyl et des compléments Après l'irradiation, on met les souris dans de l'eau contenant de la néomycine ( 0,5 mg/ml) Le jour suivant la transplantation, on injecte par voie intraveineuse 10 000 unités/souris de TNF humain obtenu par le procédé décrit à l'exemple 1, tous les deux jours jusqu'au quarante-et- unième jour On injecte, à chacune des 4 souris du groupe-témoin, suivant le même calendrier et par le même procédé que ceux pour le groupe ayant reçu une injection de TNF, une solution de tampon au phosphate contenant 0,1 % de gélatine On détermine l'apparition de la maladie par le nombre de souris survivantes, 84 jours après la transplantation et par l'examen histologique de la peau et du duodenum 21 jours après la transplantation. Conformément au taux de survie indiqué au tableau 3, on observe la mort d'une souris 21 jours après la transplantation dans le groupe-témoin Le taux de mortalité augmente après le vingt-et-unième jour et toutes les souris sont mortes 12 semaines après la transplantation En revanche, dans le groupe ayant reçu une injection de TNF, aucune souris ne meurt pendant la durée d'injection et seulement 2 souris sur 8 sont mortes 12 semaines après la transplantation. Par l'examen histologique on observe, dans le groupe-témoin, un aplatissement de la villosité, une nécrose cellulaire des cavités glandulaires et une infiltration de lymphocytes dans la sousmuqueuse, en plus d'un épaississement de l'épiderme, d'une infiltration cellulaire et d'une nécrose des cellules de l'épiderme On n'observe pas ces modifications dans le groupe ayant reçu l'injection de TNF. TABLEAU 3 Taux de survie Jour après la transplantation 21 ème 42 ème 63 ème 84 ème Témoin 7/8 3/8 1/8 0/8 TNF 8/8 8/8 7/8 6/8 Ces résultats montrent que TNF supprime GVHD. EXEMPLE 5 On prépare du TNF humain par une technique d'ADN recombiné par le procédé décrit à l'exemple 1 En utilisant le TNF humain recombiné, ainsi préparé, on formule une préparation lyophilisée pour l'injection ayant la composition suivante. Formulation TNF humain D-mannitol Albumine sérique normale (humaine) Chlorure de sodium Phosphate monosodique dihydraté (ajusté à un p H de 8,0 par de l'hydroxyde de sodium). x 105 unités mg mg 2,0 mg 3,9 mg REVENDICATIONS 1 L'application du facteur tumoral de nécrose pour lutter contre les troubles de démyélinisation. 2 L'application du facteur tumoral de nécrose pour lutter contre l'uvéite. 3 L'application du facteur tumoral de nécrose pour lutter contre les troubles de l'hôte qui a reçu une greffe. 4 Application suivant la revendication 1, caractérisée en ce que les troubles de démyélinisation sont une sclérose multiple. Application suivant la revendication 1, caractérisée en ce que les troubles de démyélinisation sont une encéphalomyélite aiguë diffuse. 6 Application suivant la revendication 1, caractérisée en ce que le facteur tumoral de nécrose est sous la forme d'une composition pharmaceutique comprenant une quantité de facteur tumoral de nécrose efficace pour lutter contre les troubles de démyélinisation, et au moins un véhicule, diluant ou excipient acceptable pharmaceutiquement. 7 Application suivant la revendication 2, caractérisée en ce que le facteur tumoral de nécrose est sous la forme d'une composition pharmaceutique comprenant une quantité de facteur tumoral de nécrose efficace pour lutter contre l'uvéite, et au moins un véhicule, diluant ou excipient acceptable pharmaceutiquement. 8 Application suivant la revendication 3, caractérisée en ce que le facteur tumoral de nécrose est sous la forme d'une composition pharmaceutique comprenant une quantité de facteur tumoral de nécrose efficace pour lutter contre le trouble de l'hôte qui a reçu une greffe, et au moins un véhicule, diluant ou excipient acceptable pharmaceutiquement. 9 Application suivant l'une des revendications 1 à 3, caractérisée en ce que le facteur tumoral de nécrose est préparé à partir d'une cellule provenant de l'homme. Application suivant l'une des revendications 1 à 3, caractérisé en ce que le facteur tumoral de nécrose est préparé au moyen d'une technique d'ADN recombiné. 11 Application suivant l'une des revendications 1 à 3, caractérisée en ce que le facteur tumoral de nécrose est adapté pour l'injection par voie intraveineuse, par voie intramusculaire, par voie sous-cutanée ou par voie intradermique, pour l'administration orale ou rectale, pour l'application externe ou pour l'instillation.