Brevet FR2655269A1 — publié le 19910607

L'invention a pour objet des protéines empêchant l'interaction entre le fragment Fc d'une immunoglobuline G et son récepteur ainsi que l'utilisation de ces protéines dans le traitement de maladies immunodépressives au toimmunes et virales. La présente invention porte particulièrement sur le traitement des affections liées aux virus HIV par des anticorps dirigés contre les récepteurs des immunoglobulines de type IgG. A la surface de nombreuses cellules, il existe des récepteurs qui permettent une relation entre les anticorps et les cellules de l'immunité . Parmi ces récepteurs, certains ont une affinité spécifique pour le fragment Fc des immunoglobulines Un modèle particulièrement étudié a été celui des antigènes CD 16 portés par le récepteur Fc gamma R III. Les CD 16 sont des antigènes de différenciation exprimés par les cellules humaines appartenant aux populations suivantes: cellules dites "natural killer " (NK), cellules K, macrophages, polynucléaires neutrophiles et eosi nophiles et une sous population de cellules T (CD 16+, CD 3 Ils sont spécifiquement reconnus par une série d'anticorps monoclonaux dont les plus utilisés sont le 3G8 et l'anti-leu 11 B . (Unkeless et al., Ann. Rev. Immunol. 1988 ; 6 : 251-281). L'anticorps anti CD 16 3G8 est un anticorps monoclonal de souris de sous classe IgG 1, décrit et isolé par FLEIT (FLEIT et al., Proc. Natl. Acad. Sci.USA,1982,79, 3275-3279) et résultant après clonage en agarose, de la fusion de cellules spléniques de souris CD 2 F1 immuni sées par voie intrapéritonéale à 2 semaines d'intervalle par 5 x 106 polynucléaires viables et de cellules de myélome P3U. Cet anticorps monoclonal est dirigé contre le récepteur Fc de faible affinité de type III portant l'antigène CD 16. I1 est étudié et sélectionné pour sa capacité à inhiber la formation de rosettes EIgG (Unkeless et al. J. Exp. Med.1979 ,150,580 ). L'anticorps est ainsi apte à bloquer in vitro la re connaissance de la partie Fc des immunoglobulines de type G par le récepteur CD 16. Le nombre de sites de liaison du 3G8 aux polynucléaires est de 120 000 environ par cellule. Cet anticorps reconnaît une forte proportion de monocytes cultivés in vitro pendant plusieurs jours, ainsi que certaines cellules spécifiques comme les macrophages pulmonaires .(CLARKS0N et al. J. Exp. Med, 1988; 167: 408-417). Cet anticorps monoclonal a été utilisé en clinique humaine dans le traitement des purpuras auto-immuns résistants (CLARKS0N et al., N. Engl. J.Med.,1986,314,12361239). Dans ce cas, cet anticorps bloque les récepteurs Fc inhibant la phagocytose des particules opsonisées telles que les plaquettes recouvertes d'anticorps auto-immuns. I1 a été observé que l'activité NK des patients était fortement inhibée. Les antigènes CD 16 sont portés par les récepteurs pour le fragment Fc des IgG de faible affinité ou hu-Fc-gamma RIII . Ils ont une affinité préférentielle pour les IgG aggrégées ou impliquées dans des immuns complexes. Lors de la maturation leucocytaire et monocytaire, ce récepteur apparaît tardivement (au stade métamyélocyte et macrophagique). In vivo, les CD 16 jouent un rôle clé dans la clairance des complexes immuns à IgG (pour lesquels ils ont une affinité particulière) dont le rôle fut démontré tant chez le primate que chez l'homme atteint de purpura thrombopénique autoimmun par l'injection in vivo d'un anticorps monoclonal spécifique du récepteur(le 3G8),rôle clé enfin dans tous les phénomènes de phagocytose ADCC (Cytotoxicité cellulaire Anticorps dépendante), de reconnaissance et de présentation des antigènes par des cellules compétentes du système immunitaire. L'ADCC (Cytotoxicité Cellulaire Anticorps-dépendante ) est déterminée par la technique décrite par PERUSSIA et al. (J. of Immunology, 1986, 133, N"1, 180-189) . Cet te technique est réalisée dans des plaques de microtitra 51 tion par un essai de relargage de chrome 51 de 3 heures. Les cellules P815 Y de souris sensibilisées par un anticorps IgG de lapin anti P 815 Y (dilution l/loeooe) ou des érythrocytes de poulet sensibilisés par une dilution au 1/100e de l'anticorps IgG de lapin anti-érythrocytes de poulet sont utilisés comme cellules cibles par les PBL (lymphocytes du sang périphérique ) et les monocytes . Dans 1' expérience d'inhibition de la cytotoxicité à médiation cellulaire dépendante des anticorps, les différents anticorps (ascites ou surnageants ) sont incubés pendant les périodes d'incubation . La concentration de l'anticorps est gardée constante dans chaque puits. La stimulation des cellules NK in vitro par différentes entités immunologiques tels que : anticorps anti CD 16 type 3G8, complexes immuns entre autres antigènes stimulateurs a été décrite (ANEGON et al.,J.Exp. Med.,1988, 167,452-472 ; CUTURI et al., J. Exp. Med., 1989,169, 569-583 ) Ces références bibliographiques dé crivent un système de culture de cellules NK. Selon cette technique les lymphocytes du sang périphérique sont cultivés à 370C avec des cellules lymphoblastoi- des RPMI 8866 irradiées à 50 grays pendant 10 jours (5 : 1 PBM/ cellules lymphoblastoldes, 2.5 x 105 PBM/ml/ RPMI/10% FCS) dans des plaques de cultures à 5% CO2 . Le milieu RPMI (milieu 1640) est contient du L-glutamate,et est dépourvu de bicarbonate de soude (MOORE et al., 1967, J.A.M.A. , 199, 519) . Le nombre total de cellules après 10 jours de culture est augmenté de 10 fois et la popula tion cellulaire comprend 60 à 80% de cellules NK CD 16+/ NKH 1+/CD 3 et 20 à 40% de cellules T CD 3+/CD 16-NKH 1-. Des populations homogènes de cellules NK et T sont sélectionnées et purifiées par gradient de densité et technique de rosettes indirectes avec des anticorps de chèvre anti Ig de souris sensibilisées. La pureté de ces préparations ( supérieure à 98%) est déterminée par ìmmunofluo- rescence indirecte (cytofluorométre de flux) grâce à un panel d'anticorps monoclonaux . Les cellules NK et T obtenues de ces cocultures sont cultivées à 37"C, 5 x 106 cellules/ml RPMI 10% sérum veau foetal, pendant différen tes périodes avec différents inducteurs.Les ligands formant des rosettes (ligands FCR) sont des anticorps anti CD 16 (3 G 8) liés à la sépharose 4 B activée au bromure de cyanogène (5 mg anticorps / ml sépharose , 5 microlitres de billes pour 106 cellules) et des immuns complexes c'est-à-dire des anticorps IgG sensibilisés par des érythrocytes de boeuf (EA7S). Des anticorps non relevants liés à la sépharose 4B et des érythrocytes sont utilisés comme contrôles . Après culture, le surnageant de culture et/ou les cellules sont recueillis, les billes de sépharose sont détachées des cellules par vibrations (vortex) et éliminées de la suspension cellulaire après une centrifugation d'une minute à 500 Rpm . Les complexes immuns sont éliminés par lyse des globules rouges avec un milieu hypotonique . La viabilité cellulaire est supérieure à 95 dans toutes les conditions . Les cellules libres de tout ligand et les surnageants de culture sont ensuite utilisés dans différents essais de dosage de cytokines par tests radioimmunologiques ou immunoenzymatiques selon des techniques classiques disponibles dans le commerce. On observe que cette mise en contact est suivie d'un effet de stimulation des cellules CD 16+ NK et ces cellules stimulées relarguent alors des molécules cytotoxiques et cytokines et des facteurs de croissances telles que le facteur de nécrose tumorale (T.N.F.), l'interféron gamma (IFN-gamma ) , l'interleukine 1 (IL1) l'interleukine 3 (IL3), le facteur de stimulation de la croissance des macrophages et des granulocytes (GM-CSF).Aucune production d'interleukine 1 bêta (IL 1 bêta) ou de G-CSF n'est prouvée en revanche. PERUSSIA et al (J. of Immunology, 1986, 133, n"l, 180-189) ont aussi développé une technique de caractérisation des anticorps anti-CD 16,par inhibition de la formation de rosettes . Selon cette technique, des érythrocytes de boeuf sont sensibilisés par un anticorps IgG de lapin anti-érythrocytes de boeuf (EA7S) à une dilution au La préparation EA7S est gardée en suspens ion à 1% en RPMI 1640 supplémentée par 10% de sérum de veau foetal pendant au minimum 1 semaine . Les cellules PBL (50 microlitres 5 x 1015 cellules) sont mélangées à 50 microlitres d'une suspension EA7S à 0.5% dans des plaques de microtitration pour la formation de rosettes . Le mélange est centrifugé (1000 rpm/l minute) et le culot est incubé à 40C pendant 30 minutes . Deux cent cellules au minimum sont comptées et les cellules portant 5 et plus EA7S sont considérées positives .Dans les expériences d'inhibition de formation de rosettes EA7S, les PBL ( 25 microlitres , 5 x 105 cellules ) sont mélangés avec un volume égal de l'anticorps et avec la préparation EA7S. Les anticorps monoclonaux non relevants en spécificité et de différentes sous classes d'immunoglobulines G sont utilisés comme contrôles . Le pourcentage d'inhibition est calculé selon la formule A/B x 100, dans laquelle A est la proportion de cellules formant rosettes (RFC) en présence de l'anticorps inhibiteur et B est la proportion de RFCEA7S en absence de l'anticorps. Récemment, le gène du CD 16 a été cloné par de nombreuses équipes . Ainsi, le CD 16 des neutrophiles est une protéine liée à la membrane cellulaire par un groupement phosphatidyl inositol glycane et peut, par conséquent être relargué de la surface cellulaire par action de l'enzyme phospholipase C. Le CD 16 des cellules NK et des macrophages est résistant à cette tentative de digestion . Ce CD 16 est en fait codé par un autre gène, lui aussi récemment cloné, qui code pour un récepteur lié à la membrane cellulaire par une partie transmembranaire et intracytoplasmique (RAVETCH et al. J. Exp. Med. 1989, 170, 481-487). I1 a été montré (DAERON et FRIDMAN, Ann. Inst. Pasteur/ Immunol.(1985), 136C, 383-437) que les récepteurs pouvaient être relargués in vitro à partir de cellules mises en culture dans des milieux sans sérum. Ces formes solubles de récepteurs ont été baptisées Immunoglobulin Binding Factors (IBF) , car , une fois relarguées, elles conservent leur affinité spécifique pour le fragment Fc des IgG I1 a été prouvé que ces IBF ont la capacité lorsqu'elles sont mises en contact avec des lymphocytes B activés d'inhiber puissamment et spécifiquement la secrétion d'IgG par ces lymphocytes activés. A 1 inverse, ces IBF sont secretées ,lorsque le milieu de culture est enrichi en IgG .Ainsi, un véritable réseau de régulation de la sécrétion des IgG a été mis en évidence in vitro Par la suite, ce même type de réseau a été mis en évidence pour les autres classes d'immunoglobulines récepteur à Fc-epsilon pour des IgE, récepteur à Fc-alpha pour les IgA définissant ainsi un réseau de régulation isotypique de la production d'immunoglobulines. Chez la souris en 1984 et chez l'homme en 1987 l'existence de ces formes solubles de récepteurs Fc gamma de faible affinité a été mise en évidence dans le sérum (KHAYAT et al., J. Immunol.(1985), 132 : 2496-2501; KHAYAT et al., J. Immunol. Methods., (1987) , 100: 235-241).Chez la souris, il a pu être montré que ces récepteurs sériques augmentaient avec l'age ainsi qu'au cours de certaines affections autoimmunes, infectieuses ou de certains syndromes lymphoprolifératifs (KHAYAT et al., J. Immunol.(1985), 24:83-91 .KHAYAT et al . Scand. J. Immunol. 1986, 24, 83-91. PURE et al., J. Exp. Med. (1984) , 160: 1836-1849). I1 a été enfin décrit récemment l'existence de molécules CD 16 solubles dans le sérum ou plasma humain à l'aide d'un test immunoenzymatique (Elisa) spécifique basé sur l'utilisation de deux anticorps monoclonaux anti CD 16 (3G8 et anti- leu 11 B (KHAYAT et al., J.Immunol. Methods , (1987), 100: 235-241). Ces molécules solubles du sérum ont pu être adsorbées par chromatographie sur colonne d'IgG -sépharose et Fc-sépharose , mais non sur Fab'2 sepharose démontrant qu'elles conservent leur affinité pour le Fc des IgG. Le procédé d'isolement du récepteur CD 16 ainsi que le produit de ce procédé et un procédé de dosage de ce récepteur ont fait l'objet de la demande de brevet PCT/ FR 88/00103 (publication WO 88/06733). On a maintenant découvert que les protéines empêchant l'interaction entre un fragment Fc d'une immunoglobuline et son récepteur permettent de traiter des maladies immunodépressives et/ou des maladies autoimmunes. Les demandeurs ont montré de manière surprenante en utilisant le procédé de dosage du CD 16 décrit dans la demande WO 88/06.733 précédemment citée que,parmi une population infectée par le virus HIV, le taux de CD 16 soluble pouvait être corrêlé de manière significative avec le taux de T4 de p24, ou d'anticorps anti p 24 ainsi que d'une manière plus générale avec le stade clinique de la maladie HIV. Faisant suite à cette étude , la demanderesse a montré que cet anticorps avait une efficacité réelle dans le traitement de malades atteint du Sida. La présente invention a donc pour objet de nouvelles protéines empêchant au moins partiellement l'interaction entre le fragment Fc d'une immunoglobuline G et son ré cepteur de type membranaire ou soluble, à l'exclusion des récepteurs gamma I et II. Elle a également pour objet l'utilisation des protéines , anticorps ou autres et leurs fragments pour le traitement des affections liées aux virus HIV, notamment du SIDA , des myélodisplasies et/ou des affections autoimmunes Les protéines ou leurs fragments autres que les anticorps anti récepteur empêchant au moins partiellement l'interaction entre un fragment Fc d'une IgG et son récepteur de type membranaire ou soluble, peuvent être notamment des protéines ayant une communauté de séquence avec le récepteur pour le fragment Fc des immunoglobulines G. Préférentiellement, ces protéines ou fragments de protéines auront une communauté de séquence avec le récepteur Fc gamma III porteur de l'antigène CD 16 , spécifique des immunoglobulines de type IgG et pourront notamment être obtenues par recombinaison génétique.Les fragments de protéines seront préférentiellement actifs et solubles Encore plus préférentiellement , ces protéines ou fragments de protéines ayant une communauté de séquence avec l'antigène CD 16 seront obtenues par expression d'un vecteur recombiné génétiquement dans des cellules d'Escheria Coli ou dans des cellules eucaryotes , et en particulier dans la lignée de cellules d'hamster CHO. L'invention a d'autre part pour objet des protéines caractérisées en ce qu'elles sont des anticorps ayant des activités immunologiques spécifiques dirigées contre des fragments de la protéine CD 16,ou des anticorps antiidiotypes dirigés contre des anticorps anti-CD16. De tels fragments seront notamment les fragments de la protéine CD 16 ayant les séquences d'acides aminés suivantes ou des fragments de ces séquences NH2-PRO-ARG-TRP- VAL-PHE - LYS-GLU-GLU-ASP-PRO-ILE-HIS-LEU ARG-CYS-C02H. NH2-LEU-GLN-ASN-GLY-LYS-ASP-ARG-LYS-TYR-PHE-HIS-HIS-ASN- SER-CYS-C02H. NH2-ALA-THR-VAL-ASN-ASP-SER-GLY-GLU-TYR-ARG-CYS-GLU-C02H NH2-VAL-SER-THR-ISO-SER-SER-PHE-SER-PRO-PRO-GLY-C02H. Ces protéines ou fragments de protéines y compris les anticorps ou fragments d'anticorps peuvent notamment être définis comme inhibants au moins en partie la formation de rosettes entre des neutrophiles humains et des globules rouges de moutons opsonisés par des immunoglobulines G anti-globules rouges de moutons,selon la technique définie précédemment Les anticorps ou fragments d'anticorps peuvent aussi être définis comme stimulants la synthèse et éventuelle ment le relargage de cytokine(s) et/ou de facteur(s) de croissance par les cellules NK en cultures, notamment de TNF , selon la technique définie précédemment. Les protéines ou fragments de protéines y compris les anticorps ou fragments d'anticorps précédemment décrits peuvent aussi être définis comme inhibants au moins partiellement la cytotoxicité cellulaire anticorps-dépendante (ADCC ) mesurée par la méthode telle que définie précédemment L'invention a encore pour objet des médicaments contenant ces protéines ou fragments de protéines pour le traitement des affections liées aux virus HIV, notamment du SIDA , des myélodisplasies et/ou des affections autoimmunes. La présente invention a aussi pour objet des compositions pharmaceutiques contenant une quantité efficace d'au moins une de ces protéines ou fragments de protéines en association avec un ou plusieurs diluants ou adjuvants compatibles et pharmaceutiquement acceptables . Ces compositions peuvent être utilisées dans le traitement des affections liées aux virus HIV, notamment du SIDA, des myélodisplasies et/ou des affections auto-immunes. Ces compositions peuvent notamment être administrées par voie parentérale et entérale. L'invention est de plus relative à l'utilisation de ces protéines ou fragments de protéines pour le traitement des affections liées aux virus HIV, notamment du SIDA , des myélodisplasies et/ou des affections autoimmunes. La présente invention ,outre l'utilisation de protéines et de fragments de protéines présentant une communauté de séquence avec le récepteur pour le fragment Fc des immunoglobulines G, a pour autre objet l'utilisation d'une protéine ou fragments de protéine ,empêchant au moins partiellement l'interaction entre un fragment Fc d'une immunoglobuline G et son récepteur de type membranaire ou soluble, l'exclusion des récepteurs Fc gamma I et II, pour la fabrication d'un médicament pour le traitement des affections liées aux virus HIV , notamment du SIDA, des myélodisplasies et/ou des affections auto- immunes. Ces protéines ou fragments de protéines peuvent notamment avoir une communauté de séquence avec le récepteur III pour le fragment Fc des immunoglobulines G. La protéine rentrant dans cette fabrication peut aussi être un anticorps anti-récepteur , c'est-à-dire un anticorps dirigé contre le récepteur membranaire ou soluble du fragment Fc de l'immunoglobuline , et en particulier un anticorps anti-CD 16 Cette protéine peut être définie comme inhibant au moins en partie la formation de rosettes selon la technique de PERUSSIA et al.(J.of Immunology 1986, 133 , n"l, 180-189) précédemment citée. Une telle protéine peut aussi inhiber au moins partiellement l'activité cytotoxique anticorps-dépendante (ADCC) telle que définie précédemment et mesurée selon PERUSSIA et al.(J. of Immunology, 1986, 133, n0l, 180-189). Un anticorps de ce type peut aussi stimuler la synthèse et éventuellement le relarguage de cytokine(s) et/ou de facteur (s) de croissance par les cellules "Natural Killer" (NK) en culture selon la technique précédemment citée (ANEGON et al. 1988 J. of Exp. Med, 167, 452 - 472; CUTURI et al. , J. Exp. Med, 1989, 169, 569-583). L'anticorps est en particulier l'anticorps monoclonal 3G8. Selon un mode de mise en oeuvre préférentiel de l'invention, le traitement des malades par l'anticorps se fait par voie parentérale ou entérale. L'invention sera encore illustrée sans être aucunement limitée par les exemples qui suivent dans lesquels: Les figures 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8 et 9 sont des diagrammes dans lesquels on a donné en abscisses le temps exprimé en jours, avec des échelles variables selon les jours , et en ordonnées le nombre respectivement de plaquettes, d'érythroblastes, de réticulocytes, de myélocy tes, de polyneutrophiles, de métamyélocytes, de monocytes , de leucocytes , et de lymphocytes. La figure 10 représente l'évolution du taux de lymphocytes T4 (en ordonnée) en fonction du temps exprimé en jours (en abscisse). La figure 11 représente l'évolution des activités des cellules NK et de la cytotoxicité cellulaire anticorps - dépendante (ADCC) en ordonnée, en fonction du temps exprimé en jours en abscisse. La figure 12 est un diagramme représentant l'évolution du taux d'anticorps 3G8 dans le sérum d'un patient traité par cet anticorps exprimé en ordonnée en ng/ml en fonction du temps exprimé en jours, avec des échelles variables selon les jours, en abscisse Les figures 13, 14, 15, 16, 17 et 18 représentent l'évolution en fonction du temps exprimé en jours, avec des échelles variables pour les jours (en abscisse) des taux de cytokines sériques, respectivement de facteur de nécrose tumorale (TNF), de l'IFN-gamma, du récepteur à l'interleukine 2 soluble (CD25S), de l'interleukine 1 alpha , de l'interleukine 2 soluble et du facteur de stimulation de la croissance des macrophages et des granulocytes (GM-CSF). Sur ces 18 figures, T1, T2, T3 et T4 correspondent aux quatre injections d'anticorps 3G8. La figure 19 représente la mesure du taux de CD16 soluble dans le milieu conditionné dans les cellules CDO de hamster. La figure 20 représente un gel obtenu par électrophorèse SDS-PAGE des protéines des souches BL 21 DE 3, BL 21 plys E, BL 21 pLys S induites ou non induites. EXEMPLE 1 Etude sérologique de la distribution des antigènes CD 16 solubles. A l'aide du procédé de dosage des CD 16 solubles décrits dans la demande de brevet WO 88/06.733 précédemment mentionnée des études séro-épidémiologiques dans des pathologies infectueuses, néoplastiques et autoimmunes ont été effectuées pour définir la distribution du CD 16 soluble au cours de désordres pathologiques 10) Etude sérologique Au cours de ce type d'études séroépidémiologiques le taux de CD 16 soluble a été dosé dans plus de 500 serums appartenant à des individus sains ou atteints de différentes pathologies . Ainsi, une évolution tout à fait significative des taux de CD 16 soluble a été observée dans le sérum de patients atteints d'infection par le virus HIV au fur et a mesure de l'aggravation de leur maladie chez 73 individus tous infectés par le virus HIV et présentant des degrés différents de symptomatologie allant de la simple séropositivité à l'acquisition de maladies graves ou tumorales. Pour chacun de ces patients, une série large d'informations était disponible (âge, mode de contamination, sexe , stade clinique d'évolution, nombre de lymphocytes T4, de lymphocytes T8, taux sérique de p 24, d'anti p24, d'IgG, d'IgA, d'IgM, d'IgE) et on a ainsi pu rechercher l'existence de corrélation statistique entre le taux sérique de CD 16 soluble et les autres paramètres cliniques ou biologiques I1 a été ainsi mis en évidence une corrélation extrêmement significative entre le taux de CD 16 soluble et le stade clinique de la maladie HIV (p = 0.002) , le taux de T4 (p = 0.02 ) et le taux de P 24 circulant (p = 0.02) ainsi que le taux d'anticorps anti-p24 (p = 0.003). Ces résultats figurent dans les tableaux I et II suivants ;dans le tableau II le taux de CD16 soluble est exprimé comme l'inverse de la dernière dilution positive du sérum. TABLEAU I Relations entre les paramètres immunologiques et le taux de CD 16 dans le sérum des patients atteints d'une affection liée aux virus HIV. Paramètres (Coefficient de corrélation) Immunologiques avec le taux de CD 16 soluble P Cellules CD4+ 0.2359 .02 Cellules CD8+ 0.0734 NS Antigène p24 - 0.2272 .02 Anticorps anti-p24 0.3146 .003 IgG 0.1099 NS* IgM - 0.0976 NS* IgA - 0.1168 NS* IgE 0.0869 NS* CD25 soluble - 0.1431 NS* *NS = non significatif. TABLEAU II Corrélation entre l'état des patients selon la classification CDC et le stade clinique Taux de CD 16 P soluble Patients sains (contrôles) 3.92 (0.68) Stade CDC II 8.54 (1.26) 0.0003 Stade CDC III 7.63 (1.30) 0.002 Stade CDC IV 1.08 (0.43) 0.05 Les chiffres entre parenthèses correspondent aux écarts types. Ainsi , il apparaît que le taux de CD 16 soluble est directement proportionnel à la gravité de l'évolution clinique de la maladie HIV et que ce taux est également proportionnel aux paramètres biologiques classiques caractéristiques du pronostic de cette affection:T4, p24 et anti p-24. I1 est apparu aussi que chez des patients dans le stade final de la maladie . Le stade IV dans la classification définie par le "Center for Disease Control" (stade CDC IV) le taux de CD 16 soluble peut devenir nul. 2)Etude cytologique L'expression cellulaire du CD 16 a été également dé terminée I1 a été montré par BOROS et al..(Abstract Th BP 84 in Program and Abstract from the V International Conference on Aids, Montréal, Canada, 1989) que sur les neutrophiles des malades atteints de maladie HIV, l'expression du récepteur Fc était significativement diminuée lors du passage au Sida vrai, cependant aucune information n'était donnée quant à l'expression des CD 16 des cellules NK et lymphocytes T. Par des méthodes de fluorescence en double marquage, l'expression du CD 16 sur la membrane de cellules CD3+/CD16+ (T) et NK de 30 des 73 patients infectés a été observée et il a été prouvé que la population CD3+/CD 16+ est sensiblement augmentée en proportion et en valeur absolue chez les pa tients infectés. Le tableau III ci-après résume les résultats obtenus. Dans ce tableau les chiffres entre parenthèses correspon dent aux écarts types. TABLEAU III Corrélation entre l'expression de l'antigène CD 16 à la surface des lymphocytes de patients atteints par la maladie HIV le taux de CD 16 soluble et le stade chimique selon la classification CDC: Type cellulaire CD3+ CD16+ Leul9+ CD16+ [(Leul9+CDl6+/Leul9+)j (en % x 100) ( en % x 100) (en % x 100) Stade CDC Il 73.4 (17.5) 101.4 (34.1) 46.9 (5.4) Stade CDC III 64.4 (15.4) 82.0 (19.4) 47.3 (2.9) Stade CDC IV 56.0 (11.6) 169.7 (57.0) 51.9 (7.7) P NS NS NS Taux de CD 16 0.3 NS NS soluble EXEMPLE 2 a) Utilisation thérapeutique de l'anticorps 3G8 Une étude pilote d'injection de l'anticorps 3G8 réa lisée chez la souris et chez le primate a montré une bonne tolérance à ces injections.De plus, cet anticorps a été utilisé avec succès chez un patient dans le traitement d'un purpura auto-immun résistant (CLARKSON et al,l986, N. Engl. J. Med., 314,1236-1239). L'anticorps monoclonal 3G8 a été injecté à un patient atteint d'une maladie liée au virus HIV évoluée associée à un purpura auto-immun résistant à toute thérapeutique,tel qu'il se rencontre souvent au cours des maladies liées au virus HIV. I1 s'agissait d'un patient de 35 ans ayant pour antécédent une hépatite B, plusieurs blénnoragies et un herpès génital Le patient présentait les signes généraux de la ma ladie HIV permettant de le classer ARC depuis au moins deux ans . Différentes thérapeutiques avaient été déjà tentées sur ce patient : la cyclosporine, suivie d'une splénectomie .Une thérapeutique par 1'AZT et le zovirax (aciclovir,dictionnaire Vidal, éd. 1989, p.l758) avait été aussi tentée sans résultat Avant le traitement par l'anticorps 3G8 , le patient se trouvait au stade III ou IV de la maladie HIV selon la classification CDC et n'avait pas subi de traitement ayant une action sur le système immunologique depuis au moins 28 jours L'injection de l'anticorps a été effectuée dans les conditions qui suivent L'anticorps monoclonal a été préparé dans des conditions de sécurité sur la lignée (stérilité, absence de virus leucémogènes, de mycoplasmes) sur l'anticorps purifié (pureté, concentration en anticorps , en protéines, en sous-classes d'Ig, DNA, polynucléotides, stérilité, absence de pyrogène et mycoplasmes ). L'injection suit la posologie suivante : 0.4 mg/kg en perfusion intraveineuse d'une heure diluée dans une solution d'albumine à 4%. La première injection a été réalisée entre 10 heures et 11 heures du matin en une perfusion d'une heure Durant l'administration du produit , aucun effet n'a été à signaler , en revanche une heure plus tard, l'apparition de frissons intenses d'une fièvre à 400C justifiait l'administration de 10 mg de polaramine (maléate de dexchlorphéniramine, dictionnaire Vidal, éd. 1989, p.1327) et 200 mg d'hémisuccinate d'hydrocortisone L'ensemble de ces phénomènes fut régressif aux environs de 12 heures ; quant à la température , elle s'est normalisée aux environs de 20 heures Une seconde injection de 3G8 à la même dose a été réalisée à la même heure 2 jours plus tard en brève perfusion. Celle-ci a été suivie du même phénomène thermique et de l'apparition de frissons intenses accompagnés de douleurs osseuses tolérables .Ces phénomènes ont cessé, en deux heures pour les frissons , en 6 heures pour la fièvre et les algies osseuses, d'où recours à l'administration de prodalfalgan (chlorhydrate de propacétamol, dictionnaire Vidal, éd. 1989,p.1373) à raison de 3 ampoules et de 10 mg de polaramine et 200 mg d'hémisuccinate d'hydrocortisone Un dernier traitement par 3G8 a été réalisé comportant une première injection de 8 heures à 9 heures du matin suivie d'une deuxième injection de 10 heures à 11 heures du matin le même jour. Cette double dose a été suivie des mêmes phénomènes cliniques précédemment rencontrés , à savoir syndrome fébrile à 390C durant 4 heures, frissons intenses durant 2 heures , l'ensemble de ces phénomènes ayant cessé sous 10 mg de polaramine et 200 mg d'hémisuccinate d 'hydrocortisone. En revanche , il convient de signaler l'apparition dès la fin de la 2ème injection de douleurs osseuses intenses justifiant la mise sous morphine par voie injectable . Ces douleurs osseuses se sont atténués sous stupéfiants mais n'ont vraiment cessé que 4 jours plus tard. b) Suivi de l'étude Cette étude s'est déroulée avec des examens réguliers et fondamentaux pour apprécier l'efficacité du traitement par l'anticorps monoclonal anti CD 16 chez ce patient à savoir NFS plaquettes à Jo,Jl,(toutes les 3 heures ), J2 (matin et soir), J3 puis chaque jour - Profil Sanguin Biochimique chaque jour- sous populations lymphocytaires à Jo, J1, J2, J3 puis 2 à 3 fois par semaine ainsi que l'activité NK à Jo, J1, J3 puis 1 fois par semaine , mesure de 1'ADCC à Jo, J1, J3 puis 1 fois par semaine , dosage de la pharmacocinétique du 3G8 chaque heure pendant 8 heures puis 2 fois par jour, dosage des anticorps anti IgG de souris chaque jour, et prélèvement pour dosage des facteurs de croissance et lymphokines sériques 2 fois par jour, virémie, p24, anti p 24 et immunoglobulines 1 fois par jour; ceci pendant l'hospitalisation elle-même du patient D'autre part, en ambulatoire, la consultation du patient est réalisée 1 fois par semaine pendant 1 mois puis régulièrement 1 fois par mois pendant toute la durée de l'étude et assortie de ces mêmes examens et prélèvements. c) Résultats-observations: 1) données hématologiques ~ I1 a été observé différentes données très significatives : tout d'abord une remontée spectaculaire et toujours durable à ce jour du taux de plaquettes (Fig.l). Celle-ci s'est affirmée dès la première injection de l'anticorps monoclonal 3G8 et ceci à la 22ème heure après injection, ce taux légèrement effondré à la deuxième injection s'est à nouveau élevé après celle-ci , les 3ème et 4ème injections ayant provoqué une remontée spectaculaire et toujours durable . Ceci est d'un intérêt considérable dans la mesure où sont alors écartés tous risques d'hémorragies incontrolâbles toujours graves. De la même façon, la 3ème et 4ème injections de l'anticorps monoclonal et après une stabilisation du taux d'érythroblastes (Fig.2) au cours des 2 premières injec tions, est observée une remontée brusque et spectaculaire du taux d'érythroblastes. Ce taux est resté constant pendant les 18 jours où des prélèvements ont été effectués puis a retrouvé le niveau de base initial au jour 48. A la 3ème injection et à partir du jour 10 de la 4ème injection, on a pu observer également une forte re montée du taux de réticulocytes (fig.3). Les myélocytes sont également impliqués dans la ré ponse cellulaire à l'injection de 3G8 (fig.4). Après la première injection, le taux très élevé va chuter au jour 2, de la même façon le taux de myélocytes élevé à nouveau après la 2ème injection chute au jour 4, les 3ème et 4ème injections provoquent une remontée spectaculaire de taux de myélocytes constant pendant 24 heures avant de chuter au jour 9 Les polynucléaires neutrophiles (fig.5) remontent à chaque injection de 3G8 immédiatement après la première injection , 2 jours après la deuxième injection, et dès la troisième et quatrième injections , le taux atteint un maximum qui ne réatteindra le niveau basal que deux jours plus tard. Les métamyélocytes (fiv,6) sont augmentés de la même façon après chaque injection de l'anticorps monoclonal rejoignant le niveau initial un jour après la première injection, 2 jours après la deuxième injection et 3 jours après les deux dernières injections Les taux de monocytes (fig.7) baissent après la première injection avant d'augmenter à J2, la deuxième injection montre un phénomène identique , les troisième et quatrième injections également. Les taux de leucocytes (fig.8) augmentent dès la première injection ainsi que les trois suivantes avec une chute à chacune des injections un jour après la remontée maximale. 2)Données lymphocytaires De la même façon et comme pour les données hématologiques , on a pu obtenir à chacune des injections une élé vation très spectaculaire et ensuite toujours durable du taux de lymphocytes totaux (fig.9) et T4 plus particulièrement (CD4+) (fiv.10) Cette observation est d'un grand intérêt puisque l'on sait que les T4 circulants sont directement liés au pronostic des affections liées aux virus HIV. 3) Activité NK. L'activité naturelle des cellules NK a été testée comme décrit précédemment par la technique classique de Chrome - Release. On remarque figure Il que la fonction NK est très altérée au début du traitement , ce qui est classique chez ce type de patient HIV , mais s'améliore de manière très significative au cours du traitement , et notamment à partir de la 3ème injection. 4) Données concernant la cytotoxicité cellulaire anticorps dépendante .(ADCC). L'activité ADCC a été mesurée par la méthode de PERUSSIA et al. (J. of Immunology, 1986, 133, n"l, 180-189 ).Cette activité qui était très importante chez ce patient est tombée dès la première injection d'anticorps 3G8 et est restée à un taux faible durant toute la durée de l'étude, comme le montre la figure 11. 5)Pharmacocinétique de l'anticorps 3G8 Le taux de 3G8 dans le sérum du patient a été déter miné au cours du traitement . La pharmacocinétique de cet anticorps est représentée sur la figure 12, qui montre sa disparition progressive. 6) Production et relargage de cytokines sériques. Le dosage des cytokines sériques a été effectué à l'aide de kit immunoenzymatiques commerciaux de type Elisa. Le taux de facteur de nécrose des tumeurs(TNF) sérique s'élève très rapidement après chaque injection et en particulier lors de la première injection , comme le montre la figure 13. De façon similaire on a dosé d'autres cytokines l'interféron gamma (figure 14),le récepteur à l'Interleukine 2 soluble (CD 25 S), (figure 15), l'Interleukine 1 alpha (figure 16),1'Interleukine 2 soluble (figure 17) et le facteur de stimulation de la croissance des macrophages et des granulocytes GM-CSF (figure 18). D'une façon tout à fait si- milaire , la première injection entraîne une augmentation importante du taux de ces diverses cytokines dans le sérum. Cette augmentation se retrouve lors des injections suivantes en fonction des cytokines dosées. 7) CONCLUSIONS DE L'ETUDE THERAPEUTIQUE On remarquera tout d'abord que le patient ne s'est pas immunisé contre l'anticorps monoclonal 3G8 Cette étude a permis d'une manière générale de mon trer l'efficacité du traitement par les anticorps 3G8 sur divers facteurs caractéristiques de la maladie HIV Notamment , on observe que l'injection d'anticorps 3G8 provoque une élévation importante des éléments hématopolétiques chez le patient infecté par le virus HIV et une élévation spectaculaire et durable du taux de lymphocytes et du taux de T4 circulants. Ce résultat est particulièrement intéressant car l'on sait que ces facteurs sont directement liés au diagnostic et au pronostic des affections liées aux virus HIV. I1 a d'autre part été observé par une analyse effectuée par un appareil de triage de cellules par fluorescence(FACS ) que l'injection d'anticorps 3G8 induisait une myélimie importante se traduisant par l'apparition de cel lules très immatures Toutes ces observations sont confirmées sur un autre patient infecté par le virus HIV et traité par l'anticorps monoclonal 3G8. EXEMPLE III Préparation des anticorps monoclonaux Les anticorps monoclonaux anti CD 16 solubles humains sont produits après l'immunisation des souris par des séquences peptidiques formées de 15, 12 ou 11 acides aminés Ces séquences sont choisies par ordinateur à partir du géne du CD16 (Simmons et al.1988 , Nature, 333,568) et sont les suivantes: Séquence n0l: Proline-Arginine-Tryptophane-Valine-Phényl alanine-Lysine - Acide Glutamique-Acide Aspartique - Proline- Isoleucine-Histidine Leucine- Arginine-Cystéine. Séquence n02: Leucine - Glutamine -Aspargine-Glycine Lysine - Acide Aspartique -Arginine- Lysine Tyrosine-Phénylalanine- Histidine- Histidine Asparagine- Sérine - Cystéine. Séquence n03: Alanine- Thréonine- Valine- Aspargine Aspartate- Sérine- Glycine-Glutamate-Tyro sine-Arginine- Cystéine- glutamine. Séquence n04: Valine - Sérine - Thréonine- Isoleucine Sérine - Sérine- Phénylalanine- Sérine Proline - Proline- Glycine. L'immunisation a été effectuée sur plusieurs séries de souris BALB/C femelles de 5 semaines à des doses de 60 microgrammes ,de peptides émulsifiées avec l'adjuvant complet de Freund (volume/volume) à j (O) et 2 autres injections à j 21 et j 36 à la même dose , et ceci par voie intrapéritonéale . Après la dernière injection, la fusion cellulaire est réalisée d'après la méthode dérivée de celle de Kohler et Milstein (1975, Nature, 256, 495) comme suit:Les cellules spléniques des souris immunisées (BALB/C) sont fusionnées avec des cellules de myélome déficient en HGPRT et non sécréteurs d'immunoglobulines (lignée MSl/Ag 4.1) L'hybridation est réalisée en présence d'agents chimiques tels que le polyéthylène-glycol (PEG à 33%), d'après la méthode de Galfre et al. (Méth. Enzym.l981, 73, 1 ). La séparation ou la sélection des hybridomes est effectuée au moyen d'un milieu sélectif RAT composé de 90% de DMEM, 10% de sérum foetal de veau, 1% de pyruvate de sodium , 1% antibiotique, 2,5g/ml d'amphotéricine et 10-4M d'hypoxanthine 4 x 10 7M d'aminophtérine et 1,6 x de thymidine . Ce traitement entraîne la mort des cellules non fusionnées , seules restent vivantes les cellules hybrides (Littlefield et al., Science 1964, 145, 709) La sélection d'hybridomes sécréteurs d'anticorps est réalisée par des microdosages par une technique enzy moimmunologique (ELISA), contre le peptide immunisant de la façon suivante : dans une plaque de microtitration en polystyrène rigide Nunc on dépose 100 microlitres de tampon de couplage contenant 1 micro g du peptide imunisant et on laisse incuber pendant une nuit à 40C .Ensuite la plaque est lavée 5 fois avec du PBS + 0,1% Tween 20. Après ces lavages, on dépose 100 microlitres du milieu de culture des clônes cultivés et on incube pendant 2 h a température ambiante. Après 6 lavages, 100 microlitres d'anticorps antiimmunoglobuline de souris couplé à la peroxydase et produit chez le mouton (deuxième anticorps), diluée au 1/1000ème dans du PBS + 0,01 % Tween 20 sont déposés dans chaque puit et incubés pendant 1 heure à température am brante Après 6 autres lavages, on ajoute par puits 100 microlitres d'orthophénylène diamine (OPD) diluée à 0,04% dans un tampon phosphate-citrate PH 5,6 et 14 microlitres de péroxyde (H202 à 30%) . La réaction est ensuite bloquée avec de l'acide sulfurique à 108. La quantité de deuxième anticorps est déterminée à partir de la densité optique dans un lecteur Titertek (Société Flow) à une longueur d'onde de 492 mm.Dans chaque plaque des témoins négatifs constitués du même milieu de culture mais n'ayant jamais servi à la culture de ces clônes sont présents. Les anticorps obtenus appartiennent aux classes suivantes des immunoglobulines : IgG, IgM et IgA. Afin d'obtenir un type unique d'anticorps, les hybri domes sont clonés par la méthode de dilutions limites (Immunology ,Today, 5, 265, Lefkovits et al . 1984). Après le clonage et lorsque les lignées d'hybridomes sont établies, leur prolifération et simultanément la production en masse de leurs anticorps monoclonaux sont réalisées, a)soit in vitro par culture cellulaire dans un milieu formé de 90% de DMEM (Milieu Modifié de Dulbecco avec 4,2 g de glucose ) (Dulbecco et al.,1959 ,Virology,8,396) + 10t de sérum embryonnaire de veau + 100 unités de pénicilline et 50 micro g de streptomycine par ml de milieu + 2,5 micro g d'amphotéricine par ml de milieu. L'incubation de ces boîtes est effectuée à 370C dans une atmosphère humide contenant 6% de C02 dans l'air b) soit in vivo sous forme d'ascites ,d'après la méthode de GOSSE et coll.(1983 ,Hybridomes Perspectives et Réalités SELF éd. Paris). Dans ce cas 5 x 106 cellules hybrides sont injectées dans le péritoine de souris BALB/C agées, pré-traitées au pristane . En moyenne 15 jours après l'innoculation , le liquide d'ascite s'étant accumulé,sera prélevé, centrifugé et testé en Elisa. Ces anticorps sont sélectionnés pour leur activité anti CD 16 d'après la méthode Elisa mise au point par KHAYAT et coll.1987 (J. Immunol. Method, 100,235) et ceci contre le CD 16 recombinant génétique, contre le sérum d'un sujet sain contenant un taux élevé de CD16 soluble et contre du CD 16 soluble purifié sur colonne d'anticorps spécifiques (type 3G8) couplée à du sépharose 4B-C NBR ou purifiée sur colonne de gel de filtration, ainsi que en FACS contre les différentes lignées cellulaires du sang exprimant le CD16 , comme les polynucléaires (UNKELESS, 1988, Ann. Rev. Immunol ,6, 251). La purification de ces anticorps à partir des surnageants ou des ascites est effectuée par précipitation au sulfate d'ammonium à 50% puis dialyse contre du PBS pendant la nuit et par chromatographie d'affinité (EY et coll.l978 - Immunochemistry, 1978, 15, 429) soit sur antigène immobilisé sur supports (type sépharose couplé au peptide immunisant ) ou sur des supports comportant des immunoglobulines anti IgG ou anti IgM de souris selon la classe de l'anticorps considéré. EXEMPLE IV Production de CD16 soluble in vitro dans des systèmes procaryotes et eucaryotes: 10) PRODUCTION DE CD16 SOLUBLE EN CELLULES CHO Les oligonucléotides xol22 (5-GAATTCAAGCTTCATATGTGGCAGCT -GCTCCTCCCAACT-3') et xol23( 5'-GAATTCGGATCCTTAGTACCC AGGTGGAGAGAATGATGA-3') ont été synthétisés sur un appareil 8600 (Milligen/Biosearch, Burlington,USA) . Ils ont ensuite été utilisés pour amplifier par PCR (Réaction en chaîne utilisant une polymérase) (SAIKI et al.,1988,Science,239, 487-491) un fragment codant pour la partie extracellulai re du Fc RIII avec son peptide signal à partir du plasmide pCD16 portant le cDNA du gène complet (SIMMONS & SEED 1988, Nature, 333,568-570) 30 cycles d'amplification ont été réalisés à une température d'élongation de 65"C. Après extraction par le chloroforme et précipitation par l'éthanol,le fragment amplifié a été hydrolysé par les enzymes de restriction BamHI et HindIII et incubé en présence de T4-DNA ligase avec le grand fragment du vecteur pSV2-cat ( Gorman et al. 1982, Mol. Cell. Biol., 2,1044-1051) coupé par les enzymes BgIII et HindIII,puis transfecté dans la souche E. coli C 600. Les clones recombinants ont été caractérisés par hydrolyse enzymatique et l'un d'entre eux a été sélectionné et préparé sur gradient de césium. L'ADN du plasmide recombinant obtenu (pXL 1603) a été contrôlé par séquençage puis introduit par cotransfection avec le vecteur pSV2-dhfr (Subramani et al.1981, Mol. Cell. Biol, 1. 854-864 )dans des cellules CHOdhfr. (URLAUB et al.1980,Proc.Natl.Acad.Sci.(USA)77,4216).Les cellules recombinantes ont été sélectionnées par culture en milieu DMEM sans hypoxanthine ni thymidine puis amplifiées en présence de quantités croissantes de méthotrexa te (jusqu'à 25 micro M).Le milieu conditionné par les clones recombinants a été concentré 10 fois après précipitation au sulfate d'ammonium puis dosé par ELISA sandwich selon la méthode décrite de la demande WO 88/06.733 et un clone (P 2.4 ) a été sélectionné comme indiqué sur la figure 19 qui montre la relation entre la densité optique des échantillons, déterminée en ELISA et la dilution du milieu de culture des cellules 20)PRODUCTION DE CD16 SOLUBLE DANS ESCHERICHIA COLI Les oligonucléotides xol23 (cf. paragraphe précédent et xol24 (5' -AAGCTTGAATTCATATGCGGACTGAAGATCTCCCAAAGG-3') ont été synthétisés sur un appareil 8600 (Milligen/Biosearch, Burlington, USA). Ils ont ensuite été utilisés pour amplifier par PCR un fragment codant pour la partie extracellulaire mature du Fc RIII ,sans son peptide signal, à partir du plasmide pCD16 portant le cDNA complet du gène d'un Fc RIII membranaire . 30 cycles d'amplification ont été réalisés à une température d'élongation de 620C. Après extraction par le chloroforme et précipitation par l'éthanol, le fragment amplifié a été hydrolysé par l'enzyme de restriction BamHI et incubé en présence de T4-DNA ligase et du vecteur M13mpl8 (Pharmacia, Suède)linéarisé par l'enzyme EcoRI (Biolabs, USA) puis introduit par transfection dans la souche E. coli TG1. Les clones recombinants ont été caractérisés par hydrolyse enzymatique et l'un d'entre eux a été sélectionné et préparé sur gradient de césium.L'ADN du M13 recombinant été hydrolysé par les enzymes de restriction Ndel Pvul et BamHI, et le fragment de restriction de 608 pb a été préparé par électroélution . Ce fragment portant le gène codant pour la partie extracellulaire du CD16 a été cloné entre les sites NdeI et BamHI du vecteur d'expression pET3a (Rosenberg et al.1987,Gène ,56,125-135) et transfecté dans E. coli C600. Les plasmides recombinants ont été caractérisés par hydrolyse enzymatique, l'un d'entre eux (pXL1790) a été choisi et introduit par transformation dans les souches E.coli BL21(DE3), BL21(DE3)pLysS et BL21(DE3)pLysE. Les clones recombinants ont été sélectionnés en présence d'ampicilline et de chloramphénicol (pour pLysS et pLysE). Un clone recombinant a été choisi dans chaque cas et a servi à inoculer 10 ml de milieu LB qui a été incubé une nuit à 37"C. 600 microlitres de chaque inoculum ont servi à ensemencer o0 ml de milieu LB frais contenant 100 micro g/ml d'ampicilline et 50 micro g/ml de chloramphénicol. Ces cultures ont été incubées à 37"C avec agitation (200 rpm) jusqu'à une densité optique de 1 à 650 nm. Chaque culture a été divisée en deux et lmM IPTG ont été rajoutés à l'une, puis les cultures ont été agitées 3 heures de plus à 370C. En fin d'induction, les bactéries ont été récoltées par centrifugation et les culots ont été repris dans 15 ml de tampon de lyse (Tris 50mM pH8 , DTT lmM , EDTA lmM,TritonX-100 0,1%),congelés puis lysés par sonication. 1,5 ml d'extrait cellulaire ainsi préparé des différentes souches ont été centrifugés 5 min. à 10.000 g et le culot a été soumis à une electrophorèse SDS-PAGE sur gel de polyacrylamide à 12,5 % . La figure 19 montre les profils d'élution des protéines des différentes souches, les puits 1 et 8 correspondant aux marqueurs de poids moléculaire les puits 2 et 3 à la souche BL 21 DE 3 non induite (puits 2) ou induite (puits 3); les puits 4 et 5 à la souche BL 21 pLys S non induite (puits 4) ou induite (puits 5) ,les puits 6 et 7 correspondants à la souche BL21pLysE non induite (puits 6) ou induite (puits 7). REVENDICATIONS l.Protéines empêchant au moins partiellement l'interaction entre le fragment Fc d'une immunoglobuline G et son récepteur de type membranaire ou soluble à l'exclusion des récepteurs Fc gamma I et II. 2.Protéine selon la revendication 1, caractérisée en ce qu'elle a une communauté de séquence avec le récepteur pour le fragment Fc des immunoglobulines G. 3.Protél ne selon l'une des revendications 1 ou 2, caractérisée en ce que ledit récepteur est le récepteur Fc gamma III porteur de l'antigène CD 16. 4.Protéine selon l'une quelconque des revendications 1 à 3, caractérisée en ce qu'elle est constituée d'un fragment de la protéine CD 16. 5.Protéine ou fragment de proté'ine selon l'une quel conque des revendications 1à 4, obtenue par recombinaison génétique 6.Protéïne ou fragment de protéine selon la revendication 5 obtenue par expression d'un vecteur recombiné génétiquement dans des cellules d'Escherichia Coli. 7.Protéïne ou fragment de protéine selon la revendication 5 obtenue par expression d'un vecteur recombiné génétiquement dans des cellules eucaryotes, et en particulier dans la lignée de cellules d'hamster CHO. 8.Protéine selon la revendication 1, caractérisée en ce qu'elle est un anticorps ayant une activité immunologique spécifique dirigée contre un fragment de la protéine CD16 ou un anticorps anti-idiotype dirigé contre un anticorps antiCD16. 9.Anticorps selon la revendication 8,caractérisé en ce qu'il est dirigé contre le fragment de la protéine CD16 ayant la séquence d'acides aminés suivante ou une partie de cette séquence NH2-PRO-ARG-TRP-VAL-PHE-LYS -GLU-GLU-ASP-PRO-ILE-HIS-LEU ARG-CYS-CO2H. lO.Anticorps selon la revendication 8, caractérisé en ce qu il est dirigé contre le fragment de la protéine CD16 ayant la séquence d'acides aminés suivante ou une partie de cette séquence NH2-LEU-GLN-ASN-GLY-LYS-ASP-ARG-LYS-TYR-PHE-HIS-HIS-ASN-SER -CYS-CO2H. ll.Anticorps selon la revendication 8,caractérisé en ce qu'il est dirigé contre le fragment de la protéine CD16 ayant la séquence d'acides aminés suivante ou une partie de cette séquence NH2-ALA-THR-VAL-ASN-ASP-SER-GLY-GLU-TYR-ARG-CYS-GLU-CO2H. 12.Anticorps selon la revendication 8,caractérisé en ce qu'il est dirigé contre le fragment de la protéine CD16 ayant la séquence d'acides aminés suivante ou une partie de cette séquence NE2-VAL-SER-THR-ISO-SER-SER-PHE-SER-PRO-PRO-GLY-C02H. 13.Protéine ou fragment de protéine selon l'une quel conque des revendications 1 à 12, y compris un anticorps ou fragment d'anticorps inhibant au moins en partie la forma tion de rosettes entre des neutrophiles humains et des globules rouges de moutons opsonisés par des immunoglobulines G antiglobules rouges de moutons. 14.Anticorps ou fragment d'anticorps selon l'une quelconque des revendications 8 à 12, stimulant la synthèse et éventuellement le recyclage de cytokine(s) et/ou de facteur (s) de croissance par les cellules NK en culture, notamment de TNF. 15.Protéine ou fragment de protéine, y compris un anticorps ou fragment d'anticorps selon l'une quelconque des revendications 1 à 12,inhibant au moins partiellement la cytotoxicité cellulaire anticorps-dépendante. 16. Médicament contenant au moins une protéine ou fragment de protéine selon l'une quelconque des revendications î a 15. 17. Médicament selon la revendication 16 pour le traitement des affections liées aux virus HIV, et notamment du SIDA, des myélodisplasies et/ou des affections autoimmu nes 18.Composition pharmaceutique caractérisée en ce qu'elle contient une quantité efficace d'au moins une protéine selon l'une quelconque des revendications 1 à 15 en association avec un ou plusieurs diluants ou adjuvants com patibles et pharmaceutiquement acceptables. l9.Composition selon la revendication 18,caractérisée en ce qu'elle est destinée au traitement des affections liées aux virus HIV,notamment du SIDA, des myélodisplasies et des affections autoimmunes. 20.Composition selon l'une des revendications 18 ou 19 présentée en vue de l'administration parentérale ou entérale. 21.Utilisation des protéines ou fragments de protéines selon l'une quelconque des revendications 1 à 15 pour le traitement des affections liées aux virus HIV, notamment du SIDA, des myélodisplasies et des affections autoimmunes 22.Utilisation de protéines ou fragments de protéines empêchant au moins partiellement l'interaction entre le fragment Fc d'une immunoglobuline G et son récepteur membranaire ou soluble , à l'exclusion des récepteurs Fc gamma I et II , pour la fabrication d'un médicament pour le traitement des affections liées aux virus HIV, et notamment du SIDA, des myélodisplasies et des affections autoimmunes 23.Utilisation selon la revendication 22 de protéines et de fragments de protéines ayant une communauté de séquen ce avec le récepteur pour le fragment Fc des immunoglobulines G , pour la fabrication d'un médicament pour le traitement des affections liées aux virus HIV, notamment du SIDA, des myélodisplasies et des affections autoimmunes. 24.Utilisation d'un anticorps monoclonal, empêchant au moins partiellement l'interaction entre le fragment Fc d'une immunoglobuline G et son récepteur membranaire ou soluble à l'exclusion des récepteurs Fc gamma I et II, pour la fabrication d'un médicament pour le traitement des affections liées aux virus HIV,notamment du SIDA , des myélodisplasies et des affections autoimmunes. 25.Utilisation selon l'une quelconque des revendications 22 à 24 d'une protéine, ou fragment de protéine ,y compris un anticorps ou fragment d'anticorps inhibant au moins en partie la formation de rosettes entre des neutrol philes humains et des globules rouges de moutons opsonisés par des immunoglobulines G anti-globules rouges de moutons. 26. Utilisation selon l'une quelconque des revendications 22 et 24 d'un anticorps ou fragment d'anticorps stimu lant la synthèse et éventuellement le relargage de cytokine (s) et/ou de facteur (s) de croissance et notamment de TNF par les cellules NK en culture 27.Utilisation selon l'une quelconque des revendications 22 à 24 d'une protéine ou fragment de protéine,y com pris un anticorps ou fragment d'anticorps inhibant au moins partiellement la cytotoxicité cellulaire, anticorps-dépendants. 28.Utilisation selon l'une quelconque des revendications 24 à 27 d'un anticorps anti CD 16. 29.Utilisation selon l'une quelconque des revendications 24 à 28 de l'anticorps monoclonal 3G8. 30.Utilisation selon l'une quelconque des revendications 22 à 29 pour la fabrication d'un médicament pour le traitement par voie parentérale ou entérale.