Brevet FR2650504A1 — publié le 19910208

La présente invention a trait à la chimie orga- nique, et concerne plus précisément une nouvelle substance, l'hydrochlorure monohydraté de l'ester éthylique de l'acide 6-bromo-5-hydroxy-4-dimé-thylaminométhyl-1-méthyl-2-phényl- thiométhylindole-3-carbonique, un procédé pour son obten- tion et un médicament antiviral, à effet inducteur d'in- terféron et immunomodulant à base de cette substance. Une grande attention est accordée actuellement à la recherche et à l'étude des médicaments antiviraux, à effet inducteur d'interféron et immunomodulant. Une at- tention spéciale est accordée aux remèdes capables de modu- ler (stimuler ou inhiber) les immunoréactions de l'orga- nisme, c'est-à-dire à des immunomodulants. Les immunomodulants élèvent la résistance générale de l'organisme en agissant sur les immunoréactions spécifi- ques et les facteurs non spécifiques de défense, y compris sur la synthèse de l'interféron endogène. Ils trouvent ap- plication dans le traitement des maladies dans la. pathogé- nèse desquelles les altérations de l'état immunitaire de l'organisme jouent un rôle important, tels les déficits immunitaires primaires et secondaires, y compris les tu- meurs malignes, ainsi que les infections viral-es chroni- ques et récidivantes. Parmi les rares composés chimiques synthétiques utilisables comme immunomodulants, le plus actif et large- ment utilisé dans la pratique médicale est le lévamisole (hydrochlorure de (-) 2,3,5,6-tétrahydro-6-phényl-imidaso-/ 2,1-/-thiazole). (M.D. Mashkovsky "Lekarstvennye sredstva", 1987, (Moscou), "Meditsina", t. 2, pages 169 - 171). Le lévamisole est utilisé commre immunomodulant dans le traitement complexe de maladies diverses liées à des états de déficit immunitaire. L'emploi du lévamisole a été décrit lors du traitement d'infections graves réci- divantes d'herpès. Comme certains autres immunomodulants, le lévamisole stimule la synthèse. de l'interféron sérique dans l'organisme. Les titres de l'interféron synthétisé sous l'action du lévamisole ne dépassent pas 80 à 160 U/ml dans la culture cellulaire; 160 à 320 U/ml dans le sérum sanguin des souris et 40 à 80 U/ml dans le sérum sanguin des souris et 40 à 80 U/ml dans le sérum sanguin humain. Cependant, le lévamisole est hautement toxique et peut provoquer différents effets secondaires, tels que céphalalgie, altération du sommeil, hyperthermie, modifi- cations des sensations gustatives, dyspepsie, hallucina- tions olfactives (modification des odeurs), allergie cuta- née,symptômes rappelant la grippe et symptômes neurologi- ques. L'effet secondaire le plus dangeureux du lévami- sole lors de son emploi comme immunomodulant est l'agranu- locytose, c'est-à-dire la diminution de la quantité de gra- nulocytes neutrophiles jusqu'à moins de 25% de leur quan- tité normale. C'est pourquoi, durant le traitement au léva- misole il convient de faire systématiquement des analyses de sang. Actuellement on connaît des médicaments antivi- raux contenant, comme principe actif, des dérivés de l'adamantane, par exemple, la remantadine (l'hydrochlorure de c-méthyl-l-adamantaneméthylamine). Mécanismes de l'action antivirale des dérivés de l'adamantane, 1982, (Riga) "Zinatne", pages 25 à 29, 129 à 141). Les médica- ments précités ont des effets secondaires sur le système nerveux central. Les composés selon l'invention, le procédé pour leur obtention et le médicament dérivé sont nouveaux et non décrits dans les publications. A la base de la présente invention se trouve le problème de la création d'un nouveau composé doté d'une haute activité antivirale, inductrice d'interféron et immunomodulante, d'une faible toxicité, n'ayant pas d'ef- fet secondaire, et de l'élaboration d'un procédé pour son obtention. Ce problème est résolu par un nouveau composé: l'hydrochlorure monohydraté de l'ester éthylique de l'aci- de 6-bromo-5-hydroxy-4-diméthylaminométhyl-l-méthyl-2- phénylthiométhylindole-3-carbonique de formule suivante: CH2N(CH3)2 HO COOC2H5.HC1.H20 2 5.HCl. H0 -'/\N -CH SC6H5 Br 265 CH3 Le composé selon l'invention se présente sous la forme d'une poudre cristalline de couleur allant du blanc nuancé de vert et de jaune au jaune clair verdâtre, de goût amer, inodore. La température de fusion n'est pas caractéristique. Le composé perd sa molécule d'eau lors de son échauffement dellO à 120 C pendant tÉois heures. La substance selon l'invention est peu soluble dans l'eau, le méthanol, l'éthanol et n'est pas hygrosco- pique. La solution contenant 1 g de substance pour 1450 ml' d'eau à-255C a un pH de 4,37 (évaluation potentiométrique). Le spectre ultra-violet d'une solution à 0,001- du composé selon l'invention dans de l'.éthanol à 95% se situe dans la zone de 230 à 350 nm et a deux maxima d'ab- sorption à 25712 nm (lg 4,3) et à. 315- nm (lg E3,2). Le spectre infra-rouge a des bandes d'absorption à 3320 cm1 (groupe OH) et 1673 cm-1 (groupe C=O). Dans le spectre de masse des pics peu intenses sont observés pour un rapport m/z 476/478 qui correspon- dent à l'ion moléculaire. Le rapport des intensités des pics J476/J478 correspond à la présence dans la molécule d'un atome de brome. Le spectre est caractérisé par les pics intenses des ions (M-Ph SH/+ (m/z 322/324), PhSH+ (m/z 110), m/z 44 (C02).-Le spectre de masse n'est pas stable car, lors de l'échauffement de l'échantillon, on assiste à sa décomposition thermique. Selon l'invention le procédé d'obtention du com- posé hydrochlorure monohydraté de l'ester éthylique de l'acide 6-bromo-5-hydroxy-4-diméthylaminométhyl-1-méthyl- 2-phénylthiométhylindole-3-carbonique consiste à traiter l'ester éthylique de l'acide 5-acétoxy-l,2-diméthylindole- 3-carbonique par un agent donneur de brome dans un milieu d'un solvant organique inerte en ébullition, à soumettre l'ester éthylique de l'acide 5-acétoxy-6 bromo-2-bromemé- thyl-l-méthylindole-3-carbonique formé à une interaction avec le thiephénol en présence de l'hydroxyde d'un métal alcalin ou de son alcoolate dans un milieu de solvant orga- nique, à soumettre l'ester éthylique de l'acide 6-bromo- -hydroxy-1-méthyl-2-phénylthiométhylindole-3-carbonique formé à une interaction avec un agent aminométhylant dans un milieu de solvant organique à une température allant de C à celle d'ébullition du mélange en réaction et à ex- traire ensuite le produit cherché à partir de la base formée, l'ester éthylique de l'acide-6-bromo-5-hydroxy-4-diméthyl aminoméhtyl-1-l1-méthyl-2-phénylthiométhylindole-3-carboni- que. Comme agent donneur de brome il est avantageux d'utiliser le brome ou le N-bromosuccinimide et comme sol- vant organique inerte, le chloroforme, le dichloréthane ou le tétrachlorure de carbone. Lors de l'interaction de l'ester éthylique de l'acide 5-acétoxy-6-bromo-2-bromométhyl-l-méthylindole-3- carbonique avec le thiophénol il est avantageux d'utiliser l'alcool méthylique, éthylique ou isopropylique comme sol- vant organique. Comme agent aminométhylant il est préférable d'utiliser un mélange de diméthylamine et de formol ou de bis-diméthylaminométhane; Lors de l'emploi du mélange de diméthylamine et de formol, comme solvant organique on utilise de l'acide acétique, et la réaction de formation de l'aminométhyl est conduite à une température de 65 à 75 C. Lors de.liemploi du bis-diméthylaminométhane comme agent aminométhylant, il est avantageux d'employer comme comme solvant organique le dioxane et de conduire cette réaction à la température d'ébullition du mélange. L'extraction du produit final se fait de préférence à l'aide d'acide chlorhydrique agissant dans un milieu d'acétone en ébullition sur l'ester éthylique de l'acide 6-bromo-5-hydroxy-4-diméthylaminométhy-l-1-méthyl-2-phényl- -thiométhylindole-3-carbonique. Le rendement en produit fini représente 44 à 61%D en poids, calculé sur l'ester éthylique de l'acide 5-acé- toxy-l,2-diméthylindole-3-carbonique de départ. Le composé selon l'invention possède une activité antivirale, inductrice d'interféron et immunomodulante et, selon l'invention, est une substance médicamenteuse active à effet antiviral, inducteur d'interféron et immunomodu- lant. Le médicament selon l'invention peut être employé sous différentes formes médicamenteuses, de préférence en comprimés. Selon l'invention le médicament sous forme de comprimés contient de 0,1 à 0,2 g de principe actif par comprimé. Le médicament en comprimé contient de préférence de l'amidon ou du sucre en poudre comme excipient pharma- ceutique. Le médicament selon l'invention a été étudié expérimentalement sur des animaux et cliniquement sur des humains. Son activité antivirale a été étudiée sur les virus de la grippe A et B lors d'expériences faites sur des cultures de fibroblastes d'embryons de poulet. Le médicament selon l'invention a été introduit dans la culture cellulaire- à raison de 5 pg/ml, à diffé- rents délais avant et après la contamination de la culture par le virus de la grippe afin d'étudier l'influence dudit médicament sur l'accumulation du virus infectieux dans les cellules de la culture tissulaire pendant la période de l'infection monocyclique. Dans une autre série d'expériences on a étudié l'influence du médicament selon l'invention sur la repro- duction du virus en fonction du moment de l'application du médicament avant et après la contamination de la cul- ture cellulaire, c'est-à-dire sur l'évolution de la repro- duction du virus de la grippe. Les résultats expérimentauxont montré que le mé- dicament selon l'invention révèle son activité inhibitrice du virus, évaluée d'après la baisse du titre infectieux et l'inhibition de l'activité de- formation de plages lors d'une infection monocyclique, de préférence aux moments correspondant aux étapes précoces de reproduction du virus de la grippe dans les cellules: adsorption, pénétration et, probablement, déprotéinisation. L'action antivirale de la substance selon l'inven- tion a été étudiée en comparaison avec celle de la remanta- dine. Le médicament selon l'invention surpasse la reman- tadine au point de vue largeur du spectre antiviral, montre un effet chimiothérapeutique marqué sur les virus de la grippe A et B dans les cultures de cellules et dans la pneumonie grippale expérimentale causée par les virus grip- paux A et B. La remantadine est active seulement contre le virus A et est sans effet sur le virus B. De plus, expéri- mentalement, la résistance du virus grippal au médicament selon l'invention se développe beaucoup plus lentement que celle à la remantadine. Une comparaison de liactivité antivirale du médi- camen selon l'invention et de la remantadine est présentée dans le tableau 1. TABLEAU 1 Médicament selon l'invention Remantadine - Inhibe la reproduction des Inhibe la reproduction du virus de la grippe A et B virus de la grippe A en cul- en culture cellulaire et ture cellulaire et dans les dans les embryons de poulet. embryons de poulet. Inactif envers le virus B. Présente un effet thérapeu- Présente un effet thérapeu- tique en cas de pneumonie tique en cas de pneumonie grippale de type A et B grippale de type A chez les chez les souris. souris. Incactif en cas de pneumonie due au virus B. Lors du passage du virus de Lors du passage du virus la grippe A en culture cel- de la grippe de type A en lulaire en présence du médi- culture cellulaire.en présence- cament selon l'invention-, de rémantadine/une résistance une résistance du virus au du virus au médicament sur- médicament ne survient pas vient dès le 2è à 3è passage. pendant 6 passages. N'a pas d'effet virulicide -N'a pas d'effet virulicide sur le virus de la grippe. sur le virus de la grippe. La concentration maximale La concentration maximale supportable pour une cul- i supportable pour une culture ture de fibroblastes d'em- de fibroblastes d'embryon de bryon de poulet est de poulet est de 20 ug/ml. pg/ml. LD50 pour les souris en LD50 pour les souris en absorption orale - absorption orale - 340 mg/kg. - 340 mg/kg. - I L'étude expérimentale de l'innocuité du médicament selon l'invention a montré que celui-ci est peu toxique lors d'une seule absorption orale (LD50 pour les-souris est de 340 mg/kg, pour les rats de 3000 mg/kg, pour les cobayes de 4000 mg/kg). L'absorption orale prolongée du médicament selon l'invention à doses de 100 à 125 mg/kg chez les rats pen- dant 6 mois et chez les cobayes pendant 3 mois, à doses de 50 mg/kg chez les lapins pendant 2 mois et de 25 mg/kg chez les chiens pendant 6 mois n'a causé aucune manifesta- tion pathologique, ce qui a été confirmé par des examens cliniques, hématologiques, biochimiques et pathomorpholo- giques. En cas d'absorption du médicament par les animaux à des doses plus élevées et pendant longtemps, des altéra- tions non spécifiques de caractère dystrophique peuvent se développer dans les organes parenchymateux des animaux. Lors de son absorption par voie orale le médicament n'a pas d'effet local irritant, ce qui a été confirmé par des in- vestigations histologiques. L'étude de l'effet allergène du médicament selon l'invention a été effectuée sur des cobayes et des lapins.. En injections intradermiques et en applications cutanées répétées le médicament selon l'invention, n'a pas d'action allergène. Le médicament selon l'invention n'a pas d'activité tératogène. En doses non toxiques pour des femelles gravi- des, soit de 250 mg/kg (ce qui dépasse de 20 à 30 fois la dose quotidienne maximum pour des humains), le médica- ment n'a pas causé de déviation de l'embryogénèse ni du développement post-natal chez des rats blancs. L'évalua- tion complexe de l'état des embryons et de la première génération des descendants des animaux à l'aide de tests d'anatomie microscopique, de tests histologiques et physio- logiques, y compris des tests de:comportement, permet -de conclure-à l'absence d'effet-tératogène du médicament se- lon l'invention. Le médicament selon l'invention n'a pas d'effet mutagène. Cette étude a été effectuée sur la Salmonella typhimurium prise comme objet de test pour une dose de la substance revendiquée de 50 à 1000 g par disque ou boite- de pétri. Le médicament selon l'invention a été testé en clinique comme moyen thérapeutique antiviral dans des cas de grippe causée par des virus A et B chez 1650 malades. Le médicament était administré par voie orale à raison de 0,2 g 4 fois par jour pendant 3 jours. Les es- sais cliniques du médicament selon l'invention ont été effectués en comparaison avec les résultats du traitement symptomatique d'un groupe témoin de malades. L'efficacité thérapeutique du médicament selon l'invention en cas de grippe de type A et B se manifeste par le raccourcissement des périodes de fébrilité, d'intoxication et d'inflamma- tion des muqueuses, ainsi que par la diminution de la du- rée de la maladie. Cet effet thérapeutique a été. confirmé par les résultats des examens sérologiques. La croissance des titres d'anticorps antivirus gri.ppaux A et B est signi- ficativement moindre chez les malades traités par le médi- cament selon l'invention que chez-les malades témoins rece- vant seulement un traitement symptomatique. Le médicament selon l'invention prévient les complications de la grippe et diminue la quantité d'aggravations des maladies chroni- ques observées chez les malades ayant souffert de grippe. Les essais cliniques ont mis en évidence la sécu- rité de l'emploi du médicament selon l'invention. Aucun cas d'effet secondaire n'a pu être décelé lors de l'emploi à doses de cure de 1800 à 3200 mg, ni chez les malades ayant la grippe, ni chez les volontaires sains. L'étude de l'activité inductrice d'interféron du médicament selon l'invention a été effectuée in vitro dans des expériences sur une culture de fibroblastes d'embryon de poulet passés d'abord à la trypsine, in vivo dans des expériences réalisées sur 340 souris non consanguines de de poids égal de 18 à 20 cg et sur 25 volontaires, c'est-à- dire jeunes personnes des deux sexes âgées de 18 à 30 ans. Pour l'induction d'interféron on a ajouté à une culture de fibrobalstes d'embryon de poulet diverses doses du médicament, selon l'invention, mélangé à une solution à 2% de diéthylaminoéthyl dextrane en proportion de i: 4, à raison de 0,2 ml par tube contenant une monocouche de cellules. On a effectué l'incubation des cellules à 37 C pendant 1 heure. Ensuite on a rincé les cellules au moyen de milieu N 199 et on les a recouvertes de i ml de ce mi- lieu sans ajouter de sérum bovin. Au bout de 8, 24 et 48 heures d'incubation à 37 C on a récolté le liquide de cul- ture et on l'a titré au moyen du virus de l'encéphalomyé- lité vénézuélienne selon une méthode connue pour déceler la présence d'interféron dans la culture de fibroblastes d'embryon de poulet. Les résultats du titrage sont présentés dans le tableau 2. Comme standard de comparaison lors de l'étude de l'acti- vité inductrice d'interféron du médicament selon l'invention on a uti- iisé un inducteur d'interféron hautement actif, l'ARN.à double spirale du phage RF2 (l'acide ribonucléique à dou- 2' ble spirale du bactériophage RF2). Activité Inductrice d'interféron du médicament selon l'invention dans une culture de fibroblastes d'em- bryon de poulet TABLEAU 2 T T |Concentra-, Titre d'interféron après (U/ml) tration ---------- --- --------- pg/ml 8 h 24 h 48 h ------------------------- --------------------- ---'--------- ----------- Le médicament selon l'invention 10, 0 80,0 160,0 40,0 Le médicament selon l'invention 20,0 640-1280 1280-2560 64-320 L'ARN à double spirale du t phage RF2 '100,0 phage RF 1O0,0 R 160,0 par re- t |cherché L'ARN à double spirale du! phage RF2 400,0 640-1280 1280-2560 640-320 2 12-20 t40-320 l1 Les résultats présentés dans le tableau 2 permet- tent de conclure que le médicament selon l'invention est un inducteur d'interféron hautement actif dans une culture de fibroblastes d'embryon de poulet. Pour une concentra- tion de 20,g/ml, le médicament selon l'invention induit déjà la formation d'interféron au bout de 8 h (titre: 640 à 1280 U/ml, le titre maximum est déterminé au bout de 24 h -2560 U/ml, vers 48 h le titre d'interféron baisse jusqu'à 320 U/ml). Un effet dépendant de la dose du médicament selon l'invention sur l'induction d'interféron dans les cultures de fibroblastes d'embryons de poulet a été déterminé. Une diminution de la concentration du médicament selon l'inven- tion de deux fois (Jusqu'à 10 pg/ml) cause une diminution de l'induction d'interféron d'environ 8 fois, toutefois l'évolution de cette induction reste la même. L'étude comparée de l'induction d'interféron * sous l'influence du médicament selon l'invention et l'in- ducteur d'interféron étalon hautement actif, 1'ARN à dou- ble spirale du phage RF2, a mis en évidence'une dynamique d'induction semblable et des titres proches d'interféron. Toutefois pour cela il a fallu 20 fois plus d'ARN à double spirale du phage RF2 (400 pg/ml), la concentration de pg/ml ne donnant qu'une faible induction d'interféron. Dans la série suivante d'expériences, la capacité du médicament selon l'invention à induire l'interféron dans le sérum sanguin d'animaux expérimentaux a été étu- diée. Le médicament selon l'invention a été administré par voie buccale une seule 'lois à raison de 250,.125 et 62,5 mg/kg à des souris (3 lots de 100 souris chacun) et au bout de 16, 24, 48 et 72 heures on a prélevé du sérum sanguin, qui fut utilisé pour le titrage de l'interféron dans les cellules L des souris de lignée pure contaminée par le virus-test de la stomatite vésiculeuse. De plus, dans un lot de 20 souris le médicament selon l'invention a été injecté par par voie intra-péritonéale à raison de 10 mg/kg en une seule fois et au bout de 24 heures on a prélevé du sérum sanguin, dans lequel on a également déterminé le titre d'interféron. Les résultats des essais sont présentés dans le tableau 3. TABLEAU 3 Evolution de l'induction de l'interféron dans le sérum sanguin de souris sous l'influence du médicament selon l'invention g t Médicament et Titre d'interféron (U/ml) au bout de moded'adminis- Dose,............à........... tration mg/kg 16 h 24 h 48 h 72 h Le médicament 250 320-540 i 640-1280 l 320 l 160 - selon l'inven- 125 640 320-640 640 160 tion par voie 62,5, 320-640 640 160 40 buccale Le médicament selon l'inven- tion par voie intra- g pas péritonéale 10 étudié 640-1280 pas étudié g g I Sérum sanguin g des souris sans t médicament ' selon l'inven- l tion 0 10-20 10-20 10-20 1 10-20 l Les résultats présentés dans le tableau 3 montrent que sous l'influence du médicament, selon l'invention, administré par voie buccale l'interféron est induit dans le sérum sanguin. Cet effet est caractérisé par sa dépendance. de la dose et se manifeste le mieux pour des doses de réfé- rence variant entre 250 et 62,5 mg/kg de masse corporelle de l'animal. Les titres élevés d'interféron (640 U/ml) sont décelés dans le sérum des souris au bout de 16 h et sont observés jusqu'à 48 h. Le médicament selon l'inven- tion stimule également l'induction d'interféron lors de son injection par voie intra-péritonéale. Lors de l'administration répétée du médicament selon l'invention à des souris dans le but d'induire la formation d'interféron, il survient un état d'hyporéac- tivité dans le sérum sanguin. L'état d'hyporéactivité est un phénomène typique, conséquence de l'action des induc- lO teurs d'interféron. Le médicament selon l'invention en tant qu'in- ducteur d'interféron a une action prophylactique contre des infections virales expérimentales. Cette action pro- phylactique a été étudiée par rapport à la pneumonie grip- pale des souris, contractée par contamination par voie nasale des animaux à l'aide du virus de la grippe de type A (Bethezda) 63 (H2N2), A (Aichi) (H3N2), et par rapport à l'herpès généralisé des souris, contracté par contamination par voie nasale à l'aide du virus de l'hef- pès simple du type du premier antigène de souche L2. Les résultats sont présentés dans le tableau 4. TABLEAU 4 Action prophylactique du médicament selon l'invention dans les infections virales expérimentales Pneumonie grippale des souris Herpès généralisé des souris Moment et Létalité Diminu- P Moment Létalité Diminu- P Dose mode d'admi- -quantitte tion de (fiabi- Dose et mode quantité tion de (fiabi mg/kg nistration absolue % la léta- lité) mg/kg d'admi- absolue % la létalité) d'animaux lité nistra- d'animaux lité %.tion % _ -:..._...._.... . par voie 8/40 20 50 31,2 la contamina- 12/40 30 40 tion mination emoin 28/40 70 - Témoin 20/20 100 (sans le (sans médica- le médi ment) cament) en numérateur - le nombre d'animaux morts en dénominateur - le nombre de souris dans le lot o> C> Le médicament selon l'invention administré prophy- lactiquement par voie buccale 24 et 6 heures avant la con- tamination à raison de doses allant de 31,2 mg/kg à mg/kg diminue la létalité des-souris par pneumonie grippale de 40 à 50% par rapport au témoin. L'administration du médicament selon l'invention par voie buccale à raison de 30 mg/kg une seule fois 24 heures avant la contamina- tion préserve de la mort 40% des animaux atteints d'her- pès généralisé. L'activité inductrice d'interféron du médicament selon l'invention a été également étudiée chez l'humain. La recherche de l'interféron sérique a été effectuée sur des sérums sanguins des personnes ayant reçu par voie bucr cale le médicament selon l'invention en comprimés (0,I g) selon différents schémas. Le titrage des sérums. a été effec- tué selon la méthode universellement adoptée en utilisant une culture de cellules humaines diplo.ides M-22 et le vi- rus-test de l'encéphalomyocardite des souris. Les résul- tats sont présentés dans le tableau 5. TABLEAU 5 Etude de l'activité'inductrice d'interféron du médicament selon l'invention chez les humains r tf Présence d'interféron dans le serum sanguin humain Après une dose |Après 3 doses Après 6 doses unique de médiJdu médicament du médicament cament selon Iselon l'inven- selon l'invention f_ 0 l'invention Ition pendant pendant deux Nombre de pendant un 'un jour/ jours/600 mg/ N du t personnes jour/100 mg/ 1300 mg/ lot dans le à------ - - à-.-------------- lot Nombrel Titre 'Nombre' Titre Nombre Titre de ré-, de 'de ré-j de I de ré- de fr Oponsesi l'in- 1ponses' l'in- J ponses il'inter- posi- terfé-;posi- terfé- posi- féron, tives ron, Itives tron, tives U/m U/ml U/ml 1 f à..à.....-...L........ à3------ ------- - ' ler 13 8 40-80 - -.-. lot I 2ème " 12 - 12 '160-320' 12 140-80 lot X U/ml = Unit s/MI. U/ml = Unités/ml.- Il a été établi que.l'administration unique du médicament selon l'invention par voie buccale à raison de mg a induit l'apparition d'interféron dans le sérum sanguin à des titres de 40 à 80 U/ml chez 8 des 13 volon- taires examinés (61,5%). L'administration du médicament selon l'invention à raison d'un comprimé trois fois par jour (300 mg) a provoqué une augmentation brusque de l'induction d'interféron. L'interféron a été décelé dans le sérum sanguin de tous les 12 volontaires (100%) à des titres atteignant le niveau de 160 à 320 U/ml. L'augmen- tation ultérieure de la dose jusqu'à 600 mg pendant 2 jours (3 comprimés par jour) a conduit à une diminution brusque de l'induction de l'interféron (le titre de l'interféron dans le sérum sanguin n'a pas dépassé 40 à 80 U/ml). Les résultats obtenus témoignent de l'activité notable du médicament selon l'invention sur l'induction de l'interféron chez les humains lors de son administration par voie buccale. La quantité maximaled'interféron dans lesérum sanguin humain est déterminée après l'absorption de 300 mg du médicament (100 mg 3 fois par jour). L'augmen- tation de la dose et de la durée de la prise du médicament selon l'invention conduit chez les humains à un état d'hy- poréactivité, caractérisée par une diminution brusque db titre de l'interféron sérique. L'activité immunomodulante du médicament, selon l'invention, a été étudiée. L'influence du médicament selon l'invention, sur la fonction du système immunitaire a été étudiée. L'influence du médicament selon l'invention, sur la fonction des cellules phagocytaires a été étudiée chez des femelles matures de souris hybrides (CBA/C 57 BL6) F. Le médicament a été administré par voie buccale à raison de 125 mg/kg en une fois et une fois par jour pen- dant 5 jours. Le lévamisole a été utlisé comme médicament témoin et administré selon le même schéma à raison de pg/par souris. A différents délais après l'administra- tion du médicament aux souris, on a mis en évidence les macrophages péritonéaux dont la capacité d'absorption a été déterminée d'après l'absorption du rouge neutre et la quantité par spectrophotométrie selon une courbe calibrée, pour une longueur d'onde de 530 nm. Les résultats sont présentés dans le tableau 6. TABLEAU 6 Capacité d'absorption (pg/6.106 cellules) des macrophages péritonéaux à différents délais après l'administration unique du médicament selon l'invention ou de lévamisole Délais après Té Médicament l'administraTemoin Lévamisole selon tion amion l'invention 1 jour 20,8-3,8 24,2 4,5 27,7 3,5 (24 heures) a'p I I I I I I Les résultats entre parenthèses se rapportent au pourcen- tage par rapport au témoin. L'administration du médicament selon l'invention ou du lévemisole n'a pas influencé la quantité de macro- phages extraits par lavage de la cavité péritonéale mais a stimulé leur. capacité d'absorption. C'est ainsi que 2 à 3 jours après l'administration unique du médicament se- lon l'invention la capacité d'absorption des macrophages chez les souris ayant reçu ce médicament a augmenté jus- qu'à 155%, alors que chez les souris ayant reçu du léva- misole elle avait atteint 135% (p Après l'administration quotidienne des deux médicaments aux mêmes doses pendant 5 jours la capacité d'absorption des macrophages est restée au même niveau - respectivement 16413% (p l'invention stimule la capacité d'absorption des macro- phages de façon plus marquée que ne le fait le lévamisole. L'influence du médicament selon l'invention sur la génèse des anticorps a été étudiée par comparaison avec celle du lévamisole et de i'ARN à double spirale du phage RF2. Des souris-hybrides ont été utilisées (CBA/C 57 BL6) F ainsi que des animaux porteurs de tumeurs telles que le carcinome de la glande mammaire implanté sous la peau de la cuisse, des animaux intacts et irradiés totalement à 2 Gy. La génèse des anticorps a été étudiée par rapport aux globules rouges des moutons ayant subi l'immunisation par voie intra-péritonéale à raison de 1.108 cellules. Au bout de 5 jours après l'immunisation les animaux étaient abattus par décapitation et la quantité de cellules de la rate formant des anticorps était déterminée selon la méthode de Kaningheim. La somme des résultats expérimentaux est présentée dans le tableau 7. Le médicament selon l'invention a augmenté la quantité de cellules formant des anticorps quel que soit le mode d'administration jusqu'à 167 à 246%. Le lévamisole et i'ARN à double spirale du phage RF2 n'ont augmenté la quantité de cellules formant des anticorps que de 143 à 170% . Seul le médicament selon l'invention a eu une action stimulante marquée sur les animaux frradiés, en par- ticulier au plus haut degré lors de l'administration du médicament 3 jours avant l'irradiation. La réponse immuni- taire de suite après l'irradiation représentait 230% de celle des témoins. -Chez ces mêmes animaux le lévamisole est peu efficace, 'ARN double spirale du phage RF2 ne 26S0504 l'est pas du tout. Le médicament selon l'invention a eu également un effet immunostimulant sur-les animaux porteurs de tumeurs (du 7ème au 17ème jour de croissance de la tumeur) après une administration unique(l'immunisation étant pratiquée après 3 jours) ou 5 fois quotidiennement. Le lévamisole et l'ARN à double spirale du phage RF2 n'ont pas été effi- caces dans ces expériences. Le médicament selon l'invention a été actif chez les animaux porteurs de tumeurs irradiés totalement, ayant une action immunostimulante marquée même quand le niveau de la génèse des anticorps était diminué d'environ fois par rapport à celui des animaux intacts. Le lévami- sole a également eu une action immunostimulante chez ces animaux. L 'ARN à double spirale du phage RF2 n'a pas eu d'effet. Ainsi donc, le médicament selon l'invention a la capacité de stimuler la génèse des anticorps chez.tous les animaux étudiés, autant intacts qu'irradiés, et son effi- cacité est supérieure à celle des produits de comparaison, c'est-à-dire le lévamisole et l'ARN à double spirale du phage RF2. TABLEAU 7 Etude comparée de l'influence du médicament selon l'invention, du lévamisole et de l'ARN à double spirale du phage RF sur la génèse des anticorps (en % par rapport aux témoins) chez des souris intactes, irradiées totalement (2 Gy), porteuses de tumeurs et porteuses de tumeurs irradiées totalement (2 Gy) TABLEAU 7 i _ I I I a ARN h doubtle Médicament aMédicament Médicament dLévamisole Lévamisole spirale (lu Médicament selon l'in- Iselon l'Jnselon l'in- Lots d'ani- quotidien- 5 fois avec phage Rr 5 fois:helon vention quoIvention quo- vention maux (souris)nement pen- un intervalle' avec un inle r-l'invenlioni LidliennementILiennement 5 fois avec dant 3 jours de 5 jours valle (de 3 joursti s fo'i i pendant 3 jours pendant 5 jours, un inLervulle Iiedn Ior irlev I] ___________| __ _" ____,___de 3 jours t I i, t i ' I I I Intactes 164-6,1 170+15,1* 143+7,5' 24t6+6,0 a 14113 j 192-14,0* 167+12, 3* Irradiées I totalement ' (2 Gy), 171-24,0 104-6,0 j 886,6 1230-12,0 j 129-19 j 10111,3 96-20,0 Porteuses 0 de tumeurs 14-23,0 91-14,0 t 74-31, 0:21110,0 99-19 154 16,6* 110-11,0 Porteuses I de tumeurs I irradiées 8635,0 402-12,5 9221,0 175+24,6* 121-25 128-28,5 250521,5+ I ' Note: - la différence avec les témoins est fiable (P40,05) tlj re o Uin oC On a étudié l'influence du médicament selon l'invention sur la réaction d'immunité cellulaire, testée par la réaction du greffon contre le receveur. On a irradié des souris hybrides (CBA/C 57 BL6) F- mâles âgés de 3 mois à raison de 5 Gy. Un jour après l'ir- radiation on a injecté par voie intra-veineuse des lympho- cytes obtenus à partir des ganglions lymphatiques mésen- tériques de souris de lignée mère CBA âgées de 3 mois, à raison de 1,25, 2,5 et 5,0 millions de caryocytes. Dans les groupes expérimentaux, de suite après l'injection intra-veineuse de lymphocytes, on a administré par voie buccale le médicament selon l'invention à raison de mg/kg de la masse du corps ou de lévamisole à raison de 5 mg/kg dans une solution d'amidon à 2,%. Dans chaque lot il y avait 15 sou-ris. Huit jours après l'irradiation on a tué des souris, leurs rates ont été fixées et on y a compté le nombre de colonies de diamètre supérieur à 0,2 mm. Les données obtenues sont présentées dans le tableau 8. L'injection de lymphocytes allogènes en fortes doses (2,5 et 5 millions) cause chez les témoins une dimi- nution du nombre de colonies spléniques, alors que, dans le cas de l'utilisation de la dose minimum (1,25.10 6) la formation de colonies dans la rate augmente un peu. L'ad- ministration du médicament selon l'invention diminue les deux variantes de déviation par rapport aux valeurs té- moin, à condition toutefois que la dose des cellules in- jectées ne soit pas la plus forte (5.106). Le lévamisole a le même genre d'action, seulement un peu moins marquée. De plus, dans le cas o les lymphocytes allogènes ne sont pas injectés, le lévamisole diminue quelque peu la for- mation des colonies de là rate, alors que le médicament selon l'invention n'a pas cet effet. TABLEAU 8 Influence du médicament selon l'invention et du lévamisole sur l'inactivation des cellules souches par les lymphocytes allogènes Quantité Administra- Nombre de colonies en- de lympho- tion de médi- clnie en- cytes in- cament par dogènes de la Médicament, injectés voie buccale i rate x106 (M + m) Témoin 5,0 - 0,3 0,1 --"'"-- i 2,5 - i09., 2,5 0,9:t0,3 1,25 - 4,1C0,6 Médicament 5,0 + 0,3t0,1 ] I. I selon l'in- vention -""-- 2,5! -!0'+0' Tl 2,5 I + I 1,6 0,2 --""-- ô 1,25 + 2,510,4 --'--! -! - I 2,210,4 Lévamisole 5,0 + 0,7-0,2 --""-- 2,5 + 1,1-0,2 --""-- 1,25 + 2,3-0,5 I,.1 1 __ __| _ X + ^ 2,2 0,5 Ainsi donc, l'administration du médicament selon l'invention dans les conditions d'une réaction induite du greffon contre le receveur normalise l'activité de prolifération des-"cellules cibles" et leur capacité de donner des colonies viables aussi bien'dans le cas d'inhi- bition de cette activité, en présence de fortes doses de lymphocytes, que dans celui de stimulation, en présence de doses moindres de lymphocytes, Le médicament de l'invention dépasse le lévamisole, qui est un médicament connu, en efficacité. Les qualités immunostimulantes du médicament selon l'invention ont été étudiées-sur les modèles de la crois- sance de tumeurs implantées et de brOlure de la peau. On a étudié l'influence du médicament selon l'in- vention sur la croissance du sarcome-45 implanté sous la peau de la cuisse droite de rats mâles matures de la li- gnée Wistar. Le médicament selon l'invention a été intro- duit dans l'estomac sous forme d'une suspension dans une solution à 1% d'amidon à raison de 125 mg/kg pendant jours quotidiennement et ceci à partir de 2 semaines après l'inoculation de la tumeur. Les animaux témoins n'ont reçu que la solution d'amidon. L'évolution de la tumeur a été contrôlée par des mesures vitales de son volume. Pen- dant les deux mois de la durée de l'observation on a dé- couvert une inhibition de la croissance de la tumeur dans le lot (10 animaux) qui a reçu le médicament selon l'in-. vention. Ainsi donc, le médicament selon l'invention exer- ce une.action inhibitrice sur la croissance d'une tumeur expérimentale fibroblastique, probablement médiée par la stimulation de la réactivité immunologique. Les résultats des essais sont présentés dans le - tableau 9. TABLEAU 9 Influence du médicament selon l'invention, 125 mg/kg par jour pendant 5 jours,sur la croissance du sarcome-45 chez les rats. TABLEAU 9 ti Croissance de la tumeur en cm Moment écoulé après l'implantation de la tumeur sans médicament avec administration i selon l'invention du médicament selon l'invention 1 mois 11,9-0,86 8,2-1,4 !i p L'étude de l'influence du médicament selon l'in- vention sur les brûlures de la peau a mis en évidence la capacité du médicament selon l'invention à exercer une action de protection thermique et à diminuer la brûlure de la peau. On a étudié l'influence du médicament-selon l'in- vention sur l'état de l'immunité de personnes. Vingt cinq jeunes gens bien protants, volontaires, âgés de 18 à 30 ans ont été mis en observation. On a évalué l'état immunitaire sur la base de. l'étude du système immunitaire des cellules-T, à savoir l'état des lymphocytes du sang périphérique, la teneur absolue et relative en cellules-T (par la méthode de Gondal), l'état de stabilité des récepteurs sur la mem- brane superficielle des lymphocytes. L'influence de doses variées du médicament selon l'invention sur l'état immunitaire des jeunes gens a été étudiée sans stimulation préalable par un antigène et lors d'une infection par le vaccin de la grippe, créée par vaccination à l'aide du vaccin anti-A administré par voie nasale en proportion 1: 1 avec un diluant et en volume de 1,0 ml. L'investigation a été menée selon la méthode du double contrôle aveugle et en plus des comprimés du médi- cament selon l'invention on a utilisé un placebo d'aspect analogue. Les résultats ont été soumis à une analyse sta- tistique. Les données obtenues montrent que le médicament selon l'invention administré une fois par voie buccale à raison de 100 mg et en doses quotidiennes de 300 mg, soit 100 mg trois fois par jour, ne modifie pas-quantita- tivement la population de cellules-T mais cause une modi- fication de la liaison des récepteurs avec la membrane su- perficielle des lymphocytes, modification qui se maintient pendant les 14 jours de la durée de l'observation. La vaccination effectuée un jour après l'adminis- tration du médicament selon l'invention, n'a pas influencé le caractère des modifications de la liaison des récepteurs avec la membrane des lymphocytes. Les modifications des propriétés de la surface membranaire des lymphocytes sous l'action du médicament selon l'invention se répercutent probablement sur des variations des propriétés fonctionnelles de ces cellules conduisant à un renforcement de la fonction du système im- -30 unitaire, dont l'effet protecteur du médicament selon l'invention observé vis à vis 'du développement de l'in- fection grippale est représentatif. Le médicament selon l'invention prévient le développement-des complications post-grippales et diminue de façon sensible la fréquence des aggravations des maladies chroniques chez les personnes qui ont souffert de la grippe. Les résultats des essais ont montré que le médi- cament selon l'invention est inoffensif, est bien toléré, à un effet thérapeutique en cas de grippes des types A et B, prévient le développement des complications post- grippales et l'aggravation des maladies chroniques après une grippe. De plus, le médicament selon l'invention est un inducteur d'interféron efficace et un immunostimu- lateur n'ayant aucun effet toxique et secondaire sur l'organisme. Le médicament selon l'invention peut être recommandé comme immunostimulateur dans les cas de défi- cits immunitaires secondaires, y compris ceux des traite- * ments aux rayons et aux radiations thermiques chez des malades carcinologiques, ainsi que les cas d'infections virales chroniques et récidivantes. Il est recommandé de prendre le médicament de l'invention une ou deux fois par semaine pendant toute la durée de la cure du traitement spécifique anticancé- reux. La quantité de substance absorbée en une fois est de 300 à 400 mg (soit environ 250 mg/m2), celle d'une cure (compte tenu du fait qu'une cure anticancéreuse dure 1 à 2 mois) est de 3 à 6 g de médicament selon l'inven- tion. Les résultats de l'étude de la pharmacocinétique du médicament selon l'invention marqué au C14 montrent que le produit est rapidement éliminé ce qui permet d'éviter une cumulation éventuelle dans l'organisme. Le principe actif du médicament selon l'inven- tion c'est-à-dire l'hydrochlorure monohydraté de l'ester éthylique de l'acide 6-bromo-5-hydroxy-4-diméthylaminomé- -thyl-1-méthyl-2-phénylthiométhylindole-3-carbonique est obtenu de la façon suivante. L'ester éthylique de l'acide 5-acétoxy-1,2-dimé- thylindole-3-carbonique est traité par un agent donneur de brome dans un milieu de solvant organique inerte en ébul- lition. Comme agent donneur de brome on utilise de pré- férence le brome ou le N-bromosuccinimide, et comme sol- vant organique on utilise le chloroforme, le dichloréthane ou le tétrachlorure de carbone. L'ester éthylique de l'aci- de 5-acétoxy-6-bromo-2-bromométhyl-1-méthylindole-3- carbonique formé est soumis à l'interaction avec un thio- phénol en présence d'hydroxyde d'un métal alcalin ou de son alcoolate en milieu de solvant organique. Comme hydroxyde de métal alcalin on emploie la potasse, la soude caustique au alors la réaction se passe en présence d'alcoolate de solium. Comme solvant oragni- que à ce stade-on préfère l'alcool méthylique, éthylique ou isopropylique. L'ester éthylique de l'acide 6-bromo-5-hydroxy- 1-méthyl-2-phénylthiométhylindole-3-carbonique.obtenu est soumis à l'action d'un agent aminométhylant, le bisdimé- thylaminométhane ou d'un mélange de diméthylamine et de formol, en milieu de solvant organique à une température allant de 650C à la température d'ébullition de la masse en réaction. Lors de la réaction.aminométhylante par le bis- diméthylaminométhane, il est avantageux d'employer du dioxane et de conduire la réaction- à la température d'ébullition. Le rendement en ester éthylique de l'acide 6-bromo-5-hydroxy-4-diméthylaminométhyl-l-méthyl-2- phénylthiométhylindole-3-carbonique représente 70%. Si l'on emploie pour la réaction aminométhylante un mélange de diméthylamine et de formol il est avantageux d'employer comme solvant organique l'acide acét.ique et de conduire la réaction à une température de 65 à 75 C. La- baisse de la température de la réaction la ralentit, son augmentation cause la caramélisation de la masse en réac- tion. Le rendement en ester éthylique de l'acide 6-bromo- 4-diméthylaminométhyl-1l-méthyl-2-phénylthiométhylindole-3- carbonique à ce stade représente 85%. On sépare le produit recherché grâce à l'adjonc- tion d'une solution d'acide chlorhydrique dans l'éther à la solution de la base obtenue dans l'acétone. Il est préférable de séparer le produit recherché en soumettant la base obtenue à l'action de l'acide chlorhydrique en mi- lieu d'acétone en ébullition. Le schéma réactionnel est le suivant: AcO 00C2H5 Br2 ouNBS- Eb CH3 Br - 2 0 hH Br "' I CH3 CH3 oBr ACH2Br5C6H5 (0H3)2NOH2N(H3)2 -CH Eb CH3 CH0, CH2N(CH3)2 _25 C HO COO0C2H5. Br-.2Brc605S6H (CH3)NCH2N(CH3) 3,H2 2 3U $ H. 2CHC6 Eb3 CH2N(CH3) HH3 HO i/COOC 2H5.HC1À H0 HC1,H 20B H cH L'invention sera mieux comprise à l'aide des exem- ples non limitatifs suivants. Exemple 1 A une solution de 110 g f0,4 mole) de l'ester éthylique de l'acide 5-acétoxy-1,2-diméthylindole-3- carbonique dans 1200 ml de tétrachlorure de carbone on ajoute, en mélangeant le tout, 127,8 (0,8 mole) de brome et on fait bouillir. On refroidit la masse en réaction et on filtre le précipité. On obtient 150,7 (87'Q) de l'ester éthylique de l'acide 5-acétoxy-6-bromo-2-bromométhyl-1-méthylindole- 3-carbonique sous forme d'une poudre cristalline blanche, soluble en la réchauffant dans un alcool inférieur, le chlorure de carbone et insoluble dans l'eau. La tempéra- ture de fusion est de 179 à 1!00C. Trouvé, en: C 41i.50, H 3,50, Br 36,97, C15H15Br20 Calculé, en%: C 4150, H 3,49, Br 36,90. A une solution de 52,1 g (0,93 mole) de potasse dans 1300 ml de méthanol à la température ambiante et en mélangeant, -on ajoute 34,1 g (0,31 mole) de thiophénol et ensuite 135 g (0,31 mole) d'ester éthylique d'acide acétoxy-6-bromo-2-bromométhyvl-1-méthylindole-3-carboni- que. Le mélange est maintenu à Ia température ambiante pendant 3 heures, puis neutralisé par de l'acide acétique dilué, le précipité est filtré et lavé à l'eau. On obtient 125,6 g (96,4%) de l'ester éthylique de l'acide 6-bromo-5-hydroxy-1-méthyl-2-phénylthiométhylindole- 3-carbonique sous forme de poudre cristalline de couleur jaunâtre, soluble en la réchauffant dans un alcool infé- rieur, l'éthylacétate,et insoluble dans l'eau. La tempé- rature de fusion est de 196 à 1970C (à partir de l'éthyla- cétate). Trouvé, en %: C 54,14, H 4,24, C H. BrNO S * C19H18BrN035, Calculé, en: C 54,30, H 4,32. A 125 ml d'acide acétique'en mélangeant et en refroidissant on ajoute 56 ml (0,385 mole) d'une solution à 33%o de diméthylamine et ensuite 12,6 ml (0,165 mole) d'une solution de formol à 37,7%. A la solution obtenue on ajoute 61,3 g (0,146 mole) de l'ester éthylique de l'acide 6-bromo-5-hydroxy-l-méthyl-2-phénylthiométhylin- dole-3-carbonique. La masse en réaction est mélangée à la température de 65 à 750C pendant 30 minutes. La solution fournie est refroidie et neutralisée par une solution de soude caustique. Le préci- pité est séparé et lavé à l'eau. On obtient 59,9 g (85,1%) de l'ester éthylique de l'acide 6-bromo-5-hydroxy-4-diméthylaminométhyl-1-méthyl- 2-phénylthiométhylindole-3-carbonique sous forme d'une pou- dre cristalline de couleur blanche soluble en la réchauf- fant dans l'acétone, l'acétonitrile, le dioxane, un alcool inférieur et insoluble dans l'eau. La température de fu- sion est de 127 à 128 C (à partir de l'acétonitrile). Trouvé, en: C 55,53, H 5,35, N 6,01, C H BrN O S. C22H25BrN203 Calculé, en: C 55,34, H 5,29, N 5,87. A une solution de 47,1 g (0,0986 mole) d'ester éthylique de l'acide 6-bromo-5-hydroxy-4-diméthylamino- méthyl-l-méthyl -2-phénylthiométhylindole-3-carbonique dans 280 ml d'acétone en mélangeant et à l'ébullition on ajoute 11 ml (0,1282 mole) d'acide chlorhydrique concentré. La masse en réaction est refroidie, le précipité est séparé et recristallisé dans un mélange d'acétone et de méthanol. On obtient 45,1 g (86%) de produit final, l'hydro- chlorure monohydraté de l'ester éthylique de l'acide 6-bromo- -hydroxy--4-diméthylaminométhyl-1-méthyl-2-phénylthiométhy- -lindole-3carbonique. Trouvé, en: C 4.9,57, H 5,30, Br 14,98, C1 6,54, S 5,89, N 5,30, H20 3,28. C22H28BrC1N204S. Calculé, en %: C 49,67, H 5,31, 8r 15,02, Cl 6,.67, N 5,27, S 6,03, H20 3,38. Le rendement en produit final, en le calculant sur la base de l'ester éthylique de l'acide 5-acétoxy-l,2-dimé- thylindole-3-carboniquede départ est de 61,38%. Exemple 2 Le procédé est effectué de façon analogue à celle décrite dans l'exemple i sauf que, lors de l'obten-- tion de l'ester éthylique de l'acide 5-acétoxy-6-bromo-2- bromométhyl-l-méthylindole-3-carbonique la réaction est effectuée dans le chloroforme. Dans ce cas le produit indiqué est séparé à 79,3,%. La température de fusion est de 167 à 169 C. Le rendement en produit cherché est de 55,95,% en le calculant sur l'ester éthylique de l'acide 5-acétoxy-1,2- diméthylindole-3-carbonique. Le produit est identique à celui décrit dans l'exemple 1. Exemple 3 Le procédé est réalisé de façon analogue à celle de l'exemple 1, sauf que, pour l'obtention de l'ester éthylique de l'acide 5-acétoxy-6-bromo-2-bromométhyl-1- méthylindole-3-carbonique la réaction se passe dans le dichloréthane. Dans ce cas le produit mentionné est séparé à 63,5% . Sa température de fusion est de 167 à 168 C. Le rendement en produit cherché est de 46,07% en le calculant sur l'ester éthylique de l'acide 5-acétoxy-l,2- diméthylindole-3-carbonique. Le produit est identique à celui décrit dans l'exemple 1. Exemple 4 A une solution de 44 g (0,16 mole) de l'ester éthylique de l'acide 5-acétoxy-l,2-diméthylindole-3-carbo- -nique dans 560 ml de tétrachlorure de carbone on ajoute 64 g (0,36 mole) de N-bromosuccinimide et on fait bouil- lir le mélange en réaction pendant 6 heures. On filtre la solution chaude pour en séparer la succinimide, on la lave au tétrachlorure de carbone chaud. Après une évapo- ration partielle du filtrat dans le vide et son refroidis- sement, le précipité est séparé et recristallisé dans l'isopropanol. On obtient 43,4 g (62,7%) d'ester éthylique de l'acide 5-acétoxy-6-bromo-2-bromométhyl-1-méthylindole- 3-carbonique de température de fusion égale à: 179 à 180 C. Ensuite, le procédé est conduit de façon analogue à celle de l'exemple 1. Exemple 5 le procédé est réalisé de façon analogue à celle décrite dans l'exemple 1, sauf que lors de l'obtention de l'ester éthylique de l'acide 6-bromo-5-hydroxy-4- diméthylaminométhyl-l-méthyl-2-phénylthiométhylindole- 3-carbonique, la réaction aminométhylante s'effectue de la façon suivante. A une solution de 76,4 g (0,18 mole) d'ester éthy- lique d'acide 6-bromo-5-hydroxy-1-méthyl-2-phénylthiomé- thylindole-3-carbonique dans 470 ml de dioxane on ajoute ml (0,36 mole) de bis-diméthylaminométhane. On fait bouillir la masse en réaction pendant 3 heures, on-la refroidit, on la dilue dans 3 à 4 volumes d'eau. Les cris- taux précipités sont séparés, lavés à l'eau et séchés. On obtient 60,1 g (70%) d'ester éthylique de l'acide 6-bromo-. -hydroxy-4-diméthylaminométhyl=l-méthyl-2-phénylthiométhy- lindole -3carbonique de température de fusion égale à: à 126 C. Ensuite le procédé est conduit de façon analogue à celle de l'exemple 1. Le rendement en produit cherché est de 50,49% en le calculant sur l'ester éthylique de l'acide 5-acétoxy-1,2- diméthylindole-3-carbonique de départ. La substance est identique à celle de l'exemple 1. Exemple 6 Le procédé est réalisé de façon analogue à celle de l'exemple 1, sauf que le processus d'obtention de l'es- ter éthylique de l'acide 6-bromo-5-hydroxy-1-méthyl-2- phénylthiométhylindole-3-carbonique s'effectue dans l'étha- nol en présence d'éthylate de sodium. Le produit de la réaction est séparé à 96,8%. Sa température de fusion est de 196 à 1970C. Le rendement en produitcherché en le calculant sur l'ester éthylique de l'acide 5-acétoxy-1,2-diméthylindole: 3-carbonique est de 59,4o.- Exemple 7 Le procédé est réalisé de façon analogue à celle de l'exemple 1, sauf que le processus d'obtention de l'ester éthylique de l'acide 6-bromo-5-hydroxy-l-méthyl- 2-phénylthiométhylindole-3-carbonique s'effectue dans l'isopropanol en présence de soude caustique. Le produit de la réaction est séparé à 94,5,n, sa température de fusion est de 196 à 197 C. Le rendement en produit final en le calculant sur l'ester éthylique de l'acide 5-acétoxy-1,2-diméthyl- indole-3-carbonique est de 56,7?%.! R E V E N D I C A T I 0 N S i. Hydrochlorure monohydraté de l'ester éthylique de l'acide 6-bromo-5-hydroxy-4-diméthylaminométhyl-1-méthyl- 2-phénylthiométhylindole-3-carbonique de formule suivante: CH2N(CH3)2 HO X 2 5. HC1.H20 Br s Br N CH2SC6H5 CH3 LM3 2. Procédé de production d'hydrochlorure monohy- draté de l'ester éthylique de l'acide 6-bromo-5-hydroxy-4- diméthylaminométhyl-l-méthyl-2-phénylthiométhylindole.-3- carbonique, caractérisé en ce qu'on traite l'ester éthyli- que de l'acide 5-acétoxy-l,2-diméthylindole-3-carbonique par un agent donneur de brome dans un milieu de solvant organique en ébullition, on soumet l'ester éthylique de l'acide 5-acétoxy-6-bromo-2-bromométhyl-1-méthylindole-3- carbonique formé à une interaction avec du thiophénol en présence d'hydroxyde d'un métal alcalin ou de son alcoolate dans un milieu de solvant organique, on soumet l'ester éthylique de l'acide 6-bromo-5-hydroxy-l-méthyl-2-phényl- thiométhylindole-3-carbonique ainsi obtenu à l'action d'un agent aminométhylant dans un milieu de solvant organique à une température allant de 65 C-à celle de l'ébullition du mélange en réaction et ensuite à partir de la base ainsi formée, l'ester éthylique de l'acide 6-bromo-5-hydroxy-4- diméthylaminométhyl-l-méthyl-2-phénylthiométhylindole-3- carbonique, on extrait le produit final. 3. Procédé selon la revendication 2, caractérisé ence que comme agent donneur de brome, on utilise le brome ou le N-bromosuccinimide. 4. Procédé selon l'une des revendications 2 ou 3, caractérisé en ce que comme solvant organique inerte on utilise le chloroforme, le dichloréthane ou le tétrachlo- rure de carbone. 5. Procédé selon la revendication 2, caractérisé en ce que pour l'interaction de l'ester éthylique de l'aci- de 5-acétoxy-6-bromo-2-bromométhyl-1-méthylindole-3-carbo- -nique avec le thiophénol, on utilise comme solvant organi- que de l'alcool méthylique, éthylique ou isopropylique. 6. Procédé selon la revendication 2, caractérisé en ce que, comme agent aminométhylant, on utilise un mé- lange de diméthylamine et de formol ou le bis-diméthylami- nométhane. 7. Procédé selon les revendications 2 et 6, caractérisé en ce que, lors de l'utilisation du mélange de diméthylamine et de formol, on utilise comme solvant organique de l'acide acétique et la réaction aminométhy- lante est conduite à une température de 65 à 75 C. 8. Procédé selon les revendications 2 et 6, caractérisé en ce que lors de l'utilisation de bis- diméthylaminométhane, on utilise comme solvant organique -'25 du dioxane et la réaction aminométhylante est conduite à la température d'ébullition du mélange en réaction. 9. Procédé selon la revendication 2, caractérisé en ce qu'on effectue la séparation du produit cherché par le traitement de l'ester éthylique de l'acide 6-bromo-5- hydroxy-4 diméthylaminométhyl-l-méthyl-2-phénylthiométhyl- indole-3 -carbonique par l'acide chlorhydrique dans un mi- lieu d'acétone en ébullition. 10. Médicament antiviral à effet inducteur d'in- terféron et immunomodulant, contenant un principe actif et un excipient pharmat-eutique, caractérisé en ce que comme pricipe actif il contient l'hydrochlorure monohydraté de de l'ester éthylique de l'acide 6-bromo-5-hydroxy-4-dimé- -thylaminométhyl-1-méthyl-2-phénylthiométhylindole-3- carbonique selon la revendication 1. 11. Médicament selon la revendication 10, sous forme de comprimés, caractérisé en ce qu'il contient le principe actif à raison de 0,1 à 0,2 g par comprimé. 12. Médicament selon la revendication 11, carac- térisé en ce qu'il contient de l'amidon ou du sucre en poudre comme excipient pharmaceutique.