Brevet FR2658519A1 — publié le 19910823

SUBSTRATS PEPTIDIQUES POUR IDENTIFICATION DU FACTEUR la DONDAINE DE L'INVENTION La présente invention a trait en tant que produits industriels nouveaux à des composés tri- et tétrapeptidiques. Ces nouveaux produits sont particulièrement utiles en tant que substrats pour l'identification et le dosage du Facteur la (i.e. Facteur X activé) intervenant dans les mécanismes de lthémostase. L'invention concerne également le procédé de préparation de ces nouveaux produits ainsi que le procédé de dosage et/ou d'identification du Facteur la au moyen desdits produits. ART ANTEXIEUR On sait que les enzymes de la classe E.C. 3.4.21 [telle que définie dans l'ouvrage "Enzyme Nomenclature", Elsevier Scientific Publishing Company, Amsterdam 1973, pages 238 et suivantes (ancienne nomenclature : classe E.C. 3.4.4.)3 sont des substances qui scindent les liaisons amides du squelette protéique ou peptidique du côté du groupe carboxyle des restes Arg, Lys, Orn et His. Il s'agit là d'un mécanisme de clivage bien connu de l'homme de métier et qui est amplement exemplifié dans les documents antérieurs cités ci-après. Les substrats d'enzymes de ladite classe actuellement utilisés sont des composés essentiellement tri- ou tétrapeptidiques dont l'extrémité N-terminale est généralement substituée par un groupe de blocage tel que benzoyle, benzyloxycarbonyle, t-butyloxycarbonyle, t-amyloxycarbonyle, tosyle, acétyle ou analogue, et dont ltextrémité CO-terminale est amidifiée par un groupe aminé pouvant être un reste radioactif ou un reste capable de conférer, avant ou (mieux) après clivage, une coloration ou une fluorescence, notamment un groupe pnitroanilino. Voir à cet effet, les documents de brevet suivants FR-A-2 372 798, EP-A-O 004 256, US-A 4 508 644, US-A-4 448 715, FR-A-2 471 411, FR-A-2 317 280 et FR-A-2 459 226. I1 se trouve que les dérivés peptidiques dans les documents de brevets précités ont peu d'affinité pour l'eau. Ils sont peu solubles ou peu dispersables dans l'eau; par suite il est quelquefois nécessaire de leur adjoindre un solvant organique pour pouvoir les utiliser. Les systèmes comprenant des solvants mixtes ne sont guère compatibles, d'une manière générale, avec les milieux biologiques : ils entraient soit une diminution de l'activité du substrat, soit encore, dans certains cas, une déterioration de l'enzyme que l'on veut doser. De plus, la faible affinité pour lleau de ces substrats entraîne une diminution de la sensibilité des méthodes de dosage des enzymes. Pour améliorer l'hydrosolubilité des substrats enzymatiques, on connait de EP-A-O 025 190 une première solution technique qui consiste à substituer sur ladite extrémité N-terminale un reste de polyéthylèneglycol monoéthérifié par un groupe alkyle, par exemple Me-O(CH2CH20)x-CO (où x est un nombre entier tel que le reste de polyéthylèneglycol ait un poids moléculaire moyen de 600 environ), le reste aminoacide comportant l'extrémité CO-terminale de la channe peptidique étant différent des restes Arg et Lys qui interviennent selon l'invention comme on le verra ci-après ; et on connait de de EP-A-O 280 610 (de la Demanderesse) une autre solution technique qui consiste à fixer sur l'extrémité Nterminale d'un dipeptide un reste alkyloxycarbonylméthylènecarbonyle, tel que le reste méthoxymalonyle (i.e. Me-O-CO-CH2-CO ; en abrégé MM). Par ailleurs selon le document EP-A-O 280 610 précité les substrats dipeptidiques comportant ledit reste méthoxymalonyle sur ladite extrémité N-terminale sont, d'une manière générale présentés comme étant plus sensibles vis-à-vis des enzymes de la classe E.C. 3.4.21 que les substrats tri- et tétrapeptidiques comportant ledit reste méthoxymalonyle. Toutefois ces substrats dipeptidiques selon EP-A-O 280 610 ne sont pas particulièrement spécifiques vis-à-vis du Facteur Xa et ne permettent pas un dosage efficace dudit Facteur Xa. On sait que le Facteur Xa, qui fait partie de la sous-classe E.C. 3.4.21.6, est un des éléments importants intervenant dans les mécanismes de l'hémostase. L'activation du Facteur X conduit à la formation du Facteur Xa, qui est une sérine protéase responsable de la transformation de la prothrombine en thrombine. I1 est donc très intéressant, du point de vue du diagnostic, de disposer de substrats peptidiques spécifiques du Facteur Xa et utilisables selon une technique de détermination simple avant tout accident thromboembolique néfaste. Pour la détermination du Facteur Xa on sait que l'on a déjà préconisé des substrats tri- et tétrapeptidiques. Parmi les substrats tripeptidiques qui ont été proposés à cet effet on connait en particulier - de EP-A-O 004 256 précité, les Cbo-L-Pyr-Gly-L-Arg-pNA, H-L-Pyr-Gly-L-Ar g-pNA et leurs sels d'addition d'acide; - de EP-A-O 110 306, les Z-D-Leu-Gly-L-Arg-pNA (présenté comme illustrant l'art antérieur ; voir tableau VIII page 32 dudit document EP-A-O 110 306), Z-D-Leu-Gly-L-Arg(2-OMe)pNA Z-D-Leu-Gly-L-Arg(2-CONHMe)pNA Z-D-Leu-Gly-L-Arg(2-COOBu)pNA, H-D-Lys(Z)-Gly-L-Arg(2-Z)pNA, Tos-Gly-L-Pro-L-Arg(2-CONHiPr)pNA, et leurs sels d'addition ; et, - de US-A-4 440 678 et US-A-4 480 030 (qui correspondent à EP-A-O 034 122), les composés de formule dans laquelle xl est alcanoyle en C2-C8, z -aminoalcanoyle en C2-C8, phénylalcanoyle (où le fragment alcanoyle est en C2-C4 et le fragment phényle peut être substitué en position para par NH2), cyclohexylcarbonyle (pouvant être substitué en position 4 par MeNH), benzoyle (pouvant être substitué en position ortho ou para), alkoxycarbonyle (où le fragment alkoxy est en C1-C8), benzyloxycarbonyle (où le fragment benzyloxy peut être substitué en position para par MeO, Me ou C1), alcanesulfonyle en C1-C4, phénylsulfonyle (où le fragment phényle peut être substitué en position para par Me),c X2 est alkyle en C1-C6 à chaîne hydrocarbonée linéaire ou ramifiée, hydroxyalkyle en C1-C2, alkoxyalkyle (où le fragment alkoxy est en C1-C4 et le fragment alkyle en C1 C2), LV-carboxyalkyle ou # -alkoxycarbonylalkyle (où les fragments alkyle sont en C1-C3 et le fragment alkoxy est en C1-C4), # -benzyloxycarbonylalkyle (où le fragment alkyle est en C1-C3), cyclohexyle, cyclohexylméthyle, 4-hydroxycyclohexylméthyle, phényle, benzyle, 4-hydroxybenzyle ou imidazol-4-yl-méthyle, avec la condition que X1 est différent du groupe benzyloxycarbonyle quand x2 est isopropyle ou cyclohexyle, X3 est alkyle en C1-C4, X4 est H, Me ou Et, X5 est un groupe aminé comportant un groupe amino substitué par un reste aromatique ou hétérocyclique, clivable par hydrolyse enzymatique pour donner un composé H-X5 coloré ou fluorescent détectable photométriquement, spectrophotométriquement, fluorophotométriquement, la quantité de H-X5 libérée étant proportionnelle à la quantité d'enzyme provoquant le clivage du substrat peptidique ; et leurs sels d'addition d'acide. Parmi les composés de formule lo, qui ont été proposés pour la détermination du Facteur Xa, on peut notamment citer les tripeptides Cbo-D-CHG-Gly-L-Arg-pNA, Cbo-D-CHT-MeGly-L-Arg-pNa, Cbo-D-CEA-MeGly-L-Arg-pNA, Cbo-D-Nle-MeGly-L-Arg-pNA, MeSO2-D-CHA-Gly-L-Arg-pNA, Boc-D-AOA-Gly-L-Arg-pNA et leurs sels d'addition d'acide. Parmi les composés tétrapeptidiques qui ont été décrits comme substrats utiles dans la détermination du Facteur Xa, on connaît en particulier - le composé S-2222 (commercialisé par la société dite Kabi Diagnostica, Stockholm, Suède) qui répond à la formule Bz-L-Ile-Glu-Gly-L-Arg-pNA, HC1 - de CH-A- 637 627 (correspondant à FR-A-2 372 798 précité) les composés Bz-L-Ile-Glu(OMe)-Gly-L-Arg-pNA, Bz-L-Ile-Asp(Mor)-Gly-L-Arg-pNA et leurs sels d'addition d'acide; - de EP-A-O 010 306 précité, le Bz-L-Ile-L-Glu(0Me ) -Gly-L-Arg-( 2-C0NHMe)pNA et ses sels d'addition d'acide. L'art antérieur relatif aux substrats tri- ou tétrapeptidiques préconisés pour la détermination du Facteur Xa enseigne que la spécificité est fonction (i) de la nature de la chaîne peptidique, (ii) de la structure du groupe de blocage de l'extrémité N-terminale, et (iii) du choix du groupe révélateur clivable de l'extrémité CO-terminale de ladite chaîne. OBJET DE L' INVENTION Suivant l'invention on préconise une nouvelle solution technique qui se différencie de l'art antérieur par le choix d'un groupe (i) bloquant l'extrémité Nterminale de la chaîne peptidique, et (ii) améliorant l1hydrosolubilité ou l'affinité pour l'eau des composés tri- ou tétrapeptidiques utiles dans la détermination du Facteur Xa. Ainsi, selon un premier aspect de l'invention on préconise en tant que produits industriels nouveaux, des composés peptidiques qui sont caractérisés en ce qu'ils sont choisis parmi l'ensemble constitué par (i) les tri- et tétrapeptides répondant à la formule Q-Al-A2-Gly-A4-R (I) dans laquelle Q est un groupe bloquant l'extrémité N-terminale de la chaîne peptidique et qui est choisi parmi l'ensemble constitué par (a) un reste oxymalonyle de formule Rl-O-CO-CH2-CO, où R1 est un groupe alkyle en C1-C4 ; un groupe phényle ; un groupe phényle substitué par un ou plusieurs groupes Me, MeO, C1, Br, F, CF3 ; un groupe cycloalkyle en C3-C6 ; un groupe benzyle ; un groupe benzyle substitué par un ou plusieurs groupes Me, MeO, C1, Br, F, CF3 ; ou un groupe cycloalkylméthyle où le fragment cycloalkyle est en C3-C6, et (b) un reste de polyléthylèneglycol de formule R2-O(CE2CH20)n-CO, où R2 est un groupe alkyle en C1-C6, phényle ou benzyle et n est un nombre entier ayant pour valeur 1 à 170, A1 est choisi parmi l'ensemble constitué par les groupes Leu, Ile, Nle, Nva, CHA, CHG, CHT, Phe, Ala et Lys où la fonction basique latérale du reste Lys est bloquée par un groupe convenable éliminant substantiellement le caractère basique de ladite fonction latérale, A2 est une simple liaison, Asp ou Glu, le groupe acide carboxylique latéral de Asp et Glu étant susceptible d'être estérifié ou amidifié, A4 est choisi parmi l'ensemble constitué par les groupes Arg et Lys, R est un moyen de marquage clivable ; et (ii) leurs sels d'addition. Selon un second aspect de l'invention on préconise l'utilisation des composés de formule I et de leurs sels d'addition d'acide en tant que substrats enzymatiques pour la détermination du Facteur sa. On a en effet trouvé de façon surprenante que les tri- et tétrapeptides selon 1 invention sont plus intéressants que les substrats tri- et tétrapeptidiques antérieurement connus dans le domaine de la détermination du Facteur Xa, soit par ce qu'ils sont plus actifs, soit par ce qu'ils sont plus sélectifs, soit encore par ce qu'ils sont plus hydrosolubles que lesdits substrats antérieurs. Suivant un autre aspect de l'invention on préconise un procédé pour la préparation des composés de formule I et de leurs sels d'addition. Suivant encore un autre aspect de l'invention on fournit un procédé de détermination du Facteur Xa au moyen des composés de formule I ou de leurs sels d'addition. ABREVIATIONS Dans la présente description, on a utilisé les abréviations suivantes par commodité - pour les restes d'aminoacide Ala = i-alanyle ss-Ala = ss-alanyle AOA = i-aminooctanoyle Arg = arginyle Asp = &alpha;-aspartyle CHA = 3-cyclohexylalanyle CHG = i-cyclohexylglycyle CHT = 3-(4-hydroxycyclohexyl)alanyle Ile = isoleucyle Leu = leucyle Lys = lysyle MeGly = N-méthylglycyle (ou sarcosyle) Nle = norleucyle Nva = norvalyle Phe = phénylalanyle Pro = prolyle Pyr = pyroglutaminyle (ou 2-pyrrolidone-5 carbonyle) - pour les autres abréviations Ac = acétyle AcOH = acide acétique Adoc = adamantyloxycarbonyle Aoc = t-amyloxycarbonyle Boc = t-butyloxycarbonyle Bop = hexafluorophosphate de l-(benzotria zolyl)oxy-tris(diméthylamino)phosphonium (autre nomenclature réactif de CASTRO) de formule Bu = n-butyle Bz = benzoyle Bzl = benzyle Cbo = carbobenzoxy CCM = chromatograhie sur couche mince DCCI = dicyclohexylcarbodiimide DIEA = diisopropyléthylamine DMF = diméthylformamide Et = éthyle EM = éthyloxymalonyle (EtO-CO-CH2-CO) Et3N = triéthylamine Eto = ethoxy Fmoc = 9-fluorenylmethyloxycarbonyle Foc = furfuryloxycarbonyle HMPT = N,N,N',N'',N''-hexamethylphosphoro triamide HOBT = 1-hydroxybenzotriazole HPLC = chromatographie liquide haute perfor mance H-TFA = acide trifluoroacétique (ou encore HTFA) Iboc = isobornyloxycarbonyle iBu = isobutyle iPr = isopropyle Me n méthyle MeO t méthode MeOH t méthanol MM = methyloxymalonyle (MeO-CO-CH2-CO) Mor = l-morpholinyle OD = densité optique OSu = N-oxysuccinimide ou (2,4-dioxopyrroli din-l-yl)oxy PEG = polyéthylèneglycol Ph = phényle pH = cologarithme de la concentration en ions H+ Pi = l-pipéridinyle PM = poids moléculaire pNA = p-nitroanilino ou (4-N02)C6H4NH Pr = n-propyle Py = l-pyrrolidinyle RT = température ambiante (15-200C) tBu = t-butyle THF = tétrahydrofuranne Tos = p-toluènesulfonyle (ou tosyle) TR = temps de rétention Z = benzyloxycarbonyle Z(p-Cl) = p-chlorobenzyloxycarbonyle Z(p-OMe) = p-méthoxybenzyloxycarbonyle DESCRIPTION DETBILLEE DE L'INVENTION Comme indiqué plus haut le groupe Q est un groupe bloquant l'extrémité N-terminale de la chaîne peptidique A1-A2-Gly-A4. Il représente un reste oxymalonyle de formule Rl-O-CO-CH2-CO ou un reste de PEG de formule R2-O(CH2CH20)n-CO. Dans ledit reste d'oxymalonyle, R1 peut notamment représenter - un groupe alkyle en C1-C4, de préférence Me, Et, Pr, iPr, Bu ou tBu, - un groupe phényle, - un groupe tolyle, xylyle, 2-, 3- ou 4-méthoxyphényle 2,4-, 2,6-, 3,4- ou 3,5-diméthoxyphényle, 4-chloro phényle, 4-fluorophényle, 3,4-, 3,5- ou 2,6-dichloro phényle, 3-trifluorométhylphényle, - un groupe cyclopropyle, cyclopentyle ou cyclohexyle, - un groupe benzyle, - un groupe 2-, 3- ou 4-méthylbenzyle, 2-, 3- ou 4 méthoxybenzyle, 2,4-, 2,6-, 3,4- ou 3,5-diméthyl benzyle, 2,4-, 2,6-, 3,4- ou 3,5-diméthoxybenzyle, 2-, 3- ou 4-chlorobenzyle, 2-, 3- ou 4-fluorobenzyle, 2,4-, 2,6-, 3,4 ou 3,5-dichlorobenzyle, 3-trifluoro méthylbenzyle, ou - un groupe cyclopropyl-, cyclopentyl- ou cyclohexyl méthyle. Quand R1 est un groupe phényle substitué ou benzyle substitué les substitutions seront avantageusement placées en position 2,3 et/ou 4. De façon encore plus avantageuse R1 sera Me ou Et, pour conférer une plus grande affinité au composé peptidique vis-à-vis de l'eau; en d'autres termes, Q sera alors MM ou EM. En ce qui concerne le fragment O(CH2CH20)n du reste de PEG, n sera, comme indiqué plus haut, un nombre entier ayant pour valeur 1 à 170. En particulier le PM moyen du fragment O(CH2CH20)n sera compris entre environ 60 (n = 1) et environ 7100 (n = 161). De façon avantageuse dans ledit reste de PEG R2 sera Me, Et, Pr, iPr, Bu, tBu ou n-hexyle ; de façon encore plus avantageuse R2 sera Me ou Et. Comme indiqué ci-dessus, A1 est un reste d'aminoacide choisi parmi l'ensemble constitué par Leu, Ile, Nle, Nva, CHA, CHG, CHT, Phe, Ala et Lys où la fonction basique latérale du reste Lys est bloquée par un groupe acide convenable [tel que Boc, Cbo, Z, Z(p-Cl), Z(p-OMe), Adoc, Aoc, Fmoc, Foc, Iboci. Dans le cas du reste Lys un tel groupe acide permet d'éliminer pratiquement le caractère basique de la fonction basique latérale. Le reste A1 peut être de configuration L ou D, toutefois pour disposer d'une meilleure activité ou sen sibilité, en ce qui concerne la détermination du Facteur Xa, on préfère plutot que ledit reste A1 soit de configuration D. C'est pourquoi A1 sera avantageusement choisi parmi l'ensemble constitué par les groupes D-Leu, D-Ile, D-Nle, D-Nva, D-CHA, D-CHG, D-CHT, D-Phe, D-Ala et D-Lys où la fonction basique latérale de D-Lys est bloquée par un groupe acide convenable, Les restes A1 que l'on considère comme étant les plus intéressants selon l'invention sont D-Nle, D-Leu et D-CHA. Comme indiqué plus haut A2 représente une simple liaison ou un reste Asp ou Glu, le groupe carboxy latéral de chaque reste Asp et Glu pouvant le cas échéant autre estérifié [i.e. remplacement du groupe OH de la fonction COOH par un groupe OR3 ou R3 est notamment alkyle en C1 C4 (par exemple Me, Et, iPr, Pr, Bu, tBu ou iBu), hydroxyalkyle an C1-C4 (de préférence CH2CH2OH), cycloalkyle en C3-C6 (tel que cyclopropyle, cyclopentyle ou mieux cyclohexyle) ou #-aminoalkyle ou le fragment alkyle est en C2-C4 et ou l'atome d'azote du fragment amino peut etre monoalkyle (NHR4), dialkyle (NR4R5) ou inclus dans un cycle (NR4R5 = groupe -hétérocyclique)] ou amidifié [i.e. remplacement du groupe OH de la fonction COOH par un groupe NH2, NHR4 ou NR4R5 (ou R4 et R5, identiques ou differents, représentent chacun un groupe alkyle en C1-C4, R4 et R5 considérés ensemble pouvant former avec l'atome d'azote, auquel ils sont liés, un groupe N-hétérocyclique de 5 à 7 sommets notamment choisi parmi l'ensemble constitue par les groupes pyrrolidino, piperidino, morpholino, thiomorpholino, piperazino, 4-(2-hydroxyethyl)-piperazino, 4methylpiperazino, 4-(4-chlorophenyl)piperazino, hexamethyleneimino)]. Des exemples de restes Glu et Asp, où le groupe C00H latéral est estérifié ou amidifié, sont présentés dans les documents CH-A-637 627 et FR-A-2 372 798 précités, incorporés ici à titre de référence. De façon avantageuse, lorsque A2 représente un reste d'aminoacide, ledit reste sera de configuration L A2 sera donc soit une simple liaison soit un reste Glu ou Asp notamment choisi parmi 1'ensemble constitué par les groupes t-Glu, t-Asp, L-Glu(Mor), L-Glu(Py), L-Glu(Pi), L-Glu(OMe), L-Glu (OEt), L-Glu(OtBu), L-Asp(Mor), L-Asp(Py), L-Asp(Pi), L-Asp(OMe), L-Asp(OEt) et L-Asp(OtBu). De façon également avantageuse, A4 représentera L-Arg ou t-Lys. Le moyen de marquage R est bien connu dans la technique des dosages biologiques et microbiologiques, voir à cet effet l'art antérieur précité et notamment le document US-A-4 448 715. Ledit moyen de marquage sera de préférence choisi parmi l'ensemble des groupes aminés NH-R' qui (i) induisent une modification de coloration, (ii) induisent une modification de fluorescence ou (iii) comportent au moins un élément radioactif (par exemple un groupe anilino ou benzylamino marqué par un radiosotope 14C ou 3H). Convient au but de l'invention tout groupe amino NH-R' donnant pendant ou après la réaction enzymatique un signal susceptible d'être amplifié pour être détecté (par exemple par mesure de la densité optique sous une longueur tonde donnée, ou encore par mesure de la radioactivité). La quantité de produit H-R obtenu par clivage lors de lXhydrolyse enzymatique est proportionnelle à la quantité d'enzyme utilisée. Ladite quantité de H-R est déterminable photométriquement, spectrophotométriquement, fluorospectrophotométriquement ou électrochimiquement. Le groupe R que l'on préfère suivant l'invention est un groupe chromogène, de façon typique un groupe nitrophénylamino (dans lequel le reste phényle est susceptible d'être substitué par un groupe COOH, F, C1, Br, CH3, OCH3, CN, CF3, et/ou S03H), ou un groupe fluorogène, de façon typique un groupe naphtylamino (dans lequel le reste naphtyle est susceptible d'être substitué par un groupe OCH3, COOH, S03H ou CH3), et les groupes 4méthylcoumaryl-7-amino, 4-trifluorométhylcoumaryl-7-amino et analogues. Parmi les groupes aminés chromogènes et fluorogènes,qui convienent suivant l'invention, on peut notamment citer les p-nitroanilino (en abrégé pNA), 2-carboxy-4nitroanilino et 3-carboxy-4-nitroanilino, 2-halogéno-4nitroanilino et 3-halogéno-4-nitroanilino (où l'halogène est F, C1 ou Br), 2-méthoxy-5-méthyl-4-nitroanilino, 2hydroxysulfonyl-4-nitroanilino, 4-trifluorométhyl-2-nitroanilino, 4-trifluorométhyl-3-nitroanilino, 4-cyano-2nitroanilino, 2-naphtylamino, 4-hydroxysulfonyl-1-naphtylamino, quinolylamino, nitroquinolylamino et analogues. Le groupe R préféré suivant l'invention est un groupe chromogène à savoir, d'une part, pNA et, d'autre part, les groupes analogues, où le noyau phényle de pNA est substitué en position 2 ou 3 qui répondent à la formule dans laquelle Y est Br, C1, F, CF3, COOH, COOW, CONH2, CONHW, CONW2, CONH(CH2)mNMe2, OH ou OW, où W est un groupe allyle en C3-C6, aryle en C6-C10, aralkyle en C7-C11 ou alicyclique en C3-C8 et m est un nombre entier ayant pour valeur 1 à 10. De tels groupes de formule II où le noyau phényle du groupe pNA est substitué sont notamment décrits dans le document EP-A-O 110 306 précité. Les sels d'addition suivant l'invention sont essentiellement des sels d'addition d'acide obtenus par réaction d'un composé de formule I avec un acide minéral ou organique. Le meilleur mode de mise en oeuvre de l'invention consiste à utiliser comme substrat un composé tri- ou tétrapeptidique répondant à la formule Q-A1-A2-Gly-A4-pNA (III) dans laquelle - Q est MM, EM ou R2-O(CH2CH20)n-CO où R2 est Me, Et, Pr, iPr, Bu, iBu, ou n-hexyle et où n est un nombre entier compris entre 1 et environ 161, - A1 est choisi parmi l'ensemble constitué par D-Leu, D Ile, D-Nle, D-Nva, D-CEA, D-CHG, D-CHT, D-Phe, D-Ala, D Lys(Cbo) et D-Lys(Boc), les groupes A1 préférés étant D Nle, D-Leu et D-CHA, -A2 est choisi parmi l'ensemble constitué par une simple liaison et les groupes L-Glu et L-Asp où le groupe OH du reste acide carboxylique latéral desdits L-Glu et L-Asp peut être remplacé par OMe, OEt, OtBu, morpholino, pipéridino ou pyrrolidino, -A4 est choisi parmi l'ensemble constitué par L-Arg et L-Lys, et ses sels d'addition d'acide. De façon non limitative on a consigné dans les tableaux I et II ci-après un certain nombre de composés peptidiques (composés "Ex") selon 1 l'invention. Par commodité, on a également mentionné dans le tableau I un peptide de référence qui a été commercialisé en tant que substrat spécifique du Facteur Xa pour comparaison. Les composés peptidiques selon l'invention, qui se sont révélés être particulièrement intéressants sont notamment les suivants (a) MM-D-Leu-Gly-L-Arg-pNA, (b) EM-D-Leu-Gly-L-Arg-pNA, (c) MeO(CH2CH20)-D-Leu-Gly-L-Arg-pNA, (d) MeO(CE2CH20)2-D-Leu-Gly-L-Arg-pNA, (e) MeO(CH2CH20)3-D-Leu-Gly-L-Arg-pNA, (f) MeO(CH2CH20)7-D-Leu-Gly-L-Arg-pNA, (g) MM-D-Nle-Gly-L-Arg-pNA, (h) MM-D-Nle-L-Glu(Py)-Gly-L-Arg-pNA, (i) MM-D-CHA-Gly-L-Arg-pNA, (j) MM-D-Ile-L-Glu(OMe) -Gly-L-Arg-pNA, (k) EM-D-Nle-Gly-L-Arg-pNA, et (1) leurs sels d'addition d'acide. TABLEAU I Q-A1-A2-Gly-A4-pNA, HA Produit Q A1 A2 A4 HA Ex. 1 MM D-Leu - L-Arg AcOH Ex. 2 EM D-Leu - L-Arg AcOH Ex. 3 MM D-CHA - L-Arg AcOH Ex. 4 MM D-Nle - L-Lys AcOH Ex. 5 MM D-CHT - L-Arg AcOH Ex. 6 MM D-Nve - L-Arg AcOH Ex. 7 MM D-CHG - L-Arg HCl Ex. 8 MM D-Phe - L-Arg HCl Ex. 9 MM D-Ile - L-Arg HCl Ex.10 MM D-Ile - L-Arg AcOH TABLEAU I (suite 2) Produit Q A1 A2 A4 HA Ex.11 MM D-Lys(Cbo) - L-Arg AcOH Ex.12 MM D-CHG L-Asp(Py) L-Lys HCl Ex.13 MM D-CHT - L-Arg H-TFA Ex.14 MM D-Nle - L-Arg HCl Ex.15 EM D-CHA - L-Arg HCl Ex.16 EM D-CHT - L-Arg HCl Ex.17 EM D-Nva - L-Arg Ac-OH Ex.18 EM D-CHG - L-Arg Ac-OH Ex.20 EM D-Ile - L-Arg HCl Ex.21 EM D-Nle - L-Arg HCl TABLEAU I (suite 3) Produit Q A1 A2 A4 HA Ex.22 MM D-Ile - L-Lys AcOH Ex.23 MM D-CHG - L-Lys AcOH Ex.24 MM D-Nva - L-Lys HCl Ex.25 MM D-Lys(Boc) - L-Arg AcOH Ex.26 MM D-Ala - L-Arg HCl Ex.27 MM D-Nle L-Glu(Py) L-Arg HCl Ex.28 MM D-Nle L-Glu(OMe) L-Arg AcOH Ex.29 MM D-Nle L-Asp(Py) L-Arg AcOH Ex.30 MM D-Nle L-Glu L-Arg HCl Ex.31 MM D-Leu L-Glu(Oe) L-Arg AcOH Ex.32 MM D-Ile L-Glu L-Arg AcOH Ex.33 MM D-Ile L-Glu(OMe) L-Arg AcOH Ex.34 MM D-Nva L-Glu(Mor) L-Arg AcOH TABLEAU I (suite 4) Produit Q A1 A2 A4 HA Ex.35 MM D-CHT L-Asp(OMe) L-Arg AcOH Ex.36 MM D-Leu L-Asp L-Lys AcOH Ex.37 MM D-Lys(Cbo) L-Glu(Pi) L-Arg HCl Ex.38 MM D-Lys(Cbo) L-Asp(Pi) L-Arg HCl Ex.39 MM D-CHA L-Glu L-Arg AcOH Ex.40 MM D-CHG L-Glu(Py) L-Arg AcOH Ex.41 MM D-Ala L-Glu(OtBu) L-Arg AcOH Ex.42 MM D-Ala L-Asp L-Arg AcOH Ex.43 MM D-Leu L-Glu(Py) L-Arg HCl Ex.44 MM D-Leu L-Asp(OMe) L-Arg HCl Ex.45 MM D-Ile L-Asp(Py) L-Arg AcOH Ex.46 MM D-Phe L-Glu L-Arg AcOH Ex.47 MM D-Phe L-Glu(OMe) L-Arg AcOH Produit Q A1 A2 A4 Ha Ex.48 MM D-Phe L-Asp L-arg HCl Ex.49 MM D-PHE L-Asp(Pi) L-Arg HCl Ex.50 MM D-Nle L-Glu(Mor) L-Lys AcOH Ex.51 MM D-Nle L-Asp L-Arg AcOH Ex.52 MM D-Lys(Cbo) L-Glu L-Arg AcOH Ex.53 MM D-Lys(Cbo) L-Glu(Ome) L-Arg AcOH Ex.54 MM D-Lys(Cbo) L-Glu(Py) L-Arg AcOH Ex.55 MM D-Lys(Cbo) L-Asp L-Arg AcOH Ex.56 MM D-Lys(Vbo) L-Asp(Py) L-Arg AcOH Ex.57 MM D-Nva L-Glu(OMe) L-Arg AcOH Ex.58 MM D-Nva L-Asp L-Arg AcOH Ex.59 MM D-CHG L-Asp(Py) L-Arg AcOH Ex.60 EM D-CHG L-Asp L-Arg AcOH CP1 CH3SO2 D-Leu - L-Arg AcOH TABLEAU II R2-O(CH2CH2O)n-CO-A1-A2-Gly-Au-pNA, HA Produit R2 n A1 A2 A4 HA Ex.61 Me 1 D-Leu - L-Arg AcOH Ex.62 Me 2 D-Leu - L-arg AcOH Ex.63 Me 3 D-Leu - L-Arg AcOH Ex.64 Me 7 D-Leu - L-Arg AcOH Ex.65 Me 12 D-Leu - L-Arg AcOH Ex.66 Me 16 D-Leu - L-Arg AcOH Ex.67 Me 150 D-Leu - L-Arg AcOH Ex.68 Me 161 D-Leu - L-Arg AcOH Ex.69 Me 113 D-Leu - L-Arg AcOH Ex.70 Me 45 D-Leu - L-Arg AcOH TABLEAU II (suite 1) R2-O(CH2CH2O)n-CO-A1-A2-Gly-A4-pNA, HA Produit R2 n A1 A2 A4 HA Ex71 Me 1 D-Nle - L-Arg AcOH Ex72 Me 2 D-Nle - L-Arg AcOH Ex73 Me 3 D-Nle - L-Arg AcOH Ex74 Me 45 D-Nle - L-Arg AcOH Ex75 Me 2 D-CHA - L-Arg AcOH Ex76 Me 7 D-CHA - L-Arg AcOH Ex77 Me 113 D-CHA - L-Arg AcOH Ex78 Me 2 D-CHT - L-Arg AcOH Ex79 Me 3 D-CHT - L-Arg AcOH Ex80 Me 7 D-Ala - L-Arg AcOH TABLEAU II (suite 2) R2-O(CH2CH2O)n -CO-A1-A2-Gly-a4-pNA, HA Produit R2 n A1 A2 A4 HA Ex81 Me 1 D-Leu L-Glu(Py) L-Arg HCl Ex82 Me 7 D-Leu L-Glu(OMe) L-Arg HCl Ex83 Me 16 D-Leu L-Glu(Pi) L-Arg HCl Ex84 Me 2 D-Nle L-Asp(Py) L-Arg HCl Ex85 Me 7 D-Nle L-Asp(OMe) L-Arg HCl Ex86 Me 113 D-Nle L-Asp(Py) L-lys HCl Ex87 Me 2 D-CHA L-Glu(Py) L-lys HCl Ex88 Me 7 D-CHA L-Glu(OMe) L-lys HCl Ex89 Me 2 D-CHA L-Glu(Pi) L-lys HCl Ex90 Me 113 D-CHA L-Glu L-lys HCl TABLEAU II (suite 3) R2-O(CH2CH2O)n -CO-A1-A2-Gly-a4-pNA, HA Produit R2 n A1 A2 A4 HA Ex91 Et 2 D-Lys(Cbo) L-Glu L-Arg HCl Ex92 Et 7 D-Lys(Cbo) L-Glu L-Arg HCl Ex93 Et 2 D-Nva L-Glu L-Arg HCl Ex94 Et 2 D-Nva L-Asp L-Arg HCl Ex95 Et 7 D-Phe L-Glu L-Arg HCl Ex96 Et 7 D-Phe L-Asp L-Arg HCl Ex97 Et 7 D-Ile L-Glu L-Arg HCl Ex98 Et 7 D-CHG L-Asp L-Arg HCl Ex99 Bu 1 D-Leu - L-Arg HCl Ex100 Bu 7 D-Leu - L-Arg HCl TABLEAU II (fin) R2-O(CH2CH2O)n -CO-A1-A2-Gly-a4-pNA, HA Produit R2 n A1 A2 A4 HA Ex 101 Bu 7 D-Nle - L-Arg AcOH Ex 102 Bu 12 D-Nle - L-Arg AcOH Ex 103 n-hexyle 1 D-Leu - L-Arg AcOH Ex 104 n-hexyle 7 D-Leu - L-Arg AcOH Ex 105 n-hexyle 1 D-CHA - L-Arg AcOH Ex 106 n-hexyle 7 D-CHA - L-Arg AcOH Les composés tri- et tétrapeptidiques suivant l'invention peuvent être préparés selon une méthode connue en soi par application de mécanismes réactionnels classiques.Le procédé de préparation que l'on préconise ici est caractérisé en ce que l'on fait réagir un peptide de formule H-A1-A2-Gly-A4-R (IV) où A1, A2, A4 et R sont définis comme indiqué ci-dessus, avec une substance choisie parmi l'ensemble constitué par a) les dérivés oxymalonyle de formule R1-O-CO-CH2-CO-T (V) où R1 est défini comme indiqué ci-dessus, et, T représente OH, F, C1 ou Br, et b) les dérivés de PEG de formule R2-O(CH2CH2O)n-CO-Hal (VI) où R2 et n sont définis comme ci-dessus, et Hal représente F, C1 ou Br. Les réactions IV + V = I et IV + VI = I sont chacune effectuées dans un solvant inerte, tel que DMF ou THF, en présence d'un excès d'une base agissant comme cosolvant et comme accepteur de protons telle que Et3N, DIEA ou toute autre amine tertiaire convenable. De façon pratique, pour la mise en oeuvre de la réaction IV + V = I, on préconise deux techniques différentes en fonction de la nature du groupe T. Quand T est F, C1 ou Br, on utilisera un rapport molaire IV/V inférieur ou égal à 1/2. Quand T est OH, on opèrera en outre en présence d'un agent couplant tel que Bop ou HOBT (DCCI étant ajouté le cas échéant à l'agent couplant HOBT lorsque celui-ci est utilisé) à une température d'environ 0 C pendant au moins 1 heure puis à RT pendant au moins 24 heures, avec un rapport molaire IV/V compris dans la gamme allant de 1/1 à 1/1,5. De plus, quand dans ladite réaction IV + V = I, T est F, C1 ou Br, on utilisera un rapport molaire IV/Et3N compris entre 1,7/1 à 3,6/1 et mieux de 2/1 à 3,1/1. De façon pratique, la réaction IV + VI = I sera effectuée avec un rapport molaire IV/VI inférieur ou égal à 1 et de préférence inférieur ou égal à 0,8. Pour la mise en oeuvre de la réaction IV + VI =I, on préfère faire appel à un dérivé de formule VI dans lequel Hal est Cl. Un tel dérivé chloré, utilisé comme matière première pour ladite réaction IV + VI = I, peut être synthétisé selon le schéma réactionnel Les composés de formule V sont préparés à partir de l'acide malonique, d'une part, et les composés de formule IV sont obtenus selon une méthode classique de la synthèse peptidique comme décrit notamment dans le document EP-A-O 280 610 précité, d'autre part. Les composés selon l'invention sont utiles dans la détermination du Facteur Xa. On préconise donc également un nécessaire, kit ou trousse de dosage destiné à la détermination du Facteur Xa, qui renferme au moins un composé peptidique choisi parmi l'ensemble constitué par les composés de formule I et leurs sels d'addition, et le cas échéant, un échantillon étalon de Facteur Xa et de milieux tamponnés de dilution. On préconise également un procédé de détermination du Facteur Xa, ledit procédé étant caractérisé en ce que l'on met en contact dans un milieu biologique aqueux une quantité donnée d'un composé de formule I ou de l'un de ses sels d'addition et un échantillon à tester (éventuellement dilué) susceptible de contenir du Facteur Xa. D'autres avantages et caractéristiques de l'invention seront mieux compris à la lecture qui va suivre de la description d'exemples de préparation et de résultats dressais comparatifs. L'ensemble de ces éléments n'est nullement limitatif mais est donné à titre d'illustration. PREPARATION I Obtention de MM-D-Leu-Gly-L-Arg-pNA, AcOH (Exemple 1) a) Z-L-Arg-pNA, HCl On dissout 344 g (1 mole) de Z-L-Arg-OH, HC1 dans du HMPT anhydre (fraichement distillé et séché sur tamis moléculaire) à RT, puis on ajoute 139 ml (1 mole) de Et3N à RT sous agitation. A la solution résultante, on ajoute 328 g (2 moles) de p-nitrophénylisocyanate. Le milieu réactionnel résultant est maintenu sous agitation pendant 24 h à RT, puis est évaporé sous vide et repris avec une quantité minimale de AcOH avant d'être dilué avec AcOEt. La solution résultante est ensuite extraite successivement trois fois avec de petites quantités de NaHC03 0,5 M, trois fois avec une solution de KHS04 à 50 g/l puis plusieurs fois avec H20 à demi-saturée en NaCl. La phase organique est ensuite séchée sur sulfate de sodium anhydre. Après filtration (élimination de Na2S04), on évapore le solvant et recristallise le résidu d'évaporation dans le mélange AcOEt/MeOMe (3/7) v/v. On obtient 350 g du produit attendu sous la forme dtune poudre de couleur blanche. F = 128-1300C. Analyse (CCM sur gel de silice) Rf = 0,5 dans AcOEt/pyridine/AcOH/H20 (20/4,5/3/1) v/v; Rf = 0,69 dans CHC13/MeOH/AcOH (5/3/1) v/v. b) H-L-Ara-pNA, 2XBr Dans un appareillage en verre et téflon, on charge 100 g (0,215 moles) de Z-L-Arg-pNA, HCl. On ajoute, sous atmosphère inerte (courant d'azote), successivement 800 ml de AcOH glacial, 200 ml d'anisole, 1000 ml de HBr en solution dans AcOH glacial. On laisse réagir pendant 1 h à RT sous atmosphère d'azote. Après ce laps de temps, le mélange réactionnel, qui est devenu homogène au cours de la déprotection, est précipité dans 20 1 d'éther (MeOMe ou EtOEt). Après décantation, le surnageant est écarté et le précipité est lavé plusieurs fois à l'éther, On recueille le précipité par filtration, le sèche sous vide sur KOH pendant 24 h.On obtient 94,2 g (rendement : 96 %) du produit attendu Analyse (CCM sur gel de silice) Rf = 0,04 dans AcOEt/pyridine/AcOH/H20 (20/4,5/3/1,5) v/v Rf = 0,38 dans BuOH/AcOH/H20 (3/1/1) v/v. c) Boc-Gly-L-Arg-pNA, HBr On dissout 1 g (2,19 mmoles) de H-L-Arg-pNA, 2HBr dans 10 ml de DMF puis on ajoute 0,854 ml (6,57 mmoles) de DIEA. Dans un autre récipient, on neutralise 384 mg (2,19 mmoles) de Boc-Gly-OH dissous dans 5 ml de DMF au moyen d'une quantité de 0,285 ml de DIEA. On mélange les deux solutions ainsi obtenues et au milieu résultant on ajoute 970 mg de Bop tout en le maintenant à RT; on maintient également le pH à une valeur comprise entre 7 et 8 par ajout de petites portions de DIEA au cours de la réaction. Au bout d'une heure, la réaction est complètement terminée et on évapore à sec sous vide le milieu réactionnel; on reprend le résidu d'évaporation par un mélange AcOEt/MeOH et extrait au moyen d'une solution aqueuse de NaHC03 0,5 M.On sèche la phase organique sur sulfate de sodium, la concentre sous vide puis précipite dans ltéther (MeOMe ou EtOEt). On obtient 874 mg (rendement : 75 %) de produit attendu. Analyse (CCM sur gel de silice) Rf = 0,53 dans CHC13/MeOH/AcOH (10/3/1) v/v. d) H-Gly-L-Arg-pNA, 2H-TFA On charge dans un réacteur 874 mg (1,64 mmoles) de Boc-Gly-L-Arg-pNA, HBr puis ajoute successivement 6,6 ml de CH2C12 et 6,6 ml de H-TFA. Après 0,25 h de réaction à RT, on précipite directement le mélange réactionnel dans l'éther. I1 se forme un précipité blanc floconneux que l'on filtre et sèche. On obtient 910 mg (rendement 96 %) de produit attendu. Analyse (CCM sur gel de silice) Rf = 0,09 dans CHCl3/MeOH/AcOH (5/3/1) v/v. e) Boc-D-Leu-Gly-L-Arg-pNA, H-TFA En suivant les modalités opératoires de la préparation Ic, on fait réagir un mélange réactionnel comprenant (i) 910 mg (1,57 mmoles) de H-Gly-L-Arg-pNA, 2H-TFA, (ii) 363 mg (1,57 mmoles) de Boc-D-Leu-OH, (iii) 1,2 ml de DIEA et (iv) 695 mg (1,57 mmoles) de Bop dans le DMF, et on maintient le mélange réactionnel à RT sous agitation pendant 2 h. Après évaporation à sec sous vide, le résidu d'évaporation est chromatographié sur gel de silice avec comme éluant un gradient de CHC13/MeOH/AcOH de (20/3/1) à (10/311) v/v. On réunit les fractions homogènes recueillies et évapore l'éluant. Par lyophilisation, on obtient 785 mg (rendement : 80 %) du produit pur attendu. Analyse (CCM sur gel de silice) Rf = 0,33 dans CHC13/MeOH/AcOH (10/3/1) v/v. f) H-D-Leu-Gly-L-Arg-pNA, 2H-TFA On fait réagir 785 mg (1,25 mmoles) de Boc-D-Leu Gly-L-Arg-pNA, H-TFA obtenu selon la préparation Ie avec 5 ml de CH2C12 et 5 ml de H-TFA à RT. Au bout de 0,25 h, le mélange réactionnel est directement précipité dans l'éther. On obtient un précipité blanc que l'on filtre, lave à ltéther et sèche. On recueille 779 mg (rendement 90 %) du produit attendu. Analyse (CCM sur gel de silice) Rf = 0,2 dans CHC13/MeOH/AcOH (5/3/1) v/v. g) MM-D-Leu-Gly-L-Arg-pNA, AcOff Dans un récipient de réaction, on charge 7,79 mg (1,12 mmoles) de H-D-Leu-Gly-L-Arg-pNA, 2E-TFA puis ajoute 15 ml de DMF et 0,517 ml (3,705 mmoles) de Et3N. On refroidit le mélange résultant à -300C sous agitation puis introduit goutte-à-goutte (toujours sous agitation et à -300C) 0,265 ml de chlorure de méthyloxymalonyle (MeO-CO-CH2-CO-Cl). Le mélange résultant est maintenu à -300C pendant. 0,5 h puis on le laisse se réchauffer jusqu'à RT. Après 2 h de réaction, le mélange réactionnel est filtré pour éliminer le sel de triéthylammonium qui s'est formé et le filtrat est évaporé sous vide. Le résidu d'évaporation est précipité au moyen d'éther (EtOEt), filtré puis chromatographié sur résine échangeuse d'ions (AMBERLITER IRA 401 S) préalablement acétylée, avec comme éluant le mélange MeOH/H20 (3/2) v/v. Les fractions homogènes sont réunies et évaporées. Par lyophilisation du résidu d'évaporation résultant, on obtient 566 mg (rendement : 81 %) du produit attendu. Analyse CCM sur gel de silice Rf = 0,71 dans CHC13/MeOH/AcOH (10/3/1) v/v; HPLC [sur colonne d'HYPERSILR C 18 (granulométrie : 31ka) fourni par la société dite MERCK] TR = 10 minutes [avec solution isocrotique contenant eau (72,4 %) acétonitrile (27,5 %) et AcOH (0,2 Z p/p)i. PREPARATION II Obtention de MM-D-Leu-L-Arg-pNA, AcOH (Exemple 1) On procède comme indiqué dans la préparation I mais en remplaçant l'étape Ig par l'étape suivante. Dans un récipient de réaction, on charge 1391 mg (2 mmoles) de H-D-Leu-Gly-L-Arg-pNA, 2H-TFA puis introduit 30 ml de DMF et 0,7 ml (5 mmoles) de Et3N. On ajoute à la température ambiante 973,5 mg de Bop puis ajoute au mélange résultant une solution de 259 mg d'acide méthyloxymalonyle (MeO-CO-CH2-CO-OH) dans 10 ml de DMF et 0,7 ml de Et3N. Pendant ltévolution de la réaction, on maintient le pH entre 7 et 8 pendant le couplage par ajout successif de petites quantités de Et3N; après 3 h de réaction sous agitation, le couplage est terminé. On extrait le milieu réactionnel au moyen d'un système solvant AcOEt/KHS04 (à 5 Z p/v) puis AcOEt/NaHC03 0,5 N. On lave ensuite la phase AcOEt avec de l'eau à demisaturée en NaCl. La phase AcOEt est évaporée sous vide puis le résidu d'évaporation est chromatographié sur colonne de silice (granulométrie : 40-60 micromètres) au moyen du système éluant CHC13/MeOH/AcOH (8/3/1) v/v. Les fractions homogènes sont réunies et évaporées. Par lyophilisation du résidu d'évaporation résultant, on obtient 812 mg (rendement : 65 %) du produit attendu. Analyse CCM sur gel de silice Rf = 0,71 dans CHC13/MeOH/AcOH (10/3/1) v/v; HPLC [comme indiqué plus haut au stade Ig] TR = 10 minutes. PREPARATION III Obtention de Me-OCH2CH20-CO-D-Leu-Gly-L-Arg-pNA, AcOH (Exemple 61) a) Et-OCH2CH20-CO-Cl Dans un réacteur à une température de -300C, on condense le phosgène puis ajoute goutte-à-goutte (toujours à -300C), au moyen d'une ampoule de coulée, 10 ml de l'éther monométhylique d'éthylèneglycol préalablement dissous dans du THF, de façon à ce que le phosgène soit toujours dans un large excès par rapport à l'alcool. On maintient le milieu réactionnel sous agitation à -300C pendant 2 h puis on le laisse se réchauffer jusqu'à RT. L'excès de phosgène est éliminé par un courant d'azote opérant pendant plusieurs heures afin d'éliminer toute trace dudit phosgène. Le mélange réactionnel est ensuite évaporé sous vide et le liquide obtenu est utilisé tel quel dans l'étape suivante de couplage. On obtient 1320 mg (rendement : 95 %) du produit attendu. Analyse (spectre IR) - disparition de la bande alcool à 3300 cm1; - apparition des bandes chloroformiates à 1776, 1152 et 690 cm~l. Remarque lie procédé de l'étape IIIa est directement utilisable pour obtenir les autres chloroformiates de formule R2-O(CH2CH2O)n-CO-Cl b)MeOCH2O-CO-D-Leu-Gly-L-Arg-pNA, AcOH Dans un récipient de réaction, on charge 1391 mg (2 mmoles) de H-D-Leu-Gly-L-Arg-pNA, 2H-TFA (obtenu comme indiqué dans la préparation If) puis ajoute 30 ml de DMF et 0,624 ml de Et3N. Le mélange résultant est refroidi à 0 C au moyen d'un bain glace. On ajoute audit mélange ainsi refroidi 0,304 g (2,2 mmoles) de chloroformiate MeOCH2CH20-CO-Cl. On maintient le milieu réactionnel sous agitation pendant 1 h, on le laisse se réchauffer jusqu'à RT puis poursuit la réaction pendant 1 h à RT.Le mélange réactionnel est ensuite filtré, évaporé sous vide et le résidu d'évaporation est chromatographié sur une résine échangeuse d'ions (AMBERLITER IRA 400 S) préalablement acétylée, avec comme éluant le mélange MeOH/H20 (3/2) v/v. Les fractions homogènes sont réunies et évaporées. Par lyophilisation du résidu d'évaporation résultant, on obtient 814 mg (rendement : 65 Z) du produit attendu. Analyse CCM sur gel de silice Rf = 0,65 dans CHC13/MeOHIAcOH (10/3/1) v/v. PREPARÂTION Iv Obtention de Me-O(CH2CH2O)7-CO-D-Leu-Gly-L-Arg-pNA, AcOH (Exemple 64) On procède comme indiqué à la préparation IIIb en remplaçant le Me-OCH2CH20-CO-Cl par le MeO(CH2CH20)7-COCl pour obtenir 1,038 g (rendement : 61 %) du produit attendu. Analyse (CCM sur gel de silice) Rf = 0,61 dans CHC13/MeOH/AcOH (10/3/1) v/v; Rf = 0,14 dans CHCl3/MeOH/AcOH (20/3/1) v/v. PREPARATION V Obtention de Me-O(CH2CH20)2-CO-D-Leu-Gly-L-Arg-pNA, AcOH (Exemple 62) On procède comme indiqué à la préparation IIIb en remplaçant le Me-OCH2CH2O-CO-Cl par le MeO(CH2CH20)2-COCl pour obtenir 851 mg (rendement : 68 %) du produit attendu. Analyse (CCM sur gel de silice) Rf = 0,45 dans CHCl3/MeOH/AcOH (15/3/1) v/v. ESSAIS COMPARATIFS L'activité des peptides suivant l'invention visà-vis du Facteur Xa a été déterminée selon une des méthodes classiques, telle que décrite dans EP-A-O 280 160 (voir page 14), en appréciant la vitesse d'hydrolyse par la variation de la densité optique dans le temps ( OD/min). Les résultats qui ont été obtenus à des doses équimolaires ont été consignés dans le tableau II ciaprès où par commodité, l'activité du produit de référence CP 1 est précisée comme étant égale à 100 Z Les résultats comparatifs du tableau II mettent en évidence que les peptides suivant l'invention sont au moins aussi actifs que le produit de référence CP 1. TABLEAU Il ACTIVITE VIS-A-VIS DU FACTEUR Xa Produit Activité Ex 1 115 % Ex 2 132 % Ex 14 140 % Ex 33 105 % Ex 61 145 % Ex 62 105 % Ex 63 110 % Ex 64 103 % Ex 73 121 % Ex 101 124 % CP 1 100 Z REVENDICATIONS 1. Composé peptidique appartenant à la famille des substrats tri- et tétrapeptidiques, caractérisé en ce qulil est choisi parmi 11 ensemble constitué par (i) les tri- et tétrapeptides répondant à la formule Q-A1-A2-Gly-A4-R (I) dans laquelle Q est un groupe bloquant l'extrémité N-terminale de la chaîne peptidique et qui est choisi parmi l'ensemble constitué par (a) un reste oxymalonyle de formule Rl-O-CO-CH2-CO, où R1 est un groupe alkyle en C1-C4 ; un groupe phényle ; un groupe phényle substitué par un ou plusieurs groupes Me, MeO, C1, Br, F, CF3 ; un groupe cycloalkyle en C3-C6 ; un groupe benzyle ; un groupe benzyle substitué par un ou plusieurs groupes Me, MeO, C1, Br, F, CF3 ; ou un groupe cycloalkylméthyle où le fragment cycloalkyle est en C3-C6; et (b) un reste de polyléthylèneglycol de formule Rz-O(CH2CH20)n-CO, où R2 est un groupe alkyle en C1-C6, phényle ou benzyle et n est un nombre entier ayant pour valeur 1 à 170, A1 est choisi parmi l'ensemble constitué par les groupes Leu, Ile, Nle, Nva, CHA, CHG, CHT, Phe, Ala et Lys où la fonction basique latérale du reste Lys est bloquée par un groupe convenable éliminant substantiellement le caractère basique de ladite fonction latérale, A2 est une simple liaison, Asp ou Glu, le groupe acide carboxylique latéral de Asp et Glu étant susceptible d'être estérifié ou amidifié, A4 est choisi parmi l'ensemble constitué par les groupes Arg et Lys, R est un moyen de marquage clivable ; et (ii) leurs sels d'addition. 2. Composé peptidique suivant la revendication 1, caractérisé en ce que, dans le reste R1-O-CO-CH2-CO, R1 est choisi parmi l'ensemble constitué par les groupes alkyle en C1-C4, phényle, tolyle, xylyle, 2-, 3- ou 4méthoxyphényle, 2,4- 2,6- 3,4- ou 3,5-diméthoxyphényle, 4-chlorophényle, 4-fluorophényle, 3,4-, 3,5- ou 2,6dichlorophényle, 3-triflurométhylphényle, cyclopropyle, cyclopentyle, cyclohexyle, benzyle, 2-, 3- ou 4-méthylbenzyle, 2-, 3- ou 4-méthoxybenzyle, 2,4-, 2,6-, 3,4- ou 3,5-diméthylbenzyle, 2,4-, 2,6-, 3,4- ou 3,5-diméthoxybenzyle, 2-, 3- ou 4-chlorobenzyle, 2-, 3- ou 4-fluorobenzyle, 2,4-, 2,6-, 3,4 ou 3,5-dichlorobenzyle, 3-trifluorométhylbenzyle, cyclopropylméthyle, cyclopentylméthyle et cyclohexylméthyle. 3. Composé peptidique suivant la revendication 1, caractérisé en ce que, dans le reste R2-O(CH2CH20)n-CO, n est un nombre entier ayant pour valeur 1 à 161. 4. Composé peptidique suivant la revendication 1, caractérisé en ce que A1 est choisi parmi l'ensemble constitué par les groupes D-Leu, D-Ile, D-Nle, D-Nva, D CHA, D-CHG, D-CHT, D-Phe, D-Ala et D-Lys où la fonction basique latérale de D-Lys est bloquée par un groupe acide convenable. 5. Composé peptidique suivant la revendication 1, caractérisé en ce que A1 est D-Leu, D-Nle ou D-CHA. 6. Composé peptidique suivant la revendication 1, caractérisé en ce que A2 est une simple liaison ou L-Glu, li-Asp, L-Glu(Mor), L-Glu(Py), L-Glu(Pi), L-Glu(OMe), L-Glu (OEt), L-Glu(OtBu), L-Asp(Mor), L-Asp(Py), L-Asp(Pi), L-Asp(OMe), L-Asp(OEt) et L-Asp(OtBu). 7. Composé peptidique suivant la revendication 1, caractérisé en ce qu'il est choisi parmi l'ensemble constitué par (i) les composés tri- ou tétrapeptidiques répondant à la formule Q-A1-A2-Gly-A4-pNA (III) dans laquelle - Q est MM, EM ou R2-O(CH2CH20)n-CO où R2 est Me, Et, Pr, iPr, Bu, iBu, ou n-hexyle et où n est un nombre entier compris entre 1 et environ 161, - A1 est choisi parmi l'ensemble constitué par D-lieu, D Ile, D-Nle, D-Nva, D-CHA, D-CHC, D-CHT, D-Phe, D-Ala, D Lys(Cbo) et D-Lys(Boc), les groupes A1 préférés étant D Nle, D-Leu et D-CHA, -A2 est choisi parmi l'ensemble constitué par une simple liaison et les groupes L-Glu et L-Asp où le groupe OH du reste acide carboxylique latéral desdits L-Glu et L-Asp peut être remplacé par OMe, OEt, 0tBu, morpholino, pipéridino ou pyrrolidino, -A4 est choisi parmi ltensemble constitué par L-Arg et L-liys; et, (ii) leurs sels d'addition d'acide. 8. Composé peptidique suivant la revendication 1, caractérisé en ce qu'il est choisi parmi l'ensemble constitué par (a) MM-D-Leu-Gly-L-Arg-pNA, (b) EM-D-Leu-Gly-L-Arg-pNA, (c) MeO(CH2CH20)-D-Leu-Gly-L-Arg-pNA, (d) MeO(CH2CH20)2-D-Leu-Gly-L-Arg-pNA, (e) MeO (CH2CH2O) 3-D-Leu-Gly-L-Arg-pNA, (f) MeO(CH2CH2O)7-D-Leu-Gly-L-Arg-pNA, (g) MM-D-Nle-Gly-L-Arg-pNA, (h) E1M-D-Nle-L-Glu(Py)-Gly-L-Arg-pNA, (i) MM-D-CHA-Gly-L-Arg-pNA, (j) MM-D-Ile-L-Glu(OMe)-Gly-Z-Arg-pNA, (k) EM-D-Nle-Gly-L-Arg-pNA, et (1) leurs sels d'addition d'acide. 9. Procédé de préparation d'un composé tri- ou tétrapeptique de formule I et de ses sels d'addition selon la revendication 1, ledit procédé étant caractérisé en ce que lton fait réagir un peptide de formule H-Al-A2-Gly-A4-R (IV) où A1, A2, A4 et R sont définis comme indiqué ci-dessus, avec une substance choisie parmi l'ensemble constitué par a) les dérivés oxymalonyle de formule R1-O-CO-CH2-CO-T (V) où R1 est défini comme indiqué ci-dessus, et, T représente OH, F, C1 ou Br, et b) les dérivés de PEG de formule R2 O(cH2cH2o)n-co-Hal (VI) où R2 et n sont définis comme ci-dessus, et Hal représente F, C1 ou Br. 10. Utilisation d'un composé de formule I ou de l'un de ses sels d'addition selon la revendication 1, dans la détermination du Facteur Xa. 11. Procédé de détermination du Facteur Xa, ledit procédé étant caractérisé en ce que l'on met en contact dans un milieu biologique aqueux une quantité donnée d'un composé de formule I ou de l'un de ses sels d'addition et un échantillon à tester susceptible de contenir du Facteur Xa. 12. Nécessaire de dosage destiné à la détermination du Facteur Xa, caractérisé en ce qu'il renferme au moins un composé peptidique choisi parmi l'ensemble constitué par les composés de formule I et leurs sels d'addition selon la revendication 1, et le cas échéant, un échantillon étalon de Facteur Xa et de milieux tamponnés de dilution.