Brevet FR2654836A1 — publié le 19910524

La présente invention est relative à un appareil d'exécution automatique d'un immunodosage en plusieurs étapes successives d'au moins une substance biologique dans une pluralité d'échantillons biologiques ainsi qu'au procédé et aux réactifs de mise en oeuvre dudit appareil. L'invention s' applique plus particulièrement, mais non limitativement, à la détection simultanée sur un même échantillon de ligands, d'antiligands, d'haptènes ou de tout autre substance biologique éventuellement présente dans le fluide biologique à analyser. Les méthodes de détermination de la présence ou de la concentration de ligands ou de substances biologiques dans des fluides biologiques, par voie immunologiques, sont à présent bien connues ; elles sont basées sur la formation d'un complexe entre la substance à déterminer et un ou des anticorps, l'un des composants du complexe pouvant être marqué notamment par une enzyme, pour permettre sa détection et/ou son analyse quantitative après séparation de l'antigène ou de l'anticorps marqué complexé, de l'antigène ou de l'anticorps marqué non complexé Le principe des méthodes RIA et ELISA est également bien connu. La technique ELISA (Enzyme linked immunosorbent assay), notamment, est une méthode immuno-enzymatique, d'une très grande sensibilité, de titrage d'anticorps, par exemple, qui consiste à utiliser un complexe immunoadsorbant constitué notamment par un antigène fixé sur un support solide, pour capter les anticorps spécifiques contenus dans le milieu biologique, tel que sérum, à tester, l'immun-complexe ainsi obtenu étant détecté par un anticorps anti-espèce marqué par une enzyme, après quoi on ajoute un substrat spécifique de l'enzyme, dont la dégradation par l'enzyme fait apparaître un produit coloré ; l'intensité de la coloration est propor tionnelle à la quantité d'enzyme qui réagit et donc à la quantité d'anticorps présente dans le milieu biologique testé ; l'intensité de la coloration peut être appréciée à l'oeil nu ou mesurée par tout moyen approprié, notamment par photométrie. Dans les méthodes immunologiques ci-dessus, utilisant une phase hétérogène, la nature de cette phase solide qui sert de support à la réaction immunologique est très importante car elle détermine la sensibilité de la mesure. Les supports qui ont été proposés pour le test ELISA sont, notamment, des grains de polyacrylamide activés par le glutaraldéhyde (AVRAMEAS et TERNYNCK, Immunochemistry, 1969, 6, pages 53-65) ; des particules de cellulose activée par le bromure de cyanogène, sur lesquelles des anticorps sont fixés par liaisons covalentes (ENGVALL et PERLMANN, Immunochemistry, 1971, 8, 871874) ; des tubes de polystyrène sur la surface desquels des antigènes sont fixés par simple adsorption physique (ENGVALL et PERLMANN, J. Immun. 1972, 160, 129-136) ; des disques de papier activé par le bromure de cyanogène et sur lesquels est fixé un anticorps ou un antigène (BRIGH TON et Coll. Scand. 1974, 29, 166-174).Cependant, les supports les plus répandus actuellement sont les surfaces en matière plastique qui se présentent sous forme de microplaques de 96 puits à fond plat, en U ou en V, en polystyrène ou en PVC, ou de barrettes de 8 puits. Un autre support, formé de billes magnétiques a également été décrit et permet d'envisager l'automatisation des procédés mis en oeuvre. On peut citer notamment les billes magnétiques décrites dans le Brevet européen 38 730 RHONE POULENC, Spécialités chimiques qui décrit des latex de polymères magnétiques, les billes magnétiques décrites dans le Brevet européen 125 995 ADVANCED MAGNETICS INC., les billes magnétiques décrites dans les Brevets français 2 262 805 et 2 454 098 CORNING GLASS WORKS ou les billes décrites dans les Demandes de Brevets européens SERONO DIAGNOSTICS PARTNERS 105 714, 190 006, 238 353, 249 357. Les différentes billes magnétiques décrites dans les documents précités sont également applicables pour la mise en oeuvre d'un dosage immunologique tel que l'ELISA ou le RIA. Tant la méthode RIA que la méthode ELISA peuvent être mises en oeuvre de plusieurs manières - La méthode indirecte est la plus simple pour doser des anticorps. L'antigène est fixé sur la microplaque (en présence d'albumine pour bloquer les sites non occupés). Le sérum à doser est ajouté et la fixation des anticorps est détectée par l'addition d'anticorps anti-Ig marqués convenablement, notamment couplés à une enzyme et révélés quantitativement au spectrophotomètre après addition du substrat de l'enzyme. - Une technique de compétition peut être utilisée pour doser les antigènes. Comme dans la technique précédente, c'est l'antigène qui est toujours fixé sur les plaques. Un mélange d'antigène et de faibles quantités d'anticorps est ajouté. La quantité d'anticorps fixée sur la plaque est d'autant plus faible que les molécules d'antigène ont neutralisé plus de molécules d'anticorps. - Des méthodes en sandwich ou bi-site peuvent être utilisées pour doser des antigènes ou des anticorps. Pour doser des antigènes, les microplaques sont recouvertes de l'anticorps, l'antigène est ajouté puis l'anticorps spécifique, marqué de manière appropriée, notamment couplé à une enzyme, est appliqué et révélé par l'addition du substrat. La technique ne s'applique cependant qu'aux antigènes divalents ou possédant plusieurs déterminants. Pour doser des anticorps, les microplaques sont au contraire recouvertes de l'antigène et on ajoute successivement l'anticorps à doser et l'antigène marqué par une enzyme. De tels procédés ne sont toutefois pas entièrement automatisables car ils ne permettent pas de mettre en oeuvre un dosage automatique d'au moins une substance dans une pluralité d'échantillons. En effet, la mise en oeuvre de ces différents procédés ne permettent d'effectuer que des dosages paramètre par paramètre, soit en flux continu, soit en flux discontinu. Or, il est souhaitable, notamment dans les laboratoires d'analyse médicale de fournir des dispositifs automatiques de dosages multi-paramétriques à accès aléatoire, beaucoup plus rapides à réaliser et d'un moindre coût. Un dosage multi-paramétrique à accès aléatoire permet, notamment, sur un échantillon biologique de réaliser le dosage de vingt paramètres différents et sur l'échantillon suivant de ne réaliser le dosage que de deux paramètres par exemple. La Demanderesse s'est en conséquence donné pour but de pourvoir à un procédé et à un appareil de détermination et/ou de dosage automatique d'au moins une substance, notamment ligands, antiligands, haptènes ou autres molécules biologiques qui répond mieux aux nécessités de la pratique que les appareils de l'Art antérieur, notamment en ce qu'il permet un dosage multiparamétrique, pour chaque échantillon, dans un temps relativement court et à un moindre coût, notamment en ce qu'il permet d'utiliser beaucoup moins de réactifs, et plus particulièrement des monoréactifs, d'emploi plus simple. La présente invention a pour objet un appareil de dosage automatique de type immunologique d'au moins une substance dans une pluralité d'échantillons à analyser, en plusieurs étapes successives constituant une sé quence analytique, caractérisé en ce qu'il comporte (1) un module échantillons constitué par une pluralité de supports de tubes contenant lesdits échantillons, associé à un microprocesseur de commande ; (2) un module réactionnel constitué par une pluralité de supports de tubes destinés à recevoir successivement une quantité aliquote desdits échantillons et une quantité aliquote d'un réactif approprié, associé à un microprocesseur de commande ; (3) un module réactifs constitué par une pluralité de supports de tubes contenant les réactifs appropriés aux différents dosages à réaliser, chacun desdits réactifs comprenant des billes magnétiques appropriées ;; (4) un moyen de distribution des échantillons dans les tubes dudit module réactionnel ; (5) un moyen de distribution des réactifs dans les tubes dudit module réactionnel ; (6) un moyen approprié de lecture de la réaction effectuée dans le module réactionnel ; et (7) un système informatique constitué par un ordinateur de commande des différents modules et moyens (1) à (6), et permettant l'exécution d'une succession de séquences analytiques identiques, quel que soit le dosage à réaliser. Une séquence analytique selon l'invention comprend au moins une série d'étapes constituant une incubation immunologique et une série d'étapes constituant une incubation de révélation, notamment une incubation enzymatique. Selon un mode de réalisation avantageux de l'installation conforme à l'invention, les modules réactionnel, échantillons et réactifs comprennent chacun une couronne entraînée en rotation à vitesse angulaire constante, lesdites rotations des différentes couronnes étant synchronisées par le système informatique. On définit, au sens de la présente invention, une rotation complète du module réactionnel, comme étant la succession d'un nombre donné de positions prises par un tube, la position un étant la position de départ de chaque tube et le nombre de positions étant de 100 dans un exemple de réalisation de l'invention. Selon une caractéristique de l'invention, le module réactionnel comprend, en outre, un dispositif de lavage comprenant un moyen d'application d'un champ magnétique à la partie inférieure des tubes et une tête de lavage comportant au moins un moyen d'aspiration du liquide contenu dans lesdits tubes, au moins un moyen de distribution d'un liquide de lavage auxdits tubes et éventuellement au moins un moyen de distribution d'un substrat approprié. Avantageusement, le moyen d'application d'un champ magnétique est constitué par quatre paires d'aimants, chaque paire étant éventuellement associée à une armature métallique de canalisation des lignes de flux magnétique. Chaque aimant a une dimension permettant d'appliquer un champ magnétique simultanément à deux tubes consécutifs, lorsque ceux-ci sont dans la position appropriée. Avantageusement, la tête de lavage comprend quatre moyens d'aspiration, trois moyens de lavage et un moyen de distribution d'un substrat approprié. Selon encore une autre caractéristique de l'appareil conforme à l'invention, ledit module réactionnel comprend un nombre de positions de tubes correspondant à la réalisation d'au moins une séquence analytique comportant une série d'étapes successives, laquelle/lesquelles séquences analytiques étant identiques quel que soit le dosage à réaliser, chaque étape correspondant à un nombre de positions séquentielles d'un tube dans le module réactionnel, la durée de séjour d'un tube dans une position étant constante, lesdites étapes successives d'une séquence analytique étant - dépôt de l'échantillon à analyser en position 1 ; - dépôt du réactif approprié en position 4 ; - préaimantation en position 86 ; - aimantation et aspiration en position 87 ; - lavage en position 88 ; - préaimantation en position 89 ; - aimantation et aspiration en position 90 ; - lavage en position 91 ;; - préaimantation en position 92 ; - aimantation et aspiration en position 93 ; - lavage en position 94 ; - préaimantation en position 95 ; - aimantation et aspiration en position 96 ; - distribution du substrat en position 98 ; - préaimantation en position 82 ; - lecture du résultat en position 83. L'ensemble de ces étapes successives constitue une séquence analytique, qui comprend, dans le cas de la distribution d'un seul réactif (dosage "monoréactif"), deux rotations complètes du module réactionnel, par tout moyen approprié, notamment un moteur électrique et dans le cas de la distribution de deux réactifs (dosage "biréactif"), trois rotations complètes du module réactionnel. Selon encore une autre caractéristique de l'invention, la durée de séjour dans une position est comprise entre 5 et 20 secondes environ. On peut ainsi réaliser une centaine de séquences analytiques à l'heure. Selon une autre caractéristique de l'appareil conforme à l'invention, le module réactionnel est, en outre, associé à un dispositif de régulation de la température. Selon encore une autre caractéristique de l'invention, l'appareil comprend en outre un moyen de décontamination par rinçage des moyens de distribution des échantillons dans les tubes du module réactionnel. Ce moyen de décontamination est avantageusement constitué par un récipient associé, par une pompe et une électrovanne trois voies, par exemple, à un réservoir de détergent approprié L'installation conforme à 1 invention a l'avantage de permettre l'automatisation intégrale des techniques ELISA ou RIA et de réaliser simultanément sur un même échantillon notamment des dosages de protéines, d'haptènes et d'anticorps, en un temps très court inférieur à 1 heure. La présente invention a également pour objet un procédé de dosage immunologique, notamment par compétition ou par une méthode bi-site, en plusieurs étapes successives, d'au moins une substance dans une pluralité d'échantillons à analyser, utilisant comme support solide des billes magnétiques appropriées, caractérisé en ce qu il comporte pour chaque échantillon à analyser * au moins une incubation immunologique comprenant - la distribution successive d'une quantité aliquote d'échantillon puis d'une quantité aliquote de réactif approprié dans un tube de réaction entraîné en rotation à vitesse constante, au moment où ce dernier est dans la position appropriée auxdites distributions, puis décontamination de chaque système de distribution, - la mise en contact de l'échantillon et du réactif approprié pendant un temps convenable dépendant de la durée d'une rotation complète d'un tube de réaction, - au moins une étape de sédimentation des billes magnétiques sur lesquelles est éventuellement fixé la substance à détecter, à l'aide de l'application d'un champ magnétique approprié, - au moins une étape de lavage desdites billes magnétiques, et * une incubation de révélation comprenant - éventuellement la distribution et la mise en contact d'un substrat approprié avec lesdites billes, pendant un temps convenable dépendant de la durée de rotation entre ladite distribution et l'étape de lecture du résultat, puis - la lecture du résultat par tout moyen approprié, lesdites étapes étant automatisées, constituant une séquence analytique et étant déterminées par les rotations synchrones de modules A, C et E, portant respectivement les tubes contenant les échantillons à analyser, les tubes réactifs et les tubes de réaction destinés à recevoir successivement les quantités aliquotes desdits échantillons et les quantités aliquotes des réactifs appropriés comprenant les billes magnétiques. Selon un mode de mise en oeuvre avantageux du procédé conforme à l'invention, il comprend une incubation immunologique et une incubation de révélation constituée par une incubation enzymatique, lesquelles étapes successives correspondent chacune à un nombre de positions séquentielles d'un tube de réaction et sont I. incubation immunologique a - le dépôt de l'échantillon à analyser ; b - le dépôt du réactif approprié ; c - la mise en contact de l'échantillon et du réactif pendant un temps approprié, dépendant de la durée d'une rotation complète d'un tube de réaction ; d - une première sédimentation des particules magnétiques suivie d'une aspiration du surnageant puis d'un premier lavage ; e - une deuxième sédimentation des particules magnétiques suivie d'une aspiration du surnageant puis d'un deuxième lavage ;; f - une troisième sédimentation des particules magnétiques suivie d'une aspiration du surnageant puis d'un troisième lavage ; g - une quatrième sédimentation des particules suivie d'une aspiration du surnageant puis II. incubation enzymatique h - une distribution du substrat et la mise en contact des billes magnétiques avec ledit substrat, pendant un temps approprié, dépendant de la durée de rotation entre la distribution du substrat et l'étape de lecture du résultat, suivie d'une sédimentation i - puis la lecture du résultat. Selon un autre mode de mise en oeuvre du procédé conforme à 1 invention, celui-ci comprend deux incubations immunologiques et une incubation de révélation constituée par une incubation enzymatique, lesdites étapes successives correspondant chacune à un nombre de positions séquentielles d'un tube de réaction et sont I. première incubation immunologique a - le dépôt de l'échantillon à analyser ; b - le dépôt d'un réactif approprié ; c - la mise en contact de l'échantillon et du réactif pendant un temps approprié, dépendant de la durée d'une rotation complète d'un tube de réaction ; d - une première sédimentation des particules magnétiques suivie d'une aspiration du surnageant puis d'un premier lavage ; e - une deuxième sédimentation des particules magnétiques suivie d'une aspiration du surnageant puis d'un deuxième lavage ;; f - une troisième sédimentation des particules magnétiques suivie d'une aspiration du surnageant puis d'un troisième lavage ; g - une quatrième sédimentation des particules suivie d'une aspiration du surnageant puis II. deuxième incubation immunologique - les étapes a- à g- sont réalisées une seconde fois ; puis III. incubation enzymatique h - une distribution du substrat et la mise en contact des billes magnétiques avec ledit substrat, pendant un temps approprié, dépendant de la durée de rotation entre la distribution du substrat et l'étape de lecture du résultat, suivie d'une sédimentation i - puis la lecture du résultat. Selon un autre mode de mise en oeuvre du procédé conforme à l'invention, chaque réactif comprend avantageusement des billes magnétiques recouvertes d'une substance S1 se liant spécifiquement à la substance à détecter et un conjugué constitué par un marqueur approprié couplé à une substance S2, identique ou différente de S et qui ne réagit pas avec Selon une disposition avantageuse de ce mode de mise en oeuvre, ledit réactif est constitué de billes magnétiques recouvertes d'une substance S1 choisie dans le groupe qui comprend les anticorps monoclonaux appropriés, les fragments F(ab')2 d'un anticorps monoclonal approprié, les anticorps polyclonaux appropriés, lesdits anticorps étant dirigés contre la substance à doser et les antigènes appropriés, notamment la substance à doser ou l'un de ses fragments et d'un conjugué constitué par de la phosphatase alcaline associée à une substance S2 choisie dans le groupe qui comprend les anticorps monoclonaux appropriés, les fragments F(ab')2 d'un anticorps monoclonal approprié, les anticorps polyclonaux appropriés, lesdits anticorps étant dirigés contre la substance à doser et les antigènes appropriés, notamment la substance à doser ou l'un de ses fragments et les complexes antigène-immunoglobuline. Un tel réactif a l'avantage d'être stable pendant 30 jours et d'être particulièrement bien adapté au procédé de dosage automatique conforme à l'invention. Pour certaines des substances à doser, une séquence analytique comprenant une seule incubation immunologique et une incubation de révélation est nécessaire ; il s'agit en particulier de l'v-féto-protéine (AFP), de la LH, de la FSH, de l'hCG, des IgE et de la prolactine et ce de manière non limitative. Pour d'autres substances, la séquence analytique comprend deux incubations immunologiques et une incubation de révélation ; il s'agit notamment, et ce de manière non limitative, de la TSH, de la T3, de la T4 totale et de la T4 libre et du cortisol ou bien des anticorps qui apparaissent lors des infections, notamment dues à un parasite (toxoplasmose par exemple), un virus (rubéole, VIH, par exemple) ou à un microorganisme (Chlamydiae par exemple). Pour ces dernières substances (anticorps), le procédé conforme à l'invention permet de réaliser les dosages en évitant l'étape de pré-dilution habituellement nécessaire. Selon encore un autre mode de mise en oeuvre du procédé conforme à l'invention, il comprend en outre une étape de calibration multiparamétrique. Un tel procédé a en effet l'avantage - de ne pas nécessiter une calibration pour chaque série de dosages, une calibration des différents lots de réactifs étant suffisante ; - de calibrer, lors d'une étape unique, l'ensemble des substances pouvant éventuellement être dosées. La présente invention a, de plus, pour objet un réactif de diagnostic immunologique liquide, caractérisé en ce qu'il comprend des billes magnétiques recouvertes d'une substance S1 se liant spécifiquement à la substance à détecter et un conjugué constitué par un marqueur approprié couplé à une substance S2, identique ou différente de S1 et qui ne réagit pas avec On peut citer notamment, comme billes magnétiques qui présentent les propriétés adaptées au procédé conforme à l'invention, les billes décrites dans le brevet européen 38 730, au nom de RHONE-POULENC SPECIALITES CHIMIQUES et dénommées billes "ESTAPOR". Selon un mode de réalisation avantageux dudit réactif, il est constitué de billes magnétiques recouvertes d'une substance S1 choisie dans le groupe qui comprend les anticorps monoclonaux appropriés, les fragments F(ab')2 d'un anticorps monoclonal approprié, les anticorps polyclonaux appropriés, lesdits anticorps étant dirigés contre la substance à doser et les antigènes appropriés, notamment la substance à doser ou l'un de ses fragments et d'un conjugué constitué par de la phosphatase alcaline associée à une substance S2 choisie dans le groupe qui comprend les anticorps monoclonaux appropriés, les fragments F(ab')2 d'un anticorps monoclonal approprié, les anticorps polyclonaux appropriés, lesdits anticorps étant dirigés contre la substance à doser et les antigènes appropriés, notamment la substance à doser ou l'un de ses fragments et les complexes antigène-immunoglobuline. La présente invention a, en outre, pour objet un kit ou trousse de diagnostic, prêt à l'emploi, caractérisé en ce qu'il est constitué par au moins un réactif de diagnostic immunologique conforme à l'invention. Outre les dispositions qui précèdent, l'invention comprend encore d'autres dispositions qui ressortiront de la description qui va suivre, faite en référence aux dessins annexés dans lesquels la figure 1 illustre schématiquement l'installation conforme à l'invention ; la figure 2 est une vue schématique en perspective de la tête de lavage ; la figure 3 représente schématiquement la succession des étapes réalisées au niveau du module réactionnel ; la figure 4 illustre schématiquement le fonctionnement du dispositif de lavage. Il doit être bien entendu, toutefois, que ces dessins et les parties descriptives correspondantes sont donnés uniquement à titre d'illustration de l'objet de l'invention, dont ils ne constituent en aucune manière une limitation. L'installation conforme à l'invention est illustrée schématiquement sur la figure 1. Elle comprend un module échantillon A, un module réactionnel C, un module réactif E et deux bras B, D de prélèvement et de distribution de produits, chaque module A, C, E étant constitué essentiellement d'une couronne équipée de supports de tubes, et entraînée en rotation à vitesse constante par un moteur électrique sous commande d'un microprocesseur, de telle sorte que les rotations des trois couronnes soient synchronisées. Le module échantillon A comprend une pluralité de tubes Te, chacun contenant chacun un échantillon de fluide biologique dans lequel au moins une substance est à doser, ledit module étant amovible. Le bras de distribution B, qui comprend un support d'aiguille et une aiguille de diamètre approprié, prélève un échantillon (10 à 150 Fl) et le dépose dans le tube situé en position 1 sur le module réactionnel C, puis le module A et le module C avancent d'un tube, et une nouvelle distribution est réalisée en position 1 du module C, jusqu'à passage de tous les échantillons présents sur le module A. Dans le module C, lorsque le premier tube dans lequel a été réalisé un dépôt arrive en position 4, le dispositif de distribution D prélève au niveau du module réactif E, le réactif approprié (50 à 400 R -contenant des billes magnétiques recouvertes d'une substance appropriée S1 et un conjugué constitué par un marqueur approprié et une substance qui se lie spécifiquement à la sub stance à détecter, mais qui n'interagit pas avec S1- et le dépose dans le tube en position 4 et ce jusqu' au passage de tous les tubes présents sur le module réactionnel C contenant un échantillon, en position 4. Les dispositifs de distribution B et D sont systématiquement décontaminés entre deux prélèvements, notamment en présence de "TWEEN". Dans un mode de réalisation préféré de cette installation, le module échantillon A peut comprendre jusqu'à 36 tubes Te, notamment des tubes à prélèvement tels qu'habituellement utilisés dans les laboratoires d'analyse médicale, le module réactif E jusqu'à 20 tubes ou réservoirs pouvant contenir jusqu'à 100 ml de réactif et le module réactionnel peut occuper 100 positions angulaires différentes. Le temps de séjour dans une position est avantageusement de 10 secondes et permet environ 100 dosages par heure. Le module réactif E peut avantageusement être réfrigéré et comporter des moyens d'agitation des réactifs, permettant le maintien en suspension des billes magnétiques, sans l'adjonction d'un quelconque électro-aimant à l'intérieur des tubes réactifs ; en effet, le mouvement de rotation dudit module réactif E permet avantageusement une agitation suffisante des billes magnétiques. Le module réactionnel C peut avantageusement être thermostaté à 37"C. Une telle installation permet notamment le dosage de lthCG, de la TSH, de la T3 totale et libre, de la T4 totale et libre, du cortisol, des IgG ou des IgM présentes en particulier dans les infections suivantes toxoplasmose, rubéole, infections à Chiamydia, hépatite, infections à VIH, de polypeptides et protéines tels que AFP, ACE. Le marqueur peut avantageusement être de la phosphatase alcaline. La figure 2 représente une tête de lavage L conforme à l'invention, associée au module réactionnel C et qui comprend un moyen 20 de distribution du substrat, quatre moyens d'aspiration 211-214 et trois moyens de lavage 221-223. Lorsqu'un tube arrive en position 86, une préaimantation est réalisée, puis en position 87 du module réactionnel C, un champ magnétique est appliqué et une aspiration du liquide contenu dans le tube est réalisée ; en position 88, un lavage des billes magnétiques sédimentées en position 87 est réalisé et la succession préaimantation, aimantation-aspiration, lavage est à nouveau réalisée en positions (89, 90, 91 ; 92, 93, 94) puis une dernière succession comprenant la distribution du substrat à la place du lavage est réalisée en positions 95, 96, 98. La figure 3 montre la succession des étapes d'une séquence analytique comme définie plus haut et comprenant une incubation immunologique et une incubation enzymatique, dans un mode de réalisation de l'installation comportant 100 tubes au niveau du module réactionnel - en position 1, on a le dépôt de l'échantillon à analyser - en position 4, on a le dépôt du réactif ; - en position 86, on a la première préaimantation ; - en position 87, on a la première aimantation et aspiration J - on a le premier lavage en position 88 - la deuxième série préaimantation, aimantation, aspiration et lavage est réalisée en positions 89,90 et 91 - la troisième série préaimantation, aimantation et aspiration et lavage est réalisée en positions 92, 93 et 94 ;; - la quatrième série comprend la distribution du substrat de la phosphatase alcaline (PNPP) et comprend une préaimantation, une aimantation, une aspiration et une distribution du substrat en positions 95, 96 et 98 ; - la lecture de la réaction est précédée par une préaimantation en position 82, la lecture proprement dite ayant lieu en position 83 à l'aide d'un système de lecture approprié et notamment d'un photomètre à filtre interférentiels, avec une lecture systématique à trois longueurs d'onde différentes, et ce de manière non limitative ; La figure 4 illustre l'étape de lavage et montre un tube Tr en positions 86 (préaimantation), 87 (aimantation et aspiration), 88 (lavage), 89 (préaimantation), 90 (aimantation et aspiration), 91 (lavage) sur le module réactionnel.L'aimantation des particules magnétiques est réalisée par des aimants 50 permanents ayant une induction magnétique de 1023 tesla environ, qui sont groupés par paire, dans chacune desquelles ils sont supportés par une armature magnétique de canalisation des lignes de flux magnétique. La durée d'aimantation nécessaire à la sédimentation desdites billes est de l'ordre de 15 secondes. Les aimants 50 ont une dimension correspondant à deux tubes. Cette installation permet notamment de réaliser des dosages immunoenzymatiques comme suit Exemple 1 : Dosage dans un même sérum des IgG antitoxoplasmose, des IgM antitoxoplasmose, de lthCG, de la prolactine, des IgG anti-rubéole et des Chlamydia dénommé ci-après "plateau grossesse" Une telle installation permet, par exemple, le dosage dans un même sérum des IgG antitoxoplasmose, des IgM antitoxoplasmose, de 1'HCG et de la prolactine, de la rubéole et des Chlamydia dénommé ci-après "plateau gros sasse". Dans ce cas, l'hCG et la prolactine nécessitent un seul réactif (une séquence analytique comportant une seule incubation immunologique, conforme à l'invention) alors que les IgG antitoxoplasmose, les IgM antitoxoplasmose, les IgG anti-rubéole et les Chlamydia nécessitent deux réactifs (deux séquences analytiques conformes à l'invention). Dans cet exemple, le module réactif E comporte - en position 1, un réactif hCG comprenant des billes "ESTAPOR" recouvertes d'un fragment F(ab')2 d'un anticorps monoclonal dirigé contre lthCG et un conjugué phosphatase alcaline (PAL) -fragment F(ab')2 d'un anticorps monoclonal dirigé contre l'hCG, différent du pre mier ; - en position 2, un réactif prolactine comprenant des billes "ESTAPOR" recouvertes d'un fragment F(ab')2 d'un anticorps monoclonal dirigé contre la prolactine et un conjugué phosphatase alcaline (PAL)-fragment F(ab')2 d'un anticorps monoclonal dirigé contre la prolactine, différent du premier ; - en position 3, pour le dosage des IgG antitoxoplasmose, un premier réactif anti-toxoplasmose comprenant des billes "ESTAPOR" recouvertes d'un antigène toxoplasmique ;; - en position 4, pour le dosage des IgG antitoxoplasmose, un deuxième réactif antitoxoplasmose constitué d'un conjugué phosphatase alcaline (PAL) -anticorps polyclonal anti-IgG humaine ; - en position 5, un premier réactif contre la rubéole comprenant des billes magnétiques recouvertes d'un antigène rubéolique ; - en position 6, un deuxième réactif contre la rubéole, constitué d'un conjugué phosphatase alcaline (PAL)-anticorps polyclonal anti-IgG humaine ; - en position 7, un premier réactif anti-Chlamydia comprenant des billes magnétiques recouvertes d'un antigène chlamydial ; - en position 8, un deuxième réactif anti Chiamydia, constitué d'un conjugué phosphatase alcaline (PAL)-anticorps polyclonal anti-IgG humaine ;; - en position 9, pour le dosage des IgM antitoxoplasmose, un premier réactif anti-toxoplasmose comprenant des billes magnétiques recouvertes d'un fragment F(ab')2 d'un anticorps monoclonal anti-toxoplasmose ; - en position 10, pour le dosage des IgM antitoxoplasmose, un deuxième réactif anti-toxoplasmose, constitué d'un complexe formé d'un antigène toxoplasmique purifié, marqué par une Ig d'origine animale, conjuguée à la phosphatase alcaline. Le module échantillon A comprend les différents sérums à analyser. Pour un premier sérum, situé sur le plateau échantillons A, on dose successivement les différentes substances énoncées ci-dessus, en introduisant dans différents tubes de réaction, situés sur le module C réactionnel, une quantité appropriée de sérum, une quantité appropriée d'un complément volumique ou lwflush't, puis, en position 4 sur le module réactionnel, une quantité appropriée de réactif 1 ; la séquence analytique est poursuivie jusqu' à distribution du substrat (500 Fl) pour les dosages "monoréactif" (une incubation immunologique et une incubation enzymatique), puis lecture de la réaction à trois longueurs d'onde différentes, sur un photomètre à filtres interférentiels.Pour les dosages nécessitant deux réactifs, ceux-ci sont introduits uniquement dans les tubes réactionnels appropriés, la lecture de la réaction se faisant, en ce cas, seulement après la distribution du deuxième réactif, suivie au moment opportun de la distribution du substrat, celle-ci tétant , en ce cas, pas réalisée à la fin de la deuxième rotation complète. Pour un deuxième sérum, seul le dosage de la prolactine peut être programmé, par exemple. Il s'agit donc bien d'un dosage multi-paramétrique à accès aléatoire, c' est-à-dire permettant de doser un nombre différent de substances pour chaque échantillon à analyser. Après la sortie du premier résultat, les suivants se succèdent toutes les 10 secondes, par exemple, ainsi le temps nécessaire à la réalisation de 100 dosages nécessitant une séquence analytique comprenant une seule incubation immunologique, est d'environ 50 minutes et le temps nécessaire à la réalisation de 100 dosages nécessitant une séquence analytique comprenant deux incubations immunologiques est d'environ 65 minutes. Le tableau I suivant résume les quantités nécessaires des différentes substances à distribuer, en fonction de la substance à doser *SERUM *FLUSH *Réactif *Réactif *SUBSTRAT 1 2 hCG 100 50 300 500 PRL 25 50 300 500 CEI AMYDIAE 10 50 300 400 500 RUBEOLE 10 50 300 300 500 TOXO G 10 50 300 400 500 TOXO M 10 50 300 400 500 *tous les volumes sont exprimés en Rl Exemple 2 : dosage de 15 paramètres différents. Le tableau II ci-après montre les quantités des différentes substances à ajouter *SERUM *FLUSH *Réactif *Réactif *SUBSTRAT 1 2 AFP 20 1 50 300 7 500 LH 100 50 300 500 FSH 100 50 300 500 hCG 100 50 300 500 IgE 20 50 300 500 PRL 25 50 300 500 CHLAMYDIAE 10 50 300 400 50 CORTISOL 100 50 100 150 500 RUBEOLE 10 50 300 300 500 T3 150 50 200 400 500 T4 100 50 200 400 500 T4 libre 100 50 150 200 500 TOXO G 10 50 300 400 500 TOXO M 10 50 300 400 500 TSH 150 50 150 400 500 *tous les volumes sont exprimés en Rl. De manière générale, le réactif utilisé pour le dosage des substances qui ne nécessitent qu'une incubation immunologique est constitué par des billes recouvertes d'un fragment F(ab')2 d'un anticorps monoclonal dirigé contre la substance à doser et d'un conjugué PAL-F(ab')2 d'un anticorps monoclonal différent du premier dirigé contre la substance à doser. Pour ce qui concerne les substances qui nécessitent deux incubations immunologiques - cortisol : le premier réactif est constitué de billes recouvertes d'anticorps polyclonaux anticortisol et le deuxième réactif est constitué de cortisol marqué à la PAL ; - T3 totale, t3 libre, T4 totale et T4 libre le premier réactif est constitué de billes recouvertes d'anticorps monoclonaux anti-T3 ou T4 sous forme F(ab')2 et le deuxième réactif est constitué de T3 ou T4 marquée à la PAL ; - TSH : le premier réactif est constitué de billes recouvertes d'anticorps monoclonaux anti-TSH sous forme F(ab')2 et le deuxième réactif est constitué de fragment F(ab')2 d'un autre anticorps monoclonal dirigé contre la TSH marquée à la PAL. Comme dans l'exemple 1, on peut programmer le dosage d'un nombre de paramètres différents pour chaque échantillon à analyser. Ainsi que cela ressort de ce qui précède, l'invention ne se limite nullement à ceux de ses modes de mise en oeuvre, de réalisation et d'application qui viennent d'être décrits de façon plus explicite ; elle en embrasse, au contraire, toutes les variantes qui peuvent venir à l'esprit du technicien en la matière, sans s'écarter du cadre ni de la portée de la présente invention. REVENDICATIONS 1') Appareil de dosage automatique de type immunologique d'au moins une substance dans une pluralité d'échantillons à analyser, en plusieurs étapes successives constituant une séquence analytique, caractérisé en ce qu'il comporte (1) un module échantillons (A) constitué par une pluralité de supports de tubes (Te) contenant lesdits échantillons, associé à un microprocesseur de commande ; (2) un module réactionnel (C) constitué par une pluralité de supports de tubes (Tr) destinés à recevoir successivement une quantité aliquote desdits échantillons et une quantité aliquote d'un mélange de réactifs approprié, associé à un microprocesseur de commande ;; (3) un module réactif (E) constitué par une pluralité de supports de tubes contenant le/les réactifs appropriés aux différents dosages à réaliser, au moins l'un desdits réactifs étant sous forme de billes magnétiques ; (4) un moyen de distribution (B) des échantillons dans les tubes (Tr) dudit module réactionnel ; (5) un moyen de distribution (D) des réactifs dans les tubes dudit module réactionnel ; (6) un moyen approprié de lecture de la réaction effectuée dans le module réactionnel ; et (7) un système informatique constitué par un ordinateur de commande des différents modules et moyens (1) à (6), et permettant l'exécution d'une succession de séquences analytiques identiques, quel que soit le dosage à réaliser. 2 ) Appareil selon la revendication 1, caractérisé en ce que les modules réactionnel (C), échantillon (A) et réactif (E) comprennent chacun une couronne entraînée en rotation à vitesse angulaire constante, lesdites rotations des différentes couronnes étant synchronisées par le système informatique. 3') Appareil selon la revendication 1 ou la revendication 2, caractérisé en ce que le module réactionnel (C) comprend, en outre, un dispositif de lavage comprenant un moyen d'application d'un champ magnétique à la partie inférieure des tubes (Tr) et une tête de lavage (L) comportant au moins un moyen (21) d'aspiration du liquide contenu dans lesdits tubes, au moins un moyen (22) de distribution d'un liquide de lavage auxdits tubes et éventuellement au moins un moyen (20) de distribution d'un substrat approprié. 4') Appareil selon l'une quelconque des revendications 1 à 3, caractérisé en ce que le moyen d'application d'un champ magnétique est constitué par quatre paires d'aimants (50), chaque paire étant éventuellement associée à une armature métallique de canalisation des lignes de flux magnétique. 5 ) Appareil selon la revendication 4, caractérisé en ce que chaque aimant (50) a une dimension permettant d'appliquer un champ magnétique simultanément à deux tubes consécutifs. 6 ) Appareil selon l'une quelconque des revendications 1 à 5, caractérisé en ce que la tête de lavage (L) comprend un moyen (20) de distribution d'un substrat approprié, quatre moyens (211-214) d'aspiration et trois moyens (221-223)de lavage. 7 ) Appareil selon l'une quelconque des revendications 1 à 6, caractérisé en ce que ledit module réactionnel (C) comprend un nombre de positions de tubes correspondant à la réalisation d'au moins une séquence analytique comportant une série d'étapes successives, laquelle/lesquelles séquences analytiques étant identiques quel que soit le dosage à réaliser, chaque étape correspondant à un nombre de positions séquentielles d'un tube dans le module réactionnel, la durée de séjour d'un tube dans une position étant constante, lesquelles étapes successives d'une séquence analytique sont - dépôt de l'échantillon à analyser en position 1 ; - dépôt du/des réactifs en position 4 ; - préaimantation en position 86 ; - aimantation et aspiration en position 87 ; - lavage en position 88 ; - préaimantation en position 89 ;; - aimantation et aspiration en position 90 ; - lavage en position 91 ; - préaimantation en position 92 ; - aimantation et aspiration en position 93 ; - lavage en position 94 ; - préaimantation en position 95 ; - aimantation et aspiration en position 96 ; - distribution du substrat en position 98 ; - préaimantation en position 82 ; - lecture du résultat en position 83. 8 ) Appareil selon la revendication 7, caractérisé en ce que la durée de séjour dans une position est comprise entre 5 et 20 secondes environ. 9 ) Appareil selon l'une quelconque des revendications 1 à 8, caractérisé en ce que le module réactionnel (C) est, en outre, associé à un dispositif de régulation de la température. 10 ) Appareil selon l'une quelconque des revendications 1 à 9, caractérisé en ce qu' il comprend en outre un moyen de décontamination par rinçage des moyens de distribution (B) des échantillons dans les tubes du module réactionnel. 11") Appareil selon la revendication 10, caractérisé en ce que le moyen de décontamination est avantageusement constitué par un récipient associé par une pompe et une électrovanne, à un réservoir de détergent approprié. 12') Procédé de dosage immunologique, en plusieurs étapes successives, d'au moins une substance dans une pluralité d'échantillons à analyser, utilisant comme support solide des billes magnétiques appropriées, caractérisé en ce qu'il comporte pour chaque échantillon à analyser * au moins une incubation immunologique comprenant - la distribution successive d'une quantité aliquote d'échantillon puis d'une quantité aliquote de réactif approprié dans un tube de réaction entraîné en rotation à vitesse constante, au moment où ce dernier est dans la position appropriée auxdites distributions, puis décontamination de chaque système de distribution, - la mise en contact de l'échantillon et du réactif approprié pendant un temps convenable dépendant de la durée d'une rotation complète d'un tube de réaction, - au moins une étape de sédimentation des billes magnétiques sur lesquelles est éventuellement fixé la substance à détecter, à l'aide de l'application d'un champ magnétique approprié, - au moins une étape de lavage desdites billes magnétiques, et * une incubation de révélation comprenant - éventuellement la distribution et la mise en contact d'un substrat approprié avec lesdites billes, pendant un temps convenable dépendant de la durée de ro tation entre ladite distribution et l'étape de lecture du résultat, puis - la lecture du résultat par tout moyen approprié, lesdites étapes étant automatisées, constituant une séquence analytique identique quel que soit le dosage à réaliser et étant déterminées par les rotations synchrones de modules A, C et E, portant respectivement les tubes contenant les échantillons à analyser, les tubes réactifs et les tubes de réaction destinés à recevoir successivement les quantités aliquotes desdits échantillons et les quantités aliquotes des réactifs appropriés comprenant les billes magnétiques. 13') Procédé selon la revendication 12, caractérisé en ce qu'il comprend une incubation immunologique et une incubation de révélation constituée par une incubation enzymatique, lesquelles étapes successives correspondent chacune à un nombre de positions séquentielles d'un tube de réaction et sont I. incubation immunologique a - le dépôt de l'échantillon à analyser ; b - le dépôt du réactif approprié ; c - la mise en contact de l'échantillon et du réactif pendant un temps approprié, dépendant de la durée d'une rotation complète d'un tube de réaction ; d - une première sédimentation des particules magnétiques suivie d'une aspiration du surnageant puis d'un premier lavage ; e - une deuxième sédimentation des particules magnétiques suivie d'une aspiration du surnageant puis d'un deuxième lavage ;; f - une troisième sédimentation des particules magnétiques suivie d'une aspiration du surnageant puis d'un troisième lavage ; g - une quatrième sédimentation des particules suivie d'une aspiration du surnageant puis II. incubation enzymatique h - une distribution du substrat et la mise en contact des billes magnétiques avec ledit substrat, pendant un temps approprié, dépendant de la durée de rotation entre la distribution du substrat et l'étape de lecture du résultat, suivie d'une sédimentation J i - puis la lecture du résultat. 14') Procédé selon la revendication 12, caractérisé en ce qu'il comprend deux incubations immunologiques et une incubation de révélation constituée par une incubation enzymatique, lesdites étapes successives correspondant chacune à un nombre de positions séquentielles d'un tube de réaction et sont I. première incubation immunologique a - le dépôt de l'échantillon à analyser ; b - le dépôt d'un réactif approprié ; c - la mise en contact de l'échantillon et du réactif pendant un temps approprié, dépendant de la durée d'une rotation complète d'un tube de réaction ; d - une première sédimentation des particules magnétiques suivie d'une aspiration du surnageant puis d'un premier lavage ; e - une deuxième sédimentation des particules magnétiques suivie d'une aspiration du surnageant puis d'un deuxième lavage ;; f - une troisième sédimentation des particules magnétiques suivie d'une aspiration du surnageant puis d'un troisième lavage ; g - une quatrième sédimentation des particules suivie d'une aspiration du surnageant puis II. deuxième incubation immunologique - les étapes a- à g- sont réalisées une seconde fois ; puis III. incubation enzymatique h - une distribution du substrat et la mise en contact des billes magnétiques avec ledit substrat, pendant un temps approprié, dépendant de la durée de rotation entre la distribution du substrat et l'étape de lecture du résultat, suivie d'une sédimentation i - puis la lecture du résultat. 15') Procédé selon l'une quelconque des revendications 12 ou 13, caractérisé en ce que chaque réactif comprend avantageusement des billes magnétiques recou vertes d'une substance S1 se liant spécifiquement à la substance à détecter, en suspension dans un liquide approprié et un conjugué constitué par un marqueur approprié couplé à une substance S2, identique ou différente de la substance S1 et qui ne réagit pas avec 16') Procédé selon la revendication 15, caractérisé en ce que ledit réactif est constitué de billes magnétiques recouvertes d'une substance S1 choisie dans le groupe qui comprend les anticorps monoclonaux appropriés, les fragments F(ab')2 d'un anticorps monoclonal approprié, les anticorps polyclonaux appropriés, et les antigènes appropriés et d'un conjugué constitué par de la phosphatase alcaline associée à une substance S2 choisie dans le groupe qui comprend les anticorps monoclonaux appropriés, les fragments F(ab')2 d'un anticorps monoclonal approprié, les anticorps polyclonaux appropriés, les antigènes appropriés et les complexes antigène-immunoglobuline. 17') Procédé selon l'une quelconque des revendications 12 à 16, caractérisé en ce qu'il comprend en outre une étape de calibration multiparamétrique. 18') Réactif de diagnostic immunologique pour la mise en oeuvre du procédé de dosage selon l'une quelconque des revendications 12 à 17, caractérisé en ce qu'il comprend des billes magnétiques recouvertes d'une substance S1 se liant spécifiquement à la substance à détecter, en suspension dans un liquide approprié et un conjugué constitué par un marqueur approprié couplé à une substance S2, identique ou différente de S1 ou qui ne réagit pas avec 19 ) Réactif selon la revendication 18, caractérisé en ce qu'il est constitué de billes magnétiques recouvertes d'une substance S1 choisie dans le groupe qui comprend les anticorps monoclonaux appropriés, les frag ments F(ab')2 d'un anticorps monoclonal approprié, les anticorps polyclonaux appropriés et les antigènes ap propriés et d'un conjugué constitué par de la phosphatase alcaline associée à une substance S2 choisie dans le groupe qui comprend les anticorps monoclonaux appropriés, les fragments F(ab')2 d'un anticorps monoclonal approprié, les anticorps polyclonaux appropriés, les antigènes appropriés et les complexes antigène-immunoglobuline. 20') Kit ou trousse de diagnostic, prêt à l'emploi pour la mise en oeuvre du procédé de dosage selon l'une quelconque des revendications 12 à 17, caractérisé en ce qu'il est constitué par au moins un réactif de diagnostic immunologique selon la revendication 18 ou la revendication 19.