Brevet FR2657014A1 — publié le 19910719

RECEPTEUR HUMAIN DE LA TSH. SEQUENCE CODANT POUR CE RECEPTEUR La présente invention concerne le récepteur humain de la TSH ainsi que l'acide nucléique codant pour ce récepteur. Le récepteur de la TSH est le récepteur de l'hormone thyréotrope (TSH pour thyroide stimulatory hormone). Ce récepteur est impliqué dans de nombreuses maladies de la thydroïde et notamment dans des maladies auto-immunes telles que la maladie de Basedow, ou autres dérèglements du fonctionnement de la thyroïde. Les différentes données disponibles jusqu'à présent sur le récepteur de la TSH, ne permettent pas d'établir avec certitude sa structure. Les poids moléculaires connus varient entre 30000 et 200000 selon les données. Cette divergence montre les nombreuses incertitudes qui subsistent pour connaître ces molécules, leurs propriétés biologiques et phamarcologiques. Les inventeurs ont maintenant cloné et isolé la séquence de nucléotides (acide nucléique) codant pour le récepteur de la TSH. Ils ont par ailleurs localisé le gène codant pour ce récepteur. L'invention concerne donc un acide nucléique codant pour le récepteur humain de la TSH ou une partie de ce récepteur. L'invention concerne également la protéine ayant des propriétés de récepteur, codée par le susdit acide nucléique. Elle vise aussi des vecteurs recombinants comprenant à titre de séquence exogène l'acide nucléique codant pour le récepteur de la TSH humaine. Elle se rapporte également à des hôtes cellulaires transformés capables d'exprimer le récepteur de la TSH humaine. L'invention offre également des moyens pour le diagnostique ou le contrôle, voire le traitement de certaines maladies thyroïdiennes telle que par exemple la maladie de Basedow, ces moyens consistant notamment en la production du récepteur par expression dans un système cellulaire procaryote ou dans un système cellulaire eucaryote, afin de détecter et éventuellement de mesurer les anticorps dirigés contre ce récepteur existant dans diverses maladies thyroïdiennes, en particulier la maladie de Basedow, en des sondes nucléotidiques pour la détection d'anomalies génétiques du gène du récepteur de la TSH, ou pour la détection d'anomalies des récepteurs dans le cas de certains cancers ; ces moyens consistent également en des anticorps dirigés contre le récepteur humain de la TSH, ces anticorps pouvant éventuellement être modifiés pour acquérir une toxicité.D'autres moyens visés par l'invention sont des peptides capables de se fixer à des anticorps dirigés contre le récepteur humain de la TSH, anticorps qui se forment au cours de certaines maladies thyroïdiennes, et en particulier la maladie de Basedow et d'empêcher ainsi les anticorps naturels de se fixer sur le récepteur et de l'activer ou de l'inhiber. L'acide nucléique de l'invention est en ce qu'il répond à la séquence nucléotidique I suivante ggcgatttcggaggatvgvagaaagtagccccgagtcccgtggaaa -1 C ATG AGG CCG GCG GAC TTG CTG CAG CTG GTG CTG CTG CTC GAC CTG CCC AGG GAC CTG GGC GGA ATG GGG TGT TCG TCT CCA CCC 84 TGC GAG TGC CAT CAG GAG GAG GAC TTA AGA GTC ACC TGC AAG GAT ATT CAA CGC ATC CCC AGC TTA CCG CCC AGT ACG CAG ACT 168 CTG AAG CTT ATT GAG ACT CAC CTG AGA ACT ATT CCA AGT CAT GCA TTT TCT AAT CTG CCC AAT ATT TCC AGA ATC TAC GTA TCT 252 ATA GAT GTG ACT CTG CAG CAG CTG GAA TCA CAC TCC TTC TAC AAT TTG AGT AAA GTG ACT CAC ATA GAA ATT CGG AAT ACC AGG 336 AAC TTA ACT TAC ATA GAC CCT GAT GCC CTC AAA GAG CTC CCC CTC CTA AAG TTC CTT GGC ATT TTC AAC ACT GGA CTT AAA ATG 420 TTC CCT GAC CTG ACC AAA GTT TAT TCC ACT GAT ATA TTC TTT ATA CTT GAA ATT ACA GAC AAC CCT TAC ATG ACG TCA ATC CCT 504 GTG AAT GCT TTT CAG GGA CTA TGC AAT GAA ACC TTG ACA CTG AAG CTG TAC AAC AAC GGC TTT ACT TCA GTC CAA GGA TAT GCT 565 TTC AAT GGG ACA AAG CTG GAT GCT GTT TAC CTA AAC AAG AAT AAA TAC CTG ACA GTT ATT GAC AAA GAT GCA TTT GGA GGA GTA 672 TAC AGT GGA CCA AGC TTG CTG GAC GTG TCT CAA ACC AGT GTC ACT GCC CTT CCA TCC AAA GGC CTG GAG CAC CTG AAG GAA CTG 756 ATA GCA AGA AAC ACC TGG ACT CTT AAG AAA CTT CCA CTT TCC TTG AGT TTC CTT CAC CTC ACA CGG GCT GAC CTT TCT TAC CCA 840 AGC CAC TGC TGT GCC TTT AAG AAT CAG AAG AAA ATC AGA GGA ATC CTT GAG TCC TTG ATG TGT AAT GAG AGC AGT ATG CAG AGC 924 TTG CGC CAG AGA AAA TCT GTG AAT GCC TTG AAT AGC CCC CTC CAC CAG GAA TAT GAA GAG AAT CTG GGT GAC AGC ATT GTT GGG 1008 TAC AAG GAA AAG TCC AAG TTC CAG GAT ACT CAT AAC AAC GCT CAT TAT TAC GTC TTC TTT GAA GAA CAA GAG GAT GAG ATC ATT 1092 GGT TTT GGC CAG GAG CTC AAA AAC CCC CAG GAA GAG ACT CTA CAA GCT TTT GAC AGC CAT TAT GAC TAC ACC ATA TGT GGG GAC 1176 C AGT GAA GAC ATG GTG TGT ACC CCC AAG TCC GAT GAG TTC AAC CCG TGT GAA GAC ATA ATG GGC TAC AAG TTC CTG AGA ATT GTG 1260 GTG TGG TTC GTT AGT CTG CTG GCT CTC CTG GGC AAT GTC TTT GTC CTG CTT ATT CTC CTC ACC AGC CAC TAC AAA CTG AAC GTC 1344 CCC CGC TTT CTC ATG TGC AAC CTG GCC TTT GCG GAT TTC TGC ATG GGG ATG TAC CTG CTC CTC ATC GCC TCT GTA GAC CTC TAC 1428 ACT CAC TCT GAG TAC TAC AAC CAT GCC ATC GAC TGG CAG ACA GGC CCT GGG TGC AAC ACG GCT GGT TTC TTC ACT GTC TTT GCA 1512 AGC GAG TTA TCG GTG TAT ACG CTG ACG GTC ATC ACC CTG GAG CGC TGG TAT GCC ATC ACC TTC GCC ATG CGC CTG GAC CGG AAG 1596 ATC CGC CTC AGG CAC GCA TGT GCC ATC ATG GTT GGG GGC TGG GTT TGC TGC TTC CTT CTC GCC CTG CTT CCT TTG GTG GGA ATA 1680 AGT AGC TAT GCC AAA GTC AGT ATC TGC CTG CCC ATG GAC ACC GAG ACC CCT CTT GCT CTG GCA TAT ATT GTT TTT GTT CTG ACG 1764 CTC AAC ATA GTT GCC TTC GTC ATC GTC TGC TGC TGT TAT GTG AAG ATC TAC ATC ACA GTC CGA AAT CCG CAG TAC AAC CCA GGG 1648 GAC AAA GAT ACC AAA ATT GCC AAG AGG ATG GCT GTG TTG ATC TTC ACC GAC TTC ATA TGC ATG GCC CCA ATC TCA TTC TAT GCT 1932 CTG TCA GCA ATT CTG AAC AAG CCT CTC ATC ACT GTT AGC AAC TCC AAA ATC TTG CTG GTA CTC TTC TAT CCA CTT AAC TCC TGT 2016 GCC AAT CCA TTC CTC TAT GCT ATT TTC ACC AAG GCC TTC CAG AGG GAT GTG TTC ATC CTA CTC AGC AAG TTT GGC ATC TGT AAA 2100 CGC CAG GCT CAG GCA TAC CGG GGG CAG AGG GTT CCT CCA AAG AAC AGC ACT GAT ATT CAG GTT CAA AAG GTT ACC CAC GAG ATG 2184 AGG CAG GGT CTC CAC AAC ATG GAA GAT GTC TAT GAA CTG ATT GAA AAG TCC CAT CTA ACC CCA AAG AAG CAA GGC CAA ATC TCA 2268 GAA GAG TAT ATG CAA ACG GTT TTG taagttaacactacactactcacaatggtaggggaacttacaaaataatagtttcttgaatatgcattcaatcccatg 2371 ou un variant de cet acide nucléique ou un fragment de cet acide nucléique dès lors que ce variant ou ce fragment code pour une protéine ou un polypeptide présentant les propriétés structurales et/ou les propriétés fonctionnelles et/ou les propriétés antigéniques du récepteur humain de la TSH. Entrent donc dans le cadre de l'invention des variants de l'acide nucléique répondant à la séquence I ou des parties de cet acide nucléique, lorsque la protéine codée résultante vérifie au moins ou plusieurs des conditions suivantes * la protéine ou le polypeptide codé contient les sites contenus dans la séquence d'acides aminés déduite de l'acide nucléique de séquence I, et dont la présence est nécessaire pour que, lorsque ce fragment est exposé à la surface d'une cellule, il soit capable de se comporter commme le récepteur TSH humain (de lier la TSH Ae participer à l'activation de l'adénylate cyclase, ou d'un autre système de transduction): : * la protéine ou le polypeptide codé est susceptible d'être reconnu par des anticorps qui reconnaissent soit la séquence d'acides aminés II donnée ci-après ou reconnaissant une forme secrétée, circulante du récepteur humain TSH * soit la protéine ou le polypeptide est susceptible ou le polypeptide codé est suceptible de générer des anticorps qui reconnaissent la séquence d'acides aminés II ci-après et forme avec ces anticorps un complexe du type anticorps-antigène. Il est à signaler que l'acide nucléique selon l'invention est portée par un gène localisé sur le chromosome humain 14 en position q31. L'acide nucléique selon l'invention est particulièrement avantageux dans la mesure où il est effet, dans l'hypothèse de l'utilisation de cet acide nucléique ou de ses produits d'expression dans des applications diagnostiques et, éventuellement thérapeutiques chez l'homme, il est important de disposer d'un matériel génétique compatible avec l'utilisation chez l'homme, que ce soit dans un but diagnostique, pharmacologique ou thérapeutique. L'acide nucléique de l'invention est avantageusement l'acide nucléique codant pour une protéine mature correspondant au récepteur humain de la TSH, cette protéine mature étant caractérisée en ce que le peptide signal a été libéré. L'invention concerne également les fragments d'acide nucléique correspondant aux séquences suivantes: - séquence nucléotidique codant pour la séquence d'acides aminés comprise entre l'acide aminé en position 1 et l'acide aminé en position 394, - séquence nucléotidique codant pour la séquence d'acides aminés comprise entre l'acide aminé en position 395 et l'acide aminé en position 660, - séquence nucléotidique codant pour la séquence d'acides aminés comprise entre l'acide aminé en position 661 et l'acide aminé en position 743. La numérotation ci-dessus fait référence aux exemples et aux figures qui les illustrent. L'acide nucléique selon l'invention peut également être caractérisé en ce qu'il code pour une protéine répondant à la séquence d'acides aminés II suivante Met Arg Pro Ala Asp Leu Leu Gln Leu Val Leu Leu Leu Asp Leu Pro Arg Asp Leu Gly Gly Met Gly Cys Ser Ser Pro Pro 28 Cys Glu Cys His Gln Glu Glu Asp Phe Arg Val Thr Cys Lys Asp Ile Gln Arg Ile Pro Ser Leu Pro Pro Ser Thr Gln Thr 56 Leu Leu Lys Ile Glu Thr His Leu Arg Thr Ile Pro Ser His Ala Phe Ser Asn Leu Pro Asn Ile Ser Arg Ile Tyr Val Ser 84 Ile Asp Val Thr Leu Gln Gln Leu Glu Ser His Ser Phe Tyr Asn Leu Ser Lys Val Thr His Ile Glu Ile Arg Asn Thr Arg 112 Asn Leu Thr Tyr Ile Asp Pro Asp Ala Leu Lys Glu Leu Pro Leu Leu Lys Phe Leu Gly Ile Phe Asn Thr Gly Leu Lys Met 140 Phe Pro Asp Leu Thr Lys Val Tyr Ser Thr Asp Ile Phe Phe Ile Leu Glu Ile Thr Asp Asn Pro Tyr Met Thr Ser Ile Pro 168 Val Asn Ala Phe Gln Gly Leu Cys Asn Glu Thr Leu Thr Leu Lys Leu Tyr Asn Asn Gly Phe Thr Ser Val Gln Gly Tyr Ala 196 Phe Asn Gly Thr Lys Leu Asp Ala Val Tyr Leu Asn Lys Asn Lys Tyr Leu Thr Val Ile Asp Lys Asp Ala Phe Gly Gly Val 224 Tyr Ser Gly Pro Ser Leu Leu Asp Val Ser Gln Thr Ser Val Thr Ala Leu Pro Ser Lys Gly Leu Glu His Leu lys Glu Leu 252 Ile Ala Arg Asn Thr Trp Thr Leu Lys Lys Leu Pro Leu Ser Leu Ser Phe Leu His Leu Thr Arg Ala Asp Leu Ser Tyr Pro 280 Ser His Cys Cys Ala Phe Lys Asn Gln Lys Lys Ile Arg Gly Ile Leu Glu Ser Leu Met Cys Asn Glu Ser Ser Met Gln Ser 308 Leu Arg Gln Arg Lys Ser Val Asn Ala Leu Asn Ser Pro Leu His Gln Glu Tyr Glu Glu Asn Leu Gly Asp Ser Ile Val Gly 336 Tyr Lys Glu Lys Ser Lys Phe Gln Asp Thr His Asn Asn Ala His Tyr Tyr Val Phe Phe Glu Glu Gln Glu Asp Glu Ile Ile 364 Gly Phe Gly Gln Glu Leu Lys Asn Pro Gln Glu Glu Thr Leu Gln Ala Phe Asp Ser His Tyr Asp Tyr Thr Ile Cys Gly Asp 392 Ser Glu Asp Met Val Cys Thr Pro Lys Ser Asp Glu Phe Asn Pro Cys Glu Asp Ile Met Gly Tyr Lys Phe Leu Arg Ile Val 420 Val Trp Phe Val Ser Leu Leu Ala Leu Leu Gly Asn Val Phe Val Leu Leu Ile Leu Leu Thr Ser His Tyr Lys Leu Asn Val 448 Pro Arg Phe Leu Met Cys Asn Leu Ala Phe Ala Asp Phe Cys Met Gly Met Tyr Leu Leu Leu Ile Ala Ser Val Asp Leu Tyr 476 Thr His Ser Glu Tyr Tyr Asn His Ala Ile Asp Trp Gln Thr Gly Pro Gly Cys Asn Thr Ala Gly Phe Phe Thr Val Phe Ala 504 Ser Glu Leu Ser Val Tyr Thr Leu Thr Val Ile Thr Leu Glu Arg Trp Tyr Ala Ile Thr Phe Ala Met Arg Leu Asp Arg Lys 532 Ile Arg Leu Arg His Ala Cys Ala Ile Met Val Gly Gly Trp Val Cys Cys Phe Leu Leu Ala Leu Leu Pro Leu Val Gly Ile 560 Ser Ser Tyr Ala Lys Val Ser Ile Cys Leu Pro Met Asp Thr Glu Thr Pro Leu Ala Leu Ala Tyr Lys Val Phe Val Leu Thr 588 Leu Asn Ile Val Ala Phe Val Ile Val Cys Cys Cys Tyr Val Lys Ile Tyr Ile Thr Val Arg Asn Pro Gln Tyr Asn Pro Gly 616 Asp Lys Asp Thr Lys Ile Ala Lys Arg Met Ala Val Leu Ile Phe Thr Asp Phe Ile Cys Met Ala Pro Ile Ser Phe Tyr Ala 644 Leu Ser Ala Ile Leu Asn Lys Pro Leu Ile Thr Val Ser Asn Ser Lys Ile Leu Leu Val Leu Phe Tyr Pro Leu Asn Ser Cys 672 Ala Asn Pro Phe Leu Tyr Ala Ile Phe Thr Lys Ala Phe Gln Arg Asp Val Phe Ile Leu Leu Ser Lys Phe Gly Ile Cys Lys 700 Arg Gln Ala Gln Ala Tyr Arg Gly Gln Arg Val Pro Pro Lys Asn Ser Thr Asp Ile Gln Val Gln Lys Val Thr His Glu Met 726 Arg Gln Gly Leu His Asn Met Glu Asp Val Tyr Glu Leu Ile Glu Lys Ser His Leu Thr Pro Lys Lys Gln Gly Gln Ile Ser 756 Glu Glu Tyr Met Gln Thr Val Leu 764 ou pour une variante ou une partie de cette protéine, dès lors que ladite variante ou partie de protéine présente les propriétés structurales ou fonctionnelles ou antigéniques de la séquence II, ou encore ces propriétés combinées. L'invention concerne également une protéine caractérisée en ce qu'elle répond a tout ou partie de la séquence d'acides aminés II donnée ci-dessus, dès lors que la protéine ainsi formée possède les propriétés structurales et/ou fonctionnelles et/ou antigéniques du récepteur humain de la TSH, ou ces propriétés combinées. Selon un mode de réalisation avantageux de l'invention, cette protéine correspond au récepteur humain de la TSH. La protéine de l'invention peut au contraire, suivant un autre mode de réalisation de l'invention, être dépourvus du site de fixation du récepteur humain de la TSH. Conformément à la définition précédente, l'invention vise en particulier la proteine correspondant au récepteur humain de TSH, cette protéine étant dépourvue du peptide signal. L'invention vise donc à la fois la protéine du récepteur humain TSH ou des fragments polypeptidiques ou peptidiques de cette protéine, sous forme glycosylée ou non. Les fragments peptidiques sont avantageusememt obtenus par synthèse chimique selon les méthodes classiques ou éventuellement par clivage de la protéine avec des enzymes appropriées. On pourra avantageusement choisir ces peptides à l'intérieur des régions les plus hydrophiles de la protéines correspondant au récepteur humain de la TSH. Ces peptides peuvent par exemple être utilisés pour produire des anticorps polyclonaux ou monoclonaux par les méthodes classiques de production d'anticorps monoclonaux. La connaissance de la séquence en acides aminés de la protéine récepteur humain de la TSH ainsi que la possibilité de faire exprimer l'ADNc ou le gène du récepteur de la TSH constitue des moyens pour rechercher des molécules apparentées à la TSH mais plus actives ou encore des antagonistes de la TSH. Dans cette hypothèse, on peut avoir recours par exemple à des modifications ponctuelles de la TSH. L'invention vise également des vecteurs recombinants caractérisés en ce qu'ils comprennent à titre d'acide nucléique exogène, l'un des acides nucléiques définis précédemment, inséré en un site non essentiel pour la réplication du vecteur. Ces vecteurs recombinants sont de préférence des vecteurs d'expression et de clonage de l'acide nucléique exogène. Des vecteurs recombinants préférés sont par exemple des plasmides, des phages, des cosmides, des dérivés viraux comme par exemple le Baculovirus. Des vecteurs recombinants particulièrement avantageux pour la réalisation de l'invention sont ceux dans lesquels l'acide nucléique exogène est placé sous le contrôle d'éléments de régulation permettant son expression dans un hôte cellulaire déterminé. De tels éléments de régulation sont choisis pour leur capacité à être reconnus par le système enzymatique de l'hôte cellulaire choisi. Les vecteurs recombinants de l'invention peuvent être mis en oeuvre dans des systèmes cellulaires procaryotes tels que des bactéries, notamment E.coli, des systèmes cellulaires eucaryotes, notamment des levures, des cellules animales, par exemple des cellules d'insectes, notamment des cellules de drosophiles ou encore des cellules de mammifères. Des cellules de mammifères intéressantes sont par exemple les cellules CHO. L'invention concerne aussi un hôte cellulaire caractérisé en ce qu'il est transformé par un vecteur choisi parmi les vecteurs précédemment décrits, dans des conditions telles qu'il permet l'expression de l'acide nucléique exogène inséré dans le vecteur. Les hôtes cellulaires préférés pour la réalisation de l'invention sont des systèmes procaryotes, notamment des bactéries telles que E.coli, des systèmes eucaryotes, notamment des levures, ou encore des cellules d'insectes, notamment celles de la drosophile, ou des cellules animales en particulier de cellules de mammifères, comme les cellules de CHO. Un hôte cellulaire particulièrement préféré est constitué par des cellules de drosphile transformées par un vecteur du type baculovirus, lui-même modifié par un acide nucléique de l'invention. L'expression du récepteur de TSH peut être obtenue sous la forme non native. L'hôte cellulaire que l'on choisit pour exprimer le récepteur humain de la TSH, peut également être un hôte capable d'exprimer le récepteur de la TSH humaine dans sa conformation native ou une partie de ce récepteur. Le récepteur de la TSH ainsi produit ou une partie de ce récepteur se trouve donc dans une conformation tridimensionnelle analogue à celle qu'il présente in situ. Selon un autre mode de réalisation préféré de l'invention, l'hôte cellulaire est caractérisé en ce que le récepteur humain de la TSH qu'il permet d'exprimer a subi les modifications posttraductionnelles naturellement réalisées in situ. L'invention concerne également le récepteur de la TSH ou un fragment de ce récepteur, tel qu'exprimé par un hôte cellulaire transformé par un vecteur recombinant décrit dans les pages précédentes. L'invention concerne également des anticorps polyclonaux ou monoclonaux caractérisés en ce qu'ils ont la capacité de reconnaître spécifiquement le récepteur humain de la TSH selon les définitions données précédemment. Des anticorps monoclonaux peuvent être obtenus par les méthodes classiques, notamment en opérant selon les étapes suivantes - fusion de cellules spléniques d'un animal par exemple une souris, préalablement immunisée avec une protéine selon l'invention, avec des cellules de myélome et récupération des hybridomes ainsi formés, - culture des hybridomes et sélection des hybridomes capables de produire des anticorps monoclonaux dirigés contre la susdite protéine. Des anticorps avantageux sont des anticorps dirigés contre le domaine extra-cellulaire du récepteur humain de la TSH. Ces anticorps peuvent également être obtenus à partir d'hybridomes résultant de la fusion de cellules spléniques de souris, préalablement immunisées avec des peptides éventuellement couplés à une macromolécule, issus du récepteur humain de la TSH, ces cellules étant fusionnées avec des cellules de myélome. Les peptides utilisés peuvent être des peptides issus du récepteur de la TSH, ou encore des peptides obtenus par synthèse chimique selon les méthodes classiques. Les anticorps monoclonaux ou polyclonaux intéressant dans le cadre de l'invention peuvent également se présenter sous forme immunotoxines, obtenues par modification de l'anticorps par une molécule toxique, par exemple la toxine diphtérique ou par un produit radioactif. Ces immunotoxines peuvent dans ce cas, former des agents thérapeutiques utilisables pour le traitement de certaines pathologies et notamment de certains cancers de la thyroïde. L'invention vise également un procédé pour la préparation d'un récepteur humain de la TSH comprenant: - la transformation d'un hôte cellulaire compétent avec un vecteur recombinant tel que décrit ci-dessus comprenant un acide nucléique exogène conforme à l'invention, sous le contrôle d'éléments de régulation, notamment d'un promoteur reconnu par les polymérases de l'hôte cellulaire et permettant l'expression dans cet hôte dudit acide nucléique, - la culture de l'hôte cellulaire transformé dans des conditions permettant l'expression dudit acide nucléique et, le cas échéant, le transport de la protéine exprimée vers la membrane. L'invention vise également un procédé pour le diagnostic in vitro sur un échantillon biologique de la présence d'anticorps dirigés contre le récepteur humain de la TSH, caractérisé par - la mise en contact de l'échantillon biologique, notamment du plasma, avec la protéine de l'invention correspondant au récepteur humain de la TSH ou à une partie de ce récepteur préalablement fixée sur un support, - la détection des complexes anticorps-protéine éventuellement formés. L'invention vise également un kit pour le diagnostic in vitro sur un échantillon biologique de la présence d'anticorps dirigés contre le récepteur humain de la TSH, comprenant - la protéine de l'invention ou partie de cette protéine, fixée sur un support, - des moyens de révélation de la formation du complexe protéine-anticorps. Un tel kit de diagnostic peut être mis en oeuvre pour détecter des anticorps anti-récepteur de TSH produits dans le cas d'une affection due par exemple à la maladie de Basedow, ou une autre maladie thyroïdienne. L'invention se rapporte en outre à des sondes nucléotidiques, synthétiques ou non, caractérisées en ce qu'elles s'hybrident avec un acide nucléique selon l'invention, ou avec sa séquence complémentaire ou avec 1'ARN correspondant. De telles sondes peuvent être utilisées pour des opérations de diagnostic d'anomalies génétiques du récepteur humain de la TSH ou encore pour la détection d'anomalies présentes au niveau du récepteur lors de certains cancers. On peut aussi préparer un système de détection des anticorps sur des cellules transfectées avec un vecteur selon l'invention. Les cellules transfectées sont mises en contact avec par exemple le sang du malade. On détecte alors si la fixation de la TSH radioactive est inhibée ou si l'adénylate cyclase ou tout autre système de transduction est activée. A cet égard l'invention vise tout système utilisant l'expression de l'ADNc ou du gène du récepteur de la TSH pour un test fonctionnel de la présence d'anticorps. L'invention vise de plus toute méthode de mesure biologique de la TSH par expression du récepteur de la TSH. D'autres caractéristiques et avantages de l'invention apparaîtront dans les exemples et les figures dont les légendes sont présentées ci-après. Figure 1 : Représentation schématique de la structure du récepteur TSH humain. A : empreinte d'hydropathie (Hoop M.J. et al. 1981, PNAS - USA 78, 3824-3828). Les régions hydrophobes correspondent à des valeurs négatives. I à IV correspondent aux segments transmembranaires potentiels. B : Comparaison des récepteurs hTSH (récepteur humain de la TSH) et des récepteurs pLH/hCG décrit par Loosfelth et al. (1989, Science 245, 525-528). Les régions hachurées représentent le peptide signal potentiel et les 7 régions membranaires. E1-5 sont les domaines potentiels extracellulaires et I1,2 les domaines intracellulaires. La numérotation des acides aminés est donnée au-dessus et au-dessous de la figure. C : Carte des clones d'ADNc utilisés pour le séquençage. AhTSHR sont les clones de xgtl0. La phase ouverte de lecture est encadrée. Figure 2 : Séquence du récepteur humain de TSH (hTSHR) et de la protéine déduite La position +1 est celle du premier nucléotide du codon d'initiation. La numérotation des nucléotides (au-dessus) et des acides aminés (en-dessous) est donnée. Les sites de glycosylation liée à l'azote du domaine extracellulaire sont soulignés, un site potentiel de phosphorylation par la kinase C est indiqué par un trait en pointillés. Des modifications apparaissent pour certains clones. Elles sont données au-dessus des séquences. Les modifications des acides aminés sont Leu Pro 13, Leu Pro 260, Tyr His 414, Phe Leu 500, Phe Leu 634, Glu Asp 727, Lys Asn 744. Figure 3 : Analyse des empreintes ARN de l'ARNm du récepteur de TSH - les ARNs polyadénylés (20 yg) de la thyroïde humaine (ligne 1), des testicules (ligne 2), des ovaires (ligne 3), du foie (ligne 4) et de la rate (ligne 5) sont analysés. La taille des marqueurs d'ADN est indiquée en Kb (kilobase). Figure 4 : Expression de l'ADNc du récepteur de TSH dans des cellules COS 7. Les cellules COS 7 ont été transfectées avec un vecteur codant pour le récepteur de TSH. La fixation de 125I-bTSH a été étudiée comme décrit dans "Méthodes" en présence de concentrations croissante de bTSH non marquée (o > pLH (o) et hFSH Les Les résultats apparaissent en pourcentage de liaison 125I-bTSH en l'absence d'hormones non marquées (3 tests). Encadré : stimulation de l'adénylate cyclase. EXEMPLES CLONAGE DE L'ADNc DU RECEPTEUR DE LA TSH METHODES Des ADNs complémentaires (ADNc) amorcés au hasard ont été préparés à partir d'ARNs polyadénylés de thyroïde humaine. La sélection par la taille des ADNc et le clonage dans un vecteur AgtlO ont été décrits par Loosfelt H. et al. (1989, Science 245, 525-528). La banque d'ADNc (1,5 106 clones) a été criblée avec l'ADNc du récepteur de la LH/hCG (lutéotrophine/choriogonadotrope humaine) du porc, dans sa totalité, marqué au 32P. Des filtres de nitrocellulose ont été hybridés à 37'C pendant 36 heures avec 5.105 cpm/ml de sonde dans 6xSSC (1xSSC = 0,15N de chlorure de sodium, 0,015M de citrate de sodium), un tampon contenant 30% de formamide, 0,5% de polyvinylpyrrolidone, 0,5% de ficoll, 0,5% de sérum albumine bovine, dénaturé avec de 1'ADN de sperme de saumon (150pg/ml) et 0,2% de sodium dodecyl sulfate. Les filtres ont été lavés deux fois pendant 15 minutes à 50"C dans 6xSSC et deux fois pendant 15 minutes à 25"C dans 2xSSC et finalement 10 minutes à 45 C dans 2xSSC. Une centaine de clones positifs ont été examinés pour déterminer leur capacité à hybrider avec soit la région extracellulaire soit la région transmembranaire de l'ADNc du récepteur de la LH/hCG porcine. 8 clones ont été sélectionnés pour procéder au séquençage. Séguençaqe. Le séquençage a été réalisé selon la méthode décrite par Misraki M. et al. (1987, Biochem Biophys. Res. Commun. 143, 740-748) après sous-clonage de clones ATSHR dans un vecteur blue script (stratagène). Analyse d'ARN blot Ces analyses ont été réalisées en utilisant des ARNs polyadénylés pour les tissus humains. L'hybridation a été réalisée avec un insérat d'ADNc (2,2Kb) de xTSHR3, amorcé au hasard (6x106 cpm/ng, 5x105 cpm/ml). Expression de l'ADNc cloné La région codante complète du récepteur de l'hormone TSH humaine (hTSHR) a été construite en utilisant les clones AhTSHR3 et ahTSHRk (qui s'étendent entre le nucléotide 44 et le nuléotide 2395, la numérotation démarrant au premier codon). L'ADNc a été inséré dans le vecteur pKSV10 (Pharmacia) et utilisé pour transfecter des cellules COS7 comme décrit par Guiochon-Mantel A. et al. (1988, Nature 336, 695-698). Les cellules ont été utilisées 48 heures après la transfection. Etude de la fixation de l'iode 1251 (125I-bTSH). De la TSH bovine (bTSH) purifiée (40 i.u/mg), a été iodinisée par la méthode à la lactoperoxydase décrite par Powell-Jones C.H.J. et al. (1980, JBC 255, 4001-4010) et a été purifiée par chromatographie ultrogel ACA44. L'activité spécifique était de 25pCi/pg et l'activité maximale de fixation était 30% de la radioactivité totale (mesuré sur des membranes de thyroïde de porc). Les tests de fixation ont été réalisés en 3 exemplaires avec 105 cellules dans 200p1 de PSA (20mM phosphate pH 7,4, 0,2% de sérum albumine bovine) 0,25M de tampon sucrose contenant 3xlO4cpm de 125I-bTSH et différentes quantités de bTSH (30 i.u/mg). Après 30 minutes d'incubation à 37"C, la suspension a été étalée sur 400A1 de PSA, 1M de tampon de sucrose et centrifugée à 10.000 g pendant 10 minutes. Les surnageants ont été aspirés et les parties inférieures des tubes ont été coupées et mesurées pour la radioactivité. Des expériences de contrôle ont été réalisées avec des cellules transfectées avec le vecteur d'expression de l'ADNc de récepteur de la progestérone de lapin (Guiochon-Mantel A. et al.). Pour tester la spécificité de la fixation de la TSH bovine, des tests de compétition ont été également été effectués en utilisant l'hormone LH (Luteinizin Hormon) de porc purifiée non marquée, et de la FSH (hormone folliculo stimulante) humaine (150 i.u/mg, Metrodin Serono - Suisse). Stimulation de l'activité adenylate cyclase par la TSH. 6x105 cellules COS 7 ont été étalées par 60nM plaques et transfectées avec 5 yg de pKSV-TSHR et 5 pg d'ADN entraineur. 42 heures plus tard, chaque plaque a été lavée 3 fois avec un milieu Eagle contenant de la gélatine (1 mg/ml > . Chaque plaque a ensuite été incubée avec 4,5ml du même milieu contenant 0,5nM de 3-isobutyl-1-methyl xanthine pendant 15 minutes à 37"C. Différentes concentrations de TSH bovine ont été ajoutées et l'incubation a été poursuivie pendant 5 minutes à 37"C. Le milieu Eagle a été récupéré et les cellules ont été collectées dans 0,8ml de 1N d'acide perchlorique et centrifugé. Les surnageants ont été neutralisés et testés pour déterminer la présence de AMPc (International CIS). RESULTATS ET DISCUSSION Clonaqe de l'ADNc du récepteur de TSH Les ARN polyadénylés (poly(A+)) ont été isolés à partir des thyroïdes humaines et utilisés pour préparer une banque d'ADNc dans un vecteur AgtlO. La banque a été criblée à faible stringence avec une sonde correspondant au récepteur LH/hCG du porc tel que décrit par Loosfelt H. et al. (1989, Science 245, 525-528). Le criblage des 1,5 106 clones de la banque a conduit à isoler 180 signaux positifs. Huit clones ont été sélectionnés pour l'analyse de la séquence (figure lc) en utilisant des sondes correspondant aux régions 5' et 3' de l'ADNc du récepteur LH/hCG de porc. Analyse de la séquence du récepteur TSH La séquence de nucléotides présente un codon ATG qui est précédé par un codon stop en amont du cadre, définissant ainsi une phase de lecture ouverte de 764 acides aminés (figure 2). La partie N-terminale code pour une séquence de 21 acides aminés caractéristique d'un peptide signal avec un site de clivage tel que décrit par Von Heijne G. (1986) (Nucleic Acid Research, 14, 4683-4686). Par conséquent, la protéine mature consiste probablement en une séquence de 743 acides aminés avec un poids moléculaire calculé de 84501 daltons. On peut envisager l'organisation structurale de la protéine de la façon suivante, comme le confirme le profil d'hydropathie du récepteur de la TSH (figure la) : un grand domaine extracellulaire s'étend jusqu'à l'acide aminé 394 à partir de l'extrémité N-terminale. I1 contient 6 sites potentiels de glycosylation liée par l'azote. Cette région est divisée en 5 segments (figure lb) El à E5. Le domaine E3 (cinquième domaine) est fortement acide (PKi = 4,14) et diverge par sa séquence et par sa longueur de la région correspondante et également acide du récepteur de la LH. Le domaine membranaire comporte environ 266 acides aminés et pourrait comporter 7 segments transmembranaires. La partie intracellulaire du récepteur de la TSH comporte 83 acides aminés et est très basique (PKi = 9,6). Le premier segment de cette partie présente des homologies avec le récepteur de la LH/hCG. Le second segment est divergent, en particulier au niveau de sa partie C-terminale. Le domaine intracellulaire comprend une grande proportion d'acides aminés du type sérine et thréonine et un site consensus pour la phosphorylation par la protéine kinase C (figure 2). La phosphorylation par des kinases spécifiques peut jouer un rôle dans le découplage spécifique de récepteurs avec des protéines G. Analyse Northern Blot des ARNs poly(A+) (figure 3) et des ARN totaux Cette analyse a été faite à partir de plusieurs ARNs de différents organes et montre la présence dans la thyroïde de types de messagers prédominants de 4300 nucléotides et d'une bande moins abondante de 3900 nucléotides. Les espèces plus petites et minoritaires de 1700 et 1100 nucléotides ont également été mises en évidence. Aucun messager n'a été observé dans les testicules, les ovaires, la rate et le foie. Expression de 1'ADNc cloné La région codante dans sa longueur totale a été reconstruite à partir de AHTSHR2 et SHTSHR3 (figure tic), insérée dans le vecteur d'expression pKSV10 et transfectée dans des cellules COS7 (décrit par Katamine S. et al. 1988, Mol. Cell Biol. 8, 259-266). Cette opération a conduit à l'obtention sur les membranes des cellules d'une protéine qui fixe la TSH bovine marquée avec l'iode 125 (125I-bTSH). La fixation pouvait être saturée (déplacement avec TSH non marquée) et spécifique (125I-bTSH) ne pouvait pas être déplacée par l'hormone LH de porc (pLH) ou l'hormone FSH humaine (hFSH)(figure 4). De plus, aucune fixation saturable de 125I-bTSH n'a été observée lorsque les cellules ont été transfectées avec le vecteur d'expression pKSV10 de contrôle codant pour le récepteur de la progestérone de lapin. L'incubation avec TSH des cellules transfectées avec le vecteur pKSV-TSHR a montré une accumulation accrue de AMPc (AMP cyclique - figure 4 - encadré). Une telle stimulation de l'adénylate cyclase n'a pas été observée dans les cellules transfectées avec le vecteur d'expression de contrôle. REVENDICATIONS 1. Acide nucléique, caractérisé en ce qu'il répond à la séquence nucléotidique I suivante ggcgatttcggaggatvgvagaaagtagccccgagtcccgtggaaa -1 C ATG AGG CCG GCG GAC TTG CTG CAG CTG GTG CTG CTG CTC GAC CTG CCC AGG GAC CTG GGC GGA ATG GGG TGT TCG TCT CCA CCC 84 TGC GAG TGC CAT CAG GAG GAG GAC TTA AGA GTC ACC TGC AAG GAT ATT CAA CGC ATC CCC AGC TTA CCG CCC AGT ACG CAG ACT 168 CTG AAG CTT ATT GAG ACT CAC CTG AGA ACT ATT CCA AGT CAT GCA TTT TCT AAT CTG CCC AAT ATT TCC AGA ATC TAC GTA TCT 252 ATA GAT GTG ACT CTG CAG CAG CTG GAA TCA CAC TCC TTC TAC AAT TTG AGT AAA GTG ACT CAC ATA GAA ATT CGG AAT ACC AGG 336 AAC TTA ACT TAC ATA GAC CCT GAT GCC CTC AAA GAG CTC CCC CTC CTA AAG TTC CTT GGC ATT TTC AAC ACT GGA CTT AAA ATG 420 TTC CCT GAC CTG ACC AAA GTT TAT TCC ACT GAT ATA TTC TTT ATA CTT GAA ATT ACA GAC AAC CCT TAC ATG ACG TCA ATC CCT 588 GTG AAT GCT TTT CAG GGA CTA TGC AAT GAA ACC TTG ACA CTG AAG CTG TAC AAC AAC GGC TTT ACT TCA GTC CAA GGA TAT GCT 565 TTC AAT GGG ACA AAG CTG GAT GCT GTT TAC CTA AAC AAG AAT AAA TAC CTG ACA GTT ATT GAC AAA GAT GCA TTT GGA GGA GTA 672 TAC AGT GGA CCA AGC TTG CTG GAC GTG TCT CAA ACC AGT GTC ACT GCC CTT CCA TCC AAA GGC CTG GAG CAC CTG AAG GAA CTG 756 ATA GCA AGA AAC ACC TGG ACT CTT AAG AAA CTT CCA CTT TCC TTG AGT TTC CTT CAC CTC ACA CGG GCT GAC CTT TCT TAC CCA 840 AGC CAC TGC TGT GCC TTT AAG AAT CAG AAG AAA ATC AGA GGA ATC CTT GAG TCC TTG ATG TGT AAT GAG AGC AGT ATG CAG AGC 924 TTG CGC CAG AGA AAA TCT GTG AAT GCC TTG AAT AGC CCC CTC CAC CAG GAA TAT GAA GAG AAT CTG GGT GAC AGC ATT GTT GGG 1008 TAC AAG GAA AAG TCC AAG TTC CAG GAT ACT CAT AAC AAC GCT CAT TAT TAC GTC TTC TTT GAA GAA CAA GAG GAT GAG ATC ATT 1092 GGT TTT GGC CAG GAG CTC AAA AAC CCC CAG GAA GAG ACT CTA CAA GCT TTT GAC AGC CAT TAT GAC TAC ACC ATA TGT GGG GAC 1176 C AGT GAA GAC ATG GTG TGT ACC CCC AAG TCC GAT GAG TTC AAC CCG TGT GAA GAC ATA ATG GGC TAC AAG TTC CTG AGA ATT GTG 1260 GTG TGG TTC GTT AGT CTG CTG GCT CTC CTG GGC AAT GTC TTT GTC CTG CTT ATT CTC CTC ACC AGC CAC TAC AAA CTG AAC GTC 1344 CCC CGC TTT CTC ATG TGC AAC CTG GCC TTT GCG GAT TTC TGC ATG GGG ATG TAC CTG CTC CTC ATC GCC TCT GTA GAC CTC TAC 1420 ACT CAC TCT GAG TAC TAC AAC CAT GCC ATC GAC TGG CAG ACA GGC CCT GGG TGC AAC ACG GCT GGT TTC TTC ACT GTC TTT GCA 1512 AGC GAG TTA TCG GTG TAT ACG CTG ACG GTC ATC ACC CTG GAG CGC TGG TAT GCC ATC ACC TTC GCC ATG CGC CTG GAC CGG AAG 1596 ATC CGC CTC AGG CAC GCA TGT GCC ATC ATG GTT GGG GGC TGG GTT TGC TGC TTC CTT CTC GCC CTG CTT CCT TTG GTG GGA ATA 1680 AGT AGC TAT GCC AAA GTC AGT ATC TGC CTG CCC ATG GAC ACC GAG ACC CCT CTT GCT CTG GCA TAT ATT GTT TTT GTT CTG ACG 1764 CTC AAC ATA GTT GCC TTC GTC ATC GTC TGC TGC TGT TAT GTG AAG ATC TAC ATC ACA GTC CGA AAT CCG CAG TAC AAC CCA GGG 1648 GAC AAA GAT ACC AAA ATT GCC AAG AGG ATG GCT GTG TTG ATC TTC ACC GAC TTC ATA TGC ATG GCC CCA ATC TCA TTC TAT GCT 1932 CTG TCA GCA ATT CTG AAC AAG CCT CTC ATC ACT GTT AGC AAC TCC AAA ATC TTG CTG GTA CTC TTC TAT CCA CTT AAC TCC TGT 2016 GCC AAT CCA TTC CTC TAT GCT ATT TTC ACC AAG GCC TTC CAG AGG GAT GTG TTC ATC CTA CTC AGC AAG TTT GGC ATC TGT AAA 2100 CGC CAG GCT CAG GCA TAC CGG GGG CAG AGG GTT CCT CCA AAG AAC AGC ACT GAT ATT CAG GTT CAA AAG GTT ACC CAC GAG ATG 2184 AGG CAG GGT CTC CAC AAC ATG GAA GAT GTC TAT GAA CTG ATT GAA AAG TCC CAT CTA ACC CCA AAG AAG CAA GGC CAA ATC TCA 2268 GAA GAG TAT ATG CAA ACG GTT TTG taagttaacactacactactcacaatggtaggggaacttacaaaataatagtttcttgaatatgcattcaatcccatg 2371 ou un variant de cet acide nucléique ou un fragment de cet acide nucléique dès lors que ce variant ou ce fragment code pour une protéine ou un polypeptide présentant les propriétés structurales et/ou les propriétés fonctionnelles et/ou les propriétés antigéniques du récepteur humain de la TSH, ou encore ces propriétés combinées. 2. Acide nucléique selon la revendication 1, caractérisé en ce qu'il est dépourvu de la séquence codant pour le peptide signal. 3. Acide nucléique selon la revendication 1, caractérisé en ce qu'il comprend l'une des séquences nucléotidiques suivantes - séquence codant pour la séquence d'acides aminés comprise entre 1 et 394 - séquence codant pour la séquence d'acides aminés comrise entre 395 et 660 - séquence codant pour la séquence d'acides aminés compris entre 661 et 743. 4. Acide nucléique caractérisé en ce qu'il code pour la protéine répondant à la séquence d'acides aminés II suivante Met Arg Pro Ala Asp Leu Leu Gln Leu Val Leu Leu Leu Asp Leu Pro Arg Asp Leu Gly Gly Met Gly Cys Ser Ser Pro Pro 28 Cys Glu Cys His Gln Glu Glu Asp Phe Arg Val Thr Cys Lys Asp Ile Gln Arg Ile Pro Ser Leu Pro Pro Ser Thr Gln Thr 56 Leu Leu Lys Ile Glu Thr His Leu Arg Thr Ile Pro Ser His Ala Phe Ser Asn Leu Pro Asn Ile Ser Arg Ile Tyr Val Ser 84 Ile Asp Val Thr Leu Gln Gln Leu Glu Ser His Ser Phe Tyr Asn Leu Ser Lys Val Thr His Ile Glu Ile Arg Asn Thr Arg 112 Asn Leu Thr Tyr Ile Asp Pro Asp Ala Leu Lys Glu Leu Pro Leu Leu Lys Phe Leu Gly Ile Phe Asn Thr Gly Leu Lys Met 140 Phe Pro Asp Leu Thr Lys Val Tyr Ser Thr Asp Ile Phe Phe Ile Leu Glu Ile Thr Asp Asn Pro Tyr Met Thr Ser Ile Pro 168 Val Asn Ala Phe Gln Gly Leu Cys Asn Glu Thr Leu Thr Leu Lys Leu Tyr Asn Asn Gly Phe Thr Ser Val Gln Gly Tyr Ala 196 Phe Asn Gly Thr Lys Leu Asp Ala Val Tyr Leu Asn Lys Asn Lys Tyr Leu Thr Val Ile Asp Lys Asp Ala Phe Gly Gly Val 224 Tyr Ser Gly Pro Ser Leu Leu Asp Val Ser Gln Thr Ser Val Thr Ala Leu Pro Ser Lys Gly Leu Glu His Leu lys Glu Leu 252 Ile Ala Arg Asn Thr Trp Thr Leu Lys Lys Leu Pro Leu Ser Leu Ser Phe Leu His Leu Thr Arg Ala Asp Leu Ser Tyr Pro 280 Ser His Cys Cys Ala Phe Lys Asn Gln Lys Lys Ile Arg Gly Ile Leu Glu Ser Leu Met Cys Asn Glu Ser Ser Met Gln Ser 308 Leu Arg Gln Arg Lys Ser Val Asn Ala Leu Asn Ser Pro Leu His Gln Glu Tyr Glu Glu Asn Leu Gly Asp Ser Ile Val Gly 336 Tyr Lys Glu Lys Ser Lys Phe Gln Asp Thr His Asn Asn Ala His Tyr Tyr Val Phe Phe Glu Glu Gln Glu Asp Glu Ile Ile 364 Gly Phe Gly Gln Glu Leu Lys Asn Pro Gln Glu Glu Thr Leu Gln Ala Phe Asp Ser His Tyr Asp Tyr Thr Ile Cys Gly Asp 392 Ser Glu Asp Met Val Cys Thr Pro Lys Ser Asp Glu Phe Asn Pro Cys Glu Asp Ile Met Gly Tyr Lys Phe Leu Arg Ile Val 420 Val Trp Phe Val Ser Leu Leu Ala Leu Leu Gly Asn Val Phe Val Leu Leu Ile Leu Leu Thr Ser His Tyr Lys Leu Asn Val 448 Pro Arg Phe Leu Met Cys Asn Leu Ala Phe Ala Asp Phe Cys Met Gly Met Tyr Leu Leu Leu Ile Ala Ser Val Asp Leu Tyr 476 Thr His Ser Glu Tyr Tyr Asn His Ala Ile Asp Trp Gln Thr Gly Pro Gly Cys Asn Thr Ala Gly Phe Phe Thr Val Phe Ala 504 Ser Glu Leu Ser Val Tyr Thr Leu Thr Val Ile Thr Leu Glu Arg Trp Tyr Ala Ile Thr Phe Ala Met Arg Leu Asp Arg Lys 532 Ile Arg Leu Arg His Ala Cys Ala Ile Met Val Gly Gly Trp Val Cys Cys Phe Leu Leu Ala Leu Leu Pro Leu Val Gly Ile 560 Ser Ser Tyr Ala Lys Val Ser Ile Cys Leu Pro Met Asp Thr Glu Thr Pro Leu Ala Leu Ala Tyr Lys Val Phe Val Leu Thr 588 Leu Asn Ile Val Ala Phe Val Ile Val Cys Cys Cys Tyr Val Lys Ile Tyr Ile Thr Val Arg Asn Pro Gln Tyr Asn Pro Gly 616 Asp Lys Asp Thr Lys Ile Ala Lys Arg Met Ala Val Leu Ile Phe Thr Asp Phe Ile Cys Met Ala Pro Ile Ser Phe Tyr Ala 644 Leu Ser Ala Ile Leu Asn Lys Pro Leu Ile Thr Val Ser Asn Ser Lys Ile Leu Leu Val Leu Phe Tyr Pro Leu Asn Ser Cys 672 Ala Asn Pro Phe Leu Tyr Ala Ile Phe Thr Lys Ala Phe Gln Arg Asp Val Phe Ile Leu Leu Ser Lys Phe Gly Ile Cys Lys 700 Arg Gln Ala Gln Ala Tyr Arg Gly Gln Arg Val Pro Pro Lys Asn Ser Thr Asp Ile Gln Val Gln Lys Val Thr His Glu Met 726 Arg Gln Gly Leu His Asn Met Glu Asp Val Tyr Glu Leu Ile Glu Lys Ser His Leu Thr Pro Lys Lys Gln Gly Gln Ile Ser 756 Glu Glu Tyr Met Gln Thr Val Leu 764 ou pour une variante ou une partie de cette protéine, dès lors que ladite variante ou partie de protéine présente les propriétés structurales et/ou fonctionnelles et/ou antigéniques de la séquence II, ou encore ces propriétés combinées. 5. Protéine caractérisée en ce qu'elle répond à la séquence d'acides aminés II suivante, ou à une partie de cette séquence, suffisante pour que la protéine ainsi formée possède les propriétés structurales et/ou fonctionnelles et/ou antigéniques du récepteur humain de la TSH, ou ces propriétés combinées. 6. Vecteur recombinant en particulier pour l'expression et le clonage, caractérisé en ce qu'il comprend un acide nucléique exogène selon l'une quelconque des revendications 1 à 4, inséré en un site non essentiel pour sa réplication, et notamment en ce qu'il s'agit d'un plasmide, d'un phage, d'un cosmide, d'un bactériophage, de dérivés viraux notamment du baculovirus, l'acide nucléique contenu dans le vecteur étant sous le contrôle des éléments de régulation permettant de promouvoir et de réguler l'expression de cet acide nucléique dans un hôte cellulaire déterminé. 7. Vecteur recombinant selon la revendication 6, caractérisé en ce qu'il a la capacité d'être exprimé dans des systèmes cellulaires procaryotes tels que les bactéries, notamment E.coli, des systèmes cellulaires eucaryotes notamment des levures, des cellules des cellules d'insectes notamment de la drosophile ou des cellules animales par exemple des cellules de mammifères. 8. Hôte cellulaire caractérisé en ce qu'il est transformé par un vecteur recombinant selon l'une quelconque des revendications 6 ou 7 dans des conditions permettant l'expression de l'acide nucléique exogène inséré dans le vecteur et en particulier, en ce qu'il s'agit d'un système procaryote, notamment de bactéries par exemple E.coli, d'un système eucaryote, notamment de levures ou de cellules d'insectes, par exemple de drosphile ou de cellules animales, en particulier de mammifère, par exemple des cellules CHO. 9. Hôte cellulaire selon la revendication 8, caractérisé en ce qu'il s'agit de cellules d'insectes, par exemple de cellules de drosophile, transformées par un baculovirus lui-même modifié par un acide nucléique ou un fragment d'acide nucléique selon l'une quelconque des revendications 1 à 4. 10. Hôte cellulaire selon l'une quelconque des revendications 10 à 12, caractérisé en ce qu'il est capable d'exprimer le récepteur humain de la TSH notamment dans sa conformation native ou une partie de cette protéine. 11 Hôte cellulaire selon l'une quelconque des revendications 8 à 10, caractérisé en ce que le récepteur exprimé comporte le cas échéant les modifications post-traductionnelles naturellement réalisées in situ. 12. Récepteur de la TSH ou fragment de ce récepteur tel qu'exprimé par un hôte cellulaire transformé selon l'une des revendications 8 à 10. 13. Anticorps polyclonaux ou monoclonaux, caractérisés en ce qu'ils ont la capacité de reconnaître spécifiquement le récepteur humain de la TSH selon la revendication 5. 14. Procédé pour la préparation d'une protéine selon la revendication 4 comprenant - la transformation d'un hôte cellulaire compétent avec un vecteur recombinant comprenant un acide nucléique exogène selon l'une quelconque des revendications 1 à 4, sous le contrôle d'éléments de régulation, notamment d'un promoteur reconnu par les polymérases de l'hôte cellulaire et permettant l'expression dans cet hôte cellulaire dudit acide nucléique, - la culture de l'hôte cellulaire transformé dans des conditions permettant l'expression dudit acide nucléique et, le cas échéant, le transport de la protéine exprimee vers la membrane de l'hôte cellulaire. 15. Procédé pour le diagnostic in vitro sur un échantillon biologique de la présence d'anticorps dirigés contre le récepteur humain de la TSH, caractérisé par - la mise en contact de l'échantillon biologique, notamment du plasma, avec la protéine selon la revendication 4 préalablement fixée sur un support, - la détection des complexes protéine-anticorps éventuellement formés. 16. Kit pour le diagnostic in vitro sur un échantillon biologique de la présence d'anticorps dirigés contre le récepteur humain de la TSH, comprenant: - la protéine ou partie de protéine selon la revendication 4, fixée sur un support, - des moyens de révélation de la formation du complexe protéine-anticorps. 17. Sonde nucléotidique synthétique ou non, caractérisée en ce qu'elle hybride avec un acide nucléique selon l'une quelconque des revendications 1 à 4 ou avec sa séquence complémentaire ou 1'ARN correspondant.