Brevet FR2653115A1 — publié le 19910419

La présente invention concerne la chimie bioorga- nique et a notamment pour objet un procédé d'obtention d'un composé organique biologiquement actif marqué par un isotope de l'hydrogène. Les composés de ce type ont de multiples applications, en particulier dans les recherches biomédi- cales. Pour obtenir des composés organiques biologique- ment actifs marqués par des isotopes de l'hydrogène, on a ordinairement recours à des réactions câtalytiques d'hydrogénation des composés de base insaturés ou de déshalogénation des composés de base dérivés halogénés. On obtient ainsi des composés marqués par des isotopes de l'hydrogène ne contenant que 1 ou 2 isotopes de l'hydrogène. Les progrès dans le domaine de la biologie molécu- laire et de la génétique dépendent beaucoup de la possibi- lité de disposer de composés organiques biologiquement ac- tifs marqués par des isotopes de l'hydrogène, ces composés étant indispensables, par exemple, pour les recherches au niveau de récepteurs cellulaires ou dans le diagnostic radioimmunologique. A cet égard, un intérêt tout particulier est attri- bué aux procédés universels d'obtention de composés marqués par isotope et appartenant à différentes classes de compo- sés organiques biologiquement actifs. On connait un procédé d'obtention d'un composé organique biologiquement actif et marqué par isotope, et notamment de l'amine biogène, selon lequel on prépare un mélange de la solution aqueuse d'amine biogène avec un porteur inorganique et un catalyseur, on traite ensuite, à une température de 280 à 303 K, ce mélange par un isotope gazeux de l'hydrogène, et notamment par le tritium et l'on extrait l produit désiré du mélange réactionnel (Radioche- mical Radioanalitical Letters, v. 46, NO 5, 1981, K.Veres e.a., "Tritiation of organic compounds by the CESG method", pages 307-316). Toutefois,le degré d'inclusion d'isotope (en par- ticulier, la valeur de l'activité molaire qui lui est pro- portionnelle) dans le composé marqué obtenu selon ce pro- cédé est de 30 à 500 TBq/mol, soit moins de 0,5 d'un atome d'isotope de l'hydrogène par molécule du composé mar- qué. La marque isotopique est alors incluse surtout dans les atomes les plus réactifs de l'hydrogène du composé ob- tenu. On obtient donc, selon ce procédé, des amines biogè- nes à faible degré d'inclusion de l'isotope d'hydrogène marqueur (du tritium) et la répartition de cette marque dans la molécule du composé marqué est irrégulière. On connait un procédé d'obtention d'un composé organique biologiquement actif marqué par des isotopes de l'hydrogène (par exemple, de l'amine biogène, des amino- acides, des composants d'acides nucléiques, etc...) selon lequel on prépare un mélange de la solution du composé de base dans l'eau ou dans un solvant organique, avec un porteur inorganique et un catalyseur, on traite, à une température de 288 à 303 K, le mélange obtenu par un iso- tope gazeux de l'hydrogène, en particulier par le tritium, et l'on extrait le produit désiré (Uspekhi khimii, volume 50, fascicule 2, 1981, Moscou, L.A. Neiman, "Tritiation des composés biologiquement actifs par les méthodes d'échange", pages 210-213). L'activité molaire du composé marqué obtenu selon ce procédé est de 30 à 500 TBq/mole. L'inclusion de la marque isotopique se fait, là aussi, surtout dans les ato- mes les plus réactifs de l'hydrogène du composé obtenu. Dans ce procédé, lui aussi, on obtient donc des composés organiques biologiquement actifs caractérisés par un faible degré d'inclusion de la marque d'hydrogène isoto- pique (du tritium) et par une répartition irrégulière de cette marque dans la molécule du composé marqué. Dans le cadre de l'invention, on s'est proposé de créer un procédé universel d'obtention d'un composé organi- que biologiquement actif marqué par isotope qui permettrait d'augmenter le degré d'inclusion de l'isotope d'hydrogène marqueur et d'obtenir des composés organiques biologiquement actifs au marquage multiple avec une répartition régulière de l'isotope marqueur de l'hydrogène dans la molécule du composé marque. Ce problème est résolu grâce à un procédé d'obten- tion d'un composé organique biologiquement actif marqué par des isotopes de l'hydrogène, selon lequel on prépare un mélange du composé de base, d'un porteur inorganique et d'un catalyseur sous forme d'un métal du groupe du platine, on soumet ce mélange à l'action d'un isotope de l'hydrogène lO à une température supérieure à 287 K et l'on extrait le produit désiré, procédé dans lequel selon l'invention, la réaction du mélange ci-dessus décrit avec l'isotope de l'hy- drogène,est réalisée à une température de 373 à 523 K et dans lequel le mélange réactionnel est ensuite refroidi à une température de 388 à 303 K. Il est préférable d'utiliser en tant que composé de base un complexe de ce composé de base et d'un métal du groupe du platine. Il est également désirable d'utiliser un complexe d'un métal du groupe du platine avec des amines, amino- acides, oses, osamines, peptides, bases puriques et pyrimi- diques, nucléosides, acides carboxyliques, dérivés azotés de tétrahydrothiofène. Il est également préférable d'utiliser le deutérium en tant qu'isotope de l'hydrogène. Le procédé d'obtention d'un composé organique bio- logiquement actif marqué par un isotope de l'hydrogène selon l'invention permet d'obtenir des composés marqués, caracté- risés par un degré élevé d'inclusion de la marque isotopique, et des composés à marquage multiple et à répartition régu- lière de la marque isotopique dans la molécule du composé marqué. Le procédé selon l'invention est universel puis- qu'ilpermet d'obtenir des composés organiques biologiquement actifs variés, sans qu'il soit nécessaire de synthétiser au préalable des composés de base insaturés ou halogénés. Le procédé selon l'invention permet d'obtenir éga- lement des composés optiquement actifs au marquage multiple par des isotopes de l'hydrogène. En outre, en ce qui concerne l'obtention des pepti- des marqués par isotope de l'hydrogène, le procédé selon l'invention permet d'obtenir des peptides à marquage multi- ple de n'importe quelle structure chimique dans lesquels la marque isotopique est régulièrement incluse dans tous les groupements aminoacides o elle est localisée, surtout sur les atomes de carbone alpha. Le procédé d'obtention d'un composé organique biologiquement actif marqué par un isotope de l'hydrogène selon l'invention est le suivant. On mélange le composé organique biologiquement actif de base ou son complexe comprenant un métal du groupe du platine avec un porteur inorganique et un catalyseur sous forme d'un métal du groupe du platine. En tant que composé organique biologiquement actif de base, on peut utiliser, par exemple, des composés tels que amines, amino-acides, oses, osamines, peptides, bases puriques et pyrimidiques, nucléosides, acides carboxyliques, dérivés azotés de tétrahydrothiofène, etc..., et en tant que métal du groupe du platine on utilise, par exemple, le platine, le palladium, etc... On fait réagir le mélange ainsi obtenu, avec un isotope de l'hydrogène à une température de 373 à 523 K, puis on refroidit le mélange réactionnel à une température de 288 à 303 K et l'on en extrait le produit désiré. En tant qu'isotope de l'hydrogène, on utilise alors le deutérium ou le traitium. Si la température de réaction du mélange décrit ci- dessus avec l'isotope de l'hydrogène,est inférieure à 373 K, le degré d'inclusion de la marque isotopique dans le composé n'est pas suffisamment élevé; si cette température est supérieure à 523 K, il se produit la décomposition du com- posé marqué à obtenir. Si le mélange réactionnel est refroidi à une tem- pérature supérieure à 303 K, il peut se décomposer au cours de l'extraction du produit désiré. Le refroidissement du mélange réactionnel à une température inférieure à 288 K est également à déconseil- ler, car cela exigerait des dépenses supplémentaires en temps sans aucun effet positif supplémentaire. Le produit désiré est extrait du mélange réaction- nel à l'aide d'un solvant, puis est épuré,par exemple, par des méthodes chromatographiques, et est soumis à une ana- lyse chimique et radiochimique. L'invention sera mieux comprise à la lecture de la description des exemples de réalisation qui suivent. Exemple 1. On mélange 15,0 mg de catalyseur sur support sous forme de palladium à 5%o sur carbonate de calcium et 3,0 mg de complexe palladium-valine L. On place le mélange dans une ampoule. Celle-ci est mise sous vide, est remplie de deutérium gazeux à une pres- sion de 0,04 MPa et chauffée à 493 K. On maintient le mélange réactionnel à cette température jusqu'à ce que la réaction du deutérium avec la valine L se termine, puis on le refroidit à 293 K. On extrait le produit désiré à l'aide de la solu- tion à 0,1 M d'hydroxyde d'ammonium et on l'épure par chromatographie en phase liquide. L'épuration chromatographique est faite sur échan- geur cationique carboxylique Amberlite CG 50 (III) sous forme cuivrique. Le taux de chargement du sorbant par les ions du cuivre est de 70%. Eluant: hydroxyde d'ammonium à 0,2 M. Les traces d'ions de cuivre sont supprimées dans l'6éluant en le faisant passer sur une colonne chromatogra- phique de 15 x 10 mm remplie du sorbant formateur de com- plexe Dowex A I. La fraction de valine L est recueillie selon les indications du détecteur ultra-violet entre 22 et 27 ml. L'éluant est évaporé, la valine L est analysée par chromatospectrométrie de masse, par chromatographie en phase liquide sur sorbant chiral et par chromatographie sur couche mince. Pour établir le degré de substitution par le deu- térium, des atomes d'hydrogène dans la molécule de valine L par spectrométrie de masse, on obtient un dérivé de la valine sous forme de triméthylsilyle qui est introduit dans le chromatospectromètre de masse. Dans le cas de la valine L, la pointe principale (144 unités atomiques) se déplace de 8 unités atomiques pour atteindre 152. Le taux de subs- titution des atomes d'hydrogène stables par le deutérium, est de 96,7, %. Le taux de substitution des atomes d'hydro- gène alpha est évalué d'après le rapport des pointes à la masse de 219 et 218 unités et est égal à 96,4,%. Ainsi donc, le taux de substitution en position alpha est le même que celui dans le reste de la partie hy- drocarbonée de la molécule, ce qui témoigne de la régula- rité de répartition du deutérium marqueur dans la molécule de l'aminoacide. Le rendement chimique en amino-acide et la pureté optique sont évalués par chromatographie haute- ment efficace sur un sorbant contenant des groupements optiquement actifs d'oxyproline L et chargé d'ions de cui- vre. La colonne est de 250 x 4 mm. Granulométrie des parti- cules de sorbant: 5 pm. Eluant: 0,01 M d'acétate d'am- -4 monium à pH 4, 0 contenant 1.10 4 M d'acétate de cuivre (II). La valine L est éluée et passe de 18 à 22 ml; dans ces conditions, l'isomère D doit atteindre 27 mi. La teneur du produit en isomère L est de 98%'. On obtient 1,0 mg de (2H8) valine L à un rendement chimique de 699%. La pureté chimique est évaluée par chromatographie sur couche mince sur "Silufol" dans le système isopropanol: acétone: ammoniac (15: 9: 9). Le produit est chromato- graphiquement homogène, aucune impureté n'a été détectée. Exemples 2 à 9. On mélange 5, 6 mg de catalyseur (palladium sur carbonate de calcium) et 1,4 mg de complexe rhodium-valine Rh (L-Val) C12. On place 7 mg du mélange obtenu dans chacune des ampoules, on met les ampoules sous vide et on les rem- plit de deutérium gazeux à une pression de 0, 026 MPa. La réaction entre le mélange et le deutérium est effectuée pendant 20 minutes à une température de 413 à 5330 K. En- suite,le traitement est poursuivi comme dans l'exemple 1. Le degré d'inclusion du deutérium et le rendement en amino- acide marqué sont spécifiés sur le tableau 1 ci-après. TABLEAU 1 Echange isotopique en phase solide entre deutérium gazeux et complexe rhodium-valine ExempleTempérature, Inclusion du deutérium,, Exemple - X at/mol O Rendement,,o lK- at/mol 2 413 0,24 90 3 433 0,57 90 4 453 0,97 85 473 1,97 85 6 493 2,85 80 7 513 4,0 65 8 523 4,8 1 40 9 533 4,9 10 Exemplesse à 15. On mélange 1,4 mg de complexe rhodium-valine Rh (L-Val) C12 (4,3 micromoles) et une quantité variable entre 5 et 200 mg de catalyseur contenant 5"' en poids de palladium sur carbonate de calcium. Le mélange est homogé- néisé en ampoules et congelé à l'azote liquide. L'eau est éliminée par séchage par lyophilisation. Les ampoules sont mises sous vide et remplies de deutérium gazeux sous une pression de 0,026 MPa. La réaction avec le deutérium a lieu pendant 40 minutes à 473 K. Le traitement est alors poursuivi comme dans l'exemple 1. Le degré d'inclusion du deutérium, la pureté optique et le rendement en amino-acide sont représentées sur le tableau 2 ci-après. TABLEAU 2 Inclusion du deutérium dans la valine L en fonc- tion du rapport amino-acide/catalyseur apr.mn 'Inclusion du Pureté ^Rapport amino-, Rapor amideutérium, i Rendement, optique, Exemple acide/catalyseur at/mol at/mol%% IIi o III 1: 10 3,6 84 90 I 11 1: 20 3,6 82 81 12 1: 40 3,6 82 73 13 1:100. 3,6 79 18 14 1:200' 3,5 81 10 1:400 2,8 61 9 Exemple 16. On mélange 5,6 mg de palladium sur sulfate de baryum à 5,% et 1,4 mg (4,2)m mole) de complexe rhodium- valine, comme décrit dans l'exemple 2, on place le mélange dans une ampoule, on met celle-ci sous vide et on la rem- plit de deutérium gazeux sous une pression de 0,026 MPa. Le rapport aminoacide/catalyseur est de 1: 10. La réaction avec le deutérium dure 40 minutes à 473 K. on extrait le produit désiré et on le soumet à l'analyse, comme décrit dans l'exemple 1. On obtient 380 pg de valine L avec un rendement chimique de 75%,, une pureté optique de 87% et un degré d'inclusion du deutérium de 1,4 atome par molécule d'amino-acide. Exemples 17 à 19. On mélange 5,6 mg de palladium sur carbonate de calcium à 5% et 4,3 D mole de complexe de valine de rho- dium (III) ou de palladium (II) ou de platine (II), comme décrit dans l'exemple 2. On place le mélange dans une am- poule que l'on remplit de deutérium gazeux sous une pres- sion de 0,026 MPa. Le rapport amino-acide/catalyseur est égal à 1: 10. La réaction avec le deutérium dure 40 minu- tes à 473 K. Le degré d'inclusion du deutérium et le rende- ment en amino-acide marqué sont indiqués sur le tableau 3 ci-après. TABLEAU 3 Inclusion du deutérium dans la valine L et rendement en valine L en fonction de la nature de l'ion formateur de complexe. Ion formateur de Inclusion du Exemple complexe i deutérium, at/mol Rendement, % 17 Rhodium (III) 3,6 84 18 Platine (II) 4,5 70 19 Palladium (II) 5,4 74 Exemples 20 à 33. On mélange 5,6 mg de palladium sur carbonate de calcium à 5% et 1,4 mg (4,3 p mole) de complexe rhodium- valine et l'on place le mélange dans une ampoule. Celle-ci est mise sous vide et est remplie de deutérium gazeux sous une pression de 0,026 MPa (127 p mole). Le traitement est poursuivi et le produit désiré est soumis à l'analyse comme décrit dans l'exemple 1. L'inclusion du deutérium au tempé- ratures de 433, 473 et 513 K est spécifiée sur le tableau 4. Exemples 34 à 42. On mélange 5,6 mg de palladium sur carbonate de calcium à 5% et 4,3 P mole de complexes rhodium (III)- amino-acides, le mélange est mis en ampoule. L'ampoule estmise sous vide et est remplie de deutérium gazeux sous une pression de 0,026 MPa (127 p mole). Le mélange réaction- nel est maintenu pendant 60 minutes à 473 K. Le traitement est alors poursuivi comme décrit dans l'exemple 1. Le ren- dement en amino-acides marqués et le degré d'inclusion du deutérium dans la molécule d'amino-acide sont spécifiés sur le tableau 5. TABLEAU 4 Inclusion du deutérium dans la valine L en fonction de la température et du temps de réaction. N Temps, minutes d'ordre ---------------------------------------- i 20 40 80 160 1 ' Exemple N (à 433 K) 20 21 22 23 24 2 Inclusion du deuté- rium, at/mol 0,3 0,57 1,0 1,35 1,53 3 î Rendement, o 90 g90 90 90 g90 Exemple NO (à 4730K) 25 26 27 28 29 ' Inclusion du deuté- rium, at/mol 1 1,06 1,97 3,62 4,6 5,4 6 Rendement, o 90 85- TO 70 60 50 7 Taux tôtal-de subs- ' i titution des atomes i d'hydrogène par le deutérium 1 13% 25% ' 45% % 57 % 68%o 8 i Taux de substitution i i i des atomes d'hydro- gène en position al- pha par le deutérium 12% 23% i 41% 52% 1 65% 9 Exemple N (à 513 K) 30 31 32 33 Inclusion du deuté- rium, at/mol 3,0 4,6 5,2 5,5 l Rendement, % 80 65 50 30 W rI TABLEAU 5 Inclusion du deutérium dans des amino-acides Inclusion, Taux de subsPureté i Amino-acide du deuté- titution des optique,R rium, atomes d'hy- % ' at/mol i drogène par i i i i m le deutérium,,.: l l l I,I 34 r&alamine i 2,71 i 68 i 90 i 80 Glycine ' 1,67 ' 84 r - _ r 75 36 'Sérine i 1,71 i 57 i 85 î 70 37 'Thréonine ' 3,14 63 85 r 70 38 iValine i 4,40 m 55 90 i 80 39; p-alaine3,05 ' 76 - 85 iAcide I I i-aminobu- i i A ityrique i 4,77 i 79 90 i 80 41 'Proline 5,47 ' 78 ' 99 ' 90 42 'Isoleucine i 5,06 i 51 i 90 î 80 i I Exemples 43 à 46. On mélange 5,6 mg de palladium sur carbonate de calcium à 5,% et 1,2 mg (34,3 p mole) de complexe palladium- valine et l'on place le mélange dans une ampoule. Celle-ci est mise sous vide et est remplie de deutérium gazeux sous une pression de 0,026 MPa (127 p mole). On fait reposer le mélange réactionnel à 493 K et on le traite ensuite, comme décrit dans l'exemple 1. Les résultats sont repré- sentés sur le tableau 6. Dans l'exemple 46, on remplace le deutérium gazeux au bout de 10 minutes de réaction et l'on poursuit la réac- tion encore pendant 10 minutes. Exemples 47 à 56. On mélange 5,6 mg de palladium sur carbonate de ba- ryum à 5,% et 4,3 u mole de complexes de leucine L derhodium (III) et de palladium (II), comme décrit dans l'exemple 2. On place le mélange dans une ampoule et l'on remplit celle- ci de deutérium gazeux sous une pression de 0,026 MPa (127 p mole). Le rapport amino-acide/catalyseur est de 1: 10. La réaction avec le deutérium est effectuée pendant 2 heures à 453 K. On extrait le produit désiré et on le soumet au traitement, comme décrit dans l'exemple 1. L'in- clusion du deutérium et le rendement en amino-acide marqué sont indiqués sur le tableau 7. TABLEAU 6 Inclusion du deutérium dans la valine L i |iTaux d'inclu- Taux de subs:Rende- Pureté Exemple Temps,mni sion du deu- titution des ment, optique, térium, at/mol' atomes d'hy- O drogène par le l deutérium, ' 43 10 5,25 1 66 78 99 44 20 5,50 69 76 99 40 l 5,60 70 72 99 46 10,10 6,90 86 76 99 II I I TABLEAU 7 Inclusion du deutérium dans la leucine L t J Pureté E: Ion formaInclusion du Pureté Exemple TK1:Rendement, TK teur de deutérium, r noptique, I IO i complexe at/mol I I I I 1 2 3 4 5 r 6 i i 47 453 Rhodium 2,7 86 93 48 453:Palladium 4,2 82 99 49 453 Palladium 4, 5 90 99 473 Palladium 6,2 83 94 51 493 Palladium 7,2 71 86 52 513 Palladium 7,8 40 63 53 453 Rhodium 3, 2 8 90 98 54 473 Rhodium 4,9 85 95 493 'Rhodium 5,0 65 82 56 ' 513 'Rhodium, 5,0 735 60 Exemple']57. On met en ampoule, 21- mg-de mélange c-ompre-nant 10 mg d'oxyde d'aluminium, 1 mg de biotine et 10 mg de catalyseur contenant 51 en poids de palladium sur carbonate de calcium, ce mélange étant préparé comme décrit dans l'exemple 1. L'ampoule est mise sous vide à 10-3 hPa de pression rési- duelle et on la remplit de tritium gazeux sous une pression de 400 hPa. L'ampoule est réchauffée à une température de 473 K, est maintenue à cette température pendant 40 minutes, puis est refroidie à 288K et l'on extrait le produit désiré. A cet effet, le mélange réactionnel est suspendu dans 3,0 ml de solvant composé de 1 partie d'hydroxyde d'ammonium à 0,1 M et de 2 parties de méthanol. Le cataly- * seur et son support sont séparés par centrifugation, la so- lution est évaporée sous dépression pour éliminer le tri- tium labile, les produits de réaction sont dissous dans 150 jl d'éluant et on les soumet à la chromatographie sur sorbant Ultrasphère ODS-5 rm. Comme éluant, on utilise un solvant contenant 20% en volume de méthanol, 0,4% en volume de trifluoracétate de triéthylamine et 0,1% en volume de phosphate de sodium monosubstitué. L'indice d'acide est de 4,0. Débit d'éluant: 1,2 ml/mn, pression: 16,0 MPa. On utilise un détecteur ultraviolet à la longueur d'onde de la lumière, de travail, de 220 nm. La biotine marquée par tritium est éluée à 15 ml dans un volume de 3 ml. L'éluant est évaporé à sec sous dépression, le produit est dissous dans de l'éthanol aqueux à 50%o en volume, pour obtenir une concentration radioactive de 37 GBq/l. On obtient 122 g (0,60 p mole) de biotine marquée par tritium avec un rende- ment chimique de 12,2 %, une activité molaire de 1600 TBq/mole, dans une quantité de 800 MBq. Selon les ré- sultats de la chromatographie liquide de haute performance, la pureté radiochimique de la biotine (G - H) est supérieure à 98%. Exemple 58. On place dans une ampoule, 21 mg de mélange compre- nant 10 mg d'oxyde d'aluminium, 1 mg d'adénosine et 10 mg de catalyseur (palladium sur carbonate de calcium à 5%), préparé comme indiqué dans l'exemple 1. L'ampoule est mise sous vide jusqu'à une pression résiduelle de 10 3hPa et est remplie de tritium gazeux sous une pression de 400 hPa, puis est maintenue à 473 K pendant 40 minutes. le mélange réactionnel refroidi à 3030K, est suspen- du dans 3,0 ml de solvant composé de 5 parties d'acide sul- furique à 0,02 M et de 1 partie de méthanol. Le catalyseur et le support en oxyde d'aluminium sont séparés par centri- fugation, la solution est évaporée sous dépression. Les produits de réaction sont dissous dans 150 Pl d'éluant et sont soumis à la chromatographie sur sorbant Ultrasphère ODS-5 pm. Comme éluant, on utilise un solvant contenant 6%' en volume de méthanol et 0,4%/ en volume de phosphate de sodium monosubstitué. l'indice d'acide de l'éluant est de 4,0. Le débit d'éluant est de 1,5 ml/mn. On utilise un détecteur spectrophotométrique ultraviolet aux longueurs d'onde de travail de 254 nm et 280 nm. L'adénosine marquée par tritium est éluée à 20ml dans un volume de 2,5 ml. L'éluant est évaporé à sec sous dépression, le pro- duit est dissous dans de l'éthanol aqueux à 50% en volume de manière à obtenir une concentration radioactive de 37 GBq/litre. On obtient ainsi 30,7 pg (0,11 p mole) d'adénosine marquée par tritium avec un rendement chimique de 3,1% et une activité molaire de 4000 TBq/mole dans une quantité de 455 MBq. Le spectre ultraviolet du produit marqué par tri- tium est complètement conforme à l'adénosine de la composi- tion isotopique normale. Selon les résultats de la chromato- graphie liquide de haute performance, la pureté radiochi- mique de l'adénosine (G -3H) est supérieure à 98%. Exemples 59et 60. On place dans une ampoule, 21 mg de mélange compre- nant 10 mg d'oxyde d'aluminium, 1 mg d'adénosine et 10 mg de catalyseur contenant du palladium sur carbonate de cal- cium à 5%O, préparé comme décrit dans l'exemple 1. Le traite- ment est effectué comme dans l'exemple 58. Les résultats de l'analyse du produit obtenu sont représentés sur le ta- bleau 8 ci-après. TABLEAU 8 Inclusion du Activité Exemples Température, tritium, molaire, Rendement, % O K tatome/mol i TBq/mole I 59 433 2,03 2180 50,0 453 2,86 3070 13,2 Procédé connu 293 0,3 330 40,0 I I I I Exemple 61. on place dans une ampoule 16 mg de mélange compre- nant 10 mg d'oxyde d'aluminium, 1,0 mg de phénylalanine et 5,0 mg de catalyseur (palladium à 5,% sur carbonate de calcium), ce mélange est préparé comme indiqué dans l'exemple 1. l'ampoule est mise sous vide et est remplie de tritium gazeux sous une pression de 400 hPa. L'ampoule est chauffée à 473 K et est maintenue à cette température pndant 40 minutes. Le mélange réactionnel refroidi est suspendu dans 3,0 ml d'hydroxyde d'ammonium à 0, 1 M. Le catalyseur et le support en oxyde d'aluminium sont sépa- rés par centrifugation, la solution est évaporée à 2 re- prises avec de l'ammoniac à 0,1 M, pour éliminer le tri- tium labile. Les produits de réaction sont dissous dans 200 f1 d'hydroxyde d'ammonium à 0,1 M et sont soumis à la chro- matographie sur sorbant Amberlite CG 50 (III) sous forme cuivrique. Chargement du sorbant par les ions de cuivre: 70&%; éluant: hydroxyde d'ammonium à 0,2 M. La phényla- nine marquée par tritium est éluée à 18 ml dans un volume de 6 ml. Sur le sorbant formateur de complexe Dowex Al, on élimine les ions de cuivre du produit et on l'évapore sous dépression. Le produit est dissous dans de l'éthanol aqueux à 50%, pour obtenir une concentration radio-active de 37 GBq/litre. On obtient ainsi 350 pg de phénylalanine (G - H) d'une activité molaire de 3030 TBq/mol. Exemples 62 à 69. 21 mg de mélange comprenant 10 mg d'oxyde d'alumi- nium, 1 mg de méthionine L et 10 mg de catalyseur (rhodium sur oxyde d'aluminium à 5% ) sont placés dans une ampoule. Le traitement est effectué comme décrit dans l'exemple 61. Les résultats de l'analyse du produit désiré sont résumés sur le tableau 9. TABLEAU 9 Exemples Inclusion du i Activité Exemples jT Temperature- tritium, | Rendement, rETempératlres tritium,, molaire, of OK { atome/mol TBq/mole i ' 62 373 0,01 11 100 63 393 0,04 41 100 64 413 0,16 170 100 433 1,4 444 85 66 453 1,5 1600 32 67 473 3,1 3300 15 68 493 3,1 90 3 69 513 - - 0 Exemple 70. On place dans une ampoule, 21 mg de mélange compre- nant 10 mg d'oxyde d'aluminium soumis au séchage par lyophi- lisation, 1 mg de glucosamine et 10 mg de catalyseur (pal- ladium sur carbone de calcium à 5%), ce mélange est préparé comme décrit dans l'exemple 1. L'ampoule est mise sous un vide de 10-3hPa et est remplie de tritium gazeux sous une pression de 400 hPa. L'ampoule est chauffée à 453 K et est maintenue à cette température pendant 30 minutes. Le mélange réactionnel refroidi est suspendu dans 3,0 mg d'hydroxyde d'ammonium à 0,1 M. Le catalyseur et le support sont séparés par centrifugation, la solution est évaporée sous dépression, pour éliminer le tritium labile. Les produits de réaction sont dissous dans 150 Pl d'éluant (acétonitrile/eau dans la proportion 6:1) et sont soumis à la chromatographie sur sorbant en amino-propyle d'une gra- lO nulométrie de 5 pm. L'éluant est évaporé à sec sous dépres- sion, le produit est dissous dans de l'éthanol aqueux à 50%, pour obtenir une concentration radio-active de 37 GBq/l. On obtient ainsi 62 g de glucosamine (G - 3H) marquée par le tritium et ayant une activité molaire de 3400 TBq/mole; rendement chimique: 6,2%. Exemple 71. On place dans l'ampoule, il mg de mélange compre- nant 5,0 mg de carbonate de calcium, 0,5 mg d'histidine L et 5,5 mg de catalyseur (palladium sur sulfate de baryum à 5%), ce mélange est préparé comme indiqué dans l'exemple 1. L'ampoule est mise sous vide et est remplie de tritium ga- zeux sous une pression de 250 hPa. L'ampoule est chauffée à 493 K pendant 20 minutes. Le mélange réactionnel est sus- pendu dans 1,5 ml d'hydroxyde d'ammonium à 0,1 M. Le cata- lyseur et le support sont séparés par centrifugation, la solution est évaporée 2 fois avec de l'hydroxyde d'ammo- nium à 0,1 M, pour éliminer le tritium labile. Pour le res- te, le traitement se fait comme décrit dans l'exemple 61. On obtient ainsi 86 mCi d'histidine L (-2,3,2', 5' - 3H) d'une radioactivité molaire de 4600 TBq/mol, ce qui correspond à un taux de substitution de l'hydrogène par le tritium de 86% et à un taux d'inclusion du tritium de 4,3 atomes par molécule d'amino-acide. Rendement chimique: %, pureté radiochimique: 98%, pureté optique: 80% . Selon les données de RPM (résonance paramagnétique),le tritium marqueur est réparti de manière régulière dans toutes les liaisons carbone-hydrogène. Exemples 72 à 75. On place dans une ampoule, 11 mg de mélange compre- nant 5,0 mg d'oxyde d'aluminium, 0,5 mg d'hexadécylamine (C 16H33NH2) ou 0,5 mg d'acide stéarique (C17H35Co02H) et ,5 mg de catalyseur hétérogène de palladium. Les conditions de préparation du mélange et de sa réaction avec le tritium sont les mêmes que dans l'exemple 71. Les résultats de l'analyse du produit final sont repré- sentés sur le tableau 10. TABLEAU 10 [Quantité Activité Rendement, Exemples Catalyseur X Composé ide radiomolaire, actiité,molaire, ' :activité, MBq TBq/mole I I I I i 72 Pd/BaSO4 à 5%, C16H33NH2 5200 17700 15 73 Pd/C à lO0% C1H NH 6600 31400 9 1,16 33 2, 74 I Pd/BaCO3 C17H35 CO2H 5900 18500 20 Pd/C à lO 6c17H35C2300 30000 14 tIJ Exemples 76 à 79. le tableau 11 ci-dessous résume les exemples 76 à 79 d'obtention de l'alanine, de l'acide indolilacétique, du tryptophane, de la tryptamine marqués par le tritium, la réaction avec celui-ci étant effectué à 473 K et dans les conditions spécifiées dans l'exemple 61. TABLEAU 11 Activité Exemples i Composé molaire, Rndement, TBq/mole i ' 3 i l 76 L-(2, 3 -3H)-alanine 2400 90 1 3 I 1 77 (G - H)-acide indolilacétique: 3000 32 3iI 78 (G - H)-tryptophane 2700 50 79 (G - H)-tryptamine ' 2500 60 Exemple 80. On place dans une ampoule, un mélange comprenant 6,2 mg (5,5 P mole) de comprexe composé du rhodium et d'un peptide, analogue de l'hormone adrénocorticotrope HACT47 naturelle (Met-Glu-His-Phen-Pro-Gly-Pro) et de 20 pg de catalyseur de palladium à 5% sur sulfate de baryum, ce mé- lange est préparé comme décrit dans l'exemple 1. L'ampoule est mise sous un vide de 10 3hPa et est remplie de tritium gazeux à la pression de 400 hPa. Le mé- lange réactionnel est porté à 413 K et est maintenu à cette température pendant 2 heures. La réaction terminée, le mélange réactionnel est refroidi à 288 K, le tritium gazeux est évacué et le mélange réactionnel est lavé au filtre 2 fois à 10 ml de méthanol. Le filtrat réuni est évaporé, puis est dissous dans 1 ml de méthanol aqueux à 50D%. Le produit fini est extrait par chromatographie en phase liquide. L'éluant est une solution aqueuse à 11,5% d'alcool propylique secondaire contenant 0,1%' en volume d'acide trifluoroacétique. La fraction contenant le peptide marqué par tritium est séchée et diluée dans du méthanol pour obtenir une concentration radioactive de 37 GBq/litre. Selon les résultats de la chromatographie et du comp- tage par scintillation en phase liquide, on évalue le ren- dement chimique en produit fini, la radioactivité totale et la radioactivité molaire du produit. On obtient ainsi 3000 g de peptide marqué par tritium d'une radioactivité totale de 5,55 GBq (150 ml) et d'une activité molaire de 1690 TBq/mole. Le rendement chimique en produit désiré est de 60%. Exemple 81. On place dans une ampoule, 405 mg du mélange compre- nant 5,2 mg (6 micromoles) de complexe composé de rhodium et du peptide faisant partie de la famille d'encéphaline (Try-DAla,-Gly-Phen-Gly(OH))et 400 mg de catalyseur de palladium à 5% sur sulfate de baryum, ce mélange est pré- paré comme décrit dans l'exemple 1. On met l'ampoule sous -3 un vide de 10 hPa et on la remplit de tritium gazeux sous une pression de 400 hPa. La réaction entre le mélange et le tritium s'effectue à 413 Kpendant 40 minutes. Le mé- lange réactionnel est refroidi à 304 K, le tritium gazeux est évacué et le mélange réactionnel est lavé au filtre par deux portions de 10 ml d'éthanol aqueux à 20% contenant 0,2% d'hydroxyde d'ammonium. Le filtrat réuni est évaporé et est dissous dans 1 ml de la solution aqueuse de métha- nol à 50%. Le produit est épuré par chromatographie liquide de haute performance sur une colonne remplie du silicagel modifié contenant des groupements octadécyliques C18 (Serva; 4,6 x 250 mm). Comme éluant, on utilise la solution aqueuse à 60% de méthanol contenant 0,1% en volume d'acide tri- fluoroacétique.]- On obtient 1120 pg (2,19 mol) de peptide marqué par tritium d'une radioactivité totale de 3,81 GBq (103 mCi) et d'une activité molaire de 1780 YBq/mole. Le rendement chimique en produit fini est de 28%. Exemple 82. On place dans une ampoule, 17 mg comprenant 16,8 mg (13,3 mole) de complexe rhodium-peptide de la famille d'encéphaline (Tyr-DAla-Gly-PhenLeu-Arg) et 400 mg de catalyseur au palladium sur sulfate de baryum, ce mélange est préparé comme décrit dans l'exemple 80. La réaction avec le tritium dure i heure à 413 K. L'extraction et l'épu- ration du peptide sont faites comme décrit dans l'exemple 81. On obtient 7420 pg (7,18 mole) de peptide marqué par tritium d'une radioactivité totale de 13,2 GBq (360 mCi) et d'une activité molaire de 1850 TBq/mole. Le rendement chimique est de 54,%. Exemple 83. 417 mg de mélange comprenant un complexe peptide (Tyr-DAla-Gly-Phen-Leu-Arg)-rhodium et un catalyseur de pal- ladium sur sulfate de baryum, ce mélange étant préparé comme décrit dans l'exemple 82, sont chauffés à la tempéra- ture de 453 K dans les conditions de l'exemple 80. On obtient 980 pg de peptide marqué par tritium d'une radioactivité totale de 4,54 GBq (122 mCi), d'une activité molaire de 4880 TBq/mol et d'un rendement chimique de 7,%. Le taux de substitution de l'hydrogène par le tritium est de 4,56 atomes par molécule de peptide. Exemple 84. On place dans une ampoule, 111 mg de mélange obtenu comme décrit dans l'exemple 80 et comprenant 11 mg (10 p mole) de complexe du peptide faisant partie de la famille d'encéphaline (Tyr-DAla-Gly-Phen-DLeu) et le cata- lyseur contenant 50 mg de palladium à 5,% sur sulfate de baryum et 50 mg de rhodium sur carbonate de calcium. Le peptide est obtenu, extrait et épuré comme décrit dans l'exemple 81 avec l'utilisation en tant qu'éluant d'une solution aqueuse à 70% de méthanol contenant 0,1 o en volume d'acide trifluoroacétique. On obtient 2260 pg (3,01 mol) de peptide marqué par tritium d'une radioactivité totale de 5,03 GBq (136 mCi), d'une activité molaire de 1780 TBq/mole, et avec un rende- ment chimique en produit fini de 34% . Exemple 85. On place dans une ampoule, 108 mg de mélange préparé comme décrit dans l'exemple 80 et comprenant 8,2 mg de complexe rhodium-peptide de leucine-encéphaline (Tyr-Gly- Gly-Phen-Leu) et le catalyseur de palladium à 5,% sur sulfate de baryum. Le traitement du mélange obtenu est poursuivi comme décrit dans l'exemple 80. le produit désiré est extrait et est épuré par chromatographie sur colonne "Ultrasphère ODS" (150 X 4,6 mm, 5-pm). En tant qu'éluant, on utilise du méthanol aqueux à 60% contenant 0,2% en volume d'acide trifluoroacétique. On obtient 2360 g (3,8 p mole)peptide marqué par tritium d'une radioactivité totale de 5,89 GBq (160 mCi), d'une activité molaire de 1550 TBq/mol et avec un rendement chimique de 38o%. Exemple 86. On place dans une ampoule, 154 mg de mélange compre- nant 12 mg (4,5 p mole) de complexe platine-peptide (Gly-Leu- Leu-Asp-Leu-Lys), et 140 mg de catalyseur de rhodium sur oxyde d'aluminium. Le mélange réactionnel est préparé comme décrit dans l'exemple 80. La réaction avec le tritium dure 1 heure. Le peptide est extrait et est épuré par chromatogra- phie sur colonne. On obtient 1770 pg (2,67 pg mole) de peptide marqué par tritium d'une radioactivité totale de 4,3 GBq (116 mCi), d'une activité molaire de 1610 TBq/mol et avec un rendement chimique de 59%. Exemple 87. On place dans une ampoule, 206 mg de mélange préparé comme décrit dans l'exemple 80 et comprenant 6,0 mg (5,2 p mole) de peptide (Tyr-Ala-GlyPhen-Tyr-Pro) et mg de catalyseur de palladium à 5% sur sulfate de baryum. Le mélange réactionnel est préparé comme décrit dans l'exemple 80. La réaction s'effectue pendant 2 heures à la température de 413 K. Le peptide est extrait et est épuré par chromatographie sur colonne. En tant qu'éluant, on uti- lise de l'acétonitrile aqueux à 40%o contenant 0,05% en volume d'acide trifluoroacétique. On obtient 100 pg (1,15 p mole) de peptide marqué par tritium d'une radioactivité totale de 1,86 GBq (50 mCi), d'une activité molaire de 1630 TBq/mole et avec un rendement chimique de 22%. Exemple 88. On place dans une ampoule, 412 mg de mélange préparé comme décrit dans l'exemple 80 et comprenant 12 mg (9,5 I mole) de complexe rhodium-peptide (Thre-Lys-Pro-Arg- Pro-Gly-Pro) et 400 mg de catalyseur de palladium sur sul- fate de baryum. Le mélange réactionnel est préparé comme décrit dans l'exemple 80. La réaction s'opère pendant 1 heure à 413 K. Le peptide est extrait et est épuré par chromatographie sur colonne, en utilisant comme éluant le méthanol aqueux à 60% contenant 1 m mole de trifluoracétate de tributylammonium; pH de l'éluant: 2,2. On obtient 2000 g (1,9 l mole) de peptide marqué par tritium d'une radioactivité totale de 3,7 GBq (100 mCi) , d'une activité molaire de 1960 TBq/mole et avec un rendement chimique de ,0. Exemple 89. On place dans une ampoule, 246 mg de mélange obtenu comme décrit dans l'exemple 80 et comprenant 16 mg (15 p mole) de complexe rhodium-peptide (Tyr-Pro-Arg), 10000 p g (15 p mole) de chlorure de rhodium et 130 mg de palladium à 5%o sur sulfate de baryum. Le mélange réactionnel est préparé comme décrit dans l'exemple 80. La réaction dure 1 heure à 4430K. Le peptide est extrait et est épuré par chromatographie sur colonne dans le système d'une solution aqueuse à 30% de méthanol contenant 0,1% en volume d'acide trifluoroacétique. On obtient 1500 pg de peptide marqué par tritium d'une radioactivité totale de 6,7 GBq (181 mCi), d'une ac- tivité molaire de 1940 TBq/mole et avec un rendement chimi- que de 23% .- Exemples 90 à 98. 146 mg de mélange décrit dans l'exemple 87 et com- prenant un complexe rhodium-peptide Tyr-Pro-Arg et un cata- lyseur au palladium à 5% sur sulfate de baryuum sont chauf- fés avec le tritium dans les conditions décrites dans l'exemple 88 et à différentes températures. Les résultats sont résumés sur le tableau 12. Exemple 99. On place dans une ampoule, 5,5 mg de mélange obtenu comme décrit dans l'exemple 20 et comprenant 0,5 mg de L-valine et 5,0 mg de catalyseur sur support à 5%/ de palla- dium sur carbonate de calcium. L'ampoule est mise sous un -3 vide de 103 hPa et est remplie du tritium gazeux sous une pression de 400 hPa. L'ampoule est portée à 493aK et est maintenue à cette température pendant 30 minutes. Le mélange réactionnel est suspendu dans 3,0 ml d'hydroxyde d'ammonium à 0,1 M. Le catalyseur est séparé par centrifugation, la solution est évaporée à sec deux fois avec de l'hydroxyde d'ammonium à 0,1 M, pour éliminer le tritium labile, et le résidu est dissous dans 150 r1 d'hydroxyde d'ammonium à 0,1 M. TABLEAU 12 Influence de la température de réaction sur le rendement et le taux de substitution des atomes d'hydrogène du peptide (3H) Tyr-Pro-Arg pendant un temps de réaction de 1 heure Température, iRendement, Taux d'inclusion i Substitution de Exemple Eep OK du tritium, % l'hydrogène, at/mol 373 64 16 0,29 91 393 60 21 0,38 92 403 62 34 0,61 93 413 56 38 0,69 94 423 58 68 1,23 433 31 85 1,54 96 443 21 100 1,81 97 453 8 106 1,92 98 473 O 0 - L'épuration chromatographique est effectuée sur échangeur cationique carboxylique Amberlite CG 50 (III) sous forme cuivrique. Le degré de chargement du sorbant par les ions de cuivre est de 70 'o. Eluant: hydroxyde d'ammonium à 0,2 M. On utilise un détecteur ultraviolet à écoulement dont la cuvette de mesure est suivie d'une colonne de 15 x 10 mm servant à éliminer les traces de cuivre dans l'éluantet dont est remplie dusorbant formateur de complexe Dowex A-I. La fraction L-valine recueillie est de 20 à 26 ml. L'éluant est évaporé, la L-valine est dissoute dans l'éthanol aqueux à 50% et la concentration radioactive est portée à 37 GBq/litre. On obtient 2400 MBq de (2, 3, 4, 5-3H)-valine d'une activité molaire de 6300 TBq/mole. Le rendement chimique est de: 8,9%. La pure- té radiochimique est mesurée par chromatographie en couche mince sur "Silufol" dans le système isopropanol: acétone: ammoniac (15: 9: 9). Mobilité de la valine: 0,45. Pureté radiochimique: 98% . La pureté optique est mesurée par chromatographie sur colonne par échange de ligands sur sorbant chiral. La pureté optique est de: 17o'%. Exemples 100 à 105. On place dans une ampoule, 11 mg de mélange compre- nant 10 mg de catalyseur de palladium à 5% sur carbonate de calcium et 1 mg de L-valine. On met l'ampoule sous vide et on la remplit de tritium sous une pression de 400 hPa. L'échange isotopique et l'extraction de la valine marquée par tritium s'effectuent comme décrit dans l'exem- ple 99. Le taux d'inclusion du tritium en fonction de la température d'échange isotopique est indiqué sur le tableau 13 ci-après. TABLEAU 13 Température, Activité molaire, Rendement, Inclusion du Exemples EOK TPqmole % tritium, i8 Xi I atome/mol I I lI 433 810 85 0,75 101 453 3070 65 r 2,9 102 473 5200 18 4,8 103 493 6300 10 5,9 104 513 7000 8 6,5 533 - 0 - Exemples 106 à 109. * On place dans une ampoule, l1 mg de mélange compre- nant 0l mg de catalyseur contenant du palladium à 5%/ sur carbonate de calcium, et 1 mg de L-amino-acide. L'ampoule est mise sous vide et est remplie de tritium sous une pres- sion de 400 hPa. La réaction est effectuée à 473 K pendant minutes. Les résultats de la réaction d'échange isoto- pique sont résumés sur le tableau 14 ci-après. TABLEAU 14 Radioactivité molaire, Rendement, Exemples Amino-acides Ci/mole TB/mole { | Ci/mole TBq/mole l l I.I 106 Leucine 6700 13 107 Proline 5600 14 108 Thréonine 3300 12 109 Isoleucine 6500 13 Exemple 110. On place dans une ampoule, 6 mg de mélange compre- nant 5 mg de catalyseur de palladium à 10% sur carbone et 1 mg de L-valine. On met l'ampoule sous vide et on la rem- plit de tritium sous une pression de 350 hPa. La réaction est effectuée à 4730K pendant 40 minutes. Le produit est extrait comme décrit dans l'exemple 99. On obtient 120 g de L-valine d'une activité molaire de 4800 TBq/mol, à un rendement chimique de 12,%. Exemple 111. On place dans une ampoule, 12 mg de mélange compre- nant 2 mg de complexe histamine-K2P+C14 et 10 mg de cata- lyseur au rhodium à 5%o sur oxyde d'aluminium. On met l'am- poule sous un vide de 103 hPa et on la remplit de tritium gazeux sous une pression de 300 hPa. On maintient l'ampoule à 413 K pendant 1 heure. Le mélange réactionnel est suspendu dans 3,0 ml de mélange de volume égaux d'acide chlorhydrique à 0,01 M et d'éthanol. Le catalyseur est séparé par centrifugation, la solution est évaporée à sec, pour éliminer le tritium labile. Les produits de réaction sont dissous dans 200 1 d'hydroxyde d'ammonium. l'épuration chromatographique est effectuée sur échangeur cationique carboxylique Amberlite CG 50 (III) sous forme cuivrique. Le degré de chargement du sorbant par le cuivre est de 15,%, l'éluant est l'hydroxyde d'ammonium à 0,1 M. On utilise un détecteur ultraviolet dont la cuvet- te de mesure est suivie d'une colonne de 15 x 10 mm servant à éliminer les ions de cuivre dans le produitet dont est rem- plie du sorbant formateur de complexe Dowex A-l. La frac- tion contenant l'histamine recueillie est de 28 à 33 ml. L'éluant est évaporé, l'amine biogène est dissous dans l'éthanol aqueux à 50% dt la concentration radioactive est portée à 37 GBq/mole. On obtient 2400 MBq de (G - 3H)- histamine d'une activité molaire de 1700 TBq/mole. Le ren- dement chimique en amine biogène est de 37 . La pureté radiochimique est évaluée en colonne Ultrasphère ODS dans le système acide trifluoroacétique à 0,01 M - acétonitrile. La pureté radiochimique est de 98%. Exemples 112 à 135. L'influence de la température de réaction, de la nature du métal formateur de complexe et du catalyseur est résumée sous forme du tableau 15. La réaction, l'extrac- tion et l'analyse du produit sont effectuées comme décrit dans l'exemple 111. TABLEAU 15 Obtention d'amines biogènes marquées par tritium par échange isotopique en phase solide en présence de tritium gazeux ! | | XFormateur de complexe II L _________________________________________________________I K2Ptcl4 K2PtC16 RhC3 N s d'ordre Amine Catalyseur 2 ilà- - - IIl 8 | Température, K I -g.. I I I____________________v________ 13731 393' 413' 453 's473 373' 413 453 3731 413 453 ----[----I- I_I I I I I I IC j g g jg g ggg I II 1 Exemple 1112 113, 114, 115116117 118 - 1191 120 1121 j I II I 2 jHistamine Ph/A12035,% Rendement, ' 37 26j 24J 1,5 0 40, 15 i - 321 12 4 3 g Activité molaire,1740 113001170011900-' 30011300- 670,1100 g 2000 àl _| s TBq/mole, l l gl l g t---------- ------------ ---i -t- -t-- ---- ----à........ 4 Exemple 1122 123, 124 ll l l l l l l l l I | l II iTryptamine 1 Ph/A 12035%Rendement, %, 6i i 16j 1 3 i 2 3 6 Activité molaire,i6701 1 14401 1 600 TBq/mole àààà à à àà-- --------------- -ààààà--------- --------- -- ----- ----- --à ---àF-- - 7 g 711 Exemple 11251 126' 127' 128 j129 1 130131132 g 1331 134135 8 iTryptaminePd/BaSO45% Rendement, 80' 1 541 14 1 0 40 30 16 1 6 1 5 TrIrtmir, g8d/0S 60' 5,40g18 g g g j g g g g g g g gjI IlActivité mol1070 130 Activité molaire,, 90 1 180 11260 11700 - J 4001 740 11200 22001070 J 1300 _ _ _ _ _ _ __a__ I TBq/m ole g g g g g g g _ RE V E N D I CA T I O N S 1. Procédé d'obtention d'un composé organique biologiquement actif marqué par un isotope de l'hydrogène consistant à préparer un mélange comprenant le composé de départ, un porteur inorganique et un catalyseur sous forme d'un métal du groupe du platine, à faire réagir ledit mélange avec un isotope de l'hydrogène à une température supérieure à287 K et à extraire le produit désiré, caractérisé en ce que la réaction entre ledit mélange et l'isotope de l'hydrogène est effectuée à une température de 373 à 523 K et en ce qu'ensuite le mélange réactionnel est refroidi à une température de 288 à 303 K. 2. Procédé selon la revendication 1, caractérisé en ce que le composé de départ complexé avec un métal du groupe du platine est utilisé. 3. Procédé selon la revendication 2, caractérisé en ce qu'en tant que complexe dont fait partie le compose de départ, un complexe du métal du groupe du platine et des composés choisis dans le groupe comprenant les amines, les amino-acides, les oses, les osamines, les peptides, les bases puriques et pyrimidiniques, les nucléosides, les acides carboxyliques, les dérivés azotés de tétrahydro- thiofène, est utilisé. 4. Procédé selon les revendications 1 à 3, carac- térisé en ce que le deutérium est utilisé en tant qu'iso- tope de l'hydrogène.