Brevet FR2657350A1 — publié le 19910726

Cette invention réalisée dans les Laboratoires suivants Laboratoire de Chimie Organique-Université d'Orléans; Laboratoire de Biopharmacologie transfusionnelle-CRTS de Tours; Laboratoire de Pharmacologie et Toxicologie fondamentales-CNRS de Tours, se rapporte à des composés chimiques utiles notamment pour l'internalisation érythro- cytaire de composés biologiquement actifs et plus particulièrement à de nouveaux dérivés de la naloxone et de la naltrexone. Il a déjà été réalisé des encapsulations de substances dans les érythrocytes (Green R et AI, The LANCET ( 1980); p 327; ROPARS, NICOLAU, CHASSAIGNE FR 82 11749) Cependant, l'utilisation de globules rouges pour le transport de médicaments hydrophobes pose encore aujourd'hui des difficultés lors de l'interaction de ce type de médicaments avec la membrane érythrocytaire. On assiste soit à une fuite plus ou moins rapide du vecteur, soit à une adsorption considérable qui ne permet pas une internalisation du produit. Un des objets de la présente invention est précisément de proposer une solution au problème précité. Plus particulièrement la présente invention se rapporte à un dérivé destiné à l'encapsulation dans les érythrocytes d'un composé biologiquement actif hydrophobe caractérisé en ce qu'il est constitué dudit composé biologiquement actif couplé chimiquement à un groupement chimique à caractère hydrophile par un élément de liaison qui est clivé par les enzymes lysosomiales et/ou plasmatiques mais qui est stable dans les érythrocytes. De tels composés chimiques de par leur structure présentent un caractère hydrophile accentué, une interaction faible avec la membrane érythrocytaire et une stabilité chimique à l'égard des diverses enzymes présentes dans ce type de cellules Enfin, lors de la destruction des érythrocytes par le système phagocytaire, ils peuvent être clivés par les enzymes lysosomiales ou plasmatiques et libérer ainsi le médicament. Le groupement chimique à caractère hydrophile utilisé selon l'invention peut être une chaîne contenant un ou plusieurs sucres et/ou un ou plusieurs acides aminés Il peut également s'agir d'un radical sulfate phosphate, polyphosphate ou autre fonction hydrophile. Parmi les composés chimiques objet de la présente invention on citera tout particulièrement de nouveaux dérivés de la naloxone et de la naltrexone. La naloxone est un antagoniste pur et spécifique de morphinomimétiques sans effet agoniste. La présente invention se rapporte donc également à un composé chimique selon l'invention caractérisé en ce qu'il est représenté par la formule générale I I/R 1 R 20 o 0- (I) o O dans laquelle: R 1 représente CH -CH 2-CH/ 2 CH 2 un groupement CH 2 =CH-CH 2 ou OR 2 représente un groupement sulfate ou un groupement phosphate ou polyphosphate de formule II: R 40-2 \ O n X (II) dans laquelle R 4 est choisi parmi un alkoxy en C 13, OH et ses sels alcalins, X est un cation alcalin et de préférence Na+, et N représente un entier de 1 à 3, et OR 3 représente OH ou un groupement sulfate, à la condition que si R 1 représente CH 2 =CH-CH 2, OR 2 et/ou OR 3 sont différents d'un groupe- ment sulfate. Les dérivés de la naloxone et de la naltrexone sont des esters de naloxone et de naltrexone obtenus par greffage sur l'hydroxyle en position 3 d'un groupement monophosphate ou polyphosphate ou, sur les hydroxyles en positions 3 et/ou 14, de groupements sulfate. Parmi ces composés, on citera tout particulièrement les dérivés dans lesquels OR 3 représente un groupement QH et OR 2 un groupement phosphate ou triphosphate de formule II. Ces composés de formule générale I sont intéressants à titre de prodrogues de la naloxone ou naltrexone En raison de leur caractère hydrophile, ils peuvent être internalisés de manière satisfaisante dans les globules rouges Enfin, lors de la destruction desdits globules rouges, ils sont hydrolysés in vivo et libèrent alors la molécule du composé biologiquement actif, c'est-à-dire la naloxone ou la naltrexone. Ces composés sont obtenus par estérification d'au moins un hydroxyle de la naloxone ou de la naltrexone. Alors que le disulfate de naloxone en position 3 et 14 et le monosulfate en position 3 ont déjà fait l'objet d'une description dans la littérature (Linder C and Fishman J, J Medicinal Chem 16, 553, 1973), les différents sulfates de la naltrexone étaient aujourd'hui encore inconnus. A partir des précédents travaux cités, les inventeurs ont donc après modification du protocole opératoire, isolé les deux dérivés de la naltrexone recherchés L'obtention du disulfate fait intervenir une sulfatation directe, celle du monosulfate en position 3 un processus de blocage et de déblocage utilisant les esters acétiques. Dans le cadre de la préparation des dérivés phosphatés de formule générale I, le traitement de la naloxone ou naltrexone par le dérivé chloré, engendré à partir du diméthylphosphite, permet dans les conditions appropriées l'estérification sélective de l'hydroxyle en position 3. Les esters ainsi préparés et soumis à l'action de l'iodure de sodium donnent ensuite naissance aux phosphates monosodiques corres- pondants. Ainsi, la condensation sur la naloxone du cyanoéthyl N,Ndiisopropylchlorophosphoramidite au sein du chlorure de méthylène en présence de diisopropyléthylamine conduit au monoester en position 3, qui par action du cyano-2-éthanol et du tétrazole puis oxydation au moyen de l'hydroperoxyde de tert butyle, génère le phosphate correspondant Les groupements protecteurs cyanoéthyle sont éliminés par l'ammoniac au sein du méthanol, le sel d'ammonium est ensuite transformé en analogue sodé par passage sur résine échangeuse d'ions. En ce qui concerne la naltrexone, la séquence utilisée fait appel au pyrophosphate de tétrabenzyle Ainsi, le phénate de lithium, obtenu par traitement de la naltrexone par le diisopropylamidure de lithium à basse température, est aisément phosphorylé au moyen du pyrophosphate précédemment mentionné. L'hydrogénolyse de l'ester formé suivie d'une chromatographie sur résine échangeuse d'ions, permet d'isoler alors le sel disodique recherché. Le même processus est utilisable avec la naloxone si ce n'est qu'en raison de la double liaison allylique, la coupure des esters benzyliques est réalisée avec le bromure de triméthylsilyle. A partir des dérivés monophosphatés de la naloxone et de la naltrexone, il peut être ensuite réalisé la préparation de dérivés triphosphates au moyen du 1,1 ' carbonyldiimidazole, suivi d'un traitement par le pyrophosphate. En ce qui concerne les composés selon l'invention de formule générale I, il est en outre important d'étudier leurs propriétés d'interaction avec les différents tissus de récepteurs des opiacés: affinité et sélectivité. Par conséquent, afin d'apprécier celles-ci, il a été testé la capacité de quelques dérivés de la naloxone et de la naltrexone à se fixer sur un récepteur spécifique de ces derniers. Il est connu que la multiplicité des effets engendrés par les analgésiques de type morphine résulte de l'activation simultanée (non sélective) par cette dernière de plusieurs type -p J, et k de récepteurs spécifiques centraux et périphériques dont les propriétés de liaison in vitro et les distributions régionales ont été clairement différenciées On connait à l'heure actuelle, de nombreux ligands spécifiques des sites opio Tdes. Ainsi, les sites opioldes de type p, C)et k co-existent dans le cerveau des mammifères mais en proportions différentes selon l'espèce Les pourcentages de sites opioldes de type p, {et k sont respectivement 46, 42 et 11 dans le cerveau de rat, 24, 32 et 44 dans le cerveau de cobaye 43, 19 et 38 dans le cerveau de lapin Néanmoins, certaines "préparations" contiennent un type particulier de site opiorde en proportion très élevée: le cervelet de lapin contient 80 % de sites de type p, les cellules hybrides neuroblastome x gliome NG 108-15: 100 % de sites de type et le cervelet de cobaye: 85 % de sites de type k. Il a en outre été mis en évidence une régulation allostérique différentielle de la liaison in vitro des agonistes et des antagonistes non seulement au site de type' mais aussi aux sites de type p et k: la fixation d'un agoniste est fortement inhibée en présence d'ions Na et de '-guanylylimidodiphosphate (Gpp N Hp) alors que, dans ces conditions, la fixation d'un antagoniste ne l'est pas. Les dérivés de la naloxone et de la naltrexone, objets de la présente invention, se caractérisent également par une affinité apparente satisfaisante pour les sites opioldes p et k. La présente invention se rapporte également aux compositions pharmaceutiques caractérisées en ce qu'elles comportent, à titre de principe actif, au moins un composé selon l'invention. Selon un mode préféré de l'invention, on utilisera un composé de formule générale I. Les composés de formule générale I peuvent également être utilisés selon l'invention à titre de prodrogues de la naloxone ou de la naltrexone. La présente invention se rapporte également aux érythrocytes rescellés contenant au moins un dérivé selon l'invention. Par érythrocyte rescellé, on entend désigner un érythrocyte qui a subi une lyse puis une reconstitution de la membrane érythrocytaire. Les exemples donnés ci-dessous à titre non limitatif permettront de mettre en évidence d'autres caractéristiques de la présente invention. EXEMPLE 1: Préparation des dérivés disulfate de la naltrexone et naloxone en positions 3 et 14 ( 0,306 mmol) du chlorhydrate de naloxone (ou naltrexone) sont agités en présence d'un excès de dicyclohexylcarbodiimide ( 3,126 mmol) dans du diméthylformamide ( 4 ml) L'ensemble est maintenu à O C. Un volume de 0,5 ml d'une solution froide de H 2 SO 4 ( 0,2 ml, 3,47 mmol) est ajouté au mélange Après I heure d'agitation à O C, le mélange est ajusté à p H 9 avec NH 40 H ( 10 %) et la dicyclohexylurée est éliminée Après évaporation, le résidu obtenu est dissous dans I ml de DMF, ensuite filtré pour éliminer les sels inorganiques Le dérivé 3,14-disulfate précipite avec de l'acétate d'éthyle La filtration donne un produit blanc. IR (K Br): ( 0503) 1250 cm-1; (C=O) 1700 cm-l. RMN (DMSO-d): 4,7 ppm (d, H 9); 5 ppm (s,H 5); 6,75 ppm (d,HI); 7,4 ppm (d, H 2). 1 CH 2 R-=CH 2 =CH-CH 2; 79 %; R 1 =CH 2-CH; 86 % CH 2 EXEMPLE 2 Préparation du dérivé de la naloxone (ou naltrexone) monosulfaté en position 3 La diacétylation de la naloxone (ou naltrexone) ( 0,459 mmol) en présence de 4 ml d'anhydride acétique se fait à reflux pendant une heure Après évaporation, le résidu est dissous dans du dichlorométhane, et extrait plusieurs fois au moyen d'une solution aqueuse de 5 % Na OH puis avec de l'eau La phase organique est évaporée, et le produit est purifié par passage sur une colonne de silice (éluant: Me OH-CH 2 CI 2: 1/9). C 2 2 -CH -CH-CH79 H 2 Rendement: R 1 =CH 2 =CH-CH 2: 79 %; R 1 =CH-C: 86 % CH 2 Description du composé IR (K Br): (C=O, 14 acétate) 1730 cm-1; (C=O, 3 acétate) 1760 cm-1. RMN (CDCL 3): 2,15 ppm (s, 14 acétate méthyl H) 2,3 ppm (s, 3 acétate méthyl H); 4,4 ppm (d, H 9); 4,65 ppm (s, H 5); 6,65 6,8 ppm ( 2 d, HI, H 2). ( 0,332 mmol) du composé 3,14-acétate sont hydrolysés par action de 12 ml d'une solution aqueuse de H 2 SO 4 à 4 % pendant 24 heures à température ambiante Le mélange réactionnel est ajusté à p H 8 avec NH 40 H ( 10 %), et extrait au dichlorométhane Après séchage et évapo- ration de la phase organique, le dérivé 14-acétate est purifié sur une colonne de silice (éluant: Me OH-CH 2 CI 2: 1/9). CH 2 Rendement: R 1 =CH 2 =CH-CH 2: 77 %; R 1 =CH 2-CH: 79 % CH 2 Description du composé IR (K Br): (C=O, 14 acétate) 1730 cm-1; V (O-H) 3420 cm-l. RMN (CDCL 3): 2,2 ppm (s, 14 acétate méthyl H) 4,4 ppm (d, H 9); 4,7 ppm (s, H 5) 6,55; 6,70 ppm ( 2 d, HI, H 2). Un mélange de dérivé 14-acétate ( 0,259 mmol) et de DCCI ( 3,00 mmol) est agité dans 3 ml de la DMF, auxquels on ajoute ensuite I m I d'une solution froide de H 2504 ( 0,029 ml, 0,518 mmol) dans du DMF à O C. Après une heure d'agitation, la dicyclohexylurée est éliminée par simple filtration, après avoir basifié le mélange réactionnel avec NH 4 OH ( 10 %) à p H 9 Le résidu obtenu, dissous dans 2 ml de DMF, est de nouveau filtré pour éliminer les sels inorganiques Le produit précipite par action de l'acétate d'éthyle. CH 2 Rendement: R 1 =CH 2 =CH-CH 2: 63 %; R 1 =CH 2-CH |:50 % CH 2 Description du composé IR (K Br): (O 503) 1250 cm-1; (C=O, 14 acétate) 1730 cm-1. RMN (DMSO-d): 2,2 ppm (s, 14 acétate méthyl H); 4,5 ppm (d, H 9); 5 ppm (s, H 5) 6,8 ppm (d, HI); 7,4 ppm (d, H 2). Le passage au dérivé 3-monosulfaté, se fait par traitement de ( 0,0967 mmol) du composé 3-sulfate 14-acétate par une solution diluée de NH 4 OH ( 20 ml, p H 9) L'hydrolyse est maintenue pendant 2 heures à température ambiante sous agitation constante Après évaporation, le monosulfate dissous dans I ml de DMF, précipite en presence de l'acétate d'éthyle. CH 2 /c M Rendement: R 1 =CH 2 =CH-CH 2: 65 %; R 2 =CH 2-CH:75 %. CH 2 Description du composé final IR (K Br): (O 503) 1250 cm-1; Q (C=O) 1720 cm-1, RMN (DMSO-d): 4,9 ppm (s, H 5); 6,7 ppm (d, HI) 7,3 ppm (d, H 2) EXEMPLE 3 Préparation des monophosphates monosodiques de la naloxone et de la naltrexone A -10 C sous agitation on ajoute goutte à goutte à un mélange de I eq de naloxone (ou naltrexone) dissous dans du dichlorométhane et 5 eq de la triéthylamine, 3 eq de (CH 30)2 P(O)CL (dilués 20 fois dans le benzène) A la fin de l'addition on laisse le mélange revenir à température ambiante et reposer 48 heures Après concentration à sec, on reprend le résidus dans du dichlorométhane Ensuite on réalise un lavage avec du bicarbonate à 5 % puis rapidement avec de l'eau, pour obtenir le dérivé phosphate diméthylé avec des rendements de: CH R 1 = CH 2 =CH-CH 2; 83 %; RI = CH 2-CH; 85 % CH 2 La déméthylation se réalise au moyen d'un excès d'iodure de sodium ( 5 eq) dans l'acétone, et conduit au monophosphate monosodique. CH fi H 2 Rendement: R 1 = CH 2 =CH-CH 2; 95 %; R 1 = CH 2-C; 96 % CH 2 Description IR (K Br): (C=O) 1720 cm-I; ' (P=O) 1240 cm-1; (P-O-C) 1150 à 1100 cm-l. RMN (DMSO-d): 3,6 ppm (d, OCH 3); 4,75 ppm (s, H 5) 6,75 ppm (d,HI); 7,4 ppm (d, H 2). EXEMPLE 4 Préparation des dérivés monophosphatés disodiques de la naloxone et de la naltrexone 1) Phosphorylation par le 2-cyanoéthyl-N,N-diisopropylchlorophospho- ramidite I Le traitement de naloxone ( 0,5502 mmol) par le 2-cyanoéthyl N,N-diisopropylchlorophosphoramidite ( 0,7152 mmol) au sein du dichloro- méthane en présence de N-éthyl N,N-diisopropylamine ( 1,0729 mmol), conduit au monoester correspondant avec un rendement de 99 % La réaction se fait sous argon à température ambiante pendant 1 heure. Ensuite par action du cyano-2-éthanol ( 0,5546 mmol) et du tétrazole ( 0, 6536 mmol) pendant I heure, puis oxydation par de l'hydroperoxyde de tert butyle ( 0,2 ml) pendant 1 h 20 on obtient le dérivé phosphaté dont les groupements protecteurs cyanoéthyles sont éliminés par l'ammoniac dans du méthanol On transforme ensuite ce dérivé en phosphate disodique par passage sur résine échangeuse d'ions Rendement: 55 %. 2) Phosphorylation par le tétrabenzyle pyrophosphate (TBPP) A une solution à O C de naloxone (ou naltrexone) ( 0,1466 mmol) en presence de diisopropylamidure de lithium ( 0,4398 mmol) dans le tétrahydrofurane, on ajoute à -78 C, sous argon, ( 0,322 mmol) du TBPP Le mélange est maintenu 1 heure à -78 C, puis ramené à O C On ajoute une solution de bicarbonate saturée durant 1 heure Après extraction au dichlorométhane, le produit isolé est purifié sur colonne de silice (éluant Me OH-CH 2 CL 2: 5/95). CH 2 Rendement: R 1 = CH 2 =CH-CH 2; 84 %; R 1 = CH 2-CH/; 80 % CH 2 Déprotection Dans le cas de la naltrexone dibenzylphosphate, on pratique une hydrogénolyse, H 2/Pd dans Me OH, suivie d'une chromatographie sur résine échangeuse d'ions. Rendement: 74 %. En raisons de la double liaison allylique présente dans la naloxone, la débenzylation se fait par du bromure de triméthylsilyle, suivie d'une chromatographie sur séphadex A-25 DEAE, sur une résine échangeuse d'ions. Rendement: 68 %. Description: IR (K Br):)(C=O) 1720 cm-1; (P=O) 1240 cm-I RMN (DMSO-d): 4,9 ppm (s, H 5) ; 6,7 ppm (d, HI); 7,5 ppm (d, H 2). Les comportements biologiques de certains composés chimi- ques ont été ensuite étudiés. EXEMPLE 5: Préparation des triphosphates de la naloxone et de la naltrexone Le 3monophosphate de naloxone (ou naltrexone) ( 0,23752 mmol) est converti en sel de pyridinium par passage sur une colonne échangeuse d'ions DOWEX 50 X 8 (forme pyridinium) Le traitement de la solution aqueuse ainsi obtenue par la tributylamine ( 0,47504 mmol), suivi de plusieurs co-évaporations à l'aide de la pyridine sèche et de la diméthylformamide, aboutit au sel de bis-tributylammonium du monophos- phate correspondant. Ce sel est ensuite dissous dans la diméthylformamide, dans laquelle on ajoute ( 1,1876 mmol) du l,l'-carbonyl-diimidazole (CDI) Le mélange réactionnel est maintenu à température ambiante, sous argon, pendant toute une nuit Après élimination de l'excès de CDI par addition du méthanol, on obtient l'ester activé. Le pyrophosphate tétrasodium décahydraté est transformé en sel de tétrabutylammonium correspondant sous forme de gomme suivant le protocole identique décrit précédemment Ce dernier, dissous dans la DMF, est additionné à l'ester activé de départ La réaction est gardée pendant 45 heures, à température ambiante sous argon Après évaporation, le produit est purifié par chromatographie échangeuse d'ions D E A E -Trisacryl, M(CH 3 COO-) éluée avec un gradient continu ( 0-0,5 M d'une solution aqueuse d'acétate d'ammonium) La fraction ainsi obtenue correspondant au produit pur est lyophilisée Rendement: 50 %. Toutes les étapes de cette synthèse ont été contrôlées par chromatographie sur couche mince de silice (éluant: alcool isopropylique/ solution NH 40 H 27 06/eau: 6/3/1). Description du composé IR (K Br))(C=O) 1725 cm-I;)(P=O) 1240 cm-I. UV (H 20, 280 nm, log (E)= 3,13 l/mol cm). RMN (D 20) 5 ppm (s, H 5); 6,6 à 6,7 ppm (m, HI) 7,11 à 7,28 ppm (m, H 2). EXEMPLE 6: Dans un premier temps, on a apprécié les rendements d'internalisation de 5 composés selon l'invention, dérivés de la naloxone ou de la naltrexone Les résultats sont présentés dans le tableau I. Tableau 1; Résultats d'enca Dsulation des orodroques étudiées dans 1 es qlobules rouqes. Rdt Rdt Rdt Rdt i Encap Hte Hb Glob Nal 3 MP 60 % 73 % 84 % 86 % (O Me,O Na) i 1 O Nalt 3 MP 62 % 71 % 81 % 86 % (O Me,O Na) Nal 3 MP 56 % 83 % 86 % 75 % i r ( 2 Na) i Nalt 3 MP 72 % 75 % 71 % 88 % i ( 2 Na) Nal 3; 14 71 % 83 % 82 % 89 % disulfate Nalt 3; 14 51 % 74 % 71 % 88 % disulfate i Nal 3 TP 37 % 79 % 76 % 84 % i i i Nalt 3 TP 34 % 90 % 86 % 93 % i i i Nomenclatures _ Nal: naloxone Nalt: naltrexone 3.MP (O Me,O Na): 3 monophosphate (O Me,O Na) 3.MP ( 2 Na): 3 monophosphate ( 2 Na) 3.TP: 3 triphosphate Rdt encap: rendement d'encapsulation Rdt Hte rendement en hématocrite Rdt Hb: rendement en hémoglobine Rdt Glob: rendement globulaire EXEMPLE 7 Ces composés ont été également testés pour leur adsorption membranaire et stabilité érythrocitaire et plasmatique. Les résultats sont présentés dans le tableau II: Tableau II: Caractéristiaues des molécules étudiées i adsorotion membranaire et stabilité érvthrocytaire et olas- matiaue. i Adsorption Stabilité dans GR chargés: membranaire hémolysat sérum frais Incubation 24 hi à Hte 45 % 4 C 37 'C 4 'C 37 'C Fuite extra i cellulaire i i 4 'C 37 'Ci i Nal 3 MP 10 % + + + + 6 % 40 % (O Me,O Na) i Nalt 3 MP 10 % + + + + 5 % 40 % i (O Me,O Na) Nal 3 MP O % + + + + 1 % 12 % ( 2 Na) Nalt 3 MP 22 % + + + *a 1 % 12 % ( 2 Na) Nal 3; 14 34 % + + + + 5 % 50 % i disulfate i Nalt 3; 14 40 % + + + + 15 % 70 % i disulfate Nal 3 TP 22 % + + + *b 0 % O % i i Nalt 3 TP 22 % + + + *c O % O % i i +: stable. *: stabilité dans le sérum frais à 37 'C au boutde 24 h: on ne retrouve que 8 à 12 %, 78 % et 65 % de la quantité de départ dans le serum respectivement pour (a), (b) et (c). EXEMPLE 7 Criblage in vitro de dérivés de la naloxone et la naltrexone en tant que ligands opioldes de type li ou k. Animaux Les animaux utilisés sont des lapins néo-zélandais d'environ 1500 g et des cobayes tricolores d'environ 300 g. Fraction membranaire brute La préparation utilisée est une fraction membranaire brute obtenue à partir de tissu frais (cervelet de lapin, cervelet de cobaye) par une méthode standard d'homogénéisation et de centrifugation différen- tielle La suspension finale est en tampon tris-HC 1 ( 50 m M, p H 7,4) et contient environ 5 mg de protéine par mi. Radioligand l 15,16 (n)-3 Hl diprenorphine à 25-30 CI/mmol (Amersham International plc, Amersham, Angleterre). Expériences de compétition Radioligand ( 0,3 pmol) de l 3 Hl diprenorphine et fraction membranaire brute ( 0,25 mg de protéine) sont incubés pendant 1 heure à C dans un volume final de 1,0 ml en tampon Tris-H Cl ( 50 m M, p H 7,4) (i) en absence de toute drogue compétitrice, (ii) en présence de 12 concentrations croissantes de la nouvelle drogue et, (iii) en présence de 10 pmol/l de diprenorphine non radioactive. Le contenu de chaque tube est ensuite rapidement filtré (sous vide) sur disques de fibre de verre (Whatman GF/B) disposés sur un jeu de rampes de filtration Millipore modèle 1225 Les filtres sont rincés avec 2 x 3 ml de tampon froid (O-2 C) puis séchés sous une lampe IR pendant 15 minutes La radioactivité de chaque filtre, dans 3 ml de cocktail Ready-sol MB (Beckman) est comptée avec un compteur à scintillation liquide Kontron modèle MR 300. Analyse des données A partir des paramètres mesurés, il est ensuite calculé les différentes constantes Kx pour les sites considérés. Dans le tableau III figurent les paramètres caractéristiques de l'inhibition par la naloxone, la naltrexone et par leurs dérivés -3phosphate, -3-phosphate (O Me), -3-triphosphate, -3-sulfate et -3,14disulfate de la liaison à l'équilibre de la ( 3 H) diprenorphine ( 0,3 nmol/l) dans une fraction membranaire brute de cervelet de lapin (sites opioides de type p) et dans une fraction membranaire brute de cervelet de cobaye (sites opioides de type k). Ces valeurs ont été calculées à partir des valeurs mesurées des concentrations CI 50 de drogue inhibant de 50 % la liaison à l'équilibre de ( 3 H) diprenorphine utilisée à la concentration fixe de 0,3 n M. La valeur de K est d'autant plus faible que l'affinité du composé chimique pour le site de fixation est grande. On peut ainsi noter que les dérivés 3-phosphates ont conservé une excellente affinité apparente pour les sites opioldes p et k La naloxone 3-phosphate semble même avoir une activité légèrement plus élevée que la naloxone pour les deux types de sites opiordes. ci 0 D Tableau II: Propriétés pharmacologiques nrol/1 (code) # naloxone naloxone-3-phosphate naloxone-3-phosphate(O Me) naloxone-3-triphopshate naloxone-3-sulfate naloxone-3,14-disulfate (SLN) (SLP 3) (SLP 1) (SLP 5) (SL 53) (SLSI) 5.2 3.5 1,200 4,300 ,800 + O 9 0.3 13 D + 2 + 390 + 3,600 ( 2) ( 2) ( 2) ( 3) ( 4) ( 3) 1.3 0.9 ,2 1,070 ,200 18 + 3 4.8 + 1 2,500 O 370 106 + 15 28,500 + 4,700 > 100,000 ( 2) ( 3)' ( 3) ( 3) ( 4) ( 3) KIK 4.5 1.2 7,103 > 25,000 naticrexone naltrexone-3-phosphace naltrexona-3-phosphace(O Me) naltrexone-3-triphosphate naltrexone-3-sulfate naltrexone-3,14-disulfate (SLNT) (SLP 4) (SLP 2) (SLP 6) (SL 54) (SL 52) 1.2 22 5.2 1,540 7,850 0.2 0.4 1,300 ( 3) ( 5) ( 5) ( 3) ( 3) ( 3) 0.3 5.6 1.3 1,960 I 50: concentration inhibitrice 50 KI: constante de dissociation apparente du composé testé KI:constante de dissociation apparente du composé testé produit I 50 N 4.9 2,200 39,000 0.7 + 3 + 35 1.4 À 270 5,500 ( 2) ( 4) ( 4) ( 3) ( 3) ( 4) 1.2 7.5 3.8 9,700 t O (n Un 0 i 0 n Y-IP REVENDICATIONS 1 Dérivé destiné à l'encapsulation dans les érythrocytes d'un composé biologiquement actif hydrophobe caractérisé en ce qu'il est constitué dudit composé biologiquement actif couplé chimiquement à un groupement chimique à caractère hydrophile, par un élément de liaison qui est clivé par les enzymes lysosomiales et/ou plasmatiques mais qui est stable dans les érythrocytes. 2 Dérivé selon la revendication 1, caractérisé en ce que le groupement chimique à caractère hydrophile est une chaîne contenant un ou plusieurs sucres et/ou un ou plusieurs amino-acides. 3 Dérivé selon la revendication 1, caractérisé en ce que le groupement chimique à caractère hydrophile est un radical sulfate, phosphate ou polyphosphate. 4 Dérivé selon la revendication 1 ou 3, caractérisé en ce qu'il est représenté par la formule I N R 1 R RO O dans laquelle: R 1 représente un groupement un groupement CH 2-=CHCH 2 ou -CH 2 / 2 CH 2 CH -CH CH 2 OR 2 représente un groupement sulfate ou un groupement phosphate ou polyphosphate de formule II R P-O n (II) dans laquelle: R 4 est choisi parmi un alkoxy en C 1 3, OH et ses sels alcalins, X un cation alcalin et de préférence Na', n représente un entier de 1 à 3, et OR 3 représente OH ou un groupement sulfate à la conditions que si R 1 représente CH 2 =CH-CH 2, OR 2 et/ou OR 3 sont différents d'un groupe- ment sulfate. Dérivé selon la revendication 4, caractérisé en ce qu'il correspond à la formule I dans laquelle OR 3 représente un groupement OH, et OR 2 un groupement phosphate ou polyphosphate de formule II. 6 Dérivé selon la revendication 4 ou 5 caractérisés en ce qu'il présente en outre une affinité apparente satisfaisante pour les sites opioldes p et k. 7 A titre de prodrogue de la naloxone ou de la naltrexone un dérivé selon l'une des revendications 4 à 6. 8 Composition pharmaceutique caractérisée en ce qu'elle contient à titre de principe actif au moins un dérivé selon l'une des revendications 1 à 6. 9 Erythrocyte rescellé, caractérisé en ce qu'il contient au moins un dérivé selon l'une des revendications 1 à 6.