Brevet FR2660659A1 — publié le 19911011

POLYPEPTIDES AYANT UNE ACTIVITE DE RECEPTEUR DOPANINERGIQUE, ACIDES NUCLEIQUES CODANT POUR CE8 POLYPEPTIDES ET UTILISATION DE CE8 POLYPEPTIDES POUR LE CRIBLAGE DE 8UB8TANCE8 ACTIVES SUR CE8 POLYPEPTIDES. L'invention a pour objet des polypeptides ayant une activité de récepteur dopaminergique et les gènes codant pour ces polypeptides. L'invention est également relative - à des vecteurs contenant les genes codant pour des polypeptides ayant une activité de récepteur dopaminergique, - à des cellules transformées pour exprimer les gènes susdits sur lesquelles il est possible d'évaluer l'activité d'agents agonistes ou antagonistes desdits récepteurs, - à des sondes nucléotidiques suceptibles de s'hybrider avec les gènes codant pour les susdits polypeptides, lesquelles sondes seraient susceptibles d'être utilisées pour le diagnostic in vitro d'affections, notamment neurologiques, psychiatriques, cardiovasculaires ou neuroendocriniennes, - à des anticorps polyclonaux et monoclonaux dirigés contre les susdits polypeptides et utilisables dans un but analytique pour purifier lesdits polypeptides, de diagnostic in vitro, ou dans un but thérapeutique, notamment dans les affections impliquant les systèmes dopaminergiques, - à des trousses (ou kits) pour étudier le degré d'affinité de certaines susbtances pour les susdits polypeptides - à des médicaments destinés plus particulièrement au traitement des affections psychiatriques, neurologiques, cardiovasculaires ou neuroendocriniennes et contenant des substances actives sur les susdits polypeptides ayant une activité de récepteur dopaminergique, ou contenant des substances actives sur des cellules transfectées par les gènes ou fragments de gènes codant pour lesdits polypeptides à activité de récepteur dopaminergique, - à des médicaments actifs sur les récepteurs dopaminergiques déjà identifiés mais dont on voudrait diminuer certains effets secondaires attribuables à leur interaction avec lesdits polypeptides. Il était admis jusqu'alors que les divers effets de la dopamine résultaient de son interaction avec deux types de récepteurs communément désignés sous les noms de récepteurs D-l et D-2 (Kebabian et Calne, (1979)(1)). Parmi ceux-ci, seule la séquence du récepteur D-2 était connue (Bunzow et al., (1988)(2)) et deux isoformes du récepteur D-2 (parfois désignées D-2A et D-2B ou encore D-2(415) et D-2(444) résultant de l'épissage alternatif de 1'ARN messager du gène dudit récepteur avaient été décrites (Giros et al., (1989)(3) ; Dal Toso et al., (1989)(4)). Le récepteur D-2 appartient à la famille des récepteurs comportant sept domaines transmembranaires, couplés à une protéine G et présentant un certain degré d'homologie avec les récepteurs de la famille des rhodopsines qui sont exprimés par les photorécepteurs de la rétine. L'existence de récepteurs dopaminergiques distincts des récepteurs D-l et D-2 avait été suspectée par divers auteurs sur des observations indirectes (voir notamment Schwartz et al., (1984)(5)) mais n'avait jamais été prouvée car lesdits récepteurs n'avaient jamais été isolés, ni identifiés quant à leur structure, ni entièrement définis par leurs propriétés pharmacologiques. En particulier, l'existence d'autorécepteurs régulant la synthèse et/ou la libération de dopamine et/ou encore l'activité des neurones dopaminergiques avait été démontrée mais il était couramment admis qu'ils étaient identiques aux récepteurs D-2 en ce qui concerne leur pharmacologie. L'invention a pour objet de donner accès à de nouveaux polypeptides ayant une activité de récepteur dopaminergique, ne s'apparentant ni à celle des récepteurs dopaminergiques D-l, ni à celle des récepteurs dopaminergiques D-2. L'invention a également pour objet des procédés de criblage de nouveaux médicaments agissant sur les nouveaux polypeptides ayant une action de récepteur dopaminergique ou dont on voudrait au contraire éviter l'interaction avec les nouveaux polypeptides, et destinés, entre autres, au traitement des troubles psychiatriques, neurologiques, cardiovasculaires ou neuroendocriniens. En particulier, le nouveau polypeptide de l'invention ayant une activité de récepteur dopaminergique - contient la séquence de 446 acides aminés de la Figure 1 ou un fragment de cette séquence, ce fragment étant tel que * soit il contient néanmoins les sites contenus dans cette séquence et dont la présence est nécessaire pour que, lorsque ce fragment est présent dans une membrane, il soit capable de lier la dopamine à ses agonistes ou antagonistes de manière spécifique et mesurable, par exemple au moyen d'un ligand radioactif selon la technique décrite dans Sokoloff et al. (1980)(6) et dans Martres et al. (1985) (7). * soit il est susceptible d'être reconnu par des anticorps qui reconnaissent également la susdite séquence de 446 acides aminés, mais ne reconnaissent ni le récepteur dopaminergique D-1, ni le récepteur dopaminergique D-2 * soit il est susceptible de générer des anticorps qui reconnaissent la susdite séquence de 446 acides aminés mais ne reconnaissent ni le récepteur dopaminergique D-l, ni le récepteur dopaminergique D-2. La reconnaissance de la susdite séquence de 446 acides aminés par les susdits anticorps - ou du susdit fragment par les susdits anticorps - signifie que la susdite séquence forme un complexe avec l'un des susdits anticorps. La formation du complexe antigene (c'est-à-dire séquence de 446 acides aminés ou susdit fragment)anticorps et la détection de l'existence d'un complexe formé peuvent se faire par des techniques classiques (telles que celles utilisant un traceur marqué par des isotopes radioactifs ou une enzyme). Pour ce qui est de la définition des "fragments contenant les sites" et répondant à la susdite définition, on se reportera ci-après dans la description. Parmi les fragments ci-dessus définis, on préfere le ou les fragments produits par épissage alternatif de l'ÂRN messager produit par le gène codant pour la séquence de 446 acides aminés définie ci-dessus. L'invention concerne également des protéines chimeres dans lesquelles le polypeptide tel que défini plus haut ou des parties de celui-ci sont réunis à un enchaînement d'acides aminés hétérologue par rapport à ce polypeptide. Les polypeptides et protéines chimères de l'invention peuvent être glycosylés et peuvent comporter ou non des ponts disulfure. Dans la suite de la description, les polypeptides de l'invention seront, pour simplifier, désignés par "récepteurs D-3". Un récepteur D-3 avantageux de l'invention est constitué par l'enchaînement des acides aminés 1 à 446, représentés sur la Figure 1. Ce récepteur D-3 est considéré comme comportant sept régions transmembranaires hydrophobes séparées par des boucles hydrophiles intra et extracellulaires. L'invention concerne également les polypeptides variants qui correspondent aux polypeptides susdéfinis comportant certaines mutations localisées, sans que les polypeptides ne perdent les propriétés de récepteur D-3 dopaminergique. Parmi ces variants, on peut mentionner ceux qui sont reconnus par des anticorps reconnaissant les régions transmembranaires, ainsi que ceux qui sont reconnus par des anticorps reconnaissant les régions autres que les régions transmembranaires. L'invention concerne également des acides nucléiques qui comprennent ou qui sont constitués par un enchaînement de nucléotides codant pour l'un quelconque des récepteurs D-3 précédemment définis. Plus particulièrement, l'invention concerne l'acide nucléique qui comprend l'enchaînement de nucléotides représenté sur la Figure 2, s'étendant de l'extrémité constituée par le nucléotide en position 1 à celle constituée par le nucléotide en position 1863. L'invention concerne particulièrement l'acide nucléique représenté sur la Figure 2 comprenant ou étant constitué par l'enchaînement s'étendant de l'extrémité constituée par le nucléotide en position 442 à celle constituée par le nucléotide en position 1779. L'acide nucléique sus-défini correspond à la partie codante du gène correspondant au polypeptide représenté sur la Figure 1. Font également partie de l'invention les acides nucléiques variants par rapport à ceux sus-définis et qui comportent certaines mutations localisées dans la mesure ou ces acides nucléiques variants s'hybrident avec les acides nucléiques précédemment définis ou avec les sondes nucléiques définies ci-après dans les conditions d'hybridation définies ci-après dans la description. Les acides nucléiques de l'invention peuvent être préparés soit par un procédé chimique, soit par d'autres procédés. Un mode de préparation approprié des acides nucléiques (comportant au maximum 200 nucléotides - ou pb, lorsqu'il s'agit d'acides nucléiques bicaténaires) de l'invention par voie chimique comprend les étapes suivantes - la synthèse d'ADN en utilisant la méthode automatisée de p-cyanéthyl phosphoramidite décrite dans Bioorganic Chemistry 4; 274-325, 1986, - le clonage des ADN ainsi obtenus dans un vecteur plasmidien approprié et la récupération des ADN par hybridation avec une sonde appropriée. Un mode de préparation, par voie chimique, d'acides nucléiques de longueur supérieure à 200 nucléotides - ou pb (lorsqu'il s'agit d'acides nucléiques bicaténaires) comprend les étapes suivantes: - l'assemblage d'oligonucléotides synthétisés chimiquement, pourvus à leurs extrémités de sites de restriction différents, dont les séquences sont compatibles avec l'enchaînement en acides aminés du polypeptide naturel selon le principe décrit dans Proc. Nat. Acad. Sci. USA 80; 7461-7465, 1983, - le clonage des ADN ainsi obtenus dans un vecteur plasmidien approprié et la récupération de l'acide nucléique recherché par hybridation avec une sonde appropriée. Un autre procédé de préparation des acides nucléiques de l'invention à partir d'ARNm comprend les étapes suivantes - préparation d'ARN cellulaire à partir de tout tissu exprimant le récepteur dopaminergique D-3 selon les techniques décrites par Maniatis et al. (1982) (8), et Ausubel F.M. et al. (1989)(9), - récupération et purification des ARNm par passage des ARN cellulaires totaux par chromatographie avec un oligodT immobilisé, - synthèse d'un brin d'ADNc à partir des ARNm purifiés d'après la technique décrite dans Gene 25:263, 1983, - clonage des acides nucléiques ainsi obtenus dans un vecteur plasmidien approprié et récupération de la séquence nucléotidique recherchée en utilisant une sonde d'hybridation appropriée. Pour préparer les acides nucléiques de l'invention, les sondes d'hybridation oligonucléotidiques synthétisées chimiquement sont les suivantes celle définie par la séquence d'acides nucléiques représentée sur la Figure 2, s'étendant de l'extrémité constituée par le nucléotide en position 1, à celle constituée par le nucléotide en position 441, celle définie par la séquence d'acides nucléiques représentée sur la Figure 2, s'étendant de l'extrémité constituée par le nucléotide en position 442, à celle constituée par le nucléotide en position 537, celle définie par la séquence d'acides nucléiques représentée sur la Figure 2, s'étendant de l'extrémité constituée par le nucléotide en position 718, à celle constituée par le nucléotide en position 753, celle - celle définie par la séquence d'acides nucléiques représentée sur la Figure 2, s'étendant de l'extrémité constituée par le nucléotide en position 820, à celle constituée par le nucléotide en position 888, celle - celle définie par la séquence d'acides nucléiques représentée sur la Figure 2, s'étendant de l'extrémité constituée par le nucléotide en position 958, & celle constituée par le nucléotide en position 996, celle - celle définie par la séquence d'acides nucléiques représentée sur la Figure 2, s'étendant de l'extrémité constituée par le nucléotide en position 1068, à celle constituée par le nucléotide en position 1240, celle - celle définie par la séquence d'acides nucléiques représentée sur la Figure 2, s'étendant de l'extrémité constituée par le nucléotide en position 1068, à celle constituée par le nucléotide en position 1566, ou leur séquence nucléotidique complémentaire; ce sont des séquences qui ont été dérivées de celles de la Figure 2 et elles peuvent être utilisées dans les conditions d'hybridation décrites par Maniatis et al. (1982)(8). La synthèse du brin d'ADNc et son amplification subséquente in vitro peut également être effectuée en utilisant la méthode PCR (Polymerase Chain Reaction), comme décrit par exemple par Goblet et al. (1989) (10), en utilisant deux amplimeres chimiquement synthétisés définis à partir de la séquence de la Figure 2. Des amplimères appropriés sont par exemple : celui défini sur la Figure 2 du nucléotide 410 au nucléotide 433 et celui défini sur la Figure 2 du nucléotide 1800 au nucléotide 1825. Le fragment d'acides nucléiques amplifié peut être ensuite cloné selon les techniques décrites dans Ausubel F.M. et al. (1989)(11). L'invention concerne également les vecteurs recombinants, en particulier pour le clonage et/ou l'expression, notamment du type plasmide, cosmide, phage, ou virus, contenant un acide nucléique de l'invention en l'un de ses sites non essentiels pour sa réplication. Un vecteur approprié de l'invention, contient en l'un de ses sites non essentiels pour sa réplication des éléments nécessaires pour promouvoir l'expression d'un polypeptide selon l'invention, dans un hôte cellulaire et eventuellement un promoteur reconnu par les polymerases de l'hôte cellulaire, en particulier un promoteur inductible et éventuellement une séquence signal et une séquence d'ancrage. L'invention concerne également un hôte cellulaire transformé par un vecteur recombinant défini précédemment comprenant les éléments de régulation permettant l'expression de la séquence nucléotidique codant pour l'un des polypeptides selon l'invention dans cet hôte. Par hôte cellulaire on entend tout organisme susceptible d'être maintenu en culture. L'un des microorganismes utilisés peut être constitué par une bactérie, notamment Escherichia Coli. Un organisme de choix est constitué par un organisme eucaryote tel que des cellules CHO (Chinese Hamster Ovary) ou COS-7 (fibroblaste de rein de singe vert africain transformé par le virus SV-40). Mais d'autres organismes peuvent être utilisés tout aussi aisément, naturellement sous réserve que l'on dispose pour chacun d'entre eux des vecteurs, notamment plasmidiques, susceptibles de s'y répliquer et des sequences de nucléotides insérables dans ces vecteurs et capables, lorsqu'elles sont suivies dans ces vecteurs par un insérat codant pour un polypeptide de l'invention, d'assurer l'expression de cet insérat dans les organismes choisis et leur transport dans les membranes de ces hôtes cellulaires. L' invention concerne également les anticorps dirigés de façon spécifique contre l'un des polypeptides de l'invention, ces anticorps étant tels qu'ils ne reconnaissent ni le récepteur dopaminergique D-l, ni le récepteur dopaminergique D-2. En particulier, ces anticorps reconnaissent les séquences d'acides aminés suivantes - celle définie par la séquence d'acides aminés représentée sur la Figure 1 s'étendant de l'extrémité constituée par l'acide aminé en position 1 à celle constituée par l'acide aminé en position 38, - celle définie par la séquence d'acides aminés représentée sur la Figure 1 s'étendant de l'extrémité constituée par l'acide aminé en position 135 à celle constituée par l'acide aminé en position 147, - celle définie par la séquence d'acides aminés représentée sur la Figure 1 s'étendant de l'extrémité constituee par l'acide aminé en position 175 à celle constituée par l'acide aminé en position 187, - celle définie par la séquence d'acides aminés représentée sur la Figure 1 s'étendant de l'extrémité constituée par l'acide aminé en position 210 à celle constituée par l'acide aminé en position 375. Pour obtenir les anticorps, on peut injecter chez l'animal l'un de susdits polypeptides. On prépare des anticorps monoclonaux par fusion cellulaire entre des cellules de myélome et des cellules spleniques de souris immunisées, selon les procedés classiques. Les anticorps de l'invention peuvent être utilisés pour le diagnostic in vitro du caractère tumoral ou non de certaines cellules ainsi que du caractère bénin ou malin de certaines tumeurs, dans la mesure où ces éléments sont corrélés à l'expression pathologique du récepteur D-3. On a pu constater en effet, que dans certaines tumeurs, notamment tumeurs du poumon, il est possible de détecter l'expression de récepteurs dopaminergiques qui ne devraient pas être normalement présents (Sokoloff et al. (1989)(12)). Ce procédé de diagnostic in vitro à partir du prélèvement biologique susceptible de contenir le récepteur dopaminergique D-3 comprend - la mise en contact d'un anticorps de l'invention avec le susdit prélèvement biologique dans des conditions permettant la production éventuelle d'un complexe immunologique formé entre le récepteur dopaminergique D-3 ou produit qui en a dérivé et l'anticorps de l'invention, - la détection du susdit complexe immunologique formé. L'invention concerne également les sondes nucléotidiques synthétiques ou non, s'hybridant avec l'un des acides nucléiques définis ci-dessus ou leurs séquences complémentaires ou leur ARN correspondant, ces sondes étant telles qu'elles s'hybrident ni avec le gène ni avec les ARN messagers des récepteurs D-1 et D-2 dopaminergiques. Les sondes de l'invention comportent au minimum 10, avantageusement 15 acides nucléiques et peuvent comporter au maximum la totalité de la séquence nucléotidique représentée sur la Figure 2. Pour les sondes les plus courtes, c'est-à-dire d'environ 10 à environ 100 nucléotides, des conditions d'hybridation appropriées sont les suivantes: 900 mN de NaCl, 90 mM de tri-sodium citrate pH 7,0, 100 yg/ml d'ADN de sperme de saumon, 0,05% de pyrophosphate de sodium, 10 à 25% de formamide déionisée, 0,02% de Ficoll (Pm de 400.000), 0,02% d'albumine de sérum bovine, 0,02% de polyvinylpyrrolidone, pendant 14 à 16 heures à 42"C. Pour les sondes les plus longues, c'est-à-dire présentant plus d'environ 100 nucléotides, des conditions d'hybridation appropriées sont les suivantes 600 mM de NaCl, 60 mM de tri-sodium citrate, 20 pg/ml d'ADN de sperme de saumon, 20 pg/ml d'ARNt de levure, 8 mM de Tris-HCl pH 7,4, 40 à 60% de formamide déionisée, 0,02% de Ficoll, 0,02% d'albumine de sérum bovine, 0,02% de polyvinylpyrrolidone, 0,2% de sodium dodécyl sulfate, 10% de sulfate de dextrane. L'invention concerne en particulier les sondes nucléotidiques définies précédemment. Les sondes de l'invention peuvent être utilisées comme outils de diagnostic notamment in vitro d'affections neurologiques, psychiatriques et cardiovasculaires. Les sondes de l'invention peuvent également servir à détailler l'épissage alternatif de l'ARN messager produit par le gène codant pour la séquence de 446 acides aminés définie ci-dessus, l'existence ou non de cet epissage pouvant être liée à des pathologies neurologiques, psychiatriques, cardiovasculaires ou neuroendocriniennes. Plus particulièrement, les sondes de l'invention peuvent être utilisées pour détecter les anomalies génétiques, notamment polymorphismes ou mutations ponctuelles. En ce qui concerne la détection des polymorphismes du gène codant pour le récepteur dopaminergique D-3 chez un individu, elle peut être réalisée à partir d'un échantillon biologique tel que le sang, prélevé chez l'individu selon un procéde comprenant les étapes suivantes - le traitement de l'acide nucléique issu de l'échantillon biologique sus-mentionné réalisé à l'aide d'une enzyme de restriction dans des conditions permettant l'obtention de fragments de restriction issus du clivage dudit acide nucléique au niveau de ces sites de restriction reconnus par ladite enzyme, - la mise en contact d'une sonde nucléotidique de l'invention, susceptible de s'hybrider avec les fragments sus-mentionnés dans des conditions permettant la production éventuelle de complexes d'hybridation entre ladite sonde et les fragments de restriction sus-mentionnés, - la détection des susdits complexes d'hybridation, - la mesure de taille des éventuels fragments de restriction polymorphes engagés dans les complexes d'hybridation sus-mentionnes. En ce qui concerne la méthode de diagnostic in vitro de détection des mutations ponctuelles de l'acide nucléique ou d'un fragment de l'acide nucléique codant pour le récepteur dopaminergique D-3 chez un individu, elle peut être effectuée selon le procédé comprenant les étapes suivantes - la mise en contact d'une sonde nucléotidique de 1'invention avec un prélèvement biologique, par exemple du sang, dans des conditions permettant le production eventuelle d'un complexe d'hybridation forme entre la sonde et l'acice nucléique ou un fragment d'acide nucléique sus-mentionne, - la détection du susdit complexe d'hybridation, - le séquençage de l'acide nucléique ou du fragment d'acide nucléique intervenant dans le susdit complexe d'hybridation, - la comparaison de la séquence de l'acide nucléique ou du fragment d'acide nucléique intervenant dans le susdit complexe d'hybridation avec la séquence de l'acide nucléique (ne présentant pas de mutation) ou du fragment de l'acide nucléique (ne présentant pas de mutation) du récepteur dopaminergique D-3. En ce qui concerne la detection de l'épissage alternatif de l'ARN messager produit par le gène codant pour le récepteur D-3, elle peut se faire par quantification de l'ARN messager contenu dans un échantillon de tissu, en utilisant l'une des sondes de l'invention. Les sondes de l'invention peuvent également être utilisées pour detecter l'expression pathologique du récepteur dopaminergique D-3, cette expression étant révélée par la présence d'ARN messager du récepteur dopaminergique D-3 dans des cellules ou il ne devrait pas être présent. Cette détection in vitro peut être effectuée à partir d'un échantillon biologique prelevé chez un individu, tel que le sang, selon un procédé qui comprend les etapes suivantes - l'amplification préalable possible des quantités de séquence nucleotidique susceptible d'être contenue dans un échantillon biologique prelevé sur un patient, au moyen d'une amorce d'ADN, - la mise en contact de l'échantillon biologique indiqué ci-dessus avec une sonde nucléotidique, dans des conditions permettant la production d'un complexe d'hybridation formé de ladite sonde et ladite séquence nucléotidique, - la détection du complexe d'hybridation ci-dessus qui a pu se former. Cette expression pathologique du récepteur dopaminergique D-3 peut se manifester dans le cas de certaines tumeurs, et peut aussi être corrélée au caractère malin ou bénin de certaines tumeurs. Les polypeptides de l'invention peuvent être préparés par culture dans un milieu approprié d'un hôte cellulaire préalablement transforme par un vecteur recombinant contenant l'un des acides nucléiques définis précédemment et par récupération à partir de la susdite culture du polypeptide produit par ledit hôte cellulaire transformé. Un autre procédé de préparation des polypeptides de l'invention est caractérisé en ce que, partant de préférence de l'amino acide C-terminal, l'on condense successivement deux à deux les aminoacyles successifs dans l'ordre requis, ou des aminoacyles et des fragments préalablement formes et contenant déjà plusieurs résidus aminoacyles dans l'ordre approprié, ou encore plusieurs fragments préalablement ainsi préparés, étant entendu que l'on aura eu soin de protéger au préalable toutes les fonctions réactives portées par ces aminoacyles ou fragments à l'exception des fonctions amines de l'un et carboxyles de l'autre ou vice versa, qui doivent normalement intervenir dans la formation des liaisons peptidiques, notamment après activation de la fonction carboxyle, selon les méthodes connues dans la synthèse des peptides et ainsi de suite, de proche en proche, jusqu'à l'acide aminé N-terminal. S'agissant de realiser l'expression des récepteurs dopaminergiques D-3 dans une bactérie, telle que E. coli ou dans une cellule eucaryote telle qu'une cellule CHO, on effectue les étapes suivantes - la transformation d'un hôte cellulaire compétent avec un vecteur, notamment un plasmide ou un phage, dans lequel a auparavant été insérée une séquence de nucléotides codant pour le récepteur D-3 (insérat), sous le contrôle d'éléments de régulation, notamment d'un promoteur reconnu par les polymérases de l'hôte cellulaire et permettant l'expression dans l'hôte cellulaire utilisé de ladite séquence de nucléotides, - la culture de l'hôte cellulaire transforme dans des conditions permettant l'expression dudit insérat, et le transport du recepteur D-3 exprimé vers la membrane de façon telle que les séquences transmembranaires du récepteur D-3 soient exposées à la surface de l'hôte cellulaire transforme. S'agissant de l'expression en cellules eucaryotes, les éléments de régulation peuvent comporter le promoteur endogène des récepteurs dopaminergiques ou des promoteurs viraux tels que ceux des virus SV40 ou du virus du sarcome de Rous (RSV). S'agissant de l'expression dans E. coli, les éléments de régulation peuvent comporter le promoteur de l'opéron lactose ou de l'opéron tryptophane. L'invention concerne également un procédé de détection de la capacité d'une molécule dopaminergique à se comporter comme ligand vis-à-vis d'un polypeptide de l'invention, lequel procéde comprend - la mise en contact de la molécule dopaminergique avec un hôte cellulaire préalablement transformé par un vecteur lui-même modifié par un insérat codant pour le susdit polypeptide, cet hôte portant à sa surface un ou plusieurs sites specifiques de ce polypeptide, le cas échéant après induction de l'expression de cet insérat, cette mise en contact étant effectuée dans des conditions permettant la formation d'une liaison entre l'un au moins de ces sites spécifiques et ladite molécule dès lors qu'elle s'avèrerait effectivement posséder une affinité pour ce polypeptide, - la détection de la formation éventuelle d'un complexe du type ligand-polypeptide. L'invention concerne également un procéde pour l'étude de l'affinité d'un polypeptide de l'invention pour un ou plusieurs ligands déterminés, lequel procédé comprend - la transformation d'un hôte cellulaire compétent avec un vecteur, notamment un plasmide ou un phage, dans lequel avait auparavant été insérée une séquence de nucléotides codant pour le récepteur D-3 (insérat), sous le contrôle d'éléments de régulation, notamment d'un promoteur reconnu par les polymérases de l'hôte cellulaire et permettant l'expression dans l'hôte cellulaire utilisé de ladite séquence de nucléotides, - la culture de l'hôte cellulaire transforme dans des conditions permettant l'expression dudit insérat, et le transport du récepteur D-3 exprimé vers la membrane de façon telle que les séquences transmembranaires du récepteur D-3 soient exposées à la surface de l'hôte cellulaire transforme, - la mise en contact de cet hôte cellulaire avec ces ligands déterminés, - la détection d'une liaison spécifique entre ledit hôte cellulaire transformé et lesdits ligands determines. Le procédé decrit ci-dessus permet egalement l'identification des "fragments contenant les sites" dont question précédemment et qui ne comportent qu'une partie de la séquence de 446 acides aminés de la Figure 1. Cette identification consiste à utiliser des insérats de taille plus réduite que l'acide nucléique codant pour la susdite séquence, à mettre en oeuvre les étapes relatives à l'expression, au transport du produit d'expression et à l'exposition rappelées cidessus. Lorsqu'on obtient l'expression, le transport du produit d'expression et son exposition sur la membrane, ainsi que la réaction avec les ligands telle que précédemment définie, on peut déterminer ainsi les fragments contenant les sites essentiels. Par conséquent, l'absence de réaction avec les ligands, telle que précédemment définie, en utilisant des fragments de taille plus réduite que la séquence complète, tendrait à montrer qu'on a éliminé certains sites essentiels. L'invention concerne également une trousse pour la détection de l'affinité éventuelle d'un ligand pour un polypeptide de l'invention, laquelle trousse comprend: - une culture d'hôtes cellulaires transformes par un vecteur modifié tel que défini précédemment ou une culture d'hôtes cellulaires définis précédemment, ou une préparation de membranes desdits hôtes, - des moyens physiques ou chimiques pour induire l'expression de la séquence nucléotidiques contenue dans le vecteur modifie lorsque le promoteur placé en amont de cette séquence est un promoteur inductible par lesdits moyens physiques ou chimiques, et obtenir une protéine, - un ou plusieurs ligands temoins ayant des affinités déterminées pour le susdit polypeptide, - des moyens physiques ou chimiques pour la caractérisation de l'activité biologique de la proteine exprimée. L'invention concerne également un procédé de criblage de médicaments destinés au traitement d'affections neurologiques (telles que la maladie de Parkinson), psychiatriques (telles que les états psychotiques), cardiovasculaires (telles que l'hypertension artérielle) ou neuroendocriniennes (telles que les disfonctionnements de l'axe hypothalamo-hypophysaire). L'invention concerne également des medicaments contenant, comme substance active, une substance active sur l'un au moins des polypeptides selon l'invention, ayant une activité de récepteur dopaminergique ou contenant comme substance active des substances actives sur des cellules transfectées par les gènes ou les fragments de gènes codant l'un au moins des polypeptides à activite de récepteur dopaminergique selon l'invention, en association avec un véhicule pharmaceutiquement acceptable. L'invention concerne également des médicaments contenant, comme substance active, une substance active sur les récepteurs dopaminergiques D-l ou D-2, mais inactive sur les polypeptides à activité de récepteur dopaminergique selon l'invention. D'autres caractéristiques et avantages de l'invention apparaissent dans la suite de la description et des exemples, notamment en rapport avec les dessins et tableaux dans lesquels - La Figure 1 représente les séquences d'acides aminés du récepteur dopaminergique D-2 (deuxième ligne) de rat, alignée avec celle du récepteur dopaminergique D-3 de rat (première ligne). Dans les sequences du récepteur dopaminergique D-2, les résidus d'amino acides identiques et en position analogue à ceux du recepteur dopaminergique D-3 sont marqués par des doubles traits (=). Pour mettre en évidence les homologies, on a effectué des délétions dans les deux séquences, et ces délétions sont représentées par les espaces pointillés Dans la région N-terminale extra-cellulaire du récepteur D-3, les sequences consensus pour les sites de glycosylation liés à l'asparagine (NXS/T) sont en positions 12 et 19. La Figure 2 représentée la séquence d'acides nucléiques du récepteur dopaminergique D-3 chez le rat, et la séquence d'acides aminés correspondante. La Figure 3 représentée des analyses de Northern Blot d'ARN de tissus cérébraux de rat. Dans la Figure 3, les références 1 à 10 correspondent respectivement a 1 : hypothalamus, 2 : medulla-pont, 3 : bulbe olfactif, 4 : tubercules olfactifs, 5 : striatum, 6 : substance noire, 7 : cortex, 8 : hippocampe, 9 : cervelet, 10 : hypophyse. EXEMPLE Détermination de la séquence du récepteur dopaminergique D-3 du rat -: Des oligonucleotides ont été synthétisés à partir de la séquence du récepteur dopaminergique D-2 (nucléotides 146-233, Bunzow et al. (1988)(2)), radiomarqués et utilisés pour cribler une banque d'ADNc de cerveau de rat (Giros et al. (1989)(3)). Parmi quatre millions de clones, un a été isolé comprenant une phase ouverte de lecture partielle qui présentait de fortes homologies avec le recepteur dopaminergique D-2, de la partie N-terminale jusqu'à la deuxième partie transmembranaire. L'ADN de ce clone a été radiomarqué et utilisé pour cribler une banque génomique de rat. Parmi un million de clones, trois clones identiques ont été isolés, différents des séquences du récepteur D-2 et du susdit clone, mais fortement homologues avec ceuxci. Pour obtenir la séquence codante entière, la technique de "Polymerase Chain Reaction" (PCR) a été utilisée sur de l'ARNm de cerveau de rat avec une amorce dégénérée contenu dans la septième partie transmembranaire du récepteur dopaminergique D-2 (GAC(AG)GCACTGTT(GC )AC(GA)TA(GC)AGCCA) et de manière séquentielle, trois amorces de la séquence nouvelle (nucléotides 442-467, 491-513 et 617-641 de la Figure 2). Un ADNc dont la séquence recouvre les nucléotides 641 à 1710 de la Figure 2 a ainsi été obtenu. Pour obtenir la fin de la partie codante, une banque génomique de rat a ensuite été criblee avec un fragment terminal de l'ADNc obtenu ci-dessus par PCR. Sur 450.000 clones, deux clones positifs se chevauchant partiellement ont été obtenus, dont la séquence a fourni la fin de la phase ouverte de lecture, jusqu'au codon stop TGA (nucleotides 1711 à 1782 de la Figure 2). Pour enfin obtenir la séquence complète du récepteur, des expériences de PCR à partir de l'ARNm de tubercules olfactifs de rat ont été à nouveau réalisées en utilisant comme amorces les nucléotides 410-432 en 5' et 1823-1800 en 3'. BIBLIOGRAPHIE 1. Kekabian J.W. et Calne D.B., "Multiple receptors for dopamine". Nature, 1979, 277: 93-96. 2. Bunzow J.R., Van Tol H.H.N., Grandy D.K., Albert P., Salon J., Christie Mc D., Machida C.A., Neve K.A. et Civelli O. "Cloning and expression of a D-2 dopamine receptor cDNA". Nature, 1988, 336: 783-787. 3. Giros B., Sokoloff P., Martres M.P., Riou J.F., Emorine L.J. et Schwartz J.C. "Alternative splicing directs the expression of two D-2 dopamine receptor isoforms". Nature, 1989, 342: 923-926. 4. Dal Toso R., Sommer B., Ewert M., Herb A., Pritchett D.B., Bach A., Shivers B.D. et Seeburg P.H. "The dopamine D-2 receptor : two molecular forms generated by alternative splicing". The EMBO Journal, 1989, 8: 4025-4034. 5. Schwartz J.C., Delandre M., Martres M.P., Sokoloff P., Protais P., Vasse M., Costentin J., Laibe P., Wermuth C.G., Gulat C. et Lafitte A. "Biochemical and behavioral identification of discriminant benzamide derivatives : new tools to differentiate subclasses of dopamine receptors". Catecholamines: neuropharmacology and central nervous system. Theoretical aspects. Alan R. Liss, Inc. N.Y. 1984, pp. 59-72. 6. Sokoloff P., Martres M.P. et Schwartz J.C. "Three classes of dopamine receptor (D-2, D-3, D-4) identified by binding studies with 3H-apomorphine and 3H-domperidone". Naunyn-Schmiedeberg's Arch. Pharmacol. 1980, 315: 89-102. 7. Martres M.P., Bouthenet M.L., Sales N., Sokoloff P. et Schwartz J.C. "Widespread distribution of brain dopamine receptors evidenced with 125I- iodosulpride, a highly selective ligand". Science, 1985, 228: 752-755. 8. Maniatis et al., "Molecular cloning", Cold Spring Harbor Laboratory, 1982. 9. Ausubel F.M., Brent R., Kingston R.E., Moore D.D., Smith J.A., Seidman J.G. et Struhl K. (1989) Current Protocols in Molecular Biology, chapître 4, Green Publishing Associates et Wiley Interscience, New York. 10. Goblet et al. Nucleic Acid Research, 17, 2144, 1989 "One step amplification of transcripts in total RNA using Polymerase Chain Reaction". 11. Ausubel F.M., Brent R., Kingston R.E., Moore D.D., Smith J.A., Seidman J.G. et Struhl K. (1989) Current Protocols in Molecular Biology, chapître 3, Green Publishing Associates et Wiley Interscience, New York. 12. Sokoloff P., Riou J.F., Martres M.P. et Schwartz J.C. "Presence of dopamine D-2 receptors in human tumoral cell lines". Biochem. Biophys. Res. Comm. 1989, 162: 575-582. REVENDICATIONS 1. Polypeptide ayant une activité de récepteur dopaminergique contenant la séquence de 446 acides aminés de la Figure 1, ou un fragment de cette séquence, ce fragment étant tel que * soit il contient néanmoins les sites contenus dans cette séquence et dont la présence est nécessaire pour que, lorsque ce fragment est exposé à la surface d'une cellule, il soit capable de lier la dopamine à ses agonistes ou antagonistes de manière spécifique et mesurable, par exemple au moyen d'un ligand radioactif selon la technique décrite dans Solokoff et al. (1980)(6) et Martres et al. (1985)(7), * soit il est susceptible d'être reconnu par des anticorps qui reconnaissent également la susdite séquence de 446 acides aminés, mais ne reconnaissent ni le récepteur dopaminergique D-l, ni le récepteur dopaminergique D-2, * soit il est susceptible de générer des anticorps reconnaissant la susdite séquence de 446 acides aminés mais ne reconnaissant ni le récepteur dopaminergique D-l, ni le récepteur dopaminergique D-2 ou polypeptides variants qui correspondent aux polypeptides sus-définis, comportant certaines mutations localisées, sans que les polypeptides ne perdent les propriétés de récepteur dopaminergique. 2. Polypeptide selon la revendication 1, caractérisé en ce qu'il est constitué par la séquence, représentée sur la Figure 1, s'étendant de l'extrémité constituée par l'acide aminé en position 1 à celle constituée par l'extrémité en position 446. 3. Acide nucléique caractérisé en ce qu'il comprend ou est constitué par un enchaînement de nucléotides codant pour les polypeptides selon les revendications 1 ou 2. 4. Acide nucléique selon la revendication 5, caractérisé en ce qu'il comprend ou est constitué par l'enchaînement de nucléotides représenté sur la Figure 2, s'étendant de l'extrémité constituée par le nucléotide 1 à celle constituée par le nucléotide 1863, ou est constitué par l'enchaînement de nucléotides représenté sur la Figure 2, s'étendant de l'extrémité constituée par le nucléotide 442 à celle constituée par le nucléotide 1779. 5. Vecteur recombinant, en particulier pour le clonage et/ou l'expression, notamment du type plasmide, cosmide, phage ou virus, caractérisé en ce qu'il contient un acide nucléique selon l'une des revendications 3 et 4 en l'un de ses sites non essentiels pour sa réplication. 6. Vecteur recombinant selon la revendication 5, caractérisé en ce qu'il contient en l'un de ses sites non essentiels pour sa réplication des éléments nécessaires pour promouvoir l'expression d'une séquences d'acides aminés selon les revendications 1 ou 2, dans un hôte cellulaire et éventuellement un promoteur reconnu par les polymérases de l'hôte cellulaire, en particulier un promoteur inductible et éventuellement une séquence signal et une séquence d'ancrage. 7. Hôte cellulaire transformé par un vecteur recombinant selon l'une quelconque des revendications 5 ou 6 et comprenant les éléments de régulation permettant l'expression de la séquence nucléotidique codant pour le polypeptide selon l'une des revendications 1 ou 2 dans cet hôte. 8. Hôte cellulaire transformé selon la revendication 7, caractérisé en ce qu'il est choisi parmi les bactéries, notamment E. coli. 9. Hôte cellulaire transformé selon la revendication 7, caractérisé en ce qu'il est choisi parmi les organismes eucaryotes tels que des cellules CHO ou COS-7. 10. Anticorps caractérisé(s) en ce qu'il(s) est (ou sont) dirigé(s) de façon spécifique contre un polypeptide selon l'une quelconque des revendications 1 ou 2, et en ce qu'il(s) ne reconnait (ou reconnaissent) ni le récepteur dopaminergique D-l, ni le récepteur dopaminergique D-2 et en particulier celui ou ceux reconnaissant les séquences d'acides aminés suivantes:: - celle définie par la séquence d'acides aminés représentée sur la Figure 1 s'étendant de l'extrémité constituée par l'acide aminé en position 1 à celle constituée par l'acide aminé en position 38, - celle définie par la séquence d'acides aminés représentée sur la Figure 1 s'étendant de l'extrémité constituée par l'acide aminé en position 135 à celle constituée par l'acide aminé en position 147, - celle définie par la séquence d'acides aminés représentée sur la Figure 1 s'étendant de l'extrémité constituée par l'acide aminé en position 175 à celle constituée par l'acide aminé en position 187, - celle définie par la séquence d'acides aminés représentée sur la Figure 1 s'étendant de l'extrémité constituée par l'acide aminé en position 210 à celle constituée par l'acide aminé en position 375. 11. Sonde nucléotidique caractérisée en ce qu'elle s'hybride avec l'un des acides nucléiques selon les revendications 3 et 4 ou leur séquence complémentaire dans les conditions d'hybridation telles qu'elle ne s'hybride pas aves les gènes ou ARN messager des récepteurs dopaminergiques D-l ou D-2, et en particulier les sondes choisies parmi les sondes nucléotidiques suivantes celle - celle définie par la séquence d'acides nucléiques représentée sur la Figure 2, s'étendant de l'extrémité constituée par le nucléotide en position 1, à celle constituée par le nucléotide en position 441, celle - celle définie par la séquence d'acides nucléiques représentée sur la Figure 2, s'étendant de l'extrémité constituée par le nucléotide en position 442 à celle constituée par le nucléotide en position 537, celle - celle définie par la séquence d'acides nucléiques représentée sur la Figure 2, s'étendant de l'extrémité constituée par le nucléotide en position 718, à celle constituée par le nucléotide en position 753, celle - celle définie par la séquence d'acides nucléiques représentée sur la Figure 2, s'étendant de l'extrémité constituée par le nucléotide en position 820, à celle constituée par le nucléotide en position 888, . - celle définie par la séquence d'acides nucléiques représentée sur la Figure 2, s'étendant de l'extrémité constituée par le nucléotide en position 958, à celle constituee par le nucléotide en position 996, . - celle définie par la séquence d'acides nucléiques représentée sur la Figure 2, s'étendant de l'extrémité constituée par le nucléotide en position 1068, à celle constituée par le nucléotide en position 1240, . - celle définie par la séquence d'acides nucléiques représentée sur la Figure 2, s'étendant de l'extrémité constituée par le nucléotide en position 1068, à celle constituée par le nucléotide en position 1566, ou leur séquence nucléotidique complémentaire. 12. Procédé de détection de la capacité d'une molécule à se comporter comme ligand vis-à-vis d'un polypeptide selon l'une quelconque des revendications 1 ou 2, caractérisé par - la mise en contact de la molécule avec un hôte cellulaire préalablement transformé par un vecteur lui-même modifié par un insérat codant pour le susdit polypeptide, cet hôte portant à sa surface un ou plusieurs sites spécifiques de ce polypeptide, le cas échéant après induction de l'expression de cet insérat, cette mise en contact étant effectuée dans des conditions permettant la formation d'une liaison entre l'un au moins de ces sites spécifiques et ladite molécule dès lors qu'elle s'avèrerait effectivement posséder une affinité pour ce polypeptide, - la détection de la formation éventuelle d'un complexe du type ligand-polypeptide. 13. Procédé pour l'étude de l'affinité d'un polypeptide selon l'une quelconque des revendications 1 ou 2, pour un plusieurs ligands déterminés, caractérisé par - la transformation d'un hôte cellulaire compétent avec un vecteur, notamment un plasmide ou un phage, dans lequel avait auparavant été insérée une séquence de nucléotides ou codant pour le récepteur D-3 (insérat), sous le contrôle d'éléments de régulation, notamment d'un promoteur reconnu par les polymérases de l'hôte cellulaire et permettant l'expression dans l'hôte cellulaire utilisé de ladite séquence de nucléotides, - la culture de l'hôte cellulaire transformé dans des conditions permettant l'expression dudit insérat, et le transport du récepteur D-3 exprimé vers la membrane de façon telle que les séquences transmembranaires de récepteur D-3 soient exposées à la surface de l'hôte cellulaire transformé, - la mise en contact de cet hôte cellulaire avec ces ligands déterminés, - la détection d'une réaction affine entre ledit hôte cellulaire transformé et lesdits ligands déterminés. 14. Procédé de diagnostic in vitro de l'expression pathologique du récepteur dopaminergique D-3, dans lequel on utilise l'une ou plusieurs quelconques des sondes définies selon la revendication 11, comprenant les étapes suivantes - l'amplification préalable possible des quantités de séquence nucléotidique selon l'une quelconque des revendications 3 ou 4 susceptible d'être contenue dans un échantillon biologique prélevé sur un patient, au moyen d'amorces d'ADN, - la mise en contact de l'échantillon biologique indiqué ci-dessus avec une sonde nucléotidique selon la revendication 11, dans des conditions permettant la production d'un complexe d'hybridation formé de ladite sonde et ladite séquence nucléotidique, - la détection du complexe d'hybridation ci-dessus qui a pu se former. 15. Procédé de diagnostic in vitro d'anomalies génétiques, notamment polymorphismes du gène codant pour le récepteur dopaminergique D-3 chez un individu, susceptibles d'être corrélées à des affections psychiatriques, neurologiques, cardiovasculaires ou neuroendocriniennes, à partir d'un échantillon biologique, tel que le sang, prélevé chez un individu, selon un procédé comprenant les étapes suivants - le traitement de l'acide nucléique issu de l'échantillon biologique sus-mentionné réalisé à l'aide d'une enzyme de restriction dans des conditions permettant l'obtention de fragments de restriction issus du clivage dudit acide nucléique au niveau de ces sites de restriction reconnus par ladite enzyme, - la mise en contact d'une sonde nucléotidique selon la revendication 11, susceptible de s'hybrider avec les fragments sus-mentionnés dans des conditions permettant la production éventuelle de complexes d'hybridation entre ladite sonde et les fragments de restriction sus-mentionnés, - la détection des susdits complexes d'hybridation, - la mesure de taille des éventuels fragments de restriction polymorphes engagés dans les complexes d'hybridation sus-mentionnés. 16. Procédé de diagnostic in vitro de détection de mutations ponctuelles de l'acide nucléique ou d'un fragment de l'acide nucléique codant pour le récepteur dopaminergique D-3 selon les revendications 3 ou 4, chez un individu, comprenant les étapes suivantes - la mise en contact d'une sonde nucléotidique selon la revendication 11, avec un prélèvement biologique, par exemple du sang, dans des conditions permettant le production éventuelle d'un complexe d'hybridation formé entre la sonde et l'acice nucléique ou le fragment d'acide nucléique sus-mentionné, - la détection du susdit complexe d'hybridation, - le séquençage de l'acide nucléique ou du fragment d'acide nucléique intervenant dans le susdit complexe d'hybridation, - la comparaison de la séquence de l'acide nucléique ou du fragment d'acide nucléique intervenant dans le susdit complexe d'hybridation avec la séquence de l'acide nucléique (ne présentant pas de mutation) ou du fragment de l'acide nucléique (ne présentant pas de mutation) du récepteur dopaminergique D-3. 17. Procédé de diagnostic in vitro de l'expression pathologique du récepteur dopaminergique D-3, dans lequel on utilise l'un ou plusieurs anticorps selon la revendication 10 comprenant les étapes suivantes - la mise en contact d'un anticorps selon la revendication 10 avec le susdit prélèvement biologique dans des conditions permettant la production éventuelle d'un complexe immunologique formé entre le récepteur dopaminergique D-3 ou produit qui en a dérivé et l'anticorps de l'invention, - la détection du susdit complexe immunologique formé. 18. Médicament contenant comme substance active une substance active sur l'un au moins des polypeptides selon l'une des revendications 1 ou 2, ayant une activité de récepteur dopaminergique ou contenant comme substance active des substances actives sur des cellules transfectées par les gènes ou les fragments de gènes codant l'un au moins des polypeptides à activité de récepteur dopaminergique selon l'une des revendications 1 ou 2 en association avec un véhicule pharmaceutiquement acceptable. 19. Médicament contenant comme substance active une substance active sur les récepteurs dopaminergiques D-1 ou D-2, mais inactive sur les polypeptides à activité de récepteur dopaminergique selon l'une des revendications 1 ou 2.