Brevet FR2656424A1 — publié le 19910628

PROCEDE D'ELECqRD ANALYSE RAPHIDE DES LIQUIDES BIOLOGIQpES, DISPOSITIF UTILISE A CET ET APPLICAlICNS DxNS LE DOMAINE BIODOGIQpE La présente invention se rapporte au domaine de la chimie et plus particulièrement au domaine de la chimie biologique. Elle a en particulier pour objet, un procédé d'électro-analyse rapide des liquides biologiques et le dispositif d'électro-analyse utilisé à cet effet. La présente invention concerne plus précisément un procédé de détection et de dosage dans les liquides biologiques de substances chimiques organiques, normales ou anormales, anodines ou pathologiques dont la présence indique soit le fonctionnement normal des processus biologiques, soit au contraire, la survenue d'une détérioration du métabolisme liée à la présence d'un agent extérieur ou d'un mécanisme pathogénique interne. La plupart des liquides d'origine biologique comme l'urine, le plasma, le liquide céphalo-rachidien, le liquide synovial, mais aussi les jus de fruits, solutions d'extraction de végétaux, contiennent de nombreux composés organiques, de structures aromatiques, qui peuvent être oxydés ou réduits par voie électro-chimique, à des potentiels variés, compris entre le potentiel de réduction de l'oxygène vers +0,10 V/E.N.H et le potentiel d'oxydation de l'eau. La littérature antérieure indique que le dosage par oxydation ou réduction électrochimique sans séparation préalable de ces composés est rendu difficile, ou même dans certains cas, impossible, dans la mesure où les domaines de potentiel dans lesquels ces réactions ont lieu, se superposent en général lorsque plusieurs de ces composés électroactifs se trouvent présents simultanément. Par contre, ce dosage est pratiqué après séparation préalable de ces composés, par exemple d'une manière courante à l'aide d'une technique chromatographique. Ceux-ci peuvent alors être oxydés, par exemple, successivement au fur et à mesure de leur sortie de la colonne chromatographique sur une électrode détectrice polarisée à un potentiel suffisamment élevé pour les oxyder en totalité.Ces procédés d'analyse restent toutefois relativement onéreux et lents, du fait de la mise en oeuvre d'un appareillage approprié pour réaliser la séparation préalable. Par ailleurs, parmi les techniques coulométriques, la voltammétrie cyclique à balayage linéaire de potentiel de polarisation, à des vitesses de l'ordre de quelques millivolts par seconde, de solutions imprégnant la capillarité d'électrodes constituées de poudre compactée de carbone électrochimiquement inerte, de granulométrie à l'échelle de quelques microns, dites à pâte de carbone, permet classiquement de mettre en évidence les propriétés d'électroactivité de nombreux composés de structures variées, et de déterminer la concentration de ceux-ci, lorsque les solutions étudiées contiennent un seul composé, ou un petit nombre de composés oxydables à des potentiels suffisamment différents.Selon ce procédé, la très faible quantité de composé électroactif contenue dans la solution imbibant les interstices compris entre les grains de carbone est électrolysée, lorsque le potentiel atteint la valeur convenable, sur la très grande surface développée de la poudre de graphite (celle-ci étant typiquement de 2 plusieurs m2/g, en quelques secondes, ctest-à-dire avant que le potentiel ne soit modifié de façon importante et sans que le composé électroactif contenu dans cette capillarité ait le temps d'être échangé avec la solution imbibant l'amas de pâte de carbone qui constitue l'électrode.Dans ces conditions, la variation du courant enregistré en fonction du potentiel, ou du temps, présente la forme d'un pic, dont le potentiel du maximum correspond, pour un composé oxydable d'une manière réversible, au potentiel normal apparent d'oxydo-réduction de ce composé. Si, après oxydation totale du composé en question, le sens de variation du potentiel est inversé, par exemple avec la même vitesse de balayage, la forme oxydée du composé, maintenant présente dans l'électrode, est réduite avec une variation du courant avec le potentiel inverse de celle imposée au balayage aller, dans la mesure où cette forme oxydée n'a pas eu le temps de diffuser hors de la capillarité de la pâte de graphite.Toutefois, de nombreux composés organiques électrochimiquement oxydables subissent, après oxydation, des réactions chimiques irréversibles qui modifient leur structure aromatique et, par conséquent, leurs propriétés électrochimiques. En particulier, pour ces composés, le pic de réduction n'apparait plus au balayage retour. Lorsqu'on tente toutefois d'appliquer ce procédé à l'analyse des liquides biologiques, en particulier des urines, sans séparation préalable des différents composés électroactifs qu'ils contiennent, la plupart de ceux-ci s'oxydent à des potentiels trop voisins les uns des autres, pour donner lieu à la formation de pics séparés, et l'enregistrement de la variation du courant avec le potentiel ne permet alors pas de déterminer les concentrations de la plupart des composés présents. A titre d'exemple, la figure 1 donne l'enregistrement de cette variation pour une urine d'adulte sain, acidifiée à pH 1 par addition d'acide chlorhydrique, à l'aide d'une électrode constituée de 200 mg de poudre de graphite inerte de granulométrie 200 mesh, compactée dans le dispositif représenté dans la Planche 1.On note que la plupart des composés oxydables le sont à des potentiels supérieurs à 800 mV/E.N.H, donc dans un intervalle de potentiel resserré entre cette valeur et le potentiel d'oxydation de l'eau, situé ici, vers 1300 mV/E.N.H, et que de ce fait, l'enregistrement obtenu ne permet pas d'effectuer une discrimination nette de la majorité des pics d'oxydation les uns par rapport aux autres. La présente invention concerne un procédé qui vise donc à pallier cette difficulté et se rapporte aux appareillages d'analyse mettant en application ce procédé. Selon le procédé, objet de l'invention, après réalisation d'un premier balayage aller et retour, à l'aide soit d'un générateur potentiostatique à trois électrodes, soit d'un simple générateur de tension continue régulée avec utilisation d'une contre-électrode susceptible de débiter quelques mA sans changement notable de potentiel, on procède à un second balayage et, le cas échéant à un troisième balayage aller et retour, entre les mêmes bornes de potentiel ou des bornes différentes et les courants d'électrolyse mis en jeu durant ces balayages sont enregistrés.Dans ces conditions, on relève sur l'enregistrement de la variation du courant avec le potentiel correspondant au second balayage aller et retour, et, le cas échéant au troisième, des pics correspondant à des propriétés d'oxydo-réduction nouvelles des produits des transformations chimiques irréversibles des formes oxydées des composés initialement présents, obtenues au cours du premier balayage aller. Ces pics se situent en général à des potentiels inférieurs à ceux des oxydations initiales correspondantes, et sont de ce fait, plus distants les uns des autres que ceux obtenus précédemment. Par ailleurs, l'information complémentaire que ces pics apportent, permet souvent de disjoindre des contributions superposées dans le voltammogramme enregistré pour le premier balayage. L'invention concerne également un dispositif d'électroanalyse qui permet le double balayage aller et retour et éventuellement, un troisième balayage aller et retour. Il comprend, ainsi que représenté Planche 1, une cellule d'analyse (3) qui reçoit le liquide à analyser sans purification ou séparation préliminaire dans laquelle est disposé un disque de verre fritté (7) contre lequel est pressée l'électrode de mesure constituée d'une couche de poudre de graphite compactée (8) et d'un disque de graphite (5) assujetti au bati de la cellule (2) et auquel est connecté, d'une manière fixe, un collecteur de courant (6) monté d'une manière étanche à la partie inférieure de la cellule d'analyse (3). Une contre électrode et une électrode de référence, non représentées, sont plongées dans le liquide à analyser qui est versé dans la cellule d'analyse, et de ce fait, pénètre la capillarité de la poudre de graphite (8). La contre électrode d'oxydo-réduction est constituée par un fil de métal noble de la famille du platine comme par exemple un fil de platine, de palladium ou d'iridium. Selon un mode d'éxecution actuellement préféré et figuré sur la planche nO 1, la cellule d'analyse est montée serrée sur le bati (2) supportant le disque de verre fritté et la partie graphitée, par l'intermédiaire d'un filetage porté à la partie supérieure dudit bati. L'étanchéité de ce bati est également assurée par un moyen d'étanchéité disposé à la partie inférieure du bati comme par exemple au bouchon ou un joint d'étanchéité (10) maintenu par un dispositif de serrage tel que filetage, cannelures ou rodage. La rigidité de l'ensemble bati-cellule d'analyse est obtenue par la présence d'une entretoise (4) et du joint d'étanchéité torique (9 et 9'). Le volume de la cellule d'analyse est de quelques ml et plus précisement varie de 0,5 à 5 ml. L'intensité relevée sur l'électrode de mesure ou sur la contre électrode est de quelques mA et plus précisement de O à 10 mk. Le débit de ce courant d'analyse s'effectue par l'intermédiaire d'un générateur non figuré sur le dessin qui fournit ce courant électrolyse à potentiel croissant à une vitesse linéaire dans le sens des potentiels positifs puis des potentiels négatifs et inversement. un dispositif d'enregistrement non figuré connecté à l'électrode de graphite par le moyen du collecteur de courant permet de détecter ou d'enregistrer les variations de potentiel au fur et à mesure des balayages aller et retour. L'électrode de mesure, schématisée sur la planche 1, est ainsi constituée d'un empilement de poudre très fine de graphite, compactée d'une façon géométriquement reproductible entre un collecteur massif de graphite et un verre fritté permettant l'imprégnation de la poudre de graphite et laissant passer le courant ionique vers la solution où se trouve une contre-électrode collectrice de ce courant. La surface développée des grains de graphite peut être évaluée, pour 200 mg du graphite électrochimiquement inerte utilisé, à environ 7 m2 et le volume de solution électrolytique, correspondant au remplissage des pores intersticiels, qui va être traité par oxydation électrochimique est de l'ordre de 1/10è de millilitre. Ceci inverse tout à fait le rapport de la surface de l'électrode et du volume de solution électrolysée par rapport aux méthodes d'analyse électrochimique dites polarographiques ou coulométriques. Cette contre-électrode de mesure est insérée dans un circuit potentiostatique permettant d'en fixer le potentiel à des valeurs variables linéairement dans le temps, entre deux bornes correspondant respectivement à la réduction et à l'oxydation du milieu électrolytique utilisé. Ce balayage est effectué à une vitesse fixée en général à 1 V/200 s par potentiels croissants, avec retour à la même vitesse à la borne inférieure, et suivi d'un second balayage aller et retour identique, et, si utile, d'un t v troisième. Compte tenu de la vitesse de balayage utilisée et des faibles quantités de substrats piégés dans l'électrode à des distances très faibles des parois des grains de graphite, les transferts électrochimiques s'expriment donc sur les tracés sous la forme de pics traduisant la consommation par électrolyse des composés électroactifs contenus dans la pâte de graphite. En variante du dispositif décrit ci-dessus, la contre-électrode en métal inattaqué, peut être une électrode de référence, de préférence en argent chloruré, de surface suffisante pour débiter des courants de l'ordre de quelques mA sans variation notable du potentiel d'électrode. Le dispositif selon l'invention peut en outre comporter une commande de potentiel et de relevé du courant par commande informatisée, à l'aide d'un micro-ordinateur équipé d'une interface entrée/sortie digitale-analogique avec exploitation informatisée des Voltamoograimnes obtenus pour l'identification et la mesure de la concentration des composants de l'échantillon. Deux balayages successifs ou même trois balayages effectués sur une telle électrode en équilibre d'imprégnation avec une urine à étudier permettent ainsi d'obtenir des tracés qui se présentent sous la forme d'une succession de pics plus ou moins séparés et d'amplitudes variées, en principe proportionnels aux concentrations qui reflètent immédiatement, sans séparation préalable, d'une façon très visuelle, la présence des différents composés urinaires électroactifs, chacun à un potentiel qui le caractérise. Comme exposé précédemment, le procédé d'électro-analyse selon l'invention trouve de nombreuses applications .en biologie. Il permet de détecter même à l'échelle du nanogramme/hl, la présence de catabolites neuromédiateurs ou de substances du métabolisme, dans le sang, l'urine, le liquide céphalo-rachidien, la salive, le liquide synovial, le plasma sanguin, ... Il permet de détecter ou de doser, dans ces mêmes liquides biologiques, la présence des produits biologiques normaux (bases puriques, acides aminés, protéines, cholestérol, les vitamines, les hormones) ou anormaux, tels que poisons, drogues ou toxines. Il permet encore d'étudier le métabolisme ou le devenir dans l'organisme de médicaments en fonction de la voie d'administration, de la voie d'excrétion et de la dose administrée. Il permet aussi de déterminer en fonction de l'âge, en particulier du foetus aux personnes âgées, l'évolution de l'excrétion et du métabolisme des produits biologiques. Ce procédé constitue donc, à la fois, un mode de détection extrêmement sensible de substances spécifiques normales ou anormales dans l'organisme, et un mode d'évaluation de la présence de substances dont l'insuffisance ou l'excès peuvent constituer un phénomène pathologique. La figure 3 fournit, à cet égard, les différences de détection au cours de deux balayages aller et retour successifs d'une urine de sujet normal. Elle met en évidence l'apparition de pics tout à fait spécifiques correspondants à l'acide urique, et à l'acide 5-hydroxy indolyl acétique urinaire. C'est ainsi que les figures 2a et 2b représentent respectivement les voltammogrammes enregistrés, à l'aide du dispositif selon l'invention, aux premiers et seconds balayages aller et retour, pour une urine de patient sain après prise d'ascorbate de sodium, acidifiée à pH 1. Les potentiels d'oxydation anodique ou de réduction cathodique des principaux composants électroactifs présents dans une telle urine normale, ou des produits de transformation de leurs formes oxydées obtenues au premier balayage, ont été portés sur ces figures. Les amplitudes des pics correspondants sont proportionnelles aux concentrations de ces composants.On notera que les composants ainsi détectés sont principalement : les produits du catabolisme des bases puriques (urate), ainsi que la tyrosine et le tryptophane et les catabolites des neuroinédiateurs dérivés de ceux-ci (5-HIA, VMA, Hzk, xanthurénate ..), l'ascorbate et l'oxalate, composants qui, pour la plupart, constituent des marqueurs d'état physiologiques particuliers ou d'affections variés. 5-HIza = acide 5-hydroxy indole acétique = = acide Vanillylmandelique = = Acide homovanillique Xanthurénate = Acide Xanthurénique Trp = Tryptophane Un autre exemple d'utilisation du dispositif selon l'invention réside dans le dépistage d'affections variées par modification des amplitudes de pics présents dans les urines d'adultes sains, les figures 4, 5 et 6 représentent respectivement les voltammogrammes relevés - pour la première miction d'un nouveau né sain, dont le métabolisme des neuromédiateurs n'est pas encore entièrement établi ; - pour une miction de nouveau-né affecté d'une réaction inflammatoire pulmonaire - pour des mongoliens, nouveau-nés aussi bien qu'adultes. Les variations d'amplitudes des pics correspondant à la tyrosine, au tryptophane et aux catabolites des neuromédiateurs qui en dérivent, sont évidentes sur ces tracés. Elles peuvent être quantitativement appréciées, indépendamment du flux urinaire, par le calcul des rapports d'amplitudes des pics correspondant aux différents composants de l'urine. Le procédé proposé apparait toutefois bien plus intéressant encore pour dépister des états physiologiques anormaux lorsque ceux-ci se traduisent par l'apparition de pics non présents dans les voltammogrammes urinaires normaux. A titre d'exemples non limitatifs, les figures 7 à 10 représentent des modifications observées d'une manière systématique dans différents états pathologiques ou à la suite de l'administration de produits à caractère médicamenteux ou de drogues stupéfiantes. La figure 7, relative à un prélèvement urinaire effectué au cours d'une crise de goutte, indique la présence d'un pic très intense d'oxydation vers 1200 mV/E.N.H, oblitéré en particulier par les pics d'oxydation de la tyrosine, du tryptophane et de l'oxalate et par conséquent, non quantitativement exploitable, mais également celle de pics d'oxydo-réduction, réversibles, de produits de transformation après oxydation du constituant urinaire correspondant à ce pic d'oxydation, nettement caractérisables sur l'enregistrement du second balayage à 950 mV/E.N.H, potentiel auquel aucun autre composé ne réagit au second balayage, ainsi qu'à 750 et 570 mV/E.N.H. La Figure 8, représente un voltammogramme urinaire typique de patient atteint de démence du type Alzheimer. On y note que le tracé de retour de second balayage fait apparaitre, à 850 mV/E.N.H, un pic d'amplitude nettement réduite par rapport à celle du pic relevé au même potentiel au cours du premier balayage retour. Cette réduction d'amplitude correspond à un produit d'oxydation obtenu au premier balayage vers 1200 mV/E.N.H, dont la présence est attestée par l'augmentation de l'amplitude du pic de réduction observé au premier balayage retour, et dégradé à son tour par le second passage dans cette même zone de potentiel. A titre d'exemple supplémentaire des capacités d'exploitation du procédé préconisé en diagnostic médical, on peut encore noter que les voltammogrammes du liquide céphalo-rachidien du même type de patients font apparaitre une forte réduction des concentrations en ascorbate par rapport à des sujets adultes neurophysiologiquement sains. La Figure 9, relative à un prélèvement urinaire dilué 3 fois, effectué 48 h après administration d'une benzodiazépine à des fins anesthésiques, permet de noter la présence de pics anormaux d'oxydation irréversibles vers 750-800 mV/E.N.H et 1020 mV/E.N.H au premier balayage aller, difficilement exploitables quantitativement, mais surtout celle d'un important pic réversible observable à 500 mV/E.N.H sur les balayages suivants, dont la variation au cours des mictions successives permet de suivre l'excrétion du composant exogène concerné. La Figure 10, relative à une urine d'opiomane, diluée 8 fois, fait apparaitre de même, à 820 mV/E.N.H, au second balayage, un pic réversible qui offre la possibilité d'identifier qualitativement et quantitativement l'état d'imprégnation des patients par les drogues de structures aromatiques comme la Morphine et ses dérivés. Des pics anormaux similaires sont observés pour d'autres types de drogues de structures aromatiques, telles que les amphétamines. L'invention trouve donc une application supplémentaire dans la détection des toxicomanies ou dans la recherche de substances anti-fatigue ou dopantes susceptibles d'être utilisées par des sportifs. APPLICATI(TJ AU SUIVI DES URINES DE PATIENTS IRRADIES A DOSE ELEVEE. A titre d'exemple d'application à des pathologies graves et des thérapeutiques lourdes, on a mené une étude visant à suivre par la méthode décrite, la composition en catabolites électroactifs détectés dans les urines de malades hospitalisés dans un service d'Hématologie hospitalier, qui ont subi des irradiations corporelles totales afin de les préparer à une greffe de moelle à visée thérapeutique pour certains types de leucémies. Pour chaque malade, on a enregistré les voltappérogrammes correspondant à des échantillons d'urine prélevés avant (sur une diurèse de 24 h), pendant (sur le volume total recueilli pendant l'irradiation) et après irradiation (sur le volume recueilli entre l'arrêt de l'irradiation et le lendemain matin et sur une des diurèses de 24 h des jours suivants). A l'examen des résultats, dont un exemple est illustré sur la figure 11, on a observé, pour chaque malade, des modifications qualitatives ou quantitatives, plus ou moins importantes, apparaissant pendant l'irradiation ou juste après, et allant toujours dans le sens d'une augmentation des quantités excrétées, quelquefois avec apparition de nouveaux produits. La variabilité selon les individus montre à quel point, les réactions physiologiques des différents malades traités ont été différentes. Le procédé selon 1 l'invention permet donc une détection rapide de l'effet du rayonnement au niveau des urines et offre la possibilité de trier les malades selon leur réaction au traitement. Il va de soi en particulier qu'outre l'étant pathologique, les pré-médications auxquelles ont été soumis ces patients, sont susceptibles de se répercuter sur l'information que l'on a relevée. La Figure 11 montre cette application intéressante du procédé selon l'invention sur les effets biologiques de l'irradiation corporelle d'une patiente atteinte de leucémie aiguë lymphoblastique. Les diagrammes a), b), c) et d) montrent l'apparition de métabolites au moment de l'irradiation puis leur dépression continue au cours du temps. AUTRES APPLICATIONS Outre cette application à des cas cliniques et thérapeutiques relativement homogènes, on a constaté, à partir d'urines prélevées sur des individus, personnel du Laboratoire et malades hospitalisés, présentant des pathologies très diverses que les voltampérogrammes urinaires prennent des formes très variables en se modifiant parfois considérablement par - apparition de nouveaux pics - ou augmentation très importantes de certains pics comme les pics d'acide urique, tyrosine et tryptophane lors de crises de goutte ou le pic correspondant au 5HIAA pour des malades atteints d'une tumeur carcinoide. - diminution de pics normalement présents s'expliquant dans certains cas par un type de médication ou par un désordre nerveux. En particulier, des variations importantes par excès ou par défaut, corrélées ou non entre elles, de pics correspondant à l'ensemble SHIAA, HVA et VMA apparaissent fréquemment sur les voltampérogrammes de patients consultants de cabinets médicaux de spécialités (Figure 13). Compte tenu de l'importance de ces composants en tant que catabolites reflétant les métabolismes de la sérotonine, de la dopamine, de l'adrénaline et de la noradrénaline, une source nouvelle de diagnostic de dépistage semble ainsi offerte par l'utilisation de cette nouvelle méthode analytique. Cette méthode apparait ici, complémentaire, au niveau du dépistage à faible coût, des techniques analytiques plus lourdes opérant par chromatographie de haute performance suivie d'une détection électrochimique pour les mêmes composés. Ces variations de constitution urinaire, que l'on n'a pas toujours pu corréler jusqu'à présent à des pathologies précises, compte tenu de l'hétérogenéité des dossiers et de leur complexité, rendent compte par leur diversité, de la richesse de l'information apportée. Il semble donc essentiel d'exploiter ce type d'observation biochimique rapide, à faibles coûts d'équipement et d'exécution, polyvalente et automatisable, pour le suivi thérapeutique et le dépistage, en particulier d'affections cancéreuses, psychiatriques, rénales et hépatiques, ainsi que des réactions inflammatoires en général qui se manifestent par des modifications marquées de l'excrétion urinaire des composés électroactifs détectés. Enfin, cette méthode s'avère également très utilisable pour la détection urinaire des catabolites de nombreux médicaments comportant des structures aromatiques. REVENDICATIONS L'invention a pour objet 10- Un procédé d'électro-analyse rapide des liquides biologiques permettant la détection ou le dosage dans lesdits liquides de substances chimiques organiques normales ou anormales par voltammétrie cyclique à balayage linéaire de potentiel à l'aide d'une électrode de graphite poreuse, caractérisé en ce que l'on soumet l'échantillon de liquide biologique sans séparation préalable après un premier balayage de potentiels aller et retour, à un second balayage aller et retour puis éventuellement, à un troisième balayage aller et retour et, en ce qu'on enregistre les pics correspondant aux propriétés d'oxydo-réduction nouvelles des produits de transformation chimique irréversible des formes oxydées des composés qui se trouvaient initialement et détectés lors du premier balayage aller et retour. 2 - Un dispositif pour la mise en oeuvre du procédé selon la revendication 10 qui comprend une cellule d'analyse qui reçoit le liquide à analyser sans purification ou séparation préliminaire, dans laquelle, est disposé un disque de verre fritté auquel est reliée une électrode constituée d'une couche de poudre de graphite compressée et d'un disque de graphite assujetti au bati de la cellule et auquel est connecté d'une manière permanente, un collecteur de courant monté d'une manière étanche à la partie inférieure de la cellule d'analyse. 30- Un dispositif selon la revendication 20 dans lequel on utilise des électrodes de carbone poreuses précompactées ou frittées, simplement suspendues ou posées au contact d'un collecteur de carbone dans une cellule d'électrolyse à deux ou trois électrodes. 40- Un dispositif selon l'une des revendications 2 à 30 dans lequel la cellule d'électro-analyse utilise une électrode de mesure constituée de poudre de carbone compactée avec contrôle de la force de serrage entre un collecteur de carbone massif et un disque de verre fritté et soit a) une contre-électrode inattaquable et une électrode de référence b) seulement une contre-électrode, préférentiellement en argent chloruré, de surface suffisante pour débiter des courants de l'ordre de quelques mA sans variation notable de potentiel d'électrode. 50- Un dispositif selon la revendication 40 dans lequel on utilise un générateur potentiostatique piloté pour réaliser le balayage de potentiel dans le cas de l'utilisation d'une cellule à trois électrodes ou d'un simple générateur de tension régulée avec emploi d'une cellule à deux électrodes. 60- Un dispositif selon l'une des revendications 2 à 50 dans lequel on réalise une commande de potentiel et de relevé du courant par commande informatisée à l'aide d'un micro ordinateur équipé d'une interface d'entrée/sortie digitale analogique et exploitation informatisée des voltammogrammes obtenus pour l'identification et la mesure des concentrations des composants présents dans l'échantillon à analyser. 70- Application du procédé selon la revendication 10 à la détection ou au dosage de catabolites de neuromédiateurs et des substances du métabolisme dans les liquides biologiques. 80- Application du procédé selon la revendication 10 à la détection et au dosage des produits biologiques choisis dans le groupe constitué par les bases puriques, les acides aminés aromatiques, la cystéine, des protéines, les vitamines et les hormones de structure aromatique. 90- Application du procédé selon la revendication 10 à l'étude du métabolisme de médicaments de structure aromatique par détection ou dosage dans les liquides biologiques d'un ou plusieurs produits spécifiques de l'excrétion du produit médicamenteux concerné. 100- Application du procédé selon la revendication 10 à la recherche et au dosage de substances à caractère aromatique choisies dans le groupe des dérivés de la Morphine, de l'acide lysergique et des amphétamines qui consiste à rechercher, dans les liquides biologiques par électro-analyse, les substances aromatiques résultant du métabolisme des produits incriminés. 11 - Application du procédé selon la revendication 10 au suivi des effets physiologiques d'irradiation chez des sujets irradiés à doses élevées, qui consiste à rechercher, dans l'urine, par électro-analyse, les modifications qualitatives ou quantitatives de l'excrétion des substances physiologiques.