Brevet FR2642971A1 — publié le 19900817

- I - PREPARATION COSMETIQUE ET PROCEDE DE FABRICATION DE CETTE PREPARATION La présente invention concerne une préparation cosmétique pour le traitement de la peau ainsi qu'un procédé de fabrication de cette préparation. Elle concerne plus spécifiquement une préparation cosmétique basée sur de l'acide hyaluronique, une substance naturelle qui se trouve dans le tissu animal, et plus spécifiquement dans les crêtes de coqs, l'humeur vitreuse, dans les cordons ombilicaux et dans le fluide sinovial de mamrmifères. La présente invention concerne en particulier la purification de l'hyaluronate de sodium, un procédé d'isolation et de purification de l'hyaluronate de sodium, des préparations ou des compositions contenant de l'hyaluronate de sodium destinées à un usage cosmétique, ainsi que des méthodes de fabrication d'une telle préparation contenant une partie composée d'acide hyaluronique destiné à cet usage, ainsi que des méthodes pour effectuer et utiliser ces préparations et ces compositions contenant une telle partie composée d'acide hyaluronique à usage cosmétique. La fonction naturelle d'une peau saine consiste à fournir une protection de l'individu contre une très large variété d'influences extérieures potentiellement agressives. Une peau saine est à la fois physiquement résistante et capable d'arrêter les longueurs d'onde agressives de la lumière solaire ainsi que les bactéries nocives. Additionnellement, une peau saine est également capable de constituer une barrière de protection contre les assauts permanents d'une grande variété de polluants chimiques dangereux présents dans l'air, notamment dans les cités modernes. La résistance mécanique de la peau saine est due au moins en partie à un réseau de fibres protéiniques hautement spécialisées qui s'entre- -2- croisent sur la totalité de la structure de la peau dans toutes les directions. Le collagène et l'élastine sont deux des substances présentes dans la composition de ces fibres. Ce réseau de fibres, appelé tissu connectif aide à protéger les vaisseaux sanguins, les nerfs et les cellules -\ivantes de la peau contre l'assaut des facteurs d'environnement, faibles ou intenses de la vie de tous les jours. Les trous entre les mailles du tissu connectif sont remplis par un mélange à consistance gélatineuse de mucopolysaccharose (variété de 1G sucre) connu sous le nom d'acide hyaluronique (hyaluronate) et d'eau. La présence du composé d'hyaluronate et d'eau dans le tissu connectif est essentiel pour le transport de substances nutritives vers les cellules vivantes de la peau. La capacité de la peau à maintenir une barrière efficace contre les bactéries et les polluants du monde extérieur dépend de la santé du composé d'hyaluronate et d'eau. Toute aussi importante est la capacité du composé d'hyaluronate et d'eau pour prévenir le dessèchement, la formation de rugosités, de rides et le vieillissement de la peau. 2 C Le composé d'hyaluronate et d'eau constitue de loin, en volume, la partie la plus importante du tissu cutané et toute réduction temporaire ou durable de la qualité de l'hyaluronate dans ce composé engendre immanquablement un dessèchement de la peau, ainsi que l!apparition de rides et d'autres signes de vieillissement. L'acide hyaluronique (HA) est également connu sous le terme de glyco- saminoglycane. L'unité périodique dans la molécule d'acide hyaluronique est un disaccharose consistué d'acide D-glucuronique et de N-acétyl-D- glucosamrine. Etant donné que l'acide hyaluronique possède une charge r négative pour un pH neutre, il est soluble dans l'eau dans laquelle il forme des solutions fortement visqueuses. L'unité acide D-glucuronique et l'unité N-acétyl-D-glucosamine sont liées par des liaisons glycosi- diques du type béta (1-3), tandis que chaque unité disaccharose est liée à la suivante au moyen de liaisons du type béta (1-4). Les liaisons béta (1-4) peuvent être brisées par hydrolyse au moyen de l'enzyme hya- luronidase. 26 29Xz1 - 3- Une variété de substances couramment appelées acide hyaluronique a été isolée par de nombreuses méthodes à partir de tissus comprenant des cordons ombilicaux, de la peau, de l'humeur vitreuse, du fluide sinovial, des tumeurs, de la peau ovine, streptocoques haemolytique, des crêtes de coqs et des parois de veines ou d'artères. Les méthodes connues pour obtenir l'acide hyaluronique aboutissent à un produit ayant des propriétés variées et une palette très large de viscosité. Le brevet américain N 2 585 546 décrit par exemple une méthode pour obtenir de l'acide hyaluronique qui procède par traitement de cordons ombilicaux lavés à l'acétone au moyen d'une solution saline diluée, acidification de l'extrait résultant, retrait du caillot formé, précipitation de l'acide hyaluronique avec de la protéine à partir de l'extrait acidifié au moyen de sulfate d'ammonium, agitation du liquide avec de la pyridine, précipitation d'une autre fraction hautement contaminée avec de la protéine suivie par plus de sulfate d'ammonium qui élimine une partie de la pyridine de la solution en suspension en même temps que de l'acide hyaluronique de forte viscosité. L'acide hyaluronique est collecté à la surface de séparation entre les deux phases liquides et peut être séparé par filtration, centrifugation ou tout autre procédé usuel. Une modification de ce procédé peut être obtenue par fractionnement de l'extrait de sels acidifiés des cordons ombilicaux au moyen d'alcool et de sulfate d'ammonium. On ajoute de l'alcool à l'extrait de sel acidifié et on élimine le précipité résultant. Le sulfate d'ammonium solide est ajouté au liquide jusqu'à saturation et la solution forme deux phases avec un précipité d'acide hyaluronique à la ligne de séparation de ces phases. Le brevet américain N 3 396 081 permet de produire une poudre sèche d'acide hyaluronique obtenu à partir d'une substance contenant ce produit tel que par exemple des organes d'origine animale comprenant le corps vitré des yeux, les cordons ombilicaux et similaires ou à partir de cultures bactériennes qui produisent de l'acide hyaluronique. On chauffe pendant un temps relativement court une suspension de poudre résultante dans une solution aqueuse alcaline, ce qui permet de dénaturer la protéine. Après ajustage au pH et à la température - 4 - optimaux, compte tenu de l'enzyme utilisée, la protéine est décomposée par des ferments protéolytiques, de préférence par une préparation hyotolytique d'Aspergillus oryzae. Après retrait des acides aminés libres et des sels minéraux par traitement au moyen d'échangeur d'ions, on obtient une solution impure d'acide hyaluronique contenant encore des protéines. La solution impure de cet acide hyaluronique contenant des résidus protéiniques est amenée à un pH de l'ordre de 3 à 4, dans laquelle lesdites impuretés forment avec l'acide hyaluronique un composé insoluble, tandis qu'une partie de l'acide hyaluronique précipite avec les impuretés, notamment avec les protéines résiduelles qui ne peuvent être éliminées que difficilement sans dépolymérisation de l'acide hyaluro- nique, après quoi les composés complexes insolubles sont séparés par centrifugation à grande vitesse. Après traitement au moyen d'un sel de sodium, la solution d'acide hyaluronique résultante ayant une concen- 1 5 tratiorn de l'ordre 0,2 0 dans l'eau a une viscosité relative de 20 et constitue une solution transparente ne contenant ni protéines, ni antigènes, ni pyrogènes, décrite comme étant utilisable pour une stérilisation à chaud sans entraîner une importante diminution de la viscosite. Le brevet améericain N 3 862 003 décrit un procédé d'extraction de mucopolysaccharose de tissus connectifs d'origine animale, qui comporte une phase de trempage de ces tissus dans de l'eau à une température comprise entre 105 et 150 C sous pression élevée, une phase de soum:ssion de l'extrait résultant à un traitement à la protéase et/ou un traitement basique et à une phase de séparation et de récupération des mrucopolysaccharoses. Le brevet américain N 4 141 973 décrit un procédé de préparation d'une fraction d'acide hyaluronique ultrapur à poids moléculaire élevé qui est obtenue à partir de tissus animaux contenant de l'acide hyaluronique, dans lequel on extrait le sang du tissu animal contenant cet acide, on extrait l'acide du sang, on effectue une déprotéinisation de l'extrait d'acide hyaluronique et on élimine tous les agents d'inflammation non identifiés présents dans l'extrait en traitant l'extrait d'acide hyaluronique déprotéinisé à un pH compris entre 6,0 et 7,0 au moyen d'un volume au 264297.1 - moins égal de chloroforme, de telle manière que l'extrait déprotéinisé forme un mélange à deux phases qui est ensuite suffisamment brassé à une température comprise entre 15 et 40 C pour que les deux phases soient en contact intime, le traitement se terminant par une séparation et une évacuation du chloroforme. Le brevet américain N 4 517 296 concerne une préparation d'acide hyaluronique en grande quantité à partir de bactéries streptococciques par culture de ces bactéries dans un milieu enrichi de CO2, ce procédé comportant une phase de séparation des bactéries du bouillon résultant et l'isolation de l'acide hyaluronique des autres composants du bouillon. La séparation des micro-organismes de l'acide hyaluronique est facilitée par la destruction des bactéries au moyen d'acide trichloro-acétique. Après le retrait des cellules des bactéries et la concentration des produits à masse moléculaire plus élevée de la fermentation, on isole l'acide hyaluronique et on le purifie par précipitation, remise en suspension et reprécipitation. La présente invention se propose de pallier les difficultés de l'art antérieur en se basant sur la découverte d'une préparation d'acide hyaluronique qui contient certaines fractions d'acide hyaluronique stables à la température, purifiés et stérilisés à chaud. Ces fractions d'acide hyaluronique conviennent à des préparations cosmétiques ainsi qu'à celles qui sont destinées aux traitements d'entretien de la peau. La présente invention a pour objet de fournir des préparations cosmétiques destinées à une admistration topique de tissus épidermiques, composées d'une fraction d'acide hyaluronique et de préférence d'une fraction de cet acide dans laquelle l'acide hyaluronique est présent sous la forme d'un sel, tel qu'un sel de sodium, par exemple de l'hyaluronate de sodium, et contenant au moins un stabilisant, de préférence choisi parmi le groupe de composés comprenant le benzoate de sodium, le méthylparabène, le propylparabène ainsi que des combinaisons de ces composés, mais plus particulièrement le méthyparabène seul. Un autre objet de la présente invention est la réalisation d'une 26429 7T1 - 6 - de sel de sodium d'acide hyaluronique et environ 0,2 à 0,2596 de méthylparabène, et de préférence environ 1,0% de sel de sodium d'acide hyaluronique, par exemple de l'hyaluronate de sodium, environ 0,2% de méth)ylparabène, le reste étant constitué par exemple de 98 à 99% d'eau. L'objet de la présente invention consiste à réaliser une fraction d'acide hyaluronique utilisable pour des préparations cosmétiques telles que mentionnées ci-dessus, cette fraction d'acide hyaluronique ayant un poids moléculaire inférieur à 800 000 et de préférence supérieure à 500 000 et d'une manière préférentielle compris entre 600 000 et 700 000, la valeur de ce poids moléculaire étant avantageusement comprise entre 625 000 et 675 055. Un autre objet de la présente invention concerne un procédé de fabrication d'acide hyaluronique destiné à des préparations cosmétiques, telles que rmentionnées ci-dessus, comportant au moins l'une des caractéristiques choisies parmi le groupe suivant: a) contenant moins de 1,25 mrg et de préférence moins de 0,5 mg de mucopolysaccharose sulfaté pour 100 mg d'hyaluronate déterminé par une lecture par extinction ne dépassant pas 0,018, b) ne contenant pas plus de 15 ppm et de préférence moins de pprm de fer, déterminés par spectrométrie par absorption atomique, c) ne contenant pas plus de 15 ppm et de préférence moins de pprn de plomb déterminés par spectrométie par absorption atomique, d) basées sur 300 mcg d'hyaluronate de sodium, contenant: I) de 0,75 mcg et de préférence moins de 0,5 mcg de glucosarnine Il) moins de 7,5 mcg et de préférence moins de 5,0 mcg d'acide glucuronique, 36 III) moins d'environ 7,5 mcg et de préférence moins de 5,0 mcg de N-acétylglucosamine, IV) moins de 0,15 mcg et de préférence mois de 0,5 mcg d'acides aminés, e) àyant un contenu de protéines de moins de 0,6%8 et de préférence moins de 0,4% en utilisant la méthode de Lowry, f) ayant un coefficient d'absorption des rayons ultraviolets de 264297-1 - 7 - 257 nm de moins de 0,275 et de préférence de moins de 0,23, g) ayant un coefficient d'absorption des rayons ultraviolets de 280 nm de moins de 0,25 et de préférence de moins de 0,19, h) ayant un pH compris entre 7,3 et 7,9 et de préférence compris entre 7,5 et 7,7. Un autre objet de la présente invention consiste à fournir un procédé de fabrication d'une préparation pharmaceutique destinée à une adminis- tration topique sur les tisssus épidermiques, qui implique la préparation d'une telle fraction d'acide hyaluronique, de préférence d'hyaluronate de sodium tel que mentionné ci-dessus, ce procédé comprenant une phase de remplissage d'un réservoir de mélange avec de l'eau chaude, par exemple chauffée à une température de l'ordre de 60 à 90 C, une phase d'introduction et de dissolution de stabilisant choisi parmi le groupe comportant du méthylparahydroxybenzoate, du propylparahydroxyben- zoate, du benzoate de sodium et des mélange de ces composés et de préférence du méthylparabène pour réaliser une solution aqueuse stabilisante, une phase d'addition et de dissolution d'une fraction d'acide hyaluronique dans la solution stabilisante pour former une solution résultante, une phase d'ajustage du pH de la solution résultante à un pH compris entre 7,5 et 7,7, une phase de dilution de la solution à pH ajusté avec une.quantité d'eau en vue d'obtenir un volume aqueux voulu, une phase de remplissage des fioles au moyen de cette préparation aqueuse, cette phase comportant de préférence une étape de filtration de cette préparation aqueuse à travers une membrane dans un récipient récepteur avant le remplissage desdites fioles, ladite membrane étant de préférence une membrane à 0,8. La présente invention sera mieux comprise en référence à la description d'exemples de.réalisation et du dessin annexé dans lequel: la fig. I représente une bande d'électrophorèse illustrant une bande unique de couleur bleue qui représente l'acide hyaluronique tel qu'il est détecté par le procédé d'identification par électrophorèse qui sera décrit cidessous, -8- la fig. 2 représente une bande similaire à celle représentée par la fig. 1, qui représente une bande bleue additionnelle caractéristique de l'hyaluronate de sodium, c'est-à-dire une bande relativement faible, la fig. 3 représente un appareil en verre permettant la détermination du contenu en sulfate des mucopolysaccharoses qui peuvent être présents dans l'acide hyaluronique, la fig. 4 représente des graphiques comparant les analyses de produits courants à base d'hyaluronate, ces analyses étant faites par des procédés de chromatographie liquide à haute pression, et la fig. 5 représente un graphique permettant de comparer des degrés de pureté de divers produits à base d'acide hyaluronique. La présente invention est basée sur la découverte que la dégradation des qualités de la peau due à une réduction des taux de l'hyaluronate, peut être soignée par l'application d'une préparation destinée à traiter cette peau et contenant une fraction d'acide hyaluronique. On notera tout d'abord que cette préparation pour le traitement de la peau bénéficie de facultés d'absorption exceptionnelles. On constate que cette préparation a la faculté de pénétrer dans les couches profondes de la peau et de remplacer l'hyaluronate naturel qui a partiellement ou totalement disparu suite à des agressions dues à l'environnement ou à l'âge. La préparation destinée au traitement de la peau s'est révélée comme étant un agent humidifiant en profondeur et ayant une action anti-vieil- lissement agissant efficacement sur une peau sèche ridée ou présentant d'autres défauts. Etant donné que la préparation pour lé traitement de la peau selon l'invention comporte une molécule nouvelle et unique d'hyaluronate naturel spécialement développé pour une application cutanée, celle-ci est complètement absorbée par les couches les plus profondes de la peau étant donné que la structure moléculaire de la fraction d'acide hyaluronique utilisé dans le cadre de la présente invention est sensiblement identique à celle qui est contenue dans la peau saine, de sorte qu'elle compense la faible concentration en 26429 '.1 -9- hyaluronate de la peau sèche, endommagée ou vieillissante. Les préparations de traitement de la peau selon la présente invention fournissent de l'hyaluronate essentiellement naturel, pour réhydrater la peau vieillissante, sèche ou endommagée. Sans ces préparations il est virtuellement impossible de restaurer le complexe d'hyaluronate et d'eau que l'on trouve dans la peau saine. La présente invention est par conséquent basée sur la découverte d'une molécule nouvelle et unique d'acide hyaluronique développée spécia- lement pour soigner la peau et possédant des caractéristiques que l'on n'a trouve dans aucune autre préparation basée sur de l'hyaluronate. La préparation hypoallergénique selon la présente invention contient la forme la plus pure, sensiblement à 1009o, de l'hyaluronate présent. Il est prouvé que l'hyaluronate, qui constitue une substance naturelle formant des liaisons avec de l'eau et qui se trouve dans la peau et en particulier dans le tissus connectif, est capable de réparer efficacement la peau endommagée par les effets du soleil, du vent et de l'âge. Une faible application de la préparation sur l'épiderme améliore les propriétés de la peau ainsi que son apparence, réduit les rides et restaure le tissu cutané. En plus du fait que la préparation constitue un remède particulièrement efficace pour le traitement de la peau, on a constaté que cette préparation est étonnament universelle et d'application commode. Son très haut degré de pureté (100%), sa faculté d'être facilement absorbée, son efficacité et sa visco-élasticité, ce qui facilite son application, distinguent particulièrement la préparation selon l'invention et en font un produit idéal pour le traitement de la peau. Combinée au fait qu'elle est non allergénique, la préparation selon l'invention ne constitue pas uniquement un moyen de traitement exceptionnel de la peau à appliquer pendant la nuit, mais est également une base parfaite pour tout type de produit de maquillage. Les propriétés anti-vieillissement des préparations selon la présente 264297.1 - 1 - invention se résument à des qualités de rajeunissement d'une peau endommagée, des qualités d'humidification en profondeur et d'absorption totale. une absence d'effet allergénique, la faculté de se combiner avec tous les produits de maquillage quels que soient leur couleur et leur parfum et leur compatibilité avec les crèmes de traitement de la peau, tout en contenant de l'hyaluronate naturel absolument pur. L'hyaluronate naturel à l'état pur est une substance relativement nouvelle pour le traitement de la peau. Comme mentionné précédemment, l'hyaluronate à des propriétés spéciales de visco-élasticité, lubrification et nutrition des cellules qui font que les préparations qui contiennent cette substance qui en constitue l'ingrédient actif, sont efficaces contre le vieillissement. Sans vouio'r se lier à une quelconque théorie particulière, on peut affirmer que les préparations de traitement de la peau selon la présente invention contiennent de l'hyaluronate naturel qui se fixe dans le tissu cutané humain et est extrêmement hydrophile ce qui engendre une hydratation efficace de ce tissu. Etant donné que de l'air entre dans la préparation, cette préparation, lorsqu'elle est appliquée sur le tissu provoque simultanément une aération et une hydratation du tissu. De même que l'élastine et le collagène, l'ingrédient actif des préparations selon] 'invention, c'est-a-dire l'hyaluronate, constitue un composé naturel qui est présent dans le tissu cutané humain. Il a pour effet d'influencer la structure de ce tissu en formant des liaisons entre les fibrides collagènes et en retenant l'humidité à la manière d'une éponge moléculaire. L'effet globale des préparations selon l'invention consiste à améliorer la circulation sanguine et à accélérer l'apport de substances nutrities aux cellules de la peau. De cette manière, les préparations pour le traitement de la peau contenant de l'hyaluronate selon la présente invention améliorent la couleur, le teint et la texture de la peau, ce qui engendre un aspect de bonne santé et de bien-être. On peut affirmer qu'antérieurement à la présente invention, la molécule d'hyaluronate spécifiquement destiné aux traitements de la peau et incorporé dans les préparations prévues pour effectuer ce traitement - Il - selon la présente invention n'a jamais été produite. La suite de ce texte est une description détaillée des processus préférés de fabrication d'hyaluronate et de préparations pour le traitement de la peau contenant ledit hyaluronate selon la présente invention. Bien que la séparation et la purification de l'hyaluronate de sodium provenant de crêtes de coq constitue le mode opératoire de la présente invention, on peut admettre que d'autres substances servant de matières premières contenant de l'acide hyaluronique peuvent être utilisées dans le cadre de la présente invention. On procède tout d'abord à une inspection et à une sélection de crêtes de coq en bonne santé, et pesant approximativement entre 20 et 80 g, on les 1 5 détache de la tête de poulets récemmemt décapités et traités dans une usine entièrement automatisée. Dans les 30 minutes qui suivent ces crêtes sont rapidement congelées à une température avoisinant de préférence 40 C en utilisant avantageusement une technique de congélation par plaque réfrigérée. Ces crêtes congelées sont ensuite placées dans des sacs en plastique et conditionnées dans des boîtes en carton. Les blocs congelés de crêtes de coq pèsent entre 2 et 5 kg et sont ensuite stockés à des températures comprises entre -20 et -40 C pendant le transport qui s'effectue dans des congélateurs équipés de dispositifs d'enregistrement continu, de systèmes d'alarme et de systèmes de contrôle automatique et de réenclenchement -du générateur de froid. Bien que les crêtes de coq puissent être stockées à l'état congelé pendant une période de douze mois sans que l'on enregistre une perte d'acide hyaluronique, on se limite habituellement à une conservation de huit mois à compter de la date de réception. De préférence, on traite simultanément environ 3 000 kg de crêtes de coq congelées et on leur attribue un numéro de référence. Une quantité suffisante de crêtes est convoyée vers une chambre de traitement à air conditionné équipée d'une alimentation en air filtré qui est maintenue dans des conditions sanitaires extrêmement strictes. Après répartition partielle dans des conteneurs appropriés, les crêtes de coq sont lavées à l'eau courante. Après le lavage, ces crêtes sont pesées et émincées au moyen d'un -12hachoire à viande en acier inoxydable 316 ayant des diamètres de trous de 4 mm. Les crêtes émincées sont pompées au moyen d'une pompe alvéolaire en acier inoxydable et un convoyeur, également en acier inoxydable, les amène vers un récipient équipé d'un malaxeur à vitesse régulée qui les mélange à de l'acétone anhydre qui 'est pompée depuis un réservoir extérieur à travers un débitmètre. Toutes les parties qui sont en contact avec l'acétone sont réalisées en acier inoxydable' 316. On ajoute l'acétone dans une proportion de 2 à 1 en volume par rapport aux crêtes érmincées et le malaxage s'effectue pendant six heures à une vitesse de C tours/minute. La proportion d'acétone par rapport au tissu frais est particulièrement importante étant donné que les trois premières phases de déshydratation éliminent les impuretés solubles dans l'eau. Le melarnge d'acétone et de crêtes émincées est abandonné pendant environ douze heures pour la décantation, après quoi l'acétone surnageant est aspirée et éliirinée (l'acétone est recyclée par distillation). L'extraction a l'acétone est répétée au moins six fois jusqu'à ce que l'on 2r obtienne de l'acétone surnageant le produit de la décantation qui soit incolore et transparente et contenant moins de 5 , d'humidité. Dans ce cadre. le taux d'eau contenue par l'acétone est analysé et utilisé comme un processus de contrôle basé sur la méthode Karl-Fischer et les résul:ats obtenus sont enregistrés sur la feuille de fabrication. Si la sixième phase d'extraction à l'acétone aboutit à de l'acétone contenant plus de 5c d'numidité le procédé est recommencé. Après la dernière opération d'extraction à l'acétone, le gâteau mouillé est pompé tout en continuant à être malaxé au moyen d'une centrifugeuse du type Alpha Corn. Condor pour produire un produit sec ayant un taux d'humidité compris entre I et 39% et de préférence compris entre 1 à 29ô et plus particulièrement de 1%o. Le produit sec est mis dans des récipients appropriés etiquetés et sur lesquels le poids total et la date de séchage sont indiqués. Dans cet état, la substance peut être stockée pendant 90 jours à 17-18 C avant de subir la suite du traitement. Le processus mentionné ci-dessus permet d'obtenir environ 500 à 600 kg de poudre sèche à partir des 3 000 kg de crêtes de coq fraîches. - 13- 250 à 300 kg de poudre de crêtes de coq séchées, produite selon le processus mentionné ci-dessus, sont mélangés dans un récipient en acier inoxydable pourvu d'une enveloppe avec 3000 I de phosphate de cystéine tampon, de pH 7,5, préparé comme suit: Na2HPO4.12H20 30 750 g Na2H2PO4. 2H20 5 850 g Cystéine HCI 5 400 g Méthyle/éthyle parabène 2 400 g Eau onpyrogénique, déionisée préparée par osmose inverse en utilisant un filtre à membrane telle que celle commercialisée par Millipore (marque déposée du type RO-60 pour compléter à 3000 1. On amène la solution tampon de phosphate et de tissu à 60-65 C au moyen d'un régulateur thermique automatique tout en maintenant le malaxage à une vitesse de 60 tours/minute, ces opérations se poursuivant à cette température pendant une heure. A cette masse en agitation on ajoute une préparation de papaine préparée en ajoutant 200 g de papaine cristalline ayant une activité spécifique minimale à 60 000 unités/g protéolitique dans une bonbone en verre de 5 I de capacité contenant 4 I d'eau déminéralisée. Le mélange tampon d'enzyme et de tissu est agité pendant 24 heures à la température de 60 à 65 C, à raison de 60tours/minute. Ensuite, ce mélange est refroidi par circulation d'eau froide à travers l'enveloppe durécipient, et est ramené à une température de 25 C, l'agitation étant maintenue. A ce mélange on ajoute 60 kg de Celite-535 (marque déposée) comme agent de filtration et on maintient l'agitation pendant environ une heure après quoi, le mélange est filtré sous pression à travers un filtrepresse. On obtient un liquide clair jaunâtre qui est collecté dans un récipient de 5000 I de capacité en acier inoxydable. Le contenu protéinique est de l'ordre de 30 à 40 mg/ml lorsque la mesure est effectuée par la réaction' de Biuret. - 14- Ce liquide clair jaunâtre est pompé à travers une membrane d'ultrafil- tration (du type 4DDS, Danemark) ayant une surface totale de filtration ce 42,6 m2 et une membrane ayant une limite d'exclusion moléculaire de 000 daltons. La première phase d'ultrafiltration est effectuée à volume constant par addition continue d'eau déminéralisée. On obtient un ultrafiltrat incolore ayant 5 à 6 fois le volume original. De préférence, après l'obtention du cinquième volume d'ultrafiltrat, on érifie, l'absence d'acides aminés en faisant un essai à la ninhydrine. On poursuit l'ultrafiltration jusqu'à ce que le perméat ne contienne plus d'acides aminés. A la fin de cette utltrafiltration, le volume est réduit à 1/3 du volume original en continuant l'ultrafiltration sans ajouter d'eau afin de produire un liquide concentre. La phase d'ultrafiltration est importante étant donné que de petites molécuies telles que des molécules d'acides aminés, de peptides et de nucléotides sont ainsi éliminées. Ces molécules peuvent avoir des propriétés inflammatoires et leur élimination permet d'obtenir un produit exempt de telles substances susceptibles de produire des inf lar mmations. Après ultrafiltration, la solution doit être tout à fait claire, son volume doit être enregistré avec précision et son titre de glycosaminoglycol doit être déterminé au moyen d'un test au carbazole. Ce titre (GAG) doit être compris entre 12 et 17 mg/n-il. Le liquide concentré est ensuite transféré dans un récipient en acier inoxydable de 5000G I de capacité, équipé d'un agitateur à vitesse régulée et d'un dispositif de régulation de la température. On ajoute du chlorure de sodium cristallin en quantité suffisante tout en agitant, pour amener la solution à 0,1 mole. La molarité est testée au moyen de nitrate d'argent pour déterminer la quantité de chlorure. Le mélange est chauffé à 50 C à la vitesse de 100 I/minute et l'agitation est maintenue à la vitesse de 60 tours/minute. On prépare séparément une solution de chlorure de cétylpyridinium (CCP) dans un récipient en ajoutant 45,0 kg de chlorure de cétylpéri- - 15- dinium à 3000 I de chlorure de sodium à 0,1M dans de l'eau déionisée. La solution est ajoutée à l'extrait de tissu aqueux sous agitation perma- nente. Cette agitation se poursuit à la vitesse de 50 tours/minute pendant une heure pendant qu'il se forme un précipité. On ajoute 50 kg de Célite 535 et on mélange le tout dans le récipient. Ce mélange est refroidi à 25 C pendant une période de l'ordre de 4 heures après quoi il est centrifugé à une vitesse constante de 250 tours/minute dans un panier de 850 mm en acier inoxydable. La phase liquide claire est séparée et le précipité est transféré dans un récipient approprié en acier inoxydable. Le contrôle de la masse molaire et la phase de précipitation sont importants pour retirer les glycoproteines. Le précipité résultant est dissous dans un récipient en acier inoxydable de 5050 I de capacité dans une solution aqueuse à 0,01M de chlorure de sodium qui a été préparée dans un conteneur séparé contenant 0,0596 de chlorure de cétylpiridinium. Le mélange est agité pendant 60 minutes à tours/minute tout en étant maintenu à 500C. Le mélange est ensuite refroidi à 25 C pendant 4 heures et centrifugé comme décrit dans la phase 40. Le processus de lavage est répété plusieurs fois, de préférence deux à trois fois. Le précipité final lavé est centrifugé à une vitesse de 800 tours/minute pendant 60 minutes (pour séparer les contaminants glycoprotéiniques résiduels) et le précipité est transféré dans un récipient en acier inoxydable de 5000 I de capacité. On ajoute au précipité rincé 3000 I d'une solution de chlorure de sodium à 0,05M1 contenant 0,05% de CCP tandis que l'on maintient l'agitation à la vitesse de 50 tours/minute à une température de 50 C pendant 60 minutes. Le mélange est refroidi à 25 C pendant deux heures. Ce mélange est ensuite centrifugé comme précédemment et le liquide clair surnageant est évacué. Ce processus est répété en utilisant des solutions de chlorure de sodium ayant une concentration de 0,IM et contenant 0,0596 de CCP. Ce mélange est ensuite centrifugé comme précédemment et le liquide clair surnageant est évacué. Ce processus utilisant une solution de 0,1M de-NaCl avec 0,05% de.CCP est répété au minimum une - 16- fois et les produits de rinçage sont évacués. On effectue l'extraction du précipité issu de cette phase après au moins trois à quatre heures en utilisant du chlorure de sodium à 0,25MN et des volumes plus faibles de 3000 1, 550g 1, 5001 et 500 1, en mesurant l'acide hyaluronique contenu dans chacun de ces extraits. Le taux d'acide hyaluronique contenu dans ces extraits est de 2 à 3, 1 à 3, 0,2 à I et 0 à 0,6 mg/ml, lorsque l'on mesure le taux pour chacun des extraits. La matière qui surnage est transférée dans un récipient en acier inoxydable de 5000 1 de capacité et le précipité est évacué. Ce processus est important pour permettre l'isolation d'acide hyaluronique pur et éliminer les autres complexes de CCP et de mucopolysaccharoses. La substance surnageante de l'extrait est élevée à une température de lI'ordre de 5r C sous agitation permanente et on ajoute du NaCI pour amener le mélange à 0,33M. On ajoute 1,0 kg de CCP tout en maintenant l'agitation et en maintenant la température à 50 C pendant douze heures. Ce mélange est refroidi à environ 25 C pour une durée de l'ordre de cinq heures pendant laquelle il se forme un précipité. Ce précipité contient des impuretés et est collecté par filtration à travers un filtre-presse sur des passages revêtus de Celite-535. La solution aqueuse claire est refiltrée sous pression à travers un filtre à 0,7 u (Pall, Grancde-Bretagne) et l'extrait filtré est séparé par ultrafiltration. Le liquide surnageant est ultrafiltré à volume constant tandis que l'on rrmaintient la solution de chlorure de sodium à 0,33M jusqu'à ce que l'équivalent de trois fois le volume initial ait été filtré. La susbtance filtrée est ensuite concentrée pour une nouvelle ultrafiltration utilisant un filtre à membrane ayant une limite d'exclusion de 300 000 DDS. Cette phase élimine la fraction à faible poids moléculaire d'acides hyaluroniques qui peuvent être combinés à des peptides. La solution concentrée est précipitée sous agitation à 50 tours/minute pendant environ quatre heures à une température constante de l'ordre de 2M C, avec deux volumes d'éthanol à 95%. Le précipité est recueilli par 17- centrifugation et le liquide surnageant est évacué. Le précipité est dissous dans 1000 I de chlorure de sodium à 0,IM et est reprécipité avec trois volumes d'éthanol à 95 % dans les mêmes conditions que précé- demment. Le précipité est ensuite collecté et rincé trois fois avec de l'éthanol à 75%, en utilisant respectivement des volumes de 500 1, de 250 I et de 250 1 et ensuite trois fois avec des volumes de 500 1, 250 I et 250 I d'éthanol pur. Le précipité est ensuite lavé trois fois avec 500 1, 250 1 et 250 I-d'acétone anhydre. Cette phase est importante pour la purification de l'acide hyaluronique et l'élimination des composés de CCP et d'autres substances qui peuvent être entraînées au cours des phases précédentes. Le matériau solide précipité est ensuite séché sous vide à I à 16-2 Torr et à 30 C pendant soixante heures. Ce processus permet d'obtenir 2,0 à 2,5 kg d'hyaluronate de sodium pour 1000 kg de crêtes de coq fraîches. Les spécifications des réactifs, utilisés pour la purification de l'acide hyaluronique sont les suivantes Acétone U.S.P.XX Chlorure de sodium U.S.P.XX Chlorure de cétylpyridinium U.S.P.XX Ethanol U.S.P.XX dénaturé par l'addition de 1% de toluol Eau l'eau courante est purifiée par osmose inverse pour l'amener à une conductivité électrique de pms. On notera que l'absence de substances du type histamine dans l'acide hyaluronique produit selon le processus ci-dessus rend celui-ci particu- lièrement approprié pour une -utilisation cosmétique. L'absence de substances du type histamine dans l'acide hyaluronique peut être testée par le processus suivant. Le test de présence ou d'absence de substance du type histamine a été effectué sur plusieurs lots de matière et les conditions expérimentales et les résultats sont mentionnés ci-dessous. Le test utilisé est la préparation à base d'intestins de cochon d'Inde décrit dans la plupart des pharmacopées. On sacrifie par traumatisme crânien et on saigne un - 18 - cochon d'Inde pesant entre 200 et 350 g. On excise l'iléum depuis le point de conjonction iléo-coécal. On élimine les dix premiers centimètres d'intestin grêle en raison de la présence de plaques de Peyer qui rendraient la prépration extrêmement instable en raison de l'histamine contenue dans ces plaques. La partie de l'intestin est convenablement rincée avec une solution pré-oxygénée maintenue à une température supérieure à la température ambiante. La solution qui est également utilisée pour l'incubation de l'intestin est composée comme suit Liquide physiologique salin concentré (50 ml) comprenant NaCI S g KCI 0,2 g CaCI2 2H20 0,1325 g MgCI2 6H20 0,1065 g Na2HPO#20 N2a;HPO 4 2H20 6,25 g NaHCO3 g/l glucose 0,5 g/l sulfate d'atropine 0,5 mg/l Hydrochloride de morphine* 5 mg/l H 20 redistillée 950 ml (*) la morphine est ajoutée conformément aux spécifications Eur. Ph. afin de renforcer la stabilité de la préparation organique et de supprimer les mouvements spontanés. De ce fait, on obtient une base très stable sans interférence avec des mouvements péristatiques et des mouvements de réponse à l'histamine oxygénée. Un morceau de 4 cm d'iléum est fixé à chaque extrémité au moyen d'un fil de soie fin sans obstruer le passage intestinal. Une extrémité est fixée à la base du bain d'incubation dans lequel l'organe est oxygéné par un flux de mélange de 02 et de CO2 (95% + 5%). La température du bain est maintenue constante à 37 C. L'autre extrémité est fixée à un transducteur isotonique connecté à un instrument destiné à enregistrer ies oscillations. Après oxygénation, le liquide d'incubation a un pH de 7,3 à 7,4. Après une heure d'attente pendant laquelle la préparation est 19- constamment rincée, le test peut commencer. La contraction d'organe est induite par l'addition répétée de dihydro- chlorure d'histamine (concentration finale 0,1 mcg/ml) toutes les dix minutes jusqu'à ce que deux à trois réponses identiques soient obtenues. On effectue des rinçages répétés après'qu'une contraction maximale ait été observée, contraction enregistrée par un enregistreur kymographique pour permettre le retour aux élongations de base (distension maximale). Toutes les cinq minutes, on effectue des rinçages importants. L'histamine utilisée est dissoute dans le liquide d'incubation et avant addition d'une quantité destinée à aboutir à la concentration finale de 0,1 mcg/ml (0,2 ml) on retire une certaine quantité du liquide du bain. Quand on a établi les données de base, on prépare un échantillon test de 0,5 ml d'hyaluronate de sodium (retiré préalablement du bain). L'échantillon test est constitué de-10 mg/ml dissous dans 0,9% de NaCI. Etant donné que le bain d'incubation a une capacité de 6,5 ml, la concentration finale d'hyaluronate de sodium atteinte dans le bain est de 769, 23 mcg/ml. Au bout de dix minutes, l'absence de contractions est enregistrée, après quoi, sans rinçage, on introduit 0,1 mcg/ml d'histamine dans le bain. La contraction résultante est égale aux contractions induites précédemment en absence d'hyaluronate de sodium. En l'absence d'une réponse habituellement induite par l'histamine, la préparation est considérée comme exempte de substances similaires à l'histamine. L'hyaluronate de sodium produit selon la présente invention et utilisée pour les préparations cosmétiques est une poudre douce, blanche, inodore, hygroscopique, soluble dans l'eau, non dialysable et insoluble dans des solvants organiques, et peut être identifiée par électrophorèse sur des bandes d'acétate de cellulose sur lesquelles la migration de l'échantillon est comparée à celle d'un échantillon standard par visualisation au moyen de bleu alcian. La presence de sodium est détectée dans la cendre sulfatée d'acide hyaluronique par spectrophoto- métrie par absorption. La présence de mucopolysacharoses sulfatés tels - 20 - que le sulfate de chrondroïtine, peut également être détectée par la méthode d'électrophorèse mentionnée précédemment. Les composés sulfatés ont un coefficient Rf plus élevé que l'acide hyaluronique. La présence de mucopolysaccharoses sulfatés se quantifie par la mesure de la quantité de sulfate d'une réaction d'acide perchlorique sur de l'hyaluronate de sodium en utilisant les méthodes analytiques décrites ci-dessous. De préférence, l'hyaluronate de sodium ne contient pas plus de 0,5 mg de mucopolysaccharoses sulfatés pour 100 g d'hyaluronate de sodium déterminé par lecture de l'absorption n'excédant pas 0,018 (100 mcg S04 à une absorption de 0,18 à 660 nm), pas plus de 100 ppm de fer déterminés par spectrométrie par absorption atomique, et pas plus de ppm de plomb également déterminés par spectrométrie par absorption atomique. On peut déterminer la présence d'acide glucuronique libre, de glucosamine et de Nacétylglucosamine par chromatographie de couches minces. Dans 350 mcg d'hyaluronate de sodium tous les composés (à l'exception des acides aminés) se trouvent à des taux non détectables compares aux normes acceptées Glucosamine 0,5 mcg Acide glucoronique 5,0 mcg N-acétyl glucosamine 5,0 mcg Acides aminés 0,5 mcg L'hyaluronate de sodium préparé selon l'invention a de préférence un poids moléculaire compris entre 600 000 et 700 000 déterminé par un viscosimètre automatique de Haney, un contenu protéinique de moins de G,4 o (Lowry) et un coefficient d'absorption des ultraviolets de moins de 0,230 pour une longueur d'onde de 257 nm et de moins de 0,190 pour une longueur d'onde de 290 nm. Le pH est de préférence compris entre 7,5 et 7,7. L'analyse de l'acide hyaluronique est basée sur des mesures de quantités stoechiométriques d'acide glucuronique obtenu à partir d'acide hyaluronique après une hydrolyse acide qui n'est pas inférieure à 97% et non supérieure à 102% calculée sur un poids sec. 264297.1 - 21 - On pourrait utiliser un autre procédé d'analyse basé sur un test d'identification par électrophorèse (A) après élimination de l'acide hyaluronique souillé par le bleu alcian avec de l'acide-acétique glacial et lecture du taux d'absorption à 670 nm par rapport à un standard pas inférieur à 97 % et pas supérieur à 102 -96 du poids sec. La méthode analytique préférée implique l'identification par électropho- rèse au moyen du matériel ci-dessous: un appareil d'électrophorèse, par exemple un appareil commercialisé sous la dénomination ELVI; des bandes d'acétate de cellulose 10 x 2,7 cm; un colorant bleu alcian (index des colorants 74240) 1 ,% en solution dans de l'acide chlorhydrique à 0,01 N préparé avant l'expérience; une solution de rinçage: HCL 0,01 N; une solution tampon: pH 8,6 de force ionique 0,025; de l'acide diéthylbarbiturique et du sel de sodium. Une solution aqueuse de 10 yl de substance de test contenant 2mg/ml sous forme de ruban est déposée au pôle négatif de la bande. L'électrophorèse est effectuée à 300 V pendant 20 minutes. La bande est retirée et trempée dans la solution de bleu alcian pendant 5 minutes. Le colorant non fixé est rincé par des rinçages répétitifs avec une solution d'acide chlorhydrique à 0,01 N. Le résultat est une bande simple (comparable à un standard approprié) de couleur bleue représentant l'acide hyaluronique tel que le montre la fig. I. Les mucopolysaccharoses autres que l'acide hyaluronique peuvent être détectés par le procédé d'électrophorèse décrit ci-dessus. A titre d'exemple, additionnellement à la bande bleue caractéristique de l'hyaluronate de sodium, la bande peut présenter une faible plage ayant un Rf plus élevé comme le montre la fig. 2. A cet égard, la fig. 2 représente deux plages au lieu d'une, la première correspondant à la plage d'hyaluronate de sodium obtenu de l'ensemencement des 10 ul, la seconde moins évidente correspondant à un mucopolysaccharose autre que l'hyaluronate de sodium, par exemple le sulfate de chrondroitine provenant d'un ensemencement de 0,4 ug. L'hyaluronate de sodium produit selon l'invention doit comporter, de préférence, moins de 0,5% de mucopolysacharoses autres que l'acide - 22 - hyaluronique. Etant donné que pratiquement tous les mucopolysaccha- roses qui sont présents à titre d'impuretés sont des mucopolysaccharoses sulfatés contenant approximativement 10%, de SOt,-- le test de détection du S04-- constitue une méthode indirecte pour détecter ces impuretés. A cet égard, la matière organique est oxydée pour former du Na2SO4 puis du SO4- par précipitation avec du BaCI2 et l'on mesure la turbidité. Dans un tube à essais en pyrex (marque déposée) contenant 20 mg de susbtance à tester, on ajoute I ml de HCIO4 à 70%9 exempt de sulfates. On dépose ce tube avec un bulbe en verre tel que représenté par la fig. 3 dans un bain de sable à 1800C jusqu'à ce que la minéralisation soit complète. Le tube à essais est ensuite séché à la flamme, refroidi après quoi le résidu est dissous dans quelques gouttes de HCI concentré puis séché jusqu'à la disparition complète de l'acide chlorhydrique et des fumées nitrées. Le tube à essais avec son contenu est à nouveau refroidi et le résidu est redissous avec 2 ml de HCL IN après quoi on ajoute 2 ml d'une solution de BaCl2 à 59o. La solution résultante est agitée puis mise au repos pendant 30 minutes à la température ambiante. On lit à nouveau le taux d'absorption à 660 nm. Etant donné que 100 ug de 504 donnent une absorption de 0,180, ce test doit aboutir à un taux d'absorption ne dépassant pas 0,018 ce qui correspond à 0,5 mg de mucopolysaccharose sulfaté dans 100 mg (0,596) de la substance testée (limite supérieure). La méthode ci-dessous est utilisée pour déterminer la présence de fer, de plomb, d'acide glucuronique libre et de N-acétylglucosamine. Pour détecter la présence de fer, on pèse 1 OG mg de Na-HA et on dissout cette substance dans 10 ml d'acide chlorhydrique de concentration IN. L'absorption de la longueur d'onde appropriée est lue au moyen d'un instrument d'absorption atomique connu en soi. La fraction hyaluronique (Na-HA) en accord avec la présente invention doit contenir plus de 100 ppm de fer. - 23 - Pour détecter la présence de plomb on dissout 100 mg de NA-HA dans 10 ml de HCI IN, et on effectue à nouveau une analyse de l'absorption au moyen d'un instrument d'absorption atomique. Le NA-HA produit selon la présente invention ne doit pas contenir plus de 10 ppm de plomb. Le processus suivant est utilisé pour déterminer la présence d'acide glucuronique libre, de N-acétylglucosamine et de glucosamine. On dépose sur le plateau d'un "Kieselgel" 60 (Merck N 5721), 0,5 mcg de glucosamine, 5 mcg de N-acétylglucosamine et 300 mcg d'hyaluronate de sodium et on les développe par la suite avec un solvant constitué d'un mélange aqueux d'éthanol (67,33) contenant 50mg/100ml de ninhydrine et on chauffe le plateau à IG00C. La glucosamine se développe comme un spot rose avec un Rf d'approximativement 0,02 et si d'autres spots roses de Rf variable apparaissent, ils représentent différents acides aminés. Les spots représentant l'acide glucuronique (Rf environ 0,65) et la Nacétylglucosamine (Rf environ 0,7) sont visualisés au- moyen de vapeurs d'iode (sensiblité 5 mcg). Le NA-HA doit être testé pour mettre en évidence l'absence d'un quelconque de ces composants. Toutefois, on notera que de l'acide glucuronique libre de la N-acétylglucosamine et de la glucosamine sont présents dans le Na-HA, mais à des concentrations inférieures à la sénsiblité de la méthode. - Dans le cas de la présente invention, le poids moléculaire du Na-HA est déterminé comme étant compris entre 600 000 et 700 000 au moyen d'un viscosimètre automatique de Haney. Un processus typique pour effectuer cette vérification implique la formation d'une solution de sulfate de sodium à 0,05 M avec de l'eau déminéralisée, la filtration de 2 I de cette solution et l'utilisation d'un flacon filtrant avant le transfert d'un litre de la solution de sulfate de sodium à 0,05 M filtrée dans un appareil de contrôle de solvant. On ajoute ensuite 2 ml de NA-HA à 100 ml de la solution de sulfate de sodium à 0,05 M pour obtenir une solution standard. La solution standard est ensuite injectée dans un viscosimètre 24- différentiel (modèle 100) et ce viscomètre différentiel est calibré à 30 au moyen de cette solution standard. Un échantillon à analyser est ensuite injecté dans le viscosimètre différentiel et la viscosité est mémorisée par exemple sur un ordinateur personnel du type commer- cialisé par IBM. En utilisant la méthode de Lowry, le contenu protéinique du Na-HA de la présente invention est en principe inférieur à 0,4 % en utilisant comme référence l'albumine d'un sérum de bovin. Le test pour détecter les protéines en utilisant la méthode de Lowry implique la préparation préliminaire de références en diluant une solution standard de protéines avec de l'eau pour obtenir un volume de 1,O ml stocké dans des tubes à essais convenablement étiquetés. Protéine Protéine Solution standard Eau concentration (mrnl) (ml) (ug/ml) 6, 125 0,S75 50 2 r G,250 0,750 100 0,550 0,500 200 0,750 0,250 300 1,000 0 400 Ln tube test est étiqueté "blanc" et 1,0 ml d'eau est ajoutée à ce tube.. D'autres échantillons sont ensuite ajoutés aux tubes test convenablement étiquetés et dilués chacun à 1,0 ml d'eau. On ajoute ensuite 1,0 ml d'une solution réactive de Lowry à chaque tube et on mélange le tout. On laisse ensuite reposer ces solutions à la température ambiante pendant 20 minutes puis on procède à un mélange immédiat et rapide en ajoutant à chaque tube 0,5 ml d'une solution de réactif phénolique de Folin & Ciocalteu. On laisse la couleur se développer pendant 30 minutes après quoi les solutions sont transférées dans des cuvettes et l'on mesure le taux d'absorption des standards et des échantillons à analyser pour des 2642971. - longueurs d'ondes comprises entre 500 et 800 nm, la lecture étant entièrement effectuée dans les 30 minutes. Les valeurs d'absorption des standards dont les taux de concentration de protéines sont connus sont marquées pour préparer une courbe de calibration. Les concentrations en protéines des autres tubes sont déterminées à partir de la courbe de calibration. Le résultat est multiplié par le facteur de dilution approprié pour obtenir la concentration en protéines de l'échantillon original. La caractérisation des polymères et du Na-HA en accord avec la présente invention peut être effectuée en utilisant la détermination de la viscosité, de préférence par l'utilisation d'un viscosimètre de Haney. Ceci représente la méthode la plus rapide et la plus facile pour déterminer le poids moléculaire des polymères sur une base relative. La mesure différentielle est basée sur un équivalent fluide du pont de Wheatstone. La pression différentielle à travers ce pont est mémorisée de façon continue et à la fin de la manipulation un ordinateur calcule la viscosité intrinsèque. Le poids moléculaire est calculé à partir de la viscosité intrinsèque et des constantes des polymères. Les méthodes ci-dessous sont décrites à titre de processus d'essais utilisés dans le cadre de la présente invention. Le test colorimétrique des mucopolysaccharoses consiste en une détermination colorimétrique de l'acide glucuronique constituant une partie de la molécule de mucopolysaccharose. Dans le but de la présente invention, l'anàlyse de l'hyaluronate de sodium, la détermination du taux de mucopolysaccharose consiste en une détermination colorimétrique de la part d'acide glucuronique contenue dans la molécule d'hyaluronate de sodium. L'essai se fait par utilisation d'un acide glucuronique approprié. Ce test se fait en double en utilisant un acide glucuronique standard approprié, pour compenser de petites variations du taux d'absorption - 26 - dues à des variations du temps de chauffage et de refroidissement. Pour préparer une solution d'acide glucuronique standard, on utilise 52 mg de sel-d'acide D-glucuronique à 99 9 (Aldrich) qui contient 889,3 mg d'acide D-glucuronique par gramme, qui est ensuite introduit dans un flacon de 100 ml de capacité volumétrique et dilué avec de l'eau puis mélangé par ultrasons pendant une durée de 3 minutes. On effectue à l'aide d'une pipette un prélèvement de 10,0 ml dans le flacon volumétrique de 100 ml, on dilue à l'aide d'un volume d'eau on mélange le tout et l'on agite au moyen d'un vibreur ultrasonique pendant 3 minutes pour atteindre une concentration de 46,2 mcg d'acide D-glucuronique par ml. Pour tester l'hyaluronate de sodium, on utilise une solution aqueuse contenant I15G mcg/ml d'hyaluronate de sodium que l'on prépare par des dilutions successives. Ceci implique le pesage de 10 mg d'hyaluronate de sodium standard, son introduction dans un flacon volumétrique de 100 ml, la dissolution dans l'eau et l'action d'ultrasons pendant 3 minutes pour aboutir à une concentration de 100 mcg d'hyaluronate de sodium par ml de solution. On prélève 1,0 ml d'hyaluronate de sodium au moyen d'une pipette dans le flacon volumétrique et on dilue cette quantité dans un 2G volume d'eau que l'on mélange et soumet à l'action des ultrasons pendant 3 minutes. * Pour obtenir une solution standard d'acide glucuronique (BDH 38039), il est indispensable de préparer une solution aqueuse fraîche contenant 46,2 mcg par ml d'acide glucuronique, cette solution étant de nouveau préparée par dilutions successives. Un réactif A est préparé par dissolution de 1,9 g de tétraborate de sodium dans 100 ml d'acide sulfurique concentré. Le réactif est stable pendant de nombreux mois dans un réfrigérateur. Un réactif B est préparé par dissolution de 125 mg de carbazol dans 100 mI d'éthanol absolu. Ce réactif est stable pendant deux semaines lorsqu'il est stocké dans une bouteille en verre ambré dans un réfrigérateur. On introduit dans une série de six tubes à essais 10 ml du réactif A; tous ces tubes à essais sont placés dans un bain d'eau glacée. Dans le premier flacon, on ajoute 2,0 ml d'eau pour former un tube à essais "neutre" et on ajoute 27 - 2,0 ml d'hyaluronate de sodium standard. Dans deux autres tubes, on ajoute 2, 0ml d'une solution standard d'acide glucuronique. Dans deux autres tubes on ajoute 2,0 ml d'un échantillon de la préparation. Les tubes à essais sont bouchés puis agités d'abord en douceur puis vigoureusement. Ces tubes à essais sont ensuite transférés dans un bain d'eau chaude ou de vapeur en utilisant l'appareil illustré par la fig. 3, ou similaire, pendant 10 minutes puis refroidis dans de l'eau glacée. 0,5 ml du réactif B est ajouté et l'ensemble est agité vigoureusement avant une phase de chauffage pendant 15 minutes dans un bain jusqu'à ce qu'une coloration rouge se développe. Les tubes à essais sont ensuite refroidis dans de l'eau à la température ambiante avant qu'on lise le taux d'absorption du tube neutre pour une longeur d'onde de 530 nm en utilisant par exemple un spectrophotomètre de Bechman modèle DU-7HS. La couleur est stable pendant au moins 2 heures. Les taux d'absorption pour les différents matériaux contenus dans les tubes sont sensiblement les mêmes étant donné que la quantité d'acide glucuronique est identique à celle du standard comme le montre la formule ci-dessous: Na hyaluronate 9D = absorption pour la substance expérimentale x 100 absorption standard alternativmrneent ceci peut s'exprimer comme suit Asp poids d'acide glucuronique standard Astd 46,397 0,8893 (10) = mg/ml Na-HA o Asp = l'absorption des échantillons Astd =l'absorption de l'acide glucuronique standard 0,8893 = facteur de correction de la solution d'acide -glucuronique pour une solution d'acide glucuronique pur à 99906. - 28 - Comme mentionné ci-dessus, l'hyaluronate de sodium pur contient 46,297% d'acide glucuronique. L'analyse de l'hyaluronate de sodium peut être effectuée par une technique d'électrophorèse par dépôt de 10 ul d'une solution aqueuse d'hyaluronate de sodium (2 mg/ml) sur trois bandes d'électrophorèse, en parallèle avec trois autres bandes ensemencées d'hyaluronate de sodium standard. Après coloration et rinçage comme mentionné précédemment, l'excès de liquide est évacué de ces bandes au moyen de papier filtre et ces bandes sont séchées à la température ambiante. La zone contenant la plage traitée est découpée de chaque bande et placée dans un tube à essais contenant 2 ml d'acide acétique glacial. Les tubes à essais sont placés dans un bain d'eau à une température de 30 à 40 C et agités occasionnellement pour assurer une dispersion fine. On ajoute I ml d'eau avant l'agitation. La solution obtenue doit être claire ou légèrement colorée en bleu. La coloration est stable et obéit à la loi de Larnbert- Beer pour les concentrations d'hyaluronate de sodium comprises entre 5 et 40 mcg. Le temps de maintien des bandes dans la solution n'est pas critique étant donné qu'une extraction prolongée n'entraîne que ces changements de couleur négligeables. Le taux d'absorption de la solution est déterminé par un spectropho- tomètre approprié pour une longueur d'onde de 620 nm et comparé à un écnantillon neutre obtenu par un processus identique sur une zone de la bande éloignée de la plage traitée. L'échantillon neutre doit donner des taux compris entre G,020 et 0,040. Les valeurs d'absorption des plages représentant les 20 mcg standards doivent être comprises entre 0,240 et G, 260 en utilisant la formule suivante % Na-Ha = absorption (substance analysée) x 100 Absorption (standard) (la valeur d'absorption est le taux minimun des trois solutions). La précision et la fiabilité du test d'électrophorèse peuvent être calculées comme suit 26429,7 1 - 29 - la précision est calculée comme étant le coeficient en 96 de la variation ci-dessous: S x 100 -x o S représente la déviation standard, et X = la valeur minimale des lectures (douze lecture par groupe de trois). La déviation standard est la racine carrée de la variante. La variante (52) est obtenue en divisant la somme des carrés des écarts-par rapport au minimum par le nombre de degrés de liberté (n-l) dans lequel n est le nombre des déterminations utilisé pour le calcul. Précision = 1,16i5 x 100 = 1,1739 98,97 La correction se calcule comme suit: % de dé iation= valeur théorique - valeur trouvée x 10- 1,03 valeur théorique Ci-dessous on définit la caractérisation de l'hyaluronate de sodium Na-HA selon la présente invention Na-HA est une solution aqueuse visqueuse claire et incolore. La présence de Na-HA est déterminée par utilisation d'une méthode d'électrophorèse, La bande caractéristique de HA a un Rf comparable au standard peut être visualisée par le bleu alcian. L'acide glucuronique, la glycosamine et la N-acétylglucosamine sont identifiés par TLC d'échantillons hydrolysés d'un acide Na-HA avec visualisation par utilisation de ninhydrine et de vapeurs d'iode. La présence de sodium est détecté dans de la cendre sulfatée de HA au moyen d'unr spectrophotomètre à absorption atomique. Le pH de l'acide hyaluronique se situe entre 7,5 et 7,7 (mesure 26429-71 - 30 - électrométrique). L'absence d'impuretés telles que des mucopolysaccharoses sulfatés et des acides aminés et des produits de dégénération, tels que l'acide glucuronique, la glusamine et la N- acétylglucosamine, dans un échantillon non hydrolysé, est confirmée par l'utilisation de la méthode TLC dans laquelle ces impuretés ne sont pas détectées. L'analyse de l'acide hyaluronique est basée sur la mesure des quantités stoechiométriques d'acide glucuronique issues de l'acide hyaluronique suite à une hydrolyse acide utilisant une réaction au carbazol, par exemple compris entre 97 et 102% de la quantité étiquetée. Le Na-HA répond à diverses normes américaines en matière de stérilité, d'absence de pyrogène et de volume de remplissage. Le contenu de méthylparabène est déterminé selon une méthode normalisée ou selon un autre processus approprié. Ci-dessous sera décrit le processus préféré de la réalisation d'une préparation cosmétique à base d'hyaluronate de sodium purifié obtenu selon les procédés décrits ci-dessus. Dann un récipient propre en acier inoxydable équipé d'un malaxeur et d'un thermostat, on introduit 250 I d'eau doublement distillée ainsi que le rnmétylparabène, puis on chauffe à environ 60 à 90 C. On ajoute de l'hyaluronate de sodium et on attend qu'il soit complètement dissous, de préférence au moins 4 heures, après quoi on refroidit le mélange à environ 25 C en continuant à malaxer doucement. On ajuste le pH avec des solutions de NaOH de concentration IN ou de HCI de contration I N, pour qu'il atteigne une valeur comprise entre 7,5 et 7,7, après quoi on ajoute de l'eau jusqu'à un volume complet de 300 1. La solution est ensuite filtrée sous pression d'azote à travers un filtre à membrane à 0,S u du type Pall AXP puis conditionnée dans des bouteilles en verre neutre incolore de 30 ml du type I (Braun). - 31 - La formule préférée de la préparation cosmétique est la suivante hyaluronate de sodium 3000 g méthylparabène 600 g eau pour injection 300 1 Les tests en laboratoire ont démontré que cette préparation pour le traitement de la peau, selon la présente invention est plus pure que les autres formes de produits à base d'hyaluronate destinées au traitement de la peau. La méthode d'exclusion par gel HPLC est utilisée pour la détermination de la concentration d'hyaluronate de sodium dans la préparation de la présente invention, comparée à d'autres préparations contenant de l'hvaluronate de sodium qui sont commercialisées. Selon ce procédé, on pèse 1,0 mg d'hyaluronate de sodium que l'on introduit dans un flacon Volumétrique de 100 ml et que l'on mélange jusqu'il soit complètement dissous pour obtenir une solution dont la concentration est de 10 mg/ml. On prélève 2,0 ml de HA de la solution au moyen d'une pipette que l'on introduit dans un flacon volumétrique et que l'on complète avec de l'eau avant de le mélanger de façon complète. On prélève 2,0 ml des solutions contenant de P'hyaluronate de sodium au moyen d'une pipette que l'on introduit dans un flacon volumétrique de 10 ml et que l'on complète avec de l'eau. On démarre une chromatographie liquide avec une vitesse d'écoulement de 1, 5 ml/min. jusqu'à ce que l'on obtienne une base stable. Pour éviter l'influence des fluctuations de la température ambiante, la colonne est isolée et l'on essaie de maintenir la température du local aussi constante que possible. - On effectue un test pilote pour déterminer le temps de rétention d'un standard externe en injectant 20 mcl lors de cet essai. Ceci permet de calibrer un intégrateur électronique. Les calculs peuvent également être effectués par zones au moyen d'une - 32 - courbe comme mentionné ci-dessous Zone en-dessous pic échantillons zone en dessous pic standard x 100 = 9 de concentration de HA Les résultats de ces comparaisons entre la préparation contenant de l'hyaluronate de sodium selon la présente invention avec les préparations du commerce sont représentés par les fig. 4 et 5. La présente invention permet d'obtenir et d'utiliser une fraction d'acide hyaluronique (HA) pur et sensiblement exempt de pyrogènes, stérilisé à chaud, et de réaliser des préparations et des formules contenant cette fraction d'acide hyaluronique destiné à des traitements cosmétiques de tissu humain pour supprimer les signes de vieillissement et les traumatismes causés par des brûlures ou des blessures physiques. La présente invention se base sur la constatation que cette fraction d'acide hyaluronique est à la fois bénéfique et efficace dans le traitement des tissus cutanés et notamment dans celui des rides dues au vieillissement ou à une exposition excessive à l'environnement ainsi qu'aux traitements de tissus brûlés ou blesses. Dans les cas o le vent ou le soleil ont endommagé la peau, l'ont desséchée, les préparations pour le traitement de ces peaux selon la présente invention peuvent être appliquées plusieurs fois par jour pour restituer les propriétés initiales de cette peau en quelques jours. Les préparations destinées au traitement de la peau selon l'invention peuvent être appliquées une ou deux fois par jour sur une peau préalablement nettoyée en vue de la rajeunir ou de la reconstituer lorsqu'elle montre des signes de vieillissement tels qu'un dessèchement, l'apparition de rides, l'apparition de rugosités ou des modifications pigmentaires. Les préparations pour le traitement de la peau selon la présente invention peuvent constituer une base de maquillage ou une base pour un traitement nocturne. L'utilisation régulière de ces préparations constitue un facteur du maintien d'une apparence juvénile et assure une protection efficace contre les facteurs agressifs de l'environnement susceptibles d'accélérer le processus de vieillissement de la peau. Pour atteindre des résultats optimaux, les préparations pour le 264297.1 - 33 - traitement de la peau selon la présente invention peuvent être appliquées pendant deux à trois semaines jusqu'à ce que la peau ait absorbé la substance nutritive à base d'hyaluronate qui lui est nécessaire. Après quoi, une faible quantité de cette préparation peut être appliquée comme mentionné ci-dessous. D'autres agents actifs tels que le collagène, P'élastine ou des liposones peuvent être appliqués directement sur la peau après la préparation de traitement de la peau selon la présente invention. De manière particulièrement avantageuse, les préparations de traitement de la peau selon la présente invention peuvent être appliquées à l'aide d'un tampon de coton sur une peau fraîchement nettoyée, sur la face et le cou avant la mise en place d'une crème de nuit ou d'une crème hydratante, deux fois par jour, une fois avant d'aller au lit et-une fois le matin. La présente invention et ses principaux avantages ne sont pas limités aux formes de réalisation décrites mais peuvent être modifiés et présenter diverses variantes évidentes pour l'homme de l'art sans pour autant dépasser le cadre de cette invention. - 34 - Revendications 1. Préparation cosmétique pour le traitement de la peau comportant a) une fraction composée d'acide hyaluronique, d'origine naturelle; b) un stabilisant, et c) de l'eau. 2. Préparation selon la revendication 1, dans laquelle ladite fraction d'acide hyalurique comprend au moins une des caractéristiques sélectionnées parmi les suivantes: I) masse moléculaire comprise entre 500 000 et 800 000; Il) contenance de moins de 1,25 6 du poids total de muco- polysaccharoses sulfatés; 111) contenance de moins de 0,6?0 du poids total de protéines; IV) contenance de moins de 150 ppm du poids total de fer; V) contenance de moins de 15 ppm du poids total de plomb VI) contenance de moins de 0,0025% de glucosamine; VII) contenance de moins de 0,025% d'acide glucuronique; VIII) contenance de moins de 0,025%ô de Nacétylglucosamine; lX) contenance de moins de 0,0025% d'acides aminés; X) coefficient d'absorption de moins de 0,275 des rayons ultra- violets de 257nm de longueur d'onde; XI) coefficient d'absorption de moins de 0,25 des rayons ultras:iolets de 280 nm de longueur d'onde, et XII) pH de l'ordre de 7,3 à 7,9. 3. Préparation selon la revendication 2, dans laquelle ladite fraction d'acide hyaluronique comporte au moins l'une des caractéristiques choisies parmi le groupe suivant: 1) poids moléculaire compris entre 600 000 et 700 000; Il) contenance de moins de 1%ô du poids total de mucosac- charoses sulfatés; 111) contenance de moins de 0,4%, du poids total de protéines; IV) contenance de moins de 100 ppm du poids total de fer; V) contenance de moins de 10 ppm du poids total de plomb; VI) contenance de moins de 0,00166% de glucosamine; - 35 - VII) contenance de moins de 0,0166% d'acide glucoronique; VIII) contenance de moins de 0,0166% de N-acétylglucosamine; IX) contenance de moins de 0,0166%& d'acides aminés; X) coefficient d'absorption inférieur à 0,23 des rayons ultraviolets de 257 nm de longueur d'onde; XI) coefficient d'absorption de moins de 0,19 des rayons ultraviolets de 280 nm, et XII) pH compris entre 7,5 et 7,7. 4. Préparation selon la revendication 3, dans laquelle ladite fraction d'acide hyaluronique a un poids moléculaire compris entre 625 000 et 675 000. 5. Préparation selon la revendication 3, dans laquelle ladite fraction d'acide hyaluronique contient moins de 0,596 de mucopolysaccharoses sulfatés par rapport au poids total. 6. Préparation selon la revendication 3, dans laquelle ladite fraction d'acide hyaluronique est présente sous la forme d'un sel. 7. Préparation selon la revendication 6, dans laquelle ledit sel est un sel de sodium. S. Préparation selon la revendication 7, dans laquelle ledit sel de sodium est du hyaluronate de sodium. 9. Préparation selon la revendication 8, dans laquelle ledit stabilisant est choisi parmi le groupe comprenant du benzoate de sodium, du méthylparabène, du propylparabène et des combinaisons de ces composés. 10. Préparation selon la revendication 9, dans laquelle ledit stabilisant est du méthylparabène. Il. Préparation selon la revendication 10, dans laquelle ladite préparation comprend - 36 - I à 1,2 93 d'hyaluronate de sodium; de 0,2 à 0,25% de méthylparabène, et 98 à 9996 d'eau. 12. Préparation selon la revendication 11, dans laquelle ladite préparation comprend en poids total: environ 1,096 d'hyaluronate de scrdium, environ 0,2% de méthylparabène, le reste étant composé d'eau. 1 0 13. Partie composée d'acide hyaluronique comprenant au moins une des caractéristiques sélectionnées parmi le groupe suivant: I) masse moléculaire comprise entre 500 000 et 800 000; 11) contenance de moins de 1,25% du poids total de mucopoly- saccharoses sulfatés; III) contenance de moins de 0,69o du poids total de protéines; 1V) contenance de moins de 150 ppm du poids total de fer; V) contenance de moins de 15 ppm du poids total de plomb VI) contenance de moins de 0,0025%,0 de glucosamine; VII) contenance de moins de 0,025%0 d'acide glucuronique; VIII) contenance de moins de 0,025%o de Nacétylglucosamine; IX) contenance de moins de 0,0025%0 d'acides aminés; X) coefficient d'absorption de moins de 0,275 des rayons ultra- xiolets de 257nm de longueur d'onde; XI) coefficient d'absorption de moins de 0,25 des rayons ultraviolets de 280 nm de longueur d'onde, et XII) pH de l'ordre de 7,3 à 7,9. 14. Partie composée d'acide hyaluronique selon la revendication 13, dans laquelle ladite fraction d'acide hyaluronique comporte au moins l'une des caractéristiques choisies parmi les suivantes: I) poids moléculaire compris entre 600 000 et 700 000; Il) contenance de moins de 19 du poids total de mucopoly- saccharoses sulfatés; III) contenance de moins de 0,4% du poids total de protéines; IV) contenance de moins de 100 ppm du poids total de fer; V) contenance de moins de 10 ppm du poids total de plomb; - 37 - VI) contenance de moins de 0,00166% de glucosamine; VII) contenance de moins de 0,0166%0 dracide glucoronique; VIII) contenance de moins de 0, 0166%9 de N-acétylglucosamine; IX) contenance de moins de 0,0166% d'acides aminés; X) coefficient d'absorption inférieur à 0,23 des rayons ultraviolets de 257 nm de longueur d'onde; XI) coefficient d'absorption des rayons ultraviolets de 280 nm de longueur d'onde de moins de 0,19, et XII) pH compris entre 7,5 et 7,7. 15. Partie composée d'acide hyaluronique selon la revendication 14, dans laquelle ladite fraction d'acide hyaluronique a un poids moléculaire compris entre 625 000 et 675 000. 16. Partie d'acide hyaluronique selon la revendication 15, dans laquelle ladite fraction d'acide hyaluronique contient moins de 0,5% de mucopolysaccharoses sulfatés par rapport au poids total. 17. Partie d'acide hyaluronique selon la revendication 16, dans laquelle ladite fraction d'acide hyaluronique est présente sous la forme d'un sel. IS. Partie d'acide hyaluronique selon la revendication 17, dans laquelle ledit sel se présente. sous la forme de sel de sodium; 19. Partie d'acide hyaluronique selon la revendication 18, dans laquelle ledit sel de sodium est de l'hyaluronate de sodium. 20. Procédé de fabrication d'une fraction d'acide hyaluronique d'origine naturelle, comprenant: a) la - fourniture d'un tissu contenant une fraction d'acide hyaluronique, b) la subdivision de ce tissu en particules, c) la soumission des ces particules de tissu à une opération d'extraction à l'acétone comprenant: 1) le mélange desdites particules de tissu avec l'acétone pour produire un mélange de particules dudit tissu et d'acétone; 264 97.1 - 38 - Il) une phase de décantation du mélange de particules dudit tissu et d'acétone, et III) l'évacuation de l'acétone surnageant au-dessus des particules dudit tissu, d) une phase de poursuite de l'extraction de l'acétone pour former de l'acétone supernaturelle contenant moins de 5% d'humidité; e) une phase de retrait de l'humidité des particules de tissus dont on a retiré l'acétone pour produire une poudre; f) une phase d'introduction de papaine pour former un mélange tampon d'enzyme et de tissu; h) une phase de filtration du mélange tampon d'enzyme et de tissu pour séparer le liquide; i) une phase d'ultrafiltration dudit liquide pour obtenir un ultrafiltrat ayant un volume qui est au moins cinq plus grand que le volume dudit mélange tampon d'enzyme et de tissu; j) une phase de poursuite de l'ultrafiltration jusqu'au moment o le perméat est négatif aux acides aminés, k) une phase de réduction du volume de l'ultrafitltrat pour produire un liquide concentré, I) une phase de formation d'un précipité exempt de glycopro- téine contenant du chlorure de cétylpyridinium; m) une phase de soumission du précipité exempt de glycopro- téine contenant du chlorure de cétylpyridinium pour effectuer une extraction au moyen d'une solution de chlorure de sodium pour obtenir un extrait surnageant contenant de l'acide hyaluronique; n) une phase de précipitation des impuretés contenues dans l'extrait surnageant pour produire une solution aqueuse sensiblement claire; o) une phase d'ultrafiltration de cette sofution aqueuse à volume sensiblement constant pour former un filtrat résultant; p) une phase de concentration du filtrat par ultrafiltration dudit filtrat au moyen d'une membrane ayant des limites d'exclusion de l'ordre de 300 DDS pour évacuer l'acide hyaluronique de faible poids moléculaire pour produire un concentré; q) une phase de précipitation du concentré dans de l'alcool; r) une phase de lavage du précipité résultant au moyen - 39 - d'acétone anhydre pour former un composé précipité solide; s) une phase de séchage dudit composé précipité solide contenant une fraction d'acide hyaluronique. 21. Procédé selon la revendication 20, dans lequel ladite fraction contenant de l'acide hyaluronique comporte au moins l'une des caractéristiques choisies parmi le groupe suivant: I) masse moléculaire comprise entre 500 000 et 800 000; Il) contenance de moins de 1,25,% du poids total de mucopo- lysaccharoses sulfatés; III) contenance de moins de 0,696 du poids total de protéines; IV) contenance de moins de 150 ppm du poids total de fer; V) contenance de moins de 15 ppm du poids total de plomb Vl) contenance de moins de 0,0025% de glucosamine; VII) contenance de moins de 0,025% d'acide glucuronique; VIII) contenance de moins de 0,025% de Nacétylglucosamine; lx) contenance de moins de 0,0025% d'acides aminés; X) coefficient d'absorption de moins de 0,275 des rayons ultraviolets de 257nm de longueur d'onde; Xl) coefficient d'absorption de moins de 0,25 des rayons ultraviolets de 280 nm de longueur d'onde, et XII) pH de l'ordre de 7,3 à 7,9. 22. Procédé selon la revendication 21, dans lequel ladite fraction d'acide hyaluronique comporte au moins l'une des caractéristiques choisies parmi le groupe suivant I) poids moléculaire compris entre 600 000 et 700 000; Il) contenance de moins de 1% du poids total de mucosac- charoses sulfatés; III) contenance de moins de 0,496 du poids total de protéines; IV) contenance de moins de 100 ppm du poids total de fer; V) contenance de moins de 10 ppm du poids total de plomb; VI) contenance de moins de 0,00166% de glucosamine; VII) contenance de moins de 0,0166% d'acide glucoronique; VIII) contenance de moins de 0,0166% de Nacétylglucosamine; IX) contenance de moins de 0;0166 6 d'acides aminés; 6 4-297 ? - 40 - X) coefficient d'absorption inférieur à 0,23 des rayons ultraviolets de 257 nm de longueur d'onde; XI) coefficient d'absorption de moins de 0,19 des rayons ultraviolets de 280 nm de longueur d'onde, et XII) pH compris entre 7,5 et 7,7. 23. Procédé selon la revendication 22, dans lequel ladite fraction d'acide hyaluronique a un poids moléculaire compris entre 625 000 et 675 000. 24. Procédé selon la revendication 23, dans lequel ladite fraction d'acide hyaluronique contient au moins 0,5% de mucopolysaccharoses sulfatés par rapport au poids total. 25. Procédé selon la revendication 24, dans lequel ladite fraction d'acide hyaluronique est présente sous la forme d'un sel. 26. Procédé selon la revendication 25, dans lequel ledit sel est un sel de sodium. 27. Procédé selon la revendication 26, dans lequel ledit sel de sodium est un hyaluronate de sodium. 28. Procédé selon la revendication 27, dans lequel ledit stabilisant est sélectionné parmi le groupe comprenant du benzoate de sodium, du méthyparabène, du propylparabène et des combinaisons de ces composés. 29. Procédé de réalisation d'une préparation comportant une fraction d'acide hyaluronique comprenant: a) une phase de formation d'un mélangne aqueux à une température comprise entre 60 C et 90 C, comprenant une fraction d'acide hyaluronique et d'eau dans une solution résultante,; b) une phase d'ajustage du pH de ladite solution résultante pour produire une solution à pH ajusté comprenant une fraction d'acide hyaluronique, des stabilisants et de l'eau, dans laquelle ladite fraction d'acide hyaluronique comporte au moins l'une des caractéristiques choisies parmi le groupe suivant 264 297. - 41 - I) masse moléculaire comprise entre 500 000 et 800 000; 11) contenance de moins de 1,25 , du poids total de mucopolysaccharoses sulfatés; III) contenance de moins de 0,6% du poids total de protéines; IV) contenance de moins de 150 ppm du poids total de fer; V) contenance de moins de 15 ppm du poids total de plomb VI) contenance de moins de 0, 0025 ,96 de gluco samine; VII) contenance de moins de 0,025% d'acide glucuronique; VIII) contenance de moins de 0,025% de N-acétyl- glucosamine; IX) contenance de moins de 0,002596 d'acides aminés; X) coefficient d'absorption de moins de 0,275 des rayons ultraviolets de 257nm de longueur d'onde; XI) coefficient d'absorption de moins de 0,25 des rayons ultraviolets de 280 nm de longueur d'onde, et XII) pH de l'ordre de 7,3 à 7,9, et C) une phase de transposition de ladite solution à pH ajusté vers des conteneurs. 30. Procédé selon la revendication 29, dans lequel ladite fraction contenant de l'acide hyaluronique comporte les caractéristiques choisies parmi le groupe suivant I) poids moléculaire compris entre 600 000 et 700 000; Il) contenance de moins de 196 du poids total de mucopoly saccharoses sulfatés; III) contenance de moins de 0,496 du poids total de protéines; IV) contenance de moins de 100 ppm du poids total de fer; V) contenance de moins de 10 ppm du poids total de plomb; VI) contenance de moins de 0,00166% de glucosamine; -42- VII) contenance de moins de 0, 016696 d'acide glucoronique; VIII) contenance de moins de 0,0166% de Nacétylglucosamine; IX) contenance de moins de 0,0166% d'acides aminés; X) coefficient d'absorption inférieur à 0,23 des rayons ultraviolets de 257 nm de longueur d'onde; Xl) coefficient d'absorption de moins de 0,19 des rayons ultraviolets de 280 nm de longueur d'onde, et XII) pH- compris entre 7,5 et 7,7. 31. Procédé selon la revendication 30, dans lequel ladite fraction contenant de l'acide hyaluronique a un poids moléculaire moyen compris entre 625 00O et 675 000. 32. Procédé selon la revendication 31, dans lequel ladite fraction contenant de l'acide hyaluronique contient moins de 0,5% de mucopo- lysaccharoses sulfatés par rapport au poids total. 33. Procédé selon la revendication 32, dans lequel ladite fraction contenant l'acide hyaluronique se présente sous la forme d'un sel. 34. Procédé selon la revendication 33, dans lequel ledit sel est un sel de sodium. 35. Procédé selon la revendication 34, dans lequel ledit sel est de l'hvaluronate de sodium. 36. Procédé selon la revendication 35, dans lequel ledit stabilisant est choisi parmi le groupe comprenant le benzoate de sodium, le méthyl- parabène, le propylparabène et des combinaisons de ces composés. 37. Procédé selon la revendication 36, comprenant un phase de dilution de ladite solution à pH ajusté au moyen d'une quantité d'eau pour obtenir une solution aqueuse finale comprenant I à 1,296 d'hyaluronate de sodium, 0,2 à 025% de méthylparabène, et 9S à 99% d'eau. - 43 - 38. Procédé selon la revendication 37, dans lequel ledit volume final de la préparation aqueuse comprend: environ 1,0% d'hyaluronate de sodium, environ 0,2%ô de méthylparabène, et le reste d'eau par rapport au poids total. 39. Procédé selon la revendication 29, dans lequel ladite réalisation comprend: 1) la préparation d'une fraction contenant de l'acide hyaluro- nique; Il) l'introduction d'un stabilisant choisi parmi le groupe comprenant du méthylparahydroxybenzoate, du propylparahydroxyben- zoate, du benzoate de sodium et des mélanges de ces composés dans de l'eau chauffée à une température comprise entre 60 C et 90 C pour former une solution stabilisante, 11I) une phase d'addition et de dissolution de ladite fraction contenant de l'acide hyaluronique dans ladite solution stabilisante pour former ladite solution résultante. 40. Procédé selon la revendication 39, dans lequel ledit stabilisant est du méthylparabène. 41. Procédé selon la revendication 40, dans lequel ladite fraction contenant de l'acide hyaluronique est réalisée au moyen d'un procédé comprenant: a) la fourniture d'un tissu contenant une fraction d'acide hyaluronique, b) la subdivision de ce tissu en particules, c) la soumission des ces particules de tissu à une opération d'extraction à l'acétone comprenant I) le mélange desdites particules de tissu avec l'acétone pour produire un mélange de particules dudit tissu et d'acétone; Il) une phase de décantation du mélange de particules dudit tissu et d'acétone, et III) l'évacuation de l'acétone surnageant audessus des particules dudit tissu, - 44 - d) une phase de poursuite de l'extraction de l'acétone pour former de l'acétone supernaturelle contenant moins de 596 d'humidité; e) une phase de retrait de l'humidité des particules de tissus dont on a retiré l'acétone pour produire une poudre; f) une phase d'introduction de papaine pour former un mélange tampon d'enzyme et de tissu; h) une phase de filtration du mélange tampon d'enzyme et de tissu pour séparer le liquide; i) une phase d'ultrafiltration dudit liquide pour obtenir un ultrafiltrat ayant un volume qui est au moins cinq plus grand que le volume dudit mélange tampon d'enzyme et de tissu; J) une phase de poursuite de l'ultrafiltration jusqu'au moment o le perméat est négatif aux acides aminés, k) une phase de réduction du volume de l'ultrafitltrat pour produire un liquide concentré, I) une phase de formation d'un précipité exempt de glycopro- téine contenant du chlorure de cétylpyridinium; mr) une phase de soumission du précipité exempt de glycopro- té.ne contenant du chlorure de cétylpyridinium pour effectuer une 2G extraction au moyen d'une solution de chlorure de sodium pour obtenir un extrait surnageant contenant de l'acide hyaluronique; n) une phase de précipitation des impuretés contenues dans l'extrait surnageant pour produire une solution aqueuse sensiblement claire; o) une phase d'ultrafiltration de cette solution aqueuse à volume sensiblement constant pour former un filtrat résultant; p) une phase de concentration du filtrat par ultrafiltration dudit filtrat au moyen d'une membrane ayant des limites d'exclusion de l'ordre de 300 DDS pour évacuer l'acide hyaluronique de faible poids moléculaire pour produire un concentré; q) une phase de précipitation du concentré dans de l'alcool; r) une phase de lavage du précipité résultant au moyen d'acétone anhydre pour former un composé précipité solide; s) une phase de séchage dudit composé précipité solide contenant une fraction d'acide hyaluronique.