Brevet FR2642973A1 — publié le 19900817

La présente invention concerne le dérivé glucidique dioxyméthylé de la strophanthidine, qui est connu sous le nom de Mansonine, à savoir la 2',3' 0 dioxyméthyl- 6ssméthyl-3ssD-glucose-strophanthidine de formule brute C31H46O10, de structure digitalo-mimétique, et répondant à la formule (I) suivante: soit, dans ea représentation spatiale La présente invention porte, d'une part, sur un nouveau procédé de préparation du composé de formule (I), et 'autre part, sur l'utilisation de ce composé, ou de ses ses pharmaceutiquement acceptables, dans des préparations pharmaceutiques pour le traitement et la prévention des insuffisances cardiaques et de maladies cardio-vasculaires. L'invention porte également sur une fraction contenant le composé de formule (i) et sur ses applications également pour le traitement et la prévention des insuffisances cardiaques et des maladies cardio-vasculaires. La préparation du composé de formule (i > a été décrite pour la première fois par Allgeier et al., dans "Hely. Chim. Acta. 50, 1967, p. 455 Agr. Trop. 27, 1947. p. 422". En Afrique de l'Ouest, des préparations d'écorces de M altissima sont utilisées traditionnellement comme poisons de flèches, et comme décoctions en bains externes anticedémiques. La présente invention a donc d'abord pour objet un procéde de préparation du composé de formule (I), ce procédé étant caractérisé par le fait que - dans une première étape, on conduit une extraction aqueuse à chaud d'écorces de Mansonia altissima, pour obtenir un extrait P1 ; - dans une seconde étape, on procède å une extraction de l'extrait P1 par un solvant organique capable de solubiliser P1 pour obtenir un extrait P2 ;; - dens une troisieme étape, on conduit un fractionnement de l'extrait P2 par une succession de chromatographies d'échange dotions sur des résines anioniques et cationiques capables d'éliminer les substances chromogènes que contient l'extrait P2, en ne retenant A chaque chromatographie que la fraction capable d'inhiber l'ATPase Na , K , pour obtenir une fraction P3 ;; - dans une quatrième étape, on conduit un fractionnement de 1 fraction P3 par une chromatographie d'élution ou de partage, afin de recueillir la fraction P4 qui est capable d'inhiber l'ATFase Na+, K+ et qui constitue le composé de formule (I > recherché ; et - le cas échéant, on transforme le composé de formule (I) en l'un de ses sels pharmaceutiquement acceptables. On utilise notamment, comme produit de départ, des écorces de Mansonie altissima var. altissima. La première étape du procédé est donc une extraction aqueuse, à chaud, notamment à l'ébullition, à la pression atmosphérique ou, si on le désire, sous pression. A la deuxième étape. qui peut être conduite à froid, on utilise notamment, comme solvant d'extraction, un solvant organique chloré, tel que le chloroforme. De préférence, entre la première et la deuxième étape, on effectue une délipidation de l'extrait P1, à l'aide notamment d'un agent de délipidat-ion classique, comme l'éther de pétrole. A la troisieme étape, on-utilise, comme résines anioniques, en particulier des résines de type dextrane ou polysaccharide, modifiées par l'introduction de fonctions anioniques, telles que la fonction carbamate de méthyle. A cette même étape, on utilise, comme résines cationiques, notamment des résines de type dextrane ou polysaccharide, modifiées par l'introduction de fonctions cationiques, telles que la fonction diméthylaminoéthyle, et des résines obtenues par condensation du formaldéhyde avec des acides phénol- et phényl-sulfoniques. A la quatrième étape, on peut conduire un fractionnement de la fraction P3 par une chromatographie d'élution, sur une colonne de gel de silice par exemple, ou encore per une chromatographie de partage sur couche mince. Le composé de formule (I) est obtenu notamment sous la forme de fins cristaux, à l'état très concentré dans un mélange eau-éthanol (1: 1 > . Ce composé pourra donc être présenté sous forme de solutions très diluées dans l'eau bidistillée ou le sérum physiologique. Par ailleurs, le composé de formule (I) pourra être salifié sur ses sites hydrophobes. La présente invention porte également sur la fraction P3, telle qu'elle est obtenue par le procédé qui vient à'être défini. Les présents inventeurs ont par ailleurs maintenant mis en évidence que le composé de formule (I) présente à ia fois des activités tonicardiaque, vasodilatatrice. anticalcique et antiarythmique. Certes. i avait été démontré au préalable que des extraits aqueux d'écorces de Mensonia altissima var. aitissima inhibent l'activité de l'ATPase Na+, K des microsomes de cerveau de lapin (C.R. Acad. Sc. Paris, t. 26-4, en date du 6 juin 1977). Cependant, cet extrait total n'a pas de propriétés bien déterminées, s'agissant d'un mélange complexe de nombreuses substances. Les travaux menés par les présents inventeurs ont maintenant permis de mettre en évidence que le composé de formule (I? possède des propriétés tonicardiaques en même temps qu'antihypertensives, alors que la plupart des produits de ce type, s'ils sont tonicardiaques, sont plutôt des hypertenseurs. Cette double potentialité complémentaire est à souligner. Par ailleurs, il a été confirmé que le composé de formule (I) possède des propriétés anticalciques, évitant ainsi chez les hypertendus l'accumulation et l'absorption de calcium par les plaquettes du sang, qui peuvent boucher les vaisseaux sanguins. Il a aussi été confirmé que le composé de formule (I > a une activité antiarythmique, ce qui évite de faire appel au choc électrique pour lutter contre la fibrillation. Cette combinaison unique de propriétés rend le composé de formule. (I) très intéressant comme médicament pour le traitement et la prévention des insuffisances cardiaques et en pathologie cardio-vasculaire, comme substitut des digitaliques classiques. Il a ainsi été montré que le composé de formule a) une action inotrope positive, avec une augmentation de la contraction a 70% au-dessus de la normale s la dose 10 nM plasmatique, et du tonus de la contraction du transversus de 200% à la dose 50 nM chez le mouton b > une action vasodilatatrice périphérique avec réduction de la résistance périphérique totale de 30% à la dose 10 nM plasmatique , c > un effet anticalcique avec réduction d'un courant calcique rentrant de 30% à 70% à des doses de 5 à 50 nM sur la fibre slno-auriculaire de la grenouille. Par ailleurs, le composé de formule (I) présente des effets antiarythmiques à des doses picomolaires sur le coeur arythmique de rat et des effets anti-fibrillants a. 50 nM, par un rallongement du délai diastolique du trabécule ventriculaire de singe. Ce médicament pourra donc être prescrit dans le traitement et la prévention des états pathologiques tels que - les insuffisances cardiaques pour lesquelles les digitaliques sont prescrits, dans le but d'améliorer la cardiotonicité, pour améliorer le rythme cardiaque, et pour lutter contre la fibrillation - l'hypertension artérielle d'origine hypercalcique, pour lutter contre 1' artériosclérose La présente invention a donc pour objet une composition médicamenteuse pour le traitement et la prévention des insuffisances cardiaques et de maladies cardio-vasculaires chez l'homme et l'animal, caractérisée par le fait qu'elle renferme, à titre de principe actif, la fraction P telle que définie ci-dessus, ou de la 2'.K'-åioxyméthyl-6$méthyl-36D-glucose-strophanthidine de formule (I), ou l'un de ses sels pharmaceutiquement acceptables, en association avec un véhicule pharmaceutique ment acceptable convenant au type d'administration ccnsidéré. La présente invention a aussi pour objet l'utilisation de la fraction P3 telle que définie ci-dessus, du dérivé de formule (I) ou de l'un des sels pharmaceutiquement acceptables de ce dernier, pour fabriquer une composition médicamenteuse ayant la destination précitée. La présente invention concerne aussi un procédé de préparation d'une composition médicamenteuse destinée au traitement et à la prévention d'insuffisances cardiaques et de maladies cardio-vasculaires chez l'homme et l'animal, caractérisé par le fait qu'on mélange une quantité pharmaceutiquement efficace de la fraction P3 telle que définie ci-dessus, ou de la 2',3'-dioxyméthyl-6ssméthyl3ssD-glucose-strophanthidine, ou de l'un des sels p:arrceutiquement acceptables de cette dernière, avec au moins un excipient compatible pharmaceutiquement acceptable. La composition pharmaceutique selon l'invention convient pour l'administration orale, notamment sous forme de gélules ou de comprimés, ou bien pour l'administration par injection intraveineuse ou intramusculaire, ou encore pour l'administration intrapéritonéale. En particulier, elle convient pour le traitement des défaillances cardiaques et des maladies cardio-vasculaires, en particulier, de l'hypertension et de l'artériosclérose detype hypercalcique, procurant une quantité efficace du composé de formule (I) ou d'un de ses sels pharmaceutiquement acceptables, allant jusqu'a 300 ng par kg de poids corporel, ou, de préférence, jusqu'à 250 ng par kg de poids corporel. On va maintenant décrire de façon détaillée, tout d'abord en (A) 1'obtention du composé de formule (I) à l'état pur conformément au procédé de la présente invention, ainsi que son identification, puis en (B), la caractéri ctren des propriétés pharmacodynamiques de ce composé. (A) PREFARATION DU COMPOSE DE FORMULE (I > 1 - Extraction te composé de formule (I) a été extrait à partir d'écorces de Mansonis altissima var. altissillies dans la forêt tropicale primaire de Côte d'ivoire. 500 g de ces écorces débarrassées de leur cuticule sont hachés, portés à ébullition, pendant 2 heures, dans 2 litres d'eau bidistillée. La décoction brune-et sirupeuse obtenue est filtrée sur de la gaze médicale, pour éliminer le résidu, puis sur du papier filtre Whatmann n 3MM doublé de coton hydrophile. Le filtrat est ensuite évaporé à siccité dans un évaporateur rotatif Rotavapor BUchi, à 30'C et à pression réduite. Les 100 g de l'extrait P1 qui en résulte, se présentant sous la forme d'une pâte brune, visqueuse, sont délipidés à l'éther de pétrole (2 ml/g de P1), avec des agitations périodiques, pendant 48 heures. Le produit insoluble de la délipidation est-redissous dans 300 ml d'eau bidistillée et extrait au chloroforme (rapport final CHCl3/H2O 80:20, v/v) dans une ampoule à décanter pendant 24 heures. On agite par retournements périodiques. La phase chloroformique, évaporée à siccité à 30-C et à pression réduite, donne 10 g d'un extrait P2, poudreux, jaune, amer et très hygroscopique. 2) Purification Les 10 g de l'extrait P2 dissous dans du chloroforme sont purifiés par chromatographie sur une série de trois colonnes - la première (1 x 10 cm) est une colonne de carbamate de méthyle (CM-)-Sephadex anionique C-25 (Pharmacia Fine Chemicals) ; - la seconde colonne (2,5 x 20 cm), une colonne d'Amberlite 20-50 type IRA-68 cationique lot 40280 (Reagenzen) ; et - la troisième colonne (1,5 x 15 cm), une colonne de DEAE + -Sephadex A25 (Pharmacia Fine Chemicals) lot 4994. Les substances sont éluées à travers les colonne, pré-équilibrées avec un mélange CHCl3/H20 (50:50, v:v > ; en utilisant, comme éluant, CHCl3/H20 (50:50, v/v), pendant 6 heures, å une vitesse d'élution d'environ 62,5 ml/heure, on recueille 500 ml d'éluats incolores et limpides, qu'on soumet alors à une lyophilisation. On sélectionne et on retient les fractions capables d'inhiber fortement l'ATPase Na+,K+ de rein de porc, conformément à la méthode de Schooner et al décrite dans "Eur. J. Biochem. 1 (1967), p 334-343". On obtient alors 1 g d'une fraction P3, se présentent sous le forme d'une poudre blanche sale. La fraction P3, redîssoute dans 10 ml de CHCl3/H2O (90:10, v/v). est chromatographiée sur une colonne (2,5 x 20 cm) de Silica gel (60 F 254, Merck Darmstad > , équilibrée dans une phase mobile CHCl3/H20 (90: 10, v/v) comme cela est décrit par Allgeier et coll. dans Helv. Chim. Acta. 50, 1967, pp. 456-460. La vitesse d'élution est de 62,5 ml/h et la fraction recherchée P4, sélectionnée par la méthode précitée de Schöner, est éluée dans le premier litre de la phase mobile recueillie. Ces 1000 ml d'éluat sont lyophilisés et donnent 400 mg de P4 semi-cristallisé, qui sont redissous dans 20 ml d'éthanol et cristallisent dans ce solvant, à la température ambiante. 3) Analvse des fractions P3et P4 Les fractions P3 et P4 sont chromatographiées sur couche mince de plaques (20 x 20 cm > de cellulose enduite de polyéthylène imide fluorescente (lot 5579-1166005, Merck Darmstad). 10 mg de chaque fraction dissoute dans du CHCl3/H20 (50:50 v/v) ont été déposés en comparaison avec les mêmes quantités d'Ouabaïne (lot 7887-8545885, Merck Darmstad) et de Mansonine de référence (0,5 ml 10-3 M, lot 67). fournie par le Docteur Allgeier de l'institut de Chimie Organique de Balle. La chromatographie est à phase mobile montante, composée de butanol/eau/acide acétique (5: 3: 2, v/v: v > dans une enceinte saturée de vapeurs butanoliques. L'élution dure 4 heures. La lecture par fluorescence aux rayons UV de ce chromatogramme donne - Pour P3 : quatre taches dont l'une à un Rf de 0,700 - Pour P4 : une tache à un Rf de 0,700 - Pour la Mansonine de référence : une tache à un Rf de 0, 700 - Pour l'Ouabaïne : une tache à un Rf de 0,650. La fraction P3 a donc été résolue en quatre taches, oui ont été retirées par grattage. Toutes les fractions ont été dissoutes dans 3 ml d'eau chacune, puis elles ont été centrifugées pendant 20 minutes à 10 000 x g. Les spectres UV (de O à 350 nm), réalisés sur des solutions 100 g/ml de CHCI3/H20 (50:50, v/v > , permettent d'évaluer le degré de pureté des fractions chromato graphitées - P3 : 4 pics à 160, 217, 218 et 230 nm - P4 : 1 seul pic à 217 nm - Mansonine de référence : 1 seul pic à 217 nm D'autres chromatographies sur plaque à couche mince de silicagel, réalisées simultanément et comparativement avec l'ouabaïne et la fraction P4, ont été révélées avec le réactif de KEDDE , du H2SO4 2N et du Cl3Sb. Ces treitements permettent d'identifier une lactone insaturée et la nature stéroïdique et glycosidique de la fraction P4 comme chez l'ouabaïne et la Mansonine de référence La caractérisation de P4, ainsi identifié à la Mansonine, a consisté en la détermination de la formule brute de la masse moléculaire et de la structure par une spectroscopie de masse ionique (Modèle CH4 Ionic T04 Einlassystem). Les résultats sont confirmés par un spectre de résonance magnétique nucléaire modèle Brucker (Fig 1). Le spectre UV (Fig 2) est aussi confirmé par une chromatographie phase liquide de haute performance (HPLC > (Système C18 inverse Modèle 440 > , en condition isocratique Légendes des figures 1, 2 et 3 : Figure 1 : RMN Résonance de H+ sous forme [3H]. Solvant : éthancl pur Figure 2 : UV Densité optique en fonction de la longueur d'onde en nm. Solvant : alccol-eau Concentration : 100 pg/ml Figure 3 : HPLC Densité optique en fonction du temps d'élution en mn (à 254 nm > . Eluant : méthanol/eau (30:70, v/v) Débit d'élution : 1 ml/minute Vitesse d'enregistrement = 1 cm/minute 5 > Résultats Il résulte du traitement de P4 par la spectroscopie de masse et par la résonance magnétique nucléaire (Fig 1) que la substance est un stéroïde glucidique (C31H46O10). qui réagit positivement aux tests de Libermann, au trichlorure d'antimoine (Cl3Sb) et å la réaction de Kedde. Ces réactions confirment respectivement la nature glycosidique et stéroïdique porteuse d'une lactone insaturée. Le spectre en HPLC détermine le degré de pureté avec un pic unique (Fig 3), et le spectre UV donne une abscrption maximale à 217 nm (Fig 2 > .La température de fusion est à 172 + 2'C, le pouvoir rotatoire [&alpha;]D20= + 6,7 C dans le méthanol et le-poids moléculaire (PM) = 578,71. (B) CARACTERISATION DES PROPRIETES PHARMACODYNAMIQUES DU COMPOSE DE FORMULE (I) Les études ont d'abord porté (1) sur la toxicité du composé (I), puis (1) Limites de toxicité du composé Les tests de toxicité portant sur la dose létale (DL > , la dose létale 50 (DL50) et la dose maximale tolérée (DMT), ont été effectués sur le rat, le cobaye et le lapin . Tableau I : Doses limites de toxicité du composé (I) Paramètres Rat Cobaye Lapin DMT ( g/kg) 120 # 5 130 # 3 12 # 0,02 DL50 ( g/kg) 150 # 5 110 # 5 20 # 0,05 DL100 ( g/kg) 200 # 5 130 # 7 100 # 0,5 La toxicité du composé (I) est deux fois plus réduite chez le rat, réputé résistant aux digitaliques, que chez le cobaye reconnu assez sensible En revanche, chez le lapin, cette toxicité est 5 fois plus forte que chez le cobeye. Par ailleurs, des tests sur la contracilité et l'excitabilité [atleau II : Limites de toxicité du composé (I) sur le myocarde (singe et lapin) I Dose thérapeutique Dose toxique Effets # 100 nM # 100 nM ( faible forte (5x10-8M (# 10-7M) Inotrope (+) (++) * (+++) Chronotrope (-) (--) * (++) Dromotrope (-) (--) * (---) Sathmotrope (-) (+) * (++) t Effets dont l'ampleur croit avec les concentrations en composé de formule (I). (2) Effets biochimiques du composé (I) Le composé (i) présente des effets inotropes ifs sur l'hémodynamie du chien anesthésié. Cet effet inotrope est corroboré par des effets inhibiteurs sur l'ATPase Na+K+. Le composé Cette reconnaissance différentielle est bien marquée chez le rat, le chien, le cobaye et le singe, par une participation selon des pourcentages bien définis de populations de sites de haute affinité et de basse affinité. Les sensibilités comparées au composé (I) des isoformes de l'ATPase Na K de sarcolemmes de coeur de rat, de cobaye, de chien et de singe, sont rapportées dans le Tableau III. Tableau III : Tableau comparatif de la sensibilité au + + composé I) des isoformes de l'ATPase Na ,K des sarcolemmes du coeur du rat, cobaye, chien et du singe Espèces CI@@(nm) Kn % contribution SR/activité e fixation &alpha;+(nM) &alpha;(vM) HA BA D&alpha;/kD&alpha;;+ at nonmal ans Ca2+ (n=8) ! 20+1 I 9+1 9#1 ! 54#5 4656 1000 avec Ca2+ nM+ (n=7) 1000#12 9#1 6#3 38#2 62#2 670 Ret en SA choc C+Ca2+mM (n=5) 1200#20 60#7 50#6 30#2 30#2 830 Hypertrophie (n=5) + Ca2+ 2 mM 500#10 20#2 50#2 66#6 34#6 2500 Cobaye normal (n=8) 100#10 10#1 3#1 57#4 43#4 300 Ineuffisant (n=2) 100#10 10+1 15+5 i 48+5 5255 1500 bien normal 30#5 0,5#0,1 0,1#0,00 30#5 70#5 167 inge normal oeur congelé 600#50 75#10 55#10 68#2 32#2 167 choc : mêmes conditions opératoires que l'hypertrophie. On constate, dans ce Tableau, que le rapport de pourcentages des populations des sites de basse affinité (BA) sur ceux des populations de sites de haute affinité (HA), qui marque la sélectivité dans la fixation du composé (I) sur les isoformes de l'ATPese Na+K+, peut être comparé à la notion d'indice thérapeutique IT qui est déterminé in vivo par le rapport de la dose toxique-sur la dose thérapeutique.Dans ce tabieau, le composé (i) présente, pour le rat, unanimement reconnu comme résistant aux digitaliques (sélectivité dans la fixation de l'ordre de 250), un indice quatre fois supérieur aux digitaliques (sélectivité dans la fixation égale è 1000 > . Dans les cas pathologiques, ce rapport passe de 1000 à 2500 dans le coeur hypertrophié de rat, de 300 à 1500 dans le coeur insuffisant de cobaye. Chez le singe, pour lequel ce rapport est de 750, la sensibilité des isoformes au composé (I) est parfaitement représentée par les courbes de la Figure 4. Légende de la Figure 4 ATPase Na K du coeur du singe Mangabe + EGTA sensibilité à l'ouabaïne (@) et au composé (I) (@). La courbe donne le pourcentage d' activité résiduelle en fonction du logarithme de la concentration en ousbaïne ou en composé (I) (S) Effets hemodvnamiaues et physiologiques du composé (I) On décrira ces effets en faisant référence aux Figures 5 à 9 ci-après Figure SA : Effet inotrope du composé (I) 3,3 nmoles/kg/min et pendant 20 minutes sur la pression systolique du chien anesthésié (méthode de Jareau et al (1984) LND 623.-Eur. Heart J., 5 309-314. ) La courbe représentée est la courbe de variation (#%) de la pression au c-ours du temps. Figure 5B : Evolution du couple potentiel d'action intracellulaire (FA)/tonus de la contraction du transversus ventriculaire droit de mouton (I) en présence du composé (I) 500 nM (dose toxique) dans un temps allant de 0 à 20 minutes Variations du PA N+1 o à 6 mn : 5% 2 10 mn : 9% 3 15 mn : 15% 4 20 mn : 26% (avec apparition de OAP > Variations du tonus de la contraction N 100% 1 120% 2 140% 3 175% 4 200% OAP : oscillation après potentiel OAC : oscillation après contraction CII) en fonction de concentrations de composé à 500 nM à 20 minutes. Variations du PA N+1 : 5% 2 : 10% (10-7M) 3 : 15% (2.10 îo M > 4 : 28% (5.10-7M) (avec apparition d'OAP) Variations du tonus de la contraction N 100% 1 120% 2 140 3 175% 4 200% La technique utilisée est celle de la microélectrode Physiol. 34. 383-396 ; Coraboeuf et al (1949), C. R. Soc. Biol., Paris, 143, 1329-1331). La solution de perfusion est du tyrode + du sucrose. Figure 6 : Effet vasodilatateur du composé 3,3 nmoles/kg/min et pendant 20 minutes sur plusieurs paramètres de l'hémodynamie de chien anesthésie. Les courbes représentées décrivent la variation d'un paramètre a à d ci-apres en fonction du temps a la Pression Artérielle Moyennne : PAM b l'indice de Kotr : PAM/FC (FC = fréquence cardiaque) c la Résistance Périphérique Totale (RPT) : PAM/DC (DC = débit cardiaque) d la Conscmmation d'Oxygène : PAM x FC La solution du composé (I > injectée est diluée avec du NaCl Le controle est joint à NaCI et marque #% = 0 La méthode est la méthode précitée de Jarreau et al. Figure 7: Courant calcique de dépolarisation de la fibre sino-auriculaire de grenouille par la méthode de voltage-clamp (50 mV) (Deck et al Arch., 280, 50-62). Le milieu de perfusion est du Ringer physiologique + Tetrodontoxine (TTX > + mannitol + Ca2t 2,5 mM sans Composé (i) 0 M (N) en présence de composé (I) 5 x 10 9 M Figure e # Effet du composé coeur rendu arythmique par hypothermie isolé de rat) A : Fonctionnement normal du coeur arythmique B : Addition du composé (I) à 20 pM finale) C : Modification du fonctionnement arythmique par le composé D :Suite de C après 3 minutes Echelle verticale : i cm - Horizontale : 10s Figure 9 : Effet du composé (I) sur le temps. de la dépolarisation diastolique du trabécule ventriculaire du singe Technique de la microélectrode. 9A Evolution de la phase diastolique des réponses électriques du trabécule de singe en présence du Ca et de composé (I) 1. 2mM K+ 2. 2mM K+ et composé (I) 5 x 10-8 M 3. 2mM K++ et 0,5 mM Ca ++ 4. 2mM K+, 0,5 mM Ca++ et composé (I) 5 x 10 - M 9B Action comparative de l'adrénaline et du composé (I) sur la phase diastolique de la réponse électrique transmembranaire du trabécule de singe que pour 9A > . 1. 0,5 mM Ca 2. 0,5 mM Ca et adrénaline 10 5 mM 3. 0,5 mM Ca et composé Résultats 1 > Résultats hémodynamiques chez le chien Les chiens anesthésiés sont perfusés pendant 20 minutes avec le composé (I) ou l'ouabaïne, à la dose de 3,3 nanomol/kg et par minute, å la vitesse de 1 ml/mn en i.v. (saphène). Les témoins sont perfusés dans les mêmes conditions avec une solution de NaCl 0,9% (Pds/V). Ce protocole permet d'observer l'évolution jusqu'à 180 minutes des paramètres suivants, en présence du composé (I) et d'ouabaïne en doses équimolaires et dans les mêmes conditions expérimentales.Les valeurs sont exprimées en #% de l'action de la drogue par rapport au témoin = La concentration finale des drogues, soumises à la diffusion étant estimée à 60 nM, cette dose inotrope exerce une évolution globale de 0 min début d'observation) à i80 min (fin d'observation) des paramètres suivants, consignés dans le Tableau IV. a) au niveau du coeur - Pression systolique (P'max) de 0 à +70% b) au niveau des vaisseaux - .La pression artérielle moyenne (PAM) varie de 0 à -30% (Fig. 6a > - La consommation d'oxygène (PAMxFC) varie de o å -27% - L'index Katz CPAM/FC) varie de 0 à -33% (Fig 6b) - La résistance périphérique totale (RPT) varie de O à -34% (Fig. 6c) On constate que le composé (I) 80 mM fait varier les paramètre de # de pression intravasculaire en dessous de zéro. Il y a donc action vasodilatatrice du composé (I). Tableau IV Variation des paramètres hémodynamiques chez le chien anesthésié en prsence du composé (I) (MSN) et d'ouabaïne (OUA) : 3,3 nanomoles/kg/min x 20 min. Paramètres Drogues %# à 0 min %# à 20 min %# max (min) %# à 90 min P'max MSN 0 70#1 75#1,5 (45') 60#2 OUA o 45 #2 90 #1,5(45') 75 t2 P'max/P40 MSN 0 65#1,2 65#1,2(20') 40#1,5 OUA 0 30#2 55#2(40') 45#2 P'min MSN 0 18#2 18#2(20') -40#0,8 OUA 0 50#2 60#2(30') 35 Index relaxation MSN 0 -1#0,6 0,50(90') 0,5 PTVG OUA 0 -1#0,6 0,50(5') -1 Fréquence MSN 0 4#0,5 5#1(15') 4#0,5 cardiaque FC OUA 0 0 7#2(60') 7#2 Débit éjection MSN 0 12#1 13#1(60') 11#0,5 systolique DES OUA 0 10#2 15#2(25') 2#0,5 Index cardiaque MSN 0 5#2 7#1(40') 5#1 OUA 0 10#2 15#1(35') 5#2 Consommation O2 MSN 0 20#1 20#1(20') -27#3 PAM x FC OUA 0 45#2 45#2(20') 25#2 Index Katz MSN 0 10#0,6 12#1(10') -33#2 PAM/FC OUA 0 45#3 45#3(20') 2#0,6 Travail (TWg) MSN 0 33#2 33#2(20') -26#1 PAM x DC OUA 0 60#3 65#2(25') 15#2 Résist. MSN 0 -0,13 7#1(10') -33#1 périf. tot. OUA 0 25#2 25#2(20') 5#1 RPT = PAM/DC Press. art. MSN 0 19#1 19#1(20') -14#1 systol. PAS OUA 0 40#1 45#2(30') 15#2 Press. art. MSN 0 18#0,5 18#0,5(20') -40#1 diast. OUA 0 40#2 40#2(20') 5#1 TWg/batt. MSN 0 28#1 28#1(20') -29#1 OUA 0 65#3 70#5(25') 20#2 ésultats physiologiques Ces résultats caractérisent l'action du composé (I) sur les activités électrique et mécanique du transversus ventriculaire droit de mouton, sur le courant calcique et de dépolarisation de l'oreillette gauche de grenouille et sur la pression carotidienne sanguine du rat anesthésié au Nembutal. a) Activités électrique et mécanioue du transversus L'activité électrique est représentée par PA d'amplitude égale à 115 millivolts en valeur absolue, et une durée de 450 millisecondes. L'amplitude de ce PA subit une réduction de 5, 10, 20 et 30% de sa valeur normale de 0 à 20 minutes avec le composé (I) 5 x 10 7 M (Fig. 5B ). L'activité mécanique est représenté par les tracés (Fig. 5S (I) et ) d'une contraction normale de 200 mg de tonus et 400 millisecondes de durée. Ces paramètres qui évoluent jusqu'à 200% du tonus normal par 5 x 10-7 M de composé (I), varient avec les concentrations de composé (I) (5 x 10 & à 5 x 10 7 M) et avec le temps jusqu'à 20 min. La dose de composé (I > , ainsi que d'oscillation extra-contraction oscillation after contraction (O.A.C.) sur la contraction (Fig. 5B (I > et ). b) Le courant calcique de dépolarisation Le courant calcique a été réalisé avec un voltage imposé (voltage clamp) de 50 mV en présence de TTX qui élimine le courant sodique rapide. La présence de composé (I) 5 x 10 9 M donne une réduction de 30%, aggravée à 70% du courant calcique normal par le composé (I) 5 x 10 8 M de concentration finale, dans un milieu Ringer + Ca2+ 2,5 mM (Fig. 7). REVENDICATIONS i. Composition médicamenteuse pour le traitement et la prévention des insuffisances cardiaques et de maladies cardio-vasculai res chez l'homme et l'animal, caractérisée par le fait qu'elle renferme, à titre de principe actif, de la 2',3'-dioxyméthyl-6-méthyl-3-bêta-D-glucose-strophanthi- dine, également connue sous le nom de Mansonine, représentée par la formule ( où l'un de ses sels pharmaceutiquement acceptables, en association avec un véhicule pharmaceutiquement acceptable convenant au type d'administration considéré. 2. Composition médicamenteuse selon la revendication 1, caractérisée par le fait qu'elle est destinée au traitement et à la prévention des états pathologiques tels que: - les insuffisances cardiaques pour lesquelles les digital iques sont prescrits, dans le but d'améliorer la car diotonicité, pour améliorer le rythme cardiage et pour lutter contre la fibrillation; - I'hypertension artérielle d'origine hypercalcique. pour lutter contre l'arteriosclérose. 3. Composition médicamenteuse selon l'une des re vendicat ions I et 2, caractérisée par le fait qu'ellee convient pour l'administration orale, notamment sous forme de gélules ou de comprimés, ou bien pour l'administration par injection intraveineuse ou intramusculaire, ou encore pour l'administration intrspéritonéale. 4. Composition médicamenteuse selon l'une des revendications 1 à 3, pourle traitement des défaillances cardiaques et des maladies cardio-vasculaires, en particulier de l'hypertension et de l'artériosclérose de type hypercalci que, procurant une quantité efficace du composé de formule (I), ou d'un de ses sels pharmaceutiquement acceptables, allant jusqu'à 300 ng par kg de poids corporel, ou, de préférence, jusqu'à 250 ng, par kg de poids corporel. 5. Médicament contenant de la mansonine. 6. Utilisation de la 2', 3'-dioxyméthyl-6-beta- méthy-l-3-bêta-D-glucose-strophanthine, représentée par la formule I) ou de l'un de ses sels pharmaceutiquement acceptables pour fabriquer une composition médicamenteuse destinée au traitement des insuffisances cardiaques et de maladies cardiovasculaires chez l'homme et l'animal. 7. Procédé de préparation d'une composition médicamenteuse destinée au traitement et à la prévention d'insuffisances cardiaques et de maladies cardio-vasculaires chez l'homme et l'animal, caractérisé par le fait qu'on mélange une quantité pharmaceutiquement efficace de 2',3' dioxyméthyl-6-bêta-D-glucose-strophanthidine, ou de l'un des sels pharmaceutiquement acceptables avec au moins un excipient compatible pharmaceutiquement acceptable.