Brevet FR2636343A1 — publié le 19900316

L'acide céto-2 L gulonique, intermédiaire de synthèse de l'acide ascorbique, est généralement présent dans les moûts de fermentation de microorganismes appropriés sous forme de céto-2 L gulonate de calcium. Pour sa transformation en acide ascorbique, il est parti- culièrement avantageux de pouvoir disposer de l'acide céto-2 L gulonique soit sous forme libre (2KLG-H) soit sous forme de sel de sodium (2KLG-Na) sous une forme aussi pure que possible. Selon les demandes de brevets japonais JP 52.66684 et JP 53.62894, il est connu de préparer le céto-2 L gulonate de sodium pratiquement pur & partir d'un moût de fermentation contenant du céto-2 L gulonate de calcium. Cependant la mise en oeuvre indus- trielle de ces procédés ne permet pas d'obtenir directement l'acide céto2 L gulonique nécessaire à la transformation ultérieure en acide ascorbique. Il a maintenant été trouvé, et c'est ce qui fait l'objet de la présente invention, que l'acide céto-2 L gulonique (2KLG-H) pratiquement pur peut être obtenu avec de bons rendements A partir des moûts de fermentation contenant le céto-2 L gulonate de calcium par un procédé simple et facilement reproductible. Les milieux de fermentation conduisant au 2KLG-H contien- nent généralement, A côté de l'acide céto-2 L gulonique sous forme de sel de calcium, une biomasse insoluble et des impuretés orga- niques ou minérales, les impuretés minérales consistant essentiel- lement d'anions inorganiques associés A des cations métalliques tels que les ions sodium, potassium ou magnésium. Le procédé selon l'invention consiste essentiellement en la réalisation des étapes successives suivantes: 1) séparation des insolubles du moût de fermentation, 2) déminéralisation du moût filtré, 3) séparation de l'acide céto-2 L gulonique. La mise en oeuvre du procédé peut être réalisée en continu ou en discontinu. La biomasse et les substances insolubles qui représentent généralement de 1,5 à 3 % en poids du moût entier peuvent être séparées du moût: - soit par centrifugation après floculation au moyen d'un agent floculant tel que, par exemple, de type polyacrylamnide, - soit par filtration sous pression réduite après flocu- lation au moyen d'un agent floculant tel que, par exemple le poly- acrylamide, et addition d'un adjuvant de filtration tel que, par exemple, la farine de bois ou la terre de diatomées, - soit par ultrafiltration à travers des membranes miné- rales ou organiques appropriées telles que les membranes polyvinyl- difluorées ou les membranes constituées de ZrO2 sur matrice de carbone. Le moût débarrassé de la biomasse et des substances insolubles peut étre concentré, soit par évaporation sous pression réduite à une température inférieure à 60 C jusqu'à un volume correspondant entre 1/4 et 1/3 du volume initial, soit par osmose inverse sur une membrane polysulfonée A une température voisine de 500 C jusqu'à la moitié environ de son volume. Le moût concentré est généralement acidifié par addition d'acide sulfurique concentré en quantité pratiquement stoechiomé- trique par rapport au calcium présent & une température inférieure ou égale A 40oC. Le sulfate de calcium qui précipite est séparé par filtration et est lavé à l'eau. Le filtrat qui contient des cations divers dont les principaux sont le calcium non précipité, le sodium, le potassium et le magnésium est décationisé et acidifié par passage sur une colonne de résine polymérique échangeuse de cations en cycle acide, de préférence de type sulfonique. Il est également possible, avant la concentration, de décationiser *t d'acidifier le moût par passage direct sur une résine cationique sous forme acide, de préférence de type sulfonique. Le moût débarrassé des sédiments et des cations, éventuel- lement concentré, peut étre débarrassé des anions en solution par passage sur une résine polymérique échangeuse d'anions. de préfé- rence de type dialkylanino. La solution déminéralisée est alors concentrée par évapo- ration sous pression réduite à une température inférieure A 60 C jusqu'à environ 70 % du volume initial. La cristallisation de l'acide céto-2 L gulonique est obtenue par une concentration supplé- mentaire sous pression réduite à une température voisine de 40 C jusqu'à une diminution du volume comprise entre 30 et 40 % environ suivie éventuellement d'un refroidissement de la bouillie cristalline. Il peut être particulièrement avantageux d'effectuer la cristallisation en continu dans un cristallisoir fonctionnant par évaporation sous pression réduite & une température voisine de 40 C et muni d'un échangeur externe. Les cristaux obtenus sont séparés par filtration ou par essorage puis lavés à l'eau. L'acide céto-2 L gulonique est isolé sous forme d'un monohydrate dont la pureté est généralement voisine de 100 % et dont la molécule d'eau d'hydratation peut être éliminée par chauffage sous pression réduite. Généralement le séchage des cristaux d'acide céto-2 L gulonique monohydraté humide est effectué par transport sous un flux d'air chaud. Selon la présente invention, l'acide céto-2 L gulonique peut aussi être obtenu après extraction du moût concentré et déminé- ralisé au moyen d'un solvant organique convenable choisi parmi les hydrocarbures aliphatiques ou aromatiques éventuellement halogénés contenant en solution une amine aliphatique, de préférence secon- daire, contenant plus de 20 atomes de carbone. La solution organique ainsi obtenue peut être extraite par une solution aqueuse d'un acide minéral fort choisi parmi les acides chlorhydrique, sulfurique ou nitrique dont la concentration peut être comprise entre 0,5N et 3N. La solution aqueuse ainsi obtenue peut être concentrée à sec pour conduire à un acide céto-2 L gulonique monohydraté sous forme pulvérulente dont la pureté est généralement supérieure à %. Les exemples suivants, donnés à titre non limitatif, montrent comment l'invention peut être mise en pratique. EXEMPLE 1 - Séparation des insolubles du moût de fermentation On utilise un moût de fermentation obtenu par culture d'une souche de corynébactérium productrice d'acide céto-2 L gulo- nique contenant 1,6 % environ de biomasse et de substances insolu- bles et 10 % de céto-2 L gulonate de calcium. La biomasse et les substances insolubles peuvent être séparées selon l'une des méthodes suivantes: 1) On fait passer 123 kg de moût de fermentation contenant environ 2 kg de sédiments à travers une membrane d'ultrafiltration CARBOSEP dont la porosité est de 80 000 DA, à une température de C. On obtient ainsi 112 kg de perméat exempt de produits inso- lubles et 11 kg de rétentat contenant la totalité des sédiments et dans lequel la concentration en céto-2 L gulonate de calcium est égale à celle dans le perméat. Le rétentat est épuisé par diafiltration par additions successives d'eau au rétentat au cours d'une ultrafiltration iden- tique & celle décrite précédemment. La diafiltration est arrêtée lorsque la teneur en céto-2 L gulonate de calcium dans les perméats réunis correspond & un taux de récupération d'au moins 99 %. 2) A 500 g de moût entier, agité vigoureusement, on ajoute cm3 d'une solution aqueuse à 5 g/litre de floculant du type polyacrylamide FLOERGER 8850. Après quelques minutes de contact, on ajoute, en maintenant la vigoureuse agitation, 10 g de farine de bois. Le mélange obtenu est filtré sur toile filtrante sous une pression réduite (300 am de mercure; 40 kPa). Le gAteau de filtration est lavé par 50 cm3 d'eau. La perte en céto-2 L gulonate de calcium est inférieure à 2 % Le poids du filtrat contenant 9,4 % de céto-2 L gulonate de calcium est de 520 g. 3) 200 litres de moût entier contenant 2,7 % de sédiments sont floculés à l'aide de 8 litres d'une solution aqueuse à 5 g/ litre d'un agent floculant du type polyacrylamide (FLOERGER 8850) puis sont introduits en continu au débit de 2000 litres/heure dans une clarificatrice centrifuge & assiettes de 7200 m2 de surface équivalente. On recueille un moût clarifié contenant 0,1 % de sédiments. EXEMPLE 2 - Concentration du moût Le moût débarrassé des insolubles peut être concentré selon l'une des méthodes suivantes: 1) On concentre 225 litres de moût exempt d'insolubles par évaporation sous pression réduite (72 amm de mercure; 9, 5 kPa) à une température de 47 C jusqu'à un volume de 62 litres. La dégradation thermique est inférieure à 0,5 %. 2) On concentre 60 litres de moût exempt d'insolubles par passage à travers un module d'osmose inverse équipé de membranes polysulfonées (PCI Z 99) à un débit de 25 litres/h.m2 et à une température inférieure ou égale à 50 C jusqu'à obtenir un volume de litres. EXEMPLE 3 - Précipitation du sulfate de calcium Dans un réacteur agité, maintenu à une température infé- rieure ou égale à 400C et contenant 2 litres de moût concentré obtenu dans les conditions décrites dans l'exemple 2-1, on ajoute une quantité d'acide sulfurique concentré correspondant, en moles, à la quantité totale de calcium présent dans le réacteur soit 100 cm3. Le sulfate de calcium.qui précipite sous forme de dihy- drate est séparé par filtration et lavé à l'eau. Le filtrat et les lavages réunis contiennent 99,5 %, en moles, de l'acide céto-2 L gulonique initial. Le rendement de l'élimination du calcium est de 95 %. EXEMPLE 4 - Elimination des cations On passe 3 litres du filtrat obtenu à l'exemple 3 (avant d'être mélangé aux eaux de lavage du gAteau de sulfate de calcium) sur une colonne de 80 cm de hauteur et de 5 cm de diamètre contenant 1,6 litre de résine cationique forte (Amberlite IRC 120) en cycle acide. Après lavage, on obtient ainsi 5,5 litres de moût dans lequel la teneur en cendres sulfuriques est inférieure à 1 % par rapport à l'acide céto-2 L gulonique présent dans la solution. Le taux de récupération de l'acide céto-2 L gulonique est supérieur & 99, 5 %. EXEMPLE 5 - Elimination des anions On fait passer 0,4 litre du moût obtenu à l'exemple 4 & travers une colonne de 10 cm de hauteur et 1,4 cm de diamètre conte- nant 15 cm3 de résine anionique faible (Amberlite IRA 93) afin de diminuer d'un facteur 10 la teneur en acide sulfurique dans le moût acidifié. La perte en acide céto-2 L gulonique n'excède pas 2 % de la quantité introduite. EXEMPLE 6 - Cristallisation de l'acide céto-2 L gulonique 5000 g de moût obtenu dans ies conditions de l'exemple 5 sont concentrés par évaporation de façon & obtenir 3430 g d'une solution contenant 1170 g d'acide céto-2 L gulonique et 255 g d'impuretés. Le concentrat ainsi obtenu est concentré partiellement sous pression réduite (40 mm de mercure; 5,3 kPa) & une température de 40 C jusqu'à un poids de 2010 g. Cette concentration supplémen- taire conduit & la cristallisation de l'acide céto-2 L gulonique hydraté. La bouillie de cristaux est refroidie à 25C. Les cristaux sont séparés par filtration et lavés à l'eau. On obtient ainsi 930 g d'acide céto-2 L gulonique hydraté dont la pureté est supérieure & 99 % et dont la teneur en cendres sulfuriques est inférieure à 0,1 %. Le rendement est de 73 % Les eaux-mères de filtration et les eaux de lavage Jont réunies puis concentrées sous pression réduite (40 mm de mercure; ,3 kPa) jusqu'& un poids de 710 g. Après refroidissement, les cristaux sont séparés par filtration et lavés à l'eau. On obtient ainsi 285 g d'acide céto-2 L gulonique monohydraté dont la pureté est de 89 % Les cristaux d'acide céto-2 L gulonique monohydraté humides (5,8 % d'eau) dont la pureté est supérieure a 99 % (9400 g) sont séchés par de l'air à 750C circulant à 5 m/s dans un séchoir & transport pneumatique, le temps de séjour étant de 3 secondes. On obtient ainsi 8850 g d'acide céto-2 L gulonique mono- hydraté. L'acide céto-2 L gulonique monohydraté peut être déshydraté par chauffage à 40 C sous pression réduite (5 mm de mercure; 0,67 kPa) pendant plusieurs heures. EXEMPLE 7 On met en contact 1 litre de moût débarrassé des sédiments et des cations contenant 80 g d'acide céto-2 L gulonique ayant une pureté de 84 % avec 1 litre d'une solution de 260 g d'ADOGEN 83 (Marque déposée SCHERING) dans le kérosène pendant 0,5 heure à 50 C. L'acide céto-2 L gulonique (83 %) qui est extrait dans la phase organique est réextrait quantitativement par 690 cm3 d'une solution aqueuse d'acide nitrique 1N. La solution concentrée à sec fournit 81,5 g d'un produit cristallisé contenant 89 % d'acide céto-2 L gulonique monohydraté. REVENDICATIONS 1 - Procédé de séparation de l'acide céto-2 L gulonique à partir d'un moût de fermentation contenant essentiellement le sel de calcium de 1 'acide céto-2 L gulonique caractérisé en ce que l'on sépare les insolubles contenus dans le moût, déminéralise le moût filtré, puis sépare l'acide céto-2 L gulonique. 2 - Procédé selon la revendication 1 caractérisé en ce que les insolubles contenus dans le moût de fermentation sont éliminés par centrifugation, par filtration en présence d'un agent floculant et d'un adjuvant de filtration soit par ultra-filtration. 3 - Procédé selon la revendication 1 caractérisé en ce que la séparation des cations est effectuée après concentration, acidi- fication au moyen d'acide sulfurique en quantité stoechiométrique par rapport au calcium présent dans le moût, séparation du sulfate de calcium précipité par filtration, puis passage du filtrat sur une colonne échangeuse de cations en cycle acide. 4 - Procédé selon la revendication 1 en ce que la sépara- tion des cations est effectuée par passage du moût séparé des insolubles sur une colonne échangeuse de cations en cycle acide. 5. Procédé selon la revendication 1 caractérisé en ce que l'élimination des anions est effectuée par passage du moût débarras- sé des cations sur une colonne échangeuse d'anions. 6 - Procédé selon la revendication 1 caractérisé en ce que l'acide céto-2 L gulonique est cristallisé après concentration du moût déminéralisé puis séparé par filtration. g 7 - Procédé selon la revendication 1 caractérisé en ce que l'acide céto2 L gulonique est obtenu après extraction du août concentré et déminéralisé, au moyen d'un solvant organique choisi parmi les hydrocarbures aliphatiques ou aromatiques éventuellement halogénés contenant une amine aliphatique ayant plus de 20 atomes de carbone puis ré-extraction au moyen d'une solution aqueuse d'un acide minéral fort choisi parmi les acides chlorhydrique, nitrique et sulfurique et concentration & sec de la solution aqueuse obtenue. 8 - Procédé selon la revendication 1 caractérisé en ce qu'il est mis en oeuvre en continu ou en discontinu.