Brevet FR2645455A2 — publié le 19901012

FR 2645455 A2 19901012 FR 8904762 A 19890411 Procédé de stabiLisation de phases lamellaires lipidiques hydra tées, par exemple de liposomes, composition de phases lamellaires Lipidiques hydratées, par exemple des Liposomes, stabilisées et utilisation en pharmacie ou en cosmétologie sous forme de composi- tions pharmaceutiques ou cosmétiques. On a déjà décrit. dans le brevet principal FR-8 714 632 non publié à ce jour et qui sera publié sous le numéro FR-A-2 622 104 un procédé de stabilisation de phases lamellaires lipidiques hydratées, par exemple de liposomes, en introduisant les phases lamellaires lipidiques hydratées Ou les liposomes dans une solution homogène d'atélocollagène et-de glycosaminoglycannes. Selon la présente invention, on a maintenant découvert de manière totalement inattendue que l'on pouvait encore augmenter la stabilisation des phases lamellaires Lipidiques hydratées, notamment des liposomes, lorsqu'on fabriquait les phases lamellaires lipidiques hydratées ou les liposomes en présence d'une telle solution homogène d!atélocollagène-glycosaminoglycannes. Ainsi, selon un premier aspect, la présente invention fournit un procédé de stabilisation de phases lamellaires lipidiques hydratées, ou des vésicules type liposomes, caractérisé en ce qu'on prépare les phases lamellaires lipidiques hydratées ou les vésicules type liposomes en présence d'une solution homogène d'atélocolLagène-glycosaminoglycannes. La solution homogène d'atélocollagène et de glycosaminoglycannes est avantageusement telle que préparée dans le brevet principal qui est incorporé ici par référence. Selon une variante de réalisation avantageuse, le principe actif encapsulé est dissous dans la solution d'atéocollagène- glycosaminoglycannes. Comme principe actif, on peut utiliser un principe actif quelconque. Des principes actifs préférés sont des principes actifs cosmériques ou pharmaceutiques. Par exemple, on peut utiliser comme principe actif de l'héparane sulfate. Selon un deuxième aspect, la présente invention fournit aussi une composition contenant des phases lamellaires lipidiques hydratées ou des vésicules type liposomes, stabilisées, caractérisée en ce que les phases lamellaires lipidiques hydratées, ou les vésicules type liposomes, ont été préparées en présence d'une solution homogène d'atélocollagéne et de glycosaminoglycannes. Comme décrit dans le brevet principal, l'utilisation préférée des compositions selon l'invention concerne une utilisation en pharmacie ou en cosmétologie, sous forme de compositions -pharmaceutiques ou cosmétiques. Pour ce faire, on peut utiLiser la composition telle quelle ou bien lui adjoindre divers composants ou excipients appropriés biel connus-de l'homme de l'art, sans aucun problème particulier, sous réserve de vérifier que cette adjonction ne modifie pas la stabilité des phases lamellaires lipidiques hydratées, notamment des vésicules type liposomes. Grâce à l'invention, on obtient de manière totalement inattendue une très grande stabilité en particulier des vésicules type liposomes. On obtient également une diminution d'antigénicité du support stabilisant ainsi qu'une amélioration marquée de la protection de l'un des composants du support stabilisant, à savoir l'atélocollagène vis-à-vis des collagénases entraînant un prolongement "in vivo" de L'effet retard de l'atélocollagène. Les compositions selon l'invention présentent.une pro priété hydratante accrue, une action plus marquée de régénération du derme et l'épiderme par accroissement du développement cellu Laire. L'autre avantage de l'invention réside dans Le fait que le procédé de fabrication de vésicules types liposomes est extremement simple en permettant de préparer égaLement des émulsions. L'invention apporte donc des améliorations techniques remarquables, déterminantes vis-à-vis de la technique antérieure. D'autres buts, caractéristiques et avantages de l'invention apparaTtrontégalement clairement à la lumière de la description explicative qui va suivre faite en référence à un exempLe de réalisation de compositions selon L'invention mettant en oeuvre le procédé selon L'invention précédemment décrit avec un. test de stabilité. EXEMPLE 1 Préparation d'une composition de liposomes contenant de l'héparane sulfate comme principe actif en présence d'une solution complexe atélocollagène-glycosaminoglycannes. On prépare à 10 kg de complexe atélocollagène-glycosaminoglycannes, renfermant 20 g de collagène, 5 g de chondroitine-4 sulfate comme décrit aux étapes b à d de l'exemple 1 de FR-8 714 632. A cette solution on peut ajouter des conservateurs, par exemple 10 g de Nipagi R et 50 g de PhénoniPRde chez NIPA Laboratories Limited. (UK). Dans cette solution on ajoute 10 g d'héparane sulfate sous agitation mécanique jusqu'à obtention d'une solution homogène. Le pH est ajusté à 7,2 avec de la soude. Dans ce bain maintenu sous agitation à température -ambiante, on ajoute 100 g de lécithine d'oeuf. Après dissolution complète, le mélange est agité par agitateur ultrasonique type ultra Turax type UTL 60, tournant à 8 000 trlmin pendant 10 min. On obtient ainsi 10 kg de solution contenant des vésicules liposomiques stabilisées dans la solution d'atelocollagène- glycosaminoglycannes. La stabilité des tiposomes est vérifiée par microscope électronique à transmission comme décrit dans L'exemple 2. EXEMPLE 2 Stabilité des liposomes obtenus à l'exemple 1. On vérifie la stabilité des liposomes obtenus à l'exemple 1 par étude de La perméabilité de la membrane des vésicules liposomiques vis-à-vis de la 6-carboxyfluoresceine (6-CF). Pour ce faire, on encapsule dans les vésicules liposomiques la 6-carboxyfluoresceine qui a été ajoutée dans la solution d'atelocollagène-glycosaminoglycannes. On a tout d'abord préparé des liposomes encapsulant la 6carboxyfluoresceine de manière classique par agitation ultrasonique, les liposomes obtenus étant donc non stabilisés, dite solution "témoin" figure 1, à laquelle on introduit un volume de dilution identique au volume de support stabilisant collagèneglycosaminoglycannes appelé en abréviation COLL-GAG, ayant le même pH et la même pression osmotique, formé à partir de , la courbe de solution "témoin" étant réalisée pour deux valeurs différentes du rapport concentration de lipides/concentration de col La gène, égal respectivement à 6,25 (courbe solution "témoin" 9-9) ou à 1,25, courbe A-A, figure 1 par rapport à des liposomes préparés par agitation ultrasonique de manière classique mais stabilisés par la suite par L'introduction de ceux-ci dans une solution atélocol-- lagene-glycosaminoglycannes (voir les courbes COLL-GAG 0-0 Q-A, figure 1). Par ailleurs, à la figure 2 annexée, on a représenté les courbes de perméabilité des liposomes (100 mol X de lécithine) au cours du temps, soit lorsque les liposomes sont préparés en présence de la solution d'atélocoLlagène-glycosaminoglycannes selon la présente invention à 0,1 X (courbe 0-0, figure 2) par rapport à la solution "témoin" (en l'absence de COLL-GAG) (courbe 6-6, figure 2). L'examen des courbes des figures 1 et 2 fait ressortir de façon très nette que la perméabilité de la paroi liposomique est diminuee dans le cas des liposomes stabilisés par la solution de collagène-GAG après formation des capsules par rapport aux liposomes non stabilisés (voir figure 1). Ce phénomène est encore plus marqué lorsque les liposomes ont été formés en présence de collagène-GAG (figure 2). On comprend ainsi que l'invention comprend tous les moyens constituant des équivalents techniques des moyens décrits ainsi que leurs diverses combinaisons. Par exemple, on comprend que le liposome peut être fabriqué par toute méthode de fabrication des vésicules type liposomes compatible avec l'introduction des lipides dans une solution d'atelocollagène-glycosaminoglycannes. REVENDICATIONS 1 - Procédé de stabilisation de phases lamellaires lipidiques hydratées, ou des vésicules types liposomes, selon l'une quelconque des revendications 1 à 11 du brevet principal Ni 87.14632, caractérisé en ce qu'on prépare les phases Lamellaires lipidiques hydratées ou les vésicules type liposomes en présence d'une solution homogène d'até-locollagène-glycosaminoglycannes. 2 - Procédé selon la revendication 1, caractérisé en ce que les phases Lamellaires lipidiques hydratées ou les vésicules type liposomes encapsulent un principe actif, en particulier un principe actif cosmétique ou pharmaceutique. 3 - Procédé selon la revendication 1 ou 2, caractérisé ce qu'on dissout le principe actif dans la solution de complexe atélocollagène-glycosaminoglycannes. 4 - Procédé selon la revendication 2 ou 3, caractérisé en ce que le principe actif est de L'héparine sulfate. 5 - Composition contenant des phases lamellaires lipidiques hydratées ou des vésicules type liposomes, stabilisée, selon l'une quelconque des revendications de composition 12 à 17 du brevet principal N|87.14632, caractérisée en ce que les phases lamellaires lipidiques hydratées ou les vésicules type liposomes ont été préparées en présence d'une solution d'atélocollagène et de glycosaminoglycannes, en particulier selon le procédé décrit selon l'une des revendications 1 à 4. 6 - Utilisation de la composition telle que définie à la revendication 5 ou telle qu'obtenue par le procédé selon l'une des revendications 1 à 4, en pharmacie ou en cosmétologie, sous forme de compositions pharmaceutiques ou cosmétiques.