Brevet FR2639957A1 — publié le 19900608

Boites de culture. La présente invention concerne des boites de culture, notamment des boites de Petrir destinées a la culture des micro-organismes. La gravité d'une septicémie est corrélée à la concentration bactérienne sanguine (Dietzmann D.E. Fischer G W et Schoenknecht F.D. Neonatal Escherichia coli septicemia bacterial counts in blood J. Pediat, 1974 85.1 pages 128 a 130 ; Santosham M et Moxon ER Detection and quantitation of bacteremia in childhood J. Pediat 1977 91.5 pages 719a 721 ; Sullivan T.D. Lascolea L J et Neter E Relationship between the magnitude of bacteremia in children and the clinical disease, Pediatrics 1982. 69.2 pages 69.6 à 702). Les décès et les méningites surviennent surtout quand la concentration bactérienne sanguine dépasse un seuil donné. Les observations cliniques ont été confirmées par les modèles de septicémie expérimentale chez l'animal, qui ont montré que les concentrations bactériennes sanguines sont plus élevées chez les animaux inoculés avec des bactéries pathogènes que chez ceux inoculés avec des bactéries non pathogènes (Snipes R P, Ghazikhanian G Y, Hirsh D C Fate of Pasteurella multocida in the bloom vascular system of turkeys following intravenous inoculation. Comparaison of an encapsulated virulent strain with its avirulent acapsular variant A-i diseases 1936 31. 9 pages 254 à 258. Cependant, pour les études cliniques chez l'enfant ou pour les études expérimentales chez le pigeon ou chez le poulet, la connaissance de la concentration bactérienne à un instant donné ne suffit pas pour prédire la gravité d'une bactérémie. Certains enfants, malgré une faible concentration bactérienne dans le sang, ont une méningite ou décèdent. I1 est souhaitable d'effectuer plusieurs prélèvements à des instants connus échelonnés dans le temps pour étudier la vitesse d'augmentation de la concentration bactérienne, de connaître précisément ces instants et d'avoir rapidement les résultats de la culture. On pratique actuellement les hémocultures quantitatives de la manière suivante. On étale un volume donné de sang sur une couche de gélose et on met la boite de Petri à l'étuve. Cn compte ensuite les colonies bactériennes. Ces opérations ne peuvent se faire que dans un laboratoire de bactériologie en atmosphère stérile (bec Bunsen) pour respecter les règles d'asepsie.Effectuer ces opérations au lit du malade entrainerait des risques trop importants de contamination. I1 faut donc prélever du sang du malade, l'additionner d'un anticoagulant ou le transporter dans un tube d'hémolyse qui l'empêche de coaguler. I1 faut surtout l'étaler rapidement sur de la gélose parce que, si l'intervalle de temps, entre le pré lèvement et la culture,est trop long, certaines bactéries fragiles (méningocoque, streptocoque, pneumoniae, hemophylus influenzae) peuvent être détruites, alors que d'autres peuvent se multiplier in vitro (Escherichia coli) avec un temps de génération de 20 à 30 minutes. L'interprétation des résultats de ces hémocultures quantitatives devient difficile, d'autant que souvent l'intervalle de temps qui s'écoule entre le prélèvement et l'ensemencement est prolongé aléatoirement par les heures de fermeture du laboratoire. L'invention pallie ces inconvénients par une boite de culture permettant d'y introduire, au chevet du malade, le sang prélevé sans enfreindre les règles d'asepsie. La boîte de culture comprend un réceptacle qui est recouvert d'un couvercle et sur le fond ducuel est déposée une couche d'un milieu de culture, notamment de gélose. Suivant l'invention, il est prévu des moyens de mise en communication de l'espace intérieur de la boîte compris entre la couche et le couvercle avec l'extérieur, alors que le réceptacle est recouvert du couvercle. On peut ainsi introduire le sang sur Ja couche de gélose en respectant les règles d'asepsie, puisque la boîte reste toujours coiffée du couvercle. Les moyens de mise en communication sont destinés à permettre une introduction d'inoculum et non à autoriser le prélèvement de ce qui se trouve déjà à l'intérieur de la boîte, la couche étant d'ailleurs souvent d'un seul tenant1 fixée au réceptacle et de dimension bien trop grande pour pouvoir sortir de la boîte par les moyens de mise en communication. Ceux-ci peuvent être constitués d'un hublot en caoutchouc butyle destiné à être perforé par l'aiguille d'une seringue d'injection du sang prélevé. Mais, de préférence et plus simplement, les moyens de communication comprennent deux orifices ménagés sur des faces en regard du réceptacle et du couvercle, celui-ci étant monté mobile sur le réceptacle, de manière à pouvoir passer d'un état de confinement, où les orifices ne sont pas alignés, à un état d'alignement, où ils le sont. L'infirmière introduit la seringue dans le canal formé par les orifices alignés, injecte le sang dans la boîte, retire la seringue et déplace immédiatement le couvercle par rapport au réceptacle, pour mettre fin à l'alignement des orifices. L'intérieur de la boîte ne communique plus avec l'extérieur. De préférence, les orifices viennent en coïncidence, par une rotation du couvercle sur le réceptacle, les orifices étant ménagés sur un rebord du couvercle, en regard de la face latérale du réceptacle. Suivant un perfectionnement déterminant de l'invention, la boîte comprend des moyens d'étalement d'un inoculum sur la couche, alors que le réceptacle est recouvert du couvercle. Dès après l'introduction de l'inoculum, on peut, sans perte de temps, étaler le sang ou autre inoculum en sorte que la culture des bactéries commence immédiatement, sans qu'elles aient le temps de se multiplier ou d'être détruites, et cela quel que soit l'instant d'arrivée de la boîte au laboratoire ou les heures d'ouverture de celui-ci. Suivant une variante préférée, parce que simple à fabriquer et ne nécessitant pas de râteau sous forme d'une pièce distincte pouvant se perdre et nécessitant des travaux de montage, les moyens d'étalement comprennent un râteau issu d'une face intérieure du couvercle, celui-ci étant monté mobile sur le réceptacle de manière à pouvoir passer d'une position de dépot où le rateau est à distance de la couche et laisse place ainsi à une seringue permettant de déposer l'inoculum, à une position de ratissage où le râteau touche la couche. Pour que le râteau ne s'enfonce pas trop dans la couche, il est prévu avantageusement une butée disposée de manière à empêcher le râteau d'aller au-delà de la position de ratissage. La fabrication de la boite est simplifiée quand la butée est constituée du bord supérieur du réceptacle qui vient buter sur la face inférieure de la partie supérieure du couvercle. Pour empêcher que, par inadvertance, le couvercle soit remis après le ratissage en l'état d'alignement, le couvercle est monté mobile sur le réceptacle de maniere a pouvoir passer de la position de dépot, où le râteau est à distance de la couche et où le couvercle peut venir dans l'état d'alignement, à une position de retrait, où le râteau est encore à distance de la couche de manière à laisser libre champ à la croissance des bactéries, mais où le couvercle ne peut pas venir, ou du moins ne peut venir qu'imparfaitement dans l'état d'alignement. On empêche aussi de cette façon d'inoculer par erreur deux fois la même couche de gélose. Suivant un mode de réalisation préféré, le couvercle est monté tournant sur le réceptacle cylindrique et, par des nervures cédant élastiquement, mobile dans la direction de l'axe du réceptacle entre deux nervures du réceptacle qui cèdent élastiquement et qui définissent les positions de dépôt et de retrait. On passe des positions de dépôt aux positions de ratissage1 puis de retraitlen appuyant sur le couvercle de manière à franchir les nervures élastiques ou en sculevant le couvercle de manière à franchir ces nervures élastiques, mais sans cependant décoiffer le réceptacle. Suivant une variante, une butée est disposée de manière à limiter le déplacement relatif du râteau et de la couche pour que le râteau ne ratisse qu'une partie déterminée de la couche. On peut utiliser les autres parties pour y inoculer d'autres inoculum, soit ulté- rieurement, soit en prévoyant des moyens de mise en communication associés à chaque partie. De la même façon, on prévoit plusieurs râteaux, chacun d'entre eux étant affecté à une partie différente de la couche, de manière a ne pas contaminer mutuellement les parties de gélose. Au dessin annexé, donné uniquement à titre d'exemple : la figure 1 est une vue éclatée, en perspective, d'une boîte suivant l'invention les figures 2, 3 et 4 sont des vues partielles en coupe illustrant, respectivement, les positions de dépôt, de ratissage et de retrait. La boite de Petri représentée à la figure 1 comporte un réceptacle 1 et un couvercle 2 en matière plastique. Le couvercle 2 a des dimensions telles qu'il peut juste coiffer le réceptacle 1. Dans la face latérale du réceptacle 1, est prévu un trou 3. Dans le rebord vertical du couvercle 2 est prévu un trou 4. Sur la face latérale extérieure du réceptacle 1 sont prévues deux nervures 5, 6, périphériques,espacées l'une de l'autre. De la face latérale intérieure du réceptacle 1 est issue une butée 7. De la face inférieure de la partie supérieure du couvercle, sont issus quatre râteaux 8 sous la forme de deux bandes en matière plastiaue se croisant à angle droit dans l'axe de la boite. L'un des râteaux vient en contact avec la butée 7 lorsque l'on fait tourner le couvercle 2 sur le réceptacle 1. Sur la face intérieure de la partie latérale du couvercle 2, sont ménagées deux nervures 9, 10 cédant élastiquement. La figure 2 illustre position de déport. Les trous 3 et 4 sont alignés. Le râteau 8 est à distance d'une couche de gélose 11 déposée sur le fond du réceptacle et dont la face supérieure est à un niveau plus bas que le trou 3. La nervure 10 repose sur la nervure 5. La nervure 9 repose sur la nervure 6. Le dépit effectué, on fait tourner le couvercle 2 autour du réceptacle 1, de manière que les trous 3 et 4 ne soient plus alignés. Puis, immédiatement, on enfonce le couvercle 2 à fond sur le réceptacle 1 (figure 3) en faisant passer les nervures 9 et 10 en-dessous de la nervure 6, la profondeur d'enfoncement étant limitée par la venue en butée du bord 12 de la face latérale du réceptacle, avec la face inférieure de la partie supérieure du couvercle 2. Dans cette position, le râteau 8 est juste en contact avec la couche 11. En faisant tourner le couvercle 2 sur la boîte 1, on ratisse la couche de gélose à l'aide du râteau 8 et on étale l'inoculum sur a couche de gélose Dès que cette opération est effectuée, on soulève à nouveau le couvercle 2 du réceptacle 1, sans cependant que le couvercle cesse de coiffer le réceptacle 1. A cet effet, on fait passer élastiquement la nervure 10 entre les nervures 6 et 5, la nervure 10 étant soutenue par la nervure 6. En cette position de retrait (fig.3), le râteau est à nouveau à distance de la couche de gélose il et n e gêne pas la croissance des bactéries. Mais il est en une position différente de celle représentée à la figure 2, ce qui permet à l'opérateur de reconnaître que la boîte est déjà en utilisation. En outre, les trous 3 et 4 ne peuvent plus être mis en coïncidence ou ne peuvent plus y être mis que partiellement, en sorte que l'introduction d'une seringue dans l'espace compris entre le râteau 8 et la couche de gélose 11 est impossible. A l'arrivée au laboratoire, on ôte en atmosphère aseptisée le couvercle 2 du réceptacle 1 et on procède aux opérations habituelles, notamment de numération. REVENDICATIONS 1. Boite de culture comprenant un réceptacle (1) qui est recouvert d'un couvercle (2) et sur le fond duquel est disposée une couche (11) d'un milieu de culture, caractérisée par des moyens de mise en communication (3, 4) avec l'extérieur de l'espace intérieur de la boite compris entre la couche (11) et le couvercle (2), alors que le réceptacle (1) est recouvert du couvercle (2). 2. Boîte de culture suivant la revendication 1, caractérisée en ce que les moyens de mise en communication comprennent deux orifices (3, 4) ménagés sur les faces en regard du réceptacle (1) et du couvercle (2), celui-ci étant monté mobile sur le réceptacle de manière à pouvoir passer d'un état de confinement, où les orifices (3, 4) ne sont pas alignés, à un état d'alignement, où ils le sont. 3. Boite de culture suivant la revendication 1 ou 2, caractérisée en ce qu'elle comprend des moyens d'étalement (8) d'un inoculum sur la couche (11), alors que le réceptacle (1) est recouvert du couvercle (2). 4. Boite suivant la revendication 3, caractérisée en ce que les moyens d'étalement comprennent un râteau (8) issu d'une face intérieure du couvercle, celui-ci étant monté mobile sur le réceptacle (1) de manière à pouvoir passer d'une position de dépit, où le râteau (8) est à distance de la couche (11) à une position de ratissage où il la touche. 5. Boite suivant la revendication 3, caractérisée par une butée (12) disposée de manière à empêcher le râteau (8) d'aller au-delà de la position de ratissage. 6. Boite suivant la revendication 4, caractérisée en ce que la butée est constituée du bord (12) supérieur du réceptacle (1) venant buter sur la face inférieure de la partie supérieure du couvercle (2). 7. Boîte suivant l'une des revendications 3 à 6, caractérisée en ce que le couvercle (2) est monté mobile sur le réceptacle (1), de manière à pouvoir passer de la position de dépôt, où le râteau (8) est à distance de la couche (11) et où le couvercle (2) peut venir dans l'état d'alignement, à une position de retrait où le râteau (8) est à distance de la couche (11), mais où le couvercle (2) ne peut pas venir, ou du moins ne venir qu'imparfaitement, dans l'état d'alignement. 8. Boîte suivant l'une des revendications 3 à 7, caractérisée en ce que le couvercle (2) est monté tournant sur le réceptacle (1) cylindrique et, par des nervures (9, 10) cédant élastiquement, mobile dans la direction de l'axe du réceptacle (1) entre des nervures (5, 6) du réceptacle qui cèdent élastiquement et qui définissent les positions de dépôt et de retrait. 9. Boite suivant l'une des revendications 3 à 8, caractérisée par une butée (7) qui est disposée de manière à limiter le déplacement relatif du râteau (8) et de la couche (11) pour que le râteau (8) ne ratisse qu'une partie déterminée de la couche (11). 10. Boîte suivant la revendication 9, caractérisée par plusieurs râteaux (8) affectés chacun à une parte différente de la couche.