Brevet FR2646607A1 — publié le 19901109

La présente invention se rapporte à des anticorps monoclonaux anti-B2 microglobuline. Récemment, il a été mis en évidence par les inventeurs que des anticorps monoclonaux pouvaient intervenir sur la production du virus HIV 1. Plus précisément, la présente invention se rapporte à des anticorps monoclonaux anti-B2 microglobuline, caractérisés en ce qu'ils sont utiles pour le traitement et/ou la prévention du HIV 1 dans des cellules. Il a ainsi été montré que la majorité des anticorps monoclonaux anti-B2 microglobuline retardaient la formation de sincytia dans les cellules \1T4 infectées et retardaient également fortement la production du HIV I dans les cellules mononucléaires infectées du sang périphérique. L'interférence de ces anticorps vis-à-vis de la production dudit virus se realiserait de préférence lors du cycle de réplication virale ou encore lors de la réplication ou conception de la particule virale. La présente invention se rapporte également à l'utilisation à titre de médicament destiné au traitement ou à la prévention de maladies liées à une infection virale d'un de ces anticorps de même qu'aux De telles compositions pharmaceutiques pourraient contenir également d'autres composants actifs thérapeutiquement ou non. Les exemples et figures données ci-dessous permettront de mettre en évidence d'autres avantages et caractéristiques de la présente invention. La figure 1 représente l'effet des anticorps monoclonaux anti-B2 microglobuline, HCLI-151-I, Bloc6, D2-62-2 ou C21-48A, sur la production de HIV 1 par des cellules mononucléaires du sang périphérique (PB\1C). Les PBMC ont été incubées avec ou sans anticorps monoclonaux. La figure 2 représente l'activité des anticorps monoclonaux anti-B2 microglobuline BI 1G6 sur des cellules MT4 infectées par le HIV 1. La figure 3 représente la production de HIV -1 par des cellules mononucléaires de sang périphérique cultivées et non pré-incubées avec des anticorps monoclonaux anti-B2 microglobuline BI 1G6. Matériels et méthodes I) Anticorps monoclonaux Les liquides ascitiques d'anti-B2 microglobuline, (B211G) BI 1G6, B2-62-2 et C21-48A, ont été fournis par la Société lmmunotech S.A. (Immunotech, Marseille, France). Le liquide ascitique d'anti-B2 microglobuline HC11-151-1 a été produit et caractérisé dans le laboratoire. Les anticorps monoclonaux ont été utilisés aux concentrations suivantes : 100 llg/ml pour les fluides ascitiques du Bile6, 1/50c pour ceux du B2-62-2, C21-48A et HC11-151-1. 2) Les cellules La lignée cellulaire MT4 immortalisée T positive aux HTLV1 CD4 hautement réceptive à l'effet cytopathogénique du HIV 1, dérive de patients et a été fournie par N. YAMAMOTO. Des cellules sont cultivées dans un milieu RPMI 1640 (GIBCO, Paisley, Ecosse) additionné de 10 9 & de sérum de veau foetal (Bio-Lab Jerusalem Israël), I % mélange d'antibiotique PSN et I 06 de glutamine (GIBCO, Paisley, Ecpsse). Les cellules mononucléaires du sang périphérique. Elles ont été obtenues à partir de donneurs de sang volontaires par leucophérèse. Elles ont été isolées à partir d'une centrifugation à un gradien de densité Ficoll-Hypraque, lavées et stockées à 700C. Après décongélation, les cellules mononucléaires de sang périphérique ont été cultivées à un taux de 106 cellules par ml dans un milieu de culture de lignée cellulaire additionnée avec IL-2 (10 % de lymphocult-T LF, Biotest Diagnostic, Allemagne), du sérum anti-interféron (28 p/ml, MILES, PARIS, FRANCE) et de polylrène (2 pg/ml, SIGMA, St Louis, MO, U.S.A), 3 jours avec de la phytobemagglutine A (pHA 1/1000, DIFCO, Detroit, Michigan) et 4 autres jours sans celui-ci avant l'essai d'infection. 3) Essai d'infection au HIV 3.105 cellules MT4 ou 105 cellules PBMC sont incubées ou non durant 1 heure à 4"C dans une plaque à 96 micropuits (COSTAR, Cambridge, MA) avec des anticorps monoclonaux dans un milieu cellulaire de 100 ul. Les cellules sont lavées 3 fois avec 200 ,ul et exposées 1 heure à 40C à 100 ul d'HIV 1 (HIV 1 -BRU) (activité réverse transcriptase 1,5.106 cpm/ml) et dilué à 10 3 (pour MT4) ou 10-1 (pour PBMC).Les cellules sont lavées ensuite 5 fois puis cultivées avec ou sans anticorps monoclonaux à 37"C dans une plaque à 24 micropuits (COSTAR, Cambridge MA), sous une atmosphère de CO2 à 5 % en duplicate pour les cellules MT4 et dans des ballons à 25 cm2 (COSTAR, Cambridge MA) pour le PBMC. L'infection des cellules \1T4 par du VIH 1 a été suivie tous les jours en évaluant la formation de syncitia et en observant l'effet cytopathogénique au mlcroscope optlque. L'infection de PBMC a été contrôlée deux fois par semalne en mesurant l'activité de la réverse transcriptase. L) Essai sur l'inhibition de la formation de syncitia 105 de cellules mononucléaires de sang périphérique infectées chroniquement par du HIV 1, lavées 3 fois, ont été mélangées avec 3. 104 de cellules non infectées MT4 dans un milieu de culture de lignée cellulaire (300 ,ul) avec ou sans anticorps monoclonaux, cultivées toute une nuit, en duplicate 9 heures dans une plaque à micropuits à 370C, sous une atmosphère de CO2 à 5 % et la formation de syncitia a été évaluée au microscope optique. EXEMPLE 1 Essai d'anticorps monoclonaux anti B, microglobuiines sur la production de HIV I sur les cellules MT4 et les cellules mononucléaires du sang périphérique 1) Les anticorps monoclonaux anti-B2 microglobulines retardent la production de HIV I par les cellules mononucléaires du sang périphérique. L'effet des anticorps monoclonaux anti-B2 microglobulines sur la production de HIV I par les cellules mononucléaires du sang périphérique incubées avant l'infection et cultivées juste après avec ces anticorps monoclonaux a été évalué en contrôlant l'activité réverse transcriptase de leur surnageant (figure 1). Les anticorps monoclonaux anti-B2 microglobulines retardent l'effet cytopathogénique induit par le virus HIV I dans les cellules MT4. Pour déterminer si les anticorps monoclonaux anti-B2 microglobulines pouvaient retarder également la production de HIV I dans les cellules MT4, ces cellules ont été incubées avec des anticorps monoclonaux, infectées avec du HIV 1 puis cultivées avec des anticorps monoclonaux et l'effet cytopathogénique a été évalué quotidiennement (figure 2), le BI 1G6 mais non le C21-48A retarde l'apparition de l'effet cytopathogénique. EXEMPLE 2 Activité des anticorps monoclonaux anti-B2 microglobulines BllG6 sur la pénétration du HIV I dans les cellules mononucléaires du sang periphérique Afin de voir si les anticorps monoclonaux anti-B2 microglobulines pouvaient empêcher la pénétration du HIV 1, les cellules mononucléaires du sang périphérique ont été pré-incubées avec des anticorps monoclonaux, infectées avec du HIV 1 mais cultivées sans anticorps. La figure 3 montre que la pré-incubation avec le Bl IG6 réduit la production du HIV 1 par les cellules mononucléaires du sang périphérique. EXEMPLE 3 Activité des anticorps monoclonaux anti-B2 microglobulines sur la culture de cellules mononucléaires du sang périphérique infectées par du HIV I Dans l'expérience suivante, les cellules mononucléaires du sang périphérique ont été infectées avec du HIV I, lavées puis immédiatement cultivées avec des anticorps monoclonaux. La figure 3b montre que la culture avec le Bloc6 retarde l'apparition de l'activité de la réverse transcriptase dans le surnageant des cellules mononucléaires du sang périphérique. REVENDICATIONS 1. Anticorps monoclonaux anti-B2 de la microglobuline, caractérisés en ce qu'ils sont utiles pour le traiternent et/ou la prévention du virus VIH 1 dans les cellules. 2. Anticorps selon la revendication I, caractérisés en ce qu'il s'agit des anticorps monoclonaux anti-B2 microglobuline Elle6, B2-62-2, C21-48A et/ou MCI 1-151-I. 3. Anticorps selon l'une des revendications i et 2, caractérisés en ce que les cellules traitées sont des cellules MT4. 4. Anticorps selon l'une des revendications I à 3, caractérisés en ce que les cellules traitées sont des cellules mononucléaires de sang périphérique. 5. A titre de médicament destiné au traitement ou à la prévention de maladies liées à une infection virale, les anticorps selon l'une des revendications 1 à 4. 6. Composition pharmaceutique caractérisée en ce qu'elle contient à titre de principe actif au moins un anticorps selon l'une des revendications I à 4. 7. Composition pharmaceutique selon la revendication 5, caractérlsée en ce qu'elle contient d'autres composants.