Brevet FR2641465A1 — publié le 19900713

1. La présente invention concerne l'emploi en thérapeutique d'une pyrazolopyrimidine connue. Elle a plus particulièrement pour objet l'emploi comme capteur (Scavenger) de radicaux libres d'une pyrezolopyrinidine et son emploi pour le traitement des séquelles d'hypoxie ou d'anoxie tissulaire. Elle concerne spécifiquement l'emploi comme capteur de radicaux libres de la 4-mercapto 6-hydroxy pyrazolo (4,3-d) pyrimidine et de ses sels d'addition avec un acide minéral ou organique. Ce composé déjà décrit dans la littérature est considéré comme le métabolite principal du Thiopurinol (4-mercapto pyrazolo (4,3-d) pyrimidine. Il est généralement préparé par oxydation enzymatique du Thiopurinol au moyen de Xanthine oxydase du lait fixée sur Sepharose par liaison à l'aide du bromure de Cyanogène (cf. Pasquier et C. Auschez Europ. J. of Drug Metabolism and Pharm. 1979 p. 59). Les propriétés de composé synthétique ainsi obtenu, sont identiques à celles du produit isolé de l'urine des sujets traités par le Thiopurinol. Aucune propriété thérapeutique n'était connue jusqu'ici pour la 4-mercapto 6 hydroxypyrazolo (3,4-d) pyrimidine. Le rôle des radicaux libres dans les lésions cardiaques, digestives, pancréatiques et pulmonaires provoquées par la reperfusion a été étudié expérimentalement, mais, plus récemment, on a également tenté d'établir une corrélation entre les radicaux libres et les lésions cérébrales secondaires à une ischémie-reperfusion. Normalement, l'oxygène est métabolisé en deux molécules d'eau par l'addition de quatre électrons liés b quatre atomes d'hydrogène. Ce processus se déroule dans les mitochondries sous le contrôle enzymatique de la cytochrome- oxydase. a1. . /.l.. 2. Lors de chaque adjonction d'un électron à une molécule d'oxygène, des composés hautement réactifs sont produits en présence d'ions hydrogène. Un électron forme un radical anionique superoxyde, un deuxième, un peroxyde d'hydrogène, et un troisième, le radical hydroxyl. Habituellement, la cytochrome oxydase empêche les radicaux intermédiaires de réagir avec les autres molécules voisines, ou bien les radicaux sont éliminés par des enzymes destructrices, telles que superoxyde dismutase, catalase, ou glutathion peroxydase. En cas d'ischémie tissulaire, les composants cellulaires normaux se dégradent. Ces produits de dégradation constituent alors le substrat de réactions aboutissant à la production de radicaux libres, lors de l'apport d'oxygène secondaire à la réperfusion. Pendant l'ischémie, l'hypoxanthine, par exemple, s'accumule par dégradation de l'adénosine triphosphate et une accumulation d'acides gras se produit par dégradation des phospholipides. Certaines enzymes sont également altérées au cours de l'ischémie et catalysent alors des réactions qui produisent des radicaux comme produits terminaux. La xanthine déshydrogénase, par exemple, catalyse habituelle- ment une réaction dont le produit terminal est l'acide urique. Le produit ischémique convertit la xanthine déshydrogénase en xanthine oxydase, qui catalyse la production de radicaux à partir de l'oxygène et de l'hypoxanthine. Il semble démontré que les radicaux sont impliqués dans les lésions cérébrales provoquées par l'ischémie- reperfusion. Le cerveau est particulièrement exposé à ces lésions car il contient des taux élevés d'acides gras peroxydables et des taux relativement faibles d'enzymes protectrices (R. Floyd). *-../... 3. Floyd et ses collègues ont utilisé des techniques électrochimiques pour détecter la réaction chimique impliquant les radicaux libres hydroxyl dans le cerveau de la gerbille. Ils ont montré que l'ischémie ne suffisait pas, à elle seule, à provoquer la réaction chimique et les lésions tissulaires, mais que la reperfusion était nécessaire. Le mécanisme des lésions de reperfusion se met en place pendant l'ischémie, avec formation de xanthine oxydase et de son substrat, l'hypoxanthine, un produit de dégradation de l'adénosine triphosphate. Lorsque le débit sanguin est rétabli dans les tissus, la réintro- duction de l'oxygène moléculaire déclenche la formation de superoxydes. Kontos a expliqué les mécanismes possibles des lésions dues a'ux radicaux oxygène. D'après lui, une fois produits, les radicaux oxygène réagissent avec.les acides gras insaturés des membranes cellulaires, des protéines, des enzymes et de l'ADN. Au niveau du cerveau, par exemple, les cellules nerveuses sont lésées, ce qui altère l'activité électrique cérébrale. Floyd a démontré que la synthèse des neurotransmetteurs, en particulier de la dopamine, est affectée par la peroxydation du tissu nerveux. Selon lui, les lésions des membranes neuronales ou des enzymes catalysant la réaction en sont responsables. Kontos a également émis l'hypothèse que les cellules endothéliales vasculaires et musculaires lisses sont endommagées, conduisant à une dilatation des artérioles cérébrales et à une effraction de la barrière hémo- méningée. Il admet cependant qu'il est parfois difficile de déterminer quelle est la part de responsabilité respective, dans les lésions observées, de l'ischémie et des radicaux. *--/..--. 4. On a déjà pourtant décrit de nombreuses substances pouvant permettre de détruire les radicaux oxygène pendant la reperfusion. La vitamine E a été proposée, mais le malade doit avoir un taux sanguin élevé de vitamine E avant la survenue de l'ischémie, ce qui est difficile à obtenir dans la mesure o celle-ci est inattendue. Sa concentration au niveau des lésions doit également être élevée, ce qui nécessite l'administration d'une quantité importante et parfois intolérable. La vitamine E se révèle donc inutilisable en pratique. La superoxyde dismutase a été utilisée avec succès chez le chat pour corriger les modifications vasculaires ischémiques. A la différence de la vitamine E, elle peut être administrée juste avant la reperfusion. Une autre approche consiste à diminuer la production des radicaux. L'allopurinol inhibe la xanthine oxydase, mais présente les mêmes contraintes que la vitamine E. Ginsberg pense que l'allopurinol peut être plus utile dans les tissus possédant des taux enzymatiques élevés, tels que le coeur. Les chélateurs, tels que l'acide édétique et la desferrio- xamine, qui se lient aux atomes de fer des enzymes, représentent d'autres alternatives possibles. La 4-mercapto 6-hydroxy pyrazolo (4,3-d) pyrimidine trouve une application en thérapeutique en tant qu' inhibiteur de la synthèse de l'acide urique et en tant qu'anti-oxydant. En tant que tel, on l'utilise dans les systèmes ischémie-reperfusion d'organes et elle protège les tissus contre les lésions provoquées par les radicaux libres. Les radicaux libres, en effet, apparaissent dans des tissus privés d'oxygène à la suite d'une ischémie suivie d'une reperfusion au cours de laquelle a lieu un apport important d'oxygène; leurs origines sont nombreuses, les deux sources principales sont: 1) la xanthine oxydase produisant des anions superoxydes lorsqu'elle catalyse l'oxydation de la xanthine ou de l'hypoxanthine en acide urique; 2) Les polynucléaires neutrophiles qui, lorsqu'ils sont stimulés, produisent des anions superoxydes. A../... 5. La présence d'anions superoxydes entraîne la formation de dérivés tels que le peroxyde d'hydrogène, radical très réactifs, et des peroxydes lipidiques pouvant se former à partir des lipides membran'aires. D'après les résultats obtenus, il semble que Oxythiopurinol soit meilleur protecteur que l'Allopurinol, vis-à-vis des radicaux hydroxyles, ainsi que vis-à-vis des peroxydes. Les applications cliniques directes prévues peuvent être: 1) Protection de différents organes au cours d'inter- ventions chirurgicales (CEC ou transplantation); 2) Anti-inflammatoire: l'inflammation étant une conséquence d'une accumulation de polynucléaires activés; 3) Radioprotecteur: au cours d'irradiations médicales, afin de protéger certains tissus contre les radio- lésions; 4) Protection contre la cataracte dont l'étiologie est liée à l'existence de radicaux libres; ) Le traitement des rétinopathies et des dégénérescences. 6) Dans le domaine de la pathologie des voies respiratoires - soulagement des symptômes inflammatoires aigus prévention des surinfections - protection renforcée contre la survenue des rhinites atropiques ou croOteuses (effet-lésion). A ces fins, la 4-mercapto 6-hydroxy pyrazolo (4,3-d) pyramidine et ses sels est administrée par voie buccale ou parentérale sous forme de compositions pharmaceutiques. Dans celles-ci, la 4-mercapto 6-hydroxypurazolo (4,3-d) pyrimidine ou un de ses sels est mélangée, ou ajoutée, ou dissoute dans un véhicule ou un excipient inerte, - non toxique, pharmaceutiquement acceptable. /... 6. On pourra citer, à cet égard, les solutés en suspensions injectables pour perfusion veineuse, les comprimés, - les dragées, les gélules, les poudres aromatisées, ou non, présentées en sachets, les comprimés effervescents. La posologie usuelle varie selon la voie d'administration, l'âge du sujet et l'indication thérapeutique. Elle s'échelonne de 100 à 600 mg par jour. La 4-mercapto 6-hydroxypyrazolo (4,3-d) pyrimidine ou un de ses sels est présentée de préférence sous forme de préparations destinées à la voie buccale comme des comprimés ou des gélules renfermant 100, 200 ou 300 mg de principe actif. L'invention s'étend aussi à un procédé d'.obtention des compositions pharmaceutiques à base de 4-mercapto 6-hydroxy pyrazolo (4,3-d) pyrimidine ou d'un de ses sels selon l'invention caractérisé en ce que l'on. incorpore ou mélange la 4-mercapto 6-hydroxypyrazolo (4,3-d) pyrimidine, ou un de ses sels avec un excipient ou un véhicule non toxique selon les méthodes connues en pharmacotechnie. 7. R E V E N D I C A T I ONS L'invention a pour objet: 1) Les compositions pharmaceutiques renfermant, à titre de principe actif, la 4-mercapto 6-hydroxy pyrazolo_ (4,3-d) pyrimidine ou un de ses sels en association 5. ou en mélange avec un véhicule ou un excipient inerte non-toxique pharmaceutiquement - acceptable - 2) Les compositions pharmaceutiques, selon la revendication , dans lesquelles le principe actif est la 4- mercapto 6-hydroxypyrazolo (4,3-d) pyrimidine. 3) Les compositions pharmaceutiques, selon la revendica- tion 10, ou la revendication 2 , dans lesquelles la teneur en principe actif s'échelonne de 100 à 300 mg dans les préparations pour la voie buccale. 4) Un procédé d'obtention des compositions pharmaceutiques selon la revendication 1 caractérisé en ce que l'on mélange ou incorpore la 4mercapto 6-hydroxy pyrazolo (4,3-d) pyrimidine ou un de ses sels avec un excipient ou un véhicule inerte, non toxique, pharmaceutiquement acceptable.