Brevet FR2643637A1 — publié le 19900831

Complexe d'ion calcium avec au moins un acide gras insaturé, agent biomédiateur comprenant un tel complexe, composition pharmaceutique l'incorporant et extraits de plantes ou d'organes d'animaux en contenant. La présente invention concerne essentiellement un complexe de l'ion calcium avec au moins un acide gras insaturé, un agent biomédiateur comprenant un tel complexe, une composition pharmaceutique l'incorporant et des extraits de plantes et > 'organes animaux. On sait que le calcium est aujourd'hui considéré comme un bioélément majeur. Il y a seulement une génération, L'ion Ca était, à peu de chose près, connu des physiologiques comme un constituant minéral de l'os et un élément du plasma sanguin nécessaire au fonctionnement du coeur et à la coagulation du sang. Puis, on a découvert Le rôle de L'ion calcium dans Le mécanisme de contrac tion-rel chement du musc te strié, suivi de la mise en évidence des pompes à calcium dont l'efficacité est directement dépendante de la concentration en ion Ca2+ (voir The Role of Calcium in Biological Systems L.J. ANGHILERI et al. vol. 1, 2, 3 C.R.C. Press Boca Raton/Florida 1982). Aujourd'hui, on sait que l'ion calcium participe à de trés nombreuses fonctions biologiques. Les processus dépendant du calcium les plus connus sont La transmission de l'influx nerveux et La libération de neuromédiateurs, Les mécanismes de contraction des muscles striés, cardiaques et lisses, et les mécanismes de sécrétion des glandes exocrines et endocrines (voir Endocrinology of Calcium Metabolism J.A. PARSONS Editor Raven Press New York 1982). On sait ainsi que le calcium interagit sur les récepteurs hormonaux et régule les effets des hormones soit en agissant directement sur les enzymes, soit indirectement en modifiant le pH intracellulaire, La concentration en phosphate et en sodium et la disponibilité du magnésium. Le calcium est également un constituant essentiel des membranes plasmatiques qui influence leurs structures, leur défarmabilité,et leur perméabilité. Son aptitude à se lier aux mucroprotéines affecte leurs propriétés de surface, et ses effets sur les microtubules s'étendent à une large gamme de fonctions. Chez Les vertébrés, l'homéostase calcique est régulée par des migrations de calcium entre cinq compartiments : les fluides extracellulaires, l'ensemble intracellulaire lui-même subdivisé en plusieurs secteurs, les os et les fluides connexes, le lumen intestinal, et le fLuide des tubules rénaux. Le transport entre ces divers compartiments est piloté par trois hormones : le cholécalciférol, l'hormone parathyro1dienne (PTH) et la calcitonine. Dans Les différents processus de régulation par les changements de concentrations de Ca 2+ cytosolique ou extracellulaire interviennent au moins trois systèmes membranaires différents de la cellule. C'est ainsi que les concentrations cytoplasmiques en Ca 2+ sont capables de réguler simultanément plusieurs activités différentes au sein d'une même cellule, ce qui donne une idée de la subtilité des mécanismes impliqués. Les processus biochimiques qui permettent de reieter hors de la cellule le calcium devenu excédentaire, de le convoyer dans les fluides extracetlulaires puis de le minéraliser dans l'urine avant excrétion sont également tout à fait remarquables. Or, face à la finesse de ces processus biochimiques, les moyens therapeutiques de correction des concentrations en calcium ou d'inflexion de leurs dérivés restent tout à fait grossiers. Les apports en quantité de calcium intracellulaire, destinés par exemple à la constitution ou reconstitution des tissus osseux, sont relativement maîtrisés et le praticien dispose de deux axes de prescription : la supplémentation de L'apport alimentaire par la prise de sels assimilabLes comme le gluconate ou le glycérophosphate de calcium et la stimulation de La fixation calcique par complexes polypeptidiques comme la calcitonine associés à des facteurs vitaminiques D. Le calcium biomédiateur, celui dont la variation locale de concentration est active sur les processus biologiques, est en revanche modulé, en influx ou en reflux, par des actions indirectes ; les intermédiaires biologiques les plus connus étant les calmodulines (voir 1 - Calcium Transport in Contraction and Secretion Editors : E. CARAFOLI et al. North Holland Amsterdam 1975 2 - Calcium Regulation and Bone Metabolism vol. 9 Editors : D.U. COllN et al. Excerpta Medica Amsterdam 1986). La présente invention a donc pour but de résoudre le nouveau problème technique consistant en la fourniture d'un nouveau complexe d'ion calcium capable de constituer un agent biomédiateur de qualité remarquable en permettant un apport calcique in situ grâce à une biodisponibilité importante. La présente invention a encore pour but de résoudre le nouveau problème technique consistant en la fourniture d'un nouvel agent biomédiateur présentant une biodisponibilité importante, réalisant un apport calcique in situ, grâce à la conjuguaison des effets d'au moins les deux facteurs suivants, à savoir : a) une ampiphilie moléculaire propice au passage des membranes cellulaires ; b) une insaturation de chaîne propice à a mobilité dans les fluides biologiques. La présente invention a encore pour but de résoudre le nouveau problème technique consistant en la fourniture d'un agent biomédiateur à base d'ion calcium de très grande biodisponibilité, conjuguant les deux facteurs précités, ainsi qu'un troisième facteur consistant en L'obtention d'un effet chélatant additionnel de l'ion calcium par la combinaison avec des groupes fonctionnels peptidiques. La présente invention a encore pour but de résoudre le nouveau problème technique consistant en la fourniture d'une composition pharmaceutique réalisant un apport calcique in situ, permettant de traiter toutes les pathologiques dues à la biomédiation du calcium, permettant de préférence de réaliser les traitements thérapeutiques suivants - traitement antalgique, par exemple névralgie dentaire ou céphalée, - traitement anti-inflammatoire, par exemple érythème, ou polyarthrite rhumatoide, - traitement anti-pyretique, - traitement cardiotonique, - traitement myotonique, par exemple polyarthrite rhumatorde. Enfin, La présente invention a encore pour but de résoudre le nouveau problème technique consistant en la fourniture d'extraits de plantes ou de parties de plantes, et d'extraits d'organes d'animaux comprenant de nouveaux complexes d'ion calcium à effet biomédiateur remarquable. La présente invention permet de résoudre les nouveaux problèmes techniques précités pour la première fois, d'une manière particulièrement simple, utilisable à l'échelle industrielle. Ainsi, selon un premier aspect, la présente invention fournit un complexe de l'ion calcium, caractérisé en ce qu'il comprend L'ion calcium combiné à au moins un acide gras insaturé, de préférence ayant de 14 à 26 atomes de carbone, encore de préférence de 16 à 24 atomes de carbone. Cet acide gras insaturé peut être linéaire ou ramifié. Selon un mode de réalisation avantageux de l'invention, ce complexe est caractérisé en ce que l'acide gras insaturé est un acide gras polyinsaturé, de préférence sans conjugaison des liaisons éthyléniques. De préférence, cet acide gras polyinsaturé sans conjugaison des liaisons éthyléniques est choisi parmi l'acide 9,12-linotéique, l'acide 9,12,15-Linolénique, l'acide 5,8,11 ,14-arachidonique. Selon un mode de réalisation particulièrement avantageux de l'invention, le complexe d'ion calcium précité comprend en outre au moins un agent de chélation du calcium à structure peptidique ou pseudopeptidique dont l'un des aminoacides est la proline, de préférence de poids moléculaire inférieur à environ 1 000. De préférence, il s'agit d'un di- ou tripeptide. Selon une caractéristique encore davantage préférée, le di- ou tripeptide est choisi parmi le groupe consistant de la cystéyl-proline, la p-glutamyl-proline, la glycyl-p-glutamylproline ou la dicétopipérazine de la proline. Selon un deuxième aspect, la présente invention fournit encore un agent biomédiateur, caractérisé en ce qu'il comprend un complexe de l'ion calcium dans lequel L'ion calcium est combiné à au moins un acide gras insaturé, de préférence ayant de 14 à 26 atomes de carbone, encore de préférence de t6 à 24 atomes de carbone. Cet acide gras insaturé peut être linéaire ou ramifié. Selon un mode de réalisation avantageux, L'acide gras insaturé précité est un acide gras polyinsaturé, de préférence sans conjugaison des liaisons éthyléniques. Selon encore un mode de réalisation préféré de l'invention, l'acide gras polyinsaturé précité sans conjugaison des liaisons éthyléniques est choisi parmi le groupe consistant de l'acide 9,12-linoleique, l'acide 9,12,15-linolénique, l'acide 5,8, 11,14-arachidonique. Selon encore un autre mode de réalisation particulièrement avantageux de l'invention, L'agent biomédiateur précité est en outre caractérisé en ce qu'il comprend au moins un agent de chélation du calcium à structure peptidique ou pseudopeptidique dont l'un des aminoacides est la proline. De préférence, cet agent de chélation est un di- ou tripeptide. Selon une caractéristique encore préférée, cet agent de chélation est choisi parmi le groupe consistant de la cystéylproline, la p-glutamyl-proline, la glycyl-p-glutamyl-proline ou la dicétopipérazine de la proline. Selon encore une autre variante de réalisation de l'invention, cet ion complexe de calcium est contenu sous forme phospholipidique ou glycophospholipidique dans un extrait de plantes ou de parties de plantes, de préférence appartenant aux familles des crucifères, des Linées ou des Résédacées. Selon encore une autre variante de réalisation de l'invention, l'ion complexe du calcium précité est contenu sous forme phospholipidique ou glycophospholipidique dans un extrait d'organes d'animaux, ces animaux étant de préférence des poissons appartenant aux familles des Clupéidés, des Gadidés, des Salmonidés ou des Scombridés. Selon un troisième aspect, la présente invention concerne également une composition pharmaceutique, caractérisée en ce qu'elle comprend à titre de principe actif un complexe de L'ion calcium tel que précédemment défini ou un agent biomédiateur tel que précédemment défini. Selon une autre caractéristique avantageuse de la composition pharmaceutique selon l'invention, celle-ci est caractérisée en ce qu'elle comprend une concentration en complexe d'ion calcium précitée comprise entre 0,1 et 5 X, en pourcentage en poids par rapport au poids total de la composition pharmaceutique. Selon un mode de réalisation particulier de la composition pharmaceutique selon L'invention, celle-ci est caractérisée en ce qu'il s'agit d'une composition pharmaceutique à activité antalgique de préférence formulée pour une administration pernasale. Selon un autre mode de réalisation particulier de la composition pharmaceutique selon l'invention, celle-ci est caractérisée en ce qu'il s'agit d'une composition pharmaceutique à activité antipyrétique, de préférence formulée pour une administration orale. Selon un autre mode de réalisation particulier de la composition pharmaceutique selon l'invention, celle-ci est caractérisée en ce qu'il s'agit d'une composition pharmaceutique à activité anti-inflammatoire, de préférence formulée pour une administration orale. Selon un autre mode de réalisation particulier de la composition pharmaceutique selon L'invention, celle-ci est caractérisée en ce qu'il s'agit d'une composition à activité myotonique, de préférence formulée pour une administration topique, en particulier sous forme d'un gel. Selon encore un autre mode de réalisation particulier de la composition pharmaceutique selon L'invention, celle-ci est caractérisée en ce qu'il s'agit d'une composition pharmaceutique à activité cardiotonique, présentant une activité inotrope positive sans effet chronotrope positif associé, de préférence formulée pour une administration percutanée. On peut ainsi constater que l'invention permet de préparer des compositions pharmaceutiques particulièrement intéressantes notamment dans le traitement de la douleur, de la fièvre, de l'inflammation et de L'atonie musculaire, ce qui représente un avantage technique déterminant, inattendu pour L'homme de l'art. Selon une variante de réalisation, la composition pharmaceutique se présente sous forme de gélules dosées de 20 à 100 mg, en particulier à 50 mg d'extrait, ou de principe actif, ces gélules étant de préférence rendues gastrorésistantes. Les compositions pharmaceutiques selon l'invention peuvent se présenter sous diverses formes galéniques, la voie d'administration et le dosage étant adaptés à l'activité thérapeutique recherchée. Par exemple, pour un traitement antalgique, la voie d'administration sera pernasale et La posologie sera de 5 mg par pulvérisation. Par ailleurs, dans le cas d'un traitement antiinflammatoire, la voie d'administration sera orale et la posologie sera de 2 gelules dosées à 50 mg par jour. Dans le cas d'un traitement antipyrétique, la voie d'administration sera orale et la posologie sera de 3 gélules à 50 mg par jour. Dans le cas d'un traitement cardiotonique, la voie d'administration sera percutanée et la posologie sera de 5 mg par jour. Dans le cas d'un traitement myotonique, la voie d'administration sera topique et ta posologie sera de 4 applications par jour d'une noisette de gel correspondant à 5 mg. La présente invention couvre encore une composition pharmaceutique, caractérisée en ce qu'elle comprend à titre de principe actif un extrait naturel issu d'organismes animaux, végétaux, de préférence respectivement choisis parmi des extraits de poissons appartenant aux familles des Clupéidés, des Gadidés, des Salmonidés ou des Scombridés, ou des extraits de plantes appartenant aux familles des Crucifères, des Linées ou des Résédacées. La présente invention concerne encore un procédé de traitement thérapeutique d'un mammifère, incluant un être humain, caractérisé en ce qu'on administre à ce mammifère une quantité thérapeutiquement efficace d'un complexe de L'ion calcium dans lequel L'ion calcium est combiné à au moins un acide gras insaturé, linéaire ou ramifié, de préférence ayant de 14 à 26 atomes de carbone, encore de préférence de 16 à 24 atomes de carbone.Selon des variantes de réalisation particulières de ce procédé de traitement thérapeutique, on réalise un traitement antalgique, de préférence par administration pernasale ; selon une autre variante, on réalise un traitement antipyrétique, de préférence par une administration orale ; selon encore une autre variante, on réalise un traitement anti-inflammatoire, de préférence par une administration orale ; encore selon une autre variante, on réalise un traitement myotonique, de préférence par une administration topique, en particulier sous forme d'un gel ; encore selon une autre variante, on réalise un traitement cardiotonique, de préférence par une administration percutanée. On peut dire de manière générale que le complexe d'ion calcium selon l'invention, l'agent biomédiateur selon l'invention le contenant ainsi que Les compositions pharmaceutiques le contenant permettent de traiter tous les états pathologiques qui régressent ou cèdent par une activation de la biorégulation calcique. Le mode d'action de ce complexe d'ion calcium n'est pas encore élucidé. On pense qu'il pourrait relever du système des kinines et faire intervenir en particulier la bradykinine, ceci étant donné simplement à titre indicatif comme étant une explication scientifique possible du mécanisme d'action. Selon encore un autre aspect de La présente invention, Les extraits de plantes et de poissons sont réalisés selon des procédés généraux permettant L'extraction de préférence simuLtanée des lipides et des peptides de faibles masses moléculaires. Les conditions sont optimisées pour priviLégier L'extraction des acides gras insaturés selon l'invention soit sous forme estérifiée, soit sous forme libre ou salifiée, ainsi que tes très petits peptides, ctest-à-dire dont le poids moléculaire est inférieur à 1 000. Parmi les plantes, toutes les Crucifères, les Linées et les Résédacées, sont utilisables, en particulier les : - Reseda Alba L., R. Lutea L., R. Luteola L., R. Odorata L. et R. Phyteuma L. - Oligomeris Subulata (Del) Boiss. - Ochrademus Baccatus Del. - Asterocarpus Sesamoides Gay., Clusii Gay. - Sinapis Galba L. et S. Arvensis L. - Linum glandulosum Moench, L.Narbonense L., L.Carthaticum L. et L. Usitatisimum L. On peut utiliser les plantes entières récoltées en fleurs ou en fruits ou des graines. On les sèche ensuite à L'abri de La lumière sous courant d'air. Parmi les poissons, toutes tes espèces riches en lipides insaturés peuvent être utilisées, notamment celles des familles des Cupléidés, des Galidés, des Salmonidés et des Scombridés. La matière première peut être le poisson entier ou les seuls organes de stockage des lipides. La congélation préalable à l'extraction parant avantageuse. Il peut s'agir d'un extrait aqueux ou organique qui résulte de l'action d'un solvant aqueux ou organique ou d'un mélange de tels solvants sur le broyat de plantes ou de chairs. Il s'agit donc bien de l'extraction des produits solubles ou miscibles dans l'un ou l'autre de ces solvants ou dans les deux. L'extrait aqueux résulte avantageusement de l'épuisement par de l'eau d'un broyat des tissus, puis de la récupération par un moyen approprié du soluté sec, comme la lyophilisation ou la nébulisation auxquelles peut éventuellement être associée une precon- centration telle qu'une osmose inverse. Dans le cas d'une lyophilisation ou d'une nébulisation, il peut être avantageux d'utiliser un agent support physiologiquement inerte, par exemple à effet viscosifiant ou absorbant ou déshydratant, tel que lthydroxypropyl- méthylcellulose ou HPMC, l'acide silicique, une maltodextrine ou un dextran. On peut également procéder à une extraction par solvant organique et l'extrait obtenu peut ensuite être concentré pour éliminer tout ou partie du solvant organique utilisé. On peut éventuellement terminer par un fractionnement chromatographique de cet extrait. L'extrait organique résulte avantageusement de l'epuise- ment par un solvant organique, tel que l'éther, l'hexane, le méthanol, l'éthanol ou du C02 liquide en phase supercritique, d'un broyat des tissus, puis de la récupération par évaporation du soluté sec. Comme solvant, on préférera toutefois l'éther, l'hexane ou L'éther de pétrole et encore de préférence le méthyltertiobutyléther, ou le CO2 liquide en phase supercritique, à L'état pur ou éventuellement avec des traces d'eau ou d'éthanol ou similaire. On peut également réaliser une extraction par une action simultanée du solvant aqueux et du solvant organique ; dans ce cas, ce dernier est de préférence alcoolique, notamment l'éthanol. Les extraits résultant de la phase extractive sont ultérieurement soumis à une calcification. Ce traitement des extraits est conduit en deux temps, une hydrolyse de leurs esters d'acides gras selon tes procédés généraux de saponification, celle-ci étant opérée de préférence par une lessive de soude en milieu alcoolique, puis une calcification au lait de chaux dans le même milieu. La calcification directe est également possible. Les extraits, avant saponification ou après calcification, peuvent être décolorés et/ou désodorisés par des adsorbants comme les charbons actifs employés en colonnes continues, ou en discontinu par addition au milieu puis séparation sur media filtrants inertes. Enfin, l'invention couvre également les extraits de plantes ou de parties de plantes caractérisés en ce qu'ils sont obtenus à partir de plantes appartenant aux familles des Crucifères, des Linées ou des Résédacées ; ainsi que les extraits d'organes animaux, caractérises en ce qu'ils sont obtenus à partir de poissons appartenant aux familles des Clupéidés, des Gadidés, des Salmonidés ou des Scombridés. De préférence ces extraits sont obtenus par les procédés généraux précédemment décrits. La présente invention sera maintenant illustrée à partir de plusieurs exemples de L'invention donnés simplement à titre d'illustration et qui ne sauraient donc en aucune façon limiter la portée de l'invention. Dans les exemples, comme dans le texte et les revendications, tous les pourcentages sont donnés en poids, sauf indication contraire. Exemple 1 selon L'invention Exemple de synthèse du complexe de calcium On met par exemple en solution l'ester méthylique de l'acide a-linolénique dans 100 fois son poids de méthanol puis on traite par 3 fois son poids de lessive de potasse a 10 X sous agitation au reflux pendant 1 h ; le tout est ensuite versé dans une solution aqueuse de même volume de chlorure de calcium à 5 X et l'ensemble est porté au reflux pendant 5 min avant d'être concentré jusqu'à un volume résiduel inférieur au dixième de la solution méthanolique initiale. Le précipité est sépare sur verre fritté, essoré, lavé par 2 fois son volume d'eau puis séché. On obtient ainsi ce complexe de calcium de l'acide a-lino- lénique selon l'invention, qui se présente sous la forme d'une poudre de couleur blanc casse ; son point de fusion n'est pas net, on observe une perte d'eau puis une décomposition ; sa faible solubilité dans L'eau et les solvants usuels ont conduit à l'iden- tification séparée de trois constituants : de L'eau, du calcium et de L'acide alphalinolénique correspondant à un polyhydrate d'alpha linoléate de calcium, le spectre UV présente deux maxima d'absorption à 252 et 320 nm et, dans le spectre infrarouge, des bandes caractéristiques de l'acide pur, à 1681 et 1651 cm-l sont associées à une forte absorption diffuse dans la zone de 3000 à 3500 cm Exemple 2 selon l'invention En procédant d'une manière similaire à l'exemple 1,- on peut préparer : Le complexe de calcium de l'acide 9,12-linoléique, se présentant sous la forme d'une poudre de couleur blanchâtre présentant les caractéristiques physiques et spectrales d'un hydrate de linoléate de calcium, les trois composants étant identifiés comme dans l'exemple 1. Exemple 3 selon l'invention En procédant également d'une manière similaire à L'exemple 1, on prepare le complexe de calcium de l'acide 5,8,11,14-arachido nique se présentant sous La forme -d'une poudre de couleur blanchatre présentant les caractéristiques physiques et spectrales d'un hydrate d'arachidonate de calcium, le trois composants étant identifiés comme dans L'exemple 1. Exemple 4 Préparation d'un extrait selon L'invention d'origine végétale La plante appartenant à la famille des Résédacées, à savoir la plante Réséda alba L, ceuillie entière à la maturité des graines puis séchée dans les règles de l'art est grossièrement broyée puis agitée mécaniquement pendant 48 h dans un mélange à 600C de 10 fois son poids d'eau et une fois son poids d'alcool à 95 Z en volume. Après refroidissement à la température ambiante, La phase liquide est séparée du marc, calcifiée au lait de chaux jusqu'à pH 8, filtré à 0,40 jjm, puis concentrée 5 fois sous vide au-dessous de 500C. Le concentrat est agité doucement pendant 15 h, abandonné au repos 48 h puis filtré sous vide. Le précipité récupéré repris par deux fois son poids d'eau froide puis refiltré, séché, homogé néisé et conditionné. Ce précipité se présente sous la forme d'une poudre beige, sans point de fusion net ; la caractérisation de ses constituants est difficile en l'état, en raison de sa faible solubilité dans les solvants usuels. Néanmoins, les fractions solubilisées indiquent en U.V., en I.R., en R.M.N. et en spectrométrie de masse la présence d'eau, de calcium, d'acides gras et de dérivés peptidiques. Les acides gras observés sont notamment ceux des exemples 1 à 3 mais, par chromatographie en phase gazeuse de leurs dérivés décalcifiés puis estérifiés, il apparait en sus pour environ 30 X des acides gras saturés du type palmitique. Les dérivés peptidiques donnent par hydrolyse essentiellement de ta proline. Exemple 5 Extrait d'origine animale selon l'invention La chair décongelée d'un poisson frais de la famille des Salmonidés, à savoir le saumon Salmo rubor, est dilacérée mécani quement dans 5 fois son poids frais d'eau froide, la phase liquide est séparée et la pulpe réépuisée par 3 fois son poids d'eau froide puis reséparée. Les phases liquides sont rejointes, filtrées à 0,40 pm puis concentrées 3 fois sous vide. Le concentrat est éventuellement enrichi à ce stade en huile du poisson obtenue par ailleurs si aucun corps gras n'a relargué à la surface. Le concentrat est alors traité sous agitation par 0,1 fois son volume d'alcool à 95 Z en volume puis à la lesi 'e de soude jusqu'à pH 9 et on le fait porter au reflux pendant 1 h. Après ajout de lait de chaux pour élever le pH au-dessus de 11, un reflux complésnentaire de 5 min, l'ensemble est concentré 3 fois puis refroidi, te précipité est isolé par centrifugation, séché, homogénéise puis stocké. Ce précipité se présente sous la forme d'une poudre de couleur beige présentant des caractéristiques physiques et spectrales analogues à celles de l'exemple 4. Exemple 6 Exemple de formulation d'agent biomédiateur selon L'invention Selon une première variante de réalisation, un agent biomédiateur selon l'invention est formé par le produit obtenu directement à L'état brut dans l'un quelconque des exemples 1 à 5 précités. Selon une autre variante de réalisation avantageuse, l'extrait brut obtenu à l'exemple 1, 2 ou 3, sous forme de produit sec, est mélangé avec 5 X de son poids de glycyl-p-glutamyl-proline jusqu'à parfaite homogénéité, puis stocké. Ce mélange constitue le principe actif d'une composition pharmaceutique selon L'invention telle que formulée par exemple dans Les exemples suivants. Exemple 7 Composition pharmaceutique selon l'invention Exemple de spécialité de géLuLes Le produit obtenu selon l'un quelconque des exemples 1 à 6 précités est additionné de son poids de stéarate de magnésium et de 10 fois son poids de cellulose microcristalline puis intimement homogénéisé, le mélange obtenu est réparti au moyen d'un équipement adapté de répartition en gélules de gélatine module 2 à raison de 240 mg/unité. Les gélules ainsi dosées à 20 mg d'extrait sont enrobées au moyen d'un appareil de gomme arabique, d'ester de cellulose et d'oxyde de titane. Après séchage, les gélules obtenues sont gastrorésistantes et conditionnées sous blister en plaquettes de 15 regroupées en étuis de 2. Exemple 8 Composition pharmaceutique selon l'invention Spécialité de gel dermique Le produit obtenu selon l'un quelconque des exempLes 1 à 6 est dissous dans un mélange de son poids d'alcool à 95 Z en volume, de son poids de glycérol, de son poids de monoéthyléther de diéthylèneglycol et de 7 fois son poids d'eau purifiée ; du carbopol à raison de 1 Z est dispersé dans la solution à froid par agitation mécanique non turubulente puis de la triéthanolamine est ajoutée par fractions sucessives de façon à ajuster le pH à 6. Le gel obtenu est alors conditionné en tube polyéthylène de 30 g. Exemple 9 Composition pharmaceutique selon l'invention Spécialité de soluté nasal Le produit obtenu à l'un quelconque des exemples 1 à 6 est dissous à raison de 5 mg/ml dans un excipient à usage de nébulisation nasale à base de sérum physiologique, de glycérine et de monoéthyléther de diéthylèneglycol. La préparation est conditionnée en flacon polyéthylène de 30 ml équipé d'une canule de pulvéri- sation nasale délivrant 0,1 ml par pression. Exemple 10 ESSAIS PHARMACOLOGiQUES A - Recherche d'une activité antalgique PRINCIPE L'injection intra-péritonéale d'acide acétique chez la souris provoque un syndrome douloureux, qui peut être diminué ou aboli par L'injection préalable d'une substance analgésique. Le syndrome douloureux se traduit par une torsion de la musculature dorso-abdominale et L'étirement des pattes postérieures de la souris. MATERIEZ ET METHODE 1 - ANIMAUX Des souris mâles de souche EOPS (10 par lot) provenant du centre d'élevage de Montpellier ont été utilisées dans cette étude. Les animaux sont maintenus en observation pendant 4 jours avant Le début des essais. En début d'essai, les animaux pèsent en moyenne 20 g. Pendant la période d'observation les animaux, répartis par cage de 10, reçoivent nourriture et eau de boisson ad libitum et sont soumis à une température comprise entre 21 et 23 C et à un cycle jour/obscurité de 12 h. 2 - PRODUITS - Produit de L'exemple 4 - Acétylsalicylate de Lysine (ASPEGI p injectable 0,5 g). - Paracétamol (DAFALGA - Solution à 1 X d'acide acétique. 3 - PROTOCOLE Les souris sont mises à jeun de nourriture 18 h avant le test. L'acide acétique est injecté 30 min après l'administration de la substance à tester (temps to). Un lot d'animaux témoins reçoit le véhicule. Le décomptage des contractions débute à t 5 min et se poursuit durant 15 min. On considère comme étant la dose efficace 50 (DE50), la dose d'analgésique qui réduit le nombre de contractions de 50 X. L'efficacité de produit de L'exemple 4 a été évaluée par rapport au paracétamol et à l'aspégic. Le produit de L'exemple 4 et le paracétamol ont fait l'objet d'une détermination de DE50; 4 - DOSES UTILISEES - Produit de l'exemple 4 - 10, 20, 50 et 100 mg/kg. - ASPEGI a 30Q mg/kg. - PARACETAMOL 100, 160, 200, 320. Les dilutions sont ajustées de façon à administrer 10 ml/kg. 5 - EXPRESSION DES RESULTATS Le nombre de contractions est relevé pour chaque animal et est comparé entre les différents lots par les tests F de SNEDECOR et t de Student. Le pourcentage de protection des animaux traités est calculé par rapport au nombre de coliques obtenus chez les témoins. Les résultats sont exprimés aux figures 1, 2 et 3. B - Recherche~d'une activité anti-inflammatoire (Produit de L'exemple 4) OEDEME A LA CARRAGENINE - TECHNIQUE DE WINTER (1) INTRODUCTION L'injection de carragénine sous l'aponévrose plantaire de la patte postérieure du rat provoque une réaction inflammatoire aiguë qui peut être réduite par les substances anti-inflammatoires. ^TRIEL ET ZETHODES 1 - ANIMAUX Des rats mates de souche Wistar (12 par lot), provenant du centre d'élevage de Montpellier ont été utilisés dans cette étude. Les animaux sont maintenus en observation pendant 4 jours avant le début des essais. En début d'essai, les animaux pèsent en moyenne 90 g. Pendant la période d'observation, les animaux répartis par cage de 5 reçoivent nourriture et eau de boisson ad libitum et sont soumis à une température comprise entre 21 et 23 C et à un cycle jour/obscurité de 12 h. 2 - PRODUITS - Produit de L'exemple 4 - Carragénine type lambda SATIA. CECA S.A. - Excipients. - sérum physiologique - eau gommeuse 3 X. 3 - PROTOCOLE Les rats sont mis à jeun de nourriture la veille du test. La carragénine (0,05 ml - solution 1 gX dans le sérum physiologique) est injectée dans Le coussinet pLantaire de la patte postérieure droite 1/2 h après L'administration intrapéritonéale de la substance à l'étude. Un lot d'animaux témoins sert de contrôle et reçoit l'excipient. Pour chaque dose de substance, les concentrations des suspensions utilisées sont ajustées de manière à administrer exactement 1 ml par 100 g de poids corporel. Les mesures pléthysmographiques (2) sont faites avant et 1 h, 2 h, 3 h et 4 h après l'administration de la carragénine. 4 - DOSES UTILISEES - Produit de L'exemple 4 - 100, 200, 400 mg/kg voie intrapéritonéale. 5 - EXPRESSION DES RESULTATS Le pourcentage d'augmentation du volume de la patte est obtenu pour chaque animal selon La formule suivante Volume mesuré - Volume initial Z = Volume initial - x 100 Les pourcentages d'enflure sont analysés par les tests F de SNEDECOR et t de STUDENT (3). L'acitvité anti-inflammatoire est exprimée par le pourcentage de réduction de l'oedème chez Les rats traités par rapport aux témoins selon la formule suivante Z Enflure témoins - X Enflure traités X = X Enflure témoins x 100 RESULTATS Les résultats sont consignés dans les tableaux I, II et graphiques des figures 4 et 5. TABLEAU I Z d'augmentation du volume de la patte TRAITEMENTS 1 h 2 h 3 h 4 h TEMOINS 25+8 50+16 52+17 46+4 Produit de L'exemple 4 100 mg/kg 17+8 -16+12 12+11* 13+12* 200 mg/kg 17+4 21+13* 26+13* 19+10* 400 mg/kg 12+7 13+9* 19+14+ 15+10 *Significativement différent des témoins TABLEAU II X d'inhibition de l'oedème TRAITEMENTS 1 h 2 h 3 h 4 h Produit de L'exemple 4 100 mg/kg 29 67 76 70 200 mg/kg 31 57 50 57 400 mg/kg 49 73 62 66 C - Recherche d'une activité antipyrétique INTRODUCTION L'administration de levure de bière chez le rat provoque une hyperthermie qui peut etre réduite par les substances antipyrétiques. MATERIEZ ET MéTHODES 1 - ANIMAUX Des rats males de souche Wistar (12 par lot), provenant du centre d'élevage de Montpellier ont été utilisés dans cette étude. Les animaux sont maintenus en observation pendant 4 jours avant le début des essais. En début d'essai, les animaux pèsent en moyenne 200 g. Pendant la période d'observation les animaux, répartis par cage de 5, reçoivent nourriture et eau de boisson ad libitum et sont soumis à une température comprise entre 21 et 23 C et à un cycle jour/obscurité de 12 h. 2 - PRODUITS - Produit de l'exemple 4 - Paracétamol (DAFALGA ) - Excipients - sérum physioLogique - levure de bière 3 - PROTOCOLE Les animaux (10 par lot) sont mis à jeun de nourriture 16 h avant le test. Le jour du test, les rats sont pesés et reçoivent une injection de levure de bière (2 g/kg) par voie souscutanée. 3 h après, les substances à l'étude sont administrées par voie intrapéritonéale. La température de chaque animal est relevée avant et après l'induction de l'hypertermie par la levure de bière ainsi qu'après traitement-toutes les heures pendant 4 h à l'aide d'un thermocouple constitué d'une sonde rectale et d'un appareil de lecture. 4 - DOSES UTILISEES - Produits de l'exemple 4 - 50 et 100 mg/kg par voie intrapéritonéale en suspension dans l'eau pour préparation injectable. - Paracétamol - 200 et 400 mg/kg par voie intrapéritonéale en suspension dans l'eau gommeuse à 3 X. 5 - EXPRESSION DES RESULTATS (voir figure 6) L'homogénéité des températures avant et après induction de l'hyperthermique a été vérifiée par une analyse de variance. La significativité de l'hyperthermie après injection de la levure de bière a été confirmée, pour chaque lot par un test t de STUDENT. La différence mesurée de de base, mesurée après 1 h, 2 h et 4 h de traitement (température différentielle) a été calculée pour chaque animal puis comparée entre le lot témoin et les lots traités par une analyse de variance. RESULTATS Moyenne des écarts à La température de base Temoins 1,08 +09 1,18+09 1,24+04 1,07+13 Produit de L'exemple 4 50 mg/kg 0,43+12 0,57+13 0,54+14 0,59+09 Produit de t'exemple 4 100 mg/kg -0,80+12 -0,70+15f -0,36+38 0,21+16 ParacétamoL 200 mg/kg -1,02+23* -1,60+26 .1,63+38* -1,13+44* ParacetamoL 400 mg/kg .1,52+25* .1,75+27* .1,87+35* 1,43+46 *Différence significative par rapport aux témoins CONCLUSION L'examen des résultats montre que, dans nos conditions expérimentales, Le produit de l'exemple 4 réduit l'hyperthermie induite par La levure de bière de façon significative par rapport. aux témoins. Bien que son efficacité soit moindre que ceLle au paracétamol, le produit de l'exemple 4, du fait de sa faible toxicité, présente un bénéfice thérapeutique important. D - Recherche d'une activité cardiaque (cardiotonique) L'activité cardiaque de L'échantillon du produit de L'exemple 4 a été recherchée par la méthode des oreillettes isolées de rat. A - TRIEL ET METHODES 1 - MONTAGES DE LA PREPARATION Des rats des deux sexes d'un poids moyen de 300 g sont assommés puis le coeur est rapidement prélevé et placé dans un bécher contenant de la solution oxygénée de CHENOWETH-KOELLE (SCK) de composition suivante (mM) : NaCI, 1,20 ; KCl, 5,63 ; CaCI2, 2,0 ; dextrose, 9,7 ; MgCl2, 2,0 ; NaHC03, 26,0. Les oreillettes droite et gauche sont détachées du coeur et placées dans une cuve à organe isolé contenant de la SCK oxygénée de façon permanente et maintenue à une température de 370C à l'aide d'une pompe à circulation. La portion Libre de l'oreillette est accrochée à une électrode de Plexiglas, alors que l'autre extrémité (détachée du coeur) est pincée par un clip qui est ensuite connecté à un enregistreur isométrique. L'oreillette droite bat spontanément et permet de suivre l'effet chronotrope par enregistrement du rythme. L'oreillette gauche, entraînée électriquement à la fréquence de 1,6 Hz, avec une durée de l'impulsion de 5 ms et un voltage double du seuil à l'aide d'un stimulateur Grass, permet de mesurer l'effet inotrope par évaluation des variations de tension. Les réponses chronotrope (oreiLLette droite) inotrope (oreillette gauche) sont enregistrées sur Physiograph (Narco-bio Systems). Les valeurs basales sont respectivement 195 battements/ minute (oreillette droite) et 0,5 g (oreiLlette gauche). Les oreillettes ainsi disposées ne Sont utilisées qu'après 45 min d'attente. Pendant cette période, le liquide du bain est remplacé toutes les 15 min. 2 - PROTOCOLE D'ETUDE Le produit de l'exemple 4 a été rajouté directement dans la cuve à organe iso-lé sous la forme d'une solution concentrée 100 fois. Après obtention de la tension maximale induite, par l'administration d'une première dose de produit de l'exemple 4, la dose suivante est rajoutée sans lavage et ainsi de suite. Les concentrations indiquées correspondent aux concentrations cumulés présentes dans la cuve. Les résultats sont exprimés en pourcentage de variation par rapport aux valeurs basales mesurées avant toute administration. B - RESULTATS Les résultats d'une expérimentation typique sont illustrés à la figure 7. Ces résultants indiquent que le produit de L'exemple 4 possède une activité inotrope positive sans activité chronotrope positive. La valeur moyenne, sur trois expériences, de L'augmentation de tension induite par 0,30 mg de produit de l'exemple 4 par mt est de 90 + 5 Z. Elle est de 50 + 5 Z pour 0,15 mg/ml. Dans des conditions similaires, I'isoprénaline (1Q-6M) induit une augmentation de tension de 200 Z, mais également une augmentation de rythme de 100 Z environ. C - CONCLUSION Le produit de L'exemple 4 possède une activité inotrope positive sans activité chronotrope positive. Ces propriétés pharmacologiques apparaissent potentiellement très intéressantes dans le cadre du traitement de l'insuffisance cardiaque. REVENDICATIONS 1. Complexe de calcium, caractérisé en ce qu'il comprend L'ion calcium combiné à au moins un acide gras insaturé, de préférence ayant de 14 à 26 atomes de carbone, encore de préférence de 16 à 24 atomes de carbone, linéaire ou ramifié. 2. Complexe selon la revendication 1, caractérisé en ce que L'acide gras insaturé précité est un acide gras polyinsaturé, de préférence sans conjuguai son des Liai sons éthyléniques. 3. Complexe selon la revendication 2, caractérisé en ce que l'acide gras polyinsaturé précité est choisi parmi le groupe consistant de l'acide 9,12-linoleique, l'acide 9,12,15-linolénique et L'acide 5,8,11,14-arachidonique. 4. Complexe selon l'une des revendications 1 à 3, carac térisé en ce qu'il comprend en outre au moins un agent de chélation du calcium à structure peptidique ou pseudopeptidique dont L'un des aminoacides est La proline, de préférence de poids moléculaire inférieur à environ î 000. 5. Complexe selon la revendication 3, caractérisé en ce que L'agent de chélation comprend un di- ou un tripeptide. 6. -CompLexe selon la revendication 5, caractérisé en ce que le di- ou tripeptide précité est choisi parmi le groupe consistant de La cystéyl-proline, la p-glutamyl-proline, la glycylp-glutamyl-proline et la dicétopipérazine de la proline. 7. Agent biomédiateur, caractérisé en ce qu'il comprend L'ion calcium combiné à au moins un acide gras insaturé, de préférence ayant de 14 à 26 atomes de carbone, encore de préférence de 16 à 24 atomes de carbone, linéaire ou ramifié. 8. Agent biomédiateur selon la revendication 7, caractérisé en ce que L'acide gras insaturé précité est un acide gras polyinsaturé, de préférence sans conjuguai son des liaisons éthyléniques. 9. Agent biomédiateur selon la revendication 8, caractérise en ce que L'acide gras polyinsaturé précité est choisi parmi Le groupe consistant de l'acide 9/12-linoléique, L'acide 9,12,15 linolénique, l'acide 5,8,11,14-arachidonique. 10. Agent biomédiateur selon l'une des revendications 7 à 9, caractérisé en ce qu'il comprend en outre au moins un agent de chélation du calcium à structure peptidique ou pseudopetidique dont L'un des aminoacides est La proline, de préférence de poids moléculaire inférieur à environ 1 000. 11. Agent biomédiateur selon la revendication 10, caractérisé en ce que l'agent de chélation est un di- ou un tripeptide. 12. Agent biomédiateur selon La revendication 11, caractérisé en ce que le di- ou tripeptide précité est choisi parmi le groupe consistant de la cystéyl-proline, la p-glutamyL-proline, la glycyl-p-glutamyl-proline et La dicétopipérazine de La proline. 13. Agent biomédiateur selon L'une des revendications 7 à 12, caractérisé en ce que le complexe de calcium précité est contenu sous forme phospholipidique ou glycophospholipidique dans un extrait naturel issu d'organismes animaux ou végétaux. 14. Agent biomédiateur selon la revendication 13, caractérisé en ce que l'extrait naturel végétal est un extrait de plantes appartenant aux familles des Crucifères, des Linées ou des-Réséda- cées. 15. Agent biomédiateur seLon la revendication 13, carac térisé en ce que L'extrait d'organe animal précité est un extrait de poissons appartenant aux familles des Clupéidés, des Gadidés, des Salmonidés ou des Scombridés. 16. Composition pharmaceutique, caractérisée en ce qu'elle comprend à titre de principe actif un complexe de calcium tel que défini à L'une quelconque des revendications I à 6, ou un agent biomédiateur tel que défini à L'une quelconque des revendications 7 à 15. 17. Composition pharmaceutique selon la revendication 16, caractérisée en ce que le complexe de calcium est présent à une concentration de 0,1 à 5 en pourcentage en poids par rapport au poids total de la composition. 18. Composition pharmaceutique, caractérisée en ce qu'elle comprend à titre de principe actif un extrait naturel issu d'orga nismes animaux ou végétaux, de préférence respectivement choisi parmi des extraits de poissons appartenant aux familles des Clupéidés, des Gadidés, des Salmonidés ou des Scombridés, ou des extraits de plantes appartenant aux familles des crucifères, des Linées ou de Résédacées, ledit extrait naturel issu d'organismes animaux ou végétaux, contenant un complexe de calcium tel que défini selon L'une quelconque des revendications 1 à 6. 19. Composition pharmaceutique selon l'une des revendications 16 à 18, caractérisée en ce qu'il s'agit d'une composition pharmaceutique à activité antalgique, de préférence formulée pour une administration pernasale. 20. Composition pharmaceutique selon l'une des revendications 16 à 18, caractérisée en ce qu'il s'agit d'une composition pharmaceutique à activité antipyrétique, de préférence formulée pour une administration orale. 21. Composition pharmaceutique selon l'une des revendications 16 à 18, caractérisée en ce qu il s'agit d'une composition pharmaceutique à activité anti-inflammatoire, de préférence formulée pour une administration orale. 22. Composition pharmaceutique selon L'une des revendications 16 à 18, caractérisée en ce qu'il s'agit d'une composition à activite myotonique, de préférence formulée pour une administration topique, en particulier sous forme de gel. 23. Composition pharmaceutique selon l'une des revendications 16 à 18, caractérisée en ce qu'il s'agit d'une composition pharmaceutique à activité cardiotonique, présentant une activité inotrope positive sans effet chronotrope positif associé, de préférence formuLée pour une administration percutanée. 24. Composition pharmaceutique selon L'une des revendications 16 à 18, caractérisée en ce qu'elle se présente sous forme de gellules dosées à 50 mg d'extrait ou de principe actif, ces gellules étant de préférence rendues gastrorésistantes. 25. Extrait de plantes ou de parties de plantes, caractérisé en ce qu'il est obtenu à partir de plantes appartenant aux familles des Crciféres, des Linées ou des Résédacées et en ce qu'il contient un complexe de calcium tel que défini selon L'une quelconque des revendications 1 à 6. 26. Extrait d'organes d'animaux, caractérisé en ce qu'il est obtenu à partir de poissons appartenant aux familles des Clupéidés, des Gadidés, des Salmonidés ou des Scombridés et en ce qu'il contient un complexe de calcium tel que défini selon l'une quelconque des revendications 1 à 6. 27. Procédé de préparation d'extrait de plantes ou de parties de plantes ou d'organes d'animaux, tel que défini à la revendication 25 ou 26, caractérisé en ce qu'il s'agit d'un extrait aqueux ou organique qui résulte de l'action d'un solvant aqueux ou organique ou d'un mélange de tels solvants sur un broyat de plantes ou de chairs, éventuellement suivi d'une concentration et d'une récupération par un moyen approprié du soluté sec, comme par exemple par lyophilisation ou nébulisation, et en ce qu'on soumet les extraits à une calcification directe ou indirecte, les extraits ayant de préférence été décolorés et/ou désodorisés.