Brevet FR2638323A1 — publié le 19900504

La présente invention concerne un procédé de traite- ment de sperme et, en particulier, un procédé permettant de séparer le sperme des microbes et bactéries qu'il contient et de séparer les spermatozoïdes porteurs du chromosome X de ceux porteurs du chromosome Y. L'invention concerne aussi un dispositif pour la mise en oeuvre de ce procédé. Les procédés modernes pour le traitement de la stérilité et la résolution de divers problèmes gynécologi- ques comprennent l'insémination artificielle in utero, la fertilisation externe ("bébés éprouvettes"), la transplanta- tion de l'embryon et la transplantation sperme/ovaire dans l'oviducte. Au cours de ces interventions modernes, les échantillons de sperme traité peuvent contenir diverses colonies bactériennes et divers microbes, du fait que la semence brute est contaminée par ceux-ci et que les procédés connus ne permettent pas de séparer les bactéries ou les microbes des échantillons de sperme. Ces procédés connus de traitement utilisés lors du prélèvement d'échantillons de sperme comprennent les techniques suivantes: 1') Procédé de déplacement ou de migration simple des spema*ozoïdes décrit par Makler et autres en 1983. 2-) Technique de migration classique. 3') Procédé de déplacement vers le bas. 4') Gradient de percolation discontinue. ') Procédé de centrifugation utilisé dans l'insémina- tion in utero. Le tableau de la page 2 montre de manière schéma- tique les résultats produits par ces divers procédés connus en ce qui concerne la concentration du sperme, son taux d'activité, sa morphologie et sa concentration en microbes en partant d'un sperme brut normal. Il indique également dans sa dernière ligne un but visé par la présente invention, qui est d'obtenir un sperme stérile dont le taux d'activité et la morphologie soient améliorés. Concentration Taux Xorphologie Concentration Procédé en sperme d'activité (X) (X de la en microbes normale) (U. P. C./ml) Semence Dans la Dans la Dans la lxlOs brute fourchette fourchette fourchette (ou plus) normale normale normale Déplacement simple F migrationII tI classique Procédé t t descendant Gradient de l percolation I,, discontinue - t t Centrifu- 1 Pas de gation variation Présent S lff f t t 1 1 sans microbes procédé t indique un accroissement proportionnel au nombre de flèches t indique une diminution proportionnelle au nombre de flèches U.F.C. Unités de formation de colonies. D'autre part, on sait que chaque centimètre cube de semence brute de 90% des individus normaux contient approxi- mativement lx10e colonies bactériennes, o Staphylococcus Epidermis est le plus fréquemment rencontré et représente environ 77%, Corynobacterium sp. représente environ 66%, Viridans Streptococci environ 50%, et, en outre, on peut rencontrer diverses bactéries aérobies comme le streptocoque o-hémolytique, Neisseria sp. (et non Nesseria gonorrhoeae), pseudomonas aeruginosa, des diphythéroïdes et diverses bactéries anaérobies comme le peptocoque prévotique, le pepto-streptocoque, etc. Le tableau de la page 4 suivante montre la contami- nation bactérienne du sperme brut et du sperme préparé, respectivement non ensemencés et ensemencés par diverses bactéries, lorsqu'ils ont été traités par les cinq procédés classiques spécifiés ci-avant et numérotés de 1 à 5. L& dernière colonne indique un but visé et atteint par le procédé belon la présente invention. Ce tableau de la page 4 montre qu'il est difficile de recueillir des échantillons de sperme qui ne contiennent pas de microbes. C'est pour cette raison que les médecins ajoutent des antibiotiques aux échantillons de sperme avant de pratiquer des inséminations in utero ou des transferts de gamètes intra-fallopiens. Il est exact que les antibiotiques tuent les microbes et les bactéries, mais les microbes tués ou ayant achevé leur cycle de vie deviennent des résidus et dégagent des endotoxines qui sont nuisibles pour le sperme, les ovules et les embryons, et entra!nent l'échec de l'intervention ou augmentent le risque d'infection pour les femmes traitées pour stérilité en causant des complications cliniques ou subcliniques. Aussi, un but de la présente intention est de proposer un procédé de séparation qui produise du sperme exempt de microbes et de bactéries, sans qu'il soit nécessaire de faire appel à des antibiotiques. Echantillon Procédé 1 Procédé 2 Procédé 3 Procédé 4 Procédé 5 Invention Bactéries Bactéries Bactéries Bactéries Bactéries Semence brute existantes existantes existantes existantes existantes Bactéries en quantité en qqantité en quantité en quantité en quantité inexistantes réduite réduite réduite apparemment fortement réduite augm entée Bactéries Bactéries Bactéries Semence préparée existantes existantes existantes Bactéries en quantité en quantité en quantité inexistantes réduite réduite réduite Semence brute E. Coli E. Coli B. Coli E. Coli. Coli H. Coli ensemencée par encore encore encore encore encore inexistants H. Coli existants existants existants existants existants Semence brute S. Aureus S. Aureus S. Aureus S. Aureus S. Aureus S. Aureus ensemencée par encore encore encore encore encore inexistants Staphylococcus existants existants existants existants existants Aureus Semence brute Weisseria eisseria Netseri esseria eisera Neisseria eisseria ensemencée par Gonorrh. Gonorrh. Gonorrh. Gonorrh. Gonorrh. Gonorrh. eiseerie encere encore encore encore encre inexistants Gonorrhoeae existants existants existants existants existants Semence prépareée H. Coli E. Coli B. Coll B. Coli ensemencée par encore encore encore inexistants E. Coli existants existants existants Semence préparée S. Aureus S. Aureus S. Aureus S. Aureus ensemencée par encore encore encore inexistants Staphylococcus existants existants existants Aureus Semence préparée Jeisseria Neisseria leisseria Jeisseria ensemencée par Gonorrh. Gonorrh. Gonorrh. Gonorrh. Jeisseria encore encore encore inexistants Gonorrhoeae existants existants existants -2638323 Un autre but de l'invention est de fournir un tel procédé qui, en outre, soit susceptible de séparer les sper- mntozoides porteurs du chromosome X de ceux qui sont porteurs du chromosome Y ou, plus brièvement, de séparer le sperme X du sperme Y. Un but supplémentaire est de réaliser un procédé de ce genre qui soit particulièrement apte à être utilisé pour des inséminations artificielles. Selon l'invention, ces buts sont atteints grâce un procédé du genre spécifié plus haut qui est caractérisé par le fait que l'onplace le sperme à traiter dans un tube de séparation contenant un milieu de culture, que l'on fait incuber l'ensemble pendant le temps nécessaire à une migra- tion significative du sperme vers une autre portion du tube de séparation, et que l'on détache cette portion pour l'utilisation ultérieure du sperme qu'elle contient. Grâce à ce procédé, on peut obtenir des échantillons de sperme exempts de germes sans addition d'antibiotiques. Un objet de la présente invention est, d'autre part, un dispositif pour la mise en oeuvre du procédé spécifié ci- dessus qui permette d'en obtenir tous les effets et qui soit simple d'emploi Avantageusement, un tel dispositif est caractérisé par le fait que chaque portion à détacher du tube de sépara- tion est délimitée par des lignes de cassure préférentielle tracées annulairement au coupe-verre. Il suffit alors de casser le tube de séparation aux endroits marqués au préalable pour recueillir le sperme exempt de germes ou le sperme enrichi en chromosomes Y. Selon une première forme de réalisation, ce tube de séparation présente la forme générale d'un U couché dans un plan vertical, avec une branche inférieure sensiblement horizontale, ouverte à une extrémité et se rétrécissant à autre pour se raccorder à la branche supérieure, le point ou le sperme est déposé au début du traitement étant situé à la base du début du coude qui raccorde la branche inférieure à la branche supérieure, et la portion du tube que l'on détache après le traitement et qui contient le sperme exempt de germes ou enrichi en chromosomes Y, s'étendant sur la majeure partie de sa branche supérieure. Dans un tel tube, le sperme se déplace, par exemple, de droite à gauche, puis de bas en haut après être passé par deux coudes, puis de gauche à droite, ce qui dilue les résidus et les substances chimiques nuisibles. Un tel tube en U couché vertical permet en outre des observations au microscope qui permettent de suivre l'évolu- tion de la quantité de sperme présente dans la partie du tube à détacher si le fond de la branche inférieure du tube de séparation comporte au moins une excroissance en demi- lune qui s'étend dans le sens longitudinal, et si la branche Dipérieure de ce tube, au droit de chacune de ces excrois- sances en demi-lune, comporte au moins une sphère d'observa- tion au microscope. Selon une autre forme de réalisation de ce dispositif, son tube de séparation est un tube droit, rempli initialement de milieu de culture, qui est fermé à son extrémité supérieure, qui comprend des moyens pour l'accro- cher verticalement dans un autre tube contenant le sperme à traiter, son extrémité inférieure plongeant dans ce sperme, et dont la portion détachable, destinée à recueillir le sperme exempt de microbes ou enrichi en chromosomes Y, s'étend sensiblement en son milieu. Selon une forme de réalisation supplémentaire du dispositif en question, ledit tube de séparation est un tube droit, rempli initialement de milieu de culture, qui est fermé à son extrémité supérieure par une poire en caoutchouc ou similaire, qui est solidaire d'un disque annulaire percé de trous au moyen duquel il peut être posé verticalement sur le bord supérieur d'un autre tube contenant le sperme à traiter, son extrémité inférieure plongeant dans ce sperme, et qui comprend au moins une portion détachable s'étendant sensiblement en son milieu. - La figure 1 représente une vue en perspective d'un tube de séparation en U couché selon la présente invention; - La figure 1A montre une variante de l'objet de la figure 1; - La figure 2 montre, également en vue en perspecti- ve, un tube de séparation droit selon la présente invention; - La figure 3 représente l'objet de la figure 2 en fonctionnement; - Les figures 4 et 5 sont analogues, respectivement, aux figures 2 et 3, mais elles représentent un tube de séparation selon l'invention du type à quatre trous; et: - La figure 6 représente, toujours en vue en pers- pective, une autre variante du tube de séparation selon l'invention. Comme on le voit sur la figure 1, le tube de séparation en forme de U couché vertical 1 est composé d'un tube en verre terminé à sa partie supérieure par une poire 2 en caoutchouc ou en caoutchouc aux silicones. Sa partie inférieure comprend au moins une partie en verre en forme de croissant 11 qui fait saillie à l'intérieur de la paroi intérieure du tube. Le reste de ce tube de séparation est un tube creux 3 contenant un milieu de culture liquide pour le sperme. Ce milieu de culture peut être du milieu B.W.W. ou du milieu de Ham F-10 avec 10% de sérum humain prélevé avant l'ovulation ou prélevé sur le cordon ombilical. Ce milieu est aJouté en A et la semence brute est placée en P. Le point H du verre convexe du croissant 11 peut empêcher le liquide de refluer et il réfléchit la lumière pour rendre le niveau supérieur 4 du tube en U couché plus clair lorsqu'on examine le sperme au microscope. Dans la partie F, le diamètre intérieur du tube est de 6 mm. Dans l'espace collecteur d'air, la distance entre les points Q et A est également de 6 mm. Le tube s'incline doucement à partir du point Q pour devenir plus étroit, et il s'incurve vers le haut pour former une zone collectrice d'air. La partie arrière du tube est horizontale et s'étend en U Jusqu'au point D. Le diamètre intérieur en D est égal à 1 mm. Le tube peut être gravé annulairement au moyen d'un outil de découpe du verre en C, D et J pour faciliter sa cassure lors du processus clinique de prélèvement du sperme choisi. Les capacités des divers segments du tube sont environ les suivantes: P-C: 0,15 ml; C-D: 0,12 ml; D-E: 0,06 ml; A-P: 0,05 ml. La capacité de la poire en caoutchouc est de 0,5 ml. La longueur de chaque segment est la suivante: A-B: 1 cm; Q-L: 1 cm; B-C (surface exté- rieure): 2 cm; K-L: 1 cm stable. La partie en col-de-cygne du tube comprise entre les points D et E est destinée à le protéger contre les erreurs opératoires et la contamination par l'air. Le sperme stérile peut être récolté pour son traitement ultérieur après une incubation de 30 minutes à une heure. Le tube préparé doit être incubé dans un incubateur à 37'C avec une teneur élevée en humidité (96% et plus) et 5% de gaz carbonique. La concentration du sperme sur le segment C-D doit être égale à -30x106 ou plus. La poire en caoutchouc peut empêcher le milieu de culture de refluer et elle peut aussi exprimer des échantillons de sperme contenus dans le milieu de culture. Lorsque de la semence brute est placée dans le tube à l'endroit destiné aux échantillons, des bulles d'air peuvent parfois être présentes. C'est pour cela que la zone collectrice d'air au point Q peut empêcher lés bulles d'air de se déplacer et d'entraîner des bactéries vers le segment C-D. Le point P est la zone destinée aux échantillons de sperme. Du fait que la densité de ces derniers est supé- g rieure à celles du milieu de culture, la semence mise en place se situe de manière stable au fond du tube entre les points A et B. Le tube à extrémité en col-de-cygne des figures 2 et 3 est également en verre. Son diamètre intérieur est égal à 3,5 mm, et l'épaisseur de sa paroi est inférieure & 0,5 mm. La longueur de ses divers segments est la suivante: A-B: 2 mm; B-C: 15 mm; C-D: 25 mm. Leur capacité est environ la suivante: A-B: 0,02 ml; B-C: 0, 15 ml; C-D: 0,25 ml; D-E: 0,25 ml. Du point E Jusqu'à son extrémité, le tube de séparation est plein. Sa capacité totale est de 0,65 ml environ. Ce tube est gravé annulairement au découpeur de verre en C et D afin de pouvoir détacher facilement les sections C-D et D-E qui contiennent le milieu de culture et les spécimens de sperme choisis. Lors du fonctionnement, on verse un milieu de culture dans le tube à partir de son ouverture A. On place un échantillon de sperme convenable dans un tube en verre borosilicaté de 75 mm de longueur et de 22 mm de diamètre intérieur. On suspend ensuite le tube en col-de-cygne sur l'ouverture supérieure du tube en verre borosilitaté, la section inférieure A-B plongeant dans la partie centrale de l'échantillon de semence. L'incubateur est thermostaté & 37'C avec une humidité élevée et 5% de gaz carbonique. On fait incuber le tube préparé pendant une heure. Après cette incubation, on coupe le tube en C pour séparer le segment C-D que l'on appelle "n'l, et le segment D-E appelé "n'2". La concentration du segment n'l est de 6 à 12xl06/ml; sa capacité étant de 0,25 ml, ce seg- ment n'l contient environ 20x105 spermatozoïdes. Le segment n'2 en contient environ 75x10s. Les deux segments n'l et n'2 ne contiennent pas de bactéries. L'échantillon du segment n'l est utilisable pour la fertilisation de I0 & 40 ovules, la moyenne étant de 25 ovules environ. L'échantillon du segment n'2 est utilisable pour la fertilisation de 3 à 12 ovules, la moyenne étant de 7 ovules environ. Le tube de séparation à quatre trous des figures 4 et 5 comprend un tube en verre et une poire en caoutchouc, le diamètre intérieur du tube étant de 3,5 mm environ, et l'épaisseur de sa paroi étant inférieure & 0,5 mm. La longueur de ses divers segments est la suivante: A-B: 2 mm; A-C: 15 mm; C-D: 25 mm; D-E: 25 mm; E-F: 7 mm; H-J: 15 mm; A-F: 72 mm; longueur totale du tube: 90 mm. L'épaisseur de la partie G est égale à 3 mm et son diamètre à 25 mm, le diamètre de chaque trou H de la partie G étant égal à 2 mm. La capacité de chaque segment est environ la suivan- te: A-B: 0,02 ml; A-C: 0,15 ml; C-D: 0,25 ml; D-E: 0,25 ml; E-F: 0, 07 ml; F-J: 0,18 ml; A-P: 0,72 ml. La capacité de la poire en caoutchouc est égale à 0,65 ml environ qui est aussi la capacité du tube entre le point A et le point E. Les quatre trous H de la partie G permettent au gaz carbonique de pénétrer dans le tube contenant l'échantillon de semence au cours de l'incubation. Le sperme doit être alimenté en dextrose, en acides aminés et en gaz carbonique pour recevoir de l'énergie. La paroi du tube doit être gravée annulairement au découpeur de verre en C pour pouvoir casser facilement le tube lorsque l'on recueille le segment A-G. La poire en caoutchouc est destinée & aspirer le milieu de culture liquide pour l'échantillon de semence des segments C-D et D-E. Du fait que la capacité de la poire en caoutchouc est de 0,65 ml, et donc égale à celle du segment compris entre les points A et E, lorsque l'on aspire du milieu de culture destiné à la semence depuis l'ouverture A du tube de séparation, le liquide monte Jusqu'au point E. Lors du fonctionnement, on place du sperme au fond d'un tube en verre borosilicaté du 75 mm de long et de 22 mm de diamètre intérieur. On place ensuite le tube de séparation & quatre trous dans ce tube en verre borosilicaté, la partie G couvrant l'ouverture de ce dernier, et la partie avant du tube de séparation plongeant dans la partie centrale de l'échantillon de sperme du point A Jusqu'au point B. On met alors les deux tubes dans un incubateur à taux d'humidité élevé avec 5% de gaz carbonique, et on laisse incuber pendant une heure pour permettre au sperme de monter. Après cette incubation, on coupe le tube en C et on exprime le milieu liquide des segments C-D et D-E, lequels sont respectivement numérotés 3 et 4. Les segments n'3 et n'4 sont respectivement identiques aux segments n'l et n'2 décrits ci-avant. Tous ces segments ne contiennent pas de microbes ou de résidus de sperme, et aucun antibiotique n'est nécessaire. Le sperme obtenu est pur et il convient parfaitement à la fertilisation. Ce qui vient d'être décrit concerne la séparation du sperme et des microbes. Le tube en verre de la figure 1 est aussi utilisable pour la séparation des chromosomes X et Y du sperme. Du fait que la taille du chromosome Y du sperme est environ 1/6 de celle du chromosome X, le chromosome Y est nettement plus petit et plus léger que le chromosome X. La tête du spermatozoide X est grande et elle comporte un nucléole circulaire. La tête du spermatozoïde Y est petite et elle résiste mieux aux solutions alcalines que le sperma- tozoïde X. Le sperme Y présente un taux de survie supérieur dans un milieu faiblement alcalin à pH relativement élevé. Pans un tel milieu, et pour une durée déterminée, le sperme Y peut normalement se déplacer sur une distance supérieure au sperme X. Pour cette raison, plus le tube de séparation est long, meilleure est la séparation réalisée du sperme X et du sperme Y. Ceci explique pourquoi on recueille plus de sperme Y à l'extrémité arrière du tube de séparation. Pour séparer le sperme X du sperme Y en utilisant le dispositif de la figure 1, on commence par ajouter un milieu faiblement alcalin dont la viscosité est faible dans le tube creux Jusqu'au niveau A. Le milieu adopté peut être le milieu B.W.W. ou le milieu de Ham F-10 avec 10% de sérum humain recueilli avant l'ovulation ou prélevé sur le cordon ombilical, et on ajuste le milieu à pH 8,0 avant l'emploi. Après cela, on place la semence brute qui contient originairement des microbes au point P de la zone destinée à l'échantillon de semence. La partie H est destinée à éviter le reflux ou le débordement du milieu liquide. Le diamètre intérieur du tube est égal à 6 mm, sa forme et ses dimensions étant celles décrites plus haut au sujet de la figure 1. Le sperme de l'échantillon de semence n'a besoin que d'une heure à une heure et demie pour se déplacer Jusqu'au milieu de culture. Lorsque ce processus est achevé, le rapport du sperme Y au sperme X recueilli à l'extrémité arrière du segment C-D est compris entre 4 et 5 environ. Pour résumer, le tableau suivant montre les avanta- ges du procédé selon l'invention, ainsi que ses différences avec les techniques existantes. Procédé. Procédé de l'invention Procédé classique 1. Milieu de Milieu de culture Albumine. culture. à faible viscosité. 2. Antibiotique. Inutile. nécessaire ou devrait être utilisé. 3. Principes a) Application du a) Absence du principe de de base. procédé de séparation traitement rendant le sperme/germes. sperme exempt de germes. b) Technique de migration b) Technique de migration multi-directionnelle. uni-directionnelle. c) Technique de migration c) Technique de migration longue distance. courte distance. d) Tube de séparation d) Pas de tube de sépara- spécial nécessaire. tion spécial nécessaire. e) Application de e) Théorie de l'hydrodyna- l'hydrodynamique et nique inutile. de l'équation de Bernouilli. 4. Direction de De droite à gauche, puis Migration vers le bas ou migration. de bas en haut, puis de selon une seule direction. gauche à droite, hori- Pas de coudes. zontalement. Passage par deux coudes. 5. Tube de Fait sur mesure pour Tube de centrifugeuse ou séparation. le présent procédé. tube à essais classique. 6. Longueur du Long. Court. tube de sépa- ration. 7. Calibre du Fin et se rétrécissant. Gros et constant. tube de sépa- ration. 8. Position du Horizontale. Pas de Verticale. Support néces- tube de sépa- support nécessaire. saire. ration. 9. Rupture du Oui. Rupture facile. Non. tube pour recueillir l'échantillon voulu. 10. Possibilité Oui. Examen parfait. Non. Inapplicable. d'examen au microscope avant le pré- livement des échantillons. 11il. Distance de 9 cm ou plus. Environ 3 cm seulement. migration du sperme pendant la séparation. 12. Longueur du Peut être choisie en Longueur fixe. tube de sépa- fonction de l'échantil- ration. lon de semence brute et en accord avec la physio- logie. 13. Procédé de Utilisable pour l'insémi- Procédé de suspension prélèvement. nation directe in utero. nécessaire. Non utilisable pour l'insémination direc- te in utero. -2638323 14. Contamination Non, car le tube doit Oui, par courant de con- au cours du être brisé par portions vection. La quantité de processus et la viscosité du milieu bactéries correspond à la par des bacté- liquide est faible. Le quantité initialement pré- ries existant sperme placé au fond du sente dans le sperme brut, au préalable. tube ne transporte pas et elle ne peut pas être de microbes. éliminée par suspension. 15. Existence de Non. Oui. Les antibiotiques ne microbes ou de peuvent pas garantir une bactéries dans élimination complète des l'échantillon microbes et des bactéries. de sperme après la sépa- ration. 16. Existence de Non. Les bactéries tuées par toxines dans l'antibiotique dégagent l'échantillon des substances toxiques. de sperme sélectionné. 17. Durée de sépa- Courte. Longue. ration. 18. Effet. Excellent. Bon. 19. Etat du a) Peu de cas de maux a) Xaux de ventre fréquem- patient après de ventre. ment rencontrés. l'interven- b) Pas de péritonite b) Péritonite pelvienne tion. pelvienne. fréquente, généralement accompagnée de frissons et de pyrexte. 20. Point faible. Néant. Quantité de sperme préle- vée souvent insuffisante. Dans sa forme de réalisation représentée sur la figure 6, le fond 3 du tube de séparation 1 selon la présente invention comprend une pluralité de creux concaves qui se présentent comme des lentilles convexes lorsqu'on les regarde depuis le haut. Le tube de séparation 1 est un tube creux dont le fond est plus large et qui se rétrécit en tournant vers le -2638323 haut avec un calibre moindre en proportion. Ce tube comprend aussi une sphère 6 dans sa partie supérieure, cette sphère étant disposée à la verticale des lentilles convexes inférieures formées par les creux concaves 5, de sorte que la lumière peut être focalisée sur le milieu liquide avec l'effet de lentilles convexes lors de l'observation au microscope. La partie supérieure 4 du tube de séparation 1 comporte une portion horizontale et une poire de caoutchouc 2 est montée sur son extrémité coudée. Des ovaires sont placés au préalable dans.la sphère 6, et, lorsque le sperme se déplace dans le tube coudé, il peut fertiliser les ovaires de la sphère 6 pour réaliser une insémination artificielle in vitro. Tout ovaire inséminé voit débuter le processus de divison cellulaire dans la sphère 6, et le praticien peut utiliser un outil de découpage du verre pour recueillir l'embryon de l'ovaire inséminé en vue de le transplanter dans l'utérus d'une femme o se poursuit le processus de la conception. Le procédé d'insémination artificielle appliqué dans la présente forme de réalisation préférée est mis en oeuvre de la manière décrite ci-avant, et il doit comprendre une phase d'incubation à 37'C dans un incubateur à teneur élevée en humidité contenant 5% de gaz carbonique. -2638323 - REVENDICATIONS - 1. Procédé de traitement de sperme, caractérisé par le fait que l'on place le sperme à traiter dans un tube de séparation contenant un milieu de culture, que l'on fait incuber l'ensemble pendant le temps nécessaire A une migra- tion significative du sperme vers une autre portion du tube de séparation, et que l'on détache cette portion pour l'utilisation ultérieure du sperme qu'elle contient. 2. Procédé selon la revendication 1, caractérisé par le fait qu'en vue de la séparation du sperme et des microbes, ledit milieu de culture est choisi dans le groupe comprenant le milieu B.W.W. et le milieu F-10 de Ham, et qu'il est additionné de 10% environ de sérum humain. 3. Frocédé selon la revendication 1, caractérisé par le fait qu'en vue de la séparation des spermatozoïdes porteurs du chromosome X et de ceux porteurs du chromosome Y, ledit milieu dé culture est faiblement alcalin et & faible visco- sité, et que le sperme brut peut être préparé au préalable en le mélangeant à un milieu de culture liquide dans un rapport en volume de l'ordre de 1 à 3, en agitant ce mélan- ge, en le soumettant à une centrifugation, et en séparant le sperme ainsi traité. 4. Dispositif pour la mise en oeuvre du procédé selon l'une quelconque des revendications 1 à 3, caractérisé par le fait que chaque portion à détacher (C-D; D-E) dudit tube de séparation (1) est délimitée par des lignes de cassure préférentielle tracées annulairement au coupe-verre. 5. Dispositif selon la revendication 4, caractérisé par le fait que ledit tube de séparation (1> présente la forme générale d'un U couché dans un plan vertical, avec une bran- che inférieure (F) sensiblement horizontale, ouverte à une extrémité et se rétrécissant à l'autre pour se raccorder & la branche supérieure (4), le point (P) o le sperme est déposé au début du traitement étant situé à la base du début du coude qui raccorde la branche inférieure (F) à la branche supérieure (4), et la portion (C-D) dudit tube (1) à déta- cher après le traitement s'étendant sur la majeure partie de ladite branche supérieure (4). 6. Dispositif selon la revendication 5, caractérisé par le fait que la branche supérieure (4) dudit tube de sépara- tion (1) se termine, du côté opposé au coude (A-C) de ce dernier, par un col-de-cygne (D-E) fermé par une poire en caoutchouc (2) ou similaire. 7. Dispositif selon l'une quelconque des revendications et 6, caractérisé par. le fait que le fond de la branche inférieure (F) dudit tube de séparation (1) comporte au moins une excroissance en demilune (11) qui s'étend dans le sens longitudinal et/ou des pieds de support (G). 8. Dispositif selon la revendication 7, caractérisé par le fait que la branche supérieure (4) dudit tube de sépara- tion (1), au droit de chacune desdites excroissances en demi-lune (11), comporte au moins une sphère (6) d'observa- tJon au microscope. 9. Dispositif selon la revendication 4, caractérisé par le fait que ledit tube de séparation est un tube droit, rempli initialement de milieu de culture, qui est fermé à son extrémité supérieure (E), qui comprend des moyens pour l'accrocher verticalement dans un autre tube contenant le sperme à traiter, son extrémité inférieure plongeant dans ce sperme, et dont la portion détachable (C-D) s'étend sensi- blement en son milieu. 10. Dispositif selon la revendication 4, caractérisé par le fait que ledit tube de séparation est un tube droit, rempli initialement de milieu de culture, qui est fermé à son extrémité supérieure (J) par une poire en caoutchouc ou similaire, qui est solidaire d'un disque annulaire (G) percé de trous (H) au moyen duquel il peut être posé verticalement sur le bord supérieur d'un autre tube contenant le sperme à traiter, son extrémité inférieure plongeant dans ce sperme, et qui comprend au moins une portion détachable (C-D; D-E) s'étendant sensiblement en son milieu.