Brevet FR2646353A1 — publié le 19901102

Utilisation de peptides contenant de La Statine pour la préparation de médicaments utiLes pour Le traitement des maladies virales La présente invention a pour objet L'utilisation de peptides inhibiteurs de protéases acides pour La préparation de médicaments utiLes pour Le traitement de maladies virales et plus particulièrement pour Le traitement de L'immunodéficience humaine, également connue sous Le nom de SIDA. Le SIDA ou syndrome d'immunodéficience acquise est la phase termina Le d'une maladie, connaissant actuellement une expansion épidémique, dont L'agent responsable est l'un des rétrovirus de l'immunodéficience humaine ou virus HIV (HIE1 ou HIV2). Les virus HIV, transmis notamment par voie sexuelle ou à L'occasion d'une transfusion sanguine avec du sang contaminé, ont pour cibles les cellules ayant à lueur surface un récepteur antigénique connu sous la dénomination de molécule de surface CD4 ou récepteur CD4. Les Lymphocytes T4 qui jouent un rôle essentiel dans le système immunitaire possèdent ce récepteur CD4 et sont donc des ceLlules-cibles des virus HIV. L'infection par les virus HIV débute donc par La fixation des particules viraLes, et plus particulièrement de la protéine gp 120 de L'enveloppe virale, sur Les récepteurs CD4 des Lymphocytes T4. Elle se poursuit par La fusion de l'enveloppe virale et de la membrane cellulaire ; L'ART du génome viraL est ensuite transcrit à L'aide d'une enzyme particulière, la transcriptase inverse ou reverse transcriptase (qui n'existe pas dans Les ceLluLes normales) en ADN double brin et intégré au génome cellu Laire. Une cellule ainsi infectée synthétise alors Les protéines virales et notamment la protéine gp 120, qui se toge sur La membrane celLulaire. Du fait de La grande affinité de la protéine gp 120 pour les récepteurs CD4, cette celLuLe infectée peut fixer des Lymphocytes T4 sains et former un syncytium incapable de survivre. Une seule cellule infectée peut donc provoquer La mort de nombreux Lymphocytes T4 sains. D'autre part, des protéines virales gp 120 isolées circu Lent parfois dans le sang et La lymphe et se Lient aux récepteurs CD4 des Lymphocytes T4 sains, LesqueLs deviennent aLors des celluLes-cibles pour le système immunitaire. Les virus HIV se répliquent aussi dans les monocytes, Les macrophages et Les celluLes apparentées et perturbent probablement Leur fonctionnement. L'infection par un vi-rus HIV peut d'une certaine manière modifier La quantité ou La structure des cytokines produites par les macrophages activés et tes Lymphocytes activés, ces cytokines s'avérant alors toxiques pour Les Lymphocytes T4 auxiliaires. L'un quelconque des mécanismes ci-dessus entrasse La destruction des lymphocytes T4 et simultanément l'effondrement du système immunitaire. Différents moyens d'action sur les virus HIV ont déjà été envisagés, notamment au niveau de la répLication des virus. A cet effet, on peut se référer notamment à l'ouvrage de F. BARRE-SINOUSSI et al. intitulé "LE SIDA EN QUESTION", Collection Témoins d'Aujourd'hui, édité par PLON (1987) et à L'article de R. YARCHOAN et al. intitulé "LES TRAITEMENTS DU SIDA", dans la Revue "Pour la Science" Décembre 1988, p. 94-104. Les inhibiteurs de La transcriptase inverse actueLlement utiLisés dans Le traitement du SIDA sont des didésoxynucléosides, qui sont des analogues des nucléosides, et notamment L'azidothymidine (AZT). L'un des problèmes posés par ces inhibiteurs est qu'iLs ne sont jamais totalement spécifiques et qu'à certaines doses ils peuvent empêcher la division des celluLes non infectées, entraînant ainsi des toxicités importantes, nécessitant l'interruption du traitement. On a également proposé l'utilisation d'oligonucléosides, compLémentaires d'une partie des ARN messagers viraux. On a maintenant trouvé que L'on peut utiliser, pour le traitement de maLadies vira Les, notamment celles causées par les rétrovirus et plus particulièrement pour le traitement du SIDA, des peptides inhibiteurs de protéases acides. Ainsi, La présente invention a pour objet L'utilisation pour la préparation de tels médicaments des peptides inhibiteurs de protéases acides décrits dans le brevet européen nO 104964. Ces peptides sont Les composés répondant à La formule générale : R - X - Y - Statyl1-Ala-Statyl2-R' (I) dans Laquelle on désigne par Statyl1 le radical dérivant de L'aminoacide statine, à savoir O Il -NH - CH - CHOH - CH2 - C I 2 CH 12 CH H3C CH3 isomère 3S, 4S et par Statyl2 le radicaL dérivant du même aminoacide, qu'il s'agisse de l'isomère 3S;4s ou de L'isomère 3R, 4S. - R désigne un atome d'hydrogène ou un groupement acylant fixe sur le groupe amino terminal de L'aminoacide X, - X et Y, identiques ou différents, désignent des résidus d'acides aminés de configuration L ou D Lorsqu'il existe un centre d'asymétrie dans La molécule, et éventuellement protégés dans leur chaine latérale, Lesdits acides aminés étant choisis parmi Les acides aminés suivants : - X : Phénylalanine, Tryptophane, Histidine, Boc-Histidine, Tyrosine, Proline, Isoleucine ; - Y : Phénylalanine, Tryptophane, Histidine, Tyrosine, Proline, Leucine, IsoLeucine, Valine, Glycine ; - R' représente OH, O-alkyle en C1-C6 et Leurs sets pharmaceu tiquement acceptables. Plus particulièrement, R peut représenter Les groupements acétyle (Ac), isovaléryle (iVa), octoyle, t.butoxycarbonyle (Boc), adamantyLoxycarbonyle (A doc), (benzyloxycarbonyl) P-amino-éthyl- sulfonyle (Z-Tau), (t-butyloxycarbonyL) p-amino-éthyLsulfonyle (Boc-Tau), phénylsulfonyle, benzylsulfonyle, phényl-3 propionyle. Ces peptides peuvent être préparés selon Les méthodes habituelles en synthèse peptidique. En particulier, iLs peuvent être préparés par un procédé étape par étape dit "procédé stepwise" à partir de l'extrémité C-terminale ainsi qu'iL est indiqué dans Le brevet européen n 104 964. L'évaluation de L'effet antiviral des peptides utilisés selon l'invention a été effectuée selon Le protocole suivant. L'évaluation est basée sur l'étude de L'effet cytopathogène du virus HIV1 sur La Lignée celLulaire MT4, après infection par Le virus HIV1. Les solutions mères des composés testés sont à une concentration de 10-3 M dans un mélange volume à volume des solutions A et B (solution A : 1 ml acide acétique pur + 19 ml méthanol, soLution B : 10 ml NaOH1N + 20 ml méthanol). Les dilutions successives sont réalisées en milieu RP I-1640 (Roswell Park Memorial Institute, RPMI-1640) contenant 10 X FCS (FoetaL Calf Serum) + i X PSN (Pénicilline Streptomycine Néomycine) + 1 X Glutamine. Test MT4 (tumeur myéloblastoide) Les cellules MT4 au jour 2 après le dernier repiquage sont pré-incubées 1 h à 370C avec des dilutions des différents composés à étudier à raison de 3.105 cellules pour 100 l de volume final (microplaque à 96 puits). L'infection est réalisée en micropuits en ajoutant 100 p1 d'une dilution appropriée du virus HIV1 (la dilution de virus a été déterminée pour induire La formation de syncitia en 4-5 jours). Après une incubation de 1 h à 370C, Les cellules MT4 infectées sont lavées 3 fois avant d'être mises en culture à la concentration de 3.105 cellules par mL en microplaque à 24 puits, en présence des différents composés étudiés aux dilutions choisies. Tous les 3 ou 4 jours, Les cellules sont ramenées à 3.105 par ml avec Le milieu RPMI-1640 à 10 X FCS + 1 X PSN + 1 X GLuta- mine, toujours en présence des différents composés étudiés. Tous Les 2 jours, l'apparition des syncytia est observée dans les cultures. Avec Les differents composés étudiés, la formation de syncytia est retardée ou même entièrement supprimée. En l'absence de traitement, la formation de syncytia est observée 4 à 6 jours après l'infection, suivie de la mort des cellules. Exemple : Ainsi, Le composé de formule (brevet européen nO 104 964 exemple 13) dans Laquelle R1 représente un atome d'hydrogène ou un alkyle en C1-C4 et les abréviations Tyr, Val et Ala désignent respectivement Les aminoacides, de configuration L, tyrosine, valine, et alanine et Sta représente L'isomère 3S, 4S de L'acide amino-4 hydroxy-3 méthyl-6 heptanoique ou Statine, à La concentration de 10 5 M, inhibe totalement La formation de syncytia pendant toute La durée de L'expérience soit 21 jours après t'infection des ceLluLes. Des essais avec des celLules connues sous La dénomination CEM infectées traitées ou non par Le produit étudié CII, R = CH3) ont montré que Le traitement n'affectait pas la viabilité des cellules. Par ailleurs, avec ce même composé, une analyse par immunofluorescence des celluLes traitées a permis de déterminer que L'absence de production virale était corrélée avec l'absence d'expression des antigènes viraux. Ces résultats ont été confirmés par une technique d'immunoprécipitation qui montre L'absence des antigènes viraux communément dénommés p 55, p 40, p 25, gp 160 et gp 120 (p = protéine ; gp = glycoprotéine ; Le chiffre indiquant Le poids molé oculaire en kilodattons de La protéine-ou de la glycoprotéine constituant t'antigène antiviral) chez les celLules infectées traitées alors que ces mêmes antigènes apparaissent normaLement dans les cellules infectées non traitées. Tous ces résultats Laissent penser que Les composés (I) peuvent donc etre utilisés en tant que médicaments pour Le traitement des maladies virales et en particulier pour Le traitement du syndrome d'immunodéficience acquise. La présente demande concerne également Les compositions pharmaceutiques contenant au moins un des composés de formule (I) ou un de leurs sels en tant qu'ingrédient actif destinées au traitement des maladies virales. Les compositions pharmaceutiques selon la présente invention sont administrées de préférence par voie injectable sous forme de solution ou de suspensions injectables. La quantité de principe actif varie suivant la nature et la gravité de l'infection à traiter. Chez l'homme, la posologie est le plus souvent comprise entre 1 et 500 mg par jour. REVENDICATIONS 1. Utilisation, pour La préparation d'un médicament destiné au traitement des maladies virales, d'un composé de formule R - X - Y - Statyl1-ALa-Statyl2-R' (I) dans laquelle ont désigne par Statyl1 Le radical dérivant de L'aminoacide statine, à savoir : 0 -NH - CH - CH0H - CH2 - C CH i2 CH 113C CH3 isomère 35, 45 et par Statyl2 le radical dérivant du même aminoacide, qu'il s'agisse de L'isomère 3S, 45 ou de l'isomère 3R, 4S ;; - R désigne un atome d'hydrogène ou un groupement acylant fixé sur Le groupe amino terminal de t'aminoacide X, - X et Y identiques ou différents désignent des résidus d'acides aminés de configuration L ou D Lorsqu'il existe un centre d'asymétrie dans La molécule, et éventuellement protégés dans leur chai ne latéraLe, Lesdits acides aminés étant choisis parmi Les acides aminés suivants - X : Phénylalanine, Tryptophane, Histidine, Boc-Histidine, Tyro sine, Proline, Isoleucine ; - Y : Phénylalanine, Tryptophane, Histidine, Tyrosine, Prolixe, Leucine, Isoleucine, Valine, GLycine ; - R' représente OH, O-alkyLe en C1-C6 et ou d'un de ses sels pharmaceutiquement acceptables. 2. Utilisation selon ta revendication 1, caractérisé en ce que R est choisi parmi les groupes acétyle (Ac), isovaléryle (iVa), octoyle, t.butoxycarbonyle (Boc), adamantyloxycarbonyle (A doc), (benzyloxycarbonyl) B-amino-éthylsulfonyle (Z-Tau), (t-butyl oxycarbonyl) ss-amino-éthylsulfonyle (Boc-Tau), phénylsulfonyle, benzylsulfonyle, phényl-3 propionyle. 3. Utilisation selon la revendication 1 pour le traitement d'une maladie virale causée par Le rétrovirus de L'immunodéficience humaine ou virus HIV, en particulier MIVI et HIV2. 4. Utilisation selon la revendication 1, où Le composé repond à la formule : dans laquelle R1 représente un atome d'hydrogène ou un alkyle en C 1-C4 et Statyl1 désigne le radical dérivant de l'aminoacide statine, à savoir : l'isomère 3S, 4S du radical et Statyl2 désigne le radical dérivant du même aminoacide, qu'il s'agisse de l'isomère 3S, 4S ou de l'isomère 3R, 4S.