Brevet FR2640639A1 — publié le 19900622

MILIEU DE CULTURE DESTINE A L'IDENTIFICATION DES BACTERIES ISOLEES DES URINES INFECTEES La présente invention concerne un milieu de culture destiné è la croissance des bactérles pathogénes, particulièrement utile à la recherche et à l'identification des bactéries pouvant infecter les urines. Cette recherche se pratique habituellement par la méthode dite de la "lame immergée", qui consiste à inonder des milieux nutritifs gélosés avec des urines présumées in+ectées, puis à observer et à compter les colonies bactériennes obtenues aprés incubation à 37 C. La plupart des milieux utilisés pour cette technique contiennent du lactose, dont la fermentation par les bactéries est révélée par un indicateur coloré, selon un procédé utilisé depuis très longtemps en bactériologie médicale. Plusieurs dispositifs commerciaux destinés à l'étude bactériologique des urines associent sur un meme support deux milieux différents à base de lactose, ce qui permet de différentier deux catégories de bactéries, selon que ce sucre est fermenté ou non. La présente invention concerne la préparation d' un milieu gélosé contenant des composés nutritifs (peptones et hydrolysats), un indicateur coloré et un glucide, le D-mannitol, à une concentration comprise entre z et 20 g/l suffisante pour provoquer une modification de pH témoignant de la fermentation de ce sucre. inuention consiste aussi à aasocier sur un meme support en matière plastique ce milieu a un autre milieu nutritif contenant un sucre différent, par exemple le lactose, ce qui permet de différencier auatre catégories de bactéries, selon que chacun des sucres est fermenté ou non. Cette modification apporte une amélioration très importante de la reconnaissance présomptive de bactéries qui sont à l'origine de graves infections épidémiques hospitalières L'observation conjointe des deux milieux gélosés, dont l'un ontient du mannitol, et l'autre par exemple du lactose, permet de distinguer en particulier parmi les bacilles gram-négatif (a) le genre Serratia des autres genres bactériens (figure 1/3). Elle permet aussi figure 2/3), de séparer parmi les cocci gram-positif (b), les staphylocoques à caractère pathogéne constant des staphylocoques connus pour etre de simples contaminants des urines. Cette distinction n'est pas possible avec les dispositifs commerciaux dont les deux milieux associes ne contiennent qu'un seul sucre. Le milieu au mannitol peut etre utilisé dans la fabrication de "lames immergées" prètes à l@emplol, constituées de plusieurs milieux de culture gélosés coulés sur un support, comme le montre par exemple la figure 3/3 : deux milleux (a et b) sont coulés face a face ou l'un à coté de l'autre sur un support plastique c) muni d'un bouchon étanche (d), lui meme présenté dans un flacon plastique (e) qui se visse sur le bouchon. Lors de l'ensemencement, on immerge le support dans l'urine, puis on le replace dans le flacon étanche en vue de l'incubation à 37 C. Selon un procédé de fabrication, qui constitue un simple exemple d'application, la composition peut etre la suivante i EXEMPLE 1 Peptones et hydrolysats 10 g L cysteine 0,128 g Mannitol 10 g Pleu de bromothymol 0,02 g Agar 15 g Selon une variante de ce procédé, il peut etre ajouté au milieu de la méthy-4-umbélliféryl béta D glucuronide, afin de mettre en évidence l'enzyme dit béta D glucuronidase de Escherichia coll. l'amélioration de la reconnaissance directe des bactéries sur ce milieu est d'un grand intérêt pour le bactériologiste, qui peut donner un diagnostic présomptif du genre bactérien et choisir les antibiotiques à tester, et pour le médecin, qui peut mettre en oeuvre plus rapidement un traitement adapté à la bactérie identifiée. REVENDICATIONS 1) Milieu de culture utilisable en bactériologie médicale pour la croissance et l'identi+icatic'n de bactéries pathogénies dans les urines, caractérisé en ce qu'il contient des substances nutritives, et du D-mannitol en quantité suffisante pour permettre la révélation de la fermentation de ce sucre par un indicateur coloré de pH présent dans le milieu. Milieu de culture selon la revendication 1, caractérisé en ce qu il est destiné à etre observé parallélement à un autre milieu nutritif contenant un sucre différent du mannitol. 3) Milieu de culture sel on la revendication 1, caractérisé en ce qu'il peut etre complété par l'ajout de méthyl 4 umbelliféryl béta D glocuronide. 4) Milieu de culture selon l'une quelconque des reuendications précédentes, caractérisé en ce que ce deu > ' milieu sont associes sur un meme support, afin de favoriser I identification présomptive de certaines bactéries importantes en bactériologie médicale. 5) Milieu de culture sel on l'une quel conque des revendications précédentes, caractérisé en ce qu'il peut etre utilisé dans la fabrication de dispositifs préts à l'emploi destinés à la numération et à la culture des bactérie pouvant infecter les ur i nes.