Brevet FR2646347A1 — publié le 19901102

La présente invention concerne un nouveau dérivé d'hydro- xyphénéthylamine et ses sels, procédé de préparation, applica- tion à titre de médicaments et utilisation comme outil pharma- cologique spécifique. L'invention a pour objet un nouveau dérivé d'hydroxyphéné- tylamine caractérisé en ce qu'il répond à la formule (I): OH (CH2)2-N-(CH2)2 J (I) (CH2)4 CH3 ainsi que ses sels d'addition avec les acides minéraux et organiques. Les sels d'addition avec les acides minéraux ou organiques peuvent être, par exemple, les sels formés avec les acides chlorhydrique, bromhydrique, iodhydrique, nitrique, sulfuri- que, phosphorique, acétique, formique, benzoique, maléique, fumarique, succinique, tartrique, citrique, oxalique, glyoxy- lique, aspartique, alcanesulfoniques, tels que l'acide méthane sulfonique et arylsulfonique, tels que l'acide benzène sul- fonique. La présente invention a notamment pour objet: - le N-pentyl F:phénéthyl 3-hydroxy phénéthylamine ainsi que: - le chlorhydrate de N-pentyl N-phénéthyl 3-hydroxy phénéthyl- amine. L'invention a également pour objet un procédé de prépara- tion du produit de formule 'I) tel que définie à la revendica- tion 1, ainsi ue de ses sels d'addition avec les acides mineraux et organiques, caractérisé en ce que l'on dérméthyle le produit de fornule () : 0CH3 J (CH2)2-N-(CH2)2 (CH2) 4 CH3 pour obtenir le produit de formule (I) que l'on peut isoler sous forme de base et, si désiré, salifier. Dans les conditions préférentielles de mise en oeuvre de 2.'invention, le procédé de préparation ci-dessus décrit est caractérise en ce que la déméthylation du produit de formule (_:, est effectuée au moyen d'une solution concentrée d'acide zrsmhydriure, au reflux du mélange réactionnel. Les produits de formule (i) présentent un caractère basi- que. On peut avantageusement préparer les sels d'addition de ces produits, en faisant réagir en proportions sensiblement stsechiométricues, un acide mineral ou organique avec lesdits troduits. Le produit, objet de la présente invention, possède de très intéressantes propriétés pharmacologiques: il présente en particulier une affinité antagoniste pour le récepteur opiacé kappa remarquablement dissociée. Le produit, objet de la présente invention, présente une faible affinité pour le récepteur opiacé mu et pratiquement pas pour le récepteur dopaminergique D2. Ces propriétés sont illustrées plus loin dans la partie expérimentale. Ces remarquables propriétés justifient l'utilisation de ce produit, objet de la présente demande, et de ses sels, à titre de medicaments. La présente demande a ainsi pour objet l'application a titre de meéicaments, de ce nouveau dérivé d'hydroxypené,tyl- amine tel rue défini par la formule (I', ainsi que des sels d'adzition avec -es acides pharmaceutiguement acceptables de ce dartve. Les médicaments, objet de la présente invention, trouvent par exemple leur emploi dans le cas de traitement intensif avec un produit agoniste du récepteur opiacé kappa, ce trai- tement nécessitant une interruption pour des raisons, par exemple, de surdosage. Un tel type de médicament agoniste kappa est décrit par exemple dans le brevet français n 2 603 035 et est utilisé notamment pour combattre une douleur d'origines diverses, par exemple une douleur de nature musculaire, articulaire ou nerveuse. Un autre exemple d'agoniste kappa est le produit: U - 50 488 qui possède en plus de la propriété analgésique une propriété diurétique. L'effet du produit antagoniste kappa, objet de la présente invention, est alors de déplacer spécifiquement le produit agoniste par compétition au niveau du récepteur kappa, jouant ainsi le rôle d'un antidote. Ainsi, le produit et ses sels, objets de l'invention, peu- vent, par exemple, exercer un effet antagoniste vis-à-vis de l'activité analgésique ou de l'activité diurétique d'un ago- niste kappa. La dose usuelle, variable selon le produit utilisé, le sujet traité et l'affection en cause peut être, par exemple de mg à 200 mg par jour, par voie orale et parentérale chez l'homme. L'invention a également pour objet les compositions phar- maceutiques qui renferment le dérivé précité ou l'un de ses sels d'addition avec les acides pharmaceutiquement accepta- bles, à titre de principe actif. A titre de médicaments, le dérivé répondant à la for- mule (I) et ses sels d'addition avec les acides pharmaceuti- quement acceptables peuvent être incorporés dans des composi- tions pharmaceutiques destinées à la voie digestive ou paren- térale. Ces compositions pharmaceutiques peuvent être, par exemple, solides ou liquides et se présenter sous les formes pharmaceutiques couramment utilisées en médecine hunaine, comme par exemple, les comprimes, simples ou dragé-ifiés, les gélules, les capsules, les granulés, les suppositoires, les préparations injectables; elles sont préparées selon -es méthodes usuelles. Le ou les principes actifs peuvent y être incorporés à des excipients habituellement employés dans ces compositions pharmaceutiques, tels que le talc, la gomme arabique, le lactose, l'amidon, le stéarate de magnésium, le beurre de cacao, les véhicules aqueux ou non, les corps gras d'origine animale ou végétale, les dérivés paraffiniques, les glycols, les divers agents mouillants, dispersants ou émulsi- fiants, les conservateurs. De plus, les produits objets de l'invention, en raison de I0 leur reconnaissance spécifique du récepteur opiacé kappa, Cette propriété les rend tout particulièrement précieux pour les expériences en laboratoire qui nécessitent une haute specificité du produit de référence utilisé, ce que ne possè- dent pas les produits de référence les plus connus comme antagonistes du récepteur opiacé kappa tels que la NALOXONE ou MR2266 u u-reconnaissent, en particulier, le récepteur cpiazé mu. Ainsi l'invention a également pour objet l'utilisation du produit de formule (I) telle que définie ci-dessus comme moyen d'étude, de dosage et de localisation des récepteurs opiacés kappa. L'invention a tout particulièrement pour objet l'uti-lisa- tion du produit de formule (I) telle que définie précédemment et de ses sels d'addition avec les acides pharmaceutiquement acceptables pour la préparation de compositions pharmaceuti- ques destinées au traitement du surdosage d'un produit ago- niste du récepteur opiacé kappa. L'invention a enfin pour objet à titre de produit indus- triel nouveau, le produit de formule (II): OCH3 / 9 \ (C'-^2)2-N-(CH2)2 2 () -n (CH2) 4 CH3 utile notamment pour la préparation du produit de formule (I). Le produit de formule (II) peut être préparé par un pro- cédé caractérisé en ce que l'on fait réagir le produit de formule (III) OCH3 OC \ (CH2)2-N-(CH2)2 (III) J H avec un halogénure de formule (IV): Hal-(CH2)4-CH3 (IV) dans laquelle Hal représente un atome de chlore, de brome ou d'iode pour obtenir le produit de formule (II) recherché. La préparation du produit de formule (III) est décrite dans le brevet français n' 2 356 417. Il va être donné, à titre non limitatif, des exemples de mise en oeuvre de l'invention. Exemple 1: N-pentyl N-phénéthyl 3-hydroxy phénéthylamine Stade A: préparation du bromhydrate de N-phénéthyl 3-méthoxy phénéthylamine. Un exemple de cette préparation est donné au stade A de l'exemple 1 du brevet français n; 2 356 417. Stade B: préparation du N-pentyl N-phénéthyl 3-méthoxy phéne- thylamine. Une quantité de 13,4 g de bromhydrate de N-phénéthyl 3- méthoxy phénéthylamine est portée au reflux dans, 200 cm3 d'acétone en présence de 22 cm3 d'iodure de pentyle et de 29,3 g de carbonate de potassium -pendant 4 heures. Après véri- fication en chromatographie sur couche mince que le produit de départ a disparu, le milieu est filtré. Le précipité ainsi obtenu est lavé à l'acétone et le filtrat concentré à sec sous pression réduite. La quantité de 30 g de produit brut ainsi obtenue est chromatographiée sur gel de silice puis éluée par un mélange 70/30 de cyclohexane-acétate d'éthyle et la fraction ainsi isolée du produit pur recherché soit le Npentyl N-phénéthyl 3-méthoxy phénéthylamine est de 11,4 g sous forme d'une huile jaune. Stade C: préparation du N-pentyl N-phénéthyl 3-méthoxy peénéthylamine Une quantité de 6,7 g de N-pentyl N-phénéthyl 3-méthoxy phénéthylamine est portée au reflux dans 40 cm3 d'une solu- tion aqueuse d'acide bromhydrique à 48% pendant une heure et demie à la température de +150 C. Apres refroidissement du milieu à une température de +20 C à +25 C, l'extraction est faire au chlorure de méthylène et les liqueurs chlorométhylé- niques obtenues sont séchées sur sulfate de sodium, filtrées puis concentrées à sec sous pression réduite. Les 8,55 g de produit brut obtenus sont purifiés par chro- matographie sur gel de silice puis élués par un mélange 50/50 de chlorure de méthylène-tétrahydrofuranne pour donner 3,2 g de produit alors redissouts à chaud dans 3 cm3 d'isopropanol puis recristallisés à la température ambiante soit environ +20c à +25 C. Après essorage suivi de lavage par deux fois avec 3 cm3 d'isopropanol glacé puis séchage à +50 C en étuve à vide, la fraction ainsi isolée du produit recherché soit le N-pentyl N- phénéthyl 3-hydroxy phénéthylamine est de 1,72g sous forme de cristaux blancs d'un point de fusion compris entre 82 C et 84 C. Analyse: C21H29NO PM = 311,471 C H N % calculé 80,98 9,38 4,49 % trouvé 81,20 9,60 4,40 Exemple 2: chlorhydrate de N-pentyl N-phénéthyl 3-hydroxy phénéthylamine On place une quantité de 15 g de N-pentyl N-phénéthyl 3- hydroxy phénéthylamine décrite à l'exemple 1 dans 45 cm3 d'eau déminéralisée et ajoute 4 cm3 d'acide chlcrhydrique concentré. La suspension est laissé une nuit à température ambiante sous agitation. Le produit obtenu est ensuite glacé une heure à une tempe- rature comprise entre 0 et +5C puis essoré et rincé par 35 cm3 d'eau déminéralisée glacée à environ +5 C. Après séchage, on obtient 16,29 g de chlorhydrate de N- pentyl N-phénéthyl 3-hydroxy phénéthylamine sous forme de cristaux blancs fondant à la température de +115 C. Analyse: C21H30NOC1 PM = 347,93 C H N CL % calculé 72,5 8,69 4,02 10,19 % trouvé 72,7 8,8 3,9 10,3 Etude pharmacoloqique 1) Effet antagoniste vis-a-vis de l'activité diuréticue de U-50 488 Action sur la diurèse L'essai est réalisé sur des rats mâles de poids corporel moyen de 150 g à jeûn depuis 16 heures mais ayant de l'eau ad libitum comme boisson. Le produit de l'exemple 1 a 20 mg/kg SC et le U-50488 à mg/kg PO sont administrés simultanément à un groupe de 12 rats, un deuxième groupe d'animaux est traité uniquement par le U-50488 a 5 mg/kg PO, tandis qu'un autre lot reçoit seulement une injection sous-cutanée de produit de l'exemple 1 à 20 mg/kg. Un lot de rats témoins reçoit les véhicules cor- respondants aux deux produits. Les rats sont ensuite placés dans des cages à diurèse par groupe de deux et le volume urinaire est recueilli pendant une heure. Dose Volume urinaire excrété mg/kg SC en 1 heure (ml/kg) m esm Témoins 0 6,5 0,2 Produit de l'exemple 1 20 6,7 0,2 U-50 488 5 9,8 0,3 U-50 488 + produit de 5 20 5,7 0,2 l'exemple 1 - 2) Effet antaconiste vis-à-vis de l'activité analaesiae de U-50 488 Test de la plaque chaude chez la souris Des souris femelles sont placées une par une sur une plaque de cuivre maintenue à 56 C à l'aide d'un bainmarie thermostaté. La réaction à la douleur se manifeste par le léchage d'une ou des deux pattes antérieures. Le temps de réaction au stimulus thermique et noté et l'on ne retient que les animaux réagissant entre 4,5 et 6,5 secondes. Les animaux sont ensuite répartis par groupes homogènes. Un groupe d'ani- maux témoins reçoit le U-50 488 à 5 mg/kg SC, un autre groupe le produit de l'exemple 1 à 20 mg/kg SC, tandis que les deux produits sont administrés simultanément par voie SC à un troisième lot d'animaux à ces mêmes doses. Un groupe d'animaux témoins reçoit les injections de véhicule correspondant. Le temps de réaction à la douleur est mesuré trente minu- tes après injection des produits. Les variations du temps de réaction sont exprimées en pourcentage du temps initial, compte tenu des variations du groupe témoin. Dose Temps de réaction (s) 2C mg/kg SC m esm 0 mn 30 mn Témoins 0 5,2 0,1 5,0 z 0,2 Produit de l'exemple 1 20 5,1 0,1 4,7 0,6 U-50 488 5 5,2 0,1 9,6 1,1 U-50 488 + produit de 5 + 20 5,1 0,2 6,7 z 0,6 * l'exemple 1 * p ayant été traité par le U-50 488. 3) Mise en évidence de la propriété de dissociation des acti- vités KaDpa, et dopaminergiques soit de la seule affinité pour le récepteur opiacé Kappa: a) Test de liaison au récepteur eopiacé Kappa in vitro On utilise des culots membranaires conservés à -30:C (éventuellement pendant environ 30 jours) et préparés à partir de cervelets de cobayes. Ces culots scnt remis en suspension dans le tamron Tris -H 7,7. On réartit les fractions de 2 cm3 dans des tubes à g hémolyse et ajoute de la 3H éthylkétocyclazocine 1 nM et le produit à étudier. (Le produit est d'abord testé à 5 x 10-6M en triple). Lorsque le produit testé déplace de plus de 50 % la radioactivité liée spécifiquement au récepteur, il est testé à nouveau selon une gamme de 7 doses afin de déterminer la dose qui inhibe de 50 % la radioactivité liée spécifique- ment au récepteur. On détermine ainsi la concentration inhi- bitrice 50 %). La liaison non spécifique est déterminée par addition de produit connu sous le nom U-50 488 H (Lahti et al. 1982, Life Sci. 31, 2257) à 10-5M (en triple). On incube à 25*C pendant minutes, remet au bain-marie à 0oC, 5 minutes, filtre sous vide, rince au tampon Tris pH 7,7 et compte la radioactivité en présence du scintillant Triton. Le résultat est exprimé directement en concentration inhihitrice 50 % (CI50), c'est-à-dire en concentration de produit étudié, exprimée en nM, nécessaire pour déplacer 50 % de la radioactivité spécifique fixée sur le récepteur étudié. Résultat: La CI50 trouvée pour le produit de l'exemple 1 est de 57 nanomoles. b) Test de liaison au récepteur opiacé mu in vitro On utilise des culots membranaires conservés à -30 C (éventuellement pendant environ 30 jours) et préparés à partir de cerveaux de rats. Ces culots sont -remis en suspension dans le tampon Tris pH 7,7. On répartit des fractions de 2 cm3 dans des tubes à hémolyse et ajoute de la 3H DAGO (1 nM) et le produit à étu- dier. (Le produit est d'abord testé à 5 x 10-6M, en triple). Lorsque le produit testé déplace de plus de 50 % la radioacti- vité liée spécifiquement au récepteur, il est testé à nouveau selon une gamme de 7 doses afin'de déterminer la dose qui inhibe de 50 % la radioactivité liée spécifiquement au récep- teur. On détermine ainsi la concentration inhibitrice 50 %). La liaison non spécifique est déterminée par addition de morphine (CHILDERS S.R. Eur. J. Pharm.acol. 55, 11) à 10-5M (en triple). On incube à 25'C pendant 40 minutes, remet au bain- marie à C'C, 5 minutes, filtre sous vide, rince au tampon Tris pH 7,7 et compte la radioactivité en présence du scintillant Triton. Le résultat est exprimé directement en concentration inhibitrice 50 % (CI50), c'est-àdire en concentration de produit étudié, exprimée en nM, nécessaire pour déplacer 50 % de la radioactivité spécifique fixée sur le récepteur étudié. Résultat: La CI50 trouvée pour le produit de l'exemple 1 est de 840 nanomoles. c) Test de liaison au récepteur à la dopamine in vitro On utilise des culots membranaires conservés à -30 C (éventuellement pendant environ 30 jours) et préparés à partir de corps striés de rats. Ces culots sont remis en suspension dans le tampon Krebs Tris pH 7,25. Après une préincubation de 10 minutes à 37 C, on répartit en des fractions de 2 cm3 dans des tubes à hémolyse et ajoute des 3H spiropéridol (0,15 nM) et le produit à étu- dier. (Le produit est d'abord testé à 5 x 10-6M, en triple). Lorsque le produit testé déplace de plus de 50 % la radio- activité liée spécifiquement au récepteur, il est testé à nouveau selon une gamme de 7 doses afin de déterminer la dose qui inhibe de 50 % la radioactivité liée spécifiquement au récepteur. On détermine ainsi la concentration inhibitrice 50 %). La liaison non spécifique est déterminée par addition de halopéridol (SIELDS J.Z. and Co BRAIN RESEARCH 1977, 136, p. 578-584) à 10-5M (en triple). On incube à 27"C pendant minutes, remet au bain-marie à 0 C, 5 minutes, filtre sous vide, rince au tampon Tris pH 7,7 et compte la radioactivité en présence du scintillant Triton. Le résultat est exprimé directement en concentration inhibitrice 50 % (CI50), c'est-à-dire en concentration de produit étudié, exprimée en nM, nécessaire pour déplacer 50 % de la radioactivité spécifique fixée sur le récepteur étudié. Résultat: La Ci50 trouvée pour le produit de l'exemple 1 est de 10600 nanomoles. Ccnclusior: il Le produit de l'exemple 1 n'est affiné cue pour le récep- teur opiacé Kappa. 4) Test de distinction entre aconiste et antagoniste au récep- teur opiacé Kappa L'utilisation d'un ligand antagoniste permet de distinguer in vitro si un produit est agoniste ou antagoniste; dans ce cas en effet un agoniste verra sa CI50 augmenter dans un rapport important (15 à 50) selon qu'il est incubé en absence ou en présence de NaCl et/ou GTP, alors que la CI50 d'un antagoniste variera peu dans les 2 conditions. On utilise des culots membranaires conservés à -301C (éventuellement pendant environ 30 jours, et préparés à partir de cervelets de cobayes, avec ou sans NaCl 100 mM, GTP 50 uM. Ces culots sont remis en suspension dans le tampon Tris mM pH 7,7. On répartit des fractions de 2 cm3 dans des tybes à hémolyse et ajoute de la 3H diprénorphine (0,3 nM4) et le produit à étudier. (Le produit est d'abord testé à s x 10-6M, en triple). Lorsque le produit testé déplace de plus de 50 % la radioactivité liée spécifiquement au récep- teur, il est testé à nouveau selon une gamme de 7 doses afin de déterminer la dose qui inhibe de 50 % la radioactivité liée spécifiquement au récepteur. On détermine ainsi la concentra- tion inhibitrice 50 %). La liaison non spécifique est déterminée par addition de produit appelé U-50 488 (FRANCES B.C. et al. Eur. J. Phar- macol. 1985, 117, 223) à 10-5M en triple). On incube à 25 C pendant 40 minutes, remet au bain-marie à 0 C, 5 minutes, filtre sous vide, rince au tampon Tris pH 7,7 et compte la radioactivité en présence du scintillant Triton. Le résultat est exprimé directement en concentration inhibitrice 50 % (CI50), c'est-à-dire en concentration de produit étudié, exprimée en nM, nécessaire pour déplacer 50 % de la radioactivité spécifique fixée sur le récepteur étudié. Résultat: La CI50 est de 43 nM en absence de GTP et NaCi, et de rM en présence de GTP et NaCl. Ainsi le résultat obtenu montre bien que le produit de l'exemple 1 est un produit antaaoniste du récepteur Kappa. REVENDICATIONS 1) Nouveau dérivé d'hydroxyphénétylamine caractérisé en ce qu'il répond à la formule (I): OH (CH2)2-N-(CH2)2 (I) (CH2)4 ' I CH3 ainsi are ses sels d'addition avec les acides minéraux et organiques. 2) - le N-pentyi N-phénéthyl 3-hydroxy phénéthylamine - le chlorhydrate de N-pentyl N-phénéthyl 3-hydroxy phénéthyl- amine. 3) Procédé de préparation du produit de formule (1) tel que définie à la revendication 1, ainsi que de ses sels d'addition avec les acides minéraux et organiques, caractérisé en ce que l'on déméthyle le produit de formule (II): 0CH3 b (CH2)2-N-(CH2)2 (II) - I1 (CH2)4 I CH3 pour obtenir le produit de formule (I) que l'on peut isoler sous forme de base et, si désiré, salifier.- 4) Médicaments caractérisés en ce qu'ils sont constitués par le prcduit de formule (I) telle que définie à la revendication 1 ainsi que par ses sels d'addition avec Les acides pharma- ceutiquaement acceptables. ) Compositions pharmaceutiques caractérisées en ce qu'elles renferment, à titre de principe actif, le produit de formule (I) telle que définie à la revendication 1 ou l'un de ses sels d'addition avec les acides pharmaceutiquement acceptables. 6) Utilisation du produit de formule (I) telle que définie à la revendication 1 comme moyen d'étude, de dosage et de loca- lisation des récepteurs opiacés kappa. 7) Utilisation du produit de formule (I) telle que définie à la revendication 1 et de ses sels d'addition avec les acides pharmaceutiquement acceptables pour la préparation de composi- tions pharmaceutiques destinées au traitement du surdosage d'un produit agoniste du récepteur opiacé kappa. 8) A titre de produit industriel nouveau, le produit de for- mule (II) telle que définie à la revendication 3.