Brevet FR2647788A1 — publié le 19901207

La présente invention concerne de nouveaux dérivés de pyridobenzoindole de formule générale leurs sels d'addition avec les acides, leur préparation et les compositions pharmaceutiques qui les contiennent. Dans la demande de brevet européen 239 476 ont été décrits des dérivés de S-carboline de formule générale dans laquelle Rt et R5 sont entre autres des atomes d'hydrogène, R2 peut représenter un atome d'hydrogène, un radical hydroxy ou alcoyloxy, R3 et R4 sont notamment des radicaux alcoyle et n égale 2 à 4, qui présentent une activité anti-tumorale. Par ailleurs, d'autres dérivés du pyridoindole ont été décrits dans la littérature par C. DUCROCQ et coll., J.Het Chem., 12 (5), 963 (1975) ou par Ch.S. LEE et colt., Heterocycles, 16 (7), 1081 (1981) mais aucune activité thérapeutique n'est mentionnée. Les nouveaux dérivés du pyridohenzoindole de formule générale (I) dans laquelle R représente un radical alcoyle contenant 1 ou 2 atomes de carbone, alk représente un radical alcoylène droit ou ramifié contenant 2 à 4 atomes de carbone, R1 représente un atome d'hydrogène ou un radical alcoyle contenant 1 ou 2 atomes de carbone et R2 représente un radical hydroxy ou méthoxy, présentent des propriétés anti-tumorales particulièrement intéressantes. Selon l'invention, les produits de formule générale (I) peuvent etre obtenus à partir du dérivé chloré de formule générale dans laquelle R1, est défini comme précédemment par action d'une amine de formule générale H2N - alk - N(R)2 (III) dans laquelle alk et R sont définis comme précédemment, suivie le cas échéant de la transformation du produit méthoxylé obtenu en un dérivé hydroxy-9 pyrido[4,3-b]benzote]indole. La réaction de l'amine de formule générale (III) sur le dérivé chloré de formule (II) s'effectue en présence d'un excès de l'amine, de préférence sous azote, éventuellement dans un solvant organique inerte, ou sans solvant, à une température comprise entre la température de reflux du mélange réactionnel, et 250ex (autoclave). La déméthylation s'effectue par toute méthode connue qui n'altère pas le reste de la molécule. Le dérivé chloré de formule générale (II) pour lequel R1, est un atome d'hydrogène peut être préparé à partir de la pyridone correspondante, de formule par action d'un agent de chloration. On opère généralement au moyen d'un agent de chloration choisi parmi l'oxychlorure de phosphore ou les dérivés halogénés du phosphore en présence d'une base tertiaire (diéthylaniline, diméthylaniline par exemple) dans un solvant organique tel qu'un un nitrile (acétonitrile par exemple), à une température comprise entre 75 et 900C (température de reflux du mélange réactionnel). De préférence, la réaction s'effectue sous azote. Le produit de formule générale (II) pour lequel R1 et un radical alcoyle peut-etre obtenu par alkylation du produit pour lequel R1 est un atome d'hydrogène par exemple par action du dérivé halogéné convenable, en présence de carbonate de potassium. Le produit de formule (IV) peut être préparé à partir de l'hydrazone de formule par réaction de Fisher thermique, par analogie avec la méthode décrite par C.H. NGUYEN et E. BISACNI, Tetrahedron, 42 (8), 2203 (1986 > . L'hydrazone de formule (V) est préparée par condensation d'hydrazino-4 méthyl-5-1H-pyridone-2 avec la méthoxy-6 tétralone-2. La réaction s'effectue généralement dans un solvant organique tel qu'un alcool (éthanol par exemple), à la température de reflux du mélange réactionnel. La méthoxy-6 tétralone peut être obtenue selon la méthode décrite dans J. Am. Chem. Soc., 82, 2573 (1960). L'hydrazino-4 méthyl-5-1H-pyridone-2 peut être préparée selon la méthode décrite par C.H. NGUYEN et E. BISAGNI, Tetrahedron, 42 (8Z, 2203 (1986). Les dérivés de pyridobenzoindole de formule générale (I) peuvent être purifiés par cristallisation ou par chromatographie. Les nouveaux dérivés de pyridobenzoindole selon l'invention peuvent être transformés en sels d'addition avec les acides, par action d'un acide dans un solvant organique. Le sel précipite, éventuellement après concentration de sa solution, il est séparé par filtration ou décantation. Comme sels pharmaceutiquement acceptables, on peut citer les sels d'addition avec les acides minéraux tels que chlorhydrates, bromhydrates, sulfates, nitrates, phosphates, ou organiques tels que acétate, propionates, succinates, maléates, fumarates, méthanesulfonates, p.toluènesulfonates, iséthionates ou des dérivés de substitution de ces composés. Les dérivés de formule générale (I) sont particulièrement intéressants comme agents anti-tumoraux. Leurs propriétés anti-tumorales ont notamment été mises en évidence sur les tumeurs greffées de la souris. Plus particulièrement sur leucémie P388, ils se sont montrés actifs à des doses comprises entre 5 et 20 mg/kg par voie intrapéritonéale. Leur toxicité chez la souris exprimée par leur dose maximale tolérée est comprise entre 10 et 20 mg/kg par voie intrapéritonéale. Les exemples suivants donnés à titre non limitatif illustrent la présente invention. EXEMPLE 1 Le [(diméthylamino-3)propyl]amino-1 méthoxy-9 méthyl-4-5Hpyrido 14,3-b] benzo [e) indole (8,7 g) est placé dans un ballon réactionnel de 500 cm3 muni d'un agitateur et maintenu sous argon, avec 220 cm3 d'acide bromhydrique (d = 1,47, 47 %). Ce mélange, devenu homogène à l'ébullition, est chauffé à reflux pendant 4 heures et concentré à sec sous pression réduite. Le résidu solide est dissous dans l'eau (800 cm3) alcalinisé par l'ammoniaque à 28 % (85 cm3) ajouté goutte à goutte, pour former un précipité gommeux. Au mélange résultant, on ajoute 800 cm3 d'acétate d'éthyle. L'ensemble est agité pendant 1 heure et filtré pour éliminer une petite fraction insoluble. La phase organique est décantée et les eaux mères sont extraites deux fois avec 400 cm3 d'acétate d'éthyle. La phase organique est séchée sur sulfate de sodium, filtrée, traitée avec 16 à 20 g de charbon animal pour la décolorer, filtrée et concentrée à sec. Le résidu solide est repris dans 80 cm3 d'acétone, agité pendant 1 heure et filtré puis lavé 2 fois avec 15 cm3 d'acétone froide. Le traitement dans l'acétone est répété une fois pour donner 6,3 g de poudre cristalline jaune-beige, F = 216-2180C, correspondant au [(diméthylamino-3)propyl]amino-1 hydroxy-9 méthyl-45H-pyrido [4,3-b] benzo [e] indole. Le [(diméthylamino-3)propyllamino-l hydroxy-9 méthyl-4SH-pyrido [4,3-b] benzo [e] indole (7,5 g) en solution dans la méthyléthylcétone bouillante (650 cm3 > , est ajouté à une solution d'acide méthanesulfonique (6,4 g, 3 équivalents) dans 300 cm3 de méthyléthylcétone bouillante et le mélange est maintenu à reflux pendant 5 minutes. Il se forme une masse gommeuse insoluble, qui se délite progressivement en une poudre grise, en 18 heures sous agitation. Le solide est filtré, lavé avec la méthyléthylcétone et mis rapidement dans un dessicateur contenant de l'anhydride phosphorique. Après 18 heures, sous pression réduite (15 mm de mercure), on obtient 11,7 g (97 %) du di-méthanesulfonate de [(diméthylamino-3)propyl]amino-1 hydroxy-9 méthyl-4-5H-pyrido [4,3-b] benzo [e] indole, F = 245-2550C. Une solution de [(diméthylamino-3)propyl]amino-1 hydroxy -9 méthyl-4-5H-pyrido [4,3-b] benzo [e) indole (670 mg) dans le méthanol bouillant (150 cm3) est versée dans 100 cm3 de méthanol saturé par l'acide chlorhydrique. La solution est concentrée jusqu'à 30 cm3 et additionnée de 60 cm3 d'acétone. Le précipité est filtré après 15 minutes à froid, lavé à l'acétone et placé rapidement dans un dessicateur sous vide. On obtient ainsi 620 mg Le [(diméthylamino-3)propyl]amino-1 hydroxy-9 méthyl-4SH-pyrido [4,3-b] benzo [e] indole (350 mg) en solution dans l'acétone à l'ébullition (100 cm3) est versé dans une solution d'acide maléique (350 mg, 3 équivalents) dans l'acétone bouillante (30 cm3) et le mélange est laissé en flacon bouché pendant une nuit à la température ambiante. Le solide obtenu est filtré, lavé à l'acétone et placé pendant 18 heures sous vide pour donner des microcristaux belges de di-maléate de [(diméthylamino-3)propyl] amino-1 hydroxy-9 méthyl-4-5H-pyrido [4,3-b] benzo [e] indole, F = 204-2060C. Le [(diméthylamino-3)propyl]amino-1 méthoxy-9 méthyl-45H-pyrido [4,3-b) benzo [e] indole peut être préparé de la manière suivante Le chloro-1 méthoxy-9 méthyl-4-5H-pyrido [4,3-b] benzo [e] indole (7,2 g, 24 mmol) est placé dans un ballon de 500 cm3 contenant 120 cm3 (large excès) de diméthylamino-3 propylamine et chauffé à reflux, sous azote et sous agitation, pendant 72 heures, (disparition totale du dérivé chloré, contrôlé sur plaque de silice). L'excès de la diamine est évaporé au bain-marie sous pression réduite et le résidu est repris dans l'eau puis alcalinisé par l'ammoniaque. Le solide formé est filtré, lavé à l'eau, repris dans le chlorure de méthylène et lavé avec 150 cm3 d'eau additionnée de 10 cm3 d'ammoniaque. La solution organique est séchée, filtrée et évaporée pour donner un résidu solide correspondant au [(diméthylamino-3) propyl]amino-1 méthoxy-9 méthyl-4-5H-pyridot4,3-b) benzo [e] indole pur en CCM (8,7 g). Le chloro-1 méthoxy-9 méthyl-4-5H-pyridol4,3-b] benzo [e] indole peut être obtenu de la manière suivante Dans un ballon de 1 litre, muni d'un agitateur magnétique, d'une ampoule à addition, d'un réfrigérant et maintenu sous azote, on introduit 12,2 g (43 mmol) de méthoxy-9 méthyl-4-2H, SH-pyrido [4,3-b] benzo [e] indolone-1, 10,4 g (172 mmol) d'acétamide 40 g (172 mmol) de chlorure de benzyl triéthylammonium 110 cm3 d'acétonitrile et 28 cm3 (172 mmol) de diéthylaniline fraichement rectifiée. Par l'ampoule, on ajoute progressivement 200 cm3 d'oxychlorure de phosphore rectifié, et observe une réaction exothermique. Le mélange est chauffé à reflux pendant 10 heures, tandis qu'après être passé par une phase homogène, un précipité apparaît. Après le temps indiqué, on concentre à sec, au bain marie chauffé à 700C et sous pression réduite (15 mm de mercure). Au résidu obtenu, on ajoute 300 cm3 d'eau glacée et le mélange, bien agité pendant 2 minutes, est chauffé à l'ébullition. Il se forme un précipité jaune, que l'on filtre à froid et lave ensuite à l'eau froide. Ce précipité est repris dans 300 cm3 d'eau distillée et le mélange est alcalinisé, à froid, par l'ammoniaque. L'ensemble est laissé sous agitation pendant 1 heure et le précipité est filtré et lavé à l'eau. Le contrôle en chromatographie sur couche mince montre la présence du composé attendu (rf s 0,5) et la présence de traces du composé de départ (rf = 0,36) (SiO2, CH2Cl2 EtOH, 9/1). Le produit attendu cristallise dans l'alcool dans lequel il est très peu soluble (gros volumes) en donnant 12 g (92 2) d'aiguilles jaunes, F > 2700C (rf = 0,58 sur plaque silice, éluant acétate d'éthyle pur). Le méthoxy-9 méthyl-4-2H,5H-pyrido [4,3-b] benzo [e] indolone-l peut être préparé de la manière suivante Dans un tricol de 4 litres, on mélange la N-(méthyl-5-tH -pyridone-2 yl)-4 N'-(méthoxy-6 tétrahydro-1,2,3,4-naphtalènyli- dène)-2 hydrazine (31 g, 0,1 mol > et le diphényléther (1 litre) puis chauffe à reflux pendant 40 minutes, en maintenant l'ensemble sous bonne agitation et sous azote. Le mélange devient homogène et se décolore. Le chauffage est interrompu pour laisser refroidir à 2000C et contrôler la transformation du composé de départ. En continuant à agiter, le charbon palladié à 10 % (5 g) en suspension dans le diphényléther (100 cm3) est ajouté progressivement, avec précautions (mousses et dégagement d'hydrogène1, et le nouveau mélange est de nouveau chauffé à reflux pendant 40 minutes. L'hexane (2 litres) est ajouté au mélange refroidi et le précipité formé est filtré puis lavé à l'hexane. Il est alors repris dans 1 litre d'acide acétique bouillant, filtré pour éliminer le charbon palladié et ce dernier est lavé une fois avec 50 à 100 cm3 d'acide acétique bouillant. L'ensemble du filtrat est concentré à 500 cm3 et le solide obtenu après refroidissement est filtré, lavé à l'acétone bouillante et séché pour donner 22 g (75 2) de microcristaux jaune pâle, F 5 2600C, correspondant à la N-(méthyl-5 -1H-pyridone-2 yl)-4 N'-(méthoxy-6 tétrahydro-1,2,3,4-naphtalènyli- dène)-2 hydrazine attendue, légèrement hydratée (rf = 0,36 sur plaque de silice, avec le mélange CH2Cl2-EtOH 9/1 comme éluant). La N-(méthyl-5-1H-pyridone-2 yl)-4 N'-(méthoxy-6 tétrahydro-1,2,3,4-naphtalènylidène)-2 hydrazine peut être préparée de la manière suivante Le mélange de lthydrazino-4 méthyl-5-1H-pyridone-2 (13,9 g, 0,1 mol) dans l'éthanol absolu (600 cm3) est chauffé à reflux. A la solution, devenue homogène à l'ébullition, on ajoute la méthoxy-6 tétralone-2 (11,3 g, 0,12 mol) et le mélange, devenu rapidement hétérogène, est chauffé à reflux pendant 4 heures 30 minutes. Le précipité formé est filtré, repris dans 400 cm3 d'éthanol bouillant dans lequel l'hydrazone est très peu soluble puis filtré à froid pour donner 15,7 g (98 %) de microcristaux incolores, F r 240-2500C, avec décomposition. EXEMPLE 2 Le dimaléate de (diméthylamino-3 méthyl-2 propyl) amine1 méthoxy-9 méthyl-4-5H-pyrido(4,3-b] benzo [e] indole-(R,S) (3 g) est dissous dans l'eau et additionné d'ammoniaque. Après extraction par 3 fois 100 cm3 de chlorure de méthylène séchage et concentration à sec, on obtient la base libre correspondante qui est utilisée telle quelle dans la suite de la synthèse. Le (diméthylamino-3 méthyl-2 propyl) amino-1 méthoxy-9 méthyl-4-5H-pyrido[4,3-b] benzo [el indole-(R,S) est repris dans 120 cm3 d'acide bromhydrique (d = 1,47, 47 1) en opérant de manière analogue à l'exemple 1. Après chauffage à reflux pendant 4 heures, et refroidissement, un précipité apparaît. Le mélange réactionnel est concentré à sec sous pression réduite, puis le résidu est additionné de 200 cm3 d'eau et la solution obtenue est filtrée pour éliminer un léger insoluble. Le filtrat est additionné de 20 cm3 de triéthylamine et de 30 cm3 d'ammoniaque concentré, puis de 200 cm3 de chlorure de méthylène. Après agitation pendant 1 heure à température ambiante, le mélange est extrait par 4 fois 100 cm3 de chlorure de méthylène, séché et concentré à sec. Le résidu solide est chromatographié sur alumine en éluant successivement par 500 cm3 de chlorure de méthylène, 1 litre d'un mélange (97-3) de chlorure de méthylène et d'éthanol, et 1 litre d'un mélange (80-20) de chlorure de méthylène et d'éthanol. Les fractions correspondant au dernier litre d'éluant sont recueillies et concentrées à sec. On obtient ainsi 2,1 g de diméthylamino-3 méthyl-2 propyl)amino-1 hydroxy-9 méthyl-4 5H-pyrido[4,3-b] benzo[e] indole-(R,S) brut. Le produit obtenu est dissous dans 200 cm3 d'acétone et porté à ébullition, puis additionné d'acide maléique (2,1 g, 3 équivalents) en solution dans 50 cm3 d'acétone bouillante. Le mélange est concentré à moitié de son volume et laissé refroidir. On obtient ainsi 2,25 g de dimaléate de (diméthylamino-3 méthyl-2 propyl)amino-1 hydroxy-9 méthyl-4 SH-pyrido [4,3-bl benzo [e] indole-(R,S) fondant à 215-2200C. Le dimaléate de (diméthylamino-3 méthyl-2 propyl) amino-1 méthoxy-9 méthyl-4-5H-pyrido 14,3-b] benzo (e] indole-(R,S) peut être obtenu de la manière suivante Le chloro-1 méthoxy-9 méthyl-4-5H-pyrido [4,3-b] benzo [e] indole (2,1 g) est chauffé en autoclave à 1800C pendant 16 heures avec la diméthylamino-3 méthyl-2 propylamine. On opère dans les conditions décrites à l'exemple 1, alcalinise par l'ammoniaque reprend par le chlorure de méthylène et chromatographie sur alumine en éluant par 1,5 litre de chlorure de méthylène. Après concentration à sec, le résidu obtenu est dissous dans 60 cm3 d'acétone et chauffé 2 minutes avec de l'acide maléique (2,5 g, 3 équivalents) dissous dans 50 cm3 d'acétone. Après refroidissement et précipitation on obtient 3,2 g de dimaléate de (diméthylamino-3 méthyl-2 propyl) amino-1 méthoxy-9 méthyl-4-5H- pyrido [4,3-b] benzo [e] indole-(R,S) fondant à 1800C. EXEMPLE 3 En opérant de manière analogue à l'exemple 2 mais à partir de tri-méthanesulfonate de [(diméthylamino-3 )propyl]amino-1 méthoxy-9 diméthyl-4,5 pyrido [4,3-b] benzo [e] indole hydraté (2H20); on obtient le di-méthamesulfonate de [(diméthylamino-3)propyl] amino-1 hydroxy-9 diméthyl-4,5 pyrido 14,3-bl benzo [e] indole hydraté (1,5 H2O), F t 135-1500C avec un rendement de 95 %. Le tri-méthanesulfonate de [(diméthylamino-3)propyl] amino-1 méthoxy-9 diméthyl-4,5 pyrido (4,3-bl benzo [e] indole hydraté (2H20) peut-être obtenu comme décrit à l'exemple 2 mais à partir du chloro-1 méthoxy-9 diméthyl-4,5 pyrido [4,3-b] benzo [e] indole. Le produit est obtenu avec un rendement de 86 %, F r 115- 1250C. Le chloro-1 méthoxy-9 diméthyl-4,5 pyrido [4,3-b] benzo [e] indole peut-être obtenu de la manière suivante Le chloro-1 méthoxy-9 méthyl-4 5H pyrido 14,3-b] benzo [e] indole (15 mmol) est dissous dans 100 cm3 de diméthylformamide et traité sous agitation, à température ambiante, pendant 15 heures, par 1,15 cm3 (18 mmol) d'iodure de méthyle en présence de 16,6 g (120 mmol) de carbonate de potassium. Le mélange réactionnel est concentré à sec sous pression réduite. Le résidu est repris dans l'eau et extrait par du chlorure de méthylène. La solution est séchée sur sulfate de magnésium et concentrée à sec. Le résidu solide est recristallisé dans l'éthanol pour donner le chloré1 méthoxy-9 diméthyl-4,5 pyrido [4,3-b] benzo [e] indole sous forme d'aiguilles blanches avec un rendement de 86 % ; = 185-1870C. La présente invention concerne également les compositions pharmaceutiques qui contiennent comme produit actif au moins un produit de formule générale (I) à l'état pur (sous forme libre ou sous forme de sel) ou en association avec un ou plusieurs adjuvants pharmaceutiquement acceptables. Ces compositions peuvent etre utilisées par voie parentérale. Les compositions pour administration parentérale, peuvent être des solutions stériles aqueuses ou non aqueuses, des suspensions ou des émulsions. Comme solvant ou véhicule, on peut employer le propylèneglycol, un polyéthylèneglycol, des huiles végétales, en particulier l'huile d'olive et des esters organiques injectables, par exemple l'oléate d'éthyle. Ces compositions peuvent également contenir des adjuvants, en particulier des agents mouillants, émulsifiants ou dispersants. La stérilisation peut se faire de plusieurs façons, par exemple à l'aide d'un filtre bactériologique, en incorporant à la composition des agents stérilisants, par irradiation ou par chauffage. Elles peuvent également être préparées sous forme de compositions solides stériles qui seront dissoutes au moment de l'emploi dans de l'eau stérile ou tout autre milieu stérile injectable. En thérapeutique humaine, les médicaments selon la présente invention sont particulièrement utiles dans le traitement des cancers digestifs, des cancers pulmonaires, des cancers des testicules ou des ovaires ainsi que dans les traitements des cancers de la tête et du cou. D'une façon générale, le médecin déterminera la posologie qu'il estime la plus appropriée en fonction de l'âge, du poids et de tous les autres facteurs propres au sujet à traiter. Le mode d'administration préféré est la voie intraveineuse. A titre indicatif, les médicaments selon l'invention peuvent être administrés chez l'homme à raison de 30 à 200 mg/m2 par traitement, par voie intra-veineuse. L'exemple suivant, donné à titre non limitatif, illustre une composition selon la présente invention EXEMPLE On prépare une solution contenant 6,44 g de dichlorhydrate de [(diméthylanino-3)propyl] amino-1 hydroxy-9 méthyl-4 SH-py- rido [4,3-b] benzo [e] indole hydraté (1,5 H20), en dissolvant ce produit dans du soluté physiologique apyrogène en quantité suffisante pour obtenir 100 cm3. La solution obtenue est répartie aseptiquement en ampoules, à raison de 2 cm3 par ampoule. Les ampoules sont scellées et contiennent chacune 100 mg de l(diméthylamino-3)propyl] amino-1 hydroxy-9 méthyl-4 5H-pyrido [4,3-b] benzo [e]indole. REVENDICATIONS 1 - Un nouveau dérivé de pyridobenzoindole de formule générale dans laquelle R représente un radical alcoyle contenant 1 ou 2 atomes de carbone, alk représente un radical alcoylène droit ou ramifié contenant 2 à 4 atomes de carbone, R1 représente un atome d'hydrogène ou un radical alcoyle contenant 1 ou 2 atomes de carbone et R2 représente un radical hydroxy ou méthoxy, ainsi que ses sels d'addition avec les acides. 2 - Un procédé de préparation d'un dérivé de pyridobenzoindole selon la revendication 1, caractérisé en ce que l'on fait agir une amine de formule générale H2N - alk - N(R)2 dans laquelle alk et R sont définis comme dans la revendication 1, sur un dérivé chloré de formule puis transforme le cas échéant le produit méthoxylé obtenu en un dérivé hydroxy-9 pyrido [4,3-b] benzo tel indole et transforme éventuellement le produit obtenu en un sel d'addition avec un acide. 3 - Composition pharmaceutique caractérisée en ce qu'elle contient un produit selon la revendication 1 à l'état pur ou sous forme d'association avec tout diluant ou adjuvant compatible et pharmaceutiquement acceptable.