Brevet FR2637293A1 — publié le 19900406

La présente invention est relative à des plasmides recombinants, à des vecteurs comprenant lesdits plasmides, à leurs procédés de production ainsi qutà une souche de cyanobactérie Synechocystis modifiée, apte à Entre hôte desdits plasmides et/ou desdits Vecteurs. Les cyanobactéries sont des bactéries Gram négatives photosynthétiques, caractérisées par une photosynthèse de type végétal et pour certaines espèces filamenteuses, une capacité de fixer l'azote atmosphérique en sym- biose ou & l'état libre. Un petit nombre de ces organismes sont naturellement transformables par leur propre ADN ou, sous certaines conditions, par de l'ADN étranger préalablement amplifié et extrait d'E. coli. Les espèces filamenteuses et fixatrices d'azote ne semblent pas être spontanément transformables mais il existe des systèmes de transfert de matériel génétique basés sur la mobilisation de plasmides par des plasmides conjuguant à large spectre d'hôte chez les Gram négatifs. TOVEY K.C. et al., (Biochem. J., 1974, 142, 4756) ont montré que certaines souches de Synechococcus, en particulier la souche 7942, sont suffisamment radiorésis tantes pour permettre leur croissance en X 4C02 pur et donc la production de biomasse uniformément marquée au X 4C, en particulier, acides aminés et sucres. Ceci, couplé à des méthodes de purification adéquates, fournit une méthode devenue standard de production d'acides aminés et de sucres uniformément marqués au 14C. FRIEDBERG et al., (Mol. Gen. Genet., 1986, 203, 505-510) présentent des systèmes de plasmides qui utilisent des signaux de régulation du bactériophage Lambda pour accomplir une expression régulée de gènes clonés dans une souche derivée de Synechococcus R2. Ces systèmes de plasmides portent la région opérateur-promoteur et le gène citi du répresseur thermosensible du bactériophage Lambda. Pour étudier la fonction des signaux régulateurs de Lambda dans R2, un fragment de DNA portant le gène cat, est inséré dans un plasmide recombinant de Synechococcus R2. Ce gène code pour la chloramphénicol acétyltransférase et permet, par la mesure de l'activité enzymatique, de démontrer que l'expression peut être régulée par la température. TANDEAU de MARSAC et al. (Mol. Gen. Genet., 1987, 209, 396-398) décrivent dans cet article l'expression des gènes de toxines polypeptidiques larvicides de Bacilles sphaericus 1593 M, dans une souche de Synechococcus R2 ou PCC7942. Bacillus sphaericus est l'une des bactéries formant des spores, qui synthétise une puissante toxine entcmocide active contre les larves de différentes sortes de moustiques. La souche Synechococcus R2 s'est révélée être une cyanobactérie de choix pour cette expression. La transformation de la souche Synechococcus R2 est mise en oeuvre selon la méthode de Van Den Handel. Ces différents travaux font état de l'utilisation de la cyanobactérie Synechococcus R2, comme cellule hôte. Il est connu que le choix d'un vecteur d'expression pour un hôte adéquat est très difficile à réaliser. On attend d'un vecteur idéal qu'il soit stable, qu'il soit présent en nombre constant et élevé dans chaque cellule, ceci pour augmenter le nombre de copies du gène susceptibles d'être traduites en protéines, qu'il puisse fonctionner comme vecteur navette, qu'il contienne des gènes grâce aux produits desquels on peut exercer une sélection efficace sur la cellule qui le contient, comme une résistance aux antibiotiques ; qu'il possède un système d'expression permettant une abondante production de polypeptides ou de protéines. Dans un article paru en 1986, dans Mol. Gen. Genet., 204, 185-?91, les Inventeurs ont montré qu'une autre cyancbactérie, la cyanobactérie Synechocystis PCC 6803 contient 4 plasmides cryptiques (pUS1, pUS2, pUS3, de 2,27 kb et pUS de 5,20 kb) ; pUS2 et pUS3 ont une structure très semblable et sont collectivement appels pUSA. A partir de ces plasmides, ils ont obtenu 2 plasmides recombinants résistants à la kanamycine (Kmr) (pUF3 et pUF12), par clonage des fragments de restriction HpaI de pUS3 et de pUS2 respectivement, au -site HindII du gène ampicilline résistant (Apr) du plasmide pACYC177 d'E. coli. Les plasmides pUF3 et pUF12 portent un fragment HpaI de 1,7 kb en provenance du plasmide pUSA et sont tous deux capables de se répliquer dans E. ccli, ainsi que de rendre la cyanobactérie Synechocystis 6803 kanamycine résistante (Kmr). Les fragments adjacents de 1,7 kb et 50 bp clonés à partir du plasmide pUS2 dans le plasmide pUF12 portent toutes les informations nécessaires à une réplication efficace dans Synechocystis 6803. Ceci ne s'applique pas en ce qui concerne le fragment de restriction HpaI de 1,7 kb cloné à partir du plasmide pUS3 dans le plasmide pUF3, car le plasmide pUF3 est instable dans la cyanobactérie, étant remplacé par le plasmide recombinant pUF311. Ce comportement différent du plasmide pUF3 et du plasmide pUF12 peut résulter de l'orientation opposée de leurs inserts cyanobactériens HpaI de 1,7 kb, de l'absence dans pUF12 d'un site HindIII caractéristique de pUF3 et de la présence dans pUF12, mais non dans pUF3, du fragment HpaI de 50 bp. Les Inventeurs ont trouvé un nombre moyen de copies par cyancbactérie de une et douze molécules pour pUF12 et pUF311, respectivement. Les fragments HpaI de 0,32 kb et de 0,25 kb de pUS2, non clonés dans pUF12 mais présents dans pUF311 pourraient être impliqués dans le contrôle du nombre de copies de plasmides dans Synechocystis 6803. Le plasmide recombinant pUF311 a été utilisé pour construire le vecteur navette Cmr Kmr pFCLV7 de 9,35 kb, qui est équivalent à un plasmide pUF311 (8 kb) avec un fragment HaeII de 1,35 kb portant le gène Cmr du plasmide d'E. coli pACYC184. Les Synechocystis 6803 de type sauvage sont peu transformées par les vecteurs navettes pUF12, pUF3l1 et pFCLV7 ; cependant, lorsque la cyanobactérie réceptrice contient déjà un plasmide pUF311 (souche SUF311) l'efficacité de la transformation par le plasmide pFCLV7 est augmentée d'environ 40 fois. Dans cet Article, les Inventeurs ont développé un système de clonage pour la cyanobactérie Synechocystis 6803 en construisant un vecteur navette convenable et une souche hôte hautement transformable. Les composants principaux de ce système sont - le vecteur navette Cmr Kmr pFCLV7 de 9,35 kb qui porte 3 sites de restriction uniques dans le gène Kmr (ClaI, SmaI, XhoI) et un dans le gène Cmr (EcoRI). - la souche hôte SUF311 qui est hautement transformable par pFCLV7, ladite fréquence de transformation étant due à l'existence d'une recombinaison homologue entre ce vecteur et le plasmide hybride pUF311 résidant dans la souche de cyanobactérie. Poursuivant leurs travaux dans cette direction, les Inventeurs se sont, en conséquence, donné pour but de pourvoir à une nouvelle souche hôte, ainsi qu'à un vecteur d'expression hautement compatibles et qui permettent l'ex- pression de nombreuses molécules de polypeptides. Les Inventeurs ont visé à trouver un système hôte-vecteur qui permette l'expression de nombreux polypeptides et, notamment, d'hormones uniformément marquées au 14C. Ce système hôte/vecteur d'expression présente un certain nombre d'avantages, notamment pour l'expression et la production de polypeptides uniformément marqués, par rapport aux méthodes chimiques de marquage (méthode au tritium, notamment) qui ne marquent que quelques acides aminés. La présente invention a ainsi l'avantage de produire des substances marquées uniformément et dont, en particulier, le métabolisme, peut être suivi de manière très précise. Ledit couple vecteur d'expression/cellule hôte tel que défini dans l'invention, a également l'avantage de permettre la production industrielle d'enzymes de restrictien, de toxines animales, ou des algicides/herbicides qui présentent également un grand intérêt industriel. La présente invention a pour objet un plasmide recombinant, caractérisé par les propriétés suivantes - il comprend 6,5 kb, -- il est obtenu par traitement d'un fragment de restriction BamHI - XhoI du plasmide pUF3îl par le fragment de Klenow de l'ADN polymérase I, avec dégradation d'une partie du fragment à partir du site BamHI et ligation au fragment SmaI de 2 kb contenant le gène Smr, du plasmide pHP45D d'E. coli. - il contient un fragment de 2,3 kb qui correspond à sa partie cyanobactérienne. - il est résistant à la streptomycine (Smr), Ce plasmide recombinant a été dénommé pFCfl5 par les Inventeurs. Conformément à l'invention, ledit plasmide recombinant est déposé sous le n I-784, en date du 19 juillet 1988 auprès de la Collection Nationale de cultures de micro-organismes tenue par 1'Institut Pasteur. La présente invention a également pour objet un plasmide recombinant caractérisé par les propriétés sui vantes - il comprend 7,15 kb, - il est obtenu par ligation d'un fragment de restriction BamHI - PstI de 4,4 kb du plasmide pFCLV7 portant les gènes de résistance à la kanamycine (Kmr) et au chloramphénicol (Cmr) et une origine de réplication d'E. coli, avec le fragment BamHI - PstI de 2,75 kb du plasmide recombinant, selon l'invention, pFCa5 qui contient la partie cyanobactérienne de 2,3 kb. Ce plasmide recombinant a été dénommé pFC57 par les Inventeurs. On appelle partie cyanobactérienne du plasmide, le fragment de 2,3 kb qui permet la réplication autonome du plasmide la contenant dans un Synechocystis sp. et notamment dans Synechocystis 6803. Ces deux plasmides recombinants conformes à l'invention, sont homologues, à l'exception de leur partie E. coli, portant les gènes de résistance aux antibiotiques. a presente invention a également pour obJet un vecteur sauge de promoteur, permettant de tester dans des conditions appropriees l'efficacité de séquences promoteurs dans la cyanobactérle et de fournir des vecteurs d'expres sion, caractérisé en ce qu'il comprend (a) un segment d'ADN contenant une origine de réplication fonctionnelle dans E. coli et un gène de résistance à un antibiotique approprié, permettant la sélection de transformants dans la cyanobactérie (b) un gène dépourvu de son promoteur, mais dont l'activité soit aisément détectable soit par un test enzymatique simpie, soit par le fait qu'l; confère une résistance à un antlb;;otlque, soit les deux (c) Immédiatement en amont de ce gène, un site multiple de clonage, dans lequel on peut introduire une séquence de promoteur approprié (d) en amont de ce site multiple de clonage, un signal termlnateur de transcrlptlon, qui empêche la transcription à partir de tout autre promoteur qui serait situe en amont de celui introduit au site multiple de clonage, ledit vecteur Jauge de promoteur étant non replicatif tel quel dans la cyanobacterie, et étant désigné cl-après vecteur jauge de promoteur passif. On entend par promoteur, toute séquence d'ADN propre à assurer la synthèse efficace de l'ARN messager correspondant à un gène donné. Les sites de clonage peuvent être avantageusement, mais de manière non limitative, les sites Hindis, SalI, PstI et BamHI. Conformément & l'invention, le gène de résistance à un antibiotique approprié est sélectionné dans le groupe qui comprend, notamment, le gène de résistance à la streptomycine, le gène de résistance à la kanamycine et le gène de résistance au chloramphénicol. Egalement conformément à l'invention, le gène dépourvu de son promoteur (b) est sélectionné dans le groupe qui comprend notamment le gène de la chloramphénicol transacétylase, le gène de la a-galactosidase, le gène conférant une résistance à la streptomycine. Selon un mode de réalisation avantageux, le vecteur sauge de promoteur passif comprend (a) un segment d'ADN contenant une origine de réplication fonctionnelle du plasmide pACYC177 d'E. coli et un gène de résistance à la kanamycine (Kmr), permettant la sélection de transformants dans la cyanobactérie (b) le gène de la chloramphénicol transacétylase (cat) dépourvu de son promoteur (c) immédiatement en amont de ce gène, un site multiple de clonage dans lequel on peut introduire une séquence de promoteur approprié vd, en amont du site multiple de clonage, le signal terminateur de transcription de la protéine 32 du coliphage T4. Ce vecteur jauge de promoteur passif a été dénommé pFF11 par les Inventeurs. ta présente invention a, de plus, pour objet un vecteur jauge de promoteur, permettant de tester l'efficacité de séquences promoteurs dans la cyanobactérie et de fournir des vecteurs d'expression, caractérisé en ce qu'il comprend : (a) un vecteur Jauge de promoteur passif conforme à l'invention. (b) un fragment de plasmide de Synechocystis sp. de 2,3 kb, qui correspond à la partie cyanobactérienne dudit plasmide,. ledit vecteur sauge de promoteur étant réplicatif dans la cyanobactérie et étant désigné ci-après vecteur Jauge de promoteur actif. Selon un mode de réalisation avantageux, le vezteur 7auge de promoteur actif comprend (a) un segment d'ADN contenant une origine de réplication fonctionnelle du plasmide pACYC177 d'E. coli et un gène de résistance à la kanamyclne (Kmrl, permettant la sélection de transformants dans la cyanobactérie (b) un fragment de plasmide de Synechocystis sp. de 2,3 kb, qui correspond à la partie cyanobactérienne dudit plasmide ; (c) le gène de la chloramphénicol transacétylase dépourvu de son promoteur (d > immédiatement er. amont de ce gène, un site multiple de clonage dans lequel on peut introduire une séquence de promoteur approprié ; ; (e) en amont du site multiple de clonage, le signal terminateur de transcrIptIon de la protéine 32 du coliphage T4. Ce vecteur Jauge de promoteur actif a été dénommé pFF16 par les Inventeurs. La présente invention a egalement pour objet un micro-organisme obtenu par transformation génétique, carac térisé en ce qu'il est obtenu par transformation de la cyanobactérie Synechocystis sF. par le plasmide pFCQ5, conforme à l'invention. Ce micro-organisre a été dénommé souche SFCQ5 par les Inventeurs. Conformément à l'invention ledit micro-orga nisme est déposé sous le n I-783 en date du 19 juillet 1988 auprès de la Collection nationale de cultures de micro-organismes tenue par l'Institut Pasteur. Selon une disposition avantageuse, cette souche présente une radio-résistance importante. La transformation du micro-organisme conforme à l'invention est principalement due à un événement de recombinaison homologue entre le plasmide résidant et le plasmide transformant. La présente invention a, de plus, pour objet un vecteur d'express;on, caractérisé en ce qu'il est constitué par (a > un vecteur jauge de promoteur conforme à l'invention, (b) une séquence d'ADN qu comporte un promoteur approprié, lequel vecteur d'expression est dit non-chargé, c'est-adure, apte à recevoir au moins une séquence d'ADN ou un gène codant pour une protéine ou un polypeptide donné. Selon un mode de réalisation préféré du vecteur d'expression, le vecteur jauge de promoteur est un vecteur jauge de promoteur pass-. melon un autre mode de réalisation du vecteur d'expression, le promoteur approprié est un promoteur constitutif. Selon un autre mode de réalisation du vecteur d'expression, le promoteur approprié est un promoteur dont l'activité est modulée en fonction des conditions de croissance. Selon une disposition avantageuse de ce mode de réalisation, l'activité du promoteur est modulée en fonction de la température. sous l'effet d'un répresseur thermosensible dudit promoteur, lequel répresseur est compris dans la séquence d'ADN (b) susdite. Selon une modalité avantageuse de cette dispo- sition, ledit promoteur est choisi dans le groupe qui comprend le promoteur pL du phage Lambda et le promoteur pR du phage Lambda, le répresseur étant en ce cas produit par l'allèle 857 du gène CI du coliphage Lambda. Selon une autre disposition avantageuse de ce mode de réalisation, l'activité du promoteur est modulée en fonction de la lumière, sous l'effet d'un répresseur photosensible propre à la cyanobactérie. La présente invention a également pour objet un procédé de production du plasmide recombinant de 6,5 kb, caractérisé en ce qu'il est obtenu par traitement d'un fragment de restriction BamHI - XhoI de 6,65 kb du plasmide pUF311, par le fragment de Klenow de l'ADN-polymérase I, avec dégradation sur une longueur de 2,1 kb, à partir du site BamHI et ligation au fragment SmaI de 2 kb contenant le gene Smr, du plasmide pHP45 d'E. coli, puis obtention d'un clone Smr qu possède ledit plasmide recombinant après transformation dans E. coli. La présente invention a, en outre, pour objet un procédé de production du plasmide recombinant de 7,15 kb tel que défini plus haut et dénommé pFC57 par les Inventeurs, caractérisé en ce qu'il est obtenu par ligation d'un fragmen de restriction Ba'-..YI - PstI de 4,4 kb du plasmide pFC~V7 portant les gènes ae résistance à la kanamycine (Kmr) et au chlcramphénicol (Cmr) et une origine de réplication d'E. coli, avec le fragment BamHI - PstI de 2,75 kb d plasmide recombinant, selon l'invention, de 6,5 kb qui contient la partie cyanobactérienne de 2,3 kb. La présente invention a également pour objet un procédé de production du vecteur jauge de promoteur passif tel ie défini plus haut, caractérisé en ce que (') l'on traite le plasmide pFC57 par au moins une enzyme de restriction appropriée, de manière à former un fragment dépourvu de sa partie cyanobactérienne (2) l'on traite un plasmide d'E. coli contenant le gène Smr par au mois une enzyme de restriction appropriée, de manière à former un fragment de plasmide contenant tout ou partie du gène Smr, ce fragment devant per mettre ultérieurement une recombinaison in vivo dans la cyanobactérie entre le vecteur passif et la région portant le gène Smr sur le plasmide pFCQ5 présent dans la cyanobactérie. (3) l'on réalise une ligation entre les fragments préparés en (1) et (2) et en ce que l'on prépare ainsi un plasmide dit "intermédiaire" que l'on traite par au moins une enzyme de restriction appropriée de manière à préparer un fragment dépourvu du gène Cmr initialement présent sur le plasmide pFC57. (4) l'on traite un plasmide d'E. coli contenant la séquence codante d'un gène dont l'expression dans la cyanobactérie soit aisément détectable, tel que ie gène de la chloramphenicol transacétylase, le gène de la a galactosidase, ie gène confèrent une résistance à la streptomycine, par au moins une enzyme de restriction appropriée de manière à préparer un fragment contenant la séquence codante dudit gène, mais non son promoteur, et ayant en amont de cette séquence codante au mois un site unique de clonage permettant d'introduire le ou les promoteurs dont on veut tester l'expression dans la cyanobactérle . t5) l'on réalise une ligation entre les fragments preparés en (3) et (4) et en ce que l'on prépare ainsi un plasmide qui est le vecteur Jauge de promoteur passif. Selon un mode de mise en oeuvre avantageux, la ligation des trois fragments constitjtifs de ce vecteur est realisée successlvement, l'ordre de ligation des fragments étant indifférent. Selon un autre mode de mise en oeuvre avantageux, la lîgation des trois fragments constitutifs dudit vecteur est réalisée simultanément. Selon encore un autre mode de mise en oeuvre avantageux, le site unique de clonage de l'étape ! 4) est lui-même avantageusement introduit par une ligation supplémentaire ou par mutagenèse dirigée. La présente invention a également pour objet un plasmide recombinant intermédiaire, pour la production du vecteur jauge de promoteur passif. Le vecteur jauge de promoteur passif, désigné sous le nom de pFF11, est obtenu par la succession des étapes suivantes (1) on traite le plasmide d'E. coli pKK232-8 contenant la région N-terminale du gène cat dépourvu de son promoteur par les enzymes de restrictions BamHI et EcoRI, de manière à obtenir un fragment BamHI-EcoRI de 0,27 kb dudit plasmide (2) on réalise une ligation entre le fragment obtenu en (1) et le fragment EcoRI-BamHI de 6,3 kb provenant du plasmide recombinant pFC57 de 7,15 kb conforme à l'invention, et portant la région C-terminale du gène cat propre à reconstituer avec le fragment de 0,27 kb cidessus, le gène cat en entier, dépourvu de son promoteur, ainsi que le gène de résistance à la kanamycine (Kmr) et en ce que l'on obtient ainsi un plasmide intermédiaire désigné pFF4 par les Inventeurs ;; (3) on traite ledit plasmide intermédiaire par les enzymes de restriction BamHI et FspI de manière à obte nir un fragment BamHI-FspI dudit plasmide intermédiaire pFF4 (4) et on réalise une ligation entre le fragment obtenu en (3) et un fragment de 1,7 kb BamHI-XmnI du plasmide d'E. ccli pHP45a portant le gène de résistance à la streptomycine et le signal terminateur de transcription de la protéine 32 du coliphage T4. La présente invention a également pour objet un procédé de production du vecteur jauge de promoteur actif, conforme à l'invention, caractérisé en ce que l'on lntro- duit, in vivre, dans une souche de synechocystis conforme à l'invention, le fragment de plasmide de 2,3 kb, qui cor respond à la fraction cyanobactérienne d'un plasmide recombinant conforme à l'invention, dans un vecteur jauge de promoteur passif, lequel fragment est introduit par recombinaison entre les régions homologues du vecteur jauge de promoteur et du plasmide recombinant pFCQ5 présent dans ladite souche. La présente invention a, de plus, pour objet un procédé de production du vecteur d'expression, caractérisé en ce qu'il est obtenu par ligation d'un fragment de plasmide approprié d'E. coli, obtenu par traitement convenable avec au moins une enzyme de restriction appropriée, avec un vecteur sauge de promoteur conforme à l'invention, linéa- risé par traitement par au moins une enzyme de restriction appropriée et en ce qu'il constitue un vecteur d'expression non chargé prêt à recevoir au moins un fragment d'ADN étranger que l'on désire faire exprimer. Le vecteur d'expression dénommé pFF17 est obtenu par ligation du fragment HinPI de 0,87 kb du plasmide d'E. coli pMY12-6 avec le vecteur jauge de promoteur passif dénommé pFF11, au site BamHI dudit vecteur Jauge. La présente invention a, en outre, pour objet un procédé de chargement d'un vecteur d'éxpressicn nonchargé en au moins une séquence d'ADN étranger, caractérisé en ce qu'au moins une séquence étrangère est Introduite directement, in vitre, dans ledit vecteur d'expression. Selon un mode de mise en oeuvre avantageux, la séquence étrangère d'ADN est introduite en amont du gène dépourvu de son promoteur, -tel que défini C1 dessus pour le vecteur sauge de promoteur en (b)-, dudit vecteur par clonage dans l'un des sites de restriction, en aval du prc- moteur. Selon une disposition préférée de ce mode de mise en oeuvre, lorsque le gène dépourvu de son promoteur est le gène cat, ie clonage est réalisé dans l'un de ses trois sites uniques, BamHI, SalI et PstI. Le vecteur d'expression non chargé pFFl7 peut directement exprimer le gène cat, codant pour une activité chloramphénlcol-transacétylase, pour laquelle il n'existe normalement pas d'information génétique dans la cyanobactérie Synechocystis sp. La présente invention a également pour objet un vecteur d'expression dit chargé, caractérisé en ce qu'il est formé d'un vecteur d'expression non-chargé conforme à l'invention, dans lequel a été insérée directement in vitro au moins une séquence d'ADN étranger qu'on désire faire exprimer. Lorsque le vecteur d'expression pFF17 est ln- troduit cans une cyanobactérie Synechocystis sp. conforme à l'invention. c'est-à-dire, portant le plasmide pFC#5, il se forme dans celle-ci un vecteur d'expression chargé, exprimant le gène cat et dénommé par les Inventeurs pFF18. La présente invention a, en outre, pour objet un processus d'expression de gène étranger, caractérisé en ce qu'il met en oeuvre un vecteur d'expression chargé tel que défini ci-dessus dans un micro-organisme conforme à 1' invention. Selon un mode de réalisation avantageux de ce processus, l'expression est réalisée en présence d'un milieu contenant au moins 95 % de 14C, avantageusement sous forme de 14002. Ledit vecteur d'expression permet, notamment, l'expression conditionnelle à une température supérieure à 37-C ae toute séquence d'ADN. Ce vecteur, introduit dans la cyanobactérie modifiée conformement a l 'nvention, permet d'exprimer des gènes de protéines ou de polypeptides et notamment d'hormones animales pour les produire sous forme de polypeptides marqués au 14Ç Outre les dispositions qui précèdent, l'inven- tion comprend encore d'autre dispositions qui ressortiront de la description qui va suivre, qul se réfère à des exemples de mise en oeuvre du procédé objet de la présente invention. Il doit être bien entendu, toutefois, que ces exemples sont donnés uniquement à titre d'illustration de l'objet de l'invention, dont ils ne constituent en aucune manière une limitation. EXEMPLE 1 : PROCEDE DE PRODUCTION DU PLASMIDE pFC95 (l) environ 2 pg du plasmide pUF311 sont digérés par les enzymes BamHI et XhoI et déposés sur gel d'agarose. Après électrophorèse, le fragment d'ADN de 6,65 kb est purifié par électroélution, suivie d'une extraction au phénol et de deux extractions au chloroforme, d'une precipitation à froid en présence d'acétate d'ammonium 2,5 M et de deux volumes d'éthanol. (11) environ 2 g du plasmide d'E. ccli pHP45Q (Prentki et Krisch, 1984, Gene, 29, 303-313 > sont digérés par l'enzyme SmaI et déposés sur gel d'agarose. Le fragment de 2,0 kb est purifié par électroélution et précipité comme dans (1). (iii) Le fragment ae 6,65 kb repris dans un volume de 10 l contenant le tampon NT (selon Maniatis et al., Molecular Cloning, a laboratory manual, Cold Spring Harbor Laboratory, 1982, 545 p.3 et les quatre nucléotides dCTP, dTTP, dATP et dGTP à 200 nM chacun est incubé 30 minutes à température ambiante en présence de deux unités du fragment de Klenow de l'ADN polymérase I d'E. coli, traité 5 minutes à 80 C et précipité a l'éthanol comme décrit dans (i). (lv) Environ 0,5 g d'un mélange approximativement équimolaire de ces deux fragments sont resuspendus dans 10 l de tampon de ligation (selon Maniatis et al. op. cit.) en présence de cinq unités de l'ADN ligase du coliphage T4. Après une nuit à 16 C, la moitié de ce mélange est utilisé pour transformer des cellules d'E. coli DH5a rendues compstentes par traitement au CaCl2. Ces cellules sont étalées par aliquot de 100 l sur du milieu LB contenant de la streptomycine à 20 g/ml. (v) Après 24 heures d'lncubatlon à 37 C, des colonies résistantes à la streptomycine sont observées. L'une d'elles a été réisolée et son ADN plasmidique préparé par méthode rapide à partir d'une culture de 5 ml, puis par préparation à partir d'une culture de 250 ml suivie d'une purification du plasmide sur gradient de CsCl. Une carte physique du plasmide a été établie par digestion simple ou double avec plusieurs enzymes de restriction, dont SmaI, BamHI et XhoI. Le plasmide correspondant a les propriétés décrites pour le plasmide pFC#5, c'est-à-dlre qu'il résulte d'une fusicn entre le fragment SmaI et le fragment BamHI XhoI présent dans le mélange de ligation (iv), ce dernier ayant été partiellement digéré par une exonucléase à partir du site BamHI sur une longueur de 2,1 kb. EXEMPLE 2 : PROCEDE DE PRODUCTION DU PLASHIDE pFC57 (1) Environ 2 g du plasmide pFCLV7 sont digérés par les enzymes BamHI et PstI, et déposés sur gel d'agarcse Après électrophorèse, le fragment de 4,4 kb est purifié par électroélution et précipité à l'éthanol comme décris dans l'exemple 1 (1). (ll) Environ 4 g du plasmide pFCQ5 sont digérés par les mêmes enzymes et déposés sur gel d'agarose. Le fragment de 4,4 kb est purifié par électroélutlon et précipitié à l'éthanol comme décrit dans l'exemple 1 (i). (iii) Environ 0,5 g d'un mélange approximativement équimolaire des deux fragments sont repris dans 10 ; de tampon de llgatlon, traités pendant une nuit à 16'C par une unité d'ADN iigase du coliphage T4 et utilisés pour transformer des cellules compétentes d'E. coli DH5a comme décrit dans l'exemple 1 (iv). Après étalement de ces cellules sur milieu LB contenant de la kanamyclne (50 g/ml) et du chloramphénicol (30 pg/ml), des colonies sont observées après 24 heures d'incubation à 37 C. Parmi ces colonies, l'une prose au hasard a été réisolée et son ADN plasmidique préparé comme décrit dans l'exemple 1 (v). Une carte physique du plasmide par digestion en présence de diverses enzymes de restriction (dont BamHI et PstI) montre qu'il a la structure attendue du plasmide recombinant pFC57, excepté que le site PstI n'a pas été reconstitué lors du clonage. EXEMPLE 3 : PROCEDE DE PRODUCTION DU VECTEUR JAUGE DE PROMOTEUR PASSIF pFF11 : (i) environ 2 pg du plasmide pKK232-8 (Brosius 1984, Gene., 27, 151-160) sont digérés par les enzymes BamHI et EcoRI et déposés sur gel d'agarose. Le fragment de 0,27 Kb est purifié par électroélutícn et précipité à l'méthanol comme décrit dans l'exemple 1. (;1) Environ 3 ug du plasmide pFC57 sont digérés par les mêmes enzymes et le fragment de 6,3 kb est pu rifié par électroéluticn et précipité à l'éthanol comme dé crit dans l'exemple 1. (iii) Environ 0,5 ijg d'un mélange approximativement équlmola;re des deux fragments sont traités par une unité d'ADN ligase du coliphage T4 et introduit par transformation dans des cellules d'E. coli DH5a compétentes comme décrit dans l'exemple 1. Après étalement sur boîtes LB contenant de la kanamycine (50 pg/ml), plusieurs colonies apparaissent après 24 heures d'incubation à 37'C. (fiv) L'une d'elles, prise au hasard, contient un plasmide dont la carte de restriction (notamment après digestion par les enzymes SalI, PstI, BamHI et EcoRI) correspond à celle attendue d'un plasmide obtenu par recombinuaison in vitro entre les deux fragments purifiés plus haut. Ce plasmide a été purifié à partir d'une culture de 250 ml et passage sur gradient de CsCl, et désigné pFF4. (v) Environ 3 pg du plasmide pFF4 sont aigérés par les enzymes BamHI et FspI, déposés sur gel d'agarose et le fragment de 3,7 kb est purifié par électroélutlon et précipité à l'méthanol comme décrit dans l'exemple 1. On prépare de même ie fragment de 1,7 kb issu de la double di gestion par les enzymes BamHI et XmnI d'environ 4 ctg du plasmide pHP45#. (vi) Environ 0,5 g d'un mélange approximativement équimolaire des deux fragments sont traités par 5 Unités d'ADN ligase du coliphage T4 et utilisés pour transformer des cellules compétentes d'E. coli DH5a comme décrit dans l'exemple 1. Après étalement sur LB contenant de la kanamycine (50 pg/ml) et de la streptomycine (20 pg/ml), des colonies sont obtenues, dont la plupart sont également capable de croître sur LB contenant de la streptomycine (20 g/ml). Le plasmide préparé à partir de l'une de ces colonies, prise au hasard, a la carte physique attendue de pFFlî. EXEMPLE 4 : PROCEDE DE PRODUCTION DU VECTEUR JAUGE DE PROMOTEUR ACTIF pFF16 (l) 50 ml d'une culture de Synechocystis SFCQ5 en phase exponentielle de croissance (D.O. à 580 nm d'environ 1,0) préalablement cultivée en trois cultures successives sur milieu BG 11 modifié (Labarre et al. J. Bacteriol., 1987, 169, 4668-4673) contenant 5 pg/ml de streptomycine, à 30 et sous agitation orbitale (250 rpm) avec un éclairage de 3500 lux (lumière blanche), sont récoltées par lavage dans 10 ml de milieu fra;s et centrifugation à température ambiante (10 minutes a 12 000 g). (ii) Ces cellules sont reprises dans un volume de milieu frais ajusté pour obtenir environ 108 cellules par ml. Un ml de cette suspension est placé dans un tube stérile en pyrex et on y ajoute 1 g de plasmide pFF11 (pu rifié comme décrit dans l'exemple 3) dans 100 ml d'un tampon Tris-HCl 10 mM (pH 7,5 et 0,1 mM en EDTA. On agite doucement pendant quelques secondes et on incube, sans agitation, pendant 90 minutes dans les conditions de lumière et de température décrites plus haut. (ill) Les cellules sont étalées par aliquot de 100 l sur des boftes du milieu BG11 décrit plus haut et incubées dans les conditions de lumière et température déjà décrites pour 24 heures, après quoi, on ajoute sous la gélose 0,4 ml d'une solutlon stock de kanamycine (5 mg/l). Après au moins une semasse d'incubation dans les mêmes conditions, des colonies isolées apparaissent sur les boites purifiées par réisolement sur milieu BG11 contenant 30 pg/ml de kanamycine. (iv) Les cellules de l'une de ces colonies sont prises au hasard sont inoculées dans une culture de 50 ml de milieu BG il modifié et contenant de la kanamyclne (50 pg/ml). Après trois jours sous agitation orbitale dans les conditions décrites plus haut (i), 1 ml de cette culture est transféré dans une culture fraîche. (v > A partir de cette dernière culture de 50 mi. en phase exponentielle de croissance, les cellules sont récoltées par centrifugation et l'ADN plasmidique est préparé selon le protocole de Chauvat et al., 1986, Mol. Gen. Genet 204, 185-191. Environ 0,1 g de plasmide sont obtenus et repris dans 100 ,l du tampon Tris-HCl (pH 7,5) décrit plus haut. Après transformation de cellules compétentes d'E. coli DH5a comme décrit dans l'exemple 1, et étalement sur LB contenant 50 crg/ml de kanamycine, des colonies résistantes à la kanamycine sont observees en 24 heures d'incubation à 37'C. A partir de l'une de ces colonies prise au hasard, l'ADN plasmidique est préparé comme décrit dans l'exemple 1. Sa carte physique est dressée par analyse de restriction en utilisant diverses enzymes dont BamHI et EcoRI et il est observé qu'elle correspond à la structure attendue du plasmide pFF16. EXEMPLE 5 : PROCEDE DE PRODUCTION DU VECTEUR D'EXPRESSION pFF17 : (l) Environ 4 pg du plasmide pMY 12-6 (Taurimoto et al., 1982, Molec. Gen. Genet. 187, 79-86) sont digérés par l'enzyme HinPI et déposés sur gel d'électrophorèse. Le fragment de 0,87 kb est préparé par électroélut;on et précipité à l'méthanol comme décrit dans l'exemple 1, puis traité au fragment de Klenow de l'ADN polymérase I d'E. coli, comme précisé dans l'exemple 1. (11) Environ 1 g du plasmide pFF11 est digéré par l'enzyme BamHI, extrait au phénol puis deux fois au chloroforme, précipité à l'éthanol puis traité par le fragment de Klenow comme décrit dans l'exemple 1. (iii) environ 0,5 g d'un mélange approximativement équimolaire du fragment et du plasmide linéarisé sont traités par 5 unités de l'ADN ligase du coliphage T4, et introduit par transformation dans des cellules compétentes de DH5a comme décrit dans l'exemple 1. Cette ligation permet d'obtenir des colonies poussant sur LB contenant du chloramphénicol (50 pgSml) à 42 C et sensible au même antibiotique à 30 C. Une au moins de ces colonies a été trouvée correspondant à des cellules portant le plasmide pFF17, qui correspond à la ligation du fragment HinPI de 0,87 kb avec pFF11, avec reconstitution d'un seul site BamHI sur les deux sites attendus, le site reconstitué étant celui immédiatement en aval du promoteur pR du coliphage lambda porté par le fragment HinPI, comme le démontre une analyse de restriction du plasmide correspondant. EXEMPLE 6 : PROCEDE DE CHARGEMENT DU VECTEUR D'EXPRESSION pFF17 PAR UN ADN ETRANGER (i) Environ 3 g du plasmide pFF17 sont traités par l'enzyme BamHI, extrait au phénol puis au chloroforme (deux extractions) et précipité a l'éthanol comme décrit dans l'exemple 1. Le culot d'ADN est redissous dans 48 pl de tampon CIP (selon Maniatis, op. oit. p. 133) et traité pendant une heure à 37 en présence de 0,G2 unités de phosphatase d'intestin de veau (CIP) commerciale. Après une nouvelle série d'extraction au phénol puis au chloroforme, l'ADN est reprécipité à l'éthanol. (11) Environ 2 g du plasmide pMC 1871 (Shapira et al., 1983, Gene, 25, 71) sont digérés par l'enzyme BamHI et déposés sur gel d'agarose. Le fragment de 3,2 Kb contenant la séquence du gène lacZ (codant pour la ss galactcsi dase d'E. coli, dépourvu des huit premiers acides aminés et contenant trois codons stop immédiatement à la fin de la séquence codante) est purifié par électroélution, extrac tions au phénol puis au chloroforme et précipitation à l'éthanol, comme décrit dans l'exemple 1. (iii) 0,5 jig d'un mélange approximativement équimolaire est utilisé pour transformer des cellules com pétentes de la souche DH5a. Après étalement sur milieu LB contenant de la kanamycine (50 g/ml) et de la streptomy cine (20 g/ml), on réisole les colonies obtenues après 24 heures d'incubation à 37 .A partir de clones analysés au hasard, on vérifie (par digestion avec diverses enzymes de restriction dont BamHI, qui doit produire un fragment de 3,2 Kb et un fragment de 6,3 Kb) que l'un au moins d'entre eux contient un plasmide de 9,5 Kb ayant la carte de restriction attendue pour un plasmide résultant de l'lntégra- tion du gène lacZ dans le plasmide pFF17. L'analyse par digestion ClaI permet d'identifier dans quelle orientation le fragment lacZ a été intégré ; l'orientation qui permet l'expression sous le controle du promoteur thermorégulable pR étant celie qui produit un fragment Clal de 4,3 Kb et un de 5,2 Kb. (iv) Qn prépare au moins 100 g de plasmide à partir d'une culture de 250 ml du clone correspondant sur milieu LB contenant de la kanamycine (50 g/ml), avec purification du plasmide sur gradient de CsC1. Cet ADN est utilisé pour transformer une culture de 50 ml de Synechocystis SFCQ5 dans les conditions expérimentales décrites dans l'exemple 4. Après étaler..ent des cellules transformées sur milieu BG11, que l'on supplémente en kanamycine après 24 heures d'incubation come décrit dans l'exemple 4. Des colonies sont observées après au moins une semaine dtincubat;on. Après réisolement, une de ces colonies est lno- culées sur le même milieu en culture liquide de 50 ml et son ADN plasmique est préparé selon le protocole de Chauvat et al. (1986, Mol. Gen. genet., 204, 185-191) puis utilisé pour transformer des cellules compétentes de E. coli DH5a. Après transformation sur LB supplémenté en kanamycine, on obtient des colonies après 24 heures d'incubation à 37'. Sur quelques un des clones correspondants, on vérifie la présence d'un plasmide de 12,5 Kb (par carte de restriction en utilisant diverses enzymes mais au moins BamHI et Clal) résultant de la recombinaison in vivo entre le plasmide transformant (portant le gène lacZ intégré dans pFFî7) et le plasmide pFcn5 présent dans la souche de Syne chocysfls. EXEMPLE 7 : EXPRESSION DE LA CHLORAMPHENICOL TRANSACETYLASE DANS LE VECTEUR D'EXPRESSION pFF17 (1, Environ 1 g du plasmide pFF17 sont utilisés pour transformer une culture de 50 ml de Synechocystis pFCQ5 selon le protocole décrit dans l'exemple 4. Après au moins une semaine d'incubation à 30 sous 3000 luxs de lumière blanche, des colonies kanamycine résistantes sont observées. Un certain nombre de ces colonies sont réisolées sur le même milieu puis transférées sur boîtes contenant du chloramphénicol à 10 pg/ml et incubés dans les conditions décrites plus haut, à 30 et 39' La majorité des colonies initialement sélec tionnées pour leur résistance à la kanamycine a acquis une rées tance au chloramphénicol à 39 , tout en restant sensables à cet antibiotique à 30. Ces propriétés indiquent que le plasmide pFF11 (qui porte le gène Kmr ainsi que le gène cat, ce dernier étant sous le contrôle du promoteur pR du coliphage lambda et de son répresseur thermosensible), a acquis une origine de réplication fonctionnelle (correspondant au fragment de 2,3 Kb d'origine cyanobactérienne qui est présente dans pFCQ5) dans Synechocystis sp., par recombinaison homologue avec le plasmide pFCQ5 lnltlalement présent dans la souche SFC#5. De ce fait, le gène cat peut s'exprimer (de manière thermosensiblel dans la cyanobactérie. Ce plasmide recombinant est dénommé pFFî8 par les Inventeurs.Les souches transformées ont toutefois conservées le plasmide pFCQ5, car une fraction des molécules de pFCQ5 n'a pas participé à la recombinaison in vivo et est donc restée intacte. (ii) Pour enrichir les clones de cyanobactéries issues de la transformation en plasmide pFF18 et pour faciliter la perte spontanée du plasmide pFCQ5 subsistant, un des clones résistant à la kanamycine (et au chloramphénicol à 39 ) ) est restrié sur milieu contenant de la kanamycine (300 pg/ml), mais dépourvu de streptomycine, et incubé 5 Jours à 30 . Cette opération est répétée cinq fois. A partir de la dernière sous-culture, on inocule une culture de 50 ml de milieu BG11 contenant de la kanamycine. A partir de cette dernière culture, on extrait l'ADN plasmidique de Synechocystis selon le procédé décrit dans l'exemple 4. L'ADN plasmidique est utilisé pour transformer des cellules compétentes d'E. ccli DH5a (voir exemple 1) qui sont eta- lées et incubées 24 heures à 37= sur milieu LB contenant de la streptomycine (2O pg/ml). La sélection sur streptomycine correspond à des colonies d'E. coli ayant acquis soit le plasmide pFCQ5, soit le plasmide recombinant pFF18. Ce dernier étant également kanamycine résistant, on détermine le pourcentage des molécules de plasmide pFF18 (par rapport à l'ensemble des molécules de pFF18 et de pFCQ5 dans la cyanobactérie à partir de laquelle on a extrait l'ADN) en déterminant la fraction des colonies d'E. coli résistantes à la streptomycine qui sont également résistantes à la ka namyclne lorsqu'on les transfert sur milieu LB contenant ce dernier antibiotique. Ce pourcentage est typiquement de l'ordre de 75 t. On vérifie enfin que les colonies d'E. coli résistantes à la kanamycine et à la streptomycine (et donc supposées héberger le plasmide pFFl8) sont résistantes au chloramphénicol lorsqu'elles sont incubées à 39 ou 42 , mais pas à 30 (iii) A partir d'une telle colonie d'E. coli résistante aux trois antibiotiques (conditionellement en ce qui concerne le chloramphénicol), on inocule du milieu LB contenant de la kanamycine et on prépare l'ADN plasmidique correspondant comme décrit dans l'exemple 1.Ce plasmide est analysé par digestion avec les enzymes de restriction appropriés (mais au moins BamHI et XhoI) pour vérifier qu'il a bien la structure attendue pour pFF18 (la digestion par BamHI donne une bande de 2,9 Kb et une bande de 6,5 Kb). (fiv) A partir du clone de Synechocystis résis- tant à la kanamycine sous-cultivé en (ii), on inocule 100 mi du milieu BG11 contenant de a kanamycine sous 3000 iuxs de lumière blanche et à 30 comme décrit plus haut, jusqu'à ce que la densité optique de la culture à 580 nm soit d'environ 1,0. La moitié de la culture est alors mélangée à 50 ml de milieu frais préchauffé à 48 et transférée à 39 pendant 20 heures, l'autre moitié étant diluée deux fois dans du milieu frais et cultivée comme précédemment à 30'. (v) deux ml de chaque culture sont récoltés par centrifugation en microcentrifuge à 15 000 rpm (deux minutes) et repris dans le même volume de milieu frais. Cette opération est répétée, le culot cellulaire étant cette fois repris dans deux ml de tampon Tris-HCl 50 mM (pH 8,0). Les cellules sont congelées dans un mélange de carboglace et d'éthanol et broyées à la presse d'Eaton sous une pression de 100 kg/cm2. L'extrait est progressivement décongelé dans un bain de glace, centrifugé deux minutes à 10 000 rpm à 4 et le surnageant est conservé pour le dosage des protéines (par la méthode de Bradford, 1976, Anal. Biochem., 72, 248254) et de la chloramphénicol transacétylase (selon Shaw, 1983, Meth. in Enz. 43, 737-755). La culture à 30 ne contient aucune activité chloramphénicol transacétylase détectable (bruit de fond : AinsI que cela ressort de ce qui précède, l'in- vention ne se limite nullement à ceux de ses modes de mise en oeuvre, de réalisation et d'applications qui viennent d'être décrits de façon plus explicite ; elle en embrasse, au contraire, toutes les variantes qui peuvent venir à l'esprit du technicien en la matière, sans s'écarter du cadre, ni de la portée de la présente invention. REVENDICATIONS Plasmide recombinant, caractérisé par les propriétés suivantes - il comprend 6,5 kb, - il est obtenu par traitement d'un fragment de restriction BamHI - XhoI du plasmide pUF311 par le fragment de Klenow de l'ADN polymérase I, avec dégradation d'une partie du fragment à partir du site BamHI et ligation au fragment SmaI de 2 kb contenant le gène Smr, du plasmide pHP45n d'E. coli. - il contient un fragment de 2,3 kb qui correspond à sa partie cyanobactérienne. - il est résistant à la streptomycine (Smr), 2-) Plasm;de selon la revendication 1, caractérisé en ce qu'il a été dénommé pFCQ5 et en ce qu'il est déposé sous le n I-784, en date du 19 juillet 1988 auprès de la Collection Nationale de cultures de micro-organismes tenue par l'Institut Pasteur. 3 ) Plasmide recombinant, caractérisé en ce qu'il présente les propriétés suivantes - il comprend 7,15 kb, - il est obtenu par ligation d'un fragment de restriction BamHI - PstI de 4,4 kb du plasmide pFCLV7 portant les gènes de résistance à la kanamycine (Kmr) et au chlorampénicol (Cmr) et une origine de réplication d'E. coli, avec le fragment BamHI - PstI de 2,75 kb du plasmide recombinant, selon la revendication 1 ou la revendication 2, ui contient la partie cyanobactérienne de 2,3 kb. g ) Vecteur jauge de promoteur, permettant de tester dans des conditions appropriées l'efficacité de séquences promoteurs dans la cyanobactérie et de fournir des vecteurs d'expression, caractérisé en ce qu'il comprend (a) un segment d'ADN contenant une origine de replicataon fonctionnelle dans E. coli et un gène de résis tance à un antibiotique approprié, permettant la sélection de transformants dans la cyanobactérie (b) un gène dépourvu de son promoteur, mais dont l'activité soit aisément détectable soit par un test enzymatique simple, soit par le fait qu'il confère une résistance à un antibiotique, soit les deux (c) immédiatement en amont de ce gène, un site multiple de clonage, dans lequel on peut introauire une séquence de promoteur approprié (d) en amont de ce site multiple de clonage, un signal terminateur de transcription, qui empêche la trans crption à partir de tout autre promoteur qui serait situé en amont de celui introduit au site multiple de clonage, ledit vecteur 3auge de promoteur étant non replicatif tel quel dans la cyanobactérie, et étant désigné ci-après vecteur sauge de promoteur passif. 5 > Vecteur Jauge de promoteur selon la revendication 4, caractérisé en ce que le gène de résistance à un antibiotIque approprié est sélectionné dans le groupe qui comprend, notament, le gène de résistance à la streptomycine, le gène de résistance à la kanamycine et le gène de résistance au chloramphénIcol. 6;) Vecteur Jauge de promoteur selon la revendication 4 ou la revendication 5, caractérisé en ce que le gène dépourvu de son promoteur (b) est sélectionné dans le groupe qui comprend le gène de la chloramphénicol transacétylase, le gène de la 2-galactosldase, le gène conférant une résistance à la streptomycine. 7 ) Vecteur 7auge de promoteur selon l'une quelconque des revendicatlons 4 à 6, caractérisé en ce qu'il comprend (a) un segnent d'ADN contenant une origine de réplication fonctionne'le du plasmide pACYC177 d'E. coli et un gène de résistance â la kanamycine (Kmt), permettant la sélection de transformants dans la cyanobactérie (b) le gène de la chloramphénicol transacétylase dépourvu de son promoteur (c) immédiatement en amont de ce gène, un site multiple de clonage dans lequel on peut introduire une séquence de promoteur approprié (d) en amont du site multiple de clonage, le signal terminateur de transcription de la protéine 32 du coliphage T4. 8 > Vecteur Jauge de promoteur, permettant de tester l'efficacité de séquences promoteurs dans la cyanobactérie et de fournir des vecteurs d'expression, caractérisé en ce qu'il comprend (a) un vecteur Jauge de promoteur passif selon l'une quelconque des revendications 4 à 7. (b) un fragment de plasmide de Synechocystis sp. de 2,3 kb, qui correspond à la partie cyanobactérienne dudit plasmide, ledit vecteur jauge de promoteur étant réplicatif dans la cyanobactérie, et étant désigné ci-après vecteur jauge de promoteur actif. 9 > Vecteur 3auge de promoteur selon la reven dication 8, caractérisé en ce qu'il comprend (a) un segment d'ADN contenant une origine de réplication fonctionnelle du plasmide pACYC177 d'E. coli et un gène de résistance à la kanamycine (Kmr), permettant la sélection de transformants dans la cyanobactérie ; (b) un fragment de plasmide de Synechocystis sp. de 2,3 kb, qui .correspond à la partie cyanobactérienne dudit plasmide ; (c) le gène de la chloramphénicol transacétylase dépourvu de son promoteur (d) immédiatement en amont de ce gène, un site multiple de clonage dans lequel on peut introduire une séquence de promoteur approprié ;; (e) en amont du site multiple de clonage, le signal terminateur de transcription de la protéine 32 du coliphage T4. 10') Micro-organisme obtenu par transformation génétique, caractérisé en ce qu'il est obtenu par transformation de la cyanobactérie Synechocystis sp. par le plasmide recombinant de 6,5 kb, selon la revendication 1 ou la revendication 2. 11-) Micro-organisme selon la revendication 10, caractérisé en ce qu'il a été dénommé SFCQ5 et qu'il est déposé sous le n I-783 en date du 19 juillet 1988 auprès de la Collection nationale de cultures de micro-organismes tenue par l'Institut Pasteur. 12 ) Micro-organisme selon la revendication 10 ou la revendication 11, caractérisé en ce qu'il présente une radlo-réslstance importante. 13) Vecteur d'expression, caractérisé en ce qu'il est constitué par (a) un vecteur jauge de promoteur, selon l'une quelconque des revendications 4 å 9, (b) une séquence d'ADN qui comporte un promoteur approprié, lequel vecteur d'expression est dit non-chargé, c'est-àdire, apte à recevoir au moins une séquence d'ADN ou un gène codant pour une protéine ou un polypeptide donné. 14' ) Vecteur d'expression selon la revendicaton 13, caractérisé en ce qu'il est un vecteur jauge de promoteur passif. 15 ) Vecteur d'expression selon la revendication 13 ou la revendication 14, caractérisé en ce que le promoteur approprié est un promoteur constitutif. 16') Vecteur d'exsression selon la revendication 13 ou la revendication 14, caractérisé en ce que le promoteur approprié est un promoteur dont l'activité est modulée en fonction des conditions de croissance. 17') Vecteur d'expression selon la revendication 16, caractérisé en ce que l'activité du promoteur est modulée en fonction ae la température, sous l'effet d'un répresseur thermosensible dudit promoteur, lequel répresseur est compris dans la séquence d'ADN (b) susdite. 18ç) Vecteur d'expression selon la revendication 17, caractérisé en ce que ledit promoteur est choisi dans le groupe qui comprend le promoteur pL du phage Lambda et le promoteur PR du phage Lambda, le répresseur étant en ce cas produit par l'allèle 857 du gène CI du coliphage Lambda. 19') Vecteur d'expression selon la revendication 16, caractérisé en ce que l'activité du promoteur est modulée en fonction de la lumière, sous l'effet d'un répresseur photosensible propre à la cyanobactérie. 20') Procédé de production du plasmide recombinant de 6,5 kb selon la revendication 1 ou la revendication 2, caractérisé en ce qu'il est obtenu par traitement dtun fragment de restriction BamHI - XhoI de 6,65 kb du plasmide pUF311, par le fragment de Klenow de 1'ADN polymérase I, avec dégradation sur une longueur de 2,1 kb, à partir du site BamHI et ligation au fragment SmaI de 2 kb contenant le gène Smr, du plasmide pHP45Q d'E. coli, puis obtention d'un clone Smr qui possède- ledit plasmide recombinant après transformation dans E. coli. 21') Procédé de production du plasmide recombinant de 7,15 kb selon la revendication 3, caractérisé en ce qu'il est obtenu par ligation d'un fragment de restriction BamHI - PstI de 4,4 kb du plasmide pFCLV7 portant les gènes de résistance à la kanamycine (Kmr) et au chloramphénicol (Cmr) et une origine de réplication d'E. ccli, avec le fragment BamHI - PstI de 2,75 kb du plasmide recombinant, de 6,5 kb selon la revendication : ou la revendication 2, qui contient la partie cyanobactérienne de 2,3 kb. 22Ç) Procédé de production du vecteur jauge de promoteur passif, selon l'une quelconque des revendications 4 à 7, caractérisé en ce que (1) l'on traite le plasmide pFC57 par au moins une enzyme de restriction appropriée, de manière à former un fragment dépourvu de sa partie cyanobactér1enne (2) l'on traite un plasmide d'E. coli contenant le gène Smr par au moins une enzyme de restriction appropriée, de manière à former un fragment de plasmide contenant tout ou partie du gène Smr, ledit fragment devant permettre ultérieurement une recombinaison ln vivo dans la cyanobactérie entre le vecteur passif et la région portant le gène Smr sur le plasmide pFCQ5 présent dans la cyanobactérie. (3) l'on réalise une ligation entre les fragments préparés en (1) et (2) et en ce que l'on prépare ainsi un plasmide dit "intermédiaire" que l'on traite par au moins une enzyme de restriction appropriée de manière à préparer un fragment dépourvu du gène Cmr initialement présent sur le plasmide pFC57. (4) l'on traite un plasmide d'E. coli contenant la séquence codante d'un gène dont l'expression dans la cyanobactérie soit aisément détectable selon la revendication 6 tel que le gène de la chloramphénicol transacétylase, le gène de la ss-galactosidase, le gène conférent une résistance à la streptomycine, par au moins une enzyme de restriction appropriée de manière à préparer un fragment contenant la sequence codante dudit gène, mais non son promoteur, et ayant en amont de cette séquence codante au moins un site unique de clonage permettant d'introduire le ou les promoteurs dont on veut tester l'expression dans la cyanobactérie. (5) l'on réalise une ligation entre les fragments préparés en (3) et (4) et en ce: que l'on prépare ainsi un plasmide qui est le vecteur 7auge de promoteur passif. 23 ) Procédé de production du vecteur Jauge de promoteur passif selon la revendication 22, caractérisé en ce que la ligation des trois fragments constitutifs de ce vecteur est réalisée successivement, l'ordre de ligation des fragments étant indifférent. 24) Procédé de production du vecteur jauge de promoteur passif selon la revendication 22, caractérisé en ce que la ligation des trois fragment constitutifs dudit vecteur est réalisée simultanément. 25 ) Procédé de production du vecteur jauge de promoteur passif selon l'une quelconque des revendications 22 à 24, caractérisé en ce que le site unique de clonage de l'étape (4) est lui-même avantageusement introduit par une ligation supplémentaire ou par mutagénèse dirigée. 26 ) Plasmide recombinant, caractérisé en ce qu'il est un plasmide recombinant intermédiaire, pour la production du vecteur Jauge de promoteur passif, selon l'une quelconque des revendications 22 à 25. 27 ) Procédé de production du vecteur jauge de promoteur actif selon la revendication 8 ou la revendication 9, caractérisé en ce que l'on introduit, in vivre, dans une souche de Synechocystis selon l'une quelconque des revendications 10 à 12, le fragment de plasmide de 2,3 kb, qui correspond à la fraction cyanobactérienne d'un plasmide recombinant, selon l'une quelconque des revendications 1 à 3, dans un vecteur sauge de promoteur passif, lequel fragment est introduit par recombinaison entre les régions homologues du vecteur jauge de promoteur et du plasmide recombinant pFCQ5 présent dans ladite souche. 28 ) Procédé de production dun vecteur d'expression selon l'une quelconque des revendications 13 à 19, caractérisé en ce qu'il est obtenu par ligation d'un fragment de plasmide dE. ccli, obtenu pa: traitement convenable avec au moins une enzyme de restriction appropriée, avec un vecteur jauge de promoteur selon l'une quelconque des revendications 4 à 9, linéarisé par traitement par au moins une enzyme de restriction appropriée et en ce qu'il constitue un vecteur d'expression non chargé prêt à recevoir au moins un fragment deADN étranger que l'on désire faire exprimer. 29') Procédé de chargement d'un vecteur d'expression non-chargé selon l'une quelconque des revendications 13 à 19, en au moins une séquence d'ADN étranger, caractérisé en ce qu'au moins une séquence étrangère est introduite directement, in vitre, dans ledit vecteur d'expression. 30') Procédé selon la revendication 29, caractérisé en ce que la séquence étrangère d'ADN est introduite en amont du gène dépourvu de son promoteur, -tel que défini pour le vecteur jauge de promoteur en (b) de la revendication 4-, dudit vecteur par clonage dans l'un des sites de restriction, en aval du promoteur. 31 ) Procédé selon la revendication 29 ou la revendication 30, caractérisé en ce que lorsque le gène dépourvu de son promoteur est le gène cat, la séquence étrangère d'ADN est introduite en amont dudit gène dudit vecteur, par clonage dans l'un de ses trois sites uniques, BamHI, Sal I et PstI, en aval du promoteur. 32ç) Vecteur d'expression chargé caractérisé en ce qu'il est formé d'un vecteur d'expression non-chargé selon l'une quelconque des revendications 13 à 19, dans lequel a été insérée directement in vitro au moins une séquence d'ADN étranger qu'on désire faire exprimer. 33 ) Processus d'expression de gène étranger, caractérisé en ce qu'il met en oeuvre un vecteur d'expres sion chargé selon la revendication 32 dans un micro-organisme selon la revendication 10 ou la revendication 11. 34') Processus selon la revendication 3, caractérisé en ce que l'expression est réalisée en présence d'un milieu contenant au moins 95 % de t4C, avantageusement sous forme de 14cl2.