Brevet FR2634763A1 — publié le 19900202

La présente invention concerne de nouveaux amino- acides et leurs dérivés, ainsi que de nouveaux peptides. Ces nouveaux amino-acides comportent, dans leur formule, un résidu tyrosine modifiée; quant aux nouveaux peptides, ils comportent, dans leur' séquence, un résidu tyrosine modifiée, avec, en particulier, un enchaînement spécifique d'amino- acides. L'invention concerne également la préparation de ces nouveaux composés, ainsi que leur application comme médicaments, notamment dans le traitement des maladies nerveuses d'origine centrale. La présence d'un résidu tyrosine sulfatée a été mise en évidence dans de nombreux peptides (fibrinopeptide B tBETTELHEIM, F.R., J. Am. Chem. Soc., 76, 2838 (1954)], gastrine EGREGORY, H. Nature, 204, 931 (1964)], cholécystokinine (MUTT, V., Eur. J. Biochem., 6 156, (1968)], et plus récemment, dans plusieurs protéines sécrétrices Sci. USA, _L 34, (1985>]. La sulfetation du groupe -OH phénolique de l'aminoacide tyrosine est vraisemblablement un évènement post-traductionnel qui se produit au niveau des résidus tyrosine de la procholécystokinine [VARGAS, F., Ann. NY Acad. Sci., 448 110 295. 519-522, (1982)]. Enfin, la sulfetation de l'amino- acide tyrosine seul pourrait également exister dans les milieux biologiques [RONDOUIN, G., Neuropept.,.,L 23-28 (1980>3. 1376 FR L'intérât de la ty-rosine sulfatée dans les processus biologiques est donc manifeste. Toutefois, 1' i nt rè est l irté par le foit que la 4-scn -(i^- -H est facilemer.t hydrolysable [BETTELHEIM, F.R., J. Am. Cherm. Soc., 76, 2838-2839, (1954)]3. Une autre modification posttraductionnelle des protéinee, qui s'avère être un processus important dans la régulation cellulaire est la phosphorylation des résidus tyrosines [HUNTER, T., Cell, 2. 647-648 (1980); USHIRO, H., J. Biol. Chem., 255, 8363-8365 (1980)]. La phospho- rylation des protéines, notamment des protéines membranaires (récepteurs. transducteurs, etc..), s'effectue en effet tout particulièrement au niveau de la tyrosine des dérivés peptidiques, sous l'action d'enzymes dénommées tyrosine- kinases, dont certaines correspondraient à des protéines d'exoression des oncogènes [HUNTER, T., Ann. Rev. Biochem., 54, (1985), 897-930]. Par ailleurs, de nombreux agonistes ou antagonistes des récepteurs aux amino-acides excitateurs présentent des structures dérivées des a-aminoacides, caractérisées par une chaine latérale aliphatique terminée par une fonction acide sulfonique ou phosphonique [WATKINS, J.C., TINS, 10(7), Il a maintenant été trouvé de nouveaux amino- acides dont l'intérêt potentiel en tant que médicaments est aussi grand que celui de la tyrosine O-sulfatée ou 0-phosphorylée, mais qui présentent une plus grande stabilité chimique et, par conséquent, sont susceptibles d'avoir une plus longue durée d'action que la tyrosine O- sulfatée ou 0-phosphorylée lorsqu'ils se trouvent administrés dans un organisme vivant. La présente invention concerne également de nouveaux peptides comportant un résidu tyrosine O-sulfatée ou 0-phosphorylé pouvant être modifiés comme dans le cas des nouveaux amino-acides de l'invention et comportant un enchaînement spécifique d'amino-acides, ce par quoi ils sont 1376 FR également susceptibles, de par leur plus grande stabilité chimique et enzymatique, d'avoir une plus longue durée d'action Icrsqu' lS sccnt administrés dans un crg.anise vivant. Parmi les nouveaux peptides selon l'invention, sont plus particulièrement intéressants les peptides présentant des propriétés cholécystokininergiques. Ainsi la présente invention concerne tout particulièrement, mais non exclusivement, de nouveaux peptides présentant des propriétés cholécvstokininerziques, leur préparation et les compositions thérapeutiques qui les contiennent. On sait qu'il existe au moins deux types de récepteurs cholécystokininergiques, de poids moléculaires différents [SAKAMOTO et al., J. Biol. Chem. '258, 12707 (1983); SAKAMOTO et al., Biochem. Biophys. Res. Comm.. 124, 497 (1984)], capables de lier l'octapeptide sulfaté suivant Asp-Tyr(SO3H)-Met-Gly-Trp-Met-Asp-Phe-NH2. On distingue ainsi les récepteurs du système nerveux central et les récepteurs du système nerveux périphérique. Au niveau du système nerveux central, la CCK8 joue un rôle de neurotransmetteur IGOLTERMAN et al., J. Biol. Chem. 255, 6181 (1908)]. De plus, elle est colocalisée avec la dopamine dans certains neurones de la voie mésolimbique tHOKFELT et al., Nature, 285, 476 striatum [FUXE et al., Eur. J. Pharmacol., 67, 329 (1980)]. Les récepteurs périphériques, eux, sont impliqués dans la contraction des muscles lisses au niveau intestinal [HUTCHINSON et al., Eur. J. Pharmacol. , 69, 87 (1981); CHANG et al., Neuroscience Lett., 46. 71 (1984)] et dans la libération d'amylase pancréatique [JENSEN et al., J. Biol. Chem., 257, 5554 (1982)]. 1376 FR L La CCK8, ainsi que d'autres produits structurel- lement apparentés sont connus par la demande de brevet allemand 3 i5 2'R3 uou -VO' '*e actionr_ Par ailleurs, ce peptide possède des propriétés analgésiques (Barbaz et al, Neuropharmacology, 25, 823 (1986)>; il facilite les processus de mémorisation ); il a des propriétés anorexigènes (Gibbs et al. J. Comp. Physiol. Psychol. 84, 488 (1973)), et, également. il accélère la motilité intestinale (Mutt. Gastrointestinal hormones, Jersey Glass. G.B. Ed. Raven Press, New York, pages 169-221 (1980)). On connaît, par le brevet allemand précité, des analogues de la CCKs qui possèdent, dans la séquence peptidique, la tyrosine O-sulfatée comme amino-acide, et qui ne présentent, dans leur séquence, que des amino acides naturels. Toutefois, l'intérêt pratique de tels produits est limité du fait que la liaison -0-S03H est facilement hydrolysable comme l'a rapporté BETTELHEIM F.R., J. Am. Soc., 76, 2838 (1954). De même, ces produits sont rapidement hydrolysés au niveau des liaisons peptidiques par différentes classes de protéases (Durieux et al. Neuropeptides, Z, 1-9 (1986>). Il était donc intéressant de rechercher des produits analogues de la CCK mais présentent une plus grande stabilité, tout en conservant ou en améliorant les propriétés de la CCK8. Il est particulièrement important d'observer que certaines modifications de la séquence des peptides cholecystokininergiques, qui sont effectuées selon l'invention, conduisent à des peptides très affins et sélectifs envers les récepteurs centraux à CCK (type B), par rapport aux récepteurs périphériques à CCK (type A>, les rendant ainsi utilisables comme outils thérapeutiques spécifiques du système nerveux central. 1376 FR La Drésente invention a donc d'abord pour objet des composés chimiques représentés par la formule: R! N - CH- A- W I I R (CH) 2 C2n (I) dans laquelle: R! & R2 représentent chacun indépendamment un atome d'hydrogène; un radical alkyle en C1- C8 à chaîne droite ou ramifiée, éventuellement substitué; un radical cycloalkyle en C3-C ou un reste aromatique 3 7 mono- ou polycyclique, éventuellement substitués; e' dans le cas o R représente un atome d'hydrogène, 1 R2 pouvant également représenter un radical protecteur de fonction amine du type acyle ou du type uréthanne, ou encore un reste d'acide aminé ou un fragment peptidique; * R1 et R2 pouvant également former, avec l'atome d'azote auquel ils se rattachent, un cycle à'5 & 7 chaînons pouvant contenir un autre hétéroatome, et pouvant être substitué par un radical alkyle en C!-C8 à chaîne droite ou ramifiée; - A représente carbonyle ou méthylène; - W représente hydroxy, phénoxy, alcoxy en C1-C8, phénoxy(alkyle en C1-C8). amino, (alkyl en C1-8)- amino éventuellement substitué, di(alkyl en C -C8>- 1376 FR8 1376 FR amino, dont les fractions alkyle peuvent âtre substituées et/ou peuvent former, avec l'atome d'azote autuel elles se rattachent, un cycle à 4-6 che!nons pouvant contenir un autre hétéroatome; * ou lorsque A représente carbonyle, W représente un reste acide aminé ou un fragment peptidique; Y représente un reste choisi parmi ceux de formule: -OOO3(II); -0S020R3 (I) -OPO(R3)2 (III>) -(CH2> -52 OR3 -(IV); et -(CH2) -PO(OR3)2 (V), 2m o: - R représente un atome d'hydrogène ou un radical alkyle en C1-C8 à chaîne droite ou ramifiée, éventuellement substitué; et - m va de 1 à 4; Z représente un cycle à 6 chaînons choisi parmi les cycles cyclohexane, pyridyle ou phényle, éventuellement substitués; et - n va de 0 4; à la condition que lorsque Y représente un reste (II) ou (III), la séquence -AW soit autre qu'une séquence composée d'amino-acides naturels, lesdits composés se présentant sous les formes D, L ou DL, ainsi que leurs mélanges et leurs sels pharmaceutiquement acceptables. Selon la définition de l'invention, par "séquence d'amino-acides naturels) ), on entend l'une quelconque des combinaisons, dans un ordre quelconque, des amino-acides 1376 FR tels que décrit dans l'ouvrage "Biochimie" de Lehninger, page 67, Ed. Flammarion-Médecine-Science. Les radicaux alkyle entrant dans les définitions de R et R peuvent être substitués, par exemple par 1 2 phényle, lui-même éventuellement substitué, par exemple, par halogène. Les restes aromatiques, entrant dans la définition de R1 et R2 sont, par exemple, des restes phényle. Les restes cycloalkyle et aromatiques, entrant dans la définition de R1 et R2, peuvent être substitués, par exemple, par au moins un atome d'halogène. Quand R1 et R2 forment ensemble un cycle contenant un hétéroatome, celui-ci peut être oxygène, soufre ou azote. Les radicaux alkyle, entrant dans la définition de certains substituants indiqués pour W, sont à chaîne droite ou ramifiée. Les radicaux alkylamino et dialkylamino entrant dans la définition de W peuvent être substitués, par exemple, par phényle. Dans le cas o W signifie dialkylamino et o les fractions alkyle forment un hétérocyle contenant un hétéroatome, ce dernier peut être oxygène, soufre ou azote. Dans le cas o le reste alkyle, entrant dans la définition de R3, est substitué, le substituant peut être, entre autres, phényle. Par ailleurs, Z, qui représente notamment phényle, peut être substitué sur le cycle, par exemple, par au moins un substituant choisi parmi halogène, hydroxy, alkyle, alcoxy, hydroalkyle ou alcoxyalkyle. Le radical protecteur de fonction amine du type acyle, entrant dans la définition de R2, est, par exemple, un radical formyle, acétyle, chloracétyle, trifluoracétyle, propionyle, butyryle, isobutyryle, ychlorobutyryle, oxalyle, succinyle, glutamyle, pyroglutamyle, phtalyle, ptoluènesulfonyle. Quant au radical protecteur de fonction amine du type uréthanne, entrant dans la définition de R2, c'est, par 1376 FR D exemple, un radical tert-butylcxycarbonyle, iscpropyloxy- carbonyle, éthoxycarbonyle, ailyloxycarbonyle, benzyicxy- car'nyle, mono- ou polyhalobenzyloxycarbonyle. Une classe particulière de composés de formule (I) est celle dans laquelle: - -A- représente -CO; et - W représente: - B - D - Trp - E - Asp - Phe!NHQ, o !0 - B et E, identiques ou différents, représentent un reste choisi parmi méthionine, norleucine, leucine, sérine. thréonine, allothréonine, cystéine, homocystéine et les dérivés Nméthylés correspondants, les fonctions OH ou SH des restes sérine, thréonine, allothréonine, cystéine et homocystéine ou de leurs dérivés Nméthylés correspondants pouvant être libres ou protégées; - D représente un reste glycine; - Q représente hydrogène ou alkyle en C -Cs, à chaîne droite ou ramifiée, éventuellement substitué, ou encore phényle ou phénylalkyle, dont la fraction alkyle, à chaine droite ou ramifiée, contient 1à 8 atomes de carbone, et dont la fraction phényle peut être substituée; * B pouvant également représenter un reste diamino-1,1 alkyle, diamino-1,1 thiométhylalkyle, diamino-1,1 mercaptoalkyle ou diamino-1,1 hydroxy- alkyle, les fractions alkyle étant en C1-Cs, à chaîne droite ou ramifiée, éventuellement substituées par un reste cycloalkyle ou reste aromatique, et, dans tous ces cas, D représentant nécessairement un reste malonique. Les fonctions OH ou SH des restes sérine, thréonine, allothréonine, cystéine ou homocystéine ou de leurs dérivés N-méthylés, entrant dans la définition de B et 1376 FR E, peuvent être protégées notamment par: i) un radical alkyle contenant 1 à 8 atomes de carbone, à chaîne droite ou ramifiée; ii) un radical phényle, non substitué ou substitué par un ou plusieurs atomes de fluor; iii) un radical benzyle, non substitué ou substitué par un ou plusieurs atomes de fluor; iv) un radical alkylcarbonyle, dont la partie alkyle contient 1 & 5 atomes de carbone, en chaine droite ou ramifiée, ou bien benzoyle, phénylacétyle ou benzhydrylcarbonyle, dont les parties phényle peuvent être non substituées ou substituées par un ou plusieurs atomes de fluor. Les restes entrant dans la définition de B lorsque D représente un reste acide malonique, sont notamment les restes diamino-1,1 pentane, diamino-l, 1 méthyl-3 butane, hydroxy-2 diamino-1,1 éthane, hydroxy-2 diamino-1,1 propane, diamino-l, 1 thiométhy-3 propane, mercapto-2 diamino-1,1 éthane ou mercapto-3 diamino-1,1 propane, dont les fonctions OH ou SH sont libres ou protégées comme indiqué ci-dessus pour les restes cystéine ou homocystéine. Les restes alkyle et phényle, entrant dans la définition de Q, peuvent être substitués par au moins un atome de fluor. La présente invention a également pour objet des procédés de préparation des composés représentés par la formule (I) telle que définie ci-dessus. Dans le cas o Y représente un radical de formule (IV), également telle que définie ci-dessus, ce procédé est caractérisé par le fait que: 1376 FR on fait réacir un suifite alcalin (sulfite de sodium> sur un composé de formule générale (VI): COOR4 R'2NH - C COOR (CH2 CH2 n (VI) (CH2> - X 2m dans laquelle: - R'2 représente un groupe protecteur de la fonction amine, tel que défini ci-dessus pour R2, - R4 représente un radical alkyle; - X représente halogène, tel que chlore; - m, n et Z étant tels que définis ci-dessus; - puis on hydrolyse et on décarboxyle le produit intermédiaire pour obtenir un composé de formule générale (Ia): R'2NH - CH- COOH I (CH I2n (Ia> 2 m 3 (CH2> m- S0$3N - puis on isole le composé obtenu et on le transforme, si on le désire, en un autre composé de formule générale (I>, dans laquelle Y représente un radical de formule générale (IV), par toute méthode connue en soi, et on transforme éventuellement le composé obtenu en un sel pharmaceutiquement acceptable. 1376 FR !! L'action du sulfite de sodium sur le produit de formule générale (VI) s'effectue généralement par chauffage à une température comprise entre 100 et 120'C, en presence d'une base minérale aqueuse, telle que la soude ou la potasse. L'hydrolyse et la décarboxylation subséquentes sont effectuées par chauffage à une température comprise entre 100 et 120'C, en présence d'un acide minéral fort, tel que l'acide chlorhydrique aqueux. La transformation du produit de formule générale (Ia) en un autre produit de formule générale CI) peut s'effectuer par toute méthode connue de l'homme du métier pour transformer, par exemple, un acide carboxylique ou sulfonique en ester, un ester en alcool, en éther ou en amine, ou pour transformer un amide en amine, alkyler ou acyler une amine ou débloquer une fonction amine. Les produits de formule (VI) peuvent être obtenus par action du chlorure de thtonyle sur un alcool de formule générale (VII): COOR4 R' 2NH - C COOR4 (CH) 2n dans laquelle les symboles sont définis comme précédemment, en opérant sans solvant ou dans un solvant organique, tel que le chlorure de méthylène, & la température de reflux du mélange réactionnel. 1376 FR Les produits de formule générale (VII) peuvent être obtenus par action du nitrite de sodium sur un produit de ferm._,e gnmr!e (Ii) COOR R' NH - C \ COOR (CH) 4 2 n (VIII) (CH)- NH- 2 m -2 dans laquelle les symboles sont définis comme précédemment, suivie d'une hydrolyse du composé diazoïque formé intermédiairement, selon les conditions habituelles connues de l'homme du métier. Les produits de formule générale R' NH - C I COOR (CH> 4 2n (CH 2--CN 2 m-i dans laquelle les symboles sont définis comme précédemment, en opérant par toute méthode connue, par exemple par réduction au moyen d'hydrogène en présence de catalyseur, comme le palladium sur noir de carbone, dans un alcool, tel que le méthanol ou l'éthanol. 1376 FR Les produits de formule gEénérale (IX) peuvent être préparés par action d'un produit de formule générale (X): COOR R'2NH - CH (X) COOR4 dans laquelle R'2 et R4 ont les définitions données ci-avant sur un produit de formule générale (XI): X' I (CH2)n 2n (CH> CN 2 m-1 dans laquelle X' représente un atome d'halogène, et les autres symboles sont définis comme précédemment, en opérant selon les conditions habituelles, en présence d'une base organique, telle qu'un éthylate alcalin. La présente invention a également pour objet un procédé de préparation d'un composé représenté par la formule (I) telle que définie ci-dessus, dans laquelle Y représente un radical de formule générale (V), également telle que définie ci-dessus, ce procédé étant caractérisé par le fait que: - on fait réagir un phosphite de formule générale (XII): P(OR' 3)3 (XII) o R'3 représente un radical alkyle, tel que défini précédemment pour R3, 36 1376 FR sur un composé de formule générale (VI): COOR R' NH - C 1\2 COOR (CH2) (CH)- X 2m dans lacuelle: - R'2 représente un radical alkyle tel que défini ci- 2- dessus pour R2; - R représente un radical alkyle; 4- - X représente halogène, tel que chlore; - m, n et Z étant tels que définis ci-dessus; puis on hydrolyse et on décarboxyle le produit ú0 intermédiaire pour obtenir un composé de formule générale (Ib): H2N - CH - COOH (CH2 >n ]2 n (Ib> (CH2)m- PO(OH)2 - puis on isole le produit obtenu, éventuellement sous forme de sel, et on le transforme, si on le désire, en un autre produit de formule générale (I) dans laquelle Y représente un radical de formule-générale (V), par toute méthode connue en soi, et on transforme éventuellement le produit cherché en un sel pharmaceu- tiquement acceptable. 1376 FR ae; euTwp Jna;ze;oJd juDTpuj un -auasjdej : no epTDu lez ap 9AT;v 9acjap un no- HO - d - a - a - O0 - Ho - HN,H : (IIIX) alvIus alnujIoj ap apT;dad un,p e2v;dnoD aI easTIQ. uo - : auvAns uo5bj I ap sgJgdgJd aJ;uuanad Isnssep-TD sTuTjgp anb sle% %ugq b %a 3 la S bHN-@q-sv-3d -co---: o;uasvJdaJ M- * c, a!1 _o0_ a@UasqxdeJ V_. oz ianba! suvp (I> aviguS alnwioj ap sTnpoid saq aupnQ uo%;Duoj aun janbolqgp inod no auTmu aun J8alXD no JaiX/g 'lau;p ua apTum un auJoJsu%; inod no 'ap-; ua' no jaq; ua 'IooDoi ua xa;sa un 'jasa ua anb;uoqdsoqd no anb$iXxoqhiD apTDQ un 'aldwaxa.vd 'JanJoJsuuJx -nod 51 JaT;%9 np auaoq4,[ ap anuuoD apoq% tu a;no4 jgd Janaeajj,s ned lv9u9s aeTnwao} ap a;Tdsoqd np uo;D%,j ú9iú9E que défini ci-dessus pour R2; - G représente OH, ou un radical des formules (IV> ou (V), telles que définies en relaticn avec la formule (I); et - les autres symboles sont tels que définis ci-dessus en relation avec la formule (I); avec le tripeptide de formule (XIV): H-E-Asp-PheNH2 (XIV) o E est tel que défini ci-dessus, ce tripeptide étant éventuellement protégé, - puis on élimine le (ou les) groupement(s protecteur(s), et on isole le produit obtenu à l'état libre ou à l'état de sel, et on le transforme éventuellement en un autre produit tel que défini ci- dessus, par toute méthode connue en soi, et on transforme, si on le désire, le produit final en sel pharmaceutiquement acceptable ou en produit à l'état libre selon le cas. Le couplage des produits de formule générale (XIII) et (XIV) s'effectue par toute méthode connue de l'homme du métier pour condenser un peptide sur un autre peptide. Il est particulièrement avantageux d'utiliser le peptide de formule générale (XIII) sous une forme activée. Comme forme activée, on peut citer le produit de réaction du composé de formule générale (XIII) avec l'hydroxy- benzotriazole, la N-hydroxysuccinimide, le p-nitrophénol ou le tri- ou penta-chlorophénol, préparé en présence d'un agent de condensation. Dans la pratique, il est particulièrement avantageux d'utiliser, comme forme activée, le produit de réaction avec le N-hydroxysuccinimide dans un solvant organique, tel qu'un éther, comme le tétrahydrofuranne, un solvant chloré, comme le chlorure de méthylène ou le 1376 FR _.7 chloroforme, un amide, comme le diméthylformamide, ou un mélange de ces-solvants, en présence de dicyclohexyl- carbodiide, & une temrpérature voisine de O'C. Le tripeptide de formule (XIV) peut être obtenu selon la méthode décrite par RUIZ-GAYO et al., Peptides, À 415 (1985). Le produit de formule générale (XIII) peut être obtenu par couplage du peptide de formule (XV): H-B-D-Trp-OH (XV) o B et D sont tels que définis ci-dessus,sur un amino-acide de formule générale (XVI): R'2NH - CH - COOH I précédemment, en relation avec la formule (I). Le couplage s'effectue par toute méthode connue en soi, en chimie peptidique, notamment par la méthode dont les conditions sont indiquées précédemment, pour coupler ensemble les produits des formules générales (XIII) et (XIV). Le produit de formule générale (XV) peut être préparé selon la méthode décrite par RUIZ-GAYO et al., Peptides,, 415 (1985). 1376 FR Les produits de formule générale (I) dans lesquels l' enchaînement -A-W représente -CO-B-D-Trp-E-A4sp-Fhe-N.HQ (B, D, E et Q étant tels que définis ci-dessus) peuvent aussi être préparés par couplage d'un peptide de formule générale: H-B-D-Trp-E-Asp(OR5>)-Phe-NH-Q (XVII) o: - B, D, E et Q sont tels que définis ci-dessus: et - R5 représente un radical protecteur d'acide carboxylique, et, plus particulièrement, un groupe tert.-butyle ou benzyle. sur un composé de la formule (XVI), telle que définie ci- dessus. Le couplage s'effectue par toute méthode connue de l'homme du métier pour condenser un aminoacide sur un peptide, notamment selon les procédés indiqués précédemment. Le produit de formule générale (XVII) est obtenu après déprotection de la fonction amine terminale de l'hexapeptide: R" 2-B-D-Trp-E-Asp-Phe-NHQ (XVIII) (o R"2 est défini comme pour R2 et R2), obtenu par condensation du dipeptide: R" 2-B-D-OH (XIX) sur le tétrapeptide de formule: H-Trp-E-Asp(OR5>-Phe-NHQ (XX) formules dans lesquelles R"2, B, D, E, Q et R sont tels que définis précédemment. Il est particulièrement avantageux d'utiliser cette méthode de préparation dans le cas o le résidu B est un reste diamino-1, alkyle, diamino-1, thiométhylalkyle, diamino-1, 1 mercaptoalkyle, ou diamino-1, 1 hydroxyalkyle, et le résidu D est un reste acide malonique. Dans tous ces 1376 FR cas, le dipeptide R"2-B-D-OH, présentant alors une liaison rétro-inverso est synthétisé a partir d'un amino-acide R"2-F-OH, -F- étant tel que cet amino-acide soit un précurseur du résidu B tel qu'il vient d'être défini correspondant au reste B selon une transposition de Curtius. La synthèse du dipeptide rétro-inverso s'effectue selon la méthode générale décrite par Chorev et Goodman, Int. J. Peptide Protein Research, 21, 258 (1983). L'amino- acide R" -F-OH eût activé sous forme d'azoture d'acyle au niveau de la fonction carboxylique, puis, par chauffage, il se transpose en dérivé isocyanate, sur lequel on condense l'acide malonique pour conduire au dipeptide retro-inverso R "2-B-D-OH (XIX>. Il est particulièrement avantageux de protéger la fonction amine par un groupe benzyloxycarbonyle. Le tétrepeptide de formule générale J. Med. Chem. 21. 1030 Dans le cas o le groupe Y correspond à la formule générale (II), la fonction hémiester sulfurique est obtenue par sulfatation de la fonction phénol de la tyrosine d'un peptide de formule générale (I), à l'aide du complexe anhydride sulfurique-pyridine. Dans la cas o le groupe Y correspond à la formule générale (III>, la fonction ester phosphorique est obtenue notamment avec le chlorophosphonate de diéthyle selon la méthode Valerio et al page 2609, 1984). Comme le remarquera facilement l'homme du métier, il est nécessaire, pour mettre en oeuvre le prQcédé selon l'invention, d'effectuer, à divers stades de la synthèse, 35.des réactions sur des produits dont les fonctions acides ou amines auront dû au préalable être protégées. Dans ce cas, 1376 FR le radical protecteur sera éliminé au moment le plus opportun de la synthèse, notamment avant couplage des acides amrinés ou des peptides entre eux. A titre non limitatif, on pourra, par exemple, protéger les fonctions de la manière suivante: - Pour les fonctions amine, on pourra utiliser les radicaux protecteurs énumérés pour la définition du symbole R'2 précédent. Lorsque le blocage s'effectue sur un produit intermédiaire et est donc destiné à être éliminé par la suite, il est avantageux d'utiliser le radical tert-butyloxycarbonyle; celui-ci pourra ensuite être éliminé dans des conditions relativement douces, par exemple en milieu acide au moyen d'acide trifluoroacétique dilué ou non, dans le chlorure deméthylène, ou au moyen d'une solution d'acide chlorhydrique gazeux dans un solvant anhydre, tel que le dioxanne ou l'acide acétique; on isole alors souvent le peptide ou l'acide aminé sous forme de trifluoroacétate ou d'acétate. La base pourra être libérée au moment que l'on désire, à l'aide d'une base plus forte telle que la triéthylamine-ou la N,N'-diisopropyléthylamine. - Pour les fonctions acides, on pourra, par exemple, utiliser les radicaux ester habituellement employés en chimie peptidique et facilement éliminables par la suite. Il est particulièrement avantageux de bloquer les fonctions acides sous forme d'esters méthyliques ou éthyliques qui seront ensuite éliminés par saponification au moyen d'une solution aqueuse d'un hydroxyde alcalin, tel que la soude. Lorsqu'en plus de la fonction acide C-terminale, il existe une autre fonction acide portée par la chaîne latérale d'un amino-acide, tel que l'acide aspartique, cette fonction acide pourra être avantageusement bloquée par un 1376 FR v21 autre type de radical afin de débloquer ensuite les fonctions acides sélectivement. Dans le cas de l'acide aspartilque par exemple, on pourra employer un radical benzyloxy que l'on pourra éliminer ensuite par hydrogénolyse en présence d'un catalyseur, tel que le palladium sur charbon actif. Les formes diastéréoisomères des peptides résultant de l'introduction, dans leur séquence, du résidu tyrosine modifiée, dans lequel Y correspond à la formule (IV) ou (V), peuvent éventuellement être séparées selon les méthodes habituelles comme la chromatographie. Les nouveaux produits de formule générale (I), ainsi que les intermédiaires de synthèse, peuvent être purifiés, le cas échéant, par les méthodes habituelles, telles que la cristallisation, la chromatographie ou la formation de sels. Lorsque les produits de formule générale (I) possèdent, dans leur molécule, une fonction amine libre, ils peuvent être convertis en sels d'addition avec les acides, par action d'un acide, en opérant dans un solvant organique, tel qu'un alcool, une cétone, un éther ou un solvant chloré. Le sel précipite, éventuellement après concentration de sa solution; il est séparé par filtration ou décantation. Comme sels d'addition avec les acides, on peut citer les sels d'acides minéraux, tels que chlorhydrates, sulfates ou phosphates, et les sels d'acides organiques, tels qu'acétates, propionates, succinates, benzoates, fumarates, maléates, méthanesulfonates, iséthionates, théophillineacét. ates, salicylates, phénolphtalinates, méthylène bis-P-oxynaphtoates ou des dérivés de substitution de ces composés. Lorsque les produits de formule générale (I) renferment dans leur molécule une fonction acide salifiable, il est parfois avantageux de les isoler sous forme de sel de sodium ou de potassium. Les acides libres peuvent ensuite être, si on le désire, libérés de leurs sels selon les 1376 FR techniques habitueles et être, si on le désire retransformés en un autre sel avec une base. Comme sels avec les bases, on peut citer par exemple, les sels de sodium, de potassium ou les sels d'addition avec les bases azotées tels que les sels *d'éthanclaemine ou de lysine. Les nouveaux composés selon l'invention de formule générale (I) présentent d'intéressantes propriétés pharmacologiques les rendant utiles dans le traitement des maladies nerveuses d'origine centrale, en particulier, dans le cas o ces composés présentent une sélectivité pour les récepteurs de type centraux; les composés de formule (I) présentent également un intérêt pour leurs propriétés analgésiques, anorexigènes et stimulantes de la motilité intestinale. Les amino-acides et leurs dérivés se sont en effet montrés actifs in vitro dans le test d'affinité vis-à-vis des récepteurs aux amino-acides excitateurs. Ces propriétés sont mises en évidence par la mesure du pouvoir inhibiteur la technique décrite par OLVERMAN et al., Nature 307. 460- 462 Les produits selon l'invention présentent une toxicité faible. Leur DL50 est généralement comprise entre et 100 mg/kg par voie intraveineuse et entre 100 et mg/kg par voie sous-cutanée, chez la souris. Les peptides selon l'invention se sont également montrés actifs in vitro dans les tests d'affinité vis-à--vis des récepteurs du système nerveux central et périphérique (pancréas, muscles lisses intestinaux). Ces propriétés sont mises en évidence, d'une part, dons des tests de liaison sur membranes de cerveau de souris, et, d'autre, part dans des tests pharmacologiques de libération d'amylase pancréatique de cobaye et de contraction d'iléon de cobaye. 1376 FR La présente invention concerne également les médicaments constitués par un produit de formule générale (i);, sous forme libre ou sous forme de sel d'addition avec un acide ou une base pharmaceutiquement acceptable, à l'état pur ou sous forme d'une composition dans laquelle il est associé à tout autre produit pharmaceutiquement compatible, pouvant être inerte ou physiologiquement actif. Les médicaments selon-l'invention peuvent être utilisés par voie orale, parentérale, rectale ou sous forme de patches. Comme compositions solides pour administration orale, peuvent être utilisés des comprimés, pilules, poudres (notamment dans des capsules de gélatine ou des cachets) ou granulés. Dans ces compositions, le produit actif selon l'invention est mélangé à un ou plusieurs diluants inertes, tels qu'amidon, cellulose, saccharose, lactose ou silice. Ces compositions peuvent également comprendre des substances autres que les diluants, par exemple un ou plusieurs lubrifiants, tels que le stéearate de magnésium ou le talc, un colorant, un enrobage (dragées) ou un vernis. Comme compositions liquides pour administration orale, on peut utiliser des solutions, des suspensions, des émulsions, des sirops et des élixirs pharmaceutiquement acceptables contenant des diluants inertes, tels que l'eau, l'éthanol, le glycérol, les huiles végétales ou l'huile de paraffine. Ces compositions peuvent également comprendre des substances autres que les diluants, par exemple des produits mouillants, édulcorants, épaississants, - aromatisants ou stabilisants. Les compositions stériles pour administration parentérale peuvent être, de préférence, des solutions aqueuses ou non aqueuses, des suspensions ou des émulsions. Comme solvant ou véhicule, on peut employer l'eau, le propylêneglycol, un polyéthylèneglycol, des huiles végétales, en particulier, l'huile d'olive, des esters organiques injectables, par exemple, l'oléate d'éthyle ou autres solvants organiques convenables. Ces compositions 1376 FR peuvent également contenir des adjuvants, en particulier, des agents mouillants, isotonisants, émulsifiants, dispersants et stabilisants. La stérilisation peut se faire de plusieurs façons, par exemple par filtration aseptisante, en incorporant è la composition des agents stérilisants, par irradiation ou par chauffage. Elles peuvent également être préparées sous forme de compositions solides stériles qui peuvent être dissoutes au moment de l'emploi dans un milieu stérile injectable. i0 Les compositions pour administration rectale sont les suppositoires ou les capsules rectales, qui contiennent, outre le produit actif, des excipients, tels que le beurre de cacao, des glycérides semi-synthétiques ou des polyéthylèneglycols. En thérapeutique humaine, les amino-acides et leurs dérivés, ainsi que les peptides selon l'invention, sont particulièrement utiles dans le traitement et la prévention des affections liées aux destructions neuronales produites par les ischémies avec anoxie, les dommages causés au tissu cérébral par les crises d'hypoglycémie en particulier chez l'adulte âgé, les crises épileptiques et plus généralement les maladies dégénératrices liées au vieillissement (maladie d'Alzheimer) ou génétique (chorée de Huntington) ainsi que pour leur action facilitante sur les processus de mémorisation; et les peptides selon l'invention sont particulièrement utiles dans le traitement des affections du système nerveux central dans lesquelles se produit un dysfonctionnement des voies dopaminergiques par exemple dans la maladie de Parkinson, les chorées, la schizophrénie, les dyskinésies tardives ou les épisodes maniaco-dépressifs. Ainsi, les composés de formule (I) présentent des propriétés antipsychotiques, les rendant utiles comme neuroleptiques; un effet facilitant les processus de mémorisation, les rendant utiles chez des sujets âgés pour pallier le vieillissement des cellules nerveuses; des 1376 FR propriétés analgésiques; ils sont utiles comme anorexigènes, et ils ont des effets stimulant la motilité intestinale, les rendant utiles pour activer le transit intestinal. Les doses dépendent de l'effet recherché et de la durée du traitement; elles sont généralement comprises entre 2 et 10 mg par Jour par voie parentérale pour un adulte en une ou plusieurs prises. D'une façon générale, le médecin déterminera la posologie qu'il estime la plus appropriée en fonction de l'âge, du poids et de tous les autres facteurs propres au sujet & traiter. Pour mieux illustrer l'objet de l'invention, on va en décrire maintenant plusieurs exemples de réalisation. Exemple I: N-acetvl sulfonatométhvl-4 phénylalanine monosodique CH CO - NH - CH - COOH 3 CH2 CH2- SO3Na Etape 1: Préparation de l'acétamido-2 COOC2H5 2 5 / CH3CO - NH -C COOC2H CH2 XO CN 1376 FR A 25 cm d'éthanol anhydre, on ajoute 0,26 g de sodium. Lorsque tout le sodium a disparu, on ajoute à la solution 2,17 g d'acétamido malonate d'éthyle et on chauffe le mélange pendant 15 minutes à une température voisine de 110'C. A la solution légèrement trouble obtenue, on ajoute, en 15 minutes, 1,96 g d'a-bromo p-tolunitrile et on chauffe le mélange réactionnel pendant 17 heures 6 une température voisine de 110'C. Après refroidissement, on ajoute 50 cm d'eau distillée tout en maintenant l'agitation. Le précipité qui se forme est séparé par filtration et lavé avec deux fois 10 cm3 d'eau distillée, puis séché sous pression réduite (1 mmn de mercure; 0. 13 kPa) à 40'C. On obtient ainsi 2,89 g d'acétamido- 2 (cyano-4 benzyl)-2 malonate d'éthyle sous forme de cristaux blancs. Rf: 0,73 [chromatographie sur couche mince de gel de silice; solvant: chloroforme-méthanol COOC2H5 CH CO - NH - C \ COOC2H5 CH2 2 HC1 CH 2NH2 2 2 A une suspension de 200 mg de catalyseur au palladium sur noir de carbone dans 4 cm3 d'éthanol, on fait passer un courant d'hydrogène pendant 1 heure jusqu'à saturation, puis on ajoute une solution de 996 mg d'acétamido-2 (cyano-4 benzyl)-2 malonate d'éthyle dans 3 3 cm d'éthanol, puis 1,5 cm d'une solution aqueuse 1376 FR d'acide chlorhydrique concentrée. Le mélange est hydrogéné sous pression atmosphérique, à une température voisine de 'CC pendant 22 heures. Le mélange réactionnel est alors filtré, le catalyseur est lavé avec 2 fois 8 cm3 d'éthanol. Le filtrat et les liqueurs de lavage sont réunis et concentrés à sec sous pression réduite (20 mm de mercure; 2,7 RPe) & 30-C. Le résidu est repris par 60 cm3 d'eau distillée et la solution obtenue est agitée pendant minutes. Un insoluble est séparé par filtration et le - filtrat est concentré à sec sous pression réduite d'éthyle sous forme d'un solide blanc. Rf: 0,28 [chromatographie sur couche mince de gel de silice; solvant: chloroforme-méthanol-eau-acide acétique-acétate d'éthyle (respectivement 35-15-3-1,5-1 en volumes)]. Etape 3: Préparation de l'acétamido-2 (hydroxyméthvl-4 benzyl)-2 malonate d'éthyle COOC2H5 2 5 CH CO- NH - C COOC H CH2 2 5 Go CH OH A une solution de 2,06 g de chlorhydrate d'acétamido-2 1376 FR aqueuse d'acide chlorhydrique iN, puis avec 100 cm3 d'une solution acueuse de bicarbonate de sodium à 5% et, enfin, avec 100 cm' d'une solution aqueuse saturée de chlorure de sodium, puis séchées sur sulfate de sodium; la solution est filtrée et le filtrat est évaporé à sec sous pression réduite [20 mm de mercure (2,7 kPa), puis 1 mm de mercure (0,13 kPa)] à 40'C. On obtient ainsi 1,67 g d'acétamido-2 (hydroxyméthyl-4 benzyl)-2 malonate d'éthyle sous forme d'un solide blanc. Rf = 0,15 [chromatographie sur couche mince de gel de silice; solvant: hexane-acétate d'éthyle-méthanol (60-40-4 en volumes)]. Etape 4: Préparation de l'acétamido-2 (chlorométhvl-4 benzvl>)-2 malonate d'éthvle COOC2H5 CH3CO - NH - C \ COOC2H5 CH2 1376 FR solide blanc. Rf = 0,62 [chromatographie sur couche mince de gel de silice; solvant: dichlorométhane-méthanol -2 malonate d'éthyle et on chauffe le mélange réactionnel pendant 3 heures à une température voisine de 'C. Après refroidissement à une température voisine de 'C, on amène le mélange réactionnel & pH = 1 au moyen d'une solution aqueuse d'acide chlorhydrique 1N et on chauffe à nouveau le mélange A 120'C pendant 1 heure. Le mélange réactionnel est refroidi à une température voisine de 20'C et repris par 150 cm d'éthanol; les sels minéraux sont séparés par filtration et le filtrat est concentré à sec sous pression réduite (20 mm de mercure; 2,7 kPa) A 30'C. Le résidu obtenu est chromatographié sur une colonne de 2,5 cm de diamètre garnie de 100 g de gel de silice, en éluant avec un mélange de dichlorométhane, de méthanol, d'eau et d'acide acétique (respectivement 70-30-6-3 en volumes>. On obtient ainsi 424 mg de N-acétyl sulfonatométhyl-4 phénylalanine monosodique. Spectre de RMN du proton O2 3 4,11 ppm, m: 1H (-îH -COOH) 6,88 ppm, d: 2H et 6,97 ppm d: 2H m/e = 324 Rf = 0,16 [chromatographie sur couche mince de gel de silice; solvant: dichlorométhane-méthanol-eau-acide acétique (70-30-6-3 en volumes)]. 1376 FR À [ $etnIoA Sú ua 01-06) IOU qgtfu-lu-q%9%uoJoqDTp: uaA aD;AIo: Ts @p ae ap eDu3m aqznoD uns aîqdv2o;vwotID] T 1'0 = jM DuBtq ap-ios un,p amuxoj snos aXq.9 ap;uuolvul Z_(IXzuaq *-t,-jxjpO4QaUOqdqOqd) Z-op6ua^+,aDa,p 2S 9g' T SUTg;uai;qo Uo (s$unlIoA ua 01-06> Ioumq;9u ap o a euBq;ipoiaTq p @ up vTugu un Daau;umnlT ua '( a;;nppi uoTssaJd snos gJod;ag isa al{q4q,p a;Tqdsoqd ap siOxa,-j -sa-naq il:Xuvpued xnljau a. gjjneq-sa aS@ iAj^,,p lTFqdsoqd @p uD j, *p;ea aeTqi; ;,p a;auo-[tn Z-(-Exzuaq ?-i{q @taoJotq) EZ-opi;P: ^W,p Sm 0o ap asugIgux un Z(G HZo00) 0d - HO ZHO HI I0000 I O - HN - OOOHO H000 aiXqaJe,9% ap avuOlzut 3-(lIzuaq (HO)Od -ZHO I0N ' z 1 HOOQ-HO- qUiue uq g-IA;u gUOt4uSoGLq ap apJ.ot4Jlt4: lCax C_ Etape 2:Préeparation du produit attendu A une solution de 27,5 mg d'acétamido-2 (phosphonatométhyl-4 benzyl)-2 malonate de tétraéthyle ainsi 3 3 préparé dans 1 cm d'eau distillée et 1 cm de méthanol, on ajoute 0,24 cm3 d'une solution aqueuse de soude IN et on agite le mélange pendant 3, heures à une température voisine de 20'C. On ajoute alors 4 cm d'eau distillée et 2,.5 cm3 d'une solution aqueuse d'acide chlorhydrique concentré et on chauffe le mélange à reflux pendant 4 heures. Apres refroidissement à une température voisine de 20'C, on ajoute cm3 d'eau distillée et on ajuste le pH à 4 au moyen d'une solution aqueuse de soude à 10%. Après lyophilisation de la solution et purification par chromatographie sur colonne (O 0,9 cm) avec, comme éluant, un mélange de propanol-2 et de NH4OH 28% (respectivement 60-40 en volumes), on obtient 9,5 mg de chlorhydrate de phosphonométhyl-4 phénylalanine sous forme d'un produit blanc. Rf = O, 10 [chromatographie sur couche de gel de silice; solvant: propanol-2 - NH OH 28% (60-40 en 4 volumes>]. Spectre de RMN du proton (270 MHz; D20) 7,0 ppm et 7, 10 ppm: d, 4H (H aromatiques). En opérant comme décrit aux exemples 1 et 2 et par opérations subséquentes sur les produits ainsi isolés, ont été préparés les produits suivants: 1376 FR E>:emDle 3: N-acétyl (sulfonatomnthyl-4 m4thoxv-2 pnénv1lalarine monosodique CH3CO-HN - CH - COOH CH CH30 CH2- SO3Na Rf = 0,24 [chromatographie sur couche mince de gel de silice; solvant: dichlorométhane-méthanol-eau-acide acétique (70-30-10-10 en volumes)]. Exemple 4: N-ac+tyl (sulfonatométhvl-4) cvclohexylalanine monosodicue CH3CO-HN - CH - COOH CH2 C CH 2- SO3Na Rf = 0,27 [chromatographie sur couche mince de gel de silice; solvant: dichlorométhane-méthanol-eau-acide acétique (70-30-10-10 en volumes)]. Exemple 5: N-tétraméthvlène (sulfonato-méthvl-4) phénylalanine monosodique CH3-CH2-CH2-CH2- HN - CH - COOH CH2 CH2- SO3Na 1376 FR Rf = 0,27 [chromatographie sur couche mince de gel de silice; solvant: dichlorométhane-méthanol-eau-acide acótique (70-30-10-10 en vc!umes)3. Exemple 6: Amino-2 (sulfonatométhvl-4 phényl)-3 propanol H2N - CH - CH20H [ CH2 S CH2- S 03H 2 3 Rf = 0,32 Ichromatographie sur couche mince de gel de silice; solvant: dichlorométhane-méthahol-eau-acide acétique (70-30-10-10 en volumes)]. Exemple 7: Chlorhydrate de H N -CH - COOH H2N - CH - COOH HC1 CH2- SO Na 2 3 Rf 0,25 [chromatographie sur couche mince de gel de silice; solvant: dichlorométhane-méthanol-eau-acide acétique (70-30-10-10 en volumes)]. Exemple 8: N-acétyl CH CO- NH - CH - COOH CH2 HC1 O CH2- PO(OH)2 1376 FR Rf = 0,23 [chromatographie sur couche mince de gel de silice;:olvant dichl rom-th ne - 'ol-e "-sc d acétique (70-30-10-10 en volumes)]. Exemple 9: N-ecétyl méthoxysulfonvlméthvl-4 phénylelaninete de méthyle CH3CO-HN - CH - COOCH3 CH2 CH 2- S03CH3 Rf = 0,56 Echromatographie sur couche mince de gel de silice; solvent: dichlorométhane-méthanol-eau-acide acétique (70-30-6-3 en volumes)]. Exemple 10: Chlorhvdrate de (phosphcnoéthyl-4) phénvlalanine H 2N - CH - COOH CH2 HCl CH2- CH2- PO Rf = 0,19 [chromatographie sur couche mince de gel de silice; solvant: dichlorométhane-méthanol-eau-acide acétique (70-30-10-10 en volumes>]. 1376 FR Exemple 11: N-acétyl (diéthylphosphonatométhyl-4 dichloro-2.6) phénylelanine CH3CO-HN - CH - COOH CH2 C;1 C1 Rf = 0,35 [chromatographie sur couche mince de gel de silice; solvant: dichlorométhane-méthanol-eau-acide acétique (70-30-6-3 en volumes)]. Exemple 12: Amino-2 (phosphonométhyl-4 phényl)-3 N-benzvl propenamide H2N - CH - CO - NH - CH2 CH2 ô I CH2- PO(OH)2 Rf = 0,24 [chromatographie sur couche mince de gel de silice; solvant: dichlorométhane-méthanol-eau-acide acétique (70-30-10-10 en volumes)]. Dans les exemples suivants, les acides aminés sont 30. représentés par la forme abrégée conventionnelle. Les autres abréviations ont les significations suivantes: BOC = tertiobutyloxycarbonyle OBZ = benzyloxy Ac = acétyle DCC = dicyclohexylcarbodiimide HOBt = hydroxy-1 benzotriazole 1376 FR TFA = acide trifluoracétique. gNle = gem diamino-1,1 pentane mGly = acide malonique HONSu= Nhydroxysuccinimide Cbz = Benzyloxycarbonyle Exemple 13: Ac-L-Phe(p-CH2e03)-NLe-Gly-Trp-NLe-Asp-PheNH2 et Exemple 14: Ac-D-Phe(p-CH2SO3Ne)-NLeGly-Trp-NLe-Asp-PheNH2 Etape 1 Préparation de Ac-LD-Phe(P-CH2SONa)-NLeG!v-Trp-OC-2H A une solution refroidie à 0'C de 84,2 mg de N-acétyl sulfonatométhyl-4 LD-phénylalanine monosodique (préparée comme décrit à l'exemple 1), dans 6 cm de diméthylformamide, on ajoute successivement 105 mg de H-NLe-Gly-Trp-0C2H5, 41,3 mg d'hydroxy-1 benzotriazole et ,6 mg de dicyclohexylcarbodiimide. Le mélange réactionnel est agité pendant 1 heure à 0'C et pendant une nuit à une température voisine de 20'C. Apres évaporation du diméthylformamide sous pression réduite (1 mm de mercure; 0,13 kPa), on aJoute 10 cm3 d'acétate d'éthyle. Le produit et la dicyclohexylurée précipitent. Après élimination du surnageant, on solubilise le produit dans 40 cm3 d'eau, tandis que la dicyclohexylurée reste insoluble en milieu aqueux. Apres filtration, la phase aqueuse est lyophilisée. On obtient ainsi 147 mg de Ac-LD-Phe(p-CH2 SO3Na)-NLe-Gly-Trp-OC2H5 sous forme de produit blanc. Rf = 0,25 [chromatographie sur couche mince de gel de silice; éluant: dichlorométhane-méthanol-eau-acide acétique 1376 FR EtaDe 2: Préparation de Ac-LD-Phe(p-CH2S Na)-NLe-Gly-Trp-OH mg du produit obtenu à l'étape 1 sont dissous 3 3 dans 8 cm d'eau et 1 cm de méthanol et la solution est refroidie 6 0'C. A cette solution, on ajoute 0,3 cm de solution aqueuse de soude 1N. Le mélange réactionnel est agité pendant I heure à O'C et pendant 3 heures et demie à une température voisine de 20C. Après évaporation du méthanol, on ajoute 5 cm3 d'eau et on élimine le produit non o saponifié par extraction avec 6 cm d'acétate d'éthyle. La phase aqueuse est acidifiée à O'C Jusqu'à pH = 2 avec une solution aqueuse d'acide chlorhydrique 1N. Après lyophilisation, on obtient 90 mg de Ac-LD-Phe(p-CH 2SO3Na)-Nle-Gly- Trp-OH sous forme d'un produit blanc. Rf = 0,10 [chromatographie sur couche mince de gel de silice; solvant: dichlorométhane-méthanol-eau-acide acétique L'absence de racémisation au niveau du résidu tryptophane, à cette étape de la synthèse, est contrôlée par RMN du 1H (270 MHz). Etape 3: Préparation de: Ac-LD-Phe(p-CH2SO3Na)-NLe-Gly-Trp-NLe-Asp -PheNH2,TFA dans 2 cm de diméthylformamide, on ajoute successivement 5 gl de triéthylamine, 20 mg de Ac-LD-Phe(p-CH2SO3Na)-NLe-Gly-Trp-OH (préparé comme décrit à l'étape 2>, 9,2 mg d'hydroxy-1 benzotriazole et 12,4 mg de dicyclohexylcarbodiimide. Le mélange réactionnel est agité pendant 1 heure a 0'C et pendant une nuit à une température voisine de 20'C. Après avoir évaporé le diméthylformamide sous pression réduite (1 mm de mercure; 0,13 kPa), on ajoute 10 cm3 d'acétate d'éthyle puis 25 c'm3 d'éther éthylique. Apres agitation, décantation et prélèvement du surnageant, on lave de nouveau le produit avec 20 cm 1376 FR d'éther. Après prélèvement du surnageant, le produit est séché. On obtient ainsi 26,4 mg de Ac-LD-Phe(p-CH2SO3Ne)-NLe-Gly-Trp-NLe-Asp(OBZ)- PheNH2 Sous forme d'un produit blanc. Rf = 0,38 pour le premier diastéréoisomère. Rf = 0,43 pour le deuxième diastéréoisomère [chromatographie sur couche mince de gel de silice; solvant:dichlorométhane-méthanol-eau-acide acétique-acétate d'éthyle (35-15-3-1,5-1 en volumes)]. i0 Etape 4: Préparation du mélange racémioue des produits attendus Le produit obtenu à l'étape 3 est ajouté à 14,7 mg du même produit provenant d'une autre opération et l'ensemble [soit 41,1 mg de Ac-LD-Phe(p-CH2SO Na) -NLe-Gly-Trp-NLe-Asp(OBZ)-PheNH est 2 3 2 dissous dans 8 cm3 de méthanol. La solution est ajoutée & une suspension de 12 mg de catalyseur à 10% de palladium sur noir de carbone dans 2 cm de méthanol, préalablement satu- rée en hydrogène pendant 1 heure et demie. L'hydrogénolyse est poursuivie pendant 2 heures à une température voisine de 'C, sous pression atmosphérique. Après filtration et rinçage du catalyseur (2 fois avec 6 cm de méthanol), la solution est concentrée sous pression réduite (20 mm de mercure; 2,7 kPa) à 30'C. On obtient ainsi 30,7 mg de Ac-LD-Phe(pCH2S03Na)-NLe-Gly-Trp-NLe-Asp-PheNH2 sous forme de produit blanc. Rf = 0,23 pour le premier diastéréoisomère Rf = 0,20 pour le second diastéréoisomère [chromatographie sur couche mince de gel de silice; solvant: dichloromréthane-méthanol-eau-acide acétique-acétate d'éthyle (35-15-3-1,5-1 en volumes>)]. 1376 FR Etape 5: Séparation des diastéréoisomères La séparation des diastéréoisomères est effectuée sur 2i mg de mélange, par chromatographie sur colonne de 0,9 cm de diamètre, garnie de 15 g de silice, en éluant avec un mélange d'acétate d'éthyle, de pyridine, d'acide acétique et d'eau dans les proportions respectives suivantes: -20-6-11 (Exemple 13). Rf = 0,26 tchromatographie sur couche mince de gel de silice; éluant: acétate d'éthyle-pyridine-acide acétique-eau HPLC: temps de rétention = 9 minutes; éluant: mé-lange de tampon phosphate de triéthylamine (0,025 M; pH = 6,5) et d'acétonitrile (71-29 en volumes); débit = 1,2 cm /minute. Spectre de masse en ionisation FAB: m/e = 1054 (MH). 3,6 mg de Ac-D-Phe(p-CHSO 3Na)-NLe-Gly-Trp-NLe-Asp-PheNH2 Rf = O, 21 [chromatographie sur couche mince de gel de silice; éluant: acétate d'éthyle-pyridine-acide acétique-eau (60-20-6-11 en volumes)]. HPLC: temps de rétention = 7,8 minutes; éluant: 3 mélange de tampon phosphate de triéthylamine (0,025 M; pH = 6,5) et d'acétonitrile (71-29 en volumes); débit = 1,2 cm3 /minute. Spectre de masse en ionisation FAB: m/e = 1054 (MH+) 1376 FR Exem;.e 15: Eoc-Tyr(SC3Na)-gNle-mGiy-Trp-(N-Me)N!e-Asp(Na)-Phe-NH2 Etape 1: Préparation de Boc-(N-Me)Nle-OH A une solution refroidie à O'C de 2,31 g de Boc-Nle-OH dans 20 mi de tétrahydrofuranne et 2,5 ml de diméthylformamide, on ajoute successivement 0,125 g d'hexaoxa-1,4,7,10,13, 16 cyclooctadécane et 0,77 ml d'iodure de méthyle. Le mélange réactionnel est agit=, sous azote, pendant 24 heures, à température ambiante, puis il est acidifié par de l'acide citrique 0,75M juscu'à pH 3. La phase aqueuse est extraite par de l'éther, puis elle est rincée avec une solution aqueuse saturée de chlorure de sodium jusqu'à neutralité. La phase organique est séchée sur sulfate de sodium, filtr-ée et évaporée à sec sous pression réduite (20 mm de mercure; 2,7 kPa); à une température voisine de 40'C pour conduire à 2,32 g de Boc-(N-Me)Nle-OH, sous forme d'une huile. Rf = O, 54 [gel de silice; CHCl3-MeOH (85-15 en volumes)]. Etape 2: Préparation de Boc((N-Me)Nle-Asp(OBzl)-Phe-NH2 A une solution refroidie à O'C de 2,89 g de H-Asp(OBzl)-Phe-NH2, préparé selon la méthode décrite par CHARFENTIER et al. dans "J. Med. Chem., 30, 962, 1987", dans cm3 de diméthylformamide et 15 cm3 de dichlorométhane, on aJoute successivement 0,84 ml de triéthylamine, 1,47 g de Boc(N-Me)Nle-OH, 1,48 g de dicyclohexylcarbodiimide et 0,69 g d'hydroxysuccinimide. Le mélange réactionnel est agité pendant 1 heure à O'C, puis pendant une nuit à une température voisine de 20'C. Le solide formé est éliminé par filtration, et le filtrat est concentré à sec sous pression réduite (20 mmn de mercure; 2,7 kPa), à une température voisine de 40'C. Le résidu huileux est trituré 1376 FR t(SlTuntOA Ue 1-6) touqI;p-moouJoJ lqoTq aoTTs ap 1e] ú*'0 = J D'.001-96 9 3uQpuo0 3ulq' ap-los un,p e@Jo1 snos Z HN-aqd-(lZGO)dsV-alN(aN-N)-d-úL- 3O ap 2 VS'Z 1suTI kua;;qo u0 dsvTIN(eW-N)-H ep S g z ap 0. l aepioJJeu uoT;nlos aun y oz ZHN-@d-(l2So)dsv4l apzo r C n,p eu=xoi s.nc, ' Nwi-^uvV-Nt-i- ap 2 tj ú al BlTanzaJ uo U ;} J:;TTJ Jod PIOS.Sa.P.l.s el súnd 'aXqw;.p ag;DQ,7 ap;a enbTTCqt;pp Jatr,t ap DeAu i t ú9 L9 2 Etape 5: Préparation de H-Trp-(N-Me)Nle-Asp(OeZ)-Phe-NH2.TFA On dissout 3, 18 de Boc-Trp-(N-Me)Nle-Asp(OBZ)-Phe-NH2 dans un mélange refroidi à O'C de 7 cm3 de chlorure de méthylène, 7 cm3 d'acide trifluoracétique et 0,5 cm d'anisole, et on agite le mélange réactionnel sous azote pendant 45 minutes à O'C, et pendant 45 minutes & une température voisine de 20'C. Les solvants sont ensuite évaporés sous pression réduite (1 mm de mercure; 0,13 kPa) à une température voisine de 40'C, et le résidu obtenu est précipité par de l'éther diéthylique. On obtient ainsi 2,70 g de H-Trp-(N)Me)Nle-Asp(OBZ)-Phe-NH,,TFA. Rf = 0,20 [gel de silice; chloroforme-méthanol' (9-1 en volumes>]. Etape 6: Préparation du N-renzyloxvcarbonyl N'-mralonyl-diamrino-1, 1 pente-.e (Cbz-gNle-mOlv-OH) A une solution refroidie à -20'C de 2,65 g de -3 Cbz-Nle-OH dans 25 cm de tétrahydrofuranne contenant 1,37 cm3 de Néthylmorpholine, on ajoute 1,03 cm3 de chloroformiate d'éthyle. On agite le mélange réactionnel pendant 15 minutes à -15'C, et on ajoute 1,3 g d'azoture de sodium en solution dans 10 cm3 d'eau et on maintient sous agitation pendant 30 minutes à O'C. Le mélange réactionnel est extrait avec de l'acétate d'éthyle à O'C, et la phase organique est lavée successivement avec une solution aqueuse saturée de chlorure de sodium, une solution aqueuse saturée de bicarbonate de sodium, puis, à nouveau, par une solution aqueuse saturée de chlorure de sodium. La phase organique est séchée sur sulfate de magnésium, puis elle est filtrée et évaporée sous pression réduite (20 mm de mercure; 2,7 kPa>) à 20'C. Le résidu huileux est repris dans 40 cm de toluène, et il est chauffé à 80'C pendant 10 minutes, puis il est traité par une solution de 3,12 g d'acide 1376 FR malonloue dans 15 cm de dioxanne. Le mélange réactionneli est alors chauffé à 80'C pendant 30 minutes, puis il est maintenu & O'C pendant i Jour. Le précipité est lavé avec du dichlorométhane, et il est purifié par chromatographie flash sur gel de silice, en éluant avec un mélange de chloroforme, de méthanol et d'acide acétique (90-5-5 en volumes), pour conduire & 1,6 g de Boc-gNle-mGly-OH sous forme d'un solide blanc fondant à 142-145'C. Rf = 0,41 [gel de silice; chloroforme-méthanol- acide acétique (90-5-5 en volumes)]. * Etape 7: Préparation de: Cbz-gNle-mGly-Trp-(N-Me)Nle-Asp(OBZ)-Phe-NH. A une solution refroidie A O'C, de 0,46 g de H-Trp-(N-Me>Nle-Asp(OBZ)-Phe-NH2 dans 3 ml de diméthyl- formamide, on ajoute successivement 0,066 cm de triéthylamine, 0,18 g de Cbz-gNle-mGly-OH, 0,066 g d'hydroxysuccinimide et'O, 143 g de dicyclohexylcarbodiimide. Le mélange réactionnel est agité sous azote pendant 1 heure, & O'C, puis pendant une nuit à température ambiante. L'insoluble formé est éliminé par filtration, et le filtrat est condensé à sec sous pression réduite (1 mm de mercure; 0,13 kPa>. Le résidu huileux obtenu est précipité par un mélange d'éther diéthylique et d'acétate d'éthyle. On obtient ainsi, après purification par chromatographie flash sur gel de silice du précipité, en éluant avec un mélange chloroforme-méthanol (97-3 en volumes)', 0,34 g de Cbz-gNle-mGlyTrp-(N-Me)Nle-Asp(OBZ>-Phe-NH2. 3O2 sous forme d'un solide blanc fondant à 190-193'C. Rf = 0,39 [gel de silice; chloroforme-méthanol (9-1 en volumes>]. 1376 FR Etape 8: Préoaration de: H-NNle-m1!y-Trp- (N-Me>Nle-Asp-Phe--NH2. A une solution de 0,32 g de Cbz-gN!e-mGl!y-Trp-(N-Me)Nle-Asp(OBZ)-Phe-NH2. dans un mélange de 5 cm de diméthylformamide et de 5 cm de méthanol, on ajoute 30 mg de palladium sur charbon actif (10% en poids), et on hydrogène le mélange sous pression atmosphérique, à une température voisine de 20'C, pendant 4 heures. Après élimination du catalyseur par filtration, le filtrat est concentré à sec sous pression réduite (1 mmn de mercure; 0,13 kPa) à 40'C. On obtient ainsi 0,23 g de H-gNle-mGly-Trp- (N-Me)Nle-Asp-Phe-NH2. sous forme d'un produit solide blanc fondant à 138-140'C. Rf = 0,5 [gel de silice; acétate d'éthyle- pyridine-acide acétique-eau EtaDe 9: Préparation de Boc-Tyr-RNie-mGly-Trp-(N-Me)Nle-Asp-Phe-NH.2 A une solution refroidie à O C de 0,2 g de H-gNle-mGly-Trp-(N-Me)Nle-Asp- Phe-NH dans 3 cm3 de diméthylformamide, on ajoute 0,12 g de Boc-Tyr-ONp et 0,05 g de HOBt et on agite le mélange réactionnel pendant 30 minutes à O'C, et pendant 4 heures à une température voisine de 20'C. Après évaporation du solvant sous pression réduite (1 mm de mercure; 0,13 kPa), le résidu huileux est précipité par un mélange d'acétate d'éthyle et d'éther diéthylique. On obtient ainsi 0,173 g de Boc-Tyr-gNle-mGly-Trp-(NMe)Nle-Asp-Phe NH2, sous forme d'un solide blanc fondant à 162-164'C. Rf = 0,42 [gel de silice; acétate d'éthyle- pyridine-acide acétique-eau (100-20-6-11 en volumes)]. Etape 10: Préparation du produit attendu: Boc-Tyr (SO3Na)-gNle-mGly-Trp(N-Me)Nle-Asp-Phe-NH2 A une solution de 0,16 g de Boc-Tyr-gNle-mGly-Trp(N-Me)Nle-Asp-Phe-NH2 1376 FR dans un mélange de 2 cm de diméthylformamide et de 5 cm de pyridine, on ajoute 1 g de complexe anhydride sulfurique- pyridine, et on agite le mélange réactionnel sous atmosphère d'azote pendant une nuit & une température voisine de 20'C. Après évaporation du solvant sous pression réduite (1 mm de mercure; 0,13 kPa) à 40'C, le résidu est repris à O'C par cm3 d'eau et la suspension est agitée pendant 3 heures à O+C, en maintenant le pH à une valeur voisine de 7 au moyen d'une solution aqueuse saturée de bicarbonate de sodinm. Le produit en suspension est collecté par centrifugation. Une seconde fraction de produit est obtenue par lyophilisation de la phase aqueuse et précipitation des sels minéraux par le méthanol. Ces deux fractions sont réunies et purifiées par chromatographie sur une colonne de gel de silice, en éluant avec un mélange d'acétate d'éthyle, de pyridine, d'acide acétique et d'eau (60-20-6-11 en volumes>. On obtient ainsi 0,10 g de Boc-Tyr(SO3Na)-gNle-mGly-Trp-(N-Me)Nle-Asp(Na)-Phe-NH2 sous forme d'un solide blanc. Rf = 0,26 [gel de silice; acetate d'éthyle- pyridine-acide scétique-eau (60-20-6-11 en volumes)]. Spectre de masse en ionisation FAB: m/e = 1150 (MH >. HPLC: temps de rétention = 19 minutes; éluant: mélange de tampon phosphate de triéthylamine (0,025M; pH = 6,5) et d'acétonitrile (65-35 en volumes>; débit 1,2 cm3/minute. En opérant comme indiqué aux exemples 13 A 15, on a préparé les produits suivants selon l'une ou l'autre des voies utilisées: Exemple 16: Boc-Tyr(SO3Na)-Nle-Gly-Trp-( Rf: 0,50 [silicagel; acétate d'éthyle-pyridine- acide acétique-eau ] 1376 FR 4D Spectre de masse en ionisation FAB: m/e = 1150 (). HPLC: temps ae rétention = 28 minutes; éluent: mélange de tampon phosphate de triéthylamine (0, 025M; pH 6,5) et d'acétonitrile (65-35 en volumes); débit 1, 2 cm3/minute. Exemple 17: Boc-Tyr (SO3Na)-gNle-mGly-Trp-Nle-Asp (Na)-Phe-NH2 I0 Rf: 0,30 [silicagel; acétate d'éthyle-pyridine- acide acétique-eau (80-20-6-11 en volumes)] Spectre de masse en ionisation FAB: m/e = 1136 (E). HPLC: temps de rétention = 16 minutes; éluant: mélange de tampon phosphate de triéthylamine (0,025M; pH 6,5) et d'acétonitrile (65-35 en volumes); débit 1,2 ml/minute. Exemple 18: Ac-L-Phe (p-CH2SO3Na)-gNle-mGly-Trp- Rf: 0,18 [silicagel; acétate d'éthyle-pyridine- acide acétique-eau (40-20-6-11 en volumes)] Spectre de masse en ionisation FAB: m/e = 1068 (F/q+). HPLC: temps de rétention = 7,2 minutes; éluant: mélange de tampon phosphate de triéthylamine (0,025M; pH 6,5) et d'acétonitrile Exemple 19: Ac-L-Phe (p-CH2 SO 3Na)-gMet-Gl y-Trp-(N-Me)Nle-Asp-Phe-NH2 23 a)-Me-GlTp Rf: 0,28 [silicagel; acétate d'éthyle-pyridine- acide acétique-eau (40-20-6-11 en volumes)] 1376 FR Spectre de masse en ionisation FAB: m/e = 1086 (ME)ri. nFPLC temps de rétention = i6 minutes; éluant: mélange de tampon phosphate de triéthylamine (0,025M; pH 6,5) et d'acétonitrile (65-35 en volumes>. Exemple-. 20: Ac-L-Phe(p-CH2SO3Na)-gNle-mGly-Trp- Rf: 0.1,5 [silicagel; acétate d'éthyle-pyridine- acide acétique-eau (80-20-6-11 en volumes)] Spectre de masse en ionisation FAB: m/e = 1086 f HPLC: temps de rétention = 16 minutes; éluant: mélange de tampon phosphate de triéthylamine (0,025M; pH 6,5) et d'acétonitrile (68-32 en volumes). Exemple 21: Ac-L-Phe(p-CH2SO3Na)-gThr-mGly-Trp-(N-Me)Nle-Asp-Phe-NH2 Rf: 0,23 [silicagel; acétate d'éthyle-pyridine- acide acétique-eau ] Spectre de masse en ionisation FAB: m/e = 1056 (MH"). - HPLC: temps de rétention = 7 minutes; éluant: mélange de tampon phosphate de triéthylamine (0,025M; pH 6,5) et d'acétonitrile (63-37 en volumes). Exemple 22: AcLPe-CSQN Ac-L-Phe(p-CH2SO3Na)-gMet-mGly-Trp- Rf: 0,17 [-silicagel; acétate d'éthyle-pyridine- acide acétique-eau (60-20-6-11 en volumes)] Spectre de masse en ionisation FAB: m/e = 1104 (MH +). 1376 FR o> HPLC: temps de rétention = 15,3 minutes; éluant: mélange de tampon phosphate de tfriéthvlamine (V, 025Y; pH 6,5> et a'acétonitrile (63-37 en volumes). Exemple 23: Mise en évidence de l'activité des composés des Exemples 13 à 16 et 18 1> Tests de liaison: Les analogues de la cholécystokinine sont testés 0 dans les expriences de co.mptitlon vis-à-vis du ligand (3H)propionyl-CCK8 sur cortex et sur membranes pancréatiques de cobaye. Les protocoles expérimentaux de préparation de tissus et les conditions de liaison sont analogues à ceux décrits par PELAPRAT et al., Life Sci., 37Z, 2489 (1985). Les résultats sont exprimés par les constantes d'inhibition KI dans le tableau I suivant. Les valeurs qui figurent dans ce tableau, représentent la moyenne ( de trois expériences indépendantes, chacune étant effectuée en triplicate. La (3H)-propionyl-CCK a été utilisée à la concentration correspondant à sa constante de dissociation c'est-à-dire, 0,2 nM pour le cerveau et 0,1 nM pour le pancréas. TABLEAU I _ __ _ _ Test de liaison Test de liaison Produit testé cortex de cobaye membranes pancréati- ques de cobaye KI -9 9 Exemple 13 3,2 0,59 x 10 1,7 0,2 x 10 8 Exemple 14 1,6 0,21 x 10 1,9 0,4 x 10-8 Exemple 15 0,11 0,02 x 109 1,06 0,07 x 10 9 -9 -9 xemple 16 0,15 0,02 x 10 78 6 x 10 -9 xemple 18 1,3 0,53 x 10 93 4 x 10 2> Test de libération d'amylase pancréatique: La sécrétion d'amylase est mesurée après incubat!on pendant 30 minutes & 37'C d'acini pancréatiques en présence des produits à étudier, selon le protocole expérimental décrit par PEIKIN et al., Am. J. Physiol., 235 (6>, E 743-E 749, (1978). L'activité amylasique est déterminée & l'aide du réactif Phadebas effectuées en triplicate. f TABLEAU II I Sécrétion d'amylase d'acini Produit testé pancréatiques de cobaye Activité agoniste EC50 (M> I.I- 150 Exemple 13 3,3 0,9 x 1010 I -9 xemple 14 1,6 0,4 x 109 Exemple 15 0,35 0,07 x 10-9 2ô 9 Exemple 16 377 118 x 109 xemple 18 642 91 x 109 3) Test d'activité contracturante sur l'iléon de cobaye Ce test est réalisé selon la méthode décrite par HUTCHINSON et al., Eur. J. Pharmacol., 69, 87 (1981). Des bandelettes d'iléon de cobaye de la partie terminale sont rapidement prélevées et fixées dans la cuve d'un capteur isométrique contenant 25 cm3 d'une solution de Tyrode. La - solution est maintenue 6 37'C tout en faisant barboter bulle & bulle un gaz composé de 95% d'oxygène et de 5% de C02. Les composés & étudier sont testés dans les conditions décrites par RUIZ-GAYO et al., Peptides, i 415, Les résultats observés sont reportés dans le tableau III. Les valeurs indiquées dans ce tableau 1376 FR représentent 1a moyenne ( e.s.m. > de trois exDériences indépendantes. TABLEAU II Produit testé Activité contracturante sur iléon de cobaye' Activité agoniste EC50 (M> Exemple 13 3,8 0,3 x 109 Exemple 14 1,8 0,4 x 10 8 0 IXem'Dle 15,0 C, I x 10 Exemple 16 >1000 Exemple 18 >1000 ExemDle 24: Test de stabilité enzymaticue sur les composés des exemples 15. 16, 18 La résistance à la dégradation enzymatique de ces analogues a été testée dans des membranes brutes de cerveau de rat qui contiennent à la fois l'activité aminopeptidasique, thiolprotéasique et enképhalinasique [MATSAS et al. FEBS. Lett. 175, 124 (1984)-; Mc DERMOTT et al. Neurochem. Int. 5, 641 (1983)]. Ces composés ont été testés suivant le protocole décrit précédemment par DURIEUX et al. Neuropeptides Z, 1, (1986). Les valeurs obtenues (temps de 1/2 vie) figurent dans le tableau IV. TABLEAU IV Produit testé Temps de 1/2 vie CCK8 45 minutes Exemple 15 >180 minutes Exemple 16 >250 minutes Exemple 18 >250 minutes F 1376 FR ' Exemple 25 On Drépare une solution injectable contenant 2 mg de produit actif ayant la composition suivante: - N-acetyl sulfonatométhyl-4 phénylalaninate monosodique.................. 2 mg - Eau distillée.QS. SP..........2 cm3 Exemple 26 On prépare une solution injectable contenant 1 mg de produit actif ayant la composition suivante: - Ac-L-Phe(p-CH2SO3Na)-NLe-Gly-Trp-NLe-Asp-PheNH2..1,03 mg -Eau distillée Q:. P......... Q.S.2 cm Exemple 27: On prépare une solution injectable contenant 1 mg de produit actif ayant la composition suivante: - Boc-Tyr(S03Na)-gNle-mGly-Trp-(N-Me)Nle-Asp(Na)Phe-NH2........ 1 mg - Eau distillée................................... Q. S.P. 2 cm Exemple 28: On prépare une solution injectable contenant 1 mg de produit actif ayant la composition suivante: - Al-L-Phe(p-CH2 SO3Na)-gNle-mGly-Trp-(N-Me)NleAsp-Phe-NH2. 1 mg - Eau distillée.................................. Q.S.P. 2 cm 1376 FR REVEZND1 CATI CNS 1 - Composés chimiques représentés par la formule: R1 N - CH- A - W I R2 (CH2 R2 2)n (I) Y dans laquelle: - Ri à R2 représentent chacun indépendamment un atome d'hydrogène; un radical alkyle en C 1- C8 à chaine droite ou ramifiée, éventuellement substitué; un radical cycloaikyle en C3-C7 ou un reste aromatique mono- ou polycyclique, éventuellement substitués; * dans le cas o R représente un atome d'hydrogène, 1 R2 pouvant également représenter un radical protecteur de fonction amine du type acyle ou du type uréthanne, ou encore un reste d'acide aminé ou un fragment peptidique; * R1 et R2 pouvant également former, avec l'atome d'azote auquel ils se rattachent, un cycle à 5 à 7 chaînons pouvant contenir un autre hétéroatome, et pouvant être substitué par un radical alkyle en - C1-C8 à chaîne droite ou ramifiée; - A représente carbonyle ou méthylène; - W représente hydroxy, Fhénoxy, alcoxy en C1-C8, phénoxy(alkyle en C1-C8), amino. (alkyl en C1-C8)- amino éventuellement substitué, di(alkyl en C1-C8)- 1376 FR amino, dont les fractions alkyle peuvent être substituées et/ou peuvent former, avec l'atome d'azote auquel elles se rattachent, un cycle à 4-6. char..ns pouvant contenir un autre hétéroatome; * ou lorsque A représente carbonyle, W représente un reste acide aminé ou un fragment peptidique; Y représente un reste choisi parmi ceux de formule: -OSO OR 2 3II); -OPO(OR) (III 3 2 -(CH) -SO OR IV); et 2 m 2 3 (IV>; et -(CH2)m-PO(OR3)2 V), O: - R3 représente un atome d'hydrogène ou un radical alkyle en C1-C8 à chaîne droite ou ramifiée, éventuellement substitué; et - m va de 1 à 4; 2O - Z représente un cycle à 6 cheaînons choisi parmi les cycles cyciohexane, pyridyle ou phényle, éventuellement substitués; et - n va de 0 à 4; A la condition que lorsque Y représente un reste (II) ou (III), la séquence -AW soit autre qu'une séquence composée d'amino-acides naturels, 3O lesdits composés se présentant sous les formes D, L ou DL, ainsi que leurs mélanges et leurs sels pharmaceutiquement acceptables. 1376 FR 2 - Composé chimique selon la revendication 1, caractérisé par le fait que - -A- repré,s-ente t; et - W représente: -B - D - Trp - E - Asp - PheNHQ, o - B et E, identiques ou différents, représentent un resté choisi parmi méthionine, norleucine, leucine, sérine, thréonine, allothréonine, cystéine, homocystéine et les dérivés N-méthylés correspondants, les fonctions OH ou SH des restes sérine, thréonine. allothréonine, cystéine et homocystéine ou de leurs dérivés N-méthylés correspondants pouvant être libres ou protégées; - D représente un reste glycine; - Q représente hydrogène ou alkyle en C1-C8, à chaîne droite ou ramifiée, éventuellement substitué, ou encore phényle ou phénylalkyle, dont la fraction alkyle, à chaine droite ou ramifiée, contient 1 à 8 atomes de carbone, et dont la fraction phênyle peut être substituée; B pouvant également représenter un reste diamino-1,1 alkyle, diamino-1, 1 thiométhylalkyle, diamino-1,1 mercaptoalkyle ou diamino-1, 1 hydroxy- alkyle, les fractions alkyle étant en C1-C8, à chaîne droite ou ramifiée, éventuellement substituées par un reste cycloalkyle ou reste aromatique, et, dans tous ces cas, D représentant nécessairement un reste malonique. 3 - Composé chimique selon l'une des revendications 1 et 2, caractérisé par le fait que le radical protecteur de fonction amine du type acyle entrant dans la définition de R2 est un radical formyle, acétyle, chloracétyle, trifluoracétyle, propionyle, butyryle, isobutyryle, y-chlorobutyryle, oxalyle, succinyle, glutamyle, pyroglutamyle, phtalyle, p-toluènesulfonyle. 4 - Composé chimique selon l'une des revendicatic.n 1 et 2, caractérisé par le fait que le radical protecteur de fcncticn amine du type ur&thanne entrant dans la dàfinition de B est un radical tert-butyloxycarbonyle, isopropyloxy- crbonyle, éthoxycarbonyle, allyloxycarbonyle, benzyloxy- carbonyle, monoou polyhalobenzyloxycarbonyle, nitrobenzyloxycarbonyle. - Composé chimique selon l'une des revendications 1 à 4, caractérisé par le fait que le reste Z est un reste phényle. 6 - Procédé de préparation d'un composé représenté par la formule (I) telle que définie à la revendication 1, dans laquelle Y représente un radical de formule COOR4 / R' NH - C COOR (CH) 4 m X dans laquelle: - R'2 représente un groupe protecteur de la fonction amine, tel que défini ci-dessus pour R2, - R4 représente un radical alkyle; - X représente halogène, tel que chlore; - m, n et Z étant tels que définis à la revendication; 1376 FR puis on hydrolyse et on décarboxy!e le produit intermédiaire pour obtenir un ccmposé de formule / 4néral ere&pect:avement.la. et R' NH - CHCOOH HoN - CH- COOH (CH2 (CH2 ô (l>(H> I0 I (CH2 S03Na (CH2)m- PO(OH)2 - puis on isole le composé obtenu et on le transforme, si on le désire, en un autre composé de formule générale (I) dans laquelle Y représente un radical de formule i5 générale respectivement (IV) et (V), par toute méthode connue en soi, et on transforme éventuellement le composé obtenu en un sel pharmaceutiquement acceptable. 7 - Procédé de préparation du composé tel que défini à la revendication 2, caractérisé par le fait que - on réalise le couplage d'un peptide de formule générale (XIII) R' 2NH - CH - CO - B - D - Trp - OH (CH2 (XIII) ou un dérivé activé de cet acide, o - R'I représente un radical protecteur d'amine tel que défini ci-dessus pour R2; et G représente OH, ou un radical des formules (IV) ou (V), telles que définies en reltion avec la formule (I); et 1376 FR - les autres symboles sont tels que définis ci- dessus en relation avec la formule (I); avec le tripeptide de formule protecteur(s), et on isole le produit obtenu & l'état libre ou à l'état de sel, et on le transforme éventuellement en un autre produit tel que défini ci- dessus, par toute méthode connue en soi, et on transforme, si on le désire, le produit final en sel pharmaceutiquement acceptable ou en produit A l'état libre selon le cas. 8 - Procédé selon la revendication 7, caractérisé par le fait que le produit de formule générale (XIII) est obtenu par couplage du peptide de formule (XV): H-B-D-Trp-OH (XV> o B et D sont tels que définis ci-dessus, sur un amino-acide de formule générale (XVI): R' NH - CH - COOH 2 (CH) 1 2n C(XVI) G dans laquelle: - G représente OH, ou un radical des formules (IV> ou ( précédemment, en relation avec la formule (I). 1376 FR 9 - Procédé de préparation des composés de formule (I) conformes à la revendication 2, caractérisé par le fait cue ces composs snt préparés par c- ge un peptide de formule générale: H-B-D-Trp-E-Asp(OR5)-Phe-NH-Q (XVII) o: - B, D, E et Q sont tels que définis ci-dessus; et - R5 représente un radical protecteur d'acide carboxylique, et, plus particulièrement, un groupe tert.-butyle ou benzyle. sur un composé de la formule (XVI), telle que définie ci- dessus. - Composition pharmaceutique, caractérisée par le fait qu'elle contient au moins un composé tel que défini à l'une des revendications I à 9, en association avec un ou plusieurs diluants ou adjutants compatibles ou pharmaceutiquement acceptabes. Il - Composition selon la revendication 10, caractérisée par le fait qu'elle est destinée au traitement des maladies nerveuses d'origine centrale, à pallier le vieillissement des cellules nerveuses, au traitement de la douleur, et qu'elle est appliquée comme anorexigène, et comme agent stimumlant la motilité intestinale. 1376 FR