Brevet FR2635266A3 — publié le 19900216

FR 2635266 A3 19900216 FR 8911952 A 19890913 STRUCTURE FONDAMENTALE DE L'ACTION DES RECEPTEURS ET SES CONSEQUENCES PRATIQUES RADICALEMENT IMPORTANTES CONTENANT LE GAMMA DES PREPARATIONS CONTRE VIRUS (HIV COMPRIS), CANCER, SPHINGOLIPIDOSES, BACTERIES, INSECTES, PROTOZOAIRES ET HELMINTHES ET POUR ANESTHESIE La cormnunication joue un rôle indispensable dans la vie cellulaire d'un organisme où il y en a des milliards.Pour atteindre cet objectif, les molécules spéciales et sélectives, se trouvant au général a la surface membra naire (je n' examine pas ici les hormones stéroides et d'autres hormones d'action analogue), réagissent avec les messagers de communication (ligands): les hormones, les neurotransmetteurs, les facteurs de croissance; ceux-ci declenchent la séquence des événements (signal) qui induit la réponse cellulaire adéquate à l'état d'un'organisme (comme la mitose, la synthèse des molécules, la différenciation, ltexocytose, l'endocytose). Etant le sujet-clé de nombreuses disciplines biologiques et médicales (endocrinologie, pharmacologie, immunologie, physiologie, neurologie, toxicologie, pathologie), cette question attire l'attention de très nombreux laboratoires de tendance basique et appliquée des Universitiés, des Instituts et des Hopitaux du monde entier.Malgré la récente explosion spectaculaire dans de nouvelles connaissances (ou les informations vieillissent en 2 ans seulement) dans la structure établie et dans le mécanisme de l'action (et de la généralisation a partir de ceux-ci) des récepteurs, des protéines G et du second messager avec le phosphatidyl phosphoinositol (PPI) et les protéines kinases, on n'a pas encore de connaissance approfondie des événements qui se passent à partir des récepteurs membranaires et, par conséquent, la cause de la présence de nombreux composants dans la membrane cellulaire reste aujourd'hui un vrai mystère. De nombreux points concernant la transformation du signal a travers la membrane restent à developper. Heureusement de nombreux résultats scientifiques divergents,concernant ce domaine-clé des Sciences de la vie et une série de mes propres travaux-clés dans le domaine du debut du signal dans la cellule et dans la compréhension de l'action du signal m'ont permis de créer et développer une structure fondamentale et originale d'une action des récepteurs. Les dérangements pendant les actions de ces substances physiologiquement importantes doivent conduire (et malheureusement ont conduit) aux nombreuses maladies existantes.Comme conséquence de cette structure fondamentale je presente ici les developpements pratiques très importants et urgents: les préparations contre une dizaine de maladies mentales des nouveauxnés, contre le cancer, et pour l'exécution de l'anesthésie et contre les virus et les bactéries et même contre les insectes, protozoaires et les helminthes. Je presente aussi la transcription et translation directe des anticorps la plus effectifs dans l'organisme utilisant les génomes des virus et des bactéries inoffensifs. Ma structure originale et fondamentale est expose ci-dessous. Après l'interaction du ligand avec le récepteur il y a un changement de conformation du récepteur (1,2). Il doit être suffisamment large pour permettre selon la structure proposée aux chaînes des glucides de récepteur-glycoprotéine d'avoir l'interaction avec les glucides de glycolipides (3). Le fait de la présence des similitudes fortes des structures glucidiques terminales des glycoprotéines membranaires avec les structures glucidiques des glycolipides(gangliosides et cérébrosides) (4,5) peut permettre leur interaction plus forte a cause de la meilleure interaction des groupes hydroxyles des structures-"chaises", celles-ci devant avoir une superposition correspondante.Dans les systèmes des glucides ayant les liaisons H fortes, les mo lécules du solvant (l'eau), en général, sont exclues pendant cette interaction (6,7). Je considère que les molécules des gangliosides sont les premières de tous les glycolipides (ou plutôt des glycosphingolipides) qui réagissent avec les récepteurs-glycoprotéines, parce que d'une part il y a des interactions spécifiques et l'attraction électrostatique des charges négatives des gangliosides qui peuvent reagir avec les charges négatives des protéines au moyen des ponts de Ca2+ (8)./ Le degré de l'association de Ca2+ avec les ganglio- sides est semblable a celui des phospholipides négatifs (9) permettant aux molécules-"chaises"de se rapprocher et d'avoir des interactions plus fortes./ D'autre part la plus grande hydratation et la plus grande dimention du groupe-tête doivent amplifier l'effet du signal faisant du ganglioside un premier réactif plus sar /la quantité d'eau congelée pour des gangliosides est beaucoup plus importante que pour les cérébrosides (10)/.Le fait clair, qu'a partir des gangliosides, il y a déjà la formation de "patches" et de "caps" avec les anticorps contre les groupes de colorants conjugés avec ces gangliosides et évidemment se trouvant uniquement sur les gangliosides des lymphocytes T (11), argumente aussi pour la propriété des gangliosides. La participation des gangliosides (les antigènes I et i) dans le processus de "capping" sans création de liens directs avec le ligand Concanavaline A (Con A) indique la meme conclusion (12).Le fait d'une action primaire des toxines, des virus et probablement d'autres agents est devenu ambigu d'après de nombeuses expériences (13,14) qui indiquent les glycoprotéines comme de veritables récepteurs des virus et des toxines (c.à.d. plus proche de monschéma proposé,reg. plus bas, s.v.p.). Ainsi on peut expliquer. déja les expériences de Kanfer J.N. et al (15), qui n'étaient pas facilement compréhensibles jusqu a maintenant. Avec les concentrations faibles de toxine cholérique il n'y avait pas d'effet de la toxine parce que ces concentrations n'étaient pas suffisantes pour réagir avec les glycoprotéines correspondantes (concentration molaire plus faible que celle des gangliosides correspondantes). D'autre part avec des concentrations très fortes de toxine, il y avait apparemment un blocage des groupes nécessaires de tous les gangliosides par la molécule de toxine relativement grande. Cette nouvelle explication interprète facilement la suppresion du signal avec les quantités excessives de Con A. Ce fait est le sujet de nombreuses discussions depuis longtemps (16).Les expériences avec les ligands mulitivalents, réagissant seulement contre les gangliosides, montrent l'absence des amas /en différence avec le cas des anticorps contre les groupes de colorants conjugés avec ces gangliosides (11)-reg.plus haut, s.v.p./ et confirment cette interprétation (14,17). De plus les expériences concernant une action positive des molécules monovalentes de Con A et Ricine (RCA 60) (18,19) sont explicables en considérant le changement de conformation de la protéine-récepteur (comme l'action de l'hormone monovalente). Les expériences concernant le mécanisme de l'action de la toxine pertussis confirment cette explication. Selon ces expériences (20) l'hydrolyse de l'acide sialique et des groupes de N-acetylglucosamine (3ème de ltextremite de la chaîne glucide de récepteur-glycoprotéine) diminue fortement l'affinité de la chaîne glucidique pendant l'interaction avec la toxine. Mais l'hydrolyse du glucose (2eme de I'extremité) ne change pas cette affinité. De plus grace a la synthese de cette chaîne glucidique sans ce glucose, l'affinité mentionnée a même augmenté.Sachant, par exemple, que la quantité optimale des glucides dans le site actif des anticorps est approximativement de 5 on peut supposer que seuls ces groupes (acide sialique et N-acetylglucosamine) interagissent avec le site actif de la toxine en se rapprochant et en provoquant une plus forte tension de la chaîne parce que les groupes intermediaires du glucose apparemment ne font pas cette interaction. Maintenant je voudrais montrer pourquoi les glycosphingolipides membranaires ont les propriétés particulaires qui leur permettent d'être des initiateurs lipidiques du signal dans la membrane. L'observation d'un comportement des sphingolipides naturels lors des temperatures de transition montre qu'il y a la présence d'un état métastable. Cet état métastable est caractérisé par la participation des liaisons H interlipidiques (21-23). La phase la plus stable est caractérisée par l'hydratation des lipides avec les groupes de la surface et par la rupture des liaisons H intermoléculaires (24). Les sphingolipides ont les groupes dans leur échine qui sont des donneurs et des accepteurs des liaisons H.L'orientation de ces liaisons H des donneurs et des accepteurs (les groupes amides et les groupes hydro xyles) permet a ces molécules l'interaction laterale avec les autres molécules lipidiques (21). Si ces groupes OH sont exposés l'eau enrobant les lipides membranaires, les liaisons H individuelles entre les molécules (lipide-H2O) n'ont pas besion d'être fortes pour se refermer (lipide-lipide) d'une molécule a une autre (25). Les ségrégations latérales des sphingolipides formant des amas sont bien connues (26).Mais cet état métastable "magique" n'est pas seulement la propriété des sphingolipides parce que même la phosphatidyl choline (PC) peut avoir la phase métastable semblable à celle de glycosphingolipides après transformation de sa chaîne acylique dans la chaîne "acyl-carbamoyl" qui se manifeste comme liaison H-donneur via le groupe .NH (27). C. .d. la phase métastable des sphingolipides est caractéri sée par la liaison H entre les molécules mais pas par une conformation spécifique ou par une configuration stérique des groupes-tetes ou de l'échine des ceramides. ...Dans la structure fondamentale proposée je suppose que, après cette forte déshydratation produite a cause des interactions plus fortes des glucides de gangliosides avec ceux de glycoprotéines, il y a une transition des molécules lipidiques des gangliosides dans un état caractérisé par les liaisons H entre les chaînes d'après le changement de conformation et très probablement une déshydratation provoquée par les interactions indiquées plus haut.Le fait de l'inhibition totale de l'aggrégation des plaquettes seulement après le remplacement de l'eau par D20 sans le changement de l'associ- ation du ligand (28), prêche en faveur de l'importance mentionnée de l'eau dans la transmission du signal à travers la membrane, bien que je ne puisse pas insister, selon la structure proposee, sur l'issue de toutes les expériences semblables. Un autre fait important et pas accidentel est très interessant. Les régions des récepteurs, comme le récepteur muscarinique (29), le récepteur B-adrénergique (30), ou le récepteur de la lipoprotéine de faible densité (LDL) (31) /qui participe aussi dans la transmission du signal (32)/, se situant près des places d'une fixation des glucides et ayant l'interaction avec les glycosphingolipides, ont trop peu de charges.Ceci doit aider a la déshydratation profonde mentionnée et indique la justesse de la structure proposée. Les resultats, obtenus avec la sonde paramagnétique, indiquent la redistribution des liaisons H des céramides et des cérébrosides après l'interaction des ligands (la Con A et la phytohémagglutinine) avec leurs récepteurs (33). Le fait que des gangliosides (la chaîne glucidique du ganglioside intacte avec la chaîne lipidique dégénérée) agglomérent ("cocap") avec les "caps" des immunoglobulines membranaires avec leurs anticorps sur des lymphocytes (34), confirme l'ordre des événements indiqués ci-dessus. Les résultats de la réso nance magnétique nucleaire (35) montrent la dependence entre la conformation de la chaine acylique et la groupe-tête de glucides dans les glycolipides. On trouve la même dépendance entre la conformation du groupe-tête et la chaîne lipidique dans les expériences avec les molécules synthétiques et naturelles de sphingomyéline (SM) avec les longeurs des chaînes différentes. Seulement les molécules de stearoyl-SM ont eu un état de la transition métastable (23). La dépendance de l'accessibilité des cérébrosides a la matrice lipidique à leurs anticorps (36) montre aussi la validité de l'interprétation ci-dessus. On peut supposer que, après cette interaction des glucides avec la déhydratation mentionnée, les parties lipidiques des gangliosides peuvent plus facilement avoir des interactions qui correspondent a un état métastable des liaisons H intermoléculaires. Cette "cristalisation", a partir d'un centre protéinique (récepteur) après une interaction des gangliosides, qui ont un plan structural des glucides semblable, doit continuer avec les cérébrosides. On vois ici encore une confirmation. La majorité des cérébrosides ont le glucose et le galactose dans le groupe-tête. On les trouve dans la partie proximale des gangliosides, libres de l'interaction avec glycoprotéines, avec une autre confirmation.Je propose que les cérébrosides constituent la partie de ce "cristal" (plaque) métastable dans le deuxième "circle concentrique" autour du récepteur par les interactions des glucides et, encore plus important, par les liaisons H interlipidiques. Apparemment a partir d'une dimention (qui reflète des changements plus grands accompagnant la soustraction de l'eau de la partie correspondante de la membrane) les interactions lipidiques sont suffisantes parce que les lipides comme céramide (sans les glucides) sont agglomérés dans la plaque (33,37,38) (il nty a que les quantités faibles du céramide dans la membrane naturelle, reflétant le fait qu'il est le produit du métabolisme). La molécule de SM avec la longeur de la chaîne acylique 18C (18:0), qui a la phase métastable mentionnée et caractérisée par les liaisons H intermoléculaires (23) , peut vraisemblablement participer par sa partie lipidique à cette plaque agrandissant par des liaisons H interlipidiques. Mais les autres molécules naturelles de SM ne peuvent pas, apparemment, y participer (39). Les resultats de RMN indiquent la présence de liaisons H intramoléculaires dans ces molécules (40). Très vraisemblablement cela reflète l'absence d'un état métastable des molécules de SM naturelles (23) et la constance d'un spécimen de la diffraction des rayons X des bicouches de SM exposées aux humidités différentcs (41). Et apparemment pour "attirer" toutes les molécules de SM membranaires la Nature a trouvé une solution originale. On sait que les SM des membranes des mammifères ont leur temperature de transition à près de 37c(42).On sait tgalement que plus de 50% de SM de la mem. brane plasmique ont sur la longeur de la chaîne acylique plus de 20 carbones (43).Et en plus l'empaquetage des chaînes lipidiques de SM dans la bicouche est très dense et il n'y a aucune interdigitation des molécules adjacentes dans la même couche (41). C. .d. il y a une forte dissipation de l'énergie libre pendant la transition de phase de SM. Et quand avec les liaisons H intermoléculaires les molécules de SM (qui ont la longeur des chaînes 18:0 et la tempe rature de transition évidemment de plus de 370 C) sont pris dans la plaque mentionnée, le reste des autres molécules de SM doit avoir Itétat du gel sans influences complémentaires de près des mêmes 37"C "cellulaires".Il est probable que la mosaïque organisée des molécules de SM avec les chaînes très et moins longues doive surgir dans la plaque autour du récepteur. La mosalque des chaînes grasses ayant "le cercle concentrique"décrit peut apparaître et autour des dimères des récepteurs du facteur de croissance epidermique (EGF) et de l'insuline (44) avec les dimensions plus petites, ces dimères étant formés après l'action du ligand sans négation du changement de conformation indépendant (45). Mais apres cette création des domaines de SM (même comme"anneau extérieur") on peut naturellment supposer qu'il y a une interaction du cholestérol avec SM parce que l'interaction préférentielle du cholestérol avec SM (25,46) peut avoir lieu seulement avec les domaines de SM mais pas avec les molécules de SM individuelles (47). Je suppose que cette redistribution du cholestérol dans le plan membranaire doit conduire à la diminution appréciable de la quantité de cholestérol dans le reste de la.membrane qui doit provoquer la séparation de phases (48) après l'interaction d'un ligand avec le récepteur (49).En conséquence on peut supposer la création de zones fluides avec les phospholipides qui ont une affinité faible pour le cholestérol ou à cause de leurs chaînes lipidiques ou à cause de leurs têtes. Par exemple, la phosphatidyl éthanolamine a une telle affinité au cholestérol (50) et doit apparemment être dans cette zone lipidique. La publication de Broekman et al (51) selon laquelle la phospholipase A2 agit préférentiellement sur PE pendant l'activation des plaquettes argumente pour cela.Le fait de la présence de seulement 10% de l'acide arachidonique (AA) dans la couche extérieure de la quantité de AA totale dans la membrane (52) et la présence d'au moins 50% de AA dans la couche extérieure de la quantité totale de AA dans PE (52) /don- nuant une plus forte garantie de l'action de la séparation de phases enregistrée par Zagyansky et Jard (49)1 confirme la propagation mentionnée. Les molécules de PC avec les chaînes cis et bien insaturées comme AA (20:4) doivent avoir une faible affinité au cholestérol parce que, dans le cas de la bicouche de PC, le cholestérol s'étend seulement jusqu'au douzième atome C (46). Il est évident que les différents coudes de AA sont un obstacle aux meilleures interactions avec le cholestérol.Les expériences avec les antibiotiques (polyenes) qui font les interactions spécifiques avec le cholestérol et même selon Schroeder (53) l'elimine de la membrane en faisant le complexe,confirment aussi la validité de la structure proposée avec la participation du cholestérol. Selon Zagyansky et Jard (19), l'amphotéricine B élimine les effets biologiques et physiques de l'action des ligands et selon Elliams et Lefkowitz (54), la molécule de filipine fait un obstacle à l'association de l'agoniste avec le récepteur B-adrénergique. La présence du site actif du récepteur de ce type près de la membrane biologique (55,56) a facilité apparemment l'obtention de ces résultats. Selon H.McConnel et collaborateurs (57), le cholésterol s'accumule près des interfaces: liquide-solide pour diminuer la tension de surface. Cette conclusion de McConnel et collaborateurs coincide avec ma suggestion que justement les molécules de SM, qui ont l'affinité supérieure au cholestérol et qui n'ont pas de liaisons H intermoléculaires, doivent se trouver près de la frontière liquide-solide. La conclusion que SM ait une liaison intramoléculaire entre le groupe 3hydroxyl et l'oxygène de la partie ester (40) et la conclusion que le cholestrérol fasse l'interaction avec le carbonyl du groupe amide des sphingolipides par la liaison H (58,59), confirme le fait de l'interaction plus forte du cholestérol avec SM. D'un autre côté très vraisemblablement, les groupes NH des glycosphingolipides participent aux interactions intermoléculaires des lipides, et leur interaction avec le cholesterol doit être plus faible. L'interprétation de la confirmation expérimentale de cette création de zones plus fluides autour de la plaque avec le récepteur est concluable d'après les expériences de Curtain et (33). (La PC avec une chaîne modifiée n'a pas dû avoir avoir l'interaction forte avec le cholestérol et son microenvironnement devient plus fluide après le signal). Huganir et Greengard (60) ont classifié les récepteurs membranaires en 3 groupes: 1)les récepteurs qui activent des effecteurs par les protéines G, 2) les récepteurs qui ont les tyrosine kinases, 3) les récepteurs qui font la conductibilité des ions par les changements de conformation. /Selon (61),les métabolites de l'acide arachidonique ne fonctionnent pas comme hormones circulantes mais sont plutôt les parahormones ou autocoids et font leur action au niveau des seconds messangers. Reg.,s.v.p., aussi (62,63)/. Les récepteurs du 3ème groupe (comme l'acetylcholine récepteur nicotinique) ne sont pas le sujet de cette invention quoique la partie essentielle des conclusions de la structure proposée est applicable pour l'action de ces récepteurs .D'un autre côté on peut diviser le premier groupe en deux sousgroupes: les récepteurs qui activent le cycle de phosphatidyl inositols et les récepteurs qui activent ou inhibent l'enzyme l'adényl cyclase.-Outre cela, les protéines G doivent apparemment participer à l'action des récepteurs du deuxème groupe (64). En réalité la classification est beaucoup plus compliquée parce qu'il y a la présence de l'interaction homogène et hétérogène des récepteurs (60,65-67) ou par exemple, il y a la présence des formes différentes des isorécepteurs avec des mécanismes d'action différents /(68) ou par exemple (69)/ ayant l'interaction entre eux. En conséquence, le signal est determiné comme une somme d'après une superposition des composants des cycles et des noeuds interférant entre eux qui dépend d'un type cellulaire, d'un type du tissue, d'un état cellulaire dans un moment particulier, des concentrations des substances dif férentes, d'une présence des autres signaux etc.Mais quand même on peut relever les noeuds du signal essentiels et même communs pour tous les cas mentionnés, ci-dessus d'après toutes les manifestations nombreuses de l'activité cellulaire souvent observées dans les cultures cellulaires étant dans les conditions différentes de celles d'un organisme dans les lignes établies et leurs mutantes ayant la quantité de chromosomes modifiée, ou dans les cultures des cellules cancéreuses ou transformées. Je pense que ces noeuds communs incluent les complexes des ligands avec des récepteurs, des glycolipides et des phospholipides ayant une haute affinité (reg.plus bas, s.v.p.) et se situant longtemps sur la surface cellulaire pendant le signal. Ces noeuds communs incluent aussi les complexes des ligands avec des récepteurs et des lipides ayant une faible affinité et servant, comme je suppose la première fois, à la régulation de l'activité des enzymes sur la couche intérieure de la membrane. La présence de ces récepteurs d'affinité différente a été observée dans tous les types de récepteurs (et comme je le suppose d'une manière convaincante, peut être révélée dans tous les récepteurs): les récepteurs avec le cycle PPI, avec l'action de ckMP et avec l'action de tyrosines kinases (reg. plus bas, s.v.p.). Ces complexes avec une faible affinité (qui n'est pas elle-nême constante et, apparemment, diminue avec la progression du signal-reg. plus bas, s.v.p.) ne se trouvent pas pendant longtemps sur la surface cellulaire,Ils sont endo cytés par les puits recouverts. Les produits de cette endocytose servent seulement à la régulation de l'action des complexes affins mais moins nombreux dans tous les types de récepteurs considerés, restant longtemps sur la surface cellulaire (reg. plus ba, s.v.p.). La confirmation sérieuse de la généralité des processus, ayant lieu sur la surface cellulaire, est la présence du courant "sustained" de Ca2+ à travers la membrane plasmique dans tous les types de récepteurs (70-72). Puis le noeud commun de tous les récepteurs considérés doit être la protéine kinase C (reg. plus bas, s.v.p.). L'endocytose mentionnée plus haut, synchronisée avec le courant du signal, doit servir à sa régulation (au moins) comme rétroaction. Comme je le pense (reg. plus bas, s.v.p.), la régulation de l'association "adressable" des protéines périphériques et temporaires comme la protéine kinase C ou les protéines G /aussi présentes dans tous les signaux (64)/ a lieu pour tous les signaux :: 1)avec la mosaïque des longs acides gras de la couche extérieure de la membrane pendant la création du complexe mentionné des glycosphingolipides et sphingomyéline avec les récepteurs qui doivent être individuels pour chaque signal, 2) avec le système de l'inclusion bien régularisé et synchronisée des acides gras insaturés dans les phospholipides de la couche intérieure comme conséquence de l'augmentation de la transformation de l'échange des lipides dans la cellule avec la propagation du signal. Dans la grande quantité des récepteurs de tous les types considerés avec la propagation du signal il y a une augmentation du pH dans le cytoplasme qui est la conséquence de l'action de l'echangeur Na 1H active par la pro téine kinase C (reg. plus bas,s.v.p.)(73).Comme resultat du signal, le sodium entre dans la cellule et il y a une activation de la synthèse de ARN, des protooncogènes et de ADN dans le cas de la mitose (74). Comme je pense, les deux types des récepteurs avec les affinités très différentes sont justement le résultat des interactions mentionnées ci-dessus (75-80). Les arguments suivants témoignent de cela. Harden et al (81) ont séparé dans le gradient de densité les récepteurs B-adrénergiques avant l'interaction avec le ligand obtenant le spectre continue des recepteurs avec les deux maximums faiblement exprimés dans le diapason des densités. Après l'interaction avec le ligand, dans la cellule bien sûr, il y a une forte redistribution du nombres de récepteurs et les deux pics deviennent clairement exprimés. Le pic, essentiellement plus grand, correspond aux récepteurs avec l'affinité moins forte. C'est la premiere fois que je propose qu'il y ait un équilibre dynamique entre ces deux formes de récepteurs.Apparemment, des composants comme les glycolipides,avec lesquels il y a la création du complexe ligand-recepteur, changent l'affinité de récepteur au ligand,et ils sont justement de tels composants migrants entre les récepteurs différents qui font l'équilibre dynamique mentionné des récepteurs,celui-ci étant profondement déplacé en présence du ligand,en plus dans les formes stables.Selon Bremer et al, par exemple les gangliosides GM1 et GM2 augmentent l'affinité e S récepteurs au facteur de croissance (2). Ou par exemple, selon la proposition de Chorev et collaborateurs (82), le derivé de l'antagoniste irreversible se lie avec le site du récepteur tandis que sa queue bromacylique fait l'interaction avec la molécule de lipid qui apparemment participe à la création du site actif.Cette nouvelle hypothese pourrait clairement expliquer le mystère de 12 ans d'une absence de la restitution complète de fluorescence des comp]exes des recepteurs avec ou sans ligands dans la membrane cellulaire native (83,84) en commençant par la première au monde, au printemps de 1975, expérience (85), sans ligand dans le site actif, par la technique du rétablissement de la fluorescence apres photo-extinction (FPR). De plus malgré la présence de zones à mobilité limitée après l'interaction du récepteur avec le ligand (49), influençant remarQuablement le pourcentage du rétablissement de la fluorescence, il y a la présence des "recepteurs immobiles" parce que le pourcentage du rétablissement de la fluorescence dans cette expérience augmente de 30 à 50 d'après les photo-extinctions réitérées quoiqu'il n'y a pas eu 100% du rétablissement à cause des zones à mobilité limitée.La présence de la mobilité de =100h des récepteurs libres, sans ligand, sur toute l'étendue de la cellule dans la champe électrique (19,86-88) est bien résoluble, et apparemment essentiellement grâce à l'hypothèse introduite, meme avec une apparente contradiction à la présence d'un grand pourcentage des "récepteurs immobiles"./Il n'y avait pas du tout de mobilité des récepteurs dans toutes ces expériences dans un certain pourcentage des cellules, peut-être par exemple à cause de la présence des cellules dans des stades différentes pendant le cycle cellulaire (89). Apparemment, cette propriété de la membrane plasmique est conservée pendant ltevolu- tion cellulaire/. Je pense que deux larges sous-groupes des récepteurs, révélés pendant l'in- teraction de récepteurs e-adrénergiques avec les lectines conjugues avec l'agarose (90), doivent refléter justement la présence des changements de conformation dans les récepteurs qui sont apparemment dans le complexe avec les sphingolipides les plus proches. Cela doit provoquer une accessibilité différente des récepteurs aux lectines sur l'agarose et une apparence de deux types d'affinité pour les récepteurs sans ligands. On peut supposer aussi que, puisque les récepteurs B-adrénergiques sont les récepteurs pour Con A, il y a le déplacement d'un equilibre entre les deux types de récepteurs sans ligands après l'interaction avec Con A (81) parce qu'apparemment il y a un changement du microenvironnement sphingolipidique. Selon De Meyts et al (91) l'occupation du site actif des récepteurs de l'insuline par les molécules du ligand commence par les récepteurs plus affins en continuant par les récepteurs moins affines. Comme je suppose, les composants, comme les gangliosides pour un état d'affinité forte, étant en quantité limitée dans la membrane cellulaire, sont "arrachés" par les récepteurs réagissant en premier lieu, en outre apparemment statistiquement. Le fait oue les récepteurs de Con A, beaucoup plus nombreux que les récepteurs de l'insuline,prennent dans ces sites actifs ces composants essentiels mais déficitaires, indique pour cette supposition, parce que, d'après cette intervention de Con A, le graphique de Scatchard devient linaire, re flétant seulement la présence des sites avec l'affinité faible. Aussi les graphiques de Scatchard sont devenus linaires avec les sites actifs de l'affinité faible après la modulation analogue par les récepteurs de Con A des immunoglobulines G membranaires (91). Le fait, que pour une élimination des sites actifs les plus affins des récepteurs différents, l'interaction seulement avec Con A soit nécessaire, prouve clairement qu'apparemment cela doit concérner les molécules ayant les glucides correspondants.Il est très probable que cela concerne les gangliosides, ce qui confirme clairement la structure proposée. Apparemment les nombreuses interactions des lectines différentes bloquent l'association de l'EGF avec leurs récepteurs (370 et 40C) (92). En considerant tous ces résultats expérimentaux il faut avoir en vue que, en réalité, les sites actifs des récepteurs doivent avoir une plus forte affinité pendant une association avec les antagonistes que celle reçue déjà d'après des manipulations avec eux (93). On peut voir d'après les expériences de Pratt et Pastan (94) que l'affinité du site actif est créee avec l'assistance des interactions glucidiques et en conséquence, d'après ma structure proposée, avec l'assistance des glycolipides, parce que le changement analogue mentionné de l'affinité des récepteurs de l'insuline a lieu apparemment dans ce cas lorsque l'association de l'EGF avec les récepteurs des cellules mutantes, privées de la synthèse de N-acetylglucosamine, est seulement un tiers de l'association de cellules normales (37 et 40C), et n'est que 13% avec les récepteurs des cellules mutantes transformées avec la tunicamycine, qui inhibe l'association des glucides aux récepteurs.Et encore apparemment, le même cas "d'arrachement" des composants "déficitaires" avec la diminution de la constante d'association a lieu après l'association irréversible de l'antagoniste B-adrénergique ("affinité label") qui a une liaison covalente avec le lipide constituant le site actif. Avec cela, cet antagoniste peut etre associé seulement avec la moitié des sites actifs (82). Le fait, que la structure oligomère de ce récepteur ne soit pas connue, confirme cette conclusion (95). Je pense qu'il y a deux types d'événements pendant et après la création des complexes, mentionnés ci-dessus, pour tous les types de signaux. Premièrement, ce sont les événements qui passent dans la couche extérieure de la membrane qui conduisent d'un côté à l'augmentation du courant de Ca2+ dans la cellule à travers la membrane plasmique et d'un autre côté à la désensibilation et l'endocytose des récepteurs avec les ligands. Et deuxièmement, ce sont les événements se propageant à cause apparemment des changements de conformation des récepteurs à l'interieur avec l'activation de la tyrosine kinase, de l'adényl cyclase, de la protéine kinase C.Avec cela,il y a aussi la modulation, comme je propose la pre mière fois, de la redistribution et de la conformation des chaînes grasses des glycosphingolipides et des phospholipides de la couche intérieure de la membrane avec surtout les chaînes de glycosphingolipides "intentionnellement" longues des complexes décrits plus haut qui conduit au changement de redistribution des protéines différentes comme protéines G, protéines kinases et phospholipases et leurs substrates entre la surface membranaire intérieure et le cytoplasme et, comme je pense, qui détermine la localisation suffisamment précise de ces protéines périphériques dans les niches préparées pour eux dans la membrane.Les niches doivent être suffisamment bien déterminées pour chaque type de récepteurs parce que elles (niches) doivent être déterminées par le schéma de l'interaction prosé plus haut récepteur ganglioside cérébroside-t sphingomyéline évidemment individuel pour chaque récepteur. Regardons des événements se passant dans la couche extérieure de la membrane. Vraisemblablement, la redistribution des lipides sur la surface membranaire et la création des phases différentes d'après l'action du ligand conduit à l'activation des phospholipases C et D spécifiques pour les molécules de glycosylphosphatidyl inositol qui contiennent le glycanne, I'éthanolamine et la protéine interconnectes avec les liaisons covalentes avec le phosphatidyl inositol (PI) (96,97). Si une large expansion de ces molécules dans la membrane plasmique des cellules différentes (98) confirme le caractère général de l'action des phospholipases C et D dans ce cas pendant les signaux différents.Telle hydrolyse conduit à l'apparition des mo lécules de diacylglycérol (DG) (99-101). L'acide phosphatidique (PA) doit apparaître apparemment tout de suite (102) ou après l'action de la phospholipase D dans la couche extérieure de la membrane (96) ou avec le delai d'apres l'action de la diacylglicérol kinase sur DG (103,104). En outre l'activité de la phospholipase C spécifique pour PC (son action était révélée dans la couche extérieure de la membrane en quelques secondes) contribue à l'apparence de DG.Le fait de la présence du petit pic, qui est près du début du signal, montre que l'action de ces phospholipases de la couche extérieure a lieu (105): ce pic a les dimensions revatives semblables à l'expérience de Griendling K.K. et al (106) apres l'action de la toxine pertussis qui inhibe des protéines G se situant à la couche in térieure de la membrane et ayant la participation à l'action des phospholipases C (aussi A2et D) de la couche intérieure de la membrane (107) (reg. plus bas, s.v.p.). Avec cela apparemment, le réseau favorable des liaisons H intramoléculaires dans la molécule de phospholipase A2 nécessaires à son activation (108) est crée, considérant la création des liaisons H intermoléculaires mentionnées des sphingolipides et la déshydrata tion près de la structure extérieure lipidique.Le fait de la diminution de l'activité de la phospholipase A2 avec l'action des anesthétiques (109) confirme cet argument. Il est proposé que les anesthétiques suppriment les liaisons H d?ns leur action (25,110). C. .d. d'après ma structure proposée plus haut, on peut déduire un mecanisme concret et pratique de l'anesthe- sie: la suppression des liasons hydrogène entre les molécules des sphingolipides. Les expériences de Hirata et al (111)protlvent la présence de l'activation de la phospholipase A2. Les anticorps contre les molécules de lipomoduline (l'inhibiteur de la phospholipase A2) appliqués à l'extérieur de la cellule ont augmenté l'activité de cet enzyme appr. de 3 fois (sans hormone) et de 12 fois (avec hormone).Ainsi l'action des enzymes différents sur la surface cellulaire conduit à la formation temporaire de DG et la création de PA presque dès le début du signal (112). Apparemment dans tous les les types de récepteurs, le PA sert au flux de Ca à travers la membrane par un mécanisme encore mystérieux: un autre mécanisme proposé (avec le métabolisme de PPI) n'a pas les confirmations essentielles (113). Ensuite, il y a une activation de la protéine kinase C dans tous les cas. Dans le cas du mécanisme-"PPI", cette activation a lieu à cause de l'augmentation temporaire de Ca2+ dans le cytoplasme et de l'augmentation de DG (114) et dans les autres cas, apparemment à cause d'une action directe de DG (97, 101). Il y a de nombreux résultats qui indiquent que la protéine kinase C participe à l'action du signal dans les systemes sans le cycle PPI (71,101, 115-124). Et en plus on sait que la protéine kinase C influence l'echangeur Na+ /H + et les ions hydrogène sortent de la cellule en augmentant le pH dans le cytoplasme (73,74,125-128). Cette augmentation du pH était enrégistrée dans un très grand nombre de signaux de tous les types (73), ce que confirme respectablemer.t le fait de l'activation de la protéine kinase C dans tous ces signaux. Le DG, dans la couche intérieure de la membrane, apparemment est formée de plusieurs sources. C'est la phospholipase C spécifique pour PI (129,130) avec l'activité dépendant du flux de Ca à travers la membrane (103,131). Outre cela, il y a la phospholipase C spécifique pour PC (phosphatidyl ethamolamine- PE) qui a apparemment sa protéine G (130,132-134). Cette protéine C peut être activée par la protéine kinase C (134). La phospholipase C spécifique pour PC (PE) n'a pas besoin, due flux de Ca2+ à travers la membrane (131) comme la phospholipase D de la couche intérieure pour PC (PE) qui a aussi sa protéine G spécifique (135,136). L'activité de cette phospholipase D peut être augmentée par la protéine kinase C (136). La cinetique de la formation de DG est souvent avec deux pics (102,103, 137,138). La précision de la méthode n'est pas très grande parce que DG était mesuré dans la membrane et dans le cytoplaste.Et par exemple dans le cas des cellules adipeuses, une augmentation de DG, à cause de la degradation de PI, est très difficile à voir parce que la quantité de DG dans ce type de cellules est très grande (139).Je pense que le premier pic correspond aux deux réactions décrites plus haut: la formation de DG dans la couche extérieure de la membrane à cause de l'hydrolyse des glycosylinositols et de l'hydrolyse de PC (PE) et la formation de DG dans la couche in térieure de la membrane à cause due l'hydrolyse de PPI (106,138,140). Avec l'activation de la protéine kinase C, il y a une inhibition de l'activité de la phospholipase C hydrolysant spécifiquement PPI (106,123,130). Apparemment le deuxème pic doit être présent grâce à l'action de la protéine kinase C parce qu'on peut le simuler avec le phorbol ester (137,138).Vraisemblablement ce pic est formé à cause de l'activation des phospholipases qui hydrolysent PC (phosphatidyl éthanolamine) (106,130,133,135,137) et/ou PI (106,129,130) avec la stade de la phosphorilation des protéines G par les molécules de la protéine kinase C déjà activée. Après ou/et pendant l'activation des phospholipases C il y a apparemment l'activation des phospholipases A2 de la couche intérieure (112). Comme il était mentionné, l'activation des phospholipases A2 est favorisée par la séparation de phases, par les phospholipides avec la charge négative et par les ions de Ca2+. Outre cela, les produits comme le DG, qui sont les résultats du signal, favorisent le déplacement de l'équilibre de la présence de phospholipases A2 entre le cytoplasme et la couche intérieure en direction de sa présence dans la membrane (141).En outre, on doit mentionner la présence des formes nombreuses des phospholipases A2 /reg. s.v.p., par exemple (142)/. Protéine kinase C favorise aussi l'activation de la phospholiase A2 par l'inactivation de ses inhibiteurs (lipomoduline et lipocortine) (143,144). L'activation de la phospholipase A2 avec le phorbol ester se manifeste aussi en faveur de cela (145). Les phospholipides chargés négativement (PA) (qui activent la phospholipase A2) (146) et les ions de Ca2+ se présentent comme résultat du flux de Ca2+ à travers la membrane, comme action des phospholipases D activées par la protéine kinase C avec la protéine G dans la couche intérieure de la membrane (136) ou comme action de la diacylglycérol kinase sur le DG (131). Comme je pense, les mêmes composants favorisent une certaine séparation localisée des phospholipides dans la couche intérieure de la membrane avec la creation des zones vacantes pour les protéines péri phériques (la protéine kinase C et phospholipase A2 compris) (reg. plus bas, s.v.p.). Avec le temps la quantité de DG diminue au profit de l'activation de la diacylglycérollipase qui dépend de Ca2+ (147,148) ou au profit de l'action de diacylglycérol kinase (149) favorisant une accumulation de PA (102,112, 150). Vraisemblablement la diacylglycérol kinase hydrolyse seulement les chaînes grasses dans la position C2 (147) et en conséquence le monoacylglycérol (MAG), en migrant bien de la bicouche, peut être révélé en quantités suffisantes à l'extérieur, dans la solution, et à l'intérieur de la cellule (148). Cette chaîne du métabolisme doit conduire plus tard à la synthèse cellulaire de PI par l'acide lysophosphatidique et PA (sans DG comme produit intermédiaire), mais avec une inclusion probable de AA /s.v.p., reg. plus bas les details de la corrélation avec les travaux de Resch et collaborateurs (151,152)/. Cette inclusion ne se passe pas d'après la synthèse des phospholipides dans la cellule de novo (153). Les acides gras (les AA inclus) sont incorporés dans les phospholipides ou à partir de lipoprotéines endocytées (154), ou à partir d'une réserve cellulaire (155).Avec l'action du signal, la quantité des acides gras libres doit augmenter (51) créant le courant dynamique de ces acides gras en direction de la membrane (156), bien que le niveau des acides gras libres doive être très faible à cause d'un processus de l'estérification des acides gras avec leur inclusion dans les phospholipides (157). Le triacylglycérol (TG), le dépôt des acides gras, est hydrolysé, en général, par des lipases se situant dans les lysosomes ou dans les membranes plasmiques (158-160)./L'activation des lipases se situant dans les membranes plasmiques sert, apparemment, à l'hydrolyse de TG accumulé dans les membranes plasmiques avec l'activation du signal, celle-ci pouvant être executée avec le phorbol ester (161)/.La synthèse de novo des phospholipides (162) pendant le signal était enregistrée dans un certain nombre de cas à partir de glycérophosphate formé d'après la glycolyse (102). Ces phospholipides sont inclus apparemment dans la membrane cellulaire avec le système de la membrane vésiculaire de Golgi et de réticulum endoplasmique activé par le signal (138,163), par exemple avec le mécanisme incluant la protéine G (164) ou/et, comme je pense, avec l'activation de la protéine kinase C,qui augmente une efficacité de ce processus du transport dirigé à partir des membranes intracellulaires de Golgi et du réticulum endoplasmique à la membrane plasmique au profit de la phosphorilation des protéines d'assemblage inclues dans la régulation de la structure et de la fon cation des puits recouverts (165).Il est evident que plus l'endocytose est intensive, plus on observera des lipides membranaires qui vont vers les lysosomes. Cette formulation aide à éclaircir le rôle qui j'ai proposé pour la protéine kinase C dans la création des puits recouverts avec la phosphorilation de leurs protéines d'assemblage. Selon les expériences de Larkin et al (166) la quantité des puits recouverts et le degré de l'endocytose diminuent avec une exposition des cellules dans le tempon sans K+. D'après les expériences de Ramussen H. et collaborateurs (167) on sait qu'il y a une augmentation du flux "sustained" de Ca2+ dans une cellule avec une augmentation des ions de K dans le tampon extérieur (avec l'hyperpolarisation correspondante).C.à.d. dans le cas de l'expérience de Larkin et al, il y avait avait une diminution du niveau basal du flux de Ca dans la cellule à tra- vers la membrane (ne pas confondre avec les canaux dependant d'un voltage) (reg. plus bas, s.v.p.). Comme je pense cela doit amener une diminution d'un niveau basal de l'activité de la protéine kinase C dépendant de la concentration de Ca2+ (114), c.à.d. une diminution de la phosphorilation des proteines d'assemblage mentionnées (168). On peut voir la confirmation de la structure de la régulation de l'endocytose avec les puits recouverts dans les expériences de Kolesnick (169) selon lesquelles DG stimule une augmentation de l'hydrolyse de SM dans toute la cellule.On peut expliquer ces ex périences par une augmentation de l'activité de la protéine kinase C d'après laquelle un certain nombre des puits recouverts et un degré de l'endocytose augmentent. En conséquence, une plus forte quantité de SM va dans les lysosomes où elle est hydrolysée. Enfin on peut voir d'un côte les processus de la degradation et de l'elimination des lipides de la membrane plasmique et d'un autre côté la synthèse et l'incorporation des lipides dans la membrane plasmique, logiquement égales à la masse. Naturellement on se pose la question de savoir pourquoi on a besoin de ce flux des dynamique des lipides. On voit une augmentation systématique de l'inclusion des acides gras insaturés et inclusion de AA dans les phospholipides d'après les expériences de Resch et collaborateurs avec la stimulation de la mitose des lymphocytes T par Con A (170-172). Ces auteurs et d'autres ont démontré que par exemple l'activité de Na K ATPase ou de la lysolécithine acyltransferase augmente mais l'activité des autres enzymes (par exemple la phosphatase) diminue (173,174).Avec cela on peut simuler le mêne effet de la modulation de l'activité des enzymes mentionnés par l'addition simple des acides gras insaturés (dans les limites restreintes) aux fragments membranaires des lymphocytes (175,176). De plus, l'effet de la modulation des enzymes membranaires par le degré des acides gras insaturés inclus dans les phospholipides a une expansion plus large (177) en augmentant aussi, par exemple, l'activité de tels enzymes comme l'adenyl cyclase.Selon Rozengurt (128) ou Berridge (74) justement les enzymes, qui changent la concentration ionique de Ca2+ et de Na+ (c. .d., par exemple, la Na+K+ATPase mentionnée), sont associés par le moyen nécessaire au développment du signal et à l'induction de la synthèse de ADN et de la croissance cellulaire, et, par exemple, une inhibition de cet enzyme conduit à l'arrêt de la mitose au stade premier (174,176). En plus selon Li et al (178) l'activité d'une autre ATPase (Ca Mg ATPase) doit avoir une dépendance directe du degré de l'insaturation des acides gras de la bicouche parce que la composition des lipides entourant cette ATPase depend directement de la concentration totale des lipides insaturés dans la membrane (179).Enfin on voit que cet entrelacs (décrivant des chemins mé- taboliques des événements bien synchronisés quand même et passant pendant le signal) est nécessaire pour la modulation du degré de la saturation des lipides dans la membrane plasmique, qui (la degré) change avec la propagation du signal et ne change pas même après une exposition simple des phocytes intacts avec les acides gras dans le tampon extérieur (170). De plus, selon Stubbs et Smith (177) le degré de l'insaturation des acides gras régularise l'affinité et la perte des récepteurs membranaires.Enfin, j'ai l'impression que le signal, dans sa totalité, est le processus bien synchronisé dans lequel un mouvement ou une interaction de tel ou tel type de protéines, de lipides, de glucides ou d'acides nucléiques et leurs dé- rivés sont synchronisés avec la rétroaction pendant la propagation du signal, ce qu'on voit même d'après une information incomplète et non-detailée d'aujourd'hui (180). La composition phospholipidique de la membrane est maintenue automatiquement avec une précision suffisante par les enzymes différents. Par exemple, selon Mooibroek et al (109) le rapport SM/PC est maintenu par l'action de la sphingomyélinidase. Il faut remarquer que le rapport de deux branches d'utilisation des acides gras, la synthèse de novo et l'echange sont différents pour les types de cellules différentes et pour les conditions expérimentales différentes (155). Je pense que le processus synchronisé de l'augmentation de la quantité des acides gras insaturés dans les phospholipides doit servir à d'autres buts. Il y a la modulation directe des acides gras dans la couche intérieure grâce à la présence des acides gras longs dans les molécules des sphingoglycolipides et phospholipides interagissant avec la récepteur dans la couche extérieure de la membrane. Récemment on a trouve même les chaînes tres longues de 28-38 atomes de carbone dans les molécules de SM et de PC (181-183). L'expérience indiquant l'importance de la transformation d'un signal artificiel avec les chaînes longues a été fait en 1978 (184). Je pense, que pour formation de la bicouche d'épaisseur plus ou moins égale, les molécules avec les chaînes grasses les plus courtes d'une couche doivent se trouver en dessous des molécules avec les chaînes grasses les plus longues d'une autre couche. En outre,les molécules des protéines, qui changent de lieu dans la cellule pendant le signal (cytoplasme 2 membrane plasmique) en obtenant "par hasard" les chaines grasses les plus courtes, pourraient trouver par un tel moyen leur place dans la membrane à cause d'un mouvement et d'une fixation (185) dans la membrane, ces places étant déterminées par les glucides de recepteur, c.à.d. par le type de récepteur. Par exemple, le substrate principal de la protéine kinase C "obtient" la chaîne 14:0 pour être phosphorilé dans la membrane (186,187). La protéine kinase C (elle-même) "obtient" les chaînes myristiques ou palmitiques (188, 189). Selon Buss J.E. et al (193) les autres protéines kinases (tyrosine et A) et le régulateur de la phosphatase et apparemment toutes les proteines G sont modifiés par l'acide myristique pour être insérés dans la couche in térieure de la membrane. Vraisemblablement une augmentation de la quantité des acides gras insaturés sert aussi au meilleur accueil de ces protéines temporaires périphériques dans la membrane, parce que les liaisons doubles cys dans les acides gras provoquent la conformation plus chaotique et moins dense dans la couche lipidique (191).Cela concerne plutôt la couche intérieure de la membrane parce que selon Perret B. et al (192) le 90% d'AA sont situés dans la couche intérieure où les composants périphériques temporaires mentionnées peuvent s'insérer plus correctement en accord avec la chronologie du signal.Le fait que la longeur de l'acide arachidonique même à l'état allonge soit moindre que celle de l'acide oléique allongé, selon Li et collaborateurs (178), argumente pour cela fait que, par exemple, la phospholipase C et les oncogènes avec l'activité de la tyrosine kinase aient les domaines communs qui sont destinés apparemment aux interactions avec les composants cellulaires,indique l'existance de telles places avec "l'adresse" (193). Il y a aussi les domaines communs analogues entre la phospholipase A2 et la protéine kinase C (194).Apparemment une augmentation de l'affinité, par exemple, de l'adényl cyclase (le récepteur B-adrénergique), pendant l'inclusion dans la membrane de l'acide cys-vaccenique, a la connection justement avec la création de "l'adresse" particulière pour la protéine G mais ce n' est pas à cause d'une diminution de la viscosité membranaire (195). La lysophosphatidyl.transférase a un rôle important dans le remplacement des acides saturés par les acides insaturés. L'activité de tel enzyme peut être modulée justement par les facteurs qui se modifient avec la chronologie du signal: une augmentation d'un degré de l'insaturation dans les phospholipides avec certaines limites /une stimulation de l'acetyltransférase accompagne une augmentation de la liberation de l'acide arachidonique dans les plaquettes stimulées par la trombine (196) et dans les lymphocytes stimulés par Con A (174), et aussi le changement de la concentration de DG. Le DG inhibe directement la lysophosphatidyl transférase selon les travaux de Resch et collaborateurs (197).On peut en voir le support dans les expériences de Axelrod et collaborateurs (198) selon lesquelles le DG stimule une augmentation de la synthèse de la prostaglandine après l'action de la bradykinine avec le moyen indépendant de la protéine kinase C. Parce que si le DG inhibe réellement la lysophosphatidyl transférase, cela doit produire une augmentation de la concentration de l'acide arachidonique conduisant à la synthèse de la prostaglandine.La quantité de DG dans la membrane diminue (reg. plus haut, s.v.p.) avec la propagation du signal et une faible concentration de DG dans les membranes des cellules, appartenant aux lignes can céreuses établies qui se trouvent dans le processus permanent de l'action du signal (mitose), temoigne pour cela où cette concentration peut être déterminée expérimentalement plus facilement (161) (reg. plus haut, s.v.p.). Les expériences avec les molécules de cyclosporine qui a inhibé directement (en utilisant le contrôle de l'activité avec les fragments membranaires) l'activité de l'acyltransférase activée pendant le signal (199) parlent en faveur de cela. En plus la molécule de cyclosporine inhibe une inclusion de AA dans PC et PE des lymphocytes stimulés par Con A et par les 2+ anticorps contre l'immunoglobuline G et avec l'ionophore de Ca A 23187 (152,199).Avec cela pourtant l'inhibition de l'inclusion de AA dans PI était une exception: dans c cas-là il y avait seulement une inhibition faible de l'inclusion de cet acide, confirmant élégamment la structure de la synthèse additionnelle "demi"-de novo de PI selon la branche métabolique: DG MAG PA PI (reg.plus haut, s.v.p.). Apparemment, l'importance du processus de l'inclusion des acides gras insaturés dans les phospholipides membranaires est confirmée d'après une unhibition par la molécule de cyclosporine de la prolifération des cellules mésangliales rénales (200) et des lymphocytes B et T (151). Une diminution de l'affinité des récepteurs membranaires et leur perte de la surface membranaire étaient enrégistrées avec une augmentation d'un degré de l'insaturation des acides gras et en particulier avec une augmentation de la quantité de AA (177). Comme je suppose la première fois,cela signifie qu'il y a une augmentation du volume des zones avec une plus grande fluidité apparue des le début de la séparation de phases (49).Comme résultat du processus,ces petites zones,apparemment,confluent dans un courant commun dans lequel il y a la formation continue des"patches" et des "caps". Avec cela, ces "patches" et ces "caps" sont constitués des complexes des récepteurs formés à cause de l'association des "anneaux" extérieurs des "patches" de SM qui font une structure dense (reg. plus haut,s.v.p.-).Et plus tard des complexes, vraisemblablement, vont aux puits recouverts et disparaissent de la surface membranaire.Par exemple,dans le cas des récepteurs B-adrener- giques selon Harden et collaborateurs (81),il y avait une augmentation du ma ximum dans un gradient de densité appartenant aux récepteurs avec l'affinité faible après l'interaction avec l'agoniste (15 min, 370C). Dans le cas des récepteurs E-adrénergiques pendant l'interaction des molécules (ligands) avec les récepteurs il y avait dès le début (avec tE/2~ 3 min) la diminution de l'affinité de l'adényl cyclase et après (avec lag-periode ~ 60 min) il y avait la perte des récepteurs (81,201).Dans le cas, par exemple, des récepteurs avec l'activation de la tyrosine kinase (EGF, insuline) il y avait la perte des récepteurs pendant la dizaine de minutes (202), comme dans le cas de l'interaction des lectines mitogéniques ou dans le cas des anticorps contre les immunoglobulines avec la surface des lymphocytes (203). Avec cela,les processus de la diminution de l'affinité mentionnée dans le schéma général doivent avoir lieu aussi dès le début.Je répète, comme je propose la première fois, cette dizaine des minutes, d'une "attente" pendant le processus de la formation des "patches", est nécessaire justement pour l'augmentation du degré de l'insaturation des acides gras de ces lipides dans la couche extérieure de la membrane.On peut clairement voir dans les photographies de la publication de Haigler et al (204) que justement les complexes avec une faible activité des récepteurs de l'EGF avec des molécules de l'EGF qui ont été marquées par la fluorescéine et en conséquence ont perdu la partie de l'activité biologique, sont endocytés mieux que les molécules de l'EGF natives /selon la publication de Schlessinger et collaborateurs (203), même dans le cas des précausions spéciales pour préserver l'activité biologique de l'EGF, l'activité dérivante a diminué de 60%/. Seule l'occupation des récepteurs par ligand, même avec un débrayage temporaire de l'effecteur au niveau de la protéine régulatrice ou de la pro téine kinase A, est suffisante pour la desensibilation (205,206), ce qui indique l'importance des processus primaires concernant l'interaction ligand-récepteur. En plus la comparaison des types différents de "caps" par leurs dimensions, qui n'ont pas de corrélation directe avec la quantité de récepteurs, favorise la présence et l'importance de la partie lipidique des complexes. Par exemple, la quantité des récepteurs de Con A est de 9 à 27 fois plus grande que la quantité des récepteurs des immunoglobulines de la surface (207), mais le "cap" formé avec les immunoglobulines de la surface est beaucoup plus grand que le "cap" formé avec les récepteurs de Con A (208,209). Et dans le cas des nombreuses molécules de glycoprotéine principale de la surface cellulaire qui ne sont pas des récepteurs et qui sont agglomérées par les trois couches des anticorps,le "cap" a la dimension d'un petit cercle (209). On peut voir à travers ces (et d'autres) expériences qu'apparemment la dimension des amas différents depend fortement de quelques autres fac teurs. Vraisemblablement ces facteurs sont les lipides constituant les complexes spécifiques avec chaque type individuel de récepteurs selon ma structure proposée. Déjà les premières expériences de FPR (85) ont pu dessiner la création de petites zones dès la début du processus de la formation des amas avec la distribution de la fluorescence uniforme visible dans le microscope fluorescent. Le "cap" (pH neutres) était observé après la coloration des composants de la surface cellulaire (pH faiblement alcalines) (= 7% - lipides et ~93% - protéines). De plus le pourcentage du rétablissement de la fluorscence était clairement nul, malgré le fait qu on ait pu voir la formation et la mobilité des amas à l'oeil. Ce paradoxe de plusieurs années, d'après cette structure présentée, peut être facilement expliqué par la présence au début du processus des zones de separation de phase beaucoup plus petites que la grandeur du diamètre du faisceau laser.La fusionnement suivant ces zones, apparemment pendant le processus de l'augmentation de l'insaturation des lipides, conduisait au processus, déjà visible, de la formation des amas de plus en plus grands. Les faits suivants sont en faveur de cette interprétation. Quand on place les cellules après le processus du "capping" dans le thermostat pour le temps suffisant, les molécules fluorescentes observées qui n'étaient pas dans le "cap" deviennent mobiles (latéralement), avec la courbe suffisamment homogène et la constant de diffusion semblable à la constante de diffusion des protéines dans la membrane (85), et ayant la valeur du rétablissement de la fluorescence de près de 60%. C.à.d. il est assez clair que les zones formés par les molécules qui sont devenues la partie de "cap" ont gené le rétablissement de la fluorescence de ces récepteurs.Il semble que le processus du "capping" était initié par les glycolipides à cause de la dimèrisation des colorants au pH faiblement alcalins. Apparemment justement cette dimèrisation, approchant les glucides, menait à la formation des liaisons hydrogène (reg. plus haut, s.v.p.). Ces expériences ont été confirmées avec les récepteurs différents dans un nombre des publications /par exemple (210)/. On peut trouver une explication analogue de l'influence des zones formées par un type de récepteurs nombreux avec des ligands sur le mouvement des autres pour les expériences de Poo (211) avec le ralentissement de la mobilité dans le champ électrique des récepteurs libres de lectines d'après une interaction des autres récepteurs des lectines avec leurs ligands.Vraisemblablement les nombreux récepteurs de Con A (avec le ligand) avaient une influence semblable sur le pourcentage du rétablissement de la fluorescence pour les récepteurs reperesentant les immunoglobulines de surface (212). Outre l'endocytose provoquée par une occupation du récepteur par le li gand, il y a l'endocytose provoquée par la phosphorilation du récepteur avec la protéine kinase C. Par, exemple, dans le cas des récepteurs de l'EGF, où le mécanisme moléculaire de I'endocytose provoquée par le ligand et la protéine kinase C est mieux etudié, le processus initial de l'internalisation est différent. Il y a la phosphorilation de la thréonine 654 dans le cas où l'internalisation est provoquée seulement par la protéine kinase C, ce que l'on n'observe pas dans le cas de l'endocytose provoquée seulement par la présence du ligand (71). On peut supposer qu'il y a une régulation analogue des autres récepteurs Soins étudiée dans cet aspect) par la protéine kinase C.Cela confirme encore le rôle-clef de la protéine kinase C dans la transmission du signal dans la cellule (65). Ce processus, quand la pro téine kinase C peut regulariser le récepteur (qui l'a activé) en l'élimi- nant de la surface cellulaire, s'appelle la régulation homogène (65) et je pense que cela a lieu grâce à la position proche du récepteur et de la protéine kinase C activée par ce récepteur, qui (protéine kinase C) vraisemblablement est suffisamment immobile (mobilité latérale), dans la niche en "dessous" du récepteur preparée pour cet enzyme par les chaînes longues de la couche extérieure de la membrane et par la modulation de la couche intérieure (reg. plus haut, s.v.p.).En outre, la protéine kinase C peut exécuter la régulation des autres récepteurs (la régulation hétèrogène) dans les niches où elle ne se trouve pas (65,66). Dans telle régulation, la pro téine kinase C fait la phosphorilation des composants plus mobiles. Apparemment ses substrats mobiles (eux-mêmes) la "trouvent" grâce à leur phosphorilation avec l'acide myristique (le sous-composant cationique de la protéine kinase A, les protéines G, p60V src). Par exemple, dans le cas des récepteurs B-adrénergiques vraisemblablement, protéine kinase C désensibilise des récepteurs des érythrocytes (115) se trouvant avec eux dans le même complexe immobile. Dans le cas des récepteurs B-adrénergiques des autres cellules, où on ne vois pas de désensibilisation de la protéine kinase C (115). Pourtant la protéine kinase C dans ces cellules peut exécuter l'activation (ou l'inhibition) hétérogène grâce à la phosphorilation de la protéine G ou du sous-composant cationique de la pro téine kinase A (213). On peut voir ce type de régulation hétérogène, et important apparemment pour chaque signal, dans la structure proposée plus haut (par exemple l'activation des phospholipases différentes de la couche intérieure de la membarne). Vraisemblablement, comne c c'était mentionné, les récepteurs, qui doivent être endocytés, passent par les puits recouverts, par les endosomes (ou GERL) et par les lysosomes (168,214). Généralement les récepteurs de hormones et de facteurs de croissance (le nombre de leurs activités apriori a lieu dans la bicouche normale de la membrane plasmique) vont dans les puits recouverts en étant déjà reconnus après l'interaction avec les ligands (215,216).Même cela, dans le cas des récepteurs de LDL (qui en gé néral doivent seulement fournir le cholestérol dans la cellule), change la valeur de la diffusion latérale =100 fois après l'interaction avec le ligand (217) et, par exemple, les derniers résultats, faits avec les précausions spéciales,indiquent le caractère primaire diffusif de leur distribution dans la membrane (218). En outre d'après Goppert-Stobe et Resch (170), on peut voir que la quantité des phospholipides reste la même pendant l'action du signal à l'exeption de SM, justement tel phospholipide qui participe à la formation du complexe lipidique avec le récepteur selon la structure proposée plus haut.Comme il était mentionné, avec l'addition de DG de l'ex- térieur, l'hydrolyse totale de SM dans toute la cellule augmente (169), ce qu'on peut expliquer aussi (reg. plus haut, s.v.p.) avec une augmentation du transport de SM dans les lysosomes par les puits recouverts. On peut voir d'après les expériences de Ulîson et al (219) (reg. plus bas, s.v.p.) la preuve analogue de l'endocytose des complexes lipidiques avec le récepteur. De plus je propose la premiere fois dans ma structure que l'endocytose serve seulement à la rétroaction de la propagation du signal dans la cellule pour l'inhibition au moins de la protéine kinase C. On a trouvé récemment que les sphingosines inhibent la protéine kinase C (220).Parce que la protéine kinase C est l'enzyme principal présent dans tous les types de signaux (reg. plus haut, s.v.p.), on peut s'attendre à ce que le processus de l'endocytose, qui transporte les complexes des récepteurs avec les sphingolipides (reg. la structure proposée plus haut, s.v.p.) dans les lysosomes, où ils (sphingolipides) sont hydrolysés jusqu'à la sphingosine et le ceramide, serve à une inhibition de la protéine kinase C par ces sphingolipides transportés par ce chemin par les lysosomes vers la surface intérieure de la membarne plasmique. Il y a aussi les autres résulatats confirmant la justesse de cette nouvelle proposition. Selon Maxfield (221) la synthèse de l'ADN augmente de 2 à 7 fois d'après l'inhibition de l'aggrégation des récepteurs de l'EGF. Selon Kahn (222) une injection d'insuline intacte à l'intérieure de la cellule n'a provoqué aucun effet biologique. Selon Schlessinger (71) la-phosphorilation des récepteurs d'EGF (thréonine 654) par la protéine kinase C conduit à l'endocytose des récepteurs et l'inhibition de la mitose. Outre cela, selon Russel et al (223), l'internalisation des récepteurs d'insuline avec les anticorps n'était pas capable de faire l'inclusion de la thymidine dans l'ADN. "La coincidence" suivante confirme d'une façon élémentaire ma proposition. Les récepteurs opiacés diminuent le niveau de cAMP grâce à l'inhibition de l'adényl cyclase.Dans ce cas-là, apparemment, on ne peut pas attendre une diminution trop dangereuse (du point de vue biologique) du niveau de cAMP et la rétroaction avec la protéine kinase C pourrait apparaître comme inutile.Et en réalité les amas formes pendant la mitose ne sont pas endocytés justement dans ce cas-là et la quantité et l'affinité des sites actifs ne changent pas apparemment à cause de la formation des ponts disulfures (224), par exemple à la différence de l'aggrégation et l'endocytose des récepteurs TSH stimulant l'adé- nyl cyclase (225). On a démontré dans le cas des récepteurs muscariniques (226) que l'activité de la protéine kinase C reste forte jusqu'à l'inhibition des récepteurs, ce qui confirme encore ma conclusion.Une preuve convaincante pour ma conclusion est l'augmentation de la quantité totale de la sphingosine dans la cellule d'après une action des formyl peptides dans les neutrophiles sans sa synthèse de novo. La concentration de la sphingosine augmente de 1,6 fois après l'action de la concentration de 10 nM des peptides, et de 2,5 fois après l'action de 1 uM des peptides. Une augmentation semblable de la sphingosine dans les cellules a été observée après le changement pour le tampon avec Ca , ce que doit augmenter le niveau basal de l'endocytose avec cela (selon ma structure). Comme avec l'endocytose, il y avait une augmentation seulement à 370C mais il n'y avait pas à 40 et 250C (219). L'interprétation des auteurs était fondée sur la présence connue des localisations intracellulaires des sphingosines (227).De plus les résultats obtenus avec des amines comme les molécules de chloroquine et de monestine, augmentant le pH dans les lysosomes et en conséquence inhibant l'hydrolyse des produits de l'endocytose et servant à la thèse d'une importance de l'en- docytose pour l'action du signal dans la cellule, sont ambigüs en réalité. Sachant la structure polaire de ces substances, on peut attendre une interférence de ces substances au niveau des liaisons H déjà pendant la formation des complexes des récepteurs avec les lipides et plus tard au niveau de l'endocytose des récepteurs. Justement cette dernière conclusion eait enrégistrée dans la presse scientifique /reg. par exemple (228)/ mais l'inhibition du signal était à cause de la première conclusion. C.à.d. la plus grand partie des récepteurs, se représentant comme les récepteurs moins affins, comme je propose, sert à la régulation négative au moins de la protéine kinase C. En même temps la partie des récepteurs moins grande, se représentant comme récepteurs plus affins, doit rester sur la surface membranaire. La nécessité de la présence permanent de ces récepteurs sur la surface membranaire était démontrée d'une manière convaincante dans les expériences de Cautricasas et collaborateurs (229) selon lesquelles la présence de ces récepteurs EGF pour l'exécution de la mitose était nécessaire pendant au moins 8 heures. Vraisemblablement ces récepteurs sont toujours indispensables pour le flux "sustained" de Ca2+ à travers la membrane plasmique (reg. plus haut, s.v.p.) (79,230). Le fait, que la concentration de l'hormone l'ACTH nécessaire pour la moitié du flux de Ca maximal, soit 14 fois plus grande que pour la moitié de la production de l'aldostérone maximale, parle en faveur de cela (231). Comme confirmation de la structure de l'action universelle du flux de Ca2+ pour tous les types de signaux proposée plus haut, son activité était enrégistrée d'après l'action des hormones-de l'activation primaire de l'adényl cyclase et de l'activation de cycle PPI (232). Apparemment le PA a le rôle-clef dans ce flux "sustained" de Ca . On peut remarquer le parallélisme entre la formation de PA et le flux de Ca à travers la membrane et leur régulation mutuelle. Selon Takuwa et collaborateurs (233) une augmentation d'un niveau basal du flux "sustained" de Ca2+ commence après =5 secondes comme stimulation de la synthèse de PA (103,112,234) qui fait la corrélation avec l'action du signal (234). La publication de Putney et collaborateurs (235) indique ce rôle de PA et Ca2+ dans l'action du signal. Selon cette publication, le PA a stimulé le signal seulement en présence de Ca2+. De plus l'affinité de Ca2+ et de PA était bien démontrée (et aussi de l'ionophore de Ca2+ A23187 en comparison des autres phospholipides). Le fait, que la régulation de la quantité de PA pendant la transformation de PA en PI dans le membrane soit réalisée par deux seconds messagers cAMP et Ca2+ (146) ayant les effets opposés (le Ca2+ augmente la concentration de PA), indique le rôle-clef de PA. Je voudrais proposer ici la structure moléculaire, en principe nouvelle et très importante de flux "sustained" de Ca2+ à travers la membrane: Je pense qu'il y a une augmentation de la quantité de lysoPA dans la couche extérieure de la membrane d'après les actions des phospholipases A2 activées avec la structure du signal /de plus avec la présence des phospholipases A2 spécifiques justement pour PA (236)/ dans la couche extérieure de la membrane et il y a une activation moderée des acyltransférases à cause d'une augmentation de la quantité de DG avec le signal (reg.plus haut, s.v.p.). Avec cela, les nombreuses structures du type micellaire fermé (avec les chaînes grasses à l'intérieure) (237) doivent se former, qui favorisent le passage de lysoPA dans la couche intérieure de la membrane où il y a encore la reacylation de lysoPA avec la sortie de cette structure dans les directions différentes au plan de la couche intérieure. Il se passe quelque chose comme la rotation de la "roue", constituant cette phase membranaire lipidique avec l'inclusion des phospholipides de la couche extérieure et leur sortie de la "roue" dans la couche intérieure. On peut même supposer que la phospholipase A2 spécifique pour PA est située près de la base de cette structure dans la zone de ces complexes des récepteurs d'une forte affinité. Cette proposition peut avoir lieu pour l'acyltransférase (199).Le Ca bivalent, avec l'affinité forte au PA adhérant au lysoPA sur la surface extérieure par tel moyen traverse la membrane en se tournant avec lui (lysoPA) dans la "roue" vers la surface intérieure de la membrane. Avec cela, le Ca2+ doit former aussi les ponts lipidiques affermissant les phospholipides voisins dans la "roue". Je pense que justement cette phase est une base de l'action d'une structure commune de la création des pores relativement etroits pendant une action des agents lytiques différents (238), et les cations bivalents, le Ca2+ compris, diminuent la lysis membranaire vraisemblablement à cause de l'affermissement mentionné des phospholipides dans cette phase. Selon Lapetina et Cautricasas (239) il y avait 10% de lysoPA pendant l'action du signal dans les plaquettes.Les expériences concernant la transformation de PA en PI d'après l'action de lysoPA (146) confirment brillament le transport de Ca2+ par ces phospholipides parce que le Ga inhibe cette transformation (reg.plus haut, s.v.p.). Dans ce cas général comme résultat de ma structure proposée, le Ca reste avec son porteur (subit à l'acylation) sur la surface intérieure de la membrane, sans le changement de la concentration totale de Ca2+ à l'intérieure de la cellule mais avec le changement de la concentration locale de la surface de la couche intérieure de la membrane, ce qui entraîne une concordance exellente avec les conclusions de Alkon et Rasmussen (240). En me fondant sur ce resultat j'ai la possibilité de déduire que la mo bilité cellulaire est detérminée par une apparition de ces nouvelles structures micellaires de l'autre phase d'après l'activation des récepteurs et leur rotation comme les chenilles d'un tracteur. Le fait, que la vitesse de la mobilité des neutrophiles d'après l'action des formyl peptides (et seulement d'après leur action à cause de la création des complexes struc turés-reg. plus haut, s.v.p.) augmente après une application extérieure de la phospholipase A2 (241), est convaincant en faveur de cela. Apparemment il a une autre confirmation grâce à une inhibition de l'acyltransfe- rase de la couche intérieure après une action du phorbol ester qui stimule l'augmentation de DG dans la couche intérieure par la protéine kinase C et par les phospholipases C (reg. plus haut, s.v.p.) en inhibant d'après cela l'acyltransférase de la couche intérieure. La réversibilité de la mobilité cellulaire après l'action d'un inhibiteur de la DGkinase (241) pernet de voir une image suffisamment pittoresque de la rotation des "roues" de la mobilité dans un sens inverse parce qu'avec une augmentataion de la concentration de DG de la couche intérieure, les molécules de lysoPA peuvent s'accumuler déjà dans cette couche à cause de l'inhibition de l'acyltrans férase et se deplacer avec la "roue" vers la couche extérieure. Un rôle important présumé de PA dans l'activation des phospholipases A2 de la couche intérieure et extérieure était souligné plus tôt. La série des expériences concernant l'action de Ca et de cAMP sur la réaction d'une transformation de A en PI confirme ce schéma (51,146,329,242). Selon Nishizuka (114) la PC (comme SM) inhibe la protéine kinase C. Ce fait est soutenu par une inclusion de 80 à 90% de l'acide myristique, servant (reg. plus haut, s.v.p.) "d'adresse" aux substrats de la protéine kinase C, dans PC (102,136). On peut supposer que PA /l'acide myristique s incorpore aussi dans PA (103)/, la molécule de phosphatidyl sérine et DG concourissent avec PC pour une plus forte activité de ce enzyme-clé. On peut appliquer cette conclusion d'un rôle régulateur de l'endocytose au problème important de l'immunologie -l'interaction entre lymphocytes B et T résultant de la formation des cellules qui synthétisent l'immunoglobuline G (IgG). Selon Zagyansky (243-245) pendant l'interaction entre lymphocytes B (avec le récepteur pour l'antigene-IgM membranaire) et lymphocytes T (avec les récepteurs pour l'antigène) l'interaction entre les fragments de l'antigène qui deviennent un pont entre les lymphocytes B et T et IgG soluble a lieu.Comme résultat l'IgG forme la structure- "scorpion". Cette molécule de l'IgG membranaire doit réagir plus tard avec les récepteurs Fc pour les anticorps des lymphocytes B qui surgissent comme résultat de l'action des molécules de lymphokines sécrétées par des lymphocytes T dans le microenvironnement des cellules B.La possibilité de cette sécrétion dirigée par les lymphocytes T pendant l'endocytose a été confirmée récemment (26). Je pense qu'après cette interaction il y a I'endocytose (247) de l'antigène par les lymphocytes B avec la protéolyse de l'antigène dans les lysosomes. Après cette protéolyse, les fragments de l'antigène doivent se déplacer en direction de la membrane (pareillement aux produits susmentionnés de l'hydrolyse des sphingolipides), sans ou avec une association préalable dans le cytoplasme avec les produits du complexe majeur d'hystocompatibilité Il (CMH II) qui doit apparaitre comme résultat d'une action du facteur de croissance des cellules B (BCGF) qui induit l'apparence de cette classe de ClH sur les cellules B (248,249). Je pense qu'après cette phase il y a l'activation des lymphocytes B (250) et la première prolifération des cellules a lieu. Vraisemblablement il y a seulement une division à ce stade (250).Après cette division, comwe je propose, la deuxieme interaction entre les lymphocytes B et T doit avoir lieu. Cette fois les lymphocytes B sont déjà les cellules présentant l'antigène (251-254). Cette deuxième interaction entre les cellules B et T a lieu déjà quand il y a le changement spécial du complexe du récepteur de cellules T /la molécule CD4 interagit avec les récepteurs de cellules T (255)/. Et la communication des cellules B à la synthèse des sous-classes d'IgG avec la prolifération et la différenciation conséquante passent déjà après cette interaction des lymphocytes B et T avec le complexe CMH II (250). C.à.d. l'innovation décrit plus haut de la structure nouvelle de l'action des hormones, des neurotransmetteurs et des facteurs de croissance donne la conséquence et la corrélation générale des événements qui ont lieu pendant le signal. Sans doute, il y aura la conséquence des interactions de tels ou tels glucides ou lipides concrets. Avec l'établissement exact des telles conséquences (Cartes) pour chaque récepteur concret par les méthodes de la biologie moléculaire et cellulaire comme la "liaison croisée" chimique bivalente, la migration de ltenergie, le blocage des groupes avec les anticorps, la modification chimique exacte avec les dérivés du deutérium dans telles ou telles conditions dépendant d'un tissue, d'un age ou d'un sex, les conditions qui n'ont jamais existé, seront presentes pour la Medicine de domain.Cela doit être evident qu'il y a des déragements de ce processus dans l'état normal conduisant à beaucoup de maladies. Certainement avec cela, le but de l'utilisation des préparations nouvelles est un approchement de l'état de l'action des récepteurs dans le cas pathologique à leur action dans le cas normal grâce à une introduction des préparations des gangliosides et des glycolipides neutres dans un organisme. Heureusement par exemple les gangliosides s incorporent facilement dans la membrane de la cellule native à partir d'une solution à l'extérieur (2,256,257). Le fait empirique qu'avec une addition exogène des gangliosides, il y a une augmentation de l'action des protéines kinases différentes (258,259) indique la justesse du chemin choisi selon la structure fondamentale. D'après le nombre des traveaux, on sait que les modulations différentes de la croissance cellulaire conduisent au changement de la comosition glycolipidique (5,260,261). Le changement de la composition glycolipidique est brillamment observable à partir de nombreuses comparaisons des cellules normales et cancéreuses (262-265). La différence essentielle dans le processus du rétablissement de la fluorescence a été démontrée entre les cellules normales et cancéreuses (266,267), ce qui doit- témoigner apparemment en faveur des dimentions différentes des zones de mobilité limitée des récepteurs avec les ligands dans le cas de cellules normales et cancéreuses reflétant la composition différente des composants lipidiques dans le complexe.De plus les travaux empiriques concernant une addition des glycolipides dans la membrane cellulaire ont démontré les changements considérables des processus les plus essentiels dans les cellules, et en particulier un arrêt de la pro lifération cellulaire (2,256,263,268).On vois bien en conséquence de ces travaux le rôle des gangliosides dans le processus de la division inter rompu des cellules et la possibilité avec leur aide-d'influencer ce processus. Bien sûr c'est seulement avec la connaissance scientifique de la séquence des évenements pendant la formation du complexe: récepteur sphingolipides, phospholipides en accorde avec la structure proposée, qu'on peut trouver des préparations les plus efficaces des spningolipides naturels ou synthétisé spéciallement dans ce but par les méthodes de la biochimie ou de la chimie organique classiques (269). Une autre application importante pour la médicine découle de la structure fondamentale concernant la dizaine de maladies mentales des nouveaux-nés du type de sphingolipidoses (notamment les maladies de Sandhoff, de Fabr de Gaucher, de Krabbe, de Niemann-Pick, de Tay-Sachs,gangliosidose GM3,leucodystrophie métachromatique,gangliosidose généralisée,lactosylcéramidose). Ces sphingolipidoses sont des maladies héréditaires avec une accumulation des lysosphingolipides à cause du catabolisme perturbé qui conduit à la sphingosine et au céramide. Selon Hannun et Bell (220) et Kreutter et al (270) les gangliosides différents et tous leurs dérivés ont inhibé la protéine kinase C in vitro. Le premier groupe des auteurs attribue "à la accumulation intracellulaire des lysosphingolipides..une inhibition de la protéine kinase C". Le fait de la présence de telles accumulations dans la cellule, comme les auteurs le constatent, sert à leur hypothèse (227). Le deuxème groupe des auteurs attribue cette inhibition à la réaction de la protéine kinase C avec les gangliosides. Ma structure fondamentale donne une autre explication claire de la forme de la régulation de la protéine kinase C. Les sphingolipides se trouvent dans les lysosomes, comme résultat de lten- docytose provoquée par le ligand, ce que la première fois découle de ma structure proposée. Dans le cas normal il y a leur hydrolyse jusqu'à la sphingosine et le céramide qui se déplacent par les chemins intracellulaires "adressés" vers la surface intérieure de la membrane comme la rétroaction pour la protéine kinase C (reg. plus haut, s.v.p.). Je propose la première fois que l'inactivation des kinases pendant leur interaction in vitro avec les autres sphingolipides et leurs produits se passe seulement à cause de la similitude de leur structure avec celle de la sphingosine et du céramide mais ces glycosphinolipides ne peuvent pas être transportés par les mêmes chemins que la sphingosine et le céramide.En conséquence je proprse d'introduire la sphingosine ou/et le céramide pour la lutte contre les maladies mentionnées des dérangements du catabolisme de la sphingosine et du céramide par le biais de l'endocytose (et seulement de l'endocytose par les puits recouverts) parce que l'introduction des sphingolipides faites par les auteurs (220) doit conduire au nombre des autres effets (selon ma structure),et leur livraison vers la couche intérieure de la membrane ne peut pas être garantie adéquatement. Je constate qu'on peut, par exemple, créer la préparation nouvelle avec la méthode de l'extraction avec l'hep- tane des lipides de LDL (271), facilement endocytable, et leur remplacement par la sphingosine et/ou le céramide. La création des préparations plus effectives et moins nocives pour l'exé- cution de l'anesthésie est une application importante de la structure décrite parce que selon cetLe structure le mécanisme de l'action des anesthétiques (reg. plus haut, s.v.p.) consiste à detruire les liaisons H interlipidiques pendant la formation du complexe récepteur, sphingolipides , phospholipidesv cholestérol grâce aux groupes polaires de l'anesthétique. Donc selon cette structure originale, la création du réseau des liaisons hydrogène et des charges à la surface de la membrane plasmique joue un rôle essentiel dans les fonctions vitales des cellules (transmission du signal, différenciation, endocytose, mitose, endocytose, synthèse des molécules). On peut s'attendre à ce que l'introduction des molécules chargées à la surface cellulaire puisse empêcher l'activité cellulaire. Bien sûr, on ne pourra le faire de manière efficace et intelligente que lorsque l'on connaîtra le réseau des liaisons hydrogène et des charges pour des récepteurs pendant l'action des signaux spécifiques selon la structure et les moyens proposés plus haut.Ces extra-charges (ayant une ou deux polarités en même temps) peuvent être introduites ou avec les molécules (comme les anticorps ou les lectines) qui possèdent une affinité avec des composés membranaires particulaires (pour préserver l'action du signal) ou qui possèdent une af finité avec des objets subordonnés être endocytés pour préserver cette endocytose ou ces extra-charges peuvent être appliquées avec les molécules chargées par l'introduction directe de ces molécules dans la couche membranaire. Regardons l'application de cette innovation pour le cas des molécules chargées et introduites directement dans la couche membranaire: Il est connu que le cholestérol possède une structure hydrophobe avec un groupe polaire (OH) situé au pôle de la structure annulaire. Sa partie hydrophobe est inserée dans la membrane et son groupe polaire est situé près de la surface membranaire (46,272). Donc on peut s'attendre à ce que les autres composés avec de telles propriétés puissent avoir une position similaire. On doit prendre en considération, bien sûr, les forces conduisant à l'affini té correspondant entre ce composé et les composés membranaires (cette polarité au pôle n'est pas une propriété suffisante pour être bien insérée dans la membrane). Le 1-oxide-2-pyridinethione (pyrithione) possède de telles propriétes. Il est bien connu que les dérivés de ce composé ont une activité antibactérienne et antifongique (273,274). Il est interessant ae noter que les produits, les plus communs utilisés comme antibactériens et antifongiques, sont les dimères: sialicyl anilides, carboanilides et diphenol (chacun de leurs deux anneaux contient les groupes polaires comme éthoxy, hydroxy et halogènes) mais le (mono) phenol a ces activités à un niveau très reduit (274,275). Apparemment l'affinité d'un seul anneau avec la membrane n'est pas si forte et le second anneau multiplie la constante de binding de l'association. Cela peut être analogue à l'augmentation de l'affinité (avidité) des anticorps multivalents (276).Ainsi les sels (avec plusieurs anneaux) des métaux multivalents /comme Zn,Fe,Al,Mn,Sb,Cu,Bi,Sn,Pb,Co de pyrithione (PTO)/ou du (S-S) dimère de PTO sont treks actifs. Selon Pristley et Brown (277) le Zn pyrithione (ZnPTO) est plus actif que le Na pyrithione (NaPTO), malgré le fait que le ZnPTO existe comme un complexe sans charge nette tandis que le NaPTO est le sel où PTO ait une charge négative (278) (selon la structure fondamentale mentionnée plus haut, la molécule chargée doit être plus active). Les résultats sur les cellules isolées dans les cultures montrent aussi l'activité toxique (reversible avec des petites concentrations) de ZnPTO et NaPTO pour la survie cellulaire (par ce mécanisme, une connu d'eux) (277,279) et pour l'activité antimitotique avec (très) petites concentrations (279,280).On a pu observer également l'inhibition d'une liberation d'histamine (le signal) des mastocytes en culture avec des très petites concentrations de ZnPTO et NaPTO (279). Donc au vue de la structure décrite plus haut et des résultats expérementaux cités, j'ai regardé l'activité du dérivé de l-oxide-2-pyridinéthione: ZnPTO dans la solution liquide de shampooing "Active" (avec la concentration de sel cosmétique: 0,75%) contre les poux. Ces résultats étaient très concluants.Chacune des 7 expériences , testée sur l'homme contaminé par les poux, était tres largement positive et les 100% des poux ( > 40 dans chaque expérience) dans les cheveux étaient "immediatement" ( p.), on peut evidemment avoir la même activité destructive avec les sels de PTO contre les monocellulaires: protozoaires. En conséquence de l'action fulgurante des sels de PTO sur les oeufs des insectes, on peut conclure les mêmes résultats destructeur avec les oeufs des helminthes. Evidemment les résultats semblables doivent être valables pour tous les autres sels et dimères de PTO (reg. plus haut, s.v.p.). Je doit noter que malgré cette activité foudroyante pour les insectes, les préparations de ces dérivés de PTO sont exceptionnellement neutre pour les hommes et pour les animaux. Malgré une intense utilisation de ZnPTO contre des pellicules il n'y avait presque pas de rapport de dermatite allergique (281).Il n'y avait pas d'effet toxique subaiguë de ZnPTO aux doses de îOmg per kg du poids de l'animal par jour pendant 15-80 jours pour les rats, les lapins et les singes (282). Lorsque cette substance de PTO a été administréé dans le tube digestif, il n'y avait pas d'effets nocifs sur les rats,lapins, singes aux doses de 10 mg/kg/jour pendant 15-80 jours. Il nty avait non plus d'effets occulaires chez les animaux sauf les chiens (les animaux nocturnes) (282).J'ai démontré que les composés de PTO, incorporés dans les compositions de détergents sont très actifs et ils ont des propriétés comparables avec peu des composés utilisés avant pour des buts gramicidals (283).Il est connu que les composés actifs de PTO peuvent être incorporés dans les compositions prenant l'état liquid, barre ou poudre des detérgents organiques, des savons ou pas savons et des detérgents nonioniques, anioniques, cationiques ou amphotériques comme on peut désirer pour satisfaire les exigences des produits particuliers (281). La synthèse de PTO à partir du halogène pyridine (284) et de ses dérivés métaux (Me) (273) sont simples. La raison d'une telle protection cutanée chez l'homme et les animaux peuvent être parce que quelques constituants de l'épiderme de la peau des mammifères (comme le strutum corneum- la plus importante barrière de peau peuvent bloquer l'absorption ou diminuer la cytotoxicité de MePTO tandis que la micine, salive et traces de sérum diminuent l'action de MePTO (285). La toxicité intraveneuse des dérivés de PTO a été démontrée et les doses sub aiguë de 125 mg/kg/jour de ZnPTO sont létales pour les lapins (286). Apparemment dans ce cas, il y a la destruction de la membrane cellulaire /(279), reg.aussi ci-dessous, s.v.p./. Il faut mentionner que ces composés montrent la propriété de rester sur la peau et de retenir l'activité pendant le lavage (283). En plus de l'innocuité mentionnée de relativement petites doses des dérivés de PTO subaiguë ou ces doses introduites dans les animaux par le tube digestif (10 mg/kg/jour pendant 15-80 jours), il y a un autre argument qui rend l'utilisation de ces produits indispensables pour le traitement des animaux domestiques avec les pesticides: L'ELIMINATION réversible de ces substances de l'organisme.Les arguments suivants montrent que a)le mécanisme propose plus haut de l'action de ces dérivés de PTO par la rupture du réseau des liaisons hydrogène et des charges sur la membrane cellulaire plasmique n'oblige pas ces substances à traverser la membrane, et c'est bien compatible avec le mécanisme d'avoir une action commune (280) pour les dé- rivés chargés(Na) qui ne peuvent pas, en principe, traverser la bicouche membranaire et les dérivés polaires de Zn; b)on peut deduire de petites doses (PTO) introduites pendant presque 80 jours (282) sans detecter d'effet nocif chez les animaux, qu'il n'y a pas d'accumulation de ces substances qui, aux fortes doses(125 mg/kg/jour), sont létales; c)ce mécanisme proposé plus haut de l'action de ces substances (dans des doses resonables) montre seulement le blocage du signal dans la membrane cellulaire extérieure, mais pas de destruction membranaire et cellulaire in situ; après l'élimination des petites doses de ces substances la cellule reprend son rythme normal (27 9) Donc le Jeu d'enorme activité de ces substances contre les insectes et de la grande innocuité chez l'homme et les animaux est (outre de la très forte défence par le stritium corneum de la peau des mammifères) dans l'énorme différence de leurs poids aux mêmes doses utilisées qui sont très petites pour les mammifères et grandes pour les insectes C.à.d. ces extrêmement fortes, mais pas dangereuses pour la santé des hommes, animaux (et apparemment les oiseaux) et plantes (selon mon observation) préparations, prenant en considération leur élimination de l'organisme dans le cas de petites concentrations, sont indispensables pour l'utilisation contre tous les insectes (et aussi les protozoaires et les oeufs des helminthes) dans la medicine, la vétérinarie et aussi dans l'agriculture des plantes. On peut voir l'application de l'utilisation des extra-charges sur la surface cellulaire par les anticorps extra-chargés dans un exemple très important de l'endocytose des virus: Il est connu que les virus HIV (virus de l'immuno-dificience humaine) couverts par les anticorps, peuvent encore être endocytés par les cellules par les puits recouverts (287) et l'infection continue (288). Les autres virus suivent souvent le même destin (289 291). Si on prend en consideration que les liaisons hydrogène et les charges ont un rôle-clef à jouer dans l'endocytose (reg. plus haut, s.v.p.), je propose d'utiliser contre les virus des anticorps avec des charges modifiées qui doivent empêcher l'endocytose de ces virus. Ces extra-charges peuvent aussi aider à empêcher un attachement des virus.Pour modifier la charge on peut utiliser les anticorps en augmentant la quantité des acides aminés chargées dans sa séquence modifiee, ou on peut attacher aux anticorps (surtout dans le fragment Fc) les moleculés différentes chargées (par exemple, l'acide polyglutamique ou polylysine). On ne pourra le faire de ma niere efficace et intelligente que lorsque l'on connaîtra le reseau des liaisons hydrogène et des charges dans la transmission des signaux. Ces extracharges, selon la structure proposée, doivent empêcher l'endocytose des virus. On peut s'attendre aussi, pendant l'utilisation de mêmes types de molécules chargées, au changement des activités vitales des bactéries conduisant à leur neutralisation.Par exemple, l'arrêt de la division: parce que la separation de phases, dépendant des charges, doit avoir lieu pendant la division cellulaire (reg. plus haut, s.v.p.). Le fait que l'autre façon d'introduire de l'extra-charge sur la surface cellulaire (les sels de PTO) est effective contre les bactéries (reg. plus haut, s. v.p.) soutient cette conclusion. Ces anticorps,mentionnés plus haut, ayant la séquence modifiée avec la quantité augmentée des acides aminés charges, "annihilants" d'après la structure fondamentale, peuvent être appliqués avec succès en utilisant les bactéries et virus inoffensifs,couraament decrits (292). Récemment on a réussi à construire un vecteur capable d'insérer des gènes étrangers dans les bactéries inoffensives comme BCG (Bacille de Calmette Guérin) ou dans d'autres bactéries rendues non pathogènes (293) ou dans les virus comme le virus vaccinia ou des virus beaucoup plus bénins /Ref. dans (294, 295)/.Ces auteurs ont pu produire une réponse immunitaire de l'organisme utilisant des gènes étranger des protéines antigèniques des bactéries et des virus pathogènes.Cette méthode est très moderne et perspective, même si une série de problèmes apparaît (292). Je propose ici un moyen encore plus radical:utiliser des génomes de ces bactéries et des virus inoffensifs, vivant dans l'organisme, pour produire des anticorps directement dans l'organisme. Pour cela il faut introduire, avec les méthodes de génie genetique courantes (296) les gènes des anticorps desirés dans ces bactéries et virus inoffensifs. Le moyen doit être plus efficace si l'on utilise des anticorps perfectionnés comme des anticorps avec la quantité augmentée des charges (voir plus haut) ou les anticorps appartenant aux sous-classes spéciales qui n'existent pas dans notre système d'évolution terrestre (243-245,293). De telles réponses radicales d'anticorps, produites par les génomes des virus et des bactéries inoffensifs n'existent pas encore. Grâce à cette réponse universelle on peut attendre une explosion imprévisible dans la guérison des maladies. Le fait, que pour la neutralisation des virus et bactéries,on puisse utiliser des anticorps incomplets avec extra-charges, synthétisés déjà par le génomes bactériens modifiés (29.7), donne une base proche et perspective pour des applications médicales. Ces résultats ont été déposés en 1988 et publiés dans les éditions de la Protection de la Propriété Industrielle (398-301). Li terature 1.Karplus M. & McCammon J.A. Annu.Rev.Biochem.52,263,1983 2. 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REVENDICATIONS 1.Innovation "Structure fondamentale de l'action des récepteurs et ces conséquences pratiques radicalement importantes contenant le gamme des préparations contre virus (HIV compris), cancer, sphingolipidoses, bactéries, insectes, protozoaires et helminthes et pour anesthésie" caractérisée en ce qu'elle comporte une série de connaissances nouvelles de l'action des hormones, des neurotransmetteurs et des facteurs de croissance avec les validations nouvelles suivantes: la création des complexes: ligands récepteur lipides selon le schéma: récepteur, ganglioside cérébroside sphingomyeline, choléstérol avec les liaisons hydrogène interglucidiques et interlipidiques surtout; la modulation de la structure de la couche intérieure de la membrane pour la création des sites de l'association avec les protéines mobiles comme la protéine kinase C, la protéine G ou les phospholipases par les chaînes très longues de la couche extérieure et une augmentation de l'insaturation des acides gras de la couche intérieure; la validation de I'endocytose comme moyen de la régulation négative (ré- troaction) des enzymes de la couche interieure de la membrane, en par ticulier de la protéine kinase C;; la validation de la structure micellaire et rotatoire pour le transport de Ca2+ à travers la membrane plasmique avec l'acide lysophosphati dique d'après l'action de la phospholipase A2 et de I'acyltransférase; la validation des structures fondamentales de la biologie cellulaire:: les structures communes de l'action des récepteurs; la structure de l'action de l'endocytose; la structure de l'équilibre dynamique et statique des récepteurs dans la membarne; la structure de l'action des puits recouverts; la structure de la mobilité cellulaire; la structure de l'action de la toxine pertussis; la structure complète de l'interaction des lymphocytes B et T; les conséquences pratiques faites à partir de cette structure fondamen tale et ses validations mentionnées permettant d'obtenir le gamma de NOWELLES PREPARATIONS RADICALEMENT IMPORTANTES:: 2.Innovation selon la revendication 1 caractérisée en ce qu'elle comporte de nouvelles PREPARATIONS avec la sphingosine et/ou le céramide contre les maladies mentales-SPHINGOLIPIDOSES (maladies de Sandoff,de Fabry,de Gaucher,de Krabbe,de Niemann-Pick,de Tay-Sachs,gangliosidose GM , leukodystro- phie métachromatique, gangliosidose généralisée, lactosylcéramidose) incorporant les porteurs de sphingosine et/ou céramide qui peuvent être endocytés dans la cellule par les puits recouverts. 3.Innovation selon la revendication 1 caractérisée en ce qu'elle comporte de nouvelles PREPARATIONS pour la réalisation de l'AXESTHESIE qui élimine à cause de ces groupes polaires des liaisons intermoléculaires hydrogène d'après la création du complexe: recepteur+sphingolipides++phospholi- pides-cholestérol. 4.Innovation selon la revendication 1 caractérisée en ce qu'elle comporte de nouvelles PREPARATIONS des sphingolipides naturels et synthétiques contre le CANCER qui bloquent la division continue des cellules. 5.Innovation selon la revendication 1 caractérisée en ce qu'elle comporte de nouvelles PREPARATIONS des gangliosides et des glycolipides neutres qui approchent l'action des récepteurs de l'état pathologique à l'action des récepteurs en état normal connus par l'assistance des séquences de l'action de chaque récepteur particulier en état normal et pathologique établies avec les moyens proposés. 6.Innovation selon les revendications I et 5 caractérisée en ce qu'elle comporte de nouvelles PREPARATIONS pour la rupture du réseau des liaisons hydrogène et des charges à la surface de la memebrane plasmique et qui en conséquence empêche l'activité cellulaire avec la totalité des extracharges induites avec ces PREPARATIONS (faites de manière la plus efficace et intellegent d'après les sequences de ces réseaux des liaisons hydrogène et des charges établis selon les moyens proposées): a) faites des molécules (comme les anticorps et les lectines) qui sont affines aux certains composés membranaires ou aux objets subordonnés être endocytés; b) faites des molecules chargees introduites directement dans la couche membranaire. 7.Innovation selon les revendications 1 et 6 caractérisée en ce qu'elle comporte de nouvelles PREPARATIONS avec des dérivés de 1-oxide-2-pyridin- éthione (les sels des métaux: Na,Zn,Fe,Al,Sb,Cu,Bi,Sn,Pb,Co,Mn et le.dimère disulfure) contre tous INSECTES et leur formes NON-IMAGO, contre les PRO TOZOAIRES et les oeufs des HELMINTHES. 8.Innovation selon les revendications 1 et 6 caractérisé en ce qu'elle comporte de nouvelles PREPARATIONS des anticorps de n'importe quel type, espèce et hétérogénéité, ayant les charges modifiées, agissant contre tous VIRUS (HIV compris) qui doivent empêcher la pénétration des virus dans la cellule et contre les EACTERIES qui doivent neutraliser leurs fonctions (surtout leur division). 9.Innovation selon les revendications 1,6 et 8 caractérisée en ce qu'elle comporte de nouvelles PREPARATIONS des anticorps modifiés: a) par différentes molécules chargées qui sont conjugues avec ces anti corps; b) par l'augmentation de la quantité totale des acides aminés chargés dans la séquence des anticorps. 10.Innovation selon les revendications 1 et 9 caractérisée en ce qu'elle comporte de nouvelles PREPARATIONS des virus et des bactéries inoffensifs ayant les génomes des anticorps désirés avec leur transcription et translation dans l'organisme.