Brevet FR2624022A1 — publié le 19890609

APPAREIL DE PERFUSION CONTENANT DES HEPATOCYTES ET PROCEDES POUR SA PREPARATION ET SON UTILISATION L'invention concerne un appareil de perfusion contenant des hépatocytes et des procédés pour sa préparation et son utilisation. Les appareils de perfusion de l'invention contenant des hépatocytes sont utiles notamment comme foies artificiels externes et réacteurs à hépatocytes. La nécessité d'un foie artificiel externe, par exemple pour un patient dont le foie est déficient et dans l'attente d'une greffe, est reconnue dans l'art, Jauregui H.O. et coll., "Hybrid Artificial Liver", dans Szycher M. (ed.), Biocompatible Polymers, Metals and Other Composites (Lancaster, PA, Technomic Pub) 1983, pp. 907-928 et brevet US n' 3 734 851 de Matsumura. Wolf F.W. et Munkelt B.E., "Bilirubin Conjugation by an Artificial Liver Composed of Cultured Cells and Synthetic Capillaries", Vol. XXI Trans. Amer. Soc. Artif. Int. Organs, 1975, pp. 16-23, décrivent des expériences dans lesquelles des cellules d'hépatome (tumeur hépatique) de rat sont disposées dans les régions entre les fibres semi-perméables creuses d'une cartouche et on fait passer du sang à travers les fibres pour le traiter avec les cellules d'hépatome. Dans ces appareils à fibres creuses, les fibres sont utilisées pour isoler les cellules du système de défense immunitaire du patient et ont des tailles des pores permettant le transfert des substances toxiques. Rager et coll., "Noenatal Hepatocyte Culture on Artificial Capillaries. A Model for Drug Metabolism and the Artificial Liver", ASAIO J., 6:26-35 (Janvier/Mars 1983), et Jauregui H.O. et coll., "Adult Rat Hepatocyte Cultures at the Cellular Component of an Artificial Hybrid Liver", dans Paul J. (ed.), Biomaterials in Artificial Organs, (MacMillan) 1983, pp. 130-140 décrivent des expériences dans lesquelles on cultive des hépatocytes (cellules hépatiques saines) sur les surfaces extérieures et à l'intérieur des parois de fibres semi-perméables creuses dans une cartouche. La dernière référence suggère le traitement des fibres avec du collagène avant l'ensemencement avec les hépatocytes pour améliorer la fixation. - Jauregui H.O. et coll., "Hybrid Artificial Liver", supra, indiquent qu'il est souhaitable de fixer les hépatocytes (qui sont des cellules tributaires de l'ancrage) à un substrat polymère biocompatible (p. 913) et indiquent la fixation à l'aide de ligands tels qu'une asialoglycoprotéine, l'insuline, le facteur de croissance épidermique, le collagène et la fibronectine (p. 917). L'invention concerne de façon générale un appareil de perfusion qui comprend une membrane semi-perméable pour séparer un compartiment de perfusion d'un compartiment d'hépatocytes et utilise une liaison de reconnaissance oligosaccharide-lectine pour fixer les hépatocytes à un élément support de biopolymère dans le compartiment des hépatocytes. Dans les modes de réalisation préférés, les hépatocytes ont une activité de cytochrome P450, qui est l'activité principale de détoxification de la cellule hépatique; la membrane est constituée par des fibres creuses communiquant avec les entrées et sorties de perfusion de l'appareil et les hépatocytes sont fixés sur des portions de la surface extérieure des fibres; les lectines sont l'agglutinine de Lens culinaris (LCA), l'agglutinine de Phaseolus vulgaris (PHA) ou l'agglutinine de germes de blé (WGA); l'appareil comprend également une entrée de déchets et une sortie de déchets, et il existe un second ensemble de fibres creuses communiquant avec l'entrée et la sortie de déchets; il y a deux types de lectines raccordés aux deux ensembles de fibres, le premier type (LCA et PHA) reconnaissant les sucres situés de façon prédominante dans le domaine des sinusoïdes sanguins des hépatocytes, par exemple les groupes i-D-mannosyle et c-D-glucosyle (pour LCA) et -D-galactosyl-(1-3)-NAcgalactosyl-t-D-galactosyle (pour PHA), le second type (WGA) reconnaissant les sucres situés de façon prédominante dans le domaine biliaire des hépatocytes, par exemple l'acide -NAc-neuraminique. L'appareil de perfusion selon l'invention peut être utilisé comme réacteur à hépatocytes. Il peut également être raccordé à un patient à l'aide d'aiguilles de ponction veineuse et utilisé comme foie artificiel. D'autres caractéristiques et avantages de l'invention apparaitront à la lecture de la description ci-après de modes de réalisation préférés et des revendications. Les modes de réalisation préférés de l'invention vont maintenant être décrits en regard des dessins annexés, dans lesquels: la figure 1 est une élévation schématique d'un appareil de perfusion selon l'invention; la figure 2 est une représentation schématique de la fixation d'un hépatocyte à une surface extérieure d'une fibre creuse de l'appareil de la figure 1; la figure 3 est une représentation schématique d'une autre fixation d'un hépatocyte à la surface externe d'une fibre creuse de l'appareil de la figure 1; la figure 4 est une élévation schématique d'un autre mode de réalisation d'un appareil de perfusion selon l'invention; la figure 5 est une coupe schématique verticale selon la ligne 5-5 de la figure 4, de l'appareil de la figure 4; et la figure 6 est une représentation schématique de la fixation polarisée d'hépatocytes à des fibres creuses selon l'autre mode de réalisation illustré par la figure 4. Structure de l'appareil La figure 1 illustre un appareil de perfusion 10 comprenant une enveloppe externe rigide 12 en plastique contenant plusieurs fibres creuses 14 faites d'une membrane semi-perméable et des bouchons extérieurs 16 et 18. Les extrémités supérieure et inférieure des fibres creuses 14 sont empotées dans un matériau d'empotage 15 et ainsi scellées à la surface interne de l'enveloppe 12 à proximité des extrémités supérieure et inférieure selon des techniques qui sont bien connues dans l'art. Le bouchon 16 a une entrée de perfusion 20 et le bouchon 18 a une sortie de perfusion 22 qui communiquent toutes deux avec les intérieurs des fibres creuses 14. Les orifices 24 et 26 sont vers l'intérieur relativement à la matière d'empotage 15 et assurent l'accès à la région du récipient 12 située à l'extérieur des fibres creuses 14. Les fibres 14 agissent comme une barrière entre le compartiment de perfusion 25, l'intérieur des fibres (figure 2) et le compartiment des hépatocytes 27 dans la région entre les surfaces extérieures des fibres 14 et l'intérieur de l'enveloppe 12. La figure 2 montre un hépatocyte 28 qui est fixé à la surface externe d'une fibre creuse 14 par une liaison de reconnaissance oligosaccharidelectine comprenant des sucres 30 naturellement présents sur la surface de l'hépatocyte 28 et des lectines 32 liées par covalence à la fibre creuse 14. Les lectines 32 sont de préférence l'agglutinine de Lens culinaris (LCA, spécifique des groupes x-D-mannosyle et o-D-glucosyle) ou l'agglutinine de Phaseolus vulgaris (PHA, spécifique du groupe 6-Dgalactosyl-(1-3)-NAc-galactosyl--D-galactosyle). Comme le montre la figure 3, qui illustre un autre mode de fixation, un hépatocyte 28 est fixé de façon semblable à la surface externe de la fibre creuse 14 par une liaison de reconnaissance oligosaccharide- lectine, mais dans ce cas, le sucre 30 (galactose) est lié par covalence à la fibre 14 et la lectine 33 (récepteur à l'asialoglycoprotéine) existe naturellement à la surface de l'hépatocyte 28 (voir Steer C.J. et coll., "Studies on a Mammalian Repatic Binding Protein Specific for Asialoglycoproteins", Journal of Biological Chemistry, vol. 255, No. 7, 10 avril 1980, pp. 3008-3013). Un avantage de cette disposition est que seules les cellules hépatiques se fixent à la membrane. Comme le montrent les figures 4 à 6 qui illustrent un autre mode de réalisation, l'appareil de perfusion 38 comprend des fibres creuses 14' pour un courant de déchets, W, et des fibres creuses 14" pour un courant de produits nutritifs, N. Bien que la figure 4 illustre un écoulement en courants de même sens, un écoulement à contre-courant peut être utilisé et peut être préféré. Les fibres creuses 14' sont empotées dans les orifices de déchets 40 pour assurer une traversée des déchets à l'intérieur des fibres 14' et les fibres creuses 14" sont empotées dans les orifices de produits nutritifs 42 à l'intérieur des fibres 14" pour assurer un passage des produits nutritifs à l'intérieur des fibres 14". Un autre compartiment est constitué par la région à l'intérieur de l'enveloppe 12 et à l'extérieur des fibres 14' et 14"; ce compartiment complémentaire communique avec les orifices 44 et 46. Comme le montre la figure 6, des hépatocytes 34 sont fixés à la fibre creuse 14' par des lectines constituées de l'agglutinine de germes de blé qui reconnaissent les sucres situés de façon prédominante dans le domaine biliaire des hépatocytes 34 (c'est-à-dire la 1-N-acétylglucosamine et l'acide NAc-neuraminique). Les hépatocytes 36 sont fixés à la fibre creuse 14" par l'intermédiaire des lectines LCA ou PHA qui reconnaissent les sucres (mentionnés cidessus) situés principalement dans le domaine des sinusoides (pôle sanguin). Donc, les pôles sanguins des hépatocytes 36 sont dirigés pour recevoir les produits nutritifs du courant de produits nutritifs N et les pôles biliaires des hépatocytes 34 sont dirigés pour excréter les déchets vers le courant de déchets W. Fabrication et utilisation Le foie artificiel 10 est constitué d'une enveloppe standard 12 munie de fibres creuses empotées selon des modes opératoires bien connus dans l'art. Les fibres 14 sont faites de polyuréthane polyacrylique et ont des diamètres extérieurs entre 150 Fm et 400 Fm, des diamètres intérieurs entre 50 1m et 350 Bm et des pores de taille telle que les limites de séparation correspondent à des poids moléculaires de 40 000 à 250 000. Les surfaces externes des fibres 14 sont traitées pour établir des groupes carboxy et/ou amino pour faciliter la fixation des lectines selon des techniques connues dans l'art. Par exemple, les surfaces externes des fibres peuvent être traitées pour établir des groupes hydroxyles que l'on utilise ensuite pour établir des groupes carboxy et/ou amino selon des techniques bien connues (Curtis A.S.G. et coll., "Substrate Hydroxylation and Cell Adhesion", J. Cell Science, Vol. 86, 1986, pp. 9-24, Schnabel W., Polymer Degradation (Munich, 1981)). Les lectines 32 sont liées par covalence aux surfaces extérieures des fibres creuses selon la méthode au carbodiimide décrite par Hatten M.E. et Francois A.M., "Adhesive Specificity of Developing Cerebellar Cells on Lectin Substrata", Developmental Biology, Vol. 87, 1981, pp. 102-113. Si l'on utilise l'autre procédé de fixation illustré par la figure 3, des sucres et non des lectines sont liés par covalence aux surfaces extérieures des fibres 14. On prépare les hépatocytes à partir de foies d'homme, de rat ou de porc et on les isole selon une modification de la méthode décrite par Seglen P. O., "Preparation of Isolated Rat Liver Cells", chapitre 4, dans Methods in Cellular Biology, 13:29-83 (1976), à l'aide du milieu de culture tissulaire essentiel de Chee modifié (Scott Labs, Fiskeville, RI ou MA Bioproducts, Walkersville, MD) avec addition de 10 % de sérum de veau foetal. Ce milieu de culture tissulaire contient des concentrations accrues d'arginine, d'asparagine, d'isoleucine, de leucine, de sérine, de valine et de glutamine. Un pouvoir tampon accru est assuré par l'incorporation de mg/l de bicarbonate de sodium. Le milieu d'ensemencement comprenant les hépatocytes est injecté par les orifices 24 et 26 dans le compartiment d'hépatocytes 27 pour remplir la région entre les extérieurs des fibres creuses, on ferme des orifices 24 et 26 et on retient le milieu d'ensemencement dans le compartiment d'hépatocytes 27 avec de l'air à l'intérieur des fibres pendant 2 heures au cours desquelles la fixation des hépatocytes se produit. On fait passer du milieu frais (sans hépatocytes) par les orifices 24 et 26 à travers le compartiment 27 pour éliminer les cellules non fixées à l'intérieur du compartiment 27 (par exemple, 10 à 20 % des cellules). Le milieu d'ensemencement contient suffisamment d'hépatocytes pour que le nombre effectivement fixé soit d'au moins 87 x 109 (un nombre théorique d'hépatocytes capable de maintenir en vie un sujet humain atteint d'une insuffisance hépatique totale). On fait également passer du milieu frais (sans hépatocytes) par les intérieurs des fibres à un débit de 15 ml/min pour entretenir les cellules. On recycle ce milieu à travers une boucle sans fin faite principalement de PTFE (choisi en raison de ses caractéristiques de faible absorption), la boucle comprend également une petite portion de tubulure de Néoprène dans une pompe péristaltique (choisi en raison de ses caractéristiques d'absorption relativement faibles et de sa bonne souplesse dans la pompe) et une section longue d'un mètre de tubulure Tygon (choisi pour sa perméabilité à l'oxygène malgré ses caractéristiques d'absorption relativement importantes). La fabrication du dispositif 38 est semblable, les lectines différentes étant fixées aux fibres respectives 14' et 14". Le temps écoulé entre la fixation des cellules et l'utilisation peut se situer, par exemple, entre 24 heures et 4 semaines. Pendant cette période, on perfuse en continu le milieu dans les intérieurs des fibres, comme noté ci-dessus, afin d'entretenir les cellules en leur apportant des produits nutritifs et de l'oxygène. L'appareil de perfusion 12 peut être utilisé comme réacteur à hépatocytes pour étudier l'effet de différentes conditions (par exemple des produits toxiques et nutritifs différents) sur le fonctionnement des hépatocytes. L'appareil de perfusion 12 peut également être utilisé comme foie artificiel pour un patient dans l'attente d'une greffe de foie. On élimine tout d'abord le milieu nutritif par rinçage des intérieurs des fibres avec une solution salée stérile. On raccorde l'entrée et la sortie de perfusion 20 et 22 en maintenant des conditions stériles à une tubulure stérile (non représentée) ayant des aiguilles de ponction veineuse de prélèvement et de retour pour le raccordement à un patient. La tubulure peut également comprendre des raccords pour un autre traitement extracorporel du sang, par exemple une dialyse ou une technique comprenant une séparation de composants du sang, par exemple un échange de plasma. L'orifice 26 pourrait être raccordé à un trajet d'écoulement permettant l'élimination des produits résiduels des hépatocytes dans le compartiment d'hépatocytes 27 et le retour sélectif éventuel de certains composants du composant 27 à la canalisation d'écoulement du sang conduisant au patient, par exemple à l'aide d'un appareil complémentaire à membrane d'ultrafiltration pour limiter la taille des composants renvoyés dans le sang du patient. Après amorçage avec du soluté salé stérile de la totalité de la tubulure, on la raccorde par ses aiguilles de ponction veineuse au patient et le sang s'écoule à l'intérieur des fibres 14. Les produits chimiques toxiques et les autres entités du sang, qui sont plus petites que la taille des pores et ont une concentration plus élevée dans le compartiment 25 que dans le liquide du compartiment 27 des hépatocytes, traversent la paroi faite d'une membrane semi-perméable des fibres 14 et sont métabolisés par les hépatocytes 28. Les composants plus gros du sang, par exemple les globules blancs et rouges et les immunoglobulines, ne traversent pas les pores. Le sang, dans les fibres 14, est à une pression plus élevée que dans la chambre 27 des hépatocytes et cette pression transmembranaire provoque de plus une ultrafiltration. L'utilisation de l'appareil de perfusion 38 est semblable, avec des possibilités complémentaires de traitement des déchets assurées par les fibres de déchets 14' et les orifices de déchets 40 additionnels. Les hépatocytes 28 conservent leur fonction de cytochrome P450 et peuvent donc assurer la détoxication de nombreux composants toxiques responsables du syndrome d'encéphalopathie hépatique. De même, les hépatocytes 28 conservent leurs fonctions de production chimique et les produits chimiques qu'ils forment peuvent être renvoyés au patient selon deux voies possibles: à travers la membrane constituant la paroi de la fibre 14 ou par l'intermédiaire d'un dispositif additionnel à membrane d'ultrafiltration raccordé à l'orifice 26, comme noté ci-dessus. Les expériences ont démontré que des hépatocytes fixés aux surfaces extérieures de membranes semi-perméables creuses par une liaison de reconnaissance oligosaccharide-lectine sont viables et conservent leur fonction de glycuronidation, comme déterminé par le métabolisme du Rouge de phénol. Des expériences ont également démontré que les hépatocytes fixés à la surface extérieure des fibres creuses par une liaison de reconnaissance oligosaccharide- lectine conservent une activité de cytochrome P450. D'autres modes de réalisation de l'invention entrent dans le cadre d e l' i n v e n t i o n. Par exemple, on pourrait utiliser d'autres lectines fixant les hépatocytes aux membranes, par exemple les lectines indiquées par McMillan P.N. dans "Light and Electron Microscope Analysis of Lectin Binding to Adult Rat Liver In Situ", Laboratory Investigation, Vol. 50, No. 4 (1984), pp. 408-470, incorporé ici à titre de référence avec les autres références mentionnées. Des lectines spécifiques que l'on peut utiliser dans la liaison de reconnaissance oligosaccharide-lectine selon l'invention sont la Concanavaline A (Con A, spécifique de l'-D-mannose, de l'o-D-glucose et de l'x-NAc-glucosamine), l'agglutinine de Ricinus communis (RCA I, spécifique du P-D-galactose et de l'o-D-galactose) et l'agglutinine de Pisum sativum (PSA, spécifique de l'*-D-mannose et de l'-D-glucose. REVENDICATIONS 1. Appareil de perfusion 10 pour la culture et l'entretien d'hêpatocytes, caractérisé en ce qu'il comprend une chambre ayant une entrée de perfusion 20 et une sortie de perfusion 22, une membrane semi-perméable dans ladite chambre délimitant un compartiment de perfusion 25 et un compartiment d'hépatocytes 27 séparés, un support de biopolymère dans ledit compartiment d'hépatocytes, et des premiers hépatocytes dans ledit compartiment d'hépatocytes fixés par une liaison de reconnaissance oligosaccharide-lectine audit support de biopolymère. 2. Appareil selon la revendication 1, caractérisé en ce que lesdits hépatocytes ont une activité de cytochrome P450. 3. Appareil selon la revendication 1, caractérisé en ce que ledit support de biopolymère est constitué d'un portion de la surface de ladite membrane en vis-à-vis dudit compartiment d'hépatocytes. 4. Appareil selon la revendication 3, caractérisé en ce que ladite membrane comprend un premier ensemble de fibres creuses 14, les intérieurs desdites fibres creuses communiquant avec lesdites entrée et sortie de perfusion et ledit support de biopolynère est constitué de portions de la surface extérieure desdites fibres. 5. Appareil selon la revendication 1, caractérisé en ce que ladite lectine est liée par covalence audit support de biopolymère et ledit oligosaccharide fait partie de la surface cellulaire desdits hépatocytes. 6. Appareil selon la revendication 1, caractérisé en ce que ledit oligosaccharide est lié par covalence audit support de biopolymère et ladite lectine fait partie de la surface cellulaire desdits hépatocytes. 7. Appareil selon la revendication 5, caractérisé en ce que ladite'lectine comprend une lectine du groupe de l'agglutinine de Ricinus communis, l'agglutinine de germes de blé, l'agglutinine de Pisum sativum, l'agglutinine de Lens culinaris, l'agglutinine de Phaseolus vulgaris et la Concanavaline A. 8. Appareil selon la revendication 7, caractérisé en ce que ladite lectine comprend l'agglutinine de Lens culinaris. 9. Appareil selon la revendication 7, caractérisé en ce que ladite lectine comprend l'agglutinine de germes de blé. 10. Appareil selon la revendication 4, caractérisé en ce que lesdites fibres creuses sont faites de polyuréthane polyacrylique. 11. Appareil selon la revendication 4, caractérisé en ce que ladite chambre comprend de plus une entrée de déchets 40 et une sortie de déchets 40 et de plus un second ensemble de fibres creuses 14', les intérieurs dudit second ensemble de fibres creuses communiquant avec lesdites entrée et sortie de déchets. 12. Appareil selon la revendication 11, comprenant de plus des seconds hépatocytes dans ledit compartiment d'hépatocytes fixés par une liaison de reconnaissance oligosaccharide-lectine aux surfaces extérieures dudit second ensemble de fibres creuses. 13. Appareil selon la revendication 12, dans lequel ladite première lectine appartient à un type qui reconnaît les sucres situés de façon prédominante dans le domaine des sinusoides sanguins desdits premiers hépatocytes. 14. Appareil selon la revendication 13, caractérisé en ce que ladite seconde lectine appartient à un type qui reconnaît les sucres situés de façon prédominante dans le domaine biliaire desdits seconds hépatocytes. 15. Appareil selon la revendication 14, caractérisé en ce que ladite première lectine comprend l'agglutinine de Lens culinaris ou l'agglutinine de Phaseolus vulgaris. 16. Appareil selon la revendication 15, caractérisé en ce que la seconde lectine comprend l'agglutinine de germes de blé. 17. Appareil selon l'une quelconque des revendications 4, 7, ou 12, caractérisé en ce que lesdits premiers hépatocytes ont une activité de cytochrome P450. 18. Appareil selon la revendication 1, caractérisé en ce qu'il comprend de plus des tubulures pour le raccordement à un patient, lesdites tubulures étant raccordées auxdites entrée et sortie de perfusion. 19. Appareil selon la revendication 18, caractérisé en ce qu'il comprend de plus un dispositif pour renvoyer certains produits formés par lesdits hépatocytes audit patient. 20. Appareil selon la revendication 19, comprenant de plus un dispositif pour traiter lesdits produits avant leur retour audit patient. 21. Appareil selon la revendication 1, comprenant de plus un dispositif pour faire s'écouler des produits nutritifs à travers ledit compartiment de perfusion. 22. Procédé pour préparer un appareil de perfusion 10 pour cultiver et entretenir des hépatocytes, caractérisé en ce qu'il consiste à se pourvoir d'une chambre ayant une entrée de perfusion 20 et une sortie de perfusion 22, une membrane semi-perméable dans ladite chambre délimitant un compartiment de perfusion 25 et un compartiment d'hépatocytes 27 séparés et un support de biopolynère dans ledit compartiment d'hépatocytes, et fixer des premiers hépatocytes dans ledit compartiment d'hépatocytes par l'intermédiaire d'une liaison de reconnaissance oligosaccharide-lectine audit support de biopolymère. 23. Procédé selon la revendication 22, caractérisé en ce que lesdits hépatocytes ont une activité de cytochrome P450. 24. Procédé selon la revendication 22, caractérisé en ce que ladite membrane comprend un premier ensemble de fibres creuses 14, les intérieurs desdites fibres creuses communiquant avec lesdites entrée et sortie de perfusion et ledit support de biopolynère est constitué de portions de la surface extérieure desdites fibres. 25. Procédé selon la revendication 24, caractérisé en ce que ladite fixation comprend la liaison par covalence de ladite lectine auxdites portions extérieures de la surface et ledit oligosaccharide fait partie de la surface cellulaire desdits hépatocytes. 26. Procédé selon la revendication 25, caractérisé en ce que ladite lectine comprend une lectine du groupe de l'agglutinine de Ricinus communis, l'agglutinine de germes de blé, l'agglutinine de Pisum sativum, l'agglutinine de Lens culinaris, l'aggl-utinine de Phaseolus vulgaris et la Concanavaline A. 27. Procédé selon la revendication 26, caractérisé en ce que ladite fixation comprend l'injection d'un milieu d'ensemencement comprenant des hépatocytes dans ledit compartiment d'hépatocytes. 28. Procédé selon la revendication 27, caractérisé en ce que ladite fixation comprend de plus une période d'attente après ladite injection puis la purge dudit milieu dudit compartiment d'hépatocytes. 29. Procédé selon la revendication 28, caractérisé en ce qu'il comprend de plus le passage de produits nutritifs à travers ledit compartiment de perfusion après ladite fixation pour entretenir lesdites cellules. 30. Procédé d'utilisation d'un dispositif de perfusion d'hépatocytes, caractérisé en ce qu'il consiste à se pourvoir d'un dispositif de perfusion 10 comprenant une chambre ayant une entrée de perfusion 20 et une sortie de perfusion 22, une membrane semi-perméable dans ladite chambre délimitant un compartiment de perfusion 25 et un compartiment d'hépatocytes 27 séparés, et des premiers hépatocytes fixés par une liaison de reconnaissance oligosaccharide-lectine à un support de biopolymère dans ledit compartiment d'hépatocytes, et faire passer un liquide de perfusion à travers ladite entrée, ledit compartiment d'hépatocytes et ladite sortie. 31. Procédé selon la revendication 30, caractérisé en ce que lesdits hépatocytes ont une activité de cytochrome P450. 32. Procédé selon la revendication 30, caractérisé en ce que ladite membrane comprend des fibres creuses 14, les intérieurs desdites fibres creuses communiquant avec lesdites entrée et sortie de perfusion et ledit support de biopolymère comprend des portions de la surface extérieure desdites fibres. 33. Procédé selon la revendication 32, caractérisé en ce que laditelectine comprend une lectine du groupe de l'agglutinine de Ricinus communis, l'agglutinine de germes de blé, l'agglutinine de Pisum sativum, l'agglutinine de Lens Culinaris, l'agglutinine de Phaseolus vulgaris et la Concanavaline A. 34. Procédé selon la revendication 31, caractérisé en ce que ledit liquide de perfusion comprend du sang, et les tubulures raccordent un patient auxdites entrée et sortie de perfusion. 35. Procédé selon la revendication 34, caractérisé en ce qu'il comprend de plus le retour de certains produits formés par lesdits hépatocytes audit patient. 36. Procédé selon la revendication 35, caractérisé en ce qu'il comprend de plus le traitement desdits produits avant le retour audit patient. 37. Procédé selon la revendication 30, caractérisé en ce qu'il comprend de plus le passage de substances nutritives à travers ledit compartiment de perfusion.