Brevet FR2623399A1 — publié le 19890526

Procédé de fabrication d'antigènes, de vaccins et de sérums contre les maladies bactériennes ou virales et composition mise en oeuvre. L'invention a pour objet un nouveau procédé de fabrication d'antigènes, et leur utilisation dans des vaccins ou sérums. Il existe certains types de virus pour lesquels aucun vaccin efficace n'a pu être mis au point à ce jour, notamment en raison du fait qu'ils sont entourés d'une membrane cytoplasmique qui est dérivée de l'espèce infectée et qui les masque à la reconnaissance des défenses immunitaires du malade. On sait par ailleurs que les virus enveloppés sont constitués de deux sortes d'antigènes - les Ons sont propres à la membrane cytoplasmique, comme ils sont dérivés des cellules de l'espèce infectée, ils sont faiblement immunigènes pour celle-ci; - les autres sont propres au corps viral et sont donc beaucoup plus immunigènes pour l'espèce infectée. Il s'agit en particulier des virus de l'Herpès, des Togavirus, des Rétrovirus pour lesquels il n'existe pas de vaccin ou de sérum efficace à ce jour, mais également d'autres virus pour lesquels il existe déjà des procédés de vaccination, notamment les Myxovirus, les Réovirus, etc. Le demandeur a découvert qu'il était possible de préparer des antigènes de tels virus, en particulier les antigènes propres au core viral, grâce à l'utilisation d'une composition particulière ayant un effet phlogistique et caustique sur les membranes cytoplasmiques qui entourent les cores viraux tout en ayant un effet de mise en éveil et de stimulation des membranes cytoplasmiques entourant les cellules eucaryotes. Une telle composition a déjà été décrite du moins en partie dans la demande de brevet français n" 87.10912, ayant essentiellement pour objet la composition pharmaceutique destinée à la prévention et au traitement des maladies d'origine bactérienne ou virale et contenant dans un milieu alcoolique physiologiquement acceptable et antiseptique, au moins un agent à effet phlogistique choisi parmi la poudre de Cantharide, Causticum d'Hahneman et/ou l'iode, à des doses homéopathiques, au moins un agent ayant un effet de stimulation des membranes cytoplasmiques eucaryotes choisi parmi les oligo-éléments et/ou le phosphore, à des doses homéopathiques et au moins un agent ayant un effet de tannage et d'inhibition des cores viraux et des membranes bactériennes, constitué par du phénol. La composition décrite dans cette demande antérieure peut également contenir des substances actives ayant un effet de congestion des vaisseaux sanguins, de mobilisation leucocytaire, de fluidification des sécrétions et d'inhibition des suppurations, choisies plus particulièrement parmi l'acide silicilique, l'arnica de montagne, l'Hepar Sulfur utilisés à des doses homéopathiques. La composition décrite antérieurement peut également contenir des agents à effet anti-inflammatoire tels que l'indigo sauvage, la Bryone, présents également à des doses homéopathiques. Cette composition peut également contenir de l'acide nitrique, du carbonate de calcium, produit en particulier à partir des huîtres, de l'Echinée d'Amérique du Nord, de l'eau de seiche, la teinture de feuilles de Thuya, l'anémone pulsatile et du fenouil d'eau. Le demandeur a découvert maintenant, ce qui fait l'objet de l'invention, qu'en utilisant une telle composition, il était possible de préparer des antigènes particulièrement efficaces pour la préparation de vaccins ou de sérums destinés à combattre les maladies virales ou bactériennes, en particulier des maladies induites par des virus entourés d'une membrane cytoplasmique dérivée de l'espèce infectée. Un objet de l'invention est donc constitué parle procédé de préparation d'antigènes. Un autre objet de l'invention est constitué par l'utilisation de ces antigènes pour la préparation de vaccins ou de sérums. L'invention a également pour objet une composition destinée à être utilisée dans la préparation de ces antigènes. D'autres objets de l'invention apparaîtront à la lecture de la description et des exemples qui suivent. Le procédé conforme à l'invention destiné à préparer des antigènes est caractérisé plus particulièrement par le fait que l'on introduit dans un milieu physiologiquement acceptable contenant des virus ou des bactéries vivants, au moins une composition contenant dans un milieu légèrement antiseptique, au moins un agent caustique sur les membranes virales, au moins un agent vésicant et des substances ayant un effet protecteur sur les cellules vivantes. Conformément à l'invention, on utilise à titre de substance antiseptique, des alcools physiologiquement acceptables, plus particulièrement l'alcool éthylique ou le phénol, ayant également un effet de tannage et d'inhibition des cores viraux et des membranes bactériennes. Il est également possible d'utiliser d'autres antiseptiques bien connus dans ce domaine. Ces agents sont utilisés dans des doses faibles, de préférence comprises pour l'alcool dans des proportions de 20 à 50% par rapport au poids total de la composition, le reste étant constitué essentiellement par de l'eau. Le phénol est de préférence utilisé dans des proportions comprises entre 1 à 3% en poids par rapport au poids total de la composition. Cette composition contient, par ailleurs, des substances caustiques à des doses homéopathiques et plus particulièrement du bichromate de potassium, du chlorure de mercure, en particulier le chlorure de mercure sublimé, l'acide nitrique, l'acétate de cuivre, l'acide arsénieux, l'acide chlorhydrique, l'acide chromique, l'acide sulfurique, le calcium natif, le chlorure d'antimoine, le chlorure de zinc, le nitrate d'argent, la potasse, la soude, le sulfate de cuivre, ainsi que tout autre composé ayant un tel effet et leurs mélanges, à des doses homéopathiques. Les substances vésicantes utilisées également conformément à l'invention à des doses homéopathiques, sont plus particulièrement choisies parmi la poudre de Cantharide, l'émitique, l'euphorbe, l'huile de croton, l'iodum mercurique, ainsi que le bichromate de potassium également utilisé pour son effet caustique, l'essence de térébenthine ou l'essence de moutarde, ainsi que tout autre agent ayant un effet vésicant et leurs mélanges, à des doses homéopathiques. La composition conforme à l'invention contient également des substances d'inhibition des ARN messagers à des doses homéopathiques et plus particulièrement les extraits de feuilles de thuya ou tout autre antimitotique de synthèse tels ceux utilisés en chimiothérapie. Lorsque le milieu physiologiquement acceptable contenant les virus ou les bactéries est utilisé en présence d'une culture cellulaire, la composition contient également des substances de protection des cellules eucaryotes, de la circulation sanguine, de la mobilisation leucocytaire. Une composition particulièrement préférée, utilisable conformément à l'invention, est une composition contenant dans de l'eau, 20 à 50% d'alcool éthylique, 1 à 3% de phénol, et les composants suivants à des doses homéopathiques exprimées en unités hahnemaniennes (CH), à savoir Iode 10 à 100 CH Acide nitrique 5 à 40 CH Poudre de Cantharide 5 à 60 CH Causticum d'Hahneman O à 80 CH Carbonate de calcium O à 60 CH Oligo-éléments O à 80 ppm Echinée d'Amérique du Nord O à 20 ppm Phosphore 6 à 15 CH Eau de seiche O à 60 CH Teinture de feuilles de Thuya 25 à 60 CH Acide silicilique O à 60 CH Arnica de Montagne O à 20 CH Anémone pulsatile O à 60 CH Bryone O à 20 CH Fenouil d'eau O à 20 CH Hepar Sulfur O à 80 CH Indigo sauvage 5 à 35 CH Les substances caustiques mentionnées ci-dessus sont utilisables plus particulièrement dans les proportions suivantes Bichromate de potassium O à 30 CH Chlorure de mercure sublimé O à 50 CH Acétate de cuivre O à 40 CH Acide arsénieux O à 80 CH Acide chlorhydrique o à 30 CH Acide chromique O à 40 CH Acide sulfurique O à 30 CH Calcium natif O à 40 CH Chlorure d'antimoine O à 30 CH Chlorure de zinc O à 60 CH Nitrate d'argent O à 50 CH Potasse O à 50 CH Hydroxyde de sodium O à 30 CH Sulfate de cuivre O à 30 CH Les substances vésicantes utilisables à dose homéopathique le sont plus particulièrement dans les doses suivantes Emitique O à 30 CH Euphorbe O à 30 CH Huile de croton O à 30 CH Iodum mercurique O à 60 CH Essence de térébenthine O à 30 CH Essence de moutarde O à 20 CH La composition utilisée conformément à l'invention est introduite dans le milieu physiologiquement acceptable contenant les virus ou les bactéries, sur culture cellulaire, et est utilisée dans des concentrations variables suivant la nature des agents pathogènes en cause, et selon que l'on veut obtenir des virus atténués ou des virus-inactivés. Pour l'obtention de virus atténués, on utilisera la composition de l'invention à une concentration de 10 à 1/iode. Pour l'obtention de virus inactivés, on l'utilisera à l'état pur. On utilise, soit des virus atténués, soit des virus inactivés, suivant la nature de la réponse immunitaire et la marge de séc.urité souhaitées. L'homme de métier pourra choisir l'une ou l'autre des méthodes. Le milieu physiologiquement acceptable contenant le ou les virus ou la ou les bactéries, est essentiellement constitué par du sérum physiologique ou de l'eau de mer (Plasma d'aminton). Les virus utilisables sont de préférence des virus enveloppés par une membrane cytoplasmique dérivée de l'espèce infectée parmi lesquels on peut plus particulièrement citer les virus de l'Herpès (ADN), les Togavirus (ARN) et les Rétrovirus (ARN). On peut plus particulièrement citer les virus du type HIV pour les Rétrovirus. L'invention s'applique également aux autres virus pour lesquels il existe déjà des procédés de vaccination, notamment les Myxovirus, les Réovirus .... L'invention peut également s'appliquer à la production de vaccins antibactériens et en particulier sur des bactéries telles que streptocoques, staphylocoques pseudomonas. Comme indiqué ci-dessus, les antigènes de la membrane cytoplasmique, dans la mesure où ils sont dérivés des cellules de l'espèce infectée, sont plus faiblement immunigènes, de sorte qu'il est souhaitable de séparer ces antigènes, des antigènes propres au core viral. Un autre objet de l'invention est donc constitué par un procédé de séparation des antigènes propres à la membrane de ceux propres aux cores viraux à partir de la composition d'antigène produite conformément au procédé de l'invention. La séparation, à partir de la composition ainsi produite, de l'antigène spécifique au core viral peut être effectuée par des techniques classiques telles que plus particulièrement une technique de séparation par migration sur gélose, par utilisation d'ultrasons, par sédimentation ou filtrage, par chromatographie en phase gazeuse ou en couche mince. L'homme de métier pourra choisir l'une ou l'autre de ces méthodes selon la nature des virus en cause ou éventuellement combiner ces différentes méthodes de séparation. L'antigène spécifique du core viral ainsi préparé constitue donc un autre objet de l'invention. Un tel antigène s'est révélé particulièrement efficace puisqu'il permet d'éviter notamment du fait de l'absence de l'antigène membranaire, la formation d'un complexe antigène-anticore protégeant le core viral des anticorps qui lui sont spécifiques. La composition d'antigène préparée selon le procédé conforme à l'invention et de préférence l'antigène spécifique du core viral sont utilisés pour la préparation de vaccins selon les méthodes classiques. On introduit les antigènes en cause dans un milieu physiologiquement acceptable habituellement utilisé pour la préparation des vaccins. On peut plus particulièrement mettre les antigènes séparés et purifiés en émulsion dans des huiles ou alors dans de l'hydroxyde d'aluminium en présence éventuellement d'agents dopants, c'est-à-dire d'agents stimulants de l'immunité, tels que plus particulièrement des extraits des membranes bactériennes. Une autre forme d'application des antigènes conforme à l'invention est leur utilisation pour la préparation de sérums hyperimmuns. La préparation de tels sérums est connue en elle-même et consiste à effectuer des injections répétées des vaccins préparés selon l'invention à des espèces animales telles que par exemple le cheval ou le chimpanzé et à isoler ultérieurement de façon classique le sérum hyperimmun ainsi prépare. Les virus traités conformément à l'invention peuvent être également utilisés directement pour l'autovaccination ou la production de sérums hyperimmuns, par application à l'individu ou à l'animal de la composition résultant du traitement par la composition conforme à l'invention. Les vaccins ainsi préparés peuvent être utilisés pour l'homme ou l'animal afin de le vacciner contre différentes maladies résultant de l'infection par des virus enveloppés et plus particulièrement l'Herpès, le S.I.D.A.et toutes les autres maladies bactériennes ou virales. Les sérums hyperimmuns peuvent être utilisés notamment pour le traitement immédiat des maladies. Les antigènes conformes à l'invention peuvent donc, d'une part, s'appliquer pour vacciner des sujets sains afin de les immuniser contre un certain nombre de maladies ou alors pour traiter des sujet malades par injection du sérum hyperimmun, notamment par un traitement systémique. Le vaccin permet d'avoir un effet d'immunisation au bout de trois semaines. Les exemples suivants sont destinés à illustrer l'invention sans pour autant présenter un caractère limitatif. EXEMPLE 1 On a introduit dans une suspension de virus, à la concentration de 106, en particulier l'Equine Herpes Virus type I, responsable de la rhinopneumonie virale équine, la composition suivante Acide silicilique 30 CH Acide nitrique 12 CH Anémone pulsatile 30 CH Arnica de montagne 12 CH Indigo sauvage 12 CH Bryone 12 CH Poudre de Cantharide 12 CH Causticum d'Hahneman 30 CH Carbonate de chaux (huitres) 30 CH Echinée d'Amérique du Nord 12 CH Encre de seiche 30 CH Fenouil d'eau 12 CH Hepar sulfur 30 CH Iode 30 CH Phosphore blanc 12 CH Teinture des feuilles de Thuya 30 CH Phénol 2% Alcool 47,5 400 CM3 Eau 440 CM3 On met en présence une suspension virale Equine Herpes Virus (référence Pasteur) avec la composition définie ci-dessus. On prépare cinq compositions différentes en diluant respectivement à 1/10, 1/20, 1/30 et 1/40. On laisse incuber 1 heure à 37"C. On infecte des cultures cellulaires avec les suspensions virales ainsi traitées et on observe l'effet cytopathogène. Suivant les concentrations, on observe un effet virulicide de 6 log (V6) pour une dilution de 1/10, un effet virulicide de 3 log (V3) à 1/20, un premier effet virostatique (V55) pour une dilution de 1/40 et un dernier effet virostatique pour une dilution de 1/60. Les virus soumis à la concentration (VT) sont utilisés pour la réalisation d'un vaccin pour l'homme. Ceux correspondants aux stades V3 et V6 sont principalement utilisés pour la préparation de vaccins totaux chez l'animal, en vue de préparer des sérums hyperimmuns, et traiter l'homme malade en le décontaminant. Les sérums hyperimmuns peuvent etre titrés à 1/100, 1/150, 1/200. et 1/250 suivant la nature de la souche virale. On a obtenu des résultats similaires avec un Réovirus et un Togavirus. EXEMPLE 2 On a utilisé la meme composition que celle décrite dans l'exemple 1, on a effectué des injections répétées de l'antigène spécifique du core viral à un cheval et on a préparé de manière classique un sérum hyperimmun. Le sérum ainsi préparé a été injecté par voie parentérale à un cheval atteint d'une rhinopneumonie virale équine. On a constaté un effet après deux heures de traitement. REVENDICATIONS 1. Procédé de fabrication d'antigènes, caractérisé par le fait qu'on introduit dans un milieu physiologiquement acceptable contenant des virus ou des bactéries vivants, une composition contenant dans un milieu légèrement antiseptique au moins un agent caustique pour la membrane du virus ou de la bactérie, au moins un agent vésicant et des substances ayant un effet protecteur sur les cellules vivantes. 2. Procédé selon la revendication 1, caractérisé par le fait que le milieu légèrement antiseptique est constitué par un milieu aqueux contenant un alcool physiologiquement acceptable ou du phénol ou leurs mélanges. 3. Procédé selon la revendication 2, caractérisé par le fait que l'alcool est de l'alcool éthylique. 4. Procédé selon l'une quelconque des revendications 1 à 3, caractérisé par le fait que l'alcool est présent dans des proportions comprises entre 20 et 50% en poids par rapport au poids total de la composition et que le phénol est présent dans des proportions comprises entre 1 et 3% par rapport au poids total de la composition. 5. Procédé selon l'une quelconque des revendications 1 à 4, caractérisé par le fait qu'elle contient a titre de substance caustique, du bichromate de potassium, du chlorure de mercure sublimé, de l'acide nitrique, de l'acétate de cuivre, de l'acide arsénieux, de l'acide chlorhydrique, de l'acide chromique, de ltacide sulfurique, du calcium natif, du chlorure d'antimoine, du chlorure de zinc, du nitrate d'argent, de la potasse, de l'hydroxyde de sodium, du sulfate de cuivre ou leurs mélanges, à des doses homéopathiques. 6. Procédé selon l'une quelconque des revendications 1 à 5, caractérisé par le fait que la composition mise en oeuvre contient à titre de substance vésicante, de la poudre de cantharide, l'émitique, l'euphorbe, l'huile de croton, l'iodum mercurique, l'essence de térébenthine, le bichromate de potassium, l'essence de moutarde ou leurs mélanges, à des doses homéopathiques. 7. Procédé selon l'une quelconque des revendications 1 à 6, caractérisé par le fait qu'elle contient également des agents d'inhibition des ARN messagers à des doses homéopathiques. 8. Procédé selon la revendication 7, caractérisé par le fait que la compositIon mise en oeuvre contient, à titre de substance d'inhibition des ARN messagers, des extraits de feuilles de thuya ou des agents antimitotiques. 9. Procédé selon l'une quelconque des revendications 1 à 8, caractérisé par le fait que la composition mise en oeuvre contient des substances de protection des cellules eucaryotes, de la circulation sanguine, de la mobilisation leucocytaire. 10. Procédé selon l'une quelconque des revendications 1 à 9, caractérisé par le fait que les agents présents à des doses homéopathiques sont utilisés dans les proportions suivantes Iode 10 à 100 CH Acide nitrique 5 à 40 CH Poudre de Cantharide 5 à 60 CH Causticum d'Hahneman O à 80 CH Carbonate de calcium O à 60 CH Oligo-éléments O à 80 ppm Echinée d'Amérique du Nord O à 20 ppm Phosphore 6 à 15 CH Eau de seiche O à 60 CH Teinture de feuilles de Thuya 25 à 60 CH Acide silicilique O à 60 CH Arnica de Montagne O à 20 CH Anémone pulsatile O à 60 CH Bryone O à 20 CH Fenouil d'eau O à 20 CH Hepar Sulfur O à 80 CH Indigo sauvage O à 35 CH 11.Procédé selon l'une quelconque des revendications 1 à 10, caractérisé par le fait que la composition mise en oeuvre contient un ou plusieurs des agents suivants à des doses homéopathiques Bichromate de potassium Chlorure de mercure Acide nitrique Acétate de cuivre Acide 'arsénieux Acide chlorhydrique Acide chromique Acide sulfurique Calcium natif Chlorure d'antimoine Chlorure de zinc Nitrate d'argent Potasse Hydroxyde de sodium Sulfate de cuivre Emitique Euphorbe Huile de croton Iodum mercurique Essence de térébenthine Essence de moutarde 12. Procédé selon l'une quelconque des revendications 1 à 11, caractérisé par le fait que la composition mise en oeuvre est utilisée dans des proportions de 10 à 1/100 par rapport au poids total de la composition contenant les virus ou bactéries. 13. Procédé selon l'une quelconque des revendications 1 à 12, caractérisé par le fait que les virus sont choisis parmi les Rétrovirus, les virus de l'Herpès, les Togavirus. 14. Procédé selon l'une quelconque des revendications 1 à 13, caractérisé par le fait que les virus sont choisis parmi les Myxovirus et les Réovirus. 15. Procédé selon l'une quelconque des revendications 1 à 12, caractérisé par le fait que les bactéries sont choisies parmi le genre Streptomyces, Staphylocoques, Pseudomonas. 16. Procédé selon l'une quelconque des revendications 1 à 15, caractérisé par le fait que l'on fait suivre la préparation de la composition antigène d'une étape de séparation des antigènes spécifiques du core viral et des antigènes spécifiques de la membrane cytoplasmique. 17. Procédé selon la revendication 16, caractérisé par le fait que la séparation s'effectue par migration sur gélose, ultrasons, sédimentation, filtrage ou la combinaison de ces différentes méthodes. 18. Procédé selon l'une quelconque des revendications 1 à 17, caractérisé par le fait que l'on obtient des antigènes à base de virus atténués. 19. Procédé selon l'une quelconque des revendications 1 à 17, caractérisé par le fait que l'on obtient des antigènes à partir du virus inactivé. 20. Vaccin caractérisé par le fait qu'il contient au moins un antigène préparé par le procédé selon l'une quelconque des revendications 1 à 19, dans un support physiologiquement acceptable. 21. Sérum hyperimmun caractérisé par le fait qu'il a été préparé par injections répétées à un mammifère d'au moins un vaccin selon la revendication 20. 22. Antigène préparé selon l'une quelconque des revendications 1 à 19 pour son utilisation dans le traitement des maladies virales ou bactériennes. 23. Composition permettant la fabrication d'antigènes, caractérisée par le fait qu'elle contient dans un milieu légèrement antiseptique et physiologiquement acceptable au moins un agent caustique choisi parmi Bichromate de potassium Chlorure de mercure sublimé Acétate de cuivre Acide arsénieux Acide chlorhydrique Acide chromique Acide sulfurique Calcium natif Chlorure d'antimoine Chlorure de zinc Nitrate d'argent Potasse Hydroxyde de sodium Sulfate de cuivre ou leurs mélanges à des doses homéopathiques. 24. Composition selon la revendication 23, caractérisée par le fait qu'elle contient également des agents vésicants choisis parmi Emitique Euphorbe Huile de croton Iodum mercurique Essence de térébenthine Essence de moutarde 25. Composition selon l'une quelconque des revendications 23 et 24, caractérisée par le fait qu'elle contient également un ou plusieurs agents choisis parmi des substances d'inhibition des ARN messagers, des substances de protection de cellules eucaryotes, de la circulation sanguine et de la mobilisation leucocytaire.