Brevet FR2625507A1 — publié le 19890707

Procédé de préparation d'un copolymère de deux acides a-aminés et copolymère ainsi obtenu La présente invention concerne un nouveau procédé de synthèse d'un copolymère de deux acides a-aminés, qui comprend la préparation d'un mélange du N- carboxyanhydride d'un premier acide a-aminé et du N-carboxyanhydride d'un second acide a-aminé, suivie de la copolymérisation de ce mélange. Elle a également pour objet le copolymère obtenu par ce procédé. Conformément aux procédés connus de ce type, on obtient le mélange des N- carboxyanhydrides des premier et second acides a-aminés séparément le N-carboxyanhydride du premier acide a-aminé et le N- carboxyanhydride du second acide a-aminé, par réaction séparée du phosgène sur le premier acide aminé et sur le second acide aminé, puis (ii) en mélangeant, après éventuelle purification, les deux N- carboxyanhydrides ainsi obtenus. Du fait de la préparation distincte des deux E-carboxyanhydrides, ces procédés connus nécessitent la mise en oeuvre de deux chaînes parallèles de production comprenant chacune un réacteur muni d'accessoires divers (agitateur, moyens de mesure de la température, dispositif de reflux, amenées pour les réactifs, moyens de réglage du débit de phosgène, moyens d'évacuation du mélange réactionnelle), de moyens de purification du N-carboxyanhydride et de moyens de transfert dudit N-carboxyanhydride vers le réacteur de polymérisation. La mise en oeuvre de ces procédés fait donc nécessairement appel à. un équipement complexe et, partant, coûteux. En outre, il est souvent difficile de programmer toutes les opérations effectuées avec cet équipement pour qu'il y ait synchronisme entre les deux chaînes parallèles de production. Une telle difficulté résulte de la complexité des équipements utilisés, mais aussi du fait que la réaction de l'un des acides aminés avec le phosgène peut nécessiter une durée plus importante que l'autre acide aminé. Il s'ensuit qu'il arrive fréquemment, avec les procédés connus décrits ci-dessus, que les opérations relatives à l'un des 1-carboxyanhydrides soient terminées avant celles relatives à l'autre N-carboxyanhydride de sorte que le N-carboxyanhydride obtenu en premier doit être stocké pendant une période plus ou moins longue avant d'être utilisé en vue de la copolymérisation. Or, il a été constaté que ces N- carboxyanhydrides se conservent mal et sont sensibles à divers agents, -2 - notamment l'humidité, ce qui oblige à prendre des précautions qui compliquent encore les équipements et la synthèse desdits N-carboxyanhydrides. La présente invention a pour but de surmonter les inconvénients.sus- mentionnés et pour ce faire elle propose un procédé conforme à celui défini au premier paragraphe de cette description, qui se caractérise en ce que le mélange des N-carboxyanhydrides des premier et second acides a-aminés est obtenu par action du phosgène sur un mélange d'un premier et d'un second acides a-aminés ayant des vitesses de réaction voisines avec le phosgène. On comprendra en effet qu'en sélectionnant de manière appropriée les acides aminés de départ, à savoir ceux ayant des vitesses de réaction comparables avec le phosgène, il devient possible de les faire réagir simultanément avec le phosgène dans un réacteur unique et une seule chaîne de production est dès lors suffisante pour obtenir les N- carboxyanhydrides désirés ce qui non seulement simplifie grandement l'équipement à mettre en oeuvre pour la synthèse du copolymère désiré mais encore évite tout risque de dégradation des N-carboxyanhydrides puisque ces derniers sont obtenus simultanément et le stockage temporaire de l'un ou de l'autre n'est plus nécessaire. Les premier et second acides a-aminés sont avantageusement constitués par des acides a-aminés dont l'atome de carbone en position P se présente sous la forme CH2 et dont le groupe amine en a se présente sous la forme NH2. On préfère tout particulièrement que l'un des acides soit constitué par la leucine, notamment la L-leucine, et que l'autre acide soit constitué par l'acide glutamique ou l'acide glutamique dont la fonction carboxyle la plus éloignée de la fonction amine est estérifié par un groupe méthyle ou benzyle, notamment l'acide L-glutamique ou l'ester méthylique ou benzylique de l'acide Lglutamique. Le mélange des premier et second acides a-aminés destiné à réagir avec le phosgène comprend avantageusement de 40 à 60% en mole de l'un de ces acides aminés et 60 à 40% en mole de l'autre. La réaction des acides a-aminés peut être effectuée dans un solvant organique et on peut citer le dioxane ou le tétrahydrofurane à titre d'exemples. -3-- Avant de procéder à la copolymérisation des N-carboxyanhydrides résultants, il est souhaitable de les soumettre à un traitement approprié pour réduire leur teneur en dérivés chlorés, de préférence Jusqu'à une valeur inférieure à 0,1%, ces dérivés étant produits au cours de la réaction du phosgène avec les acides "-aminés. Un tel traitement est décrit ci-après dans le cadre de préparations données à des fins d'illustration de l'invention. Le mélange des N-carboxyanhydrides est ensuite soumis à la réaction de copolymérisation, avantageusement à des températures modérées, dans un solvant approprié tel que le dioxane et en présence d'un initiateur de copolymérisation comme une amine tertiaire (triéthylamine, tributylamine, triéthanolamine, etc.) éventuellement en présence d'un sel de lithium (chlorure ou nitrate par exemple) ou une base forte telle qu'un alcoolate de métal alcalin (méthylate de sodium par exemple). Le rapport de la somme du nombre de moles des N- carboxyanhydrides au nombre de moles de l'initiateur de copolymérisation est fonction de l'initiateur utilisé et de la viscosité souhaitée pour le copolymère. Ainsi, dans le cas o l'initiateur est constitué par la tributylamine, un rapport situé dans l'intervalle allant de 25 à 200 conduit à l'obtention d'un copolymère possédant une viscosité intrinsèque appropriée aux usages décrits ci-après auxquels est destiné ce copolymère. De même, lorsque l'initiateur est constitué par le méthylate de sodium, un rapport situé dans l'intervalle allant de 100 à 1000 conduit à l'obtention d'un copolymère approprié. Le copolymére obtenu par mise en oeuvre du procédé décrit ci-dessus, est isolé en coulant le mélange réactionnel dans un grand excès d'eau. En procédant ainsi, le copolymère précipite sous la forme d'un produit fibreux très hydrophobe et très volumineux. Ce copolymère trouve essentiellement son application comme moyen de revêtement des plaies cutanées, des zones cutanées en cours de réparation, des brulûres et des zones de prélèvement de greffes, moyen de revêtement qui favorise la cicatrisation tout en assurant, Jusqu'à la guérison ou la cicatrisation, la protection de ces plaies et zones contre les agressions extérieures, que ces dernières soient d'ordre mécanique ou microbien. -4- En vue de cette utilisation, le copolymère est amené sous une forme appropriée à son dépôt en mince couche sur la partie à protèger. Ainsi, ce copolymère peut par exemple être amené sous la forme d'un film mince ou d'une poudre ou incorporé dans un gel. A partir de ce copolymère on peut notamment réaliser un film mince par la technique bien connue de l'inversion de phase comme cela sera décrit ci-après avec davantage de détails. Un tel film est généralement translucide, souple et non poreux, il présente une épaisseur de préférence comprise entre 300 et 750pm et il est perméable à l'oxygène, à la vapeur d'eau et à certaines solutions désinfectantes que l'on pourrait éventuellement désirer appliquer à travers ce film. En vue de l'obtention d'un film ayant ces caractéristiques, il est souhaitable que le copolymère ait une viscosité intrinsèque à 30'C.. dans l'acide dichloroacétique comprise entre 0,5 et 3 dl/g. Après guérison ou cicatrisation, le film, la poudre ou le gel est retiré ou s'élimine spontanément de la zone sur laquelle il a été appliqué. i5 Les préparations suivantes sont données à titre d'illustration de l'invention. Préparation du L-glutamate de méthyle IL-Glu(ONe)] Dans un réacteur de 2 litres, on place 1,25 litre de méthanol. On coule ensuite à une température inférieure à 20'C, 100ml de chlorure d'acétyle. La coulée terminée et dans les mêmes conditions de température on aJoute en une seule fois 148 g d'acide L-glutamique et on agite à température ambiante pendant 24 heures. On coule enuite dans le mélange obtenu 125 ml de pyridine à une température inférieure à 20'C. Il se forme un précipité et on agite encore pendant 48 heures à température ambiante. On sépare le précipité par filtration, on le lave 2 fois à l'éthanol et une fois à l'éther, puis le sèche sous vide ce qui conduit à 174 g (rendement: 86, 56%) de l'ester attendu qui se présente sous la forme d'un produit blanc. Analyse élémentaire Trouvé (%) Calculé (%) C:45,22-45,23. 44,72 H:7,14-7,16 6,88 N:8,46-8,46 8,69 CCN éluant: BuOH/CH3COOH/HO20: 4/1/1 -5 Préparation du mélange des N-carboxyanhydrides de la L-leucine et du L- glutamate de méthyle Dans un réacteur de 2 litres muni d'un système antiretour de 2 litres, d'une arrivée de gaz permettant un débit important de phosgène et d'argon, d'un réfrigérant à boules, d'un receveur à soude et d'une colonne à charbon actif, on place 65,5 g de L-leucine (0,5 mole), 80,5 g de L-glutamate de méthyle (0,5 mole) et 1600 ml de dioxane anhydre passé préalablement sur alumine pour le débarrasser des peroxydes qu'il peut contenir. La suspension obtenue est purgée à l'argon pendant 30 mn. On passe ensuite un courant rapide de phosgène tout en agitant énergiquement le mélange. On porte la température à l'intérieur du ballon à 40 C. Au bout de 6 heures, le mélange réactionnel devient homogène. La solution est ensuite balayée à l'argon pendant au moins 48 heures à 40'C dans le but d'éliminer le maximum de dérivés chlorés dissous dans la solution. On évapore sous. vide et épuise le résidu avec 20 litres de dioxane anhydre par portions de 2 litres. On vérifie dans le distillat que la quantité de dérivés chlorés diminue progressivement. La solution dans le dioxane est évaporée sous vide et le résidu est repris avec 800 ml d'hexane sec. Il y a cristallisation d'un produit sur lequel on effectue, après séchage sous vide, un dosage potentiomètrique des ions chlorure. Dans le cas o la teneur en ions chlorure est supérieure à 0,4%, il y a lieu de reprendre les épuisements au dioxane. Dans le cas contraire, un traitement final avec la quantité théorique de AgaO en solution dans le dioxane doit permettre d'abaisser la teneur en ions chlorure à moins de 0, 1%. C'est la condition nécessaire pour obtenir à l'étape suivante un copolymère convenable pour la réalisation d'un film mince. On obtient finalement environ 140 g (rendement: 81,39%) du mélange attendu prêt pour la copolymérisation. Préparation du copolymère de la L-leucine et du L-glutamate de méthyle Dans un réacteur de 2 litres muni d'un agitateur puissant, on introduit 137 g du mélange préparé comme indiqué ci-dessus et 2000 ml de dioxane anhydre. La solution obtenue est portée, sous argon, à une température de 40'C. On introduit alors en une seule fois 16 ml d'une solution 0,1 M de méthylate de sodium dans le dioxane ou 8 ml d'une solution 1 X de tributylamine dans le dioxane. Au bout de 4 heures d'agitation la réaction de polymérisation démarre et la solution -6- devient de plus en plus visqueuse. On laisse encore agiter pendant 3 Jours en vérifiant la disparition de la bande caractéristique des N-carboxyanhydrides à 1785 cm' en I.R.. Le temps de polymérisation dépend de la quantité de dérivés chlorés présente dans le milieu et de la quantité d'initiateur de polymérisation utilisé. Pour une teneur en dérivés chlorés inférieure à 0, 1%, un rapport en moles du mélange des N-carboxyanhydrides à l'initiateur de 100 dans le cas de l'utilisation de la tributylamine ou de 500 dans le cas de. l'utilisation du méthylate de sodium est particulièrement convenable pour obtenir un copolymère apte à être mis sous la forme d'un film. La solution visqueuse du copolymère dans le dioxane est ensuite coulée lentement dans un récipient contenant 10 litres d'eau. Le copolymère précipite au contact de l'eau, on sépare le précipité par filtration, on le sèche à l'air sur papier et termine le séchage sous vide. On obtient ainsi 85 g d'un produit blanc ayant les caractéristiques suivantes: 5. viscosité intrinsèque à 30'C dans l'acide dichloroacétique: 1,79 dl/g analyse élémentaire: Trouvé (%) Calculé (%) C: 56,04-56,1? 56,23 N: 7,99-7,96 7,83 N: 10,48-10,42 10,93 * (Les pourcentages calculés sont déterminés pour une quantité équimolaire. de L-leucine et de L-glutamate de méthyle). pouvoir rotatoire: a=-44' (c=1% dans l'acide dichloroacétique) à 20'C pour la raie D du sodium. 25.Chromatographie liquide haute pression: dosage de la L-leucine et de l'acide L-glutamique après une hydrolyse de 48 heures dans HCl concentré à 100'C: L-leucine À 44% acide L-glutamique: 56% Fabrication d'un film mince à partir du copolymére de L-leucine et du L- glutamate de méthyle On commence par réaliser un collodion du copolymère dans un solvant organique très polaire tel que la N-méthyl pyrrolidone, la N-diméthylacétamide, la N- diméthylformamide, le diméthylsulfoxyde ou l'acide difluoro- ou trifluoro acétique, Après coulée, sur l'épaisseur voulue (500pm par exemple), du collodion obtenu, sur une plaque en verre, on immerge la plaque supportant le copolymère -7 - dans plusieurs bains d'eau successifs pour coaguler le collodion et laver le film résultant. On détache ce film de la plaque de verre et on l'immerge dans un bain contenant 75% de PEG 600 et 25% de sérum physiologique pour en imprégner le film en vue de sa conservation. Après mise en sachet imperméable, on stérilise le tout par irradiation de rayonnement y. -8- REVENDICATIONS 1. Procédé de synthèse d'un copolymère de deux acides a-aminés, qui comprend la préparation d'un mélange du N-carboxyanhydride d'un premier acide a-aminé et du N-carboxyanhydride d'un second acide a-aminé, suivie de la copolymérisation de ce mélange, caractérisé en ce que ledit mélange est obtenu par action du phasgène sur un mélange d'un premier et d'un second acides a-aminés ayant des vitesses de réaction voisines avec le phosgène. 2. Procédé selon la revendication 1, caractérisé en ce que -les premier et second acides a-aminés sont constitués par des acides a-aminés dont l'atome de carbone en position P se présente sous la forme CHm et dont le groupe aminc en a se présente sous la forme NH2. 3. Procédé selon la revendication 1 ou 2, caractérisé en ce que l'un des acides a-aminés est la leucine. 4. Procédé selon l'une des revendications précédentes, caractérisé en ce que. l'un des acides a-aminés est l'acide glutamique ou l'acide glutamique dont la fonction carboxyle la plus éloignée de la fonction amine est estérifiée pae un groupe méthyle ou benzyle. 5. Procédé selon l'une des revendications précédentes, caractérisé en ce que ledit mélange des premier et second acides a-aminés comprend de 40 à 60% en mole de l'un de ces acides aminés et 60 à 40% en mole de l'autre. 6. Copolymère obtenu par la mise en oeuvre du procédé selon l'une quelconque * des revendications 1 à 5. 7. Agent pour le revêtement des plaies cutanées, des zones cutanées en cours de réparation, des brûlures et des zones de prélèvement de greffes, caractérisé en ce qu'il comprend le copolymère selon la revendication 6. 8. Agent selon la revendication 7, caractérisé en ce qu'il se présente sous la forme d'un film mince, d'une poudre ou d'un gel.