Brevet FR2623498A1 — publié le 19890526

Nouveaux composés énantiomères dérivés d'amino-acides, leur procédé de préparation et leurs applications thérapeutiques. La présente invention est relative à de nouveaux composés énantiomères dérivés d'amino-acides, à leur procédé de préparation et à leurs applications thérapeutiques. Le composé N-(2 (mercaptométhyl)-1 oxo-3 phényl propyl) glycine ou thiorphan a été décrit sous sa forme racémique (R, S) comme un puissant inhibiteur de l'enképhalinase, enzyme responsable de l'inactivation des enképhalines, et comme un moins puissant inhibiteur de l'enzyme de conversion de l'angiotensine ou ACE (Roques et al., Nature, 1980,288, 286, Roques et al. EP-A-0038758; US-A-4513009). Ce composé présente des propriétés analgésiques par voie intraveineuse et intracérébroventriculaire liées à la protection des enképhalines endogènes mais aussi, à dose plus élevée, une activité hypotensive qui peut présenter des inconvénients pour certaines applications thérapeutiques. Ces mêmes propriétés et inconvénient potentiel se retrouvent dans un de ses dérivés, l'Acétorphan ou ester benzylique de N (acéthylthio-3 benzyl 2-propionyl) glycine (R, S) qui présente cependant l'avantage d'être actif par voie intraveineuse, à faible dose (voisine de 1 mg/kg) alors que le (R, S) thiorphan n'est actif que par voie intracérébrale ou à des doses environ 50 fois plus élevées, par voie générale (Lecomte et al., J. Pharmacol. Exp. Ther., 1986, 237, 937). Récemment, un procédé de synthèse asymétrique, diffi- cilement applicable à la préparation industrielle, a permis d'obtenir séparément les deux -énantiomères du thiorphan (Evans et al., J. Org. Chem. 1985, 50, 1830) et de montrer que, alors que ces deux composés présentent une activité inhibitrice de l'enképhalinase voisine, l'activité inhibi- trice de l'ACE résidait principalement dans l'isomère (S) et l'activité analgésique (par voie intracérébrale) principale- ment dans l'isomère (R). Par ailleurs, l'équi-activité, vis-à-vis de l'enképhalinase des deux isomères du thiorphan, obtenus ici encore par un procédé de séparation difficile- ment applicable à une préparation industrielle, a été confirmée (FourniéZaluski et al. J. Med. Chem. 1986, 29, 751). Le but de la présente invention est: 1. de fournir, à titre de produits industriels nouveaux, des préparations sensiblement pures des isomères (R) et (S) de l'acétorphan et de dérivés voisins, 2. d'apporter un nouveau procédé de séparation applica- ble à la préparation industrielle des isomères (R) et (S) de l'acétorphan et de dérivés voisins, 3. de décrire les activités analgésiques observées après administration à dose élevée par voie orale et sans effets secondaires gênants liés à l'inhibition de l'ACE, 4. de décrire un certain nombre d'autres effets de ces composés sur le tube digestif dont l'ensemble autorise une activité thérapeutique originale dans un certain nombre de troubles fonctionnels tel que le syndrome du "côlon irritable" pour lequel aucun traitement efficace n'a été proposé, 5. de fournir, par l'application thérapeutique de ces composés, de nouveaux médicaments. Les dérivés de l'invention répondent à la formule: CH3 - CO - S - CH2 - CH - CO - NH - CH2 - CO R1 I CH2 - C6H5 (R) et (S) dans laquelle R1 = CH3 ou CH2 - C6H5 Les composés ainsi définis sont les suivants: Exemple 1. CH3 - CO - S - CH2 - CH - CO - NH - CH2 C0 CH2 - CO C2 6H5 CH2 - C6H5 (R) Exemple 2. CH3 - CO - S - CH2 - CH- CO - NH -CH2 COQ CH2 - C6H5 CH2 - C6H5 (S) Exemple 3. CH3- CO - S - CH2 - CH - CO - NH - CH2 CO - CH3 I CH2 - C6H5 (R) Exemple 4. CH3 - CO - S - CH2 - CH - CO - NH - CH2 - CO - CH3 CH2 - C6H5 (S) Les composés de la présente invention sont préparés par la suite de réactions ci-dessous. el, Ph NH l NH 0 jo 0 OH ó-'( t ( +)2 NH1 -5Ni-il O OH OH Ph Ph s | 5cOH \ (5 > OO -.F-sPb. 'r-o o o (-)1 R(+)! A,&,J o Ph -)fS 1r Ph o 5(-)3 R(+)0o S 3 s(-)_s ó*)2P L'étape initiale est le dédoublement de l'acide acétylthio-3 benzyl 2-propanoique. Pour ce faire, on fait réagir l'acide racémique de préférence avec l!éphédrine (+), ou selon le cas (-) notamment dans l'éther. Le sel obtenu est recristallisé, par exemple dans un mélange de dichlorométhane/éther de pétrole. Les sels obtenus sont optiquement purs. L'acide est libéré par action, par exem- ple, d'acide chlorhydrique et le couplage avec l'ester correspondant de l'acide aminé (glycine ou alanine) est réalisé, de préférence, en présence de dicyclohexyl carbodi- imide (DCC) comme agent de couplage et d'hydroxybenzotriazole (HOBT) pour éviter la racémisation. Exemple 1. Ester benzylique de N (acétylthio-3-benzyl 2-propionyl) glycine (R). Synthèse d'acéthylthio-3-benzyl 2-propionate d'éphédrinium (+). Dans un erlenmeyer, on introduit 10 g d'acide acétylthio-3 benzyl-2 propanoique (42 mmol) racémique. On le dissout dans 50 ml d'éther, puis on ajoute 3,47 g de (+) éphédrine (21 mmol). On agite jusqu'à dissolution et laisse cristalliser à température ambiante. Les premiers cristaux apparaissent au bout de quelques heures (3h). On filtre le sel (brun) après 3 jours à température ambiante. Le sel est broyé et lavé par 5 ml d'éther. Masse de sel (+) obtenu: 4,2 g - Rendement: 49 % F = 103 - 114'C (C) 25 = +43,0' (c = 1,20 dans le MeOH) D On dissout 4,1 g de sel ( (C) = +43,0') dans 20 ml de dichlorométhane chaud. On revient à température ambiante puis on ajoute 20 ml d' éther de pétrole. On laisse cris- talliser à température ambiante. On filtre après 33 heures. Masse de sel (+) obtenu: 2,80 g - Rendement: 68 %. F = 115 - 123'C = +47,5' (c = 1,20 dans le MeOH) (D On répète l'opération précédente en dissolvant 2,39 g de sel (()25 = + 47,5') dans 11 ml de CH2C12 chaud et 7 ml d'éther de pétrole. On laisse cristalliser pendant 23 heures. On filtre. Masse de sel obtenu: 1,69 g - Rendement: 71 %. Rendement des 2 recristallisations: 48 %. (O)25 = +49,2' (c = 1,20 dans le MeOH). D Synthèse de l'acide R (+) acéthylthio-3 benzyl-2 propanoique. On met en solution 1,6 g du sel précédent (+) (()25 = +49,2') dans un mélange de 20 ml d'eau et de D ml de CH2Cl2. On ajoute de l'acide chlorhydrique 1N jusqu'à pH=1. On sépare la phase organique et on extrait la phase aqueuse par 2 fois 15 ml de CH2Cl2. Les phases organiques sont réunies, séchées sur MgS04 et concentrées pour donner l'acide (+) acétylthio-3 benzyl-2 propanoique. Masse d'acide (+) obtenu: 0,95 g - rendement: 97 %. ('()25 = +35,3' (c = 1,30 dans le MeOH). D Dans un tricol muni d'une garde à chlorure de calcium et d'une agitation magnétique, on place 3,74 g d'acide R (+) (15,7 mmol, (î)2 = + 35,4') en solution dans 26 ml de THF anhydre. On ajoute successivement, à environ 0-5'C, 5,29 g de glycinate de benzyle (sous forme de paratoluène sul- fonate, 15,7 mmol) et 1,58 g de triéthylamine (15,7 mmol) dans 30 ml de chloroforme, 2,13 g d'hydroxybenzotriazole (HOBT) (15,7 mmol) dans 22 ml de THF et 3,24 g de dicy- clohexylcarbodiimide (DCC) (15,7 mmol) dans 19 ml de chloro- forme. On agite 1 h à O'C puis 5 h à température ambiante. La dicyclohexylurée (DCU) est filtrée et on évapore à sec. Le résidu jaune est repris par 40 ml d'acétate d'éthyle. La DCU qui a, à nouveau, précipité est filtrée. La phase organique est successivement lavée par 1 fois 20 ml d'eau, 3 fois 20 ml d'une solution saturée d'hydrogénocarbonate de sodium, 1 fois 20 ml d'eau et 1 fois ml d'une solution saturée de chlorure de sodium. On sèche sur sulfate de magnésium et on- évapore à sec. On obtient un résidu solide jaune. On le dissout dans 25 ml d'éther à ébullition. On laisse refroidir. On filtre et sèche sous vide sur pentaoxyde de phosphore. On obtient un solide blanc. Masse du composé 1 R (+): 5,31 g - Rendement 87 %. F: 69'C (K) ( )25 = +23,9', c = 1,2 MeOH. D RMN 1H: 7,36 (s,5H); 7,24 (s,5H); 5,85 (s, 1H); ,14 (s, 2H); 3,95 (dd, 2H, J1 = 3,3 Hz, J2 = 4,6 Hz); 3,22 à 2,74 (m, 5H); 2,34 (s, 3H). IR (cm -1): 3280; 1755; 1695; 1640. RMN 13 C: 195,8 (s); 172,9 (s); 169,2 (s); 138,4 (s); 134,9 (s); 128,7 (d) ; 128,4 (d); 128,2 (d); 127,7 (d); 127,5 (d); 127,3 (d); 126,5 (d); 66,9 (t); 49,1 (d); 41,2 (t); 38,2 (t); 31,0 (t); 30,4 (q). Ce composé, R(+), sera désigné, ci-après, composé (1). Microanalyse: Trouvé: C%: 65,34; N%:3,95; H%: 6,10 Calculé: 65,45 3,63 5,97. Exemple 2: Ester benzylique de N (acétylthio-3-benzyl 2-propionyl) glycine (S) (-). On suit le mode opératoire décrit dans l'exemple 1 en utilisant la (-) éphédrine. Les caractéristiques du sel obtenu sont identiques à celles de son énantiomère décrit dans l'exemple 1, à l'exception du pouvoir rotatoire (c)q5 = -49,3 (1,4 MeOH). L'acide S (-) N acéthylthio 3-benzyl-2 propanoique est libéré dans les mêmes conditions que dans l'exemple 1 (K) D = -26,4 (1,3 MeOH). Pour la synthèse du (S) acétorphan, on suit le mode opératoire décrit dans l'exemple 1, à partir de l'acide S (-). Rendement: 84 %. (0) D = 24,1', c = 1,3, MeOH. Les caractéristiques spectrales de l'exemple 2 S (-) sont identiques à celles de son énantiomère. F: 71C (K). Microanalyse: Trouvé:C%: 65,02; N%: 3,88, H% 5,87 Calculé: 65,45 3,63 5,97. Ce composé sera désigné, ci-après, composé (2). Exemple 3. Ester méthylique de la N (R) acéthylthio-3 benzyl 2- propionyl glycine. Dans les conditions décrites pour l'exemple 1, l'acide R (+) est couplé avec le glycinate de méthyle et le produit attendu est obtenu avec un rendement comparable. Ce composé sera désigné, ci-après, composé (3). Exemple 4. Ester méthylique de la N (S) acéthylthio-3 benzyl 2- propionyl glycine. L'acide S (-) est couplé, dans des con- ditions décrites pour l'obtention de l'exemple 2, avec le glycinate de méthyle. Ce composé sera désigné, ci-après, composé (4). Dans une variante, on peut également préparer le com- posé (2), à titre d'exemple, en partant du filtrat obtenu dans l'exemple 1 après extraction de l'acéthylthio-3 benzyl 2-propionate d'éphédrinium (+ ). On traite le filtrat par la (-) éphédrine, le traitement se poursuivant comme dans 1' exemple 2. A/ - ETUDE BIOLOGIQUE. Dosage de l'activité "Enképhalinasique" et de l'activité de l'angiotensine convertase (ACE) et détermination de l'effet des inhibiteurs in vitro et chez la souris. Les résultats sont rassemblés dans le tableau ci- dessous. ACTIVITES INHIBITRICES DE L'ENKEPHALINASE ET DE L'ACE IN VITRO-. ET IN VIVO. TABLEAU 1. COMPOSES Enképhalinase ACE Ifn vitro(a) In vivo(b) In vitro(c) In vivo(d) (IC50'nM) (DI50'mg/kg) (IC50'nM) (DI5O'mg/kg) (1) 2 0,8 5.000 inactif (> 20) (2) 3 0,4 100 10 (a) Activité mesurée sur membranes de striatum selon Llorens et al., J. Neurochem, 1982, 39, 1081. (b) Activité mesurée dans le striatum de souris 30 mn après administration i.v. selon Llorens-Cortes et al., Eur. J. Pharmacol., 1985, 119, 183. (c) et (d) Activités mesurées sur membranes de striatum de souris in vitro ou 30 mn après administration i.v. selon Yang etNess, J. Neurochem., 1972, 19, 2443. B/ - ETUDE PHARMACOLOGIQUE L'étude pharmacologique des produits décrits ci-dessus a permis de mettre en évidence un effet antalgique, psycho- trope, antidiarrhéique, anti-acide gastrique, et un effet anti-inflammatoire dans la cholécystite expérimentale. Les épreuves pharmacologiques réalisées ont été les suivantes: I. TOXICITE AIGUE La détermination de la mortalité chez la souris est observée à la suite de l'administration unique par voie intraveineuse de doses croissantes des composés à tester. La DL 50, pour les composés étudiés, est supérieure à mg/kg/i.v. II. TOXICITE SUBAIGUE Le composé (1) a été administré pendant 3 semaines à des souris à la dose orale de 2 g/kg/jour. Aucune modifica- tion de l'évolution pondérale et aucun signe de toxicité n'ont été présentés par les animaux par rapport aux témoins. Le poids des organes et leur examen anatomo-pathologique après sacrifice des animaux n'ont montré aucune différence par rapport aux témoins solvant. Par ailleurs, chez les animaux chez qui on procédait à une épreuve de réversibilité à l'arrêt du traitement, aucun signe de tolérance, ni d'accoutumance et aucun phénomène de sevrage n'ont été observés. III - ACTIVITES ANALGESIQUES MESUREES SUR LE TEST DU SAUT DE LA PLAQUE A 55' C APRES ADMINISTRATION A LA SOURIS. (Eddy et Leimbach, J. Pharmacol. Exp. Ther. 1953, 107 385) TABLEAU 2 Temps d'adm. Dose Délai de avant (mg/kg) Voie réponse épreuve (sec) Témoins 50 + 5 Composé (1) 1h 30 orale 80 6* Composé (1) 1h 100 orale 140 + 10* Composé (2) 1h 30 orale 75 + 5* Composé (1) 20' 5 i.v. 85 + 5* * P L'absence d'effet inhibiteur sur l'ACE du composé 1 permet de l'administrer à dose élevée. IV - ACTIVITE ANTIDIARRHEIQUE MESUREE CHEZ LE RAT TRAITE A L'HUILE DE RICIN. ( Neimegeers et ai., Arzneim. Forsch., 1974, 24, 1622) TABLEAU 3 10. Délai d'apparition des selles diarrhéiques (min) Témoins 80' + 5 Composé (1) (20 mg/kg,p.o.) 190' + 30* Composé (2) (10 mg/kg,p.o-) 160' + 25* Les composés (1) et (2) selon l'invention ont été administrés 30 mn avant l'huile de ricin. * p par jauge de contrainte). Voie Dose Avant repas Après repas (mg/kg) (-2/0) (O/+2h) (+2/10h) Témoin - 6,1 1,5 8,8 1,9 11,2 2,5 Composé (1) i.v. 1 5,9 0,7 15,2 2,4* 18,3 3, 1* Composé (1) p.o. 10 6,4+0,8 17,4+2,7* 21,5+4,6* Composé (2) p.o. 5 6,2+ 0,9 16,3+2,5* 20,1+3,7* Influence de l'administration préalable du composé par voie intraveineuse (IV) ou orale (PO) sur l'évolution de l'index moteur colique à la suite d'un repas standard chez le chien. * p VI - ACTIVITE INHIBITRICE DE L'ACTIVITE ACIDE GASTRIQUE. Chez le chat, la stimulation de la sécrétion acide gas- trique induite par la Pentagastrine, le 2-désoxy glucose et l'histamine est significativement (p 1,5 et de 5 mglkg/i.v. VII -ACTIVITE ANTI-INFLAMMATOIRE DANS LA CHOLECYSTITE EXPERIMENTALE. Chez le chat (Méthode de SVAVIK J.- et al. SURGERY, 1981, 90, 500), à la dose de 3 mg/kg/i.v. - le composé (1) diminue significativement l'hypersécrétion induite par l'inflammation de la vésicule biliaire. TABLEAU 5 Composés Sécrétion nette d'eau (ml/h) chez les animaux avec cholécystites (n = 10) Témoin 0,85 0,23 Composé (1) 0,21 0,15* * p Les résultats de ces études mettent en évidence la fai- ble toxicité et les intéressantes propriétés inhibitrices de l'enképhalinase, notamment comme: antalgique, psychotrope, antidiarrhéique régulateur de la motricité colique, anti- acide gastrique, anti-inflammatoire au cours des cholécystites expérimentales, des dérivés de l'invention. Ces propriétés les rendent utiles en médecine humaine et médecine vétérinaire. Les composés (1) et (3), (R), sont utiles à la fois pour des indications centrales et périphériques, notamment comme antalgique et psychotrope et comme médicament de la colopathie fonctionnelle, du reflux gastro-oesophagien et de la cholécystite aiguë. Ils sont meme élevées administrables à des doses unitaireMs/ de préférence, de 50 à 500 mg de principe actif et à une posologie quotidienne, de préférence, variant de 50 mg à 1 g de principe actif. Les composés (2) et (4), c'est-à-dire (S), seront utiles préférablement pour les indications périphériques (colopathie fonctionnelle, reflux gastro-oesophagien et cholécystite aiguë) à des doses unitaires faibles, de préférence, de 5 à 100 mg de principe actif et des posolo- gies quotidiennes variant, de préférence, de 5 à 200 mg de principe actif. Les médicaments de l'invention sont administrables à l'homme par voie orale, parentérale ou rectale. REVENDICATIONS 1. Composé énantiomère (R) ou (S) ayant la formule CH3 - CO - S - CH2 - CH - CO - NH - CH2 - COO R1 CH2 - C6H5 dans laquelle Rl = CH3 ou CH2-C6H5 2. Composé énantiomère (R) ou (S) selon la revendica- tion 1, ayant la formule (1) CH3 - CO - S - CH2 - CH - CO - NH - CH2 - COO CH2 - C6H5 -I CH2 - C6H5 (R) ou (2) CH3 - CO - S - CH2 - CH'- CO - NH - CH2 - COO CH2 - C6H5 CH2 - CGH5 (S) 3. Procédé de préparation du composé R (+) selon la revendication 2, caractérisé en ce que l'on réalise le dédoublement de l'acide acétylthio3 benzyl 2-propanoique racémique, notamment par réaction avec l'éphédrine (+), l'on récupère le sel de l'énantiomorphe (+) obtenu, on libère l'acide énantiomorphe et on effectue le couplage avec l'ester correspondant de l'acide aminé. 4. Procédé de préparation du composé S (-) selon la revendication 2, caractérisé en ce que l'on réalise le dédoublement de l'acide acéthylthio3 benzyl 2-propanoique racémique, notamment par réaction avec l'éphédrine (-), l'on récupère le sel de l'énantiomorphe (-) obtenu, on libère l'acide énantiomorphe et on effectue le couplage avec l'ester correspondant de l'acide aminé. 5. Procédé selon l'une des revendications 3 et 4, caractérisé en ce que l'on procède au couplage de l'ester correpondant de l'acide aminé avec le sel énantiomorphe en présence de DCC comme agent de couplage et HOBT pour éviter la racémisation. 6. Procédé selon l'une des revendications 1 à 5, caractérisé en ce que l'on procède à la libération de l'acide énantiomorphe par action d'acide chlorhydrique. 7. Médicament caractérisé en ce qu' il comporte, comme principe actif, l'un des composés selon l'une des revendica- tions 1 et 2. 8. Médicament selon la revendication 7, caractérisé en ce qu' il comporte, comme principe actif, un composé R(+), notamment celui de la revendication 2. 9. Médicament selon la revendication 8, caractérisé par une dose unitaire comprise entre 50 et 500 mg de prin- cipe actif, les doses administrables journellement pouvant varier entre 50 mg et 1 g. 10. Médicament selon la revendication 7, caractérisé en ce qu'il comporte, comme principe actif, un composé S (-), notamment celui de la revendication 2. 11. Médicament selon la revendication 10, caractérisé par une dose unitaire, de 5 à 100 mg de principe actif, les doses administrables journellement étant comprises entre 5 et 200 mg.