Brevet FR2624856A1 — publié le 19890623

Sel de trométhamine du l-méthyl-bêta-oxo-alpha (phénylcarbamoyl)-2-pyrrolepropionitrile Arrière plan de l'invention Le Brevet U.S. 4.256.759 décrit le l-méthyl-bêta-oxo -alpha-phénylcarbamoyl-2-pyrrolepropionitrile de formule I, Le composé de formule I est de caractère acide mais il peut exister sous une forme tautomère énolique représentée par la formule Ia Les sels mentionnés dans le Brevet U.S; 4.256.759 pour cette catégorie de composés, sont les sels avec des bases pharmaceutiquement acceptables telles que les hydroxydes de métal alcalin, de métal alcalino-terreux, de cuivre ou de zinc l'ammoniaque, les mono-, di- ou tri-(alkyl-ou hydroxyalkyl-) inférieur-amines, les alkylèneimines ou les alkylènediamines, par exemple les sels de sodium, de potassium, de magnésium, d'ammonium, de mono-, di- ou tri-(méthyl, éthyl ou hydroxyéthyl) -ammonium, de pyrrolidinium, d'éthylènediammonium ou de morpholinium ; ou leurs divers hydrates. Les sels plus particulièrement décrits pour le composé de formule I sont le sel de sodium, le sel de potassium, le sel de calcium, et le sel de tris-hydroxyéthyl-ammonium (triéthanolamine). Les sels de sodium, potassium et calcium ne sont pas cristallins. La trométhamine est l'amine primaire, tris-(hydroxy méthyl)-aminomé thane, également nommée 2-amino-2- (hydroxyméthyl) -1,3-propanediol ,et décrite dans le "Merck Index", dixième édition, page 1395. L'amine tertiaire, triéthanolamine, a été chimiquement transformée en laboratoire, en la N-nitrosodiéthanolamine qui a été impliquée comme carcinogène potentiel. Un certain intérêt a été exprimé sur les sels de triéthanolamine en tant que sels pharmaceutiques, cela étant basé sur la spéculation que la triéthanolamine pourrait d'une façon ou d'une autre être transformée métaboliquement chez les mammifères en N-nitrosodiéthanolamine. D'autre part, l'amine primaire trométhamine, n'est pas connue pour etre chimiquement transformable en un quelconque dérivé N-nitroso. Résumé de l'invention La présente invention concerne le nouveau sel de trométhamine du l-méthyl-bêta-oxo-alpha-(phénylcarbamoyl)-2-pyrrolepropionitrile pharmaceutiquement acceptable, les compositions pharmaceutiques comprenant ledit sel et un procédé pour traiter les états inflammatoires et arthritiques chez les mammifères grâce à l'administration dudit sel à des mammifères nécessitant un tel traitement. Description détaillée de l'invention Plus précisément, la présente invention concerne le sel 1 : 1 du 1-méthyl-bêta-oxo-alpha-(phénylcarbamoyl)-2-pyrrole- propionitrile avec la trométhamine, que l'on peut représenter par la formule développée II Le nouveau sel de formule II manifeste une activité anti-inflammatoire et anti-arthritique. Le sel de formule Il révèle également une activité biologique indicatrice des effets potentiels de modifications de la maladie dans l'arthrite, y compris l'inhibition de la dégradation de la matrice de cartilage ainsi que l'accroissement de l'immunité à médiation cellulaire déprimée. Le sel est bien toléré et pratiquement exempt d'effets secondaires indésirables aux doses thérapeutiquement efficaces. Dans les études de toxicité aigüe chez le rat, on observe que le sel de la présente invention est moins toxique que l'acide libre de formule I ou que son sel de triéthanolamine. On n' observe aucun mort (0/10 animaux) avec le sel de trométhamine de formule II à une dose de 2,4 millimoles/kg p. o. (932 mg/kg p. o.) tandis que l'on observe un taux de mortalité de 50 % avec le sel de triéthanolamine du composé de formule I à une dose équimolaire de 2,4 millimoles/kg p. o. (1000 mg/kg p. o.), et que l'on observe un taux de mortalité de 40 % à une dose équimolaire de 2,4 millimoles/kg p. o. (641 mg/kg p. o.) avec l'acide libre de formule I. En outre, le sel de trométhamine de la présente invention est dénué de tout rapport relatif à la conversion métabolique potentielle en un dérivé N-nitroso. Les caractères précédents rendent le composé de l'invention particulièrement utile lorsqu'il est administré seul ou en combinaison, à des mammifères y compris l'homme, pour le traitement par exemple de l'arthrite rhumatoide et de 1 'ostéo-arthrite. Les propriétés pharmacologiques, essentiellement les activités anti-inflammatoires, analségiques, anti-rhumatismales, immuno-potentiatrices et anti-arthritiques, peuvent être démontrées par des essais in vitro ou in vivo, en utilisant pour ces derniers avantageusement des mammifères tels que des rats, des souris, des cobayes ou des chiens à titre de sujets de l'essai. On peut administrer le composé aux animaux, soit par voie entérique, de préférence par voie orale, parentérale, par exemple par voie sous-cutanée ou intraveineuse, ou par voie topique, par exemple sous la forme de solutions ou de suspensions aqueuses. La dose appliquée peut être comprise dans un intervalle allant d'environ 0,1 à 100 mg/kg/jour, de préférence allant d'environ i à 50 mg/kg/jour.Les essais (ou tests) englobent les procédés classiques de dosages in vivo pour lesdites activités, comme l'oedème de la patte à la carragénine, les tests sur l'arthrite avec l'adjuvant chez le rat et le test de la synovite du chien. Les concentrations du composé utilisées dans les tests in vitro sont comprises dans l'intervalle allant d'environ 1 x 10-8M à 1 x 10-4M, de préférence d'environ 1 x î07N à 1 x 10-5M. Ces tests englobent l'inhibition de la protéase neutre in vitro, décrite dans "Arthritis Rheum. 17", 47 (1974), ou l'inhibition de la chimiotaxie des neutrophiles décrite dans "Ann. N.Y. Acad. Sci.", 256, 177 (1975) ; ou la diminution de l'adhérence des leucocytes décrite dans "Amer. J. Med." 61, 597 (1976). On peut déterminer l'inhibition de l'activation chimiotactique des neutrophiles in vivo, en mesurant l'inhibition de l'accumulation des neutrophiles dans des éponges de polyuréthane imprégnées de carraghénine implantées, pour l'administration orale du composé à des rats. On peut déterminer les effets immunopotentiateurs (immuno- stimulants) sur des animaux immunisés par le BCG. In vitro, on détermine l'augmentation de l'immunité à médiation cellulaire en mesurant l'augmentation dans la chimiotaxie des macrophages isolés sur des rats immunisés par le BCG. In vivo, on la détermine sur le rat arthritique, ayant reçu l'adjuvant, immunisé par le BCG, en mesurant l'effet sur la réaction d'hypersensibilité différée essentiellement comme cela est décrit dans "Current Therapeutic Research" 30, S34 (1981). On peut déterminer l'effet sur la dégradation de la matrice (substance intercellulaire) du cartilage dans le modèle en co-culture cartilage-membrane synoviale de dégradation de la matrice qui est effectué de la manière suivante la matrice de protéoglycane du cartilage de la cloison nasale du boeuf est marquée in vitro par incorporation de 35S dans le glycosaminoglycane. On incube des tranches de cartilage toute la nuit dans un milieu exempt de sulfate contenant du sulfate de sodium 35S. On cultive conjointement des tranches de cartilage marquées au 35S avec des explants de membrane synoviale normale, dans des plaques de culture tissulaire à plusieurs puits. Après 4 jours d'incubation, on compte une portion aliquote de 100 1 du milieu. On hydrolyse les tranches de cartilage et on compte une portion aliquote de 100 pl de l'hydroîysat de cartilage. On termine le pourcentage de 35S libéré dans le milieu et on calcule le pourcentage d'inhibition de la dégradation de la matrice.. On peut également déterminer l'inhibition de la dégradation de la matrice de cartilage en mesurant l'inhibition de la rupture du cartilage par des protéases neutres obtenues à partir de leucocytes de sang humain On prépare le sel cristallin de trométhamine de la présente invention en faisant réagir le composé de formule I, avantageusement avec une quantité équimolaire ou un légèr excès de trométhamine en présence d'un solvant inerte convenable, par exemple un solvant alcoolique ou éthéré ou leurs mélanges, de manière à cristalliser le sel dans la solution. Des solvants convenables sont par exemple l'éthanol, l'isopropanol, un mélange de tétrahydrofuranne et de méthyl-t-butyléther, ou un mélange d'éthanol et de toluène.La formation du sel s'effectue généralement dans le solvant le plus polaire, et on ajoute le second solvant moins polaire à une température élevée en une quantité suffisante pour achever la cristallisation du produit. On prépare le produit de départ de formule I comme cela est décrit dans le Brevet U.S. 4.256.759. Le sel de trométhamine de l'invention peut être un hydrate ou il peut englober d'autres solvants qui sont utilisés pour la cristallisation du produit. Les compositions pharmaceutiques selon l'invention sont celles qui conviennent pour l'administration entérique, telle que l'administration orale ou rectale,et pour l'administration parentérale à des mammifères y compris l'homme, pour l'allègement de la douleur et le traitement des troubles inflammatoires/arthri- tiques tels que l'ostéo-arthrite et l'arthrite rhumatoide, et des maladies à médiation immunologique, qui comprennent une quantité efficace du composé pharmacologiquement actif de formule II en combinaison avec un ou plusieurs véhicules pharmaceutiquement acceptables. Le sel pharmacologiquement actif de l'invention est incorporé dans des compositions pharmaceutiques contenant une quantité efficace de ce dernier conjointement ou en mélange avec des excipients convenables pour l'application entérique, parentérale ou topique. On préfère les comprimés et les gélules de gélatine comprenant l'ingrédient actif conjointement avec (a) des diluants, par exemple le lactose, le dextrose, le sucrose, le mannitol, le sorbitol, la cellulose, I'hydroxypropyl -méthylcellulose et/ou la glycine ; (b) des lubrifiants, par exemple la silice, le talc, l'acide stéarique, son sel de magnésium ou de calcium et/ou le poîyéthylèneglycoî ; et pour les comprimés également (c) des liants, par exemple le silicate mixte de magnésium et d'aluminium, l'empois d'amidon, la gélatine, la gomme adragante, la méthylcellulose, la carboxyméthylcellulose de sodium et/ou la polyvinylpyrrolidone si nécessaire (d) des agents de désintégration, par exemple des amidons, l'agar, l'acide alginique ou son sel de sodium, ou des mélanges effervescents ; et/ou (e) des absorbants, des colorants, des arômes et des édulcorants .Les compositions injectables sont de préférence des solutions ou des suspensions aqueuses isotoniques, et les suppositoires ou les lotions topiques sont avantageusement préparés à partir d'émulsion ou de suspension grasses.Elles peuvent être stérilisées et/ou contenir des adjuvants tels que des agents de conservation, des stabilisants, des agents mouillants ou émulsionnants, des promoteurs de solutions, des sels pour règler la pression osmotique et/ou des tampons. Lesdites compositions pharmaceutiques peuvent également contenir d'autres substances thérapeutiquement intéressantes. On les prépare conformément aux procédés classiques respectivement de mélange ; de granulation ou d'enrobage et elles contiennent d'environ 0,1 à 75 %, de préférence d'environ 1 à 50 % de l'ingrédient actif. L'invention concerne en outre un procédé pour traiter et améliorer les troubles inflammatoires et arthritiques, tels que l'arthrite rhumatoide ou I'ostéo-arthrite, chez les mammifères y compris l'homme, qui comprend l'administration à un mammifère qui en a besoin, d'une quantité efficace du composé de l'invention ou d'une composition pharmaceutique comprenant le composé de l'invention en combinaison avec un ou plusieurs véhicules pharmaceutiquement acceptables. La dose du composé actif administrée dépend de l'espèce de l'animal à sang chaud (mammifère), du poids corporel, de l'âge, de la condition individuelle et de la forme d'administration. La dose unitaire pour un mammifère pesant d'environ 50 à 70 kg, peut contenir entre environ 100 et 500 mg du principe actif. Les exemples suivants sont destinés à illustrer l'invention et ils ne sont pas destinés à la limiter. Les températures sont données en degré centrigrade. S'il n'y a pas d'autres indications, toutes les évaporations sont effectuées sous pression réduite, de préférence entre environ 15 et 100 mm de Hg. La structure du produit est confirmée par les procédés analytiques, en particulier les caractéristiques spectroscopiques (par exemple SM, IR, RMN) et l'analyse élémentaire. EXEMPLE 1 On chauffe au reflux une suspens ion de 10,09 g de l-méthyl-bêta-oxo-alpha- (phénylcart, smoyl) -2-pyrrolepropionitrile dans 160 ml de tétrahydrofuranne, on refroidit la solution résultante à 50 - 550 et on la traite avec 5,22g de trométhamine. On agite le mélange résultant au reflux pendant une demi-heure, on le refroidit à environ 45 - 500, puis on le traite avec du charbon actif, on l'agite jusqu'à ce que l'on atteigne la température ambiante et on le filtre à l'aide de Hyflo. On réduit la solution résultante jusqu'à un volume d'environ 50 ml on ajoute lentement 40 ml de méthyl-t-butyl-éther et on agite le mélange à 15 - 200 pendant deux heures. On recueille le produit cristallin, on le lave avec un mélange 1 : 1 de tétrahydrofuranne et de méthyl-t-butyl-éther, on le sèche à 800C sous vide toute la nuit pour obtenir le sel de trométhamine du l-méthyl-bêta-oxo -alpha-(phénylcarbamoyl)-2-pyrroleproprionitrile (1 1), point de fusion 163 - 1650. EXEMPLE 2 On chauffe au reflux pendant environ une demi-heure, une suspension de 13,36 g de l-méthyl-bêta-oxo-alpha-(phénylcarbamoyl)-2-pyrrolepropionitrile et de 6,06 g de trométhamine dans 100 ml d'éthanol, on laisse la solution refroidir jusqu'à environ la température ambiante, on la traite avec du charbon actif, on la filtre et on la réduit jusqu'à un volume d'environ 45 ml à une température inférieure à 600. On chauffe la solution à environ 50 - 550, on ajoute lentement 100 ml de toluène sur une période d'environ une demi-heure, sous agitation, et on refroidit lentement le mélange résultant jusqu'à environ 150 sur une période d'une heure et on l'agite à 150 pendant ~ 1 heure.On receuille le produit cristallin résultant par filtration, on le lave avec du toluène et on le sèche à 70 - 800 sous un vide peu poussé pendant 24 heures pour obtenir le sel de trométhamine du l-méthyl-bêta-oxo-alpha -(phénylcarbamoyl)-2-pyrrolepropionitrile de l'exemple 1. On peut obtenir une seconde récolte en évaporant la liqueur mère jusqu'à siccité et en cristallisant plus de produit dans de l'éthanol:- toluène (1 : 2) comme décrit ci-dessus. EXEMPLE 3 A une suspension de 13,85 g de l-méthyl-bêta-oxo-alpha- -(phénylcarbamoyl)-2-pyrrolepropionitrile dans 350 ml d'éthanol, on ajoute 6,1 g de trométhamine. On chauffe la suspension jusqu'à l'obtention d'une solution et on réduit le volume à environ 75 ml. On refroidit la solution pour cristalliser le produit, on recueille le sel, on le lave avec de l'éthanol/éther, et on le sèche pour obtenir le sel de trométhamine du l-méthyl-bêta-oxo-alpha-(phénylcarbamoyl)-2-pyrrolepropionitrile (1 : 1) de l'exemple 1. EXEMPLE 4 Préparation de 10.000 comprimés contenant chacun 250 mg du principe actif l-méthyl-béta-oxo-alpha-(phénylcarbamoyl 2-pyrrolepropionitrile-trométhamine 2.500,0 g Silice colloidale 20,0 g Cellulose monocristalline 465,0 g Hydroxypropyl-méthylcellulose 160,0 g Polyvinylpyrrolidone réticulée 200,0 g Stéarate de magnésium 35,0 g Eau purifiée quantité suffisante On mélange dans un malaxeur convenable pendant environ 20 minutes la substance médicamenteuse, la silice et l'hydroxy- propyllméthylcellulose. On granule le mélange avec une quantité suffisante d'eau.On brise les granules humides dans un broyeur, on les fait passer à travers un tamis * 5, on les sèche à 350 pendant 6 heures puis on les brise encore dans un broyeur et on les fait passer à travers un .tamis * 2. Ensuite, on mélange conjointement les granules résultants, la cellulose et la poly vinylpyrrolidone dans un malaxeur convenable pendant environ 15 minutes ,on ajoute le stéarate de magnésium (que l'on fait d'abord passer dans un tamis # 30), et on le mélange avec ce qui précède pendant environ 5 minutes. Ensuite, on comprime la granulation résultante en comprimés. Puis si on le souhaite, on peut enrober les comprimés. EXEMPLE 5 Etude de la toxicité aigüe On administre une dose équimolaire unique de chaque composé, par voie orale par gavage, sous la forme d'une suspension d'amidon de mais à 3 %, à 5 rats femelles et 5 rats mâles Sprague-Dawley. Les animaux sont alors observés pendant 15 jours. L'incidence comparative de la mortalité pour l'acide libre de formule I, son sel de triéthanolamine et le sel de trométhamine de formule II, est la suivante a) pour le l-méthyl-bêta-oxo-alpha-(phénylcarbamoyl)-2- pyrrolepropionitrile (I, poids mol. : 267,28). Dose Mortalité Millimoles/kg mg/kg Ma le Femelle 1,2 321 0/5 0/5 2,4 641 2/5 2/5 3,6 962 4/5 4/5 b) pour le sel de triéthanolamine de l-méthyl-bêta -oxo-alpha-(phénylcarbamoyl)-2Xyrrole-propionitrile (poids mol. 416,49) . Dose Mortalité Millimoles/kg mg/kg Mâle Femelle 1,2 500 0/5 0/5 2,4 1000 2/5 3/5 3,6 1500 5/5 5/5 c) pour le sel de trométhamine de l-méthyl-bêta-oxo -alpha-(phénylcarbamoyl)-2-pyrrolepropionitrile (II, poids mol. : 388,41). Dose Mortalité Millimoles/kg mg/kg Mâle Femelle 1,2 466 0/5 0/5 2,4 932 0/5 0/5 3,6 1398 5/5 5/5 REVENDICATIONS 1. Sel de trométhamine du l-méthyl-bêta-oXo-ipha(phénylcarbamoyl)-2-pyrrolepropionitrile. 2. Composition pharmaceutique anti-inflammatoire ou anti-arthritique qui comprend une quantité efficace du composé selon la revendication 1, en combinaison avec un ou plusieurs véhicules pharmaceutiquement acceptables. 3. Utilisation du composé selon la revendication 1 à titre d'agent anti-inflammatoire ou anti-arthritique, ou pour la préparation d'une composition pharmaceutique possédant une activité anti-inflammatoire et antsarthritique. 4. Utilisation selon la revendication 3, pour le traitement de l'arthrite rhumatoide. 5. Utilisation selon la revendication 3, pour le traitement de ltostéo-arthrite. 6. Utilisation du composé selon la revendication 1, pour l'inhibition de la chimiotaxie des neutrophiles ou pour la préparation d'une composition pharmaceutique pour l'inhibition de la chimiotaxie des neutrophiles. 7. Utilisation du composé selon la revendication 1, pour l'accroissement de l'immunité à médiation cellulaire ou pour la préparation d'une composition pharmaceutique pour augmenter l'immunité à médiation cellulaire. 8. Procédé pour la préparation d'une composition pharmaceutique pour le traitement des états inflammatoires ou arthritiques, qui comprend la préparation du composé selon la revendication 1 en une formulation convenable pour le traitement de l'arthrite rhumatoide. 9. Procédé pour la préparation d'une composition pharmaceutique pour le traitement des états inflammatoires ou arthritiques, qui comprend la préparation du composé selon la revendication 1 en une formulation convenable pour le traitement de 1' ostéo-arthrite. 10. Procédé pour la préparation d'une composition pharmaceutique avec des effets immuno-stimulants, qui comprend la préparation du composé selon la revendication 1 en une formulation convenable pour le traitement des maladies à médiation de nature immunologique.