Brevet FR2628531A1 — publié le 19890915

La présente invention est relative à un procédé de recherche spécifique, très rapide et sensible, dans un milieu liquide ou semi-liquide, de la présence éventuelle de micro-organismes, même présents en quantité extrêmement faible et, lorsqu'une telle présence est détectée, de numé- ration desdits micro-organismes. Par quantité extrêmement faible, on entend au sens de la présente invention, un très petit nombre de micro-organismes, qui peut être aussi faible qu'un seul micro-organisme. L'analyse qualitative et quantitative rapide de la présence de microorganismes tels que bactéries, levures, moisissures, parasites, virus dans des produits alimentaires, des produits d'hygiène ou des fluides, ainsi que la surveillance d'un processus de fermentation au cours de sa réalisation, s'avèrent très utiles et importants dans les différentes industries concernées. On utilise habituellement, comme technique de détection, la mise en culture d'un échantillon du produit à tester. Cette méthode de détection a l'inconvénient d'être longue à mettre en oeuvre, les micro-organismes éventuellement présents se développant dans un délai de 2 à jours. De plus, la numération de micro-organismes par cette méthode n'est absolument pas précise et ne permet qu'une évaluation approximative du nombre de micro- organismes présents au départ; l'identification des micro- organismes, par cette méthode, reste partielle. On connaît également une autre technique de détection, par analyse d'images, mais celle-ci est coûteuse et difficile à mettre en oeuvre. Pour arriver à une numéra- tion correcte ou une détection sensible de micro-organismes présents dans l'échantillon, il faut analyser tous les champs de l'échantillon, ce qui rend cette recherche très longue. Il est également connu de marquer les cellules au moyen de colorants chimiques ou biologiques; on connait en particulier de nombreux colorants chimiques ou biolo- giques pour le marquage de micro-organismes: notamment les colorants des acides nucléiques, qui marquent le plus souvent les cellules mortes et non les cellules vivantes; les fluorochromes tels que les dérivés-de la fluorescéine et de la phycoérythrine, qui sont utilisés depuis de nom- breuses années, à travers leur couplage à des anticorps. L'utilisation d'anticorps polyspécifiques ou monospécifiques rendus fluorescents ont été décrits dans l'Art antérieur, notamment la Demanderesse dans son Brevet n' 86 01620 décrit des anticorps polyspécifiques anti- levures et antimoisissures. Toutefois, ces anticorps fluorescents rendent fluorescentes toutes les cellules, qu'elles soient vivantes ou mortes, ce qui représente un inconvénient important, soit pour déterminer sélectivement la présence d'un conta- minant vivant dans un produit alimentaire ou d'hygiène, soit pour déterminer l'évolution ou la bonne marche d'un processus de fermentation. D'autres colorants ont également été décrits dans la littérature, en particulier le diacétate de fluo- rescéine (FDA) et le diacétate de carboxyfluorescéine (CFDA). Un certain nombre d'articles (T.H. CHRZANOWSKI et al., "Applicability of the fluorescein diacetate method of detecting active bacteria in fresh water", paru en 1984 dans Microbial Ecology (10: 179 - 185), B. Lundgren "Fluo- rescein diacetate as a stain of metabolically active bacte- ria in soil", paru dans OIKOS, 1981 (36: 17 - 22), JARNAGIN et al. "the use of fluorescein diacetate and ethi- dium bromide as a stain for evaluating viability of myco- bacteria" paru dans Stain Technol., 1980, (55, 4, 253 - 258), SCHNURER J. et al. "Fluorescein diactetate hydrolysis as a measure of total microbialI activity in soil and litter", paru dans Applied Environm. Microbiol., 1982, (43, 6, 1256 - 1261), SONTAG) décrivent ces colorants et leur mécanisme d'action. Toutefois, il s'agit en général de méthodes d'estimation, ou bien, lorsque la méthode est quantitative, elle utilise en association un colorant chi- mique des acides nucléiques; ce sont des méthodes peu appropriées à l'analyse en série. Le FDA, dans ces articles est utilisé pour la détection des bactéries. Les techniques de détection selon l'Art anté- rieur ne permettent pas la détection sélective de micro- organismes vivants, surtout présents en très petite quan- tité. En conséquence, l'invention s'est donnée pour but de pourvoir à un procédé de recherche, de détection et de numération de micro-organismes, très rapide et facile à mettre en oeuvre, sensible, spécifique et peu coûteux, per- mettant le comptage à l'unité près desdits micro- organismes. La présente invention a pour objet un procédé de recherche, de détection et de numération de micro- organismes, présents normalement, ou éventuellement conte- nus en tant que contaminants dans un milieu à l'état liquide, semiliquide, gélifié, p&teux, solide ou analogue, notamment des produits alimentaires, des produits d'hygiène, des fluides biologiques, caractérisé en ce que lesdits produits ou fluides sont tout d'abord mis en contact avec au moins un colorant de viabilité positive utilisé soit seul, soit en mélange avec d'autres substances telles que celles choisies dans le groupe.qui comprend d'autres colorants de viabilité, des colorants vitaux, des anticorps rendus fluorescents et des sondes nucléiques rendues fluorescentes, ledit colorant de viabilité marquant sélectivement seulement les micro-organismes vivants présents dans lesdits produits ou fluides, puis en ce que dans un deuxième temps, -le comptage individuel desdits 4- micro-organismes marqués est réalisé par un moyen apprc- prié. On entend par micro-organismes, au sens de la présente invention, notamment des bactéries, des levures, des moisissures, des parasites et des virus. On entend par colorant de viabilité positive, uns substance qui ne colore que les cellules vivantes et non les cellules mortes et dont l'intensité de coloration des cellules est proportionnelle à leur activité métabo- lique. Les colorants vitaux, au sens de la présente invention, sont des colorants des acides nucléiques et.se combinent avec le matériel génétique des cellules aussi bien vivantes que mortes. On peut citer, à titre d'exemple non limitatif de colorants vitaux, le bromure d'éthydium, l'iodure du propydium, la mythramycine A, le DAPI, le Hoechst 33258, le Hoechst 33342. Selon un mode de mise en oeuvre avantageux, le comptage individuel desdits micro-organismes marqués, est réalisé par cytomètrie en flux. La cytomètrie en flux, en elle-même est connue et a été décrite dans des brevets antérieurs, notamment, les Brevets Becton, Dickinson & Co, les Brevets Partec et plus particulièrement la demande de Brevet européen 177 718. Les cytomètres en flux selon l'Art antérieur font intervenir un certain nombre de paramètres d'analyse des particules (fluorescences, taille, granulosité). Ces cyto- mètres en flux sont de ce fait très sophistiqués, fragiles et complexes à utiliser dans un cadre industriel. Le procédé selon l'invention a l'avantage, par rapport aux cytomètres en flux de l'Art antérieur, de per- mettre l'utilisation de ceux-ci à l'échelle industrielle. De plus, la combinaison de moyens selon l'invention, a également l'avantage de permettre la réali- sation de dosages en série, rapides à mettre en ceuvre. fiables ainsi que des comptages à l'unité prés. Selon un autre mode de mise en oeuvre avanta- geux de l'invention, le comptage individuel desdits micro- organismes marqués, est réalisé par analyse d'images. Selon encore un autre mode de mise en oeuvre avantageux, les échantillons à analyser sont soumis à un traitement préalable biologique, chimique ou physique, des- tiné à mettre les micro-organismes dans un état métabolique optimal, propre à favoriser l'ingestion du colorant de viabilité positive, par lesdits micro-organismes. Selon une disposition avantageuse de ce mode de mise en oeuvre, le traitement préalable est constitué par l'action d'un tampon d'ajustement du pH du milieu. Selon une modalité avantageuse de cette dispo- sition, le tampon d'ajustement du pH est utilisé également en tant que milieu de solubilisation. Selon une autre disposition avantageuse de ce mode de mise en oeuvre, le traitement préalable est consti- tué par l'action des ultrasons. Selon encore une autre disposition avantageuse de ce mode de mise en oeuvre, le traitement préalable est constitué par l'action d'enzymes appropriées. Le traitement préalable permet l'individua- lisation des cellules, formant à l'origine des colonies, et augmente ainsi la sensibilité de la détection. Selon encore une autre disposition de ce mode de mise en oeuvre, les échantillons à analyser sont soumis à une séparation de phases, notamment centrifugation, fil- tration. Selon un autre mode de m.se en oeuvre avanta- geux dudit procédé, le colorant de viabilité positive est choisi parmi les substances non fluorescentes ou peu fluo- rescentes, qui pénètrent dans le micro-organisme, lesdites substances étant alors clivées ou modifiées de manière à fournir un produit fluorescent, ledit produit étant piégé dans sa majeure partie ou totalement à l'intérieur dudlt micro-organisme. Selon encore un autre mode de mise en oeuvre avantageux dudit procédé, les anticorps sont choisis parmi les anticorps polyclonaux et/ou monoclonaux, mono ou poly- spécifiques, anti-levures et/ou anti-bactéries et/ou anti- moisissures et/ou anti-parasites et/ou anti-virus et les anticorps polyclonaux et/ou monoclonaux mono ou poly- génériques anti-levures et/ou anti-bactéries et/ou anti- moisissures et/ou anti-parasites et/ou anti-virus. Conformément à l'invention, les anticorps mis en oeuvre sont rendus fluorescents par un agent fluoro- chrome approprié. Les colorants de viabilité ont pour r8le de marquer sélectivement les micro-organismes vivants. Les anticorps ont pour rôle de marquer spécifi- quement une espèce ou un genre de micro-organisme, que celui-ci soit vivant ou mort. Les colorants de viabilité, conformes à l'invention, sont choisis dans le groupe qui comprend le FDA, le 6-CFDA, le 5-CFDA, le dilaurate de fluorescéine, l'ester de 5,6-CFDA N-hydroxy succinimide, le dipropionate de fluorescéine, la di-bêta-D-galactoside fluorescéine, le phosphate de 30-méthylfluorescéine, le pentaacétoxy ester de 2',7'-bis(carboxyéthyl)5(6)-carboxyfluorescéine (BCECF/AM), le diacétate d'azidofluorescéine, l'acétate de 4-méthylumbelliferyl, le 4-méthylumbelliferyl bêta-D-galac- toside, le 4-méthylumbelliferyl alpha-D-mannopyranoside, le nonanoate de 4-méthyllumbelliferyl, le phosphate de 4- méthylumbelliferyl, l'alanine-7-amino-4-méthylcoumarine, la glycine-7-amino-4-méthylcoumarine, la proline-7-amino-4- méthylcoumarine, la valine-7-amino-4-méthylcoumarine, la glycyl-L-proline-7-amino-4-méthylcoumarine, le 1,4-diacé- toxy-2,3-dicyanobenzène (ABD), l'hydroéthidine, l'acétate de résorufine. Le dlacétate de fluorescéine marque de manière spécifique les levures vivantes et non les levures mortes. Le diacétate de carboxyfluorescéine marque de manière spécifique, les bactéries vivantes et non les bac- téries mortes. La présente invention a également pour objet une installation pour la mise en oeuvre dudit procédé de recherche, de détection et de numération de micro-orga- nismes, comprenant un cytomètre en flux pourvu d'un fais- ceau lumineux approprié, d'une cellule de mesure comprenant une chambre de mesure en flux, que traverse l'échantillon de produit ou de fluide à analyser et un dispositif d'enregistrement des signaux de fluorescence émis par les- dits micro-organismes, caractérisé en ce que la cellule de mesure est pourvue d'un moyen de fermeture du système d'aspiration que comprend le cytomètre, lequel entre en action sous l'effet du retrait de l'échantillon du porte- échantillon. Outre les dispositions qui précèdent, l'invention comprend encore d'autres dispositions, qui ressortiront de la description qui va suivre, qui se réfère à des exemples de mise en oeuvre du procédé conforme à l'invention et à une description détaillée de l'installation avec référence aux dessins annexés, qui illustrent un mode de réalisation de l'installation et dans lesquels: - la figure 1 représente schématiquement un mode de réalisation d'une installation de mise en oeuvre du procédé selon l'invention. - la figure 2 représente une vue-en perspective d'un mode de réalisation d'une chambre de mesure. Il doit 4tre bien entendu, toutefois, que les exemples, les dessins et les parties descriptives corres- pondantes sont donnés uniquement à titre d'illustration de l'objet de l'invention, dont ils ne constituent en aucune manière une limitation. L'installation représentée aux figures 1 et 2 est destinée à la détection de micro-organismes marqués. La figure 1 représente une installation de détection de particules conforme à l'invention. Cette installation comprend une source lumi- neuse 10, qui dans la réalisation représentée est une lampe à vapeur de mercure; le faisceau lumineux 11 produit, est focalisé au moyen de la lentille 12 et est dirigé vers la chambre de mesure 21 au moyen du miroir dichroïque 13; à cette même chambre de mesure, arrive également l'échantillon 30 traité selon le procédé conforme à l'invention, et dans lequel la recherche, la détection et la numération de micro-organismes sont effectuées. Une pompe à vide 31 permet l'aspiration de l'échantillon; une vanne électromagnétique 35 permet la fermeture du système d'aspiration, ladite vanne entrant en action sous l'effet du retrait de l'échantillon 30 du porte-échantillon. Si l'échantillon contient des micro-organismes, rendus fluorescents, ceux-ci réemettent une lumière fluo- rescente dans le visible, qui est transmise, lors de leur passage dans la chambre de flux, par un objectif de micro- scope 14 et est transformée en signal électrique au moyen d'un photomultiplicateur 40, puis enregistrée sur un support adéquat, notamment sous forme d'histogramme. Simultanément, l'échantillon est visualisé par un oculaire 60. Entre le photomultiplicateur 40 et l'appareil d'enregistrement, un discriminateur 50 permet d'obtenir une bonne résolution sur l'histogramme. La figure 2 représente la cellule de mesure en flux 20 en perspective, qui comprend une chambre 21 permet- tant le passage des micro-organismes à détecter. Ladite chambre est rendue étanche par la pose d'une lamelle de microscope 25 sur la cellule 20. Les micro-organismes éven- tuellement contenus dans l'échantillon sont injectés dans la chambre 21 par une tubulure d'environ 100 pm plongeant directement. dans l'échantillon 30, le jet liquide les transportant étant alors enrobé par un liquide 23 trans- porté au moyen de la tubulure 22. Une pompe à vide 31 permet l'aspiration concomitante de l'échantillon et du liquide d'enrobage; celle-ci sera arrêtée par la mise en oeuvre d'une vanne électromagnétique 35 de fermeture du système d'aspiration, elle-même commandée par le retrait de l'échantillon. Le liquide d'enrobage, placé sous une légère surpression, sera alors refoulé par la tubulure 24, assu- rant un rinçage automatique de celle-ci, dans le cadre d'une analyse en série. Exemple 1: Recherche de levures contaminant le yaourt. I1 est possible, selon la/les espèce(s) de levure à rechercher, de choisir le colorant de viabilité et/ou les anticorps anti-levures les plus appropriés à ladite levure. Le yaourt est solubilisé au moyen de réactifs- appropriés, tel que le tampon carbonate EDTA pH 9,0. Le produit est centrifugé 5 minutes à i 500 g. Le culot est repris dans du chlorure de sodium à 9 g/l. Le diacétate de fluorescéine, éventuellement associé aux anticorps fluores- cents anti-levures appropriés sont rajoutés. Une incubation de 5 à 10 minutes à 37'C permet aux réactions chimiques de se produire; la suspension est soumise aux ultra-sons pendant 10 secondes. La suspension résultante est ensuite passée directement dans le compteur de particules pour une analyse continue en flux, sous un volume variant de 0,2 à 2' ml. Il est possible de compter significativement à l'unité SO30 près, de 10 à 1 000 000 de micro-organismes rendus fluores- cents (figures 3, 4 et 5). Les figures 3, 4 et 5 représentent des histo- grammes de population de levures cultivées dans le yaourt. On a en abscisse le canal de fluorescence représentant l'intensité de lumière et en ordonnée le nombre de cellules par canal. Dans le cas de la figure 3, il s'agit de levures du genre Saccharomyces; dans le cas de la figure 4, il s'agit de levures du genre Rhodotorula et dans le cas de la figure 5, il s'agit de Debaryomyces hansenii. Exemple 2: Recherche de levures contaminant le yaourt à pulpe de fruits: Dans le cas o l'échantillon est consitué de yaourts à pulpe de fruits, des enzymes sont ajoutées pour favoriser la solubilisation-dudit échantillon. L'échantillon est traité comme dans l'exemple 1, sauf que préalablement à l'addition du colo- rant et/ou de l'anticorps, de la pectinase est rajoutée pour favoriser la solubilisation; la réaction enzymatique s'effectue en incubant à 37C et pendant 5 minutes l'échantillon de yaourt en présence de l'enzyme. Exemple 3: Recherche de bactéries dans la bière ou dans des milieux de culture servant à la fermenta- tion d'organismes recombinés (production de médicaments par exemple). Typiquement, 50 ml de suspension cellulaire sont centrifugés. Le culot est remis en suspension tel qu'indiqué dans l'exemple 1. La suite du procédé est simi- laire, les colorants de viabilité ou les anticorps étant toutefois adaptés au problème spécifique. Cependant, le colorant de viabilité ayant une fluorescence dans le vert, - les anticorps sont marqués au moyen d'un fluorochrome à émission dans le rouge, la phycoérythrine par exemple; il est alors possible, dans ce cas, a'effectuer un comptage des microorganismes doublement marqués, ce qui permet d'identifier le micro-organisme et de déterminer simultané- ment sa viabilité. La figure 6 représente un histogramme de popu- lation de bactéries du genre Lactobacillus détecté dans un échantillon de bière naturellement contaminé. En abscisse on a le canal de fluorescence, et en ordonnée le nombre de particules par canal. Exemple 4: Recherche de bactéries et/ou de levures dans des produits préparés (exemple pâte de tomates, mayonnaise, sauce béarnaise, etc...) Après une extraction aqueuse de ces produits, la suspension résultante est filtrée grossièrement à travers un filtre de 15 pm par exemple. Le produit filtré est centrifugé ainsi qu'indiqué dans l'exemple 1 ci-dessus. Le reste du processus est similaire, ayant toutefois la possibilité d'utiliser en mélange 2 colorants de viabilité ayant une fluorescence dans le vert et 2 anticorps monoclo- naux ayant une fluorescence dans le rouge à des longueurs d'onde différentes, par exemple. L'appareil comprendra alors une mesure des 3 paramètres, permettant de distinguer et de compter simultanément les levures vivantes d'une espèce donnée, les levures mortes de même espèce, les bactéries vivantes d'une espèce donnée, les bactéries mortes de même espèce, le total des levures vivantes d'autres espèces et le total des bactéries vivantes d'autres espèces. Exemple 5: Recherche de bactéries totales dans le lait cru. Le lait cru est traité pour détruire les micelles de caséine et est ensuite centrifugé; le culot est repris dans un tampon tel que décrit dans l'exemple 1, en ajoutant en plus quelques gouttes d'un détergent appro- prié tel que Tween 20. La suite du processus est similaire. Toutefois, les cellules somatiques du lait peuvent se colo- rer. On procède alors à une mesure et un comptage simulta- nés de la fluorescence et de la taille des particules par impédancemétrie, ce qui permet de différencier les bacté- ries (moins de 1 pm en taille) dez cellules somatiques (environ 10 pm ou plus en taille). Exemple 6: Recherche de bactéries pathogènes dans les liquides biologiques humains, tel le liquide céphalo-rachidien. La détection précoce d'une méningite à ménin- gocoques peut être réalisée directement à partir du fluide cérébro-spinal par centrifugation, et coloration du culot par anticorps monoclonaux spécifiques disponibles commer- cialement. La culture du micro-organisme spécifique n'est plus nécessaire, la sensibilité de l'appareil étant suffi- sante. Le colorant de viabilité positive est utilisé simul- tanément pour s'assurer de l'état métabolique des cellules. Similairement, les bactéries (bactériémie) ou les parasites peuvent être recherchés dans les urines, par exemple. Exemple 7: Numération rapide de levures dans un brassin: La suspension de levures constituant le brassin est diluée par du NaCl à 9 g/l de manière à obtenir une - densité de cellules comprise entre 5 000 et 50 000/ml. Une solution du colorant de.viabilité adéquat est ajoutée à une concentration de 1 %. Une incubation de 5 mn à 45'C colore les levures, que l'on peut ensuite compter au moyen de l'installation conforme à l'invention, en moins d'une minute. Exemple 8: Numération rapide de levures dans un levain: On procède comme dans l'exemple 6. Exemple 9: Test de germination de spores de moisissures et numération rapide des spores ayant germé: Les moisissures utiles sont généralement four- nies lyophilisées aux industries fromagères. Leur germina- tion et le délai d'obtention de celle-ci peuvent être déterminés en les plaçant dans un tampon de germination favorable au gonflement de leur paroi, notamment solution saline tamponnée au phosphate et additionnée d'une substance énergétique telle que glucose, saccharose, fruc- tose, etc... ou, éventuellement, milieu alimentaire. Après 4 à 6 heures d'incubation, le gonflement de la paroi des spores rend celles-ci pbrméables aux colo- rants de viabilité, utlllsé de la même manière que dans l'exemple 7. L'analyse de l'échantillon dans l'installation conforme à l'invention, permet, après dilution adéquate, dans un délai de l'ordre d'une minute, de déterminer le pourcentage de spores germées et leur nombre total. Ainsi que cela ressort de ce qui précède, l'invention se limite nullement à ceux de ces modes de mise en oeuvre, de réalisation et d'application qui viennent d'être décrits de façon plus explicite; elle en embrasse au contraire toutes les variantes qui peuvent venir à l'esprit du technicien en la matière, sans s'écarter du * cadre, ni de la portée de la présente invention. -14, REVENDICATIONS 1l) Procédé de recherche, de détection et de numération de microorganismes, présents normalement, ou éventuellement contenus en tant que contaminants dans un milieu à l'état liquide, semi-liquide, gélifié, pateux, solide ou analogue, notamment des produits alimentaires, des produits d'hygiène, des fluides biologiques, caracté- risé en ce que lesdits produits ou fluides sont tout d'abord mis en contact avec au moins un colorant de viabi- 0lo lité positive utilisé soit seul, soit en mélange avec d'autres substances telles que celles choisies dans le groupe qui comprend d'autres colorants de viabilité, des colorants vitaux, des anticorps rendus fluorescents et des sondes nucléiques rendues fluorescentes, ledit colorant de viabilité marquant sélectivement seulement les micro- organismes vivants présents dans lesdits produits ou fluides, puis en ce que dans un deuxième temps, le comptage individuel desdits microorganismes marqués est réalisé par un moyen approprié. 2') Procédé selon la revendication 1, caracté- risé en ce que le comptage individuel desdits micro- organismes marqués, est réalisé par cytomètrie en flux. 3) Procédé selon la revendication 1, caracté- risé en ce que le comptage individuel desdits micro- organismes marqués, est réalisé par analyse d'images. 4) Procédé selon l'une quelconque des revendi- cations 1 à 3, caractérisé en ce que les échantillons à analyser sont soumis à un traitement préalable, biologique, chimique ou physique, destiné à mettre les micro-organismes dans un état métabolique optimal, propre à favoriser l'ingestion du colorant de viabilité positive, par lesdits micro-organismes. ) Procédé selon la revendication 4, caractérisé en ce que le traitement préalable est constitué par l'action d'un tampon d'ajustement du pH du milieu. 6') Procédé selon l'une quelconque des revendi- cations 4 et 5, caractérisé en ce que le tampon d'ajustement du pH est utilisé également en tant que milieu de solubilisation. 7) Procédé selon la revendication 4, caracté- risé en ce que le traitement préalable est constitué par l'action des ultrasons. 8') Procédé selon la revendication 4, caracté- risé en ce que le traitement préalable est constitué par l'action d'enzymes appropriées. 9') Procédé selon l'une quelconque des revendi- cations 4 à 8, caractérisé en ce que les échantillons à analyser sont soumis à une séparation de phases, notamment centrifugation, filtration. 10') Procédé selon l'une quelconque des revendications 1 à 9, caractérisé en ce que le colorant de viabilité positive est choisi parmi les substances non fluorescentes ou peu fluorescentes, qui pénètrent dans le micro-organisme, lesdites substances étant alors clivées ou modifiés de manière à fournir un produit fluorescent, ledit produit étant piégé dans sa majeure partie ou en totalité à l'intérieur dudit micro-organisme. 11') Procédé selon l'une quelconque des reven- dications 1 à 10, caractérisé en ce que les anticorps sont choisis parmi les anticorps polyclonaux et/ou monoclonaux, mono ou polyspécifiques, anti-levures et/ou anti-bactéries et/ou anti-moisissures et/ou anti-parasites et/ou anti- virus et les anticorps polyclonaux et/ou monoclonaux mono ou polygénériques anti-levures et/ou anti-bactéries et/ou anti-moisissures et/ou anti-parasites et/ou anti-virus. 12') Procédé selon la re.e.ndication 11, carac- térisé en ce que les anticorps mis en oeuvre sont rendus fluorescents par un agent fluorochrome approprié. 13') Installation pour la mise en oeuvre du procédé selon les revendications 1 à 12, comprenant un cytomètre en flux pourvu d'un faisceau lumineux appro- 2628531' prié (11), d'une cellule de mesure (20) comprenant une chambre de mesure (21) en flux, que traverse l'échantil- lon (30) de produit ou de fluide & analyser et un dispo- sitif d'enregistrement (40,50) des signaux de fluorescence émis par lesdits micro-organismes, caractérisé en ce que la cellule de mesure (20) est pourvue d'un moyen de fermeture (35) du système d'aspiration que comprend le cytomètre, lequel entre en action sous l'effet du retrait de l'échantillon du porte-échantillon.