Brevet FR2630327A1 — publié le 19891027

La présente invention concerne une préparation pharma- ceutique contenant de l'acide 4-biphényLylacétique ou BPAA (égale- ment dénommé parfois "felbinac") utile dans le traitement de L'arthrite. Le BPAA est Le métaboLite actif du "fenbufen", médicament de La cLasse des anti-inflammatoires non stéroides et qui est Lar- gement prescrit pour divers états comprenant L'arthrite. Le BPAA lui-même, cependant, n'a généralement pas été utilisé jusqu'à présent en thérapie, bien que L'on dispose depuis peu de temps d'un -gel contenant du BPAA pour L'application topique dans Le traitement de l'arthrite. La présente invention résulte des recherches effectuées par la demanderesse pour trouver u.; système amélioré fournissant le BPAA dans le traitement de l'arthrite. Une méthode courante pour traiter l'arthrite est la thérapie intraarticuLaire, dans LaqueLle L'agent actif est injecté directement dans la région de l'articulation enflammée. Cependant, la demanderesse a trouvé que dans Le cas du BPAA, les solutions ou- suspensions injectables cLassiques du médicament ont un effet faible ou n'ont pas d'effet dans la réduction de L'infLammation des articulations arthritiques. Contrairement à ces résultats décourageants, La demande- resse a maintenant trouvé seLon L'invention que des préparations Liposomales de BPAA peuvent produire une réduction considérable de L'inflammation articulaire et que cet effet souhaitabLe est d'une durée exceptionnellement Longue. Ces propriétés avantageuses des préparations liposomaLes de BPAA n'étaient pas du tout prévisibles. L'utilisation de Lipo- somes comme support pour Les médicaments a été suggérée depuis de nombreuses annéeset, déjà en 1979, De Silva et ses coLLaborateurs utilisaient une formulation en liposomes pour fournir des agents antiinflammatoires stéroÂdes dans des articulations arthritiques du genou (De SiLva et autres, Lancet, 1., p 1 320, 1979). Cependant, jusqu'à présent, iL n'y a pas sur Le marché de préparation Liposo- male efficace d'un médicament anti-inflammatoire pour la thérapie intraarticulaire. Donc, la présente invention propose d'une manière géné- rale une préparation liposomaLe utiLe dans la thérapie intra- articulaire et contenant du BPAA comme ingrédient actif. Comme il est bien connu, Les liposomes se forment Lorsque l'on Laisse gonfler des phospholipides ou d'autres molécules amphi- pathiques convenables dans l'eau ou des solutions aqueuses pour former des structures (ordinairement) multicouches composées de plusieurs doubles couches séparées Les unes des autres par une matière aqueuse. Les préparations liposomales de la présente inven- tion peuvent être préparées par l'une quelconque des techniques connues utilisant des phospholipides ou d'autres lipides amphipa- thiques appropriés à cet effet. Cependant, on préfère en particu- lier l'utilisation de lécithine d'oeuf comme source de phospho- lipides parce qu'elle a une faible température de transition de phases et formera donc des liposomes à la température ambiante en présence de matière aqueuse. D'autres phospholipides appropriés qui peuvent être utilisés selon l'invention comprennent par exemple d'autres lécithines naturelles comme la lécithine de soja et des lécithines synthétiques saturées et insaturées, par exemple dimy- ristoylphosphatidylcholine, dipalmitoylphosphatidylcholine, distéa- roylphosphatidylcholine, dioléylphosphatidylcholine et dilinoléyl- phosphatidylcholine. En général, le rapport pondéraL lipide/BPAA dans les pré- parations liposomales de l'invention est compris dans la gamme de 7: 1 à 15: 1 pour un effet thérapeutique intéressant in vivo, le rapport pondéraI préféré lipide/BPAA étant de 9: 1 à 11: 1. Les préparations liposomales de l'invention peuvent facultativement contenir un ou plusieurs agents auxiliaires pharma- ceutiquement acceptables connus comme conférant des propriétés avantageuses aux préparations Liposomales, par exemple: (a) substances connues comme donnant une charge négative aux liposomes, par exemple acide phosphatidique d'oeuf ou phosphate de dicétyle; (b) substances connues comme donnant une charge positive, par exemple stéarylamine ou acétate de stéarylamine; (c) substances connues comme agissant sur Les propriétés physiques des Liposomes d'une manière plus souhaitable; par exemple, stérols tels que cholestérol, ergostérol, phytostérol, sitostérol,', pyroglutamate de sitostérol, 7-déshydrocholestérol ou Lanostérol, ou caprolactame, qui agissent sur la rigidité de la membrane;- (d) substances connues comme ayant des propriétés anti- oxydantes pour améliorer la stabilité chimique des composants des Liposomes, telLes que tocophérot, gallate de propyle, palmitate d'ascorbyle ou hydroxytoluène butylé. Les modes de mise en oeuvre préférés de L'invention con- tiennent du cholestérol pour augmenter Le tassement des molécules, généralement dans un rapport pondéraL lipide/cholestéroL de 1: 1 à 10: 1, de préférence de 4: 1 à 7: 1. On a trouvé que La dimension de particule des prépara- tions liposomales peut avoir un effet important sur leur effica- cité. Donc, d'une part il semble que les particules doivent être suffisamment petites pour être phagocytées par les cellules syno- viales, tandis que d'autre part elles ne doivent pas être assez petites pour s'échaper de la cavité synoviale dans La circulation systémique. En conséquence, on préfère en généraL que La dimension de particule des liposomes soit dans la gamme de 0,1 à 5,0 upm, de préférence de 0,5 à 3,0 mn. La préparation Liposomale selon l'invention peut être fabriquée par des techniques connues des spécialistes. Ainsi, par exemple, on peut dissoudre Le BPAA, Le Lipide choisi et Les ingré- dients facuLtatifs éventueLs dans Le chloroforme ou un autre soLvant organique approprié qui est ensuite éLiminé par évapora- tion. Lorsque L'on disperse La matière résultante dans un mitieu aqueux convenable comme L'eau distiLlée, le sérum physioLogique isotonique ou une solution tampon, il se forme une suspension de Liposomes multilamellaires. La dimension de particule de la suspen- sion liposomale peut ensuite si nécessaire être ajustée par exemple par filtration et/ou traitement par les ultrasons. De préférence, on doit prendre Les mesures habituelLes (par exemple stérilisation sur filtre des composants séparés et maintien des conditions aseptiques de traitement) pour assurer la stérilité de la suspen- sion liposomale. Ou bien encore, on peut stériliser La suspension liposomale après la préparation si la dimension de particule néces- saire des liposomes est de moins de 0,2 pm de diamètre. On peut remplir des fioles avec la suspension Liposomale ainsi préparée pour l'utilisation telle que, mais pour éviter le risque d'une dégradation inacceptable au stockage, on préfère qu'elle soit déshydratée, par exemple séchée par congélation par des techniques classiques, prête pour la reconstitution au moment de l'emploi. De préférence, le mélange déshydraté lipide/médicament est conservé sous azote jusqu'à ce que l'on en ait besoin pour l'utilisation. Il est reconstitué par l'addition d'un véhicule aqueux pour injection tel quepar exemple,dextrose à 5 %, sorbi- tol à 5 X, sérum physiologique isotonique ou sérum physiologique tamponné au phosphate. On préfère que le pH de la formulation injectable soit dans la gamme de 6,5-8,5, mieux encore de 6,8-7,8, le pH souhaité étant atteint de préférence par l'addition appro- priée de sérum physiologique tamponné. Les préparations liposomales contenant du BPAA selon l'invention ont une utilisation potentielle pour le traitement de l'arthrite ou comme analgésiqueintraveineux. Pour le traitement de l'arthrite, les préparations sont à administrer de préférence par injection directe dans la cavité articulaire à un taux de dosage d'environ 10-20 mg de BPAA tous les deux mois environ, selon la taille de L'articulation enflammée traitée. Dans les dessins annexés, - ta figure 1 représente les variations dans le temps du diamètre du genou enflammé d'un lapin dans un modèle d'arthrite aiguë traitée par la préparation liposomale de BPAA selon l'inven- tion; - la figure 2 représente les variations dans le temps du diamètre du genou d'un lapin dans un modèle d'arthrite rhumatolde aiguë traitée par une solution de sel d'éthanolamine de BPAA; - la figure 3 représente les variations dans le temps du diamètre du genou d'un lapin dans un modèle d'arthrite rhumatoide aiguë traitée par une suspension de BPAA; et - La figure 4 représente les variations dans le temps du diamètre du genou d'un Lapin dans un modèle d'arthrite chronique (induite par un antigène) traitée par la préparation Liposomale de BPAA selon l'invention. Les exemples suivants illustrent l'invention sans toute- fois en limiter La portée. EXEMPLE 1 On prépare une préparation liposomale muLtilamellaire de composition suivante: Lécithine d'oeuf 2,5 g cholestérol 0,6 g BPAA 0,25 g On dissout d'abord les constituants dans 50 mL de chloro- forme dans un ballon à fond rond. On élimine ensuite le solvant dans un évaporateur rotatif à 40 -45 C pour laisser dans le ballon un film de lipide/stéroL/BPAA. Ensuite, on hydrate le film à La température ambiante par addition de 25 ml de sérum physiologique tamponné au phosphate (pH 8, 0). Apres agitation vigoureuse pour disperser le film, La suspension liposomale résultante a une dimen- sion de particule d'environ 1-2 pm, un pH final de 6,85 et une con- centration en BPAA d'environ 10,0 mg/ml. On injecte ensuite 1,0 mL de La préparation liposomale stérile ainsi préparée dans l'articulation enflammée du genou d'un lapin qui a été irritée (modèLe d'arthrite "aigue") deux jours auparavant par un méLange de poly-D-lysine et d'acide hyaluronique (PDL/HA). On injecte en même temps une solution témoin de sérum physiologique dans L'articulation de l'autre genou du Lapin, qui a également reçu deux jours auparavant L'injection du même mélange irritant. On mesure ensuite périodiquement les diamètres des deux articulations pendant Les semaines suivantes. Les résultats de cette expérience sont représentés graphiquement dans la figure 1 ci-annexée, par des ronds pLeins (e) pour le genou ayant reçu L'injection de BPAA et par des cercLes (o) pour Le genou ayant reçu- L'injection de sérum physiologique. Comme on peut Le voir d'après la figure 1, la dimension des deux genoux augmente rapidement et de manière importante après l'injection du mélange irritant. Le genou témoin, qui a reçu au jour 2 l'injection de sérum physiologicque, reste pratiquement aussi enflé jusqu'au jour 72 o i l reçoit l'injection d'une nouvelle dose de mélange irritant, ce qui entraîne rapide- ment une nouvelLe augmentation de taille. Le genou cqui avait reçu l'injection de la préparation liposomale de BPAA selon l'invention reste également enflé pendant une semaine à peu près après l'injec- tion, mais désenfle ensuite constamment une manière importante jusque vers le jour 45. Entre le jour 45 et le jour 72, il y a seu- lement une faible augmentation de taille du genou et lorsque le genou, de manière analogue, reçoit ensuite au jour 72 une injection d'une nouvelle dose du mélange irritant, la taille résultante du genou est encore inférieure à celle du genou témoin. La "dispersion" des points individuels indiqués dans le graphique de la figure 1, en particulier les variations apparentes des dimensions d'articulations entre le jour 2 et le jour 10, est presque certainement le reflet de la difficulté que l'on a rencon- trée à mesurer chaque fois l'articulation précisemment dans la même position. Le poids du lapin est de 2,24 kg au début de ce test et de 2,19 kg au jour 73. Les résultats indiqués dans la figure 1 font apparaître la promesse que les préparations liposomales de BPAA selon l'inven- tion offriront en une seule injection un soulagement prolongé des patients ayant des articulations gravement arthritiques. EXEMPLE COMPARATIF 1 En suivant le mode opératoire général de l'exemple 1, on injecte dans une articulation enflammée de genou d'un lapin I ml d'une solution stérile à 5 mg/ml du sel d'éthanolamine de BPAA (équivalant à 5 mg de BPAA) dans un véhicule aqueux et on mesure périodiquement le diamètre de l'articulation et on le compare avec le diamètre de l'articulation de l'autre genou ayant reçu comme témoin une injection de sérum physiologique. Les résultats de cette expé- rience sont représentés graphiquement à la figure 2 ci-annexée par -.-x pour le genou traité par injection de sérum physiologique et par---{--- pour le genou traité par 5 mg de BPAA en solution. On observe dans la figure 2 qu'iL n'y a en réalité pas du tout de diminution statistiquement significative du diamètre de L'articuLation du genou qui a reçu l'injection de la solution de BPAA jusque vers Le jour 12, après quoi le diamètre diminue, mais seulement jusqu'à la valeur de l'articulation du genou ayant reçu L'injection témoin de sérum physiologique. La figure 2 illustre que les solutions de BPAA sont inefficaces pour souLager L'arthrite dans ce modèle d'arthrite rhumatoide. EXEMPLE COMPARATIF 2 Dans une autre experience, en suivant à nouveau Le mode opératoire général de l'exemple 1, on essait dans le modèle d'arthrite rhumatoide une suspension aqueuse tamponnée au phosphate contenant 10 mg/ml de BPAA, par injection de 0,5 ml de la suspen- sion de BPAA dans l'articulation du genou enflammé du lapin. Les résultats de cette expérience sont représentés graphiquement dans la figure 3 ci-annexée par -x- pour le genou ayant reçu l'injection de sérum physiologique et par---C{---pour le genou traité par 5 mg de BPAA en suspension. On peut voir à la figure 3 que jusque 4 jours environ l'articulation du genou traitée par la suspension de BPAA diminue à peu près à la même vitesse faible que l'articulation du genou témoin traitée par injection de sérum physiologique, après quoi le diamètre du genou ayant reçu l'injection de BPAA augmente en fait un peu, indiquant peutêtre que Le BPAA en suspension pourrait en réalité être un agent irri- tant. La figure 3 illustre que les suspensions de BPAA sont également inefficaces dans Le traitement de ce modèle d'arthrite rhumatoide. EXEMPLE 2 On étudie L'efficacité de La même préparation LiposomaLe utilisée à L'exemple 1 dans un modèle d'arthrite "chronique" (induite par un antigène). La méthode utilisée est La suivante: jour O: injections intradermiques dans le dos d'un lapin de portions aliquotes de 1 ml d'adjuvant complet de Freund avec de l'ovalbumine (à 10 mg/ml). Jour 14: répétition de la sensibilisation ci-dessus. Jour 28: injection intra-articulaire de la dose d'ovalbumine (1 mg) inductrice. Jour 30: injections intra-articulaires de la préparation liposo- maLe de BPAA et de sérum physiologique comme témoin. Jour 118: nouvelle injection intra-articulaire de la dose d'oval- bumine (1 mg) inductrice. On mesure périodiquement pendant les semaines suivantes Les diamètres des articulations du genou ayant reçu l'injection de BPAA et du genou témoin. Les résultats sont représentés graphique- ment dans la figure 4 ci-annexée par - x pour le genou ayant reçu l'injection de sérum physiologique et par---!--- pour Le genou ayant reçu l'injection de liposomes de 5 mg de BPAA. Dans la figure 4, le taux est mesuré à partir de la première injection d'une dose d'ovalbumine inductrice, c'est-à-dire que le jour O sur le graphique est le 28e jour de l'expérience. La figure 4 montre que l'articulation du genou ayant reçu l'injection de BPAA diminue assez rapidement de diamètre jusque vers le jour 20 après l'injection o il n'est pratiquement plus enflé. Alors seulement, il semble que les effets bénéfiques de l'injection de BPAA commencent à s'atténuer. Au contraire, le diamètre du genou témoin (injection de sérum physiologique) diminue plus lentement pendant à peu près les 40 premiers jours après l'injection et il reste pratiquement constantmais à une valeur plus élevée que le genou ayant reçu l'injection de BPAA. REVENDICATIONS 1. Préparation pharmaceutique utile en thérapie intra- articulaire, caractérisée en ce qu'elle comprend de L'acide 4- biphénylylacétique ou BPAA comme ingrédient actif, associé à des. liposomes comme support. 2. Préparation selon La revendication 1, caractérisée en ce que Le rapport pondéraL du BPAA au Lipide utiLisé pour former Les Liposomes est de 1: 7 à 1: 15, de préférence de 1: 9 à 1: 11. 3. Préparation seLon La revendication 2, caractérisée en ce que Ledit Lipide est La Lécithine d'oeuf. 4. Préparation seLon L'une queLconque des revendications précédentes, caractérisée en ce qu'eLLe comprend également du cholestérol dans un rapport pondéraL Lipide/cholestérol de 1: 1 à 10: 1, de préférence de 4:1 à 7: 1. 5. Préparation selon l'une quelconque des revendications précédentes, caractérisée en ce que La dimension de particuLe des liposomes est de 0,1 à 5,0 pm, de préférence de 0,5 à 3,0 pm. 6. Préparation selon l'une quelconque des revendications précédentes, caractérisée en ce qu'elle comprend également un véhicule aqueux pour injection. 7. Mélange lipide-BPAA approprié pour La reconstitution par un véhicule aqueux pour injection, caractérisé en ce qu'il est formé en déshydratant une préparation Liposomale seLon L'une quel- conque des revendications précédentes. 8. MéLange Lipide-BPAA formant une préparation Liposomale par addition d'un véhicule aqueux, caractérisé en ce qu'il est produit en dissolvant le BPAA et un lipide dans un solvant orga- nique eten éliminant ensuite ce solvant organique par évaporation. - 9. Utilisation de la préparation liposomale selon L'une quelconque des revendications 1 à 6-dans La préparation d'un médi- cament pour la thérapie intra-articuLaire.