Brevet FR2629458A2 — publié le 19891006

FR 2629458 A2 19891006 FR 8804436 A 19880405 La présente invention constitue un développement de l'invention objet de la demande de brevet principal N 87 10917 auquel on pourra se reporter pour la meilleure intelligence du présent Certificat d'Addition. Plus précisément, la présente invention concerne de nouvelles sondes d'acides nucléiques, ADN mono-brin ou ARN, marquées, ces sondes étant spécifiques de chacun des différents types de virus du papillome humain (HPV) par rapport aux autres types de virus HPV. La présente invention concerne également un procédé de détection et d'identification sélective des différents types de virus de papillome humain HPVIa, HPV5, HPV6b, HPV8, HPVII, HPVI6, HPV18 et HPV33. % des femmes sont infectées par le virus HPV; le virus se localise dans les cellules cervicales et conduit dans un certain nombre de cas, à des lésions dysplasiques et/ou malignes du col utérin. Parmi les nombreux types de virus HPV, HPVI6 et HPVI8 semblent le plus fréquemment associés à ces lésions. Les HPV se caractérisent par un génome à ADN double brin circulaire, long d'environ 8000 paires de bases, enveloppé dans une capside protéique de 60 nm de diamètre. Le virus subsiste dans les lésions non malignes à l'état d'épisome non intégré. On observe dans ces cas la perturbation de la différentiation cellulaire et la production de particules virales aux stades tardifs de la différentiation. Lorsque le carcinome utérin est établi, on constate une intégration variable de certaines séquences de I'ADN viral dans l'ADN cellulaire. La détection des virus HPV dans le col utérin s'effectuait par l'emploi de sondes moléculaires constituées de fragments d'ADN viral clonés et marqués isotopiquement. Dans le cadre d'études épidémiologiques et du diagnostic en routine des infections par HPV, il est' utile de développer une méthode rapide, simple, spécifique et sensible basée sur l'emploi de sondes à ADN synthétique marquées de façon non isotopique et utilisables in situ. A cet effet, on a identifié,, au niveau de l'ADN, des régions spécifiques des différents types de virus HPV pour en déduire des sondes synthétiques homologues complémentaires. Idéalement, les sondes choisies doivent être capables de détecter un type de virus à l'exclusion de tout autre type d'HPV. Les séquences nucléotidiques de HPVI, HPV5, HPV6, HPVI1, HPVI6, HPV18 et HPV33 sont connues. La spécificité des séquences proposées dans la demande de brevet principal a été améliorée en prenant en compte les nouvelles données de la séquence du virus HPVla, telle qu'elle a été actualisée dans la version 13 de la banque de données EMBL de novembre 1987. Par rapport à l'ancienne version que l'on connaissait de la séquence qui avait servi de base à la détermination des séquences sondes décrites dans la demande de brevet principal, plusieurs modifications ont été apportées, l'organisation génomique du virus HPVIa apparaîssant désormais comparable à celle des autres virus de HPV. Si l'on s'en réfère à la nouvelle numérotation de HPV la, la place occupée par les sondes spécifiques de HPVla décrite par la demande de brevet principal doivent être décalées de 4273 par soustraction. Ainsi, la sonde spécifique annoncée en position 5296, sonde spécifique de HPVIa, apparaît désormais en position 1023. Sur la base de la nouvelle séquence de HPV la, de nouvelles sondes spécifiques sont maintenant proposées par la présente invention. Ces sondes sont à considérer comme des sondes sélectives alternatives par rapport à celles décrites dans la demande de brevet principal. La présente invention a donc pour objet une première série de huit sondes d'acides nucléiques d'ADN mono-brin ou d'ARN, chacune spécifique d'un type de virus de papillome humain par rapport aux autres types. Ces sondes comportent une séquence d'acides nucléiques marquées comprenant les oligomères suivants pour HPVIa: CXGXCCCXXCXGCGCGAGACGX pour HPV5: XXGXAXGGGAXCGGGGGCGXXXA pour HPV6b: GGCAAXCAXXAACGCAGGGGCG pour HPV8: GCAGCXCAGXCCGCGGCXCC pour HPVII: GAAGCXCXCCCAAGCCXGCXAXX pour HPVI16:ACCAGAGACAACXGAXCXCXACXG et: ACAAGCAGAACCGGACAGAGCCCA pour HPVI8: CCCAXXGXAXCACCCACGGCCC pour PHV33: GXCCXCCGGXXACXGXAGACACX Les séquences ci-dessus correspondent aux séquences de la fibre ou brin direct(e) ou codant(e) de l'ADN du virus et peuvent s'hybrider avec l'ADN bicaténaire ou avec la fibre inverse lorsque l'ADN a été dénaturé. On peut aussi, bien entendu, utiliser des oligormères complémentaires en interchangeant A et X d'une part, et C et G d'autre part. Ces oligomères complémentaires sont notamment utiles comme sondes pour s'hybrider avec l'ARN messager du virus. On rappelle que dans les séquences ci-dessus, ATCGU représente les nucléotides correspondant aux bases adénine, thymine, cytosine, guanine et uracyl respectivement, et X représente T ou U. L'oligomère sélectif pour HPVIa comprend 22 monomères. Le premier nucléotide de cette séquence correspond à la position 3448 du brin codant de l'ADN du virus. La séquence se termine à la position 3469. Cette séquence correspond à une position située dans le gène E3 du virus HPVIa et présente une température de demi-hybridation de 72 C. L'oligomère sélectif pour HPV5 comprend 23 monomères. Cette séquence correspond à la position 1800-1822 de l'ADN du virus située dans le gène El et présente une température de demi-hybridation de 70 C. L'oligomère sélectif pour HPV6b comprend 22 monomères. Cette séquence correspond à la position 4755-4776 de 1'ADN du virus située dans le gène L2 et présente une température de demi-hybridation de 70 C. L'oligomère sélectif pour HPV8 comprend 20 monomères. Cette séquence correspond à la position 1208-1227 de 1'ADN du virus située dans le gène El et présente une température de demi-hybridation de 70 C. L'oligomère sélectif pour HPVl l comprend 23 monomeres. Cette séquence correspond à la position 4637-4659 de l'ADN du virus située dans le gène L2 et présente une température de demi-hybridation de 70 C. Le premier oligomère sélectif pour HPV16 comprend 24 monomères. Cette séquence correspond à la position 609-632 de l'ADN du virus située dans le gène E7 et présente une température de demi-hybryda- tion à 70 . Pour le virus HPV16 une seconde sonde spécifique de 24 monomères a été déterminée, elle est située dans le gène E7 dépourvu de toutes bases T ou U, elle est repérée en position 690-713. L'oligomère sélectif pour HPV18 comprend 22 monomères. Cette séquence correspond à la position 5486-5507 de l'ADN du virus située dans le gène L2 et présente une température de demi-hybridation de 72 C. L'oligomère sélectif pour HPV33 comprend 23 monomères. Cette séquence correspond à la position 4475-4497 de l'ADN du virus située dans le gène L2 et présente une température de demi-hybridation de 70 C. La présente invention a également pour objet une seconde série de sondes spécifiques de chacun des types de virus HPV par rapport aux autres types de virus. Ces sondes présentent une longueur de 35 monomères. Il s'agit des sondes spécifiques précédentes, rallongées vers l'amont ou vers l'aval selon les zones d'analogie repérées. Ces oligomères correspondent également à la fibre codante de l'ADN du virus. L'invention a donc également pour objet les séquences complémentaires qui peuvent notamment s'hybrider avec l'ARN messager. Ces nouvelles sondes spécifiques consistent en des séquences d'acides nucléiques marquées, comportant les oligomères suivants pour HPVla: XGXCCCXXCXGCGCGAGACGXXGGAAGXAXACACA. Cette séquence correspond à la position 3449-3482 du brin codant de l'ADN du virus et est située dans le gène E3. Pour HPV5: XGXAXGGGAXCGGGGGCGXXXAGCCAXGGACCAXA. Cette séquence correspond à la position 18i01-1835 de' 'ADN du virus, elle est située dans le gène El. Pour HPV6b: GCAAXCAXXAACGCAGGGGCGCCXGAAAXXGXGCC. Cette séquence correspond à la position 4756-4790 de l'ADN du virus et est située dans le gène L2. Pour HPV8: GCAGCXCAGXCCGCGGCXCCAGXCAAXAXCACXGX. Cette séquence correspond à la position 1208-1242 de l'ADN du virus et est située dans le gène El. Pour HPV1: XAXAXACCCXXGGGAAGCXCXCCCAAGCCXGCXAX. Cette séquence correspond à la position 4624-4658 de l'ADN du virus et est située dans le gène L2. Pour HPV16: XGXXAGAXXXGCAACCAGAGACAACXGAXCXCXAC. Cette séquence correspond à la position 596-630 de l'ADN du virus et est située dans le gène E7. Pour HPV 18: CCCAXXGXAXCACCCACGGCCCCXGCCXCXACACA. Cette séquence correspond à la position 5486-5520 de l'ADN du virus et est située dans le gène L2. Pour HPV33: XCCXCCGGXXACXGXAGACACXGXXGGACCXXXAG. Cette séquence correspond à la position 4476-4510 de l'ADN du virus et est située dans le gène L2. La présente invention a également pour objet d'autres sondes d'acides nucléiques spécifiques de chacun des types de virus de papillome humain, mais toujours situées dans la région E7 du génome de chacun de ces virus. En effet, le gène E7 du génome de chacun de ces virus HPV est le plus concerné dans la forme intégrée de ces virus dans l'ADN des cellules malignes. Une première série de sondes spécifiques comporte des oligonucléotides d'une longueur telle qu'ils présentent une température de demi-hybridation de 70 C. Il s'agit des oligomères suivants ou de leurs complémentaires: Virus Oligomère Longueur Position Gène ____________________________ --------------- HPVIa GACCGXCCXCGCGGAXCACAG 21 711-731 E7 HPV5 GCCXGACAACGAAAGGAXCXCXXA 24 788-811 E7 HPV6b GACGAAGXGGACGGACAAGAXXC 23 641-663 E7 HPV8 XGXCAACGCAACXGAXXCGGGXAX 24 856-879 E7 HPVII XGAGGXGGACAAGGXGGACAAAC 23 634-656 E7 HPV16 AGXGXGACXCXACGCXXCGGXXG 23 740-762 E7 HPV18 XXGXAAGXGXGAAGCCAGAAXXGAG 25 784-808 E7 HPV33 AGCAAGXGACCXACGAACCAXACA 24 788-811 E7 - - ___ - --- - __ - ___-----à-à----------- Un autre objet de la présente invention est une nouvelle série de sondes d'acides nucléiques spécifiques de la région E7 de chacun des types de virus de HPV par rapport aux autres types de virus, ces sondes comportant des oligonucléotides de longueur de 35 monomères, à savoir les oligomères suivants ou leurs complémentaires Virus Oligomère Position HPVIla GACCGXCCXCGCGGAXCACAGCGCCAXXAGACAGC 711-745 HPV5 GAGGAGCCXGACAACGAAAGGAXCXCXXACAAAGX 783-817 HPV6b GAGGXGGACGAAGXGGACGGACAAGAXXCACAACC 635-669 HPV8 CXXXXXGXCAACGCAACXGAXXCGGGXAXCAGGAC 851-885 HPVIl AGAAGAXGAGGXGGACAAGGXGGACAAACAAGACG 628-662 HPVI16 XXGCAAGXGXGACXCXACGCXXCGGXXGXGCGXAC 735-769 HPV18 AXGXGXXGXAAGXGXGAAGCCAGAAXXGAGCXAGX 779-813 HPV33 AGXACAGCAAGXGACCXACGAACCAXACAGCAACX 783-817 Ces séries de sondes correspondent comme les précédentes à la fibre codante de l'ADN du virus et leurs complémentaires à la fibre inverse qui peuvent donc s'hybrider avec l'ARN messager notamment. Les positions indiquées correspondent au brin direct pour les précédentes. La présente invention concerne également des sondes qui permettent de distinguer les virus HPV responsables des tumeurs de peau de ceux, propres aux muqueuses, qui provoquent des cancers anogénitaux ou des voies orales, nasales et paranasales. La présente invention a donc pour objet des sondes spécifiques du sousgroupe de virus constitué par HPV16, HPV18 et HPV33 qui provoquent des tumeurs de muqueuses, caractérisées en ce qu'elles comportent la séquence suivante: XXAGGCACAXAXXXX ou son complémentaire. Cette séquence est commune à HPVI6, HPVI8 et HPV33 et ne se retrouve pas dans les autres types de virus HPV. Elle se situe aux positions suivantes (numérotation par rapport à la fibre codante) Virus Position Gène HPV16 7696-7710 en aval de LI HPVI8 7686-7700 en aval de LI HPV33 7741-7755 en aval de L1 La présente invention a également pour objet des sondes spécifiques du sous-groupe HPVI6, HPV18 qui provoquent des tumeurs de muqueuses, caractérisées en ce qu'elles comportent la séquence suivante AXAXCAAAXAXXAGXGAAGX ou son complémentaire. Cette séquence est commune à HPV16 et HPVI8 et ne se retrouve dans aucun des autres types de virus HPV. Elle se situe aux positions suivantes (numérotation par rapport à la fibre codante) Virus Position Gène _______________________-_____________________________ HPV16 1839-1858 El HPVI8 1910-1929 El Enfin, la présente invention a pour objet une sonde spécifique du sous-groupe de virus consistant en HPV5 et HPV8 qui provoque des tumeurs de la peau, caractérisée en ce qu'elle comporte un fragment de 56 bases de long dont la séquence définie par rapport au brin codant est la suivante CAAACAACAGXXGCXGACAAXAXXXXAAAAXAXGGCAGXGCXGGXGXAXXX XXXGG Elle se situe aux position suivantes (numérotation par rapport à la fibre codande) Virus Position Gène HPV5 4450-4505 L2 HPV8 4383-4438 L2 A l'intérieur de ce fragment, on peut choisir des séquences plus courtes ayant des températures de demi-hybridation de l'ordre de 70 C. Parmi ces différentes possibilités, on peut citer la sonde comportant la séquence XAXGGCAGXGCXGGXGXAXXXXXXG ou son complémentaire Cette séquence correspond aux positions 4480-4504 de HPV5 et 4413-4437 de HPV8 (numérotées par rapport à la fibre codante). Les sondes sélectionnées, communes à chacun des sous-groupes de virus HPV, permettent d'identifier chacun des sous-groupes et, par leur sélectivité, de les distinguer entre eux. La présente invention a également pour objet une sonde d'acides nucléiques, caractérisée en ce qu'elle est marquée par l'un des procédés connus pour le marquage des sondes ADN ou ARN, choisi notamment parmi les marquages radioactifs tels que 32p et les marquages enzymatiques, tels qu'avec la biotine, ainsi qu'un procédé de détection d'un type de virus HPV ou d'un sous-groupe de virus HPV à l'aide d'une sonde, selon l'invention, caractérisé en ce qu'on hybride ladite sonde à une séquence d'ADN ou d'ARN desdits virus HPV, le cas échéant, préalablement dénaturé s'il était initialement bicaténaire. D'autres caractéristiques et avantages de l'invention apparaî- tront à la lumière de l'exemple non limitatif de réalisation qui va suivre. La description fait référence à des figures. La figure I représente l'hybridation sélective des sondes générales synthétiques HPV aux ADN des virus HPV. a: ADN du virus HPV6b, digéré par BamHI b: ADN du virus HPVI 1, digéré par BamHl c: ADN du virus HPVI6, digéré par BamHI d: ADN du virus HPV18, digéré par EcoRI A sonde spécifique de HPV6b B sonde spécifique de HPVI I C sonde spécifique de HPVI6 D: sonde spécifique de HPVI8 La figure 2 représente l'hybridation sélective des sondes synthétiques dirigées contre la région E7 du génome de HPV aux ADN des virus HPV. a: ADN du virus HPV6b, digéré par BarnHI b: ADN du virus HPV1, digéré par BamHI c: ADN du virus HPVI6, digéré par BamHI d: ADN du virus HPVIS, digéré par EcoRI A: sonde spécifique de HPV6b B: sonde spécifique de HPVI 1 C: sonde spécifique de HPVI6 D: sonde spécifique de HPVI8 1: fragments d'ADN radioactifs lambda EcoRI-HindII-Stan- dards de taille. Il Hybridation des sondes HPV avec l'ADN des différents virus Les génomes de l'HPV6b, 11, 16 et 128 ont été reçus clonés dans pBR322. Quand on digère les clones 6b, 11, 16 par BamHI et le clone 18 par EcoRI, on sépare le génone du virus (environ 8 kb) du pBR322. a) Amplification des clones La présence des génomes d'HPV dans les clones a été confirmée par restriction. Les clones ont ensuite été amplifiés et l'ADN a été purifié sur gradient de chlorure de césium. b) Séparation de l'ADN des virus HPV sur gel d'agarose 1,6 pg de chaque ADN ont été digérés soit par BamHI pour les clones 6b, 1l et 16, soit par EcoRI pour le clone 18. Les 1,6 pg de chaque ADN ont été répartis en adjacence et parallèlement sur huit gels d'agarose 0,8 % (200 ng ADN/clone/gel) à proximité d'un marqueur de taille marqué radioactivement (lambda HindIII-EcoRI). Après 3 heures de migration à 80 Volts dans du TBE IX (Tris 90 mM, EDTA 2,5 mM, acide borique 90 m.I, pH 8), les gels ont été dénaturés (NaOH 0,5 M, NaCI 1,5 M) pendant 35 minutes, rincés à l'eau, puis neutralisés (NaCI 1,5 M, Tris HCI pH 8, 0,5 M) pendant 30 minutes à température ambiante. Les gels ont ensuite été déposés sur du papier Whatman 3MM, recouverts de saranwrap et mis à sécher sous vide pendant I heure à température ambiante et I heure à C. c) Marquage au 32p des sondes HPV spécifiques Les oligomères synthétiques caractéristiques des HPV6b, 11, 16 et 18 ont été synthétisés. Série Sondes spécifiques: Virus Oligomère Longueur Position Gène Temp. HPV6b CGCCCCTGCGTTAATGATTGCC 22 4776-4755 L2 70 C HPVI i AATAGCAGGCTTGGGAGAGCTTC 23 4659-4637 L2 70 C HPVI6 CAGTAGAGATCAGTTGTCTCTGGT 24 632-609 E7 70 C HPVI8 GGGCCGTGGGTGATACAATGGG 22 5597-5486 L2 72 C Par ailleurs, une deuxième série de sondes chacune spécifique d'un type de virus du papillome humain, mais située dans la région E7 du génome de chacun de ces virus, a été parallèlement synthétisée. Série sondes E7 Virus Oligomère Longueur Position Gène Temp. HPV6b GAATCTTGTCCGTCCACTTCGTC 23 663-641 E7 70 C HPVlI GTTTGTCCACCTTGTCCACCTCA 23 656-634 E7 70 C HPVI6 CAACCGAAGCGTAGAGTCACACT 23 762-740 E7 70 C HPV18 CTCAATTCTGGCTTCACACTTACAA 25 808-784 E7 70 C Dans ces deux séries, les sondes correspondent à la fibre inverse des HPV, les positions indiquéessont repérées sur la fibre directe. Les huit oligomères ont été marqués au 32p par kination selon le protocole suivant: 0,1 pg de chaque oligomère a été mélangé, dans un volume final de 30 p1, à 30 pCi de gamma 32p ATP (3000 Ci/mmole), 5 unités T4 polynucléotide kinase, 67 mM Tris HCI pH 8, 10 mM MgCI2, 10 mM dithiothrétiol et incubé 45 minutes à 37 C. Les oligomères marqués ont été séparés des nucléotides libres par chromatographie sur Sephadex G50. L'activité spécifique obtenue s'élève à 5.108 cpm/pg d'oligomère engagé dans la réaction. d) Hybridation sur gel avec les sondes marquées Les gels d'agarose ont été décollés du papier Whatman en les plongeant quelques minutes dans de l'eau. Chaque gel a été hybridé avec l'un des quatre oligomères marqués radioactivement, dans un volume de 5 ml de mélange d'hybridation comprenant 2.106 cpm/ml d'oligbmères radioactifs, 0,1 % SDS, 100 pg/m d'ADN de sperme de saumon dénaturé 10 minutes à 100 C, 5 x SSPE (NaCI 0,9 M, NaH2PO4 50 mM, EDTA pH 8, mMl). L'incubation s'effectue dans des sacs en plastique scellés et dans un bain agitant à 65 C pendant environ 14 heures. e) Lavage et exposition Les gels ont été lavés deux fois 15 minutes, puis 1 heure à température ambiante, 10 minutes à 65 C et enfin 1 heure à température ambiante dans du 6XSSC (0,9 M NaCI, 90 mM citrate trisodique, pH 7). Après avoir été déposés sur une feuille de papier Whatman et recouverts de saranwrap, les gels ont été mis à exposer entre deux écrans renforçateurs à -70 C de 2 à 14 heures (Film Kodak X-OmatS). f) Résultats Deux séries de quatre duplicata contenant l'ADN des clones HPV6b, 11, 16 et 18 ont été chacune hybridées à l'un des quatre oligomères des deux séries sondes spécifiques. On voit que l'HPV6b n'est reconnu que par les sondes 6b (Fig. IA et 2A), que l'HPVII n'est reconnu que par les sondes 11 (Fig. lB et 2B), que l'HPV16 n'est reconnu que par les sondes 16 (Fig. IC et 2C) et enfin que seul l'HPV18 est reconnu par les sondes 18 (Fig. ID et 2D). Chaque sonde reconnaît exclusivement l'HPV correspondant à l'exclusion des autres types de HPV. REVENDICATIONS 1. Sonde d'acides nucléiques spécifiques pour la détection du type de virus de papillome humain HPVla, selon la revendication 1 du brevet principal, caractérisée en ce qu'elle comporte un oligomère choisi parmi CXGXCCCXXCXGCGCGAGACGX XGXCCCXXCXGCGCGAGACGXXGGAAGXAXACACA GACCGXCCXCGCGGAXCACAG GACCGXCCXCGCGGAXCACAGCGCCAXXAGACAGC avec X = T ou U ou leurs complémentaires. 2. Sonde d'acides nucléiques spécifiques pour la détection du type de virus de papillome humain HPV5, selon la revendication I du brevet principal, caractérisée en ce qu'elle comporte un oligomère choisi parmi XXGXAXGGGAXCGGGGGCGXXXA XGXAXGGGAXCGGGGGCGXXXAGCCAXGGACCAXA GCCXGACAACGAAAGGAXCXCXXA GAGGAGCCXGACAACGAAAGGAXCXCXXACAAAGX avec X = T ou U ou leurs complémentaires. 3. Sonde d'acides nucléiques spécifiques pour la détection du type de virus de papillome humain HPV6b, selon la revendication 1 du brevet principal, caractérisée en ce qu'elle comporte un oligomère choisi parmi: GGCAAXCAXXAACGCAGGGGCG GCAAXCAXXAACGCAGGGGCGCCXGAAAXXGXGCC GACGAAGXGGACGGACAAGAXXC GAGGXGGACGAAGXGGACGGACAAGAXXCACAACC avec X = T ou U ou leurs complémentaires. 4. Sonde d'acides nucléiques spécifiques pour la détection du type de virus de papillome humain HPV8, selon la revendication I du brevet principal, caractérisée en ce qu'elle comporte un oligomère choisi parmi GCAGCXCAGXCCGCGGCXCC GCAGCXCAGXCCGCGGCXCCAGXCAAXAXCACXGX XGXCAACGCAACXGAXXCGGGXAX CXXXXXGXCAACGCAACXGAXXCGGGXAXCAGGAC avec X = T ou U ou leurs complémentaires. 5. Sonde d'àcides nucléiques spécifiques pour la détection du type de virus de papillome humain HPVII 1, selon la revendication I du brevet principal, caractérisée en ce qu'elle comporte un oligomère choisi parmi: GAAGCXCXCCCAAGCCXGCXAXX XAXAXACCCXXGGGAAGCXCXCCCAAGCCXGCXAX XGAGGXGGACAAGGXGGACAAAC AGAAGAXGAGGXGGACAAGGXGGACAAACAAGACG avec X = T ou U ou leurs complémentaires. 6. Sonde d'acides nucléiques spécifiques pour la détection du type de virus de papillome humain HPVI6, selon la revendication 1 du brevet principal, caractérisée en ce qu'elle comporte un oligomère choisi parmi - ACCAGAGACAACXGAXCXCXACXGX et: ACAAGCAGAACCGGACAGAGCCCA XGXXAGAXXXGCAACCAGAGACAACXGAXCXCXAC AGXGXGACXCXACGCXXCGGXXG XXGCAAGXGXGACXCXACGCXXCGGXXGXGCGXAC avec X = T ou U ou leurs complémentaires. 7. Sonde d'acides nucléiques spécifiques pour la détection du type de virus de papillome humain HPVI8, selon la revendication 1 du brevet principal, caractérisée en ce qu'elle comporte un oligomère choisi parmi: CCCAXXGXAXCACCCACGGCCC CCCAXXGXAXCACCCACGGCCCCXGCCXCXACACA XXGXAAGXGXGAAGCCAGAAXXGAG AXGXGXXGXAAGXGXGAAGCCAGAAXXGAGCXAGX avec X = T ou U ou leurs complémentaires. 8. Sonde d'acides nucléiques spécifiques pour la détection du type de virus de papillome humain HPV33, selon la revendication I du brevet principal, caractérisée en ce qu'elle comporte un oligomère choisi parmi: GXCCXCCGGXXACXGXAGACACX XCCXCCGGXXACXGXAGACACXGXXGGACCXXXAG AGCAAGXGACCXACGAACCAXACA AGXACAGCAAGXGACCXACGAACCAXACAGCAACX avec X = T ou U ou leurs complémentaires. 9. Sonde d'acides nucléiques spécifiques du sous-groupe de virus HPV constitué par HPV16, HPV18 et HPV33, selon la revendication 1 du brevet principal, caractérisée en ce qu'elle comporte l'oligomère XXAGGCACAXAXXXX avec X = T ou U ou son complémentaire. 10. Sonde d'acides nucléiques spécifiques du sous-groupe de virus constitué par HPVI6 et HPVIS, selon la revendication 1 du brevet principal, caractérisée en ce qu'elle comporte l'oligomère AXAXCAAAXAXXAGXGAAGX avec X = T ou U ou son complémentaire. 11. Sonde d'acides nucléiques spécifiques du sous-groupe de virus constitué par HPV5 et HPV8, selon la revendication 1 du brevet principal, caractérisée en ce qu'elle comporte l'oligomère CAAACAACAGXXGCXGACAAXAXXXXAAAAXAXGGCAGXGCXGGXGXAXXX XXXGG avec X = T ou U ou son complémentaire ou un fragment de ceux-ci comportant entre 18 et 35 oligomères tel que XAXGGCAGXGCXGGXGXAXXXXXXG avec X = T ou U ou son complémentaire. 12. Sonde d'acides nucléiques selon l'une des revendications précédentes, caractérisée en ce qu'elle est marquée par l'un des procédés connus pour le marquage des sondes ADN ou ARN, choisi notamment parmi les marquages radioactifs, tels que 32p et les marquages enzymatiques, tels qu'avec la biotine. 13. Procédé de détection d'un type de virus HPV ou d'un sous-groupe de virus HPV à l'aide d'une sonde, selon l'une des revendica- tions précédentes, caractérisé en ce qu'on hybride ladite sonde à une séquence d'ADN ou d'ARN desdits virus HPV, le cas échéant, préalablement dénaturé s'il était initialement bicaténaire.