Brevet FR2624694A1 — publié le 19890623

-1- Insecticide à base d'un virus du groupe des baculovirus. son procédé de préparation et son utilisation pour la destruction de Phthorimaea operculella. La présente invention a pour objet un agent insecticide actif contre Phthorimaea perculella, une composition insecticide contenant cet agent, un procédé de préparation de ce dernier et un procédé de destruction de Phthorimaea operculla. EPhthrimaa operculella est un parasite des solanacées cultivées telles que la pomme de terre, le tabac, la tomate et l'aubergine. Ainsi, il est communément appelé teigne de la pomme de terre ou mineuse des feuilles de tabac. Les chenilles de ce parasite se nourrissant des végétaux sur lesquelles elles se développent, on a depuis toujours cherché à lutter contre ces insectes nuisibles. A cet effet, on a notamment fait appel aux insecticides chimiques dont la toxicité à l'égard des vertébrés en général et de l'Homme en particulier, oblige toutefois a de sevères précautions d'emploi. Aussi, le but de la présente invention est il de proposer un insecticide inoffensif pour les vertébrés et les plantes et que l'on peut qualifier de biologique. Cette invention repose sur la mise en évidence surprenante que le virus naturel (baculovirus de polyèdrose nucléaire) de la noctuelle Mamestra brassicae (parasite du chou), lorsqu'il est ingéré par les chenilles Phthoriiaea operculella, provoque une mortalité importante de ces chenilles. En conséquence, un premier objet de la présente invention, réside dans un agent insecticide actif contre Phthorimaea operculella, qui se caractérise en ce qu'il est constitué par le baculovirus de la polyedrose nucléaire de la noctuelle Xamestra brassicae. Les baculovirus ayant généralement une activité virale très spécifique, il est tout à fait inattendu que le baculovirus particulier mis en oeuvre dans la présente invention, ait une activité à l'égard d'un parasite, la chenille PhZhrima goperculella, aussi différent de la chenille de la noctuelle Mamestra brassicae. En effet, Phthorimaea operculella et amestra brassicae appartiennent à des familles différentes, le premier appartenant à la famille des Noctuidae et le second à la famille des Gelechiidae. De plus, le baculovirus de Xamestra brassicae et le virus naturel de Phthorimaea plierculella ont des positions taxonomiques différentes puisque le premier entre dans le sous-groupe des virus des polyèdroses nucléaires alors que le second entre dans le sous-groupe des virus de la granulose. Il est également important de noter que les aires 2geographiques de présence de Mamestra brassicae et Phhorimaea operculella étant différentes, il ne peut y avoir de mortalité naturelle de Phthorimaea operculella due à la présence du virus de Mamestra brassicae.Un second objet de la présente invention réside dans une composition insecticide active contre Phthorimaea perculella, cette composition se caractérisant en ce qu'elle comprend dans un véhicule approprié, en tant que principe actif, l'agent insecticide défini ci-dessus. Cette composition insecticide peut se présenter sous différentes formes. Ainsi, elle peut par exemple se présenter sous la forme d'une suspension dudit agent insecticide dans un véhicule liquide contenant éventuellement un agent dispersant, ce véhicule liquide étant de préférence choisi dans le groupe comprenant l'eau, les huiles végétales (notamment huile de coton) et leurs mélanges. Elle peut en variante se présenter sous la forme d'une poudre comprenant ledit agent insecticide et un véhicule pulvérulent tel que le talc. Bien entendu, cette composition peut, si on le souhaite, également contenir d'autres additifs, par exemple des additifs susceptibles d'améliorer l'adhérence. La présente invention a en outre pour objet un procédé de préparation de l'agent insecticide défini ci-dessus, ce procédé étant caractérisé en ce qu'il comprend les étapes consistant: (a) à contaminer des chenilles de Mamestra brassicae à l'avant dernier stade larvaire par le baculovirus de la polyèdrose nucléaire de la noctuelle Kamestra brassicae, et (b) à extraire, des chenilles mortes par suite de cette contamination, les baculovirus qui se sont multipliés en leur sein. Avantageusement, l'étape (a) de ce procédé consiste à faire ingérer auxdites chenilles, un milieu nutritif contaminé par ledit baculovirus, ce milieu comprenant de préférence les éléments nutritifs suivants: poudre de chou, levure de bière, maïs broyé, germe de blé broyé, hydrolysat de caséine, sels minéraux. Quant à l'étape (b) de ce procédé, il comprend de préférence le broyage des chenilles mortes et la filtration de la bouillie résultant de ce broyage, sur un filtre ayant une ouverture de maille permettant de retenir les particules de dimension supérieure à 0,3 gm et notamment les polyèdres du baculovirus qui possèdent une dimension de 0,5 à 2,5 pm, cette filtration étant suivie de l'élimination de la phase liquide du filtrat. Cette élimination peut en 3 - particulier être realisee par précipitation acétonique en présence de lactose, lyophilisation ou séchage par atomisation. La présente invention a enfin pour objet un procédé de destruction de Phthorimaea operculella infestant le feuillage, les tubercules, les fruits et/ou les bourgeons floraux des solanacées cultivées, ce procédé se caractérisant en. ce qu'il consiste à appliquer l'agent insecticide ou la composition insecticide défini ci-dessus, sur lesdits feuillage, tubercules, fruits et/ou bourgeons floraux. Quand la composition insecticide est mise en oeuvre sous la forme d'une suspension, celle-ci est de préférence appliquée sur les feuillages, fruits et/ou bourgeons floraux à raison de 1.10' à 5.10'1 polyèdres/hectare de feuillage, fruits et/ou bourgeons floraux et quand elle est mise en oeuvre sous la forme d'une poudre, cette dernière est de préférence déposée par poudrage sur les tubercules à raison de 1.109 à 10.109 polyèdres/g de tubercules. Les exemples non limitatifs ci-après sont donnés à des fins d'illustration de l'invention. Exemple 1: production du baculovirus de la polyèdrose nucléaire de la noctuelle Mamestra brassicae Des chenilles de Mamestra brassicae sont élevées sur un milieu nutritif artificiel (M) décrit a l'exemple 2, jusqu'à l'avant dernier stade larvaire. Elles sont alors infectées par ingestion d'un milieu nutritif artificiel (X') décrit à l'exemple 3, contaminé par le baculovirus de la -polyèdrose nucléaire de la - noctuelle Xamestra brassicae. Les chenilles contaminées meurent dans un délai de 9 à 10 jours. Les cadavres sont ensuite broyés et filtrés par. exemple sur un filtre en fibres de verre présentant une ouverture de maille permettant de retenir toutes particules de dimension supérieure A 0,3 pm. Sur le filtrat, on effectue une précipitation acétonique en y ajoutant 4 volumes d'acétone pour 1 volume de filtrat et du lactose à raison de 6 % en poids du f iltrat et en soumettant le mélange résultant à une forte agitation pour l'homogénéiser. En variante, on peut lyophiliser le filtrat ou- le soumettre à un séchage par atomisation. La poudre ainsi obtenue contient les Baculovirus désirés plus des débris cellulaires. L'activité des préparations obtenues comme décrit ci-dessus est déterminée par une série de comptages à l'aide d'une cellule hématimétrique qui permet de dénombrer un nombre moyen de polyèdres, puis par des essais biologiques mesurant l'activité insecticide sur chenilles. Exemple 2: Composition du milieu nutritif (X> cité dans l'exemple 1 Pour 1 kg de ce milieu nutritif, on utilise: -- 4 6- - - Substances liantes (A) agar - agar 16 g. eau distillée 780 ml. - Eléments nutritifs (B) poudre de chou 64 g. levure de bière 34 g. maïs broyé 64 g. germe de blé broyé 32 g. hydrolysat de caséine 5 g. mélange salin 3,5 g. - Agents anti-microbiens (B'): acide benzoïque 2,5 g. - Nipagine (C) = Parahydroxybenzoate de méthyle 1,1 g. - Formaldehyle (D) 0,5 ml. - Vitamines (E) mélange vitaminé 3 g. acide ascorbique 4,5 g. L'agar-agar est dissous dans la moitié de la quantité d'eau indiquée, a ' C, pendant 20 minutes en autoclave. Pendant ce temps, les poudres B et B' sont mélangées avec l'eau restante; le parahydroxybenzoate de méthyle (C) est dissous dans 5 ml d'alcool à 90'. Lorsque la gélose est dissoute, elle est incorporée aux éléments nutritifs (B) et (B') à l'aide d'un mélangeur de type ménager. La température de l'ensemble descend alors rapidement à 55' C, température à laquelle on peut inclure les antimicrobiens (C) et( D) et les vitamines (E). Le mélange, encore chaud, est distribué dans les différents dispositi2s d'élevage et durcit rapidement en refroidissant. Il peut être conservé en boites fermées pendant 8 à 10 jours à 5' C. Exemple 3: Composition du milieu nutritif (X') cité dans l'exemple 1 Ce milieu est également utilisé pour les essais biologiques de titrage. Pour un kilogramme de milieu on utilise: agar-agar 12 g, eau 800 ml, poudre de chou 64 g, levure de bière 34 g, maïs.64 g, germe de blé 32 g, acide benzoïicue 2,5 g, nipagine 1,1 g, acide ascorbique 4,5 g. Exemple 4 Traitement contre la teigne de la pomme de terre -5- La souche du ravageur utilise pour l'expérimentation provient de la région de Casablanca Dar Bouazza (Maroc). L'élevage de cette souche est effectué sur tubercules de pomme de terre, à une température de 25' C. Un essai a éte effectué sur le feuillage de pommes de terre. Des papillons Pthorimaea operculella provenant du Maroc, sont mis à pondre dans une cage contenant des tiges avec feuilles et après 48 heures on compte les oeufs. Ensuite, on pulvérise sur le feuillage, dans une tour de traitement, une suspension dans l'eau du virus préparé conformément à l'exemple 1 et ce, à deux doses différentes du virus, à savoir à la dose de 50 polyèdres/mm2 de feuillage (dose 1) et à la dose de 250 polyèdres/mm2 de feuillage (dose 2). On évalue l'ar.vité léthale de cette suspension en comptant le nombre de papillons formés à i, zir des oeufs. Les résultats obtenus sont les suivants: - témoin non traité 65 oeufs conduisent à 54 papillons: environ 17 % de mortalité - baculovirus dose 1 51 oeufs conduisent à 37 papillons: environ 28 % de mortalite - baculovirus dose 2 51 oeufs conduisent à 17 papillons: environ 67 % de mortalité Avec ce mode de traitement on observe une action du virus lie a la dose. Par ailleurs, plusieurs essais ont été effectués sur les tubercules de pomme de terre en utilisant respectivement une poudre constituée de 98 % en pc A de talc et de 2 % du baculovirus préparé conformément à l'exemple 1 et p_ ntant une activite virale de 72.10- polyèdres/g et une poudre constituée de % de talc et de 10 % de ce même baculovirus. La quantité de poudre mise en oeuvre représentait 1 % du poids des tubercules. Les tubercules ont été traitées en les enrobant par les poudres ci-dessus et l'activité léthale de ces-poudres a été déterminée en comptant le nombre de papillons formés à partir des oeufs pondus en 24 heures- par 30 papillons Phthorimae operculella. Les résultats obtenus sont comme suit: témoin non traité 100 % des oeufs pondus ont conduit à la formation d'un papillon - poudre dosée à 2 % 26 % seulement des oeufs pondus ont conduit à la formation d'un papillon (taux de mortalité: 74 %) - poudre dosée à 10 % 9 % seulement des oeufs pondus ont conduit à la formation d'un papillon (taux de mortalité: 91%) 6- On a repete à quatre reprises les essais ci-dessus en utilisant un témoin non traité et la poudre dosée à 2 % et on a observé les pourcentages de sortie de papillons suivants: témoin 100 %; poudre dosée à 2 %: 5 %, 12 %, 8 X et 23 %. Les résultats ci-dessus démontrent indéniablement la puissante activite insecticide des compositions testées. -7 - REVENDICATIONS 1. Agent insecticide actif contre Phthorimaea operculella, caractérisé en ce qu'il est constitue par le baculovirus de la polyèdrose nucléaire de la noctuelle Mamestr brassicae. 2. Composition insecticide active contre Phthorimaea r lla, caractérisée en ce q'elle comprend dans un véhicule approprié, en tant que principe actif, l'agent insecticide selon la revendication 1. 3. Composition insecticide selon la revendication 2, caractérisée en ce qu'elle se présente sous la forme d'une suspension dudit baculovirus dans un véhicule liquide. 4. Composition insecticide selon la revendication 3, caractérisée en ce que ledit véhicule liquide est choisi dans le groupe comprenant l'eau, les huiles végetales et leurs mélanges. 5. Composition insecticide selon la revendication 2, caractérisée en ce qu'elle se présente sous la forme d'une poudre comprenant ledit baculovirus et un véhicule pulvérulent. 6. Procédé de préparation de l'agent insecticide défini a la revendication 1, caractérisé en ce qu'il comprend les étapes consistant: (a) à contaminer des chenilles de Mamestra brassicae à l'avant dernier stade larvaire par le baculovirus de la polyèdrose nucléaire de la noctuelle amestra brassicae, et (b) à extraire, des chenilles mortes par suite de cette contamination, les baculovirus qui se sont miltipliés en leur sein. 7. Procédé selon la revendication 6, caractérisé en ce que l'étape (aY consiste & faire ingérer auxdites chenilles, un milieu nutritif contaminé par ledit baculovirus, ce milieu comprenant les éléments nutritifs suivants: poudre de chou, levure de bière, maïs broyé, germe de blé broyé, hydrolysat de caséine, sels minéraux. 8. Procédé selon la revendication 6 ou 7, caractérisé en ce que l'étape (b) comprend le broyage des chenilles mortes et la filtration du résultat de ce broyage sur un filtre ayant une ouverture de maille permettant de retenir les particules de dimension supérieure à 0,3 gm, cette filtration étant suivie de l'élimination de la phase liquide du filtrat. 9. Procédé selon la revendication 8, caractérisé en ce que l'élimination de la phase liquide du filtrat est réalisée par précipitation acétonique en présence de lactose, lyophilisation ou séchage par atomisation. 10. Procédé de destruction de Phthorimaea operculella infestant le feuillage, les tubercules, les fruits et/ou les bourgeons floraux des solanacées cultivées, caractérisé en ce qu'il consiste à appliquer l'agent insecticide ou la composition insecticide selon l'une des revendications 1 à 5, sur lesdits feuillage, tubercules, fruits et/ou bourgeons floraux. 11. Procedé selon la revendication 10, mettant en oeuvre la composition insecticide sous la forme d'une suspension, caractérisé en ce qu'il consiste a appliquer cette suspension sur les feuillage, fruits et/ou bourgeons floraux, à raison de 1.10'- à 5.10' polyèdres/hectare de feuillage, fruits et/ou bourgeons floraux. 12. Procédé selon la revendication 10, mettant en oeuvre la composition insecticide sous la forme d'une poudre, caracterisé en ce qu'il consiste à poudrer les tubercules au moyen de cette composition à raison de 1.10:' a 10.10: polyèdres/g de tubercules.