Brevet FR2627492A1 — publié le 19890825

Nouveaux dérivés de l'amino-5'-didéoxy-2'-5'-uridíne, procédé pour les préparer et compositions pharmaceutiques contenant ces composés. La présente invention a pour objet de nouveaux dérivés de l'amino-5'-didéoxy-2'-5'-uridine, un procédé pour les préparer et des compositions pharmaceutiques les contenant. On connaît déjà certains dérivés de la déoxy-2'-uridine. C'est ainsi qu'ont été décrits des dérivés de la déoxy2'-uridine substitués en position 5, et répondant à la formule chimique générale suivante dans laquelle R est un radical alkyle saturé ou insature ayant de 1 à 4 atomes de carbone, un radical aryle ou un halogène, lesdits radicaux alkyle et aryle pouvant comporter au moins un substituant halogène. On connaît également, notamment par le brevet américain 4,093,716 l'amino-5'-didéoxy-2t-5'-méthyl-5-uridine de formule qui est présenté comme inhibiteur potentiel du virus de l'herpès. La préparation de ce composé est décrite dans un article d'Horwitz et al, dans la revue "The Journal of American Chemical Society 27 3045, (1962)". La présente invention concerne une nouvelle classe de dérivés de l'amino-5'-didéoxy-2'-5'-uridine répondant à la formule générale suivante dans laquelle . R représente un radical alkyle saturé ou insaturé ayant de 1 à 4. atomes de carbone, un radical aryle ou un halogène, lesdits radicaux alkyle ou aryle pouvant comporter au moins un substituant halogène ; et . R' représente un reste d'acide aminé ou de peptide comportant de deux à six acides aminés. Il a en effet été découvert que ces nouveaux dérivés possèdent la propriété pharmacologique intéressante d'être des inhibiteurs de la thymidine kinase foetale présente dans les tissus cancéreux humains et sont ainsi des inhibiteurs de la synthèse de l'ADN des cellules cancéreuses en voie de prolifération. Ces nouveaux produits se présentent, suivant la structure de l'acide aminé ou du peptide précité, sous la forme D ou L. Le procédé général pour la préparation des composés selon l'invention de formule dans laquelle R et R' sont définis comme ci-dessus, comporte la réaction, par voie chimique ou par voie enzymatique d'un dérivé aminé en position 5' répondant à la formule générale dans laquelle R a la même signification que dans la formule I, avec un acide aminé ou un peptide comportant de deux à six acides aminés. Les composés de forme L sont préparés de préférence par réaction enzymatique du dérivé aminé de formule II avec un acide aminé ou un peptide de forme L ou DL, en présence d'une enzyme choisie parmi la papaine et la chymopapaine, la réaction étant effectuée à une température d'environ 10 à environ 700C en milieu acide. Dans ces conditions, il y a réaction entre la fonction amine du dérivé aminé en 5' et la fonction acide libre de l'acide aminé ou du peptide, étant entendu que les fonctions amines dudit acide aminé ou peptide sont préalablement bloquées à l'aide de réactifs connus tels que le benzyloxycarbonyle, le t-butoxycarbonyle ou le fluorénométhyloxycarbonyle. Les composés de forme L, D ou DL peuvent également être préparés en utilisant un procédé purement chimique. La présente invention concerne également des compositions pharmaceutiques, notamment à activité d'inhibiteur de la synthèse de l'ADN des cellules cancéreuses en voie de prolifération, caractérisées en ce qu'elles contiennent, à titre d'ingrédient actif, au moins l'un des composés définis précédemment de formule générale I, en association avec un véhicule ou support non-toxique pharmaceutiquement acceptable. L'invention sera illustrée plus en détail par les exemples non-limitatifs suivants Exemple 1 : Voie enzymatique Synthèse de N-(L-alanyl)-amino-5'-didéoxy-2' ,5'-méthyl-5-uridine Dans un tricol de 100 ml équipé d'une agitation magnétique, d'un thermomètre et d'un réfrigérant, on introduit successivement - 16 ml de soude normale - 3,57 g de (N-benzyloxycarbonyl)-L-alanine (0,016 mole) - 3,86 g d'amino-5'-didéoxy-2',5'-méthyl-5-uridine (0,016 mole) - 188 mg de chlorhydrate de L-cystéine dissous dans 2,4 ml d'eau distillée - 20 ml de solution tampon citrique pH : 5 Le milieu réactionnel dont le pH est 8,98 est chauffé à 500C à a partir de 300C, le mélange est limpide. A 500C, on additionne une solution de 3,6 g de papaine (2,9 UI/mg) dans 8 ml d'eau. Le pH évolue lentement vers 8,41. Par addition d'acide citrique en poudre (m = 1,2 g) on amène le pH à 4,6 et laisse sous vive agitation pendant 24 h. La réaction terminée, on refroidit le milieu réactionnel, filtre et lave le précipité à l'eau. Après séchage à 60 C sous vide, on obtient 4,3 g de N-[(N-benzyloxycarbonyl)-L-alanyl]-amino-5'-didéoxy-2',5'-méthyl-5- uridine. La purification est effectuée par cristallisation dans 50 ml de méthanol. m = 3,9 g Rdt = 55% Pureté :95% Ce composé est mis en solution dans le méthanol et hydrogéné en présence de 400 mg de charbon palladié à 10 %. Après filtration du catalyseur et concentration du solvant, on reprend le résidu par l'éther éthylique et filtre-le précipité obtenu. On obtient après séchage 7,9 mmoles de N-(L-alanyl)amino-5'-didéoxy-2',5'-méthyl-5-uridine (Rdt : 90 %). La recristallisation dans 20 ml ce méthanol du produit précédent conduit à 7,11 mmoles du composé désiré optiquement pur (B 1245) m = 2,21 g Rdt global : 44 % , F = 190-1930C (Thermovar) [&alpha;D20 = -28 5 (C = 0,5 MeOH) ; IR (KBR) : 1670cm-l (C=0); 1275 cm-1, 1580 cm-1, 3250 cm-1 (N - H). RMN (200 MHz, CD3OD) : 1,30 (3H, d, Me ala) ; 1,90 (3H, s, Me) ; 2,22 à 2,28 (2H, m, C-2'-H) ; 3,47 à 3,51 (3H, m, C-5'-H, C-ala-H) 3,90 à 3',92 (1H, m, C-4'-H) ; 4,25 à 4,27 (1H, m, C-3'-H) ; 6,18 (1H, t, C-1'-H) ; 7,49 (1H, s, C-6-H). Exemple 2 : Voie chimique Synthèse de N-(D-alanyl)-amino-5'-didéoxy-2',5'-méthyl-5-uridine Dans un tricol de 100 ml équipé d'une agitation magnétique, d'un thermomètre et d'une garde de chlorure de calcium, on introduit o - 20 ml de dichlorométhane sec (tamis-4 A) - 893 mg de (N-benzyloxycarbonyl)-D-alanine (4 mmoles) - 0,6 ml de triéthylamine (4,3 mmoles) On refroidit la solution obtenue à -50C et ajoute 0,4 ml de chloroformiate d'éthyle (4,2 mmoles). Après 90 minutes d'agitation, on additionne 964 mg d'amino-5'-didéoxy-2',5'-méthyl-5-uridine et laisse 60 minutes à -50C puis une nuit à température ambiante. On filtre le précipité formé.et le lave par 15 ml d'eau permutée. Après séchage à l'étuve sous vide à 600C, on obtient 1,33 g de N-[(N-benzyloxycarbonyl)-D-alanyl]-amino-5'-didéoxy- 2',5'-méthyl-5-uridine. Une cristallisation dans 50 ml de méthanol conduit à 1,2 g d'un composé de pureté satisfaisante (Rdt : 67 ). L'hydrogénolyse et une purification analogues à celles décrites dans l'exemple 1, conduisent au N- IR (KBr) : 1670 cm 1 (C = 0) ; 1275 cm 1, 1580 cm 1, 3250 cm 1 (N - H) ; C.C.M. : (MeOH, H20 : 80/20) rf = 0,21 Silice 60 F254. En utilisant des processus expérimentaux analogues à ceux décrits dans les exemples 1 et 2 et que l'homme de métier retrouvera facilement, on a préparé les composés suivants N-(L-alanyl)-amino 5'-didéoxy-2',5'-éthyl-5-uridine N-(L-alanyl)-amino 5'-didéoxy-2',5'-butyl-5-uridine N-(L-alanyl)-amino 5'-didéoxy-2',5'-propyl-5-uridine N-(L-valyl)-amino 5'-didéoxy-2',5'-méthyl-5-uridine N- (L-leucyl) -amino 5'-didéoxy-2',5'-méthyl-5-uridine N-(sarcosyl)-amino 5'-didéoxy-2' ,5'-méthyl-5-uridine N-( -alanyl)-amino 5'-didéoxy-2' ,5'-méthyl-5-uridine N-(L-alanyl)-L-alanyl)-amino 5'-didéoxy-2' ,5'-méthyl-5-uridine N-(L-alanyl-L-alanyl-L-alanyl)-amino 5'-didéoxy-2',5'méthyl-5-uridine N-(L-glycyl)-amino 5'-didéoxy-2',5'-méthyl-5-uridine N-L(L-alanyl)j6-amino 5'-didéoxy-2' ,5'-méthyl-5-uridine N-(L-alanyl)-amino 5'-didéoxy-2',5'-bromo-5-uridine N-(L-alanyl)-amino 5'-didéoxy-2' ,5'-chlorométhyl-5-uridine N-(L-alanyl)-amino 5'-didéoxy-2',5'-chloro-4-phényl-5-uridine L'activité des composés selon l'invention, comme inhibiteurs de la synthèse de l'ADN des cellules cancéreuses en voie de prolifération a été mise en oeuvre selon le mode opératoire suivant Des cellules du cancer du sein hormonodépendantes (MCF7) qui contiennent 95-96 ,0 de thymidine kinase foetale, sont traitées par les ultrasons et centrifugées à 105.000 g. La concentration des protéines du cytosol obtenu est mesurée et ajustée par dilution à 1,5 mg de protéines par ml de cytosol. Celui-ci est incubé, à 370C pendant 10 minutes, dans un tampon Tris (pH : 7,6) en présence de thymidine [C14-2] (40 - umolaire), d'ATP -(8 mMolaire) et de chlorure de magnésium. La réacton enzymatique est stoppée par l'addition d'acide perchlorique. Les nucléotides formés sont séparés par électrophorèse haute tension, les taches sont découpées et comptées. On a donné au Tableau I les résultats des essais réalisés avec les composés des exemples 1 et 2 ainsi qu'avec des témoins sans inhibiteur, à titre de comparaison. Les valeurs données sont exprimées en picomoles par millilitre de cytosol par minute. TABLEAU 1 Composé Concentration TMP + TTP TTP (Témoin) sans inhibiteur 1993 1573 Ex. 1 1 mMolaire 1329 38 (Témoin) sans inhibiteur 486 i 368 Ex. 2 1 mMolaire 388 46 Ce test biochimique est basé sur la connaissance du fait que la thymidine kinase occupe une position stratégique dans.les processus biochimiques aboutissant à la synthèse de l'ADN, qui utilise le thymidine triphosphate (TTP) qui peut être considéré comme le produit final d'une réaction complexe initiée par la thymidine kinase. Comme le montre le tableau 1, les composés selon l'invention agissent comme inhibiteurs de la synthèse du TTP, et donc vraisemblablement de la synthèse de l'ADN des cellules cancéreuses en voie de prolifération. REVENDICATIONS 1. Dérivés de l'amino-5'didéoxy-2'-5'-uridine, caractérisés en ce qu'ils répondent à la formule générale suivante dans laquelle : . R représente un radical alkyle saturé ou insaturé ayant de 1 à 4 atomes de carbone, un radical aryle ou un halogène, lesdits radicaux alkyle ou aryle pouvant comporter au moins un substituant halogène ; et . R' représente un reste d'acide aminé ou de peptide comportant de 2 à 6 acides aminés. 2. Dérivés selon la revendication 1, caractérisés en ce que le reste d'acide aminé-ou de peptide précité se présente sous la forme L ou D. 3. Dérivés selon la revendication 1, caractérisés en ce qu'il s'agit des composés suivants . N-(L-alanyl)-amino-5'-didéoxy-2',5'-méthyl-5-uridine . N- (D-alanyl)-amino-5'-didéoxy-2' ,5 ' -méthyl-5-uridine 4. Procédé de préparation des dérivés répondant à la formule générale I, caractérisés en ce qu'il comporte la réaction, par voie enzymatique ou par voie chimique d'un dérivé aminé répondant à la formule générale dans laquelle R a la même signification que dans la formule I, avec un acide aminé ou un peptide comportant de 2 à 6 acides aminés; 5.Procédé de préparation des dérivés répondant à la formule générale I dans laquelle le reste d'acide aminé ou de peptide se présente sous la forme L, caractérisé en qu'il comporte la réaction enzymatique d'un dérivé aminé de formule générale avec un acide aminé ou un peptide comportant de 2 à 6 acides aminés, en présence d'une enzyme choisie parmi la papaine et la chymopapaine, la réaction étant effectuée à une température d'environ 10 à environ 700C en milieu acide, les fonctions amines dudit acide aminé ou dudit peptide ayant été préalablement bloquées. 6. Composition pharmaceutique, caractérisée en ce qu'elle contient, à titre dringrédient actif au moins un composé selon l'une des revendications 1 à 3, en association avec un véhicule ou support non-toxique, pharmaceutiquement acceptable. 7; Composition pharmaceutique à activité d'inhibiteur de la synthèse de l'ADt des cellules cancéreuses en voie de prolifération, caractérisée en ce qu'elle contient, à titre d'ingrédient actif, au moins un composé seloh l'une des, revendications 1 à 3, en association avec un véhicule ou support non-toxique, pharmaceutiquement acceptable.