Brevet FR2625099A1 — publié le 19890630

La présente invention concerne la mise au point d'un vaccin contre la toxoplasmose. La toxoplasmose est provoquée par un parasite protozoaire, le Toxoplasme gondii. C'est un organisme unicellulaire eucaryote qui est obligatoirement un parasite intracellulaire. On le trouve dans le monde entier. Aux USA par exemple, 50 8 de la population présente des anticorps contre le toxoplasme. La plupart des infections sont asymptomatiques ou entraînent des troubles mineurs. Toutefois deux classes d'individus risquent de développer une maladie grave - les patients immunodéprimes chez qui les infections latentes maintenues à l'état de kystes peuvent se réactiver, - les embryons dont la mere développe une infection primaire par des toxoplasmes ; en effet ceux-ci peuvent traverser le placenta et se multiplier dans les tissus foetaux, en parti culier dans le systeme nerveux central et la rétine de l'oeil, ce qui provoque des lésions irréversibles. Le cycle de vie du parasite comprend 2 phases - une multiplication asexuée qui peut se produire dans divers mammifères dont l'homme et qui se termine par l'enkystement de parasites "dormants" et, - une multiplication sexuée qui ne se produit que chez le chat. Quand un chat ingère un kyste (présent dans un muscle d'un autre animal), les parasites dormants, appelés bradyzoites, sont libertés dans l'intestin et pénètrent dans les cellules épithéliales où ils se divisent et se différencient sexuellement. (Ils se multiplient aussi de manière asexuée dans les autres organes comme chez tous les mammifères). Les gamètes fusionnent et le zygote s'entoure d'une paroi protectrice et est ainsi éliminé avec les excréments, du chat. A température ambiante, le zygote sporule en 8 sporozoites qui restent dans la coque protectrice. Ces sporozoites sont infectieux pour tout autre mammifère. Quand un animal ingère des sporozoites, ceux-ci sont libérés dans l'intestin, pénètrent dans l'épithélium où ils se multiplient asexuellement pour donner des tachyzoites. Ceux-ci se dispersent et provoquent une infection aiguë disséminée. Le tachyzoite est un organisme unicellulaire de 5 > x 5 qui ne peut se multiplier qu'à l'intérieur des cellules il se multiplie dans tous les types de cellules qui ont été testées. Les cellules infectées se lysent après 2 jours en libérant une centaine de parasites. Dans l'animal infecté, la multiplication du parasite est interrompue par la réponse immunitaire et le parasite s'enkyste dans les muscles et le cerveau. La forme enkystée du parasite ou bradyzoite se maintient à l'état "dormant". Les humains peuvent donc se contaminer par deux voies - en ingérant des sporozoîtes excrétés par les chats, - en consommant de la viande (boeuf et mouton) mal cuite qui contient des bradyzotes enkystés ; ceux-ci sont libérés dans l'intestin et reprennent leur multiplication active en tachyzoîtes. Dans ce cycle de vie complexe du parasite, le tachyzoïte apparaît comme la première cible possible pour dresser une réponse immunitaire et plusieurs travaux ont abouti à l'identification d'antigènes membranaires susceptibles d'induire des anticorps. Des protéines et des polysaccharides de préparations de membranes de tachyzoites sont reconnus par les IgM et les IgG du serum de patients atteints de toxoplasmose aiguë ou chronique et des anticorps monoclonaux spécifiques de ces antigènes membranaires ont déjà été décrits (Kasper et al., 1984 et Johnson et al., 1983). En particulier, un antigène membranaire d'un PM de 30000 a été identifié par Kasper et al., (1983) et reconnu comme protecteur ; l'antigène a été purifié à partir des parasites par immunoadsorption avec des anticorps monoclonaux. Des anticorps monoclonaux dressés contre cet antigène sont capables de tuer le parasite en présence de complément humain. Deux autres antigènes membranaires de PM 35000 et 14000 ont été mis en évidence par Araujo et Remington (1984) les antigènes ont été purifiés à partir des parasites par électrophorèse sur gel de polyacrylamide ; leur injection à des souris les protège contre une inoculation d'épreuve avec le parasite. La présente invention suit une approche différente, basée sur l'hypothèse que la réponse immunitaire doit être le fait d'une stimulation répétée par les antigènes relargués par les bradyzoites enkystés et sur le fait que ces molécules doivent vraisemblablement présenter des épi topes communs aux antigènes excrétés-sécrétés par les tachyzoites et être ainsi responsables d'une immunité concomitante. Dans la perspective de cette nouvelle stratégie vaccinale, l'invention a donc pour objet, non plus des protéines membranaires, mais une protéine excrétée-sécrétée par le tachyzoite, commune aux tachyzoites et aux bradyzoites et donc reconnue par des sérums de patients présentant une toxoplasmose chronique, ctest-à-dire qui sont dans une phase de la maladie a seul le bradyzoite, forme enkystée du parasite, est présent. Par traduction in vitro des ARN messagers des tachyzoites, un antigène majeur de 24 Kd, et un autre mineur de 37 Kd, associé, semble-t-il, au premier, ont été identifiés par des serums humains comme des marqueurs de la phase chronique de la maladie lorsque l'immunité à la réinfection est acquise. D'autre part, par une expérience d'immunocompétition, on a constaté que de l'antigène bradyzolte était capable de diminuer fortement la fixation de ces produits de traduction des ARN messagers de tachyzoite de 24 et 37 Kd par des anticorps anti-antigènes excrétéssécrétés. I1 est donc probable que ces antigènes sont également présents au niveau des bradyzoïtes. La présente invention concerne la détermination de la séquence du cADN qui code pour un antigène de 24 Kd environ ou au moins pour un polypeptide qui comprend les épitopes de celui-ci qui sont reconnus par des anticorps dressés contre les antigènes "excrétés-sécrétés" du tachyzoite. C'est pourquoi la présente invention concerne tout d'abord la séquence d'ADN codant pour la protéine de 24 Kd tel que décrit dans la figure 1. La présente invention concerne également la protéine dont la synthèse est dirigée par ce cADN, synthèse qui peut être effectuée dans différentes cellules hôtes, bactéries, levures ou cellules supérieures, en fonction du vecteur dans lequel le cADN est inséré et des signaux de contrôle de l'expression sous lesquels il est placé. La protéine selon la présente invention peut présenter une structure primaire identique à celle de la protéine native, présente dans le toxoplasme, mais elle peut aussi être un dérivé de celle-ci ou une protéine incomplète mais comprenant les épitopes importants pour la reconnaissance par les anticorps et donc pour l'induction de l'immunité. Cette protéine ou la protéine incomplète peut encore être fusionnée à une autre protéine (ou fragment de protéine), suite à une manipu lation génétique des segments d'ADN correspondants, destinée à favoriser une meilleure expression de la protéine dans la cellule hôte ou éventuellement à provoquer son excrétion hors de la cellule. Les technologies permettant le clonage et l'expression d'un gène étranger dans différentes cellules hâtes sont connues de l'homme de métier. Elles seront illustrées dans les exemples ci-après, étant entendu que d'autres vecteurs et d'autres cellules hôtes peuvent être utilisés. L'expression du gène correspondant à une protéine de 24 Kd dans une bactérie, en l'occurence E.coli, a été obtenue avec un vecteur comprenant le promoteur de lambda L et le CIIrbs comme site de fixation des ribosomes. La protéine hybride obtenue comporte une partie de la protéine CII et la protéine de 24 Kd ou une partie de celle-ci. Dans le cas où l'hâte est une levure, par exemple S. cerevisiae, il est possible d'utiliser un vecteur plasmidique de levure comportant une origine de réplication fonctionnelle dans la levure, par exemple l'origine de réplication du plasmide 5 et, un gène de sélection tel que URA3. Dans le cas présent, le promoteur utilisé est celui du gène PGK avec la partie 5' du gène PKG qui conduit soit à une protéine fusionnée, soit à une protéine mature. Lorsque l'hâte est une cellule de mammifère, on utilisera de préférence comme vecteur d'expression un poxvirus, par exemple le virus de la vaccine. Le virus recombinant comportera le gène codant pour une protéine selon l'invention inséré de préférence dans le gène TK du virus de la vaccine et sous le contrôle d'un promoteur fort tel que le promoteur du gène de la protéine 7,5 K de la vaccine. Le gène codant pour la protéine selon l'invention pourra également être fusionné à une région codant pour un fragment d'une autre protéine, par exemple une séquence signal fonctionnelle, telle que la séquence signal de l'interleukine 2 humaine. L'invention concerne également les cellules hôtes transformées par les vecteurs d'expression des protéines selon la présente invention ainsi qu'un procédé de préparation de telles protéines, caractérisé en ce qu'on cultive ces cellules hôtes et que l'on récupère les protéines selon l'invention. Bien entendu, les méthodes de culture, de récupération et de séparation des protéines dépendront de l'hôte mais sont connues de l'homme de métier. Enfin la présente invention concerne des compositions pharmaceutiques utiles comme vaccins contre la toxoplasmose, caractérisés en ce qu'ils comportent au moins une protéine ou un poxvirus selon l'invention dans un support pharmaceutiquement acceptable. La présente invention concerne en particulier des vaccins vivants, caractérisés en ce qu'ils comportent des virus de la vaccine recombinants vivants qui expriment la protéine selon l'invention, présentés dans un support pharmaceutiquement acceptable. De préférence, ces vaccins seront sous forme adminis trable par exemple par injection. Le support pharmaceutiquemen acceptable pourra être un support aqueux pour injection. Le processus de vaccination devra être adapté au type de vaccin utilisé (protéine ou virus vivant). Il est également possible de dresser des anticorps contre les protéines selon l'invention. Ces anticorps et ces protéines pourront être utilisés comme agent de diagnostic de la toxoplasmose. Dans la présente invention les séquences de nucléotides des gènes ou d'acides aminés des protéines qui sont représentés dans les figures ne seront pas reprises mais sont partie intégrante de l'invention de la présente description. Les exemples ci-après sont destinés à mettre en évidence d'autres caractéristiques et avantages de la présente invention. La description sera faite en utilisant les figures 1 à 4 ci-annexées. Les figures suivantes illustrent les exemples La figure 1 représente la séquence TG.TX11-3.SEQ du cADN de l'antigène de 24 Kd du toxoplasmes déterminée sur les inserts des clones TX8, T10, TX11 et TX3.3. La figure 2 représente l'analyse par "Western Blot" des produits d'expression de E.coli/pTG 2171 et E.coli/pTG 2172. La figure 3 représente l'immunoprécipitation des protéines exprimées par le virus -de la vaccine recombinant W .TG.TX 2170. Sur cette figure, on représente C = Culot S = Surnageant WT = Virus de la vaccine sauvage + = + tunicamycine - = sans tunicamycine La figure 4 complète la figure 3 en illustrant les résultats d'analyse par "Western Blot" des sérums de souris immunisées par le virus de la vaccine recombinant W.TG.TX 2170. Sur cette figure, on représente 1,2,3,4 : Souris immunisées avec le VV.TG.TX2170 vis à vis de protéines induites par le pTG 2171. ci : Contrôle : sérums des souris 1, 2, 3, 4 vis à vis de protéines induites par un plasmide non relevant. C2 : Contrôle : sérum de souris vaccinées par le virus vaccine sauvage vis a' vis de protéines induites par le pTG 2171 Exemple I : Clonage et détermination de la séquence du cAD correspondant à un antigène de 24 Kd du tachyzolte. Comme indiqué précédemment, des anticorps de lapins dressés contre une préparation d'antigènes 11excrétés-sécrétés" (E-S) de tachyzoites reconnaissent une bande majeure de 24 Kd dans les produits de traduction in vitro des ARN messagers des tachyzoetes. Le cADN correspondant à cet antigène a été cloné. A partir de 1'ARN extrait des tachyzoites, une banque de cADN a été préparée en Xgtlln. Ce dérivé du phage X permet l'expression de gènes étrangers sous le contrôle du promoteur lac, après fusion du cADN avec le gène de la P-galacto- sidase de E.coli (Young et Davis, 1983). L'induction de l'expression de la protéine fusionnée est déclenchée à 420C en présence d'isopropyl.B .D. thiogalactopyranoside. Les protéines synthétisées sont adsorbées sur fibres de nitrocellulose puis incubées en présence d'anticorps de lapin dressés contre les antigènes E-S. Cette détection par anticorps permet d'identifier les phages recombinants dont l'insert de cADN dirige la synthèse d'une protéine ou fraction de protéine portant des épitopes reconnus par les anticorps dressés contre les antigènes E-S. Trois clones ont été sélectionnés et reclonés de kgtll dans le vecteur pUC 13. Ces 3 clones ont été désignés TX8, TX10 et TXll. Leur position est indiquée sur la figure 1 qui montre qu'ils se chevauchent largement. Les inserts de cADN de ces 3 clones ont été repris sous forme de fragments EcoRI pour être insérés dans le vecteur M13 TG 131, dans les 2 orientations, pour être séquencés. Les phages résultants sont dénommés - M13 TG TXll et M13 TG TXllR - M13 TG TXlO et M13 TG TX1OR - M13 TG TX8 et M13 TG TX8R La détermination de la séquence a été faite suivant la technique connue sous le nom de "cyclone" qui consiste à créer des délétions de tailles variables dans 1'ADN simple brin à l'aide de la T4 polymérase (On utilise le "kit" fourni par Genofit). La séquence des inserts de différentes tailles ainsi générés est effectuée suivant la méthode de Sanger (Les nucléotides sont achetés chez Pharmacia, le 32P-dATP chez Amersham, la polymérase de Klenow chez Xppligène). Différentes amorces sont utilisées pour le séquençage - TG II 5' AAGGCGATTAAGIIG 3' (Primer universel) - TG 1276 5' CAGCTTAAGGATGACA 3' - TG 1299 5' CACGAACACCGATGC 3' - TG 1290 5' TGCCTGTGGGTCTCT 3' - TG 1420 5' GACACTCACTGTACAAC 3' L'analyse des séquences obtenues (à l'aide du programme de compilation DNA Star, IBM) indique le clone le plus complet est le clone M13 TG TXll, qui ne contient cependant pas 1'ATG initiateur. Une recherche de cet ATG a été conduite par hybridation d'autres clones de cDNA avec un oligonucléotide 5' terminal de séquence 5' XCGCAAGCTCGCTCGGCAGTTTCA, dénommé TG 1325. Le clone 3.3 ainsi identifié a été sous-cloné dans le vecteur M13 mplO (vendu par Amersham) et la séquence faite avec l'oligonucléotide TG 1420. Le clone 3.3. comporte 12 bases de plus que le clone M13 TG TXll, mais n'atteint pas 1'ATG initiateur. La plus grande séquence ainsi obtenue est représentée dans la figure 1. La numérotation de la séquence commence à la première base du clone TX11, car c'est ce clone qui a été exprimé par la suite. Elle est dénommée TG TX11-3.SEQ et comporte un cadre ouvert de lecture de 785 paires de base, ce qui donne un poids moléculaire t-héorique d'environ 29 Kd. Ce résultat et les travaux publiés actuellement ne fournissent aucune information sur la séquence N-terminale du premier produit de traduction du gène natif ni sur l'existence éventuelle d'un précurseur et d'un peptide signal précédant la protéine mature. Toutefois, la localisation exacte du premier aminoacide n'est pas essentielle dans le contexte de l'invention car la stratégie adoptée pour l'isolement de ce gène et pour son expression comprend la recherche des épitopes majeurs qui sont présents dans la protéine de 24 Kd qui sont reconnus par le système immunitaire de l'hôte. Cet argument sera utilisé dans les exemples suivants qui décrivent l'expression des épitopes importants dans différents organismes. Exemple 2 : Expression de l'antigène de 24 Kd dans E.coli Les clones M13 TG TXll et M13 TGTX8 ont un cadre de lecture ouvert en phase avec le site EcoRl du kgtll. Les fragments EcoRl de ces deux clones ont été clonés dans la même phase de lecture pour créer une protéine fusionnée avec le cII de X dans le vecteur pTG 1924 (décrit dans la demande de brevet français 86.11986), sous la dominance du promoteur thermoinductible PL de W. Le fragment provenant de M13 TG TXll cloné dans pTG 1924 génère le pTG 2171. Le fragment provenant de M13 TG TX8 génère le pTG 2172. Les bactéries E.coli TGE 901 sont transformées avec les pTG 2171 et 2172. Après induction à 42au, les produits d'expression sont analysés sur gel d'acrylamide SDS. L'analyse par "Western-blot" des protéines induites au moyen d'anticorps dirigés contre les antigènes "excrétéssécrétés" révèle l'existence de protéines spécifiques. Après migration sur gel SDS 15% les protéines sont transférées sur nitrocellulose dans un tampon Tris 25mM Glycérine 192mM, 20 % Méthanol. Le transfert des protéines se fait sous 500mM - 6V pendant 1 heure. On fait ensuite réagir avec les protéines fixées sur la nitrocellulose du sérum de lapin anti-antigènes de toxoplasme, dilué au 1/100e dans du tampon Tris l0mM, 150mM NaCl, 1/2000 Triton X-100 (Sigma), additionné de 3 % de lait en poudre, pendant une nuit à 40C. La nitrocellulose est lavée trois fois 10 minutes avec du tampon Tris lOmM NaCl 150mM. On ajoute un anticorps anti Ig de lapin biotinylé (Amersham) dilué au 1/500e dans le tampon de lavage additionné de 2 % de sérum de veau foetal (FCS). Après 1 heure à température ambiante, on lave trois fois puis on ajoute le complexe streptavidine-peroxydase (Amersham) dilué au 1/500e dans le même tampon additionné de 2 % FCS pendant une heure. Après 3 lavages, on révèle par addition d'H202 en présence de colorant (HRP Color). Le résultat est montré dans la figure 2. On voit une réaction spécifique pour le pTG 2172 avec une protéine de 24 Kd, ce qui, compte tenu du cadre ouvert de lecture représenté à la figure 1 (clone TX8) est le double de la taille attendue. Pour le pTG 2171, on observe une forte réaction avec une protéine de 33 Kd, et une réaction plus faible avec une protéine de 24 Kd (clone TXll). Ces résultats montrent donc l'existence de protéines spécifiquement reconnues par les anticorps dirigés contre les antigènes excrétés-sécrétés de toxoplasme. Exemple 3 : Expression de l'antigène de 24 Kd dans le virus de la vaccine. Le cadre de lecture du M13 TG TXll fragment EcoRl en phase avec kgtll) a été repris pour être introduit dans le virus de la vaccine, fusionné en amont avec le signal et les 8 premiers acides aminés de 1'IL2 (une construction semblable a été décrite dans la demande de brevet français nO 86.11986). Pour ce faire, le fragment EcoR1 est cloné dans le pTG 188-1 en aval du signal de 1'IL2 en phase avec le codon d'initiation du peptide signal. Le plasmide résultant est le pTG 217Q ATG EcoRl Stop EcoRl 8 / // ////08 a.a Signal IL2 r Cadre de lecture de due de M13 TG TXll I Protéine de fusion IL2 - TOXOPLASME Dans le pTG 2170, le gène codant pour la protéine fusionnée IL2 - Toxoplasme est flanqué des séquences du gène TK du virus de la vaccine, sous la dominance du promoteur 7,5 K du même virus.Ces séquences insérées dans le gène TK de la vaccine peuvent être transférées dans le génome du virus de la vaccine par une double recombinaison comme cela a été décrit précédemment (Kieny et al., 1984). Le virus de la vaccine recombinant résultant est le VV.TG.TX2170. Des cellules BHK 21 sont infectées avec le virus VV.TG.TX2170 (0,1 ufp/cellule) pendant 16 heures. Après ajout de méthionine 35S pendant 6 heures, les protéines marquées sont immunoprécipitées à l'aide d'un anticorps de lapin anti "antigènes excrétés-sécrétés" de toxoplasme. La figure 3 indique que l'on met en évidence spécifiquement 2 protéines, respectivement de 24 Kd et 33 Kd. La protéine de 33 Kd est exportée dans le surnageant des cultures alors que la protéine de 24 Kd est associée aux cellules Une cinétique de marquage ("pulse-chase" avec méthionine froide) semble indiquer que la forme à 33 Kd dérive de la forme à 24 Kd.Cette maturation n'est pas due à une glycosylation comme le montre, d'une part un marquage en présence de tunicamycine, d'autre part un marquage au mannose 3H. Il est raisonnable de penser que ces formes (24 et 33 Kd) sont les mêmes que celles qui sont visualisées sur "Western-Blot" (voir précédemment) avec les protéines induites par pTG 2171 (TXll), ainsi que les 2 formes (24 et 37 Kd) immunoprécipitées dans les produits de traduction des ARN messagers des tachyzoïtes. Les différences observées entre les poids moléculaires apparents et celui théorique correspondant à la séquence de la figure 1 peuvent s'expliquer par des modifications post traductionnelles. Cependant une protéine de poids moléculaire théorique de 29 Kd peut migrer selon un poids apparent de 33 Kd. La forme observée à 24 Kd serait alors le résultat d'un clivage. Exemple 4 : Induction d'anticorps chez les animaux immunisés par le virus recombinant W.TG.TX2170. Quatre souris femelles Balb C de 6 semaines sont scarifiées à la base de la queue avec 5.107 ufp de virus recombinant VV.TG.TX2170. Les souris sont scarifiées une seconde fois dans les mêmes conditions 1 mois plus tard. Les sérums sont prélevés 15 jours après la deuxième injection et leur réactivité testée vis à vis des protéines induites par le pTG 2171 (clone TXll), par la technique de "Western Blot" précédemment décrite. La dilution des sérums est de 1/100e. La figure 4 montre que les sérums de toutes les souris réagissent spécifiquement avec une protéine de 33 Kd. La réponse est particulièreement forte pour les souris 1 et 3 qui reconnaissent également faiblement une forme à 24 Kd. Cette analyse indique que le recombinant VV.TG.TX2170 peut induire une réponse contre la protéine recombinante exprimée dans E.coli. REFERENCES Kasper Bradley et Pfefferkorn - J. Immunol. 132, 443-449 (1984) Johnson Mc Donald et Ncoh - J. Protozool. 30, 3M-356 (1983) Kasper Crabb et Pfefferkorn - J. Immunol. 5-2407 (1983) Araujo et Remington - Inf. and Imm. 45, 122-126 (1984) Young et Davis - Science 222, 778-782 (1983) Kieny, Lathe, Drillien, Spehner, Skory, Schmitt, Wiktor, Koprowski et Lecocq - Nature 312, 163-166 (1984) REVENDICATIONS 1. Protéine qui comprend les épi topes de la protéine de 24 Kd qui sont reconnus par les anticorps dressés contre les antigènes "excrétés-sécrétés" du toxoplasme. 2. Protéine selon la revendication 1, caractérisée en ce qu'il s'agit d'une protéine hybride comportant une partie de protéine non originaire du toxoplasme. 3. Protéine selon l'une des revendications 1 ou 2, caractérisée en ce qu'elle comporte la séquence complète de la protéine de 24 Kd. 4. Protéine selon la revendication 1, caractérisée en ce qu'elle correspond à la protéine dont la synthèse. est dirigée par le cADN de la figure 1 ou à un fragment de ce cADN, ladite protéine étant reconnue par les anticorps dressés contre les antigènes "excrétés-sécrétés" du toxoplasme. 5. Protéine selon l'une quelconque des revendications 1 à 4, caractérisée en ce qu'elle est préparée à partir de bactéries. 6. Protéine selon l'une quelconque des revendications 1 à 4, caractérisée en ce qu'elle est préparée à partir de levures ou de cultures cellulaires. 7. Cellule incorporant un bloc ou vecteur d'expression de la protéine selon l'une quelconque des revendications 1à 6. 8. Cellule selon la revendication 7, caractérisée en ce qu'il s'agit d'une bactérie transformée par un plasmide compqrtant le gène codant pour une protéine selon l'une quelconque des revendications 1 à 5, sous le contrôle d'un promoteur bactérien. 9. Cellule selon la revendication 7, caractérisée en ce qu'il s'agit 5'une levure transformée par un plasmide comportant le gène codant pour une protéine selon l'une quelconque des revendications 1 à 4 ou 6, sous le contrôle d'un promoteur de levure. 10. Cellule selon l'une quelconque des revendications 8 ou 9, caractérisée en ce que le gène codant est constitué par tout ou partie de la séquence de cADN de la figure 1. li. Poxvirus caractérisé en ce qu'il comporte un gène codant pour une protéine selon l'une quelconque des revendications 1 à 4, placé sous le contrôle des éléments qui permettent l'expression de ce gène par le poxvirus. 12. Poxvirus selon la revendication 11, caractérisé en ce que ledit poxvirus est le virus de la vaccine. 13. Poxvirus selon la revendication 12, caratérisé en ce que les éléments qui permettent l'expression du gène comportent le promoteur viral du gène 7,5 K de la vaccine. 14. Poxvirus selon la revendication 13, caractérisé en ce que les éléments qui permettent l'expression du gène comportent une séquence codant pour la séquence signal de 1'I humaine. 15. Cellule de mammifère infectée par un poxvirus selon l'une quelconque des revendications 11 à 14. 16. Procédé de préparation d'une protéine selon l'une quelconque des'revendications 1 à 6, caractérisé en ce qu'on cultive dans un milieu approprié une cellule selon l'une des revendications 7 à 10 ou 15 et que l'on récupère ensuite ladite protéine. 17. Sequence d'ADN codant pour la protéine de 24 Kd selon l'une quelconque des revendications 1 à 6. 18. Séquence d'ADN selon la figure 1. 19. Composition pharmaceutique destinée notamment à la prévention de la toxoplasmose, caractérisée en ce qu'elle comporte à titre d'agent actif au moins une protéine selon l'une quelconque des revendications 1 à 6 ou un poxvirus selon l'une quelconque des revendications 11 à 14. 20. Composition pharmaceutique selon la revendication 19 caractérisée en ce qu'elle comprend à titre d'agent actif un poxvirus selon l'une quelconque des revendications 11 à 14, vivant. 21. Composition pharmaceutique selon la revendication 19 caractérisée en ce qu'elle comprend à titre d'agent actif un poxvirus selon l'une quelconque des revendications 11 à 14, tué. 22. Composition pharmaceutique selon l'une quelconque des revendications 19 à 21, caractérisée en ce qu'elle se présente sous forme injectable à l'homme ou à l'animal. 23. Anticorps dressés contre une protéine selon l'une quelconque des revendications 1 à 6 ou induit par un poxvirus selon l'une quelconque des revendications 11 à 14. 24. Application des anticorps selon la revendication 23 ou de la protéine selon l'une quelconque des revendications 1 à 6, à titre d'agents de diagnostic de la toxoplasmose.