Brevet FR2623398A1 — publié le 19890526

I COMPOSITIONS MEDICAMENTEUSES A BASE DE FLAVONOIDES ET DE SAPONINES EXTRAITS DE CHRYSANTHELLUM PROCEDE DE PREPARATION ET APPLICATIONS THERAPEUTIQUES La présente invention concerne des compositions médicamenteuses à base de flavonoîdes et de saponines extraits de chrysanthellum ainsi qu'un procédé de préparation de ces extraits et l'application de ces compositions au traitement de la lithiase cystinique, des insuffisances veineuses et des dislipidémies. Le chrysanthellum est une plante sub- tropicale appartenant à la famille des Hélianthées. Cette plante se rencontre en Afrique Centrale et en Amérique du Sud et certaines de ses variétés Americanum, Procumbens, Indicum et AfroAmericanum ont été utilisées sous forme d'extraits aqueux ou hydro-alcoolique, dans des buts médicamenteux. C'est ainsi que le BSM-FR 979 et le FR-A-2 096 902 décrivent des médicaments obtenus à partir d'extraits aqueux ou hydro-alcooliques de Chrysanthellum Americanum Vatke; ces médicaments sont destinés au traitement des troubles intestinaux associés ou non à des troubles hépatiques. I1 faut noter que les extraits de Chrysanthellurm proposés se présentent sous la forme soit de solutés instables, soit d'une masse brunâtre compacte et hygroscopique, de composition incomplètement définie et com- portant à côté de substances pharmacologiquement actives non isolées une forte proportion de ballast inerte. Cette composition ainsi définie est bien évidemment un obstacle à l'emploi de cet extrait comme médicament dans des conditions -de posologie précises et reproductibles. FR-A-2 276 060 décrit, par ailleurs, une méthode de purification plus poussée d'extraits de Chrysanthellum qui permet d'obtenir des extraits pulvérulents de composition mieux définie. Cette méthode exige au moins vingt lavages dans l'acétate d'éthyle et conduit à l'obtention d'un extrait très concentré en composés polyphénoliques, mais peu ou mal défini quant à la nature des composés qui accompagnent ces polyphénols. Les médicaments obtenus à partir de ces extraits sont donc essentiellement constitués de dérivés flavonoïdes, notamment O- déhydroxylés et ils présentent une activité sur la perméabilité capillaire. Au cours de ses recherches, l'Inventeur a réussi à déterminer de façon surprenante qu'il était possible d'associer aux dérivés flavonoïdes extraits du Chrysanthellum des saponines, en quantité définie, également extraites de cette plante pour obtenir des compositions médicamenteuses nouvelles présentant des propriétés pharmacologiques différentes de celles des médicaments à base d'extraits de Chrysanthellum connus jusqu'alors. Les compositions médicamenteuses selon l'invention sont donc caractérisées en ce que leur principe actif est essentiellement constitué de l'association de flavonoîdes et de saponines extraits du Chrysanthellum. Le rapport moyen entre les flavonoîdes et les saponines est de 2/1. Selon un mode de réalisation préféré de l'invention, le principe actif des compositions médicamenteuses renferme, en outre, des dérivés de l'acide caféique et de l'acide chlorogénique. L'invention concerne également un procédé de préparation de l'extrait de Chrysanthellum prévu pour constituer le principe actif des compositions médicamenteuses selon l'invention. Ce procédé va maintenant être décrit. Le matériel végétal utilisé au départ est choisi parmi les variétés suivantes de Chrysanthellum: Chrysanthellum americanumrn et sa variété procumbens et Chrysanthellum indicum, sous-espèce afro-americanum. On soumet l'ensemble de la plante fraîche ou sèche, à un broyage mécanique jusqu'à obtention d'une poudre grossière. On fait ensuite macérer cette poudre pendant 10 à 24 heures à température ambiante dans de l'eau ou dans un solvant polaire tel que l'alcool de titre supérieur à 300, par exemple de l'alcool à 60 ou à 96 . L'extraction du principe actif peut ensuite se faire à froid, par macération ou lixiviation dans un solvant quelconque: eau, alcool éthylique, alcool méthylique, alcool butylique. La durée de l'extraction est, bien entendu, fonction du temps d'humectation du matériel végétal et de son épuisement progressif. C'est ainsi que, par exemple, une extraction de 200 Kg de poudre de plante à température ambiante d'environ 20 C dans de l'alcool éthylique à a donné de bons résultats. L'extraction peut également se faire à chaud dans de l'éthanol ou dans un autre solvant alcoolique, mais le titre du solvant alcoolique est alors supérieur à 50 . L'extraction comporte, de préférence, une étape de macération suivie d'une percolation itérative. L'étape suivante de purification de l'extrait obtenu est tout à fait décisive pour l'obtention du produit selon l'invention. Il convient, en effet, que cette purification n'élimine pas les constituants doués d'activité que l'on désire maintenir dans le produit, et tout spécialement les flavonoides et les saponines. L'Inventeur a pu déterminer que l'on atteignait ce but en limitant la purification à un maximum de deux lavages à l'aide d'un solvant organique non polaire tel que le dichlorométhane. Ces lavages sont effectués, de préférence, dans les conditions suivantes: dans des cuves ou bacs inox ou verre, à un volume d'extrait primaire est ajouté un volume d'un des solvants suivants: dichlorométhane, acetate d'éthyle, isopropanol, tertiobutylméthyléther ou toluène. Les deux phases sont soumises à une forte agitation pendant 1 à 2 heures. Après décantation, l'opération est renouvelée une fois, à température de + 10 à + C. Cette opération de lavage peut également être réalisée en pré- sence de sels de relargage tels que sulfate de sodium ou sulfate d'ammonium. A titre d'exemple la phase organique de l'extrait reçoit 10 pour cent (P/V) de sulfate de sodium sous forte agitation continue. Après 2 heures de contact à + 20 C, l'extrait est centrifugé ou décanté puis séché rapidement. On obtient, en fin d'opération, une poudre adaptée aux transfor- mations galéniques usuelles. Cette poudre renferme des flavonoTdes et des saponines dans le rapport moyen de 2/I. Des examens effectués en résonance magnétique nucléaire, en spectrométrie de masse et en chromatographie liquide haute pression ont permis de déterminer que l'extrait obtenu présente la composition suivante Saponines: chrysantelline A et B dérivés de acide échinocystique et caulophyllogénine, Flavonoides - glucosyl 7 isookanine - glucosyl 7 eriodictyol - glucosyl 7 lutéoline - mareine - maritiméine Apigénine: apigénine Acides caféique, chlorogénique et isochlorogénique. On a procédé, par ailleurs, sur l'extrait ainsi obtenu à une série d'essais toxicologiques permettant de déterminer - la toxicité à six mois chez le rat, - la toxicité de la reproduction/fertilité. On a également effectué des tests de tératologie ainsi que des tests de mutagénicité. Les résultats de ces essais et tests ont permis de déterminer que le traitement chronique de 4 lots de 40 rats pendant 26 semaines est sans effet toxique à la dose-moyenne de 125 DTH, que les tests de tératologie chez le rat et chez le lapin n'ont signalé aucun effet embryotoxique et tératogène aux doses de 250 à 360 DTH et que l'étude de la reproduction chez le rat ne montre aucune action délétère. Les tests pharmacologiques montrent que l'extrait selon l'invention possède des propriétés anti-oedémateuses, telles que celles données dans le test à la carragénine sur la patte du lapin, et des effets protecteurs vis-à-vis des thrombi veineux chez le lapin. Enfin, de nombreux essais cliniques ont permis de déterminer que l'extrait de Chrysanthellum selon l'invention constituait le principe actif de compositions médicamenteuses présentant une activité thérapeutique tout à fait surprenante comparativement aux autres substances médicamenteuses classiques à base d'extraits de Chrysanthellum. C'est ainsi que les substances médicamenteuses renfermant l'ex- trait de Chrysanthellum selon l'invention sont spécialement actives dans le traitement d'une lithiase très difficile à soigner, la lithiase cystinique. Des essais, in vitro d'abord, sur le pouvoir anticristallisant de l'extrait de Chrysanthellum et des essais in vivo ensuite sur plusieurs malades cystiniques permettent de proposer l'extrait dans le traitement de cette maladie. Des malades chroniques, sous traitement pendant dix-huit mois, n'ont eu aucune rechute et leur cristallurie cystinique est restée normale. Des évaluations effectuées en milieu hospitalier auprès de quatre-vingt hommes et cent trente six femmes ont permis d'étudier les propriétés des compositions médicamenteuses selon l'invention dans le trai- tement des artérites et de l'insuffisance veineuse des membres inférieurs. Dans le cas de l'artérite, l'association naturelle des flavonoides et des saponines dans l'extrait selon l'invention intervient, non seulement, sur la microcirculation et la dynamique capillaire, mais aussi sur la rhéologie, l'agrégation plaquettaire et erythrocytaire et la réaction inflammatoire et oedémateuse, alors que l'extrait décrit dans FR-A-2 270 060 ne traitait que les vasculopathies induites par fragilité capillaire. Dans le cas de l'insuffisance veineuse, cette même association intervient, outre sur la dynamique capillaire, sur la continence valvulaire. L'extrait de Chrysanthellum selon l'invention trouve également une application spécialement intéressante dans le traitement des dislipi- démies et spécialement de l'hyperchlolestérolémie et de l'hyperlipidémie. Une population, dûment définie et sous surveillance biologique et diététique, voit son taux moyen de cholestérol abaissé de 17 % et son taux moyen de triglycérides de 56 % après un à deux mois de traitement à raison de 300 mg d'extrait par jour. Les compositions médicamenteuses selon l'invention associées à un support pharmaceutiquement acceptable peuvent être administrées par voie locale ou générale. Par voie générale il faut entendre essentiellement la voie orale (comprimés, dragées, gélules, capsules, poudres, sirops, solutés). - REVENDICATIONS - 1- Compositions médicamenteuses, caractérisées en ce que leur principe actif est essentiellement constitué de l'association de flavonoîdes et de saponines extraits du Chrysanthellum. 2- Compositions selon la revendication 1, caractérisées en ce que le rapport moyen entre les flavonoïdes et les saponines est de 2/1. 3- Compositions selon la revendication 1 et la revendication 2, caractérisées en ce que le principe actif des compositions médicamenteuses renferme, en outre, des dérivés de l'acide caféique et de l'acide chloro- génique. 4- Compositions selon l'une des revendications I à 3, caractérisées en ce que les flavonoides sont au moins au nombre de six et choisis parmi les flavonoides - glucosyl 7 isookanine - glucosyl 7 eriodictyol glucosyl 7 lutéoline - mareine - maritimeine - apigénine - acides caféique, chlorogé- nique et isochlorogénique. - Compositions selon l'une des revendications I à 3, caractérisées en ce que les saponines sont au moins au nombre de deux et choisis parmi les chrysantelline A et B dérivé de acide échinocystique et caulophyllogénine. 6- Compositions selon la revendication 3, caractérisées en ce que les dérivés de l'acide caféique et de l'acide chlorogénique et isochlorogénique sont conservés dans l'extrait. 7- Procédé pour l'obtention de l'extrait constituant le principe actif de la composition médicamenteuse selon l'une quelconque des reven- dications 1 à 6, caractérisé en ce qu'il consiste à soumettre une plante choisie parmi les Chrysanthellum dit americanum et sa variété procumbens et les Chrysanthellum indicum, sous-espèce afro-américanum à un traitement de broyage suivi d'une extraction par un solvant polaire puis à soumettre l'extrait obtenu à un maximum de deux lavages à l'aide d'un solvant non polaire. 8- Procédé selon la revendication 7, caractérisé en ce que l'étape d'extraction se fait par macération ou lixiviation dans un alcool de titre supérieur à 30 , ou dans l'eau, à froid. 9- Procédé selon la revendication 7, caractérisé en ce que l'étape d'extraction se fait par macération suivie d'une percolation itérative dans un alcool de titre supérieur à 50 , à chaud. - Application des compositions médicamenteuses selon l'une quelconque des revendications I à 6 au traitement de la lithiase cystinique. 11- Application des compositions médicamenteuses selon l'une quelconque des revendications 1 à 6 au traitement des artérites et de l'insuffisance veineuse des membres inférieurs.