Brevet FR2631125A1 — publié le 19891110

La présente invention est relative à un procédé de détection directe de chlamydiae, à des anticorps mono clonaux anti-chlauydiae et à leurs applications au diagnos tic des infections chlamydiales. Le genre Chlamydia comprend des organismes bactériens procaryotes, parasites obligatoires des cellules eucaryotes. Les chlamydiae présentent un cycle biologique de réplication intracellulaire et une vie extracellulaire. Sur le plan taxonomique, on reconnaît deux espèces : Chlamydia trachomatis et Chlamydia psittaci. La structure de chlamydiae rappelle celle des bactéries Gram négatives ; en effet, les chlamydiae contiennent des membranes internes et externes identiques à celles des bactéries Gram négatives, mais ne possèdent pas le peptidoglycane ; l'antigène de groupe des chlamydiae est un lipopolysaccharide acide (acide 2-céto-3-désoxyocta noïque). On a démontré récemment la similitude structurale et antigénique entre un fragment lipopolysaccharidique de la membrane externe d'une bactérie Gram négative mutante (Salmonella ninesotta mR 595) et les glycolipides membranaires de Chlamydia trachomatis et psittaci (Nurminen et al., Infect. Immun., 1985, 40,2). De plus, dès 1980 (SCHACHTER J. et H.D.CALDWELL), il a été bien établi que les bactéries du genre-Chlamydi8 possèdent un antigène de groupe lipopolysaccharidique connu comme étant thermostable Les chlaiydiae sont des agents pathogènes de l'homme et des animaux. Chlamydia trachomatis parasite les muqueuses uro-génitale, conjonctivo-oculaire, synoviale et respiratoire de l'homme et constitue le premier agent étiologique des maladies sexuellement transmissibles dans le monde occidental. Cing millions de cas de chlamydioses gtnitales sont recensés chaque année. La pathologie génitale féminine est d'abord cervicale, ensuite endométriale et tubaire et peut occasionner la stérilité par obstruction tubaire. Chlamydia trachomatis est un des principaux agents respon sables de la stérilité chez la femme, et les enfants nés de aères infectées ont un risque de 50 2 de contracter une conjonctivité et/ou une pneumonie à Chlamydia trachomatis. Une autre pathologie produite par Chlamydia trachomatis et plus importante que la précédente est le trachome, responsable des cinq cent millions de cas recensés dans le monde. Chlamydia trachomatis est également un agent responsable d'arthrites, d'endocardites de périhépatites et d'infections génitales masculines. Chlamydia psittaci est une bactérie pathogène pour l'homme et d'autres espèces animales. Chez l'homme, Chlamydia psittaci est responsable des pneumonies aiguës (10 à 20 2 de pneumonies chez l'adulte) et de la pneumopathie interstitielle du nouveau ne. Dans la suite du présent Mémoire descriptif, on entend par prélèvement biologique aussi bien des prélèvements de fluides circulants que notamment, des prélèvements uréthraux, cervicaux, conjonctivaux, bronchiques et périhépatiques. Il a été montré, dans la demande de Brevet européen n 98 557, que les antigènes de Chlamydia trachomatis présentent une réaction croisée avec le polysaccharide de membrane de souches mutantes de bactéries Gram négatives, notamment de Salmonella ainnesota mur 595, dénommé ReLPS. Cette Demande de Brevet européen n 98 557 au nom de ORION Corporation Ltd décrit une préparation contenant du ReLPS, pour le diagnostic des infections à chlamydiae et pour la production d'anticorps polyclonaux spécifiques de l'antigène de groupe de chlamydiae ; du ReLPS traité par une substance alcaline faible est utilisé comme immunogène pour produire des anticorps spécifiques de l'antigène de groupe de chlamydiae ; la même molécule est utilisée pour la détection d'anticorps polyclonaux spécifiques de l'antigène de groupe de chlamydiae. Cette Demande n 98 557 spécifie en particulier qu'il s'agit d'une réaction croisée dans les deux sens, c'est-à-dire, que le ReLPS réagit avec les anticorps antichlamydiae et vice versa les antigènes chlamydiae (antigènes de groupe) réagissent avec les anticorps anti-ReLPS. La Demande de Brevet européen n 183 383, au nom de IQ(Bio) Limitez décrit un procédé de détermination qualitative et quantitative de la présence de Chlamydia trachomatis à l'aide d'une méthode immunoenzymatique classique, ledit procédé comprenant la préparation d'un échantillon, obtenu à partir d'un matériel de départ (prélèvement biologique) par un procédé incluant le chauffage dudit matériel de départ à température comprise entre 70 et 110 C, pendant un temps variant de 5 à 40 inutesf de manière à rendre la détermination plus spécifique. Dans Ann. Biol. Clin., 1985, 43, 603, l'Inventeur a décrit des anticorps monoclonaux spécifiques de Chlamydia trachomatis pour le diagnostic rapide par immunofluorescence indirecte, obtenus à partir de cultures de deux hybridomes (clones 12C6 et 2F12). La Demande de Brevet européen au nom de The United States of America, n 193 431 décrit des anticorps onoclonaux contre les antigènes de groupe de chlamydiae, obtenus à partir d'une culture d'hybridomes producteurs d'anticorps monoclonaux qui reconnaissent spécifiquement l'antigène de groupe de chlamydiae. L' Inventeur a publié dans J. Immunol. nethods, 1986, 94, 153 - t59, un article qui décrit une réaction itmunoenzymatique de détection d'anticorps anti-chlamydiae, qui tire partie de la réaction croisée entre l'antigène ReLPS (produit à partir d'une souche mutante de Salmonella thyphimurium, S. ninnesota mR 595) et l'antigène lipopolysaccharidique de toutes les souches de chlamydiae. Les techniques ELISA et par microimmunofluorescence pour la détection sérologique des chlamydiae sont comparées dans cet article. Elles ontrent 78 Z de corrélation pour les sérums testés. Cette méthode immunoenzymatique est un outil utile pour la détection de tous les sérotypes des infections chlamydiales ; néanmoins, il s'agit d'une détection d'anticorps anti-chlamydiae. Cette méthode ne permet pas le diagnostic direct de la présence de chlamydiae dans un prélèvement biologique (muqueuse, tissu par exemple), qui présenterait, en clinique un intérêt certain. Il apparaît donc que les tests décrits dans l'Art antérieur détectent principalement la présence d'anticorps anti-chlamydiae dans un prélèvement biologique, soit en utilisant la réaction antigène de groupe des chlamydiae-anticorps anti-chlamydiae, soit en utilisant la réaction antigène ReLPS-anticorps anti-chlamydiae ; la révélation de la réaction est réalisée soit par imoeunofluo- rescence -indirecte, soit par une réaction enzymatique. La Demande de Brevet européen 183 383 détecte la présence de Chlamydia dans un prélèvement, mais les conditions de traitement telles que décrites dans cette Demande ne rendent pas cette détection assez sensible et spécifique. Habituellement, la détection des chlamydiae ne peut être réalisée que par la culture cellulaire d'un prélèvement. Or, la mise en évidence de Chlamydia trachomatis nécessite des cultures spécifiques, qui requièrent plusieurs jours, sont difficiles à mettre en oeuvre, coûteuses et réalisées dans des laboratoires spécialisés. La présente invention s'est, en conséquence, donné pour but de pourvoir à une méthode de détection des chlamydiae directement dans un prélèvement biologique. Une telle méthode permet le diagnostic sans ambiguïté d'une infection à chlamydiae en cours d'évolution. C'est également un but de l'invention de pourvoir à des lignées cellulaires hybrides productrices d'anticorps monoclonaux propres à etre utilisés pour le diagnostic direct d'infections chlamydiales. C'est en outre un but de l'invention de pourvoir à un kit ou coffret pour la mise en oeuvre de ladite méthode de détection. La présente invention a pour objet un procédé de détection d'infections à Chlamydia, notamment à Chlamydia trachomatis ou à Chlamydia psittaci, à l'aide d'une technique immunoenzymologique de type compétitif, caractérisé en ce que les chlamydiae éventuellement présentes dans un prélèvement biologique sont détectées au cours d'une première étape, par la mise en contact de l'échantillon biologique, traité de manière appropriée, avec des anticorps monoclonaux anti-chlamydiae appropriés, auxquels se lient les chlamydiae, si de tels antigènes sont présents dans l'échantillon à contrôler, puis en ce que, au cours d'une deuxième étape, le complexe éventuellement obtenu est incubé avec le lipopolysaccharide de membrane d'une souche mutante de bactéries Gram négatives (dénommé ci-après antigène ReLPS) adsorbé sur un support solide approprié, la lecture du résultat étant révélée au cours d'une troisième étape, en mettant en contact un conjugué approprié avec les anticorps monoclonaux complexés au ReLPS obtenus au cours de la deuxième étape. Selon un mode de mise en oeuvre avantageux dudit procédé, le conjugué.est un anticorps anti-immunoglobuline de mammifère convenable, notamment de souris, conjugué à un marqueur approprié. Le marqueur peut être n'importe quel marqueur connu tel que des enzymes, des substances fluorescentes,des substances radioactives. Il peut également être un système d'amplification des signaux spécifiques tel que la biotine N-hydroxysuccinimide. Selon un autre mode de mise en oeuvre dudit procédé, le conjugué est l'anticorps monoclonal anti-chlamydiae couplé à un marqueur approprié. L'antigène ReLPS est adsorbé sur un support solide choisi dans le groupe qui comprend les plaques de microtitration, les billes de latex, les disques de papier de nitrocellulose. L'antigène ReLPS est produit, d'une manière connue en soi, à partir d'une souche mutante de bactérie Gram négative et notamment de Salmonella typhimurinni (Salmonella minnesota mR 595). Selon un autre mode de mise en oeuvre avantageux, le prélèvement biologique est chauffé à une température comprise entre 115-C et 125eC pendant 2 à 4 minutes. La présente invention a également pour objet des lignées cellulaires produisant des anticorps monoclonaux anti-chlamydiae, caractérisées en ce qu'elles sont obtenues par immunisation de mammifères convenables, notamment de souris, par- une souche de Chlamydia trachomatis, suivie d'une fusion entre les cellules de rate prélevées chez lesdits mammifères immunisés et des cellules hybrides de souris SP20 (HGPRT négatives), détermination des clones qui produisent des anticorps anti-chlamydiae, sélection de clones convenables qui reconnaissent à la fois la plupart des souches de chlamydiae et antigène ReLPS et culture desdits clones pour la production des anticorps monoclonaux désirés. Selon un mode de réalisation avantageux de l'invention, les clones sont sélectionnés par leur aptitude à produire des anticorps qui présentent une affinité élevée d'au moins 101 H-l, vis-à-vis du ReLPS. Les lignées cellulaires obtenues conformément à l'invention ont été déposées auprès de la Collection Nationale de Cultures de Micro-organismes tenue par l'INSTITUT PASTEUR. La lignée 4B21 a été déposée sous le n'I-73B, en date du 15 mars 1988. La lignée 7B21 a été déposée sous le ntI-739, en date du 15 mars 1988. La lignée 12C6 a été-déposée sous le n-I-740, en date du 15 mars 1988. La lignée A8 a été déposée sous le n-I-753, en date du 03 mai 1988. La présente invention a également pour objet des anticorps monoclonaux anti-chlamydiae produits par les lignées cellulaires hybrides conformes à l'invention. Selon un mode de réalisation préféré, lesdits anticorps sont utilisés en mélange, à des concentrations appropriées. La production d'anticorps monoclonaux antichlamydiae, par des clones différents de ceux conformes à la présente invention-, est connue notamment par la demande de Brevet européen n 192 033 et la publication Ann. Biol. Clin. 1985, 603 ; cependant, les anticorps monoclonaux produits par les clones conformes-à l'invention présentent des propriétés avantageuses, dans le cadre du procédé de détection conforme à l'invention, notamment en ce qu'ils sont capables de reconnaître à la fois toutes les souches de chlamydiae et le lipopolysaccharide ReLPS d'une souche mutante de bactéries à Gram négatives, notamment de Salmonella thyphimurium. La présente invention a, en outre, pour objet un kit prêt à l'emploi, pour la détection de chlamydiae, dans un échantillon biologique à contrôler, caractérisé en ce qu'il comprend - des doses appropriées d'anticorps monoclonaux dirigés contre les chlamydiae conformes à l'invention, éventuellement conjugués à un marqueur approprié - un échantillon biologique dit témoin positif, contenant des chlamydiae - un échantillon biologique dit témoin négatif, ne contenant pas de chlamydiae ; - des doses appropriées de ReLPS d'une souche mutante de bactéries Gram négatives - des quantités appropriées d'un système de révélation convenable - des quantités utiles de tampons appropriés pour la mise en oeuvre de ladite réaction - un support solide approprié, apte à être associé à l'antigène ReLPS. En variante, le kit est caractérisé en ce qu'il comprend - des doses appropriées d'anticorps monoclonaux dirigés contre les chlamydiae, conformes à l'invention - des doses appropriées de ReLPS d'une souche mutante de bactéries Gram négatives - des doses appropriées d'un anticorps antiimmunoglobuline de mammifère convenable, notamment de souris, conjugué à un marqueur approprié - des quantités appropriées d'un système de révélation convenable - des quantités utiles de tampons appropriés pour la mise en oeuvre de ladite réaction - un échantillon biologique dit témoin positif, contenant des chlamydiae - un échantillon biologique dit témoin négatif, ne contenant pas de chlamydiae - un support solide approprié, apte à être associé à l'antigène ReLPS. Le marqueur peut être n'importe quel marqueur connu tel que des enzymes, des substances fluorescentes, des substances radioactives. Il peut également être un système d'amplification des signaux spécifiques tel que la biotine N-hydroxysuccinimide associée à la streptavidine peroxydase. Dans le cas où le marqueur est une enzyme, les systèmes de révélation appropriés sont notamment et de manière non limitative : le paranitrophényl phosphate (pour la phosphatase alcaline), le dihydrochlorure de 1,2-phény lènediamine (OPD) pour la peroxydase. Les supports solides aptes à être associés à l'antigène ReLPS sont notamment des plaques de microtitration, des billes de latex, des disques de papier de nitrocellulose. Outre les dispositions qui précèdent, l'invention comprend encore d'autres dispositions, qui ressortiront de la Description qui va suivre, qui se réfère à des exemples dé mise en oeuvre de la présente invention. Il doit etre bien entendu, toutefois, que ces exemples sont donnés uniquement à titre d'illustration de l'objet de l'invention, dont ils ne constituent en aucune manière une limitation. Exemple 1 : Préparation de l'antigène ReLPS : Cette préparation est telle que celle décrite dans l'article paru dans J. Immunol. Methods, 1986, 94, 153-159, au nom de l'Inventeur. Les bactéries mutantes sont incubées 18 heures à 37 C sur des plaques d'agar-Salmonella et récoltées par lavage à l'eau distillée. Les bactéries lavées et séchées sont traitées avec un mélange de phénol (90 g de phénol dans 11 ml d'eau), chloroforme et éther de pétrole dans un rapport 2:5:8 respectivement. Après homogénéisation de la- suspen- sion bactérienne, les bactéries sont centrifugées (5 000 rpm pendant 15 mn), les solvants sont évaporés et le lipopolysaccharide (LPS) est précipité avec de l'eau. Le LPS est lavé trois fois avec du phénol à 80 S, de nouveau lavé avec de l'éther et finalement le culot est repris dans de l'eau distillée à 45-C, centrifugé à 100 000 g pendant 4 heures et stocké à température ambiante après lyophilisation. Exemple 2 : Préparation et sélection des anticorps nonoclonaux reconnaissant le ReLPS et les chlamydiae. Les anticorps ont été obtenus par fusion des cellules spléniques de souris BALB/C immunisées par la souche LBl de Chlamydia trachomatis avec des cellules de l'hybridome SP20, non sécréteur. Après clonage, réalisé par dilution limite, les hybridomes sécréteurs ont été sélectionnés. La réactivité des anticorps monoclonaux 4B21, 12C6, A8 et 7B21 a été étudiée, tant vis-à-vis des différentes souches de Chlamydia trachomatis et Chlamydia psittaci, que vis à vis de l'antigène ReLPS. Des plaques de microtitration en polystyrène sont enduites avec du ReLPS (150 ng/100 ul/puits) dilué dans du PBS pH 7,4 contenant 0,025 Z de gluraraldéhyde, scellés à la paraffine, puis incubés pendant une nuit à 3-7'C sous agitation douce ; après trois lavages avec du PBS-Tween 20 à 0,05 S, les plaques sont incubées à 378C pendant une heure avec 200 iil d'éthanolamine 0,1 M. Les anticorps monoclonaux anti-chlamydiae à des concentrations croissantes variant de 125 à 2 000 ng, sont incubés à 37'C pendant 90 minutes. La réaction est révélée par l'introduction d'anticorps anti-IgG de souris conjugués à de la phosphatase alcaline, qui sont dilués convenablement avec du PBS Tween 20 à 4 X, additionnés à chaque puits et incubés à 37"C pendant 90 minutes. Après trois lavages avec du PBS Tween 20 à 0,05 Z et un dernier lavage avec 0,1 M de diéthanolamine, 100 ul de substrat (paranitrophényl phosphate) sont ajoutés, suivi d'une incubation de 30 minutes à 37'C. L'absorbance est mesurée à 405 nm. La figure 1 montre la reconnaissance de l'antigène ReLPS par les anticorps monoclonaux produits par les clones 4B21, 7B21, 12C6 et A8. L'axe des abscisses correspond aux concentrations en anticorps monoclonaux (ng) l'axe des ordonnées correspond aux densités optiques. Les différentes courbes représentent cette reconnaissance en fonction de la concentration en anticorps, (*) pour les anticorps monoclonaux produits par le clone A8, (r) pour les anticorps monoclonaux produits par le clone 12C6, (1) pour les anticorps monoclonaux produits par le clone 7B21, (+) pour les anticorps monoclonaux produits par le clone 4B2 1. Le tableau I ci-après précise les souches de chlamydiae reconnues par les anticorps monoclonaux produits par les clones 4B21, 7B21, A8 et 12C6. TABLEAU I clones 4B21 7B21 A8 12C6 souche A 8A1 +++ ++ + + B TW51 +++ + + + D LB1 ++ ++ + + E E DX20 ++ ++ + + F MRS 301 ++ + + + G IOL 238 j + + + + HNS 4 +++ ++ + + I' - - + + JUW 36 +++ ++ - + + K' + - + + L 1 440 L ++ + + + L 2 434 B4 +++ - ++ + + L 3 404 B4 ++ ++ + + PSITTACI 1/6BC | - - + + Exemple 3 : Détection de chlamydiae dans une suspension cellulaire, par l'anticorps monoclonal 4B21. Le Tableau II montre que l'addition de quantités croissantes de suspension de chlamydiae entraîne une inhibition de la reconnaissance du ReLPS à 1,5 pg/ml par l'anticorps monoclonal 4B21. Exemple 4 : Détection de chlamydiae dans une suspension cellulaire, par l'anticorps monoclonal 7B21. Le Tableau II montre que l'addition de quantités croissantes de suspension de chlamydiae entraîne une inhibition de la reconnaissance de l'antigène ReLPS par l'anticorps monoclonal 7B21. Exemple 5 : Détection de chlaaydiae dans une suspension cellulaire, par l'anticorps monoclonal A8. Le Tableau II montre que l'addition de quantités croissantes de suspension de chlamydiae entraîne une inhibition de la reconnaissance de l'antigène ReLPS par l'anticorps monoclonal A8. TABLEAU II INHIBITION DES ANTICORPS MONOCLONAUX ANTI-CHLAMYDIAE PAR LA SOUCHE LGV2 DE CHLAMYDIA TRACHOHATIS, ELISA ReLPS 1,5 pg/ml Concentrations en Chlamydia trachomatis 104 105 106 107 108 109 Hybridomes 4 B21 920 850 810 702 512 93 7 B21 820 760 694 530 280 125 A8 512 530 418 346 228 63 Exemple 6 : Détection de chlaaydiae, par la méthode conforme à l'invention, dans laquelle l'anticorps monoclonal est marqué à la phosphatase alcaline. Première étape : Incubation de l'échantillon biologique chauffé à 120*C pendant trois minutes juste avant la réaction avec le mélange d'anticorps monoclonaux an-ti-chlamydiae Des quantités appropriées d'un mélange d'anticorps monoclonaux 7B21, 4B21 et A8, conjugués à la phosphatase alcaline, sont incubés pendant 90 minutes avec des échantillons biologiques traités, contenant éventuellement des chlamydiae. Deuxième etape : Les complexes formés lors de la première étape sont incubés à 371C pendant 80 minutes sur des plaques de polystyrène recouvertes de ReLPS. Ces plaques de microtitration ont été préalablement enduites avec du ReLPS (1,5 pg/ml) soniqué et dilué dans du PBS pH 7,4 contenant 0,025 X de glutaraldéhyde ; les plaques sont scellées à la paraffine et incubées à 37iC pendant une nuit sous agitation douce ; après trois lavages avec 0,05 Z de Tween 20-PBS, les plaques sont incubées à 37-C pendant une heure avec 200 ul d'éthanolamine 0,1 M et restent prêtes à 1 emploi. La réaction anticorps anti-chlamydiae-ReLPS est révélée par l'introduction de 100 ul de substrat et du chromogène et la mesure de l'absorption de la lumière est faite à 405 nm, celle-ci étant diminuée lorsqu'il y a des chlamydiae dans le prélèvement par rapport au témoin sans chlamydiae. Le marquage desdits anticorps monoclonaux avec la phosphatase alcaline, n'altère pas les propriétés de reconnaissance de l'anticorps monoclonal vis-à-vis des chlamydiae d'une part et, d'autre part, du ReLPS adsorbé sur du polystyrène. La figure 2 montre l'inhibition de la liaison ReLPS - anticorps monoclonaux anti-chlamydiae conjugués à la phosphatase alcaline en présence de quantités croissantes de Chlamydia trachomati.s.L'axe des ordonnées correspond aux densités optiques, l'histogramme (A) est obtenu en l'absence de chlamydiae : la colonne (g ) correspond à la révélation de la liaison ReLPS anticorps monoclonaux anti-chlamydiae conjugués à la phosphatase alcaline, la colonne () correspond à un témoin sans ReLPS fixé ; l'histogramme (B) est obtenu en présence de chlamydiae et montre l'inhibition de la liaison ReLPS anticorps monoclonaux anti-chlamydiae conjugués à la phosphatase alcaline (colonne ()), la colonne ( ) étant un témoin. La quantité de ReLPS fixé est de 150 ng. Le Tableau III montre l'inhib-ition de la fixation des anticorps monoclonaux 7 B21 et 4 B21 sur le ReLPS par Chlamydia trachomatis. TABLEAU III ANTICORPS MONOCLONAUX CONJUGUES A LA PHOSPHATASE ALCALINE 4B21 ET 7B21 (500 ng/ml) Concentrations en Chlamydia trachomatis 104 105 106 107 108 109 Hybridomes (D.O.) 7 7 B21 i 1250 1003 840 620 318 120 4 B21 Exemple 7 : :Détection de chlaaydiae par la méthode conforme à 11 invention, dans laquelle les anticorps monoclonaux sont conjugués à la biotine N-hydroxysuccini- mide Le protocole est similaire à celui de l'exemple 6 ; toutefois,les anticorps monoclonaux anti-chlamydiae sont couplés à la biotine N-hydroxysuccinimide, complexés à la streptavidine-peroxydase, et la mise en évidence du complexe, est réalisée par incubation avec le substrat et le chromogène approprié qui dans la réalisation présente est du dihydrochlorure de 1,2 phénylènediaiine. Les exemples 6 et 7 sont des exemples de méthode directe ; en effet, on entend par méthode directe. une méthode dans laquelle l'anticorps monoclonal est couplé à un traceur enzymatique ou radioactif ou à un système d'amplification de signaux spécifiques et complexé à un marqueur enzymatique. Exemple 8 : Détection de chlarydiae par la méthode conforme à l'invention, dans laquelle le conjugué est un anticorps anti-Ig de souris couplé à une enzyme. Lors de la première étape, telle que décrite dans I'exemple 6, les anticorps monoclonaux anti-chlamydiae ne sont pas conjugués ; lors de la deuxième étape, la révélation est réalisée par l'introduction d'anticorps anti-IgG de souris conjugués à une enzyme ou à la biotine et dilués dans du PBS - Tween à 4 X, incubés à 37'C pendant 90 minutes. Après trois lavages avec du PBS Tween 20, 0,05 %, le substrat et le chromogène sont ajoutés et après une incubation variable en fonction du système enzymatique utilisé l'absorbance est mesurée à la longueur d'onde correspondant à l'absorption atomique du produit utilisé. Dans la présente réalisation, non lim-itative, les anticorps anti-IgG sont conjugués à de -la phosphatase alcaline, puis après addition de 100 ul de paranitrophényl phosphate, l'incubation est de 30 minutes à 37 C. L'absorbance est mesurée à-405 nm. Cette réaction permet de visualiser la fixation des anticorps monoclonaux anti ReLPS/chlamydiae sur le ReLPS ou l'inhibition de ladite fixation en la présence de chlamydiae. L'exemple 8 est un exemple de méthode indirecte ; en effet, l'anticorps révélateur de la réaction est différent de l'anticorps monoclonal spécifique èt dirigé contre iui. Ainsi que cela ressort de ce qui précède, l'invention ne se limite nullement à ceux de ses modes de mise en oeuvre, et d'application qui viennent d'être décrits de façon plus explicite ; elle en embrasse au contraire to-utes les variantes qui peuvent venir à l'esprit du technicien en la matière, sans s'écarter du cadre, ni de la portée de la présente invention. REVENDICATIONS 1.) Procédé de détection d'infections à Chlamydia, notamment à Chlamydia trachomatis ou à Chlamydia psittaci, à l'aide d'une technique immunoenzymologique de type compétitif, caractérisé en ce que les chlamydiae éventuellement présentes dans un prélèvement biologique sont détectées au cours d'une première etape, par la mise en contact de l'échantillon biologique, traité de manière appropriée, avec des anticorps monoclonaux anti-chlamydiae appropriés. auxquels se lient les chlamydiae, si de tels antigènes sont présents dans l'échantillon à contrôler, puis en ce que, au cours d'une deuxième étape, le complexe éventuellement obtenu est incubé avec le lipopolysaccharide de membrane d'une souche mutante de bactéries Gram négatives (dénommé ci-après antigène ReLPS) adsorbé sur un support solide approprié, la lecture du résultat étant révélée au cours d'une troisième étape, en mettant en contact un conjugué approprié avec les anticorps monoclonaux complexés au ReLPS, obtenus au cours de la deuxième étape. 2-) Procédé selon la revendication 1, ca?acté- risé en ce que le conjugué est un anticorps anti-immunoglobuline de mammifère convenable, notamment de souris, couplé à un marqueur approprié. 3')Procédé selon la revendication 1, caractérisé en ce que le conjugué est un anticorps monoclonal anti-chlamydiae couplé à un marqueur approprié. 4') Procédé selon l'une quelconque des revendications 1 à 3, caractérisé en ce que le prélèvement biologique est chauffé à une température comprise entre 115'C et 125-C pendant 2 à 4 minutes. 5 ) ) Lignées cellulaires produisant des anti- corps monoclonaux anti-chlamydiae, caractérisées en ce qu'elles sont obtenues par immunisation de mammifères convenables, notamment de souris, par une souche de Chlamydia trachomatis appropriée, suivie d'une fusion entre les cellules de rate prélevées chez lesdits mammifères immuni sés et des cellules hybrides de souris SP2O, détermination des clones qui produisent des anticorps anti-chlamydiae, sélection de clones convenables qui reconnaissent à la fois la plupart des- souches de chlamydiae et l'antigène ReLPS et culture desdits clones pour la production des anticorps monoclonaux désirés. 6-) Lignées cellulaires selpn la revendication 5, caractérisées en ce que les clones sont sélectionnés par leur aptitude à produire des anticorps qui présentent une affinité élevée d'au moins 107 M-l, vis-à-vis -du ReLPS. 7-) Lignées cellulaires s-elon la revendication 5 ou la revendication 6, caractérisées en ce qu'elles ont été déposées sous le n-I-738, en date du 15 mars 1988, sous le n-I-739, en date du 15 mars 1988, sous le n-I-740, en date du 15 mars 1988, sous le nÍ-753, en date du 03 mai 1988 auprès de la Collection Nationale de Cultures de Hicro-organismes tenue par L'INSTITUT PASTEUR. 8 ) Anticorps monoclonaux anti-chlamydiae produits par les lignées cellulaires hybrides, selon les revendications 5 à 7. 9 ) Anticorps selon la revendication 8, caractérisés en ce qu'ils sont utilisés en mélange, à des concentrations appropriées. 10.) Kit prêt à l'emploi, pour la détection de chlamydiae, dans un échantillon biologique à contrôler, caractérisé en ce qu'il comprend - des doses appropriées d'anticorps monoclonaux dirigés contre les chlamydiae conformes à l'invention, éventuellement couplés à un marqueur approprié - un échantillon biologique dit témoin positif, contenant des chlamydiae - un échantillon-biologique dit témoin négatif, ne contenant pas de chlamydiae - des doses appropriées de ReLPS d'une souche mutante de bactéries Gram négatives - des quantités appropriées d'un système de révélation convenable - des quantités utiles de tampons appropriés pour la mise en oeuvre de ladite réaction - un support solide approprié, apte à être associé à l'antigène ReLPS. 1 Kit prêt à l'emploi, caractérisé en ce qu'il comprend - des doses appropriées d'anticorps monoclonaux dirigés contre les chlamydiae, conformes à l'invention - des doses appropriées de ReLPS d'une souche mutante de bactéries Gram négatives - des doses appropriées d'un anticorps antiimmunoglobuline de mammifère convenable; notamment de souris, conjugué à un marqueur approprié - des quantités appropriées d'un système de révélation convenable - des quantités utiles de tampons appropriés pour la mise en oeuvre de ladite réaction - un échantillon biologique dit témoin positif, contenant des chlamydiae - un échantillon biologique dit témoin négatif, ne contenant pas de chlamydiae - un support solide approprié, apte à être associé à l'antigène ReLPS.