Brevet FR2631450A1 — publié le 19891117

La présente invention a pour objet une méthode de sérodiagnostic pour la détection de cancers, qui consiste à utiliser un antigène reconnaissable par un anticorps monoclonal humain, en particulier un antigène provenant d'animaux autres que l'homme. A ce jour, il a été publié différents travaux concernant un procédé de préparation d'anticorps monoclo- naux humains qui peuvent réagir avec des cellules can- céreuses, qui consiste à cultiver des hybridomes humain- humain obtenus par fusion de cellules productrices d'anticorps provenant de patients atteints de cancers avec des partenaires cellulaires tels que des cellules de myélome (Proc. Nat. Acad. Sci., U.S.A. 77, 6841 (1980); Brit. J. Cancer, 43, 105 et 696 (1981); Lancet, i 11 (1982); Eur. J. Cancer, 19, 347 (1983); J. Exp. Med., 159, 537 (1984); Cancer Res., 45, 263 et 3951 (1985); J. Immunol., 137 1083 (1986)). Les anticorps monoclonaux humains décrits dans ces travaux ne sont pas spécifiques de cellules cancéreuses et peuvent en conséquence réagir tout aussi bien avec des cellules normales. En outre, comme antigènes reconnus par lesdits anticorps monoclonaux, pratiquement seul l'antigène GM3 ou GD3 de ganglioside, qui peut être reconnu par un anticorps monoclonal humain produit par un hybridome, a été reconnu jusqu'à présent (Proc. Nat. Acad. Sci., U.S.A., 84, 2416 (1987)). Ainsi, il se révèle qu'une méthode de sérodiagnostic pour la détection de cancers, qui consiste à utiliser un antigène reconnaissable par un anticorps monoclonal humain, n'a pas encore été décrite jusqu'à présent. De manière similaire, il n'a été publiée jusqu'à ce jour aucune méthode de sérodiagnostic pour la détection de cancers, qui consiste à utiliser un antigène reconnais- sable par un anticorps monoclonal humain et qui provient d'animaux autres que l'homme. Les marqueurs tumoraux utilisés classiquement dans une méthode analytique pour la détection du cancer, telle qu'une méthode de sérodiagnostic, proviennent de l'homme. Ces marqueurs tumoraux peuvent comprendre des protéines d'embryon telles que l'alpha-foetoprotéine et - l'antigène carcinoembryonnaire, des substances déterminant les groupes sanguins, des hormones et des iso-enzymes. La méthode analytique utilisant ces marqueurs tumoraux peut permettre avantageusement le traitement de nombreux échantillons d'une. manière simple et s'est révélée d'une grande importance non seulement pour le dépistage des cancers mais également pour le contrôle des effets thérapeutiques et postopératoires. Cependant, la méthode analytique utilisant les marqueurs tumoraux ou antigènes précités, connue classique- ment, peut ne pas permettre une détection suffisante de cancers. En outre, il est très difficile d'obtenir les marqueurs ou antigènes en une grande quantité puisque ceux- ci sont d'origine humaine. De plus, puisque ces antigènes ou marqueurs peuvent malheureusement exister également chez des individus sains, leur utilisation augmenterait le taux de réponses faussement positives dans la méthode analyti- que. D'autre part, il est très difficile de diagnostiquer des cancers à leur stade précoce par des méthodes analyti- ques classiques qui détectent une certaine quantité des marqueurs ou antigènes tumoraux dans le sang car seule une petite quantité de ces marqueurs tumoraux ou antigènes est présente à ce stade. Les matières antigéniques qui peuvent être obtenues à partir d'animaux autres que l'homme et utilisées avantageusement dans une méthode de sérodiagnostic pour les cancers ont été étudiées et la Demanderesse a trouvé que les matières antigéniques d'origine animale qui peuvent être reconnues par un anticorps monoclonal humain produit par un hybridome humain-humain issu de cellules productri- ces d'anticorps provenant de patients atteints de cancers, notamment par un anticorps monoclonal humain produit par HB4C5, peuvent jouer le rôle de l'antigène précité. La présente invention a été menée à son terme sur la base de ces découvertes. En conséquence, un objectif de la présente invention consiste à proposer une méthode de sérodiagnos- tic pour la détection de cancers, qui consiste à utiliser un antigène reconnaissable par un anticorps monoclonal humain, en particulier un antigène provenant d'animaux autres que l'homme. La présente invention est caractérisée en ce qu'une certaine quantité d'anticorps contre des antigènes liés aux cancers, dans le sang, de la manière décrite ci- dessus, est dosée au lieu des antigènes proprement dits, qui ont été dosés dans les méthodes classiques. En conséquence, même dans le cas o seule une quantité extrêmement faible des antigènes est présente dans le sang, il est encore possible de déterminer la quantité d'an- ticorps car cette quantité peut avoir été accrue dans l'organisme humain. Ainsi, la présente invention rend possible un diagnostic précoce de cancers. (1) Préparation de cellules produisant un anticorps monoclonal humain: Des lymphocytes (2x107 cellules) obtenus à partir du ganglion lymphatique ou du sang périphérique de patients présentant un cancer du poumon sont fusionnés à une lignée cellulaire mère convenant pour la préparation d'un hybridome humain-humain, NAT-30 (In Vitro Cell. Develop. Biol., 21, 593 (1985)) ou H0-323 (Cell Biol. Intern. Reports, 10, 77 (1986)) en présence de poly- éthylèneglycol (P.M. = 4000 ou 1500) d'une manière classique pour préparer des hybridomes. A partir des hybridomes résultants, les hybridomes qui peuvent produire des anticorps monoclonaux humains réactifs avec la lignée cellulaire de cancers du poumon PC-8, mais non avec des lignées cellulaires normales, sont sélectionnés. Un exemple de l'hybridome produisant l'an- ticorps monoclonal humain spécifique des cancers précité est HB4C5 (In Vitro Cell. Develop. Biol., 21, 583 (1985)), qui a été déposé le 12 mai 1988 au Fermentation Research Institute, Agency of Industrial Science and Technology (JAPON) et auquel a été attribué le numéro de dépôt FERM BP1879. Ce dépôt a été effectué conformément au Traité de Budapest sur la Reconnaissance Internationale du Dépôt d'un Micro-organisme en vue du Dépôt de Brevets. (2) Recherche des matières antigéniues: La recherche de la présence des matières antigéniques qui peuvent être reconnues par l'anticorps monoclonal humain du groupe des IgM produit par l'hybridome humain-humain HB4C5 est effectuée chez des animaux tels que le porc, les bovins et la souris, révélant le fait que cette matière est présente en grande quantité dans le pancréas de ces animaux. D'après la recherche précitée, la réactivité de matières antigéniques dans différents échantillons avec l'anticorps monoclonal humain conforme à la présente invention est déterminée par le mode opératoire suivant. Mode oDeratoire pour la détermination: Un extrait du pancréas, ainsi que des échantil- lons obtenus dans chaque étape de purification, sont soumis à une séparation par électrophorèse sur gel de polyacryla- mide au dodécylsulfate de sodium (SDS) (SDS-GEPA) sur un gel à gradient continu (4 à 20%) (Laemmli et collabora- teurs, Nature, 227, 680 (1970)). Les protéines séparées sont transférées par électrophorèse sur une membrane de nitrocellulose et les protéines ainsi transférées sur la membrane sont amenées à réagir avec l'anticorps monoclonal humain conforme à la présente invention par la méthode d'immunocoloration suivante: 263 1 4 5 0 Dans le mode opératoire suivant, tous les traitements sont effectués à température ambiante. Avant la réaction immunologique, la membrane de nitrocellulose est bloquée par trempage dans du sérum physiologique tamponné avec un phosphate (STP) contenant 0,05% de Tween 20 (STP/Tween) pendant 1 heure afin d'éviter une adsorption non spécifique. Après le blocage, la membrane est traitée avec l'anticorps monoclonal humain pendant 1 heure, est lavée avec le mélange STP/Tween pendant 30 minutes et est amenée a réagir pendant 1 heure avec un anticorps anti-IgM humaine conjugué avec une peroxydase. Après lavage avec le mélange STP/Tween, la membrane est incubée pendant 15 minutes dans une solution de DAB (acide 3,3'-diaminoben- zidine-tétrachlorhydrique) servant de substrat, de sorte que les matières antigéniques liées à l'anticorps monoclo- nal humain soient colorées en brun. Ces matières antigéniques reconnues par l'anticorps monoclonal humain conforme a la présente invention ont été identifiées comme étant des carboxy- peptidases, de la manière décrite dans les EXEMPLES. Des carboxypeptidases peuvent être obtenues à partir du pancréas de bovin (Methods Enzymol., 19, 460 (1970)) ou bien à partir du suc pancréatique de rat (Anal. Biochem., 171, 294 (1988)). En variante, des carboxy- peptidases peuvent être purifiées par le procédé décrit dans l'Exemple 1 ci-dessous. (3) Méthode de sérodiagnostic: L'antigène reconnu par l'anticorps monoclonal humain conforme à la présente invention est dilué par addition de tampon au carbonate de sodium (pH 9,5) à une concentration finale de 10 gg/ml. Une portion de 100 g1 de l'antigène dilué est introduite dans 48 puits d'une plaque de réaction immunologique à 96 puits et est incubée pendant 1 heure à 37C pour revêtir chaque puits avec l'antigène ajouté. Le tampon au carbonate de sodium est introduit dans 263.1450 les puits restants, sans antigène, et est traité de la manière décrite cidessus, afin que ces puits servent de témoins. La plaque est lavée a deux reprises avec du STP et est incubée, afin d'effectuer un blocage, avec un mélange sérum de veau foetal (SVF)/STP pendant 1 heure à 37'C. Une fois la solution de blocage rejetée, un volume de 50 p1 de chaque échantillon de sérum dilué au 1:200 avec le mélange SVF 10%/STP est immédiatement introduit dans les puits revêtus d'antigène et les puits témoins traités ci-dessus et est incubé pendant 1 heure à 37C. Dans le cas o un anticorps, qui peut réagir avec l'antigène appliqué, est présent dans l'échantillon de sérum, l'anticorps peut se lier à l'antigène et, en conséquence, être immobilisé sur la plaque. La plaque est lavée à trois reprises avec un mélange STP/Tween, puis le dosage de la quantité d'an- ticorps immobilisé est effectué par un procédé usuel. Un volume de 100 pi d'anti-IgG ou IgM humaine conjugué à une peroxydase est introduit dans chaque puits et incubé pendant 30 minutes à 37 C. Apres lavage à trois reprises avec un mélange STP/Tween, un volume de 100 p1 de solution de substrat, largement utilisée, contenant du 2,2'-azino- bis-(3-éthylbenzothiazoline-6-sulfonate) diammonique est introduit dans chaque puits lavé et est incubé pendant 15 minutes à température ambiante. Puis un volume de 100 p1 d'acide oxalique à 1,5% est introduit dans chaque puits afin de terminer la réaction enzymatique. Le développement de la coloration est mesuré par spectrophotométrie à 415 nm. Le degré de développement de coloration est corrélé positivement à la quantité d'anticorps dans l'échantillon de sérum. Une absorbance de chaque échantillon de sérum est obtenue en soustrayant l'absorbance du puits témoin à celle du puits revêtu d'antigène correspondant. La méthode de sérodiagnostic précitée est mise en oeuvre avec des sérums provenant d'individus sains, de patients présentant des troubles bénins et de patients présentant des cancers. La comparaison des absorbances déterminées pour les échantillons précités a montré que les échantillons de sérum de patients atteints de cancers du poumon présen- taient des absorbances notablement supérieures à celles des patients présentant des troubles bénins du poumon, ainsi que celles des individus sains. En outre, les échantillons de sérum des patients présentant un cancer des ovaires, un cancer du larynx, un cancer utérin et un cancer du foie ont mis en évidence également de hauts degrés d'absorbance, indiquant une différence notable d'absorbance entre ces échantillons provenant de patients atteints de cancers et les échantillons provenant des individus sains. La présente invention est décrite à présent plus en détail par référence aux exemples non limitatifs suivants. EXEMPLE 1 Une poudre acétonique de pancréas de porc obtenue suivant un procédé classique (J. Biol. Chem., 223, 457 (1956) ou une poudre de trypsine brute (1:250, Difco) peut être utilisée comme matière de départ pour la purification des matières antigéniques d'origine animale. La poudre a été mise en suspension dans du tampon A (Tris- HCl 10 mM, pH 7,4). La suspension résultante a été centrifugée pendant 20 minutes à 10 000 g à 4'C pour obtenir un surnageant (Surnageant I). Le précipité a été remis en suspension dans du tampon A en effectuant une agitation pendant 10 minutes à 4 C, puis une centrifugation identique à celle décrite ci-dessus, pour obtenir un surnageant (Surnageaht II). Les mêmes modes opératoires ont été répétés pour obtenir un surnageant (Surnageant III). Les surnageants I, II et III ainsi obtenus ont été mélangés les uns aux autres et dilués avec du tampon A à une concentration finale de 10 mg/ml. La solution résultante a été introduite dans une colonne Mono Q (Pharmacia) préalablement équilibrée avec du tampon A en un rapport de 5 mg de protéine par ml de la résine et lavée avec 5 volumes de colonne de tampon A. Après un lavage supplémentaire avec du tampon A contenant du NaCl 150 mM, une élution avec un gradient linéaire de 150 à 350 mM de NaCl a été effectuée et deux matières, pouvant réagir fortement avec l'anticorps monoclonal produit par HB4C5, ont été éluées respectivement à 260 mM et 300 mM de NaCl. Ces matières sont désignées respectivement sous les noms de Antigène I et Antigène II. Sur le SDS-GEPA décrit ci-dessus, les Antigènes I et II ont migré en une seule bande chacun, indiquant que leurs poids moléculaires sont respectivement égaux à environ 42 000 et 40 000. En conséquence, les Antigènes I et II ainsi purifiés ont été considérés comme présentant une grande pureté. Sachant que le poids moléculaire de la trypsine de porc est égal 'à 23 000, il est possible de considérer que ces antigènes sont totalement différents de la trypsine de porc qui est abondante dans le pancréas de porc. Les résultats obtenus dans le SDS-GEPA précité sont présentés ci-dessous: P.M. Distance de migration Rf Bleu de bromophénol 0, 67 K 51,0 mm 1 (marqueur coloré) Marqueurs (BIO-RAD) Lysozyme 14,4 50,5 0, 99 Inhibiteur de 21-,5 48,5 0,95 trypsine Anhydrase carbo- 31,0 43,5 0,85 nique Ovalbumine 45,0 37,5 0,74 Sérum-albumine 66,2 33,0 0,65 bovine Phosphorylase B 92,5 25,5 0,50 Antigène I 42 39,3 0,771 Antigène II 40 40, 0 0,784 EXEMPLE 2 Pour identifier les matières antigéniques purifiées dans l'exemple 1, celles-ci ont été comparées à différentes carboxypeptidases, de la manière suivante: I. Comparaison des activités enzymatiques: Suivant le procédé décrit dans Anal. Biochem. 171, 294 (1988), l'activité d'hydrolyse au moyen d'hi- ppuryl-L-phénylalanine servant de substrat enzymatique, a été déterminée par spectrophotométrie a 254 nm. La carboxy- peptidase A bovine (CPase A) utilisée dans cette expérience est une carboxypeptidase disponible dans le commerce (Sigma, N' C-0261 Type I, provenant de pancréas de bovin). Les résultats sont présentés ci-dessous: Concentration Echantillon (Ag/ml) Activité (DO254) Provenant de porc Antigène I 50 0,05 Antigène II 50 0, 06 CPase A bovine 50 0,05 (temps de réaction: 1 minute, longueur du trajet optique: 1 cm) Les résultats ci-dessus montrent nettement que les Antigènes I et II possèdent pratiquement la même activité de CPase A que la CPase A bovine du commerce. II.. Comparaison des réactivités immunologicues: Des antisérums de lapin contre les Antigènes I et II ont été préparés et utilisés dans 1'immunoessai enzymatique mis en oeuvre dans la méthode de sérodiagnos- tic précitée afin de déterminer leurs réactivités avec la CPase bovine et la carboxypeptidase B porcine disponible dans le commerce (CPase B, Sigma, N C-7011 Type I, provenant du pancréas de porc), ainsi qu'avec les Antigè- nes I et II. Les résultats sont présentés ci-dessous: Echantillon Réactivité (DO415) Sérum anti-Antigène I Sérum anti-Antigène II (dilué au 1:1000) (dilué au 1:1000) Antigène I 0,899 0,772 II 0,836 0,843 CPase A bovine 0,378 0,484 CPase B porcine 0,027 0,015 Comme le montrent les résultats ci-dessus, mettant en évidence que le sérum anti-Antigène I de lapin peut réagir avec l'Antigène II et la CPase bovine ainsi qu'avec son Antigène I immunogène, il est possible de considérer que ces matières sont très similaires les unes des autres. Le sérum anti-Antigène II de lapin a réagi dé la même manière. D'autre part, ces anti-sérums ne réagis- saient pas avec la CPase B porcine, indiquant une haute spécificité de ces anti-sérums contre la CPase A. III. Comparaison de séquence d'aminoacides: La séquence d'amino-acides de +3 à +13 de l'Antigène II a été déterminée comme étant la séquence Ala- Thr-Tyr-His-Thr-Leu-Glu-Glu-Ile-Tyr, qui est identique à celle de la CPase A bovine, sauf que Glu en position +9 est remplacé par Asp dans la CPase A bovine. En outre, des schémas réactionnels pratiquement identiques pour des échantillons ont été obtenus dans les méthodes de sérodiagnostic utilisant les Antigènes I et II et la CPase A bovine comme antigène, ce qui est présenté sur le Tableau 3 dans l'exemple 4 ci-dessous. Sur la base des résultats précités, les Antigènes I et II provenant du porc peuvent être iden- tifiés sous le nom de carboxypeptidase A. EXEMPLE 3 Une certaine quantité d'anticorps de types IgG et IgM qui réagissaient avec l'Antigène II, c'est-a-dire la CPase A porcine constituant l'antigène présent dans des sérums d'individus sains et de patients souffrant de cancer du poumon, a été dosée par la méthode de sérodiagnostic de l'invention de la manière décrite ci-dessus. TABLEATU I Sérum d'indi- Réactivité (D0415) vidus sains IgM IgG A -0,084 -0,073 B -0,065 -0,046 C -0,088 -0,156 D -0,169 -0,010 E -0,061 0,022 F -0,072 -0,030 G -0,001 0,035 H -0,010 -0,030 I -0,128 -0,026 TABLEAU 2 Sérum de patients Reactivité (DO415) présentant un cancer _ du poumon IgM IgG a 0,770 0,184 b 0,122 0,083 c -0,018 0,539 d -0,004 0,225 e -0,037 0, 420 f 0,010 0,033 Comme le montre le tableau 1, les valeurs de DO15 des individus sains sont proches de zéro. En conséquence, si des échantillons ayant une densité optique & 415 nm supérieure a 0,1 étaient considérés comme étant positifs, 2 échantillons d'IgM et 4 échantillons d'IgG provenant des échantillons de sérum de 6 patients atteints de cancer du poumon ont été considérés comme étant positifs, montrant que 5 sérums des patients atteints de cancer du poumon étaient positifs au total. Les exemples suivants ont été mis en oeuvre en ce qui concerne seulement des échantillons d'IgG, qui ont montré des taux positifs supérieurs à ceux des IgM, ce qui ne signifie cependant jamais qu'une IgM n'est pas néces- saire pour la méthode de sérodiagnostic. EXEMPLE 4 Par l'utilisation d'Antigène II, de la CPase A bovine, de la CPase B porcine et de la CPase A de souris dont la purification a été effectuée par un procédé identique à celui de l'exemple 1, la méthode de séro- diagnostic conforme à la présente a été mise en oeuvre pour doser une certaine quantité d'anticorps de type IgG dans les sérums d'individus sains, de patients atteints de cancer du poumon et de patients atteints de cancer des ovaires, ainsi que pour déterminer la réactivité de ces matières avec l'anticorps monoclonal humain (MoAb) produit par HB4C5-. Ces résultats obtenus sont résumés sur le tableau 3. Le tableau 3 montre nettement que la méthode de sérodiagnostic conforme à la présente invention, qui utilise l'antigène reconnu par l'anticorps monoclonal humain, notamment des carboxypeptidases telles que la CPase A et la CPase B, peut offrir généralement un moyen satisfaisant pour la détection de cancers. TABLEAU 3 Réactivité (DO415) Sérum CPase A CPase B CPase A CPase de porcine porcine bovine souris SVF 10%/STP 0,041 0,017 0,055 0,017 Mg/ml de MoAb 1,196 0,854 1,428 0,876 Individus sains 1. 0,116 0,017 0, 113 0,007 2. 0,051 0,000 0,120 0,003 3. 0,091 0,005 0,125 0,008 Patients atteints de cancer du poumon 1. 0,393 0,111 0,428 0,211 2. 0,866 0,356 0,802 0,565 Patients atteints de cancer des ovaires 1. 0,829 0,029 0,663 0,729 2. 0,493 0,220 0,564 0,402 3. 0,404 0,199 0,553 0,303 EXEMPLE 5 La méthode de sérodiagnostic conforme à la présente invention a été mise en oeuvre en utilisant des échantillons de sérum provenant de patients ayant dif- férents types de cancers, comprenant le cancer du poumon, de patients présentant des troubles bénins et d'individus sains et.en utilisant comme antigène la CPase A bovine. Les résultats sont présentés sur la figure 1. Les échantillons de sérum des individus sains et des patients présentant des troubles bénins ont montré généralement de faibles réactivités, tandis que de nombreux échantillons de sérum des patients présentant des cancers tels que le cancer du poumon, le cancer des ovaires, le cancer du larynx, le cancer utérin et le cancer du foie, ont présenté de fortes réactivités dans la méthode de sérodiagnostic. En consé- quence, il est considéré que ces résultats peuvent prouver une grande utilité de la méthode de sérodiagnostic de la présente invention pour la détection de cancers. Le taux de positivité de chaque groupe d'échantillons a été calculé sur la base des résultats de la figure 1, une valeur moyenne de DO415 des individus sains étant ajoutée à la valeur 2 x E.T. (écart-type), à savoir 0,28, et la valeur résultante étant utilisée comme critère pour évaluer la positivité ou non des échantillons. Les résultats sont présentés sur le tableau 4 ci-dessous. 2631-450 TABLEAU 4 Numéro d'échan- Numéro d'échan- Taux de sérum tillon tillon positif posivité (%) 1. Individus 38 1 3 sains 2. Cancer du poumon 26 14 54 3. Cancer des ovaires 14 10 71 4. Cancer du larynx 4 4 100 5. Cancer utérin 5 3 60 6. Cancer du foie 13 7 54 7. Cancer du rectum 13 5 38 8. Cancer de l'estomac 22 7 32 9. Cancer de la 4 2 50 vésicule biliaire 10. Cancer du pancréas 6 0 o Troubles bénins 11. Poumon 14 0 0 12. Ovaires 5 0 0 13. Foie 23 2 9 14. Vésicule biliaire 9 0 0 15. Pancréas 5 0 0 16. Vaisseaux sanguins 4 0 o Comme le montrent les résultats ci-dessus, les échantillons de sérum provenant des patients présentant un cancer du poumon, un cancer des ovaires, un cancer du larynx, un cancer utérin et un cancer du foie mettent en évidence des taux de positivité supérieurs a 50%. D'autre part, les échantillons de sérum de patients présentant un cancer du pancréas, ainsi que ceux des individus sains et des patients présentant des troubles bénins, révèlent des taux de positivité notablement inférieurs. En conséquence, la méthode de sérodiagnostic de la présente invention utilisant l'antigène reconnaissable par l'anticorps monoclonal humain produit par des hybrido- mes humain-humain tels que HB4C5 et issus d'animaux autres que l'homme, notamment la carboxypeptidase A, peut être utilisée avantageusement pour la détection de cancers tels que le cancer du poumon, le cancer des ovaires, le cancer du larynx, le cancer utérin et le cancer du foie. Il va de soi que la présente invention n'a été décrite qu'à titre explicatif, mais nullement limitatif, et que de nombreuses modifications peuvent y être apportées sans sortir de son cadre. REVENDICATIONS 1. Méthode de sérodiagnostic pour la détection de cancers, caractérisée en ce qu'elle consiste a utiliser un antigène reconnaissable par un anticorps monoclonal humain et issu d'animaux autres que l'homme. 2. Méthode de sérodiagnostic suivant la revendication 1, caractérisée en ce que l'anticorps monoclonal humain est celui produit par un hybridome humain-humain HB4C5. 3. Méthode de sérodiagnostic suivant la revendication 1 ou 2, caractérisée en ce que l'antigène est une carboxypeptidase. 4. Méthode de sérodiagnostic suivant la revendication 3, caractérisée en ce que la carboxypeptidase est la carboxypeptidase A. 5. Méthode de sérodiagnostic suivant la revendication 3, caractérisée en ce que la carboxypeptidase est la carboxypeptidase B. 6. Méthode de sérodiagnostic suivant l'une des revendications précédentes, caractérisée en ce que l'animal est le porc, un bovin ou la souris. 7. Méthode de sérodiagnostic suivant l'une des revendications précédentes, caractérisée en ce qu'une certaine quantité d'un anticorps dans le sang, pouvant réagir avec l'antigène, est dosée. 8. Méthode de sérodiagnostic suivant l'une des revendications précédentes, caractérisée en ce qu'un immuno-essai enzymatique est utilisé.