Brevet FR2633929A2 — publié le 19900112

FR 2633929 A2 19900112 FR 8809092 A 19880705 Le premier objet de la présente invention est la prépara- tion conformément au brevet n 8713294 de nouveaux esters et/ou de polyesters de l'acide n-butyrique présentant des actions thérapeuti- ques retardées grâce à la combinaison chimique du dit acide n-buty- rique par des liaisons covalentes biodégradables avec des dérivés polyhydroxylés non toxiques, ainsi que leur pharmacocinétique. Le se- cond objet de la présente invention est la mise en évidence in vivo de l'effet antitumoral du O-n butanoyl-3 di-O-isopropylidène-l,2:5,6(-D glucofurannose noté I (PJ120), du O-n butanoyl-3 O-isopropylidène- 1,2 i-D glucofurannose noté II (JP12) ainsi que de 3 des nouveaux dérivés décrits dans la présente invention. Exemple 3: Préparation et effet retard de 9 nouveaux esters et/ou polyesters de l'acide n-butyrique dérivés de monosaccharides et du glycérol. Le O-butanoyl-6 0-isopropylidène-1,2( -D glucofurannose (noté III) est préparé par isomérisation du O-butanoyl-3 0-isopro- pylidène-l,2O(-D glucofurannose (II) synthétisé dans les conditions de l'exemple 4. On dissout 30 g de II dans 1 litre de méthanol contenant 10 â de triéthylamine; le mélange est agité à température ambiante pendant 2 heures. Apres évaporation sous pression réduite, le sirop obtenu fractionné par HPLC préparative sur colonne WATERS Prep. pack P/N 500-41, 75 meshs (éluant hexane-acétone, 80/20 v/v) donne: -9 clrfre 22 g de produit III, F= 85-86 C, 2= 29 (chloroforme) 5 g de mixte (II + III) - 2 g de produit de départ (II), F = 50-52 C, C-WZ = 17,30 (chloroforme) On remarquera que le produit II issu du fractionnement par HPLC cristallise alors que sa préparation selon l'exemple 2 conduisait à un état sirupeux. La structure du dérivé III est confirmée par RMN. -2- Le tri-O-n butanoyl-3,5,6 0-isopropylidène 1,2 ( -D gluco- furannose (noté IV) est préparé à partir du O-isopropylidène-l,2od-D glucofurannose selon la méthodologie de l'exemple 1 du brevet n 8713294. F = 35-36 C, ée] -2= 10,7 (chloroforme). La structure du dérivé IV est confirmée par RMN. Le O-n-butanoyl-6 di-O-isopropylidène-1,2:3,4 a -D galacto- pyrannose (noté V) est préparé à partir du di-O-isopropylidène-1,2:3,4 dD galactopyrannose selon la méthodologie de l'exemple 1 du brevet n 8713294. F = 77-78 C, 2] 22= -40 (chloroforme). La structure du dérivé V est confirmée par RMN. Le penta O-n-butanoyl-l1,2,3,4,6 D- galactopyrannose (noté VI) est préparé à partir du D-galactose selon la méthodologie de l'exemple 1 du brevet n 8713294. n= 1,488; ± 22= +370 (chloroforme) La structure du dérivé VI est confirmée par RMN qui indique en outre la prédominance de l'anomère d (> 90 %) Le penta-O-n butanoyl-l,2,3,4,6 D-glucopyrannose (noté VII) est préparé à partir du D-glucose selon la méthodologie de l'exemple 1 du brevet n 8713294. n 1,4516 22= +18,3 (chloroforme) La structure du dérivé VII est confirmée par RMN qui indi- que en outre la prédominance de l'anomère d (>90 %). Le O-n butanoyl-l-isopropylidène-2,3 propane (noté VIII) est préparé à partir du 0-isopropylidène-l,2 propanol-3 selon la mé- thodologie de l'exemple 1 du brevet n 8713294. liquide, n.0= 1,4295 La structure du dérivé VIII est confirmée par RMN. Le O-n butanoyl-l propane diol-2,3 (noté IX) est préparé à partir de VIII par déprotection des hydroxyles en 2 et 3 soit en phase homogène selon la méthodologie de l'exemple 2 du brevet n 8713294 lé- gèrement modifiée (6 heures à température ambiante au lieu de 1 heure à 70 C); soit en phase hétérogène par passage sur une colonne de 25 ml de résine Amberlist 15 Wet maintenue à 30 C avec un débit de 0,1 ml/mn de VIII en solution à 20 % dans un mélange isopropanol-eau 90-10 v/v. La purification s'effectue sur colonne de gel de silice avec com- me éluant l'éther éthylique. Les rendements en produit final sont de 53 % et en phase homogène et de 85 % en phase hétérogène. liquide, n20 1,4465 La structure du dérivé IX est confirmée par RMN. Le O-n butanbyl-3 di-O-palmitoyl-l,2 propane (noté X) est préparé à partir de IX selon la méthodologie de l'exemple 1 du brevet n 8713294. F = 54 C La structure du dérivé X est confirmée par RMN. Le di-O-n butanoyl-2,3 0-palmitoyl-1 propane (noté XI) e st préparé selon la séquence suivante: a) estérification par le chlorure de palmitoyle du 0-iso propylidène-l,2 propanol-3, selon la méthodologie de l'exemple 1 du brevet n 8713294, conduisant au O-n palmitoyl-l 0-isopropylidène-2,3 propane; b) déprotection des hydroxyles en 2 et 3 du composé ob- tenu en a) selon les méthodologies décrites pour la préparation de IX, conduisant au O-n palmitoyl-l propane diol-2,3; c) estérification par le chlorure de butanoyle du compo- sé obtenu en b) selon la méthodologie de l'exemple 1 du brevet n 8713294, conduisant à XI. Liquide, n20= 1,4475. Liquide, n- 1,4475. Soetre RMN- H des butyrates derives de monosaccharides I à VII (BRUCKER WP.300-référence interne THS). (:: ::: ::= : I: II: III IV: V: VI: II) H-1: 3,57 d: 5,95 d: 5,93 d: 5,88 d:-5,54 d:6,41 d 6,32 da (:: : ( H-2 4,47 d: 4,57 d: 4,52 d: 4,41l d: 4,33 dd:5,38 d: 5,06 dd H-3: 5,32 dd: 5,32 d: 4,33 d: 5,29 d: 4,62 dd:5,53 d: 5,46 dd C:::: .: ( -4: 4,21 dd 4,20 dd: 4,16 ad: 4,42 dd: 4,24 dd:5,38 d: 5,12 dd H-5: 4, 19 q: 3,80 m 4,03 m: 5,20 m: 4,04 m:4,39 t: 4,07 m H-6,8 4,40 d:,08 md: 4, 17 dd (: :, a: : , 3 a::{ H-' 4,00 m 3,75 m 4,36: 4,10 d: 4,16 dd: 4,04 d: 4,07 dd (0::.37 :: 4,0::: (a):: :: :: CH2 L: 2,32 t: 2,40 t: 2,37 t: 2,20 *: 2,33 t: 2,12 - 2,57 m: 2,.7 - 2,41 m (CH, 1.67 1.67 m:,: 1,60o: 1,60 m1,66 n1,4Z - 1,96 m: 1,63 a (CH3: 0,95 t: 0,97 t: 0,88 t: 0,91 m: 0,96 n:0,95 m: 0,94 m C.... ---- ........: ----: -:... -----:... (b):: ::: :: 1:,52 s: 1.50: 1,45 s: 1,49 s: 1,50 s: C:: :: 3 (CH3!.40 s: 1,32: 1,29 s 1,2 s: 1,45 s: 1,32 s(2xCH3: 1,34 S: (: :,3 :: :::) ::: :: : 1,33 s: (:: : a) reste butyrsque-O-C0-CHzCHZCH3 b) reste isoprooylidene auapTTAdoJdosT azsai (q 5T H3 -ZHD-zHj-03-O: anbTiXznq a4sai (e (::) (::) :: Lú ' I) (::: s LE'T : ú) ( q:: (q)) () (: z:: : ()) (::: :) w 96'0 - O0: 6' -:'1 5'I640 Hi (:: : : ) ( W 91: w 65'1 xaq 1'T.: m 59'T: ()ZH) 01 (:::) ( w Tl'Z w Z'Z: 1 ZZ'Z: Z'Z: ()ZH) (::: :) () (::: :) i-( *I -H PP t' PP 17 *I-H PP L': PP: ,-H) (::: :) ( T-H 'J3 T-H J3 PP 9'ú PP 7P L': ú-H) (: : :) ( w 8g': w TZ'ç: w T ': Z Z-H) (: : ::) ( PP 51: PP 60':: PP L't : *I-H ) ç (::: :) (PP TIú': PP Z':(TH+TH) P ZO': PP OT'7: T-H) (: : : :) ) (::: :) ( IX X: XI: IIIA:) (::::) (SHWI ua auaauT aouaJa4aJ-oO'dM 83>DA8) IX e IIIA TOJa3AT6 np sa^TJap sazeJ qnq sap H -NWH aj3oadS Z 7 Z oron 5 Spectre RMN- 13C des butyrates derives de monosaccharides I a VII (BRUCKER WP.300-reférence interne THS). t1:I:I:IV: VI: VIl (: :: : (::à: C-1: 105,41: 104,72: 104,93: 105,20: .96,52: 89,83 "): 8,76 te 3 C-2 83,48 82,97 85,16 83,59 70,94 67,74 69,11 C-3: 75,S5: 76,05 75,33: 74,73 70,70 67,74: 69,96 (: ::..: I C-4: 79,98: 78,85: 79,30: 77,03: 66,23 66,86: 67,49 C-5 72,49 66,22: 68,77: 67,63: 71,33 69,27: 69,42 C-6 67,35 63.86 65,98 63,17 63,37 61,39 61,24) (---------- -- -- - -- ----- -- -- -- - - - - - - - -- -- --------:--- ---_ ---------:--______:________ ----------------y (C:::::::) 1 0 (C::: :: :: ( / xCH (.0 3: 25.27 26,01 26,19: 26,31 24,61: (:: : :: :: : 26,24 26,40: 26.,78: 26,81 25,07: (:: : ::À ] (CH3) 26,78 Z6,10(2xCH3X (: :69: :) : 26,9:: :: :: (a):::. C=O 172,00 173,32 174,34t172,18 - 173,15: 173,75 171,51 - 172,71 171,29 - 173,133 ( C t 36,13 35,31 36,03: 35,84 - 36,08 36,19 35,92 35,58 - 3b,se (: :61: :58:::) Cp:i 18,44 18,18: 18,36: 18,14 - 18,42 18,53 18,31 - 18,97 18,19 (:: : -:::I 3 C: 13,61 13,45: 13,65: 13,67 1366 13,61 13,49 t:: : :: :: (a) reste butyrique 0-C0-CH2 CH2 -CH ( multiOlicité des signaux, les déoplacements chimiaues des différentes chalnes butyriques n'étant pas strie- * tement identiques 7 - 2633929 Spectre RMN-13C des butyrates dérivés du q'lycérol VIII à XI (BRUCKER WP. 300-référence interne TMS) (: :::) (: VIII: IX: X: XI) (: :::) (: :::) (: - :::) ( C-1: 66,38: 63,27: 62,13: 61,99) (: :::) ( C-2: 64,50: 70,03: 66,95: 68,79) (: :::) ( C-3: 73,70: 64,83: 62,13: 61,99) (:' :::) (. .. .....:....:....:.......:.........) (: :::) ( C 109,81: -: (0 /CH3' ( SC 3:: ::) \ ( C: :::) (0/- \CH: 25,41 - - -) 3 CH3: 26,70:) (: :::) ( (a)::: 172,86: 172,59) ( C=0: 173,40: 174,08: 173,06: 172,99) (::: 173,27: 173,20) (: :::) ,80) ( Ci: 35,98 : 35,88: 35,95: 35,95) (: :::) C: 18,40: 18,19: 18,39 18,26) ( C: 13,65 : 13,48: 13,64: 13,49) (--:: --::-) (. .. .....:....:....:.......:.........) ( (b)::::) ( C}: -: -: 34,25: 33,94) (: :::) ( CS,: -: -: 31,99: 31,83) ( -:: ::) (lix (CH): -: -:24,94 29,74: 22,59 29,58) (: :::) ( C1: -: - 22,74: 22,59) (: ( C: - : -: 14,14: 14,01) ( t:: ::) (a) reste butyrique: 0-CO-CH2 CH2 CH3 (b) reste palmitique: 0CO-CH2- CH2- (CH2)1l-CH2 CH3 À I-.l - -8-2633929 Pharmacocinétique chez le Lapin et toxicité aiguë chez la Souris, des dérivés III à XI, comparées à celles des dérivés I et II du brevet n 8713294. c) (:: DL50 en g/kg) ( Dérivé: demi-vie sérique:-------------------------) (: (en heures)::) (: : voie i.p.: voie orale) - - -- --- - -: - - -- -- -- - -- --- -- ---: - --- --- ----: - ------ - -) (:.: :) ( I: 12: 1,75 + 0,39: > 8) (:: :) ( II: 8: 4,2 + 0,4: > 8) (:: :) III: 5: 3,00 + 0,35: > 8) (:: :) ( IV: 8: > 8: > 8) (:: :) ( V: 24:2,5 0,4: >8) (:: :) ( VI: 3: >8: > 8) (:: :) ( VII: 2: > 8: > 8) (:: :) ( VIII: 4,33: 5,4 0,3: > 8) (:: :) ( IX: 2,66: 2,25 + 0,23: > 8) (:: :) ( X: 1,75: > 2 > 6) (:: :) ( XI: 3: > 8: >8) (:: :) Exemple 4: Tests antitumoraux in-vivo chez la souris. L'étude des propriétés antitumorales a été menée chez la Souris, selon le protocole de CHANY et CERUTTI (Int. J. Cancer, 1982, , 489) sur les dérivés I à V. La greffe tumorale est réalisée par la souche TG 180 (injection ip.de 106 cellules pour une souris mâle de 25 g et de 0,1 ml d'une solution de Corynebacterium Parvum Mérieux (CP)). Le lot té- moin n 2 est tralté quoditiennement par du CP (0,1 ml); le lot té- moin n 3 est tralté quotidiennement par de l'interféron (EAT 113-0,5 ml); le lot témoin n 4 est tralté chaque jour alternativement par du CP puis de l'interféron; les lots expérimentaux sont traités, après -9- 2633929 la greffe tumorale (Jo), alternativement à J + 1 par le butyrate co- valent (0,5 ml d'une solution & 8 mmol de produit I à V) à J + 2 par de l'interféron, à J + 3 par CP et ceci pendant trois semaines. Le tableau ci-après rassemble les résultats obtenus cinq semaines après la greffe tumorale. Tableau des tests antitumoraux in vivo chez la Souris i::Tmoin: Temoin: Témoin: Temoin::: : n0l: n: 2: n3: n4: L: II: III: IV: V (: - (C.P) -(lnterferon): (CP -; ::::interferon): (P3 120):JP12:: ( -------------- -------- --------------------- ----------- --------::: :::- ( nombre: 15: 1515 5: 15: 15: 15: 15: 15: 15 d'animaux::::: :::: ( ------------------ --:----- --__ - - - (:: *.::: : : : : ( nomore maxlmum::::: :: ::j d'animaux: 15: 15: 15: 14: 9: 10: 7: 13: 1 2 ( tumoriis:::: ( -o----:'?--e::: :-------: ------- - ____ ------- 1(: ::::3*:: i nombre de *, * (survivants apres: 0 3 3I 9 1 3: 3 (5 semaines:: ::: : --- --- --- --- - -- -- -- --- --- --- -- -- - - -- -- - -- -- ---- à nomore de survivants: 0 1 3 0 0 ----(--------t -------:-----------:-----------1--------:-----'---:-------:--- nombre de::: survivants::: 1: 2: 7 9 8 3 3 (tumeur -):: Le faible nombre de survivants avec les comooses IV ec V peut s'expliquer par les difficultéis à soluDillser ces produits. -10- 2633929 Revendications du certificat d'addition. 1 - Dérivés selon les revendications 1,2,3 et 11 du brevet n 8713294 caractérisés en ce que la fraction hydroxylée est du glucose estérifié par l'acide n-butyrique en 6 ou simultanément en 3,5,6 ou encore simultanément en 1,2,3,4,6; les groupements hydroxylés 1,2 étant substitués par un ou zéro groupement isopropylidène. 2 - Dérivés selon la revendication 1 caractérisés en ce que la frac- tion hydroxylée est du galactose estérifié par l'acide n-butyrique en 6 ou simultanément en 1,2,3,4,6; les groupements hydroxylés 1,2 et 3,4 étant substitués par deux ou zéro groupements isopropylidène. 3 - Dérivés selon la revendication 1 caractérisés en ce que la frac- tion hydroxylée est du glycérol estérifié par l'acide n-butyrique en 1 les groupements hydroxylés 2,3 étant substitués par un ou zéro groupement isopropylidène, ou encore par deux groupements ester de l'acide palmitique, ou encore par deux groupements ester de tout autre acide gras non volatil saturé ou non. 4 - Dérivés selon la revendication 1 caractérisés en ce que la frac- tion hydroxylée est du glycérol estérifié par l'acide n-butyrique en 1 et 2; le groupement hydroxyle 3 étant substitué par un ester de l'acide palmitique, ou encore par deux groupements esters de tout autre acide gras non volatil saturé ou non. - Dérivés selon l'une quelconque des revendications 1 à 4 caractéri- sés en ce qu'ils présentent in vivo une libération retardée de l'acide nbutyrique, une action antitumorale et/ou antivirale, en association ou non avec entr'autres, l'interféron, l'extrait de Corynebacterium Parvum ou l'une des fractions de ce dernier.