Brevet FR2618158A1 — publié le 19890120

Procédé de régénération et de décontamination de levures utilisées dans des installations de fermentation. L'invention concerne les procédés de régénération et de décontamination de levures utilisées dans des instal- lations de fermentation. Un procédé connu de régénération et de décontami- nation des levures consiste à les mettre en contact avec un milieu acide, notamment une solution aqueuse sulfurique. Il se produit une désorption des macromolécules adhérant aux levures et une destruction des germes contaminants. Or, on s'est maintenant aperçu que ce traitement acide tue, certes, les bactéries et autres germes, mais est aussi nocif pour les levures. L'invention pallie cet inconvénient par un procé- dé qui consisteà ne mettre les levures en contact avec le milieu acide, à un pH compris entre 1,2 et 3 et, de préfé- rence, compris entre 1,2 et 1,7, que pendant une durée in- férieure à 30 minutes et, de préférence, inférieure à 5 minutes. On a trouvé qu'à ces conditions de pH et de du- rées de contact avec le milieu acide, les levures se con- servent pour l'essentiel et qu'en tout cas les pertes sont bien moindres. Les microarganismes sont tués et les macro- molécules désorbent dès que les durées de contact dépas- sent 0,5 minutes et, de préférence 1 minute. On diminue d'autant plus la durée de contact que le pH est plus bas. Les milieux acides sont généralement des solu- tions aqueuses concentrées d'acides minéraux, tels que l'acide phosphorique et l'acide sulfurique. La concentra- tion en acide est ajustée en fonction du pH souhaité. Dans le cas d'une fermentation alcoolique, la concentration est de préférence telle que l'apport d'eau est inférieur à la quantité d'eau de dilution du sirop de sucres nécessaire à une fermentation produisant des vins titrant moins de % d'éthanol. L'acide qui convient bien est l'acide sul- furique concentré. Pour se rendre maître de la durée de contact, on ne saurait mélanger simplement les levures et le milieu acide sans autre précaution, puisqu'alors certaines levures se trouvant dans des zones mortes de mélange seraient en contact trop longtemps avec le milieu acide, alors que d'au- tres ne le seraient qu'insuffisamment, même si la durée moyenne de contact satisfait à la condition prévue par l'in- vention. L'invention prévoit d'effectuer la mise en contact en continu dans un réacteur en écoulement piston [plug flow (ou piston flow) reactor] . On rappelle qu'un mélange est en écoulement piston lorsqu'il progresse dans un réacteur par tranches parallèles et indépendantes n'échangeant pas de matière (diffusion axiale négligeable) à la manière d'un piston dans un cylindre. On trouvera une description de réacteurs à écoulement piston aux pages 56 et 57 de l'ou- vrage de Jacques Villermaux intitulé "Génie de la réaction chimique conception et fonctionnement des réacteurs" Edi- tions Lavoisier TEC & DOC. On ne peut pas mettre en oeuvre un réacteur en écoulement piston susceptible de recevoir, à l'échelle in- dustrielle, avec un débit convenable, la suspension diluée de levures, qui sort directement d'un fermenteur, par exemple de production d'éthanol. Le volume à traiter im-- pliquerait un réacteur démesurément long. C'est pourquoi, dans un mode d'exécution perfectionné de l'invention, on procède, en amont du stade de mise en contact avec un mi- lieu acide, à une concentration de la suspension des levu- res. A cet effet, il est avantageux d'utiliser des levures floculantes. Ces levures ont la propriété de dé- floculer en milieu acide, leur pH de défloculation étant supérieur à celui auquel on procède à la mise en contact. Un pH de défloculation inférieur à 3, par exemple, convient bien. L'emploi de levures floculantes permet de bien con- centrer les levures floculantes, de préférence dans un décanteur centrifuge horizontal. Avantageusement, le décanteur cen- trifuge tourne à des vitesses donnant des accélérations de 2000 à 3000 g et notamment 2400 à 2600 g. Il fournit une "boue" de levures ayant une teneur en levures supérieu- re à 150 g/l et, de préférence, supérieure à 200 g/l, par exemple comprise entre 200 et 250 g/l. Lorsque cette boue de levures floculées et concentrées passe ensuite dans le réacteur de mise en contact avec un milieu acide, elles défloculent, sous l'effet même de ce milieu, la combinai- son de l'acidité et de l'emploi de levures floculantes ayant ainsi pour fonction à la fois de régénérer et de dé- contaminer les levures et de rendre l'opération de brève mise en contact faisable industriellement, par la grande concentration préalable que la floculation rend possible et par l'absence de décantation pendant le passage dans le réacteur en écoulement piston. Les levures floculantes sont de préférence du genre Saccharomyces, telles que Saccharomybes cerevisiae, Schizosaccharomyces pombe et Saccharomvces uvarum. L'invention vise également une installation de fermentation comprenant un fermenteur ayant une entrée et une sortie et.un circuit de régénération relié à l'entrée et à la sortie, caractérisée en ce que le circuit comprend successivement, de la sortie vers l'entrée, un dispositif de concentration des levures et un réacteur en écoulement piston. L'invention s'applique particulièrement aux ins- tallations de production d'éthanol par fermentation. La figure unique du dessin annexé est un schéma d'une installation suivant l'invention. La fermentation est mise en oeuvre dans une ou plusieurs cuves en cascade A, A',..... De façon continue, on alimente la cuve A en sirop de sucre concentré par un conduit 1 et en une fraction de l'eau et/ou des vinasses nécessaires à l'obtention d'un jus alcoolisé au titre souhaité par un conduit 2. De l'air peut être injecté en 3. Le gaz carbonique produit au cours de la fermentation est évacuée en 5, 5',.... De façon continue, on extrait par une sortie un jus alcoolisé, appelé "vin" 6. Il contient des levures flo- culantes dont la concentration est la même que celle éta- blie dans la cuve A. Le jus est envoyé dans un décanteur horizontal centrifuge B. L'accélération centrifuge est in- férieure à 3000 g. La fraction clarifiée ou délevurée du vin est extraite en 8 pour être envoyée en colonne à dis- tiller. Le débit de vin dans le conduit 8 est égal à la somme des débits de liquide entrant par les conduit 1, 2 et 4. Le vin clarifié a une teneur en levures inférieure à levures par ml. La fraction des levures concen- trées est extraite en 7. La concentration en levures est supérieure à 25 % (p/p). Le concentré est dilué avec une eau acidifiée 4 de façon que le pH se situe entre 1 et 3. Les levures défloculent. En conséquence de quoi, un trai- tement acide dans un réacteur piston de type lyre C peut être effectué. La vitesse du fluide dans le réacteur peut être lente, sans que les levures ne décantent. Le temps de séjour hydraulique dans le réacteur est généralement compris entre 1 et 5 minutes, mais peut atteindre 60 minutes lorsque le pH est compris entre 2 et 3. Les caractéristi- ques de concentration initiale en levures et de déflocu- lation en milieu acide permettent de contrôler parfaite- ment la durée du traitement. Le flux de levures acidifiées retourne au réacteur A par le conduit d'entrée 9. Dans A, le pH du milieu réactionnel est compris entre 4 et 5 du fait de la dilution du contenu du conduit 9 par les apports des conduits 1 et 2, et surtout du pouvoir tampon des substances contenues dans le sirop arrivant par le conduit 1. Cette augmentation de pH conduit à une refloculation instantanée des levures apportées par 9. Les propriétés de décantation des levures qui ont permis d'obtenir leur exceptionnel taux de concentration dans le décanteur cen- trifuge horizontal sont donc retrouvées. Le traitement acide des levures dans le réacteur piston permet un contrôle exact de la destruction des germes contaminants, du lavage des levures, ainsi que de leur mortalité. Il présente l'avantage de pouvoir être mis en oeuvre de façon continue sans affecter la producti- vité globale de l'installation de fermentation. Il répond donc aux exigences des nouvelles unités de production d'éthanol agricole à forte productivité, devant fonction- ner pendant de longues périodes. L'exemple suivant illustre l'invention. Exemple Fermentation de mélasse Conditions de fermentation * L'essai a été effectué sur une unité pilote de - fermentation continue en une cuve de type CSTR (continuous stirred tank reactor) d'un volume utile de 5000 litres. Le réacteur est équipé de systèmes de régulation: - du pH, par addition d'acide sulfurique concen- tré, - de température, - de niveau et de débit. Les débits d'alimentation en eau et en substrat 6 2 6 18618158 sont régulés en continu. Une rampe d'aération permet l'aération du milieu de fermentation. * Les conditions de fermentation sont les suivantes: - pH: 4,8 0,5 température: 30 C 1 C - aération: 1 vvh (volume d'air par volume de milieu et par heure). Le substrat fermenté est de la mélasse de bette- raves à 54 % de sucres fermentescibles totaux (exprimés en unités-glucose). L'alimentation du réacteur a été régulée à 330 l/h, avec un moût à 137 g de saccharose/l (soit 144g/1 de sucres fermentescibles totaux). Aucune addition de sels (sulfate de magnésie, phosphate d'ammonium,...) n'a été effectuée. Le taux de conversion du sucre, pour un temps de séjour hydraulique de 15 heures, a été de 99 %. Le.titre alcoolique du vin est de 8,5 GL (6,63 g/l), ce qui correspond à un rendement de transformation du sucre en éthanol de 62 litres d'éthanol pour 100 g de saccharose (ce rendement est égal à 92 % du rendement théorique, dit "de Gay-Lussac"). Mise en oeuvre du procédé de régénération/décontamination des levures La souche de levure utilisée est une souche Saccharomyces cerevisiae. Sa concentration dans la cuve a été stabilisée à 20 g de matière sèche/l, c'est-à-dire 5.108 cellules/ml de milieu. Le milieu de fermentation est envoyé dans un décanteur centre fuge horizontal fourni par Guinard de marque D1L à un débit de 700 1/ La vitesse de rotation du bol du décanteur a été fixée à 5000 t/mn, ce qui crée une accélération centrifuge de 2500 g. La vitesse relative de rotation de la vis con- voyeuse par rapport au bol peut être réglée à 10, 20 ou t/mn. Elle a été fixée à 30 t/mn afin d'augmenter la vitesse d'évacuation des boues. La couronne de réglage déterminant le diamètre de débordement du liquide clair a été montée avec un dia- mètre faible (110 mm), afin de clarifier au maximum l'ef- fluent et de maximiser ainsi le taux de recyclage des le- vures. Le vin clarifié issu du séparateur, au débit de 650 l/h, ne contient plus que 4 à 7.106 levures/ml. La "boue" de levures concentrées contient 300 à 320 g/l de matière sèche totale, dont 250 g/l de levure. La viscosité des boues est de l'ordre de 30 Pa.s. (à 20 C). Les levures concentrées sont réintroduites en totalité dans le réacteur de fermentation. Le débit de "boue" des levures est égal à 50 1/h. Le séparateur centrifuge utilisé permet donc d'obtenir un rendement de séparation (le rapport de la mas- se des insolubles des sédiments en sortie à la masse des insolubles en alimentation) voisin de 99 % et d'atteindre un facteur de concentration (rapport de la concentration en insolubles des sédiments en sortie à la concentration des insolubles en alimentation) des levures égal à 12. Le taux de contamination bactérien du milieu de culture s'est élevé à 2. 106 germes/ml en 15 jours (les contaminants ont été dénombrés sur gélose MRS, adapté au dénombrement de la flore de type lactique qui se développe en priorité à pH bas). Le système de mise en contact avec un milieu aci- de consiste en un réacteur piston permettant un temps de séjour hydraulique des levures de 5 mn à pH = 1,8. Le concentré de levures est additionné d'un volu- me égal d'eau acidifiée, soit 50 1 permettant d'obtenir une crème de levures de viscosité voisine de 0,3 Pa.s. au pH désiré. Les quantités d'acide (H2S04, 36 N) nécessaires au traitement sont de 11 g/l de crème diluée au 1/2. On constate au cours du traitement: - une défloculation totale des agrégats de boues, - une réduction significative du nombre de germes. La "boue" de levure acidifiée et diluée est ré- introduite dans la cuve de fermentation après traitement. Après réintroduction de la "boue" de levure dans la cuve de fermentation, le phénomène de floculation se reproduit de façon instantanée. Le traitement proposé permet de conserver un excellent rendement de fermentation alcoolique sur de lon- gues périodes de fermentation, d'annuler presque totale- ment les risques d'infection, malgré un système de fermen- tation non stérile, de réduire le taux de contaminants de façon significative et de ne perdre que très peu de levures. REVENDICATIONS 1. Procédé de régénération et de décontamination de levures en les mettant en contact avec un milieu acide, caractérisé en ce qu'il consiste à ne mettre les levures en contact avec le milieu acide, à un pH compris entre 1,2 et 3, que pendant une durée inférieure à 30 minutes. 2. Procédé suivant la revendication 1, caractéri- sé en ce qu'il consiste à ne mettre les levures en contact avec le milieu acide, à un pH compris entre 1,2 et 1,7, que pendant une durée inférieure à 5 minutes. 3. Procédé suivant la revendication 1 ou 2, carac- térisé en ce qu'il consiste à mettre les levures en contact avec le milieu acide pendant au moins une demi-minute et, de préférence, pendant au moins une minute. 4. Procédé suivant l'une des revendications 1 à 3, caractérisé en ce qu'il consiste à mettre les levures en contact avec le milieu acide dans un réacteur en écoulement piston. 5. Procédé suivant l'une des revendications 1 à 4, caractérisé en ce qu'il consiste à cdncentrer une suspen- sion de levures floculantes à mettre en contact avec le milieu acide en une boue ayant une concentration en levu- res d'au moins 150 g/l et, de préférence, d'au moins 200g/l, avant de la mettre en contact le milieu acide. 6. Procédé suivant la revendication 5, caractéri- sé en ce qu'il consiste à effectuer la concentration dans un décanteur centrifuge horizontal. 7. Procédé suivant la revendication 5 ou 6, carac- térisé en ce que les levures floculantes sont du genre saccharomyces. 8. Installation de fermentation comprenant un fermenteur ayant une entrée et une sortie et un circuit de régénération relié à l'entrée et à la sortie, caracté- risé en ce que le circuit comprend successivement, de la sortie vers l'entrée, un dispositif de concentration des levures et un réacteur en écoulement piston. 9. Installation suivant la revendication 8, carac- térisé en ce que le dispositif de concentration est un dé- canteur centrifuge.