Brevet FR2619824A1 — publié le 19890303

La présente invention concerne la biotechnologie, et plus particulièrement, un procédé d'immobilisation de la ss-galactosidase élaborée par un mycelium de champignon. L'invention trouve son application dans la production de sirop de glucose-galactose, succédané de valeur du sucre dans différentes productions de l'industrie laitière, de la confiserie et de la boulangerie. Dans la production du sirop de glucose-galactose, les ss-galactosidases d'origine mycélienne sont utilisées à titre de biocatalyseur au cours de l'hydrolyse du lactose du lait et du sérum de lait. Cependant, l'utilisation des ss-galactosidases solubles présente toute une série d'inconvénients 1. elle ne permet pas d'obtenir un haut degré d'hydrolyse du lactose (de 50 à 60) ; 2. elle contamine le produit fini par des additions protéiques, notamment la ss-galactosidase elle-mme 3. elle permet des réactions de trans-glycosilation et de trans-galactosilation qui détériorent les qualités organoleptiques des produits finis 4. elle est difficile à mettre en oeuvre par un processus automatique continu d'hydrolyse du lactose. L'utilisation des B-galactosidases immobilisées exclut les inconvénients susmentionnés. On connaît un procédé d'immobilisation de la ss-galactosidase provenant de mycélium d'Aspergillus niger sur un porteur minéral, modifié par adsorption d'orthoou de para-dianisidine qui est ensuite diazotée, par interaction dudit porteur avec l'enzyme (Journal of Solid Phase Biochemistry, v. 1, NO 2, 1976, R.A. Messing, L.F. Bialousz, E.E Lindner, Aromatic amine coupling of Aspergillus niger Lactase to controlled-pore silica with o-dianisidine). On en obtient alors des produits de ss-galactosidase immobilisée possédant une activité de 335 unités d'activité enzyzymatique d'hydrolyse par gramme de porteur (à la température de 500C) et un degré de fixation de 17po. L'unité d'activité enzymatique d'hydrolyse est l'activité d'une quantité d'enzyme hydrolisant 1 micromole de lactose par minute à la température de 300C et à pH = 4,0. Pour calculer l'activité à 500C, il faut multiplier la valeur de l'activité à 300C par un coefficient égal à 2,5. La modification dudit procédé d'immobilisation de la ss galactosidase, consistant en l'utilisation à un de ses stades de l'aldéhyde glutarique, aboutit à l'obtention de produits, présentant une activité de 443 à 620 unités/g de porteur (à500C) et un degré de fixation de 25 à 31%. Ce produit, utilisé dans l'hydrolyse d'une solution à 5% de lactose dans une solution tampon à pH = 3,5 et à la température de 500C, a une période de demi-inactivation égale à 52 jours. Cependant, l'utilisation d'une diamine aromatique, qui est un poison du sang, ne permet pas d'avoir recours à ce procédé pour l'immobilisation des enzymes destinés à l'industrie alimentaire. On connatt un procédé d'immobilisation de la ss-galactosidase produit par un mycelium d'Aspergillus niger sur des porteurs hydrophobes comportant une longue chaîne aliphatique et des radicaux phényles. La fixation de l'enzyme s'effectue sur les radicaux phényles du porteur par fixation covalente au moyen de l'aldéhyde glutarique (Demande de Brevet Français 2.399.435). Ce procédé n'a pas eu de large application à cause de la nécessité d'utiliser pour la fixation de l'enzyme un porteur modifié par les agents spécifiques, ainsi que d'utiliser au cours de l'immobilisation des substances tensio-actives pour l'hydrophilisation de la surface du porteur. On connaît un procédé d'immobilisation de la ss-galactosidase mycélienne d'Aspergillus niger sur l'oxyde d'Aluminium poreux utilisé en tant que porteur durant 16-20 heures. Dans le but d'élever la quantité d'enzyme adsorbé, on traite soit l'enzyme, soit la surface du porteur par un colorant triazinique. On fixe l'enzyme adsorbé par une solution d'aldéhyde glutarique que l'on ajoute dans la solution de l'enzyme avant l'adsorption de ce dernier ou 5 minutes après l'adsorption (USA, 3.873.425). L'activité de la ss-galactosidase obtenue et immobilisée de cette façon est égale à 7,6 unités/g de produit. L'inconvénient de ce procédé réside dans la faible activité du produit immobilisé, la grande dépense d'enzyme due à ce qu'après l'addition de l'aldéhyde glutarique à la solution l'enzyme forme des conglomérats qui ne peuvent pas être utilisés pour leur immobilisation ultérieure, ainsi qu'en l'important délavage de l'enzyme adsorbé lors de son utilisation pour l'hydrolyse du lactose de sérum de lait. Par ailleurs, l'amélioration de l'adsorption exige l'utilisation de colorants, ce qui est indésirable dans l'industrie alimentaire. Le problème posé dans la présente invention consiste à réaliser, par sélection de la matière première et par modification des paramètres du processus, l'immobilisation de ss-galactosidase produite par un mycelium de champignon en obtenant un produit hautement actif et stable au cours de son utilisation, et cela en un cycle technologique plus court et sans utilisation de substances toxiques. Le procédé selon l'invention d'immobilisation de ss-galactosidase produite par un mycélium de champignon par adsorption de ladite ss-galactosidase à partir de sa solution sur un porteur minéral avec fixation ultérieure de la ss-galactosidase adsorbée sur le porteur au moyen d'aldéhyde glutarique effectue l'immobilisation de la ss-galactosidase produite par la souche Penicillium canescens F-178 puis la fixation de la ss-galactosidase adsorbée par une solution contenant de 0,5 à 2,5% d'aldéhyde glutarique. Grâce à la présente invention, il est possible d'obtenir un produit de S-galactosidase immobilisée ayant une activité de 420-450 unités/g de porteur (température 300C, pH = 4,0, lactose à 5,0%), dont la période de demi-inactivation est égale à 136 jours. Le procédé revendiqué permet de simplifier le processus d'immobilisation en éliminant l'adsorption d'un colorant, et de réduire de 6 à 8 fois la durée de l'immobilisation par rapport au procédé exposé dans le brevet d'invention des USA NO 3.873.426, Selon une variante de l'invention, on utilise à titre de porteur minéral un composé granulé de formule Si02.n H20 où n est un nombre entier, ce composé possédant une surface spécifique de 70-100 m2/g, avec une dimension des grains de 3155O0jim et des pores de 40-6Onm. L'utilisation du porteur siliceux choisi contribue à élever l'activité du produit obtenu et à renforcer sa stabilité. Pour réduire de 20% la consommation de ss-galactosidase soluble et rendre possible l'immobilisation de l'enzyme immédiatement après le stade de'sa production en culture, ainsi que pour rehausser la stabilité du produit (période d'inactivation de l'enzyme d'environ 200 jours), suivant une variante de l'invention, on utilise une solution contenant de 20-50 mg/ml de ss-galactosidase produite par un mycélium de champignon. On immobilise ladite ss-galactosidase par adsorption à plusieurs reprises sur le même porteur jusqu'à l'immobilisation de ladite ss-galactosidase sur toute la surface du porteur, et on effectue après chaque adsorption élémentaire la fixation de l'enzyme avec une solution d'aldéhyde glutarique à 1,0-2,5%. Les différents buts et avantages de la présente invention seront bien compris à l'aide de la description détaillée du procédé d'immobilisation de la ss-galactosidase provenant d'un mycelium de champignon et des exemples de réalisation de ce procédé. Dans le procédé revendiqué on propose de réaliser l'immobilisation de la ss-galactosidase produite par la souche Penicillium canescens F-178 dont la technologie de production est simple et accessible. La technologie de production de ladite B-galactosidase comporte les stades de culture de l'enzyme, d'ultra-concentration et de séchage avec un séchoir à pulvérisation, contrairement à la technologie d'obtention d'autres ss-galactosidases où l'on met en oeuvre, outre les stades mentionnés, une épuration sur la carboxyméthyl-cellulose, une séparation par des solvants organiques, une chromatographie d'affinité. La production de la ss-galactosidase de la souche Penicillium canescens F-178 se réalise par des procédés généralement connus, comportant la culture du champion microscopique, l'ultraconcentration du liquide de culture, le séchage du produit actif enzymatique - la ss-galactosidase de la souche Penicillium canescens F-178 avec un séchoir à pulvérisation, la dissolution subséquente du produit obtenu dans une solution tampon contenant 0,2 M d'acétate de pH = 4,0 +0,1 jusqu'à l'obtention d'une concentration suffisante pour l'immobilisation de l'enzyme, cette concentration étant en général supérieure à 130 mg/ml. Le procédé revendiqué peut être réalisé sur n'importe quel porteur minéral granulé connu, par exemple, sur des gels de silice qui ont une surface spécifique de 28 m2/g et une dimension des pores de 75nm, les silices macroporeuses (aérosils) d'une surface spécifique de 26 à 120 m2/g de porteur. Le plus avantageux est d'utiliser comme porteur un corps poreux granulé de formule SiO2.nH20, où n est un nombre entier, qui a une surface spécifique de 70 à 100 m2/g, une dimension des grains de 315 à 500 Zm et une dimension des pores de 40 à 60 nm. On réalise le processus d'immobilisation suivant l'invention revendiquée, par adsorption de la B-galactosidase de la souche Penicillium canescens F-178 sur un porteur minéral granulé à la température ambiante et au cours d'un temps suffisant pour que dans la solution s'établisse une concentration en masse à l'équilibre inférieure à 4-6% de la concentration intiale. On obtient alors l'immobilisation de ladite ss-galactosidase sur toute la surface du porteur. On fixe la ss-galactosidase adsorbée sur porteur au moyen d'une solution à 0,5-2,5% d'aldéhyde glutarique, qui stabilise l'enzyme sur le porteur et permet d'utiliser le produit fini à des températures allant Jusqu'à 40-600C. Pour des concentration d'aldéhyde glutarique inférieures à 0,5% dans la solution de fixation, on peut observer un délavage de l'enzyme du porteur lors de son utilisation pour l'hydrolyse du sérum de lait ; pour des concentrations de l'aldéhyde glutarique supérieures à 2,5fi on note une réduction de l'activité des produits immobilisés de ladite ss-galactosidase due à la grande quantité de liaisons chimiques qui bloquent les zones d'activité de l'enzyme. L'invention revendiquée prévoit d'utiliser la ss-galactosidase de la souche Penicillium canescens F-178 à une concentration de 20-50 mg/ml. Une telle concentration s'obtient après le stade de culture du champignon microscopique au cours de la séparation de ladite 13-galactosidase. L'exclusion des stades d'ultraconcentration du liquide de culture et de séchage du produit enzymatique de ladite B-galactosidase permet de simplifier le processus d'immobilisation dans son ensemble et de réduire de 20% la consommation d'enzyme. Si on utilise la ss-galactosidase de la souche Penicillium canescens F-178 avec une concentration de 20-50 mg/ml pour l'obtention de produits immobilisés hautement actifs, on réalise l'immobilisation par plusieurs traitements du porteur avec des solutions alternées de ss-galactosidase d'une concentration de 20-50 mg/ml et d'aldéhyde glutarique à 1,0-2,5%. Chacune des solutions utilisées successivement, aussi bien de l'enzyme que de l'aldéhyde glutarique, doit correspondre à la concentration initialement indiquée. Le nombre de traitements du porteur par les solutions d'enzyme et d'aldéhyde glutarique est en général compris entre 3 et 8, ce qui assure l'immobilisation de l'enzyme sur toute la surface du porteur. Si on utilise une concentration d'aldéhyde glutarique inférieure à 1% on constate un délavage de l'enzyme de la surface du porteur durant son utilisation pour l'hydrolyse du lactose du sérum de lait ; une concentration d'aldéhyde glutarique supérieure à 2,5% entraîne une réduction de l'activité des produits immobilisés de la ss-galactosidase par suite de la formation d'une grande quantité de liaisons qui bloquent les centres actifs de l'enzyme. En portant ladite ss-galactosidase immobilisée à plusieurs reprises à une température de 50-600C au sein d'une solution tampon d'acétate pendant 60 minutes la conservation de l'activité du produit immobilisé est de 50% supérieure à celle d'un produit obtenu par immobilisation en une seule reprise de la ss-galactosidase contenue dans une solution de forte concentration. Exemple 1. Ajouter à 0,8 g de produit enzymatique de ss-galactosidase de la souche Penicillium canescens F-178 ayant une activité de 630 unité/g de produit, dissous dans 5 ml de solution tampon 0,2M d'acétate et de pH = 4, 0, l/g de porteur siliceux granulé. Réaliser l'immobilisation durant 3 heures avec brassage, à la température de 240C. Ensuite ajouter à la suspension de produit immobilisé 1 ml de solution à 25% d'aldéhyde glutarique. Effectuer le traitement par l'aldéhyde glutarique pendant 1,5 heure. Effectuer le lavage de l'enzyme faiblement adsorbé par une solution 2M de NaCl, une solution tampon 0,2M d'acétate et par de l'eau. L'activité de la ss-galactosidase immobilisée est égale à 280 unités/g de porteur. Exemple 2. A 0,8 g de produit enzymatique de ss-galactosidase de la souche Penicillium canescens F-178 d'une activité de 630 unités/g de produit, dissous dans 5 ml de solution tampon 0,2M d'acétate de pH L 4,0, ajouter 1 g de silice granulée microporeuse (surface spécifique de 25 à 120 m2/g). Effectuer l'immobilisation comme dans l'exemple 1. Réaliser la fixation du produit immobilisé par 5 ml de solution à 2,5% d'aldéhyde glutarique dans une solution tampon O,lM de phosphate de pH = 7,0. L'activité de l'enzyme immobilisé est de 300 unités/g de porteur. Exemple 3. A 1,2 g de produit enzymatique de ss-galactosidase de la souche Penicillium canescens F-178 d'une activité de 3000 unités/g du produit, dissous dans 30 ml de solution tampon 0,2M d'acétate à pH = 4,0, ajouter 6 g de porteur siliceux granulé (SiO2.nH20, surface spécifique 70-100 m2/g). Effectuer l'immobilisation pendant 3 heures. Effectuer la fixation du produit immobilisé par l'aldéhyde glutarique durant 1,5 heure, la concentration de l'aldéhyde glutarique étant dans ce cas égale à 2%. L'activité du produit immobilisé est 450 unités/g du porteur. Exemple 4 A 60 g de produit enzymatique de ss-galactosidase de la souche Penicillium canescens F-178 d'une activité de 630 unités/g du produit dissous dans 350 ml de solution tampon 0,2M d'acétate à pH = 4,0, ajouter 100 g de porteur siliceux granulé (SiO2nH20 surface spécifique 70-100 2/g), dont la dimension des grains est de 315-500 et celle des pores à 40-60nm. Effectuer l'immobilisation pendant 2 heures à la température de 100C. Réaliser la fixation du produit immobilisé par 500 ml de solution d'aldéhyde glutarique à 1% dans une solution tampon 0,1M de phosphate à pH = 7,0 durant 1 heure. L'activité du produit obtenu est de 220 unités/g du porteur. Placer dans une colonne thermostatée de 10 mm de diamètre 1,7 g de produit humide de ss-galactosidase de la souche Penicillium canescens F-178 d'une activité de 220 unités/g du porteur. Amener dans la colonne du sérum de lait déprotéiné et déminéralisé avec une teneur de 5% de lactose à raison de 25 ml/h à la température de 50du. Recueillir l'hydrolysat de lactose à la sortie de la colonne et déterminer le taux de glucose, d'après lequel on calcule le degré d'hydrolyse du lactose. Le degré d'hydrolyse du lactose atteint 95-100%. Dans des conditions de fonctionnement ininterrompu, sans nettoyage ni désinfection, pendant 36 heures le degré d'hydrolyse du lactose ne change pas. La période de demi-inactivation de la ss-galactosidase immobilisée de la souche Penicillium canescens F-178, calculée en partant des données expérimentales, est égale à 136 jours. Exemple 5. Charger une colonne de 10 mm de diamètre de 0,3784 g de porteur siliceux granulé, identique à celui de l'exemple 4. Faire passer dans la colonne en 3 heures 15 ml de solution de ss-galactosidase de la souche Penicillium canescens F-178 d'une activité totale de 1536 unités. Traiter durant 1,5 heure l'enzyme adsorbé par une solution de 1% d'aldéhyde glutarique dans une solution tampon de phosphate. L'activité de l'enzyme immobilisé est égale à 320 unités/g de porteur. Exemple 6. Charger une colonne de 10 mm de diamètre de 0,3626 g de porteur siliceux granulé (identique à celui de l'exemple 4). En 2 heures faire passer par la colonne 15 ml de solution de ss-galactosidase de la souche Penicillium canescens F-178 ayant une activité totale de 1536 unités. Faire passer ensuite dans la colonne une solution à 2% d'aldéhyde glutariqué dans une solution tampon de phosphate. L'activité de l'enzyme immobilisé est de 300 unités/g. Exemple 7. A 5 ml de solution de ss-galactosidase de la souche Penicillium canescens F-178 d'une concentration de 20 mg/ml et d'une activité totale de 90 unités, ajouter 1 g de porteur granulé minéral, identique à celui de l'exemple 4. Réaliser l'immobilisation en 1,5 heure en mélangeant par oscillation. Ajouter ensuite l'aldéhyde glutarique jusqu a une concentration finale de 2,5% et mélanger encore pendant 1 heure. Drainer la solution et laver l'enzyme immobilisé avec 80 ml d'eau, puis verser la portion suivante (5 ml) de solution dudit enzyme avec une concentration de 20 mg/ml. Réaliser l'adsorption et la fixation comme indiqué plus haut. Répéter l'immobilisation (adsorption et fixation) de 1 à 8 fois. L'activité de la ss-galactosidase immobilisée après chaque immobilisation figure dans le tableau 1. Exemple 8. A 5 ml de solution de B-galactosidase de la souche Penicillium canescens F-178 d'une concentration de 30 mg/ml et d'une activité totale de 135 unités ajouter îg de porteur granulé minéral, identique à celui de l'exemple 4. Réaliser l'immobilisation comme décrit dans l'exemple 7. L'activité des produits de la ss-galactosidase immobilisée est représentée dans le tableau 1. Exemple 9. A 5 ml de solution de B-galactosidase de la souche Penicillium canescens F-178 d'une concentration de 40 mg/ml et d'activité totale 180 unités , ajouter 1 g de porteur granulé minéral, identique à celui de l'exemple 7. L'activité du produit de la ss-galactosidase immobilisée figure dans le tableau 1. Exemple 10. A 5 ml de solution de ss-galactosidase de la souche Penicillium canescens F-178 d'une concentration de 50 mg/ml et d'activité totale 225 unités, ajouter 1 g de porteur granulé minéral, identique à celui de l'exemple 4. Réaliser l'immobilisation comme dans l'exemple 7. L'activité des produits de la ss-galactosidase figure dans le tableau 1. Exemple 11. (Référence). A 340 g de porteur minéral granulé sec ajouter 1000 ml de solution de ss-galactosidase de la souche Penicillium canescens F-178 d'une activité totale de 270 unités. Réaliser l'immobilisation durant 3 heures. Ensuite additionner au mélange de réaction 100 ml de solution à 25% d'aldéhyde glutarique. Effectuer la fixation pendant 1 heure. L'activité du produit immobilisé est de 350 unités/g, pour un degré de fixation de l'activité de 44%. TABLEAU N 1 Activité des produits de îaA -galactosidase de souche Penicillium canescens F-178, obtenus par immobilisation multiple (exemples 7,8,9,10) NO Nombre Unités/g de Unités/g Taux de des d'iano- produit de de pro- fixation exem- bilisa- départ duit obte- d'après ples tions nu l'activité 1 2 3 4 5 1 1. 90 - 90 100 2 2. 90 (180) 148 82 3 3. 90 (270) 187 73 4 4. 90 (360) 229 64 5 5. 90 (450) 256 57 6 6. 90 (540) 343 64 7 7. 90 (630) 350 56 8 8. 90 (720) 370 52 9 1. 135 - 132 98 10 2. 135 (270) 213 79 11 3. 135 (405) 257 63 12 4. 135 (540) 322 60 13 5. 135 (675) 360 53 14 1. 180 - 134 73 15 2. 180 (360) 212 59 16 3. 180 (540) 258 48 17 4. 180 (720) 350 49 18 1. 225 - 160 73 19 2. 225 (450) 266 59 20 3. 225 (675) 340 51 Exemple 12. A 5 ml de solution de ss-galactosidase de la souche Penicillium canescens F-178 d'une concentration de 130 mg/ml et d'une activité totale de 600 unités, ajouter 1 g de porteur minéral granulé, identique à celui de l'exemple 4. Réaliser l'adsorption pendant 3 heures. Additionner ensuite au mélange de la réaction 0,5 ml de solution à 25 d'aldéhyde glutarique et effectuer la fixation pendant 1 heure. L'activité du produit immobilisé est de 290 unités/g de produit pour un degré de fixation, d'après l'activité, de 48%. Exemple 13. A 5 ml de solution de ss-galactosidase de la souche Penicillium canescens F-178 d'une concentration de 20 mg/ml et d'une activité totale de 90 unités, ajouter 1 g de porteur minéral granulé, identique à celui de l'exemple 4. Réaliser l'immobilisation pendant 1,5 heure. Ajouter ensuite au mélange 0,5 ml de solution à 2556 d'aldéhyde glutarique. Effectuer la fixation du produit immobilisé sur le porteur comme cela est décrit dans l'exemple 7. L'activité du produit immobilisé est de 350 unités de produit pour un degré de fixation, d'après l'activité, de 56-60%. Exemple 14. Réaliser l'adsorption de la solution de ss-galactosidase de la souche Penicillium canescens F-178 de la même façon que dans l'exemple 13. Ajouter au mélange 0,15 ml d'aldéhyde glutarique à 25%. Effectuer la fixation du produit immobilisé sur le porteur comme dans l'exemple 7. L'activité du produit immobilisé est de 360 unités/g de produit. Après un maintien prolongé dans un mélange de solution à 30% d'isopropanol dans une solution 2M de NaCl, la bétagalactosidase passe en solution et la solution manifeste une activité ss-galactosidasique. Dans les exemples de 7 à 13 on n'observe pas d'activité 13-galactosidasique. Exemple 15. Réaliser l'adsorption de ss-galactosidase sur le porteur minéral granulé, identique à celui de l'exemple 4, de la même façon que dans l'exemple 13. Ajouter ensuite au mélange 1 ml de solution à 25% d'aldéhyde glutarique. Effectuer la fixation du produit immobilisé sur le porteur comme dans l'exemple 7. L'activité du produit immobilisé est de 280 unités/g de produit. Exemple 16. A 5 ml de solution de ss-galactosidase de la souche Penicillium canescens F-178 de concentration 160 mg/ml et d'activité totale 2400 unités, ajouter 1 g de porteur minéral granulé, identique à celui de l'exemple 4. Réaliser l'adsorption pendant 3 heures. Ajouter ensuite au mélange de la réaction 0,5 ml de solution à 25% d'aldéhyde glutarique. Effectuer la fixation au moyen de l'aldéhyde glutarique sur le porteur durant 1 heure. L'activité du produit immobilisé est de 840 unités/g de produit, pour un degré de conservation de l'activité de 35%. Exemple 17 A 5 ml de solution de B-galactosidase de la souche Penicillium canescens F-178 de concentration 20 mg/ml et d'activité totale 300 unités, ajouter 1 g de porteur minéral granulé, identique à celui de l'exemple 4, Réaliser l'immobilisation de la même façon que dans l'exemple 7. Après immobilisation à 6 reprises l'activité du produit atteint 970 unités/g de produit, pour un degré de conservation de l'activité de 54%. Exemple 18. Charger un recipient de 1,2 kg de porteur minéral granulé sec, identique à celui de l'exemple 4 et ajouter par un dispositif à douche 6 litres de solution de 13-galactosidase. La concentration de la solution est 20 mg/ml et l'activité totale 10,8-104 unités. Réaliser l'immobilisation par circulation des réactifs. Effectuer l'adsorption pendant 30 minutes, puis ajouter dans la solution d'enzyme 360 ml de solution ê 25% d'aldéhyde glutarique et conduire la fixation durant 45 minutes. Répéter ces opérations 6 fois. Laver en circuit fermé, comme cela est décrit dans l'exemple 7. L'activité du produit immobilisé est 360 unités/g de produit, pour un degré de conservation de l'activité de 47%. Exemple 19. A 8 g de produit immobilisé de ss-galactosidase de la souche Penicillium canescens F-178, obtenu par immobilisation unique comme dans l'exemple 11, ajouter 80 ml de solution tampon 0,2M d'acétate, pH = 4,0, à la température de 600C. Toutes les 10 minutes pendant une heure prélever des échantillons et établir l'activité selon une méthode standard. D'après les données ainsi 60 obtenues calculer la constante d'inactivation K qui est égale à 26 10~3/min. in Exemple 20. A 8 g de produit immobilisé de ss-galactosidase, obtenu par immobilisation à plusieurs reprises, comme dans l'exemple 7, ajouter 80 ml de solution tampon 0,2M d'acétate, pH = 4,0, à la température de 60'C. Toutes les 10 minutes pendant une heure prélever des échantillons et établir l'activité selon une méthode standard. Constante d'inactivation c-alculée. K600 = 16,61O-3/min. REVENDICATIONS 1. Procédé d'immobilisation de ss-galactosidase produite par un mycelium de champignon par adsorption à partir de sa solution sur un porteur minéral avec fixation ultérieure de la ss-galactosidase adsorbée sur le porteur au moyen d'aldéhyde glutarique, caractérisé en ce que l'on réalise l'immobilisation de la B-galactosidase produite par la souche Penicillium canescens F-178 et en ce que l'on effectue la fixation de la B-galactosidase adsorbée sur le porteur par une solution à 0,5-2,5% d'aldéhyde glutarique. 2. Procédé selon la revendication 1, caractérisé en ce que le porteur minéral est un composé granulé poreux de formule SiO2.nH20, où n est un nombre entier, qui a une surface spécifique de 70 à 100 m2/g, une dimension des grains de 315 à 500 um et une dimension des pores de 40 à 60 mm. 3. Procédé selon l'une des revendications 1 et 2, caractérisé en ce que, lorsque l'on utilise une solution de ladite ss-galactosidase à une concentration de 20 à 50 mg/ml, on effectue l'immobilisation de la B-galactosidase par son adsorption à plusieurs reprises à partir de solutions de la concentration susmentionnée sur le même porteur jusqu'à l'immobilisation de ladite B-galactosidase sur toute la surface du porteur, en effectuant après chaque adsorption élémentaire la fixation de la ss-galactosidase adsorbée par une solution d'aldéhyde glutarique à 1,0-2,5%.