Brevet FR2617486A1 — publié le 19890106

1. La présente invention conczrne des dérivés des acides nucléiquesqui ont une activité physiologique, uti- lisables comme médicaments et qui sont peu toxiques. Les acides nucléiques sont composés de cycles purine ou de cycles pyimidine et de ribose ou de sucres ana- logues à l'état lié aux cycles, dans lesquels ces éléments constitutifs sont liés les uns aux autres par un pont phos- phate pour former une structure en chaîne. Parmi les acides nucléiques, le RNA (polymère de ribonucléotide) est un composé macromoléculaire à structu- re en chaîne ayant le ribose comme sucre dans lequel les parties sucre sont liées les unes aux autres par un pont phosphate par la liaison diester. Dans les acides nucléi- ques à double brin, les parties cycles purine ou cycles pyrimidine des bases constituant l'acide nucléique (par exemple l' inosine, l'adénosine, la cytidine, l'uridine, etc.) sont liées par une liaison hydrogène "complémentaire" 2. pour donner une stéréo-structure en hélice. Comme on s'at- tend à ce que les acides nucléiques ayant une structure à double brin possèdent des fonctions physiologiques utiles, de nombreuses études ont été effectuées jusqu'à présent sur ces acides nucléiques (Biochemical and Biophysical Research Communications, 58, 1974, etc.). Parmi les acides nucléiques de cette espèce, un dérivé synthétique du RNA à double brin, l'acide poly- inosinique.polycytidylique est désigné ci-après sous le nom de dérivé "poly-I.poly-C"; et l'acide polyinosinique qui est la partie constitutive de ce dérivé, est désigné sous le nom de "poly-I" et l'acide polycytidylique sous le nom de "poly-C". Récemment, on a découvert que divers RNA naturels et synthétiques à double chaîne avaient une capacité d'induc- tion de l'interféron (Field et coll. Proc. Nat. Acad. Sci. U.S., 58, 1004, 1967; Field et coll. Proc. Nat. Acad. Sci. US., 58, 2102, 1967; Field et coll., Proc. Nat. Acad. Sci. U.S., 61, 340, 1968; Tytell et coll., Proc. Nat. Acad. Sci. U.S., 58, 1719, 1967; Field et coll. J. Gen. Physiol., 56 905, 1970; De Clercq et coll., Methods in Enzy mology, 78, 291, 1981). Des exemples typiques des dérivés synthétiques connus de l'acide nucléique sont mentionnés ci-dessous. Dérivés synthétiques de l'acide nucléique comme induc- teur de l'interféron (I) Complexes homopolymère.homopolymère (polymères d'acide nucléique à double brin ayant le poly-I.poly-C comme structure appparentée (1) Dérivés modifies par des bases Acide polyinosinique. poly(acide 5-bromocytidylique); Acide polyinosinique.poly(acide 2thiocytidylique); Acide poly(7-déazainosinique). acide polycytidylique; Acide poly(7)déazainosinique).poly(acide 5-bromo- cytidylique). 3. (2) Dérivés modifiés par des sucres: Poly(acide 2' -azidoinosinique). acide polycytidy- lique. (3) Dérivés modifiés par l'acide phosphorique: Acide polyinosinique.poly(acide cytidine-5'- thiophosphorique). (II) Copolymères intermodifiés: Poly (acide adénylique-acide uridylique). (III) Complexes homopolymère.copolymère: Acide polyinosinique.poly(acide cytidylique, acide uridylique); Acide polyinosinique.poly(acide cytidylique, acide 4-thiouridylique). (IV) Complexes acide synthétique /Polycation: Acide polyinosinique.acide polycytidylique. poly-L-lysine (désigné ci-après sous le nom de "poly-ICLC"). (V) Autres: Acide polyinosinique.poly(acide 1-vinylcytidyli- que). Comme il a été indiqué ci-dessus, divers types de RNA à double brin, en particulier des dérivés comprenant le poly-I.poly-C comme corps apparenté, ontété signalés ces dernières années. Il existe une théorie bien établie sur une série de dérivés de l'acide nucléique comprenant ceux- ci en ce qui concerne les relations entre la structure des dérivés et leurs fonctions (De Clercq et coll. Texas Reports on Biology and Medicine, 41, 77, 1982). En particulier, ces auteurs indiquent dans leur rapport que des polymères d'acide nucléique ayant la ca- pacité de produire des interférons doivent être des subs- tances macromoléculaires ayant une valeur de la cons- tante de sédimentation de 4S ou davantage. Comme autre action physiologique du poly-I. poly-C, le dérivé est connu pour avoir une activité 4. d'inhibition de la propagation de cellules cancéreuses transplantées sur l'animal (Levy et coll., Proc. Nat. Acad. Sci., U.S., 62, 357, 1969). On pense que cette activité contribue également à une fonction d'activation de la bioimmunité (Karter et coll. J. Immunol. 104,1035, 1970). Ainsi on s'attendait initialement à ce que le poly-I.poly-C puisse être utilisé cliniquement en raison de son activité antivirale et de son activité cancéro- statique mais on a trouvé de manière inattendue que le dérivé avait une forte toxicité. En conséquence, il se pose un problème pour l'utilisation du dérivé pour l'ad- ministration à l'homme. Cependant, l'utilisation comme mé- dicament du dérivé du poly-I.poly-C est toujours à l'es- sai à l'heure actuelle. Levy et coll. ont mis au point un poly-ICLC ayant une forte activité productrice de l'interféron (Levy et coll. Texas Reports on Biology and Medicine, 41, 653, 1982). Bien qu'on puisse s'attendre à ce que le poly-I.poly-C mentionné ci-dessus et ses dérivés présen- tent un degré suffisant de divers effets utiles, la to- xicité n'a pas pu être contournée dans la plupart des cas (De Clercq et coll. Infect. Immuni., 6, 344, 1972), et par conséquent, il est nécessaire de disposer de moyens pour l'application de ces substances à l'organis- me humain. La demanderesse a étudié de manière continue les fonctions de divers acides nucléiques sur la base de la technique antérieure mentionnée ci-dessus pendant une du- rée prolongée et elle a trouvé que, en réglant la longueur des chalnes des dérivés d'acide nucléique à double brin, la toxicité des dérivés peut être très fortement réduite tandis que leurs activités physiologiques nécessaires peu- vent être conservées telles quelles et elle a ainsi 5. abouti à la présente invention. En conséquence, l'aspect caractéristique de la présente invention réside dans la limitation de la lon- gueur des chatnes des polymères d'acide nucléique à dou- ble brin dans un intervalle défini. En particulier, l'objet de l'invention est de fournir des dérivés d'acide nucléique à double brin ayant le RNA comme corps apparenté, caractérisé en ce que toute la répartition des tailles moléculaires des déri- vés rentre dans l'intervalle correspondant à des valeurs de la constante de sédimentation de 4S à 13S. Plus particulièrement, il est fourni conformé- ment à la présente invention des dérivés d'acide nucléi- que à double brin ayant le RNA comme corps apparenté, qui sont caractérisés en ce que les molécules, pour la répartition maxima dans la distribution complète des tailles moléculaires des dérivés ont des nombres de ba- ses dans l'intervalle de 50 à 10 000. La figure 1 représente un diagramme d'élution de filtration sur gel par HPLC des dérivés d'acide nucléi- que de la présente invention. La demanderesse s'est intéressée précédemment au fait que le poly-I.polyC en tant que produit commercial ou en tant que produit préparé par synthèse par une réaction classique est toxique et elle a effectué aes études répétées de manière à éclaircir la cause de la to- xicité des dérivés. Ainsi, elle a abouti à un effet si- gnificatif et en conséquence elle a déposé des demandes de brevet à l'Office japonais des Brevets (demande de brevet japonais n 61-001076 et une autre demande de brevet japonais avec la priorité de cette demande de bre- vet n 61-001076) qui concerne des dérivés d'acide nucléi- que ayant une structure d'un ordre plus élevé. Par la sui- te, elle a effectué d'autres études sur le sujet et elle a trouvé à présent un autre fait nouveau, et elle a ainsi 6. réalisé la présente invention qui sera décrite en détail ci-après. La demanderesse a examiné des polymères d'acide nucléique en ce qui concerne à la fois l'activité d'inhi- bition des cellules cancéreuses dans des souris portant_les cancers et les propriétés de léser les cellules souche de moelle de souris comme indices,et elle a découvert les faits suivants: lorsque des polymères d'acide nu- cléique ont une répartitiondes tailles moléculaires cor- respondant à plus de 13S comme constante de sédimentation, les polymères sont actifs et sont toxiques; lorsque les polymères d'acide nucléique ont une répartition des tail- les moléculaires correspondant à une constante de sédi- mentation de 4S à 13S, les polymères sont actifs, mais leur toxicité est extrêmement faible, et lorsque les po- lymères d'acide nucléique ont une répartition des tailles moléculaires inférieure à 4S, les polymères ne sont ni toxiques ni actifs. Le fait que les dérivés du poly-I.poly-C ayant une constante de sédimentation inférieure b 4S sont inac- tifs correspond presque au rapport de Declark précité, mais aucune indication n'a été donnée jusqu'à présent, à propos des polymères d'acide nucléique, en ce qui con- cerne les relations entre leur longueur de chaîne et leur toxicité. La demanderesse a été la première à trouver que le réglage de la taille moléculaire (longueur de chaîne) du poly-I.poly-C et de ses dérivés pour qu'elle soit dans un intervalle déterminé est le facteur le plus im- portant pour réduire notablement la toxicité des acides nucléiques polymères. Conformément à la présente invention, la répar- tition des tailles moléculaires des dérivés d'acidesnu- cléiquesà régler est de préférence dans l'intervalle cor- respondant à une valeur de la constante de sédimentation 7. de 4S à 13S (c'est-à-dire dans l'intervalle de 50 à 000 bases du dérivé du polymère). Dans cet intervalle, la longueur de chaîne dans la répartition maxima çomprend généralement environ 100 à 600 bases. Une paire de bases (désignée ci-après par "pb") qui est généralement utilisée comme l'unité pour représenter la taille moléculaire des acides nucléi- ques peut être utilisée pour représenter la taille mo- léculaire d'acides nucléiques par le nombre des bases constituant l'acide nucléique. (Par exemple, 10 pb dési- gnent un polymère à double brin ayant 10 bases). Dans le présent mémoire, il est également fait référence à d'autres polymères d'acide nucléique que les polymères à double brin en plus des polymères d'acide nucléique et par conséquent le terme "nombre de bases" est utilisé ici à la place de "pb'-pour -représenter la taille molé- culaire des acides nucléiques. (Par exemple, un polymè- re d'acide nucléique ayant un "nombre de basesde 10" signifie que le polymère a 10 bases. Lorsque la taille moléculaire d'un acide nucléi- que doit être déterminée ou identifiée, on utilise en général une "valeur de la constante de sédimentation" (valeur S). Cependant, la demanderesse a pu obtenir le nombre de bases mentionné ci-dessus des acides nucléi- ques au moyen de la chromatographie liquide à haute per- formance (HPLC) en utilisant une colonne de filtration sur gel ou une électrophorèse (décrite ci-dessous en dé- tail), dans laquelle des DNA à double brin (fragments de DNA de phage M13) ayant des tailles moléculaires connues sont utilisés comme marqueurs et le nombre de ba- ses de l'acide nucléique à déterminer est calculé sur la base du nombre du témoin. Jusqu'à présent, la valeur de la constante de sédimentation (valeur S) a été largement utilisée pour 8. la représentation de la masse moléculaire des acides nu- cléiques macromoléculaires. Les acides nucléiques ma- cromoléculaires qui existent dans le commerce sont re- présentés au moyen de leur valeur S. Cependant, en raison du progrès des techniques expérimentales ces der- nières années, un moyen pour déterminer plus précisément la masse moléculaire des substances macromoléculaires a été mis au point en utilisant l'électrophorèse sur gel, la chromatographie sur gel, la chromatographie par échange d'ions, etc. de telle sorte que la détermination de la longueur de chaîne de l'acide nucléique macromo- léculaire est devenue possible. Dans ces conditions, la relation entre la représentation par la valeur S et la représentation par la longueur de chaîne devient pro- blématique. En.particulier, comme les molécules d'acide nucléique respectives ont leurs valeurs intrinsèques dans le cas de la représentation par la valeur S,le point de savoir si oui ou non la représentation par la valeur S et la représentation par la longueur de cha1ne pourraient correspondre exactement l'une à l'autre comme moyen de représenter la masse moléculaire des acides nucléiques ne pose pas toujours de problème. En conséquence, pour la présentation de la masse moléculaire des polymères d'acidesnucléiqus de la présente invention, la représentation par la valeur S est également utilisée dans la description du présent mé- moire conformément à la manière classique dans le domai- ne de la chimie des acides nucléiques. Cependant, comme la "valeur S" est une valeur obtenue par une méthode de mesure de la masse moléculaire des acides nucléiques macromoléculaires sous la forme d'une masse moléculaire prise comme un tout (ou sous la forme d'un état molécu- laire de la substance), la représentation sur la base de la mesure de la longueur de cha5ne de la substance (qui est le "nombre de bases" auquel il est fait référence ici) 9. est également mentionnée en même temps que la "valeur S". Ceci provient en particulier de ce que la limite de la distribution des masses-moléculaires doit être représen- tée de manière plus- précise dans la réalisation de la présente invention. Comme dérivés d'acide nucléique de la présente invention on peut citer ceux obtenus en calibrant (en raccourcissant les chaînes) des dérivés d'acide nucléi- que synthétiques précités. Des dérivés ainsi calibrés ont la même structure essentielle que le poly-I.poly-C. Ce- pendant, les dérivés d'acide nucléique de la présente invention sont caractérisés par la définition spécifique de la répartition desmasses moléculaires de leurs d6ri- vés. Comme dérivés d'acide nucléique de la présen- te invention, on peut par exemple, mentionner les substan- ces suivantes: Acide polyinosinique.poly(acide 5-bromocytidy- lique) ayant une valeur S de 4 à 13, de préfé- rence ceux dans lesquels les molécules au maxi- mum de la répartition moléculaire ont un nom- bre de bases de 100 à 600. Acide polyinosinique.poly(acide 2-thiocytidyli- que) ayant une valeur S de 4 à 13, de préf6ren- ce ceux dans leqsuels les molécules, au maximum. de la répartition moléculaire, ont un nombre de bases de 100 à 600. Poly(acide 7-déazainosinique).acide polycytidyli- que ayant une valeur S de 4 à 13, de préférence ceux pour lesquels les molécules, au maximum de la répartition moléculaire, ont un nombre de ba- ses de 100 à 600. poly (acide 7-déazainosinique).poly (acide 5-bro- mocytidylique) ayant une valeur S de 4 à 13, de préférence ceux pour lesquels les molécules, au 10. maximum de la répartition moléculaire, ont des nombres de basesde 100 à 600. poly(acide 2'-azidoinosinique),acide polycyti- dylique ayant une valeur S de 4 à 13, de pré- férence ceux pour lesquels les molécules, au ma- ximum de la répartition moléculaire, ont un nombre de bases de 100 à 600. Acide polyinosinique.poly (acide cytidine-5' - thiophosphorique) ayant une valeur S de 4 à 13, de préférence ceux pour lesquels les molécules, au maximum de la répartition moléculaire, ont un nombre de baes de 100 à 600. Poly(acide adénylique-acide uridylique) ayant une valeur S de 4 à 13, de préférence ceux pour lesquels les molécules, au maximum de la réparti- tion moléculaire, ont un nombre de bases de 100 à 600. Acide polyinosinique.poly(acide cytidylique, acide uridylique) ayant une valeur S de 4 à 13, de préférence ceux pour lesquels les molécules, au maximum de la répartition moléculaire, ont un nombre de bases de 100 à 600. Acide polyinosinique.acide polycytidylique.poly- L-lysine ayant une valeur S de 4 à 13, de préfé- rence ceux pour lesquels les molécules,au maxi- mum de la répartition moléculaire,ont un nombre de bases de 100 à 600. Acide polyinosinique.poly(acide 1-vinylcytidyli- que) ayant une valeur de S de 4 à 13, de préfé- rence ceux pour lesquels les molécules, au maxi- mum de la répartition moléculaires, ont un nom- bre de bases de 100 à 600. Pour la préparation des dérivés d'acide nucléi- que de la présente invention, les parties chaine latérale phosphate des polymères précités ou des dérivés de 11. polymère) à (V) précités peuvent être clivés de telle sorte que les polymères ou les dérivés de polymère peu- vent 4tre divisés en substances de faible masse molé- culaire.' Pour le -clivage des polymères ou des dérivés de polymère, on peut utiliser la dégradation thermique (décrite en détail ci-dessous) ainsi qu'une hydrolyse limitée par les alcalis, ou une hydrolyse partielle avec de la RNase, etc. C'est seulement pour l'aspect caractéristique des dérivés d'acide nucléique de la présente invention résultant de la limitation de la répartition de leur taille de molécules à un intervalle particulier en rai- son du clivage des parties de chaîne latérale phosphate mentionné ci-dessus dans les dérivés, pour diviser ain- si les dérivés en composés de faible masse moléculaire, que l'effet de la présente invention qui comprend (1) l'augmentation de l'activité physiologique et (2) l'aug- mentation de la sécurité peut être obtenue. L'activité physiologique des dérivés &'acide nucléique de la présente invention est extrêmement uti- le pour les médicaments. Les dérivés d'acide nucléique de la présente invention ont une activité cancérostati- que qui sera décrite ci-dessous en détail. Cette activi- té n'est qu'une des diverses autres activités physiologi- ques des dérivés d'acide nucléique de la présente inven- tion. En ce qui concerne les autres activités physio- logiques des dérivés d'acide nucléique de la présente invention qui ont le poly-I.poly-C comme corps apparenté on peut encore citer la capacité de produire du TNF, la capacité de produire de l'interféron, la capacité de pro- duire de l'interleukine 2-, la capacité d'activer les macrophages, la capacité d'activer les cellules NK, l'activité d'inhibition de la prolifération des cellules 12. tumorales, l'activité d'inhibition de la prolifération des cellules tumorales dans des souris rasées portant des cellules tumorales humaines, l'activité d'inhibition des métastases des cellules tumorales dans le poumon etc. Les dérivés d'acide nucléique de la présente in- vention ont une sécurité beaucoup plus élevée que le po- ly-I.poly-C classique et les inducteurs de l'interféron analogues. En conséquence, les composés de la présente invention sont utiles comme agent antiviral, comme agent anti-tumoral, etc. Pour l'utilisation des dérivés d'acide nucléi- que de la présente invention comme médicaments, les déri- vés peuvent être administrés directement à des animaux y compris l'homme, ou encore ils peuvent être ajoutés à un support non toxique et inerte pharmaceutiquement acceptable, pour donner une composition médicamenteuse contenant par exemple.'ingrédient actif à une concentra- tion de 0,1 % à 99,5 %, de préférence de 0,5 % à 90 %, et la composition médicamenteuse obtenue peut être ad- * ministrée aux animaux y compris l'homme. Comme support, on peut utiliser un ou plu- sieurs adjuvants médicamenteux tels qu'un diluant liqui- de, solide ou semi-solide, une charge, etc. On préfè- re que la composition médicamenteuse soit administrée sous forme de dose unitaire. Les dérivés d'acide nucléique de la présente invention peuvent être admi- nistrés par diverses voies d'administration, par exemple par administration orale, par administration locale à des tissus, ou par administration rectale. Il est évident que la composition médicamenteuse est uti- lisée sous la forme de préparation qui convient pour ces modes d'administration,par exemple, sous la forme de diverses préparations orales, solutions pour injection, inhalation, solution ophtalmique, pommade, suppositoire, etc. En particulier, l'application à des tissus et 13. l'administration locale sont particulièrement préférées pour l'administration de compositions médicamenteuses de la présente invention. Il est souhaitable que la dose de la composi- tion -médicamenteuse de la présente invention comme remè- de pour les tumeurs malignes soit déterminée de manière appropriée en tenant compte de l'état du malade, par exemple de son âge et de son poids, ainsi que de la voie d'administration et des symptômes et de la gravité de la maladie. En général, la composition est adminis- trée à des adultes dans une quantité de 0,05 à 1000 mg/ par dose comme quantité de l'ingrédient actif de dérivé de l'acide nucléique de la présente invention. On préfè- re, en général, administrer une perfusion intraveineuse à raison de 5 à 100 mg de ce dérivé. Suivant le cas, une quantité plus faible que celle indiquée ci-dessus peut être suffisante, ou au contraire, une quantité plus élevée que celle indiquée ci-dessus peut devenir nécessaire. Dans l'administration effective, la composi- tion peut être administrée une fois à plusieurs fois par jour à des intervalles d'un jour à plusieurs jours. Lorsque la composition médicale de la présente invention est utilisée comme remède pour les tumeurs bénignes ou des maladies virales, il est encore souhaita- ble de déterminer la dose en tenant compte des symptômes et de la gravité de la maladie, de la voie d'administra- tion et de l'état du malade, etc. En général, la dose peut être dans 1' intervalle allant de la même quantité que la dose pour le remède précité pour des tumeurs malignes à plusieurs dixième de celle -ci. Les dérivés d'acide nucléique de la présente invention peuvent être utilisés en même temps que divers modificateurs de réponse biologique (BRM) et que divers cancérostatiques qui seront mentionnés ci-dessous. Dans l'utilisation en association, on peut s'attendre à un 14. effet synergique dQ à la fois à cet ingrédient supplé- mentaire et au dérivé d'acide nucléique de la présente invention, en même temps qu'à une réduction des effets secondaires nuisibles de ce dernier dérivé. Exemples de BRM: Interférons (a, -, T); Interleukines (IL-1, IL-2); CSF (facteur stimulant les colonies); TNF (facteur de nécrose des tumeurs); Levamizole, Bestatine, Acide rétinoîque, cellules LAK., etc. Exemples de cancérostatiques: -FU (5-fluorouracile); Ara-C (Cytosine Arabinoside); Ara-A (Adénine Arabinoside); CDDP (Cisplatine); Cyclophosphamide; AZT (Azidothymidine). Activités physiologiques des dérivés d'acide nucléique de l'invention: Les activités physiologiques des dérivés d'aci- de nucléique de la présente invention seront décrites ci- dessous. Activité d'inhibition de prolifération des cellules tumo- rales chez les souris portant des tumeurs: L'activité d'inhibition de la prolifération des cellules tumorales chez des souris portant une tumeur Meth-A (souris portant un cancer transplanté de manière isologue) a été examinée par la méthode suivante. Des cellules de Meth-A (3 x 10 /0,2 ml) ont été mises en sus- pension dans une solution saline physiologique, et la suspension obtenue a été injectée par voie sous-cutanée à des souris balb/c. (âgées de 5 semaines, mâles). Deux jours après l'injection, la substance active à examiner (substance d'essai) a été injectée par voie intraveineuse 15. aux souris à raison de trois fois par semaine pendant 2 semaines. Deux jours après l'injection finale, la partie des cellules tumorales a été prélevée et son poids a été mesuré. Les résultats obtenus sont donnés dans le tableau ci-dessous. - La substance d'essai (I) poly-I.poly-C ayant une répartition des masses moléculaires supérieure à 13S; la substance d'essai (II) est un poly-I.poly-C ayant une répartition des masses moléculaires de 4S à 13S (valeur S = 8), la substance d'essai (III) est un poly-I.poly-(C12,M (à savoir, un dérivé de poly-C dans lequel les acides cytidyliques sont remplacés par un acide uridylique à raison d'un acide uridylique pour 12 acides cytidyli- ques) ayant une répartition des tailles moléculaires de plus de 13S; et la substance d'essai (IV) est un poly-I.poly(C12, U) ayant une répartition des tailles moléculaires de 4S à 13S (valeur S = 9). Le groupe témoin n'a reçu qu'une administration de solution saline physiologique. Substance d'essai Nombre de + (g/souris) sois es- Moy. - écart- Inhibition % sayees s type Témoin - 10 2,73 + 0,21 - Substance d'essai (I) (100) 10 0,46 + 0,05 83* Substance d'essai t(II) (100) 10 1,01 0,17 63* Substance d'essai j (III) (100) 10 0,69 + 0,04 73* Substance d'essai (IV) (100) 10 1,80 + 0,20 34* (*): P tive. Le tableau ci-dessus montre clairement que les dérivés d'acide nucléique de la présente invention ont un effet significatif d'inhibition de la prolifération des cellules tumorales chez des souris portant des cancers. 16. Activité d'inhibition des métastases des cellules tumo- rales dans le poumon: Des cellules de mélanome transplantables de manière isologue B16FlO (2 x 105) ont été implantées _ dans des souris C57BL/6 (màles, âgées de 5 semaines) dans leur veine. Deux semaines après l'implantation, on comp- te le nombre de nodosités transplantées dans le poumon (le nombre de colonies). On administre la substance d'essai aux animaux par voie intraveineuse 24 heures avant la transplantation de cellules de mélanome B16FlO dans leur veine. Le nombre des animaux d'essai est de 9. Les résultats obtenus sont donnés dans le tableau ci- dessous. La substance d'essai (I), la substance d'essai (II) et le témoin étaient les mêmes que ci-dessus. Substance d'essai Dose Nombre de Inhibition % (g/kg) colonies Témoin 5 Substance d'essai (I) 5 25 8* 7150 11 3* 87 500 1 1* 99 Substance d'esai (II) 5 58 8* 33 24 7*, 72 500 13 2* 84 (*) P tive. Le tableau ci-dessus montre clairement que les dérivés d'acide nucléique de la présente invention ont un effet significatif d'inhibition des métastases des cellules tumorales dans le poumon chez la souris. Sécurité des dérivés d'acide nucléique de l'invention: La sécurité des dérivés de l'acide nucléique de la présente invention a été déterminée comme il est indiqué ci-dessous. 17. Cytotoxicité pour des cellules souche de moelle de souris Les dérivés d'acide nucléique de la présente invention ont été examinés en ce qui concerne la cytotoxi- cité pour des cellules souche de moelle de souris. La substance d'essai (I), la substance d'essai (II), la sub- stance d'essai (III) et la substance d'essai (IV) étaient les mêmes que ci-dessus. Pour le groupe témoin, on a ad- ministré seulement une solution saline physiologique. Chacune des substances d'essai a été injectée par voie intraveineuse à des souris Balb/c (âgées de 8 semaines, mâles) à raison de 0,5 mg/kg. Chacun des groupes d'essai comprenait cinq souris. 24 heures après l'injec- tion, les cellules de moelle ont été prélevées sur cha- que souris. Les cellules ont été fixées puis colorées avec de la coloration de Giemsa. Les cellules du frottis ont été examinées au microscope, et le pourcentage de -variation a été calculé sur la base du nombre des réti- culocytes apparus conformément à la formule suivante Pourcentage de variation (%) =(témin) - (groupe d'essai) x 100 (groupe d'essai) Le résultats obtenus sont représentés dans le tableau ci-dessous. Pourcentage de variation (%) Substance d'essai (I) 61 Substance d'essai {II) 0 ISubstance d'essai (III) 59 Substance d'essai (IV) 0 Le tableau cidessus montre clairement que les dérivés d'acide nucléique de la présente invention ont une sécurité extrêmement élevée. Essai de toxicité aiguë: L'essai de toxicité aiguë a été effectué en 18. en utilisant des souris balb/c. La substance d'essai a été administrée par voie intraveineuse à des souris en une seule fois, et la DL50 a été calculée à partir du nombre de souris mortes au bout d'une semaine. Les résultats obtenus sont donnés dans le tableau ci-dessous. Animal d'essai Voie d'admi- DL50 nistration nistration Substance Substance d'essai (I d'essai (II} Souris balb/c i.v. 35 mg/kg > 150 mg/kg Comme il ressort clairement du tableau ci-des- sus, la toxicité de la substance d'essai (II) est très inférieure à celle de la substance d'essai (I). Il est donc clair que la toxicité est en relation étroite avec la longueur de chalne des dérivés d'acide nucléique. Les exemples suivants sont destines à illustrer la préparation des dérivés d'acide nucléique de la pré- sente invention d'une manière plus détaillée, mais non à limiter le domaine de la présente invention. EXEMPLE (1) Préparation de dérivés d'acide nucléique à double brin On dissout des quantités équimolaires de poly-C du commerce (ayant une valeur S de 6 à 12) et de poly-I (ayant une valeur S de 6 à 12) dans un tampon Tris contenant du NaCl 50 mM pour préparer une solution ayant une concentration de 10 à 20 mg/ml. On la chauffe progressivement dans un bain-marie de la température am- biante à 68 C. On la maintient ensuite à 68 C pendant en- viron 10 minutes, puis on la laisse refroidir spontané- ment à la température ambiante. On la stocke alors à 4 C. On lyophilise la solution ainsi préparée pour obtenir 1,2 g de dérivé d'acide nucléique sous la forme d'un solide blanc. 19. Celui-ci est la substance d'essai (I) mention- née ci-dessus (ayant une valeur S de 13 à 24). De la même manière que ci-dessus, excepté qu'on utilise un copolymère de poly(C12, U) à la place du poly-C, S on obtient un poly-I.poly(C12, U) (substance d'essai (III) ayant une valeur S de 13 à 24). Comme le procédé ci-dessus est général, tous les dérivés d'acide nucléique mentionnés dans ce qui précède, peuvent également etre préparés de la même manière que le poly-I.poly-C. (2) Transformation de dérivés d'acide nucléique en compo- sés de faible masse moléculaire On dissout 1 g de la substance d'essai (I) obtenue dans le stade (1) ci-dessus dans 120 ml d'eau, et on y ajoute 30 ml d'une solution de NaCl 5M et 150 ml de formaldéhyde. On agite énergiquement le mélange obte- nu, ce qui donne une solution homogène. Après avoir chauffé la solution réactionnelle à 80 C pendant 8 heures, on la dialyse complètement contre de l'eau et on la lyo- philise,-ce qui donne 0,95 g d'un solide blanc. Celui-ci est la substance d'essai (Il) (ayant une valeur S de 8). On dissout 1 g de la substance d'essai (III) obtenu dans le stade (1) cidessus dans 120 ml d'eau, et on y -ajoute 30 ml d'une solution de NaCl 5M et 150 ml de formaldéhyde. On agite énergiquement le mélange obtenu, ce qui donne une solution homogène. Après avoir chauffé la solution réactionnelle à 60 C pendant 12 heures, on la dialyse complètement contre de l'eau puis on la lyQ- philise, ce qui donne 0,95 g d'un solide blanc. Celui-ci est la substance d'essai (IV) {ayant une valeur S de 9). La figure 1 représente un diagramme d'élution dans une chromatographie liquide à haute performance par filtration sur gel des substances d'essai respectives, 20. dans lequel l'absorbant à 260 nm est en ordonnées, et le temps de rétention (en minutes) et le nombre de pb correspondants sont en abscisses. (1) est la substance d'essai (I), (2) est la substance d'essai (III), (3) est la substance d'essai (IV) et (4) est la substance d'essai (II). Les conditions de 1'HPLC sont les suivantes: on utilise un gel TSK une colonne de filtration sur gel G-DNA-PW. L'élution a été effectuée avec de 1'EDTA 1 mM et une solution de NaCl 0,3M contenant un tampon tris-HCl (pH 7,5). La vitesse d'élution est de 0,2 ml/min et le temps d'élution est indiqué au-dessus du diagramme d'élu- tion respectif ( axe des abscisses). Une longueur d'onde d'absorption ultraviolette de 260 nm est utilisée pour la détection, et l'absorbance pour la totalité de la gradua- tion de 0,04 DO/ml est indiquée sur l'axe des ordonnées du graphique. Le chiffre pour les marqueurs indiqué au-dessous de l'axe des abscisses (pb) désigne le nombre de bases du DNA. Comme marqueurs, on a utilisé les fragments hy- drolysés de RR-DNA de phage M13 hydrolysés par des en- zymes de restriction. Le diagramme d'élution des substances d'essai (I) ((1) dans le dessin) et celui de la substance d'es- sai (III) ((2) dans le dessin) se ressemblent bien l'un à l'autre, les courbes du digranumme d'élution apparaissant 34 minutes après l'application de l'échantillon dans chaque cas. Le pic indique la région vide de la colonne, d'o l'on conclut que la quasi-totalité des constituants de ces substances d'essai ont un nombre de bases de 6000 ou davantage. En outre, on observe que la répartition des tailles moléculaires des substances d'essai de faible masse moléculaire,de la substance d'essai (II) ((4) dans 21. le dessin) et de la sistance d'essai (IV) ((3) dans le dessin)tombent dans une plage déterminée, et la réparti- tion moléculaire maxima (pic) apparaît au voisinage de (nombre de bases) et de.600 (nombre de bases) pour ces substances d'essai de faible masse moléculaire. Si la taille moléculaire est représentée par le "nombre de bases" l'unité du Wnombre de bases" peut être la même que celle des "pb" de la figure 1. Par exemple, du poly-I.poly-C a été traité pour être clivé dans les substances de faible masse moléculai- re constitutives,après quoi, on a diversement modifié le temps de réaction et la température de réaction. La ré- partition des tailles moléculaires (nombre de bases et la répartition des tailles moléculaires (nombre de bases) sont indiquées ci-dessous pour les substances de faible masse moléculaire obtenues par ce procédé. Température Temps de Répartition molé-, Répartition mo- de réaction réaction culaire maxima léculaire (nom- I ___ (nombre de bases) bre de bases) - Oh - >10000 C 24 h 30 10-55 C 16 h 100 50-800 C 8 h 1000 200-6000 C 12 h 600 50-5000 Dans l'exemple ci-dessus, un RNA à double brin a été traité pour être clivé dans des substances de fai- ble masse moléculaire. D'une manière analogue, un RNA à brin unique peut également être traité exactement de la même manière. La présente invention n'est pas limitée aux exemples de réalisation qui viennent d'être décrits, elle est au contraire susceptible de modifications et de variantes qui apparaftront à l'homme de l'art. 26 1748 6 22. REVENDICATIONS 1 - Dérivés des acides nucléiques à dbuble brin ayant le RNA comme corps apparenté,caractérisés en ce que la totalité de la répartition des tailles moléculaires des dérivés est dans l'intervalle de valeur de la oa0stante de sédimentation de 4S à 13S. 2 - Dérivés des acides nucléiques & double brin ayant le RNA comme corps apparenté, caractérisés en ce que les molécules pendant la répartitionmaxim3le dans toute la distribution des tailles moléculaires des dérivés ont un nombre de bases dans l'intervalle de 50 à 10 000. 3 - Dérivés des acides nucléiques à double brin selon la revendication 1, ou 2, qui sont choisis dans le groupe constitué de l'acide polyinosinique. poly(acide 5-bromocytidylique) ayant une valeur S de 4 à 13, de pré- férence ceux pour lesquels les molécules correspondant ai, maximum de la répartition moléculaire ont un nombre de bases de 100 à 600; un acide polyinosinique.poly(aci- de 2-thiocytidylique) ayant une valeur S de 4 à 13, de pré- férence ceux dont les molécules correspondant à la répar- tition moléculaire maximale ont un nombre de bases de 100 à 600; un poly(acide 7-déazainosinique).acide polycytidy- lique ayant une valeur S de 4 à 13, de préférence ceux dont les molécules correspondant à la répartition molécu- laire ximwdle ont un nombre de bases de 100 à 600; un poly(acide 7-déazainosinique).poly(acide 5-bromocytidyli- que) ayant une valeur de S de 4 à 13, de préférence ceux dont les molécules correspondant à la répartition molécu- laire nximele ont un nombre de bases de 100 à 600; un poly(acide 2'azidoinosinique).acide polycytidylique ayant une valeur de S de 4 à 13, de préférence ceux dont les molécules correspondant à la répartition moléculaire maximum ont un nombre de bases de 100 à 600; un acide polyinosinique.poly(acide cytidine-5'(-thiophopshorique) ayant une valeur de S de 4 à 13, de préférence ceux dont 23. les molécules correspondant à la répartition moléculai- re aximaoele ont un nombre de bases de 100 à 600, un poly (acide adénylique-acide uridylique) ayant une valeur de S de 4 à 13, de préférence. ceux dont les molécules corres- pondant à la répartition moléculaire maximaleont un nom- bre de bases de 100 à 600; un acide polyinosinique. poly(acide cytidylique, acide uridylique) ayant une valeur de S de 4 à 13, de préférence ceux dont les molécules correspondant à la répartition moléculaire maxiimle ont un nombre de bases de 100 à 600; un acide polyinosinique. acide polycytidylique.poly-L-lysine ayant une valeur de S de 4 à 13, de préférence ceux dont les molécules cor- respondant au maximum de répartition des masses moléculai- res ont un nombre de bases de 100 à 600; et un acide poly- inosinique.poly(acide 1-vinylcytidylique) ayant une va- leur de S de 4 à 13, de préférence ceux dont les molécu- les correspondant au maximum de la répartition moléculai- re ont un nombre de bases de 100 à 600. 4 - Composition anti-tumorale contenant conune ingrédient actif, le dérivé d'acide nucléique à double brin suivant l'une quelconque des revendications 1 à 3. - Composition antivirale contenant comme ingré- dient actif, le dérivé d'acide nucléique à double chatne selon l'une quelconque des revendications 1 à 3. 6 - Composition anti-tumorale selon la revendica- tion 4, qui contient en outre un ou plusieurs modifica- teurs de la réponse biologique et/ou cancérostatique. 7 - Composition antivirale selon la revendica- tion 5, qui contient en outre un ou plusieurs modificateurs de réponse biologiqueset/ou cancérostatiques.