Brevet FR2620027A1 — publié le 19890310

NOUVELLE UTILISATION DE LA (5-AKIIO-2-(4-X-ETHYL-1-PIPERIDIIYL) PHEXYL)-(4-CELOROPEEYL) -XETHAONE La présente invention concerne une nouvelle utilisation de la (5-amino-2-(4-méthyl-l-pipéridlnyl)phényl)-(4-chlorophényl)- méthanone en tant qu'inhibiteur de l'infectivlté virale. On connaît par EP-69 012 la (5-amino-2-(4-méthyl-1- pipéridinyl)phényl)-(4-chlorophényl)-méthanone en tant qu'agent immunostimulant et immunoadjuvant, et qu'on désignera dans ce cui suit comme étant le produit. De façon surprenante. on vient à présent de découvrir que edi4t produit possède des propriétés virucides qui se manifestent par une inhibition de i.'infectivité virale. On a en particulier montré que ledit produit possède la propriété d'inhiber l'infectivité de cellules mononuclées périphériques humaines par le rétrovirus "Human Immunodeficiency Virus" (enr abrégé HiV) appartenant à la famille des lentivirus. On trouvera, ci-après, les protocoles expérimentaux qui ont Dermis de mettre en évidence la nouvelle propriété de la (5-amino-2-(4-méthyl-'l-piperidinyl)phényl)-(4-chlorophényl)- méthanone. Pour chacun des trois protocoles qui suivent, on a préparé une solution mère de (5-amino-2-(4-methyl-l-pipéridinyl)phéyl)- (4-chlorophényl)-méthanone à 100 mg/l dans de l'eau physiologique contenant 9 g/I de chlorure de sodium et acidifiée à pH=3 par de l'acide chlorhydrique. La solution mere est ensuite diluée dans un milieu RPMI i640 jusqu'à la concentration désirée. La solution ainsi obtenue est stérilisée par filtration sur IMILLIPORE" 0,22 pm. A partir de cellules T lymphoblastoïdes (lignée CEM) infectées par un virus HIV et donc susceptibles de produire ledit virus HIV, on recueille ce dernier par des moyens appropriés à partir d'un surnageant de culture desdites cellules. Les cellules utilisées sont des lymphocytes de suJets normaux HIV négatifs isolés à partir du sang périphérique par gradient de Ficoll puis stimulés pendant trois jours par de la phytohémagglutinine p (en abrégé pHAp) avant leur utilisation. Les lymphocytes sont ensuite cultivés dans le milieu RPMI 1640 contenant 10 % de sérum de veau foetal, 10 % d'interleukine Il, 2 pg/ml de polybrène, 1 % de glutamine, 1 % d'antibiotiques et une dilution au 1/2500 de sérum anti-interféron " humain. La production du virus HIV par des cellules T humaines traitées ou non par le produit a été régulièrement suivie par 20. mesure de l'activité transcriptase inverse, représentative de la réplication virale, et présente dans 1 ml de surnageant de culture. On concentre 100 fois 1 ml de surnageant par ultracentrifugation puis on détermine l'activité enzymatique de cet échantillon dans 50 il d'un mélange réactionnel contenant 50 mM de tampon tris scintillation Kontron. Trois protocoles ou types de traitement sont effectués simultanément, chacun desdits traitements étant effectué avec une dose prédéterminée de produit (5-amino-2-(4-méthyl-1- pipéridinyl)phényl)-(4-chlorophényl)-méthanone. Un témoin sans produit est également effectué de la même manière que pour les trois protocoles qui sont donnés ci-après: I - PROTOCOLE 1 Il s'agit d'un pré-traitement avant l'infection virale. On prépare trois suspensions de 3 ml chacune de lymphocytes (106 cellules/ml) préalablement stimulés par de la pHAp. Une suspension est traitée par une dose de 0,1 pg/ml, l'autre par 0,05 pg/ml et la dernière par 0,01 pg/ml de produit pendant 18 heures. Les cellules de chaque culture ainsi obtenue sont ensuite lavées pour éliminer le produit avant d'être infectées par du virus HIV 1 dont l'activité transcriptase inverse est de 5000 cpm/106 cellules. Après une heure d'adsorption virale, les trois suspensions infectées et le témoin sont aJustés à ' cellules/ml dans le milieu de culture. On cultive les cellules des trois suspensions et du témoin pendant trente Jours à raison d'un passage (ou repiquage) tous les trois ou quatre Jours. A chaque passage, la production de virus HIV 1 est suivie par mesure de l'activité transcriptase inverse présente dans 1 ml de surnageant de chaque culture et comparée à celle observée pour la culture témoin. Les figures 1 à 3 qui représentent l'activité transcriptase inverse (en cpm/ml) en fonction du temps (en nombre de jours), comprennent chacune quatre courbes T représentant l'activité transcriptase inverse dans la culture témoin. Ci représentant l'activité transcriptase inverse pour la culture traitée par une dose de 0,1 pg/ml de produit. C= représentant 'l'activité transcriptase inverse pour la culture traitée par une dose de 0,05 pg/ml de produit, et C- représentant l'activité transcriptase inverse pour la culture traitée par une dose de 0,01 pg/ml de produit. La figure 1 montre qu'un pré-traitement de lymphocytes humains par des doses croissantes de produit provoque une inhibition partielle du pouvoir infectieux du virus HiV 1 pour lesdits lymphocytes quelle que soit la dose. En effet, il suffit de déterminer le rapport de la valeur de l'activ4té transcriptase inverse de la culture témoin (courbe T) à chacune des valeurs des activités transcriptase inverse des autres cultures, pour constater que déjà une assez sensible inhibition de!'infectivité virale a été obtenue. II - PROTOCOLE 2 Il s'agit d'un traitement pendant l'adsorption virale. Trois suspensions de 3 ml chacune de lymphocytes humains préalablement stimulés par de la pHAp sont infectées par du virus HIV 1 dont l'activité transcriptase inverse est de 5 000 cpmZ10O cellules en même temps qu'est introduit le produit à des doses de 0,1, 0,05 ou 0,01 pg/ml respectivement. Après une heure à 37'C, les lymphocytes sont lavés puis remis en culture à raison de l0. cetlules/ml. La production virale est suivie de façon identioue au protoc7le i précédent. La figure 2 est representa-ive de i'activ;té transcriptase inverse en fonction du temps donné en nombre de jours et relative au protocole 2. La.figure 2 mcntre, lorsque i'adsorption du virus HIV 1 sur des lymphocytes humains est effectuée en présence de diverses concentrations du produit (courbes Ci à Cz), une inhibition très significative du pouvoir infectieux du virus HIV pour les cellules T humaines. Il est aisé de constater encore que les rapports des valeurs des activités transcriptase inverse déterminés comme précédemment indicué a propos de la figure I, sont relativement importants. L'inhibition constatée semble être proportionnelle à la dose ut'il'sée et elle est maximale à la conc-entration la plus forte étudiée (0,1 ug/ml, courbe Ci de la figure 2). Pour les autres doses de cette production virale. III - PROTOCOLE 3 Il s'agit d'un traitement après adsorption virale (post- traitement). Trois suspensions de 3 mi chacune de lymphocytes humains préalablement stimulés par de la pHAp sont infectées par du virus HIV 1 dont l'activité transcriptase inverse est de 5 000 cpm/10e' cellules. Après une heure d'adsorption virale à 37'C, les lymphocytes sont remis en culture à raison de 10'- cellules/ml dans du milieu de culture contenant 0,1, 0,05 ou 0,01 pg/ml de produit respectivement. Trois Jours après et sept jours après l'infection virale, les cellules sont centrifugées puis remises en culture à raison de i0C cellules/ml dans du milieu de culture contenant du produit aux doses précitees. A partir du dixième jour après l'infection virale, les passages cellulaires sont effectués tous les trois ou quatre jours sans addition de produit. La production virale est suivie de façon identique aux protocoles précédents. - La figure 3 est représentative de l'activité transcriptase inverse relative au protocole 3. Lorsque les lymphocytes humains sont traités pendant trois passages après l'adsorption virale par des doses croissantes de produit (courbe C1 pour la dose de 0.1 uIg/ml. courbe C-. pour la dose de 0,05 pg/ml et courbe CÄ pour la dose de 0,01 pg/ml), une inhibition de l'infection virale et vraisemblablement une inhibition de la multiplication du HIV I dans ces lymphocytes est observée. Elle est réellement tres significative lors d'un traitement à 0,1 pg/ml, car le rapport des pics des courbes T et Ci est relativement élevé, de l'ordre de 10. Elle est partielle pour les autres doses. Lors du pré-traitement par le produit, quelle que soit la dose, on observe un retard important dans l'apparition du pic de transcriptase inverse et une inhibition partielle du pouvoir infectieux du virus par rapport à la culture témoin n'ayant pas reçu de produit. Dans le traitement simultané à l'adsorption virale et dans le posttraitement, on observe une inhibition très significative du pouvoir infectieux du virus, cette inhibition étant maximale à la dose la plus forte étudiée, -quel que soit le temps de culture. Ces résultats suggèrent une action éventuelle du produit sur le virus et sa réplication. Selon l'invention, on envisage l'utilisation de la (5-amino-2-(4-méthyl-l-pipéridinyl)phényl)-(4-chlorophényl)- méthanone en tant que produit pour l'obtention d'un médicament virucide destiné à une utilisation en thérapeutique humaine ou animale vis-à-vis des infections virales. On envisage notamment l'utilisation dudit produit pour l'obtention d'un médicament virucide destiné à une utilisation en thérapeutique humaine vis-à-vis de l'infectivité de cellules humaines par les rétrovirus, notamment les lentivirus, comme par exemple les virus HIV 1, HIV 2, HTLV-I et HTLV-II. On envisage encore l'utilisation dudit produit pour l'obtention d'un médicament virucide destiné à une utilisation en thérapeutique animale vis-à-vis des infections virales, notamment vis-à-vis de l'infectivité de cellules animales par les virus FeLV et VISNA. D'une façon générale, le produit est utile en thérapeutique humaine ou animale pour le traitement des maladies dont l'origine est virale, notamment les syndromes apparentés au SIDA, les formes asymptomatiques des infectivités par les virus HIV, le SIDA, certains cancers comme par exemple les leucémies humaines à lymphocytes T ou la leucémie féline, l'anémie infectieuse équine, les infections par le virus de Epstein-Barr, l'arthrite caprine, l'hépatite de type B et les infections par le virus VISNA du mouton. La posologie quotidienne préconisée pour l'administration du produit par voie orale est de 1 à 10 mg/kg en une ou plusieurs prises. Suivant l'invention, on préconise donc l'utilisation de la (5-amino-2-(4-méthyl-l-pipéridinyl)phényl)-(4-chlorophényl)- méthanone pour la fabrication d'un médicament virucide dans un conditionnement accompagné d'une notice en vue de son emploi dans le traitement ou la prévention de maladies d'origine virale chez les humains ou les animaux, pour la fabrication de moyens destinés à combattre les maladies d'origine virale chez les humains ou les animaux, et dans le traitement des maladies d'origine virale chez les humains ou les animaux. REVENDICATIONS 1) Utilisation de la (5-amino-2-(4-méthyl-l-pipéridinyl)' phényl)-(4chlorophényl)-méthanone pour l'obtention d'un médicament virucide destiné à une utilisation en thérapeutique humaine ou animale vis-à-vis des infections virales. 2) Utilisation selon la revendication 1, caractérisée en ce que lesdites infections virales sont des infections rétrovirales. 3) Utilisation de la (5-amino-2-(4-méthyl-l-pipéridinyl phér.yl')-(4-chlorophényl)-méthanone pour l'obtention d'un médicament virucide destiné à une utilisation en thérapeutique humaine vis-à-vis de l'infectivité de cellules humaines par les rétrovirus. 4) Utilisation selon la revendication 3 caractérisée en ce que lesdits rétrovirus sont des lentivirus. 5) Utilisation selon les revendications 3 ou 4, caractérisée en ce que lesdits rétrovirus ou lentivirus sont des virus HIV. 6) Utilisation selon les revendications 3 ou 4, caractérisée en ce que lesdits rétrovirus ou lentivirus sont des virus HTLV. 7) Utilisation de la (5-amino-2-(4-méthyl-l-pipéridinyl) phényl)-(4chlorophényl)-méthanone pour l'obtention d'un médicament virucide destiné à une utilisation en thérapeutique animale vis-à-vis de l'infectivite de cellules animale par iez rétrovirus. 8) Utilisation selon la revendication 7, caractérisêe en ce que lesdits rétrovirus sont des virus FeLV. 9) Utilisation selon la revendication 7, caractérisee en ce que lesdits rétrovirus sont des virus VISNA. ) Utilisation de la (5-amino-2-(4-méthyl-l-pipéridinyl) phényl)-(4chlorophényl)-méthanone pour la fabrication d'un médicament virucide dans un conditionnement accompagné d'une notice en vue de son emploi dans le traitement ou la prévention de maladies d'origine virale chez les humains ou les animaux. 11) Utilisation de la (5-amino-2-(4-méthyl-l-pipéridinvl) phényl)-(4chlorophényl)-méthanone pour la fabrication de moyens destinés à combattre les maladies d'origine virale chez les humains ou les animaux. 12) Utilisation de la (5-amino-2-(4-méthyl-l-pipéridinyl) phényl)-(4chlorophényl)-méthanone dans le traitement des maladies d'origine virale chez les humains ou les animaux.