Brevet FR2619568A1 — publié le 19890224

2619568. La présente invention concerne de nouvelles résines qui sont constituées par des polymères modifiés du styrène réticulé; elle concerne également la préparation de ces résines, ainsi que leurs applications pour l'analyse et la purification de molécules d'origine biologique, notamment comme phase stationnaire en chromatographie d'échange d'ions et d'affinité, en particulier pour réaliser le fractionne- ment de mélanges de protéines. Egalement, leur interaction avec des protéines, notamment les anticorps anti-ADN et anti-phospholipides présents dans le sérum des patients atteints de LED, les rend applicables à des opérations d'épuration sélective des différents types d'anticorps développés par les malades lupiques. Ces nouvelles résines selon l'invention ont comme originalité de comporter des substituants copiant les sites chimiques de l'ADN et de certains phospholipides. Elles se présentent notamment sous forme de particules de polystyrène réticulé classique, ayant à leur surface, dans une répartition statistique, les différents éléments suivants: bases puriques et pyrimidiques, pentoses et phosphates, fixés indépendamment sur les unités de polystyrène avec des bras espaceurs de longueur'et de nature chimique variables, des taux de substitution élevés pouvant être obtenus. La présence possible des groupements phosphorylés rend ces résines particulièrement intéressantes en chromatographie d'échange d'ions. Les supports chromatographiques, qui ont été développés Jusqu'ici dans ce domaine, sont le plus souvent à base de polymères naturels, modifiés afin de porter des groupements permettant l'échange de protéines cationiques (groupements carboxyméthyle, sulfopropyle> ou anioniques (groupements aminoéthyle, diéthylaminoéthyle). Les supports chromatographiques précités sont des gels qui ne permettent qu'une utilisation en basse pression, ce qui limite considérablement leur emploi à l'échelle industrielle. En effet, leur faible résistance mécanique limite, voire interdit, leur utilisation en chromatographie en phase liquide haute performance conséquence, leur intérêt industriel. Pour pallier ces inconvénients, on a déjà recherché, pour ces applications, des supports qui, de par leur réticulation, possèdent de bonne propriétés mécaniques, c'est-à-dire une bonne rigidité. Parmi les polymères qui ont ainsi été proposés, on peut citer le polyacrylamide, le polymère trisacrylique, le poly(méthacrylate d'hydroxy- méthyle), les polymères vinyliques. Cependant, les modifications chimiques qui ont été effectuées dans le but de conférer aux polymères de base un caractère de support d'échange d'ions restent souvent difficiles, et les taux de substitution obtenus sont généralement faibles. Ainsi, les supports à base de polystyrène réticulé avec un taux de l'ordre de 2% de divinylbenzène, possèdent une excellente tenue mécanique, mais leur forte hydro- phobicité a jusqu'à maintenant fortement limité leur usage en chromatographie des protéines. Pour qu'un tel support soit utilisable en chromatographie d'échange de produits d'origine biologique, il est nécessaire qu'il soit fortement substitué par des motifs à la fois hydrophiles et ionisables. On a maintenant découvert, selon l'invention, une famille de polymères fonctionnels bien définie, qui répond aux problèmes posés, c'est-à-dire qui présente le double avantage, tout en conservant l'excellente tenue mécanique des polymères ou copolymères de base, d'être hydrophiles et de présenter une capacité d'échange d'ions importante. En effet, les résines selon la présente invention, porteuses de groupements phosphate, lesquels Jusqu'alors n'avaient pu être greffés de façon importante sur les phases stationnaires classiques, ont des propriétés acido-basiques, et donc, d'échange d'ions, assez nettement différentes des supports habituels. Il est également apparu que les supports selon l'invention sont toujours utilisables dans des conditions d'élution en chromatographie liquide haute performance, car ils résistent sans modification à des pressions voisines de 200 bars. La présente invention a d'abord pour objet un polymère dérivé d'un polymère ou copolymère réticulé du styrène, caractérisé par le fait que la chaîne du polymère ou copolymère est substituée par un ou plusieurs groupes, identiques ou différents, appartenant aux catégories suivantes: -Z-A; -Z-A2; -Z-A1-Z7 -A2; -Z-41-A3-A2; -Z-Al -A o - Z représente une chaine d'espacement; - Z' représente une chaîne de liaison; - A1 représente un reste phosphate; - A2 représente le reste d'une base purique ou d'une base pyrimidique; - A3 représente un reste de sucre; et - A4 représente un reste d'une molécule intervenant dans la structure polaire des divers phospholipides. La chaîne d'espacement Z est notamment choisie parmi les restes: * -(CH2) n-, n valant de 1 à 6, éventuellement rendu hydrophile par remplacement d'au moins un H par un OH; ou -SO2-NH-(CH2)m-, m valant de 1 à 6, le reste -(CH2)m étant éventuellement rendu hydrophile par remplacement d'au moins un H par un OH. En particulier, on peut mentionner, comme chaines d'espacement Z, les restes -H2-; -(CH22-; -(CH2)3-; -C2-2 2 2 -SO 2-NH-(CH2)2ou3-; -SO 2-NH-CHOH-; et -S0 2-NH-CH2-CHOH-CHOH- Quant & la chatne de liaison Z', elle est notamment constituée par la chaîne -(CH2)p-, p valant de 1 à 6, le reste -(CH 2)P- étant éventuellement rendu hydrophile par remplacement d'au moins un H par un OH. En ce qui concerne le reste A2, on peut mentionner, & titre d'exemples, les restes des bases puriques majeures que sont l'adénine et la guanine, ainsi que les restes des bases pyrimidiques majeures que sont la cytosine, la thymine et l'uracile. Le reste A3 représente notamment un reste de sucre, relié par son groupement -CH2- au reste phosphate; A titre d'exemple, on peut citer un reste de pentose, en particulier, le reste du D-ribose (ou du 2-désoxy-Dribose> de formule: -CH 0 OH OH (H) Quant au reste A4, il représente notamment une molécule estérifiée de choline, d'éthanolamine, de sérine, de glycérol ou d'inositol. Le polymère de base, qui est modifié selon la présente invention, est un homo- ou copolymère du styrène que l'on peut définir comme étant un polymère à partir d'un mélange de monomères de base comprenant, pour 100 parties en poids, 50 - 100 parties en poids de styrène éventuellement substitué comme l'a-méthylstyrène, et O - 50 parties en poids d'au moins un monomère copolymérisable A insaturation éthylénique choisi notamment parmi les monomères acryliques comme les acrylates et méthacrylates alkyliques inférieurs, les acrylates d'alcoxy inférieurs, l'acrylonitrile, l'acrylamide, les acrylates d'hydroxyalkyle inférieurs, les méthacrylates d'hydroxyalkyle inférieurs, l'acide acrylique et l'acide méthacrylique. De plus, ces polymères du styrène sont réticulés, c'est-à- dire qu'un monomére de réticulation classique choisi notamment parmi les polyvinylbenzènes, comme le divinylbenzène ont été ajoutés aux monomères de départ, en une quantité pouvant aller Jusqu'à 5 parties en poids pour 100 parties en poids desdits monoméres. Selon l'invention, on utilisera, de préférence, l'homopolymère du styrène, lequel est un support classique; celui que l'on a utilisé ici était un polystyrène réticulé avec au plus 5% en poids, en particulier avec 2% en poids, d'au moins un monomère de réticulation, comme le divinylbenzène, et se présentant sous la forme de billes d'une dimension voisine de 50 pm. Pour simplification, on désignera, dans la suite du présente mémoire, les homo- et copolyméres du styrène par le terme "polystyrène". La substitution de la chaine du polystyrène selon l'invention s'effectue principalement en position para du noyau phényle. Par ailleurs, selon la présente invention, chaque groupe phényle non impliqué dans la réticulation peut comporter un substituant tel que défini ci-dessus. La présente invention a encore pour objet un procédé de préparation du polymère dérivé du polystyrène réticulé, tel que défini ci-dessus, caractérisé par le fait qu'il comporte la fixation sur le polystyrène réticulé de base, en une ou plusieurs étapes, d'un reste -Z-X (o X représente un halogène et Z est tel que défini ci-dessus) ou d'un reste Z-OH (o Z est tel que défini ci-dessus), puis (I) dans le cas o l'on a fixé un reste -Z-X, la réaction du polystyrène ainsi modifié avec une base purique ou pyrimidique, afin de former le substituant -Z-A,; (II) dans le cas o l'on a fixé un reste -Z-OH, (IIa) la phosphorylation du polystyrène ainsi modifié, afin de former le substituant -Z-A1; puis * lorsque l'on souhaite former le substituant -Z-A 1-Z'-A2, la réaction du reste -Z-A1 avec une base purique modifiée schématisée par la formule: 26 1 9568 N N NN Z'-OH ou avec une base pyrimidique modifiée schématisée par la formule: N (II) olIl N I Z' -OH * lorque l'on souhaite former le substituant -Z-A1-A3-A2, la réaction du reste -Z-A1 avec un nucléoside de formule -A 3-A2, résultant de la liaison de l'azote 9 d'une base purique ou de l'azote 1 d'une base pyrimidique avec le carbone 1' d'un sucre; lorsque l'on souhaite former le substituant -Z-K1-A4, la réaction du groupement -Z-A1 avec une molécule intervenant dans la structure polaire des divers phospholipides; ou bien (IIb) lorsque l'on souhaite former directement le substituant -Z- A -A3-A2, la réaction du polystyrène ainsi modifié avec un nucléoside monophosphate de formule A1-A3-A2; (IIc) lorsque l'on souhaite former le substituant i-Z-A1-Z'-A2, la réaction du polystyrène ainsi modifié avec une base purique transformée schématisée par la formule-: X>(la)N I (a et qui est obtenue par phosphorylation de la base purique modifiée de formule (I), ou avec une base pyrimidique transformée schématisée par la formule: (IIa) I 'Z'-A1 et qui est obtenue par la phosphorylation de la base pyrimidique modifiée de formule (II); ou bien (IId) lorsqu'on souhaite former le substituant Z-A1-A4, la réaction du polystyrène ainsi modifié avec un reste A4 phosphorylé. On peut commencer par fixer sur le polystyrène de départ le radical -CH2X en faisant réagir ledit polystyrène 2O avec un halométhyl méthyl éther en présence de chlorure stannique. On peut également commencer par fixer sur le polystyrène de départ le radical -CH20H, en faisant réagir, en présence d'un catalyseur transfert de phase, la résine obtenue comme indiqué ci-dessus, c'est-à-dire modifiée par des radicaux -CH2-X, avec l'acétate de potassium, puis en hydrolysant l'acétate obtenu par la potasse concentrée. On peut également commencer par fixer sur le polystyrène de départ, le radical -CH 2-CH2-OH, * en faisant réagir la résine modifiée de façon à porter des radicaux -CH2-X avec le cyanure de sodium, en présence d'un catalyseur transfert de phase, pour obtenir le substituant -CH 2-CmN; * puis en faisant réagir le polystyrène ainsi modifié avec l'acide chlorhydrique en milieu alcoolique, afin d'obtenir le substituant -CH2COOH; * puis en réduisant par le diborane, afin d'obtenir le susbtituant -CH2-CH2-OH. On peut également commencer par fixer sur le polystyrène de départ, le radical -CH2-CH2-CH2-OH, 2 2 2 en condensant un malonate d'alkyle sur la résine comportant des groupes CH2-X, afin d'obtenir le substituant: COOR / - CH2-CH \ COOR (R étant un reste alkyle); * puis, en hydrolysant la fonction diester ainsi obtenue pour donner une fonction diacide à laquelle on fait subir une décarboxylation en milieu acide, afin d'obtenir le substituant -CH2CH2-COOH; 2 2 * puis en réduisant par le diborane afin d'obtenir le substituant -CH 2-CH2-CH2-OH. On peut également commencer par fixer sur le polystyrène de départ, le radical -S02-NH-(CH2)2 ou 3-OH, a en faisant réagir l'acide chlorosulfonique sur le polystyrène de départ, de façon à obtenir le substituant -SO2Cl, * puis en faisant agir l'éthanolamine ou la propanolamine sur le substituant précité. On peut également commencer par fixer sur le polystyrène de départ, le radical -S02-NH-CH2-CHOH-CH2OH, * en faisant réagir l'acide chlorosulfonique sur le polystyrène de départ, de façon à obtenir le substituant -SO2Cl; * puis en faisant agir l'amino-3 propanediol-1,2 sur le substituant précité. On réalise avantageusement la phosphorylation à l'aide du dichlorophosphate de méthyle, de l'acide phosphoreux ou de l'oxychlorure de phosphore, et notamment, à l'aide de l'oxychlorure de phosphore. J+d 'UoUO$OI 'aIIaLubz- J L, fLtuuo s-ua T -Tq;a -ouom as1odoozoaIîounmnT 'as^odoo;%aI, vSIrr 'Via anb sia; 'anb;SoloTq asXIeue,p saa;%sXs sop suep ka enbTSoIoTq au;TSo,p salnoglou sep uoTIvoT;Tand 2I.nod 'snssap-To TuT;p anb la% 'augKXqs np glnoTa 05 aiKIulodoo no aeaçúXlod un,p ATag;p aZemXlod np uoTeslTInl aeqo anod:uuawaIv2q e uo;;ueAuT aluesgid ml sapTogIonu sael ea EaV1,I Ncjv 1 'sl;gisqns a=oo uu:k;aipv senbT:CmXzue sexaldmuoo no 'saazue-oo 'saOEXzua sap 'suo;,p a2umqog,p no;TuTç;v,p Z aqdeuoqoaqo a:d 'uoT;%oT;$Tnd QI aauuoluaE queuale2g nnad uo '(sapTdTIoqdsoqdT-u qa squvInoiTo sueln2oo-TIuv )Cav-T;ue sd-ooTo.ue) sanbTdnI saplI sael ad seddoleAip sdioo-T-u,p sadX; sua;; p sep saAToeas suoTeQnda, sap asTlea, rnod alduaxe red ',%TuTj;g,p 0deo'o. ua auTvuuoTivis aseqd aueoo enb TsuTv 'sanbTa;oid sbuvlar ap euluuooer; ae rnod XuemeaQTlno;:ked e 'suoTp saSueqog,p ae daa.zo;emoro ua TuuoTQs sQqd aumroo 'snssep-To TUT;Pp anb Ia: 'auQzXs np qInoT% ajiaaXLodoo no araXlîod unp aaTaep aaOXIlod np uoTesTIT;:n, %a qo rnod;uaImEalg g uoTuaauT a:%uasad gl *apTUITTP -oqJeoiúxeqoIoXorfp-1' IT ap apTeil V HO-Z%uvn4T4sqns el ns ( %uauae Toadsaa aTnuro; ap auwpuodsazoo 01 aseq el DIeOd oaAQ %uvlXaoqdsoqd ua (II) no elnumo; ap eagTjpom aseq eun eaudard uo 'uT;ua - ' apmTpoqtoJIXxaq oIoKOTp-,.R'tl el ap apTel (II) no (I) sainmuro; sap sae;Tpour saseq sal ans v-Z- asai np uoT;ovg9 el asg I ar uO asqgId ap;.4xasuQI4 inasfXLIso un,p aouasgpd ua auelXq;a,p aeuoqqjo al oaAe aseq g1 ai2gwa;4g; uo '-ZHO-z HO-=.-. sellenbsal suep (II> no (I) salnaro; ap sagi;Tpom saseq sael iaedgad inod 89S6L93 6 895619Z Pour mieux illustrer la présente invention, on en décrira ci-après plusieurs modes de mise en oeuvre Les Exemples A à H concernent la préparation de différentes résines de polystyrène modifiées intermédiaires dans la préparation des résines selon la présente invention. Les Exemples 1 & 6 concernent la préparation de différentes résines selon la présente invention. Les résultats de microanalyse pour chacune des résines mises en Jeu sont rapportés dans le tableau III qui fait suite & l'Exemple 5. Les Exemples 7 à 11 illustrent les différentes utilisations des résines selon l'invention. Exemple A Préparation du poly(parachlorométhylstyrane) -CH2-CH- -CH2-CH- À +CJCzOC3 nC14 t0 +J CtCH20CH3 SnCt4 + CH3OH CH2Cl On place 24,5 g du méthanol et du CH2Cl2. 2 2' Le rendement est supérieur & 80%. Cette résine PS-CH2C1 servira de base pour de nombreuses réactions. TABLEAU I DOSAGE ARGENTIMETRIQUE PS-CI C1 (microanalyse) __ _ _ _ _ _ _ ___ __ _ ___ Méq/g de - CH2Cl 5,1 5,3 5,8 (5,3) (5,15) (5,7) % Cl en g/100 g 18,1 18,8 20,6 (18,8) (18,3) (20,1) % de Substitution 77,8 81 88 (81,1) (78,5) (86,5) * Le taux de chlore de la résine préparée est déterminé par dosage des ions chlorure libérés par hydrolyse par la butylamine. Après avoir acidifié la suspension, le dosage est effectué à l'aide d'une électrode indicatrice d'argent. Exemple B Préparation du poly(parachlorosulfonylstyrène) lère étape: -CH 2-CH -CH2--CH +HS3Cl >- + HCl S03H 2ème étape: -CH -CH- -CH -CH- + HS03CI.C + H2SO4 S03H SO 2C Le symbole PS remplacera, dans la suite du présent mémoire, le polystyrène substitué en position para. On place 2,6 g (25 méq) de polystyrène (FLUKA) dans 125 ml (2000 méq) de CH2C12, sous agitation, pendant 4 heures, à la température ambiante. On ajoute ensuite 15 ml (225 méq) de HSO Cl et on laisse 1 heure sous agitation. On filtre avec CH2Cl2, puis de l'acétone et du CH2C 2, et on utilise immédiatement le produit obtenu pour réagir avec l'éthanolamine, la propanolamine ou l'amino-3 propanediol-1,2. Le rendement total est voisin de 80%. TABLEAU II DOSAGE ARGENTIMETRIQUE DE PS-SQ2 Cl Méq/g de -SO Cl % Cl en g/100 g '% de substitution 3,86 13,7 78,2 3,88 13,8 78,5 * Le taux de chlore de la résine préparée est déterminé par dosage des ions chlorure libérés par hydrolyse par la soude. Après avoir acidifié la suspension, le dosage est effectué à l'aide d'une électrode indicatrice d'argent. Exemple C Préparation du poly(parahydroxynméthylstyrène) lère étape: PSCH2CI+CH3COOK PS-CH2-O-C-CH3 +KCI C.T.P.' Il 3 o0 * C.T.P. = catalyseur de transfert de phase constitué par du chlorure de tricaprylylméthylammonium 2ème étape: P1 S-CH2-O-C-C H3 + KOH - PS-CH20H +CH3COOK o C T. P * C.T.P. = catalyseur de transfert de phase constitué par du chlorure de tricaprylylméthylammonium On place 10 g (55 méq) de PS-CH 2Cl dans 70 ml (620 méq) de C6H4Cl2 sous agitation, pendant 1 heure. On aJoute 15 g de CH3COOK dissous dans 30 ml d'eau, 3 ml de catalyseur, et on place le ballon dans un bain d'huile à 85- 90'C, pendant environ 30 heures; puis, sans séparer, on ajoute, dans le ballon, 15 g de KOH dissous dans 15 ml d'eau et 1 ml de catalyseur qu'on laisse touJours & la mnme température pendant 45 heures. Ensuite, on filtre avec de l'eau, puis des mélanges H2O/tétrahydrofuranne de plus en plus concentrés en tétrahydrofuranne, du méthanol et du CH2c 12 Malgré la réaction en phase hétérogène, la réaction s'effectue de façon quasi totale. Exemple D Préparation du poly(paracarboxyméthylstyrène) PS-CH2Ct+NQC=N C.T.R * PSCH2C-N+NaCi + C2H50H.HCI \A J PS-CH2- CO-NH2 PS-CH2-COOHNNH3 C.T.P. = catalyseur de transfert de phase constitué par [(C4H9)4N +, SO4H] Dans un premier stade, on dissout, à chaud, 3,5 g de NaCSN dans 50 ml de N,N-diméthylformamide, on ajoute 5 g (26 méq) de PS-CH2C1, 50 ml de N,Ndiméthylformamide et 1,2 g (3,5 méq) de (C 4Hg) 4N, SO4H], que l'on porte à 80'C pendant 24 heures, on filtre ensuite en effectuant les lavages classiques avec H20, le dioxanne, le méthanol, CH2Cl2, et on sèche la résine formée qui est la paracyano- méthylstyrène PS-CH2-CEN. Dans un second stade, on place 2 g (11 mèq) de PS-CH2-CaN et un mélange HC1 concentré (37,5 ml)/éthanol 252- (12,5 ml) dans une ampoule de verre que l'on scelle. On porte l'ampoule à 110'C, pendant 30 heures, sous agitation, puis, toujours sous agitation, pendant 4 heures à la température ambiante; on ouvre l'ampoule (placée dans un bain de glace), et, de nouveau, on agite à la température ambiante, pendant 4 heures. On plonge le produit obtenu dans un mélange d'eau et de méthanol; on filtre ensuite avec de plus en plus de méthanol; ensuite, on place le produit pendant une dizaine d'heures en suspension dans de la soude 5N; on filtre à l'eau, puis dans de la soude 3 10-2N; on filtre à l'eau (on obtient PSCH2-COONa). On laisse alors en suspension dans un mélange HC1 3N(50) / dioxanne (50) pendant une dizaine d'heures, et on effectue les filtrations avec H20, le dioxanne, le méthanol et CH2C12 Exemple E Préparation du poly(paracarboxyêthylstyrène) P" 0CH /COCOOC2H5CO3K25 C00C2H5 PS-CH2CI\,COOC 2H5 CT.P PS-CH2-CH\coocH5 HCl 2 NaOH COOH /COONa PSCH2 2CH/ H -- PS-CH2-CH PS-CH2.--CH2-COOH + C 2 On dissout, à chaud, 5 g de CO3K2 dans 50 mnl de N,N-diméthylformamide, puis on aJoute 1 g de sulfate de tétrabutylammonium, 2 g (11 méq) de PSCH2C1 et 15 ml (100 meq) de (COOC2H5)2CH2, à 85'C, pendant 24 heures. On filtre ensuite avec de l'eau, du tétrahydrofuranne, du méthanol et CH2C12. 2 6 1 9 5 G 8 Ensuite, 1 g du diester obtenu est mis sous agitation dans 15 ml d'éthanol pendant 2 heures. On raJoute ml de NaOH 5N, et l'on agite pendant 15 heures. Apres filtration à l'eau, on met en suspension la résine dans 100 ml d'HCl 5N, à 110'C, pendant 24 heures; puis, on filtre avec H20, du dioxanne, du méthanol et CH2Cl 2 Exemple F1 Préparation des composés PS-(CH2) -CH2OH n=1,2 > B2H6 +3PStC' KCOO0H (PS'CHc2---OB +3 d 116+ -n-1,2 o (Ps CsC-OB +3-0 3PS4C 2CH20H +B(OH3 Ce premier procédé utilise une solution commerciale molaire de B2H6 dans le tétrahydrofuranne et réagit à 0'C suivant les deux réactions ci-dessus à 95%. Ayant eu bien soin de tout sécher avant, on place 0,8 g (3,5 méq) de PS(CH2)1,2-COOH dans 35 mi de tétrahydrofuranne anhydre pendant 30 minutes; puis on met le ballon dans un bain à -5'C, -10'C, pendant 1 heure. A l'aide d'une seringue, on injecte ensuite lentement 18 ml d'un mélange B2H6/tétrahydrofuranne 1 M, touJours dans le bain à la même température. On laisse agiter pendant 1 heure; on porte le ballon à 35'C pendant 6 heures, puis à la température ambiante pendant une trentaine d'heures. On additionne enfin un mélange H2 O (50)/tétrahydrofuranne (50), ap IL ge SUBp HIVEN ap P 1 ap uoTqnIossTp.cd a.i[d.ad uop.nlos aun,p In g' 'laloT; aunp apTv,l 'I.Tnpo-z4uT uo '-anaq I %uvpuacd awISTp ap Il Oz suep uoisuadsns ua spi:.sa aqoQs uaTq auTsgi ap (bqui tg) S I III %a II sTnd 'I suoT4oga sel;ueATns 'HOOO- =U(Z HO)-ScI auTs$i eL ap aouesgid ua '( óaKITp>) jaq-9 I[q% a-XxoqXam ap 4a aaoq ap an.zonliTa% ap a2uviq.m un ans (HEI'2) uznTpos ap aan.zpÀXtocoq np uoT:ov avd "cn;Ts uT" auvioqTp np uOealad eI.%s-ee-pu 9pgooad puooas ao SZ 0o zq E &O-D,5-d)q- HOODHJSdE+ 9 R II o gt HO ZHO- I (H)>_-Sdi sasooo sap uo-mzcda se À HIODHu 4a ou4q U np fnea,l g ap oaAe aa;IT; uo 4a uoaîAua salnal ot,:.uvpuad N z_ 01 HOg suep sTo; sinaîsnId sTnd NI HOQX suep uoTsuadsns ua emu uo %a ai;Z;T uo! sannaq gl %uvpuad (auuvxop 'K[ IOH) uonlo s aun suep iae4Sg aq;nsue ass; iv uo 'nea, @p oe DaA % Iu; uo 89S6L9Z 2 6 1 9 5 68 diglyme (4,7 méq). On inJecte ensuite lentement une solution de [0,75 ml (BF3, (C2H5)-O>, 1,25 ml diglyme]. Puis on additionne, lentement, à l'aide d'une ampoule, un mélange H20 (50) /diglyme (50>. On verse le tout dans 200 ml d'eau. On filtre avec de l'eau, du dioxanne, du méthanol et CH2C12. Exemple G Préparation du poly(para N-hydroxyéthylsulfamide- styrène) et du poly(para N-hydroxypropylsulfamide styrène) PS-Sc CL H2N(C H}OH > PS-S02-NHCH2 H + HCt 02 fl:n2j3 fl:2,3 On place 5,1 g (20 méq) de PS-SO Cl dans 50 ml de CH2C 2, sous agitation, pendant 1 heure. Dn aJoute 28 ml (450 mrq) d'éthanolamine ou 35 ml de propanolamine (450 méq) portés à 50'C, pendant 24 heures. On filtre ensuite avec CH2C12 et avec de l'eau. On agite pendant 2 heures le produit obtenu dans un mélange HCl 2N (1/4) /H20 (3/4); on filtre et on agite ensuite dans l'eau, le tétrahydro- furanne et CH 2Cl2. Les rendements sont supérieurs à 90%. Exemple H Préparation du poly(para N-dihydroxy-1,2 propyl- sulfamidestyrène> PS-S02CL - H2N-CH-CHOHH2OH > PS-S2H CF-CHOH-C2O +HCl On place 4 g (16 méq) de PS-SO2Cl + 10 ml de CH2C12 + 8 ml (130 mêq) d'amino-3 propanediol-1,2 à 26 1 9568 température ambiante, pendant 1 heure, puis à 50-C, sous agitation pendant 5 heures; et, enfin, à la température ambiante, pendant 2 heures; puis, on filtre avec CH2C12 et de l'eau; on agite pendant 2 heures dans HCl (0,3 N), on filtre avec de l'eau et CH2Cl2. 2 2' Exemple 1 Phosphorylation des résines hydroxylées O Io 2 N CH22 -OH.PS-SO2-NH-(CH2) -O-P-OH OH O0 PS-(C H2)- OH-, PS-(C H2) -O-P-OH 112,3 1,2,3 1 OH A - Phosphorylation à l'aide du dichlorophosphate de méthyle L'action du dichlorophosphate de méthyle sur la pyridine, puis de leur action sur un alcool a été décrite par J. SMURT et J. CATLIN dans "Tetrahedron Letters", n' 58, pages 5081-82 (1970), puis par M. RUBINSTEIN et A. PATCHORNIK, dans "Tetrahedron Letters", vol. 31, pages 2107- 2110 (1975). Dans une première étape, il se forme le sel de N-mthylpyridinium dichlorophosphate qui réagit ensuite sur un alcool. O4 O [ % 3] [ BitO +ZOH -oz iiOH OH Cette méthode a été effectuée sur les deux familles de résines indiquées en tête de cet exemple: On place, & 0'C, 50 ml de pyridine anhydre et 5 ml (50 méq) de dichlorophosphate de méthyle, pendant 1/2 heure. On verse 2 g (environ 10 méq) de la résine hydroxylée choisie, sous agitation, à la température ambiante, pendant 24 heures. On verse ensuite le tout dans 400 ml de CO HNa à 10%, sous agitation, pendant 4 heures; on filtre; on met en suspension le produit obtenu dans HCl (iN) puis on filtre et on agite dans l'eau, le dioxanne et CH2Cl2. B - Phosphorylation à l'aide de l'acide phosphoreux. Le principe de cette méthode s'appuie sur l'article de H. TAKAKU; Y. SHIXADA; H. OKA, dans "Chem. Pharm. Bull", vol. 21, n' 8, pages 1844-45 (1973)", suivant lequel on utilise l'acide phosphoreux comme agent de phosphorylation. La réaction peut être décomposées en deux stades: tout d'abord l'acide phosphoreux H3PO3 sur le N-méthylimidazole en présence de chlorure mercurique HgCl2, forme le sel de N-phosphoryl-N'-méthylimidazole, qui agit ensuite sur un alcool pour former un phosphate substitué, c'est-à-dire: R HO-P-H-+ N-CH3 >HO -Ne --H3>.HO-F-Z , V 3 gu OH Hq() 8 ZOH OH Hq (o) Cette méthode a été effectuée sur les deux familles de résines indiquées en tête de cet exemple. On place 15 ml de N-méthylimidazole (180 méq), 4,1 g (15 méq) d'HgCl2 et 1,5 g (15 méq) d'H3PO3 dans un ballon à 80'C, pendant 2 heures. On aJoute 2 g (environ méq) de résine, toujours à 80'C, pendant 24 heures. On filtre à l'eau et on verse le tout dans 400 ml de bicarbonate de soude saturé; on filtre avec de l'eau, du dioxanne, du méthanol et CH2Cl2 C Phosphorylation à l'aide de l'oxychlorure de phosphore. La réaction peut être représentée ainsi: Cl OP- OH O=P-O-Z I OH 1 g (5 méq) de résine hydroxylée est mélangé à 10 ml de PO-(OCH3)3 et à 1,5 g (10 méq) de POCl3; le tout est porté à 60'C, pendant 24 heures, puis versé dans l'eau et on lave avec le tétrahydrofuranne, le méthanol et CH2Cl2 On a obtenu, en particulier, la transformation du poly(hydroxyéthyl styrène) en son composé phosphorylé dans OH I lequel les groupes désirés PS-(CH2)2-O-P-OH représentent 78% Il de la masse de la résine. Exemple 2 A - Fixation de l'uracile sur le polystyrène chlorométhylê NN PS-CH2C It iH -N; =O HCl + PS-CH N 2- On place 2 g 2 heures. On filtre avec de l'eau, des mélanges H2 0/tétra- hydrofuranne de plus en plus concentrés en tétrahydro- furanne, du méthanol et CH2C12. Le taux de substitution du polystyrène est de 59%. B - Fixation d'autres bases sur le polystyrène chloromthylé. * De la même façon que précédemment, on a fixé, sur la résine PS-CH2Cl, dans le diméthylsulfoxyde et en présence de carbonate de potassium, la cytosine, la thymine, l'adénine et la guanine, pour obtenir les résines modifiées respectives suivantes, les taux de substitution du poly- styrène étant respectivement 53, 39, 74 et 89%: NH2 o N j thymine HNOCH3 o- cytosine o0 Ni I_ N PS-C H2 PS-CH2 NH2 N HN Hc CH Adénine H uanine PS-C H2 PS-CH2 Egalement, on a fixé l'adénine sur la résine PS-CH2Cl en conduisant la réaction dans l'orthodichloro- benzène, en présence de potasse. Exemple 3 OH Fixation de bases sur la résine PS-(CH.) -O-P-OH O On prépare des bases N-hydroxyéthylées en faisant réagir la base choisie avec le carbonate d'éthylène en pré- sence du catalyseur transfert de phase [ (C4H9)4N+, so4f] 24 2619568 dans le N,N-dimethylformamide anhydre. Il est facile d'obtenlr les produits purs par cristallisation. Il est possible de condenser ces bases N-hydroxy- OH *I éthylées avec la résine PS-(CH2)2-O-P-OH à l'aide de la O N,N'dicyclohexylcarbodiimide (D.C.C.I.) dans le N,N-diméthylformamide. Le mécanisme d'action de la D.C.C.I. est le suivant: OH OH NH R-P-OH + -N=C=N - R- -O-C + R' OH - !5 IO N OH R-P-O-R'+ HN-C-NH- 0 o La N,N'-dicyclohexylurée est infiniment soluble dans le N,N-diméthylformamide et l'éthanol à chaud. * Lorqu'on utilise l'adénine comme base, le schéma réactionnel est le suivant: NH2N N2 N /\ 1l / "N â2 -c HH N hiC + IH2 I -.-.P. HC Ii I HHC C_....H -- ydhCyeH 0 2G _2G. OH (N-9, hydroxyét hyl1adni ne) OH I PS -(cCH2iyO-P-OH + (N-9, hydroxyéthyladénine) I o rH2 zN C, C o0 MC Il 1 P \\ CH li o On a réalisé la condensation avec i méq/g de substitution "hydroxyéthylphosphate hydroxyéthyladénine" en masse). * Lorsque l'on utilise la cytosine comme base, on commence par préparer la N,l-hydroxyéthylcytosine de formule: 1 112 N cH I II 0 NCH On réalise la condensation de la N,l-hydroxyéthyl- OH I cytosine sur PS- tion "(hydroxyéthylphosphate hydroxyéthylcytosine)" sur le polystyrène, tout en laissant 1,3 méq/g de substitution ((hydroxyéthylphosphate>> (soit 30% en masse) Exemple 4 Fixation de bases hydroxyéthylphosphate sur le poly(parahydroxyéthylstyrène) OH I PS- OH PS-(CH) -O-P-O-(CH) -base 2 2 2 2 Dans le cas o la base est l'adénine, on commence par préparer l'adénine N-9,hydroxyéthyl phosphate de formule: N H!. I 0 N/'N OH c-_ cH2- O-P- OH A cet effet, on réalise la phosphorylation, avec POC13, de la N,9-hydroxyéthyladénine, puis on condense le produit obtenu avec le poly(hydroxyéthylstyrane) à l'aide de la N,N'-dicyclohexylcarbodiimide, comme décrit à l'Exemple 3. On a ainsi obtenu 1,03 méq/g de substitution (analyse identique avec P ou N), soit 40% en masse de la molécule contenant le phosphodiester et l'adénine, le reste de la résine étant constitué par du polystyrène substitué par des groupes hydroxyéthyle et/ou hydroxyméthyle, et par du polystyrène non substitué. Exemple 5 Préparation de la résine: NHz N À,\/N N HtN/\N5 OH o / PS-(CH2)-O-P-O-CH-CH CH Z l21 lo CH-CH OC \OH Il A: Fixation d'adénosine sur la résine PS- de D.M.F. On aJoute alors 1,3 g d'adénosine et 10 ml d'eau. Le ballon est porté à 105'C pendant 2 heures et demi. Après 0 2 évaporations sous vide et remise en suspension dans du D.N.F. anhydre, on aJoute 7 g de DCCI avec 50 ml de D.K.F. anhydre et on laisse l'ensemble 18 heures à 110'C. La résine est successivement lavée avec du D.M.F. et de l'éthanol chaud. La condensation de l'adénosine donne 0,34 méq/g de substitution (soit 16, 3%) et 2,54 méq/g de poly(hydroxy éthyl phosphate)styrène (58%). B: Fixation d'adénosine monophosphate sur PS-(CH2)2-OH On procède de la méme façon qu'à l'Exemple 5 A, en mettant en contact 0,4 g de résine (2,4 méq) avec 0,9 g d'adénosine monopnosphate (2,6 méq). On obtient ainsi 8% de substitution avec ainsi la même proportion de groupements phosphate, de sucre et de base. Le reste de la résine est constitué de motifs hydroxyle. TABLEAU III - RESULTATS DE MICROANALYSE I de subsI Exemrples Résines % C % H % 0 % N % Cl % Na % S % P mq/g Xut PS 91,8 7,5 0,4 A PS-CH 2Cl 72 6,1 20,8 5,9 90 C PS-CH 2CH 79,4 7 10 0,5 6,3 84 D (lère étape) PS-al2-C=-N 82,2 6,5 2 8,1 / COOC2H5 E (lère étape) PS-CH -CH 73 17,1 0,4 2,6 74 COC2H5 O E (2nme étape) PS-(CH2)2-CO0H 74,1 6,9 16,4 5,1 89 G PS-SO2-NH-(CH2)2-OH 50 5,8 25 5,21 0,5 13,1 3,7 84 G PS-SO2-NHl-(CH2)370H 53 6,3 24 4,9 F2 PS-(CH2)3_-CH 80,2 7,7 8,3 0,3 5,2 84 I 1 PS-SO2-NH-(CH2)2-0-P-CH39,5 5 27,8 4,7 0,6 10,1 7,8 2,5 77 CH %O vi Co TABLEAU III (suite) - RESULTATS DE MICROANALYSE Exerrples Résines % C %H % O % N % Cl P m q/gsubs- titution 2 PS-Co2--guanine 58,3 4,8 8,2 23,2 5,9 3,3 89 2 PS-/H2-uracile 71,8 5,7 13,1 7,2 1,9 2,6 59 2 PS-CH2-thymine 74,4 6,3 7 4,3 1,6 39 2 PSCH2-cytosine 70,4 6,4 8,8 9,8 3,4 2,3 53 2 PS-CH2-adnine 63,7 5,2 20,7 5, 2 3 74 Il 1 PS-C2-0--o- 66,3 6,9 16 2,4 0,7 4,3 1,4 30 î 1 PS-(CH2)2-O-P-CH 53,8 6,5 24 2,6 10,5 3,4 78 CH O 1 P- ( O 61,9 6,6 19,2 7,9 2,55 62 %r ce TABLEAU III (suite) - RESULTATS DE MICROANALYSE Eoerrples Résines % C % H %O % N % C1 P réq/g de substi- tution o O " II 4 PS-(C 2)2-O-P-O-(CH2)2-adeénine 58,2 7,2 18,3 7 0,3 6 1,0 39 (et CH 20 en PO4) o O I 4 PS-(CH2)2-O-P-O-(CH2)2-cytosine 59,3 6,9 19,6 3,9 0,4 6,8 0,93 34 (et 011 w OH 29 en PO4) o A 56,7 7 -20,6 2,5 1,2 7,9 0,34 16 (et 1 Oacdnine._________ _ 58 en PO4) PS- (C2) 2 -OP--CH2-r \l '- (CH 2 2-0' j j4_2 B 76,1 7,5 12 11,8 0,48 0,48 0,17 8 On a reporté ici les % en masse de sites substitués par la fonction désirée ro oc o -n co EXEXPLE 6: Fixation de la choline sur le poly éthyl styrène) o I + PS-CH2-CH2-O0-P-O-CH2-CH2-N- (CH3) II Comme il est décrit par H.J. LUCUS, "J. Am. Chem. Soc, 72, p 5491 (1950)>, la réaction de PCl3 avec l'éthylène glycol forme le 2-chloro-2oxo-l,3-2-dioxaphospholane: 0 0 CH2 O I P CH 2 -.ci O Cl Ce composé est ensuite condensé à -10'C dans le dichloromethane avec un polystyrène hydroxyéthyl. On obtient ainsi le motif: I / CH2 PS- 2-O-e 2 Le cycle est alors ouvert avec une solution à 20% de triméthylamine dans le T.H.F. EXEXPLE 7: Dans cet Exemple, on dccrira la courbe de titration qui est représentée sur la figure 1 et qui est obtenue avec o I une résine PS-(CH2)3-O-P-OH (substitution en groupements OH phosphate: 60%), obtenue de la même manière qu'aux Exemples F2 (pour la fixation du bras espaceur) et 1 (pour la phosphorylation). Le produit titrant est la soude. On constate que la zone de pH qui définit les conditions optimales d'utilisation de cette résine comme support d'échange d'ions est centrée autour de pH 7. Dans ces conditions, une telle résine favorise la séparation de protéines sans risque de dénaturation de ces dernières. EXEXPLE 8: Cet Exemple illustre l'application de la résine de 1î l'Exemple 7 comme support chromatographique. Les figures 2 à 5 sont des chromatogrammes obtenus en utilisant la résine de l'Exemple 7 dans une colonne en acier inoxydable de 250 x 4 mm, avec un système de chromatographie liquide haute performance. L'élution des protéines se fait soit en tampon citrate 0,16 M pH = 5, soit en tampon Tris 0,05 M pH = 7,6 et cela à un débit de 0,1 ou 0,2 ml/mn. Cette résine a permis, en particulier, la séparation par chromatographie liquide haute performance d'un mélange constitué de Myoglobine et de Cytochrome C, comme le montre la figure 6. Légendes des figures: 2: Cytochrome C en tampon citrate 0,16 M, pH = 5, débit: 0,2 ml/mn, temps d'élution: 7,96 mn. 3: Cytochrome C en tampon Tris 0,05 M, NaCl de 0 à 2M, pH = 7,6, débit: 0,1 ml/mn, temps d'élution: 68,38 mn. 4: Ribonucléase en tampon citrate 0,16 M, pH = 5, débit: 0,2 ml/mn, temps d'élution: 8,53 mn. : Albumine en tampon citrate 0,16 M, NaCl 2 M, pH = 5, débit: 0,1 ml/mn, temps d'élutior.: 18,5 mn. 6: Cytochrome C + Myoglobine en tampon Tris 0,05 M, pH = 7,6, débit: 0,1 ml/mn, NaCl de 0 à 2 M temps d'élution: Myoglobine = 14,12 mn; Cytochrome C = 71,06 mn. EXEMPLE 9: Cet Exemple illustrs l'utilisation, comme immnunoadsorbant spécifique, de la résine: O PS-(CH2)2-O-P-OH (substitution en groupements I OH phosphate: 70%), obtenue de la même manière qu'aux Exemples F, (pour la fixation du bras espaceur) et 1 (pour la phosphorylation). La figure 7 montre l'adsorption d'anticoagulants circulants (A.C.C.) d'un sérum lupique sur une résine porteuse de groupes phosphate. Sur la courbe sont exprims, en ordonnées, le temps de Céphaline - Kaolin (T.C.K.) en secondes et, en abscisses, la dilution du sérum dans du tampon. L'allongement du temps de coagulation dû aux A.C.C. n'existe plus si le sérum lupique a été au préalable incubé avec la résine. La courbe est alors identique à celle d'un sérum humain normal. Sur la figure ?: A: Sérum lupique : Sérum lupique incubé avec la résine de l'invention +: Sérum humain normal. De plus, le taux d'anticorps anti-ADN de ce sérum mesuré par le test de FARR, n'a pasvarié indiquant que l'adsorption des A.C.C. sur cette résine est hautement spécifique. Exemple 10: Cet exemple illustre l'utilisation, comme immunoadsorbant spécifique, de la résine: Il PS-(CH2)2-O-P-OH (substitution en groupements 1 OH phosphate: 30%), obtenue de la même manière qu'a l'Exemple 9. La figure 8 montre l'isotherme d'adsorption d'IgG anti-ADN d'un sérum lupique sur une résine porteuse de groupements phosphate. Sur les courbes, sont exprimées, en ordonnées, les concentrations molaires des IgG antiADN adsorbées sur la résine à l'équilibre, et, en abscisses, la concentration des mêmes IgG dans le sérum lupique pour différentes quantités de polymère mises en suspension dans le sérum. Sur la figure 8: *: 322 g de polymère par 1 de sérum +: 215 g *: 107 g ". *: 54 g ". Exemple 11: Cet exemple illustre l'utilisation, comme phase stationnaire en chromatographie d'affinité, de la résine: on O Il PS-(CH2 2) -O-P-OH (substitution en groupements OH phosphate: 64%), obtenue de la même manière qu'à l'Exemple 9, pour la purification d'un facteur de RNAPolymérase B requis pour la transcription de l'ADN. Dans cet exemple, un extrait cellulaire contenant le facteur de transcription UEF du promoteur majeur tardif de l'adénovirus-2 et d'autres polymères bioiogiques en solution dans un tampon Tris-HCl 50 mX à pH 7,9, 50 mM KCl et déposé à 4'C sur une colonne chromatographique constituée de 300 pl de la résine préalablement équilibrée dans le mnme tampon. Une élution effectuée avec une solution tampon Tris-HCl 50 mM & pH 7,9, KCl 1 M, permet d'obtenir le facteur UEF à un haut degré de pureté. La caractéris.ation du facteur est effectuée par deux méthodes: électrophorése en gel de polyacrylamide qui révèle la présence du facteur UEF purifié; À mise en évidence de l'activité biologique du facteur UEF selon la méthode décrite par V. Moncollin et Coll., Embo Journal, Vol. 5, page 2577-2584 (1986). Cet exemple démontre que la résine fixe spécifiquement le facteur UEF à l'exclusion des autres constituants du complexe de transcription pourtant présents dans l'extrait cellulaire initial, et illustre les possibilités d'utilisation de la résine en chromatographie d'affinité pour la purification de polymères d'origine biologique. REVENDICATIONS 1 - Polymère dérivé d'un polymère ou copolymère réticulé du styrène, caractérisé par le fait que la chaîne du polymère ou copolymère est substituée par un ou plusieurs groupes, identiques ou différents, appartenant aux catégories suivantes: -Z-A1; -Z-A; -Z-A 1-Z' -A2; -Z-A -Z-A1-A3-A2; -Z-A1-A4 o - Z représente une chaîne d'espacement; - Z' représente une chaîne de liaison; - A1 représente un reste phosphate; - A2 représente le reste d'une base purique ou d'une base pyrimidique; - A3 représente un reste de sucre; et - A4 représente un reste d'une molécule intervenant dans la structure polaire des divers phospholipides. 2 - Polymère selon la revendication l, caractérisé par le fait que Z est choisi parmi les restes: * -(CH2)n-, n valant de 1 & 6, éventuellement rendu hydrophile par remplacement d'au moins un H par un OH; ou * -S02-NH(CH2)m-, m valant de 1 & 6, le reste -(CH2) étant éventuellement rendu hydrophile par remplacement d'au moins un H par un OH. 3 - Polymère selon la revendication 2, caractérisé :30 par le fait que Z est choisi parmi les restes -CH2-; -(CH2)2-; -(CH2)3-; - S32-NH-(CH22u3-; -SO-NH-CHOH-; 2 2 2 3 2 2 2au3 et -SO2-NH-CH2-CHOH-CHOH-. 4 - Polymère selon l'une des revendications 1 à 3, caractérisé par le fait que Z' représente -(CH>)p-, p valant de 1 à 6, ce reste étant éventuellement rendu hydrophile par remplacement d'au moins un H par un OH. - Polymère selon l'une des revendications 1 a 4, caractérisé par le fait que A2 représente le reste d'une base purique choisie parmi l'adénine et la guanine, ou le reste d'une base pyrimidique choisie parmi la cytosine, la thymine et l'uracile. 6 - Polymère selon l'une des revendications 1 a 5, caractérisé par le fait que A3 représente le reste d'un pentose, et, notamment, du D-ribose ou du 2-désoxy-D-ribose, relié par son groupement CH2- au reste phosphate 7 - Polymère selon l'une des revendications 1 à 6. caractérisé par le fait que A4 représente une molécule estérifiée de choline, d'éthanolamine, de sérine, de glycérol ou d'inositol. 8 - Polymère selon l'une des revendications 1 à 7. caractérisé par le fait que la substitution de la chaîne du polystyrène s'effectue en position para du noyau phényle. 9 - Polymère selon l'une des revendications 1 a 8, caractérisé par le fait que chaque groupe phényle non impliqué dans la réticulation peut porter un substituant tel que défini à la revendication 1. - Polymère selon l'une des revendications 1 à 9, caractérisé par le fait qu'il a été réticulé avec au plus % en poids d'au moins un monomre de réticulation, comme le divinylbenzène. 11il - Polymère selon l'une des revendications 1 à , caractérisé par le fait qu'il résulte de la modification d'un polystyrène de base se présentant sous la forme de billes d'une dimension voisine de 50 pm. 12 - Procédé de préparation du polymère dérivé du (co)polymère réticulé du styrène, tel que défini à l'une des revendications 1 à 11, caractérisé par le fait qu'il comporte la fixation sur le polystyrène réticulé de base, en une ou plusieurs étapes, d'un reste -Z-X (o X représente un halogène et Z est tel que défini à la revendication 1) ou d'un reste -Z-OH, puis (I) dans le cas o l'on a fixé un reste -Z-X, la réaction du polystyrène ainsi modifié avec une base purique ou pyrimidique, afin de former le substituant -Z-A2; (II) dans le cas o l'on a fixé un reste -Z-OH, (IIa) la phosphorylation du polystyrène ainsi modifié, afin de former le substituant -Z-A1; puis lorsque l'on souhaite former le substituant -Z-A1- Z'-A2,.la réaction du reste -Z-A avec une base purique modifiée, schématisée par la formule: N N N Z'-OH ou avec une base pyrimidique modifiée schématisée par la formule: N QCX (II) N Z' -OH * lorque l'on souhaite former le substituant -Z-A1-A3-A2, la réaction du reste -Z-A1 avec un nucléoside de formule -A3-A2, résultant de la liaison de l'azote 9 d'une base purique ou de l'azote 1 d'une base pyrimidique avec le carbone 1' d'un sucre; * lorsque l'on souhaite former le substituant -Z-A1-A4, la réaction du groupement -Z-A1 avec une molécule intervenant dans la structure polaire des divers phospholipides; ou bien (IIb) lorsque l'on souhaite former directement le substituant -Z-A1-A3-A2, la réaction du polystyrène ainsi modifié avec un nucléoside monophosphate de formule A1-A3-A2; (IIc) lorsque l'on souhaite former le substituant -Z-A1-Z'-A2, la réaction du polystyrène ainsi modifié avec une base purique transformée, schématisée par la formule: I NN WN L N X ( I Z' -A et qui est obtenue par phosphorylation de la base purique modifiée de formule (I), ou avec une base pyrimidique transformée, schématisée par la formule: N Q0 (I(a) N ) Z'-A1 et qui est obtenue par la phosphorylation de la base pyrimidique modifiée de formule (II); ou bien (IId) lorsque l'on souhaite former le substituant -Z-A1-A4, la réaction du polystyrène ainsi modifie avec un reste A4 phosphorylé. 13 - Procédé selon la revendication 12, caractérisé par le fait qu'on commence par fixer sur le polystyrène de départ le radical -CH2-X en faisant réagir ledit polystyrène avec un halométhyl méthyl éther en présence de chlorure stannique. 14 - Frocédé selon la revendication 12, caractérisé par le fait qu'on commence par fixer sur le polystyrène de départ le radical -CH2-OH, en faisant réagir, en présence d'un catalyseur transfert de phase, la résine obtenue par le procédé selon la revendication 13 avec- l'acétate de potassium, puis en hydrolysant l'acétate obtenu par la potasse concentrée. - Procédé selon la revendication 12, caractérisé par le fait qu'on commence par fixer sur le polystyrène de départ, le radical -CH2-CH -OH, p 2 2 * en faisant réagir la résine obtenue par le procédé selon la revendication 13 avec le cyanure de sodium, en présence d'un catalyseur transfert de phase, pour obtenir le substituant -CH2-C-N; puis en faisant réagir le polystyrène ainsi modifié avec l'acide chlorhydrique en milieu alcoolique, afin d'obtenir le substituant -CH2-COOH; puis en réduisant par le diborane afin d'obtenir le substituant -CH 2-CH 2-OH. 2O 16 - Procédé selon la revendication 12, caractérisé par le fait qu'on commence par fixer sur le polystyrène de départ, le radical -CH2-CH2-CH 2OH, * en condensant un malonate d'alkyle sur la résine obtenue par le procédé selon la revendication 13, afin d'obtenir le substituant: COOR - CH2-CH \ 30.COOR (R étant un reste alkyle); * puis, en hydrolysant la fonction diester ainsi obtenue pour donner une fonction diacide à laquelle on fait subir une décarboxylation en milieu acide, afin d'obtenir le substituant -CH2CH2-COOH; 2 2 * puis en réduisant par le diborane afin d'obtenir le substituant -CH2-CH2-CH 2-OH 26 1 9568 17 - Procédé selon la revendication 12, caractérisé par le fait qu'on commence par fixer sur le polystyrène de départ, le radical -S02-NH(CH2ou -OH, en faisant agir l'acide chlorosulfonique sur le polystyrène de départ, de façon à obtenir le substituant -SO2Cl, * puis, en faisant agir l'éthanolamine ou la propanolamine sur le substituant précité. 18 - Procédé selon la revendication 12, caractérisé par le fait qu'on commence par fixer sur le polystyrène de départ, le radical -S02-NH-CH2CHOH-CH2OH, À en faisant réagir l'acide chlorosulfonique sur le polystyrène de départ, de façon d'obtenir le substituant -SO2Cl; puis, en faisant agir l'amino-3 propanediol-l,2 sur le substituant précité. 19 - Procédé selon l'une des revendications 12 a 17, caractérisé par le fait qu'on réalise la phosphorylation à l'aide du dichlorophosphate de méthyle, de l'acide phosphoreux, ou de l'oxychlorure de phosphore, et notamment à l'aide de l'oxychlorure de phosphore. - Procédé selon l'une des revendications 12 à 19, caractérisé par le fait qu'on prépare les bases modifiees des formules (I) ou (II) dans lesquelles Z' = -CH2-CH2- en faisant réagir ladite base avec le carbonate d'éthylène en présence d'un catalyseur transfert de phase. 21 - Procédé selon l'une des revendications 12 à , caractérisé par le fait qu'on réalise la réaction du reste -Z-A sur les bases modifiées des formules (I) ou 1 (II) à l'aide de la N,N'-dicyclohexylcarbodiimide. 22 - Procédé selon l'une des revendications 12 à , caractérisé par le fait qu'on prépare une base modifiée de formule (Ia) ou (IIa) en phosphorylant avec POCl3 la base correspondante de formule (I) ou (II), puis on condense ladite base de formule (Ia) ou (IIa) sur le substituant -Z-OH à l'aide de la N,N'-dicyclohexylcarbodiimide. Oú uoTST leO"O aIT alIUUOsuam$p-Tq.a -ououi asoJodo;oaJIounuL$ zsvzoqdoxoaIV 'vSIqE 'VIE anb sa; 'anbTSoIoTq asXIQuv,p aI;asJS sap suep; a anbT2oloTq au!Tc2o,p úInoTIO1 sap uoTi.oUTTlnd el anod '11 W I suoTeoTpuaAae sap aunI. Tu;p anb la, '@uKXs np InoDTra a KitXodoD no u; Xlod un,p eAçIp aQuiXlod np uo %'sTI;In - Le sapIo;Ionu sal %auv , 5 Na, Tl 's%.asqns aIuoo %uw;axpw 'sanbT:uewzua saxaldaoo ap no sauXzua-oo ap 'sEa'Xzua,p uoTlozT;and el inod 'DZ za úZ suo;%oTpuaai sap aun,j uolas uo;us.Ifl - Àsenbsdnl sepvl=w sl ied s5gddoIaAp sduooTuQ,p sadX% suaa;);;p sap saA;; %aos suo;;evndg sap lasTIa 0 anod ' uo soTpuanaI UT uolas uoT;eSTIITf - Ge y;5u,;4eJp eTqdelso:qeomo1qz ua waXeuuoT;4es asvqd armoo '11 e I suo eoTpuAa^l sap aun, uT;ap anb la; 'aueaK;s np aInoll; aacluodoo no auaXlOd un,p aAa;p apmXlod np uoTsTlI;a - bZ suo;,p eRuqoa,p aqde3oeusolqo ua aTeuuo$ss asvqd auooo '11 B I suoIeDopuaea sap vuni,, Tuj;@p anb a% 'aua%; s np inoji% ajauIodo no autuXod un,p >A;-zp a r X1od np uoT;%esj-4ç - ú E9