Brevet FR2622584A1 — publié le 19890505

La présente invention concerne de nouveaux dérivés des ginkgolides, ainsi qu'un procédé pour leur préparation. L'invention concerne des dérivés alcoxy-l et alcoxy-10 des ginkgolides A, B,C,J et M. Les groupes alcoxy préférés sont les groupes méthoxy et éthoxy. L'invention concerne également un procédé pour la préparation des dérivés alcoxy-l et alcoxy-10 des ginkgolides A,B,C,J, et M, le procédé consistant à faire réagir, dans un solvant non polaire, un ginkgolide A,B, C,J ou M avec un excès de diazoalcane et à séparer le mélange d'alcoxy-l ginkgolide et d'alcoxy-10 ginkgoilide qui en résulte. Dans le procédé selon l'invention, le ginkgolide sélectionné est dissout dans le dioxane, à la concentration lg pour 100 ml, et le diazoalcane choisi est dissout dans de l'éther éthylique. La solution contenant le diazoalcane est lentement ajoutée à celle contenant le ginkgolide, dans la proportion -de 10 équivalents de diazoalcane par équivalent de ginkgolide. Après avoir laissé le mélange réactionnel à température ambiante pendant 3 à 8 heures, on obtient un mélange d'alcoxy-l ginkgolide et d'alcoxy-10 ginkgolide. La séparation des deux produits, à partir du ginkgolide n'ayant pas réagi, peut être convenablement réalisée par évaporation des solvants et élution des résidus sur une colonne de gel de silice en utilisant un mélange d'acétate d'éthyle: hexane 1:1 en volume. La solution qui en résulte est évaporée et traitée au chloroforme qui dissout le dérivé alcoxy-10. On extrait le dit dérivé alcoxy-10 de la solution chloroformique et on traite le reste de la solution à l'éther éthylique pour -2- obtenir le dérivé alcoxy-l. Les compositions thérapeutiques à base d'alcoxy ginkgolides présentent un intérêt dans le traitement des maladies induites par le PAF-acéther, et l'invention concerne donc les compositions pharmaceutiques comprenant un dérivé alcoxy-l de ginkgolide A,B,C,J ou M ou un dérivé alcoxy-10 d'un des dits ginkgolides ou un mélange de deux ou plus des dits dérivés alcoxy-l et/ou alcoxy-10, associés avec tout diluant ou excipient pharmaceutiquement acceptable. L'invention sera mieux comprise grâce à la description des exemples qui suivent: Exemple 1 Méthoxy-l et méthoxy-10 ginkgolide B A une solution de ginkgolide B dans le dioxane (10g/l), on ajoute lentement 10 équivalents d'une solution de diazométhane dans l'éther éthylique. Après avoir laissé le mélange sous agitation, à température ambiante, pendant plusieurs heures, on le sépare selon le procédé de l'invention décrit ci-dessus. Le méthoxy-l ginkgolide B, dont la structure est confirmée par HPLC, est obtenu avec un rendement de 66,1 % et le méthoxy-10 ginkgolide B, avec un rendement de 24,4 %. On obtient les rendements suivants en utilisant le procédé décrit cidessus, mais avec des ginkgolides A et C: méthoxy-1 uéthoxy-10 Ginkgolide A 56,3 % 13,2 % Ginkgolide C 49,1 % 16,7 % -3- Exemple 2 Ethoxy-l et éthoxy-10 ginkgolide B La méthode décrite à l'Exemple 1 est utilisée, mais avec du diazoéthane au lieu du diazométhane (durée: 6 heures), l'éthoxy-l ginkgolide B est obtenu avec un rendement de 63,2 % et l'éthoxy-10 avec un rendement de ,7 %. On obtient les rendements suivants en utilisant le procédé décrit ci-dessus, mais avec les ginkgolides A et C: éthoxy-1 éthoxy-10 Ginkgolide A 72,8 % 20,1 % Ginkgolide C 59,2 % 30,4 % TOXICITE La toxicité des composés selon l'invention a été testée sur des souris par voie orale. On n'a constaté aucun décès de souris en administrant la dose maximum administrable tant chez la souris que chez le rat. PHARMACOLOGIE L'intérêt pharmaceutique des composés selon l'invention a été mis en évidence par les expérimentations pharmaceutiques suivantes. -4- 1) - Inhibition de l'agrégation plaquettaire sur le lapin de NouvelleZélande L'expérimentation a été conduite sur des plaquettes à partir de plasma de lapin de Nouvelle-Zélande. Des échantillons de sang ont été prelevés par l'artère auriculaire et mis dans une solution de tampon citrate (3,8 %; pH 7,4); le sang a ensuite été centrifugé pendant mn à 1200 t/mn. L'échantillon testé a été préparé dans le DMSO, puis versé sur des plaquettes riches en plasma pendant 1 mn, et une dose de 2n5 nM de PAF a été ajoutée. La détermination est faite sur un appareil Cronolog Coultronics qui détermine le pourcentage de transmission correspondant à la valeur maximale du pic avant la désagré- gation. Le pourcentage de variation de l'inhibition est apprécié par le pourcentage de transmission calculé (témoin: DMSO pur). Cette méthode est décrite en détail dans LABORATORY INVESTIGATIONS, Vol. 41, No. 3, p. 275, 1979, JEAN-PIERRE CAZENAVE, Dr. MED., JACQUES BENVENISTE, Dr. MED., AND J. FRASER MUSTARD, M. D., "Aggregation of Rabbits Platelets Reaction and the Arachidonate Pathway and inhibited by Membrane-Active Drugs". Les résultats démontrent que les composés inhibent l'agrégation induite par 2,5 nM de PAF. Cinq tests réalisés sur des lots de chacun des cinq lapins ont permis de calculer la CI,0 des divers composés en utilisant la méthode de régression linéaire. On a trouvé les valeurs suivante pour CI50 sur les plaquettes: 2622'84 - 5 - Type de Ginkgolide et -OCH3 -OCH position de mole/1 mole/1 substitution B -1 6,6 10-7 1,1 10-6 B -10 2,9 10-7 7,2 10-6 C -1 4,2 10-6 8,5 10-6 C -10 3,0 10-6 9,3 10-6 A -1 4,6 10-6 8,7 i0-6 -4 A -10 1,3 10- 6,2 104 2) - Bronchoconstriction anaphylactique chez le cobaye passivement sensibilisé Sensibilisation passive hétérologue Des cobayes males de souche HARTLEY (400-500g) sont sensibilisés par une injection intraveineuse (IV) d'un immunsérum antiovalbumine de lapin (Cooper Biomédical, U.S.A.). Afin d'obtenir, 24 heures après, une réponse anaphylactique suffisante, les conditions suivantes d'utilisation de l'immunsérum ont été déterminées: injection IV dans le pénis du sérum dilué au demi, sous un volume de 0,05 ml/100 g. Mesure de la bronchoconstriction Les cobayes sont anesthésiés à l'uréthane (2 g/kg IP). Ils sont alors trachéotomisés et ventilés par une pompe respiratoire (Ugo Basile) sous un volume de lml/100 g à raison de 60 coups/mn. Un pneumothorax est pratiqué pour - 6 - abolir la respiration spontanée. La résistance initiale est gardée constante à la pression de 10 cm d'eau en accord avec la méthode de Konzett et Rossler et l'air en excès est mesuré avec un transmetteur à bronchospasme (Ugo Basile) couplé à un enregistreur "Gemini" (Ugo Basile). La veine jugulaire est cathétérisée pour les administrations intraveineuses de 0. 75 mg/kg (passif hétérologue d'ovalbumine). Les produits sont administrés par voie orale (PO), une heure avant la stimulation antigénique, sous la forme d'une suspension en eau gommée (dose: 25 mg/kg). Expression des résultats La bronchoconstriction induite par l'ovalbumine est exprimée en pourcentage de la bronchoconstriction maximale obtenue par clampage de la trachée. Les résultats sont reportés dans le tableau suivant: Type de Ginkgolide et -OCH3 -OC2H5 position de % % substitution B -1 - 49,7*** - 38,3 ** B -10 - 54,9*** - 36,2 ** C -1 - 40,1 ** - 39,8 ** C -10 - 30,6 * - 23,1 * A -1 - 32,0* - 15,1 NS A -10 - 25,2 * - 12,2 NS NS: Non Significatif À: Significatif À*: Très Significatif ***: Hautement Significatif- ?622584 -7- POSOLOGIE En thérapie humaine, les doses habituelles pour administration par voie orale sont de 0,5 g à 1 g par jour, en cachets ou gelules pendant un mois. -5 Par voie injectable, trois injections hebdomadaires de 0,05 à 0,2 g en solution isotonique, pendant un mois, sont recommandées. REVENDICATIONS 1) Alcoxy-l ou alcoxy-10 ginkgolides ou mélanges en contenant. 2) Un procédé de préparation des dérivés de ginkgolides selon la revendication 1 consistant à faire réagir une solution du ginkgolide choisi dans le dioxane avec une solution du diazoalcane approprié en excès dans l'éther éthylique, à température ambiante, pendant une à dix heures.