Brevet FR2611743A1 — publié le 19880909

La présente invention concerne des L-aminoacides tels qu'acide L-glutamique, L-lysine, L-glutamine, L-arginine, L-phénylalanine, L-thréonine, L-isoleucine, L-histidine, L-valine, L-sérine, L-ornithine, L-citrulline, L-tyrosine, L-tryptophane, L-leucine, etc. et l'acide 5'-inosinique qui ont été largement utilisés pour-les assaisonnements, additifs alimentaires, médicaments, etc. Les L-aminoacides tels qu'acide L-glutamique, L-lysine, L-glutamine, L-arginine, L-phénylalanine, L-threonine, L-isoleucine, L-histidine, L-valine, L-sérine, L-ornithine, Lcitrulline, L-tyrosine, L-tryptophane, L-leucine, etc. et l'acide 5'-inosinique ont été produits jusqu'a présent à l'échelle industrielle par fermentation en utilisant des micro-organismes appartenant au genre Brevibacterium, au genre Corynebacterium, au genre Bacillus ou au genre Escherichia. Le problème à résoudre par la présente invention est de mettre au point un procédé pour la production de L-aminoacides ou d'acide 5'-inosinique par fermentation à l'échelle industrielle avec de faibles coûts de production. A la suite de recherches poussées en vue d'améliorer le rendement en L-aminoacides ci-dessus ou en acide 5'-inosinique par un procédé de fermentation, la demanderesse a trouvé que le rendement en L-aminoacides ou acide nucléique désirés peut être nettement amélioré par fermentation de milieux additionnés d'une quantité définie d'au moins une substance choisie parmi la N-méthylglycine (ci-après dénommée MG), la N,N-diméthylglycine (ci-après DMG), la N,N,N-triméthylglycine (ci-après TMG) et la choline ou hydroxyde de (ss-hydroxyéthyl)-triméthylammonium (ci-après HETMA). Afin de mettre au point un procédé pour la production industrielle à faible coût de L-aminoacides ou d'acide 5'-inosinique, la présente invention a été réalisée sur la base de la découverte ci-dessus. Autrement dit, la présente invention concerne un procédé pour La production d'un L-aminoacide ou d'acide 5'-inosinique qui consiste à cultiver une bactérie productrice de L-aminoacidesou une bactérie productrice d'acide inosinique dans un milieu contenant au moins une substance choisie parmi la MG, la DMG, la TMG et l'HETMA pour produire un L-aminoacide ou l'acide 5'-inosinique et à récolter Le L-aminoacide ou l'acide 5'-inosinique. On ne connaissait pas la découverte que par incorporation de MG, de DMG, de TMG ou de HETMA dans des milieux contenant des sucres et d'autres sources principales de carbone, on pouvait améliorer le rendement en L-aminoacides ou en acide 5'-inosinique dans un procédé par fermentation à L'échelle industrielle. On connaît simplement la production de L-sérine par fermentation à partir de la L-bétaine en utilisant le genre Pseudomonas ou le genre Escherichia (demande de brevet japonais non examinée publiée n" 49-134896) et la production de L-aminoacides par fermentation en utilisant la choline comme principale source de carbone,en utilisant le genre Pseudomonas. Cependant, dans la production de L-sérine par fermentation à partir de la bétaine, la bétaine est spécifiée comme un précurseur de la sérine à partir duquel on ne peut pas attendre facilement un rendement amélioré à l'échelle industrielle de la production de L-aminoacides par fermentation. En outre, également dans la production de L-aminoacides par fermentation en utilisant la choline comme principale source de carbone, la choline est utilisée seulement comme source principale de carbone et le rendement en L-aminoacides est limité à des traces. D'autre part, on sait que l'addition aux milieux en quantité définie de déchet ou résidu de Stephen,formé comme sousproduit dans les étapes de fabrication du sucre de betteraves, peut améliorer nettement le rendement en L-aminoacides ou en acide 5'-inosinique d'un procédé par fermentation (demande de brevet japonais non examinée publiée n" 59-216593). Cependant, on ne connaissait pas la découverte que même dans des milieux additionnés de résidu de Stephen, on pouvait améliorer nettement le rendement en L-aminoacides ou en acide 5'-inosinique d'un procédé par fermentation en y ajoutant encore de la MG, de la DMG, de la TMG ou de l'HETMA.La présente invention repose sur la nouvelle découverte qui permet une forte augmentation du rendement en L-aminoacides ou en acide 5'-inosinique d'un procédé par fermentation et qui est extrêmement intéressante également du point de vue industriel. Le terme"L-aminoacide"utilisédans la présente invention désigne des L-aminoacides tels qu'acide L-glutamique, L-lysine, L-glutamine, L-arginine, L-phénylalanine, L-thréonine, L-isoleucine, L-tyrosine, L-tryptophane et L-leucine, etc. et bien qu'il y ait d'autres L-aminoacides que ceux décrits ici, le procédé de la présente invention est applicable pour autant qu'ils soient produits par fermentation. Les bactéries productrices de L-aminoacides utilisées dans la présente invention peuvent être n'importe quels microorganismes pour autant qu'ils soient capables de produire les L-aminoacides mentionnés ci-dessus. En particulier, on peut utiliser les bactéries suivantes : 1. Bactéries productrices d'acide L-glutamique Brevibacterium divaricatum ATCC 14020 Brevibacterium flavum ATCC 14067 Brevibacterium lactofermentum ATCC 13869 Brevibacterium lactofermentum FERM-P 5012 (AJ 11360) Corynebacterium acetoacidophilum ATCC 13870 Corynebacterium glutamicum ATCC 13032 2. Bactéries productrices de L-lysine Brevibacterium fLavum FERM-P 1708 (AJ 3419) Corynebacterium glutamicum FERM-P 1709 (AJ 3420) Brevibacterium lactofermentum FERM-P 1712 (A 3425) Brevibacterium lactofermentum FERM-P 1711 (AJ 3424) Brevibacterium flavum ATCC 21475 Corynebacterium glutamicum ATCC 12416 Brevibacterium lactofermentum ATCC 11470 Corynebacterium acetoglutamicum ATCC 11472 (AJ 11094) 3.Bactéries productrices de L-glutamine : Brevibacterium flavum FERM-P 4272 Corynebacterium acetoacidophilum ATCC 13870 Microbacterium flavum FERM-BP 664 (AJ 3684) Brevibacterium flavum FERM-BP 662 (AJ 3409) Corynebacterium acetoglutamicum ATCC 13870 Corynebacterium glutamicum FERM-BP 663 (AJ 3682) 4. Bactéries productrices de L-arginine Brevibacterium flavum FERM-P 4948 Corynebacterium glutamicum FERM-P 7274 (AJ 12093) Brevibacterium flavum NRRL 12235 (AJ 11337) Corynebacterium acetoglutamicum NRRL 12239 (AJ 11342) 5.Bactéries productrices de L-phénylalanine : Brevibacterium lactofermentum FERM-P 5417 Brevibacterium flavum FERM-P 1916 (AJ 3439) Corynebacterium glutamicum ATCC 21670 Arthrobacter citreus ATCC 21422 Brevibacterium lactofermentum ATCC 21420 Corynebacterium acetoacidophilum ATCC 21421 Brevibacterium flavum NRRL 12269 (AJ 11476) Corynebacterium glutamicum ATCC 21670 6. Bactéries productrices de L-thréonine Escherichia coli FERM-P 4900 (AJ 11334) Corynebacterium glutamicum FERM-P 5835 (AJ 11654) Brevibacterium flavum FERM-P 4164 (AJ 11172) Brevibacterium lactofermentum FERM-P 4180 (AJ 11178) Brevibacterium flavum ATCC 21269 Corynebacterium acetoacidophilum ATCC 21270 7. Bactéries productrices de L-isoleucine Brevibacterium flavum FERM-P 3672 Brevibacterium lactofermentum FERM-P 4192 (AJ 11190) Corynebacterium glutamicum FERM-P 756 (AJ 12150) Corynebacterium glutamicum FERM-P 757 (AJ 12151) Corynebacterium glutamicum FERM-P 758 (AJ 12153) Brevibacterium flavum FERM-P 759 (AJ 12149) Brevibacterium flavum FERM-P 760 (AJ 12152) 8. Bactéries productrices de L-histidine Brevibacterium flavum FERM-P 2317 Brevibacterium lactofermentum FERM-P 1565 (AJ 3386) Corynebacterium glutamicum ATCC 14297 Brevibacterium lactofermentum ATCC 21086 Corynebacterium acetoacidophilum ATCC 21407 Brevitacterium flavum ATCC 21406 (AJ 3225) Bacillus subtilis FERM-BP 217 (AJ 11733) Arthrobacter citreus ATCC 21412 9.Bactéries productrices de L-valine : Brevibacterium lactofermentum FERM-P 1845 Brevibacterium flavum FERM-P 512 (AJ 3276) Corynebacterium lactofermentum FERM-P 1968 (AJ 3455) Escherichia coli NRRL 12285 (AJ 11470) 10. Bactéries productrices de L-sérine : Corynebacterium glycinophilum FERM-P 1687 Brevitacterium Lactofermentum FERM-P 1371 (AJ 3360) Pseudomonas megarubessens FERM-P 4532 (AJ 11262) 11. Bactéries productrices de L-çrinithine Brevibacterium lactofermentum FERM-P 5936 (AJ 11678) Corynebacterium glutamicum FERM-P 5644 (AJ 11589) Arthrobacter citreus ATCC 21040 Corynebacterium glutamicum ATCC 13232 12. Bactéries productrices de L-citrulline Corynebacterium glutamicum FERM-P 5643 (AJ 1158 & Brevibacterium flavum FERM-P 1645 (AJ 3408) 13.Bactéries productrices de L-tyrosine : Corynebacterium glutamicum FERM-P 5836 (AJ 11655) Brevibacterium flavum FERM-P 7914 (AJ 12180) Bacillus subtilis FERM-P 6758 (AJ 11968) 14. Bactéries productrices de L-tryptopha e Bacillus subtilis FERM-P 5286 (AJ 11483) Brevibacterium lactofermentum FERM-P 7127 (AJ 12044) Brevibacterium flavum FERM-P 2551 Corynebacterium glutamicum FERM-P 7128 (AJ 12052) Brevibacterium flavum ATCC 21427 Brevibacterium flavum FERM-BP 114 (AJ 11667) Bacillus subtilis FERM-BP 208 (AJ 11713) Brevibacterium flavum FERM-BP 475 (AJ 12022) Corynebacterium glutamicum FERM-BP 478 (AJ 12118) Bacillus subtilis FERM-BP 200 (AJ 11709) 15.Bactéries productrices de L-leucine Brevibacterium lactofermentum FERM-P 1769 (AJ 3427) Brevibacterium flavum FERM-P 420 (AJ 3226) Corynebacterium glutamicum FERM-P 1966 (AJ 3453) Brevibacterium flavum FERM-BP 755 (AJ 3686) Corynebacterium glutamicum FERM-BP 756 (AJ 12150) Corynebacterium glutamicum FERM-P 757 (AJ 12151) Brevibacterium flavum FERM-BP 759 (AJ 12149) 16. Bactéries productrices d'acide 5'-inosinique Corynebacterium SP FERM-P 4973 (AJ 11352) Corynebacterium equi FERM-P 4968 (AJ 11347) Corynebacterium equi FERM-P 4971 (AJ 11350) Corynebacterium equi FERM-P 5397 (AJ 11552) Corynebacterium equi FERM-P 6261 (AJ 11749) Corynebacterium equi FERM-P 6255 (AJ 11743) Brevibacterium ammoniagenes FERM-P 7949 (AJ 12192) Bacillus subtilis FERM-P 4120 (AJ 11158) Bacillus subtilis FERM-P 6441 (AJ 11820), etc. Comme milieux de base pour la production de L-aminoacides ou d'acide 5'-inosinique, on peut utiliser dans la présente invention des milieux classiques connus pour la production de L-aminoacides appropriés pour les bactéries productrices de Laminoacides et les milieux appropriés pour la production d'acide 5'-inosinique par fermentation. Plus particulièrement, on peut utiliser comme sources de carbone principales, les sucres tels que glucose, saccharose, fructose, maltose, mélasse de patates douces, mélasse finale de patates douces, mélasse de betteraves, mélasse finale de betteraves, sucre brut, liqueur d'amidon saccharifié, liqueur de cellulose saccharifiée, liqueur de pâte saccharifiée, etc. ; les acides gras tels qu'acide acétique, acide propionique, acide benzoique, etc. ; les acides organiques tels qu'acide pyruvique, acide citrique, acide succinique, acide fumarique, acide malique etc. ; les alcools tels qu'alcool éthylique, alcool butylique, etc. ; isolément ou en mélanges entre eux. En outre, on peut également utiliser les précurseurs des L-aminoacides désirés dans le cycle de biosynthèse, etc. Comme sources d'azote, on peut utiliser des sels d'ammonium tels que sulfate d'ammonium, chlorure d'ammonium, nitrate d'ammonium, acétate d'ammonium, etc. ; l'urée, l'ammoniac liquide, l'ammoniaque, en outre des mélanges d'aminoacides qui sont des composés azotés organiques, la liqueur de trempage de mais, l'hydrolysat acide de caséine, L'extrait de levure, l'hydrolysat de soja, la peptone, l'extrait de viande, etc. On peut utiliser comme sels inorganiques les phosphates, les sels de magnésium, les sels de calcium, les sels de potassium, les sels de sodium, les sels de fer, les sels de manganèse, les sels de zinc, les sels de cuivre et d'autres oligo-éléments métalliques si nécessaire. En outre, si nécessaire, on peut également utiliser des vitamines telles que biotine, thiamine, etc. Les conditions de culture dans la présente invention sont les mêmes que dans la production ordinaire d'aminoacides par fermentation. Bien que les conditions varient un peu selon les L-aminoacides ou la souche utilisée, la température de culture est de préférence de 20 à 40"C, en particulier de 28 à 37"C. En ce qui concerne le pH, on obtient de bons résultats lorsque le pH est réglé pour que le milieu soit neutre. La culture est mise en oeuvre en conditions aériennes, par exemple culture à l'air, culture avec agitation, culture mitée, etc. La durée de culture est en général de 20 à 7 jours meis la durée peut également être prolongée par culture continue, etc.Pour isoler chaque aminoacide de chaque solution de fermentation d'aminoacide, on peut utiliser le traitement par une résine échangeuse d'ions et d'autres techniques connues de récupération. La MG (CHJNHCH2COOH), la DMG ((CH3)2NCH2COOH), la TMG ((CH3)3N CH2COO ou (OH) (CH3)3N CH2COOH) et l'HETMA ((OH) (CH3)3 N+CH2CH2OH) et leurs sels sont accessibles non seulement comme réactifs, mais aussi comme produits industriels en grandes quantités à faibles coûts. La MG est connue sous le nombre de sarcosine et on la rencontre dans la nature dans la mousse de fleur ; la MG est préparée par synthèse par condensation de la méthylamine et de l'acide chloroacétique ou par synthèse de Strecker des aminoacides, etc. La DMG est obtenue par réaction de la diméthylamine. La TMG est connue sous le nom de bétaine de glycine et contenue en grandes quantités dans la betterave à sucre, les graines de coton, etc. et préparée par synthèse par réaction de l'acide chloroacétique avec la triméthylamine. L'HETMA est connue sous le nom de choline, contenue en grandes quantités dans les feuilles de radis, etc. et préparée par synthèse par réaction de la triméthylamine avec une solution aqueuse concentrée d'oxyde d'éthylène. Divers autres sels de ces substances existent dans le commerce ; par exemple; le sel de sodium de MG, les chlorhydrates de DMG et de TMG et le chlorure, l'hydrogénotartrate, le dihydrogénocitrate, le gluconate, etc. d'HETMA sont produits industriellement et facilement accessibles. La MG, la DMG, la TMG ou l'HETMA qui sont utilisés dans la présente invention peuvent être sous la forme de leurs sels ou peuvent être remplacés par des substances naturelles les contenant. Pour utiliser la MG, la DMG, la TMG ou l'HETMA dans la présente invention, on peut les incorporer, isolément ou en combinaison de deux ou plusieurs, dans le milieu de fermentation à une concentration de 0,01 à 5 %, de préférence de 0,05 à 2,0 %. Pour les incorporer dans le milieu de fermentation, on peut les ajouter préalablement au milieu de fermentation, puis soumettre à incubation ; ou bien encore, on peut les incorporer en une fois, en plusieurs portions ou en continu pendant l'incubation. En outre, on peut les ajouter à la culture d'inoculation qui est ensuite incorporée dans la fermentation principale. Les exemples suivants illustrent l'invention sans toutefois en limiter la portée. Exemple 1 On ajuste à pH 7,5 un milieu d'inoculation contenant 3 g/dl de glucose, 0,1 g/dl de KH2PO4, 0,05 g/dl de MgS04.7H20, 1 mg/dl de FeS04.7H20, 1 mg/dl de MnS04.4H20, 0,5 g/dl d'urée, 30 ug/l de biotine, 100 pg/l de chlorhydrate de thiamine et de l'hydrolysat de protéines de soja contenant 50 mg/dl d'azote total et on charge 50 ml du milieu d'inoculation dans un flacon de 500 ml et ensuite on stérilise par chauffage. On inocule le milieu avec Brevibacterum lactofermentum ATCC 13869 et on cultive en culture agitée pendant 16 h en maintenant le milieu à 31,5"C. D'autre part, on prépare comme mieux de production d'acide glutamique un milieu contenant 8,0 g/dl de mélasse de canne à sucre (en sucre), 0,2 g/dl de KH2P04, 0,1 g/dl de MgS04.7H20, 2,0 mg/dl de FeS04.4H20, 200 pg/l de chlorhydrate de thiamine, 30 mg/dl d'hydrolysat de protéines de soja (en azote total) et 200 mg/dl de résidu de Stephen concentré (concentration en azote total 2,0 g/dl) comme concentration en azote total et un milieu contenant en outre 0,01 à 5 g/dl de TMG. Après réglage à pH 7,8, on charge 285 ml de chaque milieu dans un petit fermenteur de 1,0 I puis on stérilise par chauffage à 115"C pendant 10 min. On inocule chaque milieu avec 15 ml de la solution de culture d'inoculation obtenue par incubation préalable et on effectue la culture avec agitation à l'air à 31,5"C. Pendant la période de culture, on maintient le pH de la solution de culture à 7,8 par le gaz ammoniac et en même temps on ajoute de la mélasse de canne à sucre préalablement stérilisée pour régler la concentration en sucre dans la solution de culture à 2-4 g/dl, calculée en saccharose ; de cette manière, on met en oeuvre la culture. A un instant approprié pendant la culture, on ajoute du monopalmitate de polyoxyéthylénesorbitanne. Au moment où la vitesse de consommation du sucre est fortement réduite, on arrête l'alimentation en sucre et la fermentation est terminée en 28 à 40 h.On mesure la quantité d'acide L-glutamique accumulée dans chaque solution de culture et on détermine le rendement par rapport au sucre. Les résultats obtenus sont indiqués dans le tableau 1 ci-dessous. TABLEAU 1 Quantité de TMG Quantité d'acide Rendement rapporté ajoutée L-glutamique au sucre (o/dl) (a/dl) (%) 0 10,0 52,0 0,01 10,3 52,5 0,05 10,5 53,1 0,25 10,7 53,6 0,5 10,7 54,7 1,0 10,8 55,5 2,0 10,5 53,8 3,0 10,5 52,5 5,0 9,8 41,5 Exemple 2 On ajuste à pH 7,0 un milieu d'inoculation contenant 5 g/dl de glucose, 0,2 g/dl de (NH4)2S04, 0,2 g/dl d'urée, 0,15 g/dl de KH2PO4, 0,04 g/dl de MgS04.7H20, 1 mg/dl de FeS04.7H20, 100 ug/l de chlorhydrate de thiamine, 3 ug/l de biotine et 30 mg/dl d'hydrolysat acide de protéines de soja comme azote total et on charge 50 ml du milieu d'inoculation dans un flacon de 500 ml et on stérilise par chauffage.On inocule le milieu avec une bactérie productrice de glutamine ou Brevibacterium flavum FERM-BP 662 et on cultive sur secoueuse pendant 12 h en maintenant la température à 31,50C. D'autre part, on charge dans un fermenteur de 1,0 I puis on stérilise 285 ml d'un milieu contenant 13 g/dl de glucose, 0,25 g/dl de KH2P04, 40 mg/dl de MgS04.7H20, 1,5 g/dl de (NH4)2S04, 1,5 g/dl de Na2SO4, 0,1 mg/dl de FeS04.7H20, 3,5 llg/l de biotine, 350 ug/l de chlorhydrate de thiamine et 500 mg/dl de résidu de Stephen concent ré, formé comme sous-produit dans les étapes du procédé de Stephen dans l'usine de fabrication de sucre de betterave, comme concentration en azote total, et en outre 0,01 à 5 g/dl d'HETMA, le milieu étant réglé à pH 6,5. On effectue la culture à 31,5"C avec agitation à l'air tout en maintenant le pH entre 6,5 et 6,0 par le gaz ammoniac, jusqu'à ce que le glucose restant atteigne 0,5 g/dl. Le rendement en L-glutamine rapporté au poids de sucre est indiqué dans le tableau 2 ci-dessous. TABLEAU 2 Quantité d'HETMA ajoutée Rendement en L-glutamine (/dol) (%) 0 41,0 0,01 41,5 0,05 42,0 0,25 42,5 0,5 43,0 1,0 44,0 2,0 43,0 3,0 41,5 5,0 40,0 Dans le groupe avec addition de 0,01 à 3 g/dl d'HETMA, le rendement est amélioré par rapport au groupe témoin. Dans le groupe additionné de 1,0 g/dl d'HETMA, on obtient 1 I de la solution de culture et on en sépare les cellules par centrifugation. On fait passer le liquide surnageant à travers une résine échangeuse d'ions fortement acide "DIA ION" (marque déposée) SK-1B (sous la forme NH4). Après lavage de la résine par l'eau, on élue par NH4OH 2N, on concentre ensuite l'éluat et on obtient à partir du concentré 35,9 g de cristaux bruts de L-glutamine. Exemple 3 On ajuste à pH 7,0 un milieu contenant 13 g/dl de glucose, 6 g/dl de (NH4)2S04, 0,1 g/dl de KH2PO4, 0,04 g/dl de MgS04.7H20, 1 mg/dl de FeS047.H20, 1 mg/dl de MnS04.4H20, 100 tig/dl de chlorhydrate de thiamine, 50 g/l de biotine, 500 mg/dl de résidu de Stephen concentré,formé comme sous-produit dans les étapes du procédé de Stephen dans l'usine de fabrication de sucre de betteraves, comme concentration en azote total, additionné de 0,01 à 3,0 g/dl d'HETMA et 5 g/dl de carbonate de calcium (stérilisé séparément), et on charge 20 mg du milieu dans un flacon de 500 ml puis on stérilise par chauffage. On inocule le milieu par Brevibacterum flavum NRRL 12235 au moyen d'une boucle de pLatine et on cultive sur secoueuse pendant 4 jours en maintenant la température à 31,55C. Le rendement en L-arginine rapporté au poids de sucre est repré senté dans le tableau 3 ci-dessous. TABLEAU 3 Quantité d'HETMA ajoutée Rendement en L-arginine (a/dl) (%) 0 30,5 0,01 31,0 0,05 31,3 0,25 32,0 0,5 33,0 1,0 32,0 2,0 31,0 3,0 29,5 Dans le groupe avec addition de 0,5 g/dl d'HETMA, on obtient 1 I de la solution de culture et on en sépare les cellules et autres matières insolubles par centrifugation. On fait passer le liquide surnageant à travers une résine échangeuse d'ions faiblement acide acide "AMBERLITE" (marque déposée) C-5O (forme NH4 ). Après lavage de la résine par l'eau, on élue la L-arginine par NH4OH 2N, ensuite on concentre l'éluat et on obtient à partir du concentré 30,5 g de cristaux bruts de L-arginine. Exemple 4 On prépare un milieu pour la production de L-isoleucine en ajoutant 0,01 à 3 g/dl de DMG à un milieu ayant la composition indiquée dans le tableau 4 ci-dessous, contenant du glucose comme source de carbone. Après avoir réglé le pH à 7,2, on charge chaque fois 20 ml de chaque milieu dans un flacon de secoueuse de 500 ml puis on stérilise par chauffage à 115"C pendant 10 min. TABLEAU 4 Composant Concentration Glucose 15,0 g/dl (NH4)2S04 1,0 g/dl KH2PO4 0,15 g/dl MgS04.7H20 0,04 g/dl FeS04.4H20 1,0 mg/dl MnSO4.4H20 1,0 mg/dl Chlorhydrate de thiamine 300,0 ug/dl Hydrolysat acide de protéines de soja (azote total) 25,0 mg/dl Biotine 5,0 ug/dl Résidu de Stephen (azote total) 200 mg/dl (Carbonate de calcium ajouté après stérilisation séparée 5,0 g/dD On inocule chaque milieu avec Brevibacterium flavum FERM-BP 759 obtenu précédemment par culture et on cultive sur secoueuse à 31,5"C jusqu'à ce que le glucose ait disparu. Le rendement en L-isoleucine rapporté au poids de sucre est indiqué dans le tableau 5 ci-dessous. TABLEAU 5 Quantité de DMG ajoutée Rendement en L-isoleucine (a/dl) (%) O 12,0 0,1 12,5 0,05 12,7 0,25 13,0 0,5 13,3 1,0 13,5 2,0 13,0 3,0 11,5 Exemple 5 On prépare un milieu pour la production de L-valine en ajoutant 0,01 à 3 g/dl de TMG à un milieu ayant la composition indiquée dans le tableau 6 ci-dessous et contenant du glucose comme source de carbone. Après réglage du pH à 7,0, on ajoute séparément chaque fois 20 ml de chaque milieu dans un flacon de 500 ml puis on stérilise par chauffage à 115"C pendant 10 min. TABLEAU 6 Composant Concentration Glucose 15,0 g/dl (NH4)2S04 3,0 g/dl KH2P04 0,1 g/dl MgS04.7H20 0,04 g/dl FeSO4.4H20 1,0 mg/dl MnSO4. 4H20 1,0 mg/dl Chlorhydrate de thiamine 30,0 pg/dl Hydrolysat acide de protéines de soja (N total) 80,0 mg/dl Biotine 5,0 ug/dl DI-méthionine 60,0 mg/dl Résidu de Stephen (azote total) 200 mg/dl (Carbonate de calcium ajouté après stérilisatinn sépare 5,0 g/dl) On inocule chaque milieu avec Brevibacterium lactofermentum FERM-P1845 obtenu précédemment par culture et on cultive sur secoueuse à 31,5"C jusqu'à disparition du glucose. Le rendement en L-valine rapporté au poids de sucre est indiqué dans le tableau 7 ci-dessous. TABLEAU 7 Quantité de TMG ajoutée Rendement en L-valine (q/dl) (%) O 12,0 0,01 12,5 0,05 13,0 0,25 13,5 0,5 14,0 1,0 13,5 2,0 12,5 3,0 11,5 ExemPle 6 Dans des flacons de secoueuse de 500 ml, on charge séparément chaque fois 50 ml du milieu d'inoculation ayant la composition indiquée dans le tableau 8 ci-dessous. Après stérilisation par chauffage à llO"C pendant 5 min, on inocule avec Brevibactérium flavum ATCC 21475 et on cultive sur secoueuse à 31,5"C pendant 20 h pour donner une solution de culture d'inoculation. D'autre part, on charge séparément chaque fois 20 ml du milieu pour la production de L-lysine indiqué dans le tableau 4 dans des flacons de Sakaguchi puis on stérilise.On ajoute ensuite 1,5 g de carbonate de calcium préalablement stérilisé par chauffage à sec et on inocule chaque fois avec 1 ml du milieu d'inoculation décrit ci-dessus puis on cultive sur secoueuse à 31,50C. Après 24 h de culture, on ajoute de la TMG au milieu en quantité de O g/dl, 0,01 g/dl, 0,05 g/dl, 0,25 g/dl, 1,0 g/dl, 2,0 g/dl et 5,0 g/dl et on continue la culture. La quantité de L-lysine accumulée et le rendement sont indiqués dans le tableau 9 ci-après. TABLEAU 8 Composition du milieu Milieu Milieu de fer Composant d'inoculation mentation prin cipal Glucose 3 g/dl Mélasse de patate douce - 15 g/dl KH2PO4 0,1 g/dl 0,1 g/dl MgS04.7H20 0,04 g/dl 0,04 g/dl FeS04.7H20 1 mg/dl 1 mg/dl MnSO4 .4H20 1 mg/dl 1 mg/dl (NH4)2S04 - 5,5 g/dl Hydrolysat acide de protéines de soja (en azote total) 100 mg/dl 100 mg/dl Nicotinamide 0,5 mg/dl 1 mg/dl DL-alanine 50 mg/dl 100 mg/dl Biotine 100 pg/dl 200 zg/dl Chlorhydrate de thiamine 200 pg/dl 200 g/dl Urée 0,5 g/dl Résidu de Stephen (azote total) - 200 mg/dl pH 7,0 7,0 TABLEAU 9 Quantité de TMG Quantité de L-lysine Rendement en ajoutée accumulée L-lysine (c/dl) (q/dl) (%) O 3,83 25,5 0,01 4,10 27,3 0,05 4,22 28,1 0,25 4,56 30,4 1,0 4,35 29,0 2,0 4,23 28,2 5,0 4,05 27,0 Cn recueille les fractions ayant terminé la culture dans le groupe avec addition de 0,25 g/dl de TMG et on en élimine les cellules et le sel de calcium par centrifugation. On fait passer 1 I du liquide surnageant à travers une résine échangeuse d'ions fortement acide "AMBERLITE" (marque déposée) IR-120 type CH pour y adsorber la L-lysine. On élue ensuite la L-lysine adsorbée par l'ammoniaque aqueuse à 3 % et on concentre l'éluat sous pression réduite. Après addition d'acide chlorhydrique au concentré, on refroidit le système pour précipiter la L-lysine sous forme de chlorhydrate de L-lysine dihydraté et on obtient 36,5 g de cristaux. ExemPle 7 On ajuste à pH 7,0 un milieu d'inoculation contenant 3 g/dl de glucose, 0,2 g/dl de (NH4)2sO4, 0,2 g/dl d'urée, 0,15 g/dl de KH2P04, 0,04 g/dl de MgS04.7H20, 1 mg/dl de FeS04.7H20, 100 ug/l de chlorhydrate de thiamine, 300 ug/l de biotine et 140 mg/dl d'hydrclysat acide de protéines de soja, comme azote total et on charge 50 ml du milieu d'inoculation dans un flacon de 500 ml puis on stérilise par chauffage. On inocule le milieu avec Brevibacterium flavum ATCC 21269 et Escherichia coli FERM-P 4900 (AJ 11334), respectivement, et on cultive sur secoueuse pendant 12 h en maintenant à 31,5"C pour donner une solution de culture d'inoculation. D'autre part, on charge séparément des flacons de 500 ml chacun avec 20 ml d'un milieu contenant 13 g/dl de glucose, 0,25 g/dl de KH2PO4, 40 mg/dl de MgS04.7H20, 2,0 g/dl de (NH4)2S04, 1 mg/dl de MnS04.4H20, 1 mg/dl de FeS04.7H20, 40 mg/dl de L-isoleucire, 50 lag/l de biotine, 5 ug/l de chlorhydrate de thiamine, 32 mg/dl de résidu de Stephen,comme azote total, ou d'un milieu contenant en outre 0,01 à 5 g/dl de TMG, ajusté à pH 6,5, puis on stérilise par la vapeur à 1100C pendant 10 min. On ajoute à chaque milieu 2 g de carbonate de calcium préalablement stérilisé par chauffage à sec, respectivement, et on y ajoute encore 1 ml de la solution de culture d'inoculation décrite ci-dessus puis on cultive à 31,50C. Le rendement en L-thréonine obtenue après la culture, rapporté au poids de sucre,est indiqué dans le tableau 10 ci-dessous. TABLEAU 10 Rendement en L-thréonine Quantité de TMG Brevibactérium Escherichia ajoutée flavum coli C/dL) (%) (%) 0 12,0 25,0 0,01 12,5 26,0 0,05 12,8 27,5 0,25 13,5 28,5 0,5 14,0 30,0 1,0 14,5 31,0 2,0 13,0 28,0 5,0 12,5 26,0 A partir du groupe additionné de 0,25 g/dl de TMG, on obtient 1 I de la solution de culture et on sépare les cellules et le carbonate de calcium de la solution de culture par centrifugation. On fait passer le liquide surnageant, 500 ml, à travers une colonne de résine échangeuse d'ions fortement acide "AMBERLITE" (marque déposée) IR-120 (forme H+). On élue par l'ammoniaque aqueuse à 3 % et on recueille les fractions d'aminoacides, on élimine les sels, on décolore et on concentre sous pression réduite. On ajoute de L'alcool au concentré.Après stockage en refroidissant, on recueille les cristaux formés et on les sèche pour donner 7,6 g de cristaux de thréonine ayant une pureté de 98 % ou plus. ExempLe 8 A un milieu pour la production de L-histidine ayant la composition indiquée dans le tableau 11 ci-dessous, on ajoute 0,01 à 3 g/dl de MG. Après réglage à pH 7,2, on charge séparément chaque fois 20 ml du milieu dans un flacon de secoueuse de 500 ml puis on stérilise par chauffage à 115"C pendant 10 min. TABLEAU 11 Composant Concentration Glucose 13,0 g/dl (NH4) 2S04 5,0 g/dl KH 2P04 0,1 g/dl MgS04.7H20 0,04 g/dl FeS04.4H20 1,0 mg/dl MnS04.4H20 1,0 mg/dl Chlorhydrate de thiamine 50,0 wg/dl Hydrolysat acide de protéines de soja (azote total) 30,0 mg/dl Biotine 50,0 llg/dl Résidu de Stephen (azote total) 100 mg/dl (Carbonate de calcium ajouté après stérilisation séparée 5,0 g/dl) On inocule chaque milieu avec Brevibacterium flavum ATCC 21406 obtenu par culture préalable sur bouillon incliné et on cultive sur secoueuse à 31,5"C jusqu'à disparition du glucose. Le rendement en L-histidine rapporté au poids de sucre est indiqué dans le tableau 12 ci-dessous. Tableau 12 Quantité de MG Rendement en ajoutée (g/dl) L-histidine(^) 0 10,0 0,01 10,5 0,025 11,0 0,5 11,5 1,0 12,0 2,0 11,0 3,0 9,5 On élimine les cellules et le carbonate de calcium de 1 I de la solution de culture obtenue dans le groupe additionné de 0,5 g/dl de MG et on fait passer le liquide surnageant à travers une résine échangeuse d'ions fortement acide "AMBERLITE" (marque déposée) IR-120 (forme H +) pour adsorber la L-histidine. On élue ensuite la L-histidine adsorbée par l'ammoniaque aqueuse à 3 % et on concentre ensuite l'éluat sous pression réduite. On refroidit le concentré et on le laisse reposer pour précipiter des cristaux de L-histidine. On sèche les cristaux pour donner 7,1 g de L-histidine. Exemple 9 On prépare un milieu pour La production de L-phénylalanine en ajoutant 0,01 à 3,0 g/dl de DMG à un milieu ayant la composition indiquée dans le tableau 13 ci-dessous contenant du saccharose comme source de carbone. Après réglage à pH 7,0, on ajoute séparément chaque fois 20 ml dans un flacon de secoueuse de 500 ml puis on stérilise par chauffage à 115"C pendant 10 min. TABLEAU 13 Composant Concentration Saccharose 13,0 g/dl KH2P04 1,5 g/dl (NH4)2S04 1,0 g/dl MgS04.7H20 0,1 g/dl MnS04.4H20 1,0 mg/dl FeS04.7H20 1,0 mg/dl Chlorhydrate de thiamine 20,0 pg/dl DL-méthionine 50,0 mg/dl L-tyrosine 40,0 mg/dl Hydrolysat acide de protéines de soja (azote total) 100,0 mg/dl Acide fumarique 1,0 g/dl Biotine 5,0 lig/dl Acide acétique 0,3 mg/dl Acide glutamique 0,2 g/dl Résidu de Stephen (azote total) 100 mg/dl (Carbonate de calcium ajouté après stérilisation séparée 5,0 g/dl) On inocule chaque milieu avec Brevibacterium lactofermentum ATCC 21420 obtenu préalablement par culture sur bouillon incliné et on cultive sur secoueuse à 31,50C jusqu'à disparition du glucose.Le rendement en L-phénylalanine rapporté au poids de sucre est indiqué dans le tableau 14 ci-dessous. TABLEAU 14 Quantité de DMG Rendement en ajoutée L-phénylalanine (g/dl) 0 9,0 0,01 9,5 0,02 10,5 0,5 11,0 1,0 11,5 2,0 11,0 3,0 10,5 Exemple 10 On prépare un milieu pour la production de L-tryptophane en ajoutant 0,01 à 5 g/dl de TMG à un milieu ayant la composition indiquée dans le tableau 15 ci-dessous contenant du glucose comme source de carbone. Après réglage à pH 7,0, on charge chaque fois 20 ml du milieu dans un flacon de secoueuse de 500 ml puis on stérilise par chauffage à 1150C pendant 10 min. TABLEAU 15 Composant Concentration Glucose 13,0 g/dl (NH4)2S04 4,0 g/dl KH2PO4 0,1 g/dl MgS04.7H20 0,04 g/dl FeSO4. 7H20 1,0 mg/dl MnSO4. 4H20 1,0 mg/dl Chlorhydrate de thiamine 200,0 pg/dl Hydrolysat acide de caséine 0,1 g/dl Hydrolysat acide de protéines de soja (azote total) 30,0 mg/dl L-phénylalanine 20,0 mg/dl Biotine 300,0 pg/dl Résidu de Stephen (azote total) 100 mg/dl (Carbonate de calcium ajouté après stérilisation séparée 5,0 g/dl) On inocule chaque milieu avec Bacillus subtilis FERM-BP 208 obtenu par culture préalable et on cultive sur secoueuse à 30"C jusqu a disparition du glucose. Le rendement L-tryptophane rapporté au poids de sucre est indiqué dans le tableau 16 ci-dessous. TABLEAU 16 Quantité de TMG Rendement en ajoutée L-tryptophane 0 5,0 0,01 6,0 0,02 6,5 0,5 7,0 1,0 7,5 2,0 6,5 3,0 6,0 5,0 5,5 Exemple 11 On prépare un milieu pour la production de L-sérine en ajoutant 0,01 à 3 g/dl de DMG à un milieu ayant la composition indiquée dans le tableau 17 ci-dessous contenant du glucose comme source de carbone. Après réglage à pH 7,0, on charge séparément chaque fois 20 ml de milieu dans un flacon de secoueuse de 500 ml. TABLEAU 17 Composant Concentration Glucose 13,0 g/dl (NH4) 2SO4 0,2 g/dl KH2P04 0,2 g/dl MgSO4.7H20 0,05 g/dl FeSO4. 4H20 2,0 mg/dl Acide folique 1 000 pg/dl Chlorhydrate de thiamine 1 000 pg/dl Nicotinamide 2 500 ug/l Hydrolysat acide de protéines de soja (azote total) 60 mg/dl Biotine 200 ug/l Méthionine 0,1 g/dl L-leucine 20 mg/dl Glycine 3,5 g/dl DL-méthionine 40 mg/dl Résidu de Stephen (azote total) 100 mg/dl (Carbonate de calcium ajouté après stérilisation séparée 5,0 g/dl) On inocule chaque milieu avec Corynebacterium glycinophilum FERM-P 1687 obtenu par culture préalable et on cultive sur secoueuse à 34"C. Le rendement en L-sérine rapporté aux moles de glycine consommée est indiqué dans le tableau 18 ci-dessous. TABLEAU 18 Quantité de DMG Rendement en ajoutée L-sérine (g/dl) (%) 0 36,0 0,01 37,0 0,05 38,0 1,0 38,5 2,0 37,5 3,0 35,0 Exemple 12 On ajoute 0,1 à 5 g/dl de TMG à un milieu ayant la composition indiquée dans le tableau 19 ci-dessous et on charge séparément chaque fois 20 ml du milieu dans un flacon de 500 ml puis on stérilise par chauffage à 1200C pendant 10 min. On inocule chaque fois avec trois boucles de platine de cellules obtenues en cultivant Corynebacterium equi AJ 11749 (FERM-P 6262) à 31,5"C pendant 18 h dans un milieu incliné ayant la composition suivante 20 g/l de glucose, 10 g/l d'extrait de levure, 10 g/l de peptone, 5 g/l de sel de table et 20 g/l de gélose (pH 7,2).Après culture à 34"C pendant 2 jours, on ajoute 50 g/l de glucose et 10 g/l d'inosine puis on cultive sur secoueuse pendant encore 3 jours. La quantité d'acide 5'-inosinique accumulée dans la solution de culture est indiquée dans le tableau 20 ci-après. TABLEAU 19 Composant Concentration Glucose 13,0 g/dl Extrait de levure 1 g/dl Sulfate d'ammonium 0,5 g/dl KH 2P04 2 g/dl MgS04.7H20 0,6 g/dl Panthothénate de calcium 1 mg/dl Acide p-aminobenzoique 1 mg/dl Adénine 8 mg/dl Biotine 1 000 pg/dl Hydrolysat acide de protéines de soja (azote total) 90 mg/dl Acide glutamique 2 pg/dl Résidu de Stephen (azote total) 100 mg/dl pH 6,5 TABLEAU 20 Quantité de TMG Quantité d'acide ajoutée 5'-inosinique (g/dl) (5'-IMP Na2.7,5H20) 0 28 0,1 28,5 0,5 29 1,0 30 2,0 29,5 3,0 29 5,0 27 Exemple 13 On ajuste à pH 6,0 un milieu d'inoculation contenant 3 g/dl de glucose, 0,1 g/dl de KH2PO4, 0,04 g/dl de MgS04.7H20, 0,001 g/dl de FeS04.7H20, 0,001 g/dl de MnS04.4H20, 0,3 g/dl d'urée, de l'hydrolysat acide de protéines de soja contenant 60 mg/dl d'azote total, 30 pg/dl de chlorhydrate de thiamine et 20 pg/l de biotine et on charge 50 ml du milieu d'inoculation dans un flacon de 500 ml puis on stérilise par chauffage. On inocule le milieu avec Brevibacterium lactofermentum FERM-P 5936 (AJ 11678) et on cultive sur secoueuse pendant 13 h en maintenant à 31,5"C. D'autre part, on ajuste à pH 7,0 chaque fois 20 ml d'un milieu contenant 13 g/dl de glucose 0,1 g/dl de KH2PO4, 0,04 g/dl de MgSO4.7H20, 0,001 g/dl de FeSO4.7H20, 0,001 g/dl MnSO4.4H20, 4,0 g/dl de sulfate d'ammonium, 65 mg/dl d'hydrolysat acide de protéines de soja,en azote total, 20 pg/dl de chlorhydrate de thiamine, 10 pg/dl de biotine et 78-mg/dl de L-arginine ou d'un milieu contenant en outre 0,01 à 3 g/dl de DMG, respectivement, puis on stérilise par chauffage à 1150C pendant 10 min.On ajoute à chaque milieu 2 g de carbonate de calcium préalablement stérilisé par chauffage à sec, respectivement, et on y ajoute chaque fois 1 ml de la solution de culture d'inoculation décrite ci-dessus puis on cultive à 31,50C. Le rendement en L-ornithine après la fin de la culture, rapporté au sucre, est indiqué dans le tableau 21 ci-dessous. TABLEAU 21 Quantité de DMG Rendement en ajoutée L-ornithine (g/dl) (%) 0 24,5 0,01 26,0 0,05 27,5 1,0 29,0 2,0 27,0 3,0 23,0 Exemple 14 On ajuste à pH 6,0 un milieu d'inoculation contenant 3 g/dl de glucose, 0,1 g/dl de KH2P04, 0,04 g/dl de MgSO4.7H20, 0,001 g/dl de FeS04.7H20, 0,001 g/dl de MnSO4.4H20, 0,3 g/dl d'urée, 60 mg/dl d'hydrolysat acide de protéines de soja,en azote total, 30 ug/l de chlorhydrate de thiamine et 20 pg/l de biotine et on charge 50 ml du milieu d'inoculation dans un flacon de 500 ml puis on stérilise par chauffage. On inocule le milieu avec Corynebacterium glutamicum ATCC 13232 et on cultive sur secoueuse pendant 13 h en maintenant à 31,5"C. D'autre part, on charge séparément des flacons de 500 ml chacun avec 20 ml d'un milieu contenant 13 g/dl de glucose, 0,1 g/dl de KH2PO4, 0,04 g/dl de MgS04.7H20, 0,001 g/dl de MnS04.4H20, 4,0 g/dl de sulfate d'ammonium, 65 mg/dl d'hydrolysat acide de protéines de soja en azote total, 20 pg/l de chlorhydrate de thiamine, 10 pg/dl de biotine et 70 mg/dl de L-homosérine ou d'un milieu contenant en outre 0,01 à 3 g/dl de DMG, ajusté à pH 7,0, puis on stérilise par chauffage à 115"C pendant 10 min. On ajoute à chaque milieu 2 g de carbonate de calcium préalablement stérilisé par chauffage à sec et on y ajoute chaque fois 1 ml de la solution de culture d'inoculation décrite ci-dessus puis on cultive à 31,50C. Le rendement en L-ornithine après la fin de la culture, rapporté au sucre, est indiqué dans le tableau 22 ci-dessous. TABLEAU 22 Quantité de DMG Rendement en ajoutée L-ornithine tg/dl) (%) o 24,5 0,01 26,0 0,05 27,5 1,0 29,0 2,0 27,0 3,0 23,0 Exemple 15 On ajuste à pH 6,0 un milieu d'inoculation contenant 3 g/dl de glucose, 0,1 g/dl de KH2P04, 0,04 g/dl de MgS04.7H20, 1,0 mg/dl de FeS04.7H20, 1,0 mg/dl de MnS04.4H20, 0,3 g/dl d'urée, 60 mg/dl d'hydrolysat acide de protéines de soja (en azote total), 30pg/dl de chlorhydrate de thiamine et 20pg/dl de biotine et on charge 50 ml du milieu d'inoculation dans un flacon de 500 ml puis on stérilise par chauffage. On inocule le milieu avec Corynebacterium glutamicum FERM-P 5643 (AJ 11588) et on cultive sur secoueuse pendant 13 h. en maintenant à 31,5"C. D'autre part, on cultive de maniére semblable l'exemple 14 chaque fois dans un milieu contenant 13 g/dl de glucose, 0,1 g/dl de KH2PO4, 0,04 g/dl de MgS04.7H20, 1,0 mg/dl de FeSD4. 7H20, 1,0 mg/dl de MnS04.4H20, 3,0 g/dl de chlorure d'ammonium, 65 g/dl d'hydrolysat acide de protéines de soja (en azote total), 20 g/dl de chlorhydrate de thiamine, lOug/dl de biotine et 70 mg/dl de L-arginine et un milieu contenant en outre 0,01 à 3 g/dl de G, ajusté à pH 7,0. Le rendement en L-citrulline, rapporté au sucre après la fin de la culture, est indiqué dans le tableau 23 ci-dessous. TABLEAU 23 Quantité de MG Rendement en ajoutée L-citrulline (g/dl) (%) 0 13,5 0,01 14,0 0,05 14,5 1,0 15,5 2,0 14,0 3,0 13,0 Exemple 16 On charge séparément dans un flacon de secoueJse ce 500 ml chaque fois 50 ml d'un milieu d'inoculation ayant la c=-co- sition indiquée dans le tableau 24 ci-dessous. Après stérilisation par chauffage à llO C pendant 5 min, on inocule avec Corynebacterium glutamicum FERM-P 5836 (AJ 11655) et on cultive sur secoueuse à 31,5 C pendant 12 h pour donner une solution de culture d'inoculaticn. D'autre part, on cultive de manière semblable à l'exemple 14 chaque fois dans un milieu de fermentation principale de L-tyrosine ayant la composition indiquée dans le tableau 24 cs un milieu contenant en outre 0,01 à 3 g/dl d'HETMA. La quantité e L-tyrosine après la fin de la culture est indiquée dans le tableau 25 ci-dessous. TABLEAU 24 Composition du milieu Milieu d'ino- Milieu de fermen Composant culation tation principal Glucose 3 g/dl 13 g/dl Urée 0,3 g/dl Acétate d'ammonium 0,5 g/dl 1,0 g/dl Sulfate d'ammonium - 3,0 g/dl KH2PO4 0,1 g/dl 0,2 g/dl MgS04.7H20 0,04 g/dl 0,1 g/dl MnSO4. 4H20 1 mg/dl 1 mg/dl FeS04.7H20 1 mg/dl 1 mg/dl Chlorhydrate de thiamine 300 pg/dl 50 pg/dl Biotine 200 ug/dl 100 ug/dl DL-phénylalanine 50 mg/dl Hydrolysat acide de protéines de soja dégraissé (azote total) 6,5 ml/l pH 7,0 7,0 TABLEAU 25 Quantité d'HETMA Rendement en ajoutée L-tyrosine (g/dl) (%) 0 6,0 0,01 6,5 0,03 8,0 0,5 9,0 1,0 8,2 2,0 7,5 3,0 6,0 Exemple 17 On ajuste à pH 6 un milieu d'inoculation contenant 3 g/dl de glucose, 0,1 g/dl de KH2P04, 0,3 g/dl d'urée, 0,04 g/dl de MgS04.7H20, 1 mg/dl de FeS04.7H20, 1 mg/dl de MnS04.4H20, 40 mg/dl de DL-méthionine, 10 pg/l de biotine, 200 ug/l de chlorhydrate de thiamine et 50 mg/dl d'hydrolysat acide de protéines de soja (en azote total) et on charge 50 ml du milieu d'inoculation dans un flacon de 500 ml puis on stérilise par chauffage à 1200C pendant 10 min. On inocule le milieu avec Brevibacterium flavum FERM-BP 755 et on cultive sur secoueuse pendant 20 h en maintenant à 31,5"C. D'autre part, on met en oeuvre la culture de manière semblable à L'exemple 14 chaque fois dans un milieu contenant 13 g/dl de mélasse de betterave (calculée en glucose), 0,1 g/dl de KH2PO4, 2,0 g/dl de CNH4)2S04, 0,04 g/dl de MgS04.7H20, 1 mg/dl de FeS04.7H20, 1 mt/dl de MnS04.4H20, 100 mg/dl de DL-méthionine, 50 ug/l de biotine et 300 ug/l de chlorhydrate de thiamine et 50 mg/dl d'hydrolysat acide de protéines de soja dégraissé ou milieu contenant en outre 0,01 à 3 g/dl d'HETMA, réglé à pH 7,0. La quantité de L-leucine produite après la fin de la culture est indiquée dans le tableau 26 ci-dessous. TABLEAU 26 Quantité d'HETMA Rendement en ajoutée L-leucine (g/dl) (%) 0 12,0 0,01 13,2 0,5 14,2 1,0 15,0 2,0 14,0 3,0 12,5 Il est entendu que l'invention n'est pas limitée aux modes de réalisation préférés décrits ci-dessus à titre d'illustration et que l'homme de l'art peut y apporter diverses modifications et divers changements sans toutefois s'écarter du cadre et de l'esprit de l'invention. REVENDICATION Procédé pour la fabrication d'un L-aminoacide ou d'acide 5'-inosinique, caractérisé en ce qu'il consiste à cultiver une bactérie productrice de L-aminoacides ou une bactérie productrice d'acide 5'-inosinique dans un milieu contenant de la mélasse de canne à sucre, du saccharose ou du glucose comme source de carbone principale et contenant au moins une substance choisie parmi la N-méthylglycine, la N,N-diméthylgLycine, la N,N,N-triméthylglycine et L'hydroxyde de (-hydroxyétbyl)triméthylammonium pour produire un L-aminoacide ou l'acide 5'-inosinique et à récolter Le L-aminoacide ou l'acide 5'-inosinique.