Brevet FR2613726A2 — publié le 19881014

FR 2613726 A2 19881014 FR 8705207 A 19870413 La présente invention concerne un perfectionnement aux souches de Saccharomyces transformées selon le brevet principal. Plus particulièrement, le brevet principal décrit des souches de Saccharomyces transformées comportant un bloc d'expression de 1 'alpha-amyloglucosidase. La présente addition concerne la transformation de souches particulières de Saccharomyces, en particulier des souches polyploides et prototrophes utilisées dans l'industrie de la panification ; il s'agit par exemple de la souche de S. cerevisiae TGF1. Ces souches polyploides et prototrophes doivent être cotransformées avec un vecteur tel que décrit au brevet principal et un plasmide conférant un phénotype dominant. L'un des objets de la présente invention est la mise en oeuvre de cette enzyme, l'alpha-amyloglucosidase, en particulier d'Aspergillus niger, lors de la fermentation panaire car l'-amyloglucosidase qui dégrade l'amidon directement en glucose, présente un effet bénéfique sur la fermentation panaire puisque ce sucre est directement assimilable par la levure de boulangerie. L'adjonction de cette enzyme permet d'améliorer les fabrications en rendant la pâte plus sèche au toucher donc plus facile à traiter en machine, et surtout d'activer de façon notable l'activité fermentative de la levure boulangère, donc de réduire largement les temps de fermentations. De plus, elle devrait être source d'innovation en permettant la mise au point de produits de panification relativement sucrés ce qui est pratiquement impossible sans addition d'enzymes dans un processus de fabrication court. La présente invention concerne donc, en outre, des procédés permettant de faire sécréter une amyloglucosidase par une souche de boulangerie du genre Saccharomyces cerevisiae. En particulier, l'invention concerne un procédé de fermentation panaire dans lequel au moins l'une des souches utilisées dans la fermentation est une souche telle que décrite précédemment. Exemple 1 La même expérience que celle décrite dans le brevet principal (exemple 8) est réalisée au départ d'une souche utilisée dans l'industrie de panification. Cette souche TGFl étant polyploide et prototrophe, on doit effectuer une cotransformation avec le pTG1867 et un plasmide conférant un phénotype dominant, le plasmide pTGl825. La souche TGFl est transformée avec l'ADN des plasmides pTGl825 et pTGl867 préalablement digéré par EcoRI. Parmi les 500 clones résistant au G418 (300 Ag/ml) obtenus, l'un exprime l'amyloglucosidase de façon stable durant au moins 50 générations ; ce clone est appelé TGFl-AMGl. L'hybridation des ADN génomiques digérés par EcoRI des souches TGF1-AMG1 et TGF1 par un oligonucléotide TG529 spécifique du gène MFai de Saccharomyces cerevisiae par la technique de Southern révèle que le bloc d'expression de l'amyloglucosidase est intégré dans le génome au locus MFal (figure 1) de TGF1-AMG1. La quantité d'amyloglucosidase sécrétée par la sou che TGFl-AMGl a été dosée. Après trois jours d'incubation en milieu complet YPG a' 300C sous agitation à 250 RPM, la cultu re de TGFl-AMGl produit 100 U d'-amyloglucosidase active par litre de surnageant d'une culture à une densité cellulaire de 5 x 107 cellules/ml. Dépôt de souche représentative de l'invention La souche TGFl AMGl a été déposée à la Collection Nationale de Cultures de Microorganismes, 28 Rue du Docteur Roux, Paris, le 27 janvier 1987 sous le n" I650. REVENDICATIONS 1) Souche transformée selon l'une des revendications 14 à 16 du brevet principal, caractérisé en ce qu'il s'agit d'une souche de Saccharomyces pOlyploSde et prototrophe. 2) Souche selon la revendication 1, caractérisée en ce qu'il s'agit d'une souche de Saccharomyces utilisée dans l'industrie de panification. 3) Souche selon la revendication 2, caractérisée en ce qu'il s'agit de la souche de Saccharomyces cerevisiae TGFl. 4) Souche selon l'une des revendications 1 à 3, caractérisée en ce que le bloc d'expression de l'amyloglucosidase dérive du plasmide pTGl867. 5) Procédé de fermentation panaire, caractérisé en ce qu'au moins l'une des souches utilisées dans la fermentation est une souche selon l'une des revendications 1 à 4.