Brevet FR2613727A2 — publié le 19881014

FR 2613727 A2 19881014 FR 8705208 A 19870413 La présente addition concerne un perfectionnement à l'objet du brevet principal. Plus particulièrement, le brevet principal concerne des souches de Saccharomyces capables d'exprimer l'alphaamyloglucosidase. La présente addition concerne l'introduction du gène et l'expression de l'alpha-amylase de B. licheniformis dans une souche de Saccharomyces produisant de l'alphaamyloglucosidase. L'expression simultanée de l'amyloglucosidase et d'une a-amylase devrait conduire à une synergie de ces 2 activités enzymatiques dans la dégradation de l'amidon ou des dextrines en résidus glucoses. La présente addition concerne plus particulièrement l'expression simultanée de l'alpha-amylase et de l'amyloglucosidase dans une souche de levure de brasserie, S. uvarum, polyploide, en particulier la souche 2285 TG2 k4GC. L'addition concerne également l'utilisation de ces souches pour la préparation de l'alpha-amylase. L'exemple ci-après est destiné à mettre en évidence d'autres caractéristiques et avantages de la présente addition. EXEMPLE Intégration dans la souche polyplode Saccharomyces uvarum 2285 TG2 AMGC du bloc d'expression de 1'a-amylase de B. Licheniformis. On a transformé la souche 2285 TG2 AMGC avec 1 g d'ADN de pTG1825 et 10 g de M13TG1817 préalablement digéré par BamHI par la technique dérivée de Webster et Dickson (1983). Le vecteur 1413TG1817 libère par digestion avec BamHI un fragment d'ADN contenant le-gène His3 de Saccharomyces uvarum dans lequel on a inséré la cassette d'expression de l'a amylase. La construction du vecteur M13TG1817 a été décrite dans le brevet français 86.06703. Sur 400 clones résistant au G418 (300 sg/ml), 4 clones produisent de l'a-amylase. Ces clones expriment l'a amylase de façon stable durant 50 générations. L'hybridation des ADN génomiques digérés par BamHI des souches 2285 TG2 AMGC-AMY1 et 2285 TGZ AMGC par un oligonucléotide TG227 spécifique du gène His3 de S. uvarum par la technique de Southern révèle aue le bloc d'expression de )a amvlase est intéar dans le génome au locus His3 (Figure 1) de la souche 2285 TG2 AMGC-AMYI. Réf. Webster T.D. et Dickson R.C. (1983) Gene 26, 243-252. Dépôt de souche représentative dc l'invention La souche 2285 TG2 AMGC-AMY1 a été déposée à la Collection Nationale de Cultures de Microorganismes, 28 Rue du Docteur Roux, Paris, le 27 janvier 1987 sous le n I649. REVENDICATIONS 1) Souche de Saccharomyces selon l'une des revendications 14 à 16 du brevet principal, caractérisée en ce qu'elle est transformée simultanément par un bloc d'expression selon l'une des revendications 1 à 13 du brevet principal et par un bloc d'expression de l'a-amylase et en ce qu'elle sécrète simultanément 1' amylase et l'amyloglucosidase. 2) Souche selon la revendication 1, caractérisée en ce qu'il s'agit d'une souche brassicole du genre S. uvarum. 3) Souche selon la revendication 2, caractérisée en ce qu'il s'agit de la souche S. uvarum 2285 TG2 AMGC. 4) Souche selon l'une des revendications 1 à 3 caractérisée en ce que le bloc d'expression de 1' a-amylase dérive du vecteur M13TG1817. 5) Procédé de fermentation caractérisé en ce qu'au moins l'une des souches utilisées dans la fermentation est une souche selon l'une des revendications 1 à 4.