Brevet FR2613581A1 — publié le 19881014

La présente invention concerne un procédé de pro- duction de plants greffés de végétaux ligneux ou semi- ligneux et plus particulièrement de vigne et les plants obtenus Le phylloxera est apparu en France en 1866 et a complètement détruit le vignoble en 1914. Sa reconstitution n'a pu être assurée qu'à partir du greffage des cépages français sur des variétés américaines ou des hybrides ré- sistants à l'insecte. Ce greffage consiste à assembler le porte-greffe qui sera enterré et donnera les racines au greffon qui sera la partie aérienne et portera les raisins. Actuellement, la méthode utilisée est à peu près la même que celle qui a servi à reconstituer le vignoble francais. Le greffage s'effectue à la fin de l'hiver sur du matériel aoûté par l'assemblage d'un sarment de porte- greffe américain d'une longueur de 20 à 30 cm à un greffon d'une variété de vitis vinifera de 4 à 5 cm portant un bourgeon. L'ensemble est ensuite mis en stratification afin de réaliser un cal de soudure au niveau du greffage. 15 à 21 jours après, les greffés-soudés sont plantés soit sous serre, soit en pleine terre afin de les faire raciner, le bourgeon du greffon démarrant au cours de ces opérations Cette technique traditionnelle de greffage permet d'obtenir des plants greffés-soudés prêts à être plantés en 6 ou 12 mois, mais avec des pourcentages de réussite assez faibles, de l'ordre de 30-35%. Le développement de nouvelles technologies, no- tamment la culture IN VITRO, pour la production des plants de vigne, a conduit à l'étude de nouvelles techniques de greffage. La multiplication végétative IN VITRO a permis de mettre en oeuvre la méthode dite du greffage en vert Cette technique présente deux inconvénients majeurs: -le greffage étant réalisé sur un porte-greffe ra- ciné, il faut produire IN VITRO l'ensemble des porte- greffes nécessaires à la production, - il faut annuler les 7 à 8 yeux de la base du porte-greffe dont le développement inhiberait celui du greffon, opération délicate, longue et onéreuse. FR-A-86 01117 décrit une machine à greffer en vert. La présente invention a pour objet un procédé de production de plants greffés de végétaux ligneux ou semi- ligneux pour l'obtention de plants notamment de vigne vi- sant à obtenir des plants prêts à être plantés en un délai plus bref après le greffage avec un taux de réussite jamais obtenu jusqu'à ce jour et de qualité supérieure. La technique selon la présente invention est le greffage sur bouture herbacée. Plus particulièrement la présente invention propose un procédé de greffage de végétaux ligneux ou semi-ligneux pour l'obtention de plants comprenant en combinaison les étapes consistant: a)à élever en serre ou sous tunnel protecteur au moins un jeune plant de porte-greffe et au moins un jeune plant de greffon issus de la culture IN VITRO pendant une durée suffisante pour obtenir des rameaux herbacés possédant des entre-noeuds suffisamment longs. b) à prélever sur les plants obtenus selon l'étape a) décrite ci-dessus, des boutures de porte-greffe et des greffons; c) à insérer un greffon comprenant un seul bour- geon sur une bouture de porte-greffe en coupant en deux biseaux l'extrémité inférieure du greffon, en incisant l'extrémité supérieure de la bouture de porte-greffe en son milieu puis en assemblant les deux parties par emboîtement; d) à introduire ledit ensemble greffé selon c) ci- dessus dans un milieu de développement qui est humidifié avec une solution nutritive; e) à placer l'ensemble selon d) ci-dessus dans une enceinte à atmosphère saturée d'humidité et à température supérieure à 200C; f) à supprimer le bourgeon porté par le porte- greffe; g)A élever les plants en serre ou sous tunnel pro- tecteur jusqu'au stade désiré de croissance. La présente invention concerne également les carac- téristiques ci-après considérées isolément ou selon toutes leurs combinaisons techniquement possibles: - le jeune plant de greffon est une variété de vitis-vinifera; -la culture des jeunes plants de porte-greffe et de greffon est effectuée en serre ou sous abri protecteur;deux a trois mois après il est possible de commencer à effectuer des prélèvements; -les rameaux herbacés ont des entre-noeuds d'une longueur d'environ 10 + 2 cm; -les boutures de portegreffe sont sectionnées A la partie basale sous un oeil qui est supprimée; -les boutures de porte-greffe sont sectionnées dans la partie médiane d'un entre-noeud comportant l'oeil supé- rieur ainsi que la plus grande partie de l'entre-noeud sui- vant; -l'extrémité inférieure du greffon est coupée en deux biseaux ayant un angle de 16 + 4 tandis que celle su- périeure de la bouture de porte-greffe est fendue en son mi- lieu sur une longueur de 5 A 10 mm et les deux parties sont assemblées par emboîtement; -le milieu de développement de l'ensemble greffé est un cube de laine de roche; -l'emboîtement du greffon et de la bouture de porte-greffe peut être réalisé par d'autres procédés tels que la greffe anglaise, la greffe oméga, la greffe en fente ou tout autre procédé d'assemblage; -le milieu de développement de l'ensemble greffé est un pot contenant un mélange de tourbe et de pouzzolane ou tout autre substrat de culture; 26 13581 -la solution nutritive est choisie parmi une solu- tion à base de nitrate de calcium, de nitrate de potasse, de sulfate de magnésie, de nitrate d'ammoniaque,de phospha- te bipotassique, de citrate de fer et d'un mélange de plu- sieurs oligo-éléments; -l'enceinte est à une température comprise entre 20 et 30'C sous une humidité de 90 à 100%; -la soudure porte-greffe - greffon correspond à l'émission des racines et apparatt au bout d'environ 10 jours. Divers avantages et caractéristiques de la présente invention ressortiront de la description détaillée ci-après faite en regard des dessins annexés sur lesquels: Figs. 1 et lA illustrent un plant greffé de l'art antérieur selon la méthode traditionnelle; Figs. 2 et 2A illustrent un plant greffé de l'art antérieur issu de la culture IN VITRO obtenu par greffage sur une plante porte-greffe; Figs.3 et 3A illustrent un plant greffé issu de culture IN VITRO obtenu par greffage sur une bouture porte- greffe selon la présente invention; Fig.4 illustre les étapes de production d'une bou- ture porte-greffe; Fig.5 illustre les étapes de production d'un gref- fon; Fig.6 illustre les étapes de production d'un plant greffé selon l'invention à partir de bouture de porte-greffe et d'un greffon. Sur les figures 1 et lA, le plant traditionnel est désigné par 1, il comprend un porte-greffe 4 et un greffon , 7 représentant l'enracinement. La longueur d'un tel plant 1 est comprise entre 25 et 30 cm, son diamètre 1 est de 6 à 14 mm, son enracinnement 7 est peu fourni (seulement quelque racines), la longueur entre-noeud est d'environ 10 cm et la soudure portegreffe 4 et greffon 5 est grosse souvent avec des parties nécrosées.Le plant se- lon la figure 1 est un plant en phase de dormance tandis que celui selon la figure lA est un plant en phase de crois- sance, les feuilles de greffon portant la référence 6. Sur les figures 2 et 2A, le plant greffé issu de la culture IN VITRO obtenu par greffage sur plante porte- greffe ou greffage en vert est désigné par 2, il comprend un porte-greffe 4' et un greffon 5', 7' étant l'enracinement. La longueur d'un tel plant 2 est comprise entre 15 et 30cm, son diamètre 2 est de 1,5 à 5 mm, son enracinement 7' est chevelu et important, la longueur entre-noeud est très variable et sensiblement de 2 à 5 cm et la soudure porte- greffe 4'-greffon 5' est une simple boursoufflure.Le plant selon la figure 2 est un plant en phase de dormance tandis que celui selon la figure 2A est un plant en phase de crois- sance, les feuilles du greffon portant la référence 6'. Sur les figures 3 et 3A, le plant greffé de l'invention issu de culture IN VITRO obtenu par greffage sur bouture porte-greffe est désigné par 3. Il comprend un porte-greffe 4" et un greffon-S", 7" étant l'enracinement. La longueur du plant 3 est comprise entre 15 et 30 cm,son diamètre 43 est de 3 à 5 mm, son enracinement 7" est che- velu et important, la longueur entre-noeud est comprise en- tre 10 + 2 cm, la soudure porte-greffe 4"-greffon 5" est à terme assimilée à la plante. Le plant selon la figure 3 est un plant en phase de dormance tandis que le plant selon la figure 4 est un plant en phase de croissance 6" illustrant les feuilles du greffon. Les figures 4 et 5 montrent respectivement les di- verses étapes pour l'obtention de bouture de porte-greffe 12 et de greffon 12'. Les stades I et II sur ces figures correspondent à la culture IN VITRO 9, 9' pour l'obtention de jeunes plants de porte-greffe et de greffon.Les jeunes plants de porte-greffe 8 et de greffon 8' sont schématisés dans l'étape III. Ils ont été élevés en serre ou sous tunnel protecteur quand les conditions de tempé- rature le permettent.A partir de 2 à 3 mois, on obtient ain- si des rameaux herbacés de porte-greffe 10 et des rameaux herbacés de greffon 10' selon l'étape IV possédant des entre-noeuds respectivement 11, 11' d'une longueur voisine de 10 + 2 cm. On prélève alors sur les plants de porte- greffe selon l'étape IV des boutures porte-greffe 12 dont la partie basale est sectionnée soit juste sous un oeil 13 soit dans la partie médiane 14 d'un entre-noeud 11 et qui comporte l'oeil supérieur 13 ainsi que la plus grande partie de l'entre-noeud suivant 11. La bouture porte-greffe 12 ain- si récoltée comprend tout ou partie d'un entre-noeud 11, un noeud intermédiaire avec sa feuille et son prompt-bourgeon et tout ou partie de l'entre-noeud supérieur. On prélève en même temps sur les plants de greffons selon l'étape IV de la figure 5 des greffons 12' à un seul bourgeon. La réussite de l'opération bouture-greffe est conditionnée par le maintien tant sur le porte-greffe 4" que le greffon 5" de tout ou partie de la feuille qu'il porte respectivement; lorsque celle-ci est trop importante, elle peut être réduite d'un tiers en surface. La base 15 du greffon 12' est assemblée à la partie supérieure 16 de la bouture porte-greffe 12 soit par un greffage manuel soit par un greffage mécanique. Quel que soit le mode utilisé, le principe de greffage est le même: l'extrémité 15 du greffon 12' est coupée en deux biseaux 17, 18 ayant un angle de 16 + 40 alors que celle de la bouture porte-greffe 12 est fendue en 19 en son milieu sur une lon- gueur de 5 à 10 mm. Ces deux étapes sont illustrées sur la figure 6 par I et II. Selon l'étape III de la figure 6, les deux parties' 12, 12' sont alors assemblées par embolte- ment 20. La base de cet ensemble est alors introduite comme indiqué dans l'étape IV sur la figure 6 dans un milieu de développement 21. Ce milieu de développement 21 est consti- tué soit par un cube de laine de roche soit par un pot contenant un mélange de tourbe et de pouzzolane ou tout autre substrat;l'un ou l'autre est humidifié avec une solu- tion nutritive puis placé dans une enceinte à atmosphère sa- turée d'humidité d'environ 90 à 100% et ayant une température de 20 à 30 C. Diverses solutions peuvent être utilisées comme par exemple une solution à base de nitrate de calcium, de nitrate de potasse, de sulfate de magnésie, de nitrate d'ammoniaque, de phosphate bipotassique, de ci- trate de fer et un mélange de plusieurs oligo-éléments. La soudure porte-greffe -greffon comme illustrée dans les éta- pes V et VI sur la figure 6 et l'émission de racines 7" sont obtenues simultanément en une dizaine de jours, moment à partir duquel il est très aisé de supprimer le bourgeon 22 porté par le porte-greffe 12 afin que son développement ne se fasse pas au détriment du greffon 12'. Les plants 23 sont alors élevés soit en serre soit sous tunnel protecteur.Il est ainsi possible d'obtenir des plants prêts à être plantés au vignoble sept semaines après le greffage avec un taux de réussite de 85 + 5%. La présente invention est décrite à propos du gref- fage de plants de vigne mais elle s'applique aussi au gref- fage de tous les autres plants qui ne sont pas des plants de vigne mais qui nécessitent un greffage. Le matériel herbacé 10, 10' issu de culture IN VITRO 9, 9' présente un certain nombre de caractéristiques originales qui assurent la bonne réussite de la bouture-gref- fe. Il présente une aptitude à la rhizogénèse exceptionnelle très largement supérieure à celle de jeunes pouces herbacées prélevées sur une plante élevée dans les conditions naturel- les. Ceci est vrai pour la vigne mais aussi pour le pêcher amandier GF 677, le rosier etc.. Cette caractéristique est particulièrement spectaculaire pour le pêcher-amandier dont on connatt les faibles potentialités d'enracinement par les techniques traditionnelles de multiplication végétative (bouturage, marcottage); à partir du matériel issu de cultures IN VITRO/on obtient un enracinement des jeunes bou- tures à plus de 90% pour cette plante, l'opération peut être répétée plusieurs fois après la sortie de tube avant que l'aptitude à la rhizogénèse ne diminue. Par ailleurs, la qualité de la soudure IN VITRO en- tre le porte-greffe 4" et le greffon 5" dépend beaucoup de l'âge physiologique des deux partenaires et de leur état sa- nitaire. En ce qui concerne l'âge physiologique, il est incontestable que la microplante issue de culture est un ma- tériel original dont les caractéristiques se rapprochent beaucoup de celui provenant de la germination de graines; tous deux possèdent des assises génératrices (cambiums) en cours d'édification qui ne commandent pas encore au plan moléculaire toutes les fonctions qui seront celles de la plante adulte. Grâce à la culture IN VITRO, on possède du matériel biologique en porte-greffe et en greffon qui est au même âge physiologique et plus précisément qui présente les caractéristiques des plantes juvéniles; les deux parte- - naires ont donc plus de possibilité ou moins de restriction à s'amalgamer et à permettre une soudure rapide et parfaite qui assure une excellente connexion entre les vaisseaux du porte-greffe 4" et ceux du greffon 5". Il importe de noter que lorsque les plantes issues de culture IN VITRO ont mis en place les processus moléculaires qui conduisent à une synthèse abondante de composés phénoliques ce qui est aisé- ment repérable par l'oxydation de la base des boutures sec- tionnées par la partie médiane d'un entre-noeud 11, la réussite de l'opération bouture-greffe diminue considérable- ment c'est-à-dire de 30 à 40%. Il est possible de retarder cette évolution biochimique des jeunes plants de vigne en les maintenant à une température constamment supérieure à C plus particulièrement entre 20 et 30 C. On comprend aisément l'intérêt du procédé de la présente invention: tout d'abord un intérêt économique puisqu'il est possible d'obtenir très rapidement un très grand nombre de plants pouvant être implantés au vignoble Dans le cas de greffage traditionnel, à partir d'une boutu- re de porte-greffe et d'un greffon, on obtient 0,35 plant en six ou douze mois.Avec le greffage en vert, A partir d'une bouture de porte-greffe et d'une bouture de greffon, on ob- tient 0,80 plant en 10 semaines. Par contre, avec le pro- cédé selon la présente invention de la bouture-greffe herbacée, il est possible d'obtenir à partir d'un plant de porte-greffe et d'un plant de greffon, quatre boutures de porte-greffe et quatre greffons toutes les quatre semai- nes,ce qui donne 3,2 plants en sept semaines. Un intérêt qualitatif ensuite puisque le greffage est réalisé dans une phase herbacée avec des cellules jeunes ayant un fort poten- tiel de multiplication. Tous ces facteurs permettent d'avoir une soudure parfaite, sans nécrose, comme cela est le cas avec un greffage traditionnel. En ce qui concerne l'influence de l'état sanitaire sur la réussite de l'opération, il est aussi à noter que la culture de méristèmes introduit un facteur positif supplé- mentaire par rapport à la thermothérapie.La culture de mé- ristèmes permet en effet d'éliminer des virus encore inconnus car peu pathogènes, virus qui ne sont pas détruits par la thermothérapie même lorsque celle-ci est associée à la culture d'apex. Or, la multiplication de ces virus appa- remment discrets n'est pas totalement sans incidence sur le développement de la plante, ceci est d'autant plus vrai quand on associe, comme c'est le cas dans le greffage, deux partenaires; l'un des deux peut héberger un virus très peu pathogène pour lui mais qui perturbe plus profondément le métabolisme de l'autre d'o la possibilité de l'apparition d'une incompatibilité porte-greffe-greffon plus ou moins grave. Le procédé selon la présente invention doit permettre de limiter ce phénomène. 2613581 Le procédé de l'invention de bouture-greffe herbacée s'adapte à tous les végétaux ligneux ou semi-ligneux dont la production nécessite un greffage. Le produit obtenu par le procédé selon la présente invention est très caractéristique de par son diamètre qui, pour la vigne est pris dans la gamme de 3 à 5 mm et en ce que la longueur entre-noeud est pour la vigne d'environ 10 à 2 cm et que la soudure est à terme assimilée à la plante comme illustré sur la figure 3 o l'on constate que la sou- dure porte-greffe 4" greffon 5" est harmonieuse. Il convient de noter qu'à titre d'exemple dans l'étape g), les plants 23 sont élevés en serre ou sous tun- nel protecteur pendant environ sept semaines. La culture en serre ou sous abri protecteur des jeunes plants de porte- greffe et de greffon (8,8') assure l'obtention de boutures de portegreffe et des greffons durant une période qui peut se poursuivre jusqu'à ce que les conditions de développement ne soient plus favorables. L'invention n'est pas limitée au mode de réalisation représenté et décrit en détail et elle englobe les équiva- lents techniques. li REVENDICATIONS 1.Procédé de production de plants greffés de végé- taux ligneux ou semi-ligneux pour l'obtention de plants comprenant en combinaison les étapes consistant: a) à élever en serre ou sous tunnel protecteur au moins un jeune plant de porte-greffe et au moins un jeune plant de greffon issus de la culture IN VITRO (9,9') pen- dant une durée suffisante pour obtenir des rameaux herbacés (8,8') possédant des entre-noeuds (11,11'),suffisamment longs; b)à prélever sur les plants (10,10') obtenus selon l'étape a)ci-dessus des boutures de porte-greffe (12) et des greffons (12'), c)à insérer un greffon (12') comprenant un seul bourgeon sur une bouture de porte-greffe (12) en coupant en deux biseaux (17,18) l'extrémité inférieure (15) du greffon (12') en incisant l'extrémité supérieure de la bouture de porte-greffe (12) en son milieu (19) puis en as- semblant les deux parties (12,12')par emboîtement (20), d)à introduire ledit ensemble greffé selon c) ci- dessus dans un milieu de développement (21) qui est humidi- fiée avec une solution nutritive; e) à placer l'ensemble selon d) cidessus dans une enceinte à atmosphère saturée d'humidité et à température supérieure à 200C, f) à supprimer le bourgeon (22) porté par le porte- greffe (4")-, g)à élever les plants (23) en serre ou sous tunnel protecteur jusqu'au stade désiré de croissance. 2.Procédé selon la revendication 1 caractérisé en ce que le jeune plant de greffon (8') est une variété de vitis vinifera. 3.Procédé selon l'une des revendications 1 ou 2 ca- ractérisé en ce que la culture en serre ou sous abri pro- tecteur des jeunes plants de porte-greffe et de greffon (8,8') permet d'obtenir des boutures de porte-greffe et des greffons durant une période qui peut se poursuivre jusqu'a ce que les conditions de développement ne soient plus favorables. 4.Procédé selon l'une quelconque des revendications 1 à 3, caractérisé en ce que les entre-noeuds (11,11') des rameaux herbacés (10,10') ont une longueur d'environ 10 2 cm. 5.Procédé selon l'une quelconque des revendications 1 à 4, caractérisé en ce que les boutures de porte-greffe (12) sont sectionnées à la partie basale sous un oeil (13). 6.Procédé selon l'une quelconque des revendications 1 A 4, caractérisé en ce que les boutures de porte-greffe (12) sont sectionnées dans la partie médiane (14) d'un entre- noeud (11) comportant l'oeil supérieur (13) ainsi que la plus grande partie de l'entre-noeud (11) suivant. 7.Procédé selon l'une quelconque des revendications 1 à 6, caractérisé en ce que l'extrémité inférieure (15) du greffon (12') est coupée en deux biseaux (17,18) ayant un angle de 16 4- tandis que celle supérieure de la bouture porte-greffe (12) est fendue en son milieu (19) sur une longueur de 5 A 10 mm et les deux boutures (12,12') sont assemblées par emboîtement (20). 8.Procédé selon l'une quelconque des revendications 1 à 6, caractérisé en ce l'opération d'incision peut être choisie parmi un groupe d'opération d'incision telle que greffe anglaise, greffe en oméga, greffe en fente ou tout autre procédé d'assemblage. 9.Procédé selon l'une quelconque des revendications 1 A 7, caractérisé en ce que le milieu de développement (21) de l'ensemble greffé est un cube de laine de roche. 10.Procédé selon l'une quelconque des revendications 1 à 7,caractérisé en ce que le milieu de développement (21) de l'ensemble greffé est un pot contenant un mélange de tourbe et de pouzzolane ou tout autre substrat de culture. 11. Procédé selon l'une quelconque des revendica- tions 1 à 9 caractérisé en ce que la solution de matière nutritive est choisie parmi une solution à base de nitrate de calcium, de nitrate de potasse, de sulfate de magnésie, de nitrate d'ammoniaque, et phosphate bipotassique, de ci- trate de fer et d'un mélange de plusieurs oligo-éléments. 12.Procédé selon l'une quelconque des revendications 1 à 10, caractérisé en ce que l'enceinte est à une tempéra- ture comprise entre 20 et 30"C sous une humidité de 90 à 100%. 13.Procédé selon l'une quelconque des revendications 1 à 11, caractérisé en ce que la soudure porte-greffe (4") -greffon (5") correspond à l'émission des racines (7") et apparalt au bout d'environ 10 jours.