Brevet FR2622455A1 — publié le 19890505

! La pré-snte invention concerne l'aélioratiun de la -roduztion laitière chez les mammiferes, y comris l'Mze, ainsi que l'augmentation du poids de leurs nouveaux-nés aà la naissance et l'amélioration de leur croissance post-natale. L'invention s'applique notarsent aux animaux des espèces ovine, caprine, bovine et porcine. Concernant la production laitière, les effets de l'hormone de croissance bovine (désignée ci-après par l'abréviation "bGH)"), obtenue par recombinaison génétique, sur la lactation chez les vaches laitières ont été étudiés par Bauman D.E. et al, dont les travaux ont été rapportés dans "J. Dairy Sci., S5 (supp 1) 121 (Abstr.>, 1982". Depuis lors, de nombreux travaux sur les bovins ont confirme l'intérêt d'augmenter la galactopoiése à la suite de traitements quotidiens de vaches laitières par la bGH pendant des lactations entières (Baird L.S. et al., (J. Dairy Sci., 69 (supp 1) 118 (Abst.) 1986"; Bauman D.E. et al, "J. Dairy Sci., 68 1352-62 (1985)); Chau-la V. et Schneider P.L., i(Proc. Univ. Guelph Nutr. Conf. pp 106o-21 (1986)); Hutchinson C.F. et al, "J. Dairy Sci., 5 (Sup 1) 152 (Abat.> (1986)"; Xollett T.A. et al., "(J. Dairy Sci., 69 (supp 1) 118 (Abst.> (1986)"; et Soderhol M.C.G. et al. "J. Dairy Sci., 69 (supp 1), 152 (Abst.) (g1986))". Après analyse de ces résultats ajustés a un lait à 3,5% en matières grasses, on observe un production laitière augmentée de 15, 19 et 22% pour des traitements respectifs de 12,5, 25 et 50 mg de bGH par jour. De plus, l'augmentation de la prise alimentaire chez les vaches traitées n'est pas proportionnelle à l'amélioration de la productivité laitière, de sorte que l'efficacité alimentaire (exprimée en kilogramme de lait à 3, 5% de matières grasses par kilogramme de matière sèche ingérée) est augmentée respectivement de 13,7, 16,8 et 15,3% chez des animaux recevant 12,5, 25 ou 50 mg de bGH/jour pendant une longue période. 0717 FR Le facteur de stimulation de la secrétion de l'hormone de croissance humaine a été isolé, caractéris, et il est maintenant synthétisé de façon industrielle. Ce facteur sera désigné ci-après par l'abréviation ( ". Sa forme naturelle contient 44 acides aminés. On connaît également la forme comportant 29 acides aminés, qui est obtenue après délétion de la partie C terminale de la molécule et dont l'activité biologique est similaire à celle de la molécule intacte. Dans les deux cas, le GRF humain rine !0 diffère des GRF bovin et ovin correspondants que par un très petit nombre d'acides aminés. Par ailleurs, la réalisation d'une forme lente est plus facile à réaliser pour l'hGR? que pour l'hormone de croissance humaine ou hormone antehypophysaire humaine (désignée ci-après par l'abréviation "hGH"), toujours à cause de la taille plus petite de la molécule et d'un nombre plus faible de sites actifs à protéger au cours de la réalisation d'un "implant". L'hGRF est actuellement utilisé en médecr.ne '.humaine, come facteur de libération de l'hormone de l'hGH (Cuillemin R., Bazeau P., Bohlen P., Esch F., Ling N., Wehrenberg W.B., " Wash.D.C., 218. 585.7, 1982"). 2-5 Les présenrts inventeurs ont eu pour obJectif d'obtenir une amélioration des performances laitières par un traitement des animaux pendant des périodes de temps courtes, afin d'éviter le traitement quotidien, lequel représente un inconvénient aussi bien sur le plan économique que sur le plan pratique. C'est ainsi qu'ils ont découvert que l'administra- tion aux femelles de l'hGRF, de ses fragments actifs, ou des analogues correspondants, pendant la gestation et, de façon plus précise, pendant une courte durée, à un moment déter- miné de la gestation, permettait d'atteindre les obJectifs précités. Les fragments actifs correspondent à des 0717 FR solies d'.hGRF tronuees rmais com.ortant l'activite Ain=e, a forme à 9 acides ami'é., qcui a été indiDuée c-- de__u_ et sera d.-igr.ée ci-a re par -l'abréviation -, cotitue une forms ritéressante de la famille e_ substances actives selon l'invention. Quant aux analogues mentionnés également ci- dessus, de l'hGRF ou de ses fragments actifs, ils corres- pondent respectivement à l'hGRF et aux fragments actifs dans lesquels au moins un acide aminé a été substitué. De plus, au cours de leurs travaux, les inventeurs ont été amenés a constater que l'administration des principes actifs susindiqués, touJours pendant la gestation, mais à un autre moment de celle-ci et toujours sur une période relativement courte, conduisait à une augmentation du poids des nouveaux-nés, à la naissance et à une amélio- ration de leur croissance post-natale, par rapport aux animaux issus de mères non traitées. Le traitement cumulé pendant les deux pariodes precitées a également été réalisé. A cet avantage d'un traitement sur une courte duréecu sur de cu rte-s durées, s'ajoute le fait cue les substances précitées, et, en particulier, le hGRF (1-29) est une molécule spécifique, donc applicable à toutes les espèces, et qui fait partie des hormones protéiques, donc entierement dégradées par l'organisme. Parmi les nombreuses applications particulières que l'on peut mentionner pour la présente invention, on peut signaler que, chez la truie, il en résultera une augmenta- tion du poids des porcelets et une diminution de la mortalité par hypotrophie; l'obtention d'une puberté plus précoce chez la brebis et la vache (on pourra avancer ainsi la date de mise à la reproduction). Chez l'homme, l'avan- tage de pouvoir, sans inconvénient pour la mère et l'enfant, éviter la naissance d'un enfant hypotrophe, mérite d'être signalé. La présente invention a donc d'abord pour objet l'application de l'hGRF ou de l'un de ses analogues, ou 0717 FR 4'- encore d'un fragrmeXnt actif de l'hGRF cu de l'un de ses analogues, Tour augmenter la production laitiere chez lee mammiferes, y compris l'home, et/ou pour accroitre le poids de leurs nouveaux-nis à la naissance et améliorer la croissance post-natale. Dans un mode de réalisation préféré, on utilise l'hGRF sous sa forme comportant 29 actdes aminés (GRF 1-29 humain) ou un analogue de celle-ci. La présente invention a également pour objet une n0 composition destinée à être fournie aux mammifères, y compris l'homme, pour augmenter la production laitière et/ou pour augmenter le poids de leurs nouveaux-nés a la naissance et améliorer la croissance post-natale, caractérisée par le fait qu'elle contient, comme principe actif, l'hGRF ou l'un de ses analogues, ou encore un fragment actif de l'hGRF ou de l'un de ses analogues, ledit principe actif étant associé à un véhicule physiologiquement acceptable. En particulier, cette composition se présente sous une forme injectable, en solution dans un soluté physiologique. La quantité de principe actif à injecter varie selon les espèces. Dans le cas de la brebis, elle est, de préférence, de l'ordre de 25 yg/kg de poids corporel/jour par la voie sous-cutanée. La composition sera donc présentée en conséquence. Conformément à un mode de réalisation particulier, le principe actif de la composition pourrait être placé sous une forme permettant sa libération lente dans l'organisme. L'invention a également pour objet un procédé pour augmenter la production laitière chez les mammifères, y compris l'homme, et/ou pour accroître le poids de leurs nouveaux-nés à la naissance et améliorer la croissance post- natale, caractérisé par le fait qu'il consiste à fournir à la mère, pendant la gestation, une quantité efficace d'hGRF ou d'un de ses analogues, ou encore d'un fragment actif de l'hGRF ou de l'un de ses analogues. 0717 FR On peut mentionner en particu!ier: - Un proeD pour augmenter la production!aitire i che les matniferes, y compris l'homme. le principe actif étant fournri à la mère sur une période de l'ordre de 10 - 20 jours, à la fin du deuxième tiers de la gestation. - Un procédé pour accroître le poids des nouveaux-nés des mammifères, y compris l'homme, à la naissance et améliorer la croissance post-natale, le principe actif 0a étant fourni à la mère, sur une période de l'ordre de - 20 jours, précédant immédiatement la parturition; et - un procédé pour augmenter la production laitière chez les mammifères, y compris l'homme, et/ou pour- augmenter le poids de leurs nouveaux-nés à la naissance et améliorer leur croissance post-natale, le principe actif étant fourni à la mère sur une période de 10 - 20 jours & la fin du deuxième tiers de la gestation, et sur une période de 10 - 20 jours précédant 0 i-immédiatement la parturition. La présente invention a également pour objet l'utilisation de l'hGRP ou d'un de ses analogues, ou encore d'un fragment actif de l'hGRF ou de l'un de ses analogues, pour fabriquer une composition destinée à augmenter la production laitière chez les mammifères, y compris l'homme, et/ou pour augmenter le poids de leurs nouveaux-nés à la naissance et améliorer leur croissance post-natale. Les présents inventeurs ont réalisé des essais mettant en évidence les résultats énoncés ci-dessus. 0717 FR A - INCIDENCES DE L'ADMINISTRATION D'hGRF (-29 AUX EPREIS EXN FIN DE GESTATION, SUR LA CROISSANCE FPETALE 1 - Protocole expérimental On a réparti, en deux lots de 15 brebis chacun, 30 brebis gestantes se trouvant au 135ème jour de gestation, en tenant compte du nombre de foetus supposés présents dans les utérus et des performances laitières antérieures, toutes les brebis étant multipares. Le lot A, ne recevant aucun traitement, sert de lot témoin. Le lot B reçoit, par voie sous-cutanée, 1,5 mg d'hGRF (1-29) (soit environ 20 yg par kilo de poids corporel), de façon biquotidienne, à 8 heures et 14 heures, à partir du Jour 137 de gestation jusqu'au Jour de la mise bas (lequel a varié entre le Jour 145 et le jour 147 selon les brebis). L'administration d'hGRF (1-29) est interrompue dès cue la 'arturition survient. Chez tous les animaux, agnel.age est induit par ad.ministration de fluoro-9a trihydroxv-ilB,17a,21 méthyl-!6a pregnadiéne-i,4 dicne-3,20 n(propose sous la DCI de Dexamthasone), à raison de 15 mg par voie intramusculaire à 20 heures au jour 144 de la gestation. On a comparé les poids à la naissance des agneaux issus des mères des 2 lots A et B. 2 Résultats Les observations suivantes ont été faites: * L'administration d'hGRF 0717 FR dess:n ann-ex>:é qui represente le dosage hormonal OGH e-n. f-.:t4ion des heures de 'a journée (moyenne sur 15 brebis). au c ur. 1 et _au lour 146 de la gestation Léqende de la figure 1 >---C hGRF (1-29) administré comme indiqué, a G138à - @ hGRF (1-29) administré comme indiqué, à G146. Dans ces conditions, les animaux du lot B ont un taux de GH circulant pendant le jour qui est de 10 à 15 fois supérieur à celui du lot A. * Les parturitions se sont déroulées dans les mêmes cor.di- tions pour les 2 lots, l'administration prépartum d'hGRF (1-29) ne modifiant pas les dates d'agnelage. * Le poids à la naissance des agneaux issus de mères traitées (lot B, n = 20) est très significativement ( 0,S003) plus élevé cue celui des agneaux issus du lot témoir (lot A, n = 21), puisque les agneaux issus de brebis du lot B pèsent 4,17 0,13 kg, pour 3,61 0,14 kg pour les agneaux issus de mères du lot A. Cette étude expérimentale a mis en évidence que le traitement des brebis par i'hGRF (1-29) dans l'immédiat pràpartum induit une croissance in utero plus rapide des foetus. B - UTILISATION D'hGRF (1-29) A LA FIN DU DEUXIEXE TIERS DE SO LA GESTATION ET/OU EN FIN DE GESTATION CHEZ LES BREBIS: INCIDENCE SUR LA CROISSANCE FOETALE ET SUR LA CROISSANCE ULTERIEURE DES JEUNES BREBIS 1 -Protocole expérimental On a réparti en quatre lots de 12 brebis chacun, 48 brebis gestantes multipares, en tenant compte des 0717 FR ^roâuct ior. laat i're nt _ r% -eureE et de la parité pr Jue (dCzEage OCS - Ovine Chcrionic $atotroin)). Le premier lot constitue ie lot tlmoin, les brebie ne recevant aucun traitement. Les trois autres lots reçoivenrt, par voie sous- cutanée, 1,5 mg d'hGRF (1-29), de façon biquotidienne * du Jour 105 au Jour 115 de la gestation pour le second lot, qui sera désigné dans ce qui suit conmme étant le lot i5 designé, dans ce qui suit, comme étant le lot "CGRFi+2)). Comme dans l'étude précédente, l'administration d'hGRF (1-29) est interrompue dès que la parturition survient et l'agnelage est induit par administration de _.é:-=aGezasone au jour 145 de la gestaticn, dans les 0 conditions indiquées précédemment. Après la parturition, on a mesuré la production laitière des brebis de façon biquotidienne, et on a suivi la croissance des agneaux, lesquels ont reçu un allaitement artificiel fourni "ad libitum)), les agneaux ne recevant aucun traitement adjuvant de croissance. 2 - Résultats a - Poids à la naissance L'analyse a porté uniquement sur les agneaux SO doubles répartis comme suit: Témoin n = 12 GRF2 n = 12 GRF1 n = 16 GRF1+2 n = 12 La figure 2 du dessin annexé, qui représente le diagramme du poids à la naissance des agneaux issus des 0717 FR quatre lots, mantre que le traitement effectué induit, cIhez les brebis du lt GRF-2, une croissance in utero plus gra.nde des foetus, puis_-ue la valeur moyenne du poids a la naissance est, pour ce lot, de 3,54 kg (p ? 0,007), =c= qu'il n'est que de 2,91 kg pour les agneaux issus des mares "té.oins)-. La figure 2 montre également que les agneaux issus des lots GRFI et GRFl.+2 ont un poids de naissance sensiblement analogue a celui des agneaux issus des mares "téemoins". b - Croissance des agneaux A l'âge de 30 Jours, après analyse des variances prenant en covariable le poids à la naissance, on a observé une croissance plus importante de tous les agneaux issus des mères du lot GRF2. C'est ce que montre la figure 3 qui est une représentation analogue à celle de la figure 4, permettant de comparer les poids des agneaux issus des meres des quatre 'lts, à l'âge de 30 jours Le Tableau l suivant cobplète cette figure 3. Tableau 1 Lot Nombre d'agneaux Poids des agneaux à 30 jours Témoin 7 12,12 0,7 kg GRF2 12 14,73 0,53 kg (p>0,006) GRF! 14 13,6 0,5 kg (p?0,09) GRF1+2 10 13 0,66 kg de 21% le poids des contr8les à 30 Jours. 0717 FR Par ailleurs. quand les brebis ont été traitées par l'hGRF (1-29) entre les jcurs 105 et 115 de leur geetation, elles donnent naissanc--e A des agneaux dont le poids de naissance est du m&me ordre que ceux des aúneaux: 'issus de= mres la croissance des agneaux issues des mères "témoins". 3 - Production laitière 10 Après analyse de variance, en prenant la produc- tion antérieure en covariable. après correction tenant compte de!a parité (nombre d'agneaux par gestation) lors de la lactation en cours et lors de la lactation de référence, on a comnaré les résultats de la production laitière entre les lots témoins et les lots "GRFl" et "GRF2"). A partir des résultats obtenus sur cinq semaines de lactation, on a tracé les courbes des figures 4 et 5, les données de base étant rapportées dans le Tableau 2 suivant. Tableau 2 Production laitière Semaine de Fig. 4 Fig. 5 lactation Témoin GRF1 Témoin GRF2 1 980 70 1075 50 ns 1020 50 1050 60 ns 2 950 G0 1090 70 ns 1025 60 1010 50 ns 3 845 50 1025 60 p?0,07 975 50 855 50 ns 4 760 45 920 60 p?0,1 925 50 840 40 ns _ 5 720 50 880 50 p>O,08 860 50 745 60 ns On constate que la production laitière des brebis traitées entre les Jours 105 et 115 de la gestation (lot "GRFl") est supérieure & celle des brebis "témoins)" (plus de 23% lors de la cinquième semaine de lactation avec p?0,08). Tout ce passe donc comme si le traitement par l'hGRF (1-29) entre les jours 105 et 115 de la gestation 0717 FR aum-er.:aRt la rrar-enés chez les brebis trai:e-. Ce- rèsuitata corfirnent ceux obtenus avec l'induction de o a !actetion et mrntrent cue la GH est bien une horm=n-e imncrtzanee dan, le processus de a marmcnenese gravidlue, agissant apparemment independamnment de l'hormone!lacentaire OPL. Le rôle de la GH comme facteur régulant l'orientation des " vers la mamelle ou vers l'utérus selon la période de stimulation par l'hGRF est mis en évidence, ce qui signifie qu'une brebis dent on a induit une forte mammogenèse ne donnera pas naissance à un agneau de plus grand poids, à l'inverse, celle que l'on stimule de façon à obtenir un agneau plus gros, aurait une production laitière diminuée. SO 0717 FR REVENDICATIONS 1 - Application de l'hGRF ou de l'un de ses analogues, ou encore d'un fragment actif de l'hGRF ou de l'un de ses analogues, pour augmenter la production laitière chez les mammifères, y compris l'homme, et/ou pour accroître le poids de leurs nouveaux-nés à la naissance et améliorer la croissance post-natale. 2 - Application selon la revendication 1, caractérisée par le fait qu'on utilise le fragment actif d'hGRF qui comporte 29 acides aminés [hGRF (1-29)3. 3 - Application selon l'une des revendications 1 et 2, chez les animaux des especes ovine, caprine, bovine et porcine. 4 Composition destinée à être fournie aux mammifères, y compris l'homme, pour augmenter la production laitière et/ou pour accroître le poids de leurs nouveaux-nés a la nai:ssance et améliorer la croissance post-natale, caractérisée par le fait qu'elle contient, comme principe actif, l'hGRF ou l'un de ses analogues, ou encore un fragment actif de l'hGRF ou de l'un de ses analogues, ledit principe actif etant associé a un véhicule physiologiquement acceptable. - Composition selon la revendication 4, caractérisée par le fait que le principe actif est l'hGRF (1-29). 6 - Composition selon l'une des revendications 4 et 5, caractérisée par le fait qu'elle se présente sous une forme injectable. 7 - Procédé pour augmenter la production laitière chez les mammifères et/ou pour accroître le poids de leurs nouveaux-nés à la naissance et améliorer la croissance post- natale, caractérisé par le fait qu'il consiste à fournir à la femelle du mammifère, pendant la gestation, une quantité efficace de l'hGRF ou de l'un de ses analogues, ou encore S5 d'un fragment actif de l'hGRF ou de l'un de ses analogues. 0717 FR 8 - Procédé pour augmenter la production laitière chez les mammifères, caractérisé par le fait qu'il consiste a administrer A la femelle du mammifère, sur une période de l'ordre de 10 à 20 jours, à la fin du deuxième tiers de la gestation, une quantité efficace de 1'hGRF ou de l'un de ses analogues, ou encore d'un fragment actif de l'hGRYF ou de l'un de ses analogues. 9 - Procédé pour accroître le poids des nouveaux- nes des mammifères à la naissance et améliorer la croissance post-natale, caractérisé par le fait qu'il consiste A fournir à la femelle du mammifère, sur une période de l'ordre de 10 a 20 Jours précédant immédiatement la parturition, une quantité efficace de l'hGRF ou de l'un de ses analogues, ou encore un fragment actif de l'hGRF ou de l'un de ses analogues. - Procédé pour augmenter la production laitière chez les mammifères et/ou pour accroître le poids de leurs nouveaux-nés à la naissance et améliorer la croissance post- natale, caractérisé par le fait qu'il consiste à fournir a la femelle du mammifère, sur une période -de 10 à 20 jours a la fin du deuxième tiers de la gestation, et sur une période de 10 à 20 Jours précédant immédiatement la parturition, une quantité efficace d'hGRF ou d'un de ses analogues ou encore un fragment actif de l'hGRF ou de l'un de ses analogues. 11 - Utilisation de l'hGRF ou de l'un de ses analogues, ou encore d'un fragment actif de l'hGRF ou de l'un de ses analogues, pour fabriquer une composition destinée a augmenter la production laitière chez les mammifères, y compris l'homme, et/ou pour augmenter le poids de leurs nouveaux-nés à la naissance et améliorer la croissance post-natale. 0717 FR