Brevet FR2611138A2 — publié le 19880826

FR 2611138 A2 19880826 FR 8702137 A 19870219 Le présent certificat d'addition est un développement de la demande de brevet nO 86 17116 déposée le 5 décembre 1986. La présente invention concerne en effet également un procédé de préparation de microcristaux d'une substance insoluble dans l'eau, présentant une affinité pour les phospholipides. Elle concerne en outre les microcristaux obtenus et les compositions pharma zutiques en contenant, notamment les compositions pharmaceutiques liquides. La demande de brevet nO 86 17116 décrivait en particulier des procédés de préparation de microcristaux comportant à titre de substances actives des ginkgolides. On pourra s'y reporter pour la pleine intelligence du présent certificat d'addition. Les ginkgolides sont des substances qui interviennent dans le traitement des maladies provoquées par l'acéther du "Facteur d'activation des plaquettes". L'acéther du "Facteur d'activation des plaquettes" (PAF-acether) est un phospholipide qui peut être la cause de nombreuses maladies chez l'être humain ou chez les animaux L'acéther du "Facteur d'activation des plaquettes" provoque l'agrégation des plaquettes, ainsi que la libération de leur amine vaso-active. La libération est provoquée chez les animaux et les êtres humains sous l'effet de différents types de chocs, tels que les chocs anaphylactiques, les brûlures, les chocs septiques, les chocs par irradiation et les traumas. Sa libération conduit par la suite à une suppression des réactions immunitaires suite à l'épuisement des moyens de défense de l'organisme.En effet, depuis son identification (1 -0-alkyl-2 (R) -acétyl-glycéro-3-phosphoryl- choline) et sa synthèse totale, la preuve de sa parti cipation dans certains processus physiopathologiques, se sont accumulées, principalement dans l'anaphylaxie pulmonaire et différents états de choc. On connaît de nombreux antagonistes spécifiques du PAF-acéther. On en distingue principalement deux séries 1) des produits présentant une structure analogue d celle du PAF-acdther, 2) des produits naturels à activité antagoniste spécifique. Parmi cette deuxième catégorie, l'on trouve d'une part leslignanes et néolignanes tels que la kadsurénone (Piper futokadsurae), la magnosalicine (Magnolia salicifolia), les nectandrines A et B (Nectandra rigida) et le dinorlignane de synthèse L-652.731 et, d'autre part, les terpénoldes isolés du Ginkgo biloba (Ginkgolides). Cependant, ces substances antagonistes de l'acéther du "Facteur d'activation des plaquettes" présentent un inconvénient majeur, en ce qu'ils sont très peu solubles, ce qui rend leur utilisation en fait quasiment inexistante car subordonnée dans la pratique à une administration par perfusion. De manière tout à fait surprenante, la demanderesse avait découvert, selon l'invention objet de la demande de brevet n0'86 17116, que les ginkgolides pouvaient être rendus solublasen interagissant avec des phospholipides dans un procédé de préparation de microcristaux. La présente invention apporte désormais une généralisation conforme au procédé, selon la revendication 1 de ladite demande de brevet principal, pour la préparation de microcristaux, généralisation aux subs tances antagonistes de l'acéther du "Facteur d'activa tion des plaquettes", substances hydrophobe et inter agissant avec les phospholipides. La plupart de ces subs tances se sont en effet avérées d'une Dart, hydrophobe et d'autre part, présentant également une affinité pour les phospholipides et donc une aptitude à la formation de microcristaux avec les phospholipides, ces microcristaux étant solubles dans l'eau. L'affinité des substances antagonistes de l'acéther du "Facteur d'activation des plaquettes" pour les phospholipides est sans doute à l'origine de leur action inhibitrice sur le PAF-acéther qui présente, comme. on l'a vu, également une structure phospholipidique. Comme il a été découvert par la demanderesse, cette affinité offre la possibilité de solubiliser ces substances par la préparation de microcristaux. Mais, en outre, il est probable que la similitude des structures phospholipidiques d'une part, des microcristaux formés et, d'autre part, du PAF-acéther est également à l'origine d'une plus grande activité thérapeutique des compositions pharmaceutiques contenant ces microcristaux de substances antagonistes du PAF-acéther. La présente invention a donc pour objet un procédé de préparation de microcristaux d'une substance insoluble dans l'eau présentant une affinité pour les phospholipides qui comporte les étapes suivantes a) on évapore le ou les solvants d'une solution de phos pholipides et de ladite substance, et b) on remet le film obtenu, aPrès évaporation du ou des solvants en suspension dans une solution aqueuse nar agitation vinoureuse. Dans la présente demande de brevet, on entend par microcristaux des microparticules lipidiques préparés selon le procédé ci-dessus, la structure microcristalline n'étant pas necessairement obtenue strictosensu. Selon la caractéristique essentielle de la présente invention, la substance active en cause est choisie parmi les substances antagonistes de l'acéther du "Facteur d'activation des plaquettes". Dans ce procédé, il faut entendre par substances antagonistes de l'acéther du "Facteur d'activation des plaquettes" une substance permettant de traiter efficacement les maladies provoquées par l'acéther du "Facteur d'activation des plaquettes". Par affinité pour les "phospholipides", il faut entendre interaction avec les thostholitides car voie chimique ou tar voie Dhvsiau. Plus particulièrement, selon la présente invention, les substances antagonistes de l'acéther du "Facteur d'activation des plaquettes" peuvent être choisies parmi des produits de synthèse présentant une structure analogue à celle du "Facteur d'activation des plaquettes" ou des produits naturels, tels que les terpénoides, les lignanes et les néolignanes. Notamment parmi les lignanes et néolignanes, les substances antagonistes de l'acéther du "Facteur d'activation des plaquettes" sont choisies parmi la kadsurénone, la magnosalicine, les nectandrines A et B et le dinorlignane de synthèse L-652.731. Parmi les produits de synthèse, on peut citer les dérivés de canthène 5, 6. Dans le procédé, selon la présente invention, le rapport molaire entre le ou les phospholipides et la substance à traiter peut être quelconque, mais de préférence inférieur à 2/1 et de préférence encore voisin du rapport molaire 1/1 (c'est-à-dire compris entre 0,8 et 1,2 par exemple) pour obtenir le meilleur rendement en cristaux. Dans un mode particulier de réalisation de l'invention, le phospholipide est la phosphatidylcholine. Pour remettre le film obtenu à l'étape B en suspension, ceci peut entre effectué par diverses techniques connues, mais il est intéressant de pouvoir utiliser le traitement aux ultrasons. Dans un mode de réalisation particulier de l'invention, les solvants utilisés sont les solvants organiques usuels, par exemple le chloroforme ou le méthanol ou encore des mélange de solvants, par exemple de chloroforme et méthanol. De manière avantageuse dans l'étape B du procédé, on remet le film obtenu après évaporation du solvant en suspension dans une solution tamponnée à PH compris entre 5 et 8, de préférence à PH 5,9, par exemple dans un tampon acétate ou phosphate. Dans un mode préférentiel du procédé, les microcristaux sont purifés par centrifugation et lavage à l'eau distillée. La présente invention concerne également les microcristaux obtenus par ce procédé ou par un procédé qui en dérive, ainsi que des compositions pharmaceutiques qui contiennent comme principe actif de tels microcristaux, notamment des compositions pharmaceutiques et le liquide pouvant être injectable ou pulvérisable. L'invention sera maintenant plus explicitée à la lumière des exemples qui vont suivre. Exemple 1 : Préparation de microcristaux de kadsurénone à PH 5,9. Des microcristaux contenant de la kadsurénone et de la phosphatidylcholine sont préparés selon le schéma suivant. a) Préparation Un film lipidique est formé dans un ballon en dissolvant de la phosphatidylcholine dans un sol vant et la kadsurénone dans un autre solvant, et après évaporation du solvant sous vide à l'aide d'un évapo rateur rotatif à une température de 300C. Ainsi, à un milligramme de kadsurénone (1 mq/ml) dans le chloroforme : méthanol (1:1 en volume), on a ajouté dans un ballon de 50 ml, 4,6 ml de phosphatidylcholine (0,5 mg/ml) dans le chloroforme : méthanol (4:1 en volume). Les microcristaux sont formés par addition de 0,5 ml de tampon acétate 0,15 M PH 5,9 et sonication pendant 5 minutes à 100 W dans un bain à ultrasons. Les microcristaux sont conservés sous azote à 40C. On obtient ainsi des microcristaux ayant une taille sensiblement homogène de l'ordre de 500 nm. b) Purification La préparation des microcristaux est centrifugée à 2000 g pendant 15 minutes et les microcristaux sont lavés deux fois à de l'eau bidistillée. Les micro cristaux dans l'eau ont le même aspect microscopique que ceux obtenus dans du tampon acétate à PH 5,9. Exemple 2 : Préparation de microcristaux à PH 5,9 conte nant des produits L-652.731 (MSD) (voir exemple 6). Des microcristaux contenant de la phosphatidyl choline et du produit L-652.731 (MSD) sont préparés selon le schéma décrit à l'exemple précédent. Aîmg du pro duit L-652.731 on ajoute 3,9 ml de phosphatidylcholine (0,5 mg/ml) dans un ballon de 50 ml et on évapore sous vide le solvant à 300C. Le film est repris par 0,5 ml de tampon acétate 0,15 M, PH 5,9 et soumis aux ultrasons 5 minutes à une puissance de 100 W. Exemple 3 : Préparation des microcristaux à PH 5,9 contenant du ginkgolide B. Les microcristaux contenant les phosphatidylcholines et du ginkgolide B sont préparés selon le schéma décrit à l'exemple 1. A 5 ml de ginkgolide B (2,57 mg/ml) dans le méthanol, on ajoute 5,9 ml de phosphatidylcholine (4 mg/ml) dans le chloroforme Le film est repris par 1 ml de tampon à PH 6, agité virougeusement puis soumis aux ultrasons 5,5 ml à une puissance de 100 W. Exemple 4 : Agents antiPAF-acéther On trouvera dans la littérature de nombreux autres agents antiPAF-acéther susceptibles d'être appliqués au procédé selon la présente invention, notamment dans "PAF-acéther specific binding sites : 2. Design of specific antagonists" de P. Braquet et J.J. Godfroid (TIPS - October 1986 - Elsevier Science Publishers B.V., Amsterdam). On distingue plusieurs séries d'agents anti PAF, entre autres : 1) les antagonistes présentant une structure mo léculaire analogue à celle du PAF-acéther, telle que les CV-3988 (TAKEDA), RU-45703 (ROUSSEL-UCLAF/PHARMACO CHIMIE MOLECULAIRE), ONO-6240 (ONO), Ro 19-3704 (HOFMANN-LA ROCHE), SRI 63-119 (SANDOZ) et SRI 63-072 (SANDOZ) ou encore des antagonistes présentant une structure modifiée par rapport à celle du PAF-acéther telle que la PIPERIDINE SRI 63-073 (SANDOZ) ou le DIOXANONE (HOFFMANN-LA ROCHE). 2) des produits naturels comme les lignanes et néolignanes tels que la KADSURENONE (PIPER FUTOKADSURAE), la 1MAGNOSALICIDE (MAGNOLIA SALICIFOLIA), les NECTANDRINES A et B (NECTANDRA RIGIDA) et le DINORLIGNANE DE SYNTHESE L-652.731 de formule L-652.731 (X=O, MSD) Outre les terpénoides isolés du GINKGO BILOBA (GINKGOLIDES) concernés par la demande de brevet principal. REVENDICATIONS 1. Procédé de préparation de microcristaux d'une substance insoluble dans l'eau présentant une affinité pour les phospholipides selon la revendication 1 du brevet principal, caractérisé en ce que a) on évapore le ou les solvants organiques d'une solu tion de phospholipides et de ladite substance, et b) on remet le film obtenu, après évaporation du ou des solvants, en suspension dans une solution aqueuse par agitation vigoureuse ladite substance étant choisie parmi les substances antagonistes de l'acéther du "Facteur d'activation des plaquettes". 2. Procédé selon la revendication 1, caractérisé en ce que la substance en cause est choisie parmi les lignanes et néolignanes. 3. Procédé selon la revendication 1 ou 2, caractérisé en ce que la substance est choisie parmi la kadsurénone ou ses dérivés et le dinorlignane de synthèse L-652-731 et ses dérivés. 4. Procédé selon l'une des revendications précédentes, caractérisé en ce que la substance est choisie parmi les substances antagonistes du PAF-acéther présentant une structure analogue dudit PAF-acéther. 5. Procédé selon l'une des revendications précédentes, caractérisé en ce que le rapport molaire entre le ou les phospholipides d'une part, et la substance d'autre parut, est compris entre 0,2 et 2,5. 6. Procédé selon l'une des revendications précédentes, caractérisé en ce que le rapport molaire entre le ou les phospholipides d'une part, et la substance d'autre part, est compris entre 0,8 et 1,2. 7. Procédé selon l'une des revendications précédentes, caractérisé en ce que le phospholipide est la phosphatidylcholine. 8. Procédé selon l'une des revendications précédentes, caractérisé en ce que les solvants sont choisis parmi le chloroforme, le méthanol ou des mélanges de chloroforme et méthanol. 9. Procédé selon l'une des revendications précédentes, caractérisé en ce que dans l'étape B du procédé on remet le film obtenu après évaporation du solvant en suspension dans une solution tamponnée à PH compris. entre 5 et 8, de préférence à PH 5,9. 10. Procédé selon l'une des revendications précédentes, caractérisé en ce que dans l'étape B du procédé on remet le film obtenu après évaporation du solvant en suspension dans une solution de tampon acétate ou phosphate. 11. Procédé selon l'une des revendications précédentes, caractérisé en ce que l'agitation vigoureuse dans l'étape B est obtenue par traitement en ultrasons. 12. Procédé selon l'une des revendications précédentes, caractérisé en ce que, après l'étape B du procédé, des microcristaux sont purifiés par centrifugation et lavage à l'eau distillée. 13 Microcristaux obtenus par la mise en oeuvre du procédé selon l'une des revendications précédentes. 14. Composition pharmaceutique, caractérisée en ce qu'elle contient comme principe actif des microcristaux selon l'une des revendications précédentes. 15. Composition pharmaceutique liquide, caractérisée en ce qu'elle contient comme principe actif des microcristaux selon l'une des revendications précédentes. 16. Composition pharmaceutique liquide selon la revendication 15, caractérisée en ce qu'elle est conditionnée sous forme injectable. 17. Composition pharmaceutique liquide selon la revendication 16, caractérisée en ce qu'elle est conditionnée sous forme pulvérisable.