Brevet FR2619311A1 — publié le 19890217

-1- 2619311 L'invention concerne.de nouvelles compositions pharmaceutiques pour l'application topique possédant une activité antimicrobienne. Plus précisément, l'inven- tion concerne des compositions pharmaceutiques antimicro- biennes pour l'application topique qui se caractérisent en ce qu'elles contiennent en tant que substance active antimicrobienne un composé du groupe des substances ac- tives contenant dans leur molécule un noyau d'imidazole substitué par un groupe alkyle inférieur, en combinaison avec un ou plusieurs acides benzoiques éventuellement substitués, cette combinaison conduisant à une activité antimicrobienne synergétique. Dans le brevet européen n 0 007 595, on décrit des compositions pharmaceutiques contenant la substance active antimycotique Clotrimazol (1-[(2-chlorophényl)- diphénylméthyl]-1H-imidazole pour l'application externe en particulier un nouveau gel contenant cette substance active, des crèmes ou encore des compositions liquides qui contiennent du Crotamiton (N-crotonyl-N-éthyl-o- toluidine) en tant que solvant. D'autre part, dans le brevet européen n 0 070 525, on décrit des compositions pharmaceutiques contenant des substances actives antimycotiques ayant un cycle imidazole dans la molécule, par exemple le Niconazol, l'Econazol, ou encore l'Isoconazol, en solu- -a- Z 2619311 tion dans le Crotamiton, l'essence de menthe poivrée ou encore le salicylate de méthyle, ces derniers ayant également des activités pharmaceutiques en tant que pre- parations pour la peau mais étant tous dépourvus d'acti- vité antimycotique. A la suite de nouvelles recherches, et comme on le verra plus en détails ci-après, on a trouvé avec sur- prise que la combinaison consistant en une substance ac- tive antimicrobienne du groupe des substances actives contenant dans leur molécule un cycle imidazole substitué par un groupe alkyle inférieur, à savoir un composé de formule I N NR1 CH -CH-0-CH- R2 1 R3 Cl '-- t)X / 1/ ci Cl dans laquelle au moins un des symboles R1, R2 et R3 représente un atome d'halogène et les autres l'hydro- gène, ou bien ses sels formés par addition avec des acides acceptables pour l'usage pharmaceutique, ou bien un composé de formule II R C-- l(C6H52 f dans laquelle R4 représente un atome d'halogène, et un ou plusieurs acides benzoïques éventuellement substitués, avec le cas échéant des véhicules et/ou produits auxiliaires pharmaceutiques usuels dans les compositions pharmaceutiques pour l'application topique, possède une activité antimicrobienne-synergétique extra- ordinaire. Les acides benzoiques éventuellement substitués sont des acides de ce type qui contiennent en tant que substituants dans des positions variées du cycle benzé- nique un ou plusieurs atomes d'halogènes, des groupes hydroxy ou alcoxy inférieurs. On préfère les acides benzoîques éventuellement monosubstitués portant le substituant en position ortho du groupe carboxy dans le cycle benzénique. Dans les combinaisons décrites ci-dessus, l'u- tilisation de l'acide o-hydroxybenzoique, de l'acide salicylique et/ou de l'acide benzo3que non substitué pré- sente un intérêt particulier. Les halogènes mentionnés consistent en brome, iode ou fluor, mais plus spécialement en chlore. Un groupe alcoxy inférieur est un grouoe éthoxy, n-propoxy, isopropoxy, n-butoxy, isobutoxy, sec- butoxy ou tert-butoxy, plus spécialement méthoxy. La combinaison des substances actives mention- nées ci-dessus a une activité antimicrobienne synergé- tique inattendue par rapport à celle des composants individuels. L'invention concerne en particulier des compo- sitions pharmaceutiques antimicrobiennespour l'applica- tion topique consistant en la combinaison d'un composé de formule I dans laquelle au moins un des symboles RI, R2 et R3 représente un atome de chlore et les autres l'hydrogène, ou de ses sels formés par addition avec des acides acceptables pour l'usage pharmaceutique, par -4- exemple le Miconazol (R1 = R2 = Cl, R3 = H), l'Econazol (R2 = Cl, R1 = R H) et l'Isoconazol (R1 = R5 = Cl, R2 = H) ou d'un composé de formule II dans laquelle R4 représente un atome de chlore, par exemple le Clotrima- zol, et d'un ou plusieurs acides benzoiques éventuelle- ment substitués avec, le cas échéant, des véhicules et/ ou produits auxiliaires pharmaceutiques usuels. L'invention concerne en particulier des compo- sitions pharmaceutiques pour l'application topique qui, en raison d'un effet synergétique, ont des propriétés antimicrobiennes particulièrement marquées, ces compo- sitions consistant en la combinaison du Miconazol, en tant que composé de formule I dans laquelle R1 et R2 représentent chacun un atome de chlore et R3 l'hydro- gène, ou d'un sel de ce composé formé par addition avec un acide acceptable pour l'usage pharmaceutique, ou d'un composé de formule II dans laquelle R4 représente un atome de chlore, à savoir le Clotrimazol, et de l'acide salicylique et/ou de l'acide benzoique, avec le cas échéant des véhicules et/ou des produits auxiliaires pharmaceutiques usuels. De préférence, l'invention concerne des compo- sitions pharmaceutiques particulièrement actives, pour l'application topique, qui contiennent une combinaison du nitrate de Miconazol ou de Clotrimazol et d'acide salicylique et/ou d'acide benzoique avec, le cas échéant, des véhicules et/ou produits auxiliaires pharmaceutiques usue ls. Pour la préparation des sels des composés de formule I formés par addition avec des acides accepta- bles pour l'usage pharmaceutique, on peut utiliser tous les acides convenant à cet effet. On citera par exemple 1pq acides suivants: les acides haloqcnhydriques, par exemple l'acide chlorhydrique et l'acide bremhydrique, en particulier l'acide chlorhydrique, l'acide sulfurique, 5- l'acide phosphorique, l'acide nitrique, l'acide per- chlorique, des acides carboxyliques ou sulfoniques ali- phatiques, alicycliques, aromatiques ou hétérocycliques, par exemple les acides formique, acétique, propionique, succinique, glycolique, lactique, malonique, tartrique, citrique, ascorbique, maléique, hydroxymaléique, pyru- vique, phénylacétique, benzoique, p-aminobenzoique, an- thranilique, p-hydroxybenzoîque, salicylique ou encore p-aminosalicylique, embonique, méthane- et éthane- sulfonique, hydroxyéthane-sulfonique, éthylène-sulfo- nique, halbgénobenzène-sulfoniques, toluène-sulfonique, 1,5-naphtalène-disulfonique ou sulfanilique, la méthio- nine, le tryptophane, la lysine ou encore l'arginine. Les compositions pharmaceutiques selon l'inven- tion ont des propriétés antimicrobiennes, en particulier antimycotiques et antibactériennes. Ainsi par exemple, elles sont actives sur les microorganismes rencontrés dans les cas de blessures et de lésions dermiques, par exemple les espèces Tricophyton comme Trichophyton menta- grophytes, Epidermaphyton, par exemple Epidermaphyton floccosum, Microsporon, par exemple Microsporon felineum, les espèces Aspergillus, par exemple Aspergillus niger et Aspergillus finigatus, les mycolevures telles que les espèces Pytyrosporum, les espèces Candida, par exemple Candida albicans, et les bactéries à gram positif, par exemple les espèces Staphylococcus, par exemple Staphylo- coccus aureus, Pseudomonas aeruginosa, Propioni bacterium et Coryne bacterium acnes. Cette énumération de micro- organismes est donnée uniquement à titre illustratif mais ne limite nullement la gamme des germes qu'on peut com- battre. Les compositions pharmaceutiques préparées con- formément à l'invention peuvent être utilisées en tant qu'agents à activité antimycotique pour le traitement des infections de la peau causées par des dermatophytes -6- et des saccharomycètes, par exemple des dermatomycoses et des mycoses systémiques, ou encore en tant qu'agents à activité antibactérienne, pour le traitement de l'ac- né, des pellicules et d'autres maladies de la peau. D'autre part, les combinaisons préparées conformément à l'invention ont également des propriétés anti-pruri- tiques et peuvent être utilisées pour le traitement des maladies à pruritus. Les compositions pharmaceutiques selon l'in- vention pour l'application topique contiennent, en plus des combinaisons d'un composé de formule I ou II et d'un ou plusieurs acides benzoiques éventuellement substi- tués, des véhicules ou produits auxiliaires acceptables pour l'usage pharmaceutique. La posologie quotidienne des substances actives dépend de l'âge ou d'autres con- ditions individuelles du patient et également du type de la formulation. Les concentrations préférées des substances actives combinées dans les compositions selon l'inven- tion se situent dans l'intervalle de 0,01 à 10 % en poids pour les imidazoles à substituant alkyle inférieur de formule I ou II, de préférence de 0,1 à 2 % en poids, et de 0,5 à 25 % en poids pour le ou les acides ben- zoiques éventuellement substitués, de préférence cepen- dant I à 15 % en poids. Les compositions pharmaceutiques convenant pour l'application topique sont principalement des crèmes, des pommades et des gels, mais également des poudres, des pâtes, des lotions, des teintures, des mousses, des pro- duits à pulvériser, des aérosols, des solutions et des baumes. Les crèmes ou lotions sont des émulsions huile- dans-l'eau contenant plus de 50 % d'eau. On utilise sur- tout pour la base huileuse des alcools gras, par exemple l'alcool laurylique, cétylique ou stéarylique, des acides gras, par exemple l'acide palmitique ou l'acide stéarique, des cires liquides à solides, par exemple du myristate d'isopropyle, de la lanoline ou de la cire d'abeilles et/ou des hydrocarbures, par exemple de la vaseline (petrolatum) ou de l'huile de paraffine. Les agents émulsionnants utilisés sont des substances ten- sioactives ayant principalement des propriétés hydro- philes, par exemple les agents émulsionnants non- ioniques de ce type, entre autres les esters d'acides gras de polyalcools ou des adducts de l'oxyde d'éthylène de ces esters, par exemple des esters d'acides gras et de polyglycérol ou des esters d'acides gras et de sor- bitanne polyoxyéthyléné (produits du commerce Tweens), des éthers d'alcools gras ou des esters d'acides gras polyoxyéthylénés, ou des agents émulsionnants ioniques possédant les propriétés voulues, par exemple les sels de métaux alcalins de sulfates d'alcools gras comme le laurylsulfate de sodium, le cétylsulfate de sodium ou le stéarylsulfate de sodium, qu'on utilise habituelle- ment conjointement avec des alcools gras, par exemple de l'alcool cétylique ou de l'alcool stéarylique. Les additifs à la phase aqueuse sont entre autres des pro- duits qui empêchent le séchage des crèmes, par exemple des polyalcools comme le glycérol, le sorbitol, le pro- pylène-glycol et/ou des polyéthylène-glycols, mais égale- ment des conservateurs, des parfums, etc. Les pommades ou lotions sont des émulsions eau-dans-l'huile contenant jusqu'à 70 %, mais de préfé- rence d'environ 20 à 50 % d'eau ou de phase aqueuse. La phase grasse consiste principalement en hydrocarbures, par exemple vaseline, huile de paraffine et/ou paraffine, avec, pour améliorer la capacité d'absorption de l'eau, de préférence des composés hydroxylés appropriés, par exemple des alcools gras ou leurs esters, entre autres l'alcool cétylique ou les alcools de lanoline ou la lano- 28 261 311 -8- line. Les agents émulsionnants sont des substances possédant les propriétés lipophiles voulues, par exemple des esters d'acides gras et de sorbitanne (produits du commerce Spans), par exemple l'oléate de sorbitanne et/ou l'isostéarate de sorbitanne. Les additifs à la phase aqueuse sont entre autres des agents humectants tels que des polyalcools, par exemple du glycérol, du propylène-glycol, du sorbitol et/ou des polyéthylène- glycols, et des conservateurs, des parfums, etc. Les micro-émulsions sont des systèmes isotropes dont la base consiste en les quatre composants suivants: l'eau, un agent émulsionnant, par exemple un agent ten- sioactif tel que le produit du commerce Eumulgin, un li- pide, par exemple une huile non polaire telle que l'huile de paraffine, et un alcool portant un groupe lipophile, par exemple le 2-octyldodécanol. Si on le désire, on peut introduire d'autres additifs dans les micro-émul- sions. Les pommades grasses sont anhydres et contien- nent en tant que base plus spécialement des hydrocarbures tels que la paraffine, la vaseline et/ou des huiles de paraffines, ou encore des matières grasses naturelles ou artificielles, par exemple le triglycéride des acides gras de coco ou de préférence des huiles hydrogénées, par exemple l'huile d'arachide ou l'huile de ricin hydro- génée, ou encore des esters partiels d'acides gras et du glycérol, par exemple le mono- et le di-stéarate de glycérol, avec les alcools gras augmentant la capacité d'absorption de l'eau, les agents émulsionnants et/ou additifs mentionnés en référence aux pommades. Dans le cas des gels, il faut différencier les gels aqueux, anhydres ou à faible teneur en eau, qui consistent en matières gonflables et gélifiables. On citera en premier lieu des hydrogels transparents à base de macromolécules minérales ou organiques. Les -9- 2619311 composants minéraux à haut poids moléculaire ayant des propriétés gélifiantes consistent principalement en silicates hydratés tels que des aluminosilicates, par exemple la bentonite, les aluminosilicates de magnésium, par exemple le produit du commerce Veegum, ou une silice colloïdale, par exemple le produit du commerce Aerosil. Parmi les substances organiques à haut poids moléculaire qu'on peut utiliser, on citera par exemple des macromolé- cules naturelles, artificielles ou synthétiques. Les polymères naturels et artificiels dérivent principale- ment de polysaccharides contenant les motifs d'hydrates de carbone les plus variés, par exemple la cellulose, les amidons, la gomme adragante, la gomme arabique, la gélose, la gélatine, l'acide alginique et ses sels tels que l'alginate de sodium, et leurs dérivés tels que les alkylcelluloses inférieures, par exemple la méthyl- ou l'éthyl-cellulose, la carboxy- ou une hydroxyalkyl- cellulose inférieure, par exemple la carboxyméthyl- cellulose ou l'hydroxyéthylcellulose. Les motifs de structure des macromolécules synthétiques gélifiantes sont par exemple des composés aliphatiques insaturés portant les substituants appropriés comme l'alcool vi- nylique, la vinylpyrrolidone, l'acide acrylique ou mé- thacrylique. Comme exemples des polymères qui convien- nent, on citera des dérivés de l'alcool polyvinylique comme le produit du commerce Polyviol, des polyvinyl- pyrrolidines comme le produit du commerce Kollidon, des polyacrylates ou polyméthacrylates tels que les produits du commerce Rohagit S ou Eudispert. On peut ajouter aux gels des additifs usuels tels que les con- servateurs ou des parfums. Les pâtes sont des crèmes et pommades contenant des constituants pulvérulents qui absorbent les sécré- tions, par exemple des oxydes métalliques comme l'oxyde de titane ou l'oxyde de zinc, ou encore du talc et/ou -10- des aluminosilicates qui ont pour fonction de retenir l'humidité ou les sécrétions. Les mousses sont administrées par exemple à partir de récipients sous pression et consistent en émulsions liquides du type huile-dans-l'eau sous forme aérosol avec, pour propulseurs, des hydrocarbures halo- génés tels que les chlorofluoralcanes inférieurs, par exemple le dichlorodifluorométhane et le dichlorotétra- fluoréthane. Pour la phase huileuse, on utilise entre autres des hydrocarbures tels que l'huile de paraffine, des alcools gras tels que l'alcool cétylique, des esters d'acides gras tels que le myristate d'isopropyle et/ou d'autres cires. On utilise entre autres en tant qu'a- gents émulsionnants des mélanges d'agents émulsionnants appropriés principalement hydrophiles comme les esters d'acides gras et de sorbitanne polyoxyéthylénés (pro- duits du commerce Tweens) et d'agents émulsionnants possédant principalement des propriétés lipophiles tels que les esters d'acides gras et de sorbitanne (produits -0 du commerce Spans). On trouve en outre les additifs usuels tels que les conservateurs, etc. Les teintures et lotions sont principalement à base d'éthanol, avec adjonction éventuelle d'eau, et contiennent entre autres des polyalcools, par exemple du glycérol, des glycols et/ou un polyéthylène-glycol en tant qu'agents humectants, empêchant l'évaporation,et des substances surgraissantes, par exemple des esters d'acides gras et de polyéthylène-glycols inférieurs, c'est-à-dire des substances lipophiles solubles dans le mélange aqueux, qui servent à remplacer les matières grasses éliminées de la peau par l'éthanol; lorsque c'est nécessaire, on peut ajouter d'autres produits auxiliaires et additifs. Les compositions pharmaceutiques pour l'appli- cation topique sont préparées de manière connue en soi, _11 - par exemple par dissolution ou mise en suspension de la substance active dans la base ou une partie de la base lorsque c'est nécessaire. Lorsqu'on administre la subs- tance active à l'état de solution, celle-ci est en géné- ral dissoute dans l'une des deux phases avant la mise en émulsion; lorsqu'on l'utilise à l'état de suspension, on la mélange avec une partie de la base après la mise en émulsion puis on ajoute le reste de la composition. La supériorité des compositions pharmaceutiques préparées conformément à l'invention et contenant la combinaison de substances actives décrite ci-dessus ré- sulte de l'activité antimicrobienne synergétique de la combinaison par rapport à l'activité antimicrobienne des composants individuels. On donne ci-après des renseigne- ments détaillés à ce sujet; Lorsqu'on introduit des substances actives dif- férentes dans une composition, les propriétés de ces substances actives peuvent s'opposer, s'ajouter ou con- duire à une activité synergétique. Naturellement, l'acti- vité synergétique est la plus recherchée car d'une part elle permet des doses plus faibles et d'autre part elle permet une amélioration de l'activité par rapport à celle des composants individuels. Avec les composés ou combinaisons de composés qu'on utilise pour leur activi- té antimicrobienne, en particulieir leur activité anti- mycotique, on détermine la capacité d'inhibition de la croissance des germes par mesure de X CMI (concentration minimale inhibitrice) et des taux de mortalité, en pro- cédant à la mesure des zones d'inhibition. Si l'on définit la "concentration inhibitrice partielle" par la fraction: -12- Concentration minimale inhibitrice (CMI) des composants actifs dans le produit combiné (l'es- sai est effectué simultanément avec 2 ou 3 compo- sants actifs en solution) CIP= Concentration minimale inhibitrice (CMI) du com- posant actif individuel (l'essai est effectué en solution avec un seul composant actif) on peut désigner par ZCIP la somme des valeurs de CIP obtenues à la mesure s'il n'y a pas d'action mutuelle entre les composants individuels. En d'autres termes, s'il y a synergie, la somme des valeurs de CIP obtenues à la mesure pour les composants individuels est infé- rieure à la valeur úCIP obtenue pour la combinaison des substances actives. La valeur ZCIP déterminée à la mesure donne une indication sur l'intensité de l'ac- tion mutuelle entre les composés individuels d'une com- binaison. La concentration minimale inhibitrice (CMI) est donnée en Ig/ml pour le Miconazol (utilisé à l'état de nitrate), l'acide salicylique, l'acide benzoïque, seuls ou en combinaisons dans le tableau I ci-après; les modes opératoires ayant conduit à ces résultats sont décrits plus loin. Tableau I CMI (ug/ml Concentration inhibitrice Somme des Germe partielle (CIP) CIP nitrate de B miconazol C. albicans 4 - 8 - - - 1365 - - - 680 0,25 200 - 0,0625 + 0,146 = 0,2 0,5 - 200 0,125 + 0,294 m 0,589 0,25 100 100 0,065 + 0,07 + 0,15 M 0,28 T. mentagrophytes 1 - - - 670 - - - 510 0,5 200 - 0,5 +0 0, 0,8 0,06 - 200 0,06 + 0,65 = 0,71 0,06 25 200 0,06 + 0,04 + 0,65 = 0,75 0,25 200 50 0,25 + 0,5 + 0,16 = 0,71 S. aureus 4 - - S = acide salicylique; B acide benzoique -14- Les valeurs de CMI déterminées répondent aux attentes. Les valeurs trouvées pour le Miconazol indi- quent une bonne activité mais par contre, pour l'acide benzoique ou l'acide salicylique, il faut des concen- trations allant jusqu'à la limite de solubilité pour obtenir une valeur de CMI. Des sous-cultures dans des godets, qui ne présentent pas de croissance microbienne, indiquent qu'une concentration de l'acide benzoïque re- présentant la CMI ou le voisinage de la CMI a encore un effet microbicide alors que l'activité du Miconazol est principalement statique, et on observe une nouvelle croissance de microbes dans les sous-cultures. Les valeurs de CMI obtenues pour des combinai- sons du Miconazol et de l'acide salicylique ou de l'acide benzoique ou des deux donnent des valeurs d'activité anti- microbiennes supérieures aux valeurs obtenues par addi- tion. Pour le germe Candida albicans, l'activité de la combinaison des substances actives est très supérieure à celle qu'on pouvait attendre de l'addition des concentra- tions inhibitrices partielles (CIP). On a observé à cet égard que des concentrations considérablement inférieures aux valeurs de CMI ont en- * core une activité significative sur la croissance. Les observations faites à ce sujet, à savoir que les compo- sants individuels contribuent tous à l'activité anti- microbienne, présentent de l'importance pour le produit à l'état de composition dans laquelle la diffusion des produits individuels est limitée en soi. Le mode opératoire de la détermination des acti- vités in vitro du Miconazol, de l'acide salicylique et de l'acide benzoïque sur les germes Candida albicans, Trichophyton mentagraphytes et Staphylococcus aureus est décrit ci-après. -15- 2 691 1 1 Détermination de la concentration minimale inhibitrice (CMI) 1. Inoculum Les germes utilisés sont C. albicans i.C.Y. C 610, T. mentagrophytes N.C.P.F 80 et S. aureus N.C.T.C. 8532. Les germes C. albicans sont cultivés pendant la nuit dans du milieu liquide de Sabouraud à une température de 32 C et l'inoculum obtenu est dilué à peu près & 2 x 105 germes en se basant sur un compte total des germes. Les germes de T. mentagrophytes micro- conidia ont été prélevés sur une culture âgée de 12 jours effectuée sur de la gélose au dextrose de Sabou- raud à une température de 32aC, et on a conservé une suspension aqueuse lavée à l'état congelé. Les essais in vitro ont été effectués à la dilution correspondante dans un milieu nutritif consistant en du milieu liquide de Sabouraud avec des inocul ms de 2 x 105 germes/ml de substrat, basé sur un compte total des germes. Une cul- ture de S. aureus dans un milieu nutritif consistant en "Isotonic Sensittest-Broth" (ISB) faite à une température de 37 C (pendant la nuit) a été diluée dans un rapport de 1:500par de l'ISB. On a ensuite compté les germes vi- vants. 2. Solutions On a préparé par dilution de deux fois des so- lutions de Niconazol, d'acide salicylique et/ou d'acide benzoique dans un bouillon de viande. Aux fortes con- centrations d'acide salicylique et d'acide benzoique, on vérifie la concentration de la substance active dans la solution en préparant une solution saturée qu'on filtre au travers d'un filtre à membrane de 0,45Ium. Le filtrat obtenu, utilisé pour la préparation d'une di- lution de deux fois pour la détermination de la CMI, est analysé par chromatographie de liquide sous haute pres- sion. Pour le Miconazol, on utilise comme solvant le DMF (0,5 %) qui est présent à cette concentration dans -16- tous les milieux. 3. Mode opératoire d'essai in vitro On détermine les valeurs de CMI des substances actives individuelles en plaçant des volumes de 1001 dans les gros godets d'une plaque à microtitrage. On ajoute un volume égal d'inoculum et on cultive les pla- ques à 32 C pour les deux germes fongiques et à une tem- pérature de 37 C pour S. aureus. Pour les valeurs de CMI, on prépare des combinaisons de deux composés dans chaque cas qu'on utilise en solution aux trois concentrations différentes nécessaires; on introduit ensuite 75/1litres de chaque combinaison et de chaque inoculum dans les go- dets des plaques à microtitrage et on cultive comme dé- crit ci-dessus. On a également soumis aux essais un sys- tème consistant en trois composants en utilisant un vo- lume de 50)litres pour l'ensemencement des plaques. Résultats Les résultats sont observés 24 heures après culture (incubation) pour S. albicans et S. aureus et 6 à 7 jours pour T. mentagraphytes. Les points finals sont déterminés à l'examen visuel direct et par mesure de la densité optique, par utilisation d'un photomètre à réseau vertical à 450 nm. En particulier, la lecture de la densité optique permet d'étudier l'activité sur la croissance des concentrations inférieures aux valeurs de CMI. On a étudié l'activité antimicrobienne de di- verses compositions de crèmes en estimant les zones d'inhibition selon le mode opératoire suivant: Mesure de la zone d'inhibition (plaque à prolifération) On inocule (ensemencement) environ I x 10 germes/ml de chacun des germes soumus aux essais à la surface d'une plaque de gélose (SDA pour levures et mycètes et TSA pour bactéries) et on laisse sécher pendant 30 minutes. Dans la gélose des plaques, à l'aide -17- d'un percebouchon n 3, on forme des creux (godets) et on introduit dans ces creux environ 100 mg de crème. On cultive les plaques pendant la nuit (plus longtemps pour les mycètes) à une température de 32 C et on me- sure le diamètre des zones d'inhibition (cf. tableau II). Germes utilisés: Candida albicans,.Trichophyton mentagrophytes, Staphylococcus aureus, Pseudomonas aeru- ginosa. Une comparaison de tous les essais de diffusion sur gélose montre que la combinaison MSB (Miconazol + acide salicylique + acide benzoique) est nettement plus active que les autres, & savoir le Miconazol seul ou la combinaison SB (acide salicylique + acide benzoique). Résultats obtenus avec les compositions de crèmes On a utilisé les abréviations suivantes: MSB: la crème contient du Miconazol, de l'acide sali- cylique et de l'acide benzoïque SB: la crème contient de l'acide salicylique et de l'acide benzoïque D: crème du commerce Daktarin (& 2 % de Miconazol) de la firme Janssen Pharmaceuticals, Belgique M = Miconazol à 2 %. Tableau II Compositions de crèmes Microorganisme (germe) Zones d'inhibition (diamètre, mm) MSB SB M D C. albicans (MCYC610) (1) 27 17,7 9,2 17,2 (2) 33,7 24,7 16,7 59,8 (5) 29,5 * 11,5 24,0 T. mentagrophytes NCOF80, prégermé 55 58 30,5 45 T. mentagrophytes (1) 54, 5 52,5 57,8 43 1 NCPF80, microconidia (2) 49,0 55,5 45,5 40,8 c, (3) > 80 * 45,5 54 T. mentagrophytes ATCC 18748 52,5 50,3 41,8 57 (plaques à prolifération) T. mentagrophytes 56 54,6 28 * C. albicans 24 20 15,6 * T. mentagrophytes 44,6 54,9 * 50,9 Les résultats obtenus avec MSB, comparativement à D et M, sont signifiants à un niveau de 0,05 %. Les résultats obtenus avec MSB comparativement à SB sont signifiants à un niveau de 2,5%. w * - mesure non effectuée. -19- Etude de diffusion La plupart des compositions pharmaceutiques consistent en la substance active et les produits auxi- liaires et il est donc extrêmement important de vérifier l'activité du composé actif dans la composition particu- lière. Pour permettre l'application topique, il faut vé- rifier que la substance active ou les substances actives diffusent de la composition: à cet effet, on exploite l'essai de diffusion sur plaques qui permet de vérifier que le produit est utilisable. Les résultats obtenus dans cet essai sont rapportés dans le tableau III. Les compositions I à 7 contiennent toutes la même formula- tion de base mais les substances actives sont diffé- rentes. Les abréviations utilisées sont bien compréhen- sibles; ainsi par exemple, l'abréviation M2S3 indique 2 % de Miconazol et 3 % d'acide salicylique. L'abrévia- tion DJ désigne la composition du commerce Daktarin de la firme Janssen, AJ désigne le produit du commerce Acnidazil de la firme Janssen. A l'examen des résultats, on remarque qu'avec les microorganismes (germes) utili- sés, la combinaison de Miconazol, d'acide benzoïquè et d'acide salicylique est en moyenne la-plus appropriée. On notera que les comparaisons entre toutes les composi- tions ont été réalisées au même moment car des comparai- sons effectuées à des jours différents ne donnent pas les mêmes résultats. Toutefois, l'ordre relatif reste le même. Détermination de l'activité antimicrobienne d'une composition de crème sur des germes variés Tableau III Zones d'inhibition (diamètre en mm) pour la Germes composition de crème n 1. 2. 3. 4. 5. 6. 7. 8. 9. M283 M2 S3B6 S3 B6 M2B6 MES3B6 DJ AJ (C. albicans (M.C.Y.C.610) 15,3 9,2 17,7 0 11,2 23 27 17,2 * T. mentagrophytes (N.C.P.F.80) 34 30,5 38 27,3 37,3 47,5 55 43 * prégermé T. mentagrophytes (N.C.P.F.80) 31,5 37,8 52,5 22,5 42 51,3 54,3 43 * microconidia S. aureus 49,3 24,5 42,8 45,2 54,2 56 48,9 30,2 20,5 (N.C.T. C.6749 S.D.A.plates) Ps. aeruginosa 11,8 O 21,3 14,5 14,8 16,7 20,8 12,7 0 (N.C.T.C.1033552 S.D.A.plates) C. albicans (N.C.Y.C.610) 3355,3 16,724, 7 11,2 21,5 33,3 33,7 39,8 20,5 T. mentagrophytes (A.T.C.C.18748) 50,5 41, 8 50,3 28,5 47,8 54,2 52,3 57 52 T. mentagrophytes (N.C.P.F.80) 61,8 45,3 55,3 56,8 45,8 60,3 49,0 40,8 33 *= rmesure non effectuée M - Miconazol (%), b: benzoïque (%) S = acide salicylique (%), DS = Daktarin (Janssen), AJ = Acnidazor (Janssen). -21- Les compositions de crèmes soumises aux essais sont les suivantes (préparation et description dans les exemples 4 à 6). Crème n 1 Composition paraffine molle (blanche) 23,75 propylène-glycol 11,40 alcool cétostéarylique 23,75 Cetrimide 0,95 Méthylparaben 0,025 Propylparaben 0,015 eau 35,15 nitrate de Miconazol 2,00 acide salicylique 5,00 acide benzoique 0,00 Crème na 2 Coomrosition % paraffine molle (blanche) 24,50 propylène-glycol 11,75 alcool cétostéarylique 24,50 Cetrimide 0,98 Méthylparaben 0,025 Propylparaben 0,015 eau 56,25 nitrate de Miconazol 2,00 acide salicylique 0 acide benzoique 0 Crème n 3 Composition % paraffine molle (blanche) 22,75 propylène-glycol 10,92 alcool cétostéarylique 22,75 Cetrimide 0,91 Méthylparaben 0,025 Propylparaben 0,015 -22- eau 33,67 nitrate de I4iconazol 0,00 acide salicylique 5,00 acide benzoique 6,00 Crème n 4 Composition va paraffine molle (blanche) 24,25 propylène-glycol 11,64 alcool cétostéarylisue 24,25 Cetrimode 0,97 ?é thylparaben 0,025 Propylparaben 0,015 eau 35,89 nitrate de Miconazol 0,00 acide salicylique 5,00 acide benzoique 0,00 Crème n 5 Composition paraffine molle (blanche) 23,50 propylène-glycol 11,28 alcool cétostéarylique 23,50 Cetrimode 0,94 Méthylparaben 0,025 Propylparaben 0, 015 eau 34,78 nitrate de Miconazol 0,00 acide salicylique 0,00 acide benzoique 6,00 Crème n 6 Composition % paraffine molle (blanche) 23,00 propylène-glycol 11,04 alcool cétostéarylique 23,00 Cetrimide 0,92 Méthylparaben 0,025 -25- Propylparaben 0,015 eau 54 '04 nitrate de Miconazol 2,00 acide salicylique 0,00O acide benzoïque 6,00 Crème n 7 Composition paraffine molle (blanche) 22,25 propylène-glycol 10,68 alcool cétostéarylique 22,25 Cetrimide 0,89 Mléthylparaben 0,025 Propylparaben 0, 015 eau 32,93 1) nitrate de Miconazol 2,00 acide salicylique 3,00 acide benzoique 6,00 Crème n 8 Daktarin (de la firme Janssen) à 2 % en poids de nitrate de Miconazol Crème n0 9 Acnidaziie(de la firme Janssen) à 2 % en poids de nitrate de Miconazol et 5 % en poids de peroxyde de benzoyle. Activité fongicide du Miconazol avec l'acide salicylique et/ou l'acide benzoique Des sous-cultures des essais de CMI effectués pour la détermination de la CMB (concentration minimale bactéricide) montrent que l'acide benzoïque et l'acide salicylique ont une activité fongicide à des concentra- tions qui ne sont que légèrement supérieures aux valeurs de CMI déterminées par l'expérience. Pour la détermina- tion de l'activité microbicide des constituants actifs, on a utilisé comme germes des microconidies, et on a ) On a abaissé la concentration à 0,1 % et on n'a pas constaté de perte d'activité. -24- exploité le procédé pour la détermination des taux de mortalité. Des concentrations supérieures ou égales à /,,um/ml de IMiconazol ont conduit à une activité fon- gicide dans un délai de 24 heures; pour l'acide ben- zoique et l'acide salicylique, on a constaté la même activité à des concentrations de 400 à 6001g/ml. Une combinaison d'autres basses concentrations dans une période d'essai de 6 heures a montré que l'a- cide salicylique accroissait dans tous les cas l'acti- vité fongicide du Miconazol à une concentration de 20 ou même de 10,ug/ml. La combinaison de l'acide benzoIque et de l'acide salicylique conduit également à une acti- vité fongicide améliorée. L'activité sur les spores peut être considérée comme inhibitrice et comme totalement destructrice. La preuve en a été apportée en déterminant l'activité en présence et après élimination des substances actives, par mesure de la capacité à former des colonies. Le Miconazol (à 10/ug/ml) et l'acide salicyli- que (à 200/ug/ml) seuls ou en combinaison entre eux ont un effet inhibiteur cer la germination est inhibée mais quelques germes survivent. Activité de l'acide salicylique et du Miconazol par étude de la viabilité et de l'aptitude à former des germes (en %) de T. mentagrophytes microconidia Tableau IV Combinaison Viabilité, cfu/ml à Capacité de germination pH o/oà 6 hr 24 hr 6 hr 24 hr à blanc 3,5 x 105 2,4 x 105 12 65 - M10 5,9 x 105 7,0 x 104 9 11 5,88 MlO/S 200 8,3 x 104 2,3 x 104 6 16 5,41 M10/S 400 0 0 4 13 5,06 M20 3,3 x 105 4,6 x 105 7 5 5,84 1M20/S 200 2,2 x 104 5,3 x 103 8 13 5,41 M20/S 400 0 0 9 12 5,07 S 200 4,8 x 105 1,2 x 105 12 41 5,45 S 400 0 0 14 14 5,08 M = Miconazol, S acide salicylique -26- Le compte initial à To donne 7,9 x 105 cfu/ml. On a soumis le Miconazol à diverses concentrations dans des compositions de crèmes à des essais sur T. mentagro- phytes (tableau V). Les compositions contenant la combi- naison MSB sont nettement supérieures à celles qui con- tiennent la combinaison SB. La composition de crème con- tenant 2 % de MSB est nettement supérieure aux autres compositions soumises aux essais alors que par contre, les compositions contenant 0,1 à 1 % de Miconazol ne sont pas nettement différentes et surtout ne sont pas nettement supérieures aux compositions contenant la composition SB ou à des produits commerciaux contenant uniquement 2 % de Niconazol (Daktarin). Effet de la concentration du Miconazol dans des composi- tions de crèmes contenant 3 % d'acide salicylique et 6 % d'acide benzoique, sur T. mentagrophytes Tableau V Crème Diamètre des zones d'inhibition, mm Mo - I 2 3 4 5 yenne E.T. 1. Miconazol 2 % 46 44 45,5 45 42,5 44,6 1,39 2. Miconazol 1 % 40 40,5 45 44,5 45,44 42,2 1,89 3. Niconazol 0,5 % 40,5 40,5 40,5 44 42 41,8 1,144 4. Miconazol 0,25 % 42,5 40,5 40 42 39 40,8 1,44 5. Miconazol 0,1 % 42,5 40, 5 40,5 40 42,5 41,2 1,20 6. Miconazol O % 34 36 35,5 35 34 34,9 0,89 7. Miconazol 2 % 33,5 30 31 29 NT 30,9 1,93 (Daktarin 3o T. mentagrophytes 7, 5 x 104 Signifiance (0,05 %) Multiple--Range-Test (Neuman Keuls) pour la signifiance (0,05 %). -27- I contre 2,3,4,5,6,7 différences signifiantes 2 contre 5,4,5 pas de différences signifiantes 2 contre 6,7 différences signifiantes 3 contre 4, 5 pas de différences signifiantes 3 contre 6,7 différences signifiantes 4 contre 5 pas de différences signifiantes 4 contre 6,7 différences signifiantes contre 6,7 différences signifiantes 6 contre 7 différences signifiantes Les résultats rapportés dans le tableau V mon- trent que l'effet synergétique apparaît sur un grand intervalle de concentrations variées en Miconazol. 2. Une deuxième preuve de l'effet synergétique peut être apportée par les résultats cinétiques du ta- bleau VI ci-après. On a déterminé les taux de mortalité de T. men- tagrophites microconidia dans le cas de l'utilisation du MIiconazol (M) seul et en combinaison avec l'acide ben- zoïque (B) et l'acide salicylique (S). Tableau VI Temps M20 M20+S 200 M20+B 200 MO1 M10+S 200 MlO+B 200 (hrs) I IxlQ5 1, 1x105 6,7x104 2,0x105 1,3x105 1,2x105 2 3,3x104 1,2x104 2,5x10 4 9,2x104 5,8xl04 4,2x1 04 4 2,2x104 1,8x103 1,9x104 1,6x105 1,5x104 2,5x104 6 1, 4x104 5,0x102 1,2x1Q4 7,5x104 8,3x1035 2,6x104 24 8,3x102 0 4,2x102 2, 3x104 3,3x102 1,7x104 pH initial 5,98 5,57 5,50 5,94 5,54 5,49 final 5,95 5,54 5,50 5,93 5,53 5,48 S - acide salicylique, B = acide benzoïque Le compte initial a TO donne un résultat de 5,9 x 105 cfu/ml oo o -29- Toutes les solutions ont été faites dans le milieu liquide de Sabouraud (SLM + 0,5 % de DMF) la veille afin d'assurer une dissolution complète. A 0,1 ml de Trichophyton mentagrophytes micro- conidia, on a ajouté 9,9 ml d'un échantillon (T. ment. estimé: 1 x 108 cfu/ml). Le compte des germes viables a été fait sur la solution contenant les germes. Les volumes de 0,1 ml ont été prélevés avec une pipette de ,,ulitres. Les échantillons ont été maintenus dans tous les cas à une température de 32 C. On a prélevé 1 ml au bout de 1, 2, 4, 6 et 24 heures, et on a compté/es germes viables. Les dilutions en série ont été faites dans de l'eau à 0,1 % de peptone et réparties sur des plaques selon le mode opératoire de Miles et Migra, sur gélose à la dextrose de Sabouraud. Les plaques ont été exami- nées au bout de 6 et 14 jours. Echantillon Concentration I M 20,g/ml 2 M 20 + S 200,g/ml 3 M 20 + B 200/ug/ml 4 M 10o,,/ug/ml M 10 + S 200 Ig/ml 6 M 10 + B 2001ug/ml S = acide salicylique; B = acide benzoïque A titre de comparaison, on a déterminé les va- leurs de CMI pour le Miconazol dans le milieu liquide de Sabouraud. Les concentrations en Miconazol étaient de 4, 2, 1, 0,5, 0,25, O,125/ug/ml (en double exemplaire). On a ajouté 0,1 ml de T. microconidia afin de parvenir à une concentration finale d'environ I x 105 cfu/ml (la même quantité de germes que ci-dessus). Les exemples qui suivent illustrent l'invention -30- sans toutefois la limiter. Exemple 1 On prépare de la manière suivante une poudre contenant 2 % de nitrate de Miconazol, 2,% d'acide sali- cylique et 3 % d'acide benzoique: Composition nitrate de Miiconazol 2 % acide salicylique 2 % acide benzoïque 3 % silice amorphe 0,1 % talc purifié et micronisé complément à 100 % Le nitrate de MIiconazol, l'acide salicylique et l'acide benzoique sont micronisés en présence de la silice amorphe. Le mélange micronisé est ensuite ajouté par petites portions au talc stérile, micronisé et puri- fié. On poursuit le mélange jusqu'à homogénéité. Exemple 2 On prépare de la manière suivante une composi- tion en aérosol contenant 3 % de nitrate de Miconazol, 3 % d'acide salicylique et 6 % d'acide benzoique: Composition nitrate de Miconazol 3% acide salicylique 5 % acide benzoique 6 % Tween 80 0,1 % silice amorphe 0, 1 % hydrocarbure désodorisé q.s. On prépare un mélange micronisé du nitrate de Miconazol, de l'acide salicylique, de l'acide benzoique et du dioxyde de silice amoDrphe (cgoe décrit ci-dessus pour la préparation d'une poudre). Sur ce mélange, on pulvérise le Tween 80 à l'état de solution alcoolique, en plusieurs portions afin d'assurer l'évaporation du solvant et une répartition uniforme. La poudre revêtue du Tween 80 est ensuite mise en suspension dans l'hydrocarbure désodorisé -51- 2619311 -31 - puis introduite dans les emballages par des techniques classiques. L'hydrocarbure utilisé est un hydrocarbure non inflammable possédant les propriétés voulues. Exemple 3 On prépare de la manière suivante une composi- tion en lotion contenant 1 % de nitrate de Miconazol, 3 % d'acide salicylique et 6 % d'acide benzoique: Composition nitrate de Niconazol 1 % acide salicylique 3 % acide benzoique 6 % butylhydroxytoluène 2 % diéthyltoluamide 2 % polyéthylène-glycol 400 complément à 100 % On introduit le nitrate de Miconazol, l'acide salicylique et l'acide benzoique dans la moitié de la quantité totale de polyéthylène-glycol 400, le butyl- hydroxytoluène et le diéthyltoluamide et on agite jus- qu'à obtention d'une solution limpide. On complète alors au volume final par le restant de polyéthylène-glycol 400. Exemple 4 On prépare de la manière suivante une crème contenant 2 % de nitrate de Miconazol, 3 % d'acide sali- cylique et 6 % d'acide benzoique: Composition paraffine molle (blanche) 22,25 % propylène-glycol 10,68 % alcool cétostéarylique 22,25 % Cetrimide 0,89 % Methylparaben 0,025/o Propylparaben 0,01 5/0 eau 32,93 % nitrate de Miconazol 2,00 % acide salicylique 3,00 % -32- Z -D261931 1 acide benzoïque 6,00 % Pour la préparation de cette crème, on peut utiliser une technique de fusion ou de dispersion. On mélange la paraffine molle blanche, le propylène-glycol et l'alcool cétostéarylique et on chauffe jusqu'à ob- tention d'un liquide homogène visqueux. On dissout le nitrate de Miconazol, l'acide salicylique et l'acide benzoYque dans ce liquide, avec les Paraben. On dissout d'autre part le Cetrimide dans l'eau à 60 C et on ajoute sous agitation vigoureuse à la phase huileuse. On obtient une crème homogène. On ajoute le restant de l'eau et on homogénéise à nouveau le mélange. Exemple 5 On prépare comme décrit dans l'exemple 4 une composition de crème contenant 2 % de nitrate de Micona- zol et 3 % d'acide salicylique. Compo s ition paraffine molle (blanche) 23,75 % propylène-glycol 11,40 % alcool cétostéarylique 23,75 % Cetrimide 0,95 % Méthylparaben 0,025% Propylparaben 0,015%/ eau 35,15 % nitrate de Miconazol 2,00 % acide salicylique 3,00 % Exemple 6 On prépare comme décrit dans l'exemple 4 une composition de crème contenant 2 % de nitrate de Miconazol et 6 % d'acide benzoique: Composition paraffine molle (blanche) 23,00 % propylène-glycol 11,04 % alcool cétostéarylique 23,00 % Cetrimide 0,92 % MIéthylparaben 0,025 %e Fropylparaben 0,015 % eau 34,04 % nitrate de Miconazol 2,00 % acide salicylique 0,00 % acide benzoIque 6,00 %, Exemple 7 On prépare de la manière suivante une crème contenant 2 % de Clotrimazol, 3 % d'acide salicylique et 6 %5 d'acide benzo!que: Composition paraffine molle (blanche) 22,25 %0 propylène-glycol 10,68 % alcool cétostéarylique 22,25 %o Cetrimide 0,89 % Méthylparaben 0,025 % Propylparaben 0,015 % eau 32,93 % Clotrimazol 2,00 % acide salicylique 3,00 % acide benzoique 6,00 % Comme dans l'exemple 4, on peut utiliser pour la préparation une technique de fusion ou une technique de dispersion. On mélange la paraffine molle blanche, le propylène-glycol et l'alcool cétostéarylique et on chauffe jusqu'à obtention d'un liquide homogène vis- queux. On dissout le Clotrimazol, l'acide salicylique et l'acide benzoïque dans ce liquide avec les Paraben et on ajoute sous agitation vigoureuse à la phase hui- leuse. On obtient une crème homogène. On ajoute le res- tant de l'eau et on homogénéise à nouveau. Exemple 8 On prépare comme décrit dans l'exemple 7,une composition de crème contenant 2 % de Clotrimazol et 3 % d'acide salicylique: -34-26 931 Composition paraffine molle (blanche) 23,75 %C propylène-glycol 11,40 % alcool cétostéarylique 23,75 co' Cetrimide 0,95 % Méthylparaben 0,025%9 Propylparaben 0,015% eau 35.15 %o Clotrimazol 2,00 % acide salicylique 5, 00 'cc Exemple 9 On prépare comme décrit dans l'exemple 7 une composition de crème contenant 2 % de Clotrimazol et 6 % d'acide benzoïque: Composition paraffine molle (blanche) 23,00 % propylène-glycol 11,04 % alcool cétostéarylique 25,00 % Cetrimide 0,92 % Méthylparaben 0,025% Propylparaben 0,015% eau 34,04 % Clotrimazol 2,00 % acide salicylique 0, 00 % acide benzoique 6,00 % -2619311 -35- - RVENDICATIONS - 1 - Compositions pharmaceutiques antimicro- biennes pour l'application topique, caractérisées en ce qu'elles contiennent une combinaison consistant en une substance active antimicrobienne du groupe des subs- tances actives contenant dans leur molécule un cycle imidazole substitué par un groupe alkyle inférieur, à savoir un composé de formule I - NÀ N 1R 1C2-CH-O-CH2- -R2 (I) X cil cc Cl dans laquelle l'un au moins des symboles R1, R2 et R3 représente un atome d'halogène et les autres l'hydrogène, ou ses sels formés par addition avec des acides accep- tables pour l'usage pharmaceutique, ou bien un composé de formule II 30. 7 (C6H5)2 (I) 3o N Idra dans laquelle R4 représente un atome d'halogène, -36- et un ou plusieurs acides benzoiques éventuellement substitués, accompagnés le cas échéant de véhicules et/ou produits auxiliaires pharmaceutiques usuels. 2 - Compositions selon la revendication 1, caractérisées en ce que la combinaison consiste en un composé de formule I dans laquelle l'un au moins des symboles R1, R2 et R5 représente un atome de chlore et les autres l'hydrogène, ou ses sels formés par addition avec des acides acceptables pour l'usage pharmaceutique, par exemple le Hliconazol (R1 = R2 = Cl, R3 = H), l'Econazol (R5 = Cl, R1 = R3 = H), et l'Isoconazol (R1 = R3 = Cl, R2 = H) ou en un composé de formule II dans laquelle R4 représente un atome de chlore, par exemple le Clotrimazol, et un ou plusieurs acides ben- zoiques éventuellement substitués, accompagnés le cas échéant de véhicules et/ou produits auxiliaires pharma- ceutiques usuels. - Compositions selon la revendication 1, ca- - ractérisées en ce que la combinaison consiste en le Hiconazol en tant que composé de formule I dans laquelle R1 et R2 représentent un atome de chlore et R3 l'hydro- gène, ou un sel de ce composé formé par addition avec un acide acceptable pour l'usage pharmaceutique, ou en un composé de formule II dans laquelle R4 représente un atome de chlore, le Clotrimazol, et l'acide salicylique et/ou l'acide benzoïque, accompagnés le cas échéant de véhicules et/ou produits auxiliaires pharmaceutiques usuels. 4 - Compositions selon la revendication 1, ca- ractérisées en ce que la combinaison consiste en nitrate de Miconazol et acide salicylique et/ou acide benzoique, accompagnés le cas échéant de véhicules et/ou produits auxiliaires pharmaceutiques usuels. - Compositions selon la revendication 1, ca- ractérisées en ce que la combinaison consiste en - 37 - Clotrimazol et acide salicylique et/ou acide benzolque, accompagnés le cas échéant de véhicules et/ou produits auxiliaires pharmaceutiques usuels. 6 - Compositions selon la revendication 1, ca- ractérisées en ce qu'elles contiennent de 0,01 à 10% en poids d'un imidazole substitué par un groupe alkyle inférieur répondant à la formule I ou II et 0,5 à 25% en poids d'un ou plu- sieurs acides benzoiques éventuellement substitués, acrcompagnés de véhicules et/ou produits auxiliaires usuels pour l'application topique. 7 - Compositions selon la revendication 1, ca- ractérisées en ce qu'elles contiennent de 0,1 à 2,0% en poids d'un imidazole substitué par ungroupe alkyle inférieur répondant à la formule I ou II et 1,0 à 15,0% en poids d'un ou plusieurs acides benzoiques éventuellement substitués, accompa- gnés de véhicules et/ou produits auxiliaires usuels pour 1' application topique. 8 - Compositions selon la revendication 1, caractérisées en ce qu'elles. contiennent une quantité synergique efficace d'un imidazole substitué par un groupe alkyle inférieur de formule I ou II et d'un ou plusieurs acides benzo!ques éventu- ellenent substitués, accompagnes le cas échéant, de véhicules et/ ou produits auxiliaires pour l'application topique. 9 - Compositions selon l'une quelconque des revendications 1 à8, sous la forne de gels, de crèmes, de pommades, de pâtes, de poudres, de solutions, de teintures, de mousses, de produits à pulvériser, d'aérosols, de collodions ou de lotions. - Procédé de préparation d'une composition-pharmaceu- tique antimicrobienne pour l'application topique selon l'une quelconque des revendications 1 à 8, caractérisé en ce que l'on mélange une substance anti-microbienne du groupe des substances actives contenant dans leurs molécules un cycle imidazole substitué par un groupe alkyle inférieur, à savoir un composé de formule I. I--N CH2-CH-0-CH2 / R2 (I) | | 3 Cl dans laquelle l'un au moins des symboles R1, R2 et R3 représente un atome d'halogène et les autres l'hydrogène, ou ses sels formés par addition avec des acides accep- tables pour l'usage pharmaceutique, ou bien un composé de formule II R4 /\ __ C (C6H5)2 (II) N pIA dans laquelle R4 représente un atome d'halogène, avec un ou plusieurs acides benzoiques éventuellement substitués et le cas échéant des véhicules et/ou pro- duits auxiliaires pharmaceutiques usuels.