Brevet FR2621326A1 — publié le 19890407

La présente invention est relative à des produits sidérophores bactériens inhibiteurs de parasites endogènes, a des procédés d'obtention de ces produits, à des compo- sitions anti-parasitaires et notamment anti-malariques contenant lesdits produits. Dans la littérature, il est spécifié que le fer est un élément essentiel au développement microbien; cependant, bien qu'élément largement répandu dans la nature, le fer sous forme ferrique est très peu soluble et est donc peu disponi- ble directement sans le concours de mécanismes ayant une haute affinité pour ces formes ferriques et qui permettent leur passage à travers la paroi bactérienne, afin d'assurer la multiplication des bactéries, surtout lorsque le milieu est pauvre en fer. Les entérobactéries sécrètent un chélateur de fer, l'entérocheline à structure phénolique; certaines souches d'Escherichia coli, Aerobacter aerogenes, Salmonella sp. et Klebsiella pneumoniae entre autres sécrètent en plus un ché- lateur du fer non phénolique appelé aérobactine. Dans l'article de WARNER et al. (Inf. Immun., 1981, 33, 2, p. 540-545), il est précisé que E. coli synthétise de l'aérobactine, dont les déterminants génétiques sont situés sur des plasmides appelés ColV plasmide, car identifiés comme étant capables de promouvoir la synthèse de Colicine V. Les Auteurs de l'invention ont également observé que Klebsiella pneumoniae protégeait partiellement les sa- gouins contre les infections a Plasmodium falciparum. Dans l'article de NASSIF (Inf. Immun., 1986, 54, 3, p. 603-608), il est montré qu'un des facteurs de la virulence de certaines souches de Klebsiella pneumoniae est la produc- tion d'aérobactine par lesdites souches. De plus, seules les souches aptes à produire de l'aérobactine peuvent continuer à se multiplier dans un mi- lieu pauvre en fer. La production d'aérobactine est liée à la présence -2- d'un plasmide. Dans l'article de WILLIAMS et al. (Inf. Immun., 1986, 51, 3, p. 942-947), il est précisé que, bien que P'aé- robactine ait une affinité moindre pour les dérivés ferriques que l'entérocheline, elle possède des propriétés phy- siologiques et de régulation qui permettent un apport en fer, pour la croissance bactérienne, en quantités plus importantes que l'entérocheline; en effet, l'aérobactine stimule la croissance bactérienne à des concentrations 500 fois plus faibles que celles de l'entérocheline. Par ailleurs, CLARK et al. (Nature, 1976, 259, 309-311 et Parasitol., 1977, 74, 9-18) ont montré que certai- nes espèces bactériennes sont reconnues comme ayant des pro- priétés immunostimulantes et sont utilisées pour protéger les souris contre le parasite murin Babesia spp. et contre Plas- modium spp. Certains composés présentant une action anti- parasitaire sont décrits dans l'Art antérieur. En particulier: La quinine, qui agit par fixation sur I'ADN des schizontes, essentiellement sur les formes jeunes et provoque la destruction de ceux-ci en 2 à 4 jours; toutefois celle-ci présente une certaine toxicité. Les dérivés de la 4-aminoquinoléine, notamment la chloroquine, qui agissent par inhibition de la polymérase de l'ADN des parasites, empêchant sa réplication et provoquent la destruction de ceux-ci en 2 à 4 jours. Ces dérivés ne pré- sentent pas une toxicité importante; cependant de plus en plus de souches, notamment de Piasmodium falciparum, sont ré- sistantes à ces dérivés. La présente invention s'est fixé pour but de pour- voir à une nouvelle famille d'anti-parasitaires d'action spé- cifique sur les parasites endocellulaires, notamment contenus dans les globules rouges humains, qui se distinguent des anti-parasitaires proposés dans l'Art antérieur en ce qu'ils agissent selon un mécanisme d'action totalement différent et - 3 - original dans ce domaine,.à savoir une action de chélateur du fer, entraînant une privation en fer du parasite, associée à une action de toxine, ce qui a pour effet de permettre des traitements d'efficacité plus rapide, à des doses moindres qu'avec les composés de l'Art antérieur, les anti-parasitaires conformes à l'invention présentant de plus une faible toxicité. La présente invention a pour objet des produits si- dérophores, caractérisés en ce qu'ils comprennent au moins un groupe hydroxamate, au moins une liaison peptidique, en ce qu'ils présentent un poids moléculaire inférieur à 1000 D, en ce qu'ils ont la propriété de pénétrer dans les cellules, no- tamment dans les globules rouges, dans lesquels ils exercent une activité anti-parasitaire, notamment antimalarique, spé- cifique et irréversible vis-à-vis des parasites endocel- lulaires, notamment contenus dans les globules rouges (P. chabaudi, P. falciparum...), ladite activité étant désignée sous le nom d'"activité plasmocidine". Selon un mode de réalisation avantageux des pro- duits sidérophores conformes à la présente invention, ceux-ci sont caractérisés en ce qu'ils répondent à la formule I ci- après: CH3 H3 C=O C==O I I NOH NOH I i (CH2)4 COOH (CH2)4 I I CH--NH---COH CH2- -- CH 2-CO-NH ?iH COOH OH COOH (I) laquelle formule englobe également les produits dérivés par substitution, et en ce qu'ils présentent une activité plasmo- cidine. Les produits de formule I inhibent la multiplica- tion des parasites endocellulaires par une action combinée de chélateur de fer et de toxine. Lesdits composés selon l'invention sont non toxi- _4- ques pour l'homme ou l'animal. La présente invention a également pour objet un. procédé d'obtention des produits sidérophores conformes a l'invention. Selon un mode de mise en oeuvre avantageux de ce procédé, lesdits produits selon l'invention sont synthétisés par une bactérie puis sont purifiés à partir du surnageant de culture de ladite bactérie, cultivée dans un milieu appro- prié. Selon une disposition avantageuse de ce mode de mi- se en oeuvre, ladite bactérie est une entérobactérie pathogè- ne. Selon une modalité préférée de cette disposition, ladite bactérie est Klebsiella pneumoniae K5a 1101. Selon une autre disposition avantageuse de ce mode de mise en oeuvre, le milieu de culture est dépourvu de fer. Selon encore une disposition préférée, le surna- geant de culture contenant lesdits produits est introduit dans une colonne de chromatographie échangeuse d'ions puis élué. Selon une autre modalité avantageuse de ce mode de mise en oeuvre, la portion d'éluat contenant lesdits produits subit une filtration sur gel Sephadex G50. Les composants actifs selon l'invention peuvent être formulés en compositions'anti-parasitaires. Selon un autre aspect'de la présente invention, on fournit des compositions pharmaceutiques comprenant une quan- tité active d'au moins un produit sidérophore ayant une acti- vité plasmocidine tant chez l'homme que chez l'animal, éven- tuellement associé à un véhicule d'administration appropriée. Les compositions pharmaceutiques peuvent être administrées notamment par voie orale, parentérale. Lorsqu'elles sont administrées par voie orale, lesdites compositions peuvent être présentées sous forme retard notamment par adsorption du/des principe(s) actif(s) sur du 262 1 326 -5- phosphate de calcium. Outre les dispositions qui précèdent, l'invention comprend encore d'autres dispositions, qui ressortiront de la description qui va suivre. L'invention sera mieux comprise à l'aide du complé- ment de description qui va suivre, qui se réfère à des exem- ples de préparation des produits selon l'invention par voie de synthèse, de mise en évidence de l'activité anti-parasi- taire desdits produits conformes à l'invention. Il doit être bien entendu, toutefois, que ces exem- ples sont donnés uniquement à titre d'illustration de l'objet de l'invention, dont ils ne constituent en aucune manière une limitation. EXEMPLE EXEMPLE 1 - Tests de caractérisation de l'activité anti-parasitaire des produits conformes à la présente invention, dite activité plasmocidine. 1. Mise en évidence de l'inhibition de la multiplication des parasites In vitro, cette inhibition est associée à la sécrétion par les bactéries d'une substance de PM = 300, chélatrice du fer, un hydroxamate, appelé aérobactine. L'activité "plasmocidine" a été observée en fonction du milieu de culture bactérienne (Tableau I) et de la concen- tration finale (exprimée en %), en aérobactine, calculée à partir du titrage.en hydroxamate du surnageant de bacté- ries, dans le milieu de culture des parasites (Tableau II). Les surnageants de culture de Klebsiella pneumoniae K5a ont été introduits dans des cultures de Plasmodium falciparum comme décrit dans le Tableau I. Le pourcentage de schizontes tués est estimé comme indiqué dans la figure 1. Cette inhibition n'a pu être mise en évidence que lorsque les bactéries sont mises dans des milieux de cultures dépourvus de fer tel que M9 ou RPMI. Le tableau I montre l'activité "plasmocidine" de l'aérobactine en fonction du milieu de culture (déprivé ou -6- non en fer). TABLEAU I Milieu de Croissance Taux d'augmentation de culture bactérienne la parasitémie Jour 1 Jour 3 L broth (1) - 3 à 5 10 a 20 + 3 à 5 10 20 RPII (2) - 3 a 5 10 à 20 + 1 1 RPMI* (3) - 3 a 5 10 à 20 + RPMI* + Fe - 3 a 5 10 20 + 3 à 5 10 20 M9 (4) - 3 à 5 10 à 20 + 0,1 M9 + Fe 3 5 10 20 + 3 a 5 10 a 20 + (1) et (4) sont décrits dans Nassif et A1. (Infect. Immun., 1986, 54, 603-608). (2) est liquide (GIBCO) et supplémenté en glutamine. (3) est un milieu RPMI modifié pour permettre la croissance de P. falciparum sans addition de sérum humain. Klebsiella pneumoniae K5a 1101 est mis en culture dans différents milieux comme indiqué dans le tableau ci-dessus et récolté à A526nm = 1. Le surnageant de culture est filtré (filtres Millex 0,22 pm) et introduit dans le milieu de culture d'une souche de Plasmodium falciparum FUP; les parasites étant cultivés selon TRAGER et al. (Science, 1976, 193, 673-675) et synchronisés selon la technique développée par LAMBROS et al. (J. Parasitol., 1979, 65, 418-420). La parasitémie initiale était de 1 à 2% et les pa- rasites étaient en début de phase schizonte. Les surna- -7- geants "+" sont les surnageants de culture de Klebsiella pneumoniae; les surnageants "-" sont les surnageants de contrôle (sans croissance bactérienne). Les surnageants sont introduits dans le milieu une concentration finale de 10% en aérobactine, concentration calculée à partir du titrage en hydroxamate. La parasitémie a été suivie pendant 3 jours après l'addition des surnageants et estimée par comptage d'au moins 5000 globules rouges sur des frottis colorés au Giemsa. "+ Fe" signifie que 100 pr de FeC13 ont été ajou- tées dans la culture de parasites en même temps que le surnageant. Les résultats correspondent à une valeur moyenne de trois expérimentations indépendantes. Le Tableau II précise l'activité "plasmocidine" de l'aérobactine en fonction de sa concentration finale calculée a partir du titrage en hydroxamate du surnageant de culture. TABLEAU II Taux d'augmentation de la Surnageant Concentration parasitémie finale Jour 1 Jour 2 Jour 3 (anneaux) (schizontes) (anneaux) K.pneumoniae 10% 0, 02 0,02 0,02 / RPMI* 5% 0,1 0,1 0,02 2,5% 1 1 1 1,25% 2 à 3 2 a 3 5 a 8 RPMI* 1,25% - 10% 3 a 5 3 a 5 10 à 20 L'expérimentation a eu lieu dans les mêmes condi- tions que celles décrites dans le Tableau I. Le surnageant de culture de Klebsiella pneumoniae -- 8 - K5a 1101 développée dans un milieu RPMI a été introduit à différentes concentrations en aérobactine (calculées à partir du titrage en hydroxamate) dans des culturel de Plasmodium falciparum. Les résultats correspondent à deux expérimentations indépendantes. Les résultats présentés dans le Tableau II condui- sent à établir une courbe dose/réponse présentée dans la figure 1; celleci comporte en abscisse la concentration finale en aérobactine, calculée à partir du titrage en hydroxamate du surnageant de culture de K. pneumaniae, exprimée en % et en ordonnée le pourcentage de schizontes tués. Cette courbe montre l'activité plasmocidine de l'aérobactine. L'activité du surnageant a été évaluée en calculant le taux d'augmentation de la parasitémie au cours de chaque cycle parasitaire. Cette courbe est en accord avec les effets observes après une injection intraveineuse d'un surnageant de cul- ture de Klebsiella pneumoniae à des singes infectés par Plasmodium falciparum. In vitro, le surnageant de culture de Klebsiella pneumoniae K5a inhibe donc la multiplication de Plasmodium falciparum en culture dans des globules rouges humains. On observe une dégénérescence des schizontes. - In vivo, des singes Saïmiri sciureus infectés par Klebsiella pneumoniae K5a montrent une certaine résistance a l'infection par Plasmodium falciparum. Cette "résistan- ce" a pu être associée à la sécrétion par les bactéries d'une ou plusieurs substance(s) de poids molécu- laire 1000, à des singes parasités par Plasmodium falciparum, on observe une inhibition de la multiplication des parasites (figure 2). La figure 2 présente en abscisse la durée de l'in- -9- fection en jours et en ordonnée la parasit4mie exprimée en pourcentage. Quatre singes sont infectés avec 108 parasites (jour 0). L'aérobactine est partiellement purifiée à partir d'un surnageant de culture de Klebsiella pneumoniae K5a au moyen de filtrations successives sur des membranes AMICON PM30, AMICON PM10 et UM2. La fraction non retenue par les membranes et dont le poids moléculaire est inférieur à 1000 est utilisée. Les singes Nos. 1 et 2 sont des contrôles. Les singes Nos. 3 et 4 ont été infectés comme dé- crit ci-dessus. Les injections péritonéales d'aérobactine commen- cent au jour J=4. Les doses injectées sont exprimées en ml/jour et précisées dans le Tableau III ci-après. TABLEAU III DOSES (en ml/j) SINGES J4 J5 J6 J7 J8 J9 Singe n 3 - - 2 2 2 2 2 5 _ _ _ _ _ __ _ Singe n 4 8 8 8 8 8 - La parasitémie est mesurée chaque jour, deux heures avant l'injection, par comptage d'au moins 5000 globules rou- ges sur des frottis sanguins colorés au Giemsa. - 10 - 2. Identification de la Plasmocidine L'activité "plasmocidine" a été étudiée à partir de souches de Klebsiella pneumoniae différant par leur séro- type ou leur virulence (Tabléau IV). TABLEAU IV Souches Sero- Viru- Milieu Concen- % schi- bacté- type lence de crois- tration zontes A526nm riennes sance finale tués 1101 K5 + RPMI* 20% 99% % 99% 0.15 et 5% 95% à 98% à 2,5% 60% a 70% 0.20 1102 RPMI*+ Fe 2,5% a 20% 0 0.01 7825 K1 + RPMI* 20% 95% à 99% 10% 65% à 75% 0.10 % 50% à 60% 2,5% 30% à 40% 0.15 25. RPMI*+ Fe 2,5% à 20%{ 0 0.5 52144 K1 - RPMI* 2,5% à 20% 0 0.005 RPMI*+ Fe 2,5% à 20% 0 0.005 Les souches K5a 1101 et 1102 ont été isolées des singes Saïmiri sciureus infectés; en ce qui concerne les souches de K. pneumoniae 7825 et 52144, voir NASSIF (Inf. Immun., 1986, 54, 3, p. 603-608). Les nomenclatures des sérotypes correspondent à celles de RICHARD C. úBull. INST. PASTEUR (Paris), 1982, 80, 127-145]. - 1i - Les souches virulentes K5a 1101 et K1 7825 ont une activité "plasmocidine", tandis que la souche non virulen- té K1 52144 n'en a pas. I1 a été montré que la non virulence de la souche K1 52144 est liée à la non production d'aérobactine (NASSIF X., SANSONETTI P.J., Infect., Immunol., 1986, 54, 603-608). La production d'hydroxamate a été mesurée sur un échantillon de 200 pl de surnageant, comme décrit dans CSAKY (Acta. Chem. Scand., 1948,. 2, 450-454). La toxicité pour Plasmodium falciparum est associéee au pic de purification de l'aérobactine obtenu par colonne 4changeuse d'ions (Dowex) et filtration sur gel Sepha- dex G50 (cf. figure 3). La figure 3 montre que l'activité "plasmocidine" est retrouvée après purification de l'aérobactine. Les résultats suggèrent que l'activité "plasmo- cidine" est une propriété de l'aérobactine. L'aérobactine a été purifiée à partir d'un surna- geant de culture de Klebsiella pneumoniae K5a 1101 culti- vée dans un milieu RPMI*. * Figure 3a: un surnageant de culture (500 ml à pH 7,0) est introduit dans une colonne Dowex-l (25 x 2 cm) et élué avec 500 ml d'un gradient de chlorure d'ammonium variant de 0,4 a 1,0 M, a un débit de 30 ml/h. Les fractions (2,5 ml) sont collectées et l'hydroxamate est dosé selon la méthode de CSAKY. Figure 3b:. le pool d'hydroxamate (10 a 15 ml) collecté par la chromatographie par échange d'ions est introduit dans une colonne Sephadex G50 (25 x 2 cm) et élué avec 100 mM d'un tampon phosphate (pH 7,0), à un débit de 30 ml/h. Les fractions (2 à 3 ml) sont collectées et - 12 - l'hydroxamate dosé (absorbance A526nm --e--), sont également mesurées, l'inhibi- tion de la croissance de Plasmodium falci- parum (-o-) et l'absorbance A220nm (-t-) 5. Inhibition de la croissance de Plasmodium falciparum: 0,2 pm des fractions filtrées sont introdui- tes dans une culture de Plasmodium falci- parum synchronisée, à une concentration fi- nale de 2,5%, comme décrit dans le Ta- bleau I; 100 pCi/ml de méthionine marquée au soufre 35 (Amersham) sont ajoutées au jour 1 (anneaux); la culture de parasite est col- lectée au jour 2 (schizontes) et l'incorpo- ration de 35S-méthionine est mesurée dans du TCA à 10%. La concentration en aérobactine du pool d'hydro- xamate collecté après la filtration sur gel est estimée en comparaison avec le titre en hydroxamate d'une solution de L-Lysine hydroxamate à une concentration connue. 3. Mise en évidence de l'action anti-parasitaire On a comparé l'action "antiplasmodiale" de trois chélateurs de fer in vitro vis-à-vis de Plasmodium falci- parum et on a également étudié l'effet de l'addition de fer sur la culture de parasites (figure 4). L'hydrochlorure de L-Lysine hydroxamate ne présente pas d'activité "antiplasmodiale", ceci indiquant que le groupe hydroxamate n'intervient pas seul dans l'activité "plasmocidine" de 1 'aérobactine. La desferioxamine, un hydroxamate chélateur du fer utilisé pour provoquer une déprivation en fer dans les surcharges en fer, chez l'homme, inhibe la croissance des parasites. L'inhibition par la desferioxamine est totalement reversée par l'addition de fer dans la culture de para- - 13 - sites. Au contraire, l'addition du fer à des cultures de parasites traitées à l'aérobactine ne reverse pas l'action "plasmocidine" de l'aérobactine. Ainsi la déprivation en fer joue un rôle dans l'ac- tivité "antiplasmodiale" de la desferioxamine mais pas dans l'activité "plasmocidine" de l'aérobactine. Ceci indique que l'aérobactine agit probablement comme une toxine et non par simple déprivation en fer. La figure 4a montre l'inhibition de la croissance de Plasmodium falciparum par la L-Lysine hydroxamate (A--*-), la desferioxamine (--_) et l'aérobactine (-o--), la mesure étant effectuée comme décrit à la figure 3. L'addition de 2.10-3 Ml de FeC13 à la culture de parasites, immédiatement après l'hydroxamate a peu d'effet sur l'inhibition due à l'aérobactine (-o--) alors qu'elle reverse complètement l'inhibition due à la desferioxamine ( W). La figure 4b montre le rôle de la concentration en FeC13 dans la réversion de l'inhibition due à la desfe- rioxamine. -* pas de FeC13 -o- 2.10-4 M FeC13 10-3 M FeC13 -El-- 2.10-3 M FeC13 4. Tests quantitatifs Des tests in vitro ont montré notamment que l'aéro- bactine est capable d'inhiber à 100% la croissance de Plasmodium falciparum aà une concentration de 2,5 pg/ml (environ 10-5 M). Un autre essai réalisé in vivo a montré que l'in- jection intraveineuse (15 pg/souris) d'aérobactine puri- fiée a des souris infectées par Plasmodium chaubaudi entraîne un ralentissement de la multiplication des para- - 14 - traitées avec 7,5 pg d'aérobactine, ou non traitées, ne survivent pas, l'injection d'aérobactine ne présente pas de toxicité pour la souris. Le même effet a été observe chez la souris infectée par P. falciparum comme le montre la figure 5 dans laquelle on a porté en abscisse le nombre de jours de survie et en ordonnée le pourcentage de ralentissement de la multiplication des parasites. 5. Spécificité de l'action anti-parasitaire Un autre essai a montré l'action spécifique de l'aérobactine sur les cellules parasitées; en effet, l'aérobactine pénètre rapidement dans les globules rouges parasités et est concentrée au moins 200 fois dans la cel- lule parasitée. Elle n'est pas concentrée dans des globu- les rouges sains. La desferioxamine ne pénètre pas dans les globules rouges parasités. Cet essai étudie l'incorporation de lysine marquée au tritium dans des globules rouges normaux et des globu- les rouges infectés par Plasmodium falciparum. La figure 6 présente les résultats. - L'aérobactine marquée au tritium (0,2 a 0,3 mCi/mnol) est purifiée comme décrit précédemment (fi- gure 3) à partir d'un surnageant de culture de souches K5 1101 de Klebsiella pneumoniae, cultivée dans un milieu RPMI* contenant 100 pCi/ml de lysine tritiée. La desferioxamine marquée a l'iode 125 (50 mCi/mmol) est obtenue par la technique iodogène. L'aérobactine tritiée (7 pg/ml) et la desferioxa- mine 1125 (50 pg/ml) sont introduites dans des cultures synchronisées de Plasmodium falciparum (stade schizonte, 20% de parasitémie, hématocrite: 5%) et dans une suspen- sion de globules rouges (5% hématocrite). Les cultures sont incubées à 37 C et des échantillons de 50 p1 sont prélevés à des moments différents. Pour chaque échantillon, on mesure: 1. les cpm dans le surnageant de culture, - 15 - 2. les cpm dans les surnageants de la lyse des glo- bules rouges (les globules rouges sont lysés dans 40 vol. de RPMI dix fois dilué et les para- sites libres sont précipités à l'aide d'une cen- trifugation à 5000 rpm pendant 5 mn et lavés dans du RPMI), 3. les cpm associés aux parasites libres. Les parasites sont dans un deuxième temps lysés pour préparer les fractions solubles et membranaires comme décrit précédemment (BRAUN-BRETON et al., Molecular Bio- chem. Parasitol., 1986, 20, 33-43). La radioactivité est essentiellement retrouvée dans la fraction soluble car l'aérobactine intraparasitaire est récupérée dans la fraction soluble des parasites. L'aérobactine n'est pas détectée dans le cytoplasme des globules rouges. : aérobactine extracellulaire ----: aérobactine associée aux globules rouges --o-.: aérobactine associée aux parasites ----: desferioxamine extracellulaire f -: desferioxamine intracellulaire 6. Etude de la toxicité des produits selon l'invention Un autre essai sur la toxicité des produits selon l'invention montre qu'aucun effet toxique après l'injec- tion d'aérobactine n'a été observé chez les souris ou les singes. Par ailleurs, l'addition d'aérobactine purifiée à des fibroblastes en culture n'a aucun effet toxique sur ces cellules. 7. Cinétique d'action sur les parasites Comme il est indiqué sur la figure 7, l'aérobactine réprime rapidement l'incorporation de S35- méthionine dans les protéines des schizontes. En abscisse on a le temps en minutes et en ordonnée le pourcentage de schizontes inhibés. 262 1 326 - 16 - Les conditions opératoires sont les suivantes: - Les schizontes de Plasmodium falciparum sont con- centrés à partir d'une culture, lavés et cultivés a 37 C pendant une heure. Des solutions d'hydro- xamate (--- 50 pg/ml d'aérobactine et -o- 500 pg/ml de desferioxamine) sont ajoutés aux schizontes. L'incubation à 37"C est poursuivie et des échantillons sont prélevés a des temps dif- férents; l'hydroxamate est retiré par lavage des cellules et celles-ci sont à nouveau cultivées en présence de 250 pCi/ml S35-méthionine pendant une heure. - Les cultures sont récoltées et l'incorporation de la S35-méthionine est mesurée. - On voit que l'aérobactine inhibe l'incorporation de méthionine chez 90% des schizontes en 2 heures alors que la desferioxamine n'a aucune action sur l'incorporation de méthionine. Une telle activité n'a pas été retrouvée lorsque l'aérobactine est introduite dans des cultures de fibroblastes L pendant 5 heures. - 17 - REVENDICATIONS l') Produits sidérophores caractérisés en ce qu'ils comprennent au moins un groupe hydroxamate, au moins une liaison peptidique, en ce qu'ils présentent un poids molécu- laire inférieur à 1000 D, en ce qu'ils ont la propriété de pénétrer dans les cellules, notamment dans les globules rou- ges, dans lesquels ils exercent une activité anti-parasitai- re, notamment antimalarique, spécifique et irréversible vis- a-vis des parasites endocellulaires, notamment contenus dans les globules rouges, ladite activité étant désignée sous le nom d'"activité plasmocidine". 2 ) Produits selon la revendication 1, caractérisés en ce qu'ils répondent à la formule I ci-après: CH3 CH3 C==O C==O I I NOH NOH I I (CH2)4 COOH (CH2)4 CH--NH--CO --CH2--C--CH2--CO--NH-CH COOH OH COOH (I) laquelle formule englobe également les produits dérivés par substitution et en ce qu'ils présentent une activité plasmo- cidine. 3 ) Procédé d'obtention des produits selon les re- vendications 1 et 2, caractérisé en ce que lesdits produits sont synthétisés par une bactérie et en ce qu'ils sont puri- fiés à partir du surnageant de culture de ladite bactérie, cultivée dans un milieu approprié. 4 ) Procédé selon la revendication 3, caractérisé en ce que ladite bactérie est une entérobactérie pathogène. -) Procédé selon la revendication 4, caractérisé en ce que ladite bactérie est Klebsiella pneumoniae K5a 1101. 6 ) Procédé selon les revendications 3 à 5, carac- térisé en ce que le milieu de culture est dépourvu de fer. 7e) Procédé selon les revendications 3 à 6, carac- - 18 - térisé en ce que le surnageant de culture contenant lesdits produits est introduit dans une colonne de chromatographie 4changeuse d'ions puis élu4. 8 ) Procédé selon les revendications 3 à 7, carac- térisé en ce que la portion d'éluat contenant lesdits pro- duits subit une filtration sur gel. 9) Compositions pharmaceutiques, caractérisées en ce qu'elles comprennent une quantité active d'un produit si- dérophore selon la revendication 1 ou la revendication 2, éventuellement associé à un véhicule d'administration appro- prié. ) Compositions pharmaceutiques selon la revendi- cation 10, caractérisées en ce que lorsqu'elles sont présen- tées sous forme retard, le/les principe(s) actif(s) est/sont adsorbés sur du phosphate de calcium.