Brevet FR2613372A1 — publié le 19881007

i PARTICULES COMPOSITES POLYMERE/METAL COMPACTES, DISPERSIONS AQUEUSES DESDITES PARTICULES, LEUR PROCEDE DE PREPARATION ET LEUR APPLICATION EN BIOLOGIE La présente invention a pour objet des particules composites compac- tes à base d'une matrice de polymère renfermant des inclusions de métal, lesdites particules composites étant de préférence calibrées et se présentant telles quelles ou en dispersion notamment dans l'eau, leur procédé de préparation et leur application en biologie. Des particules de polymère imprégnées de métal à l'état de valence O sont décrites dans le brevet américain n 4197220. Il s'agit de parti- cules de polyvinylpyridine hydrophiles et microporeuses que l'on imprègne de métal par complexation d'ions métalliques suivie d'une réduction au borohydrure. La microporosité du support ainsi que l'état de division du métal précipité à l'intérieur des pores en font un matériau intéressant pour l'hydrogénation catalytique des oléfines. D'autres applications sont également citées comme l'imagerie médicale (particules opaques aux électrons en microscopie électronique) ou les techniques de séparation de protéines. L'inconvénient présenté par de telles particules consistent en ce qu'elles sont poreuses et contiennent en surface du métal. En effet dans des applications qui font intervenir des substances biologiques (protéines, etc...), des cellules ou des médicaments, il est très important que le métal soit totalement encapsulé dans le polymère de la particule et absent de la surface. Ainsi en génie enzymatique, il est connu que certaines enzymes sont inhibées au contact d'ions métalliques provenant du support. Par exemple, on montre que la chymotrypsine immobilisée sur de la poudre de nickel perd rapidement son activité (MUNRO.P.A et al, Biotechnology and Bioengeneering. Vol XIX, 101-124, (1977)). Un autre effet indésirable concerne les phénomènes d'adsorption irréversible d'hormones (T3, T4) ou de stéroides sur des supports magnétiques à base d'oxyde de fer, ce qui gène considérablement les dosages de type radioimmunoassays (RIA). Enfin, en culture cellulaire, la présence d'ions métalliques issus du support peuvent également perturber l'adhésion des cellules. La préparation de colloides metalliques en milieu organique est connue depuis les travaux de HESS et PARKER (J.Appl. Poly. Sci, Vol 10, 19151927, (1966)) et J.R. THOMAS (Brevet américain n 32228881) ainsi que T.W. SMITH (Brevet américain n 4252671 à 4252678). La technique consiste à décomposer thermiquement un dérivé métal carbonyle dans une solution organique de polymère. Le ferrofluide obtenu est une dispersion colloidale de particules métalliques de 10-6 & 10-5 amn dans un solvant organique. Le polymère est adsorbé & la surface des grains métalliques et assure la stabilité colloidale de la suspension. Lorsque ce ferro- fluide est exposé & l'atmosphère ambiante, les grains métalliques, bien qu'étant confinés dans une phase organique hydrophobe, s'oxydent rapidement et perdent leurs propriétés magnétiques (GRIFFITHS et al., J. Appl Phy., Vol 50 (11), Nov. 1979, p. 7108).D'autre part, à cause de leur taille généralement inférieure & 3001, ces grains métalliques surfactés par le polymère ne peuvent être séparés du solvant organique (par aimantation, dans le cas de ferrofluide de fer ou de cobalt) sans détruire la stabilité colloidale. Enfin, ces grains de métal surfactés sont totalement incompatibles avec les milieux aqueux et ne peuvent pas en conséquence être utilisés dans les applications décrites précédem- ment. La Demanderesse a décrit dans son brevet européen n 38.730 des latex de particules de polymère vinylaromatique hydrophobe renfermant une charge magnétisable; ceux-ci sont obtenus par dispersion de la charge magnétique dans une phase organique formée d'un amorceur organo- soluble, du monomère vinylarosatique et/ou d'un composé organique insoluble dans l'eau, puis mélange de la dispersion avec une solution aqueuse d'émulsifiant, homogénéisation et enfin polymérisation; un tel procédé présente l'inconvénient de ne pouvoir être utilisé que pour la préparation de latex de particules non calibrées, c'est-à-dire présen- tant une distribution granulomâtrique étalée. Il est bien connu que lorsqu'ils sont utilisés comme phase solide en biologie, les latex doivent être de préférence calibrés. La Demanderesse a trouvé un procédé permettant de préparer des particules compactes composites polymère/métal calibrées ou non dans lesquelles le métal est totalement encapsulé (inclus) dans le polymère, conserve son état de valence O ainsi que ams propriétés magnétiques (s'il s'agit d'un métal magnétisable tel que le fer ou le cobalt) au cours du temps. Le métal n'est plus accessible à la surface des particules et n'est plus en mesure d'interagir avec des substances ancrées à la surface du polymère. La présente invention a pour objet un procédé de préparation de particules compactes composites polymère/métal comprenant les étapes suivantes: 1) on disperse dans un liquide organique, solvant de complexes métalcarbonyles, organocarbonyles ou hydrocarbonés décomposables thermiquement à une température inférieure au point d'ébullition dudit liquide organique, des particules anhydres de polymère portant des sites nucléophiles coordinables auxdits complexes, la taille desdites particules étant de l'ordre de 0,1 micron & 1 mm, de préférence de l'ordre de 0,5 à 100 microns, la nature dudit polymère constituant lesdites particules étant telle que lesdites particules sont susceptibles de gonfler de 0,1 à 50 fois, de préférence de 3 à 10 fois, leur volume en présence dudit liquide organique; 2) on introduit dans la dispersion de particules de polymère gonflées ainsi obtenue, un complexe métal carbonyle, organocarbonyle ou hydrocarboné soluble dans ledit liquide organique, selon un rapport pondéral métal dudit complexe/polymère de l'ordre de 0,5/100 à 200/100, de préférence de l'ordre de 3/100 & 35/100, et on effectue une opération de thermolyse dudit complexe, cette opération ayant lieu sous atmosphère réductrice lorsque ledit complexe est un complexe métal hydrocarboné 3) on élimine ledit liquide organique gonflant 4) éventuellement on redisperse lesdites particules composites compactes ainsi obtenues dans un liquide non gonflant dudit polymère. Le polymère pouvant être mis en oeuvre peut être tout polymère réticulé portant des sites nucléophiles susceptibles de se coordiner aux complexes carbonyles, organocarbonyles ou hydrocarbonés dudit métal, ledit polymère devant en outre être susceptible de gonfler en présence d'un liquide organique solvant d'un desdits complexes, jusqu'& un volume tel qu'il devient accessible aux molécules dudit complexe. Parmi ces polymères réticulés on peut citer les copolymères dérivés de: 30 à 99 %, de préférence 50 & 95 %, en poids d'au moins un monomère monoethylenique. On peut citer parmi les monomères monoethyléniques À le styrène et ses dérivés (vinyltoluene, ethylvinylbenzene...) les esters et amides de l'acide (meth) acrylique tels que le methacrylate de methyle, l'acrylate de butyle, (meth) acrylamide, À l'acide (meth) acrylique et les diacides monoethyleniques tels que l'acide maleique, l'acide itaconique la vinylpyrrolidone À les esters vinyliques (acétate de vinyle, propionate de vinyle À les chlorures de vinyle et vinylidiène. - 0,5 & 50 %, de préférence 2 & 20 %, en poids d'au moins un monomère polyéthylénique réticulable. On peut citer parmi les monomères polyethyléniques: le divinylbenzène et ses dérivés les dienes conjugués (butadiene,...) les dérivés polyallyliques (tetraallylethylene,...) les (meth) acrylates de polyols (dimethacrylate d'éthylene glycol...) 20. le methylene-bis(acrylamide) l'acide-bis(acrylamido)acétique - et 0,5 & 30 %, de préférence 3 & 30 %, en poids d'au moins un monomère nucléophile coordinable. On peut citer parmi les monomères nucléophiles coordinables: 25. les vinylpyridines (2-vinylpyridine, 4-vinylpyridine, 2-methyl, 5vinylpyridine, 2-5 divinylpyridine,...) les di(ethyl)amino-alkyl(meth) acrylates les di(ethyl)amino-alkyl(meth)acrylamides,... l'allylamine 30. l'éthylene imine le (meth)acrylonitrile le 1vinylimidazole les dialkylaminométhyl styrènes Lesdits copolymères peuvent être obtenus selon les techniques classiques de polymérisation en émulsion, microsuspension, suspension ou dispersion par voie radicaire. Les particules de polymère mises en oeuvre à la première étape peuvent présenter une répartition granulométrique polydispersée ou monodispersée, c'est-à-dire être calibrées ou non calibrées. Le terme "calibrées" signifie de taille uniforme avec un écart type en diamètre inférieur à 5 %. La nature et le faible taux de réticulation dudit polymère permet aux particules mises en oeuvre de gonfler d'une manière sensible tout en restant insolubles dans ledit liquide organique. Le liquide organique est choisi de telle sorte qu'il gonfle les particules de polymère, ne décompose pas spontanément les complexes métal carbonyles, organocarbonyles ou hydrocarbures, et est inerte vis-à-vis de ceux-ci (il est préférable que ledit liquide organique ne soit pas electron-donneur). Pour une meilleure réalisation industrielle, il est préférable que le point d'ébullition dudit liquide organique soit à pression atmosphé- rique supérieur à 80 C et de préférence supérieur à 100 C, ce afin d'éviter l'utilisation d'installations sous pression. Parmi les liquides organiques pouvant favorablement être mis en oeuvre, on peut citer les dérivés aromatiques (toluene, ethylbenzene, xylenes,...), les dérivés aromatiques chlorés (mono, di, et trichloro- benzene,...), les hydrocarbures aliphatiques et cycliques (heptane, décane, cyclohexane, décaline,...), les dialkyl ethers, les alcools (pentanol, cyclohexanol,...), les esters (propionate de methyle....), etc. La dispersion desdites particules de polymère dans le liquide organique s'effectue sans difficultés majeures; la présence d'un agent émulsifiant n'est pas nécessaire car le gonflement important du polymère..DTD: favorise les mécanismes de stabilisation par répulsion stérique. La concentration en poids de particules de polymère dans le liquide organique peut varier entre 1 et 35 % suivant la capacité de gonflement du polymère. Une concentration de l'ordre de 1 à 20 % en poids est souhaitable, ce afin de conserver une viscosité modérée du milieu pour faciliter par exemple le dégagement ultérieur de monoxyde de carbone lorsque le complexe mis en oeuvre est un métal carbonyle. A la deuxième étape, parmi les complexes métal carbonyles, organo- carbonyles ou hydrocarbonés pouvant être mis en oeuvre, on peut citer les complexes carbonyles, organocarbonyles de type aliphatique, cyclo- aliphatique ou aromatique, hydrocarbonés de type aliphatique, cycloali- phatique... des métaux des groupes VIa, VIIa et VIII de la Classifica- tion périodique des éléments, notamment ceux des métaux suivants: chrome, molybdène, tungstène, manganèse, rhénium, fer, cobalt, rhodium, iridium, nickel, osmium, ruthénium. A titre d'exemple on peut citer: - les complexes métalcarbonyles suivants: Cr(CO)6; Ho(CO)6; w(CO)6 (Mn)2 (CO)1o; (Re)2(Co)10 Fe(CO)5; (Fe)2(CO)9; (Fe)3(CO)12; (CO)2(C0)8; (Co)4(CO)12; Ni(CO)4; (Rh)6(CO)12; (Rh)4(C0)12; (Ir)4(CO)12 (Os)3(CO)12; (Ru)3(CO)12 les complexes organocarbonyles suivants: (methylcyclopentadienyl)Mn(CO)3; (cyclopentadienyl)Mn(CO)3; (cyclopentadienyl) Co(CO)2; (cyclopentadienyl) Re(CO)3 - les complexes hydrocarbonés suivants: (di- 5-cyclopentadienyl) Ni ou Fe A cette deuxième étape, l'introduction du complexe métallique est de préférence réalisée à température ambiante ou tout au moins à une température inférieure à celle de décomposition dudit complexe, ce pour éviter un brusque dégagement de monoxyde de carbone par exemple dans le cas des complexes carbonyles. Le complexe est de préférence mis en oeuvre en totalité dès le début de la 2ème étape; toutefois, une variante consiste à introduire de 15 % à 50 % dudit complexe au départ, puis à additionner le reste dudit complexe en continu sur une durée de 0,5 à 3 heures. L'opération de thermolyse est réalisée à une température supérieure à la température de décomposition dudit complexe et de préférence voisine de celle du point d'ébullition dudit liquide organique, ce afin de favoriser l'élimination par exemple du monoxyde de carbone; le déroulement de cette opération peut être suivi en mesurant par exemple le volume de monoxyde de carbone dégagé. Ladite opération de thermolyse peut être réalisée sous atmosphère réductrice pour éviter une éventuelle oxydation du métal; cette opération peut par exemple être conduite sous bullage d'hydrogène au sein du milieu réactionnel. Lorsque le complexe mis en oeuvre est un complexe métal hydrocarboné par exemple le (di- -cyclopentadienyl)Ni ou Fe (appelés nickelocène et ferrocène), cette opération est impérativement conduite sous atmosphère réductrice apportée par exemple par bullage d'hydrogène au sein du milieu réactionnel; elle est de préférence conduite sous une pression d'hydrogène de 5 à 10 bar par exemple. Lorsque le liquide organique ne gonfle les particules de polymère que lorsqu'il est porté à une certaine température appelée température théta (c'est le cas notamment du cyclohexane ou du décahydronaphtalène vis-àvis des copolymères riches en motifs styreniques), il est bien entendu que la température de réalisation de la 2ème étape doit être supérieure à cette température théta. Compte tenu de ces considérations, le domaine de température préfé- rentiel de la réaction de thermolyse se situe généralement entre 80 C et 200 C. Le temps nécessaire pour la décomposition totale du complexe est bien entendu fonction de la température mise en oeuvre et de la stabi- lité thermique dudit complexe; généralement cette opération dure au moins 1 heure et n'excède par 24 heures. Au cours de cette étape le complexe ajouté à la dispersion de particules de polymère gonflées se dissout d'abord à l'état moléculaire à l'extérieur et à l'intérieur des particules gonflées de liquide organique; lorsque l'ensemble est porté à une température supérieure à celle de décomposition du complexe (correspondant de préférence à la température de reflux dudit liquide organique), le complexe se décom- pose; la précipitation du métal à l'état de valence zéro est amorcée à l'intérieur des particules grâce aux sites nucléophiles du polymère; les nucléi ainsi formés catalysent à leur tour la décomposition du complexe; aucune formation de métal n'est observée dans la phase liquide organique en dehors des particules. La teneur en métal des particules obtenues à la fin de cette deu- xième étape, la grosseur des cristallites et leur répartition peuvent être contrôlées en ajustant les conditions opératoires. La décomposition thermique des complexes s'amorçant au niveau des sites nucléophiles, la densité des nucléi métalliques est directement reliée au nombre de sites nucléophiles. Ainsi pour une même quantité de métal introduite, les cristallites de métal sont d'autant plus petites que la concentration en sites est plus élevée. Les conditions opératoires décrites ci-dessus permettent d'aboutir à une taille de cristallites de l'ordre de 10-6 à 10-4 mu, et le plus souvent de l'ordre de 3 10-6 à 3 10O5 u; Le taux de métal ainsi incorporé peut aller jusqu'à 67 % en poids, de préférence jusqu'à 26 % en poids, par rapport aux particules. La troisième étape est celle d'élimination du liquide organique gonflant; elle a pour but d'encapsuler le métal par le polymère, par passage des particules de polymère de l'état gonflé à l'état compact; la taille des particules composites obtenues correspondant quasiment à celle des particules du polymère de départ. Ledit liquide organique gonflant peut être éliminé du milieu réactionnel par les moyens classiques de séparation liquide-solide tels que la centrifugation, la filtration ou l'aimantation (lorsque le métal contenu dans les particules est magnétisable). Le liquide organique gonflant restant dans ledites particules peut ensuite être éliminé par séchage. Un autre mode d'élimination du liquide organique gonflant consiste, après séparation des particules du milieu réaction, à laver lesdites particules à l'aide d'un liquide non-gonflant du polymère et miscible au liquide organique gonflant; cette opération de lavage peut être répétée plusieurs fois. Le choix du liquide non gonflant est lié bien entendu à la nature du polymère. Ainsi lorsque ledit polymère est riche en motifs styréniques, les liquides non gonflants les plus usuels sont les monoalcools tels que le méthanol, l'éthanol, l'isopropanol et les diols tels que le monoethylène ou propylène glycol. Si désiré, les particules composites en dispersion ainsi obtenues, peuvent être isolées par tout moyen connu tel que la centrifugation, la filtration ou l'aimantation (lorsque le métal contenu dans les particu- les composites est magnétisable). Un mode de réalisation tout particulièrement intéressant du procédé de l'invention, consiste en la préparation de latex (dispersions aqueuses) de particules composites. Ledit mode particulier consiste à réaliser l'élimination du liquide organique gonflant (3ème étape) par séparation des particules obtenues à la 2ème étape par centrifugation, filtration ou aimantation (lorsque le métal contenu est magnétisable), puis lavage des particules séparées, à l'aide d'un liquide non gonflant intermédiaire miscible avec le liquide organique gonflant et avec l'eau (cette opération de lavage pouvant être répétée plusieurs fois), & effectuer une nouvelle opération de séparation des particules composites ainsi obtenues et une nouvelle opération de lavage par de l'eau desdites particules composites ainsi séparées (cette opération de lavage pouvant être répétée plusieurs fois). Le liquide non gonflant intermédiaire doit être miscible avec le liquide gonflant et avec l'eau, et ne pas être réactif avec le métal contenu dans les particules. Ainsi lorsque le liquide organique gonflant est un dérivé aromatique (toluène, xylène) le milieu non gonflant intermédiaire peut être choisi parmi le monoalcools tels que méthanol, isopropanol et les diols tels que monoéthylène ou propylène glycol. La redispersion dans le liquide non gonflant intermédiaire ou dans l'eau est facilitée par l'addition de surfactants. Par le terme "surfactant" on entend toutes les substances à carac- tère amphiphile telles que les émulsifiants anioniques (alkyl-sulfate, alkyl-sulfonates, alkyl-aryl-sulfonates, dialkylsulfosuccinates, sels d'acides gras...), cationiques (sels de cetyl-pyridinium, sels d'alkylbenzyl ammonium, sels d'amines grasses), non ioniques (nonyl-phénolsethoxylés, monooléate de sorbitan éthoxylé, copolymères oxyde d'éthylèneoxyde de propylène,...) mais également des polymères solubles dans le milieu de suspension susceptibles de s'adsorber à la surface des particules. Parmi ces derniers, on peut citer l'alcool polyvinylique, les dérivés cellulosiques (hydroxyalkylcelluloses,...), la polyvinylpyrrolidone, l'acide polyacrylique, des résines copolymères (styrène-maléique, methylvinylether maléique, acrylique-maléique), des polymères cationiques comme la polyallylamine ou bien encore des macromolécules naturelles comme la gélatine ou la bovine sérum albumine. La présente invention a également pour objet des particules composites polymère/métal calibrées, dans lesquelles le métal est totalement encapsulé dans le polymère. Le terme "calibrées" signigie de taille uniforme avec un écart type en diamètre inférieur à 5 %. Lesdites particules composites polymère/métal de l'invention sont caractérisées en ce que: - elles sont compactes, calibrées, présentant une taille uniforme de l'ordre de 0,1 micron à 1 ns, de préférence de l'ordre de 0,5 à 100 microns, et sont constituées d'une matrice à base d'un polymère portant des sites nucléo- philes coordinables, la quantité de sites nucléophiles coordi- nables représentant de l'ordre de 0,5 à 30 %, de préférence de l'ordre de 3 à 30 %, du poids dudit polymère; et, encapsulées dans ladite matrice, de cristallites d'un métal à l'état de valence zéro, cristallites dont la taille est de l'ordre de 10-6 à 10 -4m, de préférence de l'ordre de -6 -5 3 106 à 3 105 am; - la quantité de métal encapsulé représente environ de 0,5 à 67 %, de préférence de 3 à 26 % du poids desdites particules; - le métal est choisi parmi les métaux dont les complexes carbonyles, organocarbonyles ou hydrocarbonés sont thermiquement instables; - la nature dudit polymère est telle que ce dernier est susceptible de gonfler de 0,1 à 50 fois, de préférence de 3 à 10 fois, son volume en présence d'un liquide organique solvant desdits comple- xes métalcarbonyles, métal organocarbonyles ou métalhydrocarbonés, le point d'ébullition dudit liquide organique étant supérieur à la température de décomposition desdits complexes. Le métal entrant dans la composition desdites particules peut être tout métal magnétisable ou non, susceptible de former des complexes carbonyles, organocarbonyles. ou hydrocarbonés décomposables par thermolyse, éventuellement sous atmosphère réductrice, jusqu'à l'état métal de valence zéro. On peut citer à titre d'exemple les métaux des groupes VIa, VIIa et VIII de la classification périodique des éléments tels que le chrome, le molybdène, le tungstène, le manganèse, le rhénium, le fer, le cobalt, le rhodium, l'iridium, le nickel, l'osmium le ruthénium... Le polymère constituant la matrice peut être tout polymère réticulé portant des sites nucléophiles susceptibles de se coordiner aux com- plexes carbonyles, organocarbonyles ou hydrocarbonés dudit métal, ledit polymère devant en outre être susceptible de gonfler en présence d'un liquide organique solvant d'un desdits complexes, jusqu'à un volume tel qu'il devient accessible aux molécules dudit complexe. Les polymères pouvant constituer la matrice des particules composites faisant l'objet de l'invention sont ceux déjà cités ci-dessus. Un cas particulier des particules composites polymère/métal compac- tes calibrées faisant l'objet de l'invention sont des particules de taille uniforme de l'ordre de 0,1 micron à 1 mm, de préférence de l'ordre de 0,5 à 100 micron et constituées - de 95,5 à 43 %, de préférence 97 & 74 %, en poids d'une matrice constituée d'un copolymère dérivé de 30 & 99 %, de préférence 50 à 95 % en poids d'au moins un monomère monoethylenique, de 0,5 à %, de préférence 2 & 20 % en poids d'au moins un monomère polyethylenique réticulable et de 0,5 à 30 %, de préférence de 3 à 30 % en poids d'au moins un monomère nucléophile coordinable - et, encapsulées dans ladite matrice, de l'ordre de 0,5 & 67 %, de préférence de l'ordre de 3 à 26 % en poids de cristallites d'un métal du groupe VIa, VIIa ou VIII de la Classification Pénodique des éléments à l'état de valence 0, la taille desdites cristalli- tes étant de l'ordre de 10-6 à 10 4 ml, de préférence de l'ordre de 3 10-6 à 3 10-5 mm. Lesdites particules composites calibrées peuvent être préparées selon le mode opératoire ci-dessus décrit, en mettant en oeuvre & la ière étape des particules calibrées de polymère portant des sites nucléophiles coordinables. Un autre objet de l'invention consiste en des dispersions aqueuses ou latex desdites particules composites calibrées ci-dessus décrites, le taux d'extrait sec desdites dispersions (c'est-à-dire le taux de particules composites calibrées) allant de 1 & 50 % en poids, de préférence de 5 à 20 % en poids. Lesdits latex de particules composites calibrées peuvent être préparés melon les méthodes connues par dispersion dans l'eau desdites particules composites calibrées ci-dessus décrites en présence d'émulsifiants. D'une manière préférentielle ceux-ci sont obtenus selon le procédé de préparation de latex ci-dessus décrit, en mettant en oeuvre & la 1ère étape des particules calibrées de polymère. Les particules composites polymère/métal telles quelles ou en dispersion aqueuse, faisant l'objet de l'invention, peuvent être utili- sées comme phase solide en biologie dans les tests de diagnostic. Lorsque le métal est magnétisable, on peut tirer parti des propriétés magnétisables des particules pour les séparer facilement du milieu d'incubation et accélérer les étapes de lavage dans les tests hétéro- gènes du type radio-immunoassays ou enzyme-immunoassays. On peut également mentionner l'usage de ces produits en tant que support pour immobilisation d'enzymes de cellules ou d'antigènes/anti- corps en biotechnologie; en imagerie médicale. D'autres applications de ces particules en dispersion aqueuse concernent les peintures, colles et encres conductrices ainsi que l'enregistrement magnétique. Les exemples suivants sont donnés & titre indicatif et ne peuvent être considérés comme une limite du domaine et de l'esprit de l'invention. EXEMPLE 1 A 175 g de toluène sec on ajoute 25 g de cobalt carbonyle. Cette solution est conservée à l'abri de l'air. Dans un ballon tricol de 100 ml placé dans un bain d'huile, muni d'une arrivée d'azote, d'un dispositif d'agitation à ancre, relié à un connecteur à solvant léger et surmonté d'un réfrigérant connecté à un dispositif de mesure du monoxyde de carbone dégagé, on introduit: - 18 g de toluène - et 2 g de particules calibrées (diamètre moyen de 2,1 m + 0, 1/m) constituées d'un copolymère de styrène/divinyl benzène/4vinylpyridine (% en poids respectifs 85/10/5), ce qui correspond à un extrait sec de % en poids de copolymère réticulé dans le toluène. On fait buller l'azote au niveau de la dispersion obtenue. L'agitation est réglée à 100 t/mn et la température du bain d'huile est ammenée à une température suffisante (1300C) pour porter le toluène à ébullition et entrainer les dernières traces d'eau. Après 3 heures de distillation, le réacteur est refroidi à température ambiante; l'arrivée d'azote est retirée. On introduit alors, & l'aide d'une seringue, 4,15 g de solution de cobalt carbonyle préparée précédemment (ce qui correspond à un rapport pondéral métal/particules de 0,089). On observe aussitôt un premier dégagement gazeux de 30 ml de monoxyde de carbone correspondant au déplacement du CO (du métal carbonyle) par les motifs pyridine des particules. À -' 2613372 On porte alors la température du bain à 130 C en 40 mn (ce qui correspond & une température interne de 110 C). Le reflux du toluène accélère le dégagement de monoxyde de carbone (56 % du volume total théorique sont dégagés dès la sise à reflux du solvant). Après 4 h supplémentaires de chauffage à 130 C, 95 % du volume théorique de monoxyde de carbone a été recueilli; la dispersion est passée d'un aspect rouge-orangé & un aspect noir foncé. Le milieu réactionnel est refroidi à température ambiante. Les particules gonflées en suspension ainsi obtenues sont attirées en présence d'un aimant. Le surnageant est parfaitement transparent et non coloré; son analyse infra-rouge ne révèle aucune trace de cobalt carbonyle ou de complexes polynucléaires du cobalt. Les billes sont récupérées par séparation magnétique; le solvant résiduel est éliminé dans un évaporateur rotatif à 40 C sous 2700 Pascal puis à 60 C sous 1600 Pascal. - Sur la poudre noire obtenue, on analyse la teneur en cobalt par minéralisation et dosage des ions cobalt par absorption atomique; celle-ci est de 8,9 % (théorie: 8,9 %). La répartition du métal au sein des particules est révélée par microscopie électronique à transmission sur des coupes ultra-minces réalisées en mélangeant les billes à une résine d'inclusion EPON 812 (résine de type epoxy commercialisée par BALZERS) et en découpant le composite obtenu à l'aide d'un ultramicrotome. On constate que le métal est distribué de fagon uniforme dans tout le volume des particules composites sous forme de cristaux de 3 10- à 15 10-6 MM. L'examen de ces mêmes particules par microscopie à balayage montre que l'imprégnation par le métal n'a pas affecté l'aspect des billes, leur surface restant parfaitement lisse et sphérique. 1 g de ces particules composites est ajouté à 50 al d'une solution aqueuse & 1 g/1 de laurylsulfate de sodium. Après 30 s de traitement aux ultra-sons, on obtient une suspension stable. Ces particules composites peuvent être séparées du milieu en moins de 10 un en appliquant latéralement sur le flacon contenant la dispersion un aimant de laboratoire (8 10 Tesla). Conservées sous forme de suspension aqueuse, ces particules conservent leurs propriétés magnétiques même après 6 sois de stockage. 26 13372 EXEMPLE. 2 à 10 On donne ci-après le sens des abréviations figurant aux tableaux I à IV: S: styrène DVB: divinylbenzène MAM: méthacrylate de méthyle 4-VP: 4vinylpyridine NVI: N-vinylimidazole DEAMS: diethylaminométhyl styrène AN: acrylonitrile On répète l'opération décrite à l'exemple 1 en mettant en oeuvre: - des particules calibrées du copolymère défini aux tableaux I à IV, en présence du liquide gonflant ("solvant") figurant auxdits tableaux; les quantités respectives de copolymère et de liquide gonflant figurent auxdits tableaux ("extrait sec"). - le métal carbonyl figurant aux tableaux I à IV, dissous dans ledit liquide gonflant; les quantités respectives de métal carbonyle et de copolymère figurent auxdits tableaux ("métal / particules"). Les conditions de température et de durée de l'opération de thermo- lyse figurent aux tableaux I à IV. La température indiquée correspond à celle de l'intérieur du ballon et la durée correspond au temps pendant lequel le ballon est chauffé pour maintenir la température indiquée à l'intérieur du ballon (elle n'inclut pas celle nécessaire pour amener le ballon à la température indiquée). Les caractéristiques des particules composites obtenues figurent aux tableaux I à IV. EXEMPLE 11 On répète l'opération décrite aux exemples 1 à 10, en mettant en oeuvre des particules non calibrées de copolymère. La nature des constituants mis en oeuvre, leurs quantités respecti- ves, les conditions opératoires et les caractéristiques des particules composites obtenues figurent au tableau IV. EXEMPLE 12 On répète l'opération de thermolyse décrite à l'exemple 1. Les particules gonflées en suspension obtenues sont attirées en présence d'un aimant; le surnageant est éliminé et remplacé par de l'éthanol (50 ml par gramme de particules). Cette opération est répétée trois fois. Le dernier surnageant est éliminé et remplacé par une solution aqueuse à 1 g/l de Iaurylsulfate de sodium (50 ml par gramme de particules). Cette opération est répétée trois fois. Les dernières traces de toluène piégées au sein des particules sont éliminées par distillation azéotropique & 110 C pendant une heure. On obtient ainsi un latex de particules composites dont les propriétés figurent au tableau IV. TABLEAU I :EXEMPLE: 1 : 2: 3: :---: -------------:.............: --: :: : :: : Copolymère réticulé:: :: : - composition:: :: :. S %: 85 : 65: 90: :. DVB%: 10 : 10: 5: :. MAM %: : :. 4-VP%: 5 : 25: 5: :. NVI %: ::: :.DEAMS%: ::: :. AN % : - 0 particulesm: 2,1 + 0,1: 2,1 + 0,1: 2,1 + 0,1 : - extrait sec %: 10: 9: 9: Solvant: toluène : toluène: toluène: Métal carbonyle: C02(CO)8: C02(C0)8: C02(CO)8: : métal/particule (poids): 0,089: 0,089: 0,077: : Conditions opératoires:::: - température 0C: 110: 110: 133: : - durée h: 4: 5: 6,25: Particules composites:::: : - 0t'm: 2,1 + 0,1 : 2,1 + 0,1: 2, 1 + 0,1 : - % métal: 8,9 : 8,7: 7,5: : - 0 cristallites mm x 106: 3-15: 2 3-13 *TABLEAU II : EXEMPLE: 4 : 5: 6: :........_.....:. . . ....::.......: :: : :: : CoDolymère réticulé:::: : - composition:::: :. S %: 90 : 75: 85: :.DVB%: 10 : 10: 5: :. AM%: ::: :. 4-VP%: 5 : 15:: :. NVI %: :: 10: :.DEAMS%: ::: :.AN%: ::: : - 0 particulesGm: 2,1 + 0,1: 2,1 + 0,1: 2,1 + 0,1: : - extrait sec %: 8, 4: 11,3: 8,7: : Solvant: toluène :chlorobenzène: xylène: : Métal carbonyle: C02(C0)8: Fe(CO)5: C02(C0)8: : métal/particule (poids): 0,178: 0,133: 0,091: : Conditions opératoires:::: : - température C: 110: 150: 135: - durée h: 6,16: 22: 6,5: : Particules composites:::: - 0m: 2,1 + 0, 1 : 2,1 + 0,1: 2,1 + 0,1: : - % métal: 18 : 13: 8,7: : - 0 cristallites mm x 10-6:: -: 3-8: S -*6: va- :-:. B.oT[l;q0 - z S0'0+56'0: '0 +'Z:-'0 + 'Z: -: *:: :so^socuoD se1nDFiud: O0: SZ'L: S'S: q eoanp -: : osl: 5ú1: 01T D0 etn1;iadUO; - *::: OaTO1,do suoT%puoD: OZ so: O'O: Pi'O: 6'0: (spTod)TnoT;.zd/ulv/u: : 9(o0)ID:S(OD)e: 9(OD)ZO0:8 ZalAuoqvuo I: :euezueqoaolqo:aublAx: aufnlol: lu3aalO: 6 V11 L'8 %Des fVlK -: so'o: S +6' l'O + l' O + I u:seTna;.d 0 : S :: 01:: % N ': ::': S: %'lgAIi ': :::: L,-%A ': :s:: : % aM * OT : SZ::: %N-', ': O1 : O: S: O: % aAa s: : 09: S: 59: s: :::: uoTsaoduoo -: 09:se s, ua9odoD: ::::: SlnoTe az Todo ::::: : 6: 8: L: X: III nYsWIY.L TABLEAU IV : EXEMPLE: 10 il: 11: 12 : Copol re rticul:: : :.$%: 85: 5::5 *mmH :.4-VP%: 5 : 5: 5 :. NVI %: :: :.DEAMS% :.AN%: :: : - 0 particulesm: 9,7 + 0,5: 52 + 23: 2,1 + 1 - extrait sec %: 9: 9: 10 : Solvant: toluène : toluène: toluène : Métal carbonyle: C02(C0)8: C02(C0) 8: C02(CO)8 : métal/particule (poids): 0,05: 0,05: 0,089 : Conditions opératoires: :: : - température C: 110: 110: 110 - durée h: 4: 4: 4 : Particules composites::: : - 0 m: 9,7+ 0,5 : 52 + 23: 2,1+ 0,1 : - % métal: 4,9 : 5: 8,9 : - cristallites mm x 106:: 3 - 15 3 - REVENDICATIONS 1/ Procédé de préparation de particules compactes composites polymè- re/métal comprenant les étapes suivantes: a) on disperse dans un liquide organique, solvant de complexes métalcarbonyles, organocarbonyles ou hydrocarbonés décomposables thermiquement à une température inférieure au point d'ébullition dudit liquide organique, des particules anhydres de polymère portant des sites nucléophiles coordinables auxdits complexes, la taille desdites particules étant de l'ordre de 0,1 micron à 1 mm, la nature dudit polymère constituant lesdites particules étant telle que lesdites particules sont susceptibles de gonfler de 0,1 & 50 fois, leur volume en présence dudit liquide organique; b) on introduit dans la dispersion de particules de polymère gonflées ainsi obtenue, un complexe métal carbonyle, organocarbonyle ou hydrocarboné soluble dans ledit liquide organique, selon un rapport pondéral métal dudit complexe/polymère de l'ordre de 0,5/100 & 200/100, et on effectue une opération de thermolyse dudit complexe, cette opération ayant lieu sous atmosphère réductrice lorsque ledit complexe est un complexe métal hydrocar- boné c) on élimine ledit liquide organique gonflant d) éventuellement on redisperse lesdites particules composites compactes ainsi obtenues dans un liquide non gonflant dudit polymère. 2/ Procédé selon la revendication 1 caractérisé en ce qu'après élimina- tion du liquide organique gonflant à l'étape c), les particules composites obtenues sont lavées à l'aide d'un liquide non gonflant intermédiaire miscible avec le liquide organique gonflant et avec l'eau, puis séparées dudit liquide non gonflant intermédiaire et dispersées dans de l'eau par lavage à l'eau. 3/ Particules composites calibrées polymère/métal de taille uniforme de l'ordre de 0,1 micron & 1 mm caractérisées en ce que: - elles sont compactes et sont constituées: 35. d'une matrice à base d'un polymère portant des sites nucléo- philes coordinables, la quantité de sites nucléophiles coordi- nables représentant de l'ordre de 0,5 à 30 % du poids dudit polymère; et, encapsulées dans ladite matrice, de cristallites d'un métal à l'état de valence zéro, cristallites dont la taille -6 -4 est de l'ordre de 10 à 10 mm - la quantité de métal encapsulé représente environ de 0,5 & 67 %, du poids desdites particules; - le métal est choisi parmi les métaux dont les complexes carbonyles, organocarbonyles ou hydrocarbonés sont thermiquement instables; - la nature dudit polymère est telle que ce dernier est susceptible de gonfler de 0,1 & 50 fois son volume en présence d'un liquide organique solvant desdits complexes métalcarbonyles, métal organocarbonyles ou métalhydrocarbonés, le point d'ébullition dudit liquidé organique étant supérieur à la température de décomposition desdits complexes. 4/ Particules composites calibrées selon la revendication 3 caractéri- sées en ce que la quantité de sites nucléophiles de la matrice est de l'ordre de 3 & 30 % du poids de polymère. / Particules composites calibrées polymère/métal de taille uniforme de l'ordre de 0,1 & 1 m* caractérisées en ce qu'elles sont compactes et constituées: - de 95,5 à 43 % en poids d'une matrice constituée d'un copolymère dérivé de 30 à 99 % en poids d'au moins un monomère monoethyle- nique, de 0,5 à 50 % en poids d'au moins un monomère polyethyle- nique réticulable et de 0,5 à 30 % en poids d'au moins un monomère nucléophile coordinable - et, encapsulées dans ladite matrice, de l'ordre de 0,5 à 67 % en poids de cristallites d'un métal du groupe VIa, VIIa ou VIII de la Classification Périodique des éléments à l'état de valence 0, la taille desdites cristallites étant de l'ordre de 10-6 à 10-4 mm. 6/ Particules composites calibrées selon l'une quelconque des revendi- cations 3 à 5 caractérisées en ce qu'elles présentent une taille uniforme de l'ordre de 0,5 à 100 microns. 7/ Particules composites calibrées selon l'une quelconque des revendi- cations 3 à 6 caractérisées en ce qu'elles sont constituées de 97 à 74 % en poids de matrice et de 3 à 26 % en poids de métal. 8/ Particules composites calibrées selon l'une quelconque des revendi- cations 3 à 7 caractérisées en ce que la taille des cristallites de métal est de l'ordre de 3 10-6 à 3 10-5 ms 26 13372 9/ Dispersions aqueuses de particules composites calibrées, caractérisées en ce qu'elles comprennent de 1 à 50 % en poids des particules composites calibrées faisant l'objet de l'une quelconque des revendications 3 & 8. 10/Procédé de préparation des particules composites calibrées faisant l'objet de la revendication 3, caractérisé en ce qu'il comprend les étapes suivantes: a) on disperse dans un liquide organique, solvant de complexes métalcarbonyles, organocarbonyles ou hydrocarbonés décomposables thermiquement & une température inférieure au point d'ébullition dudit liquide organique, des particules anhydres et calibrées de polymère portant des sites nucléophiles coordinables auxdits complexes, la taille desdites particules étant uniforme et de l'ordre de 0,1 micron à 1 mm, la nature dudit polymère consti- tuant lesdites particules étant telle que lesdites particules sont susceptibles de gonfler de 0,1 à 50 fois leur volume en présence dudit liquide organique; b) on introduit dans la dispersion de particules de polymère gonflées ainsi obtenue, un complexe métal carbonyle, organocarbonyle ou hydrocarboné soluble dans ledit liquide organique, selon un rapport pondéral métal dudit complexe/polymère de l'ordre de 0, 5/100 à 200/100, et on effectue une opération de thermolyse dudit complexe, cette opération ayant lieu sous atmosphère réductrice lorsque ledit complexe est un complexe métal hydrocar- boné c) on élimine ledit liquide organique gonflant d) éventuellement on redisperse lesdites particules composites compactes ainsi obtenues dans un liquide non gonflant dudit polymère. Il/Procédé de préparation de, dispersions aqueuses des particules composites calibrées faisant l'objet de la revendication 3, caracté- risé en ce que: a) on disperse dans un liquide organique, solvant de complexes métalcarbonyles, organocarbonyles ou hydrocarbonés décomposables thermiquement à une température inférieure au point d'ébullition dudit liquide organique, des particules anhydres et calibrées de polymère portant des sites nucléophiles coordinables auxdits complexes, la taille desdites particules étant uniforme et de l'ordre de 0,1 micron à 1 mm, la nature dudit polymère consti- tuant lesdites particules étant telle que lesdites particules sont susceptibles de gonfler de 0,1 à 50 fois leur volume en présence dudit liquide organique; b) on introduit dans la dispersion de particules de polymère gonflées ainsi obtenue, un complexe métal carbonyle, organocarbonyle ou hydrocarboné soluble dans ledit liquide organique, selon un rapport pondéral métal dudit complexe/polymère de l'ordre de 0, 5/100 à 200/100, et on effectue une opération de thermolyse dudit complexe, cette opération ayant lieu sous atmosphère réductrice lorsque ledit complexe est un complexe métal hydrocar- boné c) on élimine ledit liquide organique gonflant d) on lave les particules composites obtenues à l'aide d'un liquide non gonflant intermédiaire miscible avec ledit liquide organique gonflant et avec de l'eau e) on élimine ledit liquide non gonflant f) on disperse dans l'eau les particules composites obtenues, par lavage à l'eau jusqu'à obtenir une concentration dans l'eau des particules de l'ordre de 1 à 50% en poids. 12/Procédé selon l'une quelconque des revendications 1, 2, 10 ou 11 caractérisé en ce qu'à l'étape a) la taille des particules de polymère est de l'ordre de 0,5 à 100 microns. 13/Procédé selon l'une quelconque des revendications 1, 2, 10 - 12 caractérisé en ce qu'à l'étape a) les particules de polymère sont susceptibles de gonfler de 3 A 10 fois leur volume en présence dudit liquide organique. 14/Procédé selon l'une quelconque des revendications 1, 2, 10 - 13 caractérisé en ce qu'à l'étape b) le rapport pondéral métal dudit complexe/polymère est de l'ordre de 3/100 à 35/100. /Procédé selon l'une quelconque des revendications 1, 2, 10 - 14 caractérisé en ce que ledit polymère est constitué de: - 30 à 99 % en poids d'au moins un monomère monoéthylénique, 0,5 à 50 % en poids d'au moins un monomère polyéthylénique rêticulable, et 0,5 à 30 % en poids d'au moins un monomère nucléophile coordinable. 16/Procédé selon la revendication 15, caractérisé en ce que ledit polymère est constitué de: - 50 à 95 % en poids d'au moins un monomère monoéthylénique - 2 à 20 % en poids d'au moins un monomère polyéthylénique réticu- lable - 3 à 30 % en poids d'au moins un monomère nucléophile coordinable. 17/Procédé selon la revendication 15 ou 16 caractérisé en ce que ledit monomère monoéthylénique est du styrène, un dérivé du styrène, un ester ou un amide de l'acide acrylique ou méthacrylique, de l'acide acrylique ou méthacrylique, un diacide monoéthylénique, de la vinylpyrrolidone, un ester vinylique, du chlorure de vinyle ou de vinylidène. 18/Procédé selon l'une quelconque des revendications 15 à 17 caractérisé en ce que ledit monomère polyéthylénique est du divinylbenzène, un dérivé du divinylbenzène, un diène conjugué, un dérivé polyallylique, un acrylate ou méthacrylate de polyol, du méthylène-bis (acrylamide), de l'acide bis (acrylamido)acétique. 19/Procédé selon l'une quelconque des revendications 15 à 18 caractérisé en ce que le monomère nucléophile coordinable est une vinylpyridine, un di(éthyl)amino-alkylacrylate ou méthacrylate, un di (éthyl) amino-alkylacrylamide or méthacrylamide, de l'allylamine, de l'éthy- lène imine, de l'acrylonitrile ou du méthacrylonitrile, du 1-vinyl- imidazole, un dialkylaminométhylstyrène. /Procédé selon l'une quelconque des revendications 1, 2, 10 - 19 caractérisé en ce que ledit liquide organique gonflant est un dérivé aromatique, éventuellement chloré, un hydrocarbure aliphatique ou cycloaliphatique, un dialkyl éther, un alcool, un ester, de point d'ébullition supérieur à la température de décomposition dudit complexe. 21/Procédé selon l'une quelconque des revendications 1, 2, 10 - 20, caractérisé en ce que la concentration de particules de polymère dans le liquide organique gonflant à l'étape a) va de 1 à 35 % en poids. 22/Procédé selon l'une quelconque des revendications 1, 2, 10 - 21 caractérisé en ce que ledit complexe est un complexe carbonyle organocarbonyle de type aliphatique, cycloaliphatique ou aromatique, hydrocarboné de type aliphatique, cycloaliphatique des métaux des groupes VIa, VIIa et VIII de la Classification périodique des éléments. 23/Procédé selon la revendication 22 caractérisé en ce que lesdits complexes sont de formule Cr(CO)6; Mo(CO)6; W(Co)6; (Mn)2 (C0)10 ; (Re) 2(CO)10; Fe(CO)5; (Fe)2(CO)9; (Fe)3(C0)12; (C0)2(C0)8; (Co)4(CO)12; Ni(CO) 4; (Rh)6,(C0)12; (Rh)4(C0)12; (Ir)4(CO)12; (Os)3(CO)12; (Ru)3(CO)12 (methylcyclopentadienyl)Mn(CO)3; (cyclopentadienyl)Nn(CO)3; (cyclopentadienyl) Co(CO)2; (cyclopentadienyl)Re(CO)3;(di- 5cyclopentadienyl)Ni ou Fe 24/Procédé selon l'une quelconque des revendications 1, 2, 10 - 23 caractérisé en ce que l'opération de thermolyse est réalisée & une température allant de 80 & 200 C. /Procédé selon la revendication 24 caractérisé en ce que l'opération de thermolyse est réalisée à une température voisine de celle d'ébullition du liquide organique gonflant. 26/Utilisation des particules compactes composites polymère/métal telles quelles ou en dispersion aqueuse obtenues selon le procédé de l'une quelconque des revendications 1, 2, 10 - 25 en biologie. 27/Utilisation des particules compactes composites calibrées, polymère/métal telles quelles ou en dispersions aqueuses faisant l'objet des revendications 3 à 9 comme phase solide en biologie dans les tests de diagnostic.