Brevet FR2615621A1 — publié le 19881125

La présente invention a pour objet des procédés d'agrégation réversibles de particules qui sont dispersées dans un- milieu liquide par l'utilisation d'un polymère polyionique destiné à provoquer l'agrégation des particules et d'un réactif chimique destiné & inverser l'agrégation des particules par clivage d'au moins une partie des liaisons à l'intérieur du polymère polyionique. Les applications de la présente invention concernent en particulier la séparation de cellules de liquides biologi- ques tels que le sang total, le liquide lymphatique, l'urine, des cultures de cellules, etc. De nombreuses techniques sont connues pour déterminer la présence et la quantité d'un analyte dans un échantillon, tel qu'un liquide biologique, par exemple le sang ou l'urine. Un mode opératoire analytique in vitro est la plus courante de ces techniques. La plupart de ces techniques font intervenir une liaison compétitive de l'analyte & déterminer et d'un analogue marqué d'un tel analyte pour les sites de liaison sur un récepteur particulier, par exemple un anticorps. Certaines de ces techniques comprennent une étape d'agrégation dans laquelle l'analogue marqué, lié ou non lié, est fixé ou associé à un support tel qu'une particule, dont l'agrégation se produit. L'agrégat peut ensuite être examiné pour déterminer la présence d'un signal produit en rapport avec la quantité d'analyte dans l'échantillon. Plusieurs techniques sont connues pour l'agrégation de particules mises en suspension dans un milieu liquide. Par exemple, l'agrégation des particules peut être effectuée en utilisant un polymère dans le milieu. Dans d'autres cas, l'agrégation des particules peut être effectuée conjointement avec des particules magnéti- ques au moyen d'un polymère qui, par exemple, lie de manière non spécifique les particules et les particules magnétiques: Plusieurs techniques sont connues pour la séparation de fractions liées et non liées. Par exemple, ces techniques comprennent une migration différentielle des fractions liées et des fractions libres, par exemple des chromato-électrophorèses, la filtration sur gel, etc., la précipitation chimique de la. fraction liée ou de la fraction libre, par exemple au moyen de solvants organi- ques, de sels, 'd'acides, etc., suivie d'une filtration ou centrifugation; la précipitation immunologique de la fraction liée, par exemple par une technique & double anticorps, suivie d'une filtration ou d'une centrifuga- tion; l'absorption de la fraction liée ou libre sur des milieux de sorption sélective, par exemple le charbon, des silicates, des résines, etc.; des techniques de séparation magnétique, etc. Les séparations magnétiques entrent générale- ment dans deux catégories générales. Il y a des séparations dans lesquelles la matière à séparer est magnétique par nature. Le second type consiste à rendre magnétiques un ou plusieurs constituants d'un mélange par fixation & une entité sensible au magnétisme. Par exemple, dans des séparations biologiques, les matières intéressantes ne sont généralement pas suffisamment magnétiques et, en consé- quence, des particules magnétiques liées & des anticorps, des lectines et d'autres molécules d'acheminement vers la cible ont été utilisées pour isoler la plupart de ces matières. La liaison de particules non magnétiques et de particules magnétiques les unes aux autres peut être influencée par le pH. En conséquence, un procédé qui a été proposé pour inverser l'agrégation des particules consiste à modifier le pH. La fixation peut également être influen- cée par d'autres facteurs tels que la force ionique et la présence de polymères ioniques ou non ioniques. Dans une voie, dans laquelle les particules sont liées par des interactions ioniques, la force ionique est accrue pour faciliter l'inversion du couplage des particules non magnétiques et des particules magnétiques. Un procédé de détermination de la concentration de substances dans des liquides biologiques (par exemple des médicaments, des hormones, des vitamines et des enzymes), dans lequel des microparticules perméables solides, insolubles dans l'eau et sensibles au magnétisme sont utilisées, est révélé dans le brevet des Etats-Unis d'Amérique N' 4 115 534. Le brevet des Etats-Unis d'Améri- que N' 4 452 773 fait connaître des microsphères de fer magnétiquedextrane qui peuvent être liées par covalence à des anticorps, des enzymes et d'autres molécules biologi- ques et utilisées pour le marquage et la séparation de cellules et d'autres particules et molécules biologiques au moyen d'un champ magnétique. Des microparticules revêtues magnétisables, leurs suspensions réversibles et des procédés les concernant sont révélés dans le brevet des Etats-Unis d'Amérique N' 4 454 234. Un procédé pour séparer des billes cationiques de billes anioniques dans des lits de résines mixtes en utilisant une matière intrinsèquement ferromagnétique incorporée à chacune des billes ioniques est décrit dans le brevet des Etats-Unis d'Amérique N* 4 523 996. Un procédé de séparation magnétique au moyen d'un colloide de particules magnétiques est décrit dans le brevet des Etats-Unis d'Amérique N' 4 526 681. La demande de brevet du Royaume-Uni N' 2 152 664A fait connaître des réactifs magnétiques analytiques. Le procédé de la présente invention concerne l'agrégation réversible de particules mises en suspension dans un milieu liquide par l'utilisation d'un polymère polyionique pour l'agrégation des particules et par mise en contact des particules agrégées avec un réactif chimique capable d'inverser l'agrégation par clivage du polymère polyionique. Lorsque les particules dans le milieu sont non magnétiques, elles peuvent former des agrégats les unes avec les autres, avec d'autres particules non magnétiques ou bien avec des particules magnétiques par addition d'un polymère polyionique. Lorsque les particules sont magnéti- ques, elles peuvent former des agrégats les unes avec les autres ou avec des particules non magnétiques par addition d'un polymère polyionique. Les applications du procédé de la présente invention concernent en particulier la détermination d'analytes organiques ou biologiques, en particulier des analytes présentant un intérêt dans l'analyse de liquides corporels. Des analyses particulièrement intéressantes sont des analyses dans lesquelles l'analyte est un membre d'une paire à liaison spécifique (pls), l'analyte ou un élément pls complémentaire de l'analyte étant lié, ou bien pouvant se lier, à la surface externe d'une particule. Si le membre pls sur la particule n'est pas complémentaire de l'analyte, alors un membre pls complémentaire est également ajouté. Le procédé consiste à mélanger les particules qui sont mises en suspension dans un milieu liquide avec un membre pls complémentaire de l'analyte ou bien au membre pls présent sur la surface, et à ajouter un polymère polyionique qui est capable de provoquer une agrégation non spécifique des particules. Après agrégation, un réactif chimique qui est capable d'inverser l'agrégation par clivage d'au moins une partie des liaisons du polymère polyionique est ajouté. Ensuite, l'agrégation spécifique résiduelle des particules est mesurée. Normalement, le membre pls est détecté au moyen d'un signal produit par l'utilisation d'un système engendrant un signal qui émet un signal en rapport avec la quantité de l'analyte dans l'échantillon. Des procédés particulièrement intéressants sont ceux consistant & séparer des cellules du sang total, l'analyte étant un constituant présent en surface ou bien se liant à une particule non magnétique. Dans un tel cas, le procédé consiste à mélanger dans le milieu l'échantillon comprenant des particules non magnétiques, tel que du sang total, des particules magnétiques et un polymère polyionique destiné à l'ag- glutination non spécifique des particules magnétiques et des particules non magnétiques, par exemple des cellules. Le milieu est soumis à un gradient de champ magnétique pour séparer les cellules agglutinées du plasma sanguin. Les cellules agglutinées sont mises en contact avec un réactif chimique dans des conditions permettant l'inversion de l'agglutination par une dépolymérisation, au moins partielle, du polymère polyionique. Le procédé de la présente invention offre une manière de séparer des particules non magnétiques d'un milieu au moyen d'une agrégation non spécifique de ces particules à des particules magnétiques par l'utilisation d'un polymère polyionique. Il offre également un moyen d'inverser l'agrégation par l'utilisation d'un réactif chimique qui clive au moins une partie des liaisons à l'intérieur du polymère polyionique. La présente invention comprend également des polymères polyioniques nouveaux comprenant des polycations répondant à la formule (A) n dans laquelle A est chargé positivement et renferme 4 à 30 atomes autres que l'hydrogène, les atomes étant choisis indépendamment dans le groupe comprenant le- carbone, l'oxygène, le phosphore, l'azote et le soufre et au moins l'un des groupes A possédant une liaison clivable; n étant en moyenne compris dans l'intervalle de 5 à 10 000. En outre, la présente invention comprend des kits destinés & mettre en oeuvre le procédé de l'invention et & effectuer une analyse pour la détermination d'un analyte dans un échantillon suspecté de renfermer ce dernier. La présente invention a pour objet un procédé - d'agrégation réversible de particules mises en suspension dans un milieu liquide. Le procédé consiste à utiliser un polymère polyionique pour l'agrégation de particules ou l'agrégation conjointe de particules les unes avec les autres et à inverser l'agrégation par l'utilisation d'un réactif chimique permettant de cliver au moins une partie des liaisons clivables à l'intérieur du polymère polyioni- que. Souvent, la particule à séparer du milieu liquide est une particule non magnétique ou qui s'associe à, ou est amenée à s'associer à, une particule non magnétique. D'autre part, la particule à séparer est parfois magnétique ou bien amenée à s'associer à une particule magnétique par agrégation conjointe. En conséquence, par l'addition d'un polymère polyionique conforme à la présente invention, l'agrégation est effectuée entre des particules non magnétiques, entre des particules magnétiques et des particules non magnétiques ou bien entre des particules magnétiques. Dans les cas o les particules à séparer du milieu liquide sont magnétiques ou bien o les particules magnétiques sont utilisées pour l'agrégation conjointe & des particules non magnétiques, les particules agrégées sont séparées du milieu par l'utilisation d'un gradient de champ magnétique. Dans les cas o des particules magnéti- ques ne sont pas utilisées, les agrégats peuvent être séparés du milieu liquide en utilisant n'importe quel procédé connu comprenant, mais à titre non limitatif, la centrifugation, la filtration, la flottation, le partage entre des solvants non miscibles, l'absorption sur des mileux sorbants sélectifs, etc. Les particules agrégées sont traitées avec un réactif.chimique capable de cliver au moins une partie des liaisons à l'intérieur du polymère polyionique pendant un temps suffisant pour inverser l'agrégation. De plus, la présente invention a pour objet des compositions nouvelles destinées à l'agrégation réversible de particules mises en suspension dans un milieu liquide. Les compositions de la présente invention sont des polymères polyioniques répondant à la formule: (A)n dans laquelle A est chargé positivement et renferme 4 à 30 atomes autres que l'hydrogène, les atomes étant choisis indépendamment dans le groupe comprenant le carbone, l'oxygène, le phosphore, l'azote et le soufre, au moins l'un desdits groupes A possédant une liaison clivable; et n étant en moyenne compris dans.l'intervalle de 5 à 10 000. Les compositions préférées sont des polymères polyioniques répondant à la formule: R2 n dans laquelle R1 et R2 sont identiques ou différents et sont choisis indépendamment dans le groupe comprenant des groupe aryle, aralkyle, aikyle, alkylène et alkoxy-alkyle de 1 à 6 atomes de carbone, et des groupes aryle, aralkyle, alkyle, alkylène et alkoxy-alkyle substitués de 1 à 6 atomes de carbone. B est un groupe de jonction contenant 2 à 30 atomes autres que l'hydrogène, atomes qui sont choisis indépendamment dans le groupe comprenant le carbone, i'oxygène, le phosphore, l'azote et le soufre, au moins l'un des groupes B renfermant une liaison clivable qui, une fois clivée, provoque une diminution de n, n étant en moyenne compris dans l'intervalle de 5 à 10 000. Les liaisons clivables sont de préférence présentes dans des disulfures, des esters carboxyliques, des phosphates et des sulfates, et des amides, des carboboranes, des siloxanes, des glycols vicinaux, etc. Les réactifs destinés au clivage des liaisons clivables comprennent, mais à. titre non limitatif, des agents réducteurs tels que des mercaptans, comme le dithioérythritol, des enzymes hydrolytiques tels que la pepsine, des periodates, des sulfites, des phosphites et des borohydrures, l'eau oxygénée et des fluorures. Le procédé de l'invention possède de larges applications dans le domaine de la séparation d'un milieu de particules mises en suspension, en particulier pour la séparation de matières biologiques telles que des cellules et des micro-organismes, et dans le domaine des immuno- essais et de la détermination des groupes sanguins. Le procédé permet l'agrégation des particules au moyen d'un polymère polyionique et l'inversion de l'agrégation par addition d'un réactif chimique capable de dépolymériser au moins partiellement le polymère polyionique. La présente invention propose un procédé pour l'agrégation réversible de particules, qui est plus efficace qu'une, et supprime le besoin d'une, inversion de la liaison ionique des particules par une modification de la force ionique ou du pH du milieu. La présente invention s'applique également à la détermination d'un analyte dans un échantillon, dans laquelle une étape de séparation est requise. Avant d'aller plus loin dans la description des formes dée réalisation particulières de la présente invention, un certain nombre de termes seront définis. Analyte -- Composé ou composition & doser, matière présentant un intérêt. L'analyte peut être un membre d'une paire à liaison spécifique (plsj et peut être un ligand, qui est mono- ou polyvalent, habituellement antigénique ou hapténique, et est un composé unique ou bien un ensemble de composés qui partagent au moin un site épitopique ou de déterminant commun. L'analyte peut également être un constituant d'une particule ou bien peut se lier & une particule au cours d'une analyse. Un exemple d'un analyte qui est un constituant d'une particule est un antigène à la surface d'une cellule, tel qu'un antigène des groupes sanguins (A, B, AB, O, D, etc.) ou un antigène HLA. Un exemple d'un analyte qui se lie à une particule au cours d'une analyse est un membre pls dans lequel un membre pls complémentaire est lié à une particule, une glycoprotéine ou des glycolipides dans lesquels une lectine est liée à une particule, des anticorps dans lesquels la protéine A est liée à une particule, etc. La liaison impliquée lorsqu'un analyte se lie à une particule peut être spécifique ou non spécifique, immunologique ou non immuno- logique. Les analystes du type ligand polyvalent sont normalement des poly(aminoacides), c'est-à-dire des polypeptides et des protéines, des polysaccharides, des acides nucléiques et leurs associations. Ces associations comprennent des constituants de bactéries, de virus, de chromosomes, de gènes, de mitochondries, de noyaux, de membranes cellulaires, etc. La nature précise de certains des analytes, conjointement avec de nombreux exemples de ces derniers, sont révélés dans le brevet des Etats-Unis d'Amérique N' 4 299 916, en particulier dans les colonnes 16 à 23. Dans la plupart des cas, les analytes du type ligand polyépitopique utilisés dans la présente invention possèdent un poids moléculaire d'au moins environ 5000, le plus souvent d'au moins environ 10 000. Dans la catégorie des poly(aminoacides), les poly(aminoacides) intéressants ont généralement un poids moléculaire compris dans l'intervalle d'environ 5000 à 5 000 000, le plus souvent d'environ 20 000 à 1 000 000; parmi les hormones intéres- santes, les poids moléculaires sont habituellement compris dans l'intervalle d'environ 5000 & 60 000. Des protéines très diverses peuvent être considérées comme constituant la famille de protéines ayant des caractéristiques structurales similaires, de protéines ayant des fonctions biologiques particulières, de protéines se rapportant à des micro-organismes particuliers, notamment des microorganismes vecteurs de maladies, etc. Les analytes du type ligand monoépitopique ont généralement un poids moléculaire compris dans l'intervalle d'environ 100 à 2000, le plus souvent de 125 à 1000. Les analytes intéressants comprennent des médicaments, des métabolites, des pesticides, des polluants, etc. Parmi les médicaments intéressants se trouvent les alcaloïdes. Parmi les alcaloïdes se trouvent les alcaloides morphiniques, qui comprennent la morphine, la codéine, l'héroïne, le dextrométhorphane, leurs dérivés et métabolites; des alcaloïdes du type cocaïne, qui comprennent la cocaïne et la benzoyl-ecgonine, leurs dérivés et métabolites, des alcaloides de l'ergot, qui comprennent le diéthylamide de l'acide lysergique; des alcaloïdes stéroidiens; des iminazoyl-alcaloîdes; des alcaloïdes dérivés de la quinazoline, des alcaloïdes dérivés de l'isoquinoléine; des alcaloïdes dérivés de la quinoléine, qui comprennent la quinine et la quinidine; des alcaloïdes diterpéniques, -11 leurs dérivés et métabolites. Le groupe suivant de médicaments comprend des stéroides, qui comprennent les oestrogènes, les androgènes, les stéroides adrénocorticaux, les acides biliaires, les glycosides et aglycones cardiotoniques, qui comprennent la digoxine et la digoxigénine, les saponines et sapogénines, leurs dérivés et métabolites. Sont également comprises les substances mimétiques de stéroides, telles que le diéthyl- stilboestrol. Le groupe suivant de médicaments comprend des lactames penta- ou hexagonaux qui comprennent les bar- biturates, par exemple le phénobarbital et le sécobarbital, la diphénylhydantoine, la primidone, l'éthosuximide et leurs métabolites. Le groupe suivant de médicaments est constitué d'amino-alkylbenzènes, renfermant un groupe alkyle de 2 à 6 atomes de carbone, qui comprend les amphétamines, les catécholamines, comprenant l'éphédrine, la L-dopa, l'épinéphrine, la narcéine, la papavérine et leurs métabolites. Le groupe suivant de médicaments est constitué de composés benzhétérocycliques, comprenant l'oxazepam, la chlorpromazine, le tégrétol, l'imipramine, leurs dérivés et métabolites, les noyaux hétérocycliques étant des azépines, des diazépines et des phénothiazines. Le groupe suivant de médicaments est constitué des purines, comprenant la théophylline, la caféine, leurs métabolites et dérivés. Le groupe suivant de médicaments comprend ceux dérivés de la marijuana, comprenant le cannabinol et le tétrahydrocannabinol. Le groupe suivant de médicaments comprend des vitamines telles que les vitamines A, B, par exemple B12, C,D, E et K, l'acide folique et la thiamine. Le groupe suivant de médicaments est constitué des prostaglandines, qui diffèrent par le degré et les sites d'hydroxylation et d'insaturation. Le groupe suivant de médicaments est constitué d'antibiotiques, comprenant la pénicilline, la chloromycé- tine, l'actinomycétine, la tétracycline, la terramycine, leurs métabolites et dérivés. Le groupe suivant de médicaments est constitué' des nucléosides et nucléotides, comprenant l'ATP, le NAD, le FMN, l'adénosine, la guanosine, la thymidine et la cytidine, avec leurs dérivés glucidiques et phosphatés appropriés. Le groupe suivant de médicaments est un ensemble de divers médicaments, comprenant la méthadone, le méprobamate, la sérotonine, la mépéridine, l'amitrip- tyline, la nortriptyline, la lidocaine, le procaïnamide, l'acétylprocaïnamide, le propranolol, la griséofulvine, l'acide valproïque, les butyrophénones, les antihistamini- ques, des médicaments anticholinergiques, tels que l'atropine, leurs métabolites et dérivés. - Les métabolites en rapport avec des états pathologiques comprennent la spermine, le galactose, l'acide phénylpyruvique et la porphyrine de Type 1. Le groupe suivant de médicaments est constitué d'aminoglycosides, tels que la gentamycine, la kanamycine, la tobramycine et l'amikacine. Parmi les pesticides intéressants se trouvent des biphényles polyhalogénés, des esters de phosphates, des thiophosphates, des carbamates, des sulfénamides polyhalo- génés, leurs métabolites et dérivés. Pour les analytes servant de récepteurs, les poids moléculaires sont généralement compris dans l'inter- valle de 10 000 à 2 x 108, le plus souvent de 10 000 & I06. Pour les immunoglobulines, IgA, IgG, IgE et IgM, les poids moléculaires sont généralement compris dans l'intervalle d'environ 160 000 à environ 106. Les enzymes ont habituel- lement des poids moléculaires compris dans l'intervalle d'environ 10 000 à 1 000 000. Les récepteurs naturels varient considérablement, ayant généralement un poids moléculaire d'au moins environ 25 000 et pouvant être égal ou supérieur à 106, récepteurs comprenant des matières telles que l'avidine, l'ADN, l'ARN, la globuline de liaison à la thyroxine, la pré-albumine de liaison à la thyroxine, la transcortine, etc. Analogue de ligand ou analogue d'analyte-- Ligand modifié, succédané de ligand, analyte modifié ou succédané d'analyte, qui peut entrer en compétition pour un récepteur avec le ligand ou l'analyte analogue, la modification offrant un moyen de relier un analogue de ligand ou analogue d'analyte à une autre molécule. L'analogue de ligand ou l'analogue d'analyte présente habituellement des différences avec le ligand ou l'analyte supérieures au remplacement d'un atome d'hydrogène par une liaison gui relie l'analogue de ligand ou l'analogue d'analyte à un noyau central ou un marqueur, mais pas nécessairement. L'expression "succédané de ligand" ou "succédané d'analyte" désigne un composé apte à se lier spécifiquement à un récepteur complémentaire du ligand ou de l'analyte. Ainsi, le succédané de ligand ou succédané d'analyte peut se lier au récepteur d'une manière similaire à celle du ligand ou de l'analyte. Le succédané peut être, par exemple, un anticorps dirigé contre l'idiotype d'un anticorps contre le ligand ou l'analyte. Poly(analogue de ligand) -- Un ensemble d'analogues de ligands reliés les uns aux autres de manière covalente, habituellement & un noyau central. Le noyau central est une matière polyfonctionnelle, habituellement polymérique, comprenant le plus souvent un ensemble de groupes fonctionnels, par exemple de groupes hydroxyle, amino, mercapto, éthyléniques, etc., servant de sites de jonction. Le noyau central peut être hydrosoluble ou insoluble dans l'eau, de préférence hydrosoluble, et possède habituellement un poids moléculaire d'au moins environ 30 000 et pouvant être égal ou supérieur à 000 000. Des exemples de noyaux centraux comprennent des polysaccharides, des polypeptides (comprenant des protéines), des acides nucléiques, des résines échangeuses d'anions, etc. Les noyaux centraux insolubles dans l'eau peuvent également comprendre des parois de récipients, par exemple en verre ou en matière plastique, des perles de verre, des polymères d'addition et de condensation, des billes de Sephadex et d'agarose, etc. Membre d'une paire à liaison spécifique ("membre pls") -- Une molécule, parmi deux molécules différentes, présentant en surface ou dans une cavité une région qui se lie spécifiquemept à, et est ainsi définie comme, une région complémentaire d'une organisation spatiale et polaire particulière de l'autre molécule. Les membres de la paire à liaison spécifique sont désignés sous les noms de ligand et de récepteur (antiligand). Il s'agit habituellement de membres d'une paire immunologique telle qu'une paire antigène-anticorps, bien que d'autres paires à liaison spécifique telles que la paire biotineavidine, des paires hormones-récepteurs hormonaux, des duplex d'acides nucléiques, une paire IgG-protéine A, une paire ADN-ADN, une paire ADN-ARN, etc., ne soient pas des paires im- munologiques mais entrent cependant dans le cadre de la présente invention. Ligand -- Tout composé organique pour lequel existe naturellement ou peut être préparé un récepteur. Récepteur ("antiligand") -- Tout composé ou toute composition capable de reconnaître une organisation spatiale et polaire particulière d'une molécule, par exemple un site épitopique ou de déterminant. Des exemples de récepteurs comprennent des récepteurs naturels, par exemple la globuline de liaison à la thyroxine, des anticorps, des enzymes, des fragments de Fab, des lectines, des acides nucléiques, la protéine A, le constituant Clq du complément, etc. Particules non magnétiques -Particules diamagnétiques ou paramagnétiques ayant habituellement une susceptibilité magnétique (t) inférieure à 1 x 10. -5 emu/Oecm3.Les particules non magnétiques possèdent généralement un diamètre d'au moins environ 0,02 micromètre et ne dépassant pas environ 100 micromètres, habituellement d'au moins environ 0,05 micromètre et inférieur à environ 20 micromètres, de préférence d'environ 0,3 à 10 micromètres. La particule non magnétique peut être organique ou inorganique, susceptible ou non de gonfler, poreuse ou non poreuse, ayant de préférence une masse volumique proche de celle de l'eau, généralement comprise dans l'intervalle d'environ 0,7 à environ 1,5 g/ml, et constituée d'une matière qui peut être transparente, partiellement transparente ou opaque. Habituellement, les particules non magnétiques possèdent une charge, positive ou négative, et peuvent avoir sur leur surface des membres pls. Le plus souvent, les particules non magnétiques sont des matières biologiques telles que des cellules et des micro-organismes, par exemple des érythrocytes, des leucocytes, des lymphocytes, des hybridomes, des micro- organismes du genre Streptococcus, Staphylococcus aureus, E. coli, des virus, etc. Les particules non magnétiques peuvent également être des particules constituées de polymères organiques et inorganiques, des liposomes, des particules de latex, des vésicules de phospholipides, des chylomicrons, des lipoprotéines, etc. Les polymères sont habituellement des polymères d'addition ou de condensation. Les particules non magnéti- ques obtenues à partir de ces polymères sont aisément dispersables dans le milieu analytique et peuvent présenter une capacité d'absorption ou de fonctionnalisation de manière à fixer, directement ou indirectement, un membre pls ou une particule magnétique. Fréquemment, la particule non magnétique est un analyte, est liée à un analyte ou se lie a un analyte au cours d'une analyse. Les particules non magnétiques non initialement liées à l'analyte peuvent être obtenues à partir de matières naturelles, de matières naturelles qui sont modifiées par synthèse et de matières synthétiques. Parmi les polymères organiques particulièrement intéres- sants se trouvent des polysaccharides, en particulier des polysaccharides réticulés, tels que l'agarose, qui est disponible sous le nom de Sepharose, du dextranne, disponible sous les noms de Sephadex et de Sephacryl, de la cellulose, de l'amidon, etc; des polymères d'addition, tels que le polystyrène, l'alcool polyvinylique, des homopolymères et des copolymères de dérivés d'acrylate et de méthacrylate, en particulier des esters et des amides ayant des fonctionnalités hydroxyle libres, etc. Les particules non magnétiques destinées à être utilisées dans des analyses sont habituellement polyfonc- tionnelles et sont liées ou bien sont capables de se lier spécifiquement de manière non covalente à un membre pls, tel que des anticorps, l'avidine, la biotine, des lectines, la protéine A, etc. Des groupes fonctionnels très divers sont disponibles ou peuvent être incorporés. Les groupes fonctionnels comprennent des acides carboxyliques, des aldéhydes, des groupes amino, des groupes cyano, des groupes éthylène, des groupes hydroxyle, des groupes mercapto, etc. La manière de fixerdes composés très divers à des particules est bien connue et est amplement illustrée dans la littérature. Voir, par exemple, Cuatrecasas, J. Biol. Chem., 2A5 3059 (1970). La longueur d'un groupe de jonction peut varier considérablement, suivant la nature du composé relié, l'effet de la distance entre le composé relié et la particule sur la liaison des membres pls et de l'analyte, etc. La particule non magnétique possède habituelle- ment une charge électronique, positive ou négative. La particule peut être chargée par nature ou bien peut être traitée chimiquement ou physiquement pour l'introduction d'une charge. Par exemple, des groupes tels que les groupes carboxyle, sulfonate, phosphate, amino, etc., peuvent être liés chimiquement & ou formés sur les particules par des techniques connues dans la pratique. Les cellules sont habituellement chargées négativement en raison de la présence de résidus d'acide sialique à la surface de la cellule. Les particules de latex peuvent être chargées positivement ou négativement mais possèdent habituellement une charge négative résultant de l'introduction de groupes fonctionnels ou de l'absorption de polymères chargés tels que des polypeptides, des protéines, un polyacrylate, etc. Les particules non magnétiques peuvent être fluorescentes ou non fluorescentes, habituellement non fluorescentes, mais, lorsqu'elles sont fluorescentes, elles peuvent être fluorescentes directement ou bien du fait de la présence de composés fluorescents ou de corps engendrant une fluorescence liés à la particule, de manière classique. Les corps engendrant une fluorescence sont habituellement dissous dans ou liés de manière covalente ou non covalente à la particule non magnétique et sont fréquemment liés pratiquement uniformément dans toute la particule. Le brevet des Etats-Unis d'Amérique NO 3 853 987 fait connaître des particules de latex traitées par la fluores- céine, qui sont disponibles dans le commerce sous le nom de Covaspheres auprès de Covalent Technology Corp. Les corps intéressants engendrant une fluores- cence émettent généralement une lumière à une longueur d'onde supérieure & 350 nm, habituellement supérieure à 400nm et de préférence supérieure à 450 nm. Avantageuse- ment, les corps engendrant une fluorescence possèdent un haut rendement quantique, un déplacement de Stockes important et sont chimiquement stables dans les conditions de leur conjugaison et de leur utilisation. L'expression "corps engendrant une fluorescence" est destinée à comprendre des substances qui émettent une lumière par activation par une radiation électromagnétique ou bien par activation chimique et comprend des substances fluorescen- tes et phosphorescentes, des scintillateurs et des substances chimioluminescentes. Les corps intéressants engendrant une fluores- cence entrent dans diverses catégories possédant certaines fonctionnalités primordiales. Ces fonctionnalités primor- diales comprennent le 1- et le 2-aminonaphtalène, des p,p- diaminostilbènes, des pyrènes, des sels quaternaires de phénanthridine, des 9-aminoacridines, des p,p'-diaminos- tilbènes, des imines, des anthracènes, l'oxacarbocyanine, la mérocyanine, la 3-aminoéquilénine, le pérylène, le bis- benzoxazole, le bis-para-oxazolyl-benzène, la 1,2-benzo- phénazine, le rétinol, des sels de bis-3-aminopyridinium, l'hellébrigénine, la tétracycline, le stérophénol, la benzimidazolylphénylamine, le 2-oxo-3-chromène, l'indole, le xanthène, la 7-hydroxycoumarine, des 4,5-benzimidazoles, la phénoxazine, un salicylate, la strophanthidine, des porphyrines, des triarylméthanes, la flavine et des oxydes et sels de chélates de terres rares. Des exemples de corps engendrant une fluorescence sont énumérés dans le brevet des Etats-Unis d'Amérique N' 4 318 707, colonnes 7 et 8. Les colorants dérivés de type squaraine décrits dans la publication EPO NI 214 847 sont également utiles comme corps engendrant une fluorescence. En outre, il est possible d'utiliser des particules non magnétiques absorbant la lumière qui sont des particules solides insolubles ayant un diamètre d'au moins environ 10 nm. De nombreux types différents de particules peuvent être utilisés. Des particules particulièrement intéressantes sont des particules de carbone, telles que des particules de charbon, de noir de fumée, de graphite, de carbone colloidal, etc. Outre les particules de carbone, des sols métalliques peuvent également être utilisés, en particulier des sols des métaux nobles tels que l'or, l'argent et le platine. Marqueur -- Un membre du système engendrant un signal qui est conjugué à un membre pls. Le marqueur peut être isotopique ou non isotopique, habituellement non isotopique, comprenant des catalyseurs tels qu'un enzyme, une substance chromogène telle qu'un corps engendrant une fluorescence, un colorant ou un corps chimioluminescent, une substance. radioactive, une particule, etc. - Système engendrant un signal -- Le système engendrant un signal peut renfermer un ou plusieurs constituants, au moins l'un des constituants étant un marqueur. Le système engendrant un signal produit un signal qui est en rapport avec la présence ou la quantité d'analyte dans un échantillon. Le système engendrant un signal comprend tous les réactifs nécessaires pour produire un signal mesurable. Lorsque le marqueur n'est pas conjugué à un membre pls analogue à l'analyte, le marqueur est habituellement lié à un membre pls complémentaire d'un membre pls qui est analogue à l'analyte. D'autres cons- tituants du système engendrant un signal peuvent comprendre des substrats, des renforçateurs, des activateurs, des composés chimioluminescents, des cofacteurs, des in- hibiteurs, des accepteurs, des ions métalliques, des substances & liaison spécifique nécessaires pour la liaison de substances engendrant un signal, etc. D'autres cons- tituants du système engendrant un signal peuvent être des coenzymes, des substances qui réagissent avec des produits enzymatiques, d'autres enzymes et catalyseurs, etc. Le système engendrant un signal produit un signal détectable par un moyen externe, de préférence par mesure du degré d'agrégation de particules, ou bien par l'utilisation d'une radiation électromagnétique, avantageusement par examen visuel. Dans la plupart des cas, le système engendrant un signal comprend des particules, telles que des particules fluorescentes ou d'autres particules absorbant la lumière, un substrat chromophore et un enzyme, les substrats chromophores étant transformés par voie enzymatique en des colorants qui absorbent la lumière dans la région de la lumière ultraviolette ou de la lumière visible, des composés phosphorescents, des corps engendrant une fluorescence ou des corps engendrant une chimiolumines- cence. Le système engendrant un signal peut comprendre au moins un catalyseur, habituellement un enzyme, et au moins un substrat, et peut comprendre deux ou plus de deux catalyseurs et un ensemble de substrats, et peut comprendre une association d'enzymes, le substrat d'un enzyme étant le produit de l'autre enzyme. Le système engendrant un signal fonctionne en engendrant un produit qui donne un signal détectable en rapport avec la quantité d'analyte dans l'échantillon. Un grand nombre d'enzymes et de coenzymes utiles dans un système engendrant un signal est mentionné dans le brevet des Etats-Unis d'Amérique N" 4 275 149, colonnes 19 & 23, et le brevet des Etats-Unis d'Amérique NI 4 318 980, colonnes 10 à 14. Un certain nombre d'as- sociations d'enzymes est indiqué dans le brevet des Etats- Unis d'Amérique NO 4 275 149, colonnes 23 à 28, associa- tions pouvant être utilisées dans la présente invention. Des enzymes particulièrement intéressants sont ceux qui font intervenir la production d'eau oxygénée et l'utilisation d'eau oxygénée pour l'oxydation d'un précurseur de colorant en un colorant. Des associations particulières comprennent des saccharide-oxydases, par exemple la glucose- et la galactose-oxydase, ou des oxydases hétérocycliques, telles que l'uricase et la xanthine-oxydase, couplées a un enzyme qui utilise l'eau oxygénée pour l'oxydation d'un précurseur de colorant, c'est-à-dire une peroxydase telle que la peroxydase de raifort, une lactoperoxydase ou une microperoxydase. D'autres associations d'enzymes peuvent être trouvées dans l'art antérieur mentionné. Lorsqu'un seul enzyme est utilisé comme marqueur, d'autres enzymes peuvent- être utilisés, tels que des hydrolases, des transférases et des oxydoréductases, de préférence des hydrolases telles que la phosphatase alcaline et la 0-galactosidase. En variante, il est possible d'utiliser des luciférases telles que la luciférase de luciole et la luciférase bactérienne. Des exemples de coenzymes qui peuvent être utilisés comprennent le NAD[H]; le NADP[H], le pyridoxal- phosphate; le FAD[H]; le FMN[H], etc., habituellement des coenzymes faisant intervenir des réactions de cyclisation; voir en particulier le brevet des Etats-Unis d'Amérique N' 4 318 980. Le produit de la réaction enzymatique est habituellement un colorant ou un corps engendrant une fluorescence. Un grand nombre d'exemples de corps en- gendrant une fluorescence est indiqué dans le brevet des Etats-Unis d'Amérique N' 4 275 149, colonnes 30 et 31. Particules magnétiques -- Particules qui sont par nature sensibles au magnétisme ou bien ont été rendues magnétiques, par exemple par fixation à une substance sensible au magnétisme ou bien par incorporation d'une telle substance aux particules. Les particules magnétiques peuvent être paramagnétiques, ferromagnétiques ou super- paramagnétiques, habituellement paramagnétiques et possèdent des susceptibilités magnétiques () d'au moins x 10-5 emu/Oecm3, habituellement d'au moins 4 x 10-4 emu/Oecm3. Le diamètre des particules - doit être faible, compris généralement dans l'intervalle d'environ 5 nm à 50 micromètres, avantageusement d'environ 20 nm à 5 micromé- tres, de préférence d'environ 50 nm à 1 micromètre, fréquemment égal & un diamètre propre aux particules colloidales. Des exemples du constituant magnétique de particules qui sont par nature magnétiques ou bien sensibles au magnétisme sont des sels et oxydes complexes, borures et sulfures de fer, de cobalt, de nickel et de terres rares ayant une forte susceptibilité magnétique, par exemple l'hématite, la ferrite. Le constituant magnétique d'autres particules de ce type comprend des métaux purs ou des alliages comprenant un ou plusieurs de ces éléments. Dans la plupart des cas, les particules magnétiques contiennent un noyau du constituant magnétique avec des groupes fonctionnels en surface, tels que des groupes hydroxyle, silicate, carboxylate, sulfate, amino, phosphate, etc. Fréquemment, on utilise un revêtement superficiel supplémentaire qui est lié de manière covalente ou non covalente à la surface. Le revêtement superficiel peut être un détergent anionique ou cationique, habituelle- ment anionique; ou bien le revêtement peut être une protéine telle que l'albumine, l'immunoglobuline, l'avidi- ne, la fétuine, etc.; ou bien il peut s'agir d'un glucide tel que le dextranne, le chitosane, l'amylose, etc., ou des mélanges de ces substances sous leur forme naturelle ou fonctionnalisée de manière à ajuster leur charge et leur pouvoir hydrophile. En variante, les particules peuvent être revêtues d'autres substances amphiphiles telles que des lipopolysaccharides, un octyl-glucoside, etc. En variante, le constituant magnétique peut être incorporé à une particule, tel que, par exemple, par imprégnation d'une matrice polymérique avec la substance. Pour une description plus approfondie de la préparation de particules magnétiques par ce procédé, voir Whitesides et collaborateurs (1983), Trends in Biotechnoloav, 1(5):144- 148 et les références qui y sont mentionnées. Dans les cas o il est souhaitable d'utiliser de petites particules magnétiques, des particules magnéti- ques ayant un diamètre inférieur à -cent nanomètres peuvent être produites par précipitation d'oxydes de fer en présence ou en l'absence d'un revêtement tel qu'un polysaccharide ou une protéine. Des particules magnétiques de quelques micromètres de diamètre peuvent également être produites par un procédé de passage dans un broyeur à boulets et l'élimination de la matière qui possède un diamètre non compris dans l'intervalle intéressant. Habituellement, les particules magnétiques formées par ce dernier procédé présentent une grande polydispersité. Des suspensions d'oxydes métalliques qui sont généralement monodispersées peuvent être préparées par un ajustement soigneux du pH, de la température et des concentrations au cours de la mise en oeuvre du procédé de précipitation. Le revêtement des particules magnétiques avec des macro- molécules peut accroître leur stabilité colloidale. Cela peut être effectué par absorption directe de polymères de hauts poids moléculaires ou bien par fonctionnalisation de la surface de la particule, puis liaison des macromolécules aux groupes fonctionnels. Des techniques de polymérisation en émulsion et de greffage offrent un moyen de revêtir des particules magnétiques avec des polymères. En général, la particule magnétique qui est la plus appropriée à un but donné peut être déterminée principalement par le diamètre et les propriétés des particules & séparer. Pour des immuno-essais ou la séparation de cellules, les particules magnétiques doivent de préférence pouvoir être aisément mises en suspension, former des suspensions stables, de préférence colloidales, et avoir une grande susceptibilité magnétique. Lorsqu'un élément pls est lié à la surface, son aptitude à se lier à un pls complémentaire doit être conservée et doit être stable au cours du temps. De petites particules magnétiques ( petites particules. Des particules magnétiques ayant un diamètre intermédiaire (100 à 1000 nm) peuvent être mises en suspension aisément et nécessitent une densité de charges en surface inférieure à celle de particules plus petites pour empêcher une agrégation spontanée. Des particules magnétiques ayant un diamètre compris dans cet intervalle peuvent être produites par polymérisation en émulsion et présentent l'avantage de posséder une surface qui est aisément modifiée par greffage ou bien par liaison covalente de macromolécules à leur surface. Cependant, elles restent en suspension pendant des temps plus courts et leurs rapports inférieurs de la surface au volume diminuent la vitesse de liaison à la substance à séparer. Fluide magnétique -- Une suspension colloïdale dans un véhicule liquide de particules magnétiques qui ne sont pas aisément séparées par un champ magnétique. Le liquide résultant possède les propriétés générales d'une matière magnétique. Le fluide se magnétise spontanément en présence d'un champ magnétique externe. Le liquide joue également le rôle de fluide et est capable de prendre la forme du récipient qui le contient, de s'écouler et de se déplacer autour d'obstacles. Un exemple d'un fluide magnétique est un fluide ferromagnétique dans lequel les particules en suspension sont des particules ferromagnéti- ques (voir, par exemple, Rosenweig, ci-dessus, et le brevet des EtatsUnis d'Amérique N' 4 019 994, ainsi que Khalafolla et collaborateurs (1980), IEEE Transactions on Maanetics. MAG-16:178-183). Les particules magnétiques colloïdales peuvent être revêtues d'une matière protéique, par exemple une protéine sérique telle qu'une albumine, une gammaglobuline, etc. Les particules magnétiques colloïdales peuvent être mélangées à une solution aqueuse de protéines, tamponnée, pour préparer les particules magnétiques colloïdales revêtues de protéines. Le revêtement des particules magnétiques avec une protéine peut être effectué par liaison physique (par exemple par absorption) ou chimique. Liaison non spécifique -- Liaison non covalente entre des particules qui sont relativement indépendantes des structures superficielles spécifiques. Cette liaison non spécifique résulte habituellement d'interactions électrostatiques entre des particules de charges opposées ou bien entre des particules ayant la même charge, un réactif polyionique ayant une charge opposée à celle de ces particules étant utilisé. La liaison non spécifique peut également résulter d'interactions hydrophobes entre des particules. Polymère polyionique -- Un composé, une composition ou une matière, inorganique ou organique, naturelle ou synthétique, ayant au moins cinq charges identiques, polyanionique ou polycationique, ayant de préférence au moins dix charges identiques; par exemple un polyélectrolyte. Le polymère polyionique de la présente invention est capable de provoquer l'agrégation de particules dans un milieu liquide et possède des liaisons capables d'être clivées par un réactif chimique pour inverser l'agrégation des particules. Des exemples de liaisons clivables dans le polymère polyionique sont des disulfures, des esters carboxyliques, des phosphates et des sulfates, des amides, des carboboranes, des siloxanes, des glycols vicinaux, etc. - Des polymères polyioniques pouvant être utilisés dans la présente invention comprennent des polymères répondant à la formule suivante: (A)n dans laquelle A est chargé positivement et renferme 4 a 30 atomes autres que l'hydrogène, les atomes étant indépendam- ment choisis dans le groupe comprenant le carbone, l'oxygène, le phosphore, l'azote et le soufre, et au moins l'un des groupes A renfermant une liaison clivable; n étant en moyenne compris dans l'intervalle de 5 à 10 000. * Un polymère polycationique préféré de la présente invention répond à la formule structurale suivante: -N± Bj R2 jn dans laquelle R1 et R2 sont identiques ou différents et sont choisis indépendamment dans le groupe comprenant des groupes aryle, aralkyle, alkyle, alkylène et alkoxyalkyle de 1 & 6 atomes de carbone, et des groupes aryle, aralkyle, alkyle, alkylène et alkoxyalkyle substitués de 1 à 6 atomes de carbone; B est un groupe de jonction contenant 2 & 30 atomes autres que l'hydrogène, atomes qui sont choisis indépendamment dans le groupe comprenant le carbone, l'oxygène, le phosphore, l'azote et le soufre, au moins l'un desdits groupes B renfermant une liaison clivable; n étant en moyenne compris dans l'intervalle de 5 à 10 000. Les liaisons clivables comprennent de préférence des - disulfures ou des glycols. Un autre polymère polycationique apprécié répond à la formule structurale précitée dans laquelle R1 et R2 sont identiques ou différents et sont choisis indépendamment dans le groupe comprenant des groupe alkyle, alkylène et alkoxyalkyle de 1 à 6 atomes de carbone; B est choisi indépendamment dans le groupe comprenant un polyalkylène ou un O,0'-bisalkylénylpolyéther, un disulfure de bis-alkylényle et un bis-alkylényl-éthylène- glycol dans lequel au moins l'un des groupes B renferme un groupe disulfure ou glycol; et n est en moyenne compris dans l'intervalle de 5 à 10 000. Un autre polymère polycationique apprécié répond à la formule structurale précitée dans laquelle R1 et R2 sont identiques ou différents et sont choisis indépendamment dans le groupe comprenant des groupes alkyle de 1 à 4 atomes de carbone; B est choisi indépendamment dans le groupe comprenant des groupes de formule -(CH2)a- (S-S)b-(CH2)c- dans laquelle b a la valeur 0 ou 1, a et c vont de 2 à 8 lorsque b a la valeur 1, et a et c vont de 2 à 10 lorsque b a la valeur 0, sous réserve que, dans au moins l'un des groupes B, b soit égal à 1; et n est en moyenne compris dans l'intervalle de 10 à 10 000 et, de préférence, dans l'intervalle de 10 à 20. Un autre polycation apprécié répond à la formule structurale précitée dans laquelle R1 et R2 sont des groupes méthyle; B est un groupe (CH2) m[CH(OH)]2(CH2)p, m et p vont de i & 8; et n est en moyenne compris dans l'intervalle de 10 à 200, de préféren- ce de 10 & 100. Un autre polycation apprécié répond à la formule structurale précitée dans laquelle R1 et R2 sont des groupes méthyle; B est un groupe -(CH2)a-SS-(CH2)c-, dans lequel a et c vont de 3 à 5; et n est en moyenne compris dans l'intervalle de 10 à 20. Agent d'inversion -- Un composé, une composi- tion ou une matière chimique, naturel ou synthétique, organique ou inorganique, capable d'inverser l'agrégation de particules par une dépolymérisation, au moins partielle, du polymère polyionique. L'agent d'inversion ou de clivage agit sur les liaisons du polymère polyionique et clive en moyenne au moins une liaison par polymère, de préférence au moins deux liaisons par polymère. Le choix de réactifs particuliers d'inversion dépend des liaisons clivables à l'intérieur du polymère polyionique. Les agents d'inversion suivants sont proposés à titre d'exemple et non à titre limitatif du cadre de la présente invention. En général, les agents d'inversion sont choisis-dans le groupe comprenant des enzymes hydrolytiques tels que la pepsine, la trypsine, la chymotrypsine, une phosphodiestérase, etc.; des mercaptans, par exemple le mercaptoéthanol, le dithioérythritol et le glutathion, etc.; des sulfites, des halogénures, des phosphites, des periodates et des borohydrures; et des peroxydes, tels que l'eau oxygénée. Comme il a été mis en évidence à titre d'exemple, l'agent particulier d'inversion choisi dépend des liaisons qui seront clivées. Par exemple, lorsque la liaison clivable relie deux atomes de soufre, le réactif choisi est généralement un agent réducteur tel que, par exemple, le dithioérythritol, etc. Lorsque la liaison clivable est une liaison peptidique, le réactif d'inversion peut être la trypsine, etc. Dans les cas o la liaison clivable relie les atomes de carbone d'un glycol vicinal, l'agent d'inversion peut être un periodate, tel que le periodate de sodium, etc. Lorsque la liaison clivable relie les atomes de carbone et d'oxygène d'un ester, l'agent d'inversion peut être la chymotrypsine, l'hydroxyde de sodium, etc. Lorsque la liaison est un ester de phosphate, l'agent d'inversion peut être une phosphodiestérase et, lorsque la liaison est un carboborane, l'agent d'inversion peut être l'eau oxygénée. Lorsque la liaison est un siloxane, l'agent peut être un fluorure. Matières auxiliaires -- Différentes matières auxiliaires sont fréquemment utilisées dans une analyse conforme à la présente invention. Par exemple, des tampons sont habituellement présents dans le milieu analytique, ainsi que des stabilisants pour le milieu analytique et les constituants de l'analyse. Fréquemment, outre ces additifs, il est possible d'incorporer des protéines supplémentaires, telles que des albumines, ou des surfactants, en par- ticulier des surfactants non ioniques, des renforçateurs de liaison, par exemple des polyalkylèneglycols, etc. Comme mentionné ci-dessus, la présente invention comprend un procédé pour l'agrégation réversible de particules dispersées ou mises en suspension dans un milieu liquide. Le procédé consiste à mélanger le milieu liquide aux polymères polyioniques. Les polymères polyioni- ques de la présente invention sont capables de provoquer l'agrégation des particules et sont également capables d'être clivés de manière à inverser l'agrégation. On laisse s'effectuer l'incubation du milieu liquide contenant les particules et le polymère polyionique pendant un temps suffisant pour que l'agrégation des particules se produise. Ensuite, les particules agrégées sont mises en contact avec un réactif chimique qui est capable de cliver le polymère polyionique, dans des conditions, par exemple de temps, de température, de concentration de réactif, etc., choisies de manière à inverser l'agrégation. Les particules à séparer sont fréquemment des particules non magnétiques, ou sont liées à des particules non magnétiques, par exemple des hématies. Dans ces cas, il est habituellement convenable d'utiliser des particules magnétiques. En général, l'agrégation conjointe des particules non magnétiques avec des particules magnétiques est obtenue par l'incorporation de particules magnétiques et d'un polymère polyionique au milieu liquide. Lorsque des particules non magnétiques et des particules magnétiques ayant la même charge sont utilisées, un polymère polyioni- que de charge opposée est choisi. Après avoir laissé le milieu en incubation pendant un temps suffisant pour former un agrégat, on soumet le milieu à un gradient de champ magnétique pour séparer du milieu les particules agrégées. Après la séparation des particules du milieu, l'agrégation des particules est inversée. Lors de la mise en oeuvre du procédé de la présenteinvention, l'agrégation est inversée par mise en contact des particules avec l'agent d'inver- sion. Des températures modérées sont normalement utilisées pour la mise en oeuvre du procédé de la présente invention et, habituellement, des températures constantes sont utilisées au cours du temps pendant lequel le procédé est mis en oeuvre. En général, les températures sont choisies de manière à faciliter l'agrégation ou l'agréga- tion conjointe des particules par liaison des particules au polymère polyionique. La température d'agrégation des particules, en particulier lors de la mise en oeuvre d'une analyse, est généralement comprise dans l'intervalle d'environ 0' à 50'C, le plus souvent d'environ 15' à 40'C. De même, lors de la mise en contact des particules agrégées avec l'agent d'inversion, on peut choisir une température qui facilite l'inversion de l'agrégation ou de l'agrégation conjointe des particules par clivage du polymère polyioni- que. La température d'inversion de l'agrégation, en particulier lors de la mise en oeuvre d'une analyse, est généralement comprise dans l'intervalle d'environ 0' à 'C, le plus souvent d'environ 15' à 40'C. Lorsque des particules non magnétiques doivent être séparées d'un milieu, la concentration des particules non magnétiques peut varier largement suivant les besoins. Par exemple, dans la séparation des hématies, le volume cellulaire peut représenter cinquante pour cent du volume total du sang. A l'opposé, il peut être souhaitable de séparer d'un échantillon d'eau une quantité pouvant s'abaisser à 1000 bactéries/ml. Lorsqu'il est nécessaire d'obtenir des particules non magnétiques qui sont relative- ment dépourvues du milieu, comme lors d'une analyse, le volume total des particules non magnétiques doit être habituellement inférieur à cinq pour cent du milieu. Dans une analyse, lorsque l'analyte est un constituant d'une particule ou se lie à une particule, la concentration en analyte varie généralement d'environ 10-4 à 10-14 M, le -6 -1 plus souvent d'environ 10-6 à 10-12 M. Dans les cas o des particules magnétiques sont ajoutées au milieu liquide dans lequel des particules intéressantes sont mises en suspension, la concentration des particules magnétiques ajoutées au milieu dépend de la quantité de particules dans le milieu qui doivent être séparées, et de la vitesse de séparation qui est désirée, etc. La concentration des particules magnétiques dépend également du gradient de champ magnétique et de l'inten- sité de champ magnétique, de la susceptibilité magnétique des particules magnétiques, etc. En général, plus la concentration de particules magnétiques ajoutées pour l'agrégation des particules mises en suspension dans le milieu liquide est forte, plus la séparation est efficace et rapide; cependant, une trop forte concentration peut provoquer un entraînement excessif du milieu. La concentra- tion de particules magnétiques ajoutées au milieu est normalement déterminée de manière empirique et - varie généralement d'environ 0,1 à 1000 pg/ml, le plus souvent d'environ 0,5 & 200 Mg/ml, fréquement d'environ 1 à 50 gg/ml. - Dans les cas o des particules non magnétiques autres que des particules naturelles associées à l'analyte sont ajoutées au milieu dans lequel les particules intéressantes sont mises en suspension, leur concentration dépend de nombreux facteurs tels que le diamètre et la surface spécifique des particules, la concentration des particules dans le milieu, la vitesse désirée de sépara- tion, etc. En général, la concentration de particules non magnétiques ajoutées au milieu est habituellement déter- minée de manière empirique et varie généralement d'environ 0,01 à 100 gg/ml, le plus souvent d'environ 0,1 & 20 gg/ml. La concentration de particules non magnétiques dépend également de la température, de la solubilité, de la viscosité, du procédé de séparation qui est utilisé, etc. Bien que les concentrations des différents réactifs soient généralement déterminées par l'intervalle de concentration intéressant des particules dont l'agréga- tion et la désagrégation doivent être effectuées, avec ou sans faire intervenir des procédés de séparation ou l'intervalle de concentration de l'analyte dans une analyse, la concentration finale de chacun des réactifs est habituellement déterminée de manière empirique pour optimiser la vitesse et le degré d'agrégation, de désagré- gation et de séparation des particules comme cela peut être le cas et, dans le cas d'une analyse, de sensibilité et de spécificité de l'analyse dans la plage intéressante. D'autres facteurs & considérer comprennent des effets de liaison non spécifique et spécifique, la vitesse désirée de réaction, la température, la solubilité, la viscosité, etc. Le polymère polyionique destiné à l'agrégation des particules est incorporé au milieu liquide. Comme mentionné ci-dessus, le polymère polyionique utilisé dans la présente invention est capable d'être dépolymérisé, au moins partiellement, par un agent d'inversion. Le polymère polyionique possède une charge opposée à celle des particules. La quantité de polymère polyionique ajoutée doit être suffisante pour l'agrégation ou l'agrégation conjointe de pratiquement la totalité des particules. Cette concentration peut être déterminée de manière empirique. En général, le polymère polyionique possède une concentration dans le milieu liquide suffisante pour fournir un certain - nombre d'ions associés au polymère, égal au nombre total de charges de signe opposé sur toutes les particules dans le milieu. Dans une analyse répondant à la description ci- dessus, dans laquelle la concentration en analyte varie d'environ 10-4 1014 M, le polymère polyionique possède une concentration d'environ 10 mM à 1 mM, le plus souvent d'environ 10 mM à 100 mM. Dans une analyse, le milieu aqueux peut contenir également un ou plusieurs membres d'un système engendrant un signal. Comme mentionné ci- dessus, la concentration des différents membres du système engendrant un signal varie et dépend de l'intervalle de concentration intéressant de l'analyte et du type de mesure ou d'analyse impliqué. En règle générale, la concentration des dif- férents membres du système engendrant un signal est choisie de manière & optimiser le signal produit en rapport avec l'intervalle de concentration intéressant de l'analyte. L'agrégation non spécifique se produit pratiquement instantanément, et elle est habituellement suffisante pour permettre de laisser reposer le mélange pendant 60 secondes, fréquemment moins de 15 secondes. Lorsqu'une liaison spécifique est requise, le milieu liquide est maintenu pendant un temps suffisant pour que la liaison se produise. Habituellement, cela nécessite 0,5 à minutes, le plus souvent 1 à 60 minutes. Dans les cas o des particules magnétiques sont utilisées, le champ magnétique est appliqué de préférence immédiatement après le mélange. Le degré de liaison entre les particules et les particules magnétiques, ou entre des particules magnétiques, permet de contrôler l'efficacité de la séparation magnétique. L'application au milieu d'un champ magnétique pour séparer les particules du milieu peut être effectuée d'une manière classique qui produit un fort gradient de champ magnétique. Habituellement, le procédé est mis en oeuvre dans un récipient fait d'une matière non magnétique, par exemple de verre ou de matière plastique. Lors de l'application du champ magnétique, le récipient de réaction peut être placé à proximité immédiate d'un électro-aimant ou d'un aimant permanent, de préférence permanent, qui possède une géométrie permettant d'obtenir l'intensité et le gradient de champ maximaux dans la suspension. Plus l'intensité du champ magnétique est forte et plus le gradient est fort, plus la séparation est rapide. Habituellement, il est convenable d'effectuer la séparation dans un tube ayant un diamètre d'environ 2 à mm, de préférence d'environ 3 à 15 mm, avec un ou plusieurs aimants permanents montés aussi près que possible du tube pour produire des intensités magnétiques d'au moins environ 200 Oe et, de préférence, d'au moins environ lKOe, avec des gradients de champ magnétique habituellement d'au moins environ 20 KOe/cm. Le champ magnétique est appliqué pendant un temps suffisant pour parvenir au degré désiré de séparation des particules du milieu. Suivant la géométrie, l'intensité de champ, la susceptibilité magnétique de la particule, etc., le champ magnétique est appliqué pendant un temps d'environ 2 secondes à 1 heure, de préférence d'environ 5 secondes à 60 secondes. Une fois les particules concentrées dans une partie du récipient, le milieu liquide de mise en suspen- sion peut être séparé des particules par n'importe quel moyen convenable tel que, par exemple, une décantation, un pipetage, etc. La présente invention peut s'appliquer également aux cas dans lesquels des particules non magnétiques doivent être séparées d'un milieu liquide sans l'utilisation de particules magnétiques. Dans ces cas, les particules non magnétiques agrégées peuvent être séparées du milieu par n'importe quel procédé convenable. Ces procédés comprennent, à titre d'exemple mais non à titre limitatif, la sédimentation, la centrifugation, la flottation, le partage entre des solvants non miscibles, la filtration, l'absorption sur des milieux sorbants sélectifs, par exemple le charbon, des silicates, des résines, etc.; etc. Les particules séparées du milieu liquide sont traitées pour inverser l'agrégation des particules. En général, les particules sont mises en suspension dans un milieu liquide avec un réactif chimique capable d'inverser l'agrégation. L'inversion de l'agrégation des particules et l'agrégation conjointe des particules et des particules magnétiques est effectuée par clivage d'au moins une partie des liaisons à l'intérieur du polymère polyionique. En conséquence, l'agent d'inversion choisi dépend du polymère polyionique utilisé. En outre, il est important de choisir l'agent d'inversion par rapport à la nature des particules dans l'agrégat de manière à réduire au minimum ou éviter d'endommager les particules après l'inversion de l'agréga- tion. L'agent d'inversion choisi dépolymérise au moins partiellement le polymère polyionique utilisé pour l'agrégation ou l'agrégation conjointe des particules. La concentration en agent d'inversion doit être suffisante pour avoir pour résultat une inversion impor- tante ou totale de l'agrégation ou de l'agrégation conjointe des particules. La concentration de l'agent d'inversion dépend généralement de la nature des liaisons dans le polymère polyionique qui sont clivées. En général, la concentration de l'agent d'inversion est au moins égale à la concentration des liaisons à cliver, avantageusement au moins dix fois égale à la concentration des liaisons, de préférence au moins cent fois égale à la concentration des liaisons à cliver. Suivant la force et le nombre des liaisons à cliver, et la nature et la concentration de l'agent d'inversion, la température et le temps nécessaires pour inverser l'agrégation varient. En général, la température est comprise dans l'intervalle d'environ 0' à 45'C, le plus souvent d'environ 15' à 40'C. De manière similaire, le temps requis pour inverser l'agrégation varie d'environ 0 à minutes, habituellement de 15 à 40 minutes. Une fois les particules séparées de l'agrégat, elles peuvent être utilisées de la manière désirée. Par exemple, dans une analyse, les particules séparées peuvent être examinées pour déterminer la présence d'un signal détectable en rapport avec la quantité d'un analyte dans l'échantillon. Les particules séparées peuvent être des cellules qui peuvent être utilisées de la manière requise. Par exemple, les particules séparées peuvent être des hématies, des cellules destinées à des tests, etc. Dans une forme de réalisation appréciée de la présente invention, les particules magnétiques sont fournies sous forme d'un liquide magnétique, par exemple d'un fluide ferromagnétique. Les particules à séparer sont associées au liquide magnétique. Une application importante du procédé de l'invention est la séparation de cellules d'un échantillon contenant des cellules, telle que, par exemple, la 37 - séparation d'hématies du sang total. Dans le procédé, en utilisant du sang total, à titre d'exemple et non à titre limitatif, un échantillon de sang total est mélangé dans un milieu liquide à des particules magnétiques chargées dans des conditions de liaison non spécifique des particules magnétiques aux cellules en présence d'un polymère polyionique. Les cellules possèdent habituellement une charge négative du fait de la présence de résidus d'acide sialique, ou d'autres résidus, à la surface des cellules. En général, les particules magnétiques possèdent une charge négative. Un polymère polycationique capable de provoquer l'agrégation des particules et possédant également des liaisons clivables, de sorte que l'inversion de ladite agrégation puisse être effectuée, est incorporé au milieu pour fournir les conditions de liaison non spécifique entre les cellules et les particules magnétiques. Les réactifs polycationiques de la présente invention décrits en détail dans le présent mémoire sont utiles dans ce procédé. Le milieu peut alors être soumis à un gradient de champ magnétique pour séparer les cellules agrégées du milieu. L'application du champ magnétique a pour résultat une concentration de l'agrégat de cellules-particules magnétiques dans une partie du récipient, permettant sa séparation du milieu résiduel dépourvu de cellules, par exemple par décantation, pipetage, etc. L'agrégat séparé de cellules-particules magnétiques peut ensuite être traité pour libérer les cellules de l'agrégat, de la manière décrite ci-dessus. L'agent d'inversion choisi dépend de la nature des liaisons du polymère polycationique, de la manière indiquée ci- dessus. Le procédé de la présente invention offre des avantages particuliers pour des modes opératoires auto- matisés de détermination des groupes sanguins en offrant une manière de préparer du plasma sanguin sans centrifuga- tion. Il est également utile dans le test d'antiglobuline de Coombs, dans lequel du plasma contenant une immunoglobu- line est tout d'abord mélangé à des cellules destinées au test, puis doit être soigneusement séparé afin de déter- miner si des anticorps provenant du plasma se sont liés aux cellules. Dans ce mode opératoire, des particules magnéti- ques et un polymère polyionique qui joue le rôle d'agent d'agrégation non spécifique sont ajoutés au mélange de plasma et de cellules destinées au test, et les cellules séparées ultérieurement sont remises en suspension à l'aide d'un agent d'inversion qui clive les liaisons du polymère polyionique. De plus, le procédé de ia présente invention peut être utilisé dans des immuno-essais dans lesquels un membre pls est lié à une particule et il est désiré de séparer et de laver les particules sans centrifugation; les particules peuvent être magnétiques ou non magnétiques. La présente invention peut s'appliquer de manière générale à des analyses concernant un analyte dans un échantillon suspecté de contenir cet analyte. L'analyte est un membre pls. Dans l'analyse, l'échantillon est mélangé dans un milieu analytique à un membre pls com- plémentaire de l'analyte, au moins l'un de l'analyte ou du membre pls complémentaire étant lié à la surface d'une particule non magnétique, habituellement une cellule, telle qu'un érythrocyte, une particule de latex ou une particule magnétique. Des particules magnétiques chargées sont également mélangées au milieu dans des conditions permet- tant la liaison non spécifique et l'agrégation des particules par l'utilisation d'un polymère polyionique afin de provoquer la liaison non spécifique entre les particules et les particules magnétiques. Un perfectionnement offert par la présente invention consiste en l'inversion de l'agrégation par un moyen chimique permettant de cliver les liaisons du polymère d'agrégation. L'analyse fait intervenir habituellement un système engendrant un signal destiné à produire un signal détectable en rapport avec la quantité d'analyte dans l'échantillon. Le système engendrant un signal comprend habituellement un membre pls marqué. Le milieu peut être mélangé en outre à aucun, un ou plusieurs membres du système engendrant un signal. Lorsque des particules magnétiques sont utilisées, le milieu est soumis à un gradient de champ magnétique pour séparer du milieu les agrégats comprenant les particules magnétiques. Un réactif chimique capable de cliver le polymère polyionique est ajouté aux particules séparées. L'agrégation spécifique résiduelle des particules peut alors être mesurée. Un telle détermination peut nécessiter l'addition de n'importe quel membre restant du système engendrant un signal, non ajouté précédemment. A titre de commodité, les réactifs destinés à l'agrégation des particules et l'inversion de l'agrégation peuvent être fournis à l'état conditionné sous forme d'un kit en des quantités prédéterminées pour l'agrégation et l'inversion de l'agrégation d'un analyte prédéterminé. Le kit peut comprendre (a) un réactif polymérique destiné à l'agrégation de particules dans un milieu liquide et (b) un agent d'inversion destiné à l'inversion de l'agrégation des particules par clivage de liaisons à l'intérieur du réactif polymérique. En outre, le kit peut comprendre également des particules magnétiques et/ou des agents auxiliaires, de la manière requise. A titre de commodité, les réactifs permettant d'effectuer une analyse peuvent être fournis à l'état conditionné sous forme d'un kit en des quantités prédéter- minées pour l'utilisation dans la détermination d'un analyte. Le kit peut comprendre (a) un membre pls com- plémentaire de l'analyte, (b) un membre pls lié à une particule chargée si l'analyte et le membre pis complémen- taire ne sont liés ni l'un ni l'autre à une particule chargée, (c) des particules magnétiques chargées si la particule chargée est non magnétique, et (d) un réactif polymérique destiné à la liaison non spécifique des particules magnétiques ou des particules magnétiques et des particules non magnétiques, le réactif polymérique étant capable d'être clivé par un réactif chimique, permettant l'inversion de la liaison non spécfifique.-En outre, le kit peut comprendre également le réactif chimique destiné & l'inversion de la liaison non spécifique et des réactifs destinés à engendrer un signal en rapport avec la quantité d'analyte dans l'échantillon. Des agents auxiliaires peuvent être incorporés de la manière nécessaire pour l'analyse particulière. EXEMPLES La présente invention est décrite plus en détail au moyen des exemples illustratifs suivants. Tôutes les parties et tous les pourcentages mentionnés sont exprimés en volume, sauf spécification contraire. Les températures sont exprimées en degrés centigrades (OC). Les spectres RMN ont été déterminés sur un spectromètre Varian T60. Les spectres UV ont été déterminés sur un spectropho- tomètre Cary 210. D'autres spectromètres ou spectrophotomè- tres peuvent être utilisés. Avant la description des exemples, un certain nombre de termes seront définis. DEFINITIONS Billes de latex - Latex de polystyrène acrylé de 0,297 gm, dépourvu de surfactant, provenant de IDC de Portland, Oregon. LISS - Glycine 0,23 M, NaCl 0,029 M, KH2PO4 0,0017 M et Na2HPO4 0,0013 M, pH 6,7. KOH - Hydroxyde de potassium. H202 - Eau oxygénée. Polybrène - Obtenu auprès de Sigma Chemical Company, Saint Louis, MO. DMSO - Diméthylsulfoxyde. DTE - Dithioérythritol. Tampon - Carbonate d'ammonium 0,02 M, pH 7. EXEMPLE 1 Préparation de disulfure de 2-diméthvlaminoéthanethiol (1) Une solution homogène de chlorhydrate de 2- diméthylaminoéthanethiol (14,2 g, 100 mmoles) dans le méthanol (50 ml) a été agitée et refroidie à 0C. Du KOH (101 mmoles) a été ajouté à la solution refroidie sous agitation, suivi par une addition lente de H202 (49,9 mmoles). Au bout de 15 minutes, le méthanol a été évaporé et le mélange résultant a été soumis à une extraction à trois reprises avec de l'éther. L'extrait éthéré a été déshydraté (Na2SO4), filtré et évaporé, donnant 10,1 g d'une huile de couleur jaune pâle. La distillation de l'huile sous un vide poussé a donné 10 g du disulfure (1) sous forme d'un liquide incolore. LA. C44a EXEMPLE 2 Préparation de 4-brène Du pseudo-brène (t-brène) a été préparé en utilisant les deux procédés (A et B) ci-dessous: Procédé A: Le diaminodisulfure (1) (1,043 g, 5 mmoles) préparé de la même manière que dans l'Exemple 1, et du 1,3-dibromopropane (1,03 g, 5 mmoles) ont été ajoutés à environ 4 ml de DMSO. Le mélange réactionnel a été placé dans un récipient clos et agité à température ambiante. Au bout de 3 à 4 heures, le mélange réactionnel était trouble et, au bout d'un jour, un précipité blanc s'est formé. Au bout de 7 jours, le mélange réactionnel a été dilué avec 5 ml de méthanol et ajouté & de l'éther diéthylique (100 ml), provoquant la formation d'un précipité blanc. Le '-brène solide a été recueilli par centrifugation. La purification de la matière solide par addition de méthanol (5 ml), suivie par une précipitation par l'éther diéthylique (100 ml), a été répétée deux fois de plus. Une portion de la substance solide a été chromatographiée sur du Sephadex G25 avec du tampon au carbonate d'ammonium 0,02 M. Procédé B: Du disulfure de diamine (1) (1,04 g, 5 mmoles) et du 1,3-dibromopropane (1,03 g, 5 mmoles) ont été ajoutés à environ 4 ml d'un mélange DMS0- H20 (dans le rapport 75:25 en volume/volume). Le mélange réactionnel a été placé dans un récipient clos et agité à température ambiante. Le mélange réactionnel était trouble et s'est clarifié en 3 à 4 heures. Une quantité totale de ml d'eau a été ajoutée périodiquement pendant les onze jours suivants, en des proportions permettant de porter la réaction au point de trouble. L'eau a été ensuite évaporée. Le produit a été précipité au moyen d'éther diéthylique et une partie de la substance solide a été chromatographiée comme dans le procédé A. RMN pour le Procédé A et le Procédé B (D20) 6 2,50 et 2,55 (petits singulets, groupes terminaux- N(CI3)2), 3,3, (ls, +NCH3) et 3,35-4,1 (m, CZ2) ppm. Tableau 1 1,6-bis&imthyl- (mg) 68,9 172,3 344,6 517,0 620,4 r n (moles) 0,4 1,0 2,0 3,0 3,6 Diamiroi- (mg) 750,2 625,2 416,8 208,4 83,4 ulfure (1) (iles) 3,6 3,0 2,0 1,0 0,4 1,3-dibre- (mg) 824,0 824,0 824,0 824,0 824,0 pED: m (Mmles) 4,0 4,0 4,0 4,0 4,0 EXEMPLE 3 Préparation de coDolvmères Des copolymères du diaminodisulfure (1) et de 1,6-diméthylaminohexane avec du 1,3-dibromopropane ont été préparés dans le DMSO, de la manière indiquée sur le Tableau 1. Les réactions et les séparations des produits ont été effectuées comme dans l'Exemple 1, sauf que l'éther diéthylique a été remplacé par l'acétate d'éthyle pour les deux premières précipitations. Les copolymères A et B étaient des poudres blanches; les copolymères C et D étaient des substances solides gommeuses et le copolymère E était une substance solide hygroscopique. Sous un vide poussé, les copolymères C -et D sont devenus des mousses vitreuses. -EXEMPLE 4 Préparation d'hydroxvDolvbrène Un mélange de 1,6-bisdiméthylaminohexane (1,24 g, 5 mmoles), de DL-1,4-dibromo-2,3-butanediol (1,24 g, 5 mmoles), et de DMSO (3,5 ml) a été placé dans un récipient clos et agité. Le mélange diphasique initial est devenu homogène au bout de 3 jours. Au bout de 6 jours, le mélange réactionnel a été ajouté à 150 ml d'éther diéthyli- que anhydre, donnant de l'hydroxypolybrène sous forme d'une huile gommeuse. Une partie a été purifiée davantage par dissolution dans quatre fois son poids de méthanol, par précipitation & -78 et décantation du surnageant froid. RMN (méthanol-d4): 6 0,3-2,3 (m, 8H, NCH2CU2- Cl2CI2CH2-); 2,9 (s, (m, 2H, CIOH) ppm. L'addition d'acide a déplacé vers le bas le singulet de diméthylamine terminal. EXEMPLE-5 Préparation de polymère à partir du disulfure de 2- diméthvlaminoéthanethiol et de 1.4-dibromobutane Une solution de diaminodisulfure (1) (834 mg, 4,0 mmoles) et de 1,4-dibromobutane (864 mg, 4,0 mmoles) dans le DMSO (2,8 ml) a été placée dans un récipient clos et agitée. Au bout de 7 jours, le mélange pâteux a été dilué avec du méthanol (5 ml), précipité en faisant tomber goutte à goutte la suspension, résultante dans l'acétate d'éthyle (100 ml), et a été recueilli par centrifugation. Le cycle de suspension, de précipitation et de centrifuga- tion a été répété à deux autres reprises, donnant une poudre blanche qui a été déshydratée sous vide. EXEMPLE 6 Aarégation de Particules de latex par du polvbrène et du - brène Des mélanges d'essai contenant des particules de latex (0,88 mg/ml), du tampon au carbonate d'ammonium et différentes concentrations d'un agent d'agrégation (polybrène, -brène ou hydroxypolybrène) ont été préparés et l'agrégation a été examinée visuellement au bout de 0 à secondes. Les mélanges ne présentant aucune agrégation ont été réexaminés au bout de 4 à 6 heures. Les mélanges d'essai contenant des agrégats nettement discernables ont été appelés mélanges positifs (+). Ceux restant troubles, sans aucun agrégat ou dépôt discernable au bout de 6 heures, ont été appelés mélanges négatifs (-). Les mélanges contenant quelques agrégats dans une suspension trouble et ceux contenant une suspension trouble qui a sédimenté en 6 2 6 1 5 6 2 1 heures ont été appelés mélanges limites ( ). Les fractions de colonne de haut et de bas poids moléculaires du ±brène de l'Exemple 2 ont été testées. Le disulfure de 2diméthylaminoéthanethiol (diaminodisulfure (1>) a été utilisé comme témoin. Les résultats sont présentés sur le Tableau 2 ci-dessous. 2 6 1 5 6 21 TABLEAU 2 Contrxaticn Polybrène '-brène Hydrxy- Diamine dans le Haut poids Bas poids polybrène témoin 1mélange d'essai mol-u1l. molécul. 0 /ml - - - - - O,025 mW-ml - -. 0,050 mml + - - - - 0,100 mml + + + - 0,200 mlg/ml - + + + - 0,400 m/ml -+ + + 0,800 m/ml Les résultats sur le Tableau 2 montrent que tous les polymères testés ont provoqué l'agrégation des particules de latex. Dans chaque cas, la plage de con- centration de polymère qui a provoqué l'agrégation était au moins égale à un facteur deux. Le diaminodisulfure (1) servant de témoin n'a pas provoqué l'agrégation des particules de latex. EXEMPLE 7 Empêchement d'aaréaation dépendante du Y-brène Des mélanges d'essai de particules de latex (2,2 mg/ml) et de DTE (1,22 mM) dans du tampon au carbonate d'ammonium ont été traités avec des solutions de V-brène dans du tampon au carbonate d'ammonium. Le mélange final contenait des particules de latex (0,88 mg/ml), du DTE (0,49 EM) et du '-brène (0,2 mg/ml). Les fractions de colonne de haut poids moléculaire et de bas poids molécu- laire de f-brène de l'Exemple 2 ont été testées. Du polybrène (0,1 mg/ml dans le mélange final) a été utilisé à la place de t-brène' comme témoin. L'agrégation a été détectée visuellement comme dans l'Exemple 6. La présence de DTE dans les mélanges d'essai a empêché l'agrégation de particules de latex par le V-brène. Cela a été observé pour les fractions de haut poids moléculaire et de bas poids moléculaire du I-brène. L'agrégation de particules de latex par le polybrène n'a pas été empêchée par l'addition de DTE. EXEMPLE 8 Inversion de l'aQrégation dépendante du '-brène Des mélanges d'essai agrégés (500 ml) contenant des particules de latex (0,88 mg/ml) et du +brène (0,2 mg/ml) dans du tampon au carbonate d'ammonium ont été traités avec une solution aqueuse de DTE (10 Ml de solution à 25 mM). Les fractions de haut poids moléculaire et de bas poids moléculaire de Wbrène de l'Exemple 2 ont été testées. Les mélanges d'essai agrégés contenant du polybrène (0,1 mg/ml) au lieu de *-brène ont été utilisés comme témoins. L'agrégation a été évaluée de la même manière que dans l'Exemple 6. La dispersion des particules de latex agrégées avec du '-brène par le DTE a été constatée. Le remplacement du DTE par H20 n'a pas provoqué une dispersion des agrégats. Le mode opératoire a été répété en remplaçant le f-brène par du polybrène. Ni le DTE ni H20 n'ont provoqué de dispersion de particules de latex agrégées par le polybrène. EXEMPLE 9 Empêchement de l'aaréaation dépendante de l'hvdrox2polv- brène Des mélanges d'essai contenant des particules de latex (2,2 mg/ml) et NaIO4 (5 mM, 2,5 mM, 1,25 mM, 0,625 mM ou 0 mM) dans du tampon au carbonate d'ammonium ont été traités avec de l'hydroxypolybrène dans du tampon au carbonate d'ammonium, de sorte que le mélange final contenait des particules de latex (0,88 mg/ml), de l'hydroxypolybrène (0,1 mg/ml) et NaIO4 (2 mM, 1 mM, 0,5 mM, 0,25 mM ou 0 mM). Deux séries de témoins ont été préparées. Dans la première série, NaIO4 a été remplacé par une concentration équivalente de NaCl. Dans la seconde série, l'hydroxypolybrène a été remplacé par le polybrène (0,1 mg/ml). L'agrégation a été évaluée visuellement de la même manière que dans l'Exemple 6. Une concentration en NaIO4 de 2 mM a empêché une agrégation immédiate, tandis que des concentrations de i mM et de 0,5 mM étaient initialement des concentrations limites. Au bout de 16 heures, des mélanges contenant une concentration en NaIO4 supérieure à 0,5 mM n'ont plus présenté d'agrégation. Les témoins dépourvus de NaIO4 ont présenté une agrégation immédiate et ne se sont pas modifiés, comme les témoins contenant du polybrène. EXEMPLE 19 Inversion de l'agrégation dépendante de lthvdroxvDolvbrène Une solution aqueuse de NaIO4 (10 41, 5 p1, 1,5 41 ou 1,2 41 de solution à 0,1 M) a été ajoutée à des mélanges d'essai (500 1) et de l'hydroxypolybrène (0,1 mg/ml) dans du tampon au carbonate d'ammonium. Deux séries de témoins ont été préparées. Dans la première série, NaIO4 a été remplacé par NaCl à une concentration égale. Dans la seconde série, l'hydroxypolybrène a été remplacé par le polybrène. L'agrégation des mélanges a été observée visuellement de la même manière que dans l'Exemple 6. Les particules de latex agrégées contenant de l'hydroxypolybrène ont été dispersées immédiatement par les deux concentrations supérieures en NaIO4. Au bout de 16 heures, les quatre concentrations en NaIO4 testées ont toutes provoqué la dispersion des particules de latex agrégées, tandis que, en l'absence de NaIO4, les agrégats sont restés. L'agrégation des témoins avec NaCl et des témoins avec du polybrène n'a pas varié. EXEMPLE 11 Agrégaation de sang par du f-brène et des copolvmères. Du sang (10 1), du LISS (85 41) et une solution du polymère d'essai (15 4l) dans du LISS ont été mélangés et l'agrégation a été évaluée visuellement au bout de 30 secondes, de la même manière que dans l'Exemple 6. Les polymères, leurs concentrations et les performances d'agrégation sont présentés sur le Tableau 3 ci-dessous. Les copolymères étaient ceux de l'Exemple 3 et le -brène était celui de l'Exemple 2. TABLEAU 3 Cpolymm D Qopl1mr A -brAne oxmntr. Agréga- Cmxo=tr. Agréa- oCxntr. Agréa- * finale tirn finale tion finale tion 1,4 mqml + 1,4 mg/ml + 1,4 mg/ml + 0, 68 m//ml + 0,14 mg/ml + 0,68 m /ml + 0,14 mq/nl - 0,14 mg/ml - 0, 014 mg/ml - 0 mg/ml - O 'mg/m - O mg/tml - EXEMPLE 12 Empêchement de l'aarégation des hématies Des mélanges d'essai contenant des hématies lavées (10 M1 de cellules à 50 % dans du LISS), une solution aqueuse de DTE (5 M1 de solution à 25 mM) et du LISS (95 >1) ont été préparés. Des témoins ont été préparés, témoins dans lesquels le DTE a été remplacé par H20 seul. Une solution aqueuse de 1-brène (5 pl de solution à 10 mg/ml) a été ajoutée à chaque mélange d'essai et à chaque témoin. L'agrégation a été évaluée visuellement de la même manière que dans l'Exemple 6 au bout de 30 secondes. Les témoins ne contenant pas de DTE ont présenté une agrégation immédiate, tandis que l'agrégation a été empêchée dans le mélange d'essai contenant du DTE. L'agglutination des hématies par le polybrène dans un essai similaire n'est pas influencée par le DTE. EXEMPLE 13 Inversion de l'aaréaation des hématies Des mélanges d'essai agrégés d'hématies ont été préparés en mélangeant des hématies (10 4l de cellules à 50 % dans du LISS), du LISS (95 l)-et une solution aqueuse de '-brène (5 jl de solution à 10 mg/ml). Une solution aqueuse de DTE (5 1 de solution à 25 mM) a été ajoutée aux mélanges d'essai. Dans une série de témoins, H20 seul a remplacé la solution aqueuse de DTE. L'agrégation a été évaluée visuellement, de la même manière que dans l'Exemple 6, au bout de 30 secondes. Les mélanges d'essai traités avec du DTE présentaient une dispersion des cellules agrégées. Les témoins sans DTE sont restés agrégés. Les hématies agrégées par le polybrène dans une expérience comparable ne sont pas dispersées par le DTE. ! EXEMPLE 14 Préparation de Particules magnétiaues succinvyées Deux-cents (200) mg de particules magnétiques (Advanced Magnetic, BioMag 4100, 4 ml) ont été lavés par séparation magnétique (3 x 40 ml de tampon au phosphate 0,1 M, pH 7,0) et remis en suspension dans 15 ml du tampon précité. Les particules ont été amenées à réagir avec de l'anhydride succinique (5 ml de solution 1 M dans le DMF) par addition de 5 portions aliquotes en 2 heures (le pH a été ajusté à 7,0 après chaque addition). Les particules succinylées ont été lavées par séparation magnétique (3 x ml de tampon au phosphate 0,1 M, pH 7,0 et 2 x 40 ml de LISS), remises en suspension dans 20 ml de LISS et entreposées à 4'C avec de l'azide de sodium à 0,02 %. EXEMPLE 15 Séparation de sans total Du sang total (480 p1) a été mélangé à une solution de c-brène (80 1 de solution à 20 mg/ml dans du LISS). Une suspension de particules magnétiques, préparée de la même manière que dans l'Exemple 14 (2 mg dans 248 ml de LISS), a été ajoutée et la suspension a été mélangée. Les agrégats ont été soumis à une séparation magnétique. la séparation a été suivie visuellement lors de l'attirance vers les aimants des cellules agrégées et des particules magnétiques. Au bout d'une minute, du plasma limpide a été prélevé & la pipette. Une séparation ne s'est pas produite lorsque le Y-brène a été remplacé par du LISS seul. EXEMPLE 16 Agrégation, empêchement et inversion de l'aaréaation du sana au moyen d'hvdroxvDolvbrène A. Agrégation Du sang (10 l1), du LISS (95 41) et une solution d'hydroxypolybrène (5 Mi de solution à 100 mg/ml, mg/ml, 1 mg/ml ou O mg/ml) dans du LISS ont été mélangés et l'agrégation a été évaluée au bout de 30 secondes, de la même manière que dans l'Exemple 6. Une agrégation a été observée avec les deux concentrations les plus fortes en hydroxypolybrène testées. B. Inhibition Du sang (10 -1), du LISS (95 p1) et une solution aqueuse de NaIO4 (5 pi de solution a 25 mM) ont été mélangés dans chaque échantillon analytique. Une solution d'hydroxypolybrène (5 p1 de solution à 10 mg/ml) dans du LISS a été ajoutée. Des témoins dans lesquels la solution de NaIO4 a été remplacée par H20 ont été également préparés. L'agrégation a été évaluée visuellement au bout de 30 secondes, de la même manière que dans l'Exemple 6. Aucune agrégation n'a été observée lorsque NaIO4 était présent. Une agrégation a été observée dans les témoins dépourvus de NaIO4. L'agrégation par le polybrène dans une expérience comparable n'est pas influencée par NaIO4. C. Inversion Des mélanges analytiques agrégés ont été préparés en mélangeant du sang (10 Al) du LISS (95 Al) et une solution d'hydroxypolybrène (5 pil de solution à 10 mg/ml) dans du LISS. Une solution aqueuse de NaIO4 (5 Mm de solution à 25 mM) a été ajoutée à chaque mélange analytique. Des témoins dans lesquels la solution de NaIO4 a été remplacée par H20 seul ont été également préparés. L'agrégation a été évaluée visuellement au bout de 30 secondes, de la même manière que dans l'Exemple 6. Les cellules agrégées étaient dispersées dans les mélanges analytiques contenant NaIO4. Elles n'étaient pas dispersées dans les témoins qui étaient dépourvus de NaIO4. Dans une expérience comparable, les cellules agrégées par le polybrène ne sont pas dispersées par NaIO4. Il va de soi que la présente invention n'a été décrite qu'à titre explicatif, mais nullement limitatif, et que de nombreuses modifications peuvent y être apportées sans sortir de son cadre. REVENDICATIONS 1. Procédé d'agrégation réversible de particules mises en suspension dans un milieu liquide, caractérisé en ce qu'il consiste: à mélanger ledit milieu à un polymère polyionique capable de provoquer l'agrégation desdites particules; à incuber ledit milieu pendant un temps suffisant pour que l'agrégation desdites particules se produise; et à mettre en contact lesdites particules avec un réactif chimique capable de cliver ledit polymère polyionique pendant un temps suffisant pour inverser ladite agrégation. 2. Procédé suivant la revendication 1, caractérisé en ce que l'agrégation réversible accroit la liaison spécifique entre lesdites particules. 3. Procédé d'agrégation réversible de particules mises en suspension dans un milieu aqueux, consistant (a) à provoquer l'agrégation desdites particules par addition audit milieu d'un polymère polyionique capable de provoquer l'agrégation desdites particules, (b) à incuber ledit milieu pendant un temps suffisant pour que l'agrégation se produise, (c) à séparer les particules agrégées dudit milieu et (d) à inverser l'agrégation desdites particules, caractérisé en ce ce que le perfec- tionnement consiste à utiliser un polymère polyionique capable d'être dépolymérisé par un réactif chimique, provoquant ainsi l'inversion de ladite agrégation. 4. Procédé de séparation d'un milieu liquide de particules qui y sont dispersées, consistant (a) à provoquer l'agrégation conjointe desdites particules avec des particules magnétiques par incorporation audit milieu d'un polymère polyionique, (b) à soumettre ledit milieu à un gradient de champ magnétique pour séparer dudit milieu lesdites particules et particules magnétiques agrégées conjointement et (c) & inverser l'agrégation desdites particules, caractérisé en ce que le perfectionnement consiste & utiliser pour l!agrégation conjointe desdites particules et desdites particules magnétiques un polymère polyionique capable d'être dépolymérisé par un réactif chimique, provoquant ainsi l'inversion de ladite agrégation conjointe. 5. Procédé de séparation d'un milieu liquide de particules qui y sont dispersées, consistant (a) à mettre en suspension des particules magnétiques dans ledit milieu liquide, (b) à ajouter un polymère polyionique destiné à provoquer la liaison non spécifique desdites particules auxdites particules magnétiques, (c) à séparer les particules liées dudit milieu au moyen d'un gradient de champ magnétique et (d) à inverser la -liaison non spécifi- que desdites particules et desdites particules magnétiques, caractérisé en ce que le perfectionnement consiste à utiliser pour la liaison non spécifique desdites particules auxdites particules magnétiques un polymère polyionique capable d'être dépolymérisé par un réactif chimique, provoquant ainsi l'inversion de ladite liaison non spécifique. 6. Procédé de séparation de particules d'un milieu contenant lesdites particules, caractérisé en ce qu'il consiste: à mélanger ledit milieu contenant lesdites particules à un polymère polyionique destiné & provoquer la liaison non spécifique desdites particules, ledit polymère polyionique étant capable d'être clivé par un réactif chimique, provoquant ainsi l'inversion de ladite liaison non spécifique; à séparer lesdites particules liées dudit milieu; et à mettre en contact lesdites particules liées audit réactif chimique dans des conditions permettant l'inversion de ladite liaison non spécifique. 7. Procédé de détermination de la présence d'un analyte qui est un membre d'une paire à Iiaison spécifique (pls), ledit analyte ou un membre pls complémen- taire dudit analyte étant présent sur la surface de particules mises en suspension dans un milieu liquide, caractérisé en ce qu'il consiste: à mélanger lesdites particules mises en suspension dans ledit milieu liquide à un membre pls complémentaire dudit analyte ou au membre pls sur ladite surface; à ajouter un polymère polyionique capable de provoquer l'agrégation non spécifique desdites par- ticules; à incuber ledit milieu liquide pendant un temps suffisant pour que l'agrégation non spécifique desdites particules se produise; à ajouter audit milieu liquide un réactif chimique capable de cliver ledit polymère polyionique; à incuber ledit milieu liquide pendant un temps suffisant pour provoquer -l'inversion de ladite agrégation non spécifique desdites particules; et à mesurer l'agrégation spécifique résiduel- le desdites particules. 8. Procédé de séparation de cellules du sang total, caractérisé en ce qu'il consiste: à mélanger un échantillon de sang total, des particules magnétiques chargées et un réactif polyioni- que destiné à provoquer l'agglutination non spécifique desdites particules magnétiques et desdites cellules, ledit réactif polyionique étant capable d'être clivé par un réactif chimique, provoquant ainsi l'inversion de ladite agglutination; à soumettre ledit milieu à un gradient de champ magnétique pour séparer lesdites cellules agglutinées du plasma sanguin; et & mettre en contact lesdites cellules agglutinées avec une solution aqueuse dudit réactif chimique dans des conditions permettant l'inversion de ladite agglutination par une dépolymérisation au moins partielle dudit réactif polyionique. 9. Analyse destinée à déterminer la présence d'un analyte dans un échantillon suspecté de contenir ledit analyte, ce dernier étant un membre d'une paire à liaison spécifique (pls) comprenant un ligand et son récepteur complémentaire, ladite analyse comprenant les étapes consistant à mélanger l'échantillon dans un milieu analytique à un membre pls complémentaire dudit analyte, au moins l'un dudit analyte et dudit membre pls complémentaire se liant à la surface d'une particule non magnétique, à mélanger ledit milieu à des particules magnétiques et à un réactif polymérique destiné à provoquer la liaison non spécifique desdites particules magnétiques auxdites particules non magnétiques, à soumettre ledit milieu à un gradient de champ magnétique pour séparer lesdites particules liées dudit milieu, et à inverser l'agrégation desdites particules agrégées, caractérisée en ce que le perfectionnement consiste à utiliser comme réactif polymérique un réactif capable d'être clivé par un réactif chimique, provoquant ainsi l'inversion de ladite agréga- tion; et à inverser ladite agrégation par addition dudit réactif chimique. 10. Polycation, caractérisé en ce qu'il répond & la formule - N± B- R2 n dans laquelle R1 et R2 sont identiques ou différents et sont choisis indépendamment dans le groupe comprenant des groupes aryle, de 6 à 20 atomes de carbone, aralkyle de 6 à atomes de carbone dans la partie aryle et i à 6 atomes de carbone dans la partie alkyle, alkyle de 1 à 6 atomes de carbone, alkoxyalkyle de i à 6 atomes de carbone dans la partie alkoxy et i à 6 atomes de carbone dans la partie alkyle, et des groupes alkyle, aryle et aralkyle sub- stitués; B est un groupe de jonction contenant 2 à atomes autres que l'hydrogène, atomes qui sont choisis indépendamment dans le groupe comprenant le carbone, l'oxygène, le phosphore, l'azote et le soufre, au moins l'un desdits groupes B renfermant un groupe disulfure ou glycol; et n a une valeur moyenne comprise dans l'intervalle de 10 à 10 000. 11. Composition, caractérisée en ce qu'elle comprend des particules agglutinées non spécifiquement auxquelles sont liés un membre d'une paire à liaison spécifique (pls) comprenant un ligand et son récepteur complémentaire et le polycation suivant la revendication 10. 12. Kit destiné à effectuer une analyse permettant de déterminer la présence d'un analyte dans un échantillon suspecté de contenir ledit analyte, ce dernier étant un membre d'une paire à liaison spécifique compre- nant un ligand et son récepteur complémentaire, caracté- risé en ce qu'il comprend (a) un membre pls complémentaire- dudit analyte, (b) un membre pls lié à une particule chargée si ledit analyte et ledit membre pls complémentaire ne sont liés ni l'un ni l'autre à une particule chargée, (c) des particules magnétiques chargées si ladite particule chargée est non magnétique, et (d) un réactif polymérique destiné à provoquer la' liaison non spécifique desdites 26 15621 particules magnétiques, ou desdites particules magnétiques et desdites particules non magnétiques, ledit réactif polymérique étant capable d'être clivé par un réactif chimique, provoquant ainsi l'inversion de ladite liaison non spécifique. 13. Kit destiné à l'agrégation réversible de particules, caractérisé en ce qu'il comprend (a) un réactif polymérique destiné à l'agrégation desdites particules et (b) un réactif chimique capable de cliver des liaisons à l'intérieur du réactif polymérique.