Brevet FR2612399A1 — publié le 19880923

La présente invention est relative à des compositions pharmaceutiques agissant sur le coeur et le système cardiovasculaire. Selon un autre aspect de l'invention, on fournit un procédé pour la préparation de ces compositions. On sait que des acides gras w-3 insaturés en C18-22 possèdent d'avantageuses propriétés biologiques. L'acide éicosapentaènoique (EPR) et l'acide docbsahexaènoïque (DHR) sont remarquables parmi ceux-ci. Dyerberg et coll. [The Lancet 15, 117 (1978)] ont souligné l'importance et les multiples effets biologiques des deux acides, Les effets associés au rôle important des acides gras polyinsaturés, en particulier de l'EPA et du DHR dans l'hyperlipidémie et des maladies thrombotiques, ont été résumés par Goodnight et coll. [Rrteriosclerosis 2, 87 (1982) Revieul]. Des compositions pharmaceutiques contenant de I'EPS et du DHR en tant que composants actifs, ont été décrites par exemple dans la spécification de brevet allemand ho, 3 438 630 pour l'abaissement du taux de cholestérol, et dans les demandes de brevet japonais publiées No. 58.08037 et 60.49097 contre la sclérose cérébrale et pour empêcher la formation de thrombus chez des patients souffrant de maladies cardiaques. Plusieurs articles ont été consacrés à l'effet d'inhibition de l'agrégation des plaquettes et donc à l'effet d'inhibition de la formation de thrombus, exercé par lEPA et le DHA [Spencer et Caraega: Prostagi. Leucotrienes and Med. 23, 129 (1986); Knopp et coll.: New Engl. Journ. of Med. 314, 937 (1986). L'action antivirale de l'EPA et du DHR est décrite dans la spécification de brevet U.S. No. 4 513 008. Les composants actifs de l'huile de poisson, par exemple l'EPR et le DHA, sont des précurseurs de la biosynthèse de la série PG-3 et ils inhibent la formation des métabolites nuisibles comme TXR2 et TXB2, provenant de la dite "cascade de l'acide arachidonique" qui est une chaîne de processus biologiques compliqués partant de l'acide arachidonique. En plus de leurs nombreux effets favorables, les acides gras polyinsaturés ont la propriété pathologique défavorable d'être soumis à une décompositon oxydante spontanée dans l'organisme humain et de donner ainsi naissance à la formation d'aldéhydes actifs, comme le malondialdéhyde qui est nuisible pour l'organisme. Ces aldéhydes sont capables de réagir principalement avec les tissus conjonctifs de façon nocive du point de vue physiologique, qui peut conduire à - la dite "lipofuscinose céroidale. On sait de plus, que des algues ont été utilisées depuis des temps immémoriaux par l'humanité à des fins de nutrition et d'alimentation. Les algues sont donc principalement consommées par les peuples de l'extrême Orient; ces derniers temps, cependant, elles sont largement utilisées sous forme sèche ou sous la forme de comprimés également dans les pays dévéloppés. Les algues sont les supports de matières nutritives extrêmement intéressantes puisque leur forme séchée contient en fortes concentrations, des substances qui sont essentielles pour une vie en bonne santé, comme des vitamines, des protéines, des complexes de protéines avec des microéléments, des saccharides, des acides gras polyinsaturés et similaires., Des renseignements généraux et détaillés concernant des algues sont décrits par exemple, par Zajic dans: Properties and Products of Algae (Edition Planum, New-York, 1970). Cette dernière décade, on a commencé à étudier les effets biologiques des microéléments et des oligoéléments. On a ainsi appris que le sélénium est l'une des substances les plus importantes et les plus indispensables à la vie. L'action bénéfique du sélénium repose surtout sur son effet d'activation dirigé contre l'enzyme glutathion peroxydase, dans la mesure o le sélénium est un constituant indispensable du groupe prosthétique de l'enzyme glutathion peroxydase. Cette enzyme est l'inhibiteur endogène le plus important des processus nocifs de peroxydation. Le sélénium en lui-même, a un effet hypotenseur, il améliore les états ischémique, hypoxique et infarci du coeur et il inhibe la lipofuscinose céroîdale du système nerveux central; de plus, il exerce un effet bénéfique sur la périodontite. Il a une notable activité anticancer et il a été montré qu il diminue la probabilité du développement des maladies cancéreuses; de plus, on considère qu'il est un agent inhibant la mutagénèse. Le sélénium n'est pas accumulé dans l'organisme, il doit donc être fourni en continu. Jusqu'à maintenant, le sélénium a été principalement introduit dans l'organisme sous la forme de composés inorganiques, par exemple de dioxyde de sélénium ou de sélénite de sodium. On a démontré que de nombreuses modifications ou maladies, respectivement, comme une nécrose du foie, une myonécrose, une destruction de la membrane des érythrocytes, des lésions interstitielles, une élévation de ST dans l'ECG, le syndrome de Kwashiorkor (sous-alimentation en protéines) et une sclérose en plaques, sont induites par une insuffisance en sélénium. Un rapport complet sur les effets biologiques du sélénium a été publié par Thressa et coll. [Nutrition Revies 35, 7 (1977)], Shamberger [J. of Env. Path. and Tox, 4, 305 (1980)], ainsi que par Masukawa et coll. [Experientia 39, 405 (1983)]. La présente invention a pour but de fournir une nouvelle composition pharmaceutique agissant principalement sur le coeur et le système cardiovasculaire, qui permet de combiner les propriétés avantageuses du DHA, de l'EPR, des algues ainsi que du sélénium et qui élimine simultanément les propriétés désavantageuses des acides gras polyinsaturés. L'invention repose sur la constatation selon laquelle le but ci-dessus peut être parfaitement atteint par l'utilisation d'une algue contenant du sélénium avec des acides gras polyinsaturés. La présente invention est donc relative à une composition pharmaceutique agissant sur le coeur et le système cardiovasculaire, qui comprend 0,5 à 50% en masse d'algue contenant du sélénium ainsi que 99,5 à 50% en masse d'acides gras en C18_22 contenant au moins deux liaisons insaturées ou des dérivés de ceuxci, éventuellement en mélange avec des supports et/ou des additifs et/ou des antioxydants couramment utilisés dans l'industrie pharmaceutique. De plus, l'invention concerne un procédé pour préparer la composition cidessus, qui comprend le mélange de 0,5 à 50 en masse d'al gue contenant du sélénium ainsi que de 99,5 à 50% en masse d'acides gras en C18-22 contenant au moins deux Jiaisons insaturées ou des dérivés de ceux-ci, éventuellement avec des supports et/ou des additifs et/ou des antioxydants couramment utilisés dans l'industrie pharmaceutique. Les compositions selon Il'inventionn comprennent convenablement de l'acide éicosapentaènoique (EPA) et l'acide docosahexaènoTque (DHA), ainsi qu'une algue contenant du sélénium. L'algue contenant du sélénium est préparée selon la procédure qui est décrite dans la demande de brevet de la Demanderesse déposée en même temps que la présente demande et correspondant à la demande de brevet hongrois No. 575/88. On peut employer comme matière de départ des acides gras w-3 insaturés représentant un composant de la composition, des huiles pouvant être obtenues à partir de divers poissons de mer ou d'eau douce, surtout du maquereau, de la morue, du hareng, de la sardine, du calmar, ainsi que du foie de ces poissons, par exemple l'huile de foie de morue et l'huile de foie de requin. En plus de 'EPA et du DHRA, les huiles de poissons contiennent une grande quantité d'acides gras saturés ainsi que d'acides gras insaturés dans une faible mesure et d'autres composants non-hydrolysables. L'élimination de ces constituants est très importante puisque l'administration des compositions thérapeutiques préparées à partir des huiles de poissons augmenterait notablement la quantité calorique introduite ainsi que le taux de triglycérides du sang. De plus, les constituants nonhydrolysables peuvent contenir des stéroïdes comme le cholestérol, la vitamine D ( et sa provitamine) et/ou la vitamine A. Les vitamines D et A s'accumulent dans l'organisqme humain si bien qu'un traitement prolongé, requis pour l'effet désiré, serait impossible avec une composition contenant ces vitamines. Les composants mentionnés plus haut comme des acides gras saturés ou partiellement insaturés ainsi que les constituants non-hydrolysables, par exemple le cholestérol, les vitamines R et D, sont donc éliminés de l'huile de poisson. De cette façon, la quantité totale d'EPA et de DHA dans l'huile de poisson est enrichie à plus de 50%. Les souches Chlorella ou Scenedesmus peuvent être convenablement utilisées comme algues utiles pour la consommation humaine et elles représentent une matière première indispensable pour l'alimentation moderne en raison de leur effet biologique très favorable. II est convenable d'utiliserdel',-tocophérol (vitamine E), du glutathion ou des antioxydants traditionnels comme le butylhydroxytoluène comme agents conservateurs actifs pour inhiber l'oxydation de la composition selon la présente invention. Les matières couramment utilisées dans l'industrie pharmaceutique comme le lactose, l'amidon ou le stéarate de magnésium, peuvent être employées comme véhicule ou support. Des recherches pharmacologiques ont montré que la composition est dépourvue d'effets secondaires nuisibles à la santé, en ce qu'aucun changement n'était observé dans le système enzymatique microsomial du foie de rat avec une quantité centuple de la dose usuelle. La quantité de lipofuscine accumulée dans l'organisme a été notablement réduite par rapport à celle d'un témoin après traitement avec la composition. Les études effectuées avec la composition de l'invention sur des rattes Uistar pendant 6 semaines, ont permis d'observer un net effet d'inhibition de l'agrégation des plaquettes. La dose quotidienne efficace optimale (calculée pour un poids corporel moyen de 75 kg) de la composition consistant en huile de poisson et poudre d'algue s'élève à 2 g, avec une teneur en sélénium de 240 pg. En moyenne, le composant huile comprend 22% d'EPA et 43% de DHAR, Les principaux avantages de la composition selon la présente invention peuvent être résumés de la façon suivante: a) Les propriétés préférables de l'EPR et du DHR ainsi que du sélénium et de l'algue sont combinées, b) Les effets nuisibles provoqués par les composants lipides saturés ainsi que par la teneur en vitamine R et D des compositions connues contenant de l'huile de poisson, sont éliminés. c) Le risque d'apparition de "lipofuscinose céroîdale" par consommation d'acides gras polyinsaturés, est supprimé. d) La composition contient du sélénium en tant que substance naturelle enrichie dans l'algue; le sélénium administré avec l'algue est mieux résorbé et exerce ses effets favorables de façon plus favorable. e) La composition développe une action thérapeutique avantageuse dans le cas de troubles atopiques et elle est utile pour le traitement préventif de l'eczéma, de l'asthme, de symptômes allergiques, de rhinite allergique et/ou de troubles atopiques, par exemple, la migraine, la maladie de Crohn, la colite ulcérative, I'otite moyenne, le syndrome néphrotique et le diabète, La composition de Il'invention est porticulièrement utile pour le traitement des troubles du système cardiovasculaire: pour des manifestations apoplectiques, des états.thrombo-emboliques comme une attaque, un infarctus et un syndrome de Keshan des malades jeunes, ainsiquepour lapréventionde conditions anormales, L'invention est illustrée en détail par les exemples non limitatifs suivants. Les acides gras w-3 polyinsaturés utilisés dans la composition de l'invention peuvent être préparés selon les exemples 1 et 2, tandis que les algues enrichies en sélénium peuvent être préparées selon l'exemple 3. Les compositions pharmaceutiques selon l'invention sont décrites dans les exemples 4 à 6. Exemple 1 2 kg d'hydroxyde de sodium sont dissous dans 70 litres d'éthanol à 95% et 10 kg d'huile de foie de morue sont ajoutés à une température de 50 à 60 C. Le mélange est chauffé à reflux sous azote pendant 2 heures et ensuite refroidi à 10 C sous agitation. Les sels sodiques des acides gras saturés sont précipités. Les cristaux sont filtrés et lavés avec un peu d'éthanol. Le filtrat éthanolique est évaporé et 20 litres d'eau bouillante sont ajoutés au résidu. Les composés non-hydrolysables comme le cholestérol sont complètement éliminés par extraction avec 5 litres d'hexane. La phase aqueuse est acidifiée à pH 2 par addition d'acide sulfurique et à nouveau extraite avec 15 litres d'hexane. La phase organique est lavée à l'eau, séchée sur du sulfate de sodium anhydre et évaporée pour donner 3,2 kg d'huile concentrée ayant une teneur en DHR de 36,8% et une teneur en EPA de 31,8%. Cette huile est brune et sent le poisson. Elle est donc mélangée à de la terre à foulon, chauffée sous azote à 105 C pendant 10 minutes et filtrée à chaud. La désodorisation est achevée par distillation à la vapeur sous vide à 170 C/1 mm de Hg pendant 3 heures, ce qui fournit 1,6 kg d'une huile inodore, jaune clair, sans saveur et de composition inchangée. Exemple 2 On fait tomber goutte-à-goutte 8 kg de solution d'hydroxyde de sodium à 40% à 50-60 C, dans 24 kg d'huile de foie de morue dissoute à 60 C dans 16 litres de méthanol sous agitation. Le mélange est ensuite agité à 60 C pendant 45 minutes supplémentaires. On ajoute 20 kg d'acide chlorhydrique à 15% à la solution à environ 60 C. Après séparation, la phase organique est lavée avec 10 kg d'acide chlorhydrique à 15% et ensuite avec 180 litres d'eau chaude du robinet jusqu'à neutralité. Les phases sont à nouveau séparées, 100 litres d'acétone sont ajoutés à la phase huileuse qui est ensuite chauffée à environ 45 C et une solution de 3,8 kg d'hydroxyde de lithium monohydraté dans 30 litres d'eau est ajoutée. Après 30 minutes d'agitation, le mélange est laissé reposer une nuit, puis filtré et le filtrat acétonique est évaporé. Le résidu est acidifié par addition d'environ 8 kg d'acide chlorhydrique à 15%, extrait 3 fois avec de Il'hexane et évaporé. Une atmosphère d'azote est utilisée pendant toute l'opération de purification. On obtient ainsi 6,4 kg d'huile de poisson purifiée ayant un indice d'iode de 258 et un indice d'acide de 160. On ajoute goutte-à-goutte à 60 C, un kg d'huile de foie de morue purifiée de la façon décrite plus haut, à une solution contenant 3 kg d'urée dans 9 litres de méthanol. Le mélange est agité à la même température pendant 2 heures et ensuite refroidi. Il est laissé reposer à -10 C pendant une nuit, puis filtré et le filtrat est évaporé. On ajoute 2,5 litres d'acide chlorhydrique 1:1 au résidu et on agite le mélange pendant 15 minutes. Après extraction avec de l'hexane, la phase hexanique est lavée à l'eau jusqu'à neutralité, séchée sur du sulfate de sodium anhydre et évaporée pour donner 0,34 kg d'acide gras i-3 insaturé ayant un indice d'iode de 315, contenant 2X4% d'EPR et 42% de DHR, Exemple 3 mg de sélénite de sodium sont ajoutés à 6 litres de milieu de culture de Knop-Pringsheim introduit dans un flacon en verre de culture d'alg..,es ayant un volume de 10 litres. Le milieu de culture ainsi obtenu est stérilisé à 121 C sous une surpression de 1 bar pendant 30 minutes. Ensuite, la solution stérile est refroidie et inoculée avec une culture pure de Scenedesmus obtisiusculus qui est capable d'incorporer rapidement le sélénium. On fait barbotter de l'air stérile contenant 5% en volume de dioxyde de carbone à travers le milieu de culture à 25 C, tandis qu'on éclaire le système avec un tube à décharge électrique travail lant avec 4000 lux à une longueur d'onde de 440 à 700 pm. Après une période de culture de 14 jours, I'algue est séparée du milieu de culture. La masse d'algues ainsi obtenue est décomposée par ultrason et séchée soigneusement à une température inférieure à C. Le rendement est de 6 g d'une poudre d'algue ayant une teneur en sélénium de 1200 pg/g. Exemple i 100 g d'une poudre d'algue contenant du sélénium (teneur en sélénium: 260 p9/9) sont ajoutés à 150 g d'huile de foie de morue enrichie à 65% (contenant 221 d'EPR et 43% de DHR). Rprès homogénéisation, on ajoute 0, 1% de vitamine E. Le composant actif ainsi obtenu est introduit dans des capsules de gélatine tendre, lesquelles sont conditionnées dans des feuilles à alvéoles, Exemple 5 La procédure de l'exemple 4 est répétée, sauf que les matières premières suivantes sont employées: 400 g d'huile de foie de morue enrichie d 65%, contenant 222 d'EPR et 43% de DHA; 70,6 g d'une poudre d'algue ayant une teneur en sélénium de 1200 pg/g; et 0,4 g de vitamine E. Le produit homogénéisé est introduit dans des capsules capables de recevoir 500 mg de composant actif. Exemple 6 Des comprimés ayant la composition suivante sont préparés selon des procédures et avec des dispositifs pharmaceutiques connus: Huile de foie de morue enrichie en EPA et en DHA et contenant 0,1% de vitamine E (avec une teneur en DHA de 432 et une teneur en EPR de 22%) 200 mg Poudre d'algue contenant du sélénium (teneur en sélénium: 1500 pg/g) 86 mg Lactose 140 mg ARnmidon 60 mg9 Polyvinylpyrrolidone 3,5 mg Stéarate de magnésium 3,5 mg Les comprimés peuvent être éventuellement enrobés de sucre dans une machine d'empastillage. 261239 9 REUENDICATIONS 1. Composition pharmaceutique agissant sur le coeur et le système cardiovasculaire, caractérisée en ce qu'elle comprend 0,5 à 50% en masse d'algue contenant du sélénium ainsi que 99,5 à 50% en masse d'acides gras en C18-22 contenant au moins deux liaisons insaturées ou des dérivés de ceux-ci, éventuellement en mélange avec des supports et/ou des additifs et/ou des antioxydants couramment utilisés dans l'industrie pharmaceutique. 2, Composition suivant la revendication 1, caractérisée en ce qu'elle comprend 5 à 35% en masse d'algue contenant du sélénium. 3. Composition suivant la revendication 1, car.actérisée en ce qu'elle comprend 15 à 25% en masse d'algue contenant du sélénium. 4. Composition suivant la revendication 1, caractérisée en ce qu'elle comprend 95 à 65% en masse d'acides gras en C18-22 contenant au moins deux liaisons insaturées ou des dérivés de ceux-ci. 5. Composition suivant la revendication 1, caractérisée en ce qu'elle comprend.85 à 75% en masse d'acides gras en C18-22 contenant au moins deux liaisons insaturées ou des dérivés de ceux-ci. 6. Composition pharmaceutique suivant l'une quelconque des revendications 1 à 5, caractérisée en ce qu'elle comprend des acides gras extraits de l'huile de poissons de mer en tant qu'acides gras insaturés. 7. Composition pharmaceutique suivant l'une quelconque des revendications 1 à 6, caractérisée en ce qu'elle comprend l'acide 5,8,11,14,17-éicosapentaènoîque et l'acide 4,7,10,13,16,19- docosahexaênoique en tant qu'acides gras insaturés. 8. Procédé pour la préparation d'une composition pharmaceutique agissant sur le coeur et le système cardiovasculaire, caractérisé en ce qu'il comprend le mélange de 0,5 à 50% en masse d'algue contenant du sélénium ainsi que de 99,5 à 50% en masse d'acides gras en C18_22 contenant au moins deux 1 1 liaisons insaturées ou des dérivés de ceux-ci, éventuellement avec des supports et/ou des additifs et/ou des antioxydants couramment utilisés dans l'industrie pharmaceutique. 9. Procédé suivant la revendication 8, caractérisé en ce qu'on mélange 5 à 35X en masse d'algue contenant du sélénium et à 65% en masse d'acides gras en C18_22 contenant au moins deux liaisons insaturées. 10. Procédé suivant la revendication 8, caractérisé en ce qu'on mélange 15 à 25% en masse d'algue contenant du sélénium et 85 à 75X en masse d'acides gras en C18-22 contenant au moins deux liaisons insaturées.