Brevet FR2622106A1 — publié le 19890428

La présente invention a pour objet une nouvelle application thérapeutique de dérivés du 4H- benzo[4,5]cyclohepta[1,2-b]thiophène. L'invention concerne en particulier une nouvelle application thérapeutique des acides a-[10- oxy-4H-benzo[4,5]cyclohepta[1,2-b]thiophène-4- ylidène]-carboxyliques, leurs esters physiologiquement hydrolysables et physiologiquement acceptables et leurs sels pharmaceutiquement acceptables, lesdits composés étant désignés ci-après les composés de l'invention. Les composés de l'invention sont connus et ont été décrits ainsi que leurs procédés de prépara- tion, par exemple dans la demande de brevet européen No 0 138 765 A2. Comme décrit dans cette demande, le système 4H-benzo[4,5]cyclo-hepta[1,2b]thiophène des composés de l'invention peut porter des substituants en plus de ceux spécifiés en position 4 et 10. En particulier, il peut être substitué dans le cycle benzènique et/ou dans le cycle thiophénique. En plus des substituants en position 4 et 10, le système 4H-benzo[4,5]-cyclo- hepta[1,2-b]thiophène peut être substitué, par exemple monosubstitué, dans le cycle benzènique par des halo- gènes, par exemple le chlore, ou des groupes hydroxy. Un groupe particulier de composés de l'in- vention décrits et revendiqués dans la demande de brevet européen N 0 138 765 A2 comprend les composés de formule Ia OR, (Ia) ceI Cook dans laquelle R1 signifie l'hydrogène ou un groupe alkyle en C1-C4 ou (phényl) alkyle en C1-C4, R2 signifie l'hydrogène ou un groupe alkyle en C1-C4, et le cycle A est non substitué ou substitué par un halo- gène ou un groupe hydroxy, et leurs esters physiologiquement hydrolysables et physiologiquement acceptables et leurs sels pharma- ceutiquement acceptables. Selon la demande de brevet européen NI 0 138 765 A2, les composés de formule Ia ci-dessus, dans laquelle R1 signifie un groupe alkyle en Cj-C4, R2 signifie l'hydrogène et le cycle A est éventuellement monosubstitué par un groupe hydroxy.ou par un halogène (par exemple le chlore), de préférence dans laquelle le cycle A est non substitué, et leurs esters physiologi- quement hydrolysables et physiologiquement acceptables et leurs sels phàrmaceutiquement acceptables, forment un sous-groupe préféré. Un autre groupe de composés de l'invention comprend les acides [2-halo-10-oxy-4H-benzo[4,5]cyclo- hepta[1,2-b]thiophène-4-ylidène]-acétiques, leurs esters physiologiquement hydrolysables et physiologi- quement acceptables et leurs sels pharmaceutiquement acceptables, par exemple les composés de formule Ib /0Rs CH I I COON dans laquelle R3 signifie l'hydrogène ou un groupe alkyle en C1-C4 et R4 signifie un halogène, et leurs esters physiologiquement hydrolysables et physiologiquement acceptables et leurs sels pharmaceu- tiquement acceptables. Ces composés sont également connus et ont été décrits ainsi que leurs procédés de préparation dans la demande de brevet britannique N 2 183 648 A. Selon ladite demande de brevet britannique N0 2 183 648 A, les composés de formule Ib ci-dessus dans laquelle R3 signifie un groupe alkyle en C1-C4 et leurs esters physiologiquement hydrolysables et physio- logiquement acceptables et leurs sels d'addition d'acides pharmaceutiquement acceptables, forment un sous-groupe préféré. Les composés de formule Ia et Ib, leurs esters et les sels de ces composés tels que définis plus haut, ainsi que leurs sous-groupes définis plus haut, sont également préférés comme composés de l'in- vention pour une utilisation selon la présente inven- tion. Dans les composés de formule Ia et Ib, les groupes alkyle représentés par R1I, R2 et R3 ainsi que les restes aikyle des groupes (phényl)alkyle en C1-C4 représentés par R1 dans la formule Ia, peuvent être linéaires ou ramifiés. Lorsque R1 ou R3 signifie un groupe alkyle en C1-C4, il s'agit de préférence d'un groupe méthyle. Lorsque R4 signifie un halogène dans la formule Ib, il s'agit du fluor, du chlore, du brome ou de l'iode. R4 signifie de préférence le chlore. Par l'expression "esters physiologiquement hydrolysables et physiologiquement acceptables", par exemple telle qu'appliquée aux composés de formule Ia ou Ib, on entend des esters dans lesquels le groupe carboxy est estérifié et qui sont hydrolysables sous des conditions physiologiques pour donner un alcool qui est lui-même physiologiquement acceptable, par exemple non toxique, aux doses désirées. De tels esters comprennent, par exemple des esters avec des alcools aliphatiques ayant de 1 à 4 atomes de carbone. Les sels pharmaceutiquement acceptables, par exemple ceux des composés de formule Ia ou Ib, comprennent par exemple les sels de métaux alcalins tels que les sels de sodium et de potassium, ainsi que les sels de métaux alcalino-terreux tels que les sels de calcium. On notera que les composés de l'invention dans lesquels le groupe oxy en position 10 signifie un groupe hydroxy, par exemple les composés de formule Ia ou Ib dans lesquelles R1 ou R3 signifie l'hydrogène, existent sous forme cétonique ainsi que sous forme énolique, dans le cas par exemple des composés de formule Ia et Ib comme décrit dans la demande de brevet européen NO 0 138 765 A2 et dans la demande de brevet britannique N 2 183 648 A. Lorsqu'un compoé de l'in- vention existe sous des formes tautomères, pour des raisons pratiques ce composé sera défini dans la pré- sente demande uniquement par référence à la forme énolique; l'invention n'est cependant pas limitée par la nomenclature ou la représentation graphique uti- lisée, mais comprend l'utilisation de ces composés ausi bien sous la forme cétonique que sous la forme éno- lique. Les composés de l'invention, par exemple les composés de formule Ia ou Ib, existent sous formes d'isomères cis et trans, c'est-à-dire sous forme d'iso- mères Z et E. L'invention comprend l'utilisation des isomères cis et trans individuels ainsi que leurs mé- langes. Dans la description et les revendications, les isomères cis (Z) et trans (E) sont désignés selon la nomenclature CIP classique [Angew. Chem. 94, 614 (1982) et Loc. cit.], comme expliqué plus en détail, par exemple, dans la demande de brevet européen N 0 138 765 A2 et la demande de brevet britannique N 2 183 648 A mentionnées plus haut. En général, selon l'invention on utilise de préférence les isomères (Z) des composés de l'inven- tion. Pour une utilisation selon l'invention, les composés de l'invention sont donc essentiellement sous forme d'isomères Z. Ils se présentent plus préférable- ment sous une forme isomère Z pure ou essentiellement pure. Les composés individuels appropriés pour une utilisation selon l'invention sont les suivants: A) L'ester éthylique de l'acide [10-Méthoxy-4H- benzo[4,5]cyclohepta[1,2-b]thiophène-4-ylidène]- acétique [mélange d'isomères Z et E]. B) L'ester éthylique de l'acide [7-Chloro-10-méthoxy- 4H-benzo[4,5]cyclohepta[1,2-b]thiophène-4-ylidène]- acétique: B1) comme mélange d'isomères Z et E); B2) comme isomère Z; B3) comme isomère E. C) L'ester éthylique de l'acide [6-Hydroxy-10-méthoxy- 4H-benzo[4,5]cyclohepta[1,2-b]thiophène-4-ylidène]- acétique: Cl) comme mélange d'isomères Z et E; C2) comme isomère Z; C3) comme isomère E. D) L'acide [10-Méthoxy-4H-benzo[4,5]cyclohepta[1,2-b] thiophène-4-ylidène]acétique: D1) comme mélange d'isomères Z et E; D2) comme isomère Z; D3) comme isomère E. E) L'ester méthylique de l'acide [10-Méthoxy-4H- benzo[4,5]cyclohepta[1,2-b]lthiophène-4-ylidènel- acétique: El) comme mélange d'isomères Z et E; E2) comme isomère Z; E3) comme isomère E. F) L'acide [7-Chloro-10-méthoxy-4H-benzo[4,5]cyclo- hepta[l,2-b]thiophène-4-ylidène]-acétique: F1) comme mélange d'isomères Z et E: F2) comme isomère Z; F3) comme isomère E. G) L'acide [6-Hydroxy-10-méthoxy-4H-benzo[4,5]cyclo- hepta[l,2-b]thiophène-4-ylidène]-acétique: G1) comme mélange d'isomères Z et E; G2) comme isomère Z; G3) comme isomère E. H) L'acide [10-Hydroxy-4Hbenzo[4,5]cyclohepta[1,2-b] thiophène-4-ylidène]-acétique [isomère Z]. J) L'ester éthylique de l'acide [2-Chloro-10-méthoxy- 4H-benzo[4,5]cyclohepta[1,2-b]thiophène-4-ylidène]- acétique: J1) comme mélange d'isomères Z et E; J2) comme isomère Z; J3) comme isomère E. K) L'acide [2-Chloro-10-méthoxy-4H-benzo[4,5]cyclo- hepta[1,2-b]thiophène-4-ylidène]-acétique: K1) comme isomère Z; K2) comme isomère E. Les composés préférés pour une utilisation selon l'invention sont les composés D2 et K1 ci-dessus, spécialement les composés D2 et K1 sous une forme isomère Z pure ou essentiellement pure. Comme décrit dans la demande de brevet européen NO O 138 765 A2 et dans la demande de brevet britannique N 2 183 648, les composés de l'invention sont utiles comme agents anti-inflammatoires, agents anti- pyrétiques et agents analgésiques sur la base de l'activité observée par exemple dans l'essai de l'ar- thrite à l'adjuvant chez le rat, l'essai de fièvre provoquée par des lipopolysaccharides (LPS) chez le rat et l'essai de douleur à l'arthrite chez le rat. Selon l'invention, on a maintenant trouvé de façon surprenante que les composés de l'invention exercent une activité inhibitrice sur les monokines, en particulier sur la IL-1 (interleukine-1), en parti- culier une activité inhibitrice sur la libération ou la sécrétion de la IL-1. On a trouvé que les composés de l'invention sont utiles pour le traitement ou le trai- tement d'appoint d'une grande variété de maladies ou d'états non encore suspectés jusqu'à présent [pour une discussion générale sur le rôle de la IL-1 dans l'étio- logie de maladies et d'autres états pathologiques, voir Dinarello, J. Clin. Immunol. 5 (5), 287-297 (1985)]. Selon un premier aspect, l'invention concerne l'utilisation des composés de l'invention comme agents inhibiteurs d'une monokine, en particulier comme agents inhibiteurs de la sécrétion ou de la libération de la IL-1, destinés à un traitement théra- peutique autre qu'un traitement anti-inflammatoire ou anti-pyrétique. L'invention concerne également: 1. Les composés de l'invention pour l'utilisation commme agents inhibiteurs d'une monokine, en parti- culier comme agents inhibiteurs de la sécrétion ou de la libération de la IL-1, destinés à un traite- ment thérapeutique autre qu'un traitement anti- inflammatoire ou anti-pyrétique. Selon des variantes spécifiques, l'invention concerne également: 2. Les composés de l'invention pour l'utilisation comme agents inhibiteurs d'une monokine, en parti- culier comme agents inhibiteurs de la sécrétion ou de la libération de la IL-1, destinés à un traite- ment des atteintes pathologiques exogènes ou endo- gènes autre qu'un traitement anti-pyrétique ou anti-inflammatoire. Selon un autre aspect, l'invention concerne: 2.1 Les composés de l'invention pour l'utilisation comme médicaments destinés au traitement de la réaction de phase aiguë, autre qu'une réaction fébrile ou inflammatoire, résultant d'une atteinte pathologique endogène ou exogène, ou destinés au traitement des changements de la phase aiguë, autres que les changements fébriles ou inflamma- toires, résultant d'une infection occulte ou d'une maladie chronique. Selon encore un autre aspect, l'invention concerne également: 2.2 Les composés de l'invention pour l'utilisation comme médicaments destinés au traitement de la neutrophilie, de l'infiltration cellulaire mononu- cléaire, de l'hyperémie, de l'hypozincémie, de l'hypoferrémie, de la protéolyse musculaire, de l'anorexie ou de la somnolence pathologique, se manifestant par exemple dans la réaction de phase aiguë résultant d'une atteinte pathologique endo- gène ou exogène ou dans les changements de la phase aiguë résultant d'une infection occulte ou d'une maladie chronique. Comme. exemples d'atteintes phatologiques exogènes ou endogènes, on peut citer par exemple l'in- vasion microbienne, par exemple une infection bacté- rienne ou virale (telle que la grippe), une réaction immunologique indésirable ou pathologique, les troubles néoplastiques, les brûlures ou les blessures. Comme exemples d'infections occultes ou de maladies chroniques, on peut citer en particulier l'arthrite, spécialement l'arthrite rhumatoïde et l'inflammation intestinale. Selon d'autres aspects, lfinvention concerne également: 3. Les composés de l'invention pour l'utilisation comme médicaments destinés à induire ou à obtenir une immunosuppression en particulier pour le trai- tement de maladies auto-immunes. Comme maladies auto-immunes pour lesquelles on utilise les composés de l'invention, on peut citer par exemple, la spondyl-arthrite ankylosante, les troubles hématologiques auto-immuns (y compris par exemple-l'anémie hémolytique, l'anémie aplastique, l'anémie de globules rouges purs et la thrombocytopénie idiopathique), le lupus érythémateux systémique, la polychondrite, la sclérodermie, la granulomatose de Wegener, la dermatomyosite, l'hépatite active chroni- que, la myasthénie grave, le psoriasis, la sprue idio- pathique, les inflammations intestinales auto-immunes (y compris par exemple la colite ulcérative et la mala- die de Crohn), l'ophtalmopathie endocrine, la maladie de Grave, la sarcoïdose, la sclérose en plaques, la cirrhose biliaire primitive, le diabète juvénile (dia- bète sucré de type I), le syndrome de Reiter, l'uvéite non infectieuse (antérieure et postérieure), la kéra- tite auto-immune (y compris par exemple la kérato- conjonctivite sèche et la kérato-conjonctivite ver- nale), la fibrose pulmonaire interstitielle, l'arthrite psoriasique et la glomérulonéphrite (avec ou sans syndrome néphrotique, par exemple comprenant le syn- drome néphrotique idiopathique ou la néphropathie à faibles changements), la spondyl-arthrite ankylosante, le syndrome de Reiter et l'arthrite psoriasique présen- tant un intérêt particulier. Pour ces applications, on peut, si on le désire ou si cela est approprié, utiliser les composés de l'invention comme adjuvants à d'autres traitements thérapeutiques utilisant la cyclosporine ou un stéroïde immunosuppresseurs, en particulier un traitement théra- peutique utilisant la Ciclosporine ou cyclosporine A (commercialisée sous la marque SANDIMMUNE R ou SANDIMMUN R) comme substance active immunosuppresive. L'invention concerne également 4. Les composés de l'invention pour l'utilisation comme médicaments destinés à un traitement a) de la déplétion calcique tissulaire ou b) des processus dégénératifs des os ou des cartilages. Selon un autre aspect, l'invention concerne 4.1 Les composés de l'invention pour l'utilisation comme médicaments destinés au traitement de la décalcification ou de la résorption osseuse (y compris la déplétion calcique dans la matrice osseuse); ou 4.2 Les composés de l'invention pour l'utilisation comme médicaments destinés au traitement des dé- ficiences calciques odontales ou périodontales; ou 4.3 Les composés de l'invention pour l'utilisation comme médicaments destinés au traitement des pro- cessus de résorption (par exemple la résorption calcique) ou de l'infiltration fibroblastique au niveau ou dans les articulations. Selon un aspect particulier, l'invention concerne les composés de l'invention pour l'utilisation définie sous 4 et 4.1 à 4.3 comme médicaments pour le traitement de la déplétion calcique ou des processus dégénératifs des os ou des cartilages, des maladies périodontales, de l'arthrose et de la spondyl-arthrite ankylosante et d'autres maladies, par exemple la dé- ficience calcique odontale ou périodontale; l'ostéo- porose d'origines diverses, y compris l'ostéoporose climatérique ou post-ménopausique, ainsi que l'ostéo- porose due au vieillissement, à l'immobilisation ou à un traumatisme; l'ostéopathie, y compris les états aigus et chroniques associés à une déminéralisation du squelette; l'ostéomalacie, par exemple comme adjuvant à une thérapie spécifique; la consolidation osseuse et la régénération osseuse; ainsi que la tétanie et la téta- nie latente. En raison de leur aptitude à modifier les processus de résorption calcique ou la déplétion cal- cique osseuse, les composés de l'invention sont spécia- lement utiles dans le traitement de conditions arthri- tiques dans lesquelles de tels processus sont un facteur essentiel, en particulier dans le traitement de l'ostéoarthrite et de la spondyl-arthrite ankylosante. L'invention concerne également 5. Les composés de l'invention pour l'utilisation comme médicaments destinés au traitement de la fibrose ou des affections caractérisées par une fibrose, comme la fibrose hépatique congénitale, la fibrose endomyocardique, la fibrose cystique, la silicose provoquée par des diatomées, la fibrose pulmonaire, la fibrose rétropéritonéale, la fibrose néoplastique, la fibrose périurétérale, la fibrose post-fibrineuse, la fibrose proliférative, la fibrose de remplacement, la fibrose de l'utérus, l'adhésion post-opératoire et les cicatrices. Les composés de l'invention sont spéciale- ment utiles pour le traitement de la fibrose pulmo- naire. 6. Les composés de l'invention pour l'utilisation comme médicaments destinés au traitement, traite- ment d'appoint ou adjuvant de l'invasion tumorale ou des symptômes associés à une croissance tumorale (y compris la protéolyse musculaire), de la maladie de Kreutzfeld-Jacob, de la maladie de Alzheimer, de la somnolence pathologique, de la goutte, du choc aux endotoxines ou de l'épidermolyse bulleuse. Selon un aspect particulier, l'invention concerne l'utilisation définie sous 6 ci-dessus, des composés de l'invention comme médicaments destinés au traitement de symptômes associés à une croissance tumorale (y compris la protéolyse musculaire), de la goutte ou du choc aux endotoxines. L'invention concerne également: A. Les composés de l'invention pour l'utilisation dans la préparation d'un médicament pour une utilisation comme définie sous 1 à 6 ci-dessus. B. Une composition pharmaceutique pour une utilisation définie sous 1 à 6 ci-dessus, comprenant un composé de l'invention en association avec un ou plusieurs diluants ou véhicules pharmaceutiquement accep- tables. L'utilité des composés de l'invention comme inhibiteurs d'une monokine, en particulier comme inhi- biteurs de la libération ou de la sécrétion de la IL-1, ainsi que l'utilité des composés de l'invention dans le traitement des maladies et des états spécifiés plus haut, peuvent être mises en évidence dans des essais pharmacologiques classiques ainsi que dans des essais cliniques, par exemple comme décrit ci-après. 1. Inhibition de la secretion de la IL-1 (interleukine-1) 1.1 Essai aux chondrocytes INTRODUCTION Des cultures cellulaires confluentes de chondrocytes de lapin se sont révélées être des cellules cibles relativement spécifique pour la IL-1. La IL-1 purifiée, [Schnyder et coil., J. Immunol. 138, 496 (1987)], la ILi-6 humaine recombinante (rhIL-1) ou des milieux conditionnés recueillis à partir de monocytes humains stimu- lés, de macrophages péritonéaux de lapins ou de souris ou la lignée cellulaire murine P388D1, [Koren et coll., J. Immunol., 114, 894 (1975)] provoquent des changements caractéristiques dans la sécrétion des chondrocytes. En particulier, une.métalloprotéinase (MP) latente est induite, alors que la sécrétion de l'activateur du plasmi- nogène (PA) est réduite. La réponse d'induction de la MP est relativement spécifique à la IL-1, tandis que la IL-2, la TNF-z, l'e-interféron humain recombinant (rh IFN-a), le rh IFN-y, le myristate-acétate de phorbol, la concanavaline A, les prostaglandines de type E et l'indométhacine n'ont pas d'influence. La réduction de la sécré- tion du PA provoquée par la monokine constitue un paramètre hautement sensible (comparable à l'essai LAF - voir ci-après), bien qu'il ne soit pas aussi spécifique que celui de la MP. [voir Evêquoz et coll., Biochem. J. 219 667-677 (1984); Schnyder et coll., Brit. J. Rheumatol. 24 (Supp.- 1), 128-132 (1985); et Schnyder et coll., J. Immunol. 138, 496-503 (1987)]. 1.1.a INHIBITION DE LA MONOKINE DE MACROPHAGES DE SOURIS On cultive in vitro des macrophages périto- néaux de souris résidents [Schnyder et coll., J. Exp. Med, 148, 435-450 (1978)] pendant 1 jour avec le composé à essayer à diverses concentra- tions. Les milieux de culture sont dilués 1:1 (v:v) avec un milieu frais et ajoutés à des chondrocytes confluents de lapins. Deux jours plus tard, on détermine l'activité de la MP dans le milieu de culture de chondrocytes. Dans cet essai, les composés de l'invention, en parti- culier le composé D2, sont actifs en stoppant la libération de monokine, à des concentrations comprises entre environ 3,0 et environ 100 #M. Ainsi, la DE50 pour le composé D2 sous forme isomère Z essentiellement pure, déterminée au cours de 3-5 essais effectués en triple, est de l'ordre de 100 #M. 1.1.b INHIBITION DE LA MONOKINE DE MONOCYTES HUMAINS On obtient par centrifugation des cellules mononuclées à partir du sang de volontaires sains et on les cultive sur des plaques de cultures tissulaires avec le composé à essayer à diverses concentrations [Schnyder et coll., J. Immunol., 138, 496-503 (1987)]. Au bout de 4 heures, on élimine les lymphocytes non-adhérents par des lavages successifs. On ajoute du milieu frais, le composé à essayer et les lipopolysaccharides (LPS) comme stimulant et on incube les monocytes pendant encore 19 heures. Les milieux de cultures rassemblés sont dilués 1:10 (v:v) avec le milieu frais et ajoutés aux chondrocytes confluents de lapins. L'activité de la MP dans le milieu de culture de chondrocytes est évaluée au bout de deux jours. Dans cet essai, les composés de l'invention, en particulier les composés D2 et K1, sont actifs en stoppant la libération de monokine, à des concentrations comprises entre environ 30 et environ 100 #M. La DE50 pour les composés D2 et K1, chacun sous forme isomère Z essentiellement pure, a été déterminée lors de 3 à 7 essais séparés, comprenant chacun 3 déterminations parallèles, et est de l'ordre de 60 à 100 pM pour les deux composés. 1.2 ESSAI-LAF (PROLIFERATION DES THYMOCYTES) La prolifération des lymphocytes est l'essai classique pour déterminer l'activité d'une mono- kine. Il est très sensible, bien que relativement non spécifique, la IL-2, le myristate-acétate de phorbol, la concanavaline A, les prostaglandines de type E et l'indométhacine provoquant des per- turbations. Les milieux de cultures de monocytes humains sont préparés comme décrit sous l.l.b ci-dessus, dilués 1:10, 1:20 et 1:40 (v:v) et ajoutés à 1,5 x 10-6 thymocytes/ml (obtenus à partir de souris C3H/HeJ), dans un milieu de Eagle modifié par Dulbecco, contenant 10 mM d'acide hydroxyéthyl-pipérazine-éthane-sulfo- nique, 12 mM de NaHCO3, 2 mM de glutamine, 2% de sérum foétal de boeuf, 10 pM de 2-mercaptoétha- nol, 0,1 pM d'indométhacine et des antibiotiques. On incube les cellules pendant 2 jours dans des plaques de culture 96puits et on détermine le taux de prolifération par incorporation de 3H- thymidine (1 #C/puits) pendant les 6 dernières heures. On recueille sur papier filtre les cellules et on mesure la radioactivité incorpo- rée. Dans l'essai ci-dessus, les composés de l'invention inhibent la production de monokine à des concentrations comprises entre environ 30 et environ 100 pM. La DE50 pour les composés D2 et K1, chacun sous forme isomère Z essentiellement pure, est déterminée lors de 2 essais séparés comprenant chacun 3 déterminations parallèles et est de l'ordre d'environ 30 pM. Afin d'éliminer un effet antagoniste ou une influence directe des composés de l'invention sur la prolifération des thymocytes de souris que l'on a utilisés dans l'essai-LAF ci-dessus, on détermine l'effet des composés de l'invention sur l'incorporation de 3H-thymidine après la stimu- lation des thymocytes avec la IL-1 ou la IL-2 humaines recombinantes. Dans cet essai, on a trouvé que les composés de l'invention, en parti- culier les composés D2 et Kl, n'ont pas d'influ- ence significaive sur la prolifération induite par 10 ng/ml de IL-2 humaine recombinante ou par ng/ml de lL-l recombinante et on ne décèle * aucune dépendance de la concentration. En outre, l'influence sur la sécrétion de la MP induite par la IL-l est déterminée en utili- sant des chondrocytes comme systèmes cibles pour la IL-1. On ajoute la IL1 (Genzyme Corporation, USA) avec ou sans le composé de l'invention ou la Dexaméthasone (témoin) aux chondrocytes et on détermine l'activité de la métalloprotéinase dans le surnageant au bout de 2 jours d'incubation. Il ressort de cet essai que les composés de l'inven- tion, en particulier les composés D2 et Kl, n'influencent pas la sécrétion de MP induite par la IL-1. 1.3 KIT-RIA. DETERMINATION QUANTITATIVE DE LA IL-1 On procède comme décrit sous l.l.b. plus haut et on détermine les concentrations en IL-1 dans le milieu de culture non dilué qui a été recueilli, en utilisant un kit-RIA CISTRON pour la détermination de la IL1 (le kit CISTRON est commercialisé par Cistron, 10, Bloomfield Avenue, P. O. Box 2004, Pine Brook, NJ 07 058 USA). Il est spécifique pour la IL-li et détecte la matière intra- et extra-cellulaire). Les composés de l'invention, en particulier les composés D2 et K1, sont actifs dans l'essai ci-dessus en abaissant les taux de IL-1 déter- minés dans le milieu extra-cellulaire. Par contre, les taux de IL-1 intra-cellulaires de- meurent pratiquement unchangés. Ainsi, les DE50 pour l'abaissement du taux de IL-1 extra-cellu- laire, déterminées pour les composés D2 et K1 chacun sous forme isomère Z essentiellement pure, lors de 2-8 essais chacun avec 3 déterminations parallèles, sont respectivement de l'ordre de 40 et 25 pM. Dans chaque détermination, la teneur en IL-1 extra-cellulaire est réduite de façon significative. 1.4 LIBERATION PAR RAPPORT A L'INHIBITION DE LA SYNTHESE 1.4.a PREPARATION D'HOMOGENATS ET DE LYSATS A des monocytes humains adhérents lavés on ajoute 0,3 ml de solution saline tamponnée au phosphate contenant 1% de sérum AB humain inacti- vé à la chaleur et on détache les cellules à l'aide d'un détacheur mécanique. On transfère ensuite la solution contenant les cellules dans deux autres puits appartenant au même groupe. On répète cette opération 3 fois. On homogénéise la suspension finale rassemblée (0,9 ml) à l'aided'un homogénéisateur Dounce (Kontes Co, Vineland, NJ) en efffectuant 5 traitements successifs de 7 coups avec le pilon B. On prépare le lysat en ajoutant aux mono-couches de monocytes humains lavés, 0,3 ml de digitonine à 0,01% dans de l'eau. 1.4.b EFFET SUR LA SYNTHESE ET LA LIBERATION DE IL-1 On dilue 50 pl d'homogénat à 500 pl avec le milieu et on l'ajoute à des chondrocytes conflu- ents pour déterminer l'activité inductrice de la métalloprotéinase comme mesure de la teneur en IL-1. On a également déterminé la teneur en IL-1 dans les milieux de culture, les homogénats et les lysats cellulaires à l'aide de l'essai RIA (voir 1.3.). Dans ces essais, les composés de l'inven- tion, en particulier le composé D2, réduisent les taux de IL-1 dans les surnageants, alors que la teneur cellulaire moyenne en IL-1 dans les homo- génats et les lysats n'est que faiblement réduite ou demeure inchangée. 1.5 EFFET SUR L'ADHERENCE DES MONOCYTES En présence du composé à essayer ou d'un véhicule, on prépare des monocytes de cellules mononuclées humaines fraîchement recueillies. On aspire le milieu au bout de 4 heures et on lave la mono-couche cellulaire en procédant de manière habituelle. Les monocytes adhérents sont ensuite lysés en utilisant de la digitonine dans de l'eau et on mesure la quantité de ADN et l'activité de l'enzyme cytosolique LDH. Dans cet essai, les composés de l'invention, en particulier le compo- sé D2, et le véhicule ne réduisent pas l'adhé- rence des monocytes. 1.6 EFFET SUR LA SECRETION DE MONOKINES A côté de la IL-1, la TNF-= et la IL-6 sont des monokines bien connues qui sont libérées à partir de monocytes stimulés. En procédant comme décrit plus haut, on prépare des milieux de culture de monocytes humains. On contrôle la teneur en IL-l et en TNF-a selon l'essai RIA et la teneur en IL-6 par un essai biologique comme décrit plus bas. Les composés de l'invention, en particulier le compo- sé D2, inhibent la libération de la IL-1 de façon plus significative que celle de la IL-6 et de la TNF-a. ESSAI BIOLOGIQUE DE LA IL-6 Pour déterminer la IL-6 dans les milieux conditionnés à partir de monocytes humains, on cultive pendant 48 heures 2,4 x 104 cellules/ml de B13.29 dans 0,2 ml sur des plaques de culture 96 puits (Costar) avec les milieux de culture, dilués dans un milieu Dulbecco modifié par Iscove exempt de sérum et additionné de 200 U/ml de IL-6 recombinante, 50 pM de 2-mercaptoéthanol et des antibiotiques. On détermine les taux de prolifé- ration à l'aide d'une incorporation de 3H-thymi- dine (luC/puits) pendant les 6 dernières heures. On recueille les cellules sur papier filtre, on mesure la radioactivité incorporée et on la compare avec une préparation normalisée de IL-6. 1.7 EFFET SUR LA PERTE DE LACTATE DEHYDROGENASE ET SUR LA SECRETION DE LYSOZYME En procédant comme décrit plus haut, on prépare des milieux de culture à partir de mono- cytes humains. On contrôle cinétiquement le lysozyme et la lactate déhydrogénase (LDH) à l'aide d'un appareil Twinreader (Flow Laborato- ries AG) relié à un ordinateur. On mélange les échantillons (50 ml) pour le LDH avec 200 p1 de mélange de substrat, contenant des concentrations finales de 50 mM de tampon au phosphate, pH 7,5, 0,8 mM de pyruvate de sodium, 0,24 mM de NADH2 et 0,04% d'albumine bovine et-les modifications d'absorption à 340 nm sont mesurées 11 fois à des intervalles de i minute. L'ordinateur calcule les vitesses initiales qui sont utilisées pour déter- miner les unités. On mélange des échantillons (50 Pl) pour le lysozyme avec 100 pl de suspension de 1,2 mg/ml de M.Lysodeikticus dans 67 mM de tampon au phosphate pH 6,2 et les modifications de turbidité à 492 nm sont contrôlées 11 fois à des intervalles de 4 minutes. Lors de chaque série d'essai, on établit une courbe d'étalonnage avec du lysozyme cristallisé de blanc d'oeuf de poule [J. Schnyder et coll., J. Exp. Med. 148, 435 (1978)]. On n'observe aucune perte importante de LDH à partir des cultures de cellules témoins et traitées. Les composés de l'invention, en parti- culier le composé D2, réduisent faiblement la libération de lysozyme, à des valeurs qui ne sont pas inférieures à celles des essais témoins non stimulés. 2. PREVENTION DE LA RESORPTION OSSEUSE (TRAITEMENT DE LA DEPLETION CALCIQUE TISSULAIRE) On cultive pendant 4-5 jours des moitiés de crânes (parties frontale et pariétale) de souris Swiss albino sur des grilles d'acier inox dans un milieu de culture tissulaire osseux BGJ, addi- tionné de 1 mg/ml de BSA à l'interphase du milieu et de gaz dans une atmosphènre humidifiée (95% d'air/5% de C02) à 37 C [voir Reynolds et coll., dans "Organ Culture in Biomed. Res." eds. Balls et Mamichendam, Cambridge University Press, 355-366 (1976)]. On détermine l'influence de la substance à essayer à diverses concentrations sur la libéra- tion de calcium dans le milieu d'essai en pré- sence de stimulateurs de libération de calcium [PGE2, LPS ou 1,25 dihydro vitamine D3 (1,25D3)]. A cet effet, on mesure par spectrométrie les concentrations de calcium dans les surnageants des cultures osseuses obtenus après 72 et 144 heures de culture et dans les extraits de TCA des crânes à la fin de la culture [Gindler et coll., Am. J. Clin. Pathol. 58, 376-382 (1972)]. L'acti- vité de l'enzyme lysosomle la N-acétyl-glucose- aminidase dans les surnageants de culture osseuse et dans les extraits au Triton 100 des crânes après culture est également déterminée selon la méthode décrite par Banerjee et Basu, Biochem. J., 45, 113-118 (1975). Les changements dans l'activité des enzymes sont exprimés en unités p/moitiés de crânes et comme % de libération. Les composés de l'invention, par exemple le composé D2 ou Kl sous forme isomère Z essentiel- lement pure, inhibent la libération de calcium et exercent une influence concomitante sur la N-acé- tylglucose-aminidase dans les essais ci-dessus, à des concentrations comprises entre lx10-5 et x10-6 M. Les valeurs CI50 déterminées pour le composé D2 sous forme isomère Z essentiellement pure, sont par exemple les suivantes: CI50 (M) Calcium N-acétylglucose- En présence de: înds aminidase PGE2 2,2 x 10-5 7,9 x 10-6O LPS 2,8 x 10-5 8e3 x 10-6 1,25D3 3,8 x 10-5 3,7 x 10-5 (Pour le calcul des valeurs CI50 on prend comme % la différence entre le taux de résorption dans les cultures témoins et la résorption dans les cultures stimulées au maximum. La CI50 est exprimée comme la concentration de la substance à essayer qui inhibe la résorption maximale de %). 3. ACTIVITE MODIFIANT LA MALADIE DANS LE MODELE ANIMAL D'ARTHRITE RHUMATOIDE Après avoir provoqué une arthrite à l'adju- vant chez 48 rats mâles adultes, on leur adminis- tre le composé à essayer par voie orale pendant jours. Aux jours 10, 20, 30 et 40, on mesure le gonflement articulaire et la densité osseuse et on les compare à celles des animaux témoins reçevant le placebo. En plus, on mesure les glucosaminoglucanes (GAG) des cartilages dans les condyles fémoraux isolés après le traitement. On détermine la =2-macroglobuline dans le sérum aux jours 0, 3, 6, 9, 16 et 22. En administrant les composés de l'invention par voie orale à une dose comprise entre 2,5 et mg/kg/jour, on observe après une réduction initiale de la densité osseuse provoquée par l'inflammation, une restauration progressive de la teneur minérale normale. On constate non seulement que la densité osseuse augmente comme il ressort des mesures de densité effectuées selon la méthode indiquée plus haut, mais égale- ment que les concentrations plasmatiques de =2-macroglobuline sont réduites en fonction de la dose. En outre, l'analyse de la teneur en GAG des cartilages touchés révèle une augmentation liée à la dose de la teneur en protéoglucanes. Dans ce modèle d'essai d'arthrite rhuma- toïde, les composés de l'invention, par exemple le composé D2 sous forme isomère Z essentiel- lement pure, exercent une activité modifiant la maladie spécialement après 30 jours de traite- ment, et exercent en particulier un effet de protection sur les cartilages et les os de rats atteints d'arthrite à l'adjuvant. La méthode utilisée dans l'essai ci-dessus pour une estimation in vivo de la densité osseuse chez les rats adultes est basée sur la méthode de mesure radiographique de la densité décrite par Albanese et coll., dans J. Amer. Ger. Soc. 17, 142-153 (1969). Pendant le traitement avec la substance à essayer, on effectue une analyse longitudinale des os chez les rats atteints d'une arthrite et on la compare à celle des rats non traités atteints d'une arthrite et des animaux témoins. Le balayage radiographique quantitatif in vivo est efffectué en utilisant comme para- mètre la masse trabéculaire. L'image radiogra- phique est ensuite balayée et on transforme les valeurs grises en unités de Densité Optique Re- lative (ROD) à l'aide d'un appareil à résolution élevée de mesure de la densité. En raison des caractéristiques du système (l'obscurcissement de l'image signifiant une Densité Optique Relative élevée), on exprime les valeurs enregistrées sous la forme (l-x), o x est la ROD mesurée expéri- mentalement, afin de tenir compte de l'effet biologique des rayons X sur le tissu osseux (c'est-à-dire que l'obscurcissement du film indique une baisse de la densité osseuse). Avec les valeurs résultantes de la mesure de la densi- té on établit une courbe en fonction du poids de l'animal, les animaux ayant le même poids dans un même groupe. 4. ACTIVITE IMMUNOSUPRESSIVE (MALADIES AUTO-IMMUNES) Dans chacun des essais suivants, le composé à essayer, c'est-à-dire le composé de l'inven- tion, par exemple le composé D2 ou K1, chacun sous forme isomère Z essentiellement pure, est administré par voie orale à une dose comprise entre environ 5 et 60 mg/kg/jour, soit seul ou avec la cyclosporine A par voie orale à une dose comprise entre environ 1 et 10 mg/kg/jour dans l'huile d'olive (c'est-à-dire essentiellement en dessous des doses généralement nécessaires pour une action immunosuppressive dans les essais décrits). 4.1 UVEITE: MODULATION DE L'UVEITE EXPERIMENTALE AUTO-IMMUNE (UEA) On effectue l'essai selon la méthode géné- rale décrite par Nussenblatt et coll., dans Arch. Ophthal. 100, 1146-1149 (1982). Des groupes de 6 à 10 rats ($) Lewis d'un poids d'environ 150-200 g sont immunisés avec 30 pg d'antigène S de boeuf émulsifié (1:1 p.p.p.) dans un adjuvant de Freund complet enrichi avec 2, 5 mg/ml de Mycobacterium tuberculosis H 37 RA, par injection dans la patte postérieure. La substance à essayer est administrée aux doses indiquées plus haut soit i) en l'absence ou ii) en association avec un traitement à la cyclo- sporine A durant 7 jours consécutifs, en débutant 7 jours après l'immunisation. Les groupes témoins recoivent un placébo à la place de la substance à essayer. On tue les rats le 14*X jour après l'immunisation et on isole les yeux immédiate- ment, on les fixe dans du formaldéhyde, on les place dans de la paraffine et on les colore avec de l'héamatoxyline-éosine et du PAS. On effectue l'évaluation histopathologique en aveugle et on estime l'inflammation selon une échelle allant de 0 (absence d'inflammation) à 4 (panophthalmie). On examine les cas sélectionnés par transmission et microscopie électronique à balayage. Les yeux des animaux présentant une UEA ont une inflamma- tion généralisée de la rétine et de la choroïde avec des cellules inflammées emmêlées dans un exudat fibreux survenant dans la cavité vitreuse, l'espace sous-rétinien et la chambre antérieure. En administrant i) le composé à essayer ou ii) le composé à essayer plus la cyclosporine A aux doses indiquées, on observe une nette réduc- tion du nombre des animaux atteints de UEA en comparaison des résultats obtenus avec les groupes témoins reçevant i) un placebo ou ii) un placebo plus de la cyclosporine A à des doses identiques. 4.2.a SCLEROSE EN PLAQUES I: ACTIVITE PREVENTIVE SUR L'ENCEPHALOMYELITE ALLERGIQUE EXERIMENTALE (EAE) On réalise l'expérimentation selon la mé- thode générale décrite par Borel et coll., dans Agents and Actions, 6, 468 (1976). L'EAE est induite dans des groupes de 8 à 12 rats Wistar (0) ou Lewis (J) pesant chacun 150 à 200 g, par injection intradermique dans chaque coussinet de patte postérieure, de 0,1 ml d'une émulsion comprenant 2,5 g de moelle épinière de bovin (lyophilisée et reconstituée avec 12 ml de H20), 1,5 ml d'Arlacel A, 8,0 ml de Nujol et 0,2 ml de sérum physiologique contenant 20 mg de Mycobacte- rium phlei séché et tué. On administre i) le composé à essayer ou ii) le composé à essayer plus la cyclosporine A 5 jours par semaine, en commençant le jour de la sensibilisation et en continuant pendant 3 semaines. L'apparition de 1'EAE chez les groupes témoins se fait entre 9 et 16 jours après la sensibilisation et est caracté- risée par les symptômes de paralysie des membres postérieurs et de la queue. On examine les ani- maux d'essai quotidiennement pour déceler les symptômes de la maladie et on attribue un score positif à l'apparition de la maladie lorsqu'on observe une implication complète des deux pattes postérieures et de la queue. On garde les animaux d'essai en observation pendant une période totale de 25 jours. En administrant i) le composé à essayer ou ii) le composé à essayer plus la cyclosporine A aux doses indiquées plus haut, on observe une nette réduction de l'apparition de l'EAE pendant la période d'essai en comparaison des groupes témoins reçevant i) un placebo ou ii) un placebo plus la cyclosporine A à des doses identiques. 4.2.b SCLEROSE EN PLAQUES II: ACTIVITE SUR LA EAE ETABLIE On procède comme décrit sous 4.2.a mais en administrant i) la substance à essayer ou ii) la substance à essayer plus la cyclosporine A en commençant les jours 8 ou 9 après la sensibili- sation (c'est-à-dire immédiatement avant l'appa- rition des symptômes de la maladie), en adminis- tration quotidienne ou tous les deux jours, et en continuant le traitement pendant environ 14 jours. On examine les animaux quotidiennement pendant le traitement pour déceler les symptômes de la maladie, et on attribue un score comme décrit sous 4.2.a. En administrant i) la substance à essayer ou ii) la substance à essayer plus la cyclosporine A aux doses indiquées plus haut, on observe une réduction importante de l'apparition de l'EAE pendant le traitement si l'on compare avec les résultats obtenus chez les groupes témoins re- cevant i) un placebo ou ii) un placebo plus la cyclosporine A à des doses identiques. 4.3 LUPUS ERYTHEMATEUX AIGU DISSEMINE: MODELE DE SOURIS (NZB/NZW)F1 Les essais sont basés sur la souche de souris (NZB/NZW)F1 décrite et explicitée par Steinberg et coll., dans Bulletin on the Rheu- matic Diseases 28, n 4-5, 940-946 (1977-78), publié par The Arthritis Foundation, Atlanta, Georgie. Chez les femmelles de cette souche, les caractéristiques du syndrome du LEAD, y compris la formation d'auto-anticorps anti-ADN et anti- érythrocyte ainsi que la protéinuréie, apparais- sent spontanément à l'âge d'environ 5 à 7,5 mois. L'affection conduit finalement à la mort. Pour les besoins de l'essai, on emploie des groupes de 6 à 8 souris 0. Le traitement avec i) la substance à essayer ou ii) la substance à essayer plus la cyclosporine A est effectué 5 fois par semaine et se poursuit pendant environ 8 à 10 semaines en commençant a) avant l'apparition spontanée des auto-anticorps, par exemple à l'âge d'environ 5 mois ou b) après l'apparition sponta- née des auto-anticorps, par exemple à l'âge d'environ 8 à 9 mois. On mesure les titres des anti-corps anti-ADN et anti-érythrocyte à inter- valles réguliers pendant la période d'essai, en utilisant la technique ELISA, en commençant environ une semaine avant le début du traitement. Les autres paramètres soumis au contrôle sont l'apparition de la protéinurie (mesurée une fois par semaine) et la durée de vie. Les résultats des groupes traités sous a) et b) tels que spéci- fiés plus haut mettent respectivement en évidence l'efficacité prophylactique et thérapeutique. En administrant i) la substance à essayer ou ii) la substance à essayer plus la cyclosporine A aux doses indiquées plus haut, on obtient une réduction importante des titres des anticorps et de l'apparition de la protéinurie ainsi qu'une augmentation de la durée de vie moyenne, que ce soit dans le traitement prophylactique ou dans le traitement thérapeutique, si l'on compare avec les résultats des groupes témoins recevant i) le placebo ou ii) le placebo plus la cyclosporine A à des doses identiques. 5. FIBROSE PULMONAIRE Les essais sont effectués selon la méthode générale décrite par G.J. Laurent et coll., dans Eur. J. Clin. Invest. (1981) 11, 441-448. On provoque une fibrose pulmonaire chez des groupes de 4 lapins blancs de Nouvelle Zélande (âgés de 127 jours au début de l'essai), d'un poids de 2,0-2,5 kg, par instillation par voie intratra- chéale de 10 mg/kg de bléomycine. On examine les poumons des animaux soumis à l'essai 2, 4 et 8 semaines plus tard. En administrant par voie orale le composé à essayer, c'est-à-dire le composé de l'invention, par exemple le composé D2 ou K1, chacun sous forme isomère Z essentiel- lement pure, à une dose comprise entre 2,5 et 60 mg/kg/jour, on observe une réduction importante de la fibrose pulmonaire, comparé aux résultats obtenus avec les groupes témoins recevant le placebo. 6. ESSAI CLINIQUE I: PSORIASIS On effectue l'essai avec des adultes et 0 présentant un psoriasis chronique grave couvrant % de la surface du corps ou plus comme mis en évidence par la règle des 9, et dont l'état est stable ou évolutif avec un traitement habituel. Au moins 2 semaines avant le début de l'essai, on suspend tous les traitements systémiques, topi- ques ou photothérapiques spécialement destinés à la maladie de peau. Pendant cette période, on continue uniquement les émollients doux, 2% d'acide salicylique dans l'huile d'olive, les shampoings au goudron et/ou une crème ou une pommade contenant 1% d'hydrocortisone ainsi que les médicaments contre l'arthrite ou pour soigner une maladie concomitante au psoriasis. Au bout de 2 semaines sans traitement ("wash out"), on soumet les patients à l'essai après une nuit de jeûne de 8 à 10 heures. Lors de l'admis- sion, on effectue les examens de laboratoire suivants: numération globulaire, électrolytes sanguins, glucose, calcium, phosphore, acide urique, ALT/AST/LDH (alanine aminotransférase, aspartate aminotransférase, lactate déhydrogé- nase), facteur de croissance épidermique plasma- tique, hormone de croissance et EGF de l'urine. On évalue l'extension clinique du psoriasis selon la règle des 9, et on utilise une échelle de valeur de 0 à 4 pour les rougeurs, l'épaisseur et la squamosité de la peau en utilisant la méthode décrite par Kragballe et coll., dans Arch. Derma- tol. 119, 548-552 (1983). On prend des photo- graphies des lésions choisies. On effectue une biopsie d'une parcelle de peau de 6 mm en pra- tiquant une anesthésie par infiltration de 1% de lidocaïne. Pendant l'essai, on administre aux patients le composé de l'invention, par exemple le composé D2 ou K1, chacun sous forme isomère Z essentiel- lement pure, à des doses comprises entre environ 400 et environ 1200 mg/jour/par voie orale, en une seule fois ou en doses fractionnées jusqu'à 4 fois par jour. Aucun autre traitement n'est permis pendant l'essai, sauf ceux utilisés lors de la période sans traitement ("wash out">. Tous les examens sont effectués au début de l'essai (jeûne, urine, évaluation clinique de l'extension du psoriasis, photographie, biopsie d'une parcelle de peau) et sont répétés pendant l'essai les jours 7, 14, 21 et 28. Les patients prenant part à l'essai et à qui l'on administre le traitement selon l'invention présentent une amélioration importante de leur état, comme mis en évidence par la réduction progressive de l'extension clinique du psoriasis, en particulier de la lésion psoriasique, ainsi qu'une réduction importante de l'échelle de valeur pour l'état de la lésion. En plus, les résultats des biopsies de parcelles de peau font apparaître un net changement histologique par rapport à l'état de la lésion, y compris une réduction de l'indice mitotique, de l'infiltrat inflammatoire et une amélioration notable de la vascularisation. L'efficacité peut également être prouvée en répétant l'essai en double-aveugle, croisé, en utilisant 'deux groupes de patients, un groupe recevant le composé de l'invention selon un traitement tel qu'indiqué plus haut et l'autre groupe recevant uniquement un placebo, et en comparant l'extension des lésions des deux groupes. 7. ESSAI CLINIQUE II: MALADIE DE ALZHEIMER (AD/SDAT) On effectue l'essai en utilisant des groupes comprenant de 6 à 10 patients des deux sexes présentant une démence faible à modérée du type maladie d'Alzheimer et démence sénile du type Alzheimer selon les paramètres définis dans le DSM-III (Diagnostic and Statistical Manual of Mental Disorders, 3im' édition), en excluant les patients atteints d'une maladie cardio-vascu- laire grave, d'hypotension (pression sanguine systolique rénale et/ou du syndrome de malabsorption. L'essai commence avec un EEG et un essai psychométrique au temps O. On administre ensuite aux patients le placebo ou le médicament à essayer, administrés comme indiqué plus bas, et on répète l'EEG et les essais psychométriques 60, et 180 minutes après l'administration. Les essais psychométriques utilisés sont les suivants: i) Essai de mémoire sélective selon la méthode décrite par Buschke: "Selective Reminding for Analysis of Memory and Learning", dans J. Verbal Learning and Verbal Behaviour 12, 543-550 (1973); ii) Mesure de la faculté constructive selon la méthode décrite par Muratomo et coll.: "Effetc of Physiostigmin on Constructional and Memory Tasks in Alzheimer's disease", Arch. Neurol. 36, 501- 503 (1973); et iii) Mémoire des figures géométriques selon la modification du test de rétention visuelle décrit par Benton. Pendant l'essai, on administre aux patients soit un placebo soit un composé de l'invention, par exemple le composé D2 ou K1, chacun sous forme isomère Z essentiellement pure, à des doses comprises entre environ 450 et environ 1200 mg/ par voie orale, en doses uniques ou en doses fractionnées 2 à 3 fois. On enregistre les paramètres supplémentaires suivants: Hématologie: numération des globules rouges, hémoglobine, hématocrite, numération des globules blancs, formule leucocytaire, vitesse de sédimen- tation, glycémie. Urine: albumine, glucose. Sérum: alcaline phosphatase, aspartate-aminotrans- férase; alanine -aminotransférase, bilirubine, GT, tri- et tétraiodothyronine, thyréotropine, créa- tinine. Les patients recevant le composé de l'inven- tion aux doses indiquées plus haut, présentent une amélioration sensible de leur état comme le montrent les résultats de 1'EEG et des essais psychométriques, par rapport aux patients re- cevant un placebo. 8. ESSAI CLINIQUE III: RESORPTION CALCIQUE - MALADIE PERIODONTALE On effectue l'essai avec des patients volon- taires des deux sexes présentant une maladie périodontale. On administre par voie orale le composé de l'invention, par exemple le composé D2 ou K1, sous forme isomère Z essentiellement pure, à des doses comprises entre environ 400 et 1200 mg/kg/jour, en une seule fois ou en doses frac- tionnées jusqu'à 4 fois par jour, ou par injec- tion dans la gencive à l'endroit de la maladie, à des doses comprises entre environ 0,5 et 1,0 à environ 5,0 mg dans chaque poche parodontale. On examine les patients régulièrement 1 à 2 fois par semaines pour voir la progression de la maladie. On observe une mette amélioration de l'état des patients au bout d'environ 2 à 3 semaines de traitement continu. 9. ESSAI CLINIQUE IV: MALADIE DEGENERATIVE DES ARTI- CULATIONS On effectue l'essai avec des patients volon- taires des deux sexes présentant une arthrite psoriatique ou une spondylarthrose séronégative ou une ostéoarthrose. On administre le composé de l'invention, par exemple le composé D2 ou K1, sous forme isomère Z essentiellement pure, à des doses comprises entre environ 200 et 1200 mg/- jour/par voie orale, en une seule fois ou en doses fractionnées jusqu'à 4 fois par jour pendant 8 semaines. On examine les patients à intervalles réguliers de 2 semaines pour voir la progression de la maladie en étudiant des para- mètres tels que la sensation de douleur au niveau des articulations, l'évaluation de la capacité fonctionnelle selon la méthode de Steinbrocker, la force de préhension ou l'indice de Richtie. On observe une amélioration de l'état des patients au bout de 8 semaines de traitement. On peut obtenir des résultats similaires dans des essais effectués sur d'autres maladies que celles indi- quées plus haut, par exemple celles impliquant la protéolyse musculaire, la somnolence pathologique etc..., en utilisant les composés de l'invention, en particulier les composés D2 ou K1, chacun sous forme isomère Z essentiellement pure, à des doses identiques ou équivalentes à celles indiquées plus haut. Les doses quotidiennes utilisées dans la présente invention dépendront bien sûr de divers facteurs, par exemple du composé de l'invention choisi, de l'état particulier à traiter et de l'effet désiré. En général, toutefois, on obtient des résultats satisfaisants en administrant les composés de l'invention à des doses quotidiennes comprises entre environ 100 mg et environ 2,0 g, de préférence entre 350 mg et environ 2,0 g, par exemple jusqu'à environ 1,5 g par administration par voie orale une fois par jour ou en doses fractionnées 2 à 4 fois par jour, ou sous une forme à libération prolongée. Les doses unitaires destinées à une administration par voie orale contiennent d'environ 25 mg à environ 1,0 g de substance active en association avec un ou plusieurs diluants ou véhicules pharmaceutique- ment acceptables. Lorsque les composés de l'invention sont administrés en association, par exemple comme adjuvants, avec d'autres immunosuppresseurs, par exemple pour le traitement de maladies ou d'états spécifiques tels que décrits plus haut, les doses on immunosuppresseur administré conjointement dé- pendent bien sûr du type de substance immuno- suppressive utilisée, par exemple s'il s'agit d'un stéroïde ou d'une cyclosporine, du type de substance spécifique utilisée, de l'état à traiter, du traitement désiré, etc... En général, toutefois, on obtient des résultats satisfaisants en administrant conjointement la substance immu- nosuppressive à des doses représentant environ %, par exemple 50% de celles nécessaires habi- tuellement lorsque ladite substance immuno- suppressive est utilisée seule dans un traite- ment. Ainsi, lorsqu'on administre conjointement une cyclosporine comme immunosuppresseur, on obtient des résultats satisfaisants après une administration de la cyclosporine à une dose comprise entre environ 1 et environ 25 mg/kg/jour (par exemple dans le cas de la cyclosporine A, à une dose comprise entre environ 5 et environ 15 mg/kg/jour), administrée au patient par voie orale en doses unitaires ou en doses fractionnées 2 à 3 fois par jour. Lorsqu'une administration de cyclosporine par voie intra-veineuse est néces- saire, par exemple par perfusion (par exemple dans la phase initiale du traitement), des doses inférieures comprises par exemple entre environ 0, 5 et 5,0 mg/kg/jour (par exemple dans le cas de la cyclosporine A, entre environ 1 et environ 3 mg/kg/jour pour la dose initiale, ou d'environ 2 mg/kg/jour pour la dose d'entretien) sont généra- lement indiquées. Conformément à ce qui précède, l'invention concerne, dans un autre aspect: 7. Les composés de l'invention pour l'utili- sation en association avec une seconde substance active, ladite substance étant un immunosuppres- seur, par exemple un stéroïde ou une cyclosporine immunossupresseurs, par exemple la cyclosporine A, et ladite association étant destinée à obtenir une immunosuppression par exemple dans le traite- ment de l'une quelconque des maladies auto-immu- nes spécifiées plus haut. 8. L'utilisation selon 7 pour réduire la dose de substance immunosuppressive. On peut préparer les -compositions de l'in- vention selon les méthodes habituelles en mélangeant un composé de l'invention avec des diluants ou véhicules pharmaceutiquement acceptables. L'exemple suivant illustre la préparation de compositions solides selon l'invention. EXEMPLE: Préparation de compositions solides des- tinées à une administration par voie orale Les comprimés ou les gélules peuvent contenir la substance active en association avec des excipients habituels pharmaceutiquement acceptables, par exemple des diluants inertes tels que le carbonate de calcium, le carbonate de sodium, le lactose et le talc, des agents de granulation et de désintégration, par exemple l'amidon et l'acide alginique, des agents aromatisants, édulcorants, et colorants, des liants, par exemple l'amidon, la gélatine et la gomme arabique, et des agents lubrifiants, par exemple le stéarate de magnésium, l'acide stéarique et le talc. L'exemple suivant illustre la préparation des gélules. INGREDIENTS POIDS/DOSE Substance active, par exemple le composé D2 ou K1, sous forme isomère Z essentiellement pure 200,00 mg Lactose (200 mesh) 109,75 mg Amidon de maïs 35,00 mg Silice (Aérosil 200) 1,75 mg Stéarate de magnésium 3,50 mg Total 350,00 mg On mélange intimement les ingrédients selon les méthodes galéniques habituelles, on remplit des capsules de gélatine dure avec le mélange obtenu et on scelle les capsules. Poids des capsules - 97,0 mg; Poids total des capsules remplies = 447,0 mg. Les composés de l'invention sont bien tolé- rés aux doses nécessaires pour une utilisation selon l'invention. Les DL50 établies pour le composé D2 sous forme isomère Z essentiellement pure chez les souris et les rats après 14 jours d'administration par voie orale et après 7 jours d'administration par voie intra- veineuse sont les suivantes: chez les souris, 1623 mg/kg/par voie orale, 163'mg/kg/par voie intra-vei- neuse; chez les rats, 1721 mg/kg/par voie orale, 50 mg/kg/par voie intra-veineuse. Chez le chien beagle, on a trouvé que le même composé est généralement bien toléré lorsqu'il est administré à des doses élevées jusqu'à 200 mg/kg/jour pendant 26 semaines. * Pour le composé K1 sous forme isomère Z essentiellement pure, dans des études toxicologiques pilotes effectuées sur le chien beagle, on n'a pas observé d'effets pathologiques après une administration de doses comprisesentre 150 et 200 mg/kg/par voie orale, dans des gélules pendant 5 semaines et dans l'huile d'olive de la 66m' à la 8ême semaine. Les sels d'addition d'acides pharmaceutique- ment acceptables ont des niveaux de tolérance et d'activité identiques ou similaires à ceux des acides libres. L'invention concerne également un médicament destiné à obtenir une immunosuppression et comprenant un acide a-[1O-oxy-4H-benzo[4,5]cyclohepta[1,2-b]thiophêne- 4-ylidène]-carboxylique ou l'un de ses esters physiolo- giquement hydrolysable et physiologiquement acceptable ou un sel de ces composés, en association avec une seconde substance active, ladite substance active étant un immuno- suppresseur. REVENDICATIONS 1. L'utilisation des acides a-[10-oxy-4H- benzo[4,5]cyclohepta[l,2-b]thiophène-4-ylidène]- carboxyliques, de leurs esters physiologiquement hydro- lysables et physiologiquement acceptables et de leurs sels pharmaceutiquement accepatbles, comme agents inhibiteurs d'une monokine, en particulier comme agents inhibiteurs de la sécrétion ou de la libération de la IL-l, destinés à un traitement thérapeutique autre qu'un traitement anti-inflammatoire ou anti-pyrétique. 2. Les acides a-[10-oxy-4H-benzo-[4,5]cyclo- hepta[1,2-b]thiophène-4-ylidene]-carboxyliques, leurs esters physiologiquement hydrolysables et physiologi- quement acceptables et leurs sels pharmaceutiquement acceptables, pour l'utilisation comme agents inhibi- teurs d'une monokine, en particulier comme agents inhibiteurs de la sécrétion ou de la libération de la IL-l, destinés à un traitement thérapeutique autre qu'un traitement anti-inflammatoire ou anti-pyrétique. 3. Une composition pharmaceutique pour inhiber une monokine et destinée à un traitement théra- peutique autre qu'un traitement anti-inflammatoire ou anti-pyrétique, caractérisée en ce qu'elle comprend, comme substance active, un acide a-[10-oxy-4H-benzo- [4,5]cyclohepta[1,2-b]-thiophène-4-ylidène]-carbo- xylique, ou l'un de-ses esters physiologiquement hydrolysables et physiologiquement acceptables, ou un sel pharmaceutiquement acceptable de ces composés, en association avec un ou plusieurs diluants ou véhicules pharmaceutiquement acceptables. 4. Une composition ou l'utilisation selon l'une quelconque des revendications 1 à 3, caractérisée en ce que la monokine est l'interleukine-1. 5. Une composition ou l'utilisation selon l'une quelconque des revendications 1 à 3, pour induire ou obtenir une immunosuppression, pour le traitement des atteintes pathologiques exogènes ou endogènes, pour le traitement de la déplétion calcique tissulaire ou des processus dégénératifs des os ou des cartilages ou pour le traitement ou le traitement d'appoint ou adju- vant de l'invasion tumorale ou des symptômes associés à une croissance tumorale, ou pour le traitement de la maladie de Kreutzfeld-Jacob, de la maladie de Alzhei- mer, de la somnolence pathologique, de la goutte, du choc aux endotoxines ou de l'épidermolyse bulleuse. 6. Une composition ou l'utilisation selon l'une quelconque des revendications 1 à 5, caractérisée en ce que l'acide a-[10O-oxy-4H-benzo[4,5]cyclo- hepta[l,2-b]thiophène-4-ylidène]-carboxylique est un composé de formule la (Ia) cet *I Co le cycle A est non substitué ou substitué par un halo- gène ou un groupe hydroxy, ou un composé de formule ib OR CH COQ 1 dans laquelle R3 signifie l'hydrogène ou un groupe alkyle en CI-C4 et R4 signifie un halogène, et leurs esters physiologiquement hydrolysables et physiologiquement acceptables et leurs sels pharmaceu- tiquement acceptables. 7. Une composition ou l'utilisation selon la revendication 6, caractérisée en ce que l'acide c-[10-oxy-4H-benzo[4,5]cyclohepta[1,2-b]thiophène-4- ylidène]-carboxylique ou ses esters physiologiquement hydrolysables et physiologiquement acceptables est choisi parmi les composés suivants: A) L'ester éthylique de l'acide [10-Méthoxy-4H- benzo[4,5]cyclohepta[1,2-b]thiophène-4-ylidène]- acétique, B) L'ester éthylique de l'acide (7-Chloro-10-méthoxy- 4H-benzo[4,5]cyclohepta[1,2-b]thiophène-4-ylidène]- acétique, C) L'ester éthylique de l'acide [6-Hydroxy-10-méthoxy- 4H-benzo[4,5]cyclohepta[1,2-b]thiophène-4-ylidène]- acétique, D) L'acide [10-Méthoxy-4H-benzo[4,5]cyclohepta[1,2-b] thiophène4-ylidène]acétique, E) L'ester méthylique de l'acide [10-Méthoxy-4H- benzo[4,5]cyclohepta[1,2-b]thiophène-4-ylidène]- acétique, F) L'acide [7-Chloro-10-méthoxy-4H-benzo[4,5]cyclo- hepta[1,2-b]thiophène-4-ylidène]-acétique, G) L'acide [6-Hydroxy-10-méthoxy-4H-benzo[4,5]cyclo- hepta[1,2-b]thiophène-4-ylidène]-acétique, H) L'acide [10-Hydroxy-4Hbenzo[4,5]cyclohepta[1,2-b] thiophène-4-ylidène]-acétique, J) L'ester éthylique de l'acide [2-Chloro-10-méthoxy- 4H-benzo[4,5]cyclohepta[1,2-b]thiophène-4-ylidène]- acétique, K) L'acide [2-Chloro-10-méthoxy-4H-benzo[4,5]cyclo- hepta[1,2-b]thiophène-4-ylidène]-acétique, et leurs sels pharmaceutiquement acceptables. 8. L'utilisation d'un acide a-[10-oxy-4H- benzo[4,5]cyclohepta[1,2-b]thiophène-4-ylidène]- carboxylique ou l'un de ses esters physiologiquement hydrolysables et physiologiquement acceptables, ou un sel pharmaceutiquement acceptable de ces composés pour la préparation d'un médicament inhibiteur d'une monokine destiné à un traitement thérapeutique autre qu'un traitement anti-inflammatoire ou anti-pyrétique. 9. Les acides "-[10-oxy-4H-benzo[4,5]cyclo- hepta[1,2-b]thiophène-4-ylidène]-carboxyliques ou leurs esters physiologiquement hydrolysables et physiologi- quement acceptables, et les sels pharmaceutiquement acceptables de ces composéspour l'utilisation en association avec une seconde substance active, ladite substance étant un immunosuppresseur, et ladite asso- ciation étant destinée à obtenir une immunosuppression. 10. Un médicament destiné à obtenir une immunosuppression et comprenant un acide =-[10-oxy-4H- benzo[4,5]cyclohepta[1,2-b]thiophène-4-ylidène]- carboxylique ou l'un de ses esters physiologiquement hydrolysable et physiologiquement acceptable:-ou un sel a 2 2622106 de ces composés, en association avec une seconde substance active, ladite substance active étant un immunosuppresseur.