Brevet FR2622086A1 — publié le 19890428

Environ 150 millions de tonnes de foin sont moissonnées chaque année aux Etats-Unis. La perte en production est probablement plus importante que pour toute autre récolte. Ces pertes sont dues à une arrivée à maturité défavorable de la luzerne, aux dommages causés par la pluie, à la perte occasionnée dans le champ lors de la moisson et aux pertes imputables à la conservation. Les pertes sont généralement de l'ordre-de 20 à 40%, mais peuvent atteindre 70% si les conditions météorologiques sont défavorables. Ces pertes résultent de la respiration continuelle des plantes, du 1 0 broyage -des feuilles occasionné par le traitement mécanique et du lessivage dû à la pluie. La mise en bottes du foin à des humidités plus élevées que la norme (25-30%) permet de minimiser le risque de pertes dues aux dommages occasionnés par la pluie et au traitement mécanique des feuilles. Cependant, une mise en bottes 1 5 réalisée à des humidités supérieures à 20% augmente considérablement le risque de pertes au cours de la conservation, à cause de l'oxydation et de la moisissure. Les pertes au cours de la conservation constituent une source importante, mais contrôlable, de perte de substance nutritive. Du foin entreposé dans un bâtiment présentant un taux d'humidité inférieur à 20% subira une perte normale en extrait sec-variant de 5 à 10%. Des humidités plus élevées intensifient l'activité des micro- organismes aérobies d'oxydation, provoquant ainsi une production de chaleur. Un échauffement excessif résulte en des pertes d'extrait sec dues à la respiration qui produit du CO2 et de l'eau. L'échauffement provoque également des pertes de substance nutritive par l'intermédiaire de réactions de brunissement non-enzymatiques. La quantité de chaleur générée dépendra du taux d'humidité du foin, de la température ambiante, des populations microbiennes existantes, 3 0 ainsi que de la taille et de la densité des bottes. Des dommages excessifs causés par un échauffement réduisent la digestibilité des protéines ainsi que l'énergie disponible. Le taux de protéines endommagées par un échauffement peut être mesuré par une détermination du taux d'azote contenu dans la fibre en tant 3 5 qu'azote acide détergent de la fibre (ADIN OU ADF-N). Dans des conditions normales, moins de 7% de la quantité totale d'azote devraient être présents dans la fibre. Un échauffement a provoqué des dommages excessifs lorsque cette valeur atteint 15%. Les dommages par moisissure lors de la conservation peuvent également occasionner des pertes significatives. Environ 5% seulement des moisissures produisent des mycotoxines; cependant, celles-ci peuvent avoir des effets néfastes sur la sapidité et sur la ration alimentaire. Le fait de nourrir les animaux avec du foin moisi aura pour conséquence une réduction significative de la quantité d'extrait sec par ration, une diminution des gains de poids et des taux 1 0 de conversion de l'alimentation plus faibles. Ces pertes peuvent être jusquà 25% plus importantes que dans les cas témoins non moisis. Le foin entreposé contient des épiphytes qui se développent naturellement dans des conditions propices. Ces épiphytes peuvent être favorables ou préjudiciables à la qualité du foin et rivalisent entre eux pour une domination écologique dans le foin entreposé. Ces épiphytes peuvent être soit des bactéries, soit des champignons. Les organismes bactériens usuels de moisissure sont ceux qui sont membres des genres Sporosarcina et Bacillus. La moisissure par champignons est souvent provoquée par les membres des genres 2 0 Aspergillus, Penicillium et Mucor. Différentes approches ont été envisagées afin de limiter la prolifération de ces épiphytes responsables de la moisissure des produits agricoles. Une simple approche a consisté à vaporiser le produit agricole. au moment du stockage à l'aide d'un inhibiteur de 2 5 moisissure tel que, par exemple, de l'acide propionique. Un inconvénient majeur de cette approche est son prix, dans la mesure o l'on doit utiliser d'importantes quantités d'acide pour traiter de façon adéquate le produit agricole. De plus, la nature fondamentalement toxique et corrosive des acides tels que l'acide 3 O propionique nécessite que des techniques de manutention spéciales soient utilisées par le fermier pour protéger le personnel qui manipule l'acide. De plus, tout équipement entrant en contact avec l'acide doit être soigneusement nettoyé afin d'éviter des dommages par corrosion. Pour plus de détails en ce qui concerne une autre 3 5 approche, se reporter à ma demande également en cours, au nom du même demandeur, intitulée AGENT DE CONSERVATION DU FOIN, numéro de série 891260, déposée le 28 juillet 1986, et qui se rapporte à l'utilisation d'un sel inorganique composé d'un mélange d'oxyde de zinc, d'oxyde de magnésium et d'une source d'ions cuivriques soluble dans l'eau en combinaison avec un acide organique tel que de l'acide acidique [sic], de l'acide propionique ou de l'acide sorbique. Cependant, en dépit de recherches approfondies portant sur le développement de divers produits destinés à être utilisés comme substances inoculatrices pour les produits agricoles, la moisissure du foin reste aujourd'hui un problème d'actualité. De ce fait, un objectif principal de la présente invention consiste à fournir un mélange assurant la conservation du foin, dont le rôle est d'ajouter au foin uniquement des organismes qui se développent naturellement, ceci dans des proportions qui permettent d'empêcher la croissance des organismes de moisissure, tout en réduisant l'échauffement dans le foin présentant un taux d'humidité élevé. Un autre objectif de la présente invention est de frournir un produit de conservation du foin amélioré, qui agit de façon 2 O surprenante pour réduire de manière significative l'échauffement au sein du foin présentant un taux d'humidité élevé, tout en éliminant le besoin d'ajouter des additifs non naturels. Un objectif supplémentaire de la présente invention consiste à fournir un mélange assurant la conservation du foin qui ne présente pas de risque de pollution pour l'environnement. Un autre objectif supplémentaire de la présente invention consiste à fournir un produit de conservation du foin permettant d'obtenir une bonne qualité du foin, telle qu'elle est mesurée par la température, le taux de récupération de l'extrait sec, le profil d'azote, 3 O la couleur, le montant des micro-organismes, y compris les levures et moisissures. Un autre objectif supplémentaire de la présente invention consiste à fournir un produit de conservation du foin, ainsi qu'une méthode de conservation du foin, qui permet d'ajouter au foin, à des 3 5 taux qui assurent la conservation du foin, des micro-organismes Bacillus pumilus. Un autre objectif supplémentaire de la présente invention consiste à fournir des produits de conservation du foin qui, lorsqu'ils sont appliqués sur le foin, permettent de réduire le risque.de dégradation par échauffement, tout en empêchant simultanément la croissance des organismes de moisissure tels que l'Aspergillus flavus. La méthode et les moyens employés pour atteindre chacun de ces objectifs, ainsi que d'autres, apparaissent clairement dans la description détaillée de l'invention qui est donnée ci-après. RESUME DE L'INVENTION Dans la présente invention, le -foin est traité avec Bacilllus pumilus afin de protéger la qualité du foin. Bacillus pumilus est capable d'inhiber les organismes de moisissure responsables de la détérioration du -foin lorsqu'il est entreposé pour de longues durées. Par conséquent, la présente invention fournit une méthode de traitement du foin qui permet d'améliorer sa conservation et qui consiste à administrer au foin une quantité adéquate de Bacillus 1 0 pumil'us ou de mutants, ou d'équivalents de celui-ci. L'invention prend également en compte un mélange de traitement du foin contenant le Bacillus pumilus. Le mélange peut être solide ou liquide. 1 5 DESCRIPTION DETAILLEE DE L'INVENTION La moisissure du foin due à la détérioration causée par la croissance des organismes de moisissure est un problème important au sein de la communauté agricole. Les organismes de moisissure communs comprennent le genre Aspergillus et l'espèce Aspergillus flavus, ainsi que les genres Penicillium et Mucor. Le foin qui est mis en bottes à une humidité supérieure à environ 25% s'échauffe et moisit dans environ 97% des cas, suivant les indications d'études menées sur le terrain. Ces bottes échauffées sont remarquablement plus pauvres en couleur, en valeur nutritionnelle et présentent un taux de moisissure visible plus élevé. Il a été découvert que des souches de Bacillus pumilus permettent de protéger la qualité du foin. Bien que l'on ne souhaite être limité par aucune théorie de praticabilité, il semble probable 3 0 que le Bacillus pumilus produise un ou plusieurs composants inhibiteurs qui empêchent la croissance des champignons et également des bactéries telles que l'isolat bactérien Sporosarcina. Les Sporosarcina sont responsables du duvet blanc indésirable que l'on peut observer sur les tiges de foin après seulement quelques 3 5 jours de conservation. Ces organismes peuvent généralement être observés dans les bottes très chaudes. Il semble également qu'ils favorisent la croissance de champignons, soit pendant leur propre croissance, soit à un stade ultérieur. La compréhension des interactions microbiennes constitue un élément essentiel de l'utilisation de cette souche dans le but d'améliorer la qualité du foin entreposé. Initialement, lorsque le foin est mis en bottes, il se produit une importante éclosion d'une classe de miicroorganismes (le groupe Gram négatif). Cela s'observe au cours des 1-3 premiers jours. Ensuite, cela est remplacé par un second groupe (le groupe Gram positif). Le Bacillus pumilus appartient à ce groupe, le groupe Gram positif. Si les Bacillus pumilus sélectionnés sont présents en grand nombre, de la manière dont cela est défini ci-après, le foin ne s'échauffe pas, ni ne moisit, à ce stade. Plus tard, d'autres groupes de microflore deviennent dominants à mesure que les populations de Bacillus pumilus 1 5 diminuent. A la fin de la période de conservation, lorsque le foin est utilisé comme produit alimentaire, le Bacillus fait partie de la microflore. Encore une fois, bien que cette demande ne souhaite être limitée par aucune théorie, il est possible que le Bacillus puisse affecter la qualité du foin simplement par une compétition pour des éléments nutritifs avec les autres organismes présents. Dans la méthode préconisée par l'invention, le foin est traité à l'aide d'une quantité adéquate à la conservation du foin de Bacillus pumilus ou de mutants, ou d'équivalents de celui-ci, de maniere à améliorer la conservation et à maintefilr la qualité du foin, et en 2 5 même temps à diminuer la prolifération des organismes de moisissure. La méthode de l'invention est particulièrement utile dans la mesure o l'organisme de l'invention est non-pathogène, se développe naturellement dans le foin à de faibles niveaux et, par 3 0 conséquent, ne créera pas de maladies chez un animal qui consomme le produit agricole ainsi conservé. A l'inverse de nombreux types de conservation qui utilisent une application de produits chimiques coûteux et souvent dangereux, la méthode de l'invention est basée sur le renforcement d'une colonisation par des organismes désirables 3 5 qui se développent naturellement, et cela par l'intermédiaire d'une amélioration de leur aptitude à rivaliser avec des organismes de moisissure, se développant eux aussi de façon naturelle, tels que l'Aspergillus flavus. Le contrôle de ces organismes nuisibles constitue un aspect important, dans la mesure o un grand nombre des organismes en rapport avec la moisissure des produits agricoles sous conservation sontdes champignons qui sont reconnus pour produire de puissantes mycotoxines. On sait que ces mycotoxines provoquent des maladies et même la mort chez des animaux qui consomment une alimentation contaminée par ces champignons. Il y a certaines souches préférées de Bacillus pumilus qui ont 1 0 été isolées et estimées largement préférables dans le mélange de cette invention. Ces souches sont disponibles sur demande par le demandeur, et sont identifiés en tant que Souches N 288, 289, 290, 296, 299, 302, 305 et 307. Les souches ont été déposées auprès de l'American Type Culture Collection à Rockville, Maryland, et 1 5 possèdent une identification. supplémentaire sous les numéros d'accès ATCC 53682, 53683, 53684, 52685, 53686, 53687, 53688et 53689, respectivement. On peut utiliser un mélange de ces souches préférées, qui est satisfaisant, ou tout autre combinaison plus restreinte de celles-ci, ou simplement une souche unique. Le Bacillus pumilus fut isolé à partir de foin entreposé à l'aide de techniques bien connues dans ce domaine, et décrites d'une manière générale ci-dessus. D'autres Bacillus pumilus peuvent être isolés et testés selon les méthodes d'expérimentation habituelles pour permettre d'évaluer l'efficacité d'f Bacillus pumilus en ce qui concerne la conservation de la qualité du foin. Sous la dénomination "mutants efficaces de celui-ci" sont rangés tous les mutants du Bacillus pumilus qui possèdent les propriétés désirées d'inhibition des champignons que l'on trouve dans la souche présente, ou les équivalents en substance- de ceux-ci. 3 0 De tels mutants sont considérés comme étant équivalents sur le plan fonctionnel à la souche mère. Il est bien connu de ceux qui ont une compétence ordinaire dans le domaine qu'une mutation spontanée est un phénomène classique en matière de micro-organismes, et que des mutations peuvent également être provoquées intentionnellement au moyen de toute une gamme de techniques connues. Par exemple, des mutants peuvent être créés à l'aide de produits chimiques, de substances radioactives et de techniques de recombinaison. Indépendamment de la manière dont les mutations sont provoquées, le point important est que les mutants fonctionnent de manière à conserver le. produit agricole de la façon décrite pour la souche mère. En d'autres termes, la présente invention prend en bompte les mutations résultant de modifications mineures telles que, par exemple, des transformations taxinomiques mineures comme la fermentation de certains sucres.. 1 0 ' Bien que l'invention soit décrite en accordant un rôle particulier à l'espèce préférée du Bacillus pumilus, et à certaines souches spécifiques dérivées de celui-ci, il faut comprendre que l'invention considère que l'on peut utiliser d'autres organismes qui s'apparentent de façon proche sur le plan génétique au genre 1 5 Bacillus. Il peut par conséquent être possible d'atteindre la plupart sinon tous les objectifs de cette invention avec d'autres espèces membres du genre Bacillus, telles que le Bacillus subtilus et le Bacillus cereus. Le Bacillus pumilus est fortement préféré parce qu'il fait partie de la flore normale du foin. Par le terme "foin", on désigne toutes les formes de foin, à la façon dont le terme est habituellement utilisé en agriculture. Le foin est le plus généralement composé de luzerne, d'herbe, ou de mélanges de luzerne et d'herbe. Il est possible que le mélange de conservation du foin de cette invention puisse également être utilisé comme substance inoculatrice adéquate lors de l'ensilage, afin de réduire la moisissure lors de l'ensilage. Une autre possibilité différente est que le mélange puisse opérer efficacement pour conserver des grains tels que le maïs, le blé, le riz et le soja. Dans la présente invention, l'inhibition des organismes 3 0 responsables de la moisissure du- foin est réalisée au moyen d'un traitement du foin par des organismes du genre Bacillus, plus particulièrement le Bacillus pumilus, ou par des mélanges contenant le Bacillus pumilus ou des organismes apparentés de façon proche, et également au moyen d'un traitement par des mutants adéquats ou 3 5 par des équivalents du Bacillus pumilus, ou par des mélanges contenant ceux-ci. Les mélanges qui sont utilisés dans la méthode de l'invention peuvent être sous forme liquide ou solide et peuvent contenir des souches bactériennes supplémentaires. Dans les formes de traitement solides, le mélange peut comprendre le Bacillus pumilus et une substance porteuse. La nature de cette substance porteuse peut être un liquide aqueux ou non- aqueux, ou un solide. Sous les formés solides, le mélange peut contenir des substances porteuses solides ou des extensions physiques. Des exemples de telles substances porteuses solides, de diluants solides ou d'extensions physiques comprennent: malto-dextrine, amidon, carbonate de calcium, cellulose, petit-lait, épis de maïs broyés et dioxyde de silicone. En bref, la substance porteuse peut être organique ou une extension physique inorganique. Le mélange solide peut être appliqué directement sur le foin sous la forme d'un léger 1 5 saupoudrage de poudre ou, s'il est dispersé dans une substance porteuse liquide, on peut aisément le vaporiser sur le foin. Les mélanges ordinaires utilisables pour traiter le foin selon le principe de cette invention contiennent 102-1012 organismes viables/gm, avec une concentration préférable de 104-1010 organismes viables/gm, ou encore plus préférable 105-107 organismes viables/gm. Le domaine de traitement du foin est généralement 105-1015 organismes viables/tonne, avec une concentration préférable de 107- 1013 organismes viables/tonne, ou encore plus préférable 108-1l010O organismes viables/tonne. Le mélange de la présente invention peut comprendre, en plus du Bacillus pumilus ou des mutants ou des équivalents de cet organisme, d'autres organismes habituels de conservation des produits fermiers comme, par exemple, le Lactobacillus, le 3 0 Streptococcus et le Pediococcus, ainsi que certains enzymes provenant de champignons ou de bactéries. Ceux qui possèdent une compétence ordinaire dans le domaine connaissent d'autres substances porteuses adéquates et d'autres formes de dosage, ou seront en mesure de déterminer cela à l'aide 3 5 des moyens d'expérimentation habituels. De plus, l'administration des différents mélanges peut être effectuée à l'aide des techniques classiques bien connues de ceux qui possèdent une compétence ordinaire dans le domaine. La description ci-dessus décrit de manière générale la présente invention. Il est possible d'en comprendre plus complètement le principe en se reportant aux exemples spécifiques suivants, qui sont fournis cidessous uniquement à des fins d'illustration et ne constituent pas une limitation, sauf en 'cas de mention contraire explicite. EXEMPLES Du foin fut traité à l'aide de vaccins préparés avec des mélanges des souches n 288, 289, 290, 296, 299, 302, 306 et 307 du 1 5 Bacillus pumilus. La qualité du foin fut déterminée par un examen de la température, de la microflore et par une analyse nutritionnelle. Des évaluations visuelles furent établies pour tous les traitements, comprenant la couleur, le duvet blanc et les spores de moisissure. 2 0 De la luzerne fut coupée à l'aide d'une faucheuse munie d'un appareil à conditionner et laissée à sécher dans le champ dans des conditions extérieures normales. Le foin fauché fut disposé en andains et râtelé une fois seulement avant d'être mis en bottes. Le taux de séchage, la maturité et les données météorologiques furent enregistrées. Le foin fut mis en bottes à une humidité de 22 à 34 pour cent pendant tous les essais, mais pour un essai donné, l'humidité du foin ne fut autorisée à varier que de 2 à 5 pour cent entre les bottes traitées et les bottes témoins. Pour les expériences avec de petites bottes cubiques, le 3 0 processus suivant fut observé. Le foin fut traité avec des solutions aqueuses du produit de conservation du foin, à l'aide d'un vaporisateur. Pour l'expérience extérieure plus longue, le traitement fut appliqué à 15-20 bottes de 100 livres (45 kg). Des bottes témoins non inoculées furent également préparées. Un total de 15- 3 5 20 bottes fut préparé comme témoin. Le foin fut ramené du champ, mis en meules et entreposé sur des palettes en bois sur un sol en ciment dans un hangar fermé. Des sondes de température furent placées au centre de chaque meule et la température fut relevée toute les heures. Un système modèle plus petit fut également développé pour simuler des études sur -des bottes plus grosses. Une livre (450 grammes) de foin fut tassée dans un emballage d'expédition en polystyrène (épaisseur de parois de 2 pouces (5 cm)) avec des dimensions approximatives de 6" x'10" x) 6" (15 cm x 25 cm x 15 cm). On comprima le foin en plaçant une brique sur le foin après qu'un 1 O thermisteur ait été placé au centre de la masse de foin. Le couvercle en polystyrène fut placé sans le serrer sur le dessus et la boîte entière fut placée dans un incubateur à 37 C pour commencer l'échauffement. Les traitements furent appliqués sur le foin en vaporisant à l'aide d'un vaporisateur TLC en verre. L'échantillonnage des bottes fut effectué en retirant six noyaux d'échantillonnage/période d'échantillonnage à l'aide d'un Penn State Forage Sampler. Au sein de chaque meule, on échantillonna deux bottes dans le bas, dans le milieu et dans le haut, de manière à minimiser la variabilité à l'intérieur des meules. Les noyaux 2 0 d'échantillonnage furent placés dans des sachets stériles d'empaquetage par tourbillons, mis en commun par traitement et conservés sur glace pendant leur transport au laboratoire. L'échantillonnage des boîtes en polystyrène constituant le modèle de botte fut effectué en prélevant un échantillon au centre de chaque boîte. Les temps d'échantillonnage furent approximativement 0, 2, 7, 14, 21, 30 et 60 jours. Le montant de micro-organismes obtenu pour le Bacillus pumilus tel qu'il fut appliqué aux échantillons de foin par vaporisation fut de 106/gm de foin. Cela correspond à un montant 3 0 d'organismes de 109/tonne de foin. Les organismes furent constitués d'un mélange à parts égales des souches numéros 288, 289, 290, 296, 299, 302, 305 et 307 de Bacillus pumilus. Les traitements en Bacillus pumilus furent préparés en cultivant les huit souches individuellement dans du bouillon de soja trypsique pendant 24 3 5 heures à 37 C. Les cellules furent prélevées par centrifugation à 4 C et les grains de cellules furent rétablis en suspension dans une solution tampon de phosphate 0,04 M. Les cellules furent transportées sur le champ dans de la glace pour une application immédiate,ou congelées à -70 C pour une utilisation ultérieure. Avant leur application sur le foin, les cellules sont dispersées dans 18,9 litres (5 gallons) d'eau et appliquées [à raison de 18,9 litres (5 gallons) par tonne] au moyen d'un vaporisateur fixé à la machine à mettre en botte. La colonie unités formantes/traitement fut déterminée au moment de l'application. Les analyses des échantillons portèrent sur les contenus en extrait sec, ADF, ADF-N, NDF et N. La température fut relevée toutes les heures à l'aide de thermisteurs précis à +0,2 C. Les données furent analysées en utilisant les covariables extrait sec (DM) et température du jour 0. Le foin fut l'objet d'une observation visuelle pendant toute la période des essais et à la fin de la période de conservation afin de mettre en évi- dence la microflore de moisi de moisissure blanche. le foin fut soumis à une évaluation concernant moisi et moisissure blanche sur une échelle allant de un à 10, 10 étant la qualité la plus pauvre. Les différences de couleur furent déterminées à la fin de la période de conservation, en utilisant des échan- tillons de peinturepour réaliser la comparaison. Les couleurs s'échelonnèrent de 1 vert à 23 brun. Dans le système modèle plus petit, les différences de température entre les expériences constituent les résultats les plus instructifs étant donné que les thermisteurs sont précis à +0,2 C et que les mesures furent relevées toutes les heures. Cela résulta en environ 500 points de données/traitement/ expérience. Le traitement qui fut de manière significative le plus frais dans l'ensemble parmi les modèles expérimentaux fut le Bacillus (Tableaux 1 et 2). Ce traitement a tendance à avoir des populations plus faibles de fermenta- tion et de moisissure. Le traitement Bacillus présente également des valeurs nutritionnelles considérablement plus élevées (ADF plus faible). NDF, ADF-N, WSC, N et les déterminations de protéines disponibles ont également tendance à démontrer des valeurs nutritionnelles plus élevées, bien que ces différences ne soient pas significatives. Les traitements Bacillus donnent également des résultats visuels considérablement meilleurs, indiquant moins de moisissure isible. Les résultats de couleur sont en moins bon accord, et ne présntent pas de différences entre les traitements dans ces petites bottes modèles. Tableau 1 EFFET DU TRAITEMENT SELECTIONNE SUR LA TEMPERATURE MOYENNE OUANTITE MICROBIOLOGIOUE DE MICROBES ET OUALITE VISUELLE DU FON DANS LES BOTTES DU MODELE EXPERIMENTAL Traitement Reps Temp Aerobies - YM1 Couleur Moisissure2 Bacillus 3 36,57* 8,10 2,72 10,5 4,5* Témoin 5 37,28 8,36 3,30 9,25 7,5 1 Les valeurs de YM (fermentation-moisissure) correspondent à la fin de l'expérience 2 Moisissure; la quantité de moisi observée visuellement dans les bottes sur une échelle de 1 (pas de moisi) à 10 (très moisi) * Les moyens de traitement suivis d'une astérisque présentent une différence significative avec le témoin P Tableau 2 EFFET DES TRAITEMENTS SELECTIONNES SUR LA COMPOSITION CHIMIOUE FINALE DU FOIN DANS LES BOTTES DU MODELE EXPERIMENTAL Hemi- Traitement Reps N NDF ADF ADF-N Cellulose AP1 Bacillus 3 3,01 55,11 39,60* 0,25 15,51* 17,25 Témoin 5 2,80 57,30 43,58 0,32 13,72 15,50 1 Protéine disponible (N%) (%ADF-N) (6,25) = AP * Les traitements suivis d'une astérisque présentent une différence 3 0 significative (P 1 5 traitées. Le traitement du foin à l'aide des souches du Bacillus pumilus permet d'obtenir des bottes plus fraîches, moins moisies et plus vertes que les bottes témoins non inoculées. Le traitement à l'aide du Bacillus pumiluspermet également d'obtenir des bottes qui 2 O fournissent des rations plus élevées de protéines disponibles, de matières digestibles totales et d'énergie quotidienne. Tableau 3 EFFET DES TRAITEMENTS SELECTIONNES SUR LA TEMPERATURE MOYENNE. 2 5 LA OUALITE MICROBIOLOGIOUE (LOGIO) ET VISUELLE DU FOIN DANS DES MEULES DE PETITES BOTTES CUBTOUES EXPERIENCE N 590 BOTTES (2EME TRANCHE) Total 3 O Traitement Temp C Aerobies YM1 Couleur Blanc Moisissure Bacillus 19,92* 8,82 3,33 6,5 0,0 0,0* Témoin 24,92 9,00 3,00 10,5 3,5 2, 5 I Les valeurs de YM (fermentation-moisissure) correspondent à la fin de l'expérience * Les moyens de traitement suivis d'une astérisque présentent une différence significative (P Tableau 4 EFFET DES TRAITEMENTS SUR LA COMPOSITION CHIMIQUE FINALE DU FOIN DANS LES BOTTES DU MODELE EXPERIMENTAL EXPERIENCE N 590 BOTTES Hemi- Traitement N NDF ADF ADF-N Cellulose AP Bacillus 3,42* 52,70 38,32 0,221 14,38 19,99* Témoin 3,23 56,30 40,49 0,246 15,81 18,65 N initial = 3,61 NDF initial = 51,42 ADF initial = 38,66 Hemicellulose = 12,76 ADF-N = 0,276 AP = protéine disponible = 20,83 DM = 70,15 * Les traitements suivis d'une astérisque présentent une différence significative (P nutritionnelle du foin. On peut par conséquent considérer que l'invention atteint au moins tous les objectifs fixés. REVENDICATIONS 1. Méthode de conservation de la qualité du foin, caractérisée en ce qu'elle comprend: un traitement du foin frais à l'aide d'une quan- tité faible, mais suffisante pour assurer la conversation de la qualité du foin, du micro-organisme Bacillus pumilus. -2. Méthode selon la revendication 1, caracté- risée en ce que le micro-organisme est le Bacillus pumilus ou des mutants ou des équivalents adéquats de celui-ci. 3. Méthode selon la revendication 2, caracté- risée en ce que ledit traitement s'effectue par vaporisa- tion. 4. Méthode selon la revendication 3, caracté- risée en ce que la quantité d'organismes viables par tonne de foin traité se situe dans le domaine allant d'environ 105 à environ 1015 organismes par tonne de foin. 5. Méthode de conservation de la qualité du foin, caractérisée en ce qu'elle consiste à: ajouter à du foin frais dans des conditions qui favorisent la colonisation d'organismes, du Bacillus pumilus, ou des mutants ou des équivalents de celui-ci; et à permettre à ces dits organismes de coloniser de manière significative et, par conséquent, de prévenir la croissance de la colonie d'organismes de moisissure se développant naturellement, dont la colonisation est par suite empêchée. 6. Méthode selon la revendication 5, caracté- risée en ce que lesdits organismes sont ajoutés en vapo- risant un liquide qui les contient sur ledit foin. 7. Méthode selon la revendication 6, caracté- risée en ce que lesdits organismes sont ajoutés de manière à fournir une quantité d'organismes viables allant d'environ 105 à environ 10 15 organismes viables par tonne de foin. 8. Méthode selon l'une des revendications 4 et 7, caractérisée en ce que la quantité d'organismes varie de à 1013 par tonne de foin. 9. Méthode selon la revendication 8, caracté- risée en ce que la quantité d'organismes varie d'environ 108 à environ 10 par tonne de foin. 10. Méthode selon l'une des revendications 2 et 5, caractérisée en ce que le Bacillus pumilus est sélectionné à partir du groupe constitué des Bacillus pumilus souches n 288, 289, 290, 296, 299, 302, 305 et 307. 11. Méthode selon l'une des revendications 1 et , caractérisée en ce que le mélange de traitement com- prend d'autres organismes de conservation des produits fermiers. 12. Méthode selon la revendication 11, carac- térisée en ce que lesdits autres organismes sont sélec- tionnés à partir du groupe des Lactobacillus, Strepto- coccus, Pediococcus et enzymes dérivés de champignons ou de bactéries. 13. Mélange utilisable comme produit de conser- vation du foin, caractérisé en ce qu'il comprend une cul- ture du Bacillus pumilus ou de mutants adéquats de celui- ci,dispersée dans une substance porteuse de suspension. 14. Mélange selon la revendication 13, dans lequel le mélange contient environ de 102 à environ 1012, 4 10 de préférence environ de 104 à environ 10, et notamment environ de 105 à environ 107 organismes viables par gramme. 15. Mélange selon la revendication 13, carac- térisée en ce que la substance porteuse de suspension est un liquide. 16. Mélange selon la revendication 13, carac- térisé en ce que la substance porteuse de suspension est un solide. 17. Mélange selon la revendication 13, carac- térisée en ce que la substance porteuse solide est soluble dans l'eau et sélectionnée à partir du groupe constitué du carbonate de calcium, de l'amidon et de la cellulose. 18. Méthode permettant l'inhibition des orga- nismes responsables de la moisissure du foin, caracté- risée en ce qu'elle comprend: un traitement du foin frais à l'aide d'une quan- tité adéquate pour la conservation du foin du Bacillus pumilus ou d'autres organismes prochement apparentés; ledit traitement s'effectuant dans des condi- tions qui favorisent la croissance des organismes dudit Bacillus pumilus ou des autres organismes prochement appa- rentés, et par conséquent inhibent la croissance des or- ganismes de moisissure qui se développent naturellement.