Brevet FR2608924A1 — publié le 19880701

La présente invention concerne une composition thérapeutique contenant à titre de principe actif un dérive de prostaglandine ou d'un analogue de prostaglandine, ayant notamment une activité antitumorale. On a déjà décrit des prostaglandines ayant une activité antitumorale. Ainsi Masanori Fukushima et Taketoshi Ratio ont décrit l'activité antitumorale de prostaglandines et notamment de PGA1,a7PGA1, 12 epi A7PGA1, PGJ2, h12PGJ2 etc12, 14PGJ2 (Icosanoids and Cancer, H. Thaler-Dao et al, Raven Press N.Y.; Cancer Research 46, 35-38, 19861 ainsi que de clavulones et de punaglandines (Advance in Prostaglandin, Thromboxane and Leukotriene Research Vol. 15 O. Hayarshi et S. Yamomoto Raven Press New York). Ces auteurs ont considéré que l'activité antitumorale était liée à l'insaturationa 3, ss dans le noyau cyclopentènone de ces composés. On a maintenant trouvé que des produits d'addition de thiols sur des prostaglandines ou des analogues de prostaglandines ayant un noyau cyclopen tène ont une activité antitumorale. La présente invention a en conséquence pour objet des compositions thérapeutiques caractérisées en ce qu'elles contiennent à titre de principe actif un composé choisi parmi les composés de formule dans lesquelles Z1 et Z2 sont deux chaines appartenant aux channes des prostaglandines ou des analogues de prostaglandines, R est un groupe hydrocarboné éventuellement substitué par un ou plusieurs groupes NH2, ou un groupe de formule dans laquelle n = 1 ou 2 est un atome d'hydrogène, un résidu d'acide aminé ou un résidu dérivant d'un enchaînement d'acides aminés, W2 est un groupe hydroxy, un résidu d'acide aminé ou un résidu dérivant d'un enchaînement d'acide aminé, R1 est un atome d'hydrogène, un groupe hydrocarboné ou un atome halogène, R2 est un atome d'hydrogène, un groupe hydroxy ou un groupe acyloxy. La chaine Z1 peut être notamment une chaîne de formule correspondant à la chaîne Z1 de PGA1 ou PGJ1 correspondant à la chaîne Z1 de PGA2 ou PGJ2 La chai ne Z2 peut être notamment une chai ne de formule correspondant à la chaîne Z de PGA ou de PGJ ainsi que les chaînes cétoniques correspondantes. Il peut s'agir également de chaînes qui correspondent au raccoursissement de ces chaînes, ou de chaînes obtenues par des réactions de réduction ou d'oxydation. Comme exemples de telles chaînes on peut citer pour Z2 les chalnes de formule Les chaînes Z1 et Z2 comprennent également celles présentées dans les clavulones et les punaglandines (voir article dans Advance in Prostaglandins déjà cité). Certains composés de formule I et II sont connus. C'est ainsi que E.A. Ham et coll. (Prostaglandins 10, 217, 1975) ont mentionné le produit d'addition de la cysteine et du glutathion sur PGA1. Cajen et coll. (J. Biol. Chem. 251, 6550, 1976) ont en outre décrit le produit de réduction du produit d'addition du glutathion avec PGA1. Les composés de formules I et III peuvent être obtenus à partir des cyclopentènones correspondantes de formule par une réaction avec des thiols de formule RSH VII La réaction peut etre effectuée en milieu aqueux au voisinage de la neutralité (par exemple tampon Tris, HC1, PH 7.4). Comme exemple de thiols utilisables on peut citer notamment la cysteine de formule la cysteinylglycine de formule le glutathion de formule la cysteamine de formule HS-CH2-CH2-NH2 Les composés de formule II et IV peuvent etre obtenus par réduction respectivement des composés de formule I et III, notamment par le borohydrure de sodium. En variante, un certain nombre de composés de formule II peuvent être obtenus invitro. C'est ainsi que les composés 9-hydroxy-11-cysteinyl-PGA, et 9-hydroxy-1 1-cysteinylglycyl-PGA1 peuvent être obtenus par incubation de la prostaglandine PGA1 avec des cellules tumorales de rat, notamment des neuroblastomes B 104 et des gliomes C6-, et séparation des métabolites. Les exemples suivants illustrent la préparation des composés utilisés dans la présente invention. ExemPle 1 Obtention in vitro de produits d'addition de cystéine etde cystéinylglycine sur la 9-hydroxy-PGA1. a) On ensemence 2.104 cellules de neuroblastomes B104 et on les fait incuber pendant 24 h dans un milieu complet (2ml) constitué par un mélange 1/1 milieu de Eagle modifié par Dulbecco (DMEM) et tamponné par du bicarbonate/milieu F12 de Ham complété par du sérum de foetus de veau inactivé par la chaleur (FCS, 2,55) et du sérum de cheval (HS, 50), 15 mM de Hepes, 100 U/ml de pénicilline, 50 micro g/ml de streptomycine et 0,25 micro g/ml de fungizone.Puis on effectue une culture à 37 C dans un incubateur humidifié à 5% de C02 sur un milieu comprenant les mêmes ingrédients que le milieu complet précédent, à l'exception du sérum qui est remplacé par 5 pg/ml d'insuline, 100 gug/ml de transférine, 20 nM de progestérone, 100 luM de putrescine et 30 nM de séleniure de sodium. On ajoute un mélange de prostaglandine PGA1 à la dose de 10 6M et de (3H)PGA1 utilisé comme traceur et on laisse incuber. On élimine les cellules par centrifugation et on dépose le surnageant sur une cartouche Sep Pak C18 (Water) préalablement lavée avec 2 ml de méthanol et 10 ml d'eau. On lave l'échantillon avec 10 ml d'eau puis on élue avec 6 ml de méthanol. On amène à sec les fractions méthanoliques et on les redissout dans un tampon phosphate 10 2M pH 7,4 et on introduit sur une colonne de Sephadex G10 (1,8 x 25 cm). On élue avec le même tampon. On effectue une élimination de sel sur cartouche Sep Pak C18, puis on réalise une chromatogra phie liquide haute performance à phase inversée (rp HPLC) sur une colonne de Nucleosil C18. On élue à un débit de 1 ml/mn avec un mélange de deux solvants : A (eau contenant 0,28 d'acide acétique) et B (méthanol) comme suit : un gradient linéaire pendant 10 mn de 47 à 57% de B; 57% de B pendant 40 mn; gradient linéaire pendant 20 mn de 57 à 80% de B. On analyse les fractions recueillies par comptage par scintigraphie. Les résultats sont reportés sur la Fig. 1 qui fait apparaître 4 pics de radioactivité correspondant à 4 métabolites de PGA1. A titre de contrôle PGA1 ajouté au même milieu pendant 3 jours à 37*C, en l'absence de cellules a été purifié par la même méthode chromatographique. On observe seulement un pic de rétention à 71 minutes. b) On opère comme en a) mais en utilisant des cellules gliomes C6 et en utilisant le milieu de culture suivant : DMEM complété avec 10% de FCS, 100 U/ml de pénicilline et 50 micro g/ml de streptomycine. Les résultats sont reportés sur la Fig. 2 qui met en évidence également 4 pics. c) Détermination des produits obtenus par spectrométrie de masse (Technique FAB). Les métabolites obtenus selon a) et b) sont les mêmes Métabolites I et II masse moléculaire 516 composition élémentaire C25H44 N207S Deux isomères correspondant au produit d'"addition" de la cysteinyl glycine sur la 9-hydroxy PGA1, par abbréviation 9-OH-PGA1-Cys-Gly, de formule Métabolites III et IV masse moléculaire 459 composition élémentaire C23 H41 NO6S Ces métabolites correspondent à deux isomères du produit d'"addition" de la cystéine sur la 9-hydrox-y-PGA1, par abçréviation 9-OH-PGA1-Cys de formule Exemple 2 On fait réagir 1 mmole de PGA1 et 1 mmole de cystéine dans du tampon 0,2 M Tris HCl pH 7,4 pendant une heure à 37-C. On obtient un produit d'addition PGA1-Cys. Exemple 3 On opère comme à l'exemple 2 en utilisant comme thiol la cystéinylglycine. On obtient un produit d'addition PGA1-Cys Gly de formule Exemple 4 On opère comme à l'exemple 2 en utilisant comme thiol le glutathion (par ab.réviation GSH). On obtient un produit d'addition PGA1-SG. Exemple 5 On ajoute à la solution obtenue à l'exemple 2 du borohydrure de sodium. Puis on ajuste le pH à 3,5 avec de l'acide formique. On extrait à l'acétate d'éthyle. On effectue un passage sur une cartouche Sep Pack C18 puis une chromatographie en phase liquide sur colonne Nucleosil C18 comme à l'exemple 1. On sépare ainsi deux isomères de 9-OH-PGA1 - Cys. ExemDlç 6 On opère comme à l'exemple 5 avec la solution de l'exemple 3. On sépare finalement deux isomères 9-OH PGA1 -CYS-Gly. Le's essais suivants mettent en évidence l'activité antitumorale des composés. On a mesuré l'inhibition de la prolifération de neuroblastomes B104 dans le même milieu qu'à l'exemple la avec une concentration initiale de 2.104 cellules/ml après addition du produit à tester. On a réalisé une incubation pendant 24 h et on a mesuré le nombre de cellules au bout de 24 h à l'aide d'un comp teur Coulter. On a calculé le pourcentage d'inhibition par rapport à une culture témoin. Les résultats figurent dans le tableau ci-après TABLEAU I Concentration Produit 10-6M 10-7 Métabolite I 28 t 3 26 t 2 Métabolite II 49 t 1 41 + 3 Métabolite III 19 + 9 17 + 3 Métabolite IV 13 + 10 10 + 4 PGA1-GSH 23 - 11 13 - 10 PGA1-Cys 51 + 10 43+ 8 PGA1-Cys-Gly 46 t 10 18 # 19 9-OH-PGA1-Cys (isomère 1) 24 # 8 9-OH-PGA1-Cys (isomère 2) 34 # 8 26 - 1 9-OH-PGA1-Cys-Gly (isomère 1) 54 # 23 26 # 23 9-OH-PGA1-Cys-Gly (isomère 2) 49 t 6 30 # 12 Les compositions thérapeutiques selon l'invention peuvent être administrées à l'homme par voie orale ou parentérale. Compte tenu de la solubilité élevée dans l'eau des composés utilisés, on peut généralement les administrer sous forme de solutions aqueuses. La quantité de principe utilisée dépend généralement du patient et de la sévérité de la maladie. Chez l'homme de 70 kg on peut généralement administrer de 50 à 500 mg/jour par voie parentérale. Les compositions peuvent en outre contenir plusieurs principes actifs de formule I à IV ainsi que d'autres composés à activité antitumorale. REVENDICATIONS 1. Composition thérapeutique caractérisée en ce qu'elle contient à titre de principe actif un composé choisi parmi les composés de formule dans lesquelles Z1 et Z2 sont deux chaînes appartenant aux chaînes des prostaglandines ou des analogues de prostaglandines. R est un groupe hydrocarboné éventuellement substitué par un ou plusieurs groupes NH2, ou un groupe de formule dans laquelle n = 1 ou 2 W1 est un atome d'hydrogène, un résidu d'acide aminé ou un résidu dérivant a d'un enchaînement d'acides ami- nés, W2 est un groupe hydroxy, un résidu d'acide aminé ou un résidu dérivant d'un enchaînement d'acide aminé, R1 est un atome d'hydrogène, un groupe hydrocarboné ou un atome halogène, R2 est un atome d'hydrogène, un groupe hydroxy ou un groupe acyloxy. 2. Composition selon la revendication 1, caractérisée en ce qu'elle contient une 9-OH-PGA1-Cys de formule 3. Composition selon la revendication 1, caractérisée en ce qu'elle contient une 9-OH-PGA1 - Cys-Gly de formule 4. Composition selon la revendication 1, caractérisée en ce qu'elle contient une PGA1-Cys. 5. Composition selon la revendication 1, caractérisée en ce qu'elle contient une PGA1-Cys-Gly. 6. 9-OH-PGA1-Cys de formule 7. 9-OH-PGA1-Cys-Gly de formule 8. Procédé de préparation de 9-OH-PGA1-Cys et de 9-OH-PGA1-Cys-Gly, caractérisé en ce que l'on fait incuber la prostaglandine PGA1 avec des cellules tumorales de rat et l'on sépare les métabolites. 9. Procédé selon la revendication 8, caractérisé en ce que les cellules tumorales de rat sont des neuroblastomes B104 ou des gliomes C6. 10. Une PGA1-Cys-Gly de formule