Brevet FR2604182A1 — publié le 19880325

Procédé de traitement de cellules en utilisant des particules congelées d'une suspension contenant des cellules. La présente invention est relative à un procédé de traitement de cellules pour en faciliter l'extraction de substances utiles. Plus particulièrement, elle vise un procédé de traitement de cellules qui consiste à pro- jeter des particules congelées d'une suspension contenant des cellules, de manière à les faire entrer en colli- sion et à donner ainsi de l'énergie due au choc aux sur- faces des cellules. Il est connu que l'on peut extraire efficacement des substances d'une cellule d'un microorganisme/telles que des levures ou des bactéries, en congelant et en broyant la cellule. C'est ainsi, par exemple, que la demande de bre- vet non examinée, publiée au Japon sous le No 29983/78, décrit un procédé qui consiste à congeler des cellules telles que des levures en les mettant en contact avec un gaz liquéfié pour former des particules ayant un dia- mètre de 1 à 5 mm, puis à broyer les cellules congelées obtenues par un broyeur tel qu'un extracteur à vis, à une température très basse, dans une atmosphère gazeuse à basse température. Mais ce procédé ne peut pas rompre ou endommager, d'une manière efficace, les cellules, puisqu'il congèle des entités liquides au sein des cellules et qu'il faut que les particules atteignent un diamètre de 1 à 5 mm pour être réduites en poudre par le broyeur mentionné ci-dessus. La demande de brevet japonais No 869-83 décrit un procédé qui consiste à congeler une suspension qui contient un microorganisme en une certaine concentra- tion pour former des particules ayant un diamètre de à 10 mm environ, ou un volume de 1 cm3, puis à réduire en poudre les particules congelées obtenues telles qu'elles sont. Mais, comme ce procédé utilise des parti- cules congelées relativement grandes, comme décrit ci- dessus,les broyeurs que l'on peut utiliser sont limités, par exemple à des broyeurs à marteau, à des broyeurs à boulets, etc. En outre, il est difficile de se rendre maître du broyage qui convient pour extraire des subs- tances pures de cellules, quand on utilise ces broyeurs. Comme la chaleur entraînée pendant leur fonctionnement modifie les propriétés des substances à extraire, il peut se produire une pollution de fragments de boulets et ces broyeurs broient souvent si excessivement les cellules qu'il peut se produire une pollution des frag- ments pulvérisés de membranes de cellules et/ou de constituants de cellules au sein de la cellule. L'invention vise un procédé de traitement de cellules,dont le fonctionnement est facile à maîtriser et qui rompt et endommage, d'une manière continue, les cellules de façon à faciliter l'extraction de substan- ces utiles en une grande pureté, sans modification des propriétés de ces substances utiles par la chaleur, ainsi que sans pollution de membranes de cellules ou de constituants de cellules broyés. On peut pallier les inconvénients des procédés classiques mentionnés ci-dessus en projetant des parti- cules congelées d'une suspensioncontenant des cellules de manière à obtenir une collision et à donner une énergie due au choc à la cellule. L'invention vise donc un procédé de traitement des cellules de manière à faciliter l'extraction de substances utiles de leur sein, caractérisé en ce qu'il consiste à projeter des particules congelées contenant des cellules de manière à faire entrer les particules en collision et à leur donner une énergie due au choc de façon à endommager la surface des cellules. Suivant un autre de ses aspects, l'invention vise un procédé pour traiter des cellules de manière à faciliter l'extraction de substances utiles de leur sein, caractérisé en ce qu'il consiste à produire des gouttelettes microfines de liquideayant un diamètre de 500 microns ou inférieur à cette valeur, d'une suspen- sion contenant des cellules, à mettre les gouttelettes microfines de liquide en contact avec un agent réfrigé- rant pour produire des particules congelées ayant un diamètre de sensiblement 500 microns ou inférieur à cette valeur, puis à projeter les particules congelées de manière à les faire entrer en collision et à leur donner une énergie due au choc, afin d'endommager la surface des cellules. Il n'y a pas de limitation aux cellules qui peu- vent être traitées par le procédé suivant l'invention. Des exemples de ces cellules sont celles delevures, d'actinomycetes, de champignons, de bactéries, de pro- tozoaires, de protistes, d'algues, de cellules végéta- les et animales ou de leurs lignées cellulaires. Suivant l'invention, on peut rompre ou endomma- ger des surfaces de cellules telles que des parois de cellules et des membranes de cellules, de manière à extraire efficacement des substances utiles, telles que des protéines, englobant des peptides et des enzymes, des alcaloides, des stéroides, des saponines, des anti- biotiques, des carcinostatiques, des acides gras supérieurs insaturés, des vitamines, des édulcorants naturels et d'autres constituants bruts servant de médicaments. On peut également endommager des surfaces de cellules d'algues, telles que chlorella, spirillina, etc., de manière à les digérer efficacement. Il n'y a pas de limitation à la taille et à la forme des particules congelées contenant des cellules pouvant être traitées par le procédé suivant l'invention, pour autant qu'on peut les projeter d'une buse. Mais, de préférence, les particules congelées contenant des cellules ont sensiblement un diamètre de 500 microns ou inférieur à cette valeur, puisqu'il faut une grande énergie de projection pour faire sortir des particules ayant un diamètre de plus de 500 microns. De préférence les particules congelées contenant des cellules sont sèches, ont un diamètre de particule de 500 microns ou inférieur à cette valeur et ont une température propre de -15 C ou inférieure à cette valeur, de preférence de -50 C ou inférieure à cette valeur, et sont congelées par l'un des deux procédés suivants, ou par une combi- naison de ces deux procédés: un premier procédé de contact liquideliquide et un second procédé de contact gaz-liquide. Dans le premier procédé, des gouttelettes microfines de liquide d'une suspension contenant des cellules ayant un diamètre de 500 microns ou un diamè- tre inférieur à cette valeur, tombent goutte à goutte dans un réfrigérant liquide constitué d'un gaz liquéfié à la surface duquel on engendre, de préférence, des rides. Dans le second procédé, des gouttelettes micro- fines de liquide d'une suspension contenant des cellu- les ayant un diamètre de 500 microns ou un diamètre infé- rieur à cette valeur, tombent goutte à goutte dans une région gazeuse de refroidissement dans laquelle monte un gaz à basse température évaporé à partir d'un réfri- gérant en gaz liquéfié. Dans la présente invention, la distance entre la position o les gouttelettes microfines congelées de liquide contenant des cellules sont projetées et la position o une énergie due à un choc leur est donnée, et qui est désignée ci-après par point d'impact, dépend de la vitesse et de la quantité des particules à proje- ter. Mais la distance ci-dessus, que l'on désigne par distance de projection, est de préférence de 10 à 100 mm, puisqu'une distance plus longue fait que la surface du point d'impact augmente avec augmentation corrélative de la perte de l'énergie due au choc. La particule congelée contenant des cellules, utilisée dans la présente invention, contient de préfé- rence de 0,005 à 0,5 g de cellule par ml. Si la parti- cule contient une quantité excessivement grande de cel- lules, non seulement le milieu dans lequel les cellules sont en suspension, mais également les espèces liquides à l'intérieur des cellules sont congelées et les cellu- les sont endommagées d'une manière si excessive qu'il peut se produire une pollution des fragments de membra- nes de cellules et/ou de constituants de cellules au sein de la cellule, et que le rendement en substances utiles à extraire du sein des cellules diminue. Si la particule contient une quantité excessivement petite de cellules, les membranes des cellules ne sont pas rompues ni endanmagees suffisamment pour extraire les substances utiles du sein des cellules. Il n'y a pas limitation au milieu dans lequel les cellules sont mises en suspension, pour autant qu'il n'influe pas sur les propriétés des cellules ou des substances utiles à extraire. En général, on peut utili- ser commodément et d'une manière satisfaisante, comme milieu, des milieux aqueux, tels que l'eau, une solution de sérum physiologique, une solution-tampon, une solu- tion isoosmolaire, une solution saline, etc. On peut également utiliser des milieux aqueux contenant des sol- vants organiques qui contiennent, avec les milieux aqueux mentionnés cidessus, des solvants organiques hydrophiles, tels que des alcanols inférieurs, comme le méthanol, l'éthanol et le propanol, et des alcoylcéto- nes inférieures, comme l'acétone, la méthyléthylcétone et la diéthylcétone. On peut, en outre, utiliser comme milieu des solvants organiques tels que le chlorure d'éthylène (pf. -35,3 C, eb. 83,7 C), le chlorure de butyl tertiaire (pf. -28,5 C, eb. 51,0 C), le chlorure de méthylène (pf. -96 C, eb. 41,6 C), le chloral (pf. -57,5 C, eb. 98 C), le chloroforme (pf. -63,5 C, eb. 61,2 C) et le tétrachlorure de carbone (pf.-22,6 C, eb. 76,7 C), et leurs mélanges. On peut mélanger les solvants organiques mentionnés ci-dessus à des esters inférieurs d'acides gras, tels que l'acétate de méthyle, le propionate de méthyle, etc. et/ou à des solvants hydrocarbonés, tels que le cyclohexane, le cyclopentane, le pentane, l'heptane, le benzene, etc. I1 n'y a pas de limitation au réfrigérant utili- sé pour congeler le milieu, pourvu qu'il ait un point d'ébullition de 15 C ou inférieur à cette valeur et, de préférence, de -50 C ou inférieur à cette valeur quand on l'utilise en milieu aqueux. Quand on utilise un milieu aqueux contenant un solvant organique, ou quand on utilise un solvant organique, le réfrigérant doit être facile à évaporer et avoir un point d'ébulli- tion inférieur au point de fusion du milieu ou du sol- vant. En général, on préfère les réfrigérants tels que l'azote liquide, l'hélium liquide, l'argon liquide, l'air liquide, etc., qui ont une température de -150 C ou inférieure à cette valeur et, mieux encore, du point de vue pratique, de -150 C à -200 C. Quand on utilise un milieu aqueux, on peut utiliser comme réfrigérant du dioxyde de carbone liquéfié ou un gaz liquéfié tel que le méthane, l'éthane, le propane, etc. On peut utiliser le réfrigérant sous la forme d'un liquide, dans lequel les gouttelettes microfines de liquide de la suspension contenant des cellules sont versées directement goutte à goutte et ainsi congelées par un contact liquide-liquide, oui-sous la forme d'un gaz qui constitue une région gazeuse de refroidissement, dans laquelle des gouttelettes. microfines de liquide de la suspension contenant des cellules sont versées gout- te à goutte et sont ainsi congelées par un contact gaz- liquide. Dans les deux cas, on maintient le réfrigérant à une température inférieure au point de fusion du mi- lieu utilisé. Si la température du réfrigérant est supé- rieure à -15 C, les particules congelées de la suspen- sion contenant des cellules fondront à leur surface et ainsi s'aggloméreront les unes aux autres. C'est pour- quoi le réfrigérant doit avoir une température de -15 C, ou inférieur à cette valeur et, de préférence, de -50 C ou inférieure à cette valeur. Si la températu- re est de -15 C ou est inférieure à -15 C, on obtient des particules congelées qui s'écoulent facilement. Si la température est de -50 C ou est inférieure à cette valeur, on peut congeler instantanément des gouttelet- tes microfines de liquide de la suspension contenant des cellules. Pour préparer des particules congelées ayant un diamètre préféré de 500 microns ou inférieur à cette valeur, en faisant tomber goutte à goutte des gouttelettes microfines de liquide de la suspension contenant des cellules dans un réfrigérant liquide, on préfère engendrer des rides ayant une hauteur de 5 à mm à la surface du réfrigérant. La figure 1 est un schéma d'écoulement d'une installation qui convient pour effectuer un procédé suivant l'invention; la figure 2 est un schéma d'écoulement de l'uni- té de fabrication des particules congelées de la figure 1; les figures 3 et 4 sont des vues coupées,respec- tivement en plan et en élévation, illustrant l'agencement du conduit de barbotage 3a utilisé comme moyen pour en- gendrer des rides à la figure 2; les figures 5(A), 5(B), 5(C) et 5(D) sont des vues en coupe et en élévation d'autres exemples de moyens pour engendrer des rides, qui peuvent être utili- sés à la place du conduit de barbotage 3a de la figure 3; la figure 6 est un schéma illustrant la fonction des bulles engendrées par le conduit de barbotage 3a de la figure 3; la figure 7 est une vue en coupe et en éléva- tion d'un exemple de moyensde projection de la figure 2; la figure 8 est une vue en coupe et en élévation d'un autre exemple de moyen d'alimentation 6, qui peut être utilisé pour l'unité de la figure 2; la figure 9 est un schéma qui représente un mode de réalisation approprié pour la mise en oeuvre de la présente invention, en utilisant deux moyens de projection ou plusieurs moyens de projection; les figures 10(A) et 10(B) sont des vues, res- pectivement en perspective et en élévation, schématiques, de moyens destines à récupérer des particules détruites; la figure 11 est une vue en coupe en élévation d'un autre appareil, apte à permettre la mise en oeuvre d'un procédé suivant l'invention; la figure 12 est une vue en coupe et en élévaticn d'une variante de l'appareil de la figure 11; la figure 13 est une vue en coupe, à plus gran- de échelle, de l'appareil de la figure 12; les figures 14 à 17 sont des vues en coupe et en élévation de variantes de l'appareil de la figure 11, et la figure 18 est un graphique illustrant les variations de la vitesse de génération de réfrigérant évaporé dans la région gazeuse de refroidissement de l'appareil des figures 11 à 17, en fonction de la ré- partition des températures. En se référant maintenant aux figures 1 à 10, on va décrire une installation qui convient pour effectuer la présente invention. La figure 1 représente schématiquement une ins- tallation qui convient pour la mise en oeuvre du procé- dé suivant l'invention en congelant des gouttelettes microfines pulvérisées d'une suspension contenant des cellules, en les faisant tomber goutte à goutte dans un réfrigérant liquide. A la figure 1, le numéro de référence 50 indi- que, d'une manière générale, une unité pour faire des particules congelées dans laquelle des particules con- gelées, ayant de préférence un diamètre de 500 microns ou inférieur à cette valeur, sont fabriquées à partir d'une suspension contenant des cellules. On décrit l'unité 50 en détail ci-dessous. Les particules conge- lées, fabriquées par l'unité 50, sont soutirées par le fond de l'unité 50 et sont envoyées, par un conduit ayant un élévateur 60, sur un transporteur 70 à courroie. Le transporteur 70 à courroie les apporte à une trémie sur sa courroie à tamis formant crible. De l'air est aspiré dans l'espace défini à l'intérieur de la cour- roie par une pompe d'aspiration, qui n'est pas repré- sentée. Un conduit 81 communique avec le fond de la trémie 81,de l'azote gazeux ou de l'air à basse tempé- rature pouvant être envoyé à la trémie par ce conduit de manière à fluidiser les particules congelées qui s'y trouvent. Les particules congelées dans la trémie sont envoyées, par un conduit 82, à l'entrée latéra- le d'un dispositif de projection 91 qui est monté sur la boite de récupération 90. De l'air ou de l'azote gazeux à basse température, que l'on appelle ci-après gaz d'entraînement, est envoyé à l'entrée centrale du dispositif de projection 91, par un conduit 93, afin d'accélérer et de projeter les particules congelées jusqu'à un point d'impact. Dans la boîte 90, le point d'impact est formé par la surface d'un obstacle tel qu'un plateau 92 dur. Bien que la distance entre le dispositif de projection 91 et le point d'impact 92 puisse être déterminée en fonction de la forme et de la taille des particules congelées, elle est en géné- ral de 10 à 100 mm. Les particules congelées sont pro- jetées par le dispositif de projection 91 en conser- vant leur propre température, qui est inférieure à leur point de fusion. Ensuite, les particules proje- tées entrent en collision avec le plateau 92 dur sur lequel elles s'écrasent. Le plateau 92 dur décrit ci-dessus est seule- ment un exemple des obstacles qui donnent un point d'impact aux particules congelées qui sont projetées. Les obstacles peuvent avoir une surface incurvée au lieu de la surface plane du plateau 92 dur. Bien que les matériaux,en lesquels ces obstacles tels que le plateau 92 dur sont constitués, puissent être choisis en fonction de la dureté et de la vitesse des particu- les congelées qui sont projetées, ce sont de préférence des métaux et des céramiques. En variante, on peut former le point d'impact en projetant des particules congelées de deux ou de plusieurs dispositifs de projection 91, de manière que les particules congelées viennent en collision les unes avec les autres, comme représenté à la figure 9. Dans ce cas, bien qu'il n'y ait pas de limitation à l'angle a comprise entre chaque dispositif de projec- tion, cet angle est de préférence compris entre 60 et environ quand les distances D1 et D2 entre les dis- positifs de projection et le point d'impact sont de 10 à 100 mm. En outre, on peut prévoir deux points d'im- pact en fixant un obstacle tel que le plateau 92 incur- vé derrière le point o les particules congelées entrent en collision les unes avec les autres, comme représenté à la figure 9. Il vaut mieux, suivant l'invention, projeter les particules congelées à l'intérieur du boîtier repré- senté à la figure 10, qui est destiné tout particulière- ment à récupérer les particules détruites, parce que sinon les particules congelées qui y sont projetées sont envoyées vers le haut, quand elles sont détruites au point d'impact. Le boîtier a un diamètre de 500 mm et une hauteur de 110 mm. On peut monter un, deux ou plusieurs dispositifs de projection 91 au centre de la surface supérieure du boîtier. Quand des particules con- gelées sont projetées dans le boîtier, les particules détruites se répartissent dans une direction sensible- ment horizontale dans le casier, tout en étant expo- sées à une pression moindre,et désaccélérées,en raison de chicanes 94, de sorte qu'elles peuvent être recueil- lies facilement. Suivant l'invention, les particules ainsi re- cueillies peuvent être détruites à nouveau, si on le souhaite, après avoir été fondues et recongelées. En se reportant à la figure 2, on décrit en détail l'unité 50 de la figure 1 permettant de fabri- quer des particules congelées. La figure 2 est un schéma de circulation de l'unité 50 de fabrication de particules congelées de la figure 1. A la figure 2, le numéro de référence 1 indique une cuve de stockage de réfrigérant liquide, le numéro de référence 2 indique le réfrigérant liquide stocké dans la cuve 1, le numéro de référence 3 indique des moyens pour engendrer des rides à la surface du ré- frigérant en donnant de l'énergie cinétique à la région supérieure du réfrigérant, le numéro de référence 4 indi- que des moyens de pulvérisation qui mélangent une suspension contenant des cellules à un gaz et atomisent la suspen- sion, le numéro de référence 5 indique des moyens de ré- glage du niveau du réfrigérant, le numéro de référence indique des moyens pour évacuer les particules conge- lées, le numéro de référence 7 indique des moyens de prérefroidissement de la suspension contenant des cellu- les destinées à être congelées et d'un gaz destiné à être mélangé à la suspension, le numéro de référence 8 indique une source de réfrigérant, le numéro de réfé- rence 9 indique une source de suspension contenant les cellules et le numéro de référence 10 indique une sour- ce de gaz destiné à être mélangé à la suspension con- tenant des cellules. La cuve de stockage 1 comprend une enveloppe de section transversale carrée et un fond en forme de pyra- mide inversée qui est en acier inoxydable (SUS 304). La cuve 1 a une largeur de 400 mm, une profondeur de 400 mm et une hauteur de 200 mm. Sur la paroi extérieure de la cuve 1 est prévue une couche sous vide isolante qui n'est pas représentée. La cuve de stockage 1 contient un réfrigérant 2 liquide, constitué d'azote liquide, qui est amené de la source 8 par un conduit 11. Le niveau indiqué en L du réfrigérant 2 stocké dans la cuve 1 est maintenu à 500 mm environ du fond de la cuve. Le niveau L est réglé à une hauteur déterminée à l'avance en utilisant des moyens de réglage du niveau du réfrigérant, ces moyens comprenant un détecteur de niveau 5a, un panneau de commande de niveau 5b, une vanne de commande 5c, etc. Les moyens pour engendrer des rides 3 compren- nent un conduit de barbotage 3a, une vanne 3b pour com- mander le barbotage, un débitmètre 3c, etc. qui donnent de l'énergie cinétique au réfrigérant, de manière que des rides se produisent à la surface du réfrigérant 2. Le conduit de barbotage 3a a la forme d'une anse carrée, comme représenté à la figure 3, et est fixé horizontalement à un niveau de 40 à 150 mm endessous de la surface du réfrigérant, comme représenté à la figure 4. Si le conduit 3a est fixé à un niveau plus bas, le rendement du barbotage diminue, parce que le gaz de barbotage issu du conduit 3a peut être refroidi d'une manière excessive et parce qu'il faut ainsi une plus grande quantité de réfrigérant et de gaz de barbotage. C'est pourquoi il est souhaitable que le niveau du con- duit de barbotage 3a soit à 100 mm en-dessous de la sur- face du réfrigérant 2 ou soit à une distance inférieure à 100 mm de la surface du réfrigérant 2. Le conduit 3a de barbotage est muni, du côté intérieur, de plusieurs orifices 3d à partir desquels du gaz est envoyé sous forme de bulles, les orifices étant distants de 50 à 100 mm. Le réfrigérant gazeux est envoyé de la région gazeuse de la source de réfrigérant 8, en passant par le conduit 12 et par la vanne de commande 3b, puis est envoyé dans le réfrigérant 2 liquide par les orifices 3d. La quantité de réfrigérant gazeux qui est en- voyée par le conduit 3 est avantageusement comprise en- tre 200 et 400 litres/m2.minute. Dans cette plage, il se produit un courant ascendant de bulles au voisinage de la surface du réfrigérant 2. L'écoulement des bulles 13 donne de l'énergie cinétique à la surface du réfri- gérant 2, en engendrant des rides W ayant une hauteur d'ondulations de 5 à 20 mm, comme représenté à la figure 6. Les rides font vibrer chaque particule conge- lée qui tombe dans le réfrigérant 2 et empêchent ainsi toute agglomération des particules congelées. La présence des bulles 13 s'écoulant dans le réfrigérant fait que la masse volumique du liquide diminue au voisinage de la surface du réfrigérant 2 et facilite ainsi la chute des particules congelées dans le réfrigérant 2. La hauteur optimale des ondulations des rides est de 5 à 10 mm environ. Si la hauteur des ondulations est supérieure à 20 mm, les rides remuent le réfrigérant au voisinage de sa surface et influent ainsi sur la chute des particules congelées. A la figure 2, le conduit de barbotage 3a est utilisé comme moyen pour engendrer des rides, du réfri- gérant gazeux y étant envoyé de la région gazeuse de la source 8 du réfrigérant. En variante, le réfrigérant gazeux peut être envoyé au conduit de barbotage 3a par une autre source prévue pour stocker le réfrigérant gazeux indépendamment de la source 8. Le gaz envoyé au conduit de barbotage 3a n'est pas nécessairement le réfrigérant gazeux. Ce peut être n'importe quel autre gaz qui a un point de rosée bas ou qui contient du C02 gazeux. On peut utiliser, par exemple, de l'air décarbonaté, à la place du réfri- gérant gazeux. Les moyens suivants peuvent être utilisés comme moyens pour engendrer des rides, au lieu du conduit de barbotage 3a décrit ci-dessus. (a) Moyen pour engendrer des rides du type à projection de liquide: Dans ce cas, un conduit qui a une structure analogue au conduit de barbotage 3, à la figure 3, est fixé en-dessous du réfrigérant 2. Ce conduit projette du réfrigérant liquide provenant d'une source 8 par ses orifices. Ce conduit n'exige pas la présence du con- * duit 111mais exige la présence d'un conduit de récupéra- tion du réfrigérant de l'unité 1, de manière à maintenir la surface L du réfrigérant à un niveau déterminé à l'avance. (b) Moyens pour engendrer des rides de type à oscillations: Dans ce cas, on monte des oscillateurs 20 qui sont animés d'un mouvement alternatif ou qui tournent à une vitesse donnée sur la paroi intérieure de la cuve 1, comme représenté aux figures 5(A) et 5(B). Ces oscil- lateurs 20 sont entrainés par des moteurs 21 montés sur la paroi extérieure de la cuve 1 et donnent de l'énergie cinétique de vibration au réfrigérant 2, ce qui engendre des rides à la surface L du réfrigérant 2. (c) Moyens pour engendrer des rides de type acoustique: Dans ce cas, on monte des vibrateurs acoustiques 22 qui engendrent des vibrations ayant une fréquence déterminée à l'avance dans la paroi de la cuve 1, comme représenté à la figure 5(C). Les vibrateurs acoustiques 22 donnent de l'énergie acoustique au réfrigérant 2, ce qui engendre des rides à la surface L du réfrigérant 2. (d) Moyens pour engendrer des rides du type par pulvérisation: Dans ce cas, on monte des dispositifs de pulvé- risation au-dessus de la surface du réfrigérant 2. Les dispositifs de pulvérisation projettent du réfrigérant liquide ou un gaz ayant un point de rosée relativement élevé, tel que du réfrigérant gazeux et de l'air décar- bonatésur la surface de l'agent réfrigérant et donnent ainsi de l'énergiecinétique au réfrigérant 2, ce qui engendre des rides à la surface. (e) Moyens pour engendrer des rides du type à secousses: Dans ce cas, une cuve 1 de stockage de réfrigé- rant est montée sur une table 22 à secousses et se voit appliquer une force cinétique par secouage par l'inter- médiaire de cames 23 et de ressorts 24, de manière à secouer le réfrigérant 2 et à engendrer des rides à la surface du réfrigérant 2. Les moyens de pulvérisation 4 mélangent une sus- pension contenant des cellules à un gaz et produisent des gouttelettes microfines de liquide du mélange de la suspension et du gaz. Les gouttelettes microfines doi- vent avoir un diamètre de 500 microns ou un diamètre inférieur à cette valeur. La figure 7 représente un exemple des moyens de pulvérisation 4,qui comprennent un corps 4a ayant une entrée 4b pour du liquide à l'extrémité postérieure et une entree 4c pour le gaz du côté postérieur. Le corps 4a est muni, du côté de la partie postérieure, de deux passages 4b' et 4c' coaxiaux et, du côté de la partie antérieure, d'un étranglement 4d o la suspension conte- nant des cellules est mélangée à du gaz. Le mélange de gaz et de liquide ainsi produit est envoyé ensuite à une chambre de mélange 4e o le mélange est agité et dispersé par une palette de guidage 4f, puis est ato- misé et projeté par l'orifice de la buse 4g. Bien en- tendu, le dispositif de pulvérisation suivant la figure 7 peut être remplacé par un autre dispositif de pulvé- risation ayant une structure ou une configuration dif- férente, pour autant que sa fonction de mélanger du gaz à du liquide et sa fonction d'atomisation et de pulvérisation du mélange gaz-liquide soient assurées. Comme on le voit mieux à la figure 2, une suspension contenant des cellules à congeler est en- voyée à l'entrée pour le liquide 4b des moyens de pulvérisation4, sous une pression d'alimentation de 1,0 à 2,0 kg/cm2 en provenance d'une source 9, par l'inter- médiaire d'une pompe 144'une vanne de réduction de la pression 15, d'une vanne de commande 16 et de moyens de refroidissement 7. Les moyens de refroidissement 7 se- ront décrits ultérieurement. Du gaz relativement inso- luble dans le liquide est envoyé, sous une pression de 1,0 à 2,0 kg/cm2, d'une source 10 à l'entrée pour le gaz 4c des moyens de pulvérisation 4, en passant par une vanne de réduction de la pression 17, un débitmètre 18, une vanne de commande 19 et des moyens de refroidissement 7. En variante, on peut introduire le gaz à l'entrée 4c à partir de la région gazeuse de la source 8 du réfrigérant, au lieu d'utiliser la sour- ce 10. Le rapport de la suspension contenant les cellu- les au gaz dans les moyens de pulvérisation 4 est, de manière optimale, compris entre 0,5 et 1,5, en étant calculé par l'équation suivante: Liquide (litre/heure) Gaz (litres normaux/minute) En faisant varier le rapport dans la plage mentionnée ci- dessus, on peut modifier le diamètre des particules con- gelées du diamètre maximum jusqu'à un-dixième de celui- ci, même quand les pressions d'alimentation, tant du gaz que de la suspension, sont fixées. Bien qu'il soit plus avantageux que l'orifice de la buse 4c ait un dia- mètre petit, l'orifice 4g a de préférence un diamètre de 0,3 à 1,0 mm environ pour ne pas avoir de problèmes de fabrication et d'engorgement. Le mélange de gaz et de liquide qui est produit dans la partie étranglée 4d de la chambre de mélange 4e, est dispersé uniformément à l'extérieur de la palette de guidage 4f et est ensuite projeté vers le bas par la buse 4g, sur la surface du réfrigérant. Quand il passe dans la buse 4g, le gaz se trouve à la fois à l'inté- rieur et à l'extérieur des particules de liquide atomi- sé. Après avoir passé dans la buse 4c, le gaz à l'intérieur des particules de liquide atomisées s'expanse lui-même et fait que les particules atomisées se divisent en des particules plus petites, tandis que le gaz à l'extérieur des particules de liquide atomisé force les particules à diffuser d'une manière vigoureuse et oblige ainsi les particules à entrer en collision les unes avec les au- tres et à se diviser en des particules plus petites. Les gouttelettes microfines de liquide ainsi produites par les moyens de pulvérisation deviennent ainsi des particules sphériques en raison de la tension superficielle lorsqu'elles tombent dans la cuve 1 et atteignent ensuite la surface du réfrigérant. La distance entre les moyens de projection 4 et la surface du réfrigérant et la température à l'inté- rieur de la cuve 1 ont une grande influence sur le dia- mètre et sur la forme des particules qui seront conge- lées dans le réfrigérant 2. La distance doit être com- prise entre 500 et 1500 mm. La température doit être comprise entre -15 C ou être inférieure à cette valeur et, de préférence, être de -20 C ou être inférieure à cette valeur. Il va de soi que la distance est décomp- tée entre le sommet des rides et les moyens de pulvérisa- tion 4, bien que le niveau de la surface du réfrigérant varie toujours en raison des rides. Les moyens 5 pour régler le niveau de la surfa- ce du réfrigérant ont pour fonction de maintenir sensi- blement constante la distance entre la surface du ré- frigérant L et les moyens de pulvérisation 4. Les moyens 5 sont une combinaison des dispositifs connus, tels qu'un détecteur de la surface du liquide 5a, un dispositif de commande de la surface du liquide 5b, une vanne de commande 5c, munie d'un conduit d'alimen- tation en réfrigérant 5c, etc. Les moyens de refroidissement 7 abaissent la température de la suspension contenant des cellules et d'un gaz avant qu'ils soient introduits dans les moyens de pulvérisation 4 et permettent de faire des économies de réfrigérant. Les moyens de refroidissement 7 comprennent un dispositif de refroidissement 7a pour du liquide et un dispositif de refroidissement 7b pour du gaz. Du réfri- gérant évaporé est introduit de la cuve 1 aux deux dis- positifs de refroidissement 7a et 7b de manière à pré- refroidir la suspension et le gaz. Dans l'installation de la figure 2, le liquide et le gaz sont prérefroidis séparément et sont ensuite mélangés et atomisés dans les moyens de pulvérisation 4. En variante, on peut d'abord mélanger le liquide et le gaz dans des chambres de mélange de gaz et de liqui- de qui seraient prévues indépendamment des moyens de pulvérisation 4 puis refroidir le mélange dans les moyens de refroi- dissement 7 et le projeter par les moyens de pulvérisa- tion 4. Chaque gouttelette K de suspension contenant les cellules,qui a été projetée par les moyens de pulvérisation 4, tombe dans le réfrigérant liquide et se congèle, puis peut s'abaisser indépendamment des au- tres, puisque les rides engendrées à la surface du ré- frigérant empêchent les particules congelées de s'agglo- mérer. Des particules congelées, qui sont tombées au fond de la cuve 1, sont soutirées par un conduit 1 ayant des moyens d'évacuation 60. Les moyens d'évacuation 60 à la figure 1 com- prennent un élévateur 60 du type à convoyeur pneumati- quelqui envoie les particules congelées de l'unité 1 au transporteur 70, en passant par un conduit qui les re- lie. Dans l'unité 1 de la figure 2, un élévateur du type convoyeur à vis, tel que représenté à la figure 8, peut être utilisé à la place de l'élévateur 60 et com- prend un conduit de guidage 6a inséré dans la cuve 1, une vis 6b rotative qui est prévue à l'intérieur du conduit de guidage 6a et un moteur d'entraînement 6c qui entraîne la vis 6b. On peut également utiliser des moyens d'évacuation du type à convbyeur à courroie et d'autres types, par exemple un appareil pour évacuer des particules congelées décrit à la demande de brevet japonais No 173317/86 o des particules congelées, qui sont tombées au fond d'une cuve, sont soutirées en même temps qu'un courant ascendant de barbotage du réfrigé- rant par un conduit, puis sont séparées du réfrigérant. Les particules congelées ainsi soutirées peu- vent être projetées par un dispositif de projection, comme décrit ci-dessus. En se référant aux figures 11 à 18, on va décri- re d'autres appareils qui conviennent pour mettre en oeuvre un procédé suivant l'invention. La figure 11 est un schéma d'un appareil qui convient pour effectuer le procédé suivant la présente invention, des particules congelées d'une suspension contenant des cellules étant produites dans une région gazeuse de refroidissement, par un contact gaz-liquide, à contre-courant, d'un gaz ascendant de réfrigérant évaporé et de gouttelettes microfines de liquide de la suspension contenant des cellules qui tombent goutte à goutte, les particules congelées étant ensuite proje- tées de manière à entrer en collision. Cet appareil, suivant la figure 1, est une variante à l'unité de fa- brication de particules congelées 1 de la figure 1. A la figure 11, le numéro de référence 111 in- - dique une cuve pour fabriquer des particules congelées, le numéro de référence 112 des moyens pour recueillir les particules congelées, le numéro de référence 113 des moyens de projection, le numéro de référence 114 des moyens pour engendrer de la vapeur du réfrigérant. La cuve 111, pour fabriquer des particules con- gelées, est une cuve qui est isolée et qui est rendue étanche et elle a une section horizontale carrée, chaque côté ayant 400 mm. La cuve 111 est munie, à l'extrémité supérieure de l'une de ses parois latérales, d'une sortie 11la pour du gaz de refroidissement. Les moyens 112, pour recueillir des particules congelées, comprennent un tamis 115 en forme de pyramide inversée et un tube de sortie 116, qui est disposé verti- calement au centre de la cuve 111, en-dessous du fond du tamis 115. Le tamis 115 est fixé le long de la paroi intérieure de la cuve 111 et subdivise l'intérieur de la cuve 111 en une région pour le gaz de refroidissement 117a à la partie supérieure de la cuve 111 et en une ré- gion pour engendrer de la vapeur de réfrigérant 117b à la partie inférieure de la cuve 111. Le tamis 115 est en une grille en fil métallique qui résiste à une tempé- rature basse et a une dimension de maille telle que seul du réfrigérant sous forme de vapeur peut y passer, c'est par exemple un tamis ayant une ouverture de maille de 0,8 mm et fabriqué en SUS 304. La sortie 116 débouche à l'extérieur du fond de la cuve 111 et est munie, à pro- ximité du fond, d'une vanne 116a-telle qu'une vanne tour- nante pour soutirer des particules congelées. Bien que l'angle e entre le tamis 115 et une droite horizontale doive varier suivant la quantité de réfrigérant éva- poré, le diamètre des particules congelées et, si l'on utilise des racles ou non, il est typiquement de 450 quand on n'utilise pas de racle. Le tamis peut être incliné di- rectement d'une paroi latérale à la paroi latérale op- posée, comme représenté à la figure 14. Les moyens de projection 113 comprennent un dispositif de projection 118 qui est monté au centre de 260418Z la paroi supérieure de la cuve 111, un conduit 119 qui est relié au dispositif de projection 118, de ma- nière à alimenter celui-ci en suspension contenant des cellules, et un conduit 120 qui communique avec le dis- positif de projection 118, de manière à l'alimenter en gaz d'entraînement tel que de l'azote gazeux refroidi et mis sous une pression convenable. Par les moyens de projection 113, une suspension contenant des cellules est projetée vers le bas par la buse 118a prévue au som- met du dispositif de projection 118, en raison de la pression du gaz d'entrainement. La dimension des goutte- lettes microfines de liquide projetées, c'est-à-dire des particules contenant des cellules 124a, peut être modifiée en fonction du diamètre de l'orifice de la buse et de la pression du gaz d'entraînement. Les moyens 114, pour engendrer de la vapeur du réfrigérant, comprennent un conduit 121 qui envoie une quantité déterminée à l'avance de réfrigérant tel que de l'azote liquide 122 à la région o est engendrée de la vapeur de réfrigérant 117b et un conduit de barbota- ge 123 qui est disposé dans le réfrigérant 122 et qui est alimenté en gaz tel qu'en azote gazeux, en argon gazeux et en air sec pour faire barboter de la vapeur de réfrigérant 122a. Dans l'unité de fabrication des particules con- gelées de la figure 11, du réfrigérant 122a évaporé passe de la région 117b engendrant du réfrigérant éva- poré, à la région 117a de gaz de refroidissement, en passant à travers le tamis 115 et monte dans la région 117a vers la sortie 111a. En d'autres termes, du réfri- gérant 122a évaporé monte peu à peu vers la sortie 11la au fur et à mesure que sa masse spécifique se modifie en échangeant de la chaleur avec des gouttelettes de suspension contenant les cellules 124a qui sont proje- tées. D'autre part, au fur et à mesure que les goutte- lettes 124a contenant des cellules tombent dans la ré- gion du gaz de refroidissement 117a, elles échangent de la chaleur avec le réfrigérant 122a évaporé ascen- dant, par un contact gaz-liquide à contre-courant et se congèlent. Comme les gouttelettes 124a sont conge- lées dans la région 117a en phase gazeuse du réfrigé- rant évaporé, elles sont conformées en particules con- gelées sphériques, en raison de leur propre tension superficielle. Comme les gouttelettes 124a viennent en contact seulement avec le réfrigérant évaporé ascendant, il ne se produit pas d'agglomération de gouttelettes 124a, les gouttelettes 124a sont congelées indépendam- ment les unes des autres et on obtient ainsi des parti- cules congelées ayant un diamètre uniforme. Dans le dispositif de la figure 11, les parti- cules 124b congelées ainsi obtenues tombent sur le tamis 115. Comme le tamis 115 est incliné, les particu- les 124 congelées sont recueillies facilement sans s'accumuler sur le tamis 115. Le réfrigérant évaporé, qui passe vers le haut, à travers le tamis 115, main- tient la température des particules congelées qui ont atteint le tamis 115 et fluidisent les particules con- gelées. Le réfrigérant empêche également que les parti- cules congelées sur le tamis 115 voient leur dureté diminuer et qu'elles s'agglomèrent. Une expérience effectuée sur le dispositif de la figure 11 montre que la hauteur efficace de la ré- gion 117a du gaz de refroidissement, c'est-à-dire la distance H entre la buse 118a et le tamis 115, peut être diminuée jusqu'à 1 mètre environ, pour obtenir des particules 124b congelées de grande qualité, pourvu que les trois paramètres suivants soient satisfaits: a) la vitesse de la suspension contenant des cellules issue de la buse 118a est de 0,2 litre/minute (12 li- tres/heure), ce qui est suffisant pour maintenir la température moyenne à -80 C ou à une valeur inférieure à -80 0C dans la partie latérale inférieure de la région 117a du gaz de refroidissement, c'est-à-dire à proxi- mité de la partie supérieure du tamis 115; b) les par- ticules 124a projetées ont un diamètre de 300 microns ou un diamètre inférieur à cette valeur; et c) la pression de projection de la suspension contenant des cellules est de 4 kg/cm2. Dans le dispositif de la figure 11, il y a une relation étroite entre la température de la région du gaz de refroidissement et la vitesse à laquelle le ré- frigérant évaporé 122a est engendrée. La figure 18 illus- tre la répartition dans un plan horizontal de la tempé- rature de la région 117a du gaz de refroidissement quand la vitesse à laquelle le gaz est engendré à par- tir de l'azote liquide est de 20, 40 et 60 m3 normaux/ heure, alors que la suspension contenant les cellules est projetée à un débit de 0,2 litre/minute, que la charge spatiale est de 75 kg/m2h, et que la charge du gaz de refroidissement est de 250 m3 normaux/m2h quand la surface en section horizontale de la région du gaz de refroidissement est de 0,16 m2. On voit, à la figure 18, que 40 m3 normaux/h de réfrigérant évaporé sont nécessaires pour maintenir la température moyenne de la région du gaz de refroi- dissement à -80 C ou à une valeur inférieure, si la sec- tion droite horizontale est de 0,16 m2, si la suspension contenant des cellules est projetée à un débit de 0,2 litre/minute (12 litres/heure), et si les gouttelettes microfines projetées de la suspension contenant des cellules ont un diamètre de 300 microns, ou un diamètre inférieur à cette valeur. Dans ce cas, la distance qui est requise pour obtenir suffisamment de temps pour con- geler les gouttelettes microfines projetées de suspen- sion contenant des cellules est de 1 mètre environ. Conmme la distance H efficace de la région 117a du gaz de refroidissement peut être diminuée à 1 mètre environ de la manière mentionnée ci-dessus, toute l'unité peut être conçue d'une manière très pe- tite, tout comme la cuve 111. Il est possible de projeter la suspension con- tenant des cellules dans la direction verticale, comme représenté à la figure 11, si la pression de projection est faible ou si les gouttelettes projetées ou les par- ticules congelées ont un diamètre petit. Sinon, la cuve 118 doit avoir une dimension suffisamment grande pour assurer une certaine durée de contact des gouttelettes 124a projetées et du réfrigérant 122a évaporé si une suspension contenant les cellules est projetée de la buse 118a dans la direction verticale, comme représenté à la figure 11. Mais, si la suspension est projetée dans la direction horizontale, comme illustré à la figure 14, la durée de mise en contact des gouttelettes 124 proje- tées et du gaz 122a évaporé peut être assurée sans avoir une cuve de grande dimension. Les particules 124b congelées qui sont tombées sur le tamis 115 se déplacent automatiquement le long du tamis 115 et sont recueillies dans le conduit 116 d'évacuation, puisque le tamis 115 est incliné vers le bas, en direction du conduit 116 d'évacuation, et puis- que du réfrigérant 122a évaporé passe vers le haut à travers le tamis 115. Les particules 124 congelées, ainsi recueillies, sont évacuées à l'extérieur de la cuve 111 par la vanne 116 d'évacuation, puis sont proje- tées sur le plateau 128 en matériau dur. Les conditions de production de particules con- gelées, à partir de gouttelettes microfines de suspen- sion contenant des cellules qui sont projetées, peuvent être déterminées expérimentalement par le spécialiste et notamment, par exemple, le débit de projection de la suspension contenant des cellules, la température de la région du gaz de refroidissement o se font les particu- les congelées, la vitesse de formation du réfrigérant évaporé qui est nécessaire pour maintenir constante la température de la région du gaz de refroidissement, le diamètre de particules qui y est nécessaire, la vitesse de chute des particules congelées, la durée de contact entre les particules congelées et le gaz réfrigérant, etc. Recueillir des particules 124b congelées d'une manière efficace dans le conduit 116 d'évacuation dépend de l'angle e d'inclinaison du tamis 115, de la tempéra- ture du tamis 115, de la vitesse du réfrigérant évaporé passant à travers le tamis 115 et du diamètre des parti- cules congelées. Néanmoins, quels que soient ces paramè- tres, on peut recueillir d'une manière efficace les particules 124b congelées dans le conduit 116 d'évacua- tion en donnant au tamis 115 une vibration, une oscilla- tion ou des secousses continues ou intermittentes, à l'aide d'un dispositif tel qu'un vibreur, qui n'est pas représenté. Comme représenté aux figures 12, 13 et 15 à 17, les moyens 112 pour recueillir des particules congelées peuvent être du type qui envoie les particules 124b congelées produites dans une cuve 111 directement à des moyens 125 qui sont destinés à projeter les particules congelées et qui sont ménagés à l'extérieur de la cuve 111. En se reportant à la figure 12, la cuve 111 de fabrication de particules congelées est munie, du côté supérieur, d'une chambre 126 de récupération de la cha- leur perduequi communique avec la cuve 111 par une sortie 1lla pour du gaz. Un dispositif de projection , qui projette des particules congelées, est monté au bas de la chambre 126. Dans le dispositif de la figure 12, des moyens 112 de récupération des particu- les congelées comprennent un conduit 116 d'évacuation des particules congelées qui met directement le fond du tamis 115 en communication avec le dispositif de projec- tion 125. Le dispositif de projection 125 communique également avec un conduit 127 pour un gaz d'entraîne- ment. Comme gaz d'entraînement, on introduit de l'air sous pression, de l'azote gazeux, etc., dans le disposi- tif de projection 125 par le conduit 127, les particu- les 124b congelées étant aspirées par le conduit 116 vers le dispositif de projection 125, en vertu de l'effet d'éjection, puis sont projetées sur un plateau 128 en matériau dur. Le conduit 127 a, à l'intérieur de la chambre 126, une partie 129 qui sert d'échangeur de chaleur pour échanger de la chaleur entre le gaz d'entraînement et le réfrigérant 122a évaporé entrant dans la chambre 126 par la sortie 111a. La partie 129 échangeant de la cha- leur est conformée en serpentin, à parois épaisses, * avec un certain nombre d'ailettes 129a, comme représen- té à la figure 13, pour augmenter la surface de contact avec le réfrigérant évaporé et conduire efficacement la chaleur et également pour augmenter l'accumulation de chaleur. La partie 129 est de préférence en alliage de cuivre ayant une grande conductivité thermique. On peut ainsi prérefroidir suffisamment du gaz d'entraînement pour maintenir les particules 124b conge- lées à une dureté suffisante et pour empêcher toute agglomération des particules 124b congelées dans le dis- positif de projection 125 et projeter ainsi les particu- les de manière à rompre ou endommager d'une façon efficace les membranes des cellules. Comme la partie 129 a une paroi épaisse avec un certain nombre d'ailettes 129a, on peut prérefroidir du gaz d'entraine- ment en raison de l'accumulation de la chaleur, même si du gaz 122a évaporé n'est pas engendré pendant un fonc- tionnement intermittent de l'unité de fabrication des particules congelées. Cet échangeur de chaleur peut pré- refroidir le gaz d'entraînement jusqu'à la température du réfrigérant évaporé venant de la sortie 111a. Mais, si nécessaire, il est possible de refroidir le gaz d'entraînement à une température bien plus basse en pro- jetant vers le serpentin un réfrigérant tel que de l'azote liquide issu d'une buse 130 montée sur la partie supérieure de la chambre 126 de récupération de la chaleur. Comme représenté à la figure 15, on peut utili- ser, au lieu du tamis 115 incliné représenté aux figures 11, 12 et 14, un tamis plan 115 associé à une racle 132 animée d'un mouvement alternatif au-dessus du tamis par un vérin 131, de manière à envoyer les particu- les 124a congelées s'accumulant sur le tamis dans une trémie 133a. Au fur et à mesure qu'un gaz d'entraînement est introduit dans le dispositif de projection 125, des particules 124b congelées recueillies dans la trémie 133a sont aspirées vers le dispositif de projection 125, puis sont projetées sur le plateau 128 en matériau dur. En outre, les moyens pour recueillir des parti- cules congelées peuvent comprendre un tamis qui se dé- place de l'intérieur à l'extérieur de la cuve 111. Un exemple en est donné à la figure 16 et comprend un trans- porteur 135 ayant un coursier tamis 115', une partie d'extrémité du transporteur 135 étant disposée dans la chambre 133 de récupération des particules congelées. Le transporteur 135 subdivise l'intérieur de la cuve 111 en deux régions 117a et 117b et est entraîné dans le sens indiqué par une flèche à la figure 16, en en- voyant des particules 124b congelées s'accumulant sur le coursier tamis 115', de l'intérieur de la cuve 111 à une trémie 133a de la chambre 133. Un autre exemple en est donné à la figure 17 et comprend un plateau en forme de tamis 115" qui tourne autour d'un axe vertical en étant entrainé par un mécanisme d'entraînement 136 convenable. Dans ce cas, des particules 124b congelées s'accumulant sur le plateau 115" de la cuve 111 sont en- voyées à la chambre de récupération 133 et recueillies dans la trémie 133a en utilisant une racle' 137 conve- nable. Aux figures 11 à 17, les moyens de pulvérisation 118 peuvent être le dispositif de pulvérisation repré- senté à la figure 7; la distance entre les moyens de pulvérisation 125 et le plateau 124 et le matériau et la forme de ce plateau peuvent être choisis comme men- tionné ci-dessus à propos du dispositif de la figure 1; et on peut effectuer la projection et la récupération des particules congelées à la façon illustrée aux figu- res 9 et 10. Exemple On explicitera maintenant un procédé de produc- tion de particules congelées contenant des cellules sui- vant la présente invention en se référant aux exemples suivants, auxquels l'invention n'est pas limitée. Exemple 1 On met en suspension dans de l'eau une levure vivante de préparation du pain, disponible dans le com- merce et fabriquée par la Société Toyo Jozo Co., pour préparer une suspension de levure à 0,1 g/ml environ. Puis on effectue une expérience en utilisant le dispositif représenté à la figure 1 et décrit ci- dessus. On constitue une cuve ayant un corps carré de 400 mm x 400 mm de section droite et de 900 mm de hau- teur et un fond en forme de pyramide inversée de 300 mm de hauteur, en tant que cuve de stockage 1 du réfrigé- rant liquide dudit dispositif. On charge ensuite de l'azote liquide comme réfrigérant liquide 2 jusqu'à la hauteur de 500 mm à partir du fond de la cuve, com- me représenté à la figure 2. En d'autres termes, la distance entre le sommet de la cuve et la surface L du réfrigérant liquide est de 700 mm. En outre, on dispose horizontalement à 50 mm en-dessous de la surface du liquide, un conduit 3 de barbotage en forme de boucle carrée (350 mm x 350 mm). On envoie au conduit 3 de l'azote gazeux provenant de la région en phase gazeuse d'une source 8 d'azote liqui- de à un débit de 300 litres/m2;minute et on le projette par les orifices 3d à l'intérieur de la cuve 1 pour en- gendrer des rides d'une hauteur d'ondulations moyenne de 8 mm à la surface extérieur de l'azote liquide. On introduit la suspension de levure sous la forme d'un liquide destiné à être congelé et de l'azo- te gazeux à 25 C,emmagasiné dans une cuve 10 haute pression sous la forme de gaz, dans des moyens de pul- vérisation 4, à des débits de 0,2 litre/minute et de. 1 litre/minute respectivement, de manière à les mélan- ger dans les moyens de pulvérisation 4. Les moyens de pulvérisation 4 sont disposés à 700 mm environ au- dessus de la surface L de l'azote liquide et ont un orifice de buse d'un diamètre de 0,7 mm. Puis on pro- jette le mélange de gaz et de liquide sur la surface liquide sous une pression de projection de 4 kg/cm2. La température la plus élevée de l'espace supérieur de la cuve 1 est de -20 C. D'autre part, pour maintenir la surface de l'azote liquide 2 dans la cuve 1 à un niveau constant, on envoie de l'azote liquide du conduit lI à l'inté- rieur de la cuve à un débit de 20 litres/heure. Le dé- bit de l'azote gazeux sortant de la cuve est de 20 x 0,65 m3 normaux/h, afin de prérefroidir la suspension de levure et l'azote gazeux destiné à être mélangé par les moyens de refroidissement 7. Quand le mélange de la suspension de levure et de l'azote gazeux est projeté d'une manière continue par les moyens de pulvérisation 4 en 10 minutes environ dans les conditions mentionnées ci-dessus, on obtient environ 1000 ml de particules congelées contenant des cellules de levure de panification sous la forme de sphères de glace. La dimension moyenne des sphères est comprise entre 50 et 100 microns. On stocke les sphères de glace au moyen d'un élévateur 60 et d'un transporteur 70 dans un dispositif de stockage auquel on envoie de l'azote gazeux sous une pression de 2 kg/cm2 et à une température de 70 C afin de fluidiser les sphères de glace à partir du fond et afin de maintenir la température des sphères de glace à -70 C. Puis on les projette, par un dispositif de projection 91 ayant une buse de 8,3 mm de diamètre. L'azote gazeux d'entraînement envoyé dans le conduit central d'entrée du dispositif d'éjection 91 est sous une pression d'accélération de 4,7 à 5 kg/cm2 et à une température de -70 C, tandis que la température des sphères de glace, après avoir été projetée par la buse, est de -70 C. On projette des sphères de glace dans les conditions ci-dessus, tout en fixant la distance de projection D à 20 mm, et à 50 mm, puis on recueille les particules détruites respectives contenant des cellules de levure. On met en suspension dans de l'eau, à titre d'échantillon, respectivement la suspension de levure, les phères de glace contenant des cellules de levure et les particules détruites contenant des cellules de levure. Puis on les sépare par centrifugation pour obte- nir une fraction de cellules de levure et une fraction surnageante pour chacun des échantillons. On détermine quantitativement les protéines pour les fractions surnageantes par la méthode de Lowry, et l'activité enzymatique, au moyen d'une activité alcool déhydrogénase. Les résultats obtenus sont consi- gnés au tableau 1. (Méthode d'essai). On mesure l'activité alcool déhydrogénase par absorptiométrie en utilisant 1,OO ml d'un mélange réac- tionnel liquide comprenant 0,63 ml'de solution-tampon au barbital 0-,05 M (pH 8,6), 0,10 ml d'une solution aqueuse de bleu de nitrotétrazolium à 0, 25 % (NTB), fabriquée par Dojin Kagaku Institute, 0,02 ml d'albu- mine à 10 % (sérum bovin), c'est-à-dire Fraction V Powder fabriquée par la Société Armour Pharmaceutical Co., 0,10 ml de NAD à 10 mM, c'est-à- dire du NAD + fabriqué par la Société Oriental Kobo Co., 0,05 ml de diaphorase (DI) à 100 U/ml, fabriquée par Toyo Jozo Co., et 0,10 ml d'éthanol 1.M. D'une part, après avoir chargé 1,00 ml du mélan- ge réactionnel liquide dans une cellule en verre et l'avoir chauffé préliminairement à 37 C pendant 5 minu- tes, on verse 10 ml des échantillons décrits ci-dessus dans le mélange réactionnel liquide et on abandonne à 37 C pendant 10 minutes. Puis on ajoute 2 ml d'acide chlorhydrique 0,1 N pour achever la réaction et on dé- termine l'absorbance As de l'échantillon à une longueur d'onde de 550 microns. D'autre part, après avoir chargé 1 ml du:,mélan- ge réactionnel liquide dans une cellule en verre et l'avoir laissé à 37 C pendant 15 minutes, on verse 2 ml de HCl 0,1 N et 10 microlitres de l'échantillon dans le mélange réactionnel liquide. Puis on détermine, à titre de témoin, l'absorbance Ab à une longueur d'onde de 550 microns. A partir de l'absorbance As de l'échantillon et de l'absorbance Ab du témoin, on détermine l'acti- vité alcool déhydrogénase de l'échantillon par l'équation suivante: (activité) = (As - Ab)/10 3,01 16,4 0,01 dans laquelle: 16,4 est le coefficient d'extinction molaire de NTB de type réduit (cm2/Pmole) est la durée de réaction (minute) 3,01 est la quantité finalement dissoute (ml) 0,01 est la quantité de solution d'enzyme (ml). On effectue la détermination quantitative des protéines par la méthode de Lowry telle que décrite ci- dessous. Apres avoir mélangé intimement 0,5 ml de l'échantillon à 5 ml d'un réactif A préparé par le pro- cédé décrit ci-dessous, dans une cellule en verre, et après avoir laissé le mélange à la température ambiante pendant 10 minutes, on ajoute rapidement au mélange 0,5 ml de réactif de Folin préparé en diluant un pro- duit disponible dans le commerce (fabriqué par la Socié- té Wako Seiyaku Co.) en deux fois à l'eau, puis on l'abandonne pendant 30 minutes. On mesure ensuite l'ab- sorbance à 750 microns par une méthode d'absorptiomé- trie et on effectue la détermination quantitative par rapport à la courbe d'étalonnage de l'albumine sérique du boeuf. La réactif A est un réactif alcalin préparé en mélangeant un réactif (1) obtenu en dissolvant NaCO3 dans NaOH 1N en une concentration de 2 %, et un réactif (2) obtenu en dissolvant CuSO4,5H20 dans du citrate de sodium à 1 %, en une concentration de 0,5 % juste avant l'emploi. Exemple 2 En utilisant la même suspension de levure qu'à l'exemple 1, on prépare des particules congelées conte- nant des cellules de levure dans les mêmes conditions qu'à l'exemple 1, si ce n'est que le débit de la sus- pension de levure est de 0,2 ml/minute, le débit de l'azote gazeux de 1 litre/minute, le diamètre de la buse de 0,5 mm et la pression de pulvérisation est comprise entre 2 et 2,5 kg/cm. On obtient des sphères de glace contenant des cellules de levure ayant un diamètre de 200 à 300 microns. De la même façon qu'à l'exemple 1, on projette les sphères de glace, puis on recueille les particules détruites contenant des cellules de levure. On effectue ensuite une analyse de la même façon qu'à l'exemple 1. Le résultat obtenu est indiqué au tableau 2. Exemple 3 On effectue une expérience de la même façon qu'à l'exemple 1, si ce n'est qu'on utilise une suspen- sion de levure contenant 0,0583 g/ml de cellulesde levure par ml. On effectue l'expérience avec une distan- ce de projection D de 20 mm seulement. Le résultat obtenu est indiqué au tableau 3. Exemple comparatif On réduit en poudre des corps de cellulesde levure en utilisant un pulvérisateur de cellules disponible dans le commerce, à savoir celui de type Dyno-Mill KDL fabriqué par Willy A Bachofen Maschinen- fabrik. On fait tourner à 2000 tours/minute un réci- pient de broyage d'un volume de 0,6 ml destiné à être utilisé dans le Dyno-Mill et chargé de perles de verre du type MK-2G d'une granulométrie correspondant à des diamètres compris entre 0,25 et 0,5 mm. Pour effectuer la destruction des cellules de levure, on ajoute en continu au récipient, à un débit de 100 ml/minute, une suspension contenant des cellules de levure qui a été préparée en mettant 0,23 g/ml de levure vivante desti- née à la fabrication du pain et fabriquée par Toyo Jozo Co. dans de l'eau. Le résultat obtenu est indiqué au tableau 4. Exemple 4 On effectue une expérience dans le dispositif représenté à la figure 12, en utilisant des solutions diluées à moitié et au quart de la suspension de levure à 0,1 g/ml. La cuve de fabrication des particules conge- lées dans le dispositif est constituée d'une cuve ayant une partie de corps carrée de 400 mm x 400 mm de section droite et de 1400 mm de hauteur et munie, à la partie inférieure, d'un élément en forme de tamis 115 en métal SUS 303, d'une ouverture de maille de 0,105 mm et fai- sant un angle 6 de 60 . On charge de l'azote liquide comme réfrigérant liquide jusqu'à une hauteur de 100 mm environ à partir du bas de la cuve. La distance entre la partie la plus élevée de l'élément en forme de tamis et la surface de l'azote liquide est de 300 mm environ et la distance entre la partie la plus élevée de l'élé- ment en forme de tamis et la buse est de 1000 mm environ. En outre, on engendre un gaz ascendant sous for- me de vapeur à partir du réfrigérant, à un débit de m3 normaux/heure, pour maintenir à -80 C environ la température à l'intérieur de la cuve de fabrication des particules congelées. Puis, en utilisant la suspension de levure! comme liquide à congeleret l'azote gazeux à 25 C, comme gaz de mélange, on les envoie à des moyens de pulvérisation 118 situés à 1000 mm environ au-dessus de la partie la plus élevée de l'élément en forme de tamis, et ayant un orifice de buse d'un diamètre de 0,5 mm,à un débit de 0,2 litre/minute pour la suspen- sion de levure et à un débit de 5 litres/minutes pour l'azote gazeux. On les mélange dans les moyens de 2604 182 pulvérisation 118, puis on projette le mélange vers le bas, sous une pression de pulvérisation après le.mélan- ge, de 3,5 kg/cm2. Apres avoir projeté en continu le mélange de la suspension de levure et d'azote gazeux pendant 10 minu- tes environ dans les conditions mentionnées ci-dessus, * on obtient environ 1000 ml de sphères de glace contenant des cellules de levure. La dimension moyenne des sphères est de 100 microns environ. Les sphères de glace ainsi obtenues sont ensuite projetées en continu, du dispositif de projection 125, qui a une buse de 8,3 mm de diamètre, tout en maintenant la température du produit à -70 C. Dans ce cas, l'azote * gazeux d'entrainement envoyé par le conduit d'entrée central du dispositif de projection 125 est sous une pression d'accélération de 4 kg/cm2 et a une température de -70 C. La température des sphères de glace, après projection de la buse, est de -70 C. En outre, la dis- tance entre la buse et le plateau 128 en matériau dur est de 20 mm. Apres la projection, on recueille des particu- les détruites de sphères de glace contenant des cellu- les de levure et on leur applique les mêmes analyses qu'à l'exemple 1. On obtient les résultats indiqués au tableau 5. Exemple 5 On effectue l'expérience dans les mêmes condi- tions qu'à l'exemple 4, si ce n'est qu'on utilise seu- lement la suspension de levure à 0,05 g/ml, que l'on fixe le débit de la suspension de levure à 0,2 litre/ minute, le débit d'azote gazeux à 1 litre/minute et la pression de pulvérisation des moyens de pulvérisa- tion 118 à 25 kg/cm2 apres le mélange. On obtient ainsi des sphères de glace contenant de la levure et ayant un diamètre.de 20 microns environ dans l'unité 2 6 0 4 1 82 de fabrication de particules congelées. Après la projection, on recueille les particu- les détruites contenant de la levure, et on leur applique les mêmes analyses qu'à l'exemple 1. On ob- tient les résultats consignés au tableau 6. Tableau 1 Activité alcool Teneur en déhydrogénase: protéine: fraction fraction surnageante surnageante (U/g::) (mg/g::) Suspension de 3 levure (0,1 g/ml) Sphères de glace contenant des 101 108 cellules de levure Particules I détruites contenant des cellules de 99 158 levure (distance de projection 20mm) Particules II I détruites contenant des cellules de I108 105 levure (distance 1 de projection 50mm) ::: g indique le poids de la cellule de levure Tableau 2 Activité alcool Teneur en déhydrogénase: protéine: fraction fraction surnageante surnageante (U/g::) (mg/g:) Suspension de levure (0,1 g/ml) 3 Sphères de glace contenant des 55 69 cellules de levure Particules I détrui- tes contenant des cellules de levure 65 107 (distance de projec- tion 20 mm) Particules II détrui- tes contenant des cellules de levure 73 121 (distance de projec- tion 50 mm) Tableau 3 Activité alcool Teneur en déhydrogénase: protéine: fraction fraction surnageante surnageante (U/g::) (mg/g::) Suspension de 3 levure (0,0583 g/ml) Sphères de glace con- tenant des cellules 115 155 de levure Particules détruites contenant des cellu- les de levure (dis- 359 244 tance de projection (20 mm) Tableau 4 Activité alcool Teneur en déhydrogénase: protéine: fraction fraction surnageante surnageante (U/g':) (mg/g::) Suspension de levure 3 (0,23 g/ml) Solution traitée au 245 165 Dn-il245 165 Dyno-Mill Tableau 5 Activité alcool Teneur en déhydrogénase: protéine: fraction fraction surnageante surnageante (U/g') (mg/g:') Suspension de levure 1 (0,025 g/ml) Sphères de glace contenant des 189 87 cellules de levure Particules détruites contenant des cellu- les de levure (dis- 314 121 tance de projection mm) Suspension de levure 2 6 (0,05 g/ml) Sphères de glace conte- nant des cellules de 217 102 levure Particules détruites contenant des cellu- les de levure (dis- 469 175 tance de projection mm) Tableau 6 Activité alcool Teneur en déhydrogénase: protéine: fraction fraction surnageante surnageante (U/g::) (mg/g::) Suspension de levure 2 6 (0,05 g/ml) Sphères de glace contenant des cellu- 197 96 les de levure Particules détruites contenant des cellu- les de levure (dis- 416 177 tance de projection 20 mm) REVENDICATIONS 1. Procédé de traitement des cellules de maniè- re à faciliter l'extraction de substances utiles de leur sein, caractérisé en ce qu'il consiste à projeter des particules congelées contenant des cellules de manière à faire entrer les particules en collision et à leur donner une énergie due au choc de façon à endommager la surface des cellules. 2. Procédé suivant la revendication 1, caracté- risé en ce qu'il consiste à donner de l'énergie due au choc en faisant entrer les particules congelées en col- lision les unes avec les autres. 3. Procédé suivant la revendication 1, caracté- risé en ce qu'il consiste à donner aux particules de l'énergie due au choc en faisant entrer les particules congelées en collision avec des obstacles. 4. Procédé suivant l'une des revendications 1 à 3, caractérisé en ce que les particules congelées ont un diamètre de 500 microns ou inférieur à cette valeur. 5. Procédé suivant l'une des revendications 1 à 4, caractérisé en ce qu'il consiste à projeter les particules congelées par un dispositif de projection. 6. Procédé pour traiter des cellules de manière à faciliter l'extraction de substances utiles de leur sein, caractérisé en ce qu'il consiste à produire des gouttelettes microfines de liquide ayant un diamètre de 500 microns ou inférieur à cette valeur, d'une sus- pension contenant des cellules, à mettre les goutte- lettes microfines de liquide en contact avec un agent réfrigérant pour produire des particules congelées ayant un diamètre de sensiblement 500 microns ou infé- rieur à cette valeur, puis à projeter les particules congelées de manière à les faire entrer en collision et à leur donner une énergie due au choc, afin d'en- dommager la surface des cellules. 7. Procédé suivant la revendication 6, caracté- risé en ce qu'il consiste à produire les particules congelées en faisant tomber goutte à goutte les goutte- lettes microfines de liquide, d'un diamètre de 500 mi- crons ou inférieur à cette valeur, dans un réfrigérant consistant en un gaz liquéfié, de manière à congeler les gouttelettes microfines de liquide par un contact liquide-liquide avec le réfrigérant. 8. Procédé suivant la revendication 7, caracté- risé en ce qu'il consiste à faire tomber goutte à gout- te les gouttelettes microfines de liquide, ayant un diamètre de 500 microns ou inférieur à cette valeur, dans un réfrigérant à la surface duquel on engendre des rides. 9. Procédé suivant la revendication 6, caracté- risé en ce qu'il consiste à produire les particules congelées en faisant tomber goutte à goutte les goutte- lettes microfines de liquide, ayant un diamètre de 500 microns ou inférieur à cette valeur, dans une région gazeuse de refroidissement, à réfrigérant sous forme de vapeur ascendantede manière à congeler les goutte- lettes microfines de liquide par un contact gaz-liquide avec le réfrigérant. 10. Procédé suivant l'une des revendications 6 à 9, caractérisé en ce qu'il consiste à donner de l'énergie due au choc en faisant entrer les particules congelées en collision les unes avec les autres. 11. Procédé suivant l'une des revendications 6 à 9, caractérisé en ce qu'il consiste à donner de l'énergie due au choc en faisant entrer les particules congelées en collision avec des obstacles. 12. Procédé suivant l'une des revendications 6 à 11, caractérisé en ce que la suspension contient de 0,005 g à 0,5 g de cellule par ml. 13. Procédé suivant l'une des revendications 6 à 12, caractérisé en ce qu'il consiste à produire les gouttelettes microfines de liquide en utilisant un pulvérisateur. 14. Procédé suivant l'une des revendications 6 à 13, caractérisé en ce qu'il consiste à projeter les particules congelées par un dispositif de projection.