Brevet FR2605330A1 — publié le 19880422

i La presente invention a pour objet un récipient destiné à recevoir un ou plusieurs milieux de culture pour microorganismes, un procédé de remplissage de ce dispositif par un tel milieu et son application à la détection de microorganismes en vue de leur dénombrement et de leur identification. Dans de nombreuses industries, notamment les. industries alimentaires, pharmaceutiques et électroniques ainsi que dans les hopitaux, il-est essentiel de pouvoir évaluer le degré de contamination d'un certain nombre de produits, ou de surfaces, par des microorganismes tels que des bactéries, levures ou moisissures. Pour effectuer cette évaluation dans le cas d'un produit liquide, on effectue généralement une filtration d'un échantillon sur une membrane filtrante stérile, on dépose la membrane filtrante sur un milieu de culture gélosé contenu dans un récipient et on met ensuite ce récipient à incuber à une température et pendant un temps suffisants pour permettre aux microorganismes éventuellement présents dans l'échantillon de se développer et de se multiplier sous forme de colonies visibles à l'oeil nu, de façon qu'on puisse les compter et les identifier. L'une des opérations importantes pour une bonne mise en oeuvre de cette technique de numération de germes sur membrane microporeuse filtrante est la mise en contact entre le milieu de culture gélosé et la membrane filtrante qui a servi à retenir les microorganismes. L'état de surface du milieu de.culture gélosé est donc un facteur important pour la réussite de l'opération. Il existe actuellement des récipients, appelés boites de Pétri, en verre ou en plastique, le plus souvent vendues stériles et à usage unique, comportant deux pièces, à savoir un couvercle simplement posé sur un fond dans lequel est coulé le milieu gélosé nutritif qui a eté préalablement chauffé afin d'être liquéfié. Apres rf ro.d,sernrt et soliclafication du milîeu gélosé, les boites de Pétri peuvent etre utilisees. ou stockées au réfrigérateur afin d'être conservées déris.Jr' meilleures conditions. La surface du milieu de culture gélosé est alors mise en contact avec la membrane microporeuse filtrante sur le dessus de laquelle ont été recueillis les éventuels microorganismes et le développement de ces derniers est assuré par capillarité à travers les pores de la membrane. L'utilisation des boites de Pétri présente un certain nombre d'inconvénients. Tout d'abord, la surface du milieu gélosé peut présenter un certain nombre de défauts dûs soit à une température de coulée qui n'est pas adéquate soit à un refroidissement trop brutal et l'effet dit de peau d'orange qui en resulte se traduit par des défauts de surface qui peuvent nuire au bon contact entre le milieu de culture et le dessous de la membrane filtrante nécessaire pour obtenir le développement des microorganismes. D'autre part, il y a une déformation de la surface du milieu gélosé dont la périphérie n'est pas plane mais remonte. par capillarité sur les parois verticales du fond de la boite de Pétri en formant ce qu'on appelle un congé; la présence de ce congé limite la surface d'utilisation de la gélose et il est fréquent d'utiliser des membranes filtrantes de diamètre sensiblement inférieur à celui de la boite de Pétri, d'o un encombrement accru et un volume de gélose inutilisé. Il y a également, lors du remplissage de la boite de Pétri, avec le milieu gélosé, risque de remontée de bulles d'air qui viennent crever la surface et peuvent y créer, par suite de la nature visqueuse de ce milieu, des cratères nuisibles à un bon contact avec la membrane filtrante. Etant donnée que les boites de Pétri sont remplies à chaud, 'il se produit, lors du refroidissement du milieu de culture, une c-onciren at orl sur le dessous du CoiJv-! I (le; cette condensation ruisselle parfois sur le dessus du millieu gélose, ce qui nécessite une opération de sechage préalable à l'étuve avant utilisation. Ce phénomène est amplifié lors du stockage des boites au réfrigérateur. Bien entendu la surface du milieu de culture gélosé est exposé à des risques de contamination exogène lors du stockage dans des boites de Pétri puisque celles-ci ne sont pas étanches. Enfin les boites de Pétri ne permettent pas la numération directe de germes éventuellement présents sur une surface par simple contact de la surface du milieu gélosé sur ladite surface en raison de sa forme concave. Le brevet LlS-A-4.326.028 décrit une boite de Pétri perfectionnée comprenant un boitier cylindrique solidaire d'une grille de support perforée et destinée à recevoir dos à dos deux milieux de culture différents qui permettent des observations dans les deux compartiments situés de part et d'autre de la grille; mais l'une comme l'autre des surfaces de ces deux milieux de culture présentent les mêmes inconvénients que ceux présentés par les boites de Pétri. La présente invention a pour objet un récipient perfectionné permettant la même utilisation que les boites de Pétri sans les inconvénients ci-dessus. Ce récipient, destiné à recevoir un ou plusieurs milieux de culture pour microorganismes, et qui se présente de préférence sous forme stérile à usage unique, qui peuvent être en verre ou en matière plastique, comporte trois pièces, a savoir d une part un boitier cylindrique ouvert à ses deux extrémités et muni d'une grille de support perforée reliée par sa périphérie circulaire aux parois internes du boitier et d'autre part un couvercle et un fond. Le récipient selon l'invention se caractérise par le fait que l'extrémité supérieure du boitier s'ajuste de manière étanche aux liquides sur le couvercle ide maniitre a permettre la coulée à chaud d'un milieu de culture lorsque le récipient repose sur son couvercle. Pour remplir un tel récipient avec un milieu de culture pour microorganismes, on le retourne pour qu'il repose sur son couvercle étanche, on enlève le fond et on verse le milieu de culture dans le boitier, muni seulement de son couvercle, jusqu'à ce que la grille de support perforée soit noyée dans le milieu; on remet alors le fond et le récipient, qui peut être stocké au réfrigérateur en vue de son utilisation ultérieure, est, après avoir été retourné à nouveau pour reposer sur le fond, couvercle sur le dessus, prêt à l'emploi. Grâce à cette structure et à ce mode de remplis- sage, la surface du milieu nutritif qui va être utilisée pour la mise en contact avec les microorganismes est, non pas la surface supérieure lors cde la coulée, mais, par suite du retournement du récipient, la surface inférieure qui se trouve directement en contact avec le couvercle dont l'état de surface est particulièrement soigné. Cette surface, qui est moulée selon la forme donnée au couvercle, ne va donc présenter aucun des défauts de surface énumérés ci-dessus. Elle ne présentera en particulier ni un effet de peau d'orange, ni congés à son pourtour, ni cratères dues à des bulles d'air.. Il n'y a aucun risque de condensation d'eau ou de contamination exogène de la surface du milieu nutritif qui sera mise en contact avec les microorganismes à détecter puisque cette surface est en contact direct avec le couvercle préalablement stérilisé. Et enfin en donnant au couvercle la forme désirée, par exemple une forme plane ou légèrement concave, on peut obtenir une surface du milieu nutritif de forme plane ou convexe correspondante, ce qui permet de l'appliquer directement par contact sur une surface dont on veut vérifier la contamination, operati.ra l mpossible avec une boite de Pétr.L ordinaire. Le récipient selon la présente inverition peut être utilisé avec toutes les méthodes de controle mi.crobio- logique utilisant une membrane microporeuse filtrante et notamment selon le procédé faisant l'objet du brevet Français N 84.01470 déposé le 31 Janvier 1984 par la demanderesse. L'invention va maintenant être décrite à l'aide des dessins ci-joints o: - la figure 1 représente une vue en coupe d'un premier mode de réalisation du récipient selon l'invention, en position pour le remplissage du milieu nutritif; - la figure 2 représente schématiquement un second -mode de réalisation du récipient selon l'invention, en position pour le remplissage du milieu nutritif; - la figure 3 représente schématiquement un autre mode de réalisation du récipient selon l'invention dans une position analogue à celle de la figure 1; - la figure 4 représente le même mode de réalisation que celui de la figure 3 mais dans lequel le couvercle a été tourné de 90 par rapport à la position qu'il occupait sur la figure 3; - la figure 5 représente schématiquement encore un autre mode de réalisation de l'invention; et - la figure 6 représente une vue en plan du boitier cylindrique selon le mode de réalisation de la figure 5. Le récipient 1 selon la présente invention comporte trois pièces constitutives, à savoir un bottier cylindrique 2, un couvercle 3 et un fond 4. Le boitier 2 représenté sur la figure 1 comporte une seule paroi 5 présentant une faible conicité pour permettre l'emboitage à étanchéité des deux extrémités ouvertes du boitier sur le couvercle 3 et le fond 4 respectivement. La paroi 5 est sulidaire,, d proxImité de l'extrémité supérieure dcu bcitet 2, d'une grille de support perforée 7, destinée à soutenir le milieu de culture et qui est de forme circulaire planre ayant meme axe que le boîtier 2. Cette grille 7, qui est reliée à sa périphérie circulaire avec la paroi 5 du boitier, peut se présenter sous forme d'un réseau d'éléments circulaires concentriques 8' et radiaux 9 (voir figure 6) ayant de préférence une surface supérieure, c'est-à-dire tournée vers le couvercle 3, plane et ayant une section droite qui peut être triangulaire. Une telle forme de grille retient en effet plus facilement le milieu de culture gélosé lorsque le récipient est dans sa position d'utilisation comme boite de Pétrl, c'est-à-dire dans la position inverse de celle représentée sur la figure 1. L'extrémité supérieure du boîtier 2 présente une surface plane 24 en forme de couronne située dans un plan perpendiculaire à l'axe du boitier 2. Enfin le boitier 2 présente des éléments de préhension notamment deux oreilles de préhension 13 et 14 diamétralement opposées (voir figure 6). Le couvercle 3 se présente sous forme d un élément circulaire définissant une surface supérieure dont la périphérie est d une seule pièce avec un petit rebord 15 sensiblement cylindrique présentant de préférence une faible conicité pour permettre son emboitement à étanchéité à l'extrémité supérieure ouverte du boitier 2. Le couvercle 3 peut être, comme représenté sur les figures 1 à 5, sous forme d'un élément circulaire définissant une couronne plane 25 coopérant avec la surface plane 24 du boitier et une surface intérieure centrale 26 légèrement concave du côté tourné vers le boitier, l'autre cot convexe étant de préférence muni d'un trépied cylindrique 16 de plus petit diamètre servant de support au recipierit, lorsqu'il est retourneé et qu] coinper:le Jd c-onvexlté dudit côté. Cette forme concave du couvercle 3 est particulièrement intéressante car elle permet de donner par moulage une forme convexe à la surface du milieu nutritif destinée à entrer en contact avec les microorganismes a détecter. Le fond 4 se présente, comme le couvercle 3, sous forme d'un élément circulaire définissant une surface plane dont la périphérie est d'une seule pièce avec un petit rebord 17 sensiblement cylindrique présentant de préférence une faible conicité pour permettre son emboitement à étanchéité avec l'extrémité inférieure ouverte du boitier 2. Ledit rebord 17 peut comporter un gradin 18 facilitant la préhension pour désemboiter le fond 4 du boitier 2. Le couvercle 3 comme le fond 4 peuvent éventuel- lement comporter chacun des éléments de préhension facilitant leur emboitement à étanchéité sur le bottier 2. Le mode de réalisation représenté schématiquement sur la figure 2 diffère de celui représenté sur la figure 1 par le fait que le boitier 2 présente deux parois sensible- ment cylindriques et concentriques 5 et 6 au lieu d'une seule paroi 5. Dans ce second mode de réalisation, qui est plus spécialement destiné à être utilisé avec le manchon faisant l'objet du brevet français 84.01470 précité, la paroi externe 5 présente une faible conici-té pour permettre, comme dans la variante de la figure 1, l'emboitage à étanchéité des deux extrémités ouvertes du bottier sur le couvercle 3 et le fond 4 respectivement. La paroi interne 6 est d'une seule pièce avec la grille de support perforée 7. Et les deux parois concentriques 5 et 6 sont reliees, à leur extrémité supérieure par une couronne ci. rcula re p.la ne d- racco-rdemenrit 10, de mme;i axe que le boitier. Cette couronne 10 est munie d'un certain nombre de perforations axiales 11, par exemple quatre comme représenté sur la figure 6, pratiquées de préférences dcans une gorge circulaire 12 située sur la face supérieure de la couronne 10. Le fond 4, dans cette seconde variante, est muni à proximité de sa périphérie et à l'intérieur du rebord 17 de perforations axiales 19 servant d'évent et situées de préférence à l'aplomb de la couronne circulaire de raccordement 10 des deux parois concentriques 5 et 6 du boitier pour mettre en communication le volume définl par ces deux parois avec l'extérieur et éviter ainsi tout effet de piston entre le fond 4 et le boîtier 2 du récipient selon l'invention. Un troisième mode de réalisation représenté sur les figures 3 et 4 diffère de celui représenté sur les figures 1 ou 2 par la forme du couvercle 3. En effet sur les figures 3 et 4, le couvercle 3 présente un rebord 15 de longueur axiale sensiblement plus grande et qui présente deux échancrures 20 et 21 diamétralement opposées, situées du côté opposé au trépied 16. Ces échancrures 20 et 21 du couvercle coopèrent -avec les oreilles de préhension 13 et 14 du bottier pour -maintenir ces deux parties emboîtées à une profondeur maximale l'une dans l'autre, o le milieu de culture 22 est au contact du couvercle 3, comme représenté sur la figure 3, ou bien par simple rotation de 90 du couvercle par rapport au boitier, pour maintenir ces deux parties du récipient emboîtées l'une dans l'autre à une moindre profondeur, ménageant une chambre d'incubation 23 entre le milieu de culture et le couvercle, comme représenté sur la figure 4. Lin quatr.ern mode de réalisation represerinte sur ].es figures 5 et 6 diffère de celui représenté sur les figures precéderites par le fait que le boitier 4 comprnrort une barrière étanche 24, ce qui permet d'introduire deux milieux de culture différents 22 et 22'. Il est bien évident que le récipient selon la présente invention, compte-tenu des avantages qu'il présente, est particulièrement intéressant dclans de nombreuses applications. Il est utile non seulement comme boite de Pétri mais également pour le contrôle microbiolo- gique de surfaces; il convient également dans le procédé et le dispositif de contrôle biologique à manchon faisant l'objet du brevet français N 84. 01470 précité; enfin il peut contenir un ou plusieurs milieux de culture différents afin d'effectuer la numération cie différents microorga- nismes recueillis sur une même membrane microporeuse filtrante, ce qui réduit considérablement le temps de contrôle, le matériel à utiliser et par conséquent le cout du test. 1i REVENDICATIONS 1. Récipient (1) destiné à recevoir un ou plusieurs milieux de culture (22 et 22') pour des microorganismes se présentant de préférence sous forme stérile à usage unique, comportant d'une part un bo tier (2) sensiblement cylindrique ou légèrement conique, ouvert à ses deux extrémités et muni, selon une section transversale, d'une grille de support perforée (7) reliée par sa périphérie circulaire à la paroi interne du boitier (2) et d'autre part un couvercle (3) et un fond (4) caractérisé en ce que l'extrémité supérieure du boîtier (2} s'ajuste de manière étanche aux liquides sur le couvercle (3) de manière à permettre la coulée à chaud d'un milieu de culture lorsque le récipient repose sur son couvercle. 2. Récipient selon la revendication 1, caractérisé en ce que l'extrémité supérieure du boitier (2) présente une surface plane en forme de couronne située dans un plan perpendiculaire à l'axe du boitier et qui coopère avec une surface plane correspondante du couvercle (3) pour assurer l'ajustement étanche du couvercle sur cette extrémité du boitier. 3. Récipient selon ia revendication 1 ou 2, caractérisé en ce que la paroi externe du boitier (2) présente une faible conicité et que le couvercle (3) et le fond (4) présentent également une faible conicité correspondante qui permet leur ajustement étanche à chacune des deux extrémités ouvertes du boîtier (2). 4. Récipient selon l'une quelconque des revendi- cations précédentes, caractérisé en ce que le couvercle (3) se présente sous forme d'un élément circulaire dont la périphérie est d'une seule pièce avec un petit rebord (15) sensiblement cylindrique, ledit élément circulaire définissant une couronne plane coopérant avec l'extrémité supérieure du boîtier (2) et une surface intérieure centrale qui peut être légèrement concave du côté tourné vers le boîtier (2), ledit élément étant muni cie prefrr rice de '1 autre cet t d'un t.rép.Led c:ylrndriqu.e (16) de diamètre inférieure servant de support lorsque le récipient (1) repose sur son couvercle (3). 5. Récipient selon l'une quelconque des revendi- cations précédentes, caractérisé en c:e que le fond (4) se présente sous forme d'un élément circulaire définissant une surface plane et dont la périphérie est d'une seule pièce avec un petit rebord (17) sensiblement cylindrique, ledit rebord (17) présentant éventuellement un gradin (18) limitant l'emboîtement du fond (4) sur le boitier (2)-. 6. Récipient selon l'une quelconque des revendi- cations précédentes, caractérisé en c:e que le boitier (2) comporte deux parois sensiblement cylindriques et concentriques (5 et 6) dont la paroi externe (5) présente de préférence une faible conicité, dont la paroi interne (6) est d'une seule pièce avec la grille de support perforée (7), ces deux parois (5 et 6) étant reliées à leur extrémité supérieure par une couronne circulaire plane de raccordement (10), muni d un certain nombre de perforations axiales (11), pratiquées de préférence dans une gorge circulaire (12) située sur la face supérieure de la couronne (10). 7. Recipient selon l'une quelconque des revendl- cations précédentes caractérisé en ce que le boitier cylindrique (2), le fond (4), le couvercle (3) ou deux d'entre eux ou les trois présentent des élémenrits de préhension. 8. Récipient selon l'une quelconque des revendi- cations précédentes caractérisé en ce que la grille de support perforée (7) du boltier cylindrique (2) se présente sous forme d'un réseau d'éléments circulaires concentriques (8) et radiaux (9) présentant de préférence une surface supérieure plane et dont la section peut être notamment triangulaire. 9. Récipient selon les revendications précédentes 4 et 7 caractérisé en ce que le boitier cylindrique (2) preserite des oreilles Ci pr htri nsiori ( 13 et 14) dinLt.ra - lement opposées et. er c-p que le rebord sensiblement cylindrique (15) du couviL cl ' ) présenrite deu>) ec ha rcrures diamétralement opposées (20 et 21) susceptibles de recevoir les oreilles de préhension (13 et 14) du boitaer selon cieux positions situées à des profondeurs différentes par rotation de 90 du couvercle (3) par rapport audit boitier (4). 10. Procédé de remplissage avec un ou plusieurs milieux de culture de microorganismes du récipient (1) faisant l'objet de l'une quelconque des revendications 1 à 8 caractérisé en ce qu'on verse le ou lesdits milieux de culture (22 et 22') dans le récipient (1) lorsque celui-ci repose sur son couvercle (3), le fond (4) ayant été préalablement enlevé. 1il. Application du récipient selon l'une quelconque des revendications 1 à 9 à la détection de microorganismes caractérisée en ce que, après remplissage dudit récipient selon le procédé de la revendication 10 et emboitage du fond (4) sur le boitier (2) le récipient repose sur l'élément lui servant de fond (4) et on enlève le couvercle (3) pour utiliser la surface du milieu de culture qui était en contact avec le couvercle (3) pour recevoir les microorganismes dont on veut détecter la présence.