Brevet FR2599845A1 — publié le 19871211

La présente invention est relative à un proo6eé et' à un dispositif pour déterminer la.présence d'-un antigène dans des échantillons d'essai en utilisant une nouvelle technique d'essai inmmunologique ànarquage enzymatique du type à deux sites. Un essai ir.munologique à marquage enzymatique, utilisant des anticorps qui réagissent avec des domaines différents sur le même antigène a été décrit dans la littérature scientifique. En général, tous ces essais imnunologiques à deux sites, sont réalisés de la manière suivante: un anticorps d'une paire d'anticorps est fixé sur um support solide tel que la paroi d'un tube en matière plastique ou la surface d'une tige en matière plastique. Le deuxièrme - anticrns est conjugué avec un mrrqueur enzymatique. échantillcn contenant l'antigène et le conjugué corportant. le deuxième anticorps sont mélangés ensemble avec le premier anticorps fixé sur le support solide. En présence de l'antigène, 2 l'anticorps conjugué se fixe sur le support solide par l'internédiaire de l'autre anticorps de la paire d'anticorps. Le support solide est ensuite lavé efficacement pour éliminer toute trace de conjugué non fixé. 25 Enfin, le support solide est incubé avec un substrat enzymatique chromogène. La réaction de coloration peut ensuite être observée visuellement ou à l'aide d'un instrument pour indiquer la présence et la quantité de l'antigène. Ces essais immunologiques à 30 deux sites, peuvent être spécifiques et rapides mais ils nécessitent plusieurs étapes de lavage et d'incubation chromogène. La présente invention a pour objet un essai immunologique à deux sites qui ne comporte aucune étape de lavage ou de réaction Chromogène séparées. L'échantillon contenant l'antigène est mélangé 5 avec les deux anticorps réactifs et on applique le mélange sur la surface d'un dispositif d'essai à deux couches. La couche inférieure contient le substrat chromogène. En présence de l'antigène, le conjugué est acheminé jusqu'à la couche inférieure et il 10 produit une réaction de coloration. En l'absence de l'antigène, tout le conjugué est piégé dans la phase solide de la couche de piégeage supérieure et il ne peut atteindre la couche chromogène inférieure. Le principe de la présente invention est exactement à 15 l'opposé des essais irmunologiques à deux sites anterieurs dans la mesure o le conjugué qui ne peut se fixer à l'antigène, est piégé sur la phase solide. Le conjugue qui se fixe à l'antigène migre à travers la zone de la phase solide jusqu'à la couche 20 chromogène. Les avantages précédents et d'autres de la présente invention apparaîtront à l'homme de l'art, à la lecture des revendications et de la description ci-dessous. La présente invention a pour objet un dispositif pour déterminer la présence d'antigènes dans un échantillon, caractérisé en ce qu'il comprend: a. une zone de piégeage contenant un matériau susceptible de piéger des anticorps liés à une enzyme 30 se déplaçant librement, mais pas des anticorps fixes à une particule de transport qui se déplace librement à travers ladite zone de piégeage, et b. une zone de substrat contenant un matériau susceptible réir avec des anticorps liés à une 35 enzyme pour produire une réaction qui indique la présence des anticorps. Suivant d'autres caractéristiques: Lesdites zones de piégeage et de substrat, sont juxtaposées. La réaction dans la zone de substrat qui indique la présence desdits anticorps liés à une enzyme est une réaction chromogène. Ladite zone de piégeage est réalisée en 10 nitrocellulose revêtue avec de la protéine A. Ladite zone de piégeage est réalisée en gel d'agarose. La présente invention a également pour objet un procédé de détermination de la présence d'un antigène 15 dans un échantillon d'essai, caractérisé en ce que: a. on met l'échantillon d'essai en contact avec un mélange d'anticorps d'un premier et d'un deuxième types qui sont chacun spécifiques dudit antigène mais qui reconnaissent chacun des domaines différents 20 dudit antigène, les anticorps du premier type étant fixés sur une particule de transport et lesdits anticorps de deuxième type étant liés à l'enzyme, de sorte qu'en présence dudit antigène, des complexes comprenant ses anticorps du premier type fixés à une 25 particule de transport, l'antigène et des anticorps du deuxième type liés à une enzyme, sont formés dans ledit mélange; b. on met ledit mélange en contact avec le dispositif comprenant une zone de piégeage et une 30 zone de substrat, dans lequel ladite zone de piégeage contient un matériau susceptible de piéger des anticorps libres comprenant les anticorps du deuxième type liés à l'enzyme et non fixés, mais pas les anticorps du premier corps fixés & une particule de 35 transport ou une autre substance fixée & ladite particule de transport, formant lesdits complexes et dans lequel ladite zone de substrat contient un matériau susceptible de réagir avec ladite enzyme pour indiquer la présence desdits anticorps du deuxième type liés à l'enzyme; c. on laisse ledit mélange pénétrer à travers ladite zone de piégeage dans laquelle tous les anticorps fixés sur les particules de transport formant lesdits complexes, se déplacent librement à 10 travers ladite zone de piégeage jusqu'à la zone de substrat tandis que tous les anticorps qui ne sont pas directement ou indirectement fixés auxdites particules de -transport, y compris les anticorps du deuxième type liés à une enzyme et se déplaçant 15 librement, sont piégés dans ladite zone de piégeage; et d. on observe la présence ou l'absence d'une modification quelconque dans ladite zone de substrat pour déterminer de cette façon la présence ou 20 l'absence de l'antigène testé dans ledit échantillon. Suivant d'autres caractéristiques: Lesdites zones de piégeage et de substrat sont juxtaposées. Ladite modification dans la zone de substrat 25 pour la détermination de la présence ou de l'absence de l'antigène testé dans ledit échantillon, est produite par un changement de couleur. Ladite zone de piégeage est réalisée en nitrocellulose. L'antigène recherché est la gonadotrophine chorionique humaine. La présente invention a également pour objet un dispositif pour déterminer la présence d'antigènes dans un échantillon, caractérisé en ce qu'il 35 comprend: a. une zone de piégeage comprenant (i) des anticorps d'un premier et d'un deuxième types, chacun de ceux-ci étant spécifique de l'antigène testé mais il reconnaît des domaines différents de l'antigène, les 5 anticorps du premier type étant fixés sur une particule de transport et les anticorps du deuxième type étant liés a une enzyme, de sorte qu'en présence de l'antigène testé, les anticorps du premier type et du deuxième type, forment des 10 complexes avec ledit antigène dans la zone de piégeage, comprenant des anticorps du premier type fixés à une particule de transport, l'antigène et des anticorps du deuxième type liés à l'enzyme, et (ii) un matériau susceptible de piéger les anticorps du 15 deuxième type mais pas les anticorps du premier type ou une autre substance fixés à ladite particule de transport, et b. une zone de substrat contenant un matériau susceptible de réagir avec les anticorps du deuxième 20 type liés à l'enzyme pour produire une réaction qui indique la présence desdits anticorps. Lesdites zones de piégeage et de substrat sont juxtaposées. Ladite réaction dans la zone de substrat qui 25 indique la présence desdits anticorps liés à l'enzyme est une réaction chromogène. Ladite zone de piégeage est réalisée en nitrocellulose revêtue avec de la protéine. Ladite zone de piégeage est réalisée en gel 30 d'agarose. La présente invention a encore pour objet un procédé de détermination de la présence d'un antigène dans un échantillon d'essai, caractérisé en ce que: a. on met l'échantillon d'essai en contact avec 35 un dispositif comprenant (i) des anticorps d'un premier type et d'un deuxième type qui sont chacun spécifiques de l'antigène mais qui reconnaissent des domaines différents de l'antigène, les anticorps du premier type étant fixés à une particule de transport 5 et les anticorps du deuxième type étant liés à une enzyme, de sorte qu'en présence de l'antigène testé, les anticorps du premier type et du deuxième type forment des complexes avec ledit antigène dans la zone de piégeage, comprenant des anticorps du premier 10 type fixés à une particule de transport, l'antigène et des anticorps du deuxième type liés à l'enzyme, (ii) un matériau susceptible de piéger les anticorps du deuxième type mais pas les anticorps du premier type ou une autre substance fixés auxdites particules 15 de transport, et (iii) une zone de substrat contenant un matériau susceptible de réagir avec des anticorps du deuxième type liés à l'enzyme pour produire une réaction qui indique la présence des anticorps; b. on laisse ledit mélange pénétrer à travers la 20 zone de piégeage dans laquelle tous les anticorps fixés auxdites particules de transport formant les complexes se déplacent librement à travers la zone de piégeage jusqu'à la zone de substrat, tandis que tous les anticorps qui ne sont pas fixés auxdites 25 particules de transport, comprenant les anticorps du deuxième type liés à l'enzyme et se déplaçant librement, sont piégés par ladite zone de piégeage; et c. on observe la présence ou l'absence d'une 30 modification quelconque dans ladite zone de substrat pour déterminer de cette façon la présence ou l'absence de l'antigène testé dans ledit échantillon. Suivant d'autres caractéristiques: Lesdites zones de substrat et de piégeage sont 35 juxtaposées. Ladite modification dans la zone de substrat pour déterminer la présence ou l'absence de l'antigène testé dans ledit échantillon, est produit par un changement de couleur. Ladite zone de piégeage est réalisée en nitrocellulose. L'antigène détecté est la gonadotrophine chorionique humaine. La présente invention va être mieux comprise à 10 la description qui va suivre donnée uniquement à titre illustratif et non limitatif! et faite en référence aux dessins annexés, sur lesquels: La figure 1 est un schéma illustrant le dispositif A de la présente invention; La figure 2 est un schéma illustrant le procédé de la présente invention utilisant le dispositif A de la figure 1; La figure 3 est un schéma illustrant le procédé de la présente invention utilisant le dispositif A de 20 la figure 1 et indiquant les résultats obtenus quand un fluide d'essai 26 est exempt d'antigène 28; La figure 4 est un diagramme illustrant le piégeage du conjugué libre enzymeanticorps en utilisant un tamis moléculaire pour la couche de 25 piégeage; La figure 5 est un diagramme illustrant le piégeage conjugué libre enzyme-anticorps en utilisant une combinaison de protéine A et de nitrocellulose pour la couche de piégeage; et La figure 6 est un diagramme illustrant le piégeage du conjugué libre enzyme-anticorps en utilisant une résine échangeuse de cations pour la couche de piégeage. En se référant à la figure 1, on remarquera que 35 le dispositif A de la présente invention comprend deux couches distinctes, à savoir une zone de piégeage 18 et une zone de substrat 20. Des anticorps 10 d'un premier type et des anticorps 12 d'un deuxième type, sont illustrés en étant disposés au 5 voisinage immédiat du dispositif A. Des anticorps 10 du premier type sont fixés sur la smrfa des particules de transport 14 et des anticorps 12 du deuxième type, sont conjugués avec une enzyme 16. La zone de piégeage 18 est réalisée à partir 10 d'un matériau poreux qui piège les anticorps 12 du deuxième type conjugués avec l'enzyme 16, mais qui ne capturent pas les particules de transport 14 qui sont liées aux anticorps 10 de premier type. La zone de substrat 20 est également réalisée à partir d'un 15 matériau poreux et elle contient un réactif chromogène 2 fixé, c'est-à-dire un matériau qui réagit avec l'enzyme 16 conjuguée aux anticorps 2 du deuxième type pour produire une couleur. Le dispositif A est illustré sur un support 24. On se référera à la figure 2 sur laquelle un fluide désigné de manière générale par la référence numérique 26 et contenant un antigène libre 28, est mélangé de manière spécifique avec des anticorps 10 du premier type fixés sur des particules de transport 25 14 et des anticorps 12 du deuxième type conjugués avec l'enzyme 16. Les anticorps 10 du premier type fixés aux particules de transport 14 se lient à des sites de reconnaissance spécifiques des antigènes 28. De manière analogue, les anticorps 12 du deuxième 30 type conjugués avec l'enzyme 16 et liés à d'autres sites récepteurs spécifiques sur les antigènes 28, sont liés aux anticorps 10 du premier type qui sont euxmêmes fixés aux particules de transport 14 en formant ainsi des complexes 32. Lorsque le fluide 35 diffuse à travers la zone de piégeage 18, tous les anticorps 12 du deuxième type conjugués à l'enzyme 16 qui n'ont pas formé les complexes 32 résultants, sont piégés dans la.zone de piégeage 18 tandis que tous les anticorps 12 du deuxième type conjugués à l'enzyme 16 ayant formé des complexes 32 résultants, se déplacent librement à travers la zone de piégeage 18 jusqu'à la zone de substrat 22 o l'enzyme 16 conjuguée réagit avec le réactif chromogène 22 pour produire une couleur distinctive qui indique la présence de l'antigène 28 dans le fluide 26 utilisé. On se réfèrera à la figure 3 sur laquelle un fluide désigné de manière générale par la référence numérique 26, est appliqué de manière spécifique sur la surface 30 de la zone de piégeage 18. Lorsque le flu- ide diffuse à travers la zone de piégeage 18, tous les anticorps 12 du dizane.tpconjugués avec l'enzyme 16 sont piégés par la zone de piégeage 18. En consequence, aucun anticorps lié à l'enzyme n'atteint le réactif chromogène 22 dans la zone de substrat 20 20 et on n'observe aucun changement de couleur, ce qui indique l'absence de l'antigène 28 dans le fluide d'essai 26. La présente invention utilise les quatre éléments suivants. Des anticorps d'un premier type et 25 d'un deuxième type qui reconnaissent des sites différents sur le même antigène, une particule de transport sur laquelle se fixent les anticorps du premier type, une enzyme conjuguée aux anticorps du deuxième type et un dispositif d'essai immunologique 30 comprenant une zone de piégeage qui fixe les anticorps du deuxième type mais pas ceux du premier type, et une zone de substrat qui réagit avec l'enzyme conjuguée aux anticorps du deuxième type pour produire une couleur distinctive (voir la 35 figure 1). Les anticorps comprennent des anticorps d'un premier type qui sont fixés sur une particule de transport et des anticorps d'un deuxième type qui sont conjugués avec un marqueur, tel qu'une enzyme. 5 Bien que - les deux classes d'anticorps soient spécifiques du même antigène, chaque type d'anticorps reconnaît des épitopes ou des sites de liaison différents. Ainsi, chaque type d'anticorps peut se fixer sur le même antigène en facilitant la mise en 10 oeuvre d'un essai immunologique à deux sites. Le concept de base de la présente invention repose sur l'interaction réciproque des particules de transport, des deux types d'anticorps et d'un dispositif d'essai immunologique qui comprend des 15 zones de piégeage et de substrat stratifiées. La zone de piégeage est très spécifique pour le conjugué d'anticorps libre, comprenant des anticorps du deuxième type tandis que les particules de transport se déplacent librement entre les deux couches. La 20 couche de substrat produit une réaction chromogène en *présence de l'enzyme. Quand les deux types d'anticorps sont mélangés avec un échantillon exempt d'antigène et que ce mélange est placé au contact des zones de substrat et 25 de piégeage stratifiées, on n'observe aucun changement de couleur (voir la figure 3). En raison de l'absence d'antigène, la reconnaissance à deux sites n'a pas lieettnis -i conjuguésindicateurslibresà anticorps du deuxième type, snt piégé6 par la zone de 30 piégeage. Ainsi, aucune réaction enzymatique n'a lieu dans le substrat et on n'observe aucun changement de couleur. En revanche, en présence d'un échantillon contenant un antigène, les anticorps du deuxième type 35 conjugués se fixent sur les particules de transport il par l'intermédiaire de l'antigène (voir la figure 2). A la suite de la reconnaissance à deux sites, l'enzyme conjuguée à l'anticorps ne peut peut être piégée dans la zone de piégeage dans la mesure o les 5 particules de transport empêchent le conjugu d'être piégé par la couche de piégeage. Ainsi, la particule de transport véhicule le conjugué jusqu'à la couche chromogène, seulement si l'antigène est présent. Dans le mode de réalisation préféré de la 10 présente invention, les anticorps utilisés comprennent deux types d'anticorps qui sont spécifiques de l'antigène testé. En revanche, chaque type d'anticorps est très spécifique d'un site de reconnaissance ou d'un épitope différent sur 15 l'antigène considéré de sorte qu'aucune réaction croisée ou un chevauchement, ne se produit. En outre, chacun des types d'anticorps qui sont spécifiques de l'antigène testé, peuvent être rencontrés dans la zone de piégeage du dispositif, ce qui élimine le 20 besoin d'une opération de mélange quelconque préalable à l'application. Les matériaux utilisés pour réaliser le dispositif de la présente invention sont bien connus dans la technique. La couche de piégeage peut être un 25 matériau à tamis moléculaire quelconque qui piège les conjugués à faible poids moléculaire mais qui ne piège pas les particules de transport. Le mécanisme de piégeage peut être basé sans toutefois y être limité, sur la taille, c'est-à-dire 30 en utilisant des particules de tamis moléculaire comportant de petites cavités qui piègent seulement les petits conjugués anticorps-enzyme et pas les complexes à particule de transport qui sont trop gros pour pénétrer dans les cavités du matériau de 35 tamis moléculaire; sur la charge, c'est-à-dire que le conjugué anticorps-enzyme se lie à des groupes de charge opposée rencontrés dans la zone de piégeage avec lesquels les particules de transport ne se lient pas dans la mesure o isr charge moyenne est 5 différente de celle du matériau rencontré dans la zone de piégeage ou dans la solution d'essai dans la mesure o la masse des particules de transport est beaucoup plus importante que celle des autres protéines! et sur les affinités naturelles 10 intrinsèques des protéines dans leurs sites de liaison, c'est-à-dire que la protéine A se fixe seulement -sur la partie FC des anticorps. Ainsi, lorsque les parties FC des anticorps sont fixées à la surface des particules de transport, la protéine A ne 15 peut physiquement plus se fixer sur lesdits anticorps, en permettant ainsi au complexe de la particule de transport de se déplacer à travers la zone de piégeage tout en piégeant les anticorps qui se déplacent librement. Des exemples du matériau solide approprié pour la réalisation de la zone de piégeage, comprennent des matériaux résineux et fibreux, des gels d'agarose et tout autre matériau comportant suffisamment d'espace vide pour piéger les anticorps se déplaçant 25 librement mais pas les particules de transport. De plus, les substrats appropriés ou les réactifs chromogènes utilisés dans la présente invention, sont bien connus dans la technique. A cet égard, on peut utiliser un certain nombre de types 30 différents d'enzymes purifiées qui réagissent directement ou indirectement avec l'agent chromogène rencontré. Un exemple d'une telle enzyme et de son substrat correspondant, est la peroxydase de raifort et le phosphate de pnitrophényle. Les anticorps 35 peuvent également être marqués avec des marqueurs radioactifs ou fluorescents. Dans un mode de réalisation de la présente invention, la fixation physique du conjugué sur la 5 particule de transport, le met à l'abri de sa fixation sur une protéine A fixée à la surface de la couche de piégeage. Les moyens par lesquels la couche de piégeage piège le conjugué, ne sont pas limités à ces modes de réalisation spécifiques. En variante, on peut également utiliser d'autres moyens, tels que la formation d'un complexe biotine-avidine. La présente invention n'est en revanche pas limitée à cette enzyme et à ses substrats correspondants. D'autres combinaisons enzyme-substrat 15 bien connue dans la technique, peuvent également être utilisées. La particule de transport peut également être réalisée de différentes façons. La particule de transport peut par exemple être une substance 20 colloidale d'un poids moléculaire élevé, tel que du dextrane, des particules solides composées de matières plastiques, de verre, de matériaux résineux ou métalliques, ou d'un polymère à poids moléculaire élevé. De plus, la particule de transport peut 25 également comporter une charge totale de surface anionique qui empêche le conjugué d'être piégé par une charge cationique présente sur la couche de piégeage. La présente invention va maintenant être décrite 30 plus en détail en se référant à l'exemple suivant. Exemple Essai: Détermination de la possibilité de l'utilisation de la présente invention pour la détection de la grossesse par l'intermédiaire de la 35 -2599845 détection d'un antigène formé par la gonadotrophine chorionique humaine (HCG). Produits utilisés: A. Antigène: gonadotrophine chorionique humaine (HCG) 5 provenant du nécessaire Pregnospia & urine témoin positive à une concentration de 150 m UI/ml. B. Anticorps: (i) anticorps de premier type fixg sur des particules de transport. Anticorps monoclonaux de souris dirigés contre 1'HCG (lot 4284148 fourni à 10 l'état lyophilisé) fixés à des particules d'or colloïdal de Pregnospia. (ii) anticorps de deuxième type conjugués avec une enzyme: anticorps antiHCG de Miles Yeda Inc. (lot 1064, spécifiques de la sous15 unité beta. Source: ascite du clone PC-2). Concentration en peroxydase: 0,53 mg/ml IGG de souris: 1,01 mg/ml Affinité: 5,3 x 10 litres/mole C. Zones de piégeage A. Preswollen Sephadex G-100 M compacté dans une chambre conique de 0,4 cm au sommet, de 0,4 cm de hauteur, de 0,1 cm à la base et d'un volume de 75 i1. B. Nitrocellulose d'une taille de pore de 5 micromètres, de Millipore, 4 couches empilées dans un 25 puits immunologique revêtu avec de la protéine A (S. aureus, souche Cowan, laboratoires Vector) à une concentration de 10 mg/ml fixée avec de l'albumine de sérum bovin C. Résine cationique (Beckman FPLC Mono C) 30 préparée comme en A cidessus. D. Substrat enzymatique chromogène: glucose oxydase à une concentration de 2,0 mg/ml + tétraméthylbenzidine (TMB) à une concentration de 20,0 mg/ml dissoutes dans du méthanol absolu et séchées à l'air sur du 35 papier Whatman nS5. Procédé: Etape 1: Préparation des deux types d'anticorps et de leurs agents de fixation. Les anticorps du premier type consistant en anticorps monoc1onauxdirW= reun site récepteur spécifique de l'antigène HCG, sont fixes sur des particules de transport consistant en particules d'or colloïdal de Pregnospia. Les anticorps du deuxième type consistant en 10 anticorps monoclonaux spécifiques de la sous-unité bêta qui reconnaissent un domaine différent sur l'antigène HCG que celui reconnu par les anticorps du premier type, sont conjugues à la peroxydage de raifort (HRP). Etape 2: Préparation de divers dispositifs d'essai immunologique. On a utilisé trois types d'essai immunologique (correspondant aux types décrits cidessus dans le titre "zones de piégeage"). Chacun de ceux-ci utilisait un type différent dans une zone de 20 piégeage qui a été disposée au sommet de la couche de substrat par des procédés connus dans la technique. Etape 3: La solution d'essai a été mélangée avec les deux types d'anticorps. Le mélange a ensuite été placé en contact avec la couche de surface des divers 25 dispositifs d'essai immunologique. RESULTATS Les figures 4 & 6 sont des diagrammes en unités de densité chromatique en fonction du temps. La figure 4 illustre le piégeage du conjugué 30 libre par la zone de tamis moléculaire. En l'absence d'un antigène, on n'a observé aucune coloration notable pour une dilution de 1 millième dans un volume de 100 1. Par application directe sur la couche de substrat, une densité chromatique de 0,47 35 est apparue en deux minutes. Avec une pré- incubation de 2 minutes avec l'antigène, on a obtenu une réaction de coloration notable de 0,31 unité de densité chromatique. La figure 5 illustre le mode de réalisation utilisant la couche de piégeage à la nitrocellulose et à la protéine A. La couche de piégeage s'est avérée modérément efficace. En l'absence d'antigène, on a seulement obtenu une coloration de 0,13 due au support précité. En l'absence de l'antigène, la 10 coloration était de 0,25, ce qui indique que la fixation du conjugué sur la particule de transport l'a manifestement empêché d'être piégée par la protéine A. La figure 6 illustre l'utilisation d'une résine 15 échangeuse de cations pour la couche de piégeage. Ce mode de réalisation était moins efficace que les autres mentionnés ci-dessus, mais il a permis de déterminer la présence ou l'absence d'antigène. En l'absence de l'antigène, une coloration notable est 20 apparue pour toutes les dilutions d'anticorps. En présence de l'antigène, un accroissement quantitatif de la coloration a été observé, ce qui indique que la particule de transport conférait une certaine protection contre la fixation sur la résine. Compte tenu de ce qui précède, il est clair que le dispositif et le procédé de la présente invention, sont vraiment efficaces pour la détermination de la présenced'unantigène spécifique dans un échantillon d'essai donné. Les nombreuses applications de la 30 présente invention apparaîtront facilement à l'homme de l'art concerné par la présente invention. Bien entendu, de nombreuses modifications et variantes peuvent être apportées à la présente invention sans sortir de son cadre tel qu'il est 35 revendiqué dans les revendications annexées. REVENDICATIONS 1. Dispositif (A) pour déterminer la présence 5 d',nantigène (28) dans un échantillon, caractérisé en ce qu'il comprend: a. une zone de piégeage (18) contenant un matériau susceptible de piéger des anticorps (12) liés à une enzyme (16) se déplaçant librement, mais 10 pas des anticorps (10) fixés à une particule de transport (14), qui se déplace librement à travers ladite zone de piégeage, et b. une zone de substrat (20) contenant un matériau (22) susceptible irénr- avec des anticorps 15 liés à une enzyme pour produire une réaction qui indique la présence des anticorps. 2. Dispositif suivant la revendication 1, caractérisé en ce que les zones de piégeage et de substrat, sont juxtaposées. 3. Dispositif suivant la revendication 1, caractérisé en ce que ladite réaction dans la zone de substrat qui indique la présence desdits anticorps liés à une enzyme est une réaction chromogène. 4. Dispositif suivant la revendication 1, 25 caractérisé en ce que ladite zone de piégeage est réalisée en nitrocellulose revêtue avec de la protéine A. 5. Dispositif suivant la revendication 1, caractérisé en ce que ladite zone de piégeage est 30 réalisée en gel d'agarose. 6. Procédé de détermination de la présence d'un antigène dans un échantillon essai, caractérisé en ce que: a. on met l'échantillon d'essai (26) en contact 35 avec un mélange d'anticorps d'un premier et d'un deuxième types qui sont chacun spécifiques dudit antigène (28) mais qui reconnaissent chacun des domaines différents dudit antigène, les anticorps (10) du premier type étant fixés sur une particule de 5 transport (14) et lesdits anticorps de deuxième type étant liés à l'enzyme (16), de sorte qu'en présence dudit antigène, des complexes comprenant &es anticorps du premier type fixés à une particule de transport, l'antigène et des anticorps du deuxième 10 type liés' à une enzyme, sont formés dans ledit mélange; b. on met ledit mélange en contact avec le dispositif (A) comprenant une zone de piégeage (18) et une zone de substrat (20), dans lequel ladite zone 15 de piégeage contient un matériau susceptible de piéger des anticorps libres comprenant les anticorps du'deuxième type liés à l'enzyme et non fixés, mais pas les anticorps du premier corps fixés à une particule de transport (14) ou 'une autre substance 20 fixée à ladite particule de transport, formant lesdits complexes et dans lequel ladite zone de substrat contient un matériau (22) susceptible de réagir avec ladite enzyme pour indiquer la présence desdits anticorps du deuxième type liés à l'enzyme; c. on laisse ledit mélange pénétrer à travers ladite zone de piégeage dans laquelle tous les anticorps fixé - sur les particules de transport formant lesdits complexes, se déplacent librement à travers ladite zone de piégeage jusqu'à la zone de 30 substrat tandis que tous les anticorps qui ne sont pas directement ou indirectement fixés auxdites particules de transport, y compris les anticorps du deuxième type liés à une enzyme et se déplaçant librement, sont piégés dans ladite zone de piégeage; 35 et d. on observe la présence ou l'absence d'une modification quelconque dans ladite zone de substrat pour déterminer de cette façon la présence ou l'absence de l'antigène testé dans ledit échantillon. 5 7. Procédé suivant la revendication 6, caractérisé en ce que lesdites zones de piégeage et de substrat sont juxtaposées. 8. Procédé suivant la revendication 6, caractérisé en ce que ladite modification dans la 10 zone de substrat pour la détermination de la présence ou de l'absence de l'antigène testé dans ledit échantillon, est produite par un changement de couleur. 9. Procédé suivant la revendication 6, 15 caractérisé en ce que ladite zone de piégeage est réalisée en nitrocellulose. 10. Procédé suivant la revendication 6, caractérisé en ce que l'antigène recherché est la gonadotrophine chorionique humaine. 11. Dispositif (A) pour déterminer la présence d'antigènes (28) dans un échantillon, caractérisé en ce qu'il comprend: a. une zone de piégeage (18) comprenant (i) des anticorps d'un premier et d'un deuxième types, chacun 25 de ceux-ci étant spécifique de l'antigène testé mais il reconnaît différents domaines de l'antigène, les anticorps (10) du premier type étant fixés sur une particule de transport (14) et les anticorps (12) du deuxième type étant liés à une enzyme (16), de sorte 30. qu-J présence de l'antigène testé, les anticorps du premier type et du deuxième type, forment des complexes (32) avec ledit antigène dans la zone de piégeage, comprenant des anticorps du premier type fixes & une particule de transport, l'antigène et des 35 anticorps du deuxième type liés à l'enzyme, et (ii) un matériau susceptible de piéger les anticorps du deuxième type mais pas les anticorps du premier type ou une autre substance fixés à ladite particule de transport, et b. une zone de substrat (20) contenant un matériau (22) susceptible de réagir avec les anticorps du deuxième type liés à l'enzyme pour produire une réaction qui indique la présence desdits anticorps. 12. Dispositif suivant la revendication 11, caractérisé en ce que lesdites zones de piégeage et de substrat sont juxtaposées. 13. Dispositif suivant la revendication 11, caractérisé en ce que ladite réaction dans la zone de 15 substrat qui indique la présence desdits anticorps liés à l'enzyme est une réaction chromogène. 14. Dispositif suivant la revendication 11, caractérisé en ce que ladite zone de piégeage est réalisée en nitrocellulose revêtue avec de la 20 protéine. 15. Dispositif suivant la revendication 11, caractérisé en ce que ladite zone de piégeage est réalisée en gel d'agarose. 16. Procédé de détermination de la présence d'un 25 antigène (28) dans un échantillon d'essai (26), caractérisé en ce que: a. on met l'échantillon d'essai en contact avec un dispositif (A) comprenant (i) des anticorps d'un premier type et d'un deuxième type qui sont chacun 30 spécifiques de l'antigène mais qui reconnaissent des domaines différents -de l'antigène, les anticorps du premier type étant fixés à une particule de transport (14) et les anticorps du deuxième type étant liés à une enzyme (16), de sorte qu'en présence de 35 l'antigène testé, les anticorps du premier type et du deuxième type forment des complexes avec ledit antigène dans la zone de piégeage, comprenant des anticorps du premier type fixés à une particule de transport, l'antigène et des anticorps du deuxième 5 type liés à l'enzyme, (ii) un matériau susceptible de piéger les anticorps du deuxième type mais pas les anticorps du premier type ou une autre substance fixés auxdites particules de transport, et (iii) une zone de substrat (20) contenant un matériau 10 susceptible de réagir avec des anticorps du deuxième type liés à l'enzyme pour produire une réaction qui indique la présence des anticorps; b. on laisse ledit mélange pénétrer à travers la zone de piégeage dans laquelle tous les anticorps 15 fixés auxdites particules de transport formant les complexes (32) se déplacent librement à travers la zone de piégeage jusqu'à la zone de substrat, tandis que tous les anticorps qui ne sont pas fixés auxdites particules de transport, comprenant les anticorps du 20 deuxième type liés à l'enzyme et se déplaçant librement, sont piégés par ladite zone de piégeage; et c. on observe la présence ou l'absence d'une modification quelconque dans ladite zone de substrat 25 pour déterminer -de cette façon la présence ou l'absence de l'antigène testé dans ledit échantillon. 17. Procédé suivant la revendication 16, caractérisé en ce que lesdites zones de substrat et de piégeage sont juxtaposées. 18. Procédé suivant la revendication 16, caractérisé en ce que ladite modification dans la zone de substrat pour déterminer la présence ou l'absence de l'antigène testé dans ledit échantillon, est produit par un changement de couleur. 35 19. Procédé suivant la revendication 16, caractérisé en ce que ladite zone de piégeage est réalisée en nitrocellulose. 20. Procédé suivant la revendication 16, caractérisé en ce que l'antigène détecté est la gonadotrophine chorionique humaine.