Brevet FR2598616A1 — publié le 19871120

Composition pharmaceutique destinée au traitement des phénomènes d'inflammation chez les mammifères. La présente invention concerne une composition pharmaceutique destinée au traitement des phénomènes d'inflammation chez les mammi5 fères, et plus particulièrement au traitement de l'arthrite ou symptômes similaires basés sur l'oxygène actif ou les superoxydes. On s'est aperçu depuis quelques temps que les phénomènes d'inflammation chez les mammifères pouvaient être, au moins en partie, reliés à la présence d'oxygène actif, y compris les superoxydes et les 10 radicaux qui y sont associés sur le site inflammatoire. On a effectué des recherches importantes pour mesurer et détecter les radicaux oxygène, pour déterminer les mécanismes selon lesquels les enzymes, tels que le dismutase superoxyde sont efficaces pour bloquer la toxicité du radical oxygène, ainsi que pour la mise au point et l'utilisation d'oxy15 dases amine cuivre dans la prévention des altérations des tissus et même dans l'amorçage de la récupération des tissus altérés. Les composés que l'on a jusqu'à présent mis au point pour l'antagonisme oxygène actif et superoxyde, ainsi que pour la destruction in-vivo, ne se sont pourtant pas révélés aussi efficaces que désiré; 20 ils provoquent des réactions secondaires ou encore ne peuvent être fabriqués en quantités commercialement intéressantes à un coût raisonnable. La présente invention s'est donné pour objet de remédier aux inconvénients ci-dessus mentionnés en proposant une composition pharmaceutique nouvelle permettant de traiter les affections inflammatoires 25 aiguës ou chroniques provenant de la présence toxique d'oxygène actif ou de superoxyde. La composition pharmaceutique selon l'invention ne présente pas de caractère de toxicité, ni d'effets secondaires mesurables. La composition pharmaceutique selon l'invention, destinée au 30 traitement des phénomènes d'inflammation chez les mammifères, est caractérisée en ce qu'elle est essentiellement constituée d'au moins un complexe organo-métallique apte à exercer in-vivo un effet antioxydant sur les superoxydes, le métal dudit complexe étant choisi parmi le cobalt et le fer. Le complexe organo-métallique selon l'invention est utilisé de préférence dans le traitement de l'arthrite aiguë ou chronique selon une posologie de 0,1 à 250 mg/kg du patient mais, dans tous les cas à au plus 50 % de la LD50 du composé, quand le médicament, comme il est préféré, est administré par voie orale. Le complexe, ou une combinaison de complexes, peut pourtant être aussi administré par voie sous5 cutanée ou même par voie topique dans un excipient convenable, par exemple dans un sérum physiologique dans le cas d'administration souscutanée et dans le diméthylsulfoxyde (DMSO) dans le cas d'administration topique; on peut aussi employer des excipients pour onguents, pommades ou autres excipients classiques. Dans le cas d'administration orale, le complexe ou le mélange de complexes, peut être préparé selon les formes adaptées. Par exemple, il peut être préparé sous forme de dragées, et capsules, de comprimés, d'élixirs ou sous toute autre forme convenable. La dose peut être administrée en une à six fois par jour, selon 15 la gravité de l'état inflammatoire, de préférence sous surveillance médicale, de telle sorte que le dosage puisse être réduit ou le nombre d'administrations quotidiennes abaissé selon que persiste l'état inflammatoire. Les composés selon l'invention présentent aussi des propriétés prophylactiques, en prévenant la propagation de l'inflammation arthri20 tique; on a pu constater qu'ils étaient efficaces pour réduire la gravité de l'état des sujets disposés à un tel état inflammatoire. Les composés peuvent aussi être efficaces dans la prévention des accidents cardiaques postischémiques ainsi que dans des applications gériatriques autres que les applications antiarthritiques. Les inventeurs ont découvert que l'effet anti-inflammatoire était exceptionnellement prononcé avec des complexes organo-métalliques de faible toxicité choisis dans le groupe comprenant: un [Co(2,3,9,10tétra(alkyl inférieur)-1,4,8,11-tétraazacyclotétradéca1,3,8,10-tetraène) C12]Cl, un l,l-diméthylferrocenium ou autre sel d'alkyl-ferrocenium, un complexe de cobalt (III)-bis(acétyl ou propio acétone)-éthylènediimine, et le [Co(2,12-diméthyl-3,7,11,17-tétraazabicyclo[l1.3.1] heptadéca- 1(17),2, 11,13,15-pentaène) C12]CI' H20. Dans le cas des dérivés de ferrocénium, les inventeurs ont découvert que le rôle-clé était joué par l'ion ferrocénium, de sorte que l'on peut utiliser tout sel de cet ion physiologiquement compatible ou pharmaceutiquement efficace. De plus les groupes méthyles ne sont importants que pour autant que deux radicaux méthylène -CH2- sont attachés au radical ferrocénium. Les groupes méthyles peuvent donc 5 être remplacés par des groupes alkyl, alkényle ou alcoxy en C1 à C5. Les meilleurs résultats sont obtenus avec les sels de 1, 1diméthylferrocénium. Dans le cas d'un (Co(2,3,9,10-tétra(alkyl inférieur)- 1,4,8,11tétraazacyclotétradéca-l,3,8,1010 tétraène) C12)CI, on a trouvé que l'alkyl inférieur pouvait être un alkyl en C1 à C6, mais que les résultats les meilleurs étaient obtenus quand le (Co (2,3,9,10- tétra(alkyl inférieur)-l,4,8, l-tétraazacyclotétradéca-1,3,8,10tétraène) C12)CI est le Co(2,3,9,10-tétraméthyl-1,4 8,1 -tétraazacyclotétradéca-1,3,8,10-tétraène) C12)CI. Le complexe de cobalt (Ill)-bis (acétyl propio acétone)-éthylènediimine est de préférence un complexe de cobalt (Ill)-bis (acétylacétone) éthylènediimine, et plus spécialement le [Co(bis(acétylacétone)-éthylènediimine) (NH3)2]+CI-. Les inventeurs ont découvert que les complexes ci-dessus peuvent être utilisés en même temps que des anti-inflammatoires connus avec des chaînes latérales d'acide propionique, et plus spécialement l'indométhacine, dans le but de calmer la douleur causée par l'inflammation 25 arthritique. La préparation des composés selon l'invention va maintenant être décrite [Co(Tim)C12]CI Tim = 2,3,9,10-tétraméthyl-1,4,8,11-tétraazacyclotétradéca-1,3,8, 10tétraène, ce composé présente la formule suivante (produit n 8). / CH2 CH2 CH2 N CI N5 3cX \ / / rCH3 Co y H3C N CH3 I I | ci i CH CH2 0 /1 CH2 Pour préparer le [Co(Tim)C12]PF6, on utilise le procédé de 15 Bush et al(lnorg. Chem., 1972, 11, 2893). On ajoute lentement une solution saturée de chlorure de tétraméthylammonium dans de l'acétone à une solution saturée de [Co(Tim) C12]PF6 dans de l'acétone jusqu'à ce que la solution devienne trouble. Par refroidissement, on obtient des cristaux vert clair du composé de 20 formule ci-avant Analyse: calculée pour C14H24N4CoCI3: C,40,63; H, 5,8; N,13,54. Trouvé: C, 40,57; H, 5,67; N, 13,15. Sels de 1, l-Diméthylferrocénium (PF, C I, BF, Br, Clo). Le sel PF6= présente la formule suivante (produit n 19). 25 CH3 Fe PF 41 CHP6 2 5 98616 On utilise le procédé de Wahl et al. (3. Phys. Chem., 1975, 79, 2049-52). On agite à température ambiante pendant 10 minutes une solution de diméthylferrocène (0,65 g, 3mmol) dans de l'acide sulfurique concentré (8 ml), puis on la verse dans 60 ml d'eau distillée froide. On élimine par filtration le produit insoluble, on traite le filtrat bleu foncé avec 0,82 g (5 mmol) d'hexafluorophosphate d'ammonium. On agite pendant 1/2 heure et on refroidit. Le produit solide séparé (formule ciavant) est rassemblé, lavé à l'éther éthylique et séché sous vide pen10 dant deux jours. Analyse: calculé pour C12H14FePF6: C, 40,14; H, 3,93. Trouvé: C, 39, 98; H, 4,23. Complexe de Cobalt (i111) Bis (acétylacétone)-éthylènediimine [Co(BAE) (NH3)2]CI - Produit n 23. 15 H3C NH3 O-CH3 \ C3H Ci C C C NH N-C / C2 N"3 C/ 3 H3C CH2 _ CH2 2 25 Ce complexe est préparé selon une modification du procédé 30 décrit par G. Costa et al., 3. Organometal. Chem., 1966, 6, 181 - 187. On dissout du Bis (acétylacétone)-éthylènediimine (BAE, 2.24 g, 10 mmol) dans du méthanol (100 ml) et on le traite avec du chlorure de cobalt hexahydrate (2,38 g, 10 mmol). La solution brune est agitée à température ambiante pendant I jour 1/2 afin de permettre l'oxydation 35 du cobalt (pas de précipité formé); on la traite avec 7 ml d'une solution aqueuse concentrée d'ammoniac, puis on la chauffe sous reflux pendant 2 heures. Le solide brun-jaune qui se sépare au repos est recristallisé à partir du mélange éthanol/eau. Analyse calculé pour C12H240O2N4CoCI: C, 41,09; H, 6,90. Trouvé C, 40,81 H, 7,00. [Co(CR)C12]CI'H20 - Produit N 39 CR = 2,12-diméthyl-3,7,11,17tétraazabicyclo [11.3.1] heptadéca- 1(17), 2,11,13,15-pentaène. H H2 CHN CH2 2 CH2CH2 N N 1N C lCo C ci 1 '- CH3 H3C N 3 I C) On prépare le complexe Co(II), [Co(CR)C12] et on l'oxyde par le procédé décrit par Poon et al. pour le perchlorate analogue (J. Chem. Soc. Dalton, 1977, 1247-1251. Le complexe de formule ci-dessus est recristallisé à partir d'acétone. Analyse: calculé pour C16H24ON4CoCI3: C, 42,35; H, 5,33; N, 12,35; CI, 23,45. Trouvé: C, 41,35; H, 5,69; N, 12,07; Cl, 23,64. Etudes inflammatoires in-vivo: Les médicaments utilisés sont préparés juste avant d'effectuer l'expérimentation. Les médicaments sont dissous, à une concentration de 10-2M (ou 2 x 10-2M ou 4 x10-2M) dans une solution saline stérile dépourvue de pyrogène. Le médicament dissous est filtré sur filtre stérile et dépourvu de pyrogène 0,2 micron (acrodisque, Gelman) . 35 Processus: On numérote, pèse, et répartit dans 2 à 3 cages, 3 à 4 souris par cage, 8 à 12 souris femelles CD.1 (Charles river), de 2 à 5 mois. On injecte, sans ordre précis, par voie sous-cutanée, 0,2 ml de solution saline dépourvue de pyrogène ou de médicament. minutes après injection du médicament ou de la solution 5 saline, on injecte dans la patte droite de chaque souris 25 microlitres d'une solution saline à 1 %, dépourvue de pyrogène, de carraghénin (type viscarine, Marine Colloids), ou 5 microlitres (0, 227 U) de Xanthineoxydase (Sigma). 1,5 à 2 heures après injection du stimulus inflammatoire à 10 la patte droite, on ampute les deux pattes de l'animal à l'articulation du genou et on les pèse. La patte gauche, qui n'a pas reçu d'injection, sert de témoin pour estimer le taux de gonflement de la patte droite de chaque animal. Calculs: 20 25 30 La différence en mg entre les poids de la patte droite et de la patte gauche chez les animaux témoins (ayant reçu l'injection de solution saline) correspond à 100 % de réaction inflammatoire aiguë. Simultanément, la différence entre les pattes des animaux traités au médicament est calculée et comparée au témoin Tableau I: Influence de différents produits sur l'oedème carraghénique des pattes chez les souris, mesuré par le poids des pattes Produit Nombre Total Voie mg/kg % % d'expériences souris d'adminis- moyenne activité inhibition tration solution saline - - *S.C. 100 % O 23 4 14 *S.C. 25 63,1 % 36P9 % 8 4 15 *S.C. 29,8 73,2 % 26,8 % 39 5 18 *S.C. 35,7 64,7 % 35,3 % 19 I 4 *S.C. 23,5 88,2 % 11,8 % 19 3 11 *S.C. 58,9 54 % 46 % * Sous-cutanée 25986-16 Tableau Il: Influence des différents Droduits sur l'oedème xanthine- oxydase des pattes, mesuré par abaissement de température. Nombre Total Voie d'ad- mng/kg % Produit expériences souris ministration moyenne activité inhibition inhibition Soutkin se - - *S.C. - 100 % O 23 2 6 *S.C. 22,7 31% 69 %9 8 3 10 *S.C. 25,1l 33,2 % 66t8 % 19 I 4 *S.C. 46r8 69p5 % 30t5 % 19 3 12 *S.C. 91t5 49,6 % 50,4 % * sous-cutanée Tableau III: Valeur LD50 et ED50 des différents médicaments sur l'oe15 dème des pattes xanthine-oxydase et carraghènine chez les souris. mesure du stimulus xanthine oxydase temp. ED50 mg/kg carraghénine poids- mg ED50 mg/kg médicament LD50 mg/kg 23 75 19 " 875 93 65 39 85 - 43 8 172 faire les comprimés pour obtenir des comprimés de 300 mg contenant 25 mg de composé actif. Un lot de fabrication renferme 1000 comprimés. Exemple 2 On prépare des dragées ayant la composition suivante 10 composant actif (un ou plusieurs des composes 8, 19, 23 ou 39) 50,0 mg lactose 94,0 mg polyvinyle pyrrolidone 154,0 mg stéarate de magnésium 2,0 mg 300,0 mg Les granulés sont préparés comme dans l'exemple 1, puis on façonne des dragées en amande de 150 mg. Ces dragées sont revêtues d'une couche renfermant du sucre et du talc, colorées avec un colorant alimentaire approprié et polies avec de la cire d'abeilles. 20 Exemple 3 On dissout 25 mg de composé actif (1 ou plusieurs des composés 8, 19, 23 ou 39) dans 1000 ml d'eau distillée. On remplit 500 ampoules avec cette solution. On obtient ainsi des ampoules renfermant 2 ml d'une solution à 25 mg/ml de composé actif. Le contenu de chaque am25 poule est injecté par voie sous-cutanée. Exemple 4 On prépare des capsules de gélatine ayant la composition suivante Composant actif (un ou plusieurs des composés 8, 19, 23 ou 39) 25,0 mg amidon de mais 122,0 mg silice colloïdale 3,0 mg ,0 mg Les ingrédients sont homogénéisés puis introduits dans des capsules de gélatine dure. Un lot de fabrication renferme I 000 capsules 35 renfermant 150 mg avec 25,0 mg d'ingrédient actif par capsule. Revendications I - Composition pharmaceutique destinée au traitement des phénomènes d'inflammation chez les mammifères, caractérisée en ce qu'elle est essentiellement constituée d'au moins un complexe organo5 métallique apte à exercer in-vivo un effet anti-oxydant sur les superoxydes, le métal dudit complexe étant choisi parmi le cobalt et le fer. 2 - Composition pharmaceutique selon la revendication 1, caractérisée en ce que le complexe organo-métallique est choisi dans le groupe comprenant un [Co(2,3,9,10-tétra(alkyl inférieur)-l,4,8,11-tétraazacyclotétradéca1,3, 8,10-tétraène)C12]CI, un l,l-diméthylferrocenium ou autre sel d'alkylferrocenium, un complexe de cobalt (II)-bis (acétyl ou propio acétone)éthylènediimine,et le [Co(2,12-diméthyl-3,7,11,17-tétraazabicyclo [11.3. 1]heptadéca-1(17),2, 11,13,15-pentaène)C12]Cl'H2O. 3 - Composition pharmaceutique selon la revendication 2, caractérisée en ce que le sel de l,l-diméthylferrocenium est le l,l-diméthylferrocenium hexafluorophosphate. 4 - Composition pharmaceutique selon la revendication 2, caractérisée en ce que le [Co(2,3,9,10-tétra(alkyl inférieur)- 1,4,8,11 tétraazacyclotétradéca- 1,3,8,10tétraène)C12]CI est le [Co(2,3,9,10-tétraméthyl-1,4,8,11-tétraazacyclotétradéca-1,3,8,10-tétra25 ène)CI2ICI. - Composition pharmaceutique selon la revendication 2, caractérisée en ce que le complexe de cobalt (III)-bis (acétyl ou propio acétone)éthylènediimine est le complexe de cobalt (III)-bis (acétylacétone) éthylènediimine. 6 - Composition pharmaceutique selon la revendication 2, caractérisée en ce que le complexe de cobalt (III)-bis (acétylacétone)-éthylènediimine) est le [Co(bis(acétylacétone)-éthylènediimine) (NH3)2]C. 7 - Composition pharmaceutique selon l'une des revendications I à 6, caractérisée en ce qu'elle est associée à un excipient pharmaceu35 tiquement acceptable convenant à l'application par voie orale, topique ou sous-cutanée. 2598-616 8 - Application de la composition pharmaceutique selon l'une des revendications I à 6 associée à l'indométhacine. 9 - Application de la composition pharmaceutique selon l'une des revendications I à 8 au traitement de l'arthrite. 10 - Application de la composition pharmaceutique selon l'une des revendications I à 8 au traitement de l'arthrite aiguë.