Brevet FR2600067A1 — publié le 19871218

La gastrine est une hormone polypeptidique qui possède de multiples activités biologiques dont la principale est la-stimulation de la sécrétion gastrique. Il a été établi que de nombreux peptides synthétiques dérivant en particulier du tétrapeptide C-terminal de la gastrine conservent tout ou partie des activités biologiques de la gastrine. I1 est également connu que le remplacement de certains aminoacides de la séquence de la gastrine ou de ses fragments conduit à des dérivés peptidiques qui antagonisent parfois à un niveau élevé l'action de la gastrine sur la sécrétion gastrique. Toutefois l'utilisation thérapeutique de tels dérivés se trouve considérablement limitée par la briéveté de leur activité due à la destruction très rapide des composés peptidiques dans l'organisme. La présente invention a pour objet de nouveaux dérivés pseudopeptidiques qui possèdent une forte activité antagoniste de la sécrétion gastrique associée à une durée d'action prolongée in vivo. Les composés selon l'invention répondent à la formule générale dans laquelle - X représente l'hydrogène, un groupe acétylamino, un groupe tertiobutyloxycarbonylamino ou un groupe benzyloxycarbonylamino ; - R1 représente un groupe n-butyie isobutyle méthylthioéthyle ou éthplthioéthyé; - A et B sont obligatoirement différents et représentent soit un groupe -NH-, soit un groupe -C=O - R2 représente un groupe dans lequel R3 désigne un groupe choisi parmi Les sels que les composés de formule (I) peuvent fcrmer avec les bases minérales ou organiques font partie intégrante de l'invention. Les atomes marqués C sont des atomes de carbone asymétriques et par suite peuvent exister sous la forme de 2 isomères D et L Tous les isomères sont inclus dans la présente invention. Toutefois les composés préférés comportent ld configuration L sur les atomes de carbone (1) et (2). La présente invention comporte également un procédé de préparation des pseudopeptides selon l'invention; dans lequel les étapes de déprotection sont réalisées selon des procédés bien connus de l'homme de l'art. Pour les composés (I) où A représente NH et B représente CO, on part du dipeptide amide protégé dans lequel Y et Y1 sont des groupes protecteurs, qui,traité en solution à température ambiante par le bis((trifluoroacétoxy) iodo) benzène conduit au dérivé gem diamine isolé sous forme de trifluoracétate et en conservant la stéréochimie des 2 carbones asymétriques. Le dérivé aminé (b) est condensé en solution avec un ester activé du tryptophane protégé sur l'amine ou avec un ester activé de l'acide indolyl-3 propionique pour conduire au composé (c) Par hydrogénation en solution en présence de Palladium sur charbon comme catalyseur, on élimine à la fois le groupes protecteur de l'amine terminale et le groupe Y protecteur de la chaine latérale. Sur le dérivé (d) ainsi obtenu, on condense alors l'acide R2 C00H en utilisant soit l'acide lui-même en présence d'un agent de condensation tel qu'un carbodiimide, soit un dérivé activé de l'acide, par exemple son ester avec la N-hydroxy succinimide ou encore le chlorure d'acide R,COC1 pour aboutir au composé (I). Quand R3 représente NH et lorsque celui-ci est accessible, on peut aussi remplacer l'acide R2 COOH ou son ester activé par un isocyanate R2-NCO qui conduit par addition au composé (I) correspondant. Selon une variante du procédé on peut intervertir l'ordre des étapes de la synthèse. A partir du dipeptide amide protégé (a), on peut, après déprotection sur l'azote, condenser l'acide R2 COOH ou un de ses dérivés comme indiqué précédemment pour former le composé (e) Celui-ci traité comme indiqué ci-dessus par le (bis (trifluoroacétoxy) iodo) benzène conduit au dérivé gem diaminé (f) isolé sos forme de trifluoracétate. En condensant (f) avec un ester activé du tryptophane ou de l'acide indolyl-3 propionique on obtient le composé protégé (g) Enfin par hydrogénation catalytique, on élimine le groupe protecteur de la chaine latérale qui fournit le composé (I) correspondant. Dans le cas des composés (I) où A représente -C=O et B représente NH, on part du dipeptide amide protégé qui par action de bis (trifluoracétoxy) iodo benzène, comme indiqué ci-dessus, conduit au dérivé aminé : isolé sous forme de trifluoracétate et dont la configuration des carbones asymétriques est conservée. Le dérivé (i) est alors condensé avec l'acide R2COOH ou avec un dérivé activé de celui-ci pour conduire au composé (j) Après déprotection de celui-ci par l'acide trifluoracétique, on condense sur l'amine ainsi libérée un ester activéN-protégé du tryptophane ou un ester activé de l'acide indolyl-3 prioponique pour conduire au composé (k) Par hydrogénation catalytique en présence de palladium sur charbon on élimine le groupe protecteur de la chaîne latérale pour obtenir le composé (I) correspondant. tes produits de départ de formule (a) ou (h) sont des produits connus ou peuvent être préparés par -les méthodes habituelles de synthèse peptidique. Les exemples suivants, non limitatifs, illustrent l'invention. Dans ces exemples , on utilisera également les abréviations suivantes Trp : Tryptophane. Asp : Acide as"partique. Leu : Leucine. Asp(OBzl) : Acide aspartique protégé sous forme d'ester benzylique de la fonction acide de la chaine latérale. OSu : Ester de N-hydroxysuccinimide. DMF : Diméthylformamide. TFA : Acide trifluoracétique. HOBt : Hydroxy-l benzotriazole. DCC : N, N'- dicyclohexylcarbodiimide. DCU : N, N'- dicyclohexylurée. DIEA : Diisopropyléthylamine. Nle : Norleurine Z : benzyloxycarbonyle Boc : tertiobutyloxycarbonyle Bzl : benzyle. EXEMPLE 1 A) Z-D-Asp(OBzl)-D-Leu-*NH2 A une solution refroidie à -150C de 2 g de Z-D-Asp(OBzl)-OH dans 10 ml de DMF, on ajoute 0,63 ml de N-méthylmorpholine et 0,76 ml de chloroformiate d'isobutyle. Après 5 minutes d'agitation à -150C, on ajoute 0,79 g de Dleucinamide puis on agite le mélange réactionnel pendant 1 heure à 0 C puis pendant 1 heure à température ambiante. Par addition sous vive agitation de 150 ml de solution aqueuse à 10 % d'acide citrique, il se forme un précipité incolore. On l'essore et on le lave successivement avec de l'eau (3 fois 80 ml), avec une solution saturée de bicarbonate de sodium (3 fois 80 ml) puis à nouveau avec de l'eau jusqu a neutralité. Après séchage sous vide en-présence d'anhydride phosphorique, on obtient 2,47 g du produit attendu. F : 158-1600C ; (a)20D + 13,5 (c = 1,04 DMF) ; Rendement : 94 m. A une suspension de 2,2 g du dipeptide amide obtenu ci-dessus dans 20 ml du mélange acétonitrile-eau (50-50, vol/vol), on ajoute 2,12 g de (bis(trifluoroacétoxy) iodo) benzène. Après 3 heures d'agitation à température ordinaire, on obtient une solution claire ne contenant plus de produit de départ. On évapore les solvants sous pression réduite et obtient un résidu solide incolore que l'on sèche sous vide sur anhydride phosphorique. Ce produit est utilisé tel quel pour l'étape suivante. Le résidu sec provenant-de l'étape précédente est dissous dans 5 ml de DNF contenant 0,80 ml de DIEA et 1,6 g de Boc-L-Trp-OSu. Le mélange est agité 2 heures à température ambiante puis le composé attendu est isolé comme indiqué dans le paragraphe 1. Poids : 2,79 g Rendement : 96 % ; F = 185 C, décomposition. a) Déprotection. On dissout 2 g du composé obtenu ci-dessus dans 30 ml de DMF et ajoute du catalyseur à 10 % de Palladium sur charbon. On hydrogène pendant 4 heures à température ambiante et pression atmosphérique. On filtre le catalyseur et élimine le solvant sous vide à température inférieure à 400C. Par trituration du résidu dans l'éther éthylique, on obtient un solide incolore (1,08 g) utilisé tel quel pour l'étape suivante. b) Couplage. A la solution de 0,667 g d'ester de N-hydroxysuccinimide de l'acide DL benzyl-2 malonique monoamide dans 5 ml de DMF, on ajoute le composé protégé préparé ci-dessus et 0,37 ml de DIEA. On agite pendant 4 heures à température ambiante puis on ajoute 100 ml d'une solution aqueuse à 10 O d'acide citrique. On obtient un précipité incolore qu'on essore et lave avec de l'eau (3 fois 50 mi), de l'acétate d'éthyle (3 fois 50 ml) et de l'éther éthylique (3 fois 50 ml). Après séchage sous vide sur anhydride phosphorique, on obtient 1,05 g du produit attendu. F = 2100C, décomposition 20 D + 7,0 (c = 1,4 DMF) Rendement : 52 tO. EXEMPLE 2 A partir du dipeptide amide protégé Boc-L-Leu-L-Asp(OBzl)-.NE2, (2,5 g) on prépare le composé diaminé correspondant par action de 2,6 g de (bis (trifluoroacétoxy) iodo) benzène selon la méthode décrite dans l'exemple 1-B. A la solution dans 15 ml de DMF du trifluoracétate ainsi obtenu, on ajoute 0,99 ml de DIEA, 1,11 g d'acide D,L benzyl-2 malonique monoamide et 0,78 g HOBt. Le mélange est refroidi à OOC et on ajoute 1,1 g de chlorhydrate de N-(diméthylamino-3 propyl) N'-éthyl carbodiimide. On agite 16 heures à température ambiante. Par addition de 100 ml d'une solution aqueuse à 10 % d'acide citrique, il se sépare un solide incolore que l'on essore, lave avec de l'eau (3 fois 80 ml), de l'acétone (10 ml) et de l'éther éthylique (3 fois 80 ml). Après séchage sous vide en présenced'aphydride phosphorique, on obtient 2,15 g du produit attendu. F : 184-1870C ; 20 (a)20D - 3,0 (c = 1,3 DMF) Rendement : 65 %. On déprotège sur l'azote terminal l-g du composé obtenu ci-dessus par traitement par 3 ml d'acidetrifluoracétique à températur-e ambiante durant 30 minutes. On ajoute sous vigoureuse agitation 100 ml d'éther éthylique et on obtient un précipité incolore qu'on essore, lave plusieurs fois avec de l'éther ethylique et sèche sous vide sur potasse. Le trifluoracétate ainsi obtenu est dissous dans 3 ml de DMF et on ajoute 0,3 g de DIEA et 0,642 g de Boc-L-Trp-OSu. On agite pendant 2 heures à température ambiante et isole le produit attendu comme indiqué à l'exemple 1, paragraphe A. Poids : 1,20 g F : 200-205 C ; 20 (&alpha;)20D - 9,9 (c = 1,03 DMF) Rendement 98 %. On élimine l'ester benzylique de la chaîne latérale par hydrogénation catalytique en présence de Palladium sur charbon de 1 g du produit obtenu précédemment en solution dans 80 ml d'un mélange éthanol-DYF (50-50, vol/vol). On isole le produit comme indiqué dans l'exemple 1, paragraphe D. On obtient 0,84 g du produit attendu ; F : 225 C avec décomposition (a) 20D - 14,4 (c = 1,05, D!S) Rendement : 95 0. EXEMPLE 3 A) Boc-D-Asp(OBzl)-DNle-NlI2 Préparé selon l'exemple 1 paragraphe A en remplaçant la Dleucinamide par la même quantité de D-norleucinamide. De la même façons on obtient un solide incolore. F : 140-1450C 20 (a) D + 1834 (c = 0 > 98 DMP) Rendement 95 ,0. 3) Ester de N-hydroxysuccinimide de l'acide phényl-3 propionique. A la solution refroidie à OOC de 5 g d'acide phényl-3 propionique et 5,75 g de N-hydroxy succinimide dans 40 ml de diméthoxy-l > 2 éthane, on ajoute 6,87 g de DCC. - On agite à température ambiante pendant 16 heures puis filtre la DCU formée. On dilue le filtrat-avec 200 ml d'acétate d'éthyle et lave la solution avec une solution aqueuse froide à 2 ,0 de bicarbonate de sodium (3 fois 80 ml), avec de l'eau (50 ml), avec une solution aqueuse 1N de bisulfate de potassium (100 ml) et enfin avec de l'eau salee (100 ml). On sèche la solution sur sulfate de magnésium et évapore les solvants sous vide. On obtient un solide incolore qu'on recristallise dans un mélange acétate d'éthyle-hexane. Poids : 5,69 g F : 112-l150C Rendement : 69 , Ó. C) C6 H5CH2CH2CO-D-Asp(OBz1)-DNle-NH2 On déprotège sur l'azote, 1145 g du composé préparé au paragraphe A ci-dessus par action de l'acide trifluoracétique à température ambiante pendant 30 minutes. Le trifluoracétate ainsi obtenu est dissous dans i ml de DMF. On ajoute ensuite 0,574 ml de DIEA et 0,816 g d'ester de Nhydroxysuccinimide de l'acide phényl-3 propionique. On agite 2 heures à température ambiante puis isole le produit comme indiqué à l'exemple 1 paragraphe A. F : 174-1770C. On traite 1,3 g du composé préparé ci-dessus par 1,26 g de (bis (trifluoroacétoxy) iodo) benzène selon la technique de l'exemple 1, paragraphe B. De la même façon on isole le trifluoracétate du dérivé gem diamino qu'on dissout dans 5 ml de DMF. On ajoute 0,48 ml de DIEA et 0,883 g de Boc-L-Trp-OSu. On agite le mélange pendant 16 heures à température ambiante puis on isole le produit selon la technique de l'exemple 1-A. F : 173-l780C 20 (a) D 5,6 (c = 1, DMP) Poids : 1,52 g Rendement : 95 ,0. On déprotège la chaine latérale du composé précédent par hydrogénation catalytique comme indiqué dans les exemples précédents. A partir de 1,43 g du dérivé protégé, on obtient 0,95 g du composé attendu. F : 1900C (décomposition) 20 (a) D + 9,8 (c = 1,1, DXMF) ; Rendement 80 %. EXEMPLE 4 A) G6 X;CH2NHCO-D-Asp(OBzl)-DNle-N'X2 On déprotège sur l'azote 1,65 g du composé de l'exemple 3, paragraphe A, par action de l'acide trifluoracétique 30 minutes à température ambiante. Le trifluoracétate ainsi obtenu est dissous dans 25 mol d'acétate d'éthyle et on ajoute 0,651 g de DIEA et 0,47 ml d'isocyanate de benzyle. I1 se forme rapidement un précipité qu'on essore, lave avec de l'acétate d'éthyle (3 fois 43 ml), de 1'éther éthylique (3 fois 40 ml) et sèche sous vide. Cristaux incolores - Poids : 1,6 g F : 208-2l20C (a) 20D + 1,9 (c = 1,2 D > F) D Rendement : 92 ,0. On prépare ce produit à partir du composé précédant ainsi qu'il est indiqué dans l'exemple 3 > paragraphe D. F : 2100C (décomposition) ; (a) 20 D - 233 (c = 1,09 > DMP) Rendement : 69 ,0. On déprotège la chaîne latérale du produit précédent comme indiqué dans l'exemple 3, paragraphe E. F : 200 C (décomposition 20- - 5,3 (c = 1, DMF). D EXEMPLE 5 Ce composé est préparé à partir du trifluoracétate du dérivé gem diaminé décrit à l'exemple 2-A par condensation avec l'ester de Nhydroxysuccinimide de l'acide phényl-3 propionique (exemple.3, paragraphe B) selon la technique decrite à l'exemple 3-C. Après chromatographie sur colonne de silice, en éludant par acétate d'éthyle/hexane, on obtient le produit attendu sous forme d'un solide incolore. F : 155-1580C (a) D ~ 8,7 (c = 1, DET) ; Rendement : 65 . On procède comme dans l'exemple 2-B à partir-du composé obtenu ci-dessus. F : 175-1850C ; 20 (a) D - 14,8 (c = 1, DMF) Rendement : 92 ,0. On déprotège le produit obtenu ci-dessus en opérant comme dans l'exemple 2-C. Solide incolore. F : 2050C (décomposition) 20 (a)20D - 1318 (c = 1,3, DMF) Rendement 87 %. EXEMPLE 6 On opère comme dans l'exemple 5 en remplaçant dans la première étape le couplage avec l'ester activé de l'acide phényl-3 propionique par la réaction du dérivé gem diamino avec l'isocyanate de benzyle selon la technique de l'exemple 4-A. On isole ainsi successivement F : 175-1780C ; 20 (a) 2 D ~ 10,1 (c = 1, DMF) ; Rendement : 51 ,0. F : 2O00C (décomposition) (a) 20 D - 15,7 (c = 1,1 > DMP) Rendement : 77 % et le composé du titre F : 1500C (décomposition) 20 (a) D - 17,4 (c = 1,2, DMF) Rendement :-80 %. Les composés selon l'invention ont ete étudiés en ce qui concerne leurs propriétés thérapeutiques. En particulier, ces composés ont été étudiés in vivo en ce qui concerne leur effet sécrétoire gastrique. Pour cette étude les dérivés (I) ont été dissous dans l'ammoniaque 0,1 N et la solution filtrée sur Millipore (0,2 um) a éte lyophilisée. Le modèle choisi pou la mesure de l'effet sécrétoire est celui de l'estomac de rat anesthésié reperfusé. Le protocole suivi est une modification de celui décrit préalablement par GHOSH et SCHILD. Un rat mâle de souche Wistar de 300 g, à jeun de 18 heures, est anesthésié à l'uréthanne (solution à 10 , 1,5 ml/100 g i.p.). On pratique ensuite une trachéotomie et un cathétérisme de la veine du pénis qui permettra l'administration i.v. des peptides. On place ensuite une canule dans l'oesophage jusqu'au cardia et une seconde dans le duodénum (par une duodénotomie effectuée à 3 cm environ du pylore) jusque dans la zone antrale gastrique. Un soluté propionique-succinique (pH 5,5) qui donne une variation linéaire du pH en fonction de la concentration en ions H + est utilisé pour perfuser l'estomac avec un debit de 3 ml/min. La température corporelle, ainsi que celle du soluté, est contrôlée et maintenue à 3O0C. La sécrétion acide de l'estomac va entrainer une variation de pH détectée par l'électrode de verre et enregistrée en fonction du temps. Après stabilisation de la sécrétion basale, on injecte la gastrine par voie intraveineuse soit en perfusion, soit en injection unique. La réponse est enregistrée en fonction du temps et la quantité d'acide sécrété est mesurée sur l'enregistrement par différence avec la sécrétion basale. La même expérience est réalisée en associant le produit à étudier avec le stimulant dans des rapports de concentration variables. La quantité d'ions H +. sécrétée en présence du produit à étudier est comparée à la quantité d'ions H +. sécrétée après l'administration de gastrine seule et le résultat est exprimé en d'inhibition. En utilisant différentes doses du produit à étudier, on peut, à partir des résultats obtenus, déterminer la dose efficace 50 (DE 50) ou dose qui inhibe de 50 t0 la sécrétion d'ions-H +. provoquée par la gastrine. Enfin, le peptide est administré seul à differentes doses afin de déterminer son effet agoniste éventuel sur la sécrétion gastrique. Les résultats obtenus avec divers produits de l'invention sont réunis dans le tableau suivant. : Produit de : Effet agoniste : Effet antagoniste l'exemple (1) : DE 50 mg/kg : 1 : Faible : 0,1 : 1 : Faible : 0,1 : : 2 : Faible : 0,2 : 3 : Faible 1,5 : 4 : Faible : 0,7 : 5 : Nul : 0,1 : 6 : Nul : 0,6 : 6 : Nul : 0i6 (1) Effet agoniste faible signifie que l'effet agoniste n'est mesurable qu'à partir de 3 mg/kg. Effet agoniste nul signifie qu'aucune activité agoniste n'a été décelée jusqu'à 3 mg/kg. Ces résultats montrent que - les composés selon l'invention présentent un effet agoniste fai ble ou nul vis à vis de la gastrine - les composés selon l'invention présentent un effet inhibiteur puissant de la sécrétion gastrique. De plus les composés essayés présentent une longue durée d'action. Ainsi le composé de l'exemple 5 en injection unique inhibe la sécrétion gastrique pendant plus de 2 heures. Par suite3 les composés selon l'invention pourront être utilisés en thérapeutique humaine dans tous les cas où il est utile de diminuer la sécrétion gastrique et en particulier pour le traitement des ulcères gastro-duodénaux. Les composés de la présente invention peuvent être utilisés de préférence par voie injectable : intraveineuse, intramusculaire ou sous-cutanée. Ils sont utilisés dans un solvant tel que le sérum physiologique (solution saline isotonique). La posologie peut varier suivant intensité de l'effet thérapeutique recherché , la gravite de l'affection à traiter et la voie d'administration utilisée. Elle doit donc être déterminée pour chaque patient en fonction de ces divers critères. Le plus souvent elle est comprise entre 0,1 et 10 mg de principe actif par kg de poids corporel. REVENDICATIONS 1. Nouveaux dérivés pseudopeptidiques de formule générale dans laquelle - X représente l'hydrogène, un groupe acêtylamino, un groupe tertiobutyloxycarbonylamino ou un groupe benzyloxycarbonylamino - R1 représente un groupe n-butyg isobutyla méthylthioéthyleou éthylthioéthyle; - A et B sont obligatoirement différents et représentent soit un groupe -NE-, soit un groupe -C=O - R2 représente un groupe dans lequel R3 désigne un groupe choisi parmi -CH2- -O- et -NHainsi que leurs sels avec les bases minérales ou organiques. 2. Pseudopeptides selon la revendication 1 où X représente l'hydrogène. 3. Pseudopeptides selon la revendication 1 où X représente un groupe acétylamino, tertiobutyloxycarbonylamino ou benzyloxycarbonylamino. 4. Pseudopeptides selon la revendication 3, caractérisés en ce qu'ils répondent à la formule (I) dans laquelle les centres d'asymétrie (1) et (2) sont de configuration L. 5. Procédé d'obtention des pseudopeptides de formule (I) où A représente NH et B représente CO,caracterisé en ce que - on traite en solution le dipeptide protégé où Y et Y1 représente des groupes protecteurs et R, est tel que défini ci-dessus par le (bis (trifluoroacétoxy) iodo) benzène pour former le dérivé diaminé -on condense celui-ci avec un ester activé du tryptophane N protégé ou avec un ester activé de l'acide indolyl-3 propionique pour former le composé - après élimination des groupes protecteurs Y1 et Y du composé (3), on fait réagir le dérivé aminé ainsi obtenu avec un acide R2COOH ou l'un de ses derivésréactifs correspondants pour obtenir le composé de formule (I) - éventuellement on transforme le composé (I) en l'un de ses sels. 6. Procédé de préparation des composés de formule (I) selon la revendication 5 caractérisé en ce que - on déprotège sélectivement l'amine du dipeptide (1); - sur le dérivé aminé ainsi obtenu, on condense l'acide R2COOH ou l'un de ses dérivés réactifs qui conduit au composé: - on traite le composé (4) ainsi obtenu en solution par le (bis (trifluoroacétoxy) iodo) benzène pour former le dérivé aminé: - on condense le dérivé aminé (5) avec un ester activé N- protégé du tryptophane ou avec un ester activé de l'acide indolyl-3 propio nique, selon un procédé connu en chimie peptidique pour obtenir le composé (6) - on élimine le groupe protecteur Y pour obtenir le composé (I) - éventuellement, on transforme le composé (I) en un de ses sels. 7. Procédé d'obtention des pseudopeptides de formule (I) où A représente CO et B représente NH, caractérisé en ce que: - on traite en solution le dipeptide protégé par le(bis (trifuloroacétoxy) iodo)benzène pour former le composé diaminé - on traite le composé (8) ainsi obtenu par l'acide R2COOH ou un de ses dérivés réactifs pour former le composé - après déprotection sélective sur l'azote, on condense le composé (9) avec un ester activé N-protégé du tryptophane ou avec un ester activé de l'acide indolyl-3 propionique qui conduit au composé (6) - on élimine le groupe protecteur Y pour obtenir le composé (I) - éventuellement, on transforme le composé (I) en l'un de ses seis. 8. Compositions pharmaceutIques contentant} à titre ri'ingrédient ac- tif, un peptide de formule (I) en combinaison avec-un véhicule pharmaceutiquement acceptable.