Brevet FR2602790A1 — publié le 19880219

Les cellules tumorales, qu'elles soient spontanées ou induites par des virus, peuvent présenter de nouveaux antigènes à leur surface (1). Des antigènes spécifiques de tumeurs (antigènes T) ont déjà été utilisés pour le diagnos5 tic (2) et la visualisation (3) de carcinomes humains. Plus récemment on a envisagé leur utilisation comme cibles pour une thérapie anti-tumorale spécifique. L'administration d'anticorps anti-T, soit libres soit fixés à des toxines ou à des isotopes radioactifs a déjà donné des résultats encourageants dans le traitement de certains cas cliniques (4). Par ailleurs, on peut aussi tenter de stimuler les 15 réponses immunitaires propres de l'hôte contre les antigènes T, ceci suivant différentes approches comme l'inoculation de cellules exprimant l'antigène T tuées (5-7), l'induction d'anticorps anti-idiotypiques dirigés contre la région variable des immunoglobulines anti-T (8-9), ou l'injection de l'antigène T lui-même (10), Ces expériences sont limitées par la quantité d'antigène disponible et par le fait que la stimulation d'une réponse immunitaire de type cellulaire, particulièrement importante dans l'immunité antitumorale, nécessite la présentation simultanée de l'antigène et des 25 déterminants d'histocompatibilité de l'hôte (11). La présente invention concerne l'expression d'un antigène T ou d'une partie importante de celui-ci par un virus recombinant vivant, dans le but d'induire, in vivo, une immu30 nité antitumorale. L'antigène T utilisé à titre de modèle expérimental et qui sera développé dans les exemples est celui qui apparait à la surface des cellules de rats transformées par le virus du polyome (PY) (12-14). Le virus du polyome induit plusieurs types de tumeurs chez les rongeurs. L'induction des tumeurs implique l'intégration de l'ADN viral dans le génome de l'hôte et l'expression de gènes précoces du virus (15-17). L'inocula5 tion de rongeurs avec des cellules transformées par PY, tuées, permet d'induire une immunité contre une inoculation d'épreuve avec des cellules tumorales induites par PY (1213). Toutefois la démonstration de la présence d'antigènes de transplantation spécifiques de la tumeur et de leur relation 10 avec les antigènes T dont la synthèse est dirigée par la région précoce du génome du virus PY n'a pas encore été clairement établie. Cette étude est compliquée par le fait que la région précoce du génome du PY code simultanément pour 3 protéines distinctes (17) appelées "large-T: LT", "middle-T: MT" et "small-T: ST", en rapport avec leurs poids moléculaires respectifs; ces 3 antigènes ont la même séquence Nterminale et sont reconnus par les mêmes anticorps polyclonaux. Comme cela sera décrit dans les exemples, les 3 antigènes T ont été clones et exprimés séparément, pour préciser leurs rôles et leurs potentiels respectifs. L'utilisation du virus de la vaccine comme vecteur 25 de clonage et d'expression d'antigènes étrangers a déjà été décrite (18-19). Des virus recombinants exprimant des antigènes de virus hétérologues ou de parasites ont été utilisés pour immuniser-des animaux contre le pathogène correspondant (voir revue dans la référence 20). Les antigènes exprimés par 30 le virus de la vaccine recombinant sont correctement présentés à la surface des cellules infectées et permettent l'induction d'une réponse immunitaire de type cellulaire (21-24), ce qui est particulièrement favorable puisqu'il est connu que l'élimination des cellules tumoraies implique l'immunité cel35 lulaire (25,26). La présente invention concerne l'utilisation d'un virus comme vecteur d'expression d'une séquence d'ADN codant pour la région essentielle d'une protéine spécifique d'une tumeur, appelée antigène T. Par protéine spécifique d'une tumeur on entend un antigène spécifique d'une tumeur spontanée et absent des tissus adultes normaux ou un antigène codé par un virus oncogène, agent causatif de ladite tumeur. Par région essentielle de ladite protéine on entend désigner 10 la partie de la séquence protéique capable d'induire une immunité antitumorale ou d'induire un mécanisme capable de faire régresser ladite tumeur. I1 faut noter que, bien que la vaccine soit préférée 15 comme virus vecteur, d'autres virus pourraient également être utilisés, en particulier les virus du groupe de l'Herpes et les Adenovirus. Le virus comportera l'ensemble des éléments néces20 saires à l'expression de la protéine T dans les cellules supérieures, en particulier il comportera un promoteur du virus vecteur. Dans le cas de la vaccine, on utilisera par exemple celui de la protéine de 7,5 Kd. L'ensemble promoteurséquence codante T sera inséré dans un gène non essentiel du 25 virus: par exemple, dans le cas de la vaccine, le gène de la thymidine kinase (TK), ce qui permettra une sélection aisée des virus recombinants TK-. La présente invention concerne également des cellules 30 supérieures infectées par les virus décrits plus haut ainsi qu'un procédé de préparation, à partir de ces cellules, d'un antigène T caractérisé en ce qu'il comporte la région essentielle d'une protéine spécifique de tumeur. Les conditions de culture des cellules et des virus sont connues de l'homme de métier et varient suivant les cellules et les virus utilisés, de même que les techniques de séparaticn de la protéine, celle-ci pouvant être utilisée à des degrés de purification plus ou moins poussés. La présente invention concerne enfin des compositions pharmaceutiques préventives ou curatives des tumeurs présentant l'antigène T, contenant & titre d'agent actif soit le virus selon l'invention, soit la protéine spécifique définie précédemment. Dans un premier mode de mise en oeuvre de la présente invention, le virus vivant, exprimant l'antigène T, est inoculé à l'homme ou à l'animal. Dans un second mode de mise en oeuvre de la présente invention, une préparation pharmaceutique comprenant des extraits de 15 cellules infectées par le virus recombinant ou l'antigène T complètement purifié à partir de ces extraits ou encore le virus recombinant lui-même, tué, présentant à sa surface les molécules d'antigène T, est injectée à l'homme ou à l'animal. Les compositions pharmaceutiques selon la présente invention seront utilisées de préférence sous forme injectable, à l'homme ou à l'animal. Ces compositions pharmaceutiques peuvent être préparées selon 25 des procédés connus dans le domaine des vaccins et du conditionnement des protéines. Les doses applicables pourront varier dans une large gamme et seront fonction, notamment, de la tumeur à prévenir ou à traiter, de l'état du patient et d'autres paramètres qui 30 seront évalués par le praticien. La présente invention concerne également les anticorps dressés contre l'antigène T ou la région importante de celuici et l'utilisation, à titre d'agent diagnostic de ces anti- corps ou de l'antigène T lui-même, ces molécules pouvant être marquées ou non, selon des procédés connus de l'homme de métier. Les exemples suivants illustrent le concept sur lequel repose l'invention, dans un modèle animal constitué de cellules tumorales de rat et d'un antigène T codé par-le virus du polyome, PY, responsable de la tumorigénisation mais il est évident que des résultats semblables pourraient être 10 obtenus avec tout autre antigène spécifique de tumeur et absent des tissus adultes normaux, et que l'utilisation de ces différents antigènes T fait également partie de l'invention. Parmi les autres antigènes T qui peuvent servir de 15 cible au procédé selon la présente invention, on peut citer les antigènes spécifiques du carcinome colorectal, du mélanome, du cancer du rein, du neuroblastome, du carcinome de la vessie, du carcinome mammaire, des lymphomes et des adénomes des glandes endocrines. Les antigènes tumoraux servant de cible à la présente invention peuvent être des composants de l'hôte dont l'expression est altérée dans le tissu tumoral ou, plus généralement, des antigènes codés par des virus responsables de la transformation des cellules en cellules cancéreuses, en particulier des rétrovirus ou des Papovavirus comme les papillomes et les polyomes. Exemple 1 Construction de 3 virus recombinants de la vaccine exprimant chacun l'un des antigènes T du virus PY. La figure 1 (modifiée d'après la référence 17) mon35 tre la structure de la région précoce de l'ADN du PY et met en évidence les 3 gènes LT, MT et ST qui se chevauchent et, en particulier, la partie correspondant à la région Nterminale qui leur est commune. Le site d'initiation de transcription, dans le PY, est indiqué par TATA et les signaux d'initiation et de terminaison de traduction sont notés 5 respectivement ATG et TGA. La position des introns est indiquée ainsi que celle des sites de polyadénylation. Les séquences codantes des 3 antigènes T du virus PY ont déjà été clonées après avoir été débarrassées de leurs introns par excision in vitro (2728), pour donner les plasmides pPY-LTl, pPY-MTl, pPY-STl (28). Ces séquences codantes ont été récupérées par digestion BglI à une extrémité et HindII pour LT, EcoRI pour MT et PvuII pour ST, à l'autre extrémité. L'extrémité BglI a été rendue compatible avec un si15 te BamHI par un adaptateur synthétique simple brin (42): '-d.GATCTGG-3' Les 3 segments d'ADN ainsi traités ont été introduits dans le vecteur pTG186-poly respectivement entre les sites BamHISmaI, BamHI-EcoRI et BamHI-SmaI (figure 2). Le vecteur pTG186 20 poly résulte de l'insertion du polylinker de M13TG131 (41) qui apporte plusieurs sites de restriction dans le vecteur pTG1H-TK-7,5 K (29), en aval du promoteur du gène 7,5 K du virus de la vaccine, lui-même inséré dans le gène TK de la vaccine. Les 3 séquences codantes des antigènes T et leurs signaux d'initiation et de terminaison de traduction respectifs ont donc été insérés dans un gène non essentiel du virus de la vaccine, après avoir été placés en aval d'un promoteur du virus de la vaccine. A la suite d'une double recombinaison, dans les cellules infectées par le virus sauvage et transfectées par le plasmide recombinant, comme cela a déjà été décrit précédemment (29), la séquence codante de l'antigène T se retrouve intégrée dans le génome du virus de la vaccine. Les virus recombinants, portant le gène étranger, sont sélectionnés pour leur caractère TK-, par multiplication 35 sur cellules 143 B, TK-, en présence de 5-bromo-déoxyuridine. Les virus recombinants ayant intégré les séquences codantes des antigènes T ont été identifiés par "Southern blot" et 3 virus représentatifs ont été retenus: VV.PY.LT-H, VV.PY.MT-I, VV.PY.ST-J. Exemple 2 Etude in vitro des propriétés des antigènes T synthétisés par les virus recombinants VV-PY. Les 3 antigènes T exprimés par les virus de la vaccine recombinants sont reconnus par des anticorps dressés contre l'antigène T du PY natif. La localisation intracellulaire des antigènes a été 15 étudiée à l'aide d'anticorps fluorescents: des cellules de hamster (BHK21) semiconfluentes ont été infectées séparément avec les 3 types de virus recombinants VV.PY.T (0,1 ufp/cellule; incubation pendant une nuit); les antigènes T ont été révélés, dans les cellules fixées à l'acétone (à 80 %) , par application 20 séquentielle d'antiserum de rat hyperimmun, anti-T (RAF n 4, CNRS-Nice (43); 1/50 en PBS + 1 % serumalbumine bovine), puis d'anticorps anti-rat, fluorescents (immunoglobulines de chèvre, fournies par Miles, 1/100 en PBS + 1 % serumalbumine bovine). Les 2 anticorps sont adsorbés chacun pendant 20 minu25 tes à 37 C puis les cellules sont lavées pour éliminer les anticorps non fixés. La figure 3 montre l'immunofluorescence des cellules infectées avec VV.PY.LT (A), VV.PY.MT (B), VV.PY.ST (C) et non infectées (D). On voit, dans la figure 3 a, que la protéine LT se trouve loca30 lisée, comme on l'attend (30, 16), exclusivement dans le noyau; la protéine ST est localisée principalement dans le cytoplasme (figure 3 c); la protéine MT est localisée principalement dans le cytoplasme (figure 3 b) et non à la surface, comme cela a été rapporté (15, 31). Sa détection faible mais reproductible dans 35 la région périnucléaire suggère une association avec l'appareil de Golgi et d'autres membranes intracellulaires, comme cela a été indiqué par d'autres études récentes (32-33). 26D2790 Exemple 3 Etude de la réponse immunitaire induite chez les animaux inoculés par voie sous-cutanée avec les virus recombinants. Afin d'évaluer le potentiel vaccinant des 3 recombinants VV-PY, leur capacité d'induire une réponse immunitaire antitumorale a été évaluée in vivo. On sait que des rats inoculés par voie sous cutanée 10 avec des cellules syngéniques transformées par le PY développent rapidement des tumeurs, localisées au site de la transplantation. Ce modèle expérimental doit donc permettre la mise en évidence de l'induction d'une réponse immunitaire capable de bloquer le développement de la tumeur. 15 Des groupes de rats femelles (Fischer) âgés de 4 semaines ont été inoculés par voie sous-cutanée avec les différents virus recombinants (à une dose de 107 ufp dans 100 g1), réinoculés avec la même dose après 12 jours puis soumis à une 20 inoculation d'épreuve, le 16ème jour, avec des cellules de rat 3T3 transformées par le PY complet (PYT-21), à une dose de 2.104 cellules dans 100 Fl. Un groupe de rats a été inoculé avec les 3 virus recombinants simultanément, pour mettre en évidence un éventuel effet cumulatif des 3 antigènes T, 25 comme cela a déjà été suggéré (28). Les résultats sont présentés dans le tableau I: - Tous les animaux contrôles, non vaccinés, développent des tumeurs détectables dans les 14 jours suivant l'inoculation des cellules transformées; de plus, on n'observe aucune 30 régression spontanée pendant la durée de l'expérience (42 jours). - Les animaux vaccinés avec VV.PY.LT et W.PY.MT développent de petites tumeurs (d'un diamètre > 5 mm) qui régressent rapidement pour être totalement éliminées chez 50 à 60 % 35 des animaux. - Les animaux vaccinés avec VV.PY.ST développent des tumeurs qui ne régressent pas au cours du temps. L'effet observé avec VV.PY.LT et MT est donc bien spécifique et ne peut pas être attribué à une stimulation non spécifique du rystème immunitaire par le virus de la vaccine, qui est un très bon immunogène et aurait pu avoir un mode d'action semblable à celui du BCG (34). - L'inoculation simultanée des 3 recombinants n'apporte pas d'amélioration significative. Tableau I Rejet des tumeurs par les rats inoculés par voie sous-cutanée avec les recombinants VV.PY.T Virus vaccinal VV.PY.ST VV.PY.MT VV.PY.LT VV.PY.LT +VV.PY.MT +VV.PY.ST Nombre d'animaux rejetant la tumeur/ Nombre total inoculé Temps après le challenge : 18 jours 21 jours 27 jours jours 0/4 0/7 0/10 0/10 2/4 0/4 0/7 1/10 0/10 2/4 0/4 0/7 0/4 0/7 3/10 6/10 2/10 5/10 1/4 1/4* Note: * 1 animal n'a pas développé de tumeur détectable jus35 qu'au 35ème jour après le challenge. Les animaux ont été sacrifiés après 42 jours et leurs sérums ont été analysés (Tableau II). Tous les animaux 40 vaccinés présentent des titres d'anticorps élevés contre le lI virus de la vaccine et contre les cellules transformées par PY, qu'ils aient été ou non capables de rejeter les tumeurs. Il semble donc que le rejet des tumeurs ne puisse pas être attribué aux anticorps circulants mais nécessite la participation d'un autre mécanisme immunitaire. Tableau II Titres d'anticorps des animaux vaccinés et challengés, sacrifiés après 42 jours. Virus vaccinal Diamètre de la tumeur (en mm) Titre en anticorps* contre la vaccine les cellules transformées par PY (moyenne) (moyenne) 20 15 1.8 6.9 15.9 6.7 (7.9) 13.7 10.2 7.3 18.0 (12.3) VV. PY.ST VV PY MT VV.PY.LT VV PY. LT +VV.PY.MT +VV. PY.ST 10 15 20 253 220 218 203 227 258 266 222 (224) (243) (243) (247) 56.5 26.1 31.6 33.8 35.9 32.6 28.4 25.9 11.8 21.2 30.9 87.8 16.0 23.4 33.9 17.9 (37.0) (30.7) (37.9) (22.8) - 226 227 295 300 252 255 * Les anticorps sont titrés en microplaques avec le virus de la vaccine purifié (106 ufp dans 100 g1) ou une suspension de cellules PYT-21 (105 cellules dans 100 p1); l'anticorps fixé est détecté par addition séquentielle d'IgG de mouton, anti-rat, marquées à la biotine (Amersham) puis de streptavidine-peroxydase (Amersham) puis de réactif ELAVIAR9 (Pasteur-Diagnostic). L'absorption à 492 nm est mesurée avec un lecteur de plaques Titertek-Uniskan. Le titre en anticorps est donné par le produit de la multiplication de la densité optique mesurée par la dilution de l'antiserum employée. Chaque résultat est la moyenne de 3 dilutions (1/ , 1/250 et 1/1.250). Exemple 4 Rejet des tumeurs chez les animaux vaccinés par voie intradermique avec les virus recombinants. Une autre voie d'inoculation du virus vaccinal a été essayée. Des groupes de rats femelles (Fischer) âgés de 4 semaines ont été vaccinés par voie intradermique, par scarifi20 cation de la base de la queue au scalpel, avec du virus purifié (10 p1 d'un stock à 2.109 ufp/ml). Une deuxième dose est inoculée après 15 jours. Les animaux sont soumis à l'inoculation d'épreuve, par injection souscutanée de 2.104 cellules PYT21 dans 100 41, 4 jours plus 25 tard. Les résultats sont présentés dans le tableau III. 26D2790 Tableau III Rejet des tumeurs par les rats inoculés par voie intradermique avec les recombinants VVW.PY.T. Virus vaccinal VV.PY.ST VV.PY.MT VV. PY.LT Nombre d'animaux rejetant Nombre total inoculé la tumeur/ Temps apres le challenge: 22 jours 39 jours 29 jours 0/4. 0/4 2/8 0/8 0/4 0/4 7/8 0/8 0/4 0/4 8/8 5/8 Exemple 5 Traitement des animaux les virus recombinants porteurs de tumeur avec WVV.PY.T. L'administration des virus recombinants a été tentée comme traitement curatif des tumeurs. rats inoculés avec des cellules transformées par PY et ayant développé une tumeur ont été inoculés avec le re30 combinant VV.PY.LT après 12 et 16 jours; la tumeur mesurait 2 à 3 mm au moment de la première inoculation. Chez tous les animaux la tumeur a continué à croître jusqu'à atteindre un diamètre de 15 mm. Ciez 2 animaux la tu35 meur a ensuite régressé de manière significative (observation au jour 35) puis a été totalement éliminée. Un résultat semblable n'a été observé ni avec VV.PY.MT ni avec VV.PY.ST ce qui indique des différences 40 d'immunogénicité entre les 3 espèces d'antigène T. Dépôt de souche représentative de l'invention. Le plasmide vecteur dans lequel toute séquence co5 dante d'un antigène T peut être intégrée pour être ensuite recombinée dans le virus de la vaccine a été déposé à la Collection Nationale de Cultures des Microorganismes sous le n1I 458, le 20 juin 1985. Ce plasmide de E. coli dérivé du pML2 comprend une origine de réplication dans E. coli, le gène de la plactamase, le gène TK de la vaccine, interrompu par le promoteur 7,5 K de la vaccine et une séquence codante étrangère (séquence de i'IL2 humaine), qui peut être échangée avec la 15 séquence codante d'un antigène T. REFERENCES 1. Hellstrom, K.E., Hellstrom, I. & Brown, J.P. Springer Semin. Immunopathol. 5, 127-146 (1982). 2. Herlyn, M., Blaszczyk, M. & Koprowski, H. Contr. Oncol. 19, 160-170 (1984). 3. Begent, R.H.J. Biochim. Biophys. Acta 780, 151-166 (1985). 4. Miller, R.A., Maloney, D., Warnke, R., McDougall, R., Wood, G., Kawakami, T., Dilley, J., Goris, M.I. & Levi, R. In: Hybridomas in Cancer Diagnosis and Treatment, Mitchell, M.S. & Oettgen, H.F. (eds.), Raven Press, New York (1982). 5. Gross, L. Cancer Res. 3, 326-333 (1943). 6. Foley, E.J. Cancer Res. 13, 835-837 (1953). 7. Prehn, R.T. & Main, J.M. J. Natl. Cancer Inst. 18, 769778 (1951). 8. Lee, V.K., Harriott, T.G., Kuchroo, V.K., Halliday, W.J., Hellstrom, I. & Hellstrom, K.E. Proc. Natl. Acad. Sci. USA 82, 6286-6290 (1985). 9. Herlyn, D., Ross, A.H. & Koprowski, H. Science 232, 100102 (1986). 10. Teventhia, S.S., Flyer, D.C. & Tijan, R. Virology 107,1323 (1980). 11. Zinkernagel, R.M. & Doherty, P.C. Adv. Immunol. 27, 51177 (1979). 12. Sjogren, H.O., Hellstrom, I. & Klein, I. Cancer Res. 21, 329-337 (1961). 13. Habel, K. Proc. Soc. Exp. Biol. Med. 106, 722-725 (1961). 14. Ito, Y., Brocklehurst, J.R. & Dulbecco, R. Proc. Natl. Acad. Sci. USA 74, 4666-4670 (1977). 15. Basilico, C. Pharmac. Ther. 26, 235-272 (1984). 16. Griffin, B.E. & Dilworth, S.M. Adv. Cancer Res. 39, 183268 (1983). 17. Tooze, J. DNA Tumor Viruses, Cold Spring Harbor Press, New York (1981). 18. Panicali, D. & Paoletti, E. Proc. Natl. Acad. Sci. USA 79, 4927-4931 (1982). 19. Mackett, M., Smith, G.L. & Moss, B. Proc. Natl. Acad. Sci. USA 79, 7415-7419 (1982). 20. Smith, G.L., Mackett, M. & Moss, B. Biotechnol. Genet. Eng. Rev. 2, 383-407 (1984). 21. Wiktor, T.J., MacFarlan, R.I., Reagan, K.J., EDietzschold, B., Curtis, P.J., Wunner, W.H., Kieny, M.P., Lathe, R., Lecocq, J.P., Mackett, M., Moss, B. & Koprowski, H. Proc. Natl. Acad. Sci. USA 81, 7194-7198 (1984). 22. Wiktor, T.J., Kieny, M.P. & Lathe, R. Appl. Virol. 2, in press (1986). 23. Bennink, J.R., Yewdell, J.W., Smith, G.L., Moller, C. & Moss, B. Nature 311, 578-579 (1984). 24. McMichael, A.J., Michie, C.A., Gotch, F.M., Smith, G.L. & Moss, B. J. Gen. Virol. 67, 719-726 (1986). 25. Hellstrom, K.E. & Hellstrom, I. Adv. Cancer Res. 12, 167223 (1969). 26. Heberman, R.B. Adv. Cancer Res. 19, 207-263 (1974). 27. Treisman, R., Novak, U., Favaloro, J. & Kamen, R. Nature 292, 595-600 (i981). 28. Rassoulzadegan, M., Cowie, A., Carr, A., Glaichenhaus, N., Kamen, R. & Cuzin, F. Nature 300, 713-718 (1982). 29. Kieny, M.P., Lathe, R., Drillien, R., Spehner, D., Skory, S., Schmitt, D., Wiliktor, T.J., Koprowski, H. & Lecocq, J.P. Nature 213, 163-166 (1984). 30. Takemoto, K.K., Malmgren, R.A. & Habel, K. Virology 28, 485-488 (1966). 31. Schaffhausen, B.S., Dorai, H., Arakere, G. & Benjamin, T.L. Molec. Cell. Biol. 2, 1187-1198 (1982). 32. Zhu, Z., Veldman, G.M., Cowie, A., Carr, A., Schaffhausen, B. & Kamen, R. J. Virol. 51, 170-180 (1984). 33. Dilworth, S.M., Hansson, H.A., Darnfors, C., Bjursell, G., Streuli, C. H. & Griffin, B.E. EMBO J. 5, 491-499 (1986). 34. Old, L.J., Clarke, D.A. & Benacerraf, B. Nature 184, 291292 (1959). 35. Dalianis, T., Ramqvist, T. & Klein, G. Int. J. Cancer 34, 403-406 (1984). 36. Sharma, S., Rodgers, L., Brandsma, J., Gething, M.J. & Sambrook, J. EMBO J. 4, 1479-1589 (1985). 37. Koprowski, H., Herlyn, M., Steplewski, Z. & Sears, H.F. Science 212, 53-56 (1981). 38. Real, F.X., Mattes, M.J., Houghton, A.N., Oettgen, H.F., Lloyd, K.O. & Old, L.J. J. Exp. Med. 160, 1219-1233 (1984). 39. Ueda, R., Shiku, H., Pfreudschuh, M., Takahashi, L., Li, C., W;hitmore, W.F., Oettgen, H.F. & Old, L.J. J. Exp. Med. 150, 564-572 (1979). 40. Drebin, J.A., Stern, D.F., Link, V.C., Weinberg, R.A. & Greene, M.I. Nature 312, 545-548 (1984). 41. Kieny, M.P., Lathe, R. & Lecocq, J.P. Gene 26, 91-99 (1983). 42. Lathe, R., Balland, A., Kohli, V. & Lecocq, J.P. Gene 20, 187-195 (1982). 43. Clertant, P., Gaudray, P., May, E. & Cuzin, F. J. Biol. Chem. 259, 15196-15203 (1984). REVENDICATIONS 1. Virus vecteur choisi parmi les Poxvirus, les Adénovirus et les virus du groupe Herpes, caractérisé en ce qu'il comporte une séquence d'ADN hétérologue qui code au moins pour la région essentielle d'une protéine spécifique d'une tumeur, appelée antigène T, ainsi que les éléments nécessaires à l'expression de ladite protéine dans les cellules supérieures. 2. Virus selon la revendication 1, caractérisé en ce qu'il s'agit d'un virus de la vaccine. 3. Virus selon les revendications 1 et 2, caractérisé en ce que la séquence d'ADN codant pour un antigène T est une séquence d'AbDN codant pour une protéine spécifique d'une tumeur spontanée et absente des tissus adultes normaux ou pour une protéine codée par un virus oncogène. 4. Virus selon l'une des revendications 1 à 3, caractérisé en ce que la séquence d'ADN codant pour l'antigène T est sous la dépendance d'un promoteur d'un gène du virus 20 utilisé. 5. Virus selon la revendication 4, caractérisé en ce que le promoteur est le promoteur du gène de la protéine 7,5 K du virus de la vaccine. 6. Virus selon l'une des revendications 1 à 5, 25 caractérisé en ce que la séquence d'ADN codant pour l'antigène T est clonée à l'intérieur d'un gène non essentiel, du virus utilisé. 7. Virus selon la revendication 6, caractérisé en ce que le gène non essentiel est le gène TK. 8. Virus selon l'une des revendications 1 à 7 caractérisé en ce que la séquence codant pour la protéine spécifique d'une tumeur comporte ses propres signaux d'initiation et de terminaison de traduction. 9. Virus selon la revendication 8 caractérisé en 35 ce que la séquence codant pour la protéine spécifique de tumeur est dépourvue d'introns. 10. Virus selon l'une des revendications 8 et 9 caractérisé en ce que la séquence codant pour la protéine spécifique de tumeur correspond à une séquence d'un virus oncogène à ADN ou d'une copie ADN d'un virus oncogène à ARN. 11. Virus selon la revendication 10 caractérisé en ce que la séquence du virus oncogène provient d'un virus choisi parmi les Papovavirus et les Retrovirus. 12. Cellule de mammifère infectée par un virus selon l'une des revendications 1 à 11. 13. Procédé de préparation d'une protéine spécifique de tumeur caractérisé en ce que l'on cultive des cellules selon la revendication 12 et que l'on récupère ladite protéine à partir des extraits cellulaires. 14. Protéine spécifique de tumeur obtenue par la 15 mise en oeuvre du procédé selon la revendication 13. 15. Composition pharmaceutique caractérisée en ce qu'elle contient à titre de principe actif, curatif ou préventif, au moins une protéine spécifique de tumeur selon la revendication 14. 16. Composition pharmaceutique caractérisée en ce qu'elle comporte à titre de principe actif, curatif ou préventif, un virus selon l'une des revendications 1 à 11 et un support pharmaceutiquement acceptable. 17. Composition pharmaceutique selon la revendi25 cation 16 caractérisée en ce que le virus est vivant ou tué. 18. Composition pharmaceutique selon l'une des revendication 15 à 18 caractérisée en ce qu'elle comporte un support pharmaceutiquement acceptable permettant son administration par injection, à l'homme ou à l'animal. 19. Anticorps dressés.contre une protéine spécifique de tumeur selon la revendication 14 ou contre un virus selon l'une des revendications 1 à 11, exprimant ladite protéine. 20. A titre d'agent diagnostic, un antigène pro35 téique selon la revendication 14 ou un arl.Lcorps selon Id revendication 19, marqués ou non.