Brevet FR2610785A1 — publié le 19880819

La présente invention concerne un procédé pour augmenter l'efficacité de la propagation végétative in vitro des pommes de terre. Plusieurs méthodes ont été développées pour la propagation végétative in vitro des pommes de terre. On a mis au point un procédé complexe qui peut être appliqué pour la production économique en masse du matériel de propagation des pommes de terre dans des grandes quantités et qui est convenable pour la production de matériaux de propagation différents (coupes de racines, minitubercules et petits tubercules, brevet hongrois n 1160/84). Dans le cadre de la présente invention, on a trouvé que les pousses croissent et se multiplient mieux dans les milieux liquides que dans les milieux solides. La propagation des pousses dans les milieux liquides est préférable pour obtenir des plantes avec racines. En plus de cela, on a organisé des expériences pour une propagation ultérieure des plantes avec racines qui se propagent en milieux de culture liquides. Ces expériences ont conduit à la mise au point d'une méthode qui est bien plus efficace pour la propagation in vitro comparée aux premières. Le point essentiel de cette méthode est que les plants avec racines produits dans les milieux liquides, pour une culture ultérieure dans des serres ou pour la production de minitubercules in vitro, sont propagés de telle façon que ceux qui sont divisés en pousses et en morceaux de pousses avec racines aux première et seconde parties (les pousses et morceaux de pousses avec racines) sont placés sur des milieux nutritifs frais. La propagation ultérieure des pousses qui ont grandi en milieux liquides augmente l'efficacité de la propagation, mais l'étape nouvelle essentielle de cette méthode est l'utilisation de pièces de pousses avec racines pour une propagation ultérieure et cette étape peut augmenter cinq fois le pourcentage de multiplication et, suite à cela, permet un gain de temps important. Selon une variante de cette invention, les deux (aussi bien les pousses et les morceaux de pousses avec racines) sont placés dans des milieux liquides de telle sorte que les cultures qui se sont développées à partir des pousses sont identiques aux cultures avec racines d'origine et ceux qui peuvent être utilisés pour la production de minitubercules ou qui peuvent être placés dans des serres ou qui peuvent être propagés de la façon décrite ci-dessus, alors que les cultures qui se sont développées à partir des pièces de pousses avec racines peuvent être utilisées de préférence pour la préparation de cultures de minitubercules in vitro. Selon une autre variante de cette invention, seules les pousses qui sont placées dans des milieux liquides et qui se sont développées ensuite pour devenir des cultures avec racines, alors que les morceaux de pousses avec racines sont placées sur des milieux solides et en un temps réduit, les parties avec racines ont produit plusieurs nouvelles pousses qui sont bonnes pour une propagation ultérieure. Les morceaux de pousses avec racines cultivés sur des milieux d'agar solides sont convenables, non seulement pour une propagation in vitro mais aussi pour une plantation en serre, alors qu'ils sont équivalents aux cultures développées en milieux liquides. Selon une autre variante du procédé, aussi bien les morceaux de pousses avec racines que les pousses sont placés sur des milieux solides. A partir des parties de pousses avec racines, une grande quantité de nouvelles pousses ont été développées alors que les pousses placées dans des milieux solides se sont développées en un système de racines ininterrompu. Chacune des deux cultures peut être utilisée comme décrit ci-dessus, c'est-à-dire, peut être propagée ultérieurement dans des conditions in vitro, des minitubercules in vitro peuvent être induits, ou l'on peut faire des plantation en serres. Le procédé mentionné en dernier est la variante préférée de la présente invention parce que dans ce procédé moins de propagation du matériel est nécessaire que dans le procédé utilisant des milieux liquides, et les pousses peuvent être développées à partir de tous les bourgeons des parties de pousses, qui peuvent être coupés court. La culture avec racines qui s'est développée sur des milieux d'agar peut être plantée dans le sol à côté des milieux. 26 1 0785 Pendant l'examen des possibilités d'utilisation des milieux d'agar solides, on a établi que les milieux solides peuvent être utilisés aussi en couches plus fines que d'habitude, environ en une couche de 1 cm. Le système de racines des cultures développées dans de tels milieux est plus favorable eu égard aux deux méthodes de propagation in vitro de plantation dans le sol. Le gain de temps est le résultat de deux facteurs 1. L'arrangement des pousses dans les milieux liquides nécessite moins de temps en comparaison avec le cas des milieux solides. 2. Les parties de pousses avec racines peuvent être placées sur un milieu liquide ou solide avec un mouvement à cause des racines adjacentes. Les exemples suivants illustrent l'invention. La composition des milieux nutritifs utilisés est la suivante Milieux nutritifs pour pommes de terre Milieux solides, de maintien et de propagation (en mg): NH4NO3 1 600 KNO3 1 900 CaCI2.2H2 440 MgSO4.7H20 370 Na2-EDTA+FeSO4.7H2O 25 H3BO4 6,2 MnSO4.4H20 22,3 ZnSO4.4H20 8,6 KI 0,83 Na2moO4.2H20 0,25 CuSO4.5H20 0,025 CoC12.6H20 0,025 Mésoinositol 100 Thiamine 0,5 Pyridoxine HCI 1,0 Acide nicotinique 5,0 Acide panthoténique 2,5 Acide naphtylacétique 0,001 Sacharose 30 g Agar 6,5 g pH 5,7 26 1 0785 Milieux liquides d'enracinement: comme ci-dessus mais sans agar EXEMPLE 1 Les pousses de cultures de pomme de terre développées sur milieux solides sont coupées en environ 10 morceaux et sont placées dans un flacon de 400 ml contenant 20 ml de milieu liquide et sont cultivées environ pendant 2 semaines à 22 C sous 16 heures d'éclairage à 3000 lux. Dans ces conditions, 20 à 25 nouvelles pousses et racines adjacentes se développent. La culture portant des racines est retirée avec une pince du flacon dans des conditions stériles, les pousses sont coupées et placées dans 2 ou 3 flacons contenant du milieu nutritif frais et les morceaux de pousses portant des racines restantes sont placés dans un nouveau milieu de culture liquide. Les cultures préparées de cette manière sont mises à se développer pendant 2 semaines et sont utilisées pour la production de minitubercules par induction. Après 2 ou 3 mois en moyenne, 50 minitubercules peuvent être produits à partir d'eux. Les cultures développées à partir des pousses coupées peuvent être utilisées selon le mode décrit ci-dessus pour la propagation, elles peuvent être transplantées dans des serres ou bien des minitubercules peuvent être induits. En utilisant le procédé détaillé ci-dessus on peut produire 50 % en plus de cultures dans le même temps que si on utilise des cultures développées sur milieux solides. EXEMPLE 2 Des pousses de cultures développées sur mieux solides (dont la composition est décrite ci-dessus) sont coupées et environ 10 morceaux sont placés dans un flacon de 400 ml contenant 20 ml de milieu et sont cultivées environ pendant 2 semaines à 22 C avec 16 heures d'éclairage à 3000 lux par jour. Dans ces conditions, les cultures développent 20 à 25 nouvelles pousses et racines adjacentes. les cultures portant des racines sont retirées avec des pinces stériles, les pousses sont coupées et placées dans 2 ou 3 flacons contenant des milieux liquides frais. Les cultures développées dans le milieu liquide sont utilisées pour la propagation ultérieure, l'induction de minitubercules ou sont plantées dans des serres. Les morceaux de pousses portant des racines placés sur milieux solides développent des nouvelles pousses en 2 semaines, ce qui est convenable pour établir 3 ou 4 nouvelles cultures. L'utilisation du procédé décrit ci-dessus permet de produit 5 fois plus de cultures dans le même temps que si on utilise seulement des cultures développées sur milieux solides pour la propagation et on économise ainsi beaucoup de temps. 26 1 0785 REVENDICATIONS 1) Procédé pour augmenter l'efficacité de la propagation végétative in vitro de la pomme de terre, caractérisé en ce que les cultures ayant des racines qui se sont développées dans des milieux liquides peuvent être propagées entièrement en les divisant en pousses et en morceaux de pousses ayant des racines. 2) Procédé selon la revendication 1, caractérisé en ce que toutes les parties (les pousses et les morceaux de pousses ayant des racines) sont aussi propagées dans des milieux liquides. 3) Procédé selon la revendication 1, caractérisé en ce que les pousses sont aussi propagées dans des milieux liquides, les morceaux de pousses ayant des racines sont aussi propagés sur milieux solides. 4) Procédé selon la revendication 1, caractérisé en ce que l'ensemble des pousses et des morceaux de pousses portant des racines sont propagés sur des milieux d'agar solides. ) Procédé selon l'une quelconque des revendications I à 4, caractérisé en ce que le procédé peut être répété plusieurs fois. 6) Procédé selon l'une quelconque des revendications I à 3 et , caractérisé en ce que les cultures obtenues à partir de pousses développées dans des milieux liquides peuvent être utilisées pour l'induction de minitubercules et/ou la propagation ultérieure et/ou les plantations dans des serres. 7) Procédé selon l'une quelconque des revendications I ou 2, caractérisé en ce que les cultures obtenues à partir des morceaux de pousses portant des racines développées en milieux liquides peuvent être utilisées pour l'induction de minitubercules. 8) Procédé selon l'une quelconque des revendications 1, 3 ou 4, caractérisé en ce que les cultures obtenues à partir des morceaux de pousses portant des racines développées sur milieux solides peuvent être utilisées pour la propagation de nouvelles cultures.