Brevet FR2608625A1 — publié le 19880624

L'invention est relative à un procédé d'hydrolyse enzymatique de substrats lignocellulosiques dans le but de produire des jus sucrés. Une partie importante du coût des hydrolysats de matériaux lignocellulosiques obtenus par voie enzymatique est constitue par le coût de production du système enzymatique utilisé, les cellulases. Pour cette raison divers moyens permettant de récupérer après hydrolyse et de réutiliser au moins une partie de ces cellulases ont eté étudiés. Etant donne la nature de ces enzymes, qui sont des macromolécules hydrosolubles, leur récupération à partir de la solution sucrée d'hydrolyse par des membranes d'ultrafiltration a d'abord été envisagée comme c'est le cas par exemple dans le brevet US 3642 580. Par la suite, lorsqu'il a éte découvert que les cellulases s'adsorbaient fortement sur leur substrat, la cellulose, d'autres procédés ont été proposes. Ainsi, dans le brevet US 3764 475, l'hydrolyse continue de la cellulose est effectuee en maintenant constamment une concentration élevée de cellulose qui retient ainsi les cellulases sous forme adsorbe.Un tel procédé cependant n'est pas applicable aux formes les plus communes de la cellulose, à savoir les matériaux lignocellulosiques tels que le bois, les paille1 la bagasse etc... qui contiennent des proportions importantes d'autres constituants, notamment les hemicelluloses et la lignine. En effet, on ne pourrait alors eviter l'accumulation de ces constituants solides non hydrolysés, leur élimination entrainant celle d'une partie non négligeable du substrat et donc de la cellulose, ainsi que des enzymes adsorbés. Une autre méthode (brevet US 3972 775) consiste à mettre en contact la solution sucree d'hydrolyse contenant les cellulases qui ont été libérées lors de lthydrolyse de la cellulose avec du substrat frais à hydrolyser qui adsorbe les cellulases contenues dans ladite solution. Il a cependant été constate qu'une partie seulement des cellulases était libérée lors de l'hydrolyse, ne permettant ainsi qu'une récupération limitée de ces enzymes.D'autres procédés ont été proposés pour augmenter ce taux de récupération en tentant d'éluer par lavage les cellulases qui pouvaient rester adsorbées sur le résidu lignocellulosique, ce qui ajoute une étape supplémentaire coûteuse et d'une efficacité limitée au procéde. Le caractère insatisfaisant de ces résultats a été attribué soit à l'inactivation des cellulases adsorbées soit à l'adsorption quasi irréversible de ces cellulases sur le résidu qui empêcherait leur récupération et leur reutilisation. On a maintenant constate, et c'est l'objet de la présente invention, que le recontactage- du résidu solide après hydrolyse (qui ne contient pas d'activité cellulasique mesurable importante) avec du substrat frais, permet cependant une hydrolyse substantielle de ce dernier et resulte donc en une réutilisation significative des cel 1 ul ases. Le procédé de l'invention consiste donc à soumettre un mélange aqueux de substrat lignocellulosique frais et de résidu lignocellulosique solide d'une hydrolyse enzymatique antérieure (appelé ci-après enzyme recyclé) à des conditions d'hydrolyse enzymatique, avec ou sans enzyme frais additionnel, à laisser l'hydrolyse enzymatique prendre place et à recueillir la solution de sucres résultante. De préférence l'opération est renouvelée au moins une fois, le nombre total d'opérations successives étant, par exemple, de 2 à 12. Le substrat lignocellulosique a de preference, au préalable, été prétraité pour améliorer sa susceptibilité à l'hydrolyse enzymatique. Ce type de prétraitement est bien connu et l'invention n'est pas limitée sur ce point. On peut mentionner, par exemple, un traitement par un acide, un traitement par la vapeur d'eau et/ou un traitement par brusque depressurisation a chaud. Par conditions d'hydrolyse enzymatique, on entend les conditions, bien connues des spécialistes, d'hydrolyse enzymatique de la cellulose, notamment conditions de température, de dilution, de milieu aqueux, de pH, de choix d'enzyme, qui n'ont donc pas besoin d'être mentionnées ici. Le procéde est compatible avec certains perfectionnements déjà proposés, notamment la mise en contact du jus sucré d'hydrolyse avec la charge lignocellulosique fraiche d'une opération subséquente. Une mise en oeuvre préféree du procédé, comporte les étapes suivantes, représentées schematiquement dans la figure jointe. - On met en contact dans le réacteur 14, un substrat lignocellulosique (paille, bois, etc...) préalablement pretraite pour améliorer sa susceptibilité à l'hydrolyse enzymatique (la) avec une solution de cellulases (2a) dans des conditions de dilution, de température et de pH favorables à l'hydrolyse enzymatique jusqu'à ce que l'on atteigne un taux d'hydrolyse élevé (plus de 80 % d'hydrolyse de la cellulose). - L'hydrolysat brut obtenu (3a) est séparé par exemple par filtration ou par centrifugation en un résidu solide (4a) et une solution sucree (5a) qui contient une partie des cellulases, en particulier celle qui a été libéree lors de l'hydrolyse. Cette solution (5a) est remise en contact (12) avec du substrat lignocellulosique frais prétraité (lb), ledit contact se faisant par exemple par percolation ou par remise en suspension et separation, de manière à récupérer les cellulases par adsorption, selon une methode connue. On obtient un substrat pour une étape suivante d'hydrolyse (6a) et une solution sucree (7a). - Le résidu solide (4a) est éventuellement séparé en deux parties (8a) et (9a). La partie (8a) qui peut représenter entre 0 et 30% du residu est lavée à l'eau (18) dans le contacteur (13). La solution de lavage (lova) contient une certaine quantite de sucres. Le résidu solide du lavage (1 la) riche en lignine est éliminé - Le substrat (6a), le résidu (9a) représentant 30-100 % du residu (4a) et, éventuellement, la solution (lOa) sont mélanges dans l'unité (15) pour une nouvelle opération d'hydrolyse enzymatique mise en oeuvre dans les conditions indiquees plus haut.On peut ajuster par un apport d'enzyme frais (2b) au début de l'opération l'activité enzymatique du mélange de manière à obtenir les caractéristiques cinétiques d'hydrolyse (taux et temps d'hydrolyse) désirées. L'hydrolysat brut obtenu (3b) est traité selon un protocole similaire à celui de la premiere opération. On traite le jus sucré (5b) par du substrat frais (lc). On ajuste de la façon souhaitee la partition éventuelle du résidu solide (4b) en ses fractions : (8b), éliminée par la ligne llb après lavage éventuel dans l'unité (17) par de l'eau (19) et (9b) qui sera recyclée (c'est-à-dire utilisée dans une opération subséquente).On obtient une nouvelle- solution sucrée (7b), un résidu riche en lignine (llb) et les constituants d'une future opération d'hydrolyse, le substrat recontacté (6b), le résidu recyclé (9b) et la solution éventuelle de lavage (lOb). Le nombre d'opérations successives ainsi réalisées est en principe illimité. Seule une contamination microbiologique peut amener à la limiter. Aussi ce nombre est-il habituellement de 2 à 12. On préfère le maintenir à une valeur de 2 à 6 pour mieux contrôler les problèmes de contamination microbiologique liés aux operations de recyclage. Le procédé d'hydrolyse de la biomasse lignocellulosique avec recyclage des cellulases peut etre également operé en continu mais sa mise en oeuvre par opérations discontinues successives est préférée pour les raisons de contrôle des contaminations déjà évoquées et parce qu'elle permet plus facilement d'opérer avec des taux d'hydrolyse élevés. Ces taux d'hydrolyse élevés permettent notamment de ne recycler, si on le désire, qu'une partie du résidu solide sans consentir de perte notable de substrat non hydrolysé. Le recyclage partiel du résidu solide peut en effet etre avantageux dans certains cas, par exemple pour eviter une accumulation excessive de matière solide. Par exemple à la fin d'une opération d'hydrolyse ayant fourni 20 g/l (poids sec) de résidu solide, on ne transférera à 'l'opération d'hydrolyse subsequente que 10 g/l (poids sec) soit 50 X du residu solide qui sera mélangé avec par exemple 90 g/l de substrat frais prétraité ; le reste du résidu est alors evacué apres lavage eventuel à l'eau ou avec une solution tampon. Lors des opérations d'hydrolyse, le substrat lignocellulosique peut être charge en une seule fois au début de l'opération mais il peut étre avantageux lorsque l'-on opère avec des taux de matière sèche élevés d'ajouter le substrat en plusieurs fractions au cours de l'hydrolyse afin d'eviter la manipulation de suspensions trop epaisses. Un avantage essentiel du procédé est qu'il permet d'effectuer, avec un taux de recyclage élevé des cellulases, l'hydrolyse des substrats comportant une proportion élevée de constituants solides non cellulosiques, cas le plus fréquent puisqu'il concerne tous les matériaux lignocellulosiques qui contiennent une proportion de lignine d'au moins 1 X en poids (pulpe de betterave etc...) et plus fréquemment une proportion plus elevée, par exemple au moins 10 % en poids (pailles, bois etc...). On a en effet constaté, comme il sera détaillé dans les exemples, que les résidus d'hydrolyse constitués principalement de lignine sont capables de conférer une activité d'hydrolyse de la cellulose élevée aux milieux d'hydrolyse ou ils sont recyclés.Ce point surprenant démontre qu'une partie importante des cellulases qui n'est pas libérée lors d'une hydrolyse même poussée de la cellulose (90 X ou plus de taux d'hydrolyse) n'est pas non plus inactive, mais qu'elle est en fait vraisemblablement adsorbée sur la lignine et que, dans cet état, sans qu'il soit nécessaire d'en faire une élution difficile, elle reste efficace pour l'hydrolyse d'une nouvelle charge de substrat lignocellulosique. Plus généralement, les resultats montrent que l'adsorption des cellulases sur le résidu solide d'hydrolyse est non spécifique et que même si ces cellulases adsorbées sont difficilement éluables, un simple recyclage du résidu solide permet leur reutilisation avec une bonne efficacité. Les exemples ci-dessous illustrent ces différents points. L'exemple 1 illustre l'efficacité du recyclage d'enzyme obtenu par simple transfert du résidu solide non lavé d'une première opération d'hydrolyse dans une deuxieme opération d'hydrolyse. L'exemple 2 demontre l'efficacité de ce recyclage lorsqu'il est effectué avec un résidu solide lavé à l'eau avant recyclage, montrant que les cellulases ainsi recyclées le sont sous une forme adsorbe au residu solide. L'exemple 3 illustre les résultats d'une mise en oeuvre de l'ensemble du procédé avec recyclage à la fois du résidu solide et de la solution d'hydrolyse et l'économie dans l'utilisation de l'enzyme ainsi réalisée. EXEMPLE 1 Un échantillon de paille de blé contenant 20 X de lignine a éte pretraite en vue de faciliter son hydrolyse enzymatique ultérieure. Les conditions de prêtraitement utilises sont les suivantes prétraitement à la vapeur d'eau sous 18 bars pendant 2 minutes de la paille préalablement acidifiée par trempage dans H250 4 0,08N, suivi d'une detente explosive. Ce prétraitement a été décrit dans le brevet français 2 580 669. On a effectué l'hydrolyse enzymatique de cet échantillon par des cellulases fraiches obtenues par culture de la souche Trichoderma reesei CL-847 etant entendu que toute autre souche equivalente aurait pu être utilisée. Un protocole utilisable pour la production de ces cellulases a été décrit dans le brevet français 2 555 603. La quantité de cellulases utilisée dans les essais est exprimée en unités internationales "papier filtre" (uPF).On a effectué une première serie d'opérations d'hydrolyse (Al, B1, Cl, D1, El) en 5 réacteurs agités contenant chacun, dans un volume final de 1 litre, 100 g de substrat pretraite (exprime en matière seche) et 1500 unités d'enzyme (cellulases). Le pH était ajusté à 4,8 et la température à 50"C. Le temps d'hydrolyse était de 24 h. Après hydrolyse, les résidus solides ont été séparés par centrifugation et les sucres formes dans les solutions restantes ont été dosés par chromatographie liquide haute pression (CLHP).Une deuxième série d'opérations d'hydrolyse (A2, 82, C2, D2, E2) a été réalisée dans des conditions identiques à celles de la première série d'opérations, sauf en ce qui concerne les points suivants : dans le réacteur B le substrat frais a été recontacte avec le surnageant venant de l'opération d'hydrolyse A2 pour récupérer l'enzyme soluble ; dans chacun des réacteurs C, D et E, on a rajouté au milieu réactionnel le résidu solide d'hydrolyse non lavé provenant de l'opération précédente correspondante. Des additions de cellulases fraiches ont été effectuées dans les réacteurs D (500 uPF) et E (1000 uPF). Les résultats obtenus pour chacune des deux séries d'operations et les bilans globaux pour chacun des cas de recyclage sont présentés dans le tableau 1. Dans ce tableau les bilans en sucres sont effectues sur les hydrolysats complets pour l'essai A.Pour les essais avec recyclage (B, C, D, E) les bilans sont effectués sur les solutions sucrées débarassées du résidu pour la première opération (et dans le cas de l'essai B, après l'opération de recontactage) et sur les hydrolysats complets pour la deuxième opération. Les sucres contenus dans le résidu solide de la première opération sont, dans ces quatre cas, comptabilises dans la deuxième opération. On constate que le recyclage du residu solide dans la deuxieme opération, meme sans supplémentation en enzyme permet une hydrolyse substantielle du substrat (essai C). L'effet obtenu est légèrement supérieur à celui obtenu dans le cas du recyclage des enzymes du surnageant (essai B). Le recyclage du résidu solide permet par ailleurs, moyennant une complémentation en enzyme de 1000 uPF dans la deuxième opération (essai E), de dépasser légèrement, sur l'ensemble des 2 opérations, la production de sucres obtenue sans recyclage (cas A) bien que la mise en oeuvre d'enzyme ait été plus faible (2500 uPF au lieu de 3000 uPF). L'efficacite d'utilisation de l'enzyme exprimée en grammes de sucres obtenus par unité PF d'enzyme frais mis en oeuvre est, dans tous les cas de recyclage, supérieure à celle obtenue sans recyclage. Les resultats du tableau 1 montrent également que dans les conditions utilisées, la paille pretraitée (qui contenait environ 68 % en poids de sucres totaux potentiels exprimés sous forme de TABLEAU 1 HYDAOL YSE ENZYNATIQUE DE LA PAILLE AVEC RECVCLAGE DU RESIOU SOLIDE MON LAVE I I I I I I I Cas e r'f'renca Rucyclugu de Recyclage du Recyclage de i Recyclage de i I i W nana recyclîge * 1'anryee nalubîn D rdsîdu lana a ~ ~ O ~ B o eS W ~ a - a Z % d'eneyean lean. ceepl'eeetatîen ceepîleentatian I e I I I I I I I I ~~ I I I I I I I I o . I I 2'"e oOgM I I I i U,, I (lanaî A) I ('anal R) (EssaI o, I (Eîîaî 0) I (Esîsl E) I ~~ I I I I I I I I I I I I I I i I I ~~~ ~~~~~ ~~~~~~~ 100 g ~~~~~~~ ~~~~ 100g i f > I Recyclage d'nn,yae I l~ B~~ ~ ~~~e~ W B&num; Z I I I I I I I I C I I -.- w I et ~ a ~ &commat; ~ 0 0 ~ X e t~ ~ I = I Sucrea j Ceîîebînîe I o.î t j ,;;s,~ 7.0 g I ~~an oo es I yrîduîtî j glncu,î j 33.Rg 9 22.5 g I 30.2g I 20.0 g I 30.7 g I =6 u o 20.A o j 27.2 g I 17.0 g I 10.3 g j 10.2 g ~~~~~~ j 2.4 g j 3.1 g j 2,n g I 2.0 g 2.3g I I Tatal sacraI gA.Sg I 17.Rg 50,3 g 52,0 g S7.0 g I I. I I I I i I I i I i I I .:Y Substrat c e. g I D 100 g I 7 61 r i 100 g i 100 g I I I Enîyea 'ruîî z 1500 ePI N O w I 500 afP 17 uPF j = I I Recyclagu d'esiy.a j aucun j 100% seluble -, rdsîda 99 100% rîIdî 100 %rdeîda j I I I I I I i I I I I I I I ~~~~~~ W Calleblea. I ~e ~~~~~~ ~ O ~~~~~~~ ~ ~~ ~ O j predîîts I Bîncaee j 33.0 g 22.1 g I 20.0 g j 31.0 g j 30.0 g j I I Xylaaa j 2O. g j JO g I 22.3 g j 22.10 j 22.10 I . z Arabîseee I > I z I 2.50 I 2.00 L s i letal eacr.n A.5 F j ,O x =o= g I - i -L e I i I I I I I I I i j I I O 6, I 9 j Cuedîtînes j Substrat j 200 g j 2100 j 200 g I 2000 I 2000 I ~~~~~~ fraIe j ~~~~~l ~~~~~~l ~~~~| ~~~~~~l 2500 afP j Tr. L ~w0- -3wU I -e U I -s . - o g | ^ on | oO, | - ^2^ o : r c 208 1 ou " o.o1g07:!iep -"=== ,t ,,e g.o00oiap ., I I I I I o I I S I . I > I . I . I I I I . I I I I , I I '' I l s I I' 1 . 1' 1 - 1 1- I I I o X I I U I I I I V I ' l &verbar; !] "! Qe { qIé 118 monosaccharides) a subi une hydrolyse presque complète (64,5 g de sucres libérés pour 100 g de paille pretraitee) ce qui implique que le résidu solide sur lequel sont adsorbés les enzymes recyclées est constitue principalement de lignine et contient très peu de cellulose résiduelle. Ce point est confirmé par le fait qu'une prolongation du temps d'hydrolyse jusqu'à 48 h n'entraine qu'une faible production supplementaire de sucres (2 g/l sous forme de glucose). EXEMPLE 2 Une deuxième serie d'essais a été effectuée avec la même paille et dans les mêmes conditions que dans l'exemple 1 sauf que les résidus solides provenant de la première opération et recyclés dans la deuxième opération dans les essais C, D, E ont ete lavés à l'eau avant d'être recyclés dans.cette deuxième opération . Les bilans en sucres ont été effectués comme dans l'exemple 1. Dans le cas des essais C, D, E, les sucres recueillis par lavage de ces residus solides (environ 7 g dans chaque cas) ont été comptabilises dans le bilan de la deuxième opération pour permettre une comparaison directe avec les resultats de l'exemple 1.On constate que les performances obtenues sont sensiblement les mêmes que dans exemple 1, ce qui démontre que l'enzyme transfére avec le résidu solide de la première à la seconde opération est constitue essentiellement par des cellulases adsorbées non éluables à l'eau. EXEMPLE 3 On a utilisé un echantillon de paille de ble d'origine différente de celle des échantillons des exemples 1 et 2 et contenant 19 % de lignine. Cette paille a été prétraitée et non lavee comme dans l'exemple 1 pour en effectuer l'hydrolyse selon le schéma de la figure. Dans le cas présent, on a effectué pour chacun des essais C et D trois opérations successives d'hydrolyse 1, 2 et 3, le taux de recyclage (transfert) adopté pour le résidu d'hydrolyse etant de 100 % apres la première et la deuxième opération.La première opération d'hydrolyse (1) est effectuee comme dans l'exemple 1 (volume TABLEAU 2 HYDROL YSE ENZYMATIQUE DE LA PAILLE RVEC RECVCLAGE DU RESIDU SOLIDE LAVE t I I I I t t I t I I Cas de rêfAresce t Recyclage t Racycluga dv Recyclais de Recyclage du t t t t t eses recyclaga du l'asoyaa r4,Ide t wiL t t t , d'eneyae selebîs agua ~e o w ~ ' t t t t cesldaaststIan t I I t t t t t t t I t-t t I I --t t t > .- A) t (Cveaî . I (EssaL e, I (CasaI 0- t > E) t ='tt I t t I t I C I t Enzysa fraIs I 1500 afP I 1500 afP I 1500 afP t 1500 ufP t 1500 afP I t t Recyclage deezyne I aucun aucen v ~ ~ ~~~~ ~~ I LC .at I t n-nnr I I I I I I t I I t I I I t t Sacran . Calîebîese , 1.1 s '.0 g e-ee- .- = . u t pradaîts t Glacasa t 33.5 s 22.0 e ~ eo ~ g O ~ ~ I I I Vylase I 20,40 I 27.2g I 17.0 g 17,' g t l7,0g I t I t ~~~~~ t 2.40 t 3.10 I 1.00 t 1.Og I 2.00 I t t I Vetal sueras t 04.5 0 t 57.0 0 I s7.î o t 50.7 g I 51.0 g I Il t t I t t t I t I t t t t t t t Cendîtîase I Sabstrat 100 0 s 100 g t 0~ > ~0E W C)O-; * t e fraIe a ~ 1500 afP |0 97cO s vau t Racyclaga d'eazyae suces 1002 selebla n 1002 r'aîda o 100 IN 2 risîda t I I I I t I I I t 'AI t t t t t t t fr t ~~~~~ ~~~~~~~ ~~~,~ ~~~~~~~ ~~~~ ~~~~ t pradaîte t glacasa t 33.0 0 t 22.1 0 t 20,4 5 t 32.1 g t 41.0 0 t t t t xylaea t 20,40 t 13.00 t 22.Og t 21.5g t 72.7g t t t t Arabînese t 2.40 t 1.30 t 2.10 t 2.5g t 2,Sg t t t t latal raorr~ w ~ ~ s , ~ ~ ~ ~ X ~ t I t t t t t ~~~~ t t t t t t I I t t t Candîtîaus t Oubstrat t 0O t ; gO t 2000 t c > - t t t ~~~ fraIs ~~~~~~~ ~~~~~ ~~~~~~~ afP t 2000 afP t 2500 afP t t -,-----i---- ------- ---- t t I t t Istal sucrea pradaîts t t I t I t t 120 g t 107.2 0 t 105,3 g t 110,3 g t 131 g t t fred. l-noN-lso l----S7l--I 5 j===n L j t tfrad. avcres par enlIA d'eszysea fraIs 0,043 g!ufP t 0,071 0îsfP t 0.070 g!eff t 0,007 g'afP 0.052 0!ufP I =" ~~~ ~St 1 L 1 1 ~ J réactionnel : 1 litre ; substrat (la) mis en oeuvre : 100 g (matière sèche) ; quantité d'enzyme utilise (2 a) : 1500 unités PF ; incubation : 24 h à 50"C ; pH : 4,8). Les conditions expérimentales de la deuxième (2) et de la troisieme (3) opération sont les mêmes en ce qui concerne le volume réactionnel, la température, le pH et le temps d'hydrolyse.Deux cas dont l'un avec supplementation de 500 unités PF en enzyme frais (essais C et D respectivement) sont présentés en comparaison avec les cas de référence dans lesquels on effectue trois opérations successives d'hydrolyse, sans recyclage ni de cellulases solubles ni de residu solide (essai A) ou avec recyclage de cellulases solubles sans recyclage de résidu solide (essai B). Le recyclage de cellulases solubles consiste à effectuer le contactage de la charge (lb, lc) avec la solution sucree (5a, 5b). Les bilans des sucres sont effectés sur les solutions 7a et 7b pour les deux premières opérations (1 et 2) et sur l'hydrolysat brut pour la dernière opération (3) dans les essais avec recyclage (essais B, C, D) et sur les hydrolysats bruts pour chacune des opérations de l'essai de référence A. Les sucres contenus dans les residus solides des opérations 1 et 2 de l'essai B sont comptabilisés dans les opérations suivantes (2 et 3 respectivement) pour permettre une comparaison directe avec les essais C et D. Les résultats obtenus sont présentés dans le tableau 3. Le bilan fait apparaitre l'économie importante en enzymes que permet le procédé puisque les productions totales de sucre obtenues dans l'essai C sont voisines de celles du cas de référence sans recyclage (essai A) pour une consommation d'enzyme de 55 % Par ailleurs pour la même quantite d'enzyme frais mis en oeuvre, le recyclage du residu solide en plus de celui de l'enzyme soluble (essai C) augmente encore a production de sucres par rapport au recyclage de l'enzyme soluble seul (essai B). TABLEAU 3 HYDROL YSE ENZYMATIQUE DE LA PAILLE AVEC RECYCLAGE D'ENZYNES SELON LE PROCEDE t t t Cas de rfrevce nasu RecyClage de l'enzyse t Recyclage d'enzyee t Recyclage d'ensyee t I t t recyclage d'cvzyee soluble suns uavs cospleevtatiov t avec cosplssvtat'.on t t t t (Essai X cospl'sevtalion (Essai C > I (Essai D > t w v ~ fr o I t ~~~~~~ I ~~~~~~~~~~~~~~~~ t t ~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~ t a (Essul 0 > t I t t Cooditions Substrat n fe e 0 s o es o o e rs (la) t o o o (las t e t O 1W ; e frais 1500 upf 1500 o O O + ~ Z rt I 1500 uPP O zN t t on Recyclage dRflỳRe t aucun aucuv aucun t aocuv Sucres Cellobiose e I Lt produits t ~~~~~ I 3.1 g t ~~~~~ 25,8 g 25,5 g t IL t t vylose t 23,1 g t 28,6 g t 2g.4 g I 31,3 g t t t arabinose t 2,2 g t 3,6 g 3,1 g 3.3 g I I t t Total sucres t 60.6 g I 62,6 g t 63,1 g I 64,8 g tt Condîtives t Substrat t 100g t 100g s 100g (lb > t 100g (lb) I t I Evzyse frais t f w o n s .~ t crlL D t aucun t > soluble ~ o ow 2 LII rftsldu t soluble O PW % > w I I t Sucres t Cellobiose t 5,2 g t 7,8 g I 4,3 g I 6,2 g t t produits t Glucose " 39.1 g t 13,2g 8' t O; 40 g I 27.5g t I t t ^ut ~ ~ V ~ e O se t a Arablooge t 2.2 g t 2,5 g j 2,4 g j 2,5 g j I t ~~~~~~~~~~~t Total ~~~~~ t 69.6 g I 46,6 g j 49,3 ~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~ jj Conditions t Substrat j 100 g j 100 g i îOOg(lc t 100 g Ic t t j Enzyee frais j 1500 uPE t O j O t 500 uPP (2c) I ; t ~~~~~~~~~~~~~ t Recyclage d'gnyee t auçun G soluble + 100 0. t eglubîs " 1 Ùt 01 0t W u j Sucres N j IO Ceilobiose j X0 s - 10.8 g j 0* g X CI X a j t produits j Glucose t 3.l g j 22 g j 28,7 g N 44.89 , " xo t = X n lylose t 23,1 g 14.9g t 14,1 g Z 13.Sg j j : t j Arabln0se 2,2 e j ne g e 1,7 g S l.5g j j j j Total sucres j . 69,6g I 49,4 g j 54,1 g j 7l,Sg j n ~~~ t Total sucres produits t 206,8 g t 158,8 g j 166,5 g t 1g6,3 g j e~ l I > a l l O ç &verbar; wS eu Quantité er. oe utilisée z t 1500 eh q > 0PP v j ~~~~~~~j Prod. sucres par unLté d'snryse j 0.046 g!uff j 0,106 g!urP I 010. gIuPP I ~ N g!upf j o ~ o os A Z u7 os e ~ o S n X uU~ , s I . o'l oL t C > I . t n s ns o ~z *1 " 1 "1 "1 0 o 0 Fu} o e a ;&verbar; W * Z I ~ ID o o = nl~ ID o o e 01~ ID O O c I . I 1e o lo u ~ .~ In 10 u ~ .~ 1* &commat; &commat;10 u ~ ~ ≈ ~ ~ ID a rx,~ v > D ID s BS.~ ç > D ~ID s ~ a > ~O ~l > z ~ &commat;1 &verbar; o x Z Z t K Z . . I w os I W .1 1 w 1 I 'l I =1 1 'I 1 eN S I I I I I I I Q U &verbar; n &verbar; e } ss e l l ~ 1 I v I a I ~ l o 1 v &verbar; r 4 e 4i 1 I L n I ~ I L n I ~ I L a I~ o Z ol & 4 1 u X &verbar; , Xo 1n 1, o } a. S 6 1o 1 1u 1 F &verbar; (1) u lnF a?ll 1t) UoX d: &verbar;?Z&verbar; (E) U !ltSd ;&verbar;?E&verbar; REVENDICATIONS 1. Procédé d'hydrolyse enzymatique d'un substrat lignocellulosique dans lequel on traite ledit substrat en milieu aqueux par une source d'enzyme dans des conditions d'hydrolyse enzymatique de la cellulose et on recueille la solution de sucres resultante, caractérisé en ce que au moins une fraction de la source d'enzyme consiste en tout ou partie du residu solide d'une hydrolyse enzymatique anterieure d'un substrat lignocellulosique. 2. Procédé selon la revendication 1, dans lequel le substrat lignocellulosique soumis à l'hydrolyse anterieure et à l'hydrolyse du procédé ont substantiellement la même composition. 3. Procédé selon la revendication 1 ou 2 dans lequel on repète au moins deux fois le traitement. 4. Procédé selon l'une des revendications 1 à 3, dans lequel le substrat est un substrat lignocellulosique pretraite par un acide et/ou par l'eau ou la vapeur d'eau. 5. Procedé selon l'une des revendications 1 à 4, dans lequel une fraction seulement du residu solide d'une opération est utilisée telle quelle comme source au moins partielle d'enzyme pour une opération subséquente. 6. Procédé selon la revendication 5, dans lequel la fraction du résidu solide qui n'est pas utilisée telle quelle comme source d'enzyme est soumise à un lavage à l'eau, de manière à recouvrer les sucres qu'elle renferme. 7. Procede selon l'une des revendications 1 à 6, dans lequel le substrat lignocellulosique est mis en contact avec la solution de sucres d'une hydrolyse enzymatique antérieure avant d'être traité en milieu aqueux par la source d'enzyme. 8. Procéde selon l'une des revendications 1 à 7 dans lequel on transfere à l'hydrolyse subséquente de 30 à 100 % du résidu solide venant de l'hydrolyse antérieure.