Brevet FR2606032A1 — publié le 19880506

PRCEDE IDE PREPARATICN D'ACIDE.LA'IQUE La présente invention concerne un procédé de préparation industriel d'acide lactique. Elle concerne plus particulièrement un procédé de préparation industriel d'acide lactique optiquement actif par fermentation de sources hydrocarbcnées par des microorganismes appartenant au genre Lactobacillus. La préparation d'acide-lactique par fermentation de milieux hydrocarbonés est connue depuis le début du siècle. Il est décrit par exemple dans le brevet français N 679418 de 1929 un procédé de préparation d'acide lactique par fermentation de moûts contenant des sucres à l'aide de microorganisme appartenant au genre lactobacillus. Depuis cette époque, de nombreuses améliorations aux procédés de préparation d'acide lactique par exemple par addition de peptones, d'extraits de levure (EP 113215), de levures de bière (EP 69291) ont permis d'augmenter les productivités qui restent néanmoins presque toujours inférieures à 100 g/l. Aucun des procédés décrits dans l'art antérieur ne permet une productivité satisfaisante. On entend par productivité le poids d'acide lactique formé par heure et par litre de milieu nutritif. La présente invention permet d'obtenir des productivités atteignant et même dépassant 110 g par litre. Comme mentionné précédemment, aucun des procédés de l'art antérieur ne permettait jusqu'alors d'atteindre 110 g/l/h même en augmentant la teneur en sucre de la solution initiale. La présente invention a permis d'atteindre des solutions beaucoup plus concentrées en acide lactique tout en conservant des temps de fermentation corrects de 1 'ordre de 60 heures. L'invention a donc pour objet un procédé de préparation d'acide lactique D ou L optiquement pur par fermentation d'un milieu nutritif qui contient une source hydrocarbonée, une source azotée, de 1 'acide phosphorique, des vitamines, un agent neutralisant à l'aide d'un microorganisme appartenant à la classe des lactobacillus caractérisé en ce que le milieu nutritif contient en outre comme source azotée oomplémentaire un protéolysat de poisson. La source hydrocarbanée utilisée dans le procédé de la présente invention peut être d'origine diverse. Elle peut être notamment constituée de saccharose, de lactose, de mélasse, de glucose, d'amidon, de maltose. La source azotée elle aussi peut être d'origine très diverse. On peut citer non limitativement l'eau de lavage de maïs, concentrée, ("corn steep liquor"), la levure de bière telle que notamment ses hydrolysats comme le 'Yeast extract" ou la levure fraîche, les peptones ou le chlorure d'ammonium. an préfère mettre en oeuvre l'eau de lavage de mais, concentrée ("corn steep liquor"). L'agent neutralisant qui permet de maintenir le PH de la solution nutritive aux environs de 6 pendant toute la période de croissance et d'activité synthétique du microorganisme est choisi parmi les hydroxydes alcalins, alcalinoterreux ou d'ammonium ainsi que parmi les carbonates. On préfère pour une meilleure mise en oeuvre de 1 'invention utiliser comme agent neutralisant pendant la phase de croissance du microorganisme la soude et pendant sa phase d'activité l'ammoniaque ou l'ammrniac. Le microorganisme utilisé pour la préparation d'acide lactique D ou L optiquement pur est choisi parmi l'ensemble des microorganismes appartenant à la classe des lactobacillus. On peut notamment citer pour la préparation d'acide lactique D (-) lévogyre: Lactobacillus lactis ATICC 12314, Lactobacillus delbrueckii NCDO (National Collection of Dairy Crganism) 1744, Lactobacillus leichmanii ATCC 4797, Lactobacillus bulgaricus AITOC 11842, Lactobacillus lactis ATCC 11061, Lactobacillus jugurt ATCC 9224. Pour la préparation d'acide lactique L(+) dextrogyre on peut citer non limitativement: Lactobacillus casei subsp. rhamnosus ATCC 7469, Lactobacillus casei AITCC 11443; Lactobacillus delbrueckii NR LL B 445. La source azotée complémentaire objet de la présente invention est un protéolysat de poissons. Ce protéolysat est obtenu par hydrolyse de blancs et de maigre de poissons à l'aide de protéase. Il est vendu sous la marque SEAH-FISH-D.A par la société Seah International. Mais tout autre protéolysat de poisson dégraissé peut être utilisé dans le cadre de la présente invention. Ce protéolysat peut être utilisé frais ou sous forme sèche notamment après atomisation. Le protéolysat de poisson est utilisé selon des concentrations comprises entre 3 et 5 g par litre de milieu nutritionel et de préférence d'environ 3,5 g par litre. Des quantités supérieures ne sont pas à exclure du procédé selon l'invention, elles n'apportent cependant aucun avantage supplémentaire. L'hoame de l'art adaptera la quantité optimale de protéolysat de poisson à utiliser en fonction de l'économie du procédé. La présente invention a aussi pour objet un procédé de préparation d'acide lactique D ou L optiquement actif par fermentation d'un milieu nutritif qui contient une source hydrocarbcnée, une source azotée, de l'acide phosphorique, un agent neutralisant, à l'aide d'un microorganisme appartenant à la classe des lactobacillus caractérisé en ce que la source hydrocarbonée est composée de sirop "O" et en ce qu'on ajoute au milieu nutritif une source complémentaire d'azote qui est un protéolysat de poisson. On entend par sirop "O" le sirop concentré qui sort de la dernière concentration dans les procédés d'extraction du sucre de la betterave. Ce sirop "O" contient environ 60 à 65 % de saccharose. L'extraction de sucre à partir de la betterave consiste dans une première étape à couper les betteraves en lanières ou "cossettes". Dans une deuxième étape on fait diffuser le sucre contenu dans ces lanières par passage à contre courant de ces lanières d'eau maintenue à environ 70-80 C. L'eau sortant du circuit d'extraction à contre courant contient le sucre ainsi que diverses impuretés contenues dans les betteraves. Les impuretés sont éliminées par mise en contact de la solution aqueuse avec de la chaux (chaulage), la solution obtenue est mise en contact avec du gaz carbonique (carbcnatation)qui permet la précipitation de carbonate de calcium et des impuretés. Après filtration on opère une deuxième carbcnatation jusqu'à complète précipitation de la chaux dissoute, puis une deuxième filtration. La solution aqueuse épurée contenant environ 13 % de saccharose est concentrée jusqu'à environ 60 à 65 % de saccharose. Cette solution constitue le sucre "O". Elle contient une forte proportion de saccharose et une partie des constituants de la mélasse. Elle présente l'avantage lorsqu'elle est utilisée comme source nutritive dans la production d'acide lactique d'apporter une meilleure productivité que l'utilisation du saccharose pur ou du mélange saccharose-mélasse. Cet avantage tout fait surprenant associé à l'augxmentation de productivité apportée par l'utilisation d'une source d'azote complémentaire permet d'obtenir des productivités de l'ordre de 130 grammes d'acide lactique par litre de milieu nutritif qui n'avaient jamais été atteintes dans l'art antérieur. L'invention va être décrite plus complètement à l'aide des exemples suivants qui ne doivent en aucun cas être considérés comme limitatifs de l'inventin. Cette dernière comprend tous les moyens constituant des équivalents techniques des moyens décrits ainsi que leurs combinaisons si celles-ci sont mises en oeuvre dans le cadre de la protection comme revendiquée. Exemple 1 à 12: A partir d'une souche de Lactobacillus lactis ATCC 12314, on ensemence avec 0,5 % en poids de souche un erlenmneyer contenant un milieu nutritif composé de: mélasse 100 g/l extrait de levure 6 g/l peptone pancréatique de caséine 5 g/l CH 3CONa, 3 H20 10 g/ sulfate de magnésium, 7H20 0,2 g/l sulfate de manganèse, H20 0,01 g/l sulfate ferreux, 7H20 0,01 g/l acide phosphorique 0,5 ml/l tween 80 1 ml/l vitamine B 12 20 mg/l antimousse quelques gouttes CaCo 36 g/i 33 / eau quantité suffisante pour 1 litre Après ensemencement, on laisse incuber 16 heures à l'étuve à 40 C. A partir de cet erlenmeyer incubé on ensemence avec 0,5 % en poids de la lére culture une cuve de 50 litres contenant un milieu nutritif composé de: mélasse 100 g/l eau de lavage de maïs concentrée 35 g/1 tween 80 1 ml/1 CaC03 36 g/l eau quantité suffisante pour 1 litre Après ensemencement on laisse incuber 8 heures à 40 C. A partir de cet inoculum, on ensemence avec 3,5 % en poids d'inoculum, divers milieux de culture d'une contenance de 1000 litres dont les compositions sont indiquées dans le tableau. Le PH est maintenu à 5,8 par addition d'ammoniaque, d'ammoniac ou de carbonate. Les exemples 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, sont des exemples comparatifs dans lesquels la source d'azote complémentaire est un extrait de levure (exemples 1 et 3) ou des exemples dans lesquels aucune source complémentaire n'est utilisée(exemples 2, 4, 5 et 7). Les exemples (1 et 4) sont des exemples comparatifs dans lesquels la source hydrocarbonée est du glucose, les exemples 2 et 3 sont des exemples comparatifs dans lesquels la source hydrocarbonée est le saccharose, les exemples 5, 6, 7 et 8 sont des exemples dans lesquels la source hydrocarbonée est un mélange saccharose-mélasse (75/25). Les exemples selon 1 'invention 6 et 8 prouvent que la présence de protéolysat de poisson augmente le rendement quelque soit la source hydrocarbonée et les exemples 9 à 12 prouvent que la présence simultanée de protéolysat de poisson comme source azotée complémentaire et de sirop "O" comme source hydrocarbonée apporte un effet synergique qui se traduit par une productivité nettement améliorée. CIN *daJj-d luaiuoa mpMu apUAVAlVap nuaJaObl 1 da4a uJO.u =j s IIII t I I I II I I I I o OLItI À1 I oIm 110011I I O O l 1 -'Q. oI I ' C +Ic ' IC III IIOO l I I I0*.IL99CI1I 1 I I Le'sIçcisclIl0011I m IIII I I I I I II I I I I9 1 01I I I I I Sú I II (i001 I lOi cgs'oI I I I stlObiIl0011 I l os9 i1 i + sI'CIs'zclocIItI oIl 6 I t911 +I1 ZEIsil % I sz% SLII9 I I ss tIZi'U I 11'I I sls ú6IIIszII SLI1ILI I 9CI'ZI + I I ú ISC I1IISZ%SL 9 1 9 s 8'06 III+ I IIsel 00[ 1 % î%s lSL 191 09I 6 + I OII I I I 001 I, I I eZoIgB+I I I 05DI I 0 1 10 1i I tet OI+ 1i o0i O0îI c ii ii cgt1 019+ s Oii001 % I11oi úI Iú9I 011 EI+II I I 10ú1 OJi 1% 001II I "' I--I c_I...... 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