Brevet FR2607806A1 — publié le 19880610

L'immunité est la propriété particulière que possède l'organisme d'un individu de se défendre contre les agressions externes et principalement contre les microbes Les microbes, les cellules, les substances, les molécules étrangères à l'organisme et capables d'entraîner une réaction de défense sont appelés antigènes Les défenses immunitaires de l'organisme sont multiples, coordonnées et complémentaires .Elles sont assurées par des cellules spécialisées, dites pour cette raison immuno compétentes On distingue plusieurs types d'immunité, et notamment - L' immunité naturelle, qui correspond à la capacité que possède l'organisme de se défendre contre une maladie infectieuse sans même avoir été en contact avec l'agent pathogène - L'immunité acquise, gui correspond à la résistance acquise par un individu devant une maladie, après l'avoir contractée ou avoir recu une vaccination, ou encore un traitement sérothérapique On distingue quatre fcrmes d'immunité acquise a) l'immunité naturelle active, qui fait suite spontanZément à la maladie ou à l'infection b) l'immunité naturelle passive , dûe au fait que les anticorps protecteurs maternels persistent chez un individu devenu adulte c) l'immunité artificielle active , faisant suite à une vaccination entrainant l'organisme à fabriquer ses propres défenses immunitaires après injection des toxines ou des germes non virulents, d) l'immunité artificielle passive, qui résulte de l'injection de sérum ou de solution immunospécifique . On constate ainsi que les moyens de défense de l'organisme sont complexes , des facteurs hormonaux,sériques cellulaires ou tissulaires y étant imbriqués . Les facteurs hormonaux paraissent simples , mais les immunoglobulines ont une structure très complexe, encore mal connue Les facteurs cellulaires sont encore plus complexes, et leur connaissance n'est qu'à peine ébauchée, malgré les grandes découvertes de ces dernières années a notion de terrain est primordiale . En effet si le sujet est sain et vigoureux, ses moyens de défense sont au maximum de leurs pouvoirs, et l'attaque microbienne tournera court en général . Au contraire, si le patient est affaibli par une maladie ou une opération, s'il est cirrhotique, diabétique, cancéreux, etc... l'organisme ne pourra se défendre Quelles que soient leurs causes, les défauts immunitaires sont responsables d'un certain nombre de troubles et principalement d'une grande sensibilité à l'infection Les infections sont itératives, imparfaitement prévenues par les antibiotiques . le plus souvent dûes à des germes banals , elles sont chroniques et n'en/trainent pas d'immunité Par ailleurs, la vaccination avec des germes virulents est totalement contre indiquée car elle peut provoquer une infection générale mortelle On observe que certaines substances chimiques exaltent l'activité bactéricide des leucocytes du sang et confortent les défenses immunitaires d'un individu La présente invention concerne le procédé de fabrication du complexe acrylamine-cobalt à action immuno stimulante caractérisé en ce qu'il comporte la préparation en milieu anhydre d'huile polycétonique, à partir d'éthylate de soude, d'oxalacétate d'éthyle et de malate d'éthyle , cette huile polycétonique étant ensuite condensée en milieu solvant avec une amine du type éthanolamine ;; ltacrylamine formée qui précipite, est alors dissoute dans l'eau, puis additionnée d'un sel cobalteux, et le nouveau précipité est redissout dans un électrolyte contenant un excès d'éthanolamine ; la solution résultante est soumise à une électrolyse provoquant, au niveau de l'anode, l'oxydation des ions cobalteux ; le complexe acrylamine-cobalt formé in situ est finalement isolé pour être purifié L'invention ainsi définie présente de nombreux avantages, et notamment - L'obtention d'un complexe organique d'acrylamine cobaltique suivant une nouvelle technique facilea-mettre en oeuvre. - La facilité de purification de la substance fabriquée avant son utilisation à des fins médicales Le complexe d'acrylamine cobaltique fabriqué présente des propriétés bactéricides importantes et exalte la défense immunitaire d'un individu L'invention ainsi définie sera mieux comprise grâce à la description du procédé utilisé, qui n'est présenté qu'à titre d'exemple non limitatif , notamment en ce qui concerne les conditions techniques . PROCEDE DE FABRICATION Dans 15 parties de benzène rendu anhydre on disperse 1 partie d'éthyle de sodium. L'opération est menée sous agitation et atmosphère d'azote desséchée A ce mélange homogénéisé, on ajoute 1 partie d'oxalacétate d'éthyle anhydre et 1 partie de malate d'éthyle anhydre . Le mélange obtenu contient une huile polycétonique Pour récupérer cette huile, on place le mélange dans un ballon à distiller muni d'une colonne Vigreux, par exemple . Au moyen d'un bain-marie, le mélange est doucement porté à la température de 700C, afin de distiller l'azéotrope benzène-alcool formé .L'opération de distillation est effectuée sous atmosphère d'azote et en l'absence de traces d'eau Après.refroidissement, la masse contenue dans le ballon est traitée par un acide dilué, type acide chlorhydrique N/10 et maintenue à la température de la glace fondante .L'huile polycétonique formée est extraite au moyen d'un solvant du type toluène Cette huile polycétonique a pour formule R-COO-CH2-CO-CO-CH2CHOH-COOR f R représentant le radical éthyl J Le mélange toluène-huile polycétonique est déshydraté par filtration du composé sur un lit de chlorure de calcium ou de sulfate de chaux poreux La solution huile polycétonique-toluène fraSchement préparée est mélange à une amine du type NH2-R ( R représentant le radical éthyl ) afin d'obtenir l'acrylamine Dans cette opération, la solution huile polycétonique-toluène est placée dans un récipient de verre et porté à 50 - 700C . Cette solution fortement agitée reçoit un excès d'éthanolamine fraîchement distillée Le mélange obtenu est placé dans une ampoule à décanter afin d'isoler le précipité huileux , gui, receuilli , sera lavé avec un solvant du type toluène . I1 sera ensuite redissout dans de l'eau distillée pour constituer une solution d'acrylamine Cette solution a pour formule : Elle est ensuite traitée par une solution de chlorure cobalteux (valence +2J.dilué et versée en excès . I1 se forme un précipité qui est isolé par centrifugation et lavé par une solution mère Le précipité est redissout dans l'acide chlorhydrique dilué et contenant un léger excès dréthanolamine .La solution obtenue est alors placée dans le compartiment anodique d'une cuve d'électrolyse Le compartiment cathodique de cette cuve contient une solution diluée d'acide chlorhydrique avec un léger excès d'éthanolamine Il est séparé du compartiment anodique par une paroi poreuse La solution d'acrylamine cobalteuse du compartiment anodique est soumise à une oxydation au niveau de l'anode .La tension appliquée est de 4 volts avec des électrodes de platine Il se forme dans le compartiment anodique un complexe acrylamine cobalt que l'on récupérera et purifiera avant son utilisation La purification a pour objet d'éliminer l'excès de sels de cobalt obtenu au moyen d'une électrolyse complètée par une électrophorèse descendante UTILISATION : On démontre l'effet bactéricide du complexe acrylamine cobalt en l'introduisant dans un mélange tamponné sérum-leucocytes contaminé par des germes de staphylocoques Cette expérience est réalisée dans les conditions décrites ci-après On réalise un mélange contaminé qui, pour être 3 représentatif, doit contenir 10.000 leucocytes par mm3, et 20 germes par leucocyte. On met à incuber 18 heures à 370C On homogénéise par une lente agitation, et on réalise les témoins suivants : - germes seuls, - leucocytes, sérum, germes et complexe acrylamine cobalt - leucocytes, sérum et germes Avant et après l'incubation, on réalise une numération de germes selon les méthodes habituelles L'échantillon contenant le complexe acrylamine-cobalt ne renferme plus de germes après l'incubation Une autre expérience permet de déterminer l'action immunitaire Par exemple, on injecte une suspension de 50.000 cellules d'ascite de Krebs, hautement pathogènes, dans la cavité péritonéale des souris . On attend quelques jours la multiplication des cellules, de façon à ce que le poids des souris soit de 2 à 4 grammes supérieur au poids des témoins Ce résultat atteint, on injecte le complexe acrylamine-cobalt à raison de lmg deux fois par jour . A chaque injection, on prélève 1 goutte de liquide d'ascite de la souris afin d'effectuer une numération cellulaire On constate que le nombre de cellules décroit rapidement, tandis que les leucocytes réapparaissent ; 50 t des souris ainsi traitées guérissent alors que les témoins meurent en 5 à 6 semaines Revendication 1 Nouveau procédé de fabrication de complexe de cobalt à action immuno stimulante caractérisé en ce qu'il comporte la préparation d'huile polycétonique par condensation d'éthylate de soude, d'oxalacétate et de malate d'éthyle , l'huile polycétonique est condensée avec une amine pour obtenir l'acrylamine, cette dernière dissoute dans l'eau, est mélangée avec un sel cobalteux gui précipite sous forme de complexe, ce précipité redissous dans un électrolyte en présence d'éthanolamine, est soumis à une oxydation anodique; cette oxydation transforme l'ion cobalteux en ion cobaltique et forme un complexe in situ avec l'acrylamine, qui est isolée pour être purifiée Revendication 2 Nouveau procédé de fabrication de complexe de cobalt à action immuno stimulante caractérisé en ce que la préparation d'huile polycétonique se fait au moyen d'un mélange réalisé dans du benzènz anhydre avec 1 partie d'éthylate de soude dans laquelle on ajoute lentement 1 partie d'oxalacétate d'éthyl et 1 partie de malate d'éthyl, anhydres, le mélange obtenu étant porté à une température de 700C pour éliminer l'azéotrope benzènz-alcool formé ; la substance récupérée est hydrolysée par de l'acide chlorhydrique dilué, refroidie à OOC ; l'huile polycétonique est extraite par un solvant comme le toluène, puis séchée par un sel anhydre. Revendication 3 Nouveau procédé de fabrication de complexe de cobalt à action immuno stimulante caractérisé en ce que le moyen d'obit l'acrylamine à partir d'huile polycétonique est réalisé en mélangeant à 700C et sous forte agitation , l'huile polycétonique dissoute dans le toluène avec une solution anhydre d'éthanolamine fraîchement distillée Revendication 4 Nouveau procédé de fabrication de complexe de cobalt à action immuno stimulante caractérisé en ce que le précipité huileux obtenu à partir d'un mélange d'huile polycétonique et d'éthanolamine est isolé et lavé au moyen de solvant comme le toluène, puis redissous dans l'eau Revendication 5 Nouveau procédé de fabrication de complexe de coba à action immuno stimulante caractérisé en ce que le complexe acrylamine - ions cobalteux est obtenu au moyen d'un mélange de solut. d'acrylamine avec un excès de solution de chlorure de cobalt réduit (valence +2 ), le précipité obtenu étant isolé et lavé avec les solutions mères, et redissout dans une solution aqueuse Revendication 6 Nouveau procédé de fabrication de complexe de cobalt à action immuno stimulante caractérisé en ce que le complexe acrylamine-ions cobaltiques est obtenu au moyen d'une oxydation anodi de la solution acrylamine-ions cobalteux contenant un excès d'une solution d'éthanolamine .