Brevet FR2609396A1 — publié le 19880715

COMPOSITION DE SELS ET D'ION AMPHOTERE DE CEPHALOSPORINE LYOPHILISEE OU PRECIPITEE La présente invention a pour objet des compositions de céphalosporine semi-synthétique, stable à températures éle- vées. Le brevet U.S. n 4 406 899 de Aburaki et coll. décrit le 7-[e-(2-aminothiazol-4-yl)-a-(Z)-méthoxyiminoacétamido]- 3-[(1-méthyl-1-pyrrolidinio)-méthyl]-3-cephem-4-carboxylate sous sa forme d'ion amphotère et il mentionne des sels d'addi- tion d'acides correspondants et démontre que la forme d'ion amphotère présente un spectre d'activité plus large que celui de la ceftazidime et de la céfotaxime. Il se réfère à l'ion amphotère sous le nom de 7-[(Z)-2-méthoxyimino-2-(2-amino- thiazol-4-yl)acétamido]-3-[(1-méthyl-1-pyrrolidinium)méthyl]- 3-cephem-4-carboxylate. Kessler et coll., "Comparison of a New Cephalosporin, BMY-28142, with Other Broad-Spectrum B-Lactam Antibiotics", Antimicrobial Agents and Chemotherapy, volume 27, n 2, pa- ges 207-216, février 1985, mentionnent le sulfate comme sel. Kaplan et coll., demande U.S. n 762 235 déposée le août 1985, décrivent divers sels d'addition d'acides. L'ion amphotère et ses sels d addition d'acides sont stables pendant approximativement 8 à 16 heures sous la forme de compositions injectables en solution aqueuse à 24 C. L'ion amphotère, même sous la forme d'une poudre sèche, est instable à la température ambiante et il perd 30% ou plus de son acti- vité par stockage à des températures élevées (par exemple 45 C et plus) même pendant une semaine seulement; on doit le stocker à -30 C pour garantir une stabilité adéquate et on ne peut pas de ce fait le considérer comme convenant à une 2, utilisation dans des conditions normales de réfrigération, c'est-à-dire les conditions telles qu'elles sont disponibles dans les pharmacies. Les sels d'addition d'acides mentionnés ci-dessus, bien qu'ils présentent une meilleure résistance à la température sous la forme de poudre sèche que l'ion amphotère, sont trop acides pour une utilisation intramusculaire et intraveineuse et on doit les formuler en présence de bases et/ou d'agents tampons à pH 3,5 à 6,5-pour cette utilisation. La demanderesse a maintenant constaté que le solide amorphe formé par lyophilisation ou précipitation en cosolvant d'une solution aqueuse de l'ionamphotère, c'est-à-dire de l'ion amphotère 7-[a-(2-aminothiazol-4-yl)-o-(Z)-méthoxyimino- acétamido]-3-[(1-méthyl-l-pyrrolidinio)-méthyl]-3-cephem-4- carboxylate, et d'un sel ou d'un mélange de deux sels ou plus choisis dans un groupe particulier conservait l'activité antibiotique à large spectre de l'ion amphotère mais présen- tait une stabilité à la température améliorée sous sa forme de poudre sèche et, par dilution à une concentration injectable, procurait un pH d'environ 3,5 à environ 7 et convenait donc à l'utilisation en injection intramusculaire et intraveineuse sans utilisation d'agents tampons ou de bases. Les sels à utiliser selon la présente invention sont ceux dans lesquels le cation est choisi dans le groupe consti- tué par: sodium, lithium, calcium et magnésium et l'anion est choisi dans le groupe constitué par: chlorure, bromure et iodure. Les sels sont choisis pour procurer un produit solide amorphe présentant une stabilité à la température telle qu'il perde moins d'environ 15 à 20% de son activité au stockage sous la forme de poudre sèche à 45 C pendant 2 à 4 semaines (1 à 2 semaines à 56 C), ceci étant déterminé par un essai en chromatographie liquide haute performance, c'est-à-dire CLHP. Le rapport molaire de l'ion amphotère au sel dans la solution que l'on soumet à une lyophilisation ou à une préci- pitation en cosolvant est compris entre environ 0,5/1 et environ 2/1. Les compositions selon la présente invention comprennent la forme exempte de solvate aussi bien que la forme solvatée. Une des compositions que l'on préfère comprend un solide amorphe formé à partir de l'ion amphotère et de chlorure de sodium. Une composition que l'on préfère surtout comprend le solide ci-dessus dans lequel l'ion amphotère et le chlorure de sodium se trouvent dans un rapport molaire de 1/1. Une compo- sition que l'on préfère plus encore comprend la composition molaire à 1/1 décrite ci-dessus formée par lyophilisation d'une solution aqueuse de l'ion amphotère et de chlorure de sodium. Une autre composition que l'on préfère comprend un solide amorphe formé à partir de l'ion amphotère et de chlo- rure de calcium. Les compositions que l'on préfère surtout comprennent le solide ci-dessus dans lequel l'ion amphotère et le chlorure de calcium se trouvent dans un rapport molaire de 1/0,5 ou 1/1. Les compositions que l'on préfère plus encore comprennent les compositions de rapports molaires 1/0,5 et 1/1 décrites ci-dessus formées par lyophilisation d'une solution aqueuse de l'ion amphotère et de chlorure de calcium. D'autres compositions que l'on préfère comprennent des solides amorphes formés à partir de l'ion amphotère et d'un mélange de chlorure de sodium et de chlorure de calcium. Une composition que l'on préfère surtout comprend un solide amorphe formé à partir de l'ion amphotère, de chlorure de calcium et de chlorure de sodium dans lequel l'ion am- photère, le chlorure de calcium et le chlorure de sodium se trouvent dans un rapport molaire de (a) 1/0,5/0,5 ou (b) 1/0,1-0,2/0,8-1,0. De préférence surtout, on forme ce solide par lyophilisation d'une solution aqueuse d'ion ampho- tère, de chlorure de calcium et de chlorure de sodium. Une composition que l'on préfère surtout comprend un solide amorphe formé, de préférence, par lyophilisation, à partir d'ion amphotère, de chlorure de calcium et de chlorure de sodium dans lequel l'ion amphotère, le chlorure de calcium et le chlorure de sodium se trouvent dans un rapport molaire de 1/0,2/1. On constate que ce solide présente la meilleure combinaison de stabilité sous sa forme de poudre sèche et en solution aqueuse, et d'acceptabilité pharmaceutique. En parti- culier, il présente une excellente stabilité sous la forme de poudre sèche à la température ambiante et à des températures élevées et il présente également des niveaux d'acceptabilité médicale du calcium pour l'usage chez l'homme. Une autre composition que l'on préfère surtout comprend un solide amorphe formé, de préférence par lyophilisation, à partir d'ion amphotère, de chlorure de calcium et de chlorure de sodium dans lequel l'ion amphotère, le chlorure de calcium et le chlorure de sodium se trouvent dans un rapport molaire de 1/0,5/0,5. On constate que ce solide présente une excel- lente stabilité à la fois sous sa forme de poudre sèche et lorsqu'il est reconstitué. Le terme "précipitation en cosolvant" tel qu'utilisé ici entend signifier l'addition d'un non solvant à une solution aqueuse d'ion amphotère et de sel pour les précipiter. Le terme "poudre sèche" est utilisé ici pour signifier une teneur en humidité inférieure à 5% en poids. Le terme "stable à la température", lorsqu'on l'utilise à la description de combinaisons entrant dans le cadre de la présente invention, signifie une stabilité à la température telle que l'on perde moins d'environ 15 à 20% d'activité au stockage sous la forme de poudre sèche à 45 C pendant 2 à 4 semaines (1 à 2 semaines à 56 C), ceci étant déterminé par un essai CLHP. Le terme "sans utilisation d'agents tampons ou de bases" signifie que l'on reconstitue le solide à l'aide d'eau stérile et/ou d'une solution saline sans autre ajustement du pH à l'aide d'une substance d'ajustement du pH. L'ion amphotère utilisé dans la formation des composi- tions selon l'invention présente la formule structurelle suivante: N - CONH S B2N/LC ENC 3 coH CE3 L'ion amphotère se prépare facilement comme l'ont décrit Aburaki et coll. dans le brevet U.S. n 4 406 899. Les sels convenant à l'utilisation pour l'obtention des compositions selon la présente invention comprennent par exemple: chlorure de sodium, bromure de sodium, iodure de sodium, chlorure de lithium, iodure de lithium, chlorure de calcium, bromure de calcium, iodure de calcium et chlorure de magnésium. Le rapport molaire de l'ion amphotère au sel est de préférence compris entre environ 1/1 et environ 2/1 et, de préférence surtout, il est égal à environ 1/1. La demanderesse a constaté que des compositions conve- nables pouvaient être obtenues à partir de mélanges des sels indiqués aussi bien qu'à partir des sels individuels per se. Les propriétés de stabilité de ces compositions se trouvent dans une zone située entre les stabilités des compositions formées à partir des sels individuels utilisés dans le mélan- ge. Ainsi, par exemple, on peut préparer un solide à partir d'ion amphotère, de chlorure de calcium et de chlorure de sodium et ce solide va présenter des propriétés de stabilité intermédiaires entre celles des compositions ion amphotère/NaCl et des compositions ion amphotère/CaCl2. L'utilisation d'un mélange peut être avantageuse si l'on souhaite obtenir sensi- blement les propriétés favorables de stabilité d'un sel mais, pour des raisons physiologiques, réduire la quantité de ce sel sous la forme du dosage. Dans la préparation de compositions à partir de deux sels ou plus, on emploie simplement ces sels en quantités telles que le rapport molaire soit compris dans la zone indiquée ci-dessus, c'est-à-dire ion amphotère/sel = 0,5/1 à 2/1. Comme indiqué ci-dessus, une des compositions préférées selon la présente invention est formée par lyophilisation d'une solution aqueuse de cet ion amphotère et de chlorure de sodium dans un rapport molaire de 1/1. Le spectre IR de cette composition en présente pas de différences significatives avec celui de l'ion amphotère. Cependant, il présente un point de décomposition, par calorimétrie d'exploration différentielle, avec exothermie à environ 197,4 C par comparaison avec les 173,84 C de l'ion amphotère, ce qui indique qu'il s'agit d'un composé différant de l'ion amphotère. Sans être lié par une théorie quelconque pour ce qui a été constaté, on peut suppo- ser que ce qui est présent est un complexe dans lequel Na neutralise le COO de l'ion amphotère et le C1 est neutralisé par le N de l'ion amphotère, c'est-à-dire que le composé présente la structure suivante: N2 C H CONH ci H N COONa j0 O-CH3 CO CH3 Vu cette spéculation théorique, la composition formée selon la présente invention à partir d'une solution d'ion amphotère et de chlorure de sodium dans un rapport molaire.de 1/1 sera donc quelquefois désignée ci-après sous le nom de complexe ion amphotère/NaCl 1/1 même bien que l'existence de ce complexe n'ait pas été prouvée sans équivoque. Ce complexe ion amphotère/NaCl 1/1 est très acceptable pharmaceutiquement. Il présente un large spectre d'activité antibiotique sensiblement égal à celui de l'ion amphotère. Il présente une stabilité satisfaisante en solution pendant au moins 24 heures à 25 C (à une concentration de 250 mg/ml d'ion amphotère dans de l'eau stérile, il y a moins de 10% de perte d'activité, ceci étant déterminé par CLPH), et, à la diffé- rence de l'ion amphotère, il présente une stabilité satisfai- sante à température élevée sous sa forme de poudre sèche (environ 10% de perte d'activité par stockage à 45 C pendant 4 semaines, ceci étant déterminé par CLPH) et une stabilité exceptionnelle sous sa forme de poudre sèche à des tempéra- tures normales de réfrigération (aucune perte pendant 6 mois à 4 C). Pendant toute une période de 24 heures après laquelle on l'a reconstitué pour réaliser une composition injectable (c'est-à-dire après reconstitution à une concentration injec- table), la composition injectable conserve un pH satisfaisant, c'est-àdire compris entre environ 4,2 et environ 6,2 sans utilisation d'agents tampons ni de bases et il est plutôt moins toxique que l'ion amphotère. On va maintenant décrire la préparation des compositions selon la présente invention. Comme indiqué ci-dessus, un procédé de préparation des compositions selon la présente invention consiste à lyophi- liser dans des conditions aseptiques une solution aqueuse d'ion amphotère et de sel. Ceci se réalise facilement en dissolvant par exemple l'ion amphotère dans de l'eau stérile pour réaliser une concentration comprise entre environ mg/ml et environ 400 mg/ml, et ensuite à introduire la solution aqueuse d'ion amphotère dans un réservoir équipé d'un agitateur et à agiter, puis à ajouter le sel ou mélange de sels en quantités et rapports molaires choisis et à poursuivre l'agitation jusqu'à ce que la dissolution soit complète, c'est-à-dire pendant une durée d'environ 15 minutes à environ 1 heure, puis à filtrer, c'est-à-dire à utiliser un dispositif à filtre de stérilisation puis à introduire la solution fil- trée dans des fioles et à placer ces fioles sur des plateaux de lyophilisation introduits dans un équipement de lyophili- sation, puis à les congeler à une température de -30 C à -40 C pendant une période comprise entre environ 4 heures et environ 16 heures, puis à créer un vide compris entre 10 et 100 milli- torrs et à régler la température à -10 C à -20 C pendant 15 à 20 heures, puis à 20 à 30 C pendarnt 40 à 60 heures et à conden- ser le sublimé dans un condenseur à une température par exem- ple de -40 C à -60 C. Comme indiqué ci-dessus, l'autre procédé de préparation des compositions selon la présente invention consiste en une précipitation en cosolvant d'une solution aqueuse d'ion ampho- tère et de sel. Ceci se réalise facilement dans des conditions aseptiques, c'est-à-dire en constituant une solution aqueuse telle qu'indiquée cidessus en ce qui concerne le procédé de lyophilisation mais, au lieu de procéder à une lyophilisation, à mélanger un non solvant pour précipiter le complexe ion amphotère-sel puis à séparer le précipité et à le sécher. Normalement, il est facultatif soit d'ajouter la solution de l'ion amphotère et du sel dans le non solvant, soit d'ajouter le non solvant dans la solution d'ion amphotère et de sel. Le précipité se sépare facilement, par exemple par filtration en utilisant un ensemble de filtres sous vide de stérilisation. Le séchage s'effectue facilement par séchage sous vide poussé, par exemple à une température de 40 à 60 C. Le non solvant est de préférence de l'acétone ou de l'isopropanol mais il peut s'agir de n'importe quel non-solvant de l'ion amphotère et du sel pharmaceutique sûr et qui ne réagisse pas avec ceux-ci. Les compositions selon la présente invention se mettent sous la forme de compositions injectables par dilution à l'aide d'eau stérile et/ou de solution saline pour réaliser une composition présentant une concentration de base d'acti- vité d'ion amphotère comprise entre environ 1 mg/ml et attei- gnant jusqu'à 400 mg/ml, ceci étant déterminé par un essai CLHP, de préférence entre environ 2,5 mg/ml et atteignant jusqu'à 250 mg/ml, ceci étant déterminé par essai CLHP. De préférence, la dilution à 250 mg/ml s'effectue en utilisant de l'eau stérile pour injection, U.S.P., et, si une dilution supplémentaire est nécessaire, en utilisant une solution U.S.P. de chlorure de sodium 0,9% pour injection. Pour l'admi- nistration intramusculaire ou intraveineuse à un être humain adulte, une dose totale d'environ 750 à environ 3 000 mg/j en doses subdivisées est normalement suffisante. Les compositions selon la présente invention sont de préférence expédiées et stockées sous la forme sèche dans des conditions normales de réfrigération, par exemple à 4 C, et elles doivent alors rester actives à concurrence de plus de 90% pendant au moins 1 à 2 ans. On les transforme facilement en compositions injectables lorsque, par exemple, une infir- mière ou un docteur les prépare extemporanément juste avant l'utilisation. L'invention est maintenant illustrée par les exemples suivants. EXEMPLE I Synthèse et test du complexe ion amphotère/NaCl 1/1 Dans un récipient équipé d'un agitateur, on ajoute 800 ml d'une solution aqueuse contenant 250 g d'ion amphotère. L'agitateur tournant à vitesse moyenne, on ajoute 30,41 g de NaCl pour réaliser un rapport molaire 1/1 d'ion amphotère/NaCl. De l'eau pour injection U.S.P. est ajoutée en quantité suffi- sante pour 1 litre. On poursuit alors l'agitation de la solu- tion pendant 15 minutes et, après cela, pendant des inter- valles de 5 à 10 minutes jusqu'à ce qu'un prélèvement entre les intervalles d'agitation ne montre plus de quantités signi- ficatives de particules non dissoutes. On transfère la solu- tion obtenue dans un récipient sous pression, en acier inoxy- dable et, de là, on le fait passer, sous pression d'azote, à travers un ensemble de filtres de stérilisation équipés d'un préfiltre et d'un filtre stérilisant dans un récipient stéri- lisé propre. On introduit alors de façon aseptique des doses de 4 ml (1 g d'activité d'ion amphotère) dans des fioles en verre de 10 cc. Après remplissage, on bouche les fioles de façon non étanche avec des bouchons de lyophilisation. On place ensuite les fioles sur des plateaux de lyophilisation que l'on introduit dans une armoire de lyophilisation o le produit est congelé pendant 4 heures à une température de -30 C à - 40 C. Le condenseur de l'armoire de lyophilisation est alors réglé à - 60 C + 3 C et ''on déconnecte l'ensemble de congélation. Lorsque la température du condenseur atteint -50 C, on branche la pompe à vide. Lorsque le niveau de vide atteint 200 microns, on règle la température des étagères à -13 C 3 C, température que l'on maintient pendant 16 à 18 heures. Ensuite,on règle la température des étagères à +25 C et l'on maintient une température de 25 C + 2 C pendant 48 heures. On met ensuite l'armoire de lyophilisation hors circuit et l'on extrait les fioles. Le produit se trouve sous la forme d'un solide amorphe et présente le caractère de complexe ion amphotère/NaCl 1/1. A l'analyse pour. C19 H24 N605S2ClNa on obtient les valeurs suivantes: %Na %H SNs H2 0 cendres %Cl (KF) sulfatées calculées......... 42,34 4,49 15,59 l 1,90 rien 4,27 6,58 trouvées (correc- tion pour H 20).... 41,96 4,57 14,73 12,28 1,80 3,15 6,85 On ne note pas de différences significatives par IR entre le produit selon l'invention et l'ion amphotère. Cepen- dant, le point de décomposition en calorimétrie d'exploration différentielle donne une exothermie à 197,4 C, ce qui est notoirement différent de celui de l'ion amphotère (173,84 C) et indique que le produit selon l'invention est un produit différant de l'ion amphotère. On obtient sensiblement le produit en ajoutant de 10 à volumes d'isopropanol au récipient stérilisé propre conte- nant une solution aqueuse d'ion amphotère et de chlorure de sodium pour former un précipité, en séparant le précipité par utilisation de filtration sous vide, en lavant le précipité à l'isopropanol et en le séchant sous vide poussé pour obtenir un produit sous sa forme sensiblement sèche. Dans l'évaluation de l'activité du large spectre du produit selon la présente invention, les concentrations inhi- bitrices minimum (CIM) du produit selon la présente invention et de l'ion amphotère sont déterminées par la méthode à la solution d'agar-agar à double série dans de l'agar-agar de Mueller-Hinton et les données sont présentées sur le tableau 1 ci-dessous (dans lequel le n Bristol A indique une souche particulière de micro-organismes): TABLEAU 1 Valeurs CIM (mg/ml) - Bristol Complexe ion n A Ion amphotère amphotère/NaCl 1/1 1. S. pneumoniae A9585 0,016 0,016 2. S. pyogenes A9604 0,008 0,008 3. S. faecalis A20688 16 16 4. S. aureus A9537 0,5 0,5 5. S. aureus/+sérum à 50% A9537s 1 1 6. S. aureus /Pen. Res. A9606 1 1 7. S. aureus/Meth. Res. 28 CA20699)125 125 8. E. coli A15119 0,016 0,016 9. E. coli A20341-1 ' 0, 016 0,03 10. K. pneumoniae A9664 0,016 0,06 11. K. pneumoniae A20468 0,5 7 12. E. cloacae A9659 0,016 0,016 13. E. cloacae A9656 0,03 0,06 14. P. mirabilis A9900 0,008 0,016 15. P. vulgaris A21559 0,03 0,03 16. M. morganii AI5153 0,008 0,016 17. P. rettgeri A22424 0,13 0,25 18. S. marcescens A20019 0,03 0,03 19. Ps. aeruginosa A9843a 0,5 1 20. Ps. aeruginosa/Carb. Res.A21628 2 2 Les données ci-dessus indiquent que le produit formé selon la présente invention, c'est-à-dire le complexe ion amphotère/NaCl 1/1 présente une activité microbiologique sensiblement équivalente à celle de l'ion amphotère. I1 a été démontré dans le brevet U.S. n 4 406 899 de Aburaki et coll. que l'ion amphotère présentait un large spectre d'activité par comparaison avec celui de la ceftazidime et de la céfotaxime. On a contrôlé la toxicité du complexe ion amphotère/NaCl 1/1 par administration à des rats Sprague-Dawley par une simple injection intraveineuse. La dose léthale moyenne DL50 pour l'ensemble des données des deux études est de 796 mg/kg avec des limites de confiance à 95% entre 759 et 832 mg/kg. Ceci se compare avec une DL50 de 669 mg/kg avec des limites de confiance à 95% de 618 et 732 mg/kg pour l'ion amphotère. Les courbes de réponse sont parallèles mais le rapport de puis- sance indique que le produit selon la présente invention est un peu moins toxique que l'ion amphotère. 5.Les stabilités à températures élevées sont déterminées par stockage du complexe ion amphotère/NaCl 1/1 et de l'ion amphotère sous leur forme de poudre sèche et en déterminant les pertes de puissance par CLHP. Les pertes de puissance sont présentées dans le tableau 2 ci-dessous. La spécification d'un intervalle indique les valeurs extrêmes dans une pluralité d'essais. TABLEAU 2 Stabilités à l'état sec % de perte Température Temps Ion amphotère Complexe ion amphotère/NaCl 1/1 4 C 1 mois 0-1% 6 mois aucune C 1 mois 15% 5 semaines 3,0 18 semaines 6-10% 37 C 1 mois 9-12,9 semaines 6,0 12 semaines 12,6 4 mois 9-18,0 C 1 semaine 34,1 5,6 2 semaines 8,3 4 semaines 71 10,7 56 C 1 semaine 49,6 12 2 semaines 16 4 semaines 20 C 1 jour 34,4 12,7-23,0 2 jours 46,2 21,7 3 jours 55,2 34,0 100 C 1 jour 100 92 Les stabilités d'une solution aqueuse pour le complexe ion amphotère/NaCl 1/1 sont déterminées par reconstitution (ou préparation extemporanée) à des concentrations diverses et stockage à 25 C pendant des périodes de temps comme indiquées. La reconstitution à 250 mg/ml (nominal) se fait avec de l'eau stérile pour injection U.S.P. Une dilution supplémentaire se fait à l'aide de NaCl aqueux à 0,9%. Les données sont présen- tées dans le tableau 3 ci- dessous dans lequel un intervalle indique les valeurs extrêmes dans un certain nombre d'essais. TABLEAU 3 Stabilités en solution aqueuse Concentration Temps (ma/ml) (heures) % restant pH 250 0 5,04-5,22 3 100-102 5,03-5,24 6 100-101 5,03-5,24 24 92,7-96,0 5,14-5,39 0 5,00-5,17 3 99,4 5,07-5,31 6 97-99,4 5,06-5,31 24 93,2-94,7 5,30-5,60 10 0 4,94-5,12 3 99,5-100,1 5,05-5,34 6 99,3-99,4 5,11-5,47 24 95,2-97,0 5,44-5,78 2,5 0 5,00-5,19 3 100,0 5,28-5,66 6 99,6-100,0 5,47-5,92 24 96,2-96,8 5,87-6,18 Les données de stabilité indiquent une stabilité satis- faisante en solution aqueuse pendant au moins 24 heures à 25 C (température ambiante). EXEMPLE II Synthèse et contrôle d'une composition d'ion amphotère et de chlorure de calcium On dissout 4,6 g d'ion amphotère dans 14 ml d'eau pour injection contenant 950 mg de CaCl2 (1 équivalent molaire). On fait passer la solution obtenue à travers un filtre stérile de 0,22 micron. On ajoute le filtrat dans des conditions aseptiques avec agitation rapide sur un intervalle de 5 minutes dans 400 ml d'éthanol absolu. Il se forme un précipité amorphe. Le mélange est transformé en bouillie pendant 0,5 heure. On sépare les solides par filtration sous vide et on lave à l'aide de 40 ml d'éthanol que l'on ajoute au filtrat (ici désigné sous le nom de filtrat A). Les solides encore humides d'éthanol sont mis en bouil- lie dans 100 ml d'éthanol absolu pendant 0,5 heure. Les soli- des amorphes obtenus sont séparés par filtration sous vide, lavés à l'aide de 20 ml d'éthanol, de 50 ml d'éther et ensuite sont séchés sous vide poussé à 50 C pendant 4 heures et l'on obtient 2,2 g de produit contenant de l'ion amphotère et du CaCl2 dans un rapport molaire d'approximativement 2/1. A l'analyse pour: C19 H24N605S2(C12Ca)0,5 on obtient les valeurs suivantes: %ca 9C EH %S %C 1 sous forme H20 de cendres (KF) calculées..... .. 42,56 4,51 15,68 11,96 6,6 3,73 trouvées.......... 38,4 4,85 13,76 8, 82 5,44 3,59 7,79 trouvées (base sèche).......... 41,65 14,92 9,57 5,9 3, 89 Le filtrat A ci-dessus est concentré sous vide à 35 C à un volume de 30 ml. On obtient des microparticules d'allure..DTD: cubique ne présentant aucune biréfringence. On sépare les solides denses par filtration sous vide, on lave à l'aide de 15 ml d'éthanol absolu et ensuite avec 20 ml d'éther, et on sèche comme ci-dessus, ce qui donne 2,0 g de produit solide amorphe présentant approximativement un rapport molaire ion amphotère/CaCl de 1,5/1 (ion sesqui- amphotère). A l'analyse pour: (C19H24N605S2)1,5CaCl2 et on obtient les valeurs suivantes: %Ca %C lH %N %S %C1 sous forme H 20 de cendres (KF) 5. calculées.........41,1 4,5 14,7 10,8 8,33 4,8 trouvées.......... 37,35 5, 17 12,37 10,24 7,84 4,47 3,24 (% éthanol: 0,5 mole) trouvées (base exempte d'éthanol et d'H20) 40,01 4,88 13,3 10,57 8,3 4,7 Les complexes solubles dans l'éthanol et insolubles dans l'éthanol ne présentent pas de différences significatives en CLHP et par leur spectre UV lorsqu'on les compare à l'ion amphotère. Dans l'évaluation de l'activité à large spectre du produit selon la présente invention, les concentrations inhi- bitrices minimum (CIM) du produit ion amphotère/CaCl de rapport molaire 1, 5/1 selon la présente invention et de l'ion amphotère sont déterminées par la méthode de dilution à l'agar- agar en double série dans de l'agar-agar de Mueller-Hinton et les données sont présentées dans le tableau 4 ci-dessous dans lequel le n A de Bristol indique une souche particulière de micro-organismes. TABLEAU 4 Valeurs CIM (mg/ml) Bristol Produit ion amphotère/ n A Ion amphotère CaC12 rapport mol. 1,5/1 1. S. pneumoniae A9585 0,06 0,016 2. S. pyogenes A9604 0,016 0,016 3. S. faecalis A20688 16 16 4. S. aureus A9537 1 1 5. S. aureus/+sérum à 50% A9537s 0,5 0,5 6. S. aureus /Pen.-Res. A9606 1 1 7. S. aureus/(METH.-RES.) 28 CA20699 125 63 8. E. coli A15119 0,016 0,016 9. E. coli A20341-1 0,03 0,016 10. K. pneumoniae A9664 0,03 0,03 Bristol Produit ion amphotère/ n A Ion amphotère CaC12 rapport mol. 1,5/1 11. K. pneumoniae A20468 1 1 12. E. cloacae A9659 0,016 0,016 13. E. cloacaeA9656 0,13 0,25 14. P. mirabills A9900 0,008 0,008 15. P. vulgaris A21559 0,03 Q,03 16. M. morganii A15153 0,008 0,008 17. P. rettgeri A22424 0,03 0,03 18. S. marcescens A20019 0,03 0,016 19. Ps. aeruginosa A9843a 0,5 0, 5 20. Ps. aeruginosa/Carb. Res.A21628 2 2 Les stabilités à températures élevées sont déterminées par stockage du produit ion amphotère/CaC12 dans un rapport molaire de 1,5/1 et de l'ion amphotère sous leur forme de poudre sèche et en déterminant les pertes de puissance par CLHP. Les pertes de puissance sont présentées dans le ta- bleau 5 ci-dessous. Dans le tableau 5, la spécification d'un intervalle indique les valeurs extrêmes dans une pluralité d'essais. TABLEAU 5 Stabilités à l'état sec % de perte Produit ion ampho- tère/CaCl2 Température Temps Ion amphotère rapport mol. 1,5/1 37 C 2 mois 3,5 C 1 semaine 34,1 0,4-0 2 semaines 3,2-5,7 4 semaines 71 56 C 1 semaine 49,6 0-5,3 2 semaines 1,7-6,6 4 semaines 13,7 C 1 jour 34,4 2 jours 46,2 3 jours 55,2 2,2-6,5 C 1 jour 100 20-30,0 i Z i; i i i i i SE i i i i i -i i i i i i i OZ i 8'8Li i8'L71i Louz i i i i i i i i z i i i i eZ Li O 96ú609Z SUoTqTsodwoD saD ap aHUID issa un sgadp qupqsTsqns aDuessTnd el aaquom snossap-TD 8 nealq; q au e I salduiaxa sel supp aunuoD saguTU1aq9p quos aen;egduiea; Pl sgqTlTqes slnal;a saga -2dgid quos ZTDDo ap;a IDeN ap saGbuIeUI ap;a ax92oqduI. uoOT,p Sú 2TIaud v sauiauo; sasTiTqdoKI suoTqTsoduIoo sas2aA. a slas ap sabuplquI sap quUeSTITn suOTTsOduiOD AI XdWX: * 'DaE a ú. idl IT' 'IDX 'N OS ZHD ZHDOH ' HZOdeN ' EODHeN ' OaZHPN ' eN:UoTl 0ú -uGAuT aquasead Pî ap aipeD al suep quPuea aeumoo sgagpTSUoD sed Duop quOS aU SIT a D9 o9S Se sauTeWas z V i a sauTUas t Z luepuad DoS V aXools saIl uonbsiol o%0Z 51 S sanaeT2dns aq7ad ap safequaoinod sap quauuop 1/1 a2TPIOTm qoddea unp aseq el ans squUATns sIGs sael quuaquoD s4lnpoad saq s- t i t i I i i i JZ i i i i i i i i 'OL i LDUZi z i i i i i i i i i i i i i i i i ú8 t LD6 IO I 9G Li i i iii i i i i i ii o io i i O 1S i i i i i i i s i i S'ú i 0%' i O'L i i; 9'9; S'#-0O i Oi LD 1i I i i i i i i i i i i i i 9'6Li S'ú i 96L i 0'6 i ID HNI i i i i i i. i i i i i i i i i ó1SZ i;eNOSZHNi i i i i i i i i i i i6 i 698' i 9'LZ i 9'L i NOSHDi 5 i i i i i i i i I i i i i i i i 6'6L i OSHeNi i i i i i i i i i i i i i i i g'9 i 6 j____________ ___-------;-------- -- ---- - - - -- - - - - -- - - - - -- - - - -- - - - - i 3oLú i oS'i i '9lno[e LeS i j_ _ __ _ ___ _ __ _ __ _ __ _ _ __ _ _--------i i1 S i aneJad ap% o'i i i I L neLWuIV oa 1 sgqTITqes 96ú609Z par comparaison avec des compositions formées à partir de sels simples. TABLEAU 8 Stabilités à sec Formulations % de puissance restante Temps/tempé- Ion amphotère Ion amphotère/NaCl rature pH 5,1 1/1 - pH 4.9 1 j - 70 C 66 85, 2 3 j - 70 C 54 76,6 1 s - 56 C 45-58 81,9 2 s - 56 C 39-43 73,9 4 s 56 C - 67,7 6 s - 56 C - 55,9 1 s - 45 C 70 91,7 2 s - 45 C 49 87,5 4 s 45 C 39 84,2 8 s - 45 C - 76,2 13 s - 45 C - 67,4 4 s - 37 C 69 90,4 8 s 37 C - 85,4 2013 s - 37 C - 80,9 13 s - 25 C 93,7 Formulations % de puissance restante Temps/tempé- Ion amphotère/CaCl2 Ion amphotère/CaC12 rature 1/1 - pH 4.9 1/0,5 - pH 4.6 1 j - 70 C 94,2 88,7 3 j - 70 C 88,8 80,8 1 s - 56 C 92,3 86,6 2 s - 56 C 86,9 78,4 4 s - 56 C 84,4 71,5 8 s 56 C 79,0 62,5 1 s - 45 C 96,2 94,3 2 s - 45 C 93,0 89,2 4 s - 45 C 92,9 85,8 8 s - 45 C 88,9 80,4 13 s - 45 C 86,3 75,3 4 s - 37 C 95,2 92,0 8 s 37 C 93,5 87,3 13 s - 370C 91,1 85,8 13 s - 25 C 96,4 95,6 s = semaines j = jours Formulations % de puissance restante Temps/tempé- Ion amphotère/CaC12/ Ion amphotère/NaCl/ rature NaCl - 1/0,5/0,5 CaC12 - 1/0, 8/0,2 pH 5.1 pH 4.9 1 j - 70 C 94,7 91,4 3 j - 700C 88,8 82,8 1 s - 56 C 93,3 89,0 2 s - 56 C 88,5 84,0 4 s - 56 C 82,6 76,3 8 s - 56 C 74,2 67,2 1 s - 45 C 98,1 95,8 2 s - 45 C 95,4 93,3 4 s - 45 C 91,3 88,9 8 s - 45 C 88,6 83,3 13 s - 45 C 85,3 79,3 4 S - 37 C 95,6 93,8 8 s - 37 C 92,6 90,6 13 s - 37 C 91,1 87,3 13 s - 25 C 97,4 96,7 Formulations 0% de puissance restante Temps/tempé- Ion amphotère/NaCl/ Ion amphotère/NaCl/ rature CaCl2 - 1/0,8/0,2 CaC.2 -1/1/0,2 DH 4.9 pH 4.6 1 j - 70 C 91,0 91,6 3 j - 70 C 82,4 83,0 1 s - 56 C 88,7 89,8 2 s - 56 C 83,2 84,9 4 s - 56 C 77,4 78,4 8 s - 56 C 68,0 69,7 1 s - 45 C 95,4 93,7 2 s 45 C 92,2 93,5 4 s - 45 C 88,9 89,8 8 s - 45 C 83,7 83,4 13 s - 45 C 81,2 80,3 4 s - 37 C 94,4 94,5 8 s - 37 C 90,9 90,6 13 s - 37 C 90,3 90,1 13 s - 25 C 97,9 97,2 s = semaines j = jours D'autres variantes seront évidentes pour les spécia- listes. La portée de l'invention doit donc être définie par les revendications. REVENDICATIONS 1.- Composition antibiotique à large spectre, stable à la température et qui, par dilution à une concentration injec- table, procure un pH d'environ 3,5 à environ 7 sans utilisa- tion d'agents tampons ou de bases, cette composition présen- tant essentiellement la constitution suivante: (a) le solide amorphe formé par lyophilisation ou précipita- tion en cosolvant d'une solution aqueuse de: (i) ion amphotère de 7-[a-(2-aminothiazol-4-yl)-a-(Z)- méthoxyiminoacétamido]-3-[(1-méthyl-1-pyrrolidinio)- méthyl]-3-cephem-4-carboxylate; et (ii) un sel dans lequel le cation est choisi dans le groupe constitué par: sodium, lithium, calcium et magnésium et l'anion est choisi dans le groupe constitué par chlorure, bromure et iodure, le rapport molaire de l'ion amphotère au sel dans cette solution étant compris entre environ 0,5/1 et environ 2/1; ou (b) leurs solvates. 2.- Composition antibiotique selon la revendication 1, dans laquelle le cation est le sodium. 3.- Composition antibiotique selon la revendication 1, dans laquelle le sel est le chlorure de sodium. 4.- Composition antibiotique selon la revendication 3, dans laquelle le rapport molaire de l'ion amphotère au sel est d'environ 1/1 à 2/1. 5.- Composition antibiotique selon la revendication 4, dans laquelle le solide amorphe est obtenu par lyophilisation. 6.- Composition antibiotique selon la revendication 5, présentant un point de décomposition par calométrie d'explora- tion différentielle comportant une exothermie à environ 197,4 C. 7.- Composition antibiotique selon la revendication 1, dans laquelle l'anion est le chlorure. 8.- Composition antibiotique selon la revendication 1, dans laquelle le rapport molaire de l'ion amphotère au sel est d'environ 1/1 à 2/1. 9.- Composition antibiotique selon la revendication 1, dans laquelle le sel amorphe est obtenu par lyophilisation. 10.- Composition antibiotique selon la revendication 8, dans laquelle le sel est choisi dans le groupe constitué par: chlorure de sodium, bromure de sodium, iodure de sodium, chlorure de lithium, iodure de lithium, chlorure de calcium, bromure de calcium, iodure de calcium et chlorure de magné- sium. 11.- Composition antibiotique à large spectre, stable à la température qui, par dilution à une concentration injec- table, procure un pH d'environ 3,5 à environ 7 sans utilisa- tion d'agents tampons ou de bases, cette composition ayant sensiblement la constitution suivante: (a) le solide amorphe formé par lyophilisation ou précipita- tion en cosolvant d'une solution aqueuse de: (i) ion amphotère de 7-[a-(2-aminothiazol-4-yl)-a-(Z)- méthoxyiminoacétamido]-3-[(l-méthyl-1-pyrrolidinio)- méthyl]-3-cephem-4-carboxylate; et (ii) un mélange de deux sels ou plus dans lesquels les cations sont choisis dans le groupe constitué par: sodium, lithium, calcium et magnésium et les anions sont choisis dans le groupe constitué par chlorure, bromure et iodure, le rapport molaire de l'ion amphotère aux sels totaux dans cette solution étant compris entre environ 0,5/1 et environ 2/1; ou (b) leurs solvates. 12.- Composition antibiotique selon la revendication 11, dans laquelle le rapport molaire de l'ion amphotère aux sels est d'environ 1/1 à 2/1. 13.- Composition antibiotique selon la revendication 11 ou 12, dans laquelle le mélange de sels est choisi dans le groupe constitué par chlorure de sodium, bromure de sodium, iodure de sodium, chlorure de lithium, iodure de lithium, chlorure de calcium, bromure de calcium, iodure de calcium et chlorure de magnésium. 14.- Composition antibiotique selon la revendication 11, 12 ou 13, dans laquelle le solide amorphe est obtenu par lyophilisation. 15.- Composition antibiotique à large spectre, stable à la température qui, par dilution à une concentration injec- table, procure un pH d'environ 3,5 à environ 7 sans utilisa- tion d'agents tampons ou de bases, cette composition ayant sensiblement la constitution suivante: (a) le solide amorphe formé par lyophilisation ou précipita- tion en cosolvant d'une solution aqueuse de: (i) ion amphotère de 7-[a-(2-aminothiazol-4-yl)-c-(Z)- méthoxyiminoacétamido]-3-[(1-méthyl-1-pyrrolidinio)- méthyl]-3-cephem-4-carboxylate; et (ii) un mélange de chlorure de sodium et de chlorure de calcium, le rapport molaire de l'ion amphotère, du chlorure de calcium et du chlorure de sodium dans cette solution étant a. d'environ 1/0,5/0,5; ou b. d'environ 1/0,1-0,2/0,8-1,0 16.- Composition antibiotique selon la revendication 15, dans laquelle le rapport molaire de l'ion amphotère, du chlo- rure de calcium et de chlorure de sodium est de 1/0,5/0,5. 17.- Composition antibiotique selon la revendication 15, dans laquelle le rapport molaire de l'ion amphotère, du chlo- rure de calcium'et de chlorure de sodium est de 1/0,1-0,2/1,0. 18.- Composition antibiotique selon la revendication 15, dans laquelle le rapport molaire de l'ion amphotère, du chlo- rure de calcium et de chlorure de sodium est de 1/0,1-0,2/0,8- 0,9. 19.- Composition antibiotique selon la revendication 15, dans laquelle le rapport molaire de l'ion amphotère, du chlo- rure de calcium et de chlorure de sodium est de 1/0,2/1. 20.- Composition antibiotique selon les revendications 15, 16, 17, 18 ou 19, dans laquelle le solide amorphe est formé par lyophilisation.