Brevet FR2599971A1 — publié le 19871218

PROCEDE D'OBTENTION DE MODULATEURS IMMUNOLOGIQUES POUR LE TRAITEMENT DE DEFICIENCES IMMUNITAIRES PROVOQUEES PAR DES VIRUS, ET PRODUIT AINSI OBTENU L'invention concerne un procédé d'obtention de modulateurs immunologiques pour le traitement de déficiences immunitaires provoquées par des virus et elle concerne en particulier le traitement du SIDA. Plus spécifiquement, elle concerne l'utilisation d'un facteur de transfert 5 pour le traitement des malades du SIDA et des maladies virales attribuables à des rétrovirus. Actuellement, le SIDA est une affection immunologique causée par un rétrovirus lymphotrope. En 1984, trois groupes de chercheurs ont rapporté indépendamment qu'ils avaient trouvé la séquence du genome entier du 10 rétrovirus. Chaque groupe a appelé son virus d'un nom différent:- HTLVIII (virus T-lymphotrope humain III), LAV (virus de l'adénopathie du système lymphatique - SIDA) et ARV (rétrovirus associé au SIDA). Il n'a pas été établi de façon non univoque que ces trois groupes étudiaient le même virus. En fait, un grand nombre de variantes génétiques ont été 15 isolées chez les patients. Dans la présente demande de brevet, on utilisera le terme générique HIV (virus d'immunodéficience humaine). De nombreuses thérapies antivirales-comprenant la suramine, l'hétéropolyanion-23 (HPA-23), la ribavirin et l'interferon-a ont été utilis'ies pour traiter les malades du SIDA, mais n'ont pu donner les résultats 20 cliniques attendus. La 3-Azido-3'-deoxythymidine est le seul agent antiviral qui a montré quelques résultats prometteurs. Compte tenu de ces résultats, d'autres méthodes de traitement des malades du SIDA ont été recherchées, et on a donc essayé une stimulation immune. Toutefois, des résultats désappointants ont été obtenus. La cimétidine, l'indométacine, la thymosine fraction S. et l'inosine pranobex ou l'isoprinosine ont été utilisées mais sans résultat encourageant. Il a maintenant été découvert que l'utilisation d'un facteur de transfert animal spécifique du virus HIV peut se traduire par une améliora30 tion sensible de l'état clinique des malades du SIDA, avec une augmentation ou au moins une stabilisation de leur sous-population de lymphocytes T4. L'administration du facteur de transfert peut être accompagnée par l'administration d'un ou de plusieurs extraits du thymus et/ou de la rate et/ou du foie, des anabolites et des médicaments antiviraux. 35 Cette approche est également applicable au traitement des infections virales attribuables à des rétrovirus en général. L'invention propose donc un procédé pour la préparation d'un produit de lutte contre une infection attribuable à un rétrovirus, caractérisé en ce qu'il consiste à extraire des cellules d'origine lymphoide et/ou des cellules du foie d'un animal ou d'un être humain immunisé par rapport 5 au rétrovirus, à rompre ces cellules et à dialyser ou filtrer les contenus des cellules qui sont ainsi libérés pour obtenir un facteur de transfert spécifique du rétrovirus. L'invention propose également un produit de lutte contre une infection attribuable à un rétrovirus, caractérisé en ce qu'il comprend un facteur o de transfert spécifique du rétrovirus préparé à partir de cellules d'origine lymphoide et/ou de cellules du foie d'un animal ou d'un être humain précédemment immunisé par rapport au rétrovirus. L'invention propose également un produit caractérisé en ce qu'il comprend: [a] un facteur de transfert spécifique d'un rétrovirus préparé à partir de cellules d'origine lymphoide et/ou de cellules du foie d'un animal ou d'un être humain précédemment immunisé par rapport au rétrovirus et [b] au moins un des produits comprenant des extraits de thymus et/ou de rate et/ou de foie, des anabolites et des médicaments antiviraux, o20 destinés à être utilisés simultanément ou successivement pour le traitement d'une infection attribuable au rétrovirus chez un être humain ou un animal. Le facteur de transfert animal spécifique du rétrovirus peut être préparé de la façon appropriée suivante. Tout animal adequat, par 25 exemple des cochons'd'inde ou des souris, peut être immunisé. Le rétrovirus peut être HTLV-I, HTLV-II ou un lentivirus tel que le virus HIV-1, HIV-2, SIV ou medi-visna. De préférence, l'animal est en bonne santé et ne présente pas une réaction positive au virus quand il est testé avant immunisation. Typiquement, plusieurs injections de lymphocy30 tes frais infectés par le virus sont 'données à un animal pendant une certaine période de temps. Alternativement, on peut utiliser des cellules lymphoblastes infectées par le virus, le virus lui-même ou des antigenes viraux. Le moment o l'animal a acquis le degré nécessaire d'immunisation peut être évalué, par exemple, par un test cutané, un 35 test d'inhibition de migration des leucocytes et/ou un test de transformation des lymphocytes. Le facteur de transfert spécifique du rétrovirus peut être obtenu à partir de cellules d'origine lymphoide et/ou des cellules du foie de l'animal ou d'un être humain immunisé. Par être humain immunisé, on entend unepersonne séropositive pour le virus ou une personne positive pour le virus lui-même. Une personne 5 peut être immunisée par présentation appropriée du virus, par exemple par vaccination. Alternativement, il se peut qu'un patient soit naturellement séropositif ou positif pour le virus. Les cellules d'origine lymphoide peuvent être des lymphocytes du sang périphérique ou des cellules des tissus lymphatiques tels que la rate 10 ou les ganglions lymphatiques. Une sous-population de lymphocytes suppresseurs, lymphocytes T8 dans le cas des êtres humains peut être séparée et utilisée. Le facteur de transfert est obtenu à partir des cellules extraites de l'animal ou de l'homme immunisé, par rupture des cellules pour libérer leurs contenus et par dialyse de ces contenus. 15 Les cellules peuvent être rompues par congélation - décongélation répétée, par traitement ultrasonique ou par des moyens mécaniques tel qu'un mélangeur. Typiquement, les cellules rompues sont dialysées à travers un sac de dialyse (cellulose Visking) à eau distillée ou à dépression. Alternativement, les cellules rompues peuvent être intro20 duites dans un appareil d'ultra-filtration comprenant par exemple un filtre Amicon. Le dialysat ou filtrat ainsi obtenu comprend des fractions actives connues comme facteur de transfert spécifique du virus ou DLE (extrait dialysable de leucocytes). Le dialysat comprend un facteur inducteur ou favorisant spécifique du 25 rétrovirus et un facteur suppresseur capable d'induire une immunosuppression ou immunorégulation de la réponse immunitaire au rétrovirus. Il a été constaté que le facteur de transfert préparé à partir de lymphocytes suppresseurs, c'est-à-dire ceux qui sont associés au facteur suppresseur, peut être utilisé pour améliorer l'état clinique des 30 malades, tandis que le facteur de transfert obtenu à partir des lymphocytes favorisants ne le peut pas. Le facteur de transfert obtenu à partir des lymphocytes suppresseurs peut être préparé de la façon suivante: 1] après obtention des cellules d'origine lymphoide, retrait des cellu35 les T-favorisantes (T4) ou récupération des cellules Tsuppresseur (T8), puis obtention d'une fraction de cellule, par exemple par dialyse; ou 2] obtention de la fraction désirée de cellules à partir des cellules d'origine lymphoide ou des cellules du foie et, soit retrait de la fraction facteur favorisant de la fraction de cellules, soit récupération de la fraction suppresseur, par exemple par immunoadsorption du facteur suppresseur et élution ultérieure du facteur suppresseur. 5 Il est également possible d'utiliser un facteur de transfert spécifique du rétrovirus repliqué par une ligne de cellules lymphoblastes comme décrit dans le brevet britannique GB-A-1443948. Une ligne de cellules préférée est la ligne LDV/7 décrite dans le brevet britannique GB-A1592954. La ligne de cellules lymphoblastes peut être induite par o10 un facteur de transfert spécifique du rétrovirus. Dans le cas d'un facteur de transfert obtenu à partir d'êtres humains malades du SIDA, ces individus peuvent être sans symptôme cliniques du SIDA, ou bien être en rémission. De même, le facteur de transfert spécifique du virus HIV avec lequel la ligne de cellules est incubée peut être un ex15 trait total conventionnel ou bien avoir été obtenu à partir d'une souspopulation de lymphocytes T8. Les cellules cultivées ou les cellules portant un marqueur supresseur (T8) sont rompues et le facteur de transfert est obtenu à partir des contenus des cellules comme précité. Quelle que soit la source du 'facteur spécifique du rétrovirus qui est administré à un patient, le facteur de transfert est en général sous forme d'une fraction de cellule ne contenant sensiblement aucune molécule ayant un poids moléculaire supérieur à 12.000. Cela garantit que la fraction de. cellule ne comprend pas de particules virales. Le 25 facteur de transfert peut être lyophilisé par exemple pour son stockage. Quand il doit être utilisé, le facteur de transfert lyophilisé peut être mis en suspension dans un volume approprié d'un diluant physiologiquement acceptable, par exemple une solution saline, afin de former une solution isotonique. L'invention propose donc également une composi30 tion pharmaceutique comprenant comme ingrédient actif, un facteur de transfert spécifique du rétrovirus avec un support ou un diluant physiologiquement acceptable. Le facteur de transfert est typiquement administré par voie orale ou par injection à un animal ou à un malade humain pour lutter contre 35 une immunodéficience causée par un rétrovirus. Il peut être administré à un patient qui est séropositif - HIV ou chez qui le virus HIV a été détecté. Il peut également être administré à un patient présentant les conditions cliniques du SIDA. Toutefois, il peut également être administré à titre préventif à des patients séropositifs HIV ou séronégatifs HIV. Il peut être administré à un groupe considéré comme étant à risque particulier, tels que les homosexuels ou les utilisateurs 5de drogue intraveineuse. De cette façon, le facteur de transfert peut être utilisé pour empêcher l'évolution de complexe en rapport avec le SIDA et des conditions pré-SIDA. Typiquement, le facteur de transfert est administré par voie orale ou par injection, par exemple sous-cutanée, intraveineuse, ou intramuscu10 laire. La quantité de facteur de transfert administrée dépend d'une grande variété de facteurs, comprenant l'état du patient en traitement et la gravité de l'infection. Typiquement, le facteur de transfert peut être administré à une dose comprise entre 0,1 et 100 unités, de préférence égale à environ une unité, pendant une période de temps appropriée. 15 Une quantité de 0,001 à 0,3, de préférence de 0,1 à 0,3 mg peut être administrée. Le facteur de transfert peut être donné quotidiennement ou une fois par semaine. Ces données sont applicables indépendamment du mode d'administration. Une unité est ou correspond à la quantité de facteur de transfert obtenue par dialyse de 107 cellules. Le facteur de transfert spécifique du virus HIV peut être administré en association avec des extraits embryonnaires de thymus et/ou de rate et/ou de foie, un anabolite et/ou des vitamines. L'extrait de thymus, de rate ou de foie peut être un extrait d'un tissu adulte, mais est de préférence un extrait embryonnaire. Cet extrait, un anabolite et/ou des 25 vitamines peuvent être donnés avant, en même temps que ou après le facteur de transfert. L'anabolite peut être un acétate de méthénolone. Ainsi, en plus du facteur de transfert, un patient peut recevoir une injection intramusculaire d'un extrait total embryonnaire de thymus bovin, 100 mg/jour d'acetate de méthénolone par voie orale et une 30 association poly-vitaminique. L'extrait peut être préparé par obtention de l'organe approprié d'un animal, par exemple un veau âgé de quatre mois. Le tissu est rompu, typiquement haché. Un appareil Ultra Turax peut être utilisé. Le tissu rompu est ensuite passé par une seringue pour obtenir une suspension de 35 cellules qui peut être stockée à moins 700 C. Les cellules peuvent être administrées après remise en- suspension dans un diluant physiologiquement acceptable, par exemple une solution saline. L'extrait est en général administré à une dose de 108 à 109 cellules par injection, par voie intramusculaire. L'association poly-vitaminique peut être une association connue et qui contient les vitamines suivantes: A...... 12500 Unités Internationales (U. I.) B1.....5 mg B2..... 4 mg B5..... 10 mg B6..5 mg o10 PP.. 25 mg C..... 125 mg D2..... 2500 U.I. E...... 5 mg Tout médicament antiviral peut être administré en association avec le 15 facteur de transfert spécifique du virus HIV. A nouveau, ce médicament peut être administré avant, en même temps que ou après le facteur de transfert. L'agent antiviral peut être un anticorps antithymosine, la suramine, l'hétéropolyianon-23 (HPA-23), la ribavirine, l'interféron-aou la 3-azido-3'-deoxythymidine. On peut utiliser deux ou davantage de ces 20 agents. L'agent antiviral peut avoir une toxicité faible ou peut être utilisé en quantité non toxique. Dans ce but, l'agent antiviral peut être utilisé dans une quantité d'un quart à un tiers de sa dose normale. En d'autres termes, une quantité suffisante est administrée pour ne 25 pas produire d'effets secondaires. Les exemples suivants illustrent l'invention. Exemple 1: Préparation d'un facteur de transfert spécifique du virus HIV (HIV-1) Le facteur de transfert a été préparé par immunisation de souris Balb/c âgées de 10 à 14 semaines. Les souris ont reçu. trois injections souscutanées bi-hebdomadaires de 107 lymphocytes d'un groupe obtenu à partir de quatre malades du SIDA, mélangés avec 0,5 ml d'adjuvant complet de Freund. Le facteur de transfert a été extrait de la rate et du foie des souris trois semaines après l'immunisation finale, par dialyse en utilisant des techniques conventionnelles qui ont déjà été décrites (Lawrence H.S. "Facteur de transfert dans l'immunité cellulaire" The Harvey Lectures (68ème série), Academic Press, 1974, 239- 350; Pizza G. et autres "Production in vitro d'un facteur de transfert spécifique du Carcinome des cellules translationnelles de la vessie" Br.J. Cancer 33, 1977, 606-611; Viza D. et autres "Facteur de transfert bovin spécifique pour le traitement des infections de l'herpes" Immuno5 biologie du facteur de transfert (Kirkpatrick et autres) Academic Press, 1983, 245-259). Le dialysat obtenu (TFd) était le facteur de transfert spécifique du virus HIV (HIV-1). Exemple 2: Traitement d'un patient (1) Le patient DUR était un homme homosexuel de 41 ans. Il a d'abord été lo admis pour des fièvres, de la dyspnée due au pneumocystis carinii, des sueurs nocturnes, une perte de poids, une adénopathie (5 cm) et de la fatigue dans un hôpital spécialisé dans les maladies infectieuses. Le SIDA a été ensuite diagnostiqué. Il a été trouvé porteur d'anticorps anti-HIV (anticorps anti-HIV-1). La dyspnée a été réduite par un traite15 ment antibiotique. Toutefois, la dyspnée et la fièvre persistaient toujours le troisième mois. Après administration de sulfadiazine pendant deux semaines, la dyspnée diminua et on nota une légère amélioration clinique. Le 140ème jour après son admission, il commença un traitement standard au facteur de transfert, comprenant le facteur de transfert TFd 20 administré par voie orale à des intervalles d'une semaine et à une dose de 2 x 107 équivalents cellules par semaine et, de plus, une injection intramusculaire d'un extrait total embryonnaire de thymus bovin à une dose de 5 x 108 équivalents cellules, 100 mg par jour d'acétate de méthénolone par voie orale, et une association poly-vitaminique comme 25 décrit plus haut. L'état du patient s'est ensuite amélioré: la dyspnée a disparu, son bienêtre général s'est amélioré, les sueurs nocturnes ont disparu, l'adénopathie a diminué jusqu'à 1 cm. Des tests cutanés au tétanos et au streptocoque ont été très faiblement positifs (diamètre de 0,5 mm) 30 mais malheureusement le patient n'avait pas subi de test cutané à son admission. Au bout de six mois, l'état clinique du patient était amélioré de façon marquée, et il avait retrouvé suffisamment de forces musculaires pour partir en vacances. Le nombre de cellules T4 était normal, ainsi que le rapport T4/T8. Les résultats sont représentés dans 35 le tableau 1. Le patient a reçu un traitement standard hebdomadaire au facteur de transfert TFd pendant encore six mois. Trois mois après l'arrêt du traitement, son état restait stable. Aucune rechute n'a eu lieu. Des cultures de lymphocytes prélevés sur le patient ont été trouvées légèrement positives au virus HIV trois semaines avant la fin du traitement. Toutefois, deux semaines après la fin du traitement, les cultures 5 étaient négatives. L'infection par le virus HIV a été évaluée par transcriptase inverse. Exemple 3: Traitement d'un patient (2) Le patient PAU était un homme homosexuel de trente ans. Quant il a été admis, il souffrait de fièvres (38 C), d'une adénopathie pseudo tumorale o10 généralisée, de parotidite et de lésions cutanées faciales multiples du type "Kaposi" (une biopsie n'a pas été réalisée), une perte de poids et de la fatigue. Il était positif aux anticorps HIV (HIV-1) et la présence du virus a été détectée dans le sang par co-culture. On lui a donné de la sulfadiazine, du sulfamethoxazole et de la trimethoprime. 15 Le 35ème jour, on a noté une régression étendue de l'adénopathie et la température était normale; le patient est sorti de l'hôpital. Le 92ème jour, le patient, venant pour un examen, avait de la fièvre, une fatigue extrême, une perte de poids et une adénopathie modérée. Le 102ème jour, il a commencé un traitement de 13 jours au facteur de 20 transfert TFd. Les lésions faciales avaient disparu le 12lème jour, et le virus n'a pas été détecté par co-culture le 133ème jour. A partir du 147ème jour, le patient a subi un autre traitement au facteur de transfert TFd pendant quinze jours. A la fin de cette période, la fièvre avait. diminué et le patient avait une sensation améliorée de 25 bien- être. Un traitement standard au facteur de transfert TFd a commencé le 176ème jour. Le 198ème jour, l'état du patient s'était encore amélioré, avec un gain de poids (+ 6 kg) et une disparition totale de l'adénopathie. Les nombres de lymphocytes T4 et le rapport T4/T8 étaient normaux. Le patient a maintenant repris une activité professionnelle 30 normale. Les résultats sont montrés dans le tableau 2. Le patient a reçu le traitement standard hebdomadaire au facteur de transfert TFd pendant encore six mois. Trois mois après l'arrêt du traitement, son état restait stable. Aucune rechute n'a eu lieu. Des cultures de lymphocytes du patient ont montré une infection au virus HIV 35 six semaines avant la fin du traitement, par analyse par transcriptase inverse. Toutefois, deux semaines après la fin du traitement, les cultures étaient négatives en ce qui concerne le virus HIV. Exemple 4: Traitement d'un patient (3) Le patient KER était un homme homosexuel de 45 ans. Un an et demi avant son admission, on avait diagnostiqué un complexe en relation avec le SIDA (ARC) et il avait été traité au moyen d'amoxilline pour de la 5 bronchite. Il avait des fièvres; une adénopathie et des anticorps antiHIV avaient été détectés dans son sérum. Un an avant son admission, il souffrait de polyradiculoneuropathie inflammatoire et une biopsie a montré une infiltration diffuse de lymphocytes dans les poumons, le système nerveux périphérique et la muqueuse du tractus digestif. Quand 10 il a été admis pour la première fois à l'hôpital, il avait un poids de 54 kg pour une taille de 1,80 m (une perte de poids de 32 kg), il avait de l'adénopathie, de la bronchite, des diarrhées, de la fièvre (40oC) et une expectoration purulente. Il a reçu de la sulfadiazine, du sulfamethoxazole et de la trimethoprime. Il a commencé un traitement au facteur de transfert TFd à une dose de 107 équivalents cellules par jour, pendant treize jours le 37ème jour avec un autre traitement de quinze jours commençant le 85ème jour. Le traitement standard au facteur de transfert TFd a commencé le 120ème jour. Pendant le traitement, la fièvre a diminué et il y a eu une amé20 lioration clinique générale. Il a été réadmis à l'hôpital le 13lème jour pour fatigue. Le 159ème jour sous traitement continu au facteur de transfert TFd, la fatigue avait diminué, l'adénopathie était réduite et il avait repris 7 kg en poids. Il montrait un bien-être et une énergie améliorée. Les résultats sont représentés dans le tableau 3. Le patient a reçu le traitement standard hebdomadaire au facteur de transfert TFd pendant encore six mois. Trois mois après la fin du traitement, son état restait stable. Aucune rechute n'a eu lieu. Exemple 5: Replication d'un facteur de transfert murin spécifique du virus HIV (HIV-1) en utilisant une liane de cellules LDV/7 Un facteur de transfert murin spécifique du virus HIV (HIV-1) préparé comme décrit à l'exemple 1 a été filtré à travers une membrane Milipore (0,22 pm). Le filtrat a été ajouté à 40 ml d'une culture de cellules LDV/7 à une concentration de 5 x 105 cellules/ml et avec un rapport 1: 1. Les cellules ainsi induites ont été maintenues en culture 35 pendant sept semaines, après quoi la concentration de cellules avait augmenté jusqu'à 5 x o10 cellules/ml, une quantité suffisante pour l'extraction du facteur de transfert spécifique HIV (HIV-1). Les cellu- les ont été ensuite rompues par congélation-décongélation répétée et dialysées à travers un sac de dialyse (cellulose Visking) à eau distillée, comme décrit dans l'exemple 1. Exemple 6: Traitement d'un patient (4) Le patient MB était une femme de 26 ans s'adonnant à la drogue. Elle souffrait d'un complexe associé au SIDA avec une polyadénopathie. Au début du traitement, son bilan lymphocytaire était: globules blancs.... 4800 lymphocytes T4.... 499 (20 %) lymphocytes T8.... 899 Total des lymphocytes.... 2496 Le traitement a consisté en une administration quotidienne de 5 x 10' équivalents cellules du facteur de transfert TFd pendant les premiers dix jours. Il a été suivi par une dose de 5 x 107 équivalents cellules par semaine. Après six mois de traitement, le bilan lymphocytaire était: lymphocytes T4.... 1015 (40 %) lymphocytes T8.... 790 Total des lymphocytes.... 2256 globules blancs.... 5200 L'état du patient est resté stable pendant les six mois suivants. Exemple 7: Traitement d'un patient (5) Le patient XB était l'enfant âgé de 12 mois du patient MB de l'exemple 6. L'enfant souffrait du SIDA contracté à la naissance. Il a été traité 25 par une 'administration quotidienne de 5 x 107 équivalents cellules de facteur de transfert TFd pendant les premiers dix jours. Ce traitement a été suivi par une dose de 5 x 107 équivalents cellules par semaine. Après trois mois de traitement, l'état de l'enfant s'était amélioré: augmentation de poids, diminution de la splénomégalie et des adénopa-30 thies. L'état du sang s'était stabilisé dans la gamme normale. Neuf mois après, l'état de l'enfant est toujours stable sans signes de maladie. Exemple 8: Préparation et analyse in vitro d'un facteur de transfert spécifique du virus HIV (HIV-1) obtenu à partir de lymphocytes T4 35 et T8 d'un être humain Des lymphocytes du sang périphérique ont été obtenus du patient PAU de l'exemple 3. Ces lymphocytes ont été extraits à un moment o le patient était séropositif-HIV. Les sous-populations de lymphocytes T4 et T8 ont été séparées. Des dialysats des cellules ont été obtenus de chaque sous-population suivant la procédure indiquée à l'exemple 1. Le facteur de transfert spécifique du vérus HIV (HIV-1) ainsi obtenu, a été repliqué en utilisant la ligne de cellules LDV/7 comme décrit à l'exemple 5. Les facteurs de transfert respectifs spécifiques du virus HIV (dialysats des cellules) ont été analysés in vitro en ce qui concerne leurs effets sur la replication du virus HIV-1 par les cellules LDV/7. Il a été constaté que les dialysats dérivés des cellules T4 (TFd-T4) augmentaient la production virale des cellules LDV/7 par trois fois, o10 tandis que les dialysats obtenus des cellules T8 (TFd- T8) augmentaient la production virale seulement par 1,5 fois par rapport à un contrôle. Le contrôle était une culture de cellules LDV/7 infectées par le virus HIV-1 incubées sans dialysat. Exemple 9: Préparation d'un facteur de transfert spécifique du virus 15 HIV (HIV-1) obtenu à partir de sous-populations de lymphocytes favorisants et suppresseurs de souris Le facteur de transfert a été préparé par immunisation de souris Balb/c âgées de 10 à 14 semaines. Les souris ont reçu trois injections souscutanées bi-hebdomadaires de 107 lymphocytes d'un groupe obtenus à 20 partir de quatre malades du SIDA, mélangés à 0,5 ml d'adjuvant complet de Freund. Six semaines après la première injection de lymphocytes, lorsque les souris avaient à ce moment atteint le degré nécessaire d'immunisation, elles ont été tuées et leurs rates ont été prélevées. Les sous-populations de lymphocytes favorisants et suppresseurs ont 25 été séparées. Le facteur de transfert a été préparé à partir de chaque sous-population de lymphocytes, comme décrit à l'exemple 1. En résumé, les cellules de chaque sous-population, ont été rompues par congélation-décongélation répétée. Les cellules rompues ont été dialysées à travers un 30 sac de dialyse (cellulose Visking) avec une coupure à un poids moléculaire de 12. 000, au moyen d'eau distillée. Les fractions de cellules ainsi obtenues constituaient les facteurs de transfert spécifiques du virus du SIDA obtenus à partir des lymphocytes favorisants et suppresseurs. Les facteurs de transfert ont été repliques au moyen d'une ligne de cellule LDV/7 selon la procédure décrite à l'exemple 5. Exemple 10: Traitement de patients (6) Deux malades du SIDA souffrant de lésions de Kaposi ont été traités avec le TFd T8. Pendant les premiers dix jours du traitement, chaque patient a reçu quotidiennement 5 x 107 équivalents cellules de TFd T8. Ensuite 5 chaque patient a reçu 5 x 107 équivalents cellules par semaine de TFd T8. Sous l'effet de ce traitement, les lésions des patients ont régressé. Deux malades du SIDA ont été traités par le TFd T4. Les deux malades ont reçu 5 x 107 équivalents cellules de TFd T4 par jour. Chaque patient lo a montré une baisse dramatique de son compte de globules blancs de 5000 à 600, dans les trois jours de début de traitement. En résultat, le traitement au TFd T4 a été immédiatement arrêté. Un patient est mort dans les trois jours. L'autre patient s'est remis après une administration quotidienne des 5 x 107 équivalents cellules de TFd T8. Son compte de globules blancs a augmenté en trois jours de 600 à 3000. TABLEAU 1: PATIENT DUR TESTS SANGUINS POIDS INITI L ET AUTRES SYMPTOMES ET TOTAL DES VARIATION FIEVRE CONSTATATIONS DURANT JOUR TRAITEMENT T4 T4/T8 LYMPHOCYTES (KG) LE TRAITEMENT _. _. (Ill) o lerMOIS 3e MOIS 124 140 147 162 169 (ADMISSION) ANTIBIOTIQUES ET THEOPHYLLINE SULFADIAZINE TRAITEMENT STANDARD TFD I, Il lé 638 726 632 717 712 744 1,56 1,15 1,06 0,87 0,76 0,92 1,29 1,73 1890 2016 1914 2240 2035 1860 PERTE DE POIDS,FIEVRE,SUEURS NOCTURNES DYSPNEE,PNEUMOCYSTIS CARINII, FATIGUE ADENOPATHIE(5CM) LEGERE AMELIORATION CLINIQUE 56(-6) 56(-6) (-5) (-5) (-5) 3905 3903 38 5 3805 37 8 cE' DYSPNEE CESSE.PNEUMOCYSTIS CARINII NON TROUVE. SUEURS NOCTURNES DIMINUTION DE L'ASTHENIE.MEILLEURE SENSATION DE BIEN-ETRE.DIMINUTION DE L'ADENOPATHIE(1CM).TESTS CUTANES FAIBLEMENT POSITIFS AU TETANOS ET AU STREPTOCOQUE RECUPERATION DE LA FORCE MUSCULAIRE TOTALE.DEPART EN VACANCES Ln 'o 'o 'o o' o' ra' -.l' S31VhdON S31IAID13V S30 3AnOU13U l'lJN31133X3 IN3IIVd Ro úV]I!IIVUVdSIG 3IHIVdON30V,l 9NVS 31 SNVU 31331.30 SVd i.S3,N AIH!3fNIhIO 3IHIVdON30V,l!.N35S33 S3dA31A S31 IN3SSIVUVdSIO S31Vl3VJ SNOIS31 S31 33d300W 3IHIVdON30V 3n9lJLVJ 3W3BUlX3'SOIOd 30 31U3d'S3UA3Id 9NVS 31 SNVO AIH 3a NOI13313d0.3f91lVV SOIOd 30 3l83d!ISOdVI 3dAl 30 533NVlfl3 S31VI3VJ SNOIS31 S31dI1flNW'31101lOIVd o (W39 30 S3UIVNNOI19NV9 Sn30N) 31VUONfl-OOfn3Sd 3IHIVdON30V'S3UA31I ozE ZoZ8 LoLE o8E 8E 608E (t-) (t-) (5-)99 t6EZ 991Z 0tt2 gLzz oSZZ 8LEZ SS9Zt fr9úE EI'I 50' t ES'I BO'Z 804Z S6'0 l'Il t '1 sol t ESOt ZZ6 1901 6EOI SgZII ZSZII Z9S Obll si rt 051 OAVONVIS lN3W311VJ sunor St INVON3d unror UVd Odl S31flll33 SIN31VAIfba tOi (aJl)sUflnor Et INVON3d unor Vd S3111133 SIN31VAIf03 01 1VlIdOH,l 30 31ldOS 3W[IdOH113WIl 13 310ZVXOH13WVJ1lNS 3NIZVIOVJlflS (NOISSIWOV) 861 9Z1 1791 bIg EEI IZI ZOI 0 SE O ") 3UA31 (Dm9) S31l30HdhAl 81/bl 1l 3h Noildifl S30 1VIOl IN3W31IVSI 31 INVUflO 13.N3W311VUII unO SNOIIVIVISNO0 13 S3WOldWAS S3dúlV I1WIINI SgIOd SNI[19NVS SIS31 i fld IN3IlVd: flV318Vú *'33WNI JN03 IS3 3UIVlnDVI33dS NOIIVUOI13NVol 0% 0% 8h9> Z SUIOd 30 NIV9'38l3N3IB uq 30 NOIIVSN3S 38fl31I3W'3SS33 3fl9IIV 31HIVdON3GV,1 30 N01O3fli3B, SIVW'3n9l.LVJ 3flbINI13 NOlIVdOI13WV 310VION'úN3flNIWIG S3dA31J 3IHIVdON30V'S3BA3IJ'33HUBVI1'31IH3NOU8 S3flnblU3HdIU3d SA3N S31 13 1llS3910 Snl3Vl fin 3Sl3flbnWVl SNVO S3lA3O0HdWA1 NOIIVUL1IJNI'3IHIVdON30VAlOd AIH-IINV SddODIINV'3IHIVdON30V S3dA31IJ'(DUV) V0IS nV 311 3X31dWOD o Lú oLE (bz-) (6Z-) (ZE-) (ZE-)98 98lú 09SZ b8bb 9SbE b80ú E9ZE tsgz b798E 9ztc P9BE 091Z b6bZ 600E 0s0I ooze SblZ OOLZ 11'0 01'0 '0 '00 Loto '0 LO'O LO'O Lgo, z010 '0 IE'O solo 80'0 Bl'O 01'0 Og O úEZZ 86ZI 6z1 bOI IZI tEli 8Eú1 bII iE" SI 9 Z 06E SI9 Il Il I! fi 11 il. OIl OUVONVIS IN3N31IVU81 sunor si JNVON3d snOr MVd OGA S31N1133 SlN31VAInb3 z01 Sunor Ei úNVON3d nflor Vd Oj1 S31lN133 SIN31VAINb3 O01 3WIddOHI3WIdl 13 310ZVXOH13N -VJ31flS'3NIZVIOJVlnS'NOISSINOV 3NI11I3IXOWV Ibi bEI LZI OZI úll ZOI Z6 DUt rît o0t 991 8bI i oBE o8E oOlt tZ 19 LE 9Z o NV 1NV S'l9- Il) S.... BZtî 3dA31 ((9A) S31AOOHdAl81/ b h NUlVIUVA S30 iViOl 1N3W311VUl unor lN3W31IVUl 31 1NVUnGO 13 SNOIIVIVlSN03 13 S3WOldWAS S3HinV VIIINI SOlO1 SNIDNVS SIS31 b3I IN3IIVd: n iV31Vl REVENDICATIONS 1 - Procédé de préparation d'un produit utilisable pour lutter contre une infection attribuable à un rétrovirus, caractérisé en ce qu'il consiste à extraire des cellules d'origine lymphoide et/ou des cellules du foie d'un animal ou d'un être humain immunisé par rapport au rétro5 virus, à rompre ces cellules et à dialyser ou filtrer les contenus ainsi libérés de ces cellules pour obtenir un facteur de transfert spécifique d'un rétrovirus. 2 - Procédé de préparation d'un produit de lutte contre le SIDA, caractérisé en ce qu'il consiste à immuniser un animal par rapport au virus o10 HIV, à déterminer si l'animal a acquis un degré nécessaire d'immunisation, à extraire des cellules d'origine lymphoide et/ou des cellules du foie de l'animal immunisé, à rompre les cellules et à dialyser ou filtrer les contenus des cellules ainsi libérés pour obtenir un facteur de transfert spécifique du virus HIV. 3 - Procédé selon la revendication 1 ou 2, caractérisé en ce que l'animal est immunisé par rapport au virus HIV-1. 4 - Procédé selon la revendication 3, caractérisé en ce que les cellules d'origine lymphoide sont des cellules de la rate ou des cellules des noeuds ganglionnaires. 5 - Procédé selon l'une des revendications précédentes, caractérisé en ce que des lymphocytes suppresseurs T8 obtenus à partir de l'animal ou de la personne immunisé sont rompus et dialysés ou filtrés. 6 - Procédé selon l'une des revendications précédentes, caractérisé en ce qu'il consiste également à repliquer le facteur de transfert spécifi25 que du rétrovirus au moyen d'une ligne de cellules lymphoblastes. 7 - Procédé selon la revendication 6, caractérisé en ce que la ligne de cellules est la ligne de cellules LDV/7. 8 - Procédé selon l'une des revendications précédentes, caractérisé en ce que le facteur de transfert spécifique du rétrovirus est lyophilisé. 30 9 - Produit approprié à la lutte contre le SIDA, caractérisé en ce qu'il comprend un facteur de transfert spécifique du virus HIV, préparé à partir de cellules d'origine lymphoide et/ou de cellules du foie d'un animal précédemment immunisé par rapport à un virus HIV. - Composition pharmaceutique comprenant un support ou diluant physio35 logiquement acceptable, caractérisé en ce qu'elle comprend, comme ingrédient actif, un facteur de transfert spécifique d'un rétrovirus préparé à partir de cellules d'origine lymphoide et/ou de cellules du foie d'un animal ou d'une personne précédemment immunisé par rapport au rétrovirus. 11 - Produit de lutte contre le SIDA ou une infection liée à un rétrovirus, caractérisé en ce qu'il comprend: [a] un facteur de transfert spécifique du rétrovirus préparé à partir de cellules d'origine lymphoide et/ou de cellules du foie d'un animal ou d'une personne précédemment immunisé par rapport au rétrovirus, et [b] au moins l'un des produits comprenant des extraits de thymus et/ou lo de rate et/ou de foie.des anabolites et des médicaments antiviraux, destinés à être utilisés simultanément ou successivement pour lutter chez un être humain ou chez un animal contre une infection liée au rétrovirus.