Brevet FR2598422A1 — publié le 19871113

La présente invention concerne de nouveaux pseudo-peptides utiles notamment dans le traitement des troubles du système nerveux central tels que l'épilepsie et les déficits mnésiques liés à certaines pathologies dégénératives. On connaît l'importance des médiateurs chimiques dans les troubles du système nerveux central (SNC). Parmi ceux-ci, on distingue les neuromédiateurs inhibiteurs, tels que le GABA (acide gamma10 amino-butyrique) et la sérotonine, des neuromédiateurs excitateurs, tels que l'histamine, la dopamine et l'acide glutamique. Ces derniers sont plus particulièrement concernés par la présente invention, notamment le système 15 glutamratergique qui intervient à différents niveaux du cerveau et joue très vraisemblablement un rôle important dans les mécanismes impliqués dans la rétention mnésique (BLISS, DOLPHIN, 1982; ECCLES, 1983; COLLINGRIDE, 1985). La présente invention concerne en effet les propriétés agonistes ou antagonistes de nouveaux pseudopeptides sur la neurotransmission, notamment au niveau du système glutamatergique. Il s'agit de nouveaux pseudo-peptides comportant au moins la séquence de l'acide y-glutamyl-aspartique, 25 ainsi que les dérivés de ces pseudopeptides. Parmi ces pseudo-peptides, il faut citer l'acide lui-même ainsi que les tripeptides correspondant à un amino-acide supplémentaire lié à l'extrémité C-terminale. Les dérivés en cause sont essentiellement les sels, les esters et les amides, les dérivés d'amine quaternaire ainsi que les dérivés cycliques avec des composés acide, base, alcools pharmaceutiquement acceptables. De préférence, selon la présente invention, ce nouveau pseudo-peptide est l'acide N-y-glutamylaspartique lui-même ou l'un de ses dérivés. Ces composés peuvent se trouver sous une forme isomérique quelconque, 5 à savoir qu'il peut s'agir des formes N-y-Lglutamyl-Laspartique, N-y-L-glutamyl-D-aspartique, N-y-D-glutamylLaspartique ou N-y-D-glutamyl-D-aspartique. Un composé tout particulièrement préféré selon la présente invention est le N-y-L-glutamyl-L-aspartate 10 dont la formule I est la suivante: HOOC O (I) CH-CH2-CH2-C-NH-CH-CH2-COOH H2N COOH Des résultats intéressants ont également été obtenus avec la forme N-y-D-glutamyl-D-aspartique. Un autre pseudo-peptide particulièrement utile selon la présente invention est l'acide N-y-glutamylaspartyl-aspartique ou ses dérivés, composés dans les20 quels chacun des acides aminés peut se présenter sous forme droite (R, selon la nomenclature internationale) ou gauche (S). L'acide N-y-glutamyl-aspartyl-aspartique préféré selon l'invention est celui dans lequel chacun des 25 acides aminés se trouve sous la forme gauche (S). La synthèse des pseudo-peptides selon la présente invention peut être réalisée par les procédés connus de l'homme de l'art dans le domaine de la synthèse des peptides. Ainsi on peut effectuer le couplage de l'acide Glutamique protégé, la fonction acide étant éventuellement activée, avec l'acide aspartique protégé en présence d'un agent de couplage tel que le NN' dicyclohexyl-carbodiimide. De même, pour obtenir l'acide N-y-glutamyl35 aspartyl-aspartique, on peut partir du composé obtenu précédemment en protégeant ou activant les fonctions appropriées et en le couplant avec l'acide aspartique lui aussi protégé. Ces synthèses peuvent être effectuées en pha5 se solide ou en phase organique. L'ultime étape de ces deux procédés, consiste à éliminer le ou les groupes protecteurs par une technique appropriée pour obtenir respectivement les acides N-y-glutamyl-aspartique et N-y-glutamyl-aspartyl10 aspartique ou leurs dérivés. Les pseudo-peptides selon la présente invention sont notamment utiles pour la préparation d'une composition pharmaceutique. C'est pourquoi, la présente invention concer15 ne les compositions pharmaceutiques comportant, à titre de principe actif, au moins un pseudopeptide selon l'invention. Ces compositions pharmaceutiques sont utiles pour le traitement de diverses maladies touchant au système nerveux central, notamment l'épilepsie et les trou20 bles mnésiques. Lors des premières étapes dans l'élaboration et la mise au point de médicaments épileptiques, il est nécessaire de créer des crises convulsives expérimentales chez l'animal. Les crises convulsives expérimentales 25 permettent de rechercher les anticonvulsivants dont on vérifiera ensuite les propriétés antiépileptiques. C'est pourquoi, on a induit des crises convulsives, chez la souris SWISS en lui injectant par voie intrapéritonéale du pentylénététrazole, à raison d'une 30 dose d'environ 85 mg/kg. Le pentylénététrazole est un excitant bulbaire qui, à cette dose, provoque classiquement chez la souris ou chez le lapin, des crises convulsives avec plusieurs étapes bien caractérisées. L'administration intrapéritonéale consécutive du composé de formule I selon l'invention a entra!né une 5 suppression de ces crises dans les conditions suivantes: - aux doses de 142,5 nmol /kg et 285 nmol /kg, suppression des crises chez 50% des animaux, - aux doses de 570 nmol /kg, suppression des crises chez 70% des animaux. Le composé de formule I se révèle donc très actif sur ces crises convulsives provoquées par une excitation chimique. Aux doses utilisées, il est totalement dépourvu de toxicité. D'autres essais doivent être effectués (exci15 tation électrique, crise audiogène, etc...) et permettront de déterminer les doses nécessaires du ou des principes actifs antiépileptiques selon la présente invention. La présente invention sera mieux comprise à la 20 lecture des exemples suivants. 2598422 EXEMPLE 1 Procédé de synthèse du N-Y-Lglutamyl-L-aspartate de formule I HOOC C Oi (I) CH-CH2-CH2-C-NH-CH-CH2-COOH 2 COOH Les produits de départ ont été obtenus chez Bachem A.G. Une nmole de triéthylamine est ajoutée à une suspension de 0,5 mmole de Nbenzyloxycarbonyl-L-glutamique-benzyl ester et 0,5 mmole de L-aspartiquedibenzylester-p-tosylate dans 10 ml d'acétonitrile à 5 C. Après agitation pendant 15 minutes, on ajoute 0,5 mmole de N,N'-dicyclohexyl-carbodiimide et le mélange est encore agité pendant 18 heures à 5 C. Une goutte d'acide acétique est ensuite ajoutée, suivie par 25 ml d'acétone, et le mélange est refroidi pendant une heure puis filtré pour éliminer l'acylurée formée. Après évaporation à sec sous vide, le résidu est repris dans 50 ml de chloroforme et la solution est lavée successivement avec HCl 1N (2 fois), eau, 5 % NaHCO3 aqueux (2 fois), puis eau. Le résidu est séché dans un évaporateur rotatif. Le produit obtenu est ensuite cristallisé avec l'acétate d'éthyle puis recris20 tallisé dans le système acétate d'éthyle/éther de pétrole pour obtenir 0,35 g de peptide protégé (72 % de rendement) avec un point de fusion de 121-122 C. mg de peptide protégé sont soumis à une hydrogénation dans l'acide acétique 80 % sur 100 mg de 25 catalyseur (palladium-charbon actif) pendant 18 heures. Le catalyseur est éliminé par filtration et la solution est évaporée à sec sous vide. Le pseudo-peptide déprotégé est cristallisé et Trcristallisé dans le système eau/éthanol pour obtenir 41 mg du composé de formule I (42% de rendement) avec un point de fusion de 210-212 C. Le pseudo-peptide obtenu est ensuite repurifié sur colonne PRP 1 (Hamilton) en CLHP en présence de 10% de méthanol dans une solution aqueuse d'acide hexafluorobutyrique 10 mM. EXEMPLE 2 Procédé de synthèse de l'acide N-y-D10 glutamyl-D-aspartique Les techniques utilisées pour la synthèse de l'acide y-D-glutamyl-Daspartique sont identiques à celles de l'exemple 1, si ce n'est que les réactifs N-benzyloxycarbonyl-L-glutamique benzylester et L-aspartiquedibenzylester-p-tosylate sont remplacés par leurs équivalents droits (R) N-benzyloxycarbonyl-Dglutamique benzylester et D-aspartique dibenzylesterp-tosylate. EXEMPLE 3 Procédé de caractérisation des pseudo-peptides obtenus aux exemples 1 et 2 La structure de ces pseudo-peptides a été établie par des méthodes biochimiques, puis confirmée par une analyse en spectrographie de masse. - L'acide aspartique est l'acide C-terminal. Il a été mis en évidence après hydrazinolyse du pseudopeptide; l'hydrazine H2N-NH2 rompt les liaisons peptidiques et transforme les résidus d'acides aminés en hydrazides, sauf celui situé en position C- terminale qui peut être identifié par l'analyseur d'acides aminés Durrum D500. - Le marquage de l'extrémité NH2 du pseudopeptide par le chlorure de 1diméthylaminonaphtalène-5sulfonyle (chlorure de dansyle ou DNS-C1) a permis de caractériser le résidu N-terminal: il s'agit de l'acide glutamique. Par contre des résultats négatifs ont été obtenus avec le 4-N, N-diméthylamino-arobenzène-4'isothiocyanate (DABITC), réactif utilisé dans la méthode de CHANG et qui se fixe également sur l'extrémité NH2 des chaines peptidiques et permet la détermination du 10 résidu N-terminal. Pourtant le pseudo-peptide réagit avec la ninhydrine (coloration bleue) ce qui implique que son extrémité NH2 est libre. Ces résultats apparemment contradictoires ne peuvent s'expliquer que par l'existence d'une liaison peptidoide entre les deux aci15 des aminés constituant le pseudo-peptide, c'est-à-dire une liaison entre la fonction y-carboxylique de l'acide glutamique N-terminal et la fonction amine de l'acide aspartique C-terminal. L'isomérie optique des acides aminés des deux 20 pseudo-peptides a été confirmée par une chromatographie en phase gazeuse sur une phase chirale. REVENDICATIONS 1. Pseudo-peptide, caractérisé en ce qu'il comporte au moins la séquence de l'acide y-glutamylaspartique ou l'un de ses dérivés. 2. Pseudo-peptide selon la revendication 1, caractérisé en ce qu'il s'agit d'un pseudo-peptide choisi parmi les acides N-y-L-glutamyl-L- aspartique, N-y-L-glutamyl-D-aspartique, N-y-D-glutamyl-L-aspartique et Ny-D-glutamyl-D-aspartique ou les sels ou esters ou amides ou dérivés cycliqueszcorrespondants à ces acides.. 10 3. Pseudo-peptide selon la revendication 2, caractérisé en ce qu'il s'agit de l'acide N-y-LglutamylL-aspartique ou d'un sel ou ester ou dérivés cycliques correspondants. 4. Pseudo-peptide selon la revendication 2, caractérisé en ce qu'il s'agit de l'acide N-y-D-glutamylD-aspartique ou d'un sel ou ester ou dérivés cycliques correspondants. 5. Pseudo-peptide selon l'une des revendications 1 à 4, caractérisé en ce qu'il s'agit de l'acide 20 y-glutamyl-aspartyl-aspartique ou son sel ou son ester ou ses dérivés cycliques correspondants. 6. Pseudo-peptide selon la revendication 5, caractérisé en ce qu'il s'agit de l'acide y-L-glutamylL-aspartyl-Laspartique ou son sel ou son ester ou ses 25 dérivés cycliques correspondants. 7. Composition pharmaceutique comportant à titre de principe actif au moins un pseudo-peptide selon l'une quelconque des revendications de 1 à 6. 8. Utilisation d'un pseudo-peptide selon l'une quelconque des revendications 1 à 6, pour la préparation d'une composition pharmaceutique, notamment utile dans le traitement de l'épilepsie ou des troubles mnésiques.