Brevet FR2605886A1 — publié le 19880506

NOUVELLE UTILISATION D'EXTRAIT DE PRUNUS AFRICANA EN THERAPEUTIQUE VIS-A-VIS DES TROUBLES DE LA SENESCENCE DOMAINE DE L'INVENTION La présente invention a trait à une nouvelle utilisation en thérapeutique d'un principe actif déjà connu. Plus précisément elle concerne l'utilisation d'un extrait végétal, déjà connu dans le traitement de l'adénome prostatique ( i.e.l'nypertrophie de la prostate), pour l'obtention d'un médicament destiné au traitement des troubles de la sénescence tels que l'ischémie et l'amnésie, ledit extrait végétal étant élaboré à partir de Prunus africana ou de plantes apparentées. ART ANTERIEUR On connaît du brevet français FR-A- 1 578 711 et des brevets correspondants FR-M-6 703, GB-A-1 177 645 et US-A-3 856 946 (i) l'obtention d'un extrait végétal de Prunus africana et de plantes apparentées et (ii) 11 utilisation de cet extrait en thérapeutique dans le traitement de l'adénome prostatique. On sait que l'ex > rait obtenu par lixiviation au moyen du chloroforme de l'écorce broyée de l'espèce Prunus africana (Hook .) Kalkman, également dénommée Pygeum africanum (Hook f.)a été commercialisé avec succès en tant que moyen anti-adénome prostatique, sous forme de solution dans l'huile, sous le nom de spécialité TADENAN par la demanderesse Cvoir notamment le Dictionnaire Vidal, 61-ème édition, page 1405, O.V.P. Paris, (1985)3. Selon l'enseignement des brevets précités, l'extrait utile en tant que moyen anti-adénome prostatique est obtenu par extraction de l'écorce broyée ou d'un broyat d'autres parties de la plante notamment le bois, les racines, les sommités fleuries, les feuilles et les fruits (la source préférée étant l'écorce) au moyen d'un alcool, d'un mélange eau-alcool, du chloroforme ou d'autres solvants organiques ainsi que leurs mélanges. Une étude critique de plusieurs solvants utilisables apparait dans US-A-3 856 946 (voir colonne 6 ligne 3 à colonne 4 ligne 8), le solvant préféré pour recueillir la plus grande quantité de fraction active (dénommée "complexe lipidostérolique') est le chloroforme. Les plantes qui conviennent pour l'obtention dudit extrait anti-adénome 'prostatique sont, selon lesdits brevets précités, celles qui appartiennent à la famille des rosacées, tribu des amygfalées et sont du genre Prunus, telles que le Prunus africana, qui pousse en Afrique (notamment en Afrique du Sud, en Afrique équatoriale) et à Madagascar, et les espèces apparentées ou analogues telles que notamment les Prunus crassifolia, Prunus lusitanica,- Prunus latifolium, et Prunus parviflorum. Parmi les espèces apparentées ou analogues qui conviennent on peut également mentionner les Prunus padus, Prunus nepalensis (également dénommé selon certains auteurs P. nepaulensis et P. napaulensis), Prunus wallitchi, Prunus javanica, Prunus arborea. On connaît de FR-B-2 273 553,un procédé de préparation d'un extrait de Prunus africana, selon lequel on traite la plante broyée par un liquide (notamment l'huile de palme ou d'arachide), saponifie les acides gras contenus dans la phase lipidique résultante, au moyen d'un alcali, puis extrait l'insaponifiable avec un solvant approprié, notamment l'hexane. Dans FR-B-2 273 553 l'extrait ainsi obtenu, qui exerce un effet bénéfique anti-adénome prostatique, est présenté comme étant un agent activateur de réactions enzymatiques améliorant les échanges métaboliques au niveau des cellules, et, indiqué en gériatrie, dans les cas de baisse de vitalité pour améliorer la vitalité, l'activité sexuelle et la réactivation musculaire. On connait également de FR-A-2 307 819 un autre procédé d'extraction de Prunus africana selon lequel on extrait l'écorche broyée avec de l'acide acétique anhydre en présence d'anhydride acétique, puis-désacétyle par hydrolyse ou saponification l'extrait résultant. BUT DE L'INVENTION Selon l'invention on préconise une nouvelle utilisation de l'extrait de Prunus africana et des espèces apparentées ou analogues, en tant que moyen anti-amnésie et anti-ischémie, pour l'obtention d!un médicament destiné à'. une utilisation en thérapeutique vis-à-vis des troubles de la sénescence. On vient en effet de trouver que tout extrait de Prunus africana ou (I'espèces apparentées, riche en stérols, présente des propriétés antiischémiques1antiamnésiques et antihypoxiques qui n'ont pas encore été divulguées ni décrites dans l'art antérieur sus-visé, et qui sont particulièrement bénéfiques dans certaines manifestations des troubles de la sénescence telles que l'ischémie et l'amnésie qui apparaissent notamment dans la maladie d'Al,Zheimer. DESCRIPTION DETAILLEE DE L'INVENTION Selon l'invention on propose donc une nouvelle utilisation d'un extrait de Prunus africana ou d'espèces apparentées ou analogues de la famille des rosacées, tribu des amygdalées, genre Prunus, en tant qu'ingrédient actif antiischémique et antiamnésiqué pour l'élaboration d'un médicament destiné à une utilisation thérapeutique vis-à-vis des troubles de la sénescence. L'extrait utile suivant l'invention est avantageusement un extrait total de Prunus africana ou d'une plante apparentée ou analogue, obtenu à partir de l'écorce, de la plante entière ou d'une partie-de celle-ci, notamment le bois, les racines, les sommités fleuries, les fleurs et les fruits, par extraction avec un solvant tel que notamment un mélange eau-alcool dans lequel le rapport volumique eau/alcool est inférieur à 1/4, un alcool (en particulier un alcanol inférieur en C1-C3 tel que le méthanol, l'éthanol, 1' isopropanol), un hydrocarbure aliphatique, cycloaliphatique ou aromatique (en particulier l'hexane, l'éther de pétrole, le cyclohexane, le benzène, le toluène), un hydrocarbure halogène aliphatique ou aromatique (en particulier CH2Cl2, CHCl3, CC14, CH2Cl - CH2Cl, C6H5Cl) une cétone (en particulier l'acétone, la méthyléthylcétone, la cyclohexanone), un éther (en particulier le diéthyléther, le diisopropyléther), un ester (en particulier un acétate ou benzoate d-'alkyle inférieur en C1 - C4), le tétrahydrofuranne, le diméthylformamide et leurs mélanges. On peut également utiliser une huile (huile de palme, huile d'arachide ou huile d'olive) comme solvant. Toutefois l'extraction de la plante avec une huile, impliquant 3 étapes, à savoir une extraction à l'huile proprement dite, une saponification puis une extraction de l'insaponifiable avec l'hexane par exemple, on a plutôt intérêt à pratiquer directement une extraction de la plante au moyen du solvant utilisé pour recueillir l'insaponifiable. D'une manière générale tous les solvants qui donnent, à partir du Prunus africana et des plantes apparentées ou analogues, un extrait riche en stérols, conviennent. L'expérience montre que plus la teneur en stérols est élevée, plus grande est l'activité de l'extrait. Toutefois, dans l'état actuel des connaissances rien ne permet d'affirmer que le moyen actif contenu dans l'extrait est un stérol, un mélange de stérols ou une substance liée ou associée à un ou plusieurs stérols, dès lors que le ss-sitostérol que l'on isole de l'extrait suivant l'invention est manifestement inactif. C'est' pour- quoi, par commodité on qualifie l'extrait suivant l'invention de "complexe lipido-stérolique" sans avoir à préciser quel est l'élément ou quels sont les éléments actifs dudit extrait. Le meilleur mode d'obtention de l'extrait suivant l'invention consiste à extraire l'écorce broyée et séchée de Prunus aSricana (de préférence l'espèce dite Prunus africana (Hook f.) Kalkman ou Pygeumafricanum (Hook f.) au moyen de chloroforme selon les modalités opératoires décrites à l'exemple 2 du brevet français FR-A-1 578 711 et, mieux, à l'exemple 4 du brevet américain US-A-3 856 946. On a résumé ci-après les essais pharmacologiques qui ont été entrepris avec l'extrait préféré selon l'invention, à savoir l'extrait chloroformique total d'écorce broyée de Prunus africana, pour apprécier les propriétés antiischémiques, antiamnésiques, et antihypoxiques. TEST DE L'HYPOXIE HYPOBARE CHEZ LA SOURIS Les animaux (12 par lot) après avoir été traités (administration par voie orale des produits à tester l'extrait chloroformique total de Prunus africana, l'hydergine et l'extrait de Ginko biloba, ces deux derniers étant des substances antiischémiques de référence), sont placés par groupe de 3 (1 témoin et 2 traités) dans un- dessica- teur en verre transparent d'un volume de 2 litres environ) relié en série à une trompe à vide (branchée sur.l'arrivée d'eau) et à un manomètre. Le débit de la trompe à vide est réglé de façon à atteindre une pression résiduelle de 150 mmHg (i.e. environ 2 X 104 Pa) dans l'enceinte en 30-+ 1 secondes. Dès que cette pression est atteinte, on ferme le robinet situé au-dessus du dessicateur et on déclenche un chronomètre pour apprécier le temps de survie de chaque animal. Le critère de mort est l'arrêt respiratoire définitif. Il est contemporain de l'arrêt de l'électrogénèse corticale. La mortalité chez les témoins est très constante. Elle survient au bout de 40 à 50 secondes. Lorsqu'il y a une protection importante, les animaux sont observés pendant une période de 4 minutes maximum (fait relativement rare) car le timing de la manipulation est calculé de façon à tester 3 nouvelles souris toutes les 5 minutes. Les résultats ont été consignés dans le tableau I ci-après. TABLEAU I Variation du temps de survie Produits Doses Test effectué Test effectué per os 15 rn après le 30 fln après le (mg/kg) traitement traitement Extrait de Prunus 10 + 61X + 75 % africana 100 + 84 % + 168 % Hydergine 1 + 21 X + 17 % 10 - 11% - 5% Extrait de ninko biloba 75 + 42 X + 46 % 100 + 63'% + 59 % Les résultats du tabeau I montrent que l'extrait de Prunus africana possède une activité antihypoxique importante selon le test de l'hypoxie hybobare. Il s'agit là d'une activité très intéressante car c'est une propriété connue des substances exerçant un effet thérapeutique bénéfique vis-à-vis des maladies cérébro-vasculaires et des troubles liés à l'hypoxie ou à l'ischémie. TEST DE L'AMNESIE RETROGRADE INDUITE PAR HYPOXIE CHEZ, LE RAT. Le test s'effectue sur 2 jours et porte sur des lots de 20 rats (OFA mâles de 200 + 10g) avec des cages comportant un grand compartiment éclairé et un petit compartiment non éclairé. Le premier jour, chaque rat, après avoir été traité 30 mn avant, est déposé au centre du grand compartiment -éclairé. Dès qu'il s'est réfugié dans le petit compartiment (environ 20 secondes après), on ferme l'orifice de communication avec le compartiment éclairé et on délivre par l'intermédiaire du plancher (barres de cuivre) un choc électrique nociceptif (courant rectangulaire : 60 volts, lOmsec, 50 cycles/sec) pendant 4 secondes. Le rat est ensuite retiré immédiatement du petit compartiment et soumis aussitôt à l'agression hypoxique. L'hypoxie réalisée correspond tà une mise en altitude fictive avec le dispositif habituel (dessicateur+ manomètre + trompe à vide). L'animal est amené en 15 + 1 secondes à une pression résiduelle de 140 mmHg (soit environ 1,8 x 104pa, ce qui correspond à une altitude fictive d'environ 12 200 mètres) et laissé en hypoxie jusqu'à l'arrêt respiratoire avec un temps de séjour maximum de 170 secondes (valeurs limites supérieures de résistance chez les rats témoins), puis après une récompression rapide replacé dans sa cage. Le deuxième jour de l'épreuve, chaque rat est placé à nouveau dans le grand compartiment et explore librement l'enceinte pendant 4 minutes. On mesure à l'aide d'un chronomètre le temps de latence (T.L.) pour rentrer dans le petit compartiment et la durée de séjour dans ce même compartiment (T.S.). Les traitements sont effectués par voie i.p.le premier jour seulement 30 minutes avant l'introduction de l'animal dans l'enceinte. 4 Lots de rats sont utilisés pour chaque série expérimentale (les expériences ont lieu le matin entre 7h30 et 12h30). Les résultats obtenus avec les lots suivants ont été consignés dans le tableau II ci-après. Lot nO 1 : Témoins rétention : ces animaux reçoivent de- l'huile d'arachide par voie I.P. et ne subissent pas d'amnésie rétrograde. Lot n02 : Témoins amnésie : ces animaux reçoivent de l'huile d'arachide et subissent une séance d,' hypoxie. Lot n03 : Extrait de Prunus africana. (îOmg/kg i.p en so lution dans l'huile d'arachide).Après l'ac quisition du réflexe d'évitement, les rats sont soumis à une séance d'hypoxie. Lot n04 : Extrait de Prunus africana (lOOmg/kg i.p. en solution dans l'huile d'arachide). Après l'acquisition du réflexe d'évitement, les rats sont soumis à une séance d'hypoxie. TABLEAU II Lot Dose de Prunus Nombre de Temps de Temps de africana par voie rats latence séjour i.p. (mg/kg) (secondes) (secondes) 1 o ("rétention") 20 144 # 20 35 # 17 2 0 ("amnésie" ) 20 94 # 23 104 # 20 3 10 20 77 # 29 111 # 23 4 100 20 191 # 19 26 # 12 Les résultats du tableau II montrent que l'extrait de Prunus africana administré à la dose de 100 mg/kg par voie i.p. exerce une protection significative contre les effets amnésiants de l'hypoxie. Cette propriété est selon GOURET et al., J. Pharmacol.Paris 7, 161 (1976), le fait des médiaments utilisables comme "protecteurs cérébraux" chez l'homme. TEST DE L'OEDEME CEREBRAL AU TRIETHYLETAIN CHEZ LE RAT. L'expérience est réalisée sur des rats mâles OFA pesant au départ 160 + 10 g. Les animaux sont répartis dans des grandes cages par groupe de 15. Ils ont à leur disposition en permanence d la nourriture (bouchon UAR A03) et comme boisson une solution aqueuse de chlorure de triéthylétain à 0,003%. Les contrôles cliniques suivants sont effectués aux jours J0, J4,J7, J10,J21 et J24. Un examen comportemental permet d'apprécier les troubles neurologiques 1" - Troubles de la marche, cotés de O à 10 selon l'échelle suivante O = démarche normale; 2 = démarche hésitante, train arrière peu mobile; 5 = animal immobile, tendance à pivoter autour de son train arrière; 8 = pattes postérieures et train arrière paralysés; 10 = animal en décubitus latéral, immobile, complètement paralysé. 20 Troubles de l'éqguilibre Ils sont évalués au Rota-Rod; lors des contrôles, le rat doit se maintenir sur le dispositif pendant 30 secondes consécutives (on lui donne 3 possibilités d'échecs). Les résultats obtenus avec les lots suivants ont été consignés dans les tableaux III et IV ci-après. Lot nO 1 : témoins recevant per os 2 ml/kg d'huile d'arachide; Lot n02 : animaux recevant l'extrait de Prunus africana à la dose de 10 mg/kg per os, sous un volume de 2 ml/kg d'une solution dans l'huile d'arachide; Lot n03 : animaux recevant l'extrait de Prunus africana à la dose de 100 mg/kg per os, sous un volume de 2 ml/kg d'une solution dans l'huile d'arachide; Lot n04 : animaux recevant l'extrait de Ginko biloba à la dose de 80 mg/kg per os de la solution commerciale. TABLEAU III Solution des troubles neurologiques(moyennes des cotations) Lot de traitement Jo J4 J7 J10 44 J21 J24 (per os) Témoin huile arachide 0 0 1,3#0,5 2,3#0,6 3,3#0,7 5,3#0,9 7,2#0,6 Extrait de Prunus aficana 0 0,3#0,2 2,6#0,7 1,2#0,4 2,1#0,7 3,0#0,8 5,6#1,1 (10 mg/kg) Extait de Prunus africana (100mg /kg) 0 0 0,1# 0,1 0,3#0,3 0 0 0 Extrait de Ginko biloba 0 O O Dw5+0s3 (80mglkg) TABLEAU IV Evolution des troubles de l'équilibre (%.d'échec au Rota-Rod) Lot Traitement (per os) J0 J4 J7 J10 J14 J21 J24 Témoin huile arachide 0 0 60 % 67 % 87 % 100 % 100% Extrait de Prunus africana I(îQng/kg) O 13% 67 % 73 96 60 % 87 % 100 % Extrait de Prunus africana I (lOOmg/kg) 0 0 7 % 7 % 7 % 7 % 20% Extrait de Ginko biloba 0 0 7 % 7 % 14 % 40 % 40 % (80 mg/kg) L'intoxication du triéthylétain entraîne un oedème cérébral localisé à la substance blanche dans les zones qui contrôlent la posture et la motricité. Dans les conditions expérimentales, les animaux témoins présentent un syndrôme parsplégique caractéristique. Le traitement par l'extrait de Ginko biloba combat l'apparition des troubles neurologiques et des troubles de l'équilibre induit par le triéthylétain. De façon surprenante l'extrait de Prunus africana présente une activité de même type. REVENDICATIONS 1. Utilisation d'un extrait de Prunus africana et d'espèces apparentées ou analogues de la famille des rosacées tribu des amygdalées, pour l'obtention d'un médicament antiischémique et antiamnésique destiné à une utilisation en thérapeutique vis à vis des troubles de la sénescence, en particulier l'ischémie et l'amnésie. 2. Utilisation suivant la revendication 1, caractérisée en ce que ledit extrait est obtenu par extraction d'écorce broyée de Prunus africana. 3. Utilisation suivant la revendication 1 ou 2, caractérisée en ce que ledit extrait est obtenu à partir de l'espèce Prunus africana (Hook f.) Kalkman. 4. Utilisation selon l'une quelconque des re vendicatiorsî, 2 et 3,caractérisée en ce que ledit extrait est l'extrait chloroformique total.