Brevet FR2601690A1 — publié le 19880122

Procédé de production de méthane à rendement élevé par culture de Méthanobactérium thermoautotrophicum, ou de toute autre bactérie méthanogène ayant les mêmes propriétés physiologiques de croissance. La présente invention concerne un procédé de production de méthane à rendement élevé par culture de Methanobacterium thermoautotrophicum ou de toute autre bactérie méthanogène ayant les mêmes propriétés physiologiques de croissance, dans des 10 conditions particulières. Il est bien connu que le méthane peut être produit par des bactéries dites méthanogènes. Parmi ces bactéries figurent les bactéries méthanogènes hydrogénophiles, qui sont capables de produire du méthane à partir d'un mélange gazeux, C02-H2. Certaines 15 de ces bactéries sont également thermophiles et notamment Methanococcus thermolitotrophicus et Methanobacterium thermoautotrophicum. Les propriétés physiologiques de la bactérie Methanococcus thermolithotrophicus et plus précisément l'énergétique de la croissance de cet organisme ont été décrits par Fardeau et Belaich dans Arch. Microbiol. (1986) 114:381-385. La bactérie Methanobacterium thermoautotrophicum a été étudiée par plusieurs équipes de recherche et est décrite notamment par: - Schônheit et al. dans Arch. Microbiol. I27, 59-65 (1980); - Seely et al. dans Biochem. Biophys. Rest. Comm. 116: II25-II28 (1983); - Brandis et al. dans'Zbl. Bakt. Hyg. Abt. Grig. (2, 30 3II-317, (1981)), et - Daniel et al. dans Bioeng. 14: I99-213 (1984). La plupart de ces chercheurs ont étudié cette bactérie en culture discontinue (ou culture en "batch"). Les conditions de culture préconisées par ces auteurs ne permettent pas 35 l'obtention d'une productivité et d'un pourcentage. élevés en méthane dans l'effluent gazeux du fermenteur. D'autre part, des travaux réalisés par le demandeur ont montré qu'il était possible d'atteindre avec les bactéries méthanogènes thermophiles des activités spécifiques de production 05 de méthane très importantes (372 m3 de méthane par jour et par kg, poids sec, de bactéries) mais qu'il fallait trouver une solution biotechnologique ou biologique permettant d'accroître le pourcentage de méthane dans l'effluent et la productivité du réacteur par augmentation de la biomasse active. En effet, malgré 10 l'importante activité spécifique des bactéries méthanogènes thermophiles, la productivité des fermenteurs était très faible, de l'ordre de 30 V/V/J. Il en est de même pour les biomasses maximum, obtenues en milieu non renouvelé, qui ne dépassaient pas, pour Méthanococcus thermolitotrophicus (MTL), la valeur de 0,8 g 15 poids sec/litre. Les résultats de productivité - étaient qualitativement identiques pour la deuxième bactérie utilisée: Methanobacterium thermoautotrophicum (MTA) bien que la biomasse obtenue dans le fermenteur ait été plus élevée (5 g/l)/. Jusqu'à présent, il était donc impensable d'envisager la 20 production de méthane à l'échelle industrielle par culture de l'une ou de l'autre des bactéries citées précedemment. On a maintenant trouvé que l'on peut obtenir du méthane avec aussi bien une productivité élevée qu'un haut rendement en méthane dans l'effluent produit, par culture en continu de 25 Methanobacterium thermoautotrophicum ou de toute autre bactérie méthanogène ayant les mêmes propriétés physiologiques de croissance sous alimentation forcée de gaz, c'est-à-dire avec une vitesse élevée de transfert de gaz. Ainsi la présente invention a pour objet un procédé de 30 production de méthane à rendement élevé qui consiste à cultiver les bactéries ci-dessus -en continu sur un milieu de culture adéquat et sous alimentation forcée en gaz H2/C02. Ainsi en utilisant une vitesse de transfert de gaz d'au moins 60 litres de mélange C02/H2 par litre et par heure, au moins 96 % du gaz entrant 35 dans le fermenteur est transformé en méthane. La vitesse de transfert de gaz est déterminée à partir de la productivité en méthane multipliée par cinq. Aux fins de l'invention, cette vitesse doit être d'au 05 moins 50 litres par litre et par heure. La culture de Methanobacterium thermoautotrophicum ou de toute autre bactérie méthanogène ayant les mêmes propriétés physiologiques de croissance est réalisée dans un fermenteur sur un milieu de culture contenant essentiellement une source d'azote et 10 une source de sels assimilables. Un exemple de composition du milieu de culture approprié aux fins de l'invention.est donné ci-après: KH2PO4 50 mM NaCl 40 mM NH4Cl 50 mM Na2CO3 19 mM Titriplex I 0,5 mM MgC12 0,2 mM FeCl2 50 ?M COC12 lyM Na2MoO4 1 PM Ni(N03)2, 6 H20 5 M cysteine chlorhyddrate 2,86 mM Na2S, 9 H20 2,1 mM Un tel milieu doit être préparé en anaérobiose et stérilisé par exemple pendant environ 20 minutes à environ 110 C. Le procédé de l'invention est mis en oeuvre à la température à laquelle se multiplie la bactérie, par exemple pour 30 Methanobacterium thermoautotrophicum, à une température de 65 C environ. Le fermenteur est alimenté en substrat constitué d'hydrogène et de gaz carbonique dans un rapport approprié, par exemple dans un rapport H2/C02 de 80/20 %. 35 L'alimentation en substrat gazeux du fermenteur est avantageusement effectuée par un diffuseur en verre fritté ou tout autre matériau poreux de faible porosité donnant une répartition de taille des bulles de gaz très faible par rapport au volume 05 liquide et qui est placé en dessous de la turbine d'agitation nécessaire à la dispersion de ces bulles et à la turbulence du milieu. La mesure des capacités de transfert de l'ensemble turbine diffiseur peut être réalisée en suivant l'oxydation d'une 10 solution de sulfite par l'oxygène de l'air. Le coefficient de transfert de gaz mesuré par cette méthode applelé KL.a, atteint une valeur de 3000h-1 à 65 C pour 60 litre/litre/heure d'air à l'entrée et pour une vitesse d'agitation de 600 tours par minute alors que sa valeur maximale pour les fermenteurs équipés d'une couronne de 15 diffusion classique ne dépasse pas 1500 h- 1 dans les mêmes conditions. Il est maintenant possible, grâce au procédé de l'invention d'obtenir un rendement élevé en CH4, c'est-à-dire une productivité d'au moins 250 V/V/J de méthane avec un pourcentage 20 d'au moins 85 % dans l'effluent. L'invention va être maintenant décrite en détail par l'exemple non limitatif ci-après: EXEMPLE: On a utilisé un fermenteur Interscience "Labo 2000" sur 25 lequel a ajouté deux pipes coudées en verre fritté (porosité 0) entre la turbine et le coupleur magnétique d'entraînement de la turbine. Le fermenteur a été utilisé au maximum de sa puissance de chauffe sans le système de refroidissement. L'agitation étant réglable de 300 à I200 tours par minute, les meilleurs résultats ont été obtenus à partir de 900 tours par minute. Le volume de travail était de 1 litre. On a utilisé le milieu de culture défini précédemment. Ce milieu de culture liquide stocké dans un ballon de 20 1 en anaérobiose (sous courant H2/C02 continu) a été amené au fermenteur à l'aide d'une pompe péristaltique ("Masterfiex") dans des tuyaux de silicone épais ("Victoria").Le débit d'alimentation en gaz a été commandé par une régulation électronique adaptée au 05 système. Le substrat était consituté d'un mélange gazeux H2/C02 dans un rapport 80/20+ 0,4 % ("Prodair"). Le niveau liquide dans le fermenteur a été réglé par un tube affleurant la surface et commun à la sortie des gaz et du milieu, une légère surpression du gaz entraînant l'évacuation du 10 liquide excédentaire jusqu'à affleurement du tube. L'effluent a été récolté dans un ballon stock stérile et en anaérobiose. Les flux de gaz entrant et sortant ont été mesurés à l'aide de débimètres. Le pH et le potentiel redox ont été mesurés 15 régulièrement mais non régulés. Les gaz de sortie ont été réfrigérés pour condenser la vapeur d'eau et analysés par chromatographie en phase gazeuse. Les résultats obtenus avec Methanobacterium thermoautotrophicum sont reportés sur les figures 1 à 3 annexées, 20 lesquelles représentent respectivement. - figure 1: la productivité en CH4 (ordonnées de droite: V/V/J) et en biomasse (ordonnées à gauche; g/l) de Methanobacterium thermoautotrophicum en fonction de la vitesse d'agitation à taux de dilution et débit de C02/H2 constants à 25 l'entrée; les pourcentages de CH4 dans l'effluent sont indiqués sur la courbe; - figure 2: la productivité en biomasse (g/1) de Methanobacterium thermoautotrophicum en fonction du débit d'entrée du mélange gazeux à taux de dilution et vitesse d'agitation 30 constants; figure 3:- la productivité en CH4 (V/V/J) de Methanobacterium thermoautotrophicum en fonction du débit d'entrée du mélange gazeux à taux de dilution et vitesse d'agitation constants; les pourcentages de CH4 dans l'effluent 35 sont indiqués sur la courbe. 260 1690 La figure i montre clairement que la biomasse, à l'état stationnaire, du fermenteur est proportionnelle à la vitesse de rotation de la turbine. La culture de MTA passe d'une 05 concentration cellulaire de 0,8 g/l à 3,6 g/1; dans le meme temps, la productivité du réacteur dépasse de 228 à 288 V/V/J et le pourcentage de méthane dans l'effluent gazeux de 42 à 96 % Les figures 2 et 3 montrent que pour un taux de dilution et une vitesse d'agitation constants la biomasse et la productivité du 10 réacteur sont proportionnelles au débit du gaz d'alimentation de l-a culture (mélange H2/C02). Le meilleur couple (pourcentage de CH4 dans l'effluent, productivité du réacteur) obtenu a été de 96 % de CH4 et 288 V/V/J pour une vitesse de rotation de la turbine de I200 tours par minute, le débit d'entrée étant de 60,5 1/h; le 15 débit de sortie de I2,5 1/heure; et la biomasse de 3,6 g/i poids sec. Ces résultats sont d'autant plus surprenants et originaux que des expériences analogues réalisées avec Méthanococcus thermolitotrophicus n'ont pas permis d'atteindre la 20 même productivité en CH4. Les productivités maximums obtenues dans ce cas sont toujours inférieures à 80 V/V/J avec un pourcentage de méthane dans l'effluent de 50 % environ. L'ensemble de ces essais montre que le procédé de l'invention résulte à la fois de la sélection des bactéries 25 méthanogènes particulières ayant des propriétés physiologiques de croissance spécifiques et de conditions spécifiques de culture. REVENDICATIONS. 1. Procédé- de production de méthane avec rendement élevé, caractérisé en ce qu'il consiste à cultiver sur un milieu de culture contenant une source d'azote et de sels assimilables la bactérie méthanogène Methanobacterium thermoautotrophicum ou toute 05 autre bactérie méthanogène ayant les mêmes propriétés physiologiques de croissance, sous une alimentation forcée en mélange gazeux H2/C02. 2. Procédé selon la revendication 1, caractérisé en ce que l'alimentation forcée en mélange gazeux est obtenue avec une 10 vitesse de transfert de gaz d'au moins 50 litre par litre et par heure