Brevet FR2585924A1 — publié le 19870213

La présente invention concerne de façon générale la multiplication et la production en masse d'un insecte etdomo- phage tel que Trichogramma mardis, à partir d'un h8te de substitution tel que l'oeuf de la Pyrale de la farine Ephestia kuehniella, ledit entomophage étant dans ce cas utilisé en lachers inondatifs saisonniers dans le cadre de la lutte biologique contre un ravageur des cultures de maïs, Ostrinia nubilalis ou Pyrale du mais. L'invention concerne donc plus particulièrement un procédé de production en masse d'un insecte entomophage, avec un dispositif pour sa mise en oeuvre, ainsi que l'application dudit procédé en lutte biologique au moyen de micro-conteneurs destinés au lacher au champ. Dans le cas du Trichogramme, la production de cet entomophage se réalise jusqu'à présent dans des cages dites de "multiplication" oi des oeufs hôtes sont présentés en monocouche sur plaquesà une quantité de Trichogrammes adultes, ou inoculum, dans un rapport de 10/1 et précédemment émergés d'oeufs parasités disposés en vrac dans la cage. Lorsqu'il est nécessaire de procéder à un stockage au froid avant utilisation des oeufs parasités, la durée de parasitisme des oeufs hôtes par l'inoculum de Trichogrammes doit être limitée à 48 heures à 25 C (Cf. travaux de Madame PIZZOL sur l'induction de la diapause chez Trichogramma maïdis permettant ce stockage au froid). En moyenne 75 % des oeufs hôtes ainsi présentés sont parasités. Une partie des oeufs ainsi parasités est toutefois recyclée comme inoeulum pour la génération suivante. Ce procédé de multiplication en cages pendant 24 à 48 heures présente certains inconvénients: 1 - manipulation de nombreuses cages sans grande possibilité d'automatisation; 2 - utilisation partielle du potentiel de ponte des femelles Trichogrammes, le parasitisme étant au plus de 48 heures à 250c, condition minimale indispensable à un taux correct 2 2585924 de mise en induction de diapause des larves de Trichogrammes avant leur stockage au froid. Le temps de parasitisme de la partie recyclée comme inoculum ne doit pas non plus dépasser ces 48 heures pour éviter un trop grand étalement des émergences dans les cages. Même dans ce cas, il est alors nécessaire d'attendre au moins 48 heures après les premières émergences de l'inoculum pour introduire la plaque d'oeufs hôtes. La présente invention vise donc à remédier à ces inconvénients, en fournissant notamment un procédé de multi- plication et production en masse d'insectes d'entomophages par formation d'oeufs hôtes parasités en cage de population, trouvant une application avantageuse dans le cas du Tricho- gramme et de la lutte biologique contre la Pyrale du maîs. Conformément au procédé selon l'invention, on maintient dans la cage une population constante d'insectes entomophages adultes à partir d'un inoculum formé de premiers oeufs hôtes parasités ayant subi une incubation préalable appropriée, on active dans la cage ledit inoculum, on présente en continu pendant 24 heures des seconds oeufs hôtes à parasiter par l'entomophage ayant émergé dudit inoculum, on recueille en continu les seconds oeufs hôtes ainsi parasités en vue de leur traitement ultérieur de conditionnement et l'on en prélève une fraction destinée à former ledit inoculum après l'incubation. Après avoir recueilli les seconds oeufs hôtes parasités, on les applique en tant qû'inoculum en présence d'oeufs sains de l'entomophage, sous forme d'un mélange dosé introduit en micro-conteneur destiné au lacher au champ et traité en fonction de l'étalement d'émergence des insectes entomophages désiré. Pour la mise en oeuvre du procédé tel que défini ci- dessus, le dispositif est essentiellement constitué par une enceinte régulée en température constituant une cage de population, munie d'une première bande transporteuse pour i'inoculum et d'une seconde bande transporteuse pour les oeufs hôtes à parasiter,guidées sur des rouleaux et entrainïes à la même vitesse par un groupe-moteur, ladite cage étant associée à des organes extérieurs de récupération des oeufs hôtes para- sités et de reconditionnement de ladite seconde bande, et compre- nant des moyens de formation de support eêt d'introduction de l'ino- eulum après son incubation, moyennant quoi le dispositif fonction- ne automatiquement et en continu, avec une intervention manuelle minime pour une production élevée et de qualité homogène. D'autres caractéristiques et avantages de l'invention ressortiront mieux de la description qui va suivre, faite en regard des dessins annexés sur lesquels: la figure 1 représente un schéma synoptique du dispo- sitif selon l'invention, illustrant le procédé; la figure 2 représente une sue schématique de l'avant de la cage de population; la figure 3 représente une vue schématique de l'ensem- ble général d'implantation du dispositif de production; la figure 4 représente une vue schématique à échelle agrandie d'un détail des rouleaux de guidage des bandes trans- porteuses; la figure 5 représente un schéma synoptique du mode de parasitisme en capsule; les figures 6 et 7 représentent des graphiques illus- trant l'étalement des émergences au lacher, en fonction du mode de parasitisme. Sur ces dessins, les mêmes références désignent les mêmes éléments. Dans le cas par exemple du Trichogramme, on maintient 0 dans une cage une population desdits Trichogranmes,constante de par sa quantité et ses potentialités biologiques, et l'on amène de façon continue et régulière les oeufs hôtes en vue de leur parasitisme. A cet effet, un apport régulier de Tri- ehograrmmes compensent la mortalité est nécessaire et fourni par la cage elle-même, sous forme de premiers oeufs hôtes para- sités et incubés deux semaines à 22'C, introduits dans un 4 2585924 logement prévu à cet effet sur la cage o les Trichogrammes vont pouvoir émerger et parasiter les seconds oeufs hôtes qui leur sont Irésentés en continu. De manière avantageuse, le temps de présence dans la cage de l'inoculum est de cinq jours et celui des seconds oeufs d'hôtes est de 24 haures, comme ce sera mieux expliqué ci-après. ' En se référant à la figure 1, le dispositif pour la mise en oeuvre du procédé ci-dessus comprend différents postes par rapport à une unité de référence générale E comprenant la cage proprement dite 7 dans laquelle défilent en continu deux bandes transporteuses A et B, respectivement étroite pour les premiers oeufs hôtes constituant l'inoculum-cage et large à double face pour les seconds oeufs hôtes, toutes deux entrainées à la vitesse convenable par un groupe-moteur 1. Sur la sortie de la cage de population 7, une bande étroite C supportant des oeufs venant d'être parasités et destinés à la formation de l'inoculum-cage est enroulée grâce au moteur d'entraînement 1 en une spire de référence générale 2. Pour l'activation de cet inoculum-cage, après l'incuba- tion, les spires sont introduites en 8 dans la cage, dans un logement o cinq spires 2 tiennent place. L'introduction d'une spire 2 en 8 provoque l'expulsion d'une spire 2 en 9 hors de la cage. Une spire 2 demeure donc cinq jours dans la cage, ce qui convient pour une émergence complète des Trichogrammes à partir des premiers oeufs hôtes. A la sortie de la cage de population 7, la bande large B supportant par encollage-les seconds oeufs hôtes parasités est brossée en 3 sur ses deux faces, les oeufs étant récupérés en 10 sous forme de poudre pour leur traitement ultérieur. Une fois brossée, la bande B est nettoyée en 4. rincée, puis de nouveau encollée et garnie d'oeufs hôtes sains sur ses deux faces en 5 avant sa réintroduction en 6 dans la cage 7. Le cheminement entre les postes 3 et 6 extérieurs à la cage 7 dure également 24 heures. En se référant aux figures 1 à 4, la cage 7 est constituée par une enceinte munie d'une entrée 11 représentant le; d(leux postes 6 et 8, respectivement pour la bande B et pour la bande A. Ces deux bandes sont guidées sur des rouleaux coaxiaux 12, l'un pour la bande A (13) et l'autre pour la bande B (14). Le premier rouleau 15 de l'entrée 11 est avanta- geusement muni d'un frein usuel 16 destiné à régler la tension des bandes. La cage comporte en outre un fond mobile 17, destiné en particulier à éliminer les Trichogrammes morts. Par ailleurs, une source de lumière appropriée 18 est disposée sur la face interne supérieure de la cage 7 afin de maintenir l'essentiel de la population de Trichogrammes vers le haut de la cage, tandis qu'on alimente ces derniers par exemple au moyen de miel pouvant être disposé soit automatiquement sur le bord des bandes, soit manuellement au niveau de ladite face interne supérieure. Comme mentionné plus haut, les bandes A et B sont entraînées par un groupe-moteur 1, à une vitesse telle que ces bandes parcourent leur trajet à la même vitesse entre l'entrée 11 et la sortie 19 de la cage en 24 heures. A la sortie 19, la bande A est extraite, pendant qu'une nouvelle bande d'oeufs parasités qui ont été soumis à l'incubation dans un poste séparé (non représenté) est introduite sous forme d'une spire 20 au poste 8. La bande B est dirigée de son côté sur un rouleau à brosses 3 d'oh les seconds oeufs hÈtes, parasités, sont recueillis sous forme de poudre dans un réceptacle 10. La bande B est ensuite rincée dans un bain 4, ré-encollée'en 5 sur ses deux faces et garnie en oeufs hôtes sains, puis introduite dans la cage par l'entrée 11. La bande A, provenant du poste d'incubation, introduite sous forme d'une spire 20 dans un des logements 8 de la cage 7, progresse pour son activation à une vitesse telle que son trajet total s'effectue en cinq jours, durée correspondant au temps nécessaire à l'émergence des Trichogrammes. Conformément à la présente invention, on applique ensuite les oeufs hôtes recueillis dans le réceptable 10 du dispositif de production, en tant qu'inoculum mis en présence de troisièmes oeufs hôtes sains dans des micro-conteneurs, chacun sous forme par exemple d'une capsule en cartonpâte de 1,2 cm de diamètre en deux demi-sphères collées p;i:: ultérieurement percées et destinée au lacher au champ. Le principe consiste à faire parasiter les oeufs hôtes directement dans cette capsule en y associant l'inoculum- capsule approprié. Celui-ci est calculé de telle sorte que le nombre d'oeufs parasités soit maximal tout en limitant le superparasitisme à un seuil acceptable. Dans le cas des capsules, le rapport oeufs"noirs"parasités (inoculum)/oeufs "blancs"à parasiter est de 1/15. Suivant que les sorties des adultes sont groupées ou étalées, on obtient, dans le premier cas, la possibilité de parasiter avec un inoculum donné le plus grand nombre d'oeufs hôtes dans un court délai, alors que dans le second cas, on prolonge la. période d'action des Trichogrammes au champ. Le regroupement des sorties est par ailleurs indispen- sable dans le cas du conditionnement du développement du Trichogramme au froid pour l'induction d'une diapause autorisant le stockage de longue durée du produit biologique, de la maniè- re décrite dans le brevet français N 79 17 774. Afin de définir les conditions optimales de traitement et de charge- ment des capsules, on a soumis des lots d'oeufs parasités, o apparaissait le tcut premier sdulte, à des températures relativement basses (10, 14 et 18 C et pendant des durées de 24 à 48 heures) de manière à freiner le développement nymphal et regrouper la sortie des adultes. Après ce traitement au froid, ces lots sont exposés à des températures élevées (22 à 25 C avec contrôles matin et soir des sorties durant trois jours) pour l'obtention des sorties des Trichogrammes adultes dans un court délai. Un lot témoin a été soumis par ailleurs à un développement à une température constante de 2200 C. Les résultats regroupés dans le tableau I ci-dessous montrent que ce sont les inoculum exposés à 10 et à 14 C peti:iant 24 à 48 heures et soumis à un passage à 25 C pendant 15 heures, qui offrent les conditions optimales de sorties ('.. 90 %). Tableau I: fauz d'émergence ou de sorties avant ou après réchauffement à 250C et 22 ' en fonction de durées de 24 et 48 heures d'exposition à des températures proches du seuil de développemernt. Taux Taux r e raux d'émergence après réchauffement à 25 C 0. er Taux d'émergence après réchauffemelit à 22 C d'énmer- gence lèer jour gence gevnt ler jour 2ème jour3me jourevant ler jour 2ème jour3ème jour avant avant réerchauf-raci rcet mmatin soirmatinsoirmatinsoir matin soirmatinsoirmatinsoir fernentvation 2% 2% % àa > H > 90 % > 90% 13% 8% % - 30 30% 30 -à a H 41% 41% 87% Co moin 22 0(6,2% 16,8% 86% dans les eaps'iles les oeufs hôtes à parasiter ainsi que 1 'inrocu- lum. Ces capsules, une fois fermées,sont exposées à 10 ou;4"C durant 24 à 48 heures avant d'être soumises à 250C pour une période de 15 heures. Après ce séjour à 250C on peut obtenir deux types de développement: Un développement continu en soumettant les capsules à 22-2500 jusqu'à la mort des Tricho- grammes, ou un arrêt de développement dit diapause en soumettant les capsules seulement 24 à 36 heures à 22-25 C et en les exposant ensuite quarante jours à 14 C puis trois à douze mois à 3C. Les différentes phases de traitement sont reprises dans le schéma synoptique de la figure 5, à savoir: I: Mise en capsule - Inoculum avec premier adulte sorti + oeufs hôtes d'Ephestia kuehniella à parasiter. II: Ralentissement du développement au froid: 10-14 C 24 à 48 heures. III: Réchauffement pour regrouper la sortie des adultes: 25 C, heures. IV: Développement continu: 22 ou 25 C. V: Développement 22 ou 250C, 24 à 36 heures. VI: Diapause - Induction quarante jours à 14 C; stockage trois à douze mois à 3 C. L'étalement des éclosions de la progéniture issue de cet inoculum a été suivi à la fois pour le développement continu et le développement après stockage à 3 C pendant trois mois. Les résultats sont illustrés sur les graphiques des figures 6 et 7 o-l'on a porté en abscisses l'étalement des émergences en jours et, en ordonnées,le pourcentage d'adultes émergés. Sur ces graphiques, les courbes en trait continu concernent des capsules percées de petits orifices, tandis que les courbes en pointillés concernent des capsules ouvertes. - Dans le premier cas, il y a étalement des sorties pendant cinq jours avec environ 75 % des sorties dans les premières 48 heures: environ 48 % le premier jour, environ 27 % le deuxième jour (Fig. 6) et encore 20 % des sorties du troisième au cinquième jour. - Dans le deuxième cas, on obtient 95 % des sorties dans les premières 48 heures, avec environ 70 % le premier jour et 25 % le deuxième jour (Fig. 7). Le mode de parasitisme décrit ci-dessus permet en capsule un rapport inoculum-oeufs sains de l'hôte au moins égal à 1/15 avec superparasitisme négligeable, d'o une économie substantielle d'inoculum-capsule. En outre, l'ensemble de la présente invention permét d'obtenir une chaîne automa- tisée de production, depuis l'inoculum de base jusqu'à la capsule de lacher au champ, ladite capsule pouvant en outre produire des insectes entomophages à émergence groupée ou étalée, tout en assurant une possibilité de stockage d'élé- ments conditionnés prêts à l'emplci. Comme mentionné plus haut, les capsules nécessitent naturellement d'être percées pour permettre la libération des insectes émergés, au moyen par exemple d'un dispositif à aiguilles automatique. Le perçage doit toutefois être effectué en fonction de la modalité d'utilisation adoptée, à savoir, soit juste avant le traitement à 10-14 C, soit après le stockage à 30C faisant suite à la diapause. La description détaillée donnée ci-dessus dans le cadre du Trichogramma maidis peut naturellement s'appliquer pour la production d'un autre insecte, puisqu'il suffit alors d'adapter les conditions de températures et de durées aux caractéristiques biologiques de l'individu considéré. Il est d'ailleurs bien entendu que la présente invention n'a été décrite ft représentée qu'à titre explicatif mais nullement limitatif et qu'on pourra y apporter toute modi- fication utile, notamment dans le domaine des équivalences techniques, sans sortir de son cadre. REVENDICATIONS 1. Procédé de production en masse d'un insecte entomophage, en cage de multiplication o des oeufs d'hôtes sont présentés à un inoculum produisant des insectes adultes, caractérisé par le fait qu'on maintient à température cons- tante dnis la cage une population constante d'insectes adultes à partir d'un inoculum introduit en continu, formé de premiers oeufs h8tes parasités ayant subi une incubation préalable, on active ledit inoculum dans la cage, on présente en continu pendant un temps déterminé des seconds oeufs hôtes à parasiter par l'insecte ayant émergé dudit inoculum et que l'on alimente, on recueille en continu les seconds oeufs hôtes ainsi parasités, en vue de leur traitement ultérieur de conditionnement pour ie lacher au champ, et l'on en prélève une fraction destinée à former ledit inoculum. 2. Procédé selon la revendication 1, caractérisé par le fait que l'insecte entomophage est le Trichogramma maïdis et l'oeuf hôte est celui de Ephestia kuehniella, la tempéra- ture de la cage étant de 22C00, le temps de présentation étant de 24 heures et le temps d'activation de l'inoculum étant de cinq jours. 3. Dispositif pour la mise en oeuvre du procédé selon l'une des revendications 1 ou 2, comprenant une enceinte régulée en température constituant une cage de population (7), carac- térisé par le fait que la cage est munie d'une première bande transporteuse (A) pour l'inoculum et d'une seconde bande transporteuse (B) pour les oeufs hôtes à parasiter, guidées sur des rouleaux (12) et entraînées à la même vitesse par un groupe-moteur (1), ladite cage étant associée à des moyens extérieurs de récupération (10) des oeufs h8tes parasités et de reconditionnement (4;, 5) de la seconde bande (B), et comprenant des organes (2, 8) de formation de support et d'introduction de 1' inoculum. 4. Dispositif selon la revendication 3, caractérisé par le fait que les rouleaux (12) sont constitués de deux 1 1 rouleaux coaxiaux, l'un (13) pour la bande (v.), étroite, de l'inoculum. 1 iutre (14) Iour la bande (B) . lus large, des seconds oeufs hôtes à parasiter. 5. Dispositif selon l'une des revendications 3 ou 4, caractérisé par le fait que le moyen de récupération des oeufs hôtes parasités est constitué par un rouleau à brosse (10) recevant la bande (B), et que les moyens de recondi- tionneDient de ladite bande comprennent un organe de rinçage (4) et un organe d'encollage (5) sur ses deux faces d'oeufs hôtes sains, dont la sortie est reliée à l'entrée (11) de la cage, la durée du trajet de ladite bande à l'extérieur de la cage étant de 24 heures. 6. Dispositif selon l'une quelconque des revendications 3 à 5, caractérisé par le fait que l'organe de formation de support de l'inoculum est constitué par une spire (2) de bande étroite disposée à la sortie (19) de la cage et chargée par une fraction de seconds oeufs hôtes parasités dans la cage. 7. Dispositif selon la revendication 6, caractérisé par le fait que l'organe d'introduction de l'inoculum dans la cage est constitué par un logement (8) de la cage, contenant cinq spires de support de l'inoculum ayant subi l'incubation préalable et destinées à séjourner chacune cinq jours dans la cage avec renouvellement d'une spire toutes les 24 heures. 8. Application du procédé selon l'une des revendica- tions 1 ou 2 à la lutte biologique par lacher au champ de capsules renfermant des oeufs d'insecte entomophage, carac- térisée par le fait qu'on met en oeuvre les seconds oeufs hôtes parasités, en tant qu'inoculum en présence d'oeufs hôtes sains à l'intérieur de capsules, dans le rapport 1/15. 9. Application selon la revendication 8, caractérisée par le fait que l'on soumet les capsules à un traitement de conditionnemrent permettant soit un développement continu soit un stockage par induction de diapause. 10. Capsules obtenues au moyen du procédé selon la revendication 2 et l'application selon la revendication 8.