Brevet FR2596617A1 — publié le 19871009

La présente invention concerne une nouvelle composition phytosanitaire, utile notamment dans la lutte contre les parasites en oléiculture et plus par ticulièrement dans la lutte contre la fusariose du pal mier à huile. La fusariose est une maladie vasculaire qui sévit dans toute l'aire oléicole d'Afrique. Les surfaces concernées sont estimdes à 600 000 hectares. A un taux de mortalité important correspond la perte de rentabilité des palmeraies, dès que le seuil de 15 % des palmiers fusariés est atteint. Il existe également, des risques de transfert de la maladie vers l'Asie et l'Amérique du Sud, à l'occasion de transports clandestins de matériel végétal. Il pourrait se produire, enfin, une extension en Amérique du Sud de la maladie à partir des foyers actuels du Brésil. Contre ce parasite majeur, une sélection génétique est en cours, utilisant plusieurs géniteurs tolérants de diverses origines, aucun ne conférant l'immunité à la maladie. A l'heure actuelle, la tolérance dans une population s'exprime en pourcentage d'individus d'apparence saine avec des phases critiques, notamment lors de la plantation en zones parasitées. Pour un appoint nécessaire à la sélection génétique, dans ces phases critiques, en particulier lors de la plantation en régions dont les sols contiennent des teneurs importantes en parasite spécifique, on envisage un recours à des solutions physiologiques. Il a ainsi été démontré que la prémunition de jeunes palmiers à huile par des souches avirulentesde Fusarium sp augmente leur tolérance à la maladie. Cependant, cette stimulation est temporaire et implique d'importantes manipulations de cultures fongiques. On a aussi tenté d'utiliser un acide gras tel que l'acide arachidonique, b titre de moyen de lutte contre la fusariose, mais ce principe actif est instable b température amiante et se dégrade dans le sol. Ces solutions sont insuffisantes, d'autant qu'une autre fusariose, la fusariose du palmier dattier (ou bayoud) sévit aussi, et ce dans le bassin méditerranéen et le Maghreb occidental. Et, le problème de la fusariose n'est pas unique. D'autres parasites ont des conséquences catastrophiques, tels que celui qui provoque la chute des noix de cocotier, le mildious des solonacées ou la gommose des agrumes. Il existe un besoin réel et urgent en compositions phytosanitaires, notamment utiles dans la lutte contre les parasites d'origine fongique. La présente invention concerne plus particulièrement des compositions phytosanitaires destinées à stimuler les réactions de défense des plantes contre les attaques fongiques. Il s'agit de compositions phytosanitaires comportant au moins un acide gras, ou un dérivé d'acide gras, complexé par une ou plusieurs cyclodextrines. Parmi les acides gras, il faut citer plus particulièrement les acides gras ayant dé 14 à 24 atomes de carbone, saturés, mono-insaturés ou poly-insaturés, ces acides étant, de préférence, non ramifiés. Parmi ces acides gras, il faut citer tout particulièrement l'acide arachidonique de formule : CH3-(CH2)4-{CH=CH-CH2)3-CH--CH-{CH2)3-C02H ou d'autres acides en C20 ou C18 tels que les acides linoléique ou linolénique. Ces acides peuvent Otre utilisés seuls ou en combinaison. Parmi les dérivés de ces acides utilisables dans le cadre de l'invention, il faut citer les dérivés d'oxydation, en particulier les dérivés mono- ou dihydroxylés de l'acide arachidonique ou les alcools diéniques et triéniques dérivant des acides gras en C18. Comme cela ressortira des exemples ci-après, l'acide arachidonique est un puissant éliciteur fongique, c'est-à-dire un agent stimulant les réactions de défense du palmier à huile contre les infections fongiques, tant au niveau du traitement que de la prévention de ces infections. Des expérimentations très concluantes ont aussi été réalisées en laboratoire et en serre concernant de nombreuses autres parasitoses. Et notamment, il s'avère que le complexe selon la présente invention est particulibrement utile dans la lutte contre Fusarium Oxysporum f. sp. albedinis qui provoque la fusariose du palmier dattier. De même, diverses Phytophthora sont sensibles au complexe selon la présente invention : ainsi, par exemple, la pourriture du coeur des cocotiers et la chute des noix de coco, provoquées par Phytophthora en particulier P. palmiviora et P. hevera, peuvent être enrayées par l'application du complexe selon la présente invention. De meme, ce complexe permet de lutter contre les chancres à gommose des agrumes provoquée par des Phytophthora, notamment P. palmivora et P. parasitica. Les acides gras selon l'invention doivent être complexés avec de la ou des cyclôdextrines, sous l'une quelconque des formes a, ss, Br ou y, bien que la forme ss soit préférée. Les compositions selon l'invention peuvent également comporter d'autres éléments permettant la préparation de ces compositions ou leur mise en oeuvre sous forme solide ou liquide. La forme des compositions dépend du mode d'ap- plication envisagé, les compositions sont de préférence inoculées dans les tissus, notamment dans le pseudo bulbe du palmier à huile, ou bien apportées dans le sol au niveau des racines. Les excipients de formulation peuvent outre ceux connus en la matibre pour réaliser des compositions fluides ou des pellets, par exemple, qui se prêtent bien à l'inoculation mécanique et qui assurent une libération prolongée du principe actif. L'un des avantages du complexe selon l'invention est qu'il permet de prolonger l'action de l'éliciteur fongique au niveau des tissus des plantes traitées et de faciliter les traitements. En effet, le complexe solide d'enrobage évite la dégradation de l'acide gras insaturé dont la conservation et l'utilisation s'avèrent impossibles en climat chaud et humide. L'enrobage de l'acide arachidonique ralentit sa diffusion et assure, d'après les résultats des expériences, une persistance de l'élicitation pendant environ six mois après son incorporation dans les tissus. C'est aussi l'indice que les cyclodextrines empêchent durablement l'accès des lipoxygénases de l'hôte à ce substrat qui serait rapidement oxydé, le corollaire de cette métabolisation étant son inactivation. C'est pourquoi, on préférera également administrer les compositions au niveau des tissus plutôt que dans le sol pour limiter les pertes par dégradation du complexe. La présente invention concerne également un procédé de préparation du principe actif des compositions, à savoir le complexe acide gras ou dérivé d'acide gras/ cyclodextrine, caractérisé en ce que a) on ajoute l'acide gras ou son dérivé à une solution chaude de cyclodextrine, b) on précipite le complexe par refroidissement de la solution, et c) on récupère le précipité. L'4tape a) est effectuée, de préférence, en milieu aqueux à une température comprise entre environ 60 et 900C. Les compositions selon l'invention sont plus particulièrement utiles dans la lutte contre la fusariose du palmier à huile, tant à titre curatif qu'd titre préventif, mais leur utilisation peut être étendue à d'autres agents pathogènes. Cette méthode de lutte qui fait participer activement la plante a l'avantage de ne pas excercer de pression de sélection sur le parasite, ceci n'est peut être pas essentiel dans le cas du palmier à huile, car la résistance a un caractère polygénique, mais peut devenir important lors de la création de nouveaux hybrides ou de nouveaux clones. Les exemples suivants sont destinés à illustrer d'autres caractéristiques et avantages de la présente invention. EXEMPLE 1 PREPARATION DU COMPLEXE D'INCLUSION DE L'ACIDE ARACHIDONIOUE DANS LA ss-CYCLODEXTRINE On dissout 7 g de ss-cyclodextrine dans 100 ml d'eau distillée en portant la température à 800C sous une atmosphère inerte. On ajoute 2 g d'acide arachidonique en une fois et on laisse à 800C pendant une heure. = On baisse ensuite la température du bain de 100C par heure et on agite à température ambiante pendant la nuit. Le précipité blanc du complexe ainsi obtenu est essoré, rincé à l'eau et séché sous vide. Rendement : 88 %. EXEMPLE 2 ESSAIS DE TRAITEMENT DE LA FUSARIOSE DU PALMIER A HUILE 2.1 - Expériences Les tests sur le complexe d'inclusion de l'acide arachidonique dans la ss-cyclodextrine obtenu à l'exemple 1 ont été réalisés en serres. Ces tests comportent 12 séries d'expériences dont la durée varie de 6 & 18 semaines portant sur : - 3 lignées de génomes différents avec des plants de 5 à 8 mois, 3 3 clones, d'origines proches, avec des plants de 8 à 14 mois. Les applications d'acide arachidonique enrobé de cyclodextrines à des plants inoculds expérimentalement par un mélange de deux souches virulentes du parasite sont réalisées en même temps que - l'inoculation seule du mélange de souches1 - l'inoculation associée au traitement par l'acide arachidonique. Les essais sont conduits . soit en culture hydroponique sur une solution minérale nutritive, . soit en culture en pots sur un mélange de sable et de tourbe. 2.2 - Techniques de contrôle des effets des traitements Les appréciations de l'effet de chaque traitement par rapport à l'inoculation et par rapport au témoin non inoculé résultent . du dosage des composés phênoliques totaux, car il existe une corrélation positive entre la tolérance à la fusariose et lv'accroissement des teneurs en composés phênoliques dans les tissus . de l'analyse en chromatographie liquide à haute performance (CLHP) avec différents éluants des extraits totaux de tissus de racines, par un mélange ternaire, de polarité croissante, sur colone de silice avec détection dans l'ultraviolet. On peut détecter ainsi dans ces extraits les principales phytoalexines ou facteurs de résistance du palmier huile. EXEMPLE 3 RECAPITULATION DE RESULTATS EXPERIMENTAUX L'application du complexe d'acide arachidonique enrobé de cyclodextrines à des palmiers à huile inoculés par le parasite stimule les réactions de défense. Cette stimulation est obtenue tant par l'apport au niveau des racines que par l'introduction dans les tissus du pseudo-bulbe du palmier à huile. Pour des raisons de commodité (perforation simple) et de stabilité du complexe (bioddgradation bactérienne ou fongique dans le sol), l'incorporation au niveau du pseudobulbe est préconisée. 1 - Dosage des composés phénoliques totaux Les exemples ci-dessous indiquent la variabilité de la stimulation qui dépend de la plasticité des lignées (d'origines génétiques proches) et du clone. L'ensemble des résultats est exprimé en équivalents de g d'acide chlorogénique par g de tissus frais dans les tissus de racines. C'est une valeur globale résultant des moyennes des dosages effectués sur chaque lot. la) Lignées reproduisant le croisement L2T X D10 Les résultats regroupés dans le tableau 1 suivant ont été obtenus pour un apport du complexe d'environ 1 mg d'acide arachidonique par plant aux lignées suivantes : . semis 200 : lignée classée tolérante en prépépinière (série C.1oe1), . semis 124 : lignée classée moyennement tolérante en prépépinière (série C.2501), . semis 125 : lignée classée moyennement tolérante en prépépinière juste après le semis 124 (série C.2501). TABLEAU 1 Résultats exprimés en équivalents Age du plant lors d'acide chlorogénique Lignée Durée de l'essai Plants inoculés Plants traités Gain de l'inoculation (mois) (semaines) ( g/g) ( g) (%) Semis 200 racines 2 860 + 15 5 4 2 485 pseudo-bulbe 4 150 + 67 Semis 124 racines 3 240 + 30 8 6 2 480 pseudo-bulbe 3 700 + 50 Semis 125 racines 4 350 + 35 5 7 3 200 pseudo-bulbe 4 675 + 46 lb) Clone L2516D X L2270P-LM5305 Ce clone est issu d'un arbre bon ,producteur (le critère du niveau de tolérance moyenne b la fusariose n'est probablement intervenu que secondairement par rapport aux caractères agronomiques). On a effectué pendant 4 semaines dans les mêmes conditions expérimentales que ci-dessus des essais sur des plants âgés de 8 mois. Les résultats figurent dans le tableau 2 suivant TABLEAU 2 Résultats exprimés en équivalents d'acide chlorogénique Plants inoculés Plants traités Gain ( g/g) ( g) (%) Culture hydroponique solution 2 680 - 10 (biodégradation) 2 980 pseudo-bulbe 3 650 + 23 (on note des lésions par excès de perforation) Culture en pots racines 4 525 + 32 3 430 pseudo-bulbe 3 950 + 15 (plusieurs "flèches" lésées par la perforation) On a effectué sur des plants agés de 14 mois des infections expérimentales dans les mime. dispositions que ci-dessus. Le complexe a, cependant, seulement été incorporé dans le pseudo bulbe. Cette expérience correspond aux conditions de replantation en zones fusariées en Afrique. La serie est scindée en deux groupes, selon que l'on a effectué les analyses 12 semaines ou 18 semaines après l'inoculation. Les résultats obtenus figurent dans le tableau 3 suivant. TABLEAU 3 Délai au terme duquel Résultats exprimés en équivalents on effectue les d'acide chlorogénique ( g/g) analyses (semaines) Plants inoculés Plants inoculés Gain et traités (%) 12 10 830 15 160 + 40 18 10 780 15 730 + 46 Il convient de noter qu'à ce stade végétatif les teneurs en composés phénoliques totaux sont importantes. 2 - Analyses en CLHP sur colonne de silice On a mis au point un système analytique ternaire (hexane - acétate d'éthyle - méthanol 90) à taux d'hydratation constant du méthanol. Il permet de détecter les principales phytoalexines (facteurs de résistance) du palmier à huile. La position des phytoalexines sur chaque pic est clairement établie. La détection à 280 nm (à cause de l'acétate d'éthyle) ne rend pas compte -par défaut- de l'intensité réelle de la réaction de défense (les longueurs d'onde maximum des produits phénoliques sont différentes de 280 nm). Dans les conditions expérimentales, les phytoalexines sont réparties dans 3 pics (a, ss, y (un 4ème pic 6 contenant surtout des phénols polymérisés ou oxydés). D'une façon schématique - le pic a élue principalement des dérivés de l'acide benzoïque (benzoate d'éthyle, acides di- et tri-hydroxy benzoiques, les aldéhydes correspondants), - le pic ss élue principalement des acides cinnamiques et des esters en dérivant, en particulier, des substances appelées temporairement B et C, - le pic y correspond essentiellement à des composés phénoliques, parmi lesquels des flavones et probablement des glycosides (qui se dégradent au cours des tentatives de purification). A travers trois exemples analytiques, on indique la nodulation provoquée par l'incorporation d'acide arachidonique protégé par des cyclodextrines dans les tissus des plants d'âges différents. 2a) Chromatographie d'extraits de tissus de racines de plants de la lignée S 200 (bonne tolérance en prépéipnière ; Elants de 5 mois lors de l'inoculation ; incubation : 4 semaines) : Le complexe incorporé au sol provoque une stimulation modérée du pic a, plus importante des pics ss et y. Le complexe introduit dans les tissus active considérablement les synthèses correspondants aux pics cx, ss et y, donc des phytoalexines benzoïques et cinnamiques. 2b) Chromatographie d'extraits de tissus de racines de plants de la lignée S 124 (moyenne tolérance en prépépinière ; plants de 8 mois lors de l'inoculation ; incubation 6 semaines) : Il apparaît nettement que pour les plants inoculés, la réaction est moindre que dans le cas de la lignée S 200. L'incorporation du complexe arachidonique au sol conduit & quadrupler le pic a et à doubler la surface du pic ss, tandis que les pics y et 6 semblent régresser (indication d'une synthèse sélective des phénols). L'incorporation du complexe arachidonique dans les tissus accroît davantage les synthèses actives : le pica est multiplié par 5, le pic ss est multiplié par 3 approximativement. 2c) Chromatographie d'extraits de tissus de racines de plants du clone L2516D X L2270P-LM5305 âgés de 14 mois lors de l'inoculation, c'est-à-dire correspondant au stade reolantation en zones fusariées. Les chromatographies comparent les plants inoculés à ceux traités et inoculés simultanément. (Des appareils différents ont été utilisés pour les analyses (1 mv et 10 mv & cause de pannes) les enregistrements à 12 et 18 semaines ne sont donc pas directement comparables). Réactions à 12 semaines L'intensité de la première partie du pic a passe d'une atténuation 0,32 à 2,56, soit, est multipliée par 8 ; on observe un doublement du pic ss (2,56 pour le plant traité au lieu de 1,28). C'est l'indice d'une stimulation prolongée des mécanismes de défense contre l'agent pathogène. Réactions à 18 semaines L'intensité du pic a a diminué au cours de cette période : sa surface correspond approximativement à celle des plants inoculés multipliée par 3. Par contre la surface du pic ss semble double de celle correspondant aux plants inoculés : la synthèse de composés phénoliques des groupes cinnamiques et flavonoides semble plus persistante que celle des dérivés de l'acide benzoïque. On ignore b ce stade s'il-reste des propagules vivantes du parasite dans les tissus. Comparées b celles des lignées S 124 à 6 semaines et b S 200 à 4 semaines, ces chromatographies, après 18 semaines d'infection, révèlent des réactions similaires or, il s'agit d'un clone de tolérance moyenne produit essentiellement pour ses caractères agronomiques. En conclusion, le complexe acide arachidonique/ cyclodextrine manifeste une propriété élicitrice, tant sur des lignées que sur un clone. La persistance de l'effet du complexe sur les réactions de défense de l'hôte est bonne après 18 semaines d'infection en serre (la dose d'inoculum étant quadruple de celle utilisée pour les tests de screening en prépépinières). Les plants1 en âge d'être plantés dans les anciennes palmeraies fusariées, réagissent positivement. Ce traitement devrait permettre de surmonter une crise parasitaire, au stade plantation, en appoint de la sélection. La perte de 10 % des arbres rend une plantation non rentable-sur 30 ans : la pérennité de l'arbre est un enjeu important. REVENDICATIONS 1) Composition phytosanitaire, utile notamment dans la lutte contre les parasites en oléiculture, caractérisée en ce qu'elle, comporte au moins un acide gras, ou un dérivé d'acide gras, complexé par de la ou des cyclodextrines. 2) Composition phytosanitaire selon la revendication 1, caractérisée en ce que l'acide gras est l'acide arachidonique. 3) gompositlon phytosanitaire selon l'une des revendications 1 et 2, caractérisée en ce que les dérivés d'acide gras sont des produits d'oxydation de l'acide arachidonique tels que des dérivés mono- ou di-hydroxylés. 4) Composition phytosanitaire selon la revendication 1, caractérisée en ce que l'acide gras est un acide en C18 tel' que l'acide linoléique ou l'acide linolénique. 5) Composition phytosanitaire selon la revendication 1, caractérisée en ce que les dérivés d'acide gras sont des produits d'oxydation d'acide gras en C18 ou des alcools diénivues ou trieniques correspondants. 6) Composition phytosanitaire selon l'une des revendications 1 à 5, caractérisée en ce que la cyclodextrine utilisée est la 13-cyclodextrine. 7) Procédé de préparation du principe actif des compositions selon l'une des revendications 1 à 6, à savoir le complexe acide gras ou dérivé d'acide gras/ cyclodextrine, caractérisé en ce que a) on ajoute l'acide gras ou son dérivé à une solution chaude de cyclodextrine, b) on précipite le complexe par refroidissement de la solution, et c) on récupère le précipité. fi) Procédé selon la revendication 7, caractérisé en ce que l'étape a) est conduite en solution aqueuse s environ 60-900C. 9) Application d'une composition selon l'une des revendications 1 à 6 au traitement et à la prévention des maladies fongiques des végétaux, caractérisée en ce que cette composition est inoculée dans le sol au voisinage des racines du végétal à traiter et/ou est injectée dans les tissus du végétal. 10) Application selon la revendication 9 caractérisée en ce que le végétal traité est le palmier à huile et 'la maladie fongique est la fusariose, et en ce que la composition est inoculée dans le pseudo bulbe. 11) Application selon la revendication 9, caractérisée en ce que le végétal traité est le palmier dattier et la maladie fongique est la fusariose. 12) Application selon la revendication 9, caractérisée en ce que le végétal traité est le cocottier et la maladie fongique est provoquée par Phytophthora. 13) Application selon la revendication 9, caractérisée en ce que la maladie fongique est la gommose des agrumes provoquée par Phytophtora.