Brevet FR2593705A1 — publié le 19870807

La présente invention concerne une composition pour l'interruption de la grossesse comprenant des anticorps monoclonaux et plus particulièrement des anticorps reconnaissant l'hormone chorionique gonadotrope ou un peptide de structure analogue. L'hormone chorionique gonadotrope (hCG) se compose de deux sous unitésva(ahCG)etss(sshCG) sur lesquelles se branchent des chaines glucidiques. On a représente sur les ìgu- res 1 et 2 la séquence des acides aminés des chaises OC et e de l'hormone chorionique gonadotrope. La séquence des acides amines a été décrite par Morgan F.J. Birken S; Canfieid R.E. The amino acid sequence of human chorionic gonadotropin, J. Biol. Chem. 250 5247 1975. L'hCG, presente à des taux très faibles (quelques picogrammes par millilitre) dans le sérum dtindividus normaux, est détectable dans le plasma de femme enceinte 6 à 8 jours après la fécondation. Le taux d'hCG augmente considérablement pendant le premier trimestre de la grossesse pour atteindre à la fin de celle-ci des taux compris entre 70 000 et 200 000 mUI/ml. Bien que le rôle biologique de 1 'hCG ne soit pas encore totalement connu il semble que son rôle principal est d'être le signal envoyé par l'ovule fécondé au corps jaune pour que celui-cimaintienne une synthèse d'hormones steroidien- nes. Pour avoir une action biologique, 1 'hCG doit d'abord se fixer sur des récepteurs présents dahs l'ovaire, essentiellement au niveau du corps jaune. Il a été possible d'identifier les régions plus particulièrement indispensables à une réponse b-iologique. Ces régions sont situees sur la sous-unite sshCG qui confère à cette hormone ses propriétés particulières. Le site de liaison de l'hormone à son récep teur serait situé dans la région des acides aminés 39 à 71 (S. Ramakrishnan, C. Das, G.P. Talwar,, Recognition of the beta. subunit of human chorionic gonadotropin and sub-determinants by target tissue receptors, Biochem J.,176 : 599602, 1978).D'autres régions et notamment l'extrémité carboxyterminale de la ShCG semblent avoir un râle dans l'induc- tion d'une réponse biologique, même si elles sont situées en dehors du site de liaison hormone-récepteur : en effet des anticorps dirigés contre la région 109-145 neutralisent l'action biologique de l'hCG (V.V. Stevens, J.E. Powel', A.C. Lee. Immune responses to carboxyl-terminal peptides of the hCG beta subunit. In Immunology of Reproduction, T.G. Wegmann, T.J. Gill, C.D. Cumming Eds, Oxford University press, New-York, 1983).. Le mécanisme d'une telle inhibition n'est pas totalement élucidé. On a maintenant découvert que l'administration à des femmes enceintes d'anticorps monoclonaux reconnaissant l'hCG ou un peptide de structure analogue permettait d'interrompre précocement une grossesse. La présente invention a ainsi pour objet une composition pour l'interruption de la grossesse, comprenant à titre d'ingrédient actif des anticorps monoclonaux dirigés contre un antigène choisi parmi l'hormone chorionique gonadotrope , une sous unité de celle-ci, et un peptide correspondant à une séquence peptidique d'au moins 7 acides aminés de l'hormone chorionique gonadotrope ou un mélange de ces anticorps. Les anticorps monoclonaux utilisés dans la présente invention peuvent être notamment des anticorps monoclonaux dirigés contre - l'hormone chorionique gonadotrope - la sous unité &alpha; de l'hormone chorionique gonadotrope - la sous unité ss de l'hormone chorionique gonadotrope - un peptide synthétique correspondant à une séquence peptidique d'au moins .7 acides aminés de lhor- mone chorionique gonadotrope Les anticorps monoclonaux antipeptide sont avantageusement des anticorps monoclonaux dirigés contre un peptide synthétique correspondant à une séquence comprenant de 7 à 70 acides aminés de l'hormone chorionique gonadotrope. ; en particulier contre un peptide synthétique correspondant à une séquence de la chaine ss de l'hormone chorionique gonadotrope, et plus spécialement contre un peptide synthétique correspondant à la séquence 109-145 de la chaine ss de 1 'hor- mone chorionique gonadotrope ou à une sous séquence de celle-ci d'au moins 7 acides aminés ou contre un peptide synthétique correspondant à la séquence 39-71 de la chaine ss de 1 'hormone chorionique gonadotrope ou à une sous séquence de celle-ci d'au moins 7 acides aminés; ou encore contre un peptide correspondant à une séquence peptidique de la sous unité a et plus spécialement contre un peptide correspondant à une séquence de l'extrémité carboxy terminale. Certains des anticorps monoclonaux utilisables dans la présente invention ont déjà été obtenus, à savoir des anticorps monoclonaux dirigés contre l'hormone chorionique gonadotrope (P. Berger et coll. American J. of Reproductive Immunology 5,157,60 1984), des anticorps monoclonaux dirigés contre la sshCG (D. Bellet et coll. Hybridoma 1,218,1982) et des anticorps monoclonaux dirigés contre un peptide synthétique correspondant à la séquence 109-145 de lah hCG (D. Bellet et coll. Endocrinology, Vol.115, 330, 1984). Les anti corps monoclonaux dirigés contre un peptide synthétique correspondant à une séquence peptidique de la hCG et utilisés dans la présente invention peuvent d'une maniere générale être obtenus a partir d'un peptide s.ynth- tique correspondant à une séquence peptidique de la hCG par la succession des étapes suivantes: - couplage du peptide à un agent immunogène, tel que l'ana toxine tétanique par un agent de couplage tel que le gluta raldehyde, - immunisation d'un mammifère tel que des souris BALB/c ou des souris "High responder" (souche Biozzi), avec le conjugué précédemment obtenu. - separation des lymphocytes spléniques. - fusion des lymphocytes spléniques séparés avec des cellu les de myélome, par exemple des cellules de myélome de sou ris, - culture et sélection des hybridomes obtenus, - culture des hybridomes sélectionnés pour produire des anticorps, et - séparation des anticorps du milieu de'culture. Les peptides utilises dans la présente invention peuvent être notamment obtenus par synthese en phase soli de. (Merrifield RB 1963 Solid phase peptide synthesis. The synthesis of tetrapeptide. J. Am Chem Soc 85:2149) Les anticorps monoclonaux dirigés contre l'hCG, l'OChCG ou lass hCG peuvent être obtenus d'une manière analogue mais sans couplage avec un agent immunogène, c'est à dire par immunisation directement avec l'hCG, l' hCG ou laB hCG. Des anticorps monoclonaux avantageux peuvent être obtenus après immunisation mixte c'est à dire de manière analogue mais en effectuant des immunisations successives avec des antigènes différents choisisparmi l'hCG, la hCG, lahCG et un peptide précédemment défini couplé avec un agent immunogène. I1 a été découvert que ces anticorps monoclonaux à immunisation mixte, qui reconnaissent essentiellement l'un des antigènes, présentent généralement des affinités plus grandes que les anticorps monoclonaux obtenus après immunisation avec le même antigène. On peut en outre utiliser des mélanges d'anticorps monoclonaux, et notamment des mélanges d'anticorps anti hCG ou anti FhCG et d'anticorps monoclonaux antipeptide précédemment définis. Le rapport des différents anticorps n'est pas déterminant. Ils peuvent être par exemple utilisés en des proportions sensiblement équivalentes. D'une manière générale on utilise de préférence dans la présente invention les anticorps monoclonaux (ou des mélanges) les plus actifs. La sélection de ces anticorps peut être effectuée en fonction de différents résultats suivants 1. L'affinité Ka de l'anticorps pour l'hCG ou une de ses sous unités, déterminée par une technique radioimmunologique (RIA) (Bellet et coll.Hybridoma, 1982, 1, 218). Ceux ayant la plus grande affinité sont retenus. 2. L'étude de la compétition entre hCG et anticorps vis à vis du récepteur par étude in vitro sur les testicules de rat selon la méthode décrite par R.P. MILLES et coll. Preferential masking by the receptor of immunoreactive sites on the alpha subunit of human choriogonadotropin. Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 80 : 7375-7379; 1983 . Les anticorps entrant en compétition sont retenus en priorité. 3, L'étude in vitro du déplacement de hCG liée au récepteur (testicules de porc) par les anticorps anti-hCG. La technique est la suivante - on incube les cellules de Leydig porcine 40 minutes avec hCG (50 ng/ml), - on lave les cellules avec le tampon d'incubation glycine 50 mM, NaCl 100 mM pH 3, et on ajoute les anticorps pendant 16 minutes, - on lave les cellules avec le tampon PBS 20 mM NaCl + BSA 0,5 g/l pH 7,4, - on dose les sites récepteurs restant en surface en ajoutant 125 I-hCG (; 100.000 cpm) et par incubation à + 15"C pendant 3 heures, - on lave à nouveau les cellules et on compte la radioactivité fixée après récupération des cellules. Les anticorps déplaçant la liaison sont retenus. 4. L'étude in vivo de l'inhibition de la croissance de l'utérus de rate par injection d'anticorps selon la méthode décrite par V.C. STEVENS, et coll. Immune responses to carboxyl-terminal peptides of the hCG betasubunit das Immunology of reproduction. T.G. Wagmann, T.J. Gill III editors, Oxford University press Les anticorps bloquant in vivo la croissance de l'utérus sont retenus. La présente invention a également pour objet - les nouveaux anticorps ainsi obtenus et notamment des anticorps monoclonaux dirigés contre un peptide synthétique correspondant à la séquence 39-71 de la chaine ffi de l'hormone chorionique gonadotrope, ou à une sous séquence de celle-ci d'au moins 7 acides aminés, ainsi que des anticorps monoclonaux mixtes, - un procédé de production de ces anticorps, tel que défini ci-dessus, - des hybridomes produisant des anticorps et - un procédé d'obtention de ces hybridomes. La présente invention a également pour objet un procédé pour l'interruption de la grossesse qui consiste à administrer à une femme enceinte une quantité efficace d' anticorps monoclonaux dirigés contre un antigène choisi parmi l'hormone chorionique gonadotrope, une sous unité de celle-ci et un peptide correspondant à une séquence peptidique d'au moins 7 acides aminés de l'hormone chorionique gonadotrope, ou un mélange de ces anticorps. La présente invention trouve une application notamment dans le cas de grossesse extra-utérine et pour l'interruption volontaire de grossesse, où la présente invention permet d'éviter à la fois l'anesthésie générale et tout geste chirurgical. Les compositions selon la présente invention peu vent être administrees par voie parentérale, notamment par voie intraveineuse ou intramusculaire. Les compositions peuvent être injectées sous forme de solution, notamment dans du soluté physiologique. Chez la femme la dose d'anticorps administrée est fonction du taux d'hCG circulante. Elle sera avantageusement dans la gamme suivante dose (ug)=(lO à 1000)x(taux hCG circulantecen ng/ml de sérum) La détermination préalable habituelle du taux d'hCG circulante permet donc aisément de calculer la dose d'anti corps à injecter. Les exemples suivants illustrent la préparation des anticorps monoclonaux. EXEMPLE 1 Préparation d'anticorps monoclonaux dirigés titre un peptide correspondant à la séquence peptidique 39-71 de la thCG. I - Synthèse d'un peptide correspondant à la séquence peptidique 39-71 de la FhCG. Ce peptide répond à la formule H2N - Pro - Thr - Met - Thr - Arg - Val - Leu - Gln - Gly Val - Leu - Pro - Ala - Leu - Pro - Gln - Val - Val - Cys Asn - Tyr - Arg - Asp - Val - Arg - Phe - Glu - Ser - Ile Arg - Leu - Pro - Gly - COOH. I.1 - Synthèse du peptide Le peptide est synthétisé en plusieurs étapes de type répétitif, en phase solide. L'opération est réalisée sur un synthétiseur de peptide utilisant des acides aminés protégés et des résines benzydrylamine. En fin de manipulation, le peptide est séparé de la résine par de l'acide fluorhydriaue. I.2 - Purification et analyse du peptide La purification est assurée par un système préparatoire par chromatographie liquide haute performance. La séparation du peptide de ses éventuels contaminants est effectuée par filtration sur gel TSK G 2000 puis séparation sur une résine échangeuse d'ions TSK-DEAE. Ces deux procédés séparant les peptides en fonction de leur masse moléculaire et de leur charge ionique permettent d'obtenir une pureté supérieure à 97%. L'analyse du peptide est réalisée après hydrolyse acide. Les acides aminés sont séparés sur une résine échangeuse de cations GLENCOMM6O. L'analyse des acides aminés confirme la formule du peptide. L'identité du peptide est confirmée par spectrométrie de masse FAB. II - Couplage du peptide Le couplage du peptide à un agent immunogène (anatoxine tétanique) est assurée par une technique utilisant le glutaraldéhyde en tant qu'agent de couplage selon la technique décrite par Audibert F.,Jolivet M., Chedid L, Sela M (1982 Successful immunization with a totally synthetic diphteria vaccine. Pro Natl Adad Sci USA 79-5042). III - Immunisation Le conjugué (peptide 39-71 $hCG - Anatoxine tétanique) est injecté a des souris Biozzi HR (High Responder) â- gées de 6 semaines a la dose de 100 ug en sous-cutané et en présence d'adjuvant complet de Freund. Un rappel est ensuite effectué au bout de 4 mois, 9 jours avant la fusion. en présence d'adjuvant incomplet de Freund, en sous-cutanG et à la dose de 100 ug. Trois jours avant la fusion cellulaire, un dernier rappel est réalisé par injection intraveineuse du conjugué à la dose de 100 vg. Iv - Production des hybridomes La production des hybridomes est effectuée par une technique de fusion cellulaire au PEG (polyéthylène-glycol). Elle comporte les étapes suivantes 1. Sacrifice et dissection de la souris Après ouverture du péritoine, la rate est prélevée. 2. Préparation des lymphocytes : La rate est dilacérée dans le milieu de culture RPMI, sans sérum. Les lymphocytes sont numérés en solution de Turk. 3. Préparation des cellules du myélome (lignée P3 NS l/l-Ag 4-1) Les cellules sont entretenues en milieu RPME avec 10 % de sérum de veau foetal (SVF). Une heure avant la fusion, elles sont lavées en RPMI. 4. Hybridation cellulaire 50 à 100x106 lymphocytes de la souris sont mélangés avec 12.5 a 25xi06 millions de cellules de myélome et centrifugés. Le surnageant est alors décanté et on ajoute 0,4 ml de PEG 1000 à 40 %. Après trois minutes de contact a 37 "C la suspension cellulaire est centrifugee pendant cinq minutes à faible vitesse (800 tours/minute). Les cellules sont ensuite remises en suspension doucement dans 5 ml de RPMI sans SVF, puis apres un nouveau lavage dans du RPMI + SVF 10 Z 5. Mise en culture Les cellules sont réparties dans des plaques de microculture a raison de 3x106 cellules/puits. Le lendemain, on ajoute au milieu de culture du milieu RPMI contenant de l'aminoptérine (milieu HAT).Tous les deux jours le milieu de culture est changé et remplacé par dumilieu neuf. Deux semaines après, le milieu HAT est arrêté : des clones sont visibles dans de nombreux puits. V - Détection des anticorps monoclonaux La détection des anticorps monoclonaux antipeptides 39-71 sshCG s'effectue par deux techniques V.1 - Technique radioimmunologique (RIA) Elle permet de déceler les clones producteurs d'anticorps monoclonaux possèdant une grande affinité contre l'agent immunogène. Dans le cas présent, l'antigène utilisé est le peptide 39-71 t3hCG marqué à l'iode 125 (1251). La détection est aussi réalisée avec la sous unité phCG marquée à l'iode 125. Le principe est le suivant : le surnageant de culture est mis en presence de l'antigène radiomarque et apres 18 h d'incubation à 4 "C, le complexe antigène-anticorps est précipité par le PEG a 20 Z. V.2 - Technique immunoenzymatique (ELISA) : Le surnageant de culture est incube a 4 OC pendant 18 h dans des plaques de microtitration dont chaque puits a été pviéalablement recouvert de l'antigène. Après plusieurs lavages, un second anticorps (lapin anti-souris) couplé à la péroxydase est ajouté. Après incubation et lavages, la réaction enzymatique est déclenchée par l'addition du substrat (O-phénylène diamine). L'adsorption est lue a 492 nm. VI - Production et purification des anticorps monoclonaux : Les tests de détection permettent de selectionner un certain nombre de clones secrétant des anticorps monoclonaux de forte affinité. VI.1 - Production Les hybridomes sont clones deux fois par dilution multiple en plaques de microcultures. A chaque étape, les puits sont testés pour leur immunoreactivité et une partie des cultures est congelée. En fin de clonage, le ou les hybridomes sont cultives de façon extensive en boite de culture. La production d'anticorps monoclonaux en grande quantité est assurée par le passage des cellules (5.105 cellules) dans le péritoine de souris Nude. Après 15 jours, l'ascite est recueilli et les anticorps purifiés. VI.2 - Purification Les ascites sont précipités par le sulfate d'ammonium a 50 Z, puis le précipité, repris par de l'eau distillée, est dialysée contre un tampon phosphate 0.1 M pH 8. Une chromatographie d'affinité sur protéine-A Sépharose CL-4B permet ensuite de purifier électivement l'anticorps. L'éluat contenant l'anticorps subit alors trois opérations - dosage de proteine, - controle d'immunoréactivité, - concentration par filtration (Amicon PM 30). L'anticorps est conservé soit congelé, soit lyophylys. - VII - ContrôTe des preparations galéniques d'anticorps YIN.1 - Filtration Les anti corps monoclonaux sont filtres sur filtre millipore 0,22 vm VII.2 - Bactériolo-gie-Virologie Chaque préparation subit un contrôle bactériologique (examen optique après coloration, mise en culture sur mi lieux classiques) et virologique. VU 1.3 - Recherche de pyrogènes La présence de pyrogenes est recherchée par le test au Limulus. EXEMPLE 2 Préparation d'anticorps monoclonaux dirigés contre un pep tide correspondant à la séquence peptidique 109-145 de la hCG (FB12). Ils sont préparés comme à l'exemple 1, à partir de la séquence peptidique 109-145 de la sshCG. Une lignée d'hybridomes sélectionnée pour l'ob- tention de ces anticorps a été déposée à la Collection Nationale des Cultures de- Microorganismes de l'Institut Pasteur de Paris (CNCM) sous le n 1-413. Les anticorps obtenus reconnaissent la fhCG et l'hCG (détermination selon la méthode décrite par J.M. Bidart et coll. Journal of Immunology, 134, 1985, p.457). L'affinité est Ka = 2,3.109 1/mole. EXEMPLE 3 Préparation d'anticorps monoclonaux dirigés contre la phCG par immunisation mixte avec la FhCG et un Peptide correspondant à la séquence peptidique 109-145 de la (3hCG (FEr 11). On immunise des souris BALB/c suivant le programme suivant Jour Dose Immunogène Adjuvant Voie J.0 15 ru phCG native adjuvant de SC Freund complet J.+ 8 mois 100yg fragment 109- adjuvant de SC 145 de la BhCG Freund couplé à llano- incomplet toxine tétanique J. + 15 mois 15 pg sshCG native adjuvant de SC etlO jours av- Freund ant la fusion incomplet J. +15 mois 15 pg phCG native IV (3 jours avantla fusion) La production des hybridomes et des anticorps est ensuite effectuée comme décrit à exemple 1. Une lignée d'hybridomes sélectionnée a été déposée à la CNCM sous le n I - 414. Les anticorps obtenus reconnaissent la (3hCG. L'affinité vis-à-vis de la BhCG est Ka = 0,4.109 l/mole. EXEMPLE 4 Préparation d'anticorps monoclonaux dirigés contre la hCG (HT 13). On immunise des souris Biozzi HR (High Responder) âgées de 6 semaines suivant le protocole suivant - 6 mois avant la fusion : 10 microgrammes de hCG par voie sous cutanée avec adjuvant de Freund complet (FCA) - 9 jours avant la fusion:l0 microgrammes de hCG par voie sous cutanée avec adjuvant de Freund incomplet (FIA) - 3 jours avant la fusion:l0 microgrammes de hCG par voie intra-veineuse. La production des hybridomes leur sélection et la production des anticorps monoclonaux sont ensuite effectuées comme décrit à l'exemple 1. Une lignée d'hybridomes sélectionnée a été déposée à la CNCM sous le n I-490. Les anticorps reconnaissent l'hCG, la ahCG et la sshCG. L'affinité est supérieure à 1010 1/molle. REVENDICATIONS 1. Composition pour l'interruption de la grossesse comprenant à titre d'ingrédient actif des anti corps monoclonaux dirigés contre un antigène choisi parmi l'hormone chorionique gonadotrope, une sous unité de celle-ci et un peptide correspondant à une séquence peptidique d'au moins 7 acides aminés de l'hormone cho rionique gonadotrope, ou un mélange de ces anticorps. 2. Composition selon la revendication 1, caractérisée en ce que les anticorps monoclonaux sont dirigés contre llhormone chorionique gonadotrope. 3. Composition selon la revendication 2, caracté- risée en ce que les anticorps sont produits par une lignée d'hybridomes déposée à la CNCM sous le n0 1-490. 4. Composition selon la revendication 1, caracte- risée en ce que les anticorps monoclonaux sont dirigés contre la sous unité F de l'hormone chorionique gonadotrope. 5. Composition selon la revendication 1, caractérisée en ce que les anticorps monoclonaux sont dirigés contre la sous unité a de l'hormone chorionique gonado trope. 6. Composition selon la revendication 1, caracté- risée en ce que les anticorps monoclonaux sont dirigés contre un peptide synthétique correspondant à une séquence peptidique de 7 à 70 acides aminés de 1hormone chos nique gonadotrope. 7. Composition selon la revendication 1 ou la revendication 6, caractérisée en ce que' les anticorps monoclonaux sont dirigés contre un peptide synthétique correspondant à une séquence peptidique de la chaîne P de l'hormone chorionique gonadotrope. 8. Composition selon la revendication 7, caracté- risée en ce que les anticorps monoclonaux sont dirigés contre un peptide synthétique correspondant à la séquence 109-145 de la chaîne S de l'hormone chorionique gonado trope ou à une sous-séquence de celle-ci dlau moins 7 acides aminés. 9. Composition selon la revendication 7, caracté risée en ce que les anticorps monoclonaux sont dirigés contre un peptide synthétique correspondant à la séquence 39-71 de la chaîne g de l'hormone chorionique gonado- trope ou à une sous séquence de celle-ci d'au moins 7 acides aminés. 10. Composition selon la revendication 1 ou la revendication 6, caractérisée en ce que les anticorps monoclonaux sont dirigés contre un peptide correspondant à une séquence peptidique de la chaine a de l'hormone chorionique gonadotrope. 11. Composition selon la revendication 10, caractérisée en ce que les anticorps monoclonaux sont dirigés contre un peptide correspondant à une séquence peptidique de l'extrémité carboxy-terminale de la chaîne a de l'hormone chorionique gonadotrope. li Anticorps monoclonaux dirigés contre un pep tide synthétique correspondant à la séquence 39-71 de la chaîne 8 de l'hormone chorionique gonadotrope, ou à une sous séquence de celle-ci d'au moins 7 acides amines. 1N Procédé de production d'anticorps monoclonaux sXQnwla revendication12, caractérisé en ce qu'un peptide correspondant à la séquence 39-71 de la chaine F de llhor- mone-chorionique gonadotrope ou à une séquence d'au moins 7 acides aminés de ce peptide est couple à un agent immu nogène, un mammifère est immunisé avec le conjugué obtenu, les lymphocytes spléniques sont séparés et fusionnés avec des cellules de myélome, les cellules d'hybridomes ainsi obtenues sont cultivées et sélectionnées, puis les hybri domes sélectionnés sont cultivés pour produire des anti corps et les anticorps sont séparés du milieu de culture. 14. Hybridomes caractérisés en ce qu'ils produisent des anticorps monoclonaux dirigés contre un peptide syn thétique correspondant à la séquence 39-71 de la chaine P de l'hormone chorionique gonadotrope ou à une sous sé quence de celle-ci d'au moins 7 acides aminés. 15. Procédé d'obtention d'hybridomes selon la revendication 14, caractérisé en ce qu'un peptide corres pondant à la séquence 39-71 de la chaîne P de l'hormone chorionique gonadotrope ou à une séquence d'au moins 7 acides aminés de ce peptide est couplé à un agent immu nogène, un mammifère est immunisé avec le conjugué obtenu, les lymphocytes spléniques sont séparés et fusionnés avec des cellules de myélome pour obtenir des hybridomes. 16. Procédé de production d'anticorps monoclonaux dirigés contre un antigène choisi parmi l'hormone chorionique gonadotrope, une sous unité de celle-ci et un peptide correspondant à une séquence peptidique d'au moins 7 acides aminés de l'hormone chorionique gonadotrope, caractérisé en ce que l'on immunise un mammifère successivement avec des antigènes différents choisi parmi l'hormone chorionique gonadotrope, une sous unité de celle-ci ou un conjugué obtenu par couplage d'un peptide correspondant à une séquence peptidique d'au moins 7 acides aminés de l'hormone chorionique gonadotrope avec un agent immunogène, les lymphocytes spléniques sont séparés et fusionnés avec des cellules de myélome, les cellules d'hybridomes ainsi obtenues sont cultivées et sélectionnées, puis les hybrido mes sélectionnés sont cultivés pour produire des anticorps et les anticorps sont séparés du milieu de culture. 17. Procédé de production d'anticorps monoclonaux selon la revendication 16, caractérisé en ce que l'on immunise successivement un mammifère avec la sous unité * de l'hormone chorionique gonadotrope et avec un conjugué obtenu par couplage d'un peptide synthétique correspondant à la séquence 109-145 de la chaînez de l'hormone chorionique gonadotrope avec un agent immunogène. 18. Procédé d'obtention d'hybridomes, caractérisé en ce qu'on immunise successivement un mammifère avec la sous unité F de l'hormone chorionique gonadotrope et avec un conjugué obtenu par couplage d'un peptide correspondant à la séquence 109-145 de la chaîne P de l'hormone chorionique gonadotrope avec un agent immunogène, les lymphocytes spléniques sont séparés et fusionnés avec des cellules de myélome pour obtenir des hybridomes.