Brevet FR2595141A1 — publié le 19870904

NOUVELLES COMPOSITIONS DE LIPOSOMES CONTENANT UN DES ELEMENTS D'UNE REACTION AFFINE. PROCEDE POUR LEURS PRE PARATIONS ET UTILISATION DE CES COMPOSITIONS POUR LA DETECTION DE L'ELEMENT COMPLEMENTAIRE DE LA REACTION AFFINE. NOTAMMENT D'UN ANTIGENE PARASITAIRE. L'invention a pour objet de nouvelles compositions de liposomes contenant un des éléments d'une réaction affine. Elle concerne également un procédé de préparation de telles compositions. Elle concerne enfin l'utilisation de telles compositions en vue de la détection de l'un des éléments complémentaires d'une réaction affine, notamment d'un antigène parasitaire. On entend dans ce qui suit par "élément" toute substance, composition, particule, notamment d'origine parasitaire, et par "contre-élément" toute substance, composition ou particule capable d'interagir avec "l'élément" dans une réaction affine. De façon non limitative, "élément" et "contre-élément sont constitués par un antigène et un anticorps mutuellement complémentaires ou vice-versa. La détection de la présence d'éléments ou de contre-éléments d'une réaction affine dans un milieu biologique revêt aujourd'hui une grande importance et diverses techniques ont été proposées pour y parvenir. I1 est connu par exemple, de rechercher un antigène ou un anticorps par la technique dite d'immunofluorescence. Ce procédé, qui permet une détection fine, reste cependant subjectif dans son interprétation, la fluorescence n'étant pas appréciée de la même façon par des personnes différentes. Un inconvénient majeur de cette technique, dans le cas où elle est utilisée pour la détection des parasites, réside dans le fait qu'elle nécessite l'utilisation d'une grande quantité de parasites, qui peuvent ne pas être toujours disponibles, et un équipement important. L'immofluorescence nécessite enfin un traitement chimique des parasites pouvant en tramer une modification de la structure de certains antigènes ainsi qu'une altération de leurs propriétés biologiques. D'autres procédés ont été proposés pour la détection d'antigènes ou d'anticorps. On mentionnera, par exemple, la technique dite d'hémagglutination, où la détection repose sur la formation des agglutinats que forme l'antigène recherché avec l'anticorps présent dans le réactif (ou à l'inverse l'anticorps recherché avec l'antigène présent dans le réactif). On utilise souvent en tant que support dans cette technique des globules rouges de moutons préalablement fixés. L'hémagglutination, qui ne nécessite pas l'utilisation de grandes quantités de réactifs, présente cependant l'inconvénient, (surtout dans le cas des para sites) d'aboutir à de nombreux faux positifs, du fait de l'introduction de globules rouges. Ceux-ci possèdent en effet des déterminants antigéniques pouvant réagir avec l'élément ou le contre-élément recherchés. Il a été également décrit dans la demande de brevet américain, publiée sous le numéro : 83/01571, la conjugaison covalente d'un antigène avec un liposome, dans le but de détecter la présence éventuelle de l'anticorps complémentaire dans un milieu biologique. Cette conjugaison peut se réaliser de différentes façons. Elle peut d'abord résulter d'un couplage chimique covalent, auquel cas l'antigène est fixé à la surface du liposome. Le pourcentage d'antigène fixé reste cependant faible, do fait des pertes entrainées par les différentes réactions chimiques nécessaires à cette fixation covalente. L'antigène se présente en général dans une conformation différente de celle qu'il connaît "in vivo", et est de ce fait souvent "masque vis-à-vis de l'anticorps qui lui est complémentaire. Au mieux l'affinité de l'anticorps pour l'antigène subsiste, mais à l'état diminué. Le site actif important de l'antigène peut aussi être impliqué dans les réactions de la fixation covalente à la surface du liposome. Il peut alors en résulter une perte complète de sa réactivité avec l'anticorps complémentaire. Les auteurs du brevet ont également envisagé d'associer un antigène avec un liposome, en utilisant le caractère généralement hydrophobe de l'antigène, par mise en contact de l'antigène avec des liposomes préalablement préparés et en suspension dans une solution les contenant, Cependant, les auteurs de ce brevet font état de divers inconvénients qui rendent cette technique peu utilisable en pratique. Ceux-ci résident principalement dans le fait qu'un faible pourcentage d'antigènes sont ainsi adsorbés et dans le fait que l'association ainsi réalisée est instable et rend la réaction non reproductible. La présente invention a pour but de remédier aux inconvénients énumérés ci-dessus en proposant une nouvelle composition de liposomes, simple à préparer et dont l'utilisation, notamment dans un test de détection des antigènes parasitaires, permette au technicien qui l'effectue une lecture à l'oeil nu, rapide et sûre. L'invention concerne également les liposomes eux-mêmes, tels que modifiés selon l'invention. La présente invention concerne en tant que produit une nouvelle composition de liposomes de préférence colorés, au sein d'une solutioncomprenant l'un des éléments complémentaires d'une réaction affine associé avec la surface des liposomes, sans aucun couplage chimique, caractérisée par le fait que l'élément est ancré à la surface desdits liposomes, le cas échéant, incorporé en partie dans l'épaisseur des pellicules lipidiques des liposomes, cet ancrage étant suffisamment stable pour que l'élément puisse réagir avec le contre-élément qui lui est spécifique sans se séparer desdits liposomes. Cet ancrage est compatible, lorsque l'élément est constitué par un antigène ou un anticorps, avec la préservation sensible de la conformation qu'il connait in vivo. Le procédé selon l'invention, pour réaliser les compositions de liposomes selon l'invention, est caractérisé par le fait que l'on met en contact l'élément de la réaction affine avec la matière lipidique utilisée pour la production des liposomes et en ce que l'on produit lesdits liposomes, au sein d'un milieu aqueux approprié, en présence même de l'élément de la réaction affine. L'élément utilisé doit présenter des propriétés généralement hydrophobes, par exemple du type de celles des protéines de surface de l'antigène, qui leur permettent de s'associer de façon intime avec la membrane lipidique des liposomes au cours de leur formation. Au besoin, l'élément utilisé aura au préalable été rendu hydrophobe pour satisfaire aux conditions sus-indiquées. Dans une forme de mise en oeuvre préférée du procédé selon l'invention, les liposomes sont formés par mise en contact de la suspension lipide - solution aqueuse avec un détergent approprié, dont l'élimination par dialyse induit la formation desdits liposomes. On obtient ainsi des liposomes conformes à l'invention une partie de l'élément est alors "ancrée à l'intérieur de la membrane du liposome, tandis qu'une partie au moins des sites actifs restent tournés vers l'extérieur. L'élément de la réaction affine sera ainsi associé ou même combiné d'une façon suffisamment stable -en l'absence de liaison covalente- pour qu'il puisse rester ancré au liposome quand on le met en présence du contre-élément qui lui est spécifique. La réaction affine entre les liposomes porteurs de l'élément et le contre-élément est de plus reproductible. La stabilité de l'ancrage de l'élément de la réaction affine, par exemple de l'antigène, sur les liposomes du genre en question peut être appréciée notamment par la capacité de refaire réagir l'élément fixé sur le liposome après dissociation du complexe dans lequel il était précédemment engagé avec le contre-élément de la réaction affine. Cette dissociation peut être réalisée par toute méthode connue de l'Homme du Métier, par exemple par mise en suspension de ces liposomes portant le complexe formé dans un milieu fortement ionisé ou dans un milieu acidifié, par exemple par de l'acide citrique, à pH24. Apres récupération des liposomes et leur remise en suspension dans un milieu neutre, la répétition de la réaction témoigne de la stabilité de l'accrochage. Cette stabilité est même éventuellement quantifiable. En principe les liposomes "ainsi récupérés" doivent être en état de fixer une quantité sensiblement équivalente de l'anticorps. Tout système de mesure approprié peut être mis en oeuvre. La concentration de l'élément ancré sera choisie de façon à ce qu'il puisse réagir dans des conditions acceptables avec le contre-élément qui lui est spé cifique, par exemple au cours d'une réaction d'agglutination.La concentration efficace pourra être déterminée par tout procédé connu de l'homme du métier, par exemple en procédant comme il sera décrit plus loin. La composition selon l'invention comprend, d'une manière avantageuse, une concentration en élément ancré variant de 5 à 50 pg/milligramme de phospholipide. Partant des compositions de liposomes obtenues, notamment en présence d'un détergent approprié, on pourra sélectionner la taille des liposomes en les faisant passer à travers une membrane de polycarbonate choisie de façon telle que l'on obtienne des liposomes possédant une taille variant de 1 à 10 microns, de préférence de 2 à 3 microns. On obtient alors une composition contenant des liposomes de tailles sensiblement égales, chacun renfermant sensiblement la même quantité d'éléments associés. Avantageusement on se place dans des conditions qui permettent d'obtenir des liposomes unilamellaires. De tels liposomes permettent en effet à l'élément ancré avec le liposome de pouvoir réagir dans de bonnes conditions, par exemple, avec le contre-élément qui lui est spécifique. Cette condition n'est pas indispensable. Mais on conçoit que l'on évite ainsi des pertes d'antigène qui, dans le cas de liposomes multilamellaires, s'ancreraient dans les lamelles internes des liposomes, cessant ainsi d'être accessibles aux anticorps correspondants. Selon une forme de réalisation préférée de l'invention, on colore les liposomes afin de mieux les distinguer du reste de la composition. Un colorant avantageux selon l'invention est celui qui, de plus, change de couleur à l'occasion de réactions d'oxydations. On dispose ainsi d'un moyen simple pour s'assurer de la stabilité des liposomes entrant dans la composition selon l'invention. La détérioration des liposomes se manifesterait en effet par une modification de la coloration due au colorant alors libéré. La substance colorante peut être choisie parmi toute substance, liquide ou solide, constituant un colorant puissant et possédant un caractère hydrophile empêchant le colorant de perturber la membrane liposomale ou de gêner les réactions mettant en oeuvre la composition de liposomes selon l'invention.On citera, à titre d'exemples non limitatifs, le pourpre de bromocrésol, le vert de bromocresol. Le pourpre de bromocrésol est un indicateur qui change de couleur en fonction du pH : jaune si le pH est inférieur à 5,2 et pourpre si le pH est supérieur à 6,8. La coloration des liposomes ainsi que la concentration en l'élément ancre contribuent également à rendre les agglutinats visibles à l'oeil nu et permettent au technicien effectuant le test une lecture rapide et sûre. Ainsi qu'il a été dit précédemment, le procédé de préparation de la composition de liposomes selon l'invention comprend l'opération consistant à mélanger la substance lipidique, avec l'élément de la réaction affine, dans des conditions conduisant à la formation de liposomes, notamment au sein d'une solution contenant un détergent. Pour obtenir les liposomes colorés susdits, l'opération de mélange est réalisée également en présence de la substance colorante. On dialyse ensuite contre une solution tampon pendant une nuit à une température variant d'environ 35-C à environ 40'C, afin d'éliminer entièrement le détergent de la solution et le colorant non "piégé" dans les liposomes. On observe alors la formation de liposomes unilamellaires colorés contenant l'un des éléments d'une réaction affine1 ancré avec la membrane des liposomes. D'une manière avantageuse, on dialyse contre un tampon de P B S (de l'anglais : Phosphate Buffered Saline) de pH:7,4 et à une température de 37*C. Ce tampon peut dans certains cas entraîner des phénomènes d'aggrégation spontanée, faussant la lecture de la réaction par la présence de faux positifs. Afin de remédier à cet inconvénient et selon un mode de réalisation préféré de l'invention, le tampon de PBS est utilisé avec un additif ayant pour fonction de limiter au maximum lesdits phénomènes d'aggrégation spontanée. D'une manière non limitative, l'additif peut être constitué par de la gélatine, de la glycine, ou de l'anilinonaphtalène sulfonique ci-après désigné, pour la commodité du langage par l'abbréviation ANS. Le choix de l'additif dépendra de la technique d'agglutination utilisée : sur lame, sur plaque 96 puits ou sur plaque de Terazaki. Les détergents utilisables pour la préparation de compositions de liposomes selon l'invention doivent posséder une grande capacité d'émulsion et un poids moléculaire peu élevé, d'environ 200 à environ 1000. Ils doivent de plus être facilement dialysables. On citera, à titre d'exemples non limitatifs de détergents, l'octyl-glucoside, les produits commercialisés sous la marque ZWITTERGENTS (Calbiochem-Behring), le sulfonate de cholamidopropyl-diméthylammonio-Apropane (Calbiochem-Behring). Selon un mode de réalisation préféré de l'invention, on utilise en tant que détergent le n-octyl glucoside à 20%, qui permet d'obtenir des liposomes d'une taille variant entre 1 et 3 microns. D'une manière avantageuse, la substance lipidique choisie pour la préparation des liposomes est un phospholipide d'origine humaine, saturé, de préférence non chargé, à tout le moins, possédant le moins de groupes chargés possible. Le caractère saturé évite que le phospholipide ne se péroxyde. Il faut également éviter la présence de groupes chargés qui entraîne une agglutination spontanée des liposomes en présence de sérum. A titre d'exemples non limitatifs, les phospholipides suivants peuvent être utilisés : la sphingomyéline, la phosphatidylcholine. La viscosité et la relative solidité de la membrane des liposomes sont obtenus en mélangeant le phospholipide avec un stérol, notamment le cholestérol. Le rapport molaire phospholipide/cholestérol sera choisi entre les valeurs 1/1 à 4/1. Avantageusement, ce rapport molaire sera de 2/1. Ce rapport molaire de 2/1 permet de moduler la taille des liposomes de facon beaucoup plus importante que pour d'autres rapports. Selon une forme de réalisation préférée de l'invention, les compositions de liposomes selon l'invention continuent - d'environ 5 à environ 20 mg de sphingomyéline, avantageusement 10 mg, - d'environ 1 à environ 5 mg de cholestérol, avantageusement 2,5 mg, - d'environ 0,05 à environ 1 mg d'élément ancré, avantageusement 0,125 mg, - d'environ 10 pl à environ 100 ijl de n octyl glucoside à 20%, avantageusement 50 ijl, - d'environ 100 pl à environ 500 pl de pourpre de bromocrésol à 10 mg/ml de PBS, avantageusement 251. On pourra vérifier la bonne concentration de ces différents éléments par tout moyen approprié, notamment par chromatographie en couche mince. Ainsi qu'il a été dit plus haut, la fixation de l'élément de la réaction affine sur un liposome met en jeu le caractère généralement hydrophobe de cet élément. Dans le cas où l'on utilise un antigène parasitaire, ce caractère hydrophobe est généralement naturel. Il peut, le cas échéant, être acquis, par exemple pour un anticorps en traitant ledit élément dans un milieu acide, notamment à un pH:2, pendant environ 6 heures.La concentration efficace en l'élément de la réaction affine ancré avec les liposomes pourra être déterminée, par exemple en effectuant des dilutions successives de la solution initiale contenant l'élément que l'on souhaite ancrer aux liposomes. En particulier dans le cas d'une réaction d'agglutination, la concentration efficace sera celle qui permet d'obtenir un nombre suffisant d'agglutinats pour que la réaction soit visible à l'oeil nu. Une concentration en l'élément ancré trop faible entraîne en effet que les agglutinats formés ne sont pas assez nombreux pour être visibles macroscopiquement.Inversement, une concentration trop élevée peut entraîner que les réactions entre élément et contre-élément se realisent sur un nombre limité de liposomes, les agglutinats n'étant pas de ce fait visibles macroscopiquement. En effet, par exemple lorsque l'élément ancré sur les liposomes est un antigène, les réactions d'agglutinations impliquent en général des réactions d'une pluralité de sites portés par le même anticorps avec des sites complémentaires portés par les sites correspondants d'antigènes (ou vice versa), portés par plusieurs liposomes. Cependant si la concentration en antigène sur le même liposome devient trop importante, ce sont les sites d'antigène devenus trop voisins sur le même liposome qui vont mobiliser les différents sites d'un même anticorps, d'où la réduction du nombre des agglutinations observées. L'invention concerne enfin l'utilisation en tant que réactif biologique, d'une composition de liposomes selon l'invention pour la détection dans un milieu biologique, de préférence un fluide, des éléments complémentaires d'une réaction affine, par agglutination. La composition de liposomes selon l'invention s'applique particulièrement bien à une telle réaction d'agglutination, notamment en vue de la détection de la présence dans un sérum vétérinaire ou humain d'anticorps actifs contre des antigènes parasitaires. La mise en contact de la composition selon l'invention avec un milieu biologique, par exemple un sérum, contenant le contre-élément complémentaire de la réaction affine, provoque la formation d'agglutinats. La réaction d'agglutination pourra être réalisée sur tout support à la disposition de l'Homme du Métier, notamment sur lame, plaque 96 puits ou sur plaque de Terazaki. Des caractéristiques supplémentaires de l'invention apparaitront à la lumière de la description qui suit d'un exemple de réalisation de l'invention. Il va de soi que l'invention ne se limite nullement au mode de réalisation décrit ci-après mais en embrasse au contraire toutes les variantes. FABRICATION DES LIPOSOMES 1/ Matériel - source d'azote - membrane de dialyse - octyl glucoside - sphingomyéline (SM) - cholestérol - antigène (Ag) ou anticorps (Ac) - tampon PBS - gélatine - pourpre de bromocrésol 2/ Méthode . ComPosition - 10 mg SM - 2,5 mg cholestérol Evaporer sous azote jusqu'à l'obtention d'un film fin blanc sur la paroi du tube. Ne pas évaporer sous un débit trop important en azote, le solvant organique contenant les lipides se répartit alors sur une surface d'autant plus importante. Dissolution - 50 pl octyl glucoside Ajouter l'octyl glucoside dans le tube, vortexer jusqu'à la dissolution totale des lipides se trouvant à la surface du tube. Il doit alors se former une solution blanche homogène ayant l'aspect du lait. (Si des granulations apparaissent, l'évaporation sous azote a été mal faite). . Anout de la substance à incorporer - Ag ou Ac (125 pg) L'adjonction de l'Ac ou Ag en solution aqueuse dans le tube doit se faire une fois le mélange et la dissolution bien établis. Il apparaît alors une interface entre la phase aqueuse et l'octyl glucoside qui disparait en vortexant. - 500 pl PBS - 10 mg/ml pourpre de bromocrésol Ajouter la solution au mélange. Vortexer. Dialyse 1/ Fabrication de la chambre Prendre une chambre de dialyse, fixer la membrane après humidification à l'aide d'un bracelet élastique, puis fixer la chambre dans un bécher contenant PBS + ANS 0,5 g/l. Le volume de dialyse contenu dans le bécher doit être d'au moins 10 fois celui de la chambre de dialyse. La chambre de dialyse doit être enfoncée d'environ 2 à 3mm dans le tampon de dialyse. 2/ Formation des liposomes La chambre de dialyse est placée en chambre chaude durant une nuit sous agitation. Les liposomes sont ensuite récupérés et centrifugés 5mn à 5000 t/mn. Réalisation des dosages 1/ En Plaque 96 puits - Reprendre les liposomes dans 500 ijl de tampon PBS + gélatine à 0,2 g/l. - Déposer 50 tjl de tampon dans chaque puits sauf dans le premier où l'on en dépose 90 pl. - Déposer 10 l de sérum pur dans le premier puits, puis faire des dilutions successives au 1/2 - Déposer 50 pl de liposomes - Incuber 1 h à 37'C - Déposer 5 l de sérum anti-poly humain au 1/1000 - Incuber 1 h à 37-C - Puis incuber une nuit à 4C - Centrifugation 5 minutes à 300 tr/mn. La lecture se fait à température ambiante - sédimentation : réaction négative - pas de sédimentation : réaction positive. 2/ En plaque de terazaki - Reprendre les liposomes dans 500 pl de PBS + gélatine à 0,2 g/l - Déposer 7 pl de liposomes - Déposer 5 pl de sérum - Incuber 2 h à température ambiante. La lecture s'effectue après remise en suspension par une légère agitation - sédimentation : réaction positive - pas de sédimentation : réaction négative. 3/ Sur lame - Reprendre les liposomes dans 500 tjl PBS + ANS 0,5g/l - Déposer 20 l de liposomes - Déposer 15 l de sérum La lecture s'effectue au bout de 5 minutes - réaction positive : apparition d'aggrégats - réaction négative : la solution reste homogène. EXEMPLE Le test de détection qui suit, donné à titre d'illustration, ne limite d'aucune manière l'invention telle qu'elle a déjà été décrite. Test de détection in vitro du kvste hydatique Les protéines antigéniques sont obtenues à partir d'un lyophilisat de liquide hydatique provenant d'un kyste hydatique de mouton. On prépare à partir de ces protéines antigéniques, une composition de liposomes conforme à l'invention selon la méthode décrite ci-dessus. La réaction de détection est réalisée en mettant en contact ladite composition de liposomes avec des antisérums humains de malades atteints de différentes parasitoses (kyste hydatique, ascaris, filaire, anguillule). La lecture de la réaction d'agglutination se fait sur plaque de 96 puits. On compare les résultats obtenus avec une détection des mêmes anticorps parasitaires, réalisée par immunofluorescence. Les résultats expérimentaux sont donnés dans le tableau ci-après. Le titre des antisérums a, en premier lieu, été déterminé par immunofluorescence, afin de servir de référence (colonne de gauche). Les anti sérums présentant une réaction positive en immunofluorescence sont dilués au demi (colonne du milieu) et testés par une réaction d'agglutination (colonne de droite). Cette opération de dilution suivie d'un test est répétée plusieurs fois. Par exemple, dans le cas du kyste hydatique, un antisérum dont le titre déterminé par immunofluorescence est de 1/20 a donné 24 antisérums présentant une réaction positive en immunofluorescence. Après une première dilution au demi, soit un nouveau titre de 1/40, 12 antisérums ont donné une réaction d'agglutination positive jusqu'à cette dilution. Une seconde dilution, soit un nouveau titre de 1/80, donne encore 10 antisérums présentant une réaction d'agglutination positive à cette dilution. Une troisième dilution, soit un titre de 1/160, donne encore 2 antisérums présentant une réaction d'agglutination positive. Il ressort du tableau ci-après que même après des dilutions successives de l'antisérum utilisé au départ, on obtient encore des réactions d'agglutination positives, témoignant ainsi de la finesse du test de détection effectué avec une composition de liposomes selon l'invention. Les expériences effectuées avec des antisérums de malades atteints de parasitoses autres que le kyste hydatique ont montré la plus grande spécificité-du test selon l'invention. Ainsi, dans le cas de la filaire, un antisérum, dont le titre en immunofluorescence est de 1/40 ne donne des résultats positifs, par réaction d'agglutination, qu'avec des dilutions au 1/10 et au 1/20. Une telle dilution, en immunologie, n'est généralement pas considérée comme suffisante pour aboutir à un résultat concluant, en raison principalement des différents phénomènes d'agrégation spontanée ou de faux positifs qui peuvent se produire à une telle dilution. Il ressort donc du tableau ci-après que dans le cas de la filaire et de l'anguillule, la réaction d'agglutination ne peut pas être considérée comme positive, montrant par là même la spécificité du test. Pour ce qui concerne l'ascaris, le tableau ci-après montre que l'on obtient des résultats présentant la même spécificité aussi bien en immunofluorescence qu'en agglutination. Ceci est dû au fait que les parasites responsables de l'ascaris et du kyste hydatique possèdent des antigènes communs. Il était donc normal qu'en utilisant une composition de liposomes contenant des antigènes de kyste hydatique, on obtienne une réaction d'agglutination positive avec un antisérum contenant-des anticorps du parasite responsable de l'ascaris, et ce même après des dilutions successives. TABLEAU * kvste hvdatiaue titre en titre en dosages immunofluorescence agglutination effectués 0 : 0 : 36/40 : 1/10 : 4/40 1/20 : 1/40 : 12/24 : 1/80 : 10/24 1/160 . 2/24 1/40 . 0 . 2/24 : 1/40 : 6/24 1180 : 16/24 1/80 : 1/80 : 8/24 : 11160 : 8/24 : 11320 : 8/24 1/160 : 1180 : 6/24 : 1/160 : 18/24 1/320 : 1/160 : 10/12 : 1/320 2/12 * filaire 1/20 : 0 : 2/4 : 1/10 : 2/4 1/40 : 1/10 : 6/10 : 1/20 : 4/10 1/80 : 1/10 : 1/1 1/160 : 1/10 : 1/1 1/240 : 1/10 : 1/1 * anguillule 1/20 : 0 : 2/4 : 1/10 : 2/4 1/40 . 1/10 : 2/2 1/80 : 1/10 : 1/2 : 1/20 : 1/2 1/320 : 1/10 : 2/2 * ascaris 1/20 : 1/40 : 3/5 : 1/80 : 2/5 1/40 : 1/40 : 2/3 1/80 : 1/3 1/80 : 1/80 : 1/1 REVENDICATIONS 1/ Composition de liposomes de préférence colorés, au sein d'une solution, comprenant l'un des éléments complémentaires d'une réaction affine associé avec la surface des liposomes sans aucun couplage chimique, caractérisée en ce que l'élément est ancré à la surface desdits liposomes, le cas échéant, incorporé en partie dans l'épaisseur des pellicules lipidiques des liposomes, cet ancrage étant suffisamment stable pour que l'élément puisse réagir avec le contre-élément qui lui est spécifique sans se séparer desdits liposomes. 2/ Composition selon la revendication 1, caractérisée en ce que l'élément ancré est présent dans la composition à une concentration variant de 5 à 50 pg par milligramme de phospholipide. 3/ Composition selon les revendications 1 ou 2, caractérisée en ce que les liposomes sont unilamellaires d'une taille variant entre 1 et 10 microns, notamment 2 à 3 microns. 4/ Composition selon l'une quelconque des revendications 1 à 3, caractérisée en ce que le colorant consiste en toute substance, liquide ou solide, possédant un caractère hydrophile et capable de changer de coloration à l'occasion de réactions d'oxydations. 5/ Composition selon l'une quelconque des revendications 1 à 4, caractérisée en ce que l'élément ancré est un antigène ou un anticorps, notamment un antigène parasitaire. 6/ Compositions de liposomes selon l'une quelconque des revendications 1 à 5, caractérisées en ce que les constituants des liposomes sont entre eux dans des rapports correspondant aux valeurs qui suivent - d'environ 5 mg à environ 20 mg de sphingomyéline, avantageusement 10 mg, - d'environ 1 à environ 5 mg de cholestérol, avantageusement 2,5 mg, - d'environ 0,05 à environ 1 mg de l'élément que l'on souhaite ancrer, avantageusement 0,125 mg, - d'environ 10 yl à environ 100 pl d'octyl glucoside à 20%, avantageusement 50 pl, - d'environ 100 p1 à environ 500 pl de pourpre de bromocrésol, avantageusement 250 pl. 7/ Compositions de liposomes selon l'une quelconque des revendications 1 à 6, caractérisées en ce que le rapport molaire phospholipide/cholestérol varie entre environ 1/1 et environ 4/1, avantageusement est égal à 2/1. 8/ Liposomes, de préférence colorés, comprenant l'un des éléments complémentaires d'une réaction affine associé avec la surface des liposomes sans aucun cou- plage chimique, caractérisés en ce que l'élément est ancré à la surface desdits liposomes, le cas échéant, incorporé en partie dans l'épaisseur des pellicules lipidiques des liposomes, à une concentration variant de 5 à 50 pg par milligramme de phospholipide, cet ancrage étant suffisamment stable pour que l'élément puisse réagir avec le contre-élément qui lui est spécifique sans se séparer desdits liposomes. 9/ Liposomes selon la revendication 8, caractérisés en ce qu'ils sont unilamellaires d'une taille variant entre 1 et 10 microns, notamment entre 2 et 3 microns, et en ce que l'élément ancré est un antigène ou un anticorps, notamment un antigène parasitaire. 10/ Liposomes selon les revendications 8 ou 9, caractérisés en ce que le colorant consiste en toute substance, liquide ou solide, possédant un caractère hydrophile et capable de changer de coloration à lloc- casion de réactions d'oxydations. 11/ Liposomes selon l'une quelconque des revendications 8 à 10, caractérisées en ce que les constituants desdits liposomes sont entre eux dans des rapports correspondant aux valeurs qui suivent - d'environ 5 mg à environ 20 mg de sphingomyéline, avantageusement 10 mg, - d'environ 1 à environ 5 mg de cholestérol, avantageusement 2,5 mg, - d'environ 0,05 à environ 1 mg de l'élément que l'on souhaite ancrer, avantageusement 0,125 mg, - d'environ 10 til à environ 100 jil d'octyl glucoside à 20%, avantageusement 50 pl, - d'environ 100 pl à environ 500 pl de pourpre de bromocrésol, avantageusement 250 pl. 12/ Liposomes selon l'une quelconque des revendications 8 à 11, caractérisées en ce que le rapport molaire phospholipide/cholestérol varie entre environ 1/1 et environ 4/1, avantageusement est égal à 2/1. 13/ Procédé de préparation d'une composition de liposomes selon l'une quelconque des revendications 1 à 7, caractérisé en ce qu'on met en contact l'élément avec la matière lipidique utilisée pour la production des liposomes, et en ce qu'on produit ledit liposome au sein d'un milieu aqueux approprié, en présence même de l'élément de la réaction affine. 14/ Procédé selon la revendication 13, caractérisé en ce qu'on mélange la matière lipidique avec l'élé- ment de la réaction affine, au sein d'une solution contenant un détergent et une substance colorante, et en ce qu'on dialyse le mélange obtenu contre une solution tampon pendant environ 12 heures à une température variant d'environ 35C à environ 40-C, notamment à 37-C. 15/ Procédé selon les revendications 13 ou 14, caractérisé en ce que le détergent consiste notamment en octyl glucoside. 16/ Procédé selon l'une quelconque des revendications 13 à 15, caractérisé en ce que la matière lipidique consiste notamment en un phospholipide d'origine humaine saturé, comportant le moins possible de groupes chargés. 17/ Application des compositions selon l'une quelconque des revendications 1 à 7, en tant que réactifs biologiques. 18/ Réactif biologique comprenant au moins une composition selon l'une quelconque des revendications 1 à 7, utile notamment pour la détection dans un milieu biologique, de préférence un fluide, des éléments complémentaires d'une réaction affine, notamment parasitaires, par agglutination. 19/ Utilisation du réactif selon la revendication 18, comprenant la mise en contact dudit réactif contenant l'un des éléments de la réaction affine avec le milieu biologique contenant le contre-élément complémentaire, la lecture de la réaction s'effectuant par l'apparition d'agglutinats macroscopiques contenant les liposomes colorés.