Brevet FR2591226A1 — publié le 19870612

La présente invention concerne des sels d'acides sulfoniques aromatiques de Ne-trifLuoroacétyL-LysyL-proline. La Lysyl-proLine, peptide intermédiaire synthétique, et ses dérivés sont intéressants dans La préparation de produits importants tels que La tuftsine qui possède une action augmentant l'immunité (tuftsine: Lthréonyl-L-lysyl-L-prolyl-L-arginine, Ann. N.Y. Acad. Sci., vol. 419, p 12, 1983) et Le lisinopril qui possède une action abaissant la pression sanguine (Lisinopril: N-a-(l(S)-carboxy-3-phénylpropyl)-L-lysyl-L-proline, première publication de brevet japonais n 81845/1980), et d'autres. Les procédés de synthèse pour produire ces composés reposent souvent sur un dérivé dipeptidique important comme produit de départ, la NItrifluoroacétyl-L-lysyl-L-proline. On a trouvé que ce produit de départ est instable et facilement transformé en une dicéto- pipérazine (II) selon l'équation suivante 0o (CHI2) 4NHCOCF 3 H N-CH-CO-N -.. N. + H2O (CH2)4NHCOCF3 COOH O IL n'existe pas de forme stable et facile à manipuler de la NEtrifluoroacétyl-L-lysyl-L-proline. Du fait de l'importance de ce dérivé de dipeptide comme produit de départ et que les formes connues de ce produit de départ sont instables et difficiles à manipuler, on a encore fortement besoin de formes nouvelles et plus stables de ce produit de départ. En particulier, on a besoin de NE- trifluoroacétyl-L-lysyl-L- proline cristallisée stable sous forme libre ou sous forme de sels stables. En conséquence, la présente invention a pour objet de proposer des sels de NE- trifluoroacétyl-L-Lysyl-L-proline cris- tallisés stables. La demanderesse a découvert de façon surprenante selon l'invention que cet objet et d'autres sont atteints par des sels d'acides sulfoniques aromatiques de N --trifluoroacétyl-L-lysyl-L- proline faciles à manipuler et ayant une stabilité élevée. La demanderesse a cherché à cristalliser la N -trifluoro- acétyl-L-lysyl-L-proline sous forme libre en utilisant des douzaines de types de solvants différents en cherchant à produire une forme cristallisée manipulable stable de ce dérivé de dipeptide. Cependant, l'on n'a obtenu dans aucun de ces cas cette forme cristallisée stable. En effet, le composé était tout à fait difficile à faire cristalliser. La demanderesse a ensuite préparé de nombreux sels lyophilisés formés entre le peptide sous forme libre et plusieurs types différents d'acides et déterminé par des essais leur facilité de manipulation et leur stabilité. Dans ces essais, la demanderesse a découvert de manière surprenante que des sels d'acides sulfoniques aromatiques du dérivé de dipeptide sont extrêmement faciles à mani- puler et possèdent simultanément une stabilité élevée. On entend par "forme libre" que le dérivé de peptide n'intervient pas sous la forme d'un sel avec un acide, bien qu'il puisse y avoir formation d'un sel interne. On entend par sel d'acide sulfonique aromatique selon la présente invention une forme saline du dérivé de peptide formée à partir d'acides répondant à la formule suivante R R. $ 3- N -trifluoroacétyl-L-lysyl-L-proline dans laquelle R peut représenter 1 à 5 atomes H, Cl, Br ou F ou groupes alkyles à chaîne droite ou ramifiée en C1-C4, OH ou CF3. R est de préférence un substituant parmi ceux cités et de préférence en position para par rapport au groupe acide sulfonique. Quelques exemples spécifiques d'acides sulfoniques aromatiques qui peuvent être utilisés sous la forme de sels sont les suivants: acide benzène- sulfonique, acide p-toluènesulfonique, acide bromobenzènesulfonique, acide p-hydroxybenzènesulfonique, acide xylènesulfonique et acide cumènesulfonique. Parmi ceux-ci, on préfère l'acide p-toluènesulfonique et l'acide benzènesulfonique. 2 5 9 1226 La portion peptidique de la molécule est de préférence la NtrifLuoroacétyl-L-Lysyt-L-proLine. Cependant, ses dérivés dans Lesquels un hydrogène est remplacé par un halogène tel que Cl, Br ou F, ainsi que les isomères D de La lysine ou de la proline sont également possibles. D'autres restes Ne-acyles tels qu'acétyle sont également possibles. On donne dans le tableau suivant les résultats des tests de stabilité de divers types de produits lyophilisés qui ont été préparés comme indiqué. Le taux de production de dicétopipérazine est obtenu par mesures par chromatographique liquide à haute perfor- mance (HPLC). Tableau Résultats des tests de stabilité n d'échan- tillon 4 7 Tempéra- ture de conser- Echantillon forme libre forme libre chlorhydrate chlorhydrate p-toluène- sulfonate p-toluène- sulfonate benzène- sulfonate tartrate malate citrate vation (O C) Temps écoulé (jours) et taux de dicétopipérazine (%) 0 5..10 20 30 0 0,2 0 2,5 0 0 0 0 0,6 3,3 0,8 ,2 o o0 1,1 11,6 o o 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 1,3 0 3,3 0 0,8 2,5 6,0 2,2 0 4,2 ,6 4,4 6,8 17,5 6,5 Il est évident d'après le tableau ci-dessus que,dans le cas de la forme libre du dérivé du dipeptide et des sels d'acides carboxyliques, la quantité de dicétopipérazine (II) produite augmente au cours du temps. Par contre, il n'y a pas de production de dicéto- pipérazine (II) du tout dans le cas du chlorhydrate, du p-toluène- sulfonate et du benzènesulfonate. Bien que le chlorhydrate soit stable, 2 59122 6 ce produit n'est pas facile à manipuler, parce qu'il est semblable au sucre candi et fortement déliquescent. En conséquence, Le chlorhydrate est très difficile à peser de sorte que des erreurs de pesée sont difficiles à éviter. Par contre, le p-toluènesulfonate et le benzènesulfonate sont pulvérulents, non déliquescents et très faciles à manipuler et à peser. Ainsi donc, ces composés peuvent être facilement conservés et utilisés pour une synthèse. Les sels d'acides sulfoniques aromatiques de la présente invention peuvent être obtenus,par exemple,par addition des acides sulfoniques aromatiques tels que l'acide p-toluènesulfonique à une solution aqueuse de Ne-trifluoroacétyl-L-lysyl-L-proline dans un rapport de 1 moLe de l'acide sulfonique pour 1 mole de peptide, en obtenant une solution homogène et en lyophilisant le produit. La Ne-trifluoroacétyl-L-lysyl-L- proline peut être obtenue par des techniques bien connues de synthèse des peptides. Les sels d'acides sulfoniques aromatiques de N6-trifluoro- acétyl-L-lysyl-L-proline de la présente invention peuvent être utilisés pour la synthèse de produits peptidiques connus tels que tuftsine et lisinopril, et leurs dérivés. Par exemple, on peut synthétiser des composés de formule suivante: NH2 (CH2)4 R1-CH-NlCH-CONtJ[ COOH COOH dans laquelle R1 représente un groupe alkyle en C1-C4, un groupe arylalkyle tel que benzyle, 2-phényléthyte, 3-phénylpropyle, ou un groupe aryle tel que phényle ou naphtyle. Le procédé de synthèse consiste à convertir le sel d'acide sulfonique aromatique de Ne-trifluoro- acétyl-L-lysyl-L-proline en la forme libre par neutralisation par une solution alcaline, par exemple une solution de carbonate de sodium, de bicarbonate de sodium, de triéthylamine, d'hydroxyde de sodium dilué etc, 2 5 9 1226 à faire réagir la N--trifluoroacétyl-L-lysyl-L-proline libre avec un ester d'a-cétoacide de formule R1-CO-COOR2 pour produire un dérivé de N -trifluoroacétyl-L-lysyl-L-proline de formule suivante NHCOCF3 À I (CH2)4 R -CH-NLCH-CON i 2 COOR COOH dans laquelle R1 est tel que défini ci-dessus et R représente l'hydrogène ou un groupe alkyle en C1-C4, et à hydrolyser le groupement protecteur trifluoroacétyle. Les solvants, les durées de réaction, les moyens d'élimi- nation du groupe trifluoroacétyle et les conditions de réaction pour la combinaison de l'a-cétoester avec le dérivé de peptide sont illus- trés dans les exemples ci-après. Les exemples suivants illustrent l'invention sans toute- fois en limiter la portée. Exemples Exemple I1 On dissout 135 g d'ester de benzyle de N C-benzyloxy- carbonyl-Ne-trifluoroacétyl-L-lysyl-L-proline dans un mélange de 650 ml de méthanol et 200 ml d'eau et on y ajoute 50 g de catalyseur au charbon palladié à 2 % contenant 56 % d'eau. On effectue une réduction par barbotage d'hydrogène dans la solution pendant 3 h - à la température ambiante. Après la fin de la réaction, on sépare le catalyseur par filtration. On concentre sous pression réduite le filtrat ainsi obtenu pour chasser le méthanol par distillation. On détermine la quantité de NE-trifluoroacétyl-L-lysyl-L- proline obtenue par chromatographie liquide à haute performance (HPLC). Ensuite, on ajoute une quantité équimolaire (44,7 g) d'acide ptoluènesulfonique monohydraté à la solution concentrée pour obtenir une solution homogène. La solution est lyophilisée pour donner 120 g 2 5 9 1226 (97,1 %) de p-toluènesulfonate de N -trifLuoroacétyl-L-lysyL-L- proline. Teneur en eau: 0,7 % Rotation spécifique: [D] 0 = -321 c=2 H20) Ea20 O(c=2, H O2 On détermine par chromatographie liquide à haute perfor- mance que le produit ne contient pas de dicétopipérazine. Ensuite, on met en oeuvre la réaction et le traitement selon l'exemple 1 ci-dessus sans addition d'acide p-toluènesulfonique monohydraté pour donner 77,5 g (92,3 %) de N -trifLuoroacétyl-L- Lysyl-L-proline sous forme libre. Teneur en eau: 0,9 % Rotation spécifique: [a]0Do = -4,82o (c=2, H20) La mesure par chromatographie liquide à haute performance montre que le produit contient 2,3 % en poids de la dicétopipérazine. Exemple 2 On répète l'exemple 1 en remplaçant l'acide p-toluène- sulfonique monohydraté (44,7 g) par 36,7 g d'acide benzènesulfonique pour obtenir 115 g (95,4 %) de benzènesulfonate de Ne-trifluoro- acétyl-L-lysyl-L-proline. Teneur en eau: 1,0 % Rotation spécifique: [c]20 = -32,7 (c=2, H O) On détermine par chromatographie Liquide à haute perfor- mance que Le produit ne contient pas de dicétopipérazine. Exemple comparatif Production de N -(1-(S)-carboxy-3-phénylpropyl)-Llysyl-L-proline A 1 l d'éthanol, on ajoute 50,1 g de p-toluènesulfonate de NE-trifluoroacétyl-L-lysyl-L-proline, 30,9 g de 2-oxo-4-phényl- butyrate d'éthyle, 10,1 g de triéthylamine, 100 g de tamis moLéculaire 3A fabriqué par Junsei Chemical Co. et 30 g de nickel de Raney et on agite le mélange à 25 C sous 3 bar d'hydrogène pour effectuer l'hydrogénation. Après La fin de l'absorption d'hydrogène, on filtre la solution et on lave le solide obtenu par 300 ml d'éthanol. On mélange le filtrat avec la solution de lavage éthanolique et ensuite on concentre la solution. On ajoute à la solution concentrée ci- dessus 300 ml d'eau et 300 ml de chlorure de méthylène. On ajuste le pH à 9,2 par une solution aqueuse d'hydroxyde de sodium pour obtenir deux phases. On obtient la solution aqueuse par séparation et ensuite on la lave deux fois par 300 ml de chlorure de méthylène. Ensuite, on ajuste la solution aqueuse à pH 4,6 par l'acide chlorhy- drique puis on l'extrait par 300 mi de chlorure de méthylène. On sèche sur sulfate de sodium anhydre la solution chlorométhylénique et on la concentre. On ajoute à la solution concentrée 300 ml d'éther méthyl-tbutylique et on chauffe la solution pour faire une solution homogène. On refroidit la solution en agitant pour précipiter des cristaux et on y ajoute 110 ml de cyclohexane. On agite le mélange pendant 2 h. Ensuite, on filtre le mélange et on sèche sous pression réduite les cristaux ainsi obtenus pour obtenir 26,1 g de Na-(1-(S)- éthoxycarbonyl-3-phenylpropyl)-N -trifluoroacétyl-L-tysyl-L-proline. On ajoute au produit ci-dessus 150 mi de solution aqueuse à 10 % d'hydroxyde de sodium et on agite La solution à 25 C pendant 3 h. On fait passer cette solution sur une résine échangeuse d'ions fortement acide (Diaion SK-1B, forme H+, fabriquée par Mitsubishi Chemical Industries) et ensuite on lave par l'eau. On extrait la solution par une solution aqueuse à 4 % de pyridine. On mélange les solutions éluées et ensuite on concentre jusqu'à 250 ml. On ajuste la solution à pH 5,2 par l'acide chlorhydrique et on concentre à 57 g. On ajoute 300 ml d'éthanol pour faire une solution homogène. On refroidit la solution pour précipiter les cristaux que l'on isole par filtration et on sèche pour obtenir 20,2 g de N -(1-(S)carboxy-2- phénylpropyl)-L-lysyl-L-proline À 2H20. Teneur en eau: 8,3 % par la méthode Karl Fischer Rotation spécifique: [c]25 = -26,6 (c=2, HCI 0,1 N-méthanol). Il est entendu que l'invention n'est pas limitée aux modes de réalisation préférés décrits ci-dessus à titre d'illustration et que l'homme de l'art peut y apporter diverses modifications et divers changements sans toutefois s'écarter du cadre et de l'esprit de l'invention. 2 59 1226 REVENDICATIONS 1. Sels d'acides sulfoniques aromatiques de N6-trifluoro- acétyl-L-lysyl-L-proline,caractérisés en ce qu'ils répondent à la formule générale: S03 Nú-trifLiuoroacétyl-L-lysyl-L-proline dans laquelle R peut représenter 1 à 5 atomes H, Cl, Br ou F ou groupes alkyles à chaîne droite ou ramifiée en C1-C4 OH ou CF3 2. Composé selon la revendication 1, caractérisé en ce que R est un atome hydrogène ou un groupe CH3. 3. Composé selon La revendication 1, caractérisé en ce qu'il consiste en benzènesulfonate de Ne-trifluoroacétyl-L-tysyl-L- proline. 4. Composé selon la revendication 1, caractérisé en ce qu'il consiste en p-toluènesulfonate de Nè-trifluoroacétyl-L-lysyl-L- proline. 5. Procédé pour fabriquer un dérivé de lysyl-proline de formule générale suivante NH 1 2 ( CH2)4 R1-CH-NHCH-CON COOH COOH caractérisé en ce qu'il consiste à transformer un sel d'acide sulfonique aromatique de Ne-trifluoroacétyl-L-lysyl-L-proline selon la revendica- tion I en la forme libre par neutralisation par une solution alcaline; à faire réagir ladite forme libre avec un o-cétoester de formule R1-CO-COOR2 2 5 9 1 2 2 6 pour produire un dérivé de NE-trifluoroacétyl-L-lysyl-L-proline de formule suivante: NHCOCF3 (CH2)4 R -CH-NHCH-CON I 2 COOR COOH et à éliminer par hydrolyse le groupement protecteur trifluoroacétyle dudit dérivé, dans lequel R1 est choisi parmi les groupes alkyles en C C4, i 4' benzyle, 2-phényléthyle, 3-phénylpropyle, phényle et naphtyle, et R est choisi parmi l'hydrogène et les groupes alkyles en C1-C4. 6. Procédé selon la revendication 5, caractérisé en ce que ladite neutralisation est effectuée par traitement par le carbonate de sodium, le bicarbonate de sodium, la triéthylamine ou la diisopropyléthylamine. 7. Procédé selon la revendication 5, caractérisé en ce que ladite hydrolyse est effectuée par traitement par l'hydroxyde de sodium. 8. Procédé selon la revendication 5, caractérisé en ce que l'on fait réagir ledit ester d'a-cétoacide avec ledit dérivé en conditions réductrices. 9. Procédé selon la revendication 8, caractérisé en ce que ladite réaction est effectuée en présence d'hydrogène ou d'un gaz réducteur. 10. Procédé selon la revendication 9, caractérisé en ce que ledit agent réducteur est le cyanoborohydrure de sodium.