Brevet FR2588566A1 — publié le 19870417

La présente invention concerne le domaine de la biologie en particulier des milieux de culture de cellules ou de tissus, et a pour objet un tel milieu de culture. Les cultures de cellules ou de tissus sont destinées à être greffées à un organe ou à un tissu receveur par injection intraveineuse ou intramusculaire. De telles greffes sont généralement nécessaires lorsqu'un patient souffre de graves déficiences incurables par les moyens de la médecine ou par greffage d'un organe entier. Ces greffes ont principalement pour but de traiter des insuffisances graves chez les enfants. Actuellement, de telles greffes ne snt possibles qu'à partir d'embryons résultant d'une interruption volontaire de grossesse, ou d'une fausse couche traumatique, dont certains organes sont réduits en un broyat de cellules après vérification de leur compatibilité. Cette vérification nécessaire de la compatibilité constitue un frein très important à de telles greffes du fait de la nécessité d'un important matériel embryonnaire, et du fait que des cellules non compatibles sont irrémédiablement rejetées. En outre, la culture de ces cellules ou tissus est généralement effectuée dans un sérum physiologique formé par un milieu de culture associé à un sérum de sang animal, et un tel sérum ne permet qu'un faible taux de multiplication cellulaire embryonnaire humaine et une durée de vie limitée des cellules en culture. La présente invention a pour but de pallier ces inconvénients. Elle a, en effet, pour objet un milieu de culture de cellules ou de tissus constitué par un milieu'de Leibovitz et par du sérum, caractérisé en'ce que le sérum est un sérum de sang embryonnaire humain, de cordon ombilical, de nouveau-né, ou de foetus. La quantité de sérum de sang embryonnaire humain, ajoutée au milieu de Leibovitz est avantageusement comprise entre 10 % à 30 % en volume de l'ensemble du milieu de culture. A titre préférentiel, le milieu de culture est avantageusement constitué par un mélange à 80 % d'un milieu de Leibovitz L 15 et à 20 % d'un sérum issu de sang de cordon ombilical humain, de nouveau-né, ou d'un foetus. Le milieu de culture conforme à l'invention peut être destiné à la culture de cellules ou de tissus dans un incubateur sans utilisation de Co2 pour le maintien du Ph. Ce milieu permet de réussir facilement une culture de cellules embryonnaires humaines notamment de cerveau avec un taux de multiplication considérablement augmenté par rapport aux milieux connus, ainsi qu'une durée de vie des cultures très longue, à savoir d'environ un an avec poursuite des multiplications cellulaires. Les cellules en culture sont maintenues dans le milieu pendant au moins trois semaines avant leur greffe pour ne pas provoquer de rejet de la part du receveur. En effet, une lente maturation des cellules embryonnaires humaines permet une adaptation réciproque de la greffe et du receveur sans test de compatibilité préalable. Ceci est rendu possible grâce à l'utilisation de matériels embryonnaires, à savoir sérum de sang embryonnaire et cellules ou tissus embryonnaires dissociés cultivés sur un milieu de Leibovitz mélangé à un tel sérum, de sorte que les cellules ou tissus cultivés présentent une neutralité favorisant une greffe par injection intraveineuse ou intramusculaire. Pour la conservation prolongée des cellules par congélation, le milieu de culture est augmenté de 30 % en volume de sérum de sang embryonnaire humain, de nouveau-né ou de foetus avant l'opération de congélation, et une même quantité de ce sérum est ajoutée au milieu après décongélation avant utilisation. Le milieu conforme à l'invention permet1 en outre, de manière inattendue, de réaliser plusieurs couches cellulaires ou tissulaires en culture contrairement aux milieux connus qui ne permettent que l'obtention d'une couche unique, de sorte que le matériel embryonnaire à cultiver peut être très réduit. L'invention est plus particulièrement applicable dans le domaine de la biologie, en particulier de la culture de cellules destinées à être greffées, notamment pour pallier des insuffisances chroniques de certains organes ou tissus, en particulier chez des enfants. Bien entendu, l'invention n'est pas limitée au mode de réalisation décrit. Des modifications restent possibles, sans sortir pour autant du domaine de protection de l'invention. -REVENDICATIONS 1. Milieu de culture de cellules ou de tissus constitué par un milieu de Leibovitz et par du sérum, caractérisé en ce que le sérum est un sérum de sang embryonnaire humain, de cordon ombilical, de nouveau-né, ou de foetus. 2. Milieu, suivant la revendication 1, caractérisé en ce que la quantité de sérum de sang embryonnaire humain, ajoutée au milieu de Leibovitz est avantageusement comprise entre 10 % à 30 % en volume de l'ensemble du milieu de culture. 3. Milieu, suivant l'une quelconque des revendications 1 et 2, caractérisé en ce qu'il est constitué, de préférence, par un mélange à 80 % d'un milieu de Leibovitz L 15 et à 20 % d'un sérum issu de sang de cordon ombilical humain, de nouveau-né, ou d'un foetus.