Brevet FR2591895A1 — publié le 19870626

Immunotoxines à longue durée d'action in vivo comportant la chaîne A de ricine modifiée sur ses motifs polysaccharidiques. ta présente invention concerne de nouvelles molécules médicamenteuses comportant au moins une molécule d'anticorps liée de façon covalente à au moins une molécule de chaîne A de ricine dont les motifs polysaccharidiques ont été modifiés. Dans le brevet US 4340535 et dans les brevets français No. 81 07596 et No. 81 21836(publiés sous les No. 2504010 et 2516794) on a décrit la préparation de produits anticancéreux dits "conjugués" obtenus par couplage, par liaison covalente, de la chaîne A de ricine avec des anticorps ou fragments d'anticorps dirigés contre des antigènes portés par les cellules à détruire. Les produits de ce type ont été désignés et sont désignés dans la présente demande sous le nom générique d'immunotoxines. On sait en outre que l'activité cytotoxique de ces immunotoxines peut être potentialisée par diverses substances adjuvantes telles que les sels d'ammonium, diverses amines ou certains ionophores carboxyliques tels que la monensine ou la nigéricine. A cet effet on peut se référer aux brevets et demandes de brevets FR 81 21836, 82 02081, 82 04119 et 82 04047 (publiés sous les No. 2516794, 2521010, 2522968, 2536997) au nom de la demanderesse. Toutefois, les effets thérapeutiques des immunotoxines, potentialisées ou non, ne peuvent se manifester pleinement que dans la mesure où l'immunotoxine peut, par sa partie anticorps, se localiser in vivo, sous forme active, sur la cible cellulaire à détruire. La capacité de 1'immunotoxine à se localiser sur la cible dépend en tout premier lieu de l'aptitude de l'immunotoxine à demeurer dans la circulation sanguine et les fluides extracellulaires sous forme active pendant des temps suffisamment longs pour qu'elle atteigne sa cible cellulaire et à des concentrations suffisamment fortes pour que le taux d'occupation des sites antigéniques correspondants soit élevé. De nombreuses études ont permis d'établir la cinétique d'élimination plasmatique des immunotoxines après injection intraveineuse dans différents modèles animaux. I1 est apparu qu'auprès l'injection le taux plasmatique d'immunotoxine biologiquement active décroit très rapidement et de façon très importante. Ainsi, typiquement, chez le lapin, dans un modèle utilisant une immunotoxine construite en couplant à l'aide d'un bras à pont disulfure la chaîne A de ricine à un anticorps monoclonal dirigé contre l'antigène T65 des lymphocytes T humains (anticorps T101), il apparaît que 97% de î1immunotoxine présente dans le sang circulant au temps 0 de l'injection disparaissent en 30 minutes et 99,9% en 17 heures.Cette rapide disparition de l'immunotoxine est bien évidemment préjudiciable à l'expression de sa capacité cytotoxique complète, en empêchant que l'immunotoxine ne sature de façon durable une proportion élevée des antigenes cibles portés par les cellules à détruire. En outre, la comparaison des.cinétiques d'élimination plasmatique des immunotoxines avec celles des anticorps non conjugués correspondants montre qu'à l'inverse les anticorps, comme cela est bien connu, se maintiennent dans le plasma à un haut niveau pendant des temps relativement longs. Or il existe toujours, même dans les préparations d'immunotoxines les plus purifiées, un certain taux résiduel d'anticorps non conjugués. Par le jeu des différences de vitesses d'élimination des immunotoxines et des anticorps, les anticorps non conjugués, initialement très minoritaires, deviennent progressivement majoritaires au bout de quelques heures et donc, progressivement, ces anticorps deviennent par compétition de puissants antagonistes pour la fixation des immunotoxines sur leurs cibles. I1 apparaît donc clairement l'intérêt d'accroître la persistance plasmatique des immunotoxines, sous forme active, afin d'augmenter à la fois la durée et le taux d'occupation des antigènes cibles et par conséquent d'améliorer les effets thérapeutiques des immunotoxines. Par ailleurs, des expériences de localisation in vivo de l'immunotoxine à chaîne A de ricine, radiomarquée puis injectée chez des animaux sans cible spécifique ont montré que, dans les premières minutes après l'injection, le conjugué se localise préférentiellement dans le foie. I1 en est de même pour la chaîne A de ricine qui présente le même devenir lorsqutelle est injectée sous forme non couplée. Cela suggère fortement que 1' immunotoxine se fixe dans le foie par l'intermédiaire de la sous-unité cytotoxique qu'elle contient. I1 est connu que la chaîne A de ricine est une glycoprotéine dont les groupements polyosidiques comprennent notamment des résidus de mannose et de N-acétylglucosamine, certains résidus de mannose etant en positions terminales (Agri. Biol.Chem., 1978, 42, 501). Il a été également établi l'existence au niveau du foie de récepteurs capables de reconnaître des glycoprotéines ayant de tels résidus de mannose terminaux. Il a été aussi montré que les glycoprotéines reconnues par ces récepteurs - présents sur les cellules non parenchymateuses sont rapidement éliminées de la circulation sanguine par fixation sur ces cellules qui les métabolisent. Ceci est bien documenté notamment dans le cas de la beta-glucuronidase, ainsi que dans le cas de la ribonucléase B (Arch. Biochem, Biophys., 1973, 188, 418 ; Advances in Enzymology, Meister A. Ed., New York, 1974 ; Pediat. Res., 1977, 11, 816). De l'ensemble de ces données, il semble que la rapide élimination des immunotoxines à chaîne A de ricine peut s'expliquer par la reconnaissance des résidus osidiques de la chaine A de ricine par les cellules hépatiques et en particulier les cellules non parenchymateuses. I1 est connu que par oxydation par les ions periodate des structures osidiques, y compris celles qui sont contenues dans les glycoprotéines, on provoque la rupture de la chaîne carbonée chaque fois que deux atomes de carbone adjacents portent des hydroxyles primaires ou secondaires. Si les deux hydroxyles contigus sont secondaires, comme cela est le cas dans les oses cycliques présents dans la chaîne A de ricine7 l'oxydation conduit à deux fonctions aldéhyde portées par les carbones entre lesquels la rupture a eu lieu. I1 est également connu que les fonctions aldéhyde sont très réactives vis-à-vis des groupements amines primaires par formation d'imines également connues sous le nom de bases de Schiff. Ainsi, les groupes aldéhyde formés lors de la réaction d'oxydation peuvent reagir avec des amines primaires portées par la chaîne peptidique de la glycoprotéine et former des liaisons covalentes intra- et/ou intermoléculaires indésirables, conduisant à l'instabilité du produit d'oxydation et fréquemment à la formation de polymères insolubles. I1 est également connu que la formation de bases de Schiff peut être empÊchée si les groupements aldéhyde engendrés par l'oxydation périodique sont rapidement réduits en alcool primaire stable. Cette réduction peut être mise en oeuvre en utilisant des agents réducteurs tels que les ions borohydrure. L'ion cyanoborohydrure est un réactif particulièrement approprié puisque l'ion periodate et l'ion cyanoborohydrure peuvent coexister sans que l'agent réducteur fasse perdre le pouvoir oxydant de l'ion periodate et vice versa. On a maintenant trouve, de façon absolument inattendue que lorsqu'on modifie les motifs glucidiques de la chaîne A de ricine par le procédé original décrit ci-après on obtient une nouvelle molécule de chaîne A ayant la double propriété de conserver ses activités biologiques et d'être éliminée très lentement de la circulation sanguine après injection chez les animaux supérieurs ou l'homme. Cette nouvelle chaîne A modifiée qui conserve la propriété d'inactiver les ribosomes et qui a acquis, du fait de la modification, une longue durée d'action in vivo, est désigne dans la présente demande par le symbole A-La. Ce procédé original consiste à modifier les motifs osidiques de la chaîne A de ricine par réaction simultanée avec les ions periodate et les ions cyanoborohydrure. De la sorte, les groupements aldéhyde, engendrés par l'oxydation periodique sont réduits au fur et a mesure de leur apparition, en groupements alcool primaires stables par les ions cyanoborohydrure, évitant ainsi les réactions indésirables avec des groupes aminés de la chaîne A et permettant d'obtenir un produit stable et bien soluble. On a également trouvé que, lorsque cette nouvelle molécule de chaîne A à longue durée d'action est couplée à des anticorps ou fragments d'anticorps, les conjugués obtenus conservent les propriétés biologiques connues des immunotoxines et présentent une cinetique d'élimination plasmatique lente. La présente -invention a donc pour objet, à titre de produit nouveau, une chaîne A de ricine modifiée dans sa structure, dont les motifs glucidiques ont été modifiés par l'action conjointe des ions periodate et d'ions cyanoborohydrure, ces derniers réduisant en fonctions alcool primaire stable les groupements aldéhyde engendrés par l'oxydation périodique, au fur et à mesure de leur apparition. La présente invention a aussi pour objet le procédé d'obtention de la chaîne A de ricine modifiée telle que caractérisée ci-dessus. La présente invention a également pour objet des produits appartenant à la classe des immunotoxines, obtenus par couplage covalent entre,d'une part, un anticorps ou fragment d'anticorps, utilisé sous forme naturelle ou correctement modifié et, d'autre part, une molécule de chaîne A dont les motifs glucidiques sont modifiés comme cela est caractérisé ci-dessus. On précise ci-après la signification des différents produits utilisés dans la mise en oeuvre de l'invention Le terme "periodate" désigne l'ion I04 présent dans les solutions aqueuses des sels de l'acide periodique et notamment les sels dérivant des métaux alcalins. Ces sels sont également mentionnés dans la littérature sous le nom de métaperiodates. Le terme "cyanoborohydrure" désigne l'ion CNBH présent dans les solutions aqueuses des cyanoborohydrures et dérivant notamment des métaux alcalins. Le terme "anticorps" représente une protéine choisie parmi tout anticorps ou fragment d'anticorps, ou toute immunoglobuline ou fragment d'immunoglobuline ou toute molécule dérivant des précédentes par modification artificielle de l'un quelconque de leurs groupements fonctionnels, y compris des structures osidiques qu'elles portent, sous réserve que la protéine ainsi choisie reste capable de reconnaître sélectivement un antigène donné à la surface des cellules porteuses de cet antigène et notamment des cellules cibles. L'anticorps de départ peut être polyclonal ou monoclonal. La protéine de départ peut être d'origine naturelle ou biosynthétique provenant d'une cellule dont le patrimoine génétique a été modifié dans ce but. La préparation d'anticorps monoclonaux dirigés notamment contre des cellules cibles humaines définies a été largement mentionnée dans la littérature scientifique et beaucoup de ces anticorps sont maintenant disponibles dans le commerce. Le terme "chaîne A de ricine" (ou simplement chaîne A) représente la sous-unité cytotoxique de nature glycoprotéique inactivant les ribosomes, obtenue à partir de la toxine ricine par exemple selon le procédé décrit dans le brevet US 4340535. Elle peut aussi être produite par voie biosynthétique par des cellules dont le patrimoine génétique a été modifié dans ce but et est également un composé convenable selon l'invention. Des fragments de chaîne A, à condition que de tels fragments retiennent tout ou partie de la propriété d'inactivation des ribosomes qui caractérise la chaîne A dont ils sont issus peuvent également être utilisés comme produits de départ. On préfère toutefois la chaîne A native. Le terme "chaîne A-La" représente la chaîne A de ricine modifiée selon l'invention, c'est-à-dire une molécule ayant la propriété d'inactiver les ribosomes comme la chaîne A de la ricine mais ayant une durée d'action in vivo supérieure à celle de la chaîne A et qui résulte du traitement de la chaîne A de ricine avec conjointement une solution aqueuse d'un agent oxydant, tel qu'un periodate et une solution aqueuse d'un cyanoborohydrure. On opère généralement pendant une période de temps de 0,2 à 24 heures, à un pH compris entre 5 et 7 et à l'abri de la lumière. Eventuellement au moins l'un des groupes thiol des cystéines 171 et 257 de la chaîne A de la ricine est protégé pendant le traitement ci-dessus et déprotégé après celui-ci. La chaîne A de ricine native, dont au moins l'un des groupements thiol est éventuellement protégé, est un composé de départ préféré pour la mise en oeuvre du procédé de l'invention. La protection des groupes thiol de la chaîne A de départ n1 est necessaire que lorsque lesdits groupes thiol sont ceux qui seront utilisés pour le couplage avec l'anticorps. Si pour le couplage on utilise d'autres groupes fonctionnels, la protection n'est pas indispensable. Cette protection est effectuée de préférence par réaction avec un agent susceptible de substituer les fonctions SH à l'aide d'un radical qui peut être ensuite élimine par réduction ou échange thiol/disulfure, par exemple l'acide dinitro-2,2' dithio-5, 5' dibenzolque (DTNB) ou bien l'acide (pyridyl-2 disulfanyl)-3 propionique. En l'absence d'un tel traitement les thiols libres de la chaîne A peuvent disparaître pendant la réaction d'oxydation et dans ce cas peuvent ne pas être totalement régénérés par l'action d'un agent réducteur, tel que le mercapto-2 éthanol. L'excès de l'agent bloquant est éliminé par dialyse ou par toute technique équivalente. La chaîne A dont les thiols sont bloqués est alors soumise à la réaction d'oxydation par ler ions periodate et à la réaction simultanée de reduction des groupements aldéhyde apparus en alcools primaires avec les ions cyanoborohydrure. La réaction d'oxydation periodique et la réaction de réduction sont effectuées à un pH modérément acide, compris entre 5 et 7, de préférence entre 6 et 6,5. Le periodate est mélangé au cyanoborohydrure avant l'addition de la chaîne A. Le periodate est utilisé en excès ; plus particulièrement, la concentration en periodate alcalin est toujours supérieure à la concentration des diols vicinaux susceptibles d'être oxydés : des concentrations de 10 à 50 mM en periodate de sodium pour des concentrations de 1 à 10 mg/ml de sous-unité cytotoxique sont convenables. Le cyanoborohydrure est également utilisé à une concentration supérieure à la concentration des diols vicinaux susceptibles d'être oxydés : des concentrations de 10 à 200 mM en cyanoborohydrure de sodium pour des concentrations de 1 à 10 mg/ ml de sous-unité cytotoxique sont convenables. La durée du traitement, réalisé à une température comprise entre 0 et 150C et de préférence entre 1 et 50C et à l'obscurité, est comprise entre 0,2 et 24 heures et de préférence entre 4 et 20 heures. Lorsque la réaction est terminée, le periodate restant est éliminé par addition d'un réactif qui le consomme, par exemple un excès d'ethylène-glycol ou de glycérol et les sous-produits sont éliminés par dialyse ou par toute autre procédure équivalente. Le produit obtenu à la fin de la réaction est isolé selon les techniques classiques. Lorsque les groupes thiol du produit de départ ont été bloqués, le déblocage est effectué selon les méthodes connues, par exemple par action d'un agent réducteur apte à libérer la fonction thiol préalablement bloque, tel que le mercapto-2 éthanol, ce qui conduit à l'obtention de la nouvelle glycoprotéine inactivant les ribosomes et à longue durée d'action prête à être utilisée pour le couplage avec un anticorps pour obtenir une immunotoxine. La nouvelle molécule de chaîne A de ricine ainsi obtenue (A-La) possède les propriétés principales suivantes : - un poids moléculaire non significativement différent de celui de la chaîne A native. Par électrophorèse en gradient de polyacryl amide du produit final,on constate que le procédé de modification ne fournit des polymères de la protéine qu'en quantité nulle ou très faible et ne fournit aucun produit de dégradation, - un taux de groupements thiol libres supérieur à 0,7 par mole, - une immunoréactivité envers des anticorps de lapin anti-chaîne A de ricine que l'on ne peut distinguer de celle de la chaîne A native, - une activité inhibitrice de la synthèse protéique dans un modèle acellulaire supérieure à 50% de celle provoquée par une égale quantité de chaîne A native, - enfin, après administration intraveineuse unique chez le lapin à une dose voisine de 0,4 mg/kg de poids corporel, le taux plas matique de la chaîne A à longue durée d'action (A-La) présent dans le sang circulant au temps 24 heures après l'injection est de 100 à 300 fois supérieur au taux plasmatique de la chaîne A native mesurée dans les mêmes conditions. Disposant d'une chaîne A-La possédant les propriétés resumées ci-dessus, il est possible de l'utiliser pour créer des conjugués ou immunotoxines selon les procédés déjà connus. Le couplage chimique entre la chaîne A-La et l'anticorps (ou fragment d'anticorps) peut être réalisé par tout mode opératoire qui - préserve les activités biologiques respectives des deux composants du conjugué: l'anticorps et la chaîne A-La, - assure au procédé une reproductibilité satisfaisante et un bon rendement de couplage, - permet de maîtriser la valeur du rapport chaîne A-La/anticorps dans le conjugué obtenu, - conduit à un produit stable et soluble dans l'eau. N'importe quel procédé convenablement choisi dans la gamme de ceux qui sont décrits dans le brevet US 4340535 et la demande de brevet FR 84 09703 (publiée sous le No. 2566271) peut être utilisé pour la préparation des conjugués ou immunotoxines à partir de la chaîne A-La de ricine de l'invention. Plus particulièrement, la présente invention a pour objet des produits, appartenant à la classe des immunotoxines (ci-après symbolisées IT), obtenus par couplage covalent entre, d'une part, un anticorps ou fragment d'anticorps, utilisé sous sa forme naturelle ou correctement modifié, possédant la capacité de reconnaître sélectivement un antigène porté par les cellules cibles visees et, d'autre part, la chaîne A de ricine à longue durée d'action dite chaîne A-La, obtenue par traitement, après protection des groupes thiol, avec conjointement une solution aqueuse d'un periodate alcalin et une solution aqueuse de cyanoborohydrure, puis déprotection éventuelle des groupes thiol. Avantageusement on opère pendant une période de temps de 0,2 à 24 heures, par exemple 4 à24 heures, à la température de O à 150C, à pH compris entre 5 et 7 et à l'abri de la lumière.Le couplage entre les deux protéines est de préférence réalisé par l'intermédiaire d'une liaison disulfure. Le couplage entre les deux protéines réalisé par l'intermédiaire d'une liaison disulfure a les caractéristiques suivantes - la liaison covalente entre la chaîne A-La et l'anticorps contient un radical disulfure, - l'un des atomes de soufre constituant la liaison disulfure est toujours l'atome de soufre appartenant au résidu-de cystéine en position 257 de la chaîne A-La de ricine, - le bras de liaison réunissant la chaîne A-La de ricine et l'anti corps est fixé sur ce dernier au niveau de groupements NH2 latéraux ou terminaux d'une chaîne peptidique, - ce couplage d'un anticorps avec la chaîne A-La de la ricine est réalisé selon le procédé décrit en détail dans le brevet US 4340535. Le réactif de couplage utilisé de préférence est un réactif hétérobifonctionnel du type N-succinimidyl 3-(2pyridyl-dithio)propionate ou du type acide (pyridyl-2-disulfanyl)-3 propionique activé par ltethyl-l (diméthylamino-3 propyl)-3 carbodiimide, tel que cela est décrit dans le brevet US 4340535. Les immunotoxines selon l'invention peuvent être représentées par la formule statistique suivante dans laquelle P' represente l'anticorps ou le fragment d'anticorps, W' une structure covalente appropriée, par exemple une structure à pont disulfure; A' la chaîne A-La et m le nombre de fonctions de l'anticorps ou du fragment d'anticorps intervenues dans le couplage. m peut être un entier ou non car dans la population des molécules d'anticorps le couplage ne se produit pas toujours d'une façon homogène. Le taux de couplage moyen exprimé en nombre de moles de chaîne A-La par mole d'anticorps est généralement compris entre 0,5 et 5 et en particulier entre 1 et 3. Les immunotoxines à chaîne A-La ainsi obtenues ont les propriété: suivantes - la séparation electrophorétique en gel de polyacrylamide de l'IT (A-La) conduit saune répartition du produit en une série de bandes correspondant à des produits dont les poids moléculaires diffèrent de celui de l'anticorps par incréments successifs de 30 000 daltons, - les études effectuées par cytofluorométrie permettent de montrer que l'anticorps n'a subi aucune altération importante au cours des réactions d'activation et de couplage auxquelles il a été soumis et qu'il reste capable au sein même du conjugué de reconnaître l'antigène contre lequel il est dirigé, - l'activité inhibitrice de la synthèse protéique de la chaîne A-La, modifiée et couplée à un anticorps, déterminée dans un modèle acellulaire en présence de mercapto-2-ethanol est totalement conservée. L'activité cytotoxique des immunotoxines à chaîne A-La mesurée dans un test de synthèse protéique en modèle cellulaire sur des cellules présentant l'antigène cible, est plus de 100 fois supérieure à celle mesurée dans les mêmes conditions pour des cellules ne présentant pas l'antigène cible. Par exemple, l'immunotoxine (désignée IT (A-La) AT1SE) construite en couplant, à l'aide d'un bras à pont disulfure, la chaîne A-La à un anticorps monoclonal (désigné anticorps AT15E) dirige contre l'antigène Thy 1.2 présent à la surface de certaines cellules leucémiques de souris est environ 1000 fois plus toxique vis-à-vis des cellules Thy 1.2 positives que des cellules Thy 1.2 négatives. De plus l'activité de 1'IT (A-La) AT1SE est identique à celle obtenue avec 1'IT préparée à partir du même anticorps AT1SE et la chaîne native. - enfin, après administration intraveineuse de 1'IT (A-La) chez le lapin à une dose voisine de 0,4 mg/kg de poids corporel exprimé en chaîne A, le taux plasmatique de 1'IT (A-La) présent dans le sang circulant au temps 24h après l'injection est de 50 à 100 fois supérieur au taux plasmatique de 1'IT classique mesurée dans les mêmes conditions. Ainsi typiquement chez le lapin, il apparaît que le taux plasmatique de 1'IT (A-La) AT1SE dans le sang circulant au temps 24 h après l'injection est de 9% du produit présent au temps zéro contre 0,08% pour l'IT ATTISE classique correspondante à chaîne A non modifiée, au même temps, soit un accroissement de l'ordre d'un facteur 110. On obtient ainsi des immunotoxines modifiées qui ont acquis un caractère nouveau quant à leurs propriétés pharmacocinétiques. Plus particulièrement, par modification appropriée de la sous-unite cytotoxique on a pu ajouter aux propriétés de cytotoxicité spécifique des immunotoxines, sans qu'il leur soit porté atteinte, une nouvelle propriété tout aussi Intrinsèque : la capacité à manifester une lente cinétique d'élimination plasmatique après injection chez les animaux supérieurs ou chez l'homme. I1 est apparu récemment dans la littérature des travaux ayant pour objet l'amélioration des propriétés pharma cocinétiques de la ricine et potentiellement celles des conjugués anticorps-ricine et des conjugues anticorps-chaîne A de ricine. Les publications de ces travaux sont les suivantes - European Journal of Biochemistry (1985) 147, 197-206. - Biochimica Biophysica Acta (1985) 842, 12-21, - Cancer Drug Delivery (1985) 3, 191-198. Comme cela sera expliqué ci-après, l'examen détaillé de ces publications fait apparaître des différences majeures aussi bien au niveau de la méthodologie qu'au niveau des résultats entre ces travaux et ceux de la demanderesse, d'où il ressort une très grande supériorité des produits, objets due la présente demande. A) Au niveau de la méthodologie. Selon cet art antérieur, la méthode utilisée visant à réduire la vitesse d'élimination, in vivo, de la ricine et potentiellement celle des conjugués anticorps-ricine et des conjugués anticorps-chaîne A de ricine a consisté à modifier les résidus osidiques de la toxine ricine entière en utilisant un mélange de métaperiodate de sodium et de cyanoborohydrure de sodium à pH 3.5 pendant des périodes de temps courtes dont l'optimum est défini égal à 1 heure. Le procédé mis au point par la demanderesse se distingue de cette méthode par les points suivants 1) la modification a lieu exclusivement sur la molécule de chaîne A de ricine purifiée, 2) le pH de la réaction est beaucoup plus élevé (proche de la neutralité), 3) la durée optimale de traitement beaucoup plus longue (de 4 à 16 heures). I1 convient d'indiquer également que, lorsque la méthode décrite dans ces publications est appliquée directement à la chaîne A de ricine purifiée, celle-ci est rapidement et irréversiblement dénaturée dans sa quasi-totalité, ce qui la rend impropre à toute utilisation ultérieure. Ce point a été établi expérimentalement par la demanderesse. Ainsi la procédure décrite dans ces publications pour la ricine entière ne peut pas être directement transposée à la molécule de chaîne A de ricine et donc le procédé original de modification de la chaîne A découvert par la demanderesse ne pouvait être en aucune façon anticipé de ces publications. B) Au niveau des résultats a) Propriétés de la ricine modifiée. La toxine ricine modifiée selon la méthode décrite dans ces publications a les propriétés principales suivantes 1) l'activité biologique in vitro de la ricine modifiée, c'est à dire son pouvoir cytotoxique vis-à-vis de cellules en culture, est très fortement altérée par le traitement, la perte d'activité pouvant atteindre 90% 2) la toxicité globale in vivo de la ricine modifiée évaluée dans deux espèces animales (souris et rat) est, à l'inverse, accrue d'un facteur compris entre 3 et 4. On notera que ces deux propriétés devraient conférer à un conjugué, construit par couplage d'un anticorps et de la ricine ainsi modifiée, des propriétés qui vont à contresens de ce qui est désirable pour les immunotoxines pour lesquelles sont recherchés à la fois un pouvoir cytotoxique vis-à-vis des cellules cibles le plus élevé possible et une toxicitié non spécifique globale la plus faible. 3) la captation hépatique de la ricine qui est le phénomène majeur responsable de son élimination du courant circulatoire est diminuée d'un facteur 2 lorsque la ricine a été modifiée. I1 en résulte un accroissement de la concentration plasmatique de la ricine modifiée d'un facteur seulement égal à 2,3 par rapport à cette concentration lorsque la ricine n' a pas été modifiée. En outre, il est à noter que le degré d'inhibition de la captation hépatique de la ricine obtenue par la modification chimique de ses résidus osidiques est inférieur à celui obtenu lorsque la ricine native est coadministrée in vivo avec un excès d'ovalbumine, glycoprotéine qui, par ses résidus osidiques à mannose terminal,est un puissant compétiteur de la ricine vis-àvis des récepteurs des glycoprotéines à mannose terminal des cellules hépatiques. Ceci indique que le traitement de la ricine, tel que décrit dans ces publications, est très insuffisant pour assurer une complète destruction des sucres de la ricine responsables de la captation hépatique de la toxine. b) Propriétés biologiques des immunotoxines à chaîne A issues de la ricine modifiée. Les auteurs des publications mentionnées ci-dessus, ont construit une immunotoxine en utilisant la chaîne A de ricine purifiée à partir de la ricine modifiée. La ricine modifiée a été obtenue par traitement de la ricine native par le periodate de sodium et le cyanoborohydrure de sodium à pH 3,5 pendant 60 minutes. Ces conditions sont, selon ces auteurs, les conditions optimales qui assurent le meilleur compromis entre l'accroissement du taux plasmatique de la ricine et la diminution de son activité biologique (selon ces conditions de traitement le taux plasmatique de la ricine ainsi modifiée est augmenté d'un facteur 2 à 2,3 alors que son activité est réduite d'un facteur 4,7). La chaîne A issue de la ricine ainsi modifiée a été couplée par l'intermédiaire d'un pont disulfure à un anticorps dirigé contre certaines cellules cancéreuses. Les études des propriétés biologiques de cette immunotoxine, présentées dans ces publications font apparaître une activité considérablement réduite. ta cytotoxicité induite par ce conjugué vis-à-vis des cellules cibles est inferieure d'un facteur 3 à 4 à celle du même conjugué construit avec la chaîne A de ricine native, ce qui indique que le traitement de la ricine réalisé tel que décrit par ces auteurs, qui est préjudiciable pour l'activité biologique de la ricine, l'est également pour les immunotoxines construites avec la chaîne A issue de cette ricine modifiée. Rappelons qu'à l'inverse les immunotoxines à chaine A-La préparées selon le procédé de la présente demande présentent des activités cytotoxiques vis-à-vis des cellules cibles identiques à celles obtenues avec les mêmes immunotoxines homologues construites avec la chaîne A de ricine native. C) Propriétés pharmacocinétiques de la chaîne A issue de la ricine modifiée et propriétés pharmacocinetiques des immunotoxines correspondantes. A partir des résultats exposés ci-dessus, les auteurs de ces publications prévoient que les immunotoxines prépares avec la chaîne A issue de la ricine modifiée selon leur méthode devraient avoir des propriétés pharmacocinétiques améliorées, c'est-à-dire une vitesse d'élimination du compartiment sanguin diminuée, leur conferant ainsi des activités biologiques accrues. Toutefois aucun résultat d'expérience n'apporte la demonstration de ce point essentiel. En outre, cette conclusion ne peut même pas être déduite des données publiées pour les raisons suivantes - les seuls résultats de pharmacocinétique décrits sont ceux obtenus expérimentalement avec les toxines entières (ricine et ricine modifiée) et non avec les chaînes A correspondantes. Or la toxine ricine contient une unité oligosaccharidique sur la chaîne A mais aussi deux unités oligosaccharidiques .portées par la chaîne B. Ces unités osidiques, étant toutes à mannoses terminaux, sont également susceptibles d'être reconnues par les cellules non parenchymateuses portant des récepteurs capables de reconnaître ces oses.En pratique, on ne sait pas si les motifs osidiques impli qués dans ce processus d'élimination de la ricine son ceux portés par les chaînes A ou par les chaînes B ou par les deux. I1 n'est donc pas possible de savoir si les motifs osidiques responsables de la rapide élimination de la chaîne A, comme cela est démontré par la demanderesse, sont les mêmes que ceux qui sont également impliqués dans l'élimination de la ricine. En conséquence l'inhibition partielle de la capture hépatique de la ricine modifiée par le procédé décrit dans les publications citées, qui atteste que les motifs osidiques impliques dans ce processus pour la ricine entière ont été en partie modifies, n indique, en aucune façon, que la modification des motifs osidiques de la chaîne A obtenue lorsqu'on opère sur la ricine entière est appropriée pour assurer une inhibition de la capture hépatique de la chaîne A isolée et donc une lente élimination de celle-ci et des immunotoxines correspondantes. La demanderesse a donc entrepris des travaux pour déterminer les propriétés pharmacocinétiques de la chaîne A isolée à partir de ricine modifiée selon le procédé décrit dans les publications citées et des-immunotoxines correspondantes. Les procédures expérimentales utilisées pour 1) la modification de la ricine, 2) l'isolement de la chaîne A, 3) le couplage de la chaîne A à l'anticorps sont strictement identiques celles décrites dans les publications mentionnées précédemment et dans celles citées en référence dans ces articles. Les résultats obtenus avec la chaîne A issue de ricine modifiée selon le procédé décrit dans les publications citées sont résumés dans le tableau I, dans lequel figurent aussi, à titre comparatif, les résultats obtenus avec la chaîne A native et avec la chaîne A-La préparée selon la présente invention. Tableau I. Chaîne A Chaîne a issue Chaîne A-La native de la ricine modifiée Inhibition de synthèse protéique en modèle acellulaire (CI50) 10-0M 10-9M 1,2.10-0M Thiol libre par mole de chaîne A 0,9 0,77 0,79 Poids moléculaire 30 000 30 000 30 000 +/- 3000 +/- 3000 +/- 3000 Concentration plasmatique relative (%) 24 h après 0,015 0,04 5 l'injection Ainsi, ces résultats montrent que la chaîne A obtenue à partir de la ricine modifiée présente des propriétés identiques à celles de la chaîne A-La en ce qui concerne le nombre de thiolslibrespar mole de chaîne A et le poids moléculaire. Par contre, ces deux produits diffèrent considérablement quant à leurs propriétés biologiques 1) l'activité biologique intrinsèque de la chaîne A, qui est son pouvoir à inhiber la synthèse protéique, est diminuée d'un facteur 10 pour la chaîne A issue de la ricine modifiée alors qu'elle n'est pas altérée (ou d'un facteur non significatif) pour la chaîne A-La. 2) La différence en ce qui concerne les propriétés pharmacocinétiques est encore plus spectaculaire. La concentration plasmatique mesurée 24 heures après l'injection est 125 fois superieure pour la chaîne A-La que pour la chaîne A issue de la ricine modifiée, dont la capacité à demeurer dans le courant circulatoire n'est améliorée que d'un facteur égal à 2.6 seulement par rapport à la chaîne A native. Les résultats de pharmacocinétique et d'activité biologique des immunotoxines construites avec la chaîne A issue de ricine modifiée sont résumés dans le tableau II qui présente aussi, à titre comparatif, les résultats obtenus avec les immunotoxines construites avec la chaîne A native et avec la chaîne A-La préparée selon la présente invention. Tableau II. Immunotoxine à Immunotoxine à Immunotoxine à chaîne A native chaîne A issue chaîne A-La de ricine modifiée Concentration nécessaire pour inhiber de 50% la synthèse des protéines des cellules 2.10-0M > 10-9M 2.10-0M cibles (CI50) Concentration plasmatique relative (%) 24 h après 0,08 0,6 9 l'injection Ces résultats indiquent que 1) la capacité des immunotoxines à chaîne A issue de ricine modifiée à demeurer dans la circulation in vivo est considérablement plus faible que celle enregistrée avec les immunotoxines à chaîne A-La.Au temps 24 h après injection, l'écart correspond à un facteur égal à 15, 2) l'activité cytotoxique vis-à-vis des cellules cibles des immunotoxines à chaîne A issue de ricine modifiée est au moins 20 fois inférieure à celle des immunotoxines à chaîne A native ou à chaîne A-La qui présentent des activités cytotoxiques identiques. Ces résultats demontrent la très large supériorité des immunotoxines preparées selon l'invention par rapport à celles préparées à partir des intermédiaires décrits dans la littérature. Ainsi, cet examen comparatif entre les travaux décrits dans la littérature et ceux décrits dans la présente demande confirme le caractère totalement inattendu des résultats obtenus par la demanderesse et met mieux encore en lumière le haut degré d'amélioration apporté par les nouvelles molécules de chaîne A-La et par les nouvelles molécules d'immunotoxine à chaîne A-La. Les exemples suivants permettent de mieux comprendre l'invention sans en limiter la portée. EXEMPLE 1 Cet exemple démontre, après injection intraveineuse chez l'animal, l'élimination lente de la chaîne A de ricine modifiée par réaction d'oxydation par le periodate de sodium et par réaction de réduction simultanée par le cyanoborohydrure de sodium. Modification de la chaîne A de ricine par action simultanée du periodate de sodium et du cyanoborohydrure de sodium. 1) Blocage du SH naturel de la chaîne A par le DTNB. La chaîne A de ricine a été preparée et purifiée selon le mode opératoire décrit dans le brevet US 4340535. A 20 ml d'une solution de chaîne A de ricine comportant 0,81 groupement thiol par mole de chaîne A, à la concentration de 6 mg/ml dans le tampon phosphate 125mM, pH 7, on ajoute 20 équivalents d'acide dinitro-2,2' dithio-5,5' dibenzoïque (DTNB) sous la forme de 0,7 ml de solution de DTNB dans un tampon phosphate 125mM, cette solution étant amenée à pH 7 à l'aide d'hydroxyde de sodium. On laisse incuber le mélange pendant 30 minutes à 200C. On dialyse ensuite la solution contre du PBS (tampon phosphate 20 mM, NaCl 150 tiM, pH 7) ; on obtient après centrifugation à 10 000 x g pendant 30 minutes 107 mg de chaîne A bloquée sur la fonction thiol, en solution à 5,5 mg/ml. 2) Oxydation periodique et réduction par le cyanoborohydrure de sodium de la chaîne A bloquée sur la fonction thiol L'ensemble de cette procédure est réalisé à 40C. A 107 mg de chaîne A bloquée sur la fonction thiol contenue dans 19,5 ml, on ajoute 19 ml de tampon acétate 0,2 M, pH 6,5 et on amène cette solution à pH 6,5 à l'aide de tampon acétate 0,2 M, pH 3,5. On prépare une solution de cyanoborohydrure de sodium à 160 mM dans le tampon acétate pH 6,5. On prépare une solution de periodate de sodium à 80 mM dans le tampon acétate pu 6,5, cette solution étant maintenue à l'obscurité. Puis l'on mélange dans l'obscurité 19 ml de la solution de periodate de sodium avec 19 ml de la solution de cyanoborohydrure de sodium.Après 10 minutes on ajoute, dans l'obscurité, au mélange periodate de sodium/cyanoborohydrure de sodium 38 ml de la solution de chaîne A bloquée sur la fonction thiol et on laisse l'incubation se poursuivre pendant 17 heures, à 40C dans l'obscurité. La réaction est arrêtée par addition de 2,7 ml d'une solution de glycérol à 20% (v/v) dans le tampon acétate 0,2M, pH 6,5. On laisse l'incubation se poursuivre pendant 20 heures à 40C, puis la solution est dialysée extensivement à 40C pendant 48 heures contre du tampon bicarbonate d'ammonium 50 mM, pH 7,8. Après centrifugation à 10 000 x g pendant 30 minutes, on obtient 74 ml de solution à 0,82 mg/ml de chaîne A-La bloquée sur la fonction thiol et modifiée sur ses résidus osidiques par oxydation et réduction. 3) Déblocage des groupements thiol 74 ml de solution à 0,82 mg/ml de chaîne A-La bloquée et modifiée sur ses résidus osidiques sont ramenés à 16,8 ml par concentration, puis on ajoute 0,406 ml de mercapto-2 éthanol à 50%. On laisse l'incubation se poursuivre pendant 1 h à 200C. On dialyse ensuite la solution contre le tampon PBS à 40C. On obtient ainsi 45 mg de chaîne A-La modifiée à une concentration de 2,87 mg/ml. En utilisant la technique au DTNB (Methods in Enzymology, 1972, 25, 457 (Academic Press)) on détermine que la chaîne A-La ainsi obtenue présente 0,79 groupement thiol libre par mole. Le poids moléculaire de la chaîne A-La, déterminé par électrophorèse en gradient de polyacrylamide en présence de dodécylsulfate de sodium, est de 30 000 +/- 3 000. La préparation de chaîne A-La, obtenue précédemment, a été étudiée en ce qui concerne son activité enzymatique d'inhibition de la synthèse protéique et ses propriétés pharmacocinétiques. II - Activité enzymatique de la chaîne A-La à longue durée d'action, mesurée dans un modèle acellulaire. La propriété biologique fondamentale de la chaîne A de ricine est d'inhiber lasynthèseprotéique cellulaire par altération de la sous-unité ribosomale 60S. Le protocole in vitro utilisé, comporte l'emploi de fractions subcellulaires de foie de rat convenablement complémentées et capables d'incorporer la 14C-phénylalanine en présence d'un ARN messager artificiel, l'acide polyuridylique. Le mode opératoire employé pour préparer les fractions subcellulaires et pour mesurer l'incorporation de 14C-phénylalanine est une adaptation de la méthode décrite dans Biochimica Biophysica Acta, 1973, 312, 608-615, mettant en oeuvre à la fois une fraction microsomale et une fraction de cytosol des hépatocytes de rat. L'échantillon contenant la chaîne A est introduit sous la forme d'une solution convenablement diluée dans un tampon Tris-HCl 50 mM, pH 7,6 contenant du mercapto-2 éthanol à 0,2% et de la sérum-albumine bovine à 15 microgrammes/ml. A partir des données de comptage, on calcule par rapport à un milieu témoin sans inhibiteur le pour centage d'inhibition de ltincorporation de de 14C-phenylalanine dans les protéines pour chaque milieu réactionnel contenant de la chaîne A de ricine. Les courbes obtenues permettent de calculer la CI50 ou concentration de chaîne A (native ou modifiée) qui inhibe de 50% l'incorporation du précurseur radiomarqué dans les protéines. On observe ainsi une CI50 égale à 192.10 moleil pour la chaîne A-La selon l'invention. La CI50 de la chaîne A témoin de l'expérience est de lu 10 mole/l : compte tenu de la précision des mesures, la modification n' entraîne donc pas de perte significative d'activité de la chaîne A. III- Propriétés pharmacocinétiques de la chaîne A-La à longue durée d'action. La chaîne A (native ou modifiée) est administrée chez le lapin par injection unique dans une veine de l'oreille. La quantité de chaîne A ou A-La injectée correspond à 0,415 mg/kg. Les échantillons de sang sont prélevés au cours du temps sur héparine. Les plasmas sont analysés à l'aide d'un test immunoradiométrique ci-après désigné par l'abréviation IRM-1. Cette technique a l'avantage de doser la chaîne A sans modification de celle-ci. Ce dosage est réalisé dans des plaques à microtitrations (par exemple : "NUNC-TSP screening system" Poly Labo Block France) dont le couvercle est muni de pointes hyperabsorbantes qui plongent dans les puits du socle. Ces pointes constituent les phases solides. Des anticorps de brebis anti-chaîne A de ricine (ci-après désignés sous l'abre- viation Acl), purifiés par chromatographie d'affinité, sont absorbés sur les phases solides. Pour cela 200 microlitres d'une solution d'Acl à 10 microgrammes/ml dans le tampon phosphate PBS sont distribués dans les puits. Les pointes sont mises en contact d'abord avec la solution d'Acl pendant 24 h à 4"C puis avec du sérum de veau foetal pendant 3 h à 200C pour saturer tous les sites de fixation.L'immunoabsorbant saturé est alors mis en contact pendant 3 h à 200C avec les échantillons plasmatiques à doser à différentes dilutions ou avec des solutions de chaîne A de concentrations connues pour l'établissement de la courbe d'étalonnage. Un lavage est effectué par un tampon PBS, puis l'immunoabsorbant est mis en contact pendant 2 h à 20 C avec les anticorps de brebis anti-chaîne A de ricine purifié par chromatographie d'affinité et radiomarqués (ci-après désignés par l'abréviation Ac2). Le radiomarquage de l'Ac2 est réalise avec de l'iode 125 en présence de chloramine T selon la méthode de Greenwood et Hunter (Biochem. J., 1963, 89, 114) ; l'activité spécifique des Ac2 radiomarqués est de 5 à 10 microcuries/microgramme. 106 coups par minute (cpm) d'Ac2 radiomarqués sont introduits sous 200 microlitres dans le tampon PBS, contenant 0,1% de sérum albumine bovine. Après lavage, dans le tampon PBS, les pointes sont détachées et la quantité d'Ac2 lié est mesurée par comptage de la radioactivité. La mesure dela concentration en chaîne A dans les échantillons à doser se fait par référence à la courbe d'étalonnage réalisée avec la chaîne A introduite à différentes concentrations connues. Lorsque de la chaîne A-La à longue durée d'action est injectée qhez l'animal, cette même chaîne A-La est utilisée pour l'établissement de la courbe d'étalonnage correspondante. Les valeurs de concentration en chaîne A (native ou modifiée) dans le plasma sanguin mesurées par cette technique sont reproductibles et fiables. Le seuil de détection est de 1 nanogramme/ml. L'étude de la reproductibilité intraet inter-essais donne des coefficients de variation inférieurs à 10% pour les valeurs de concentrations comprises dans la gamme de 1 à 200 nanogrammes/ml. Les résultats de ces expériences sont représentés sous la forme de courbes présentant en abscisse le temps, exprimé enheures, et en ordonnée, sur echelle logarithmique, la concentration plasmatique du produit testé, rapportée en pourcent de la concentration plasmatique théorique au temps zéro. Cette valeur appelée "concentration plasmatique relative" (CPR) est calculée à l'aide de l'expression suivante Concentration mesurée au temps t CPR = ------------------------------------ x 100 quantité injectée/volume plasmatique Le volume plasmatique est considéré égal à 36 ml/kg de poids corporel de l'animal. La figure 1 montre les courbes d'élimination plasmatique, en fonction du temps après injection intraveineuse, de la chaîne A de ricine native et de la chaîne A-La modifiée. Pour la chaîne A native (courbe l) il apparaît deux phases : dans la première phase, le produit disparaît très rapidement de la circulation, puisque trois heures après l'injection il ne reste plus dans le plasma que 0,1 % de la dose administrée. Dans la deuxième phase, la décroissance est plus lente. Lorsque la chaîne A a été modifiée sur ses motifs osidiques (chaîne A-La, courbe 2), le profil d'élimination est profondément modifié : la première phase d'élimination - responsable de la disparition de la plus grande partie du produit est pratiquement abolie, ce qui conduit à un accroissement consi dérable des taux plasmatiques de sous-unité cytotoxique active. Vingt-quatre heures après l'injection, la concentration de la chaîne A-La modifiée est 330 fois supérieure à la concentration de la chaîne A non modifiée (courbe 2). Ainsi, ces résultats prouvent que les réactions d'oxydation par le periodate de sodium et de réduction des groupes aldéhydes apparus avec formation d'alcool primaire par action du cyanoborohydrure de sodium ont modifié les sucres impliqués dans le processus de reconnaissance responsable de l'élimination de la chaîne A au point d'empêcher cette reconnaissance sans que l'activité biologique caractéristique de la chaine A soit altérée. EXEMPLE 2 Cet exemple démontre l'importance de la durée du traitement oxydatif sur les propriétés pharmacocinétiques de la chaîne A oxydée et réduite. Cinq préparations de chaîne A-La sont réalisées en utilisant le mode operatoire décrit dans l'exemple 1 excepté pour la durée du traitement par le mélange periodate de sodium plus cyanoborohydrure de sodium. Les durées de traitement sont les suivantes : zéro (arrêt immédiat par le glycérol), 30 minutes, 1 heure, 2 heures, 4 heures et 16 heures. Ces différentes préparations sont injectées chez le lapin et la concentration plasmatique relative de la chaîne A-La est mesurée au temps 24 heures selon le même-mode opératoire que dans l'exemple 1. Les résultats sont représentés sur la figure II, sur laquelle on a porté en ordonnée le CPR au temps 24 heures et en abscisse la durée du traitement du periodate-cyanoborohydrure. Ces résultats indiquent que 1) l'accroissement du taux plasmatique de la chaîne A est bien dû à la réaction d'oxydation et de réduction puisque,lorsque la réaction est immédiatement arrêtée, la concentration plasmatique de la chaîne A-La est identique à celle obtenue pour la chaîne A native, 2) il est nécessaire que la durée de ces réactions soit relativement longue pour obtenir des effets optimaux. EXEMPLE 3 Immunotoxine (abrégé IT) obtenue par réaction entre un anticorps anti-cellules T de souris (anticorps dirigé contre l'antigène Thy 1.2) substitué par des groupements disulfure activés et la chaîne A-La de ricine, a) anticorps anti-cellules T de souris ou anticorps AT1SE : cet anticorps a été obtenu selon la méthode décrite dans Journal of Immunology (1979) 122, 2491-2498, b) chaîne A-La de ricine : la chaîne A-La de ricine utilisez a été préparée ainsi qu'il a été indiqué dans l'exemple 1, c) anticorps activéanti-cellules T de souris A 10 ml d'une solution à 5,83 mg/ml d'anticorps dans un tampon borate 0,1 M, pH 8,8, on ajoute 4,25 mg de N-succinimidyl-3 (2-pyridyl-dithio)propionate dans l'éthanol à 95% sous un volume de 0,5 ml. Le mélange est agité 30 minutes à 200C.Après dialyse contre du tampon phosphate 125mM, pH 7, la solution protéique est centrifugée à 10000 x g pendant 30 minutes a' 4"C , et on obtient ainsi 57,3 mg d'anticorps activé à une concentration de 4,66 mg/ml. Par dosage spectrophotométrique à 343 nm de pyridinethione-2 libérée par échange avec le mercapto-éthanol, on constate que l'on a obtenu un anticorps portant 3,75 groupements disulfure mixte activé par mole d'anticorps. d) Préparation de l'immunotoxine à chaîne A-La de ricine à longue durée d'action. A 6,5 ml de la solution d'anticorps activé précédemment obtenue (concentration 4,66 mg/ml soit 30,3 mg d'anticorps activés) on ajoute 8,9 ml de chaîne A-La à 2,87 mg/ml obtenue comme indiqué à l'exemple 1 et on incube 20 heures à 250C. La solution est centrifugée puis purifiée par filtration sur colonne de gel (gel AcA44) avec mesure de la densité optique de l'effluent à 280nm. Le regroupement des fractions contenant à la fois l'anticorps et la chaîne A modifiée conduit à 32 ml de solution dtimmuno- toxine à 0,4 mg/ml soit 12,8 mg. Cette solution contient 0,107 mg de chaîne A-La modifiée couplée à l'anticorps par ml. Le taux de couplage moyen de cette préparation est donc de 1,8 mole de chaîne A-La par mole d'anticorps. L'immunotoxine à chaîne A-La de ricine obtenue comme indiqué ci-dessus a été étudiée en ce qui concerne ses propriétés pharmacocinétiques et ses propriétés de cytotoxicité spécifique vis-à-vis des cellules cibles. EXEMPLE 4 Cet exemple montre l'acquisition de la propriété de lente élimination plasmatique des immunotoxines à chaîne A de ricine à longue durée d'action désignées en abrégé IT (A-La). I-Mode operatoire Le conjugué préparé selon le procédé décrit dans l'exemple 3 est administré chez le lapin par injection unique dans une veine de l'oreille. La quantité injectée correspond à 0,415 mg/kg exprimé en chaîne A. Les échantillons de sang sont prélevés au cours du temps sur héparine. Les plasmas sont analysés à l'aide d'un test immunoradiométrique à deux sites ci-après désigné par l'abréviation IRM-3. Cet essai est réalisé selon la même technique que pour le test IRM-1 (décrit dans l'exemple 1) excepté que la solution Ac2 est ici une solution d'anticorps de chèvres anti-IgG de souris purifiés par chromatographie d'affinité et radiomarqués comme décrit pour la technique IRM-1 (décrit dans l'exemple 1). La mesure de la concentration en immunotoxine modifiée dans les échantillons à doser se fait par référence à une courbe d'étalonnage réalisée avec l'immunotoxine modifiée introduite à différentes concentrations connues. L'essai IRM-3 répond aux mêmes caractéristiques de fiabilité et de reproductibilité que celles décrites pour la technique IRM-1. Pour comparaison, une étude contrôle est réalisée dans les mêmes conditions avec le conjugué appelé IT-AT1SE obtenu par réaction entre le même anticorps AT1SE substitué par des groupements disulfure activé et la chaîne A native de ricine. La préparation est réalisée selon la même procédure que celle décrite dans l'exemple 3. Les résultats de ces expériences de pharmacocinétique sont représentés de la même façon que pour la chaîne A de ricine non couplée décrit dans l'exemple 1. II - Résultats La figure 3 montre les courbes d'élimination plasmatique en fonction du temps de 1'IT AT1SE conventionnelle (courbe 1) et de 1'IT (A-La) AT1SE (courbe 2) injectées par voie intraveineuse. Vingt-quatre heures après l'injection, la concentration d'immunotoxine active est 110 fois supérieure pour 1'IT (A-La) AT1SE que pour 1'IT AT1SE classique. Ce fait démontre que les nouvelles propriétés pharmacocinétiques de la chaîne A-La sont conservées après couplage à un anticorps. EXEMPLE 5 Cet exemple démontre le maintien des propriétés de cytotoxicité spécifique de 1'IT (A-La) AT1SE vis-à-vis des cellules cibles Thy 1.2 positives. ta propriété biologique fondamentale de la chaîne A de ricine est d'inhiber la synthèse protéique cellulaire par altération de la sous-unité ribosomale 60S. La technique utilisée met en oeuvre un modèle cellulaire dans lequel on mesure l'effet des substances étudiées sur l'incorporation de 14C-leucine dans les cellules cancéreuses en culture. Les cellules utilisées appartiennent à la lignée cellulaire T2 issue d'une leucémie T qui porte l'antigène Thy 1.2. Les cellules sont incubées en présence de la substance à étudier à différentes concentrations puis, en fin d'incubation, on procède à la mesure du taux d'incorporation de 14C-leucine par les cellules ainsi traitées. L'expérience est réalisée en l'absence ou en présence du chlorure d'ammonium à la concentration finale de l0mM, connu pour augmenter l'activité cytotoxique des immunotoxines. Cette mesure est effectuée selon une technique adaptée de la technique décrite dans Journal of Biological Chemistry 1974, 249 (11), 3557-3562 utilisant le traceur 14C-leucine pour la détermination du taux de synthèse protéique. La détermination de la radioactivité incorporée est effectuée ici sur les cellules entières isolées par filtration. A partir de ces déterminations, on peut tracer les courbes effets/doses présentant en abscisse la concentration molaire en chaîne A des substances étudiées et en ordonnée l'incorporation de 14C-leucine exprimée en pourcentage de l'incorporation des cellules temoins en l'absence de toute substance affectant la synthèse protéique. On peut ainsi déterminer pour chaque substance étudiée la concentration qui inhibe 50% de l'incorporation de 14C-leucine ou "concentration inhibitrice 50" (CI50). Le tableau III ci-après représente les valeurs de CI50 obtenues dans la même expérience avec 1'IT (A-La) ATTISE et IT AT1SE en l'absence ou en présence de chlorure d'ammonium d'une part, la chaîne A native et la chaîne A-La non couplée d'autre part. On peut constater que 1'IT (A-La) AT1SE a une très forte activité cytotoxique, identique à celle obtenue avec l'îmmunotoxine à chaîne A native correspondante et qui est environ 1 000 fois supérieure à celle de la chaîne A-La non couplée, mesurée dans les mêmes conditions. On peut constater également que 1'IT (A-La) AT1SE conserve pleinement sa capacité à être potentialisée par le chlorure d'ammonium Tableau III Produits Concentration inhibitrice 50. IT (A-La)AT15E 2.10-0M IT(A-La)AT15E -11 + 10 mM NH4C1 3.10-M IT AT15E 2.10-0M IT AT15E -11 + 10 mM NH4C1 3.10-M Chaîne A native 3.10 7M Chaîne A-La 2.10 7M Ces immunotoxines modifiées peuvent etre utilisées pour le traitement des affeetions cancéreuses ou non dont les cellules cibles seraient reconnues par l'anticorps utilisé pour la préparation de l'immunotoxine. Les modalités optimales d'administration ainsi que la durée du traitement devront être déterminées dans chaque cas en fonction du sujet et de la nature de l'affection à traiter. Les nouveaux médicaments selon l'invention sont conditionnés pour être utilisés par voie injectable et de préférence par voie intraveineuse. REVENDICATIONS 1. Chaîne A de ricine modifiée, ayant la cytotoxicité de la chaîne A native et une durée d'action in vivo prolongée par rapport à celle de la chaîne A, caractériséeen ce qu'elle est obtenue par traitement de la chaîne A de la ricine avec conjointement une solution aqueuse d'un periodate et une solution aqueuse d'un cyanoborohydrure. 2. Chaîne A modifiée selon la revendication 1, caractérisée en ce qu'au moins l'un des groupes thiol de la chaîne A est protégé pendant ledit traitement. 3. Chaîne A modifiée selon l'une des revendications 1 ou 2, caractérisée en ce que ledit traitement a lieu en solution aqueuse à pH 5 à 7, une température de O à 150C, à l'obscu- rité et pendant une période de 0,2 à 24 heures. 4. Chaîne A modifiée selon l'une quelconque des revendications 1 à 3, caractérisée en ce que la solution réactionnelle contient de 1 à 10 mgZml de chaîne A réactive, 10 à 50 mM de periodate alcalin et 10 à 200 mM de cyaonoborohydrure de sodium. 5. Procédé de préparation d'une chaîne A modifiée selon l'une quelconque des revendications 1 à 4, caractérisé en ce que l'on traite la chaîne A de ricine avec conjointement une solution aqueuse d'un periodate et une solution aqueuse d'un cyanoborohydrure. 6. Procédé selon la revendication 5, caractérisé en ce que ledit traitement par les ions periodate et le cyanoborohydrure a lieu en -solutTon aqueuse à pH 5 à 7, à une température de O à 150C, à l'obscurité et pendant une période de 0,2 à 24 heures. 7. Procédé selon l'une des revendications 5 ou 6, caractérisé en ce que la solution réactionnelle contient de 1 à 10 mg/ml de chaîne A réactive, 10 à 50 mM de periodate alcalin et 10 à 200 mM de cyanoborohydrure de sodium. 8. Procédé selon l'une quelconque des revendications 5 à 7, caractérisé en ce que la chaîne A de ricine est préalablement traitée par un réactif classique de protection des groupes SH, et en ce que lesdits groupes SH sont déprotégés après le traitement par les ions I04 et le cyanoborohydrure. 4 9. Procédé selon la revendication 8, caractérisé en ce que le réactif de protection des groupes SH est choisi parmi l'acide dinitro-2,2' dithio-$5' dibenzolque et l'acide (pyridyl-2 disulfanyl)-3 propionique et en ce que la déprotection des groupes SH est effectuée par action du mercapto-2 éthanol. 10. Immunotoxine à durée d'action prolongée in vivo, caractérisée en ce qu'elle résulte du couplage d'un anticorps ou d'un fragment d'anticorps à de la chaîne A de ricine modifiée selon l'une quelconque des revendications 1 à 4. 11. Immunotoxine selon la revendication 10, caractérisée en ce que le couplage entre l'anticorps ou le fragment d'anticorps et la chaîne A modifiée a lieu par l'intermédiaire d'un pont disulfure. 12. Immunotoxine selon la revendication 11, caractérisée en ce que le couplage est effectué avec un réactif hétérobifonctionnel choisi parmi le N-succinimidyl 3-(2-pyridyldithio)propionate ou l'acide (pyridyl-2-disulfany1)-3 propionique activé par 1'éthyl-1 (diméthylamino-3 propyl)-3 carbodiimide. 13. Composition pharmaceutique anticancéreuse caractérisée en ce qu'elle contient, à titre de principe actif, une immunotoxine selon l'une quelconque des revendications 10 à 12.