Brevet FR2592047A1 — publié le 19870626

Il a été montré que l'action de la majorité des hormones et notamment des hormones stéroldes s'effectue par l'intermédiaire de leur association avec une protéine spécifique appelée "récepteur". On peut donc s'attendre à ce que le changement dans la concentration des récepteurs d'un organe donné révele la présence d'un état pathologique. Le dosage des récepteurs hormonaux est particulièrement important dans le domaine des cancers sensibles aux hormones tels que les cancers du sein, de l'utérus, de la prostate. Il a été aussi montré que la connaissance du taux de récepteurs de l'oestradiol et de la progestérone est essentielle pour le pronostic et la thérapeutique des cancers du sein Mc Quire W.L. "Hormone and Cancer" 14, 337-343 (Raven Press New-York 1980). Jusqu'à ce jour, pour des raisons de sensibilité,les méthodes de dosage des récepteurs étaient basees sur des techniques radioisotopiques en dépit de leurs inconvénients bien connus (coût élevé, difficultés de marquage ...). On a cependant déjà décrit des complexes organométalliques d'oestrogènes et leur application au dosage des récepteurs oestrogéniques. (Demande de brevet européen EP 0.105.785). Cette invention utilise la propriété qu'ont des complexes des métaux carbonyles de présenter une bande infra-rouge dans la région2100-1850 cl'qui est une zone de faible absorbtion des protéines. Cependant les complexes décrits dans la demande de brevet européen EP. U.105.785 sont spécifiques du récepteur oestrogénique. L'intérêt croissant des récepteurs progestogène et glucocorticoïde ont amené a rechercher des complexes ayant une bonne stabilité en solution et ayant gardé une bonne affinité spécifique pour ces récepteurs. L'invention a pour objet un complexe organométallique d'un produit ayant une affinité pour l'un au moins des recepteurs progestogene et glucocorticoide caractérisé en ce que le produit ayant une affinité pour l'un au moins des récepteurs progestogène et glucocorticoïde est un stéroïde comportant au moins un des radicaux suivants - un radical aryle en position 11 p - un radical aryle en position 17 - un radical alkynyle en position 17 et en ce que l'entité organométallique comporte au moins un ligand carbonyle libre. Comme indiqué précédemment, ces complexes sont utiles notamment pour la détection et le dosage des récepteurs progestogène et glucocorticoïde. Parmi les produits stéroïdes ayant une affinité pour l'un au moins des récepteurs progestogène et glucocorticoïde, une première categorie est constituée par les produits comportant un radical aryle en position 11 . Ces radicaux aryles peuvent être choisis parmi les radicaux suivants : - thiényle, furyle, thiazolyle, isothiazolyle, oxazolyle, isoxazolyle, thiadiazolyl e, pyridinyle ou pipéridi nyle. Le radical arylique préféré est cependant le radical phényle éventuellement substitué. Parmi les substituants éventuels des radicaux aryliques et particulièrement du radical phényle, on peut citer les radicaux amino éventuellement nions ou disubstitués tels que les radicaux méthylamino, éthylamino, Parnii les substituants préférés du radical aryle en position 11/3, une catégorie préférée est celle des substituants comportant un atome d-'azote éventuellement oxydé. Ces différents substituants sont cités en particulier dans le brevet européen EP. 0.057.115. Parmi ces substituants, on peut citer, pour le radical en position 11, les valeurs suivantes : / CHa /CH3 r' ,O CH3 o 3 ĭÉ3 ; /cn3 X3 ; /3 e 5/eN\ CH ainsi que les valeurs correspondantes dans lesquelles l'atome d'azote est sous forme oxydée, notamment le radical Une autre catégorie de substituants, en position 11 Û , est constituée par les radicaux suivants, cités notamment dans le brevet américain USP 4,477,445 : Une seconde catégorie de produits stéroïdes pouvant être utilisés pour former les complexes est constituée par les produits comportant en position 17 et de préférence en position 17 &alpha; un radical alkynyle éventuellement substitué. Parmi les radicaux de ce type, on peut citer les radicaux suivants : -C E CH ; -C # C-CH3 ; -C r C-CF3 ; -CH2-C # CH ; -C r C-SiMe3; -C r C-CH2 CH3 ; -CEC-Cl ; -CEC-CH20H ; -C-C-C02H. Les produits peuvent également comporter en position 17 X à la fois un radical alkynyle et un radical aryle. On peut notamment citer les substituants suivants Parmi les complexes de la présente invention, on préfère cependant un complexe tel que défini ci-dessus dans lequel le radical en position 17d est un radical éthynyle ou propynyle. L'invention a donc particulièrement pour objet un complexe tel que défini ci-dessus caractérisé en ce que le stéroïde ayant une affinité pour l'un au moins des récepteurs progestogène et glucocorticoïde est un stéroïde comportant au moins l'un des radicaux suivants : - un radical aryle en position 11 f - un radical alkynyle en position 17 &alpha; et plus particulièrement encore un complexe caractérisé en ce que le stéroïde ayant une affinité pour l'un des récepteurs progestogène et glucocorticoïde est un stéroïde comportant au moins l'un des radicaux suivants : - un radical phényle éventuellement substitué en position 113, - un radical éthynyle ou propynyle en position 17 d . Parmi les produits stéroïdes préférés constituant le complexe > une première famille est constituée par les produits de formule générale dans laquelle : - soit R1 représente un radical phényle éventuellement substitué par un radical méthyle, chlorofluoro, allyloxy, diméthylamino, diméthylaminoéthoxy, méthyloxy, méthyl thio, et R3 et R4 sont tels que - ou bien R3 représente un radical hydroxyle et R4 représente un radical éthynyle, propynyle, 3-hydroxy prop-1-ényle, hydroxy propyle, ou un atome d'hydrogène, - ou bien R3 et R4 représentent ensemble un radical :: soit R1 représente un radical vinyle et R3 et R4 sont tels que R3 représente un radical hydroxyle et R4 représente un radical éthynyle ou propynyle, R2 représente un radical méthyle ou éthyle, le trait pointillé signifie que le radical R2 peut se trouver dans la position &alpha; ou 5 . Une classe préférée est constituée par les produits de la série naturelle dans laquelle le substituant R2 est dans la position p . Une seconde famille est constituée par les produits de formule générale dans laquelle - soit R5 représente un atome d'hydrogene, le trait pointillé en position 1(2) ne représente pas une seconde liaison ; les traits pointilles positions 9(10) et 11(12) representent éventuellement une seconde liaison, le radical R6 représente un atome d'hydrogène, R7 représente un radical méthyle ou éthyle, R8 représente un atome d'hydrogène ou. un radical hydroxyle et Rg représente un radical éthynyle ou propynyle, - soit R5 représente un radical méthyle, les traits pointillés en positions 9(10) et 11(12) ne représentent pas une seconde liaison, le trait pointillé en position 1(2) représente Eventuellement une seconde liaison, le radical R6 représente un atome d'hydrogène ou un radical hydroxyle, R7 représente un radical méthyle, R8 représente un radical hydroxyle et R9 représente un radical éthynyle ou propynyle. Comme steroldes particuliers, on peut citer les produits suivants On peut, pour préparer les complexes, objets de l'invention, utiliser un composé organométallique de métaux des groupes Via, VIIa ou VIII de la classification périodique. Plus particulièrement, les métaux préférés sont le chrome, le cobalt, le molybdène, le tungstène, le manganèse, le rhénium, le nickel ou le technétlum. Les composés organométalliques utilisés peuvent être différents selon que le complexe est formé avec un radical aryle porté par le stéro?de en position 11 1'3 ou 17 ou avec un radical alkynyle porté en position 17 de préférence dans les deux cas, en position 17&alpha;. Parmi les complexes de l'invention, un complexe préféré est celui caractérisé en ce que le compose organometallique avec lequel le stéroïde est complexé, est choisi - soit parmi les produits suivants : Cr(CO)3 ; Cr(oe)2CS ; Cr(CO)2CSe lorsque le complexe est formé avec un radical aryle porté par le stéroSde, - soit parmi les produits suivants Co2(CO)6 ; Mo2Cp2(CO)4 ; Co(CO)3 NiCp ; Co(CO)3Mo(CO)2Cp Mn(CO)4NiCp (Cp = cyclopentadiényle) lorsque ie complexe est formé avec un radical alkynyle porté par le stéroïde. Plus particulièrement, parmi les complexes précédents, un complexe particulièrement préféré est caractérisé en ce que le composé organométallique avec lequel le sterolde est complexé, est - soit Cr(C0)3 lorsque le complexe est formé avec un radical aryle porte par le stéroïde, - soit CoZ(C0)6 ou Mo2Cp2 (CO)4 lorsque le complexe est formé avec un radical alkynyle porté par le stéroïde. Enfin, parmi ces derniers complexes, les produits préférés sont caractérisés en ce que le composé organométallique est Cr(C0)3 fixé sur un produit stéroïde comportant un radical aryle en position 11. Parmi les complexes préférés, on peut citer les produits suivants Les complexes, objets de la présente invention, peuvent être préparés par les méthodes usuelles. En ce qui concerne les dérivés métaux carbonyles préparés à partir de molécules contenant une fonction acétylénique, on peut indiquer par exemple que la préparation de complexes dicobalt hexacarbonyles s'effectue sans difficulté à partir du réactif Co2 (CO)8 à température ambiante, sous atomosphère inerte, la reaction pouvant être effectuée dans du tétrahydrofuranne. La formation d'un complexe avec Cp2Mo2(CO)4 est effectuée de préférence par réduction du produit Cp2Mo2(CO)6 en présence de diglyze sous atmosphère inerte. En ce qui concerne les dérivés métaux carbonyles préparés à partir de molécules possédant un cycle aromatique, on peut utiliser les méthodes classiques de complexation. Une méthode plus douce peut être adoptée : elle consiste à utiliser, un organo métallique plus réactif que Cr(C0)6, le produit de formule Cr(C0)3 (NH3)3 préparé selon la méthode décrite par Vebrel et al J. Organanal Chem. 235, 197-200 (1982), la réaction a lieu au reflux du tétrahydrofuranne, par exemple. Des exemples de telles préparations sont données ci-après dans la partie expérimentale. La présente invention a enfin pour objet l'application des complexes tels que décrits précédemment au dosage des récepteurs progestogène et glucocorticolde par spectroscopie infra-rouge ou Raman. De préférence, on effectue le dosage par spectroscopie infra-rouge. Les méthodes de détection des récepteurs hormonaux sont décrites ci-après dans la partie expérimentale. Les exemples suivants illustrent l'invention, sans toutefois la limiter. Exemple 1 : Complexe du 17 ss- hydroxy 11 ss- (4-diméthylamino phényl) 17 &alpha; - (prop-l-ynyl) estra 4,9 dièn-3-one avec Co2 (CO)6 de formule : On dissout sous argon 500 mg de 170 - hydroxy 11 ss -(4-diméthylamino phényl) 17&alpha;- (prop-1-ynyl) estra 4,9-dièn 3-one dans 10 ml de THF fraîchement distillé. Une solution contenant 440 mg de Co2(CO)8 (1,28 x 10-3 mole) dissous dans 25 ml de THF fraîchement distillé est additionnée à la solution précédente par 1'intermédiaire d'une seringue. La réaction se fait à température ambiante. Une agitation magnétique est maintenue pendant environ une heure. Le controle de la réaction est fait par CCM. Après filtration, évaporation du solvant et chromatographie sur couche mince (éluant CH2Cl2/CH3COOEt = 1/1 (v/v)), 360 mg d'un produit brun sont recueillis. Le complexe est recristallisé dans l'éther isopropylique. Formule brute : C3508H35NC 2 Analyse : Calculé C : 58,75 H : 4,93 N : 1,95 Trouvé C : 59,19 H : 4,96 N : 1,95 IR (solution dans CHCl3) : VCO : 2 088,8 : 2 050,2 ; 2 025,1 ; 2 018 cm-1. RMN (solution dans Acd6) : óppm : 0,80 (3H, s, 18-Me) ; décomposition vers 160 C /&alpha;/ 20 = -274,5 (C = 2,77 x 10-3 g/ml dans CHCl3) D Exemple 2 : complexe du 17 ss - hydroxy 11 @ - (4-méthylthio phényl) 17 &alpha; - (prop-1-ynyl) estra 4,9 - dièn -3-one avec Co2 (CO)6 de formule On opère comme à l'exemple 1 au départ de 200 mg de 17 ss hydroxy 11 b- (4 - méthylthiophényl) 17&alpha;-(prop-1-ynyl) estra 4,9-diene 3-one et obtient après chromatographie sur couche mince (eluant CH2Cl2/AcOEt = 2/1 (v/v)), 240 mg de produit attendu Formule brute : C34H32SO8Co2 Analyse :Calculé C : 56,83 H : 4,49 Co : 16,40 Trouvé C : 57;05 H : 4,56 Co : 16,23 IR (solution dans CHCl3) : 2 019 cm-1. RMN (solution dans Acd6) : # ppm : 0,78 (3H, s, 18-Me) ; décomposition vers 1600C [&alpha;]D @ @@00,0 (@ - 2,@ @ @@ g/@@ @@s @@@@3) Exemple 3 : Complexe du 11 ss, 17ss -dihydroxy 21-méthyl prégna 1,4-diene 20-yne 3-one avec Co2(CO)6 de formule : On opère conme à l'exemple 1 au départ de 400 mg de 11ss, 17 ss dihydroxy 21-méthyl prégna 1,4-diène 20-yne 3-one et 730 mg de produit attendu sont recueillis après chromatographie sur couche mince (éluant CH2Cl2/AcOEt=1/1 (v/v)). Formule brute : C28H2809Co2 Analyse : Calculé C : 53,69 H : 4,50 Trouvé C : 54,75 H : 4,77 IR (solution dans CHCl3) : v CO = 2 088,8 ; 2 050,2 ; 2 027,1 ; 2 019 cm-1. RMN (solution dans Acd6) : d ppm : 1,39 (3H, s, 18-Me) ; décomposition vers 1600C /&alpha;/ 20 = -277" (c = 2,2 x 10-3 g/ml dans CHCl3) D Exemple 4 : Complexe de la norgestriénone (17 - hydroxy 19-nor 17&alpha; - # prégna 4,9,11 trién 20-yn 3-one) avec Co2 (CO),; de formule : On opère comme à l'exemple 1 après chromatographie sur couche mince (éluant : CH2Cl2/AcOEt=2/1 (v/v), on obtient 1,58 g de complexe brun qui recristallise sous forme d'aiguilles dans l'éther isopropylique). Formule brute : C26H22O8Co2 Analyse : Calculé C : 53,81 H : 3,82 Co : 20,31 Trouvé C : 53,48 H : 3,82 Co : 19,90 IR (solution dans CHCl3) : # CO : 2 095; 2 056 ; 2 029 cm-1 RMN (solution dans Acd6) : #ppm : 1,16 (3H, s, 18-Me) ; décomposition vers 160 C /&alpha;/20 = -290 (c = 1,93 x 10-3 g/ml dans CHCl3) D Exemple 5 : Complexe du 17 ss - hydroxy 11ss (4 - diméthylaminophényl 17&alpha; - (prop-1-ynyl) estra 4,9-dièn 3-one avec Mo2Cp2(CO)4 (Cp = cyclopentadiényle) de formule : On ajoute sous argon environ 15 cm3 de diglyme fraîchement distillé à 1,1 g de /Cp Mo (CO)3/2. La solution est agite magnétiquement et chauffée à 180 C pendant 3 heures ; un barbotage d'argon est maintenu.pendant le temps de la réaction. La formation de l'intermédiaire Mo2Cp2(C0)4 peut etre contrôlée par spectroscopie infra-rouge. La solution est filtrée à chaud. L'intermédiaire Mo2Cp2 (CO)4 est recueilli en solution dans le diglyme 300 mg de 17 ss- hydroxy 11(3 - (4-diméthylaminophényl) 17&alpha;- (prop-1-ynyl) estra 4,9-diène 3-one sont additionnés et le tout est mis à chauffer à 1000C pendant 5 heures. Après évaporation du solvant et chromatographie sur couche mince (éluant : CH2Cl2/AcOEt = 5/1 (v/v)), 315 mg de complexe attendu sont recueillis. Formule brute : C43O6H45MMo2 Analyse : Calculé C : 59,80 H : 5,25 N : 1,62 Mo : 22,21 Trouvé C : 60,93 H : 5,34 N : 1,72 Mo : 22,25 IR (solution dans CHCl3) : vCO : 1 982,7 ; 1 913,3 ; 1 825 cm1; RMN (solution dans aCd6) : 5,26 (5H, s, #5 C5H5 5,32 (5H, s, q5 C5H5) /&alpha;/20 = = + 84 (c = 2,38 x 10-3 g/ml dans CH2C12' D décomposition vers 1600 C. Spectre de masse : 846 = (M - OH)+ Exemple 6 : Complexe du 11-, 17ss - dihydroxy 21-méthyl prégna 1,4-diène 20-yne 3-one avec mOCP2(CO) 4. (Cp = cyclopentadiényle) de formule : On opère comme à l'exemple 5 à partir de 770 mg de de 11 ss, 17 ss- dihydroxy 21-méthyl prégna 1,4-diène 20-yne 3-one et obtient, après chromatographie (éluant : CH2Cl2/AcOEt=2/1 (v/v)), 685 mg de complexe attendu, Formule brute : C36H3807Mo2 Analyse élémentaire :Calculé C : 55,82 H : 4,94 Mo : 24,77 Trouvé C : 55,79 H : 5,05 Mo : 23,97 IR (solution dans CH2Cl2) : # CO : 1825 ; 1915 ; 1980 cm-1 RMN (solution dans CDC13) : S ppm 5,24 (5H, s, #5C5H5) 5,42 (5H, s, #5C5H5) décomposition vers 16U C /#/ 18 = 143 (c = 0,704 x 10-3 g/ml dans CH2Cl2) D Exemple 7 : Complexe du 17ss-hydroxy 11 ss- (4-diméthylaminophényl) 17&alpha; &alpha; (prop-1-ynyl) estra 4,9-dièn 3-one avec Cr(C0)3 de formule Le mode opératoire suivi est décrit par Vebrel J. Nercier R. et Belleney J.J. Organométal Chem 235,197-200 (1982) pour l'indène 500 mg de de 17ss - hydroxy 11 ss- (4-diméthylaminophényl) 17&alpha;- (prop-1-ynyl) estra 4,9-dièn 3-one et environ 600 mg de (NH3)3Cr(CO)3 sont mis à refluer pendant 4 heures dans 100 cm3 de THF fraichement distillé. Après filtration et évaporation du solvant, le mélange de produits de la réaction est chromatographié dans un éluant éther/pentane = 4/1 (v/v). Le produit migrant le plus lentement correspond au complexe désiré. 470 mg de produit attendu ont été obtenus. Formule brute : C32H3505NCr Analyse : Calculé C : 67,95 H : 6,24 N : 2,47 Trouvé C : 67,24 H : 6,62 N : 2,27 IR (pastille KBr) : # CO : 1 948 ; 1 851,5 cm1 RMN (solution dans Acd6) : : ppm : 5,46 (4H, massif, noyau aromatique complexé) décomposition vers 170 C /&alpha;/ 20 = -40,6 (C = 2,46 x 10-3 g/ml dans acétone) D Masse : (M + 1)+ = 566 (M + 1)±Cr(CO)2 = 458 (M + 1)±Cr(C0)3 = 430 (M + 1)±Cr(C0)3 - (C 3 C-CH3) = 391 Exemple 8 : Complexe du 17ss- hydroxy 11ss- /N-methyl 2,3-dihydro 1H-indol-5-yl/17&alpha; -(prop-1-ynyl) estra 4,9-dièn 3-one avec Cr(CO)3 de formule : On procède comme à exemple 7 au départ de 300 mg de 17 ss hydroxy 11ss-/N-méthyl 2,3-dihydro 1H-indol-5-yl/17 &alpha; - d(prop-1-ynyl) estra 4,9-dièn 3-one et obtient 275 mg de complexe attendu. IR (pastille KBr) : Y CO : 1 952 ; 1 877 cm1 RMN (solution dans Acd6) : # ppm : 5,49 (3H, massif noyau aromatique complexé). décomposition vers 175 C /&alpha;/ 20 = -236 (c = 2,075 x 10-3 g/ml dans acétone) D Masse : (M + 1) + = 578 M±(CEC-CH3) = 538 M±(C0)3) = 493 (M + 1)±Cr(CO)3) = 442 M±Cr(CO)3)-(C@C-CH3)=402 Exemple 9 : Complexe du 11 &alpha;, 17ss- dihydro;y 6,21-dimëthyl prégna 1, 4, 6-trlen 20-yne 3-one avec Co2(CO)6 de formule On opère comme à l'exemple 1 au départ de 400 mg de 19 ss, 17 ss dihydroxy 6,21-dimethyl prégna 1, 4, 6-trièn 20-yne 3-one et obtient 560 mg de produit attendu. IR (solution dans CHCl3) : 2 089 ; 2 050 ; 2 027 cm1 RMN (solution dans Acd6) : ppm : 1,45 (3H, s, 18-Me) ; décomposition vers 1800C /&alpha;/20 = -270 (C = 2,42 x 10-3 g/ml dans CHCl3) D Dans les exemples précédents, THF signifie tétrahydrofuranne CCM : chromatographie sur couche mince. Tous les spectres ont été enregistés sur un spectromètre à transformée de Fourier de type Nicolet 6 000 équipé d'un détecteur MCT (Mercure-Cadmium-Tellure) refroidi à l'azote liquide. Pour augmenter le rapport signal/bruit, 20 000 balayages ont été réalisés à une résolution de 4cm-1. On obtient aussi les spectres ci-joint Spectre l : Spectre IR des protéines présentes dans le cytosol d'utérus de lapin. On peut noter la très faible absorbance dans la région 2 100-1 800 cm-1. L'existence de cette "fenêtre" permet l'approche organométallique. Spectre 2 : Spectre IR du produit de l'exemple 8 en pastille KBr. On remarque les fortes intensités des bandes caractéristiques des modes de vibration VCO des groupes carbonyles du greffon organométallique (1953-1948 cm-1). Spectre 3 : Spectre IR des protéines contenant le complexe produit de l'exemple 1-protéine démontre l'importance de la "fenêtre" laissée par les protéines. Trois pics de faible intensité apparaissent dans cette zone caractéristique des métaux carbonyles alors que toutes les autres bandes de l'hormone stérolde sont masquées par celles -très intensesdes protéines. Spectre 4 : Spectre 3 après correction de ligne de base et expansion dans la régioa 2: 100-1 975 à 2 085, 2 045 et 2 015 cm. Les trois pics observés correspondent aux modes de vibration VCO de l'entité Co2(C0)6 produit de l'exemple 1 en solution dans le chloroforme. Spectre 6 Spectre IR-FT du cytosol d'utérus de lapin incubé avec le produit de l'exemple 8 après correction de ligne de base et expansion dans la région 2 000-1 850 cm . Les deux bandes observées à 1 955 et 1 880 cm'l sont caractéristiques respectivement des modes de vibration A1 et E de l'entité Cr(C0)3. Les spectres 4 et 6 démontrent qu'il n'y a aucun artéfact possible : la position et le nombre de bandes visibles dans la région 2 100-1 850 cml sont caractéristiques du marqueur stéroldien utilisé lors de l'incubation du cytosol d'utérus de lapin. Les produits des exemples 8 et 1 donnent tous deux des résultats satisfaisants quant a- la détection IR-FT des groupes métaux carbonyles parmi l'amas de protéines. ETUDE PHARMACOLOGIQUE Etude de l'activité des produits sur les récepteurs hormonaux Récepteur progestogène de l'utérus de lapine. Des lapines impubères d'environ 1 kg reçoivent une application cutanée de 25 Agd'estradiol. 5 jours après ce traitement, les animaux sont sacrifiés ; les utérus sont prélèves, pesés et homogénéisés à 0 C à l'aide d'un Potter polytetrafluoroéthylène-verre dans une solution tamponnée TS (Tris lOmM saccharose 0,25 M, HCl pH 7,4) (1 g de tissu pour 50 ml de TS). L'homogenat est ensuite ultracentrifugé (105 000 g x 90 mn) à OQC. Des aliquotes du surnageant ainsi obtenu sont incubées à 0 C pendant un temps(t), avec une concentration constante (T) de Produit R tritié (17,21-dimethyl 19-nor-4,9-prégnadiène-3,20-dione) en présence de concentrations croissantes (0 - 2 500. 10-9M) soit de R froid, soit de progestérone froide, soit du produit froid à tester. La concentration de R tritié lié (B) est ensuite mesurée dans chaque incubat par la technique d'adsorption au charbon dextran. Récepteur glucocorticoTde du thymus de rat Des rats mâles Sprague Dawley EOPS de 160 à 200 g sont surrénalectomises. 4 à 8 jours après cette ablation, les animaux sont sacrifiés et les thymus sont prélévés et homogénéisés à 00C dans un tampon Tris 10mM, saccharose 0,25M, dithiothreitol 2mM, HCl pH 7,4, à l'aide d'un Potter polytétrafluoroéthylène-verre (1 g de tissu pour 10 ml de TS). L'homogénat est ensuite ultracentrifugé (105 000 g x 90 mn) à 0 C. Des aliquotes du surnageant ainsi obtenu sont incubées à 0 C pendant un temps(t) avec une concentration constante (T) de dexaméthasone tritiée en présence de concentrations croissantes (O - 2 500, 109M) soit de dexamëthasone froide, soit du produit froid à tester.La concentration de la dexaméthasone tritiée liée (B) est ensuite mesurée dans chaque incubat par la technique d'adsorption au charbon-dextran. Calcul de l'affinité relative de liaison Le calcul de l'affinité relative de liaison (ARL) est identique pour tous les récepteurs. On trace les 2 courbes suivantes : le pourcentage de l'hormone tritiée liée B en fonction du logarithme de la concentration de T l'hormone de référence froide et B en fonction du logarithme de la T concentration du produit froid testé. On détermine la droite d'équation I50 = (B max + B min)/2. T T B max = Pourcentage de l'hormone tritiée liée pour une incubation de T cette hormone tritiée liée pour une incubation de cette hormone tritiée à la concentration T. B min = Pourcentage de l'hormone tritiée liée pour une incubation de T cette hormone tritiée à la concentration (T) en présence d'un grand excès d'hormone froide (2 500.10-9M). Les intersections de la droite I50 et des courbes permettent d'évaluer les concentrations de l'hormone de référence froide (CH) et du produit froid testé (CX) qui inhibent de 50 % la liaison de l'hormone tritiée sur le récepteur. L'affinité relative de liaison (ARL) du produit test est déterminé par l'équation ARL = 100 (CH) (cx) Les résultats obtenus sont les suivants : ARL : Progestogène : Glucocorticoïde . : Produit : temps : temps : temps : temps : : de l'exemple X court : long : court : long : : Produit de l'exemple 7: 1,3 : 20,5 . 23 : 29,5 : Produit de l'exemple 8: 7 : 50 : 31 : 43 Détection par spectroscopie infra-rouge a transformée de Fourrier (IR-FT) des récepteurs de la progestérone marqués par une hormone organo métallique. Partie expérimentale : A - Une préparation du cytosol d'utérus de lapin avec une concentration de 10,1 x 10-9 M en sites de récepteurs de la progestérone est effectuée selon la méthode suivante : Des lapines impubères d'environ 1 Kg reçoivent une application cutanée de 25 Agd'estradiol. 5 jours après ce traitement, les animaux sont sacrifiés ; les utérus sont prélévés, pesés et homogénéisés à 0 C à l'aide d'un Potter polytétrafluoroéthylène-verre dans une solution tamponnée TS (Tris 10mM saccharose 0,25 M, HCl pH 7,4)(1 g de tissu pour 10 ml de TS). B - Une solution 10-3N de l'hormone organométallique sélectionnée est préparée. Elle est effectuee dans l'alcool absolu pour le produit de l'exemple 7 et dans le DMF (dimêthylformamide) pour le produit de l'exemple 1. Toutes les dilutions pour obtenir les molarités d'incubation désirées sont faites avec de l'alcool absolu d'où un pourcentage inférieur à 5 % de DMF dans les solutions finales de produit de l'exemple 1. Pour une concentration finale 10-6M d'hormone organométallique, une fraction de cytosol est incubée pendant 3 heures en présence de marqueur raison de 50 pl de solution 2 x 105M par ml de cytosol. Une fraction du cytosol sert au dosage des protéines présentes dans la préparation par la méthode de LOWRY modifiée (Bensadoun A. Weinstein D, Analytical Biochem, 70, 241 (1976)). Ce dosage permet de determiner la concentration- de solution de sulfate de protamine à utiliser pour la précipitation des protéines. A la fin du temps d'incubation, on ajoute un volume égal de cette solution de sulfate de protamine. La solution est agitée vigoureusement et conservée à 0 C pendant 10mn. Le précipité est récupéré par centrifugation (3 300 x g pendant 15 mn). Le culot est lavé par 4 fois à l'eau bidistillée glacée. Apres lyophilisation, on obtient une poudre blanche utilisable sans autre traitement pour l'étude infrarouge. Cette poudre est pressée pour donner des micropastilles de 3mm de diamètre. Les opérations qui suivent la période d'incubation doivent être effectuées en un minimum de temps et à une température de 0 C afin de minimiser au maximum la dissociation des complexes hormone - récepteur. REVENDICATIONS 1/. Complexe orqanométallique d'un produit ayant une affinité pour l'un au moins des récepteurs progestogdne et glucocorticolde caractérisé en ce que le produit ayant une affinité pour l'un au moins des récepteurs progestogène et glucocorticoide est un stéroïde comportant au moins un des radicaux suivants - un radical aryle en position 11 ss, - un radical aryle en position 17. - un radical alkynyle en position 17, et en ce que l'entité organométallique comporte au moins un ligand carbonyle libre. 2/. Complexe selon la revendication 1 caractérisé en ce que le stérolde ayant une affinité pour l'un au moins des récepteurs progestogene et glucocorticolde est un stéroïde comportant au moins l'un des radicaux suivants - un radical aryle en position 11 ss, - un radical alkynyle en position 17 o(. 3/. Complexe selon l'une des revendications 1 ou 2 caractérisé en ce que le stéroïde ayant une affinité pour l'un des récepteurs progestogène et glucocorticolde est un stérolde comportant au moins l'un des radicaux suivants : - un radical phényle éventuellement substitué position 11 - un radical éthynyle ou propynyle en position 17 &alpha; 4/.Complexe selon l'une quelconque des revendications 1 à 3 caractérisé en ce que le stéroïde ayant une affinité pour l'un des récepteurs progestogène et glucocorticolde est choisi parmi les produits de formule générale Ia dans laquelle : - soit R1 représente un radical phényle éventuellement substitué par un radical méthyle, chlorofluoro, allyloxy, diméthylamino, diméthylaminoéthoxy, méthyloxy, méthylthio, et R3 et R4 sont tels que :: - ou bien R3 represente un radical hydroxyle et R4 représente un radical éthyle, propynyle, 3-hydroxy prop-1-enyle, hydroxy propyle, ou un atome d'hydrogène, - ou bien R3 et R4 représentent ensemble un radical soit R1 represente un radical vinyle et R3 et R4 sont tels que R3 represente un radical hydroxyle et R4 représente un radical éthynyle ou propynyle, R2 représente un radical methyle ou éthyle, le trait pointillé signifie que le radical R2 peut se trouver dans la position ' ou 5/.Complexe selon l'une quelconque des revendications 1 a 3 caractérisé en ce que le stéroïde ayant une affinité pour l'un des récepteurs progestogène et glucocorticoide est choisi parmi les produits de formule générale Ib dans laquelle - soit R5 représente un atome d'hydrogène, le trait pointillé en position 1(2) r.e représente pas vr.e seconde liaison ; les traits pointillés en positions 9(10) et 11(12) représentent éventuellement une seconde liaison, le radical R6 represente un atome d'hydrogène, R7 représente un radical methyle ou éthyle, R8 represente un atome d'hydrogene ou un radical hydroxyle et Rg représente un radical ethynyle ou propynyle, - soit R5 represente un radical méthyle, les traits pointilles en positions 9(10) et 11(12) ne représentent pas une seconde liaison, le trait pointillé en position 1(2) représente brentuellement une seconde liaison, le radical R6 représente un atome d'hydrogène ou un radical hydroxyle, R7 représente un radical méthyle, R8 représente un radical hydroxyle et Rg représente un radical ethynyle ou propynyle. 6/. Complexe selon l'une quelconque des revendications 1 a 5 caractérisé en ce que l'entité organométallique avec lequel le stéroïde est complexé, est choisi - soit parmi les produits suivants Cr(C0)3 ; Cr(C0)2CS ; Cr(C0)2CSe lorsque le complexe est formé avec un radical aryle porté par le stérolde, - soit parmi les produits suivants : Co2(CO)6 ; Mo2Cp2(CO)4 ; Co(C0)3 NiCp ; Co(CO)3MolCO)2Cp Mn(CO)4NiCp (Cp = cyclopentadiényle) lorsque le complexe est formé av ec un radical alkynyle porté par le stéride. 7/. Complexe selon l'une quelconque des revendications 1 a 6 caractérisé en ce que le composé organométallique avec lequel le stéroide est complexé est : - soit Cr(C0)3 lorsque le complexe est formé avec un radical aryle porté par le stéroïde, - soit Co2(CO)6 ou Mo2Cp2 (CO)4 lorsque le complexe est formé avec un radical alkynyle porté par le stéroide. 8/. Complexe selon l'une quelconque des revendications 1 à 4 ou 6 et 7 caractérisé en ce que le composé organométallique est Cr(C0)3 fixé sur un produit stéro5de comportant un radical aryle en position 11. 9/. Application des complexes selon l'une des revendications 1 à 8 au dosage des récepteurs progestogène et glucocorticoïde par spectroscopie infra-rouge ou Raman.