Brevet FR2587357A1 — publié le 19870320

La présente invention concerne des anticorps monoclonaux de primates non- humains, des lignées de cellules d'hybridome et des procédés pour leur produc- tion, ainsi que l'utilisation de ces lignées cellulaires pour produire lesdits anticorps. Les hybridomes sont des cellules formées par fusion d'une cellule immortalisante, telle qu'une cellule de myélome, avec le plus souvent une cellule non transformée choisie pour son aptitude à produire une substance prédéterminée particulière, par exemple un lymphocyte, pour produire des anticorps. La cellule hybride résultante peut être sélectionnée et clonée pour obtenir des lignées de cellules produisant des substances ayant une structure et/ou une propriété uniques. En particulier, ces hybridomes formés avec des lymphocytes peuvent être utilisés pour produire des anticorps monoclonaux. Le développement de la technologie des hybridomes ces dernières années a été dirigé vers l'ob- tention de lignées de cellules qui sont à la fois stables et produisent avec un rendement élevé et de manière spécifique une substance particulière que l'on désire obtenir. Il y a eu diverses approches de ce problème qui, en raison de leur origine historique, ont été largement concentrées dans le domaine des immuno- globulines / anticorps. Une étude d'activités préalables dans ce domaine donne une vue d'ensemble des types de problèmes rencontrés et des diverses solutions tentées jusqu'à présent. L'impulsion initiale pour la recherche dans les lignées de cellules hybrides fabriquant des produits monoclonaux est venue du domaine de l'immunobiologie, les produits étant des anticorps monoclonaux. Les antisérums classiques contiennent ordi- nairement un très grand nombre d'anticorps qui diffèrent structurellement par le site de fixation de l'antigène, mais se fixent chacun sur le même antigène avec un plus ou moins grand degré d'avidité et/ou de spécificité. En outre, les antisérums classiques contiennent également un grand nombre d'anticorps diriges contre d'autres antigènes et reflétrant les réactions de défense préa- lables de l'individu récepteur à partir duquel on a obtenu l'antisérum. Bien que ces antisérums "larges" soient suffisants pour la plupart des applications, on a estimé qu'une plus grande spécificité et une reproductibilité accrue marqueraient un progrès notable et fourniraient un instrument scientifique au potentiel considérable, en particulier dans le domaine du diagnostic et de la thérapie. La première solution maintenant classique a été celle décrite par KMhler et Milstein [Nature, 256, pages 495-497 (1975)], qui ont réussi à fusionner des cellules spleniques de souris préimmunisees avec des cellules de myélome de souris sensibles au "médicament". On a pu cultiver in vitro les cellules fusionnées ainsi immortalisées et les cloner à partir du stade de la cellule unique pour produire une popu- lation de cellules homogène produisant une population d'anticorps homogène (anticorps monoclonaux). Par sélection entre les nombreuses cellules uniques et reclonage sélectif, il a été possible d'obtenir et de cultiver des cellules qui produisent des anticorps ayant la spécificité désirée vis-à-vis de l'antigène. Les anticorps. de souris produits de cette manière se sont révélés utiles pour des applications en recherche et en diagnostic et certains d'entre eux ont même été utilisés en thérapeutique chez l'homme. On réaliserait cependant un progrès considérable en thérapeutique humaine par l'immunoglobuline si l'on pouvait obtenir de cette manière des anticorps humains ou de primates non-humains de spécificité et de repro- ductibilité semblables. Ceci réduirait' également le risque de sensibilisation. Plusieurs approches du problème de production in vitro de ces anticorps humains ont été tentées, mais ont jusqu'à présent largement échoué. Elles comprennent (i) La transformation de lymphocytes humains normaux par le virus d'Epstein-Barr (EBV). Cette méthode a rencontré peu de succès, étant donné que les cellules de ce type nécessitent un procédé long et fastidieux pour leur établissement et sont extrêmement difficiles à cloner et à sélectionner. (ii) La fusion de lymphocytes (humains) normaux avec des cellules de myélome humain. Cette méthode représente une analogie évidente avec l'approche souris-hybridome de souris; cependant, le pro- blème qui se pose est que, dans le système humain, on n 'a pu produire largement qu'une lignée de cellules de myelome et qu'on a trouvé que celle-ci était contaminée par du mycoplasma qui empêche la réussite des fusions. (iii) La fusion de lymphocytes humains normaux avec une lignée de cellules B lymphoblastoldes hu- maines transformées par EBV. Bien que cette méthode soit probablement la plus fiable et la plus reproductible qui soit décrite jusqu'à présent, elle présente l'inconvénient de base in vitro rencontré avec les cellules lympho- blastodes: elles sont extrêmement difficiles à cloner et, comme elles représentent un stade antérieur dans la lignée de différenciation de cellules B, leur capacité à produire et sécréter des anticorps est environ dix fois plus faible que celle des myelomes vrais. (iv) La fusion des lymphocytes humains avec des cellules de myelome de souris. Cette méthode produit des cellules ayant les mêmes excellentes caractéristiques in vitro que les hybridomes souris-souris, mais avec le gros inconvénient que ces hybrides ont une instabilité génétique- intrinsèque. Un résultat particulièrement gênant de ceci est qu'elles expulsent le chromo- some humain sur lequel est situé le génome pour la formation de la chaîne kappa légère de l'immu- noglobuline. On a mentionné par la suite qu'tl était possible, grâce à l'utilisation d'une cellule d'hybridome xenogénique servant de cellulemère pour une fusion ultérieure avec un autre cellule, d'obtenir un hybridome présentant une stabilité nettement améliorée (Ostberg et al., HYBRIDONA 2, N 4,361 1983), et que ces hybridomes xénogéniques présentent un environnement convenant mieux & l'amélioration de la stabi- lité, exprimée par la perte chromosomique. La présente invention concerne une lignée de cellules d'hybridome, comprenant une cellule immortalisante mère, fusionnée avec une cellule associée xénogénique, la cellule immortalisante résultante étant ensuite fusionnée avec une cellule capable de produire un anticorps monoclonal de pri- mate non-humain. Cette dernière cellule doit Otre génetique- ment compatible avec ladite cellule associe dans l'hybri- dome xénogénique. On entend par "génétiquement compatible" la caractéristique consistant à ressembler à la cellule apparentée, pour ce qui est de l'espèce et du genre d'origine, tout en évitant une perte significative de chromosomes, et donc en conservant un degré souhaitable de stabilité après fusion. Il s'avère maintenant que la préparation et l!utilisation d'anticorps monoclonaux de primates non-humains préparés par cette technique de fusion d'hybridomes xénogéniques peut s'avérer une approche utile du traitement des êtres humains par l'utilisation d'anticorps monoclonaux, ainsi que dans les applications de diagnostic. On ne connaît aucune mention antérieureconcernant la préparation ou l'isolement- d'anti- corps monoclonaux de primates non-humains. La présente invention a donc pour objet un procédé permettant de préparer des lignées cellulaires stables produisant des anticorps monoclonaux de primates non-humains pouvant être utilisés dans le traitement des étres humains et en diagnostic. L'invention a aussi pour objet des immunoglobulines dérivant de lymphocytes de primates non-humains et pouvant avoir une utilisation effi- cace chez l'être humain. Les primates non-humains considérés dans le cadre de l'invention comprennent essentiellement les grands singes, par exemple les orang-outans, les gorilles ou les chimpanzés, et les petits singes comme les singes du Nouveau Monde, par exemple les singes cébus, et les singes de l'Ancien Monde, par exemple les singes rhésus. Pour ce qui est d'une distinction entre les grands singes et les petits singes, il est clair que, pour des raisons prati- ques, on préfère utiliser des animaux suffisamment petits pouvant être facilement manipulés dans les conditions d'un laboratoire, mais dans le cadre de l'invention on entend l'ensemble des primates non-humains. Dans une forme particulière de réalisation de l'inven- tion, l'hybridome xénogénique choisi en tant que cellule immortalisante est un hybride de myélome qui a perdu sa propre aptitude à produire de l'immunoglobuline. Un exemple d'une telle cellule d'hybridome xénogénique serait celle obtenue à partir d'une cellule de myélome et d'une cellule de lymphocyte. Des exemples de cellules de myélome convena- bles sont celles obtenues à partir de souris et de rats, et, de préférence, elles ne produisent pas d'immunoglobulines. Ces myélomes peuvent eux-mêmes être des hybrides (par exemple myélome de souris x lymphocyte de souris), qui sont effectivement des myélomes. Une telle cellule sera par exem- ple la lignée de cellules du myélome SP-2 de la souris. Cette dernière peut ensuite être fusionnée par exemple avec un lymphocyte de singe, pour donner un anticorps monoclonal de singe. Comme il est décrit dans l'article de HYBRIDOMA 2 men- tionné ci-dessus (ainsi que dans les demandes de brevet correspondantes, par exemple la demande de brevet UK N 2 113 715A, publiée le 10 août 1983), l'hybridome xénogéni- que utilisé pour l'immortalisation est rendu résistant aux médicaments avant une nouvelle fusion, et le lymphocyte avec lequel il est fusionné est obtenu de préférence après présensibilisation, pour améliorer la production de la substance recherchée. Les procédés utilisés dans les traite- ments de résistance aux médicaments et de présensibilisation sont classiques, de même que l'opération de fusion de ces cellules. De même, la sélection des hybrides désirés et le clonage sont réalisés d'une manière classique, comme dé- crit antérieurement et publié par exemple dans les réfé- rences mentionnées ci-dessus. Dans une forme de réalisation particulière de l'inven- tion, on utilise la lignée cellulaire SP-2. Il s'agissait initialement d'un hybridome de la lignée P3-X63-Ag8 et de cellules spléniques de souris qui produisent des anticorps contre les érythrocytes du mouton, et qui a perdu son apti- tude à produire des anticorps (cf. M. Shulmann et al., NATURE 276, 269, 1978). On peut se le procurer par exemple auprès de NIGMS Human Genetic Mutant Cell Repository, réf. GM 35669 A (voir US DHHS 1982 Catalog of Cell Lines) . Cette lignée cellulaire est rendue résistante aux médicaments, puis on la- fusionne avec des lymphocytes périphériques humains normaux par des techniques classiques (cf. G. Galfre et al., NATURE 266, 550 (1977) et R. Nowinski et al., SCIENCE 210, 537 (1980)). - On obtient un grand nombre d'hybrides et, au bout d'envi- ron cinq semaines, on sélectionne cinq clones qui présentent une croissance rapide et aucune production d'anticorps. Ces cellules sont sélectionnées pour leur résistance à la 8-azaguanine et, avec trois de ces lignées, il est possible ]5 d'obtenir des mutants qui résistent à 20 gg/ml de 8-azaguanine. Ces cellules sont en même temps sensibles au milieu hypo- xanthine-aminoptérine-thymidine (HAT), ce qui a montré qu'elles avaient perdu leur aptitude à produire de l'hypo- xanthine-phorphoribosyl-transférase. L'une de ces lignées est la lignée SPAZ 4, qui peut être utilisée pour une fusion ultérieure dans le but d'obtenir un hybridome produisant des anticorps. Les lignées de cellules d'hybridome simples selon l'inven- tion, qui produisent des anticorps monoclonaux de primates non-humains, peuvent aussi, si on le souhaite ou si cela est nécessaire, subir une nouvelle fusion, par exemple avec une autre cellule de lymphocyte de singe, pour donner des cellules qui soit présentent une stabilité encore plus grande, soit ont des caractéristiques recherchées quelque peu différentes. Les anticorps selon l'invention peuvent être utilisés chez l'être humain pour lutter contre les maladies infec- tieuses, les tumeurs malignes, les allergies, et ils peuvent être utilisés pour freiner le's rejets après transplantation et dans d'autres applications connues dans la technique, comme dans le cas d'une toxicité provoquée par des substan- ces pharmaceutiques, par exemple la digoxine. On peut aussi les utiliser dans des applications de diagnostic, par exemple dans des trousses et assimilé. Les types de lignées cellulaires que concerne la pré- sente invention, sont par exemple les lignées cellulaires comprenant dés cellules de myélome de souris et des cellules de primates humains et nonhumains, provenant par exemple d'une cellule xénogénique souris-homme pour donner une lignée cellulaire (souris x homme) x primate non-humain, par exemple une lignée cellulaire d'hybridome (souris x homme) x singe, ou unre lignée cellulaire (souris x primate non-humain) x primate nonhumain, comme une lignée ]5 cellulaire (souris x singe)x singe. D'autres lignées cellulai- res obtenues selon l'invention comprennent par exemple une lignée cellulaire ((souris x homme) x primate non-humain) x primate non-humain, par exemple une lignée cellulaire ((souris x homme) x singe cébus) x singe cébus, une lignée cellulaire ((souris x homme) x singe rhésus) x singe rhésus, une lignée cellulaire ((souris x homme) x chimpanzé) x chimpanzé et une lignée cellulaire ((souris x homme) x singe rhésus) x chimpanzé. Les anticorps monoclonaux préparés selon l'invention peuvent être formulés et administrés d'une manière classi- que dans des appliations thérapeutiques, et aussi être présentés dans des trousses classiques en vue d'un diagnostic. Les exemples ci-après illustrent l'invention. Exemple 1 On dissout de la digoxine dans 2 ml d'éthanol absolu, on ajoute goutte à goutte 2 ml de periodate de sodium 0,1 M et on incube la mélange pendant 45 minutes. On ajoute ensuite 1 d'éthylèneglycol. Après 5 minutes d'incubation, on ajoute 50 mg d'hémocyanine de lépas (keyhole limpet hemo- cyanin, KLH) dans 10 ml d'eau à pH 9,5. Quand le pH s'est stabilisé à 9,5, on ajoute 0,3 g de NaBH4 dans 2 ml d'eau. La préparation obtenue est dialysée jusqu'au lendemain contre une solution saline. On émulsionne environ 4 mg de KLH-digoxine dans un volume de 0,5 ml en même temps que 0,5 mi de l'adjuvant complet de Freund. L'émulsion est injectée par voie intra- musculaire dans les deux cuisses d'un singe cébus. Après cette première injection, on effectue quatre injections de rappel, avec une quantité analogue de KtH-digoxine mais, cette fois, émulsionnée dans 0,5 ml de l'adjuvant incomplet de Freund. Après cette immunisation, une saignée d'essai montre que l'animal a produit des anticorps réagissant avec la digoxine, et pouvant inactiver la toxicité de la digoxine dans le cadre d'études in vitro. On le montre en observant que des dilutions de sérum de singe neutrali- sent l'effet toxique (létal) de la digoxine (ou de son analogue l'oubaine) sur des cellules lymphoblasto0des humaines sensibles en culture cellulaire. Après avoir laissé l'animal au repos pendant deux mois, on effectue une autre injection par voie intraveineuse, de 0,5 ml de KLHdigoxine dans une solution saline. Le troisième jour après la dernière injection intra- veineuse, on extrait les cellules de l'animal pour fusion. Yb a. On prélève du sang d'une veine périphérique, dans une seringue contenant 50 il d'une solution d'héparine (10 000 unités USP/ml). Les lymphocytes du sang sont purifiés par centrifugation à la centrifugeuse à gradient, sur un cous- sin de PERCOLL (Pharmacia, Inc., Piscataway, N.J.). Apres centrifugation, les cellules sont lavées dans une solution saline équilibrée de Hank (Gibco Laboratories, Grand-Island, N.Y., catalogue N 310-4020, que l'on peut facilement se procurer sur le marché). b. Utilisant des techniques chirurgicales aseptiques, on extrait de la zone inguinale les ganglions lymphatiques. Les ganglions lymphatiques sont écrasés à travers une toile en acier à fine ouverture de maille, pour préparer des suspensions de cellules individuelles. Les cellules isolées sont lavées dans des solutions salines équilibrées de Hank. c. Utilisant des techniques chirurgicales aseptiques, on effectue sur l'animal une splénectomie partielle. On prépare une suspension de cellules individuelles à partir du fragment de rate, en broyant l'organe à travers une toile métallique en acier à faible ouverture de maille. Cette suspension de cellules individuelles isolées est lavée dans une solution saline équilibrée de Hank. On mélange environ 2.To07 lymphocytes isolés avec- une quantité analogue de cellules de myélome SPAZ-4 (que l'on peut préparer par des procédés décrits dans la technique, comme dans la référence HYBRIDOMA 2 mentionnée ci-dessus), dans un milieu exempt de sérum, et on les pastille dans une centrifugeuse à faible vitesse. La pastille de cellules est traitée pendant une minute avec 1,0 ml de PEG-1500 à 50 % dans une solution saline équilibrée de Hank à pH 8,0. Après une minute d'incubation à 37 C, on ajoute lentement 1 ml de la solution saline équilibrée de Hank. Au cours de la minute suivante, on ajoute 10 ml de plus de la solution de Hank. Les cellules sont récupérées par centrifugation et remises en suspension dans 20 ml du milieu d'Eagle modifié de Dulbecco (N 430-2100, Gibco Laboratories), VIROLOGY 8, 396 (1959); VIROLOGY 12, 185 (1960); Tissue Culture Standards Committee, IN VITRO, vol. 6, N 2, p. 93, contenant % de sérum de foetus de boeuf et en utilisant comme sys- tème de sélection le système HAT (hypoxanthine-aminoptérine- thymidine) Au bout d'environ trois semaines, quand on observe une bonne croissance dans les réservoirs de culture, on extrait le surnageant des cultures, pour essai. L'essai est réalisé par une technique ELISA, en utilisant de la digoxine couplée à l'albumine de sérum de boeuf (BSA) en tant qu'antigène 1l (le BSA-digoxine est préparé d'une manière analogue au système KLH-digoxine). On détecte les clones positifs en utilisant un système immunoglobuline-peroxydase anti-humain ou anti-singe de lapin. Les clones positifs sont prélevés pour multiplication et, simultanément, clones par dilution limitée dans des réservoirs de microtitrage en utilisant comme cellules de charge des thymocytes de souris. Dès que l'on dispose d'un grand nombre de cellules, les clones sont conge- lés dans de l'azote liquide à -196 C. On obtient les anticorps en faisant croître les lignées de cellules d'hybridome soit en culture stationnaire, soit en culture mobile, en utilisant le milieu MEM de Dulbecco, avec un maximum de 10 % de sérum de foe.tus de boeuf. Les anticorps, d'une manière représentative à une concentration de 20 à 50 gg/ml, sont purifiés par chromatographie d'affi- nité sur des colonnes de Sépharose Protéine A (Pharmacia, Inc.), en plaçant le produit à chromatographiersur la colonne, en saturant la capacité de fixation de la colonne et en lavant la colonne avec une solution saline tamponnée par un tampon phosphate. Après élimination, de la colonne, des produits non-fixés, on.élue la colonne avec du citrate de sodium 0,05 M contenant du chlorure de sodium 0,5 M (pH 3,0). L'éluat est rapidement neutralisé par addition de Tris-HCl 1 M, pH 8,0. 2? Exemple 2_ On rend résistantes aux médicaments des cellules prépa- rées par les procédés de production et de sélection de cellules de l'Exemple 1, lesquelles cellules ont, avec le temps, perdu leur aptitude à produire de l'immunoglobuline, par un traitement en présence de 20 gg/ml de 8-azaguanine, ce qui permet d'utiliser d'une manière classique un système HAT en tant que système de sélection. Les cellules obtenues sont ensuite fusionnées avec des lymphocytes de singe cébus immunisé et, après un nouveau traitement avec le milieu HAT, on choisit des cultures cellulaires positives en utilisant les mêmes modes opératoires que l'Exemple 1 ci-dessus. Ceux décrits dans Selon ce mode opératoire, on a obtenu trois anticorps, à partir de fusions en utilisant des cellules provenant du singe cébus. Les hybridomes sont désignés respectivement par 7-1, 11-1 et 11-3. On a étudié l'aptitude des trois anticorps à inhiber la toxicité de la digoxine vis-à-vis d'une lignée de cellules lymphoblastoides humaines, IM- 9. On a obtenu les résultats suivants quand on a utilisé les anticorps à une concentration finale de 100 gg/ml: - Addition Solution saline tamponnée au tampon phosphate 7-1 11-1 11-3 Dose de digoxine ne conduisant à aucune lésion 2,9.10-8 M 4,7.107.M 9,4.10-7 M 2,3.10-7 M On a aussi étudié la spécificité de l'anticorps 7-1 vis-à-vis d'autres types d'alcaloides digitaliques. Les résultats de cet essai de spécificité sont résumés dans le tableau ci-dessous. Médicament Dose de médicament ne provo- quant aucune lésion - Oubaine Digitoxine Deslanoside Solution saline tamponnée au tampon phosphate -8 2.10-8 M -9 ,9.10 9M 2, 2,3.10-8 M 1, 2,3.10 M i 7-1 2.10-8 M -8 3.10 M 9.10-7 M Ces résultats, pris tous ensemble, montrent que les anticorps produits par ce mode opératoire peuvent être protecteurs vis-à-vis de l'effet toxique de médicaments et que, dans le cas des alcaloides digitaliques, un anticorps peut couvrir deux des médicaments utilisés chez des patients en consultation externe (digoxine et dicitoxine) et contre un médicamentutilisé par voie parentérale (deslanoside). Il n'a aucune activité contre un autre médicament utilisé par voie parentérale (oubalne). Exemple 3 D'une manière analogue à ce qui est décrit dans l'Exem- ple 1, on utilise le système KLH-digoxine en tant qu'immuno- gène chez un chimpanzé mâle adulte. Après un total de cinq injections de cet antigène, administrées essentiellement toutes les deux semaines, on effectue une provocation par administration intraveineuse de 0,5 ml de KLH-digoxine (envi- ron 4 mg de protéine). L'échantillon sanguin est prélevé de l'animal le sixième jour après la dernière injection i.v. et, un jour après la saignée, il est utilisé pour la fusion cellulaire avec la lignée de cellules du myélome SPAZ-4, en utilisant le mode opératoire décrit ci-dessus. A partir de l'échantillon obtenu le jour 6, on obtient des hybridomes produisant des anticorps IgG, appelés CH 4-14 et CH 4-25, ayant respectivement une chaîne légère lambda et une chaîne- légère kappa. On réalise une caractérisation des chaînes légères en utilisant d'une manière classique les réactifs contre les immunoglobulines humaines. Ces réactifs donnent des résultats non-ambigus, et la réactivité est, vis-à-vis des réactifs anti-humains, plus forte que vis-à-vis des réactifs anti-singe préparés contre le singe cynomolgus. Deux de ces anticorps (souris x homme) x chimpanzé ont une affinité vis-àvis de la digoxine, affinité nettement plus élevée que dans le cas de l'anticorps cébus 11-1 men- tionné dans l'Exemple 2 ci-dessus. REVENDICATIONS 1.- Une lignée de cellules d'hybridome comprenant une cellule immortalisante fusionnée avec une cellule capable de produire un anticorps mono- clonal de primate non-humain, la cellule immortali- sante comprenant une cellule d'hybridome xénogénique provenant de la fusion d'une cellule immortalisante mère avec une cellule associée, ladite cellule capable de produire l'anticorps étant génétiquement compatible avec ladite cellule associée. 2.- Une lignée de cellules d'hybridome selon la revendication l, caractérisée en ce que ladite cellule capable de produire l'anticorps est du même genre que la cellule associée dans la cellule d'hybri- dome xénogénique mère. 3.- Une lignée de cellules d'hybridome selon la revendication 1, caractérisée en ce que ladite cellule capable de produire l'anticorps est de la même espèce que la cellule associée dans la cellule d'hybridome xénogénique mère. 4.- Une lignée de cellules d'hybridome selon la revendication 2, caractérisée en ce que la cellule produisant l'anticorps monoclonal de primate non-humain est un lymphocyte. 5.- Une lignée de cellules d'hybridome selon la revendication 1, caractérisée en ce que l'anticorps monoclonal de primate non-humain est un anticorps monoclonal de singe. 6.- Une lignée de cellules d'hybridome selon la revendication 1, caractérisée en ce que la cellule immortalisante mère est une lignée de cellule SP-2. 7.- Un procédé de préparation des lignées de cellules d'hybridome selon la revendication 1, - caractérisé en ce qu'on rend résistant aux médicaments une cellule d'hybridome xénogénique, on fusionne cette cellule avec une cellule qui est capable de produire un anticorps et qui est génétiquement compatible avec la cellule associée dans l'hybridome xénogénique, et on sélectionne l'hybride désiré. 8.- Un procédé selon la revendication 7, caractérisé en ce que la sélection d'un hybride désiré est basé sur l'absence de sensibilité au HAT et sur son aptitude à produire un anticorps monoclonal de primate non-humain. 9.- Un système de fusion cellulaire qui comprend une cellule produisant un anticorps mono- clonal de primate non-humain et une cellule d'hybri- dome xénogénique provenant de la fusion d'une cellule immortalisante avec une cellule associée gqénétiquement compatible avec ladite cellule produisant l'anticorps, dans un milieu de culture nutritif ensemble avec un agent favorisant la fusion desdites cellules. 10.- Anticorps monoclonal de primate non-humain. 11.- Un anticorps selon la revendication 10, caractérisé en ce que l'anticorps est un anticorps monoclonal de singe. 12.- Une lignée cellulaire d'hybridome (souris x homme) x primate non-humain. 13.- Une lignée cellulaire selon la revendication 12, caractérisée en ce que la lignée cellulaire est une lignée cellulaire d'hybridome (souris x homme) x singe. 14.- Une lignée cellulaire selon la reven- dication 13, caractérisée en ce que la lignée cellu- laire est une lignée cellulaire d'hybridome (souris x singe) x singe. 15.- Une lignée cellulaire d'hybridome comprenant une cellule triome fusionnée avec une cellule produisant un anticorps monoclonal de primate non-humain, la cellule triome comprenant une cellule immortalisante fusionnée avec un lymphocyte de primate non-humain, la cellule immortalisante comprenant une cellule d'hybridome xénogénique provenant de la fusion d'une cellule immortalisante mère avec une cellule associée, ledit lymphocyte étant génétiquement compatible avec ladite cellule associée et avec ladite cellule produisant l'anticorps. 17.- Une lignée de cellule d'hybridome selon la revendication 16, caractérisée en ce que ladite cellule produisant l'anticorps est du même genre que le lymphocyte. 18.- Une lignée de cellules d'hybridome selon la revendication 17, caractérisée en ce que le lymphocyte est du même genre que la cellule associée et que ladite cellule produisant l'anticorps. 19.- Une lignée cellulaire selon la reven- dication 16, caractérisée en ce que la lignée cellulaire est une lignée cellulaire [(souris x homme) x primate non-humain] x primate non-humain. 20.- Une lignée cellulaire selon la reven- dication 19, caractérisée en ce que la lignée cellu- laire est une lignée cellulaire [(souris x homme) x chimpanzé] x chimpanzé. 21.- Une lignée cellulaire selon la reven- dication 14, caractérisé en ce que la lignée cellulaire est une lignée cellulaire (souris x homme) x chimpanzé. 22.- Un anticorps selon la revendication 10, caractérisé en ce que l'anticorps est un anticorps monoclonal de chimpanzé.