Brevet FR2585537A1 — publié le 19870206

PROCEDE DE CONTROLE DE L'ENVIRONNEMENT MICROBIEN DANS LA MARICULTURE DES ORMEAUX Les brevets U.S. 4 183 322, 4 226 210 et 4 253 418 présentent des amélioration importantes dans la mariculture des ormeaux et autres mollusques gastéropodes, les descriptions de ces brevets étant incorporées ici à titre de référence. La présente invention concerne des progrès supplémentaires dans l'élevage de grands nombres d'ormeaux en bonne santé au cours des tout premiers stades de la vie où certaines bactéries et autres microorganismes sont potentiellement létaux et au moins une bactérie est essentielle. La présente invention décrit des procédés de préparation pré-frai d'ormeaux adultes et des procédés améliorés de nettoyage des oeufs, d'éclosion, d'élevage des larves, d'implantation et de vie post-implantation, par lesquels un nombre sensiblement plus important d'animaux survivent aux deux premiers mois de vie alors que l'on rencontre par ailleurs une forte mortalité. Ces procédés améliorés comprennent l'utilisation d'eau exempte de bactéries à chaque stade ; l'utilisation de bactéries sélectionnées cultivées séparément pour induire l'implantation, procurer la nutrition précoce et maintenir le contrôle de la qualité de l'eau et l'utilisation d'antibiotiques pour lutter contre la croissance des bactéries indésirables.Un raffinement supplémentaire met en jeu l'addition de substances nutritives au bain d'eau pour induire la croissance des bactéries souhaitées et améliorer l'efficacité des antibiotiques utilisés. Le brevet U.S. 4 183 322 décrit le procédé de nettoyage des oeufs d'ormeaux récemment frayés, d'éclosion de ces oeufs et d'élevage des larves. I1 décrit le procédé de frai et de fertilisation et enseigne les étapes suivantes permettant d'obtenir une forte proportion d'éclosion et de survie des larves 1. Séparation des oeufs du système d'eau de mer dans lequel il sont frayés par un procédé de tamisage multiple en utilisant de l'eau de mer qui a été filtrée et traitée pour réduire le comptage bactérien à moins d'envirion 100 cellules par millilitre. 2. Eclore les oeufs dans de l'eau présentant un comptage bactérien de 100 cellules par millilitre ou inférieur. 3. Elever les larves écloses dans de l'eau de mer filtrée pour éliminer les gros constituants, mais en utilisant un filtre à mailles suffisamment grosses (laissant passer des particules d'environ 25 ,um ou inférieures) pour retenir les constituants biologiques qui contrôlent le niveau d'ammoniac. 4. Maintenir la régulation de la température, les niveaux d'oxygène dissous et les densités approximatives des oeufs et des larves pour différentes formes de conteneurs. Ce procédé réduit de manière significative la mortalité précoce, dans la mesure où 90% des oeufs éclosent et où 90% des très jeunes larves survivent. On a trouvé, cependant, que les taux de survie très élevés rencontrés à ce stade très précoce de la vie ne sont pas maintenus pendant les stades de la vie ultérieurs. On pense que l'augmentation du taux de mortalité est dû aux bactéries pathogènes sauvages introduites par les ormeaux parents dans le bain d'éclosion et dans le bain d'élevage des larves, lesquelles infectent les animaux à ce stade très précoce. Le brevet U.S. 4 226 210 décrit le procédé biologique de l'implantation et de la métamorphose des larves et les stades nutritionnels précoces des ormeaux et autres mollusques gastéropodes benthiques. Le brevet décrit aussi que, pendant les 60 premiers jours environ de la vie rampante des jeunes ormeaux, il y a une forte mortalité due à différentes causes, y compris les bactéries, la qualité de la surface de l'implantation et la nature de la communauté microbienne qui s'y trouve. Bien que le brevet décrit procure une importante maîtrise de ces effets défavorables, ainsi que des améliorations majeures quant à la survie par rapport à la nature, ce brevet reconnaît aussi qu'il se produit toujours une mortalité importante. Ce brevet enseigne aussi que des quantités économiques d'ormeaux peuvent être implantées et élevées en utilisant les étapes du procédé comprenant les suivantes 1. Préconditionnement des surfaces d'implantation pour induire l'implantation et procurer la nutrition précoce en y prévoyant une communauté microbienne. 2. Utilisation d'eau de mer exempte, ou comportant un minimum, de constituants nuisibles aux jeunes ormeaux. 3. Maintien d'une qualité d'eau satisfaisante en contrôlant l'équilibre biologique par induction d'une photosynthèse avec certaines souches d'algues et addition de substances nutritives végétales pour procurer de la nourriture et maîtriser les déchets. 4. Régulation de la température, des niveaux d'oxygène, des densités des larves, de la circulation d'eau et autres facteurs. Une réalisation préférée décrite dans le brevet U.S. 4 266 210 est de filtrer de l'eau de mer côtière pour éliminer les gros constituants, tout en retenant les microorganismes sauvages plus petits de dimensions inférieures à 5 à 10 ,um puis, pendant une période de plusieurs jours, de faire circuler cette eau à travers la cuve d'implantation et sur les surfaces d'implantation pour former une communauté microbienne induisant l'implantation. Ce brevet suggère aussi (1) d'utiliser de l'eau de mer exempte de constituants nuisibles, comprenant l'obtention de cette qualité d'eau de mer par préfiltration ; et (2) de conditionner les surfaces d'implantation en uti lisant des souches de bactéries ou autres microorganismes cultivées séparément. Les techniques enseignées dans ce brevet ont amené des améliorations importantes dans la production en mariculture mais on désire obtenir une réduction encore plus marquée de la mortalité animale. La présente invention a pour objet de progresser dans la technique de culture des ormeaux au cours des premiers stades de la vie à l'état d'oeuf, de la vie larvaire et de la vie post-larvaire en contrôlant précisément tous les processus biologiques afin d'empêcher l'entrée et la croissance de bactéries nuisibles et autres constituants biologiques nuisibles, tout en apportant, par l'intermédiaire de procédés de cultures contrôlées, des quantités et des qualités de bactéries ou d'autres microorganismes suffisantes pour induire un niveau élevé d'implantation et procurer une nutrition précoce adéquate pour permettre une survie importante et une croissance rapide au cours des quelques premiers mois de la vie. Chacun des deux brevets discutés ci-dessus décrit les effets nuisibles des bactéries pendant les stades de l'oeuf, larvaire et post-larvaire et le brevet U.S. 4 183 322 prévoit l'emploi de constituants sauvages de la dimension des bactéries pour contrôler le niveau d'ammoniac. De même, le brevet U.S. 4 226 210 prévoit l'emploi de bactéries sauvages et autres constituants biologiques de dimensions analogues pour préconditionner les surfaces d'implantation afin d'induire l'implantation et de procurer la nutrition précoce. I1 est permis d'avoir des comptes de bactéries sauvages avoisinant 100 cellules par millilitre, lesquelles, si on les utilise pour remplir les cuves de 2 millions de millilitres couramment utilisées en production pour les opérations d'éclosion des oeufs, d'élevage des larves ou d'implantation, comme le décrit le brevet U.S. 4 253 418, permet d'introduire dans chaque étape jusqu'à 2 x 108 bactéries au total. On pense maintenant que l'intro duction d'un si grand nombre de microorganismes permet l'introduction de pathogènes nuisibles pouvant provoquer une mortalité excessive au cours des stades ultérieurs de la vie. On a trouvé que l'utilisation d'eau de mer exempte de bactéries, combinée à celle d'antibiotiques et de souches sélectionnées de bactéries cultivées séparément, augmente considérablement les taux de survie des jeunes ormeaux au cours des 60 premiers jours de la vie. Les procédés de cette invention réduisent sensiblement la probabilité d'introduction d'organismes nuisibles, fournissent des bactéries nécessaires cultivées séparément et fournissent des antibiotiques pour lutter contre les pathogènes indésirables qui sont accidentellement introduits. On sait que les jeunes ormeaux ont besoin de bactéries dans leur environnement pour consommer l'ammoniac au cours des stades d'élevage des larves. La mise en oeuvre de cette invention fait d'abord intervenir la séparation d'avec l'état sauvage de souches supérieures de bactéries qui consomment de l'ammoniac au cours des stades larvaires, induisent l'implantation pour la métamorphose des larves et procurent une nutrition pendant la période immédiatement consécutive à l'implantation. Ce procédé fait intervenir l'isolement de différentes souches bactériennes d'eau de mer non filtrée naturelle au moyen de procédures de laboratoire normales pour l'isolement et la culture de bactéries marines. L'étape suivante fait intervenir des essais sur chaque culture pure isolée de ces bactéries. Des bouillons de culture, incubés pendant 24 à 48 heures, sont dilués avec de l'eau de mer filtrée à travers une membrane de 0,2 et et introduits dans des boîtes stériles contenant 100 millilitres de la même eau stérilisée par filtration. On introduit dans un bol, et ceci en cinq exemplaires, 50 à 100 larves nageantes pour chacune des dilutions de culture testée. Après avoir ajouté les larves et les bactéries, on place les bols dans un milieu thermostaté à une température convena-nt à cette espèce d'ormeaux particulière et l'on surveille chaque jour le nombre de larves qui se sont implantées, le nombre de larves mortes et le nombre restant à l'état nageant librement. Au bout d'une période de 30 jours environ, un tel procédé d'étude identifiera des souches bactériennes qui sont pathogènes, des souches qui ne produisent aucun effet et des souches qui induisent l'imDlantation et contribuent à une croissance rapide au cours de la période post-implantation qui suit. Les souches supérieures sont ensuite maintenues en culture par des techniques de laboratoire bac té- riologiques normales. L'isolement sélectif, les essais, la culture et l'utilisation de ces souches bactériennes favorables et un aspect important de cette invention. Les bactéries qui se sont avéré présenter l'effet bénéfique souhaité ont en commun les propriétés suivantes (1) Elles peuvent utiliser des composés carbonés uniques pour leur énergie et leur croissance et l'ammoniac comme seule source d'azote. (2) Elles ne nécessitent pas de vitamines ou autres facteurs de croissance. (3) Elles réalisent un métabolisme respiratoire contrairement à un métabolisme de fermentation. (4) Elles ne produisent pas de produits métaboliques toxiques ni ne libèrent de matières toxiques plus complexes. La bactérie préférée ressemble de très près à Pseudomonas cepacia et Pseudomonas marginata et est décrite en détail ci-dessous. Une autre caractéristique essentielle de cette invention est de sélectionner et de cultiver des souches des bactéries préférées qui croissent et prospèrent en présence des antibiotiques préférés. Ces souches résistantes sont utiles pour procurer à l'eau un contrôle de qualité, une induction de l'implantation et la nutrition nécessaire à entretenir les premiers stades de la vie simultanément à l'utilisation d'un antibiotique compatible pour lutter contre les bactéries nuisibles. Un autre objet de cette invention est de sélectionner et de cultiver les souches des bactéries préférées qui sont résistantes aux bactériophages, qui sont des virus dégradant les bactéries, filtrables et qui se trouvent à l'état naturel pouvant tuer la population préférée de bactéries sélectionnées en une très courte période. Un autre aspect est encore l'addition de composés chimiques qui procurent une nutrition aux bactéries préférées et qui, du fait de leurs qualités de stimulation de la croissance, rendent les composés antibiotiques encore plus efficaces en augmentant la susceptibilité des bactéries indésirables au cours de la stimulation de la croissance. La mise en oeuvre de ces caractéristiques de la présente invention sera décrite plus en détail dans la suite. En réalisant les progrès décrits dans la présente invention, on a trouvé que l'élimination ou la lutte contre les bactéries pathogènes nuisibles pendant les deux premiers mois de la vie des ormeaux pouvait éliminer une cause majeure de mortalité. Par l'utilisation, dans la technique antérieure, d'eau de mer côtière, les comptages de bactéries sauvages peuvent atteindre 10.000 cellules par centimètre cube (millilitre) pour l'eau de mer non filtrée. Même après le processus de filtration et de stérilisation décrit dans les brevets de la technique antérieure, le nombre de souches pathogènes, bien que constituant un faible pourcentage de la polulation sauvage totale, peut avoir une valeur suffisamment significative pour infecter une culture de jeunes ormeaux et provoquer une mortalité massive parfois pendant la période de 60 jours suivante.On a donc mis au point des procédés d'élimination totale, ou quasi-totale, des bactéries sauvages. Bien que l'on ait maintenant découvert que l'idéal est d'éliminer entièrement toutes les bactéries sauvages du procédé de culture afin d'éliminer les pathogènes infectieux, cet idéal est pratiquement impossible à réaliser en production. Tandis que l'on peut traiter l'eau de mer pour éliminer toutes les bactéries et bien que l'on puisse stériliser les cuves, les ustensiles et l'équipement par action de la chaleur, de produits chimiques et autres moyens, les oeufs d'ormeaux sont porteurs de bactéries acquises de la mère au moment du frai. Actuellement, il n'existe aucun procédé d'obtention d'oeufs à l'état exempt de bactéries provenant de l'ormeau mère.Par conséquent, les pathogènes ou pathogènes potentiels sont toujours présents et doivent être soit détruits soit combattus de façon à empêcher le développement de populations suffisantes pour causer une mortalité significative chez les ormeaux au stade postlarvaire. Au cours de la mise au point de ces procédés, on a découvert que les principaux pathogènes étaient des bactéries marines gram négatives. On a de plus découvert qu'un ou plusieurs composés antibiotiques du groupe constitué par la polymyxine B, le chloramphénicol, l'ampicilline, l'érythromycine et la chlortétracycline étaient hautement efficaces pour éliminer ou pour combattre la croissance de ces bactéries pathogènes. D'autres antibiotiques, comme la néomycine, la streptomycine et la gentamicine sont également efficaces, mais on préfère utiliser dans la mise en oeuvre de la présente invention l'un ou plusieurs des composés dont la liste figure ci-dessus. Bien que ces composés antibiotiques soient ceux que l'on préfère en pratique, cette invention n'est pas limitée à l'utilisation de ces seuls composés. Les procédés améliorés font intervenir les étapes de prétraitement des mâles et femelles parents avant le frai, avec certains antibiotiques, puis la filtration séparée des oeufs de l'eau dans laquelle ils ont été frayés et fertilisés, selon le procédé du brevet U.S. 4 183 322 afin d'exclure tout excès de sperme, de fèces, de mucus et autres matières organiques qui, pendant l'incubation qui suit, représentent une source dangereuse de bactéries indésirables et des substances nutritives pour les bactéries et autres facteurs nuisibles. Les oeufs séparés avec précaution sont ensuite placés dans un deuxième bain d'éclosion constitué d'eau de mer essentiellement exempte de bactéries contenant un ou plusieurs antibiotiques.Les oeufs sont maintenus dans ce bain d'éclosion pendant la période d'incubation jusqu'à ce qu'une majeure partie des larves écloses soient sorties de leurs oothèques résiduelles respectives. Les larves sont transférées du bain d'éclosion dans un nouveau bain constitué d'eau de mer essentiellement exempte de bactéries contenant un ou plusieurs antibiotiques et, lors de ce transfert, sont séparées avec précaution des débris d'éclosion. On a trouvé que la technique par bains multiples utilisant plusieurs antibiotiques couplée avec la séparation progressive des oeufs et des larves (comme la décrit le brevet U.S. 4 183 322) de la matière résiduelle augmente considérablement le taux de survie et la santé générale des animaux obtenus au cours de la vie post-implantation par rapport à ce que l'on rencontrait par le passé. Le succès de l'éclosion de grandes quantités d'oeufs et de l'élevage des larves et des ormeaux post-larvaires au cours du stade juvénile de la vie est un procédé en plusieurs étapes faisant intervenir le traitement des ormeaux parents avant le frai, le contrôle de la qualité de l'eau de mer utilisée à tous les stades, le traitement soigné des oeufs, des larves et des animaux post-larvaires et la lutte contre les populations microbiennes pendant ces stades de la vie. I1 existe de nombreux procédés par lesquels on peut obtenir de l'eau de mer essentiellement exempte de bactéries. Dans la mise en oeuvre de cette invention, on préfère l'une ou l'autre de deux variantes de procédé, la première consistant en une filtration poussée de l'eau de mer côtière à travers des filtres de sable, deux étapes de filtres de terre à diatomées, deux étapes de rayonnement ultraviolet, deux étapes de filtration sur cartouche à filtre en fibres filées (choisies pour éliminer les particules de dimensions supérieures à environ 1,0 et 5,0 um respectivement) et, enfin, l'emploi de filtres à membranes (MF-Millipore Filter du type GS (0,22 ,um) et Durapore Filter du type GV (0,22 pm) sont des filtres du commerce qui conviennent) capables d'éliminer toutes les particules de dimensions supérieures à 0,2 fm. Ce procédé élimine essentiellement toutes les bactéries. On ne connaît pas de bactéries de dimensions inférieures à 0,2 pm. On peut utiliser des filtres plus grossiers de dimension 0,5 ,um ou même supérieure, mais on préfère des filtres de 0,2 um à cause de l'assurance supplémentaire qu'ils procurent. Le deuxième procédé de purification de l'eau de mer préféré dans la présente invention est d'utiliser de l'eau de mer froide obtenue dans des grands fonds marins à une profondeur supérieure à environ 304,8 m (1000 pieds) et présentant un comptage de bactéries inférieur à 100 cellules par millilitre et souvent inférieur à 1 cellule par millilitre. Une seule étape de filtration à travers un filtre à membrane de 0,2 um élimine toutes ces bactéries. On peut utiliser d'autres procédés permettant d'obtenir une eau de mer de cette qualité, comme un rayonnement ultraviolet superintensif ou de longue durée ; une pasteurisation ou stérilisation haute température ; des rayons X ; un rayonnement nucléaire ; et une induction haute tension ; une ozonisation ; une chloration suivie d'une neutralisation du chlore résiduel ; une osmose ; l'emploi d'eau de mer artificielle fabriquée à partir d'eau douce stérile et de sels chimiques ; et d'autres procédés. Pour des raisons de simplicité et d'économie du procédé, on préconise les deux techniques préférées décrites ci-dessus. Les deux procédés sont satisfaisants pour fournir de l'eau de mer essentiellement exempte de bactéries, ce qui constitue une caractéristique essentielle de cette invention. L'utilisation d'eau de mer hautement purifiée réduit l'exposition des oeufs d'ormeaux, des larves et des animaux post-larvaires, depuis un nombre estimé à 2 x 108 cellules de bactéries sauvages (contenues dans les plus grandes cuves décrites ci-dessus) essentiellement jusqu'aux seules bactéries apportées par les parents sur les oeufs et les larves qui s'ensuivent à travers les stades successifs du développement. Au cours du processus allant du frai à l'implantation post-larvaire, le prétraitement des ormeaux parents mâles et femelles aux antibiotiques avant le frai aide à réduire la contamination des oeufs et du sperme par les bactéries indésirables qui sont associées aux animaux adultes. L'induction du frai et de la fertilisation fait intervenir des techniques qui ne font pas partie de l'invention. Comme le décrit le brevet U.S. 4 183 322, dès que se produit le frai, les oeufs sont séparés de l'eau contaminée contenant des fèces, du mucus et autres impuretés, qui comprennent les bactéries libres ou en suspension apportées par les parents. Ceci est réalisé par un procédé de filtration à étapes multiples dans lequel les oeufs sont retirés de l'eau contaminée et placés dans de l'eau traitée de fa çon à être essentiellement exempte de bactéries. On ajoute ensuite du sperme dilué qui a été soigneusement séparé des fèces et du mucus et, après le début de la division cellulaire, les oeufs filtrés sont séparés du sperme non utili sé. Dans leur habitat naturel, on pense que seuls quel ques-uns des millions d'oeufs frayés survivent à ce stade précoce de la vie. L'objet de la présente invention est d'augmenter considérablement la survie par les procédés contrôlés décrits ici. Après la délivrance des brevets susmentionnés, on a fait d'importants progrès pour améliorer sensiblement l'aptitude à la survie au cours des stades de l'oeuf fertilisé et post-larvaire juvénile précoce. L'utilisation d'eau de mer ayant subi une filtration finale à travers un filtre qui élimine les constituants de dimensions supérieures à 0,2 pm élimine essentiellement toutes les bactéries restantes.Cependant, adhérant à la surface des oeufs fertilisés, se trouvent des bactéries qui ne peuvent pas être éliminées par des moyens physiques comme la filtration et le lavage avec cette eau de mer essentiellement exempte de bactéries. Le prétraitement des parents avant le frai aide à réduire la source de contamination. L'addition d'un ou plusieurs antibiotiques à l'eau essentiellement exempte de bactéries contenant les oeufs pendant l'éclosion aide à combattre toute augmentation de la population bactérienne. L'emploi dlun ou plusieurs antibiotiques dans l'eau où sont transférées les larves nageant librement combat davantage le développement des bactéries. Enfin, le traitement antibiotique supplémentaire des larves pendant l'implantation et les périodes suivant immédiatement l'implantation, continue ce type de lutte contre les bactéries pathogènes sauvages. Comme le décrit le brevet U.S. 4 226 210, les larves sont extrêmement sélectives dans la détermination des surfaces d'implantation et on a amélioré le procédé décrit dans ce brevet pour préparer les surfaces d'implantation. Contrairement au procédé décrit antérieurement où les espèces sauvages naturelles de bactéries et autres microorganismes sont poussées à croître sur des surfaces d'implantation dans le système de culture, on a appris que l'emploi de bactéries cultivées séparément apporte des résultats sensiblement meilleurs. Un raffinement supplémentaire consiste en l'emploi de souches pures de ces bactéries qui ont été sélectionnées pour être résistantes à des antibiotiques spécifiques de manière que les bactéries préférées puissent être utilisées pour induire l'implantation et procurer la nutrition précoce dans un bain qui contient aussi les antibiotiques utilisés pour combattre les bactéries sauvages et nuisibles. On arrive à sélectionner les souches résistantes aux antibiotiques par sous-cultures répétées en présence de concentrations croissantes d'un antibiotique en utilisant des techniques bactériologiques standard jusqu'à ce qu'on obtienne une souche ayant une résistance suffisante. Un autre raffinement consiste à utiliser des souches résistantes aux antibiotiques sélectionnées de ces bactéries bénéfiques qui soient résistantes aux bactériophages nuisibles aux bactéries sélectionnées. Les souches résistantes aux bactériophages sont obtenues en exposant de grandes populations d'une souche bactérienne à un bactériophage et, après des sous-cultures répétées, à isoler les souches qui ne favorisent plus à l'évidence le développement du bactériophage lytique destructif. Ces bactériophages sont de temps en temps présents dans l'eau de mer et ne sont pas éliminés par filtration à travers des filtres de 0,2 pm. Outre ces techniques éprouvées, on envisage qu'il soit possible de mettre au point des souches de bactéries encore meilleures par manipulation génétique, bien que des travaux supplémentaires restent à faire dans ce domaine. La bactérie bénéfique actuellement préférée ressemble de très près à Pseudomonas cepacia et Pseudomonas marginata qui sont décrites partiellement dans le "Manual of Determinative Bacteriology" de Bergey, 8ème édition, R.E. Bachanan et N.E. Gibbins, coéditeurs, Williams & Wilkins Co., Baltimore, 1974. Une description plus complète de ces bactéries peut être trouvée dans "The Aerobic Pseudomo nas : A taxonomic Study", de R.Y. Stainer, N.J. Palleroni et M. Doudoroff, J. Gen. Microbiol. (1966), 43, 159-271 et dans "Taxonomy of the Aerobic Pseudomonas : Pseudomonas cepacia, P. marginata, P. alliicola et P. caryophyliit, R.W. Ballard, N.J. Palleroni, M. Doudoroff, R.Y. Stanier et M. Mandel, J. Gen. Microbiol. (1970), 60, 199-214.Bien que la bactérie de choix semble être apparentée à ces pseudomonas, elle ne correspond pas exactement à une quelconque des espèces décrites ci-dessus. La bactérie de choix est appelée Pseudomonas sp. Monterey Abalone Farms Strain 13 (souche 13 de Monterey Abalone Farms) telle que déposée dans la collection American Type Culture Collection sous le n" ATCC 39451. Cette bactérie présente les caractéristiques suivantes (1) C'est un bâtonnet gram négatif, doué de mouvement avec des flagelles péritriches polaires. (2) Son métabolisme est respiratoire plutôt que fermentatoire et il ne peut pas réduire le nitrate en nitrite ni vivre de manière anaérobie par dénitrification. (3) I1 ne fixe pas l'azote, est catalase-positif, donne une réaction à l'oxydase faible à négative et ne produit pas d'indole. (4) I1 stocke le poly-ss-hydroxybutyrate sous forme de réserve cellulaire. (5) I1 produit un pigment non fluorescent jaune sur certains milieux. (6) I1 ne produit pas d'arginine dihydrolase et les hydrolases produites ne sont pas extracellulaires pour la gélatine ou l'amidon. (7) I1 n'exige pas de facteurs de croissance particuliers et peut croître avec de l'ammoniac ou du nitrate comme source d'azote. (8) I1 peut utiliser l'un quelconque des composés suivants comme seule source de carbone et d'énergie D-ribose, D-glucose, D-mannose, D-galactose, D-fructose, saccharose, tréhalose, maltose, gluconate, acétate, propionate, butyrate, malonate, succinate, DL-malate, DL-h-hy- droxybutyrate, DL-lactate, citrate, pyruvate, mannitol, méso-inositol, glycérol, éthanol, n-propanol, glycine, L-a-alanine, k-alanine, L-sérine, L-leucine, L-isoleucine, L-aspartate, L-glutamate, L-lysine, L-arginine, L-ornithine, L-tyrosine, -aminobutyrate, L-proline, L-phénylalanine, bétaine et asparagine. (9) Il ne peut utiliser aucun des composés suivants comme seule source de carbone et d'énergie : D-xylose, D-arabinose, L-arabinose, D-fucose, L-rhamnose, cellobiose, lactose, amidon, 2-cétogluconate, caproate, pélargonate, oxalate, maléate, adipate, DL-tartrate, glycolate, lévulinate, sorbitol, éthylèneglycol, dulcitol, méthanol, isopropanol, n-butanol, géraniol, benzoate, p-hydroxybenzoate, m-hydroxybenzoate, phénylacétate, phénol, testostérone, L-thréonine, DL-norleucine, L-valine, -aminovalérate, L-citruline, L-histidine, L-tryptophane, p-aminobenzoate, putrescine, histamine, créatine, pantothénate, acétamide et nicotinate. L'addition de substances nutritives chimiques au bain d'eau de mer contenu dans la cuve d'implantation aide à maintenir une population viable des bactéries bénéfiques sélectionnées. La croissance de cette population de bactéries est nécessaire pour produire la surface adéquate pour l'implantation afin de fournir des bactéries bénéfiques adéquates pour la nutrition du début de la vie et de contrôler la concentration de ces constituants nuisibles sous forme d'ammoniac libéré au cours du métabolisme des larves. L'addition de substances nutritives bactériennes pendant les premiers traitements antibiotiques améliore aussi l'efficacité des agents antibactériens vis-à-vis des bactéries nuisibles qui se trouveraient autrement dans un état temporaire de non croissance et résistant. On a trouvé que le citrate de sodium en concentra tion de 2 à 4 parties par million (ppm) en poids ajouté au bain d'eau de mer contenant les bactéries introduites fournit une bonne croissance des bactéries que l'on a sélectionnées. Tandis qu'on préfère ajouter cette substance nutritive spécifique à cause de son rôle dans la nutrition de l'espèce que l'on a particulièrement sélectionnée, cette invention n'est pas limitée à ce composé ajouté particulier et on peut utiliser d'autres substances nutritives comme l'acétate de sodium, le glucose ou le saccharose. Le choix de la substance nutritive est basé sur les considérations suivantes. La substance nutritive doit être facilement métabolisée par la bactérie bénéfique et la majorité des bactéries nuisibles également, bien que la substance nutritive ne doive pas contenir d'azote puisque le métabolisme de la substance nutritive par la bactérie bénéfique pour sa croissance cause l'absorption et l'élimination de l'ammoniac toxique dans l'eau, que les bactéries bénéfiques utilisent comme source d'azote. Plus spécifiquement, on a mis au point un procédé de croissance des ormeaux au cours des stades précoces de la vie dans un environnement contrôlé sur le plan microbiologique, en commençant par le traitement des parents avant le frai et en traitant les stades de l'oeuf, larvaire et post-larvaire des ormeaux, un procédé préféré comportant les étapes suivantes a. Maintenir les animaux adultes nettoyés au préalable (décrassés à la brosse) dans de l'eau de mer essentiellement exempte de bactéries et contenant un ou plusieurs antibiotiques en solution pendant une période d'au moins 48 heures avant le frai, ou pendant une période suffisante pour réduire le niveau des bactéries marines nuisibles associées aux animaux adultes. b. Remplacer l'eau de mer contenant les antibiotiques par de l'eau de mer essentiellement exempte de bactéries. Les procédés de frai et de fertilisation et la séparation des oeufs fertilisés utilisent les techniques décrites dans le brevet U.S. 4 183 322. c. Placer les oeufs séparés, nettovés et fertilisés dans un second dispositif d'eau de mer essentiellement exempte de bactéries et contenant un ou plusieurs antibiotiques pendant une période nécessaire à l'incubation et à l'éclosion. d. Transférer sélectivement les larves obtenues essentiellement débarrassées de débris d'éclosion par le procédé du brevet U.S. 4 183 322 dans un troisième dispositif d'eau de mer essentiellement exempte de bactéries et contenant un ou plusieurs antibiotiques, et ajouter des souches résistantes aux antibiotiques de bactéries bénéfiques dans ce bain d'eau de mer. e. Transférer les larves développées du troisième dispositif d'eau de mer dans une cuve d'implantation (telle que décrite dans le brevet U.S. 4 253 418) d'eau de mer essentiellement exempte de bactéries, dans laquelle sont ajoutés un ou plusieurs antibiotiques et des souches sélectionnées cultivées séparément de bactéries bénéfiques résistantes aux antibiotiques (telles que décrites ci-dessus) qui induiront l'implantation des larves nageant librement, apporteront de la nourriture pour les ormeaux se développant après l'implantation et la métamorphose et métaboliseront l'ammoniac libéré par les larves au cours de leurs processus métaboliques. Dans ce procédé, les antibiotiques que l'on préfère utiliser, seuls ou en combinaison, sont la polymyxine B, l'érythromycine, l'ampicilline, le chloramphénicol et la chlortétracycline. On utilise habituellement des concentrations de 10 ppm de composé antibiotique actif dissous dans le bain d'eau de mer, mais des concentrations supérieures et inférieures sont efficaces et ce procédé ne se limite ni à ces antibiotiques spécifiques ni à ces concentrations. Dans le procédé de cette invention, on utilise un ou plusieurs antibiotiques de la manière suivante a. Utilisation d'un composé antibiotique dans une ou plusieurs des étapes précédentes. b. Utilisation d'une combinaison d'un ou plusieurs antibiotiques dans une ou plusieurs des étapes précédentes. c. Utilisation d'une série d'antibiotiques au cours de deux ou plusieurs stades. Le choix des antibiotiques utilisés est basé sur l'efficacité dans la lutte contre la mortalité due aux bactéries nuisibles et sur l'absence de toxicité en concentration efficace. Certains antibiotiques, par exemple le chloramphénicol, la tétracycline, la novobiocine et d'autres ne peuvent pas être utilisés au stade de l'oeuf à cause de leur toxicité, bien qu'ils soient non toxiques vis-à-vis des larves nageantes. L'emploi d'une série d'antibiotiques augmente le spectre d'antibiotiques et, par conséquent, contrôle plus efficacement la variété de bactéries nuisibles pouvant être présentes dans les différents bains de larves. La mise en oeuvre préférée de la présente invention consiste à employer une série d'antibiotiques au cours de l'ensemble du procédé, depuis le traitement des parents jusqu'aux 30 premiers jours après l'introduction des larves dans le bain d'implantation. Une amélioration supplémentaire de ce procédé consiste à utiliser les souches résistantes aux antibiotiques des bactéries bénéfiques cultivées séparément, de manière que les bactéries préférées prospèrent en présence d'un antibiotique spécifique, ou d'une combinaison d'antibiotiques, tandis que les bactéries indésirables introduites accidentellement seront tuées ou combattues par l'antibiotique. Une autre amélioration consiste à utiliser les souches résistantes aux bactériophages et résistantes aux antibiotiques des bactéries bénéfiques cultivées séparément. Dans la mise en oeuvre de la présente invention, on maintient et on facilite le développement de la population des bactéries bénéfiques sélectionnées dans la cuve d'implantation en ajoutant des substances nutritives pour bactéries à l'eau de mer. Une substance nutritive actuellement préférée est le citrate de sodium en concentration en poids de 2 à 4 ppm. Plus particulièrement, on place des mâles et des femelles ormeaux gravides dans des cuves de frai séparées d'environ 50 litres 48 heures avant le moment prévu pour le frai. Les coquilles de ces animaux sont soigneusement brossées pour éliminer autant que possible de la communauté biologique épiphytique, comprenant les bactéries. L'eau contenue dans les cuves est soit essentiellement exempte de bactéries ou filtrée pour présenter un très faible comptage bactérien. Dans cet exemple, on introduit dans le bain d'eau l'antibiotique chlortétracycline et on l'instille dans le courant d'eau entrant afin de maintenir une concentration voulue, par exemple 10 ppm, de composé actif sur toute la durée de 48 heures. Les cuves sont ensuite vidées et remplies de nouveau d'eau essentiellement exempte de bactéries et les animaux sont frayés séparément.Après la capture des oeufs sur un tamis de 100 lum et leur passage à travers un tamis de 300 gum au cours d'étapes successives multiples destinées à éliminer le mucus, les fèces et autres matières indésirables, les oeufs filtrés et lavés sont stérilisés, relavés et placés dans une cuve d'éclosion. Dans la plupart des cas, plusieurs millions d'oeufs sont produits, ce qui nécessite une grande cuve d'éclosion. Avec un tel nombre d'oeufs, on les place dans un bain d'eau de mer contenue dans une cuve d'environ 2000 litres qui a été stérilisée au préalable avec du chlore, séchée à l'air, puis remplie d'eau de mer essentiellement exempte de bactéries avant traversé un filtre de 0,2 pm. On ajoute ensuite un deuxième antibiotique à ce deuxième bain d'eau. A titre d'exemple, cet antibiotique est la polymyxine B en concen tration de 10 ppm. Après plusieurs jours, les oeufs auront éclos sous forme de larves nageant librement et les larves sont recueillies sur un tamis de 100 pm, lavées doucement avec de l'eau exempte de bactéries et placées dans un troisième bain d'eau dans une cuve de 2000 litres ayant été stérilisée au préalable avec du chlore, séchée à l'air et remplie d'eau de mer essentiellement exempte de bactéries ayant traversé un filtre de 0,2 pm. On ajoute un troisième antibiotique, dans cet exemple l'ampicilline, en concentration de 10 ppm. On ajoute au bain d'eau une quantité aliquote contenant environ 1,5 x 10 cellules de bactéries bénéfi ques sélectionnées ayant été soumises à une sélection et une culture supplémentaires pour être résistantes à l'ampicilline.Une aération ménagée assure le maintien de propor- tions adéquates d'oxygène et un mélange ménagé des larves. On a trouvé que des densités larvaires de 10 larves par millilitre, ou même de 20 larves par millilitre, peuvent croître de façon convenable dans ce système de culture. Après environ 48 heurespassées dans ces cuves à une température thermostatée pour ne pas dépasser 15"C pour les ormeaux rouges (Haliotis rufescens), les larves peuvent alors s'implanter. On les recueille sur un tamis de 100 pm, on les lave doucement avec de l'eau exempte de bactéries et on les transfère dans une cuve d'implantation de 2000 litres contenant une multitude de surfaces telles que décrites dans le brevet U.S. 4 253 418. Ces surfaces et la cuve elle-même ont été stérilisées au préalable avec du chlore dissous en concentration d'environ 100 ppm, séchées à l'air et ensuite remplies d'eau de mer ayant traversé un filtre de 0,2 pm. On dissout un quatrième antibiotiaue, dans cet exemple le chloramphénicol, en concentration de 10 ppm dans l'eau de mer. A cet instant, on ajoute une quantité aliquote contenant environ 5x1011 cellules bactériennes des sou ches préférées (par exemple ATCC n" 39451 décrite ci-dessus) ayant subi une sélection supplémentaire pour être résistantes à l'antibiotique chloramphénicol et aux bactériophages et ayant été cultivées séparément en culture pure. Une aération ménagée assure un mélange du contenu de la cuve. De plus, on ajoute une substance nutritive pour bactéries constituée par 10 grammes de citrate de sodium pour permettre la croissance des bactéries voulues et pour amé- liorer l'efficacité de l'antibiotique à combattre et à éliminer les bactéries sauvages apportées par les parents dans le processus de culture, ou qui peuvent être introduites accidentellement au cours d'un ou plusieurs stades successifs. Dans la plupart des cas, les larves d'ormeaux commencent leur processus d'implantation et deviennent des gastéropodes juvéniles rampants sur le fond au bout d'environ 14 à 21 jours. Le contenu de la cuve d'implantation n'est pas changé pendant environ 45 jours, bien que l'on puisse ajouter des cultures de bactéries supplémentaires sélectionnées, résistantes aux antibiotiques et résistantes aux bactériophages, si on le juge nécessaire. Ce jugement se fait sur une base hebdomadaire en utilisant des échantillons prélevés à la surface de la cuve que l'on dépose en filets sur des plaques de gélose. Environ 14 jours après l'introduction des larves dans le bain d'implantation final, on introduit dans le bain des diatomées de l'espèce Navicula, on ajoute des substances nutritives pour diatomées et on injecte dans la cuve de la lumière super-ambiante pour promouvoir la Dhotosynthèse qui contrôle l'équilibre biologique et chimique de la cuve et fournit une source de nourriture supplémentaire aux jeunes ormeaux à mesure qu'ils poursuivent leur métamorphose et traversent le stade juvénile. La préparation de ces semences de diatomées exemptes de bactéries est connue dans la technique. Dans cet exemple de procédé, on a trouvé que plus de 60 pour cent des larves introduites dans une cuve d'implantation peuvent survivre, bien que, en production courante, on estime qu'un taux de survie plus approprié est de 20 pour cent. Cela représente une amélioration importante par rapport à la nature et à la technique antérieure. Bien que la description de la présente invention utilisée à titre d'exemple concerne des ormeaux rouges, ce procédé est applicable à d'autres espèces d'ormeaux (par ex. ormeaux roses ou Haliotis corrugata), à d'autres mollusques qasté- ropodes, comprenant, sans y être limité, les conques, les "loco" et autres animaux benthiques aquatiques doués de mouvement, y compris les oursins, qui présentent une importance économique et scientifique. On pense que ce procédé est particulièrement avantageux pour la culture des oursins que l'on trouve habituellement à l'état naturel dans des environnements préférés des ormeaux. REVENDICATIONS 1.- Procédé de culture de mollusques gastéropodes et autres animaux marins et aquatiques benthiques doués de mouvement au cours des premiers mois de la vie dans un environnement contrôlé sur le plan microbiologique, caractérisé en ce qu'il comprend les étapes qui consistent à a. placer les animaux parents nettovés dans des bains de contrôle bactérien, d'eau de mer sensiblement exempte dé bactéries contenant un antibiotique b. récupérer les oeufs et le sperme des animaux parents et placer les oeufs fertilisés dans un bain d'éclosion d'eau de mer sensiblement exempte de bactéries contenant un antibiotique c. séparer les larves écloses du bain d'éclosion pour les immerger dans un bain de maintien d'eau de mer sensiblement exempte de bactéries contenant un antibiotique , et d. transférer les larves qui se développent du bain de maintien dans un bain d'implantation d'eau de mer sensiblement exempte de bactéries, l'eau de mer contenant un antibiotique et une espèce de bactéries bénéfiques sélectionnée résistante à l'antibiotique du bain d'implantation. 2.- Procédé selon la revendication 1, caractérisé en ce que les animaux parents sont retenus dans des bains de contrôle bactérien pendant environ deux jours avant le frai et en ce que les bains sont ensuite vidés et remplis de nouveau d'eau de mer fraîche sensiblement exempte de bactéries dans laquelle on induit le frai 3.- Procédé selon la revendication 1, caractérisé en ce que le bain de maintien contient aussi une espèce sélectionnée de bactéries bénéfiques résistante à l'antibiotique du bain de maintien. 4.- Procédé selon la revendication 1, caractérisé en ce que les larves écloses sont retenues dans le bain de maintien pendant au moins une journée. 5.- Procédé selon la revendication 1, caractérisé en ce que les bactéries bénéfiques sont cultivées séparément et sélectionnées pour être résistantes aux bactériophages. 6.- Procédé selon la revendication 1, caractérisé en ce que l'on aioute au bain d'implantation une substance nutritive pour bactéries. 7.- Procédé selon la revendication 6, caractérisé en ce que la substance nutritive est le citrate de sodium. 8.- Procédé selon la revendication 7, caractérisé en ce que les bactéries bénéfiques a. peuvent utiliser des composés carbonés uniques pour leur énergie et leur croissance et l'ammoniac comme seule source d'azote b. ne nécessitent pas de vitamines ni de facteurs de croissance analogues c. réalisent un métabolisme respiratoire contrairement à un métabolisme fermentatoire ; et d. ne produisent pas de produits métaboliques toxiques ni ne libèrent de matières toxiques plus complexes. 9.- Procédé selon la revendication 1, caractérisé en ce que l'eau de mer utilisée dans chaque bain est filtrée pour éliminer les particules de dimensions supérieures à 0,2 pm. 10.- Procédé selon la revendication l,~caractérisé en ce que l'eau de mer est obtenue à partir d'une source de grands fonds marins à une profondeur d'au moins 304,8 mètres (1000 pieds) au-dessous de la surface de la mer. 11.- Procédé selon la revendication 1, caractérisé en ce que l'ensemble du procédé utilise une série d'antibiotiques différents. 12.- Procédé selon la revendication 11, caractérisé en ce que les antibiotiques sont choisis dans un groupe constitué par la polymyxine B, le chloramphénicol. l'ampicilline, l'érvthromvcine, la chlortétracycline, la néomyci ne, la streptomycine et la gentamycine. 13.- Procédé selon la revendication 12, caractérisé en ce que l'antibiotique choisi pour un bain particulier est utilisé en concentration d'environ 10 parties par million dans l'eau de mer. 14.- Procédé selon la revendication 1, caractérisé en ce que les animaux sont des oursins. 15.- Procédé de culture d'ormeaux au cours des premiers mois de la vie, dans lequel on utilise une série de bains d'eau de mer pour nettoyer les animaux parents, éclore les oeufs fertilisés, maintenir les larves écloses jusqu'à ce qu'elles soient prêtes à s'implanter et fournir des surfaces d'implantation et une nutrition pour poursuivre le développement et la croissance, caractérisé en ce qu'il comprend les étapes qui consistent à : a. utiliser de l'eau de mer sensiblement exempte de bactéries dans chaque bain : et b. fournir un antibiotique dans l'eau de mer de chaque bain pour minimiser la contamination bactérienne par les animaux parents et pour empêcher le développemPnt des bactéries nuisibles dans les bains. 16.- Procédé selon la revendication 15, caractérisé en outre en ce qu'il comprend les étapes qui consistent à ajouter au bain d'implantation une bactérie bénéfique destinée à induire l'implantation des larves, contrôler l'accumulation d'ammoniac et fournir une nutrition aux ormeaux qui se développent après l'implantation et la métamorphose, la bactérie étant sélectionnée pour être résistante à l'antibiotique de la cuve d'implantation. 17.- Procédé selon la revendication 16, caractérisé en ce que la bactérie bénéfique a des caractéristiques correspondant au n" 39451 de l'American Type Culture Collection. 18.- Procédé selon la revendication 16, caractérisé en ce que l'eau de mer utilisée dans chaque bain est exemp te de particules de dimensions supérieures à environ 0,2 gum lorsqu'on l'introduit dans le bain. 19.- Procédé selon la revendication 18, caractérisé en ce que l'eau de mer introduite dans chaque bain a été filtrée pour éliminer les bactéries nuisibles et pour éliminer les particules de dimensions supérieures à environ 0,2 pm. 20.- Procédé selon la revendication 18, caractérisé en ce que l'eau de mer est tirée d'une source de qrands fonds marins à une profondeur d'au moins environ 304,8 mètres (1000 pieds) au-dessous de la surface de la mer. 21.- Procédé selon la revendication 18, caractérisé en ce que l'on utilise différents antibiotiques dans les divers bains. 22.- Procédé selon la revendication 21, caractérisé en ce que les antibiotiques sont choisis dans un groupe constitué par la polvmvxine B, le chloramphénicol, l'ampicilline, l'érvthromycine, la chlortétracycline, la néomycine, la streptomycine et la gentamycine. 23.- Procédé selon la revendication 18, caractérisé en ce qu'il comprend en outre l'étape qui consiste à ajouter une substance nutritive pour bactéries à l'eau de mer du bain d'implantation. 24.- Procédé selon la revendication 23, caractérisé en ce que la substance nutritive est le citrate de sodium. 25.- Procédé selon la revendication 24, caractérisé en ce que l'on ajoute le citrate de sodium jusqu'à l'obtention d'une concentration d'environ 2 à environ 4 ppm dans l'eau de mer.