Brevet FR2585567A1 — publié le 19870206

l La présente invention concerne une nouvelle com- position cosmétique et sa préparation, la composition étant destinée principalement à l'amélioration de l'aspect et de la qualité de la peau. L'invention comprend également des articles ou dispositifs pour le conditionnement de cette composition ou/et pour l'application de celle-ci sur la peau. L'amélioration de la qualité de la peau constitue un des objectifs importants de la cosmétologie. Il est, en effet, souvent nécessaire de stimuler la régénération natu- relle de la peau, en dehors de sa coloration, de son hydra- tation, de sa nutrition ou de sa protection contre les rayons solaires ou les vents. Aussi existe-t-il un grand nombre de crèmes, de lotions, et de laits à base de différents produits naturels ou synthétiques, employés en vue de la stimulation des processus normaux, pour rendre à une peau, plus ou moins abimée ou vieillissante, ses souplesse, tenue et aspect agré- able. Ainsi, depuis les'différentes matières grasses, végéta- les et animales, telles que, par exemple, les huiles d'amande douce ou de palme, et les graisses de crinière de cheval ou de vison, dont certaines sont utilisées depuis des siècles, jusqu'aux compositions à base d'extraits d'élastine, de col- lagène, de placenta, de végétaux et vitamines, un grand nom- bre de produits ont été expérimentés avec des résultats fort variables. Lorsqu'il s'agit de redonner à la peau, véritable- ment, les vigueurs, souplesse et eclat, les compositions em- ployées jusqu'à présent sont en défaut. La présente invention crée,dans ce domaine, un per- fectionnement important: elle intervient sur les mauvais état et aspect de la peau, par le moyen d'une composition cy- tologique, dont le rôle est de transmettre à la peau des vec- teurs cellulaires, dans un environnement de croissance; ces vecteurs exercent une action stimulatrice de la régénération tissulaire voire une action réparatrice. Ainsi, suivant l'in- vention, n'est-il plus question, comme c'est le cas générale- ment dans l'art connu, d'apporter à la peau des matières étrangères, mais d'y induire des phénomènes naturels de croissance au moyen de facteurs spécifiques de la peau el- le meme. La nouvelle composition suivant l'invention est constituée par une culture de cellules dans un milieu de croissance approprié, convenant aux traitements cosméti- ques: les cellules sont de préférence celles d'un tissu conjonctif, en particulier fibroblastiques d'origine con- jonctive. Bien que les cellules de la culture puissent être humaines,animales despécifiées, ou même végétales, vi- vantes ou mortes, des résultats particulièrement favorables sont obtenus avec des cultures de fibroblastes et kératino- cytes humains. Il peut être intéressant d'employer une cul- ture de fibroblastes obtenue à partir d'un explant des cel- lules correspondantes, prélevé sur le sujet auquel est jus- tement destinée la composition cosmétique donnée, suivant 1' invention. Le procédé d'obtention de la composition suivant l'invention peut-être réalisé par une culture cellulaire selon la technique suivante. Des fibroblastes humains sont isolés à partir de fragments de la peau, et débarrassés du tissu graisseux subcutané. Les fragments de 1 mn3 sont pla- cés dans des boites de culture et recouverts de 1 ml de mi- lieu DMEM (Eagle) complété avec du sérum de veau foetal à 10%, 2 mMide glutamine, 1 mM de pyruvate de sodium, acides aminés non-essentiels et 100 unités/ml de pénicilline-strep- tomycine. Les cultures sont incubées à 37 C, en atmosphère humide de 95% d'air et 5% de Co2 Les fibroblastes croissent à partir de l'explant; ils peuvent être repiqués après 2-3 semaines. Les cellules sont détachées quantitativement de la boite de culture après mn d'exposition à une solution de trypsine, et recueillies après centrifugation à 1700 tr/mn. Elles sont mises en sus- pension dans le milieu de culture et distribuées dans les supports de culture à une densité initiale de 1 x 102 à 1 x 108 cellules. Le milieu nutritif employé peut-être liquide, pâ- teux, particulaire ou solide; il peut par exemple être sous la forme d'un sérum physiologique, d'eau distillée, d'un gel avec de la gélatéine ou d'une autre matière gélifiante, de micro billes de verre traité, de poudre inerte, par exemple un polymère: PVC micronisé à 20 microns, fibres de polyes- ter, film de collagène etc. Le support cellulaire, entrant dans la nouvelle composition cosmétique, peut contenir un nombre très varia- ble de cellules, par exemple 102 à 108 par ml, et de préfé- 4 8 rence environ 10 à 108. Bien que la composition puisse être constituée par des cellules de tissu conjonbtif ou autres cellules, telles que prélevées sur un sujet donné, mises en suspension dans le milieu convenable pour leur culture, la forme préférée de l'invention réside en une culture, dans laquelle la croissance des cellules initiales a au moins été multipliée par 10. Des compositions particulièrement efficaces renfer- ment environ 10 à 100 fois le nombre de cellules d'ensemen- cement de départ. Les fibroblastes et les kératinocytesiétant les cellules de choix pour la composition suivant l'invention, peuvent être prélevées sur la peau de tout endroit du corps humain, animal ou végétal. Chez l'homme, il est pratique de faire le prélèvement d'une très petite quantité de peau au lobe d'une oreille ou une cuisse par exemple. Les explants dans les supports de cultures sont maintenus ainsi à 37 C, jusqu'à ce que leur nombre se multiplie dans les propor- tions voulues, notamment comme indiqué plus haut. Après cette phase de croissance et prolifération, quelle que soit la concentration en cellules dans le milieu de culture, si les cellules sont mortes, la composition doit être conservée au froid, de préférence entre 1 et 6 C, le mieux à 4 C; si elle sont vivantes, la composition est à conserver à 37 C ou - 80oC. Si le support de culture est liquide, la composition peut-être conditionnée dans des tu- bes fermés, flacons, ampoules, comme il est connu de le fai- re pour divers produits pharmaceutiques et cosmétiques; ce- pendant, selon deux importantes formes d'exécution, la nou- velle composition cosmétique est conservée dans un dispositif spécial qui, tout en assurant une excellente conservation, facilite l'application de la composition sur la peau de l'u- sager. Ces dispositifs constituent un article qui fait égale- ment partie de l'invention. Suivant un premier trait de l'invention, l'article est constitué par au moins trois couches superposées, le sup- port nutritif et ces cellules sont dans ce cas sous forme de plaque de très faible épaisseur ou filmogène stériles, par exemple: film d'origine végétale, fibres de lin, de coton, gel d'acide alginique nappeiforme ou animale biologiquement non structuré, film de gélatine ou structuré: collagène; conviennent à cet effet des matières collagénique, cellulo- sique, polysaccharides, polyéthylènes-glycols, polyvinyl- pyrrolidones, alginates et substances similaires. Ce support peut d'ailleurs être solide, liquide ou pâteux. Très favora- bles sont les produits qui permettent d'avoir la culture portée par une couche spongieuse, comme par exemple mousse polyvinyl-pyrrolidone ou de copolymères de celle-ci avec de l'acétate de vinyle, par de la cellulose spongieuse ou bien par une éponge de gélatine. Particulièrement pratique est la mise de la composition, suivant l'invention, sous la forme d'une feuille souple, par exemple, avec comme support de la gélatine, du collagène, du polyéthylène glycol, du dextrane ou autre composé filmogène du même type. Cette couche cellu- laire est inserrée entre deux autres couches inertes de pro- tection, dont une peut-être enlevée au moment de l'applica- tion decelle-ci sur la peau de l'usager. Dans d'autres cas, lors de l'application, on enlève la lère couche de protection, on appose la couche cellulaire et la 2ème couche de protec- tion, puis on enlève cette 2ème couche, la couche cellulaire s'intégrant à la peau, en particulier lorsque le support est un film de collagène. On a ainsi un article en forme de feuil- le, dont les dimensions et forme sont adaptées à la région du corps o doit avoir lieu l'application. Dans une autre forme d'exécution le support susmen- tionné se trouve dans un récipient très peu profond, servant de protecteur de l'ensemble et permettant d'avoir éventuelle- ment un support liquide ou pâteux. Les différentes variantes de l'invention sont dé- crites plus en détail ci-après, avec référence aux dessins annexes. Fig. 1 représente la coupe transversale d'une feuil- le de la composition à trois couches superposées. Fig. 2 est également une coupe transversale d'un ar- ticle suivant l'invention, o le support des cellules est logé dans un récipient de très faible profondeur. Fig. 3 est une vue en plan de l'article selon Fig. 2. Sur la Fig. 1, on voit la section d'un ensemble for- mé par un support plat 1 porteur de cellules 2, notamment de fibroblastes, avec leur milieux nutritif de culture incorporé; cette couche active est recouverte elle-même d'un film protec- teur 3, susceptible d'être décollé de 1 au moment de l'emploi de la feuille triple 1-2-3. Les films 3 et 1 sont imperméables au milieu deculture des cellules utilisées. Il est important de choisir pour 1 et 3 des matières appropriées convenant à la culture des cellules employées, sans aucun risque d'altérations de ces dernières. Comme le support 1 vient au contact de la peau, lors de l'application de l'article, il est souhaitable qu'au moins sa couche superficielle porte ou contienne un nombre suffisam- ment élevé de fibroblastes, de préférence 104 à 108 cellules par ml. La couche active, représentée par 2 sur les dessins, est constituée par les cellules, de préférence fibroblastiques, mais pouvant éventuellement être ou comprendre kératinocy- tes, lymphocytes, etc., dispersés dans le milieu de cultu- re utilisé. On a représenté 2 comme une couche distincte, mais, lorsque le support 1 est suffisamment absorbant vis- à-vis de la culture, celle-ci se trouve, en partie ou en entier, dans la couche formée par le support 1. Dans une forme d'exécution particulière, la cul- ture 2 est entièrement mélangée avec la matière du support. C'est le cas du collagène ou d'un produit gélifiant, par exemple polyvinyl-pyrrolidone, gélatine ou polysaccharide, dispersé dans le milieu liquide, contenant les cellules multipliées. Dans ce cas les deux films protecteurs sont identiques ou semblables. De préférence, le pourtour de la couche 1 est mu- ni d'un adhésif pour permettre le collage de la feuille 1-2 sur la peau du patient, après l'enlèvement du film protec- teur 3. Comme il est connu d'utiliser des bandes collantes convenant à la peau humaine, notamment dans des pansements par exemple sous la forme de sparadrap, il n'y a pas lieu de décrire ici la nature de ces rebords collants 4 (fig. 1) appliqués aux articles suivant l'invention. En ce qui concerne la couche 3, recouvrant la cul- ture, tant que celle-ci n'est pas au contact de la peau à traiter, elle est constituée par une feuille mince de matiè- re souple, de préférence polymère insoluble dans l'eau et inerte vis-àvis du milieu de culture. Conviennent bien des films de polyéthylène, polypropylène, polyamide, polyacryla- tes, acétate de cellulose, cellulose et similaires. Bien que les épaisseurs et les autres dimensions des articles en feuilles, suivant l'invention,puisse varier largement, on utilise avantageusement des produits dont le support 1 a une épaisseur d'environ 0,05 à lmm, la couche 2 active 0,1 à 3 mm et le film 3 protecteur 0,05 à 0,5 mm. Les autres dimensions préférées sont de l'ordre de 2 x 5 à 7 x 15 cm pour les largeur x longueur, et plus particulièrement 4 x 7 cm permettant une application aisée sur le visage, les mains, les jambes. Ces feuilles sont polygonales, à bords arrondis et, en particulier d'une forme trapezoidale per- mettant de recouvrir la majeure partie de la joue. Le dispositif selon Fig. 2 et 3 comporte les mê- mes couches 1 à 3 que celui de la Fig. 1, mais en général le support 1 y est plus épais et peut être particulaire ou/ et liquide. Ce support est logé dans un récipient 5 à fai- ble profondeur, par exemple de 3 à 15 mm, et de préférence de 5 à 10 mm. On retrouve ici le pourtour 4 encollé, permet- tant la fixation temporaire, sur la peau, du récipient 5 avec son support 1 porteur des cellules 2, lorsque le film protecteur 3 a été enlevé. Lors de l'utilisation du produit, la composition 1-2 peut être prise du récipient 5, au moyen, par exemple, d'une compresse; alors la compresse absorbe, si nécessaire, l'excés de la phase liquide présente, et - chargé e des cellules 2 - est apposée sur la peau,procu- rant ainsi le contact des cellules 2 avec cette dernière. Un autre article suivant l'invention, comprenant la nouvelle composition, est constitué par un récipient, par exemple tube rigide ou souple, muni d'un applicateur, chargé de composition. Cela peut être notamment une seringue de ca- pacité approprié. De préférence un tel article comporte un tube-dose, évitant des utilisations multiples, susceptibles d'entrainer la pollution toujours possible, surtout avec le milieu nutritif et les cellules. Suivant une variante de l'invention, le support 1 peut comprendre des microbilles, par exemple de verre ou de polysaccharide insoluble ("Sephadex") dispersées dans le mi- lieu nutritif de culture. On bénéficie alors d'une meilleure transmission des éléments actifs, lors de l'application de la composition sur la peau. Comme le développement cellulaire, pendant la culture, a lieu surtout sur les microparticules, on peut séparer le liquide nutritif, ce qui laisse pratique- ment une pâte pour l'application sur la peau. -2585567 Dans le cas de cette variante de l'invention, le mode préféré de préparation de la composition cosmétique consiste à disperser d'abord les particules dans le liquide nutritif choisi, ensuite ensemencer celui-ci avec des cellu- les, notament des fibroblastes, et laisser les cellules se multiplier. Le conditionnement de la culture, ainsi obtenue peut se faire alors - bien entendu à froid - selon un des modes décrits plus haut, l'ensemble ayant été conservé avec un excès de liquide. Il est toutefois recommandable de sépa- rer le liquide des microbilles avant leur application sur la peau d'un sujet. En plus des formes décrites, la nouvelle composi- tion peut également être employée sous la forme de pâte ou de pommade. On disperse alors, dans la culture terminée et refroidie, un épaississant qui peut être par exemple un de ceux que l'on a cités plus haut, dans la description du sup- port 1. Revendications 1. Composition cosmétique pour le traitement de la peau, caractérisée en ce qu'elle est constituée par des cellules de tissu conjonctif, particulièrement par des fibroblastes, dans un milieu nutritif dans lequel peut avoir lieu la croissance de ces cellules. 2.'Composition suivant la revendication 1, caractérisée en ce que la majeure partie des cellules proviennent de leur culture dans ledit milieu. 3. Composition suivant la revendication 1 ou 2, caracté- risée en ce qu'elle contient 102 à 108, et en général 104 à 108, cellules par ml. 4. Composition suivant une des revendications 1 à 3, caractérisée en ce qu'elle est associée à un support plat à pourtour encollé et recouverte d'un film insoluble dans l'eau. 5. Composition suivant la revendication 4, caractérisée en ce que le support est une matière collagénique, un poly- saccharide, polyvinyl-pyrrolidone, polyéthylène glycol, cel- lulose, acétate de cellulose ou copolymère de polyvinyl-pyr- rolidone-acétate de vinyle. 6. Composition suivant la revendication 5 ou 6, carac- térisé en ce que le support est sous une forme spongieuse. 7. Composition suivant une des revendication précé- dente, caractérisée en ce que le milieu nutritif de la culture est le milieu d'EAGLE modifié, DMEM, complété avec du sérum de veau foetal, de la glutamine, du pyruvate et Na et des acides aminés. 8. Composition suivant une des revendications 4 à 6, caractérisée en ce que le support (1) est placé dans un récipient (5) de faible profondeur. 9. Composition suivant une des revendications précé- dentes, caractérisée en ce que des microparticules, en par- ticulier microbilles de verre ou de polysaccharides insolu- ble, sont dispersées dans le milieu nutritif. 10. Composition suivant une des revendications 1 à 3 caractérisée en ce qu'elle est sous la forme d'une pâte ou de pommade, le milieu nutritif liquide étant additionné d'un épaississant, en particulier d'un polymère selon la revendi- cation 5. 11. Procédé de préparation de la composition suivant une des revendications précédentes, qui consiste à effectuer la culture de cellules d'un tissu conjonctif dans un milieu nutritif, caractérisé par ce qu'ensuite la culture obtenue est fixée sur un support absorbant gélifiant ou spongieux. 12. Procédé suivant la revendication 11, caractérisée en ce qu'on effectue la culture des cellules, en particulier de fibroblastes, dans un milieu nutritif d'Eagle modifié (DMEM), de la glutamine, du pyruvate de Na et des acides ami- nés, à 37 C. 13. Procédé de préparation de la composition suivant une des revendications 1 à 3, par culture de fibroblastes dans un milieu nutritif, caractérisé en ce que des micro- particules, notamment en verre ou en polysaccharide insoluble, sont dispersées dans ce milieu avant l'ensemencement avec des cellules prélevées dans la peau, et que le liquide est séparé des microparticules qui servent de support à la com- position.