Brevet FR2587621A1 — publié le 19870327

La présente invention est relative à l'utili- sation de substances biologiquement actives ayant une structure de peptides, qui sont appliquées, sous forme de préparations appropriées, en médecine humaine et vétérinaire, sur les muqueuses, pour y être résorbées. Pour l'application des peptides biologiquement actifs en médecine humaine et vétérinaire, il est souvent impossible de renoncer à l'injection, car les autres modes d'administration ne donnent pas de résultats suf- fisants. L'administration des substances biologiquement actives par voie rectale ou vaginale s'effectue surtout, comme on le sait, au moyen de supports de médicaments ayant une forme déterminée, c'est-à-dire de ce qu'on appelle des suppositoires, qui sont constitués par une matière oléophile ou hydrophile. Ces supports de médi- caments présentent la propriété de fondre dans la cavité du corps dans laquelle ils ont été introduits et, en fondant, de libérer la substance active qui doit se reSsorber dans la muqueuse. Le mécanisme de la fusion du support de médicament dépend de la structure chimique de ce support. La libération de la substance active s'effectue en fonction des conditions irrégulières de la fusion. Il s'y ajoute souvent que la résorption de la substance active par la muqueuse n'est généralement ni dirigée ni très efficace. C'est ainsi, par exemple, que pour l'administration par voie rectale de l'insuline, qui est un représentant typique du groupe des substances biologiquement actives ayant une structure de peptides, la quantité nécessaire à l'obtention de l'effet d'hypo- glycémie est cent fois supérieure à celle qui est néces- saire en cas d'injection intraveineuse. Les résultats sont aussi décevants en ce qui concerne l'efficacité de l'insuline administrée sous forme de gouttes dans le nez, les oreilles ou les yeux Z587621 ou par pulvérisation dans le nez. Pour remédier à ces inconvénients, on a envisagé l'utilisation de produits tensio-actifs ou de mélanges de produits tensio-actifs comme agents de résorption pour l'administration d'insuline. Les agents tensio- actifs doivent intensifier la résorption de la substance active par la muqueuse, ce qui accélère l'entrée en action du médicament, et augmente son taux d'efficacité. Il faut donc que les agents tensio-actifs utilisés pour cette application satisfassent à des exigences très strictes. Il faut que leur toxicité soit extrêmement faible, qu'ils n'irritent absolument pas la muqueuse, qu'ils n'exercent aucune influence nocive sur le milieu naturel des bactéries des muqueuses, qu'ils ne donnent avec le médicament aucune réaction chimique qui en alté- rerait l'efficacité, qu'ils soient compatibles avec le support de médicament et que, s'ils sont utilisés dans des suppositoires, ils ne provoquent pas d'irrégu- larités de fusion ou d'inhomogénéités quelconques. Les composés qui doivent satisfaire à ces exigences, se classent aussi bien parmi les agents tensio- actifs anioniques et cationiques que parmi les agents tensio-actifs non ionogènes et ampholytiques. Par exemple, le brevet DE 2 641 819 préconise l'utilisation d'acides biliaires et de leurs sels alcalins, d'éther alcoyl et alcoyl phénol-polyglycol et d'agents tensio-actifs cationiques, anioniques et ampholytiques, notamment, en ce qui concerne les deux derniers groupes d'agents tensio-actifs cités, des agents tensio-actifs provenant d'acides aminés (alcoyl- et alcoylaminoacides). Le brevet US 4 164 573 préconise, pour la même utilisation, des stéarates d'oxyde de polyéthylène, la lécithine, des dérivés des acides aminés et des acides biliaires, de même que leurs dérivés et leurs sels. Parmi ces groupes d'agents tensio-actifs, ce sont les agents tensioactifs dérivés des acides aminés qui s'avèrent, à tout prendre, les moins toxiques et les plus compatibles avec les muqueuses. Le brevet DE - OS 3 018 843 indique cependant qu'en ce qui concerne la résorption du peptide insu- line, les dérivés d'amino-acides des structures les plus variées n'ont qu'une faible efficacité et que leurs sels n'en ont aucune. Il s'y aJoute que les acides aminés n'ont qu'une compatibilité restreinte avec les bases de suppositoires liphophiles, ce qui limite fortement leur utilisation dans les suppositoires. Le but de l'invention est la mise au point d'un agent de résorption des substances biologiquement actives pour une administration à travers les muqueuses qui ne soit pas toxique, puisse être supportéefacilement par les muqueuses, ne provoque aucune inhomogénéité dans les supports de médicaments et assure l'efficacité biologique de la substance active à une vitesse com- parable à celle avec laquelle agissent les injections par piqûres. Ce but est atteint, suivant l'invention, du fait que l'on a constaté le fait surprenant et inattendu que des condensats d'acides gras albuminiques (AGA), comme ceux que l'on obtient par condensation d'hydro- lysates de glutine avec des acides gras supérieurs de poids moléculaire élevé, contenant de C8 à C18, de pré- férence de C12 à C18, suivie d'une purification comme celle dont le principe est indiqué par le brevet DD 104 793, donnent les meilleurs résultats comme agents de résorption de peptides biologiquement actifs et, par conséquent, permettent d'atteindre le but de l'invention. L'expérience a montré qu'un agent de résorption AGA obtenu de cette manière donne, avec des supports de médicaments oléophiles et hydrophiles pour supposi- toires, comme par exemple le résupol (R), la gélatine et le polyéthylglycol, des solutions complètement homo- gènes qui, même après refroidissement des suppositoires et après stockage au froid pendant quatre semaines à - 10, ne présentent aucun phénomène de ségrégation. Des essais sur l'animal ont montré à plusieurs reprises, dans des conditions permettant de considérer ce résultat comme scientifiquement généralisable et suffisamment établi, que les AGA du type décrit présentent une com- patibilité avec les muqueuses qui est supérieure à celle de tous les autres agents tensio-actifs, même à celle des alcoylsarcosides et peuvent être considérés prati- quement comme non toxiques. L'invention permet de rendre bioligiquement uti- lisablesdes peptides biologiquement actifs, comme, par exemple, l'insuline, en solution aqueuse aussi bien que sur une base de suppositoire oléophile et hydrophile, pour assurer une résorption rapide et très complète sans actions secondaires telles qu'irritation des muqueuses et réactions dues à une allergie. L'effet surprenant que les AGA exercent, comme agents de résorption de peptides biologiquement actifs pour la résorption par voie muqueuse, est décrit ci- dessous dans le cas d'une administration rectale et nasale d'insuline à des lapins et à des chiens. On a obtenu un abaissement rapide de la glycémie, dont l'évo- lution dans le temps est équivalente à celle que l'on obtient par injection sous-cutanée de vieille insuline. Le contrôle d'efficacité a été fait en déterminant le taux de glucose dans le sang et de l'insuline radio- immunologiquement réactive dans le sang. L'effet inattendu des AGA peut s'expliquer par l'association, propre à ces produits, des propriétés tensio-actives et d'analogies de structure de la partie hydrophile des AGA et des peptides biologiquement actifs ainsi qu'au fait qu'ils sont structurés à partir de substances contenues dans l'organisme vivant. Pour les essais sur l'animal, les suppositoires ont été intro- duits dans le rectum, d'une manière connue, à 7 cm de profondeur pour le lapin et à 10 cm environ pour le chien. L'application nasale a été effectuée au moyen d'un pulvérisateur de parfumerie du commerce. Les animaux utilisés pour ces essais étaient des lapins mâles ayant un bon métabolisme, non narco- tinisés, appartenant aux races chinchilla et "bélier allemand" ainsi qu'à des produits de ces races avec des lapins-lièvres, le poids de ces animaux étant d'environ 4 kg, ainsi que des Beagle-Ruden de 1 à 1,5 ans, élevés sur place, ayant un bon métabolisme et pesant de 10 à 12 kg. Tous les animaux ont été préparés à une sensi- bilité normale à l'insuline. Pendant les 18 heures pré- cédant les essais ils ne recevaient aucune nourriture; par contre, eau à volonté. On a utilisé des suppositoires de 2,0 g à base de rosupol (R) produit par le VEB DHW Rodleben et de l'insuline en cristaux standardisée d'origine porcine produite par le VEB Berlin-Chemie à une concentration de 16 VT par suppositoire pour les lapins et à une con- centration de 50 VT par suppositoire pour les chiens. La concentration des AGA variait de 1 à 10 % de la base du suppositoire. A titre de comparaison, on a utilisé des suppositoires d'insuline de composition analogue, mais sans AGA. L'application nasale a été faite avec une solution acide de 48 UT/ml d'insuline d'origine porcine standar- disée, dans un domaine de pH de 2,5 à 4,7 et pour une concentration d'AGA de0,5 à 10 % par rapport à la solution prête. La détermination de l'insuline radioimmunologi- quement réactive (détermination de l'IRI) dans le sang a été effectuée avec les appareils d'essai sur l'insu- line Rotop classiques en utilisant de l'insuline J125. Les prises de sang ont été effectuées toutes les minutes après l'administration de l'insuline au moyen d'une canule en plastique introduite dans la veine du bord de l'oreille. Parallèlement à la détermination de l'IRI, on a effectué une détermination du glucose dans le sang d'une manière encymatique suivant la - méthode 2, AB/RDA en utilisant l'appareil classique Fermognost pour la meusre de la glycémie (méthode A). L'extinction de la solution colorée a été déterminée pour la longueur d'onde 530 y par comparaison avec une valeur témoin. La concordance des valeurs mesurées pour l'IRI avec les valeurs de l'abaissement du taux de glucose dans le sang était extraordinairement bonne, ce qui montre que l'abaissement du taux de glucose est dû fondamentalement à la résorption de l'insuline aussi bien dans le cas de l'administration par voie rectale que dans le cas de l'administration par voie nasale. La comparaison avec des animaux auxquels on avait donné des suppositoires ne contenant pas d'AGA met en évidence un abaissement significatif de la glycé- mie chez les animaux soumis aux essais puis traités au moyen de suppositoires à insuline contenant des AGA. On a constaté que l'action surprenante des AGA sur l'absorption d'insuline est fonction de la concen- tration de l'AGA introduit. L'invention est décrite ci-dessous d'une manière plus détaillée au moyen d'exemples. EXEMPLES 1. Administration d'insuline à des chiens par voie rectale Suppositoire: 4,17 mg d'insuline, 50,00 mg d'AGA Rosupol U ad 2,00 g Déroulement des essais A cinq chiens du lot défini, d'un poids de 10,9 à 12,0 kg, on a donné les suppositoires dans des conditions telles que chaque animal a reçu une dose d'insuline de 2,0 UI/kg. A un autre chien, on a donné des suppositoires ayant la même concentration en insuline, mais ne con- tenant pas d'AGA. Résultats: Les chiffres du tableau indiquent le taux de glycémie en % rapporté à la valeur qu'il avait avant l'adminis- tration de l'insuline. Nodel'animal Auboutde 1 2 3 4 5 heures 1 40 34 52 73 120 2 46 35 50 68 111 3 39 39 48 64 105 4 45 33 49 63 107 52 45 64 64 112 X 44 37 53 66 111 + - 5 5 7 4 6 6 Animl témoin122 110 87 91 105 2. Administration d'insuline à des lapins par voie rectale Suppositoire: 0,66 mg d'insuline, 100,0 mg d'AGA Rosupol U ad 2,00 g Déroulement des essais: A quatre animaux du lot défini, on a administré les suppositoires dans des conditions telles que les animaux ont reçu 2 UI/kg de leur poids. A deux animaux témoins on a donné des suppositoires ayant la même concentration d'insuline, mais sans AGA. Résultats: Les chiffres du tableau se lisent comme dans le cas précédent. Nodel'animal Auboutde 10 20 30 40 50 60mn 1 101 49 52 53 57 53 2 84 61 60 65 63 58 3 80 49 41 43 47 47 4 98 84 94 80 64 75 _X_ 91 60 62 60 58 58 + 10 16 23 16 8 12 5 Animal témoin 130 145 161 145 130 121 6 Animal témin 110 128 140 141 145 147 7 Animal témoin 98 95 114 118 114 120 XK 113 123 138 135 130 127 + 16 25 24 15 16 17 No de l'animal Au bout de 70 80 90 100 110 120mn _____________________________________________________ 1 27 56 63 60 65 65 2 61 61 -- 88 87 -- 3 54 51 59 74 77 85 4 75 74 65 68 96 90 X 54 61 62 72 81 80 + - 20 10 3 12 14 13 5 Animal témoin 120 115 121 125 130 135 6 Animl témoin 110 115 119 135 146 150 7 Animal témoin 128 120 117 120 116 114 X 119 117 119 127 131 133 + 9 3 2 7 15 18 Valeurs de niveau d'IRI dans le sérum en ng/ml No de l'animal Au bout de 10 20 30. 40 50 60mn ---------------------------- 1 30 30 30 32 16 12 2 30 30 26 10 8 5 3 30 30 16 13 7 6 4 30 30 15 8 9 8 No de l'animal Au bout de 70 80 90 100 110 120mn ______________________________________________-____ 1 9 10 4 4 3 4 2 4 3 3 3 3 - 3 3 4 2 2 1 1 4 3 3 3 2 2 - 3. Administration d'insuline à des chiens par voie nasale Solution: 20,00 mg d'insuline cristallisée, 300,00 mg d'AGA Addition d'eau doublement distillée 10,00 ml pH 4,5 Déroulement des essais: A trois chiens d'un poids d'environ 11 kg, on a adminis- tré cette solution par vaporisation dans le nez, de telle manière que chaque animal a reçu intégralement une quantité de 1 UI par kg de son poids. A un animal témoin, on a administré la solution sans AGA. Résultats: No de l'animal Au bout de X 0,5 14 5 4 Animal témoin106 123 1,5 heures 67 66 94 103 89 4 21 6 106 109 97 258762 1 PREVENDICATIONS Procédé pour la fabrication de préparations pharmaceutiques de peptides présentant une capacité de résorption accrue, caractérisé en ce qu'on ajoute à l'agent actif, dans une proportion de 1 à 10 % de la masse,des produits de condensation d'acides gras albu- miniques (AGA), réalisés par condensation de produits d'hydrolisation de la glutine avec des acides gras de C8 à C18.