Brevet FR2577225A1 — publié le 19860814

Dérivés peptidiques inhibiteurs de La rénine et des protéases acides La présente invention concerne des nouveaux dérivés peptidiques inhibiteurs de la rénine et des protéases acides. Elle concerne également un procédé pour Leur obtention et leur application en thérapeutique. En 1970, UMEZAWA a isolé, à partir d'une cul- ture de streptomyces, un pentapeptide désigné sous le nom de Pepstatine dont la structure a été établie uLtérieurement et répond à la formule Isovaléryl - L-valyl - L-valyl - Statyl - L-alanyl - Statine dans laquelle on désigne sous Le nom de "statine"un acide aminé non usuel, L'acide (3S,4S) amino-4 hydroxy-3 methyl-6 heptanoique. Il a été montré que la pepstatine est un inhibiteur de protéases acides et agit en particulier sur la pepsine, la cathepsine D et la rénine. Spécialement, la rénine, enzyme d'origine rénale, intervient dans La séquence angiotensinogène, angiotensine I, angiotensine II au niveau de La transformation de l'angiotensinogène en angiotensine. L'angiotensine Il, étant un-puissant agent vasoconstricteur, intrevient dans La réguLation de la pression artérielle. On a envisagé d'utiliser la pepstatine pour Lutter contre l'hypertension artérielle chez L'homme. Toutefois, La pepstatine agissant sur L'ensembLe des protéases acides et présentant une faible solubilité en milieux aqueux et une faiblie affinité pour la rénine, son emploi en thérapeutique s'est avéré difficile. Des dérivés de la pepstatine ont été décrits dans La littérature scientifique. Par exemple, on a tenté de soLubiLiser La pepstatine par allongement de la chaîne peptidique (J. Cardiovasc. Pharmacol., 1980, 2, 687-698). La présente invention concerne au contraire des peptides dont le modèle est construit sur celui de La pepstatine. Dans certains cas, I'introduction d'acides aminés non naturets permet d'augmenter La solubilité de ces composés et leur resistance à la protéolyse. De manière tout à fait surprenante, on a trouvé que les peptides selon l'invention, qui portent des résidus hydrophiles sur différents sites, présentent un niveau d'activité élevé et très supérieur à celui de la pepstatine en tant qu'inhi- biteur de la rénine humaine La présente invention a pour objet des peptides prbsentant un niveau élevé d'activité en tant qu'inhibiteurs de la rénine et d'autres protéases acides. Dans la présente description et dans les revendications, les abréviations suivantes seront utilisées : Acides aminés et soupes Protecteurs ou activateurs. Ces abréviations sont en accord avec celles indiquées par la Commission de Nomenclature de l'IUPAC-IUB section Biochimie. Les recommandations les plus récentes sont rapportées dans Eur. J. Biochem., 1984, 138, 5-7 et 9 à 37. Acides aminés : Ala : Alanine Asn : Asparagine Asp : Acide Aspartique Gln : Glutamine GLy : Glycine His : Histidine Ile : Isoleucine Leu : Leucine Met : Methionine Nle : Norleucine Nva : Norvaline Phe : Phénylalanine Ser : Sérine Sta : Statine Lorsque la Statine est en position centrale dans le peptide, elle a toujours La configuration (3S,4S);Lorsque la Statine est en position terminale, elle peut avoir L'une ou L'autre configuration (3S,4S)-ou (3R,4S). Dérivés d'acides aminés : Met (02) : Méthionine dioxyde (PhCH2)Asp : Acide o-benzylaspartique Abu : Acide 2-aminobutyrique (Pyr-2)Ala : (Pyridyî-2)Aîanine (Pyr-3)Ala : (Pyridyl-3)Alanine (Pyr-4)Ala : (Pyridyl-4)Alanine Ces acides aminés sont, sauf indication contraire, de configuration L. Groupes protecteurs et activateurs : Ac : Acétyle Boc : t-butyloxycarbonyle (Boc)20 : Anhydride bis-terbutyloxycarbonique HONSu : N-hydroxysuccinimide OEt : Ester éthylique OMe : Ester méthylique ONp :- Ester p-nitrophénytique ONSu : Ester de N-hydroxysuccinimide oTcp : Ester trichloro-2,4,5 phénylique iVa : Isovaléryie Z : Benzoyloxycarbonyle De plus, on utilisera les abréviations suivantes AcOEt :Acétate d'éthyLe AcOH : Acide acétique Bop : HexafLuorophosphate de benzyloxy tris diméthyîamino phosphonium CCM : Chromatographie en couche mince DCCI : Dicyclohexylearbodiimide DCHA : Dicyclohexylamine DCU : Dicyclohexyturée DIPEA : Diisopropyléthylamine DMF : Diméthylformamide DMSO : Diméthylsutfoxyde Ether : Ether éthylique HOBt : Hydroxy-1 benzotriazoîe KHSO4-K2S04 : Solution aqueuse Contenant 16,6 g de bisulfate de potassium et 33,3 g de sulfate de potassium pour 1 litre MeOH : Méthanol NEM : N-éthyl-morpholine NMM : N--méthyl-morpholine TA :Température ambiante TFA : Acide trifluoracétique Les composés selon L'invention répondent à la formule générale suivante H R1 -NH-CH-C-NH-CH-C-N-CH-CHOH-CH2-C-X-Y-R4 (I) R2 O R3 3 CH2 O dans laquelle : - R1 représente l'un des groupements suivants : où a = O, 1 ou 2 où n = O, 1, 2 ou 3 où D = -CH- ou -C OH O où E = -H ou -CH3 où n = O, 1, 2 ou 3 NH2CH2CH2-SO2 BocNHCH2CH2-SO2 Z-NHCH2CH2-SO2 Alk-SO2 C6H5-(CH2)a-SO2-, où a = O, t ou 2, -Nk étant un groupement alkyle de C1 à C4, -R2 représente le groupement (CH2)b R5 dans lequel : . b = 0, 1, 2, 3 ou 4, et .R5 est un atome d'hydrogène ou un radical phényte ou naphtyle ou cyclohexyle ou pyridyle ; - R3 représente L'un des groupements suivants : un alkyle (C2 à C6) . un alcenyle (C2 à C6) . un groupement A-R6 dans lequel : 1) A est soit -(CH2)d, où d = 1, 2, 3, 4 soit -CH-Alk et R6 est l'un des restes suivants :: -NH2, -N(ALk > 2, -NHW, où W = groupe protecteur tel que benzyloxycarbonyle ; o -COOH, -COO-Alk, -COOCH2C6H5 ; -CONR7R8, où R7 et R8 sont différents ou identiques et représentent H ou Alk ou C6H5 ; OH, -O-Alk, -OCH2C6H5, -OCH2-Pyr, où Pyr représente le radical 2-, 3- ou 4-pyridyle ; -S(O)eAlk, où e= O, 1, 2, Alk étant un groupement alkyle de C1 a C4 ; 2) A est soit une liaison directe soit (CH2)d, où d = 1, 2, 3, 4 soit -CH-Alk R6 est l'un des restes suivants: phenyle, naphtyle ou cycloalkyle comportant 3 à 6 atomes de carbone hétérocycle.monocyclique tel que: imidazole, oxazole, thiazole ou tétrazole, thiophène, pyrrole, triazole, pyridine, cet hétérocycle étant éventuellement substitué par Alk ou CF3, Alk étant tel que défini ci-dessus ; - z1 représente l'isopropyle, le phényle ou le cyclohexyle formant respectivement avec le radical le résidu de l'aminoacide statine, a savoir, l'acide (3S,4S) amino-4 hydroxy-3 methyl-6 heptanolque ou de l'acide (3S,4S) amino-4 hydroxy-3 phenyl-5 pentanoique (AHPPA) ou de l'acide (3S,4S) amino-4 cyclohexyl-5 hydroxy-3 pentanoique (ACHPA) ;- - X-Y est un dipeptide choisi parmi Ala-Sta, Ala-Leu, Leu-Phe, Val-Sta, Abu-Sta, Phg-Sta ; - R4 représente l'un des groupements suivants: -OH, -OAlk', -NH2, -NAlk'2, ON, où M est un métal et Alk' représente un groupement alkyle de C1 à C6; - Z1 étant autre qu'isopropyle lorsque X-Y représente Ala-Sta. La présente invention comprend également les sels d'acides minéraux ou organiques des peptides de formule (I), pharmaceutiquement acceptables. Les produits selon l'invention peuvent être préparés selon les méthodes habituelles de la chimie des peptides. Plus particulièrement, à partir d'un composé de formule H-Y-OAlk dans laquelle Alk représente un alkyle de C1 à C4 et Y est choisi parmi les résidus des acides aminés Sta, Leu et Phe, on couple, étape par étape, les divers acides aminés convenablement protégés, le produit obtenu à chaque étape étant déprotégé, selon des procédés connus, avant d'être soumis à un nouveau couplage, chacune des opérations de couplage étant effectuée en utilisant soit un ester activé de l'aminoacide à coupler, soit l'aminoacide N-protégé en présence de dicyclohexyl-carbodiimide. Le produit de départ est un ester d'alkyle inférieur de l'acide aminé C-terminal sur lequel est condensé l'aminoacide suivant de la séquence. Après libération de la fonction amine du dipeptide, on procède à l'élongation de la chaîne peptidique par couplage de l'acide aminé suivant, convenablement protégé. Chaque phase de couplage est suivie d'une opération sélective de libération de t'amine qui va entrer en réaction lors de la création de La liaison pep- tidique suivante.Les différentes opérations de couplage sont effectuées soit en utilisant un ester activé de l'aminoacide à coupler, soit en utilisant l'aminoacide N-protégé en presence de dicyclohe'cyl-carbodiimide. Les phases de déprotection sélective de l'amine sont effectuées selon La nature. du groupe protecteur utilisé soit par hydrogénolyse, soit par acidotyse en milieu acide fort, tel que acide trifluoracétique. Lorsque l'acide aminé à introduire dans la séquence possède dans sa chaîne latérale une fonction susceptible de réagir, il convient de bloquer celle-ci par un groupe protecteur convenable que l'on élimine ultérieurement La protection de l'aminoacide initial par le groupe R1 s1 effectue selon des méthodes connues, avant le couplage du résidu avec lsaminoneide suivant. Lorsque le composé (I) porte un substituant R3 tel que le résidu correspondant est un aminoacide non naturel, celui-ci est préparé selon des methodes connues. Il est ensuite couplé avec l'aminoacide suivant selon la méthode habituelle. Les peptides (I) sous forme acide (R4 = OH) peuvent être obtenus à partir des esters correspondants par saponification en milieu alcalin dilué On peut egalement préparer leurs sels (R4 = OM). Les peptides (I) sous forme amide (R4 = NH2 ou R4 = NCAlk)2) sont obtenus di-rectement-en prenant comme produit de départ les aminoacides sous forme amide qui existent commercialement. Selon le schéma général, il est possibLe soit de préparer l'ensemble de la séquence désirée, soit de préparer deux fragments de cette séquence que l'on couple finalement pour obtenir le peptide desiré. Les composés de la- présente invention ont une action inhibitrice sur l'activité rénine plasmatique humaine très importante et de façon générale nettement supérieure à celle du produit naturel : la pepstatine ; à ce titre ils peuvent être utilisés dans le traitement de l'hypertension artérielle. Ils possèdent également une action inhibitrice marquée sur les protéases acides, notamment la pepsine. On peut donc envisager 'utilisation des produits selon l'invention dans les domaines thérapeutiques où l'inhibitìon de tels systèmes enzymatiques est justifiée, notamment, outre l'hypertension artérielle, l'ulcère gastroduodénal et les affections inflammatoires. La présente invention a aussi pour objet des médicaments antihypertenseurs contenant les peptides de formule (I) ou leurs sels pharmaceutiquement acceptables en tant que principe actif. Les peptides de la présente invention peuvent être utilisés en thérapeutique par voie injectable : intraveineuse, intramusculaire ou sous-cutanée. Ils sont utilisés dans un solvant tel que le sérum physiologique (solution saline isotonique) ou dans un tampon, tel que le tampon phosphate ; ils peuvent également être mis en suspension dans un agent diluant, aqueux ou non aqueux, pharmaceutiquement acceptable,Chaque unité de dosage peut contenir de 1 à 1 000 mg de principe actif. La quantité de principe actif à utiliser varie suivant Les effets thérapeutiques recherchés, la gravité de L'affection à traiter et la voie d'administration choisie. Elle doit être déterminée pour chaque patient et est le plus souvent comprise entre 0,100 g et 2 g de principe actif. Les exemples suivants, non limitatifs, sont donnés à titre d'illustration de la présente invention. Dans tous ces exemples, le pH des solutions dans un solvant organique est mesuré ou contrôlé en utilisant du papier pH indicateur humide. Les points de fusion-indiqués (Fc) sont pris à partir de solides triturés ; ils sont mesurés au tube capillaire. Enfin, les spectres de résonance magnétique nucléaire ont été enregistrés à 250 MHz, en solution dans Le DMSO, l'étalon interne étant L'hexaméthyldisiloxanne. Les abréviations suivantes sont utilisées s : singulet d : doublet m : multiplet ou massif. Les déplacements chimiques (delta) sont mesurés en ppm. ExemPle 1 Boc-Phe- (PhCH2)Aso-Sta-Ala-Leu-OMe (SR 42926) 1. Boc-Ala-Leu-OMe Dans 50 ml de CH2C12, on dissout successivement à TA 2,86 g de Boc-ALa-ONSu, 1,81 g de Leu-OMe, HCl et 1,15 g de NEM. On vérifie que le pH est à 6-7, sinon on L'ajuste par adjonction de NEM. On agite 4 h à TA, puis lave successivement la solution organique par KHSo4-K2SO4 à 5 X, de l'eau, NaHCO3 à 5 X ; on sèche sur Na2SO4 puis évapore le solvant et on obtient une huile. Rendement : 2,93 g (92 %). 2. Ala-Leu-OMe, TFA 360 mg du produit précédent sont recouverts de 5 ml de TFA. Après 20 min, le TFA est évaporé, on reprend le résidu par un mélange, à volume égal, pentane-éther. Par grattage un solide blanc apparaît, il est essoré, rincé à l'éther, séché. Rendement : 320 mg (85 %). 3. Boc-Sta-Ala-Leu-OCH3 330 mg du sel de TFA précédemment obtenu sont solubilisés dans 30 ml de dioxanne contenant 230 mg dQ NEN, on ajoute 275 mg de Boc-Sta-OH, 206 mg de DCCI et 135 mg de HOBt, le ph est ajusté à une valeur de 6-7 par NEM si nécessaire, puis on agite 24 h à TA. On filtre la DCU, évapore le solvant, dissout le résidu dans un mélange, à volume égal, AcOEt-hexane et chromatographie sur une colonne de gel de silice 60 Merck dans le même mélange de solvant en éluant par 250 ml du même mélange de solvant, puis 250 ml du mélange dans la proportion 75/25 en volume, puis 100 ml d'AcOEt. Les fractions contenant le produit sont évaporées, reprises dans l'éther, essorées, séchées. Rendement : 380 mg (80 X). 4. Boc-(PhCH2)Asp-Sta-Ala-Leu-OMe On traite à 0 C pendant 15 min 473 mg du peptide précédemment obtenu par 8 ml de TFA ; on concentre sous vide à t = 250C, reprend par de L'éther et évapore. On obtient un solide que L'on reprend par CH2Cl2, on neutralise à.froid le sel par un léger excès de NMM, puis on ajoute 405 mg de Boc-(PhCH2Asp), 191 mg de HOBt, 258 mg de DCCI. Le pH est ajusté à 7 par addition de NMM puis on agite 18 h. On lave ensuite par une solution de KHSO4 (environ 1M), par une solution de NaHCO3 (environ 1M), sèche et concentre. Après chromatographie sur colonne de silice avec comme éluant AcOEt, on obtient 169 mg du produit attendu qui cristallise à L1évaporation ; Fc = 147-149 C. 5. SR 42926 On traite 169 mg du produit précédent par 8 ml de TFA à 00C pendant 15 min. On concentre sous vide à 25 C, reprend par l'éther et évapore. On obtient une huile que l'on reprend par CH2Cl2, on neutralise à froid le sel par un léger-excès de NMM. Un mélange de 100 mg de Boc-Phe-ONp, 38 mg de HOBt, 26 mg de NMM est agité 2 h dans du CH2Cl2- puis ajouté au sel précédent. Après 24 h d'agitation, on lave la phase organique avec une solution de KHSO4, de NaHC03, sèche et concentre. Après chromatographie sur silice (éluant AcOEt), on obtient le produit attendu qui cristat- lise à L'évaporation du solvant. Rendement : 103 mg (50 %) ; Fc = 154-155 C. Spectre de RMN Delta Aspect Intégration Attribution 8,34 - 7,05 m 14 H 4 NHCO 10 H aromatiques 6,86 d, J=8 Hz 1 H NHCO2 5,04 s 2 H CO2CH2C6H5 3,55 s 3 N 0CM3 2,20 - 2,00 m 2 H CH2CO (Sta) 1,20 s 9 H C(CH3)3 1,13 d, J=7 Hz 3 H CH3 (Ala) 0,86 - 0,69 m 12 H (CH3)2CH Exemple 2 Boc-Phe-Asp-Sta-Ala-Leu-OMe (SR 42927) 90 mg de SR 42926 préparé selon l'exemple 1 sont. mis en solution dans 30 ml d'AcOEt puis on effectue une hydrogénolyse sous la pression d'une colonne d'eau et en présence de 90 mg de palladium sur charbon (Pd à 10 -%). Après 3 h de réaction, on filtre sur célite, lave par AcOEt puis concentre. Le solide obtenu est trituré dans un mélange hexane-éther, filtré, séché sous vide. Rendement : 63 mg (78,7 %) t Fc = 163-165 C. Spectre de RMN Le spectre de RMN est analysé par comparaison avec celui du SR 42926. On constate La perte des 5 H aromatiques entre 7,8 et 7 ppm et La perte du CH2 benzylique à 5,04 ppm. Exemple 3 Boc-Phe-(méthyl-2 thiazolyl-4)Gly-Sta-Ala-Leu-OMe (SR 43059) 1. (R,S) (Méthyl-2 thiazolyl-4) qlycinate d'éthyle Ce produit est préparé selon la méthode décrite dans J. Med. Chem, 1973, 16, 978-984. 2. (R.S) (Méthyl-2 thiazolyl-4) N-tertiobutylcarbonyl glycinate d'méthyle 6,5 g du composé préparé précédemment sont agités 3 jours dans 60 ml d'eau avec 8,1 g de Boc20, 32,5 ml de dioxanne et de la triéthylamine pour obtenir un pH alcalin. On concentre ensuite à 30 C, reprend à l'éther, lave à l'eau puis avec une solution de KHSO4, à l'eau, une solution de NaHCO3, sèche et concentre. On obtient 8,5 g d'une huile jaune. 3. (R,S) (Méthyl-2 thiazolyl-4) N-tertiobutylcarbonyl glycine 4,5 g du composé précédemment obtenu sont mis à réagir dans 80 ml de dioxanne avec 0,72 mg de soude dissous dans 15 ml d'eau. On suit la réaction par CCM. Après 2 h, on rajoute 0,6 g de soude dans 2 ml d'eau. Au bout de 3 h 45 min, il n'y a Dlus de produit de départ. On ramène à pH 5 par 15 ml d'HC1 N, concentre à 30 C, reprend à l'eau, acidifie par KHSO4, extrait par AcOEt, lave à l'eau, sèche et concentre. On recueille 2,7 g de poudre jaune. 4. Boc-Sta-Ala-Leu-OMe Ce peptide est préparé selon la méthode décrite à l'exemple 1. 5. (R,S) Boc-(Méthtyl-2 thiazolyl-4)Gly-Sta-Ala-Leu-OMe 473 mg du produit précédent sont placés dans 5 mi de TFA à 0 C. Après 20 min, on concentre, reprend trois fois par de l'éther anhydre puis concentre au maximum. Le produit obtenu est dissous dans 20 I de CH2Cl2 et amené vers pH 7 par addition de DIPEA. On ajoute ensuite 260 mg du composé obtenu à l'étape 3 et 441 mg de Bop. Après 4 jours d'agitation à pH 7, on traite à l'eau salée puis à l'eau bicarbonatée et à l'eau, on sèche et concentre, puis on effectue une chromatographie sur silice. Par élution avec AcOEt cuis un mélange AcOEt-MeOH à 9/1 en volume, on recueille une fraction solide amorphe de 607 mg par précipitation dans le pentane. 6. SR 43059 251 mg du composé obtenu précédemment sont placés dans 4 ml de TFA à 0 C puis subissent le traitement habituel. Le sel de TFA obtenu est placé dans 15 ml de CH2Cl2, le milieu réactionnel est amené à pH 7 par addition de DIPEA puis on ajoute 149 mg de Boc-Phe-ONp et 61,2 mg d'HOBt. Apres 24 h, on lave de la même façon qu'à l'étape précédente puis on chromatographie sur silice en éluant par un mélange AcOEt-AcOH à 9/1 en volume. On recueille 230 mg de poudre blanche. Soectre de RMN Delta Aspect Integration Attribution 7 - 8,4 m 11 H 5 NH 5 H aromatiques (Phe) 1 H thiazoLique 3,5 s 3 H OCH3 1,25 s 9 H C(CH3)3 Exemole 4 Boc-Phe-(evr-3)Ala-Sta-Leu-Phe-OMe (SR 43064 et SR 43066) 1. (R,S) Acetamido-2 éthoxycarbonvl-2 (pyridyl-3)-3 propionate d'éthyle A 11 g d'une solution de sodium-dans 300 ml de EtOH, on ajoute 48 g d'acétamidomalonate de diéthyle puis, en portant à reflux, on additionne 36 g de chlorhydrate de chloro- méthyl-3 pyridine, on conserve 5 h à reflux. On évapore EtOH, reprend par l'eau, extrait, sèche, concentre et chromatographie sur silice. Le mélange CH2Cl2-AcOEt à 60/40 en volume élue 23 g du composé attendu. 2. (R,S) (Pyr-3)Ala, 2HCl 15 g du diester précédent sont portés à reflux dans 200 ml d'HCL 5 N pendant 5 h. On concentre à sec, ajoute EtOH, évapore. Le procédé est réitéré jusqu'à recristallisation du dichlorhydrate : 15 g. 3. (R,S) Boc(Pyr-3)Ala 1 g du dichlorhydrate précédent est. dissous dans un mélange à volume égal eau-dioxanne. On ajoute 350 mg de soude et 1 g de (Boc)20 puis on agite une nuit à TA. Le dioxanne est évaporé, on ajoute de l'eau, neutralise par 8 g d'amberlite CG 120 t (forme acide), agite 1 h à TA puis le milieu est mis sur une colonne contenant 8 g de la même résine On élue par de L'eau distillée jusqu'à obtenir pH 5 puis élue par une solution d'ammoniaque à 4 % dans L'eau distillée. Les eaux sont concentrées. On recueille 0,69 g du produit attendu. 4. Boc-(Pvr-3)ALa-Sta-OMe On agite pendant 3 jours à TA dans 10 ml d'acéto- nitrile un mélange de 465 mg de Sta-OMe, TFA, 500 mg de Boc-(Pyr-3) Ala en présence de 780 mg de Bop, le milieu étant maintenu vers pH 7 par addition de DIPEA. On évapore alors à siccité, ajoute de l'eau, extrait par AcOEt, lave par une solution de NA2C03, de l'eau, de l'eau saline, puis on sèche sur MgSO4 et évapore à siccité. Le résidu est chromatographié sur gel de silice par un mélange éluant CH2Cl2-AcOEt à 1/9 en volume qui élue successivement : - l'isomère A le moins polaire : 150 mg ; - l'isomère B te plus polaire : 180 mg. 5. Leu-Phe-OMe Ce dipeptide est préparé selon le procédé de couplage décrit dans Les exemples précédents. 6. Boc-(Pyr-3(Ala-Sta-Leu-Phe-OMe Ce composé est d'abord préparé à partir de L'isole mère A isolé à L'étape 2. 200 mg de cet isomère A sont hydrolyses à TA pendant 1 h dans un mélange à volume égal eau-dioxanne. On évapore partiellement sous pression réduite à TA, ajoute une trace d'HCL pour amener le pH vers 4, puis évapore à siccité et sèche sous vide. Le résidu est repris dans 10 ml d'acétonitrite, on ajoute 200 mg de Leu-Phe-OCH3, TFA, 230 mg de Bop et maintient pendant- 18 h le milieu réactionneL vers pH 7 par addition de DIPEA. On évapore ensuite à siccité, ajoute de L'eau bicarbonatée, extrait par AcOEt. La phase organique, lavée par de l'eau, de L'eau saline puis séchée sur MgS04, Livre te peptide brut apres évaporation. IL est purifié par chromatographie sur gel de silice en utiLisant comme éluant CH2Cl2-AcOEt à 1/4 en volume. On obtient 300 ag de produit. 7. SR 43066 197 mg du composé précédent sont mis en contact à 00c pendant 20 ain avec 5 mL de TFA, le solvant est alors éva poré, et Le set obtenu séché sous vide. Le résidu est ais en suspension dans CH2Cl2 et neutralisé par le DIPEA. On ajoute, en solution dans CH2Cl2, 110 mg de Boc-Phe-ONp et 45 mg de HOBt ; le mélange est alors agité pendant 18 h à TA en maintenant le pH vers 7 par addition de DIPEA. On évapore à siccité, ajoute de l'eau carbonatée et extrait par AcOEt, Après lavages à L'eau et séchage sur MgSO4, le résidu est chromatographié sur gel de silice (éluant AcOEt). On obtient 150 mg du SR 43066. 8. SR 43064 A partir de l'isomère B isolé à L'étape 2, on opère selon les étapes 4 et 5 pour-préparer le SR 43064. Spectre de RMN SR 43066 Delta Aspect Intégration Attribution 6,80 d, J=8 Hz 1 H NH - Boc 4,84 d, J=4 Hz 1 H OH (Sta) 3,50 s 3 H OCH3 2,16-2,05 m 2 H CH2-CO (Sta) 1,20 s 9 H (CH3)3C SR 43064 Delta Aspect Intégration Attribution 6,85 d, J=8 Hz 1 H NH - Boc 4,83 I d, J=4 Hz 1 H OH (Sta) 3,50 s 3 H QCfi 2,10-1,95 m 2 H CH2CO (Sta) 1,21 s 9 H (CH3)3C Exemple 5 Boc-Phe-(Pyr-4)Ala-Sta-Leu-Phe-OMe (SR 43065 et SR 43144) 1. Boc-(Pyr-4)Ala-Sta-OMe En opérant comme dans l'exemple prédédent, on prépare d'abord Boc-(Pyr-4)Ala puis on couple ce produit avec Sta-Or- TFA On isole successivement 2 isomères par chromatographie - isomère A le moins polaire ; - isomère B. 2. SR 43065 Ce composé est obtenu à partir de l'isomère A en opérant comme dans l'exemple précédent. 3. SR 43144 Ce composé est obtenu à partir de L'isomère B en opérant comme dans l'exemple précédent. Spectre de RMN SR 43065 Delta Aspect Intégration Attribution 6,82 d, J=8 Hz 1 H NH - Boc 4,85 d, J=4 Hz 1 H OH (Sta) 3,50 s 3 H OCH3 2,10-2,07 m 2 H CH2CO (Sta) 1,21 s 9 H (CH3)3C SR 43144 Delta Aspect Intégration Attribution 6,87 d, J=8 Hz 1 H NH - Boc 4,85 d, J=4 Hz 1 H OH (Sta) 3,50 s 3 H 0CH3 2,10-2,00 m 2 H CH2CO (Sta) 1,23 s 9 H (CH3)3C Exemple 6 Boc-Phe-(Pyr-2)Ala-Sta-Leu-Phe-OMe CSR 43150 et SR 43151) 1. (R,S) Boc-Phe-(Pyr-2)Ala On agite pendant 48 h à TA dans 30 ml du mélange DMF-dioxanne à 1/2 en volume 1 g de dichlorhydrate de pyridyl-2 alanine, 1,65 g de Boc-Phe-ONp en présence de 2,5 ml de triéthyl- anine. On filtre un leger insoluble, évapore la solution à siccité et chromatographie le résidu sur gel de silice.Le mélange CHCl3-MeOH, NH40H (84/15/5 en volume) elue le dipeptide sous forme d'une mousse soluble dans l'eau. Rendement : 58 %. 2. Boc-Phe-(Pyr-2)Ala-Sta-OMe A 808 mg du produit précédent à 0 C dans CH2Cl2, on ajoute 880 mg de BOp et DIPEA ; puis, après 15 min de contact, 600 mg de Sta-OMe, TFA et on amène le pH vers 6-7 par addition de DIPEA. On agite 4 jours à TA puis évapore à siccité, ajoute de l'eau carbonatée et extrait par AcOEt. Après lavage par de L'eau et de l'eau saline, on isole une huile. 850 mg sont chromatographiés sur gel de silice, en éluant par AcOEt, on isole successivement : - le tripeptide le moins polaire A, homogène en CCM ; - le tripeptide le plus polaire B contenant 30 % de A. 3. SR 43150 Ce compose est obtenu à partir de L'isomère A en opérant selon la méthode décrite à l'exemple 9. 4. SR 43151 Ce composé est obtenu à partir de L'isomère ss et contient, après purification, 30 à 40 X de SR 43150. Spectre de RMN SR 43150 Delta Aspect Intégration Attribution 6,86 d, J=8 Hz 1 H NH - Boc 4,76 d, J=4 Hz 1 H OH (Sta) 3,50 s 3 li OCH3 2,13-2,07 m 2 H CH2CO (Sta) 1,22 s 9 H (CH3)3C SR 43151 (contenant 30 à 40 Z de SR 43150) Delta Aspect Intégration Attribution 6,93-6,85 d, J=8 Hz 1 H NH - Boc 4,75-4,82 d, J=4 Hz 1 H OH (Sta) 3,50 s 3 H OCli3 2,14-1,95 m 2 H CH2CO (Sta) 1,23 s 9 H (CH3)3C ExemDle 7 N-((pyridyl-2)-4 oxo-4 butyryl)-Phe-Nle-Sta-Leu-Phe-OMe (SR 42793) 1. N-((pyridyl-2)-4 oxo-4 butyryl) Dans 10 ml d'acétonitrile, on agite 1 g de Phe-OMe, HCL, 830 mg d'acide (pyridyl-2) oxo-4 butyrique en présence de 2,05 g de Bop et de 940 mg de NEM. Après 3 jours, on évapore à siccité, ajoute de l'eau et AcOEt, lave plusieurs fois par de l'eau carbonatée, de l'eau, de L'eau saline, sèche et évapore.On isole 1,25 g de solide qui est purifié par chromatographie sur gel de silice en éluant par un mélange à volume égal de pentane et AcOEt. Après recristallisation dans un mélange CH2Cl2-Et20, on obtient 870 mg du produit attendu. 2. N-((pyridyL-2)-4 oxo-4 butyryl)-Phe-OH 810 mg de l'ester précédent dans 15 ml de méthanol sont hydrolysés pendant 4 h à TA par 190 mg de soude dans 5 ml d'eau. On évapore à siccité, ajoute de L'eau carbonatée, extrait par AcOEt puis acidifie à pH 4,65 en contrôlant au pHmètre. On extrait ensuite par AcOEt, lave à l'eau, l'eau saline et évapore. Le solide blanc obtenu est recristallisé du mélange MeOH-Et20 ; Fc = 115-1200C. 3. SR 42793 On opère ensuite selon les méthodes précédemment décrites pour obtenir le produit attendu. Spectre de RMN Delta Aspect Intégration Attribution 8,67-7,05 m 19-H 5 NHCO 10 H aromatiques C6H5 - 4 H-aromatiques C5H4N 4,78 d, J=4 Hz 1 H OH (Sta) 4,50-4,11 m 4 H CH (alpha) 3,81-3,67 m 2 H CHOH (Sta) CHNH (Sta) 3,48 s 3 H OCH3 2,13-2,00 m 2 H CH2CO (Sta) 1,71-1,05 i | 12 H CH, CH2 atiphatiques 0,89-0,68 m 15 H CH3 (Nle) (CH3)2CH (Leu) (CH3)2CH (Sta) Exemple 8 (R,S) N-(Pyridyl-2)-4 hydroxy-4 butyryl)Phe-Nle-Sta-Leu-Phe-OMe (SR 42991) Ce composé est obtenu par réduction du SR 42793. On dissout 23 mg de SR 43793 dans 2 ml de MeOH et on ajoute 10 mg de BH4Na à TA. Après 18 h, on ajoute une solution de KHSO4 en excès, agite pendant 10 min puis ajoute de l'eau carbonatée et évapore MeOH à froid On extrait par 3 volumes d'AcOEt, Lave à l'eau et sèche sur K2SO4. A L'évaporation, on isole un solide qui est trituré dans le mélange éther-hexane. On obtient 16 mg du produit attendu. Spectre de RMN Delta Aspect Intégration Attribution 8,43-7,0 m 19 H 5 NHCO 10 H aromatiques C6H5 4 H aromatiques C5H4N 5,34 d, J=4 Hz 1 H OH 4,80 d, J=4 Hz 1 H OH (Sta) 4,70-4,00 m 5 H CH (alpha) 3,80-3,66 m 2 H CHOH (Sta) 3,48 s 3 H OCH3 2,13-0,63 m 33 H En utilisant les mêmes méthodes de couplage, on a préparé les composés suivants N" SR i FormuLe 42757 Boc-Phe-NLe-Sta-Abu-Sta-OMe 42759 1 BOc-Phe-Nle-Sta-Abu-Sta-OH 42871 1 I tBenzoyl)-Phe-Nle-Sta-Ala-Leu-OMe 42872 I (Cyclohexyl carbonyl)-Phe-Nle-Sta-Ala-Leu-OMe 42873 (Nicotinoyl)-Phe-Nle-Sta-Ala-Leu-OMe 43108 N-( (py ri dy 1-3) -4 oxo-4 butyry L)-Phe-N Le-Staeu-Phe-OIe 43123 (R,S) N-((pyridyl-3)-4 hydroxy-4 butyryl)-Phe-Nle-Sta Leu-Phe-OMe 43282 N-'(pyridyl-3) acétyl)-Phe-Nle-Sta-Leu-Phe-OMe 43314 N-((pyridyl-2) acétyE)-Phe-Nle-Sta-Leu-Phe-OMe 43366 Boc-Phg-Phg-Sta-Leu-Phe-OMe 43428 Boc-Phe-( CméthyL-1 imidazolyl)-2)Ala-AHPPA-Ala-Sta-OCH3 95508 Boc-Phe-NH-CH-CO-Sta-Leu-Phe-NH2 CH2-NHZ 95509 Boc-Phe-NH-CH-CO-Sta-Leu-Fhe-NH2 (C1H2)3-NHZ PZ V 867 N-t(pyridyl-3)-3 propionyl)-Phe-Nle-Sta-Leu-Phe-OMe PZ V 875 N-((pyridyl-2)-4 butyryl)-Phe-Nle-Sta-Leu-Phe-Otïe Ces produits sont caractérisés par leur spectre de RMN. SR 42757 Delta Aspect Intégration Attribution 7,41 à 7,90 4 d 4 H 4 NHCO 7,10-7,35 m 5 H H aromatiques 6,95 d 1 H NH (Boc) 4,96 d 1 H OH (Sta) 4,82 d 1 H OH (Sta) 3,65-4,28 m 7 H 3 H alpha ;; 2 CH-CH (Sta > 3,50 s 3 H CH3 ester 2,53-2,95 m 2 H CH2 (Phe) 2,00-2,40 m 4 H 2 CH2 (Sta) CH2 (Abu) 1,00-1,72 m 23 H (CH2)3 (Nle) C(CH3)2 (Boc) 2 2 CH2-CH 0,61-0,95 m 18 H CH3 (Abu) CH3 (Nle) 2 C(CH3) (Sta) SR 42759 Similaire à celui du 42757 avec disparition du signal correspondant à l'ester méthylique à 3,50 ppm. SR 42871 Delta Aspect Intégration Attribution 7,1 à 8,7 m complexe 15 H R NH 10 H aromatiques 4,8 d, J=8 Hz I H OH (Sta) 3,5 s 3 H OCH3 SR 42872 Delta Aspect Intégration Attribution 7 à 8,2 m complexe 10 H 5 H C6H5 4,8 d, J=8 Hz 1 H 5 NH, OH (Sta) 4,1-4,45 m complexe 4 H 3 H alpha 1 H isopropyl (Leu) 3,75 m 2 H 1 H alpha (Sta) 1 H isopropyl (Sta) 3,5 s 3 H OCH3 SR 42873 Delta Aspect Intégration Attribution 7 et 8,9 m complexe 14 H 5 NH 4 H C5H4N 5 H C6H5 4,8 d, J=4 Hz 1 H 1 H, OH (Sta) 4,25 m 3 H H alpha (Phe, Nle, Leu) 3,8 s large 2 H 2 H alpha (Sta, Ala) 3,55 s 3 H OCH3 SR 43108 Delta Aspect Intégration Attribution 9,02-7 m 19 H 10 H C6H5 4 H C5H4N 5 NH CO 4,80 .| d, J=4 Hz 1 H OH (Sta) 4,52-4,09 m 4 H CH 3,85-3,70 m 2 H CHOH et CHNH (St a) 3,48 s 3 H OCH3 2,12-2,00 m 2 H CH2CO (Sta) 1,70-1,08 m 12 H CH et CH2 alipha tiques (Nle,Leu,Sta) 0,92-0,71 i m 15 H CH3 (Nle, Leu, Sta) SR 43123 Delta Aspect Intégration Attribution 8,43-7,00 m 19 H 10 H C6H5 4 H C5H4N 5 H NHCO 5,33 d, J=4 Hz 1 H OH 4,83 d, J=4 Hz 1 H OH (Sta) 4,72-3,70 m 7 H CH (alpha) CHOH (Sta) CHNH (Sta) 3,50 s 3 H OCH3 2,15-0,70 m 33 H SR 43282 Delta Aspect Intégration Attribution 8,41-7,02 m 19 H C6H5, C5H4N, NHCO 4,85 d, J=4 Hz 1 H OH 4,61-4,12 m 4 H CH aLpha 3,84-3,68 m 2 H CHNH et CHOH (Sta) 3,49 s 3 H OCH3 3,45-3,18 m CH2C5H4N (+H20 de DMSO) 3,02-2,61 m 4 H CH2C6H5 2,13-2,0 m 2 H CH2CO (Sta) 1,68-1,04 m 12 H CH2 (Nle) ; eH et CH2 (Sta et Leu) 0,85-0,66 m 15 H CH3 (Nle, Sta, Leu) SR 43314 Delta Aspect Intégration Attribution 8,42-7,02 m 19 H C6H5, C5H4N, NHCO 4,82 d, J=4 Hz 1 H OH 4,60-4,14 m 4 H CH alpha 3,85-3,70 m 2 H CHNH et CHOH (Sta) 3,53 s 2 H CH2C5H4N 3,49 s 3 H OCH3 3,04-2,63 m 4 H CH2C6H5 2,11-2,00 m 2 H CH2CO (Sta) 1,72-1,08 n m 12 H CH2 (Nle) ; CH et CH2 (Sta et Leu) 0,82-0,64 m 15 H CH3 (Nle, Sta, Leu) SR 43366 Delta Aspect Intégration Attribution 7,1 à 8,75 m complexe 15 H 10 H C6H5, 5 NH 5,35 et 5,5 | 2 d, J=8 Hz 2 H 2 H alpha 5 n m 1 H OH (Sta) 3,65 m n 2 H H aLpha (Sta) 3,5 s 3 H OCH3 ester 1,35 s 9 H Boc SR 43428 (2 isomères . 7/3) Delta Aspect Intégration Attribution 8,25-7,76 n 3 H NHCO 7,39 d, J=8 Hz 1 H NHCO 7,25-7,00 m 10 H C6H5 7,00-6,89 m 2 H NHCO2 H imidazolique 6,89 | 2 s 1 H H imidazolique 5,71 | 5,32-4,0 n 5 H OH, H alpha (Ala, Phe, imidazole) 4,0-3,67 n 4 H CHNH et CHOH (AHPPA, Sta) 3,53 # 2 s 3 H N-CH3 3,44 3,50 s 3 H OCH3 3,00-1,95 m 10 H CH2-C6H5 CH2 imidazole CH2CO (AHPPA, Sta) 1,57-1,00 m 15 H (CH3)3C, CH3 (Ala) CH et CH2 (Sta) 0,77-0,69 m 6 H CH3 (Sta) Le SR 95508 et le SR 95509 sont caractérisés par ler point de fusion après recristallisation dans CH2Cl2 et par leur Rf dans un mélange CH2Cl2-MeOH à 9/1 en volume :: - SR 95508 Fc = 2030C Rf = 0,23 - SR 95509 Fc = 1920C Rf = 0,44 Les produits selon L'invention ont été étudiés en ce qui concerne leurs propriétés thérapeutiques et notamment leur action inhibitrice enzymatique. Plus particulièrement, les composés ont été évalués "in vitro" sur l'inhibition de t'actif vité Rénine Plasmatique Humaine (A.R.P.). PZ V 867 Delta Aspect Intégration Attribution 8,36-7,07 m 19 H C5H4N, C6H5, NHCO 4,84 d, J=4 Hz 1 H OH 4,57-4,12 m 4 H CH alpha (Phe, Leu, Nte) 3,84-3,67 m 2 H CHN, CHOH (Sta) 3,49 s 3 H OCli3 3,03-2,57 m 6 H CH2C6H5, CH2C5H4N 2,31 t, J environ 2 H -CH2-CH2-CO 6 Hz 2,13-2,03 m 2 H CH2CO (Sta) 1,70-1,09 m 12 H CH2 CH, CH2 (Leu), CH, CH2 (Sta) 0,85-0,66 m 15 H CH3 PZ V 875 Delta Aspect Intégration Attribution 8,54-7,04 n 19 H H aromatiques NHCO 4,87 d, J=4 Hz 1 H OH 4,61-4,14 m 4 H CH alpha (Phe, Nle, Leu) 3,87-3,70 m 2 H CHNH, CHOH (Sta) 3,50 s 3 H OCH3 3,04-2,62 m 4 H CH2C6H5 2,62-2,41 m CH2C5H4N (+DNSO) 2,14-1,95 m 4 H CH2CO tSta) C5H4N-CH2CH2, CH2 1,78-1,10 m 14 H C5H4N-CH2-CH2CH2 CH2 (Nle), CH, CH2 (Sta, Leu) 0,91-0,67 n 15 H CH3 I - METHODE Notre méthode est inspirée de GUYENE (J. Clin. Endocrinol. Metab., 1976, 43, 1301, dans la mesure où l'inhibi- tion de l'A.R.P. est évaluée à partir d'un pool de plasmas humains, riche en rénine (15 à 20 mg d'angiotensine I libérée par millilitre et par heure) incubée à 37 C en présence de concentrations croissantes du produit à étudier. L'angiotensine I libérée au cours de la réaction (les plasmas humains contiennent et le substrat : l'angiotens;- nogène, et l'enzyme : la rénine) est mesurée par dosage radioimmunologique à L'aide d'un kit. Bien entendu, un inhibiteur de l'enzyme de conversion du PMSF (phényLméthylsulfonyl)fluorure est rajouté au milieu d'incubation. Les expériences ont été effectuées à pH 7,4 qui est le pH physiologique (tampon phosphate, incubation 60 min). Les résultats sont exprimés par la dose de composé évaluée en moles, qui inhibe de 50 X (IC50) l'Activité Rénine Plasmatique Humaine présente en L'absence d'inhibiteur. On prépare une solution d'acide acétique dans Le méthanol (19/1 en volume) et une solution de soude dans le méthanol (2/1 en volume). Dans un mélange équivolumique de ces deux solutions on prépare une solution mère du peptide à 0,001 M. Les dilutions ultérieures du peptide sont alors effectuées dans le tampon adéquat selon le protocole décrit ci-dessus. La quantité de solvant présente dans une solution du peptide à une concentration inférieure à 0,0001 M n'interfère pas avec Les résultats. II - RESULTATS Les résultats obtenus avec divers produits de l'invention sont représentés dans le tableau suivant ou figurent les IC50 de chaque molecule en ce qui concerne leur inhibition de l'Activité Rénine Plasmatique Humaine à pH 7,4. De 5 à 10 doses ont été nécessaires pour determiner ces 1C50. La pepstatine, en tant que substance de référence, est toujours testée en parallèle dans chaque expérience. Les résuitats sont exprimés par leur valeur logarithmique (-Log IC50). Inhibition A.R.P. Humaine -Log CI50 M N SR Ph 7,4 Pepstatine 4,92 42793 6,05 42871 6,61 42872 6,31 42873 7,09 42926 6,40 42927 4,69 42991 7,23 43059 5,52 43064 6,50 43065 5 43066 4,88 43108 6,35 43123 7,09 43144 5,88 43150 5,21 43151 6,66 La toxicité des produits seLon L'invention est compa- tible avec leur utilisation en thérapeutique. REVENDICATIONS 1. Dérivés peptidiques de formule H R1-NH-CH-C-NH-CH-C-N-CH-CHOH-CH2-C-X-Y-R4 (I) R2 O R3 O CH2 O z dans laquelle 1 - R1 représente L'un des groupements suivants : où a = O, 1 ou 2 où n = 0, 1, 2 ou 3 où D = -CH- ou -C OH O où E = -H ou -CH3 où n = 0, 1, 2 ou 3 NH2CH2CH2-S02 BocNHCH2CH2-SO2 Z-NHCH2CH2-SO2 Alk-SO2 C6H5-(CH2)a-SO2-, où a = 0, 1 ou 2, - Alk étant un groupement alkyle de C1 à C4, - R2 représente le groupement (CH2)b R dans lequel :. b = 0, 1, 2, 3 ou 4, et R5 est un atome d'hydrogène ou un radical phényle ou naphtyle ou cyclohexyle ou pyridyle ; - R3 représente l'un des groupements suivants : un alkyle (C2 à C6) un alcényle (C2 à C6) un groupement A-R6 dans lequel : 1) A est soit-(CH2)d, où d =1, 2, 3, 4 soit -CH-Alk et R6 est l'un des restes suivants : -NH2, -N(Alk)2, -NHW, où W = groupe protecteur tel que benzyL oxycarbonyle ; -COOH, -C00-Alk, -COOCH2C6H5 ; -CONR7R8, où R7 et R8 sont différents ou identiques et représentent H ou Alk ou C6H5 ; -OH, -O-Alk, -OCH2C6H5, -OCH2-Pyr, où Pyr représente le radical 2-, 3- ou 4--pyridyte ; -S(O)eAlk, où e :O, 1, 2, Alk étant un groupement alkyle de Cl a C4 2) A est soit une liaison directe soit (CH2)d, où d : 1, 2, 3, 4, soit -CH-Alk R6 est l'un des restes suivants: phényle, naphtyle ou cycloalkyle comportant 3 à 6 atomes de carbone 0 hétérocycle monocyclique tel que : imidazole, oxazole, thiazole ou tétrazole, thiophène, pyrrole, triazole, pyridine, cet héterocycle étant éventuellement substitué par Alk ou CF3, Alk étant tel que défini ci-dessus - Z1 représente l'isopropyle, le phényle ou le cyclohexyle formant respectivement avec le radical le résidu de l'aminoacide statine, å savoir l'acide (3S, 4S) amino-4 hydroxy-3 méthyl-6 heptanoique ou de l'acide (3S,4S) amino-4 hydroxy-3 phényl-5 pentanoïque (AHPPA) ou de l'acide (3S,4S) amino-4 cyclohexyl-5 hydroxy-3 péntanoïque (ACHPA) ; - X-Y est un dipeptide choisi parmi Ala-Sta, Ala-Leu, Leu-Phe, Val-Sta, Abu-Sta, Phg-Sta - R4 représente l'un des groupements suivants : -OH, -OAlk', -NH2, - Nalk12, -OM, où M est un métal et Alk' représente un groupement alkyle de C1 à C6 ; - Z1 étant autre qu'isopropyle lorsque X-Y représente Ala-Sta, ou un de ses sels d'acides minéraux ou organiques pharmaceutiquement acceptables. 2. Procédé de préparation d'un peptide selon la revendication 1, caractérisé en ce qu'à partir d'un composé de formule H-YOAlk dans laquelle Alk représente un alkyle de C1 à C4 et Y est choisi parmi lesrésidus des acides aminés Sta, Leu et Phe, on couple, étape par étape, les divers acides aminés convenablement protégés, le produit obtenu à chaque étape étant déprotégé, selon des procédés connus, avant d'être soumis à un nouveau couplage, chacune des opérations de couplage étant effectuée en utilisant, soit un ester activé de l'aminoacide à coupler, soit l'aminoacide N-protégé en présence de dicyclohexyl-carbodiimide. 3. Compositions pharmaceutiques caractérisées en ce qu'elles contiennent un produit selon la revendication 1 en tant qu'ingrédient actif. 4. Compositions pharmaceutiques selon la revendication 3, utilisables notamment pour le traitement de La tension artérielle, caractérisées en ce quelles contiennent de 1 à 1 000 mg de produit selon la revendication 1 par unité de dosage en mélange avec un excipient pharmaceutique.