Brevet FR2580178A1 — publié le 19861017

Objets insolubles à usage médical ou chirurgical tels que membranes de dialyse rénale ou de plasmaphérèse, sondes, supports pour épuration plasmatique, ayant une activité anti-inflammatoire La présente invention concerne des objets insolubles à usage médical et/ou chirurgical, ayant une activité anti-inflammatoire. Les réactions inflammatoires de l'organisme correspondent à un ensemble de phénomènes ayant pour but de défendre l'organisme contre l'intrusion de subs- tances étrangères. Ces phénomènes mettent en jeu un grand nombre de mécanismes tant humoraux que cellulai- res qui conduisent soit à la cicatrisation, soit à une inflammation chronique pathologique. L'inflammation peut être déclenchée aussi bien par des lésions physi- ques des tissus, des réactions'chimiques, l'introduc- tion de germes ou de divers antigènes. Les amorceurs physiologiques de l'inflammation sont des protéines qui, sous l'action des stimulis précités, activent et déclenchent différents mécanismes parmi lesquels on trouve en particulier le mécanisme d'activation du sys- tème-du complément conduisant à la lyse cellulaire. Cette activation du système du complément peut être amorcée par des anticorps du type IgG ou IgM liés à un antigène. Elle peut être aussi déclenchée en l'absence d'anticorps par contact des protéines du sys- tème du complément avec des surfaces activatrices telles que des surfaces en polysaccharide. L'inflammation aiguë est une réaction norma- le qui doit se produire pour conduire à la guérison. Toutefois, dans le cas o l'on est amené à mettre en contact avec un organisme vivant une surface étrangère en vue d'un traitement local, ce qui est le cas par exemple avec les appareils d'hémodialyse et de plasma- phérèse, les sondes, les implants, les poches de sto- mie, etc..., il serait intéressant de pouvoir inhiber l'activation du système du complément induite par ces surfaces afin de réduire la réponse inflammatoire de l'organisme et de pouvoir poursuivre le traitement dans de bonnes conditions. C'est le cas en particulier lors de la pose de sondes qui engendrent une réponse inflam- matoire au niveau des passages transcutanés en raison des lésions épithéliales. Il en est de même lors des traitements d'épuration ex vivo d'un liquide biologique qui peuvent déclencher à distance une activation du système du complément et conduire à des accidents, par exemple dans le cas de dialyse rénale ou d'épurateur plasmatique. Aussi, depuis quelques années, de nombreuses recherches ont été conduites pour découvrir de nouveaux biomatériaux utilisables pour la réalisation d'objets à usage médical et/ou chirurgical ne provoquant pas l'ac- tivation du système du complément ou inhibant l'activa- tion de ce système lorsque celui-ci a été activé par d'autres moyens. La présente invention a précisément pour but de fournir des objets insolubles à usage médical et/ou chirurgical ayant une activité antiinflammatoire grâce à l'utilisation de polymères comportant des grou- pes inhibiteurs de l'activation du système du complé- ment. Selon l'invention, l'objet insoluble à usage médical et/ou chirurgical ayant une activité anti-in- flammatoire, se caractérise en ce qu'il est réalisé au moins en partie en un polymère ou un copolymère compor- tant dans sa chaîne des groupes substituables sur les- quels sont fixés de façon statistique des groupes inhi- biteurs de l'activation du système du complément choi- sis parmi les groupes répondant aux formules suivan- tes: 1) - -(CH2)mCOOR, dans laquelle R représente un atome d'hydrogène ou d'un métal physiologiquement ac- ceptable et m est égal à 0 ou est un nombre entier de 1 à 15; 2) - -CH2CO-NH-X, dans laquelle X représente 2 2 1 i R2-(S 03)-R avec p étant égal à 0 ou 1 et R re- 3 p présentant un atome d'hydrogène ou d'un métal physiologiquement acceptable à condition que R1 représente un atome d'hydrogène lorsque p est égal à 0, et R2 représentant -(CH2)- D - avec n étant un nombre entier de 1 à 4 ou un radical alkyLène, arylène ou alkylènearylène substitué ou non; 3) - -CH2-CO-NH-R2-S02-Y, dans laquelle R représente - (CH2)n- 0 avec n étant un nombre entier de 1 à 4 ou un radical alkyLène, arylène ou alkylènea- ryléne substitué ou non, et Y représente un radi- cal dérivé d'un acide aminé lié au pont -S02- par sa fonction-amine; - 4) - -S02Y dans laquelle Y a la signification donnée ci-dessus, ) - -(CH2) mCOY, dans laquelle Y représente un radical dérivé d'un acide aminé lié au pont -CO.- pàr sa fonction amine, et m est égal à 0 ou est un nombre entier de 1 à 15, 6) - -S03R1, dans laquelle R1 a la signification donnée ci-dessus, R 7) - -(CH2)m- P 0 \ R 3 4 dans laquelle R et R qui peuvent être identiques ou différents, représentent OR ou Y avec- R ayant la signification donnée ci-dessus et Y représen- tant un radical dérivé d'un acide aminé lié au pont -PO- par sa fonction amine, et m est égal à 0 ou est un nombre entier allant de 1 à 15,et 8) - -S02-NH-(CH2)n -COY dans laquelle Y repré- sente un radical dérivé d'un acide aminé lié au pont CO par sa fonction amine et n est un nombre entier de 1 à 4. Les polymères et copolymères utilisés dans l'invention peuvent être des activateurs du système du complément. Dans ce cas, la fixation des groupes inhi- biteurs de l'activation du système du complément men- tionnésci-dessus permet de rendre ces polymères et co- polymères non activateurs du système du complément. L'invention s'applique également à des polymères et copolymères non activateurs du système du complé- ment. Dans ce cas, la fixation des groupes inhibiteurs mentionnés cidessus rend ces polymère inhibiteurs de l'activation du système du complément induite par d'au- tres agents. Les polymères et copolymères utilisés dans l'invention peuyent être de différents types. On peut en particulier utiliser des polymères tels que des po- lysaccharides, des polystyrènes, des polyacrylonitri- les, des polypropylènes, des polymères de cellulose ou de dérivés de cellulose, des polyacetates de vinyle, des alcools polyvinyliques acétylés et des polysulfones aromatiques. On peut aussi utiliser des mélanges de po- lymères etdes copolymères par exemple des copolymères d'acrylonitrilecommelecopolymère acrylonitrile-buta- diène-styrène. Parmi les polymères susceptibles d'être uti- lisés dans l'invention, on peut citer les polysacchari- des, par exemple les dextranes et la cellulose, et. les polystyrènes. Dans le cas des polysaccharides qui sont gé- néralement activateurs du système du complément, la fixation des groupes mentionnés ci-dessus permet de rendre ceux-ci non activateurs du système du complé- ment, ce qui présente notamment un intérêt pour la réa- lisation des membranes de dialyse ou de plasmaphérèse qui généralement sont réalisées en de tels polymères. Dans le cas des polysaccharides, les groupes inhibiteurs fixés sur le polymère sont généralement i choisis parmi -CH2COOR1 -CH2-CO-Y et -CH2-CO-NH-X. Dans ces formules, R peut représenter un -atome d'hydrogène ou d'un métal physiologiquement ac- ceptable, par exemple de sodium, Y peut représenter un radical dérivé d'un acide aminé naturel ou synthétique lié au pont CO par sa fonction amine. A titre d'exemples d'acides aminés suscepti- bles d'être utilisés, on peut citer l'acide glutamique, l'acide aspartique, la méthionine, la cystéine, l'acide cystéique, la proline, l'hydroxyproline, la thréonine, la sérine, la tyrosine, l'alanine, la phénylalanine, la valine, la leucine, l'acide. -aminocaproîque, la palanine, l'acide y-amino-N-butyrique, l'acide 8 -amino-N-valérique, l'acide 2 aminoadipique. Y peut aussi représenter un radical dérivé d'un acide aminé répondant aux formules suivantes: ) -NH-(CH2) CH -COOR1 COOR avec r étant égal à 0 ou étant un nombre entier de 1 à 3, s étant un nombre entier de 1 à 3 et R1 ayart la signification donnée ci-dessus; ou 2 ) NH-(CH2)t-COOR1 avec t étant un nombre entier de 1 à 15 et R1 ayant la signification donnée ci-dessus. Dans la formule.donnée plus haut, X peut re- présenter un radical de formule: -C 2- -(S03)pR1 ou R2(S03)p-R1 dans lesquelles p=O ou 1, R représente comme précèdem- ment un atome d'hydrogène ou d'un métal physiologique- ment acceptable à condition que R représente un atome d'hydrogène lorsque p=O, et R2 représente -(CH 2)n - - avec n allant de 1 à 4, ou un radical alkylène, arylène ou alkylènearylène substitué ou non. A titre d'exemples de radicaux alkylène sus- ceptibles d'être utilisés, on peut citer les radicaux éthylène, triéthylène, tétraméthylène, etc... On peut aussi utiliser des radicaux dérivant des hydrocarbures saturés ramifiés par enlèvement d'un atome d'hydrogène sur deux atomes de carbone différents de la chaîne de l'hydrocarbure. A titre d'exemple de radicaux arylène suscep- tibles d'être utilisés, on peut citer le radical phény- lène. A titre d'exemple de polysaccharides modi- fiés présentant une activité anti-inflammatoire, on peut citer des dextranes modifiés par les groupes -CH2-COOR et les dextranes modifiés par des groupes de formule -CH2-COOR1 -CH2-CO-NH-CH2- \ -SO3-R1 et CH2-CO-NH-CH2- a, ainsi que les celluloses modi- 2 --C2,i fiées par des groupes -CH2COOR. Lorsque le polymère est du polystyrène, les groupes fixés sur la chaîne de ce polymère pour lui conférer des propriétés anti-inflammatoires, sont gé- néralement choisis parmi les groupes répondant aux formules -SO -Y, -S03R, -CH2-CO-NH-X, -CH2-CO-NH-R -S0 2-Y, -C0-COOR, -SO2-NH-(CH2)n- -COY et -P4 i 2 Dans ces formules, les radicaux R1 R2 X et Y peuvent représenter les mêmes radicaux que ceux uti- lisés pour la modification des polysaccharides. Les radicaux R3 et R4 reprsentent comme prcdemment R1 3 5 radicaux R et R représentent comme précédemment OR1 2 2580178 ou Y, et n est un entier de 1 à 4. Les polymères modifiés de l'invention peu- vent être préparés par des procédés classiques. Ainsi, dans le cas o l'on désire obtenir des produits dans lesquels les groupes inhibiteurs comporte i des groupes -S03R et/ou S02-Y, on réaLise généralement dans une première étape une chlorosulfonation du poly- mère par réaction avec de l'acide chlorosulfonique dans un solvant approprié, puis on transforme le groupe i -S02Cl en groupe -S03R en milieu basique et éventuel- lement en groupes -S02-Y par réaction avec une quantité appropriée d'un acide aminé en milieu basique. La sul- fonation du polymère a généralement lieu dans un mélan- ge contenant du dichlorométhane et du nitrométhane et la réaction avec l'acide aminé dans un milieu contenant un mélange eau-dioxane. Les groupes -S02Y peuvent aussi être obtenus par transformation du groupe -S02Cl par réaction d'un ester d'acide aminé en milieu basique en l'absence d'eau, généralement du dichlorométhane et de la triéthylamine..Dans ce cas, le polymère obtenu est sa- ponifié par traitement à la soude concentrée suivi des lavages décrits ci-après. Après fixation, on soumet le polymère à un lavage à l'eau suivi de lavages par des solutions de chlorure de sodium et de citrate de sodium, d'un équi- librage à un pH de 7,3 environ par plusieurs lavages avec du tampon de Michaelis, d'un nouveau lavage à l'eau et enfin d'un séchage. Ceci permetd'éliminer le plus complètement possible toute impureté susceptible d'interagir avec les constituants du plasma sanguin. Dans le cas o l'on désire obtenir des poly- mères comportant des groupements -CH2CO-NH-X, on prépare au cours d'une première étape les dérivés car- boxyméthylés des polymères, puis on fixe au cours d'une deuxième étape les amines appropriées ou le chlorure de benzyle. Généralement, le couplage des amines sur les dérivés carboxyméthylés des polymères s'effectue à l'aide de N-éthoxycarbonyl-2-éthoxy-1,2- dihydroquinoléine (EEDQ). Dans le cas o l'on fixe des groupements -CH2COY, on prépare au cours d'une première étape les dérivés carboxyméthylés des polymères, puis on fixe au cours d'une deuxième étape les aminoacides appropriés. Généralement le couplage des aminoacides sur les déri- vés carboxyméthylés des polymères s'effectue à l'aide de N-éthoxycarbonyl2-éthoxy-1,2-di-hydroquinoléine (EEDQ). Dans le cas om l'on fixe des groupements -COOR1 on fait réagir le polymère de départ avec du chlorure d'acétyle en présence de chlorure d'aluminium, puis les groupes acétyle sont transformés en carboxyle par oxy- dation à l'hypobromite de sodium. Dans le cas o l'on fixe des groupements' OR1 -P _pf iboR1 ' on ?ait réagir le polymère de départ avec du trichloru- re de phosphore en présence de chlorure d'aluminium. On dépare ensuite le produit par filtration, et on le fait réagir avec une solution aqueuse d'acide nitrique. Dans le cas om l'on fixe des groupements OR -P il Y O3- on fait réagir le polymère de départ avec du trichloru- re de phosphore en présence de trichlorure d'aliminium, puis, après séparation (par exemple filtration) les groupes dichlorure de phosphoryle sont oxydés par le chlore pour obtenir les groupes tétra- chlorure de phosphoryLe. Les groupes ainsi obtenus peuvent réagir avec les acides aminés (ou les esters d'acides aminés) déjà cités. Dans le cas, o l'on fixe des groupes -S2O -NH-(CH2) - un acide de formule NH2-(CH2)n- COOH et on transfor- me ensuite les groupes COOH en groupes COY par réaction avec une quantité appropriée de l'acide aminé corres- pondant. En raison des procédés utilisés pour la modi- fication des polymères, ceux-ci comprennent générale- ment plusieurs groupes différents appartenant aux caté- gories précitées. Ainsi, lors de la fixation de groupes CH2-CO-NCHH2 - C. -S03-R1 sur des polysaccharides, on obtient généralement des polysaccharides comportant, non seulement les groupes précités, mais également des groupes -CH2-COOR et des groupes -CH 2-CO-NH-CH2- i / Dans ce cas, pour obtenir une bonne activité anti-inflammatoire du polymère, il est préférable que le nombre de groupes -CH2-COOR1 représente au moins 35% des groupes substituables du polymère de base et que le nombre de groupes -CH2-CO-NH-CH2- -S03R1 représen- te au moins 5% des groupes substituables.du polymère de base. Dans le cas des polystyrènes, lorsque l'on veut fixer sur le polymère des groupes de formule -S02Y, on fixe généralement également des groupes de formule -S03R. Dans le cas des polystyrènes portant des groupes -COOR ou OR || - OR on peut également fixer surles cycles benzéniques non substitués des groupes -S 03R1. Selon l'invention, les objets à usage médical et/ou chirurgical réalisés en de tels polymères peuvent être en particulier des membranes de dialyse rénale ou de plasmaphérèse, des sondes et des supports pour épu- ration plasmatique. Dans le cas des membranes de dialyse rénale ou de plasmaphérèse, on réalise ces membranes en polysaccharide, par exemple en cellulose, et l'on modi- fie en surface la membrane par fixation de groupes in- hibiteurs choisis avantageusement parmi les groupes de formule -CH2-COOR1 -CH2-CO-Y et -CH2-CO-NH-X dans les- quels R, Y et X ont la signification donnée ci-dessus. Ces membranes peuvent être sous la forme de films ou de tubes. Dans le cas de sondes à usage médical ou chirurgical, ces dernières peuvent être réalisées en un polymère ou un copolymère tel que ceux habituellement utilisés, par exemple en polyoléfine ou copolymère d'oléfine comme le polyethylène et les copolymères d'éthylène et d'acétate de vinyle, mais selon l'inven- tion leur surface'qui est destinée à venir en contact avec l'organisme, est modifiée par greffage de polysty- rène sur le polymère de base, puis fixation de groupes inhibiteurs de l'activation du système du complément de formule -S 2Y -S03R -CH2CO-NH-X, -COOR -CH2-CO-NHR -SO2Y, COY, 2 2' R3 -P 4 et/ou SO2-NH-(CH2)n- -COY II R4 0 13 4 dans lesquelles R1 R3 R4, X et Y ont la signification donnée ci-dessus. 1 1 La modification de surface peut être réalisée en particulier au niveau des passages transcutanés afin d'éviter les réactions inflammatoires de l'organisme. Dans le cas de supports pour chromatographie d'affinité ou pour épuration plasmatique, on peut uti- liser un support classique et modifier la surface de ce support en le revêtant par un polymère comportant dans sa chaîne des groupes substituables sur lesquels sont fixés de façon statistique les groupes inhibiteurs de L'activation du système du complément mentionnés ci- dessus. Le support peut être constitué de grains de silice recouverts de dextrane réticulé comportant comme groupes inhibiteurs de l'activation du système du com- plément des groupes de formule -CH2COOR1, -CH2-CO-Y et/ou -CH2-CO-NH-X. D'autres caractéristiques et avantages de l'invention apparaîtront mieux à la lecture des exem- pIes suivants donnés bien entendu à titre illustratif et non limitatif, en référence au dessi.n annexé sur lequel: - la figure 1 est un diagramme illustrant l'activation du système du complément en fonction du taux de groupes -CH2COONa du Séphadex carboxyméthylé, - la figure 2 est un diagramme illustrant l'activation du système du complément par le Séphadex carboxyméthylé - en fonction du taux de groupes -CH2-COONa, - la figure 3 est un diagramme illustrant l'effet inhibiteur du Séphadex carboxyméthylé en fonc- tion de la quantité de polymère utilisée, - la figure 4 est une courbe d'étalonnage pour évaluer l'effet inhibiteur des polymères de l'in- vent i on, - la figure 5 est un diagramme représentant 12 25 80 178 1 2 l'effet inhibiteur du Séphadex carboxyméthylé en fonc- tion de la quantité de polymère utilisée, - la figure 6 est un diagramme illustrant l'effet inhibiteur du CMBS Séphadex en fonction de la quantité de polymère utilisée, - la figure 7 est un diagramme illustrant l'effet inhibiteur des polystyrènes substitués en fonc- tion des quantités de polymère utilisées, et - la figure 8 e'st un diagramme illustrant l'effet d'activation du système du complément par la cellulose en fonction de la quantité de cellulose utilisée. EXEMPLE 1: Polydextrane comportant des groupes CH2COONa de formule: 4 CH2 CHO, 0 " OH O O 1H2 COO Na a) - Préparation On utilise comme produit de départ le poly- dextrane réticulé, commercialisé sous la marque Sépha- dex G 25, qui est un dextrane réticulé par l'épichlo- rhydrine, et on le modifie par carboxyméthylation en utilisant la méthode décrite par BOUTTEMY dans le cas de la cellulose. On vérifie ensuite les propriétés des poly- dextranes réticulés ainsi modifiés (CM Séphadex) présentant des taux de carboxyméthylation allant de 18 à 95,5%, c'est-à-dire ayant un taux de groupes -CH2COOR qui représente de 18% à 85,5% des groupes substituables du polydextrane de départ. b) - Effet du polymère sur l'activation du système du complément Tout d'abord, on broie le CM Sèphadex conte- nant des motifs CH2COONa afin d'obtenir un diamètre moyen de particules de 15 pm, puis on éLimine les fines particules et on conditionne la poudre dans un tampon physiologique à pH 7,4 (tampon VBS+ ou tampon MgEGTA). Le taux de gonflement du polymère est voisin de 4,65 + 0,05 (en volume). Le tampon VBS++ est préparé à partir d'une solution cinq fois plus concentrée, conservée au froid, -1 -1 comprenant pour 42,5 g.l 1 de NaCl, 1,875 g.l 1 de Na -1 ,5diéthylbarbital et 2,875 g.l de Na 5,5-diéthyl- barbiturique et ayant un pH de 7,4. A 100 ml de cette solution diluée (VBS), on ajoute 0,5 ml de CaCl2 3.10 2 molaire et 0,5 ml de * MgCl2 0,1 molaire: on obtient ainsi le tampon VBS++. Le tampon MgEGTA est réalisé à partir d'une solution-mère conservée à 2 C comprenant 6,08 g de EGTA (0,16 M), 0,816 g de MgCl2 (0,04 M) et 75 ml d'eau dis- tillée en ajustant à un pH de 7,4-7,5 par de la soude 1ON et en ajustant ensuite à 100 ml par addition d'eau distillée. Lors des manipulations, on dilue le tampon au 1/20 en GVB de la solution-mère afin d'obtenir un tampon MgEGTA contenant 8 mmoles de EGTA et 2 mmoles 2+ de Mg. On réalise ensuite une série d'essais ayant pour but de vérifier l'effet du CM Séphadex sur l'acti- vation du système du complément par la voie classique ou par la voie alterne. Dans les deux cas, on utilise 8,75 mg de CM Séphadex par millilitre de sérum humain normal dilué au 1/4 dans le tampon correspondant. Dans un tube à hémolyse, on introduit 26,2 mg de CM Séphadex dans 1,5 ml du tampon VBS ou MgEGTA et 1,5 ml de sérum humain normal dilué au 1/2 dans le même tampon MgEGTA ou VBF. On laisse incuber 1 heure à 37 sous agitation et on mesure L'activation de la voie classique'et alterne par le dosage du CH50 et l'activa- tion de la voie alterne par le dosage de la protéine B. 1. Dosage de l'activation par la somme des voiesclassiques et alternes Dans ce cas, l'activation est mesurée en évaluant la capacité du sérum à lyser des globules rouges de mouton (GRM) recouverts d'anticorps anti-GRM. Ces cellules (EA) sont lavées deux fois en tampon VBS2+ et ajustées à 1,5.108/ml, ce qui correspond à une den- sité optique de 0,429 à 412 nm pour une suspension cellulaire diluée au 1/30ème dans l'eau distillée. Le dosage est effectué de la façon suivante. Dans un tube à hémolyse, on introduit 0,2 ml de sérum humain normal (SHN) à doser dilué au 1/20éme en VBS2+ (100 ml de tampon VBS- + 0,5 ml de CaCl2 0,03 M.et 0,5 ml de MgCl2 0,1 M), puis on fait des dilutions successives dans du sérum humain normal de 2 en 2 selon le protocole suivant: et on ajoute 0,2 ml des érythrocytes de mouton recouverts d'anticorps (EA) à 1,5.108/ml). N tubes 1 2 3 4 5 6 7 SHN 1/ eme en VBS (ml) 0,2 0,2 VBS,+ (Cml) 0,2 020, 20,2,2 2 EA (ml) 0,2 0,2 0,2 0,2 0,2 0,2 0,2 Pour mesurer la lyse spontanée: TO des cel- lules, on introduit dans un tube à hémolyse: - 0,2 ml de tampon VBS 2+ - 0,2 ml d'érythrocytes de mouton recouverts d'anti- corps. Pour mesurer la Lyse totale des celLuLes: T100, on introduit dans un tube à hémolyse: 0,2 mi de tampon VBS±,0,2 mL d'érythrocytes de mouton EA. On porte Les différents tubes à hémoLyse à 37 C et on les maintient à cette température pendant min sous agitation. On arrête ensuite la réaction avec 2,4 mL de NaCL froid 0,15N, sauf pour le tube de mesure de la lyse totale o l'on introduit 2,4 mL d'eau distillée. On centrifuge alors les tubes à environ 2800 tours/min avant de lire la densité optique DO du surna- geant à 412 nm. Le pourcentage de lyse y qui correspond à: DO - T Y T100 T0 est mesuré et on calcule le pourcentage de protéines du système de complément -résiduel à partir du degré de lyse des érythrocytes de mouton (EA) par référence au témoin sérum qui n'a pas été mis en contact avec le CM Séphadex. Plus y est élevé (DO élevé), moins le système du complément a été activé par le polymère. Les valeurs peuvent être exprimées en unité par mL, l'unité hémoly- tique 50 (CH50) qui définit la quantité de sérum néces- saire à. la lyse de 50% des EA. Le CH50 est calculé de la façon suivante: à partir du degré de lyse y, on rap- porte sur un graphique la quantité de sérum dilué (0,2 ml; 0,1 ml., etc... ) en fonction de 1-y et on lit la quantité de sérum nécessaire pour obtenir 50% de lyse des EA (.Y-=1). La précision de ce dosage est éva- 1y luée à 10%. Les résultats obtenus avec les CM Séphadex ayant des taux de groupes CH2COONa allant de 18 à ,5% sont donnés sur la figure 1 qui représente le CH50 résidueL en fonction de la teneur en groupes -CH2COONa (en %) du poLymère. Sur cette figure, on voit que L'activation du système du complément diminue avec La teneur en groupes -CH2COONa du poLymère et que pour 95,5% de groupes -CH2COONa, on n'obtient pratiquement aucune activation du système du complément. Sur cette figure, la ligne en tirets se rapporte au tube témoin sans polymère. 2. Activation par voie alterne Le dosage de l'activation de la voie alterne se fait par un dosage hémolytique de la protéine B en utilisant des-é-rythrocytes de mouton recouverts d'anti- corps et de fragments C3b. Ces cellules (EAC4-3b) sont suspendues dans un tampon physiologique à pH 7,4 DGVB+ obtenu en ajoutant à 100 ml de tampon VBS 1 ml de gélatine (à 109g pour 100 ml d'eau), 100 ml de dextrose (25g a D' glucose pour 100 ml d'eau), 1 ml de CaCl2 O,03M et 1 ml de MgCl2 0,1M. Le dextrose ajouté favori- se la formation de la C3 convertase car le milieu est rendu hypotonique. La gélatine diminue l'absorption non spécifique des protéines. Pour le dosage hémolytique, les cellules sont ajustées à 1.108/ml (densité optique de 0,286 nm pour une suspension cellulaire diluée au 1/30 dans l'eau distillée). On ajoute en excès à cette suspension cel- lulaire les protéines nécessaires à la formation de la C3 convertase alterne sau.f la protéine B dosée dans le sérum. Ainsi, on ajoute le facteur D et le facteur P dilués au 1/100 à la suspension cellulaire lavée préa- lablement deux fois en tampon DGVB. Le dosage hémolytique se fait de la façon suivante: Dans un tube à hémolyse, on introduit: - 0,1 ml de sérum humain normal à doser dilué au 1/40000 en tampon DGVB+, - 0,1 ml de EAC4,3b; 0,1 ml de P/100 et 0,1 ml de D/100. On fait différentes dilutions successives de 2 en 2 du sérum à doser selon le protocole suivant: N tubes 1 2 3 4 5 6 7 SHN 1/49,1000 , en DGVB (ml) 1DGVB E(mL) 0,1 0,1, 0,1 0,1 0,1 EAC4 C3b, P/100-D/100 0,1 0,1 0,1 0,1 0,1 0,1 0,1 (m l Pour mesurer la lyse spontanée TO et la lyse totale des cellules T100, on introduit dans un tube à hémolyse: - 0,1 ml de EAC4C3b, P/100, D/100 et - 0,1 ml de tampon DGVB. On porte les tubes au bain-marie à 30 C sous agitation pendant 30 min de façon à former la C3 con- vertase amplificatrice alterne: C3bBbP. On ajoute ensuite 0,3 ml de sérum de rat dilué au 1/20 dans un tamponphysiologique contenant de l'acide éthylénediaminetétracétique 4OmM (EDTA) pour apporter les protéines nécessaires à la lyse en excès à partir du C5..C9 sans faire intervenir les autres com- posants du sérum qui seront bloqués par l'EDTA. On incube au bain-marie à 37 C sous agitation pendant min, puis on arrête la réaction avec 1,6 ml de NaCl froid 0,15M, sauf pour le tube de lyse totale o on ajoute 1,6 ml d'eau distillée. On centrifuge à 2800 t/min avant de mesurer la densité optique (DO) du surnageant à 412 nm. La densité optique DO permet de mesurer le pourcentage de lyse: 1$ DO - T Y T- -o-T 0 Plus y est élevé, moins le polymère a activé la voie alterne du complément. On calcule le pourcentage de protéine B rési- duel du sérum humain normal préalablement incubé avec le CM Séphadex à partir du pourcentage de lyse érythro- cytaire par référence au témoin sérum n'ayant pas été mis en contact avec le CM Séphadex. On peut ainsi défi- nir la valeur Z=-lr(1-y) correspondant au nombre de sites convertasiques par cellule. Les résultats obtenus sont donnés sur la figure 2 qui représente lèpourcentage de protéine B résiduel en fonction du taux de substitution en groupes -CH2COONa du Séphadex. Comme précédemment, on constate que l'inactivation du système du complément est direc- tement proportionnelle au taux de groupes -CH2COONa. Sur cette figure, la ligne en tirets correspond à l'essai effectué avec le sérum humain normal en l'ab- sence de CM Séphadex. 3. Dosage radioimmunologique des deux voies du complément Une gamme d'étalonnage est construite selon le protocole décrit ci-après: une volume de. 125I-C3a (C3a*) est ajouté à un volume de C3a froid en quantité variable connue. Un anticorps anti C3a (AC1) est ajou- té, incubé 30 minutes à l'ambiante, puis un deuxième anticorps antiAC1 est ajouté (AC2) qui se lie au com- plexe déjà formé. La réaction est arrêtée avec du NaCI 0,15M froid, le tout est centrifugé et on compte la radioactivité du précipité formé. Ceci permet de cons- truire le graphe AC2-AC1-C3a* en fonction de la quanti- té de C3a froid. Les sérums à doser sont traités par un agent précipitant (Polyéthylene glycol) des composés de haut poids moléculaire. Apres centrifugation, un volume du surnageant à doser est ajouté à un volume de C3a* selon la technique décrite dans l'étalonnage. Selon le milieu dans lequel le sérum a été placé en présence du polymère, on mesure par cette méthode soit l'activation des deux voies (en VBS) soit l'activation de la voie alterne (en Mg EGTA). c) - Effet inhibiteur du polymère sur l'activation du système du complément 1. Activation par le Séphadex G 25 On étudie l'effet du Séphadex carboxyméthylé sur l'activation du système du comptément par le Sépha- dex G25 qui est connu pour activer le système du com- plément. Le Séphadex G25 qui constitue la résine acti- 1 5 vatrice est conditionné dans le tampon VBS + et présen- te une granulométrie d'environ 15 pm. On met en contact le Séphadex G25 à concentration constante (8,75 mg/ml de sérum humain normal) et le Séphadex G25 carboxym- éthylé à raison de 5 mg, 10 mg ou 15 mg/ml de sérum humain normal dilué au 1/4. Les témoins sont le sérum humain normal dilué au 1/4 en VBS, - le Séphadex G25 à raison de 8,75 mg/ml en sérum humain normal dilué au 1/4 en VBS, - le Séphadex G25 carboxyméthylé à 95% à raison de 5, , 15 mg/ml de sérum humain normal dilué au 1/4 en tampon VBS. Les tubes sont incubés pendant 1 heure à 37 C sous agitation et on détermine le CH50 pour mesurer l'activation des deux voies du système du complément. Les résultats obtenus sont donnés sur la fi- gure 3 o la droite 1 représente le taux de CH50 rési- 0 duel en fonction de la teneur en Séphadex carboxyméthy- lé exprimé en mg/ml de sérum humain normal. Sur cette figure, la courbe 2 illustre les résultats obtenus avec le CM Séphadex à 95% seul et la droite 3 se rapporte au sérum humain normal seul. Sur cette figure,on voit que le taux d'inhi- bition de l'activation du système du complément augmen- te avec la quantité de Séphadex G25 carboxyméthylé uti- lisé dans l'essai. Ainsi, 10 mg/ml SHN 1/4 de Séphadex carboxyméthylé à 95% inhibe 50% de l'activation globale du système du complément par 8,75 mg de Séphadex par ml de SHN 1/4 en VBS. 2. Activation par les globules rouges de lapin Dans cet essai, on étudie l'effet du CM Sé- phadex sur l'activation du système du complément par les globules rouges de lapin en mesurant l'activation par un dosage hémolytique. Pour ce dosage, on construit une courbe d'étalonnage afin d'établir la concentration de sérum humain normal (SHN) capable d'hémolyser 50 ou 100% de globules rouges de lapin (GRL) de la façon suivante. (Différentes doses 10, 11,...,36 pl) de SHN sont ajus- tées à 250 pl en tampon MgEGTA auxquels on ajoute pl de GRL à 10 8/ml. On laisse incuber à 37 C pen- dant 40 min au bain-marie sous agitation, puis on cen- trifuge à 3000 t/min et on mesure la densité optique DO du surnageant à 412 nm. On détermine le degré de lyse des GRL en fonction de la quantité de SHN présente dans le tube au moment du test. Les résultats obtenus sont donnés sur - la figure 4 qui représente la courbe d'étalonnage obtenue dans ces conditions, soit le pourcentage de lyse des GRL en fonction de la quantité de sérum humain normal utilisée. Pour évaluer l'effet du Séphadex G25 carboxy- méthylé, on ajoute différentes doses de ce polymère ajustées à 250 pl avec le tampon MgEGTA à une dose constante de SHN capable d'hémolyser 50 ou 100% des 21 2580178 GRL. On ajoute 100 pl de GRL à 10 hématies/mL en MgE6TA, on laisse incuber à 37 C au bain-marie pendant min sous agitation, puis on centrifuge à 3000 t/min et on mesure la densité optique du surnageant à 412 nm. Le pourcentage de lyse des GRL est déterminé en fonction de la quantité de polymère ajoutée. Un blanc sans sérum humain normal a été fait avec le Sé- phadex G25 carboxyméthylé afin de vérifier que le fait de mettre en contact ce polymère avec les GRL ne provo- quait pas la lyse de ces derniers. La densité optique mesurée dans ces conditions ne montre pas un tel effet. Les résultats obtenus sont donnés sur la figure 5 o la courbe représente le pourcentage de lyse des GRL de lapin pour différents polymères. Sur cette figure, on voit que l'addition de 3 à 5 mg de Séphadex carboxyméthylé à 95% conduit à un pourcentage de lyse très faib.le des GRL. et que ce polymère a donc un effet inhibiteur sur l'activation du système du complément. EXEMPLE 2: Polydextrane réticulé, modifié répondant à la formule suivante: OH OH 0o CH1 t I H. CHI COONa 0o * I h'H 1HNH S ONa a)-- Préparation du polymère Ce produit est préparé de la façon suivante. On part de Séphadex G25 carboxyméthylé à 76% mis sous forme acide et on fixe sur celui-ci de la benzylamine en opérant de la façon suivante. Dans un ballon de 250 cm3, on disperse sous agitation 5g de carboxyméthylSéphadex dans 60 cm3 d'eau; on ajoute lentement une solution de 20 g de Néthoxycarbonyl-2-éthoxy-1,2 dihydroquinoléine (EEbQ) dissous dans 160 ml d'éthanol absolu et on laisse agir une demi-heure. On ajoute alors 4,4 cm3 de benzylamine et on laisse le mélange sous agitation pendant 24 h, puis on filtre pour récupérer le produit. On lave abon- damment à l'eau distillée puis à l'éthanol absolu et encore une fois à l'eau, puis on sèche à l'étuve sous vide à 40 C pendant 24 heures. On soumet ensuite le produit ainsi obtenu à une sulfonation en opérant de la façon suivante. g du produit obtenu précédemment sont dis- persés dans 500 cm3 de nitrométhane sous agitation. On ajoute alors lentement 2,8 cm3 d'acide chlorosulfoni- que et on laisse agir pendant 2 heures. On récupère le produit par filtration, on le lave abondamment au ni- trométhane puis à l'eau distillée et on met le produit obtenu dans une solution de soude 1N pendant 2 heures afin de l'hydrolyser totalement. On récupère le produit par filtration, on le lave abondamment à l'eau distillée et on le sèche à l'étuve sous vide à 40 C pendant 24 h. Le polymère ainsi obtenu comprend: - 53% de groupes -CH2COONa, 30. - 10% de groupes -CH2CONHCH2- -So3Na, - 13% de groupes CH2CONHCH2, -24% de groupes OH non substitués. Le polymère (CMBS) ainsi obtenu a un diamètre moyen de particules de 30 pm. Apres élimination des fines particules, on le conditionne dans un tampon physiologique à pH 7,4 (VBS). Le taux.de gonflement est voisin de 4,65 + 0,05 en volume. b) - Effet -du polymère sur l'activation du système du complément. On opère comme dans l'exemple 1 pour vérifier l'effet du polymère sur l'activation du système du complément par les deux voies ou par la voie alterne seule. Les essais sont réalisés dans les mêmes condi- tions que celles de l'exemple 1. Dans ces conditions, on n'obtient pas d'activation du'système du complément aussi bien par la voie classique que par la voie alter- ne. c) - Effet du polymère sur L'activation du système du complément par les globules rouges de lapin. On vérifie cet effet dans les mêmes condi- tions que celles de L'exemple 1. Les résultats obtenus sont donnés sur la figure 6 qui représente le pourcen- tage de lyse des GRL en fonction de la teneur en poly- mère (mg) Sur cette figure, on voit que ce polymère est légèrement moins inhibiteur que le Séphadex carboxymé- thylé de l'exemple 1, puisqu'il faut plus de CMBS que de CM Séphadex pour obtenir le même résultat. Néan- moins, le CMBS a un effet inhibiteur sur l'activation du système du complément par les globules rouges de lapin. EXEMPLE 3: Polystyrène modifié par des groupes -S03 Na répondant à la formule SQ Na a) Préparation du polymère On laisse gonfler une nuit à la température ambiante 25 g de polystyrène dans 360 mI de dichloro- méthane. On ajoute alors 140 ml d'acide chlorosulfoni- que, puis on agite la suspension pendant 7 h à tempéra- ture ambiante. On filtre alors la résine brute, on la lave avec précautions au moyen de dichlorométhane et d'acétone, puis on la sèche sous vide à 50 C. On hydro- lyse ensuite le polystyrène sulfoné ainsi obtenu par la soude 2N à la température ambiante, Duis on filtre, on lave à l'eau et on sèche sous vide. Le produit obtenu (PS-SO Na) est substitué à 68% par -S03Na, son taux de gonflement est de 1,93 et le diamètre moyen de particu- les est de 30 pm. b) - Effet sur l'activation du système du complément par les globules rouges de lapin On détermine cet effet dans les mêmes condi- tions que celles des exemples 1 et 2. Les résultats obtenus sont donnés sur la figure 7 o la courbe I représente le pourcentage de lyse des globules rouges de lapin en fonction du poids de polymère utilisé (en mg). Sur cette figure, on voit que le polystyrène comportant des groupes S 03Na a un effet inhibiteur sur l'activation du système du complément par les globules rouges de lapin puisque 0,9 mg inhibe 50% des GRL. EXEMPLE 4: Polystyrène comportant des groupements -S 03Na et -SO Y avec Y représentant un radical dérivé 3 2 de l'acide aspartique répondant à la formule: - {.CH - CH2;CH CH2} (O) n S03 Na S2 3 2- NH - CH - COONa CH COONa CH2 - COONa a) - Préparation du polymère On soumet tout d'abord, comme dans l'exemple 3, du polystyrène à une chlorosulfonation, puis on fixe sur ce polystyrène chlorosulfoné de l'acide aspartique en opérant de la façon suivante. On dissout 15 mmol de chlorhydrate d'ester méthylique d'acide aspartique dans 150 ml de dichloro- méthane auquel on a ajouté 1,5 g de triéthylamine. On ajoute alors 2 g du polystyrène chlorosulfoné, puis, au bout de 2h, on ajoute 1g de triéthylamine. On arrête la réaction après une nuit. On filtre alors le polymère, on le Lave abondamment à l'alcool, puis avec de la soude 2M, 1M, 10 2M et de l'eau et on le sèche sous vide. On obtient ainsi un polymère ayantlaformuleci-dessusdans laquelle le nombre de groupes -S02Y représente 92% des motifs substitués. Ce polymère (PS-SO AA) a un taux de gonfle- ment de 1,89 et un diamètre moyen de particules de 14,3 pm. b) - Effet du polymère sur l'activation du système du complément par les globules rouges de lapin On détermine cet effet dans les mêmes condi- tions que celles de l'exemple 1 après avoir conditionné les résines dans le tampon MgEGTA. - Les résultats obtenus sont donnés sur la fi- gure 7 sur laquelle la courbe 2 se rapporte à ce poly- mère (PS-SO2AA). On voit que ce polymère a un effet inhibiteur plus prononcé que le polystyrène sulfoné (PS-SO 3Na) de l'exemple 3, puisque 0, 3 mg de PS-SO2AA suffit à inhiber 50% des GRL, alors que 0,9 mg de PS-SO3Na sont nécessaires pour obtenir le même résul- tat. EXEMPLE 5: Polystyrène modifié par des groupes COONa de formule: {CH - CH24 tHCH23C COONa a) - Préparation du polymère La résine polystyrène (12g) est mise à gon- fler dans 150 ml de dichlorométhane pendant une nuit. Le ballon est ensuite plongé dans la glace et on ajoute 9,9 ml de CH3COCI puis 15g de AlCl3 par petites quanti- tés. Le mélange est agité pendant deux jours à tempéra- ture ambiante, puis il est filtré et lavé dans des mé- langes dioxanne /eau/ acide chlorhydrique afin d'élimi- ner l'alumine formée puis à la soude et à l'eau, enfin séché. La résine précédente est alors placée dans un bain de glace dans 100 ml d'un mélange dioxanne,/eau, on lui ajoute 48g de NaOH dans 200 ml d'eau puis douce- ment 16 ml de Br2. Apres deux jours à l'ambiante, la --2 résine est lavée à la soude 1M puis 10 M, puis séchée. Le polymère obtenu est substitué à plus de 90%. b) - Effet du polymère sur l'activation du système du complément On vérifie cet effet dans les mêmes condi- tions que celles de l'exemple 1. Dans ces conditions, on a trouvé que 10 mg de polystyrène modifié par COONa n'ont aucun effet sur l'activation du système du com- plément. c) - Effet du polymère sur l'activation du système du complément par le Séphadex G25 On vérifie cet effet dans les mêmes condi- tions que celles de l'exemple 1. Les résultats obtenus montrent que ce polymère a un effet inhibiteur sur l'activation du complément par le Séphadex G25. EXEMPLE 6: Polystyrène modifié par des groupements 27 2580178 -ONa -P répondant à la formule: Il 'OH CH - CH CH CH2 - CH P UNOH 0H a) - Préparation du polymère A 2g du polymère de départ, on ajoute 14 ml de PCl3 puis, après 30 minutes à température ambiante, 1, 86g de AlCl3. Le mélange est alors chauffé à 80 C pendant 5h puis la résine résultante est filtrée, rincée au chloroforme, puis au dioxanne puis traitée par 300 ml d'un mélange dioxanne/acide nitrique /eau (2/1/1 en volume) pendant 48h. La résine obtenue est aLors traitée après filtration par de la soude diluée, puis elle est séchée sous vide. Le polymère obtenu est *substitué à environ 50%. b) - Effet du polymère sur l'activation du système du complément Cet effet est déterminé dans les mêmes condi- tions que celles de l'exemple 1, sur un polymère ayant 50% de groupes substituables occupés par: _ONa O en utilisant 10 mg du polymère. On vérifie que dans ces conditions, le pourcentage de protéines B résiduel est de 100%, ce qui montre que ce polymère n'active pas le système du complément. c) - Effet du polymère sur l'activation du système du 3c5 complément par le Séphadex G25 On détermine cet effet dans les mêmes conditions que celles de l'exemple 1 en utilisant 10 mg de polymère et l'on constate que ces 10 mg suffisent à inhiber l'activation du système du complément par le Séphadex G25. EXEMPLE 7: Cellulose modifiée par des groupes CH2-COONa. a) - Préparation du polymère On met 281 mg soit 1,73 mmotif de cellulose commercialisée sous la marque Cuprophane (Hospal Industrie, Meyzieu) 150 PT lot 296 598, dans 9,2 mi de NAOH 3M. On ajoute ensuite 0,49g (5,19 mmol) d'acide monochloracétique. Ceci correspond à un rapport de carboxyméthylation (acide/motif) de 3,5. On agite le mélange à 20 C pendant 17 heures. On sépare ensuite le polymère de la solution et on le lave dans du méthanol puis dans de l'eau. On ajuste le pH à 7 par addition d'acide acétique et on le lave à l'éthanol, puis on le filtre et on le sèche. Un dosage acide-base des fonctions carboxy- méthylées effectué par dosage automatique et par spectrométrie infrarouge montre que l'on obtient un taux de substitution d'environ 1 milliéquivalent par gramme de polymère sec. b) - Effet du polymère sur l'activation du système du complément On vérifie tout d'abord que le Cuprophane non modifié est activateur du système du complément en réa- lisant des essais par dosage radioimmunologique selon le mode opératoire de l'exemple 1 c)3 avec du sérum humain normal dilué au.1/4 et différentes quantités de Cuprophane non modifié dans le tampon VBS++ et le tam- pon MgEGTA en réalisant l'incubation pendant une heure à 37 C. Avant de réaliser les essais, on lave le Cuprophane dans NaCl 0,15M et dans le tampon correspon- dant (VBS++ ou MgEGTA). Les résultats obtenus sont donnés sur la figure 7 qui représente la quantité de C3a du surna- geant (en ng/ml.10-3) en fonction de la quantité de -polymère utilisé (en mg/ml de SHN). Sur cette figure, la courbe 1 se rapporte aux essais effectués avec Le tampon VBS++ et la courbe 2 aux essais réalisés avec le tampon MgEGTA. On constate ainsi que le Cuprophane active le système du complément par la voie classique et par la voie alterne. En revanche, on précise dans Les mêmes condi- tions, en utilisant le tampon VBS le Cuprophane car- boxyméthylé à une dose de 48 ng/ml de SHN n'active pas le système du complément. De même, des essais réalisés selon le mode opératoire de l'exemple 1 b)1, ont montré que le Cupro- phane carboxyméthylé n'activait pas le système du com- plément par les voies classique et alterne. EXEMPLE 8: réalisation d'une membrane de dialyse rénale en cellulose carboxyméthylé. On part de membranes classiques de dialyse réalisées en cellulose, qui peuvent avoir la forme de plaques planes ou de fibres creuses, et on les soumet à une carboxyméthylation en suivant le mode opératoire décrit dans l'exemple 7 de façon à modifier la surface de la membrane qui sera en contact avec le sang humain, par fixation sur celle-ci de groupes CH2COONa. _ On obtient ainsi des membranes de dialyse rénale présentant la propriété de ne plus activer le système du complément. EXEMPLE 9: Réalisation d'une sonde en polyéthylene On part d'une sonde en polyéthylène et on greffesur les parties de la sonde qui seront destinées à venir en contact avec l'organisme du polystyrène en exposant les parties de la sonde à modifier immergées dans une solution de styrène aux rayonnements y d'une source de cobalt 60, en l'absence d'oxygène. On modifie ensuite le polystyrène ainsi greffé par chlorosulfona- tion en le faisant gonfler dans un mélange de chlorométhane et de nitrométhane, puis en faisant passer de l'acide chlorosulfonique pendant 20 min en circulation et en renouvelant cette opération une fois. Apres chlorosulfonation, on traite la sonde par un ester d'acide aminé en solution dans le même solvant pendant 24 h. On saponifie ensuite par NaOH, puis on lave à l'eau et au tampon de Michaelis pendant un temps suffisant. On obtient ainsi une sonde capable d'inhiber l'activation du système du complément au niveau des passages transcutanés. REVENDICATIONS 1. Objet insoluble à usage médical ou chirur- gical ayant une activité anti-inflammatoire, caracté- risé en ce qu'il est réalisé au moins en partie en un polymère ou un copolymère comportant dans sa chaîne des groupes substituables sur lesquels sont fixés de façon statistique des groupes inhibiteurs de l'activation du système du complément choisis parmi les groupes répon- dant aux formules suivantes: 1)- -(CH2)mCOOR1 dans laquelle R1 représente un atome d'hydrogène ou d'un métal physiologiquement ac- ceptable et m est égal à O ou est un nombre entier de 1 à 15, 2) - -CH2CO-NH-X dans laquelle X représente -R2 (SO) -R1 avec p étant égal à O ou 1 et R -R-(SO3)p- représentant un atome d'hydrogène ou d'un métal physiologiquement acceptable à condition que R1 représente un atome d'hydrogène lorsque p est égal à 0, et R2 représentant -(CH2) - avec n étant un nombre entier de 1 à 4, ou un radical alkylène, arylène ou alkylènearylène substitué ou non, 3) --CH CO-N-R2-SO YdnsL 3) - -CH2-CO-NH-R2-S2-Y, dans laquelle R représente -(CH2)n - - avec n étant un nombre entier de 1 à 4, ou un radical alkylène, arylène ou alkylènea- rylène substitué ou non, et Y représente un radi- cal dérivé d'un acide aminé lié au pont -SO2- par sa fonction amine, 4) -S02Y, dans laquelle Y a la signification donnée ci-dessus, 5) - -(CH2)m-CO-Y, dans laquelle Y représente un radi- cal dérivé d'un acide aminé lié au pont -CO- par sa fonction amine, et m est égal à O ou est un nombre entier de 1 à 15, 6) - -S03R1, dans laquelle R1 a la signification donnée ci-dessus, ci-dessus, _ R3 7) - - (CH2)m X4 dans laquelle R3 et R qui peuvent être identiques ou différents, représentent OR1 ou Y avec R ayant la si- gnification donnée ci-dessus et Y représentant un radi- cal dérivé d'un acide aminé lié au pont -PO- par sa fonction amine, et m est égal à O ou est un nombre entier allant de I à 15, 8) - -S02-NH-(CH2)n- -COY dans laquelle Y repré- sente un radical dérivé d'un acide aminé lié au pont CO parsa fonction amine et n est un nombre entier de 1 à 4. 2. Objet selon la revendication 1, caractéri- sé en ce que le polymère est un polysaccharide sur lequel sont fixés de façon statistique des groupes choisis parmi -CH2COOR1, -CH2-O-Y ou -CH2-CO-NH-X. 3. Objet selon la revendication 2, caractéri- sé en ce qu'il comprend des groupes -CH2-COOR1, -CH2-CO-NH-CH2- e -S03-R1 et -CH2CO-NH-CH2 2. 4. Objet selon la revendication 2, caractéri- sé en ce qu'il comprend des groupes -CH2-COOR1. 5. Objet selon la revendication 1, caractéri- sé en ce que le polymère est du polystyrène comportant des groupes choisis parmi les groupes de formule -S0 2-Y, -S03COOR1 C2 -CO--,_CY -CH2-CO-NH-R2-S02-Y, -COY, S02-NH-(CH2)n- -CY R1 R 1 2 3 4 et P 4 dans lesquelles R, R2 R3, R4, X et Y ont O lit\ R4 la signification donnée dans la revendication 1. 6. Objet selon la revendication 1, caractéri- sé en ce que le polymère est du polystyrène sur lequel sont fixes des groupes de formule -S02-Y et -S03R dans lesquels et R1 ont la signification donne dans la lesqu.els Y et R ont La signification donnée dans La revendication 1. 7. Objet selon la revendication 1, caractéri- sé en ce qu.e le polymère est du polystyrène comportant des groupes -COONa. 8. Objet selon la revendication 1, caractéri- sé en ce que le polymère est du polystyrène comportant ON a des groupes -P 1\OH 0 H 9. Objet selon la revendication 1, caractéri- sé en ce qu'il est réalisé au moins en partie en polys- tyrène comportant des groupes -S03Na. 10. Membrane de dialyse rénale caractérisée en ce qu'elle est réalisée au moins en partie en poly- saccharide comportant dans sa chaîne des groupes subs- tituables sur lesquels sont fixés de façon statistique des groupes inhibiteurs de l'activation du système du complément choisis parmi les groupes de formules -CH2COOR1 H -CH2-CO-Y et -CH2-CO-NH-X dans lesquelles R1 représente un atome d'hydrogène ou d'un métal p.hysiolo- giquement acceptable, Y représente un radical dérivé d'un acide aminé lié au.pont CO par sa fonction amine 2 1 i - et X représente -R2-(S03) -R avec p=O ou 1, R repré- sentant un atome d'hydrogène ou d'un métal physiologi- quement acceptable, à condition que R représente un atome d'hydrogène lorsque p=O et R2 représentant -(CH2)n- n - avec n étant un nombre entier de 1 à 4, ou un radical alkylène, arylène ou alkylènearylène substitué ou non. 11. Membrane selon la revendication 10, caractérisée en ce que le polysaccharide est la cellu- lose et en ce que les groupes inhibiteurs sont les groupes -CH2-COOR avec R représentant un atome d'hy- drogène ou d'un métal physiologiquement acceptable. 12. Sonde à usage médical ou chirurgical ca- ractérisée en ce qu'elle est réalisée en polymère ou copolymére et en ce que sa surface destinée à venir en contact avec l'organisme est modifiée par greffage de polystyrène sur ledit polymère ou copolymère et fixa- tion de groupes de formules -SO2Y, -SO3R, -CH2-CO-NH-X, -COOR, -COY, R3 P, -CH2-CO-NHR2-SO2-Y, et/ou S02-NH-(CH2)n- -COY dans lesquelles R1 représente un atome d'hydrogène ou d'un métal physiologiquement acceptable, R3 et R4 qui peuvent être identiques ou différents représentent OR1 ou Y, Y représente un radical dérivé d'un acide aminé lié au pont -S02->-CO- ou -PO- par sa fonction amine, X 2 i i représente R _(S03)p-R avec -p=O ou 1, R représentant un atome d'hydrogène ou d'un métal physiologiquement I acceptable à condition que R représente un atome d'hy- drogène lorsque p=O, et R2 représentant -(CH2)m- _ - avec n étant un nombre entier de 1 à 4 ou un radical alkylène, arylène ou alkylènearylène substitué ou non etn est un nombre entier de 1 à 4. 13. Sonde selon la revendication 12, caracté- risée en ce que le polymère est du polyéthylène. 14. Support pour chromatographie d'affinité _ ouou ur épuration plasmatique n'entrainant.pas une activation du système du complément, caractérisé en ce qu'il est constitué de grains de silice dont la surface est recouverte d'un polymère comportant dans sa chaîne des groupes substituables sur lesquels sont fixés de façon statistique des groupes inhibiteurs de l'activa- tion du système du complément choisis parmi les groupes répondant aux formules suivantes: o 25 80178 1) - -(CH2)mCOOR, dans laquelle R représente un atome 2 m d'hydrogène ou d'un métal physiologiquement ac- ceptable et m est égal à 0 ou est un nombre entier de 1 à 15, 2) - -CH2CO-NH-X, dans laquelle X représente R2 1 R R-(SO)-R avec p étant égal à 0 ou 1, R1 3 p représentant un atome d'hydrogène ou d'un métal physiologiquement acceptable à condition que R1 représente un atome d'hydrogène lorsque p est égal à 0, et R représentant -(CH2) - avec n étant un nombre entier de 1 à 4, ou un radical alkylène, arylène ou alkylènearylène substitué ou non; 3) - -CH2-CO-NH-R2-S02-Y dans laquelle R2 représente 2 2-,rpéet (CH2)n- n - avec n étant un nombre entier de 1à 4, ou un radical alkyléne, arylène ou alkylènea- rylène substitué ou non, et Y représente un radi- cal dérivé d'un acide aminé lié au pont -SO2- par sa fonction amine; 4) -SO 2Y dans laquelle Y a la signification donnée ci-dessus, ) - -(CH2) mCOY, dans laquelle Y représente un radical dérivé d'un acide aminé lié au pont -CO- par sa fonction amine, et m est égal à 0 ou est un nombre entier de 1 à 15, 6) - -S03R1, dans laquelle R a la signification donnée. ci-dessus, 3. 7) - -(C2)m ' dansslaquelle R3 et R qui peuvent être identiques ou différents, représentent OR1 ou Y.avec R1 ayant la signification donnée ci- dessus et Y représentant un radical dérivé d'un acide aminé lié au pont PO- par sa fonction amine, et.m est égal à 0 ou est un nombre entier allant de 1 à 15, et 8) - -S02-NH-(CH2)n- I -COY dans laquelle Y représen- te un radical dérivé d'un acide aminé lié au pont CO par sa fonction amine et n est un nombre entier de 1 à 4. 15. Support selon la revendication 14, caractérisé en ce que le polymère est du dextrane réti- culé. 16. Support selon l'une quelconque des reven- dications 14 et 15, caractérisé en ce que les groupes inhibiteurs de l'activation du système du complément sont choisis parmi les groupes de formule -CH2COOR1, -CH2-CO-Y et -CH2-CO-NH-X.