Brevet FR2582653A1 — publié le 19861205

NOUVEAUX COMPOSES DE COUPLAGE. LEUR PROCEDE DE PREPARATION ET LEURS APPLICATIONS COMME MEDIATEURS DANS LE DEVELOPPEMENT DES EFETS DES INTERFERONS L'invention a pour objet de nouveaux composés de couplage obtenus entre un oligonucléotide et un vecteur d'introduction dans les cellules, leur procédé de prepa- ration et leurs applications biologiques, comme média- teurs dans le développement de l'action des interférons, notamment dans le développement d'une partie au moins de l'action antivirale des interférons. On sait que les interférons constituent une fa- mille de protéines caractérisées notamment par leurs propriétés antivirales. On a observé que l'effet antiviral des interfé- tons est médiatisé par la synthèse de protéines parti- culières. Des essais spécifiques ont permis d'identifier la fonction de deux d'entre elles, qui sont toutes les deux des enzymes (BAGLIONI C., 1979, Interferon induced enzymatic activities and their role in the antiviral state, Cell 17, 255-264). L'une d'entre elles est une oligonucléotide polymérase (2-5A synthétase). Cette oligonucléotide po- lymérase catalyse, après activation par les ARN bicaté- naires et à partir d'ATP, la synthèse d'une famille d'oligonucléotides. Ces oligonucléotides sont des chaines courtes d'adénosines reliées par des liaisons phosphodiester 2' - 5' (KERR I. M. et BROWN R. E., 1978, pppA2'- p5'A2'p5'A: An inhibitor of protein synthesis synthe- sized with an enzyme fraction from interferon treated celle, PNAS 75, 256260) dont la formule générale peut être représentée par pppA(2'p5'A)n. Ces oligonucléotides peuvent être désignés par "oligonucl1otides 2'-5'', notamment "oligoadênylates 2'-5'" ou par (2'-5')(A)n. L'un de ces oligoad&nylates peut être repr4senté par la formule suivante: - ' o (-) ( MO-PiO o (-)o-PoH H I N o (-)o-P=O n n CH2 N.C-N NH OH O N N N CH2 0NN 2 - i5 H-P-0 H -HH OH OH (-)o-P=O s N// Il est composé de chaines courtes contenant plu- sieurs groupes adénosine tadénine + ribose), liés entre eux par des liaisons phosphodiester, comme représenté, et dans laquelle la position en 5' du noyau-d'adénine de l'adénosine terminal est lié à un nombre variable de groupes phosphate (jusqu'à 3 sur l'oligoadénylate -0 H 2' -- p 5' représenté). Lorsque l'oligoadénylate 2' -i5' est totale- OH Il est composé de chaines courtes contenant plu- sieurs groupes adénosine (adénine + ribose), liés entre eux par des liaisons phosphodiester, comme représenté, et dans laquelle la position en 5' du noyau d'adénine de l'adénosine terminal est lié à un nombre variable de groupes phosphate.(jusqu'à 3 sur 1'oligoadénylate 2' ? 5' représenté). Lorsque 1'oligoadénylate 2') 5' est totale- ment déphosphorylé, c'est-à-dire lorsque la position en ' du noyau d'adénine de l'adénosine terminal est libre du susdit nombre variable de groupes phosphate, le com- posé résultant est désigné par "noyau (2' - 5')A3", qui est une abréviation pour "noyau riboadénylyl (2' > ') riboadénylyl (2' - 5') riboadénosine". Les noyaux 2'-5' correspondant aux oligoadény- lates (2'5') déphosphorylés sont également appelés "cores" Dans la suite de la description, on désignera également par "oligoadénylate 2'-5' non modifiés" les oligoadénylates 2'5' induits dans les cellules traitées par de l'interféron. Il est convenu que l'expression "oligoadénylate 2' 1 5'" mentionnée ci-dessus et utilisée ci-après dé- signera également, par commodité de langage, le noyau (2'-5')(A)n partiellement ou entièrement déphosphorylé. La découverte de ces oligoadénylates 2' - 5' a révélé une nouvelle classe d'oligonucléotides biologi- quement actifs, que l'on suppose présenter un rôle im- portant comme médiateurs de l'action de l'interféron, notamment-dans l'activation de l'endoribonucléase L, qui est présente aussi bien dans les cellules traitées par l'interféron que dans celles non traitées, et dans l'in- hibition de la synthèse des protéines. Mais les liaisons phosphodiester 2' - 5' de ces adénylates sont rapide- ment clivées par une enzyme désignée par 2'-phosphodies- térase (cf. la référence de BAGLIONI mentionnée ci- dessus). L'endoribonucléase L ainsi que la 2'-phospho- diestérase sont présentes à des taux sensiblement égaux dans les cellules traitées ainsi que dans les cellules non traitées par l'interféron. Lorsque la cellule est traitée par l'interféron, la concentration d'oligonucléotide 2'-5' polymérase aug- mente. L'infection par certains virus de cellules ainsi traitées entraîne la production au site de réplication virale d'ARN bicaténaires activant l'oligonucléotide 2'-5' polymérase. Il en résulte une augmentation, tran- sitoire et éventuellement localisée au site de réplica- tion du virus, de la concentration en oligoadénylate 2' -> 5' (Nilsen T. W. et Baglioni C., 1984, Interferon 5, J. Gresser Ed., Academic Press, New York). Ces oligonu- cléotides activent eux-mêmes en s'y liant spécifiquement l'endoribonucléase L qui dégrade les ARN messagers vi- raux. Lorsque l'interféron est enlevé du milieu de culture, l'activité de l'oligonucléotide 2' - 5' poly- mérase décroit et la cellule perd son état antiviral. La synthèse des protéines induites par l'inter- féron est transitoire et, par conséquent, les cellules maintenues dans les cultures de tissu ne maintiennent pas un niveau élevé de ces protéines. Par ailleurs, les oligoadénylates 2' -- 5' in- duits dans les cellules traitées par l'interféron pré- sentent l'inconvénient d'avoir une stabilité métabolique faible. -En effet, les oligoadénylates 2') 5' non mo- difiés sont, d'une part, rapidement hydrolysés par une phosphodiestérase spécifique dégradant la molécule de manière processive à partir de son ribose 2' terminal, d'autre part, sont dégradés sous l'action d'une phos- phatase du côté du premier ribose relié au nombre va- riable de groupes phosphate (Lebleu B. et Content J., 1982, Interferon 3, J. Gresser Ed., Academic Press, New York). Des recherches ont été entreprises pour trouver des composés analogues aux oligoadénylates 2' 5' non modifiés et présentant une activité accrue, en comparai- son avec l'activité d'oligoadénylates 2' -) 5' induits dans les cellules traitées par l'interféron (BAGLIONI C. et coll., 1981, Analogs of (2'-5') oligo(A). Endonuclease activation and inhibition of protein synthesis in intact cells, The Journal of Biological Chemistry, vol. 256, n' 7, p. 3 253-3 257). Différentes recherches ont été effectuées pour synthétiser (par voie enzymatique et/ou chimique) des analogues modifiés des oligoadénylates 2' -> 5' induits dans les cellules traitées par l'interféron, qui se- raient résistants aux actions de dégradation, sans per- dre leur activité biologique. Parmi ces recherches, on peut citer la synthèse enzymatique à l'aide de la 2-5A synthétase de 'cordycé- pine 2 c 5A" à partir de 2'déoxyadénosine triphosphate (DOETSCH et coll., 1981). La cordycépine a été considérée comme inhibant la synthèse des protéines en système acellulaire et le composé déphosphorylé correspondant ("core" ou "noyau") a été considéré comme bloquant la transformation blasti- que de lymphocytes humains. Ces résultats ont cependant été infirmés (CHAPEKAR M. S. et coll., 1983, Biochem. Res. Comm.,. 115, 137-143) et il semble que les effets observés aient été provoqués essentiellement par l'accumulation de pro- duits toxiques de dégradation de la cordycépine. On peut également citer, parmi les recherches effectuées, la synthèse chimique d'un analogue du noyau des oligoadénylates 2')> 5', en série xylose (IMBACH J. L. et coll., 1981, Tetrahedron Letters, vol. 22, n' 47, p. 4 699-4 702), dénommé "xylo 2'-5'A". Cet analogue s'est révélé présenter une stabilité plus im- portante vis-à-vis des phosphodiestérases que le noyau des oligoadénylates 2'-5' non modifiés, une activité intéressante vis-à-vis de virus à ADN, tel que l'Herpès, mais pas vis-à-vis de virus à ARN, (EPPSTEIN D., et coll., 1983, Nature, 302, 723-724. On peut aussi mentionner la synthèse chimique et la modification & son extrémité 2' terminale d'un oligo- adénylate 2'-5'A en un composé appelé tailed 2'-5'A' dans lequel une chaine d'hexylamine a été associée & un noyau morpholine, lui-même condensé par un groupe phos- phate sur le groupe OH en 2' du ribose terminal. Ce dé- rivé est très stable vis-à-vis des phosphodiestérases et active l'endoribonucléase L en système acellulaire (IMAI J. et coll., 1982, J. Biol. Chem., 257, 12 73912 741), mais son activité antivirale n'a pas été établie. Parmi ces recherches, on peut également mention- ner la synthèse chimique de dérivés modifiés d'oligoadé- nylates 2'-5' tels que les dérivés du 2'-5'A triphospha- tés (représenté par la formule pppA2'p5'A2'p5A) dans lesquels les atomes de phosphore en bêta et gamma du groupe triphosphate en 5' sont séparés par un groupe mé- thylène. Une autre modification pour obtenir des oligo- adénylates 2'-5'A modifiés concerne le remplacement d'un groupe hydroxyle en 3' par un groupe OCH3, soit dans l'adénosine terminal, soit dans tous les adénosines (J. A. J. DEN HARTOG et coll., 1981, J. Org. Chem., 46, 2 242-2 251). Mais il s t'est révélé que ces deux derniers groupes de composés étaient faiblement actifs, voire inactifs et ne présentaient pas une stabilité métaboli- que satisfaisante (cf. la référence mentionnée ci-dessus et BAGLIONI et coll., 1981, J. Biol. Chem., 256, 2 353- 2 357). D'autres analogues, tels que des 5'S-methylthio- phosphorothioates ont été synthétisés. Certains de ces analogues se sont révélés stables. Mais a priori, les différences apparentes des propriétés de ces analogues ne semblent pas permettre d'envisager leur utilisation sur des cellules humaines à des fins thérapeutiques (HAUGH M. C., CAYLEY P. J. et coll., 1983, Europ. J. Biochem., 132, 77-84). Des recherches ont également porté sur l'inci- dence de la modification du ou des groupes phosphate portés par le carbone en 5' des oligoadénylates 2'-5' vis-à-vis de l'activité antimitogénique (cf. TORRENCE et coll. 1983, J. Medicinal Chemistry 26, n 12,1674-1678). Les composés préparés dans le cadre de ces recherches se sont révélés présenter une activité antimitogénique, mais on a trouvé que certains d'entre eux n'activent pas l'endoribonucléase L dans un système cellulaire in vi- tro, ce qui empêche d'établir une corrélation entre l'activité antimitogénique et l'action antivirale. D'autres oligonucléotides analogues des (2'-5')(A) ont été synthétisés par voie enzymatique en n remplaçant l'adénosine, notamment par la 8azaadénosine, la toyocamycine, la sangivamycine, la formycine, la 8bromoadénosine, la tubercidine et la guanosine. Il s'est révélé que la plupart de ces composés étaient dé- gradés dans des extraits cellulaires. Seuls des tests d'inhibition de la synthèse des protéines et de la pro- lifération cellulaire ont été effectués dans des cellu- les intactes, mais l'activité antivirale n'a pas été établie (B. G. HUGUES et R. K. ROBINS, 1983, Biochemistry, 22, n 9, 2 127-2135). On a également proposé des oligonucléotides (2'-5')(A)n modifiés à leurs extrémités 3' et/ou 5' pré- sentant une augmentation très forte de la stabilité par rapport aux oligonucléotides non modifiés, vis-à-vis des phosphatases et des phosphodiestérases, sans modifier les propriétés de reconnaissance de l'endoribonucléase L. Ces oligonucléotides (2'-5')(A)n modifiés en 3' et/ou ' stabilisés inhibent la synthèse protéique et exercent une activité antivirale efficace lorsqu'ils sont in- troduits dans les cellules par microinjection à l'aide de micropipettes (B. BAYARD et coll., 1984, Eur. J. Biochem. 142, p. 291 à 298; B. BAYARD et coll. 1985, Nucleosidy and nucleotides, vol. 4 (112), p. 157 à 160). Mais le problème qui se pose à ce jour est l'in- troduction des oligonucléotides 2'-5' dans les cellules, qui n'a pas encore trouvé de solutions satisfaisantes. On a utilisé, dans ce but, les dérivés déphos- phorylés, des oligonucléotides 2'-5' ci-dessous désignés par *core" 2-5A. Ces composés se sont effectivement ré- vélés avoir une certaine activité biologique anti-herpès et antimitogène, mais une étude approfondie de leur mode d'action pour certains cas a montré que leur activité biologique pourrait résulter de la dégradation de ces composés en produits toxiques, ce qui les rend inutili- sables dans le traitement thérapeutique des affections virales. On a également proposé des modifications chimi- ques des (2'-5')(A)n, visant à augmenter l'hydrophobici- té ou à diminuer le caractère polaire, tout en mainte- nant les groupes phosphate à l'extrémité 5'. On peut par exemple citer la synthèse de dérivés couplés à leur ex- trémité 3' à une chaine d'hexylamine par un noyau N-morpholine (IMAI J. et coll. 1982, J. Biol. Chem. 257, 12 739-12 741) ou la synthèse de dérivés de structure générale A5'ppx5'A2'(p5'A)n (IMAI J. et TORRENCE P., 1984, Biochemistry, 23, 766-774). Mais l'ensemble des composés proposés à ce jour sont soit biologiquement inactifs, soit incapables de traverser efficacement la membrane plasmique et il n'est par conséquent pas possible d'envisager leur utilisation dans le traitement thérapeutique des affections virales. La Société Demanderesse a trouvé de nouveaux composés de couplage, dont une partie de la structure moléculaire correspond à celle d'oligonucléotides, no- tamment oligoadénylates 2'-5'A non modifiés ou leurs analogues ou des oligonucléotides modifiés, et une autre partie de la structure moléculaire correspond à celle d'un vecteur approprié susceptible d'être internalisé par les cellules, c'est-à-dire de traverser la membrane des cellules, lesquels composés présentent une activité antivirale semblable à celle de l'interféron, sont ré- sistants vis-à-vis de la dégradation par la 2'-phos- phodiestérase et par les phosphates, et peuvent traver- ser efficacement la membrane des cellules, permettant ainsi d'envisager leur utilisation dans le traitement des affections virales. Ces nouveaux composés de couplage sont obtenus notamment par couplage entre un oligonucléotide et un vecteur approprié. La Société Demanderesse a en effet trouvé que le couplage entre un oligonucléotide et un vecteur appro- prié, notamment un enchaînement polypeptidique approprié conduit à l'obtention d'un composé de couplage, qui mal- gré la modification de charge de l'enchaînement polypep- tidique dû à la présence de la partie oligonucléotidi- que, peut néanmoins traverser la membrane des cellules et relarguer à l'intérieur de la cellule l'oligonucléo- tide, sans que l'activité biologique dudit oligonucléo- tide ne soit modifiée, ni par la présence du vecteur se trouvant également à l'intérieur de la cellule, ni par le fait que le susdit oligonucléotide a été modifié en vue du couplage. La Société Demanderesse a également trouvé que le couplage entre un oligonucléotide et un vecteur ap- proprié, notamment un enchaînement polypeptidique appro- prié dont la structure permet de reconnaître des récep- teurs spécifiques de certaines cellules, conduit à l'obtention d'un composé de couplage dont la reconnais- sance spécifique de certaines cellules par l'enchaîne- ment polypeptidique n'a pas été affecté, lequel composé de couplage est doué de la propriété de traverser lesdi- tes cellules et de relarguer & l'intérieur de la cellule le susdit oligonucléotide, sans que l'activité biologi- que dudit oligonucléotide ne soit modifiée, ni par la présence du vecteur se trouvant également à l'intérieur de la cellule, ni par le fait que le susdit oligonucléo- tide a été modifié en vue du couplage. L'un des aspects de l'invention est de proposer de nouveaux composés de couplage, mettant en jeu des oligonucléotides, qui peuvent être reconnus par l'endo- ribonucléase L, c'est-à-dire qui peuvent former avec l'endoribonucléase L un complexe actif. Un autre aspect de l'invention est de proposer de nouveaux composés de couplage mettant en jeu des oligonucléotides, qui ont une résistance accrue vis-à- vis de la dégradation par les phosphodiestérases. Un autre aspect de l'invention est de fournir de nouveaux composés de couplage, mettant en oeuvre des oligonucléotides, et qui sont susceptibles d'inhiber la synthèse des protéines cellulaires ou virales dans les cellules intactes. Un autre aspect de l'invention est de fournir de nouveaux composés de couplage biologiquement actifs, qui présentent notamment une activité antivirale efficace. Un autre aspect de l'invention est de fournir de nouveaux composés de couplage, mettant en jeu des oligo- nucléotides et qui sont susceptibles d'être internalisés par les cellules, c'est-à-dire de traverser efficacement la membrane plasmique des cellules, tout en gardant leur activité biologique. Un autre aspect de l'invention est de fournir de nouveaux composés de couplage susceptibles de réagir spécifiquement avec des récepteurs particuliers de la surface membranaire de la cellule, d'être internalisés ll par les cellules possédant lesdits récepteurs et d'exer- cer, à l'intérieur de ces cellules, leur activité biolo- gique. Un autre aspect de l'invention est de fournir de nouveaux composés de couplage biologiquement actifs, qui présentent notamment une activité antivirale efficace et qui peuvent être ciblés, c'est-à-dire dirigés spécifi- quement sur les cellules vis-à-vis desquelles il est souhaitable que l'activité des composés de couplage s'exerce. Ces différents aspects sont obtenus par de nou- veaux composés de couplage: - dont une partie de la structure moléculaire correspond à celle d'un oligonucléotide, non modifié ou modifié, comprenant une chaîne de n unités nucléosidi- ques identiques ou différentes, n étant égal ou supé- rieur à 3, ces unités nucléosidiques étant reliées par des liaisons 2'-5' qui comprennent un groupe phosphate, et dans lesquels: 20. la première unité nucléosidique de la sus- dite chaine peut être reliée par l'intermédiaire de son carbone en 5' à un nombre variable de groupes phosphate, l'un au moins des atomes d'oxygène des groupes phosphate, lequel atome d'oxygène relié uniquement au phosphore des groupes phosphate et n'intervenant pas dans la liaison entre deux groupes phosphate, peut être remplacé par un atome de soufre, de sélénium ou un groupe NH; et/ou l'une au moins des liaisons entre deux groupes phosphate adjacents peut comporter un groupe NH ou un atome de soufre; et/ou la liaison 2'-5' phosphonate qui relie deux unités nucléosidiques adjacentes est telle que l'oxygène, relié uniquement au phosphore et lequel atome d'oxygène n'entre pas dans la liaison directe entre les deux unités nucléosidiques adjacentes est remplacé par un atome de soufre, de sélénium ou un groupe NH ou bien est telle que l'oxygène qui relie le phosphore à l'ex- trémité 5' de l'une des unités nucléosidiques est rem- placé par un atome de soufre ou un groupe NH; - et dont une autre partie de la structure mo- léculaire correspond à celle d'un enchaînement peptidi- que qui comporte au moins une séquence latérale dont l'extrémité est constituée par un groupe aminé, notam- *ment NH2. Une unité nucléosidique désigne un composé cons- titué par un pentose lié à une base purique ou pyrimidi- que, dans laquelle le pentose peut être sous la forme pyrane ou furane. Dans la suite de la description, les formules représenteront les pentoses généralement sous la forme furane. Les composés de couplage selon l'invention ont leurs unités nucléosidiques avantageusement constituées par des adénosines, l'adénosine désigne le composé constitué par du ribose lié à de l'adénine et peut être représenté par la formule: A 1' OH OH dans laquelle le ribose est sous la forme furane, mais peut être également sous la forme pyrane et dans laquel- le A représente l'adénine. Dans le cadre de l'invention, l'adénine désigne la molécule représentée par la formule suivante: NX2 Né N {' H Les composés de couplage selon l'invention peu- vent avoir leurs unités nucléosidiques qui sont constituées par des dérivés d'adénosines, les dérivés d'adénosine désignant le composé constitué par du ribose, lié à un dérivé de l'adénine. Parmi ces dérivés de l'adénine, on peut citer ceux de formule suivante: N NI12 NUt2 NH2 Nul N tN Les dérivés d'adénosine correspondants seront respectivement désignés par 8-azaadénosine, sangivamy- cine, toyocamycine, formycine, tubercidine, 8-bromo- adénosine. Le nombre d'unités nucléosidiques entrant dans la constitution des composés de couplage selon l'in- vention est égal ou supérieur à 3, ceci pouvant être expliqué par le fait qu'on a constaté la nécessité d'une certaine distance entre l'endoribonucléase L et le vec- teur sus-défini sur lequel est fixé l'oligonucléotide, afin que l'affinité de l'oligonucléotide vis-à-vis de l'endoribonucléase L ne soit pas modifiée. Le nombre d'unités nucléosidiques entrant dans la constitution des composés de couplage de l'invention n'est pas limité dans les valeurs supérieures, sous réserve que les composés de couplage obtenus puissent être associés à un véhicule physiologiquement accepta- ble. Le nombre d'unités nucléosidiques peut rapide- ment être limité dans la mesure o l'augmentation de ce nombre et la synthèse correspondante plus difficiles ne seraient pas supportées par une augmentation suffisante de l'activité. Le nombre d'unités nucléosidiques devrait être choisi de façon à ce que le poids moléculaire de l'oli- gonucléotide entrant dans la constitution du composé de couplage selon l'invention soit de préférence compris de 1 500 à 5 000 daltons. Dans une classe préférée de composés de couplage selon l'invention, la valeur de n n'est pas supérieure à , et va notamment jusqu'à 7 ou 8. Les composés de couplage selon l'invention dans lesquels la valeur de n est 3, 4 ou 5 sont particuliè- rement préférés. Dans une classe préférée d'oligonucléotides se- lon l'invention, la première unité nucléosidique est liée à un ou plusieurs groupes phosphate. De préférence, le nombre de ces groupes phos- phate est de 2 ou 3. Dans une classe préférée de composés de couplage de l'invention, la première unité nucléosidique est liée aux groupes phosphate suivants: O Q O Il Il - 0 - P - OH, - P -O- P - OH ORI OR' ORI OR' OR' OR" O O O O O -O O-- P -O - P - CH0 - P-OH 1- 0 - P -a - P - OH OR' OR" OR"' OR' OR" dans lesquelles R', R", R"' représentent, indépendamment les uns des autres: - un atome d'hydrogène, - un radical alcoyle ayant de 1 à 4 atomes de carbone, en particulier un méthyle, - un radical éthyle substitué en bêta par un groupe cyano, aryle ou arylsulfonyle, - un radical trihalogénoéthyle. Dans une classe préférée de composés de couplage selon l'invention, la liaison 2') 5' reliant deux unités nucléosidiques et comprenant au moins un atome de phosphore est une liaison phosphodiester, une liaison phosphotriester, une liaison alcoylphosphonate. La liaison 2' -- 5' phosphodiester qui relie deux unités nucléosidiques adjacents dans les composés de couplage selon l'invention peut être représentée com- me suit: base il O -P-O s-, OH La liaison 2' - 5' phosphotriester qui relie deux unités nucléosidiques adjacents dans les composés de couplage de l'invention peut être représentée comme suit base base, Il O 0 -R -O O R1 dans laquelle R1 représente un radical alcoyle ayant de 1 à 4 atomes de carbone; - un radical alcoyle ayant de 1 à 4 atomes de carbone, en particulier un méthyle, - un radical éthyle substitué en bêta par un groupe cyano, aryle ou arylsulfonyle, - un radical trihalogénoéthyle. La liaison 2' --) 5' phosphonate qui relie deux unités nucléosidiques adjacentes dans les composés de couplage selon l'invention peut être représentée comme suit: base o0- - I 0 R2 dans laquelle R2 peut représenter un alcoyle ayant de 1 à 4 atomes de carbone, en particulier le méthyle. Par oligonucléotide modifié, on désigne une chaîne de n unités nucléosidiques dans lesquelles: - soit l'un au moins des atomes d'oxygène des groupes phosphate reliés à la première unité nucléosi- dique, lequel atome d'oxygène est relié uniquement au phosphore des groupes phosphate et n'intervient pas dans la liaison entre deux groupes phosphate, est remplacé par un atome de soufre, de sélénium ou un groupe NH; - soit l'une au moins des liaisons entre deux groupes phosphate adjacents comporte un groupe NH ou un atome de soufre; - soit l'une au moins des liaisons phosphonate entre deux nucléosides adjacents comporte à la place de l'oxygène qui est relié uniquement au phosphore un atome de S, Se ou un groupe NH; - soit l'une au moins des liaisons phosphonate qui relient deux nucléosides adjacents comporte, à la place de l'oxygène qui lie le phosphore à l'extrémité 5' de l'une des unités nucléosidiques, un atome de soufre ou un groupe NH. Par oligonucléotide non modifié, on désigne une chaîne de n unités nucléosidiques dans lesquelles aucun des atomes d'oxygène des groupes phosphate n'est rempla- cé par un autre atome. L'enchaînement polypeptidique selon l'invention comporte au moins une séquence latérale dont l'extrémité est constituée par un groupe aminé, notamment NH2 qui est accessible, c'est-à-dire capable de réagir avec un groupe fonctionnel, notamment une fonction aldéhyde des oligonucléotides avec lesquels on souhaite effectuer le couplage entre le susdit oligonucléotide et l'enchaîne- ment polypeptidique. L'enchaînement polypeptidique entrant dans la constitution des composés de couplage selon l'invention doit être non toxique vis-à-vis des cellules dans les- quelles les composés de-couplage sont introduits. On désigne par groupe aminé, notamment NH2, d'une séquence latérale, le groupe aminé, notamment NH2, d'un polypeptide qui n'entre pas dans lesliaisons -C-NH peptidiques. O De façon avantageuse, la séquence latérale dont l'extrémité est constituée par un groupe NH2 appartient au résidu lysyle. L'enchaînement polypeptidique peut également avantageusement comporter des résidus arginyle, étant donné qu'il présente une séquence latérale terminée par un groupe NH2. L'enchaînement polypeptidique entrant dans la constitution des composés de couplage selon l'invention comporte avantageusement une charge globale positive pour pouvoir induire par effet de charge la pénétration dans les cellules des oligonucléotides sus-définis. L'enchaînement polypeptidique entrant dans la constitution des composés de couplage selon l'invention comporte avantageusement des molécules susceptibles d'être reconnues spécifiquement par des récepteurs de la membrane cellulaire et induire la pénétration dans les cellules des oligonucléotides sus-définis. L'enchaînement polypeptidique entrant dans la constitution des composés de couplage selon l'invention comporte avantageusement au moins 5 acides aminés, de préférence au moins 6 acides aminés. Dans le cas de polypeptides synthétiques, on a avantageusement recours à des polypeptides de 5 à envi- ron 100 acides aminés. L'enchainement polypeptidique doit avoir un poids moléculaire suffisant notamment pour être reconnu par les récepteurs spécifiques de la surface membranaire des cellules. L'enchainement polypeptidique entrant dans la constitution des composés de couplage selon l'invention a avantageusement un poids moléculaire moyen au moins d'environ 1 000. L'enchainement polypeptidique entrant dans la constitution des composés de couplage selon l'invention est avantageusement constitué par la polyarginine, et de préférence par la polylysine. La polylysine entrant dans les composés de cou- plage de l'invention comporte avantageusement 5 à envi- ron 100 résidus lysyle. La polylysine entrant dans les composés de cou- plage selon l'invention a avantageusement un poids molé- culaire moyen d'environ 14 000. Les composés de couplage de l'invention sont tels qu'il y ait au moins une molécule d'oligonucléoti- des fixée sur le même enchaînement polypeptidique, par l'intermédiaire de deux séquences latérales terminées par un groupe aminé, notamment NH2, appartenant à l'enchaînement peptidique. De façon avantageuse, le nombre de molécules d'oligonucléotides par rapport à une molécule d'enchai- nement polypeptidique est au moins égal à 2, sans limite supérieure théorique. En pratique, le nombre de molécules d'oligonu- cléotides couplées à une molécule polypeptidique est limité par le nombre de NH2 disponibles sur l'enchaîne- ment polypeptidique, c'est-à-dire par le nombre de séquences latérales terminées par des groupes aminés, notamment NH2, ainsi que par le rendement de la réaction de couplage, lequel peut être modulé entre autres par les quantités respectives d'oligonucléotide et de poly- peptide mises en oeuvre. De façon avantageuse, les composés de couplage selon l'invention comportent 2 à environ 10 molécules d'oligonucléotides par molécule de polypeptide. L'invention a également pour objet de nouveaux composés de couplage, dans lesquels une partie de la structure moléculaire correspond aux oligonucléotides ci-dessus définis et dans lesquels l'autre partie de la structure moléculaire est constituée par un enchaînement polypeptidique dans lequel des groupes NH2 ont été fixés sur les groupes carboxyliques. Les groupes carboxyliques d'un polypeptide sur lesquels on fixe un groupe NH2 sont: - le groupe carboxylique terminal libre qui figure dans tout polypeptide; - et/ou les groupes carboxyliques libres des résidus glutamyle et aspartyle. On fixe par exemple le groupe -NH2 sur un groupe -COOH, par l'intermédiaire de l'hydrazine NH2NH2, ce qui transforme -C-OH en -C-NH-NH2. il il 2 O O Dans le cas o le groupe COOH sur lequel on a fixé le groupe NH2 appartient à un résidu aspartyle, celui-ci devient un aspartate hydrazide. Dans le cas o le groupe COOH sur lequel on a fixé le groupe NH2 appartient à un résidu glutamyle, celui-ci devient un glutamate hydrazide. On appellera *polypeptide hydrazide" le poly- peptide dans lequel l'un au moins des groupes COOH a été transformé en -C-NH-NH2, comme indiqué ci-dessus. Il2 O La présence de ces groupes NH2 libres permet d'effectuer le couplage entre les oligonucléotides sus- définis et le polypeptide hydrazide. L'invention vise également les composés de cou- plage dans lesquels une partie de la structure molécu- laire correspond aux oligonucléotides sus-définis, et l'autre partie de la structure moléculaire correspond à un polypeptide qui comporte des séquences latérales ter- minées par un groupe -NH2 et des groupes carboxyliques qui ont été transformés en -C-NH-NH2. Il 2 De tels polypeptides sont par exemple constitués par des asialoglycoprotéines, telles que l'asialofétui- ne. L'invention vise également les composés de cou- plage dans lesquels une partie de la structure molécu- laire correspond aux oligonucléotides sus-définis et l'autre partie de la structure moléculaire correspond à une néoglycoprotéine, par exemple une néoglycoprotéine à mannose, telle que le mannose-polylysine qui est consti- tué par de la polylysine, sur laquelle a été fixée au moins une molécule de mannose. L'invention concerne plus généralement les com- posés de couplage dans lesquels une partie de la stru- cture moléculaire correspond aux oligonucléotides sus- définis, et l'autre partie de la structure moléculaire correspond à un vecteur polypeptidique approprié, tel que des anticorps vis-à-vis d'antigènes, de la surface cellulaire des hormones, des glycoprotéines, des chaînes B de toxines animales ou végétales, lequel vecteur peut être couplé aux oligonucléotides par l'intermédiaire du -NH2 libre des séquences latérales du polypeptide ou bien par l'intermédiaire du -NH2 des groupes -C-NH-NH2, provenant de la réaction avec l'hydrazine du groupe car- boxyle terminal du polypeptide ou des groupes carboxyle appartenant aux résidus aspartyle et ou glutamyle. Les composés de couplage selon l'invention peu- vent être représentés par la formule (I) définie ci- dessous: - T HO ZV0Y LL. I P; X dans laquelle: - Y et T, identiques ou différents, représentent in- dépendamment l'un de l'autre O, S, Se ou NH; - Z et W, identiques ou différents, représentent in- dépendamment l'un de l'autre 0, S ou NH; - A représente l'adénine ou l'un de ses dérivés comme défini ci-dessus; - E est un nombre entier égal à n 1,. n étant un nombre entier supérieur ou égal à 3; - m est un nombre entier égal à O et de préférence supé- rieur ou égal à 2; - X est un nombre entier supérieur ou égal à 1, de pré- férence compris de 2 à 10; - P est un enchaînement polypeptidique comportant au moins 5 acides aminés, et l'atome d'azote appartenant au cycle: 0 A kN appartenant également à l'extrémité d'une séquence laté- rale du polypeptide P et/ou appartenant à un groupe C-NH-N provenant d'un groupe COOH modifié par l'hydra- zine. Un groupe préféré de composés de couplage selon l'invention est constitué par ceux de formule (I): y jr zj C H22 (A T HO O P - |C! 2 L jA N I,,I P - X dans laquelle: - Y et T, identiques ou différents, représentent in- dépendamment l'un de l'autre 0, S, Se ou NH; - Z et W, identiques ou différents, représentent in- dépendamment l'un de l'autre 0, S ou NH; - A représente l'adénine ou l'un de ses dérivés comme défini ci-dessus; - E est un nombre entier égal à n 1, n étant un nombre entier supérieur ou égal à 3; - m est un nombre entier égal à 0 et de préférence supé- rieur ou égal à 2; - X est un nombre entier supérieur ou égal à 1, de pré- férence compris de 2 à 10; - P est un enchaînement polypeptidique comportant au moins 5 acides aminés, et l'atome d'azote appartenant au cycle: appartenant également à l'extrémité d'une séquence laté- rale du polypeptide P. Un autre groupe préféré de composés selon l'in- vention est constitué par ceux de formule (II): 0oi_[ P Z 1 C2 A i0 HO P- W CH2 A 0,- NH I=' C=O x dans laquelle Y, Z, T, W, E, X ont les significations ci-dessus définies, P' représente un enchaînement poly- peptidique comportant au moins 5 acides aminés, et dans lequel le groupe -C-NH-N- représenté sur la figure pro- I 0 vient du groupe -C-OH terminal du polypeptide et/ou d'un II groupe -C-OH libre d'un résidu aspartyle et/ou II O glutamyle. Un groupe préféré de composés de couplage selon l'invention est constitué par ceux de formule (III) sui- vante: A A m) T T (III) 0 N P jX dans laquelle - Y et T identiques ou différents, représentent indépen- damment l'un de l'autre 0, S, Se ou NH; - Z et W, -identiques ou différents, représentent indé- pendamment l'un de l'autre 0, S ou NH; - A représente l'adénine ou l'un de ses dérivés comme définis ci-dessus; - ú est un nombre entier égal à n 1, n étant un nombre entier supérieur ou égal à 3; - X est un nombre entier égal ou supérieur à 1, de pré- férence compris de 2 à 10; - m est un nombre entier égal à 0 et de préférence supé- rieur ou égal à 2; - P est un enchainement polypeptidique comportant au moins 5 acides aminés et dans laquelle le groupe -(CH2)4- représenté dans la formule appartient à la sé- quence latérale d'un résidu lysyle entrant dans la cons- titution de l'enchainement polypeptidique P. Un autre groupe préféré de composés de couplage selon l'invention est constitué par ceux de formule (I), dans laquelle Y, T, Z, W, A, ú, n, X, m ont les signifi- cations ci-dessus indiquées, P est un enchaînement pep- tidique comportant au moins 5 acides aminés et l'atome d'azote appartenant au cycle: A appartient également & l'extrémité de la séquence laté- rale d'un résidu d'arginyle. Un tel groupe de composés peut être représenté par la formule (IV) suivante: - CH2 A HO - #, - 202 A (IV) o_ L ZI CNH. - NH (CH (i 2)3 P X Un groupe préféré de composés de couplage selon l'invention est constitué par ceux de formule suivan- te (V): J- m e un re e g à ed ré c u(V) HO O-, P-0 -CH2 N 0P -X - X est un nombre entier égal à 1 ou, de étatéféomrenc compris de 2 à 10; - P est un enchaînement peptidique comportant au moins 5 acides aminés et dans laquelle le groupe -(CH2)4- repré- p senté dans l a formule appartient à la séquelle - A représente l'adénine ou l'un de ses dérivés comme défini ci-dessus; - [ est un nombre entier égal à n - 1, n étant un nombre entier supérieur ou égal à 3; d'un résidu lysylombre entierant dans la constitutio de prfrene sup- rieur à 2; - X est un nombre entier égal à 1 ou, de préférence compris de 2 à 10; - P est un enchainement peptidique comportant au moins 5 * acides aminés et dans laquelle le groupe -( CH2>4- repré- senté dans la formule appartient à la séquence latérale d'un résidu lysyle entrant dans la constitution de l'en- chainement polypeptidique P. Un groupe préféré de composés de couplage selon l'invention est constitué par ceux de formule suivante: m HO fi (III) HO O-, 5 T HO_ H o N I (CH2) P Jx dans laquelle: - Y et T, identiques ou différents, représentent indé- pendamment l'un de l'autre 0, S, Se ou NH; - Z et W, identiques ou différents, représentent indé- pendamment l'un de l'autre 0, S ou NH; - A représente l'adénine ou l'un de ses dérivés comme définis ci-dessus; - E est un nombre entier égal à n 1, n étant un nombre entier supérieur ou égal à 3; - m est un nombre entier égal à 0 et de préférence supé- rieur ou égal à 2; - X est un nombre entier égal à 1, de préférence compris de 2 à 10; - P est un enchaînement peptidique comportant au moins 5 acides aminés et dans lequel le groupe (CH2)4- représen- té dans la formule appartient à la séquence latérale d'un résidu lysyle entrant dans la constitution de l'en- chaînement polypeptidique P; sous réserve que l'un au moins des éléments Y ou Z est différent de l'oxygène. Une classe préférée de composés de couplage se- lon l'invention est constituée par ceux répondant à la formule (I), (II), (III), (IV) ou (V) ci-dessus définies dans lesquelles A est choisi parmi l'adénine ou ses dérivés, notamment ceux de formule N1I2 NH2 Dans une classe préférée de composés de couplage selon l'invention, le nombre m varie de 1 à 3. Parmi les groupes reliés à la première unité nu- cléosidique, et de formule: y I - P-z - 0 l'un au moins est tel que Y représente Se, S ou NH et/ou Z représente S ou NH, et les autres groupes: Y I - P-z - 1- 0 représentant des groupes phosphate. Dans une classe préférée d'oligonucléotides se- lon l'invention, Y représente S, et Z représente 0. Une classe préférée de composés de couplage se- lon l'invention est constituée par ceux de formule (VI) suivante: y1 y2 y 07 p Z1 - Z2- P - 0 -Ci2 A O O | WI I (VI) - V- 0 2 T !1 011 o--o -vu P dans laquelle - Y1 t Y3, T sont identiques ou différents et repré- sentent 0, S, Se, NH - Z1 et Z2 sont identiques ou différents et représentent 0, S, NH; l'un au moins des éléments Y1, Y2, Y3, Z1, Z2 étant dif- férent de l'oxygène; - E représente un nombre entier égal à n - 1, n étant un nombre entier égal ou supérieur à 3; - X est un nombre entier égal à 1, ou de préférence com- pris de 2 à 10; - A est une base choisie parmi l'adénine ou ses dérivés, notamment ceux de formule '82653 MM4 H tH "N2 T* sWX 142N2 NI2 lO - P est un enchainement peptidique comportant au moins 5 acides aminés et dans lequel le groupe -(CH2)4- repré- senté dans la formule appartient à la séquence latérale d'un résidu lysyle dans la constitution de l'enchaîne- ment polypeptidique. Le phosphore du groupe: y3 - O - sera appelé phosphore alpha. Le phosphore du groupe: Y2 zi - z 2 11 2 o sera appelé phosphore bêta. Le phosphore du groupe: y O - P - z - o sera appelé phosphore gamma. A l'intérieur de la classe de composés de cou- plage de formule (VI), une classe préférée de composés de couplage selon l'invention est constituée par les composés de couplage de formule (VII): n y Iiil II O-P-Z -Z -P - 0 - P - 0 - AH2 00- O- O- (VII) I OH O -P- 0 C ("2)4 1 A L J (CH dans laquelle: - Y1 représente S, Se ou NH; - Z1 représente 0, NH ou S; - E, X, A et P ayant les significations indiquées ci-dessus. Une autre classe préférée de composés de cou- plage selon l'invention est constituée par ceux de formule (VIII) suivante: 0 0 O {I 3y - O P 0 CH2 I I (CH P 2 4 OH 0 P X dans laquelle: - Y3 représente S, Se ou NH; - E, X, A et P ont les significations indiquées ci- dessus. Une autre classe de composés de couplage pré- férés selon l'invention est constituée par ceux de for- mule (IX) suivante: 1 0 0 - ileIl Il O-P-O-P-O- P - O - CH2 A I I I O o- O - 1(IX) IÄ9QO P0 CH 2 LO 0- A -0- i (CH2)4 P dans laquelle: - Y représente Se, S ou NH; - r, X, A et P ont les significations indiquées ci- dessus. Une autre classe préférée de composés de cou- plage selon l'invention est constituée par ceux de for- mule (X) suivante: O O 0 (X) an mO O - Po- .- C2 I (xH)4 I O P- O-e P X dans laquelle: - représente S ou NH; - E, X, A et P ont les significations ci-dessus indi- quées. Une autre classe préférée de composés de cou- plage selon l'invention est constituée par ceux de for- mule (XI) suivante: _ 2 0 -CH2 A - O- O T O - CH2 (XI) i5 dans laquelle: - 2' Y3 et T sont identiques ou différents et repré- sentent O, S. Se, NH; O - Z2 représente O, S, NH; l.'un au moins des éléments Y2, Y3' Z2 étant différent de l.'oxygène; - [ est un hombre entier égal à n - 1, n étant un nombre entier variant de 3 à 10; - X est un hombre entier égal à 1 ou de préférence com- pris de 2 à 10; - A est une base choisie parmi l'ad&nine ou ses dérivés notamment ceux de formule: ( NH!HH) X \ @ t > 'P dans laquelle - y 2, y3 et T sont identiques ou différents et repré- sentent 0, S, Se, NH - Z2 représente 0, S, NH l'un au moins des éléments Y 2, y3, Z2 étant différent de l'oxygène - E est un nombre entier égal à n 1, n étant un nombre entier variant de 3 à 10 - X est un nombre entier égal à I au de préférence com- pris de 2 à 10 - A est une base choisie parmi l'adénine ou ses dérivés notamment ceux de formule NF42 I g A l'intérieur de cette classe de composés de couplage, une classe préférée est constituée par ceux dans lesquels T représente l'oxygène. Une autre classe préférée de composés de cou- plage selon l'invention est constituée par ceux de for- mule (XII) suivante: |o - -P CH2 O T (XII) HO -P-0 - CH2 O (CH2)4 P X dans laquelle: - Y3 représente S, Se, NH; - T représente 0, S, Se, NH; - E est un nombre entier égal à n - 1, n variant 3 à ; - X est un nombre entier égal à 1 ou de préférence com- pris de 2 à 10; - A est une base choisie parmi l'adénine ou ses dérivés, notamment ceux de formule: Mot X X A l'intérieur de cette classe de composés de couplage, une classe préférée est constituée par ceux dans lesquels T représente l'oxygène. Des composés de couplage particulièrement préfé- rés selon l'invention ont pour formule N 0 0 x l o o NH, -O-P-O-P-O-P-oc l o- o- o O- NO o O-- !hI i I (0112)4 P = Polylys -Oine P, 2 1 2N -olysn 2 4H I Nil, (Xiv) HO O--FOfli2, 1 5 iO NU, HO O- (c:2)4 P = Polylysine P Nil, Nt N9 0 0 il R NH2(V -o---P-o-F-o- i O- =-O- -O-P-O I I / I I o. N Il Nil, no -p-oc-H', HO N(xv) HO O-P-OCHI N -O !10 O- F--OCil; (CH2) - P =Polylysine P 2 L'invention concerne également les sels qui peu- vent être obtenus par réaction des susdits oligonucléo- tides avec les bases appropriées, en particulier les sels d'ammoniums quaternaire, tels que le sel de trié- thylammonium, et les sels minéraux, tels que le sel de sodium. L'invention concerne également un procédé de préparation des composés de couplage. Pour préparer les composés de couplage selon l'invention, on peut avoir recours au procédé décrit ci-après. Ce procédé comprend: - l'oxydation du composé de départ de formule (Ibis) suivante: 0P m C (Ibis) T Il HO O- p W - e A OH - OH dans laquelle Y, Z, T, W, A, n, ú ont les significations indiquées cidessus; pour introduire deux fonctions aldéhyde sur les carbones en 2' et 3' de la dernière unité nucléosidique et obte- nir le composé de formule (Iter) suivante: y o.-! - z "CH A?(e) : T S: (Iter) HO 0-P-W ' CH2o A Z lo - l'alcoylation réductive du composé de formule (Iter) par un polypeptide P-NH2 dont l'enchaînement com- prend au moins une séquence latérale dont l'extrémité est un groupe NH2, cette réaction ayant lieu entre les fonctions aldéhyde du composé (Iter) avec le groupe NH2 du polypeptide pour obtenir le composé de formule (I): O (I) T IIH HO -,. - 2 A-H /t O N P X - le fractionnement entre les composés de cou- plage selon l'invention et les produits non couplés, notamment par filtration moléculaire. L'oxydation se fait notamment par le périodate, notamment périodate de sodium, dans des conditions de pH rigoureusement contrôlées pour éviter une bêta élimina- tion. L'expression "conditions de pH rigoureusement con- trôlées" signifie le maintien du milieu réactionnel à pH 4,0, à 0-4'C et dans l'obscurité. L'alcoylation réductive du composé de formule (Iter) se fait par des méthodes classiques telles que celles décrites dans Khym J. C., Biochemistry, 1963, A, 344-350; Gray C., Arch. Biochem. Biophys., 1974, 163, 426-428; Lee R. T. et Lee Y. C., Methods in Enzymol., 1982, 83, 289295; Imai J., Johnson M., Torrence P., J. Biol. Chem., 1982, 21, 12 739-12 741. On peut utiliser notamment le borohydrure de so- dium, ou de préférence le cyanoborohydrure de sodium, pour effectuer l'alcoylation réductive du compo- sé (Iter). Le nombre de molécules d'oligonucléotides dépend des quantités respectives du composés (Iter) par rapport à la quantité du polypeptide. En ce qui concerne la synthèse chimique des com- posés de formule (Ibis), on peut avoir recours soit à une synthèse chimique totale, soit à une synthèse enzy- matique suivie de modifications chimiques. En ce qui concerne la synthèse chimique, on peut se reporter au protocole décrit dans Methods of Enzymology, 79, 1981, 233-234. En ce qui concerne la synthèse enzymatique des composés de formule (Ibis), elle comprend: - la polymérisation du composé de formule (Iquater) suivante: 0- - Z CH2 A O- y_ |]A(Iquater) dans laquelle: - Y représente 0, S, Se ou NH; - Z représente 0, S ou NH; l'un au moins des éléments Y et Z pouvant être différent de l'oxygène; - m est supérieur ou égal à 3; - A a les significations indiquées ci-dessus; pour obtenir un composé de formule suivante (Ibis): 2-[ -Z CH0 {F}C2 A \ /T 1(Ibis) HO O- P - W - CH A 0- OH OH dans laquelle: - Y et T, identiques ou différents, représentent 0, S, Se, NH; - Z et W, identiques ou différents, représentent O, S, NH; l'un au moins des éléments Y et Z pouvant être différent de l'oxygène; - E est un nombre entier égal à n - 1, n étant supérieur ou égal à 3; - m est un nombre entier supérieur ou égal à 1; - A a les significations indiquées ci-dessus. C'est ainsi que pour obtenir l'oligonucléotide de formule suivante (XVI): - IlI - TO o -[ P - * - C U A (XVI) OH 0- P - - CH U A OH OH dans laquelle: - Y et T, identiques ou différents, représentent O, S, Se, NH; - Z et W, identiques ou différents, représentent O, S, NH; - Y et Z ne représentent pas simultanément l'oxygène; - E est un nombre entier variant de 2 à 9; - A est une base choisie parmi l'adénine ou ses dérivés, notamment ceux de formule: NHH óS41,WtH2 Nc2 * 0z5 ! Nx2 NH NH2 X I on effectue les étapes suivantes: 1' la polymérisation d'un composé de formule suivante (XVIbis): 0_ - Z- CH2 A O 4- - z (XVIbis) dans laquelle: - Y représente 0, S, Se ou NH; - Z représente 0, S ou NH; - Y et Z ne représentent pas simultanément l'oxygène; - A a les significations indiquées ci-dessus. Parmi les composés de formule sont disponibles dans le commerce, ceux de formule suivante (XVIbis): 0- P - Z CH2 (XVIbis) 0 -3 dans lesquels Y représente le soufre et Z représente l'oxygène, ainsi que ceux dans lesquels Y représente l'oxygène et Z représente le groupe NH, A représentant l'adénine ou un de ses dérivés comme définis ci-dessus. Un procédé d'obtention des oligonucléotides de formule suivante (XVII): O 0 II ÀO-P'-.O-P-O0-P -0C-H2 A t_ t_ I0_ 0 O- O- O (XVII) OH O- P -0 H2 L o r 0 1 0 OH OH dans laquelle: - Y1 représente NH, Se, S; - E est un nombre entier égal & n - 1, n variant de 3 à 10; comprend la polymérisation du composé de formule suivan- te (XVIIbis): O 0O O P - 0 -P - O - P - O - CH2 A 0 -PO-- -P0.. lO O O (XVIIbis) OH OH Un procédé d'obtention des oligonucléotides de formule suivante (XVIII) S 0 0 O - P - O- P - O -P - O - CH A O O- O- 1 0 0 / i (XVlII) Il HO O - P - O CH 1 A OH OH dans laquelle: - E a les significations précédemment indiquées; - A a la signification précédemment indiquée, et de préférence représente l'adénine; comprend la polymérisation d'un composé de formule suivante (XVIIIbis): s 0 0 -Il Il Il *O P -O - O-- O - CH A L 2 I OH OH Un procédé d'obtention des oligonucléotides de formule suivante (XIX): O O O Il Il Il P z - P - O- H O O O- 0:Of 8H20 (XIX) 10.HO 0 _ p CH2 OH OH dans laquelle: - Z1 représente NH ou S; - E est un nombre entier égal à n - 1, n variant de 3 à ; comprend la polymérisation du composé de formule suivan- te (XIXbis): l00 0 IIII II o -P _ - o- P -o OA ( XIXbis) 0 u O- 0 OH OH dans laquelle Z1 représente S ou NH et A a la signifi- cation indiquée ci-dessus. Un procédé d'obtention d'oligonucléotides de formule suivante (XX): il Il I3 o_ P --0 P -0- CH2 A 1 O (XX) O_ O_ O - OH - P - - CH2 o 0 3I A dans laquelle: - Y3 représente NH, S ou Se; - E et A ont les significations indiquées ci-dessus comprend la polymérisation du composé de formule suivan- te (XXbis) O y Il Il 113 O P -O- O- - P - CH A O O O (XXbis) OH OH dans laquelle: - Y3 représente S, Se, NH; - A a les significations indiquées ci-dessus. EXEMPLE 1 Cet exemple concerne la préparation d'oligonu- cléotides (2'-5 I I S% 0 O - P 0-- P OCH2 lo I 4 îlj1c1 OH O - P | H2 z dans laquelle ú est un nombre entier égal ou supérieur à 2. Le produit de départ est l'adénosine 5'-O-(3- thiotriphosphate) (ci-après nommé yS ATP) de formule: N i $ 0 0 II I i 2 0 \ _ O O' O- 0 - OH OH que l'on polymérise par exemple par voie enzymatique & l'aide d'une préparation partiellement purifiée de 2-5A synthétase, pour obtenir le composé de formule ci-dessus désignée par %S-(2'-5')(A)n. EXEMPLE 2 Cet exemple concerne la préparation du composé de couplage entre un composé de formule ci-après repré- senté et désigné par (2'-5')(A)n et la polylysine pour donner le composé de formule: NH2 l N N k N NH2 O O O N Il Il Il ' O- p P 0P 0 - P - OCH2 / I N O- I O- 0 - 0 P O2 2 O 2 dans laquelle [ est supérieur ou égal à 2 et P re- présente la polylysine. Ce composé de couplage est obtenu à partir du composé (2'-5')(A)n de formule suivante: NH2 'N NH2 il O il - II # 2t O - P - O - P - O - P - OC2 OH 0 P OCH2 I' 1 5 OH OH et de la polylysine. La réaction se fait entre les fonctions aldéhyde obtenue à partir de l'oxydation de la dernière unité nu- cléosidique du composé représenté ci-dessus et les grou- pes NH2 en epsilon des résidus de la lysine. On fait agir 0,6 pmoles de (2'-5')(A)n dans 400 pl sur 0,6 pmoles de I04Na dans 4 pil de tampon acé- tate de sodium 0,1 M à pH 4,75. La réaction d'oxydation est effectuée à l'abri de la lumière, à 0-4*C, pendant une heure. Dans le produit obtenu, il y a eu oxydation à % du glycol du (2'-5')(A)n. On effectue ensuite l'alcoylation réductive par le cyanoborohydrure de sodium. Pour ce faire, on additionne au produit qui vient d'être obtenu ci-dessus 300 pl de cyanoborohydrure de sodium (2 pmoles) dans du tampon phosphate de sodium 0,2 M, à pH 8,0, ainsi que 400 pl de polylysine de poids moléculaire moyen de 14 000 (0,14 pmoles). La réaction se déroule à 20-22'C pendant environ une heure. On purifie ensuite par exemple sur une colonne de gel commercialisé sous le nom de Sephadex G-25. On repère le composé de couplage de l'invention avec la méthode de dosage de Lowry à une densité optique de 260 nm. Le composé de couplage obtenu contient deux mo- lécules de (2'-5')An pour une molécule de polylysine. Le couplage entre les molécules de (2'-5')(A)n et la polylysine peut se faire par tout autre méthode de couplage connue, telle que celle décrite à propos du couplage entre le méthotrexate et la polylysine dans Proc. Nat. Acad. Sci. USA, vol. 75, n' 8, p. 3 867-3 870 August, 1978, Cell Biology. EXEMPLE 2 Cet exemple concerne la préparation d'un composé de couplage entre un composé (2'-5')(A)n et une asialo- glycoprotéine. On rappelle que les glycoprotéines comportent des séquences latérales dont l'extrémité est générale- ment constituée par une galactose et un acide sialique terminal. Par traitement approprié, on peut éliminer l'acide sialique terminal, obtenant ainsi une asialo- glycoprotéine comportant des séquences latérales dont les extrémités sont des galactoses. Ces asialoglycoprotéines sont internalisées très efficacement par les hépatocytes après interaction spé- cifique avec les récepteurs au galactose sur les membra- nes des cellules d'hépatocyte. Cet exemple concerne plus particulièrement le couplage entre l'asialofétuine et un composé de (2'-5')(A)n. Le composé de couplage est obtenu de la façon suivante. L'asialofétuine est disponible dans le commerce, distribuée notamment par la Société SIGMA. On a préalablement transformé les groupes COOH des résidus aspartyle et glutamyle de l'asialofétuine en groupe -NH-NH2, à l'aide d'hydrazine, pour augmenter le nombre de groupes NH2 disponibles. L'asialofétuine ainsi modifiée est appelée asia- lofétuine hydrazide. Pour ce faire, on ajoute 7 pl d'hydrazine pure distillée à 40 mg d'asialofétuine dans 400 pl d'eau, le pH de la solution ayant été ajusté à 4,75 à l'aide d'a- cide, notamment d'HCl O,1N. On verse sur cette solution de la carbodiimide (62 mg dans 100 pl d'eau) goutte à goutte, et on ajuste constamment le pH à 4,75 avec HCl 1N; la carbodiimide est utilisée comme catalyseur pour fixer l'hydrazine sur le carboxyle de l'aspartyle et du glutamyle et pour ob- tenir des aspertate hydrazide et des glutamate hydra- zide. Le composé obtenu est de l'asialofétuine hydra- zide que l'on purifie par gel filtration sur une colonne de Sephadex G-50, tampon acétate de sodium 0,1 M, pH 4,75. A la sortie de la colonne, on récupère l'asialo- fétuine hydrazide, et on effectue le couplage avec le composé de (2'-5')(A)n. Pour ce faire, on ajoute 1 pmole de (2'-5')An dont le dernier nucléoside a été préalablement oxydé par 12 pl d'acide périodique dans les conditions suivantes: solution à 21,4 mg/ml, tampon acétate de sodium 0,1 M, pH 4,75, à l'obscurité, pendant une heure à 4'C. Après la réaction de couplage, on passe le com- posé obtenu sur une colonne de gel filtration G-50 pour éliminer le (2'-5')(A)n non fixé à l'asialofétuine. Le composé de couplage obtenu comporte deux mo- lécules de (2'-5')An pour une molécule asialofétuine. D'autres composés de couplage peuvent être ob- tenus entre notamment à partir d'un composé (2'-5')An de formule indiquée ci-dessus et de tout polypeptide natu- rel ou synthétique susceptible d'interagir avec les ré- cepteurs de la surface cellulaire, par l'intermédiaire. de leurs groupes NH2 situés à l'extrémité de séquences latérales et/ou des groupes COOH modifiés par l'hydra- zine. On peut également obtenir des composés de cou- plage entre un composé de (2'-5')(A)n et une néoglyco- protéine, telle qu'une néoglycoprotéine à mannose, par exemple le mannose-polylysine. Le composé de couplage obtenu est susceptible d'être internalisé spécifiquement par les cellules pos- sédant des récepteurs au mannose, à savoir les macro- phages. Les composés de couplage de ce type permettent ainsi de cibler le (2'-5')An sur les macrophages. On peut également obtenir des composés de cou- plage entre un composé de (2'-5')An et des anticorps (mono ou polyclonaux) dirigés contre des antigènes de la surface cellulaire. Activité Dharmacoloaicue 1 Matériaux Les milieux proviennent d'Eurobio (Paris) et les sérums des Laboratoires Flow. 2 Cellules et virus On maintient des cellules leucémiques murines L1210 en suspension dans un milieu commercialisé sous la désignation RPMI 1640, notamment par les Laboratoires Eurobio, Paris, complété par du sérum de veau foetal à 10 % (v/v), 50 UI/ml de pénicilline et 50 pg/ml de streptomycine. On fait croître des cellules L929 dans un milieu minimal essentiel additionné de 5 % (v/v) de sé- rum de cheval donneur, de 3 g/l de bouillon de phosphate becto-tryptose, 3,4 g/l de glucose et d'antibiotiques comme mentionné ci-dessus. On utilise la souche Indiana du virus de stomatite vésiculaire (VSV) et on la fait pousser dans des cellules L929. 2' Introduction du composé de couplage dans les cellules On laisse incuber les cellules avec les composés de couplage selon l'invention. 3 Essai de l'activité antivirale Les cellules sont infectées à des temps indi- qués, avec du virus de stomatite vésiculaire (VSV) à une - multiplicité de 10 pendant une heure à 37C dans un mi- lieu RPMI 1640 additionné de sérum de veau foetal 5 % (v/v). Les virus non adsorbés sont soigneusement élimi- nés par trois lavages avec du RPMI contenant du sérum de veau foetal à 10 % (v/v). On détermine le titre de virus produit 18 heures plus tard selon les méthodes connues (Stewart W. E., 1970, J. Virol., 6, 795-799). Pour résumer 106 cellules L929 sont mises dans des boites de Petri destinées à la culture de tissus (2 cm de diamètre). 24 heures après l'incubation, on étend 0,05 ml des suspensions de virus diluée (facteur de dilution 50) soigneusement sur la monocouche des cellules. Une heure plus tard, la sus- pension virale est éliminée par succion et on étend 2 ml d'agarose fondu à 1,6 % (v/v) dans un milieu es- sentiel minimum complété par du sérum de veau foetal à 2 % (v/v) sur la monocouche des cellules. Les plaques sont incubées pendant 18 heures dans un incubateur à Co0 2 Les plaques sont ensuite révélées par une solution à 1 % (v/v) de rouge neutre dans une solution saline tamponnée isotonique de phosphate. Résultats concernant la synthèse des Protéines On a déterminé l'effet de l'inhibition de la synthèse des protéines cellulaires par des composés de couplage selon l'invention (en fonction de la dose) après incorporation de méthionine 35S dans les cellules L1210, servant à repérer les protéines synthétisées. On a aussi comparé les effets dose réponse re- latifs aux composés suivants: - mélange de deux composés non couplés entre eux: polylysine et de (2'-5')A40x Red de formule sui- vante: NH, O 0 o il il g NH, 0-P-O-P- O-P-OCH, [N 0/o- HO0- O - POC, I 1 NH 10.0 - o, CH2 CH2 OH OH - (2'-5')A3-polylysine selon l'invention (deux molécules de (2'-5') A3 par molécule de polylysine); NN, _01lopo lot" S l O' O_ Ig Il I l Il O- Ho- o-o-' i0 P-OCHO I-O' N P = Polylysine (CH24 P 2 (2'-5')A4-polylysine selon l'invention (deux molécules de (2'-5')A4 par molécule de lysine) o - À il Nil HO O-FCHI/N P = Polylysine O O--OCH, 00- (CH2)4 _ P -2 Pour ce faire, les cellules sont incubées en présence d'un mélange de polylysine et de (2'-5')A4 Ox Red non couplé, du composé (2'-5')A4polylysine selon l'invention et du composé (2'-5')A3-polylysine. L'incorporation de méthionine S est suivie par le dosage de la radioactivité incorporée après un mar- quage de 30 minutes. Ces résultats apparaissent sur la figure 1 sur laquelle on a représenté en abscisses la quantité en nM de composés testés et en ordonnées, exprimée en 10- 4 cpm la quantité de protéine synthétisée. Le mélange de polylysine et de (2'-5')A4 Ox Red non couplé est représenté par la courbe en pointillés qui porte les ronds noirs. Le composé de couplage (2'-5')A4-polylysine est représenté par la courbe en traits pleins qui porte les ronds blancs. Le composé de couplage (2'-(4)A3-polylysine est représenté par la courbe en traits pleins qui porte les triangles noirs. On constate que le composé (2'-5')A4 0x Red ne modifie sensiblement pas la synthèse des protéines dans les cellules L1210, tandis que les deux composés de cou- plage selon l'invention sont actifs vis-à-vis de l'inhi- bition de la synthèse de protéines. Activité antivirale des composés de couDlaae (2'-5')An- Dolylysine selon l'invention Pour tester l'activité biologique des composés de couplage conformes à l'invention, dans les cellules intactes, on fait incuber les cellules avec les composés de couplage selon l'invention ainsi qu'avec des composés non couplés, pour faire une étude comparative. Le tableau I ci-après est relatif à l'activité antivirale: - du composé de couplage (2'-5')A4-polylysine dont la formule a été représentée cidessus; - du composé de couplage entre le (2'-5')A4 déphosphorylé et la polylysine, ci-après dénommée "core (2'-5')A4-polylysine" de formule: iNHN IOC' H2' HO 0pD-RH,éN I Il NE, HO O-P-OCH, HO E O- -OCI I' (CH2)4 P 2 - du mélange de deux composés suivants: (2'-5')A4 et polylysine; - - du mélange de deux composés suivants: (2'-5')A4OxReddont la formule a été ci-dessus représentée et polylysine. TABLEAU I EFFET ANTIVIRAL DE (2'-5')(A)n COUPLE A LA POLYLYSINE COMPARE A DES MELANGES DE POLYLYSINE ET DE (2'-5')(A) NON COUPLE n Traitement des cellules Concentration en Titre en VSV avec poly lysine (nM) (% du contrôle) Poly lysine 500 100 Poly lysine+2'-5'(A)nox Red 500 100 Poly lysine+(2'-5')A4 500 100. core (2'-5')A4 poly lysine 500 19 (2'-5')A4 poly lysine 500 0,01 (2'-5') A4 poly lysine 180 0,6 (2'-5')A4 poly lysine 100O 5,0 (2'-5')A4 poly lysine 36 100O Les essais dont les résultats ont été rassemblés dans le tableau I ont été effectués comme suit. Des cellules L1210 en suspension sont incubées avec les différents composés aux concentrations indi- quées dans le tableau. Une heure après, les cellules sont infestées avec du virus de stomatite vésiculaire (multiplicité de l'infection = 10) et le rendement du virus est déterminé 18 heures après, par essai de plaques dans des cellules L929. Comme le montre le tableau I, le mélange de po- lylysine et de composé (2'-5')A4 non couplé ainsi que le mélange de polylysine et de composé (2'-5')A40x Red non couplé n'affectent pas la production de virus de stoma- tite vésiculaire. Au contraire, à partir d'une concentration de nM de composé de couplage (2'-5')A4-polylysine de l'invention (qui comporte deux molécules de (2'5')A4 pour une molécule de polylysine), la croissance du virus est réduite de 20 fois, environ 200 fois, 10 000 fois pour des concentrations respectives de 100, 180 et 500 nM de composé de couplage (2'-5')A4-polylysine. Conclusion Les composés de couplage selon l'invention ob- tenus à partir du couplage de (2'-5')An, naturel ou mo- difié et d'un polypeptide porteur approprié, sont des composés actifs visà-vis de l'endoribonucléase L, qui peuvent être internalisés par la cellule et présentent une activité antivirale efficace dans les cellules. L'invention concerne également les sels que les composés de couplage cidessus peuvent former avec les bases en particulier les bases minérales ou organiques. Parmi les sels de base minérale, on préfère les sels de sodium et de potassium. Parmi les sels organiques, on préfère les sels d'amine, d'alcoylamine et d'arylamine, en particulier ceux d'amines secondaires, tels que la diéthylamine, la pipérazine, ou d'amines tertiaires, tels que la méthylamine, la pyridine, la méthylpipéra- zine etc. Parmi tous ceux-ci, les sels physiologiquement acceptables sont préférés. Les sels peuvent être lyophi- * lisés. Les composés selon l'invention ont des proprié- tés biologiquement intéressantes, en particulier des propriétés du type de l'interféron, et plus particuliè- rement une activité antivirale. Les composés selon l'invention sont capables d'activer l'endoribonucléase L, de dégrader l'ARN viral, en empêchant ainsi la synthèse des protéines virales dans les cellules infectées par un virus. Les oligonucléotides selon l'invention sont donc des substituts appropriés de l'interféron et de ses ap- plications connues. Ils peuvent être préparés reproduc- tiblement sous forme hautement purifiée, comme réactifs biologiques, en particulier comme référence de comparai- son dans les essais qualitatifs et quantitatifs, dans les cultures cellulaires, des composés de l'interféron ou d'autres substances semblables & l'interféron. L'invention concerne également les sels pharma- ceutiquement acceptables des composés de couplage défi- nis ci-dessus en particulier ceux appropriés pour l'ad- ministration in vivo. L'invention concerne également les compositions pharmaceutiques associant les susdits composés de cou- plage, de préférence sous la forme de sels pharmaceuti- quement acceptables, avec un véhicule pharmaceutique. L'invention fournit ainsi des compositions pharmaceutiques ayant une activité semblable & celle de l'interféron en utilisant un composé chimique déterminé sous forme de haute pureté, ne présentant pas de toxici- té, étant stable et facile à manipuler. La composition selon l'invention peut être sous forme de préparations administrables par voie orale ou rectale, en utilisant des solides ou des liquides ap- propriés pour un tel type d'administration ou sous forme de préparations injectables stériles contenant au moins l'un quelconque des composés de couplage en association avec des véhicules liquides appropriés stériles, de préférence isotoniques. D'autres formes appropriées de préparations con- sistant en pommades dans lesquelles les composés de couplage de l'invention sont associés avec des véhicules en pommade. L'une quelconque des techniques de préparation classiquement utilisées pour associer l'interféron avec les supports pharmaceutiques peut être utilisée pour- préparer les compositions pharmaceutiques selon l'in- vention. Les compositions de l'invention ont des proprié- tés antivirales et sont en particulier susceptibles d'inhiber les maladies virales susceptibles d'être sui- vies de troubles tumoraux, par exemple les maladies in- duites par les virus de l'hépatite B ou les différentes formes de virus de l'herpès; Plus généralement, les compositions de l'inven- tion sont utiles pour le traitement et-la prévention de maladies virales, et pour les traitements antitumoraux vis-à-vis des tumeurs susceptibles d'être également dé- limitées par les traitements à l'interféron. On notera que les doses auxquelles les composi- tions sont utilisées sont déterminées selon la nature de la maladie qui afflige le patient et les conditions par- ticulières de santé. Les dosages appropriés sont déterminés par le médecin, comme la pratique l'exige dans ces domaines d'application. -REVENDICATIONS 1. Composés de couplage représentés par la for- mule (I) définie ci-dessous: o{Tz}CH2 o z ' P; X dans laquelle: - Y et T, identiques ou différents, représentent in- dépendamment l'un de l'autre O, S, Se ou NH; - Z et W, identiques ou différents, représentent in- dépendamment l'un de l'autre O, S ou NH; - - A représente l'adénine ou l'un de ses dérivés, no- tamment ceux de formule: mIo NHil N NH - E est un nombre entier égal à n 1, n étant un nombre entier supérieur ou égal à 3; - m est un nombre entier égal à O et de préférence supé- rieur ou égal à 2; - X est un nombre entier supérieur ou égal à 1, de pré- férence compris de 2 à 10; - P est un enchainement polypeptidique comportant au moins 5 acides aminés, et l'atome d'azote appartenant au cycle: L0i N appartenant également à l'extrémité d'une séquence laté- rale du polypeptide P et/ou appartenant à un groupe C-NH-N provenant d'un groupe COOH modifié par l'hydra- I o zine. 2. Composés de couplage selon la revendication 1 de formule: [ l - i I o P; X dans laquelle: - Y et T, identiques ou différents, représentent in- dépendamment l'un de l'autre 0, S, Se ou NH; - Z et W, identiques ou différents, représentent in- dépendamment l'un de l'autre 0, S ou NH; - A représente l'adénine ou l'un de ses dérivés selon la revendication 1 - E est un nombre entier égal à n - 1, n étant un nombre entier supérieur ou égal à 3; - m est un nombre entier égal à O et de préférence supé- rieur ou égal à 2; - X est un nombre entier supérieur ou égal à 1, de pré- férence compris de 2 à 10; - P est un enchainement polypeptidique comportant au moins 5 acides aminés, et l'atome d'azote appartenant au cycle: A appartenant également à l'extrémité d'une-séquence laté- rale du polypeptide P. 3. Composés de couplage selon la revendication 1 de formule (II): I. Lu u I-2 A -0 -!- (I) HO,', W - O NH C- O dans laquelle Y, Z, T, W, E, X ont les significations ci-dessus définies, P' représente un enchaînement poly- peptidique comportant au moins 5 acides aminés, et dans lequel le groupe -C-NH-N- représenté sur la figure pro- O vient du groupe -C-OH terminal du polypeptide et/ou d'un Il O groupe -COH libre des résidus aspartyle et/ou II O glutamyle. 4. Composés de couplage selon la revendication 1 de formule (III): /o. ?. (III) 0 inz1 If,--I2 (Ca2) p dans laquelle: - Y et T identiques ou différents, représentent indépen- damment l'un de l'autre 0, S, Se ou NH; - - Z et W, identiques ou différents, représentent indé- pendamment l'un de l'autre O, S ou NH; - A représente l'adénine ou l'un de ses dérivés selon la revendication 1; - E est un nombre entier égal à n 1, n étant un nombre entier supérieur ou égal à 3; - X est un nombre entier égal ou supérieur à 1, de pré- férence compris de 2 à 10; - m est un nombre entier égal à O et de préférence supé- rieur ou égal à 2; - P est un enchaînement polypeptidique comportant au moins. 5 acides aminés et dans laquelle le groupe -(CH2)4représenté dans la formule appartient à la séquence latérale d'un résidu lysyle entrant dans la constitution de l'enchaînement polypeptidique P. 5. Composés de couplage selon la revendication 1 de formule (IV): |- eu2 Adj dan -ll T - A.i C-NH..- 25., NH H2)3 P' X dans laquelle Y, T, Z, W, A, ú, n, X, m ont les signifi- cations indiquées à la revendication 1, P est un enchaî- nement peptidique comportant au moins 5 acides aminés et l'atome d'azote appartenant au cycle: A appartient également à l'extrémité de la séquence laté- rale d'un résidu d'arginyle entrant dans la constitution de l'enchaînement polypeptidique P. 6. Composés de couplage selon la revendication 1 de formule (V): -. 0 (v) nO o-,- 2 I l * | C ( | 2)4;J P dans laquelle: - A représente l'adénine ou l'un de ses dérivés selon la revendication 1; - r est un nombre entier égal à n - 1, n étant un nombre entier supérieur ou égal à 3; - m est un nombre entier égal à 0 et de préférence supé- rieur à 2; - X est un nombre entier égal à 1 ou, de préférence compris de 2 à 10; - P est un enchainement peptidique comportant au moins 5 acides aminés et dans laquelle le groupe -(CH2)4- repré- senté dans la formule appartient à la séquence latérale d'un résidu lysyle entrant dans la constitution de l'en- chainement polypeptidique P.- 7. Composés de couplage selon la revendication 1 de formule suivante: o | Z!8c2 A..' A (III) L j X PZ dans laquelle: - Y et T, identiques ou différents, représentent indé- pendamment l'un de l'autre O, S, Se ou NH; - Z et W, identiques ou différents, représentent indé- pendamment l'un de l'autre O, S ou NH; - A représente l'adénine ou l'un de ses dérivés selon la revendication 2; - E est un nombre entier égal à n 1, n étant un nombre entier supérieur ou égal à 3; - m est un nombre entier égal à O et de préférence supé- rieur ou égal à 1; - X est un nombre entier égal à 1, de préférence compris de 2 à 10; - P est un enchaînement peptidique comportant au moins 5 acides aminés et dans lequel le groupe (CH2)4- représen- té dans la formule appartient à la séquence latérale d'un résidu lysyle entrant dans la constitution de l'en- chaînement polypeptidique P; sous réserve que l'un au moins des éléments Y ou Z est différent de l'oxygène. 8. Composés de couplage selon la revendication 1 de formules suivantes: NH, I I I o o' o- o-% HOO-P- (XIII) -o Nil, P = Polylysine P2 2 ZEN!! 11 Nlll (XIV) il HO-r-OCH,I(x) HO O-P-OC M -O O-p-O (CH2)4 P, Polylysine p 2 Nil, NU -o-P--o-I'-o-r-oc1 101 o -,M X )- ( I H2.)4,_ HO O- P I 1 -o o(xv) I Pol 1ysin e (CH2)4 L P - Polylysine p 2 9. Procédé de préparation des composés de cou- plage selon l'une quelconque des revendications précé- dentes, caractérisé en ce qu'il comprend: - l'oxydation du composé de départ de formule (Ibis) suivante: - 1 -o - zA CH A 0m > T (Ibis) 15.Ho OP -W C A A j.r 0 { O-on O dans laquelle Y, Z, T, W, A, n, r ont les significations indiquées à l'une des revendications 1 à 8; pour introduire deux fonctions aldéhyde sur les carbones en 2' et 3' de la dernière unité nucléosidique et obte- nir le composé de formule (Iter) suivante: O- P - ZCH2 A I (Iter) HO0 o P - W- o H0 O- Haoaoeuo -l'alcoylation réductive du composé de formule (Iter) par un polypeptide P-NH2 dont l'enchaînement com- prend au moins une séquence latérale dont l'extrémité est un groupe aminé, notamment NH2, cette réaction ayant lieu entre les fonctions aldéhyde du composé (Iter) avec le groupe NH2 du polypeptide pour obtenir le composé de formule (I): L O mljW 1 (I) T AIIJ L P,j - le fractionnement entre les composés de cou- plage selon l'invention et les produits non couplés, notamment par filtration moléculaire.