Brevet FR2581543A1 — publié le 19861114

L'insuline est une hormone polypeptidique hypoglycémiante d'un poids noléculaire d'environ 6000 ; elle représente le traitement spécifique de l'hyperglycemie. Secrétée par le pancréas, l'insuline comporte deux chaînes : une chaîne 4 de 21 aminoacides (dépourvue d'aminoacides basiques) et une chaine B de 30 aminoacides (comportant des aminoacides basiques) ; il existe 3 ponts disulfures : 2 ponts interchaines et un pont intrachaine. En solution, compte te-nu de la concentration en insuline, du pH, 2+ de la force ionique et de la quantité d'ions Zn , l'insuline exis- te sous forme de monomères, de dimères, de tétramères ou d'hexamères. Purifiée c'est une poudre amorphe, incolore, assez altérable, soluble dans l'eau acidifiée ou alcaline, dans l'alcool faible ou la glycérine, insoluble dans l'éther, le chloroforme, l'alcool absolu, entièrement soluble dans les solutions de phosphate de soude, elle reste néanmoins insoluble à son pHi = 5s5 5,5. Dialysable, précipitant par les principaux réactifs désalbuminants, ses propriétés ne sont pas altérées par un chauffage modéré à 70du. Elle est plus facilement détruite en milieu alcalin ou acide qu'en solution neutre. Déversée dans la circulation portale, l'insuline atteint d'abord le foie qui en inactive à peu près la moitié : l'insulinémie portale est- très supérieure à celle du sang périphérique, ce qui semble nécessaire pour arrêter le flux hépatique de glucose. Dans le plasma, l'insuline est liée en proportion variable autXptou téines plasmatiques sous forme inactive. L'insuline est détruite par plusieurs organes, notamment le foie et le rein : rupture des ponts disulfures par une insulinase, puis hxdr-ol-f des channes peptidicues. Le problème posé par l'utilisation de l'insuline exogène est dO au fait que "l'insuline est inactive par voie buccale" car détruite par les e-zymes protéolytiques de la digestion ; d'où la nécessité de la \oie parentérale, et l'impossibilité de mimer réellement le pancréas endocrine, car physiologiquement l'insuline atteint d'abord le foie ayant d'être diluée dans la circulation périphérique. La présente invention concerne une technique galénique assurant une protection accrue du principe actif (représenté par l'insuline) et permet de conserver les qualités pharmacologiques lors d'une adminis tration par voie orale. Une phase lipidique est réalisée par dissolution de phospholipides amphiphiles et de lipides neutres dans un mélange de chloroforme et d'éther. La phase aqueuse est conduite en dissolvant l'insuline dans une so lution aqueuse de maltose. Les phases aqueuse et lipidique sont ensuite versées l'une sur l'au tre, tandis que le contenant servant à la préparation est doucement agité. Une fois la phase aqueuse totalement additionnée à la phase orga nique, le contenant est fermé hermétiquement, et le volume d'air piégé est chassé par un flux d'azote. Afin de réaliser une émulsion eau dans l'huile, une agitation vigou reuse du mélange préalablement formé est nécessaire pendant une di -zaine de minutes. Cette émulsion est ensuite placée dans un récipient contenant une solution de maltose plus concentrée que celle utilisée précédemment. Une vigoureuse agitation de quelques secondes permet l'obtention de sphérules de chloroforme et d'éther contenant la solution d'insuline. Une agitation douce, sous courant d'azote, est nécessaire pour préve nir la sédimentation des sphérules. Par un chauffage modéré est réalisée l'évaporation des solvants organiques. tette opération est objectivable par la décroissance de la turbidité de la suspension. Une fois les solvants organiques évaporés, la structure des lipo somes multivésiculaires est constituée. dfin de séparer les substances non envésiculées et les débris lipidisques, une séparation ultérieure soit par dialyse, soit par centri faction est nécessaire. Les liposomes multivésiculaires d'insuline sont ensuite lyophilisés. La lyophilisation ne doit être ni trop rapide, afin de ne pas détruire les structures liposomales ; ni trop lente, afin de ne pas dénaturer le principe actif par augmentation de l'osmolarité. Le lyophilisat résultant est conservé en atmosphère à hygroscopie contrôlée jusqu'à sa répartition en capsules. Les capsules contenant le lyophilisat sont ensuite rendues gastrorésistantes par pelliculages successifs d'une substance non attaquée en milieu stomacal. Cette pratique pharmacotechnique permet de réaliser une préparation insulinique active par voie orale. 1) L'enrobage gastro-résistant permet de soustraire les liposomes multivésiculaires d'insuline au suc gastrique et plus particulière ment à l'action destructive de la pepsine vis-à-vis de l'insuline à ce pH ; le pH optimum d'action de la pepsine étant très bas, aux environs de 2. Dans le milieu intestinal, où le pH est plus élevé, la pepsine n'aura pratiquement plus d'action protéolytique vis-à-vis de 1 'insuline. 2) La lyophilisation des liposomes multivésiculaires d'insuline permet leur mise en forme dans les capsules. I1 est à noter qu'une granulation par voie sèche peut également donner lieu à des comprimés. 3) La réalisation de liposomes multivésiculaires d'insuline est conduite pour de multiples raisons, notamment : la forme liposomale permet tout d'abord de masquer l'insuline aux enzymes protéolytiques destructeurs de la digestion (trypsine, chy motrpsir, entérol-are. ...; eistan au existant au niveau intestinal, donc d'empêcher sa dénaturation les liposomes ont été démontrés comme favorisant la pénétration des polypeptides au travers de la muqueuse intestinale; de plus, ils sont Ielativement stables Lis-à-vis des sels biliaires ; les liposomes multivésiculaires de par leur structure permettent une envésiculation élevée du principe actif, une libération échelonnée dans le temps du principe actif puisque toutes les structures phospholipidiques ne sont pas détruites en un seul instant. La mise en oeuvre des liposomes multivésiculaires d'insuline peut être réalisée à partir de 0,450 mole de phosphatidyléthanolamine, de 0,450 moie de cholestérol, de 0,100 mole de phosphatidylsérine, de 0,100 mole de trioléine dans 100 litres d'un mélange de chloroforme et d'éther en proportion égale ; de 150 grammes d'insuline cristallisée dans 100 litres d'une solution aqueuse de maltose 0,15 M ; et de 500 litres d'une solution aqueuse de maltose 0,20 M. L'enrobage gastro-résistant peut être conduit par pelliculages successifs d'une substance telle que l'acétophtalla-te de cellulose. REVENDICATIONS 15 Procédé de préparation galénique d'une insuline active par voie orale caractérisé par la mise en oeuvre : d'une envésiculation de l'insuline dans des liposomes multivésiculaires assurant la stabilité de l'insuline en milieu intestinal ; d'une lyophilisation de ces liposomes multivésiculaires d'insuline ; d'une répartition du lyophilisat en capsules ; d'un enrobage gastro-résistant de la forme pharmaceutique finale. 2) Procédé, selon la revendication 1, mettant en oeuvre a - pour la formation des liposomes multivésiculaires de 0,450 mole de phosphatidyléthanolamine, de 0,450 mole de cholestérol, de 0,100 mole de phosphatidylsérine, de 0,100 mole de trioléine dans 100 litres d'un mélange de chloroforme et d'éther en proportion égale ; de 150 grammes d'insuline cristallisée dans 100 litres d'une solution aqueuse de maltose 0,15 M ; et de 500 litres d'une solution aqueuse de maltose 0,20 M ; b - une lyophilisation de la préparation liposomale ; c - une répartition du lyophilisat en capsules ; d - un enrobage gastro-résistant des capsules grâce à des pelliculages successifs d'une substance telle que l'acétophtallate de cellulose. 3) Procédé, selon l'ensemble des revendications précédentes, assurant une libération échelonnée de l'insuline dans le temps, étant donné que toutes les structures phospholipidiques constituant les liposomes ne se lysent pas en un seul instant.