Brevet FR2582657A1 — publié le 19861205

La présente invention concerne un nouveau procédé de préparation de sels d'héparine de qualité pharmacopéique. L'héparine a été découverte en 1913 et depuis cette date, elle est largement utilisée en thérapeutique clinique et en prophylaxie. Jusque tout récemment, l'héparine était presque exclusivement utilisée sous forme de sel de sodium et les normes de la pharmacopée concernaient également la qualité de l'héparinate de sodium. Les expériences accumulées au cours de l'application de l'héparinate de sodium pendant plusieurs décennies et les résultats de certains essais cliniques réalisés depuis quelques années montrent cependant que dans certains domaines d'autres sels d'héparine ont des propriétés plus intéressantes. La durée d'activité de l'héparinate de calcium est par exemple4plus longue que celle de l'hépa- rinate de sodium, et l'on peut donc maintenir la dose thérapeutique par une administration moins fréquente d'héparine aux malades; de plus les hémorragies. observées pendant l'administration de l'héparinate de sodium peuvent être évitées en utilisant de l'héparine sous forme de sel de calcium /Kakkar, V.V.: Clinical usage of Heparin. Present and future trends, dir. publ. M. Verstraete, S.J. Machin, Munsgaard, Copenhague, 1980, p. 158; Kakkar V.V.: Heparin chemistry and chemical usage, Academic Press 1976/. On trouve donc de plus en plus de fabricants offrant divers héparinates ne contenant pas le sodium comme cation (p. ex. les héparinates de calcium, magnésium, lithium, potassium, ammonium) dans des buts cliniques et diagnostiques. Selon les procédés connus jusqu'ici le cation sodium de l'héparine était remplacé par un autre cation, soit en mettant en contact une solution aqueuse d'héparinate de sodium directement avec un sel soluble dans l'eau du cation choisi (ci-dessous: processus "réversible"), soit en isolant l'héparine sous forme d'acide libre au moyen d'une résine échangeuse d'ions acide puis en la transformant en le sel désiré (ci- dessous: processus "irréversible"). Dans le processus "réversible" il est pratiquement impossible de remplacer le cation sodium par l'autre cation désiré de manière que le produit contienne moins de 1% en masse de cation sodium. Même si l'on accroît la concentration du nouveau cation, c'est-à-dire si l'on emploie son sel en grand excès, on ne peut déplacer l'équilibre du processus réversible dans le sens de la formation du nouveau sel d'héparine désiré que dans une certaine limite. On peut encore arriver à déplacer l'équilibre en isolant le sel d'héparine "mixte" (c'est-à-dire le sel d'héparine contenant le cation sodium outre le nouveau cation désiré) par précipitation avec un solvant et en répétant encore plusieurs fois le processus. Il est clair que ce mode opératoire en plusieurs étapes est fastidieux, coûteux en main-d'oeuvre et consomme beaucoup de solvant, et que le rendement est - notablement réduit par la multiplicité des traitements. Selon le processus "irréversible" on effectue l'échange de cations au moyen d'une résine échangeuse de cations. Dans la première étape de ce procédé, l'héparine se forme comme acide libre, qui est susceptible de se décomposer et a une activité anticoagulante d'environ 20 à 30% plus faible. Une variante perfectionnée du processus "réversible" est décrite dans le brevet allemand N 2 417 859, dans lequel l'équilibre du processus réversible est déplacé dans le sens désiré non seulement en isolant le sel mixte formé mais aussi en éliminant le cation de l'hépari- nate de sodium de départ par dialyse. Selon ce procédé, on prépare par exemple l'héparinate de calcium en partant de l'héparinate de sodium de pureté pharmacopéique, en ajoutant du chlorure de calcium dans une solution aqueuse d'héparinate de sodium, en agitant le mélange pendant 16 heures puis en dialysant la solution dans un faible volume (300 ml) contre de l'eau désionisée et apyrogène pendant 6 heures. On dilue la solution dialysée à environ deux fois son volume d'origine et on précipite le sel d'hépa4ine "mixte" héparinate de sodium et de calcium) avec un solvant organique. On dissout le produit isolé dans l'eau distillée et on répète tout le processus. L'héparinate de calcium isolé contient moins de 0,1% en masse d'ion sodium et son activité spécifique est approximativement la même que celle du produit de départ. De fait, le procédé est avantageux, car en combinant la préci- pitation avec la dialyse, on peut effectuer l'échange de cations en deux étapes au lieu des traitements multi-étapes antérieurs. Cependant, la dialyse présente plusieurs inconvénients: la durée de réaction est accrue, il y a un plus grand risque de pyrétogénie et d'infection, la dialyse effectuée dans de faibles volumes est peu pratique, et les déper- ditions sont donc accrues. Le procédé ne convient pas pour la purification de l'héparine ou pour accroître son activité spécifique, car déjà le produit de départ est de pureté pharmacopéique. En résumé, selon les procédés connus le cation d'héparinate de sodium est remplacé par un autre cation, soit en utilisant une résine échangeuse de cations, c'est-à-dire par un processus "irréversible" ou soit par la succession de processus "réversibles", o l'on fixe l'état d'équilibre atteint dans les diverses étapes en précipitant le sel "mixte" d'héparine et l'on s'efforce de réaliser encore un déplacement de l'état d'équilibre dans la mesure désirée en partant de cet équilibre fixé. L'objectif de l'invention est de fournir un procédé par lequel - l'échange du cation d'origine de l'héparine est rendu irréversible en préparant un intermédiaire insoluble dans l'eau (sans formation d'acide héparique qui est susceptible de se décomposer), à partir duquel on peut effectuer l'échange de cations quantitativement, en une seule étape, - l'échange de cations peut être conduit non seulement à partir de l'hépa- rine de qualité pharmacopéique, mais aussi à partir de toute solution aqueuse d'héparine obtenue après l'élimination de substances pyrogènes pendant la production d'héparine, et - et qui convient, outre l'échange de cations, pour une purification plus poussée de l'héparine et pour accroître son activité spécifique. On a trouvé de façon surprenante que les cations d'ammonium quaternaires d'halogénures d'ammonium quaternaires classiquement utilisés dans d'autres buts pendant la préparation d'héparine, dans certaines conditions, conviennent également pour l'échange des cations d'héparinates. Etant donné le caractère insoluble dans l'eau du complexe héparine- amine quaternaire, le processus est irréversible et donc l'échange de cations peut s'effectuer quantitativement. L'invention concerne un procédé de préparation de sels d'héparine de qualité pharmacopéique, de préférence d'héparinate de calcium par addition d'une solution aqueuse d'un halogénure d'ammonium quaternaire capable de former un complexe héparine-amine quaternaire à une solution aqueuse d'un héparinate de qualité pharmacopéique ou à une solution aqueuse apyrogène d'héparinate contenant éventuellement des sels de métaux lourds et des fractions héparinoïdes inactives, séparation du complexe héparine-amine quaternaire précipité et son lavage avec de l'eau apyrogène désionisée, et dissolution du complexe héparine-amine quaternaire purifié i) dans une solution aqueuse d'un sel contenant le cation de l'héparinate à préparer, ou ii) dans un solvant organique non miscible à l'eau, et addition à la solution obtenue d'une solution aqueuse d'un sel contenant le cation de l'héparinate à préparer, ou iii) dans un solvant organique non miscible ou miscible de façon restreinte à l'eau, et addition à la solution obtenue d'une solution aqueuse d'un sel contenant le cation de l'héparinate à préparer, et sépa- ration des deux phases, et si on le désire, addition à la phase organique obtenue dans l'étape iii) d'une solution aqueuse d'un sel contenant le cation de l'héparinate à préparer, attente de la séparation des phases, séparation des phases l'une de l'autre et combinaison des phases aqueuses, et si on le désire, purification de la solution obtenue par l'une quelconque des étapes i)-iii), précipitation de l'héparinate désiré par addition d'un solvant miscible à l'eau, et isolement de l'héparinate précipité d'une manière connue per se, L'expression "sels d'héparine de qualité pharmacopéique" est utilisée dans toute la description et les revendications pour désigner des sels d'héparine dont la pureté répond aux normes USP XXI (Pharma- copée américaine - The United States Pharmacopoea XXI). Les termes "sels d'héparine" et "héparinates" se réfèrent à des sels pharmaceutiquement acceptables d'héparine, p. ex. des sels de magnésium, potassium, lithium, ammonium et de préférence calcium (héparinates). Les termes "sels d'héparine" et "héparinates" sont synonymes; ainsi le sel de sodium de l'héparine est identique à l'héparinate de sodium. Dans la première étape du procédé selon l'invention, on ajoute une solution aqueuse d'un halogénure d'ammonium quaternaire se dissociant facilement dans l'eau et formant avec l'anion héparinate un complexe insoluble dans l'eau, à une solution apyrogène de l'héparinate de départ. La solution d'héparinate contient généralement le cation sodium associé à l'anion héparinate, mais d'autres cations et anions peuvent également être présents, selon les étapes technologiques antérieures. Le procédé peut être précisé par l'équation réactionnelle simplifiée suivante: [Hepr + +[Kl+] + n[K2+' + n[A -] Hep(K2)i+ n[l+]+n.[A-] oQ [Hep ll] - anion héparinate, [KX1+3 le cation d'origine de l'héparine (généralement l'ion sodium), [K+] cation ammonium quaternaire formant un complexe insoluble 2 dans l'eau avec l'anion héparinate, [A'] = ion halogénure originellement attaché au cation ammonium quaternaire [K2+] (généralement l'ion chlorure ou bromure), n -=nombre de charges négatives de l'anion héparinate. Comme le complexe héparine-ammonium quaternaire est insoluble dans l'eau, la réaction se déroule quantitativement dans le sens de la flèche. Les autres cations et anions éventuellement présents dans le milieu réactionnel n'ont pas d'influence sur le déroulement de la réaction. On sépare le complexe héparine-amine quaternaire précipité et on le lave avec de l'eau désionisée et apyrogène. Contrairement aux procédés à équilibre lent, dans le procédé selon l'invention l'échange d'ions s'effectue instantanément, et les autres cations peuvent être éliminés par des techniques simples de séparation et de lavage au lieu de la dialyse longue et peu commode. Parmi les sels formant des complexes insolubles dans l'eau avec l'héparine, les halogénures d'ammonium quaternaire, p. ex. le chlorure de cétyl-pyridinium, le bromure de cétyl-triméthylammonium, l'Hyamine R 1622 (chlorure de benzyl-diméthyl-/2-(2-(p-1,1,3,3-tétraméthyl-butyl-phénoxy)- éthoxy)-éthyl/ammonium) et ses dérivés (brevets américains N 2 989 438; 3 058 884; 3 160 563 et 3 342 683) et les halogénures d'ammontum quaternaires décrits dans le brevet hongrais N 188 537 comme le chlorure de carbotétradécyl-oxyméthyl-triméthyl-ammonlum et les composés appa- rentés, se sont révélés les plus appropriés pour les buts de l'invention. On utilise de préférence comme halogénure d'ammonium qua- ternaire un composé de formule (I) ou (II) R - A - (CE2) - R2 x() I (CH2)2 R|B1(CH2)m7Il' -(CH2)2 -N -(CH2)l A D-RD 2VX (CH'2)2 klc, 2, 3 o R est un alcovyle à chaîne droite ou ramifiée ayant de 8 à 18 atomes de carbone, un phényle ou un phényl-alcoyle en C1 à C3, R1, R2 et R3 sont identiques ou différents et représentent un alcoyle à chaîne droite ayant de 1 à 4 atomes de carbone, ou R1 et R2 ensemble forment un groupe pentaméthylène et R3 est un hydrogène, Rn est un hydrogène ou un groupe identique à R, A représente un groupe -O-C- ou -C-O- Il I1l O O Bet D sont identiques ou différents et représentent une liaison de valence ou un groupe identique à A, N est un atome d'azote quaternaire, X est un anion inorganique monovalent, m est un nombre entier allant de 1 à 4, n est un nombre entier allant de 0 à 4. Les halogénures d'ammonium quaternaire ont déjà été uti- lisés dans la préparation de l'héparine mais dans des buts différents, à savoir pour séparer l'héparinate de sodium brut des solutions aqueuses diluées d'organes et de tissus animaux contenant de l'héparine et les isoler. Outre les avantages décrits ci-dessus, l'utilisation d'halogénures d'amine quaternaire est avantageuse car la plupart d'entre eux ont des propriétés bactéricides, et donc lorsqu'on utilise ces composés le risque de réinfection, c'est-à-dire de pyrétogénie, est négligeable par comparai- son avec les autres techniques connues de préparation d'héparinate de calcium. On a trouvé en outre que l'on peut contrôler avec un instru- ment la précipitation du complexe héparine-amine quaternaire, ce qui permet d'accroître l'activité spécifique de l'héparine pendant l'échange d'ions. En mesurant le potentiel d'électrode de la solution aqueuse d'hé- parine avec une électrode en verre combinée, on peut contrôler potentio- métriquement le déroulement de la précipitation, et on peut ajuster à l'optimum la quantité de la solution aqueuse de l'halogénure d'ammonium 0 quaternaire ajoutée. Pendant l'addition de la solution aqueuse d'halogé- nure d'ammonium quaternaire, tout d'abord les fractions ayant une activité anticoagulante élevée précipitent à partir du mélange d'héparine conte- nant de nombreuses fractions, tandis que les fractions inactives sont les dernières à précipiter. En contrôlant la courbe potentiométrique, on peut facilement déterminer le rapport optimal auquel le processus de précipitation doit être terminé pour empêcher la précipitation des fractions inactives. De cette manière, on peut accroître de 10 à 15% l'activité du produit de départ héparinate de sodium ayant une qualité pharmacopéique. A partir des complexes héparine-amine quaternaire, on peut facilement préparer le sel d'héparine désiré par un autre échange de cations irréversible. On peut en effet dissoudre les complexes héparine- amine quaternaire dans des solutions de sel aqueuses, p. ex. dans des solutions aqueuses de chlorure de sodium au moins 2 molaires, et à partir de la solution obtenue on peut isoler le sel correspondant, comme l'hépa- rinate de sodium, par précipitation avec un solvant, car les halogénures d'ammonium quaternaires sont solubles dans les solvants organiques utilisés pour la précipitation. Comme les héparinates se séparent, l'échange d'anions est irréversible. Comme il a été dit ci-dessus, les complexes héparine-amine quaternaire ont été utilisés jusqu'ici simplement pour l'isolement de l'héparinate de sodium brut à partir de solutions aqueuses d'héparinate de sodium, c'està-dire qu'aucun échange d'ions ne s'est produit pendant le processus. On a maintenant trouvé de façon inattendue que par le procédé selon l'invention on peut préparer n'importe quel sel d'héparine désiré à une pureté pharmacopéique, en partant de n'importe quelle solution aqueuse apyrogène d'héparinate contenant un cation différent, p. ex. à partir d'héparinate de sodium on peut facilement obtenir de l'héparinate de calcium de pureté élevée. Si l'échange d'ions est conduit selon la variante i), c'est- à-dire si l'on dissout le sel d'héparine-amine quaternaire dans une solution aqueuse d'un sel contenant le cation désiré, étant donné les concentra- tions élevées de sel une dissolution répétée du sel d'héparine précipité dans l'eau et une autre précipitation avec le solvant organique choisi peuvent être nécessaires pour obtenir le produit avec une pureté satis- faisante. Pour l'élimination complète du composé d'ammonium quaternaire, on lave à fond le produit avec un solvant approprié. On a trouvé que si l'on commence par dissoudre le complexe héparine-amine quaternaire dans un solvant organique classiquement utilisé pour la précipitation d'héparine (p. ex. méthanol, éthanol, acétone) au lieu d'une solution aqueuse concentrée de sel, on peut effectuer l'échange d'ions du complexe héparine-amine quaternaire dissous avec une solution aqueuse de sel considérablement moins concentrée (variante ii)). En choisis- sant convenablement le rapport de solvant, on précipite le sel d'héparine désiré pratiquement sans aucun accompagnement d'impureté de sel inor- ganique. L'halogénure d'ammonium quaternaire doit être éliminé du produit en lavant avec un solvant approprié tout comme dans le cas de la variante précédente. Selon la variante la plus appréciée du procédé de l'invention (variante iii) on commence par dissoudre le complexe héparine-amine quater- naire dans un solvant organique non miscible ou seulement peu miscible à l'eau (p. ex. isopropanol, n-butanol, chloroforme), on conduit l'échange d'ions en ajoutant une solution aqueuse d'un sel contenant le cation désiré à la première solution, on sépare les phases et on précipite le sel d'héparine désiré à partir de la phase aqueuse en ajoutant un solvant organique (p. ex. acétone, éthanol, méthanol). Dans cette variante, l'irréversibilité de l'échange d'ions est déjà assurée par la présence des phases liquides non miscibles, car l'balogénure d'ammonium quaternaire reste dans la phase organique, tandis que le sel d'héparine formé avec le nouveau cation est présent dans la phase aqueuse.' Un grand avantage de ce procédé est que de cette manière le composé d'ammonium quaternaire est éliminé sans aucune étape additionnelle de purification, simplement en séparant les phases. Selon un mode de réalisation préféré du procédé selon l'invention, on ajoute à une solution aqueuse d'héparinate de sodium de pureté pharmacopéique ou à une solution aqueuse apyrogène d'hépari- nate de sodium contenant éventuellement des sels de métaux lourds et des fractions héparinoïdes inactives (concentration d'héparine: 500-10 000 U. I./ml, de préférence 1000-5000 U.I./ml; pH 2-10, de préférence 4-8) une solution aqueuse à 1-20% (p/v), de préférence 5-15% (p/v) d'un composé d'ammonium quaternaire, de préférence l'HyamineR 1622 ou le chlorure de carbotétradécyl-oxyméthyl-triméthyl-ammonium, tout en agitant (U.I. = Unité Internationale). La quantité de sel d'ammonium quater- naire employée est d'environ 1,5 à 3,5 g/105 U.I. Si outre l'échange d'ions on doit également accroître l'activité spécifique, le rapport optimal est déterminé par le procédé suivant: On ajoute une solution aqueuse à 10% (p/v) du sel d'ammonium quaternaire choisi à un échantillon aliquote de la solution aqueuse d'hé- parinate de sodium de départ tout en agitant, en suivant le potentiel d'électrode par une électrode en verre combinée. On fait le graphe du' potentiel d'électrode mesuré en mV en fonction de la quantité de solution de sel d'ammonium quaternaire ajoutée et à partir de la courbe obtenue on déter- mine la quantité de sel d ammonium quaternaire nécessaire pour la précipi- tation de la fraction de l'anticoagulant actif. On peut déterminer le rapport optimal sans connaître la concentration en héparine de la solution aqueuse d'héparine, car le rapport des réactifs peut être exprimé en ml de solution d'ammonium quaternaire utilisée pour le titrage/ml de solution d'héparine. Après la précipitation du complexe héparine-amine quaternaire on centrifuge le mélange et on élimine la liqueur-mère. On met en suspension le précipité centrifugé dans l'eau désionisée apyrogène et on le soumet à une autre centrifugation. Après la centrifugation on dissout le précipité obtenu dans un volume 4 à 10 fois supérieur, de préférence 6 à 8 fois supérieur, d'un solvant organique, de préférence non miscible ou seulement peu miscible à l'eau, comme le chloroforme, l'isopropanol, l'acétate d'éthyle ou de préférence le n-butanol. A la solution organique, de préférence butanolique, on ajoute une solution à 1 à 10% (p/v), de préférence à 2 à 5% (p/v) d'un sel soluble dans l'eau du cation désiré, de préférence contenant l'ion chlorure comme anion en une quantité de 20 à 50% (v/v), de préférence 30 à 40% (v/v). On agite le mélange pendant 5 à 15 minutes, de préférence 15, et on sépare les phases. On filtre la phase aqueuse à travers une plaque de filtre Seitz ou un filtre à membrane et on précipite en ajoutant 50150% (v/v), de préférence 60-80% (v/v) d'un alcanol inférieur miscible à l'eau, p. ex. le méthanol, l'éthanol, ou une alcanone, p. ex. l'acétone. On isole l'héparinate précipité d'une manière en soi connue per se et on sèche. Le produit obtenu répond aux exigences d'USP XXI et contient moins de 0,1% (p/p d'ion sodium. L'invention est précisée en détail à l'aide des exemples non limitatifs suivants. EXEMPLE 1 A partir d'héparinate de sodium de qualité pharmacopéique avant une activité spécifique de 165 U.I./mg on prépare une solution à 4% (p/v) avec de l'eau distillée apyrogène. A 100 ml de la solution on ajoute 165 ml d'une solution aqueuse à 10% (p/v) de chlorure de cétyl- pyridinium tout en agitant. On sépare par centrifugation le précipité obtenu (complexe héparine-amine quaternaire). Le précipité humide obtenu par centrifugation pèse 16,5 g. On met le précipité en suspension dans ml d'eau distillée apyrogène et on centrifuge la suspension. On dissout l'héparinate de cétyl-pyridinium humide obtenu par la seconde centrifugation dans 200 ml d'une solution 2 molaire d'hépa- rinate de calcium tout en agitant. On purifie la solution par filtration et on précipite le sel de calcium d'héparine à partir du filtrat avec % (v/v) d'éthanol. On met en suspension dans l'éthanol le précipité d'héparinate de calcium séparé par centrifu- gation puis on le dissout dans 200 ml d'eau distillée apyrogène. A la solution on ajoute 100% (v/v) d'éthanol tout en agitant. On centrifuge l'héparinate de calcium précipité, on lave avec de l'éthanol puis avec de l'acétone et on sèche. L'activité spécifique de l'héparinate de calcium obtenu est de 162 U.I. /mg, sa teneur en sodium est inférieure à 0,1% en masse et le produit répond aux exigences d'USP XXI. EXEMPLE 2 A 100 ml de la solution d'héparinate de sodium selon l'exemple 1 on ajoute 160 ml d'une solution aqueuse à 10% de bromure de cétyl- triméthyl-ammonium. On sépare le précipité (sel d'amine quaternaire d'hépa- rine) par centrifugation, on le met en suspension dans 40 ml d'eau distillée apyrogène et on centrifuge à nouveau. On obtient 15,8 g d'un précipité humide. On dissout le précipité dans 100 ml d'éthanol, et on ajoute la solution obtenue à 200 ml d'une solution aqueuse 0,5 molaire de chlorure de calcium. On purifie par filtration l'héparinate de calcium obtenu et on ajoute 120 ml d'éthanol au filtrat tout en agitant. On met deux fois en suspension dans l'éthanol le précipité d'héparinate de calcium obtenu, on filtre, on lave à l'acétone et on sèche sous vide. L'activité spécifique de l'héparinate de calcium obtenu est de 167 U.I. /mg, sa teneur en sodium est inférieure à 0.1% en masse et le produit répond aux exigences d'USP XXI. EXEMPLE 3 On suit le procédé décrit dans l'exemple 2 sauf qu'on dissout le complexe héparine-amine quaternaire dans le méthanol au lieu de l'éthanol. L'activité spécifique de l'héparinate de calcium obtenu est de 165 U.I. /mg, sa teneur en sodium est inférieure à 0,1% en masse et sa qualité répond aux exigences d'USP XXI. EXEMPLE 4 On suit le procédé décrit dans l'exemple 2 sauf qu'on dissout le précipité d'héparine-amine quaternaire dans l'acétone. L'activité spécifique de l'héparinate de calcium obtenu est de 161 U.I. /mg, sa teneur en sodium est inférieure à 0,1% en masse et sa qualité répond aux exigences d'USP XXI. EXEMPLE 5 A 100 ml d'une solution aqueuse d'héparinate de sodium préparée selon l'exemple 1 on ajoute 130 ml d'une solution aqueuse à 10% (p/v) R d'Hyamine. On sépare par centrifugation le complexe héparine-amine quaternaire obtenu, on le met en suspension dans 45 ml d'eau et on centri- fuge à nouveau. On dissout le précipité humide dans 110 ml d'isopropanol, puis on ajoute 40 ml d'une solution aqueuse à 10% (p/v) de chlorure de calcium. Après avoir agité vigoureusement pendant 5 minutes, on laisse reposer le mélange. On sépare les phases et on fait passer la phase aqueuse à travers un filtre à membrane, et on précipite l'héparinate de calcium au moyen d'éthanol à 100% (v/v). On centrifuge le précipité d'héparinate de calcium, on le lave à l'éthanol puis avec de l'acétone et on sèche. L'héparinate de calcium obtenu répond aux exigences d'USP XXI, son activité spécifique est de 163,6 U.I./mg, et sa teneur en sodium est inférieure à 0,1% en masse. EXEMPLE 6 On suit le procédé décrit dans l'exemple 5, sauf qu'on dissout le complexe héparine-amine quaternaire dans le n-butanol au lieu de l'iso- i propanol. Le produit obtenu répond aux exigences d'USP XXI, son activité spécifique est de 167,5 U.I./mg, sa teneur en sodium reste inférieure à 0,1% en masse. EXEMPLE 7 On suit le procédé décrit dans l'exemple 5, sauf qu'on dissout le complexe héparine-amine quaternaire dans le chloroforme au lieu de l'isopropanol. Le produit obtenu répond aux exigences d'USP XXI, son activité spécifique est de 165,6 U.I./mg, et sa teneur en sodium est inférieure ] à 0,1% en masse. EXEMPLE 8 On suit le procédé décrit dans l'exemple 5, sauf qu'on forme le précipité au moyen de chlorure de carbotétradécyloxométhyl-triméthyl- ammonium au lieu d'HyamineR 1622, et qu'on dissout le précipité dans le n-butanol au lieu de l'isopropanol. Le produit obtenu répond aux exigences d'USP XXI, son activité spécifique est de 169,3 U.I./mg et sa teneur en sodium est inférieure à 0,1% en masse. EXEMPLE 9 A partir d'héparinate de sodium de qualité pharmacopéique (activité spécifique: 158 U.I./mg) on prépare une solution à 1% (p/v) avec de l'eau distillée apyrogène. On titre 50 ml de la solution avec une solution aqueuse à % (p/v) d'HyamineR 1622, au moyen d'un appareil de dosage Radiometer (type TT 2), en utilisant une électrode en verre combinée. Grâce à cet équipement le potentiel d'électrode exprimé en mV est enregistré en fonction du volume de réactif ajouté (fig. 1). Sur la base de la courbe obtenue le point d'inflexion de la première étape de titrage correspond à 11,45 ml de la solution aqueuse à 10% (p/v) d'HyamineR 1622. Sur la base du titrage on ajoute 229 ml d'une solution aqueuse à 10% (p/v) d'Hyamine R 1622 à 1000 ml de la solution d'héparinate de sodium, tout en agitant. On centrifuge le précipité, on le met en sus- pension dans l'eau apyrogène et on centrifuge à nouveau. On 'dissout le précipité humide dans 250 ml de n-butanol et on ajoute 95 ml d'une solution aqueuse 0,3 molaire de chlorure de calcium à la première solution. Après avoir agité pendant 5 minutes, on laisse reposer le mélange. Après la séparation des phases d'avec la phase aqueuse on précipite l'héparinate de calcium par addition de 100% (v/v) d'éthanol. On c entrifuge le précipité, on le lave à l'éthanol puis avec de l'acétone et on sèche. L'activité spécifique du produit obtenu est de 177 U.I./mg, et sa qualité répond aux exigences d'USP XXI. Le rendement s'élève à 98,9% et la teneur en sodium du produit est inférieure à 0,1% en masse. EXEMPLE 10 On suit le procédé décrit dans l'exemple 9, sauf qu'au lieu d'une solution- de chlorure de calcium on emploie une quantité équivalente d'une solution de chlorure de lithium. L'activité spécifique du produit obtenu est de 181 U.I./mg, le rendement est de 97,8% et le produit contient moins de 0,1% de sodium. On suit le procédé décrit dans l'exemple 9, sauf qu'au lieu de la solution de chlorure de calcium on emploie une quantité équivalente d'une solution de chlorure de magnésium. L'activité spécifique du produit obtenu est de 173 U.I./mg, le rendement est de 99,2% et la teneur en.sodium est inférieure à 0,1%. EXEMPLE 12 On suit le procédé décrit dans l'exemple 9, sauf qu'au lieu du chlorure de calcium on emploie le chlorure d'ammonium. L'activité spécifique du produit obtenu est de 183 U.I./mg, le rendement est de 97,0% et la teneur en sodium est inférieure à 0,1%. EXEMPLE 13 On suit le procédé décrit dans l'exemple 9, sauf qu'au lieu du chlorure de calcium on emploie le chlorure de potassium. L'activité spécifique du produit obtenu est de 174 U.I./mg, le rendement est de 96,8% et la teneur en sodium est inférieure à 0,1%. EXEMPLE 14 A partir d'héparinate de sodium brut contenant 150 -/g d'ions métalliques lourds (produit brut dépourvu de protéine; activité spécifique: 130 U.I. /mg) après l'élimination de substances pyrogénées de façon classique on obtient 200 litres d'une solution aqueuse ayant une activité spécifique de 3250 U.I. d'héparine/ml. A cette solution on ajoute 104 litres d'une solution aqueuse à 10% (p/v) d'Hvamine R 1622. On détermine la quantité requise d'Hyamine R 1622 au moyen du titrage potentiométrique décrit dans l'exemple 9. On centrifuge le précipité obtenu dans une centrifugeuse à sédimentation, après quoi on le met en suspension dans 30 litres d'eau distillée apyrogène et on centrifuge à nouveau. On- dissout le précipité humide dans 90 litres de n-butanol et on ajoute à la première solution 30 litres d'une solution aqueuse à 4% (p/v) de chlorure de potassium. On agite le mélange pendant 5 minutes puis on le verse dans un ballon en verre de 150 litres équipé d'un agitateur et d'un robinet d'écoulement inférieur. Après séparation des phases on élimine la phase aqueuse inférieure et on ajoute à la phase butano- lique 10 litres d'une solution aqueuse à 4% (p/v) de chlorure de calcium. Après avoir agité pendant 5 minutes, on sépare la phase aqueuse et on combine les deux phases aqueuses. On filtre la phase aqueuse combinée et on précipite l'hépa- rinate de calcium dissous en ajoutant 100% (v/v) d'éthanol. On lave le précipité avec de l'éthanol puis avec de l'acétone et on sèche sous vide. On obtient 3760 g d'héparinate de calcium ayant une activité spécifique de 170 U.I./mg. Le produit répond aux exigences posées dans USP XXI, et sa teneur en sodium est inférieure à 0,1% en masse. Si au lieu d'héparinate de calcium on doit préparer un autre héparinate contenant un cation différent, on emploie à la place de chlorure de calcium d'autres solutions de sel de molarité égale. REVENDICATIONS 1. Procédé de préparation de sels d'héparine de pureté pharmacopéique, de préférence d'héparinate de calcium, dans lequel on procède par addition d'une solution aqueuse d'un halogénure d'ammonium quaternaire capable de former un complexe héparine-amine quaternaire à une solution aqueuse d'un héparinate de qualité pharmacopéique ou à une solution aqueuse apyrogène d'héparinate contenant éventuellement des sels de métaux lourds et des fractions héparinodides inactives, séparation du complexe héparine-amine quaternaire précipité et son lavage avec de l'eau apyrogène désionisée, et dissolution du complexe héparine-amine quaternaire purifié i) dans une solution aqueuse d'un sel contenant le cation de l'héparinate à préparer, ou ii) dans un solvant organique non miscible à l'eau, et addition à la solution obtenue d'une solution aqueuse d'un sel contenant le cation de l'héparinate à préparer, ou iii) dans un solvant organique non miscible ou miscible de façon restreinte à 1' eau, et addition à la solution obtenue d'une solution aqueuse d'un sel contenant le cation de l'héparinate à préparer, attente de la séparation des deux phases et séparation des phases l'une de l'autre, et si on le désire, addition à la phase organique obtenue dans l'étape iii) d'une solution aqueuse d'un sel contenant le cation de l'héparinate à préparer, attente de la séparation des phases, séparation des phases l'une de l'autre et combinaison des phases aqueuses, et si on le désire, purification de la solution obtenue par l'une quelconque des étapes i)-iii), précipitation de l'héparinate désiré par addition d'un solvant miscible à l'eau, et isolement de l'héparinate précipité d'une manière connueper se. 2. Procédé selon la revendication 1, dans lequel on ajoute à une solution aqueuse d'un héparinate de qualité pharmacopéique ou d'un héparinate apyrogène contenant éventuellement également des sels de métaux lourds et des fractions héparinoYdes inactives ayant une concentration de 500 à 10 000 U.I./ml, de préférence de 1000 à 5000 U.I./ml une solution aqueuse à 1-20% (p/v), de préférence 5-15% (p/v), d'un halogénure d'amine quaternaire capable de former un sel d'héparine-amine quaternaire, en une quantité de 1,5 à 3,5 g/105 U.I., on sépare le complexe héparine-amine quaternaire précipité formé et on le lave avec de l'eau apyrogène, et on dissout le complexe héparine-amine quaternaire humide centrifugé, purifié i) dans une solution aqueuse 1,5 à 2,5 molaire d'un sel corres- pondant au cation de l'héparinate à préparer, ou ii) dans une quantité de 4 à 10 fois supérieure, de préfé- rence de 6 à 8 fois supérieure, d'un solvant organique miscible à l'eau, et on ajoute à la solution obtenue une solution aqueuse 0,3 à 1,0 molaire d'un sel correspondant au cation de l'héparinate à préparer, ou iii) dans une quantité de 4 à 10 fois supérieure, de préfé- rence de 6 à 8 fois supérieure, d'un solvant organique non miscible ou peu miscible à l'eau, on ajoute à la solution obtenue une solution aqueuse 0,3 à 1,0 molaire d'un sel correspondant au cation de l'héparinate à prépa- rer, on laisse les deux phases se séparer et on les sépare l'une de l'autre, et si on le désire on ajoute à la phase organique obtenue dans l'étape iii) une solution aqueuse 0,3-1,0 molaire d'un sel contenant le cation de l'héparinate à préparer, on laisse les phases se séparer, on les sépare l'une de l'autre et on combine les phases aqueuses, et si on le désire, on purifie la solution obtenue par l'une quelconque des étapes i)-iii), on précipite l'héparinate désiré en ajoutant un solvant miscible à l'eau, et on isole l'héparinate précipité de façon connue per se. 3. Procédé selon la revendication 1, dans lequel on utilise comme halogé- nure d'ammonium quaternaire un composé de formule (I) ou (Il) R1 ( 2 ul 2 X0 (I) R -A - (CH2)m R 2 ( R3 (cHz)2 L 3 (CH2) 2| R-B- (CH2)mN -(CH2)2 -i4 -(CH2) - D-Rn 2ecX (CH2) 2 ou R est un alcoyle à chaîne droite ou ramifiée ayant de 8 à 18 atomes de carbone, un phényle ou un phényl-alcoyle en C1 à C3, R1, R2 et R3 sont identiques ou différents et représentent un alcoyle à chaîne droite ayant de 1 à 4 atomes de carbone, ou R1 et R2 ensemble forment un groupe pentaméthylène et R3 est un hydrogène, Rn est un hydrogène ou un groupe identique à R, A représente un groupe -O-C- ou -C-O- Il Il O O B et D sont identiques ou différents et représentent une liaison de valence ou un groupe identique à A, N est un atome d'azote quaternaire, X est un anion inorganique monovalent, m est un nombre entier allant de 1 à 4, n est un nombre entier allant de 0 à 4 k est 1, 2 ou 3. 4. Procédé selon l'une quelconque des revendications 1 à 3, dans lequel on utilise comme halogénure d'ammonium quaternaire le chlorure de carbo- tétradécyl-oxyméthyl-triméthyl-ammonium en une quantité de 1,0 à 2,0 g/105 U.I. d'héparine, de préférence en une quantité correspondant au point d'inflexion de la courbe de titrage potentiométrique. 5. Procédé selon l'une quelconque des revendications 1 à 3, dans lequel on utilise comme halogénure d'ammonium quaternaire le chlorure de benzyl- diméthyl-/Z-(2-(p-1,1,3,3-tétraméthyl-butyl-phénoxy)éthoxy)éthyl/ammonium (HyamineR 1622) en une quantité de 1,0 à 2,0 g/105 U.I. d'héparine, de préférence en une quantité correspondant au point d'inflexion de la courbe de titrage potentiométrique. 6. Procédé selon l'une quelconque des revendications 1 à 3, dans lequel on utilise comme halogénure d'ammonium quaternaire le chlorure de cétyl- pyridinium ou le bromure de cétyl-triméthyl-ammonium en une quantité de 1,0 à 2,0 g/105 U.I. d'héparine, de préférence en une quantité corres- pondant au point d'inflexion de la courbe de titrage potentiométrlque. 7. Procédé selon l'une quelconque des revendications 1 à 6, dans lequel on dissout le complexe héparine-amine quaternaire humide centrifugé, purifié, dans 20 à 50 ml d'une solution aqueuse 1,5 à 2,5 molaire de chlorure de calcium, par rapport à 1 x 105 U.I. d'héparine. 8. Procédé selon l'une quelconque des revendications 1 à 6, dans lequel on dissout le complexe héparine-amine quaternaire humide centrifugé, purifié, dans une quantité de 4 à 10 fois supérieure, de préférence de 6 à 8 fois supérieure, d'un solvant organique peu miscible à l'eau, de préférence l'isopropanol ou le n-butanol. 9. Procédé selon l'une quelconque des revendications 1 à 6, dans lequel on dissout le complexe héparine-amine quaternaire humide centrifugé, purifié, dans une quantité de 4 à 10 fois supérieure, de préférence de 6 à 8 fois supérieure, d'un solvant organique non miscible à l'eau, de préférence le chloroforme. 10. Procédé selon l'une quelconque des revendications 1 à 6, dans lequel on dissout le complexe héparine-amine quaternaire humide centrifugé, purifié, dans une quantité de 4 à 10 fois supérieure, de préférence de 6 à 8 fois supérieure, de n-butanol, et on ajoute à la solution de à 50%, de préférence de 30 à 40% en masse d'une solution aqueuse 0,3 à 0,5 molaire de chlorure de sodium. 11. Procédé selon l'une quelconque des revendications 1 à 10, dans lequel on précipite l'héparinate formé au moyen d'un solvant organique miscible à l'eau, de préférence un alcanol ou une alcanone. 12. Procédé selon l'une quelconque des revendications 1 à 11, dans lequel on précipite l'héparinate formé avec du méthanol, de l'éthanol ou de l'acétone. 13. Procédé selon l'une quelconque des revendications 1 à 6, dans lequel on détermine la quantité d'halogénure d'ammonium quaternaire requise pour la formation de sel d'amine quaternaire d'héparine par titrage potentio- métrique.