Brevet FR2581069A1 — publié le 19861031

Glycopeptides du type 2-(2-acétamido-2-désoxy-3-0-D- gluco- pyranosyl)-alcanoyl-aminoacyl- nor Leucine ou dérivés de ces glycopeptides et compositions immunoadjuvantes les conte- nant. L'invention est relative à de nouveaux glycopep- tides du type 2-(2-acétamido-2-désoxy-3-0-D-glucopyranosyl)_ alcanoylaminoacyl-substitués, composés qui sont doués de propriétés biologiques et pharmacologiques de grande valeur. Plus particulièrement, l'invention concerne, parmi ces com- posés, ceux qui possèdent des propriétés immunorégulatrices, notamment d'adjuvants immunologiques non spécifiques, ces composés étant aptes, entre autres activités, à renforcer l'activité immunogène d'antigènes ou autres agents immuno- iO gènes naturels ou synthétiques. Par exemple, ces antigènes sont choisis parmi ceux qui sont aptes à promouvoir une activité immunoprotectrice in vivo contre des agents patho- genes. De nombreux dérivés du type 2-(2-acétamido-2- désoxy-3-0-D-glucopyranosyl)-alcanoyl-peptides, souvent désignés par l'expression "muramyl-peptides" et les propriétés immunologiquement adjuvantes qu'ils possèdent sont bien connus. Ils font l'objet de nombreuses publica- tions et de nombreux brevets, auxquels il sera d'ailleurs fait référence dans le cours de cette description. Il exis- te de nombreux analogues actifs, car de nombreuses modifi- cations peuvent être réalisées en diverses parties de leur structure de base, par exemple le noyau glucopyranosyle peut faire l'objet de substitutions diverses sans que les propriétés immunorégulatrices, notamment l'activité immuno- adjuvante, soient perdues. Des observations semblables peu- vent être faites lorsque le premier résidu aminoacyle, le plus souvent alanyle. du groupe peptidique du muramylpeptide est remplacé par un autre résidu aminoacyle. Cependant, il a été considéré jusqu'à ce jour que la structure glutamyle du second aminoacyle de la chaîne peptidique était essen- tielle à la préservation des propriétés immunorégulatrices, plus particulièrement immunoadjuvantes, sans que soient pour autant interdites des variations aux niveaux des sub- stitutions des groupes carboxyle de cette structure. Cependant, les remplacements envisagés jusqu'à ce jour de la structure glutamyle par la structure de base dé- rivée d'un autre acide aminé naturel ont en général été accompagnés par une perte de l'activité. L'invention fournit une nouvelle classe de compo- sés qui échappe à cette règle générale. Les composés modi- fiés de l'invention conservent des propriétés immunoadju- vantes, d'un ordre de grandeur qui peut être semblable à celles de la Nacétyl-muramyl-L-alanyl-D-isoglutamine ou MDP, l'un des représentants les plus significatifs de la classe de muramyl-peptides. En outre, ils sont essentielle- ment dépourvus de propriétés pyrogènes, ce qui n'est pas le cas de tous les muramyl-peptides. Par ailleurs, ils sont mé- tabolisés en dérivés eux-mêmes dépourvus de toute activité immunomodulatoire et de pyrogénicité, ce qui n'est pas le cas pour ce qui est de nombreux muramylpeptides qui s'hydroly- sent facilement en MDP, connu pour présenter une certaine activité pyrogène. Enfin, ils sont sensiblement plus faciles à préparer que les muramylpeptides. Les composés selon l'invention se distinguent pour l'essentiel des muramylpeptides ou de dérivés de muramylpep- tides par la substitution d'un groupe ayant une structure de type nor Leucine au groupe glutamyle des muramylpeptides. Plus particulièrement, l'invention concerne des composés choisis parmi les glycopeptides du type 2-(2-acé- tamido-2-désoxy-3-0-D-glucopyranosyl)-alcanoyl-aminoacyl- norLeucine et les dérivés desdits composés qui possèdent des propriétés immunoadjuvantes. Parmi ces dérivés figurent ceux qui résultent du greffage sur le glycopeptide par cou- plage covalent d'au moins un groupe porteur d'au moins un site antigénique. En particulier, le couplage est réalisé entre le glycopeptide du type 2-(2-acétamido-2-désoxy-3-0-glucopyra- nosyl)alcanoyl-aminoacyl-norLeucine comprenant au moins une fonction carboxyle, ester, alcool, sulfhydryle ou amine, ap- te à intervenir dans le couplage covalent, avec une fonction complémentaire correspondante de la molécule ou de l'agent porteur du site antigénique susdit. Par "groupe porteur d'au moins un site antigéni- que", il faut entendre tout groupe dérivé d'un antigène à- l'égard duquel une production in vivo d'anticorps est re- cherchée. Ce groupe porteur peut être constitué par un anti- gène de poids moléculaire élevé, naturel ou semi-synthétique contre lequel une protection in vivo est recherchée ou dont il convient d'accroître l'efficacité d'induction in vivo de la production d'anticorps orientés contre lui-même. Au titre des antigènes susceptibles d'être pris en considéra- tion dans le cadre de la présente demande de brevet, on mentionnera, par exemple, ceux qui font l'objet du brevet européen 3833 de la société CIBA GEIGY A.G. Parmi "les grou- pes porteurs d'au moins un site antigénique" figurent en- core les haptènes porteurs d'un tel site antigénique et ré- pondant à la définition qu'en donne la demande de brevet européen 89 290 déposée par l'Agence Nationale de Valorisa- tion de la Recherche (ANVAR). Il ne s'agit donc pas seule- ment d'haptènes porteurs d'un site antigénique qui, lorsque ces haptènes sont couplés à un glycopeptide selon l'inven- tion, leur confère la capacité d'induire in vivo des anti- corps protecteurs contre des agents pathogènes déterminés. L'invention s'étend encore au couplage avec les glycopep- tides d'autres haptènes, tels que ceux envisagés dans la - demande de brevet européen 89 290, par exemple des hormones. Les composés préférés selon l'invention sont es- sentiellement caractérisés par la formule générale suivante: R -A R O10 HO R-CH 1 3 CO X MHoe'Y - ès (l 2) z dans laquelle: - R1 est un groupe OH ou un groupe O-C6H4-NH2ou 0-(CH2)m-Ra m étant un nombre entier de 1 à 10, et R étant une fonction amine, carboxyle, thiol, hydroxyle, - A est de l'oxygène ou un groupe NH R6 est de l'hydrogène ou un groupe B ou CO-B dans lequel B est un groupe ou une chaîne linéaire ou ramifiée pouvant comporter jusqu'à environ 100 atomes de carbone, ce groupe B étant encore éventuellement porteur de un ou plusieurs groupements fonctionnels, tels qu'amino, hydroxyle, carbo- xyle, carbonyle, alcoxyle, acyle, cyclopropane, - R est un hydrogène ou un groupe alcoyle comprenant de 1 à 4 atomes de carbone, notamment méthyl, - X est un résidu alanyl, arginyl, lysyl, asparagyl, aspar- tyl, cystéinyl, glutaminyl, glutamyl, glycyl, histidyl, hy- droxyprolyl, isoleucyl, leucyl, méthionyl, phénylalanyl, prolyl, séryl, thréonyl, tryptophanyl, ou valyl; -Y est un groupe OH, NH2 ou, de préférence, OR7 ou NHR7, R7 étant un groupe hydrocarboné pouvant avoir de 1 à 20 ato- mes de carbone ou pouvant être un acide aminé tel qu'indiqué pour X, tel qu'alanyl, séryl, valyl et glycyl, ledit acide aminé étant libre, amidé ou estérifié, le groupe d'estéri- fication pouvant comporter jusqu'à 4 atomes de carbone - Z est un groupe alcoyle comprenant de 1 à 3 atomes de carbone, de préférence -CH3 ou -CH2-CH3. Les composés préférés sont ceux dans lesquels Y est un groupe OR7 ou NHR7, R7 ayant la signification sus- indiquée, et dans lesquels le groupe NH-CH-COY est un dérivé (CH2)3 Z d'un groupe nor Leucine dextrogyre, plus particulièrement d'un groupe D-nor Leucine, dans lequel Z = CH3. A titre d'exemple et pour réaliser l'allongement de la chaîne latérale du deuxième acide aminé (Nle): -NH-CH-CO, on peut avoir recours aux méthodes de synthèse (CH2)2-Z et de résolution de la leucine, notamment celles décrites dans Chemistry of the amino acids. J.P. Greenstein, M. Winitz (J. Wiley Ed. New York, London) 1961. Bien que le premier résidu aminoacyle X puisse être dextrogyre, il est préféré qu'il soit levogyre (sauf dans le cas du résidu glycyle). Des significations particulièrement préférées pour X sont: alanyle, valyle, séryle ou glycyle. Des classes préférées de composés selon l'inven- tion sont celles dans lesquelles Y est OR7, avec R7 étant un groupe alcoyle comprenant de 1 à 10 atomes de carbone, plus particulièrement méthyle, n-butyle ou n-hexyle. R est lui-même de préférence aussi constitué par un groupe méthyle. Dans une série de composés préférés de l'invention, R1 est OH, A de l'oxygène et R6 de l'hydrogène. Ceci étant, d'autres composés préférés sont ceux qui comportent des groupes fonctionnels, notamment du genre de ceux qui permettent leur couplage à d'autres constituants, par exemple, à des groupes porteurs d'au moins un site anti- génique déterminé, et ce notamment par l'intermédiaire d'un groupe R ou B. a Par exemple une classe avantageuse de composés utilisables pour de tels couplages sont ceux dans lesquels A est de l'oxygène et R6 un groupe -CO-(CH2)n-COOH, tel que le groupe succinyle -CO-(CH2)2-COOH, ou le groupe -CO-(CH2)n- NH2, tel que le groupe epsilon-amino-caproyle: -CO-(CH2)6- NHi, n étant un nombre de 1 à 10. Dans d'autres composés préférés de l'invention, les groupes R6 contiennent seuls ou en combinaison avec les groupes qui viennent d'être mentionnés, des chaînes linéai- res ou ramifiées, dont les maillons sont constitués de chai- nes hydrocarbonées, dans lesquelles, le cas échéant, certains des atomes de carbone sont remplacés, de place en place, par des atomes d'azote et/ou d'oxygène, avec notamment pour con- séquence la création de fonctions ester, éther, amido, imi- no, imido, etc. Parmi les éléments avantageusement contenus dans les chaînes B, on mentionnera des résidus aminoacyle, no- tamment des chaînons contenant de 1 à 3 résidus aminoacyle successifs, par exemple, du type lysyle ou alanyle, (ceux-ci pouvant d'ailleurs être remplacés par tous autres aminoacy- les du type indiqué à propos du groupe X), ou encore des éléments glycéryl: -O-CH2-CH(O)-CH2-O- ou glycolyle: -O-CH2-CH2-0-. D'autres groupes B préférés sont formés par des acides gras ou par des chaines telles que ci-dessus défi- nies, elles-mêmes porteuses de ramifications, par exemple par des groupes acylés, notamment des acides gras, lesquels comprennent respectivement notamment de 14 à 30 atomes de carbone, par exemple les groupes palmitoyle. D'autres groupes B préférés contiennent en parti- culier des éléments terminaux représentés par la formule: -OCH2-CHO(R8)-CH20(R9) dans lesquels R8 et R9 sont des groupements acyle comprenant de 14 à 30, notamment, de 16 à 24 atomes de carbone. La préparation des produits selon l'invention peut se faire à partir de l'acide muramique, de ses analogues ou de ses dérivés, lesquels ont en commun la structure ci-après appelée "structure muramique": R6-A 0o X/__R1 CH HOH- NEIHOOCHI COOH dans laquelle A, R, R1 et R6 ont les significations précé- demment indiquées. Des modes de préparation préférés des composés selon l'invention comprennent la fixation d'une chaîne pep- tidique de formule X-NH-CH[(CH2)3-Z]-COY; dans laquelle X, Y et Z ont les significations sus-indiquées, sur la struc- ture muramique par des méthodes traditionnelles dans le domaine de la synthèse des peptides et, le cas échéant, la fixation du groupe -A-R6 sur la position 6 de la struc- ture muramique. Il est alors entendu que les fonctions por- tées par les partenaires de la réaction, et qui n'inter- viennent pas dans celle-ci, auront si besoin été protégées au préalable. Les fonctions protégées sont finalement libé- rées dans les phases terminales de la préparation des compo- sés de l'invention. Les méthodes appliquées à la fabrication des muramylpeptides et décrites dans la littérature anté- rieure et en particulier dans les demandes de brevet fran- çais dont les références sont rappelées plus loin, peuvent également être appliquées à la production des composés se- lon l'invention. S'il y a lieu, la substitution Y est avantageuse- ment réalisée sur le groupe nor Leucine, avant la synthèse de la chaîne. La synthèse de la chaîne formée par le résidu ami- noacyle X et le groupe nor Leucine (ou homologue de celui- ci) sont réalisées suivant des méthodes traditionnelles applicables aux synthèses de peptides. A titre d'exemple, on peut choisir les méthodes d'activation des carboxyles, comme la méthode des esters activés ou celle dite des anhy- drides mixtes, ou bien celle utilisant un composé du type carbodiimide tel que le N,N'-dicyclohexylcarbodiimide ou des carbodiimides équivalents. On trouvera une revue des modes de synthèse peptidique traditionnels dans J.H. JONES, Chemistry and Industry, 723 (1974). On peut aussi se repor- ter aux demandes de brevets français déjà cités ou encore aux demandes suivantes: N 75 29624, 76 06819, 76 06820, 76 06821, 76 21889, 77 02646, et aux articles de LEFRANCIER et al. (Int. J. Peptide Protein Res., 1977, 9, 249 et 1978, 11, 289 et J. Med. Chem. 25, 1982, 87). La formation des dérivés estérifiés ou amides correspondant au groupe Y est obtenue de façon connue. On peut en particulier se reporter aux demandes de brevets français indiqués ci-dessus, et notamment aux demandes N 76 06820, 76 06821, 76 21889 et 77 02646. La synthèse du glycopeptide correspondant est alors complétée par le couplage avec la structure muramique de la chaîne aminoacyle-nor Leucine après libération préa- lable de la fonction amine N-terminale. Cette structure muramique aura elle-même été protégée au préalable. Elle sera par exemple constituée par l'acide alpha-O-benzyl- 4,6-0-benzylidène-N-acétyl-muramique. Les dérivés glyco- peptidiques sont finalement obtenus à l'état libre, après élimination (par hydrogénolyse par exemple) des groupements protecteurs. On décrit ci-après des modes de préparations pré- férés de glycopeptides de formule générale: R6 2O Rl HO NHCOCH3 CH CH3 CO-X-NHCHCOY H2)3 1) Cas dans lequel A est un oxygène: Le produit de départ est un dérivé 4,6-benzyli- dène de l'acide muramique, R1 représentant un radical ben- zyle glycoside (ou d'autres groupes glycosides), préparé comme décrit par Gross et Jeanloz (J. Org. Chem. 1967, 32, 2759). Pour obtenir un composé semblable dans lequel R1 soit un groupement autre que benzyle, on peut utiliser la méthode de préparation d'a ou $-glycosides décrite dans ce même article, ou toute méthode décrite pour de telles préparations en chimie des oligosaccharides. Ces dérivés de l'acide muramique peuvent être couplés avec un dérivé dipeptidique de formule générale H-X-NH-CH- COY, préparés (CH2)3 Z z suivant des méthodes notamment décrites par Lefrancier et al. (Int. J. Peptide Protein Res 1977, 9, 249; 1978, 11, 289; 1979, 14, 437; J. Med. Chem. 1982, 25, 87). Les mé- thodes de couplage utilisées pour obtenir les dérivés gly- copeptidiques sont également 'décrites dans les articles précédemment cités. Cependant, aussi bien dans la synthèse des dérivés dipeptidiques que dans celle des dérivés glyco- peptidiques, toute méthode de couplage connue en synthèse peptidique peut être utilisée. Les dérivés glycopeptidiques subissent une dé- benzylidénation sélective telle que décrite, par exemple, par Merser et al. (Biochem. Biophys. Res. Commun. 1975, 66, 1316). L'acylation sélective de l'hydroxyle primaire, en position C-6 du résidu muramique ainsi libéré, peut alors se faire soit par action d'un anhydride d'un acide carboxylique. Par exemple, dans le cas o R6 est un résidu d'acide succinique, soit par couplage d'un acide carboxyli- que au moyen de toute méthode de conjugaison (formation d'une liaison ester) connue en synthèse peptidique, par exemple, dans le cas o R6 est un résidu d'acide N-benzyl- oxycarbonyl-c-aminocaproique, ou bien un acide gras de na- ture simple (par exemple l'acide palmitique) ou complexe (par exemple acides mycoliques ou acide 1,2-dipalmitoyl- glycérique). Ces mêmes dérivés peuvent être également ob- tenus via une tosylation spécifique de l'hydroxyle en po- sition C-6 du résidu muramyle, telle que décrite notamment par Kusumoto et al. (Tetrahedron Letters, 1976, 47, 4237). Suivant le cas, notamment si R1 est un groupement benzoyle glycoside à éliminer, les glycopeptides sont finalement ob- tenus après hydrogénation catalytique. 2) Cas dans lequel A est un groupement NH. Cette variante a comme produit de départ un dé- rivé 6-azido de l'acide muramique, lui-même obtenu par dé- benzylidénation sélective du dérivé 4,6-benzylidène de l'acide muramique de départ, envisagé dans le cas précédent. Ces dérivés 6-azido sont préparés comme décrit notamment par Hasegawa et al. (Agric. Biol. Chem. 1980, 44, 1309). Par la suite, les synthèses conduisant aux glycopep- tides correspondant à la formule générale pour lesquels A est un groupement NH, sont semblables à celles conduisant aux glycopeptides correspondant à la formule générale pour lesquels A est un oxygène. En fait, ces synthèses compren- nent un couplage avec un dérivé dipeptidique adéquat une hydrogénation catalytique transformant le groupement azido en groupement amino et finalement une acylation par les acides carboxyliques (notamment ceux cités dans la variante précédente). Les composés ayant des propriétés immunoadjuvantes selon la présente invention comprennent les composés déri- vant du couplage entre un glycopeptide de formule I ci-des- sus, dans laquelle A, R, R6, X, Y et Z sont tels que défi- nis ci-dessus, un site particulièrement approprié à ce cou- plage se situant au niveau du groupe Ri, de préférence lorsque R1 représente un groupe 0-(CH2)m-Ra, m et Ra étant tels que définis ci-dessus. Les composés ayant des propriétés immunoadjuvantes selon la présente invention comprennent également les pro- duits dérivant du couplage entre un glycopeptide de formule I ci-dessus, dans laquelle A, R, R6, X, Y et Z sont tels que définis ci-dessus, R1 est un groupe OH et R6 est un groupe B ou CO-B, B étant tel que défini cidessus. Dans ce cas, le site particulièrement approprié à ce couplage se situe au niveau du groupe B. Il va de soi que le couplage peut s'effectuer de toute autre façon appropriée, dès lors que les propriétés immunoadjuvantes des conjugués obtenus seront conservées. En particulier, les différentes variantes des techniques indiquées dans la demande de brevet européen 89 290 pour réaliser le couplage entre un haptène et un muramylpeptide peuvent être transposés dans des conditions semblables à la conjugaison entre les glycopeptides selon la présente invention et des haptènes semblables. Les mêmes observations s'étendent aux procédés de couplage covalent qui ont été désignés dans le brevet européen 3833, pour ce qui est de la réalisation de conjugaisons covalentes entre des antigènes et des muramylpeptides, ces procédés pouvant de la même manière être transposés à la réalisation de conjugaisons entre des antigènes et des glycopeptides con- formes à la présente invention. La description de ces techniques elles-mêmes doit être considérée comme incorporée à la rédaction du présent brevet pour autant que le contenu de ces documents anté- rieurs soit considéré comme nécessaire à la compréhension totale de la présente invention. * Il sera néanmoins rappelé que, de préférence, on aura recours à des procédés tel que celui décrit par FRANTZ et ROBERTSON dans Infect. and Immunity, 33, 193-198 (1981) ou celui décrit dans Applied and Environmental Microbiology, Octobre 1981, vol. 42, N 4, 611-614 par E. KAUFFMAN en utilisant le peptide et la molécule porteuse appropriée. Ces divers procédés mettent en jeu des agents de couplage, particulièrement favorables dès lors qu'il s'agit de réali- ser le couplage entre un antigène ou haptène et un glyco- peptide conforme à l'invention, porteurs respectivement de fonctions chimiques complémentaires telles que celles que l'on rencontre dans la chimie des peptides. Dans la pratique, on utilisera avantageusement comme agent de couplage les composés suivants, cités à ti- tre non limitatif: aldéhyde glutarique, chloroformiate d'éthyle, carbodiimides hydrosolubles [N-éthyl-N'(3-dimé- thylamino-propyl)carbodiimide, HC1], diisocyanates, bis- diazobenzidine, di- et tri-chloro-s-triazines, bromures de cyanogène, benzoquinone, ainsi que les agents de couplage mentionnés dans Scand. J. Immunol., 1978, vol. 8, p. 7-23 (AVRAMEAS, TERNYNCK, GUESDON). On peut avoir recours à tout procédé de couplage faisant intervenir d'une part une ou plusieurs fonctions réactives du peptide et d'autre part, une ou plusieurs fonctions réactives des molécules supports. Avantageuse- ment, il s'agit des fonctions carboxyle et amine, lesquel- les peuvent donner lieu à une réaction de couplage en pre- sence d'un agent de couplage du genre de ceux utilisés dans la synthèse des protéines, par exemple le l-éthyl-3-(3-di- méthylaminopropyl)-carbodiimide, le N-hydroxybenzotriazole, etc. On peut encore avoir recours à la glutaraldéhyde, no- tamment, lorsqu'il s'agit de relier entre eux des groupes aminés respectivement portés par le peptide et la molécule support. D'autres caractéristiques de l'invention apparaî- tront encore au cours de la description qui suit d'exemples préférés de glycopeptides conformes à la présente invention et de leur mode de préparation. On remarquera tout d'abord que, dans ce qui suit, l'on utilisera pour la désignation de ces glycopeptides des écritures abrégées semblables à celles couramment utilisées dans le domaine des muramyl- peptides. En particulier, le groupe 2-acétamido-2-déoxy- 3-O(D-2-alcanoyl-peptides)D-glycopyranose-alcanoyl-peptide est ci-après désigné sous l'expression MurNAC, lorsque R = CH3 et sous l'expression nor MurNAc lorsque R = H. D'autres abréviations utilisées (en sus des abré- viations classiques pour les acides aminés classiques) ont les significations suivantes: (3) Nle:norleucine (4) Me:méthyle (5) Bu:butyle (6) Hex: hexyle (7) BOC:t-butyl-oxycarbonyle (8) Bzl:benzyle (9) Bzi:benzylidène (10) Su:succinyle (11) DMF: diméthylformamide (12) ptz:para-toluène sulfonate Dans ce qui suit, il sera également renvoyé aux références bibliographiques suivantes: 1. ANDERSON G.W., Zimmerman J. E. and Callahan F.M. (1964) J. Am. Chem. Soc. 86, 1839. 2. MERSER C., Sinay Pand Adam A. (1975) Biochem. Biophys. Res. Comm. 66, 1316. 3. OSAWA T. et Jeanloz R.W. (1965) J. Org. Chem. 30, 488. 4. LEFRANCIER P., Derrien M, Lederman i, Nief F, Choay J and Lederer E. (1978). Int. J. Peptide Brotein Res. II 289. - 15 - Mur NAc-L-Ala-D-Nle-NH2 BOC-L-Ala-D-Nle-OMe (I) 572 mg (2mmoles) de BOC-LAla-OSu (1) sont ajoutés à une solution, refroidie à O C, de 400 mg (2,2 mmoles) de D-Nle-OMe, HCl et de 0,24 ml (2,2:noles) de N-methylmorpholine dans 5 ml de DMF. Après une nuit, sous agitation, à température ambiante, le mélange réactionnel est évaporé à sec et le résidu obtenu repris dans l'acétate d'éthyle. La phase organique est successivement lavée avec une solution d'acide citrique 10 %, à l'eau, C avec une solution IN Na HCO3 puis a l'eau; elle est séchée sur Mg S04 filtrée et concentrée à sec. (I) est précipité dans le mélange de solvants ether de pétrole-éther: 41D mg (65 %). Fc 107.110 - [ - 6,8 (c = 1, méthanol). Anal. calculé pour C1PH2805N2 (316,40): C 56,94 - H 8, 92 - N 8,E5 Trouvé: C 56,68 -' H 9,13 - N 8,76 - BO-L-Ala-D-Nle-NH2 (I) mg (0, 63 mmoles) de (I) sont ajoutés à une solution saturée en ammoniac, de méthanol. Apres 48 heures à température ambiante, le mélange réactionnel est concentré à sec et (II) précipité dans le mélange de solvants acétate d'éthyle-hexane: 166 mg (87 %).Fc 160-1 - [ -l -14,50 (c = 1, méthanol). Anal. calculé pour C14H27N403 (301,39) C 55,79 - H 9.03 - N 13,94 Trouvé: C 55,55 - H 9,17 - N 13,72 -16 - Mur NAc-L-Ala-D-Nle-NH2 (III) 301 mg (1 mole) de (II) sont traités pendant 30 mn par 3,6 ml d'une solution HéI 1 N. dans l'acide acétique. Le mélange réactionnel est con- centré i sec, et le résidu obtenu [L-Ala-D-Nle-NH2 HCl1 directement utilisé en solution dans 5 ml de DMF. 377 mg (0.8 immoles) de Mur NAc (([Bzl-4,6-O-Bzi). (2) sont dissous dans 5 ml de DMF. A cette solution, sont successivment ajoutés à - 15', 0,08 ml (0,8 mmoles) de N-méthylmbrpholine et 0,10 ml (0,8:noles) de chlorocarbonate d'isobutyle, puis, apres 3 mn, la solution de L-Ala-D-Nle- NIH2, HCl, dans le DMF, aditionnée de 0,11 ml (1 mrole) de Nméthylmorpholine. Après 4 heures à - 15 C, le mélange réactionnel est additionné de 1 ml d'une solution 2,5 M de KHC03, à 0 C. Apres 30 mn, le produit (IIIa) est précipité par addition d'eau. Il est filtre, lavé à l'eau et desséché en présence de P205 sous vide: 384 mg (733 %) Fc 281-290' - -30,8' (c = 1, acide acétique glacial). mg (0,3 mmole) de (IIIa) sont dissous dans 15 ml d'acide acétique glacial et hydrogénés pendant 10 heures, en présence de 200 mg de palladium ' sur charbon. Le mélange réactionnel est filtre, concentré à sec. (III) est obtenu après 2 recristallisations dans le mélange de solvants méthanolacetone: 70 mg (49.3 %). Fc 220 C- + 47' (c = 1, acide acétique glacial). -17 - Mur NAc-L-Ala-D-Nle-OMe D-Nle-OMe, HCl (I) 1,17 g (8,9 mmoles) de DNle sont dissous dans 3,5 ml de méthanol absolu. A - 15 C, 0,8 ml (11 mmoles) de chlorure de thionyle sont ajoutés goutte à goutte. Apres 2 heures à 40 C, le mélange réactionnel est concentré à sec. (I) est obtenu après précipitation dans méthanol-ether: 1,316 g (81 ). Fc 138.9 - L I3z - 23 (c = 1. méthanol) Anal.calculé pour C7H16 No2CI (181,165): C 46,28 - H 8,37- N 7,71 Trouvé: C 46,19 - H 8,62 - N 7.57 - 0 BOC-L-Ala-D-Nle-OMe (II) 1,04 g (5,5 mmoles) de BOC-L-Ala sont dissous dans 5 ml de DMF. A cette solution refroidie à - 15 C, sont successivement ajoutés 0,605 ml (5,5 mmoles) de N-methylformamide, 0,715 ml (5,5 mmoles) de chlorocarbonate d'isobutyle, puis, après 3 min, 838 mg (4,6 mmoles) de (I), en solution dans 5 ml de DMF, contenant 0,55 ml de Nmethylmorpholine. Après 4 heures 'à - 15 C d'une solution KHCO3 2,5 M sont ajoutés au mélange réactionnel, qui après 30 min, est dilué à l'eau, extrait à l'acétate d'éthyle. La pose organique est succes- sivement lavée à l'eau, avec une solution KHSO4 5 I à l'eau, avec une solution NaHCo3 M, à l'eau, puis séchée sur Mg S04, filtrée, concentrée à sec: 1, 38 9. (II) est purifié sur colonne de silice à l'aide du mélange de solvants chloroforme-acétate d'éthyle 4-1 (v-v): 1,31 g (90 %) (Il est obtenu sous forme d'huile). Anal. calculé pour C15H28N205 (316.403): C 56,94 - H 8.92 - N 8,85 - Trouvé: C 56.99 - H 8,37 - N 8,90. _ 18_ Mur NAc-L-Ala-D-Nle-OMe (III) 1,31 g (4,15 mmoles) de (II) sont traités pendant 30 min par 12,45 ml d'une solution d'HCl 1 N dans l'acide acétique glacial. Le mélange réactionnel est concentré à sec et le résidu obtenu (L-Ala-D-Nle-OMe-HCl) est directement utilisé en solution dans 10 ml de DMF. 2,23 g (4,73 mmoles) de MurNAc ({i-Bzl-4,6-0-Bzi) (3) sont dissous dans 10 ml de DbF. A cette solution,refroidie à - 15 C, sont successivement ajoutés 0,52 ml (4,73 mmoles) de N-méthylmorpholine, 0,615 ml (4,73 mmoles) de chlorocarbonate d'isobutyle, puis, après 3 min, la solution de l'Ala-DNle- io OMe, HCl, en solution dans le DMF, contenant 0,473 ml (4,15 mmoles) de N-méthyl- morpholine. Apres 4 heures à - 15 C, 4,7 ml d'une solution YKHCO3 2,5 M sont ajoutés au mélange réactionnel qui, après 30 min, est dilué à l'eau. (III a) précipite, est lavé à l'eau, séché sous vide, en présence de P205. Il est obtenu après cristallisation à partir du méthanol: 2,71 g (97 Z). r[] t = + 67.7 (c = 1, acide acétique glacial). Anal. calculé pour C35H47N3010 (669,78): C 62,76 - H 7.07 - N 6,27 - Trouvé: C 62,73 - H 7. 05 - N 6.18 2,7 g (4,04 mmoles) de (III a) sont dissous dans 100 ml d'acide acétique glacial, et hydrogénés pendant 40 heures en présence de 1 g de palladium 5 % sur charbon. Le mélange réactionnel est filtré, concentré à sec. (III) est purifié sur colonne de silice, à l'aide du mélange de solvants chloroforme- méthanol 6-1 (v-v) puis sur colonne de AG 50 W X 2, diluée à l'eau. Le produit est obtenu sous forme lyophilisé: 1,24 g (62 %). [.)-+ 35,3 (c = 1, acide acétique glacial) Anal. calculé pour C21H37N3010 (491.55): C 51.31 - H 7.59 - V 8,55 - Trouvé: C 51.00 - H 7.94 - N 8,32 Mur NAc-L-Ala-D-NleOnBu BOC-L-Ala-D-Nle-OH (1) 607 mg (2,4 mmoles) de BOC-L-Ala-OSu (1) sont ajoutés à une solution, refroidie à 0 C, de 234,3 mg (1,79 mmoles) de NNle dans 8 ml de DMF contenant 0,22 ml (2 mmoles) de N-méthylmorpholine. Après 24 heures à température ambiante 0,052 ml (0,4 mmnole) de DMAPA sont ajoutés au mélange réactionnel qui est, après 1 heure, concentré à sec. Le résidu obtenu est dissous dans l'acétate d'éthyle, puis lavé successivement par une solution HCl 2M refroidie à O' et à l'eau jusqu'à pH neutre. La phase organique est séchée sur Na2SO4 puis concentrée à sec. (I) est Drécipité dans le mélange de solvants acétate d'éthyle-hexane: 268 mg (50 ").Fc 104-6 C - -:- 21 (c = 1, méthanol). Anal. calculé pour C14H26N205 (302,37) C.55,61 -H 8,67- N 9,26. Trouvé: C 55,3 - H 8,34 - N 8,89. BOD-L- Aia-D-Nle-OnBu (II) :5 340 mg (1,1 mmoles) de (I) sont dissous dans 4,5 ml de méthanol et 0,5 ml d'eau. Une solution 20 % de C5C03 est ajoutée jusqu'à obtenir un pH de 7. Le mélange est concentré à sec, le résidu repris dans 5 ml de DMF, qui est évaporé sous vide (trois fois successivement) pour être finalement dissous dans 3 ml de DMF. La solution est additionnée de 0,135 ml (1,2 mmoles) de bromure de n butyle. Apres 24 heures, le mélange réactionnel est concentré à sec; le résidu obtenu est repris dans l'acé- tate d'éthyle et lavé successivement avec une solution d'acide citrique %, à l'eau, avec une solution NaHCO3M, à l'eau, puis séché sur MgsO4. _20 _ La phase organique est filtrée, concentrée à sec (II) est obtenu sous forme d'une huile: 403 mg (100 %) Mur ilac-L-Ala-D-NLe-On Bu (III) 403 mg (1,12 mmoles) sont traités pendant 30 min par 3,4 ml d'une solution d'HCl N dans l'acide acétique glacial. Le mélange réactionnel est concentré à sec et le résidu obtenu (L-Ala-D-Nle-On Bu, HC1) directement utilisé, en solution dans 5 ml de DMF. 471 mg (1 mnole) de Mur NAc' (o'- Bz1-4,6-0-Bzi) 3) sont dissous dans 5 ml de DMF. A cette solution refroidie à - 15 C, sont successivement ajoutés 0,11 ml (1 mmole) de N-méthylmorpholine et 0,13 ml (1 mmole) de chlorocarbonate d'isobutyle, puis après 3 minutes, la solution de L-Ala- D-Ele-On C4H9, HCl dans le DMF, additionnée de 0,123 ml de N-méthylmor- pholine. Apres 4 heures à - 15 et une nuit à température ambiante, sous agitation, 2 ml de NaHCO3 sont ajoutés, puis après 30 min, (IIIa) est -5 précipité par addition d'eau, puis lavé à l'eau et desséché en présence de P205: 690 mg (97 %).Fc 218:221 C - + 90 (c = 1, DMF). 585 mg (0,8 mmoles) sont dissous dans 15 ml d'acide acétique glacial, et hydrogénés pendant 40 heures, en présence de 585 mg de Pd 5 % sur charbon. Le mélange réactionnel est filtré puis concentré à sec: 491 mg. (III) est purifié sur colonne de silice, à l'aide du mélange de solvants chloroforme-acétone, 20-5 (v-v): 595 mg (88 %) Fc 217-220 C - L + 92,7 (c = 1,DMF). 585 mg (0,8 mmoles) sont dissous dans 15 ml d'acide acétique glacial, et hydrogénés pendant 40 heures, en présence de 585 mg de Pd 5 % sur charbon. Le mélange réactionnel est filtré puis concentré à sec: 491 mg. (III) est purifié sur colonne de silice, à l'aide du mélange de solvants chloroforme-méthanol-acide acétique 60-15-2 (v-v), puis lyophilisé: 383 mg (65 e). wj2- + 35,3 (c = 1, acide acétique glacial). Anal. calculé pour C24H43N3010; 0,5 CH3 COOH, 1H20(581,64): C 51,62 - H B,14- N 7.22 Trouvé: C 51,56 - H 8,17 - V 7.30- / / / _ 22'_ Mur NAc-Gly-D-Nl e-On-Bu D-Nle-On Bu, Pts (I) 1,171 g (8,9 mmoles) de DNle, 2 g (10,5 mmoles) du monohydrate de l'acide p-toluene sulfonique et 10 ml de n-butanol, en solution dans le benzene sont chauffés à reflux. Apres contrôle en chronatographie sur couche mince de gel de silice (chloroforme-mèthanol 4-1 v-v), le mélange réactionnel est concentré à sec. (I) est purifié sur colonne de silice, à l'aide du mélange de solvants chloroforme-méthanol 6-1 (v-v), et obtenu sous forme lyophilisé: 2,55 g (80 C). Anal. calculé pour C17H29N05S (359,49): C 56,80 - H 8,13 - N 3,90 - Trouvé: C 55.00 - H 8,08 - N 4,3. BDC-Gly-D-Nle-On Bu (iI) 350 mg (2,2 mmoles) de BOC-Gly sont solubilisés dans 5 ml de DMF. A.cette solution refroidie à - 15'C sont ajoutés successivement 0,245 ml (2,2 mmoles) de chlorocarbonate d'isobutyle, puis, après 3 min, 691 mg -; (1,92 moles) de (I) en solution dans 5 ml de DMF, contenant 0,22 ml (2 mmoles) de N-mèthyimorpholine. Apres 4 heures à - 15' C, le mélange réactionnel est additionné de 2,2 ml d'une solution à 2,5 M KHCO3, puis après 30 min dilué à l'eau et extrait à l'acétate d'éthyle. La phase orga- nique est lavée à l'eau, avec une solution de KH S04 5 %, à l'eau, puis après séchage sur Mg S04 et filtration, concentré à sec. (II) est purifié sur colonne de silice, à l'aide du mélange de solvants chloroformeméthanol 0 -1 (v-v) et est obtenu sous forme d'huile. Anal. calculé pour C17H32 N205 (344,46). C 59,28 - H 9,36 - N 8,13 - Trouvé C 59.03 - H 9,36 - N 7,96 _ 23 _ Mur NAc-Gly-D-Nle-On Bu (III) 400 mg (1,16 mmoles) de d'HCl N dans l'acide acétique glacial, pendant 30 min. Le mélange réac- tionnel est concentré à sec et le résidu obtenu (Gly-D-Nle-On Bu, HCl) utilisé directement, en solution dans 5 ml de dimethyl-formamide. 625 mg (1,33 mmoles) de Mur NAc ( Gly-D-Nle-On Bu, HCl dans le DMF, contenant 0,133 ml (1,21 mmoles) de Nméthyl- morpholine. Apres 4 heures à - 15 , 1,3 ml d'une solution 2,5 M KHC03 sont additionnés au mélange réactionnel qui, après 30 min, est dilué à l'eau. (III a) précipite, est lavé à l'eau et desséché en présence de P205 sous vide. Il est purifié sur colonne de silice, à l'aide du mélange de solvants chloro- forme-acetone 18-5 (v-v) et obtenu par cristallisation à partir du méthanol: 572 mg (53 '). Fc 212-3 l- [2+ 82,5 (c = 1, acide acétique glacial). Anal. calculé pour C37H51N3010 (697,84). C 63,68 - H 7,37 - N 6,02 Trouvé C 63,15 - H 7.22 - N 5,96 - 572 mg (0.82 mmoles) de (III a) sont dissous dans 50 ml d'acide acétique glacial et hydrogénés en présence de 300 mg de Pd 5 % sur charbon pendant 40 heures. Le mélange réactionnel est filtré, concentré, lyophilisé. (III) est purifié sur colonne de silice, à l'aide du mélange de solvants chloroforme- méthanol-acide acétique 6-1-0,2 (v-v) v sur colonne d'AGIOW X 2 dilué avec le mélange de solvants DMF-eau 1-1 (v-v). Il est obtenu sous forme lyophilisé 314 mg (72.5 %).]- + 54,3 (c= 1, acide acétique glacial) 24 - Anal. calculé pour C23H41N3010 (519,60): C 53,17 - H 7,95 - N 8,08 - Trouvé-: C 53,13 - H 7.80 - N 7,73. _ 25 _ Mur Nac-L-Val-D-Nie-On Bu D-Ni e-On Bu, pts {I) 1,171 g (8,9 m.moles) de D-Nle, 2 g (10,5 mmoles) du monohydrate de l'acide p-toluène sulfonique et 10 ml de n-butanol, en solution dans le benzène sont chauffés à reflux. Apres contrôle en chroatographie sur couche mince de gel de silice (chloroforme-méthanol 4-1 v-v), le mélange réactionnel est concentré à sec. (I) est purifié sur colonne de silice, à l'aide du mélange de solvants chloroforme-méthanol 6-1 (v-v), et obtenu sous forme lyophilisé: 2,55 g (80 %'). Anal. calculé pour C17H29N05S (359,49): C 56,80 - H 8,13 N 3,90 - Trouvé: C 55.00 - H 8,08 - N 4,3 BOC-L-Val-D-Nle-On-Bu (Il) 478 mg (2,2 mmoles) de BOC-L-Val sont dissous dans 5 ml de DMF. A.cette solution refroidie à - 15 C sont successivement ajoutés 0,242 ml (2,2 mmoles) de chlorocarbonate d'isobutyle, puis, après 3 min, 691 mg (1, 9 mmoles) de(I) en solution dans 5 ml de DMF, contenant 0,22 ml (2 mmoles) de N-méthylmorpholine. Après 4 heures à - 15 , 2,2 ml d'une solution de KHCO3 2,5 M sont ajoutés au mélange réactionnel qui, après 30 min, est dilué à l'eau et extrait à l'acétate d'éthyle. La phase organique est lavée à l'eau, avec une solution KH SOy 5 %, à l'eau, puis séchée sur Mg SOu, filtrée et concentrée à sec: 762 mg. (II) est purifié sur colonne de silice; à l'aide du mélange de solvants chloroforme-acétate d'éthyle 35-1 (v-v). _ 26 _ Il est obtenu sous forme d'huile: 641 mg (86 /). Anal. calculé pour C20H38N205 (386,54): C 62,15 - H 9.90 - N 7,25 - Trouvé: C 62,19 - H 9.40 - N 7.11 Mur NAc-L-Val-D-Nle-On Bu (III) 626 mg (1,62 mmoles) de (II) sont traités pendant 30 min par 4, 9 ml d'une solution d'HCl IN dans l'acide acétique glacial. Le mélange réac- tionnel est concentré à sec et le résidu obtenu (L-Val-D-Nle-On Bu- HCl) utilisé directement, en solution dans 5 ml de DMF. 872 mg (1,85 mmoles) de Mur NAc (e-Bzl-4,6-0-Bzi) (3) sont dissous dans 5 ml de DMF. A cette solution refroidie à - 15 C sont successivement ajoutés 0,204 ml (1,85 mmoles) de N-méthylmorpholine, 0.240 ml (1,85 mmoles) de chlorocarbonate d'isobutyle, puis, après 3 min., la solution de L-Val- D-Nle-On Bu-HCl dans le DMF, contenant 0,185 ml pholine. Apres 4 heures à - 15- C, 1,8 ml d'une solution KHCO3 2,5 M sont ajoutés au mélange réactionnel qui, après 30 min, est dilué à l'eau. (IIIa) précipite, est lavé à l'eau et desseché en présence de P205 sous vide: 904 mg (78 %) Fc 226 - 7 C. LL = + 67,7 (c = 1. acide acétique glacial). Anal. calculé pour C40H57N3010 (739,917): C 64,93 - H 7,76 - N 5,68 - Trouvé: C 64,73 - H 7.78 - N 5,62 904 mg (1,22 mmoles) de (IIIa) sont dissous dans 50 ml d'acide acétique glacial et hydrogénés pendant 40 heures, en présence de 460 mg de palladium % sur charbon. Le mélange réactionnel est filtré, concentré à sec,' lyophilisé: 723 mg. _27 _ (IlIi) est purifié sur colonne de silice, à l'aide du mélange de solvants chloroforme-méthanol-acide acétique 7-1-0,5 (v-v), puis sur colonne de AG 50 W X 2, diluée avec le mélange de solvants DMF - eau = 1-1 (v-v). No Il est obtenu sous forme lyophilisee: 558 mg (91 %) CbJ3 + 210 (c = 0. 4 acide acétique glacial). Anal. calculé pour C26H47N3010 (551,68) C 55, 59 - H 8,42 - N 7.43 - Trouvé: C 55,95 - H 8,21 - N 7.53 On- peut obtenir e la même faCon des dérivés alv:opeotidim2es dans lesquels X aura une autre signification er partant se. acides aminés correspondants BOC-L-X-Nle-Y, dans lesquels i X et Y ont les significations sus-indiquées. 28 _ Mur NAc-L-Ala-D-Nle-On Hex BOC-L-Ala-D-Ntle-OH (I) 607 mg (2,4 mmDles) de BOC-L Ala-OSu (1) sont ajoutés à une solution, refroidie à 0 C, de 234,3 mg (1,79 mmoles) de N-Nle dans 8 ml de DMF D contenant 0,22 ml (2 mmoles) de N-m éthylmorpholine. Apres 24 heures, à température ambiante 0,052 ml (0,4 mmole) de DMAPA sont ajoutés au mélange réactionnel qui est, après une heure, concentreéaà sec. Le résidu obtenu est dissous dans l'acétate d'éthyle, puis lavé successivement par une solution HC1 2M refroidie à 0 et à l'eau jusqu'à pH neutre. La phase organique est 0 séchée sur Na2So4 puis concentrée à sec. (I) est précipité dans le mélange de solvants acétate d'éthyle-hexane: 268 mg (50 %)- Fc 104-6 C- [- - 210 (c = 1, méthanol). Anal. calculé pour C14H26N205 (302,37) C 55,61 - H 8,67 - N 9,26 - trouvé: C 55,33 - H 8,34 - N 8,89. BOC-L-Ala-D-Nle-On Hex (II) 268 mg (0,89 mmoles) de (I) sont dissous dans 4,5 ml de méthanol et 0,5 ml d'eau. Une solution 20 % de CC03 est ajoutée jusqu'à obtenir un pH 1 3 de 7. Le mélange est concentré à sec, le résidu repris dans 5 ml de DMF, qui est évaporé sous vide (trois fois successivement) pour être finalement dissous dans 3 ml de DMF. La solution est additionnée de 0,144 ml (1,02 mmoles) de bromure de n hexyle. Apres 24 heures, le mélange réactionnel est concentré à sec, le résidu obtenu est repris dans l'acetate d'éthyle et lavé successivement avec une solution d'acide citrique 10 %,à l'eau avec une solution NaHCO3M, à l'eau, puis séché sur MgSo. -29 - La phase organique est filtrée, concentrée a sec (II) est purifié sur colonne de silice, à l'aide du mélange de solvants Hexane-Acétate d'éthyle 3-1 (v-v). Il est obtenu sous forme d'une huile: 290 mg (85 %) Mur NAc-L-Ala-D-Nle-On Hex (III) 290 mg (0,75 mmoles) sont traités pendant 30 min par 2,25 ml d'une solution d'HCl N dans l'acide acétique glacial. Le mélange réactionnel est concentré à sec et le résidu obtenu (L-Ala-D-Nle-On Hex, HClà directement utilisé, en solution dans 5 ml de DMF. 403,5 mg (0,856 mmole) de Mur NAc (c ajoutés 0,094 ml (0,856 mmole) de N-méthylmorpholine et 0,111 ml (0,094- mmole) de chlorocarbonate d'isobutyle, puis après 3 min, la sblution de l'Ala-D-Nle-On Hexi HCl dans le DMF, additionnée de 0,086 ml de N-méthyl- morpholine. Apres 4 heures à - 15 et une nuit à température ambiante, sous agitation, 1 ml de NaHCO3 sont ajoutés, puis après 30 min, (III a) est précipité, par addition d'eau, puis lavé à l'eau et desséché en présence de P205. Il est obtenu par cristallisation à partir du méthanol: 4Q8 mg (73 D). [J; 68,4 (c = 1, acide acétique glacial) Anal. calculé pour C40H57N9010 (739,917): C 64,93 - H 7,76 - N 5,68 - Trouvé: C 64,91 - H 7,61 - N 5,61 540 mg (0,73 mmoles) sont dissous dans 50 ml d'acide acétique glacial, et hydrogénés pendant 40 heures, en présence de 250 mg de Pd 5 % sur charbon. _ 30 _ Le mélange réactionnel est filtré, puis concentré à.sec. (III) est purifié sur colonne de silice, à l'aide du mélange de solvants chloroforme-méthanol 7-1 (v-v) puis sur colonne d'A6-50 W X 2, diluée à l'eau, puis lyophilisé: 225 mg (55). + 36 (c = 1, acide acétique glacial). Anal. calculé pour C25H47N3010 (581,64): C 55,60 - H 8,43 - N 7.48 Trouvé: C 55,37 - H 8,36 - N 7,28 L'homme du métier appréciera qu'il est possible d'avoir accès aux autres composés conformes à l'invention, par exemple à des composés préférés dans lesquels Y est NHR7, par le choix ap- proprié des réactifs de départ et des groupes protecteurs à met- tre en oeuvre, et en adaptant en conséquence les techniques dé- crites à titre d'exemples dans ce qui précède. / / / z7 z/ z/ z x/ 31- Nor Mur NAc-L-Ala-D-Nle-On Bu D-Nle-On Bu, Pts (I 1,171 g (8,9 mmoles) de D-Nle, 2 g (10,5 mmoles) du monohydrate de l'acide p-toluène sulfonique et 10 ml de n-butanol, en solution dans le benzène sont chauffés à reflux. Apres contrôle en chronatographie sur couche mince de gel de silice (chloroforme-méthanol 4-1 v-v), le mélange réactionnel est.concentré à sec. (I) est purifié sur colonne de silice, à l'aide du mélange de solvants chloroforme-mèthanol 6-1 (v-v), et obtenu sous forme lyophilisé: 2,55 g (80 X). Anal. calculé pour C17H29ND5S (359,49): C 56,80 - H 8,13 - N 3,90 - Trouvé: C 55.00 - H 8,08 - N 4,3 - BOC-L-Ala-D-Nle-On Bu (II) 416 mg (2,2 mmoles) de BOC-L-Ala sont dissous dans 5 ml de DMF. A cette solution, refroidie à - 15 C, sont successivement ajoutés 0,242 ml (2,2 mmoles) de chlorocarbonate d'isobutyle, puis, après 3 min, 691 mg (1,9 mmoles) de (I) en solution dans 5 ml de DMF, contenant 0,22 ml (1,9 nmnoies) de N-méthylmorpholine. Apres 4 heures à - 15 C, 2,2 ml de KH C03 2,5 M sont ajoutés au mélange réactionnel qui, après 30 min, est dilué à l'eau et extrait à l'acétate d'éthyle. La phase organique est successivement lavée à l'eau, avec une solution KH S04 5 %, à l'eau séchée sur Mg So4, filtrée et concentrée à sec: 732 mg. (II) est purifié sur colonne de silices, à l'aide du mélange de solvants chloroforme- méthanol 10-1 (v-v) et est obtenu sous forme d'huile: 583 mg (85%). 258 1069 - 32 - Anal. calculé:pour C1sH39N205 (358,48): C 60,30 - H 9,56 - N 7,81 - Trouvé: C 60,26 - H 9.45 N 7,61. Nor Mur NAc-L-Ala-D-Nle-On Bu (III) 586 mg (1,58 mmoles) de (II) sont traités, pendant 30 min par 4,8 ml d'une solution 1 N d'HCl dans l'acide acétique glacial. Le mélange réac- tionnel est concentré à sec et le résidu obtenu (L-Ala-D-Nle- On Bu, HCl) utilisé directement en solution dans 5 ml de DMF. 530 mg (1,15 mtoles) de Nor Mur NAc ( (-Bzl-4,6-Bzi) (4) sont dissous dans 10 ml de DMF. A cette solution, refroidie à - 15 C, sont successivement 0 ajoutés 0,125 ml (1,15 mnoles) de N-méthylmorpholine, 0, 150 ml (1;15 mmoles) de chlorocarbonate d'isobutyle, puis après 3 minutes, la solution de LAla- D-Nle-On Bu, HCl dans la DMF, contenant de 0,17 ml (1,6 mmoles) de Nméthyl- morpholine. Après 4 heures à - 150 C, 1,2 ml d'une solution de KHCO3 2,5 M est ajouté au mélange réactionnel qui, après 30 min, est dilué à l'eau. (III a} précipite, est lavé à l'eau, séché en présence de P205 sous vide. (III a) est purifié sur colonne de silice, à l'aide du mélange de soivants chloroforme-acétone 18-5 (v-v) et est obtenu après cristallisation à partir du méthanol: 553 mg (75 %}. Fc 233-4 C - LcD32_ 57,4o (c = 1, acide acétique glacial). Anal. calculé pour C37H51N3010 (697.836): C 63,68 - H 7,37 - N 6,02 - Trouvé: C 63,36 - H 7,28 - N 5,93- 553 mg (0,79 rznoles) de (III a) sont dissous dans 40 ml d'acide acétique glacial et hydrogéné pendant 40 heures en présence de 270 mg de palladium % sur charbon. Le mélange réactionnel est filtré et concentré à sec. - 33 - (III) est purifié sur colonne ae silice, & l'aide du mélange de solvants chloroforme-méthanol 8-1, puis.sur colonne de AG SOW X 2, diluée a l'eau. (III) est obtenu sous forme lyophilisée: 262 mg (64 X). J+ 4,6 (c = 0.5, acide acétique glacial). Anal. calculé pour C23H41N3010 (519. 602). C 53,47 - H 7.95 - N 8,08 - Trouvé: C 53,46 - H 7,89 - N 7:72. Ont -ncore été obtenus les dérivés suivants en mettant n oeuvre des procédés tels aue décrits ci-dessus: 1) 6-O-c-aminocaproyl-MurNAc-L-Ala-D-Nle-OnBu; 2) 6-amino-6-deoxy-MurNAc-L-Ala-D-Nle-OnBu o 3) 6-dipalmitoyl-glyceroyl-6-deoxy-MurNAc-L- Ala-D-Nle-OnBu 4) 6-dipalmitoyl-glyceroyl-E-aminocaproyl-MurNAc-L- Ala-D-Nle-OnBu; les caractéristiques analytiques de ce produit étant les suivants: [0]05 = + 17,3 dans l'acide acétique c = 0,55 Formule brute = C 6 Hl15N5017, 1 CH3COOH Analyse quantitative = en %. Calculé: C = 61,61 H= 9,32 N = 5,44 Trouve: C = 61,86 H = 9,36 N = 5,55 A titre d'exemple de conjugués préférés suscepti- bles d'être fabriqués avec des composés préférés de l'in- vention, on mentionnera ceux réalisés à partir des composés du type 6-O-succinyl-MurNac-L-Ala-D-Nle-NH2, ou 6-0-succinyl- MurNac-L-Ala-D-Nle-OnBu, ou encore les dérivés 6-O-e-amino- caproyle correspondants, d'une part, et d'haptènes dont cer- tains sont indiqués ci-après à titre d'exemples préférés: le facteur de libération de la lutéotropine, connue sous la désignation LH-RH, des fragments peptidiques, ou des peptides synthétiques doués de propriétés analogues, par exemple des décapeptides du type Glu-His-Trp-Ser-Tyr-GlyLeu-Arg-Pro-Gly-NH2 ou l'acide libre correspondant pGlu-His-Trp-Ser-TyrGly-Leu-Arg-Pro-Gly. - des peptides C-terminaux de la gonadotropine chorionique humaine (hCG), - des peptides C-terminaux de la sous-unité B de la hCG, notamment un triacontapeptide contenant les résidus amino- acyles correspondant à ceux qui dans l'hCG-e ou de dérivés synthétiques terminaux du genre de ceux décrits par S. MATSUURA et al (publication déjà mentionnée plus haut), des fragments de FSH, etc, ou des peptides consistant essentiel- lement en les séquences 109-145 et 111-145 des sous-unités C-terminales de hCG-$ décrites par Arthur C.J. LEE et al dans "Molecular Immunology", vol. 17, p. 749-756. La modification des hormones qui précèdent par couplage avec des glycopeptides tels que mentionnés ci-des- sus conduit à des principes immunogènes susceptibles d'in- duire in vivo la production d'anticorps contre les hormones naturelles en question, immunogénicité d'autant plus remar- quable que les haptènes modifiés immunogènes ainsi obtenus ont des poids moléculaires extrêmement faibles. On mentionnera encore, à titre d'exemples de con- jugués mettant en jeu le couplage entre un glycopeptide conforme à l'invention et d'haptènes, ceux qui mettent en jeu différents peptides synthétiques ayant des séquences de résidus aminoacyles communs avec les principaux peptides constitutifs de l'antigène HBsAg, notamment ceux dont les aminoacyles d'extrémité correspondent à ceux qui, dans la séquence de HBsAg occupent les positions suivantes: 48-81 2-16; 22 - 35; 95 - 100; 117 - 137; 122 - 137; 117 - (selon la structure donnée par PASEK et ai et reproduite dans l'article de LERNER). On citera en outre des peptides synthétiques du genre de ceux décrits par E.H. BEACHEY et ai qui sont suscep- tibles, lorsque couplés avec un muramylpeptide, de former des anticorps actifs contre la protéine M de la surface de Streptococcus pyogenes, cette protéine désignée plus loin dans l'exemple II, sous l'abréviation "M24". On peut égale- ment se référer aux séquences peptidiques définies dans le brevet américain n 4 284 537, plus particulièrement celles définies sous les abréviations CB6 et CB7. Des haptènes peptidiques particulièrement préférés mis en oeuvre dans des conjugués conformes à l'invention sont un ou plusieurs de ceux définis ciaprès: Les haptènes mis en jeu ont étéles suivants: 1') SODP: octodécapeptide contenant une séquence de la "boucle diphtérique" et de formule-:. H2N-Ala-Ala-Cys-Ala-Gly-Asn- Arg-al-Arg- * Arg-Ser-Val-Gly-Ser-Ser-LeunLys-Cys. 2') SCB7: peptide contenantun épitope caracté- ristique du streptococcus type M24 contenant la sé- quence: Asn-Phe-Ser-Thr-Ala-Asp-SerAla-Lys- Ile-Lys-Thr-Leu-Glu-AlaGlu-Lys-AlaAla- Leu-Ala-Ala-Arg-Lys-AlaeAsp-Leu=Glu-Lys- Ala-Leu-Glu-Gly-Ala 3 ) HOs (peptide 99-12.) t peptide comprenant un site antigénique de l'enveloppe du virus contenant la sé- quence Asp-Tyr-Gln-Gly-Met-Leu-Pro-ValCys-Pro-Leu-Ile- 100 110 Pro-Gly-Ser-Ser-Thr-Thr-Ser-T.hr-Gly-Pro-Cys. 4') DDP Mal: peptide portant un épitope caracté- ristique d'un antigène protecteur contre Plasmodium Know- lesi, agent de la malaria du singe, décrit par GODSON G.N. et Coll. (1983), Nature. 305, 29-33. constitué par la sé- quence: Tyr-Gln-Ala-Gln-Gly-Asp-Gly-Ala-Asn-Ala- Gly-Gln-Pro-Gln-Ala-Gln-Gly-Asp-Gly-Ala-Asn- Ala-Gly-Gln-Pro-Cys Ces exempDles n'ont bien entendu aucun caractère limitatif. En outre, les haptènes utilisables ne sauraient être limités à des peptides. Il s'agit par exemple aussi d'haptènes saccharidiques ou osidiques. On mentionnera par exemple les groupes sanguins A et B, le polysaccharide C du Streptococcus C, l'acide cellobiuronique (Pneumo type III), tel que décrit par W.F. GOEBEL, "J. Exp. Medicine", 1939, p. 353-363, ou l'acide para-aminophényl-cellobiuro- nique. Pour mémoire, on rappelle certaines des techniques préférées pour réaliser la susdite conjugaison. Conformément à une première technique, on peut avoir recours à une réaction de couplage par l'intermédiaire de glutaraldéhyde, dans la mesure o tant l'haptène que le dérivé de glycopeptide considéré comporte des fonctions amine. Avantageusement, on peut avoir recours à d'autres formes de couplage pouvant mettre en jeu des positions dé- terminées sur la partie glycopeptide. En particulier, ces 258 1069 liaisons pourront intervenir au niveau soit de la position en C6, soit de celle en C1 du cycle saccharidique, soit en- core à l'extrémité C-terminale Y de la chaîne peptidique. En ce qui concerne les substitutions impliquant le groupement R6, on pourra avoir recours aux méthodes de couplage couramment utilisées en synthèse peptidique, dans la mesure o l'on pourra réaliser une liaison peptidique entre des fonctions appropriées portées, d'une part, par le glycopeptide et, d'autre part, par l'haptène, l'un portant par exemple une fonction amine -et l'autre une fonction car- boxyle, hydroxyle ou sulfhydrile ou vice-versa. Il va de soi qu'il conviendra alors de faire porter au groupe R6 la fonc- tion terminale appropriée, pour réaliser la fixation au ni- veau du carbone en 6 sur le groupe saccharidique selon des techniques bien connues du spécialiste. Bien entendu, on peut avoir recours à tout autre type de liaison, mettant en jeu les combinaisons pouvant intervenir entre une fonction sulfhydrile portée par l'un des partenaires que constituent l'haptène et le muramyl- peptide et un groupe maléimide porté par l'autre réactif, par exemple en faisant usage de la technique décrite par T. KITAGAWA et T. AIKAGAWA dans "J. Biochem." 79 (1976), 23 La conjugaison peut se faire en utilisant les mo- des classiques de diazotisation ou de réaction mettant en jeu un isothiocyanate, notamment lorsque le muramyl-peptide porte une fonction aromatique aminée (notamment au niveau du groupe R1) et lorsque l'haptène porte une fonction amine susceptible d'intervenir dans cette réaction. De telles tech- niques de réalisation sont décrites par exemple par B.F. ERLANGER dans "Pharmacol. Rev.", 25 (1973), 271. Le couplage peut également être réalisé par la réduction d'une base de Schiff réalisée entre une fonction aldéhyde portée par l'un des réactifs et une fonction amine portée par l'autre (G.R. GRAY, "Arch. Biochem. Biophys. 163 (1974), 426). Toutes ces réactions sont en soi bien connues et le spécialiste appréciera que de nombreuses variantes peu- vent être aménagées pour aboutir aux mêmes résultats. En ce qui concerne d'ailleurs plus particulièrement les groupes Z et R1, on remarquera aussi que, entre le glycopeptide et l'haptène, les conjugaisons peuvent s'effectuer au moyen d'un pontage, l'agent de pontage consistant par exemple en un réactif bifonctionnel. En l'occurrence, le groupe de pon- tage entre le glycopeptide et l'haptène dans le conjugué fi- nal de préférence n'excédera pas la longueur d'un enchaîne- ment correspondant à celle d'une chaîne hydrocarbonée p-dé- cylique. De tels agents de pontage sont par exemple men- tionnés dans le brevet N 78 16792 déposé le 5 Juin 1978. Dans ce qui précède, il a surtout été évoqué le cas du couplage entre un glycopeptide et un haptène de na- ture peptidique. Lorsque l'haptène est constitué par un oligosaccharide, les mêmes types de réactions peuvent être mis en oeuvre, dès lors que l'haptène possède une fonction carboxylique libre ou une fonction amine, ou encore une fonction alcool pouvant alors former des liaisons amide ou ester avec des fonctions adéquates portées par le muramyl- peptide. En variante, on pourra également avoir recours à une fixation du glycopeptide sur la position en C1 de l'oli- gosaccharide, possédant un sucre terminal réducteur, soit que la fonction pseudoaldéhyde soit oxydée en une fonction carboxylique (G. ASHWELL, "Methods in Enzymol." 28 (1972), 219), soit qu'elle soit utilisée en tant que telle 'R. GRAY déjà cité). Dans le premier cas, on établit une liaison peptidique ou ester; dans le second cas, une liaison alcoyl- amine. La fixation de l'haptène sur le glycopeptide peut intervenir en plusieurs points de celui-ci, l'inverse étant également vrai, de sorte que l'invention s'étend à des oli- gomères de glycopeptide et de l'haptène, dans la mesure o les deux constituants présentent les fonctions chimiques appropriées. De préférence, le poids moléculaire de tels conjugués ne dépasse pas 5000. D'une façon générale, le constituant haptène et le constituant glycopeptide seront avantageusement dans un rap- port pondéral compris entre 1,5 et 10, avantageusement entre 2 et 3. L'invention concerne d'ailleurs également des oli- gomères, des glycopeptides selon l'invention hydrosolubles, contenant notamment de 2 à 10 motifs glycopeptide monomères. Les techniques décrites dans le brevet français N 78 16792 déposé le 5 Juin 1978 sont directement transposables, pour ce qui est de.leur fabrication. Il va de soi que l'on aura souvent à envisager dans toutes ces réactions l'utilisation de groupes de protection pour les groupes réactifs ne devant pas intervenir dans la réaction de couplage. Ces techniques sont bien connues de l'homme du métier pour qu'il ne soit plus nécessaire d'in- sister à leur sujet. I1 est d'ailleurs à remarquer que les produits ain- si protégés sont à considérer comme faisant partie de l'in- vention et comme n'échappant pas à la portée des revendica- tions qui suivent, même si celles-ci ne définissent pas spé- cifiquement lesdits groupes de protection. Il en va de même encore des sels d'acide ou de base dans lesquels les glyco- peptides peuvent entrer, selon la nature des groupes fonc- tionnels dont ils sont porteurs. Il s'agit plus particuliè- rement encore des sels physiologiquement acceptables de ces glycopeptides, conjugués ou oligomères. - 40 - Propriétés biologiques des qlvcooeptides selon l'invention ! - ProDriétés immuno-adjuvantes L'activité immunoadjuvante a été étudiée en mettant en jeu la réponse humorale de la souris swiss femelle à la sérumalbumine bovine. Des groupes de huit souris agées de 2 mois reçoivent Dar voie sous-cutanée 0,5 mg de sérumalbumine bovine avec ou sans les substances à tester, à raison de 100 pg par souris. Les administrations sont faites en solution aqueuse. Au jour 28, on effectue des prélèvements du sérum sanguin sur les souris traitées et la réponse primaire en anticorps est déterminée par hémagglutination massive en utilisant des hématies de moutons traitées à la formaline et recouvertes de l'antigène étudié selon la méthode dé- crite par A. A. HIRATA et!..W. BRANDISSE (j.immunol.100, 641 - 648, 1968). Au jour 30 les souris resoivent une injec- tion de rappel avec les antigènes seuls (100 pg par souris) et au jour 36 or. mesure la réponse secondaire induite par la même technique de mesure. Les résultats de ces essais fiaurent dans le tableau 1 qui suit. Ce tableau contient également les- ré- sultats mesurés dans les mêmes conditions chez les animaux témoins et chez des animaux qui ont été traités de la même manière avec le MDP à titre de substance de comparai- son. Il est à remarquer que dans le test expérimental utilisé, le composé (1) n'a pas témoigné d'une activité spéci- fique, au moins à la dose utilisée. En tout état de cause, des composés de ce type font partie de l'invention en ce qu'ils constituent des produits intermédiaires utiles pour la fabrica- tion de produits actifs, par exemple par substitution d'un groupe ester au groupe carboxyle du radical nor Leucine. T A B L E A!T I AdJuvants R6ponsn primaire Reponse secondaire (Glycopeptides) Jour 28 Jour 36 T m o i n s+ T 6 il o i n s (1) MurNAc-L-Ala-D-Nle-N12 - (2) MurNAc-L-Ala-D-Nle-On C4H9 1 7 (3) MurNAc-Gly-D-Nle-On C4H9 2,64 7,83 + 1,87 (4) MurNAc-L-Val-D-Nle-On C4H9 1,64 6,46 + 1,67 (5)nor MurNAc-LAla-D-Nle-On C4H9 1,64 7,99 + 1,93 (6) MurNAc-L-Ala-D-Nle-OCH3 1,64 7,58 3 (7) MurNAc-L-Ala-D-Nle-On C6H113 4 1,64 6,39 + 3,1. uo - 42 - L'examen de ce tableau fait apparaltre une activité immunoadjuvante significative des glycopeptides selon l'invention. Toutes les substances présentent une activité immunoadjuvante significative et certaines d'entre elles ont une activité qui se rapproche sensiblement (en particulier en ce qui concerne les substances 2) 5) et 6)) de celle du MDP. Ces résultats sont également à prendre en considération à la lumière de l'absence pratiquement totale de pyrogénicité des substances selon l'invention, les- quelles présentent par conséquent un index thérapeutique particulièrement élevé. 2 - Comportement des substances dans des essais de mesure de l'effctEyvroène Les essais sont réalisés sur le lapin selon le protocole de la Pharmacopée Européenne. Les produits à l'étude ont été administrés à des lapins à raison de 3mg/kg. Les élévations de température observés chez chacun d'entre eux résultent du tableau 2 cui suit: Des résultats sensibielement équivalents ont été obtenus à des doses de 10 mg/kg chez le lapin. co co NO Ln lsaq uou = N - I' O-! O- Z'o 0 1,, H93 O-a LN- -e LV-'l3vNJnw -O' O-l 'l O-Z' O,, H30o-a [otN-a-e V-1l-3VNnW -0'O-1'O-Z'O I0T'-' 6tlb3 uo-BLN-G-etV-9-DvNÀnW.ou ^-b'O-l'O "611t3 io-a[N-a-LeA-1-3vN. nN l -1'0-0'0-1'0 tions qui précèdent dépassent 0,6 C. Les résultats obtenus avec les substances selon l'invention sont d'autant plus intéressantes que leurs métabolites sont à la foisinactifs et totalement dé"ourvus de pyrogénicité.. L'invention concerne également des compositions pharmaceutiques dans lesquelles les glvcopeptides(modifiés ou non)sont associés à un véhicule ohsioloiquement acceptable. Des compositions pharmaceutiques avantageuses sont constituées par des solutions injectables contenant une dose efficace d'au moins un composé selon l'invention. De pré- férence, ces solutions sont réalisées dans--une phase aqueuse stérilisée isotonique, de préférence saline ou glucosée. L'invention concerne également des compositions dans lesquelles les glycopeptides sont encapsulés dans des lipo- somes aptes à former des suspensions injectables. L'invention concerne plus particulièrement de tel- les solutions ou suspensioib qui sont aptes à être adminis- trées par injections intradermiques, intramusculaires ou sous-cutanées, intraveineuses ou encore par scarifications. L'invention concerne aussi des compositions phar- maceutiques, administrables par d'autres voies, notamment par voie orale ou rectale, ou encore sous des formes des- tinées à venir en contact avec des muqueuses, notamment les muqueuses oculaires, nasales, pulmonaires ou vaginales. En conséquence, elle concerne des compositions pharmaceutiques dans lesquelles l'un au moins des composés selon l'invention se trouve associé à des excipients pharmaceutiquement acceptables, solides ou liquides, adap- tés à la constitution de formes d'administration orales oculaires ou nasales, ou à des excipients adaptés à la - 45 - constitution de formes d'administration rectale. Elle concer- ne aussi des compositions destinées à la voie pulmonaire, notamment des solutions préparées en vue de l'administra- tion au moyen d'un appareil d'aérosols classique. A titre d'exemples de doses susceptibles d'être administrées, pour stimuler les réponses immunitaires de l'hôte contre des antigènes déterminés, on mentionnera des doses en micrograrimes par kg de corps, par exemDle de 10 à 1000 microgrammes/kc lors-ue 1' administration est effectuée nar voie parentérale, ou de 0.2 à 20 mg/kg par voie orale. L'utilisation des alycoreptides selon l'invention peut se faire en association avec tout agent immunogène dont on veut renforcer la caDacité d'induction in vivo d'une réponse immunitaire. L'utilisation des glvcopeptides selon l'invention est particulièrement recommandée lorsaue l'agent immunocène est faible ou utilisé à très faible dose ou encore lorsque son caractère immunogène a été amoindri, par exemple au cours des modifications ou purifications dn- térieures auxquelles il a pu être soumis. L'agent immunoaène peut être administre, soit simultanément, soit selon un programme d'administratiors décalées vis-à-vis de celle de l'agentimun ajuvmntselcnl'inveaitin. Des compositions vaccinales préférées selon l'in- vention contiennent en outre un véhicule, tel que la poly- vinyl-pyrrolidone, facilitant l'administration du vaccin. A la place de la polyvinyl-pyrrolidone, on peut utiliser tout autre type d'adjuvant au sens classique que l'on don- nait autrefois à cette expression, c'est-à-dire d'une sub- stance permettant l'absorption plus aisée d'un médicament ou facilitant son action dans l'organisme. A titre d'exem- ples, d'autres adjuvants de ce dernier type, on mentionnera encore la carboxyméthylcellulose, les hydroxydes et phospha- tes d'aluminium ou tous autres adjuvants de ce type, bien connus de l'homme de l'art. Les compositions pharmaceutiques selon l'invention sont donc essentiellement destinées à induire chez l'hôte une réaction immunitaire, lui permettant de produire des anticorps ou une immunité à médiation cellulaire à l'égard d'un antigène ou d'un haptène (conjugué ou non au glyco- peptide). Il est rappelé que l'expression haptène s'étend (dans le cas de la conjugaison) à des principes naturels, par exemple à un peptide naturel, tel qu'une hormone, dont on veut pallier les effets. Ces compositions pharmaceuti- ques sont donc particulièrement utiles en thérapeutique humaine ou vétérinaire, chaque fois qu'est recherchée une modification de l'évolution ou du comportement de l'orga- nisme humain ou animal, par exemple au niveau de la fécon- dité de l'espèce ou de l'orientation dirigée de son métabo- lisme vers la suppression de certaines hormones. Dans des cas préférés de ce dernier type, l'haptène entrant dans le conjugué mis en oeuvre est constitué par l'hormone elle- même ou un fragment de celle-ci. Dans le domaine vétérinaire, on citera en outre la production accrue de certains constituants, au détriment d'autres constituants. On citera par exemple les applica- tions des vaccins vétérinaires administrés dans le but d'accroître chez l'animal la production de viande par cas- tration immunologique. L'invention a en particulier pour objet des compo- sitions vétérinaires contenant des doses efficaces de con- jugués d'haptène, dans lesquels l'haptène lui-même est cons- titué soit par l'hormone elle-même, soit par une séquence peptidique ayant une partie commune avec l'hormone, l'hor- mone appartenant à la classe des hormones peptidiques ou glycopeptidiques. Une hormone particulièrement intéressante à cet égard est constituée par le facteur de libération de l'hormone lutéostimulante LH-RH. Des doses unitaires efficaces de ces conjugués sont, à titre d'exemples, comprises entre environ 0.1 et 2 mg/kg de corps, lorsqu'ils sont administrés par voie parentérale, et entre environ 0.2 et 20 mg/kg lorsqu'ils sont administrés par voie orale. L'invention concerne également encore des réactifs biologiques essentiellement formés à partir de ces conju- gués haptène-glycopeptides. En particulier, la partie hap- ténique peut être constituée par un principe actif de me- dicament ou de drogue (par exemple la morphine), le réac- tif biologique en question étant alors utilisé pour fabri- quer des anticorps d'apyrogénicité réduite, notamment d'anticorps monovalents ou monoclonaux. Ces anticorps sont alors à leur tour utiles pour la constitution de réactifs permettant par exemple l'étude de l'action de médicaments en cause sur l'hâte vivant. En particulier, ces anticorps permettront la détection de récepteurs cellulaires, ou encore l'étude du métabolisme et du mode d'action des mé- dicaments en cause. Des composés lipophiles parmi les composés selon l'invention ont également une activité anti-infectieuse, anti-virale ou anti-tumorale. L'invention ne se limite évidemment pas aux modes de réalisation décrits ci-dessus à titre d'exemples et l'homme de l'art peut y apporter des modifications sans pour autant sortir du cadre des revendications ci-après. Par exemple, il va de soi que ne sortiraient pas du cadre des revendications tous glycopeptides modifiés qui posséderaient des propriétés immunoadjuvantes semblables et qui présenteraient les mêmes éléments caractéristiques de structure, mais qui ne différeraient de ceux qui ont été plus particulièrement envisagés que par des substitutions locales de groupes non spécifiquement envisagés dans les définitions oui en ont été données ou Cui déborderaient celles-ci. Par exempile seraient des équivalents des muramyl- peptides modifiés de l'invention, ceux qui comporteraient des groupes de substitution sur la position 4 du groupe saccharidique, par exemple des groupes acyle comprenant de 1 à 4 atomes de carbone. Seraient encore des équivalents des comDosés reve.ndiqués, ceux dans lesquels le résidu amino- acyle séparant le "roupe NAcMur et le groupe norLeucine serait lui-même modifié, par exemple N-substitué par un roupe alcoyle irfeérieur, plus particulièrement méthyle. En conclusion, il importe de souligner que ces diverses substitutions ne sauraient faire sortir les composés ainsi modifiés du cadre de l'invention, dès lors qu'elles ne modifieraient pas les propriétés essentielles, notamment im.unoadjuvantes, des glycopeptides ainsi obtenus. Il va sans dire que sont également des équivalents des composes revendiqués tous les sels et esters biologique- ment acceptables dans lesquels composés selon l'invention sont susceptibles d'entrer, dès lors qu'ils possèdent des grou pes fonctionnels les rendant capables de les former par réac- tion avec un réactif complémentaire approprié, tel qu'une amine ou un acide physiologiquement acceptable. REVENDICATIONS 1. Composé choisi parmi les glycopeptides du type 2-(2-acetamido-2-désoxy3-OD--glucopyranosyl)alcanoyl-amino acyl-norLeucine et les dérives desdits glycopeptîdes ayant des propriétés immuno-ad]uvantes. 2. Composé selon la revendication 1 dérive d'un glycopeptide du type 2-(2-acetamido-2-desoxy-3-0-D-gluco- pyranosyl)alcanoyl-aminoacyl-norLeucine sur lequel est greffée, par couplage covalent, au moins un groupe porteur d'au moins un site antigénique. 3. Compose du type 2-(2-acétamido-2-désoxy-3-0O-D- glucopyranosyl)-alcanoyl-aminoacyl-norLeucine ou d'un déri- ve de ce glycopeptide, ce composé étant caractérisé par la formule: R -A 6, OO ! H H OCH NUC0CH 3(23 !, 1 g 0(H z' dans laquelle: - R est un groupe OH ou un groupe O-C6H4-NH2 ou O-(CH2)m- R m étant un nombre entier de 1 à 10 -, et R étant une a' a fonction amine, carboxyle, thlol, hydroxyle, - A est de l'oxygene ou un groupe NH; - R6 est de l'hydrogène ou un groupe B ou CO-B dans lequel B est un groupe ou une chaine linéaire ou ramifiée pouvant comporter Jusqu à environ 100 atomes de carbone, ce groupe B étant encore éventuellement porteur de un ou plusieurs groupements fonctionnels, tels qu'amino, hydroxyle, carbo- xyle, carbonyle. acyle, acoxyle, cyclopropane, - R est un hydrogène ou un groupe alcoyle comprenant de 1 à 4 atomes de carbone, notamment méthyl: - X est un résidu alanyl, arginyl, lysyl, asparagyl, aspar- tyl, cystéinyl, glutaminyl, glutamyl, glycyl, histidyl, hy- droxyprolyl, isoleucyl, leucyl, methionyl, phenylalanyl, prolyl, séryl, threonyl, tryptophanyl, ou valyl; - Y est un groupe OH, NH2, OR7 ou NHR7R R7 étant un groupe hydrocarboné pouvant avoir de I a 20 atomes de carbone ou pouvant être un acide aminé tel qu'indique pour X, ledit a- cide aminé étant à son tour libre, amide ou estérifié par un groupe d'estérification pouvant lui-même comporter jus- qu'à 4 atomes de carbone; - Z est un groupe alcoyle comprenant de 1 à 3 atomes de carbone, de préférence -CH3 ou -CH2- -CH3 4. Composé selon la revendication 3, choisi parmi ceux qui ont des propriétés adjuvantes. 5. Composé selon la revendication 3 ou la revendi- cation 4, ce composé ayant la formule selon la revendica- tion 3 et dans laquelle R1, A, R6, R, X et Z ont les mêmes significations que dans la revendication 3 et dans laquelle Y est un groupe OR7 ou NHR7, R7 étant un groupe hydrocarbo- né pouvant avoir de 1 à 10 atomes de carbone. 6. Composé selon l'une quelconque des revendica- tions 3 a 5, ce composé ayant la formule de la revendica- tion 3 dans laquelle A, R, X et Z sont tels que désignés dans la revendication 3, Y est un groupe OR7 ou NHR7, R7 étant tel que défini dans la revendication 3 ou dans la revendication 5, R6 est l'hydrogène et R1 est un groupe O-(CH2)m-Ra, m et Ra étant tels que définis dans la revendication 3. 7. Composé selon la revendication 6, caracterisé en ce qu'il comporte un groupe porteur d'au moins un groupe 258 1 0 6 9 antigénique, greffé par couplage covalent sur le glycopep- tide par l'intermédiaire d'un groupe antérieurement fonc- tionnel du groupe R a 8. Composé selon l'une quelconque des revendica- tions 3 à 5, ce compose ayant la formule de la revendica- tion 3 dans laquelle A, R, X et Z sont tels que définis dans la revendication 3, Y est un groupe OR7 ou NHR7, R7 etant tel que defini dans la revendication 3 ou dans la revendication 5, R1 est un groupe OH et R est un groupe B ou CO-8, B étant tel que défini dans la revendication 3. 9. Compose selon la revendication 8, caractérisé en ce qu'il comporte un groupe porteur d'au moins un groupe antigénique greffée par couplage covalent sur le glycopepti- de par l' intermédiaire d'un groupe antérieurement fonction- nel du groupe B. 10. Compose selon l'une quelconque des revendica- tions 3 a 10, caractérisé en ce que Z est un groupe méthy- le, le groupe NH-CH-COY étant de preférence dérivé de la (CH2) norLeucine. Z - - 11. Composé selon l'une quelconque des revendica- tions 3 a 10, caractérisé en ce que, sauf glycyle, X est un acide aminé lévogyre. 12. Composé selon la revendication 11, caractérisé en ce que X est un groupe glycyle, valyle, notamment L-va- lyle ou séryle, notamment L-séryle. 13. Composé selon la revendication 11, caractérisé en ce que X est un groupe alanyle. 14. Compose selon l'une quelconque des revendica- tions3 à 13, caractérise en ce que Y est un groupe OR7, dans lequel R7 est un groupe alcoyle comportant de 1 à 10 atomes de carbone. 15. Composé selon la revendication 14, dans lequel R7 est un groupe méthyle. 16. Composé selon la revendication 14, dans lequel R7 est un groupe nbutyle, 258 1 069 17. Composé selon l'une quelconque des revendica- tions 3 à 16, caractérisé en ce que R est un groupe méthy- le. 18. Composé selon l'une quelconque des revendica- tions 3 à 17, à l'exclusion de la revendication 7 ou de la revendication 9, caractérisé en ce que: - R1 est OH, - A est de l'oxygène, - R6 est de l'hydrogène. 19. Composé selon l'une quelconque des revendica- tions 3 à 17, caractérisé en ce que A est de l'oxygène et R6 est un groupe -CO-(CH2)n-COOH, avec n étant un nombre de 1 à 10, notamment un groupe -CO-(CH2)2-COOH, ou un groupe -CO-(CH 2)n-NH2 avec n étant un nombre de 1 à 10, notamment un groupe -CO-(CH 2)6-NH2, le groupe terminal, amine ou carboxyle. de R6., étant le cas échéant substitué par un groupe porteur d'au moins un site antigénique. 20. MurNAc-L-Ala-D-Nle-NH2. 21. Composé caractérisé en ce qu'il est choisi par- mi l'un des suivants: MurNAc-L-Ala-D-Nle-On-C 4H9 MurNAc-Gly-D-Nle-On-C4H 4 9 MurNAc-L-Val-D-Nle-On-C4H9 nor MurNAc-L-Val-D-Nle-OnC 4H9 MurNAc-LAla-D-Nle-OCH3 MurNAc-L-Ala-D-Nle-OnC6H13. 22. Composition, ayant notamment des propriétés im- munoadjuvantes. caractérisée par l'association d'une dose efficace d'un composé immunoadjuvant conforme à l'une quel- conque des revendications 1 à 21 avec un excipient physio- logiquement acceptable. 23. Composition selon la revendication 22, caracté- risée en ce qu'elle contient également un principe immuno- gène contre lequel une protection est recherchée chez l'hâ- te vivant auquel il est destiné. 24. Composition ayant des propriétés protectrices 258 1 069 in vivo, caracterisé par l'association avec un véhicule physiologiquement acceptable d'une dose efficace d'un com- posé comportant au moins un groupe porteur d'un site anti- génique et conforme à l'une quelconque des revendications 3 à 17 ou à la revendication 19, ce groupe porteur du susdit site antigénique étant immunologiquement approprié à l'in- duction de la synthese in vlvo d'anticorps protecteurs con- tre ledit agent déterminé.