Brevet FR2581544A1 — publié le 19861114

La jument a une saison de reproduction physiologique bien définie qui s'insère avec l'accroissement de la longueur du jour et s'étend approximativement d'OCTOBRE à FEVRIER dans la partie Sud Est de L'AUSTRALIE. Des règlementations ont imposé une date de naissance du ler AOUT pour les chevaux dans l'hémisphère Sud et, puisque les juments ont une période de gestation de 11 mois, la repro- duction doit commencer tôt en SEPTEMBRE pour des poulains qui doivent être mis bas peu après le 1er AOOT de l'année suivante. Il est souhaitable de mettre bas les poulains à une date proche du 1er AOUT car ces animaux présentent des avantages de croissances et des avantages potentiels de performances par rapport à des poulains mis bas plus tard. Le problème pour l'industrie de reproduction chevaline est qu'au début de SEP- TEMBRE seulement 20 % des juments ont des cycles oestraux de l'ovulation réguliers en AUSTRALIE DU SUD. Tout procédé qui tend à provoquer une ovulation pen- dant cette période sera donc favorable à l'industrie de repro- duction chevaline en faisant un usage plus efficace des étalons et en permettant aux juments d'être fécondées de sorte que les poulains soient mis bas à une date proche du 1ER AOUT. Dans l'hémisphère Nord, la date équivalente est le 1er Janvier. Selon la présente invention, on propose un procédé pour provoquer une ovulation chez les juments comprenant l'administration à une jument d'une quantité inductrice d'ovulation d'un produit libérateur de gonadotrophine pendant une période d'au moins sept jours. Cette période peut être étendue selon ce qui est désiré ou nécessaire et 14 à 28 jours seront généralement préférés et efficaces pour provoquer une ovulation. De préférence, le produit est administré à la jument à des intervalles au plus égaux à un jour, de préfé- rence à des intervalles aux plus égaux à une heure et encore de préférence sensiblement de façon continue durant la 2581-544 la période considérée. Pour provoquer une ovulation à un moment approprié il est préféré que, par rapport à la "mise bas" proposée- le traitement avec l'hormone libératrice de gonadotrophine (GnRH) soit commencé entre 25 et 76 jours de préférence entre 25 et 61 jours et encore de préférence entre 25 et 48 jours après la "mise bas" dans une année quelconque. On notera que les dates ci-dessus et les durées supposent une période de gestation normale ou moyenne. Comme produit, on peut utiliser une GnRH naturelle ou synthétique, des hormones luteinisantes (LH), la gonado- trophine chorionique humaine (HCG), l'hormone folliculo- stimuline et analogues. Un taux de dosage équivalent à au moins 25-100 ng/ kg/heure suffit normalement mais peut être modifié selon l'efficacité de ce produit. Tout mode d'administration approprié peut être utilisé mais en général un mode d'administration qui se rapproche de façon sensible de l'administration continue pendant cette période sera préféré. les modes d'administration appropriés incluent l'usage de pompes osmotiques, l'infusion sous cutanée, les implants solides, les implants intravaginaux, et les injections sous cutanées à intervalles. En général l'administration orale n'est pas appro- priée car le produit est habituellement détruit par les acides de l'estomac et les enzymes de la digestion. Cependant, l'administration orale sous une forme évitant cette destruction est appropriée. En conséquence, on propose également selon l'in- vention un véhicule pharmaceutique adapté à être associé au corps d'une jument et adapté à être administré selon une quantité provoquant une ovulation d'un produit libérateur de gonadotrophine pendant une période de sept jours. Les exemples suivants illustrent l'invention. 2581S44 EXEMPLES Produits et équipements Une hormone synthétique libérant de la gonadotrophine (GnRH) p Glu - His - Trp - Ser - Tyr - Gly - Leu - Pro - Gly - NH2) a été achetée à la Société United States Biochemical Corporation à Cliveland, Ohio, Etats-Unis d'Amérique. Ce produit est identique à la GnRH naturelle mais est synthétisé. L'administration de la GnRH a été effectuée au moyen de mini pompes osmotiques (de la Société ALZA Corporation à PALO ALTO, CALIFORNIE, EtatsUnis d'Amérique). Ces pompes sont formées d'une membrane rigide, semi-perméable, à l'in- térieur de laquelle est suspendue une poche hermétique qui est remplie avec la substance à administrer. Le goulot de la poche est ouvert à l'atmosphère. Entre la poche et la membrane est maintenue une solution osmotique spéciale. Cette solution provoque une entrée d'eau à travers la membrane semi-perméable lorsque la mini pompe osmotique est placée dans le corps d'un animal. L'entrée d'eau écrase la poche à un taux fixe et la substance contenue dans la poche est expulsée de la pompe osmotique à un débit constant. Le modèle de mini pompe osmotique uti- lisé pour cette expérimentation avait un débit d'infusion d'environ 2,86 1l/h pendant 28 jours. EXEMPLE I Quatorze juments élevées de façon standard en état anoestral profond ont été divisées en 3 groupes. Le groupe C (Contrôle n = 5) n'a reçu aucun traitement tandis que le groupe 50 (n = 5) et le_ggwgpe_IQQ (n = 4) ont reçu des infusions de GnRH respectivement à un débit de 50 ng/kg/h et 100 ng/kg/h. La GnRH a été administrée par implantation sous cutanée de mini pompes osmotiques (oMP) pendant 28 jours. Des échan- tillons de sang ont été prélevés quotidiennement et des pal- pations ovariennes et des détections oestrales ont été effec- tuées trois fois par semaine ou quotidiennement si un follicule supérieur à 3,5 cm était détecté. Résultats Une ovulation survint chez aucune des juments de contrôLe, chez 2 des 5 juments du groupe 50 et chez 3 des 4 juments du groupe 100. Le temps moyen entre L'insertion de LI'OMP et l'ovulation a été de 18,5 jours pour le groupe 50 et 17,3 jours pour le groupe 100. Les résultats de l'analyse hormonale ont montré que a) Des flots de LH ont été associés à l'ovulation dans chaque c b) Les concentrations quotidiennes moyennes de LH dans le plasmi étaient supérieures dans les groupes traités en comparaison des juments de contrôle; c) Les concentrations de GnRH dans le plasma ont augmenté dans les groupes traités jusqu'au douzième jour d'expérimenta- tion et ont diminué lentement ensuite; d) Il y a eu un accroissement de La fréquence de pulsation de LI dans tous Les groupes pendant la période d'expérimentation. Cependant la fréquence de pulsation de LH était sensiblement (P et unième jour de l'expérimentation, la fréquence de pulsa- tion de LH moyenne du groupe 100 était sensiblement ( EXEMPLE II Animaux - Dix jeunes juments éLevées de façon standard, de 3 à ans à en juger d'après l'usure de leurs dents, ont été utili- sées pour cette expérimentation. Pendant l'expérimentation, les juments ont été nourries au foin deux fois par jour et ont été gardées dans un enclos. Les juments ont été vaccinées contre le tétanos et la gourme et ont reçu des traitements réguliers contre les vers et les poux. Leur condition physique pendant l'expérimentation était bonne à très bonne. Des palpations ovariennes ont été effectuées et du sang a été recueilli des juments tous Les 2 ou 3 jours pen- dant 4 semaines avant le commencement de l'expérimentation. Ces examens ont révélé que les ovaires contenaient des folli- cules de 2-3 cm de diamètre et que les concentrations du plasma en progestérone étaient très faibles au moins 4 semai- nes avant l'expérimentation. Ces observations ont indiqué que les juments étaient en état oestral transitoire ou "superficiel" avant l'expérimentation. Procédures d'expérimentation. L'expérimentation a commencé le 10 Septembre 1984. Les juments ont été mises au hasard en paires dans un groupe traité ou un groupe de contrôle jusqu'à ce que toutes les juments aient été affectées à un groupe le 21 Septembre. Les juments ont été appariées de façon à ce que chaque jument ait approximativement une activité ovarienne folliculaire égale. Chaque jument traitée a été pesée juste avant l'expé- rimentation. La dose de GnRH (100 ng/kg/h) à administrer pendant 28 jours a été calculée et dissoute dans une solution physiologique (0,9 %) saline. La solution a été mise dans une OMP et placée dans une coupe de solution à la température ambiante pendant une nuit pour permettre le "temps de démar- rage" de l'OMP. Les OMP ont été introduites de façon souscutanée dans le côté du cou des juments traitées sous infiltration anesthésique locale. Les pompes ont été maintenues en utili- sant 1 ou 2 points de suture de la peau. Après insertion de l'OMP, les juments traitées et de contrôle ont été mises en groupe dans un seul enclos. Tous les 2 ou 3 jours, les juments ont été mises au parc. Les palpations ovariennes ont été effectuées ces jours-là ainsi que les collectes de sang. En outre, les juments ont été excitées avec un étalon vigoureux pour détecter le rut. Les juments qui étaient en rut ont été couvertes par l'étalon chaque lendemain jusqu'à ce que l'ovulation soit détectée par palpation ovarienne. Les échantillons de sang ont été analysés quant aux concentrations d'hormone lutéinisante (LH) et de progestérone. Une échographie aux ultrasons a été utilisée pour diagnostiquer la grossesse 14 jours après l'ovulation. Par la suite des examens aux ultrasons étaient effectués tous les 2 ou 3 jours jusqu'au quarante-cinquième jour de grossesse, lorsque l'expérimentation était terminée. Résultats Quatre des 5 juments traitées et 1 des 5 juments de contrôle ont ovulé pendant l'infusion de GnRH. Le temps d'ovulation (x + s.e.m.) (s.e.m.: erreur standard sur la moyen ne) à partir du commencement de l'expérimentation a été de 18,6 + 4,1 jours pour les juments traitées et 54,8 + 10,8 jours pour les juments de contrôle. Ces différences étaient très significatives (P lorsqu'elle a été mesurée avec le test de Student "t". Les vitesses de conception et de croissance em- bryonnaire des deux groupes de ferments, telles que jugées par des mesures ultrasoniques, ont été normales. Les résultats d'analyse hormonale ont montré que les flots de LH ont été associés à l'ovulation chez toutes les juments. En outre, dans les 2 ou 3 jours suivant la mise en place de L'OMP chez les juments traitées, il y a eu un accroissement rapide de la concentration en LH du plasma. Chez 3 juments traitées, l'accroissement initial des concentrations en LH du plasma s'est poursuivi pendant , 13, et 18 jours et était associé à l'ovulation. Chez les deux autres juments traitées, l'accroissement initial en LH a duré 7 et 12 jours respectivement et n'a pas été associé à une ovulation. IL a été suivi par une seconde période de concentrations élevées du plasma en LH lesquelles ont été associées à l'ovuLation. Les concentrations en LH du plasma des juments de contrôle sont restées inférieures à 1 nG/mL après le départ de l'expérimentation jusqu'à plusieurs jours avant l'ovuLation, alors que Les concentrations en LH du plasma se sont élevées rapidement pendant plusieurs jours et ont été associées à l'ovulation. Les concentrations en progestérone du plasma dans les deux groupes de juments se sont élevées après l'ovu- Lation pour atteindre des concentrations en accord avec la présence d'un corps progestatif fonctionnel sur l'un des ovaires. Discussion: Ces résultats suggèrent fortement que l'infusion sous-cutanée de GnRH à un débit de 100 ng/kg/h. à des juments pendant l'état anoestral transitionnel saisonnier provoque des ovulations fertiles. Les raisons sont les suivantes: 1) quatre des 5 juments traitées ont ovulé pendant la période de 28 jours de l'infusion. La jument restante a répondu à l'infusion de GnRH dans les 2 jours de l'insertion de L'OMP par un accroissement rapide des concentrations du plasma en LH, mais ceci n'était pas associé à une ovulation. 2) Le temps moyen d'ovulation à partir du commencement de l'expérimentation a été sensiblement plus court (P juments de contrôle (54,8 jours). 3) Quatre des 5 juments traitées ont été grosses à la suite de l'ovulation provoquée et le jour moyen de conception pour le groupe a été 26,6 jours après l'insertion de L'OMP, ce qui prouve que la première ovulation après l'in- sertion de LI'OMP a été fertile. Dans la mesure o cela peut être confirmé par les examens ultrasoniques, la crois- sance du foetus a été normale chez les juments traitées. 4) Après insertion de l'OMP, les concentrations du plasma en LH se sont élevées rapidement dans les 2 ou 3 jours chez toutes les juments traitées. Cet accroissement initial-a été augmenté par un dégagement apparent de flot endogène de LH chez 3 des juments, lequel était associé à l'ovu- lation. Chez les 2 autres juments traitées, l'accroisse- ment initial en LH du plasma n'était pas associé à l'ovu- lation. Chez ces juments l'ovuLation est intervenue res- pectivement 15 et 33 jours après l'insertion de LI'OMP, sue gérant que l'infusion de GnRH a stimulé la synthèse de LH et relachée par la glande pituitaire. Durée d'administration La période d'infusion GnRH dans cet exemple a étE de 28 jours. Etant donné que 3 des 5 juments traitées ont ovulé 10, 13 et 15 jours après L'insertion de L'OMP, il est probable que la période d'infusion peut être réduite à partir de ces 28 jours chez certaines juments avec probablement une limite inférieure de 7 jours. EXEMPLE III Animaux Seize juments vierges élevées de façon standard, de 3 à 6 ans ont été utilisées dans l'expérimentation qui a été conduite pendant la période anoestrale profonde de l'hiver en 1985. Les juments étaient en bonne à excellente condition et ont été conduites dans 2 enclos extérieurs penda la période d'expérimentation. Procédure expérimentale: Les juments ont été divisées en 3 groupes. Le gro pe C (n = 5) n'a pas été traité et a servi de groupe de con- trôle tandis que le groupe 50 (n = 5) et le groupe 100 (n=6) ont reçu respectivement des infusions de GnRH à un débit de ng/kg/h et 100 ng/kg/h. La GnRH a été délivrée par des OMP implantées de façon sous-cutanée pendant 28 jours en partant du 2 Juillet 1985. Des palpations ovariennes et des détections oestrales ont été effectuées 3 fois par semaine ou quotidiennement lorsqu'un follicule ovarien de plus de 3 cm de diamètre a été détecté. Résultats: L'ovulation est intervenue chez aucunedes juments de contrôle, chez 1 des 5 juments du groupe 50, et chez 4 des 6 juments du groupe 100. Les temps moyens depuis l'inser- tion de L'OMP jusqu'à l'ovulation ont été de 24 jours pour le groupe 50 et de 21,8 jours pour le groupe 100. EXEMPLE IV Animaux Dix-sept juments élevées de façon standard ou de type standard de 3 à 9 ans ont été utilisées dans l'expéri- mentation qui a commencé le 2 Octobre 1985 alors que les juments étaient en état anoestral transitionnel. Procédure expérimentale: Les juments ont été divisées en 2 groupes. Un grou- pe (n = 9) a été traité avec une infusion de GnRH à un débit de 100 ng/Kg/h délivré par des OMP implantées de façon sous- cutanée pendant 28 jours. Les juments ont été mises dans des enclos pendant l'expérimentation et ont été mises au parc tous les 2 ou 3 jours, période durant laquelle la détection oestrale a été effectuée. Les juments ont été couvertes par un étalon chaque lendemain du jour o elles ont été en rut, jusqu'à ce que l'ovulation ait été détectée par palpation ovarienne. Des échantillons de sang ont été collectés 3 fois par semaine pour déterminer les concentrations du plasma en LH et en progestérone. Une échographie ultrasonique a été utilisée pour diagnostiquer la grossesse 14 jours après l'ovulation et tous les 2 ou 3 jours après cela jusqu'au quarante cinquième jour de grossesse o l'expérimentation s'est terminée. Résultats Huit des 9 juments traitées et 2 des 8 juments de contrôle ont ovulé durant la période o les OMP étaient en fonction.Le temps moyen d'ovulation (x + s.e.m.) à partir du commencement de l'expérimentation, a été de 33,9 + 4,2 jours pour les contrôles et de 18,8 + 4,3 jours pour les juments traitées. Cette différence était significative lorsqu' elle était mesurée par le test de Student "t" (P Une mesure ultrasonique du développement des foetus a suggéré que la vitesse de croissance des foetus a été normale dans les deux groupes. Une jument de chaque groupe n'a pas conçu. Des analyses hormonales ont montré que les flots de LH étaient associés à l'ovulation et des profiles de progestérone du plasma étaient compatibles avec la forma- tion d'un corps progestatif fonctionnel chez les juments. Résultats combinés Etat anoestral profond (Exemple I, 1984; Exemple II, 1985) Groupe iNombre de Proportion de juments Pourcentage de Grue juments Ovulation juments .1 Ovulation ContrôLes l 1984 I 5 0/5 0 1985 I 5 0/5 O Combinés 10 0/10a 0 % j j I jGroupe 50 (50 ng/kg/h) 1984 | 5 2/5 40 1985 j 5 1/5 20 'Combinés I 10 3/10ab 30 % Groupe 100 (100 ng/kg/h) 1984 I 4 | 3/4 75 1985 6 j 4/6 67 j Combinés [ 10 7/10b 70 % a, b p I I - |Contrôles l C 1984e 5 1 54,8 10,8 67,8 16,0 1985 8 I 33,9 4,2 35,7 6,6 + ICombinés 13 I 41,9 5,5 I 49,1 + 8,7 j |Traitées (100 ng/kg/h GnRH) 1984 5 1 18,6 4,1 26,6 9,7 1985 9 18,6 4,3 I 24,4 8,1 II *** I * Combinés 14 18,6 3,0 25,2 6,0 P jours plus tôt que chez les contrôles. De façon plus importante, cependant, le jour de conception chez les juments traitées est survenu 24 jours plus tôt que chez les contrôles. Il est probable que ces diffé- rences seront accrues si le traitement est commencé tôt en Septembre ou tôt en février, respectivement dans les hémis- phères Sud et Nord. Dans les expérimentations soulignées ci- dessus, les différences dans le temps jusqu'à l'ovulation et la conception entre les juments traitées et de contrôle a été plus grand en 1984 quand le traitement a commencé Le 10 Septem- bre, qu'en 1985 quand le traitement n'a pas commencé avant le 20 Octobre. En dépit du démarrage tardif en 1985, la conception est intervenue 3 à 4 semaines plus tôt chez les juments traitées. Etant donné que- la saison d'éLevage est d'environ 15 semaines, cette économie est un avantage consi- dérable. Par une utilisation judicieuse du traitement, Les éleveurs pourraient éliminer certains des coûts économiques associé à une saison d'élevage précoce. Si cela est souhaité la GnRH peut être administrée aux juments après incorporation de l'hormone dans des compositions pharmaceutiques à libé- ration continue, telle que la composition référencée ICI 118 630 par Imperial Chemical Industries et décrite dans la Demande australienne AU/A/79 986/82. REVENDICATIONS 1. Procédé pour provoquer une ovulation chez les juments, caractérisé en ce qu'il comprend l'administra- tion à une jument d'une quantité provoquant l'ovulation d'un produit libérateur de gonadotrophine pendant une période d'au moins sept jours. 2. Procédé selon la revendication I caractérisé en ce que le produit est administré à la jument en commen- çant entre 25 et 78 jours après la "mise bas" officielle des chevaux comme elle peut s'appliquer respectivement dans les hémisphères Sud et Nord. 3. Procédé selon la revendication 1 caractérisé en ce que la période est de 14 à 28 jours. 4. Procédé selon la revendication I1 caractérisé en ce que le produit est administré à la jument à des inter- valles inférieurs à un jour. 5. Procédé selon la revendication 1 caractérisé en ce que le produit est administré à la jument à des inter- valles inférieurs à une heure. 6. Procédé selon la revendication 1 caractérisé en ce que le produit est administré à la jument de façon sen- siblement continue pendant la période. 7. Procédé selon la revendication 1 caractérisé en ce que le produit est sélectionné dans le groupe comprenant l'hormone naturelle libératrice de gonadotrophine (GnRH), la GnRH synthétique, l'hormone lutéinisante (LH), la gonadotro- phine chorienique humaine (hHCG), l'hormone stimulatrice de follicule (FSM) et analogues. 8. Procédé selon la revendication 1 caractérisé en ce que le produit est administré à la jument à un débit équivalent à 25-100 ng/kg/h. 9. Véhicule pharmaceutique adapté à être associé au corps d'une jument caractérisé en ce qu'il est adapté à administrer une quantité provoquant l'ovulation d'un produit libérateur de gonadotrophine pendant une période d'au moins sept jours.