Brevet FR2582651A1 — publié le 19861205

La présente invention concerne un procédé particuliè- rement efficace de préparation de la vincristine. Les alcaloïdes cytostatiques du Vinca rosea L. Catharanthus roseus G.Don) sont des anticancéreux maintenant bien connus et particulièrement utiles. Compte tenu de la faible quantité de vincristine présente dans le Catharanthus, un assez grand nombre de moyens de préparation ont été proposés par les chimistes. C'est ainsi que FR-A-2 296 418 décrit la synthèse de la vincristine par couplage de la catharan- thine et de la vindoline. D'autres laboratoires ont obtenu la transformation de la vinblastine en vincristine par oxydation dans des conditions contr8ôlées, très strictes. FR-A- 2 210 393 et US-A-3 899 493 réalisent Il'oxyda- tion par I'acide chromique à -30, -90 C dans un mélange acétone-acide acétique ou dans le chloroforme-acide acétique à _55oC. dans US-A- 4 375 432, on utilise également I'oxyde chromique, en milieu acide à -65 C, -50 C mais dans un mélange THF-acide acétique. En outre, EP-A-37 289 revendique une oxydation par un mélange sel ferreux, eau oxygénée, perchlorate dans I 'acétonitrile. ZA-A-82 08939 décrit un procédé avec Il'acide chromique et un mélange éther-chloroforme. HU-A- 23 638 propose le diterbutylchromate dans l'acide pélargonique, et enfin EP-A-117 861 obtient la transforma- tion vinblastine/vincristine en oxydant par le permanganate de potassium en milieu acide acétique. Il est clair que ces alcaloTdes dimères constituent une matière précieuse du fait de leur faible quantité dans les matières premières végétales, et par conséquent que les procédés de synthèse ou d'hémisynthèse performants sont d'un intérêt extrême. Dans cette optique, nous avons réalisé une étude approfondie de Il'oxydation, dans des solvants variés compatibles avec les solubilités des réactifs et une basse température. Il est curieux de constater la grande importance du solvant mis en oeuvre, la majorité d'entre eux ne permettant d'ailleurs pas d'accéder correctement à la vincristine: le méthanol, le diméthyl formamide, le chloroforme, le toluène, le benzène, le monoéthyléther de l'éthylène glycol, le diméthyl- éther de l'éthylèneglycol, le diméthylsulfoxyde donnent des rendements pratiquement nuls. L'acétate de méthyl, I 'acétonitrile, le dioxanne, Il'acétate de butyle, le formiate d'éthyle, Il'acétone, la méthylisobutylcétone, la méthyléthylcétone donnent des rendements médiocres. Nous avons confirmé les bons rendements obtenus dans le THF (US-A-4 375 432), mais nous avons constaté des difficultés de séparation dues aux émulsions stables au moment de I 'extraction du mili eu réactionnel par le chlorure de méthylène. - De façon tout à fait surprenante, nous avons découvert que l'acétate d'éthyle constituant un excellent solvant permettant l'oxydation de la vinblastine en vincristine, comparativement à tous ceux déjà préconisés dans la technique antérieure. L'agent oxydant mis en oeuvre est'l'acide chromique ou ses sels, et la réaction est conduite à une température comprise entre -83 C et -25 C. Le procédé d'hémisynthèse de la vincristine ainsi - mis en oeuvre selon Il'invention permet d'obtenir les avantages suivants: * rendement élevé (80-90%) * non toxicité (comparé à l'acide formique, les solvants chlorés ou aromatiques, I'acétonitrile) * ne forme pas de peroxydes (comparé à I 'éther, THF) * relativement peu inflammable (comparé à ['éther, THF) * permet une grande échelle de température, à partir de -83 C (comparé à Il'acide acétique, I'acétonitrile ou l'acide pélargonique), et * facilite la séparation finale de la vincristine après alcalinisation du fait de la non miscibilité à l'eau (comparé à l'acide acétique, l'anhydride acétique, Il'acétone, Il'acide formique, le THF, 1 ' acétoni tri le). Exemple type non limitatif d'illustration de- 'hémisynthèse selon l'invention: 209 de vinblastine base sont solubilisés dans 2 litres d'acétate d'éthyle et 40 ml d'acide acétique. La température est amenée à -70, -600C et Il'on ajoute lentement sous agitation énergique une solution de 309 de bichromate de sodium dans 130 ml d'eau et 8 ml d'acide sulfurique, en maintenant la température du milieu réactionnel à -70, -600C. L'agitation est maintenue 2 heures. ml d'ammoniaque à 10% sont ajoutés lentement de façon à neutraliser le milieu réactionnel sans échauffement excessif. L'acétate d'éthyle contenant la vincristine base brute est décanté. Une deuxième extraction est réalisée avec 1 litre du même solvant. Les phases organiques réunies sont lavées et évaporées sous vide à 40-45 C. Le résidu de vincristine brute est solubilisé dans ml de toluène et la solution est purifiée par chromatographie sur colonne de silice Merck 60 mesh avec un gradient d'élution toluène-méthanol (3 à 20 % de méthanol). La vincristine est repurifiée par cristallisation dans le méthanol, puis le sulfate ou autre sel est obtenu suivant les procédés classiques de salification avec un acide therapeutiquement acceptable. Rendement: 70-80 %. Cette même technique d'oxydation a été appliquée avec succès aux dimères apparentés comportant un atome d'azote N1 méthylé, c'est-à-dire la désoxy 4 leurosidine ou leurosine par exemple. REVEND ICAT IONS 1/ Procédé d'hémisynthèse de la vincristine, caractéri- sé en ce qu'on oxyde la vinblastine ou ses sels, par Il'acide chromique ou ses sels, à basse température dans Il'acétate d'éthyle. 2/ Procédé selon la revendication 1, caractérisé par le fait que le milieu réactionnel est additionné d'acide acét i que. 3/ Procédé selon l'une des revendications 1 et 2, caractérisé par le fait que la réaction est effectuée entre -83 C et -25 C. 4/ Procédé selon l'une des revendications 1 à 3, caractérisé par le fait que la vincristine base libérée après neutralisation du milieu réactionnel est obtenue directement par décantation de Il'acétate d'éthyle. 5/ Procédé selon Il'une des revendications 1 à 4, caractérisé par le fait que la vincristine brute est purifiée par chromatographie sur silice avec mise en oeuvre d'un gradient d'élution toluène-méthanol. 6/ Procédé selon Il'une des revendications 1 à O20 5, caractérisé par le fait que la vincristine est purifiée par cristallisation dans le méthanol. 7/ Procédé selon Il'une des revendications 1 à 6, caractérisé en ce que la vincristine est salifiée avec un acide thérapeutiquement acceptable.