Brevet FR2573760A1 — publié le 19860530

L'invention a pour objet le 25,26-dénydro-1l,23- dihydroxycholêcalciférol sous forme de l'épimère 23S ou de l'épimere 23R, ou de leurs mélanges, ainsi que les com- positions pharmaceutiques comprenant ce composé comme subs- tance active. Les composés de l'invention peuvent être préparés en partant du composé correspondant de formule I ci-dessous par l'intermédiaire des composés de formules II à IV. CH CH CH os i (CH3)CH CH 3.3 CH3 O- I CH2C wt- S Si (CH3) 2-t- C- H 32 4 9 I I 1 5 Si (CH3) 23tC4H9 OH CH 3C CH On peut faire réagir un composé I avec un halogé- 3. IVnure de t-butyldimthylsiyle, par exemple le chlorure, et une base organique, par exemple l'imidazole, avantageuse- ment dans une atmosphère inerte, par exemple d'azote ou de H préférence d'argon, et dans un solvant organique aprotique, Si(H -tCH Si(CH 3)2-tC4H9 0 OSi (CH3 -t-C4H9 Si (CH 3) 2-t-C 4H9 On peut faire réagir un composé I avec un halogé- nure de t-butyldiméthylsilyle, par exemple le chlorure, et une base organique, par exemple Il'midazole, avantageuse- ment dans une atmosphère inerte, par exemple d'azote ou de préférence d'argon, et dans un solvant organique aprotique, par exemple un éther cyclique ou un formamide alkylé, de préférence leurs mélanges. Un solvant préféré est un mélan- 25737-60 ge de diméthylformamide (DMF) et de tétrahydrofuranne (THF). Le composé II peut être obtenu par chromatographie, de préférence sur une résine échangeuse de cations, comme un acide sulfonique de type styrénique, suivie de gel de silice. Dans le traitement avec une résine échangeuse de cations, on utilise un mélange d'éther cyclique et d'alca- nol inférieur, de préférence de THF et de méthanol. L'oxydation du composé II en composé III peut être réalisée avec un sel chromate avec une amine, par exemple un halogénochromate de pyridinium, de préférence le chloro- chromate de 2,2'-bipyridinium, et un sel d'un acide car- boxylique, de préférence l'acétate de sodium, dans un sol- vant inerte, par exemple un alcane halogéné, de préférence un chloroalcane, comme le chlorure de méthylène. On fait réagir la cétone III obtenue avec l'oxyde de L3S-(3o,5f,Z)]-2-[2-méthylene-3,5-bis[(1,1-diméthyl- éthyl)diméthylsilyloxyJcyclohexylidène]éthyldiphénylphos- phine pour obtenir le composé de formule IV correspondant. Cette réaction peut être réalisée à des températures rédui- tes, par exemple inférieures à -50 C, de préférence à environ -78 C, dans une atmosphère inerte, par exemple une atmosphère d'argon, dans un solvant inerte, par exemple un éther cyclique, de préférence le THF. Il est souhaitable de transformer initialement l'oxyde de phosphine en carbanion correspondant, en traitant l'oxyde de phosphine avec un al- kyl-lithium, de préférence le n-butyl-lithium, dans un sol- vant inerte, comme un alcane inférieur, par exemple l'hexa- ne, à des températures réduites comme ci-dessus. Dans la dernière étape, on élimine les groupes pro- tecteurs de fonction hydroxyle du composé IV pour obtenir le composé de l'invention correspondant. Cette réaction peut être réalisée à la température ambiante en traitant avec le fluorure de tétraéthylammonium, en présence d'un solvant de type éther cyclique, de préférence le THF. Le composé obtenu peut être purifié par des techniques connues en soi, par exemple par chromatographie sur gel de silice. Les composés de l'invention sont des inducteurs spécifiques puissants de la différentiation cellulaire et des inhibiteurs de la prolifération cellulaire et sont par conséquent des agents utiles dans le traitement des mala- dies prolifératives, comme les tumeurs et les leucémies. Ils sont aussi utiles dans le traitement de l'ostéoporose. Ils peuvent être administrés en doses d'environ 0,10-3,0, de préférence de 0,25-2,0, pg par jour. On comprendra tou- tefois que les doses indiquées ci-dessus ne sont données qu'à titre d'exemple et ne limitent en aucun cas la portée de l'utilisation de cette invention. Les composés de l'in- vention peuvent être administrés oralement, par voie sous- cutanée, intramusculaire, intraveineuse, intrapéritonéale ou topique. Ils peuvent être formulés en compositions, comme en comprimés, en capsules ou en élixirs pour l'admi- nistration orale, ou en solutions ou suspensions stériles pour l'administration parentérale. Environ 0,10-3,0, de préférence 0,25-2,0, pg sont mélangés avec un vénicule, support, excipient, pharmaceutiquement acceptable, par exemple le phosphate de calcium; un liant, par exemple la gomme adragante; un conservateur, un stabilisant, un agent de désintégration, par exemple l'amidon de mais; un lu- brifiant, par exemple le stéarate de magnésium; un agent édulcorant, par exemple le saccharose; un agent aromati- sant, par exemple la menthe poivrée. Diverses autres subs- tances peuvent être présentes, comme des enrobages, par exemple "Shellac", ou pour modifier de toute autre manière la forme physique de la dose unitaire. Les effets anti-prolifératifs et inducteurs de dif- férentiation des composés de 1-'invention peuvent être mis en évidence en employant des techniques connues, comme celles décrites dans Cancer Research and Therapy, vol. 23: Maturation Factors and Cancers, Ed. M.A.S. Moore, Raven Press, N.Y. 1982; Nature 270 (1977) 347-9 et Blood 54 (1979) 429-39. ces effets antl-prolifératifs et inducteurs de différentiation sur des cellules HL-60 in vitro sont in- diqués sur le tableau ci-dessous. Tableau Prolifération Diff6rentiation Cellules HL-60 % de réduction Réduction du NBT Phagocytose Concentrationa) par ml du nombre des cellules formazan"+ '/ celluies phagocytiques/ Composé (x 10 9molaire) x 10- cellules total cellules camptées %"+" total cellules ccmptées%'+" Aucun (témoin du milieu) 79,1 1,4 - 3/437 41 3/325 1 ri Véhicule (0,01% d'éthanol) 75,9 + 2,0 0 3/431 1 2/364 2 + 0,7 1 10/436 2 6/367 2 *' 10 58,0 + 2,0 24 100/434 23 60/354 17 " 30 35,7 + 1,2 53 247/428 58 201/417 48 " 100 23,7 + 0,5 69 361/400 90 315/383 82 a) La concentration finale du véhicule dans toutes les cultures expérimentales était de 0,01%, v/v, d'éthanol. NBT: "nitroblue tetrazolium" C, C4 Les résultats indiquent que les composés de l'in- vention restreignent la prolifération des cellules tumora- les promyélocytiques humaines in vitro même s'ils ne sont pas directement toxiques pour les cellules. En outre, des cellules cultivées en présence de faibles doses de ces com- posés (3 à 100 x 10-9 molaire) ont été induites pour se différentier en un type de cellules plus mûres comme le met en évidence l'acquisition d'une activité enzymati- que et d'une fonction cellulaire. Les composés de l'inven- tion représentent donc une approche remarquable du contrôle des maladies cliniques dues à une prolifération et/ou à une ditférentiation cellulaire aberrante, par exemple les mala- dies néoplasiques. Exemple 1 a) On agite sous atmosphère d'argon, pendant une nuit à la température ambiante, une solution de 0,352 g d'éther [1R-E[1(R*,S*),3af,4,7au]]-octahydro-1-(3-hydroxy-1,5-di- méthyl-5-hexenyl)-7a-méthyl-1H-indène-4-ol-triméthylsilyli- que, 0,31 g de chlorure de t-butyldiméthylsilyle et 0,31 g d'imidazole dans 5 ml de DMF anhydre et 3 ml de THF anhy- dre, puis on ajoute quelques morceaux de glace. Après avoir agité le mélange 30 minutes, on le reprend dans 200 ml d'hexane/ether (5: 1) et on le lave avec 80 ml de H20 et ml de saumure et on le sèche sur Na2SO4. On filtre le mélange et on élimine le solvant sous vide, ce qui donne 0,576 g de substance. On l'agite pendant 1 heure avec 0,1 g de résine échangeuse de cations dans 5 ml de THF et 15 ml de méthanol. On filtre le mélange et on élimine les solvants sous vide. On purifie le résidu par chromatographie sur gel de silice en éluant avec de l'hexane/acétate d'éthyle (10: 1), ce qui donne 0,316 g de [1R -[lo(R*,S*),3aj,4af,- 7ae]]-octahydro-1-[3-[(1,1-diméthyléthyl)diméthylsilyl- oxy]-1,5-diméthyl-5-hexényl]-7a-méthyl-lH-indène-4-ol que l'on utilise directement dans l'étape suivante. b) On traite une solution de 0,24 g du produit de la) dans 15 ml de chlorure de méthylène anhydre avec 0,35 g d'acétate de sodium anhydre et 0,71 g de chlorochromate de 2,2'-bipyridinium et on agite le mélange à la température ambiante pendant 3 heures. Après ce temps, on ajoute une quantité supplémentaire de U,355 g de chlorochromate. On agite le mélange pendant 2 heures, puis on ajoute 1 ml d'isopropanol, on agite le mélange pendant 20 minutes, puis on le dilue à l'eau et on l'extrait avec de i'éther/acéta- te d'éthyle. La phase organique est lavée avec de l'eau et de la saumure, séchée sur du sulfate de sodium anhyare et filtrée. Les solvants sont éliminés sous vide. On purifie le résidu par chromatographie sur-gel de silice en éluant avec de l'hexane/acétate d'éthyle, ce qui donne 0,238 g de [1R-[ld(R*,S*),3a/n,7-av]-octahydro-1-[3-L(l1,1-diméthyl- éthyl)diméthylsilyloxy]-1,5-diméthyl-b-hexényl]-7a-méthyl- 1H-indène-4-one pure. c) On refroidit une solution de 0,265 g d'oxyde de L3S-(3d,5f,Z)]-2-[2-méthylène-3,5-bis-[(1,1-diméthyléthyl)- diméthylsilyloxy]cyclohexylidène]éthyldiphényl-phosphine dans 6 ml de THF anhydre à -78 C et on la traite goutte à goutte avec 0,276 ml d'une solution 1,6M de n-butyl-lithium dans l'hexane. Après avoir agité 5 minutes à -78 C, on traite la solution goutte à goutte avec 0,1 g du produit de lb) dissous dans 2,5 ml de THF anhydre. Le mélange est agi- té 1,5 heures, puis trempé par addition de 3 ml d'un mélan- ge 1: 1 de bicarbonate de sodium 1N et de tartrate de so- dium et de potassium 1N, on le laisse se réchauffer à la température ambiante, puis on le dilue à l'eau et on l'ex- trait avec de l'acétate d'éthyle. L'extrait organique est lavé avec de l'eau et de la saumure, séché sur du sulfate de sodium anhydre et filtré. Les solvants sont éliminés sous vide. On purifie le résidu par chromatographie sur gel de silice en éluant avec de l'hexane/acétate d'éthyle, ce qui donne 0,130 g d'éther trisilylique. On le dissout dans 6 ml de THF et on le traite avec 1,3 ml de fluorure de té- trabutylammonium 1M dans le THF et on l'agite à la tempé- rature ambiante pendant 20 heures. Ensuite, on ajoute 0,5 ml de fluorure de tétrabutylammonium 1M dans le THF et on poursuit l'agitation pendant 4 heures.'Le mélange est dilué à l'eau et extrait avec de l'acétate d'éthyie. L'extrait organique est lavé avec de l'eau et de la saumure, séché sur du sulfate de sodium anhydre et filtré. On élimine les matières volatiles sous vide. On purifie le résidu par chromatographie sur gel de silice en éluant avec de l'hexa- ne/acétate d'éthyle, ce qui donne 0,079 g de (1c,31,5Z,7E,- 23S)-9,10-sécocholesta-5,7,10(19),25-tetraène-1,3,23-triol pur sous forme d'une poudre blanche amorphe. []25: +37,97o (c = 0,2, EtOH). Exemple 2 En suivant le mode opératoire de l'exemple 1, on transforme successivement l'éther [lR-[Il(R*,R*)-3a(,4[,- 7ae]]-octahydro-l-(3-hydroxy=1,5-diméthyl-5-hexényl)-7a- méthyl-1H-indène-4-ol-triméthysilylique en [lR-[1l(R*,R*),3a,4a,7a]]-octahydro-1-L3-[(1,1- diméthyléthyl)diméthylsiloxy]-1,5-diméthyl-5-hexényl]-7a- méthyl-1H-indène-4-ol, [lR-[ld(R*,R*),3a,7a]]-octahydro-1-L3-[(1,1-di- méthyléthyl)diméthylsilyloxy]-1,5-diméthyl-5-hexényl]-7a- méthyl-1H-indène-4-ol et (1l,3,,5Z,7E,23R)-9,10-sécocholesta-5,7,10(19),25- tétraène-1,3,23-triol. Dans de nombreux exemples de formulations donnés ci-dessous, les composés de l'invention peuvent être utili- sés sous forme de l'épimère 23S ou de l'épimère 23R ou sous forme de leurs mélanges. Exemple A Numéro Substance mg/capsule 1. Composé de l'invention 0,00010 0,00025 0, 00050 2. polyéthylène- glycol 400 20U,00 zOO,00 zO0,0 Numéro Substance mg/capsule 3. hydroxyanisole butylée 0,100 0,100 0,100 4. palmitate d'ascorbyle 1,00 1, 00 1,00 Les substances 1, 3 et 4 sont dissoutes dans la substance 2 sous azote et encapsulées. Exemple B Numéro Substances mg/capsule 1. Composé 0,10 ml 0,50 ml 2. 95% d'éthanol- % d'eau 2,00 ml 3,00 ml La substance 1 est dissoute la substance 2 sous azote et injectée par voie intramusculaire. R t V E N D I C A T I UN S 1.- 25,26-Déhydro-ld,23dihydroxycholécalciférol sous forme de l'épimère 23S ou de l'épimère 23R ou sous forme d'un de leurs mélanges. 2.- 25,26-Déhydro-l,23S-dihydroxycholécalciférol. 3.- Composé selon la revendication 1 ou 2, caractérisé en ce qu'il est un agent antitumoral. 4.- Composition pharmaceutique, en particulier pour le traitement des tumeurs, caractérisée en ce qu'elle comprend une quantité efficace d'un composé selon la revendication 1 ou 2 comme substance active. 5.- Utilisation d'un composé selon la revendication 1 ou 2 dans la préparation d'une composition pharmaceutique selon la revendication 4, en particulier d'une composition ayant une activité antitumorale.