Brevet FR2573997A1 — publié le 19860606

Support solide capable d'adsorber les lipoprotéines et et son utilisation pour La séparation des lipoprotéines de basse densité présentes dans un liquide tel que du plasma sanguin La présente invention a pour objet un support solide capable d'adsorber les lipoprotéines de basse densité présentes dans un liquide tel que le plasma sanguin. De façon plus précise, elle concerne des supports en polymère insolubles, utilisables pour épurer sélectivement des lipoprotéines de basse densité du plasma sanguin par adsorption sélective. Le taux de ces lipoprotéines de basse densité est anormalement élevé dans Le sang de malades atteints d'hypercholestérolémie, ce qui peut entrainer des risques d'accidents cardiaques précoces par Lésions vasculaires graves dues à L'accumulation de ces lipoprotéines. Aussi, des procédés permettant d'épurer Le plasma sanguin de tels malades par adsorption des lipoprotéines de basse densité sur des supports solides présentent un grand intérêt car il n'existe actuellement aucune technique de ce genre pour effectuer cette épuration. En effet, on a utilisé jusqu'à présent des techniques de plasmaphérèse qui consistent à substituer en partie le plasma du malade par un plasma étranger ou par une solution de remplacement. Aussi, le développement de procédés d'épuration directe du plasma du malade fait l'objet de nombreuses recherches qui se justifie par l'intérêt d'éviter des injections de plasma étranger et la nécessité de maintenir les éléments plasmatiques constitutifs indispensables aux taux voulus. La présente invention a précisément pour objet un support solide capable de séparer les lipo protéines de basse densité présentes dans un liquide, qui peut être utilisé pour réaliser ex-vivo l'épuration en lipoprotéines du plasma sanguin d'un malade atteint d'hypercholestérolémie. Selon l'invention, le support solide capable d'adsorber les lipoprotéines de basse densité présentes dans un liquide,se caractérise en ce qu'il est constitué par un matériau polymère à base de polystyrène sur lequel sont fixés des groupements de formule -S02R1 dans Laquelle R1 représente le reste d'un acide aminé éventuellement modifié, lié au pont S02 par sa fonction amine, etlou des groupements de formule fS03)xM dans laquelle M représente un métal ne réagissant pas avec Le liquide et x représente La valence du métal M. L'utilisation dans L'invention de supports solides en matériau polymère à base de poLystyrène sur lequel sont fixés des groupements de formule tSO3)xM et/ou de formule -S02R1, permet d'obtenir une extraction sélective des lipoprotéines de basse densité présentes dans un Liquide tel que Le plasma par adsorption sélective due sans doute à la formation de complexes entre les lipoprotéines et les groupements actifs fus03) M et/ou -S02R1 du support. Par ailleurs, l'utilisation de tels supports est intéressante pour les applications d'épuration plasmatique ex-vivo, car on peut obtenir grâce aux choix du polymère à base de polystyrène, de bonnes caractéristiques mécaniques, une géométrie et une granulométrie adaptée à l'hémodynamique, ainsi que la biocompatibilité et la biorésistance requises pour ces applications. Le polymère à base de poLystyrène peut être soit du polystyrène pur, soit un polymère résistant à la chlorosulfonation, greffé par du styréne. Dans ce dernier cas les polyméres utilisés doivent présenter de plus une inertie chimique et physicochimique suffisante dans les conditions d'utilisation du support. Par ailleurs, il est nécessaire que le polymère soit insoluble dans les solvants éventuellement utilisés pour le greffage du styrène et pour La fixation des groupements +S03)xM et/ou des groupements -S02R1. Les polymères susceptibles d'etre utilises peuvent être des polyoléfines ne comportant pas d'insaturation éthylénique comme le polyéthylène et le polypropylène, du polychlorure de vinyle et des poLy- mères fluorés tels que Le polychlorotrifluoroéthylène et le polytétrafluoroéthylène. De préférence, Le support solide en polymère à base de polystyrène est sous la forme d'une poudre car le taux d'adsorption des lipoprotéines augmente avec la surface spécifique du support. On peut utiliser par exemple des poudres ayant une granulométrie de 100 à 200 jjm. Lorsque Le support comporte des groupes fS03)xM, M représente généralement le sodium. Lorsque le support comporte des groupes -S02R1, le reste d'acide aminé R1 provient d'un acide aminé qui comporte au moins une fonction carboxylique libre. A titre d'exemple, l'acide aminé peut être choisi dans le groupe comprenant La glycine, t'acide aspartique, la méthionine, la cystéine, L'hydroxypro- line, La thréonine, la sérine, la tyrosine, l'alanine, la phénylalanine, l'acide #-aminocaproïque, t'acide y-amino-n-butyrique et L'acide -amino-n-vatérique. De préférence, on utilise un acide aminé dicarboxylique tel que L'acide glutamique, Lorsque L'on utilise un acide aminé modifié, cette modification peut consister, par exemple en la transformation de l'acide aminé en sulfamate lorsque l'acide comprend une fonction amine libre, ou en sa transformation en sulfate lorsque l'acide comporte une fonction hydroxyle. A titre d'exemple de tels acides amines mo dixies, on peut citer La lysine-sulfamate. Les supports en polymère de L'invention qui comportent des groupes fS03)xM peuvent être préparés en soumettant à une chlorosulfonation un support en polymère à base de polystyrène pour fixer sur le po lystyrène des groupes -S02Cl, et en convertissant ensuite les groupes -sO2CL en groupes {S03)xM par hydrolyse au moyen d'une solution de M(OH)X. La premiere étape de chlorosulfonation est réalisée par réaction de L'acide chlorosulfonique avec le polymère à base de polystyrène dans un solvant approprio. Le solvant utilise peut etre du nitrométhane auquel on ajoute généralement du dichlorométhane. Pour réaliser cette réaction, on peut tout d'abord immerger le polymère dans le solvant pour le laisser gonfler et introduire ensuite t'acide chlorosulfonique. On peut aussi introduire directement le polymère dans la solution contenant L'acide chlorosulfonique. La quantité de groupes S02Cl fixée sur le polymère dépend de la quantité d'acide chlorosulfonique utilisée et du temps de réaction. En fin de réaction, on lave le support en polymère, par exemple dans du nitrométhane et de L'acétone, puis on Le sèche sous vide. La réaction d'hydrolyse peut être effectuée par une solution de soude à la température ambiante. Après cette réaction, on sépare le support de la solution de soude par fiLtration, puis on le lave à l'eau et on le séche sous vide. Les supports en polymère à base de polystyrène de l'invention qui comportent des groupements -SO2R1 et éventuellement des groupements (-SO3)xM peuvent être préparés en soumettant à une chlorosulfonation un support en polymère à base de polystyrène pour fixer sur le polystyrène des groupes -SO2Cl, et en convertissant ensuite au moins une partie des groupes -SO2Cl en groupes -SO2R1 par réaction du support chlorosulfoné avec un acide aminé en milieu basique. La première étape de chlorosulfonation peut être réalisée comme précédemment. La deuxième étape de réaction avec l'acide aminé est généralement effectuée dans un milieu contenant le mélange eau-dioxane dont le pH est ajusté par addition de soude. On dissout tout d'abord L'acide aminé dans une solution d'eau et de dioxane dont le pH est ajusté à la valeur voulue pour obtenir La dissoLution de L'acide aminé. On utilise un excès d'acide aminé par rapport aux fonctions chlorosulfonées, puis on introduit le support chlorosulfoné dans cette soLution et l'on maintient le pH à une valeur constante par addition de soude. Lorsque le pH ne varie plus, La réaction est terminée et l'on peut séparer le support de la solution par filtration, puis le soumettre à différents lavages effectués par exemple avec de L'eau et de la soude. Le support ainsi obtenu peut etre ensuite conservé à sec. La suite des réactions conduisant à l'obten- tion de polystyrène portant soit des groupes tS03)xM avec x=Na, soit des groupes -S02R1 avec R1 étant Le reste d'un acide aminé peut être schématisée de la façon suivante CH2 CH 4 HCLSO4 I Ctft 4 Aci de chtoobuifoni4ue) Qo (PS) t CH2 ce tn SO,Cf + lAcde Amxné) + NaOtl Acide Aminc) I \ NC2 tcef2 1 ,Htn tCH2 ~ CHi -À 503NaJ S02 - NH - CH - COOH I - SOgNaJ tPs- 5 2 R1 ) Lorsque l'on utilise dans L'invention un support en polymère à base de polystyrène obtenu par greffage de styrène sur un polymère résistant à La chlorosulfonation, on réalise de préférence le greffage par irradiation au moyen de rayonnements ionisants. Dans ce cas, on peut immerger une poudre du polymère résistant à la chlorosulfonation dans une solution de styrène, et soumettre L'ensemble à une irradiation en atmosphère exempte d'oxygène, en utilisant par exemple comme source d'irradiation une source de cobalt 60. On contrôle le taux de greffage de la poudre en agissant sur la concentration en styrène de la solution, sur la dose totale d'irradiation et sur le débit de dose d'irradiation. Après irradiation, on soumet généralement le produit greffé à un lavage réalisé par exemple dans un mélange d'eau et d'acétone, puis on le sèche. Ce mode de préparation de la poudre greffée est particulièrement avantageux car il permet d'obtenir un greffage du styrène à la surface de La poudre et de conférer à celle-ci après fixation des groupes fS03)xM et/ou -S02R1 une bonne affinité pour les lipoprotéines de basse densité. La presente invention a également pour objet un procédé de séparation des lipoprotéines de basse densité présentes dans un liquide. ce procédé consites - à mettre en contact le liquide avec le support soli de de l'invention, et - à séparer ensuite le liquide du support sur Lequel ont été adsorbées Les Lipoprotéines de basse densi té. Le liquide peut être du sang ou du plasma sanguin. D'autres caractéristiques et avantages de l'invention apparaitront mieux à la lecture de la description qui suit donnée bien entendu à titre illustratif et non limitatif en référence au dessin annexé sur lequel - la figure 1 représente de façon schématique un épurateur plasmatique sur colonne pour mettre en oeuvre te procédé de ltinvention, - la figure 2 représente chématiquement un autre type d'épurateur plasmatique pour mettre en oeuvre le procédé de L'invention, et - la figure 3 represente schématiquement une installation d'épuration sur sang total sur colonne. Les exemples suivants donnés bien entendu à titre non limitatif, illustrent la réalisation de supports adsorbants conformes à L'invention. EXEMPLE 1 : Préparation d'un support en polyéthylène greffé par du styrène sur lequel sont fixés des groupements -S03Na. a) - Préparation du polyéthyLène greffé On part d'une poudre de polyéthyléne de 100 à 200 pm, commercialisée sous la référence Lacqténe 1005 FN 23 par la Société ATO CHIMIE ; les caractéristique de ce polyéthylène sont Les suivantes : indice de fluidité de 0,5 g/10 min. mesuré selon ta méthode ASTM D 1238, température VICAT de 940C mesuree selon la méthode ASTM D 1525 et une masse volumique de 0,923 g/cm3. On greffe du polystyrène sur cette poudre de polyéthylène en exposant directement aux rayonnements y d'une source de cobalt 60 la poudre de polyéthylène immergée dans une soLution à 25Z de styrène dans du méthanol, en atmosphère exempte d'oxygène. On utilise un débit de dose d'irradiation de 138700 radis pendant une durée telle que la dose totale d'irradiation est de 0,48 Mrad. Dans ces conditions, le taux de greffage qui est défini comme étant égal à P1-P0 x 100 Po avec P1 représentant le poids final de la poudre greffée et PU son poids initial, est de 117X. Après irradiation, on lave la poudre greffée dans un mélange eau-méthanol : 50-50 en volume et on ta sèche. b) - Traitement de chlorosulfonation On immerge la poudre de polyéthylène greffée par du polystyrène dans une solution de nitrométhane contenant 30X (en volume) d'acide chlorosulfonique, pendant 17 heures. On retire alors la poudre de La solution et on la lave avec le nitrométhane puis on La sèche. On détermine ensuite les taux de soufre et de groupements -SO2Cl de La poudre obtenue, le taux de groupements -SO2Cl est déterminé de ta façon suivante : on hydrolyse 200 mg de la poudre avec 50 ml d'une solution 1M de NaOH pendant 24 heures au refLux. Après acidification, on titre les ions CL par une solution 0,1M de AgNO3 en utilisant une électrode indicatrice d'argent. Le taux de soufre est déterminé par micro- analyse. On obtient Les résultats suivants : 9,74X de soufre et 30,3X de groupements -S02cl. c) - Hydrolyse des fonctions chLorosuLfony- le On réalise cette hydrolyse en utilisant une solution de soude NaOH à 2 mol.l-1, a une température de 600 C. On immerge la poudre qui a été soumise au traitement de chlorosulfonation dans cette solution de soude pendant 24 heures, ce qui permet de transformer la totalité des fonctions -SO2Cl en groupements -So3Na. EXEMPLE 2 : Préparation d'un support à base de poLy- éthylène greffé par du polystyrène sur lequel sont fixés des groupements SO3Na. a) - Préparation de la poudre de polyéthy lêne greffé On part d'une poudre de polyéthylène de 100 à 200 m, commercialisée par CDF CHIMIE sous la référence Lotrène PA 0230. Les caractéristiques de ce po lyethylene sont les suivantes : indice de fluidité de 2 g/10 min. mesure selon la méthode ISO R 1133 et une masse volumique de 0,920 g/cm . On greffe du styrène sur cette poudre de polyéthylène en utilisant les mêmes conditions de greffage que celles de l'exemple 1, soit une solution à 25X de styrène dans le méthanol, un débit de dose d'irradiation de 138700 rad/h et une dose d'irradiation de 0,48 Mrad. Le taux de greffage de La poudre obtenue est de 82X. b > - Traitement de chlorosulfonation On réalise ce traitement dans Les mêmes conditions que celles de L'exemple 1 et on obtient ainsi une poudre de polyéthylène greffé par du poLystyrène contenant 8,4X de soufre et 26,1X de groupements -SO2CL c) - HydroLyse des fonctions chlorosuLfony- le On réaLise ce traitement dans les memes conditions que celles de L'exemple 1 pour obtenir du polyéthylène greffé par du polystyrène sur lequel sont fixés des groupes -S03Na. EXEMPLE 3 : Préparation d'un support en polystyrène sur lequel sont fixés des groupements -S03Na. On part d'une poudre de polystyrène de 100 à 200 m commercialisée par la Société CDF sous La référence GedexPN2Q. Ce polystyréne présente un indice de fluidité de 8 à Il g/10 min. (déterminé par La méthode ISO R 1133) et une température VICAT de 930C selon la méthode NFT 51 021. a) - Traitement de chlorosulfonation On utilise une solution de nitrométhane et de dichlorométhane contenant 95% (en volume) de nitrométhane et 5% (en volume) de dichlorométhane et on immerge la poudre de polystyrène dans cette solution pendant 30 min On ajoute ensuite L'acide chlorosulfonique de façon à obtenir une concentration en acide chlorosulfonique de 10X (en volume) et on laisse la réaction se poursuivre pendant 3h30. En fin de traitement, on obtient ainsi une poudre de polystyrène comportant 11,6X de soufre et 36X de groupements -SO2Cl. b) - Hydrolyse des fonctions chlorosulfonyle On réalise le traitement d'hydrolyse dans les mêmes conditions que ceLles de l'exemple 1, et on obtient ainsi une poudre de polystyrène sur lequel sont fixés des groupements -S03Na. Une partie de la poudre est broyée jusqu'à obtention d'une granulométrie de 10 à 100 pm. EXEMPLE 4 : Préparation d'un support en poLystyrène sur lequel sont fixés des groupements -SO2Glu. Dans cet exemple on utilise la même poudre de polystyrène que dans l'exemple 3. a) - Traitement de chlorosulfonation On utilise pour ce traitement un solvant comprenant 96,5X (en volume) de nitrométhane et 3,5X (en volume) de dichlorométhane et on lui ajoute de l'acide chiorosulfonique pour obtenir une concentration en acide chlorosulfonique de 28X (en voLume). On immerge alors La poudre de polystyrene dans la soLu- tion contenant l'acide chlorosulfonique et on laisse la réaction se poursuivre pendant 17 h. En fin de réaction, on obtient ainsi une poudre de polystyrène contenant 13% de soufre et 40,4X de groupements -S02Cl. b) - Fixation d'acide glutamique sur les fonctions chlorosulfonyle On prépare une solution d'acide glutamique dans un solvant constitué par un mélange d'eau et de dioxane dans un rapport 3/2 et on ajuste Le pH à 12 avec une solution de soude à 4 mol..-1 pour dissoudre l'acide glutamique. On utilise une quantité d'acide glutamique en excès par rapport aux fonctions chLorosulfonyle à modifier, on introduit alors la poudre de polystyrène chtorosulfonee dans la solution et on maintient le pH à 12 par addition de soude à 2 mol.l 1. Lorsque Le pH ne varie ptus, ta réaction est terminée. On procède alors à un Lavage de la poudre traitée avec de l'eau, puis avec une solution de soude à 10-2 mol.l-1. On conserve la poudre à sec. EXEMPLES 5 à 8 : Ces exemples illustrent L'utilisation des supports préparés dans Les exemples 1 à 4 pour l'épu- ration en Lipoprotéines d'un plasma sanguin. Pour réaliser cette épuration, on utiLise une cuve fermée maintenue à une température de 370C dans laqueLLe on a introduit 3 ml du support en poudre utilisé et 6 ml du plasma à épurer. On maintient l'ensemble sous agitation rotative permanente et on laisse incuber pendant 15 min. à 370C. En fin de réaction, on sépare le plasma du support par décantation ou centrifugation et on détermine les taux de lipoprotéines : cholestérol total CT, lipoprotéines de basse densité CLDL, lipoprotéines de haute densité HDL et triglycérides TG, du plasma. On a déterminé également les taux de Lipoprotéines avant La réalisation du traitement d'épuration. On en déduit ainsi le taux d'épuration obtenu. Pour déterminer les différents taux, on opère de la façon suivante : on mesure Le taux de cholestérol total (CT) par dosage colorimétrique après hydrolyse enzymatique en utilisant La trousse Sigma et La méthode décrite dans Allain. CA, Poon. LS, Cran C.S G, Richmond W, Fu PC., Clin. Chem, 20, p. 470 (74) Enzymatic determination of total serum choLesterol ; on mesure Le taux de lipoprotéines de haute densité par dosage colorimétrique dans Le surnageant après précipitation sélective des Lipoprotéines de basse densité et des lipoprotéines de très basse densité par le phosphotungstate de sodium ; on détermine Le taux de triglycérides (TG) du plasma par dosage en uLtraviolet après hydrolyse enzymatique en utilisant La trousse Sigma. Après avoir effectué ces trois dosages, on peut en déduire le taux de lipoprotéines de basse densité du plasma en utilisant la formule : LDL = CT - CHDL - 'G/5 Les résultats obtenus en utilisant Les supports des exemples 1 à 4 sont donnés dans le tableau annexé. On précise que les concentrations initiaLes du plasma traité en cholestérol total, en Lipoprotéi- nes de haute densité, en triglycérides et en Lipoprotéines de basse densité étaient Les suivantes : C T = 398 mg/ml de plasma, CHDL = 0,16 mg/ml de plasma, TG = 1,55 mg/ml de plasma, et CLDL = 351 mg/ml de plasma. Au vu des résultats donnés dans ce tableau, on constate que les supports de L'invention permettent d'obtenir un taux d'épuration élevé en Lipoprotéines de basse densité. Ces supports peuvent être utilisés pour L'épuration du sang total ou du plasma sanguin dans Les épurateurs représentés sur les figures 1 à 3. Sur la figure 1, qui illustre L'épuration en continu du plasma sanguin, on voit que l'épurateur comprend une colonne 1 contenant le support adsorbant de l'invention, un séparateur de cellules 3 pour so- ler le plasma sanguin du sang à épurer et un collec teur 5 dans lequel sont introduits, d'une part, tes ceLLules séparées (en 3) du sang à traiter et, d'autre part, le plasma épuré. Dans cette installation, une première conduite 7 munie d'une pompe 9 et d'un moyen de mesure de la pression Il sert à introduire le sang provenant du patient dans le séparateur de cellules 3. Dans ce séparateur, les cellules sont évacuées par La conduite 13 vers le collecteur 5 tandis que le plasma est dirigé par La conduite 15 munie d'une pompe 17 dans La coLonne 1 contenant Le support adsorbant de L'invention. A la sortie de La coLonne 1, Le plasma purifié est évacué par La conduite 19 munie d'un moyen de mesure de pression 21 dans Le collecteur 5 qui constitue, de plus, un système de sécurité pour éviter la présence de bulles dans le sang ainsi reconstitué. Celui-ci est évacué par la conduite 23 munie du moyen de mesure de pression 25 dans le système circuLatoire du patient. Ainsi, Les conduites 7 et 23 qui servent respectivement à l'introduction du sang dans le dispositif et à son retour dans le système circulatoire sont montées en dérivation sur une veine du patient. Sur ta figure 2, on a représenté un dispositif d'épuration dans lequel L'épuration du plasma se fait de façon discontinue alors que Le système est parcouru en continu par le sang du patient. On retrouve La plupart des constituants du système epurateur de la figure 1 et ils portent Les mêmes références. Dans ce cas, le plasma sanguin sortant du séparateur de celluLes 3 est purifié en discontinu dans les récipients 31 et 33 contenant le support adsorbant de l'invention. Dans ce but, Le plasma mis en circulation par la pompe 17 peut être extrait du circuit et introduit dans le récipient 31 par La vanne de soutirage 18. Après purification dans le récipient 31, le plasma épuré est réintroduit en amont de la pompe 17 par la conduite 16 alors que la vanne 14 est fermée. Sur La figure 3 on a représenté un épurateur sur sang total. Dans ce cas, l'installation correspond sensiblement au schéma de la figure 1, mais Le séparateur de cellules 3, La conduite 13 et la pompe 17 ont été supprimés puisque l'épuration est réalisée directement sur le sang provenant du patient. T A B L E A U Ex. Support de Chol. Total CT Chol. LDL (CLDL) Chol. HDL (CHDL) Triglycérides (TG) %chol. mg/ml % de LDL mg/ml % de HDL mg/ml mg/ml (support) adsor- (sup- dans chol (sup- dans chol (sup bé port) adsorbé prot) adsorbé port) 5 l'ex. 1 13,5% 1,08 84% 0,91 5,5% 0,06 0,54 6' l'ex. 2 6,5% 0,52 81% 0,42 7,7% 0,04 0,30 100-200 6% 0,48 77% 0,37 2,9% 0,06 0,28 7 l'ex. 3 10-100 20% 1,59 94% 1,5 1,5% 0,026 0,32 8 l'ex. 4 5,3% 0,42 76% 0,32 14% 0,06 0,20 REVENDICATIONS 1. Support solide capable d'adsorber Les Lipoprotéines de basse densité présentes dans un liqui- de, caractérisé en ce qu'il est constitué par un matériau polymère à base de polystyrène sur lequeL sont fixés des groupements de formule -S02R1, dans laquelle R1 représente le reste d'un acide aminé éventuellement modifié, lié au pont S02 par sa fonction amine, et/ou des groupements de formule fS03)xM, dans laquelle M représente un métal ne réagissant pas avec Le Liquide et x représente la valence du métal M. 2. Support selon La revendication 1, caractérisé en ce que M représente le sodium. 3. Support selon L'une quelconque des revendications 1 et 2, caractérisé en ce que L'acide aminé est L'acide glutamique. 4. Support selon L'une quelconque des revendications 1 et 2, caractérisé en ce que L'acide amine est choisi dans le groupe comprenant La glycine, L'acide aspartique, la méthionine, La cystéine, L'hy- droxyproline, la thréonine, La sérine, la tyrosine, l'alanine, la phénylalanine, L'acide -aminocaprol- que, l'acide y-amino-n-butyrique et L'acide g-amino- n-valérique. 5. Support selon L'une quelconque des revendications 1 à 4, caractérisé en ce que te polymère à base de styrène est du polystyrène. 6. support selon L'une quelconque des revendications 1 à 4, caractérisé en ce que le polymère à base de styrène est un polymère résistant à la chlorosulfonation, greffé par du styrène. 7. Support selon la revendication 6, caractérisé en ce que le polymère résistant à La chlorosulfonation est choisi parmi les polyoléfines, tes polymères fluorés et le chlorure de polyvinyle. 8. Support selon L'une quelconque des revendications 1 à 4, caractérisé en ce que Le polymère à base de styrene est du polyéthylène greffé par du sty rène. 9. Support selon L'une quelconque des revendications 1 à 8, caractérisé en ce qu'il est sous la forme de poudre 10 Procédé de séparation des Lipoprotéines de basse densité présentes dans un Liquide, caracterisé en ce qu'il consiste - à mettre en contact ledit liquide avec un support solide selon L'une quelconque des revendications 1 à 9, et - à séparer ensuite Le tiquide du support sur Lequel ont été adsorbées les lipoprotéines de basse densi té. 11. Procédé selon La revendication 10, caractérisé en ce que Le Liquide est du sang 12. Procédé se ion la revendication 10, caractérisé en ce que le liquide est du plasma sanguin.