Brevet FR2573765A1 — publié le 19860530

-1- Procédé pour la synthèse de peptides Cas S.84/20 SOLVAY & Cie (Société Anonyme) La présente invention concerne un procédé pour la synthèse de peptides à partir d'acides aminés, et à l'intervention de trialkylcyanosilanes. La silylation des acides aminés pour préparer des peptides par réaction d'un acide aminé, dont la fonction -NH2 est bloquée et dont la fonction -COOH est activée, avec un autre acide aminé, silylé à l'intervention d'agents de silylation tels que le triméthylchlorosilane, a été décrite par Kricheldorf H.R., Liebigs Ann., 1972, 763, p. 17-38. Par ailleurs, d'autres agents de silylation tels que l'hexaméthylsilazane (Birkofer L., Konkol W. et Ritter A., Chem. Ber. 1961, 94, p; 1263-1267 et Birkofer L., Ritter A. et Neuhausen P., Liebigs Ann. Chem., 1962, 659, p. 190-199) et la N-(triméthylsilyl)- diéthylamine et la N,O-bis(triméthylsilyl)acétamide (S.V. Rogozhin, Yu. A. Davidovich, A.I. Yurtanov, Seriya Khimicheskaya, N. 3, p. 657-660, March 1977 - Original article October 27, 1976) ont également été divulgués pour cette même réaction. Les divers agents de silylation utilisés à ce jour présentent toutefois des inconvénients divers. En effet, ces agents néces- sitent en général la présence d'une base qui doit être éliminée par la suite et qui provoque souvent la racémisation des acides aminés lors de l'étape de couplage ou la cyclisation interne au stade dipeptide. En outre des produits secondaires sont formés lors de la silylation et la réaction est généralement incomplète ce qui engendre des rendements faibles souvent inférieurs à 50%. Un autre inconvénient des agents de silylation de l'art antérieur est de à la présence d'eau qui décompose les réactifs alkylsilylés avec formation de l'hexaalkyldisiloxane correspondant. Par ailleurs, les dérivés silylés sont formés au cours d'une étape séparée et doivent être isolés avant l'étape de couplage. -2 Dans les procédés de l'art antérieur, la synthèse des peptides est en outre fortement limitée par les problèmes de solubilité des peptides formés lorsque leur poids moléculaire augmente. La synthèse est donc souvent limitée par les faibles solubilités des produits intermédiaires durant les réactions de couplage et par les difficultés de purification des produits finaux. Plus la chaîne peptidique est longue, plus les problèmes sont complexes. Par ailleurs, certains agents de silylation particuliers de l'art antérieur présentent des problèmes propres. C'est ainsi que - l'emploi d'hexaméthyldisilazane, réactif plus nucléophile que le composé aminé silylé désiré, provoque des réactions secondaires qui affectent le rendement du procédé. - l'utilisation du triméthylchlorosilane est incompatible avec la protection des groupements -NH2 des acides aminés par des groupe- ments de type benzyloxycarbonyle. Le procédé de la présente invention vise à réaliser la synthèse de peptides à partir d'acides aminés par des agents de silylation ne présentant pas les inconvénients des procédés connus. Plus particulièrement, le procédé permet une réaction de couplage rapide en continu, qui a lieu sans racémisation, pouvant être réalisé en l'absence de coréactifs basiques, en présence de traces d'eau et en présence des agents de protection connus. En outre, il permet l'obtention de peptides de poids moléculaire élevé avec des rendements supérieurs à ceux obtenus avec les agents de silylation connus. Le procédé de l'invention permet par ailleurs de consommer chimiquement l'eau et d'obtenir des dérivés silylés volatils ce qui facilite leur élimination. A cet effet, la présente invention concerne un procédé pour la synthèse de peptides à partir d'acides aminés au moyen de dérivés trialkylsilanes dans lequel on utilise comme trialkyl- silanes des trialkylcyanosilanes de formule générale (A) R R2 - Si- C - N (A) R3 -3 - dans laquelle R1, R2, R3 représentent, indépendamment les uns des autres des groupements alkyles qui peuvent être identiques ou différents et qui contiennent de 1 à 3 atomes de carbone. Habituel- lement, les groupements R1, R2 et R3 représentent des groupements alkyles contenant de 1 à 2 atomes de carbone. Enfin, R1, R2 et R3 représentent de préférence des groupements alkyles identiques. Le triméthylcyanosilane est tout particulièrement préféré. Les trialkylcyanosilanes utilisés dans le procédé selon l'invention sont de préférence des produits volatils qui peuvent être facilement éliminés. Ces agents de silylation possèdent des propriétés de solubilisation supérieures aux agents de silylation habituels ce qui permet leur utilisation simultanée comme réactif et comme solvant des acides aminés et des peptides. Les trialkylcyanosilanes peuvent être employés seuls, ou en présence de tiers solvants, ces derniers pouvant par exemple provenir de l'étape d'activation ou être ajoutés conjointement lors de l'étape de couplage. On préfère toutefois réaliser l'étape de couplage sans addition de tiers solvants. Des tiers solvants qui ont donné de bons résultats lorsqu'ils sont utilisés conjointement au triméthylcyanosilane sont notamment le dichlorométhane et le tétrahydrofurane. Comme acide aminé, on peut utiliser tout acide aminé possédant au moins une fonction carboxylique et au moins une fonction amine primaire ou secondaire, tel que les acides aminés naturels connus ou les acides aminés synthétiques ne se trouvant pas dans la nature. Comme acides aminés naturels, on utilise généralement des acides aminés aliphatiques linéaires, ramifiés ou cycliques, tels que les acides aminés à chaîne hydrocarbonée, les acides aminés hydroxylés ou soufrés, les acides aminés dicarboxyliques, les acides aminés basiques ainsi que les acides aminés aromatiques ou hétérocycliques. La quantité de trialkylcyanosilanes que l'on utilise dans le procédé selon l'invention peut varier dans de larges limites. En général, on met en oeuvre de 20 à 0,01 ml de trialkylcyanosilane par m.mole d'acide aminé. Dans le cas du triméthylcyanosilane, -4 - on met en oeuvre de préférence de 5 à 0,1 ml de triméthylcyano- silane par m.mole d'acide ami-né mis en oeuvre. Les autres conditions opératoires utilisées dans le procédé selon l'invention ne sont pas critiques; ainsi la pression à laquelle est effectué le procédé. est généralement comprise entre 0,1 et 10 bar. De bons résultats ont été obtenus à pression atmosphérique. La température à laquelle est effectué le procédé est telle que l'agent de silylation utilisé reste liquide à la pression considérée. Habituellement, elle est comprise entre 0 et 100 C. A pression atmosphérique, la température utilisée lorsque l'on emploie le triméthylcyanosilane comme agent de silylation est de préférence comprise entre 10 et 40 C et de bons résultats ont été obtenus à la température ambiante. Le procédé peut être réalisé dans tout appareillage conçu à cet effet. Le schéma de synthèse du procédé selon la présente invention est repris ci-après. Dans ce schéma A1, A', A2 représentent des restes d'acides aminés quelconques naturels ou synthétiques. Il est à noter que le principe du schéma, bien qu'établi pour des acides aminés à fonction amine primaire, s'applique également dans le cas des acides aminés comportant une fonction amine secondaire tels que la proline et l'hydroxyproline; dans ce cas, il suffit de substituer la fonction -NH2 par une fonction >NH dans le schéma ci-après. Schéma de synthèse 1 - protection de la fonction amine d'un premier acide aminé par un agent de protection classique, comme par exemple la protection par des groupements de type benzyloxycarbonyle (appelé ciaprès Z) ou tert-butyloxycarbonyle (t-Boc), selon les schémas: acide aminé - > acide aminé protégé z NH -A -COOH - > Z-N-A 1COOH 2 11 t-Boc NH2-A -COOH - > t-Boc-NH-A 1-COOH - 2 - activation de la fonction carboxyle par un agent d'activation classique, comme par exemple l'activation par la transformation en chlorure d'acide ou anhydride (Act) selon les schémas: acide aminé protégé -> acide aminé protégé et activé ZNH-A1-COOH -> Z-NH-A 1-COOAct () t-Boc-NH-A -COOH, t-Boc-NH-A 1-COOAct (I) ' Il est toutefois à remarquer que dans certains cas il est possible de réaliser l'activation à partir dtacides aminés protégés et dont la fonction carboxylique est substituée. Un exemple de ce type sont les acides aminés N- protégés silylés obtenus par silylation préalable par le triméthylcyanosilane (TMSCN), selon le schéma: t-Boc-NH-A -COOTMS -> tBoc-NH-A 1-COOAct (I)' 3 - silylation d'un second acide aminé par réaction avec un trialkylcyanosilane tel que le triméthylcyanosilane (TMSCN) selon le schéma: acide aminé > acide aminé silylé NH 2-A2-COOH+TMSCN-> TMS-NH-A2-COOTMS+HCN (II) Il est toutefois bien entendu que la distinction entre les étapes 1, 2 et 3 est purement formelle puisque ces étapes peuvent être menées indépendamment les unes des autres. Dès lors, l'étape 3, par exemple, peut indifféremment suivre ou précéder les étapes 1 et 2. 4 - couplage avec formation d'un peptide par réaction de l'acide aminé protégé et activé (I) ou (I)' et de l'acide aminé silylé (II) selon les schémas Z-NH-A 1-COOAct + TMS-NH-A2-COOTMS Z-NH-A I-CO-NH-A2-COOTMS + TMSAct (III) ou t-Boc-NH-A 1-COOAct + TMS-NH-A2-COOTMS > t-Boc-NH-A -CONH-A2-COOTMS + TMSAct (III)' - désilylation du peptide obtenu (III) ou (III)' par déplacement du groupement trialkylsilane et formation du groupement acide carboxylique (-COOH), comme par exemple par un traitement en milieu méthanolique ou en présence d'eau. Cette réaction se fait selon les schémas: -6 - Z-NHi-A -CO-NH-A -COOTMS -> Z-NH-A -C0O-NH-A -COOH (IV) ou t-Boc-NH-A -CO-NH-A2-COOTMS--> t-Boc-NH-A1-CO-NH-A2-COOH (IV)' Les étapes 5 et 6 peuvent être réalisées en même temps ou successivement. 6 - déprotection du peptide obtenu (IV) ou (IV)'. Cette déprotec- tion peut être réalisée par le déplacement de l'agent de protection et formation du groupement amine (NH2) par toute méthode connue, telle que par exemple un barbotage d'acide chlorhydrique gazeux à travers une solution de dichlorométhane et/ou de tétrahydrofurane, ou par de l'acide trifluoroacétique dans du dichlorométhane suivi du passage des peptides sous forme de sels sur une colonne échan- geuse d'ions acides. Cette opération peut être illustrée par les schémas généraux suivants: + H Z-NH-A -C0O-NH-A -COOH -> NH -A -CO-NH-A -COOH (V) ou t-Boc-NH-A -CO-NH-A2-COOH -> NH2-A -CO-NH-A2-COOH (V)' Lorsque l'on désire procéder à des couplages successifs d'acides aminés, les étapes 5 et/ou 6 ne sont pas toujours néces- saires. Dans ce cas, deux voies sont possibles, c'est-à-dire en débutant à partir de la terminaison carboxyle et en allant vers la terminaison amine, soit en débutant à partir de la terminaison amine et en allant vers la terminaison carboxyle. Selon la première voie, le produit (V) est silylé selon le schéma: NH2 -A -CO-NH-A2-COOH + TMSCN -> 2 1 2 TMS-NH-A1-CO-NH-A2-COOTMS (VI) i 2 et ce produit (VI) est ensuite associé avec un acide aminé protégé et activé du type (I) et (I)'. Selon la seconde voie, le produit obtenu (V) est protégé et activé selon les schémas décrits dans les étapes 1 et 2 ci-dessus et le produit obtenu est mis à réagir avec un nouvel acide aminé triméthysilylé sur les fonctions amine et carboxyle de formule (ITT. -7- Un exemple de schéma de ce deuxième cas peut être le suivant Activation t-Boc-NH-A -CONH-A>-COOH t-Boc-NH-Ai-CONH-Al-COOAct TMSCN en excès t-Boc-NH-Al-CONH-A'-COOAct+ TMSNH-A2-COOTMS > i i 2 t-Boc-NH-A -CONH-A'-CONH-A2-COOTMS I 1. Les procédés schématisés ci-avant permettent grace à l'emploi de trialkylcyanosilanes de formule générale (A) d'obtenir des peptides, de type naturel ou synthétiques n'ayant pas leur équi- valent dans la nature. Ces peptides connus ou nouveaux obtenus selon le procédé de l'invention peuvent être utilisés dans diverses applications telles que notamment la catalyse enzymatique, comme constituants nutritifs ou encore en tant que produits pharmaceutiques à usage vétérinaire ou humain. Les exemples suivants servent à illustrer l'invention. Dans ces exemples les abréviations suivantes ont été utilisées: Ala alanine Asp acide aspartique Cys cystéine Gly glycine Met méthionine Phe phénylalanine Pro proline Ser sérine Thr thrébnine Thz gamma-thiaproline Tyr tyrosine Val valine 0 Piv pivaloyloxy(triméthyl acétyloxy) O Succ N-hydroxysuccinimide Exemple 1: couplage d'un peptide avec un acide aminé activé et un acide aminé silylé 1.a: glycine-cystéine A 1,1 m.mol de cystéine hydratée lyophilisée est ajoutée Z573765 -8 - 0,5 ml de triméthylcyanosilane dans un tube à essai à paroi épaisse et muni d'un bouchon. Le mélange est passé aux ultrasons (sonificateur) jusqu'à l'obtention d'une solution claire. On chauffe le mélange entre 60 et 80 C pendant 5 minutes jusqu'à dissolution de l'acide amine. Ensuite 1 m.mol de glycine, protégée par Z (groupe benzyloxy- carbonyle) et activée par O Succ en présence de N,N'-dicyelohexyl- carbodiimide, obtenue dans une étape préalable, est ajoutée. Le couplage entre la cystéine silylée et la glycine protégée et activée est accéléré par un chauffage doux à 40 C et est terminé après 1 heure à température ambiante. La réaction est arrêtée par l'addition de 10 ml d'eau. La solution est ensuite lyophilisée et le lyophilisat est mélangé avec du n-hexane. Après une addition de 10 ml d'eau pour remettre le produit en suspension, celui-ci est centrifugé et le précipité recueilli est séché. Le rendement de formation en peptide protégé est pratiquement quantitatif (Z-Gly-CysOH) sans contamination d'épimères (Résonance Magnétique Nucléaire (RMN) formation du dipeptide Gly-CysOH.HCl (chlorhydrate du dipeptide). l.b: Glycine-Glycine La formation de Z-Gly-GlyOH est obtenue par le même procédé que celui décrit dans l'exemple 1.a, mais en mettant en oeuvre 1, 1 m.mol de glycine hydratée lyophilisée en lieu et place de la cystéine. 1.c: Alanine-Sérine La formation de Z-Ala-SerOH est obtenue par le même procédé que celui décrit dans l'exemple I.a, mais en mettant en oeuvre 1, 1 m.mol de sérine hydratée lyophilisée en lieu et place de la cystéine et 1 m.mol d'alanine protégée par Z et activée en lieu et place de la glycine. - 9- l.d: Phénylalanine-Sérine La formation de t-Boc-Phe-SerOH est obtenue par le même procédé, mais en mettant en oeuvre 1,1 m.mol de sérine hydratée lyophilisée en lieu et place de la cystéine et 1 m.mol de phényl- alanine protégée par t-Boc et activée en lieu et place de la glycine. Le groupe protégé par t-Boc est libéré par un traitement avec l'acide trifluoroacétique suivi d'une évaporation. 1.e: Proline-Phénylalanine La formation de t-Boc-Pro-PheOH est obtenue par le même procédé mais en mettant en oeuvre 1,1 m.mol de phénylalanine hydratée lyophilisée en lieu et place de la cystéine et 1 m.mol de proline protégée par t-Boc et activée en lieu et place de la glycine. Exemple 2: Condensation répétée sans purification des peptides intermédiaires Préparation de Z-Gly-Phe-SerOH 1,1 m.mol (116 mg) de sérine hydratée en poudre est dissous dans 1 ml de triméthylcyanosilane par une chauffage entre 60 et 80 C durant moins de 5 minutes. A ceci, une solution de 1 m.mol (362 mg) de t-Boc-PheOSucc (phénylalanine protégée par le groupement t-Boc et activée par la N-hydroxysuccinimide) dans 10 ml de dichlorométhane ou de tétra- hydrofurane est ajoutée. Après 30 minutes, l'ester actif a disparu. Le mélange est versé à travers un verre fritté chargé avec g de silicagel, préalablement humidifié avec 1 ml d'eau et lavé avec 2 fois 20 ml de dichlorométhane. Un barbotage d'acide chlorhydrique est réalisé durant 30 secondes à travers le filtrat qui est ensuite évaporé. Le sel de dipeptide recueilli est redissous dans 2 ml de triméthylcyanosilane à température ambiante. On ajoute ensuite 0,98 mol (275 mg) de Z-GlyOSucc (glycine protégée par le groupement Z et activée par la N-hydroxysuccinimide) dans 10 ml de dichlorométhane. - 10 - Après 30 minutes à température ambiante la réaction est arrêtée par l'addition de 10 ml d'eau, le précipité recueilli est séché. Le rendement en Z-Gly-Phe-SerOH est de 88% (calculé sur Z-GlyOSucc) (350 mg); le produit est pur selon tous les critères de RMN. Exemple 3: Préparation de Pro-Phe-Met-AspOH avec identification des oligopeptides intermédiaires lère étape: t-Boc-Met-AspOH 150 mg (1,1 m. mol) d'acide aspartique hydraté est dissous dans 0,5 ml de triméthylcyanosilane à 80 C en 3 minutes. 346 mg (1,0 m.mol)t-Boc-MetOSucc est ajouté et le tout est chauffé à 40 C. Après une heure, un mélange de 250 mg d'eau dans 2 ml d'acétonitrile est ajouté. Le produit est filtré sur 5 g de SiO2 comme dans l'exemple 2 cidessus et le produit obtenu est élué avec 30 ml d'une solution contenant 90% d'acétonitrile et 10% de méthanol. Le résidu est évaporé. Il contient en quantité équivalente le N-hydroxysuccinimide et le dipeptide désiré protégé par le groupe t-Boc. Le dipeptide obtenu est utilisé tel quel (après lavage avec cm3 d'eau afin d'éliminer le N-hydroxysuccinimide) dans l'étape de condensation suivante. 2ème étape: t-Boc-Phe-Met-AspOH La déprotection du t-Boc dipeptide de l'étape 1 est réalisée par un traitement avec 0,5 ml d'acide trifluoroacétique pendant une heure à température ambiante. La solution est ensuite évaporée et le résidu est repris dans 1,0 ml de triméthylcyanosilane. Un équivalent de t-Boc-PheOSucc est ajouté. Le couplage est réalisé comme précédemment décrit à la première étape pour le dipeptide. Le tripeptide protégé par t-Boc est obtenu avec un rendement supérieur à 95%. 73765 - 11.- 3ème étape: t-Boc-Pro-Phe-Met-AspOH Le protocole mentionné ci-dessus est répété en utilisant dans l'étape de condensation t-Boc-ProOSucc et on répète les opérations comme décrit pour la première étape. Le N-hydroxysuccinimide formé est triméthylsilylé par l'addition de 0,5 ml de triméthylcyanosilane, il est ensuite évaporé sous vide. Les résidus sont traités à l'eau puis sont lyophilisés. Du tétrapeptide protégé pur est obtenu avec un rendement quantitatif. Exemple 4: Préparation de t-Boc-Thz-Phe-Met-AspOH On opère comme décrit à l'exemple 3, les deux premières étapes sont identiques, mais lors de la troisième étape, on met en oeuvre t-Boc-ThzOSucc à la place de t-Boc-ProOSucc. Un rendement presque quantitatif de tétrapeptide est obtenu. Le produit est pur selon l'analyse de RMN. Un mélange 40:60 d'isomères uréthane au niveau de l'agent de protection t-Boc est observé à O C. Exemple 5: Préparation de diZ-Tyr-D-Ala-GlyOH lère étape: diZ-Tyr-D-AlaOH 449 mg de diZ-TyrOH (tyrosine hydratée protégée par un groupement de type dibenzyloxycarbonyle appelé diZ) est dissous dans 5 ml de tétrahydrofurane. On ajoute 0,096 ml de pyridine et 0,173 ml de triéthylamine, puis 0,144 ml de chlorure d'acide triméthylacétique (chlorure de pivaloyle, Piv-Cl) à -10 C afin d'obtenir un acide aminé protégé et activé. Apres une minute, 1 g d'un échangeur d'ions séché sous sa forme carboxylique libre (Amberlite IR C 50H) est ajouté afin de capturer tout excès de chlorure de pivaloyle. Le mélange est agité durant 1 minute à -10 C. 107 mg de D-Ala est dissous, en chauffant, dans 5 ml de triméthylcyanosilane; on obtient l'acide aminé silylé qui est ajouté au mélange précédent. - 12 - Le mélange obtenu est porté à température ambiante et maintenu à cette température durant 30 minutes. L'échangeur d'ions est filtré et le filtrat est lyophilisé. On y ajoute 2 ml de méthanol et on évapore. On obtient diZ-Tyr-D-AlaOH qui est utilisé tel quel. 2ème étape: diZ-Tyr-D-Ala-GlyOH Afin de l'activer, le dipeptide protégé obtenu lors de la première étape est dissous dans 0,096 ml de pyridine et 0,173 ml de triéthylamine puis avec- 0,144 ml de chlorure de pivaloyle. Après une minute, 1 g d'un échangeur d'ions séché sous sa forme carboxylique libre est ajouté et le mélange est agité une minute à -10 C. ml de glycine est dissous dans 5 ml de triméthylcyanosilane - afin de réaliser la silylation. Ce produit silylé obtenu est ajouté au mélange qui est maintenu 30 minutes à température ambiante. L'échangeur d'ions est filtré, le filtrat est lyophilisé et 2 ml de méthanol est ajouté. Après évaporation, le tripeptide diZ-Tyr-Ala-GlyOH est rapidement recrystallisé dans un mélange éther éthylique:acétate d'éthyle, donnant le tripeptide pur par analyse RMN. Le rendement est de 68%. Exemples 6 Exemple 6.a: synthèse de la [Met5]-encéphaline La [Met5l-encéphaline est un pentapeptide de formule Tyr-Gly-Gly-Phe-Met. lère étape: synthèse de tBoc-Gly-Gly-Phe-MetOH 1,75 g (10 m.mol) de t-Boc-GlyOH (glycine hydratée protégée par le groupement t-Boc) est dissous avec 1,6 g (20 m.mol) de pyridine et avec 1,0 g (10 m.mol) de triéthylamine dans 20 ml de tétrahydofurane séché. La solution est refroidie à--10 C, on y ajoute 1,22 ml (10 m.mol) de chlorure de pivaloyle en agitant afin de réaliser l'étape d'activation. - 13 - Après une minute, on ajoute 750 mg (10 m.mol) de H-GlyOH qui est préalablement dissous dans 6 ml de triméthylcyanosilane et ml de n-hexane afin de silyler la glycine. Le mélange est évaporé à une température supérieure à 60 C. On ajoute 20 ml de toluène et 1 ml de triméthylcyanosilane et le mélange est de nouveau évaporé sous vide afin d'éliminer le chlorure de pivaloyle en excès. Le résidu est dissous dans 20 ml de méthanol puis est évaporé. Le résidu est dissous dans 20 ml de toluène puis est évaporé. Le dipeptide obtenu t-Boc-Gly-GlyOH est directement activé par le chlorure de pivaloyle puis couplé avec PheOH silylé comme décrit précédemment. Le tripeptide obtenu t-Boc-Gly-Gly-PheOH est active, puis couplé avec MetOH silylé dans les mêmes conditions précédemment décrites. Le résidu final est dissous dans 100 ml d'acétate d'éthyle et 10 ml d'éthanol puis est lavé avec 50 ml d'acide citrique à % dans l'eau. La phase d'acétate d'éthyle est séchée sur du sulfate de magnésium puis est évaporée. Le résidu est recristallisé dans un mélange acétate d'éthyle:éther éthylique. Le tétrapeptide t-Boc-Gly-Gly-Phe-MetOH est obtenu pur selon les critères de la RMN. Le rendement est de 63% (3,25 g). 2ème étape: synthèse de la [Met5j -encéphaline 510 mg (1 m.mol) du tétrapeptide protégé par le groupement t-Boc, obtenu dans la première étape, est dissous dans 2 ml d'acide trifluoroacétique (Tfa) qui contient 15% en volume d'éthanethiol. La solution est gardée 2 heures à température ambiante, puis chauffée 15 minutes à 40 C. Après évaporation, on obtient la formation quantitative de Tfa-H3N -Gly-Gly-Phe-MetOH. A ce produit est ajouté 415 mg (1,1 mol) de t-Boc-OH-Tyr-OSucc avec 2 ml de triméthylcyanosilane et 2 ml de tétrahydrofurane. - 14 - Le sel du tétrapeptide est progressivement solubilisé, puis est passé 30 minutes aux ultrasons en agitant sous vide à 0 C, une solution claire est ainsi obtenue. Après deux heures à température ambiante, la réaction est complète et le mélange est solidifié. Le solide est dissous dans 5 ml de tétrahydrofurane. L'excès de t-Boc-(OTMS)Tyr-OSucc est enlevé par l'addition de 1 g d'aminopropyl silicagel (5,40, 3 meq.NH2/g). Après 30 minutes, le produit est filtré. Le filtrat est traité avec 20 ml de méthanol. Le produit est évaporé. Le rendement obtenu lors de cette seconde étape est de 95%. Le pentapeptide protégé par t-Boc est recristallisé dans un mélange d'acétate d'éthyle:éther éthylique. Le pentapeptide est obtenu pur selon les critères de RMN. Le rendement total est de 60%. Le pentapeptide Met -encéphaline est déprotégé par un traitement avec l'acide trifluoroacétique suivi d'une évaporation sous vide avec obtention du sel correspondant. Exemple 6.b: synthèse de la Leu -encéphaline La Leu -encéphaline est un pentapeptide de formule Tyr-Gly-Gly-Phe-Leu. La synthèse a lieu de la même manière que décrit dans l'exemple 6.a précédent, mais en remplaçant la méthionine par la leucine. -15- R E V E N D I C AT I 0 N S 1 - Procédé pour la synthèse de peptides à partir d'acides aminés au moyen de dérivés trialkylsilanes caractérisé en ce qu'on utilise comme trialkylsilanes des trialkylcyanosilanes de formule générale (A) R R2' Si - C -N (A) R3 dans laquelle R1, R2, R3 représentent indépendamment les uns des autres, des groupements alkyles, qui peuvent être identiques ou différents et qui contiennent de 1 à 3 atomes de carbone. 2 - Procédé selon la revendication 1, caractérisé en ce que les trois groupements. alkyles R1, R2, R3 contiennent de 1 à 2 atomes de carbone. 3 - Procédé selon les revendications 1 ou 2, caractérisé en ce que les trois groupements alkyles R1, R2, R3 sont identiques. 4 - Procédé selon les revendications 1 à 3, caractérisé en ce que le trialkylcyanosilane utilisé est le triméthylcyanosilane. - Procédé selon la revendication 4, caractérisé en ce que l'on met en oeuvre de 20 ml à 0,01 ml de triméthylcyanosilane par m.mole d'acide aminé. 6 - Procédé selon les revendications 4 ou 5, caractérisé en ce que l'on met en oeuvre de 5 à 0,1 ml de triméthylcyanosilane par m.mole d'acide aminé.