Brevet FR2583982A1 — publié le 19870102

/I PRODUIT MEDICAMENTEUX OBTENU A PARTIR DU THYMUS ET SON PROCEDE D'OBTENTION La présente invention a trait à un médicament et à son procédé d'obtcntion, et plus particulièrement, elle se rapporte à un produit médicamenerteuA obteniu à partir du thymus et à son procédé d'obtention. :e-, prod.uis. puvant être utilise nur la restitution des processus perturbés de l'immunogénèse, de la régénérescence, de l'hématopoïèse. de la coagulation sanguine, ainsi que pour la normalisation du métabolisme des hydrates de carbone et du métabolisme lipidique et protidique chez i 'horme. i est bien nconnu que les extraits de thymus de l'homme et des animaux contiennent des substances physiologiquement actives qui infe cent la croiscanrp et le déveluppement de l'organisme, ainsi que cer- tains urucc.u- i,,t.un.ologiques et mntaholique (Comsa n.. AM: J 'r- - enr es. 2- 0 65; G u 65; su ls eJn A. et a;- J. Im;uno:.,:-;,.. --t- f'.._..'.E 2 v'. 4- fe..i.....c..t. d u. tcu e iURSS np 45q 927 Rrpvpt d'invention des Etats-Unis d'Amérique La 4 120 951). c".. les donnaées de la littérature technique, l'extrait du thymus zu de veaux (thtymosine) est utilise à des fins thérapeutiques pour la restitution de la fonction du système immunitaire chez l'homme lors de différentes patihologies oncologiques et de maladies immuno-suppressives congénitales (Goldstein A. et ai., Transplant Proc., 7 i (Suppi. i), 681, 1975; Sakai et ai., Cancer, 36, 3, 973, 1975). L'administration de la thymosine produit chez les malades la restitution de la réactivité immunologique perturbée de l'organisme. Toutefois, jusqu'à l'heure actuelle l'efficacité thérapeutique des substances physiologiquement actives du thymus et les indications relatives à leur application dans la pratique médicale ne sont pas suffisamment étudiées. A l'heure actuelle, on connaît un produit médicamenteux à partir du tissu de thymus -la thymosine (Goldstein A. et al., Proc. Nat. Acad. Sci. USA, 69, 7, 1972), qui consiste en un complexe (environ 30 compo- sants) de polypeptides acides de poids moléculaire de 1.000 à 14.000 dalton (Hooper et ai., Ann. N.Y. Acad. Sci., 249, 125, 1975). Pour l'obtention de la thymosine, on procède comme suit (Hooper et al., 1975). On homogénéise le thymus de veaux dans une solution à 0,15M de NaCl, centrifuge à 14.000 dalton, sépare le liquide surnageant et le réchauffe à la température de 80 C, élimine le précipité par filtration, puis ajoute à la solution 5 volumes d'acétone. On sèche le précipité obtenu sur filtre, puis on le dissout de nouveau et on relargue avec le sulfate d'ammonium, au début pour une saturation à 25%, ensuite pour une saturation à 50%. Le précipité obtenu à la suite du relargage est filtré, dessalé dans une colonne de Sefadex G-25 et lyophilisé..e complexe de polypeptides obtenu à ce stade d'épuration du produit médicamenteux, possède la plus forte activité biologique, c'est-à-dire la plus forte capacité de stimulation de l'immunité cellulaire (Hooper et al., 1975). L'épuration ultérieure du produit médicamenteux entraîne la réduction de son activité biologique. La thymosine obtenue par le procédé susmentionné, contient unr. cuinulexe de polypeptides acides à point isoélectrique de 3,5 à 6,7 et de masse molecul are de 1.000 à 14.000 dalton avec une nette prépondérance des acides asparLique et giutanmique, qui composent ensemble 50% en rpn4d de la masse totale de la thymoqine- 2h Il convient de souligner la complexité du procédé d'obtention de 1a thymnsine et le grand nombre d'étapes technologiques qu'il comporte (10 étapes). Plusieurs opérations soulèvent certaines difficultés pour l'utilisation dudit procédé dans les conditions industrielles (ultracen- trifugation, utilisation des Sefadex). Ce procédé n'assure pas un rendement suffisant en produit médicamenteux, à savoir en thymosine. Par ailleurs, la thymosine provoque chez certains malades des effets secon- daires et des réactions allergiques. L'efficacité thérapeutique de la thymosine et les possibilités de son utilisation dans la pratique médicale ne sont pas encore suffisamment étudiées. On s'est proposé par sélection des opérations technologiques appropriées de créer un produit médicamenteux à partir du thymus, comportant des polypeptides de nature alcaline, et qui possède un plus large éventail d'action pharmacologique que la thymosine, et cela en l'absence d'effets secondaires et de réactions allergiques à la suite de son application. La présente invention consiste donc en un produit médicamenteux obtenu à partir du thymus, comportant des polypeptides à point isoelec- trique de 3,5 à 6,7, et, selon l'invention, contenant des polypeptides de masse moléculaire de 600 à 6.000 dalton, dont 10 à 20% de la masse présente un point isoélectrique de 7 à 9 et une masse moléculaire de 2.000 à 4.lOfl dalton. L'utilisation du produit médicamenteux obtenu à partir du thymus dans la pratique médicale permet de stinmuler la réactivité immunologique réduite de l'organisme, de stimuler 'activité des processu des malades souffrant de maladies chroniques et présentant-des pertur- bations de la régénérescence, ce qui peut être un facteur déterminant à l'égard de l'efficacité de l'utilisation de l'invention dans la méde- cine. la différence des produits médicamenteux connus obtenus à partir dû thymuc, le produit obtenu à partir du thymus. selon l'invention. r.ce g sa tpnpr Pn polyvpeptides de nature alcaline stimnule les proces- us du:'6.;-i- rtion des tissus l!és=n ce qui se traduit nar une rdlur.- tion des délais de quérison des plaies. des ulcères, ainsi que les 2[ processus de l'h6matopoiïèse, ce qui se traduit par une augmentation de la teneur en globules blancs, plaquetLes et hématies du sang périphé- iqu enr cas de teneur réduite. Le produit médicamenteux obtenu à partir du thymus, selon l'inven- tion, ne provnqlijp pas d'effets secondaires et de réactions allergiques, :;O alors que d'après les donneeb de la littérature, il est bien connu que la thymosine apporte chez 20-30% de malades des réactions allergiques. La présente invention a également pour objet un procéde d'obten- tion du produit médicamenteux obtenu à partir du thymus, comportant l'homogénéisation du tissu du thymus, la séparation du produit homogène obtenu en sédiment et liquide surnageant, le traitement du liquide surnageant par un solvant organique suivi d'un isolement subséquent du produit visé, ce procéde étant caractérisé en ce qu'avant la séparation, on extrait le tissu de thymus homogène par une solution aqueuse à 1-10% d'acide acétique en présence de chlorure de zinc durant au moins 24 heures. Le procédé, selon l'invention, se caractérise par une technologie simple et il est facile à mettre en oeuvre dans les conditions indus- trielles. Ce procédé permet de réaliser l'hydrolyse des grosses pro- téines et des autres composés macromoléculaires, de parvenir à un rendement suffisamment élevé en produit médicamenteux obtenu à partir du thymus avec un haut degré de pureté, lequel, après son administration dans l'organisme, ne provoque ni effets secondaires ni réactions aller- qiques. L'utiiisation d'une extraction prolongée par l'acide acétique en 1i présence de quantités catalytiques de chlorure de zinc favorise le dégagement des polypeptides de nature alcaline, dont la présence dans le produit assure l'élargissement de i'éventail de son action pharmacolo- gique. Il est avantageux, dans le but d'extraire au maximum les polypep- tides à point isoélectrique de 7 à 9 et de masse moléculaire de 2.000 à 4. 000 dalton, qui présentent la plus forte activité biologique, de réaliser l'extraction durant 48-72 heures à pH = 2,5-4 et à une tempéra- ture de 5 à 150C, en présence de chlorure de zinc à raison de 0,2 à 2 g par litre d'acide acétique. Il est préférable, pour une plus complète extraction des substan- ces biologiquement actives, à savoir des polypeptides de nature alca- lnc, et pour une meilleure conservation des matières premières, dp miaintenir le tissu du thymus, avant son homoà6nisation, a une tempéra- ture de -30 à -50 C durant au moins 100 heures. L'étude des propriétés du produit médicamenteux obtenu à partir du thymls cnnforme à l'invention a été obtenue par chromatographie par echange ionique dans des échangeurs de cations hydroxyles "Biocarb" protoné (N.N. Kuznetsova et ai., "Composés macromoléculdires", 18a, 2, 355, 1976), filtration sous forme de gel (Fish et al., J. Binl Chem., 244, 4989, 1969) , électrophorèse zonale sur papier et gel poiyacrylamide (par les méthodes généralement adoptées) et par analyse aux amino-acides (méthode de Stein et Moore, J. Biol. Chem., 176, 307, 1948). On a établi par la chromatographie par échange ionique que les substances obtenues contiennent trois fractions dans un rapport (en pour cent) déterminé et qui se distinguent par leurs propriétés électrochimiques. On donne ci-dessous le tableau 1 qui présente les paramètres physico-chimiques desdites fractions contenues dans le produit médica- menteux obtenu à partir du thymus. TABLEAU 1 Composant Teneur Masse moléculaire Point isoélectrique % de masse dalLonr unité pH Fraction I 40-70 600-1.000 3,5-5,0 Fraction II 20-40 5.000-6.000 5,5-6,7 Fraction III 10-20 2.000-4.000 7,0-9,0 Les fractions 1, I, III comportent différents composants, décelés par l'électrophorèse zonale. La masse moléculaire de chaque fraction a été déterminée par filtration en gel sur Sefadex G-25. Pour la détermination de la composition en amino-acides des poiy- peptides des fractions susmentionnées, a été utilisé l'analyseur automatique d'amino-acides "LKB-3201" (Suède) selon le procédé de Spackman D.H. et al. (Anal. Chem., 1958, 30, 1190-1206). On donne ci-dessous, dans le tableau 2, la composition des amino- acides du produit médicamenteux obtenu à partir du thymus, conforme à iinvention. TABLEAU 2 Teneur en amino- Teneur en fractions, % mole Am..ai.. acides du produit Amilno-acid(, conforme à l'in- Fraction Fraction Fraction vention % moc I TI III i 2 3 4 5 Aspartique 5,8 6,3. 0,6 4,2 Thréonine 5,7 6,3 6,4 5,8 Sérine 5,7 6,5 7,5 10,4 Glutamique 6,2 8,6 14,1 6,2 Proline 10,1 10,8 13, 2 9,5 Glycine 8,6 10,4 11,7 10,1 Alanine 10,7 12,6 8,7 18,6 Cystéine 3,4 2,6 1,0 0,9 Valine 8,8 5,2 6,5 3,9 Méthionine traces traces - - Isoleucine 3,9 2,3 4,9 1,3 Leucine 6,7 6,2 5,8 3,2 Tyrosine 2,4 1,2 2,4 0, 8 Phénylalanine 3,2 1,7 3,3 0,9 Histidine 2,9 2,9 2,2 0,5 Lysine 7,0 8,5 7,1 21,6 Arginine 8,5 7,8 4,6 2,1 Tryptophane traces traces traces traces L'activité biologique et le large éventail d'action pharmacolo- gique du produit selon l'ivention obtenu à partir du thymus avec une masse moléculaire de 600 à 6.000 dalton sont dus à la présence dans ce dernier de 10 à 20% en masse de poiypeptides à point isoélectrique de 7 à 9 et de masse moléculaire de 2.000 à 4.000 dalton, qui se caractéri- sent par leur teneur en résidus basiques d'acides aminés, pas exemple en lysine. Par ses propriétés physico-chimiques et sa composition d'amino- acides, le produit médicamenteux selon l'invention obtenu à partir du thymus se distingue sensiblement de la thymosine qui consiste en un complexe de polypeptides acides (à point isoélectrique de 3,5 à 6,7) de poids moléculaire de 1.000 à 14.000 dalton, contenant une forte prédomi- nance d'acides aspartique et glutamique qui forment en somme 50% de la masse du produit n(Hooper et al., Ann. N.-Y. Acad. Sci., 149, 125, 1975). On obtient le produit médicamenteux selon l'invention obLenu à partir du thymus, comne suit. On dégage du tissu du thymus les vaisseaux, les caillots sanguins, la cellule adipeuse, on le lave avec de l'eau et on le soumet à l'homo- généisation. Dans le but de mieux conserver la matière première et d'augmenter le rendement en substances biologiquement actives, c'est-àdire en uolvpeptides à point isoélectrique de 3,5 à 6,7 et de 7 à 9, il est recommandé de -aientenir dvdnt l'homogénéisation le tissu du thymus à une Lemurdature de -50 à -30 C, ou de 'e traiter par un solvant organique tel que l'ac.tonc. le chloroforme, l'Vthanol, à une température de -20 à -1 C. On soumet le tissu de thymus homo-én6isê à une extraction par une solutionr aqueuse à 1-10% d'acide acétique en présence de chlorure de zinc durant au moins 24 heures. La réalisation de l'extraction sous un tel régime favorise un meilleur rendement en polypeptides de masse moléculaire de 2.000 à 4.000 dalton et à point isoélectrique de 7 à 9, tout en assurant l'élimination des protéines et des composés macromolé- culaires, auxquels sont dus les réactions allergiques qui se produisent après administration aux malades du produit médicamenteux obtenu à partir du thymus. Les conditions optimales de l'extraction sont: 35. pH ......... .................. 2,5-4,0 température................... 5-15 C durée de l'extraction.......... 48-72 heures la teneur en chlorure de zinc étant alors de 0,2 à 2 g dans 1 litre..DTD: d'acide acétique. -7 Au terme de l'extraction, on sépare le substrat obtenu en sédiment et liquide surnageant, puis on traite ce dernier par un solvant orga- nique tel que l'acétone, le chloroforme ou l'éthanol avec extraction subséquente du sédiment qui se forme. On sèche le sédiment jusqu'à ce qu'il se transforme en poudre, laquelle contient les substances bioiogi- quement actives, notamment les polypeptides. On dissout la poudre obtenue dans de l'acide acétique, stérilise la solution par filtration et la verse dans des flacons stériles à raison de i ml, puis la lyopiliise et ferme les fldcons avec des buu- chons de caoutchouc stériles. Chaque flacon contient 10 mg de substances extraites du thymus. Le produit médicamenteux obtenu, selon l'invention, à partir du thymus ainsi préparé contient des substances biologiquement actives, notamment des polypeptides de masse moléculaire de 600 à 6.000 dalton sous le rapport suivant (% en masse): polypeptides à point isoélectrique 3,5-6,7.. . 90-80 polypeptides à point isoélectrique 7-9....... 10-20 Le produit obtenu, selon l'invention, à partir du thymus est une poudre amorphe de couleur blanche ou blanc-jaunâtre, soluble dans la 2u solution a b5% d'acide acétique et dans l'eau et pratiquement insoluble ddns l'alcooi, elle ne contient pas de protéines et le pH de sa solution aqueuse à I% est de 5 à,8. On conserve e produit médicamenteux oh.. à uàrLir du Lhymus dtdns un local sec. a l'abri de la lumière, et à une température ne dépassant pas +200C durant un délai de deux ans. On administrF le produit mMdicanienteux obtenu à partir du thymus en injection intramusculaire. A cette fin, juste avant l'injection, il dfauL dissoudre le contenu du flacon dans 1-2 mil de soluté physiologique ou de solution de novocaine. Durée de la cure de 5 à 20 jours, à raison de 10 à 30 mg de produit par jour. Le produit médicamenteux selon l'invention obtenu à partir du thymus est soumis à un large essai thérapeutique sur différentes mala- dies chez l'homme, cet essai démontrant que ce produit présente un plus large éventail d'action pharmacologique que le produit obtenu à partir du thymus déjà connu d'après la littérature technique, tout en ne produisant ni effets secondaires ni réactions allergiques, Il est recommandé d'utiliser le produit médicamenteux selon l'invention obtenu à partir du thymus dans le traitement des pathologies purulentes et inflammatoires chroniques des os et des parties molles, de l'ostéomyélite chronique posttraumatique et hématogène, des fractures osseuses, des brûlures, des ulcères trophiques de décubitus, des nécroses par radiations, de l'athérosclérose oblitérante, des pneumonies chroni- ques, des maladies ulcéreuses gastriques et duodénales, ainsi que pour la thérapeutique de l'hypofonctionnement du thymus, l'inhibition de l'immunite et de l'hématopoYése à la suite de radio-thérapie et de chimiothérapie de malades atteints de cancer. Il est également conseillé d'avoir recours au produit médicamenteux obtenu à partir du thymus à des lins de prévention des complications infectieuses de l'inhibition de l'immunité et de l'hématopo)èse, des processus de régénérescence dans la période post-traumatique et post-opératoire, en radiothérapie et en chimiothérapie, ainsi qu'à la suite de iadministration de dosess mss- vec d'antibiotiuues. il est également recommandé d'utiliser ce produit médicamenteux lors de l'intolérance a la thérapeutique antibactérienne ou à la suite de l'absence d'effet à cette thérapeutique, et également à titre d'agent de normalisation lors des perturbations fonctionnelles du métabolisme des hydrates de carbone et des métabolismes lipidique et protéique. On utilise pour l'obtention du produit médicamenteux selon l'in- vention obtenu à partir du thymus une technologie simple et bon marnhé, facile a réaliser dans les conditions industrielles, et permettant d'obtenir un produit de haute qualité et avec un bon rendement qui est supérieur, par exemple, à celui de la thymosine de 5 fois. On donne ci-dessous des exemples concrets d'obtention du produit médicamenteux obtenu, selon l'invention, à partir du thymus. EXEMPLE 1 On débarrasse 500 g de tissu du thymus, des vaisseaux, des cail- lots sanguins et de la cellule adipeuse, le lave avec de l'eau et de l'acétone, puis le maintient dans l'acétone, pris dans une proportion pondérale de 4/i par rapport au tissu du thymus, à la température de -1 C durant 24 heures, après quoi le soumet à une homogénéisation. Le tissu du thymus homogénéisé est placé dans une solution aqueuse à 3% d'acide acétique sous un rapport de 1/6 respectivement. On réalise l'extraction dans les conditions de pH 3,2, de température de 10 C durant 72 heures, en présence de chlorure de zinc, utilisé à raison de 1 g par litre d'acide acétique mentionné. Au terme de l'extraction, on centrifuge le substrat à 3.000 tr/mn pendant 20 minutes, préleve le liquide surnageant et y additionne de l'acétone en un rapport pondéral 9 2583982 de 1/5 respectivement. On sépare par filtration le sédiment formé et le lave avec de l'acétone, puis le sèche sur filtre. La poudre blanche ainsi obtenue à la quantité de 5 9 contient des substances biologique- ment actives -des polypeptides de masse moléculaire de 600 à 6.000 dalton en le rapport suivant (% en masse): polypeptides à point isoélectrique 3, 5-6,7.... 80 polypeptides à point isoélectrique 7-9........ 20 Le produit médicamenteux ainsi obtenu à partir du thymus est une poudre de couneu. blanche, soluble dans une solution à 5% d'acide acétique et l'eau, le pH de la solution aqueuse à 1% étant 5,5. Pour l'obtention de la forme médicamenteuse du-produit à partir du thymus, on dissout la poudre obtenue dans 500 ml de solution à i% d'acide dceLique. On stérilise par filtration la solution du produit et la verse à raison de i mi dans des flacons stériles, puis la lyophilise et ferme les flacons avec des bouchons de caoutchouc. Chaque flacon contient 10 mg de substances extraites du thymus. EXEMPLE 2 On débarrasse 500 g de thymus, des vaisseaux, des caillots san- quins et du tissu adipeux, le lave avec de l'eau et du chloroforme, puis *V le mainLient dans le chloroforme employé dans une proportion pondérale de 8/1 par rapport au poids du thymus, à la température de -10 C durant :eurel apr,le soumet à une homogénéisation. On place le tissu du hrymus homogqénêisé dans une solution aqueuse à 1X d'acide acétique puur un rapport pondéral de i,/. respectivement, On réalise l'extraction dans les conditions de pH = 4, de température 15 C durant 48 heures en présence de chlorure de zinc, emplové à raison de 2 g par litre d'acide acétique. Au terme de l'extraction, on soumet le substrat à une filtra- tion durant 24 heures, prélève le liquide surnageant et y additionne du chloroforme en un rapport pondérai de 1/8 respectivement. On sépare par filtration le sédiment formé et le lave avec du chloroforme et le sèche sur filtre. Les 3 g de poudre blanche ainsi obtenue contiennent des substances biologiquement actives -les polypeptides de masse moléculaire de 600 à 6.000 dalton en rapport suivant (% en masse): polypeptides à point isoélectrique 3,5-6,7.... 90 35. polypeptides à point isoélectrique 7-9........ 10 Le produit médicamenteux obtenu à partir du thymus ainsi préparé est une poudre de couleur blanche, soluble dans une solution à 5% d'acide acétique, le pH de la solution aqueuse à 1% dudit produit étant de 5,8. 2583982 Pour l'obtention de la forme médicamenteuse du produit obtenu à partir du thymus, la poudre obtenue est dissoute dans 300 ml de solution d'acide acétique à 5%. On stérilise par filtration la solution du produit et la verse à raison de 1 ml dans des flacons stériles, puis la lyophilise et ferme les flacons avec des bouchons de caoutchouc. Chaque flacon contient 10 mg de substances extrai-es du tissu du thymus. EXEMPLE 3 On libère 500 g du tissu du thymus, des vaisseaux, des caillots sanguins et de la cellule adipeuse, lave avec de l'eau, puis homogé- néise. On place le tissu du thymus homogénéisé dans une solution aqueuse à 10% d'acide acétique pour un rapport pondérai de 1/4 respectivement. On réalise l'extraction dans les conditions de pH 2,5, de température C durant 24 heures, en présence de chlorure de zinc, employé à raison de 0,2 g par litre de l'acide acétique susmentionné. Au terme de l'ex- traction, on centrifuge le substrat à 5.000 tr/mn pendant 10 minutes, prélève le liquide surnageant et y additionne de l'éthanol pour un rapport pondérai de 1/10 respectivement. On sépare par filtration le sédiment formé, le lave avec de l'éthanol, puis le sèche sur filtre. La poudre blanche ainsi obtenue en une quantité de 4 g contient des subs- tances biologiquement actives -les polypeptides de masse moléculaire de 600 à 6.000 dalton- présentant le rapport suivant (% en masse): * polypeptides à point isoélectrique 3,5-6,7.... 87 polypeptides à point isoélectrique 7-9........ i3 Lc produit médicamenteux obtenu à partir du thymus ainsi préparé est une poudre de couleur blanche, soluble dans l'acide acétique à 5%, le pH de la solution aqueuse à 1% dudit produit étant de 5,3. Pour il'obtention de la forme médicamenteuse du produit obtenu à partir du thymus, on dissout la poudre obtenue dans 400 ml d'acide acétique à 3%. On stérilise par filtration la solution du produit et la verse à raison de 1 ml dans des flacons stériles, puis la lyophilise et ferme les flacons avec des bouchons de caoutchouc. Chaque flacon contient 10 mg de substances extraites du tissu du thymus. EXEMPLE 4 On libère 500 g du tissu du thymus, des vaisseaux, des caillots sanguins et de la cellule adipeuse, lave avec de l'eau, puis homogé- néise. On place le tissu du thymus homogénéisé dans une solution aqueuse à 5% d'acide acétique pour un rapport pondérai de 1/5 respectivement. On effectue l'extraction dans les conditions de pH = 4 et de température 12 C durant 56 heures, en présence de chlorure de zinc, employé à raison de 0,5 g par litre de l'acide acétique susmentionné. Au terme de l'ex- traction, on centrifuge le substrat à 4.000 tr/mn pendant 20 minutes, prlève le liquide surnageant et y dditionnp de l'acétone pour un rapport pondéral de 1/6 respectivement. On sépare par filtration le sédiment déposé et lp lave avec de l'acétone. puis le sèche sur filtre. La poudre blanche-jaunàtre ainsi obtenue en une quantité de 5,5 g contient des substances biologiquement actives à savoir les polypeptides 3e masse moléculaire de 600 à 6.000 danton en -le rapport suivant (% en IC masse): polypeptides à point isoélectrique 3,5-6,7.... 82 polypeptides à point isoêlectrique 7-9...... 18 le produit médicamenteux obtenu à partir du thymus ainsi préparé est une puudre blanche-jaunâtre, soluble dans l'acide acétique à 5%O, le oH de la solution aqueuse à 1% dudit produit étant de 5,2. Pour l'obtention de la forme médicamenteuse du produit obtenu à partir du thymus, on dissout la poudre obtenue dans 550 ml d'acide acétique à 4%. On stérilise par filtration la solution du produit et la verse dans des flacons stériles à raison de I ml, puis la lyophilise et ferme les flacons avec des bouchons de caoutchouc. Chaque flacon contient 'O mg de substances extraites du tissu du thymus. ryrMPLE 5 O':ibéère 500 q du tissu du thymus, des vaisseaux. des caillots anguins et de la cellule adipeuse, lave avec de l'eau, maintient pendant 10 heures à la température de -50 C, puis homogénéise. On place le tissu du thymus homogénéisé dans une solution aqueuse à 2% d'acide ".étiqe pour un rapnort pondéral de 1/7 respectivement. On effectue l'extraction c!ans les conditions de pH 3,0 et de température 8 C durant heures. en présence de chlorure de zinc, employé à raison de 1,5 g U par 1 itr de ie acide acétique susmentionné. Auterme de l 'extraction, on centrifuge le substrat à 6.000 tr/mn pendant 10 minutes, prélève le liquide surnageant et y additionne de l'éthanol en un rapport pondéral de 1/10 respectivement. On sépare par filtration le sédiment déposé, le lave avec de l'éthanol et le sèche sur filtre. La poudre blanche ainsi obtenue en une quantité de 5,6 g contient des substances biologiquement actives, à savoir les polypeptides de masse moléculaire de 600 à 6.000 dalton en le rapport suivant (% en masse): 12 2583982 polypeptides à point isoélectrique 3,5-6,7.... 80 polypeptides à point isoélectrique 7-9........ 20 Le produit médicamenteux obtenu à partir du thymus ainsi préparé est une poudre blanche, soluble dans l'acide acétique à 5% et dans l'eau, le pH de la solution aqueuse a 1% dudit produit étant de 5,4. Pour l'obtention de la forme médicamenteuse du produit obtenu à partir du thymus, on dissout la poudre obtenue dans 570 ml d'acide acétique à 2%. On stérilise par filtration la solution du produit et la verse dans des flacons stériles à raison de 1 mi, puis lyophilise et ferme les flacons avec des bouchons de caoutchouc. Chaque flacon contient 10 mg de substances extraites du tissu du thymus. MU REVENDICATIONS 1.- Produit obtenu à partir du thymus contenant des polypeptides à point isoélectrique 3,5-6,7, caractérisé en ce qu'il contient des polypeptides de masse moléculaire de 600 à 6.000 dalton, dont 10 à 20% de masse à point isoélectrique 7-9 et de masse moléculaire 2.000- 4.000 dalton. 2.- Procédé d'obtention du produit obtenu à partir du thymus selon la revendication 1, comprenant l'homogénéisation du tissu du thymus, la separation du produit homogénéisé obtenu en sédiment et liquidr surna- qeant que l'on traite par solvant organique avec isolement subséquent du produit recherché, caractérisé en ce que, avant la séparation, on réalise 'extraction du tissu du thymus homogénéisé par une solution aqueuse à -ih d'acide acétique en présence de chlorure de zinc durant au moins 24 heures. i5 3.- Procédé d'obtention selon la revendication 2, caractérisé en ce que l'on réalise l'extraction durant 48-72 heures. 4.- Procédé d'obtention selon les revendications 2 et 3, caracté- risé en ce que l'on utilise le chlorure de zinc pour l'extraction à raison de 0,2-2 g par litre d'acide acétique. 2t,: 5.- Procèdé d'obtention selon les revendications 2 à 4, caracté- ri$ en ce que l'on effectue l'extraction dans les conditions de J 2.5-_et P tfpmnArature 5-15 C. -.- ree d'ubtetion selon les revendications 2 à 5, caracte- ri96 Pn ce que. avant l'homogénéisation, on maintient le tissu du thymus à une température de -50 à -30 C durant au moins 100 heures.