Brevet FR2583881A1 — publié le 19861226

Procédé et solution pour déterminer les temps de HowelL et réaliser les tests de tolérance à l'héparine. La présente invention concerne un procédé pour déterminer les temps de recalcification de plasmas préalablement décalcifiés en présence ou non d'héparine (temps de Howell et tests de tolérance à l'héparine). L'administration de certaines substances médicamenteuses impose des contrôles fréquents et précis car, pour être efficaces, les doses administrées sont souvent très proches des doses toxiques ou dangereuses ; le contrôle de l'activité thérapeutique de certains médicaments constitue donc l'une des activités importantes des laboratoires d'analyses médicales. Dans Le cas de thérapeutiques anticoagulantes destinées à fluidifier et à rendre le sang moins coagulabLe, le risque majeur est le danger hémoragique et il importe d.onc que cette efficacité et ces risques sent exactement déterminés et contrôlés. De très nombreux tests ont été uilisés pour s assurer que l'on se trouve bien dans La zone thérapeutique tout en étant assez loin de la zone dangere-use. Parmi ces tests, la determination du temps d Rowell et Le test de tolérance à l'héparine sont Parmi iè plus importants. Ces tests mesurent le temps de coagulation de plasmas sanguins décalcifiés et recalcifiés en pir-ésence ou non de quantités croissantes. d'héparine. Ces tests simples dans Leur pirin;ipe, sont toutefois mal standardisés et de sensibilité mal définie, car ils se heurtent, dans leur réalistion prat1que, à de nombreuses difficuLtés. Ils nkcessitent notamment : - un personnel qualifié et entrain observant rigoureusement le protocole obligatoire ; - un matériel parfait comprenant des tubes de verre calibrés, préalablement brûles à la flamae ; - des pipettes et un chronomètre à déclenchement manuel ; - des bains-marie thermostatés. L'emploi des tubes à hémolyse en verre est impératif car le contact du plasma avec le verre active deux des facteurs de la coagulation, à savoir les facteurs XI et XII, facteurs indispensables la formation du caillot. On comprend facilerent que l'emploi de bains-marie, de pipettes, de chronomètres à déclenchement manuel et de tubes plus ou moins bines calibrés sont des facteurs qui constituent dis obstartes sérieux à L'exécution rapide, pratique, exacte et reproductible de ces tests qui dépendent donc beaucoup trop dff laj rigueur et de La dextérité de l'opera teur. La présente invention a notamment pour objet de simplifier l'accomplissement de ces tests et de permettre leur exécution commode, manuellement ou sur des appareils automatiques. Selon l'invention, cet objectif est atteint au oyen d'un procédé remarquable par le fait que l'on incorpore un activateur pulvérulent des facteurs XI et XII dans La solution recalcifiante utilisée pour ta recalcification du plasma sanguin préatablement décalcifié, cet activateur étant par exemple, avantageusement constitué par de la poudre de verre. La solution selon l'invention est constituée par une solution recalcifiante contenant un activateur pulvérulent des facteurs XI et XII tel que, par exemple, de la poudre de verre. Grace au procédé et à la solution selon l'invention, il est possible d'effectuer des tests de détermination du temps de recalcification de plasmas sanguins tels que test de Howell ou test de tolérance à l'héparine : - soit manuellement, dans des tubes en matière plastique ; - soit, plus commodément, dans les cuvettes ou tubes en matière plastique utilisés couramment sur des appareils de coagulation ; dans des conditions d'exactitude et de rigueur totalement inconnues à ce jour. Les buts, caractéristiques et avantages susmentionnés, et d'autres encorde, ressortiront mieux de l'exposé qui suit. Le procédé de l'invention consiste principalement à incorporer, dans la solution recalcifiante utilisée pour la recalcification du plasma préalablement décalcifié, une substance pulvérulente constituée par un activateur des facteurs XI et XII, en quantité adéquate, la concentration en activateur étant calculée pour être le plus possible identique ou équivalente à l'activation due au verre des tubes à hémolyse des techniques traditionnelles de détermination du temps de Howell et de réalisation des tests de tolérance à l'héparine. La solution recalcifiante est, de manière connue, constituée par une solution de chlorure de calcium (CaCl2) M/40. L'activateur des facteurs XI et XII incorporé à cette solution est, de préférence, constitué par de la poudre de verre qui présente l'avantage, dans cette application, d'être parfaitement stable et non susceptible de s'agglomérer en agrégats qui pourraient modifier l'activité. Cette poutre de verre peut se présenter sous forme de micro-ballons, de micro-billes ou d'éclats, dont la granu lométrie est avantageusement de l'ordre de 25 microns (25y). L'activateur des facteurs XI et XII pourrait être également constitué par de la poudre de talc, ou par de la poudre de kaolin, ou par d'autres silicates pulvérulents. Lorsque l'activateur des facteurs XI et XII utilisé est constitué par de la poudre de verre ayant la granulométrie susmentionnée, on incorpore 1,5 gramme (1,5 gr) de poudre de verre dans i litre (il) de solution de chlorure de calcium M/40. Il résulte déjà de L'exposé qui précède que la solution selon l'invention est constituée par une solution de chlorure de calcium contenant, en suspension, un activateur pulvérulent des facteurs XI et XII tel que de la poudre de verre, poudre de talc, poudre de kaolin ou autre silicate pulvérulent. Lorsque cet activateur est de la poudre de verre, diverses granulométrieset diverses concentrations corrélatives de l'activateur peuvent être utilisées afin d'obtenir une activation optimale des facteurs de coagulation. Suivant un exemple avantageux, cette granulométrie peut être d'environ 25 microns (25ss) et la solution contient, par exemple, dans ce cas, 1,5 gr de poudre de verre pour il de solution de chlorure de calcium M/40. Pour la mise en oeuvre du procédé de l'invention, on utilise, par exemple, comme pour le test de Howell classique, 0,5 millilitre (0,5 ml) de la solution susmentionnée pour recalcifier 0,5 ml de plasma. REVENDICATIONS 1. - Procédé pour déterminer les temps de recalcification de plasmas préalablement décalcifiés, caractérisé en ce que l'on incorpore un activateur pulvérulent des facteurs XI et XII dans la solution recalcifiante utilisée pour la recalcification du plasma, lors de la détermination des temps de Howell et de la réalisation des tests de tolérance à l'héparine. 2. - Procédé selon la revendication 1, caractérisé en ce que l'on incorpore de la poudre de verre dans la solution recalcifiante utilisée pour la recalcification du plasma. 3.- Procédé suivant la revendication 2, caractérisé en ce que l'on incorpore une poudre de verre ayant une granulométrie de l'ordre de 25 microns. 4. - Procédé selon l'une des revendications 2 ou 3, dans lequel la solution recalcifiante utilisée est une solution de chlorure de calcium M/40, caractérisé en ce que l'on incorpore de la poudre de verre dans la proportion de 1,5 gramme de poudre de verre pour 1 litre de solution de chlorure de calcium M/40. 5. - Procédé suivant la revendication 1, caractérisé en ce que l'on incorpore, dans la solution recalcifiante utilisée, un silicate pulvérulent, tel que, par exemple, de la poudre de talc ou de la poudre de kaolin. 6. - Solution pour déterminer les temps de Howell et réaliser les tests de tolérance à l'héparine, caractérisée en ce qu'elle est constituée par une solution de chlorure de calcium contenant, en suspension,un activateur des facteurs XI et XII. 7. - Solution selon la revendication 6, caractérisée en ce que l'activateur des facteurs XI et XII est de la poudre de verre. 8. - Solution selon la revendication 7, caractérisée en ce que la poudre de verre présente une granulométrie de L'ordre de 25 microns. 9. - Solution suivant L'une des revendications 7 ou 8, caractérisée en ce qu'elle contient 1,5 gramme de poudre de verre pour 1 litre de solution de chlorure de calcium M/40. 10. - Solution selon la revendication 9, caractérisée en ce que l'activateur des facteurs XI et XII est un silicate pulvérulent tel que, par exemple, de la poudre de talc ou de la poudre de kaolin.