Brevet FR2571258A1 — publié le 19860411

PEPTIDES A ACTION HYPOTENSIVE La présente invention concerne des peptides courts, d'une longueur de deux à quatre acidesaminés, utilisables comme agents antihypertenseurs. L'hypertension est un sérieux problème de santé, de proportions épidémiques. On estime que 20 % de la population adulte de l'Amérique du Nord présente des pressions artérielles systémiques supérieures à l'ordre de grandeur normale acceptée. Quelques causes directes de l'hy- pertension, telles que le pheochromocytoma et l'hyperaldostéronisme primaire, peuvent être traitées par intervention thérapeutique directe. Ces exemples ne constituent pas la norme. Généralement, le traitement pharmacologique de l'hypertension implique le traitement des symptômes La thérapie est dirigée seulement vers la correction d'une pression anormale. Toutefois, il est clair à présent qu'une telle thérapie peut affecter favorablement les pronostics et ainsi, diminuer considérablement le risque de mortalité dûe à la maladie cardiovasculaire de la personne affectée. L'hypertension essentielle, ou primaire, est une condition mal définie dont le diagnostic s'établit par exclusion. On ne sait pas si l'hyperten- sion est une maladie en soi ou simplement l'extrémité supérieure d'un spectre continu de pressions sanguines dans la population. Chez les individus à tension normale aussi bien que chez les hypertendus, le tonus vasculaire est contrôlé par des fibres nerveuses sympathiques. Même chez les individus à tension normale, la diminution du tonus vasculaire peut réduire la pression sanguine. Ainsi, une fonction nerveuse sympathique anormale est probablement responsable de la résistance périphérique accrue qui caractérise l'hypertension primaire. La thérapie pharmacologique de l'hypertension a généralement eu comme objectif la promotion de l'excrétion saline (les diurétiques) et la dimi- nution du tonus vasculaire par des moyens directs (vasodilatateurs directs) et indirects (agents de blocage adrénergiques). Les diurétiques constituent un moyen efficace pour réduire le-volume global du sang et ainsi, la pres- sion sanguine; toutefois, leur utilisation, en particulier dans les hypertensions de moyennes à graves, s'effectue de façon secondaire par rapport à d'autres agents. Les diurétiques ont également une tendance à épuiser le potassium contenu dans le sérum, ce qui peut avoir des consé- $ quences graves pour le patient cardiaque. Les vasodilatateurs indirects sont probablement les agents les plus utilisés dans les cas d'hypertension faible à moyenne. Ces agents agissent, pour la plupart, sur une certaine partie du système nerveux sympathique. Le propanolol, un agent de blocage béta adrénergique, est largement utilisé dans ce pays, avec des succès variables. Le propanolol seul ne produit toutefois qu'un faible contrôle de l'hypertension. Une thérapie de ce type peut également entraîner divers effets secondaires désagréables, comprenant une réduction prolongée de la capacité cardiaque accompagnée de dépression, d'impotence, et d'une léthargie prononcée. D'autres agents à action indirecte tels que les Guanethidine, Pargyline, Méthyldopa, Réserpine, Clonidine, et les agents de blocage ganglionique, ont également connu des succès variés, accompagnés de nombreux effets secondaires et de réactions indésirables. De même, les problèmes d'effets secondaires sont courants avec l'utilisation à long terme des médicaments qui agissent directement sur le muscle lisse vasculaire. Le diazoxyde est aussi bien hyperuricémique que hyperglycémique. Le nitroprusside est un vasodilateur puissant mais ses effets sont de courte durée, et la drogue doit être administrée par infusion continue. L'hydralazine est utilisée régulièrement, bien que l'incidence de réactions indésirables soit très élevée. Pour tous ces agents, les points principaux a considérer par le spécialiste sont l'efficacité et les effets secondaires. Dans le domaine des composés anti-hypertenseurs, même des effets secondaires mineurs peuvent entraîner de graves problèmes de non-conformité. En ce qui con- cerne l'efficacité, les agents à action directe paraissent offrir le meilleur contrôle de l'état d'hypertension; néanmoins, leur toxicité et leurs limitations tendent à réduire leur utilité, en particulier dans des cas faibles à modérés. En conséquence, l'intérêt de la science médicale est de développer de nouvelles approches pour le traitement de l'hypertension. La présente invention propose une composition permettant de lutter contre l'hypertension, c'est-à-dire une composition hypotensive ou anti- hypertensive, comprenant un peptide ayant la structure X-Y, Y-X, ou un de ses sels, structure dans laquelle X est la proline ou la proline- proline et Y est l'arginine, la lysine, l'arginine-arginine, la lysine- lysine, l'arginine-lysine ou la lysine-arginine, en commun avec un diluant pharmaceutique approprié. Elle propose également un procédé pour soulager l'hypertension chez les mammifères hypertendus, constitué par l'administration au mammifère d'une quantité efficace antihypertensive d'un peptide ayant la structure X-Y, YX, ou d'un de ses sels, structure dans laquelle X est la proline ou la proline-proline et Y est l'arginine, la lysine, l'arginine-arginine, la lysine-lysine, l'arginine-lysine ou la lysine- arginine. L'invention propose une série de 24 petits peptides, d'une longueur de deux à quatre acides aminés, qui constituent une nouvelle classe d'agents antihypertenseursayant une action thérapeutique. La structure générale des peptides compris dans la présente invention peut être définie par XY ou YX, X étant la proline (Pro) ou la proline-proline; et Y étant l'arginine (Arg), la lysine (Lys), l'arginine-arginine, la lysine-lysine, l'arginine-lysine ou la lysine-arginine. Cela donne les 24 combinaisons possibles suivantes: XY YX Pro-Arg Arg-Pro Pro-Lys Arg-Pro-Pro Pro-Arg-Arg Lys-Pro Pro-Lys-Lys LysPro-Pro Pro-Arg-Lys Arg-Arg-Pro Pro-Lys-Arg Arg-Arg-Pro-Pro Pro-Pro-Lys Lys-Lys-Pro Pro-Pro-Arg-Arg Lys-Lys-Pro-Pro Pro-Pro-Lys-Lys Arg-Lys-Pro Pro-Pro-Arg-Lys Lys-Arg-Pro Pro-Pro-Lys-Arg Lys-Arg-Pro-Pro Pro-Pro-Arg Arg-Lys-Pro-Pro Les peptides de la présente invention peuvent être obtenus par synthèse, au moyen des procédés de synthèse connus des polypeptides. Ces peptides sont alors administrés à un mammifère hypertendu dans un diluant approprié, tel qu'une solution saline normale, le peptide étant en quan- tité suffisante pour réduire la pression sanguine du mammifère. /4h 2571258 L'invention sera mieux comprise & l'aide des exemples ciaprès: EXEMPLE 1 Le Peptide Inhibiteur de la Corticotropine (CIP) contient la séquence d acides amins suivante, dont les séquences soulignées sont celles qui constituent l'objet de la présente invention: CIP humain (ACTH 7-38): Phe-Arg-Trp-Gly-Lys-Pro-Val-Gly-Lys-Lys-Arg- Arg-Pro-Val-Lys-Val-Tyr-Pro-Asn-Gly-Ala-Glu- Asp-Glu-Ser-Ala-Glu-Ala-Phe-Pro-Leu-Glu (P.M. 3659,68) Ce fragment de CIP a été fourni par Peninsula Laboratories, San Carlos, CA. Lorsqu'il a été administré à des chiens, ce peptide a provoqué une hypotension qui était fonction de la dose. Le test concernant la pression sanguine du chien a été conduit selon le procédé suivant: Des chiens bâtards des deux sexes ayant-un poids compris entre 6 et 15 kg, ont subi une anesthésie par injection intraveineuse de pentobarbital de sodium (30 mg/kg). L'artère et la veine fémorales ont été shuntées pour la mesure de la pression sanguine et pour l'in- jection de drogues, respectivement. La pression sanguine artérielle a été déterminée au moyen d'un transducteur de pression Statham, et enregistrée sur un polygraphe Grass. La pression artérielle moyenne (MAP) a été calculée pour les périodes avant et après chaque injection de peptide. Une tracheotomie a été effectuée afin d'assurer une arrivée d'air appropriée pour la respiration spontanée. Les essais concernant l'action hypotensive ont été réalisés en injectant à chaque chien O,1; 0,5; 1 et 2 ug/kg. Le CIP, tel que fourni par Peninsula Laboratories, était sous forme lyophylisée. Avant l'injection, le CIP était dissout dans une solution saline. Le tableau 1 présente les résultats obtenus. 25 71258 TABLEAU 1 Activité hypotensive du CIP en fonction de la dose. Dose (ug/kg) Diminution de la pression sanguine (mmHg) 0,1 7 0,5 10 1,0 19 2,0 21 EXEMPLE 2 Le test concernant la pression sanguine des chiens, décrit ci- dessus, a été également utilisé pour une détermination de l'effet antihypertenseurdes peptides suivants, tous fournis par Peninsula Laboratories. Pour chaque peptide, les séquences d'acide aminé décrites par la présente invention sont soulignées: Peptide Séquence d'acide aminé Bradykinine Arg-Pro-Pro-Gly-Phe-Ser-Pro-Phe- Arg (P.M. 1060,24) Xenopsine pGlu-Gly-Lys-Arg-Pro-Trp-Ile-Leu (P.M. 980,32) Neurotensine pGlu-Leu-Tyr-Glu-Asn-Lys-Pro- Arg-Arg-Pro-Tyr-Ile-Leu (P.M. 1673,15) Substance P Arg-Pro-Lys-Pro-Gln-Gln-Phe-Phe- Gly-Leu-Met-NH2 (P.M. 1347,80) La diminution maximum de la pression sanguine par l'effet hypoten- seur ces peptides sur des chiens, dans les essais décrits ci-dessus dans l'exemple 1, est représenté en tableau 2. Chaque donnée constitue la moyenne de quatre reproductions de l'essai. TABLEAU 2 Agent Hypotenseur Dose Diminution maximum (moles/kg) de la pression sanguine Substance P 5xlO-10 50 Bradykinine 3xlO9 44 Neurotensine 7xlO10 40 Xenopsine 3xlO9 32 EXEMPLE 3 Les peptides suivants comportent des séquences d'acidesaminés (soulignées) décrites par la présente invention: Peptide Séquence d'acides aminés Tuftsine Thr-Lys-Pro-Arg Neurotensine (8-13) Arg-Arg-Pro-Tyr-Ile-Leu Fragment de CIP Gly-Lys-Lys-Arg-Arg-Pro-Val-Lys Tétrapeptide contraceptif Thy-Pro-Arg-Lys Lorsqu'il a été administré à un rat, chaque peptide a exercé une action hypotensive qui était fonction de la dose. Ces résultats sont représentés dans le tableau 3. Chaque donnée représente la moyenne de 4 essais. L'essai concernant la pression sanguine des rats a été conduit comme suit: Des rats Sprague-Dawley des deux sexes, ayant un poids compris entre et 200 g, ont subi une anesthésie au moyen de pentobarbital de sodium, et l'artère carotide droite ainsi que la veine jugulaire ont été shuntées avec un tube en polyethylène PE50. Le peptidehypotenser a été administré et la pression sanguine des rats anesthésiés a été enregistrée comme décrit plus haut pour les chiens. 7 2571258 TABLEAU 3 Activité hypotensive de peptides sélectionnés, en fonction de la dose. Dose (ugkg) Diminution de la pression sanguine (mmHg) Neurotensine Fragment Têtrapeptide Tuftsine (8-13) de CIP contraceptif 0,1 0 1,0 13 3,0 48 ,0 63 1 ,0 18 ,0 35 2 ,0 3 300,0 38 500,0 9 1000,0 1 13 2000,0 15 3000,0 12 5000,0 30 9000,0 46 EXEMPLE 4 Les dipeptides proline-lysine et arginine-proline ont été également testés pour leur action hypotensive sur les rats. Ces dipeptides ont été obtenus par synthèse, chez Vega Biochemicals, Tucson, AZ, et testés pour leur effet sur la pression sanguine des rats, suivant le procédé décrit dans l'exemple 3 ci-dessus. Les résultats étaient-les suivants: Modification de la pression sanguine en mm Hg à la dose de Dipeptide 1 mg/kg 2mg/kg 3 mg/kg L Arg-L ProA -0,8+0,8 -1,3+0,8 -13,8+4,4 L Pro-L Lys +0,2+2,6 -2,6+1,9 -7,0+3,4 A Toutes les valeurs sont des moyennes de quatre essais B Toutes les valeurs sont des moyennes de cinq essais EXEMPLE 5 Les dipeptides L Arg-L Pro et L Pro-L Lys ont été également testés dans l'essai effectué in vitro sur des bandes hélicoidales de l'artère de queue de rat. Ces essais ont été conduits selon le procédé suivant: Des rats Sprague-Dawley mâles et femelles ont été anesthésiés à l'aide de pentobarbital (50 mg/kg) avant l'ablation de l'artère de la queue. Apres séparation, l'artère a été placée dans une solution de Krebs-Hensleit glacée (KHS) qui a été oxygénée avec 95 % de 02 et 5 % de C02. Les vaisseaux ont été découpés de façon hélicoidale et des bandes d'environ 1,5 cm ont été conservées dans une chambre de Sawyer- Bartleston contenant du KHS. Le développement de la force des bandes hélicoldales a été mesuré avec un transducteur de déplacement de force Grass FT.03 et enregistré sur un polygraphe Grass Model 79 D. Les bandes hélicoidales de l'artère de queue isolées ont été équilibrées pendant une heure avant l'addition de tout peptide. Dans tous les cas, les bandes ont été d'abord contractées par addition au bain d'arginine vasopressine (AVP) . Le peptide étudié était alors introduit dans le bain et le degré de relaxation était déterminé. Les acides aminés purs L-proline, L-arginine et D-arginine, ont été inclus dans cet essai comme témoins. Les résultats obtenus étaient les suivants: Dipeptide Modification de la tension en gm aux doses de ug/ml 200 ug/ml 500 ug/ml L Arg-L Pro -0,07 -0, 18 -0,34 L Pro-L Lys -0,09 -0,16 -0,25 L Pro O 0 O L Arg O 0 O D Arg 0 O 0 EXEMPLE 6 L'addition de lysine à la molécule de bradykinine ci-dessus produit la séquence d'acide aminé suivante: Lys-Arg-Pro-Pro-Gly-Phe-Ser-Pro-Phe-Arg. Dans l'essai de pression sanguine du rat, cet analogue s'est montré encore plus hypotenseur que la bradykinine elle-même. xxxxxxxxx Les exemples ci-dessus sont fournis à titre d'illustration, sans aucune limitation du domaine de l'invention. 2571 58 REVENDICATIONS 1. Composition hypotensive, comprenant un peptide ayant la structure -X-Y, Y-X ou un de ses sels, structure caractérisée en ce que X est la proline ou la proline-proline, et Y est l'arginine, la lysine, l'arginine-arginine, la lysine-lysine, l'arginine-lysine, ou la lysine-arginine; et un support pharmaceutique approprié. 2. Composition selon la revendication 1, caractérisée en ce que le peptide est une des séquences d'acide aminé suivantes: XY:YX Pro-Arg Arg- Pro Pro-Lys Arg-Pro-Pro Pro-Arg-Arg Lys-Pro Pro-Lys-Lys Lys-Pro-Pro-.- Pro-Arg-Lys Arg-Arg-Pro Pro-Lys-Arg Arg-Arg-Pro-Pro Pro-Pro-Lys Lys-LysPro Pro-Pro-Arg-Arg Lys-Lys-Pro-Pro Pro-Pro-Lys-Lys Arg-Lys-Pro Pro-ProArg-Lys Lys-Arg-Pro Pro-Pro-Lys-Arg Lys-Arg-Pro-Pro Pro-Pro-Arg Arg-LysPro-Pro 3. Composition selon la revendication 1, caractérisée en ce que le peptide est: Pro-Arg-Arg Pro-Lys-Lys Pro-Arg-Lys Pro-Lys-Arg Pro-Pro- Lys Arg-Pro-Pro Lys-Pro-Pro Arg-Arg-Pro Lys-Lys-Pro Arg-Lys-Pro Lys-Arg- Pro Pro-Pro-Arg -/" 2571258 4. Composition selon la revendication 1, caractérisée en ce que le peptide est: Pro-Pro-Arg-Arg Pro-Pro-Lys-Lys Pro-Pro-Arg-Lys Pro-Pro-Lys- Arg Arg-Arg-Pro-Pro Lys-Lys-Pro-Pro Lys-Arg-Pro-Pro Arg-Lys-Pro-Pro 5. Procédé pour remédier à l'hypertension chez des mammifères hypertendus, consistant à administrer au mammifère une quantité suffisante, pour produire un effet antihypertenseur,d'un peptide ayant la structure X-Y, ou Y-X ou d'un de ses sels, caractérisé en ce que: X est la proline ou la proline-proline Y est l'arginine, la lysine, l'arginine-arginine, la lysine-lysine, l'arginine-lysine, ou la lysine-arginine, dans un support pharmaceutique approprié. 6. Procédé selon la revendication 5, caractérisé en ce que le peptide est: L Arg-L Pro; L Pro-L Lys; L Lys-L Pro; L Arg-L Arg-L Pro; L Arg-L Arg-L Pro; L Lys-L Arg-L Pro; L Lys-L Pro- L Arg; -L Lys-L Pro-L Arg-L Arg; ou L Lys-L Arg-L Pro-L Pro.