Brevet FR2563528A1 — publié le 19851031

La présente invention concerne un nouvel antioxydant contenant un composé organogermanique comme ingrédient principal. L'oxygène est une substance indispensable non seule- ment pour les êtres humains mais également pour tous les orga- nismes aérobies, mais il est bien connu que l'oxygène provoque divers phénomènes indésirables. Par exempLe, la graisse ou L'huile contenue dans les aliments est auto-oxydée par l'oxygène de l'air ce qui non seulement réduit la qualité d'agrément alimentaire et la valeur nutritive mais également produit des substances toxiques par formation de peroxydes. De plus, dans les organismes vivants la formation de peroxydes a été récemment indiquée comme cause du veillissement, de cancérogénèse ou similaires. Il semble qu'un acide gras insaturé, par exemple un acide gras polyinsaturé, particulièrement important tel qu'un phospholipide ou similaires qui est un composant indispensable des aliments comme acide gras essentiel, est soumis à une auto- oxydation avec un radical libre d'oxygène ou d'oxydant, ce qui constitue une réaction radicalaire en chaîne, pour former des peroxylipides appelés "hydroperoxydes" et que ces hydroperoxydes et les produits formés par destruction par oxydation d'un endo- peroxyde produit lors de l'auto-oxydation, tel que le malonaldéhyde, agissent sur l'ADN, l'ARN les protéines ou les tissus des membranes, en participant aux altérations précitées. On sait que l'adriamycine contenue dans les agents antinéoplasiques de la famille des anthracyclines, qui est un des agents chimiothérapeutiques utilisés dans le traitement médical du cancer, a un spectre d'activité antinéoplasique particulièrement étendu. Cependant, on a signalé que l'adriamycine provoque certains effets secondaires. De plus on a suggéré que la cardiotoxicité qui est un des effets secondaires est due à la peroxydation d'un lipide par l'anion-radical libre superoxyde (02), le radical hydroxyle libre (OH), le singulet oxygène ('02) ou similaires qui dérivent de la structure quinonique présente dans la structure chimique de l'adriamycine (Edward G. Mimnaugh et Col)., Journal of Pharmacology and Experimental Therapeutics, Volume 226, n 3 806 (1983)). On s'est efforcé d'inhiber l'auto-oxydation précitée. Actuellement,on utilise beaucoup des antioxydants phénoliques synthétiques tels que le butylhydroxyanisole (BHA) ou le butyl- hydroxytoluène (BHT) et des antioxydants naturels tels que le tocophérol. Cependant, ces antioxydants synthétiques ont des incon- vénients en ce qui concerne l'innocuité. Par exemple, le BHA tend à provoquer des troubles hépatiques. D'autres part, on sait que les antioxydants naturels ont des inconvénients en ce qui concerne la matière première, les effets et le coût. Donc, certains des présents inventeurs ont effectué des recherches pour découvrir un antioxydant naturel efficace autre que le tocophérol et ont mis au point un antioxydant naturel efficace et sans danger contenant de la n-tritriacontane-26, 18- dione qui est contenue dans la cire des feuilles d'eucalyptus, comme ingrédient principal (brevet JA publié, n 57-26744). De plus, on désire également mettre au point des antioxydants synthétiques efficaces et sans danger. La présente invention réalisée dans ces circonstances consiste en un nouvel antioxydant synthétique comprenant un composé organogermanique représenté par la formule générale: Ge - C - CH - COY (I) R1 R2 2Z3 dans laquelle R1, R2 et R3 sont chacun un atome d'hydrogène, un radical phényle substitué ou non substitué ou un radical alkyle, Y est un radical hydroxyle ou amino et Z est un atome d'oxygène ou de soufre. Sur le dessin annexé qui illustre le pouvoir antioxydant des nouveaux antioxydants de la présente invention, la figure I illustre te cas o l'on utilise des achro- matocytes de lapin, et les figures 2(a) et 2(b) illustrent le cas o l'on uti- lise des microsomes hépatiques de rat, (a) correspondant à l'emploi d'ADPFe+3, tandis que (b) correspond à l'emploi d'adriamycine. Les modes de réalisation préférés de l'invention vont maintenant être décrits de façon détaillée. L'antioxydant de l'invention contient un composé orga- nogermanique représenté par la formule générale (I). Dans cette formule, les substituants R1, R2 et R3 sont un atome d'hydrogène, un radical phényle substitué ou non substitué ou un radical alkyle, tel que méthyle ou éthyle, et le substituant Y est un radical hydroxyle ou amino. Le substituant Z représente un atome d'oxygène ou de soufre. Donc, lorsque Z est O, le composé organogermanique repré- senté par la formule générale (I) est un sesquioxyde constitué des structures principales et d'atomes d'oxygène qui sont unis entre eux dans un rapport de 2/3, tandis que, lorsque Z est S, c'est un sesquisulfure constitué des structures principales et d'atomes de soufre qui sont unis entre eux dans un rapport de 2/3. Les composés organogermaniques que l'on utilise dans l'invention sont, de façon commode, représentés par la formule générale (I) selon la pratique habituelle. Cependant, le composé organogermanique est une grosse molécule comprenant les structures principales et des atomes d'oxygène ou de soufre qui sont unis entre eux dans un rapport de 2/3 etpar conséquent, la formule générale (I) ne représente pas exactement la structure de ce com- posé organogermanique. Par conséquent, un tel composé organoger- manique peut également être représenté par la formule générale: - 12Ge - CH-C (I) 4 Z2 R1 R2 n ou par la formule générale: R3 Ge CH -COYI") R1 R2 J 2nZ3n Les composés organogermaniques ci-dessus peuvent être préparés selon divers procédés. Par exemple, le composé de type sesquioxyde représenté par la formule générale (I) dans laquelle Z est un atome d'oxygène et Y est un radicaLhydroxyLe, peut être préparé selon un procédé qui comprend la réaction du trichLorogermane Cl3GeH (II) avec un dérivé d'acide acrylique lR3 C C - COOH (III) I I R1 R2 pour obtenir un dérivé d'acide trichlorogermylpropionique R3 CL3Ge - C CH - COOH (IV) I! R1 R2 et hydrolyse de celui-ci, ou selon un procédé qui comprend la réac- tion du trichlorogermane (II) ci-dessus avec un dérivé d'acrylo- nitrile R C = C - CN (III') !! R R I 2 pour obtenir un dérivé de trichlorogermylpropionitrile R. CCl3Ge -C - CH CN (IV') I, R1R2 et son hydrolyse. Le composé de type sesquisulfure représenté par la for- mule générale (1),dans laquelle Z est un atome de soufre et Y est un radical hydroxyle,. peut être obtenu selon un procédé qui comprend la dissolution du dérivé d'acide trichLorogermylpropionique ci-dessus (IV) dans un solvant anhydre et le passage de sulfure d'hydrogène anhydre à travers la solution en présence de'pyridine anhydre. Dans tous Les cas, le composé représenté par la formule générale (I),dans laqueLle Y est NH2, peut être obtenu par exemple selon un procédé qui comprend la réaction d'un dérivé d'acide tri- chlorogermytpropionique (IV) avec un agent d'halogénation pour former l'halogénure d'acyle correspondant et le traitement de l'halogénure avec de l'ammoniac, puis, soit l'hydrolyse du produit, soit le passage du sulfure d'hydrogène anhydre à travers lui. Dans la préparation du sesquioxyde ou du sesquisuLfure, il semble qu'il se produise une élimination intermoLéculaire de ZH2 à partir d'un intermédiaire (V) ZH R HZ - Ge - C - CH - COOH (V) !! I ZH R1 R2 qui a été préalablement formé, pour fournir le composé organogerma- nique représenté par la formule générale (I). Le pouvoir antioxydant dans les organismes vivants des composés organogermaniques synthétisés comme ci-dessus a été examiné principalement selon un système semblable au système in vitro. Plus particulièrement, on mesure la peroxydation due à l'hydroperoxyde de tert- butyle, qui est un type de peroxyde, par emploi d'un système contenant des achromatocytes (fragments de membranes cellulaires) et la peroxydation liée au NADPH due à l'ADP-Fe3+, au radical oxygène libre, au peroxyde d'hydrogène et au radical hydroxyle libre en utilisant le système de microsomes hépatiques P-450 du rat et la peroxydation due à l'adriamycine précitée. Les résultats de ces mesures montrent que l'antioxydant de l'invention a une excellente capacité antioxydante semblable à celle du tocophérol précédemment décrit. Des exemples expérimentaux de l'invention vont mainte- nant être décrits. Exemple expérimental 1 Synthèse de composés orqanoqermaniques représentés par la formule générale (I) ( Sesquioxyde de l'acide 2-méthyl-3germylpropionique (1) On ajoute goutte à goutte pendant 5 min, 84,7 ml (0, 1 mol) d'acide méthacrylique à 18 g (0,1 mol) de trichlorogermane brut que l'on a refroidi à 5 C dans un bain glacé. On agite le mé- lange à la même température pendant 1 h, puis à la température ordinaire pendant 1,5 h. On filtre les cristaux précipités en s'aidant du vide, on lave 4 fois avec 10 ml de n-hexane que l'on a séché sur chlorure de potassium, on essore et on maintient dans un dessiccateur contenant du pentoxyde de phosphore à 65 C pendant 1 h en abaissant La pression avec une pompe à vide utilisant un piège contenant de l'hydroxyde de-potassium pour obtenir 17,03 g d'acide 2-méthyl-3-(trichlorogermyl)propionique: Point de fusion 54 -55 C Spectre IR (KBr, cm-1): 2950'-'3600, 1690, 1265, 580, 550, 405 Spectre de RMN (CDCL3, 6): 1,46 (3H, d), 2,33 (2H, dd), 3, 03 (1H, q) ,13 (1H, s) Analyse élémentaire Théorique: C = 18,05, H = 2,63, Cl = 40,00 Trouvée: C = 18,12, H = 2,70, Cl = 39,97 On ajoute 10 ml d'eau pure à 2 g (0,0075 mol) d'acide 2-méthyl-3-(trichlorogermyl) propionique cristallin obtenu selon le mode opératoire ci-dessus. La température de la solution s'élève à 25 C et le composé se dissout totalement. Après 2 min, la solution devient trouble et des cristaux commencent à précipiter. On chauffe la solution à 85 C et on la maintient à cette température pendant 1 h pour précipiter complètement les cristaux. On sépare les cris- taux par filtration, on lave avec 10 ml d'eau pure, 10 ml d'éthanol à 99, 5-% puis 10 ml d'éther et on essore pour obtenir 0,638 g de sesquioxyde cristallin de l'acide 2-méthyl-3-germylpropionique (rendement: 86,3 %). (e - CH2 - CH - COOA CH3 J203 sesquioxyde de l'acide 2-méthyl-3-germylpropionique (1) Spectre IR (KBr, cm-1): 3420, 1705, 1245, 900, 802 Spectre de RMN (D20, 6): 1,30 (3H, d), 1,68 (2H, dd), 2,93 (1H, m) Analyse élémentaire Théorique: C = 26,16, H = 3,84 Trouvée: C = 25,52, H = 4,08 Sesquioxyde du 2-méthyl-3-germylpropionamide (7). On ajoute 100 ml de chlorure de thionyle à 26,6 g (0,1 mol) de l'acide 2-méthyl-3-(trichlorogermyl)propionique pré- paré selon le procédé ( ci-dessus. On chauffe le mélange à reflux pendant 10 h et on distille sous pression réduite pour chasser l'excès de chlorure de thionyle. On obtient 25,1 g du chlo- rure d'acide correspondant sous forme d'une matière transparente incolore ayant un point d'ébullition de 101-101,5 C/0,8 mbar (rendement: 88 %). On dissout 5,69 g (0,02 mol) de ce chlorure dans 150 mL de benzène anhydre. On introduit dans la solution de L'ammoniac anhydre en refroidissant avec un bain glacé pendant 1 h puis, on introduit du chlorure d'hydrogène gazeux pendant I h. On ajoute 100 ml d'acétate de méthyle à la solution, on agite le mélange et on filtre. On distille le fiLtrat et on recristaLLise le résidu obtenu dans un mélange d'acétone et de benzène (1/2) pour obtenir g de l'amide correspondant (rendement: 79,8 %). On traite 5,70 g (0,02 mol) de L'amide obtenu selon. un procédé ordinaire pour n'hydrolyser que Les liaisons germanium- chlore. On obtient 3,01 g du composé désiré ayant les caractéris- tiques qui figurent ci-après (rendement: 79,8 %). te - CH2 - CH - CON CH3 203 sesquioxyde du 2-méthyl-3-germylpropionamide (7) Spectre IR (KBr, cm 1) 1660, 900, 800 Analyse élémentaire Théorique: Ge = 39,73, C = 26,30, H = 4,41, N = 7,67 Trouvée: Ge = 39,52, C = 26,37, H = 4,39, N = 7,61 Analyse thermique différentielle: pic endothermique à 246 C pic exathermique à 315 C Des exemples des composés représentés par la formule générale (I),dans laquelle Z est 0, comprennent les composés sui- vants, ainsi que les composés (1) et (7) ci-dessus. Les composés suivants peuvent être préparés selon un procédé semblable à celui décrit ci-dessus et présentent les caractéristiques qui figurent dans le tableau 1. e - CH - CH2 - COO (2) CH3 /203 ( - CH -CH- CO > (3) CH3 CH3 203 CH3 - C - CH2 -C C (4) ECH3) 203 e - CH-CH2 - COO (5) x 0. 3 Ge- CH.- CH - CO (6) t2 O3 CH -CH2 -CONH) (8) % CH3 203 - CH CH CONH (9) CH3 CH3 203 CH0N> (e - C - CH2 - CON (10) CH3 203 6e - CH - CH2 - CONH2 (11) t é 203 Ge - CH - CH - CONH2 (12) CH3 03 Tableau (1) \ a-ractéris- AnaLyse élémentaire Point IR (Kbr, RMN (b) \e t héorique/trouvée de cm-1) Rendement Àompos Ge c H fusion Solvant (%) Compose Ge C H(C _.. ( ,C) (2) 39,52 26,16 3,8 184C 1700 D20 1,23 (3H, d) 98,0 ''' 3'"4'-025(déc) 900 2,05 (1H, m) 39,4525,73 4,02 800 2,67 (2H, dd) (3) 36,72_ 30,3!7 4,59 2280C 1715 D20 1,20 (3H, d) 84,7 ,39 (déc) 1,30 (3H, d) 36,60 4,9,58 880 2,10 (1H, m) 2,90 (1H, m) (4) 36,72 30,37 4,59 230C 1690 D20 1,30 (6H, s) 65,8 (déc) 895 -:36,66 30,37 e4,55 795 2,55 (2H, s) (5) 29,54 43,9,9 3.- 200 C 1710 D20 3,00 (2H, s) 84,5 -2-03, 6 1 (déc)880 3,35 (1H, t) 29,55 44,01 3,61 '700. 7,35 (5H, m) (6) 27,94 46,23 4,27 200 C 1710 D20 1,15 (3H, m) 86,6 (déc) 880 3,20 (2H, d) - 27,99 4 -6, 21 -4, 22-7 700 7,30 (5H, m) Ln _o uW Co Sesquisulfure de l'acide 2-méthyl-3-germylpropionique (15). On dissout 5,3 g (0,02 mol) d'acide 2-méthyl-3-(tri- chlorogermyl)propionique dans 100 ml de benzène anhydre. On ajoute ,2 g (0,066 mol) de pyridine anhydre à la solution en refroidissant avec un bain glacé, puis on agite. On introduit du sulfure d'hydro- gène anhydre dans le mélange pendant 1 h. On chasse le benzène et on dissout le résidu dans 30 ml de méthanol. On ajoute la solution à 100 ml d'eau refroidie. On agite le mélange pendant 2 h pour pré- cipiter les cristaux. On recristallise les cristaux dans un mélange de méthanol et d'eau (1/1) pour obtenir 3,9 g de sesquisulfure cristallin d'acide 2-méthyl-3-germylpropionique (rendement: 93 %). (e - CH2 - CH - COO) CH3 2S3 sesquisulfure de l'acide 2-méthyl-3-germylpropionique (15). Spectre IR (KBr, cm 1): 3450, 1705, 1245, 425 Spectre de RMN (CD30D, 6): 1,38 (3H, d), 2,03 (2H, m), 2,94 (1H, m) Analyse élémentaire Théorique: Ge = 34,94, C = 23,13, H = 3,40, S = 23,15 Trouvée: Ge = 35,79, C = 23,39, H = 3,45, S = 22,96 9 Sesquisulfure de L'acide 3-phényl-3-germylpropionique (18). On dissout 16,4 g (0,05 mol) d'acide 3-phényl-3-(tri- chlorogermyl)propionique dans 200 mt d'acétone anhydre. On ajoute 12,6 g (0,16 mol) de pyridine anhydre à la solution en refroidis- sant avec un bain glacé, puis on agite. On introduit du sulfure d'hydrogène anhydre dans le métange pendant I h. On chasse l'acétone et on dissout le résidu dans 50 mt d'éthanol. On ajoute la solution à 400 ml d'eau pour précipiter les cristaux. On recristallise les cristaux dans un mélange d'acétate de méthyle et de benzène (1/3) pour obtenir 12,7 g de sesquisulfure cristallin d'acide 3-phényl-3- germylpropionique. e - CH - CH2 - COOH 3sesquisulfure de l'acide 3-phényl-3-germylpropionique (18). sesquisuLfure de L'acide 3-phényt-3-germyLpropionique (18). Spectre IR (KBr, cm 1): 3450, 1710, 1600, 1410, 1230, 700, 425 Spectre de RMN (acétone -d6, 6): 3,05 (2H, d), 3,62 (lH,t), - 7,23 (5H, m) Analyse élémentaire Théorique: Ge = 26,90,-C = 40,06, H = 3,36, S = 17,82 Trouvé: Ge = 26,92, C = 39,83, H = 3,41, S = 17,64 0 Sesquisulfure de 2-méthyl-3-germyl-3-méthylpropionamide (23). On traite 28,0 g (0,1 mol) d'acide 2-méthyl-3-(tri- chlorogermyL)butanoique avec 100 ml de chlorure de thionyle. On distille le mélange réactionnel sous pression réduite pour obtenir 27,0 g de chlorure de 2-méthyl-3-(trichlorogermyl)butanoyle sous forme diun produit jaune pâle ayant un point d'ébullition de 99 à C/0,8 mbar (rendement: 90,4 %). On dissout 5,8 g (0,02 mot) de ce chlorure dans 50 ml de benzène anhydre. On introduit de l'ammoniac anhydre dans la solu- tion en refroidissant avec un bain glacé pendant 1 h, puis on intro- duit du chlorure d'hydrogène gazeux pendant 1 h. On ajoute 100 ml d'acétate de méthyle, on agite le mélange et on filtre. On distille le filtrat et on recristalLise te résidu dans un mélange d'acétone et de benzène (1/2) pour obtenir 4,1 g de 2-méthyL-3-(trichloro- germyl)butanamide (rendement: 76,0 X). On dissout 10,8 g (0,04 mol) du 2-méthyl-3-(trichloro- germyl)butanamide ci-dessus dans 200 ml de benzène anhydre. On ajoute 9,5 g (0,12 mol) de pyridine anhydre à la solution, puis on agite. On fait passer du sulfure d'hydrogène gazeux anhydre à travers la solution pendant 1 h. On sépare le composé précipité et on le purifie soit par recristallisation dans l'acétone anhydre, soit par isolement en utilisant des tamis moléculaires tels que le Sephadex LH-20 (nom de marque) et du méthanol comme solvant de développement pour obtenir 7,8 g du composé désiré (rendement: 88,3 %) sesquisulfure du 2-méthyl-3-germyt-3méthylpropionamide (23) ( CH3 - CH - CH - CONH CH3 2 3 Point de fusion: 2050C (déc) Spectre IR (KBr, cm 1): 3400, 3200, 2960, 1660, 1460, 1400, 780, 570, 420 Spectre de RMN (CD30b, 6): 1,30 (3H, d, C0-CH-CH), 1,38 (3H, d, Ge-CH-CH), 2,14 (1H, m, Ge-CH), 2,27 (1H, m, CO-CH), 2,70 (2H, d, NH2) Analyse élémentaire Théorique: Ge = 32,87, C = 27,20, H = 4,56, N = 6,34, S = 21, 87 Trouvée: Ge = 32,59, C = 27,37, H = 4,43, N = 6,25, S = 21,56 Des exemples des composés représentés par la formule générale (I), dans laquelle Z est S, comprennent les composés sui- vants, ainsi que les composés (15), (18) et (23) ci-dessus. Les composés suivants sont préparés selon des procédés semblables à ceux décrits cidessus et présentent les caractéristiques qui figurent dans les tableaux 2-1 et 2-2. (GeCH2CHi2COOH) 2 S3 (13) (GeCH2CH2CONH2)2s3 (20) CH3 CH3 (Ge 'COOH)2S3 (14) (Ge CH CONH2)2S3 (21) CH3 (Ge COOH)2S3 (16) (Ge CONH2) 2S3 (22) CH3 CH3 CH3 CH3 (Ge COOH)2S3 (17) (Ge C NH2)2S3 (24) CH3 CH3 Ge CONH2)2S3 (25) (Ge COOH)2S3 (19) CH3 Ge CONH2)2S3 (26) CH3 Tableau 2-1 (14) 34,9 fi23,13 3,40 185 0C 1705 CD3OD 1,36 M, d) 57,7 -..-aract-ris-A l meti 1705 D 1 (r, d() o5,2123,17 3,39 23,34 (déc) 425 2,08- 2,95 (3H, m) (16) 32,73 27 0 4,09 21,68 2000C 1700 CD3OD 1,33 (3H, d) 92,4 3cio n 1, 40 (oH, d)n 32,53 27,26 4,10 21,57 400 2,18 (1H, m) 2,60 (1H, m) (17) 3 27,07 4,09 21,f68 190 C 1700 CD3OD 1,46 (6H, s) 80,3 (déc) 3 32,64 27,17 4,14 21,54 425 2,60 (2H, s) (19) 25,57 42,31 3,91 16,94 190 C 1705 Céone 1,45 (3H, m) 86,0 -35,2123,34 ' (dec) 700 -d 2 3,27 (2H, m) ,49 42,33 3, 90 16,99 425 D6 7,17 (5H, s) Ln oon CJ Co Tableau 2-2 aractéris- Analyse élémentaire Point IR (Kbr, RMN (6) tiques Théorique/trouvée de cm-1) Rendement fusion $oLvant (% Composé Ge C H N S (oC) (14) 32,87 27,20 4,56 6,34 230 C 3400, 3200 CD30D 1,26 (6H, s) 76,5 -- -r - --- 32-e> (déc) 2960, 1660 32,96 27,14 4,68 6,11 21,53 1460, 1120 2,86 (2H, s) (16) 27,00 40,20 5,21 17,89 2100C 3450, 3350 DMF 2,43 (1H, t) 81,8 8(déc) 3200, 1660 d_6 3,05 (2H, d) 4 3,93,1 17,6,6 (d1c) 600, 1400 7,23 (5H, m) 765,700, 420 (17) 25,66 42,46 4,27 4,95 17,00 215 C 3450, 3350 82,3 À - (dèc) 3200, 1660 ,87 42,49 4,33. 4,70 16,86 1455, 1400 1455, 1400 700, 420 1N> (J' 0% cM Co Exemple expérimental 2 Essai de composés représentés par la formule générale (I) pour déter- miner Leur pouvoir antioxydant. Essai du pouvoir antioxydant avec un système in vitro (achromato- cytes de Lapin). A 50-200 ml de sang de Lapin conservé du commerce, on ajoute un volume environ triple de liquide isotonique. On centri- fuge le mélange trois fois à 3 500 tr/min pendant 20 min. On ajoute au précipité un volume environ triple de tampon phosphate 10 mM. On centrifuge quatre fois le mélange à 13 000 tr/min pen- dans 40 min. On utilise le précipité obtenu comme achromatocytes de lapin. On dilue le précipité pour obtenir une suspension contenant environ 10 mg de protéines dans 4 ml du tampon selon la méthode de Lowry. On place la quantité correspondante de sus- pension d'achromatocytes dans un tube à essai. On ajoute dans le tube à essai 5 pL d'hydroperoxyde de tert-butyle comme accélérateur de l'oxydation et un antioxydant de l'invention dilué avec du diméthylsulfoxyde (DMSO) ou de l'eau distillée (lorsque l'anti- oxydant est dilué dans du DMSO, il est préférable de ne pas utili- ser plus de 50 pI de la solution), puis on ajoute le tampon phos- phate 10 mM ci-dessus pour obtenir un volume total de 1 mL. On agite la suspension à 37 C pendant 20 min dans une enceinte thermo- statée. On ajoute à la suspension 1 ml d'une solution aqueuse à % d'acide trichloroacétique et 2 ml d'une solution aqueuse à 0,67 % d'acétate de tert-butyle. On chauffe dans un bain-marie bouillant pendant 15 min, on refroidit avec de l'eau et on centri- fuge à 3 500 tr/min pendant 15 min. On détermine le degré de l'effet antioxydant par mesure de l'absorbance du surnageant. Le rapport de la valeur obtenue par soustraction de l'absorbance du blanc n'utilisant pas d'hydroperoxyde de tert- butyle, de celle du témoin utilisant l'hydroperoxyde de tert-butyle, à la valeur de l'absorbance du témoin est calculé et exprimé en pourcentage comme activité antioxydante. Les résultats sont illustrés par la figure 1. Essai des pouvoirs antioxydants avec un système in vitro (microsomes hépatiques de rat) (t On décapite des rats Wistar (8 semaines, 180 à 200 g C') à jeun depuis un jour et on incise les abdomens pour prélever les 2563 528 foies. On perfuse les foies avec environ 40 mL d'une solution refroidie à 0,95 % de chlorure de sodium pour éliminer Le sang contenu dans les foies. On ajoute aux foies 80 mL (par foie de rat) d'une solution refroidie 0, 25 M de saccharose, on homogénéise Le mélange en refroidissant avec un bain glacé et on centrifuge à 13 000 tr/min pendant 10 min. On centrifuge encore le surnageant à 37 500 tr/min pendant 1 h. On ajoute au précipité environ 20 mL d'une solution 125 mM de chlorure de potassium et on homogénéise à nouveau le mélange pour obtenir une suspension de microsomes. On dilue la suspension pour obtenir une suspension con- tenant 1,5 mg de protéines pour 6,5 ml de tampon, comme mesuré selon la méthode de Lowry. On place dans un tube à essai la quantité correspondant à une quantité de protéines de 1,5 mg de la suspension de microsomes. On ajoute au tube à essai une quantité appropriée d'un antioxydant de la présente invention, de l'ADP (à la concentration finale de 400 M et il en est de même ci-après), du NADPH (120 pM) et du FeSO4.7H20 (500 kpM), puis on ajoute un mélange de tampon Tris 0,1 M (pH 7,4) et de KCl 0,15 M (1/2) pour obtenir un volume total de 1,5 ml. On agite le mélange dans une enceinte thermostatée à 37 C pendant 30 min. On ajoute dans le tube à essai 3 ml d'une solu- tion à 10 % d'acide trichloroacétique et 2 ml d'une solution à 0,67 % d'acétate de tert-butyle. On chauffe le mélange au bain-marie bouillant pendant 15 min, on refroidit avec de L'eau et on centri- fuge à 3 500 tr/min pendant 10 min. On détermine le degré de l'effet antioxydant par mesure de l'absorbance du surnageant à 532 nm. Le rapport de la valeur obtenue par soustraction de l'absorbance du blanc sans ADP, NADPH, ni FeSO4.7H20 de celle du témoin avec ADP, NADPH et FeSO4.7H20 à la valeur de l'absorbance du témoin est calculé et exprimé par un pourcentage constituant l'activité antioxydante. Les résultats sont illustrés par la figure 2 (a). ( ) On prélève le foie d'un rat décapité, on homogénéise dans du tampon KCl 150 mM-Tris-HCl 50 mM (pH 7,4) et on centrifuge à 9 000 g pendant 3 min, puis à 105 000 g pendant 1 h pour obtenir une suspension de microsomes. On dilue la suspension comme décrit en 1 pour former une suspension contenant 1 mg de protéines pour I ml de tampon comme mesuré selon la méthode de Lowry. On place la suspension dans un tube à essai, puis on ajoute une quantité appropriée d'un antioxydant de la présente invention et une quantité d'adriamycine telle que l'on obtienne une concentration finale de 100 pM. On ajoute ensuite 1,9 mM de NADP, 20 mM d'acide glycose-6-phosphorique, 1, 1 UI/ml d'acide glucose-6-phosphorique-déshydrogénase et 8,6 mM de chlorure de magnésium au tube à essai, sous forme d'une suspension aqueuse pour obtenir un volume total de 1,75 ml. Comme décrit en O, on traite la solution dans une enceinte thermostatée et on détermine le degré de l'effet antioxydant par mesure de l'absorbance du surnageant à 532 nm. On prépare le blanc et le témoin comme en - Les résultats sont illustrés par la figure 2 (b). Bien entendu, diverses modifications peuvent être apportées par l'homme de l'art aux dispositifs ou procédés qui viennent d'être décrits uniquement à titre d'exemples non limita- tifs, sans sortir du cadre de l'invention. R E V E N D C A T I ON Antioxydant, caractérisé en ce qu'il comprend un compo- sé organogermanique représenté par la formule générale: e C CH - COI R1 R2 2Z3 dans laquelle R1, R2 et R3 sont un atome d'hydrogène, un radical phényle substitué ou non substitué ou un radical alkyle, Y est un radical hydroxyle ou amino et Z est un atome d'oxygène ou de soufre, comme ingrédient principal.