Brevet FR2567404A1 — publié le 19860117

"Procédé de vaccination contre la brucellose des petits ruminants, notamment des ovins ou des caprins" L'invention est relative à un procédé de vaccination contre la brucellose des petits ruminants, notamment des ovins ou des caprins. Dans le brevet No 75 36574 du 28.11.1975,au nom de 1'INRA, on . décrit un procédé de vaccination contre la brucellose, selon lequel on instille sur la conjonctive des animaux traités une dose de Brucella vivantes d'une souche avirulente ou rendue telle, en suspension dans un milieu compatible avec l'application sur la conjonctive. I1 est prévu d'utiliser une dose suffisante pour provoquer une colonisation d'au moins l'un des ganglions lymphatiques drainant la zone orbitale et pour que cette colonisation persiste environ au moins un mois postérieurement à l'instillation. Cette dose ne doit pas pratiquement excéder celle qui induirait une formation durable des anticorps humoraux responsables des réponses positives dans les épreuves traditionnelles de dépistage de l'infection. Pour l'application de ce procédé aux bovins, on prévoit selon ce brevet, d'utiliser avantageusement des Brucella abortus B.l9, à raison de 109 à 1010 de préfé 9 rence de l'ordre de 5 x 10 bactéries par dose de vaccin. En ce qui concerne les ovins, on enseigne plus spécialement l'utilisation de doses de 5 x 15 à 5 x 106 bactéries par instillation, de préférence d'environ 106 bactéries vivantes de souche Brucella molitensi5 Rev.l Or, la poursuite des travaux des inventeurs dans ce domaine, les a amenés à constater que si les doses enseignées pour les bovins conduisaient à des résultats satisfaisants, l'efficacité souhaitée n'était pas atteinte avec les doses données pour les ovins. Il s'avère, en effet, qu'une doe de 10 bactéries est insuffisante, même en rappel, en dépit de la différence de poids (10 ) et de l'efficacité particulière de la souche Rev.l sur les petits ruminants, efficacité supérieure à celle de la souche B 19 sur les bovins. L'étude de c,eproblème et la prise en compte des difficultés pratiques pour effectuer un rappel sur un animal d'élevage ("rattrapage de l'animal") a amené les inventeurs à rechercher des conditions de vaccination permettant de réaliser une vaccination unique, donc sans rappel,. Les travaux effectués ont alors montré qu'en utilisant une dose de vaccin de l'ordre de ceflè-utilisée pour les bovins, il est possible d'obtenir une protection pratiquement équivalente à celle observée par voie souscutanée, mais avec une réponse sérologique de faible amplitude et de courte durée, et de plus, sans qu'il soit nécessaire d'effectuer de rappel. L'invention a donc pour but de fournir un procédé de vaccination, sans rappel, contre la brucellose des petits ruminants tels qu'ovins et caprins assurant une protection de grande efficacité et ce, sans formation importante d'anticorps humoraux. Le procédé, selon l'invention, de vaccination contre la brucellose de petits ruminants, est caractérisé en ce qu'-on instille sur la conjonctive des animaux une dose de Brucella vivantes d'une souche avirulente ou rendue telle, contenant 5 x 108 à 5 x îo9 bactéries environ, 9 de préférence environ 10 , ces bactéries étant en suspen- sion dans un milieu compatible avec l'application sur la conjonctive. Les souches de Brucella avirulentes sont choisies avantageusement parmi celles utilisées à ce jour pour l'élaboration de vaccins administrés par voie sous-cutanée. Une souche particulièrement préférée en raison de sa remarquable efficacité est constituée par- Brucella meli tensis Rev. 1 (disponible auprès de la "School of Public Health" University of California, Berkeley, Cal, E.U.A.). Pour instiller le vaccin, on utilise une suspension de bactéries vivantes dans un milieu compatible avec son application sur la muqueuse conjonctivale, plus spécialement une suspension dans une solution aqueuse saline isotonique. Le volume instille est avantag.ousement de 1 ' ordre de 2di à 40 p1, plus spécialement de 30 l environ. La mise en oeuvre de ces dispositions, pour vacciner les petits ruminants permet d'obtenir une protection au moins égale, ou,dans certains cas très légèrement inférieure à celle donnée par la vaccination classique par voie sous-cutanée avec, cependant, l'avantage d'une réponse sérologique très faible et de très courte durée. Ilest ainsi possible de vacciner les animaux dans la nature, sans perturbation du diagnostic sérologique. De plus, cette vaccination ne nécessite pas de rappel ce qui présente un grand avantage pour les éleveurs. A cet égard, il est intéressant de noter qu'une dose de 108, ne confère une exc.ellente protection (supé- rieure à celle obtenue avec la souche Rev. 1 par voie souscutanée) que si l'on effectue un rappel également de 108. Dans l'exemple qui suit, on rapporte les essais effectués chez des ovins en opérant selon l'invention et, à titre de comparaison, selon le mode traditionnel de vaccination par voie sous cutanée. Sur les figures 1 et 2, on a rapporté les résultats obtenus dans deux essais selon l'invention et un essai de vaccination par voie sous-cutanée dans deux méthodes de dépistage d'infection respectivement par fixation du complément et par agglutination par l'antigène acide au Rose Bengale. EXEMPLE L'efficacité du procédé de vaccination selon l'invention a été déterminée chez les ovins en comparant le mode traditionnel de vaccination avec 109 Brucella melitensis Rev. 1 administrées par voie sous-cutanée et la vaccination par voie conjonctivale avec 109 et 108 bactéries de la même souche. Cent vingt agnelles agées de 4-5 mois ont été réparties en quatre groupes : groupe SC : 33 agnelles ont reçu 1,6 x 109 Rev. 1 par voie sous-cutanée groupe VC9 : 33 agnelles ont reçu 1,4 x 109 Rev.l par voie conjonctivale (une goutte à 30 pl) ; groupe VC8 : 33 agnelles ont reçu 1,4 x 108 Rev. 1 par voie conjonctivale (une goutte à 30 rl) groupe témoin : 21 agnelles n'ont pas reçu de vaccination. On a utilisé la souche Rev. 1 lyophilisée, mise en suspension dans une solution saline isotonique. Le nombre de bactéries viables inoculées a été contrôlé par culture. Après insémination des 120 agnelles à l'age de 10-11 mois, 54 ont été conservées pour l'expérience après tirage au sort parmi celles reconnues gravides. Le troupeau expérimental comprenait alors trois groupes (SC, VC9 et VC8) de 15 animaux chacun et un groupe témoin de 9 animaux. Les 54 agnelles ont été infectées avec 5 x 107 Brucella melitensis souche 53 H 38 par voie conjonctivale (2 gouttes de 30 1) alors qu'elles étaient gravides de 83-85 jours. 1) - Examen sérologique Les prélèvements sanguins sont effectuées le jour de la vaccination puis deux et quatre semaines et 2,5; 4 et 6. 5 mois plus tard. Un dernier prélèvement a été pratiqué 10 mois après la vaccination sur 40 agnelles qui n'avaient pas été retenues pour l'infection expérimentale. Les mesures ont été effectuées par fixation du complément et agglutination sur lame en milieu acide avec l'antigène au Rose Bengale. Les résultats sont respectivement donnés sur les figures 1 et 2 sur lesquelles on indique les pourcentages d'animaux à sérologie positive en fonction du délai en mois après vaccination pour les groupes SC (. ), VC9 (a ) et VC8 ( ). Ils montrent, chez les animaux vaccinés par voie sous-cutanée, une réaction sérologique intense et généralisée, persistant au moins 10 mois sur une certaine proportion d'entre eux. En revanche, seule, une faible proportion d'animaux vaccinés par voie conjonctivale (groupes VC9 et VC8) présentent des anticorps vaccinaux qui disparaissent chez tous les animaux dans un délai maximal de 2,5 mois test au Rose Bengale) ou de 4 mois (test de fixation du complément). 2) -Mesure de la protection Postérieurement à l'inoculation expérimentale avec la souche virulente Brucella melitensis 53H38, on suit les résultats cliniques, matérialisés par la proportion de mise bas à termeetla moyenne de la durée de la gestation L'excrétion des Brucella est recherchée par culture dans le mucus vaginal post-partum, le jour même et le lendemain de la mise bas. Les Brucella sont recherchées dans la.rate, le poumon et le liquide gastrique des avortons et agneaux morts de dystocie. Les brebis sont abattues 6 semaines environ apres la mise bas. 18 ganglions et 7 morceaux d'organes sont dont prélevés, broyés séparément ou en mélange et ensemencés sur milieux sélectifs. Les résultats sont reportés au tableau ci-après : Tableau : - Résultats de l'inoculation expérimentale SC Gropes Résultats cliniques VC 9 VC 8 Témoins Mise-bas à terme/total 13/15 11/15 6/13b 0/8c Durée moyenne de gestation 144,6 141,3 136,3 121,1 (écarts) (126-149) (121-150) (116-147) (111-136) Résultats bactériologiques Excrétion post-partum/totai 4/15 7/15 7/13 8/8 Avortons infectés/total 2/5 10/12 7/12 15/16 Carcasses infectées/total 5/15 6/15 8/15 7/9 Protection Brebis protégées/totala 8/15 6/15 6/15 0/9 a : sont considérées comme protégées les brebis qui n'ont pas excrété de Brucella après la mise-bas, dont les avortons ou foetus dystociques éventuels, et la carcasse n'étaient pas infectés par des Brucella b : deux brebis non gravides c : une brebis non gravide On observe globalement un effet très significatif (P( 0,001) de la vaccination. On constate que les résul tats obtenus avec le groupe VC9 (voie conjonctivale) sont voisins de ceux observés avec le groupe SC où les agnelles ont subi la vaccination classique par voie sous-cutanée. Si les résultats bactériologiques et la protection des brebis ne présentent pas de différence significative entre les groupes VC9 et VC8, en revanche, les résultats cliniques sont plus favorables avec le groupe VC9. En pratique, l'utilisation de la vaccination conjonctivale avec 10 Rev.l, tout en conduisant, chez les ovins et les caprins et pour de nombreux cas effectués dans la nature chez le bélier contre l'épididymite contagieuse à Brucella ovis, à des résultats de l'ordre de ceux observés par voie sous-cutanée, permet d'éviter tout rappel et toute réponse sérologique durable risquant de perturber le diagnostic, comme c'est le cas lors de la vaccination par voie sous-cutanée. Les essais effectués sur les caprins donnent des' résultats analogues. REVENDICATIONS 1.- Vaccin contre la brucellose caractérisé en ce qu'il comporte une dose de Brucella vivantes d'une souche avirulente ou rendue telle, contenant 5 x 108 à 5 x 109 bactéries environ, de préférence environ 109, ces bactéries étant en suspens ion dans un milieu compatible avec l'application sur la conjonctive. 2.- Vaccin selon la revendication 1, caractérisé en ce que les bactéries utilisées sont du type Brucella melitensis de souche Rev.1. 3.- Vaccin selon la revendication 1 ou 2, caractrissé en ce que les bactéries sont en suspens ion dans une solution aqueuse isotonique. 4.- Vaccin selon l'une quelconque des revendications 1 à 3J caractérisé en ce qu'il est instillé sur la conjonctive des animaux, plus spécialement des ovins ou des caprins âgés de 4 à5 mois.