Brevet FR2566780A1 — publié le 19860103

Molécules comportant au moins une séquence peptidique porteuse d'un épitope caractéristique d'une protéine produite par des cellules infectées par les parasites du paludisme et compositions les contenant. L'invention concerne des molécules comportant une cu plusieurs séquences peptidiques porteuses d'un épitope caractéristique d'une protéine produite par des cellules infectées par le parasite du paludisme. Elle concerne également des compositions les contenant, plus particulièrement des composantes de vaccin contre le paludisme dont elles peuvent constituer l'un des principes actifs. On sait que de nombreuses études ont été entreprises pour isoler des fractions polypeptidiques susceptibles de posséder des propriétés vaccinantes contre le paludisme à partir de souches purifiées de parasites dont a été reconnue la capacité d'infecter un hôte humain, telles que les souches connues sous les désignations Plasmodium falciparum ou Plasmodium knowlesi ou Plasmodium vivax pour ne citer que les principaux d'entre eux, ou à partir de cellules infectées, notamment d'érythrocytes infectés à des stades divers de l'évolution de la maladie.Plus récemment des banques de cADN clonés dérivés des génomes de sporozoïtes de Plasmodium knowlesi et des formes sanguines (dont les mérozoites) de Plasmodium falciparum ont été établies respectivement par Ellis J. et coll. (1983), Nature 302, 536-538 et Coppel, R.L. et coll. (1983), Nature, 306, 751-756. I1 a été reconnu que ces banques comportaient des clones susceptibles d'exprimer des polypeptides contenant des unités répétitives de 12 (P. knowlesi) et de 11 (P. falciparum) aminoacides respectivement. L'invention concerne plus particulièrement une autre catégorie de molécules caractérisées par la présence dans leur structure de une ou plusieurs séquences peptidiques caractéristiques d'une protéine résultant de l'acti vité infectiéuse des susdits parasites dans les cellules, notamment érythrocytes, cette protéine étant au moins à certains stades de leur développement. La molécule selon l'invention est essentiellement caractérisée par la présence d'au moins une séquence nonapeptidique de formule X-glu-Y-Val-A-Glu-Val-Z-Pro dans laquelle X est Glu ou Val, Y est Val, Leu ou Ileu, Z est Val ou Ile, A est Glu ou Asp, et dans laquelle "Glu" est l'acide glutamique, "Val" est la valine, "Ile" est l'isoleucine, "Pro" est la proline, Leu est la leucine et Asp est l'acide aspartique. Parmi les séquences peptidiques préférées de l'invention, on mentionne les suivantes (étant entendu que dans chacune des séquences 2 à 23 qui suivent les groupes des trois points respectivement situés à la verticale des résidus aminoacyles de la première séquence susmentionnée sont identiques à ces aminoacyles) 1. Glu Glu Val Val Glu Glu Val Val Pro 2. ... ... Leu ... 3. Val ... Leu ... 4. Val ... Leu ... 5. ... ... Leu ... ... ... ... Ile 6. ... ... Ile ... ... ... ... Ile 7. ... ... ... ... ... ... ... .... ... 8. ... ... Ile ,.. ... ... ... Ile 9. ... ... Leu Ile ... 10. Val ... Leu Leu ... .. ... Ile 11. Val ... ... Leu ... Asp ... lia 12. ... ... ... ... ... ... ... Ile 13. ... ... Ile Ile ... ... ... Ile 14. ... ... Ile Ile ... ... Ala Ile 15. Val ... Ile ... ... ... ... Ile 16. ... Asp Ile ... ... ... ... Ile 17. ... ... Ile ... ... Asp ... Ile ... 18. ... 19. .. ... ... ... ... ... ... ... ... 20. ... ... Leu ... ... ... ... Ile ... 21. ... ... Leu ... ... ... ... Ile 22. ... ... ... Pro ... 23. Glu Clu Leu .... L'invention concerne en premier lieu des peptides monomères synthétiques contenant notamment au plus 12 aminoacides et contenant une séquence nonapeptidique unique répondant respectivement aux formules sus-indiquées, et plus particulièrement les nonapeptides eux-mêmes, ou des oligo- mères contenant notamment des multiples de l'une quelconque des susdites séquences de 12 aminoacides, de préférence de 9 aminoacides. Il va de soi que les fonctions réactives libres que sont susceptibles de posséder certain résidus aminoacides entrant dans la constitution des molécules selon l'invention, notamment les groupes carboxyle libres portés par les groupes Glu, peuvent être modifiées, dés lors que cette modification n'entraine pas une modification des propriétés antigéniques, le cas échéant immunogènes de l'ensemble de la molécule. Les molécules ainsi modifiées entrent naturellement dans le cadre de la protection donnée à l'invention par les revendications. Ces fonctions carboxyles sont éventuellement acylées ou estérifiées. Les peptides selon l'invention peuvent être préparés par les techniques classiques, dans le domaine de la synthèse des peptides. Cette synthese peut être réalisée en solution homogène ou en phase solide. Par exemple on aura recours à la technique de synthèse en solution homogène décrit par HOUBENWEYL dans l'ouvrage intitulé "Methode der Organischen Chemie" (Méthode de la chimieorganique) édité par E. Wünsch, vol. 15-I et II. THIEME, Stuttgart 1974. Cette méthode de synthèse consiste à condenser successivement deux à deux les awinoacyles successifs dans l'ordre requis, ou à condenser des aminoacyles et des fragments préalablement formés et contenant déjà plusieurs résidus aminoacyles dans l'ordre approprié, ou encore plusieurs fragments préalablement ainsi préparés, étant entendu que l'on aura eu soin de protéger au préalable toutes les fonctions réactives portées par ces aminoacyles ou fragments,à l'exception des fonctions amine de l'un et carboxyle de l'autre ou vice versa, qui doivent normalement intervenir dans la formation des liaisons peptidiques, notamment après activation de la fonction carboxyle, selon les méthodes bien connues dans la synthèse des peptides. En variante, on pourra avoir recours à des réactions de couplage mettant en jeu des réactifs de couplage classique, du type carbodiimide, tels que par exemple la l-éthyl-3 (3-diméthyl-aminopropyl)-carbodiimide. Lorsque l'aminoacyle mis en oeuvre possède une fonction acide s1pplémentaire (notamment dans le cas de l'acide glutamique), ces fonctions seront par exemple protégées, par des groupes t-butylester. Dans le cas de la synthèse progressive, acide aminé par acide aminé, la synthèse débute de préférence par la condensation de l'amino-acide C-terminal avec l'aminoacide qui correspond à l'aminoacyle voisin dans la séquence désirée et ainsi de suite, de proche en proche, jusqu'à l'acide aminé N-tverminal. Selon une autre technique préférue de l'invention, on a recours à celle décrite par R.D. MERRIFIELD dans l'article intitulé "Solid phase pep tide synthesis" (J.Am.Chem. Soc.,45,2149-2154). Pour fabriquer une chaîne peptidique selon le procédé de MERRIFIELD, on a recours à une résine polymère très poreuse, sur laquelle on fixe le premier amino-acide C-terminal de la chaîne. Cet amino-acide est fixé sur la résine par l'intermédiaire de son groupe carboxylique et sa fonction amine est protégée, par exemple par le groupe t-butyloxycarbonyle. Lorsque le premier amino-acide C-terminal est ainsi fixé sur la résine, on enlève le groupe protecteur de la fonction amine en lavant la résine avec un acide. Dans le cas où le groupe protecteur de la fonction amine est le groupe t-butyloxycarbonyle, il peut être éliminé par traitement de la résine à l'aide d'acide trifluoroacétique. On couple ensuite le deuxième amino-acide qui fournit le second amino-acyle de la séquence recherchée, à partir du résidu amino-acyle C-terminal sur la fonction amine déprotégée du premier amino-acide C-terminal fixé sur la chaîne. De préférence, la fonction carboxyle de ce deuxième amino-acide est activée, par exemple par la dicyclohexylcarbodiimide, et la fonction amine est protégée, par exemple par le t-butyloxycarbonyle. On obtient ainsi la première partie de la chaîne peptidique recherchée, qui comporte deux aminoacides, et dont la fonction amine terminale est protégée. Comme précédemment, on déprotège la fonction amine et on peut ensuite procéder à la fixation du troisième aminoacyle, dans les conditions analogues à celles de l'addition du deuxième aminoacide C-terminal. On fixe ainsi, les uns après les autres, les acides aminés qui vont constituer la chaîne peptidique sur le groupe amine chaque fois déprotégé au préalable de la portion de la chaîne peptidique déjà formée, et qui est rattachée à la résine. Lorsque la totalité de la chaîne peptidique désirée est formée, on élimine les groupes protecteurs des différents aminoacides constituant la chaine peptidique et on détache le peptide de la résine par exemple à l'aide d'acide fluorhydrique. L'invention concerne également les oligomères hydrosolubles des peptides monomères susindiqués. L'oligo mérisation peut provoquer un accroissement de' l'iw'inunogéni- cité des peptides monomères selon l'invention. Sans qu'une telle indication chiffrée puisse être considérée comme limitative, on mentionnera néanmoins que ces oligomères peuvent éventuellement contenir de 2 à 25 unités monomères. On peut avoir recours, pour réaliser l'oligomérisation, à toute technique de polymérisation couramment utilisée dans le domaine des peptides, cette polymérisation étant ocnduite jusqu'à l'obteniton d'un oligomère ou polymère contenant le-nombre de motifs monomères requis pour l'acquisition de l'immunogénicité désirée. Une méthode préférée de l'oligomérisation ou de polymérisation du monomère consiste dans la réaction de celui-ci avec un agent de réticulation tel que le glutaraldéhyde. On peut également avoir recours à d'autres méthodes d'oligomérisation ou de couplage, par exemple à celle mettant en jeu des couplages successifs d'unités monomères, par l'intermédiaire de leurs fonctions terminales carboxyle et amine en présence d'agents de couplage homo- ou hétéro- bifonctionnels. On peut également pour la production de molécules comportant un ou plusieurs motifs nonapeptidiques tels que définis ci-dessus,avoir recours à'des techniques du génie génétique mettant en oeuvre des microorganismes transformés par un acide nucléique déterminé 'comprenant des séquences nucléotidiques appropriées correspondantes. Parmi les séquences nucléotidiques correspondantes on mentionnera celles qui sont caractérisées par les séquences de triplets qui suivent, ces séquences correspondant en particulier aux peptides a) à g) dont les formules ont été indiquées (étant entendu que les nucléotides qui sont remplacés par des points dans les séquences 2 à 23 ci-après sont identiques à ceux de la première séquence à l'aplomb duquel ils se trouvent). 1. GAA GAA GTT GTT GAA GAA GTT GTC CCT 2. ... ... T.A ... ... ... ... A 3. .T. ... C.A ..A ... ... ... ..A 4. .T. ... C.A ..A ... ... ... ..A 5. ..G ... C.A ... ... ..G ... A.A 6. ... ... A.. ..G ... ... ... A.A 7 ... ... ..C ... ... ... ..A ..A 8. ..G ... A.A ... ... ... ..G A.A 9. ... ... T.A A.. ... ... ... ... ..A 10. .T. ... C.A T.A ... ... ... A.A ..A 11. .T. ... ..A T.A ... ..T ... A.A 12. ... ... ... ... ... ... ... A.A ..A 13. ... ... A.. A.. ... ... ... A.A 14. ... ... A.. A.. ... ..G .CG A.A ..A 15. .T. ... A ... ...... G A.A ..A 16. ... ..T A.. ... ... ... ... A.A ..A 17. ... ... A.. ... ... ..T ... A.A ..A 18. ... ... ... ... ... ... ... A.A 19. ... ... ... ... ... ...... A 20. ... ... T.A ..A ... ... ... A.A ..A 21. ... ... C.A ... ... ..G ..G A.A 22. ... ... ... CC. ... ..G ... ..A ..A 23. GAA CAA CTC ... ... A ce titre l'invention concerne également des acides nucléiques contenant une ou plusieurs de ces séquences répétitives comprenant chacune 9 triplets du genre susindiqué. Elle concerne plus particulièrement des fragments d'acide nucléiaue comportant au plus 1000 paires de bases et I à 25 de ces séquences répétitives de 9 triplets chacune. L'invention concerne encore les conjugués obtenus par couplage covalent des peptides selon l'invention (ou des susdits oligomères) à des molécules porteuses (naturelles ou synthétiques), physiologiquement acceptables et non toxiques, par l'intermédiaire de groupements réactifs complémentaires respectivement portés par la molécule porteuse et le peptide. Des exemples de groupements appropriés sont illustrés dans ce qui suit A titre d'exemples de molécules porteuses ou supports macromoléculaires entrant dans la constitution des conjugués selon l'invention, on mentionnera des protéines naturelles, telles que l'anatoxine tétanique, l'ovalbumine, des sérums albumines, des hemocyamines, etc. A titre de supports macromoléculaires synthétiques, on mentionnera par exemple des polylysines ou des poly(D-L-alanine)-poly(L-lysine). La littérature mentionne d'autres types de supports macromoléculaires susceptibles d'être utilisés, lesquels présentent en général un poids moléculaire supérieur à 20.000. Pour synthétiser les conjugués selon l'invention, on peut avoir recours à des procédés connus en soi, tels que celui décrit par FRANTZ et ROBERTSON dans Infect. and Immunity, 33, 193-198 (1981), ou celui décrit dans Anplied and Environmental Micorbiology, octobre 1981, vol. 42, n 4, 611-614 Dar P. E. KAUFFr4AN en utilisant le peptide et la molécule porteuse apnropriée. Dans la pratique, on utilisera avantageusement comme agent de couplage les composés suivants, cités à titre non limitatif : aldéhyde glutarique, chloroformiate d'éthyle, carbodiimides hydrosolubles N-éthyl-N' (3-di- méthylamino-propyl) carbodiimide, HCl], diisocyanates, bis-diazobenzidine, di- et trichloro-s-triazines, bromures de cyanogène, benzoquinone, ainsi que les agents de couplage mentionnés dans Scand. J. Immunol., 1978, vol. 8, p. 7-23 (AVRAMEAS, TERNYNCK, GUESDON). On peut avoir recours à tout procédé de cou Dlage faisant intervenir d'une part une ou plusieurs fonctions réactives du peptide et d'autre part, une ou plusieurs fonctions réactives des molécules supports. Avantageusement, il s'agit des fonctions carboxyle et amine, lesquelles peuvent donner lieu à une réfaction de couplage en présence d'un agent de couplage du genre de ceux utilisés dans la synthèse des protéines, par exemple, le i-éthyl-3- (3-diméthylaminoprooyl) -carbodii- mide, le N-hydroxybenzotriazole, etc. On peut encore avoir recours àlaglutaraldéhyde, notamment lorsqu'il s'agit de relier entre eux des groupes aminés respectivement portés par le peptide et la molécule support. Des caractéristiques' supplénentaires de l'invention apparaîtront encore au cours de la description qui suit des conditions dans lesquelles un polypeptide contenant une pluralité des séquences nonapeptidiques dont la constitution a été indiquée, a été obtenu . I1 sera fait référence dans ce qui suit aux dessins dans lesauels - la figure 1 représente de façon schématique la structure d'un plasmide modifié qui a été mis en oeuvre dans la production d'un polypeptide contenant les susdites séquences non apeptidiaues et - la figure 2 fournit la structure de parties d'un acide nucléique capable de produire le susdit polypeptide et dont la séquence a été réalisée en mettant en oeuvre la technique classique de Maxam et Gilbert (1980) Methods in Enzymology 65 , 499 - 560. L'ADN génomique prélablement isolé à partir de la souche de Plasmodium falciparum (déposée à la Collection Nationale des Cultures de Microorganismes de l'institut Pasteur de Paris sous le N FUPC 1-212 le 23 décembre 1982) a été coupé par une DNAse en fragments ayant en général de l'ordre de 200 à 1 000 paires de bases. Ces fragments ont été introduits dans le vecteur pUK 270,dont la structure résulte du schéma de la fig. let qui est un dérivé du plasmide pUK 230 décrit par M. KOENEN et coll. (1982) EMBO, 1, 509-512. Ce vecteur comprend un operon-lac et, dans la partie non essentielle d'extrémité 5' du gène lac Z, une séquence nucléotidique de synthèse contenant la séquence des sites de restriction qui apparaît dans la fig. l. Le plasmide PUK 230 diffère du pUK 270 par la séquence polylinker insérée à la partie 5' du gène codant par la ss -galactosidase. Cett séquence nucléotidique de synthèse (polylinker) introduit dans le gène Z un décalage de phase dont l'effet est de rendre les gènes Z, Y et A, phénotyprquement Z, Y et A. L'introduction des fragments d'ADN genomique de Plasmodium falciparum dans ce vecteur a été réalisée dans le site Pst I, après ouverture de celui-ci et formation de brins monocaténaires oligo-G à ses extrémités. Les brins d'ADN avaient eux-mêmes été au préalable munis d'extrémités oligo-C, lesquelles ont alors permis la ligation de ces brins d'ADN dans le vecteur.L'introduction de ces fragments d'ADN dans les sites Pst I dans les conditions indiquées aboutit alors à des clones qui redeviennent lactose-positifs grâce à la remise en phase du gène Z avec son promoteur, dans les conditions également décrites par M.KOENEN. Les clones sont repérés par la coloration bleue qù' ils donnent sur des plagues indicatrices contenant de la 5-bromo 4-chloro-3-indol'rl- ,8 -D-galactosidase (X-gal) ou l'iso- propyl-l-thio- ss -D-galactoside (3PTG) ou en tant que colonies lactose positives sur de l'agar-lactose. Au contraire les vecteurs ne contenant pas de fragments conduisent à des colorations bleu pâle sur les mêmes plaques indicatrices et sont caractérisés par un phénotype lactose-négatif. Les recombinants lactose-positifs expriment alors 1'ADN inséré en tant que partie N-terminale d'une protéine chimère contenant l'essentiel de la ss - galactosidase. Les clones producteurs d'antigenes ont été identifiés par la méthode immuno-enzymatique décrite par M. XOENEN et coll. 10 000 clones rendus Lac ont ainsi été isolés et triés au moyen de divers anti-sérums dans les conditions qui seront rapportées ci-après. On a tout d'abord utilisé des anticorps de lapins qui avaient été immunisés avec des mérozoites de Plasmodium fa) ciparum dénaturées par le détergent connu sous la désignation TRITON x 100. Les sérums ont été-prélevés sur les lapins après que ceux-ci eurent reçu 2 rappels. La fraction IgG a été isolée et mise en oeuvre dans la détection immuno-enzymatique. Un deuxième tri a été réalisé en mettant en oeuvre un mélange d'anti-sérums obtenu à partir de 4 personnes qui possédaient un fort titre en-anticorps dirigé contre Plasmodium falciparum et qui étaient originaires d'une zone endémique. Avant usage les anti-sérums ont été purifiés de tdflt anticorps dirigé contre E.coli par mise en contact avec des extraits de E.coli broyés, et dilués au 1/25ème. Les essais ont été réalisés plus particulièrement comme suit. Les clones Lac+ ont été mis en culture sur de l'agar contenant du lactose en bottes de Petri en verre et lysés dans les conditions décrites par M.KOENEN. Dans certains cas les cultures ont été réalisées sur des filtres en nitro-cellulose placés sur l'agar contenant le lactose. Les colonies qui s'étaient développées ont été lysées par contact , notamment des filtres,avec du chloroforme pendant 1 minute à la température ambiante. Le chloroforme a été éliminé par exposition des filtres à l'air pendant 5 minutes à 370C. Les filtres ont ensuite été mis en contact avec des feuilles de chlorure de polyvinyle qui avaient au préalable été revêtues avec des anticorps selon la technique de BROOME S. et coîl (1978) Proc. Natl. Acad. Sci . USA 75, 2746 - 2749 et saturées avec de la sérum-albumine dissoute dans la solution de lavage, telle que décrite par M. KOENEN Et coîl, cette solution contenant en outre le détergent TRITONx 100 en concentration de 0,5% (vol/vol).Après immuno-absorption les feuilles ont été enlevées puis trempées dans la solution de lavage contenant le TRITON X 100 pendant 20 minutes. Les débris cellulaires encore adhérents ont été éliminés par des jets de la même solution produits par une seringue. Les feuilles ont alors été placées dans la solution fraîche jusqu'à ce qu'aucun débris ne soit plus visible. Les immuno-complexes ont alors été identifiés comme décrit par M. KOENEN et coll. 36 clones positifs réagissant avec les anticorps de lapin ont ainsi pu être isolés. Les colonies correspondantes ont alors été triées dans des conditions semblables, mais en mettant cette fois en oeuvre les sérums purifiés humains qui ont été rappelés plus haut. Parmi ces clones, il en est un qui a réagi d'une façon particulièrement forte avec le sérum anti-humain. L'examen des produits de ces clones par élec- trophorèse sur gel d'acrvlamide eu dodecylsulfate de sodium a permis de constater l'absence de la bande pentidique de 116 3dlodaltons correspondant normalement à la B -qalacto- sidase et la présence d'une nouvelle bande de 150 kilodaltons, bande qui a été isolée en quantités relativement importantes dans la fraction cytoplasmique de E.coli et non dans la membrane. Ce résultat était en harmonie avec la taille de l'insérat d'environ 820 paires de bases qui avait été incorporé dans le vecteur. Cet insérat a été séquencé dans les Ceux directions selon la technique de MAXAM et GILBERT. I1 a pu être déduit, en particulier de la structure des séquences d'extrémités de 620 paires de bases1 que l'insérat originaire du génôme de Plasmodium falciparum contenait sur toute sa longueur des séquences répétitives de 27 paires de bases codant pour un polypeptide répétitif de 9 aminoacides : Glu Glu Leu Val Glu Glu Val Val Pro, si ce n'est que l'on a pu observer un certain nombre de variations dans ces séquences. En particulier on a pu constater que les acides aminés isoleucine, leucine et valine pouvaient mutuellement se remplacer. Les observations faites sur ces séquences tendent à suggérer l'existence d'une hélice en a comportant des interrup- tions par les prolines.Des séquences d'ADN caractéristiques et les séquences peptidiques pour lesquelles elles codent résultent de la fig. 2. Le polypeptide ainsi exprimé est donc caractéristique de ceux qui sont conformes à l'invention. Le fait que la protéine chimère susdite est reconnue par les anticorps humains soutient l'hypothèse que le déterminant antigérique caractéristique est immunogène chez l'homme. Les techniques d'analyse de 1'ADN génomique sur "buvard de Southern" (Southern blot) selon la technique décrite par SOUTHERN E. (1975) J. Mol. Biol. 98, 503, révèlent, après digestion du fragment concerné par l'enzyme Hind III, une bande d'environ 20 à 25 kb. La technique au "buvard de Northern" (THOMAS P.F. (1980). Proc. Natl. Acad. Sci., 77, 5201) mise en oeuvre avec de 1'ARN poly-A+ permet également l'identification d'un ARN messager ayant de 7 à 9 kb. Le polypeptide contenant les séquences peptidiques répétitives conformes à l'invention présente des propriétés immunogènes. En particulier des anticorps formés contre la molécule chimère 8-galactosidase- fragment (dans laquelle la ss-galactosidase peut être considérée comme jouant un rôle de support) se sont révélés réagir avec un antigène associé aux globules rouges infectés par le P. falciparum aux stades tardifs, réaction révélée par immunofluorescence indirecte et produisant une image caractéristique. Cette même image d'immunofluorescence a été observée avec plusieurs souches de P.falciparum (Palo Alto, NF 54, It G2G1).Ceci permet d'envisager d'utiliser la séquence peptidique pour un diagnostic de P. falciparum par toutes les méthodes immunologiques connues de l'homme de l'art, telles que Elisa, Immunofluorescence, etc.. L'antigène de P. falciparum reconnu par les sérums a, dans des conditions expérimentales précises (Extraction de P. falciparum par du Triton à 1 gO puis électrophorèse en gel de SDS-polyacrylamide à 6,5 %), un poids moléculaire de l'ordre de 250 000 daltons. Les molécules selon l'invention peuvent donc, grâce à leur antigénicité, être utilisées comme réactifs, notamment pour la détection d'anticorps dirigés contre des protéines résultant de l'activité infectieuse des parasites du paludisme, notamment dans leur phase de développement érvthrocytaire, et plus particulièrement contre des protéines qui s' as- socient aux membranes des globules infectés. Parmi ces protéines on mentionnera celles qui peuvent intervenir dans la fixation des globules rouges infectés aux cellules endothéliales des capillaires du cerveau, que l'on peut observer dans les formes cérébrales du paludisme.Ces manifestations peuvent être à l'origine de.thromboses paludiques, souvent fatales pour le malade. A l'inverse, les peptides ou oligopeptides selon l'invention peuvent encore être utilisées pour la production d'anticorps in vivo, par l'immunisation de l'animal, tel que le lapin, ces anticorps pouvant à leur tour être utilisés pour le diagnostic in vitro de l'apparition de protéines de membranes ou exposées à la surface des membranes des érythrocytes, à certains stades d'évolution de l'infection parasitaire. L'invention ouvre enfin la voie à la mise au point de nouveaux principes de vaccinants contre ces phénomènes immunopathologiques particulièrement pernicieux. En particulier les résultats qui ont été évoqués permettent d'envisager l'utilisation des peptides ou oligopeptides selon l'invention, liés ou non de façon covalente à un support, en tant que principes protecteurs contre la fixation des érythrocytes infectés sur les parois'des capillaires cérébraux. A ce titre les molécules selon l'invention peuvent constituer l'un des principes actifs des vaccins actifs contre le paludisme. L'invention concerne donc également les compositions préparées sous forme de vaccins contenant soit le peptide selon l'invention, soit un oligomère de ce peptide, soit encore un conjugué de ce peptide ou oligomère avec une molécule porteuse, en association avec un véhicule approprié et, le cas échéant, ávec d'autres principes actifs vaccinants contre le paludisme. Des compositions pharmaceutiques avantageuses sont constituées par des solutions, suspensions ou liposomes injectables contenant une dose efficace d'au moins un produit selon l'invention. De préférence, ces solutions, suspensions ou liposomes sont réalisés dans une phase aqueuse stérilisée isotonique, de préférence saline ou glucosée. L'invention concerne plus particulièrement de telles suspensions, solutions ou forme liposome qui sont aptes à être administrées par injections intradermiques, intramusculaires ou sous-cutanées, ou encore par scarifications. Elle concerne également des compositions pharmaceutiques administrables par d'autre voies, notamment par voie orale ou rectale, ou encore so'is forme d'aérosols destinés à venir en contact avec des muqueuses, notamment les muqueuses oculaires, nasales, pulalonaires ou vaginales. En conséquence, elle concerne des compositions pharmaceutiques dans lesquelles l'un au moins des produits. selon l'invention se trouve associé à de excipients pharmaceutiquement acceptables, solides ou liquides, adatpés à la constitution de formes orales,oculaires ou nasales, ou avec des excipients adaptés à la constitution des formes d'administration rectale, ou encore avec des excipients gélatineux pour l'administration vaginale. Elle concerne aussi des compositions liquides isotoniques contenant l'un au moins des conjugués selon l'invention, adaptées à l'ad- ministration sur les muqueuses, notamment oculaires ou nasales. Avantageusement, les compositions vaccinales selon l'invention contiennent en outre un véhicule, tel que la polyvinyl-pyrrolidone, facilitant l'adminitration du vaccin. A la place de la polyvinyl-pyrroliione, on peut utiliser tout autre type d'adjuvant au sen3 classique que l'on donnait autrefois à cette expression, c'est-à-dire d'une substance permettant l'absorption plus aisée d'un médicament ou facilitant son action dans l'organisme. A titre d'exemples d'autres adjuvantes de ce dernier type, on mentionnera encore la carboxyméthyl-cellulose, les hydroxydes et phosphates d'aluminium ou tous autres adjuvants de ce type, bien connus de l'homme de l'art. Enfin elles contiennent si besoin un adjuvant immunologique, notamment du type muramylpeptide. L'invention ne se limite évidemment pas aux modes de réalisation décrits ci-dessus à titre d'exemples et l'homme de l'art peut y apporter des modifications sans pour autant sortir du cadre des revendications ci-après; notamment certains des acides aminés intervenant dans la séquence des peptides selon l'invention peuvent être remplacés par des acides aminés isofonctionnels ou isotériques; par exemple, une ou plusieurs des substitutions suivantes peuvent être envisagées - Glu est substitué par Asp ou Gln, - Val est remplacé par Ala ou Gly, - Leu est remplacé par Ala, etc... I1 est naturellement bien entendu que les peptides qui résultent de telles substitutions consistent en des équivalents des peptides plus particulièrement revendiquées, dès lors qu'eux-mêmes ou des oligomères ou conjugués formés à partir de ces peptides présentent des propriétés immunogènes semblables. L'invention concerne également encore plus particuliè- rement les "protéines chimère qui peuvent être obtenues par les techniques du génie génétique, ces protéines chimères pouvant contenir une ou plusieurs séquences peptidiques, notamment non-apeptidique conformes à l'invention et incorporées ou rattachées à un fragment peptidique autre que la ss- galactosidase. Ce dernier fragment peptidique a de préférence une poids moléculaire suffisant pour renforcer l'immunogénicité des séquences pentidioues selon l'invention et n'interfère pas du point de vue immunologique avec la manifestation de l'immunogénicité recherchée. Les séquences nucléotidiques correspondant aux séquences peptidiques sus-visées peuvent être utilisées selon des techniques connues d'hybridation moléculaire, comme agent de diagnostic de P. falciparum. De même, les peptides codés par ces séquences nucléotidiques peuvent être utilisés pour la détection dans les sérums de patients d'aticorps dirigés contre la susdite protéine associée aux membranes des globules éventuellement infectées. A l'inverse, ces peptides peuvent également être utilisés pour la fabrication d'anticorps, notamment chez l'animal, utilisables à leur tour pour la détection in vitro d'une infection par des parasites paludiques, notamment par mise en contact avec les globules susceptibles d'être infectés dans des conditions permettant une éventuelle réaction immunologique. REVENDICATIONS 1 - Molécule comportant au moins une séquence peptidique porteuse d'un épitope caractéristique d'une protéine produite par des cellules infectées par les parasites du paludisme, caractérisée en ce que cette séquence peptidique présente la formule X-glu-Y-Val-A-Glu-Val-Z-Pro dans laquelle X est Glu ou Val, Y est Val, Leu ou Ileu, Z est Val ou Ile,et A est Glu ou Asp. 2 - Molécule selon la revendication 1, caractérisée en ce que ladite séquence peptidique est l'une des suivantes 1. Glu Glu Val Val Glu Glu Val Val Pro 2. ... ... Leu ... 3. Val ... Leu ... 4. Val ... Leu ... ... ... ... ... ... 5. ... ... Leu ... ... ... ... Ile 6. ... ... Ile ... ... ... ... Ile 7. ... ... ... ... ... ... ... ... ... 8. ... ... Ile ... ... ... ... Ile 9. ... ... Leu île ... 10. Val ... Leu Leu ... 11. Val ... ... Leu ... Asp ... Ile 12. ... ... ... ... ... ... ... Ile 13. ... ... Ile Ile ... ... ... Ile 14. ... ... Ile Ile ... ... Ala Ile 15. Val ... Ile ... ... ... ... Ile 16 ... Asp Ile .., ... ... ... Ile . ... ... Ile ... .... Asp ... Ile 18. ... ... ... ... ... ... ... Ile 19. ... ... ... ... ... ... ... ... ... 20. ... .. Leu ... ... ... ... I Ir 21. ... ... Leu ... ... ... ... Tlc 22. ... ... ... Pro ... 23. Clu Clu Leu ... 3 - Molécule selon la revendication 1 ou la revendication 2, caractérisée en ce qu'elle est constituée d'un peptide monomère contenant 9 aminoacides, ce peptide contenant l'une des susdites séquences. 4 - Molécule selon la revendication 1 ou la revendication 2, caractérisée en ce qu'elle est constituée par le nonapeptide dont la structure correspond à celle de l'une des susdites séquences, 5 5 - Molécule selon la revendication 1 ou la revendication 2, caractérisée en ce qu'elle contient plusieurs séquences répétitives correspondant à une ou plusieurs des séquences sus-indiquées. 6 - Molécule selon la revendication 1 ou la revendication 2, caractérisée en ce qu'elle est constituée par un oligomère d'une ou plusieurs des susdites séquences, cet oligomère pouvant contenir de 2 à 25 unités monomères. 7 - Molécule selon l'une quelconque des revendications 1 à 6, caractérisée en ce qu'elle est fixée à un support. 8 - Composition immunogène caractérisée par l'association d'une molécule conforme à l'une quelconque des revendications 1 à 7, en association avec un véhicule pharmaceutique acceptable. 9 - Composition de vaccin dirigé contre le paludisme, contenant entre autres principes immunogènes une molécule conforme à l'une quelconque des revendications 1 à 7. 10 - Séquence de nucléotides codant pour une ou plusieurs des séquencespeptidiques définies dans la revendication 1 ou la revendication 2. 11 - Application des molécules conformes à l'une quelconque des revendications 1 à 7 comme agents de diagnostic. 12 - Application de la séquence de nucléotides selon la revendication 10 comme agent de diagnostic.