Brevet FR2564483A1 — publié le 19851122

Procédé de fabrication de 2,3 butane diol par fermentation aérobie d'un substrat par des souches de Bacillus Polymyxa. La présente invention concerne un procédé de fabrication de 2,3 butane diol par fermentation aérobie d'un substrat à l'aide de Bacillus Polymyxa. Le 2,3 butane diol est un diol de formule C4 02 H8 qui existe sous trois formes isomères: CH3 CH5 CH3 J-C-OH OH-C-H H-C-OH I I H-C-OH H-C-OH OH-C-H I I I CH3 CH3 CH3 meso 2,3 butane D (-) 2,3 butane diol L(+) 2,3 butane diol diol isomère levogyre isomère dextrogyre Le 2,3 butane diol est essentiellement utilisé pour la préparation de 1,3 butadiène qui est une des matières premières pour la fabrication de caoutchoucs. Il peut également être une source de monornmères tels que le méthylvinyl carbinol ou le méthylvinyl cétone. On peut l'utiliser à la place du glycérol dans la fabrication de résines polyester. Le 2,3 butane diol sous forme d'isomère levogyre peut être utilisé comme antigel. On peut également l'utiliser ainsi que l'isomère meso comme agent d'humidification dans les colles, la gélatine, la caséine, le tabac, le liège, les fibres textiles, etc. Il est connu de préparer un 2,3 butane diol par fermentation à l'aide de Bacillus Polymyxa. Il est en particulier connu d'utiliser le Bacillus Polymyxa NRRL B 510 obtenu par NORTHERN REGIONAL RESEARCH LABORATORY. En effet, le Bacillus Polymyxa a l'avantage de donner du 2,3 butane diol sous forme levogyre pratiquement pure ce qui permet de l'utiliser comme antigel. On a fait des essais de fermentation aérobie sur de nombreux substrats: glucose, fructose, saccharose, amidon, mélasse de betterave, amidon de mais, broyat de blé, liqueurs sulfitiques, petit lait, jus noir de sucrerie. Mais les rendements obtenus même avec le sucre comme substrat ne sont pas assez élevés pour que l'on puisse penser utiliser le procédé à l'échelle industrielle. La présente invention concerne un procédé qui permet d'obtenir du 2,3 butane diol avec un bon rendement. La présente invention concerne un procédé de fabrication de 2,3 butane diol par fermentation aérobie d'un substrat par des souches de Bacillus Polymrnixa, en particulier de Bacillus Polymyxa NRRL B 510, caractérisé par le fait que k substrat est constitué par dû jus de topinambour n'ayant subi -2- 2564483 aucun traitement d'hydrolyse préalable. Il était connu d'utiliser du jus de topinambour comme substrat pour la fermentation en particulier pour la fabrication d'éthanol. L'emploi de jus de topinambour est avantageux car c'est un aliment complet. En effet, il contient à la fois des sucres et des minéraux. Les sucres présents dans le jus de topinambour sont l'inuline à raison de 2/3 environ et le saccharose à raison de 1/3 environ. Il y a également du glucose et du fructose mais en faible quantité. Pour effectuer la fermentation du jus de topinambour à l'aide des microorganismes utilisés jusqu'à présent, il était nécessaire de l'hydrolyser pour dépolymériser l'inuline. Il était donc nécessaire d'effectuer une opération supplémentaire coûteuse. Selon la présente invention, on a trouvé que le Bacillus Polymyxa permettait la fermentation du jus de topinambour sans qu'il soit nécessaire de l'hydrolyser. On obtient sans dépolyrnérisation préalable à la fermentation des rendements analogues à ceux obtenus avec d'autres substrats. Selon l'invention, on ajoute de préférence au jus de topinambour un extrait de levure en quantité inférieure ou égale à lg/l. L'extrait de levure ajouté est une source de biotine, vitamine qui améliore le rendement de la fermentation. On a constaté que des quantités assez faibles avaient une action notable sur le rendement. Des quantités supérieures à lg/l n'apportent pas d'amélioration supplémentaire. Pour effectuer la fermentation selon l'invention, on introduit dans un fermentateur du jus de topinambour. On utilise de préférence du jus brut de première pression qui est le plus simple à obtenir. Au préalable, le jus de topinambour a été stérilisé par passage à l'autoclave pendant environ I heure à une température de 105 C ou pendant 15 minutes à une température de C. On ajoute éventuellement au jus de topinambour stérilisé l'extrait de levure en quantité inférieure ou égale à lg/l. La quantité d'inoculum introduite est comprise entre 1/10 et 1/20 du volume du jus de topinambour. On fait passer ensuite de l'oxygène ou de l'air. Par exemple on peut introduire de l'air à raison de 0,5 volume d'air par volume de liquide et par minute (en abrégé V.V.M.). De préférence, pendant toute la durée de la fermentation, la température est réglée à une valeur comprise entre 25 et 32 C et le pH maintenu entre 5, 8 et 6,8 par addition d'ammoniaque. On maintient également le mélange sous agitation. La fer- mentation dure une cinquantaine d'heures. Lorsque la fermentation est terminée, on sépare le 2,3 butane diol du jus de fermentation et de la biomasse. Cette séparation peut être effectuée par préconcentration, entraîne- ment à la vapeur et distillation. - 3 _2564483 On peut également effectuer une extraction (liquide-liqulde) avec divers solvants (éther diéthylique, n-butanol, acétate de butyle, butanediol diacétate, méthylvinylcarbinol). On peut transformer le 2,3 butanediol en 2,3 butane diol formal puis faire réagir ce dernier en milieu acide pour redonner le 2,3 butane diol. Selon un premier mode de réalisation préféré du procédé de fermentation selon la présente invention, on effectue la fermentation aérobie en trois phases distinctes d'agitation, en maintenant une aération constante. Dans la premiere phase, on soumet le mélange à une forte agitation telle que Je coefficient de transfert de l'oxygène à l'interface gaz-liquide soit compris entre 50 et 100 h-1 dans la deuxième phase à une agitation telle que le coefficient de transfert soit -I compris entre 20 et 40 h et dans la troisième phase à une agitation plus réduite encore telle que le coefficient de transfert soit compris entre 10 et 20 -1 h En effet, dans la première phase, la présence d'oxygène dissous permet une croissance importante des bactéries. Cette croissance peut atteindre 10 bactéries/ml. Cette première phase permet donc d'acquérir une biomasse importante. Dans la seconde phase, on réduit le transfert d'oxygène. En effet la voie métabolique conduisant au 2,3 butane diol est anaérobie et en réduisant la présence oxygène, on évite que les sucres du jus de topinambour ne soient utilisées uniquement pour faire des constituants cellulaires, du CO et de l'eau par respiration et croissance du Bacillus Polymyxa. Dans la troisième phase, on diminue encore l'agitation et par conséquent le transfert d'oxygène. On retarde ainsi la formation d'acétoine à partir de 2,3 butane diol. A ce stade la concentration en éthanol n'augmente pas par suite de sa consommation et par conséquent, le rapport 2,3 butane diol ne risque plus de ethanol diminuer. éthanol Selon un deuxième mode de réalisation préféré de l'invention, on effectue la fermentation en deux phases d'aération distinctes, le débit d'air ou d'oxygène étant plus élevé dans la première phase que dans la seconde, et l'agitatiorn étant maintenue constante dans les deux phases. EXEMPLE 1 La teneur initiale en sucre de ce jus de topinambour est de 151 g/l. On ajoute lg/l d'extrait de levure et 1/15 du volume du jus d'inoculum. Cet inoculum est obtenu par fermentation fortement aérée de 24 heures de jus de topinambour. On introduit de l'air dans le fermentateur à raison de 0, 5 VVM. Dans une première phase d'une durée de 18 h 40 minutes, on agite le mélange avec un agitateur tournant à une vitesse de 560 tours par minute (r.p.m.) ce qui donne un coefficient de transfert de 60 h - ' 2564483 -4 Le coefficient de transfert (k L a) est déterminé par désoxygénation du milieu réactionnel, puis enregistrement de la remontée de la concentration en oxygène dissous (concentration désignée par CL) lorsque l'on rétablit l'aération CL est mesurée par une sonde à oxygène dissous de type ampérométrique. Le coefficient de transfert k a est la pente de la droite CL Ln (1 - -) = f (t) ou t est le temps et C* la concentration saturante en oxygène dissous. Dans une seconde phase d'une durée de 22 h, la vitesse d'agitation est O10 réduite à 380 r.p.m., ce qui correspond à un coefficient de transfert de 20 h-k Dans une troisième phase, l'agitation est encore réduire jusqu'à 315 r.p.m. ce qui correspond à un coefficient de transfert inférieur à 15 h-1. Cette phase dure 11 heures. On obtient une solution contenant 44 g/l de 2, 3 butane diol ce qui correspond à un rendement en butane diol par rapport au sucre consommé de 31 %. La figure 1 annexée indique la courbe d'évolution des différents composés au cours de la fermentation. EXEMPLE 2 L'exemple 1 est répété mais la phase de fermentation est réalisée en deux étapes: - une première étape de 6 heures d'aération intense dans laquelle on introduit de l'air à raison de 2,1 V.V.M. - une deuxième étape de 50 heures dans laquelle on introduit de l'air à raison de 0,3 V.V.M. L'agitation est maintenue à 350 r.p.m. pendant les 2 phases d'oxygéna- tion. On obtient une solution contenant 43 g/l de 2,3 butane diol ce qui correspond à un rendement en butane diol par rapport au sucre consommé de 37,4 9%. La figure 2 annexée donne la courbe d'évolution des différents composés au cours de la fermentation. - 2564483 -REVENDICATIONS - ) Procédé de fabrication de 2,3 butane diol par fermentation aérobie d'un substrat par des souches de Bacillus Polymixa, en particulier de Bacillus Polymyxa NRRL 510 caractérisé par le fait que le substrat est constitué par du jus de topinambour n'ayant subi aucun traitement d'hydrolyse préalable. 2 ) Procédé de fabrication de 2,3 butane diol selon la revendication 1 caractérisé par le fait que l'on ajoute au jus de topinambour un extrait de levure en quantité inférieure ou égale à lg/l. 3 ) Procédé de fabrication de 2,3 butane diol par fermentation selon la revendication I caractérisé par le fait qu'on introduit dans le jus de topinambour préalablement stérilisé un inoculum en quantité comprise entre 1/10 et 1/20 du volume du jus de topinambour, on fait ensuite passer de l'oxygène ou de l'air, on règle pendant toute la durée de la fermentation la température à une valeur comprise entre 25 et 32 C et le pH à une valeur comprise entre 5,8 et 6,8 par addition d'ammoniaque et on maintient le mélange sous agitation, puis lorsque la fabrication est terminée on sépare le 2,3 butane diol du jus de fermentation et de la biomasse. 4 ) Procédé de fabrication de 2,3 butane diol par fermentation selon l'une quelconque des revendications 1 à 3 caractérisé par le fait que l'on effectue la fermentation en trois phases distinctes d'agitation en maintenant une aération constance, l'agitation étant dans la première phase telle que le coefficient de transfert d'oxygène à l'interface gaz!iquide soit compris entre et 100 h-, dans la deuxième phase telle que le coefficient de transfert soit compris entre 20 et -40 h- i et dans la troisième phase telle que le -I coefficient de transfert soit ompris entre 10 et 20 h 5 ) Procédé de fabrccation de 2,3 butane dio! par fermentation selon l'une quelconque des revendi.ations 1 à 3 caractérisé par le fait que l'on effectue la fermentation en deux phases d'aération distinctes, le débit d'air ou d'oxygènre étant plus é -eve Gens _ a première phase que dans la seconde et l'agitat:on étant maintenue cons-ante dars les deux phases.