Brevet FR2563218A1 — publié le 19851025

La présente invention a pour objet des dérivés d'acide N- (chloro-2 phényl)méthylthio-3 oxo-l propyl -aminoacétique substitué en , leur préparation et leur application en thérapeutique. Les composés de l'invention répondent à la formule générale dans laquelle R représente un groupe (Cl-C4)alkyle linéaire ou ramifié, un groupe carbamoylméthyle ou carbamoyléthyle, un groupe benzyle éventuellement hydroxylé, ou un groupe (indolyl-3)méthyle. Les composés de l'invention peuvent exister à l'état d'acides libres ou de sels, qu'ils peuvent former avec des bases acceptables en pharmacologie. La préparation des composés de l'invention peut être illustrée par le schéma suivant Le procédé consiste en trois étapes de réactions de type connu : le dérivé halogéné (II) est d'abord soumis à l'action de l'acide mercaptopropionique en milieu basique aqueux. L'acide (III) ainsi obtenu est ensuite transformé en chlorure d'acide (IV), ce dernier étant finalement soumis à l'faction d'une glycine portant le substituant R choisi, dans des conditions analogues à celles de la première étape. L'exemple suivant illustre la préparation des composés de l'invention, dont les structures sont confirmées par les analyses et les spectres IR et RMN. Exemple. Acide x-t (chloro-2 phénylméthylthio)-3 oxo-l propylamino] a-(méthyl-l propyl) acétique. Dans un ballon on agite vigoureusement à 700C un mélange de 21,2 g (0,2 mole) d'acide mercapto-3 propionique, 160 ml d'eau, 16 g (0,4 mole) de soude et 32,2 g (0,2 mole) de chloro-l chloromdthyl-2 benzène. Après 15 minutes on ajoute environ 150 g de glace pilée, puis 20 ml d'acide chlorhydrique 12 N. On essore le précipité, on le lave à l'eau et on le sèche. On le reprend avec un mélange de 100 ml de benzène et 21,9 ml (0,3 mole) de chlorure de thionyle, et on chauffe au reflux pendant 2 heures. On évapore le solvant sous pression réduite et, tout en agitant vigoureusement, on verse 14,9 g du résidu, à une vitesse telle que la température ne dépasse pas 100C, sur une solution refroidie au bain de glace et préparée à partir de 50 ml d'eau, 26,2 g (0,2 mole) de L-isoleucine et 8 g (0,2 mole) de soude. On agite le mélange pendant 10 minutes sans dépasser inox, pis on le dilue avec 500 ml d'eau et on ajoute 20 ml d'acide j de chlorhydrique concentré. On laisse reposer les cristaux formés, on les essore, on les lave à l'eau et on les essore de nouveau. Après recristallisation dans un mélange éthanol/eau, puis méchage, ils fondent à 10-1090C. Le tableau ci-dessous illustre les structures et les propriétés physiques d'autres composés selon l'invention. Composé R F(OC) 1 -CH(CH3)CH2CH3 108-109 2 -CH(CH3)2 121-122 3 -CH2CONH2 135-137 4 -CH2CH2CONH2 157-159 5 -CH 2Ù 122-123 R 6 -CH2 107-109 7 -CH,Ti-- 139-140 Les composés de l'invention ont fait l'objet d'essais pharmacologiques qui ont mis en évidence leur intérêt comme agentsmucolytiques, anti-inflammatoires, antiulcéreux, antisécré- toires et analgésiques. Pour l'étude de l'activité mucolytique, des essais ont té effectués sur le modèle expérimental de bronchite à l'anhydride sulfureux chez le rat, selon la méthode instaurée par L. Reid ("An experimental study of hypersecretion of mucus in the bronchial tree",'Brit. J. Exp. Pathol., 1963, 44, 437) et développée par A. Quevauviller et coll. ("Méthodes d'étude expérimentale des modificateurs des sécrétions bronchiques", Le Poumon et le Coeur, 1970 26, nO 1, 71-80). Les animaux utilisés sont des rats mâles Sprague Dawley SPF de Charles River (France) d'un poids moyen de 300 g répartis au hasard en lots h l'aide d'une table de répartition. Ils sont soumis pendant 3 jours, à raison de 5 ou 6 heures par jour, à une inhalation d'anhydride sulfureux à une concentration de 500 ou 600 ppm. A partir du 4e jour et jusqu'au 13e jour, les animaux sont traités avec des composés de l'invention, à raison de ln0 mg par kg et par jour, par voie orale. Les animaux témoins ne reçoivent que le solvant, une solution de tween 80 a 1 . Au cours des 8e, 9e et île jour, tous les animaux sont encore soumis à une inhalation de 300 ppm d'anhydride sulfureux pendant 1 ou 2 heures, tout en recevant les composés de l'invention ou le solvant. Les animaux sont sacrifiés 24 heures après le dernier jour de traitement, par section de l'aorte abdominale après anesthésie au pentobarbital. Après prélèvement, l'arbre trachéobronchique est fixé au formol 10 S tamponné à pH 7. En vue de l'évaluation de la rétention trachéobronchique, le mucus est coloré par une solution de Bleu Alcian à 70/nu. après coupe des bronches principales et de la trachée sel ni leur axe longitudinal, et durcissement préalable des tissus à l'alcool. L'évaluation de la rétention endobronchique est effectuée niveau de la bronche principale du poumon gauche et du lobe basal droit, ainsi qu'au niveau de la trachée. La bronche principale et la trachée étant arbitrairement divisées en trois parties (tiers hilaire, tiers moyen et tiers distal pour la bronche ; tiers supérieur, tiers moyen et tiers inférieur pour la trachée), l'évaluation de la rétention est effectuée au niveau de chaque tiers à l'aide d'une loupe binoculaire. La rétention de mucus dans les voies respiratoires pouvant se présenter macroscopiquement sous des aspects très différents, quatre formes principales d'obstruction sont retenues : dépôt, amas nodulaire, coulée et bouchon compact. Dans chacune de ces formes, excepté le bouchon compact, on distingue plusieurs types selon l'importance volumétrique de l'obstruction considérée. Pour chaque animal, on estime le volume de la rétention en attribuant à chaque forme observée une valeur chiffrée correspondant au volume occupé par cette obstruction dans la lumière bronchique ou trachéale du tiers examiné Ainsi la valeur 15 correspond à l'obstruction complète d'un bouchon compact occupant 100 % de la lumière bronchique ou trachéale et la valeur 1 correspond à l'obstruction minimum d'un petit dépôt occupant environ 1/15 de la lumière bronchique ou trachéale. L'activité mucolytique d'un produit sur la rétention trachée bronchique de mucus pathologique est définie en fonction de la diminution globale de la rétention, c'es-t-à-dire du volume de mucus secrété (volume moyen par animal et volume moyen par animal et par lot). Au niveau bronchique, le volume global de la rétention est apprécié au niveau de 2 bronches principales, soit par rapport à une cotation maximum de 90 (6 tiers bronchiques obstrués par 6 bouchons compacts : 6 x 15 = 90). Au niveau trachéal, le volume global de la rétention n'étant apprécié que sur 3 tiers, soit par rapport à une cotation maximum de 45 (3 tiers trachéaux obstrués par 3 bouchons compacts : 3 x 15 = 45), son expression chiffre est multi pliée par 2, afin que la rétention endotrachéale et la rbtn- tion endobroch i que, pour chaque a n iin aI, soient exprimées de manière comparable. Ainsi, la valeur de la rétention trachéobronchique globale. obtenue en additionnant la valeur de la rétention endotrachéale et la valeur de la rétention endobronchique, tient compte de façon égale des deux niveaux de rétention de mucus pathologique. Une analyse statistique des résultats est effectuée par le test non paramétrique de Mann et Whitney. Résultats Par rapport aux animaux témoins, les animaux traités par les composés de l'invention présentent une réduction allant jusqu'a 50 Z du volume global de la rétention trachéobronchique. Pour l'étude de l'activité anti-inflammatoire, des essais ont été effectués sur le test de l'oedème à la carragénine chez le rat selon la méthode de Winter et al. ("Carrageenin induced edema in hind paw of the rat as an assay for antiinflammatory drugs". Proc. Soc. Exp. Biol. Med. 1962, 111, 544-547). Les animaux utilisés sont des rats mâles Sprague Dawley SPF de Charles River (France) d'un poids moyen de 150 g, répartis en lots au hasard à l'aide d'une table de répartition. Les composés sont administrés par voie orale à des doses comprises entre 20 et 200 mg/kg, 1 heure avant l'injection sous l'aponévrose plantaire à l'une des pattes postérieures, de 0,1 ml de carragénine, en suspension à 1 dans du sérum physiologique stérile. Les animaux témoins ne reçoivent que le placebo, une solution de tween 80 à 1t. L'augmentation du volume de la patte est mesurée 3 heures après l'injection de carragénine au moyen d'un pléthysmomètre Ugo Basile Résultats Par rapport aux animaux témoins, les animaux traités par les composés de l'invention présentent une diminution de 40 4 du volume de l'oedème à des doses de 40 à 80 mg/kg. Pour l'étude de l'activité anti-ulcéreuse, des essais ont été effectués vis à vis des ulcères induits. chez le rat, par la phénylbutazone ou par l'éthanol. Les animaux utilisés sont, pour ces deux modèles, des rats femelles Wistar (Iffa Credo), à jeOn depuis 1R heures, répartis en lots au hasard à l'aide d'une table de répartition. Les ulcères sont provoqués par l'administration orale de phénylbutazone, en solution mole à mole avec de la soude, à la dose de 200 mg/kg, ou d'éthanol à 50 %, à la dose de 5 ml/kg. Les composés à étudier sont administrés par la voie orale 30 minutes avant l'ingestion de l'agent ulcérigène. Les animaux témoins ne reçoivent que le placebo, une solution de tween 80 à 1 %. Les animaux sont sacrifiés, par inhalation de chloroforme, 2 heures après l'ingestion de phényîbutazone ou 1 heure après l'ingestion d'éthanol. Les estomacs sont prélevés, le degré d'ulcération est noté en aveugle de O à 3 et l'index d'ulcération (degré d'ulcération x pourcentage d'animaux ayant des ulcères) est calculé. Résultats Par rapport aux animaux témoins, les animaux traités par les composés de l'invention présentent une diminution de 50 y de l'index d'ulcssration à partir de 4 mg/kg vis à vis de la phénylbutazone, et de 15 mg/kg vis à vis de l'éthanol. Pour l'étude de l'activité anti-sécretoire gastrique, des essais ont été effectués chez le rat à pylore ligaturé selon la technique de Shay et al. ("A simple method for the uniform production of gastric ulceration in the rat"- Gastroenterology, 1945, 5, 43-61) décrite par Pascaux et Laubie ("Etude pharmacologique de thiocarboxamides anti-sécrêtoires gastriques et ulc6ro-protectrices". -Arzneim. Forsch. 1971, 10, 1547-1553. Les animaux utilisés sont des rats femelles Wistar (Iffa Credo) d'un poids compris entre 203 a-t 250 g, à jeun depuis 48 heures et répartis en lots au hasard à l'aide d'une tahi de répartition. La ligature du pylore est effectuée sous légère anesthésie à ltéther après lavage de 1! estomac au moyen de 4 ml de sérum physiologique tiède. Les composés à étudier sont administrés par voie intra-péritonéale immédiatement après la ligature du pylore. Les eni- maux témoins ne reçoivent que le placebo, une solution de tween 80 à 1 9;. 4 heures plus tard, les animaux sont sacrifiés, par inhalation de chloroforme. Le contenu gastrique est prélevé et centrifugé. Le volume de la sécrétion gastrique est mesuré, l'acidité libre et l'acidité totale sont dosées par titrimétrie. Résultats Par rapport aux animaux témoins, les animaux traités par les composés de l'invention présentent une diminution de 50 à 80 % de la sécrétion d'acide gastrique dès la dose de 10 mg/kg. Pour ltétude de l'activité analgésique, des essais ont été effectués sur le "Writhing-test" à l'acide acétique chez la souris d'après Koster et al. ("Acetic acid for analgesic screening". Fed. Proc. 1959, 18, 412). Les animaux utilisés sont des souris mêles CD1 de Charles River (France), d'un poids moyen de 20 g, à jeûn depuis 18 heures. L'injection intrapéritonéale de 10 ml/kg d'une solution d'acide acétique à 0,6 % dans une solution de tween 80 à 0,2 % et de carboxyméthylcellulose à 0,25 9;, déclenche en quelques minutes chez les souris un syndrôme d'étirements et de torsions (writhing) pouvant être considéré comme l'expression d'une douleur abdominale diffuse. Les étirements sont comptabilisés pendant les 15 premières minutes qui suivent cette injection. Les composés à étudier sont administrés par voie orale, 30 minutes avant l'injection d'acide acétique. Les animaux témoins ne reçoivent que le placebo, une solution-de tween 80 à 1 %. Résultats Par rapport aux animaux témoins, les animaux traités par l- composés de l'invention présentent une diminution de 50 * ' nombre des étirements provoqués par l'acide acétique à ,1^ doses voisines de 20 mg/kg. Les résultats ci-dessus montrent que les composés de l'inven- tion peuvent être utilisés comme substances actives de médicaments et compositions pharmaceutiques destinés au traitement de diverses affections de l'appareil broncho-re-spiratoire accompagnées d'une hypersécrétion de mucus, telles que bronchites, trachéo-bronchites, bronchorrhées, asthme, etc et, de manière générale, de toutes affections liées aux désordres de la sécrétion ou du transport du mucus, au traitement d'inflammations et de douleurs d'origines diverses, ainsi qu'au traitement des ulcères et des hypersécrétions gastriques. A cet effet ils peuvent être présentés sous des formes appropriées à l'administration entérale ou parentérale par exemple sous forme de comprimés, gélules, dragées, sirops, solutions ou suspensions buvables ou injectables, en association avec des excipients convenables. La posologie quotidienne peut aller de 0,5 à 100 mg/kg de substance active, soit environ 25 à 7000 mg. Revendications 1. Composés répondant à la formule générale T dans laquelle R représente un groupe (Cl-C4)alkyle linéaire ou ramifié, un groupe carbamoylméthyle ou carbamoyléthyle, un groupe benzyle éventuellement hydroxylé, ou un groupe {indolyl-3)méthyle, ainsi que leurs sels acceptables en pharmacologie. 2. Procédé de préparation des composés selon la revendication 1, caractérisé en ce qu'on fait réagir un dérivé halogéné de formule II avec l'acide mercaptopropionique, puis on fait réagir l'acide obtenu, de formule III avec le chlorure de thionyle pour obtenir le chlorure d'acide de formule IV que l'on fait réagir ensuite avec une glycine de formule H NCHCOOH 2 R dans laquelle R est tel que défini à la revendication 1. 3. Médicament caractérisé en ce qu'il consiste en un composé selon la revendication 1.4. Composition pharmaceutique, caractérisée en ce qu'elle contient un composé selon la revendication 1, en association avec un excipient acceptable en pharmacologie.