Brevet FR2562890A1 — publié le 19851018

La présente invention concerne, de façon générale, de nouveaux composés nitrosourées, des procédés pour leur préparation ainsi que des compositions pharmaceutiques à base de tels composés, utiles notamment en chimiothérapie anticancéreuse. Plus particulierement, la présente invention concerne des composés à activité oncostatique dérivés de la cystéamine appartenant à la classe des chloroéthyl nitrosourées. Les chloroéthyl nitrosourées constituent une classe de composés utilisés en chimiothérapie anticancéreuse dans le traitement des glioblastomes de la maladie de Hodgkin et de cancers gastro-intestinaux. Les plus utilisées d'entre elles sont la BCNU, la CCNU et la méthyl CCNU. Parmi les norreux dérivés de cette série préparés récemment dans le monde, quelques uns ont été retenus sur la base de la largeur de leur spectre d'action sur les tumeurs murines pour les essais cliniques phase I et II. I1 s'agit de la chlorozotocine, 1'ACNU, 1'HECNU, la RFCKU, la CNCC. Dans cette série, la CNCC semble être la substance la plus prometteuse comme l'indique le tableau 1. En effet, à l'issue des essais dont les résultats sont rassemblés dans ce tableau, il apparaît que la CNCC possède une activité tant qualitative que quantitative très intéressante. Elle se montre active à l'égard de tous les types de tumeur répertoriés dans le tableau I, excepté sur le fibrosarcome I.C.I.G. Cette activité est quantitativement plus importante que celles observées avec les autres chloroéthyl nitrosourées. TABLEAU I Augmentation du la durée de survie (I.L.S. : T/C x 100)1 (traitement par voie I.P. au jour 1,5,9) CHLOROZOTOCINE R.R.C.U R.F.C.N.U. H.E.C.N.U. C.N.C.C. TUMEUR 15 mg/kg I.P 15 mg/kg I.P 20 mg/kg I.P 10 mg/kg I.P 30 mg/kg I.P Leucémie L 1210 N.S. N.S. 167 # # (greffée par voie i.c.) Carcinome pulmonaire N.S. N.S. N.S. # # de Lewis (implanté en souscutané) Mélano-carcinome B 16 N.S. 151 144 198 200 (implanté en souscutané) Gliome 26 N.S. 127 N.S. 182 200 (implanté en souscutané) Adénocarcinome mammaire N.S. 134 N.S. 165 185 TM2 (implanté en souscutané) Fibrosarcome I.C.I.G. # # N.S. N.S. C1 (implanté en souscutané) Carcinome du côlon # N.S. N.S. # # (Colon 26) (implanté en souscutané) M 555 ovarienne # # N.S. 210 > 254 (implanté en souscutané) N.S. -Non significatif ; # = 50 % en plus des animaux traités sont guéris 1Reproduit de "Nitrosoureas in Cancer Treatment", Ed. B. Serrou, P.S. Schein and J.L. Imbach, Elsevier North Holland, 1981, 132. Enfin, on remarque que la CNCC est employée à des doses supérieures (30 mg/kg) à celles avec lesquelles on utilise la chlorozotocine, la R.P.C.N.U., la R.F.C.N.U., ou la H.E.C.N.U., ce qui est un atout supplémentaire en chimiothérapie anticancéreuse. Dans ce domaine, on connaît en effet la nécessité de trouver un compromis entre une dose efficace de produit, permettant d'obtenir la régression maximale de la tumeuraet un minimum d'effets secondaires néfastes. La CNCC possède donc un spectre d'action étendu et permet un traitement des tumeurs murines plus efficace. C'est pourquoi la présente invention concerne de nouveaux agents cytostatiques dérivés de la CNCC, présentant une activité améliorée par rapport aux produits de la technique antérieure et/ou un spectre d'activité différent. I1 s'agit des composés de formule générale I: dans laquelle - X et Y sont définis individuellement par H ou -NO, l'un au moins e tant un groupement -NO, - n est égal à 0,1 ou 2, - R est l'hydrogène, un radical aliphatique, cycloalipha tique, cycloaliphatique-alkyl, aryleou aralcoyle, ou bien encore un groupement dans lequel R1 est un radical alkyleinférieur ou aryle, l'ensemble de ces radicaux étant éventuellement substitues. Par radical aliphatique, on entend des radicaux alkyles, alcényles ou alcynyles, droits ou ramifiés, comportant de 1 a 8 atomes de carbone. I1 s'agit de préférence de radicaux alkyles inférieurs, c'est-à-dire com portant de 1 à 7 atomes de carbone, et plus particulièrement des radicaux en C1 à C3 tels que méthyle, éthyle. Par cycloaliphatique, on entend des radicaux comportant 3 à 8 atomes de carbone, saturés ou non. En particulier, on préfère le radical cyclohexyle. Par aryle on entend des radicaux en C6-C30 renfermant un ou plusieurs noyaux, du type benzènique par exemple, substitués ou non. Parmi ces radicaux, on préfère en particulier le radical phényle, éventuellement substitué par un groupement -NO2, par exemple le groupement Par cycloaliphatique-alkyl, on entend un radical alkyle inférieur substitué par un ou plusieurs radicaux cycloaliphatiques. De même par aralcoyle, on entend un radical alkyle inférieur substitué par un ou plusieurs radicaux aryles. Les termes "alkyle inférieur", "cycloaliphatique" et "aryle" snt employés comme définis précédemment. Parmi ces radicaux, on préfère notamment le radical trityle ((C6H5)3-C-). Parmi les compos selon l'invention, on préfère en particulier les dérivés de formule Il pour lesquels le groupement -NO est porté par l'azote côté chlore. Parmi les composés selon l'invention les plus intéressants, il faut citer N-[N-(chloro-2éthyl)N-nitrosocarbamoyl]cystéamine S-méthyl N- [N-(chloro-2éthyl)N-nitrosocarbamoyl] cystéamine. S-méthyl N-nitroso-N- [N-(chloro-2éthyl)carbamoyl] cystéamine. S-acétyl N-[N-(chloro-2éthyl)N-nitrosocarbamoyl] cystéamine. S-para-nitrobenzoyl N-0N-(chloro-2éthyl)N-nitro- socarbamoyl]cystéamine. S- trityl-N-[N-(chloro-2éthyl)N-nitrosocarbamoyl] cystéamine. La présente invention concerne également les sulfoxydes de formule ainsi que les sulfones de formule correspondant à l'oxydation ménagée ou complète du soufre des composés dérivés de la cystéamine de formule De plus, l'invention a pour objet les mélanges isomériques des composés de formule générale I compte-tenu du fait que lorsque X et Y ont des significations différentes - lorsque l'un est l'hydrogène, l'autre le groupement -NO-, suivant que -NO est porté par l'azote côté chlore ou côté soufre, on obtient deux isomères de position. En particulier, l'invention concerne le mélange des isomères de position suivant Les composés selon la présente invention peuvent être préparés par différents procédés. Pour les composés dans lesquels R est un hydrogène, un radical aliphatique, cycloaliphatique, cycloaliphatique-alkyl, aryle ou aralcoyle et n =O par nitrosation du composé correspondant de formule R-S-CH2-CH2-NH-C-NH-CH2-CH2C1, par action d'un nitrite O de métal alcalin ou alcalino-terreux en présence d'un acide organique, en particulier par action de NaNO2 dans l'acide formique. En particulier, le schéma I illustre un procédé de préparation des composés de formule dans lequel R est -CH3. SCHEMA I CH, SCH1CH, NH, + O=C = NCH2CH2CI CH3SCH2CH2 NH C NHCH2CH2Ct (2 ) lr o NcY02 HCCCH o NO (I I (3) CH3SCH2CH2NCNHCH2CH2CJ (3) + CH3SCH2CH2NHCNCH2CH2CI (;; J (I NO o 80% / \ 20% Ŏ2 H2 02 ACETONE HCOOH A180 ó B1804 CHROMATOGRAPHIE CHRCtATO GAPH,E LO OUIOE Lt oulsg/LiogivE uIOE/LOuOE A220 8220/00 A5 A 2 8 & 82 On prépare l'urée (2) en faisant réagir la S-méthyl-cystéamine avec du chloroéthyl-isocyanate. On effectue ensuite la nitrosation de l'urée (2) obtenue par NaNo2 en présence d'acide formique. On obtient alors un mélange constitué de deux isomères de position suivants : la S-méthyl N-[N-(chloro-2éthyl) N-nitrosocarba moyl] cystéamine (3) et la S-méthyl N-nitroso0N-(chloro- 2 éthyl) N-carbamoyl, cystéamine (4). L'analyse du spectre RMN de ce mélange révèle la présence de ces deux isomères, l'un nitrosé côté chlore (3), l'autre nitrosé côté soufre (4) dans la proportion de 25 % / 75 %. La séparation de ces deux isomères étant très délicate, on préférera utiliser pour obtenir un produit pur le procédé suivant qui consiste à faire réagir H2N-CH2-CH2C1 sur dans lequel X1 est un groupe activant pour obtenir le dérivé nitrosé côté soufre ou R-S-CH2-CH2-NH2 sur dans lequel X2 est un groupe activant pour obtenir le dérivé nitrosé côté chlore On entend par groupe activant X1 ou X2 tout groupe fonctionnel favorisant l'addition du réactif nitrosé, tel qu'un nitrosocarbamate, sur la fonction amine primaire des éthylamines Cl-CH2-CH2-NH2 ou R-S-CH2-CH2-NH2 de façon à préparer les composés chloroéthyl-nitrosourées selon l'invention, respectivement nitrosés côté soufre ou côté chlore.Le brevet français n 2 487 343 mentionne les groupes activants classiquement utilisés, à cet effet; on cite en particulier le p-nitrophényle bes scnemas @@ et 11 lustrent aes proceaes de préparation des composés selon l'invention, purs et non pas en mélange. - Le schéma II a pour objet un procédé de préparation de la S-méthyl-N-nitroso-0N-(chloro-2 éthyl)N-carbamoyll cystéamine (4). Ce composé (4) pur est obtenu par addition sur la chloro-2 éthylamine H2NCH2CH2C1 du nitrosocarbamate (10) dont l'extrémité constitue le groupe X1 activant permettant d'obtenir le dérivé chloroéthylnitrosourée (4) nitrose côté soufre. - Le schéma III a pour objet un procédé de préparation de l'isomère de position du composé précédent (4), c est-à-dire la S-méthyl-N-EN-(chloro-2 éthyl)N nitrosocarbamoyl cystéamine (3). Pour ce faire, on effectue l'addition du nitrosocarbamate (11) sur la S-méthyl- cystéamine, l'extrémité du nitrosocarbamate correspondant dans ce cas à un groupe activant X2 permettant d'obtenir le dérivé chloroéthyl-nitrosourée (3) nitrosé côté chlore. SCHEMA II O,N - O C ci + CH3SCtI2CH2NH2 &verbar; PYRIOiNE 02N 6 NHCH2CH4SCH3 Il O NO CI PYR DINE NO 02N OC-NCH2CH2SCH (10) I' O N1O H2N CH2CH2CI I CH3SC H2CH2-N - C N H CH2CH2CI (4) 'I O H202 H202 ACETONE HCOOH + A1 Bi (TRACES) 1 À A1 (TRACES) (TRACES) X X (TRACES) Â CHROATOGRAPHIE LICUIOE/LIOUIDE A1 1 SCHEMA III 02N z OH + O=C=NCH, CH,CI j PY R DiNE 02N z O CNHCH2CH2CI Il O ! NOCL e PYR 1 0, N E - 20 c) NO 02N O C N CH2CH2CI (11) Il O CH3SCH2CH2NH2 NO CH3 SCH2CH2NHC N CH2 CH2C i (3) H201 H2 2 O H2O2 ACETONE / J HCOOH A2 B2 + + B2 (TRACES) A2 (TRACES) CHRCMATOGRAPHIE LIOUIDE/LIOüIDE A, bu 82 Pour obtenir un composé dans lequel R est et n = O, on effectuera de préférence la thio esté purification d'un composé de formule par un dérivé réactif de l'acide correspondant par exemple le chlorure d'acide. Cette thioestérification sera effectuée dans les conditions habituellement mises en oeuvre par l'homme de l'art, par exemple en présence d'un solvant anhydre, tel que la pyridine. Elle est illustrée par la dernière étape du schéma II. Le schéma IV concerne un procédé de préparation de la N- EN- (chloro-2 éthyl) N-nitrosocarbamoyl] cystéamine (1) par addition de N-(chloro-2 éthyl) N-nitrosocarbamate de para-nitrophénol (6) sur la cystéamine (7). Ainsi que précédemment, le réactif (6) constitue le composé porteur d'un groupe activant permettant d'obtenir un dérivé nitrosé côté chlore. Toutefois, cette réaction devra être conduite sous courant gazeux inerte azote par exemple, car le thiol (1) tend à se dimériser pour former la CNCC. La dernière étape du schéma IV correspond à la préparation des composés de formule générale I dans laquelle n = O et R est Le composé chloroéthylnitrosouréé (1) obtenu est alors soumis à l'action du chlorure d'acide correspondant au produit final (12) que l'on désire préparer. SCHEMA IV 02N + O = C = N-CH2-CH2-C1 pyridine X s r 02N- O-C-NH- CH2-CH2-C1 o N,O NOCl (PYRIDINE -200C) O2N O-C-N-CH2-CH2-Cl (6) 8 NOs r H-S-CH2-CH2-NH-C-N-CH2-CH2-Cl (1) o R1-C-Cl O NO R1-C-S-CH 2-CH2-NH-C11-N-CH2-CH2-Cl (12) O O Les composés oxydés selon l'invention : sulfoxydes (n = 1) et sulfones (n = 2), peuvent être préparés par oxydation ménagée ou complète du soufre des composés correspondants (n = O) avec un peroxyde tel que le peroxyde d'hydrogène. Pour obtenir les sulfoxydes selon l'invention, de formule on soumet les composés correspondants de formule à l'action d'un peroxyde tel que le peroxyde d'hydrogène, en présence d'acétone, sous agitation. Pour obtenir les sulfones selon l'invention, de formule on soumet de même les composés correspondants de formule à l'action d'un peroxyde, tel que le peroxyde d'hydrogène, en présence d'acide formique, sous agitation. La synthèse des composés selon l'invention sous forme de sulfoxydes et de sulfones est représentée par les dernières étapes des schémas I, II et III. Par souci de simplicité, on emploiera par la suite la convention suivante - la lettre A désigne les composés selon l'invention sous forme de sulfoxydes et la lettre B sous forme de sulfones, - l'indice 1 se rapposteaux composés nitrosé côté soufre, en particulier la S-méthyl-N-nitrosoEN-(chloro-2 éthyl) N-carbamoyq cystéamine, et l'indice 2 aux composés nitrosés côté chlore, en particulier la S-méthyl N-0N- (chloro-2 éthyl) N-nitrosocarbamoyl] cystéamine. Les sulfoxydes (A1 et A2) et les sulfones (B1 et B2) obtenus, ainsi que les mélanges de ceux-ci, sont purifiés de façon classique par chromatographie, notamment par chromatographie liquide/liquide. Outre, les compost selon l'invention présentant une activité oncostatique, un autre objet de la présente invention concerne des compositions pharmaceutiques comportant à titre de principe actif au moins un desdits composés. De telles compositions seront avantageusement utilisées en chimiothérapie anticancéreuse. Compte-tenu du large spectre d'action des composés selon l'invention, les compositions pharmaceutiques les contenant, pourront être utilisées pour le traitement de tumeurs circulantes telles que les leucémies, ou de tumeurs solides telles que : mélanocarcinome, carcinome pulmonaire, carcinome du côlon, adénocarcinome mammaire, gliome, fibrosarcome par exemple. De telles compositions pourront être adminis trées par voie parentérale telle que par voie intraveineuse, ou bien par voie orale. Elles pourront se présenter sous forme de comprimés, de capsules, de solutions ou suspensions dans des milieux aqueux ou organiques non toxiques, sous forme de poudres dispersables ou de solutions ou suspensions dans des milieux aqueux ou organiques non toxiques injectables. Enfin, ces compositions seront administrées à des doses comprises entre 10 mg et 100 mg de principe actif/ jour. Pour chaque traitement, la dose sera déterminée en fonction du type de tumeur, de l'état du patient, de la toxicité du produit, entre autres. Les exemples ci-après permettront de mettre en évidence d'autres caractéristiques et avantages de la présente invention. EXEMPLE 1 Préparation du mélange S-méthyl N-[N-(chloro-2 ethyl)N-nitrosocarbamoyl)l cystéamine et de la S-méthyl N-[N-(chloro-2 éthyl)N-carbamoyl)] N-nitrosocystéamine (Schéma I) A - a) préparation de la S-méthyl-N-[N-(chloro-2 éthyl)N-carbamoyl] cystéamine : Un mélange équimoléculaire de 50 mM de S-méthyl- cystéamine et de chloro-éthyl-isocyanate dans 100 cm3 d'éther anhydre est agité pendant 12 h à température ambiante. Après 1 heure d'agitation la solution limpide se trouble. Après 12 h l'abondant précipité blanc est filtré et rincé par l'éther. Le produit obtenu peut être utilisé tel quel pour les réactions suivantes Rdt : 80 % F : 740C CCM : 5 % EtOH CHCl3 Silice Merck S1 60 F 254 Rf : 0,5 IR : (KBr) V. cm-1 : 3320 (NH), 2900 à 3000 (CH), 1630 1570, 1520 (NH-C # O) RMN (CDCL3) 6 ppm [2,06 s (3) CH3 S , 2,60 t {2) - S CH2CH2] [3,36 m (2) - S CH2CH2] , [3,4 à 3,6 m (4) NH CH2CH2Cl] [5,23 à 5,9 m (2) NH] b) Nitrosation de la S-méthyl-N-[N-(chloro-2 éthyl)N-carbamoyl] cystéamine : 40 mM de l'urée obtenue en a) sont solubilisées dans 100 cm3 d'un mélange acide formique-eau volume à volume (70/30). A la solution refroidie à OOC, on ajoute par petites portions en 1 heure 400 mM de nitrite de sodium en contrôlant la température. La solution est agitée 1 heure à 0 C après la fin de l'addition de NaNO2. On dilue le milieu réactionnel par 100 cm3 d'eau glacée puis extrait par le chloroforme (5fois 50 cm3) sèche rapidement puis concentre sous pression réduite. Le produit liquide peut soit être utilisé tel quel soit purifie des substances de dégradation (peu abondantes 3 à 4 %) par chromatographie liquide-liquide sur colonne de silice : eluant CH2C12. Le dosage des deux isomères effectué en HPLC donne les proportions 80/20, dérive NO côté chlore/dérivé NO côté chlore. Rdt : 90 % B - Ce mélange peut également être préparé selon le procédé ci-après a) S-Méthyl N-[N-(chloro-2 éthyl-N-carbamoyl] cystéamine (schéma I) Une solution de 1,82 g (20 mmoles) de S-méthylcys téamine dans 40 cm3 de dichlorométhane est agitée à 0 C et additionnee goutte à goutte de 1,71 ml (20 mmoles) de chloro2 éthylisocyanate, durant 15 minutes. On laisse ensuite le mélange revenir à la température ambiante. La réaction suivie par CCM est complète en 4 heures. La solution est alors évaporée à sec sous vide et la poudre obtenue est cristallisée dans un mélange de dichlorométhane-éther (V/V). On recueille 3,2 g (81 %) de S-méthyl N- rN- (chloro-2éthyl)-N-carbamoyll cystéamine. CCM : (éluant : chloroforme-méthanol 8,5/1,5) Rf = 0,5 - Detection vapeurs d'iode. F = 800C. Analyse : C6H13 S N2 O Cl (196,5) Calc. z : C 36,64 H 6,61 N 14,24 Tr. % : 36,41 6,84 14,30 Spectre de RMN H1 (DMSO d6)6p.p.m NE : (m) centré à 6,22 ; 2 H ; échangeable à D2O CL CL (m) centré à 3,56 ; 2 H CH2NH : (m) allant de 3,42 à 3,05 ; 4 H ; ce multiplet est modifié après échange des NH S-CH2 : (t) centré à 2,48 ; 2 H CH3 : (s) 2,04 ; 3 H b) Nitrosation de la S-méthyl N-[N-(chloro-2 éthyl) N-carbamoyl] cystéamine : Dans un bain d'eau glacée, on agite une solution de 1,47 g (7,5 mmoles) du composé obtenu en a) dans 15 cm3 d'acide formique. La nitrosation est ensuite effectuée en additionnant durant 30 minutes 1,55 g (22,5 mmoles) de nitrite de sodium.On laisse revenir le mélange réactionnel à la température ambiante et l'agitation est maintenue 1 heure. La solution jaune est ensuite additionnée de 70 cm3 d'eau glacée ce qui favorise le dépôt d'une gomme jaune dans le milieu. Cette gomme est extraite avec 2x 50 cm3 de dichlorométhane. Les phases organiques rassemblées sont lavées à l'eau distillée (2 x 10 cm3) puis séchées sur sulfate de sodium et évaporées à sec sous vide. L'huile jaune recueillie sera purifiée sur colonne de silice (Kieselgel 60, 70-230 mesh) en utilisant un mélange éluant constitué de dichlorométhane et d'éther de pétrole (V/V). On obtient 1,43 g du mélange isomérique de S-méthyl N-[N-(chloro-2 éthyl)N-nitrosocarbamoyl] cystéamine et de S-méthyl N-nitroso-N[N-(chloro-2 éthyl)N-carbamoyl] cystéamine. CCM (éluant = dichlorométhane) Rf = 0,4. Détection W et vapeurs d'iode. Analyse : C6H12 S N3 O 2C (225,5) Calc. % : C 31,92 H 5,32 N 18,62 Tr. % : 32,16 5,59 18,47 Spectre de RMN H1 (DMSO d6) # p p.p.m NH : (m) centré à 8,91 ; 1 H ; échangeable à D2O CH -N : (m) centré à 4,0 ; 2 H NO CH2-C1 ; CH-2 -NH : (m) allant de 3,85 à 3,36 ; 4 H ; une partie de ce multiplet est modifiée après échange du NH. S-CH : appartenant à la molécule nitrosée côté chlore (t) centré à 2,67 S-CH : appartenant à la molécule nitrosée côté soufre (t) centré à 2,48. Ces deux triplets de S-CH s'intègrent comme deux protons. Le rapport des intégrations relatives de ces deux protons donne des proportions de 25 % pour l'isomère nitrosé côte chlore et 75 % pour l'isomère nitrosé côté soufre. CH3 appartenant à la molécule nitrosée côté chlore : (s) 2,10. CH3 appartenant à la molécule nitrosée côté soufre : (s) 2,05. Ces deux singulets CH3 s'intègrent comme 3 protons dans les mêmes proportions que précédemment. EXEMPLE 2 N-[N-(chloro-2 éthyl)N-nitroso-carbamoyl] cystéamine (Schéma IV) Une solution de 1,15 g (15 mmoles) de cystéamine (Fluka) fralchement sublimee dans 90 cm3 de benzène anhydre est agitée à température ambiante, sous courant d'azote, et additionnée par petites fractions de 4 g(14,6 mmoles) de N-(chloro-2 ethyl)-N-nitrosocarbamate de para-nitrophénol. (l'addition s'effectue durant 1 heure). La réaction suivie par CCM est complète en 12 heures. Le mélange réactionnel est alors évaporé à sec sous pression réduite. L'huile jaune résiduelle est ensuite chromatrographiée sur colonne de silice sèche (Kieselgel 60, 70-230 mesh , Merck) avec le dichlorométhane comme éluant. On recueille 1,3 g de produit sous forme huileuse à température ambiante. Conservée au réfrigérateur et sous atmosphère d'azote, cette huile cristallise. C.C.M. (éluant : dichlorométhane) Rf = 0,30 Détection UV et vapeurs d'iode. Analyse : C5HloSN302Cl (211,5) Calc. % : C 28,36 H 4,72 N 19,85 Tr. % : 28,29 4,74 19,72 Spectre 1 R (film))cm-1 (NH) 3380 ; (CH2) 2980, 2940 ; (SH) 2580 ; (C = 0) 1720 (amide) 1525 ; (N-No) 1490. Spectre de RMN H1 (CDCl3)# p.p.m : NH : (m) centré à 7,36 ; 1 H ; échangeable à D2O CH2-N : (t) centré à 4,18 ; 2 H NO NH-CH2 et CH2C1 : (m) allant de 3,80 à 3,42 ; 4 H ; une partie de ce multiplet est modifiée après échange du NH S-CH : (m) centré à 2,83 ; 2 H ; ce-multiplet est modifié après échange du SH SH : (t) centré à 1,47 ; 1 H ; échangeable à D2O L'oxydation du composé par l'iode en solution méthanolique a fourni avec un rendement quantitatif le dimère dinitrosé côte chlore qui est l'isomère minoritaire de la CNCC : le Bis-N,N'-[N-(chloro-2 éthyl)-N-nitrosocarbamoyl]cystamine, composé déjà décrit par deux autres voies de synthèse (Brevet français n 79 15672-J. OIRY, JL. IMBACH). - "Nitrosoureas in Cancer Treatment", B. SERROU, P. SCHEIN and J.L. IMBACH, Eds., Elsevier/North Holland, New-York, J.L. IMBACH, J. MARTINEZ, J. OIRY, CH. BOURUT, E. CHENU, R. MARAL and G. MATHE, 1981, 123. - J. MARTINEZ, J.OIRY, J.L. IMBACH et F. WINTERNITZ, J. Med. Chem., 1982, 25, 178. EXEMPLE 3 S-acétyl N-[N-(chloro-2 éthyl)N-nitrosocarbamoyl]cystéamine (Schéma IV) Une solution de 1,060 g (5 mmoles) de N-[N-(chloro- 2 éthyl)N-nitrosocarbamoyl]cystéamine obtenu à l'exemple 2 dans 10 cm3 de pyridine fraîchement distillée est agitée à 0 C, sous courant d'azote et additionnée goutte à goutte de 0,71 cm3 (10 mmoles) de chlorure d'acétyle fraîchement distillé. Le milieu réactionnel est maintenu a 0 C durant 1 heure, puis on le laisse revenir à la température ambiante. La solution suivie par CCM est complète en 12 heures. La solution est alors versée sur 100 cm3 d'eau glacée, ce qui favorise le dépôt d'une gomme. Cette gomme est reprise 3 par du dichlorométhane 2 x 50 cm . Les phases organiques rassemblées sont ensuite lavées à l'eau distillée (4 x 50 cm3), séchées sur sulfate de sodium puis évaporées à sec sous vide. On recueille 1,250 g d'un produit huileux légèrement jaune. Cette huile sera purifiée par chromatographie sur colonne de silice (Kieselgel 60, 70-230 mesh , Merck) en utilisant le dichlorométhane comme éluant. Le dérivé S-acetylé est recueilli avec un rendement de 70 % soit 0,880 g. CCM (éluant : dichlorométhane) : Rf = 0,2 Détection UV et vapeurs d'iode. Cristallise dans un mélange de dichlorométhane et d'éther de pétrole (2/8). F = 62-64 C Analyse : C7H12SN303Cl (253,5) Calc. % : C 33,13 H 4,73 N 16,56 Tr. % : 33,26 4,70 16,46 Spectre I.R. (KBr) &gamma;.cm-1 (NH) 3360 ; (CH2) 3040, 2960 ; absence de bande (SH) à 2580 ; (C = O) 1720, 1675 ; (amide) 1520 ; (N-NO) 1480. Spectre de RMN H1 (CDCl3) S p.p.m NH : (m) centré à 7,27 ; 1 H ; échangeable à D2O CH -N : (t) centré à 4,19 ; 2 H NO NH-CH-2 : (m) centré à 3,70 ; 2 H ; ce multiplet est modifié après échange du NH CH-2Cl : (t) centré à 3,52 ; 2 H 5-CH-2 : (t) centré à 3,16 : 2 H EXEMPLE 4 S-para-nitrobenzoyl N- EN- (chloro-2 éthyl) N-nitrosocarbamoyl] cystéamine (Schéma IV) La méthode utilisée est identique à celle mise en oeuvre dans l'exemple 3. Dans ce cas le chlorure d'acétyle est remplacé par le chlorure de para-nitrobenzoyle. La purification du composé se fait également par chromatographie sur colonne de silice avec le dichlorométhane comme éluant. Rdt = 70 %. CCM (éluant : dichloromethane) : Rf = 0,3 Détection U.V. et vapeurs d'iode. Cristallise dans un mélange de dichlorométhane et d'éther de pétrole (2/8). F = 85-86 OC. Analyse : C12H13SN4O5Cl (360,5) Calc. % : C 39,94 H 3,60 N 15,53 Tr. % : 39,83 3,64 15,49 Spectre I.R. (KBr) &gamma;.cm-1 : (NH) 3400 ; (CH), (CH2) 3120, 3080, 3050, 2980, 2940, 2870 ; absence de bande (SH) à 2580 (C = O) 1720, 1650 ; (amide) 1515 ; (N-NO) 1480 Spectre de RMN H1 (CDCl3) S p.p.m H aromatiques : (m) centré à 8,20 ; 4 H NH : (m) centré à 7,28 ; 1 H ; échangeable à D2O CH2-N : (t) centré à 4,18 ; 2 H NO NH-CH : (m) centré à 3,83 ; 2 H ; ce multiplet est modifié après échange du NH CH2C1 et S-CH : (m) allant de 3,60 à 3,32 ; 4 H EXEMPLE 5 S-trityl-N-[N-(chloro-2 éthyl)N-nitrosocarbamoyl]-cystéamine La méthode utilisée est identique à celle utilisée dans l'exemple 2.Dans ce cas le produit de départ est la S-tritylcystéamine (préparée selon F.I. CARROL, H.M. DICKSON et M.E. WALL, J. Org. Chem., 1965, 30, 33) et le solvant utilisé est l'acétate d'éthyle. La purification du composé se fait par chromatographie sur colonne de silice en utilisant un mélange éluant constitué d'éther et d'éther de pétrole (1/9). Rdt = 68 %. CCM (éluant : acétate d'éthyle-éther de pétrole (1/4) Rf = 0,5 - Détection U.V. et vapeurs d'iode. Cristallise dans un mélange d'éther et d'éther de pétrole (1/4).F = 112-1130C Analyse : C24H24SN3O2Cl (453, 5) Calc. % : C 63,50 H 5,29 N 9,26 Tr. % : 63,86 5,27 9,38 Spectre I.R. (KBr) #cm-1 : (NH) 3340 ; (CH), (CH2) 3060, 3020, 2960, 2940 ; (C = O) 1720, 1690 ; (amide) 1520 ; (N-NO) 1490. spectre de RMN H1 (CDCl3) # p.p.m : H aromatiques : (m) centré à 7,30 : 15 H NH : (m) centré à 6,90 ; 1 H ; échangeable à D2O : (t) centré à 4,10 ; 2 H CH-2NH et CH-2Cl : (m) allant de 3,60 à 3,04 ; 4 H ; une partie de ce multiplet est modifiée après échange du NH S-CH : (t) centré à 2,51 ; 2 H EXEMPLE 6 préparation de la s-méthyl N-nitroso-N-ss-N-(chloro-2 éthyl) N-carbamoyl] cystéamine (Schéma II) Le carbamate est préparé par action du chloroformiate de para nitro phényle (100 mM) sur la S-méthyl cystéamine (100 mM) dans la pyridine à température ambiante. Après 12 h de réaction on jette sur glace, filtre le précipité obtenu, lave à l'eau glacée et sèche au dessicateur sous vide sur P2O5. Rdt 60 % La nitrosation est réalisée par le chlorure de nitrosyle dans la pyridine à - 200C selon les procédés décrits dans la littératurex. Après 4 heures de réaction à -200C le milieu est hydrolysé par l'eau glacée, extrait par le chloroforme, la phase organique traitée par l'acide chlorhydrique est séchée sur Mg SO4 puis distillée sous pression réduite. On obtient une huile utilisable pour la suite de la réaction. Rdt. 80 % * J. Martinez, J. Oiry, J.L. Imbach and F. Winternitz, J. Méd. Chem., 25, 178-182, 1982 A la solution de 20 mM de nitroso-carbamate dans 25 cm3 de DMF, on ajoute goutte à goutte une solution de chloro-2-éthylamine (40 mM) libérée de son chlorhydrate par la triéthylamine. On suit l'évolution de la réaction par CCM silice Merck Si 60 F 254, éluant CHCl3. Après 30 minutes la réaction est terminée. On distille le solvant sous pression réduite et dépose le résidu sur colonne de silice. L'élution est menée par le chloroforme ou le dichloromethane.Le produit du titre élué dans les fractions de tête est une huile Rdt = 70 % CCM Merck Si 60 F 254 éluant CHCl3 Rf : 0,40 IR : Fenêtre (KBr) v. cm 1 : 3350 (NH), 2900 à 3000 (CH), 1710 1520 (NH-C = O) , 1480 (N-NO) RMN CDC13dppm [2,10 s (3) CH3 S, 2,46 t (2) [3,66 à 3,83 m (4) NH CH2CH2 Cl] 7 à 7,60 m (1) NH CH2CH2C1 échangeable] EXEMPLE 7 S-éthyl N-[N-(chloro-2 éthyl)N-nitrosocarbamoyl] cystéamine (Schéma I II) Les carbamate et nitroso-carbamate correspondants sont préparés selon les procédés de la littérature (idem précédemment) et adaptés au cas du 4-nitrophénol. A la solution refroidie de 20 mM de nitrosocarbamate dans 30 cm3 de THF on ajoute goutte à goutte sous agitation 20 mM de S-méthyl cystéamine. L'agitation est maintenue pendant 1 heure à cette température. L'avancement de la réaction est contrôlée par CCM (Silice Merck Si 60 F 254 éluant CHC13). Après 1 heure la réaction est terminée. Le milieu réactionnel est concentré sous vide et déposé sur colonne de silice et élué par CH2C12 ou CHCl3 pour séparer le p-nitrophénol de la CNU (3). Le produit élué avec les fractions de tête est une huile, Rdt : 90 % CCM Merck Si 60 F 254 éluant CHCl3 Rf = 0,40 IR : KBr (v cm-1) : 3350 (NH), 2900 à 3000 (CH), 1715 1520 (NH - C = O) , 1480 (N - NO) RMN CDCl3 # ppm 2,13 s (3) CH3S, C2,73 t (2) S CH-2CH2NH], 3,43 m (2) 83,70 m (2) S CH2CH2NHJ ,L4,10 t (2 N CH-2CH2Cl] [7 à 7,50 m (1) S CH2CH2NH échangeable] NO La S-méthyl N-[N- (chloro-3-éthyl)N-nitrosocarbamoyl] cystéamine peut également être préparée de la façon suivante Une solution de 1,179 g de méthylthio-2 éthylamine ou S-méthylcystéamine à environ 90 % (Fluka) dans 50 cm3 de benzène anhydre est agitée à 200C, sous courant d'azote, et additionnée par petites fractions de 2,98 g (10,9 mmoles) de N- (chloro-2 éthyl)N-nitrosocarbamate de para-nitrophénol. (L'addition s'effectue durant 1 heure et la réaction est exothermique, le mélange réactionnel est maintenu à 200C dans un bain d'eau froide). La réaction suivie par CCM est complète en trois heures. La solution est alors évaporée à sec sous pression réduite et l'huile résiduelle obtenue est chromatographiée sur colonne de silice (Kieselgel 60, 70230 mesh , Merck) avec un mélange éluant constitué de dichlorométhane et d'éther de pétrole V-V. On recueille 1,85 g d'une huile jaune qui sera conservée sous azote au réfrigérateur. CCM (éluant : dichlorométhane) Rf = 0,40 - Détection UV et vapeurs d'iode. Analyse : C6H12SN302Cl (225,5) Calc. % : C 31,92 H 5,32 N 18,62 Tr. % : 32,04 5,27 18,49 Spectre IR (film) #.cm-1 (NH) 3360 ; (CH2) 2960, 2920, 2840 ; (C = O) 1720 ; (amide) 1520 ; (N-NO) 1490. Spectre de RMN H1 (CDCl3) # p.p.m : NH : (m) centré à 7,43 : 1 H ; échangeable à D2O (t) centré à 4,13 ; 2 H NH-CH2 : (m) centré à 3,67 ; 2 H ; ce multiplet est modifié après échange du NH CH2C1 : (t) centré à 3,47 ; 2 H S-CH2 : (t) centré à 2,73 ; 2 H CH3-S : (s) 2,10 ; 3 H EXEMPLE 8 Préparation des sulfoxydes du mélange de l'exemple 1 (Schéma I) A la solution dans l'acétone refroidie à 00C de 15 mM de mélange isomérique on ajoute 15 cm3 d'H2O2 à 110 v. On maintient I heure sous agitation et contrôle l'avancement de la réaction par CCM. Lorsque la réaction est terminée on dilue par H2O (30 cm3) extrait par le chloroforme, @èche, distille de solvant sous pression réduite. Le produit est déposé sur colonne de silice et chromatographie par un gradient d'éthanol dans le chloroforme de 0 à 2 %. On isole 7,5 mM de sulfoxyde (Al), 4 mM de mélange et t mM de sulfoxyde (A2). F : Al = 730C A2 = 1070C CCM Silice Merck Si 60 F 254 éluant EtOH/CHC13 5 % Rf Al = 0,30 Rf A2 = 0,25 IR : (KBr) v. cm-1 Al ; 3220 (NH), 2900-300 (CH), 1030 (S = O) A2 : 3220 (NH), 2900-3000 (CH), 1045 (S = O) RMN CDCl3 # ppm Al [2,60 s (3) CH3S] , [2,80 t (2) s [3,60 à 3,90 m (4) NG-CH-2CH-2Cl], [4,20 t (2) -SCH2CH N] [7,60 à 8 m (1) NHCH2CH2Cl échangeable] NO A2 [2,60 s (3) CH3S] , [3,00 t (2) S CH-2CH2NH] [3,40 t (2) [3,86 m (2) S CH2CH-2NH] 7,40 à 7,60 m (1) S-CH2CH2NH échangeable] Masse Al m/z : 136 [CH3-SO-CH2CH2N=N-OH]+; ; m/z : 105 107 [CO-N-CH2CH2CL]+ ,m/z : 92 [m/z 136-(N-NO)] + m/z : 78 [CH3S OH-CH2]+; m/z 64 [CH3S OH]+ A2 m/z : 134 [CH3SO CH2CH2NH-C ol O]@, m/z : 91 [CH3SOCH2CH2]#, m/z : 63.65 [CH2CH2Cl]+, m/z 64 : [CH3SOH] EXEMPLE 9 Préparation des sulfones du mélange de l'exemple 1 Le protocole expérimental est le même que le précédent pour les sulfoxydes en utilisant l'acide formique au lieu de l'acétone. 3 Pour 15 mM de mélange isomérique on utilise 20 cm d'acide formique et 20 cm3 d'eau oxygénée à 110 v. La séparation et l'extraction sont conduites de la même façon, l'élution est réalisée par un gradient éthanol dans le chloroforme de 0 à 1 %. On isole les mêmes quantités de composés purs et de mélange que dans l'expérimentation exemple 3. F : B1 : 72760C B2 : 94.970C CCM Silice Merck Si 60 F 254 eluant EtOH. CHCl3 5 % RF B1 : 0,55 RF B2 : 0,50 IR : (KBr)u cm 1 B1 : 3300(NH), 2900 à 3000 (CH), 1710 1520 (NHCO), , 1485 (N - NO), 1130 (O = S = o) B2 : 3350(NH), 2910 à 3000 (CH) 1715 1525 1420 (N - NO), 1125(0=S=0) RMN : CDC1 6 ppm B1 [2,93 s (3) CH3S] , [3,10 t (2) -S [3,66 à 3,90 m (4) HN CH-2CH-2Cl] , [4,20 m (2) [7,10 à 7,33 m (1) HN CH2CH2C1 échangeable] B2 3,60 s CH-3-S] , 3,26 à 3,66 m (4) 3,83 à 4,33 m (4} [7,33 à 7,66 m (1) S CH2CH2NH échangeablej Masse B1 m/z : 152 [CH3SO2CH2CH2 N=N-OH]+; m/z 105.107 [CO N CH2CH2Cl] + m/z : 108 [m/z 136 - (N-NO)] +; m/z [94 CH3SO2HCH2]+ m/z : 80 [CH3SO2H]+ B2 m/z : 150 [CH3SO2CH2CH2NH-C O]+, m/z : 107 [CH3SO2CH2CH2]+ m/z : 80 [CH2SO2H]+; m/z : 63,65 [CH2CH2Cl]+ EXEMPLE 10 En opérant comme decrit dans les exemples 8 et 9 à partir des composés issus des exemples 6 et 7 on obtient les sulfoxydes et les sulfones correspondant A1/A2/B1/B2 sous forme pure après chromatographie liquide/liquide. Les Rf en CCM, les points de fusion, les spectres IR, RMN et de masse sont parfaitement analogues à ceux obtenus après séparation des mélanges isomères. EXEMPLE 11 Activité antitumorale des composés chloroéthylnitrosourées non-oxydés selon l'invention L'activité oncostatique de ces dérivés nitrosés a été déterminée à 1'I.C.I.G. de VILLEJUIF (Service du Pr. MATHE), en suivant un protocole expérimental décrit M. HAYAT et Coll., Cancer Chemother. Pharmacol., 1979, 3, 217-221 R. MARAL et Coll., Eur. J. Med. Chem., soumis pour publication. a) Protocole expérimental Des.souris B,D,F /OLA, mâles, sont inoculées avec 10 cellules de la souche leucémique L1210 par voie intrapéritonéale au jour O et divisées en groupes. Le premier est le groupe témoin et les autres sont traités avec les drogues à différentes concentrations au jour 1,5 et 9. Les composés sont injectés en suspension dans l'huile d'olive. La mortalité des animaux est observée et l'autopsie indique si elle est due à la leucémie ou à l'action toxique des produits. La dose létale 50 % {DL50 aiguë) est déterminée en tenant compte de la mortalité survenue avant le 8ème jour chez les animaux traités au jour J:1. La médiane de survie des animaux traités (mT) et des animaux témoins (mC) a été établie et le test statistique non paramétrique de Wilcoxon a été utilisé. Les résultats sont considérés posi tifs si l'indice I (I = mT X 100) est supérieur à 125 et mC le test significatif à p 4 0,05. La valeur oe indique que 50 % ou plus des animaux sont survivants au jour + 60. b) Résultats Plus l'intervalle des doses à efficacité maximale, ayant donc I = =, est important, plus le produit est doué d'une activité intéressante sur la leucémie L1210. Nous constatons dans le tableau II que le mélangeiso métrique (8) constitué de S-méthyl N-EN-(chloro-2 éthyl)N nitrosocarbamoylj cystéamine (3) et de S-méthyl N-nitroso[N- chloro-2 éthyl)N-carbamoyl) cystëamine (4), bien que peu toxique, ne présente aucune activité. Ce mélange (3+4) étant constitué en majeure partie de NO côté soufre, l'orienta- tion de ce travail a donc été axée vers des molécules nitrosées côté chlore.Trois molécules paraissent très intéressantes : en effet, la N-[N-(chloro-2 éthyl-N-ni trosocarbamoyl:l cystéamine (1), la S-méthyl N-[N-(chloro-2 éthyl)N-nitroso carbamoyll cystéamine (3) et la S-acétyl N-[N-(chloro-2 éthyl) N-nitrosocarbamoyl] cystéamine (5), bien qu'ayant des DL50 allant de 19 à 25 mg/kg, présentent toutes des indices I à l'infini. De plus, ces trois composés sont susceptibles de conduire à 100 % de survie à 60 jours, à différentes doses. La S-trityl N-[N-chloro-2 éthyl) N-nitrosocarbamoyl] cystéamine (9) n'est pas toxique puisque sa DL50 est superieure à 625 mg/kg. I1 est toutefois prématuré de juger son activité car les résultats cités ne sont que partiels. TABLEAU II ACTIVITE ANTITUMORALE SUR LA LEUCEMIE L.1210 i.p. DE LA SOURIS DES COMPOSES NON OXYDES (SUR LE SOUFRE) SELON L'INVENTION @@@ @@ 2USE JOUPS I= % de SURVIVANTS DOMPOSES mg/kg mg/kg/i.p. t/cx100 à JOURS i.p. 15 +3 # 100 12,5 1,5,9 # 100 (1) 19 10 " # 100 ICIG 5 " # 100 2016 2 " 188 0,32 " 125 15 1,5,9 156 12,5 " # 87 (3) 22 5 " # 100 ICIG 2 " 158 0,8 " 167 ICIG 0,32 " 133 20 1,5,9 211 15 " 490 25 (5) 25 12,5 " # 80 10 " # 100 ICIG 5 " 217 14 2018 4 " 158 1,6 " 117 0,64 " 100 (8) 80 40 1,5 80 NS ICIG 16 " 100 NS 1327 (9) 625 1,5,9 278 ICIG 250 278 2069 +Résultats partiels NS : Non siçnificatif EXEMPLE 12 Activité antitumorale des dérivés sulfoxydes (A,LA2) et sulfones (B,LB2) des composés selon l'invention Cette activité a également été étudiée chez la souris porteuse de la leucémie L 1210 greffée i.p.Cette tumeur experimentale est la plus fréquemment utilisée dans le screening" primaire des drogues cytostatiques. Ces tests ont été menes parallèlement dans deux laboratoires : à l'Unite 71 de l'institut National de la Santé et de la Recherche Médicale (INSERM), Clermont Ferrand et à l'institut de Cancérologie et d'Immunogéne- tique (ICIG) Villejuif. L'efficacité antitumorale des produits selon l'invention a été comparée à celle de la CNCC. a) Protocole expérimental Au jour J : O, des souris mâles B6D2F1 âgées de trois mois reçoivent par voie intrapéritonéale 105 cellules de la souche leucémique L 1210. Les animaux sont répartis en lots de 8 à 10 animaux pour les groupes témoins et de 6 à 8 animaux pour les groupes traités. Aux jours J:1, J:5, J:9, les animaux reçoivent par voie intrapéritonéale ou intraveineuse le traitement à différentes doses. La CNCC est administrée en suspension dans l'huile d'olive. Les produits selon l'invention sont administrés dans du sérum physiologique. La mortalité est enregistrée tous les jours. La médiane de survie des animaux traités et des animaux témoins a été déterminée. Les résultats sont considérés comme positifs lorsque l'index I = médiane de survie des animaux traités x 100) est supérieur médiane de survie des animaux témoins à 125. La valeur X signifie que 50 % à 100 % des animaux sont survivants au jour J: 90. b) Résultats &alpha; - Expérimentation réalisée à 1'INSERM L'activite cytostatique sur la leucémie L 1210 des produits selon l'invention a été évaluée chez des souris B6D F /IFFA CREDO d'après le protocole précédem 6 2-1 ment décrit. Traitement par voie intrapéritonéale Ont été administrés par voie intrapéritonéale (i.p.) soit le mélange A1 A2 dans les proportions suivantes A1 (70 %) et A2 (30 %) soit le mélange B1 B2 dans les mêmes proportions soit la CNCC aux doses suivantes : 10 mg/kg, 20 mg/kg, 30 mg/kg, 40 mg/kg et 50 mg/kg. Les résultats sont présentés sur le Tableau II et appellent les commentaires suivants très bonne efficacité du mélange A1 A2 aux doses de 20 mg/kg, 30 mg/kg et 40 mg/kg et du mélange B1 B2 aux doses de 20 mg/kg, 30 30 mg/kg, 40 mg/kg et 50 mg/kg. Ces mélanges présentent un intervalle de dose à effica cité maximale (IDEM) comparable et même supé rieur pour le mélange B1 B2 à celui de la CNCC. De plus, le nombre de survivants à 90 jours est plus grand chez les animaux ayant reçu les produits selon l'invention par rapport aux animaux ayant reçu la CNCC. Traitement par voie intraveineuse Ont été administrés par voie intraveineuse (i.v.) dans la veine caudale, les mélanges A1 A2 etB1 B2 dans les proportions et aux doses utilisées dans a). La comparaison avec la CNCC pour cette voie d'administration est impossible en raison de l'insolubilité de ce composé dans les solvants autorisant l'administration par voie intraveineuse. Les résultats sont présentés sur le Tableau III Le mélange A1 A2 est très actif aux doses de 30 mg/kg et 40 mg/kg. L'IDEM du mélange B1 B2 est supérieur (30 mg/kg, 40 mg/kg et 50 mg/kg). ss - Expérimentation réalisée à ICIG L'activité cytostatique sur la leucémie L 1210 de A1 et A2 a été évaluée à 1'ICIG chez des souris B6D2F1/OLA. Le traitement des animaux par le mélange A1 A2 dans les proportions de l'A1 (70 %) et A2 (30 %) donne des resultats très comparables à ceux obtenus à l'Unité 71 de 1'INSERM (Tableau III). I1 a en outre été procédé à 1'ICIG à une étude de l'activité antitumorale sur la leucémie L 1210 de chaque isomère A1 etA2 administré séparément par voie intraveineuse. Les résultats sont rassemblés sur le tableau IV. On constate une faible activité de A1 et une forte activité de A2 avec présence d'un IDEM et l'obtention drun pourcentage élevé de souris survivantes au jour J: 100. La comparaison des doses actives à celles de la CNCC est impossible pour les raisons d'insolubilité de la CNCC énoncées précédemment. TABLEAU III ACTIVITE ANTITUMORALE SUR LA LEUCEMIE L 1210 GREFFEE i.p. CHEZ LA SOURIS DES MELANGES A1 A2 et B1 B2 VOIE D'ADMINIS- PROPORTIONS DOSE MG/KG TRATION DU MELANGE T/C X 100 10 20 30 40 50 A1 70 % 300(2/6) #(6/6) #(6/6) #(5/6) 295(0/6) A2 30 % i.p. B1 70 % 190(0/6) #(5/6) #(6/6) #(6/6) #(5/6) B2 30 % CNCC 250(0/6) #(6/6) #(6/6) #(3/6) 125(0/6) A1 70 % 170(0/6) 270(0/6) #(6/6) #(6/6) #(3/6) A2 30% i.v. 190(0/6) 230(0/6) #(6/6) #(6/6) #(5/6) B2 30 % Traitement J1 t J5 I 9 T/C = Médiane de survie des animaux traités x 100 Médiane de survie des animaux témoins = = 50 à 100 % des animaux survivants à 90 jours ( ) = Nombre de survivants à 90 jours TABLEAU IV ACTIVITE ANTITUMORALE SUR LA LEUCEMIE L 1210 GREFEE i.p. CHEZ LA SOURIS DE A1 ET A2 INJECTES SEPAREMENT VOIE D'ADMINIS- DOSE mg/kg PRODUTT TRATION T/C X 100 5 10 20 30 40 50 60 A1 100 100 133 133 158 158 Toxique i.v. 1 5 10 20 30 40 A2 100 # # 63 63 63 EXEMPLE 13 Essais de pharmacocinétique : La cinétique d'absorption et d'épuration plasmatique des produits selon l'invention A1 et A2 a été étudiée chez différentes espèces animales après administration orale. Pour pouvoir établir une comparaison avec la CNCC, un mélange A1 A2 dans les proportions 70 % - 30 % a été utilisé. Le mélange A1 A2 et la CNCC ont été administrés à doses équiva lentes et les concentrations plasmatiques en fonction du temps de A1 et A2 ont été mesurées. a) Protocole expérimental Le mélange A1 A2 dissous dans l'eau distillée est administré par sonde gastrique à la dose de 574 mg/m2. La CNCC en suspension dans l'huile d'olive est également admi nistrée par sonde gastrique à la dose de 500 mg/m2. a - Préparation des échantillons Le sang prélevé par ponction cardiaque est rapidement centrifugé à 40C. Le plasma (lml) est déposé sur une cartouche d'Extrelut #, l'extraction est effectuée avec 6 ml de dichlorométhane. Après évaporation, l'extrait sec est repris dans 150 pl de dichlorométhane pour l'analyse chromatographique. ss - Analy=e=c=hrgm=tgg=aphig=ue L'analyse des extraits plasmatiques pour la mesure des concentrations de A1 et A2 a été effectuée par chromatographie liquide haute performance selon la technologie suivante - Colonne (40 cm x 0,46 cm) Si 100 10 pm (Merck) - Détecteur : Spectrophotomètre Pye Unicam, (Philips) # 250 nm. - Débit : 2 ml/mn. - Elution réalisée par un gradient linéaire allant de dichlorométhane 99,6 % - Ethanol 0,4 % jus qu'à dichlorométhane 95 % - Ethanol 5 % en 15 mn - Temps de rétention : A1 18.7 mn A2 20 mn b) Résultats Sur le tableau V sont rapportées les concentrations plasmatiques de A1 et A2 après administration orale à la souris, au rat et au lapin soit du mélange A1 A2 soit de la CNCC. Quelle que soit l'espèce animale, les concentrations de A1 et A2 sont beaucoup plus élevées dans le cas de l'administration des produits selon l'invention A1 et A2 que dans le cas de l'administration de la CNCC. La mesure des aires sous les courbes confirme ces résultats. Ces données pharmacocinétiques préliminaires tendent à montrer que la concentration plasmatique du compose actif A2 (cf. Exemple 12) est nettement supérieure dans le cas de l'administration de A1 A2 que dans le cas de 1 'administration de la CNCC. I1 existe donc une biodisponibilité plus grande des produits selon l'invention A1 et A2 comparés à la CNCC. TABLEAU V COMPARAISON DES CONCENTRATIONS PLASMATIQUES DE A1 ET A2 APRES ADMINISTRATION P.O. DU MELANGE A1 ET A2 ET DE CNCC A DOSE EQUIVALENTE PRODUITS NMOLE ANIMAL 5 MN 15 MN 30 MN 45 MN 1 H 1 H 30 2 H 3 H 4 H 30 ADMINISTRES /ML A1 A2 A1 208.0 206.0 177.0 124.0 88.0 35.4 23.3 10.1 4.3 A2 83.0 81.5 66.3 43.7 29.9 10.8 6.3 2.9 0.9 SOURIS CNCC (n=10) A1 13.7 34.2 71.4 32.8 37.1 26.2 20.2 11.0 6.5 A2 5.3 13.2 35.7 16.5 19.0 12.7 9.9. 6.7 3.5 A1 A2 A1 22.3 42.4 52.9 33.9 32.9 29.2 15.7 7.3 A2 8.5 17.7 22.5 11.4 14.2 12.9 7.8 2.9 RATS (n=5) A1 2.8 8.0 12.0 14.8 18.4 20.3 12.7 11.1 3.9 CNCC A2 0.9 3.2 5.4 7.2 8.1 11.4 6.4 6.5 2.2 A1 A2 A1 26.7 28.5 41.0 39.2 39.4 27.0 19.4 10.6 3.8 LAPINS A2 11.0 11.7 16.5 15.0 14.2 9.2 6.3 2.9 0.7 (n=5) CNCC A1 5.0 9.4 10.6 10.0 8.6 7.4 4.7 2.8 A2 1.8 5.0 6.0 5.5 4.2 3.5 2.0 1.0 REVENDICATIONS 1. - Composé ae formule générale I: dans laquelle - X et Y sont définis individuellement par H ou -NO, l'un au moins étant un groupement -NO, - n est égal à 0,1 ou 2, - R est l'hydrogène, un radical. aliphatique, cycloali phatique, cycloaliphatique-alkyl, aryle ou aralcoyle, ou bien encore un groupement dans lequel R1 est un radical alkyleinférieur ou aryle, l'ensemble de ces radicaux étant éventuellement substitués. 2. - Composé de formule I: dans laquelle - X, Y et n possèdent les mêmes significations qu'indiqué à la revendication 1, - R étant l'hydrogène, un radical alkyle,aralcoyle ou bien un groupement dans lequel R1 est un radical alkyle, phényle ou phényle substitué. 3. - Composé de formule 4. - Composé de formule ou 5. - Mélange isomérique des composés selon la revendication 4. 6. - Composé selon l'une des revendications 1 ou 2, caractérisé en ce que R est (C6H5)3-C-. 7. - Composé selon l'une des revendications 1 ou 2, caractérisé en ce que R est le groupement dans lequel R est 8. - Procédé de préparation des composés selon la revendication 1, dans lesquels n est égal à O et R estH, un radical aliphatique, cycloaliphatique, cycloaliphatiquealkyl, aryleou aralcoyle, caractérisé en ce qu'on effectue une nitrosation du composé correspondant de formule R-S- (CH2) 2-NH-Ç-NH- (CH2) 2-Cl O par action d'un nitrite de métal alcalin ou alcalinoterreux, en particulier NO2Na, en présence d'acide organique tel que l'acide formique. 9. - Procédé de préparation des composés selon la revendication 1 dans lesquels n est égal à O et R est H, un radical aliphatique, cycloaliphatique, cycloaliphatiquealkyl, aryle aralcoyle, caractérisé en ce qu'on fait réagir H2N-(CH2)2-C1 sur dans lequel X1 est un groupe activant pour obtenir le dérivé nitrosé côté soufre ou R-S- (CH2) 2-NH2 sur dans lequel X2 est un groupe activant pour obtenir le dérivé nitrosé côté chbre. 10. - Procédé de préparation des composés selon la revendication 1 dans lesquels R est Un groupement et n est égal à O, caractérisé en ce qu'on effectue une thioestérification d'un composé de formule par un dérivé réactif de l'acide correspondant 11. - Procédé de préparation des composés de formule I dans lesquels n = 1 ou n = 2, caractérisé en ce qu'on effectue une oxydation ménagée ou complète des composés de formule I correspondants préparés selon l'une des revendications 8 à 10. 12. - Oxydation ménagée selon la revendication 11, caractérisée en ce qu'on soumet les composés de formule I préparés selon l'une des revendications 8 a 10, à l'action d'un peroxyde, tel que le peroxyde d'hydrogène, en présence d'acétone, de manière à obtenir les sulfoxydes correspondants (n= 1). 13. - Oxydation complète selon la revendication 11, caractérisée en ce qu'on soumet les composés de formule I préparés selon l'une des revendications 8 à 10, à l'action d'un peroxyde, tel que le peroxyde d'hydrogène, en présence d'acide formique de manière à obtenir les sulfones correspondants (n = 2). 14. - Composition pharmaceutique comportant à titre de principe actif au moins un des composés selon la revendication 1. 15. - Composition pharmaceutique selon la revendication 14, utile en chimiothérapie anti-cancéreuse.