Brevet FR2570715A1 — publié le 19860328

-12- La présente invention concerne un nouveau procédé de mise en oeuvre d'une réaction enzymatique ou microbienne, et plus particulièrement un procédé de mise en oeuvre d'une réac- tion enzymatique ou microbienne dans laquelle au moins deux substances entrent en jeu, qui comprend l'utilisation d'un bioréacteur qui est construit d'une manière telle que l'on place une enzyme ou un microbe dans un espace interne (un compartiment d'enzyme) défini par deux feuilles de matériaux poreux, tels que des membranes, qui ne permettent pas à l'en- zyme ou au microbe de passer librement au travers de celles-ci, et les substances participant à la réaction sont placées dans des espaces externes en contact avec les deux matériaux poreux, si bien que ces substances sont libres de passer au travers des matériaux poreux dans l'espace interne pour être ainsi soumises à la réaction dans le compartiment et les produits de réaction peuvent passer au travers des maté- riaux poreux dans les espaces à l'extérieur du compartiment, ce par quoi la réaction enzymatique ou microbienne ainsi que la séparation des produits de réaction peuvent être effec- tuées efficacement. Dans la plupart des réactions enzymatiques et micro- biennes, au moins deux substrats et en plus un activateur autre que lesdits substrats sont habituellement nécessaires pour mettre en oeuvre la réaction et il est rare que seulement une substance unique intervienne dans la réaction. De même, au moins deux produits de réaction sont habituellement formés et il est inhabituel que seulement un produit de réaction soit formé. En conséquence, il est courant qu'au moins deux substrats pour la réaction et au moins deux produits de réac- tion entrent en jeu dans la réaction enzymatique ou micro- bienne. Cependant, lorsque deux produits de réaction ou plus sont formés, il est nécessaire de séparer ces produits de réaction après la fin de la réaction pour obtenir les produits -2- recherchés. En outre, dans le cas d'une réaction faisant appel à deux substrats au moins, l'un d'eux peut parfois avoir un effet inhibiteur ou inactivant sur l'enzyme ou sur le microbe. Il est même parfois possible qu'un produit de réaction lui-même agisse en tant qu'inhibiteur. Ainsi, les réactions enzymatiques et microbiennes peuvent être effectuées plus efficacement si les quantités de ces inhibiteurs introduits dans le système réactionnel enzymatique ou microbien peuvent être contr8lées ou si de tels inhibiteurs peuvent être rapidement évacués du système réac- tionnel. En outre, il est possible de supprimer une étape de séparation des produits de réaction si l'on peut utiliser un réacteur qui serve aussi à séparer les produits de réaction. L'enzyme est généralement tellement coûteuse que sa réutili- sation est indispensable pour réduire le coût de la production. Par conséquent, il est très important pour un bioréacteur qu'une enzyme ou un microbe puissent être facilement retirés du système réactionnel pour réutilisation. Un bioréacteur capable de répondre à toutes ces exi- gences n'a pas encore été mis au point. Par exemple, bien qu'une enzyme ou un microbe puissent être séparés d'un système réactionnel par utilisation d'une enzyme ou d'un microbe immobilisés, ou que leur réutilisation soit possible, il est impossible de remplir les conditions requises pour la mise en oeuvre simultanée de la réaction et de la séparation et pour le contrôle de l'inhibiteur. Une tentative a été faite ces dernières années pour donner une fonction de sépara- tion de produits (pouvoir adsorbant) à un support immobilisé tel qu'une enzyme ou un microbe immobilisés. Cette méthode a toutefois divers inconvénients. Par exemple, lorsqu'une substance agissant en tant qu'inhibiteur ou inactivateur est requise pour la réaction, il est difficile par cette méthode de contrôler la quantité de la substance. Lorsque le pouvoir adsorbant du support doit être utilisé, une très grande quantité du support est nécessaire pour adsorber les -3- produits et cela représente un obstacle à l'application indus- trielle. Les auteurs de la présente invention ont étudié un réacteur à utiliser dans une réaction enzymatique ou micro- bienne et ils ont mis au point un réacteur capable de répondre aux exigences décrites ci-dessus. La présente invention fournit donc un procédé pour la mise en oeuvre d'une réaction enzymatique ou microbienne faisant intervenir au moins deux substances, qui est caracté- risé par le fait que l'on utilise,par paires,deux feuilles de matériauxporeux qui ne permettent pas à une enzyme ou à un microbe de passer au travers de celles-ci, on place dans un espace interne ménagé entre ces matériaux poreux une enzyme, un microbe, une enzyme immobilisée ou un microbe immobilisé, on place dans chacun des deux espaces externes ménagés à l'extérieur des matériaux poreux chacune des sub- stances participant à la réaction, et l'on permet à ces sub- stances de passer au travers des matériaux poreux dans l'espace interne pour entrer en réaction dans cet espace. Le processus réactionnel selon la présente invention est caractérisé par le fait que l'on utilise par paires deux feuilles de matériaux poreux, tels que des membranes, qui ne permettent pas à une enzyme ni à un microbe de passer librement aux travers de celles-ci, on place une enzyme ou un microbe dans un espace interne défini par les matériaux poreux, on permet aux substances intervenant dans la réaction de passer au travers des matériaux poreux dans l'espace interne pour subir une réaction enzymatique ou microbienne, et l'on permet aux produits de réaction de passer, après la réaction, au travers des matériaux poreux pour être retires du système réactionnel enzymatique ou microbien. La figure 1 représente schématiquement une réalisation d'un dispositif utilisé dans la présente invention; sur cette figure, 1 et 2 représentent des matériaux poreux, 3 et 5 représentent les compartiments contenant les corps en réaction, -4- 4 représente un compartiment contenant une enzyme et 6 repré- sente une enveloppe externe. La figure 2 représente schématiquement une réalisation d'un réacteur de type à membrane plane selon la présente invention. La figure 3 représente schématiquement une réalisation d'un réacteur de type tubulaire. La figure 4 représente schématiquement une réalisation d'un réacteur de type spiralé. On décrit la présente invention plus en détail en se référant aux dessins ci-annexés qui représentent des réali- sations préférées de la pr6sente invention. Une réaction de lipolyse utilisant une lipase est prise comme exemple de la réaction enzymatique qui peut être représentée par la formule: A + B -C + D (dans laquelle A et B sont les substances intervenant dans la r6action et C et D sont les produits; par exemple, dans la réaction utili- sant une lipase, A est une huile, B est l'eau, C est un acide gras et D est le glycérol). En se référant à la figure 1, une enzyme est placée dans un espace interne 4 (compartiment d'enzyme) défini par les matériaux poreux 1 et 2, un substrat A est placé dans un espace externe 3 (compartiment de corps en r6action) et un substrat B est placé dans un autre espace externe 5 (compartiment de corps en réaction). Les maté- riaux poreux 1 et 2 sont faits de telle manière que des enzymes ne peuvent pas passer au travers de ceux-ci, le substrat A est libre de traverser le matériau poreux 1 et le substrat B est libre de traverser le matériau poreux 2. Dans le réacteur de la figure 1, les substrats A et B placés dans les comparti- ments de corps en réaction respectifs 3 et 5 peuvent passer au travers des matériaux poreux respectifs dans le comparti- ment d'enzyme 4 o ils subissent une réaction enzymatique en présence de l'enzyme pour former les produits C et D. Un matériau poreux 1 préféré qui peut être utilisé est un matériau qui permet au substrat A de passer au travers de -5- celui-ci mais qui ne permet pas au substrat B de passer au- travers de celui-ci et qui ne permet qu'à un des produits de réactions C et D (par exemple le produit C) de passer au travers de celui-ci. Par contre, un matériau poreux 2 préféré est un matériau qui permet au substrat B de passer au travers de celui-ci mais qui ne permet pas au substrat A de passer au travers de celui-ci et qui permet seulement au produit de réaction D de passer au travers de celui-ci. Des matériaux poreux ayant de telles propriétés peuvent être obtenus en choisissant de façon adéquate la qualité et la taille des pores du matériau poreux. Dans la réaction utilisant une lipase, un matériau hydrophobe tel que du polypropylène ou du polyéthylène peut être utilisé en tant que matériau poreux qui permet seulement à l'huile en tant que substrat et à l'acide gras en tant que produit de réaction de passer au travers de celui-ci, et un matériau hydrophile tel qu'un matériau de cellulose (acétate de cellulose par exemple) ou un polymère d'acrylonitrile peut être utilisé en tant que matériau poreux qui permet seulement à l'eau et au gly- cérol de passer au travers de celui-ci. La taille des pores des matériaux poreux peut être telle qu'elle ne permette pas à l'enzyme ni au microbe de passer au travers de ceux-ci. Comme la taille de l'enzyme est considérée comme étant de l'ordre de quelques dizaines à quelques centaines de A(=10- 4 Pm) les matériaux poreux doivent avoir une taille de pores de cet ordre. Toutefois, dans certains cas, une taille de pores aussi petite n'est pas nécessaire, suivant les systèmes réac- tionnels. Par exemple, dans le cas de la lipolyse avec une lipase dans l'espace 4 défini par les matériaux poreux, une émulsion huile/eau se forme et l'enzyme s'attache à la surface des particules de l'émulsion. Par conséquent, les matériaux poreux peuvent avoir une taille de pores telle que l'émulsion ne puisse pas passer au travers de ceux-ci, et une taille de pores allant de 0,1 à quelques pm suffit à empêcher le passage de l'enzyme à travers les matériaux poreux. Lorsque l'on utilise -6- une enzyme ou un microbe immobilisés, il n'est pas nécessaire d'avoir des pores de petite taille. En conséquence, on peut choisir les matériaux poreux en fonction de l'objectif et de l'utilisation, sans restric- tion particulière en ce qui concerne la qualité ou la taille des pores, dans la mesure o ceux-ci peuvent satisfaire aux exigences ci-dessus. Une enzyme ou un microbe qui doivent être placés dans l'espace 4 défini par les matériaux poreux peuvent se trouver sous la forme d'une poudre ou d'une solution ou d'une suspen- sion dans un solvant qui n'inactive ni l'enzyme ni le microbe. Dans la mise en pratique de la présente invention, on préfère qu'une pièce d'écartement soit disposée à l'intérieur de l'espace 4 et que l'enzyme ou le microbe soit étalé ou déposé sur la pièce d'écartement pour permettre la répartition homo- gène de l'enzyme ou du microbe. Ou encore, on peut faire circuler dans l'espace 4 (le compartiment d'enzyme 4) une solution contenant l'enzyme ou le microbeau moyen d'une pompe comme on le décrit plus en détail ciaprès. La pièce d'écartement qui doit être placée à l'intérieur de l'espace 4 peut être utilisée sans restriction particulière concernant le matériau, la forme, etc. Par exemple, lorsqu'on utilise en tant que pièce d'écartement un matériau capable d'adsorber une enzyme, tel qu'une fibre échangeuse d'ion, l'enzyme peut être immobilisée sur celui-ci. En outre, on peut donner à la pièce d'écartement une fonction supplémentaire. Les substrats présents dans les compartiments de corps en réaction 3 et 5 diffusent dans le compartiment d'enzyme 4 par diffusion due à la concentration, et les produits de réaction diffusent à partir du compartiment d'enzyme 4 dans le compartiment des corps en réaction 3 ou 5 également par diffusion de concentration. Toutefois, lorsque la vitesse de diffusion due seulement à la diffusion de concentration est trop faible et qu'on ne peut pas obtenir une vitesse de réaction suffisante, on peut accélérer la diffusion en -7- appliquant dans chaque compartiment une force accélérant la diffusion, pression ou température par exemple. Ou encore, il est possible d'appliquer une force accélérant la diffusion en utilisant une différence de pression osmotique provoquée par l'addition dans chaque compartiment d'une troisième sub- stance qui n'interfère ni avec la réaction enzymatique ni avec la réaction microbienne et qui ne traverse pas non plus le matériau poreux. Le bioréacteur utilisé dans la présente invention peut être appliqué à diverses réactions enzymatiques et micro- biennes. Des exemples de telles réactions enzymatiques dans lesquelles au moins deux substances entrent en jeu comprennent l'hydrolyse avec une lipase déjà mentionnée, la synthèse de triglécrides avec une lipase, une réaction d'échange d'esters de triglycérides en présence de lipase, l'hydrolyse de phospo- lipides avec une phospholipase, une série de réactions avec une transférase telle que représentée par la phosphorolyse de polysaccharide en présence de phosphorylase, la synthèse de l'acide malique en utilisant de la fumarase, une série de réactions en présence d'une hydrolase, telle que phosphatase ou nucléotidase, et une série de réactions en présence d'une oxydoréductase telle qu'alcool-déshydrogénase ou amino-acide- oxydoréductase. En outre, le réacteur de la présente invention peut être appliqué à la plupart des réactions microbiennes, puisque de nombreuses substances en plus des substrats sont requises pour la croissance de microbes. Par exemple, l'acide glutamique peut être produit à partir d'un substrat constitué de glucose dans le procédé de fermentation d'acide glutamique utilisant une souche du micro-organisme Corynebacterium qlutamicum. Cependant, la biotine est requise pour la crois- sance de la souche et le rendement en acide glutamique varie en fonction de la quantité de biotine. Les r6actions micro- biennes requièrent fréquemment des vitamines telles que la biotine, des sels minéraux, des acides aminés, etc., en plus du substrat comme dans la réaction microbienne précitée, -8- et le réacteur de la présente invention peut être appliqué à la plupart des réactions microbiennes. Les enzymes et les microbes utilisés dans la présente invention ne sont pas toujours de type hautement purifié et ils peuvent se trouver sous la forme d'un extrait, d'un produit partiellement purifié ou d'une liqueur de fermenta- tion. Afin de mettre en oeuvre de façon efficace la réaction avec le bioréacteur de la présente invention, le bioréacteur est construit, comme il est indiqué sur la figure 2, de telle manière que sont ménagés plusieurs compartiments réactionnels dans lesquels chaque compartiment est formé par interposition d'un compartiment d'enzyme 7 entre les matériaux poreux 9 et 10, de telle manière que les matériaux poreux de même type se font face, un compartiment de corps en réaction 5 est formé entre les deux matériaux poreux 9 et 9, et un compar- timent de corps en réaction 6 est formé entre les deux autres matériaux poreux 10 et 10. Chacun des corps en réaction est introduit dans chacun des compartiments de corps en réaction 5 et 6, chacun au moyen des pompes 3a et 3b. Dans le réacteur de la figure 2, on peut aussi introduire une enzyme ou un microbe dans le compartiment d'enzyme 7 au moyen d'une pompe 3. Sur la figure 2, les numéros 1 et 2 représentent chacun un réservoir de corps en réaction, 4 représente un réservoir d'enzyme ou de microbe, et 8 représente une enveloppe externe. Ou encore, on peut placer l'enzyme ou le microbe sur une pièce d'écartement en disposant la pièce d'écartement à-l'inté- rieur du compartement enzymatique 7 et en étalant ou en dépo- sant l'enzyme ou le microbe sur celle-ci, comme on l'a décrit plus haut. Le réacteur utilisé dans la présente invention n'est pas limité à un type à membrane plane tel qu'indiqué sur les figures 1 et 2, mais il peut avoir une forme quelconque, par exemple celle d'un tube comme il est indiqué sur la figure 3, ou bien d'une spirale comme il est identiqué sur la figure 4. -9- Dans le réacteur rubulaire de la figure 3, un compartiment d'enzyme 4 est formé entre les matériaux poreux 1 et 2, un compartiment de corps en réaction 3 est ménagé entre la mem- brane tubulaire 1 constituée par le matériau poreux, un compar- timent de corps en réaction 5 est ménagé à l'extérieur de la membrane tubulaire 2 constituée par le matériau poreux, et 6 représente une enveloppe externe. Dans le réacteur spirale de la figure 4, une feuille intercalaire 2 sur laquelle est placée une enzyme est insérée dans l'espace formé entre les membranes 1 et 3 composées d'un matériau poreux pour former un compartiment d'enzyme. Les membranes 1 et 3 sont placées entre deux feuilles d'enveloppe externe 4 et 4 et elles sont enroulées en une forme spiralée. Un compartiment de corps en réaction est formé entre une enveloppe externe et la mem- brane 1, et un autre compartiment de corps en réaction est formé entre l'autre enveloppe externe et la membrane 3. Une des caractéristiques de la présente invention est qu'une enzyme ou un microbe peuvent être facilement reti- rés du système réactionnel, comme dans le cas d'une enzyme immobilisée, et que l'enzyme ou le microbe ne sont pas immo- bilisés sur les matériaux poreux, si bien qu'il est possible d'échanger seulement l'enzyme ou le microbe lorsqu'ils ont perdu leur activité, sans avoir à changer les matériaux poreux. Les matériaux poreux qui sont coûteux peuvent ainsi être conservés. En outre, lorsque des inhibiteurs interviennent dans la réaction enzymatique ou microbienne, on peut contrôler les quantités de ces inhibiteurs à ajouter au système réac- tionnel en choisissant les matériaux constituant les membranes ou en choisissant la taille de leurs pores. Lorsqu'un produit de réaction agit en tant qu'inhibiteur, le produit de réaction peut être rapidement retiré du système réactionnel. Il en résulte que l'on peut empêcher l'inactivation de l'enzyme ou du microbe qui peuvent être réutilisés. Par exemple, dans le cas de la lipolyse avec une lipase, l'eau en tant que substrat agit en tant que facteur d'inactivation de la lipase. -10- Par conséquent, lorsque la quantité d'eau augmente de façon excessive, l'enzyme est considérablement inactivée. Lorsque l'on peut contr8ler la quantité d'eau passant au travers du matériau poreux, on peut n'introduire dans le système réactionnel que la quantité d'eau requise et on peut éviter l'inactivation de la lipase. Comme on l'a décrit plus haut, les quantités de substrats et de produits de réaction dans un système de réactions enzy- matiques de la présente invention sont fréquemment plus élevées que celles présentes dans des réactions enzymatiques classiques. En outre, la concentration d'enzyme dans le système réactionnel est généralement plus élevée que dans les systèmes classiques. Ainsi, l'environnement de l'enzyme dans le système réactionnel selon la présente invention est différent de ceux existant dans des systèmes classiques, ce qui peut être source de divers avantages. Par exemple, la réaction lipolytique utili- sant une lipase citée précédemment a eu comme résultat une augmentation de la stabilité thermique de l'enzyme. C'est-à-dire que l'utilisation du réacteur de la présente invention permet d'effectuer la réaction lipolytique avec une lipase instable à la chaleur, à une température de 40 à 60 C, avec peu d'inac- tivation, bien que cette lipase soit considérée comme étant inadéquate pour l'hydrolyse d'huile ayant un point de fusion élevé comme le suif de boeuf, car elle est normalement instable à la chaleur et devrait être utilisée à une température infé- rieure à 40 C. En conséquence, le procédé de la présente invention modifie parfois les propriétés de l'enzyme elle- même telles que stabilité thermique ou valeur optimale du pH, en fonction des conditions du système réactionnel. Une autre caractéristique de la présente invention consiste dans le fait que la réaction et la séparation de produits de réaction peuvent être effectuées simultanément. Par exemple, la réaction et la séparation d'acides gras et de glycérol formés en tant que produits de réaction peuvent être effectuées simultanément dans le cas de la lipolyse avec -11 - une lipase. La vitesse de réaction dans le bioréacteur de l'inven- tion dépend largement de la vitesse de transfert d'un corps en:: réaction à travers la membrane poreuse du réacteur et de la superficie de la membrane. Il est par conséquent impor- tant de choisir un matériau poreux permettant aux substrats de passer à travers celui-ci à une vitesse élevée afin d'aug- menter la vitesse de réaction. En outre, comme la vitesse de réaction dépend largement de la superficie des membranes, le temps de réaction peut être considérablement diminué en augmentant la superficie. Comme on l'a décrit plus haut, le bioréacteur de la présente invention fournit un procédé d'immobilisation macro- scopique d'une enzyme ou d'un microbe entre les matériaux poreux, dans lequel l'enzyme ou le microbe peuvent être faci- lement retirés du système réactionnel. En outre, il rend possible la réutilisation de l'enzyme ou du microbe et l'inhi- bition de l'inactivation de ceux-ci, ainsi que la réaction et la séparation simultanées des produits de réactions. Le bioréacteur de la présente invention fournit donc un procédé de réaction tout-à-fait nouveau présentant divers avantages que n'offrent pas les procédés classiques qui utilisent une enzyme immobilisée. En conséquence, le procédé de la présente invention est très utile du point de vue industriel. La présente invention est illustrée par les exemples descriptifs et non limitatifs ci-après. Exemple 1 On a préparé 10 feuilles de membranes poreuses (ultra- filtre ayant un poids moléculaire de fractionnement de 20 000) composées de polyacrylonitrile ayant une surface de 0,02 m2, et 10 feuilles de membranes poreuses (taille des pores: 0,1 pm) composées de Téflony (désignation commerciale d'une résine fluorée). On a mis en suspension dans une petite quantité d'huile de soja 2 g d'une enzyme lipolytique, une lipase dont l'activité était de 320 000 U/g. Sur une feuille inter- -12- calaire à placer entre les deux membranes a été déposé environ 1/10 de la suspension par feuille intercalaire, et la feuille intercalaire a été placée entre les deux membranes, fournis- sant ainsi un réacteur de type membrane plane tel que repré- senté sur la figure 2. Dans le procédé de cet exemple- l'enzyme est placée sur la feuille intercalaire en déposant la solution d'enzyme sur celle-ci, tandis que la solution d'enzyme circule au moyen d'une pompe dans le procédé représenté sur la figure 2. On a fait circuler 400 g d'huile de soja et 400 g d'eau de telle manière que l'huile de soja a été mise en contact avec la membrane de Teflon et l'eau a été mise en contact avec la membrane de polyacrylonitrile. La température a été maintenue à 30 C dans une bain à température constante pour hydrolyser l'huile de soja en présence de la lipase. Au bout de 24 heures, le taux d'hydrolyse de l'huile de soja était de 70%, et la concentration du glycérol dans l'eau était de 7%. La teneur en glycérol de l'huile et la teneur en acide gras de l'eau étaientchacune de 0,1% ou moins. D'après les résultats ci-dessus, il est évident que l'huile de soja et l'eau peuvent passer à travers les membranes poreuses dans le compartiment central contenant l'enzyme o elles entrent en réaction, et qu'après la réaction les acides gras peuvent traverser la membrane poreuse et diffuser dans le compartiment contenant l'huile, tandis que le glycérol peut passer au travers de la membrane poreuse et diffuser dans le compartiment contenant l'eau. De cette façon, la réaction et la séparation des produits de réaction peuvent être effectuées simultanément. Exemple 2 L'enzyme utilisée dans l'exemple 1 a été laissée telle quelle dans le réacteur et la solution d'acides gras et une solution aqueuse de glycérol ont été évacuées après la réaction de l'exemple 1. 400 g de nouvelle huile de soja et 400 g de nouvelle eau ont été introduits dans le réacteur d'une façon semblable à celle décrite dans l'exemple 1. Au bout de 24 heures, -13- le taux d'hydrolyse de l'huile de soja était de 70%, le même que dans l'exemple 1. Après quoi, l'enzyme a été laissée telle quelle dans le réacteur et 400 g de nouvelle huile de soja et 400 g de nouvelle eau ont été introduits dans le réacteur. Au bout de 24 heures, la troisième expérience a montré que le taux d'hydrolyse de l'huile de soja était de 70%. En conséquence, aucune inactivation de l'enzyme ne s'est manifestée dans le bioréacteur de la présente invention. La réaction a été effectuée de façon efficace en lais- sant l'enzyme telle quelle dans le réacteur, en évacuant seulement les solutions après la réaction et en introduisant de l'huile et de l'eau nouvelles. Il est clair qu'une étapedeséparation de l'enzyme hors du système est inutile. Exemple 3 On a effectué cette expérience dans les mêmes conditions que celles de l'exemple 1, mis à part que l'on a utilisé en tant que membranes poreuses à mettre en contact avec l'huile 10 feuilles de chlorure de polyvinyle (superficie: 0,02 m2, taille des pores: 2,5 pm). Les membranes poreuses qui devaient entrer en contact avec l'eau étaient des membranes de poly- acrylonitrile comme dans l'exemple 1. Dans des conditions semblables à celles de l'exemple 1, 400 g d'huile de soja et 400 g d'eau ont été introduits dans le réacteur par circu- lation pour effectuer la lipolyse. Lorsque les membranes de chlorure de polyvinyle ont été utilisées, on a constaté la diffusion d'eau dans le compartiment de l'huile et on a par conséquent soumis le côté des compartiments d'huile à une différence de pression d'environ 0,03 kg/cm2 pour empê- cher l'eau de diffuser dans le compartiment de l'huile. Au bout de 24 heures, le taux d'hydrolyse de l'huile de soja était de 80% et la concentration du glycérol dans l'eau était de 8,1%. Après 48 heures, le taux de l'hydrolyse de l'huile de soja était de 90% et la concentration du glycérol -14- dans l'eau étaitde9%. On a constaté que la vitesse de la réaction variait en fonction du matériau constituant la membrane et de la taille de ses pores, en comparant les résultats avec ceux de l'exemple 1. Exemple 4 On a utilisé les mêmes membranes poreuses que celles de l'exemple 1, mis à part que le nombre des membranes était égal à 5. On a introduit dans leréacteur 400 g d'huile de soja et 400 g d'eau. Au bout de 24 heures, le taux d'hydrolyse de l'huile de soja était de 44%. On a donc constaté que la vitesse de réaction dépendait dans une large mesure de la superficie de la membrane. Exemple 5 On a préparé 5 feuilles de membranes d'acétate de cellulose (membranes d'osmose inverse ayant un taux d'élimina- tion de sel ordinaire de 10%) ayant une surface de 0,02 m2, et 5 feuilles de membranes poreuses (taille des pores: 0,1 pm). Ces membranes ont été placées de la manière indiquée sur la figure 2 pour former ainsi une structure poreuse. A l'aide d'une pompe, on a fait circuler entre les membranes d'acétate de cellulose et de polyéthylène une suspension d'enzyme compre- nant 2,4 g de lipase et 300 g d'huile de soja, tout en faisant circuler à l'aide d'une pompe 300 g d'huile de soja et 300 g d'eau d'une manière telle que l'huile et l'eau ont été mises en contact respectivement avec la membrane de polyéthylène et avec la membrane d'acétate de cellulose. Le système réac- tionnel a été maintenu à 500C dans un récipient à température constante pour hydrolyser l'huile de soja avec la lipase. Au bout de 48 heures, le taux de l'hydrolyse de l'huile de soja était de 92%. On a ensuite évacué la solution d'acides gras et la solution aqueuse de glycérol tout en laissant l'enzyme telle quelle et on a introduit dans le réacteur, de la façon décrite plus haut, 300 g de nouvelle huile de soja et autant d'eau. Après 48 heures, le taux de l'hydrolyse -15- de l'huile de soja était de 92%. On a ensuite introduit dans le réacteur 300 g de nouvelle huile de soja et autant d'eau supplémentaires tout en laissant l'enzyme telle quelle. Comme résultat de la troisième réaction, on a obtenu le même taux d'hydrolyse de l'huile de soja après 48 heures (à savoir 92%). Le réacteur de la présente invention a donc rendu pos- sible la récupération du produit et la réutilisation de l'en- zyme tout en maintenant l'activité enzymatique à haute température (à savoir 50 C) sans alteration:- des propriétés de l'enzyme elle-même ni traitement préalable de celle-ci, tel qu'immobilisation. Exemple comparatif On a suivi le mode opératoire de l'exemple 5, mis à part que le substrat (à savoir l'huile de soja), l'eau et la lipase ont été mélangés sous agitation sans utiliser le réacteur à membrane pour réutiliser ainsi l'enzyme. 300 g d'huile de soja, 300 g d'eau et 2,4 g de l'enzyme ont été mélangés sous agitation à 50 C comme dans l'exemple 5. Le taux de l'hydrolyse de l'huile de soja était de 92% après 48 heures. Au bout de 48 heures, on a centrifugé le mélange réactionnel à 8 000 tours/minute pendant 5 minutes à 50 C. Le mélange réactionnel a été ainsi séparé en trois couches, c'est-à-dire une couche d'huile (supérieure), une couche d'émulsion (intermédiaire) et une couche aqueuse (inférieure). Environ 90% de l'enzyme était répartie dans la couche d'émul- sion alors que les 10% restants de celle-ci se trouvaient dans la phase aqueuse. On a ensuite introduit la couche d'émul- sion dans la réaction enzymatique subséquente tout en soumettant la phase aqueuse à une ultrafiltration pour récupérer par ce moyen l'enzyme contenue dans celle-ci. A savoir, la phase aqueuse a été soumise à une ultrafiltration à travers une membrane de polyacrylonitrile ayant un pouvoir de fraction- nement de 20 000 en poids moléculaire, à 9,81 x 104 Pa (1 kg/cm2). L'enzyme restant dans la memb rane a été ensuite recueillie et réutilisée dans la réaction enzymatique subséquente. -1 6- La solution concentrée d'enzyme ainsi récupérée à partir de la couche d'émulsion et de- la membrane a été ensuite ajoutée à 300 g d'huile de soja et autant d'eau et mise sous agitation pendant 48 heures à 50 C comme pour la première réaction. Dans la seconde réaction, le taux de l'hydrolyse de l'huile de soja était de 45%. On a récupéré l'enzyme par la même technique de séparation et on l'a soumise à la troisième réaction. Dans la troisième réaction, le taux de l'hydrolyse de l'huile de soja était de 6%. L'activité de l'enzyme a donc considérablement diminué dans le procédé dans lequel la lipase a été mélangée avec une huile et de l'eau sous agitation sans aucun réacteur à membrane, à une température élevée (50 C), à mesure que le nombre des réactions augmentait, si bien qu'il a été impossible de réutiliser l'enzyme. Exemple 6 On a suivi le mode opératoire de l'exemple 5, mis à part que l'on a remplacé l'huile de soja par du suif de boeuf qui était solide à la température ambiante. Après avoir effectué la réaction à 50 C pendant 48 heures, le taux de l'hydrolyse du suif de boeuf était de 90%. La seconde et la troisième réaction. ont donné également, après 48 heures, un taux d'hydrolyse de 90% chacune. Les graisses solides telles que du suif de boeuf peuvent donc être hydrolysées avec peu d'inactivation en utilisant le réacteur de la présente invention. -1 7- REVENDICATIONS 1. Procédé pour effectuer une réaction enzymatique ou microbienne entre au moins deux substances devant réagir, carac- térisé en ce qu'il comprend les étapes consistant à poacer une enzyme, un microbe, une enzyme immobilisée ou un microbe immobilisé dans un espace interne ménagé entre deux feuilles de matériaux poreux qui ne permettent pas à l'enzyme ni au microbe de passer, à placer les substances dans les deux espaces externes ménagés respectivement à l'extérieur des deux feuilles, à permettre à chacune des substances de passer au travers d'une feuille pour effectuer la réaction enzymatique ou microbienne dans l'espace interne, et à permettre à chaque produit de réaction de passer à l'extérieur à travers une feuille. 2. Procédé selon la revendication 1, caractérisé en ce qu'une des feuilles permet facilement seulement à l'une des substances et seulement à un des produits de réaction de passer au travers de celle-ci, et l'autre permet facilement à l'autre substance et à l'autre produit de réaction de passer au travers de celle-ci. 3. Procédé selon la revendication 1 ou 2, caractérisé en ce que plusieurs paires de deux feuilles sont fournies et alignées de telle manière que deux feuilles du même matériau poreux se font face. 4. Procédé selon l'une auelconque des revendications 1 à 3, ca caractérisé par le fait que l'on effectue l'hydrolyse d'huiles et de graisses en utilisant de l'eau et de l'huile en tant que substances devant réagir et une lipase en tant qu'enzyme.