Brevet FR2568124A1 — publié le 19860131

La présente invention concerne un médicament pour traiter les états hypotrophiques et notamment des retards de croissance dus chez l'enfant à un déficit sécrétoire partiel en hormone de croissance par des administrations réitérées d'aspartate d'arginine. L'aspartate d'arginine est un produit connu que l'on a décrit en FRANCE dans les brevets spéciaux de médicaments nO 1625 M et 106 CAM les 15.09.1961 et 21.12.1964. Ce produit est le sel résultant de la réaction en quantités équimoléculaires de l'acide L-aspartique sur la L-arginine. On a également décrit dans ces mêmes documents des effets physiologiques et un mode d'action probable de ce produit qui le fait utiliser en thérapeutique dans . les états hyperammoniémiques, . l'asthénie psychique et physique, . les états d'involution de l'activité et la sénilité. Jusqu'ici les variations des taux hormonaux induites par l'administration de sels d'arginine n'avaient pu être obtenues que par la voie intraveineuse et les résultats étaient inconstants. Il n'existait en outre que peu d'information sur les effets de l'administration chronique d'arginine et son action sur la sécrétion d'hormone de croissance. I1 vient d'être démontré maintenant que l'aspartate d'arginine utilisé par voie orale et selon des règles de prescription très précises augmente de façon importante la vitesse de croissance de l'enfant ou de l'adolescent retardé. Le traitement concerne principalement les enfants ou les adolescents avec . un retard statural inférieur à -2,5 un retard de maturation osseuse (âge osseux inférieur ou égal a l'âge statural) un ralentissement de la vitesse de croissance (VC inférieur à 4 cm par an) . des pics maxima de STH compris entre 5 et 10 ng/ml obtenus lors de 2 tests de stimulation pharmacologique " insu line-arginine" et glucagon-propanolol" RESULTATS TOXICOLOGIQUES L'administration par voie orale de différentes doses uniques d'aspartate d'arginine à des rats Sprague Dawley ou à des souris Swiss a montré que les doses létales à 50 % (DL 50) sont chez l'une ou l'autre des deux espèces supérieures à 20 g/kg de poids corporel. Par voie intrapéritonéale, les DL 50 chez le rat et la souris sont respectivement de ESPECE : DL 50 (g/kg) (95 % limites de confiance) Souris : 9.637 (9.381 - 9.90) Rat : 8.530 (8.178 - 8.896) L'étude de la toxicité subaiguë a été réalisée par voie orale chez le rat aux doses quotidiennes de 1, 2.5 et 5 g/kg durant 4 semaines. Aucune perturbation dans les bilans biochimique ou hématologique n'a été observée. L'étude anatomopathologique des principaux organes n'a pas révélé de lésions d'origine toxique. L'étude de la toxicité chronique a été réalisée chez le chien beagle. L'administration de l'aspartate d'arginine a été effectuée par voie orale aux doses quotidiennes de 1, 5 et 10 g/kg durant 6 mois. L'aspartate d'arginine administré à la dose de 10 g/kg provoque la mort de 2 animaux en quelques semaines. Cette dose a été ramenée à 7.5 g/kg/j. Après cette modification un mort avencore été enregistré. Aux 2 fortes doses une nette augmentation de la fréquence des diarrhées et la présence d'un ptyalisme important ont été observées. Aucune perturbation biologique et aucune lésion anatomopathologique n'ont été enregistrées, seule une légère tendance à l'hyperglycémie a été trouvée aux fortes doses. Une épreuve de réversibilité a montré que les symptomatologies clinique et biologique disparaissaient dès l'arrêt du traitement et qu'aucun signe de toxicité différée ne se manifestait.Sur une période de 6 mois la limite d'innocuité chez le chien beagle se situe entre 1 et 5 g/kg/j. RESULTATS PHARMACOLOGIOUES Pharmacologie animale L'aspartate d'arginine, administré chez le rat mâle Wistar EOPS à la dose de 100 mg/kg par voie orale, entraîne des diminutions significatives du taux plasmatique d'hormone de croissance. Ainsi, alors que le taux normal est de 104.8 ng/ml, il passe à 66.9, 59.2 et 44.6 ng/ml respectivement 45, 60 et 75 min après l'administration d'aspartate d'arginine. te taux hormone de croissance au bout de 75 min. n'est plus égal qu'è 42.6 % de la valeur normale.Le rat, comme tous les rongeurs, réagissant en sens inverse de l'homme, cette diminution significative de l'hormone de croissance est en accord avec l'augmentation du taux de cette hormone observée chez l'homme. Les résultats obtenus in vivo chez le rat ont été confirmés par l'étude de l'action directe de l'aspartate d'arginine sur des cellules d'adénomes hypophysaires GH3 de r@ts. On observe là aussi, une inhibition de la sécrétion d'hormone de cxoissance sous l'effer de l'aspartate d'arginine (cf. tableau 1). CULTURES DE GH3 10-7 M 10-9 M 10-7 M 10-9 M 10-9 M CONTROLE Arginine base Arginine base Aspartate arginine Aspartate arginine Acide aspartique (ng) (ng) (ng) (ng) (ng) (ng) 596 # 56 419 # 35 365 # 14 402 # 26 478 # 49 649 # 100 t = 5,17 t = 6 t = 5,49 t = 2,82 t = 1,63 n = 9 n = 7 n = 8 n = 9 n = 8 0,001 > 2 p 0,001 > 2 p 0,001 > 2p 0,02 > 2p > 0,01 0,2 > 2p > 0, On mesure le nombre de ng d'homone de croissance de rat/mg protéine/24 heures TABLEAU 1 Dans un autre modèle de croissance ne mettant pas en oeuvre la STH, nous avons pu démontrer que l'acide aspartique conduisait à une augmentation significative de l'incorporation du 35 dans les cartilages d'embryon de poulet alors que l'arginine dans ce modèle a conduit à une augmentation non significative (cf tableau 2). CARTILAGE INCORPORATION DE 35SOUFRE 10-7 M 10-9 M 10-7 M 10-9 M CONTROLE Arginine base Arginine base Acide aspartique Acide aspartique (cpm) (cpm) (cpm) (cpm) (cpm) 62520 # 9758 67792#9817 63346 # 10341 72179 # 7382 67515 # 7033 t = 1,35 t = 1,30 t = 2,41 t = 1,37 n = 17 n = 18 n = 17 n = 17 0,2 > 2 p > 0,1 0,3 > 2 p > 0,2 0,05 > 2p > 0.025 0,2 > 2p > 0,1 TABLEAU 2 L'effet anabolisant a été vérifié en étudiant l'évolution des courbes pondérales de rats âgés pesant au moins 450 g et pour lesquels l'administration de 250 mg/kg/j d'aspartate d'arginine pendant 30 jours a entraîné une augmentation significative des poids corporels par rapport aux poids des animaux témoins recevant du serum physiologique. Une etude pharmacocinétique par voie orale et intraveineuse à la dose de 0,1 mmole/animal chez le rat a permis de mettre en évidence une augmentation très significative des deux acides aminés libres dans le plasma, le cerveau, le foie et les testicules. Pharmacologie clinique L'administration d'aspartate d'arginine, par voie orale, à la dose unique de 250 mg/kg à 5 hommes et 7 femmes, volontaires saine, entralne des variations significatives des sécrétions de STH, d'insuline et et de glucagon. En revanche, l'administration dans les mimes conditions expérimentales de NaCl 9 /00 ne provoque aucune modification hormonale. L'absorption d'asparate d'arginine accroît les taux sanguins de STH environ dans les 150 à 180 minutes qui suivent et cette élévation est plus significative ches les femmes. Il en est de même pour les sécrétions d'insuline et de glucagon qui augmentent quel que soit le seuil, mais de façon plus précoce (à partir de 15 minutes pour l'insuline et de 30 à 60 minutes pour le glucagon). Lorsqu'il est administré par voie orale, même à faible dose, l'aspartate d'arginine induit donc une secrétion de STH, d'insuline et de glucagon comme peut le faire une perfusion intraveineuse d'arginine. L'influence du sexe est également retrouvée avec un rôle favorisant joué par les oestrogènes. La dose unique de 250 mg/kg a été choisie chez l'homme en raison des doses précédemment administrées aux animaux. Il est apparu ensuite que l'effet thérapeutique réclamait pour se manifester des posologies supérieures, de l'ordre de 500 mg/kg, plus en accord avec les doses d'arginine utilisées traditionnellement dans les explorations de la capacité sécrétoire en STH de l'hypophyse. RESULTATS THERAPEUTIQUES Ils portent sur 10 enfants présentant un retard de croissance dû à un déficit somatotrope partiel et répondant à l'ensemble des critères définis plus haut. Ces 10 enfants ont reçu pendant 3 mois chaque jour une dose unique d'aspartate d'arginine d'environ 500 mg/kg le soir au coucher. La surveillance clinique consiste à apprécier la vitesse de croissance en centimètres (3 mois avant traitement et après 3 mois d'administration du produit) à å apprécier l'âge osseux aux mimes échéances La surveillance biologique consiste à mesurer le pic physiologique de STH durant le sommeil avant et apres traitement. Les résultats sont exprimes dans le tableau 3. TABLEAU 3 ler test 2ème test. V.C. V.C. Age Age HGH HGH NOMS Numéros Pic Pic cm/3 mois cm/3 mois csseux nesseux sormeil sormeil HGH HGH avant fin lère avant fin lère avant fin lère ng/ml ng/ml traitement cure A.A. traitement cure A.A. traitemant cure A.A. AB... Mustapha # 1 6,5 4,7 1 1 12,5 13 9 34,4 20.10.65 BA... Séverine # 2 4,1 4,7 0,5 1,5 4,5 5 7,5 40 9.11.72 DA... Alexia # 3 4,1 9,2 1 2,5 9 9 11,4 7,9 25.01.69 MA... J.M. # 4 7,6 8,9 1 3 13 13 3,5 31,8 15.07.64 ME... Stéphane # 5 5,2 9,6 1 3 10,5 11 10,9 15,7 20.01.68 OR... Sylvie # 6 7,4 9,3 1,5 1,5 10 10,5 7,9 25,3 12.09.64 RI... J.M. # 7 6,3 6,1 1 2 13 13 15,4 40 9.11.65 CA... Chantal # 8 1,2 12,5 1 1 10,5 11 9,4 17,9 8.08.67 DE... Nicolas # 9 5,9 7,6 1 1,5 2 2,5 9,1 18,6 28.01.75 CH... Cyril # 10 7 10 1 2 5 5 9,4 16 3.11.72 RESULTATS 5,53 # 1,86 8,26 # 2,36 1 # 0.22 1,9 # 0,7 9 # 3,67 9,3 # 3,62 9,35 # 2,88 24,76 # 10,65 # non pondéré t = 3,673 t = 3,75 t = 4,09 0,001 > p > 0,01 0,001 > p > 0,01 0,01 > p > 0,01 L'aspartate d'arginine stavère donc capable, lorsqu'il est donné par voie orale, de stimuler les sécrétions d'hormones, telles que la STH et l'insuline chez des sujets présentant un déficit partiel, normalisant ainsi les effets de ces hormones sur le métabolisme général de l'organisme et sur diverses fonctions physiologiques, telles que la croissance par exemple. La présente invention permet donc d'envisager des traitements à long terme, inapplicables par voie veineuse, à des fins anabolisantes. Elle s'adresse aussi bien aux enfants souffrant de retards de croissance dus à un déficit sécrétoire partiel en STH, qu'aux états hypotrophiques quel que soit l' ge, quelle qu'en soit la cause, c'est-à-dire, tous les syndromes dans lesquels il est nécessaire de relancer l'anabolisme protidique. La dose efficace en aspartate d'arginine se situe à environ 500 mg/kg, en une seule prise chaque jour pendant 3 mois. L'absorption du produit se fera de préférence au moment du coucher, loin du repas du soir. REVENDICATIONS 1. Médicament pour traiter les états hypotrophiques et en particulier des retards de croissance chez l'enfant caractérisé en ce que l'on admininistre par voie orale une dose journalière d'aspartate d'arginine. 2. Medicament selon la revendication 1 caractérisé en ce que cette dose est administrée au moment du coucher en une seule prise et loin du repas du soir et qu'elle est d'environ 500 mg/kg chaque jour pendant 3 mois