Brevet FR2564856A1 — publié le 19851129

La présente invention concerne un procédé pour la production d'anticorps. Plus particulièrement, l'invention concerne un procédé qui comprend l'induction, chez un animal d'expérience, d'une réponse immunitaire due à l'introductions dans l'animal, de cellules qui produisent et sécrètent un antigène. L'invention concerne notamment un procédé pour produire des anticorps monoclonaux complémentaires d'un antigène sécrété par une cellule. Les anticorps servent largement, maintenant, pour purifier des matières biologiques et pour des essais diagnos- tiques; ils ont récemment servi aussi en thérapeutique pour traiter certains types de lymphomes et de mélanomes. Pour produire des anticorps contre un antigène spécifique, on a, dans l'art antérieur, injecté l'antigène, typiquement deux ou plus de deux fois, à un animal d'expérience, puis on a récolté l'anticorps à partir du sérum. Plus récemment, avec l'arrivée de la technologie utilisant des hybridomes, plutôt que de collecter l'anticorps sur l'appareil circula- toire de l'animal, on prélève sur l'animal, typiquement sur sa rate, un échantillon de lymphocytes, et l'on provoque la fusion de l'échantillon de cellules avec une lignée de cellules immortelles comme celles d'un myélome. On soumet les produits de cette fusion à un examen de sélection en vue de déceler des hybridomes viables qui sécrètent l'anti- corps. On cultive ensuite ces hybridomes ainsi sélectionnés pour produire des colonies A partir desquelles on peut récol- ter des quantités relativement grandes d'anticorps monoclonaux. Un facteur important dans le mode opératoire ci- dessus est le degré de pureté de l'antigène servant à induire la réponse immunitaire. Quand on cherche à obtenir un anti- corps complémentaire d'une matière biologique spécifique produite par des cellules, la concentration et la purification de l'antigène particulier, pour le séparer des protéines, glycolipides, glycoprotéines, lipoprotéines et polysaccharides très divers et qui sont typiquement présents dans les sécré- tions, sont souvent des opérations laborieuses mais qui, en même temps, constituent un facteur fondamental pour produire avec succès l'anticorps intéressant. Dans la mesure o l'échantillon de l'antigène utilisé pour l'immunisation contient des matières étrangères, l'animal imunisé produit un grand nombre d'anticorps de spécificité différente, dont une faible partie seulement constitue l'anticorps intéressant. Donc, la purification de l'anticorps pour le séparer des antisérums est fastidieuse. En outre, si l'on cherche à obtenir un lymphocyte producteur de l'anti- corps intéressant, il est nécessaire d'utiliser des modes opératoires élaborés de dépistage et de sélection pour déceler le sous-ensemble de cellules intéressantes. De plus, la purification de l'anticorps intéressant à partir des liquides prélevés, ou l'isolement d'un sousensemble de lymphocytes produisant l'anticorps intéressant, est simplifié si l'agent d'immunisation est ou comprend un échantillon d'antigène relativement pur. Lors de la production d'un anticorps d'une matière non secrétée, par exemple un antigène se trouvant à la surface de cellules (immunoglobuline) , ou d'un anticorps destiné à purifier des substances produites par des cellules, par exemple des interférons, il entre maintenant dans le cadre de la pratique moyenne de produire une lignée de cellules génétiquement modifiées, qui sécrètent l'antigène de surface ou de plus grandes quantités de l'interféron. La purification des sécrétions cellulaires pour concentrer la matière intéressante et pour enlever au moins une partie de la matière étrangère, est néanmoins souhaitable, voire même obligatoire. Récemment, comme cité, par exemple, par Hatzubai et col. (Journal of Immunology, volume 126, n 6, juin 1981) et par Miller et Col. (New England Journal of Medicine, 4 mars, 1982, page 517), il a été développé un procédé prometteur pour traiter certains types de lymphomes. La technique se fonde sur l'observation selon laquelle des tumeurs résultent de la prolifération non maîtrisée de clones de cellules (B) qui expriment sur leurs surfaces des marqueurs limités à une molécule d'immunoglobuline ce qui comprend, en partie, une structure caractéristique du clone de lymphome. La région distinctive de l'immunoglo- buline (idiotype) de chaque clone de lymphome est essentiel- lement remarquable, voire unique, et peut -distinguer des cellules de tumeur d'avec des cellules normale: uhez le patient. Les cellules d'une tumeur ne secrètent pas la molécule d'immunoglobuline portant l'idiotype, mais cette sécrétion peut être induite par la fusion de la cellule de lymphome avec une lignée de cellules de myélome. On soumet les produits résultant de la fusion (hybridomes) à des examens de sélection en vue de déceler la sécrétion de l'immunoglobuline portant l'idiotype. Après culture et récolte d'un produit brut, on purifie l'idiotype par diverses techniques chromatographi- ques et l'on injecte à des animaux d'expérience une faible dose du produit d'idiotype monoclonal, puis l'on injecte 3 à 4 semaines plus tard une injection de rappel. Quelques jours plus tard, on enlève la rate de l'animal et l'on provoque la fusion des cellules de rate avec, par exemple, une lignée de cellules de myélome. Après sélection et clonage, on collecte et purifie, en des quantités suffisantes à des fins thérapeutiques, de l'anticorps anti-idiotype. Une injection intravasculaire d'environ 150 mg d'anticorps a été associée à une rémission étendue. L'exigence d'un anticorps correspondant spécialement à chaque patient impose de graves contraintes à cette voie de traitement du cancer. Comme noté dans l'article de Miller et Col. (indiqué ci-dessus), des modes opératoires plus allégés ou rénovés pour produire ces anticorps anti- idiotypes risquent bien de faciliter l'utilisation des anticorps anti-idiotypes dans ce traitement clinique. Selon la présente invention, il a été découvert que l'on peut efficacement induire dans un organisme animal, une réponse immunitaire à une matière antigénique secrétée par une cellule, en implantant directement dans le corps de l'animal des cellules vivantes enveloppées dans une ou plusieurs membranes de capsules. Les membranes comprennent 256 4.8 56 des pores de dimensions suffisantes pour' laisser passer la matière antigénique mais empêcher le passage des cellules encapsulées. Chose étonnante, il a été trouvé qu'un antigène secrété par des cellules, par exemple de l'IgG (immunoglo- buline G) ayant un poids moléculaire de 150 000 daltons ou de l'IgM, qui peut être une molécule volumineuse pouvant correspondre à 950 000 daltons, peuvent traverser les mem- branes des capsules et induire dans l'animal la réponse immunitaire appropriée, cependant que le système immunitaire de l'animal ne détruit pas ces cellules. En outre, les cellules encapsulées, secrétant de l'antigène, subissent un métabolisme normal, y compris de la mitose, à la condi- tion qu'on leur ait fourni, dans la culture, des matières nutritives appropriées avant l'encapsulation, après l'en- capsulation et avant implantation, ou après implantation. On peut utiliser dans le procédé n'importe quelle cellule qui secrète un antigène'dont on souhaite obtenir un anticorps complémentaire mais, dans des formes préférées de réalisation de l'invention, on utilise une cellule procaryote ou euca- ryote, génétiquement modifiée et spécialement destinée à secréter des quantités-relativement grandes de l'antigène en cause. La pratique de l'invention facilite la production d'un anticorps, car l'étape, souvent fastidieuse, de puri- fication de l'antigène pour le préparer en vue du processus d'immunisation n'est pas indispensable. Au lieu de séparer l'antigène intéressant du mélange des immunoglobulines et autres matières secrétées par la cellule, pour purifier cet antigène, on peut tout simplement encapsuler la cellule ou plusieurs cellules, et utiliser les capsules comme agent d'immunisation. Typiquement, une injection de rappel n'est pas nécessaire. De même, on peut préparer des membranes de capsules ayant une perméabilité se situant dans un inter- valle choisi de manière que la plupart de la matière antigé- nique étrangère à poids moléculaire élevé reste au sein de la microcapsule implantée et ne provoque pas de réponses immunitaires étrangères. Par exemple, les IgG (immunoglobu- [ins G) peuvent être distribuées dans l'animal alors que des IgM (immunoglobulines M) sont retenues, ou bien des matières pyrogènes peuvent être retenues alors que de l'antigène à poids moléculaire bien plus faible est li,:.. /Aprèsle déroulement du processus d'immunisation, on peut récolter directement l'anticorps intéressant sur des saignées pratiquées sur l'animal d'expérience. En variante, on peut collecter des échantillons d'un lympho- cyte provenant, par exemple de la rate, faire fusionner ce lymphocyte avec une cellule maligne comme une cellule de myélome, et cloner pour produire une culture à partir de laquelle on peut obtenir des quantités relativement grandes d'un anticorps monoclonal. L'invention a notamment pour objets: - de proposer un procédé pour induire chez un animal une réponse immunitaire à l'égard d'un antigène choisi, ce processus ne nécessitant pas une purification (prélimi- naire) de l'antigène; - de provoquer une immunisation à l'aide de cellules vivantes tout en évitant un rejet des cellules par un proces- sus immunitaire; - de fournir un procédé plus rénové de production d'anticorps monoclonaux; - d'induire dans le corps d'un animal une réponse immunitaire en utilisant un véhicule d'immunisation qui délivre de l'antigène plus ou moins continuellement sur une certaine période de temps et qui ainsi, n'exige normale- ment pas d'injection de rappel. Ces buts et caractéristiques de l'invention, ainsi que d'autres buts et avantages, ressortiront de la-descrip- tion suivante, faite à titre illustratif et nullement limi- tatif en regard de la figure unique annexée, qui est un diagamme indiquant les résultats d'une expérience montrant la production de nitrogénase anti-anti-Azotobacter chez des animaux de laboratoire ayant subi un processus d'immuni- sation à l'aide d'un hybridome encapsulé qui secrète de la nitrogénase anti-Azotobacter. En gros, le concept de l'invention consiste à produire des anticorps en induisant, chez un animal d'expé- rience, une réponse immunitaire à une substance antisr,,;,i secrétée par une cellule vivante, de manière à provoquer la production d'anticorps complémentaires de l'antigène, tout en évitant les étapes fastidieuses de récolte de la substance antigénique à partir des cellules et de purifica- tion de cette substance antigénique. L'invention n'est essentiellement pas limitée quant au type de cellule ou d'antigène que l'on utilise, à la condition que la cellule sécrète l'antigène et que l'antigène possède un poids molé- culaire inférieur à environ 106 daltons. On peut utiliser des cellules eucaryotes ou procaryotes. On préfère des cellules génétiquement modifiées, spécifiquement destinées à sécréter des quantités relativement grandes de l'antigène intéressant. Ainsi, quand on souhaite produire de l'anticorps spécifique à l'égard d'une substance sécrétée à une faible concentration par une cellule, on peut utiliser des techni- ques de génie génétique -maintenant classiques pour produire une lignée de cellules qui sécrètent l'antigène en de plus grandes concentrations. On peut utiliser une technologie d'insertion de gènes ou de formation et d'utilisation d'un hybridome. Des exemples de telles techniques sont décrits dans le brevet US-A-4 232 224 (délivré le 2 décembre 1980) pour l'insertion des gènes et dans Koprowski et col. "Production of antibodies against influenza virus by somatic cell hybrids between mouse myeloma and primed spleen cells" (production d'anticorps contre le virus de l'influenza par des hybrides de cellules somatiques entre du myélome de souris et des cellules spécialement apprêtées de rate), Proc. Nat. Acad. Sci. USA 74: 2985 (1977) pour la formation des hybridomes. Par exemple, quand on souhaite produire de l'anticorps spécifique à l'égard d'un interféron, par exemple dans le but de purifier l'interféron, on peut insérer, en utili- sant un vecteur convenable, le fragment de ADN (acide désoxyribonucléique) qui code pour la productionde l'inter- féron, dans une cellule hôte procaryote, par exemple E.coli, que l'on clone pour produire une culture secrétant l'interféron. Lorsque l'on désire produire un anticorps complé- mentaire d'une substance antigénique non secrétée par une cellule, par exemple des antigènes fixés à la membrane cellulaire (immunoglobulines), on peut provoquer la fusion de la cellule avec une lignée de cellules malignes, par exemple celles d'un myélome, pour produire un hybridome qui sécrète l'antigène intéressant. Quand la cellule intéressante a été choisie, on peut la cultiver, avant ou après microencapsulation, pour produire par mitose une colonie de cellules secrétant une quantité de la substance antigénique suffisante pour induire une bonne réponse immunitaire. Généralement, le nombre des cellules nécessaires dépend de la quantité d'antigène secrétée que la lignée de cellules produit et du type d'ani- mal d'expérience au sein duquel il s'agit d'implanter les cellules encapsulées. Les cellules peuvent être encapsulées de façon générale selon le procédé décrit dans le brevet US-A-4 352 883 (Franklin Lim). Selon la technique de Lim, on peut encapsuler sans gros dommages une cellule procaryote ou eucaryote, ou une culture de cellules, y compris des cellules génétiquement modifiées et du tissu. Après leur encapsula- tion, les cellules sont saines, viables, capables de poursui- vre un métabolisme normal, de secréter les matières qu'elles secrètent normalement pendant qu'elles sont au sein des capsules, et elles peuvent subir de la mitose. Des expé- riences récentes ont indiqué, selon le large exposé du brevet cité, qu'il est possible de régler les dimensions des pores des membranes des capsules de manière que les immunoglobulines sécrétées par les cellules, qui ont un poids moléculaire supérieur à environ 100 000 daltons, traversent les membranes. Il vient d'être découvert que de telles matières à poids moléculaire relativement élevé, peuvent, quand elles sont produites par des cellules encap- sulées implantées dans le corps d'un animal, traverser la membrane des cellules et induire une réponse immunitaire. Cependant, les cellules secrétant l'antigène sont protégées contre un rejet par processus immunologique et elles restent ainsi viables pendant des périodes prolongées en pouvant ainsi servir de sources continues de la substance antigénique. Si on le désire, on peut effectuer une seconde injection des cellules encapsulées ou de l'antigène non encapsulé mais, normalement, il n'est pas nécessaire d'effectuer une injection de rappel pour renforcer la réponse immuni- taire. En outre, on peut régler, comme décrit ici et dans le brevet précité US-A-4 352 883, les dimensions des pores des microcapsules afin de permettre la traversée préféren- tielle de substances ayant un poids moléculaire relativement bas tout en provoquant la retenue de la totalité, tout au moins d'une partie, des substances à poids moléculaire supérieur. Ainsi, on peut exercer pendant l'encapsulation un degré de réglage sur le poids moléculaire des substances libérées dans le corps de l'animal. Par exemple, des cellu- les de procaryotes qui ont été soumises à des opérations de génie génétique et qui sécrètent à la fois 1) un antigène intéressant ayant un poids moléculaire inférieur, par exemple, à- 70 000 daltons environ, et 2) des matières pyrogènes ayant un poids moléculaire supérieur et donc des dimensions moléculaires effectives supérieures, peuvent être encapsulées de manière qu'une très forte proportion des matières pyro- gènes soit retenue au sein des capsules cependant qu'une réponse immunitaire est développée à l'encontre de la substance antigénique intéressante, à plus faible poids moléculaire. Comme autre exemple, selon les enseignements ici décrits, il est possible d'encapsuler des cellules qui sécrètent à la fois IgG (de l'immunoglobuline G) et IgM (de l'immunoglobuline M) de façon que IgG puisse passer dans le corps de l'animal cependant que la totalité ou la plupart de l'IgM est retenue au sein du volume intra- capsulaire. Donc, la pratique de l'invention fournit effi- cacement un degré de "purification" de l'antigène intéres- sant, du fait que l'antigène est délivré, au corps de l'animal, en étant moins dilué par des substances à 5, ds moléculaire supérieur. La purification de l'antigeni est obtenue sans dénaturation, laquelle pose un problème commun aux techniques classiques. Les capsules sont de préférence implantées, commodé- ment par injection, bar exemple, dans la cavité péritonéale d'un animal de laboratoire tel qu'un rat, une souris ou un autre mammifère. On peut aussi utiliser une implantation par voie intramusculaire ou sous-cutanée. Comme noté ci-dessus, le procédé actuellement préféré pour encapsuler les cellules est décrit dans le brevet précité US-A-4 352 883. L'échantillon de tissu, la cellule ou culture de cellules à encapsuler est tout d'abord prépa- ré(e) sous forme finement divisée selon des techniques bien connues et mis en suspension dans un milieu aqueux convenant pour le maintien et l'entretien des processus métaboliques des cellules particulières en cause. Des milieux convenant pour cela sont de façon générale disponi- bles dans le commerce. On ajoute ensuite au milieu une substance hydrosoluble, qui est physiologiquement compatible avec les cellules et que l'on peut rendre insoluble dans l'eau pour former une masse sphéroidale cohérente conservant sa forme, ou pour lui donner une autre forme. On donne ensuite à la solution la forme de gouttelettes contenant des cellules ainsi que le milieu pour leur entretien ou leur croissance; et l'on rend immédiatement ces gouttelettes insolubles dans l'eau et on les gélifie pour former des masses cohérentes, typiquement sphéroidales, conservant leur forme. La matière servant à provoquer la gélification du milieu de culture peut être n'importe quelle matière hydrosoluble non toxique qui, par une variation de la tempé- rature et/ou du pH ambiant, de l'environnement ionique, d'une concentration, peut être transformée en des masses retenant leur forme. De préférence, la matière est aussi une matière qui comprend plusieurs groupes facilement ionisés, par exemple des groupes carboxyles ou amino, qui peuvent réagir, par formation de sel, avec des polymères contenant plusieurs groupes qui s'ionisent pour former des espèces de charge opposée. L'utilisation de ces types de matières permet le dépôt d'une membrane, dont la porosité se situe dans un intervalle choisi, sans endommager les cellules labiles. Les matières actuellement préférées pour former les masses gélifiées sont des polysaccharides, naturels ou synthétiques, hydrosolubles. De nombreuses matières de ce genre, disponibles dans le commerce, sont typiquement extraites d'une matière végétale et servent souvent d'addi- tifs dans divers aliments. L'alginate de sodium constitue le polysaccharide hydrosoluble actuellement préféré. D'autres matières utilisables comprennent des fractions acides de gomme guar, de gomme arabique, de carraghénine, de pectine, de gomme adragante ou de gomme xanthane. On peutprovoquer la gélification de ces matières en introduisant des ions multivalents destinés à remplacer par échange l'ion hydrogène acide ou l'ion de métal- alcalin normalement associé aux groupes carboxyles. Les molécules des polysaccharides hydro- solubles liquides sont ainsi "réticulées" et forment un gel insoluble dans l'eau, conservant sa forme et que l'on - peut souvent resolubiliser lorsqu'on enlève les ions à rôle de réticulation, en soumettant à échange d'ions ou en utilisant un agent de séquestration. De préférence, on utilise des ions physiologiquement compatibles, par exemple le calcium, car leur utilisation tend à exercer peu d'effets adverses sur la viabilité et sur le métabolisme normal des cellules. Pour d'autres polysaccharides, on peut passer de l'état hydrosoluble à l'état gélifié insoluble dans l'eau, et inversement, en modifiant le pH du milieu dans lequel ces polysaccharides sont dissous ou en dispersion. Une composition typique de milieu de culture des cellules/solution de polysaccharide comprend des volumes égaux de cellules dans leur milieu et d'une solution saline physiologique contenant I à 2 % de polysaccharide. quand on utilise l'alginate de sodium préféré, on obtient de bons résultats avec une solution qui en contient 1,0 à 1,5 %. Dans l'étape suivante du procédé, on met la solution de polysacoharide, contenant les cellules, en forme de gouttelettes de dimensions convenables, se situant générale- ment entre 50 micromètres et quelques millimètres. Puis on immerge immédiatement les gouttelettes dans un bain de sel de calcium pour réticuler le gel et former les masses sphéroîdales à haute viscosité, retenant leur forme, et contenant la ou les cellules en suspension et son ou leurs milieux. Les sphères gélifiées se rassemblent sous forme d'une phase séparée dans la solution et elles peuvent en être séparées par aspiration. On dépose ensuite une membrane semi-perméable autour de la surface des sphères de gel. Le procédé préféré pour former la membrane consiste à réticuler de manière permanente les couches superficielles des sphères ou d'autres formes gélifiées, en les soumettant à l'action d'une solution aqueuse d'un polymère, qui a généralement un poids molécu- laire supérieur à environ 3 000 daltons et contient des groupes pouvant réagir de manière ionique avec des fonctions présentes dans les molécules de gel. Quand on utilise des polysaccharides carboxylés ou d'autres polysaccharides acides, des polymères contenant des groupes pouvant réagir avec les acides, comme des amines, des imines ou des amides, peuvent servir pour cela. On préfère actuellement pour cette étape des matières polycationiques comme de la poly- lysine, de la polyéthylèneimine, de la polyornithine et de la polyvinylamine. L'exposition aux effets des matières polycationiques aboutit à la formation de réticulations dui type liaisons salines par interaction entre les groupes anioniques, par exemple les groupes carboxyles, du polysac- charide et les groupes cationiques, par exemple les groupes amines, du polymère. Selon le type de technique utilisée pour former les membranes semiperméables, il est souvent souhaitable de traiter les capsules afin de faire réagir les groupes amino libres, ou analogues, qui risquent sinon de conférer aux capsules une tendance à l'agglomération. On peut effec- tuer ce traitement, par exemple, en immergeant la ou les capsules dans une solution d'alginate de sodium. Selon la technique d'encapsulation décrite notamment dans le brevet US-4 252 883 précité, on peut régler la perméabilité de la membrane, en partie, en choisissant le poids moléculaire du polymère servant à la réticulation, la durée de la ou des étapes de réticulation, et la concen- tration du polymère dans la solution à rôle de réticulation. Par exemple, une solution d'un polymère ayant un bas poids moléculaire pénétrera, en un temps donné, plus profondément dans le gel qu'un polymère à poids moléculaire élevé. En général, plus le poids moléculaire est élevé et moins le polymère pénètre dans le gel, et plus grande sera la dimen- sion des pores de la membrane résultante. Comme noté ci- dessus, on préfère des polymères ayant un poids moléculaire supérieur à environ 3000 daltons. Selon le brevet précité US-1-4 152 883, on utilise de la polylysine ayant un poids. moléculaire moyen d'environ 35 000 daltons, dissoute à une concentration de 0',016 % de polylysine dans une solution saline. Il a été déterminé que des membranes de capsules, du type produit par la technique ci-dessus. comprennent des pores de dimensions qui peuvent varier et que ces membranes n'empêchent pas, de façon absolue, des molécules d'un diamè- tre réel donné de traverser la membrane tout en permettant le passage de molécules plus petites. Au contraire, on pense que les pores comprennent des trajets sinueux délimités à travers la membrane par des interstices entre les matières pulyanioniques et polycationiques réticulées servant à former la membrane. Ainsi, pour un groupe donné de conditions de réaction et une paire donnée de matières polycationiques et de matières polyanioniques (ou de mélanges de telles matières), les substances à bas poids moléculaire traversent librement, par diffusion, la membrane à une vitesse relati- vement rapide sans que cette traversée ne soit sensiblement empêchée par des collisions avec la matière formant la membrane. Des molécules ayant un poids moléculaire plus grand et une plus grande dimension moléculaire efficace diffusent à travers la membrane à une vitesse subissant l'influence des dimensions latérales et de la longueur des pores. Dans ce large intervalle de dimensions moléculaires, à mesure que les dimensions des molécules augmentent, la vitesse de passage à travers la membrane diminue. La limite supérieure de l'intervalle de perméabilité est difficile à définir de manière précise, mais il existe pour chaque système une dimension moléculaire pour laquelle la vitesse de diffusion est quasi nulle. Les capsules destinées à servir dans la présente invention ont de préférence des membranes spécialement prévues pour exploiter les propriétés ci-dessus de semi- perméabilité. Ainsi, on peut exercer pendant l'encapsulation un certain degré de réglage de la perméabilité de la membrane des capsules pour permettre la diffusion de la substance antigénique intéressante tout en empochant le passage, à travers la membrane, d'au moins la cellule et, de préfé- rence, des substances étrangères présentes dans le milieu de culture ou sécrétées par les cellules dans le volume intracapsulaire. En plus des techniques de maîtrise de la perméabi- lité, décrites dans le brevet US-A-4 352 883 précité, il a été découvert deux autres techniques de réglage de la porosité. Dans une première technique, particulièrement utile quand on désire retenir au sein du volume intracapsulaire des molécules dont le poids moléculaire est supérieur à environ 20 000-100 000 daltons, tout en permettant la libéra- tion d'une matière à plus bas poids moléculaire, on peut utiliser des étapes consécutives de formation de membrane. Par exemple, on peut tout d'abord immerger des masses de gel dans une solution de polylysine à poids moléculaire élevé puis dans une solution de polylysine à bas poids moléculaire. En variante, la première formation de membrane peut impliquer une polylysine de poids intermédiaire, et l'on peut ensuite utiliser un polymère polycationique ayant une plus grande densité de charge, comme de la polyvinyl- amine. L'effet de cette technique est de réduire les dimen- sions moyennes des pores. La seconde technique de régulation de la dimension des pores a été développée en se fondant sur l'observation selon laquelle les gels d'alginate ont un volume qui varie selon leur degré d'hydratation, lequel dépend à son tour de la force ionique de la solution avec laquelle on les met en équilibre. Une membrane formée autour d'un gel dilaté d'alginate est plus uniforme qu'une membrane formée autour de gels non dilatés. Ce phénomène, lié à l'observation selon laquelle des membranes formées autour de gels denses demeurent intactes quand le gel est par la suite dilaté, permet la synthèse de membranes ayant des dimensions laté- rales accrues de pores et permet la formation de meilleures membranes. Ainsi, par exemple, quand l'antigène intéressant a un poids moléculaire de l'ordre de 200 000 daltons, on peut encapsuler les cellules qui sécrètent l'antigène, par exemple en faisant réagir une matière polycationique à poids moléculaire modéré avec des masses de gel d'alginate de calcium à haute densité contenant des cellules. On peut mettre les capsules en équilibre avec une solution de cations monovalents, et provoquer la dilatation des capsules pour augmenter le degré d'hydratation du gel, ce qui provoque la dilatation des membranes des capsules, et augmente la dimension efficace des pores. En variante, on peut sou- mettre avant l'implantation les capqules ainsi dilatées à un traitement par un polymère à rôle de réticulation. En utilisant l'une des techniques ci-dessus, ou une combinaison de telles techniques, on peut régler empi- riquement les propriétés de perméabilité des membranes pour obtenir un réglage fin de leurs capacités inhérentes de retenue ou "tamisage". L'induction de la réponse immunitaire implique une stimulation des lymphocytes par l'antigène dans l'appa- reil circulatoire de l'animal d'expérience. On peut conduire selon l'invention la récolte de l'anticorps en laisé.t tout simplement mûrir les lymphocytes responsables de la synthèse et de la sécrétion de l'anticorps intéressant puis en collectant par des saignées périodiques l'anticorps en le purifiant à l'aide de techniques bien connues de l'homme du métier. Cette technique classique de récolte d'anticorps suffit pour une production d'anticorps à petite échelle, mais une technique préférée de récolte implique les techniques maintenant classiques de manipulation pour produire des anticorps monoclonaux. Dans ce cas, après induction de la réponse immunitaire, on sacrifie l'animal et l'on provoque la fusion de lymphocytes, typiquement échantillonnés sur la rate, les ganglions lymphatiques ou la moëlle d'os, avec une lignée de cellules immortelles comme celles d'un myélome. De préférence, on utilise une lignée de cellules malignes établies secrétant peu ou pas d'immunoglobuline. On soumet les produits de fusion à un examen de sélection d'hybridomes viables sécrétant l'anti- corps, et l'on clone ensuite les hybridomes pour produire des cultures d'hybridomes qui sécrètent des quantités rela- tivement grandes de l'anticorps monoclonal. On préfère produire des hybridomes quand l'on souhaite obtenir de grandes quantités d'un anticorps spécifique d'un antigène particulier, par exemple dans des colonnes de chromatogra- phie par immuno-affinité, pour produire des nécessaires pour essais diagnostiques comme des trousses ou nécessaires pour dosages radio-immunologiques et pour dosages immuno- enzymatiques, et à des fins thérapeutiques, par exemple pour traiter un lymphome de la manière indiquée ci-dessus. Des prncédbs pour produire des hybridomes sont par exemple décrits dans les articles suivants auxquels on pourra se référer: Kropowski et col., voir ci-dessus; Howard et col. "Isolation of six monoclonal alloantibodies against histocompability antigens: clonal competition", Immunology 41:131(1980); et Trowbridge, "Interspecies spleenmyeloma hybrids producing monoclonal antibodies against mouse lympho- cyte surface glycoprotein T200", J. Exptl. Med. 148: 313 (1978) On comprendra mieux l'invention en se référant aux exemples ci-après, fournis à titre illustatif et nulle- ment limitatif. Exemple 1 On établit une lignée de cellules, secrétant des anticorps d'IgG contre de la nitrogénase d'Azotobacter, en provoquant la fusion de cellules de rate d'une souris BALB/c immunisée par de la nitrogénase d'Azobacter, et d'une lignée de cellules de myélome de souris BALB/c, GM 3570 (désignation dans la littérature P3X63Ag8.653). La lignée de cellules de myélome, qui ne sécrète pas d'igG, a été achetée au "l1uman Genetic Mutant Cell Repository" (dépôt de cellules mutantes pour génétique humaine). - On a provoqué la fusion du myélome et des lymphocytes de rate sécrétant de l'anti- nitrogénase d'Azotobacter, en utilisant des techniques classiques au polyéthylène glycol, comme décrit dans les références précitées. On a soumis à un examen de sélection les produits de la fusion pour déceler la sécrétion d'anti- nitrogénase d'Azotobacter, et l'on a encapsulé, en utilisant la technique suivante, les hybridomes viables. On a mis l'hybridome BALB/c (appelé C25) en suspen- sion dans une solution saline physiologique contenant 1,34 % (en poids/volume) d'alginate de sodium ("NaG-Kelco"). On a transféré la suspension visqueuse dans une seringue de 10 cm3 que l'on a montée sur un appareil de formation de gouttelettes sous l'effet d'un jet d'air. Un appareil à jet d'air consiste en un corps ou enveloppe comportant une buse supérieure d'admission d'air et un corps creux allongé introduit avec frottement dans un bouchon. Une seringue, par exemple une seringue de 10 cm3, équipée d'une pnmpe Pltaqbn, sni. montée au sommet de l'enveloppe et comporte une aiguille, par exemple une aiguille revêtue de "Teflon" et de 0,25 mm de diamètre intérieur, qui traverse l'enveloppe sur toute la longueur de celle-ci. L'intérieur de l'enve- loppe est conçu de manière que l'extrémité de l'aiguille soit soumise à un courant d'air laminaire constant jouant le rôle d'une lame d'air. En service, la seringue pleine de la solution contenant la matière à encapsuler est montée au sommet de l'enveloppe, et l'on active la pompe étagée de manière à refouler par incréments:des gouttes de la solu- tion vers le sommet de l'aiguille. Chaque goutte est "décou- pée" par le courant d'air et elle tombe d'environ 2,5 cm dans une solution de gélification dans laquelle elle est immédiatement gélifiée par absorption d'ions à rôle de réticulation. La solution gélificatrice préférée est une solution de l'ion calcium, par exemple une solution contenant 1,2 % (en poids/volume) de chlorure de calcium. La distance entre l'extrémité de l'aiguille et la solution de chlorure de calcium est assez grande pour que la solution d'alginate de sodium/cellule prenne la forme physiquement la plus favorable, qui est une sphère.. L'air se trouvant au sein du tube sort par une ouverture ménagée dans le bouchon. Les masses sphéroidales gélifiées, qui conservent leurs formes, ou des capsules temporaires, qui ont de préférence entre 50 microns et quelques millimètres de diamètre, se rassemblent dans la solution en formant une phase séparée que l'on peut récupérer par aspiration. On a lavé trois fois les sphères gélifiées en utili- sant à chaque fois du chlorure de sodium 150 mM, puis l'on a fait incuber durant 6 minutes à la température ambiante dans une solution contenant par ml 1,875 mg de poly-L- Lysine (Sigma Chemical Company; poids moléculaire: 000 daltons). Après l'incubation, on a lavé les capsules dans 25 ml de tampon à 5 mM de CHES (acide 2-n-cyclohexyl- amino éthane sulfonique, pH 7,5, dans une solution à 0,2 % (en poids/volume) de chlorure de calcium et de 150 mM de chlorure de sodium, une fois dans une solution à 0,2 % (en poids/volume) de chlorure de calcium dans du chlorure de sodium 150 mM, et une fois dans une solution à 150 mM de chlorure de sodium. On a ensuite soumis les capsules à un nouveau revêtement en les faisant incuber durant 4 minutes supplémentaires à la température ambiante dans une solution à 0,06 % (en poids/volume) de NaG dans du * chlorure de sodium 150 mM, on a lavé une fois dans du chlo- rure de sodium 150 mM et fait incuber durant 15 minutes supplémentaires à la température ambiante dans une solution de 150 mM de chlorure de sodium contenant 55 mM de citra de sodium. On a décanté la solution et on l'a remplacée par une solution fraîche contenant 50 mM de citrate de sodium dans 150 mM de chlorure de sodium. On a fait incuber les capsules à la température ambiante durant 6 minutes dans la seconde solution de citrate de sodium et on l'a lavée deux fois avec du chlorure de sodium 150 mM, on a lavé une fois avec du milieu de Eagle modifié selon Dulbecco (à haute teneur en glucose) puis avec du milieu de Eagle modifié (selon Dulbecco) (à haute teneur en glucose) conte- nant 20 % de sérum de foetus de veau (FCS-Dutchland Labora- tories) et de la penicilline, de la streptomycine, de la glutamine I mM et 5 x 10-5 M de mercaptoéthanol. Les capsules formées par ce mode opératoire ont été perméables à IgG (poids moléculaire d'environ 160 000 daltons) mais essen- tiellement imperméables à IgM (poids moléculaire d'environ 900 000 daltons). On a cultivé durant plusieurs jours, dans un flacon approprié, les cellules encapsulées que l'on a ensuite dispersées dans une plaque comportant 24 creux pour micro- titrage, avec du milieu de croissance, qui est du milieu de Eagle modifié selon Dulbecco (à haute teneur en glucose), comportant de la pénicilline, de la streptomycine, 20 % de sérum de foetus de veau, I mM de glutamine et 5 x 10 5M de mercaptoéthanol, à une concentration de 20 % en volume de capsule pour 80 % en volume de milieu de croissance. On a soumis les milieux intracapsulaire et extracapsulaire de chacun des creux à des dosages périodiques, en utilisant le mode opératoire suivant, pour établir la concentration de l'antinitrogénase d'Azobacter sécrétée. On a revêtu les creux d'une plaque, comportant 96 creux pour dosage immuno-enzymatique, de 100 ul d'une solution contenant par ml 10 ug de nitrogénase d'Azobacter (soit I pg) dans une solution saline de tampon de phosphate. Après avoir laissé incuber durant la nuit à 4 C, on enlevé par secousses l'excès de solution saline de tampion de phosphate et l'on a revêtu ensuite les creux avec une solution salin de tampon de phosphate comportant 1 % de sérum al, de bovin (STP-SAB). Au bout d'une heure, on a enlev. par secousses la solution de STP-SAB. On a dilué des échantil- lons, en utilisant la solution de STP-SAB et l'on a préparé des témoins en diluant, avec le même tampon, une solution, à 1 pg/ml, d'anti- nitrogénase C-25 purifiée. On a laissé les échantillons incuber durant I heure à 37'C et l'on a ensuite lavé trois fois les creux avec de 1- solution saline tampon de phosphate (STP). On a ajouté dans chaque creux une dilution à 1:1000 de IgG (immunoglobuline G) de chèvre anti-souris conjuguée à de la peroxydase dans SPT-SAB. Après deux heures d'incubation à la température ambiante, on a lavé chaque creux cinq fois avec STP. On a ajouté dans chaque creux 100 ul d'une solution de citrate de sodium 55 M contenant 4 mg/ml d'orthophénylènediamine et 0,2 % (en volume/volume) de peroxyde d'hydrogène, pH 4,5. Au bout de 15 minutes, on a arrêté la réaction en ajoutant 100 pl de HCl 4N. On a soumis les plaques à une lecture sur un lecteur de couleur de plaque pour déter- miner la concentration de l'anti-nitrogénase. Au bout de 22 jours, quand la concentration de l'anticorps dans le milieu extracapsulaire a été d'environ 1,9 ug/ml et que la concentration de l'anticorps dans le milieu intracapsulaire a été d'environ I pg/ml, on a lavé les capsules dans une solution saline tamponnée de phosphate de Dulbecco (STPD sans Ca/Mg) et l'on a injecté, dans la cavité péritonéale de chacune de trois souris C57 BL/6J un volume, de 0,5 ml, de capsule dans STPD. Ce volume de 0,5 ml de capsules a contenu environ 2,5 x 106 cellules. En même temps, on a injecté à des souris B6J une concentra- tion égale d'hybridome Balb/c x Babl/c non encapsulés. On a soumis des prélèvements de sang, effectués sur la queue des souris, à un dosage d'anti-anti-nitrogénase d'Azotobacter le second, le troisième et le sixième jour après l'implantation, en utilisant le mode opératoire suivant. On a codé une plaque pour dosage immuno-enzymatique, à 96 creux, en faisant incuber durant la nuit à 4'C, 1:P- pl de solution contenant par pl 10 pg de nitrogénase d'Azoto- bacter par creux. On a enlevé par des secousses l'excès de STP et l'on a ensuite revêtu durant I heure les creux à l'aide d'une solution de STP contenant I % de sérum albumine de bovin. Après avoir éliminé par des secousses la solution de STP-SA, on a ajouté dans chaque creux 100 pl d'une solution contenant par ml 10 jug d'anti-nitrogénase C25 purifiée, et on a laissé incuber à la température ambian- te durant 1 heure environ. On a enlevé par secousses l'excès de C25, on a lavé les creux trois fois avec STP, et l'on a placé dans chaque creux 100 ol des échantillons de sérum dilué à 1:2 avec de l'héparine dans STP-SAB. Après une heure d'incubation à la température ambiante, on a enlevé les échantillons par secousses, on a lavé chaque creux trois fois avec STP, et l'on a ajouté dans chaque creux 100)l de IgM de chèvre anti-souris (à spécificité mu) conjuguée à de la peroxydase. Après une heure d'incuba- tion à la température ambiante, on a lavé chaque creux cinq fois avec STP et l'on a introduit dans chaque creux pl de solution de citrate de sodium contenant par ml 4. mg d'orthophénylènediamine et contenant aussi 0,02 % (volume/volume) de peroxyde d'hydrogène, pH 4,5. Au bout de 15 minutes environ, il s'est développé une couleur et l'on a arrêté la réaction par l'addition de 100 1ul de HCl 4N. On a lu la plaque sur un lecteur de plaque et l'on a comparé avec des témoins pour déterminer la présence de l'anti-anti-nitrogénase dans le sérum. On n'a pas décelé d'anticorps chez l'une quelconque des souris ayant subi une injection de cellules non encapsulées. Cette constata- tion a bien correspondu avec le fait que l'hybridome BALB/c X BALB/c et les souris B6J ont des allèles d'histo-incompa- tibilité différents. Les résultats des dosages effectués sur les trois souris d'essai et sur divers témoins pour déceler la présence d'anti-anti-nitrogénase d'Azotobacter sont une indication du succès de l'obtention d'une réponse immunitaire induite chez les animaux par l'implantation des microcapsulps, comme représenté sur la figure unique annexée. Chaque bloc de la grille de la figure unique annexée représente un creux dans une plaque pour microtitrage dans laquelle les dosages ont été effectués. Le nombre figurant au coin supé- rieur gauche de chaque bloc de la grille indique la souris sur laquelle le prélèvement a été obtenu,' le nombre appa- raissant au coin supérieur droit de chaque bloc de la grille indique le jour, après implantation, o les saignées ont été échantillonnées, et le troisième nombre de chaque bloc indique la lecture de densité optique, faite à 495 nm, du dosage de détermination de l'anticorps. La concentration de l'anti-anti-nitrogénase d'Azotobacter dans l'échantillon est d'autant plus grande que le résultat de la lecture de densité optique est plus grand. Les creux marqués la à ld ont été les témoins négatifs contenant des prélèvements de sang ayant une concentration nulle en anticorps. Ainsi qu'il ressort d'un examen de la figure unique, tous ces animaux ont développé une forte réponse immunitaire dont le maximum semble se situer vers 2 à 3 jours après l'inocu- lation. Exemple 2 On a mis de l'hybridome humain-humain secrétant de l'IvM humaine (obtenu au Biological Response Modifiers Program, National Cancer Institute, Bethesda, Maryland, Etats-Unis d'Amérique) en suspension, à la concentration d'environ 106 cellules/ml, dans 20 ml d'une solution de chlorure de sodium 150 mM contenant 1,37 % (en poids/volume) d'alginate de sodium (Kelco) et 0,2 um (ml) de "Transferrin" (Sigma). On a transféré la solution visqueuse dans une seringue de 20 cm3 et de là dans un appareil de formation de gouttelettes, tel que précédemment décrit. Les gouttelet- tes sphériques ont été gélifiées par contact avec une solu- tion contenant 1,2 % (en poids/volume) de chlorure de cal- cium. Les sphères gélifiées ont été lavées trois fois avec une solution à 150 mM de chlorure de calcium et elles ont été mises à incuber durant 6 minutes à la température am- biante dans une solution contenant 0,25 mg/ml de DEAE Dextrane et 100 mg/ml de poly-L-1ysine (Sigma; poids molé- culaire moyen voisin de 65 000 daltons). On a lavé les capsules dans 50 ml de tampon CHES (acide 2-n-cyclohexylamino éthane sulfonique) puis on les a lavées dans 50 ml d'une solution de chlorure de sodium 150 mM contenant 0,2 % (en poids/volume) de chlorure de calcium. On a fait incuber les capsules durant 5 minutes à la température ambiante dans 25 ml de chlorure de sodium 150 mM contenant 0,06% (en poids/volume) de polyvinylamine, on a lavé deux fois dans du chlorure de sodium 150 mM, on a fait incuber durant 4 minutes supplémentaires à la température ambiante dans une solution à 150 mM de chlorure de sodium contenant 0,06 % (en poids/volume) d'alginate de sodium et on lavé les capsules une fois encore avec une solution de chlorure de sodium 150 mM. On a ensuite fait incuber les capsules durant 16 minutes à la température ambiante dans une solution de chlorure de sodium 150 mM contenant 55 mM de citrate de sodium, on a décanté la solution et l'on a fait incuber les capsules durant 6 minutes supplémentaires dans une solution fraîche de citrate de sodium. On a ensuite lavé les capsules une fois avec une solution de chlorure de sodium 150 mM, une fois avec du milieu de Eagle modifié selon Dulbecco (à haute teneur en glucose) et enfin avec le milieu de culture, qui est du milieu de Eagle modifié selon Dulbecco (à haute teneur en glucose) contenant 20% de sérum de foetus de veau, de la pénicilline et de la streptomycine. On a ensuite cultivé les cellules dans un milieu de croissance, selon un rapport de 20 % (en volume/ volume) des capsules pour 80 % du milieu de culture ou de croissance. On a mis au point le dosage suivant pour déterminer la quantité de IgM humaine sécrétée par les cellules et aussi pour déterminer la quantité de IgM (immunoglobuline M) présente dans le volume intracapsulaire et dans le milieu extracapsulaire. On a revêtu les creux d'une plaque à 96 creux pour microtitrage, en ajoutant 100 "l d'une dilution à 1:500 de sérum de lapin anti-humain (chaine kappa) (Cappel) dans STP. Après avoir laissé les plaques incuber à 4'C durant la nuit, on a enlevé la solution par décantation par secousses des creux et l'on a empli les creux d'une solution à 1 % de STP-SAB. Après 1 heure d'incubation à la température ambiante, on a vidé les creux en décantant le liquide. On a préparé des échantillons intracapsulaires en enlevant une partie aliquote de la culture, en lavant les capsules trois fois dans de la solution tampon de phos- phate froide (4'C) et en rompant les capsules à l'aide d'un homogénéisateur à jeu de l'ordre de l'AngstrOm (0,1 nm). On a centrifugé les débris de capsules et les cellules durant 15 minutes à 2000 t/mn, pour obtenir un culot de centrifugation, et l'on a collecté le liquide surnageant. Les échantillons extracapsulaires étaient tout simplement le milieu dans lequel on a cultivé les capsules. On a appliqué des échantillons, en des dilutions de deux fois, dans les creux ayant subi un deuxième revête- ment et l'on a fait incuber à la température ambiante durant 2 heures. On a lavé les creux trois fois avec STP et l'on a ajouté dans chaque creux 100 ul d'une dilution à 1:500 de IgM anti-humaine de lapin (specificité mu) conjuguée à de la peroxydase (Cappel). Après deux heures supplémen- taires à la température ambiante, on a lavé les creux 5 fois avec STP et l'on a ajouté 100,pl d'une solution de citrate de sodium, pH 4,5, contenant par ml 4 mg d'ortho- phénylènediamine et contenant 0,02 % (en volume/volume) de peroxyde d'hydrogène. Au bout de 15 minutes, on a arrêté la réaction en ajoutant dans chaque creux 100 Pl de HCl 4N. On a déterminé la quantité de couleur de l'échantillon sur un lecteur de plaque, et l'on a déterminé la quantité de IgM en comparant la couleur à des creux témoins contenant des quantités connues d'IgM humaine. Le dosage ci-dessus a montré qu'au moins 5 % de l'IgM synthétisée par les cellules s'est trouvée dans le milieu extracapsulaire et que le- reste a été retenu au sein des capsules. Il a été déterminé que les cellules effectuent en 1 jour la synthèse d'environ 1 g de IgM pour 106 cellules. Malgré les quantités relativement faibles de IgM libérées des capsules, on a injecté 0,5 ml de capsules (au 14e jour après l'encapsulation), par voie intrapéritoné- ale, à des souris BALB/c. On a surveillé périodiquement la réponse immunitaire des souris, en utilisant un mode opératoire classique, bien connu de l'homme du métier, pour un examen de sélection par dosage à l'aide d'un immuno- sorbant lié à de l'enzyme. Au bout d'environ 12 jours, les animaux ont montré une réponse immunitaire appréciable. A ce stade, il a été possible d'utiliser le sérum ou bien d'enlever les rates, comme décrit ci-après, pour réaliser une fusion avec des lignées de cellules immortelles pour former des hybridomes produisant de l'IgM anti-humaine. Le 21e jour, on a enlevé la rate des souris et, en suivant les modes opératoires publiés, on a effectué la fusion avec la lignée de cellules immortelles de myélome GM 3569 ("Human Genetic Mutant Cell Repository"; dépôt de cellules mutantes pour génétique humaine). En bref, on a mélangé environ 107 cellules de myélome avec les cellu- les provenant d'une rate et qui ont subi une séparation par refoulement de la rate à, travers une toile métallique. On a soumis le mélange, en suspension dans 25 ml de milieu de Eagle modifié selon Dulbecco, sans sérum (MEMD-Gibco) à 10 minutes de centrifugation à 1500 g, on a centrifugé à nouveau durant 10 minutes supplémentaires à 1500 g, on a remis en suspension dans 25 ml supplémentaires de MEMD et l'on a centrifugé à nouveau. On a mis lentement le culot résultant de la centrifugation en suspension dans MEMD contenant 40 % de polyéthylène glycol 1540 (Baker). On a fait incuber ce mélange durant 5 minutes à la température ambiante, on a dilué lentement avec 25 ml de MEMD et l'on a centrifugé durant 10 minutes supplémentaires. On a remis le mélange résultant de la fusion en suspension dans ml de MEMD, on a centrifugé à nouveau et remis en suspen- sion dans MEMD contenant 20 % de sérum de foetus de veau (SFV; Flow Labs), de la pénicilline, de la streptomycine, et de l'hypoxanthine, de la thymidine et de l'aminoptérine (HAT). Le mélange résultant de la fusion a été, après mélangeage avec des cellules de rate, réparti dans dix plaques comportant chacune 96 creux pour microtitrage. On a fait incuber les plaques à 37 C dans une atmosphère humidifiée contenant 90 % d'air et 10 % de CO2. Après 18 jours, au cours desquels il y a eu quatre changements du milieu, on a soumis le milieu provenant de chaque creux à un titrage pour détermination de la présence de IgM de souris anti-humaine, en utilisant le mode opératoire suivant de titrage. On a revêtu les creux des plaques pour dosage immuno- enzymatique par I pg de IgM humaine (10 pg/ml dans STP) et l'on a fait incuber à 4VC durant la nuit. On a vidé les creux et on les a revêtus ensuite de STP comportant 1 % de SAB, en faisant incuber au moins durant 15 minutes à la température ambiante. On a ensuite vidé les creux et l'on a ajouté 100 il de milieu de croissance provenant de chacune des cultures d'hybridome dans les creux appropriés revêtus de IgM. On a fait incuber ces plaques à 37 C en atmosphère humidifiée durant 2 heures, on a vidé les creux, on les a lavés deux fois avec STP puis l'on a ajouté dans chaque creux 100 pl d'une dilution à 1:1000 (dans STP- SAB) IgG anti-souris de chèvre conjuguée à de la peroxydase (avec adsorption de IgM humaine). On a fait incuber les plaques durant 2 heures supplémentaires à la température ambiante. Après cette incubation, on a lavé les creux cinq fois avec STP et l'on a ajouté 100 Pl d'une solution de citrate de sodium, pH 4,5, comportant 4 mg d'orthophénylène- diamine par ml et 0,02 % (en volume/volume) de peroxyde d'hydrogène. Au bout de 15 minutes, on a arrêté la réaction en ajoutant dans chaque creux 100 pl de HCl 4N. La présence d'une couleur dans un creux a indiqué la présence de IgM anti-humaine de souris dans le creux correspondant de la plaque comportant de l'hybridome. Ce mode opératoire d'examen de dépistage a déterminé que, sur 656 colonies d'hybridomes (provenant des 960 creux), 14 -colonies ont secrété de l'IgM anti-humaine. Il va de soi que, sans sortir du cadre de l'inven- tion, de nombreuses modifications peuvent être apportées au procédé décrit. REVENDICATIONS 1. Procédé pour produire des anticorps, selon lequel on induit une réponse immunitaire dans un corps d'animal, ce procédé étant caractérisé en ce qu'il comprend les étapes consistant: A) à encapsuler une cellule vivante, qui sécrète un antigène capable d'induire une réponse immunitaire dans le corps d'un animal, au sein d'une membrane comprenant des pores et délimitant un volume intracapsulaire au sein duquel ladite cellule est en suspension; B) à régler les dimensions des pores de façon à permettre audit antigène de traverser les pores, mais à empêcher ladite cellule de traverser les pores; C) à implanter cette cellule encapsulée dans le corps d'un animal; D) à laisser l'antigène ainsi sécrété traverser ladite membrane au sein du corps de l'animal, pour induire une réponse immunitaire, de sorte qu'une cellule de type lymphocyte du corps de l'animal produit un anticorps dudit antigène; et E) à récolter, par prélèvement dans l'appareil circulatoire du corps de l'animal, un anticorps complémen- taire dudit antigène. 2. Procédé selon la revendication 1, caractérisé en ce que la cellule vivante encapsulée est ou comprend une cellule d'hybridome. 3. Procédé selon la revendication 2, caractérisé en ce qu'il comporte les étapes supplémentaires consistant à fournir des substances nutritives à ladite cellule et à la laisser subir de la mitose pour produire plusieurs cellules. 4. Procédé selon la revendication 3, caractérisé en ce que la fourniture des substances nutritives précède l'étape A) d'encapsulation, au cours de laquelle on encapsule plusieurs cellules. 5. Procédé selon la revendication 3, caractérisé en ce que l'étape de fourniture de substances nutritives est réalisée après l'étape A) d'encapsulation, de sorte que plusieurs cellules sont produites au sein du volume intracapsulaire. 6. Procédé selon la revendication 3, caractérisé en ce que l'étape de fourniture des substances nutritives est réalisée après l'étape O). 7. Procédé selon l'une des revendications 1 et 2, caractérisé en ce qu'il comporte les étapes supplémentai- res consistant à: E') prélever sur le corps de l'animal un lymphocyte qui produit un anticorps complémentaire dudit antigène; F) provoquer la fusion de ce lymphocyte avec une lignée de cellules immortelles, pour former un hybridome qui produit ledit anticorps; G) cultiver cet hybridome; et H) récolter l'anticorps monoclonal produit par cet hybridome. 8. Procédé selon la revendication 7, caractérisé en ce que la lignée de cellules immortelles est ou comprend les cellules d'un myélome. 9. Procédé selon la revendication 1, caractérisé en ce que ledit antigène possède un poids moléculaire supé- rieur à environ 100 000 daltons. 10. Procédé selon la revendication 1, caractérisé en ce que ladite cellule sécrète en outre une immunoglobuline M (IgM), et en ce que l'on règle les dimensions des pores de membrane de manière que l'immunoglobuline M soit essen- tiellement retenue au sein du volume intracapsulaire. 11. Procédé selon la revendication 1, caractérisé en ce que ladite cellule est une cellule génétiquement modifiée. 12. Procédé selon la revendication 1, caractérisé en ce que ladite cellule est une cellule procaryote. 13. Procédé selon la revendication 12, caractérisé en ce que la cellule procaryote sécrète une substance pyro- gène dont le poids moléculaire est supérieur à 70 000 dal- tons, l'antigène possède un poids moléculaire inférieur à environ 70 000 daltons et, au cours de l'étape B), on règle les dimensions des pores de manière qu'au moins une partie de la substance pyrogène soit retenue au sein du volume intracapsulaire. 14. Procédé selon la revendication 1, caractérisé en ce que la cellule est une cellule eucaryote.