Brevet FR2561651A1 — publié le 19850927

l La présente invention a pour objet de nouveaux dérivés de la cyclosporine, leur prépara- tion et leur utilisation en thérapeutique, à titre de principes actifs de médicaments. Les cyclosporines appartiennent à une classe d'undécapeptides cycliques poly-N-méthylés qui possè- dent d'intéressantes propriétés pharmacologiques, en particulier une activité immunosuppressive, une activité anti-inflammatoire et une activité antiparasitaire. lO La première des cyclosporines à avoir été isolée est la CyclospQrine, un métabolite fongique naturel, également dénommée cyclosporine A et répondant à la formule A eBmt-aAbu-Sar-MeLeu-Val-MeLeu-Ala-(D)Ala-MeLeu-MeLeu-MeVal- 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 (A) reI dans laquelle -MeBmt- représente le reste N-méthyl-(4R)- 2E-4-butène-l-yl-4-méthyl-(L)thréonyle de formule B CH3 I x J I (B) y NCH2 HO (R) CH \ f\ \ CH (R) CH3 I -N-CHF-CO- I (S) CH3 dans laquelle -x-y- représente -CH=CH- (trans). Depuis la découverte de la Cyclosporine, un grand nombre de cyclosporines naturelles ont été isolées et identifiées et plusieurs autres cyclosporines non naturelles ont été préparées par voie totalement synthétique ou semi-synthétique ou par application de techniques de culture modifiées. La classe des cyclosporines est constituée actuellement par un nombre substantiel de représentants et comprend par exemple les cyclosporines naturelles A à Z [voir Kobel et coll. European Journal of applied Microbio- logy and Biotechnology 14, 237-230 (1982) et Traber et coll, 24th. Interscience Conference on Antimicrobial Agents and Chemotherapy, Washington, 8-10 octobre, 1984], ainsi que diverses cyclosporines non natu- relles ou synthétiques, comprenant les dihydro-cyclos- porines dans lesquelles le groupe -x-y- du reste -MeBmt- (voir formule B ci-dessus) est saturé, par exemple comme décrit. dans les brevets américains no 4 108 985, 4 210 581 et 4 220 641, les cyclos- porines dans lesquelles le reste -MeBmt- est sous forme isomère ou Ndéméthylée [voir brevet européen n 0 034 567 et "Cyclosporine A", Proc. Internat. Conference on Cyclosporin A, Cambridge (Grande-Bretagne) septembre 1981, ed. D.J.G. White, Elsevier Press (1982), ces deux documents décrivant un procédé de synthèse totale mis au point par R. Wenger pour la préparation des cyclosporines] et les cyclosporines dans lesquelles des amino-acides variés ont été incorporés à des positions spécifiques de la séquence peptidique (voir brevet européen n 0 056 782). Des exemples de telles cyclosporines décrites dans les documents antérieurs comprennent par exemple la[Thr]-cyclosporine (cyclosporine C),laValj2-cyclosporine (cyclosporine D), la[Nv 2-cyclosporine (cyclosporine G), la[Nva2 {Nva 5- cyclosporine (cyclosporine M), la[dihydro-MeBmt{Val]2- cyclosporine (dihydrocyclosporine D) et la[(D)Set 8- et Fihydro-MeBml- -[(D)-Ser] -cyclosporine. Selon la nomenclature adoptée actuellement pour les cyclosporines, ces composés seront définis dans la présente description par référence à la structure de la Cyclosporine, c'est-à-dire la cyclos- porine A. Selon cette nomenclature, on indique d'abord les restes de la molécule qui diffèrent de ceux pre- sents dans la Cyclosporine et on accole le terme "cyclosporine" pour caractériser les autres restes qui sont identiques à ceux présents dans la Cyclospo- rine. Par ailleurs, l'expression-dihydro-MeBmt- est utilisée pour désigner le reste de formule B ci-dessus dans laquelle -x-y- signifie -CH2-CH2-. 1 -2 Ainsi, la [dihydro-MeBmt]- la formule A, mais dans laquelle le reste -(D)-Ala- en position 8 a été remplacé par le reste -(D)-Ser-. De plus, les restes des amino acides désignés par une abréviation, par exemple -Ala-, -MeVal- etc..., doi- vent être compris, conformément à la nomenclature actuelle, comme ayant la configuration L, sauf indication contraire. Les abréviations précédées par "Me", comme dans le cas de -MeLeu-, représentent des restes N-méthylés. Les restes indi- viduels de la molécule de cyclosporine sont numérotés, comme dans l'état de la technique, dans le sens des aiguilles d'une montre et en commençant par le reste -MeBmt- ou -dihydro-MeBmt- en position 1. Le même système de numérotation sera utilisé dans la présente description. Selon la présente invention, on a trouvé maintenant què les cyclosperines dans lesquelles le reste en position 8 est le reste d'un acyloxy-a-amino- acide ayant la configuration D, se signalent par d'intéres- santes propriétés pharmacologiques. Selon un premier aspect, la présente inven- tion concerne donc une cyclosporine dans laquelle le reste de l'aminoacide en position 8 est le reste d'un (D)-acyloxy-a-amino-acide. Par reste d'un (D)-acyloxy-a-amino-acide, on entend le reste d'un a-amino- acide de la série D dans lequel la chaîne latérale fixée sur l'atome de carbone a est substituée par un groupe acyloxy. De préférence, le reste de l'amino-acide en position 8 est le reste d'un (D)-5-acyloxy-a-amino- acide, c'est-à-dire le reste d'un a-amino-acide de la série D ayant un groupe acyloxy fixé sur l'atome de carbone f. Des restes préférés de (D)-5-acyloxy-a-amino- acidessont ceux correspondant à la formule II R2 I I Ri-CO-0-CH(B3) (II) -NH-CH-CO- (D) dans laquelle R1 signifie l'hydrogène ou un groupe alkyle en C-C4 ou phényle, et R2 signifie l'hydrogène ou un groupe méthyle. Les cyclosporines spécialement préférées selon la présente invention sont celles dans lesquelles le reste de l'amino-acide en position 8 est un reste 0-acyl-(D)-séryle ou 0-acyl-(D)-thréonyle, en particu- lier un reste 0-acyl-(D)-séryle ou 0-acyl(D)-thréonyle de formule II. Dans un groupe de cyclosporines selon l'in- vention, le reste de l'amino-acide en position 8 est un reste 0-acyl-(D)séryle, spécialement un reste 0-acyl(D)-séryle dans lequel le groupe acyle correspond à la formule R1-CO-, R1 ayant la signification donnée précédemment. Dans un second groupe de cyclosporines selon l'invention, le reste de l'amino- acide en position 8 est le reste d'un (D)--acyloxy-a-amino-acide, spéciale- ment un reste 0-acyl-(D)-séryle, plus spécialement un reste 0-acyl-(D)séryle dans lequel le groupe acyle correspond à la formule R1-CO-, R1 signifiant l'hydrogène ou un groupe alkyle en C1-C4, et le reste en position 5 est un reste (L)-norvalyle. Les cyclosporines particulièrement préférées sont celles répondant à la formule I X-Y-Sar-MeLeu-Z-MeLeu-Ala-Q-MeLeu-MeLeu-Val 123 4 5 6 7 8 9 10 11i (I) dans laquelle X signifie -MeBmt- ou -dihydro-MeBmt-, Y signifie aAbu-, -Ala-, -Thr-, -Val- ou -Nva-, Z signifie -Val- ou -Nva-, et Q est un reste de formule II tel que défini précédemment. Dans la formule I, Q signifie de préférence un reste 0-acyl-(D)-séryle ou 0-acyl-(D)-thréonyle dans lesquels le groupe acyle correspond à la formule R1-CO-, R1 ayant la signification donnée pour la formule II; Y signifie de préférence -aAbu-, -Thr-, -Val- ou -Nva-. Un groupe de cyclosporines selon l'invention comprend les composés de formule I tels que définis ci-dessus,dans lesquels Y signifie -aAbu- ou Nva-, Z signifie -Val- et R2 signifie l'hydrogène. Un autre groupe de cyclosporines selon l'invention comprendles composés de formule I tels que définis ci-dessus, dans lesquels Y signifie -aAbu- ou -Nva-, Z signifie -Nva-, R1 signifie l'hydrogène ou un groupe alkyle en C1-C4 et R2 signifie l'hydrogène. L'invention concerne également un procédé de préparation d'une cyclosporine dans laquelle le reste de l'amino-acide en position 8 est le reste d'un (D)-acyloxy-a-amino-acide, par exemple le reste d'un (D)-5acyloxy-a-amino-acide, ledit procédé comprenant: a) l'acylation d'une cyclosporine dans laquelle le reste de l'amino-acide en position 8 est le reste d'un (D)-hydroxy-a-amino-acide, par exemple le reste d'un (D)-5hydroxy-a-amino-acide, ou b) la réduction d'une cyclosporine dans laquelle le reste de l'amino-acide en position 1 est un reste -MeBmt- et le reste en position 8 est le reste d'un (D)-acyloxy-a-amino-acide, par exemple le reste d'un (D)-5-acyloxy-a-amino-acide, pour obtenirla cyclosporine correspondante dans laquelle le reste en position 1 est le reste-dihydro-MeBmt-. En particulierjes cyclosporinesde formule I définies ci-dessus peuvent être préparées selon un procédé qui comprend a) l'acylation d'une cyclosporine de formule III rX-Y-Sar-MeLeu-Z-MeLeu-Ala-W-MeLeu-MeLeuMeVal 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 il (III) dans laquelle X, Y et Z ont les significations données précédemment pour la formule Iet W représente un reste de formule IV R2 f I Hm-CH (IV) -NH-CH-CO- (D) dans laquelle R2 a la signification donnée ci-dessus pour la formule II, pour introduire en position 5 dudit reste IV un groupe R1-CO- dans lequel R1 a la signi- fication donnée ci-dessus pour la formule Il, ou b) la réduction d'une cyclosporine de formule I telle que définie précédemment, dans laquelle X signifie -MeBmt-, pour produire la cyclosporine correspondante dans laquelle X signifie le reste -dihydro-MeBmt-. Les procédés a) ci-dessus peuvent être effectués selon les méthodes connues pour l'acyla- tion des groupes hydroxy, par exemple par réactionavec de préférence 2 équivalents ou, lorsque Y = -Thr-, 1 équivalent d'un halo- Ménure d'acyle approprié,par exemple un halogénure d'alcanoyle en C1-C5 ou un halogénure de benzoyle,ou avec 1 'anhydride d'acide correspondant, ou, pour la formylation, par réaction par exemple avec l'anhydride formique-acétique,à une température comprise par exemple entre environ -10 et 50 C. La réaction est effectuée sous des conditions anhydres, de façon appropriée en présence d'un solvant ou diluant inerte tel que le chlorure de méthylène, et en présence d'un agent de condensation tel que la 4-diméthyl- amino-pyridine. A ce sujet, il convient de noter que l'acylation se produit sélectivement sur le groupe OH primaire du reste de l'amino-acide en - position 8. Les procédés b) peuvent être effectués de manière analogue aux méthodes connues pour réduire des cyclosporines naturelles en dihydrocyclospo- rines correspondantes, par exemple par hydrogénation catalytique, par exemple comme décrit dans le brevet britannique n 1 567 201. L'hydrogénation est effectuée de façon appropriée sous des conditions de pH neutre à des températures comprises entre environ 20 et environ 30 C et à la pression atmosphérique ou sous une pression légèrement supérieure, en présence d'un catalyseur tel que le platine ou, de préférence, la palladium, par exemple le palladium sur charbon. On opère en présence d'un solvant ou diluant inerte tel que l'acétate d'éthyle ou un alcanol aliphatique inférieur tel que le méthanol ou l'isopropanol. Les cyclosporines ayant un reste de g-hydroxy- a-amino-acide en position 8, en particulier la[(D)- Serf-cyclosporine et la[dihydroxy-MeBmt l-D)SerI-cyclospo- rine, appropriées comme produitsde départ dans les procédés a) cidessussont connues et ont été décrites, ainsi que leur procédé de préparation, par exemple dans le brevet européen n O 056 782 mentionné précé- demment. D'autres cyclosporines ayant un reste d'hydroxy- a-amino-acide en position 8 et nécessairescomme produits de départ pour les procédés a) peuvent être préparées de manière analogue ou selon les procédés décrits dan.s le brevet européen n 0 034 567, ou selon les procédés décrits dans la présente description. Les cyclosporines de départ utilisées dans les procédés b) ci-dessus, peuvent être obtenues selon le procédé a). Bien que les cyclosporines de départ de formule III spécifiquement décrites dans les exemples ci-jointssoientconprises dans l'enseignement général du brevet européen n 0 056 782, ces cyclosporines n'ont jamais été décrites comme telles auparavant et sont donc nouvelles.Selon la présente in- vention, on a trouvé maintenant que ces cyclosporines possèdent spécialement une activité ou un profil biolo- gique intéressant ou avantageux, en particulier en ce qui concerne l'activité immunosuppressive et spécia- lement en ce qui concerne la prévention des rejets après transplantations d'organes ou greffes de moelle,en comparaison par exemple avec les cyclosporines connues de formule III, c'est-&- dire les cyclosporines de formule III spécifiquement décrites dans le brevet européen n 0 056 782. Selon un autre aspect, la présente inven- tion concerne donc une cyclosporine de formule Illa -XY'-Sar-MeLeu-Z'MeLeu-Ala-W'-MeLeu-MeLeu-MeVal 1 2 t 4 5 6 7 8 9 10 il (I IIa) dans laquelle Y' signifie -aAbu-, -Thr-, -Val- ou -Nva-, Z' signifie -Val- ou, lorsque Y' signifie -aAbu- ou -Nva-, également -Nva-, W' signifie -(D)Serou, lorsque Y' signifie -aAbu- et Z' signifie -Val-, également X' signifie -MeBmt---out lorsque Y' signifie -Thr-,-Val- ou -Nva-, Z' signifie -Val- et W' signifie -(D)Ser-, également -dihydro-MeBmt-. 1 0 Des cyclosporines spécifiques de formule IlIa sont les suivantes: a) [(D)Thr]8-cyclosporine b) [Thr]2-[(D)Ser]8-cyclosporine c) [Dlhydro-. MeBmt]l-[thr]2-[(D)Ser]8-cyclosporîne d) [ al].[(D)SerJ8, yclosporine e) [OLIhydro-MeBmt]l-[Val]2-[(D)Serj8-cyclosporine f) [L4va]2-t[(O)Serj8-. yclosporine g) [Dlhydro-MeBmt]l-[Nva]2-[ (D)Ser]8 dans le brevet européen n 0 056 782. L'invention comprcnd également un procédé iS de préparation des cyclosporines de formule Illa telles hue définies ci-dessus, ledit procédé comprenant: ) la dSrrte 'ion d'une c:y losporlne de forn'rle 11h telle que definie ci-dessus, sous forme proténée à l'otyg6ne, d) la cyclisation d'un undécapeptide à chaîne drnitç *) r ar:n' la séquence W'-4eLeu-MeLAu-MeVal-X'-Y'-Sar-MeLeu-Z'4MeLeu-Ala- 8 9 10 11 1 2 3 4 5 6 7 dans laquelle Y', Z', W' et X' ont les signiflcat'ns données ci-dessus pour la formule Illa, ledit undé- capetide étant sous forme non protégee ou sous forme prottgée à l'oxygène et, si nécessaire, la mise en oeuvre du procédé c), e) pour l'obtention d'une cyclosporine de formule IIIa dans laquelle Y' signifie -Thr-, -Valou -Nva-, Z' signifie -Val- ou, lorsque Y' signifie -Nva-, également -Nva, W' signifie -(D)-Ser- et X' signifie -MeBmt-, la culture d'une souche fongique produisant la EThr]2-cyclosporine, la [Val]2-cyclosporine, la [Nva]2-cyclosporine ou la [Nva]2-[Nva]5-cyclos- porine, dans un milieu nutritif contenant de la (D)-sérine et isolement de la cyclosporine de formule IIIa à partir du milieu de culture, f) pour l'obtention d'une cyclosporine de formule IIIa dans laquelle X' signifie -dihydro-MeBmt, la réduc- tion de la cyclosporine correspondantede formule IIIa dans laquelle X' signifie -MeBmt-. Les undecapeptides appropriés à utiliser dans le procédé d) ci-dessus peuvent être obtenus de manière analogue au procédé décrit dans le brevet européen n0 O 056 782, en combinant la séquence pepti- dique qui comprend les restes 8 à 11 de la molécule de cyclosporine avec la séquence qui comprend les restes 1 à 7 de la molécule de cyclosporine mais avec les restes appropriés en position 2 et/ou 5 et/ou 8. Le reste -(D)-Ser- ou -(D)-Thr- en position 8 est avan- tageusement sous forme protégée à l'oxygène, par exemple sous forme de dérivé 0-tert.-butylique.La cycli- sation est effectuée comme indiqué dans le brevet européen n' 0 056 782, avec élimination finale des groupes protecteurs de l'oxygène lorsqu'ils sont presents [procédé c)] selon les méthodes connues dans la chimie des peptides. La souche fongique utilisée dans le procédé e) est de préférence la souche NRRL 8044 de l'espèce Tolypocladium inflatum (Gams), dont une culture a été déposée au United States Department of Agriculture (Northern Research and Development Division), Peoria, Ill., USA,et est librement accessible au public. Une autre culture de cette souche a été déposée-au Fermen- tation Research Institute, Inage, Chiba City, Japan, sous le numéro de code FRI FERM-p No. 2796. Les caractéristiques morphologiques de cette souche, classée à l'origine comme appartenant à l'espèce Trichoderma polysporum (Link ex Pers.),ainsi queles techniques pour l'obtention et la conservation de précultures et de sous-cultures sont décrites en détail par exemple dans le brevet britannique n 1 491 509. Selon le procédé e), la souche sélectionnée, par exemple la souche de Tolypocladium inflatum (Gams), est cultivée avantageusement pendant une période d'en- viron 2 semaines à une température d'environ 27 C dans un milieu de culture tel que décrit dans les exemples suivants, avec adjonction de (D)- ou de (D,L)- sérine au milieu de production. L'amino-acide précurseur est ajouté avantageusement en quantités comprises entre environ 1 et environ 15g, plus préférablement entre environ 4 et environ 10 g/litre de milieu de culture. Avantageusement, le milieu de culture contient également l'aminoacide précurseur pour le reste présent en position 2 de la cyclosporine désirée, par exemple en des quantités comprises entre environ 6,0 et en environ 10,0 g, de préférence environ 8,0 g/litre de milieu de culture. Après incubation, on recueille la culture et on extrait selon les méthodes connues la cyclosporine de formule IIIa ainsi obtenue, par exemple par broyage des conidieset du mycélium et isolement subséquent par extraction et/ou absorption. La cyclosporine brute obtenue peut ensuite être purifiée, par exemple par chromatographie et/ou par recristallisa- tion, en particulier pour la séparer des autres cyclos- porines qui la contaminent,en particulier de la cyclos- porine naturelle. Le procédé f) ci-dessus peut être effectué par exemple en utilisant les mêmes méthodes que celles precédemment en relation avec le procédé b). Dans les exemples suivants qui illustrent la présente invention sans aucunement en limiter la portée, les températures sont indiquées en degrés celsius. Exemle 1 [ a Oaccty_- (DSer]8cyclospo rine (formule I: X =-MeBmt-, Y - aAbu-. Z = -Val-, Q = -0-acétyl-(D)Ser-] A 47 ml de [(D) Serj-cyclosporine (préparée selon le procéde décrit à l'exemple I ou 3 du brevet européen n O 056 782) dissous dans 3 ml de chlorure de méthylène,on ajoute 20 mg de 4-diméthylaminopyridine. nr; ajoute ensuite 56,1 mg de chlorure d'acetyle fraîche- ment distillé dissous dans 1 ml de chlorure de méthy- Ene et on agite le mélange réactionnel pendant 1 heure à la température ambiante. On dilue ensuite le mélange réactionnel avec 50 ml de chlorure de méthylène et on le secoue avec 30 ml d'eau. On sépare la phase organique, on la sèche sur sulfate de sodium, on la filtre et on l'évapore. Le résidu est filtré sur 60 g de gel de silice (0,062 - 0,20 mm) en utilisant comme éluant du chlorure de méthylène à 5% de méthanol et est recueilli en fractionsde 25 ml. Le composé du titre est récupéré à partir des fractions 4 à 8 par chromatographie sur couche mince en utilisant du chloro- forme à 5% de méthanol comme phase mobile [a]D = -202 (c = 0,92 dans CHCl3). Exemple 2 Les composés suivants peuvent être préparés de manière analogue à l'exemple 1 en partant de la cyclosporine non acylée correspondante: 2.1 [(O-benzoyl-(D)Ser]8-cyclosporine [formule I: X = -MeBmt-, Y = -aAbu-, Z = -Val-, Q = -O-benzoyl- (D)Ser-]: [a]20 = -220' (c =1,0 dans ChCl 3) 2.2 [0-acétyl-(D)Thr]8Cyclosporine [formule I: X = -MeBmt-, Y = -aAbu-, Z = -Val-, Q = -Oacétyl-(D)-Ser-1: [a]20 = -219- (c =1,0 dansCHCl3); 2.3 [Nva]2-[0-acétyl(D)Ser]8-Cyclosporine [formule I: X = -MeBmt-, Y = -Nva-, Z = -Val-, Q = O-acétyl-(D)Ser-]: [a]2O = -240' (c =1,0 dans CHCl3)/- 233 (c = 0,8 dans CHC13)/-177 ' (c =0,76 dans CH30H) F =143 - 147 2.4 [Val]2-[0-acétyl-(D) Ser]8-cyclosporine [formule I: X = -MeBmt-, Y = -Val-, Z = -Val-, Q = -Oacétyl-(D)Ser-]: [a]20 = -219' (c =0,9 dans CHC13); 2.5 [Nva]5-[O-acétyl(D)Ser]8-cyclosporine [formule I: X = -MeBmt-, Y = -aAbu-, Z = -Nva-, Q = -O-ac6tyl-(D)Ser-]: [a]20 = -215' (c =1,0 dans CHC13); 2.6 [Nva]2-[Nva]5[0-acetyl-(D)Ser]8-cyclosporine [formule I: X = -MeBmt-, Y = -Nva-, Z = Nva-, Q = -O-acétyl-(D)Ser-]: [a]20 = _ 196.9 (c =l,O dans CHC13); et 2.7 [Thr]2-[0-acétyl-(D)Ser]8-cyclosporine [formule I: X = -MeBmt-, Y = -Thr-, Z = -Val- Q = -O-acétyl-(D)Ser-]: [a]20 = - 251 ' (c =0,86 damnCHCl3)/174 ' (c =0,81 dansCH30H): F = 143 - 146. Exemple 3 1 8 [Dihydro-MeBmt] -[O-acétyl-(D)Ser]8-cyclosporine (formule I: X =-dihydro-MeBmt-, Y = -aAbu-, Z =-Val- Q = -O-acétyl-(D)Ser-] On hydrogène à la température ambiante et sous pression normale 54 mg de [(O-acétyl)-(D)-Ser8]- cyclosporine dans 10 ml d'éthanol en utilisant 10 mg de charbon palladié à 10%. Après 20 heures, on filtre le mélange réactionnel sur une mince couchede talc et on élimine l'éthanol par évaporation sous vide. Après séchage sous vide poussé, on obtient le compose du titre; EaID = -205,8 (c = 1,02 dans CHCl3). Exemple 4 Les composés suivants peuvent être préparés de manière analogue à l'exemple 1 en partant de la cyclosporine non-acylée correspondante,ou de manière analogue à l'exemple 3 par hydrogénation de la cyclos- porine correspondante décrite à l'exemple 2: 4.1 [Dihydro-MeBmt]l-[Nva]2[O-acétyl-(D)Ser]8-cyclosporine [formule I: X = -dihydro-MeBmt-, Y = -Nva, Z = -Val-, Q = -0-acétyl-(D)Ser-]: F 139 - 141'; []20 = -225' (c = 0,88 dans CHC13)/-163 (c =0,76 dans CH30H); 4.2 [Dihydro-MeBmt]l-[Val]2-[Oacétyl-(D)Ser]8-cyclosporine [formule I: X = -dihydro-MeBmt-, Y = -Val-, Z = -Val-, Q = -O-acétyl-(D)Ser-]: [a]0O = -210' (c =0,85darsCHCl3); et 4. 3 [Dihydro-MeBmt]l-[Thr]2-[O-acétyl-(D)Ser]8 - 162 (c =1,0 dans CH30H): F - 148 - 150. Préparation des produits de départ: Exemple 5 Les composés suivants, nécessairescomme produits de départ pour la préparation des composés des exemples 2.2 à 2.7, peuvent être préparés de manière analogue au composé connu la [(D)Ser]8- cyclosporine, dont la préparation est décrite à l'exemple 1 du brevet européen n O 056 782,mais en utilisant les séquences peptidiques comportant les restes appro- priés en position 2 et/ou 5 et/ou 8: 5.1 [(D)Thr]8-cyclosporine [formule IIIa: X' = -MeBmt-, Y' = -aAbu-, Z' = -Val-, W' = -(D)Thr-]: [a]0O= -248, 7 (c= 1,0 dans CHCl3); 5.2 [Nva]2-[(D)Ser]8-cyclosporine [formule IIIa: X' = -MeBmt-, Y' = -Nva-, Z' = -Val-, W' = -(D)Ser-]: F = 150 - 153'; [a] 20 = -262' (c =0,l dans CHC13)/-191' (c = 0,73 dans o CH30H); 5.3 [Val]2-[(D)Ser]8-cyclosporine [formule IIIa: X' = -MeBmt-, Y' = -Val-, Z' = -Val-, W' = -(D)Ser-]: [a]20= -257 (c= D l,O dans CHC13)/- 255- (c =0;45 dans CHC13)/- 189 (c = 0>42 dans CH30H): F = 136 - 140 '; 5.4 [Nva] 5-[(D)Ser]8-cyclosporine [formule IIIa: X' = -MeBmt-, Y' = -aAbu-, Z' = Nva-, W' = -(D)Ser-]: [a]O = -212 (c = 1,0 dansCHCl3); 5.5 [Nva]2-[Nva]5[(D)Ser]8-cyclosporine [formule IIIa: X' = -MeBmt-, Y' = -Nva-, Z' = -Nva, W' = -(D)Ser-] []0O = -217* (c =l,Odans CHC13); et 5.6 [Thr]2-[(D)Ser]8cyclosporine [formule IIIa: X' = -MeBmt-, Y' = -Thr-, Z' = -Val-, W' = (D)Ser-]: [a]O = - 258 (c =0,39 dans CHCl3)/- 178(c =0,40 dans CH30H): F 147 - 152. 25616 5 1 Exemple 6 Le composé de l'exemple 5.2 peut également être préparé par voie microbiologique de la manière suivante: a) 10 litres d'un milieu nutritif contenant 50 g de maltose-, 5 g de (DL)-norvaline, 8 g de (D)-sérine, 0, 75 g de KH2P04, 5,0 g de MgSO4.7H20, 0,1 g de CaC12.6H20 et 8 g de peptone de caseine par litre sont inoculés avec 1 litre d'une suspension de conidies et de mycélium de la souche fongique NRRL 8044,pré- levée d'une préculture cultivée pendant 3 jours. Le milieu de production inoculé est versé par portions de 100 ml dans 100 erlenmeyer que l'on incube ensuite pendant 14 jours à 27 sur un agitateur rotatif (180 tours/minute). Le mycélium est séparé du milieu de culture et extrait dans un appareil Turrax par broyage et agitation avec 3 x 3 litres de méthanol à 90%. Le mycélium broyé est séparé du solvant par essorage et les filtrats combinés sont concentrés par évaporation sous vide à une température de 40 , jusqu'à ce que la vapeur soit constituée essentielle- ment d'eau. Le mélange obtenu est extrait 4 fois en utilisant 0,5 litre de 1,2-dichloroéthane à chaque extraction et les solutions combinées de 1, 2-dichloroéthane sont concentrées par évaporation sous vide à une température de 40 . Le résidu obtenu est soumis à une filtration sur Sephadex LH-20 (1,4 kg, Pharmacia) avec du méthanol, et est recueilli par fractions de 280 ml. Les fractions 9 - 11, contenant un mélange de cyclosporines, sont réunies et ensuite chromatographiées par fractions de 500 ml sur colonne de gel de silice (1 kg de gel de silice "Merck", dimension des parti- cules 0,063-0,2 mm) en utilisant comme éluant de l'acétate d'éthyle saturé d'eau. Selon leur polarité, la ENva]2-cyclosporine est diluée d'abord (fractions 7 à 9), suivie par un mélange comprenant la [Nva]2-[(D)Ser]8cyclosporine et la Cyclosporine. La séparation de la [Nva]2-[(D)Serl8-cyclosporine et de la cyclosporine est effectuée par Chromato- graphie sur gel de silice (280 g, Merck, dimension des particules 0,63-0, 2 mm) en utilisant un mélange 98:2 de chloroforme et de méthanol comme éluant (fractions de 100 ml). Les fractions 20 à , contenant la [Nva] [(D)Ser] -cyclosporine brute, sont purifiées par chromatographie à faible pression sur une colonne de gel de silice à phase inversée(Merck LiChropep RP 18, 260 g, dimension des particules 0,04 - 0,063 mm) en utili- sant un mélange 85:15 de méthanol et d'eau comme éluant (fractions de 25 ml). Les fractions à 55 donnent la [Nva]-[(D)Ser]-cyclosporine à l'état pur sous forme d'une poudre blanche amorphe: F = 150-153 ; [a]20 = -262 C (c = 0,71 dans CHC13) et -191 (c = 0,73 dans CH30H). La préculture nécessaire pour le procédé ci-dessus peut être obtenue comme suit: b) La suspension de sporeset de mycélium utilisée pour l'inoculation, est préparée à partir d'une culture de la souche NRRL 8044isolée à l'origine, cultivée pendant 21 jours à 27 sur un milieu gélosé conte- nant 20 g d'extrait de malte, 20 g de gélose et 4 g d'extrait de levure par litre d'eau déminéralisée. Les spores de ces cultures sont reprises dans une solution physiologique de chlorure de sodium pour donner une concentration finale de 5 x 106 spores/ml. ml de cette suspension sont utilisés pour inoculer 1 litre d'une solution nutritive ayant la même composition que le mileu de culture de l'exemple 6a, excepté la (D)-sérine et la (DL)-norvaline, et l'incubation est effectuée à 27 pendant 3 jours sur un agitateur rotatif (200 tours/minute). Cette culture est utilisée comme inoculum pour le milieu de production. La [Nvai2-(D)Ser]8-cyclosporine peut être produite en bioréacteur de la manière suivante: c) Environ 109 spores d'une culture sur milieu gélosé incliné de la souche NRRL 8044 sont transférées dans un fermenteur en acier inoxydable contenant 20 litres d'un milieu de préculture ayant la composition suivante: Fructose 75 g Amber EHC 25 g KH20P4 5 g KC1 2,5 g Eau distillée pour 1 litre (pH = 5,5) stérilisé au préalable pendant 20 minutes à 1200. Les conditions favorables pour l'incubation sont les suivantes: température 27 , débit d'air 16 litres par minute à une surpression de 0, 5 bar et agitation rotative à 200 tours/minute. On laisse la préculture se développer en l'incubant-pendant 6 jours et on transfère ensuite 15 litres dans un fermenteur en acier inoxydable contenant 300 litres d'un milieu de production ayant la composition suivante: Maltose 75 g Amber EHC 25 g KH2PO4 5 g KCI 2,5 g (DL)-norvaline 5 g (D)-sérine 8 g Eau distillée pour 1 litre (pH = 5,5) * stérilisé au préalable pendant 20 minutes à 120 . - La culture est maintenue à une température de 27 sous une aération de 120 litres par minute et à une surpression de 0,5 bar et sous agitation à 70 tours par minute. Pour éviter la formation de mousse, on ajoute une émulsion de silicone. Apres incubation pendant 14 jours, la culture, qui a une volume total de 275 litres, est refroidie à 100 et le mycélium est éliminé en utili- lO sant un séparateur Westfalia. On extrait le filtrat en l'agitant 2 fois avec de l'acétate d'éthyle, on lave les extraits avec un peu d'eau, on les combine et on les sèche sous vide. Le mycélium est combiné avec du méthanol, homogénéisé et filtré. Cette extraction est répétée 2 fois en utilisant du métha- nol à 90%. Les extraits méthanoliques sont combinés et, sous addition d'eau, concentrés sous vide. On extrait 2 fois le concentré aqueux restant avec de l'acétate d'éthyle, on lave les extraits avec un peu d'eau, on les combine et on les concentre sous vide. La phase aqueuse * est extraite à nouveau 2 fois avec un mélange 8:2 d'acétate d'éthyle et d'isopropanol. Ces extraits sont combinés et évaporés à nouveau sous vide. Les extraits de mycélium et de filtrat sont filtrés en utilisant 50 fois la quantité de Sephadex LH-20 et du méthanol comme éluant. On purifie ensuite par chromatographie les fractions contenant les pics d'élution en utilisant 100 fois la quantité de gel de silice 60 (dimension des particults= 0,04- 0,063 mm)et de l'acétate d'éthyle saturé d'eau comme éluant. La [Nva]2 cyclosporine est éluée d'abord suivie par la cyclosporine et la [Nval2-E(D)-Ser]B- cyclosporine. Ces dernières fractions sont soumises à une autre purification par chromatographie en utilisant 140 fois la quantité de gel de silice 60 (dimension des particules 0,063 - 0,20 mm) et un mélange 98:2 de chloroforme et de méthanol comme éluant, ce qui donne la [Nva] [(D)Ser]8-cyclosporine. Exemple 7 Le composé de l'exemple 5.3.peut également être préparé par voie microbiologique en procédant de manière analogue à celle décrite à l'exemple 6a) mais avec les modifications suivantes: a) Dans le milieu nutritif, on remplace la (DL)-norva- line par 10 g de (L)-valine. Après séparation du mycelium du milieu de culture, on effectue l'extrac- tion comme suit: Le mycélium broyé est séparé du solvant par essorage et les filtrats combinés sont concentrés, sous addition d'eau, par évaporation sous vide à une température de 40 , jusqu'à ce que la vapeur soit essentiellement constituée d'eau. On extrait 3 fois le mélange en utilisant à chaque extraction litres d'acétate d'éthyle et on concentre les solu- tions d'acétate d'éthyle combinées par évaporation sous vide à une température à 40 . Le résidu obtenu est soumis à une filtration sur Sephadex LH-20 (1,4 kg, Pharmacia) avec du méthanol. Les fractions constituées d'un mélange de cyclosporinessont réunies et ensuite séparées par chromatographie sur colonne de gel de silice (3 'kg de silicagel, dimension des particules = 0,020 - 0,045 mm, "Grace") en utilisant de l'acétate d'éthyle saturé d'eau comme éluant. Selon leur pola- rité, la [Val]2-cyclosporine est éluée d'abord suivie par un mélange constitué principalement de [ al-(D)Ser]8-cyclosporine. On purifie nou- [Val] -[(D)Ser] -cyclosporine. On purifie à nou- veau la [Val]-[(D)Ser] -cyclosporine par chroma- tographie sur gel de silice (80 g, "Grace", dimension des particules = 0, 020 - 0,0045 mm) en utilisant un mélange l:l d'acétone / hexane comme éluant. Les fractions contenant la [Val]2 -[(D)Ser] 8-cyclos- porine à l'état brut sont purifiées à nouveau par chromatographie à faible pression sur une colonne de gel de silice à phase inversée ("Merck" LiChroprep RP 18, 160g, dimension des particules = 0,04 - 0,063 mm) en utilisant un mélange 80:20 de méthanol et d'eau comme éluant, ce qui donne la [Val]2-[(D)Ser]8cyclosporine à l'état pur sous forme d'une poudre blanche amorphe. b) La préculture requise est obtenue de manière analogue à celle décrite à l'exemple 6b). La [Val] -[(D)Ser] -cyclosporine peut être préparée dans un bioréacteur en procédant de manière analogue à celle décrite à l'exemple 6c) mais avec les modifications suivantes: c) Dans le milieu de production,on remplace la (DL)-nor- valine par 10 g de (L)-valine. Après combinaison du mycélium avec du méthanol, homogénéisation et filtration (répété 2 fois en utilisant du méthanol à 90%), on procède ensuite de la manière suivante: Les extraits méthanoliques sont combinés et, avec addition d'eau, concentrés sous vide. On extrait 3 fois le concentré aqueux restant avec de l'acétate d'éthyle, on lave les extraits avec un peu d'eau, on les combine et on les évapore sous vide. Les extraits de mycélium et de filtrat sont filtrés en utilisant 50 fois la quantité de Sephadex LH-20 et du méthanol comme éluant. Les fractions contenant les pics d'élution sont ensuite purifiées par chromatographie en utilisant fois la quantité de gel de silice 60 (dimension des particules = 0,04 - 0,063 mm) et de l'acétate d'éthyle saturé- d'eau comme Mluant. La [Val] -cyclos- porine est éluée d'abord suivie de la Cyclosporine et de la [Val]2-[(D) Ser]8-cyclosporine. Ces dernières fractions sont purifiées à nouveau par chromatographie sur 100 fois la quantité de gel de silice 60 en utilisant un mélange 1:1 d'acétone et d'hexane comme éluant et par chromatographie à faible pression sur gel de silice à phase inversée ("Merck" LiChroprep RP 18, dimension des particules = 0,04- 0,063 mm) en utilisant un mélange 80:20 de méthanol et d'eau comme éluant, ce qui donne la [Val]2- [(D)Ser- cyclosporine à l'état pur. Exemple 8 Le composé de l'exemple 5.6 peut également être préparé par voie microbiologique en procédantde manière analogue à celle décrite à l'exemple 6a) mais avec les modifications suivantes: a) Dans le milieu nutritif, on remplace la (DL)-norva- line par 5 g de (L)-thréonine. Apres incubation, on extrait de la manière suivante: On sépare le mycélium du milieu de culture et on l'extrait dans un appareil Turrax par broyage et agitation avec 3 x 9 litres de méthanol à 90%. Le mycélium broyé est séparé du solvant par essorage et les filtrats combinés sont concentrés, sous addi- tion d'eau, par évaporation sous vide à une tempéra- ture de 400 jusqu'à ce que la vapeur soit essentielle- ment constituée d'eau. On extrait 3 fois le mélange obtenu en utilisant 5 litres d'acétate d'éthyle à chaque extraction et on concentre les solutions d'acétate d'éthyle réunies par évaporation sous vide à une température de 40 Le résidu obtenu est soumis a une filtration sur Sephadex LH-20 (2kg, Pharmacia) avec du méthanol.. Les fractions constituées d'un mélange de cyclosporines sont réunies et ensuite séparées par chromatographie sur colonne de gel de silice (2 kg de gel de silice, dimension des particules = 0,02 - 0,045 mm, "Grace") en utilisant de l'acétate d'éthyle saturé d'eau comme éluant. Selon leur polarité, la Cyclosporine est éluée d'abord, suivie de la[(D)Ser] cyclosporine, de la [Thr]2-cyclosporine et finalement de la [Thr]-2_[(D) Ser]8-cyclosporine à l'état brut. On purifie la [Thr]2-[(D)Serl8-cyclosporine par chroma- tographie sur gel de silice (50 g, "Grace", dimen- sion des particules = 0,02 - 0,45 mm) en utilisant un mélange 2:1 d'acétone et d'hexane comme éluant, ce qui donne la [Thr] -[(D)Ser]8cyclosporine à l'état pur sous forme d'une poudre blanche amorphe. b) La préculture requise est obtenue comme décrit à l'exemple 6b). La [Thr]2-[(D)Ser]8-cyclosporine peut être préparée en bioréacteur en procédant de manière analogue à celle décrite à l'exemple 6c) mais avec les modifications suivantes: c) Dans le milieu de production, on remplace la (DL)- norvaline par 5 g de (L)-thréonine. Apres incubation et élimination du mycélium en utilisant un sépara- teur Westfalia, on procède de la manière suivante: On combine le mycélium avec du méthanol, on homogénéise et on filtre. Cette extraction est répétée 2 fois en utilisant du méthanol à 90%. Les extraits méthanoliques sont combinés et, sous addition d'eau, concentrés sous vide. On extrait 3 fois le concentré aqueux restant avec de l'acétate d'éthyle, on lave les extraits avec un peu d'eau, on les combine et on les concentre sous vide. L'extrait de mycélium est filtré en utilisant fois la quantité de Sephadex LH-20 et du méthanol comme éluant. Les fractions contenant les pics d'élution sont ensuite purifiées par chromatographie en utilisant 30 fois la quantité de gel de silice (dimension des particules = 0,04 - 0, 063 mm) et de l'acétate d'éthyle saturé d'eau comme éluant. La Cyclosporine est éluée d'abord suivie de la [(D)Ser] -cyclosporine, de la [Thr]2-cyclosporine et finalement de la [Thr] - [(D)Ser]8-cyclosporine. Ces dernières fractions sont purifiées à nouveau par chromatographie en utilisant 250 fois la quantité de gel de silice 60 (dimension des particules = 0,02-0,045 mm) et un mélange 2:1 d'acétone et d'hexane comme éluant., ce qui donne la [Thr]2-[(D)Ser]8-cyclosporine à l'état pur. Exemple 9 Les composés suivants,qui peuvent être utilisés comme produitsde départ pour la préparation des composés des exemples 4.1 à 4.3, peuvent être préparés à partir des cyclosporines indiquées aux exemples 5 à 7, en procédant de manière analogue à celle décrite à l'exemple 3. 9.1 [Dihydro-MeBmt]l-[Nva]2-[(D)Ser]8-cyclosporine [formule Illa: X' = dihydro-MeBmt-, Y' = -Nva-, Z' = -Val-, W' = -(D)Ser-] -préparée partir du produit de l'ex. 5.2 ou 6: [a]20 = D - 251 (c =,23 dansCHC13)/- 179 (c =,16 dans CH30H): F = 155- 157. 9.2 [Dihydro-MeBmt]l-[Val]2-[(D)Ser]8-cyclosporine rformule IIIa: X' = dihydro-MeBmt-, Y' = -Val-, Z' = -Val-, W' = -(D)Ser-] - prépareà partir du produit de l'ex. 5.3 ou 7: []20 = - 224 (c =l,0 dansCHC13). 9.3 [Dihydro-MeBmt]l-[Thr]2-[(D)Ser]8-cyclosporine [formule IIta: X' = dihydro-MeBmt-, Y' = -Thr-, Z' = -Val-, W' = -(D)Ser-] - préparéeà partir du produit de l'ex. 5.3 ou8[a]20 = - 262 (c =0,73 dans CHCl3)/- 173 ' (c =0,79 dans CH30H): F =156 - 158 Les cyclosporines de l'invention qui contiennent en position 8 le reste d'un(D)-acyloxy-a-amino-acide, par exemple les cyclosporines de formule I, se signa- l5 lent par d'intéressantes propriétés pharmacologiques et peuvent par conséquent être utilisées en thérapeu- tique comme médicaments. L'activité pharmacologique de ces composés a été mise en évidence dans les essais suivants: 1. Activité immunosuppressive 1.1. Hémolyse locale sur gel in vitro [R.I. Mishell et R.W. cutton, J. Exp. Medicine, 126, 423-442 (1976]. Les cyclosporines de formule I selon l'invention inhibent à des concentrations de 0,01 à 10,0,ug/ml les zones d'hémolyse, par comparaison aux essais témoins non- traités. 1.2. Essai de stimulation lymphocytaire selon Janossy et Greaves [Clin. Exp. Immunol.,9, 483 (1971) et 10, 525 (1972)]:- les cyclosporines de formule I selon l'invention inhibent, à des concentrations comprises entre 0,001 et 10,0 ug/ml, la synthèse de l'acide désoxyribonucléique (DNA) stimulée par la concanavaline A (inhibition de l'assimila- tion de la H3-thymidine), la prolifération des cellules et la blastogénèse des lymphocytes spleni- ques de souris,par comparaison aux essais témoins non traités. 1.3. Réaction lymphocytaire mixte [J.F. Bach et coll., J. Exp. Med. 136, 1430 (1972)]: La réaction, c'est-à-dire la prolifération et la différentiation, des lymphocytes [cellules spleniquesde souris Balb/c] par co-incubation pendant 5 jours avec des cellules spléniques allogéniques provenant de souris irradiées (CBA), est mesurée en présence et en l'absence de la subs- tance à essayer. La réaction en l'absence de la substance à essayer sert de témoin et est considérée comme 100%. La réaction en présence de la substance à essayer est exprimée par le changement en %, comparé avec la réaction témoin 100%. On observe une inhibition de réaction en utilisant les cyclos- porines de formule I selon l'invention à une concentration comprise entre 0,001 et 10,0 pg/ml. 1.4. Suppression des rejets d'organes: On transplante des reins de rats donneurs (F 344,?) chez des rats receveurs (Wistar-Furth,). On administre la substance à essayer par voie orale pendant 14 jours aux rats receveurs et on arrête ensuite le traitement. 7 jours après la transplantation, les animaux d'essais sont soumis à une néphrectomie bilatérale. Etant donné que' la vie des animaux d'essais dépend de la tolérance à l'organe et du fonctionnement de ce dernier, une augmen- tation du temps de survie par rapport aux animaux témoins recevant un placebo sert seulement de paramètre pour l'efficacité de la substance à essayer. Dans cet essai, les animaux présentent une durée de survie de plus de 60 à plus de 250 jours après administration par voie orale des cyclos- porines de formule I à des doses comprises entre 2,5 et 10 mg/kg, alors que les animaux témoins non traités meurent tous dans environ 9 à 10 jours par suite du phénomène de rejet de l'organe. 2. Activité anti-inflammatoire L'activité anti-inflammatoire a été mise en évidence chez le rat dans l'essai del'arthrite expéri- mentale par adjuvant. Dans cet essai, l'arthrite expérimentalepar adjuvant est provoquée selon la méthode décrite par Pearson et Wood dans "Arthr. Rheum".2, 440 (1959). Dans cet essai, les cyclospo- rines de formule I sont actives aussi bien contre l'apparition de l'arthrite que contre l'arthrite établie, après administration par voie orale à des doses comprises entre 10 et mg/kg/jour. 3. Activité anti-parasitaire L'activité anti-malarique a été déterminee selon la méthode décrite par L. Rane dans "Chemo- therapyand Drug Resistance in Malaria" ed. W. Peters, Academic Press, New York, 1970. Des souris mâles (OF1) sont infestées le jour O avec 0,2 ml d'une suspension contenant 107 cellules de parasites de l'espèce Plasmodium berghei (souche NK 65) administrée par voie intrapéritonéale. La substance à essayer est administrée par voie sous-cutanée le jour 3 à des doses variees en utilisant 5 à lO souris/dose. Le temps de survie est enregistré et la dose efficace minimale (DEM) est calculée en comparant le temps de survie avec celui des animaux témoins non traités. Pour les animaux témoins, le temps de survie est d'environ 7 jours. La DEM est la dose à laquelle le temps de survie est doublé. Dans cet essai, les cyclosporines de formule I sont actives lorsqu'elles sont administrées par voie sous-cutanée à des doses comprises entre 25 et 100 mg/kg/jour. Grace à leur activité immunosuppressive, les cyclosporines de formule I peuvent être utilisées en thérapeutique pour la prophylaxie et le traitement des maladies et des conditions nécessitant une réduction de la réponse immunitaire par exemple pour supprimer la prolifération des lymphocytes et des immunocytes, en particulier dans le traitement des maladies auto-immunes ou pour la prévention du rejet après greffe ou transplantation, par exemple dans les greffes ou transplantationsde peau, de poumon, de coeur, de coeur -poumon, de moelle osseuse, de rein, de pancréas, de rate et de cornée. Les maladies auto immunes spécifiques pour lesquelles les cyclosporines de formule I sont utiles comprennent toutes celles pour lesquelles un traitement par la cyclosporine a été proposé ou utilisé, par exemple 1' anémie aplastique, l'anémie pure, la thrombopénie idiopathique, le lupus érythémateux disséminé, la polychondrite, la sclérodermie, la granulomatose de Wegener, l'hépatite chronique active, la myasthénie grave, le psoriasis, le syndrome de Steven-Johnson, la sprue idiopathique, la maladie de Crohn, l'ophtalmopa- thie de Graves, la sarcoldose, la sclérose multiple, la cirrhose biliaire primitive, le diabète juvénile, i'ulvéite postérieure,la fibrose interstitielle du poumon et l'arthrite psoriasique. Grâce à leur activité anti-inflammatoire, les cyclcsporines de formule I peuvent également être utilisées en thérapeutique pour le traitement des conditions inflammatoires, en particulier des conditions inflammatoires avec une éthiologie auto-immune ou à composante auto-immune, par exemple pour le traitement de l'arthrite et des maladies rhumatismales telles que la polyarthrite rhumatolde. Grâce à leur activité anti-parasitaire, les cyclosporines de formule I peuvent également être utilisées en thérapeutique comme agents antiparasitaires, c'est-à-dire pour le traitement des infestations parasi- taires variées,en particulier pour le traitement des parasitoses à protozoaire ainsi que des parasitoses à trématode et à nématode. Les types spécifiques d'infestations parasitaires pour lesquelles les cyclosporines peuvent être utilisées, comprennent toutes celles pour lesquelles un traitement par la Cyclosporine a déjà été proposé antérieurement dans la littérature, comprenant la schistosomiase, la filariose, la leishmaniose, la cocci- dioidomycose et en particulier le paludisme. Pour les indications mentionnées ci-dessus, la dose quotidienne à administrer sera de l'ordre d'environ 75 jusqu'à environ 5000, de préférence jusqu'à environ 2000 et plus préférablement jusqu'à environ 1500 mg de substance active à prendre en une seule fois ou en doses fractionnées 2 à 3 fois par jour. Les doses unitaires,par exemple pour l'administration par voie orale, comprennent avantageusement d'environ 25 jusqu'à environ 2500, de préférence jusqu'à environ 1000 et plus préférablement jusqu'à environ 800 mg de substance active en mélange avec un diluant ou véhicule acceptable du point de vue pharmaceutique. Les cyclosporines comportant le reste d'un (D)-acyloxy-a-amino-acide en position 8, par exemple les cyclosporines de formule I, peuvent être administrées par n'importe quelle voie habituelle, en Particulier comme indiqué pour l'administration de la Cyclosporine, en particulier par perfusion intraveineuse,par exemple dans le cas d'une greffe ou d'une transplantation, avant ou immédiatement après la greffe ou la transplantation, ainsi que durant les épisodes de troubles gastro- intestinaux susceptibles d'entraver l'absorption du produit, ou par voie orale, par exemple sous forme d'un soluté buvable. Conformément à ce qui précède, la présente invention concerne par conséquent une cyclosporine dans laquelle le reste de l'amino-acide en position 8 est le reste d'un (D)-acyloxy-a-amino-acide, par exemple une cyclosporine de formule I, pour l'utilisation comme médicament, en particulier pour l'utilisation comme immunosupresseur ou comme agent anti-inflammatoire ou agent anti-parasitaire. L'invention concerne également un médicament contenant, comme substance active, une cyclosporine dans laquelle le reste de l'amino-acide en position 8 est le reste d'un (D)-acyloxy-a-amino-acide, par exemple une cyclosporine de formule I. L'invention concerne également une composi- tion pharmaceutique comprenant, comme substance active, une cyclosporine dans laquelle le reste de l'amino-acide en position 8 est le reste d'un (D)-acyloxy-a-amino- acide, en particulier une cyclosporine de formule I, en association avec un diluant ou véhicule acceptable du point de vue pharmaceutique. Comme indiqué précédemment, les cyclosporines de formule Ila sont des composés nouveaux qui, en plus de leur utilité comme produits intermédiaires, se signalent par une activité et/ou un profil pharmacolo- gique intéressant, en particulier en ce qui concerne leur activité immunosuppressive et spécialement leur utilité pour la prévention du rejet après greffe ou trans- plantation. L'activité et/ou le profil pharmacolo- gique de ces composés est d'un intérêt tout particulier comparé par exemple aux autres cyclosporines spécifique- ment décrites dans le brevet européen n 0 056 782. L'activité pharmacologique des cyclosporines de formule IIIa peut être mise en évidence par exemple dans les essais 1.1, 1.2, 1.3, 2 ou 3 décrits précédemment. Ces ainsi que les cyclosporines de formule IIIa selon l'invention sont actives Dans l'essai 1.1 ci-dessus à des concentrations comprises entre 0,01 à 10 pg/ml, Dans l'essai 1:2 ci-dessus à des concentrations com- prises entre 0,001 et 10 Ag/ml, Dans l'essai 1.3 ci-dessus à des concentrations com- prises entre 0,001 et 10 ug/ml, Dans l'essai 2 ci-dessus à des doses comprises entre 10 et 30 mg/kg/jour par voie orale,et Dans l'essai 3 cidessus à des doses comprises entre et 100 mg/kg/jour par voie sous- cutanée. Grâce à leur activité immunosuppressive, les cyclosporines de formule IIIa peuvent être utilisées en thérapeutique pour la prophylaxie et le traitement des maladies et des conditions nécessitant une réduction de la réponse immunitaire, par exemple pour supprimer la prolifération des lymphocytes et des immuno- cytes, en particulier dans le traitement des maladies auto-immunes, par exemple dans le traitement des maladies auto-immunes spécifiques indiquées précédemment pour l'utilisation des cyclosporines de formule I, ou pour la prévention du rejet après greffe ou trans- plantation, par exemple des types spécifiques variés indiqués précédemment pour l'utilisation des cyclospo- rines de formule I. Grâce à leur activité anti-inflamma- toire, les cyclosporines de formule IIIa peuvent égale- ment être utilisées en thérapeutique pour le traitement des conditions inflammatoires, en particulier des conditions inflammatoires avec une éthiologie auto- immune ou à composante auto-immune, par exemple pour le traitement de l'arthrite et des maladies rhumatismales telles que la polyarthrite rhumatoide. Grâce à leur activité anti-parasitaire, les cyclosporines de formule III peuvent également être utilisées en thérapeutique comme agents anti- parasitaires, par exemple pour le traitement des infections parasitaires variées, en particulier comme indiqué précédemment pour les cyclosporines de formule I. Pour les indications mentionnées ci-dessus, ! la dose quotidienne à administrer sera de l'ordre d'environ 75 à environ 5000 mg,à prendre avantageu- sement en une seule fois ou en doses fractionnées 2 à 3 fois par jour. Les doses unitaires, par exemple pour l'adminis- tration par voie orale, comprennent avantageusement par exemple d'environ 25 à environ 2500 mg de cyclosporine de formule IIIa en mélange avec un diluant ou véhicule acceptable du point de vue pharmaceutique. Les cyclosporines de formule IiIa peuvent être administrées selon n'importe quelle voie habituelle, par exemple comme indiqué pour l'administration par la cyclosporine, en particulier par perfusion intraveineuse, par exemple dans le cas d'une greffe ou d'une transplanta- tion,avant et immédiatement après la greffe ou la transplantation, ainsi que durant les épisodes de troubles gastro-intestinaux susceptibles d'entraver l'absorption du produit, ou par voie orale, par exemple sous forme d'un soluté buvable. Conformément à ce qui précède, la présente invention concerne par conséquent une cyclosporine de formule IIIa pour l'utilisation comme médicament, en particulier pour l'utilisation comme immunosuppresseur ou comme agent anti-inflammatoire ou comme agent anti-parasitaire. L'invention comprend également un médicament comprenant, comme substance active, une cyclosporine de formule IIIa. L'invention comprend également une composi- tion pharmaceutique contenant, comme substance active, une cyclosporine de formule IIIa en association avec un diluant ou véhicule acceptable du point de vue pharmaceutique. REVENDICATIONS 1.- Une cyclosporine dans laquelle le reste de l'amino-acide en position 8 est le reste d'un (D)-acyloxy-a-amino-acide. 2.- Une cyclosporine selon la revendication 1, caractérisée en ce que le reste de l'amino-acide en position 8 est le reste d'un (D)-f-acyloxy-a-amino- acide. 3.- Une cyclosporine, caractérisée en ce qu'elle répond à la formule I -X-Y-Sar-MeLeu-Z-MeLeu-AlaoQ-MeLeu-MeLeu-MeVal () 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 1l dans laquelle X signifie -MeBmt- ou -dihydro-MeBmt-, Y signifie -aAbu,-Ala-, -Thr-, -Val- ou -Nva-, Z signifie -Val- ou -Nva-, et Q est un reste de formule II R2 | (II) R1-CO-O-CH I -NH-CH-CO- dans laquelle) - R1 signifie l'hydrogène ou un groupe alkyle en Cl-C4 ou phényle et R2 signifie l'hydrogène ou un groupe méthyle. 4.- La [0-acétyl-(D)-Ser] -cyclosporine. 5.- Une cyclosporine, caractérisée en ce qu'elle est choisie parmi - la rNva]2-[O-acêtyl-(D)-Sere-cyclosporine, la 1dihydro-MeBmt]l-[o-actyl-(D) Se8cyclosporine, - la [dihydro-MeBmnt] -EO-acétyl-(D)Ser]-cyclosporine, la [0-benzoyl-(D)Ser]8-cyclosporine, 1 2 8 - la[dihydro-MeBmt]l-[Nva]2 -[0-acétyl-(D)Ser]8 -cyclospo- rine, - la [Nva] -[0-acé-tyl-(D)-Ser]8-cyclosporine, - la [0-acétyl-(D) Thr]8-cyclosporine, - la [Val]2_-[0-acétyl-(D)Ser]8-cyclosporine, - la [dihydro-MeBmt l-[Val]2-[O-acétyl-(D)Ser] 8-cyclos- porine, - la [Nva]2-[Nva]5-[0O-acétyl-(D)Ser]8-cyclosporine, lO - la [Thr] 2-[0O-acétyl-(D)Ser]8-cyclosporine, et - la [dihydro-MeBmt]l-[Thr]2-[O-acêtyl-(D)Ser]8-cyclos- porine. 6.- Procédé de préparation d'une cyclosporine dans laquelle le reste de l'amino-acide en position 8 est le reste d'un (D)-acyloxy-aamino-acide, par exemple le reste d'un (D)-5-acyloxy-a-amino-acide, caractérisé en ce qu'il comprend: a) l'acylation d'une cyclosporine dans laquelle le reste de l'amino-acide en position 8 est le reste d'un (D)hydroxy-a-amino-acide, par exemple le reste d'un (D)-5-hydroxy-a-aminoacide, ou b) la réduction d'une cyclosporine dans laquelle le reste de l'amino-acide en position 1 est un reste -MeBmt- et le reste en position 8 est le reste d'un (D)-acyloxy-a-amino-acide, par exemple le reste d'un (D)-5-acyloxy-a-amino-acide, pour obtenirla cyclosporine correspondante dans laquelle le reste en position 1 est le reste-dihydro-MeBmt-. 7.- Procédé de préparation des cyclosporines de formule I définies à la revendication 3, caractérisé en ce qu'il comprend a) l'acylation d'une cyclosporine de formule III 6 16 5 1 -X-Y-Sar-MeLeu-Z-MeLeu-Ala-W-MeLeu-MeLeu-MeVa1 |M1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 l (II) dans laquelle X, Y et Z ont les significations données à la revendication 3 et W représente un reste de formule IV R2 1I HO-CH ( I V) -NH-CH-CO- (D) dans laquelle R2 a la signification donnée à la revendication 3, pour introduire en position dudit reste IV un groupe R1-CO- dans lequel R1 a la signi- fication donnée à la revendication 3, ou b) la réduction d'une cyclosporine de formule I telle que définie à la revendication 3,dans laquelle X signifie -MeBmt-, pour produire la cyclosporine correspondante dans laquelle X signifie le reste -dihydro-MeBmt-. 8.- Une cyclosporine telle que définie à l'une quelconque des revendications 1 à 5, pour l'utili- sation comme médicament. 9.- Une cyclosporine telle que définis à l'une quelconque des revendications 1 à 5, pour l'utilisa- tion comme immuno-suppresseur ou comme agent anti-inflam- matoire ou comme agent anti-parasitaire. 1O.- Un médicament, caractérisé en ce qu'il contient, comme substance active, une cyclosporine telle que définie à l'une quelconque des revendications 1 à 5. ll.- Une composition pharmaceutique, caractérisée en ce qu'elle comprend une cyclosporine telle que définie à l'une quelconque des revendications 1 à 5, en association avec un diluant ou véhicule acceptable du point de vue pharmaceutique 12.- Unecyclosporine de formule IIIa lO -'-Y'-Sar-MeLeu-Z'MeLeu-Ala-W'-MeLeu-MeLeu-MeVal 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 i l (IIIa) dans laquelle Y' signifie -aAbu-, -Thr-, -Val- ou -Nva-, Z' signifie -Val-.ou, lorsque Y' signifie -aAbu- ou -Nva-, également -Nva-, W' signifie -(D)Serou, lorsque Y' signifie -aAbu- et Z' signifie -Val-, également -(D)Thr-, et X' signifie -MeBmt ou, lorsque Y' signifie -Thr-,-Val- ou -Nva-, Z' signifie -Val- et W' signifie -(D)Ser-, également-dihydroMeBmt-, 13. Une cyclosporine, caractérisée en ce qu'elle est choisit par la [(D)Thr]8-cyclosporine, la [Nva]2-[(D)-Ser]8-cyclosporine et la [Nva]2ENva]5-[(D) Ser]8-cyclosporine. 14.- Procédé de préparation d' une cyclos- porine de formule IIIa telle que définie à la revendica- tion 12, caractérisé en ce qu'il comprend: c) la déprotection d'une cyclosporine de formule IIIa, telle que définie à la revendication 12, sous forme protégée à l'oxygène, d) la cyclisation d'un undécapeptide à chaîne droite comprenant la séquence -W'-MeLeu-MeLeu-MeVal-X'-Y'-Sar-MeLeu-Z'-MeLeu-Ala- 8 9 10 11 1 2 3 4 5 6 7 dans laquelle Y', Z', W' et X' ont les significations données à la revendication 12 pour la formule IIIa,ledit undé- capetide étant sous forme non protégée ou sous forme protégée à l'oxygène et, si nécessaire, la mise en oeuvre du procédé c), e) pour l'obtention d'une cyclosporine de formule IIIa dans laquelle Y' signifie -Thr-, -Valou -Nva-, Z' signifie -Val- ou, lorsque Y' signifie -Nva-, également -Nva, W' signifie -(D)-Ser- et X' signifie -MeBmt-, la culture d'une souche fongique produisant la rThr]2 cyclosporine, la [Val]2-cyclosporine, 2 2 5 la [Nva]2-cyclosporine ou la ENva]2-lENva]5-cyclos- porine, dans un milieu nutritif contenant de la (D)-sérine et isolement de la cyclosporine de formule IIa à partir du milieu de culture, f) pour l'obtention d'une cyclosporine de formule IIIa dans laquelle X' signifie -dihydro-MeBmt, la réduc- tion de la cyclosporine correspondantde formule IIIa dans laquelle X' signifie -MeBmt-. 15.- Une cyclosporine telle que définie à la revendication 12 ou 13,pour l'utilisation comme médicament. 16.- Une cyclosporine telle que définie à la revendication 12 ou 13, pour l'utilisation comme immuno- suppresseur ou comme agent anti-inflammatoire ou agent anti-parasitaire. 17.- Un médicament, caractérisé en ce qu'il contient, comme substance active, une cyclosporine telle que définie à la revendication 12 ou 13. 18.- Une composition pharmaceutique, caracté- risée en ce qu'elle comprend une cyclosporine telle que définie à la revendication 12 ou 13, en association avec un diluant ou véhicule acceptable du point de vue pharmaceutique.