Brevet FR2571968A1 — publié le 19860425

Virus ourifié des lvmohadénooathies et du syndrome dim- muno-déDression acquise et antigènes d'enveloDpe de ce virus, procédé d'obtention de ce virus et de ces antigènes d'enveloppe de ce virus. aDDli-cations de ce virus ou de ces antigènes à la Drénaration de comnositions immunogènes ou Dour le diagnostic des susdites affections. La présente invention est relative à un virus purifié des lymphadénopathies (ci-aprés désignées par l'abré- viation SLA) et du syndrome d'immuno-dépression acquise (ci-après désigné sous l'abréviation SIDA), à un procédé d'obtention de ces antigènes des enveloppes de ces virus, à leurs applications à la préparation de compositions immunogènes ou pour le diagnostic des susdites affections. Un rétrovirus présentant des caractérisations de l'agent étiologique 'du SIDA a été identifié. Il a fait l'objet d'une première description dans un article de F. Barré-Sinoussi et al, Science, 220. 868 (1983). Ce rétrovirus présente les caractéristiques suivantes. Il est T-lymphotrope sa cible préférée est constituée par les cellules Leu 3 (ou lymphocytes T4) ; il a une activité de reverse transcriptase nécessitant la présence d'ions Mg2+ et présente une forte affinité pour le poly(adénylate-oligodéoxy-thymidylate)[poly(A) oligo(dT) 12-18] ; il a une densité de 1,16-1,17 dans un gradient de sucrose, un diamètre moyen de 139 nanomètres et un noyau ayant un diamètre moyen de 41 nanomètres , les lysats de ce virus sont reconnus de façon immunologique, ces lysats contiennent une protéine p25 reconnue par les mêmes sérums mais qui ntest pas reconnue immunologiquement par la protéine p24 des virus HTLVI et II. Des rétrovirus de ce type (quelquefois désignés par l'abréviation générique LAV) ont été déposés à la Collection Nationale des Cultures de Micro-organismes de l'INS- TITUT PASTEUR de Paris, sous les n 1-232. I-240 et 1-241. Des souches de virus en tous points analogues sur les plans morphologiques et immunologiques ont été isolées dans d'autres laboratoires ; on mentionnera pour mémoire la souche de rétrovirus dénommée HTLV-III (R.C. Gallo et al., Science, 224, 500 (1984) et M. G. Sarngadharan et al. Science 224, 506 (1984) et celle dénommée ARV, isolée par M. Jay Levy et ail., Science, 225, 840-842 (1984). Il est également fait référence à la demande de brevet européen déposée le 14 septembre 1984, sous priorité de la demande britannique n 83 24800 déposée le 15 septembre 1983 pour ce qui concerne une description plus détaillée des rétrovirus LAV ou analogues et des applications auxquelles des extraits de ces virus donnent lieu. Seuls les antigènes internes (core) au virus ont pu e.tre reconnus. après lyse du virus, par les sérums de patients affectés par le SIDA ou les SLA. Une protéine p41 a été décrite dans les susdits articles sur l'HTLV3 comme un composant possible de l'enveloppe du virus. Mais la preuve formelle qu'il s'agissait d'une protéine d'enveloppe n'a pas été apportée. Des procédés pour obtenir un virus LAV ou un virus apparenté ont également été décrits. On peut notamment se reférer à l'article déjà mentionné de F. Barré-Sinoussi et al., pour ce qui est de la préparation du virus dans des cultures de lymphocytes T provenant soit du sang, soit du cordon ombilical, soit également de cellules de moelle osseuse de donneurs adultes en bonne santé.Ce procédé comprend notamment les étapes essentielles suivantes e - infection virale de ces lymphocytes T, après activation par une lectine mitogène, avec une suspension virale provenant d'un surnageant brut de lymphocytes producteurs du virus (initialement obtenus à partir d'un patient infecté par le SIDA ou le SLA), - culture des cellules infectées avec du TCGF, en présence de sérum de mouton anti-a-interféron, - purification du virus produit (la production commence généralement entre le neuvième et le quinzième jours suivant l'infection et dure de 10 à 15 jours) par précipita tion du virus dans du polyéthyléneglycol pour-réaliser une concentration préalable du virus, puis centrifugation de la préparation dans un gradient de sucrose de 20 à 60 Z ou dans un gradient isotonique de métrizanide (vendu sous la marque commerciale NYCODENZ par NYEGAARD, Oslo), le virus étant récupéré avec la bande de densité appropriée (1,16-1,17 dans le cas du gradient de sucrose ou 1,10-1,11 dans un gradient NYCODENZ). Le virus LAV peut également être produit à partir de lignées continues du type T, telles que la lignée CEM, ou à partir de lignées cellulaires lvmphoblastoides B, telles qu'obtenues par transformation de lymphocytes B provenant d'un donneur sain avec le virus d'Epstein-Barr. Les lignées obtenues sont alors capables de produire en continu un virus (LAVIB) qui possèdent les lignées antigéniques et morphologiques essentielles des virus LAV (si ce n'est qu'il est recueilli dans une bande de densité parfois légèrement plus élevée que dans le cas précédent, notamment 1,18) dans le sucrose. La purification finale du virus peut également être réalisée dans un gradient de NYCODENZ. On peut encore se reporter pour les techniques générales de production de virus du type 8-LAV à la demande de brevet français déposée le 9 mai 1984 sous le n 84 07151. L'invention concerne une variété nouvelle de rétrovirus purifié, apparentée à celles qui ont été définies plus haut, mais qui s'en distingue (ou qui est caractéri- sée) par le fait que ces virus comportent un ou plusieurs antigènes, présentant les caractéristiques d'une glycoprotéine dans les tests qui sont décrits plus loin, ces antigènes pouvant être révélés par un marquage du virus avec de la cystéine marquée, notamment la 35-S-cystéine, en concentration suffisamment élevée à cet effet dans le mi- lieu de culture du virus, notamment à raison de 200 microcuries par ml de milieu, dépourvue de cystéine non mar quée. Ces antigènes sont reconnus de façon sélective par les sérums de patients affectés par le SIDA ou les SLAs ou par les sérums de porteurs asymptomatiques du virus. Un antigène préféré conforme à la précédente définition, tel qu'il peut être obtenu à partir d'un lysat de ce virus (ou par décapage doux des enveloppes du virus), a un poids moléculaire de l ordre de 110.000 daltons, ce poids moléculaire pouvant être apprécié dans un système de distances de migrations comparées dudit antigène et de protéines de poids moléculaires (PM) respectivement connus, notamment des protéines suivantes (commercialisées par AMERSHAM) et de - lysozyme-[14 C]-méthylé (PM : 14.300). - anhydrate carbonique -[14C]-methylée (PM : 30.000). - ovalbumine -[14C]-méthylé (PM : 46.000). - sérum albumine bovine [14C]-méthyle (PM :69.000). - phosphorylase b -[14C]-méthylée (PM : 92.500), - myosine -[14C]-méthylée (PM : 200.000). Les migration comparées ont été réalisées sur gel de polyacrylamide à 12,5 7;, puis sous tension de 35 V pendant 18 heures-. L'invention concerne encore les antigènes euxmêmes, notamment celui de poids moléculaire d'environ 110.000, qui possèdent en outre la capacité d'être reconnus par des sérums de patients affectés par le SIDA ou le SLA ou par des sérums de personnes qui ont été exposées à des virus LAV ou analogues à celui-ci. Ces antigènes présentent encore la caractéristique de former des complexes avec la concanavaline 'A, ledit complexe pouvant être dissocié en présence de O-methyl- -D-mannopyranoside. Les antigènes selon l'invention peuvent encore se lier à d'autres pectines, par exemple celles connues sous la désignation "LENTYL-LECTINE". L'antigène préféré selon l'invention, de poids moléculaire 110.000, est également sensible à l'action des endoglycosidases. Cette action se manifeste par la production à partir de l'antigène de poids moléculaire 110.000 d'une protéine ayant un poids moléculaire de l'ordre de 90,000, celle-ci pouvant être séparée par exemple par une immuno-précipitation ou par séparations en mettant en jeu les différences de poids moléculaires (migrations différenciées sur gel). Les antigènes préférés de l'invention sont constitués par des glycoprotéines. L'invention concerne encore un procédé pour produire les virus conformes à l'invention, ce procédé se distinguant essentiellement de ceux qui ont été rappelés plus haut au niveau de l'opération de purification finale. En particulier, l'étape de purification du procédé selon l'invention n'est plus réalisée dans des gradients, mais implique la réalisation de centrifugations différentielles opérées directement sur les surnageants des milieux de culture des cellules'productrices. Ces opérations de centrifugation comprennent notamment une premiére centrifugation sous une vitesse angulaire de centrifugation, notamment 10.000 tours par minute, permettant l'élimination des constituants non viraux, plus particulièrement des constituants cellulaires, puis une seconde centrifugation à une vitesse angulaire plus élevée, notamment à 45.000 tours par minute, pour obtenir la sédimentation du virus lui-meme. Dans des modes de mise en oeuvre préférés, la première centrifugation, à 10.000 tours par minute, est maintenue pendant 10 minutes et la seconde, à 45.000 tours par minute, pendant 20 minutes. Il ne s'agit bien entendu que de valeurs indicatives, étant entendu qu'il reste à la portée du spécialiste de modifier les conditions de centrifugation, dès lors qu'il prend soin de s'assurer de la séparation des constituants cellu-laires et des constituants viraux. Cette modification du processus de purification conduit à l'obtention de préparations virales dont peut ensuite être isolé l'antigène mentionné. Celui-ci n'a cependant pas été obtenu jusqu'à ce jour à partir des préparations de virus prépurifiés par les méthodes antérieures. En tout état de cause, les virus finalement obtenus selon le procédé de la présente invention se distinguent des préparations virales précédentes, en ce qu'ils sont reconnus par des sérums de patients ou de personnes qui ont été exposées au virus LAV ou à des souches morphologiquement et antigéniquement semblables. L'antigène selon l'invention peut lui-même être obtenu à partir de ces derniers virus, par lyse (ou autre traitement approprié) de ceux-ci en présence de tout détergent approprié et par récupération et séparation des antigènes libérés. Avantageusement, la lyse des virus est opérée en présence d'aprotinine ou de tout autre agent apte à inhiber l'action des protéases. La séparation des antigènes selon l'invention peut ensuite être opérée par toute méthode en soi connue ; par exemple on peut procéder à une séparation des protéines en mettant en jeu leurs migrations respectivement différentes dans un gel déterminé, la protéine recherchée étant ensuite isolée de la zone du gel dans laquelle elle doit normalement se trouver après une operation d'électrophorèse dans des conditions bien déterminées, eu égard à son poids moléculaire. L'antigène selon l'invention peut cependant être séparé du lysat des virus susdits, gracie à leur affinité pour les lectines, en particulier la concanavaline A ou la lentyllectine. La lectine utilisée est de préférence immobilisée sur support solide, tel que le polymère réticulé à base d'agarose, et commercialisé sous la marque SEPHAROSE. Aprés mise en contact du lysat au sein d'un tampon approprie, l'antigène retenu peut être élué de toute façon appropriée, notamment en ayant recours à une solution de O-méthyl-a-D-mannopyranoside. Une purification plus poussée de ces antigènes peut être réalisée par immuno-précipitation par des sérums de patients connus pour posséder des anticorps actifs contre ladite protéine, avec des préparations concentrées d'anticorps (anticorps polyclonaux) ou encore avec des anticorps monoclonaux, plus particuliérement orientés contre l'antigène selon l'invention, en particulier celui présentant le poids moléculaire de 110.000, ci-après désigne sous l'abréviation gel 10. Des caractéristiques supplémentaires de l'invention vont apparaitre encore au cours de la description qui suit de l'isolement d'un virus conforme à l'invention et d'un antigène d'enveloppe de ce virus. Il sera fait référence à la fig. 1, -qui est dérivée d'une reproduction photographique de bandes de gel qui ont été utilisées pour réaliser des électrophorèses d'extraits de lysats de lymphocytes T, respectivement infectes et non infectés (témoins) par une suspension de LAV. Des lymphocytes T provenant d'un donneur sain et infectés avec LAV1, 'dans les conditions décrites par F. Barré-Sinoussi et Coll., ou des cellules CEM provenant d'un malade atteint de leucémie et également infectées C- vitro avec LAV1, ont été maintenus en culture dans un 35 milieu contenant 200 microcuries de S-cystéine et dépourvu de cystéine non marquée. Les lymphocytes infectés sont maintenus en culture en milieu non dénaturant pour prévenir la dégradation de l'antigène recherché. Le surnageant du milieu de culture est ensuite soumis à une première centrifugation à 10.000 tours par minute pendant 10 minutes. pour éliminer les constituants non viraux, produits à 45.000 tours par minute pendant 20 minutes, pour produire la sédimentation du virus.Le culot de virus est alors lysé à l'aide de détergent, en présence d'aprotinine (5 Z) notamment dans les conditions décrites dans l'article de F. Barré-Sinoussi et Cool.. Les mimes opérations sont répétées sur des lymphocytes provenant d'un donneur sain à titre de témoin. Les différents lysats sont ensuite immunoprécipités par des sérums de patients affectés de SIDA ou de SLA, ainsi qu'avec des sérums provenant de donneurs sains ou affectés par d'autres maladies. Les milieux ont ensuite été soumis à électrophorese dans un gel de SDS-poly acrylamide, Les résultats sont indiques dans la fig. 2. Les bandes de gel numérotées de 1 à 6 ont été obtenues à 35 partir des préparations marquées par la S-cystéine. Les bandes numérotées 7 -à 10 correspondent aux résultats observés sur des préparations de lymphocytes infectés ou non infectés, marqués par la 35S-méthionine. Enfin la bande M correspond aux distances de migration des protéines de référence identifiées plus haut, dont les poids moléculaires ont été rappelés dans la partie droite de la figure. A la gauche de la figure sont référencées les pro téines virales qui ont été repérées. On remarque qu'e les colonnes 7 à 9 font apparaitre la protéine p25 spécifique de LAV. marquée par la 35Sméthionine, la même protéine étant absente des colonnes 8 et 10 correspondant à une observation faite sur des préparations obtenues à partir de lymphocytes sains. Les colonnes 3 et 5 correspondent aux résultats qui ont été observés sur des préparations obtenues à partir de lymphocytes infectés et marqués par la 35S-cystéine. On retrouve à la fois les protéines p25 et p18 caractéristiques des protéines du nucléotide du LAV et la glycoprotéine gap110 également spécifique de LAV.On voit ega- lement apparaitre dans les différentes préparations, bien que moins nettement, des images correspondant à une protéine p41 (poids moléculaire de l'ordre de 41,000) et non spécifique du virus LAV, Elle est observée également chez les témoins, Le virus selon l'invention et l'antigène selon l'invention peuvent etre soit précipités par des lectines, notamment la concanavaline A, ou fixés à une colonne de SEPHAROSE-concanavaline A, Cette fixation peut notamment etre opérée par la mise en contact du lysat du susdit virus au sein d'un tampon permettant la composition suivante Tris 10 mM NaCl 0,15 M CaCl2 1 mM MgCl2 1 mM Détergent commercialisé sous la marque TRITON 1 Z pH 7,4 Une fois la fixation réalisée, on lave le SEPHA ROSE-concanavaline A avec un tampon de même composition, si ce n'est la teneur en TRITON qui est abaissée à 0,1 7.. L'élution est ensuite réalisée avec une solution 0,2 M, O-méthyl-a-D-mannopyranoside, au sein du tampon de lavage. La protéine peut être davantage concentrée par immunoprécipitation avec les anticorps contenus dans des sérums de patients affectés du SIDA ou avec des anticorps polyclonaux obtenus à partir d'un sérum provenant d'un animal préalablement immunisé contre le virus selon l'in- vention ou la glycoprotéine susdite. La protéine peut alors etre récupérée par dissociation du complexe par une solution ayant une teneur adéquate en sel ionique. De préférence les susdites préparations d'anticorps ont préalablement été immobilisées de façon en soi connue sur un support insoluble du type SEPHAROSE B. On peut également avoir recours à des anticorps monoclonaux secrétés par des hybridomes préalablement préparés contre gel 10. Ces anticorps monoclonaux, ainsi que les hybridomes qui les produisent, font également partie de l'invention. On décrit ci-après les conditions dans lesquelles les anticorps monoclonaux selon l'invention peuvent être préparés. Immunisation des souris Des groupes de souris Balb/c âgées de 6 à 8 semaines ont été utilisées. Un groupe a reçu le virus comportant la susdite glycoprotéine, un autre la glycopro téine gap110. Le protocole d immunisation, identique pour les 4 souris, consistait en l'injection, par voie intrapéritonéale à trois reprises, puis une fois par voie intraveineuse, de 10 ug de la préparation antigénique en présence d'adjuvant complet de Freund au jour O. d'adjuvant incomplet de Freund au jour 14 et sans adjuvant aux jours 28 et 42. Fusion et culture des hvbrides Le variant 6.53 non secréteur du myélome P3 X 63 Ag8, résistant à l'azaguanine, provenant lui-même de la lignée MOPC-21, a été utilisé. La fusion avec les splénocytes de souris immunisées a été réalisée en présence de polyéthylene-glycol 4.000 selon la technique de FASEKAS DE ST-GROTH et SCHEIDEGGER au 45me jour (8). La sélection des hybrides en milieu RPMI 16-40 "HAT" a été effectuée selon la même technique de culture dans des plaques de 24 puits (Costar). Les hybridomes producteurs d'anticorps de spécificité adéquate ont ensuite été clonés en plaques de 96 puits. en présence d'une couche nourricière ("feeder") de thymocytes syngéniques. Les clones producteurs ainsi sé lectionnés ont alors été mis en expansion dans des plaques de 24 puits, toujours en présence de thymocytes. Lorsque la confluence apparaissait dans un des puits, le clone était injecté par voie intrapéritonéale à une souris BALB/c ayant reçu une injection de Pristane 8 jours auparavant et/ou maintenu en culture liquide. Mise en évidence des anticorps anti-LAV Cinq techniques différentes ont permis de caractériser les clones produisant des anticorps de spécificité intéressante. Dans un premier temps, on a déterminé les hybrides produisant des anticorps par une épreuve ELISA révélant les immunoglobulines de souris dans les surnageants. A partir de cette première sélection, on a recherché les surnageants qui présentaient des anticorps dirigés contre des constituants viraux à l'aide d'une épreuve ELISA révélant des anticorps anti-LAV (9), ou par l immunofluorescence sur cellules humaines productrices de virus.Enfin, les surnageants ont été analysés par radioimmunoprécipitation de virus marqué a la 35S-cystéine et par la technique du Western-Blot sur préparation virale (10) qui permettait de déterminer les spéciflcitos de ces anticorps anti-LAV; RESULTATS Les cellules obtenues a'- partir des différentes fusions ont été mises en culture dans 648 puits. L'examen microscopique a montré que la plupart de ces puits contenaient un seul clone hybride capable de pousser en milieu sélectif "HAT". Plus de 50 Z d'entre eux produisaient des anticorps donnant lieu à une réponse positive à l exa- men ELISA antivirus.Les fusions les plus représentatives ont été testées par'la technique du Western-Blot et plusieurs d'entre elles ont été sous-clonées, compte tenu de leur spécificité, de leur réactivité en ELISA antivirus et de leur comportement en culture. On a plus particulièrement retenu les hybrides qui ont produit des anticorps qui reconnaissaient la glycoprotéine de poids moléculaire correspondant à la glycoprotéine virale gap110. Tous les sousclonages ont donné lieu à des clones producteurs d'anticorps qui, après expression, ont été injectés à des souris syngéniques. L'analyse des spécificités des anticorps présents dans les différents liquides d'ascite a confirmé la spécificité des anticorps desdites ascites à l'égard de gpl 10. Les anticorps monoclonaux obtenus peuvent eux-memes etre mis en oeuvre pour purifier des protéines contenant un site antigénique également contenu dans gap110. L'invention concerne donc également ce procédé de purification en tant que tel. Ce procédé est avantageusement appliqué à des lysats de virus ou des lysats de lymphocytes T ou toutes autres cellules productrices de LAV ou analogue, dès lors qu'avant la lyse. on aura pris le soin d'éviter la séparation non contrôlée de gap110 (étant entendu que la méthode peut également être appliquée à toute solution contenant gpiîO ou une protéine. polypeptide ou glycoprotéine comportant un site antigénique de protéine d'enveloppe, reconnu par l'anticorps monoclonal, quelle que soit la nature de cette solution).Pour la mise en oeuvre de ce procédé, les anticorps monoclonaux sont avantageusement immobilisés sur un support solide, de préférence adapté à des opérations de chromatographie d'affinité. Par exemple, ces anticorps monoclonaux sont fixés sur un réseau d'agarose réticulation tri-dimensionnelle, commercialisé sous la marque SEPHAROSE par la société suédoise PHARMACIA A.G, , par exemple par la méthode au bromure de cyanogène. L'invention concerne donc plus particulièrement un procédé de séparation de ces antigènes caractérisés par les opérations consistant à faire passer le milieu susceptible de les contenir au contact d'une colonne d'affinité portant les susdits anticorps monoclonaux, pour fixer sélectivement lesdits polypeptides, protéines ou glycoprotéines puis à récupérer ceux-ci par dissociation du complexe antigène-anticorps au moyen d'tampon approprié, notamment d'une solution de force ionique adéquate, par exemple d'un sel, de préférence l'acétate d'ammonium (lequel ne laisse pas de résidu lorsque l'on réalise ensuite la lyophilisation de la préparation), On peut également avoir recours à une solution acidifiée à pH 2-4 ou à,un tampon glycine au même pH. Ces antigènes sont eux-mêmes susceptibles d'être utilisés comme réactifs, ou même comme agents de diagnostic in vitro, pour la détection d'anticorps anti-LAV. Il va de soi que l'invention concerne également des fractions polypeptidiques pouvant avoir des poids mol-écula ires plus faibles, dès lors qu'elles porteraient des sites antigéniques susceptibles d'etre reconnus par les mêmes anticorps monoclonaux.Il apparaîtra clairement au spécialiste qu à partir de l'instant où l'on dispose des anticorps monoclonaux selon l'invention, on peut envisager l'isolement, à partir des antigènes sus-indiqués, des séquences peptidiques plus petites contenant les mêmes sites antigéniques, par exemple en ayant recours à des techniques en soi connues de découpage du polypeptide initial par des enzymes susceptibles de découper les polypeptides plus grands en des sites spécifiques A titre d'exemple de telles protéines, on peut mentionner l'enzyme de StaDhvlococcus aureus V8, l'alpha-chvmotrypsine, la "protéase de glande sous-maxillaires de souris" (mouse submaxillary gland protease) commercialisée par la société BOEHRINGER, la collagénase de Vibrio alinolvticus chemovar iophaus, qui reconnait spécifiquement lesdits peptides Gly-Pro et Gly-Ala, etc.. On peut encore rechercher des polypeptides ou fragments d'antigènes d'enveloppes du virus, un clonant des fragments excisés à partir d'un cADN construit à partir des génomes des diverses variétés de virus LAV et analongues. La fig. 2 est représentative de cartes de restriction de certains de ces cADNs, comprenant un total de 9,1 à 9,2 kb. On s'intéressera plus particulièrement aux polypeptides codés par des fragments de cADN situés dans la région s'étendant entre le site KpnI (position 6100) visà-vis des cartes de restriction de la fig. 2 et le site BglII (position 9150). La présence d'un site caractéristique d'un antigène d'enveloppe du virus LAV ou analogue dans le polypeptide susceptible d'être exprimé (dans un hôte cellulaire approprié préalablement transformé par un tel fragment ou par un vecteur contenant ce fragment) peut être détecté par toute méthode immunochimique appropriée, Les antigènes du genre en question peuvent également être utilisés pour séparer des anticorps présentant les caractéristiques sus-indiquées à partir d'un mélange polyclonal d'anticorps. Dans ce cas, les polypeptides du genre en question seront à leur tour immobilisés sur un support de chromatographie d'affinité, par exemple du genre indiqué plus haut. Le procédé de séparation comprendra par conséquent l'étape consistant à faire passer une solution contenant les anticorps polyclonaux au contact des polypeptides immobilisés, et l'étape de récu pération des anticorps retenus au moyen d'une solution ou d'un tampon analogue à celle ou celui qui a été envisagé plus haut. Enfin l'invention concerne des compositions immu nogénes caractérisées par l'association d'un antigène conforme à l'invention, en tant que principe immunogène, notamment à raison de 10 à 500, par exemple de 50 à 100 microgrammes/kg, avec un excipient physiologiquement acceptable permettant son administration à un hôte vivant, plus particulièrement l'homme, en vue de lui conférer une immunité à l'égard desdits antigènes, y inclus les virus LAV ou analogues entiers, Ces antigènes constituent des principes actifs dont l'immunogénicité peut être mise en oeuvre à chaque fois qu'est recherchée une protection ia vivo contre des virus LAV ou des virus qui leur sont apparentés. L'invention concerne également un procédé utilisant les antigènes selon l'invention pour la détection de la présence d'anticorps anti-LAV, notamment dans des échantillons sanguins provenant de l'homme ou de l'animal, en vue d'effectuer la détection du SIDA ou des SLAs. Enfin l'invention concerne un procédé de diagnostic in vitro mettant en Jeu un antigène d'enveloppe conforme à la présente invention pour la détection d'anticorps anti LAV dans le sérum de patients affectés de la maladie ou de personnes immunisées contre le virus. Elle concerne plus particulierement un nécessaire ou "kit" comprenant cet antigène. Le procédé de diagnostic comprend notamment - le dépôt de quantités déterminées d'un antigène conforme à la présente invention dans les puits d'une microplaque de titrage - l'introduction dans ces puits de dilutions croissantes du sérum à diagnostiquer - l'incubation de la microplaque - le lavage soigneux de la microplaque - l'introduction dans les puits de la microplaque d anticorps marqués spécifiques d'immunoglobulines du sang, le marquage étant réalisé par une enzyme choisie parmi celles qui sont capables d'hydrolyser un substrat de telle sorte que ce dernier subit alors une modification de son absorption des radiations, au moins dans une bande de longueurs d'ondes déterminée et - la détection, de préférence de façon comparative par rapport à un témoin, de l'importance de l'hydrolyse du substrat en tant que mesure des risques potentiels ou de la présence effective de la maladie. Bien entendu, on peut réaliser des titrages quantitatifs d'anticorps sur les sérums étudies. Des méthodes préférées mettent en jeu des titrages immuno-enzymatiques ou immunofluorescents. en particulier conformément à la technique ELISA. Les titrages peuvent être des dosages par immunofluorescence ou des dosages immuno-enzymatiques directs ou indirects. REVENDICATIONS 1 - Rétrovirus présentant les caractéristiques de l'agent étiologique du SIDA. et plus particulièrement des rétrovirus LAV, caractérisé par le fait qu'il comporte un ou plusieurs antigenes présentant les caractéristiques d'une glycoprotéine et pouvant être rév-élés par un marquage du virus à l'aide d'une concentration élevée de 35S-cystéîne. notamment à raison de 200 microcuries par millilitre de milieu, et ce en l'absence de cystéine non marquée, ces antigènes étant en outre reconnus de façon sélective par des sérums de patients affectés par le SIDA ou le SLA, ou encore par des sérums de porteurs asymptomatiques du virus. 2 - Rétrovirus selon la revendication 1, caractérisé par le fait qu'il comporte un antigène d'enveloppe ayant un poids moléculaire de l'ordre de 110.000 daltons. 3 - Antigène ayant un poids moléculaire d'environ 110.000 ou antigène de poids moléculaire plus faible dérivé du précédent, qui possède la capacité d'être reconnu par des sérums de patients affectés par le SIDA ou le SLA ou par des sérums de porteurs asymptomatiques du virus. 4 - Antigène selon la revendication 3, qui présente encore la caractéristique de former des complexes avec la concanavaline A, ledit complexe pouvant être dissocié en présence de O-méthyl-a-D-mannopyranoside 5 - Antigene selon la revendication 3 ou la revendication 4 caractérisé en ce qu'il peut également se lier à'autres lectines. 6 - Antigène selon l'une quelconque Bes revendications 3 à 5, qui présente un poids moléculaire de l'ordre de 110.000 daltons et qui est également sensible à l'action des- endoglycosidases. 7 - Procédé d'obtention d'un rétrovirus conforme à la revendication 1 ou à la revendication 2, comprenant l'infection de lignées de lymphocytes T ou de lignées cellulaires lymphoblastoides B, la culture de ces cellules infectées et la purification du virus obtenu, caractérisé en ce que l'étape de purification finale du virus comprend la réalisation de centrifugations différentielles opérées directement sur les surnageants des milieux de culture des cellules productrices et la récupération du virus final, 35 lequel est marquable avec de la S-cystéine utilisée en concentrations élevées et en l'absence de cystéine non marquée. 8 - Procédé d'obtention d'un antigène conforme à l'une quelconque des revendications 3 à 6, comprenant l'isolement de cet antigène à partir du virus purifié obtenu à l'issue de la revendication 7, notamment par lyse de ce virus ou décapage des enveloppes de ce virus, et la séparation des antigènes qui ont la capacité d'être reconnus par des sérums de patients affectés par le SIDA ou le SLA, plus particulièrement de celui qui présente un poids moléculaire de l'ordre de 110.ode. 9 - Procédé selon la revendication 8, caractérisé en ce que la séparation de l'antigène comprend la mise en contact du milieu contenant l'antigène, tel qu'obtenu à l'issue du procédé défini dans la revendication 8, avec une lectine affine, telle que la concanavaline A ou la lentyl-lectine, cette lectine étant de préférence immobilisée sur un support solide, puis l'élution du susdit antigène, notamment à l'aide d'une solution de O-méthyla-D-mannopyranoside. 10 - Procédé selon la revendication 8, caractérisé en ce que ladite purification est réalisée par immunoprécipitation par les sérums de patients connus pour posséder des anticorps actifs contre ledit antigène ou encore avec des anticorps monoclonaux produits par des hybridomes préalablement formés et secrétant lesdits anticorps monoclonaux, ceux-ci reconnaissant plus particulièrement l'antigène conforme à l'une quelconque des revendications 3 à 6. 11 - Anticorps monoclonal caractérisé par sa capacité à reconnaitre spécifiquement l'antigène conforme à la revendication 6. 12 - Les hybridomes secréteurs de l'anticorps monoclonal selon la revendication 11. 13 - Composition immunogène caractérisée par l'association d'un antigène conforme à l'une quelconque des revendications 3 à 6, avec un excipient physiologiquement acceptable, permettant son administration à un hôte vivant, plus particulièrement 1 homme. 14 - Composition immunogène selon la revendication 13, caractérisée en ce qu'elle est dosée en antigène de façon à permettre l'administration d'une dose de 10 à 500, notamment de 50 à 100 microgrammes par kilogramme. 15 - Procédé de diagnostic comprenant - le dépôt de quantités déterminées d'un antigène selon l'une quelconque des revendications 3 à 6 dans les puits d'une microplaque de titrage - l'introduction dans ces puits de dilutions croissantes du sérum à diagnostiquer - l'incubation de la microplaque - le lavage soigneux de la microplaque - l'introduction dans les puits de la microplaque d'anticorps marqués spécifiques d'immunoglobulines du sang, le marquage étant réalisé par une enzyme choisie parmi celles qui sont capables d'hydrolyser un substrat de telle sorte que ce dernier subit alors une modification de son absorption des radiations, au moins dans une bande de longueurs d'ondes déterminée et - la détection, de préférence de façon comparative par rapport à un témoin, de l'importance de l'hydrolyse du substrat en tant que mesure des risques potentiels ou de la présence effective de la maladie.