Brevet FR2558828A1 — publié le 19850802

La présente invention concerne un dérivé biologiquement actif de la vitamine D, spécifique- ment une vitamine D lo,25-dihydroxylée comprenant une double liaison en 22,23-cis dans la chaîne la- térale et un procédé pour la préparer. L'homéostasie du calcium et du phosphate chez l'homme et les animaux est régie par les méta- bolites de la vitamine D et la lc,25-dihydroxyvita- mine D3 est généralement considérée comme étant le dérivé le plus actif et le plus important de la vi- tamine D agissant comme régulateur de l'équilibre normal du calcium et du phosphate. Ce métabolite naturel et les composés qui lui sont apparentés par la structure sont dès lors d'un grand intérêt phar- maceutique comme agents efficaces pour la prévention et le traitement des affections osseuses et des trou- bles apparentés du métabolisme du calcium. Outre les métabolites D3 naturels, on a préparé au cours des dernières années un certain nombre de composés qui, en raison de leur haute activité,trouvent une appli- cation ou sont prometteurs comme agents thérapeutiques, par exemple la l-hydroxyvitamine D3, la lc-hydroxy- vitamine DS, la l,25-dihydroxyvitamine D2 et cer- tains analogues fluorés. La plupart des analogues actifs connus sont caractérisés par la nature de la chaîne stéroïde latérale telle qu'elle existe dans la vitamine D3 (c'est-à-dire une chaîne latérale saturée). Les analogues connus à chaîne latérale 22,23-insaturée sont des composés de la série de la vitamine D2 (c'est-à-dire 22,23-trans-insaturés portant un radical méthyle en C-24) et sont notam- ment la 25-hydroxyvitamine D2 et les dérivés 24- et 24,25-dihydroxylés, outre trois composés exempts du radical méthyle en C-24. La Demanderesse a découvert à présent un nouvel analogue de la vitamine D qui fait l'objet de l'invention et qui répond à la formule I OH I I lI HO OH Ce nouveau composé est caractérisé par une double liaison en 22,23 dans la chaîne latérale ayant la géométrie en cis (ou Z). En raison de l'existence de cette double liaison en 22Z, qui conduit à une géo- métrie de la chaîne latérale fort différente de celle des composés comprenant une chaîne latérale saturée normale (comme dans la lo,25dihydroxyvitamine D3) ou une chaîne 22,23-trans (22E)-insaturée (comme dans la lo,25-dihydroxyvitamine D2), il fallait s'attendre à ce que ce composé cis-insaturé ne manifeste que peu ou pas d'activité biologique. Chose surprenante, ce composé manifeste une activité élevée puisqu'il est aussi actif que la l",25-dihydroxyvitamine D3 par son aptitude à élever les taux sériques de calcium chez les animaux soumis à l'épreuve. Le composé de l'invention (composé I) peut être préparé d'une 22Zdéshydrovitamine D,qui est un précurseur de formule II ci-après,par une hydroxyla- tion enzymatique in vitro au niveau de l'atome de carbone 25 au moyen d'une préparation homogénéisée de foie provenant de rats déficients en vitamine D. iiI HO OH On applique le procédé suivant: on donne à des rats mâles qui viennent d'être sevrés une alimen- tation pauvre en calcium et déficiente en vitamine D telle que décrite par Suda et al. [J.Nutr. 100, 1049 (1970)] pendant 2 semaines. On les sacrifie par dé- capitation et on prélève les foies. On prépare un produit d'homogénéisation à 20% (p/v) dans du saccha- rose 0,25 M glacé. On exécute l'incubation dans 10 ml de milieu d'incubation dans un Erlenmeyer de 125 ml contenant une aliquote du produit d'homogénéisation de foie représentant un 1 g de tissu, du saccharose 0,125 M, du tampon au phosphate 50 mM (pH 7,4),du glucose-6-phosphate 22,4 mM, de 1'ATP 20 mM, du ni- cotinamide 160 mM, du succinate 25 mM, du NADP 0,4 mM, du MgC12 5 mM, du KCl 0,1 M et 0,5 unité de glucose-6- phosphate-déshydrogénase. On amorce la réaction par addition de 400 /ug du substrat ou composé II ci- dessus en solution dans 100 /ul d'éthanol à 95%. On met le mélange à incuber à 37 C avec secouage a 80 oscillations par minute pendant 3 heures. On arrête la réaction par addition de 20 ml de méthanol et de 10 ml de dichlorométhane. Après addition d'en- core 10 ml de dichlorométhane, on recueille la phase organique tandis qu'on ré-extrait la phase aqueuse avec 10 ml de dichlorométhane. On combine les phases organiques d'un total de trois extractions et on les évapore à l'évaporateur rotatif. On dissout le résidu contenant le produit recherché dans 1 m d'un mé- lange CHC13:hexane (65:35) et on l'applique sur une colonne de Sephadex LH-20 (0,7 cm x 14 cm) remplie, mise à l'équilibre et éluée avec le même solvant. On rejette les 10 premiers ml et on recueille les ml suivants qu'on évapore. On dissout le résidu ensuite dans du 2-propanol à 8% dans de l'hexane et on le soumet à la chromatographie liquide à haute performance (Modèle LC/GPC 204 HPLC, Waters Associa- tes, Medford, MA, EUA) au moyen d'une colonne Zorbax- SIL (4,6 mm x 25 cm, Dupont, Wilmington, Delaware, EUA) fonctionnant sous une pression de 1000 livres par pouce carré (70 kg/cm2) au débit de 2 ml/minute. On élue le produit 25-hydroxylé recherché à 44 ml. On purifie ce produit davantage par chromatographie liquide à haute performance sur une colonne à phase inversée (Richrosorb Pp-18, 4,6 mm x 25 cm, E. Merck, Darmstadt, République Fédérale Allemande) fonction- nant sous une pression de 1200 livres par pouce carré (84 kg/cm 2) au débit de 2 ml/minute. On élue la co- lonne avec 22% de H20 dans du méthanol et on élue le composé à 50 ml. On purifie le produit davantage par HPLC au moyen de la colonne Zorbax-SIL dans les conditions indiquées ci-dessus. On soumet le produit résultant ensuite à la caractérisation physique. Caractérisation du produit Le spectre d'absorption UV du produit dans l'éthanol à 95% présente un Xmax à 265 nm et un min à 228 nm, indiquant la présence du chromophore 5,6- cis-triène. Le spectre de masse de la substance contient un ion moléculaire à m/e 414, comme requis pour un produit 25-hydroxylé. L'élimination d'une et de deux molécules de H20 donne des ions de fragments à m/e 396 et 378. La perte de toute la chaîne stéroïde latérale (rupture à la liaison C17/C20) fait apparaître le fragment de m/e 287 qui, par élimination d'une et de deux molécules de H2O,donne naissance aux pics à m/e 269 et 251. Le spectre comprend des pics importants à m/e 152 et 134 (152-H20) qui sont les fragments du cycle A et sont caractéristiques pour les l,3'dihydroxyvitamines D. De plus, le spectre comprend un pic très important d'un fragment à m/e 59 qui résulte de la rupture de la liaison C24/C25. La ]0 présence de cet ion confirme l'existence du radical -hydroxyle dans le composé. Ces données établis- sent donc que le composé obtenu est le composé l1,25- dihydroxylé de structure I ci-dessus. Activité biologique_ Les activités biologiques du nouvel analo- gue sont démontrées par une épreuve in vivo chez le rat. On donne à des rats mâles qui viennent d'être sevrés l'alimentation pauvre en calcium et déficiente en vitamine D de Suda et al. (voir ci-dessus) pendant 3 semaines. On les répartit ensuite en groupes comp- tant chacun S rats. On administre aux rats du groupe de contrôle 0,05 ml d'éthanol à 95% par injection à la jugulaire et on administre aux rats des autres grou- pes 325 pmoles de composé i ou de l",25-dihydroxyvita- mine D3 en solution dans 0,05 ml d'éthanol à 95%. On sacrifie les rats par décapitation 18 heures plus tard et on recueille le sang. On isole le sérum par cen- trifugation du sang et on le dilue avec une solution à 0,1% de chlorure de lanthane (1:20), puis on déter- mine la concentration sérique en calcium au spectro- photomètre d'absorption atomique. Les résultats sont rassemblés au tableau suivant: Augmentation de la concentration sérique en calcium sous l'effet d'une dose unique de 325 pmoles du com- posé I ou de lc,25-dihydroxyvitamine D3 administrée 18 heures avant le sacrifice Composé administré Concentration sérique en calcium (mg/100 ml) + écart type a) éthanol 4,2 + 0,1 a) b) composé I 5,2 + 0,2 lo(,25dihydroxyvitamine D3 5,4 + 0,4 b) b) a) b) est significativement différent de avec p Les résultats ci-dessus montrent que le nou- vel analogue est hautement actif et manifeste une ac- tivité biologique sensiblement équivalente à celle de la lt,25-dihydroxyvitamine D3. En raison de cette haute activité, le composé de l'invention peut trouver son application comme agent thérapeutique pour le traitement ou la prophylaxie de différentes affections comme les divers types de ra- chitisme, d'hypoparathyroidisme, d'ostéodystrophie, d'ostéomalacie ou d'ostéoporose chez l'homme, ou bien pour le traitement d'insuffisances calciques pathologi- ques apparentées chez les animaux (par exemple fièvre de lait, ostéomalacie, fragilité de la coquille des oeufs). De même, le composé peut être administré pour le traitement de certaines affections malignes, comme la leucémie chez l'homme. A des fins thérapeutiques, le composé peut être administré par toute voie classique et sous toute forme appropriée. Le composé peut être associé à un excipient pharmaceutique acceptable inoffensif quel- conque sous forme, par exemple, de pilules, de com- primés, de capsules de gélatine ou de suppositoires ou sous forme de solutions, d'émulsions, de disper- sions ou de suspensions dans des huiles ou solvants inoffensifs et ces compositions peuvent contenir d'autres constituants thérapeutiquement actifs et utiles que peut requérir l'application spécifique. Pour une application en médecine humaine, le composé est avantageusement administré en quantité, par exem- ple, de 0,25 à 10 /ug/jour, la dose spécifique étant ajustée en fonction de la nature de l'affection à traiter,ainsi que du passé médical, de l'état et de la réponse du sujet,comme il est évident. Le 22Z-déshydro-précurseur ou substrat (composé II) peut lui-même être préparé suivant le procédé du schéma I ci-après. Dans cette des- cription, la désignation d'un composé par un chiffre arabe (comme (1), (2), (3), etc.) renvoie aux struc- tures ainsi numérotées dans le schéma. Le substrat souhaité (composé II) est identifié par des chiffres arabes (11) dans le schéma I. (22Z-3P-(Méthoxyméthoxy)-5S,8o-(4-phényl-1,2-urazolo)- cholesta -6.22-diène (2). On fait réagir à 3-5 C sous agitation du bromure d'isopenténylphosphonium [(CH3)2CHCH2CH2PPh3Br] (1,67 g, 4,04 millimoles) dans du tétrahydrofurane sec (73 ml) avec du n-butyllithium (solution 1,7 M dans l'hexane, 2,42 ml, 4,11 millimoles). Après 1 heu- re d'agitation à la température ambiante, on refroidit la solution rouge orangé jusqu'à 3 C et on y ajoute l'aldéhyde (1) (1,84 g, 3,36 millimoles) dans du THF sec (24 ml). On agite le mélange de réaction inco- lore jusqu'au lendemain à la température ambiante et on le verse ensuite dans de l'eau, puis on l'extrait au benzène. On lave l'extrait organique avec du HCl à 5%, du bicarbonate de sodium saturé et de l'eau, on le sèche (Na2SO4) et on le concentre sous vide en une huile qu'on purifie sur une colonne de gel de silice. Par élution avec un mélange benzène- éther (94:6), on obtient le produit d'addition (2) (1,38 g, 68%) sous la forme d'une mousse: RMN 6 0,83 (3H, s, 18-H3), 0,89 et 0,91 46H, chacun d, J=6,8 Hz, 26-H3 et 27-H3), 0,97 (3H, d, J=6,8 Hz, 21-H3), 0,98 (3H, s, 19-H3), 3,30 (1H, dd, J1=4,4 Hz, J2=14Hz, 9-H), 3,38 (3H, s, OCH3), 4,33 (1H, m, 3-H), 4,70 et 4,81 (2H, q AB, J=6,8 Hz, OCH2O), 5,21 (2H, m 1, 22H et 23-H), 6,23 et 6,39 (2H, q AB, J=8,5 Hz, 6-H et 7-H), 7,41 (5H, m 1, Ar-H); IR: 1756, 1703, 1601, 1397, 1046 cm-1; spectre de masse, m/z 601 (M, 1%), 426 (4), 364 (61), 349 (16), 253 (18), 251 (18), 119 (PhNCO, 100). (22Z)-5o,80-(4-Phényl-1,2-urazolo)cholesta-6,22-diène- 3p3-ol (3). On agite pendant 2 jours à la température ambiante une solution du produit d'addition (2) (601 mg, 1 millimole) et d'acide p- toluènesulfonique (523 mg, 2,75 millimoles) dans un mélange méthanol (20 ml)- THF (12 ml). On verse le mélange de réaction dans du bicarbonate de sodium saturé et on l'extrait à plusieurs reprises au benzène. On lave les extraits à l'eau, on les sèche (Na2SO4) et on les évapore sous pression réduite. Par purification du produit brut par chromatographie sur colonne (benzène-éther 70:30 comme éluant),on obtient le produit d'addition hydro- xylé (3) (550 mg, 99%) sous la forme d'une mousse: RMN 6 0,83 (3H, s, 18H3), 0,89 et 0,91 (6H, chacun d, J=6,8 Hz, 26-H3 et 27-H3), 0,95 (3H, s, 19-H3), 0,98 (3H, d, J=6,8 Hz, 21-H3), 3,16 (1H, dd, J1=4,4 Hz, J2=14 Hz, 9-H), 4,44 (1H, m, 3-H), 5,22 (2H, m 1, 22-H et 23-H), 6,22 et 6,39 (2H, q AB, J=8,5 Hz, 6-H et 7-H), 7,40 (5H, m 1, Ar-H); IR: 3447, 1754, 1700, 1600, 1397 cm-1 spectre de masse, m/z 557 (M, 1%), 382 (35), 349 (33), 253 (20), 251 (33), 119 (100), 55 (82). (22Z)-Cholesta-5,7,22-triène-33-ol (4). On convertit le produit d'addition (3) (530 mg, 0,95 millimole) en le diène (4) par re- duction au moyen d'hydrure de lithium-aluminium (1 g) dans du tétrahydrofurane (60 ml) au reflux pendant 18 heures. Après isolement de la manière habituelle, on purifie le produit par chromatogra- phie sur de la silice (benzène-éther 94:6 comme éluant) pour obtenir à l'état de pureté le diène (4) (290 mg, 76%) après cristallisation dans l'éthanol, P.F. 148-151 C; [2]4 -132 (c=0,9, CHC13) RMN È 0,66 (3H, s, 18-H3), 0,90 et 0,91 (6H, chacun d, J=6,8 Hz, 26-H3 et 27-H3), 0,96 (3H, s, 19-H3), 0,98 (3H, d, J=6,9 Hz, 21-H3), 3,64 (1H, m, 3-H), ,20 (2H, m 1, 22-H et 23-H), 5,39 et 5,57 (2H, q AB, J=6 Hz, 7-H et 6-H); UV max 281 nm; max IR: 3346, 1463, 1375, 1364, 1067, 1040, 831 cm 1; spectre de masse, m/z 382 (M+, 100), 349 (65); 323 (32), 271 (15), 253 (30). (5Z,7E,22Z)-9,10-Secocholesta-5,7,10(19),22-tétraène- 31-ol (5) On irradie ie 5,7-diène (4) (150 mg, 0,39 millimole) en solution dans de l'éther (120 ml) et du benzène (30 ml) (dégazé à l'argon pendant 40 mi- nutes) à 0 C pendant 13 minutes au moyen d'une lampe UV et d'un filtre en Vycor. Par HPLC (1% de 2-pro- panol dans de l'hexane) du mélange résultant, on obtient la prévitamine (56,9 mg, 38%) sous la forme d'une huile incolore: RMN 6 0,75 (3H, s, 18CH3), 0,90 et 0,91 (6H, chacun d, J=6,7 Hz, 26-H3 et 27-H3), 0,99 (3H, d, J=6,8 Hz, 21-H3), 1,64 (3H, s, 19-H3), 3,90 (1H, m, 3-H), 5,20 (2H, m 1, 22-H et 23-H), 5,69 et 5,95 (2H, q AB, J= 12 Hz, 7-H e.t 6-H); UV Xmax 261 nm, min 234 nm. Par isomérisation thermique de cette pré- vitamine intermédiaire (56 mg, 0,15 millimole) dans de l'éthanol au reflux (3 heures), on obtient la vitamine analogue (5) huileuse (43 mg, 77%) après séparation par HPLC. RMN 6 0,60 (3H, s, 18-H3), 0,89 et 0,90 (6H, chacun d, J=6,7 Hz, 26-H3 et 27-H3), 0,97 (3H, d, J=6,6 Hz, 21- H3), 3,96 (1H, s, 3-H), 4,82 et 5,05 (2H, chacun m étroit, 19-H2), 5,20 (2H, m 1, 22-H et 23-H), 6,04 et 6,24 (2H, q AB, J=11,4 Hz, 7-H et 6-H); UVmax 265,5 nm, min 228 nm; UVmax min - IR: 3427, 1458, 1379, 1048, 966, 943, 892 cm-1 spectre de masse, m/z 382 (M+, 21), 349 (5), 271 (8), 253 (14), 136 (100), 118 (82). La vitamine analogue (5) est un composé connu (Bogoslovskii et al., J. Gen.Chem. USSR 48 (4), 828 (1978). 1-Hydroxylation du composé (5) On ajoute du chlorure de ptoluènesulfonyle fraîchement recristallisé (50 mg, 0,26 millimole) à une solution de la vitamine (5) (50 mg, 0,13 millimole) dans de la pyridine sèche (300 /ulitres). Après 30 heures à 4 C, on verse le mélange de réaction dans un mélange glace/NaHCO3 saturé sous agitation. On agite le mélange pendant 15 minutes et on l'extrait au ben- zène. On lave l'extrait organique au NaHCO3 saturé, au sulfate de cuivre saturé et à l'eau, on le sèche (Na2SO4) et on le concentre sous vide pour obtenir le tosylate huileux (6). On fait réagir le tosylate huileux (6) avec du NaHCO3 (150 mg) dans du méthanol anhydre (10 ml) et on agite le mélange pendant 8,5 heures à 55 C. Après refroidissement et concentra- tion à 2 ml, on dilue le mélange avec du benzène (80 ml), on le lave à l'eau, on le sèche (Na2SO4) 2 4 et on l'évapore sous pression réduite. La 3,5- cyclovitamine D huileuse (7) ainsi obtenue est suf- fisamment pure pour être utilisée au stade suivant d'oxydation sans aucune purification. On ajoute de l'hydroperoxyde de t-butyle (16,5 /ulitres, 0,118 millimole) à une suspension vivement agitée de SeO2 (5,1 mg, 0,046 millimole) dans du CH2C12 sec (5 ml). Après 30 minutes, on ajoute de la pyridine sèche (50 /ulitres) et on agite le mélange pendant encore 25 minutes à la température ambiante, on le dilue au CH2C12 (3 ml) et on le refroidit à 0 C. On ajoute ensuite la 3,5-cyclovitamine brute (7) dans du CH2C12 (4,5 ml). On laisse la réaction progresser à 0 C pendant 15 minutes, puis on réchauffe le mélange len- tement (30 minutes) jusqu'à la température ambiante. On transvase le mélange dans une ampoule à décanta- tion et on l'agite avec 30 ml de NaOH à 10%. On ajoute de l'éther (150 ml) et on lave la phase organique sé- parée avec du NaOH à 10% et de l'eau, puis on la sèche sur du Na2SO4. Par concentration à siccité sous vide, on obtient un résidu huileux jaune qu'on purifie par CCM sur plaque de gel de silice qu'on développe avec de l'hexane-acétate d'éthyle 7:3 pour obtenir la 1- hydroxycyclovitamine recherchée (20 mg, 37%): RMN 6 0,59(3H, s, 18-H3), 0, 63 (1H, m, 3-H), 0,89 et 0,90 (6H, chacun d, J=6,9 Hz, 26-H3 et 27-H3), 0, 96 (3H, d, J=6,9 Hz, 21-H3), 3,25 (3H, s, -OCH3), 4,17 (2H, m, 1-H et 6-H) , 4,96 (1H, d, J=9,3 Hz, 7-H), ,1-5,4 (4H, m 1, 19-H2, 22-H et 23-H); spectre de masse, m/z 412 (M+, 26), 380 (48), 339 (22), 269 (28), 245 (20), 135 (100). Le produit est composé principalement par la l"-hydro- xycyclovitamine D (8),ainsi que par une petite quan- tité du lp-hydroxy-épimère correspondant. On peut séparer ces constituants à ce stade si la chose est souhaitée, mais cette séparation n'est pas nécessaire. On chauffe (55 C/15 minutes) la 1-hydroxy- cyclovitamine (18 mg) obtenue comme ci-dessus dans l'acide acétique glacial (0,8 ml), on neutralise le mélange (glace/NaHCO3 saturé) et on l'extrait au ben- zène et à l'éther pour obtenir, après séparation par HPLC (1,5% de 2propanol dans l'hexane comme éluant) les 1"-hydroxy-3}-acétoxyvitamines (9) (6,60 mg, 34%, élution à 42 ml) et (10) (4,20 mg, 22%, élution à ml) à l'état de pureté. Composé (9): RMN 6 0,60 (3H, s, 18-H3), 0,90 et 0,92 (6H, chacun d, J=7,0 Hz, 26-H3 et 27-H3), 0,97 (3H, d, J=6,8 Hz, 21-H3), 2,04 (3H, s, -OCOCH3), 4,41 (1H, m, 1-H), ,02 (1H, m étroit, 19-H), 5,1-5,4 (4H, m 1, 3-,19-, 22et 23-H), 6,03 et 6,35 (2H, q AB, J=11,4 Hz, 7-H et 6-H); UV X max 264,5 nm, Xmin 227,5 nm; spectre de masse, m/z 440 (M+, 10), 380 (72), 362 (7), 269 (31), 251 (12), 135 (100), 134 (99). Composé (10): RMN 6 0,60 (3H, s, 18-H3), 0,90 et 0,91 (6H, chacun d, J=7, 0 Hz, 26-H3 et 27-H3), 0,97 (3H, d, J=6,9 Hz, 21-H3), 2,05 (3H, s, OCOCH3), 4,49 (1H, m, 1-H), ,00 et 5,14 (2H, chacun m étroit, 19-H2), 5, 20 (3H, m 1, 3-,22- et 23-H), 5,82 et 6,59 (2H, q AB, J=12,0 Hz, 7-H et 6H); UV)max 270 nm; min 228 nm; spectre de masse, m/z 440 (M+, 4), 380 (30) , 269 (10), (100), 134 (52). Hydrolyse du radical 3J-acétcxy des composés (9) et (10) On hydrolyse séparément chacun des 3p-acé- toxy-dérivés (9) et (10) suivant le même mode opéra- toire. On ajoute du KOH à 10% dans du méthanol (0,8 ml) à une solution de la 3J3-acétoxyvitamine (0,7-6 mg) dans de l'éthanol (0,1 ml) et on chauffe le mélange pendant 1 heure à 50 C. Après isolement de la manière habituelle et purification finale par HPLC (8% de 2-propanol dans l'hexane comme éluant), on obtient les 1-hydroxyvitamines correspondantes, à savoir: composé (11): (volume d'élution 39 ml). RMN 6 0,59 (3H, s, 18-H3), 0,89 et 0,90 (6H, chacun d, J=7,0 Hz, 26-H3 et 27-H3), 0,96 (3H, d, J=6,8 Hz, 21-H3), 4,23 (1H, m, 3-H), 4,43 (1H, m, lH), 5,00 (1H, m étroit, 19-H), 5,1-5,4 (3H, m 1, 19-, 22-, et 23-H), 6,02 et 6,39 (2H, q AB, J=11,4 Hz, 7-H et 6-H); UV max 264,5 nm, min 227,5 nm; spectre de masse, m/z 398 (M+, 21), 380 (8), 287 (6), 269 (7), 251 (5), 152 (36), 134 (100). Composé (12): (volume d'élution 38 ml). RMN 6 0,61 (3H, s, 18-H3), 0,89 et 0,91 (6H, chacun d, J=7,0 Hz, 26-H3 et 27-H3), 0,97 (3H, d, J=6,9 Hz, 21-H3), 4,25 (1H, m, 3-H), 4,51 (1H, m, lH), 4,98 et 5,13 (2H, chacun m étroit, 19-H2), 5,21 (2H, m 1, 22-H et 23H),5,89 et 6,59 (2H, q AB, J=11,5 Hz, 7-H et 6-H); UV max 273 nm, >min 229,5 nm; spectre de masse, m/z 398 (M, 17), 380 (4), 287 (5), 269 (5), 251 (4), 152 (29), 134 (100). Dans le procédé décrit ci-dessus, on exécute la chromatographie liquide sous haute pression (HPLC) sur un appareil Waters Associates Modèle ALC/GPC 204 avec une colonne Zorbax-Sil (DuPont) (6,2 mm x 25 cm, débit 4 ml/minute, 1500 livres par pouce carré, kg/cm2). On exécute la chromatographie sur colonne sur du gel de silice 60 N 70-230 ASTM (Merck) . On exécute la chromatographie préparative en couche mince (CCM) sur de la silice 60 PF-254 (plaques de cm x 20 cm, 1 mm de gel de silice). On exécute les irradiations avec une lampe à arc au mercure Hanovia 608A36 munie d'un filtre en Vycor. Toutes les réactions sont effectuées de préférence en at- mosphère inerte (par exemple d'argon). Si la chose est souhaitée, le composé de l'invention peut être obtenu aisément sous forme cristalline par cristal- lisation dans des solvants appropriés tels que l'hexane, des éthers ou des alcools (absolus ou aqueux),outre leurs mélanges, comme il est évident pour le spécialiste. SCHEMA I yCHO 4t) no.." o' 0, {l) R CHaOCHa ({) R*CH2OCHN W) R=N ""% I 4",, No ROSSE ) RaH (6} RaTs R X OH,o' Oxi [7) R:H (U) Xl'Acetyl {LO) Xi=Acetyl eat-- OH (LI) /11V u (12xi H. 1ó R E V E N D I C A T I ON S 1 - Composé caractérisé par la formule: QH H" OH HO 2 - Composé suivant la revendication 1, caractérisé en ce qu'il se trouve sous forme cristal- line. 3 - Composition pharmaceutique, caractéri- sée en ce qu'elle comprend le composé suivant la re- vendication 1 ou 2 conjointement avec un excipient pharmaceutiquement acceptable. 4 - Procédé de préparation d'un composé suivant la revendication 1 ou 2, caractérisé en ce qu'on exécute l'hydroxylation d'un composé de formule HÈ OH H"de manière connue. de manière connue.