Brevet FR2551872A1 — publié le 19850315

La présente invention concerne un appareil de réfrigération d'un spécimen biologique ou médical et, en particulier, un appareil de fixation cryogénique d'un spécimen en vue de son étude microscopique La fixation cryogénique d'un spécimen consiste à injecter rapidement un spécimen, à une vitesse convenablement comprise entre 5 et 15 m/s, dans un liquide de réfrigération qui peut être, par exemple, pré-refroidi à -190 C. Les cuves de réfrigération contenant des liquides à des 10 températures comprises entre -100 C et -190 C, avec des volumes compris entre 5 et 100 ml, sont utilisées dans de nombreuses opérations de préparation de spécimens, en particulier, pour la mise en oeuvre du procédé de congélation-choc ou "fixation cryogénique" de petits spécimens 15 biologiques ou médicaux en vue de leur examen microscopique ultérieur La préparation convenable du spécimen qui a été introduit dans le liquide de réfrigération ne doit être effectuée que lorsque l'on a éliminé autant de chaleur que possible de la surface du spécimen dans le temps le plus 20 court possible Cela s'applique en particulier aux spécimens biologiques ou médicaux qui n'ont pas été pré-traités, c'est-à-dire aux spécimens qui n'ont pas été soumis à une fixation préliminaire et/ou à un traitement de protection par congélation Pour de tels spécimens, la vitesse de 25 refroidissement seule détermine s'il se produit une séparation artificielle des phases plasmatiques riches en eau (la séparation rendrait l'examen microscopique sans valeur) ou si le spécimen gèle sous une forme vitreuse reflétant réellement son état antérieur (la vitrification s'opère à des vitesses de refroidissement supérieures à l O 000 o C/s). Les vitesses de réfrigération qui sont requises pour la vitrification ne sont obtenues que dans la zone superficielle du spécimen, cette zone ayant une épaisseur de 30 micromètres au plus La profondeur de la zone superficielle 35 parfaitement vitrifiée est déterminée essentiellement par la température et par les propriétés spécifiques du milieu réfrigérant, ainsi que par la vitesse à laquelle le spécimen a pénétré dans le milieu réfrigérant Le propane liquéfié -2 qui a été refroidi à une température qui n'est que légèrement supérieure à son point de congélation (-190 C) donne les meilleures conditions connues pour la vitrification En utilisant ce milieu réfrigérant, on obtient des vitesses de réfrigération initiales de l'ordre de 000 C/s, mais uniquement si le spécimen est injecté dans le liquide à des vitesses excédant S m/s. La liquéfaction, la réfrigération et le stockage du propane, dans des conditions de température constante, ne 10 présentent que peu de difficultés Cependant, l'injection du spécimen pose, elle, des problèmes et comporte des risques considérables Du fait que le spécimen est injecté à des vitesses comparativement élevées, pouvant aller jusqu'à 15 m/s, une quantité considérable de liquide de réfrigération 15 peut jaillir hors de la cuve de réfrigération En général, la quantité totale de cryogène est maintenue à un volume inférieur à 100 ml pour réduire les dangers associés avec le propane, c'est-à-dire les dangers d'incendie et d'explosion. Le diamètre du spécimen, et/ou de l'injecteur, excède en 20 général 3 mm et il est habituellement nécessaire que le spécimen soit déplacé sur une distance de 5 à 10 cm pour obtenir un refroidissement convenable Bien qu'il soit possible d'utiliser des milieux réfrigérants ininflammables, tels que des hydrocarbures halogénés (par exemple du FREON 25 13 qui a un point d'ébullition de -185 C), ces milieux donnent une vitesse de réfrigération de 20 % inférieure et d'autres difficultés demeurent Les éclaboussures de liquide réfrigérant provoquent des brûlures graves si le liquide vient en contact avec la peau. Plus de 90 % du milieu réfrigérant est souvent perdu lorsque les spécimens sont introduits dans la cuve de réfrigération à des vitesses supérieures à 10 m/s, avec des spécimens et portoirs de spécimens de diamètre classique (approximativement 3 à 5 mm), et des injecteurs de diamètre 35 classique (approximativement 4 mm) Il reste habituellement une quantité insuffisante de liquide dans la cuve de réfrigération pour réfrigérer d'autres spécimens, même quand -3 les spécimens sont petits, et les capacités thermiques du portoir de spécimen et du dispositif d'injection sont faibles Lorsqu'un spécimen et un portoir de spécimen sont insuffisamment refroidis, la quantité de chaleur qui reste à 5 l'intérieur du spécimen et/ou de l'ensemble portoir de spécimen/injecteur provoque un échauffement secondaire à la surface du spécimen apres la réfrigération superficielle initiale Par suite, il se produit une séparation artificielle dans la surface qui, initialement, avait été 10 parfaitement vitrifiée Pour pouvoir augmenter la qualité de la cryofixation en augmentant la vitesse d'injection, ainsi que pour l'accomplissement d'opérations en toute sécurité, il est souhaitable de prendre des mesures pour éviter qu'il se produise des éclaboussures de milieu réfrigérant même 15 lorsque les vitesses d'injection sont comparativement élevées. L'invention a pour but d'éliminer les inconvénients précités, c'est-à-dire qu'elle se propose d'apporter un dispositif qui empêche substantiellement le liquide réfrigé20 rant d'être projeté hors de la cuve de réfrigération, même avec des vitesses d'injection excédant 5 m/s. A cette fin, l'invention apporte un appareil de refroidissement d'un spécimen biologique ou médical, ledit appareil comprenant une cuve de réfrigération adaptée à 25 contenir un liquide réfrigérant, et un injecteur muni d'un portoir de spécimen, déplaçable le long d'une voie d'injection pour immerger un spécimen monté sur le portoir de spécimen dans un liquide réfrigérant contenu dans la cuve. Un manchon est déplaçable le long d'une voie alignée avec la 30 voie d'injection, entre une position basse pour laquelle il est contenu dans la cuve et une position haute dans laquelle le portoir de spécimen est disposé à l'intérieur du manchon et adapté à immerger le spécimen qui s'y trouve Le manchon et le dispositif d'injection coopèrent lorsque le manchon 35 est en position haute, de telle sorte que le liquide de réfrigération projeté à partir de la cuve au moment o un spécimen est immergé vient heurter le manchon ou un déflecteur prévu sur le dispositif d'injection pour être ramené dans la cuve. Le spécimen est protégé par le manchon tandis qu'il approche de la cuve de réfrigération, le manchon étant pré-refroidi par immersion dans la cuve de réfrigération. Tout milieu réfrigérant, qui est déplacé de la cuve tandis que l'injecteur, le spécimen et le portoir de spécimen entrent et pénètrent dans le liquide réfrigérant est ramené dans la cuve de réfrigération par le dispositif d'injection et le manchon La plus grande partie du milieu réfrigérant 10 revient dans la cuve le long des parois froides du manchon pour être de nouveau disponible et poursuivre l'élimination de la chaleur du spécimen et du portoir de spécimen, lequel procédé est habituellement désigné par "post-réfrigération". Tous les dangers qui sont normalement associés avec les 15 éclaboussures de milieu réfrigérant en laboratoire sont ainsi éliminés. Dans une forme d'exécution préférée, le manchon est monté à coulissement doux dans la paroi de la cuve de réfrigération. Un élément récepteur d'outil est monté sur le manchon, ou est d'une seule pièce avec ce dernier, grâce à quoi un outil peut être utilisé pour déplacer manuellement le manchon Le dispositif d'injection comprend une plaque obturatrice généralement horizontale, ou un déflecteur, qui 25 a une faible capacité thermique et qui vient fermer le manchon lorsque le manchon est en position haute, de telle sorte que le milieu réfrigérant est ramené dans la cuve de réfrigération par le déflecteur alors qu'autrement, il pourrait s'échapper par l'espace compris entre le support de 30 spécimen et le manchon Le milieu réfrigérant revient rapidement dans la cuve sans augmentation significative de température qui gênerait l'opération Les capacités thermiques des composants de l'appareil, par rapport à la capacité thermique du milieu réfrigérant, sont de préférence telles 35 que l'élévation de température du milieu réfrigérant due à la structure anti-éclaboussure n'excède pas 30 C (de telle sorte que dans le cas du propane la température s'élève de -190 à -160 C) La plus grande partie de la capacité thermique du liquide réfrigérant reste disponible pour réfrigérer le spécimen, le portoir de spécimen et l'injecteur Dans une forme d'exécution de l'invention, le manchon tend à revenir vers sa position haute sous l'effet de 5 ressorts, l'appareil comprenant des moyens de retenue relâchables adaptés à retenir le manchon en position basse. En variante, l'appareil comprend en outre un moteur électrique ou électromagnétique pour déplacer le manchon entre ses positions haute et basse. Ces dispositions réduisent considérablement le temps nécessaire à soulever le manchon, de telle sorte que le risque de réfrigération prématurée du spécimen par la paroi froide du manchon est réduit Cette structure offre également un moyen simple et fiable de déclenchement de 15 l'élévation du manchon. De préférence, le dispositif d'injection comprend des moyens d'actionnement qui, lorsqu'ils sont excités, déclenchent le mouvement du portoir de spécimen en direction de la cuve de réfrigération, et le manchon ou un élément monté sur 20 le manchon est adapté à exciter les moyens d'actionnement pendant la course du manchon ou en fin de course du manchon depuis sa position basse vers sa position haute De cette manière, l'injection est déclenchée à un moment aussi précoce que possible, de sorte que le risque de réfrigéra25 tion prématurée du spécimen est encore réduit L'opération de fixation cryogénique ne dépend donc pas du savoirfaire et de la pratique de l'opérateur En outre, on évite une injection prématurée sans protection anti-éclaboussures. De préférence, pour faciliter la pénétration d'un 30 milieu réfrigérant liquéfié dans la cuve, le manchon comprend des parties supérieure et inférieure de diamètre externe réduit, grâce à quoi des espaces annulaires sont définis entre les parties supérieure et inférieure et la surface en vis-à-vis, vers l'intérieur, de la cuve lorsque 35 le manchon est en position basse, le manchon présentant en outre une ou plusieurs rainures s'étendant entre ses parties supérieure et inférieure, et la partie inférieure définissant une ouverture depuis l'espace annulaire inférieur vers l'espace défini par le manchon, grâce à quoi le liquide réfrigérant peut pénétrer dans l'espace défini par le manchon via l'espace annulaire supérieur, les rainures, l'espace annulaire inférieur et l'ouverture. Pour permettre au liquide d'être enlevé d'une cuve, l'appareil comprend en outre, de préférence, un récipient adapté à être introduit dans la cuve de réfrigération, ledit récipient comprenant un clapet adapté à s'ouvrir pour permettre au liquide réfrigérant de pénétrer dans le 10 récipient tandis qu'il est introduit dans la cuve et adapté à se fermer pour emprisonner le liquide réfrigérant lorsque le récipient est enlevé de la cuve. Des formes d'exécution de l'invention sont décrites en détail par référence aux dessins annexés dans lesquels: la figure 1 représente, en coupe longitudinale, une vue latérale schématique d'un appareil de refroidissement connu; la figure 2 est une représentation en coupe longitudinale schématique d'une première forme d'exécution d'un 20 appareil selon l'invention; la figure 3 est une représentation en coupe longitudinale schématique d'une deuxième forme d'exécution d'un appareil selon l'invention: les figures 4 a et 4 b sont des représentations en 25 coupe respectivement longitudinale et transversale schématiques d'une troisième forme d'exécution d'un appareil selon l'invention; et les figures 5 a et 5 b sont des représentations en coupe longitudinale schématiques d'une quatrième forme 30 d'exécution d'un appareil selon l'invention, à deux stades successifs de l'utilisation. L'appareil représenté à la figure 1 correspond à l'état antérieur de la technique Une cuve de réfrigération métallique cylindrique 2 est disposée dans un récipient 35 isolant 1, la cuve de réfrigération étant réunie à un manchon cylindrique 4 via un manchon creux à paroi mince 3, le manchon 4 empêchant le contact direct entre l'azote liquide 5 qui sert de cryogène et la cuve de réfrigération pendant l'utilisation de l'appareil Du propane liquéfié ou un hydrocarbure halogéné (par exemple du FREON 13) est normalement utilisé comme liquide réfrigérant 6. Les points de congélation des liquides réfrigérants des types mentionnés ci-dessus sont supérieurs au point d'ébullition de l'azote liquide (le point de congélation du propane est de -109 C, celui du FREON 13 de -185 C, et celui du FREON 22 de -155 C; et le point d'ébullition de l'azote liquide est de -196 "C) En l'absence de mesures préventives, 10 le liquide se refroidirait jusqu'à la congélation Le liquide perdrait de la chaleur via le manchon 3 et via l'azote gazeux froid 7 qui entoure complètement la cuve de réfrigération 2, ledit gaz étant présent par suite de l'ébullition continue de l'azote liquide dans le récipient 15 1 Une telle réfrigération est empêchée au moyen d'une cartouche chauffante 8 dont le débit thermique est, habituellement, réglé d'une manière telle que la température de la cuve de réfrigération 2, et par suite celle du liquide réfrigérant 6, est continuellement et thermostatiquement 20 maintenue à une valeur légèrement supérieure au point de congélation du liquide réfrigérant Le contrôle thermostatique est obtenu au moyen d'un détecteur de température 9 et d'un circuit de commande électronique non représenté La plupart des liquides réfrigérants sont combustibles et 25 également nuisibles à la santé, de telle sorte qu'il est nécessaire d'empêcher leur évaporation vers l'atmosphère. Pour faciliter l'enlèvement en toute sécurité du liquide de réfrigération après la préparation d'un spécimen, il est prévu un manchon implanté amovible 10 disposé dans la cuve 30 de réfrigération 2 et adapté à contenir le liquide réfrigérant. Comme le montre la figure 1, un spécimen 11 est monté sur un portoir 12 qui convient aux opérations ultérieures, telles que la mise en oeuvre de coupe à l'ultramicrotome 35 cryogénique, d'entaille à l'état congelé, de substitution cryogénique, et de lyophilisation Le portoir est monté sur une tige d'injection 13 La tige est montée coulissante dans un alésage cylindrique prévu dans un guide 14. Pour obtenir de grandes vitesses de réfrigération lorsque l'on injecte un spécimen, la tige d'injection 13 est accélérée par un ressort de compression 15 (la vitesse qui peut être atteinte par la chute libre du spécimen est normalement trop lente pour l'effet recherché) L'opération d'injection est déclenchée en tirant vers l'arrière une goupille 16, dans la direction de la flèche, soit manuellement, soit au moyen d'un dispositif d'actionnement 17 excité par des moyens électriques ou électromagnétiques A la 10 suite de l'actionnement de la tige 13, le spécimen 11 se déplace sur une distance " 11 " d'approximativement 100 mm, ce qui le fait pénétrer dans le liquide 6 à une vitesse comprise entre 5 et 15 m/s Un inconvénient majeur de l'appareil décrit réside dans l'éclaboussure provoquée par 15 l'immersion des spécimens dans le liquide réfrigérant. L'appareil représenté à la figure 2 comprend un manchon cylindrique 18 qui remplace le manchon implanté 10 représenté à la figure 1 Un élément obturateur 19 récepteur d'outil est fixé à un bord supérieur du manchon cylindrique, 20 l'élément obturateur étant adapté à recevoir un outil convenable 20 muni d'une poignée isolante 21 pour permettre de soulever le manchon Les dimensions du manchon sont telles que le manchon coulisse à glissement doux dans un alésage cylindrique prévu dans la cuve de réfrigération 2 25 pour faciliter le soulèvement du manchon. Le manchon cylindrique 18 peut être soulevé jusqu'à ce qu'il vienne en contact avec une plaque mince 22, qui est fixée au moyen de boulons 23 dans un guide 14 ' appartenant à un dispositif d'injection La plaque présente une ouverture 30 permettant la traversée de la tige d'injection 13 ' Le manchon soulevé (représenté en traits tiretés), et la plaque réalisent une enceinte anti-éclaboussures qui ramène virtuellement dans la cuve de réfrigération 2 tout liquide réfrigérant projeté Avant d'être soulevés, le manchon et 35 l'élément obturateur sont refroidis à la température de la cuve de réfrigération En outre, la capacité thermique de la plaque 22 est faible et la plaque est écartée du guide pour réduire au minimum le contact thermique En conséquence, -9 l'enceinte antiéclaboussures ne provoque pas d'échauffement significatif du liquide de réfrigération avant que le liquide soit revenu dans la cuve L'échauffement causé par les composants de l'enceinte anti-éclaboussures est négli5 geable, restant invariablement au-dessous de 30 C et, dans des conditions convenables au-dessous de 5 C. L'injection du spécimen 11 est provoquée par le déplacement vers le haut d'une goupille 24 dans la direction de la flèche, la goupille étant déplacée par suite du 10 contact avec l'élément obturateur 19 lorsque le manchon est soulevé On comprend que la goupille peut être déplacée de différentes manières, par exemple au moyen d'éléments intermédiaires mécaniques ou de moyens électriques ou électro-magnétiques L'actionnement accidentel qui pourrait 15 se produire (par exemple en poussant la goupille 24 lors de la fixation du spécimen 11 ou du portoir de spécimen 12, à la tige d'injection 13 ') peut être empêché au moyen d'un dispositif de déverrouillage additionnel actionné manuellement. Lorsque l'appareil est en cours d'utilisation et que le manchon protecteur 18 a été soulevé, l'opération d'injection se déclenche immédiatement de sorte que l'endommagement du spécimen 11 qui peut survenir lorsque le spécimen reste à proximité du manchon réfrigéré, est réduit au minimum La 25 connexion opérationnelle entre le soulèvement du manchon protecteur et le déclenchement de l'opération d'injection, en conjonction avec le mécanisme de verrouillage additionnel, garantit que l'injection ne peut pas se faire tant que le manchon n'est pas soulevé. Dans la forme d'exécution de l'appareil représenté à la figure 3, le manchon 18 est soulevé au moyen de ressorts de compression 25 et 26, les ressorts étant relâchés lors du mouvement d'éléments d'actionnement 27 et 28 L'injection du spécimen 11 est déclenchée lorsque le manchon interrompt un 35 faisceau lumineux provenant d'une source 29 dont les rayons sont dirigés par une lentille 30 vers un dispositif photosensible 31 Le mouvement descendant du portoir de spécimen peut commencer soit pendant le mouvement ascendant du manchon, soit après un délai approprié Par suite du mouvement dans les directions opposées du manchon et du portoir de spécimen, la durée de l'opération est réduite au minimum et l'effet de basses températures prématurées sur le spécimen est également réduit au minimum. Dans la forme d'exécution de l'appareil représenté à la figure 4, le manchon 18 ' est monté à coulissement doux dans la cuve de réfrigération, mais il comporte des parties d'extrémité supérieure et inférieure de diamètre externe 10 réduit "d 2 " Le diamètre des parties d'extrémité diffère du diamètre '"d 1 " de la cuve de réfrigération d'une quantité suffisant à permettre au liquide réfrigérant de se déplacer dans les espaces annulaires compris entre la paroi cylindrique de la cuve de réfrigération et les surfaces en vis-à-vis 15 vers l'extérieur des parties d'extrémité du manchon Des rainures 33 sont prévues sur -les surfaces en vis-à-vis extérieures du manchon et elles s'étendent selon une direction générale verticale pour permettre au liquide de réfrigération de s'écouler vers le bas entre les parties 20 d'extrémité supérieure et inférieure Il est prévu une ouverture dans l'espace défini par le manchon à partir de l'espace compris entre la partie d'extrémité inférieure du manchon et la paroi de la cuve de réfrigération, ladite ouverture étant formée par une ou plusieurs découpes 34 à 25 l'extrémité inférieure du manchon Le milieu réfrigérant peut être liquéfié sans enlever le manchon 18 ', le risque de surpression, causé par le blocage de l'écoulement vers le bas au cours d'une tentative de liquéfaction étant éliminé. Un gaz (par exemple du propane ou du FREON) pénètre dans le 30 liquéfacteur 32 au travers de la connexion tubulaire 35, le milieu liquéfié pénétrant dans la cuve de réfrigération par la sortie 36 Dans la cuve de réfrigération, le liquide s'écoule vers le bas le long des rainures 33 et remplit la cuve de réfrigération depuis le bas au travers des découpes 35 34. L'appareil représenté à la figure 5 est adapté à faciliter l'enlèvement du liquide de réfrigération Le manchon est enlevé de la cuve de réfrigération 2 après que l'opération de préparation du spécimen ait été terminée A sa place, en utilisant un outil 37 convenable, on introduit un récipient 10 ' présentant un clapet à bille 38, selon la direction indiquée par la flèche Lorsque le récipient 10 ' 5 est introduit, la bille 38 est écartée d'une ouverture prévue dans la face inférieure dudit récipient pour permettre au liquide réfrigérant 6 de pénétrer dans le récipient 10 ' Une fois que le récipient a été complètement introduit dans la cuve de réfrigération, ledit récipient est 10 soulevé tandis que la bille 38 bloque l'ouverture, ce qui emprisonne le liquide de réfrigération dans le récipient 10 ' Le clapet à bille peut comporter un ressort de compression pour en faciliter le fonctionnement Le récipient 10 ' permet au liquide réfrigérant d'être transféré 15 dans un récipient sous pression convenant au stockage de milieux combustibles ou d'être recyclé ou brûlé d'une manière connue en soi. On doit avoir à l'esprit que diverses combinaisons et modifications des caractéristiques des formes d'exécution 20 décrites en référence aux figures 2 à 5 peuvent être faites en restant dans le cadre de l'invention Le manchon peut, par exemple 5 avoir une forme autre que cylindrique Au lieu des rainures 33 prévues dans le manchon 18 ' illustré aux figures 4, la traversée par le milieu réfrigérant liquéfié 25 pourrait se faire au moyen d'évidements prévus dans la paroi de la cuve de réfrigération 2 ' Le récipient d'enlèvement du liquide de réfrigération 10 ' pourrait être dimensionné de telle sorte qu'il puisse être introduit dans la cuve sans enlever le manchon. REVENDICATIONS 1 Appareil de réfrigération d'un spécimen biologique ou médical comprenant une cuve de réfrigération adaptée à contenir un liquide réfrigérant, et un dispositif d'injection muni d'un portoir de spécimen, déplaçable le long d'une 5 voie d'injection pour immerger un spécimen monté sur le portoir de spécimen dans le liquide réfrigérant contenu dans la cuve, caractérisé en ce qu'il comporte un manchon ( 18,18 ') déplaçable selon une autre voie alignée avec la voie d'injection, entre une position basse pour laquelle il 10 se trouve dans la cuve ( 2,2 ') et une position haute dans laquelle il reçoit le portoir de spécimen ( 12) en une position propre à l'immersion du spécimen ( 11) qui y est monté, le manchon ( 18,18 ') et lesdispositif d'injection ( 13,13 '-22) étant adaptés à coopérer lorsque le manchon est 15 en position haute, pour que le liquide réfrigérant ( 6) projeté à partir de la cuve ( 2,2 ') lors de l'immersion du spécimen ( 11) vienne heurter le manchon ( 18,18 ') ou le dispositif d'injection ( 13,13 '-22) et soit ramené dans la cuve ( 2,2 '). 2 Appareil selon la revendication 1, caractérisé en ce que le manchon ( 18,18 ') coulisse à glissement doux dans la cuve de réfrigération ( 2,2 '). 3 Appareil selon la revendication 1, caractérisé en ce qu'un élément récepteur d'outil ( 19) est monté sur le, ou 25 fait partie intégrante du, manchon ( 18,18 '), grâce à quoi un outil ( 20) peut être utilisé pour déplacer manuellement le manchon ( 18,18 '). 4 Appareil selon la revendication 1, caractérisé en ce que le manchon ( 18) est soumis à l'effet de ressorts ( 25,26) 30 tendant à l'amener vers sa position haute, l'appareil comprenant des moyens de retenue relâchables ( 27,28) pour maintenir le manchon ( 18) en position basse. Appareil selon la revendication 1, caractérisé en ce qu'il comprend en outre un moteur électrique ou électro35 magnétique adapté à déplacer le manchon ( 18,18 ') entre ses positions basse et haute. 6 Appareil selon la revendication 1, caractérisé en ce que le dispositif d'injection ( 13,13 '; 14,14 '; 22) comprend des moyens d'actionnement ( 24) qui, lorsqu'ils sont excités, entraînent le mouvement du portoir de spécimen ( 12) 5 en direction de la cuve de réfrigération ( 2,2 '), et dans lequel le manchon ( 18,18 ') ou un élément ( 19) monté sur ce manchon est adapté à exciter les moyens d'actionnement ( 24) pendant ou en fin de course du manchon ( 18,18 ') depuis sa position basse vers sa position haute. 7 Appareil selon la revendication 1, caractérisé en ce que le manchon ( 18 ') comprend des parties inférieure et supérieure de diamètre externe réduit (d 2) grâce à quoi des espaces annulaires sont définis entre les parties supérieure et inférieure et la surface en vis-à-vis vers l'intérieur de 15 la cuve ( 2 ') lorsque le manchon ( 18 ') est en position basse, le manchon ( 18 ') présentant en outre une ou plusieurs rainures ( 33) s'étendant entre ses parties inférieure et supérieure, et la partie inférieure définissant une ouverture depuis l'espace annulaire inférieur vers l'espace défini 20 par le manchon ( 18 ') grâce à quoi le liquide de réfrigération ( 6) peut pénétrer dans l'espace défini par le manchon via l'espace annulaire supérieur, les rainures ( 33), l'espace annulaire inférieur et l'ouverture ( 34). 8 Appareil selon la revendication 1, caractérisé en ce 25 qu'il comporte en outre un récipient ( 10 ') adapté à être introduit dans la cuve de réfrigération ( 2), ledit récipient ( 10 ') présentant un clapet ( 38) adapté à s'ouvrir pour permettre au liquide réfrigérant ( 6) de pénétrer dans ledit récipient ( 10 ') lorsqu'il est introduit dans la cuve ( 2) et 30 à se fermer pour emprisonner le liquide réfrigérant ( 6) lorsque ledit récipient ( 10 ') est enlevé de la cuve ( 2).