Brevet FR2550861A1 — publié le 19850222

La présente invention concerne un nouvel adhésif pour fixer les couches de sorbant des plaques à couche simple ou multiple pour chromatographie en surpression et un procédé pour sa préparation. Plus particulièrement, l'invention concerne un nouvel adhésif supprimant les inconvénients des adhésifs utilisés à ce jour pour la préparation des plaques de chromatographie en couche mince et de chromatographie haute performance et répondant aux besoins particuliers 10 des techniques de chromatographie en surpression à couche simple ou à couche multiple. L'invention concerne également la préparation de l'adhésif. On utilise des adhésifs à base de diffé15 rents composés pour fixer les couches adsorbantes aux plaques chromatographiques, dans la chromatographie en couche mince classique et la chromatographie haute performance Les adhésifs que l'on préfère particulièrement sont ceux qui résistent aux agents agressifs et qui sont 20 relativement inertes. Un groupe d'adhésifs classiques (par exemple l'agar-agar, l'amidon, l'alcool polyvinylique, l'acétate de polyvinyle) est sensible aux agents agressifs et de plus ces adhésifs se dissolvent partiellement dans les 25 systèmes ayant des concentrations élevées en eau et par conséquent leur emploi est abandonné (brevet DE n -1.442 446 et brevet HU n 161 267). Au lieu de ces adhésifs, on utilise des adhésifs inertes organiques polymères ou minéraux qui 30 résistent totalement aux systèmes aqueux, aux solvants organiques et résistent partiellement à divers agents chimiques Selon le brevet DE n 1 442 446, on utilise un polymère ayant un degré élevé de polymérisation à base d'acide acrylique ou méthacrylique ou de leurs sels ou à base de copolymères d'éthylène et d'acide maléinique ou de ses sels Le brevet DE n 1 517 929 concerne l'emploi de polyacrylamide et/ou de polyméthacrylamide 5 et de leurs dérivés pour la fixation des couches adsorbantes à base de différentes matières organiques ou minérales Selon le brevet DE n 1 915 963, on utilise comme agent liant un silicate de métal alcalin Ces adhésifs de nature organique ont pour inconvénient de 10 ne pas toujours résister en particulier aux agents agressifs (par exemple l'acide sulfurique), notamment aux températures de développement élevées et de plus de se décolorer et de réagir avec le réactif important qu'est la ninhydrine au point que cette réaction secon15 daire rende difficile l'évaluation quantitative Lorsqu'on utilise un adhésif à base de silicate de métal alcalin, il est très difficile d'assurer des conditions standard En raison de ces inconvénients, ces adhé20 sifs ne conviennent pas à la préparation des plaques pour chromatographie liquide en surpression qui doivent satisfaire aux conditions suivantes: 1) Dans les méthodes de chromatographie en surpression à couche simple ou multiple, le mélange 25 solvant migre en raison de l'écoulement provoqué par exemple par une pompe et on peut donc utiliser des mélanges solvants visqueux, tels que des tampons aqueux. L'adhésif et la couche de sorbant fixée par cet adhésif doivent résister à ces mélanges aqueux visqueux et ne 30 doivent pas se décoller ni se soulever, etc. 2) De plus, une plaque chromatographique avec une couche de sorbant est également soumise à une pression externe notable dans une chambre de type ultra- 2 $$ 0861. -3 micro sous pression, et donc le collage de la couche sorbante doit également résister à cette pression. 3) La sensibilité réduite de l'adhésif à la réaction avec la ninhydrine est particulièrement importante car la chromatographie à couche simple ou multiple en surpression est particulièrement préférée pour l'analyse quantitative des amino-acides et des peptides L'importance de la détection de traces d'amino-acides, par exemple de lysines N -méthylées, 10 doit être soulignée, car les taches de ces aminoacides peuvent finalement ne pas apparaitre sur le fond. 4) Les couches sorbantes en particules fines ayant une distribution étroite de la taille des 15 particules, qui sont constituées de différents composés organiques ou minéraux, doivent être fixées très près les unes des autres et le collage des couches adsorbantes constituées d'un mélange de composés organiques et minéraux doit également être assuré Les différentes caractéristiques des matières, par exemple les différentes capacités de gonflement, ne doivent pas avoir d'effet sur la qualité du collage. ) Un grand avantage de la chromatographie en couche simple ou multiple en surpression est que 25 l'on peut également utiliser des couches sorbantes constituées de particules particulièrement fines (par exemple 3-5 vm) et en pellicule mince (ayant par exemple une épaisseur de 45 vm) L'adhésif doit également convenir à la fixation de tels sorbants. 6) Une exigence fondamentale de la chromatographie en couche simple ou multiple en surpesssion est que quelle que soit la taille des particules, on puisse utiliser des couches sorbantes dont la taille 255086 t -4 des particules est comprise dans une gamme étroite, car, en raison de l'écoulement forcé du solvant, l'écoulement local irrégulier entre les particules de sorbants ayant des granulométries nettement différentes entraîne un 5 accroissement de la diffusion longitudinale La fixation de ces sorbants est plus difficile que celle de particules de sorbants de tailles différentes mais un adhésif approprié doit également la permettre. 7) Un des inconvénients des plaques chroma10 tographiques à couche sorbante par rapport aux garnissages des colonnes est que la présence de l'adhésif réduit l'efficacité du développement et en particulier la validité de l'évaluation quantitative. 8) Enfin la température joue un rôle très 15 important dans l'efficacité de la séparation des méthodes chromatographiques à couche simple ou multiple en surpression La température optimale dépend des caractéristiques des systèmes, la meilleure température pouvant être élevée ou basse. On doit de préférence utiliser un adhésif qui peut fixer de façon fiable la couche sorbante à une plaque support appropriée, par exemple une feuille d'aluminium, et à une feuille de recouvrement, par exemple en Téflon, dans la gamme des températures de + 5 et + 120 C. 25 L'invention concerne un adhésif à base de polyacrylamide et sa préparation, cet adhésif convenant à la fixation appropriée de couches sorbantes à particules fines, notamment dont la taille des particules est comprise dans une gamme étroite et un de leurs mélanges Ces couches peuvent être constituées d'une matière organique (cellulose, résines artificielles de polyamide) et/ou de matières minérales (par exemple gel de silice, oxyde d'aluminium, avec un gel de silice -5 comportant une phase non polaire fixée chimiquement ou non fixée) et lesdites couches sorbantes sont déposées sur des plaques chromatographiques utilisées dans des appareils de chromatographie en couche mince en sur5 pression. L'invention va maintenant être décrite de façon détaillée. L'invention repose sur la découverte que l'activité adhésive vis-à-vis des adsorbants de poly10 acrylamides préparés de différentes façons varie et dépend de la quantité et de la qualité des monomères formant la matrice et de la température de la polymérisation Les monomères et les oligomères demeurant dans la matrice de gel ont un effet nuisible sur les 15 caractéristiques d'efficacité et d'inertie superficielle des adhésifs à base de polyacrylamide et doivent donc être éliminés. On a également établi que la fraction convenant à la fixation de la couche sorbante peut être 20 précipitée dans la matrice de gel homogénéisée préparée dans une gamme limitée des températures, à l'aide d'un solvant organique soluble dans l'eau, de préférence l'acétone, et que la fraction désirée peut donc être séparée des monomères et des oligomères ayant un effet indésirable sur les caractéristiques de l'adhésif. Pour préparer l'adhésif selon l'invention, on forme tout d'abord une matrice de gel de polyacrylamide de composition spéciale dans une gamme limitée des températures puis on précipite une fraction à l'aide d'un solvant, on l'homogénéise dans l'eau et on récupère l'adhésif de type polyacrylamide dépourvu de monomères et d'oligomères grâce à des précipitations et à des homogénéisations complémentaires. Z 550861 L'adhésif constitué d'un gel de polyacrylamide convient à la fixation des couches sorbantes simples ou multiples pour chromatographie La masse volumique de l'adhésif est comprise dans la gamme de 1,004 à 1,008 g/ml, sa viscosité est 2 4 nrel une gamme étroite ou un mélange de tels sorbants. Les couches adsorbantes fixées avec l'adhésif selon l'invention conviennent bien mieux à l'évaluation quantitative que les couches d'adsorbant préparées 20 au moyen des adhésifs connus et couramment utilisés. Selon le procédé de l'invention, on ajoute entre 21 et 30 C à une solution aqueuse d'acrylamide et de N,N'-méthylène-bis-acrylamide, de la N,N,N',N'tétraméthyléthylènediamine (TEMED) puis un autre cata25 lyseur, de préférence du peroxydisulfate d'ammonium, puis on homogénéise dans un homogénéiseur le gel de polyacrylamide ainsi obtenu On obtient donc une solution opaline que l'on traite avec un solvant soluble dans l'eau, de préférence l'acétone On obtient un précipité caillebotté qu'on débarrasse du solvant puis qu'on réduit en pate par addition de la quantité initiale d'eau Cette dernière opération peut être répétée plusieurs fois La solution aqueuse opaline obtenue $ 0861 -7 après la réduction en pâte du dernier précipité caillebotté est la solution de l'adhésif de l'invention. Les modes de réalisation préférés du procédé de l'invention sont les suivants. Dans un mode de réalisation particulièrement préféré du procédé, on utilise comme matière de départ une solution aqueuse contenant 2,0 % d'acrylamide et 0,8 % de N,N'-méthylène-bis-acrylamide. On préfère utiliser la N,N,N',N'-tétra10 méthyléthylènediamine (TEMED) avec le peroxydisulfate d'ammonium l(NH 4)25208 l comme catalyseurs, mais on peut également utiliser d'autres couples catalytiques, par exemple (NH 4) 25208 avec le 3-diméthylaminopropionitrile ou la riboflavine avec la TEMED. On ajoute directement la TEMED au mélange réactionnel tandis qu'on dissout le peroxydisulfate d'ammonium dans quelques millilitres d'eau et on verse juste au centre de la solution préalablement fortement agitée Le mélange automatique s'arrête spontanément. On peut également ajouter le peroxydisulfate d'ammonium à l'état solide à la solution agitée Dans ce cas, le mélange automatique cesse également La solution commence à devenir opaline après 4 à 5 minutes et ce processus s'arrête généralement après 30 minutes. De façon appropriée, la gélification doit débuter à une température de 2223 C et atteint une température maximale de 28-30 C. On réduit en pâte le gel solidifié pendant 5 secondes dans un mélangeur de type Waring, après quoi 30 la solution opaline liquide est prête au fractionnement par solvant. On peut précipiter les grosses molécules utiles, dans la solution opaline réduite en pate, par 8 - addition d'un solvant soluble dans l'eau, tel que l'acétone, le méthanol, l'éthanol, etc, tandis que les molécules plus petites demeurent en solution De preférence, on utilise l'acétone comme solvant et dans ce cas on préfère particulièrement que le rapport des volumes de la solution opaline à l'acétone soit de 1/1. Dans tous les cas, on réduit en pate avec de l'eau, de préférence pendant 30 secondes, le préci10 pité caillebotté formé par l'acétone L'addition d'acétone provoque un dégagement de chaleur et on décante donc la solution en la refroidissant. Plus on effectue de précipitations, meilleure est la qualité de l'adhésif, mais de façon appro15 priée on effectue trois précipitations. La teneur en polyacrylamide de la solution opaline de l'adhésif varie entre 1,6 et 2,2 % Ces valeurs permettent de calculer le pourcentage d'adhésif qu'il est nécessaire d'appliquer à la couche sorbante 20 et qu'il est généralement compris entre 0,5 et 5,0 %. L'invention est illustrée par les exemples non limitatifs suivants. 25508 1 -9 EXEMPLE 1 A) PREPARATION D'UN ADHESIF DE TYPE POLYACRYLAMIDE On dissout 20 g d'acrylamide et 8 g de N,N'-méthylène-bis-acrylamide dans 1000 ml d'eau distillée On ajoute ensuite 3 ml de TEMED et on agite énergiquement dans une direction la solution aqueuse dont la température est fixée à 22,5 C et on verse au centre de la solution trouble 0,8 g de (NH 4)25208 dis10 sous dans 3 ml d'eau Après 4 minutes, le mélange commence à devenir opalin tandis que la température s'élève à 29 C, et après 30 minutes la gélification cesse. On réduit le gel en pâte pendant 5 secondes dans un mélangeur de type Waring et on ajoute 1000 ml 15 d'acétone aux 1000 ml de solution opaline On décante la solution en refroidissant, on recueille le précipité caillebotté ainsi que le précipité projeté sur les parois du récipient en s'aidant de portions de 1000 ml d'eau distillée et on réduit en pâte pendant 30 secon20 des On rajoute 1000 ml d'acétone à la solution opaline ainsi obtenue et on répète l'opération précédente, c'est-à-dire qu'on effectue une nouvelle précipitation par l'acétone Les solutions obtenues lors de la décantation sont toujours rejetées. La teneur en polyacrylamide des 1000 ml de solution opaline obtenus lors du dernier stade est de 0,021 g/ml avec une masse volumique de 1,004 g/ml et un irel de 4,65. 2550861. B) PREPARATION DE COUCHES ADSORBANTES A 44 g de gel de silice (taille moyenne des particules: 6 pm; diamètre intérieur de pores: 90 A) on ajoute 57 ml de solution d'adhésif diluée avec 87,5 ml d'eau (concentration: 2,7 %, calculée pour le gel de silice) On agite soigneusement la pâte ainsi obtenue puis on la réduit en pàte pendant 60 secondes dans un mélangeur de type Waring On étale de façon continue la pate ainsi obtenue ayant la consistance de la crème 10 aigre sur une feuille d'aluminium épaisse de 0,1 mm sur une épaisseur de 0,2 mm pour obtenir après séchage une couche épaisse de 0,16 mm Par découpage des bords on obtient 7 morceaux de plaque chromatographique larges de 20 cm et longs de 20 cm. C) DEVELOPPEMENT CHROMATOGRAPHIQUE EN COUCHE SIMPLE EN SURPRESSION Sur trois bords d'une des plaques chromatographiques préparées comme indiqué en B) ci-dessus, on retire la couche sorbante sur une largeur de 5 mm et 20 à l'aide d'une dispersion-solution de polymère contenant de l'acétate de polyvinyle et du polyacrylamide, on forme une pellicule polymère résistant à l'eau et aux solvants. On applique 15 échantillons identiques du colorant d'essai CAMAG II à 3,0 cm du bord imprégné et à 9 mm les uns 25 des autres Après séchage des dépôts, on place la plaque chromatographique dans une chambre ultramicro sous pression de type CHROMPRES 10 munie d'une plaque rapportée en Téflon dans laquelle sont ménagés des canaux dirigeant le solvant La pression d'amortisseur est de 1,2 M Pa, le débit du solvant est de 185 ml/h, le temps il de développement est de 4,6 minutes et on utilise du chlorure de méthylène comme solvant Lorsqu'on évalue le chrrmatogramme ainsi obtenu, on observe une déviation de + 1,5 % pour chacun des colorants. D) DEVELOPPEMENT CHROMATOGRAPHIQUE A COUCHE MULTIPLE (QUATRE) EN SURPRESSION On imprègne sur trois bords quatre des plaques chromatographiques ayant une couche adsorbante préparées comme en B) ci-dessus avec une dispersion10 solution de polymère contenant un acétate de polyvinyle et un polyacrylamide, par chauffage de ces plaques traitées à 100 C pendant 10 minutes On perfore en formant une encoche longue de 185 mm et large de 2 mm les bords des trois plaques supérieures (de l'ensemble de quatre) 15 à 15 mm de celui des bords qui sera différent de la partie imprégnée de la couche adsorbante. Sur trois plaques perforées comportant la couche adsorbante, préparées de la même façon, on applique des dépôts d'un extrait d'un ensemble de 3 x 20 15 échantillons de fleurs de camomille à 15 mm de la fente et à 9 mm les uns des autres Après séchage des dépôts de l'échantillon, on superpose soigneusement les feuilles les unes aux autres La feuille inférieure n'est pas perforée mais ses bords sont imprégnés et les 25 échantillons de 15 autres extraits de fleurs de camomille lui sont appliqués On place le système ainsi obtenu dans une chambre ultramicro sous pression de type CHROMPRES 10 On utilise du benzène comme éluant. Pression de l'amortisseur: 1,1 M Pa Temps de dévelop30 pement: 12,6 minutes Après développement, on sépare as sos i' les plaques, on les sèche, on pulvérise avec une solution d'acide sulfurique à 90 % contenant 0,2 % de vanilline, on chauffe à 105 C pendant 5 minutes et on évalue visuellement et avec un spectrophotomètre pour chromatogramme. 5 Les distances frontales et les Rf sont les mêmes sur les feuilles différentes, l'écart-type est dans la gamme acceptable. EXEMPLE 2 On découpe en morceaux de 20 x 40 cm des plaques chromatographiques ayant une couche adsorbante constituée de gel de silice, préparées selon l'Exemple 1 On retire la couche adsorbante des côtés opposés sur une largeur de 5 mm et, en ces emplacements, on forme une pellicule polymère résistant à l'eau et aux solvants, la plaque chromatographique convenant à la chromatographie en couche mince bidirectionnelle en surpesssion On forme un canal au centre de la couche adsorbante sur une largeur de 180 mm pour conduire le solvant puis on appli29 que 15 échantillons différents d'hydrolysats de protéines de semence de blé en quantités déterminées des deux côtés du canal sur une distance de 15 mm et à 9 mm les uns des autrès Après séchage des dépôts, on place les plaques dans une chambre ultramicro de type CHROMPRES 10 Pres25 sion de l'amortisseur: 1,2 M Pa Eluant: mélange 4/1/1/ de n-butanol/acide acétique glacial/eau Temps de développement: 68 minutes. Après développement, on pulvérise la couche adsorbante séchée avec une solution à 0,2 % de ninhydrine 30 préparée avec un mélange de méthanol et d'acide acétique et saturée de sulfate cuivrique, puis on chauffe et on évalue la coaeur du chromatogramme avec un spectroplhomtre. 25508 1 EXEMPLE 3 On prépare la couche adsorbante suivante à l'aide de l'adhésif préparé selon l'Exemple 1: On réduit en pate 40 g de talc (taille moyenne des particules: 3-4 pm) avec 40 ml de solution d'adhésif diluée avec 40 ml d'eau distillée dans un mélangeur de type Waring pendant 75 secondes On applique la pate ayant la consistance de la crème aigre ainsi obtenue sur une couche épaisse de 0,15 mm sur une 10 feuille de polytéréphtalate épaisse de 0,15 mm pour obtenir après séchage une couche de talc épaisse de 0,1 mm. Après avoir découpé les bords, on obtient 6 morceaux de plaque chromatographique de 20 x 20 cm On élimine les couches adsorbantes sur 5 mm de largeur, le long de 3 15 bords des plaques chromatographiques ainsi obtenues et on forme sur ces bandes une pellicule de polymère résistant à l'eau et aux solvants au moyen d'une dispersion de polymère contenant de l'acétate de polyvinyle et du polyacrylamide A une des feuilles dont les bords sont 20 imprégnés, on applique des quantités déterminées d'extraits de Digitalis et de glucosides tonicardiaques de Digitalis de référence dissous dans un mélange de méthanol et de chloroforme On place la feuille dans une chambre ultramicro de type CHROMPRES 10 On utilise comme éluant un mélange 18/85 de méthyléthylcétone et d'eau Temps de développement: 25 minutes. Après séchage, on pulvérise la couche adsorbante avec de l'acide phosphorique aqueux à 20 % et on chauffe à 120 C pendant 20 minutes On obtient des ta30 ches jaune verdâtre dont on effectue l'évaluation quantitative et qualitative. EXEMPLE 4 A l'aide de la solution d'adhésif de l'Exemple 1, on prépare une couche adsorbante ayant une zone de concentration de la façon suivante Dans le récipient principal de la tête particulière d'étalement (avec une surface d'étalement plus étendue), on verse, après réduction en pâte appropriée, une suspension de 33 g de gel de silice ayant une taille moyenne des particules de 6 Vm et un diamètre intérieur de pores de 90 A et 43 ml de la so10 lution d'adhésif diluée avec 66 ml d'eau distillée (concentration: 2,7 %, calculée pour le gel de silice) Dans le récipient secondaire (dont la tête d'étalement a une surface plus faible), on ajoute une pâte de 11 g de terre siliceuse en particules ayant une taille moyenne de 15 um 15 et 15 ml de la solution d'adhésif diluée avec 21,5 ml d'eau On applique les deux pâtes à une feuille d'aluminium épaisse de 0,1 mm, selon une couche épaisse de 0,1 mm pour obtenir, après séchage, une couche adsorbante épaisse de 0,08 mm ayant une zone de concentration La 20 couche adsorbante est constituée d'une bande de terre siliceuse inactive large de 4 cm et d'une bande de gel de silice en particules fines active large de 16 cm. Apres avoir découpé les bords, on obtient 10 feuilles de 20 x 20 cm dont on imprègne les bords selon 25 l'Exemple 1 pour les utiliser dans une technique chromatographique à couche simple en surpression On sépare sur la couche adsorbante des échantillons d'essence de camomille d'orifice différente Les composants des échantillons (polyines, alcools sesquiterpéniques) sont séparés sous 30 forme de bandes fines. EXEMPLE 5 En utilisant la solution d'adhésif préparée selon l'Exemple 1, on prépare une couche adsorbante constituée de gel de silice et d'une résine On réduit en pate avec 42,5 + 70 ml d'eau distillée pendant 60 secondes, 28 g de gel de silice en particules ayant une taille moyenne de 6 vm et 10 g d'une résine fortement échangeuse de cations en particules ayant une taille moyenne de 58 pm On applique la pate sous forme d'une couche épaisse 10 de 0,2 mm sur une feuille d'aluminium épaisse de 0,4 mm, par étalement continu, pour obtenir une couche sorbante jaune pale, lisse, épaisse de 0,1 mm Après avoir coupé les bords, on obtient 7 morceaux d'une plaque chromatographique de 20 x 20 cm avec une couche sorbante. Pour utiliser les feuilles selon des techniques chromatographiques à couche simple ou multiple en surpression, on imprègne les bords des plaques selon l'Exemple 1. Pour vérifier l'efficacité des plaques com20 portant la couche sorbante, on applique aux couches des hydrolysats chlorhydriques de différents peptides végétaux et des mélanges d'amino-acides de référence Après séchage, on place la plaque dans une chambre ultramicro de type CHROMPRES 10 On utilise comme éluant du tampon 25 citrate à p H 3,45 et on applique comme révélateur une solution à 0,2 % de ninhydrine dans un mélange de méthanol et d'acide acétique. 2 ss 086 1 EXEMPLE 6 On dissout 20 g d'acrylamide et 8 g de N,N'méthylène-bis-acrylamide dans 1000 ml d'eau distillée On ajoute au mélange 2,8 ml de TEMED, on fixe la température de la solution à 23 C et on agite soigneusement la solution dans une seule direction On verse ensuite 0,9 g de (NH 4)25208 cristallin au centre de la solution agitée. L'opalisation commence après 5 minutes et la gélifica'tion totale est obtenue après 30 minutes. On traite le qel selon l'Exemple 1 On obtient une solution opaline d'adhésif ayant une masse volumique de 1,005 g/ml et une viscosité nrel de 6,8. En utilisant l'adhésif ci-dessus, on prépare une couche adsorbante de la façon suivante: On réduit en pâte 40 g de gel de silice ayant une taille moyenne des particules de 3 pm et un diamètre intérieur de pores de 60 A avec 56 ml de la solution d'adhésif diluée avec 90 ml d'eau dans un mélangeur de type Waring On applique la pâte sous forme d'une couche 20 épaisse de 0,1 mm à une feuille d'aluminium épaisse de 0,1 mm par étalement continu pour obtenir après séchage une couche adsorbante épaisse de 0,06 mm Apres découpage des bords et découpage des feuilles en morceaux, on imprègne les côtés des plaques chromatographiques portant 25 la couche adsorbante selon l'Exemple 1 et on utilise les plaques pour étudier des colorants dans un système chromatographique à couche unique en surpression par application de quantités assez faibles d'échantillons (par exemple 5-10 pg) à la couche adsorbante. fj EXEMPLE 7 On prépare la plaque chromatographique suivante ayant une couche adsorbante à l'aide de l'adhésif de l'Exemple 6. On réduit en pâte 40 g d'oxyde d'aluminium ayant une taille moyenne des particules de 10 pm, avec un mélange de 28 ml de l'adhésif et 39 ml d'eau pendant 225 secondes puis on applique la pâte selon une couche épaisse de 0,2 mm sur des plaques de verre épaisses 10 de 2 mm mesurant 20 x 20 cm pour obtenir après séchage une couche d'oxyde d'aluminium épaisse de 0,6 mm. On élimine la couche adsorbante des plaques chromatographiques activées à 110 C selon trois bords sur une largeur de 4 mm et on recouvre ces bandes d'une 15 pellicule polymère Sur la plaque chromatographique ainsi formée, on applique des quantités déterminées d'extraits purifiés contenant des alcaloldes préparés à partir du pavot et dissous dans un mélange 1/1 de méthanol et de chloroforme Après séchage des dépôts, 20 on munit les feuilles d'un châssis protecteur en plastique approprié (pour protéger le système d'amortissement hydraulique de la chambre ultramicro sous pression contre l'effet de clivage des bords des plaques de verre) et on les place dans une chambre ultramicro CHROMPRES 10 avec une pression de l'amortisseur de 12 M Pa On utilise comme éluant un mélange 40/50/10 d'heptane/chloroforme/éther et, pour révéler les alcaloïdes, le réactif de Dragendorff modifié par Vagujfalvi. EXEMPLE 8 On forme une couche adsorbante semblable à la couche de gel de silice préparée selon l'Exemple 6 en utilisant l'adhésif de l'Exemple 6 et une pate con5 tenant 1,8 % de silicate de zinc activé par le manganèse comme indicateur pour l'ultraviolet. EXEMPLE 9 On dissout 36 g d'acrylamide et 16,2 g de N,N'-méthylène-bis-acrylamide dans 2000 ml d'eau dis10 tillée On ajoute ensuite 4 ml de 3diméthylaminopropionitrile, on fixe la température de la solution à 22 C et on agite soigneusement le mélange dans le même sens On dissout rapidement 1,0 g de (NH 4)25208 dans 3 ml d'eau distillée et on verse cette solution 15 au centre du mélange agité L'opalisation apparaît après 8 minutes et la gélification complète s'achève après 45 minutes. On traite le gel ainsi formé selon l'Exemple 1 On obtient une solutionopaline d'adhésif ayant 20 une masse volumique de 1,006 g/ml et une viscosité qrel de 4,3. En utilisant l'adhésif ci-dessus, on prépare la couche de sorbant suivante: On mélange g de cellulose très pure en particules ayant une 25 taille moyenne de 5 pm avec 30 ml de l'adhésif dilué avec 30 ml d'eau et on applique la pate en une couche épaisse de 0,15 mm sur une feuille d'aluminium épaisse de 0,9 mm de façon classique On découpe les bords et on découpe les feuilles On imprègne les bords et sur 30 les feuilles ainsi formées on étudie des amino-acides dans un système chromatographique à couche simple en surpression en employant comme éluant un mélange 3/4/1/2 de méthyléthylcétone/acétonitrile/acide acétique/eau, avec une pression externe de l'amortisseur de 1,4 M Pa 5 pendant 59 minutes (dans le cas du surdéveloppement). EXEMPLE 10 On utilise l'adhésif de l'Exemple 9 pour fixer un gel de silice de type RP-18 comportant une phase stationnaire fixée chimiquement à une feuille 10 d'aluminium. On réduit en pâte 20 g de poudre de gel de silice en phase inverse de type C-18 avec 80 ml d'adhésif de type polyacrylamide et 60 ml d'isopropanol pendant 175 secondes On applique la pâte fluide ainsi 15 obtenue en une couche épaisse de 0,18 mm sur une feuille d'aluminium épaisse de 0,12 mm Après découpage en morceaux et imprégnation des bords, on utilise les plaques chromatographiques séchées dans une chambre ultramicro de type CHROMPRES 10 pour la séparation en 20 phase inverse d'alcaloïdes du pavot On utilise comme éluant un mélange 6/4 d'acétonitrile et de solution 0,005 M de KH 2 PO 4 et on utilise comme révélateur du réactif de Dragendorff contenant de l'acétate d'éthyle. EXEMPLE 11 On prépare la couche adsorbante suivante à l'aide de l'adhésif de l'Exemple 9. On réduit en pâte 88 g de gel de silice ayant une taille moyenne des particules de 5 pm et un O diamètre intérieur des pores de 60 A avec 135 ml de l'adhésif dilué avec 175 ml d'eau pendant 85 secondes dans un mélangeur de type Waring On applique la pate obtenue en une couche épaisse de 0,65 mm sur une feuille d'aluminium dégraissée épaisse de 11 mm pour obtenir une couche adsorbante de gel de silice épaisse de 0,5 mm. Sur la couche adsorbante ainsi formée, on sépare les lysines N -méthylées formées dans la réaction spontanée de méthylation et de formylation de la L-lysine et du formaldéhyde en utilisant de l'eau dis10 tillée comme éluant et une pression de l'amortisseur de 1,3 M Pa. 2 i R E V E N D I C A T IONS 1. Adhésif de type polyacrylamide convenant à la fixation appropriée de couches sorbantes en particules fines ( 2-20 pm), en particulier ayant une taille des particules comprise dans une gamme étroite (A pm réaction de mélange aqueux d'acrylamide et de N,N'méthylène-bisacrylamide en présence d'un catalyseur, à 21-30 C, puis réduction en pâte du précipité obtenu 15 et éventuellement répétitions multiples de la précipitation et de la réduction en pate. 2. Adhésif selon la revendication 1, caractérisé en ce qu'on l'a préparé par emploi respectivement d'une solution aqueuse d'acrylamide à 1,6 à 2,5 % et de 20 préférence de 1,9 à 2,2 % et d'une solution aqueuse de N,N'-méthylène-bis-acrylamide à 0,6 à 1,0 % et de préférence à 0,8 à 1,0 %. 3. Adhésif selon l'une des revendications 1 ou 2, caractérisé en ce qu'on l'a préparé par emploi 25 de la N,N,N',N'-tétraméthyléthylènediamine ou du 3-diéthylaminopropionitrile, chacun en combinaison avec du peroxydisulfate d'ammonium comme catalyseur. 4. Adhésif selon l'une quelconque des revendications précédentes, caractérisé en ce qu'on l'a préparé en démarrant de préférence la réaction de polymérisation à 22 C. 5 Adhésif selon l'une quelconque des revendications précédentes, caractérisé en ce qu'on l'a préparé par emploi d'acétone, de méthanol ou d'éthanol pour la précipitation de la fraction adhésive de la matrice de gel. 6 Procédé pour la préparation d'un adhésif de type polyacrylamide convenant à la fixation appropriée de couches sorbantes en particules fines ( 2-20 Pm), en particulier ayant une taille des particules comprise dans une gamme étroite (A Dam précipitation et de la réduction en pâte. 7. Procédé selon la revendication 6, caractérisé en ce qu'il comprend l'emploi d'une solution aqueuse d'acrylamide à 1,6 à 2,5 % et de préfé30 rence à 1,9 à 2,2 % et d'une solution aqueuse de N,N'- méthylène-bis-acrylamide à 0,6 à 1,0 % et de préférence à 0,8 à 1,0 %. 8. Procédé selon la revendication 6 ou 7, caractérisé en ce qu'il comprend l'emploi de N,N,N',N'5 tétraméthyléthylènediamine ou de 3diéthylaminopropionitrile, chacun en combinaison avec du peroxydisulfate d'ammonium comme catalyseur. 9. Procédé selon l'une quelconque des revendications 6 à 8, caractérisé en ce qu'il comprend le 10 démarrage de la réaction de polymérisation de préférence à 22 C. 10. Procédé selon l'une quelconque des revendications 6 à 9, caractérisé en ce qu'il comprend l'emploi d'éthanol, de méthanol ou d'acétone pour préci15 piter la fraction de la matrice de gel convenant au collage.