Brevet FR2550221A1 — publié le 19850208

PROCEDE DE FABRICATION D'ALCOOL A L'AIDE D'UNE LEVURE ALCOOLIQUE DESTRUCTRICE L'invention concerne un procedé de fabrication d'alcool et plus particulièrement un procédé de fabrication d'alcool à partir de solutions de sucre au moyen d'une nouvelle levure alcoolique destructrice. Les procédés couramment employés pour la production d'alcool sont les procédés discontinus de fermentation, les procédés de réensemencement, et les procédes continus de fermentation, utilisant tous la levure dite alcoolique. Toutefois, dans ces procédés, la solution de sucre etant généralement utilisée pour la fermentation sous une forme non stérilisée, il existe une possibilité de contamination de la levure alcoolique par les microorganismes ou les levures sauvages, existant dans la so- lution de sucre.La possibilité de cette contamination étant plus élevee dans les procédées de réensemencement et dans les procédées de fermentation continue, les pro codés de fermentation discontinue où la possibilité de contamination est plus faible, sont actuellement d'un emploi plus courant. Dans la fabrication d'alcool par les procédés de réensemencement ou de fermentation continue, un besoin existe donc pour empêcher la contamination par les microorçanismes ou levures sauvages. Diverses mesures ont été prises dans ce but.Par exemple, dans la méthode dite de Melle Boinot, selon laquelle on récupère la levure d'un mélange de brassage à l'aide d'un séparateur par centrifugation, et on recycle cette levure de récupération pour la réemployer, on peut empêcher la contamination par les microorganismes en diminuant le pH du système de fermentation ou par addition d'un antibiotique, mais on ne peut obtenir une protection efficace contre la contamination par les levures sauvages. La méthode de fermentation alcoolique par 1 'emploi de levure immobilisée qui est une version améliorée du procédé de fermentation continue, permet de poursuivre la fermentation pendant une longue durée sans contamination par les microorganismes ou les levures sauvages, à condition que la solution de sucre dont on alimente le système de fermentation soit complètement stérilisée.Mais quand la solution de sucre n'est pas complètement ztrilise, par la chaleur par exemple, le système de fermentation permet aux différentes levures sauvages de croître graduellement et de contaminer éventuellement même 1 'intérieur des grains de la levure immobilisee en l'empêchant ainsi d'effectuer sa fonction inhérente de fermentation alcoolique. I1 en résulte un problème de diminution du rendement en alcool et de la vitesse de la fermentation alcoolique. I1 existe donc un besoin aigü, dans les procédées de fermentation continue pour la production d'alcool avec un rendement élevé à partir de solutions de sucre n'ayant pas bouillies de destruction des levures sauvages croissant indûment dans les solutions de sucre. I1 est donc désirable d'utiliser une levure alcoolique destructrice ayant un pouvoir inhérent de détruire ces levures sauvages. On a démontre récemment que les espèces du genre Saccharomyces sont capables de détruire des levures opposant s. On les désigne sous le nom de levures destructrices. L'utilisation pratique d'une levure destructrice a été décrite par Antonie van Leeuwenhoek 44,59-77 (1978) L'emploi d'une levure destructrice K1 a depuis été ap pliqué à la production de saé ou de vin, mais jamais à la production d'alcool à partir de solutions de sucre. Ceci provient de ce qu'on effectue la fermentation alcoolique des solutions de sucre à des temperatures de plus de 30"C, supérieures à celles de la fermentation du saké ou du vin, et, à ces températures plus élevees, la protéine toxique secrétee par la levure destructrice K1 ne presente plus d'activité. La présente invention permet d'obtenir une levure alcoolique destructrice K2, présentant un fort pouvoir de fermentation alcoolique et possedant le même caractère destructeur que la levure destructrice K2. L'invention a donc pour objet un procédé de production d'alcool avec un rendement élevé, à partir de solutions de sucre, au moyen d'une levure alcoolique destructrice K2. L'invention a encore pour objet un procede de production d'alcool en utilisant la souche Saccharomyces cerevisiae K2-M11Vcomme levure alcoolique destructrice K2 précitée. L'invention a aussi pour objet un procédé de production d'alcool avec un rendement élevé dans une opération de fermentation continue utilisant une solution de sucre non bouillie. L'emploi de Saccharomyces cerevisiae, une levure alcoolique destructrice, présentant un fort pouvoir de fermentation alcoolique et possédant le même caractère destructeur que la levure destructrice K2, permet de produire l'alcool avec un rendement elevé à partir de solutions de sucre, sans contamination par les levures sauvages, dans des intervalles plus larges de conditions de fermentation que celles rendues possibles jusqu'à présent.Quand on utilise, entre autresdes souches de la même espèce, la souche Saccharomyces cerevisiae K2-Mlll comme levure alcoolique destructrice, on peut effectuer la fermentation alcoolique de solutions de sucre non bouillies dans un intervalle de pH plus large que celui de 4,0 à 5,0 considere jusqu'à présent comme optimum pour la fermentation alcoolique, et à des températures plus élevees que 30"C. C'est ainsi que le procédé de fermentation utilisant cette souche particulière s'est révélé particulièrement efficace dans les procedés de réensemencement ou les procedés de fermentation en continu qui pressentent une probabilite élevée de contamination par les levures sauvages. L'invention sera mieux comprise à la letture de la description détaillée qui suit d'un mode de mise en oeuvre préféré de l'invention et à l'examen des dessins annexées, qui representent à titre non limitatif divers modes de réalisation de l'invention.Sur ces dessins - la figure 1 est un diagramme montrant la comparaison du pouvoir de fermentation de la souche préparée K2-M lllavec celui des souches parentales (souche réceptrice M111), dans des milieux de culture de mélasses, dans des conditions d'une teneur totale en sucre de 22,5%, de pH 5,1 et à 30"C; - la figure 2 est un diagramme montrant la variation du nombre de levures sauvages survivantes dans une fermentation discontinue, utilisant une levure alcoolique destructrice; - la figure 3 est un diagramme montrant la variation du nombre de levures sauvages survivantes dans une fermentation en continu utilisant une levure permanente, alcoolique, destructrice; ; - la figure 4 est un diagramme montrant 1 'ef- fet du pH sur la toxine destructrice dans une fermentation en continu à 30"C; - la figure 5 est un diagramme montrant 1 'ef- fet de la toxine destructrice sur une fermentation en continu à 35"C; et - la figure 6 est un diagramme montrant la relation entre le taux de contamination causée par des levures sauvages dans la production d'alcool en continu à partir de mélasses non stérilisées, le rendement en éthanol produit et le rendement de la fermentation. La levure destructrice K2, anterieurement décrite par Antonie van Leeuwenhoek, 44, 59-77 -(1978) et connue pour sa tolérance aux températures plus élevées et à un intervalle plus large de pH que la levure destructrice K1, a té soumise à des essais de son pouvoir de fermentation alcoolique, et on a étudié cette levure alcoolique destructrice en ce qui concerne la persistance de 1 'activité destructrice présentée par la levure quand on l'utilise dans a production d'alcool par fermentation. Ces études ont abouti à la présente invention d'une levure alcoolique destructrice K2, possédant une toxine destructrice K2, capable de détruire une large gamme de levures sauvages et, en outre, présentant un pouvoir élevé de fermentation alcoolique. La levure alcoolique destructrice K2 ne l'in- vention est sélectionnée par fusion cellulaire d'une levure alcoolique et de la levure destructrice K2. Parmi les levures alcooliques utiles comme réceptrices du plasmide destructeur K2, on peut citer, par exemple, les souches de Saccharomyces cerevisiae IFO 0224 et IFO 0215 et leurs souches variantes halotolérantes M111. Plus particulièrement, la souche M111 excelle comme réceptrice possédant un pouvoir élevé de fermentation et une hal otol érance élevée. Parmi les levures destructrices K2 jouant le rôle de donneurs du plasmide destructeur K2, on peut citer les souches Saccharomyces cerevisiae NCYC 738, 1001, 1385, 1387 et 1428 et Saccharomyces diastaticus NCYC 713. Plus particulièrement la souche Saccharomyces cerevisiae 5170, qui est produite à partir de la souche précitée 1387, d'une levure destructrice K2, et de la souche Saccharomyces cerevisiae 1020, et qui implique une variation de déficience de fusion caryogamique, est efficace pour l'introduction sélective du plasmide destructeur K2 dans la levure alcoolique.La levure alcoolique destructrice, produite à partir de la levure alcoolique précite de la souche Miii et de la levure destructrice K2 de la souche 5170, a té déposée sous la designation de levure alcoolique destructrice Saccharomyces cerevisiae K2-M111 strain (FERM-P No.7071) auprès de la "Fermentation Research Institute of the Agency of Industrial Science and Technology". La figure 1 et le Tableau 1 concernant la levure conventionnelle de fermention alcoolique et la levure alcoolique destructrice K2 de l'invention, représentent la quantité de gaz carbonique dégage et les quantités des sous-produits d'acétaldéhyde et d'acétate d'éthyle produits dans la fermentation alcoolique. On voit que la levure alcoolique destructrice de 1 'inven- tion et la levure alcoolique conventionnelle ne presen- tent aucune différence discernable dans leur pouvoir de fermentation alcoolique et les sous-produits formés. TABLEAU I Comparaison des rendements en alcool et en sous-produits de fermentation obtenus avec la souche sélectionnée K2-M111 et les souches parentales Souches essayées Produits de fermentation K2-Mlil Miii 5170 Alcool (V/V %) 12,1 12,1 2,3 Sucre total (W/V %) 2,59 2,57 18,2 Acidité (ml 0,1N NaOH/1O mi) 9,9 10,0 8,7 pH 5,2 5,2 5,1 Rendement de la fermentation (%) 83,5 83,5 15,9 Acétaidehyde (ppm) 175 157 - Acétate d'éthyl (ppm) 11,7 13,4 - Alcool méthylique (ppm) 8,5 10,0 Alcool n-propylique (ppm) 67 71 Alcool i-butylique (ppm) 55 57 Alcool i-amylique (ppm) 138 151 On essaie ensuite la levure destructrice K2 dans une solution de sucre pour déterminer son pouvoir de destruction des levures sauvages.Les résultats de cet essai sont les suivants (A) Pour déterminer la variation du nombre des cellules survivantes de levures sauvages, dans une fermenta tion discontinue avec l'emploi d'une levure alcooli que destructrice, on innocule une quantité de 107 cellules/ml, respectivement de la levureralcoolique destructrice de souche 14111 et de la levure alcoolique destructrice de souche K-M111 à un mélange de mélasses ajusté à ltavance à une teneur totale en sucres de 15% et un p14 de 4,2 et la levure sauvage de souche MCA, rendue tolerante au cyclohexymide chimique, est innoculée en quantités variables de 105 cellules/ml, 106 cellules et 107 cel lules/ml.On effectue la culture à 30 C du milieu ainsi obtenu contenant différentes levures et au cours de la culture, on analyse le bouillon de culture à différentes intervalles pour determiner le nombre de cellules survi vantes de la levure sauvage de souche MCA. Dans les sys thèmes mixtes de levure alcoolique de souche M111 et de levure sauvage de souche MCA, la levure sauvage de sou che MCA s'est propagée à toutes les concentrations es sapées. Dans les systemes mixtes de levure alcoolique destructrice de souche K2-M111 et de levure sauvage de souche MCA, la croissance de la levure sauvage de souche MCA décroît à toutes les concentrations essayées. Dans ces derniers systèmes mixtes l'effet de la toxine des tructrice est donc evident (voir figure 2). (B) La variation du nombre de cellules survivantes de levure sauvage en fermentation continue est effectuée avec l'em- ploi d'une levure immobilisée alcoolique destructrice. La levure alcoolique de souche M1lfit la levure alcoolique destructrice de souche K2-M111, toutes deux immobilisées par de l'alginate d'aluminium, sont introduites dans un réacteur à raison de 40 Z en volume, on alimente le reac teur avec une solution de sucre réajustée à une teneur totale en sucres de 15 Z et à pH 4,2, et on laisse fer menter à 30 C avec une duree de séjour fixee 10 h; ; lorsque la fermentation se stabilise, on innocule la le vure sauvage de souche MCA dans le système de fermenta tion, en quantités variables de 104, 105 ou 106 cellules/ ml, et on analyse l'effluent du système de fermentation pour determiner la variation du nombre de cellules survi vantes de levure sauvage de souche MCA. Dans le réacteur utilisant la levure alcoolique immobilisée de souche M11l, on constate que la levure sauvage de souche MCA, innocu lée en quantité de 104 cellules/ml, survit en quantité de 102 cellules/ml après 144 h de fermentation.Dans le réacteur utilisant la levure alcoolique destructrice immobilisée, de souche K2-M111, on ne décèle aucune levure sauvage 24 h après l'innoculation de la levure sauvage de souche MCA en quantité de 104 cellules/ml, 48 h apres innoculation de la même levure en quantité de cellules/ml, ou 144 h après innoculation de la même levure en quantité de 106 cellules/ml, respectivement. (voir figure 3). La comparaison de ces résultats d'essais avec ceux obtenus en fermentation discontinue montre que dans la fermentation continue, qui favorise la croissance continue de levure, l'effet de la toxine destructrice est rendu plus manifeste. (C) Pour déterminer les effets du pH et de la température sur la toxine destructrice dans la fermentation con tinue utilisant une levure alcoolique destructrice immobilisée, on utilise des solutions de mélasses préaiustees à ,oH 3,2, 4,2, et 5,2 et à une teneur totale fixe en sucres de 15 %, qu'on soumet à une fermentation continue à 30 C; on innocule la levure sauvage de souche MCA aux systemes de fermentation et on analyse les effluents des systèmes de fermen tation pour mesurer la variation du nombre de cellu les survivantes de levure.Quand on alimente avec la solution de mélasses de pH 5,2, la diminution du nombre de cellules survivantes de la levure sauvage de souche MCA est plus manifeste dans le réacteur utilisant la levure immobilisée de souche K2-M111 que dans le cas du réacteur utilisant la levure immo bilisée de souche Mini. Même à la valeur de faible pH de 3,2, on ne détecte aucune cellule survivante de levure sauvage de souche MCA apurés 48 h. de fermen talion. A toutes les valeurs de pH essayées, la levure immobilisée de souche K2-M111 se révèle invariablement efficace pour détruire la levure sauvage de souche MCA, bien que le temps nécessaire pour la manifesta tion de cet effet varie avec la valeur du pH de la solution de mélasse d'alimentation (voir figure 4). On effectue ensuite les mêmes fermentations en continu à 35 C. Au cours de la fermentation, on innocule 106 cellules/ml de levure sauvage de souche MCA et on analyse les effluents des systèmes de fer mentation pour mesurer les variations du nombre de cellules survivantes de levure sauvage de souche MCA. La levure immobilisée de K2-M111 manifeste son effet même à 35au. (voir figure 5). On observe les mêmes phénomènes avec des levures K2 destructrice de levures sauvages autres que la levure alcoolique précédemment mentionnée, la le vure alcoolique destructrice K2 et la levure de la souche 5170. On voit d'après les résultats ci-dessus que la levure alcoolique destructrice K2 de la présente invention permet d'effectuer la fermentation alcoolique dans un intervalle plus grand de valeurs de pH que 4,0 à 5,0 et à des températures plus élevées que 30"C, qui sont les conditions optimales d'une fermentation alcool que conventionnelle, et qu'elle est efficace dans une fermentation continue qui présente une plus grande possibilite de contamination par des levures sauvages. La présente invention concerne un procédé de fabrication d'alcool à partir de solutions de sucre, par l'emploi d'une levure alcoolique destructrice qui présente un pouvoir élevé de fermentation alcoolique, qui est capable de tolérer la toxine destructrice K2 et de la produire, en bref qui possède la même caractéristique destructrice que la souche destructrice. On peut avantageusement appliquer le procedé de l'invention à tout système de fermentation discontinue, aux systèmes de réensemencement et aux systèmes de fermentation continue. Il est particulièrement efficace dans les processus de réensemencement et de fermentation continue qui présentent une plus grande possibilité de contamination par les levures sauvages. Le procédé de l'invention permet d'effectuer la fermentation à des températures élevees de 25 à 38"C, de prférence 30 à 35"C, et dans un large intervalle de pH de 3,0 à 5,2, pour produire la toxine destructrice capable de détruire une grande variété de levures sauvages et de permettre de poursuivre la fermentation alcoolique pendant de longues durées. Ces données font date dans le domaine de la fermentation alcoolique de solutions de sucre. En fermentation continue, on peut utiliser la levure alcoolique destructrice de i l'invention sous forme immobiliste par l'alginate d'Al, la somme carragheen, l'amide polyacrylique et le glutaraldéhyde. Les solutions de sucre soumises à fermentation selon l'invention comprennent les solutions de sucre obtenues par saccharification de l'amidon par l'amylase ou un acide, et les solutions de sucre obtenues par saccarification de substances ligneuses par la cellulase ou un acide. L'invention est encore illustrée par les exemples pratiques suivants. Exemple n0 1 de reférence. Production d'une levure alcoolique destructrice. (A) Production d'un donneur de plasmide destructeur K2. Dans l'introduction d'un plasmide destructeur K2 dans un récepteur Ml11 par fusion cellulaire, il est nécessaire de supprimer la caryogamie des deux levures dans la mesure du possible, et d'assurer la production d'une souche possedant un plasmide destructeur K2 et contenant un noyau forme seulement de Pf111, d'un pouvoir de fermentation elevé. Pour cela, on effectue comme suit la production d'un donneur de plasmide destructeur K2, la souche 5170 (genotype: a karl-1, his 4 [KIL-K2] [NEX-O]), qui possède une variation de deficien- ce caryogamique et d'un marqueur génétique distinguable du donneur.D'abord, pour obtenir une souche du type de conjugaison-a, possédant à la fois les propriétés de destruction K7 ([KIL-K2]) et de demandeur d'histidine (his 4), on innocule Saccharomyces cerevisiae 1020 (genotype : a, his 4, karl-1, [KIL-O] [EXL-O]et Saccharomyces cerevisiae 1387 (genotype : a ura 1 [KIL-K2] [NEX-O] ) chacun à 5 mi d'un milieu de culture YEPD (contenant 2% de glucose, 2% de polypeptone, et 1% d'extrait de levure) qu'on soumet à une culture stationnaire à 30"C pendant 1 jour. A 5 ml du milieu de culture YEPD, on ajoute toutes à la fois, des portions de 100 lul des différents bouillons de culture.On soumet les levures dans les milieux réunis à une culture stationnaire a 30"C pendant 1 jour. Le bouillon de culture résultant est lavé deux fois avec de l'eau sté- rile, et étalé sur un milieu minimum (0,67% de levure à base azotée W/O amino-acide, 2% de glucose et 2% d'agaragar. La colonie qui se propage alors sur le milieu minimum est sectionne comme souche hybride, étalée sur un milieu de formation de spores (0,5% d'acétate de potassium et 2% d'agar) et soumise à une culture à 300C pendant trois jours pour la formation des spores. On divise alors un asque qui forme quatre spores avec un micromanipulateur en quatre molécules et on laisse germer sur une plaque de YEPD. De cette plaque, les souches qui sont incapables de se propager sur le milieu de culture minimum et qui peuvent se propager sur un milieu obtenu en ajoutant de l'histidine au milieu minimum, sont sé- lectionnées comme souches "demandeurs" d'histidine. De ces souches, on sélectionne des- cellules du typez de conjugaison-a. Afin de sélectionner une souche possédant une variation de deficience caryogamique (Karl-1) parmi les souches du type de conjugaison-a, possédant les pro prietes de destruction K2 et de demandeur d'histidine, sélectionnées comme indiqué ci-dessus, on croise ces sou ches avec une souche de type a, possedant les proprié tes de demandeur de leucine, de tolérance à la canavanine et de déficience respiratoire.De ces souches croises, on selectionne une souche produisant des colonies avec une grande fréquence sur un milieu obtenu en ajoutant la leucine, la canavanine et la glycérine à la place du glucose, au milieu minimum, et produisant des colonies avec une très faible frequence sur le milieu minimum, comme étant la variante caryogamique déficiente Saccharomyces cerevisiae 5170 (genotype: a karl - 1 his 4 I KIL-K2] [NEX-O]). On cultive en stries cette souche sur un milieu YEPD contenant 0,003 Z de bleu de méthylène (pH 4,2), frottee d'un récepteur de destructeur K2, pour confirmer que la souche possède une activité destructrice. (B) Production de la levure alcoolique destructrice K2-Mîii On cultive indépendamment, sur des milieux YEPD, la souche Saccharomyces cerevisiae M111, une levure alcoolique réceptrice, et la souche Saccharomyces cerevisiae 5170, une levure destructrice donneur de K2. On recueille les cellules produites durant la phase de croissance logarithmique et on lave à l'eau. On suspend indépendamment les deux masses de cellules dans un tampon de tris-sorbitol (îM sorbitol, 10 mM tris-HCL, pH 7,4 max; désigné ci-après comme solution ST) et, après addition de 0,1 ml d'acide méthylène diamine ttracétique 0,5M (EDTA) et de 50 Il de 2-mercaptoethanol, on incube a 30"C pendant 10 mn, on lave avec 2,5 ml de solution ST et on suspend nouveau dans la solution ST.Après addition é ces cellules de 50 pil d'EDTA 0,5 M (pH 7,5) et de 100 pl de Zymolyase 6000 (2,5 mg/lxl), on les incube a 30"C pendant 150 mn, pour produire les protoplastes respectifs, qu'on récupère. On suspendune partie deM111 protoplaste de la souche Saccharomyces cerevisiae M111 etdix parties du protoplaste Saccharomyces cerevisiae 5170, prépares comme décrit ci-dessus, dans 0,5 ml d'une solution contenant 1M de sorbitol, 10 mM de tris-HCL, et 10 mM de chlorure de potassium (désignée ci-après comme solution "STC"). On fait incuber les deux souches dans la suspension, à 30 C pendant 15 mn.On recueille les cellules du bouillon de culture qui en résulte, on les suspend dans 0,5 ml d'une solution PTC (35 % de PEG 4000, 10 mM de tris-HCL, 10 mM de CaCl2, pH 7,4), on fait incuber à 30 C pendant 20 mn, on lave une fois avec une solution STC et on suspend à nouveau dans 0,2 ml de solution STC. On etale la solution sur le milieu d'agar aaar minimum contenant 1M de sorbitol et on cultive à 30 C pendant une semaine. Le milieu d'agar-agar minimum sur lequel apparat une colonie est broyé dans un milieu YEPD liquide (pH 4,2) et on cultive les cellules dans le milieu liquide 25 C pendant 2 jours. On ajoute 1 ml du bouillon de culture resultant à 100 ml d'un milieu de culture YEPD liquide (pH 4,2), ainsi que 0,1 ml du bouillon de culture de la levure destructrice K2, souche Saccharomyces cerevisiae 5170. On cultive le mélange résultant à 25 C pendant trois jours. Dans 5 ml du milieu YEPD (pH 4,2), on cultive 50 ul du bouillon de culture resul- tant, à 25 C, pendant deux jours. On étale 0,1 ml du bouillon de culture produit sur le milieu d'agar-agar minimum et on cultive à 30 C pendant deux jours.La souche qui se propage est soumise au test des répliques sur milieu YEPD (pH 4,2) contenant 0,003 Z de bleu de méthylène et étalée sur une souche sensible. On sélec tionne en conséquence une souche possédant une activité destructrice, comme la levure alcoolique destructrice, souche Saccharomyces cerevisiae K2-M111 . Les propriétés de la souche créée et des souches parentales sont comparees au Tableau II. Etant donné que la souche creee à savoir la souche Saccharomy ces cerevisiae-K2-M possède le plasmide destructeur K2 (L-ds RNA, M-ds RNA) et presente une activite destructrice à 30"C, similaire à celle de la levure destructrice K2 donneur, souche Saccharomyces cerevisiae 5170, elle manifeste un effet de premiere importance dans la fermentation alcoolique, particulièrement dans la fermentation continue où la possibilité de contamination par les levures sauvages est grande. On a déposé ladite souche sous la designation microorganique de "Killer alcohol yeast Saccharomyces cerevisiae K2-M111 strain" (FERM-P No. 7071) auprès de la "Fermentation Research Institute of the Agency of Industrial Science and Technology". Par analyse él ectrophoréti que sur gel d'agarose, on confirme que la levure alcoolique receptrice, souche Saccharomyces cerevisiae Mu1 , est dénuée d-es bandes L-ds RNA, M-ds RNA, et que la souche créée Saccharomyces cerevisiae K2-Mt possède les L-ds RNA, M ds RNA de mêmes poids moléculaires que la levure destructrice donneur, souche Saccharomyces cerevisiae 5170. TABLEAU 2 Comparaison des propriétés de la souche K2 M111 crée et des propriétés des souches parentales Souche Souches créée parentales K2-M111 M111 5170 Activité destructrice (30 C) + - Col orati on TTC Rouge Rouge Rouge Pouvoir de fermentation du sucre G1 ucose + + + Galactose + + + Sucrose + + + Maltose + + + Lactose Propriété de demandeur d'Histidine - - + Exemple 2.Fermentation alcoolique continue de mélasses non stérilisées. On cultive séparément une levure alcoolique de souche Saccharomyces cerevisiae M111 et une levure alcoolique destructrice de souche Saccharomyces cerevisiae K2-M 111 pour preparer deux types de levures immobilisées. On remplit séparément deux bioréacteurs, d'un volume oratoire de 110 1, avec les deux types de levure immobilisées. On fait passer à travers les reacteurs une solution de melasses, préajustée à une teneur totale en sucres de 15 % et a pH 3,7, non soumise à la sterili- sation thermique, à la vitesse d'écoulement de Il 1/h ( T= 10 h) pour effectuer une fermentation alcoolique continue à 30 C pendant 100 Jours. La figure 6 montre les résultats obtenus. Dans le bio-réacteur contenant la levure alcoolique, le nombre de cellules de levures sauvages atteint 20 Z du nombre total de cellules de levures le 40ème jour, 40 Z le 60eme jour et 90 % le 80ème pour; le rendement de la fermentation qui etait de 83 Z le 20ème jour décroit graduellement à 77 % le 6même jour, et 69 % le 80ème jour, respectivement, de fermentation continue. Dans l'effluent du bio-réacteur contenant la levure alcoolique destructrice de souche K2-M111 , on ne détecte aucune levure sauvage au cours de la durée entière de fermentation et le rendement élevé de fermentation de 83 % demeure intact pendant une longue durée. C'est ainsi que l'on doit interrompre la production d'alcool le 60ème jour de fermentation continue lorsque le bio-réacteur utilise la levure alcooli- que de souche M111, tandis que la même fermentation peut être poursuivie pendant plus de 100 jours lorsque le bio-réacteur utilise la levure alcoolique destructrice de souche K2-M111. Bien entendu, l'invention n'est nullement limite aux exemples décrits et représentés, elle est susceptible de nombreuses variantes accessibles à l'homme de l'art, suivant les applications envisages et sans s 'écarter pour cela du cadre de l'invention. REVENDICATIONS 1. Procédé de fabridation d'alcool à partir drune solution de sucre, caractérisé par l'emploi de Saccharomyces cerevisiae, une levure alcoolique destructrice présentant un pouvoir élevé de fermentation alcoolique et possédant les mêmes propriétés destructrices qu'une levure destructrice K2. 2. Procède selon la revendication 1, caractérisé en ce que ladite levure alcoolique destructrice est la sou che Saccharomyces cerevisiae K2-M111 K2-K11