Brevet FR2550189A1 — publié le 19850208

La présente invention a pour objet de nouveaux dérivés acétyléniques possédant une activité d'inhibiteurs d'enzyme, leur préparation et leur application comme médicament. L'invention a plus précisément pour objet les composés de formule générale I: NH 2 R 1 | \ R C M C CO R 3 (I) R 2 dans laquelle R 1 et R 2 représentent chacun indépendamment un groupement hydrocarboné, ledit groupement hydrocarboné pouvant être substitué et/ou comporter des hétéroatomes, ou bien R et R représentent ensemble un groupement hydrocarboné éventuellement substitué formant, avec l'atome de carbone auquel ils sont attachés, un cycle pouvant comporter des hétéroatomes, 15 et R représente un groupement -H, un groupement alkyle inférieur ou un groupement -NH 2; ainsi que les sels d'addition des composés de formule I; et les solutions contenant lesdits composés ou sels d'addition. Parmi les composés de formule I on citera notamment ceux pour lesquels: R et R représentent chacun indépendamment un groupement alkyle ayant 1 à 5 atomes de carbone; R 1 et R représentent ensemble un groupement alkylène ayant 4 ou 5 atomes de carbone dans la chaîne, un ou plusieurs desdits atomes de carbone de la chaîne pouvant être remplacé par un hétéroatome, ledit groupement alkylène pouvant 25 être éventuellement substitué; R 3 représente un groupement alkyle ayant 1 à 5 atomes de carbone; R est choisi parmi les groupements -H, -CH 3 et -NH 2; i 2 33 2 R = R = CH et R = H; i 2 33 R =R = CH 3 et R= CH 3; R= R = CH 3 et R 3 = -NH 2; -R' 2 33 -R 1 = CH 3, R = C 2 H et R = H; R = R = CH et R = C 2 H; ou R + R = -(CH 2)5 et R = H; ainsi que les sels d'addition de ces composés. Les sels d'addition des composés de formule I sont notamment ceux formés avec les acides compatibles avec une utilisation en thérapeutique. L'invention a également pour objet le procédé de préparation des composés de formule I. Ce procédé est caractérisé par le fait que l'on utilise comme 40 produit de départ un composé de formule II: zi zl R 1 _ -z 2 CII) RC C C Z 2 R 2/ dans laquelle R et R sont définis comme précédemment, Z représente un groupement amine protégé (la liaison C-Z 1 étant-une liaison carboneazote), et Z 2 représente soit -H soit un équivalent d'un métal ou d'un groupement lié à l'atome de carbone auquel il est attaché par une liaison carbone-métal, que l'on fait réagir ledit composé de départ avec un agent d'acylation ou 10 d'alkoxy-carbonylation, pour obtenir un composé de formule III z 1 C-C C Z 3 R 4 (III) R 2 i 2 i R 4 H dans laquelle R, R et Z sont définis comme précédemment, R représente -N, alkyle inférieur ou alkoxy inférieur et Z représente soit un groupement carbonyle -CO-, soit un groupement précurseur du groupement carbonyle, puis que l'on soumet le composé obtenu à une réaction de déprotection du groupement amine et que, le cas échéant, soit on transforme le groupement Z 3 en 20 groupement carbonyle, soit dans le cas o -Z 3-R représente un groupement alkoxycarbonyle, on transforme l'ester obtenu en amide correspondant, et on obtient le composé de formule I désiré ou un sel d'addition correspondant. Les produits de départ sont obtenus par réaction avec un groupement protecteur usuel des produits de formule IV: 25 NH R 1 C C _ CH (IV) R 2/ Les produits de formule IV sont connus ou peuvent être préparés 30 selon les méthodes connues, par exemple selon la méthode décrite par G F. HENNION et E G TEACH, J Org Chem 1972, 17, 1653. Pour la protection de l'amine primaire du composé de formule IV, et pour la déprotection ultérieure, on peut utiliser par exemple une méthode analogue à celle décrite par S DJURIC, J VENIT et P MAGNUS, Tetrahedron 35 Letters, 1981, 1787 Cette méthode consiste à faire réagir l'amine de formule IV avec un composé de formule V: Alk Alk Si z 4-Si (V) Alk 1 \ Alk X X dans laquelle Alk est un alkyle inférieur, Z est un groupement alkylène et X est un atome d'halogène La réaction de déprotection de l'amine s'effectue par hydrolyse acide, par exemple par contact avec la silice humide. Le produit obtenu après la réaction de protection est caractérisé par le fait que Z (notamment dans les formules II et III ci-dessus) représente un groupement: Z 4 Alk r Alk hi si/ Ak / Alk N La transformation du composé II en organométallique correspondant (par exemple organolithien ou organomagnésien) est effectuée selon les méthodes usuelles. Les dérivés organométalliques de formule II sont par exemple ceux pour lesquels Z représente un métal alcalin ou un groupement -Mg X, X étant un halogène. Dans des modes d'exécution particuliers, le procédé de la présente demande peut encore présenter les caractéristiques suivantes: l'agent d'acylation est une amine N-acylée, l'acyle étant dérivé d'un acide alkanolque inférieur, ou un anhydride d'acide alcanoique inférieur; par exemple on peut utiliser comme agent de formylation la N-formyl pipéridine (G.A OLAH et M ARVANAGHI, Angew Chem Int Ed 1981, 878); l'agent d'alkoxy-carbonylation est un chloroformiate d'alkyle inférieur; on 25 obtient dans ce cas un composé de formule III avec Z 3 représentant un groupement carbonyle et R 4 representant un alkoxy inférieur Autrement dit, le composé III est alors un ester que l'on peut transformer en amide correspondant selon les méthodes usuelles en passant éventuellement par l'acide carboxylique correspondant ou un de ses sels (sel métallique ou sel 30 d'ammonium); par exemple on transforme ledit ester en amide par l'action de l'ammoniaque; l'agent d'acylation est un orthoester de formule: 0 Alk R 3 C O Alk \ O Ar dans laquelle R est un groupement -H ou un alkyle inférieur, -Alk est un alkyle inférieur et Ar est un groupement aromatique tel qu'un groupement phényle On obtient alors un composé de formule III correspondant, avec -Z Y représentant: 4 - 2550189 Alk-O O O-Alk Dans ce cas, après la réaction de déprotection de l'amine on transforme -Z 3 en groupement carbonyle par hydrolyse du cétal selon les méthodes connues. Les composés de formule I peuvent être transformés en tout sel d'addition correspondant par l'action d'un acide, par exemple un acide halohydrique. L'invention a également pour objet, à titre de produits intermédiaires obtenus lors de la mise en oeuvre du procédé décrit ci-dessus, les composés de formule VI: z 5 \ C C = C Z 3 _ R 5 (VI) R 2// dans laquelle soit Z représente un groupement amine protégé, Z est défini 4 comme précédemment et R a la même définition que R donnée précédemment, soit Z 5 représente un groupement -NH 2 et dans ce cas ou bien Z 3 représente un 26 6. groupement carbonyle et R représente un groupement -OR, R étant -H, alkyle 20 inférieur, un groupement ammonium ou un équivalent d'un métal, ou bien Z 3 représente un groupement précurseur du carbonyle et R est un groupement -H ou alkyle inférieur. Parmi ces composés intermédiaires, on citera notamment: ceux pour lesquels Z représente: Z 4 Alk Alk \Si Si" Alk Alk N ceux pour lesquels ledit groupement précurseur du carbonyle est un groupement: -C Alk-O O-Alk Les composés de formule I ainsi que leurs sels d'addition présentent 35 des propriétés pharmacologiques intéressantes et notamment une propriété d'inhibition de l'activité aldéhyde déshydrogénase. Ces propriétés, jointes à une toxicité réduite, permettent de les employer notamment dans le traitement de l'alcoolisme chronique On sait en effet que les inhibiteurs d'aldéhyde déshydrogénase peuvent être utilisés dans 40 les traitements de l'alcoolisme par désaccoutumance car ils empêchent la -5 transformation de l'acétaldéhyde, métabolite de l'éthanol, en acide acétique, de sorte que l'acétaldéhyde est stocké dans le foie et provoque des réactions physiques passagères désagréables (nausées après absorption de boissons alcoolisées) Il en résulte progressivement une réaction de dégoût vis à vis 5 des boissons alcoolisées; voir par exemple Biochem Pharmacology, 1982, Vol 31, 3613-3619. D'autre part, on a découvert que les inhibiteurs d'aldéhyde déshydrogénase sont capables d'agir dans les cellules eucaryotes pour empêcher notamment la transformation du malonaldéhyde (obtenu sous l'action de la 10 diamine oxydase) en acide malonique L'accumulation du malonaldéhyde dans la cellule permet de bloquer la division cellulaire, l'activité du malonaldéyde comme inhibiteur de la transcription et de la réplication ayant été démontrée in vitro. On a également découvert que parmi les composés de formule I et 15 leurs sels d'addition, certains sont capables d'agir sélectivement sur les cellules transformées probablement pour la raison qu'ils passent plus facilement à travers la paroi des cellules transformées qu'à travers la paroi des cellules normales. Parmi les composés de formule I qui sont capables d'agir sélectivement sur les cellules transformées, on citera notamment les composés de formule I A: NH 2 R' | _ C C CO (I A) R" / dans laquelle R' et W' représentent indépendamment un groupement méthyle ou éthyle, et R représente -H, alkyle inférieur ou -NH 2, ainsi que les sels d'addition des composés de formule I A. Les composés de formule I A peuvent en conséquence être utilisés 30 comme inhibiteurs sélectifs de la croissance des cellules transformées et peuvent trouver leur application en thérapeutique notamment dans le traitement des cancers comme agents anti-tumoraux en permettant notamment la régression des tumeurs et en empochant l'établissement des métastases. L'invention a également pour objet l'utilisation des composés de formule I ou I A, ainsi que de leurs sels d'addition, comme médicament. A cet effet, ils sont présentés sous forme de composition pharmaceutique comprenant comme ingrédient actif au moins un composé de formule I ou I A, ou un sel d'addition correspondant. Ces compositions pharmaceutiques comprennent en outre un excipient 40 permettant l'administration du médicament par voie orale, intratumorale, 6 intramusculaire, intraveineuse, ou sous forme d'implant. La posologie varie avec la maladie traitée, le mode d'administration et l'état du malade Généralement, la dose quotidienne de composé de formule I varie de 1 à 30 mg/kg de poids corporel, et le plus souvent de 5 à 25 mg/kg. 5 Les exemples suivants illustrent l'invention sans toutefois la limiter. Dans ces exemples, les produits sont désignés par les numéros de formule suivants: -7 - NH 2 C_ C 5 CIL CH 3 \ l CNIH 2 a.) CH 3 CH 3 r 1 /CH 3 Si Si C 3 \/ 3 N C 3 \ I C C = CR 3 a) CH 3 C 3 NH 2 CM 3 1 CH 3 J_/H ib) C 2 5 CH 3 /CH 3 Si Si CH 3-" \ / M 3 N CH 3 / 1 C C -' CH 3 b) C 2 H 5 2 _) 2550189 ' NC 2 C CH 3 c) C CH CH 3 CH 3 53 Si Si C N CH 3 I I C-C C-CH=O 4 a) CH 3 25 CH 3 \ q /-CH 3 Si Si CH 3 " \ / OC 3 N CH 3,,, C CC-CH=O 4 b) C 2 H 5/ 4 c) 4 b) C 2 Hs CH 3 /C 3 si si CHX N- \KICH N \C C -CH-0 Sa) N CC e C-CO -CH 3 CH 3 CH 3 S Si 3 CH,,-,, \/ '-,CH 3 c H 3 N ccc coj C Cc 2 C C-CO-CH 3 C H l'/ b) 8 - NC CHX 3 C-_C_ C-CHO= O 6 a) CH 3 NH 2 CH 3 C 2 O C C _-C -CH = O CH 6 b) C 25 6 b) 2550 189NH 2 \ C CH=O 6 c) NH 2 CH 3 C_ C C C-C O CH 3 7 a_) 3 CH 3 r CH 3 si si/' CH 3 \ / \ 3 N Ci H 3 j /OC 2 H 5 C C -CH CH_ 1 c \o OC 2 H 5 CH 3 25 8 a) NH 2 CH 3 IC-) C C C-C 0-CH 3 7 b) C 2 H 5 CH 3, ri,/ XCH 3 CH 3 \ / CH 3 N C -C C -CO -OC 2 H 5 CH 3 I a) NH 2 CH 3 J | / C 2 P 5 C-C -C -CH CH 3/ OC NH 2 CH 3 1 C C C -C -CO -OC)H 5 CH 3 lia) N 2 CH 3 C -C C-C-C O NH CH 3 12 a) 9 a) _ 9 EXEMPLE 1 Préparation du composé 6 a Stade 1: Protection du groupement aminé Passage du composé 2 a au composé 3 a. A une solution de 0,1 mole de l'amine 2 a dans 100 ml de chlorure de méthylène anhydre, on additionne 0,25 mole de triéthylamine anhydre On refroidit le milieu réactionnel à O C puis ajoute, sous courant d'azote et agitation mécanique, goutte à goutte, une solution de 22,6 g ( 0,105 mole) de l'agent de protection du groupement amine, de formule: CH 3 CH 3 Cl Si -CH -CH si-c i 2 2 CH 3 CH 3 On agite à O OC pendant une heure puis on laisse revenir à température ambiante, après filtration du précipité de chlorhydrate de triéthylammonium et rinçage à l'éther éthylique, l'amine protégée 3 a est obtenue sous forme de produit brut après évaporation du solvant Elle est purifiée par distillation sous vide (Rdt = 80 %). Eb: 45 C/0,01 mm Hg L'étude des spectres IR et de RMN H confirme la structure indiquée. Stade 2: Formylation Passage du composé 3 a au composé 4 a. A une solution de 0,07 mole du composé 3 a dans 300 ml d'éther éthylique anhydre refroidie à -60 C on ajoute, sous courant d'azote, 50 ml d'une solution de n-butyl lithium à 1,55 mole/litre (soit 0,075 mole) dans l'hexane. On laisse remonter la température à -30 C en 30 minutes puis on coule un solution de 9 g ( 0,08 mole) de N-formyl pipéridine dans 10 ml d'éther 25 éthylique anhydre On laisse remonter lentement la température à 20 C puis hydrolyse rapidement par une solution saturée de chlorure d'ammonium Après lavage à l'eau, séchage et évaporation du solvant, on obtient le composé 4 a que l'on utilise tel quel pour le stade suivant Ce composé 4 a peut être purifié par distillation Eb: 78-80 C/0,01 mm Hg. L'étude des spectres IR et de RMN 1 H et 13 C confirme la structure indiquée. Stade 3: Déprotection du groupement amine Passage du composé 4 a au composé 6 a (sous forme de chlorhydrate). A une solution de 0,005 mole du composé 4 a dans 20 ml d'éther 35 éthylique refroidi à O C on additionne goutte à goutte 30 ml d'une solution aqueuse d'acide chlorhydrique 0,2 N ( 1,2 éq). Apres 1 heure d'agitation à O C, la phase aqueuse est décantée et réextraite deux fois par 20 ml d'éther éthylique puis stocké à -20 C. La solution aqueuse de composé 6 a (forme chlorhydrate) est tamponnée 40 à p H 6,5 puis diluée par du sérum physiologique à la concentration voulue avant d'être testée. Il convient de préciser que les solutions concentrées du produit 6 a sont instables Le produit est conservé sous forme de solutions diluées, par exemple le chlorhydrate peut être conservé en solution aqueuse diluée. La structure du composé 6 a a été confirmée par sa préparation au départ d'un autre précurseur, l'aminoacétal 9 a (voir exemple 2). De préférence, le produit 6 a est donc conservé sous la forme du précurseur 9 a qui est hydrolysé en produit 6 a au moment de l'emploi. EXEMPLE 2 Autre préparation du composé 6 a Stade 1: Passage du composé 3 a au composé 8 a. A une solution de 0,01 mole de composé 3 a dans 40 ml de tétrahydrofuranne anhydre on additionne, sous courant d'azote, 20 ml d'une solution molaire de bromure d'éthyl-magnésium dans le tétrahydrofuranne ( 0,02 mole) Après la fin de l'addition, on porte au reflux du solvant jusqu'à ce 15 que le dégagement d'éthane cesse, soit au bout d'une heure environ On refroidit alors à 20 C puis coule goutte à goutte une solution de 4,3 g ( 0,022 mole) d'orthoformiate de diéthyle et de phényle, de formule: O C 2 H 5 HC O C 2 H 5 2 Q O C 6 H 5 Après agitation à 20 C pendant 16 heures, on hydrolyse par une solution saturée de chlorure d'ammonium La phase organique est ensuite lavée par 3 fois 20 ml d'une solution de soude 5 N puis à l'eau jusqu'à neutralité. On obtient une solution de composé 8 a que l'on utilise telle quelle au stade 25 suivant L'étude des spectres IR et de RMN 1 H confirme la structure indiquée. Stade 2: Passage-du composé 8 a au composé 9 a. On ajoute à la phase organique obtenue au stade précédent, 60 g de silice puis on chasse le solvant à l'évaporateur rotatif La silice imprégnée par le mélange réactionnel est déposée sur une colonne de 50 g de silice puis 30 on élue par un mélange méthanol-éther éthylique ( 20/80) On élue en tête l'excès d'orthoformiate de diéthyle et de phényle puis l'amino acétal pur 9 a. L'étude des spectres IR et de RE 1 H ainsi que du spectre de masse confirme la structure indiquée. Stade 3: Passage du composé 9 a au composé 6 a (sous forme de 35 chlorhydrate). L'aminoacétal 9 a est traité par 2 équivalents d'acide chlorhydrique 0,2 N pendant 18 heures à 27 C La solution aqueuse ainsi obtenue est amenée à p H 6,5 par la soude 1 N, puis diluée par du sérum physiologique à la concentration voulue. Les solutions du produit obtenu présentent les mêmes caractéristiques que celles obtenues avec le produit préparé selon l'exemple 1, notamment en ce qui concerne le dosage à 620 nm de la fonction aldéhyde à l'aide du dérivé préparé par réaction de la 3-méthyl benzo-2 thiazolinone hydrazone (MBTH) en présence de sels ferriques. De plus, les solutions de 6 a (chlorhydrate) obtenues par cette seconde méthode ont une activité en tous points comparable à celle observée avec le produit de l'exemple 1 concernant l'inhibition de la croissance en culture de tissus de cellules NRK (normales) et NRK-B 77 (transformées). EXEMPLE 3 Préparation du composé 6 b Stade 1: Passage du composé 2 b au composé 3 b. On opère de façon analogue à celle décrite à l'exemple 1, stade 1. On obtient le composé 3 b Eb: 70 C/0,01 mm Hg L'étude des spectres IR et de RMN 1 H confirme la structure indiquée. Stade 2: Passage du composé 3 b au composé 4 b. On opère de façon analogue à celle décrite à l'exemple 1, stade 2. L'étude du spectre IR et de RMN 1 H confirme la structure indiquée pour 4 b. Stade 3: Passage du composé 4 b au composé 6 b. On opère de façon analogue à celle décrite à l'exemple 1, stade 3. EXEMPLE 4 Préparation du composé 6 c Stade 1: Passage du composé 2 c au composé 3 c. On opère de façon analogue à celle décrite à l'exemple 1, stade 1. On obtient le composé 3 c; Eb: 80 C/0,01 mm Hg L'étude des spectres IR et de RMN H confirme la structure indiquée. Stade 2: Passage du composé 3 c au composé 4 c. On opère de façon analogue à celle décrite à l'exemple 1, stade 3. L'étude des spectres IR et de RMN H confirme la structure indiquée pour 4 e. Stade 3: Passage du composé 4 c au composé 6 c. On opère de façon analogue à celle décrite à l'exemple 1, stade 3. EXEMPLE 5 Préparation du composé 7 a Stade 1: Acétylation Passage du composé 3 a au composé 5 a. A une solution de 0,016 mole de composé 3 a dans 100 ml d'éther éthylique anhydre refroidie à -60 C, on additionne, sous courant d'azote, 11,4 ml d'une solution à 1,55 mole/litre de n-butyl lithium (soit 0,0176 mole) dans l'hexane On laisse remonter la température à -10 C en 30 minutes puis refroidit à nouveau à -50 C et la solution est introduite dans une ampoule de coulée isobare réfrigérée à -20 C, puis additionné goutte à goutte, sous courant d'azote, à une solution de 5 g ( 0,048 mole) d'anhydride acétique dans 30 ml de tétrahydrofuranne anhydre maintenu à 15 C Après agitation pendant 1 heure 30 minutes à -15 C, on additionne à une solution de 4 g de bicarbonate 40 de sodium dans 50 ml d'eau Quand le dégagement de gaz carbonique à cessé, on décante et extrait la phase aqueuse à l'éther éthylique Apres lavage à l'eau de la phase organique jusqu'à neutralité, séchage et évaporation du solvant, on obtient le composé 5 a que l'on peut purifier par distillation Eb: -82 C/0,01 mm Hg L'étude des spectres IR et de Rn 1 H confirme la structure indiquée. Stade 2: Passage du composé 5 a au composé 7 a. On opère de façon analogue à celle décrite à l'exemple 1, stade 3. EXEMPLE 6 Préparation du composé 7 b Stade 1: Passage du composé 3 b au composé 5 b. On opère de façon analogue à celle mentionnée à l'exemple 5, stade 1 On obtient le composé 5 b L'étude des spectres IR et de RMN H confirme la structure indiquée. Stade 2: Passage du composé 5 b au composé 7 b. On opère de façon analogue à celle décrite à l'exemple 5, stade 2. 15 EXEMPLE 7 Préparation du composé 12 a Stade 1: Ethoxycarbonylation Passage du composé 3 a au composé 10 a. A une solution de 0,01 mole du dérivé lithié du composé 3 a dans 70 ml de tétrahydrofuranne, préparé comme décrit précédemment à l'exemple 1, stade 2, on additionne à -60 C, goutte à goutte, sous courant d'azote, une solution de 20 1,4 g ( 0,011 mole) de chloroformiate d'éthyle dans 15 ml de tétrahydrofuranne. On laisse la température remonter lentement (au bout de deux heures environ) à 0 C puis hydrolyse par une solution saturée de chlorure d'ammonium Après extraction à l'éther, lavage et évaporation du solvant on obtient le composé a utilisé tel quel pour l'étape suivante. Stade 2: Déprotection du groupement amine Passage du composé 10 a au composé lia. On opère de façon analogue à celle décrite à l'exemple 1, stade 3. La fonction amine est déprotégée par traitement à l'acide chlorhydrique 1 N ( 1,1 éq) pendant 30 mn puis neutralisation à la soude 1 N L'amino ester 11 a 3 est purifié par chromatographie sur colonne de silice (éluant: acétate 30 d'éthyle) Les spectres IR, de RMN H et de masse confirment la structure indiquée. Stade 3: Amidification Passage du composé lia au composé 12 a. On traite 0,230 g d'amino ester lia obtenu au stade précédent, en solution dans 0,3 ml de méthanol, par 0,3 ml d'ammoniaque dans un flacon 35 bouché pendant 16 heures Apres extraction à l'éther éthylique, l'aminoamide obtenu 12 a est purifié sur colonne de silice (éluant: méthanol) Le spectre IR et les spectres de RMN H et de masse confirment la structure indiquée. ETUDE DES PROPRIETES PHARMACOLOGIOUES 40 1 Résultats des tests "in vitro" 1.1 Inhibition de l'activité aldéhvde déshydrogénase L'activité d'aldéhyde déshydrogénase a été recherchée par le changement de l'absorption du co-facteur NADP transformé en NADPH, à 340 nm, en présence de benzaldéhyde comme substrat La pré-incubation de l'enzyme avec le produit étudié ( 6 a, sous forme de chlorhydrate) amène une diminution de 64 % de la densité optique due à la transformation NADP NADPH. 1.2 Inhibition de la croissance de cellules transformées Les tableaux 1 et 2 ci-après donnent le résultat de ces tests qui portent sur trois types de cellules transformées Les chiffres indiqués représentent le pourcentage d'inhibition de la croissance de cellules traitées par des doses de plus en plus fortes de composé 6 a (chlorhydrate) par rapport à celles des mêmes cellules non traitées. On peut constater que le produit étudié est un inhibiteur sélectif de croissance des cellules transformées, qu'elles soient d'origine animale ou 15 humaine, et que l'inhibition de la croissance des cellules normales est nulle ou très réduite. Le produit est efficace contre la transformation des cellules d'embryon de poulet induite par le virus du sarcome de ROUS. Il faut noter que la réplication du virus n'est pas inhibée contrairement à ce 20 qui est observé avec les agents anti-tumoraux connus. 2 Tests de Toxicité Les tests dont les résultats sont donnés ci-dessous ont été réalisés avec des solutions du composé 6 a (sous forme de chlorhydrate) Dans ces tests, on a étudié l'activité vis à vis de la croissance tumorale (carcinome et 25 mélanome) et la survie de souris swiss auxquelles ont été injectées des quantités variables de cellules d'ascites de Krebs. Toxicité aigie: La DL 50 du composé 6 a (chlorhydrate) déterminée sur ces souris par deux mesures indépendantes est de 60 mg/kg. Toxicité chronique: De plus, le composé 6 a (chlorhydrate) n'a 30 montré aucune toxicité: vis à vis de cellules de la membrane amniotique humaine (aucun effet sur la croissance et sur la morphologie des cellules n'a été observé pour des concentrations de 5 10-5 et de 10-4 mole-litre -); vis à vis du clone FAZA 967 de l'hépatome de rat REUBER H 35, (aucune 35 toxicité du produit, estimée par dosage dans le milieu des enzymes lactate déshydrogénase (LDH), glutamic oxaloacetate transaminase (GOT) et glutamic pyruvate transaminase (GPT) n'a été constatée); sur des souris suisses soumises à un traitement de 2 micromoles de produit étudié par jour pendant trois semaines. 40 3 Tests "In Vivo" 2550189 i 3.1 Croissance cellulaire Deux types de tumeurs ont été utilisés: un carcinome de Lewis (sur souris swiss), un mélanome DAU d'origine humaine (sur souris nude). 3 1 1 Mélanome Les souris ont recu une injection de 5 10 cellules de mélanome DAU Celles traitées ont reçu: 2 x 15 mg/kg le premier jour, 2 x 6 mg/kg du deuxième au septième jour. On observe chez 60 % des souris traitées un retard d'une dizaine de jours dans le développement tumoral, par rapport aux témoins non traités. 3.1 2 Carcinome Le test est effectué sur des souris auxquelles 3 10 cellules de carcinome de Lewis ont été inoculées On peut observer un net ralentissement 15 de la croissance tumorale chez les souris traitées journellement par 6 mg/kg ou par 12 mg/kg du produit 6 a (chlorhydrate). 3.2 Survie Les résultats des tests ont été obtenus principalement à partir de souris auxquelles ont été injectées des cellules d'ascites de KREBS (carcinome) dont l'origine a été décrite par G KLEIN et E KLEIN Cancer Research 1951-11-466 Dans le cas d'une inoculation de 10 cellules, une injection journalière de 6 mg/kg du chlorhydrate de 6 a pendant 7 jours est déjà suffisante pour obtenir la guérison complète jusque 6 mois Dans le cas o 5 105 cellules ont été inoculées, la durée du traitement nécessaire est 25 allongée: un traitement de 7 jours à 6 mg/kg provoque un retard dans la mort mais n'augmente pas le taux de survie alors qu'un traitement de 21 jours *accroit ce taux jusque 90 %. Le même effet peut être obtenu si l'on traite d'entrée par des quantités plus importantes; par exemple 2 x 15 mg/kg le ler jour puis 2 x 6 30 mg/kg les 6 jours suivants. Ces mêmes posologies et mode d'administration sont encore suffisants pour 106 cellules mais leur efficacité est moindre dans le cas de l'inoculation de 5 10 cellules. Une étude a aussi été faite sur des souris auxquelles avaient été inoculées 3 10 cellules de leucémie L 1210 Le produit 6 a (chlorhydrate) injecté à raison de 6 mg/kg pendant 7 jours a exercé le même effet que dans le cas du carcinome. En conclusion, toutes ces études faites in vivo montrent une corrélation entre la quantité du produit étudié et le nombre de cellules 40 transformées injectées dont il est possible d'empêcher le développement. 2550189 i TABLEAU I Effet du produit 6 a (Chlorhvdratej sur la croissance cellulaire (exprimé en % d'inhibition) 15 20 25 30 35 Type de |Concentration finale de produit étudié Cellules 5 10-5 M 1 10 4 M 2 10 4 M 4 10 4 M 6 10 M Cellules normales Cellules d'embryon de poulet O O O 10 12 Fibroblastes humains MRC 5 O O O O 18 Cellules de la membraneamniotique humaine O Cellules transforméesCellules de rein de rat NRK B 77 O 16 31 57 79 NRK LA 31 à 330 O 11 63 Mort Cellules He La humaines O 18 36 78 9 l Hepatomes de rat 50 60 TABLEAU 2 Tests in vitro complémentaires effectués sur des cellules de mélanomes humains M 3 DAU et MI DOR % de cellules mortes après quatre jours de croissance: Concentration en produit étudié -3 13 -3 -3 -3 O 1,5 10 12 10 3 10-3 4 10-3 5 10-3 _,.1 I 21m M 3 DAU ( 100 % de tumeurs chez la 6 24 47 92 98 98 souris nude) Ml DOR ( 25 % de tumeurs chez la 24 21 28 24 26 23 souris nude) FFVENDICATIONS 1 Les composés de formule générale I: NH 2 R \| C C C CO R 3 (I) R 2/ dans laquelle R et R représentent chacun indépendamment un groupement hydrocarboné, ledit groupement hydrocarboné pouvant être substitué et/ou comporter des hétéroatomes, ou bien R et R représentent ensemble un 10 groupement hydrocarboné éventuellement substitué formant, avec l'atome de carbone auquel ils sont attachés, un cycle pouvant comporter des hétéroatomes, et R représente -H, un groupement alkyle inférieur ou un groupement -NH; ainsi que les sels d'addition des composés de formule I, et les solutions contenant lesdits composés ou sels d'addition. 2 Composés selon la revendication 1, caractérisés par le fait que R et R representent chacun indépendamment un groupement alkyle ayant de 1 à atomes de carbone. 3 Composés selon la revendication 1 ou 2, caractérisés par le fait que R et R 2 représentent ensemble un groupement alkylène ayant 4 ou 5 atomes 20 de carbone dans la chaîne, un ou plusieurs desdits atomes de carbone de la chaîne pouvant être remplacé par un hétéroatome, ledit groupement alkylène pouvant être éventuellement substitué. 4 Composés selon l'une quelconque des revendications I à 3, caractérisés par le fait que R 3 représente un groupement alkyle ayant 1 à 5 25 atomes de carbone. Composés selon l'une quelconque des revendications 1 à 3, caractérisés par le fait que R est choisi parmi les groupements -H, -CH 3 et -NH 2 À 6 Composés selon la revendication 1, caractérisés par le fait 30 qu'ils sont choisis parmi les composés de formule I suivants: -R = R 2 = CH 3 et R = H; i 2 33 -R = R = CH 3 et R = CH 3; 1 2 3 3 -R = R = CH et R 3 = -2; 3 C 3 132 1 2 2 R 1 CH R 2 = C H et R = H; I 33 R = CH 3 et R C 2; R + R = -(CH 2)5 et R = H; ainsi que les sels d'addition de ces composés. 7 Composés selon l'une quelconque des revendications 1 à 6, caractérisés par le fait qu'ils sont choisis parmi les sels d'addition aue 40 forment les-composés de formule I avec les acides compatibles avec une utilisation en thérapeutique. 8 Procédé de préparation des composés selon l'une quelconque des revendications précédentes, caractérisé par le fait que l'on utilise comme produit de départ un composé de formule II: Z 1 R 1 l C c z 2 R 2 X dans laquelle R 1 et R 2 sont définis comme précédemment, Z 1 représente un groupement amine protégé (la liaison C-Z 1 étant une liaison carbone-azote), et Z représente soit -H soit un équivalent d'un métal ou d'un groupement lié à l'atome de carbone auquel il est attaché par une liaison carbone-métal, que l'on fait réagir ledit composé de départ avec un agent d'acylation ou d'alkoxy-carbonylation, pour obtenir un composé de formule III 15 zl R 1 l R\ C C Z 3 R 4 (III) R 2 X i 2 1 R 4 H dans laquelle R, R et Z sont définis comme précédemment, R représente -H, 20 alkyle inférieur ou alkoxy inférieur et Z 3 représente soit un groupement carbonyle -CO-, soit un groupement précurseur du groupement carbonyle, puis que l'on soumet le composé obtenu à une réaction de déprotection du groupement amine et que, le cas échéant, soit on transforme le groupement -Z 3 en groupement carbonyle, soit dans le cas ou -Z 3-R représente un groupement alkoxycarbonyle, on transforme l'ester obtenu en amide correspondant, et on obtient le composé de formule I désiré ou un sel d'addition correspondant. 9 Procédé selon la revendication 8, caractérisé par le fait que Z 2 représente un atome d'hydrogène, un métal alcalin ou un groupement -Mg X, X étant un halogène. 10 Procédé selon l'une quelconque des revendications 8 et 9, caractérisé par le fait que ledit agent d'acylation est une amine Nacylée (l'acyle étant dérivé d'un acide alcanoique inférieur) ou un anhydride d'acide alcanoique inférieur. 11 Procédé selon la revendication 9, caractérisé par le fait que 35 ledit agent d'acylation est la N-formyl pipéridine. 12 Procédé selon l'une quelconque des revendications 8 et 9, caractérisé par le fait que ledit agent d'alkoxy-carbonylation est un chloroformiate d'alkyle inférieur. 13 Procédé selon la revendication 8, caractérisé par le fait que 40 l'on transforme ledit ester en amide par l'action de l'ammoniaque. le 2550189 l 14 Procédé selon l'une quelconque des revendications 8 et 9, caractérisé par le fait que ledit agent d'acylation est un orthoester de formule: O Alk 3 / R C O Alk \ O Ar o R est un groupement -H ou un alkyle inférieur, -Alk est un alkyle inférieur et Ar est un groupement aromatique tel qu'un groupement phényle, que l'on obtient un composé de formule III correspondant, avec -Z représentant C Alk-O/ \O-Alk, et que, après la réaction de déprotection de l'amine on transforme -Z 3 en groupement carbonyle par hydrolyse du cétal selon les méthodes connues. Procédé selon l'une quelconque des revendications 8 à 14, caractérisé par le fait que Z représente un groupement: IS z 4 Z Alk Alk Si Si Alk X / \Alk N/ 1 4 dans laquelle Alk est un alkyle inférieur et Z est un groupement alkylène ayant 2 ou 3 atomes de carbone dans la chaîne, et que l'on effectue la réaction de déprotection de l'amine par hydrolyse acide. 16 Compositions pharmaceutiques, caractérisées par le fait qu'elles renferment comme ingrédient actif au moins un composé de formule I tel que 25 défini dans l'une quelconque des revendications 1 à 7. 17 Compositions pharmaceutiques selon la revendication 16, caractérisées par le fait qu'elles renferment comme ingrédient actif soit au moins un composé de formule I A: NH 2 R'| \' C(-C _ C CO R (I A) dans laquelle R' et R" représentent indépendamment un groupement méthyle ou éthyle, et R représente -H, alkyle inférieur ou -NH 2, soit au moins un sel 2 ' d'addition d'un composé I A. 18 A titre de produits intermédiaires obtenus dans le procédé de l'une des revendications 8 à 15, les composés de formule VI: Z 5 C C C Z R (VI) R 2/ dans laquelle soit Z 5 représente un groupement amine protégé, Z 3 est défini comme précédemment et R 5 a la même définition que R donnée précédemment, soit Z représente un groupement -NH 2 et dans ce cas ou bien Z représente un 2 6 6 groupement carbonyle et R représente un groupement -OR, R étant -H, alkyle inférieur, un groupement ammonium ou un équivalent d'un métal, ou bien Z 3 représente un groupement précurseur du carbonyle et R est un groupement -H ou alkyle inférieur. 19 A titre de produits intermédiaires selon la revendication 18, les composés de formule VI pour lesquels Z 5 représente: 10 IQ Z 4 Alk/ Alk Si si Si Alk/ \/ \Alk 20 A titre de produits intermédiaires selon la revendication 18 ou 19, les composés de formule VI pour lesquels ledit groupement précurseur du carbonyle est un groupement: " COA Alk-O/ O-Alk