Brevet FR2554016A1 — publié le 19850503

La présente invention est relative à des perfectionne- ments apportés aux movens magnétiques destinés à retirer des billes de gel magnétique d'un milieu biologique. Les gels magnétiques utilisables pour des dosages immu- noenzymatiques sont connus par le brevet français INSTITUT PASTEUR 2 334 106. Ces gels magnétiques sont constitués par un gel d'acrylamide et/ou d'agarose contenant des particules ma- gnétiques, couplé avec une protéine telle qu'un anticorps ou un antigène, par l'intermédiaire d'un agent de couplage appro- prié, tel que le glutaraldéhyde. Ils sont utilisés pour réali- ser le dosage immunoenzymatique de l'antigène ou de l'anticorps correspondant contenu dans un liquide biologique à doser. Après incubation, le gel magnétique est séparé dans une première étape, du liquide biologique et, dans une seconde étape, de la protéine (antigène ou anticorps) marquée par une enzyme de dosa- ge immunoenzymatique, chaque fois en appliquant un champmagnéti- que à l'extérieur du tube dans lequel a lieu le dosage, pour retenir le gel magnétique sur les parois du tube. La demande de brevet français INSTITUT PASTEUR NO 82 20632 utilise ces gels magnétiques sur lesquels sont cou- ples des anticorps anti-déterminants antigéniques spécifiques, pour la détection immunobactériologiaue de germes pathogènes possédant des déterminants antigéniques spécifiques, dans des milieux biologiques contaminés. Conformément au procédé de détec- tion qui fait l'objet de cette demande de brevet, après incubation avec le liquide biologique supposé contaminé, les billes de gel ma- gnétique sont retirées du liquide biologique par des moyens magné- tiques, de préférence constitués par une tige aimantée, à l'aide desquels ils sont transférés sur un milieu gélosé sur lequel le pro- cessus de détection estpoursuivi.la tige aimantée utilisée à cet effet est une tige aimantée enrobée de "Téflon". Il est cependant apparu qu'une telle tige aimantée pré- sente l'inconvénient d'une part d'être insuffisamment isolée par l'enrobage de "Téflon" et d'autre part d'être susceptible d'entrer en contact indésirable avec des surfaces naturelle- ment magnétiques au cours de l'opération de transfert. La présente invention s'est en conséquence donné pour but de pourvoir à un dispositif aimanté qui répond mieux aux nécessités de la pratique que les moyens magnétiques visant aux même buts, antérieurement connus, notamment en ce qu'il est pourvu d'une isolation qui évite toute fausse manoeuvre et de moyens de rappel qui empêchent un contact accidentel des moyens magnétiques avec des surface magnétiques pendant le trans- fert des billes de gel magnétique. La présente invention a pour objet un dispositif aiman- té destiné à retirer des billes de gel magnétique ou analogues d'un fluide biologique et à les transférer sur un mili e u de dosage immunoenzymatique, du type comportant une tige aiman- tée, lequel dispositif est caractérisé en ce qu'il comprend: - un bottier en matériau isolant, notamment en matière plastique, dans lequel est ménagé un orifice traversant sur toute la hau- teur dudit boîtier; - une tige logée dans ledit orifice traver- sant qui constitue une voie de guidage de ladite tige, laquelle tige est formée d'une partie inférieure et d'une partie supérieure, la partie inférieure de la tige étant réalisée en matériau magnétique et la partie su- périeure étant réalisée en matériau non magnétique, - une rondelle de butée fixée à la face inférieure du bottier, à la sortie de l'orifice traversant susdit, - un ressort monté entre une rondelle de butée fixée au voisinage de l'extrémité supérieure de la tige et de façon spécifique au voisinage de l'extrémité de la partie supérieure, en matériau non magnétique, de ladite tige, et la face supérieure du boitier. Selon un mode de réalisation avantageux du dispositif aimanté con- forme à 1 'invention, le boîtier en matériau isolant contient un aimant. Selon un autre mode de réalisation avantageux du dispo- sitif aimanté conforme à l'invention, la partie supérieure, en matériau non-magnétique, de la tige est emboîtée dans la partie inférieure, en matériau magnétique, de ladite tige et maintenue dans cette dernière à l'aide d'un cliquet ou analogue. Selon un autre mode de réalisation avantageux du dispo- sitif aimanté conforme à l'invention, le bottier est réalisé sous forme de poignée isolante dudit dispositif. Selon encore un autre mode de réalisation avantageux du dispositif aimanté conforme à l'invention, l'orifice tra- versant de guidage de ladite tige est excentré par rapport à l'axe longitudinal du boitier. La présente invention a également pour objet un ensem- ble ou "kit" prêt à l'emploi pour la réalisation de dosages immunoenzymatiques, caractérisé en ce qu'il comprend: - un réceptacle contenant une quantité appropriée de billes de gel magnétique couplé avec un antigène ou un anticorps spécifique, - Un dispositif aimanté tel que défini dans ce Cui précède, - une boite de culture, telle qu'une boite de Petri notamment, dont la face inférieure est pourvue extérieurement d'un ai- mant de forte puissance, - un réceptacle contenant une quantité appropriée de milieu de culture pour la culture de germes pathogènes à doser, desti- né à être introduit dans ladite boite de culture, - un réceptacle contenant une quantité appropriée d'un anti- corps ou d'un antigène spécifique anti-germe pathogène à dé- tecter, destiné à être introduit sur le milieu de culture susdit, - un réceptacle contenant une quantité appropriée d'agents de lyse des cultures de germes pathogènes développées dans ladite boite de culture, - un réceptacle contenant une quantité appropriée d'eau de lavage phvsiol6giaẻ tatnonnee pour lavage des billes de gel magnéticue fixées sur la tige du disDositif aimanté susdit. Outre les dispositions aui précèdent, l'invention comprend encore d'autres dispositions, aui ressortiront de la description qui va suivre. L'invention vise plus particulièrement les dispositifs aimantés conformes aux dispositions qui précèdent et les en- sembles de dosage immunoenzymatique incluant de tels dispositifs. L'invention sera mieux comprise à l'aide du complément de description qui va suivrequi se réfère au dessin anne- xé dans lequel: - la fig. 1 est une vue de face du dispositif aimanté conforme à l'invention;rappelé en position de transfert des billes de gel magnétique qui sont fixées sur la tige aimantée, - la fig. 2 est une vue de dessus du dispositif de la fig. 1 et - la fig. 3 est une vue de face du dispositif de la fig. 1 en position de détachement des billes sur un milieu de dosage approprié Il doit être bien entendu, toutefois, que ce dessn-. et les parties descriptives correspondantes, sont donnés uni- quement à titre d'illustration de l'objet de l'invention, dont ils ne constituent en aucune manière une limitation. Le dispositif aimanté représenta aux fig. 1 à 3, com- prend un boitier 1 dans lequel est ménage un orifice traver- sant 2, qui s'étend sur la totalité de la hauteur du boitierl. Bien que l'emplacement de l'orifice traversant puisse être quelconque, néanmoins, pour des raisons de commodité, dans la mesure o le boitier, qui est réalisé en matériau isolant, est utilisé comme poignée de préhension du dispositif conforme à l'invention, il est préféré que l'orifice traversant 2 soit excentré par rapport à l'axe longitudinal du boitier. Une tige, désignée d'une façon générale par la réfé= rence 3, dont le diamètre est sensiblement égal à celui de l'orifice traversant 2, est montée dans l'orifice traver- sant 2, de manière à pouvoir coulisser dans ce dernier. Cette tige 3 comprend une partie inférieure 4 en matériau magnétique et une partie supérieure 5 en matériau non magnétique; la partie supérieure 5 de la tige 3 est emboitée dans l'extrémité supérieure de la partie inférieure 4, dans laquelle elle est fixée en position par un cliquet 6, ou par tout autre système de fixation approprié, tel que, par exemple, un système à baïonnette. Un ressort 7 est monté sur la tice 3, entre une rondelle de butée 8 fixée au voisinage de l'extrémité supérieure 10 de la tige 3, et la face supérieure 12 du boîtier 1. Une rondelle de butée 9 est fixée à la sortie de l'orifice traversant 2, sur la face inférieure.11 du bottier 1. Le boîtier 1 contient un aimant 13. Le fonctionnement du dispositif aimanté conforme à l'in- vention est le suivant: une pression exercée sur l'extrémité supérieure 10 de la tige 3 provoque le coulissement de la tige 3 vers le bas, dans l'orifice traversant 2 ménagé dans le boî- tier 1, la course de la tige 3 étant limitée par le ressort 7 et par la compression concommittante de ce dernier entre la bu- tée 8 et la face supérieure 12 du boîtier 1 (cf. figure 3). Le relâchement de la poussée exercée sur l'extrémité supérieure 10 de la tige 3 provoque le rappel de la tige 3 par le-ressort 7, dans la position représentée à la figure 1, dans laquelle la partie 4 de la tige est aimantée par l'aimant 13 contenu dans le boîtier 1. Dans son application aux procédés de dosage objets des brevets français 2 334 106 et 82 20632,. le dispositif aimanté conforme à l'invention est placé au-dessus d'un récipient conte- nant un milieu d'incubation comprenant un fluide biologique et des billes de gel magnétique couplées à une protéine appro- priée pour permettre la réalisation d'un dosage immunoenzy- matique; une pression du doigt exercée par un opérateur sur l'extrémité supérieure 10 de la tige 3, met en contact la partie inférieure 4 aimantée de la tige 3 avec le milieu, laquelle attire les billes de gel magnétique,qui s'y fixent, Le relâchement de la pression exercée sur l'extrémité supé- rieure 10 de la tige 3, provoque le rappel de la tige 3 dans la position représentée à la fig. 1, et la mise de la partie inférieure 4 de la tige 3 hors de contact avec le milieu. Les billes de gel magnétique fixées sur la partie 4 de la tige 3 sont transportées alors que le dispositif se trouve dans la position représentée à la fig. 1, jusqu'à un récipient conte- 255ss40 16 nant un milieu de dosage approprié. Une nouvelle pression est alors exercée sur l'extrémité supérieure 10 de la tige 3 par l'opérateur pour mettre en contact la partie inférieure 4 de la tige 3 avec le milieu de dosage qui est contenu dans un réci- pient approprié pourvu extérieurement d'un aimant dont la force d'attraction détache les billes de gel magnétique de la partie 4 de la tige 3 pour les faire tomber sur le milieu de dosage. La pression exercée sur l'extrémité 10 de la tige 3 est alors relachée, ce qui provoque le rappel de la tige 3 en posi- tion de repos (représentée à la fig. 1), le dispositif aimanté conforme à l'invention étant prêt pour une nouvelle opération. Le dispositif aimanté conforme à l'invention est parfai- tement isolé grâce à la disposition du boitier 1 et à la réali- sation de la tige 3 en deux parties dont la partie supérieure est non magnétique. De plus, tout contact accidentel de la partie aimantée de la tige avec des surfaces aimantées est empêché dans une grande mesure par le rappel de la tige 3 en position haute pendant son transfert du récipient contenant le milieu d'incu- bation au récipient contenant le milieu de dosage. Ainsi que cela ressort de ce qui précède, l'invention ne se limite nullement à ceux de ses mode de réalisation et d'application aui viennent d'être décrits de façon plus expli- cite; elle embrasse au contraire toutes les variantes qui peuvent venir à l'esprit du technicien en la matière, sans s'é- carter du cadre, ni de la portée, de la présente invention. REVENDICATIONS l -Dispositif aimanté destiné à retirer des billes de gel magnétique ou analogues d'un fluide biologique et à les trans- férer sur un milieu de dosage immunoenzymatique, du type com- portant une tige aimantée, lequel dispositif est caractérisé en ce qu'il comprend: - un boitier (1) en matériau isolant, notamment en matière plastique, dans lequel est ménagé un ori- fice traversant (2? sur toute la hauteur dudit boitier; - une tige (3! logée dans ledit orifice traversant (2) qui constitue une voie de guidage de ladite tige, laquelle tige (3) est formée d'une partie inférieure (4) et d'une partie supérieure(5), la partie inférieure (4) de la tige (3) étant réalisée en ma- tériau magnétiqueet la partie supérieure (5) étant réalisée en matériau non magnétique, - une rondelle de butée (9) fixée à la face inférieure (11) du boitier, à la sortie de l'orifice traversant (2) susdit, - un ressort (7) monté entre une ron- delle de butée (8) fixée au voisinage de l'extrémité supérieure (10) de la tige (3) et, de façon spécifique, au voisinage de l'extrémité de la partie supérieure (5), en matériau non magné- tique, de ladite tige (3), et la face supérieure (12) du boî- tier. 2 -Dispositif aimanté selon la revendication 1, caractéri- sé en ce que le boîtier (1) contient un aimant (13). 3 -Dispositif aimanté selon l'une quelconque des revendi- cations 1 et 2, caractérisé en ce que la partie supérieure (5), en matériau non magnétique, de la tige (3) est emboîtée dans la partie inférieure (4), en matériau magnétique, de ladite tige (3) et maintenue dans cette dernière à l'aide d'un cliquet (6) ou analogue. 4 -Dispositif aimanté selon l'une quelconque des revendi- cations 1 à 3, caractérisé en ce que le boîtier (1) est réali- sé sous forme de poignée isolante dudit dispositif. -Dispositif aimanté selon l'une quelconque des revendi- cations 1 à 4, caractérisé en ce que l'orifice traversant (2) de guidage de ladite tige (3) est excentré par rapport à l'axe vertical du boîtier (1). 6 -Ensemble ou "kit" prêt à l'emploi pour la réalisation de dosages immunoenzymatiques, caractérisé en ce qu'ilccmprend: - un réceptacle contenant une quantité appropriée de billes de gel magnétique couplé avec un antigène ou un anticorps spécifique, - un dispositif aimanté selon l'une quelconque des Revendica- tions 1 à 5, - une boîte de culture, telle qu'une boite de Petri notamment, dont la face inférieure est pourvue.extérieurement d'un aimant de forte puissance, - un réceptacle contenant une quantité appropriée de milieu de culture pour la culture de germes pathogènes à doser, destiné à être introduit dans ladite boite de culture, - un réceptacle contenant une quantité appropriée d'un anti- corps ou d'un antigène spécifique anti-germe pathogène à dé- tecter, destiné à être introduit sur le milieu de culture susdit, - un réceptacle contenant une quantité appropriée d'agents de lyse des cultures de germes pathogènes développées dans la- dite boite de culture, - un réceptacle contenant une quantité appropriée d'eau de lavage physiologique-tamDonnée.