Brevet FR2560199A1 — publié le 19850830

Prncédé de DréDaration de l'i-brassica- stérol. La présente invention concerne un procédé de préparation de l'ibrassicastérol (nom chimique: 3,5-cycloergost-22-en-6$-ol) qui est un intermédiaire de la préparation de composés présentant une activité phytohormonale, et plus particulièrement un procédé de préparation de l'ibrassicastérol, consistant à transformer un mélange de stérols naturels contenant du brassicastérol en un mélange d'i-stérol, et à traiter le mélange ainsi transformé par chromatographie sur colonne de partage à phase inverse, isolant ainsi l'i-brassicastérol du mélange d'i-stérol et à purifier l'i-brassicastérol. Récemment, on a découvert dans le pollen-; de Brassica naps L., le brassinolide, substance favo- risant la croissance des plantes, et sa structure chimique a été déterminée (voir Chemical and Engineering News, n 5, page 20 (1979)). Par la suite, de nombreux composés apparentés au brassinolide, parmi lesquels le brassinolide lui- même, ont été préparés par synthèse, et leur activité sur les plantes a été examinée. On a trouvé que l'épimère 24R du brassinolide avait une activité consi- dérable sur la croissance des plantes (voir Org. Chem., 44, 5002 (1979)), et en conséquence, il est devenu nécessaire de disposer d'un procédé industriel pour préparer des brassinolides ayant une forte activité sur les plantes. Comme l'i-brassicastérol devait être préparé comme intermédiaire pour la préparation des brassinolides, la mise au point d'un procédé industriellement avanta- geux de préparation de l'i-brassicastérol est devenue souhaitable. Jusqu'à présent, comme procédé de préparation de l'i-brassicastérol, on connaissait plusieurs procédés par exemple un procédé dans lequel l'ergostérol (qui est aisément accessible en tant que substance unique dans un état relativement pur) est utilisé comme matière de départ et est transformé en i-brassi- castérol en passant par l'i-ergostérol, un procédé dans le brassicastérol est préparé à partir de l'ergostérol et le brassicastérol ainsi préparé est transformé en i-brassicastérol, et un procédé dans lequel le brassicastérol est séparé d'un mélange de phytostérols contenant du brassicastérol, puis le brassi- castérol est transformé en i-brassicastérot. Cependant, dans le procédé ci-dessus dans lequel l'i-brassicastérol est obtenu à partir de l'ergostérol, par exemple, dans un procédé passant par l'i-ergostérol, les cinq stades suivants sont néces- saires. (1) tosylation, (2) hydrolyse, (3) oxydation, (4) réduction de Birch et (5) réduction par t'hydrure d'aluminium et de lithium (voir Steroids, 5, 745 (1965)). En conséquence, un tel procédé non seulement demande beaucoup de temps pour obtenir le composé recherché, l'i-brassicastérol, mais également ne donne qu'un faible rendement. Le procédé pose un problème d'entretien en raison de l'utilisation d'un réactif fortement in- flammable tel que le lithium métallique, et il n'est pas pratiquable comme procédé industriel. Ainsi, le procédé est utilisable que pour la préparation en laboratoire. Par conséquent, le procédé dans lequel l'ibrassicastérol est obtenu à partir de l'ergostérol, en passant par le brassicastérol,comporte des stades opératoires encore plus nombreux et n'est pas pratiquable comme procédé industriel. De même, dans le procédé consistant à séparer le brassicastérol du mélange de phytostérols, les cinq stades suivants sont nécessaires pour séparer le brassicastérol lui-même. (1) acétylation, (2) bromation, (3) cristal- lisation, (4) débromation et (5) hydrolyse, et comme le procédé utilise du brome fortement corrosif, ce procédé n'est pas pratiquable à l'échelle industriel. Compte tenu de ce qui précède, la présente invention a été réalisée, et un de ces buts est de. fournir un procédé avantageux pour isoler efficacement à l'état pur l'ibrassicastérol, qui est utile comme intermédiaire dans la préparation de composés apparentés au brassinolide, présentant une activité sur les plantes, à partir d'un mélange d'i-stérols obtenu à partir d'un mélange de stérols naturels contenant du brassicastérol. Dans un de ces aspects, la présente invention fournit un procédé de préparation de l'i-brassicastérol, consistant à introduire un mélange d'istérol provenant d'un mélange de stérols contenant du brassi- castérol dans une colonne remplie d'une charge obtenue en liant chimiquement un ou plusieurs groupes alkyles en C15 à C24 à de la silice, et en soumettant ce mélange d'i-stérol à une chromatographie sur colonne de partage à phase inverse en utilisant comme éluant (1) un alcool en C1 à C3 ou un mélange de ceux-ci, ou (2) un solvant mélangé contenant plus de 50 % en volume de ce ou ces alcools et un solvant autre que ce ou ces alcools, isolant et purifiant ainsi l'i- brassicastérol. Dans les dessins annexés, les figures 1 à 6 représentent respectivement l'état d'élution et de séparation de l'i-brassicastérol dans les chromatogra - mes respectifs des exemples 1 à 6, dans lesquels la quantité de chaque istérol élué est représentée par la réponse en tension du détecteur. La caractéristique de La présente invention réside dans Le fait qu'un mélange d'i-stérols provenant d'un mélange de stéroLs contenant du brassicastéroL, est introduit dans une coLonne rempLie d'une charge pour chromatographie sur colonne de partage en phase inverse qui a été préparée en liant des groupes alkyles en C15 à C24 à de la silice, soumettant ainsi Le mélange d'i-stérols à une chromatographie sur une colonne de partage en phase inverse en utilisant un alcooL à C1 à C3, un mélange de ceux-ci ou un solvant mélangé contenant ces alcools comme constituant princi- pal comme éluant pour isoler et purifier le 3,5-cyclo- ergost-22-en-6e-ol représenté par la formule (I). (I) OH En outre, la présente invention a égaLement pour caractéristique que le mélange de stérols utilisé comme matière de départ, contenant du brassicastérol, est mis à réagir avec un halogénure d'aLkyl sulfonyLe ou un halogénure d'aryl sulfonyle pour obtenir un ester d'acide sulfonique, et l'ester d'acide sulfonique ainsi obtenu est hydrolysé pour le transformer en un mélange d'i-stéroLs, et en soumettant le méLange d'i- stérols ainsi obtenu à une chromatographie de partage en phase inverse, la préparation de l'i-brassicastéroL peut être remarquablement simplifiée. Le brassicastérol qui est utilisé comme matière de départ pour préparer l'i-brassicastérol à la présente invention est présent dans les huiles et graisses de divers animaux et plantes en même tant que d'autres stérols. Comme animal et plante, on peut citer par exemple Brassica rapa L. var nippoleifera, Carthamus tinctorius L., etc. comme plantes, et des mollusques en particulier, des coquillages comme animaux. En conséquence, dans la présente invention, le mélange de stérols utilisé comme matière de départ pour l'i-brassicastérol est préparé en soumettant les huiles et graisses animales et végétales mentionnées ci-dessus à un moyen approprié tel qu'extraction, entraînement à la vapeur, etc. éliminant ainsi les constituants qui ne contiennent pas de stérols, et obtenant un mélange de stérols dont la teneur en stérol est aussi élevée que possible, de préférence supérieure à 70 %, et mieux encore supérieure à 80 % en poids. A cet égard, lorsque les huiles et graisses animales ou végétales précitées sont purifiées et traitées pour être utilisées comme aliments, le distillat évacué de la tour d'entraînement à la vapeur sous vide en vue de leur désodorisation ou le résidu de distillation de la tour de distillation pour l'acide gras est riche en stérols, et aussi en brassicastérol. En conséquence, un tel distillat et un tel résidu évacués sont appropriés comme matière de départ pour la préparation de l'i-brassi- castérol. En outre, lorsqu'on utilise un tel distillat ou résidu comme matière de départ il est préférable de saponifier la matière de départ par une solution méthanolique aqueuse d'un alcali caustique tel que l'hydroxyde de potassium et de n'utiliser que la matière insaponifiable obtenue en extrayant le mélange de saponification par un solvant hydrophobe tel que l'hexane et l'éther éthylique. On préfère que le mélange de stérols bruts obtenus comme matière insaponifiable soit recristallisé dans du méthanol ou de l'éther de pétrole pour éliminer la matière insaponifiable autre que les stérols et utiliser la matière insaponifiable ainsi purifiée. En soumettant La matière première à un tel traitement, un mélange de stérols ayant une teneur en stérols supérieure à 90 % en poids, dans Lequel la teneur en brassicastérol est de 9 à 25 % en poids, est obtenue par exemple à partir du distillat évacué de La tour de désodorisation par entraînement à La vapeur sous vide dans le cas de la purification de L'huile de colza. Il est particulièrement souhaitable d'avoir augmenter la concentration de stérols dans le mélange de stérols utilisé comme matière de départ, comme iL a été montré ci-dessus, pour améliorer l'ef- ficacité de la réaction, de L'isolement et de la purification. Dans la présente invention, le mélange de stérols est amené sous la forme d'ester sulfonique par un halogénure d'alkyl sulfonyle ou un halogénure d'aryl sulfonyte, par exemple le chlorure de p-toluènesulfo- nyle ou le chlorure de méthanebulfonyle en présence d'une amine tertiaire, et la substance sous laforme d'ester sulfonicueest isolée ou hydrolysée, ou hydrolyséé sans isolement pour obtenir un mélange d'i-stérols. Dans ce cas, l'hydrolyse est de préférence effectuée en présence d'un sel ou d'une base ayant une action tampon pour obtenir le mélange d'i-stérols avec un fondement intéressant. Comme sels_:, on peut citer l'acétate de potassium, et comme base la pyridine. Dans la présente invention, le mélange d'i- stérols ainsi obtenu est introduit,directement ou après élimination des stérols n'ayant pas réagis de la matière première par une chromatographie sur colonne en phase normale en utilisant de L'alumine ou du gel de silice, dans une colonne de partage en phase inverse remplie d'une charge préparée en liant chimiquement les groupes alkyles à de la silice et soumis à une chromatographie sur colonne de partage en phase inverse en utilisant comme éluant un alcool en C1 à C3, un mélange de ceux-ci ou un mélange de solvants contenant plus de 50 % en volume de l'alcool, éluant et isolant ainsi l'i-brassicastérol. Comme charge utilisée dans la chromatographie sur colonne précitée, on préfère une substance obtenue en liant chimiquement des groupes alkyles en C15 à C24 à de la silice, et une substance obtenue en liant chimiquement des groupes octadécyles à de la silice est particulièrement préférable. Lorsqu'on utilise d'autres groupes.alkyles que ceux indiqués ci-dessus, par exemple un groupe alkyle en C8, on trouve que la capacité de séparer l'i-brassicastérol est très mauvaise. A ce sujet, la charge ci-dessus est disponible dans le commerce sous le nom de BONDAPACK RC 18 et de Lichroprep RP-18. Le mélange d'i-stérols introduit dans la colonne comme il a été indiqué ci-dessus est élué en utilisant l'éluant indiqué ci-dessus. Comme éLuant, on peut citer (1) un alcool en C1 à C3 tel que le méthanol, l'éthanol, le 1-propanot et le 2-propanol ou un mélange de ceux-ci, ou (2) un solvant mélangé comprenant plus de 50 % en volume de ce ou ces alcools et un ou plusieurs solvants telsque l'eau et un mélange d'eau avec un ou plusieurs solvants organiques ayant un paramètre de force du solvant (E) de 0,4 à 0, 7 choisis dans le groupe constitué de l'acétone, du tétrahydro- furane, du dioxane, du chloroforme, du dichlorométhane, de la méthyl éthyl cétone, de l'acétate de méthyle ou d'éthyle du sulfoxyde de diméthyle et de l'acétonitrile comme troisième constituant solvant organique représentant moins de 30 % en volume (voir L.R. Synder, Principle of Adsorption Chromatography, publié par M. Dekker, New York, 1968). Le rapport de mélange (en volume) préféré pour l'alcool/eau dans le solvant mélangé est de 100/0 à 100/40, et celui de l'alcool/eau/troisième constituant (solvant organique autre que l'alcool) dans le solvant mélangé est de 100/0,1/1 à 100/50/30. Comme il a été décrit ci-dessus la présente invention permet de préparer avantageusement et industriellement l'i-brassicastérol qui est utile comme - intermédiaire pour la préparation de composés brassi- nolides favorisant la croissance des plantes, en uti- lisant un mélange de stérols accessible de manière relativement aisée comme matière de départ et en soumet- tant le mélange d'i-stérols provenant du mélange de stérols à une chromatographie sur colonne de partage en phase inverse. La présente invention sera expliquée plus en détail en se référant aux exemples ci-après. EXEMPLE I Préparation d'un mélange de stérols comme matière de départ Après avoir saponifié le distillat, évacué de la tour de désodorisation par entraînement à la vapeur sous vide, et obtenu comme sous produit dans le cas de la purification de l'huile de colza, par une solution aqueuse méthanoLique d'hydroxyde de potassium suivant un procédé classique, une matière insaponifiable est extraite du mélange réactionnel avec du nhexane et le résidu obtenu en éliminant le n-hexane par distil- lation de l'extrait est recristallisé dans de l'éther de pétrole pour obtenir un mélange de stérols contenant 21,4 % en poids de brassicastérol, 32,2 % en poids de campestérol et 46,3 % en poids de sitostérol. Tosylation du mélange de stérols A une solution de 20 g du mélange de stérols ainsi obtenu dans 20 mL de pyridine, on ajoute 10 g de chlorure de p-toluène sulfonyle et on agite le mélange une nuit à la température ambiante. Lorsque la réaction est terminée, on verse le mélange réactionnel dans deux litres d'eau glacée pour former des cristaux, et après avoir recueilli les cristaux par filtration, on les sèche sous pression réduite pour obtenir 28,3 g de cristaux bruts du tosylate de mélange de stérols (point de fusion: 101-108 C après recris- tallisation dans la ligroine et RMN: 6 = 2,50 (s.p-CH3). Préparation d'un mélange d'i-stérols - Dans 500 ml d'acétone, on dissouts 28,3 g de tosylate ainsi obtenu et on ajoute à la solution acétonique une solution aqueuse de 31 g d'acétate de potassium dans 140 ml d'eau pour former des cristaux. Après avoir dissous les cristaux dans la liqueur mère en les chauffant et en les agitant sous un condenseur à reflux, et avoir soumis la solution à un chauffage sous reflux pendant 5 heures, on refroidit la solution à la température ambiante et on sépare la couche aqueuse de la couche du solvant organique en utilisant un entonnoir de séparation. On Lave les couches aqueuses avec 500 mL d'éther de pétrole, et on mélange le liquide de lavage avec la couche du solvant organique. On lave le mélange ainsi obtenu avec une solution aqueuse saturée de chlorure de sodium, on le déshydrate en ajoutant des sulfates de sodium anhydre et on le fait évaporer à sec pour obtenir 19,7 g d'un sirop. Après avoir ajouté 100 ml de méthanol au sirop et éliminé la matière insoluble par filtration de la solution ainsi obtenue, on élimine le méthanol par distillation de la solution pour obtenir 16,7 g d'un mélange d'i-stérols brutsprésentant lesspectresde RMN et IR suivants: H-RMN (dans CDCl3): 6 = 5,2 (m, 22-H et 23-H du i-brassicastérol) 3,25 (m, 6-H) 0,2 à 0,6 (m, H du cycle cyclopropane) IR(cm1): 3 400, 2 940, 2 550, 1 450, I 370 et I 015. Isolement et purification de l'i-brassicastérol On soumet une partie (12, 3 g) du mélange d'i-stérols brut à un isolement et à une purification par chromatographie sur colonne de partage en phase inverse sur les conditions suivantes. Colonne: du Bondapack C18 (diamètre de particules de 37 à 50 pm, Waters Associates) est introduit dans une colonne de verre,résistant aux pres- sions moyennes, de 40 mm de diamètre et de 500 mm de haut. Eluant: mélange de 100 parties en volume de méthanol et de 2,5 parties d'eau, Pression d'introduction de l'éluant: 98 kPa. Débit de l'éluant: 18 ml/min. Détecteur: Shodex RRI SE- 12 (fabriqué par Showa-denko Co., Ltd). Enregistreur: enregistreur à deux canaux REC-2 (fabriqué par Pharmacia Fine Chem.). L'i-brassicastérol ainsi isolé et purifié est examiné par HPLC (chromatographie liquide sous haute pression), l'appareil étant relié à un réfractomètre différentiel à haute sensibilité, Shodex)RI SE-51; ce que on trouve que l'on obtient 1,9 g d'i-brassicastérol d'une pureté de 90 % à partir de la fraction n 1 de la figure 1 et 2,1 g d'i- brassicastérol d'une pureté de 16 % à partir de la fraction n 2 de la figure 1; ce qui montre la possibilité de disposer d'une quantité au niveau du gramme d'i-brassicastérol. On purifie la fraction n 1 en la soumettant à nouveau à la même chromatographie sur colonne pour obtenir 136 mg d'i-brassicastérol d'un échantiLlon authentique pour l'analyse sous forme de cristauU.aci- culaires présentant les propriétés suivantes: Point de fusion: 116 à 118 C (après recristallisation dans L'acétonitriLe). H RMN (dans CDCL3): 6 = 3,27 (1H, t, 6-H) ,18 à 5,22 (2H, m, 22-H et 23-H). Composition élémentaire Trouvé C 84,1 % et H 4,0 %. Calc. pour C28H460: C 84,36 % et H 4,01%. EXEMPLE 2 PréDaration d'un méLange d'i-stérols Dans une solution préparée en dissolvant 2,0 g d'un mélange de stérols constitué de 15,6 % en poids de brassicastérol, 46,1 % en poids de campestérol et 38,3 % en poids de sitostérol, préparé par Les mêmes modes opératoires que dans l'exemple 1, dans 25 ml de pyridine, on ajoute goutte à goutte 1,0 ml de chlorure de mésyle, et on agite le mélange une nuit à la température ambiante. Après avoir ajouté une solution de 10 ml d'eau dans 100 ml d'acétone au mélange réaction- nel, on chauffe le mélange sous reflux pendant 3 heures et on condense le mélange réactionnel à environ 50 % en volume, et après avoir ajouté 10 ml d'eau et 50 ml d'éther de pétrole au condensat, on agite le tout et après qu'une couche aqueuse est été séparée de la couche solvant organique, on lave la couche aqueuse avec 50 ml d'éther de pétrole et on ajoute le liquide de lavage à la couche solvant organique, et on lave la couche solvant organique combinée à l'acide chlorhy- drique dilué, avec une solution aqueuse de bicarbonate de sodium et une solution aqueuse saturée de chlorure de sodium, dans cet ordre, et on la déshydrate par addition de sulfate de sodium anhydre. En éliminant le solvant par distillation de la couche solvant déshydratée, on obtient 2,0 g de sirop et on ajoute 20 ml de méthanol au sirop, puis on fiLtre Le mélange pour éliminer la matière insoluble du mélange méthanolique. En éliminant le méthanol du filtrat par distillation, on obtient 1,57 g d'un mélange d'i-stérols bruts(La matière insoluble dans le méthanol est constituée de stérols de la matière de départ). Les données de RMN et IR du méLange d'i- stérols ainsi obtenu sont les suivantes: I Données de H-RMN dans (CDCl3): 6 = 5,2 (m, 22-H et 23-H d'i-brassicas- térol), 3,25 Cm, 6-H) et 0,2 à 0,6 (m, H du cyclopropane) Spectre IR (cm1) : 3 400, 2 940, 2 850, 1 450, 1 370 et 1 015. Isolement et purification d'i-brassicastérol On soumet une partie du mélange d'i-stérols brutsainsi obtenu à un isolement et une purification dans les conditions suivantes par chromatographie sur colonne de partage en phase inverse. Quantité du mélange d'i-stérols brut: 920 mg, Colonne: Lichroprep (RP-18 introduit dans un tube de verre de 25 mm de diamètre et de 310 mm de haut (fabriqué par E. Merck Co.), Eluant: méthanol, Pression d'introduction de l'éluant: 118 kPa, Débit de l'éluant: 5,8 ml/min, Détecteur: le même que dans l'exemple 1, Enregistreur: le même que dans l'exemple 1. On examine la pureté de l'i-brassicastérol isolé et purifié par les mêmes modes opératoires que que dans l'exemple 1, et le résultat est donné dans la figure 2. A partir de la fraction n I de la figure 2, on obtient 148, 9 mg d'i-brassicastérol d'une pureté de 92 %. EXEMPLE 3 A partir d'un mélange de stérols comprenant 7,8 % en poids de brassicastérol, 40,3 % en poids de campéstérol, 49,8 % en poids de sitostérol et 2,1 % en poids de stigmastérol, on obtient un mélange d'i- stérols bruts dans le même mode opératoire que dans l'exemple 1, et on soumet 950 mg du mélange à un isolement et à une purification par chromatographie sur colonne de partage en phase inverse danA les conditions suivantes. Colonne: Lichroprep RP-18, introduit dans un tube de verre de 25 mm de diamètre et de 310 mm de haut (fabriqué par Merck et Co.), Eluant: mélange de 100 parties en volume de méthanol et de 5 parties en volume d'eau, Pression d'introduction de l'éluant: 147 kPa, Débit de l'éluant: 3, 2 ml/min, Détecteur: Shodex RI SE-12 (fabriqué par Showa Denko Co., Ltd.), et Enregistreur: enregistreur à deux canaux REC-2 (fabriqué par Pharmacia Fine Chemicals). La pureté de l'i-brassicastérol isblé et purifié comme il a été indiqué ci-dessus est déterminée par les mêmes modes opératoires que dans l'exemple 1, et le résultat est donné dans la figure 3. A partir de la fraction n 1 de la figure 3, on obtient 72,0 mg d'ibrassicastérol ayant une pureté supérieure à 99 %. Dans la figure 3, le pic n 2 est du à l'i- campéstérol et au i-stigmastérol, et le pic n 3 est du au i-sitostérol et à des stérols de la matière de départ. On a trouvé, en outre, que même si la teneur en brassicastérol était faible dans les stérols de la matière de départ, l'i-brassicastérol peut être isolé avanta- geusement par ce procédé. EXEMPLE 4 A partir d'un mélange de stérols comprenant ,6 % en poids de brassicastérol, 36,7 % en poids de campéstérol et 47,7 % en poids de sitostéroL, on obtient un mélange d'i-stérols brutset en utilisant Le mélange d'i-stérols brutsainsi obtenu, on isole et purifie L'ibrassicastérol par les mêmes modes opératoires que dans l'exemple 1 dans Les conditions suivantes. Quantité du mélange d'i-stérols bruts: 901 mg, Colonne: la même que dans L'exemple 3, Eluant: mélange de méthanol, de 2-propanoL et d'eau dans un rapport de 100: 50: 15 dans cet ordre, Pression d'introduction de l'éLuant: 176 kPa, Débit de l'éluant: 3,0 ml/min, Détecteur et enregistreur: les mêmes que dans l'exemple 3. Un chromatograme de L'i-brassicastérol ainsi obtenu est représenté dans La figure 4. A partir de la fraction n 1 de la figure 4, on obtient 137 mg d'i-brassicastérol d'une pureté supérieure à 99 %. On trouve notamment que l'éluant à trois constituants mentionné ci-dessus, comprenant du méthanol, du 2- propanol et de l'eau peut aussi être utilisé pour l'iso- lement d'i-brassicastérol. EXEMPLE 5 A partir d'un mélange d'i-stérols brutsobtenu à partir d'un mélange de stérols contenant 15,6 % en poids de brassicastérol,-36,7 % en poids de campéstérol et 47,7 % en poids de sitostérol, on isole et purifie l'i- brassicastérol par les mêmes modes opératoires que dans l'exemple 1 dans les conditions suivantes. Quantité du mélange d'i-stérols bruts: 10,0 g, Colonne: Bondapack( C18 (diamètre de parti- cules dans L'intervalle de 37 à 50 gm, Waters associates), tassé dans un tube de verre de 40 mm de diamètre et de 500 mm de long,résistant aux pressions moyennes, Eluant: un méLange de 100 parties en volume de méthanol, 100 parties en volume d'éthanol et 20 parties en volume d'eau, Pression d'introduction de l'éluant: 147 kPa, Débit de l'éluant: 15 mL/min, Détecteur et enregistreur: les mêmes que dans l'exemple 4. Le résultat de l'analyse de l'i-brassicastérol ainsi obtenu est donné dans La figure 5. A partir de la fraction n I de la figure 5, on obtient 1,4 g d'i-brassicastérol d'une pureté de 93 %. L'exemple 5 montre que l'éLuant à trois constituantscontenant du méthanol, de l'éthanol et de l'eau est efficace pour isoler et purifier l'i-brassicastérol. EXEMPLE 6 A partir de 9,8 g du même méLange d'i-stérols brutsque dans l'exemple 5, on isole et purifie l'i- brassicastérol par les mêmes modes opératoires que dans l'exemple 5 dans les conditions suivantes. Colonne: la même que dans l'exemple 5, Eluant: mélange de 100 parties en volume de méthanol, 10 parties en volume d'acétone et 5 parties en volume d'eau, Pression d'introduction de l'éluant: 98 kPa, Débit de l'éLuant: 16 ml/min, Détecteur et enregistreur: les mêmes que dans l'exemple 5. Le résultat d'une analyse de l'i-brassicastérol ainsi obtenu est donné dans la figure 6. A partir de la fraction n 1 de la figure 6, on obtient 1,4 g d'i-brassicastérol d'une pureté de 95 %. Dans l'exemple 6, comme solvant représentatif de l'un des solvants ayant un paramètre de force du solvant C(E) dans L'intervaLLe o de 0,4 à 0,7, L'acétone (c = 0,56) a été choisie et utilisée., et avec ceLLe-ci, la substance recherchée a été obtenue avec un rendement élevé. REVENDICATIONS 1. Procédé de préparation de L'i-brassicastérol consistant à introduire un mélange d'i-stérols prove- nant d'un mélange de stérols contenant du brassicastérol dans une colonne remplie d'une charge obtenue en Liant chimiquement un ou plusieurs groupes alkyles en C15 à C24 à de la silice, et en soumettant ce mélange d'i- stérols à une chromatographie sur colonne de partage en phase inverse en utilisant C1) un alcool en C1 à C3 ou un mélange de ceux-ci ou (2) un solvant mélangé comprenant plus de 50 % en volume de ce ou ces alcools et un solvant autre que ce ou ces alcools,comme éluant, isolant et purifiant ainsi L'i-brassicastérol. 2. Procédé suivant La revendication 1,-carac- térisé en ce que le mélange de stérols contenant du brassi- castérol est une matière insaponifiable obtenue à partir d'un distillat d'huiles et graisses naturelles au stade de la désodorisation de cellesci ou d'un résidu de distillation des acides gras. 3. Procédé suivant la revendication 1,caracté- risé en ce que le mélange d'i-stérols est obtenu en trans- formant ce mélange de stérols contenant du brassicas- térol en un ester d'acide sulfonique avec un halogénure d'alkylsulfonyle ou un halogénured'arylsulfonyle, et en hydrolisant l'ester d'acide sulfonique ainsi obtenu. 4. Procédé suivant la revendication 1,caracté- risé en ce que ce solvant mélangé comprend ce ou ces alcools et de l'eau. 5. Procédé suivant la revendication 1,caracté- risé en ce que ce solvant mélangé comprend ce ou ces alcools, de l'eau et un ou plusieurs solvants organiques ayant un paramètre de force du solvant (E) de 0,4 à 0,7. o 6. Procédé suivant la revendication 5,carac- térisé en ce que ce ou ces solvants organiques ayant un paramètre de force du solvant (e) de 0,4 à 0,7 sont o choisisdans Le groupe constituant de L'acétone, du tétrahydrofurane, du dioxane, du chloroforme, du dichLo- rométhane, de La méthyL éthyLe cétone, de l'acétate d'éthyle, de L'acétate de méthyLe, du sulfoxyde de diméthyle, de L'acétonitriLe et d'un mélange de ceux-ci.