Brevet FR2555074A1 — publié le 19850524

Dispositif de séparation du sang et d'obtention de sérum. La présente invention est relative à un procédé de séparation du sang permettant en particulier d'activer l'obtention du sérum humain ou animal. I1 est bien connu, que pour les besoins d'analyses des composants du sang humain et animal, il est necessaire de separer le sang en procédant en particulier à la coagulation de celui-ci. Cette coagulation doit cependant être effectuee d'une façon très rapide, neutre, sans fibrine, sûre et efficace, sans deterioration des composants du sang et il est necessaire d'eviter l'hemolyse de celui-ci. On connaît déjà un certain nombre de dispositifs permettant de séparer le sang coagulé en une phase légère formée essentiellement de sérum et en une phase lourde formée essentiellement de matières cellulaires et fibrillaire. Toutefois, dans ce type de procédé la formation latente de fibrine dans la fraction légère ou sérum peut conduire à la contamination du sérum par la fibrine et affecter les teneurs chimiques apparentes du sérum mesurées par les appareillages de contrôle. Les durées de coagulation sont généralement de l'ordre de 30 minutes ce qui pose des problèmes au niveau de la contamination du sérum par les produits de dégradation du sang. L'un des objectifs visés par la présente invention est donc d'avoir une coagulation du sang très rapide inférieure à 3 minutes, ce qui permet une analyse des constituants de ce dernier donnant des résultats très proches de la réalité. Dans la technique antérieure on a utilisé différents dispositifs qui présentent tous l'inconvénient de nécessiter un temps relativement long de coagulation. C'est ainsi que l'on a préconisé d'utiliser des tubes en atière plastique présentant l'avantage d'une surface de contact neutre mais retardant de façon très sensible la coagulation du sang en raison d'un accrochage des hématies sur les parois intérieures des tubes. En plus de l'inconvénient d'un retard de coagulation, ces tubes nécessitent par ailleurs souvent, le recours à un décollage du caillot des parois des tubes à l'aide d'un tige, ce qui présente des risques d'hémolyse. On a également préconisé dans l'état de la technique l'utilisation de tubes en verre du type "sodocalcique" offrant une surface mouillable au contact du sang total. Ces tubes ne permettent pas non plus d'accélérer la coagulation du sang et conduisent le plus souvent à une coagulation variable suivant la morphologie des constituants du sang prélevé. La nature du verre lui-même présente un certain nombre de risques pour l'utilisation, en raison de la possibilité de diffusion à partir des surfaces internes de certains composants du verre bien connus, tels que par exemple le sodium ou le potassium. Ces composants en raison de la finesse des analyses chimiques ou biochimiques dans ce domaine peuvent présenter des interférences avec les analyses du sang lui-même. On a par ailleurs déjà préconisé d'utiliser des verres de qualité neutre qui sont d'un prix de revient très élevé et n'coffrent aucun avantage substantiel en ce qui concerne I'accélération de la coagulation. Pour remédier à cet inconvénient on a proposé de revêtir les parois d'une couche barrière de silicone compatible sur le plan des analyses médicobiologiques. L'utilisation de ce type de produit présente cependant un incon vénient majeur qui est de retarder encore la coagulation du sang. La présente invention résout ces différents problèmes et permet une coagulation ultra-rapide dans les temps de l'ordre de l à 3 minutes. Elle conduit à l'obtention d'un sérum dans un récipient en plastique ou en verre, dans lesquels les interférences possibles sont réduites au minimum en raison de la neutralité absolue du récipient, de l'absence de fibrine et de composants tels que calcium, potassium, fer, de l'absence d'hémolyse. L'invention permet également d'avoir une séparation physique automatique entre le sérum et la phase plus lourde formée essentiellement de matières cellulaire et fibrillaire. L'objet de l'invention est donc constitué par un récipient de préférence sous forme de tube, permettant la séparation du sang humain ou animal et comportant des parois intérieures revêtues par une couche filmogène non soluble dans le sang. Un autre objet de l'invention est constitué par un récipient notamment sous forme de tube comportant un activateur de coagulation constitué par une silice et un séparateur de sérum constitué par des microbilles. D'autres objets de l'invention apparattront à la lecture de la description des exemples qui suivent. Le dispositif de séparation du sang humain ou animal est constitué par un récipient de préférence sous forme de tube en matière plastique ou en verre qui est caractérisé par le fait qu'au moins la surface intérieure dudit récipient est revêtue d'une couche filmogène non soluble dans le sang et neutre chimiquement constitué par un copolymère de vinylpyrrolidone/acétate de vinyle Ces copolymères sont connus en eux-mêmes et n'ont jamais été utilisés dans le cadre de dispositifs de séparation du sang. Dvune façon surprenante ils présentent l'avantage par rapport aux silicones préconisés jusqu a ce jour, d'avoir une activité de surface remarquable de contact avec le sang, etant donné qu'ils permettent d'activer au niveau de la surface interne des dispositifs et séparation des facteurs coagulants contenus dans le sang. Cette pellicule filmogène prÇserdte egalement l'avantage de constituer une barrière efficace visà-vis notamment des constituants du verre qui pourraient éventuellement diffuser avec le temps à la surface des parois et interférer sur les dosages des constituants du sérum Ce dispositif peut bien entendu contenir en plus un activateur de coagulation connu en lui-meme ou bien l'activateur de coagulation décrit ci-après ainsi que des moyens de séparation du sérum tels que des microbilles connues en elles-mêmes ou bien du type de celles définies ci-après Selon une variante, le dispositif de séparation du sang conforme à l'invention, est constitué par un récipient de préférence sous fone de tube en plastique ou en verre caractérisé par le fait qu'il contient au moins un activateur de coagulation qui est une silice hydratée superfine micronisée. Cette silice est constituée d'agglomérats issus de l'association d'agrégats eux-même constitués par des enchannements de particules unitaires. te diamètre moyen de ces agglomérats est de l'ordre d'environ 3 microns, le diamètre des particules élémentaires étant de l'ordre de 20 millimicrons, la silice utilisée fait partie de la gamme de pigments dits "de silicates". Cet activateur de coagulation utilisé conformément à l'invention présente une morphologie ultrafine très légère et très absorbante. Un produit particulièrement approprié est celui vendu sous la dénomination TIXOSIL par la Société Rhne Poulenc. Le demandeur a constaté que l'utilisation de ce produit permettait d'accélérer de façon importante la prise en masse du caillot et de minimiser la formation de fibrine restée en suspension dans la fraction sérum apres centrifugation. L'utilisation de cet activateur permet d'éliminer toute contamination par la fibrine due à la transformation latente du fibrinogène en fibrine. Cet activateur joue également un rôle de dispersant à l'égard de tous les solides utilisés en suspension dans le liquide. On utilise cet activateur de coagulation de préférence dans des proportions d'ennviron 0,6 à 1 mg par tube d'une contenance de 5 à 10 ml. Il va de soi que cet activateur de coagulation peut remplacer les activa teurs de coagulation utilisés dans les tubes classiques dans la mesure il aura une action d'accélération de la coagulation du sang particulièrement remarquable par rapport aux produits préconisés jusqu a ce jour tels que les substances du type verre, kaolin, bentonite, terre de diatomée ou kieselguhr. Cet activateur peut également être utilisé avec les moyens de séparation classiques ou avec les billes de séparation définies ci-après qui constituent une autre variante de l'invention Selon une autre variante de l'invention, le dispositif de séparation du sang est constitué par un récipient en matière plastique ou en verre de préférence sous forme de tube caractérisé par le fait qu'il contient au moins des microbilles constitués par un polymère styrénique contenant ou non un agent porogène. Ces microbilles peuvent se présenter sous forme de perles ou de bâtonnets incolores ou colorés. Les diamètres ou les sections utilisables peuvent varier entre 0,2 et 0,8 mm. Les perles d'une diamètre d'environ 0,6 mm sont particulierement préférées en raison de la sécurité qu'elles présentent notamment par rapport aux risques d'aspiration des billes dans les conduites des dispositif d'automates ou des micropipettes manuelles. Les polymères styréniques utilisés conformément à l'invention présentent des propriétés physicochimiques intéressantes dans la mesure où ces polymères sont inertes et ont une stabilité remarquable vis-à-vis du sang et ces composants. De par leur choix, les microbilles styréniques conformes à l'invention, jouent également un rôle de barrière étanche constituant une séparation entre les composants du sang et en particulier entre la phase lourde et la phase légère constituée par le sérum. En effet, le demandeur a constaté qu'après centrifugation, les microbilles se stabilisent et constituent une barrière étanche par gonflement entre le sérum et le coagulat. Ceci présente l'avantage d'éliminer toute contamination possible entre le sérum et le coagulat. Un produit particulièrement approprié est constitué par des microbilles de STYROSEL ou STYROPORE vendu par la Société BASF. Une variante particulièrement préférée de l'invention consiste à utiliser des microbilles tels que définies ci-dessus revêtues par l'activateur de coagulation constitué par la silice hydratée superfine micronisée. Le revêtement des microbilles styréniques avec la silice précitée s'effectue suivant des procédés de revêtement classiques d'enrobage. Un mode de réalisation particulièrement préféré est constitue par un dispositif de séparation du sang humain ou animal se présentant sous forme de récipient en matière plastique ou en verre plus particulièrement sous forme de tube fermé par un bouchon en matière plastique ou en caoutchouc sous vide qui est caractérisé par le fait que les parois sont revêtues par une couche fine d'un copolymère de vinylpyrrolidone/acetate de vinyle et qui contient des microbilles sous forme de perles d'un polymère styrénique ayant un diamètre compris entre 0,2 et 0,6 mm revêtues de silice hydratée superfine. L'utilisation d'un dispositif comportant ces trois éléments en association permetde résoudre de façon optimale les problèmes posés par les analyses de sang et notamment la séparation du sérum. L'exemple suivant est destinée à illustrer l'invention sans pour autant présenter un caractère limitatif. On prépare dans un premier temps une solution de traitement d'un tube destiné à l'analyse du sang par dissolution d'un copolymère de polyvinylpyrrolidone/acétate de vinyle. Cette solution est appliquée par mouillage, par remplissage ou vaporisation sur au moins les parois intérieures du tube. La couche filmogène ainsi obtenue est séchée à l'air libre. Dans un deuxième temps, on prépare des microbilles en enrobant l'activateur de coagulation. On procède à sec en utilisant 2,5 g de silice hydratée superfine micronisée vendue sous la dénomination TIXOSIL 375 J par la Société Rhône Poulenc se présentant sous forme d'agglomérat ayant un diamètre moyen d'environ 3 microns par kg de microbilles calibrés de polymère styrénique (vendu sous la dénominatibn STYROSEL par la Société BASF) ces microbilles ayant un diamètre d'environ 0,6 mm. Par mélange les particules de silice micronisées se fixent sur les microbilles. On introduit 0,25 g de microbilles enrobés par la silice micronisée conme décrit ci-dessus dans un tube d'une contenance d'environ 10 ml. On applique sur ce tube après avoir effectué le vide un bouchon en caoutchouc. On prélève le sang et on constate au moment de l'introduction du sang dans le tube que les microbilles se répartissent dans tout le volume favorisant ainsi un contact étroit entre l'activateur et les constituants du sang. La coagulation est terminée au bout de 2-3 minutes. On procède ensuite à la centrifugation suivant les procédés classiques. On constate ainsi dans le tube, trois phases bien séparées, comprenant une première phase constituée par du sérum clair, une seconde phase constituée par des microbilles très serrés faisant barrière et une troisième phase constituée par le caillot de sang. REVENDICATIONS 1. Dispositif de séparation du sang humain ou animal se présentant sous forme d'un récipient en matière plastique ou en verre, caractérisé par le fait que les parois intérieures de ce récipient sont revêtues par une pellicule filmogène constituée par un copolymère de vinylpyTrolidoneJacétate de vinyle. 2. Dispositif de séparation du sang selon la revendication l, carac térisé par le fait qu'il contient en plus comme activateur de coagulation du sang au moins de la silice hydratée superfine micronîsée. 3. Dispositif selon la revendication 2, caractérisé par le fait que la silice hydratée est constituée par des agglomérats ayant un diamètre moyen d'environ 3 microns. 4. Dispositif selon la revendication 2 ou3, caractérisé par le fait que l'on utilise environ 0,65 mg de silice hydratée pour un tube ayant une contenance de 5 à 10 ml. 5. Dispositif selon l'une quelconque des revendications l à 4, caracté- risé par le fait qu'il contient dans sa partie inférieure des microbilles calibrés d'un polymère ou drun copolymère de styrène contenant éventuellement un agent porogène. 6. Dispositif selon la revendication 5, caractérisé par le fait que les microbilles se présentent sous forme de perlas ayant un diamètre compris entre 0,2 et 0,8 mm. 7. Dispositif de séparation du sang constitué par un récipient en ma tière plastique ou en verre caractérisé par le fait qu'il contient au moins un activateur de coagulation constitué par une silice hydratée superfine micronisée. 8. Dispositif selon la revendication 7, caractérisé par le fait que ce dispositif contient également des microbilles d'un polymère ou copolymère de styrène ayant un diamètre variant entre 0,2 et 0,8 mm. 9. Dispositif selon la revendcication 8, caractérisé par le fait que les microbilles sont revêtus de silice hydratée micronisée. ]0. Procédé de séparation du sang, caractérisé par le fait que 1 'on introduit du sang humain ou animal dans un dispositif tel que défini dans l'une quelconque des revendications 1 à 9, et qu'après coagulation on procède à la centrifugation.