Brevet FR2550707A1 — publié le 19850222

La présente invention concerne des médicaments immunomodulateurs. De nombreuses préparations modulant la réponse immune par des fractions ou des extraits de corps microbiens lysés sont connus. 5 On peut citer notamment les produits décrits dans les brevets français n 2 374 042, 2 396 018 et 2 426 470. Ces lysats ou extraits sont généralement obtenus par des procédés physiques, chimiques et plus rarement enzymatiques Si la plupart de ces préparations possède une certaine activité immuno10 modulatrice mise en évidence chez l'animal, les activités thérapeutiques chez l'homme font encore l'objet de nombreux travaux (Immunopharmacologie clinique Réalités et Perspectives G RENOUX Pharmacologie et thérapeutique R P 1982, 32, 41-42. Il était donc important de rechercher des médicaments 15 offrant aussi bien à la médecine humaine que vétérinaire une arme susceptible d'être utilisée chaque fois qu'il s'agit de rétablir ou de renforcer les défenses immunitaires. Il a été trouvé un nouveau procédé de préparation utilisant le bactériophage Le bactériophage représentant in vitro un excellent 20 outil de lyse bactérienne, son utilisation pour la fabrication de preparations immunomodulatrices a été effective avec différents genres et espèces bactériens Cette technique de lyse bactérienne par voie bactériophagique est sans limitation concernant le genre ou l'espèce des bactéries Ce procédé a permis d'obtenir des médicaments remar25 quables par leurs propriétés de modulation du système immunitaire, préparés à partir d'un ou plusieurs germes bactériens ou d'un mélange de ces germes bactériens Ces médicaments possèdent notamment un pouvoir inducteur d'interférons. Ces médicaments modulant la réponse immune contiennent 30 comme principe actif les produits de lyse ou une fraction de ces produits d'au moins une bactérie lysée par voie bactériophagique. Ces médicaments immunomodulateurs peuvent contenir comme principe actif les produits de lyse d'au moins deux bactéries lysées par voie bactériophagique. Parmi les bactéries, on peut citer de manière nullement limitative Escherichia coli, Streptococcus faecalis, Klebsiella pneumoniae, Staphylococcus aureus. Le médicament, selon l'invention, peut être associé à une substance antibiotique, telles des tétracyclines, antivirale, tels des nucléosides synthétiques interférant avec la synthèse de l'acide nucléique viral, antifongique, tel le buclosamide, ou anti5 parasitaire, telle la chloroquine. Dans une autre forme de réalisation, le médicament,selon l'invention, peut être associé à d'autres produits et compositions pharmaceutiques, tel un agent anti-tumoral (cytostatiques), un agent immuno-suppressif, (immunoglobulines antilymphocytaires) un agent antimitotique, tels les dérivés de l'acide folique ou anti-inflammatoire, telle l'indométhacine. Le médicament-de l'invention peut se présenter sous diverses formes en vue de l'administration percutanée, transcutanée, perlinguale, topique, entérale, parentérale ou aérienne Suivant les 15 cas, le médicament est conditionné avec un excipient approprié, tel sous forme d'une solution aqueuse ou alcoolique ou en suspension dans un excipient huileux, soit sous forme lyophilisée ou d'aérosols, ou de pommades. La posologie utile est susceptible de larges variations en fonctiox de la composition du médicament, de l'indication prescrite, de la forme d'administration et de l'âge du sujet traité La détermination des doses utiles est laissée à l'appréciation du médecin ou du vétérinaire, comme il est de pratique habituelle, dans les traitements de modulations de la réponse immune. A titre d'exemple, la posologie quotidienne peut comporter dans letraitement des infections chroniques ou récidivantes des voies respiratoires, dans la prévention des complications infectieuses postopératoires, ou dans la prophylaxie des infections urinaires, des doses de 1 à 50 ml, suivant la concentration de la préparation 30 immunomodulatrice. Le médicament selon l'invention est toléré de manière excellente, sa toxicité est faible ainsi que le montre le test de la DL 50 qui n'a pu être atteinte per os compte tenu de la capacité gastrique des animaux utilisés (souris, rats). Les médicaments de l'invention sont particulièrement indiqués dans le traitement des dysrégulations de la réponse immune, dans la prévention ou le traitement des agressions infectieuses bactériennes, virales, fongiques ou parasitaires, ainsi qu'en rhumato5 logie et dans la cicatrisation ou la protection des plaies. L'invention a également pour objet le procédé de préparation du médicament du type lyse bactérienne qui repose sur une séquence en au moins deux stades indispensables, à savoir une lyse bactériophagique, puis l'élimination des bactéries non lysées et des 10 débris bactériens par un procédé connu des spécialistes, tels filtration, centrifugation, etc Selon un mode de mise en oeuvre du procédé à partir d'une bactérie, on ensemence un milieu de culture adapté avec un inoculum de bactéries, puis au cours de la phase de croissance, on infecte les 15 bactéries par introduction de leurs phages homologues, on suit l'évolution de la lyse, à l'aide d'un compteur cellulaire, préalablement étalonné, jusqu'à un stade fixé correspondant à un nombre de bactéries par millilitre du milieu, ensuite on procède à l'élimination des bactéries non lysées et des débris bactériens, et l'on recueille le 20 filtrat de lyse qui constitue la préparation immunomodulatrice. Le procédé de l'invention peut être mis en oeuvre avec utilisation successive de bactéries de genres différents. Dans ce cas, on procède à un premier ensemencement d'un milieu de culture adapté avec un inoculum de bactéries d'un certain 25 genre, au cours de la phase de croissance, on infecte les bactéries par introduction de leurs phages homologues, on suit l'évolution de la lyse jusqu'à un stade fixé, de la même manière que précédemment, puis on procède alors à un second ensemencement du milieu de culture avec un inoculum de bactéries d'un autre genre, au cours de la phase 30 de croissance des bactéries du second genre, on infecte ces bactéries par introduction de leurs phages homologues, on suit l'évolution de la lyse des bactéries de ce second genre jusqu'à un stade fixé, enfin on élimine les bactéries non lysées et les débris bactériens par les méthodes connues pour ce type de séparation, et l'on recueille le filtrat de lyse obtenu à partir des deux bactéries Selon ce procédé, on peut préparer un médicament en utilisant successivement, par exemple, des bactéries des genres Klebsiella et Escherichia. Il est donné, ci-après, des exemples qui illustrent l'invention a titre non limitatif. EXEMPLE 1: préparation à partir d'une bactérie du genre Esche5 richia. La bactérie utilisée est du genre Escherichia, espèce coli, sérotype 0119: B 14, répertoriée par l'Institut Pasteur de Paris sous la référence 62 23. Le coliphage appartient au groupe morphologique C 1 (nomenclature du souscomité de Taxonomie des Bactériophages de l'International Committee for Taxonomy of Virus de l'I A M S),-il a une tête isométrique, une queue très courte, difficile à mettre en évidence, un manchon et une plaque terminale non détectables. Sur milieu gélosé, les plages de lyse ont un diamètre de 1 à 1,5 mm, 15 une forme ronde, des contours réguliers, un centre voilé et des clones r+ confluents. Le milieu de culture par litre est constitué de: extrait de boeuf 2,5 g, peptone 4,1 g, chlorure de sodium 7,0 g, eau bidistillée complément. Le milieu est ensemencé avec un inoculum de bactéries qui se trouvent en phase de croissance exponentielle et la densité initiale de la culture est de 1 106 bactéries par ml L'incubation se poursuit à 37 C sous agitation modérée. Au milieu de la phase de croissance exponentielle, soit 25 environ 60 minutes après l'ensemencement, les bactéries sont infectées par leurs phages homologues La multiplicité d'infection est de 0,02. L'évolution de la lyse est suivie à l'aide d'un compteur cellulaire, préalablement étalonné Lorsqu'il reste moins de 1000 bactéries par ml, une filtration stérilisante est réalisée par passage sur un filtre membrane de porosité voisine de 0,22,m Le filtrat de lyse constitue lui-même la préparation immunomodulatrice. EXEMPLE 2: préparation à partir d'une bactérie du genre Streptococcus. On utilise une bactérie du genre Streptococcus, espèce 35 fatcalis, variété zymogenes, répertoriée par l'Institut Pasteur de Paris sous la référence 53 152. Le phage appartient au groupe morphologique A 1 (nomenclature du souscomité de Taxonomie des Bactériophages de l'Internation& Committee for Taxonomy of Virus de l'I A M S), sa tête est isométrique, sa queue longue, le manchon est visible et la plaque termina5 le est complexe Sur milieu gélosé, les plages de lyse sont rondes, inférieures à 0,8 mm, leurs contours sont réguliers et leur centre clair Il n'ya pas de clone r ou il n'y en a qu'un seul. Par litre, le milieu de culture a pour constitution: extrait de boeuf 0,3 g, tryptase 1,0 g, dextrose 1,0 g, chlorure de 10 sodium 0,5 g, complément eau bidistillée. Le milieu est ensemencé avec un inoculum de bactéries qui se trouvent en phase stationnaire et la densité initiale est de 1.107 bactéries par ml Il est placé à l'obscurité et à 37 C, sous agitation modérée. Au début de la phase de croissance exponentielle, soit environ 40 minutes après l'ensemencement, les bactéries sont infectées par leurs phages homologues La multiplicité d'infection est de 0,1. L'évolution de la lyse est suivie à l'aide d'un compteur 20 cellulaire Lorsqu'il reste moins de 10 bactéries par ml, la culture est centrifugée stérilement à 5000 G pour éliminer les bactéries lysogènes et les corps bactériens non lysés Le surnageant constitue la préparation immunomodulatrice. EXEMPLE 3: préparation avec utilisation successive des bactéries 25 des genres Klebsiella et Escherichia. La bactérie du genre Klebsiella, espèce pneumoniae, est répertoriée par l'Institut Pasteur de Paris sous la référence 58 5. Les caractéristiques de la bactérie du genre Escherichia sont celles décrites dans l'exemple 1. Le phage, homologue de Klebsiella, appartient au groupe morphologique C 1 (nomenclature du Sous-Comité de Taxonomie des Bactériophages de l'International Committee for Taxonomy of Virus de l'I A M S), il a une tête icosaédrique, une queue courte,difficile à mettre en évidence, le manchon et la plaque terminale ne sont 35 pas détectables Sur milieu gélosé, les plages de lyse ont de 0,5 à 3 mm et sont de forme très irrégulière, avec des contours estompés et un centre clair Les clones r + sont rares. Les caractéristiques du coliphage sont décrites dans l'exemple 1. Par litre, le milieu de culture a pour constitution: extrait de boeuf 3 g, peptone 5 g, chlorure de sodium 7 g, complément en eau bidistillée. Le milieu est ensemencé avec un inoculum de Klebsiella pneumoniae qui se trouvent en phase de croissance stationnaire. La densité initiale est de 1 107 bactéries par ml La culture est placée à 37 C, sous agitation modérée. A la fin de la phase de latence, soit environ 60 minutes après l'ensemencement, les bactéries sont infectées par leurs phages homologues, la multiplicité d'infection est de 0,03. L'évolution de la lyse est suivie à l'aide d'un compteur cellulaire Lorsqu'il reste moins de 10 bactéries par ml, le milieu 15 est à nouveau ensemencé avec un inoculum d'Escherichia qui se trouve en phase de croissance stationnaire La densité initiale de cette nouvelle culture est de 5 107 Escherichia par ml. A la fin de la phase de latence soit, dans ces conditions expérimentales, 20 minutes après le deuxième ensemencement, les bacté20 ries sont infectées par les coliphages La multiplicité d'infection est de 0,1. L'évolution de la lyse est suivie à l'aide d'un compteur cellulaire Lorsqu'il reste moins de 103 Escherichia par ml, la culture est stoppée par passage à travers un filtre membrane stérili25 sant de 0,22 jum Le filtrat de lyse obtenu à partir des deux bactéries, Klebsiella pneumoniae et Escherichia coli, constitue la préparation immunomodulatrice. EXEMPLE 4: préparation en utilisant une bactérie du genre Staphylococcus. La bactérie du genre Staphylococcus, espèce aureus, sérétope 1, est répertoriée par l'Institut Pasteur de Paris sous la référence 65 6. Le phage homologue du Staphylocoque appartient au groupe morphologique A 1 (nomenclature du Sous-Comité de Taxonomie des Bac35 tériophages de l'International Committee for Taxonomy of Virus de l'I A M S); il a une tête octaédrique et une queue recouverte d'un manchon et d'une plaque terminale complexe Sur milieu gélosé, les les plages de lyse ont un diamètre de I à 2 mm, elles sont rondes et r + régulières, leur centre est clair, il n'y a pas de clone Les bactéries sont étalées sur un milieu solide contenant par litre: protéose peptone n 3 Difco 10,0 g, dextrose 1,2 g, amidon soluble 6,0 g, chlorure de sodium 3,0 g, diphosphate de sodium 2,0 g, bacto-gélatine 13,0 g, bacto-agar 6,0 g, eau purifiée Q S. Après 24 heures, les germes formant un épais tapis bactérien, sont récoltés stérilement, numérés et resuspendus dans un milieu contenant par litre: extrait de boeuf 2,5 g, peptone 4,1 g, chlorure de sodium 7,0 g, eau bidistillée Q S, pour avoir une densité de 5 10 bactéries par ml. Simultanément, les phages homologues sont introduits dans le milieu La multiplicité d'infection est de 0,01. L'évolution de la lyse est suivie à l'aide d'un compteur 15 cellulaire Lorsqu'il reste moins de 102 bactéries par ml, une filtration à travers une membrane de porosité voisine de 0,22 >um est réalisée Le filtrat de lyse lui-même constitue la préparation immunomodulatrice. ETUDE PHARMACOLOGIQUE: Les activités sur l'animal des préparations de l'invention sont illustrées avec une préparation correspondant au filtrat de lyse d'Escherichia coli obtenu selon la méthode décrite dans l'exemple 1. Le filtrat a été lyophilisé puis resolubilisé dans de l'eau distillée stérile Le facteur de concentration de cette nouvelle solution est 25 exprimé par rapport à la préparation avant lyophilisation. ACTIVITE PROTECTRICE CONTRE UNE INFECTION BACTERIENNE AIGUE. Ce test, mettant en évidence une stimulation globale du système immunitaire, a été réalisé avec des germes infectants différents de ceux entrant dans la préparation Ceci, afin de démontrer que 30 la préparation n'est pas active par un éventuel pouvoir vaccinant ou par un phénomène bactériophagique direct, mais bien par une stimulation des défenses immunitaires. Deux germes ont été testés, Klebsiella pneumoniae, une bactérie à développement intracellulaire et Staphylococcus aureus, 35 une bactérie à développement extracellulaire. Les bactéries infectantes ont été administrées à des lots de 10 souris Swiss femelles, d'un poids moyen de 18 g, au jour Jo par la voie intrapéritonéale sous un volume de 0,5 ml. La préparation immunomodulatrice a été injectée le jour précédent l'infection, à J t' il s'agit donc de la recherche d'une activité préventive La préparation a été administrée par la voie intrapéritonéale ou intraveineuse, afin d'écarter un éventuel résultat positif dû à une interférence directe de la préparation avec las germes infectants au point d'injection. Pour connaître la virulence de la souche infectante qui peut varier dans des limites considérables d'une expérience à l'autre, sa dose léthale 50 a été établie lors de chacun des tests. L'activité protectrice de la préparation contre une infection bactérienne aiguë est présentée dans le tableau I ci-dessous. 15 TABLEAU I :Bactéries Traitement: Survivants (%) q :infectants: close: traites:Temons: ::DL O :voie:volume:facteur de (n = 10) (n 10) 2:0: 5: ::concentra:: :tn :: : : :tion:: : :: :::: :: 4: -2:: : :Klebsiella:10:I P:1,0 ml: 1 x O 10 -3 I: 10:10-3:I P 1,0 ml: 1 x 70: 30 : 10:I P:1,0 ml: 1 x 100: 20 : :: :: :::: :,: :102:I V:0,5 ml: 1 x: 20: 10 : À: ::: :: : 103:I V:0,5 ml: 1 x: 80 20 * 10 4 I V '0,5 ml; 1 x * 100 20 Staphylo 104 I P 1,0 ml 1 x 10 10 ::.V:0,5 ml: Ilx:100 2 coccus -3: - 20 :uréus 10 3, P * 1,0 ml 1 x::10 :: :::: :: 3:10:I V 0,5 m: 1 x 10:20 c 3:1 o-3: :10 3 I V 0,5 ml x 100 30 P: NS: 0,050: 0,001: NS: 0,025: 0,001:NS: 0,001: NS: 0,001: STIMULATION DE L'ACTIVITE PHAGOCYTAIRE DES MACROPHAGES. Le test de Halpern (Stiffel C, 1958 J Phys 58, 911949) consiste à injecter à des souris, par la voie intraveineuse, des particules de carbone colloïdal qui seront phagocytées par les 5 cellules réticuloendothéliales du foie et de la rate essentiellement Leur vitesse d'épuration est représentative de l'activité phagocytaire Elle est mesurée en dosant, par photométrie en fonction du temps, les particules restées libres dans le sang Le LPS, une endotoxine lipopolysaccharidique extraite d'entérobactéries et puis10 sant activateur des macrophages, est utilisé comme substance de référence. Le test est réalisé de la manière suivante: 0,6 ml du filtrat d'Escherichia coli ou d'une solution de LPS (lipopolysaccharides) à 0,625 jug/ml sont injectés à des lots 15 de 5 souris Swiss femelles, d'un poids moyen de 24 g, par voie intrapéritonéales. 24 heures plus tard, 0,12 ml d'une suspension de carbone colloïdal dosé à 32 mg/ml de carbone dans de la gélatine à 4 % est injecté aux souris par voie intraveineuse. 20 pl de sang sont prélevés au sinus rétro-orbital toutes les deux minutes pendant 12 minutes Ce prélèvement de sang est immédiatement dilué dans 4 ml de Na 2 C O 03 à 1 % La solution est alors photométrée. la lecture de l'extinctiqn se fait à 620 nm. 25 la concentration en carbone colloïdal dans le sang au temps t de l'expérience est obtenue en se rapportant à une droite étalon établie préalablement L'index phagocytaire se calcule selon la formule suivante: I P = log C? log Ci T 2 -T 1 C 2 et C 1 représentent respectivement la concentration sanguine en carbone colloïdal lors du dernier et premier prélèvement de sang, T 2 et T 1 représentent le moment de ces prélèvements. Les résultats consignés dans le tableau II montrent que l'activité des macrophages péritonéaux de la souris est stimulée 35 après une administration intrapéritonéale de la préparation. 550 o 707 TABLEAU II Traitement Volume injecté I P. :Préparation (filtrat o 0,6 mli 0,028 0, 003 de lyse bactériopha gique d'E coli) Bouillon de culture o 0,6 mli 0, 012 0,001 non ensemencé (Témoin négatif) LPS (référence o 0,6 ml 0,025 0, 002 : positive) ACTIVITE INDUCTRICE D'INTERFERON SERIQUE (IFN SERIQUE). L'IFN est une glycoprotéine de poids moléculaire compris entre 10 '000 et 20 '000 daltons Il a de nombreuses activités immunomodulatrices, en particulier, il stimule l'activité des cellules NK (Natural Killer) Son mode d'action est encore en cours d'étude. Sa participation à la défense antivirale est bien établie. Deux heures après une administration de la préparation chez 6 souris Swiss femelles, de 25 g, 0,3 ml de sang sont recueillis chez chacune d'elles sur tube non hépariné L'IFN sérique est dosé classiquement en mesurant l'effet cytopathique du virus VSV (Vesicular Stomatitis Virus) infectant des cellules murines L cultivées pendant 25 24 heures en présence du sérum à tester (Havell E A et Vilcek J, Antimicrob Agents Chemotherapy 2, 476-484 1972) L'effet protecteur de l'IFN induit est comparé à celui d'IFN murin, référence internationale provenant du National Institute of Health, Bethesda, USA. La préparation induit de l'IFN sérique chez la souris, deux heures après son administration intrapéritonéale, intraveineuse ou orale, comme indiqué dans le tableau III. TABLEAU III Voie Produit Volume Facteur de U I IFN/ml concentration À:;, , ,, I.P préparation 1,5 ml 80 1058 :: placebo 1,5 ml: O O I.V prépara:: tion: 0,7 ml 80: 950: :: placebo:0,7 ml: 80: O: : P O: prépara::: : tion 1,0 ml 1000 1200 placebo 1,0 ml 1000 O À L'activité sur l'homme a été testée avec une préparation 15 selon l'exemple 3, administrée d'abord chez le volontaire,ensuite chez le malade. Une étude double-aveugle réalisée avec 15 patients volontaires a permis de mettre en évidence que l'administration orale de la préparation entraînait après 10 jours de traitement une aug20 mentation significative des réponses immunitaires à médiation cellulaire. Une deuxième étude réalisée sur 25 patients a démontré qu'une administration orale unique de différentes doses de la préparation permettait d'induire après 24 heures, une lymphokine sérique 25 de type MIF LIF Cette induction est dépendante de la dose. Plusieurs études ont permis de mettre en évidence la stimulation de la production d'IFN par des lymphocytes et monocytes humains obtenus par cytophérèse et cultivés en speener. L'IFN induit par la préparation a pu être caractérisé en 30 utilisant des antisera anti-IFN o 6, ' ouf Sa production est dépendante de la dose utilisée. A titre d'exemples, quelques travaux cliniques sont rapportés ci-après. PREVENTION ET TRAITEMENT DES INFECTIONS CHRONIQUES OU RECIDIVANTES DES VOIES RESPIRATOIRES. Deux groupes de 25 patients atteints d'infections bactériennes chroniques ou récidivantes au niveau broncho-pulmonaire ont été traités oralement respectivement, l'un par 15 ml de la préparation précitée, 20 jours par mois pendant trois mois, l'autre 10 par des traitements antibiotiques classiques La diminution du nombre d'épisode infectieux aigus pendant les six mois qu'a duré l'essai est significativement plus importante dans le groupe traité par la préparation que dans le groupe traité classiquement aux antibiotiques. PREVENTION DES INFECTIONS POST-OPERATOIRES: Une administration orale de 20 ml de la préparation a permis de diminuer de façon significative les complications infectieuses post-opératoires chez 106 patients comparativement à 72 autres malades traités classiquement. 20 PREVENTION ET TRAITEMENT DES INFECTIONS URINAIRES: Quatre auteurs ont étudié sur le plan clinique la préparation ci-dessus, chez une population de patientes atteintes d'infection urinaire chronique ou récidivante Une administration 25 orale de 15 ml par jour, 20 jours par mois pendant trois mois, a permis de réduire significativement la fréquence et la durée des épisodes infectieux ainsi que la consommation des anti-infectieux pendant les six mois d'observation comparativement aux six mois précédant le traitement. Dans tous les essais, la tolérance de la préparation a été jugée excellente par le médecin et le patient (volontaire ou malade). 13 2550707 REVENDICATIONS 1 Médicament modulant la réponse immunitaire,caractérisé en ce qu'il contient comme principe actif les produits de lyse ou une fraction de ces produits d'au moins une bactérie lysée par voie bactériophagique. 2 Médicament modulant la réponse immunitaire, selon la revendication 1, caractérisé en ce qu'il contient comme principe actif les produits de lyse d'au moins deux bactéries lysées par voie bactériophagique. 3 Médicament modulant la réponse immunitaire selon la 10 revendication 1, caractérisé en ce qu'il contient comme principe actif les produits de lyse par voie bactériophagique des bactéries Klebsiella pneumoniae et Escherichia coli. 4 Médicament selon une quelconque des revendications 1 à 3, caractérisé en ce qu'il comporte en outre une substance anti15 biotique, antivirale,-antifongique ou antiparasitaire. Médicament selon une quelconque des revendications I à 3, caractérisé en ce qu'il comporte ean outre un agent anti-tumoral ou immuno-suppressif6 Médicament selon une quelconque des revendications 1 à 3, caractérisé en ce qu'il comporte en outre un agent antimitotique ou anti-inflammatoire. 7 Médicament selon une quelconque des revendications 1 à 6, caractérisé en ce que le principe actif est associé à un excipient adapté en vue de l'administration percutanée, transcutanée, perlin25 guale, topique, entérale, parentérale ou aérienne. 8 Procédé de préparation du médicament selon la revendication 1, caractérisé en ce qu'on ensemence un milieu de culture adapté avec un inoculum de bactéries, puis au cours de la phase de croissance, on infecte les bactéries par introduction de leurs phages 30 homologues, on suit l'évolution de la lyse jusqu'à un stade fixé, ensuite on procède à l'élimination des bactéries non lysées et recueille le filtrat de lyse constituant la préparation. 9 Procédé de préparation du médicament selon la revendication 2 ou 3, caractérisé en ce qu'on procède à un premier ensemen35 cement d'un milieu de culture adapté avec un inoculum de bactéries 255070 7. d'un certain genre, au cours de la phase de croissance on infecte les bactéries par introduction de leurs phages homologues, on suit l'évolution de la lyse jusqu'à un stade fixé, puis on procède à un second ensemencement du milieu de culture avec un inoculum de bactéries d'un autre genre, au cours de la phase de croissance des bactéries du second genre, on infecte ces bactéries par introduction de leurs phages homologues, suit l'évolution de la lyse de ces bactéries du second genre jusqu'à un stade fixé, enfin on élimine les bactéries non lysées, et recueille le filtrat de lyse obtenu à partir des deux 10 bactéries. Application des médicaments dans la thérapeutique curative ou préventive des infections bactérienne, virale,fongique ou parasitaire; en thérapeutique antimitotique ou anti-inflammatoire; en tant qu'adjuvant de thérapeutique immuno-suppressives ou anti15 cancéreuses. f.