Brevet FR2554450A1 — publié le 19850510

255445O L'invention se rapporte à des glycosides de 4'-halo-anthracycline, à un procédé pour leur préparation et à des compositions pharmaceutiques les contenant. L'invention permet d'obtenir des glycosides d'anthracycline ayant la formule générale A O OH COCH 2X Rl OH I ! O A H,C R I 2 2 dans laquelle X représente un atome d'hydrogène ou un groupe hydroxy, R1 représente un atome d'hydrogène ou un groupe hydroxy ou un groupe méthoxy, R2 représente un atome de bro- me, de chlore ou de fluor. Les sels d'addition acide-pharma- ceutiquement acceptables de ces glycosides d'anthracycline sont inclus aussi dans le cadre de l'invention. Les composés de l'invention dans lesquels X représente un atome d'hydrogène peuvent être préparés par une réaction d'échange entre un composé de formule générale 2 dans laquelle R1 et tel que défini ci-dessus et R3 repré-. sente un groupe protégeant un amino, et un' fluorure, un chlorure ou un bromure, suivie de la suppression de la pro- tection dans le composé résultant de formule générale 3. Ce procédé est illustré par le schéma réactionnel qui suit. Les composés de l'invention dans lesquels X représente un groupe hydroxy peuvent être préparés à partir des composés correspondants conformes à l'invention dans -lesquels X re- présente un atome d'hydrogène par une opération de bromation- suivie par le traitement du dérivé 14-bromo résultant à l'aide de formiate de sodium aqueux selon le procédé décrit dans le brevet américain N 3803124. Ces procédés entrent aussi dans le cadre de l'invention. \ \ O OH COCH3 OH Ri OH |I R O 2OH i C 3 7 "- on' CF 3 SO2O_ 1 5 hHR3 O | OH X C O C HOC3 " OO A(XH)C 3 0 NHR A(X=H) Quand R2 représente un atome de brome ou de chlore, la réaction d'échange est exécutée de préférence entre le composé 2 et le chlorure ou le bromure de tétra (n--butvl)ammonium respectivement, et le groupe R3 protégeant amine esb de préférence un groupe trifluoroacétyle. La réac- - _or de suppression de la protection peut être une hydrolyse alcaline douce, par exemple avec une solution aqueuse 0,1 N d'hydroxide de sodium. Quand R2 représente un atome de fluor, la réaction d'échange est exécutée de préférence entre le composé 2 et le fluorure de caesium, et le groupe R3 proté- geant amine est de préférence un groupe trichloroéthoxycar- bonyle. La réaction de suppression de la protection peut alors être une hydrogénation, par exemple avec de la poudre de zinc et de l'acide acétique. La réaction d'échange peut être accomplie dans un solvant organique comme le dichlo- r-re de méthylène ou l'acétonitrile. Les matières de départ 2 sont soit des com- posés connus, par exemple la 4'-épi-4'-O-trifluorométhanesul- fonyl-N-trifluoroacétyl-daunorubicine (2: R1=OCH3, R3=COCF3: 2C voir la demande de brevet européen N 8117618.1), soit des composés facilement préparés à partir des dérivés connus 4'-épi-daunorubicine par réaction avec de l'anhydride tri- fluorométhanesulfonique. Les composés de l'invention et leurs sels 2 f'additicn acide pharmaceutiquement acceptables sont utiles cossue agents anti-tumoraux. Ces nouveaux composés de formule cnt été utilisés de la même façon que les composés appa- rentés (c'est-à-dire la daunorubicine et la doxorubicine) dans le traitement-de diverses tumeurs expérimentales muri- nes, par exemple L1210, P388, P388/04 et analogues. Il a été ronstate au cours d'essais préliminaires sélectifs que ces nouveaux composés sont dans certaines circonstances plus actifs que les composès apparentés. En conséquence, l'in- n concerne aussi une coLmposition pharmaceutique com-..DTD: 3 Atenant un qcycosice d'anthracycline conforme à l'invention ou un sel d'addition acide pharmaceutiquement acceptable de ce composé en mélange avec un véhicule ou un diluant pharma- ceutiquement acceptable. ESSAIS D'ACTIVITE BIOLOGIQUE Les composés des exemples 1, 2 et 3 ont été essayés in vitro en comparaison avec la daunorubicine (DNR) et la doxorubicine (DX) contre les cellules Hela, les cel- lules P388 sensibles et résistantes à DX (P388/DX). Les ré- sultats sont reportés sur le tableau 1 qui suit. Tous les nouveaux dérivés apparaissent être plus cytotoxiquesque les composés apparentés contre les cellules Hela et P388 sensi- bles à DX. Toutefois cette cytotoxicité accrue est beaucoup plus prononcée si on considère l'activité de ces composés contre P388/DX. Ici, on peut noter avec ces dérivés un ac- croissement de 100 à 250 fois de la cytotoxicité par rapport au médicament apparenté. In vivo les composés ont été es- sayés contre trois différentes leucémies expérimentales. L'activité anti-tumorale obtenue contre la leucémie asciti- que P388 est reportée sur le tableau 2 qui suit. L'activité présentée par les composés de l'exemple 3 est égale à celle de DNR, tandis que l'autre dérivé de DNR, le composé de l'exemple 1, a une activité anti-tumorale nettement supé- rieure à celle de DNR. Le composé de l'exemple 2 a la dose maximale tolérée (4,15 mg/kg) a environ la même activité que DX. Tous les nouveaux composés présentent une activité contre la leucémie P388/DX, comme mentionné sur le tableau 3, cependant que DNR et DX n'ont aucune efficacité. Les trois nouveaux composés ont été essayés aussi après ad- ministration intra-veineuse contre la leucémie disséminée de Gross, les résultats sont reportés sur le tableau 4 qui suit. Dans ce cas le composé de l'exemple 3 est aussi actif que DNR, cependant que le composé de l'exemple 1 apparaît plus actif que le composé apparenté. Le composé de I'exemple 2 montre environ la même efficacité que DX. Deux de ces com- posés ont été essayés aussi après administration orale et ont montré une activité intéressante cependant que DNR et DX ne sont pas actifs quand ils sont administrés oralement. Tableau 1 Activité cytotoxique des composés des exemples 1, 3 et 2 ID50(ng/ml) Composé Hela+ P388++ P388 / DX++ DNR 12,3 2,8 980 Exemple 1 6,8 0,5 4 Exemple 3 5,8 2,4 8,8 DX 12,5 4,25 1250 Exemple 2 3 0,2 7 + Essai d'inhibition de la colonie après 24 heures d'exposi- tion aux médicaments ++ Cytotoxicité évaluée après exposition pendant 48 heures aux médicaments Chiffres tirés de plusieurs essais. Tableau 2 Effet contre la leucémie ascitique P388a Composé doseb T/Cc LTSd Morts par (mg/kg) % toxicitée DNR 2,9 165.155 0/20 0/20 4,4 170.135 0/18 0/18 6,6 130.115 0/20 12/20 Exemple 1 2,9 145 0/10 0/10 4,4 160 0/10 0/10 6,6 195 0/10 0/10 280 3/10 0/10 Exemple 3 2,9 130 0/10 0/10 4,4 155 0/10 0/10 6,6 145 0/10 0/10 85 0/8 6/8 DX 4,4 215 0/10 0/10 6,6 235 0/10 0/10 10 335 4/10 0/10 Exemple 2 2,4 200 0/10 0/10 2,88 230 0/10 0/10 3,46 210 0/10 0/10 4,15 325 4/10 1/10 a Les essais ont été exécutés sur des souris CDF1, inoculées par voie ip de 106 cellules leucémiques. b Traitementip le jour1 après l'inoculation de la tumeur. c Temps médian de survie des souris traitées/temps médian de survie des témoinsx 100. d Survivants à long terme (> 60 jours). e Evaluation basée sur les constatations d'autopsie. Tableau 3 Effet contre la leucémie ascitique P388/DX Composé doseb T/Cc Morts pa (mg/kg) % toxicité DNR 4,4 91 0/10 6,6 87 0/10 Exemple 1 4,4 143 0/10 143 0/10 Exemple 3 6,6 148 0/10 122 3/10 DlX 6,6 108 1/20 117 1/20 Exemple 2 2,88 122 0/20 3,48 125 0/20 4,15 137 1/20 a Les essais ont été exécutés sur des souris BDF1 inoculées par voie ip de 106 cellules. b Traitement par voie ip le jour 1 après inoculation de la tumeur. c Temps médian de survie des souris traitées/temps médian de survie des témoins,x 100. d Evaluation basée sur les constatations d'autopsie. Tableau 4 Effet contre la leucémie de Gross Composé Voie d'admi- doseb T/Cc Morts par nistration (mg/kg) % toxicitéd DNR iv 10 142.138 2/18 183.185 1/18 22,5 217.92 9/18 Exemple 1 iv 10 217 0/10 150 6/9 22,5 100 9/9 Exemple 3 iv 6,6 185 0/10 10 115 7/10 77 10/10 orale 6,6 154 0/10 169 0/10 92 7/8 DX iv 10 183 0/10 13 225 0/10 16,9 242 0/10 Exemple 2 iv 4,05 233 0/10 ,27 258 0/10 6,85 242 3/10 orale 4,05 114 0/10 ,27 157 0/10 a Les essais ont été exécutés sur des souris C3H, inoculées par voie ip avec 2x106 cellules leucémiques. b Traitement par voie ip ou orale le jour 1 après inocula- tion de la tumeur. c Temps médian de survie des souris traitées/temps médian de survie des témoins x 100. d Evaluation basée sur les constatations d'autopsie. On donnera maintenant plusieurs exemples à titre d'illustration de l'invention. Exemple 1 4'-désoxy-4'-bromodaunorubicine (A: X=H, R1=OCH3, R2=Br) On a ajouté 2 g de bromure de tétra(n-butyl) ammonium à une solution de 4 g de 4'-épi-4'-O-trifluorométha- nesulfonyl-N-trifluoroacétyldaunorubicine (2: R1=OCH3, R3= COCF3) dans 80 ml de dichlorure de méthylène anhydre. Après 1 heure à la température de la pièce, le mélange en réac- tion a été lavé avec de l'eau et la phase organique a été soumise à évaporation sous vide. Le résidu a été purifié sur gel de silice, à l'aide du mélange dichlorure de méthy- lène:acétone comme éluant et a donné 3,5 g de 4'-désoxy-4'- bromo-N-trifluoroacétyldaunorubicine, p.f. 130 C; FD,MS 685 (M+), CCM sur plaques de Kielselgel (Merck F 254) à l'aide du mélange solvant dichlorure de méthylène:acétone (10:1 en volume) Rf 0,5. A une solution de 3 g de 4'-désoxy- 4'-bromo-N-trifluoroacétyldaunorubicine dans 20 ml d'acé- tone, on a ajouté 160 ml d'une solution aqueuse 0,1 N d'hy- droxide de sodium. Après 4 heures à 0 C, on a ajusté le pH de la solution à la valeur 8,6 à l'aide d'acide chlorhy- drique 0,1 N et on l'a soumise à extraction à l'aide dichlo- rure de méthylène. Le solvant a été éliminé par évaporation ce qui a procuré un résidu qui a été converti par traite- ment avec de l'acide chlorhydrique méthanolique en chlorhy- drate (2,2 g, p.f. 180 C avec décomposition, CCM sur pla- ques de Kieselgel (Merck F 254) à l'aide du mélange solvant dichlorure de méthylène:méthanol:eau:acide acétique (80:20: 7:3 en volume) Rf 0,32. Exemple 2 4'-désoxy-4'-bromodoxorubicine (A: X=OH, R1=OCH3, R2=Br) 2g de 4'-désoxy-4'-bromodaunorubicine, pré- parés comme décrit à l'exemple 1, ont été mis en solution dans un mélange de méthanol et de dioxane. La solution a été traitée, comme décrit dans le brevet américain N 3803124, 1 1 d'abord avec du brome pour donner le dérivé 14-bromo et en- suite avec du formiate de sodium aqueux pour donner la 4'- -désoxy-4'-bromo-doxorubicine. Celle-ci a été convertie en son chlorhydrate par traitement avec de l'acide chlorhydri- que méthanolique. p.f. 170 C (avec décomposition), FD-MS 605 (M), CCM sur plaques de Kieselgel (Merck F 254) à l'ai- de du mélange solvant dichlorure de méthylène:méthanol:eau: acide acétique (80:20:7:3 en volume) RF 0,20. Exemple 3 4'-désoxy-4'-chlorodaunorubicine (A: X=H, R1=OCH3, R2=Cl) Le traitement de la 4'-épi-4'-O-trifluoro- méthanesulfonyl-N-trifluoroacétyldaunorubicine (2, R1=OCH3, R3=COCF3) avec du chlorure de tétra (n-butyl) ammonium, sui- vi du procédé décrit à l'exemple 1, a procuré la 4'-désoxy- -4'-chlorodaunorubicine, p.f. 175 C avec décomposition, FD-MS 545 (M), CCM sur plaques de Kielselgel (Merck F 254) à l'aide du mélange solvant dichlorure de méthylène:métha- nol:eau:acide acétique (80:20:7:3 en volume) RF 0,32. Exemple 4 4'-désoxy-4'-chlorodoxorubicine (A: X=OH, R1=OCH3, R2=C1) Conformément au procédé décrit à l'exemple 2, de la 4'-désoxy-4'-chlorodaunorubicine a été convertie en 4'-désoxy-4'-chlorodoxorubicine, isolée sous forme de son chlorhydrate; p.f. 180 C (dec.); spectre de masse FC 561 [M+] CCM sur plaques de Kielselgel (Merck F 254) à l'ai- de du mélange solvant chlorure de méthylène/méthanol/eau/ acide acétique (80:20:7:3 en volume). RF 0,2. Exemple 5 4'-désoxy-4'-fluorodaunorubicine (A: X=H, R1=OCH3, R2=F) A une solution en agitation de 26 g de 4'- -épi-N-trichloroéthoxycarbonyldaunorubicine, décrite dans le brevet américain N 4345068, dans 650 ml de dichlorure de méthylène anhydre et 32 ml de pyridine anhydre, refroidie à 0 C, on a ajouté une solution de 11 ml d'anhydride de trifluorométhanesulfonique dans 140 ml de dichlorure de mé- thylène anhydre. Le mélange en réaction a été lavé avec une solution aqueuse à 5 % de bicarbonate de sodium refroidi, avec de l'eau, avec de l'acide chlorhydrique 0,1 N et avec de l'eau, dans cet ordre. La solution organique, séchée sur du sulfate de sodium anhydre, a été utilisée de la manière qui suit, sans purification supplémentaire. Une solution de 2 g de 4'-épi-4'-O-trifluo- rométhanesulfonyl-N-trichloroéthoxycarbonyldaunorubicine dans ml d'acétonitrile a été traitée à l'aide de 0,5 g de fluo- rure de caesium. Après 10 mn à la température de la pièce, le mélange a été versé dans de l'eau et soumis à extraction à l'aide de dichlorure de méthylène. La phase organique, séchée sur du sulfate de sodium anhydre, a été soumise à évaporation sous vide jusqu'à siccité. Le résidu, mis en solution dans 30 ml d'éthanol, a été traité à l'aide de 4 ml d'acide acétique et de 0,2 g de poudre de zinc à 0 C. Après 1 heure, le mélange, filtré sur de la célite, a été dilué dans de l'eau et soumis à extraction à l'aide de dichlorure de méthylène. Le produit brut, obtenu par évaporation sous vide du solvant, a été purifié par chromatographie sur une colonne de gel de silice, à l'aide de dichlorure de méthylè- ne comme éluant, et a donné la 4'-désoxy-4'-fluorodaunoru- bicine pure, isolée sous forme de son chlorhydrate: FD-MS 529 (M+), CCM sur plaques de Kieselgel (Merck F 2.54) à l'ai- de du mélange solvant dichlorure de méthylène:méthanol:eau: acide acétique (80:20:7:3 en volume). RF 0,32. Exemple 6 4'-désoxy-4'-fluorodoxorubicine (A: X=OH, R1=OCH3, R2=F) En suivant le procédé décrit à l'exemple 2, on a converti de la 4'-désoxy-4'-fluorodaunorubicine en 4'- -désoxy-4'-fluorodoxorubicine isolée sous forme de son chlo- rhydrate. REVENDICATIONS 1. Glycoside d'anthracycline ayant la formule générale A suivante: O OH COCH2X -H 0 O o H3 o A 2 H2 dans laquelle X représente un atome d'hydrogène ou un groupe hydroxy, R1 représente un atome d'hydrogène ou un groupe hydroxy ou un groupe méthoxy, R2 représente un atome de brome, de chlore ou de fluor, et sel d'addition acide pharma- ceutiquement acceptable de ce composé. 2. 4 '-désoxy-4'-bromodaunorubicine. 3. 4' -dêsoxy-4'-chlorodaunorubicine. 4. 4'-désoxy-4'-fluorodaunorubicine. 5. 4' -désoxy-4'-bromodoxorubicine. 6. 4'-désoxy-4'-chlorodoxorubicine. 7. 4 '-désoxy-4'-fluorodoxorubicine. 8. Procédé pour la préparation d'un glycoside d'anthracycline ayant la formule générale A suivante: COCH X o OH { i{I R1 O OH I I o A H3 O R2 H2 dans laquelle X représente un atome d'hydrogène, R1 repré- sente un atome d'hydrogène ou un groupe hydroxy ou un groupe méthoxy, R2 représente un atome de brome, de chlore ou de fluor, caractérisé en ce qu'on exécute une réaction d'échange entre un composé ayant la formule générale 2 suivante: O OH COCH3 i I R1 0 OH I 0 2 CF3 SO 2 3 2 dans laquelle R est tel que défini ci-dessus et R3 représente un groupe protégeant amino, et un fluorure, un bromure ou un iodure, et on supprime la protection dans le composé résul- tant ayant la formule générale 3 suivante: 0 OH COCH3 R1 H 1 o H3C O NHR3 dans laquelle R1, R2 et R3 sont tels que ci-dessus. 9. Procédé selon la revendication 8 caractérisé en ce que le fluorure est le fluorure de caesium. 10. Procédé selon la revendication 8 caractérisé en ce que le bromure est le bromure de tétra(n-butyl)ammonium. CI11. Procédé selon la revendication 8 caractérisé en ce que le chlorure est le chlorure de tétra(n-butyl)- ammonium. 12. Procédé selon l'une quelconque des revendica- tions 8 à 11 caractérisé en ce que le groupe protégeant l'amine est le groupe trichloroéthoxycarbonyle. 13. Procédé selon la revendication 12 caractérisé en ce que la réaction de suppression de la protection est une réaction d'hydrogénation. 14. Procédé selon l'une quelconque des revendica- tions 12, 13 caractérisé en ce que la suppression de la protection est effectuée à l'aide de poudre de zinc et d'acide acétique. 15. Procédé selon l'une quelconque des revendica- tions 8 à 11 caractérisé en ce que le groupe protégeant l'amine est un groupe trifluoroacétyle. 16. Procédé selon la revendication 15 caractérisé en ce que la réaction de suppression de la protection est une hydrolyse alcaline douce. 17. Procédé selon l'une quelconque des revendica- tions 15, 16 caractérisé en ce que la suppression de la protection est effectuée à l'aide d'une solution aqueuse 0,1 N d'hydroxyde de sodium. 18. Procédé selon l'une quelconque des revendica- tions 1 à 17 caractérisé en ce que la réaction d'échange est exécutée dans du dichlorure de méthylène ou de l'acétonitrile. 19. Procédé pour la préparation d'un glycoside d'anthracycline ayant la formule générale A suivante: COCH2 X OH il I R1 OH i 03 0) o A H3 R2 H2 dans laquelle X représente un groupe hydroxy, R1 représente un atome d'hydrogène ou un groupe hydroxy ou un groupe méthoxy, R2 représente un atome de brome, de chlore ou de fluor, caractérisé en ce qu'il consiste à faire réagir avec du brome un glycoside d'anthracycline ayant la formule géné- rale A de la revendication 1 dans laquelle R1 et R2 sont tels que définis à cette revendication 1 et X représente un atome d'hydrogène et en ce qu'on traite le dérivé 14-bromo résultant à l'aide d'une solution aqueuse de formiate de sodium. 20. Composition pharmaceutique caractérisée en ce qu'elle comprend un glycoside d'anthracycline selon l'une quelconque des revendications 1 à 7 ou un sel d'addition pharmaceutiquement acceptable de ce composé en mélange avec un véhicule ou un diluant pharmaceutiquement acceptable.