Brevet FR2558847A1 — publié le 19850802

La présente invention concerne un dispositif et un procédé de contrôle microbiologique des liquides qui permettent d'identifier et de dénombrer les micro-organismes vivants contenus dans un échantillon du liquide analysé. Dans de nombreuses industries, notamment les industries alimentaires, pharmaceutiques, et électroniques ainsi que dans les hôpitaux, il est essentiel de pouvoir évaluer le degré de contamination d'un certain nombre de liquides par des micro-organismes tels que les bactéries, les levures ou les moisissures. Pour effectuer cette évaluation, on utilise actuellement, de préférence à la technique d'ensemencement d'un milieu de culture en boite de Pétri, qui ne permet d'analyser que des échantillons de petit volume, la méthode de filtration sur membrane. Cette méthode consiste à filtrer l'échantillon sur une membrane stérile, préalablement déposée sur un support poreux et sur lequel on a fixé de manière étanche un entonnoir pour la réception de cet échantillon, support et entonnoir ayant été tous deux décontaminés. Après la filtration qui s'effectue générale- ment par l'intermédiaire d'une fiole à vide, et un rinçage pour éliminer les agents bactériostatiques éventuellement présents, on prélève la membrane avec une pince stérile et on la dépose sur un milieu de culture gélosé contenu dans une boîte de Pétri. La boîte de Pétri est alors mise à incuber à la température adéquate et pendant le temps nécessaire pour que les micro-organismes puissent se développer et se multiplier suffisamment sous forme de colonies visibles à l'oeil nu pour qu'on puisse les identifier et les compter. Cette méthode connue de filtration sur membrane permet d'évaluer la contamination d'échantillons même faiblement contaminés car les micro-organismes se concen- trent sur la membrane et il suffit de filtrer un volume suffisamment important d'échantillon pour recueillir un nombre suffisant de micro-organismes. Une telle méthode présente toutefois des in- convénients. Tout d'abord, elle nécessite un appareillage de laboratoire important comportant de nombreux ustensiles à stériliser et qui ne peut être confié qu'à un personnel spécialisé, étant donné les manipulations délicates qu'il implique. D'autre part, le rinçage de la membrane par un liquide de rinçage stérile n'atteint pas les zones périphériques o la membrane est pincée entre son support et le fond de l'en- tonnoir et les agents bactériostatiques éventuellement pré- sents retenus dans ces zones peuvent migrer lors de l'incu- bation et nuire à la multiplication des micro-organismes que l'on veut dénombrer. Ensuite, lors du dépôt de la membrane filtrante sur le milieu de culture de la boite de Pétri, il convient d'opérer très soigneusement en commençant par déposer la membrane sur un bord et en la déroulant pour éviter d'em- prisonner entre le milieu de culture et la membrane une bulle d'air qui, empêchant tout contact entre le milieu de culture et une partie de la surface de la membrane, nuirait à la diffusion du milieu de culture et ne permet- trait pas aux micro-organismes de se développer. Enfin, la filtration sous vide ne permet pas de vérifier que la membrane filtrante dont le diamètre des pores est calculé pour retenir un certain type de micro-organismes, par exemple 0,45 micromètre pour des bactéries, est restée intacte lors des manipulations dont elle est l'objet. Pour remédier à certains de ces inconvénients, on a proposé une autre technique de filtration qui consiste à utiliser une boite stérile à éléments circulaires em- boútés les uns dans les autres et couvercle amovible. Cette botte comporte une entrée et une sortie, disposées de part et d'autre d'un support sur lequel reposent un tampon absorbant et une membrane de filtration, coincés à leur périphérie sur le support par l'un des éléments circulaires. Après filtration généralement par aspiration de l'échantillon qui traverse successivement la membrane puis le tampon absorbant, on introduit par la sortie, donc à contre-courant, un milieu de culture pour imbiber le tampon absorbant et, la sortie une fois obstruée, la boîte peut être mise directement à l'incubateur pour permettre aux micro-organismes recueil- lis de se développer. Si cette méthode de filtration sur membranes en boîte stérile évite toute manipulation de la membrane par un opérateur et permet la prise d'échantillons directement sur le terrain, elle présente par contre des inconvénients sérieux. Tout d'abord le diamètre d'une même membrane augmente lorsqu'elle passe de l'état sec à l'état humide. En effet, la membrane et le tampon absorbant qui sont conservés dans la boite stérile à l'état sec et coincés par leur périphérie s'humidifient lors de la fil- tration de l'échantillon et cette humidification peut pro- voquer un décollement de la membrane de filtration du tam- pon absorbant; un tel décollement, empêchant tout contact. entre la membrane et le tampon imprégné de milieu de cul- ture, perturbe le développement des colonies de micro- organismes lors de l'incubation. De même que dans le procédé précédent, il n'est pas possible d'empêcher, malgré des rinçages de la membrane, la migration d'agents bactériostatiques retenus dans la zone périphérique vers le centre de la membrane o ils viennent contrecarrer le développement des microorganismes à dénombrer. D'autre part, le tampon absorbant étant humidifié lors de la filtration de l'échantillon qui peut contenir des éléments inhibiteurs de croissance, le milieu de culture, dont on imbibe par la suite le tampon absorbant, se trouve dilué d'autant et éventuellement modifié par lesdits éléments. Enfin, l'introduction du milieu de culture à contre-courant sur le tampon absorbant risque de soulever la membrane en l'éloignant de ce dernier, ce qui ne peut que perturber la croissance des micro-organismes à dénombrer. Une troisième méthode de filtration consiste à utiliser un échantillonneur du type "sucette" qui a, ccm.e son nom l'indique, La forme 2'un. sucette et comporte une membrane de filtration recouvrant un tampon absorbant imprégné d'un milieu de culture séché par lyophilisation. Par trempage de cet échantillonneur dans le liquide à analyser, on pompe par capillarité à travers la membrane un certain volume de liquide qui vient imprégner le milieu de culture lyophilisé en le solubilisant et la sucette ainsi imprégnée peut être mise directement à incuber. Cette troisième méthode est toutefois d'usage limité car elle ne peut guère être utilisée que pour l'analyse de l'eau, le volume d'échantillons analysé est de l'ordre du cm3 seulement et la reconstitution d'un milieu de culture introduit un aléa supplémentaire par rapport aux méthodes précédemment analysées. La présente invention consiste en un dispositif et un procédé de filtration sur membrane qui permet d'éviter les inconvénients ci-dessus. Le dispositif selon l'invention se caractérise par un manchon en particulier un manchon tubulaire dont le fond est constitué par une membrane filtrante fixée par sa périphérie à l'une des extrémités du manchon, chacune des extrémités dudit manchon ayant la forme d'un embout femelle, dans l'une desquelles on peut emboîter à force un récipient destiné à recevoir un milieu de cul- ture pour l'appliquer sous la membrane filtrante et dont l'autre peut recevoir un couvercle assurant la fermeture sensiblement étanche du dispositif. De préférence, le manchon est un manchon annelé dont les ondes peuvent être compressées ou déployées pour permettre au manchon de délimiter un volume intérieur minimum o toutes les ondes sont compressées et un volume intérieur maximum, o toutes les ondes sont déployées. Les extrémités en forme d'embout femelle du manchon, annelé ou non, peuvent présenter chacune une partie sensiblement cylindrique pour recevoir respective- vement lesdits récipient et couvercle. Dans un tel dispositif, si, après filtration, on comprime légèrement le volume intérieur du manchon annelé ou non, par enfoncement du ccuvercle dans l'extré- mité opposée à celle o se trouve la membrane de filtration intègre, cette dernière a tendance à prendre une forme bombée, ce qui permet, d'une part, de vérifier son intégrité et, d'autre part, d'assurer ainsi un contact de la membrane avec le milieu de culture contenu dans le récipient de son centre vers sa périphérie, ce qui évite d'emprisonner une bulle d'air. Et lorsqu'on emboîte à force le récipient dans l'extrémité du manchon o est fixée la membrane filtrante, on provoque une certaine tension de cette dernière qui, en assurant la suppression de tout pli intempestif de la membrane, permet un bon contact de toute sa superficie avec le milieu de culture. Le dispositif selon l'invention, de préférence à usage unique, peut être conditionné, prêt à l'emploi,exempt de particules, stérile, apyrogène et permet de recueillir-par filtration un échantillon d'un volume correspondant-au maximum à celui du manchon. Or, lorsque le manchon est annelé, l'encombre- ment du dispositif, conditionné manchon compressé, est mini- mum et permet pourtant de recueillir pour la filtration un échantillon d'un volume relativement important puis- qu'il peut correspondre au volume intérieur du manchon déployé. En outre, lorsque le manchon est annelé, la filtration peut s'effectuer au choix, soit en laboratoire en créant une dépression en aval de la membrane, sans qu'il soit nécessaire de prévoir un évent muni d'un filtre puisque le manchon peut se rétracter, soit directement sur le terrain,en créant une pression en amont de la membrane par compres- sion manuelle du manchon déployé contenant l'échantillon à contrôler, c'est-à-dire en utilisant le dispositif comme une pompe. La présente invention concerne également un procédé de contrôle microbiologique d'un échantillon liquide à l'aide d'une membrane filtrante qui comprend successivement l'introduction de l'échantillon à contrôler dans un manchon, en particulier un manchon tubulaire, annelé ou non, ledit manchon étant muni à son extrémité inférieure d'une membrane filtrante fixée par sa péri- P.r.e aux parois du mancnon, la filtration de l'échantillon à travers la membrane, et la mise sous pression du man- chon du côté amont de la membrane pour donner à cette der- nière une forme bombée qui facilite la mise en contact du côté aval de la membrane avec un milieu de culture. Ce procédé permet la prise d'échantillons du liquide à analyser dont le volume correspondant à celui du manchon peut être plusieurs fois celui du manchon compres- sé lorsqu'il est annelé, leur filtration immédiate direc- tement sur le lieu de prise de l'échantillon par affaisse- ment ou compression du manchon lorsqu'il est annelé et la vérification de l'intégrité de la membrane après filtra- tion et sa mise en contact avec un milieu de culture dans des conditions o on évite d'emprisonner toute bulle d'air, que le manchon soit ou non annelé. Une telle filtration permet d'obtenir un fil- trat qui peut être simplement purifié, voire même stérile selon le diamètre des pores et les caractéristiques de la membrane, ce qui permettrait éventuellement à l'utilisa- teur de s'en servir comme liquide de rinçage. L'invention va maintenant être décrite à l'aide des dessins ci-joint o: la figure 1 représente une vue de face en coupe d'un dispositif selon une première variante de l'in- vention montrant un manchon non annelé; - la figure 2 représente une vue de face en coupe d'un dispositif selon une deuxième variante de l'in- vention montrant un manchon annelé en position déployée; - la figure 3 est une vue du même dispositif que celui de la figure 2 montrant le manchon annelé en position compressée; - la figure 4 est une vue de dessus du dispo- sitif représenté sur les figures 2 et 3; - la figure S est une coupe selon la ligne A-A de la figure 2 ou de la figure 3; ss847 - la figure 6 représente schématiquement une vue en coupe d'une machine de fabrication du dispositif des figures 2 à 4; - la figure 7 représente une vue de f e n coupe d'un récipient selon l'invention destiné à recevoir un milieu de culture et qui peut s'emboîter dans l'extrémité du manchon annelé ou non o est fixée la membrane; - la figure 8 est une vue de dessus du récipient de la figure 7; - la figure 9 représente une vue de face en coupe d'un couvercle selon l'invention destiné à fermer de manière sensiblement étanche l'extrémité du manchon annelé ou non opposée à celle sur laquelle la membrane est fixée; - la figure 10 est une vue de dessus du cou- vercle de la figure 9; - la figure 11 représente une vue de dessus d'une entretoise circulaire; - les figures 12 à 15 représentent un support en différentes positions avec un dispositif selon l'in- vention à manchon annelé muni de son récipient et de son couvercle; - les figures 16 à 19 représentent en coupe un dispositif selon l'invention en cours de filtration; - les figures 20 et 21 représentent en coupe un récipient selon l'invention en cours de remplissage par un milieu de culture; - les figures 22 à 24 représentent en coupe la mise en contact de la membrane de filtration avec un milieu de culture selon l'invention; - la figure 25 représente en coupe un disposi- tif à manchon annelé selon l'invention prêt à être mis en incubation, et la figure 26 représente en coupe un dispositif dont le manchon annelé ou non (2B ou 2A) a été découpé à l'aide d'une pince coupante représentée sur la figure 27; et prêt à être mis en incubation; - les figures 28 et 29 représentent les vues, respectivement, de dessus et en coupe selon la ligne CC de la figure 28, du dispositif selon iinei -. -;- tion de lecture pour le dénombrement des micro-organismes. Le dispositif (1) selon la présente invention représenté sur les figures 1 à 5 comporte un manchon non annelé (2A) ou annelé (2B), ce dernier de structure connue, par exemple tel que décrit dans le brevet FR-A-2 467 146, lesdits manchons étant pourvus de deux extrémités (3, 4) en forme d'embout femelle et une membrane filtrante (5) étant fixée, par exemple par soudage à sa périphérie et servant de fond au manchon. Le manchon (2A ou 2B) est de forme générale cylindrique (voir figures 1 et 2) et, lorsqu'il est annelé il est constitué par des ondes (7) qui peuvent être dé- ployées comme représenté sur la figure 2 ou compressées comme représenté sur la figure 3 pour donner au manchon un volume intérieur pouvant varier dans des proportions importantes, par exemple de 1 à 5 et lui faire jouer le rôle d'un récipient à volume variable dont le fond est constitué par la membrane (5). Chacune des ondes (7) du manchon annelé (2B) peut être de section triangulaire définie par deux côtés inégaux (8 et 9) faisant chacun un angle aigu différent avec l'axe du manchon comme décrit dans le brevet précité, le côté le plus grand (8) de chaque onde se raccordant de préférence vers l'extrémité (3) du manchon o se trouve la membrane filtrante. Une telle structure dans laquelle chaque onde est dissymétrique, permet au manchon d'adopter une posi- tion stable o toutes les ondes sont compressées. Les extrémités du manchon annelé ou non (2A ou 2B) en forme d'embout femelle font partie intégrante du manchon,mais pourraient être également rapportées.L'extrémité (3), située du côté inférieur du manchcn o se trouve la membrane et repré- sentée en détail sur les figures 1 et 2,conporte une partie sensiblement cylindrique (10) de raccordeoment avec le manchon (sur le côté le plus grand (8) de l'onde la plus basse dans le cas d'un manchon annelé 2B), un rebord circulaire (11) qui s'étend radialement vers l'extérieur à partir de la partie sensiblement 2S5 847 cylindrique (10) dans un plan sensiblement perpendicu- laire à l'axe du manchon, et une partie sensiblement cylindrique finale (12). Une membrane filtrante (5) de diamètre corres- pondant approximativement à celui de la surface interne de la partie sensiblement cylindrique finale (12) est fixée sur une couronne périphérique à la face inférieure du rebord circulaire (11), comme le montrent les figures 1, 2 et 5. L'extrémité (4) du manchon (2A ou 2B),située à l'opposé de celle o se trouve la membrane, comporte une partie (13) sensiblement cylindrique se raccordant avec le manchon (sur le côté le plus petit (9) de l'onde la plus élevée dans le cas d'un manchon annelé (2B)), de préférence une partie de raccordement conique (14) qui s'évase vers l'extérieur à partir de la partie (13), et une collerette finale (15) s'étendant radialement vers l'exté- rieur dans un plan sensiblement perpendiculaire à l'axe du manchon à partir de la partie (14). Le dispositif représenté sur les figures 1 à qui est généralement en matière plastique de préférence souple comme le polyéthylène doit être fabriqué avec des spécifications extrêmement rigoureuses en ce qui concerne l'angle de raccordement de la partie cylindrique (10) avec le rebord circulaire (11). En effet, il est reccmmandé que cet angle soit un angle vif pour que la fixation ultérieure de-la membrane fil- trante (5) sur la face inférieure du rebord (11), par exemple par soudage thermique, puisse être effectuée sans bavures ni création de recoins qui pourraient retenir des agents bactériostatiques nuisibles au développement des micro-organismes qui seront recueillis sur la membrane. Pour satisfaire cette exigence technique, dans le cas d'un manchon annelé (2B), l'ensemble monobloc constitué par le manchon annelé et ses deux extrémités en forme d'embout peut être fabriqué par un procédé de moulage par injection-soufflage de la matière plastique, au cours duquel une préforme est d'abord injectée avec formation de l'extrémité (3) destiné à recevoir la membrane de filtration (5) aux tolérances exigées, puis l'autre partie de la préforme est soufflée pour réaliser le manchon annelé (2B) -!'autre extrémité (4). Un tel procédé peut être mis en oeuvre à l'aide de la machine représentée schématiquement sur la figure 6, o la matière plastique est d'abord injectée dans un moule (16) pour obtenir une préforme (17) avec les dimen- sions exactes de l'extrémité (3) o va être fixée ulté- rieurement la membrane, puis la préforme (17) est soufflée dans un moule (18) o se forment le manchon annelé (2B) et l'autre extrémité (4) en forme d'embout, cette dernière étant sectionnée par un couteau (19). L'ensemble monobloc étant ainsi préparé par injection-soufflage, il ne reste plus qu'à lui fixer par exemple par soudage la membrane filtrante (5),qui peut être ainsi la seule pièce rapportée, pour obtenir le dispositif selon la présente invention. La membrane filtrante (5) est connue et en général en matière plastique du type ester de cellulose ayant un diamètre de pore qui varie selon la taille de micro-organismes à retenir. Pour les bactéries, le diamètre des pores généralement utilisé est de 0,45 micromètre. D'autres matériaux filtrants hydrophiles ou hydrophobes peuvent être utilisés pour la rétention d'autres micro-organismes. Les membranes de tout diamètre de pores lais- sent passer les gaz lorsqu'elles sont sèches, mais devien- nent une barrière imperméable aux gaz lorsqu'elles sont mouilléesjusqu'à une certaine pression, appelée point de bulle. La surface de la membrane destinée à recueillir les micro-organismes est de préférence quadrillée et éven- tuellement chaque carré identifié par des repères pour faciliter le comptage des colonies de micro-organismes, qui se sont développées après incubation (voir figures 4, 5 et 28). Le récipient (20) selon l'invention destiné à recevoir un milieu de culture est un récipient cylindrique qui vient s'emboîter à force dans l'extrémité inférieure (3) 1 1 du dispositif (1) pour venir s'appliquer sous la membrane filtrante (5). En se référant plus particulièrement aux figures 7 et 8, le récipient (20) consiste en deux éléments sensi- blement cylindriques et concentriques (21 et 22) reliés par une couronne circulaire plane de raccordement (23) perpendiculaire à l'axe du récipient; l'élément sensible- ment cylindrique extérieur (22) présente de préférence sur sa face extérieure une très légère conicité pour des raisons explicitées ci-après; l'élément cylindrique inté- rieur (21) comporte un fond (24), de façon à délimiter une partie creuse (25) pour la réception d'un milieu de culture; la couronne de raccordement (23) est munie d'un certain nombre de perforations axiales (26), pratiquées de préfé- rence dans une gorge circulaire (27) située sur la face supérieure de la couronne (23) (voir figure 7) et qui ont pour but de servir d'évent en mettant en communication l'espace situé au-dessus du récipient avec l'espace situé en dessous du récipient et à l'intérieur de l'élément sensiblement cylindrique extérieur (22). La partie creuse (25) est fermée par une pellicule d'étanchéité amovible (28) sur une partie au moins de la couronne de raccordement (23), de façon, soit à ne pas recouvrir les perforations (26) qui font office d'évent (voir figures 7 et 8), soit à recouvrir lesdites perforations pour assurer une étanchéité parfaite (voir figures 20 et 21). Dans le mode de réalisation des figures 7 et 8, la partie creuse (25) contient un tampon absorbant et le fond (24) est muni d'un orifice axial (29), obturé par un bouchon amovible (30), pour permettre l'introduction d'un milieu de culture liquide (31) qui vient imbiber le tampon absorbant, soit par gravité à partir d'une am- poule (32), soit par pression à l'aide d'une ampoule plastique ou d'une seringue (33), après décollement partiel de la pelli- cule d'étanchéité (28) si l'on souhaite évacuer la pression, comme représenté sur les figures 20 et 21, respectivement. Dans le mode de réalisation représenté sur la figure 24, la partie creuse (25) a été directement rerplie par un milieu de culture gélosé (34) et le récipient (20) correspondant est prêt à l'emploi, de réfdr-e - usage unique et pourrait être commercialise prérempli. Le récipient (20) est fabriqué en matière plastique de préférence rigide comme le polystyrène pour s'emboîter à force dans l'extrémité (3) du manchon (2A ou 2B), fabriqué en matière plastique de préférence souple comme par exemple le polyéthylène en ayant tendance à provoquer une tension radiale dirigée vers l'extérieur sur ladite extrémité du manchon, notamment lorsque l'élé- ment (22) présente une légère conicité. Le couvercle (35),de préférence à usage unique,selon l'invention assurant la fermeture pratiquement étanche du dispositif (1) à son extrémité opposé à celle sur laquelle est soudée la membrane filtrante (5) est un couvercle cylindrique en matière plastique qui s'enfonce pratiquement à étanchéité dans ladite extrémité (4) en forme d'embout femelle. Dans l'exemple de réalisation représenté en détail sur les figures 9 et 10, le couvercle (35) comprend un fond circulaire (36) dont les bords se raccordent à une partie cylindrique (37) qui de préférence s'évase vers l'extérieur en une partie conique (38) pour se terminer par une collerette finale (39) qui s'étend radialement vers l'extérieur dans un plan sensiblement perpendiculaire à l'axe du couvercle. Les dimensions des parties cylindrique (37) et conique (38) du couvercle sont déterminées pour permettre un enfoncement pratiquement étanche du couvercle dans les parties sensiblement cylindrique (13) et conique (14) de l'extrémité (4) du dispositif (1). Le bord circulaire intérieur de la collerette (39) présente une faible portion cylindrique intérieure (40) dont le diamètre correspond au diamètre extérieur de la partie cylindrique (10) de l'extr6mité (3) pour s'y emboîter. Le fond circulaire (36) du couvercle comporte une partie creuse (41) qui s'étend dans le cas illustré symétriquement de part et d'autre de l'axe du couvercle sur la plus Frande partie d'un diamètre, sauf à ses extrémités pour ne pas empêcher le contact pratiquement étanche du couvercle avec les parois intérieures de l'extrémi-é (4) en forme d'embout femelle. Le fond de la partie creuse (41) peut avoir une courbure convexe formant loupe et cette partie (41) qui s'enfonce jusqu'à une profondeur voisine de quelques millimètres du plan formé par la collerette (39), est de préférence opacifiée à l'exception d'une fenêtre d'observation (42), laissée transparente pouvant former loupe de section grossièrement rectangulaire comme le montre la figure 28,et qui,par rotation du couvercle,détermine une couronne d'observation (43) correspondant à un certain pourcentage,par exemple 50 % de la superficie totale de la membrane filtrante. Dans le cas du manchon annelé (2B),tout ou partie du cou- vercle peut former une loupe dont le grossissement peut être ajusté par extension ou rétraction du manchon. Le fond du couvercle peut comporter également un ou plu- sieurs orifices (44), situés par exemple à mi-chemin entre l'axe et la périphérie du couvercle et pouvant être obturés chacun par un bouchon amovible (45). Le couvercle (35) est fabriqué en matière plastique de pré- férence rigide ccmme par exemple le polystyrène et la partie conique (38) intermédiaire entre la partie cyclindrique (37) et la collerette (39) peut éventuellement être omise,tout come la partie conique (14) du manchon. du manchon Le dispositif selon l'invention peut comprendre également une entretoise circulaire (46) dont le diamètre correspond approximativement à celui de la membrane fil- trante (5). Comme représenté sur la figure 11, cette entretoise consiste par exemple en un réseau grillagé de fil en matière plastique, et elle peut être intercalée entre la membrane filtrante (5) du manchon (2A ou 2B) et le récipient (20) lors de la filtration (voir par exemple la figure 19). Le dispositif (1) lorsqu'il comporte un manchon annelé (2B) muni de son récipient (20) et de son couvercle (35) et éventuellement de l'entretoise (46) peut être disposé ou non sur un support (47) tel que repré- senté sur les figures 12 et 15. Ce support (47) consiste en quatre pieds verti- caux (48), solidaires d'un collier sur-zer (49) présen- tant deux branches (50 et 51) analogues aux branches d'une paire de ciseaux et pivotant autour d'un axe de rotation (52). Chaque branche du collier (49) présente une échancrure en forme de demicercle qui épouse la partie sensiblement cylindrique (13) de l'extrémité supérieure (4) du manchon annelé. Le support (47) est également équipé d'un autre collier inférieur (53)identique au collier supérieur (49), à ceci près que les pieds (48) qui sont solidaires du collier (49), coulissent dans les deux branches du collier (53). Le procédé de contrôle microbiologique selon la présente invention va maintenant être décrit par la mise en oeuvre du dispositif qui vient d'être analysé en utilisant l'exemple du contrôle d'une solution aqueuse. oIDrsqu'on désire procéder à l'analyse microbiologique d'un liquide dont on veut compter le rnombre de micro-organismes, on procède de la manière suivante. On introduit l'échantillon du liquide à contrô- ler dans un dispositif (1) comportant un manchon, annelé ou non, (2A ou 2B) et on effectue la filtration de cet échantillon à travers la membrane filtrante (5). Lorsque le dispositif (1) utilisé comporte un manchon annelé (2B) dont les ondes sont nombreuses, il est recommandé d'utiliser un support (47). Dans ce cas, on introduit un dispositif stérile (1) comprenant un manchon annelé (2B) muni de son réci- pient (20) et de son couvercle (35) dans un support (47), dont les branches des colliers (49 et 53) ont été préala- blement ouvertes, de manière à ce que les parties cylin- driques (13) et (10) des extrémités (4 et 3) se logent dans les échancrures en demi-cercle d'une des branches des colliers (49 et 53), en réglant la hauteur du collier inférieur mobile (53) (figure 12). Après fermeture des colliers (49 at 5.,,, dispositif (1) se trouve inséré dans le support (47) (voir figure 13) et on procède à l'extension maximale du manchon annelé,(2) Un 1éloinn% le colLier mobile (53) du collier fixe (49). On enlève le couvercle (35) ou son bouchon amovible (45) et on peut introduire un échantillon de liquide à contrôler à l'intérieur du récipient formé par le manchon annelé (2B) dont le volume est alors maximum (voir la figure 14). Après remplissage par l'échantillon du dispo- sitif comportant un manchon {(2A ou 2B) et fermeture prati- quement étanche du couvercle (35), et de son bouchon (45) on peut retourner le dispositif pour le conserver en posi- tion de stockage, comme représenté par exemple sur la *figure 15. Il est égal!eent possible de filtrer médiateant l'échantillon, ce qui, en évitant tout stockage ou trans- fert de ce dernier, au cours desquels les micro-organismes pourraient commencer à se multiplier, augmente la précision du dénombrement desdits micro-organismeso Cette filtration peut s'effectuer, si on dis- pose d'une fiole à vide (54), en plaçant le dispositif, récipient enlevé et membrane vers le bas, sur la fiole à vide, soit, le manchon étant annelé ou non, d'une ma- nière connue en faisant le vide dans la fiole en aval de la membrane, soit le manchon étant annelé, en appuyant sur le couvercle du dispositif, ce qui crée une pression en amont de la membrane et produit un affaissement du manchon annelé (2B) (figures 16, 18 et 17, respectivement). Dans chacun de ces cas, la membrane (5) repose sur une entretoise (55) disposée sur un support poreux (56) (voir les figures 16 et 18). Au cas o la filtration de l'échantillon doit s'effectuer directement sur le terrain o s'effectue la prise de ce dernier, en l'absence de tout matériel de laboratoire tel qu'une fiole à vide, on dispose d'un réci- pient (20) dans lequel la feuille d'étanchéité (28) recouvre la partie creuse (25) sans obstruer la zone périphérique pourvue des perforations axiales (26). Le dispositif (1) comportant un manchon annelé (2B) muni de son couvercle (25), de ce rocipient (20) et de son entretoise (46) est co.pr-essé manuellement, ce qui provoque l'évacuation du liquide à contrôler, après traver- sée de la membrane (5) et de l'entretoise (46), dans les perforations axiales périphériques (26), sans que la partie creuse destinée à recevoir le milieu de culture ait été humidifiée (voir figure 19). Une fois la filtration et un rinçage éventuel effectués, la membrane filtrante (5) humidifiée fait barrière aux gaz et on peut lui donner la forme bombée représentée sur la figure 22 en comprimant légèrement l'air contenu dans le manchon (2A ou 2B). Cette légère compres- sion de l'intérieur du manchon (2A ou 2B) est facilement réalisée par enfoncement de la partie cylindrique (37) du convercle (35) dans la partie cylindrique correspondante (13) de l'extrémité (4) du manchon (2A ou 2B). Cette mise en forme bombée de la membrane (5) qui a lieu sans manipulation de la membrane et que le manchon soit ou non annelé est une caractéristique essen- tielle du procédé de la présente invention car, d'une part, elle permet à l'utilisateur de vérifier l'intégrité de la membrane, mais, d'autre part, elle permet la mise en contact de la membrane avec le milieu de culture de son centre vers sa périphérie, ce qui permet d'éviter tout emprisonnement de bulle d'air venant fausser les résul- tats du contrôle à effectuer. Si, quelle que soit la méthode de filtration utilisée, le récipient (20) n'a pas encore été rempli de milieu de culture, on procède à cette opération et on dispose alors d'un récipient prêt à l'emploi et de préfé- rence à usage unique, qui pourrait être commercialisé pré- rempli.. La mise en contact du côté aval de la membrane filtrante (5) avec le milieu de culture (31 ou 34) s'effectue par emboîtement à force du récipient (20), dont on a retiré la pellicule d'étanchéité (28), dans l'extré- mité inférieure du dispositif (1). Au cours de cet emboîtement, la membrane- fi1- trante (5) qui se trouve sous forme bombée, comme expliqué précédemment, va entrer d'abord en contact par son cenzre avec la face supérieure du milieu de culture sur lequel elle est progressivement plaquée, l'air s'évacuant à la périphérie par les perforations axiales (26) du récipient, comme montré sur les figures 23 et 24. De plus, en choisissant pour les matières plas- tiques du récipient et du manchon (2A ou 2B), une matière plus rigide pour le premier que pour le second, on provo- que, lors de l'emboitement à force et à fond du récipient dans l'ex- trémité (3) en forme d'embout femelle du manchon, ure tension de la membrane (5) dont les extrémités viennent s'appliquer, après le centre, sur la face supérieure plane du milieu de culture. On effectue donc, selon la présente invention, une véritable manipulation de la membrane filtrante (5) sans toucher à celle-ci et la membrane s'applique sur le milieu de culture dans des conditions optimales o on* évite tout emprisonnement de bulle d'air et toute formation intempestive de plis dans la membrane. Après mise en place du milieu de culture sur la face de la membrane filtrante (5) opposée à celle o ont été recueillis les micro-organismes, comme indiqué ci- dessus, on peut mettre directement à incuber le dispositif dans un incubateur, de préférence en le retournant, comme indiqué par exemple sur la figure 25. Toutefois, si on veut limiter le volume du dispositif à incuber, comptetenu de la place disponible dans l'incubateur, on peut découper le manchon (2A ou 2B) pour réduire la hauteur du dispositif. Ce découpage peut étre effectué, par exemple, avec la pince coupante (57) représentée sur la figure 27 qui a la forme d'une paire de ciseaux dont les deux branches semi-circulaires comportent chacune une dent aiguisée (58) dirigée vers l'intérieur qui perce le manchon (2A ou 2B) lorsqu'on referme la pince autour d'une circonférence du manchon et qui le découpe le long de cette circonférence lors d'-:-ne ti du dispositif (2A ou 2B) par rapport à la pince. La hauteur à laquelle s'effectue le découpage du manchon (2A ou 2B) peut se faire à tout niveau de celui-ci étant entendu, qu'avant de jeter le tronçon du manchon ne comportant pas la membrane, on récupère le couvercle (35) pour l'insérer sur le tronçon découpé du manchon comportant la membrane (5). Par exemple, dans le cas d'un manchon annelé (2B), le découpage peut s'effectuer en laissant subsister les deux dernières ondes (7) qui se raccordent à l'extré- mité (3) du manchon pour qu'on puisse remettre le couver- cle (35) sans le retourner, c'est-à-dire dans le sens indiqué sur les figures 16, 17, 22 ou 25 sur la partie ainsi découpée du manchon, dont la hauteur empêche le fond (36) du couvercle de venir en contact avec la membrane filtrante (5). De préférence, on découpe le manchon (2A ou 2B) sur la partie cylindrique (10) de l'extrémité (3) à quel- ques millimètres au-dessus de la membrane filtrante (5), on insère le tronçon découpé du manchon comportant la mem- brane et muni du récipient (20) dans la portion cylindrique intérieure (40) du couvercle (35) et on enlève le tronçon du manchon (2A ou 2B) ne comportant pas la membrane pour le jeter (figure 26). Dans ce cas, le couvercle (35) se trouve disposé par rapport au récipient (20) en sens opposé à celui qu'il avait lors de la filtration (voir les figures 26 et 29 par opposition aux figures 15 à 17, 22 et 25). Le dispositif, comprenant le récipient (20), la partie de l'extrémité (3) comportant la membrane filtrante (5) et le couvercle (35) est alors mis à incuber, de pré- férence couvercle en bas et récipient en haut, comme re- présenté sur la figure 26. L'incubation terminée, il reste à effectuer la numération des colonies de micro-organismes qui se sont développées à la surface de la membrane filtrante (5). Pour effectuer ce dénombrement, on découpe, si ce n'est déjà fait, le manchon le long de sa partie cylin- drique (10) et on applique le tronçon comportant la mem- brane sur la portion cylindrique intérieure (40) du couver- cle, pour obtenir le dispositif représenté sur les figures 26, 28, 29. La lecture s'effectue, le dispositif étant disposé, récipient (20) en bas, l'extrémité (3) avec sa membrane filtrante (5) étant coincé entre le récipient et le couvercle et le couverle (35) en haut (voir figures 28 et 29). Si la nature des micro-organicsms le permat et si leur nombre est réduit, la lecture du nolmmbre des colonies qui se sont développées sur la M>brne (5) peut s'effectuer en retirant le cou- vercle (35) de l'extrémité (3). Si tel n'est pas le cas, ou si l'on préfère laisser le couvercle (35) en p lace, la partie creuse (41) du cozvercle étent beaucoup plus proche de la membrane filtrante (5) que le reste de la superficie du fond circulaire (36) du couvercle, la lecture du nombre de colonies peut s'effectuer par le fond de la partie creuse sans que l'observateur soit gêné par la condensation, qui se produit essentiel- lement sur les parties du fond (36) les plus éloignées de la membrae, donc à 1 'exclusion de la partie creuse (41). Un tel système de dénombremntc permet éventuellement d'utiliser des membranes non quadrilléesce qui facilite les opérations de rinçage de la membrrane, augmente la surface de filtration et diminue le coût de la membrane. En effet, dès qu'on sort le dispositif de l'incubateur, le contraste thermique entre la température d'incubation et la tempe- rature ambiante provoque rapidement une condensation sur le fond circulaire (36) du couvercle, à l'exclusion des surfaces qui en sont éloignées et notamment la partie creuse (41) par o s'effectue la lecture du nombre de colonies de micro-organismes à évaluer. Pour faciliter cette lecture, on peut donner à la partie creuse (41) une forme convexe formant loupe et on peut de plus opacifier la plus grande partie de la partie creuse (41) comme représenté sur les figures 10 et 28, pour ne laisser subsister qu'une fenêtre d'obser- vation (42); une rotation de 360 de cette fenêtre d'obser- vation (42) du couvercle (35) sur la membrane filtrante (5) engendre une zone circulaire (43), correspondant à un pourcentage déterminé de la surface de la membrane, par exemple 50 %, et sur lequel on peut compter le nombre de colonies visibles. La présente invention met ainsi à la disposi- tion de l'utilisateur un dispositif de contrôle microbio- logique jetable qui, bien que de petit volume, peut servir à recueillir un échantillon de plus grand volume (le volume d'un manchon annelé pouvant varier par exemple entre 80 et 320 cm3), est utilisable directement sur le terrain pour recueillir et filtrer l'échantillon du liquide à contrôler, ne retient pas les agents bactériostatiques, permet à l'utilisateur de vérifier l'intégrité de la mem- brane après filtration, garantit une application de la mem- brane filtrante sur le milieu de culture sans pli et sans bulle d'air et enfin permet une lecture facilitée du nombre de micro-organismes à dénombrer après incubation. La combinaison de tous ces avantages justifie la brevetabilité du dispositif et du procédé faisant l'objet de la présente invention. REVENDICATIONS 1. Dispositif (1) de contrôle microbiologique d'un échantillon liquide à l'aide d'une membrane filtrante (5),de préférence à usage unique, caractérisé en ce qu'il comporte un manchon (2A ou 2B) dont le fond est constitué par une membrane filtrante (5),fixée par sa périphérie à l'une des extrémités du manchon, chacune des extrémités dudit manchon ayant la forme d'un embout femelle, dans l'une desquelles (3) on peut emboîter à force un récipient (20) destiné à recevoir un milieu de culture pour l'appliquer sous la membrane filtrante (5) et dont l'autre (4) peut recevoir un couvercle (35) assurant la fermeture sensiblement étanche du dispositif. 2. Dispositif selon la revendication 1, carac- térisé en ce que le manchon est un manchon annelé (2B) dont les ondes (7) peuvent être compressées ou déployées pour permettre au manchon de délimiter un volume intérieur minimum o toutes les ondes sont compressées et un volume intérieur maximum o toutes les ondes sont déployées, et dont le fond est constitué par la membrane filtrante (5) qui est fixée par sa périphérie à l'une des extrémités du manchon. 3. Dispositif selon la revendication 2, carac- térisé en ce que le manchon (2B) comporte des ondes (7) de section triangulaire définie par deux côtés inégaux (8 et 9) faisant des angles aigus différents avec l'axe du manchon, un des deux côtés, de préférence le côté le plus grand (8), de chaque onde se raccordant vers l'extré- mité du manchon o se trouve la membrane filtrante (5). 4. Dispositif selon l'une quelconque des re- vendications précédentes, caractérisé en ce que l'extré- mité (3) comporte une partie sensiblement cylindrique (10) de raccorde- ment avec le manchon (2A ou 2B), um rebord circulaire (11) s'étendant radialement vers 1 'extérieur dans un plan sensiblement perpendiculaire à l'axe du manchon,faisant un angle vif avec la partie (10) et sur la face inférieure duquel est fixée la membrane filtrante (5), et enfin une partie sensiblement cylindrique finale (12). 5. Dispositif selon l'une quelconque des re- vendications précédentes, caractérisé en ce que l'extrémité (4) du manchon (2A ou 2B) opposée à celle o est fixée la membrane filtrante (5) comporte une partie sensiblement cylindrique (13), éventuellement une partie de raccorde- ment conique (14) s'évasant vers l'extérieur, et une collerette finale (15). 6. Dispositif selon la revendication.3, carac- térisé en ce que les parties sensiblement cylindriques (10 et 13) des extrémités (3 et 4) du manchon annelé (2B) se raccordent respectivement avec les côtés les plus grands (8) et les plus petits (9) des ondes (7) dudit manchon. 7. Dispositif selon l'une quelconque des reven- dications précédentes, caractérisé en ce que le manchon annelé (2B) est fabriqué en matière plastique, par un procédé de moulage comportant l'injection de l'extrémité (3) o sera fixée la membrane filtrante (5) puis le soufflage du manchon annelé et de son autre extrémité (4) et que la membrane filtrante est enfin rapportée et fixée sur l'ensemble monobloc du manchon et de ses extrémités ainsi fabriqué par injection- soufflage, ladite matière plastique étant de préférence une matière plastique souple comme, par exemple, le polyéthylène. 8. Manchon annelé (2B), dont les ondes (7), de préférence de section triangulaire définie par deux côtés inégaux (8 et 9) faisant des angles aigus différents avec l'axe du manchon, peuvent être compressées ou déployées pour permettre au manchon de délimiter un volume intérieur minimum o toutes les ondes sont compressées et un volume intérieur maximum o toutes les ondes sont déployées, et dont le fond est constitué par une.membrane filtrante (5), fixée par sa périphérie à l'une des extrémités du manchon. 9. Récipient (20) destiné à recevoir un milieu de culture,de préférence à usage unique,caractérisé en ce qu'il cocnporte deux éléments sensiblement cylindriques et concentriques (21 et 22), dont l'élément externe (22) présente de préférence une légère conicité, dont l'élément interne comporte un fond délimitant une partie creuse (25) pour la réception d'un milieu de culture, ces deux éléments concentriques étant reliés par une couronne circulaire plane de raccordement (23) munie d'un certain nombre de perforations axiales (26), pra- tiquées de préférence dans une gorge circulaire (27) située sur la face supérieure de la couronne (23). 10. Récipient selon la revendication 9, carac- térisé en ce que la partie creuse (25) est scellée par une pellicule d'étanchéité amovible (28), sur la couronne circulaire plane de raccordement (23), de préférence sans recouvrir les perforations axiales (26), ladite partie creuse (25) étant éventuellement munie d'orifices (29) , pouvant être obturés par des bouchons amovibles (30): 11o Récipient selon la revendication 9 ou 10, caractérisé en ce que ledit récipient {20> est fabriqué en matière plasLique de préférence rigide comme, par exem- ple, le polystyrène0 12. Couvercle (35),de preéférence à usage unique, aorac- térisé en ce que le fond circulaire (36) dc-t les bords se raccordzent une partie cylindrique (37}, s évasant de préférence vers l'extérieur par une partie conique (38) et se terminant par une collerette;39), comporte une partie creuse (41), qui s'étend notarment sur une partie d'un diamètre, sauf à ses extrémités, et qui a une profondeur voisine du plan formé par la collerette (399. 13. Couvercle selon la revendication 12, carac- térisé en ce que le fond de la partie creuse (41) a une forme convexe formant loupe. 14. Couvercle selon la revendication 12 ou 13, caractérisé en ce que le fond de la partie creuse (41) est opacifié à l'exception d'une fenêtre d'observation (42). 15. Couvercle selon l'une quelconque des reven- dications 12 à 14, caractérise en ce qu'il comporte un ou plusieurs orifices (44) situés entre l'axe et la périphé- rie du couvercle et qui peuvent être obturés par un bouchon amovible (45). 16. Couvercle selon l'une quelconque des revenu dications 12 à 15, caractérisé en ce qu'il est fabriqué en matière plastique, de préférence rigide comme, par exemple, le polystyrène. 17. Dispositif selon l'une quelconque des revendications 1 à 7, caractérisé en ce qu'il comporte un manchon annelé (2B) selon la revendication 8, un réci- pient (20) selon l'une quelconque des revendications 9 à 11 et/ou un couvercle (35) selon l'une quelconque des revendications 12 à 16. 18. Procédé de contrôle microbiologique d'un échantillon liquide à l'aide d'une membrane filtrante (5), caractérisé en ce qu'il consiste à introduire l'échan- tillon de liquide à contrôler dans un manchon, de préfé- rence tubulaire annelé ou non, ledit manchon (2A ou 2B) étant muni à son extrémité inférieure (3) d'une membrane filtrante (5) fixée par sa périphérie aux parois du man- chon, à effectuer la filtration de l'échantillon à travers la membrane filtrante (5) et à mettre sous pression de gaz le côté amont de la membrane pour lui donner une forme bombée. 19. Procédé selon la revendication 18, carac- térisé en ce que l'introduction de l'échantillon, sa fil- tration et la mise sous pression du côté amont de la mem- brane sont effectuées à l'aide d'un dispositif (1) selon l'une quelconque des revendications 1 à 7 ou d'un manchon selon la revendication 8. 20. Procédé selon la revendication 18 ou 19, caractérisé en ce qu'après la mise sous pression du côté amont de la membrane filtrante (5) pour lui donner une forme bombée, on emboîte à force dans l'extrémité (3) du manchon (2A ou 2B) o est fixée la membrane, un récipient contenant un milieu de culture, notamment un récipient (20) selon l'une quelconque des revendications 9 à 11, dont on a préalablrement enlevé la pellicule d'étanchéité amovible (28), s'il en a une, pour appliquer le côté aval de la membrane sur le milieu de culture et lui redonner sa forme plane. 21. Procédé selon la revendication 20, carac- térisé en ce que le manchon (2A ou 2B), dans lequel on a emboîté à force le récipient contenant le milieu de cul- ture, est découpé de préférence à proximité de la membrane filtrante (5). 22. Procédé selon les revendications 19 et -21, caractérisé en ce qu'après découpage du manchon (2A ou 2B) à proximité de la membrane filtrante (5), on dispose le tronçon découpé du manchon comportant la membrane et dans lequel est emboîté le récipient (20) sur le couver- cle (35) encore muni de l'autre tronçon du manchon, on jette cet autre tronçon et on met à incuber le dispositif comprenant le récipient (20), le tronçon découpé du manchon comportant la membrane et le couvercle (35). 23. Procédé selon les revendications 19 et 21, caractérisé en ce que le manchon (2A ou 2B), dans lequel on a emboîté à force le récipient (20), est découpé à une distance suffisante de la membrane filtrante (5) pour que le couvercle (35), après enlèvement du tronçon découpé du manchon ne comportant pas la membrane, puisse -être disposé sur l'autre tronçon du manchon comportant la membrane, sans venir au contact de cette dernière. 24. Procédé selon la revendication 18 ou 19, caractérisé en ce que l'échantillon est introduit dans un manchon annelé (2B) et que la filtration de cet échantillon s'effectue par pression manuelle sur l'extrémité (4) du manchon opposée à celle o est fixée la membrane (5), ledit manchon (2B) étant muni d'un couvercle, de préférence un couvercle (35) selon l'une quelconque des revendications 12 à 16. 25. Procédé selon l'une quelconque des reven- dications 18 à 22 ou 24, caractérisé en ce qu'après incu- bation, on effectue le comptage des colonies de micro- organismes recueillis sur la membrane filtrante (5) et qui apparaissent à travers la fenêtre d'observation (42), lors de la rotation du couvercle (35) par rapport à la mem- brane (5). 26. Procédé selon l'une quelconque des reven- dications 18 à 22, 24 ou 25, caractérisé en ce que le comptage des colonies de micro-organismes s'effectue après incubation, le couvercle (35) étant disposé sur le tronçon découpé du manchon (2A ou 2B) comportant la membrane filtrante (5), de façon à ce que le fond de la partie creuse (41) soit disposé à proximité de la mem- brane filtrante, pour qu'il ne reçoive pas de condensa- tion.