Brevet FR2556721A1 — publié le 19850621

La présente invention concerne de nouveaux dérivés dew.-mercapto propanamide d'wamino-acides, leur procédé de préparation, leur application comme médicaments et les compositions les renfermant. L'invention a pour objet les composés de formule (I) : dans laquelle R1 représente un atome d'hydrogene ou un radical R'1 étant un radicl alcoyle renfermant de l a 5 atomes de carbone ou un radical aryle éventuellement substitué par un radical hydroxy, un radical alcoyle renfermant de 1 à 5 atomes de carbone, un radical alcoxy renfermant de 1 a 5 atomes de carbone, le radical nitro ou un atome d'halogène, R2 représente un atome d'hydrogène ou un radical alcoyle renfermant de 1 a 5 atomes de carbone, à l'exception du radical isobutyle, un radical aryle ou arylalcoyle, éventuellement susbtitués par un radical alcoyle renfermant de 1 a 5 atomes de carbone, un radical alcoxy renfermant de 1 a 5 atomes de carbone, un radical hydroxyle, un atome d'halogene, un radical trifluorométhyle, n représente un nombre entier pouvant varier de 1 a 4, R3 représente un atome d'hydrogène ou un radical alcoyle renfermant de 1 a 5 atomes de carbone, m représente un nombre entier pouvant varier de O a 4, R4 représente un atome d'hydrogène ou un radical alcoyle renfermant de 1 à 5 atomes de carbone, R4 étant toutefois pas un atome d'hydrogene, lorsque R1 représente un radical ainsi que leurs sels avec les bases. Lorsque R1 représente un radical R'1 est de préférence un radical methyle ou éthyle. Lorsque R'1 est un radical aryle, il s'agit de preference d'un radical phenyle. Lorsque R'1 est un radical aryle substitué, il s'agit de préférence d'un radical aryle substitue par un radical choisi dans le groupe formé par les radicaux hydroxy, les radicaux méthyle ou éthyle, les radicaux méthoxy ou ethoxy, le radical nitro ou un atome de chlore. Lorsque R2 représente un radical alcoyle, il s'agit de préférence du radical méthyle, éthyle, n-propyle, n-butyle, n-pentyle, isopropyle. Lorsque R2 est un radical aryle, il s'agit de préférence d'un radical phényle. Lorsque R2 est un radical arylalcoyle, il s'agit de préférence d'un radical benzyle. Lorsque R2 est un radical aryle ou alrylalcoyle substftués,fl s'agit de préférence d'un radical aryle ou arylalcoyle substitués par un radical méthyle ou éthyle, un radical méthoxy ou éthoxy, un radical hydroxyle, un atome de chlore ou un radical trifluorométhyle. Lorsque R3 représente un radical alcoyle, Il s'agit de préférence du radical méthyle, éthyle, n-propyle, n-butyle, isopropyle ou isobutyle. Préférentiellement, n et m représentent des nombres entiers pouvant varier respectivement de 1 à 4 et de O à 4, la somme de ces 2 nombres entiers pouvant varier de 1 à 5. Lorsque R4 représente un radical alcoyle, Il s'agit de préférence d'un radical méthyle ou éthyle. Les sels d'addition avec les bases peuvent etre, par exemple, ceux formés avec les métaux alcalins comme le sodium et le potassium et les amines, par exemple, la triméthylamine ou la diméthylamine. L'invention a notamnent pour objet les composés de formule (I), pour lesquels est un atome d'hydrogene,afnsf que leurs sels avec les bases et ceux pour lesquels R1 est un radical acétyle, ainsi que leurs sels avec les bases. L'invention a plus particulièrement pour objet les composés de formule (I), pour lesquels R2 est un radical benzyle ainsi que leurs sels avec les bases et tout particulièrement, pour lesquels R3 représente un atome d'hydrogène et pour lesquels n et m représentent des nombres entiers pouvant varier respectivement de 1 à 4 et de O à 4, la somme de ces deux nombres entiers pouvant varier de 1 à 4, ainsi que leurs sels avec les bases. Parmi les composés de l'invention, on peut citer les produits mentionnés dans les exemples et tout particulièrement - l'acide 3-//3-mercapto l-oxo 2-(phényl méthyl) propyli amfno/ propanoTque, ainsi que ses sels avec les bases ; - l'acide 4-1/3-mercapto 1-oxo 2-(phényl méthyl) propyli amino/ butanoTque, ainsi que ses sels avec les bases. L'invention a également pour objet un procédé de préparatfon des produits de formule (I), caractérisé en ce que l'on soumet un acide de formule (II): dans laquelle R'1 et R2 ont les significations déjà indiquées, ou un dérivé fonctionnel de cet acide, à l'action d'un produit de formule (III):: dans laquelle n, m et R3 ont les significations indiquées précédemment et dans laquelle R4 est un radical alcoyle renfermant de 1 à 5 atomes de carbone, pour obtenir un produit de formule (I) dans laquelle et R4 est un radical alcoyle renfermant de 1 à 5 atomes de carbone et dans laquelle n, m, R2 et R3 ont les significations précédentes, produits de formule (I) que l'on saponifie, si désiré, pour obtenir un produit de formule (I) dans laquelle R1 représente un atome d'hydrogène et R4 représente un atome d'hydrogène ou un radical alcoyle renfermant de 1 à 5 atomes de carbone et dans laquelle n, m, R2 et R3 ont les significations précédentes, produit de formule (I)9 quel'on soumet, si désiré, à l'action d'une base pour en former le sel. Dans les conditions préférentielles de mise en oeuvre du procédé, objet de l'invention - Le dérivé fonctionnel des acides de formule (II) est de préférence un chlorure d'acide. - La réaction de condensation entre les produits de formule (Il) et les produits de formule (III) s'effectue en presence d'une base tertiaire telle que la triéthylamine, la diméthylamino pyridine et notamment, en présence de N-méthyl morpholine. Cette réaction a lieu au sein d'un solvant chloré tel que le 1,1dichloroéthane, le chloroforme, le tétrachlorure de carbone et le chlorure de méthylene mais d'autres solvants comme l'éther éthylique, le tétrahydofuranne, le diméthyl formamide peuvent être utilisés. - La saponification des produits de formule (I) dans laquelle et R4 est un radical alcoyle renfermant de 1 à 5 atomes de carbone s'effectue par des moyens usuels, notamment en utilisant un hydroxyde de métal alcalin. Cette saponification est plus ou moins poussée, selon que l'on veut obtenir un produit de formule (I) dans laquelle R1=H et R4 représente un radical alcoyle renfermant de 1 à 5 atomes de carbone ou un produit de formule (I) dans laquelle R1 et R4 représentent tous deux un atome d'hydrogène. A titre d'exemple, on utilise dans le premier cas de la soude 0,1N à une température se situant entre -5 C ou +10in et dans le second, de la soude N à une température se situant entre +15-C et +25in. Par ailleurs, les sels d'addition des produits de formule (I) avec les bases sont obtenus par des moyens usuels. Les composés de formule (I) tels que définis ci-dessus ainsi que leurs sels avec les bases sont doués d'intéressantes propriétés pharmacologiques. Ils sont doués, en particulier, de très Intéressantes propriétés inhibitrices de l.'enképhalinase et sont doués d'une très bonne activité analgésique. L'enképhalinase est une dfpeptfdylcarboxypeptidase qui hydrolyse spécifiquement la méthionine et la leucine enképhaline entre le 3sème et le 4ème acide aminé, libérant ainsi un tripeptide Tyr-Gly-Gly (Swerts, J.P., Perdrfsot, R., Patey, G., De la Baume, S., and Schwartz, J.C., Europ. J. Pharmacol., 1979, 57 279). L'enképhallnase participe ainsi directement à la dégradation physiologiques des enképhalines, ligands naturels endogènes des récepteurs opiacés. Les composés de l'invention, qui retardent la dégradation des enképhalines, stimulent donc les réactfons de défense de l'organisme contre la douleur. Ces propriétés justifient leur application en thérapeutique et l'invention a également pour objet, à titre de médicaments, les produits tels que définis par la formule (I) ci-dessus, ainsi que les sels d'addition avec les bases pharmaceutiquement acceptables desdits produits de formule (I). La présente Invention a tout particulièrement pour objet, à titre de médlcaments, l'acide 3-//3-mercapto l-oxo 2-! phényl méthyl) propyl/ amino/ propanoTque ainsi que ses sels d'addition avec les bases pharmaceutiquement acceptables et l'acide 4-//3-mercapto l-oxo 2-(phényl méthyl) propyli aminci butanolque ainsi que ses sels d'addition avec les bases pharmaceutiquement acceptables. Les médi caments, objet de l'fnvention, peuvent être utilisés dans le traitement des algies musculafres, articulaires ou nerveuses, des douleurs dentaires, des zonas et des migraines, ainsi que dans le traitement des affections rhumatismales et aussi à titre de traitement complémentaire dans les états infectieux et fébriles. L'invention s'étend aux compositions pharmaceutiques renfermant comme principe actif, les médicaments définis cl-dessus. Ces compositions pharmaceutiques peuvent être administrées par voie buccale, rectale, par voie parentérale ou par voie locale en application topique sur la peau et les muqueuses. Ces compositions peuvent être solides ou liquides et se présenter sous les formes pharmaceutiques couramment utilisées en médecine humaine comme, par exemple, les comprimés simples ou dragéifiés, les gélules, les granulés, les suppositoires, les préparations injectables, les pommades, les crèmes, les gels et les préparations en aérosols ; elles sont préparées selon les méthodes usuelles. Le principe actif peut y être incorporé a des excipients habituellement employés dans ces compositions pharmaceutiques, tels que le talc, la gomme arabique, le lactose, l'amidon, le stéarate de magnésium, le beurre de cacao, les véhicules aqueux ou non, les corps gras d'origine animale ou végétale, les dérivés paraffiniques, les glycols, les divers agents mouillants, dispersants ou émulsifiants, les conservateurs. La posologie varie notamment en fonction de la voie d'administration, de l'affection traitée et du sujet en cause. Par exemple, chez l'adulte, elle peut varier entre 20 mg et 2 g de principe actif, par jour, par voie orale. Certains des composés de formule (II) utilisés comme produits de départ du procédé de l'Invention sont décrits et préparés dans le brevet ONDETTI et al. US 4053651. Les produits de formule (II) non décrits dans ce brevet peuvent être préparés comme indiqués dans ce brevet. Les esters de formule (III) peuvent éventuellement être utilisés sous forme de chlorhydrate. Ceux-cf sont préparés à partir des acides des produits de formule (III) dénommés ci-après produits de formule (IIIA), selon le schéma de réactions suivant : H2N - (CH2)n - CH -- (CH2)m - COOH + R40H R3 (-IIIA) J H2N - (CH2) - CH - (cH2)m - COOR4 , HCl (III) de thionyle I R3 (Helvetica Chemica Acta Vol. XXXVI, Fasc. V, 1953, N" 136-137, pages 11091115). Lorsque R3=H dans les acides de formule (IIIA), on peut représenter ces produits par la formule suivante : H2N - (CK2)Y C00 H y étant un nombre entier égal à met+1, m et n conservant leurs significations précédentes. Les acides de formule (IIIA), pour lesquels y=2,3 ou 4, sont commercialIsés. Ceux qui ne sont pas connus pour lesquels y représente un nombre entier pouvant varier de 5 à 9 peuvent être préparés comme suit : On fait réagir un anion de formule o- CH2 COOR R étant un radical alcoyle de 1 à 5 atomes de carbone, sur un dérivé phtalimidique iodé en présence de dilsopropylamîdure de lithlum à -78iC au sein de tétrahydrofurane, puis hydrolyse par chauffage en milieu acide au reflux le produit ainsi obtenu :: 1 > diisopropylamidure de lithium on 780 C tétrahydrofurane CH2 COOR ---- > Pht N ( CH2 ) yCOOR 2) PhtN (CH2) I HC1 2) H2N (CH2)y y C00H 6N reflux Le dérivé phtalimidique iodé PHtN(CH2)yI est préparé en faisant réagir le composé Br(CH2)yCl sur le phtalimidate de potassium puis l'iodure de sodium en présence d'acétone. Les acides de formule (IIIA), .pour lesquels R3 représente un radical alcoyle de 1 à 5 atomes de carbone et pour lesquels n et m représentent des nombres entiers pouvant varier respectivement de 1 à 4 et de O à 4 sont préparés d'une manière similaire à celle indiquée précédemment. Ainsi les produits de formule (IIIA) pour lesquels mFo sont préparés à partir du produit de formule R3 H2C COOR, dans laquelle R et R3 ont les significations précédentes sur un dérivé phtallmidique iodé : 1) diisopropylamidure de lithium -780C tétrahydrofurane R3s R3 H2C COOR 2) PhtN (CH2) I eH-COOR 2) Pht;N (CHZ)I ehtN(H2 n H2N(CH2)n CH C00H In I 6N R3 6N De même, pour obtenir les acides de formule (IIIA) pour lesquels R3 représente un radical acolyle de 1 à 5 atomes de carbone et pour lesquels mu1,2,3 ou 4, on fait agir l'anion de formule :: COOR dans lequel R a la signification donnée précédemment sur un dérivé obtalimidiaue iodé Ainsi a partir des acides de formule (IIIA) indiqués ci-dessous Acide 4-amino 2-méthyl butanorque Acide 5-amino 3-méthyl pentanolque Acide 5-amino 4-méthyl pentanolque Acide 6-amino 5-méthyl hexanoique On peut préparer les produits de formule (I) suivants Acide 4-//3-mercapto i-oxo 2-(phényl méthyl) propyl/ amino/ 2-méthyl butanoique. Acide 5-//3-mercapto 1-oxo 2-(phényl méthyl) propyli amino/ 3-méthyl pentanolque. Acide 5-//3-mercapto 1-oxo 2-(phényl méthyl) propyl/ amino/ 4-méthyl pentanoTque. Acide 6-//3-mercapto 1-oxo 2-(phényl méthyl) propyl/ amino/ 5-méthyl hexanolque. Les exemples suivants illustrent l'invention sans toutefois la limiter. EXEMPLE 1 : 3-//3-acétylthio 1-oxo 2-(phényl méthyl) propyl/ amino/ propanoate d'éthyle. STADE A : Préparation du chlorure d' d -(acétylthiométhyl) benzene propanoyl e. On dissout 1,21 g d'acide &alpha;-benzyl acrylique (produit décrit et préparé selon C. Mannich et Coll. Chem. Ber. 57B, 1116-8, (1924)) dans 0,8 g d'acide thioacétique, garde une heure à température ambiante sous argon, chauffe une heure à 100'C, élimine l'excès d'acide thioacétique sous pression réduite. A l'huile résiduelle, on ajoute sous agitation sous argon et à O-C, goutte à goutte, 1,8 g de chlorure de thionyle. On garde une nuit à température ambiante, élimine l'excès de chlorure de thionyle sous pression réduite, ajoute 50 cm3 de benzène que l'on élimine ensuite sous pression réduite. Après distillation de l'huile résiduelle, on obtient 1,87g de produit attendu. Eb. = -150'C (10-2 Torr). STADE B : 3-//3-acétylthio 1-oxo 2-(phényl méthyl) propyli amino/ propanoate d'éthyle. On additionne simultanément sous atmosphere inerte, à -10'C, 8,99 g de chlorure d'-(acétylthio méthyl) benzène propanoyle, préparé comme indiqué au stade A précédent et 7,18 g de N-méthyl morpholine dilués dans 100 cm3 de chloroforme, à 5,38 g du chlorhydrate de l'ester éthylique de l'acide 3amino propanolque solubilisé dans 200 cm3 de chloroforme. On laisse une nuit à température ambiante, élimine le chloroforme à 30-C sous pression réduite, reprend le résidu par 200 cm3 d'ether, filtre le précipite, lave le filtrat avec de l'acide chlorhydrique O,1N, puis à l'eau jusqu'à pH neutre, sèche et évapore à sec.On obtient 11 g de produit brut que l'on purifie par chromatographie sur silice en éluant avec du chloroforme. Le produit attendu présente un Rf de 0,19. EXEMPLE 2 : 3-//3-mercapto 1-oxo 2-(phényl méthyl) propyl/ amino/ propanoate de méthyle. On ajoute sous atmosphère inerte, à -10 C et en 1 heure, 300 cm3 de soude 0,1N à 11 g de produit obtenu à l'exemple 1 dissous dans 200 cm3 de méthanol. On laisse revenir la température à OOC, ajoute à -5"C, 300 cm3 d'acide chlorhydrique O,1N, élimine les solvants à 25 C sous pression réduite, extrait avec du chlorure de méthylène, lave avec une solution aqueuse de carbonate acide de sodium à 5 X, sèche la phase organique, concentre à sec sous pression réduite. On recueille 3,2 g de produit que l'on purifie par chromatographie sur silice en éluant avec un mélange chloroforme-acétate d'éthyle (9/1). On obtient 0,95 g de produit attendu fondant à 540C. Analyse C%, H% N% S% Calculé 59,8 6,8 5,0 11,4 Trouvé 59,9 7,0 4,9 11,2 EXEMPLE 3 : Acide 3-/!3-mercapto 1-oxo 2-(phényl méthyl) propyl/ amino/ propanolque. On ajoute sous atmosphère inerte, à -100C et en 1 heure, 43,3 cm3 de soude N à 7,1 g de produit obtenu à l'exemple 1 solubilisé dans 150 cm3 de méthanol. On laisse 2 heures à -10eC, puis 2 h. à température ambiante, acidifie jusqu'à pH=1 à OC avec de l'acide chlorhydrique 0,1N, élimine le méthanol sous pression réduite à 25 C, extrait avec du chlorure de méthylène et concentre à sec la phase organique sous pression réduite. On recueille 4,25 g de produit que l'on purifie par chromatographie sur silice en éluant avec un mélange chloroforme-acétate d'éthyle-acide acétique (90/8/2) et obtient 2,2 g de produit attendu fondant à 88 C. Analyse C% H$ N% S% Calculé 58,4 6,4 5,2 12,0 Trouvé 58,4 6,5 5,2 11,8 EXEMPLE 4 : 4-//3-acétylthio 1-oxo 2-(phényl méthyl) propyl/ amino/ butanoate d'éthyle. On ajoute simultanement, en 45 minutes sous atmosphère inerte et à 10 C, 3,83 g de produit préparé au stade A de l'exemple 1 et 3,02 g de Nméthyl morpholine dans 2,5 g de chlorhydrate de l'ester éthylique de l'acide 4-amino butanoïque dissous dans 300 cm3 de chlorure de méthylène (préparé à partir d'acide 4-amino butanolque selon la méthode de Brenner et Huber Helvetica Chemica Acta Vol XXXVI, fascicule V (1953) N' 136-137 pages 1109 à 1115). On laisse une nuit à température ambulante, élimine les solvants sous pression réduite, reprend le résidu à l'éther, filtre le précipité, lave le filtrat avec de l'acide chlorhydrique 0,1N, puis à l'eau, sèche, concentre à sec sous pression réduite. On purifie 4,7 g de résidu obtenu par chromatographie sur silice en éluant avec du chloroforme et obtient 2,16 g de produit attendu Rf 0,19 (CHCl39-AcOEt1). EXEMPLE 5 : 4-//3-mercapto 1-oxo 2-(phényl méthyl) propyl/ amino/ butanoate d'éthyle. On ajoute, à -5-C en 30 minutes et sous atmosphère inerte, 70,5 cî3 de soude O,îN à 1,976 g de produit obtenu à l'exemple 4 dissous dans 200 cm3 d'éthanol, laisse revenir à température ambiante puis refroidit à OC, ajoute en 30 minutes 70,5 cm3 d'acide chlorhydrique 0,1N. On elimine l'éthanol à 25'C sous pression réduite, extrait avec du chlorure de méthylène, seche et concentre à sec sous pression réduite. On obtient 1,85 g de produit que l'on purifie par chromatographie sur silice en éluant avec du chloroforme et obtient 2,15 g de produit attendu fondant à 70in. Analyse CX HX NX SX Calculé 62,11 7,49 4,53 10,36 Trouvé 62,2 7,6 4,5 10,1 EXEMPLE 6 : 4//3-acétyl thio 1-oxo 2-(phényl méthyl) propyl/ a.ino/ butanoate de méthyle. On opère comme à l'exemple 4 à partir de 5,9 g de chlorhydrate de l'ester methylique de l'acide 4-amino butanolque dissous dans 200 cm3 de chloroforme, de 8,7 cm3 de N-méthyl morpholine et de 9,9 g de produit obtenu au stade A de l'exemple 1 en solution dans 100 cm3 de chloroforme. On obtient 5,9 g de poduit attendu fondant à 80'C. EXEMPLE 7 : Acide 4//3-mercapto 1-oxo 2-(phényl méthyl) propyl/ amino/ butanoTque. On ajoute, sous atmosphère inerte à +5'C, 50 cm3 de soude N à 5,6 g de produit obtenu à l'exemple 6 en solution dans 100 cm3 de méthanol, agite 4 heures la solution à +5'C et 24 heures à température ambiante. On acidifie jusqu'à pH 4-5 par de l'acide chlorhydrique N, élimine le méthanol sous pression réduite, extrait à l'éther éthylique, lave à l'eau jusqu'à neutralité. On extrait les phases éthérées par une solution aqueuse saturée de bicarbonate de sodium. On dégaze cette solution par une nuit de barbotage d'argon, la filtre, acidifie le filtrat, extrait au dichlorométhane, lave, sèche, concentre à sec sous pression réduite.On redissout le produit brut dans du chlorure de méthylène, filtre, concentre à sec sous pression réduite, triture le résidu obtenu dans du pentane, seche sous pression réduite et obtient 2,9 g de produit attendu fondant à 95 C Analyse C% H% N% S% Calculé 59,76 6,80 4,98 11,39 Trouvé 59,8 6,8 4,9 11,4 EXEMPLE 8 : 5-//3-acétyl thio) 1-oxo 2-(phényl méthyl) propyl/ amino/ pentanoate de méthyle. On ajoute simultanément, en 40 minutes, sous atmosphère inerte et à 100C, 8,99 g de produit préparé au stade A de l'exemple 1 et 7,08 g de Nméthyl morpholine dilués dans 100 cm3 de chlorure de méthylène, à 5,8Ï g de chlorhydrate de l'ester méthylique de l'acide 5-amino butanolque dissous dans 300 cm3 de chlorure de méthylène (préparé à partir de l'acide 5-amino pentanoTque selon la méthode de Brenner et Huber Helvetica Chemica Acta Vol XXXVI, fascicule V, 1953, N 136-137 pages 1109-1115). On laisse une nuit à température ambiante, élimine les solvants sous pression réduite, reprend le résidu avec 300 cm3 d'éther, filtre le précipité, lave le filtrat avec de l'acide chlorhydrique O,1N puis à l'eau, sèche, élimine les solvants sous pression réduite. On purifie 11,6 g de résidu obtenu par chromatographie sur silice en éluant par un mélange hexane-acétate d'éthyle (70/30) et obtient 8,1 g de produit attendu Rf 0,11 éluant CHCl3. EXEMPLE 9 : Acide 5-//3-mercapto 1-oxo 2-(phényl méthyl) propyl/ amino/ pentanoTque. On ajoute, à -100C en 30 minutes sous atmosphère inerte, 34,8 cm3 de soude N, dans 6,1 g de produit obtenu à l'exemple 8 dissous dans 200 cm3 de méthanol. On laisse 2 heures à -10eC, puis à 20 C, acidifie avec de l'acide chlorhydrique jusqu'à pH=1. On élimine les solvants sous pression reduite, extrait au chlorure de méthylène, sèche, concentre à sec. On purifie 1,68 g de résidu obtenu par chromatographie sur silice en éluant avec un mélange chloroforme-acétate d'éthyle- & ide acétique (90/10/1) et obtient 1,45 g de produit attendu fondant à 80C. Analyse CS H% N% S% Cal culé 60,99 7,17 4,74 10,85 Trouve 61,1 7,4 4,6 10,6 EXEMPLE 10 : 5-//3-mercapto 1-oxo 2-(phényl méthyl) propyl/ amino/ pentanoate de méthyle. On ajoute à -5-C/-10-C, sous atmosphère inerte, 58 cm3 de soude 0,1N à 2 g de produit obtenu à l'exemple 8 dissous dans 150 cm3 de méthanol. On laisse 2h. à -50C > acidifie avec de l'acide chlorhydrique 0,1N, élimine le méthanol sous pression réduite à 30C, extrait au chlorure de méthylène, sèche, concentre à sec. On purifie le produit obtenu par chromatographie sur silice en éluant par un melange chloroforme-acétate d'éthyle (95/5) et obtient 1,69 g de produit attendu (f#50 C). Analyse C% H% N% S% Calculé 62,11 7,5 4,5 10,36 Trouvé 62,2 7,6 4,5 10,5 EXEMPLE 11 : Compositions pharmaceutiques. On a préparé des comprimés répondant à la formule - compose de l'exemple 3...................................... 3 200 mg - excipient q. s. pour un comprimé terminé à.................. à 350 mg (Détail de l'excipient : lactose, amidon, stéarate de magnésium, talc). EXEMPLE 12 On a préparé des comprimés répondant à la formule - composé de l'exemple 7...................................... 7 200 mg - excipient q. s. pour un comprimé terminé à.................. à 350 mg (Détail de l'excipient : lactose, amidon, stéarate de magnésium, talc). ETUDE BIOLOGIQUE 1) Etude de la toxicité aigue. On a évalué les doses non létales DLo de différents composés après admtnistration par voie orale chez la souris. On appelle DLO, la dose maximale ne provoquant aucune mortalité en 8 jours. Les résultats obtenus sont les suivants Produits de l'exemple DLo en mg/kg 2 > 400 3 B400 5 400 7 g 400 9 #400 10 A400 2) Dosage de l'enkêphalinase et determination de l'effet des produits. L'activité de l'enképhalinase est déterminée dans une fraction membranaire de striatum de rat. Les striatum sont prélevés sur glace et homogénéisés en tampon TRIS 0.05M pH 7,4 (20 fois le volume). Après une première centrifugation à 1000 g, la fraction particulaire est obtenue à la suite de deux centrifugations de 10 minutes à 20 000 g. Le culot est ensuite resuspendu en tampon TRIS et conservé à 40C. Le dosage des protéines est effectué selon la méthode au bleu de Comassie. Après une préincubation de 15 minutes à 25 C, une aliquote de protéines est incubée pendant 15 minutes à 250C en présence de 20 nanomoles de leucine-enképhaline tritiée (sur le premier acide aminé) préalablement purifiée d'1 mM de purotycine et du produit à tester en tampon TRIS. La réaction d'hydrolyse est stoppée par addition d'acide chlorhydrique 0,2N et l'incubat subit une déprotéinisation par la chaleur (15 minutes à 95oC). Dans ces conditions, la cinétique de la réaction est linéaire. Les métabolites tritiés obtenus par hydrolyse sont séparés de l'enképhaline par chromatographie sur colonne de porapak Q : ils sont élués en tampon TRIS tandis que l'enképhaline est retenue sur la colonne et recueillie ensuite en phase éthanolique. L'activité des différents produits est exprimée en concentrations inhibitrices 50 X. Résultats : Produit de laexemple Inhibition de l'enképhalinase CI 50 en 10-5 M 3 1 t 0,04 3) Test d'analgésie sur tissus inflammés. (variante de la technique de Randall et Selitto ). La technique consiste à rechercher l'effet analgésique chez le rat dont le seuil de sensibilité à la douleur a été abaissé par une inflammation. Cette dernière est obtenue par injection de carraghénine (0,25 mg/patte) sous l'aponévrose plantaire d'une patte postérieure. La douleur est provoquée par pression mécanique appliquée sur la face dorsale de la patte et augmentée régulièrement au moyen d'un analgésiaetre. Le seuil douloureux est apprécié par la pression nécessaire pour déclencher une réaction de retrait de la patte ou une réaction de vocalisation de l'animal. Les produits sont administrés par voie buccale 4 heures après l'injection de l'irritant et les mesures du seuil douloureux sont effectuées immédiatement avant l'injection de l'irritant puis une heure après le traitement (Randall, L.O. and Selitto, J.J. MA method for measurement of analgesic on lnflammed tissue. Arch. Int. Pharmacodyn., 1957, 111, 409. Résultats Produit de l'exemple DA en mg/kg/per os 3 44 20 7 50 REVENDICATIONS 1) Les composés de formule (I) dans laquelle R1 représente un atome d'hydrogène ou un radical R'1 étant un radical alcoyle renfermant de 1 à 5 atomes de carbone ou un radical aryle éventuellement substitué par un radical hydroxy, un radical alcoyle renfermant de 1 à 5 atomes de carbone, un radical alcoxy renfermant de 1 à 5 atomes de carbone, le radical nitro ou un atome d'halogène, R2 représente un atome d'hydrogène ou un radical alcoyle renfermant de 1 à 5 atomes de carbone, à l'exception du radical isobutyle, un radical aryle ou arylacoyle, éventuellement susbtitué par un radical alcoyle renfermant de 1 à 5 atomes de carbone, un radical alcoxy renfermant de 1 à 5 atomes de carbone, un radical hydroxyle, un atome d'halogène, un radical trifluorométhyfe, n représente un nombre entier pouvant varier de 1 à 4, R3 représente un atome d'hydrogène ou un radical alcoyle renfermant de 1 à 5 atomes de carbone, m représente un nombre entier pouvant varier de O à 4, R4 représente un atome d'hydrogène ou un radical alcoyle renfermant de 1 à 5 atomes de carbone, R4 n'étant toutefois pas un atome d'hydrogène, lorsque R1 représente un radical ainsi que leurs sels avec les bases. 2) Les composés de formule (I), tels que définis à la revendication 1, pour lesquels R1 est un atome d'hydrogène, ainsi que leurs sels avec les bases. 3) Les composé de formule (I), tels que définis à la revendication 1, pour lesquels R1 est un radical acétyle, ainsi que leurs sels avec les bases. 4) Les composés de formule (I), tels que définis à l'une quelconque des revendications 1 à 3, pour lesquels R2 est un radical benzyle ainsi que leurs sels avec les bases. 5) Les composés de formule (I), tel que définis à l'une quelconque des revendications 1 à 4, pour lesquels R3 représente un atome d'hydrogène et pour lesquels n et m représentent des nombres entiers pouvant varier respectivement de 1 à 4 et de O à 4, la somme de ces deux nombres entiers pouvant varier de 1 à 4, ainsi que leurs sels avec les bases. 6) L'acide 3-//3-mercapto 1-oxo 2-(phênyl méthyl) propyl/ amino/ propanolque ainsi que ses sels avec les bases. 7) L'acide 4-//3-mercapto 1-oxo 2.(phényl mêthyl) propyl/ amino/ butanoTque ainsi que ses sels avec les bases. 8) Procédé de préparation des produits de formule (I), tels que définis à la revendication 1, caractérisé en ce que l'on soumet un acide de formule (Il) dans laquelle R)1 er R2 ont les significations déjà indiquées, ou un dérivé fonctionnel de cet acide, à l'action d'un produit de formule (III):: dans laquelle n, m et R3 ont les significations indiquées précédemment et dans laquelle R4 est un radical alcoyle renfermant de 1 à 5 atomes de carbone, pour obtenir un produit de formule (I) dans laquelle et R4 est un radical alcoyle renfermant de 1 à 5 atomes de carbone et dans laquelle n, m, R2 et R3 ont les significations précédentes, produits de formule (I) que l'on saponifie, si désiré, pour obtenir un produit de formule (I) dans laquelle R1 représente un atome d'hydrogène et R4 représente un atome d'hydrogène ou un radical alcoyle renfermant de 1 à 5 atomes de carbone et dans laquelle n, m, R2 et R3 ont les significations précédentes, produit de formule (I), quel'on soumet, si désiré, à l'action d'une base pour en former le sel. 9) A titre de médicaments, les produits de formule (I), tels que définis à l'une quelconque des revendications 1 à 5, ainsi que leurs sels d'addition avec les bases pharmaceutiquement acceptables. 10) A titre de médicaments, les produits tels que définis aux revendications 6 et 7. 11) Les compositions pharmaceutiques contenant à titre de principe actif, l'un au moins des médicaments tels que définis aux revendications 9 ou 10.