Brevet FR2540117A1 — publié le 19840803

VINYLCEPHALOSPORINES SUBSTITUEES L'invention concerne des dérivés de céphalosporines possédant les groupes 3-((Z)-1-propényl) et 7-phénylglycylamido, ces derniers pouvant être substitués et elle concerne des procédés de traitement d'infection bactérienne utilisant ces composés. Les dérivés de 3-formylceph-3-émnie utilisés comme intermédiaire dans un procédé de préparation des vinylcéphalosporines substituées en position 3 de la présente invention peuvent se préparer par oxydation des 3hydroxyméthylceph-3-èmes correspondants obtenus par hydrolyse enzymatique des céphalosporines correspondantes Ce procédé est décrit dans l'art anterieur par Chamberlin, brevet des Etats Unis d'Amérique n 3 351 596 ( 7 novembre 1976) qui décrit entre autres les dérivés II ez III. C O l : Chamberlin (loc cit) décrit des dérivés sur le-groupe 3-CHO obtenu avec des réactifs carbonylés tels que la semicarbazide et l'hydroxyla- mine, mais il n'y a aucune description d'une alkylation quelconque d'un carbone du 3-CHO. Les sulfoxydes correspondants sont plus stables et ils peuvent se préparer avec un meilleur rendement (Webber, brevet britannique n 1 341 712 publié le 23 décembre 1973). La première description de céphalosporines substituées par un radical alkényle en position 3 a été faite par Clark et coll dans le brevet britannique 1 342 241 publié le 3 janvier 1974 (correspondant au brevet des Etats Unis d'Amérique n 3 769 277 et 3 994 884 publiés respectivement le 30 octobre 1973 et le 30 novembre 1976) Les composés IV et V sont décrits aux pages 25 et 29 du brevet britannique. IVSV Ces composés se préparent en faisant réagir la 3-triphénylphosphonium- méthyl céphalosporine avec le formaldéhyde ou l'acétaldéhyde Le procédé inverse consistant à faire réagir un dérivé de phosphoranylidine de formule R 3 P=CR 3 R 4 avec une 3-CH O cphalosporine est également décrit dans ce brevet à la page 5 Il est indiqué dans le brevet des Etats Unis d'Amérique n 4 107 431 que le composé IV est absorbé lorsqu'on l'administre par voie orale. Une autre description antérieure de composés de ce type a été faite par Webber et Coll, J Med Chem 18 ( 10) 986-992, ( 1975) et dans le brevet des Etats Unis d'Amérique n 4 065 620 du 27 décembre 1977 qui décrit dans ces colonnes 3, 4 et 5 le genre auquel appartiennent les présents composés Les composés spécifiques décrits sont représentés par la formule VI. /CHCONH $ C 2 (s D'autres variantes de ce type sont décrites dans le brevet des Etats Unis d'Amérique n 4 094 978 du 13 juin 1978 et 4 112 087 du septembre 1978 o sont décrits les composés VII et VIII. CHCHCONH S, 1 OS,9 IC O * 2 H VII D.$ 4,09,97 B Cl 4 2 Or I v III O C 02 H (b-a ') D S 4, 2,D 07 C:I 31 D'autres céphalosporines substituées par un radical alkényle en position 3 sont décrites dans les brevets publiés suivants: Brevet des Etats Unis d'Amérique n 3 830 700, O'Callaghan et Coll. ( 20 avril 1974), composé analogue de la 3-(nitrostyryl)céphalexine Brevet des Etats Unis d'Amérique n 3 983 113, Beeby ( 28 septembre 1976) Brevet des Etats Unis d'Amérique n 4 049 806, Beeby ( 20 septembre 1977) Brevet des Etats Unis d'Amérique n 4 139 618, Beeby ( 12 février 1979) 3(hétérocyclothio)propényl-céphalosporines. Brevet des Etats Unis d'Amérique n 4 147 863 Miyadera et Coll. ( 3 avril 1979), 3-( 1-méthyl-5-tétrazolyl)vinyl-céphalosporines. Demande de brevet allemand publié 3 019 445 (décembre 1980) 3(sulfonyloxy)vinyl-céphalosporines. Brevet francais 2 460 302 ( 23 janvier 1981), dérivés analogues de la 3-(diméthylamino)vinyl-céphalexine. Européen n 30630 ( 24 juin 1981), acide 7-{( 3-méthanesulfonamido- phényl)-a-aminoacétamido}-3-vinylceph-3-éme-4-carboxylique. Brevet des Etats Unis d'Amérique n 4 255 423, Beattie et Coll. ( 10 mars 1981) Brevet des Etats Unis d'Amérique n 4 390 693, Beattie et Coll. ( 28 juin 1983) Acides 7-( 2-thiényl)acétamido-3-( 3-acétoxy-1-propényl) et -3-(hétérocyclovinyl)ceph-3-éme-4-carboxyliques et dérivés analogues 7 a-méthoxy. Les principales céphalosporines actives par voie orale disponibles dans le commerce, l'utilisation à laquelle sont destinés les présents composés, sont la céphaléxine, céphadroxyle, céphradine, et le cépha- chlore Ces substances ont les formules IX, X, XI et XII. Ri HCS O N 3 N ci Coo C 2 H C 02 R-H cepha 1 exine l X cénhachlore XI R=C cefadroxi 1 e X Nr E 2 N / 3 O p L radine 71 Ces composés font l'objet des brevets suivants: Céphalexine U S 3 507 861 ( 21 avril 1970) Céphadroxyle U S 3 489 752 ( 13 janvier 1970) (Re 29,164) Céphachlore U S 3 925 372 ( 9 décembre 1975) Céphradine U S 3 485 819 ( 23 décembre 1969) Les structures correspondantes sont celles de la 3-chlorocépha- droxyle et de la 3-hydroxycéphadroxyle qui ont été respectivement décrites dans le brevet U S 3 489 751 du 13 janvier 1970 et le brevet britannique 1 472 174 (publié le 4 mai 1977). La présente invention procure les composés de formule XIII et XIV. (o) R 2 CHCONE Rf SE Pl 1 N Hp CEH CSCE 3 R C 02 P 2 Formule XIII (o) () R E C CHONH E R 2 i NHP' A P CH=C:: k X C O 2 p Formule XIV Dans ces formules: N est un entier égal à 0 ou 1 R 1 représente un hydrogène, O P 3, un alkoxy inférieur ou un halogène comprenant chlore, brome, fluor et iode; p 1, p 2 et P 3 sont des atomes d'hydrogène ou des groupes protecteurs classiques utilisés dans la chimie de la céphalosporine avec res- pectivement des groupes amino, carboxy et hydroxy; R 2 représente un hydrogène, O P 3 ou un alkoxy inférieur; Alk représente un groupe alkylidène ou alkylène possédant de 1 à 4 atomes de carbone; et X représente un chlore, un brome ou l'iode Ces dérivés dans lesquels N est égal à 1, et p 1, p 2 et P 3 repré- sentent des groupes protecteurs classiques sont des intermédiaires de préparation des produits finaux biologiquement actifs de la présente invention qui sont représentés par la formule XIII lorsque N est égal à O et Pl P 2, et P 3 représentent de l'hydrogène Ces produits sont intéressants en tant qu'antibiotiques à base de céphalosporine efficaces par voie orale possédant une activité forte contre les bactéries gram- positives et un spectre d'activité amélioré contre les bactéries gram- négatives, diverses bactéries auxotrophes, et des anaérobies correspon- dantes à la céphaléxine, cephadroxyle, céphachlore et céphradine Elle donne des concentrations prolongées d'antibiotiques dans le flux sanguin à la suite de l'administration par voie orale et elles conviennent pour l'administration aux êtres humains sur une base mono ou bi-quotidienne En tant que telles, elles sont administrées en dose allant de mg à 5 000 mg/j selon la taille du patient et l'état de la maladie. On peut les administrer par voie parentérale avec des dosages sembla- bles. Les produits de formule XIV sont intéressants principalement en tant qu'intermédiaires Cependant, ceux dans lesquels N est égal à 0, et p p 2 et P 3 représentent un hydrogène, possèdent une activité antibac- térienne et ils sont également utiles comme antibiotiques. Etant donné ces propriétés, les composés de formule XIII et de formule XIV dans lesquels N est égal à O et P 1, P 2 et P 3 représentent un hydrogène, sont utiles au traitement d'infection bactérienne causée par des organismes sensibles chez les mammifères A cette fin, on les administre par voie orale ou parentale en doses non toxiques ayant une efficacité antibactérienne en tant que tels ou sous la forme de l'un de leurs sels d'addition d'acides pharmaceutiquement acceptables, de sels de métal ou d'amine pharmaceutiquement acceptables ou sous la forme d'ester pharmaceutiquement acceptable. Les sels d'addition d'acides pharmaceutiquement acceptables sont ceux dans lesquels l'anion ne contribue pas de façon significative à la toxicité du sel et les sels qui sont compatibles avec les véhicules pharmaceutiques courants et sont adaptés à l'administration par voie orale ou parentérale Ils comprennent les sels dé formules XIII et XIV dans lesquels N = O et Pl représente un hydrogène avec des acides minéraux tels que l'acide chlorhydrique, l'acide bromhydrique, l'acide phosphorique et l'acide sulfurique, avec des acides carboxyliques organiques ou des acides sulfoniques organiques tels que l'acide acé- tique, l'acide citrique, l'acide maléique, l'acide succinique, l'acide benzo-ique, l'acide tartrique, l'acide fumarique, l'acide mandélique, 40117 l'acide ascorbique, l'acide malique, l'acide méthanesulfonique, l'acide paratoluènesulfonique et d'autres acides connus et utilisés dans la technique de la pénicilline et de la céphalosporine La préparation de ces sels est effectuée à l'aide de techniques classiques comprenant la réaction de l'une des substances de formules XIII ou XIV dans lesquelles n est égal à O et p 1 représente un hydrogène avec l'acide en quantité sensiblement équivalente. De même, les sels de métal et d'amide pharmaceutiquement accepta- bles sont ceux des composés de formules XIII et XIV dans lesquelles n est égal à O et p 2 représente un hydrogène, qui sont stables dans les conditions ambiantes et dans lesquels le cation ne contribue pas de façon significative à la toxicité ou à l'activité biologique du sel Des sels de métaux convenables comprennent les sels de sodium, potassium, baryum, zinc et aluminium On préfère le sels de sodium ou de potassium. Les sels d'amine préparés à partir d'amines utilisés par exemple avec la benzyl pénicilline qui sont capables de former des sels stables avec le groupe acide carboxylique comprennent des trialkylamines tels que triéthylamine, procaine, dibenzylamine, N-benzyl-$-phénéthylamine, 1éphénamine, N,N'-dibenzyléthylènediamine,déhydroabiéthylamine, N-éthylpipéridine, benzylamine, et dicyclohexylamine. Les esters pharmaceutiquement acceptables comprennent ceux qui sont actifs en soi ou qui servent comme pro-médicaments en étant hydro- lysés dans le corps pour procurer l'antibiodique en soi Des esters de ce dernier type pouvant convenir sont les phénacyl acétoxyméthyl, pivaloyloxyméthyl, a-acétoxyéthyl, a-acétoxybenzyl, ct-pivaloyloxyèthyl, 3-phtalidyl, 5-indanyl, méthoxyméthyl benzoyloxyméthyl, c-éthylbutyryl- oxyméthyl, propionyloxyméthyl, valéryloxyméthyl, isobutyloxyméthyl, glycyloxyméthyl et d'autres connus dans les techniques de la pénicilline et de la céphalosporine. Les composés de formules XIII et XIV dans lesquelles N est égal à 0 et p 1, p 2 et P 3 représentent des atomes d'hydrogène et leurs sels sont tels que définis ci-dessus, peuvent être formulés pour utilisation par voie orale ou parentérale de façon classique en utilisant des véhicules et des excipients pharmaceutiques connus et ils peuvent présentés sous forme de dose unitaire ou sous forme de container de doses multiples. Les compositions peuvent se présenter sous forme de tablettes, capsules, solutions, suspensions ou émulsions Ces composés peuvent aussi être formulés sous la forme de suppositoires en utilisant les bases de suppositoire classique telles que le beurre de cacao ou d'autres matiè- res grasses Les composés peuvent, si on le souhaite, être administrés en combinaison avec d'autres antibiotiques comprenant des céphalospo- rines, pénillicines et aminoglycosides. Le tableau 1 contient un résumé des structures des produits décrits dans les modes opératoires 1 à 43 La plupart de ces composés sont des 7 e-(Dphénylglycylamido)céphalosporines dans lesquels le radical 1-propène-1-yl est en position 3 L'atome de carbone terminal du substituant propényle de quelques uns de ceux-ci porte un substituant tel qu'un groupe alkyle (méthyle), halogène (chlore ou iode), un groupe aryle (phényle), un groupe hétérocyclothio ( 1,2,3-triazol-5-ylthio) ou un groupe alkoxy (méthoxy) Le groupe phénylglycylamido peut être non substitué ou mono ou disubstitué par un hydroxy, alkoxy ou un halogène. TABLEAU 1 Produit décrit dans les modes opératoires 1 à 43 R ECONHE S A NE 3 R 1 NH 2 N CH=CHR Composé no 9 (BMY-28100) 13 (BBS-1058) 11 (BBS-1064) 24 (BBS-1065) 26 (BBS-1066) 8 (BBS-1067) (BBS-1076) 21 (BBS-1091) 17 (BBS-1092) 32 (BMY-28060) 37 (BMY-28068) 42 (BMY-28097) R 1 H H H H H H H H H C 1 HO CH 30 R 2 R 3 (configuration) OH -CH 3 (Z) OH -C 2 H 5 (z) OH -H - H -CH 3 (Z) H -CH 2 C 1(Z) OH -CH 3 (E) OH -CH 2 C 6 H 5 (Z) OH OH -CH 2-S fi,N- OH -CH 20 CH 3 OH -CH 3 OH -CH 3 OH -CH 3 (Z) (Z) (Z) (z) 9 ' Le tableau 2 procure un résumé de l'activité antibactérienne in vitro des substances décrites dans la présente demande Les concentra- tions inhibitrices minimum déterminées par la technique de dilution à l'agar-agar pour trois groupes d'organismes désignés Gp-Ia, GP-Ib et GnIa sont indiquées Chacun de ces groupes d'organismes est constitué de cinq souches individuelles de micro-organismes qui sont identifiées dans une note de base du tableau Les organismes Gp-Ia sont des staphylocoques gram+ sensibles à la pénicilline Les organismes Gp-Ib sont des staphylocoques gram+ qui sont résistants à la pénilline et produisent de la pénicillinase Les organismes Gn-Ia sont des bactéries gram qui sont sensibles à l'ampicilline et à la céphalothine Les présentes substances ont généralement une activité faible vis-à-vis des bactéries gram résistantes à l'ampicilline et à la céphalothine On peut tirer les conclusions suivantes du tableau 2 en ce qui concerne l'activité antibactérienne in vitro de ces composés. Tous ces composés présentent une bonne activité contre les staphy- locoques sensibles à la pénicilline (Gp-Ia) Ils sont en général moins actifs contre les staphylocoques résistants à la pénicilline (Gp-Ib) d'un facteur de trois ou plus de trois Dans chaque cas, cependant, les composés sont plusieurs fois plus actifs que la céphaléxine et la céphadroxyle. Seuls ceux de' ces composés possédant le groupe cis(Z)- propényle non substitué en position 3 possèdent une bonne activité contre les bactéries gram (Gn-Ia) Se référer aux composés n' 9, 24, 32 et 42 Le composé trans(E)-propényle, composé N O 8, est moins actif contre les bactéries gram d'un facteur de 8 par rapport au composé cis-propényl correspondant, composé N O 9 De même, la substitution du groupe méthyle terminal sur le substituant propényle en position 3 semble conduire à une réduction de l'activité gram- Se référer aux composés N O 13, 15, 21 et 17 Ceci est également vrai du composé vinylique N O 11 Ces composés sont néanmoins de puissants agents anti-bactériens sensiblement équiva- lents à la céphaléxine et au céphadroxyle La substitution sur le cycle n'est en aucune façon préjudiciable à l'activité anti-bactérienne A titre de comparaison, voir les composés N O 9, 24; 32 et 42 Il semble que le composé N O 37 soit une exception à chacune des conclusions précédentes mais en fait, c'est une substance hautement active à la fois vis-à-vis des bactéries gram+ et gram contre le montre le tableau 3. TABLEAU 2 Technique de dilution à l'agar-agar (Agar-agar Mueller-Hinton) Concentration inhibitrice minimum (mcg/ml) Gp Ia 3 Gp Ib 3 Gn Ia Composé N 1 2 1 2 1 9 (BMY-28100) 0,23 0,35 0,92 0,8 0,8 O 13 (BBS-1058) 11 (BBS-1064) 24 (BBS-1065) 8 (BBS-1067) (BBS-1076) 21 (BBS-1091) 17 (BBS-1092) 32 (BMY-28060) 37 (BMY-28068) 42 (BMY-28097) céphaléxine céphadroxyle 0,40 0,40 0,23 0,26 0,20 0,61 0,53 0,354 1,2 1,2 0,3 0,13 6,30 0,70 1,10 1,4 1,2 0,92 0,9 1,4 0,7 2,7 2,1 1,24 4,1 3,6 4,1 3,6 0,8 6,3 > 50 2,7 2,7 0,53 7,2 0,534 3,6 6,2 4,1 8,3 0,8 1,1 6,3 4,1 8,3 1 les colonnes 1 et 2 indiquent des essais séparés. 2 les colonnes 1 et 2 indiquent des essais séparés. 3 moyenne de cinq organismes dans chaque groupe. Gp-Ia staphylocoques gram+, sensibles à la pénicilline; aucune production de pénicillinase. S aureus Smith A 9537 S aureus A 9497 S aureus Terajima S aureus A 9534 S aureus A 9601 Gp-Ib staphylocoques gram+, résistants à la pénicilline; producteurs de pénicillinase. S aureus 193 S aureus BX-1633-2 A 9606 S aureus A 15092 S aureus Russell S aureus A 9602 Gn-la bactéries gram-; sensibles à l'ampicilline et à la céphalothine. E coli Juhl A 15119 C E coli A 9660 K pneumoniae Dll P mirabilis A 9554 P mirabilis A 9900 4 ne fait pas partie de l'essai 1, testé séparément. Le tableau 3 contient des données comparatives pour l'activité antibactérienne in vitro contre les mêmes organismes que dans le tableau 2 en employant deux milieux de culture bactériologiques différents. L'agar-agar Mueller-Hinton est le milieu standard employé dans les tests auxquels on se réfère dans le tableau 2 Le tableau 3 contient une comparaison des concentrations inhibitrices minimum de trois des compo- sés essayés, déterminés tout d'abord dans le milieu Mueller-Hinton et ensuite dans l'agar-agar comme nutrient Le composé n 9 qui contient une substitution par un hydroxy en position 4 dans le cycle du phényle et le composé n 42 qui contient une substitution par un 3-méthoxy-4- hydroxy dans le cycle du phényl ne reflètent qu'un effet modéré du milieu Ceci signifie que les différences dans le MIC sont inférieures à trois fois Le composé n 37, composé substitué par un 3,4-dihydroxy- phényle reflète des différences d'activités entre les deux milieux de 6 à 12 fois, les concentrations inhibitrices minimum-dans l'agar-agar comme nutrient étant de beaucoup inférieures à celles déterminées dans l'agaragar de Mueller-H Flinton Par conséquent, on en conclut que le composé n 37 est comparable dans son effet antibactérien aux autres céphalosporines possédant le groupe cis-propényle en position 3 auquel on se réfère dans le tableau 2 Ce phénomène selon lequel un antibio- tique manifeste une activité plus importante dans un type de milieu nutritif que dans un autre a été décrit et étudié auparavant Confère T. A Pursiano et Coll, Antimicrobial Agents and Chemotherapy, Vol 3, n 1, pp 33-39 ( 1973). TABLEAU 3 Comparaison du milieu de test Technique de dilution de l'agar-agar Concentration inhibitrice minimum (mcg/ml) Composé n Gp Ia 2Gp Ib 2 Gn Ia 2 9 (BMY-28100) A 1 0,23 0,92 0,70 B 0,17 0,35 0,70 37 (BMY-28068) A 4,8 6,3 5,5 B 0,40 0,61 0,92 Composé n Gp Ia 2 Gp Ib 2 Gn Ia 2 42 (BMY-28097) A 0,35 1,2 0,53 B 0,23 0,40 0,40 1 A agar-agar Mueller-Hinton B agar-agar nutrient 2 valeur moyenne pour les mêmes groupes d'organismes que dans le tableau 2. Les corrélations d'activité de structure que l'on déduit des études in vitro qui précèdent sont supportées par les résultats des études in vivo sur les souris Le tableau 4 donne une liste des doses protectrices pour les souris infectees par un inoculum lethal de bacté- ries Deux bactéries différentes sont employées dans les études, l'une étant un organisme gram+ et l'autre un organisme gram- La dose protec- trice (PD 50) est celle qui donne une survie de 50 % après cinq jours lorsqu'on l'administre à un groupe de souris infectées Normalement les souris infectées non traitees meurent dans les trois jours suivant l'injection de l'inoculum lethal. TABLEAU 4 Dose protectrice pour des souris infectées par un inoculum 1 lethal Traitement par voie orale Composé n S aureus Smith E coli Juhl 9 (BMY-28100) 0,14 ( 0,31)2 1,2 ( 8,4)2 13 (BBS-1058) 0,32 ( 0,31) 3,0 ( 8,4) 11 (BBS-1064) 0,18 ( 0,31) 3,8 ( 8,4) 23 (BBS-1065) 0,18 ( 0,27) 1,5 ( 8,2) 8 (BBS-1067) 0,20 ( 0,31) 7,5 ( 8,2) 32 (BMY-28060) 0,17 ( 0,22) 3,04 ( 8,4) 37 (BMY-28068) 0,13 ( 0,27) 0,44 ( 8,2) 42 (BMY-28097) 0,093 1 Dose en mg/kg empêchant la mort pendant cinq jours pour 50 % des animaux dans des groupes de cinq souris traitées avec diverses doses du composé à essayer le jour de l'infection; déterminée par interpolation de la courbe dose/réponse; les animaux non traités meurent dans les trois jours. 2 les valeurs entre parenthèses sont celles de la céphalexine dans le même essai. 3 dans cet essai, on obtient une valeur de 0,16 mg/kg pour le BMY-28100; les valeurs de contrôle pour la cephaléxine ou le céphadroxyle ne sont pas disponibles. Les données du tableau 4 sont tirées de plusieurs expériences différentes Dans ces expériences, on utilise la céphaléxine comme traitement de contrôle La valeur PD 50 déterminée par la céphaléxine dans la même expérience est donnée entre parenthèses à côté des valeurs PD 50 des composés essayés Il est évident que chacune des céphalospori- nes possède une bonne activité contre l'infection par le staphylocoque aureus graim+ et que les composés portant le groupe cis propényl en position 3, les composés 9, 24 et 37 sont plus actifs contre l'infection par le gram-. Le tableau 5 contient des données comparatives de niveaux sanguins pour des souris traitées par voies orale et intramusculaire avec les composés à essayer énumérés dans le tableau 1 Ce tableau reflète une absorption par voie orale uniformément bonne sauf pour le composé n 21 portant un substituant hétérocyclothio sur le groupe 3-propényle Le composé n 37 manifeste des niveaux sanguins exceptionnellement élevés dans la souris à la suite de l'administration par voie orale Il appa- rait que ce composé s'est métabolisé dans le rat pour donner le composé n 42 Confère le mode opératoire 43 Le composé n 37 est le composé 3,4-dihydroxyphénol et le composé n 42 est le composé 3-méthoxy-4- hydroxyphényle Il apparaît que ce dernier a une activité élevée in vitro et in vivo. Le tableau 6 contient des données supplémentaires in vivo pour le composé n 9 vis-à-vis de quatre autres organismes par comparaison avec la céphaléxine, le céphachlore et le céphadroxyle Les tableaux 7 et 8 contiennent des données comparatives in vitro pour le composé 9 contre la céphaléxine, le céphadroxyle et le céphachlore à l'égard d'un cer- tains nombres de streptocoques Neisseria, Haemophilis et divers organis- mes anaérobies. Dans des expériences de récupérations urinaires du rat, la récupé- ration en 24 heures du composé n 9 de l'urine de rats traitée par voie orale est comparable à celle de la céphaléxine et du céphadroxyle et supérieure à celle du céphachlore Les études de stabilité comparant le composé n 9 avec la céphaléxine et le céphachlore dans une solution utilisant un tampon phosphaté à p H 6,5 et à p H 7; 0, du sérum humain (p H 6,8), du sérum de cheval (p H 7,6), et du sérum de veau (p H 8,2) comme véhicule a révélé que le composé n 9 est remarquablement plus stable que le céphachlore et qu'il est comparable à la céphaléxine. Composé no Essai 1 9 (BMY-28100) (lot 2) 13 (BBS-1058) il (BBS-1064) 24 (BBS-1065) 8 (BBS-1067) (BBS-1076) 21 (BBS-1091) 17 (BBS-1092) Cêphalexine Céphadroxyl e Essai 2 9 (BMY-28100) *24 (BBS-1065) 32 (BMY-28060) 37 (BIIY-28068) Cêphadroxyl e c (MC Dose: 100 mg/kg, p o. 1 max T 1/2 AUC 56 1,9 106 4,4 1,9 1,2 1,1 1,4 2,7 3,2 1,7 1,4 2,3 1,3 Ili 1,7 2,5 1,5 TABLEAU 5 Niveaux sanguins de la souris mg/kg, P O. Cmax T 1/2 AUC* 234 (mcg/ml) (hl (mcg h/ml) i 1 q 13 2,0 i 11 1,4 7,8 1,3 1,3 12 2,7 1,7 2,6 18 1,6 il 1,3 12 1,2 9,5 7,9 1,7 0,69 1,7 ,1 1,6 cmax (mcg/,l) mg/kg, i m. T 1/2 AUC* &li (m Cg h/ml) 28 0,88 6,6 * Moyenne de trois essais. 0,74 0,37 0,50 0,63 0,99 0,54 0,960 0,40 0,33 21 0,48 16 0,58 21 0,48 86 1,2 0,37 9,6 k-* M t A - Cm) -.à -.b Y Activité in vitro contre Orgjani sme S pyogenes S-23 il Dick I A 9604 A 20065 A 15040 moyenne géométrique 9 (BMY-28100) (lot 2)- 0,05 0,05 0,05 0,05 0,05 0,050 TABLEAU 7 les streptocoque (BES-1076) 0,2 0,2 0,2 0,2 0,2 0,20 Neisseria et Haemophilis MIC (Mc g/ml) Céphalexine Céphadroxyl e 0,8 0,8 0,8 0,8 0,8 0,80 0,8 0,8 0,8 0,8 0,8 0, 80 Céphachilore 0,2 0,2 0,2 0,2 0,2 0,2 S pneumoniae type HI iltype I iltype III t' i A 9505 A 15069 moyenne géométrique N gonorrheae A 15112 A 20142 A 20143 A 20154 A 20155 moyenne géomét rique 0,2 0,2 0,2 0,2 0,20 0,8 0,8 0,8 0,8 0,8 0,80 F 1- Ln 0,2 0,2 é 0,2 0,4 0,2 0,23 > 100 > 100 > 100 > 100 > 100 > 100 3,1 3,1 3,1 3,1 3,1 3,1 6,3 6,3 6,3 6,3 6,3 6,3 1,6 1,6 1,6 1,6 1,6 1,6 6,3 6,3 6, 3 6,3 6,3 6,3 1,6 1,6 1,6 0,8 1,3 0,8 0,8 0,8 0,8 0,8 CD > -l., Organisme N merningitidis il A 20048 A 20049 A 21487 A 21496 A 21497 moyenne géométrique 9 (BMY-28100) (lot 2) 0,8 0,8 0,8 0,8 0,80 Tableau 7 (BBS-1076) > 100 > 100 > 100 O > 100 > 100 Cêphal exi ne 6,3 6,3 6,3 6,3 6,3 Céphadroxyl e 6,3 6,3 6,3 6, 3 6,3 Cêphachl ore 0,8 0,8, 0,8 0,8 0,8 0,8 H influenzae A 9729 Il A 20177 Il A 20193 il A ú 21523 il A 9833 il A 22483 Il A 22482 moyenne géométrique H influenzae a' il S pyogenes S pne'umoniae A 22157 A 22481 A 22491 A 20201 A 20759 > 100 > 100 > 100 > 100 > 100 > 100 > 100 > 100 0,8 0,8 0,8 0,8 0,8 0,8 0, 8 0,80 1,6 1,6 1,6 0,1 0,2 6,3 6,3 6,3 6,3 6,3 6,3 6,3 6,3 6,3 6,3 6,3 6, 3 6,3 6,3 6,3 6,3 b-. 0,8 0,8 0,8 0,8 0,8 0,4 0,4 0,66 0,2 0,4 3,1 0,8 3, 1 6,3 6,3 6,3 0,4 3,1 Né VI - &I 1 Q -.b -.b 240 17 Or S aure S pyoc H infl P mira TABLEAU 6 Dose PD 50 protectrice pour des souris infectées par un inoculum léthal - Traitement par voie orale rganisme 9 (BMY-28100) Céphaléxine Céphachlore eus BX-1633 2,2 17 2,2 jenes A 20201 0,11 0,74 0,14 luenza A 9729 1,8 18 1,6 abilis A 9554 1,8 12,5 1,8 Céphadroxyle 7,2 0,25 TABLEAU 8 Activité in vitro contre les organismes anaérobies MIC (mcg/ml) Organisme e-Lac- tamase 9 (BMY- 28100) cépha- léxine cépha- chlore Gn, bâtons B fragilis A 20928-1 (-) 0,8 12,5 3,1 B fragilis A 21900 (-) 50 12,5 6,3 B fragilis A 20935 (-) 0,8 6,3 3,1 moyenne géométrique 3,2 9,9 3,9 Gn, bâtons B fragilis A 22053 (+) 50 25 100 B fragilis A 22021 (+) > 100 100 > 100 B fragilis A 22693 (+) > 100 > 100 > 100 moyenne géométrique > 100 > 75 > 100 B fragilis A 22695 (+) > 100 100 100 B fragilis A 22533 (+) > 100 > 100 > 100 moyenne géométrique > 100 > 100 > 100 Gp, bâtons C difficile A 21675 * 6,3 100 25 C perfringens A 9645 0,4 12,5 1,6 Gp, coques P acnes A 21933 0,4 1,6 0,8 P anaerobius A 21905 0,8 6,3 0,4 moyenne géométrique 0,95 11 * résistant & la clindamycine. Les composés de la présente invention sont préparés les voies de synthèse décrites dans le brevet britannique en appliquant n 1 342 241, le brevet U S 3 994 884 et le brevet U S 4 107 431 cités ci-dessus à des matières premières choisies de façon convenable Essentiellement, la formation dugroupe vinyle substitué en position 3 des céphalosporines de la présente invention implique la réaction d'un réactif halogénure avec une triarylphosphine pour donner un sel de phosphonium qui, par traitement avec une base, donne un intermédiaire phosphoranylé Ce dernier est alors traité avec un réactif carbonyle pour donner le composé de la présente invention Soit le réactif halogénure, soit le réactif carbonylé, contient le noyau de céphalosporine Ceci est illus- tré dans le schéma de réaction suivant. Réactif Intermédiaire Réactif halogénure phosphoranylé carbonylé R QCHX (C 6 5)3 P (QCH=P(C 6 H 5)3) C base R 3 \ 5 R Schéma de réaction 1 Schéma de réaction 2 QCH=CHR formules QCH:CR 3 formules XIII ou H QCH= O XIV CHX (C 6 H 5)3 P H / base c C=P(C 6 H 5)3) R 3 R 3 Dans le schéma de réaction précédent, R 3 représente H, un alkyle en C 14, un alkoxy C 1 _ 4-alkyle C 1 _ 4, un aralkyle en C 7 _ 14 ou le groupe Alk X dans lequel Alk et X sont tels que définis ci-dessus Le symbole Q se réfère au noyau de l'acide 7-amino-3-céphem-3-yl-4-carboxylique dans lequel les groupes amino et acide carboxylique peuvent porter des groupes protecteurs tels que le groupe silyle ou d'autres groupes de l'homme de l'art de la chimie des antibiotiques à base de béta-lactame, ou Q peut être un noyau d'acide 7-acilamino-3-céphem-3-yl-4-carboxylique ou le groupe 7-acylamino peut être un groupe apparaissant de façon classique dans les antibiotiques de céphalosporine comprenant le groupe phénylacétamido-a-amino-a-substitué de la présente invention tel que défini par rapport aux formules XIII et IX Les sulfoxydes des corps précédents présentent des avantages Spécifiquement, Q présente l'une des formules suivantes: 19 2540117 (O) sa I 2, / r O 002 p 2 co 2 N ACNE 0 E 2 CDO 2 2 p 2 C 02 P 2 dans lesquels: R 1 a la même signification que ci-dessus; n est un entier égal à O ou 1, indiquant le nombre d'atome d'oxygène attaché au soufre; Ac indique un groupe acyle de l'espèce que l'on trouve ordinairement dans les 7-acylaminocéphalosporines-tels que phénylacétyle, phénoxyacétyle; et B est un groupe protecteur alkylidène ou aralkylidène dérivant d'un aldéhyde ou d'une cétone tel que le groupe benzylidène que l'on enlève facilement dans une étape ultérieure, par exemple par hydrolyse en utilisant le réactif T de Girard. pl p 2, et P 3 représentent des atomes d'hydrogène ou des groupes pro- tecteurs de l'espèce conventionnellement utilisée dans la chimie de la céphalosporine avec des groupes amino, des groupes hydroxy et le groupe carboxyle. Les groupes carbonyles protecteurs (p 2) convenables comprennent des groupes aralkyles tels que benzyle, p-méthoxybenzyle, p-nitrobenzyle et des groupes diphénylméthyl (benzhydryle) alkyle tels que t-butyle; des groupes haloalkyles tels que 2,2,2-trichloroéthyle et d'autres groupes carboxyles protecteurs décrits dans la littérature, par exemple dans le brevet britannique 1 399 086 On préfère utiliser des groupes carboxyles protecteurs que l'on élimine facilement par traitement à l'acide particulièrement le benzhydryle ou le t-butyle. Les groupes protecteurs amino et hydroxy (p 1 et P 3) sont bien connus dans l'état de la technique et ils comprennent les groupes trityle et acyle tels que chloroacétyle, formyle, trichloroéthoxy- carbonyle, tert butoxycarbonyle, carbobenzyloxy, etc De nouveau, on préfère les groupes protecteurs amino que l'on élimine facilement par traitement avec un acide, notamment le groupe tert -butoxycarbonyle. Dans les schémas de réaction 1 et 2, lorsque l'on utilise le noyau K de céphalosporine sous la forme de l'oxyde-1 (n=l), les oxydes sont préparés par des modes opératoires connus tels que par oxydation de la céphalosporine correspondante (n= 0) avec l'acide m-chloroperbenzo Tque ou l'acide peracétique Dans une étape ultérieure de la synthèse, l'oxyde- 1 est réduit par des modes opératoires connus, par exemple par réduction avec l'ion iodure dans un milieu aqueux. La conversion du réactif halogénure de formule QCH 2 X selon le schéma i en intermédiaire phosphoranylé est de préférence effectuée en employant un réactif halogénure dans lequel X représente un iodure Si l'on utilise un réactif halogénure, chlorure ou bromure, il peut être transformé tout d'abord en iodure par traitement avec l'iodure de sodium dans une solution dans le diméthylformamide ou l'acétone Le réactif iodure réagit facilement avec une triarylphosphine telle que la triphé- nylphosphine dans un véhicule liquide organique qui est inerte au réactif dans les conditions de la réaction La température ambiante pendant une brève période pouvant aller jusqu'à quelques heures consti- tue des conditions convenables Les triarylphosphines convenables outre la triphénylphosphine comprennent les composés facilement disponibles possédant des groupes aryles compatibles avec la réaction tels que le phényle substitué par exemple tolyle, naphtyle, naphtyle substitué, et des groupes hétéroaromatiques ou hétéroaromatique substitués La pre- mière étape de la réaction implique la formation du sel de phosphonium qui se précipite ordinairement de la solution et est recueilli sur un filtre Le sel de triarylphosphonium est alors dissous dans un solvant organique liquide convenable, qui est non miscible à l'eau et inerte dans les conditions de la réaction, tel que le chloroforme, le trichlo- roéthylène ou un autre méthane ou éthane polychloré ou bromé L'inter- médiaire phosphoranylé est alors produit in situ par traitement de la solution avec un carbonate, bicarbonate ou hydroxyde de métal alcalin aqueux à la température ambiante La couche organique contenant l'inter- médiaire phosphoranylêe est séparée, lavée à l'eau et séchée de façon usuelle Le réactif carbonylé représenté dans le schéma de réaction est alors ajouté à la solution sèche de l'intermédiaire phosphoranylé et l'étape finale de la réaction a alors lieu à la température ambiante de nouveau en un temps de réaction relativement bref d'environ 2 à heures Le produit désiré représenté par la formule QCHICHR 3 est récupéré par des techniques connues de l'homme de l'art du laboratoire de chimie organique, telles que la chromatographie sur colonne de gel de silice. Les réactifs halogénures de formule QCH 2 X du schéma 1 sont pro- duits à partir des dérivés d'acide 7-amino ou 7-acylamiino-3-hydroxy- méthyl-ceph-3-éme-4-carboxylique par des méthodes en principe connues. La conversion de l'halogénure réactif de formule R 3 CH 2 X selon le schéma 2 en intermédiaire phosphoranylé peut s'effectuer avec le chlo- rure, le bromure ou l'iodure (X = Cl, Br, ou I) Si on le souhaite, le chlorure ou le bromure peuvent être transformés en iodure comme ci- dessus, mais ceci n'est pas essentiel La réaction avec la triaryl- phosphine telle que la triphénylphosphine est effectuée soit sans solvant, soit dans un véhicule liquide organique inerte dans les condi- tions de la réaction On peut employer la température ambiante ou des températures élevées de 20 à 150 C, pendant une période de 1 à 24 heures Ordinairement, le sel de triarylphosphonium précipite et on le recueille sur un filtre On le dissout alors dans un solvant orga- nique liquide convenable tel que le diméthylsulfoxyde ou un solvant non miscible à l'eau, tel que l'éther ou le tétrahydrofuranne et on le traite avec une base telle que butyl lithium, phényl lithium, méthoxyde de sodium ou hydrure de sodium pendant une période allant de quelques minutes à quelques heures à une température dans l'intervalle de -40 C à + 50 C Le carbonyle réactif est alors ajouté à la solution réactionnelle sèche et on laisse la réaction avoir lieu à une température de -40 C à + 50 C pendant 1 à quelques heures Le produit désiré, représenté par la formule: QCH=C est récupéré comme ci-dessus. On a trouvé que le schéma i etait convenable pour la préparation des substances de formule: QCH=CHR 3 dans laquelle: R 3 représente un alkyle inférieur, phénylalkyle, naphtalkyle, haloalkyle ou alkoxyalkyle ayant la configuration cis-(Z). Selon une variante du schéma 1, à laquelle on se référera sous le nom de méthode A, on utilise comme halogénure réactif l'ester de benzhydryle de l'acide 7 e-{a(N-t-butyxy-carbonylamine)-a-(p-hydroxyphényl)acetamido}- 3-chlorométhyl-3-cephem-4-carboxylique Ceci est illustré dans les modes opératoires 4, 5 et 6. On a trouvé qu'une autre variante du schéma 1 pouvant convenir était semblable à la méthode A, en ce sens que l'on employait comme matière de départ l'ester de benzhydryle de l'acide 7 -{a-(N-t-butoxy- carbonylamino)-a-(p-hydroxyphényl)acetamido}-3-chlorométhyl-3-céphem- 4-carboxylique mais, dans la méthode B, on emploie le chloroacétaldehyde pour produire l'acide 7-aminocephalosporanique bloqué possédant le groupe 3-chloro-1-propen-1-yl en position 3 Cette dernière substance possède une activité antibactérienne mais pas dans une mesure extraordinaire Dans la méthode B, on emploie comme intermédiaire le composé 3-chloro-1-propen-1yl et on le transforme tout d'abord en composé 3-iodo-1-propen-1-yl correspondant que l'on transforme alors avec des thios hétéroaromatiques pour produire des dérivés de la 3-hétéroarylthioprop-1-èn-1-ylcephalosporine. On se référera à une autre variante du schéma 1 sous le nom de méthode C Dans cette variante, l'ester de benzhydryle de l'acide 7amino-3-chlorométhyl-3-céphemn-4-carboxylique est préparé comme ci-dessus et le groupe 7-amino est protégé par réaction avec le benzaldehyde pour produire le groupe benzylidène protecteur. Ce dernier est alors traité avec de la triphénylphosphine pour procurer le sel de phosphonium que l'on transforme alors avec une base en intermédiaire phosphoranylé et ce dernier est traité avec un aldéhyde pour donner l'acide vinyl-7-aminocéphalosporanique substitué en position 3 que l'on peut alors acylé pour introduire le groupe acyle désiré en position 7. On propose deux variantes du schéma 2 Dans la première, la méthode D, l'acide 3-hydroxyméthyl-7-phenylacetamido-3-céphemn-4- carboxylique préparé comme décrit ci-dessus dans lequel l'acide carboxy- lique est protégé sous la forme d'ester de benzhydryle, est converti en composé 3-formyle correspondant On laisse alors ce dernier réagir avec l'intermédiaire phosphoranylé dérivé d'un halogénure de formule R 3 CH 2 X, comme représenté dans le schéma 2, et le groupe 7-acylamino désiré est introduit par un échange d'acyle. La méthode E est une autre variante du schéma de réaction 2 dans lequel on utilise comme carbonyle réactif, l'acide 7-p-hydroxyphényl- glycylamido-3-formyl-3-céphem-4-carboxylique. Etant donné qu'il est facilement disponible, l'acide 7-phényl- acétamidocéphalosporanique est une matière de départ convenable Le groupe acétoxy de cet acide peut être facilement hydrolysé par voie enzymatique en utilisant du son de blé comme source d'enzyme pour donner l'acide 7phénylacétamido-3-hydroxyméthyl-ceph-3-éme-4-carboxylique Le groupe acide carboxylique peut être protégé par conversion en ester de benzhydryle par traitement de l'acide avec du diphényldiazométhane. L'ester est alors traité avec du pentachlorure de phosphore dans des conditions connues conduisant au clivage du groupe 7-phénylacétyle et à la conversion du groupe 3-hydroxyméthyl en un groupe 3-chlorométhyle La production de l'ester de benzhydryle de l'acide 7-amino-3-chlorométhyl- 3-céphem-4-carboxylique par ces méthodes, est illustrée dans les modes opératoires 1 et 2. On peut encore transformer l'acide 7-phénylacétamido-3-hydroxy- méthylceph-3-éme-4-carboxylique en composé 3-halométhyle et delà en intermédiaire phosphoranylé, ce que l'on fait suivre d'une réaction avec un aldéhyde pour produire la 3-vinylcéphalosporine substituée selon l'une des variantes du schéma de réaction 1. Le céphalosporine-3-carboxaldéhyde représenté par la formule QCH=O dans le schéma de réaction ci-dessus servant comme carbonyle réactif dans le schéma de réaction 2, est produit par oxydation d'un ester de l'acide 7acylamino-3-hydroxyméthyl-ceph-3-ème-4-carboxylique tel que décrit dans le brevet U S n 3 351 596 cité ci-dessus Le schéma de réaction 2 est celle des deux voies que l'on préfère le moins et il ne semble pas convenir au produit propényle de formule XIII. Les composés ayant la formule QCH=CHR 3 existent sous les configu- rations cis(Z) et trans(E) On préfère les composés ayant la figuration cis(ou Z) Ils ont une activité antibactérienne plus importante que les substances correspondantes ayant la configuration trans(ou E) Les composés de formule XIV sont utiles en tant qu'intermédiaires pour la préparation d'autres céphalosporines ayant la formule QCH=CHR 3 dans laquelle R 3 représente le groupe méthylène substitué par le résidu d'un groupe nucléophilique tel que des groupes mercapto, alkylpercapto, arylmercapto ou hétéroarylmercapto tels que le 1,2,3-triazol-5-yl- mercapto et le 2-miéthyl-6-pyridinylmercapto Ceci est illustré ci- dessous dans la mode opératoire 20 Les composés d'iodométhyle sont préférés en tant qu'intermédiaires pour les procédés de déplacement nucléophiliques. Le schéma 1 est adapté à la préparation d'un produit de formule XIV par substitution du carbonyle réactif approprié de formule X Alk CHO par le reactif R 3 CHO représenté. Modes opératoires des préparations Mode opératoire n 1 3-hydroxymnéthyl7 e-phénylacétamido-3-céphem-4-carboxylate de benzhydryle (composé 1) A une suspension de tampon de phosphate (p H 7, 162,5 ml) et de son de blé ( 20 g, sec) à la température ambiante, on ajoute du sel de sodium de l'acide 7-phénylacétamidocéphalosporanique ( 5 g, 12,1 mmole) en une seule portion On surveille l'avancement de la réaction par HPLC jusqu'à ce que l'hydrolyse soit complète ( 5 heures) On filtre la suspension pour éliminer le son de blé et on refroidit le filtrat à 5-10 C pour une estérification extractive A la solution refroidie, on ajoute du chlorure de méthylène ( 32 ml) et ensuite une solution 0,5 M de diphényldiazométhane dans le chlorure de méthylène ( 24 ml) Le p H est alors ajusté à 3,0 avec de l'acide phosphorique à 28 % Apres i heure, on laisse le mélange réactionnel remonter à 20 C On ajoute lentement 56 ml d'heptane et le produit du titre cristallin qui en résulte est récupéré par filtration Rendement en produit: 3,0 g ( 50 %). Mode opératoire n 2 7 e-amino-3-chlorométhyl-3-cépheni-4-carboxylate de benzhydryle ( 2) s H 2 N t C 1 COOCH (Ph) 2 A une bouillie de P C 15 ( 8, 3 g, 40 mmoles) dans CH 2 C 12 ( 1 000 mnl), on ajoute de la pyridine ( 3, 2 g, 40 mnioles) et l'on agite le mélange pendant 20 minutes à 20 C On ajoute au mélange du 3-hydroxyméthyl-7- phénylacétamido-3-céphem-4-carboxylate de benzhydryle ( 1), 5,1 g, 10 mmoles, tandis que l'on agite à -40 C en une seule portion Le mélange est agité à -10 C pendant 15 minutes et on le laisse reposer à -10 C à C pendant 7 heures A la solution refroidie ( 1-20 C), on ajoute du propane 1,3-diol ( 10 ml) et on laisse le mélange reposer à -20 C pendant 16 heures et ensuite à la température ambiante pendant 20 minutes tout en agitant La solution qui en résulte est lavée avec de l'eau glacée ( 2 x 20 ml) et du Na Cl aqueux saturé ( 10 ml), on sèche sur Mg SO 4 et on concentre sous vide Le résidu à consistance de gomme ( 12 g) est dissous dans un mélange de CH C 13 et de n-hexane ( 2/1), et on le soumet à une chromatographie en utilisant une colonne sur gel de silice ( 200 g) et le même solvant comme éluant Les fractions contenant le composé du titre sont évaporées sous vide et le résidu est trituré avec du n-hexane pour donner ( 2) ( 2,1 g, 51 %), fondant à 110 C (déc). Les données de l'analyse sont les suivantes: IR: v K Br 3400, 2800, 1785, 1725 cm 1. X Et OH 26m 1 % UV: X Et MH 265 nm (E 11 cm 160) OMSO-D RMN: 6 6 DMSOD + CD C 13 3,69 ( 2 H, s); 3,43 ( 2 H, s); 5,09 ( 1 H, d, ppm J = 4,5 Hz); 5,24 ( 1 H, d, J = 4,5 Hz), 6,87 ( 1 H, s); 7,3 ( 10 H, m). Mode opératoire n 3 7 Y-{D-2-(t-butoxycarbonylamnino)-2-(p-hydroxyphényl)-acétamido}- 3-chloromnthyl-3-céphem-4-carboxylate-de benzhydryle (composé 3) I E 3 S NS e 2 c ( 139 3 CDCE (C 2 23 2 A un mélange de 20,7 g ( 0,05 mole) de 7-amino-3-chlorométhyl-3- c Cpham-4-carboxylate de benzhydryle ( 2) et 20 g ( 0,075 mole) d'acide D2-(t-butoxycarbonylamino)-2-(p-hlydroxyphényl)acétique dans 500 ml de tétrahydrofuranne sec (THF), on ajoute 15,45 g ( 0,075 mole) de rl,N'dicyclohexylcarbodiimide (DCC) et l'on agite le mélange à la température ambiante pendant ? heures et on évapore à siccité Le résidu est dissous dans I 1 d'acétate d'éthyle (Ac O Et) et la dicyclohexylurée insoluble est éliminée par filtration Le filtrat est lavé avec une solution aqueuse de bicarbonate de sodium, de l'eau et une solution aqueuse saturée de Na Cl, on sèche sur sulfate de sodium anhydre et on évapore à siccité Le résidu huileux est passé en chromatographie sur une colonne de gel de silice (Wako gel C-100, 500 g) par élution avec 4 1 de chloroforme et 6 1 d'un mélange chloroforme-méthanol à 1 % Les fractions que l'on souhaite sont rassemblées et évaporées à siccité Le résidu huileux est trituré avec un mélange éther-éther isopropylique pour donner 30,6 9 ( 92 %) de 3. Les données de l'analyse sont les suivantes: K Br -1 IR: v K Bax cm 1790, 1710, 1670, 1500, 1360, 1230, 1150. RMN 6 CD C 13 ppm 1,45 ( 9 H, s, C-CH 3); 3,4 ( 2 H, br-s, 2-H); 4,28 ( 2 H, s, CH 2 Cl), 4,86 ( 1 H, d, 4,5 Hz, 6-H); 5,12 ( 1 H, d, 6 Hz, CH-CO); 5,68 ( 1 H, d-d, 8 & 4,5 Hz, 7-H); 6,63 ( 2 H, d, 9 Hz, phényl-H); 6,93 ( 1 H, s, CH-Ph 2); 7,08 ( 2 H, d, 9 Hz, phényl-H); 7,0-7,5 ( 10 H, m, phényl-H). Le résidu huileux peut être utilisé dans purification chromatogra- phique dans le mode opératoire 4. Mode opératoire n 4 7 e-{D-2-(t-butoxycarbonylamnino)-2-(p-hydroxyphényl)-acetamiido}-3- iodoniéthyl-3-céphem-4-carboxylate de benzhydryle (composé 4) Un mélange de 26,6 g ( 0,04 mole) de 3 et 18 g ( 0,12 mole) d'iodure de sodium dans 400 ml d'acétone, est agité à la température ambiante pendant 2 heures et on évapore à siccité On extrait le résidu avec 400 ml d'acétate d'éthyle et l'extrait est lavé avec une solution aqueuse de Na 25203, de l'eau et une solution aqueuse saturée de Na Cl. Apres évaporation du solvant, le résidu est trituré avec un mélange étheréther isopropylique pour donner 27 g ( 89 %) du composé du titre La solution dans l'acétate d'éthyle peut êter utilisée directement dans l'étape suivante (composé 5) sans isoler le composé 4 si on le souhaite. Les données de l'analyse sont les suivantes: IR: v K Br cm'1 1790, 1710, 1670, 1500, 1360, 1220, 1150. max 25401 17 RMN CDC 13 ppm 1,47 ( 9 H, s, C-CH 3); 3,3-3,6 ( 2 H,m, 2-H); 4,20 ( 2 H, s, CH 2), 4,89 ( 1 H, d, 4,5 Hz, 6-H); 5,12 ( 1 H, d, 6 Hz, CH-CO); 5,68 ( 1 H, d-d, 8 & 4,5 Hz, 7-H); 6,62 ( 2 H, d, 9 Hz, phényl-H); 6,92 ( 1 H, s, CH Ph 2); 7,08 ( 2 H, d, 9 Hz, phényl-H); 7-7,5 ( 10 H, m, phényl-H). Mode opératoire n 5 Iodure de 7 B-{D-2-(t-butoxycarbonylamino)-2-(p-hydroxyphényl)- acétamido}-3-(triphénylphosphonio)méthyl-3-céphem-4-carboxylate de benzhydryle (composé 5) HO \ CHC ONH S I G NH N CH P (C H 5) I CO 2 C(CH 3)3 CO 2 CH(C 6 H 5)2 Un mélange de 15,1 g ( 0,02 mole) de 4 et 15,7 g ( 0,06 mole) de triphénylphosphine dans 200 ml d'acétate d'éthyle est agité à la tempé- rature ambiante pendant 1 heure Le précipité qui en résulte est re- cueilli par filtration, ce qui donne 17,4 g ( 85,5 %) de 5, fondant à 180 C On concentre le filtrat à 100 ml et le concentré est dilué avec 500 ml d'éther, ce qui donne la seconde récolte ( 1,1 g) de 5 Le rendement total est de 18,5 g ( 91 %) Le rendement d'ensemble en 5 à partir de 2 est de 74,5 % C-eci peut être augmenté jusqu'à 87,5 % en omettant les étapes de purification et d'isolement, tel qu'indiqué ci- dessus. Les données de l'analyse sont les suivantes: * IR Vmax cm-1 1780, 1670, 1490, 1420, 1350, 1240, 1150, 1190. IR:vmax c RMN: DMSO ppm 1,42 ( 9 H, s, C-CH 3); 3,45 ( 2 H,br-s, 2-H); 55,4 ( 3 H, m, 3-H & 6-H); 5,7 ( 1 H, mni, 7-H); 6,63 ( 2 H, d, 9 Hz, phényl-H); 7,1-7,45 ( 12 H, m, phényl-H); 7,5-7,9 ( 15 H, mni, phényl-H). 2 5 40117 A l'analyse, on constate que le produit C 52 H 49 N 3075 Pl et on obtient les valeurs suivantes: C H obtenu présente la formule N S calculées 61,36 4,85 4,13 3,15 trouvées 61,26 4,82 4,11 3,92 Mode opératoire N O 6 7 e-{D-2-(t-butoxycarbonylamino)-2-(p-hydroxyphényl)-acétamido}- 3-{(Z)-1-propen-1-yl}ceph-3-ème-4-carboxylate de benzhydryle (composé 6) HO-c I NH C 02 C (CH 3) 3 CO 2 CH 6 (C 65)2 A une solution de 1,8 g ( 1,77 ninmole) de 5 dans 100 ml de chloro- forme, on ajoute 100 ml d'eau contenant 2 ml ( 2 mmole) d'hydroxyde de sodium N et on agite le mélange pendant 5 minutes La couche organique est séparée, on lave à l'eau et on sèche sur sulfate de sodium anhydre. La solution dans le chloroforme étant filtrée, on concentre le filtrat à ml sous pression réduite Au concentre, on ajoute 1 g d'acétaldéhyde et le mélange est agité à la température ambiante pendant 2 heures et l'on évapore à siccité Le résidu huileux est passé en chromatographie sur une colonne de gel de silice (Waco-gel C-200, 50 g) en éluant avec du chloroforme et un mélange chloroforme-méthanol ( 99/1) Les fractions désirées sont recueillies et évaporées, ce qui donne 318 mg ( 28 %) du produit 6, point de fusion 120-130 C (déc). Les données de l'analyse sont les suivantes: IR: vm K Br cm'1 1780, 1670, 1710, 1490, 1360, 1210, 1150. max RMN: 6 CD C 13 ppm 1,3-1,5 ( 12 H, m, C-CH 3); 3,22 ( 2 H,br-s, 2 H); 4,90 ( 1 H, d, 4,5 Hz, 6-H); 5,15 ( 1 H, br-d, CH-CO), ,5-6,1 ( 3 H, m, CH-CH & 7-H); 6,63 ( 2 H, d, 9 Hz, phényl-H); 6; 91 ( 1 H, s, CH-Ph); 7, 09 ( 2 H, d, 9 Hz, phényl-H); 7,2-7,5 ( 1 OH, m, phényl-H). 25401 17 Mode opératoire n 7 7-{D-2-amino-2-(p-hydroxyphényl)acétamido}-3-{(Z)-1-propen-1-yl}- 3-ceph-ème-4-carboxylate de sodium (composé 7, sel de sodium de BMY- 28100). BO CHCONH S NF CH=CH Ce (y) COOH Un mélange de 318 mg ( 0,48 mmole) de 6 et 2,5 ml d'acide trifluoroacétique (TFA) est agité à la température ambiante pendant i heure et on dilue ensuite avec 50 ml d'éther et 50 ml d'éther isopropylique Le précipité séparé est recueilli par filtration et lavé à l'éther, ce qui donne 188 mg ( 77 %) du trifluoroacetate de 7, que l'on dissout dans 2 ml de méthanol (Me OH) A la solution, on ajoute 2 mlg ( 2 mmoles) d'une solution de 2-éthylhexanoate de sodium (SEH) dans l'acétate d'éthyle et le mélange est dilué avec 30 ml d'acétate d'éthyle pour séparer le précipité que l'on recueille par filtration, lave à l'éther et on sèche sous vide sur P 205, ce qui donne 144 mg ( 73 % à partir de 6) du produit brut 7 Le produit brut ( 135 mg) est dissous dans 10 ml d'eau et la solution est passée en chromatographie sur une colonne ( 25 mmi x 100 mm) en utilisant environ 20 ml du garnissage de la Prep Pak-500/C 18 (Waters) La colonne est éluée à l'eau et l'éluat contenant le produit désiré est concentré à 5 ml et on lyophilise, ce qui donne 93 mg ( 69 %) de 7 Point de fusion: 200 C (déc prog), pureté estimée 60 % (par HPLC). Les données de l'analyse sont les suivantes: IR: v K Br cm-1 1760, 1660, 1590, 1400, 1360, 1250. max UV: Àtampon de phosphate (ph 7) nm(E) 227 ( 11300), 280 ( 8200) U: max RMN: êD 20 ppm 1,65 ( 3 H, d, 6 Hz, -C-CH 3); 3,21 ( 1 H, d, 18 Hz, 2- H); 3,52 ( 1 H, d, 18 Hz, 2-H); 5,12 ( 1 H, d, 4,5 Hz, 6-H); ,68 ( 1 H, d, 4,5 Hz, 7-H); 5,5-5,9 ( 1 H, m, vinyl-H); ,95 ( 1 H, d, 11,5 Hz, vinyl-H) ; 6,94 ( 2 H, d, 8 Hz, phényl-H); 7,36 ( 2 H, d, 8 Hz, phényl-H). Mode opératoire n 8 Acide 7 e-{D-2-amino-2-(p-hydroxyphényl)acétamido}-3-{(E)-1-propen- 1-yl}-3-céphemr-4-carboxylique (composé 8, BB-51067). Le produit brut 7, 11,9 g, est avant la purification par chromatographie, dissous dans 50 ml de tanpce, de phosphate 0,01 M (p H 7,2)-méthanol ( 85/15) et la solution est ajustée à p H 6 avec de l'acide chlorhydrique 6 N Cette solution est soumise à une chromatographie liquide préparative de haute performance (HPLC) (prep Pak-500/C 18, System 500, Waters) par élution avec du tampon de phosphate 0,01 M (p H 7,2) contenant 15 % de méthanol L'éluat est contrôlé par HPLC analytique et l'on trouve que la première fraction de 4 1 contient l'isomère cis (BMY-28100) La seconde fraction de 1 1 contenant l'isomère trans est recueillie et concentrée à 500 ml Le concentré est ajusté à p H 3 avec de l'acide chlorhydrique dilué et elle est passée en chromatographie sur une colonne HP-20 ( 100 ml) par élution avec chaque fois 1 1 d'eau et de méthanol à 30 % Le dernier éluat d'un volume d'environ 300 ml est concentré à 10 ml et on lyophilise, ce qui donne 290 mg de l'isomère trans brut (à 55 % de pureté) Cette matière est dissoute dans 100 ml de méthanol à 50 % et on traite avec du charbon actif Le filtrat est concentré à un volume de 20 ml et on laisse se reposer pendant la durée d'une nuit à 5 C Le produit cristallise sous forme de prismes incolores que l'on recueille par filtration et que l'on sèche sous vide, 129 mg, point de fusion 230 C (déc). Les données de l'analyse sont les suivantes: IR: v K Br cm'1 1760, 1680, 1590, 1550, 1520, 1450, 1390, 1350, max 1240. UV: >tampon de phosphate (ph 7) nm(e) 228 ( 13000), 292 ( 16900) UV: Xmax RMN: 6 D 20 +Na 2 C 03 ppm 1,89 ( 3 H, d, 6 Hz, C=C-CH 3); 3,60 ( 2 H, s, 2-H); 5,13 ( 1 H, d, 4,5 Hz, 6-H); 5,20 ( 1 H, s, CH-CO); 5,68 ( 1 H, d, 4 > 5 Hz, 7-H); 5,99 ( 1 H, d-q, 16 & 6 Hz); 6,54 ( 1 H, d, 16 Hz); 6,98 ( 2 H, d, 9 Hz, phényl-H); 7,41 ( 2 H, d, 9 Hz, phényl-H). Mode opératoire n 9 Acide 7 D-2-amino-(p-hydroxyphényl)acétamido -3 (Z)-1-propen- 1-yl -3-céphem-4-carboxylique cristallin (composé 9, BMY-28100). La première fraction de 4 l, obtenue par HPLC préparative dans le mode opératoire 8 et contenant l'isomère cis est concentrée à un volume de 2 1 et le concentré est ajusté à p H 3 avec de l'acide chlorhydrique dilué La solution est chargée dans une colonne contenant du HP-20 ( 1 l) et la colonne est lavée avec 6 1 d'eau jusqu'à ce que le p H de l'ef- fluent soit égal à 7 La colonne est alors éluée avec 4 1 de méthanol aqueux à 30 %, la solution de l'éluat est surveillée par HPLC et l'on combine les fractions appropriées (environ 2,5 l) et l'on concentre à ml à une température inférieure à 40 C, sous pression réduite Il se forme un précipité cristallin Le concentré est refroidi à O C pendant 2 heures et le précipité cristallin est recueilli par filtration, lavé avec de l'acétone aqueuse à 100 % puis avec de l'acétone à 100 % et on sèche ensuite sous vide sur P 205, ce qui donne 4,09 g du produit cris- tallin désiré pur, point de fusion 218-220 C (déc), primes incolores d'une pureté de 95 % tel que déterminé par un essai de HPLC. Les données de l'analyse sont les suivantes: IR: v K Br cm-1 1750, 1680, 1560, 1520, 1460, 1390, 1350, 1270, max max 1235. UV X:tampon de phosphate (ph 7) nm(c) 228 ( 12300), 279 ( 9800) RMN: D 20 Na H Cx 3 ppm 171 ( 3 H, d, 6 Hz, C-CH); 3,27 ( 1 H, d, 18 Hz, RMN:6 D 20 +Na HC 03 ppm 1,71 ( 3 H, d, 6 Hz, C-CH,); 3,27 ( 1 H, d, 18 Hz, 2-H); 3, 59 ( 1 H, d, 18 Hz, 2-H); 5,18 ( 1 H, d, 4,5 Hz, 6-H); 5,22 ( 1 H, s, CHCO); 5,73 ( 1 H, d, 4,5 Hz, 7-H); 5,5-6,0 ( 1 H, m, CH=C); 6,02 ( 1 H, d, 11 Hz, CH=C); 6,98 ( 2 H, d, 9 Hz, phényl-H); 7,41 ( 2 H, d, 9 Hz, phényl-H). A l'analyse, on constate que le produit obtenu présente la formule C 18 H 19 N 305 S 1/2 H 20 et on obtient les valeurs suivantes: C H N S calculées 54,26 5,06 10,55 8,05 trouvées 54,15-54,19 5,13-5,08 10,30-10, 42 8,38-8,04 La liqueur mère provenant de la cristallisation ci-dessus est concentée à un volume de 10 ml et traitée avec 20 ml d'acétone Après avoir maintenue la solution pendant la durée d'une nuit dans le réfrigérateur, il se forme un précipité cristallin que l'on recueille par filtration et que l'on sèche sous vide sur P 205, poids 670 mg (pureté de 90 %) par HPLC Une portion de cette matière, 560 mg, est dissoute dans 200 ml de méthanol aqueux à 50 % et la solution est traitée avec 0,5 g de charbon actif et filtrée Le filtrat est concentré sous pression réduite à 40 C, à un volume de 20 ml, et on le maintient ensuite pendant 5 heures à 5 C Le produit se cristalline et on le recueille par filtration, on lave à l'acétone et on sèche sous vide sur P 205, ce qui donne 227 mg de BMY-28100 cristallin (à 98 % de pureté par HPLC) La lyophilisation de la liqueur mère donne 181 mg de BMY-28100 qui a une pureté de 95 % (HPLC). Mode opératoire n 10 7 e-{D-2-(t-butoxycarbonylamino)2-(p-hydroxyphényl)acétamido}- 3-vinryl-3-céphem-4-carboxylate de diphénylméthyl (composé 10) Une solution de 3 g ( 2,95 mmoles) d'iodure de 7-( 2-(N-t-butoxy- carbonylamino)-2-(p-hydroxyphényl)acétamido)-3-triphénylphosphonio)- méthyl-3-céphem-4-carboxylate de benzhydryle ( 5) dans 50 ml de chloro- forme est agitée avec un mélange de 3 ml ( 3 mmoles) de Na OH i N et 50 ml d'eau à la température ambiante pendant 1 minute La couche organique est séparée après addition d'une solution saturée de Na Cl ( 20 ml) et lavée avec de l'eau ( 3 x 30 ml) A la solution organique, on ajoute 2,5 ml de formaldéhyde aqueux à 35 % tout en agitant vigoureusement sous refroidissement à l'eau On poursuit l'agitation pendant 20 minutes La couche organique est séparée, on sèche sur Na 2 SO 4 anhydre et l'on concentre sous vide Le concentré est placé sur une colonne de gel de silice et on élut avec CH C 13 ( 600 ml) et du Me OH à 2 % dans le CHC 13 ( 800 ml), ce qui donne 850 mg ( 45 %) du composé du titre TLC: Rf 0,48 (gel de silice, Me OH-CH C 13 ( 1/10)). Mode opératoire n 11 Acide 7 e-{D-2-amino-2-(p-hydroxyphényl)acétamido}-3-vinyl-3- céphem-4-carboxylique (composé 11, BB-1064). On laisse un mélange de 850 mg ( 1,32 mmoles) de 10, et 5 ml d'acide trifluoroacétique aqueux à 90 % (TFA) séjourner à la température ambiante pendant 1 heure et on le concentre à environ 1 ml sous vide Le concentré est trituré avec 20 ml d'éther diisopropylique, ce qui donne 679 mg de poudre jaune que l'on dissout dans 3 ml de méthanol et que l'on dilue ensuite avec 30 ml d'eau On fait passer la solution à travers une colonne de HP-20 ( 50 ml), qui est lavée avec 200 ml d'eau et éluee avec 250 ml de méthanol à 30 % L'éluat contenant le composé désiré est concentré et lyophilisé, ce qui donne 197 mg ( 31 %') du composé du titre dont la pureté estimée par HPLC est de 60 %, point de fusion 190 C (déc). Les données de l'analyse sont les suivantes: IR: K Br cm 1 1760, 1680, 1615-1570, 1520. max UV: Àtampon de phosphate (ph 7) nm(c) 228 ( 13500), 283 ( 14400) U: max RMN: 6 D 20 ppm 3,6 ( 2 H, s, SCH 2); 5,51 ( 1 H, d, 5 Hz, 6-H); 5,73 ( 1 H, d, 5 Hz, 7-H); 7,03 ( 2 H, d, 8 Hz, phényl-H); 7,45 ( 2 H, d, 9 Hz, phényl-H). Mode opératoire n 12 7 _f{D-2-(t-butoxycarbonylamino)-2-(p-hydroxyphényl)-acétamido}- 3-{(Z)-1-buten-1-yl}-3-céphem-4-carboxylate de diphénylméthyl (com- posé 12). Une solution de 3 g ( 2,95 mmoles) de 5 dans 50 ml de CH 3 est mélangée avec un mélange de 3,2 ml ( 3,2 mmoles) de Na OH 1 N et 50 ml d'eau et on secoue le mélange à la température ambiante pendant 3 mi- nutes La couche organique est séparée, lavée à l'eau ( 3 x 30 ml) et avec une solution saturée de Na CI, et on séche sur Na 2 SO 4 anhydre A la solution, on ajoute 1,71 g ( 29,5 mmoles) de propionaldéhyde Le mélange est agité pendant la nuit à la température ambiante et on concentre sous pression réduite Le concentré est chargé sur une colonne de gel de silice que l'on élue avec 12 % de méthanol dans CH C 13 Les fractions présentant une tâche à RF 0,30 (TLC, Me OH-CH C 13 = 1/10) sont combinées et évaporées, ce qui donne 1,08 g ( 55 %) du composé du titre. Les données de l'analyse sont les suivantes: IR: VK Br cm'1 1780, 1680, 1500. max Mode opératoire n 13 7 -lD-2-amino-2-(p-hydroxyphényl)acétamido} -3-{(Z)-1)buten-1-yl}- 3-céphem-4-carboxylate de sodium (composé 13, BB-51058, sel de sodium). On laisse une solution de 1,08 g ( 1,61 mmoles) de 12 dans 11 ml de TFA contenant 1 % d'eau séjourner pendant 1 heure à la température ambiante Le mélange est concentré à environ 2 ml sous vide et le sirop qui en résulte est trituré avec environ 20 ml d'éther diisopropylique, ce qui donne 796 mg de poudre jaune La poudre est dissoute dans 3 ml de méthanol et la solution est traitée avec 3 ml de SEH 0,8 M dans l'acétate d'éthyle (Ac O Et), ce qui donne un précipité que l'on filtre, que l'on lave avec de l'éther diisopropylique et que l'on dissout dans ml d'eau On fait passer la solution à travers une colonne garnie avec un garnissage ( 80 ml d'une cartouche de prep PAK-500/C 18 (Waters) qu'on lave avec de l'eau et que l'on élue successivement avec du méthanol à 10 %, du méthanol à 20 % et du méthanol à 30 % Les fractions souhaitées (contrôlées par HPLC) sont rassemblées, concentrées et lyophilisées, ce qui donne 118 mg ( 9,4 %) du composé du titre, dont la pureté est estimée à 55 % (par HPLC), composé qui brunit lorsqu'on le chauffe dans un tube capillaire en verre à une température > à 180 C. Les données de l'analyse sont les suivantes: IR: v K Br cm-1 1755, 1660, 1580. max UV tampon de phosphate (ph 7) nm(e) 228 ( 10900) 278 ( 7200) UV: ÀAmaxnm E 22 190,28700 RMN * 6 D 20 ppm 0,81 ( 2 H, t, 7,5 Hz); 1,7-2,2 ( 2 H, m); 3,25 ( 2 H, A Bq); 5,01 ( 1 H, d, 5 Hz); 5,50 ( 1 H, d-t, 7,5 & 12 Hz); 5,58 ( 1 H, d, 5 Hz); 5,78 ( 1 H, d, 12 Hz); 6,86 ( 2 H, d, 8 Hz); 7,26 ( 2 H, d, 8 Hz). Mode opératoire n 14 7 e-{D-2-(t-butoxycarbonylamino)-2-(p-hydroxyphényl)acétamlidoi- 3-{(Z)-3-phényl-1-propen-1-yl}-3-céphem-4-carboxylate de diphénylméthyl (composé 14). Une solution de 3 9 ( 2,95 mmoles) de 5 dans 50 ml de CH C 13 est secouée avec un mélange de 3,2 ml ( 3,2 mmoles) de Na OH 1 N et 50 ml d'eau pendant 1 minute La couche organique est séparée avec addition d'une solution saturée de Na Cl ( 20 ml), lavée avec de l'eau ( 3 x 30 ml) et une solution de Na CI saturé et on sèche sur Na 2 SO 4 anhydre A la solution, on ajoute 7,2 g ( 30 mmoles) de phénylacétaldéhyde à 50 % et le mélange est agité pendant la nuit à la température ambiante Le mélange réactionnel est concentré sous vide et le concentré est purifié sur une colonne de gel de silice ( 75 g) en utilisant 1 % de Me OH/CH C 13, ce qui donne 800 mg ( 37 %) du composé du titre La chromatographie en couche mince (TLC): Rf 0,33 (gel de silice, Me OH-CH Cl I 3 1/10) IR (K Br): 1780, 1710-1680 cm 1 Ce composé est utilisé dans le mode opératoire 15 sans autre purification. Mode opératoire n 15 Acide 78-{D-2-amino-2-(p-hydroxyphényl)acétamido}-3-{(Z)-3- phényl-1-propen-1-yl}-3-céphem-4-carboxylique (composé 15, BB-51076). On laisse une solution de 800 mg ( 1,09 mmoles) de 14 dans 4 ml de TFA à 90 % séjourner pendant 2 heures Le mélange réactionnel est concen- tré et le concentré est trituré avec de l'éther diisopropylique, ce qui donne 490 mng de poudre jaune Une solution de la poudre dans 2 ml de méthanol est mélangée avec 20 ml d'eau et on la charge sur une colonne de HP-20 ( 50 ml) que l'on lave avec de l'eau ( 250 ml) et on élue avec du méthanol à 30 % ( 250 ml) et avec du méthanol à 75 % ( 300 ml) successive- ment L'éluat du méthanol à 75 % est concentré et lyophilisé, ce qui donne 302 mg du produit brut que l'on dissout dans 10 ml de méthanol à % et que l'on soumet à une chromatographie sur colonne en utilisant le garnissage ( 80 ml) d'une cartouche de prep PAK-500/C 18 (Waters) La colonne est éluée avec du méthanol à 75 %, ce qui donne 158 mg ( 31 %) du produit désiré Pureté estimée, 65 % (par HPLC) Le produit brunit lorsqu'on le chauffe dans un tube capillaire au-dessus de 175 C. Les données de l'analyse sont les suivantes: IR: v K Br cm-1 1760, 1680, 1600-1580, 1520. max UV >Àtampon de phosphate (ph 7) nm(s) 280 ( 8900). U: max RMN: 6 DMSO-D 6/D 20 ( 5/1) ppm 4,45 ( 2 H, d, 4 Hz, CH 2 Ph), 4, 87 ( 1 H, s, CHND 2); 6,7 ( 2 H, d, 9 Hz, Ph); 6,9-7,5 ( 7 H, m Ph). Mode opératoire n 16 7 e-{D-2-(t-butoxycarbonylamino)-2-(p-hydroxyphényl)acétamido}-3- {(Z)-3-méthoxy-1-propen-1-yl}-3-céphem-4-carboxylate de diphénylméthyl (composé 16). Une solution de 3,0 g ( 2,95 mmoles) de 5 dans CH Cl 3 ( 100 ml) est traitée avec un mélange ( 1,8 rml) de Na OH 2 N et de l'eau ( 100 ml) à la température ambiante pendant 5 minutes La phase organique est séparée, on lave avec de l'eau ( 50 ml) et du Na Cl aqueux ( 50 ml), on sèche et on 40117 évapore à environ 10 ml La solution rouge qui en résulte est traitée avec du méthoxyacétaldéhyde ( 1,3 nil, 15 mmoles) à la température ambian- te pendant 15 minutes Après évaporation du solvante, le résidu est soumis à une chromatographie sur une colonne de gel de silice ( 100 g), on élue avec un mélange toluène-Ac O Et ( 3/1 et 1/1), ce qui donne le composé du titre ( 750 mg, 38 %). Les données de l'analyse sont les suivantes: RMN: CDC 13 +D 20 ppm 1,45 (I H s, t-Bu); 3,15 ( 3 H, s, OCH 3); 3,27 ( 2 H, s, 2-CH 2), ca 3,5 ( 2 H, m, -CH 2-O Me); 4,90 ( 1 H, d, 5,0 Hz, 6-H); 5,12 ( 1 H, s, -CH-ND-); ca 5,1 ( 1 H, m, =CH-CH 2-); 5,72 ( 1 H, d, 7-H); 6,18 ( 1 H, d, 12 Hz, CH=CH-CH 2-); 6,65 & 7,10 (chaque fois 2 H, chaque fois d, HO-Ph-); 6,90 ( 1 H, s, -CH Ph 2); 7,3 ( 1 OH, s, Ph). Mode opératoire n 17 Acide 7 e-{D-2-amino-2-(p-hydroxyphényl)acétamido}-3-{(Z)-3- méthoxy-1-propen-1-yl}-3-céphem-4-carboxylique (composé 17, BB-51092). Le composé 16 est débloqué avec du TFA ( 3 ml) à la température ambiante pendant 1 heure L'évaporation du solvant suivie d'une précipi- tation dans l'éther'isopropylique, donne le trifluoroacétate du produit que l'on purifie par chromatographie sur colonne HP-20 La colonne est lavée avec H 20 ( 500 ml) et on élue avec Me OH à 30 % ( 500 ml), ce qui donne 350 mg ( 75 %) du produit désiré Pureté estimée 90 % (par HPCL) Point de fusion 160 (déc) Les données de l'analyse sont les suivantes: IR: v K Br cm -1 3400, 3180, 1760, 1680. max UV: Xtampon de phosphate p H 7 nm(e) 228 ( 11500), 279 ( 9400). NMR: 20 pp 3,40 ( 3 H, S CH), 3,40 ( 2 H, A Bq, 2-C Hx), NMR: 6 D 20 ppm 3,40 ( 3 H, s, OCH,), 3,40 ( 2 H, A Bq, 2-CH?), 4,0 ( 2 H, m, -CH 20 Me), 5,19 ( 1 H, d, 4,5 Hz, 6-H), ,25 ( 1 H, s, -CH-ND 2), 5,77 ( 1 H, d, 7-H), ca 5,8 ( 1 H, m, =CH-CH 2-), 6,20 ( 1 H, d, 11 Hz, -CH=CH-CH 2), 7,05 & 7,45 (chaque fois 2 H, chaque fois d, HO-Pb-). Mode opératoire n 18 7}-{D-2-(t-butoxycarbonylamino)-2-(p-hydroxyphényl)-acétamido}- 3-{(Z)-3-chloro-1-propen-1-yl}-3-céphemn-4-carboxylate de diphénylméthyle (composé 18) Une solution de 5 ( 5,0 g, 4,9 mmoles) dans CH Cl 3 ( 100 ml) est traitée avec un mélange de Na OH 2 N ( 2,9 ml, 5,8 mmoles) et d'eau ( 100 ml) à la température ambiante pendant 5 minutes La phase organique est séparée et lavée avec de l'eau ( 50 ml) et une solution saturée de Na Ci ( 50 ml), et on sèche sur Na 2 SO 4 anhydre Le filtrat est évaporé à environ 20 ml et l'on ajoute du chloroacétaldéhyde ( 2,0 ml, 25 mmoles). Le mélange est agité à la température ambiante pendant 30 minutes et l'on évapore sous vide Le sirop résiduaire est soumis à une chromato- graphie sur une colonne de gel de silice ( 100 g), on élue avec un mélange toluène-Ac O Et ( 3/1), ce qui donne le composé du titre 18 ( 900 mg, 27 %). Les données de l'analyse sont les suivantes: NMR: 6 CDC 13 +D 20 ppm 1,45 ( 9 H, s, t-Bu), ca 3,3 ( 2 H, mni, 2-CH 2), 3,5 4,0 ( 2 H, m, -CH 2-Cl), 4,92 ( 1 H, d, 5,0 Hz, 6-H), 5,12 ( 1 H, s, -CH-ND-), ca 5,7 ( 2 H, m, 7H & =CII-CH 2), 6,15 ( 1 H, d, 11 Hz, 3-CH=CH-CH 2-), 6,63 & 7,10 (chaque fois 2 H, chaque fois d, HO-Ph-), 6,89 ( 1 H, s, CH Ph 2), 7,3 ( 10 H, s, Pb). Le déblocage de cette substance avec TFA tel que décrit dans les exemples précédents (par exemple modes opératoires 7, 11, etc) donne l'acide 7-{D-2-amino-2-(p-hydroxyphényl)acétamido}-3-{(Z)-3-chloro-1- propen-1-yl}-3-céphem-4-carboxyl ique. Mode opératoire n 19 7 {D-2-(t-butoxycarbonylamino)-2-(p-hydroxyphényl)acétamido}- 3 {(E)-3-iodo-1-propen-1-yl}-3-cephem-4-carboxylate de diphénylméthyle (composé 19) Un mélange de 18 ( 900 mg, 1,3 mmole) et Na I ( 590 mg, 3,9 mmoles) dans l'acétone ( 18 ml) est agité à la température ambiante pendant une heure Apres évaporation du solvant, le résidu est dissous dans Ac O Et ( 100 ml), on lave successivement avec de l'eau, Na 25203 aqueux et Na Cl aqueux, on sèche et on évapore, ce qui donne le composé du titre ( 1,02 g). Les données de l'analyse sont les suivantes: NMR: 6 CDC 13 + 020 ppm 1,45 ( 9 H, s, t-Bu), ca 3,4 ( 2 H, m, 2-CH 2), ca 3,8 ( 2 H, m, -CH 2-I), 4, 90 ( 1 H, d, 5,0 Hz, 6-H), 5,14 ( 1 H, s, -CH-ND-), 5,73 ( 1 H, d, 7-H), ca 5,5 6,0 ( 1 H, m, =CU_ CH 2), 6,68 & 7,10 (chaque fois 2 H, chaque fois d, HO-Pb), 6,78 ( 1 H, d, 15 Hz, 3-CH=CH-CH 2-), 6,99 ( 1 H, s, Ch Pb 2), 7,35 ( 10 H, s, Pb). Mode opératoire n 20 78-{D-2-(t-butoxycarbonylamino)-2-(p-hydroxyphényl)acétamrido}- 3-{ 3-( 1 H-1,2,3-triazol-5-yl)thio-1-propen-1-yl}-3-cephem-4-carboxylate de diphénylméthyle (Composé 20) A une solution de 19 ( 1,0 g, 1,3 mmole) dans l'acétate d'éthyle ( 20 ml) on ajoute de l'oxyde de propylène ( 0,25 ml, 3,8 mnmoles) et du ( 1 H-1,2,3-triazol-4-yl)thiol à 0,1 M dans l'acétate d'éthyle ( 19 ml) Le mélange est agité à la température ambiante à la température ambiante pendant 30 minutes et l'on évapore sous pression réduite Le sirop résiduaire est soumis à une chromatographie sur colonne de gel de silice C-200 ( 50 g) Le produit désiré est élué avec un mélange CHC 13-tle OH ( 10/1), ce qui donne 800 mg ( 83 %) du composé du titre. Les données de l'analyse sont les suivantes: NMR: 6 CDC 13 +H 20 ppm 1,45 ( 9 H, s, t-Bu), ca 3,3 ( 4 H, m, 2-CH 2 & -CH 2-S-), 4,80 ( 1 H, d, 5,0 Hz, 6-H), 5,20 ( 1 H, s, -CH-ND-), 5,70 ( 1 H, d, 7-H), ca 5,95 ( 1 H, m, =CH-CH 2), 6,68 ( 2 H, d, HO-Pb), 6,90 ( 1 H, s, -CH Pb 2), 7,25 ( 1 OH, s, Ph), 7,52 ( 1 H, s, triazole-4-H). Mode opératoire n 21 Acide 7 e-{D-2-amino-2-(p-hydroxyphéinyl)acétamnlido}-3-{ 3-( 1 H-1,2,3,- triazol-5-yl)thio-1-propen-1-yl}-3-céphem-4-carboxylique (Composé 21, BB-51091) Un mélange de 20 ( 800 mg) et de TFA ( 2 ml) est maintenu à la température ambiante pendant une heure et on évapore ensuite à siccité. Au résidu, on ajoute de l'éther isopropylique, ce qui donne un précipité jaune ( 600 mg) que l'on dissous dans l'eau ( 1 ml) et que l'on charge dans une colonne HP-20 ( 100 ml) La colonne est lavée à l'eau ( 500 ml) et on élue avec du Me OH à 30 % et ensuite avec du Me OH à 50 % La fraction 25401 17 contenant le composé désiré est recueillie, évaporée et lyophilisée, ce qui donne 170 mg ( 33 %) du produit désiré, pureté estimée 50 % (par HPLC) , point de fusion 180 C (déc Y. Les données de l'analyse sont les suivantes: IR: m K Br cm 1 3360, 3280, 1755, 1670. R: max UV Xtampon de phosphate nm() 235 ( 14100), 252 ( 12300). max NMR: D 20 +DC 1 ppm ca 3,4 ( 4 H, m, 2-CH 2-, -CH 2-S-), 5,43 ( 1 H, d, 4,5 Hz, 6-H), 5,15 ( 1 H, s, -CH-ND 2), ca 6,0 ( 2 H, m, 7-H et =CH-CH 2-), 6,70 & 7,15 (chaque fois 2 H, chaque fois d, HO-Pb-), 8,05 ( 1 H, s, triazol-4-H). Mode opératoire n 22 Iodure de 7 e-{D-2-(t-butoxycarbonylamino)-2-phénylacétamido}-3- (triphénylphosphonio)méthyl-3-cephem-4-carboxylate de benzhydryle (composé 22) Un mélange de 14,5 g ( 0,0196 mmole) de 7-{D(-)-ca-(t-butoxycarbonyl- amino)-a-phénylacétamido}-3-iodométhyl-3-cephem-4-carboxylate de benzhy- dryle et 5,24 g ( 0,02 mole) de triphénylphosphine dans 300 ml d'acétate- d'éthyle est agité à la température ambiante pendant 2 heures Au mélange réactionnel, on ajoute 200 ml d'éther, ce qui forme un précipité que l'on recueille par filtration et qu'on lave à l'éther, ce qui donne 14,3 g ( 73 %) du composé du titre Le filtrat est concentré à 50 ml et le concentré est dilué à l'éther, ce qui donne 2,4 g de la seconde récolte du produit Rendement total 16,7 g ( 85 %). Les données de l'analyse sont les suivantes: IR: v K Br cm 1 1780, 1690, 1480, 1420, 1350, 1240, 1150. max Mode opératoire n 23 7 n-{D-2-(t-butoxycarbonylamino)-2-phénylacétamido}-3-{(Z)-1- propen-1-yl}-3-cephem-4-carboxylate de benzhydryle (composé 23) A une solution de 5 g ( 5 mmoles) de 22 dans 200 ml de chloroforme, on ajoute un mélange de 100 ml d'eau et 5 ml ( 5 mmoles) d'hydroxyde de sodium 1 N et le mélange est secoué pendant 3 minutes La couche orga- nique qui se sépare est lavée à l'eau et avec une solution saturée de Na Cl et on séche sur sulfate de magnésium anhydre La solution dans le chloroforme étant filtrée, le filtrat est concentré à 100 ml sous pression réduite Au concentré, on ajoute 3 ml d'acétaldéhyde et le mélange est agité à la température ambiante pendant 1,5 heure et évaporé à siccité Le résidu huileux est soumis à une chromatographie sur une colonne de gel de silice (Kiesel gel 60, 50 g) par élution au chloro- forme Les fractions désirées sont recueillies et évaporées à siccité et le résidu est trituré avec du n-hexane, ce qui donne 990 mg ( 31 %) du composé du titre ( 23). Les données de l'analyse sont les suivantes: IR: v K Br cm-1 1780, 1710, 1660, 1510, 1490, 1360, 1240, 1210, Imax 1150. NMR: 6 CD C 13 ppm 1,3-1,5 ( 12 H, m, -C-CH 3), 3,22 ( 2 H, s, 2-H-), 4, 93 ( 1 H, d, 4,5 Hz, 6-H), 5,23 ( 1 H, d, 8 Hz, CH-CO), ,5-6,2 ( 3 H, m, 7-H & vinyl-H), 6,94 ( 1 H, s, CH Ph), 7,2-7,5 ( 15 H, m, phényl-H). Mode opératoire N O 24 7 e-{D-2-amino-2-phénylacétamido}-3-{(Z)-1-propényl-3-cephem-4- carboxylate de sodium (composé 24, BB-51065) Un mélange de 0,94 g ( 1,47 mmole) de 23 et 3 ml de TFA est agité à la température ambiante pendant 30 minutes, puis on dilue avec 50 ml d'un mélange 1/1 éther-isopropyle éther pour séparer environ 800 mg de précipité que l'on rcueille par filtration et que l'on dissous dans 3 ml' de méthanol A la solution, on ajoute 4,5 ml ( 4,5 mmoles) de 2-éthyl- hexanoate de sodium 1 M (SEH) dans l'acétate d'éthyle et on dilue le mélange avec 50 ml d'éther et 50 ml d'éther isopropylique successive- ment Le précipité est recueilli par filtration, ce qui donne 710 mg du produit brut 24 que l'on dissous dans 20 ml d'eau et que l'on soumet à une chromatographie sur colonne en utilisant 50 ml du garnissage d'une colonne Prep PA Kl C 18 (Waters) La colonne est éluée avec de l'eau et du méthanol à 10 % Les fractions contenant le produit désiré sont recueil- lies en étant contrôlées par HPLC et on les concentre à 5 ml et on lyophilise, ce qui donne 182 mg ( 31 %) du produit désiré fondant à 200 C. Pureté estimée 50 % par HPLC. Les données de l'analyse sont les suivantes: IR: v K Br cm -1 1760, 1660, 1600, 1400, 1180, 1100. UV: Atampon de phosphate (p H 7) n() 282 ( 5500). U:Amax NMR: 6 D 20 ppm 1,60 ( 3 H, d, 6 Hz, -C-CH 3), 3,12 ( 1 H, d, 18 Hz, 2-H), 3,48 (IH, d, 18 Hz, 2-H), 5,03 ( 1 H, d, 4,5 Hz, 6-H), 5,62 ( 1 H, d, 4,5 Hz, 7-H), 5,93 ( 1 H, d, 10 Hz, vinyl-H)-, 5,2-5,8 ( 1 H, m, vinyl-H), 7,41 ( 5 H, s, phényl-H). Miode opératoire no 25 7 -{D-2-(tbutoxycarbonylamino)-2-phénylacétamido}-3-{(Z)-3 -chloro-1-propen-1-yl l3-cephem-4-carboxylate de benzhydryle (composé 25) A une solution de 2 g ( 2 mmoles) de 22 dans 50 ml de chloroforme, on ajoute 50 ml d'eau contenant 2 ml ( 2 mmoles) d'hydroxyde de sodium 1 N et le mélange est secoué pendant 3 minutes La couche organique est séparée et lavée avec de l'eau et une solution saturée de Na Cl successi- vemnient La solution de chloroforme séchée est concentrée à 30 nml sous pression réduite Au concentre, on ajoute 2 ml de chloroacétaldéhyde et le mélange est agité à la température ambiante pendant une heure, lavé avec de l'eau et ensuite avec une solution saturée de Na Cl La solution organique est séchée et évaporée à siccité Le résidu huileux est soumis à une chromatographie sur une colonne de gel de silice (Wako-gel C-200), 50 g) par élution au chloroforme Les fractions désirées sont recueil- lies et évaporées à siccité, ce qui donne 534 mg du produit brut. Les données de l'analyse sont les suivantes: 2 IR: K Br cm-1 1780, 1710, 1660, 1500, 1490, 1360, 1240, 1210, max La structure de cet échantillon n'est pas confirmée à cause de son spectre RM'N de mauvaise qualité. Mode opératoire n 26 7 _-(D-2-amino-2-phénylacétamido)-3-{(Z)-3-chloro-1-propen-1-yl}-3- cephem-4-carboxylate de sodium (composé 26, BB-51066) Un mélange de 472 mg ( 0,7 mmole) de 25 et 1,5 ml de TFA est agité à 0-15 C pendant 15 minutes et on dilue avec 30 ml d'un mélange éther- isopropyle éther ( 1/1), ce qui donne 330 mg d'un précipité jaune pâle que l'on recueille par filtration A une solution du précipité dans 3 ml de méthanol, on ajoute 2 ml ( 2 mmoles) de SEH dans l'acétate d'éthyle et le mélange est dilué avec 50 ml d'acétate d'éthyle Le précipité qui en résulte est recueilli par filtration et lavé avec de l'éther, ce qui donne 244 mg de produit brut Une solution du produit brut dans 10 ml d'eau est soumise à une chromatographie sur colonne en utilisant 50 ml du garnissage dans une cartouche de Prep PAK-500/C 18 (Waters) La ci(l r-ne est éluée avec de l'eau et du méthanol à 10 % Les fractions désirees de méthanol à 10 % sont combinées et concentrées à 5 ml et lyophilisées, ce qui donne 60 mg du produit solide fondant à 200 C (déc prog). Les données de l'analyse sont les suivantes: IR: v K Br cm-1 1760, 1660, 1630, 1360, 1120, 1070. R: max UV xtampon de phosphate (p H 7) nm(c) 243 ( 12700), 200 sh ( 4200) UV: max Mode opératoire n 27 Acide 7 e-(D(-)-2-amino-2-phénylacétamido)-3-{(Z)-1-propen-1-yl}- 3-cephem-4-carboxylique (composé 24, BB-S 1065 forme dipolaire) s .CONE NS CODE> E=CECE 3 o CO 2 E Le 7--{D-2-(t-butoxycarbonylamino)-2-phénylacétamido-3-( 1- propényl)-3-cephem-4-carboxylate (composé 23) 1,5 g ( 2,34 mmoles), est traité avec 3 ml d'acide trifluoroacétique et le mélange est agité à la température ambiante pendant 20 minutes et il est dilué avec 100 ml d'éther, ce qui donne 1,15 g ( 96 %) du trifluoroacétate brut de BB-51065. Les données de l'analyse sont les suivantes: IR: Vmax (K Br) en cm-1 1760, 1670, 1200, 1130. UV: Amax (ptl 7 tampon de phosphate) 283 nm (ó: 8300). Le trifluoroacétate ( 1,1 g, 2,25 mioles) est dissous dans 20 ml d'eau et la solution est soumise à une chromatographie sur colonne en utilisant 100 ml du garnissage obtenu à partir de la cartouche de Pre PAK/C 18 (Waters) La colonne est éluée avec de l'eau, du miéthanol à % et du méthanol à 30 % L'éluat avec du méthanol à 30 % est concentré à ml Le produit cristallin est séparé Le produit est recueilli et lavé à l'acétone et séché sous vide sur P 205, ce qui donne 505 mg ( 46 %) de BB- S 1065 pur (forme dipolaire) fondant à 180-183 C (déc) Pureté estimée 95 %. Les données de l'analyse sont les suivantes: 1 R: Vmax (K Br) en cm-1 1750, 1690, 1590, 1400, 1350. UV: Amax (p H 7 tampon de phosphate) 282 nm (s: 8800). NMR: 6 (D 20 + Na HC 03) en ppm 1,58 ( 3 H, d, I= 6 Hz, C-CH 3), 3,3 ( 2 H, d, 2-H), 5,03 ( 1 H, d, I= 4,5 Hz, 6-H), ,20 ( 1 H, s, CH-CO), 5,1-5,8 ( 1 H, m, CH=C), ,63 ( 1 H, d, I= 4,5 Hz, 7-H), 5,92 ( 1 H, d, I= 12 Hz, CH=C), 7,4 ( 5 H, s, phényl-H). Mode opératoire n 28 Acide D(-)-2-(t-butoxycarbonylamino)-2-( 3-chloro-4-hydroxy- phényl)-acétiqgue (composé 28) Un mélange de 6 g ( 0,03 mole) de 3-chloro4-hydroxyphénylglycine et de 9,8 g ( 0,045 mole) de dicarbonate de di-tbutyle dans 120 ml d'une solution de tétrahydrofuranne (THF) aqueuse à 50 % contenant 10 ml ( 0,71 mole) de triéthylamine est agité à la température ambiante pendant 3 heures Le mélange est concentré à 60 ml et le concentré est lavé à l'éther La couche aqueuse est acidifiée avec de l'acide chlorhydrique 6 N et on extrait avec 200 ml d'éther L'extrait est lavé à l'éther et avec une solution saturée de Na Cl, on seche sur Mg 504, et on évapore à siccité, ce qui donne 10 g d'un résidu huileux qui ne se solidifie pas lorsque l'on essaie de le triturer avec un mélange éther-n-hexane. Mode opératoire n 29 7 -{ D-2 ( t-butoxycarbonyl ami no) -2-( 3-chloro-4hydroxyphényl) acétamido}-3-chl orométhyl-3-cephein-4-carboxylate de benzhydryl e (composé 29) - C Ce $ C 2 C" *CO 2 C(CH 3)3 CO 2 CH (C 6 a 5) 2 A une solution de 6,2 g ( 0,015 mole) de composé 2 et 5,4 g ( 0,018 mole) de composé 28 dans 150 ml de THF sec, on ajoute 3,7 g ( 0,018 mole) de DCC et l'on agite le mélange à la température ambiante pendant une heure La dicyclohexylurée qui se sépare pendant l'agitation est éliminée par filtration et le filtrat est évaporé à siccité Le résidu étant extrait avec 200 ml d'acétate d'éthyle, l'extrait est lavé avec une solution aqueuse de Na HCO 3, de l'eau et une solution saturée de Na Cl et on sèche sur Mg SO 4 Le filtrat est évaporé à siccité et le résidu huileux est soumis à une chromatographie sur une colonne de gel de silice (Wako gel C-200, 140 g) par élution avec un mélange toluene- acétate d'éthyle ( 10/1) Les fractions désirées sont recueillies et évaporées à siccité, ce qui donne 10 g du produit 29. Les données de l'analyse sont les suivantes: IR: Vmax (K Br) en cm-1 1790, 1720, 1680, 1500, 1370, 1240, 1160. Mode opératoire n 30 Iodure 7 e-{D-2-(t-butoxycarbonylamino)-2-( 3chloro-4-hydroxy phênyl)acétamido}-3-triphériylphosphonio)méthyl-3cephemn-4-carboxylate de benzhydryle (composé 30) ECONE C C ? ó 6 E 5) X CO 2 C (Cs 3) 2 C 2 c ( 6 5) 2 A une solution de 10 g ( 0,0143 mole) de composé 29 dans 100 ml d'acétone, on ajoute 11,2 g ( 0,075 mole) d'iodure de sodium et lemélange est agité à la température ambiante pendant 30 minutes Le mélange est concentré à 30 ml Au concentré, on ajoute 200 ml d'acétate d'éthyle et le mélange est lavé avec une solution aqueuse de Na 25203, de l'eau et une solution saturée de Na Ci et on sèche sur Fig SO 4 La solution d'acétate d'éthyle est filtrée et le filtrat est concentré à la moitié de son volume Au concentre, on ajoute 3,9 g ( 0,015 mole) de triphénylphosphine et le mélange est agité à la température ambiante pendant deux heures A la solution, on ajoute 300 ml d'éther pour séparer un préci- pité que l'on recueille par filtration et que l'on sèche, ce qui donne 9, 2 g de l'iodure de phosphonium 30. Les données de l'analyse sont les suivantes: IR: vmax (K Br) en cm'1 1780, 1680, 1490, 1350, 1240, 1150. Mode opératoire N O 31 73-{D-2-(t-butoxycarbonylamino)-2-( 3-chloro-4hydroxyphényl) acétamido}-3-{(Z)-1-propen-1-yl)} 3-cephem-4-carboxylate de benzhydryle (composé 31) BO ECON v C { CE=CBCE 3 (Z) CO C (CE 3)3 l Co CE (C E) Une solution de 9,5 g ( 9 mrmoles) du composé 30 dans 200 ml de chloroforme est traitée avec un mélange d'eau ( 100 ml) et de Na OH 1 N ( 10 ml) et le mélange est secoué pendant 3 minutes La couche organique est lavée avec de l'eau et avec une solution saturée de Na Cl, séchée sur Mg SO 4 et concentrée jusqu'à environ la moitié de son volume Au concen- tré, on ajoute 20 ml d'acétaldéhyde à 90 % et le mélange est agité à la température ambiante pendant 3 heures, traité avec Mg SO 4 anhydre et filtré Le filtrat est évaporé à siccité et le résidu est passé en chromatographie sur gel de silice 60 (Merck, 120 g) par élution avec un mélange toluène-acétate d'éthyle ( 4/1) Les fractions désirées sont recueillies et évaporées à siccité et le résidu est trituré avec un mélange éther-éther isopropylique et n-hexane, ce qui donne 1,33 g du produit bloqué 31. Les données de l'analyse sont les suivantes: 1 R: Vmax (K Br) en cm-1 1770, 1700, 1660, 1480, 1350, 1210, 1150. 25401 17 Mode opératoire n 32 Acide 7 a-{D-2-amino-2-( 3-chloro-4-hydroxyphényl)acétamidor-3- {(Z)-1-propen-1-yl}-3-céphemn-4-carboxylique (composé 32, BMY-281060) )2 E Un mélange de 1,33 g ( 1,93 mmoles) de composé 31 et 3 ml d'acide trifluoroacétique est agité à la température ambiante pendant 30 minutes et le mélange est dilué avec 50 ml d'un mélange éther-éther isopropy- lique ( 1/1) pour donner 1,072 g du trifluoroacétate de 32 brut, que l'on soumet à une chromatographie sur une colonne garnie du garnissage d'une cartouche prep PAK/C 18 (Waters) ( 80 ml) La colonne est éluée avec de l'eau et du méthanol à 10 % L'éluat au méthanol à 10 % est concentré à un volume de 10 ml pour séparer un précipité cristallin que l'on recueille par filtration et que l'on lave à l'acétone On sèche sous vide sur P 205, ce qui donne 238 mg de 32 (pur à 95 %), fondant à 180-185 C (déc. prog) Le filtrat*est concentré à 5 ml et lyophilisé, ce qui donne 154 mg d'une seconde récolte qui est pure à 80 % par HPLC. Les données de l'analyse sont les suivantes: IR: vmax (K Br) en cm 1 1760, 1680, 1570, 1410, 1390, 1350, 1290, 1270. UV: Àmax (p H 7 tampon de phosphate) en nm (ó) 232 ( 10000), 280 ( 10500). NMR: 6 (D 20 + Na HC 03) en ppm 1,68 ( 3 H, d, I= 6 Hz, C=C-CH 3), 3,25 ( 1 H, d, I = 18 Hz, 2-H); 3,57 ( 1 H, d, I = 18 Hz, 2-H); 4,90 ( 1 H, s, CH-CO); 5,18 ( 1 H, d, I = 4,5 Hz, 6-H); 5,72 q( 1 H, d, I = 4,5 Hz, 7-H); 5,5-5,9 ( 1 H, m, CH=C); 5,97 ( 1 H, d, I = 12 Hz, CH=C); 7,02 ( 1 H, d, I = 8 Hz, phényl-H); 7,30 ( 1 H, d-d, I = 8 & 1,5 Hz, phényl-H); 7,50 ( 1 H, d, I = 1,5 Hz, phényl-H). Mode opératoire n 33 Mélange d'acide D(-)-2-(t-butoxycarbonylamino)-2-( 3,4-dihydroxy- phényl)acétique ( 33 a) avec ses dérivés 3 (et 4)-mono-0-butoxycarbonyle Un mélange de 3,66 g ( 0,02 mole) de 3,4-dihydroxyphénylglycine et 9,24 g ( 0,04 mole) de dicarbone de di-t-butyle dans 120 ml d'une solu- tion aqueuse de THF à 50 % contenant 10 ml ( 0,071 mole) de triéthylamine est agité à la température ambiante pendant 16 heures et le mélange est concentré à 60 ml Le concentré est lavé avec 100 ml d'éther, acidifié avec de l'acide chlorhydrique N et extrait avec de l'éther ( 100 x 2 ml). Les extraits combinés sont lavés à l'eau et avec une solution saturée de Na Cl, séchés sur Mg SO 4 et évaporés à siccité, ce qui donne 8 g d'un résidu huileux qui est un mélange du dérivé souhaité de 3,4-dihydroxy- phérnyl et des dérivés de 3 et 4-mono-0-BOC-protégé (BOC indique le t-butoxy carbonyle). Mode opératoire n 34 76-{D(-)-2-(t-butoxycarbonylamino)-2-( 3,4dihydroxyphényl) acétamido}-3-chlorométhyl-3-céphem-4-carboxylate de benzhydryle ( 34 a) et mélange de ces dérivés 3 (et 4)-mono-0-butoxycarbonyle ( 34 b). O I col (CE 3)3 Co 2 CE (C 6 E)2 Un mélange de 8 g ( 0,0193 mole) du composé 2, 8 g du produit mélangé du mode opératoire 33 et 4,12 g ( 0,02 mole) de DCC dans 200 ml de THF sec, est agité à la température ambiante pendant 1 heure Le mélange réactionnel est évaporé à siccité Le résidu est dissous dans ml d'acétate d'éthyle et la matière insoluble (dicyclohexylurée) est éliminée par filtration Le filtrat est lavé aveç une solution de Na HCO 3 aqueuse, de l'eau et une solution saturée de Na Cl, on sèche sur Mg SO 4 et on évapore à siccité sous pression réduite Le résidu huileux est soumis à une chromatographie sur une colonne de gel de sicile (gel de silice , 130 g) par élution avec un mélange toluène-acétate d'éthyle ( 5/1) et un mélange toluène-acétate d'éthyle ( 2/1) L'éluat au mélange toluène- acétate d'éthyle ( 5/1) est recueilli et évaporé à siccité, ce qui donne 9,5 g d'un mélange des dérivés mono-O-BOC-N-BOC di-protégés ( 34 b). L'éluat au mélange toluène-acetate d'éthyle 2/1 est recueilli, évaporé a siccité, ce qui donne 3 g du dérivé 3,4-dihydroxyphényl ( 34 a). Composé 34 a Les données de l'analyse sont les suivantes: IR: vmax (K Br) en cm-1 1770, 1720, 1690, 1500, 1370, 1240, 1150. NMR: 6 (CD C 13) en ppm 1,42 ( 9 H, s, C-CH 3); 3,4 ( 2 H, br-s, 2-H); 4, 30 ( 2 H, br-s, CH 2-Cl); 4,85 ( 1 H, d, I = 4,5 Hz, 6-H); 5,07 ( 1 H, d, I = 6 Hz, CH-NH); 5,74 ( 1 H, d-d, I = 9 & 4,5 Hz, 7-H); 6,6-6,9 ( 3 H, m, phényl-H); 6,93 ( 1 H, s, CH Ph); 7,3 ( 1 OH, s, phényl-H). Composé 34 b IR: vmax (K Br) en cm 1 1770, 1720, 1690, 1500, 1370, 1240, 1150. NMR: 6 (CD C 13) en ppm 1,42 ( 9 H, s, C-CH 3); 1,55 ( 9 H, s, C-CH 3); 3, 4 ( 2 H, br-s, 2-H); 4,35 ( 2 H, br-s, CH 2-Cl); 6,9-7,1 ( 4 H, m, CH Ph & phényl-H); 7,3 ( 10 H, s,phényl-H). Mode opératoire n 35 Iodure de 7 e-{D(-)-2-(t-butoxycarbonylamino)-2-( 3,4-dihydroxy- phényl)acétamido})-3-triphénylphosphoniométhyl-3-céphem-4-carboxylate de benzhydryle ( 35 a). e e CH 2 p NCB 5)3 1 C Oc (CE 3)3 C 2 c (c 6 s) 2 Un mélange de 3 g ( 4,4 mmoles) de 34 a et 3,3 g ( 22 mmoles) d'io- dure de sodium dans 50 ml d'acétone est agité à la temperature ambiante BO / J Io BO 1 pendant 30 minutes et le mélange est concentré à siccité Le résidu est extrait avec 100 ml d'acétate d'éthyle et l'extrait est lavé avec une solution aqueuse de Na 25203, de l'eau, et une solution saturée de Na Cl. Apres séchage sur Mg SO 4, l'extrait est concentré à 60 ml Au concentre, on ajoute 1,4 g ( 5,3 mmoles) de triphénylphosphine et le mélange est agité à la température ambiante pendant 1 heure Au mélange, on ajoute ml d'éther pour séparer un précipité que l'on recueille par filtra- tion et on lave à l'éther, ce qui donne 3,2 g ( 70 %) de l'iodure de phosphonium ( 35 a). Les données de l'analyse sont les suivantes: IR: vmax (K Br) en cm 1 1780, 1680, 1480, 1430, 1360, 1240, 1150. Avec une façon de procéder semblable, on fait réagir 9,5 g ( 12 mmoles) du mélange des dérivés mono-O-BOC-protégés ( 34 b) avec de l'iodure de sodium et ensuite avec la triphénylphosphine, ce qui donne ,7 g ( 77 %) d'un mélange des dérivés correspondants mono-O-BOC-N-BOC- triphénylphosphoniométhyl ( 35 b). Les données de l'analyse sont les suivantes: IR: vmax (K Br) en cm-1 1770, 1720, 1680, 1480, 1430, 1360, 1240, 1140. Mode opératoire n 36 7 c-{D(-) -2-(t-butoxycarbonylamino)-2-( 3,4-dihydroxyphényl) acétamido}-3-{(Z)-1propen-1-yl}-3-cépheni-4-carboxylate de benzhydryle (composé 36 a) Es ≤COl'J) BO / "'= HO i ',=CHCH 3 (Z) CDC (C) * t3 3 CO 2 CE (C 6 E 5)2 A une solution agitée de 3,15 g ( 3 mmoles) de composé 35 a et 10 ml d'acétaldéhyde dans 50 ml de chloroforme, on ajoute goutte à goutte 8 ml ( 4 mmoles) d'hydroxyde de sodium 0,5 N sur une periode de 10 minutes et le mélange est agité à la température ambiante pendant i heure Le mélange réactionnel est lavé à l'eau et avec une solution saturée de Na Ci, séché sur Mg SO 4 et évaporé sous pression réduite Le résidu huileux est soumis à une chromatographie sur une colonne de gel de silice (Wako gel C-200, 60 g), qui est éluée avec du chloroforme ( 2 l) et du méthanol à 2 % dans le chloroforme sous surveillance par TLC (chloroforme/méthanol = 10/1) Les fractions désirées provenant de l'éluat au méthanol à 2 % sont recueillies et évaporées à siccité, ce qui donne 0,8 g ( 40 %) du dérivé propényle 36 a. Les données de l'analyse sont les suivantes: NMR: 6 (CD C 13) en ppm 1,28 ( 3 H, d, I = 6 Hz, C-CHF 3); 1,42 ( 9 H, s, C-CH 3); 3,25 ( 2 H, s, 2-H); 4,92 ( 1 H, d, I = 4,5 Hz, 6-H); 5,08 ( 1 H, d, I = 6 Hz, CH-NH); ,3-5,8 ( 1 H, m, CH:C); 5,80 ( 1 H, d, I = 4,5 Hz, 7-H); 6,04 ( 1 H, d, I = 11 Hz, CH=C); 6,70 ( 2 H, s, phényl-H); 6,82 ( 1 H, s, phényl-H); 6,92 ( 1 H, s, CH Ph); 7,3 ( 1 OH, s, phényl-H). Par une méthode semblable à celle décrite ci-dessus, on fait réagir 10,5 g ( 9,3 mmoles) du mélange des dérivés di-protégés 3 et 4-0-BOC-N-BOC ( 35 b) avec l'acétaldéhyde, ce qui donne 3,3 g ( 46 %) du dérivé 3-propényle correspondant 36 b. Les données de l'analyse sont les suivantes: IR: vmax (K Br) en cm 1 1770, 1700, 1500, 1370, 1240, -1140. NMR: (CD C 13) en ppm 1,4 ( 9 H, s, C-CH 3); 1,55 ( 9 H, s, C-CH 3); 3,25 ( 2 H, s, 2-H); 6,07 ( 1 H, d, I = 11 Hz, CH=C); 6,9-7,1 ( 4 H, m, CH-Ph & phényl-H); 7,3-7,5 ( 10 H, m, phényl-H). Mode opératoire n 37 Acide 7 e-{D(-)-2-amino-2-( 3,4-dihydroxyphényl)acétamido}l-3- {(Z)-1-propen-1-yl}-3-céphem-4-carboxylique (cornposé 37, BMY-28068). (Z) HO 25401 17 Un mélange de 0,8 g ( 1,2 mmoles) de composé 36 a, 0,8 ml d'anisole et 3 ml d'acide trifluoroacétique est agité à la température ambiante pendant 5 minutes, et dilué avec 25 ml d'éther et 25 ml d'éther isopro- pylique Le précipité qui en résulte est recueilli par filtration et lavé avec de l'éther isopropylique, ce qui donne 557 mg du sel de trifluoroacétate brut du composé 37 Une solution du produit brut dans ml d'eau est purifiée par chromatographie sur colonne en utilisant ml du garnissage d'une cartouche prep PAK/C 18 (Waters) et la colonne est éluée avec de l'eau et du méthanol à 5 % successivement L'éluat du méthanol à 5 % contenant le produit désiré est concentré à 5 ml et lyophilisé, ce qui donne 231 mg ( 47 %) du composé 37 (forme dipolaire, pur à 90 %) Point de fusion 200 C (déc prog). Les données de l'analyse sont les suivantes: - IR: vmax (K Br) en cm 1 1760, 1690, 1580, 1530, 1400, 1360,-1290, 1270. UV: xmax (p H 7 tampon de phosphate) en nm (E) 233 ( 9200), 281 ( 11000). NMR: 6 (D 20) en ppm 1,68 ( 3 H, d, 1 = 6 Hz, C-CH 3), 3,26 ( 1 H, d, I = 18 Hz, 2-H); 3,58 ( 1 H, d, I = 18 Hz, 2-H) ,18 ( 1 H, s, CHNH); 5,22 ( 1 H, d, I = 4,5 Hz, 6-H); 5,5-5,9 ( 2 H, m, CH=C & 7-H); 5,97 ( 1 H, d, 1 = 11 Hz, CH=C); 7,05 ( 3 H, mni, phényl-H). Selon une méthode semblable, 3,3 g ( 4,3 mmoles) du mélange de dérivé N,0di-t-BOC protégé 36 b donne 1,3 g ( 75 %) du composé 37 sous sa forme dipolaire (pur à 90 %), qui donne des données spectrales identiques à celles indiquées ci-dessus. Mode opératoire n 38 Acide D(-)-2-(t-butoxycarbonylamino)-2-( 4-hydroxy-3-méthoxy- phényl)acétique (composé 38) t CCO 2 E N 3 CE 3 Co 2 C (C S 13) $ Un mélange de 2,96 g ( 0,015 mole) d'acide D(-)-2-amino-2-( 4- hydroxy-3-méthoxyphényl)acétique et 3,6 g ( 0,165 moles) de di-t-butyl- dicarbonate dans 100 ml de THF aqueux à 50 % contenant 4,2 ml ( 0,03 mole) de triéthylamine est agité à la température ambiante pendant 16 heures et le mélange réactionnel est concentré à 50 ml Le concentré est lavé avec 50 ml d'éther, acidifié avec de l'acide chlorhydrique N et il est extrait deux fois avec de l'éther ( 100 x 2 ml) Les extraits combinés sont lavés avec de l'eau et avec une solution saturée de Na Ci Les extraits secs sont évaporés à siccité, ce qui donne 4,38 g du composé 38 sous la forme de solides mousseux. Les données de l'analyse sont les suivantes: NMR: 6 (CD Cl 3) en ppm 1,4 ( 9 H, s, -C-CH 3); 3,8 ( 3 H, s, OCH 3); 5,15 ( 1 H, d, I = 6 Hz, CH-NH); 6,85 ( 3 H, s, phényl-H) Mode opératoire no 39 76-{D(-)-2-(tbutoxycarbonylamino)-2-( 4-hydroxy-3-méthoxyphényl) acétamido}-3-chllorométhyl-3-céphem-4-carboxylate de benzhydryle (com- posé 39) O E=CON I -I 2 ci Co CE OCI(C 2 C 1 C 02 C(C 3)3 CE(C 65)2 C 2 Cs (c 6-=) 2 Un mélange de 4,3 g de composé 38, 5 g ( 0,012 mole) de composé 2 et 3 g ( 0,015 mole) de DCC dans 150 ml de THF sec est agité à la température ambiante pendant 2 heures L'urée qui se précipite est éliminée par filtration et le filtrat est évaporé à siccité Une solution du résidu dans 200 ml d'acétate d'éthyle est lavée avec une solution aqueuse de Na HCO 3, de l'eau et une solution saturée de Na Cl, séchée sur Mg SO 4 et évaporée à siccité Le résidu huileux est soumis à une chromatographie sur une colonne de gel de silice (Kiesel gel 60, 100 g), qui est éluée avec un mélange toluène-acétate d'éthyle ( 4/1) sous surveillance par TLC (mélange toluéne-acétate d'éthyle 1/1 ou chloroformeméthanol 50/1) Les fractions désirées sont recueillies et évaporées à siccité, ce qui donne 7 g du composé 39 désiré, le 3-chlorométhylcêphem sous la forme de solides mousseux. Les données de l'analyse sont les suivantes: NMR: ôen ppm 1,4 ( 9 H, s, CCH 3); 3,45 ( 2 H, br-s, 2-H); 3,83 ( 3 H, s, OCH 3); 4,32 ( 2 H, s, -CH 2 Cl); 4,92 ( 1 H, d, I = 4,5 Hz, 6-H); 5,13 ( 1 H, d, I = 6 Hz, CH-NH), 5,65 ( 1 H, d, I = 6 Hz, NH); 5,80 ( 1 H, d-d, I = 8 & 4,5 Hz, 7-H); 6,85 ( 3 H, s, phényl-H); 6,95 ( 1 H, s, CH-Ph); 7,2-7,5 ( 10-H, m, phényl-H). Mode opératoire n 40 Iodure de 7 p-{D-(-)-2-(t-butoxycarbonylamino)-2-( 4-hydroxy-3- méthoxyphényl)acé tamido} -3-triphénylphosphoni ométhyl-3-céphem-4- carboxylate de benzhydryle (composé 40). EO " BCOM E C C 02 C (C 3 C 3c)2 Un mélange de 7 g ( 0,01 mole) de composé 39 et 7,5 g ( 0,05 mole) d'iodure de sodium dans 100 ml d'acétone est agité à la température ambiante pendant 30 minutes et évaporé à siccité Une solution du résidu dans 200 ml d'acétate d'éthyle est lavée avec une solution aqueuse de Na 25203, de l'eau et une solution saturée de Na Cl, séchée sur Mg 50 04 et concentrée à 100 ml Au concentré, on ajoute 3,1 g ( 0,012 mole) de triphénylphosphine et le mélange est agité à la température ambiante pendant 1 heure Au mélange réactionnel, on ajoute 100 ml d'éther et le solide séparé est recueilli par filtration, lavé avec de l'éther et séché, ce qui donne 5,8 g du dérivé triphénylphosphonium composé 40 Le filtrat éthéré est concentré à 10 ml et au concentre, on ajoute 300 ml d'éther, ce qui donne 0,9 g du produit en tant que seconde récolte Le rendement total est de 6,7 g. Mode opératoire n 41 7 j-{D-(-)-2-(t-butoxycarbonyleamino)-2-( 4-hydroxy-3-méthoxyphényl- acétamniido}-3-{(Z)-l-propen-1-yl}-3-cépheni-4-carboxylate de benzhydryle (composé 41). Ii / \) p 3 O S) /\,-/ à; >Nw=C-C::; (Z) CE 3 O CO 2 C(CE 3)3 CO CE(C 6 5)2 A un mélange agité de 5,8 9 ( 5,5 nmmoles) de composé 40 et 10 ml d'acétaldéhyde à 90 % dans 100 ml de chloroforme, on ajoute goutte à goutte 11 ml ( 5,5 mmoles) d'hydroxyde de sodium 0,5 N sur une période de 25 minutes et on agite le mélange à la température ambiante pendant 2 heures Le mélange réactionnel est lavé avec de l'eau, ensuite avec une solution saturée de Na Cl, séché avec Mg SO 4 et évaporé à siccité Le résidu huileux est soumis à une chromatographie sur une colonne de gel de silice (Kiesel gel 60, 130 g) par élution avec un mélange de toluène et acétate d'éthyle (le mélange est changé par étape: 4/1 ( 1,3 1), 3/1 ( 1,1 1); 2/1 ( 1,0 1)) et l'éluat est recueilli par fraction de 20 ml. Les fractions n 26 à la fraction n 59 sont combinées et évaporées à siccité, ce qui donne 830 9 du dérivé désiré de 3-propényle, le composé 41 sous la forme de solides mousseux. Les données de l'analyse sont les suivantes: NMR de 41: d(CD C 13) en ppm 1,35 ( 3 H, d, =CH-CH 3); 1,4 ( 9 H, s, C-CH 3); 3,85 ( 3 H, s, 0-CH 3); 6,07 ( 1 H, d, I = 11 Hz, -CH=C). Mode opératoire n 42 3 u Acide 7 e-{D(-)-2-amino-2-( 4-hydroxy-3-méthoxyphényl)acétamidol- 3-{ (Z)-1-propen-1-yl}-3-céphem-4-carboxylique (composé 42, BMY-28097). HO,CON= S) Ne 2 =CEC; Z) 40117 Un mélange de 830 mg ( 1,2 mmoles) du composé 41, 0,5 ml d'anisole et 2 ml d'acide trifluoroacétique est agité à la température ambiante pendant 5 minutes et le mélange est dilué avec 30 ml d'éther et 30 ml d'éther isopropylique Le précipité qui en résulte est recueilli par filtration, lavé avec de l'éther isopropylique et séché, ce qui donne 437 g du trifluoroacétate brut du composé 42 Le produit brut est soumis à une chromatographie sur une colonne garnie de 100 ml de garnissage d'une colonne prep PAK/C 18 (Waters) qui est éluée avec de l'eau et du méthanol à 5 % L'éluat au méthanol à 5 % est concentré à 5 ml et lyophi- lisé, ce qui donne 225 mg du composé 42 (dipolaire, pur à 90 %), point de fusion 176-180 C (déc). Les données de l'analyse sont les suivantes: IR: vmax en cm 1 1760, 1690, 1590, 1530, 1400, 1360, 1280. UV: Xmax (p H 7 tampon de phosphate) en nm (E) 235 ( 10000), 280 ( 11000). NMR: 6 (D 20) en ppm 1,68 ( 3 H, d, I= 6 Hz, C-CH 3), 3,25 ( 1 H, d, I = 18 Hz, 2-H); 3,57 ( 1 H, d, I = 18 Hz, 2-H); 4,01 ( 3 H, s, OCH 3); 5,10 ( 1 H, s, CH-CO); 5,19 ( 1 H, d, I = 4,5 Hz, 6-H); 5,78 ( 1 H, d, I = 4,5 Hz, 7-H); 5,5-5,9 ( 1 H, m, CH=C); 5,98 ( 1 H, d, I = 11 Hz, CH=C); 7,07 ( 2 H, s, phényl-H); 7,17 ( 1 H, br-s, phényl-H). HPLC: temps de rétention 9,3 minutes (tampon d'acétate 0,02 M (p H 4) contenant de l'acétonitrile à 15 %). Mode opératoire n 43 Isolement du composé 42 provenant de l'urine de rat auquel on a donné du composé 37. Six rats Wister mâles ( 400-600 g) sont placés dans des cages d'acier métabolique aprés administration orale du composé 37 à la dose de 100 mg/kg et l'urine est recueillie sur une période de 24 heures On donne aux rats leur régime normal et on leur donne de l'eau pendant l'expérience Le tableau suivant montre le volume d'urine recueilli en fonction du temps. 0-2 h 2-4 h 4-6 h 6-24 h Total volume d'urine (ml) 18 19,5 13 42 92,5 L'urine (environ 90 mi) est ajustée à p H 3 avec de l'acide hydro- chlorhydrique N et filtrée pour éliminer un précipité Le filtrat est soumis à une chromatographie sur une colonne garnie de 300 ml de HP-20 par élution avec 2 1 d'eau et 2 1 de méthanol à 30 % sous surveillance par HPLC Les fractions contenant les composants bioactifs de l'éluat au méthanol à 30 % sont recueillies, concentrées à 10 ml et lyophilisées, ce qui-donne 390 mg de solide brun Une solution du solide dans 20 ml d'eau est passée en chromatographie sur une colonne garnie de 200 ml du garnissage du colonne prep PAK/C 18 (Waters) par élution avec de l'eau, du méthanol à 5 % et du méthanol à 10 % successivement La première moitié de l'éluat du méthanol à 5 % est concentrée à 5 ml et lyophilisée, ce qui donne 44 mg du composé 37 (pur à 70 %), contenant des impuretés provenant de l'urine La seconde moitié de l'éluat au méthanol à 5 % est concentrée à 5 ml et lyophilisée, ce qui donne 36 mg du produit, qui est un mélange du composé 37, du composé 42 et des impuretés provenant de l'urine. L'éluat au méthanol à 10 % (environ 600 ml) est concentré à 5 ml et lyophilisé, ce qui donne 38 mg du composé 42 (pur à 70 % par HPLC), que l'on fait repasser en chromatographie sur une colonne ayant le même garnissage que ci-dessus ( 40 ml) par élution avec de l'eau, du méthanol à 5 % et du méthanol à 10 % Les fractions désirées éluées au méthanol à % sont combinées et concentrées à 5 ml et lyophilisées, ce qui donne 16 mg du composé 42 qui est pur à 90 % par HPLC (tampon d'acétate 0,02 M (p H 4-)-acétonitrile ( 81/15)) point de fusion 180 C (déc prog). Les données de l'analyse sont les suivantes: IR: Vmax (K Br) en cm 1 1760, 1690, 1590, 1530, 1400, 1360, 1280. UV: Xmax (p H 7 tampon de phosphate) en nm (e) 233 ( 8200), 280 ( 8800). NMR: 6 (D 20) en ppm 1,68 ( 3 H, d, I = 6 Hz, -C-CH 3), 3,26 ( 1 H, d, I = 18 Hz, 2-H); 3,58 ( 1 H, d, I = 18 Hz, 2-H); 4,01 ( 3 H, s, OCH 3); 5, 12 ( 1 H, s, CH-CO); 5,21 ( 1 H, d, I = 4,5 Hz, 6-H); 5,78 ( 1 H, d, I = 4,5 Hz, 7-H); 5,5-5,9 ( 1 H, m, CH=C-); 5,98 ( 1 H, d, I = 11 Hz, CH=C-); 7,07 ( 2 H, s, phényl-H); 7,17 ( 1 H, br-s, phényl-H). La structure du métabolite est établie comme étant celle de l'acide 78-{D(-)-2-amino-2-( 4-hydroxy-3-méthoxyphényl)acétamido}-3- {(Z)-l-propen-1-yl}-3-céphem-4-carboxylique par comparaison (NMR, IR, UV, HPLC) avec le composé 42 préparé par les modes opératoires 38, 42. 25401 17 REVENDICATIONS 1. Composé choisi dans le groupe constitué par ceux ayant la formule: R 2 CHCONH S RN 1 Pl ié CH=CHCH 3 Co C 2 P et la configuration Z autour de la double liaison hexocyclique dans laquelle: N est un entier égal à O ou 1; R représente hydrogène, OP 3, alkoxy inférieur ou halogène; p 1 p 2 et P 3 sont des atomes d'hydrogène ou des groupes protecteurs classiques utilisés dans la chimie de la céphalosporine respecti- vement avec des groupes amino, carboxy et hydroxy; R 2 représente un hydrogène, OP 3 ou un alkoxy inférieur, ainsi que d'une part les sels d'addition d'acides pharmaceutiquement acceptables des substances précédentes dans lesquelles N est égal à O et p 1, p 2 et P 3 sont l'hydrogène et, d'autre part les sels métalliques pharmaceutiquement acceptables des substances précédentes dans les- quelles N est égal à O et p 1, p 2 et P 3 sont un hydrogène. 2. Composé suivant la revendication 1, caractérisé en ce que n 1 2 3 est égal à O et p 1, p 2 et P 3 représentent des atomes d'hydrogène ainsi que leurs sels d'addition d'acides pharmaceutiquemnient acceptables et leurs sels métalliques pharmaceutiquement acceptables. 3 Composé suivant la revendication 1, consistant en l'acide 78- {D-2-amino-2-( 4-hydroxyphényl)acétamido}-3-{(Z)-1-propen-1-yl}-3-céphem 4-carboxylique. 4. Composé suivant la revendication 1, consistant en l'acide -{D-2-amino-2-phénylacétamido}-3-{(Z)-1-propen-1-yl}-3-céphem-4- carboxylique. 5. Composé suivant la revendication 1, consistant en l'acide 78-{D-2-amino-2-( 3-chloro-4-hydroxyphényl)acétamido}-3-{(Z)-1-propen- 1-yl}-3-céphem-4-carboxylique. 6. Composé suivant la revendication 1, consistant en l'acide 78- {D-2-amino-2-( 3,4-dihydroxyphényl)acétamido}-3-{(Z)-l-propen- 1-yl}-3-céphemin-4-carboxylique. 7. Composé suivant la revendication 1, consistant en l'acide 7 a-{D-2-amino-2-( 4-hydroxy-3-méthoxyphényl) acétamido}-3-{(Z)- 1-propen-l-yl}-3-céphem-4-carboxylique. 8. Composition pharmaceutique sous forme de dosage unitaire contenant une quantité non toxique antibactérienne efficace d'un composé revendiqué dans la revendication 2 et un véhicule pharmaceutiquement acceptable pour cette composition. 9. Composé choisi dans le groupe constitué par ceux ayant la formule: ()n s CHCONH NHP X CH=CHA 1 k X 2 dans laquelle: N est un entier égal à O ou 1; R 1 représente un hydrogène, O P 3 un alkoxy inférieur ou un halogène; p, p 2 et P 3 sont des atomes d'hydrogène ou des groupes protecteurs classiques utilisés dans la chimie de la céphalosporine respecti- vement avec des groupes amino, carboxy et hydroxy; R 2 est un hydrogène, O P 3 ou un alkoxy inférieur; Alk représente un alkylidéne ou un alkylène possédant de 1 à 4 atomes de carbone; et, X représente un brome, un chlore ou un iode, ainsi que les sels d'addition d'acides et les sels métalliques des substances précédentes dans lesquelles N est égal à O et pl, p 2 et p 3 représentent un hydrogène. 10. Composé suivant la revendication 9, caractérisé en ce que Alk est un méthylène et X est le chlore. 11. Composé suivant la revendication 10, consistant en l'acide 7 e-{D-2-amino-2-( 4-hydroxyphényl)acétamido}-3-{(Z)-3-chloro-1-propen- 1-yl}-3-céphem-4-carboxylique. 12. Composé suivant la revendication 10, consistant en l'acide 78- {D-2-(t-butoxycarbonylamino)-2-( 4-hydroxyphényl)acétamido}-3-{(Z)-3- chloro-1-propen-1-yl}-3-céphem-4-carboxylate de diphénylméthyle. 13. Composé suivant la revendication 10, consistant en l'acide 78-{D-2-(t-butoxycarbonylamino)-2-( 4-hydroxyphényl)acétamido}-3-( 3-iodo- -1-propen-1-yl)-3-céphem-4-carboxylate de diphénylméthyle. 14 78-{D-2-(t-butoxycarbonylamino)-2-( 4-hydroxyphényl)acétamido}- 3-chlorométhyl-3-céphem-4-carboxylate de diphénylméthyle. 15. 78-{D-2-(t-but Qxycarbonylamino)-2-( 4-hydroxyphényl)acétamido}- 3-iodométhyl-3-céphem-4-carboxylate de diphénylméthyle. 16. Iodure de 75-{D-2-(t-butoxycarbonylamino)-2-( 4-hydroxyphényl) acétamido}-3-(triphénylphosphonio)méthyl-3-céphem-4-carboxylate de diphénylméthyle. 17. Composé selon la revendication 1, caractérisé en ce que N est égal à O et au moins l'un d'entre p 1, p 2 et P 3 représente un groupe protecteur classique. 18 Composé selon la revendication 17, dans lequel p 1 et P 3, dans lequel les groupes protecteurs sont indépendamment choisis dans le groupe constitué par trityle, chloroacétyle, formyle, trichloroéthoxy- carbonyle et t-butoxycarbonyl, benzyloxycarbonyle et p 2 est un groupe protecteur choisi dans le groupe constitué de benzyle, p-méthoxybenzyle, p-nitrobenzyle, diphénylméthyle, t-butyle et 2,2,2-trichloroéthyle. 19. Le composé de la revendication 17, connu sous le nom chimique de 78-{ 2-(t-butoxycarbonylamino)-2-( 4-hydroxyphényl)acétamido}-3-{(Z)- 1-propen-1-yl}ceph-3-ème-4-carboxylate de diphénylméthyle. 20. Composé choisi dans le groupe constitué de ceux ayant la formule: (O) n 2/ R CHCON ≥ NHP z CH=CHR R X. c 02 p JD et la configuration Z autour de la double liaison hexocyclique dans laquelle: n est un entier égal à O ou 1; Ri est un hydrogène, OP 3, alkoxy inférieur ou un halogène; p 1, p 2 et P 3 sont des atomes d'hydrogène ou des groupes protecteurs classiques utilisés dans la chimie de la céphalosporine respecti- vement avec des groupes amino, carboxy et hydroxy, R 2 représente un hydrogène, OP 3 ou un alkoxy inférieur; et, R 3 est choisi dans le groupe constitué par hydrogène, alkyle en C 14, aralkyle en C 7 _ 14, hétérocyclothioalkyle en C 1 _ 4, et alkoxy C 1 _ 4- alkyle C 1 _ 4, dans laquelle au moins l'un d'entre d'eux R 1, R 2, R 3 est différent de l'hydrogène ainsi que les sels d'addition d'acides pharmaceutiquement acceptables des substances précédentes dans lesquelles N est égal à O et p 1, p 2 et P 3 sont des atomes d'hydrogène et les sels de métaux pharmaceu- tiquement acceptables des substances précédentes dans lesquelles N est égal à O, et pl p 2 et P 3 sont des atomes d'hydrogène. 21. Composé selon la revendication 20, caractérisé en ce que n égal O et p 1, p 2 et P 3 sont des atomes d'hydrogène. 22 Composé selon la revendication 20, consistant en l'acide 7 B- {D-2-amino-2-( 4-hydroxyphényl)-acétamido}-3-{(Z)-l-buten-1-yl}-3-céphem- 4-carboxylique. 23. Composé selon la revendication 20, consistant en l'acide 7 i- {D-2-amino-2-( 4-hydroxyphényl)acetamido}-3-vinyl-3-céphemin-4carboxylique. 24 Composé selon la revendication 20, consistant en l'acide 7 e- {D-2-amino-2-( 4-hydroxyphényl)acétamido}-3-{(Z)-3-phényl-1-propen-1-yl} 3-céphem-4-carboxylique. 25. Composé selon la revendication 20, consistant en l'acide 7 B- {D-2-amino-2-( 4-hydroxyphényl)acétamido}-3-{(Z)-3-( 1 H-1,2,3-triazol-5yl)- thio-1-propen-1-yl}-3-céphem-4-carboxylique. 26. Composé selon la revendication 20, consistant en l'acide 7 B- {D-2-amino-2-( 4-hydroxyphlényl)acétamido}-3-{(Z)-3-méthoxy-1-propen-l-yl} -3-céphem-4-carboxylique. 27. Procédé de préparation d'une céphalosporine de formule: R 2 CHCONH I) NHP CH=CHR 3 RO OC 2 p 2 ayant la configuration Z autour de la double liaison hexocyclique dans laquelle: n est un entier égal à O ou 1; R 1 représente un hydrogène, O P 3, un alkoxy inférieur ou un halogène; p 1, p 2 et P 3 sont des atomes d'hydrogène ou des groupes protecteurs classiques utilisés dans la chimie de la céphalosporine, respecti- vement avec des groupes amino, carboxy et hydroxy; R 2 représente un hydrogène, O P 3 ou un alkoxy inférieur; et R 3 est choisi dans le groupe constitué par hydrogène, alkyle en C 14, aralkyle en C 7 _ 14, hétérocyclothioalkyle en C 1 14, et alkoxy C 1 i 4- alkyle C 1 _ 4, caractérisé en ce que l'on fait réagir dans un véhicule liquide orga- nique inerte réactionnel à 150 C un halogénure réactif de formule QCH 2 X et R 3 CH 2 X dans laquelle: X représente Cl, Br ou I, avec une triarylphosphine pour donner un sel de phosphonium et conver- sion de ce dernier dans un solvant organique liquide non miscible à l'eau avec une base organique en un intermédiaire phosphoranylé de formule QCH=P Ar 3 ou R 3 CH=P Ar 3, ce qu'on fait suivre de la réaction de ce dernier dans les conditions à sec à -40 C à + 50 C dans ledit solvant organique liquide non miscible à l'eau avec un carbonyle réactif de formule QCHO et R 3 CHO dans laquelle un et seulement un desdits halogé- nures réactif et dudit carbonyle réactif contient le groupe Q et Q est choisi dans le groupe constitué par les formules-suivantes: ( 0) (O) N) 1 12 3 3 = 1 O . dans lesquelles: n, R 1, p, p 3 et R 3 ont les mêmes significations que ci-dessus; et, Ac indique un groupe acyle de l'espèce habituellement trouvée dans une céphalosporine; et B est un groupe protecteur alkylidène ou aralkylidéne et ce après quoi on transforme ledit produit en le produit désiré ayant la formule donnée tout d'abord ci-dessus en éliminant si nécessaire un ou plusieurs de ces groupes de blocage de formule p 1, p 2, p 3, Ac et B et en introduisant le groupe 7-acyle de formule: R 2 _: R 2 P CHCO- R 1 N H 2 dans le composé 3-substitué-7-aminoceph-3-ème qui en résulte dans lequel R 1 et R 2 sont tels que définis ci-dessus. 28. Procédé selon la revendication 27, caractérisé en ce qu'il s'applique à la préparation des composés a à N suivants: a) acide 76-{D-2-amino-2-( 4-hydroxyphényl)acétamido}-3-{(Z)-l-propen- 1-yl}-3-céphem-4-carboxylique; b) acide 7 e-{D-2-amino-2-phénylacétamidol-3-{(Z)-l-propen-1-yl}-3- cépheni-4-carboxyl ique; c) acide 7 e-{D-2-amino-2-( 3-chloro-4-hydroxyphényl)acétamidol-3- {(Z)-l-propen-1-y}-3-céphem-4-carboxylique; d) acide 7 -{D-2-amino-2-( 3, 4-dihydroxyphényl)acétamidol-3- { (Z)-l-propen-1-yl}-3 -céphem-4-carboxyl ique; e) acide 7 -{D-2-amino-2-( 4-hydroxy-3-méthoxyphény 1 l)acétamidol-3- { (Z)-l-propen-1-yl}-3-céphem-4-carboxyl ique; f) acide 7 $-{D-2-amino-2-( 4-hydroxyphényl)acétamido}-3-{ (Z)-3-chloro-. 1-'propen-1-yl} 1-3-céphenm-4-carboxyl ique; g) 7 e-{D-2-(t-butoxycarbonylamino)-2-( 4-hydroxyphényl)acétaniido}-3- { h) 7 e-{D-2-(t-butoxycarbonylamino)-2-( 4-hydroxyphényl)acétamido}-3- { 3-iodo-1-propen-1-yll-3-céphemn-4-carboxylate de diphénylmnéthyle. i) 7 e-{ 2-(t-butoxycarbonylamino)-2-( 4-hydroxyphényl)acétamido}-3- -{(Z)-l-propen- 1-yljceph-3-ême-4-carboxylate de diphénylméthyle; j) acide 7 e-{ 0-2-amino-2-( 4-hydroxyphényl-acétamido J-3-{(Z)-l- buten-1-yl}-3-cêphem-4-carboxyl ique; k) acide 7 e-{D-2-amino-2-( 4-h Ydroxyphényl)acétamido}-3-vinyl-3 '- céphenm-4-carboxyl ique; 1) acide 7 e-{ 0-2 '-amino-2-( 4-hydroxyphényl)acétamidol-3-{(Z)-3-phényl- 1-propen-1-yl}-3-céphem-4-carboxyl ique; m) acide 7 e-{D-2-amino-2-( 4-hydroxyphényl)acétamidol-3-{(Z)-3-( 1 H- 1,2,3-triazol-5-yl)thio-1-propen-1-yll}-3-céphem-4-carboxyl ique; et n) acide 7 e-{D-2-amino-2-( 4-hydroxyphényl)acêtamidol-3-{(Z)-3- méthoxy-1-propen-1-yl}-3-céphemi-4-carboxyl ique. 29 Procédé de préparation de: 7 e-{D-2-(t-butoxycarbonylamino)-2-( 4-hydroxyphényl)acétamidol-3- chlorométhyl -3-céphem-4-carboxylate de diphénylméthyle (I), 7 -{D-2-(t-butoxycarbonylaniino)-2-( 4-hydroxyphény 1 l)acétamido}-3- iodométhyl -3-céphem-4-carboxylate de diphénylméthyle ( 11), et iodure de 7 e 3-{D-2-(t-butoxycarbonylamino)-2-( 4-hydroxyphényl) acétamidol-3-(triphényl phosphonio)méthyl -3-céphem-4-carboxate de diphé- nylméthyle (III), caractérisé en ce que l'on fait réagir le 7-amino-3-chlorométhyl-3- céphem-4-carboyylate de bertzhydryle et l'acide D-2-(t-butoxycarbonyl- amino)-2-(p-hydroxyphényl)acétique pour donner le composé I, en ce qu'ensuite on fait reagir le composé I avec l'iodure de sodium pour donner le composé II, et on fait ensuite réagir le composé II avec la triphénylphosphine pour former le composé III.