Brevet FR2548192A1 — publié le 19850104

La présente invention a pour objet de nouveaux dérivés estradiéniques radioactifs marques a l'iode, leur procéde de préparation et leur application aux dosages radioimmunologiques. Plus particulièrement, elle a pour objet des dérivés estradiéniques marqués à l'iode, sous forme de mélange d'isomères syn et anti ou sous forme d'isomères syn ou sous forme d'isomères anti, de formule générale (I) dans laquelle la ligne ondulée sur l'azote oximinique signifie que la fonction oxime peut être en position syn ou anti, fcrmule dans laquelle et dans ce qui suit R représente de l'hydrogene, un groupement alcoyle ayant de 1 a 6 atomes de carbone ou un groupement acyle d'un acide carboxylique ayant de 2 a 12 atomes de carbone et R1 représente le reste d'un acide aminé R1NH2 ou le reste d'un dérivé de ce dernier, ce reste étant accepteur d'iode et étant marqué a l'iode 125 ou 134. Parmi les valeurs de R, on peut citer a) les radicaux méthyle, éthyle, propyle, isopropyge, butyle, sec-butyle, tert-butyle, pentyle, iso-pentyle, sec-pentyle, tert-pentyle, néo-pentyle, hexyle, iso-hexyle, sec-hexyle, tert-hexyle ; b) les radicaux formyle, acétyle, propionyle, butyryle, isobutyryle, valéryle, hexanoyle, benzoyle, capryle, méthoxy-carbonyle, éthoxy carbonyle. L'invention a plus particulierement pour objet les dérivés estradiéniques radioactifs marqués a l'iode de formule générale (I) dans laquelle R1 représente le reste d'un acide aminé P1NH2 ou le reste d'un dérivé de ce dernier, choisi dans le groupement constitué par l'histidine, la tyrosine, l'histidinol, l'histamine, la tyramine et le tyrosinate de méthyle marqués a l'iode 125 ou 131. Parmi les produits de formule générale (I), on citera notamment le 3 carboxyméthyloxime de 17 ss -hydroxy-11 / -(4-diméthylaminophényl )-17r - (prop-1-ynyl)estra-4,9-dien-3-one sous forme de mélange d'isomère syn et d'isomère anti, sous forme d'isomère syn et sous forme d'isomère anti couplé d 1'125 I histamine (produit A) de formule (Produit A) l'iode pouvant etre en position 2 ou 5. L'invention a également pour objet un procédé de préparation des produits répondant a la formule générale ci-dessus. Ce procède est caractérisé en ce que - on fa1trEagir un produit de formule générale (II) : dans laquelle et dans ce qui suit R a les significations précitées avec avec un halogénure de carboxymethoxylamine en présence d'une base et obtient un produit de formule (III) :: dans laquelle la ligne ondulee sur l'azote indique que ce produit est sous forme de mélange d'isomères syn et anti, puis - fixe sur la fonction acide de ce produit un groupement activateur de la fonction carbonyle et obtint le produit de formule générale (IV) dans laquelle R2 représente un groupement activateur de la fonction carbonyle et la ligne ondulée sur l'azote indique que ce produit est sous forme de melange d'isomères syn et anti, que l'on fait réagir avec un acide aminé R1NH2 possédant un groupe accepteur d'iode marqué a l'iode 125 ou 131 ou avec un dérivé d'un tel acide et obtient le produit cherché de formule générale (I), que l'on isole sous forme de mélange d'isomères syn et anti ou que l'on sépare, si désiré, en ses isomères. Ce procédé est encore caractérisé en ce que : - l'acide aminé accepteur d'iode ou le dérivé d'acide aminé est choisi dans le groupe constitué par l'histidine, la tyrosine, l'histidinol, l'histamine, la tyramine ou le tyrosinate de méthyle ; - l'halogénure de carboxyméthoxylamine est l'hémihydrochlorure de caboxyméthoxylamine et on opere sous atmosphère inerte et en présence de soude ; - on fixe sur la fonction acide un groupement activateur de la fonction carbonyle en faisant agir un halogéno formiate d'alcoyle en présence d'une base tertiaire, en milieu anhydre et sous atmosphère inerte. Dans les conditions préférentielles de mise en oeuvre, le procédé est caractérisé par les points suivants : - l'halogénoformiate d'alcoyle est le cnloroformiate d'isobutyle et on opere en présence de tri-n-butylamine ; - l'acide aminé ou son derivé, que l'on fait réagir avec le produit de formule générale (IV) dans laquelle Re représente un groupement activateur de la fonction carbonyle, est l'histamine marquée a l'iode 125 ou 131 ou son dérivé, et l'on opère sous atmosphère inerte. L'activation de la fonction carbonyle du produit de formule générale (III) peut aussi être réalisée en faisant agir sur celui-ci le N-hydroxy succinimide ou le dicyclohexylcarbodiimide, générateur des groupements activateurs de ladite fonction carbonyle. L'etherification ou l'estérification de la fonction hydroxyle en 17 du produit de formule générale (I), dans laquelle R représente de l'hydrogène, peut être effectuée selon des méthodes habituelles. L'éthérification peut être effectuée par exemple au moyen d'un agent d'éthérification tel qu'un halogénure d'alcoyle ou d'aryle, ou un sulfate de dialcoyle. L'estérification peut être effectuée par exemple au moyen d'un agent d' estérification tel qu'un dérivé fonctionnel d'acide, tel qu'un chlorure d'acide ou un anhydride. Pour obtenir les isomères syn et anti des produits de formule générale (I) séparés1 objet de l'invention, on peut procéder par exemple de la manière décrite ci-apres : on soumet un produit de formule générale (III), sous forme de mélange d'isomère syn et d'isomère anti, R a les significations précitées, a l'action d'un agent d'estériflcation pour estérifier la fonction carboxyle, sépare l'isomère syn de l'isomère anti de l'ester résultant puts saponifie séparément ladite fonction ester de chacun des isomères syn et anti, obtient l'isomère syn et l'isomère anti des produits de formule générale (III), dans laquelle R garde les significations précitées et procède ensuite séparénent, selon le procédé de l'invention, à la fixation sur la fonction acide libérée des isomères syn et anti, d'un groupement activateur de la fonction carbonyle, obtient les anhydrides mixtes correspondants, que l'on fait réagir avec un acide amine accepteur d'iode marqué à l'iode 125 ou 131, ou avec un dérive de cet acide* pour obtenir des produits de formule générale (I), objet de l'invention, sous forme d'isomère syn et sous forme d'isomère anti séparés. L'invention a également pour objet, comme déjà dit, l'application des produits de formule generale (I) et notamment du 3-carboxymethyloxime 17ss -hydroxy-11 ss -(4-diméthylaminophényl)-17 &alpha; -(prop-1-ynyl)estra-4,9-dièn-3- one, sous forme de mélange d'isomère syn et d'isomère anti, sous forme d'isomère syn et sous forme d'isomère anti couplé a 1'125I histamine (produit A), à l'étude et au dosage radioimmunologique du 17ss -hydroxy-11ss -(4-diméthylaminophényl)-17 &alpha; -(prop-1-ynyl)estra-4,9-dièn-3-one non radioactif (produit B) dans des fluides biologiques, chez l'homme ou chez l'animal. L'invention a également pour objet a titre de produits industriels nouveaux et notamment titre de produits intermédiaires nécessaires a l'exécution du procédé de l'invention, les produits des formules générales (III) et (IV) sous forme de mélange d'isomères syn et anti, ou sous forme d'isomère syn ou sous forme d'isomère anti dans lesquelles la ligne ondulée sur l'azote oximinique signifie que la fonction oxime peut être en position syn ou anti et dans laquelle R représente de l'hydrogènes un groupement alcoyle ayant de 1 à 6 atomes de carbone ou un groupement acyle d'un acide carboxylique ayant de 2 à 12 atomes de carbone, produits de formule (IV) où R2 représente un groupement activateur de la fonction carbonyle. Parmi ces produits, on citera les produits suivants : - le 3-carboxyméthyl bxi me de 17? -hydroxy-1-( 4-diméthyl ami nophényl )-17 -(prop-1-ynyl)estra-4,9-dièn-3-one sous forme de mélange d'isomères syn et anti, sous forme d'isomère syn et sous forme d'isomère anti, - l'anhydride mixte de 3-carboxyméthyloxime de 17ss-hydroxy-11ss -(4- diméthylaminophényl )-17 q -(prop-1-ynyl )estra-4,9-dien-3-one avec le formiate d'isobutyle sous forme de mélange d'isomères syn et anti, sous forme d'isomère syn et sous forme d'isomère anti Les produits de formule générale (III) sont des produits de départ utiles pour la préparation d'antigènes, nécessaires également aux dosages radioimmunologiques du produit B précité. Leur application en tant que telle fait également l'objet de la présente invention et est caractérise en ce que l'on conjugue un de ces produits avec l'albumine sérique bovine (BSA) ou avec l'albumine sérique humaine (HSA) et obtient l'antigène cherché. Dans des conditions préférentielles de mise en oeuvre, l'application des produits de formule générale (III), est caractérisée par les points suivants - on fait reagir un produit de formule générale (III) sous forme de mélange d'isomères syn et anti, sous forme d'isomère syn ou sous forme d'isomère anti dans laquelle la ligne ondulée et R ont les significations précitées en vue de l'activation de la fonction carbonyle, avec un halogénoformiate d'alcoyle, en présence d'une base tertiaire, en milieu anhydre et sous atmosphère Inerte, obtient l'anhydride mixte correspondant, de formule (IV) :: dans laquelle R garde la signification précitée et R2 représente un radical de formule -CO-O-alc, alc étant un radical alcoyle ayant au plus 6 atomes de carbone, - que l'on conjugue avec l'albumine sérique bovine (BSA) ou humaine (HSA) et obtent l'antigène cherché. L'application des produits de formule générale (III) est encore caractérisée par les points suivants - l'halogéno~formiate d'alcoyle est le chloroformiate d'isobutyle et on opère en présence de tri-n-butylamine et sous atmosphère inerte, - on fait réagir l'anhydride mixte de formule générale (IV) avec l'albumine sérique bovine (BSA) ou humaine (HSA) en ayant préalablement dissout cette dernière dans un mélange eau-dioxane sous .atmosphère inerte. L'application décrite permet d'obtenir respectivement au départ de 3-carboxyméthyloxime de 17 ss -hydroxy-11ss-(4-diméthylaminophényl)-17&alpha; - (prop-1-ynyl)estra-4,9-dien-3-one, sous forme de mélange d'isomère syn et d'isomère anti, sous forme d'isomère syn ou sous forme d'isomère anti, l'antigène de formules générales (V) et (VI > dans lesquelles R a les significations précitées : 1 H3C3 R ( > Dt C ~ C-CH3 (v) 3 o CH2 I I n BSA dans laquelle n=20 à 30 et la partie oxime de steroTde est sous forme d'isomère syn, d'isomère anti et sous forme de mélange d'isomères syn et anti et : 7 IH3C-N1 R CH3 C-CH3 3 (VI) 0 CH2 I to- I N'H n HSA dans laquelle n=20 à 30 et la partie oxime de stérorde est sous forme d'isomère syn, sous forme d'isomère anti et sous forme de mélange d'isomères syn et anti. L'invention a également pour objet, a titre de produits industriels nouveaux, les antigènes obtenus lors de l'application décrite ci-dessus, et notamment les produits de formules générales (V) et (VI). L'invention a également pour objet l'application des antigenes cidessus à la préparation des anticorps. Les produits de formule générale (I), objet de l'invention et notammlent le 3-carboxyméthyloxime de 17 ss -hydroxy-11 ss-(4diméthylaminophényl)-17 &alpha; -(prop-1-ynyl)-estra-4,9-dièn-3-one couplé à l'(125I) histamine (produit A), sous forme de mélange d'isomère syn et d'isomère anti, sous forme d'isomère syn ou sous forme d'isomère anti,sont utilisés comme déjà dit lors des études et lors du dosage radioimmunologique du 17 ss -hydroxy-11 ss-(4-diméthylaminophényl)-17&alpha; (prop-1-ynyl )-estra-4,9-dien-3-one non radioactif (produit 8) dans des fluides biologiques chez l'homme ou chez l'animal. De plus, le produit A, après son administration, peut être suivi dans son évolution et dans son comportement au niveau des fluides biologiques chez l'homme et chez l'animal. Lors de ces études, le produit A permet notamment un dosage spécifique aise de quantités de l'ordre de quelques dizaines de picogram- as par ml de fluide biologique, sans que l'on soit oblige de recourir à des méthodes d'isolement et de purification par chromatographie, avant de procéder au dosage proprement dit. Pour étudier et doser par des méthodes radioimmunologiques le 17 - hydroxy-11 ss-(4-diméthylaminophényl)-17 &alpha; -(prop-1-ynyl)-estra-4,9-dièn-3- one non radioactif (produit B), on prépare comme déjà dit à partir de ce dernier, des antigènes avec l'albumine sérique bovine (BSA) ou avec l'albumine sérique humaine (HSA). Les antigènes résultant des formules (V) et (VI), également objets de l'invention peuvent servir au développement d'anticorps lorsqu'ils sont injectés chez l'animal en présence d'un adjuvant. Ils permettent ainsi d'obtenir des serums contenant des anticorps. Ces anticorps servent ensuite de récepteurs de produits radioactifs et/ou de produits non-radioactifs, à savoir de récepteurs de produits de formule générale (I) et notamment du 3-carboxyméthyloxime de 17 -hydroxy11 ss-(4-diméthylaminophényl)-17 &alpha; -(prop-1-ynyl)-estra-4,9-dièn-3-one sous fonce de mélange d'isomère syn et d'isomère anti, sous forme d'isomère syn et sous forme d'isomère anti, couplé à 1'(125I) histamine (produit A), ainsi que du 17 ss-hydroxy-11 ss-(4-diméthylaminophényl)-17&alpha; -(prop-1-ynyl)- estra-4,9-dièn-3-one non radioactif (produit B). La présence de ces anticorps est mise en évidence au moyen d'un produit de formule générale (I) et notamment au moyen du 3 carboxyméthyloxime de 17 ss-hydroxy-11 ss-(4-diméthylaminophényl)-17&alpha; - (prop-1-ynyl)-estra-4,9-dièn-3-one sous forme de mélange d'isomère syn et d'isomère anti, sous forme d'isomère syn et sous forme d'isomère anti3 couplé à l'(125I) histamine radioactif (produit A). On procède ensuite au dosage du produit B selon des methodes radioimmunologiques conventionnelles, telles que celles décrites par - S.A. BERGSON et R.S. YALOW, HORMONE 4, p. 557 (1964) et - G.E. ABRAHAM J. of CHEM. ENDOCRINAL METAB., 29, p. 866 (1969). Les exemples suivants illustrent l'invention sans toutefois la limiter. EXEMPLE 1 : 3-carboxyméthyloxime de 17 ss -hydroxy-11 ss-(4- diméthylaminophényl)17 &alpha; -(prop-1-ynyl)-estra-4,9-dièn-3-one couplé à l'(125I) histamine. STADE A :3-carboxyméthyloxime de 17 ss -hydroxy-11ss (4-diméthylaminophényl)-17 &alpha; (prop-1-ynyl)-estra-4,9-dièn-3-one. A une solution de 1 g de 17ss-hydroxy-11ss-(4-diméthylaminophényl)- 17 04 &alpha; -(prop-1-ynyl)-estra-4,9-dièn-3-one dans 35 ml d'éthanol, on ajoute 665 mg d'hemihydrochlorure de carboxyméthoxylamine, soumet le mélange réactionnel à l'agitation pendant- une heure environ à température ambiante, additionne de 1,6 ml de soude N, puis concentre sous vide, reprend le résidu par le chloroforme, essore, évapore le filtrat à sec, le chromatographie sur silice (éluants chloroforme/méthanol 7:3), isole le produit cherché que l'on empâte par l'éther isopropylique, essore et sèche sous vide pour obtenir 1,13 g du dit produit cherché sous forme de mélange d'isomères syn et anti.La chromatographie sur couche mince de silice, avec l'élution par le système chloroforme/méthanol (8:2) donne Rf=0,45. STADE B :3-carboxyméthyloxime de 17 4 -hydroxy-11-(4 di méthyl ami nophényl )-17 -(prop-1-ynyl)-estra-4,9-dièn-3-one couplé à l'(125I) histamine sous forme de mélange d'isomères syn et anti. Préparation d'anhydride mixte de 3-carboxyméthyloxime de 17ss-hydroxy-11ss -(4-diméthylaminophényl )-17 q -(prop-l-ynyl )-estra-4,9-di èn-3-one sous forme de mélange d'isomères syn et anti, avec le formiate d'isobutyle. On dissout sous agitation et sous atmosphère inerte 3,5 mg de 3carboxyméthyloxime de 17p -hydroxy-11 ss -(4-diméthylaminophényl )-17 (prop-1-ynyl-estra-4,9-dièn-3-one préparé au stade précédent dans 50 1 de dioxane, ajoute 10 1 de mélange tri-n-butylamine/tétrahydrofuranne (1:5) puis 10 1 de mélange chloroformiate d'isobutyle/tétrahydrofuranne (1:10), maintient ce mélange réactionnel sous agitation pendant une demi-heure à 4 C environ, puis additionne de 3,4 ml de tétrahydrofuranne et obtient une solution du produit cherché, que l'on utilise telle qu'elle pour le stade suivant de la synthèse. Iodation de l'histamine. A 10 l d'une solution d'histamine 2 mM dans une solution tamponnee de phosphate de sodium 0,5 M de pH8, on ajoute successivement 1 mCi de Iodure 125 de sodium et 50z*ç9 g de chloramine T dans 10 1 1 d'eau distillée, on agite le mélange réactionnel pendant 90 secondes environ, ajoute 300/' g de métabisulfite de sodium dissout dans 10 l d'eau distillée et obtient une solution aqueuse de produit cherché Rf=O,1 (chromatographie sur couche mince de silice, système de solvant méthanol/triéthylamine (98:2), que l'on utilise telle que pour la suite de la synthèse. Condensation On ajoute, sous atmosphère inerte, à la solution d'histamine iodée obtenue cl-dessus, 50 l de solution d'anhydride mixte, précédemment préparée, agite et abandonne au repos à environ 40C sous atmosphère inerte pendant environ 1 heure et demie. On dilue ensuite le mélange réactionnel par 400 1 @1 d'une solution de bicarbonate de sodium 0,1 M, extrait par 1,6 ml de chlorure de méthylène, sépare la phase organique et l'évapore à sec sous atmosphère Inerte. On reprend le résidu par 250 1 d'acétate d'éthyle, purifie le produit par chri-tographie liquide haute performance avec élution par le système chloroforie/iéthanol (98,5:1,5). On isole et évapore à sec la solution correspondant à 2 pics grossièrement séparés sous atmosphère inerte. Les résidus sont repris par le méthanol de façon à obtenir une concentration en produit radioactif d'une activité de 25 Ci/ml. On obtient environ 100,* Ci de produit en tout. L'ensemble de la préparation du produit iodée est fait en lumière inactinique. La chromatographie sur couche mince de silice avec l'solution par le système cyclohexane/éthanol/triéthylamine (70:30:1) donne Rf=0,28. EXEMPLE 2 : antigène à partir de 3-carboxyméthyloxime de 17ss -hydroxy-11-ss (4-diméthylaminophényl)-17&alpha; -(prop-1-ynyl)-estra-4,9-dièn-3-one sous frome de mélange d'isomères syn et anti et d'albumine sérique bovine(BSA). STADE A : l'anhydride mixte de 3-carboxyméthyloxime de 17ss -hydroxy-11ss (4-diméthylaminophényl)-17 &alpha; -(prop-1-ynyl)-estra-4,9-dièn-3-one sous forme de mélange d'isomères syn et anti avec le formiate d'isobutyle. On dissout sous agitation et sous atmosphère inerte 63 mg de 3carboxyméthyloxime de 17ss -hydroxy-11 ss -(4-diméthylaminophényl)-17&alpha; (prop-1-ynyl-estra-4,9-dièn-3-one, préparé au stade A de l'exemple 1 dans 1,2 il de dioxane, ajoute 57,5 1 de tri-n-butylamine, puis abaisse la température vers 13 C, ajoute 16/ 1 de chloroformiate d'isobutyle, maintient ce melange réactionnel sous agitation à la températurede 134C environ pendant une demi-heure. On obtient une solution du produit cherché, que l'on utilise telle quelle pour le stade suivant de la synthèse. STADE B :Dissolution de l'albumine sérique bovine. On introduit à 40C sous agitation et sous atmosphère inerte 175 mg d'albumine sérique bovine dans 0,5 ml d'eau, maintient sous agitation pendant 20 mn environ, rajoute successivement après la dissolution 3 ml de dioxane et 17Ol de NaOH N. STADE C :Conjugaison. On verse lentement dans la solution d'albumine serique bovine obtenue au stade B, la solution d'anhydride mixte obtenue au stade A, amène le pH à 8,9 à l'aide d'acide chlorhydrique N et agite le mélange réactionnel pendant 5 heures à 10 C environ. On sépare ensuite la phase organique du précipité formé, la diluepar 30 ml d'eau distillée, amène le pH à 4,1 par l'addition d'acide chlorhydrique N, sépare le précipité formé, le reprend par 25 ml d'une solution aqueuse debicarbonate de sodium à 1 %. La solution résultante est laissée au repose, puis soumise à l'utrafiltration. On épuise ensuite la solution des molécules de poids moléculaire (10-15000 par 510 ml d'eau distillée puis ajuste le volume final à 17 ml. On lyophilise cette solution pendant 30 heures environ et obtient 169 mg d'antigène cherché. Analyse Spectre UV - dans eau : max 265 nm E@1=53 max 290 nm E'1=62 - dans HCl N/10 : max 290 nm E1'=61 DichroTsme circulaire - dans eau : max 222 nm # E1=-0,305 max 260 nm #E'1=-0,070 max 289 nm #E'1=-0,050 - dans HCl N/10 : max 222nm #E'1=-0,250 max 290 nm E1 1:+0,027 Ce produit contient 20à 22 groupes de stéroïde liés par mole de protéine. EXEMPLE 3 : antigène à partir de 3-carboxyméthyloxime de 17ss-hydroxy-11ss -(4-diméthylaminophényl)-17&alpha; -(prop-1-ynyl)-estra-4,9-dièn-3-one sous forme de mélange d'isomères syn et anti et d'albumine sérique humaine (HSA). En procédant comme décrit dans le stade C de l'exemple 2,mais en partant de la solution d'anhydride mixte du stade A et de la solution d'albumine sérique humaine du stade B, on obtient 180 mg d'antigène cherché. Ce produit contient 34 à 36 groupes de stéroTde liés par mole de protéine. Analyse Spectre UV - dans eau : max 265 ni El 1=79 max 291 nm El1=94 - dans HCl N/10 : max 290 ni E'1=93 Dichroïsme circulaire - dans eau : infl. 218 nm #E'1=-0,308 max 259 nm #E'1=-0,115 max 288 nm #E'1=+0,085 - dans HCl N/10 : max 223 nm #E'1=-0,300 max 283 ni # E'1=+0,037 REVENDICATIONS 1) Produits estradiéniques marqués à l'iode 125 ou 131 sous forme de mélange d'isomères syn et anti ou sous forme d'isomères syn ou anti de formule générale (I) dans laquelle la ligne ondulée sur l'azote oximinique signifie que la fonction oxime peut être en position syn ou anti, formule dans laquelle R représente de l'hydrogène, un groupement alcoyle ayant de 1 à 6 atomes de carbone ou un groupement acyle d'un acide carboxylique ayant de 2 à 12 atomes de carbone et R1 représente le reste d'un acide amine R1 NH2 ou le reste d'un dérivé de ce dernier, ce reste possédant un groupe accepteur d'iode et étant marqué à l'iode 125 ou 131 2) Produits estradiéniques radioactifs marqués à l'iode de formule générale (I) selon la revendication 1 dans laquelle R1 représente le reste d'un acide aminé R1 NH2ou le reste d'un dérivé de ce dernier choisi dans le groupe constitué par l'histidine, la tyrosine, l'histidinol, l'histamine, la tyramine et le tyrosinate de méthyle marqués à l'iode 125 ou 131 3) Le 3-carboxyméthyloxime de 17 o -hydroxy-11 ss-(4- diméthylaminophényl)-17&alpha;; -(prop-1-ynyl)-estra-4,9-dièn-3-one, sous forme de mélange d'isomère syn et d'isomère anti, couplé à l'(125I) histamine l'iode pouvant être en position 2 ou 5 de formule 4) Procédé de préparation des produits définis aux revendications 1 a 3, caractérisé en ce que - on fait réagir un produit de formule générale (II) :: dans laquelle et dans cé qui suit R a les significations indiquées à la revendication 1 avec un halogénure de carboxyméthoxyl ami ne en présence d'une base et obtient un produit de formule (III) dans laquelle la ligne ondulée sur l'azote indique que ce produit est sous forme de mélange d'isomères syn et anti puis, - fixe sur la fonction acide -de ce produit un groupement activateur de la fonction carbonyle et obtient le produit de formule générale (IV) dans laquelle R2 représente un groupement activateur de la fonction carbonyle et la ligne ondulée sur l'azote indique que ce produit est sous forme de mélange d'isomeres syn et anti, que l'on fait réagir avec un acide aminé, R1 NH2 possédant un groupe accepteur d'iode marqué à l'iode 125 ou 131 ou avec un dérivé de cet acide et obtient le produit cherché de formule générale (I), que l'on isole sous forme de mélange d'isomères syn et anti ou que l'on sépare, si désiré, en ses isomères. 5) Procédé selon la revendication 4, caractérisé en ce que l'acide aminé accepteur d'iode ou le dérivé d'acide aminé est choisi dans le groupe constitué par l'histidine, la tyrosine, l'histidinol, l'histamine, la tyramine et le tyrosinate de méthyle. 6) Procédé selon la revendication 4 ou 5, caractérise en ce que - l'halogénure de carboxyméthoxylamine est l'hémihydrochlorure de carboxyméthoxylami ne et on opere sous atmosphère inerte et en présence de soude, - on fixe sur la fonction acide un groupement activateur de la fonction carbonyle en faisant agir un halogénoformiate d'alcoyle en présence d'une base tertiaire, en milieu anhydre et sous atmosphère inerte, - l'halogénoformiate d'alcoyle est le chloroformiate d'isobutyle et on opere en présence de tri-n-butylamine. 7) Procédé suivant l'une quelconque des revendications 4 -a 6, caractérisé en ce que l'acide aminé ou son dérivé que l'on fait réagir avec le produit de formule générale (IV) dans laquelle R2 représente un groupement activateur de la fonction carbonyle, est l'histamine marquée à l'iode 125 ou 131 ou son dérivé et que l'on opère sous atmosphère inerte. 8) Procédé suivant l'une quelconque des revendications 4 à 7, caractérisé en ce que le produit de départ étant la 17ss -hydroxy-11ss-(4 diméthylaminophényl)-17&alpha; -(prop-1-ynyl)-estra-4,9-dièn-3-one, on obtient le Droduit de formule sous forme de mélange d'isomères syn et anti, ou sous forme d'isomère syn ou sous forme d'isomère anti 9) Application des produits tels que décrits aux revendications 1 à 3, aux études et aux dosages radioimmunologiques du 17ss -hydroxy-11ss-(4- diméthylaminophényl-17 &alpha; -(prop-1-ynyl)-estra-4,9-dièn-3-one non radioactif. 10) A titre de produits intermédiaires nécessaires pour la préparation des produits de formule générale (I) selon les revendications 1 à 3, les produits de formules générales (III) et (IV), sous forme de mélange d'isomères syn et anti, sous forme d'isomère syn ou sous forme d'isomère anti dans lesquelles la ligne ondulée sur l'azote oximinique signifie que la fonction oxime peut être en position syn ou anti et dans laquelle R représente de l'hydrogène, un groupement alcoyle ayant de 1 à 6 atomes de carbone ou un groupement acyle d'un acide carboxylique ayant de 2 à 12 atomes de carbone1 produits de formule (IV) où R2 représente un groupement activateur de la fonction carbonyle. 11) Produits selon la revendication 10, à savoir - le 3-carboxyméthyloxime de 17ss-hydroxy-11ss-(4-diméthylaminophényl)-17&alpha; -(prop-1-ynyl)-estra-4,9-dièn-3-one sous forme de mélange d'isomères syn et anti1 sous forme d'isomère syn et sous forme d'isomère anti, - l'anhydride mixte de 3-carboxyméthyloxime de 17ss-hydroxy-11ss-(4- diméthylaminophényl)-17 &alpha;; -(prop-1-ynyl)-estra-4,9-dièn-3-one avec le formiate d'isobutyle sous forme de mélange d'isomères syn et anti, sous forme d'isomère svn et sous forme d'isomère anti 12) Application des produits de formule générale (III) selon les revendications 10 et 11, à la préparation d'antigenes, caractérisée en ce que l'on conjugue un de ces produits avec de l'albumine sérique bovine (BSA) ou avec de l'albumine sérique humaine (HSA) et obtient l'antigène cherché. 13) Application selon la revendication 12, caractérisée en ce que l'on fait réagir un produit de formule générale (III), sous forme de mélange d'isomères syn et anti, sous forme d'isomère syn ou sous forme d'isomère anti dans laquelle la ligne ondulée et R ont les significations précitées, en vue de l'activation de la fonction carbonyle, avec un halogénoformiate d'alcoyle, en présence d'une base tertiaire, en milieu anhydre et sous atmosphère inerte, obtient l'anhydride mixte correspondant, de formule (IV) dans laquelle R garde la signification précitée et R2 représente un radical de formule -CO-O-alc, alc étant un radical alcoyle ayant au plus 6 atomes de carbone, que l'on conjugue avec l'albumine sérique bovine (BSA) ou humaine (HSA) et obtient l'antigène cherché. 14) Application selon la revendication 13, caractérisée en ce que - l'halogénoformiate d'alcoyle est le chloroformiate d'isobutyle et l'on opère en présence de tri-n-butylamine et sous atmosphère inerte - on fait réagir l'anhydride mixte de formule générale (IV) avec l'albumine sérique bovine (BSA) ou humaine (HSA) en ayant préalablement dissout cette dernière dans un mélange eau-dioxane sous atmosphère inerte. 15) -Antigènes constitués par la conjugaison d'un des produits de formule générale (III) selon la revendication 10, avec de l'albumine sérique bovine (BSA) ou avec de l'albumine sérique humaine (HSA), a savoir les antigènes de formule (V) et (VI) dans lesquelles R a les significations données à la revendication 1 dans laquelle n=20 à 30 et la partie oxime de stéroTde est sous forme d'isole syn, d'isomère anti et sous forme de mélange d'isomères syn et anti st CH3 C-CH3 3 (vi) o CH2 I ' i 1 NH n HSA dans laquelle n=20 a 30 et la partie oxime de stéroïde est sous forme d'isomère syn, sous forme d'isomère anti et sous forme de mélange d'isomères syn et anti. 16) Application des antigènes selon la revendication 15, à la préparation des anticorps.