Brevet FR2543438A1 — publié le 19841005

La présente invention concerne une composition pour la régénération des cellules et des tissus de la peau. L'invention vise également le procédé pour préparer cette composition. La peau, plus encore que les autres organes, conserve sa jeunesse en renouvelant ses cellules usées. L'épiderme est constitue de cellules mortes, nucléées, qui se kératinisent et sont éliminées. Elles doivent être remplacées par des cellules jeunes qui se forment constamment dans le derme. Cette régénération cellulaire physiologique consomme un certain nombre de matériaux indispensables que l'organisme amène à pied d'oeuvre par la voie sanguine dont les capillaires assurent la liaison avec le derme. Si l'organisme est fatigué ou vieilli, les déficiences ralentissent ce-renouvellement. I1 en résulte un vieillissement de la peau, auquel on peut remédier en lui apportant directement les facteurs que l'organisme n'est plus en mesure de lui fournir de- façon régulière et suffisante. Le but de la présente invention est de créer une composition permettant d'apporter à la peau les facteurs qui permettent d'éviter son vieillissement et qui assurent une régénération des cellules de la peau. Suivant l'invention, cette composition est caractérisée en ce qu'elle renferme un extrait aqueux d'embryons végétaux, enrichi en ADN pur et exempt de facteurs cancérigènes, cet ADN étant luimeame extrait d'embryons végétaux. L'extrait aqueux d'embryons végétaux de- cette composition apporte à la peau des vitamines, des acides aminés et des oligo-éléments. Cette composition apporte étalement et surtout à la peau de 1'ADN qui est un facteur essentiel de la multiplication cellulaire. Cette composition présente par ailleurs les deux propriétés majeures suivantes - la tolérance et la bonne assimilation par la peau t ainsi elle ne contient pas de produits animaux susceptibles d'incompatibilités; - l'absence de facteurs cancérigènes, que 1'ADN pourrait autrement porter au coeur des noyaux -des cellules du derme récepteur. L'application sur la peau de la composition conforme à l'invention permet de réactiver la multiplication cellulaire déficiente, en favorisant l'hydratation de la peau et l'assimilation des protéines. Cette composition stimule également la circulation dermique, donc la nutrition. La composition conforme à 1'invention renferme de préférence entre 1 et 10 % en poids environ d'ADN pur et exempt de facteurs cancérigenes. Les embryons végétaux sont de préférence constitués par des germes de blé et/ou de soja. Selon un autre aspect de l'invention, le procédé pour préparer la composition conforme à l'invention, pour régénérer les cellules et les tissus de la peau, comprend les étapes suivantes - on traite des embryons végétaux en milieu aqueux pour extraire 1'ADN, les vitamines, les acides aminés et les oligo-éléments, - on vérifie si l'ADN extrait est exempt de facteurs oncogènes, - si cette vérification est négative, on ajoute 1'ADN à un extrait aqueux obtenu par macération d'embryons végétaux broyés, - si cette vérification est positive, on redissout 1'ADN et on fait agir sur la solution successivement de la RNASE puis de la PRONASE, - on vérifie à nouveau si 1'ADN est exempt de facteurs oncogènes, puis - on ajoute 1'ADN à un extrait aqueux obtenu par macération d'embryons végétaux. Pour obtenir l'ADN à l'état pur et exempt de facteurs oncogènes, on procède de préférence comme suit - on broie des embryons de blé et/ou de soja en présence d'une solution d'extraction tonnée à pH sensiblement égal à 9,5 renfermant du saccharose, de L'ENTA (éthylène diamine tétracétate) et du chlorure de sodium, on filtre et on remet en suspension le résidu dans une solution tris salin tamponnée a' pH sensiblement égal à 7,4 additionne de détergent anionique, après agitation à la température ordinaire, on ajoute du perchlorate de sodium, et on poursuit l'agitation à 00C ; on ajoute ensuite du chloroforme et de l'octanol puis on centrifuge la solution, on récupère la phase aqueuse renfermant l'ADN et on précipite 1'ADE par addition d'éthanol glacé. Pour vérifier si l'ADN est exempt de facteurs oncogènes, on le soumet au test des cristallisations sensibles et à l'action sur des cultures de cellules. Si la vérification est positive, on redissout 1'ADN dans une solution de chlorure de sodium et de citrate tamponnée à pH 7, puis on fait agir à environ 370C la RNASE préalablement débarrassée de DNASE par chauffage à 800C environ puis refroidissement jusqu'à OOC environ, on fait agir ensuite la PRONASE à environ 370C,puis on ajoute du chloroforme et de l'octanol et on précipite l'ADN avec de l'méthanol glacé. La composition conforme à l'invention, est de préférence soumise à un courant d'ions négatifs pour renforcer l'activité de l'ADN. On expose ci-après à titre d'exemple non limitatif , le mode opératoire de la préparation d'une composition selon l'invention. 100 grammes de germes de blé frais et 100 grammes de germes de soja frais sont mis à macérer, après broyage et addition de 20 grammes de levure de bière, dans 1 litre d'eau auxquels on ajoute 200 grammes de glycérine, un tampon borate pour maintenir le pH à 7 et un anti-oxydant. On obtient une solution A. Parallèlement,40 grammes d'embryons de blé et de soja sont broyés dans un mortier avec du sable de Fontaine bleau en présence- d'un tampon d'extraction (0,25 M de sac charose, 0,05 M d'EDTA, 0,05 Xi de NaCl à pH égal à 9,5) Le broyat obtenu est ensuite filtré sur b couches de gaze et le filtrat est centrifugé pendant 10 minutes à C + 4 C à 25000 g. Le résidu est remis en suspension dans un bécher contenant 4 ml de tampon tris salin (0,15 M de Naci 0,015 M de tris à pH égal à 7,4) auxquels on ajoute 1,2 ml de détergent anionique à 30%. Après 15 minutes d'agitation à la température ordinaire, on ajoute 1,2 mi de perchlorate de sodium (NaCl 04 5M) et on poursuit l'agitation à OOC. On ajoute alors 6 ml de chloroforme et 0,6 ml de nWoctanol et on agite encore 15 minutes. ha solution obtenue est centrifugée à + 40C pendant 10 minutes à 25000 g. On obtient ainsi trois phases : une phase inférieure chloroformique, une croute intermédiaire protéique et une phase supérieure aqueuse contenant les acides nucléiques dont 1'ADN. Cette phase est récupérée avec précaution. L'addition de deux volumes d'éthanol glacé précipite les fibres d'ADN. Ces fibres sont enroulées autour d'une baguette de verre et conservées au froid dans de l'acétone. Les fibres ainsi obtenues contiennent essentiellement de l'ADN avec une petite quantité d'ARN et d'acides aminés. Il faut s'assurer que ces fibres n'emprisonnent pas de facteurs oncogènes ou cancérigènes. A cet effet on utilise la technique des cristallisations sensibles et l'action de ces fibres d3ADN sur des cultures de cellules. Si cette vérification est négative, on ajoute 1'ADN à l'extrait aqueux précédemment préparé. Si la vérification est positive, il faut poursuivre la purification. Après avoir enlevé de l'acétone et séché dans un courant d'air les fibres d'axe on les redissout dans un mini mum de solution de chlorure de sodium et de citrate (0,15 M NaCl, 0,015 M de citrate à pH 7). Pour abaisser le taux de contaminants protéiques et ribonucléiques, on fait agir : la RNASE (concentration: 100 mi grammes par ml final dans 0,15 M de NaCl à pH 5) pendant 30 minutes à 370C dans un bac thermostaté. La RNASE utilisée à cet effet est prélablement débarrassee de toute DNASE contaminante par chauffage à 800C pendant 10 minutes et refroidissement brusque à OOC. On fait agir ensuite la PRONASE grammes par ml final) pendant plusieurs heures à 370C. La PRONASE doit entre auparavant autodigérée pendant 2 heures à 370C puis pendant 1 heure à 370C sous agitation. A la suite de l'action des enzymes RNASE et PRONASE, il est procédé à une dernière déprotéinisation de 1'ADN au moyen d'un mélange de chloroforme et d'octanol, puis, après précipitation à 1'méthanol glacé comme décrit précédemment, on enroule les fibres d'ADN purifié sur une baguette de verre. On procède enfin à un nouveau contrôle pour vérifier 1' ab- sence de facteurs oncogènes. On peut alors ajouter 1'ADN à la solution A. La composition préparée selon l'exemple que l'on vient de décrire renferme environ 5 % d'ADN pur et exempt de facteurs oncogènes, des vitamines A, B1, B2, B5, B12, E, K, D, H et PP, des oligo-éléments tels que du calcium, du fer, du manganèse, du sodium, du potassium, du chlore, du soufre, du silicium, du zinc, du manganèse, du cobalt, du cuivre et de l'arsenic, et des acides aminés en petite quantité. Cette composition est destinée à être commercialisée telle quelle ou sous forme diluée de façon à renfermer au moins 1% d'ADN pur. L'activité de 1'ADN est de préférence renforcée en soumettant la solution à un courant d'ions négatifs. La composition conforme à l'invention peut être mélangée à d'autres ingrédients cosmétiques ou pharmaceuti ques pour permettre son application sur la peau, sous forme de lotion, crème, pommade et analogue. On donne ci-après quelques exemples de formulations cosmétiques. 1) lotion : Composition d'ADN : 1 a 10 grammes tampon borate à pH 5,8 250 ml ricinoléate de sodium : 10 ml eau distillée d'Hamamélis qsp : 1000 ml parfum hypoallergique : qs 2) crème Composition d'ADN : 2,5 grammes tampon borate à pH 5,8 : 50 ml huile d'amande : 20 ml perhydrosqualène : 3 mol émulsifiant : 20 grammes eau distillée de rose qsp : 250 grammes parfum hypoallergique : qs La composition conforme à l'invention étant donné l'absence de toxicité de 1'ADN peut également être présentée sous forme d'ampoules buvables ou injectables.A titre d'exemple la formulation d'une telle ampoule buvable ou injectable peut être la suivante ADN pur : 2,5 grammes Sérum physiologique qsp : 10 ml Les essais cliniques exposés ci-après montrent l'efficacité de la composition conforme à l'invention. I1 a été procédé à une série d'essais cliniques sur des personnes dont la peau ou les cheveux étaient susceptibles de bénéficier d'un traitement régénérateur effectif. L'association de 1'ADN, des vitamines et des oligo éléments crée une véritable synergie régénératrice. I1 a pu entre relevé des résultats très positifs et souvent spectaculaires dans les cas suivants - deux cas de couperose, - quatre cas de rides profondes au visage et au cou, - deux cas d'hypovitalité de la peau sur un état général déficient, - un cas de séborrhée, - et trois cas de cellulite localisée Sur les cheveux il a été obtenu la disparition des pellicules, de la séborrhée, un arrêt de la chute et une régénération de cheveux antérieurement ternes et cassants. Il a été constaté que la composition conforme à l'invention agit en réactivant la multiplication cellulaire déficiente, en favorisant l'hydratation de la peau et l'assimilation des protéines. De plus, il a été constaté que cette composition stimulait également la circulation dermique1 donc la nutrition des cellules. REVENDICTI0NS 1. Composition pour la régénération des cellules et des tissus de la peau, caractérisée en ce qu'elle renferme un extrait aqueux d'embryons végétaux, enrichi en ADN pur et exempt de facteurs cancérigènes, cet ADN étant lui-même extrait d'embryons végétaux. 2. Composition conforme à la revendication 1, caractérisée en ce qu'elle renferme entre 1 et 10 % en poids d'ADN pur et exempt de facteurs cancérigènes. 3. Composition conforme à l'une quelconque des revendications 1 ou 2, caractérisée en ce qu'elle renferme en outre des vitamines, des oligo-éléments et des acides aminés. 4. Composition conforme à 1'une des revendications 1 à 3, caractérisée en ce qu'elle renferme de l'ADN extrait de germes de blé et/ou de soja. 5. Procédé pour préparer une composition pour la régé- nération des cellules et des tissus de la peau0 conforme à l'une des revendications 1 à 4, caractérisé par les étapes suivantes : - on traite des embryons végétaux en milieu aqueux pour extraire l'ADN, les vitamines, les acides aminés et les olrgo éléments, - on vérifie si 1'ADN extrait est exempt de facteurs oncogènes, - si cette vérification est négative, on ajoute 1'ADN à un extrait aqueux obtenu par macération d'embryons végétaux broyés, - si cette vérification est positive, on redissout I'ADN et on fait agir la solution successivement sur de la RNASE puis sur de la PRONASE, - on vérifie à nouveau si laADN est exempt de facteurs oncogènes, puis - on ajoute l'ADN à un extrait aqueux obtenu par macé- ration d'embryons végétaux. 6. Procédé conforme à la revendication 5 caractérisé en ce que pour obtenir 1'ADN : - on broie des embryons de blé et de soja en présence d'une solution d'extraction tamponnée à pH sensiblement égal à 9,5 renfermant du saccharose, de 1'EDTA (éthylène diamine tétracétate) et du chlorure de sodium, - on filtre et on remet en suspension le résidu dans une solution tris salin tamponnée à pH sensiblement égal à 7,4 additionnée de détergent anionique, - après agitation à température ordinaire on ajoute du perchlorate de sodium et on poursuit l'agitation à 0oC, - on ajoute ensuite du chloroforme et de l'octanol puis on centrifuge la solution, on récupère la phase aqueuse renfermant 1'ADN et on précipite 1'ADN par addition d'éthanol glacé. 7. Procédé conforme à l'une quelconque des revendications 5 ou 6, caractérisé en ce qu'on vérifie si 1'ADN est exempt de facteurs oncogènes en le soumettant au test des cristallisations sensibles et à 11 action sur des cultures de cellules. 8. - Procédé conforme à la revendication 7, caractérisé en ce que si la vérification est positive, on redissout 1'ADN dans une solution de chlorure de sodium et de citrate tamponné à pH 7, puis on fait agir à environ 370C la RNASE préalablement débarrasséede DNASE par chauffage à environ 800C puis refroidissement brusque à OOCf on fait agir ensuite la PRONASE à environ 370C puis on ajoute du chloroforme et de l'octanol et on précipite 1'ADN à l'éthanol glacé. 9. Procédé conforme à l'une des revendications 5 à 8, caractérisé en ce qu'on ajoute 1'ADN purifié et exempt de facteurs oncogènes à un macérat aqueux de germes de blé et/ou de soja en présence d'un tampon de borate à pH 7 et d'une anti-oxydant. 10. Procédé conforme à l'une des revendications 5 à 9, caractérisé en ce que la composition est soumise à un courant d'ions négatifs pour renforcer l'activité de l'ADN.