Brevet FR2539579A1 — publié le 19840727

La présente invention a pour objet une méthode pour le développement à grande échelle des plantes annuelles utilisables dans une courte période de temps pendant leur développement perennant, en utilisant les pousses primordiales de la plante1 méthode qui s'applique dans les domaines de la biologie, de l'agriculture, de l'horticulture, de la pharmacologie et analogues. L'expression "pousse primordiale" utilisée ici signifie les zones constituées de pousses primordiales primaires de conglomérat de cellules présentant un diamètre de 50 à 1000 pm, dans lequel les cellules présentant des plastes ne sont pas stratifiées, et des pousses primordiales secondaires de conglomérat de cellules présentant un diamètre de 100 à 5000 )um, dans lesquelles les cellules sont doublement stratifiées, ces pousses primordiales circulant et se propageant de façon végétative pour former un conglomérat de cellules hémipshériques. Le maintien des génotypes et des types chromosom=- ques des plantes annuelles utiles a été atteint par les deux moyens suivants de la reproduction sexuelle classique et de la propagation végétative développée récemment.Toutefois, les méthodes classiques présentent les inconvénients suivants: 1) La reproduction sexuelle est une méthode dans laquelle les semences sont obtenues par meiose et fertilisation, ce qui fait que l'espèce se reproduit. Toutefois, une telle méthode nécessite un travail considérable pour passer au crible un nombre important de semences afin de maintenir le génotype et le type chromosomique utiles.Par ailleurs, il est pratiquement impossible de maintenir le génotype et le type chromosomique dans le cas de plantes annuelles utiles de par exemple, triploides, hybrides luxuriants et analogues. 2) La propagation végétative s'applique aux tissus et culture de cellules. Selon cette méthode, lorsqu'une partie de la tige, de l'apex ou pousse, de la feuille, de l'apex de racine ou analogue est stérilisée puis transplantée dans une culture artificielle à laquelle une hormone de croissance des plantes a été ajoutée, et ou l'on poursuit la culture, la dédifférenciation des cellules des tissus intervient et du callus (conglomérat de cellules non différenciées) peut entre obtenu. Le callus ainsi obtenu peut être conservé pendant une longue période de temps sous forme de cellules végétatives et peut être reproduit à grande échelle, lorsque ce callus est sous-cultivé.Dans le cas ou ce callus est transplanté dans un milieu de culture pour redifférenciation, l'embryogénèse des cellules somatiques ou développement embryonnaire nucellulaire intervient pour produire les jeunes plantes juvéniles et pour reproduire les plantes juvéniles. Cette méthode peut être appliquée de façon relativement facile à n'importe quelle plante annuelle jusqu'au stade de différenciation et de propagation du callus, mais pendant la propagation, une mutation chromosomique et une mutation génétique sont souvent générées de sorte que les mêmes génotypes et types chromosomiques des parents ne peuvent être obtenus. Par ailleurs, la redifférenciation est difficile dans le cas de certaines sortes de plantes annuelles. Même dans le cas de plantes annuelles dans lesquelles la redifférenciation est possible, la culture à long terme rend la capacité de redifférenciation fortement inférieure. Comme spécifié ci-dessus, dans le cas de la reproduction végétative classique, (a) il -est difficile de maintenir les génotypes et les types chromosomiques des plantes annuelles pendant une longue période de temps comme dans la période pérennante ; et (b) il est dans la plupart des cas impossible de redifférencier les mêmes types que les parents. En outre, dans le'cas de cellules de callus, aucun plaste, corps huileux, vacuole, substance d'assimilation ni substance emmagasinée n'est produit . Ainsi, les métabolites utiles dans les domaines de la biochimie, de l'-agricul- ture et de la pharmacologie ne peuvent être obtenus en pratique. La présente invention a pour but de résoudre les problèmes mentionnés ci-dessus de la technique antérieure. Un objet de l'invention est donc de fournir une méthode pour la propagatìon 9 grande échelle de plantes annuelles utiles en utilisant des cellules somatiques, tout en maintenant le génotype et le type chromosomique des plantes annuelles pour un certain nombre d'années, ce qui fait que les plantes annuelles utiles peuvent être reproduites et développées. Un autre objet de l'invention est de fournir une méthode pour maintenir et développer les triploides, hétéro ploies, type de mutation chromosomique, type de réarrange- ment chromosomique, génotype de mutation, hybride luxuriant, génotype d'hybride des plantes annuelles utiles pendant une longue période de temps. Selon la présente invention, l'apex de la pousse, ou zone germinative, est prélevé par des coupes sur une plante annuelle utile puis transplanté dans une culture artificielle. Par la suite, la culture est réalisée en rotation, tout an maintenant des conditions de température de 15 à 30"C, une intensité d'illumination de 2 000 à 9 000 lux , et un nombre de révolutions de 0,5 à 10 t/mn pour obtenir les pousses primordiales. Ensuite, les pousses primordiales ainsi obtenues sont cultivées par étape pour obtenir de jeunes plantes. Dans cette méthode, puisque les substances telles que les plasties, corps huileux, vacuoles, substances d'assimilation et substances de réserve qui sont utilisables dans les domaines de la pharmacologie et de la médecine, sont produites dans un corps de pousse primordial en tant qu'origine pour la propagation et la reproduction. Ainsi, la méthode selon la présente invention peut être appliquée à la production de substances qui sont utilisables dans les domaines pharmacologique et médical. Par ailleurs, elle est également applicable à la propagation et à la reproduction de plantes comestibles et de- plantes décoratives. Drautres objets et avantages de l'invention appa raieront à la lecture de la description suivante, en référence aux dessins annexés, tout en ayant à l'esprit que toutes modification, changement etlou-variation peuvent être facile ment faites par l'homme de l'art, sans s'écarter pour cela de l'esprit de l'invention et de .la portée des revendications correspondantes.Dans ces dessins - la figure 1 est une vue représentant le conglomé- rat de pousse primordiale d'un melon d'eau triplolde, grossi 5 fois - la figure 2 est une vue représentant le conglomérat de pousse primordiale d'un hybride luxuriant de mais, agrandi 2,5 fois - la figure 3 est une vue représentant le conglomérat de pousse primordiale d'un hybride luxuriant de plant de riz, agrandi 6 fois - la figure 4 est une vue représentant le conglomérat de pousse primordiale d'un hybride de gloire du matin, grossi 8 fois - la figure 5 est une coupe verticale représentant la pousse primordiale primaire d'un melon d'eau triploide grossie 30 fois dans sa zone centrale en relief - la figure 6 est une coupe verticale montrant la pousse primordiale secondaire de melon d'eau triploide, grossie 84 fois ; et - la figure 7 est une vue représentant les chromosomes 2n=33 dans la pousse primordiale de melon d'eau triploide pendant le stade moyen de la meiose, dans laquelle les vues latérales droite et gauche sont des photographies de la même image prise avec différents objectifs. L'invention est dans une large mesure applicable aux plantes annuelles utiles, y compris les plantes-annuelles médicinales et les plantes en agriculture et en horticulture, particulièrement le melon d'eau triploide (Citrillus battich), l'hybride luxuriant de mais indien (Zea mais) et- l'hybride luxuriant de plant de riz (Oryza sativa) et la gloire du matin hybride (Ipomoea nil Roth) en vue de la production à grande-échelle, tout en maintenant leur caractère de triploide, d'hybride luxuriant et d'hybride.Outre les susmentionnés melon d'eau, mais indien, plant de riz et gloire du matin, l'invention est également applicable aux plantes médicinales1 par exemple la gentiane verte du Japon (Swertia Japonîca), le pavot (Paraver somniferum), les plantes comestibles utiles par exemple le froment(Triticum Sativum), la graine de soja (Glycine max),les plantes industrielles utiles telles que le colza (Brassica campestris) et le carthame (Carthamus tinctorius), les plantes utiles en horticulture par exemple le pétunia (Petunia hybrida) -et analogues. La méthode selon la présente invention pour le développement à grande échelle végétativement et de façon pérennante des plantes annuelles utiles pendant une longue période de temps en utilisant des pousses primordiales sera expliqué plus en détail en se référant à ces caractéristiques spécifiques. DJabord, après avoir stérilisé l'apex ou zone germinative de la pousse de la plante annuelle utile au moyen d'une solution de stérilisation puis lavage avec de l'eau stérilisée, on découpe cette zone germinative par observation sous stéréo- microscope. Ensuite, la zone germinative ainsi obtenue est transplantée dans un milieu de culture artificiel renfermant une composition de sel minéral et une hormone de croissance des plantes, et on la soumet à une culture sous rotation (désignée dans ce qui suit par l'expression "culture en rotation") sous des conditions de température de 15 à 30"C, une intensité d'illumination de 2 000 à 9 000 lux et un nombre de révolutions de 0,5 à 10 t/mn pour obtenir des pousses primordiales. Lors de la préparation des pousses primordiales, leur composition et concentration dans le milieu de culture artificiel pourra être légèrement différent selon les plantes à développer. Comme composition de sel minéral dans le milieu de culture artificiel, la composition renfermée des milieux de culture connus telle que Murashige-Skoog (que l'on disi- gnera dans ce qui suit par l'abréviâtion "MS") et Gamborg B5 (désigné dans ce qui suit par l'abréviation "B5") et analogues peuvent être utilisés avec une modification légère de leurs ingrédients.Comme hormone de croissance de plantes, on peut utiliser les auxines, par exemple l'acide indolylacétique, l'acide naphtalène acétique, l'acide 2 4'dichloro-phe'noxy-acéti- que, -les cytochinines, par exemple la chinétine, la benzylaminopurine. La température de culture est de préférence une température constante de 15 à 30"C. Si elle est inférieure à 15"C,la vitesse de propagation est-basse, tandis que si la température est trop élevée, la croissance n'est pas bonne et est instable, Afin de cultiver la pousse primordiale, des rampes de lumière forte sont nécessaires. Une intensité d'illumination des rampes de lumière continue de 2000 à 9000 lux est préférable. Pour une intensité d'illumination inférieure à cette plage, la culture de la pousse primordiale est médiocre.En ce qui concerne la culture, une culture en rotation est appropriée pour la présente invention plutôt qu'une culture fixe dans laquelle le milieu de culture n'est pas mis en rotation mais reste immobile. Selon la présente invention, de bons résultats peuvent être obtenus pour un faible aombre de révolutions de 0,5 à 10 t/mn. Dans le cas de la mise en oeuvre d'une culture fixe, la croissance est lente et il est difficile de former le tissu de la pousse primordiale, alors que si le nombre de révolutions est trop élevé, beaucoup trop de zones de callus sont produites et de ce fait, aucun excellent résultat ne peut être obtenu. Lorsqùe la méthode de propagation selon l'invention est appliquée plus particulièrement aux melons d'eau triploides, à l'hybride luxuriant de mais indien, à l'hybride luxuriant de plant de riz et à la gloire du matin hybride, on peut obtenir des pousses primordiales qui se propagent activement. Les tableaux 1 à 4 montrent des exemples de milieux de culture optimale préparés en modifiant leur composition et leur concentration, dans le cas où des pousses primordiales de ces plants sont produits.Le milieu de culture artificiel pour obtenir la propagation la plus rapide et la plus stable de la pousse primordiale est constitué de B5 et de benzylaminopurine (BAP 20 ppm) pour le melon d'eau triploide (tableau 1) ; constitué de B5 et d'acide naphtalène acétique (NAA, 0,25 ppm) et de benzylaminopurine (BAP, 0,125 ppm) pour l'hybride luxuriant~de mais indien (tableau 2) ; constitué de B5 et d'acide naphtalèneacétique (NAA, 0,25 ppm) et de benzylaminopurine (BAP, 0,125 ppm pour l'hybride luxuriant de plant de riz (tableau 3) ; et constitué de B5 et d'acide 2,4-dichlorophénoxyacétique (2,4D, 0,25 ppm) pour la gloire du matin hybride (tableau 4). Dans les tableaux suivants, NAA, 2,4-D, BAP et K signifient l'acide naphtalène acétique, l'acide 2,4-dichlorophénoxy-acétique,la benzylaminopurine et la kinétine, res pectivement TABLEAU 1 o vsu ç s ao .S g u 0 0 OI 8 i pousses p | plante - juvénile plante juvénile - I o atrophié pousses primor- pousses primor- pousses puis atrophié NAA diales diales mordiales 1,0 ~a ~a a a'trophié atrophié atrophié h ç . ~ atrophié atrophié 2,4-D 'El t0 u t X ~ At aO O O O a l ô i 3 u i a t e Z e o % B % iR io / X n5 e X L~ a 1 Note * : le milieu de culture optimal pour l'obtention de pousses primordiales de melon d'eau triploides TABLEAU 2 B "m7~~9slpml~~q[ll"PI~ III I I N N 4 4 4 nl Q BAP Q auxine o (mg/i) 0,125 2,0 0,125 2,0 0 plante I I I I fi fi B fi *S N plante ju- sH vénile nt tS t nile nile o plante H pousses t plante H plante H atrophié - 'mordialea nile nile s plante g plante W plante 3 g M m m ca c 2 plante tS plante juvé- plante juvé- plante juvé- atrophié vénile A nile nile nile &verbar; &verbar; &verbar; l0 i0 > cs n o uX a 0AH v o v o ô &commat;E 04 04 wS 4S E =8 o g:f; 4t 01 P Pe PB P > St nS nH SH O sst 0S WS oM 02 e o eso F.*O a o e H > H > t > t > HF g) / ~~ un in C / es o cs o Note : ** Le milieu de culture optimal pour l'obtention de pousses primordiales d'hybride luxuriant de maïs indien TABLEAU 3 v ~a O Of: 0,125 2,0 0,125 2,0 o plante juvénile atrophié atrophié atrophié atrophié 0,25 callus M {X -- a. S 1,0 callus pousses primor- atrophié - o 0,25 atrophié pousses primor- pousses primor- O cailus 2,4-D o, d'aies Mu atrophié 9 atrophié atrophié S R i o t 004 A o0H S un aO t t X H ss N O O O O ~I ~ S ax ~I ~I ~I rd ô Z a X om Q n0r > ae z A B S n O sO O ~l ~l % u ~ u ~ Q U e h SW / Ô Ov Ô Oo Note : *** Le milieu de culture optimal pour l'obtention de pousses primordiales d'hybride luxuriant de plant de riz TABLEAU 4 - - i N rat i BAP K a, =I auxine o -- S b4 atrophié plante juvé- plante a plante juvé- plante juvé nile nile nile nile Ô tt Qe QX Q 1 r Y " pousses ~ , ~ . Ô z i -01 cailus . cailus callus O t a a a g a H g-3/ o ô o o o Note : **** Le milieu de culture optimal pour l'obtention de pousses primordiales de gloire du matin hybride. Les pousses primordiales résultantes sont sous la forme d'un conglomérat hémisphérique. Les conglomérats de melons d'eau triploides (voir figure 1) et la gloire du matin hybride (figure 4) présentent une couleur vert clair ou vert foncé et ont du callus dans leurs zones de base. Dans l'intervalle, les conglomérats de l'hybride luxuriant de mains indien (figure 2) et de l'hybride luxuriant de plant de riz (figure 3) présentent une couleur vert clair. Ces pousses primordiales préparées selon l'invention se sont encore dEveloppées activement pendant 6 à 7 mois. Ensuite, lorsque ces pousses primordiales sont transplantées dans des milieux de culture solides pour former de jeunes plants et que les milieux de culture sont soumis à une culture fixe entre 15 et 300C et pour une intensité d'illumination de 1000 à 4000 lux , il se forme d'abord un grand nombre de petites pousses fines et des racines apparaissent dans leurs zones de base. Deux à quatre mois après la culture, on peut obtenir des plantes présentant le même génotype, le même type chromosomique et le même phénotype que la plante dont elles sont issues. La pousse primordiale est une structure en relief présentant un diamètre de 50 à 80 Zm, et dont la surface est unie au stade initial (figure 5). Les cellules constitutives sont de petites cellules polygonales uniformes qui réalisent des divisions polyaxiales dans lesquelles l'axe de la division est vertical, parallèle, oblique, ou analogue. Lorsque la pousse primordiale (pousse primordiale primaire) s'agrandit graduellement et que le diamètre atteint 100 à 1000 um (voir figure 6), il se forme deux couches d'un systeme épidermique et d'un système cortexien. La couche la plus extérieure est constituée d'une ou deux couches de cellules dans lesquelles l'axe de division cellulaire est uniquement parallèle. Alors que le système cortexien du côté interne de la couche la plus extérieure est constitué d'un certain nombre de conglomérats de cellules plus ou moins grands, et à l'ihterieur de ce systime cortexien du côté interne on observe un certain nombre de chloroplastes, de vacuoles et de grains de substances de réserve bien développés. La dernière pousse primordiale (pousse primordiale secondaire) se développe sous la forme d'une structure en relief trapézoidale présentant un diamètre supérieur ou égal à 500 um, et dans les cellules du système épidermique de la couche la plus extérieure à ce stade, on trouve d'importants corps huileux et dans les cellules du système endodermique de la couche interne, le nombre de chloroplastes est accru et les vacuoles sont largement développés. A ce stade, plusieurs pousses primordiales-primaires sont nouvellement produites autour de cette structure en relief trapézoidale. De cette manière, la pousse primordiale continue de se propager et un cycle de ce type se termine en environ 7 à 14 jours. En conséquence, une pousse primordiale se développe environ quatre fois dans l'intervalle d'environ 7 à 14 jours. Ltobservation des chromosomes dans le melon d'eau triploide (2n=33) réalisée dans le but d'examiner la stabilité dans l'héritage de sa pousse primaire, il s'est confirmé que toutes les pousses primaires examinées présentent le même nombre de thromosomes, à savoir 2n=33 et que la plante dont elles sont issues (figure 7). Il-est donc maintenant possible de développer de façon végétative le melon d'eau triploide tout en maintenant de façon pérennante le caractère triploide. Ainsi, il est possible de développer à grande échelle les plantes annuelles utiles avec le même génotype et le même type chromosomique pendant un certain nombre d'années en utilisant les pousses primordiales. D'autre part, les plastes, les vacuoles, les corps huileux, les grains des substances de réserve (amidon, protéines, etc.) sont produits activement dans les pousses primordiales. Au contraire, dans la méthode classique de culture cellulaire à callus, pratiquement aucun métabolite secondaire pouvant être discerne n'est produit. Dans l'intervalle, selon la présente invention, il est probable que les substances utiles peuvent être produites industriellement à grande échelle à partir de cellules vivantes en utilisant des pousses primordiales. il est également possible de développer végétativement les pousses primordiales dans un état stable d'hérédité et de chromosomes par sous-culture en une fois par intervalle de 0,5 à 2 mois. Les effets obtenus par l'invention sont tels qu'il est possible de développer de façon végétative et pérennante les plantes annuelles utiles en utilisant les pousses primordiales et qu'il est également possible d'obtenir une importante quantité de leur population tout en maintenant de façon pérennante le génotype et le type chromosomique dans les plantes annuelles utiles. En outre, il est possible de fabriquer les substances médicales, comestibles et industrielles en utilisant celles produites par des cellules vivantes de culture. La vitesse de propagation des pousses primordiales est extrêmement rapide à une vitesse telle que seulement une zone germinative ou apex primordiale peut produire annuelle ment 412 à 452 souches primordiales, en rendant ainsi possible la culture de masse sur une large échelle. L'invention sera explicitée plus en détail en référence aux exemples spécifiques suivants qui sont destinés à limiter en aucune façon la portée de l'invention. Exemple 1 : melon d'eau triploide (Cirrulus battich) Methode de culture On utilise un Gamborg B5 modifié comme milieu de culture fondamental pour cultiver le melon d'eau, sa composition étant indiquée au tableau 5 ci-après. Tableau 5 Milieu de culture modifié à Gamborg Bg pour meloa d'eau triplolde mg/l NaH2PO4.2H2O 170,0 KNO3 * 2.500,0 (NH4)2S04 134,0 MgS04.7H20 * 250,0 CaCl2 113,0 Fe-EDTA 40,0 MnSO4.4H2O 13,0 H3B03 3,0 ZnSO4.7H2O 2,0 Na2MoO4.2H2O 0,25 CuS04.5H20 0,025 CoCl2.6H20 0,025 KI 0,75 Acide nicotinique 1,0 thiamine, HCl 10,0 pyridoxine, HCl 1,0 myoinositol 100,0 sucrose 20.000,0 acide naphtalèneacétique * 0 à 0,25 6-benzylaminopurine * 0,125à 2,0 pH : 5,7 à 5,8 Dans le tableau 5, les composés marqués par un astérisque sont utilisés pour la modification. D'abord, on prélève une partie de zone germinative présentant une longueur d'environ 15 mm d'une jeune plante juvénile d'un -melon d'eau à croissance rapide Après lavage avec une solution de stérilisation9 les feuilles sont pelées par la suite à partir du côté externe vers le côté interne sous observation en utilisant un stéréomicroscope pourvu d'une paire de pinces et d'une lame pour prélever une zone germinative d'environ 1 à 1,5 mm avec deux ou trois feuilles primordiales très fines sur le côté le plus interne. Cette zone germinative prelevée est cultivée dans le milieu de cul ture fondamental ci-dessus.La culture en rotation est réalisée dans un tube à essai de 27 mm de diamètre par 200 mm de long dans lequel on a versé 25 ml de culture fondamentale sous les conditions que la température soit de 15 à 30 C, à l'intensité d'illumination de 2000 à 9000 lux et le nombre de révolutions de 0,5 à 10 t/mn. On obtient un conglomérat de pousses primordiales vertes d'environ-10 mm de diamètre un mois après la mise en oeuvre de la culture. Par la suite, ce conglomérat est découpé chaque mois pour obtenir une- subdivision d'environ 5 à 10 mm de diamètre, que l'on transplante ensuite dans un milieu de culture frais comme décrit ci-dessus et que l'on développe. Méthode de formation d'une jeune plante Comme milieu de culture fondamental pour former de jeunes plantes, on utilise un milieu de culture solide préparé de façon telle que le milieu de culture fondamental cidessus à l'exception du sucrose, de l'acide naphtalène- acétique et de l'acide 6-benzylaminopurine est dilué S fois, et l'on ajoute 20 g/l de sucrose, 0,05 à 0,5 ppm de 6-benzylaminopurine et 8 g/l de gélatine pour obtenir un milieu de culture réglé à pH 5,7-5,8. Environ 80 ml de ce milieu de culture est vers dans un flacon conique de 300 ml, sur lequel on place de façon stationnaire un conglomérat de pousses primordiales subdivisées de 3 à 5 ml de diamètre. La culture est réalisée sous des conditions stationnaires telles que la température atteigne 15 à 30 C, et que l'intensité d'illumination soit de 4 000 lux (illuminé pendant 16 heures et non-illuminé pendant 8 heures). Après deux ou trois semaines de culture stationnaire, il se forme 4 à 6 éléments de petites pousses vert sombre ayant chacune une longueur de 3 à 4 m par conglomérat de pousse primordiale. Selon l'invention, il est possible de développer de façon pérennante les plantes annuelles en quantités importantes. Dans le cas du melon d'eau triploide, le taux de développement est d'environ trois fois par mois, atteignant un taux de propagation de 312 à environ 5x105 par an. il en résulte qu'environ 500 000 jeunes plantes juvéniles peuvent être produites par an à partir d'un seul parent. Ainsi, selon la présente invention, les plantes annuelles peuvent être produites industriellement de façon satisfaisante. Il s'est confirmé que les pousses ainsi obtenues présentent le même caractère triploide que la plante dont elles sont issues. En conséquence, une population présentant le même type chromosomal et le même génotype que les plantes dont elles sont issues peuvent être produites industriellement à grande échelle. Exemple 2 : hybride luxuriant de mais indien (Zea mais) Méthode de culture Comme milieu de culture fondamental pour hybride luxuriant de mais indien, on utilise le même milieu de culture solide que dans l'exemple 1, à l'exception que l'on emploie 0,25 à 1 mg/l d'acide naphtaléne-acétique et 0,125 mg/l de 6-benzylaminopurine. Comme dans la méthode de l'exemple 1, on prélève par découpe environ 1mm de zone germinative et soumis à une culture selon la méthode fondamentale précitée.Un mois après mise en oeuvre de la culture, on obtient un conglomérat de pousses primordiales vertes présentant un diamètre de 20 mm . Chaque mois par la suite, ce conglomérat d pousses primordiales est divisé en portions de 5 à 10 mm de diamètre, que l'on plante par la suite dans un milieu de culture fondamental frais comme décrit ci-dessus. Méthode pour obtenir un jeune plant Le même milieu de culture solide que dans l'exemple 1 est utilisé comme milieu de culture pour former de jeunes plants. Environ 80 ml de ce milieu de culture est versé dans un flacon conique de 300 ml, et le conglomérat de pousses primordiales de 15 mm était placé sur le milieu de culture ainsi versé. La culture est réalisée dans les mêmes conditions qu'à l'exemple 1. Deux ou trois semaines après la culture, des petites pousses de 10 à 20 mm de de longueur se forment et il se forme des racines à partir de leurs zones de base. Environ deux mois après la culture stationnaire, il se forme environ 2 à 3 jeunes plantes juvéniles, présentant chacune une longueur de 100 à 150 mm pour chaque conglomérat de pousses primordiales. Dans le cas de l'hybride luxuriant de mais indien, le taux de propagation est d'environ quatre fois par mois, 6 atteignant un taux de 412 à environ 6x10 par an. il en résulte qu'ernviron16.000.003 plantes plantes juvéniles peu- vent être produites par an à partir d'un seul parent. Ainsi, la plante annuelle peut être produite de façon industrielle selon la présente invention. En outre, il s'est confirmé que les pousses ainsi obtenues présentaient le même caractère d'hybride luxuriant que la plante dont elles étaient issues. En conséquence, une population présentant le même caractère d'hybride luxuriant peut être produite industriellement à grande échelle. Exemples 3 : Hybride luxuriant de plant de riz (Oryza sativa) Méthode de culture Comme milieu de culture fondamental pour l'hybride luxuriant de plant de riz, on utilise le même milieu de culture modifié que dans l'exemple 1, sauf que l'on emploie O,25à 1,0 mg/l d'acide naphtalène-acétique. Comme dans la méthode de l'exemple 1, on prélève par découpe environ 1 mm de longueur de-zone germinative, et on la cultive dans le milieu de culture fondamental ci-dessus pour obtenir un conglomérat de pousses primaires vert clair d'un diamètre de 5 mm un mois après la mise en oeuvre de la culture.Chaque mois par la suite, ce conglomérat de pousse primordiale est divisé en portions de 3 à 4 mm de diamètre, que l'on plante ensuite dans un milieu de culture frais comme décrit cidessus et que l'on développe. Méthode d'obtention d'une jeune plante Comme milieu de culture pour obtenir de jeunes plantes, on utilise un milieu de culture solide comme préparé dans l'exemple 1 de façon que le milieu de culture fondamental à l'exclusion du sucrose , de l'acide naphtalèneacétique et de l'acide-benzylaminopurine soit dilué 5 fois, et que l'on ajoute ensuite 20 g/l de sucrose et 20 g/l de gélatine pour obtenir un milieu réglé à pH 5,7-5,8. Environ 80 ml de milieu de culture ainsi préparés sont versés dans un flacon conique de 300 ml, et l'on y place le conglomérat de pousse primordiale d'environ 3 à 5 mm de diamètre. La culture est réalisée dans les mêmes conditions qu'à l'exemple 1. Deux à trois semaines après la culture, des petites pousses présentant chacune une longueur de -5 à 100 ml se forment et des racines se forment à partir de leurs zones de base. Un ou deux éléments de jeunes plants juvéniles présentant chacun une longueur d'environ 70 mm se forment pour chaque conglomérat de pousse primordiale deux mois après la culture. Dans le cas de l'hybride luxuriant de plant de riz, le taux de propagation est plutôt élevée, atteignant un taux d'environ 5 fois par mois, c'est-å-dire un taux de 512 5 environ 2,5 x 10 par année. il en résulte qu environ 250 000 000 de jeunes plants juvéniles peuvent être produits par année à partir d'un seul parent. Il s'est confirmé que les pousses ainsi obtenues présentent le même caractère d'hybride luxuriant que la plante dont ils sont issus Ainsi, la population du même hybride luxuriant peut être produit industriellement en masse. Exemple 4 : gloire du matin hybride (lpomoea nil Roth) Comme milieu de culture fondamental pour la gloire du matin hybride, on utilise le même milieu de culture modifié qu'à l'exemple 1, sauf que l'on emploie 0,25 à 1,0 mg/l d'acide 2,4-dichlorophénoxy-acétique à la place de. l'acide naphtalèneacétique et de la 6-benzylaminopurine. Comme dans la méthode de l'exemple 1, on prélève par découpe une longueur d'environ 0,5 à 1 mm de la zone germinative et on la cultive dans le milieu de culture fondamental ci-dessus. Un mois après la mise en oeuvre de la culturei on obtient un conglomérat de pousses primordiales vert d'environ 5 mm de diamètre. Chaque mois par la suite, le conglomérat de pousses primordiales ainsi obtenu est divisé en portions de 3 à 5 mm de'diamètre que l'on cultive dans un milieu de culture frais comme décrit ci-dessus. Méthode d'obtention de jeunes plantes Comme les milieux de culture pour l'obtention de jeunes plantes, on utilise le même milieu de culture solide que dans l'exemple 1 préparé d'une manière telle que le milieu de culture ci-dessus à l'exclusion du sucrose et de l t acide 2,4-dichlorophénoxy-acétique est dilué 5 fois, et l'on y ajoute 20 g/l de sucrose, 0O5 à 0s5 ppm de 6-benzylaminopu rine et 8 g/l de gélatine pour obtenir le milieu de culture tel que réglé à pH 5,7-5,8. Environ 80 ml du milieu de culture ainsi obtenus sont versés dans un flacon conique de 300 mi, sur lequel on place la pousse primordiale de 3 à 5 mm de diamètre Une semaine après la culture, des structures en relief que l'on considère comme de fines pousses d'une taille de 1 à 2 mm de longueur se forment. Dans le cas de la gloire du matin hybride, le taux de propagation est de deux fois par mois, atteignant le taux de 212 à environ 4x103 par année. En conséquence, environ 4 000 jeunes plants juvéniles peuvent être produits annuellement à partir d'un seul parent. Ainsi, la production en masse peut etre réalisée complètement à l'échelon industriel. REVENDICATIONS 1. Méthode pour le développement à grande échelle de façon pérennante d'une plante annuelle utile en utilisant des pousses primordiales, caractérisée par les étapes suivantes on prélève par découpe une zone germinative d'une plante annuelle utile et on transplante la zone germinative ainsi découpée dans un milieu de culture artifificel renfermant une composition de sel minéral et une hormone de croissance des plantes ;; on cultive, en rotation la zone germinative sous les conditions de température de 15 à 30"C, d'intensité d'illumination de 2000 à 9000 lux et un nombre de révolutions de 0,5 à 10 t/mn pour développer la pousse primordiale R et on cultive de façon stationnaire la pousse primor diaule pour obtenir de jeunes plantes, la plante annuelle utile étant développée à grande échelle de façon pérennante pendant une courte période de temps, tout en maintenant le génotype et le type chromosomique pendant un certain nombre d'années. 2. Méthode selon la revendication 1, caractérisée en ce que la plante annuelle utile est choisie dans le groupe constitué par le melon d'eau triploide, l'hybride luxuriant de mais indien, l'hybride luxuriant d-e plant de riz, et la gloire du matin hybride. 3. Méthode selon la revendication 1, caractérisée en ce que la composition de sel inorganique est un milieu de culture à base de Gamborg B que l'hormone de croissance de plante est choisie dans le groupe constitué par l'acide naphtalène-acAtique, l'acide 2,4-dichiorophénoxy-acétique, la kinétine et la benzylaminopurine. 4. Méthode selon la revendication 1, caractériséeen ce que la culture stationnaire est réalisée dans des conditions de température de 15 à 30 C et d'intensité d'illumination de 1 000 à 4 000 lux