Brevet FR2542619A1 — publié le 19840921

k 542619 L'invention concerne l'utilisation du bioxyde de chlo- re gazeux pour stériliser, notamment dans les conditions am- biantes de température, de pression et d'humidité, des surfa- ces et en particulier les surfaces imperméables au gaz d'ins- truments et ustensiles couramment utilisés dans le domaine des sciences médicales, comme ceux formés de porcelaine, d'une matière céramique, de métaux, de matières plastiques et de verre. L'introduction continue, en utilisation technique, de nouveaux matériaux ne pouvant être stérilisés par irradia- tion ou chauffage ou ne pouvant être stérilisés par exposi- tion à des systèmes liquides, a nécessité le développement d'autres moyens de stérilisation Un procédé moderne majeur destiné à cet effet se fonde sur l'utilisation d'agents chimi- ques gazeux Cependant, il faut sélectivement utiliser de tels composés chimiquescar seuls ceux qui tuent des spores peuvent être considéré comme étant des agents chimiques de stérili- sation Il existe des agents antimicrobiens très variés, mais, dans la plupart des cas, ces agents ne détruisent pas les spores de bactéries résistantes Les microbicides se-limitent spécifiquement à la destruction du type d'organisme indiqué avant le suffixe "cide", par exemple le terme bactéricide désigne un produit destiné à détruire des bactéries, le ter- me fongicide un produit pour détruire des champignons, un viricide un produit pour détruire des virus et un sporicide est destiné à détruire des spores, aussi bien bactériennes que fongiques Puisque les spores bactériennes sont les plus dif- ficiles à détruire, seuls les sporicides peuvent être consi- dérés comme synonymes d'agents chimiques de stérilisation On peut les définir comme des agents chimiques qui, lorsqu'on les utilise de façon appropriée, peuvent détruire toutes formes de vie microbiologique, ce qui comprend les spores bactériennes et fongiques et les virus. On utilise dans de nombreux hôpitaux et installations de recherches médicales de l'oxyde d'éthylène et du formal- déhyde gazeux pour stériliser de l'équipement ou des zones de travail que l'on ne peut facilement stériliser par chauffage ou à l'aide de liquides Si on l'applique en des concentrations élevées, le formaldéhyde risque de laisser un résidu de para- formaldéhyde solide C'est pourquoi on évite souvent de l'uti- ser pour la stérilisation d'un équipement délicat ou dans des cas o il peut se présenter des réactions d'allergie à cette substance Contrairement au formaldéhyde, l'oxyde d'éthylène pénètre bien dans leas matières poreuses; il est fortement absorbé par du caoutchouc et par de nombreuses matières plasti- ques, de sorte qu'il n'est pas facile d'en éliminer les vapeurs par une brève aération. La publication de travaux de recherche concernant le caractère mutagène et oncogène de l'oxyde d'éthylène et aussi du formaldéhyde menace de conduire à des limitations sévères, sinon à des interdictions totales, de l'utilisation de ces composés comme agents de stérilisation Les limitations ris- quent d'augmenter très nettement les frais associés à la sté- rilisation par l'oxyde d'éthylène Indépendemment de ces risques potentiels pour la santé, l'oxyde d'éthylène est difficile à manipuler aux concentra- tions et températures nécessaires pour une stérilisation effi- cace A une concentration de 3 à 80 A dans de l'air, l'oxyde d'éthylène est violemment explosif et donc on utilise couram- ment l'oxyde d'éthylène en mélange avec un gaz inerte tel qu'un fluorocarbone, par exemple un mélange de 12 % d'oxyde d'éthylène et de 88 % de "Fréon 121 (R) (E I Dupont) Lors de la stérilisation de produits médicaux, on utilise couram- ment des températures aussi élevées que 54,4 à 600 C pour garantir une stérilité, à des concentrations d'oxyde d'éthylène de 300 à 1200 mg/l dans la chambre de traitement On utilise couramment une préhumidification suivie par des temps d'expo- sition au gaz d'au moins 4,0 heures On peut noter aussi que l'oxyde d'éthylène est plus efficace pour la destruction de spores sèches sur des matières poreuses, comme du papier et des étoffes, que sur des matières non poreuses comme du verre, des matières céramiques, des plastiques durs et des métaux. Voir, aux pages 149 à 207, l'article ou chapitre de C W Bruch et M K Bruch, Gaseous Disinfection ldésinfection par un agent E 542619 guzeux, duals l'ouvrage D)sinrcl:ion publidé par fl A Bell nude chez l'éditeur Marcel Docker, New York ( 1970)). On sait depuis longtemps que le bioxyde de chlore est biologiquement actif et des études antérieures ont déjà indiqué que ce composé possède des propriétés bactéricides, viricides et sporicides lorsqu'on l'applique en solution a- queuse à des concentrations minimales d'environ 0,20 à 0,25 mg/1 Voir W J Masschelein dans Chorine Dioxide: Chemistry and Environmental Impact of Oxychlorine Compounds lbioxyde de chlore: chimie et impact des composés oxygénés du chlore sur l'environnementl, ouvrage de R C Rice édité chez Ann Arbor Science ( 1979); G M Ridenour et al, Water & Sewage Works, 96, 279 ( 1949) Cependant, des brevets plus récents ont affirmé que le bioxyde de chlore utilisé seul en milieu aqueux n'est un agent sporicide que si l'on opère en présence de stabilisants Voir le brevet US-A-4 073 888 (Snyder) La stérilisation par du bioxyde de chlore aqueux souffre de tous les inconvénients généraux associés à l'utilisation des agents aqueux de stérilisation, ce qui comprend les difficul- tés de formulation et de manutention, l'inaptitude à stérili. ser de l'équipement ou des substances sensibles à l'humidité, et le dépôt de résidus lors du séchage. On sait peu de choses sur la chimie en phase gazeuse du bioxyde de chlore dans de l'air A des concentrations supé- rieures à environ 10 % (c'est-à-dire à environ 288 mg/l), le composé est instable et parfois il détone, en présentant probablement une décomposition catalysée par un choc ou par la lumière C'est pourquoi le bioxyde de chlore gazeux ne peut être magasiné Aux mêmes concentrations en solution aqueuse, il est tout à fait stable. On pense que la chimie du bioxyde de chlore dans d(e l'eau subit l'inflence de la formation d'hydra Les A de basses températures (mais supérieures à O C), des concentrations élevées en bioxyde de chlore provoquent une précipitation sous forme d'hydrates dont la composition varie un peu; un chauf- fage permet de redissoudre ces hydrates Il est probable que, dans ces solutions chauffées, le bioxyde de chlore comporte Z 542619 encore quelques molécules d'eau qui l'cntouren L en un agrofjat de type "cluster" Bien entendu, de tels hydrates ne risquent pas de se présenter en phase vapeur. En général, la distance mutuelle des molécules dans la phase gazeuse et l'absence des effets dûs à un solvant po- laire doivent profondément modifier la chimie du bioxyde de chlore dans de l'air Enfin, seules des molécules relativement petites ont une pression de vapeur suffisante pour coexister avec du bioxyde de chlore Ainsi, des composés fréquemment disponibles pour réagir dans de l'eau naturelle (par exemple des protéines, certains amino acides, dés acides humiques et des acides fulviques) ne se trouveront pas à l'état de vapeur. Lovely décrit dans le brevet US-A-3 591 515 des compo- sitions pulvérulentes que l'on peut formuler pour qu'elles libèrent 10 à 10 000 ppm (parties par million ou millionièmes) de bioxyde de chlore gazeux Le bioxyde de chlore gazeux ainsi libéré est-déclaré utile pour la destruction des bactéries et pour empêcher la croissance des champignons sur des fruits pendant le transport. En raison des difficultés de manutention associées au bioxyde de chlore, des différences dans sa chimie en phase gazeuse et en solution, et des contradictions apparaissant dans les travaux cités ci-dessus, il n'a pas été montré jus- qu'à présent que le bioxyde de chlore gazeux peut utilement servir d'agent chimique de stérilisation à une concentra- tion quelconque. Donc, les objets de la présente invention sont notam- ment d'utiliser du bioxyde de chlore gazeux comme agent chimi- que de stérilisation, c'est-à-dire comme sporicide pour diverses matières et divers matériaux servant couramment pour des instruments, ustensiles el produi Ls à u- sage médical et dentaire; en de courts temps d'expositions et dans les condi- tions ambiantes de température, de pression et d'humidité relative; pour des objets comme des instruments médicaux en- fermés dans des emballages perméables à du gaz; et pour des surfaces imperméables, qui peuvonlt êIrc séchées avant stérilisation. D'autres objets, avantages et caractéristiques nou- velles de la présente invention apparaîtront à l'homme du métier à l'examen de la description suivante, présentée à titre illustratif et nullement limitatif. On atteint les buts visés par l'invention en exposant des surfaces contaminées par des organismes microbiens, com- me les surfaces d'instruments ou ustensiles servant dans les domaines médicaux et dentaires, à une atmosphère contenant une concentration efficace de bioxyde de chlore gazeux Le bioxyde de chlore gazeux stérilise efficacement les surfaces aux conditions ambiantes de température, de pression et d'humidité On peut régler les concentrations efficaces du bioxyde de chlore gazeux à un niveau auquel les risques d'ex- plosion, de corrosivité et de dépôts de résidus ne consti- tuent pas des considérations importantes, et l'on peut utili- ser le gaz de concert avec un appareil dans lequel la possibi- lité qu'une concentration toxique de bioxyde de chlore s'échappe dans l'atmosphère du lieu de travail est réduite à. son minimum. On peut préparer le bioxyde de chlore gazeux par n'importe lequel des procédés connus en pratique Un procédé préféré consiste à soumettre des solutions de chlorite de sodium à une dismutation en présence d'acides Dans une for- me de réalisation de ce procédé, on traite une solution aqueu- se diluée de persulfate de potassium par une solution aqueuse diluée de chlorite de sodium aux températures ambiantes, c'est-à-dire à 20-300 C, dans un réacteur clos Voir Rosen- blatt et al, J Org Chem, 28, 2790 ( 1963) On peut ajuster} par chauffage ou refroidissement extérieur, la température de l'atmosphère de bioxyde de chlore qui se forme dans l'espace situé au dessus du mélange réactionnel soumis à agitation. On admet ensuite la quantité voulue de bioxyde de chlore ga- zeux dans une chambre d'exposition convenable, dans laquelle on peut, de préférence, avoir fait régner un vide partiel et qui contient les objets à stériliser On admet dans la chambre d'exposition le bioxyde de chlore gazeux en mélange avec un véhicule gazeux qui est inerte à l'égard du bioxyde de chlore (c'est à dire qui ne réagit pas avec celui-ci) aux concentrations utilisées pour la stérilisation On peut ajuster la pression interne finale, à une valeur correspondant à une atmosphère (environ 1 bar) ou à une valeur supérieure, avec de l'azote, de l'argon ou un autre gaz inerte A la fin de la période d'exposition, on fait le vide dans la chambre d'exposition pour enlever le bioxyde de chlore-et l'on balaie rapidement cette chambre à l'aide d'un gaz inerte-ou d'air filtré Le bioxyde de chlore aspiré peut être facilement dé- truit en le faisant passer sur un agent réducteur, par exemple en le faisant passer dans une colonne garnie de morceaux de thiosulfate de sodium. La composition de l'atmosphère de bioxyde de chlore servant pour divers essais de stérilisation peut être déter- minée par colorimétrie à l'aide de n'importe queltles méthodes normalisées, par exemple par la méthode de Wheeler et al, Microchem J, 23, 164-168 ( 1978) On obtient à l'aide d'une seringue étanche au gaz et traversant un orifice recouvert dtune cloison, un échantillon de l'atmosphère régnant à l'inté- rieur de la chambre d'exposition On fait varier le volume de l'échantillon selon la concentration prévue pour le bioxyde de chlore dans l'atmosphère On échantillonne de préférence l'atmosphère au début et à la fin de la période d'exposition, On injecte le contenu de la seringue dans un récipient con- venable, c'est-à-dire une cuvette, contenant un volume égal de produits chimiques qui réagissent pour former une couleur dépendant de la concentration du bioxyde de chlore Après achèvement de la réaction, on mesure le coefficient d'absorp- tion optique de la solution à une longueur d'onde appropriée et l'on détermine à l'aide d'une courbe de référence la con- centration du bioxyde de chlore On peut généralement adapter cette méthode en vue d'utiliser n'importe laquelle des métho- des calorimétriques bien connues pour l'analyse du bioxyde de chlore. Des spores de l'organisme d'essai type servant à déterminor la concentration de bioxyde de chlore rjazeux pou- vant efficacement jouer un rôle de stérilisation sont celles de Bacillus Subtilis var niger (ATCC 9372) On sait que les spores seches de cet organisme sont extrêmement résistantes à la stérilisation et elles ont souvent servi à mesurer l'efficacité des agents -gazeux de stérilisation Voir, par exemple, aux pages 85-102 de l'ouvrage de M A Benarde, Disinfection, publié chez Marcel Decker, Newv Yorkk, ( 1970) le chapitre de P M Borick et R E Pepper, The Spore Problem (le problème des spores); et A M Cook et M R W Brown, J Appl Bact, 28, 361 ( 1965) dont les' exposés sont ici incorporés par référence Donc, on considère qu'une concen- tration donnée quelconque de bioxyde de chlore est efficace comme agent de stérilisation si une population initiale de 105 à 107 spores ne manifeste pas de croissance sur un mi- lieu nutritif après 9 jours d'observation suivant une exposi- tion à ladite concentration. On prépare des suspensions type de spores de B Sub- tilis var niger en opérant comme décrit par Dudd et Daley dans J Appl Bacteriol, 49, 89 ( 1980), qui est ici incor- poré par référence On prépare des bandes de papier d'essai pour incubation en plaçant 0,2 ml d'une suspension méthano- lique des spores sur des bandes de 7 x 35 mm de papier Whatman de 3 mm, préstérilisé, dans des boites de Pétri en verre On sèche les papiers sous vide ( 30 min à 30 C sous vide) et on les garde dans les conditions ambiantes de tem- pérature et d'humidité ( 20 à 30 C; 40 à 60 %o d'humidité relative) avant utilisation La charge de spores sur chaque bande préparée de cette façon est de 1,4 x 10 spores. On prépare des éprouvettes d'essai en feuilles de métal en donnant à des morceaux rectangulaires de feuille d'aluminium de 18 x 28 mm la forme de petites coupelles On les stérilise dans des boites de Pétri en verre Dans chaque coupelle, on place 0,2 ml d'une suspension méthanolique des spores On sèche les coupelles à la température ambiante et on les conserve dans les conditions ambiantes de température et d'humidité avant de les utiliser La charge en spores de O chaque coupelle es L d'environ 1,4 x 10 ospores. On place les feuilles de métal et les bandes de pa- pier dans des boites de Pétri en verre dans une chambre d'ex- position et on les expose pendant des temps allant jusqu'à 1,0 heure à des concentrations diverses de bioxyde de chlore gazeux dans de l'azote Typiquement, on effectue à chaque fois chaque essai en quadruple à sextuple On utilise une gamme de concentrations de gaz afin de déterminer pour cha- que surface les concentrations capables de jouer efficacement un rôle de stérilisation. Après exposition, on transfère 'les bandes de papier dans des tubes individuels contenant un milieu stérile favo- risant la croissance de bactéries, et l'on observe à des in- tervalles appropriés pour déceler une croissance éventuelle. On secoue les coupelles en feuille d'aluminium avec des per- les de verre dans de l'eau pour déloger les spores On met ensuite la suspension de spores en contact avec des prépara- tions de milieux convenables et l'on observe pour déceler une croissance éventuelle Si l'on n'observe pas de croissance après la période d'incubation, on attribue aux matériaux et. matières ayant subi le traitement d'exposition la qualifica- tion de "état de stérilité". Il a été trouvé que l'exposition de bandes de papier à des concentrations aussi faibles qu'environ 40 mg de bioxyde de chlore gazeux par litre à une température d'envi- ron 270 C et à une humidité relative d'environ 60 %, durant 1 heure environ, donne une stérilisation reproductible des bandes, c'est-à-dire que l'on n'observe pas de croissance des spores après une période de 9 jours d'incubation Chose étonnante, si l'on tient compte du comportement de l'oxyde d'éthylène, les spores ne s'avèrent pas plus résistantes lorsqu'on effectue leur exposition sur de l'aluminium Des concentrations de bioxyde de chlore gazeux aussi faibles qu'environ 35 mg/l ont donné une stérilisation reproductible des coupelles de feuille ou clinquant Pour chaque matière ou chaque matériau; on a atteint la stérilité dans un certain nombre d'essais après exposition à de plus faibles concentra- tions du bioxyde de chlore, ce qui comprend des concen Lra Lions aussi faibles que Il mg/l. La mise en pratique de l'invention sera maintenant illustrée encore plus complètement par références aux exemples détaillés suivants, présentée à titre illustratif et nulle- ment limitatif de l'invention. Exemple 1 On équipe d'une ampoule à robinet et d'un dispositif d'agitation magnétique un ballon à fond rond à -2 encolures, de 1 000 ml de capacité On place un tube d'admission d'azote gazeux, équipé d'un filtre à laine de verre et d'une valve à aiguille de manière à pouvoir admettre l'azote sous la sur- face du mélange réactionnel On équipe un tube de sortie à l'aide d'une valve à aiguille et on le place de manière que du gaz puisse passer du sommet du réacteur dans le récipient d'exposition. On utilise comme récipient d'exposition un grand ballon de réaction, en verre, de 2 000 ml de capacité, équipé d'un orifice recouvert d'une cloison d'obturation, d'un mano- mètre, et d'orifices d'admission et de sortie On relie le tube de sortie du ballon de 1 000 ml à l'orifice d'admission du récipient d'incubation. Dans un essai typique, on place 100 ml d'une solution aqueuse à 8 % de chlorite de sodium sous azote dans le ballon de 1 000 ml On ferme toutes les valves et l'on ajoute goutte à goutte tout en agitant une solution de 2,0 g de persulfate de potassium dans 100 ml d'eau On agite le mélange réaction- nel durant 30 à 45 minutes à 270 C pour achever la formation du bioxyde de chlore gazeux. Dans la chambre d'exposition, on place 3 à 6 bandes de papier ou coupelle en feuille d'aluminium revêLues do spores, chaque bande ou coupelle étant contenue dans une boi- te individuelle de Pétri en verre On balaie la chambre à l'azote, on la ferme puis on y fait régner un vide On ouvre la valve de sortie du tube provenant du réacteur et l'on règle, en suivant sur le manomètre les lectures de pression accrues, la quantité de bioxyde de chlore gazeux admis en provenance du réacteur On fcrme la valve de sortie e L l'on porte ensui- te à une valeur correspondant urn almunphlre (Ibar), parmi amis- sion d'azote, la pression régnant dans le récipient d'expo- sition. On échantillonne immédiatement l'atmosphère régnant -dans le récipient d'exposition, en enlevant 0,5 à 2, O ml de l'atmosphère à l'aide'd'une seringue étanche au gaz et qui traverse la cloison On détermine par la méthode de Wheeler et al, Microchem J, 23, 160 ( 1978) la concentration du bioxyde de chlore Au bout de 60 minutes, on échantillonne à nouveau l'atmosphère Puis on fait un vide dans la chambre d'exposition et on l'emplit à nouveau d'air filtré On ré- pète les étapes de mise sous vide et d'emplissage d'air, on ouvre la chambre et l'on en retire le contenu dans des condi- tions stériles. On transfère aseptiquement les bandes de papier dans des tubes individuels de bouillon de soja-tryptiçase que l'on fait incuber à 37 C On effectue après 24 et 48 heures des observations en vue de déterminer la présence ou l'absence d'une croissance des spores On fait incuber durant une semaine les tubes qui n'ont pas présenté de croissance au bout de 48 heures, et on les observe toutes les 24 heures Si l'on n'observe aucune croissance au bout d'une semaine, on enre- gistre la bande comme étant négative ou stérilisée. Après exposition, on transfère les feuilles dans des tubes individuels contenant 20 ml d'eau stérile et quelques perles de verre Après avoir vigoureusement secoué pour délo- ger les spores et les mettre en suspension, on placeen dou- ble, 0,1 ml de la suspension sur une plaque de gélose de soja- trypticase On fait incuber les plaques à 370 C et on les observe comme décrit ci-dessus à propos des bandes de papier. On effectue pour ces déterminations des essais témoins appro- priés sur des bandes et feuilles Le résultat de 18 essais spécifiques est résumé,au titre des exemples 2 à 19, sur le tableau I. il TABLEAU I Stérilisation par du bioxyde de chlore Exemple Bioxyde de chlore Résultats* (mg/1) Bandes Coupelles de feuille métallique 2 il 0/6 0/6 3 12 0/6 0/6 4 25 0/6 0/6 31 1/6 0/6 6 34 0/6 5/6 7 35 1/6 0/6 8 40 0/6 0/6 9 41 0/6 0/6 44 0/5 0/6 11 45 0/6 0/6 12 46 0/6 0/6 13 65 0/6 0/6 14 69 1/6 0/6 78 0/6 0/6 16 84 0/6 0/6 17 94 0/6 0/6 s 18 98 0/6 0/6 19 113 0/6 0/6 *Temps d'exposition: 1 heure Les résultats sont indiqués par mention du nombre de bandes ou de coupelles sur lesquel- les on observe une croissance/nombre de bandes ou coupelles traitées par exposition. Les résultats des exemples 2 à 19 montrent qu'une concentration de bioxyde de chlore d'au moins 40 mg/l peut efficacement stériliser des bandes de papier contaminées par des spores sèches de B Subtilis et ainsi, probablement, tuer tous autres microorganismes éventuellement présents. Les apparitions dispersées d'une croissance que l'on obser- ve dans les exemples 5, 7 et 14 peuvent être négligées dans une large mesure comme étant dues à une erreur expérimentale aléa Loirc On suppose qu'une ina Terise plus r ig Ulur Coust des modes opératoires de laboratoires et des normes biologjiques fera apparaitre une stérilisation efficace sur la gamme complète des concentrations de gaz que l'on utilise. On s'attend à ce que des concentrations semblables stérili- sent d'autres types de surfaces organiques poreuses, comme du caoutchouc, de la'matière plastique perméable au gaz, de l'éponge, de la matière végétale, du bois et des matières analogues, sans provoquer de décompositions appréciables ni de dépôts de résidus. Une concentration de bioxyde de chlore d'au moins mg/l est adéquate pour stériliser de la feuille ou du clinquant d'aluminium contaminé par des spores sèches La croissance observée sur une feuille dans l'exemple 6 est pro- bablement due à une erreur expérimentale aléatoire, puisqu'une gamme de plus faible concentration en gaz a toujours abouti à une stérilisation En se fondant sur ces résultats, on peut s'attendre à ce que d'autres surfaces non poreuses, normale- ment imperméables à des agents gazeux de stérilisation, soient facilement stérilisees dans des conditions semblables, comme- les surfaces d'instruments ou ustensiles médicaux ou dentai- res réalisés en des métaux comme de l'acier inoxydable, de l'acier plaqué, de l'aluminium et du nickel et/ou en de la ina- tière plastique non poreuse, de la porcelaine, de la cérami- que ou du verre. On utilise également avec succès le bioxyde de chlore gazeux pour stériliser des bandes comportant des spores, dis- ponibies dans le commerce, qui sont enfermées de manière étan- che dans des enveloppes de papier perméables à du gaz On décrit ci-après un mode opératoire pouvant servir pour la stérilisation de telles matières. Exemple 20 On expose à des atmosphères contenant par litre, mg et 100 mg de bioxyde de chlore gazeux,-comme décrit à l'exemple 1, six bandes de papier à spores "Spordi"() (Ame- * rican Sterilizer Corp,-Erie, Pennsylvanie, Etats-Unis d'Amérique) contenant chacune un mélange de spores de B. Subtilis et B Stearothermophilus (NCTC 10 003) et chacune enfermée dans une enveloppe stérile étanche de papier cristal- On retire de la chambre d'exposition les bandés de spores fermées, on ouvre dans des conditions stériles et fait incu ber comme décrit à l'exemple 1 On observe après 9 jours d'incubation des niveaux de croissance qui indiquent que les bandes sont effectivement stérilisées dans ces conditions. On s'attend donc à ce que le bioxyde de chlore stéri- lise efficacement des surfaces contaminées qui-sont enfermées de manière étanche dans des matériaux pour récipients per- méables à du gaz comme du papier revêtu ou couché ou non cou- ché, de la feuille de matière plastique, et des matières ana- logues, sans réaction importante avec les matériaux formant les récipients L'aptitude de concentrations efficaces dqu bioxyde de chlore à traverser facilement de telles enceintes va trouver une application dans - la stérilisation de produits médicaux qui sont de préférence stérilisés après emballage de manière à les maintenir à un état stérile pendant leur expédition et leur magasinage. Il a ainsi été montré que le bioxyde de chlore gazeug constitue un agent chimique efficace capable de stériliser diverses surfaces sèches dans des conditions de température) pression et humidité ambiantes Des surfaces enfermées dans des matières ou matériaux perméables au gaz sont également stérilisées de façon efficace dans ces conditions Les modes opératoires des exemples ci-dessus suggèrent des concentrations efficaces pour la stérilisationmais l'on s'attend à ce que de plus faibles concentrations puissent aussi efficacement servir à la stérilisation des matières en cause. Il va de soi que, sans sortir du cadre de l'invention, de nombreuses modifications peuvent être apportées au procédé et à la composition de stérilisation à l'aide de bioxyde de chlore gazeux, décrits ci-dessus. REV ENI) ICA Tl ONS 1 Procédé de stérilisation de surfaces présen Lani de la contamination microbiologique, caractérisé en ce qu'on met de telles surfaces, dont la contamination est due à des spores de bactéries ou comporte de Lelles spores, cri cori Lac L avec une quantité efficace de bioxyde de chlore gazeux. 2 Procédé selon la revendication 1, caractérisé en ce que la contamination est due à des spores de B Subtilis var nicer ou comporte de telles spores. 3 Procédé pour stériliser aux températures et humi- dités ambiantes des surfaces présentant de la contamination microbiologique, caractérisé en ce qu'il comprend le sécha- ge des surfaces, l'enlèvement de la quasi-totalité de l'air hors du contact avec les surfaces, et la mise des surfaces en contact, pendant au moins une heure, avec une atmosphère consistant en une quantité stérilisante de bioxyde de chlore gazeux en mélange avec une quantité de gaz inerte suffisante pour ajuster à environ 1 bar la pression du mélange gazeux. 4 Procédé selon l'une des revendications 1 et 3, caractérisé en ce que les surfaces sont formées de matières' imperméables au bioxyde de chlore gazeux. Procédé selon la revendication 4, caractérisé en ce que les matières sont choisies dans l'ensemble formé par des métaux, des verres, des porcelaines, des céramiques ou. des matières plastiques. 6 Procédé selon la revendication 5, caractérisé en ce qu'on stérilise des instruments ou ustensiles à usage médical ou dentaire - 7 Procédé selon l'une quelconque des revendications 4 à 6 prises avec la revendication 1 ou la revendication 2, caractérisé en ce qu'on sèche les surfaces avant la stérili- sation. 8 Procédé selon l'une quelconque des revendications 1 à 6, caractérisé en ce que avant la stérilisation, on en- ferme les surfaces dans une matière perméable au gaz. 9 Procédé selon l'une quelconque des revendications 1 à 6, caractérise en ce qu'on me L les surfaces en coii Lac L avec une atmosphère contenant au moins environ 11 mg de bio- xyde de chlore par litre de cette atmosphère. Procédé selon la revendication 9, caractérisé en ce que l'atmosphère que l'on utilise contient au moins environ mg de bioxyde de chlore gazeux par litre de cette atmos- phère. 11 Procédé selon l'une quelconque des revendications 4 à 6, prise avec l'une des revendications 1 et 2, caractéri- sé en ce qu'on met le-bioxyde de chlore en contact avec les surfaces dans les conditons ambiantes de température, de pression et d'humidité. 12 Procédé selon l'une des revendications 9 et 10, prise avec l'une quelconque des revendications 4 à 6 et 1 ou 2, caractérisé en ce que l'atmosphère que l'on utilise comprend également un gaz inerte. 13 Procédé selon la revendication 12, caractérisé en ce que le gaz inerte est de l'azote. 14 Procédé selon la revendication 11, caractérisé en ce que le temps de contact dure au moins une heure environ. Composition caractérisée en ce qu'elle comprend une quantité, à effet stérilisant, de bioxyde de chlore gazeux en mélange avec un véhicule gazeux inerte. 16 Composition selon la revendication 15, caractérisée en ce que le gaz inerte est de l'azote. 17 Composition selon l'une des revendications 15 et 16, caractérisée en ce qu'elle comporte au moins 11 mg de bioxyde de chlore par litre. 18 Composition selon l'une des revendications 15 et 16, caractérisée en ce qu'elle comporte au moins 40 mg de bio- xyde de chlore par litre. 19 Appareil pour stériliser des instruments et usten- siles, caractérisé en ce qu'il comporte une chambre d'exposi- tion, un dispositif pour faire le vide dans cette chambre et un dispositif pour engendrer une quantité, à effet stérilî- sant, de bioxyde de chlore gazeux, ce dernier dispositif étant associé à un dispositif destiné à introduire dans la chambre le bioxyde de chlore gazeux on mélange avec un véhiculo ga- zeux inerte. Appareil selon la revendication 19, caractérisé en ce que les instruments sont ou comprennent des instruments à rôle médical o-u dentaire présentant des surfaces impermé- ables au gaz. 21 Appareil'selon l'une de revendications 19 et 20, caractérisé en ce que le véhicule gazeux inerte est de l'azote. 22 Appareil selon l'une des revendications 19 et 20, caractérisé en ce qu'il comporte un dispositif destiné, après réalisation de la stérilisation, à détruire le bioxyde de chlore gazeux en le mettant en contact avec un agent ré- ducteur.