Brevet FR2543550A1 — publié le 19841005

- La présente invention concerne de nouvelles hydroxy-3 flavones diversement substituées sur l'oxygène en position 3, leur méthode de préparation et leur application thérapeutique. Les nouveaux produits faisant l'objet de la présente invention ont pour formule générale OH OH O O OH (I) R 1 O dans laquelle R 1 = H ou OH et R 2 = alcoxy inférieur de C 2 à C 6, cyclo- alcoxy de C 5 à C 8, méthanesulfonyloxy ou paratoluànesulfonyloxy sous réserve que R 1 soit différent de OH si R 2 = alcoxy inférieur de C 2 à C 4. Les produits tels que R 1 = OH sont dérivés de la quercétine et les produits tels que R 1 = H sont dérivés de la fisétine. On connaissait déjà quelques éthers méthyliques, et en particulier Ométhyl-3, de flavonols Un certain nombre sont des dérivés naturels La Société Biosedra avait breveté le 21 Mai 1970 sous le N 70 18458 la pentabenzylquercétine utilisée en thérapeutique dans les indications classiques des flavonoldes (inhibition de l'hyperperméabilité et réduction de la fragilité capillaire). La Société Hoffman-la-Roche a déposé le 9 4 1980 sous priorité anglaise du 10 4 1979 un brevet européen n 19081 décrivant des alcoxy-3 dihydroxy5,7 flavones à activité antivirale et en particulier des produits répondant à la formule générale I avec R 1 = OH et R 2 = alcoxy inférieur de C 1 à C 4 et de préférence égal à méthoxy ou éthoxy Ces produits bien que compris dans la formule générale telle qu'elle est présentée dans ce brevet européen ne sont toutefois pas décrits dans les exemples illustrant l'invention. Nous avons maintenant découvert que les flavones de formule I avec R 1 = H ou OH et R 2 = alcoxy inférieur de C 2 à C 6 cycloalcoxy de C 5 à C 8, méthanesulfonyloxy ou paratoluànesulfonyloxy sous réserve que R 1 soit différent de OH si R 2 = alcoxy inférieur de C 2 à C 4, présentent des propriétés inhibitrices de l'aldose réductase permettant leur emploi dans la prévention des complications, oculaires et nerveuses en particulier, du diabète Ces nouveaux produits sont également utiles en tant qu'hypoglycé- miants et hypolipidémiants. Les produits faisant l'objet de la présente invention sont préparés de la façon suivante: -2 2543550 Les produits de formule I tels que R 2 = méthanesulfonyloxy ou paratoluènesulfonyloxy sont préparés à partir des glycosides de flavones tels que R 1 = H ou OH et R 2 = O-glycosyl Les groupements phénoliques libres du glycoside sont bloqués par exemple sous forme d'esters benzolques; l'aglycone est obtenue par action d'acide chlorhydrique concentré Le groupement OH-3 du flavonol est ensuite estérifié par le chlorure de mésityle ou le chlorure de l'acide paratoluènesulfonique Les groupements benzoates sont éliminés par traitement à la soude. Les produits de formule I tels que R 1 = H ou OH et R 2 = alcoxy inférieur de C 2 à C 6 ou cycloalcoxy de C 5 à C 8, sous réserve que R 1 soit différent de OH si R 2 = alcoxy inférieur de C 2 à C 4, sont préparés par action d'un dérivé de formule HO OH R 2 CH 2 CN et de R 1 en présence d'acide chlorhydrique conduisant à HO OH C-CH R 2 R O Ce dérivé réagit avec l'anhydride de l'acide dibenzyloxy-3,4 benzotque pour conduire à un produit de formule HO HO' O-CH 24 R 2 R 1 O Cet éther est transformé en produit de formule I par hydrogénolyse en présence par exemple de palladium/Ba 504. La présente invention va être illustrée par les exemples suivants. -3 - - 2543550 Exemple 1 Synthèse de la cyclohexyloxy-3 tétrahydroxy-5,7,3 ',4 ' flavone; produit de formule I avec R 1 = OH, R 2 o; nom de code COR 1983. Synthèse du cyclohexyloxyacétonitrile Dans un réacteur de Grignard de 500 cm 3 on introduit 10 Og de cyclohexanol, 40 g de trioxane, 200 cm de toluène Ce mélange est porté à 0 C sous agitation ' On fait barboter de l'acide chlorhydrique gazeux pendant quatre heures L'eau formée est décantée. Le chlorométhoxycyclohexane est séch 6 puis distillé Eb = 75 C sous 27 millibars Un mélange composé de 62 g de ce dérivé et 56 g de cyanure cuivreux est chauffé au reflux à 120 C pendant 4 heures Le cyclohexylo- xyac 6 tonitrile est distillé Eb 60-700 C sous 0,014 millibars Rendement 75 %. Synthèse du cyclohexylglycoloyl-2 phloroglucinol On dissout dans 500 cm 3 d'éther anhydre 20 g de cyclohexyloxyacé- tonitrile et 18 g de phloroglucinol anhydre On fait barboter de l'acide chlorhydrique gazeux pendant 4 heures à O OC et on maintient sous agitation une nuit à O C On filtre Le chlorhydrate de cétimine est repris dans 250 cm 3 d'éthanol bouillant et 250 cm 3 d'eau chaude sont ajoutés Le mélange est chauffé au reflux pendant trois heures La réaction est suivie en chromatographie sur couches minces Après refroidissement le cyclohexyl- glycoloyl-2 phloroglucinol se sépare sous forme d'huile puis cristallise Il est recristallisg dans un mélange alcool/eau, repris dans du chloroforme puis précipité dans de l'éther de pétrole Rendement 60 %. Synthèse de l'anhydride de l'acide dibenzyloxy-3,4 benzolque Dans un réacteur de Grignard de 2 litres on introduit 138 g de dihydroxy-3,4 benzald 6 hyde, 138 g de carbonate de potassium et un litre de diméthylformamide (DMF) Le mélange est porté au reflux sous agitation 253 g de chlorom 6thylbenzène sont ajoutas goutte à goutte Le mélange est maintenu sous agitation au reflux pendant 6 heures Après refroidissement, le sel ayant précipité est filtré et lavé avec un peu de DMF Le milieu ractionnel est versé par petites quantités dans 15 litres d'eau glacée sous bonne agitation. Le dibenzyloxy-3,4 benzaldéhyde précipite sous forme pâteuse puis cristallise. Le solide est filtré puis repris dans du méthanol bouillant Après une filtration à chaud, on refroidit la solution méthanolique sous agitation et le précipité formé est filtré, lavé avec du méthanol glacé, de l'éther éthylique, puis séché Rendement 77 %. 4 2543550 Dans un ballon de 4 litres le mélange composé de 1,5 litre d'eau, 700 cm 3 de pyridine, 245 g de dibenzyloxy-3,4 benzaldéhyde est chauffé au reflux 162 g de permanganate de potassium sont ajoutés peu à peu Le mélange est chauffé au reflux pendant une heure puis filtré à chaud et lavé avec un litre d'eau bouillante Le premier filtrat est concentré pour éliminer la pyridine Après acidification par R 2504 au 1/2 de l'ensemble des filtrats, le précipité est filtré puis lavé avec de l'eau et séché Rendement 85 %. Le mélange constitué de un litre de benzène, 130 g d'acide dibenzyloxy-3, 4 benzolque et 45 cm de chlorure de thionyle est chauffé pendant deux heures au reflux et sous agitation Après évaporation et reprise à l'éther, le chlorure d'acide est filtré et lavé à l'éther froid Rendement 90 %. Dans un ballon muni d'un desséchant le mélange constitué par 1,5 1 d'éther anhydre, 290 cm 3 de pyridine, 100,2 g d'acide dibenzyloxy-3,4 benzotque et ,7 g du chlorure de l'acide dibenzyloxy-3,4 benzolque est agité pendant 24 heures à température ambiante Le mélange est ensuite versé dans 8 litres d'eau glacée Après 45 mn d'agitation le précipité est filtré, lavé avec un litre d'acide chlorhydrique 0,1 N glacé, un litre de Na 2 CO 30,1 N glacé puis 2 030 Ngaépi un litre d'eau glacée Le solide est solubilisé dans CHC 13; on décante, sache et évapore et l'anhydride est recristallisé dans l'acétate d'éthyle. Rendement 88 %. Synthèse de la dibenzyloxy-3 ',4 ' dihydroxy-5,7 cyclohexyloxy-3 flavone Dans un ballon de 2 litres on introduit 13,3 g de cyclohexylglycoloyl-2 phloroglucinol préparé selon lb, 130 g d'anhydride préparé selon lc et 28 cm 3 de triéthylamine Le mélange réactionnel est plongé dans un bain à C Il est chauffé 3 heures sous agitation puis refroidi à 100 C Apres addition de 1 litre de méthanol puis 60 cm 3 de potasse à 60 % il est chauffé mn au reflux Après refroidissement à 30 C on ajoute 1,5 litre d'eau froide Le précipité formé est filtré La phase aqueuse est extraite 3 fois à l'éther La solution est amenée à p H 10 avec un courant de C 02, extraite trois fois à l'acétate d'éthyle La phase organique est séchée, évaporée Le résidu est repris dans l'éther Rendement 64 %. Synthèse de la cyclohexyloxy-3 tétahydroxy-5,7,3 ',4 ' flavone On introduit dans un ballon de deux litres 27 g de dibenzyloxy-3 ',4 ' dihydroxy-5,7 cyclohexyloxy-3 flavone, 500 cm 3 d'acétone, 500 cm 3 de méthanol, 8 spatules de palladium sur Ba SO 4 à 5 % Le mélange est agité sous atmosphère d'hydrogène pendant 3 heures La réaction est suivie en chromatographie sur couches minces Après filtration sur-millipores on évapore la solution Rendement 98 %. -25 3 O Spectre de RMN dans le DMSOD 6: 0,8-2,3 ppm, 10 protons, massif complexe, CH 2; 4,0-4,6 ppm, i proton, massif complexe, H-C-O; 6,2 ppm, i proton, doublet, H-6; 6,4 ppm, i proton, doublet, H-8; 6,9 ppm, i proton, doublet, H-5 '; 7,3-7,8 ppm, 2 protons, massif complexe, H-2 ' + H-6 '; 9,9 ppm, 3 protons, dôme, OH-7 + OH-3 ' + OH-4 ', échangeables avec D 20; 12,8 ppm, l proton, singulet, OH-5 échangeable avec D 20. PF = 260-270 C (banc Kofler). Microanalyse élémentaire: calculé C 65,62 %; H 5,24 %; O 29,13 % Trouvé C 65,63 %; H 5,30 %; O 29,40 %. On prépare de Ia même façon l'éthoxy-3 trihydroxy-7,3 ',4 ' flavone, produit de la formule I avec R 1 = H et R 2 = OC 2 H 5; nom de code COR 1987 Spectre de RMN dans le DMSOD 6: 1,3 ppm, 3 protons, triplet, CH 3; 4, 1 ppm, 2 protons, quadruplet, CH 2; 6,7-8,1 ppm, 6 protons, massif complexe, protons aromatiques; 9,9 ppm, 3 protons, pic large, OH, échangeable avec D 20. PF = 254 C (appareil Mettler). Exemple 2 Synthése de la méthanesulfonyloxy-3 tétrahydroxy-3 ',4 ',5,7 flavone; produit de formule I avec R 1 OH, R 2 = GH 3-502-0; nom de code COR 1988. Synthèse de tétrabenzoyloxy-3 ',4 ',5,7 flavone 800 g de carbonate de potassium sont dissous dans 7 litres d'eau 100 g de rutine sont ajoutés sous agitation Quand le mélange est devenu limpide, on ajoute 400 cm 3 de chlorure de benzoyle en deux fois Le mélange est maintenu sous agitation vigoureuse pendant deux heures Le solide est filtré et lavé à neutralité Il est séché sous vide sur P 205, puis mis en suspension dans 3 à 4 litres d'éther éthylique; le mélange est agité vigoureusement Le solide est filtré et cette manipulation est renouvelée une seconde fois 205 g de tétrabenzoate de rutine brut ainsi obtenus sont dissous dans 1,3 litre d'éthanol bouillant 400 cm 3 d'acide chlorhydrique concentré sont ajoutés en une fois Le mélange est agité en maintenant au reflux de l'éthanol pendant une heure La phase alcoolique est séparee du solide qui a précipité en masse visqueuse Le solide est broyé dans un mortier et lavé à l'eau puis dissous dans du chloroforme Après lavage à l'eau, séchage et évaporation, le résidu est repris dans 700 cm d'acétone Le mélange est porté au reflux sous agitation, filtré à chaud Le solide est lavé avec un peu d'acétone Rendement 28,2 % (par rapport à la rutine). 6 - Synthèse de la méthanesulfonyloxy-3 tétrahydroxy-3 ',4 ',5,7 flavone 49 g de tétrabenzoate de quercétine sont dissous dans 180 cm 3 de pyridine 10 cm de chlorure de mésityle sont ajoutés Le mélange est maintenu sous agitation pendant une heure à température ambiante Une nouvelle quantité de 10 cm de chlorure de mésityle est rajoutée et l'agitation est maintenue à température ambiante pendant trois heures Le mélange est versé dans l'eau glacée sous agitation Après filtration le solide est lavé à l'eau, dissous dans du chloroforme La phase chloroformique est séchée et évaporée. 600 cm 3 d'acétone sont rajoutés au résidu d'évaporation Le mélange est porté au reflux sous agitation puis filtré à chaud Rendement 54,3 %. 8 g de tetrabenzoate de méthanesulfonyloxy-3 flavone sont dissous dans un mélange de 1,5 litres d'acétone et de méthanol bouillant et sous argon 2 g de soude dissous dans du méthanol sont ajoutés au mélange réactionnel Après avoir vérifié par chromatographie en couches minces que la réaction est totale, le mélange est refroidi et le p H est amené vers 9 à l'aide d'un courant de CO 2 Les solvants sont évaporés De l'acétate d'éthyle est ajouté au résidu Le mélange est mis sous agitation, puis le solvant est décanté Le résidu est solubilisé dans l'eau La solution est neutralisée en utilisant du C 02 et le précipité est filtré Il est séché sous vide sur P 205. Rendement 38 %. Spectre de RMN dans DMSOD 6: 3,5 ppm, 3 protons, singulet, CH 3; 6,3 ppm, 1 proton, doublet, H-6; 6,5 ppm, 1 proton, 1 doublet, H-8; 7,0 ppm, 1 proton, 1 doublet, H-5 '; 7,3-7,7 ppm, 2 protons, massif complexe, H-2 ' + H-6 '; 10,0 ppm, 3 protons, dôme, OH-7 + O H-3 ' + O E-4 ', échangeables avec D 20; 12,1 ppm, 1 proton, dôme, OH-5, échangeable avec D 20. PF = 233 C (appareil Mettler) On prépare de la même façon la paratoluènesulfonyloxy-3 tétrahydroxy-5,7,3 ',4 ' flavone, produit de formule I avec R = OH et R 2 = paratoluènesulfonyloxy; nom de code COR 1990. Les propriétés pharmacologiques des produits faisant l'objet de la présente invention sont exposées ci-après. L'intéret des produit de la présente invention dans le traitement et la prophylaxie des complications du diabète a été mis en évidence in vitro par la détermination de l'activité inhibitrice de l'aldose réductase et in vivo dans le modèle de la neuropathie induite par la streptozotocine. Inhibition de l'aldose reductase in vitro L'enzyme est extraite de cristallins de boeufs par la méthode décrite par Hayman S et Kinoshita J H (J Biol Chem 1965, 240, 2, 877) Le pourcentage d'inhibition de la capacité de l'enzyme à réduire le glycéraldéhyde en glycérol sous l'effet du produit à tester est déterminé par dosage spectophotométrique de la quantité de NADPH réagissant suivant la méthode décrite par Hayman et Kinoshita Nous donnons ci-après entre parenthèses après chaque produit la valeur du log 1/CI 50 o CI 50 représente la concentration exprimée en mole/l entrainant 50 % d'inhibition de l'activité enzymatique: COR 1983 ( 5,8), COR 1987 ( 6,3), COR 1988 ( 6,8), COR 1990 ( 5,5) Ces valeurs sont à comparer à la valeur correspondante pour la quercétine ( 5,0); Neuropathie à la streptozotocine 4 lots de 10 rats pesant environ 200 g sont traités de J -2 à J + 3 par un julep gommeux du produit à tester A JO les animaux reçoivent une injection IP de 100 mg/kg de streptozotocine dissoute dans un tampon citrate La glycémie est déterminée 24 heures et 3 jours après l'injection de l'agent diabétogène. Les rats sont sacrifiés le 3 jour après l'injection de streptozotocine et les nerfs sciatiques sont prélevés pour déterminer les taux de sorbitol et d'inositol Testé dans ces conditions le COR 1988 entraine une diminution du taux de sorbitol qui passe de 0,819 + 0,215 mg/kg chez les témoins à 0,608 + 0,049 mg/kg chez les animaux traités par 50 mg/kg et à 0,482 + 0,091 mg/kg chez les animaux traités par 100 mg/kg De même le taux d'inositol passe de 2,174 + 0,481 mg/kg chez les témoins à 1,593 + 0, 109 mg/kg chez les animaux traités par 25 mg/kg, à 1,430 + 0,104 mg/kg chez les animaux traités par 50 mg/kg et à 1,402 + 0,130 mg/kg chez les animaux traités par 100 mg/kg Les taux de sorbitol et d'inositol après traitement sont comparés aux taux témoins par le test U de Mann et Whitney (Schwartz D Méthodes statistiques à l'usage des médecins et biologistes, Ed Flammarion, Paris 1963) Les résultats obtenus sont significatifs avec p mg/kg Ces abaissements de glycémie sont significatifs. La toxicité des produits de la présente invention est déterminée chez la souris. Le COR 1983 administré par voie orale en solution dans de l'eau en présence de gomme à 6 % ne détermine aucune mortalité à la dose de 1 g/kg. Administré par voie intrapéritonéale en solution dans le "Twee"' à 5 % il ne provoque aucune mortalité jusqu'à 100 mg/kg et entraine 10 % de mortalité à la dose de 200 mg/kg. Le COR 1988 administré par voie orale en solution dans l'eau en présence de gomme à 6 % ne provoque aucune mortalité jusqu'à la dose de 3 g/kg. Les produits faisant l'objet de la présente invention sont utiles en tant qu'hypolipidémiants Ainsi le COR 1983 administré 2 fois à la dose de 400 mg/kg par voie orale à 20 heures d'intervalle chez la souris hypercho- lestérolémique entraine 24 % de diminution de la cholestérolémie. Compte tenu de leurs propriétés jointes à une faible toxicité, les produits selon la présente invention sont utiles en thérapeutique humaine et vétérinaire, par exemple dans le traitement et la prévention des complications oculaires et nerveuses du diabète ou dans le traitement du diabète et des hyperlipidémies Les produits faisant l'objet de la présente invention peuvent Atre utilisés seuls ou associés à des antidiabétiques Ils seront administrés, associés aux véhicules et excipients appropriés, par voie orale sous forme de dragées, comprimés, sirop, ampoules buvables, par voie rectale sous forme de suppositoires, par voie parentérale en injections sous cutanées, intramus- culaires, intraveineuses, par voie topique sous forme de pommades ou gels Ils peuvent également entrer dans des compositions à usage ophtalmique sous forme de collyres ou de pommades Les doses administrées varieront selon l'indication et le sujet de 5 à 500 mg/j en 2 à 6 prises pour la voie orale, de 5 à 500 mg/j en une ou deux prises pour la voie rectale, de 0,5 à 50 mg par injection pour les voies parentérales. 9 -2543550 R E V E N D I C A T IONS 1 Nouveaux produits de formule générale OH H O O O O O ' OH R 1 O R 2 avec R 1 = H ou OH et R 2 = alcoxy inférieur de C 2 à C 6, cycloalcoxy de C 5 à C 8, méthanesulfonyloxy ou paratoluènesulfonyloxy sous réserve que R 1 soit différent de OH si R = alcoxy inférieur de C 2 à C 4. 2 Procédé de préparation des produits selon la revendication 1 et tels que R 2 = méthanesulfonyloxy ou paratoluènesulfonyloxy caractérisé en ce que l'on bloque les groupements phénoliques libres d'un glycoside de flavone de formule OH HO OH Q t -glycosyl R 1 O avec R = H ou OH, par exemple sous forme d'ester benzolque, en ce que le groupement OH-3 est libéré par action d'acide chlorhydrique concentre, puis estérifié par le chlorure de mésityle ou le chlorure de l'acide paratoluènesulfonique, et en ce que les groupements benzoates sont éliminés par traitement a la soude. 3 Procédé de préparation des produits selon la revendication I et tels que R 1 = H ou OH et R = alcoxy inférieur de C 2 à C 6 ou cycloalcoxy de C 5 à C 8 sous réserve que R 1 soit différent de OH si R = alcoxy inférieur de C 2 à C 4, caractérisé en ce que l'on fait réagir un dérivé de formule R 2 CH 2 CN avec HO OH en présence d'acide chlorhydrique, en ce que le dérivé ainsi obtenu réagit avec l'anhydride de l'acide dibenzyloxy-3,4 benzo Ique, et en ce que la flavone - ainsi préparée est débenzylée par hydrogénolyse en présence, palladium/Ba 504. par exemple, de 4 Nouveau médicament caractérisé en ce que le principe actif est constitué par au moins un produit selon la revendication 1. Nouveau médicament selon la revendication 4 utile en préventive et curative des complications du diabète. thérapeutique 6 Nouveau médicament selon la revendication 4 utile en tant qu'hypolipidémiant ou hypoglycémiant. 7 Composition pharmaceutique ou vétérinaire caractérisée en ce qu'elle contient à titre de principe actif au moins un produit selon la revendication 1 en association avec un véhicule pharmaceutique ou un excipient approprié.