Brevet FR2546168A1 — publié le 19841123

Dithiodiacétamides cycliques, procédé pour leur préparation et compositions pharmaceutiques en contenant. ____________________________________________________________ La présente invention a pour objet des dithiodiacétamides cycliques, un procédé pour leur préparation et des compositions pharmaceutiques pour l'inhibition de la malformation ou de la destruction des érythrocytes due à une modification génétique de l'hémoglobine ou à des parasites et donc utiles dans le traitement de la drépanocytose et du paludisme. Il est connu que la drépanocytose est une maladie génétique qui comporte une anomalie de la structure de l'hémoglobine, dont l'acide aminé Glu-6 de la chaîne b 9 ta est remplacé par l'acide aminé Val pour donner l'hémoglobine S qui polymérise. Ladite polymérisation, lors de la désoxygénation du globule rouge, entraine la falciformation de ce dernier qui devient rigide, circule mal et se bloque dans les petits vaisseaux Les individus porteurs de deux gènes dr 6 panocytaires sont ainsi sous la menace permanente d'une complication fatale. Certains disulfures ont été décrits dans la littérature comme inhibant la falciformation; notamment la cystamine a été indiquée comme particulièrement active ("Developments of Therapeutic Agents for Sikle Cell Disease", Inserm Symposium, 1979, North Holland: Amsterdam, Editeurs J Rosa, Y Beuzard, J Hercules; p 139-153). Il a été maintenant trouvé que les dithiodiacétamides cycliques de formule I X N-CO-CH 2-S-S-CH 2-CO-N X I dans laquelle X représente une liaison directe, un atome d'oxygène ou de soufre, un groupe méthylène, un groupe éthylène ou un groupe N-R, o R est un atome d'hydrogène ou un groupe alkyle inférieur, (hydroxy)alkyle inférieur ou alkanoyle inférieur, sont très actifs dans l'inhibition de la polymérisation de l'hémoglobine S et de la falciformation des globules rouges. Il a été également trouva d'une façon surprenante que les dithiodiacétamides cycliques de formule I ci-dessus sont actifs sur les parasites affectant les érythrocytes, tels que les Plasmodia et les Eabesiae Plus particulièrement, ils montrent une activité sohizonticide in vitro sur "Plasmodium falciparum" et in vivo sur "Plasmodium berghei". L'expression "inhibition de la malformation ou de la destruction des érythrocytes", telle qu'utilisée ici, définit une inhibition oui peut 8 tre soit directe sur l'hémoglobine soit indirecte par l'inhibition de la croissance des parasites dans le globule rouge. Ainsi, la présente invention a pour objet, selon un de ses aspects, les dithiodiacêtamides cycliques de formule T ci-dessus ainsi que leurs sels pharmaceutiquement acceptables. Le terme "alkyle inférieur", tel qu'utilisé ici, désigne les groupes méthyle, éthyle, propyle et isopropyle. Le terme "alkanoyle inférieur" désigne les groupes formyle, acétyle et propionyle. L présente invention a également pour objet, selon un autre de ses aspects, un procédé pour la préparation des dithiodiacétamides cycliques de formule I ci-dessus caractérisé en ce que l'on traite un dithiodiacétate ou un mercaptoacétate d'alkyle inférieur, de méthyle ou d'éthyle de pr Cférence, avec une amine secondaire cyclique de formule EN X II dans laquelle X est tel que défini ci-dessus, à une température de 15 à 60 C et, lorsqu'on utilise un mercaptoacétate d'alkyle inférieur comme produit de départ, on soumet le produit ainsi obtenu à une oxydation; et l'on transforme éventuellement le produit ainsi obtenu dans ses s 15 sels pnarmaceutiquement acceptables. L transamination avec l'amine II peut 9 tre effectuée en mélangeant les réactifs sans utiliser de solvants, ou bien dans un solvant, de préférence un alcool, plus particulièrement le même alcool estérifiant l'acide dithiodiac 6 tique dans le produit de départ. Apres une période de 6 à 24 heures, dépendant de la température, le produit final est 'isolé selon les techniques habituelles, par exemple par évaporation et purification. Lorsque comme produit de départ on utilise un mercaptoacétate d'alkyle inférieur, le produit ainsi obtenu de formule HS-CH 2-CO-N X III, \ / dans laquelle X est tel que défini ci-dessus, est soumis a une oxydation en le laissant s'oxyder à l'air, éventuellement enrichie d'oxygène, dans une solution aqueuse ou en absence de solvants, ou bien en utilisant un agent oxydant tel que le brome, le iode ou l'eau oxygénée. Selon un mode opérationnel préférentiel, on utilise une solution & 15 % d'eau oxygénée à la température de 10-30 C. La dithiodiacótamide cyclique qui se forme prépicipite et est isolée par simple filtration ou bien elle est isolée par évaporation, a pression réduite de preference, de l'eau. Les dithiodiacétamides cycliques de la présente invention possèdent une activitl biologique remarquable car ils empachent la malformation ou la destruction des érythrocytes due à la drgpanocytose ou à des parasites tels que les Plasmodia et les Babesiae Plus particulièrement, les dithiodiac 6 tamides cycliques de formule I ci-dessus inhibent la falciformation des 6 rythrocytes des drépanocytaires. L'inhibition de la falciformation des érythrocytes humains a Etg évaluée selon la méthode consistant à laver et incuber, dans un tampon salin (p H 7,40 0,15 le), les globules rouges des drépanocytaires pendant une heure à 370 C dans un bain marie sous agitation circulaire en présence du produit ci-dessus à différentes concentrations Dans cette opération le rapport molaire produit/hémoglobine est testé initialement dans l'intervalle allant de 0, 5 à 20 En fonction des résultats obtenus, ce rapport est modifié A la fin de l'incubation l'excès de produit est enlevé par 2 5 4 6 1 6 8 lavage La suspension cellulaire ajustée à un hématocrite de % est tranferrée dans un Erlenmeyer et incubée à 370 C sous un courant d'un mélange humidifié d'azote et d'oxygène La concentration d'oxygène est réglée par une pompe -à mélange gazeux Le gaz effluent est transferr 6 dans un autre tube contenant du formaldehyde A la fin de l'incubation la suspension cellulaire est transferrée dans le formaldéhyde par simple retournement de la fiole. La proportion des cellules déformées et celles ayant les caractéristiques de drêpanocytes (ayant deux prolongements filiformes) est évaluée à l'aide d'un microscope ayant une optique interférentielle de NOMARSKY L'inhibition de la falciformation a été calculée selon la formule suivante: % cellules falciformées - % cellules falciformées en témoins présence de la drogue % cellules falciformées du témoin Dans ce test, un composé représentatif de la présente invention, la 4,4 'dithiodiacétyldimorpholine (formule I, X = 0), a montré une inhibition de 75 % de la falciformation. Dans les mêmes conditions, la cystamine donne une inhibition de 33 %. Les composés de la présente invention sont peu toxiaus et peuvent être utilisés comme médicaments. Ainsi, selon un autre de ses aspects, la présente invention se réfère à des compositions pharmaceutiques pour l'inhibition de la malformation ou de la destruction des érythrocytes due à une modification génétique de l'hémoglobine ou à des parasites renfermant, en tant qu'ingrédients actifs, des dithiodiacétamides cycliques de formule I ci-dessus, ainsi cue leurs sels d'addition éventuels pharmaceutiquement acceptables. Dans les compositions pharmaceutiques de la présente invention pour l'administration orale, sublinguale, sous- cutanée, intramusculaire, intraveineuse, transdermirue ou rectale, les ingrédients actifs de formule I ci-dessus peuvent être administres sous formes unitaires d'administration, en mélange avec des supports pharmaceutiques classiques, aux animaux et aux êtres humains pour le traitement de la dr 6 panocytose, du paludisme ou de la babgbiose Parmi les formes unitaires d'administration appropriées, il y a les formes par voie orale telles que les comprimes, les gélules, les poudres, les granules et les solutions ou suspensions orales et les formes d'administration sublinguale et buccale, de même que les formes d'administration sous-cutanée, intramusculaire ou intraveineuse, éventuellement par perfusion, et rectale. Afin d'obtenir l'effet désire, la dose de principe actif peut varier entre 0,1 et 100 mg par kg de poids du corps et par jour. Chaaue dose unitaire peut contenir de 10 à 1000 mg d'ingrédient actif en combinaison avec un support pharmaceutique Cette dose unitaire peut être administrée 1 à 4 fois par jour, éventuellement par perfusion, pour le traitement par exemple de la drépanocytose, du paludisme et de la babgbiose. On prépare simplement les poudres pour l'administration orale en broyant le composé actif à une finesse convenable et en mélangeant avec un diluant broyé similairement Le diluant peut être un matériau à base de glucide comestible tel que l'amidon Il est avantageux qu'un agent édulcorant ou un sucre, ainsi qu'une huile aromatisante, soient présents. On prépare les granulés destines à la reconstitution d'une préparation liquide orale en utilisant des diluants solubles dans l'eau; on mouille le composé actif et un diluant soluble dans l'eau tel que saccharose, glucose, etc, avec un liant tel que mucilage d'acacia, solution de gélatine, solution de méthylcellulose et on fait passer sur un tamis en forçant pour former des granules que l'on fait sécher Il est avantageux d'introduire dans la composition un agent de mise en suspension comme la gomme adragante. On fait les gélules en préparant un mélange pulvérulent comme il est décrit ci-dessus et en le mettant dans des gaines de gélatine mises en forme Comme adjuvant à l'opération de remplissage il est avantageux d'ajouter un lubrifiant tel que talc, stéarate de magnésium et stéarate de calcium au mélange pulvérulent avant l'opération de remplissage - On fait les comprimes en préparant un mélange pulvérulent, en granulant ou en tronçonnant, en ajoutant un lubrifiant et en comprimant pour former des comprimes On prépare le mélange pulvérulent en mélangeant le composé désire, convenablement broyé, avec un diluant ou une base telle qu'amidon, saccharose, kaolin, phosphate bicalcique, etc On peut granuler le mélange pulvérulent en mouillant avec le liant tel -que sirop, p 8 te d'amidon ou mucilage d'acacia et en forçant à travers un tamis Comme méthode autre que la granulation, on peut tronçonner le mélange pulvérulent, c'est-à-dire, le faire passer à travers la machine à comprimés et casser les comprimés résultant imparfaitement formes en fragments (tronçons) On peut lubrifier les tronçons pour les empocher de coller aux comprimés en formant des cubes, en ajoutant un sel stéarate, du talc ou une huile minérale On comprime ensuite le mélange lubrifiant pour constituer des comprimés. Les comprimés peuvent âtre avantageusement munis d'un revêtement protecteur constitué d'un enduit de scellement de gomme-laque, un revêtement de sucre et de méthylcellulose, et un enduit vernis de cire de earnauba, ou encore on peut le traiter d'une autre manière de telle sorte qu'ils aient une activité prolongée ou retardée et qu'ils libèrent continuellement une quantité prédéterminée de principe actif. On prépare les' fluides pour administration orale sous des formes posologiques unitaires tels que sirops o chaque cuillère à café de composition contient une quantité prédéterminée du composé actif 3 administrer. Une préparation sous forme de sirop ou d'élixir peut contenir l'ingrédient actif conjointement avec un édulcorant, du m 6thylparaben et du propylparaben comme antiseptiques, ainsi qu'un agent donnant du gout et un colorant approprié. Pour une application rectale, on recourt à des suppositoires qui sont préparés avec des liants fondant à la température rectale, par exemple du beurre de cacao ou des polyéthylèneglycols. Pour une application parentérale, on utilise des suspensions aqueuses, des solutions salines isotoniques ou des solutionz stériles et injectables qui contiennent des agents de dispersion et/ou mouillants pharmacologiquement compatibles, par exemple le propylèneglycol ou le butylèneglyco'. Le principe actif peut Etre formulé également sous forme de microcapsules, éventuellement avec un ou plusieurs supports ou additifs. Les exemples suivants illustrent l'invention sans toutefois la limiter. EXEMPLE 1. A On introduit 0,1 mol de thioglycolate de méthyle dans une fiole Erlenmeyer munie d'un agitateur magnétique, puis on ajoute 0,11 mol de pyrrolidine et on maintient l'agitation 6-:2 heures à la température ambiante A la fin de la réaction on élimine la pyrrolidine en excès et on soumet le produit obtenu à une distillation fractionnée sous pression réduite On obtient ainsi la 1-mercaptoacétyl- pyrrolidine avec un rendement de 86 % après distillation. En opérant comme décrit ci-dessus, mais en remplaçant la Fyrrolidine par 0,11 mol de 1-mgthylpipérazine et de morpholine, on obtient, respectivement: la 1-méthyl-4-mercaptoacêtylpipérazine et la 4-mercaptoacétylmorpholine. E On introduit 0,1 mol de l-mercaptoacêtylpyrrolidine dans une fiole Erlenmeyer munie d'un agitateur magnétigue On additionne 0,1 mol d'eau oxygénée (à 15 %) en maintenant la température du milieu entre 10 et 15 C et on agite ensuite le milieu pendant 2 heures à la température ambiante Par refroidissement dans un bain de glace, les cristaux de disulfure apparaissent Le produit est filtré, S 6 ché et éventuellement recristallisé dans l'eau ou dans un mélange eau/9thanol On obtient ainsi avec un rendement de 90 %, la 1,1 '-dithiodiacdtyldipyrrolidine (formule I, X = liaison directe); p f 79 C (Kofler). En opérant comme décrit ci-dessus, à partir de la 1- méthyl-4-mercaptoacétylpipgrazine et de la 4-mercaptoacétyl- morpholine, on obtient, respectivement, la 4,4 '-dithiodiacgtyldi-( 1-m 6thyl)pipérazine (formule I, X = N-CH 3); p f 110 C (Kofler); et la 4,4 '-dithiodiacétyldimorpholine (formule I, X = oxygène), sous forme de liquide visqueux. EXEMPLE 2. A une solution de 47,6 g de dithiodiacétate d'éthyle dans 150 ml d'éthanol on ajoute 34,8 g de morpholine On chauffe le mélange ainsi obtenu à 50 C pendant 24 heures, puis on évapore l'éthanol et la morpholine en excès sous pression réduite On obtient ainsi la 4,4- dithiodiac 6 tyldimorpholine sous forme de liquide visqueux. De la même façon, en traitant 0,2 mol de dithiodiac 6 tate d'Gthyle avec, respectivement, 0,4 mol de pyrrolidine et 0,4 mol de 1-méthylpipgrazine dans de l'éthanol, on obtient, respectivement: la l,l'dithiodiacétyldipyrrolidine; p f 79 C (Kofler) et la 4,4 'dithiodiacétyldi-( 1 l-mthyl)pipgrazine; p f 110 C (Kofler). EXEMPLE 3. On prépare une composition pour comprimés renfermant, en tant que principe actif, un des composés décrits dans les Exemples 1 et 2, ayant la formule suivante: principe actif 500 mg glycine 120 mg cellulose microgranulaire 70 mg silice précipitée 18 mg carboxyméthylamidon 30 mg stéarate de magnésium 11 mg talc 11 mg On mélange les quantités calculées des composants pendant 30 minutes, puis on granule a sec et on fait passer le mélange à travers un tamis à mailles de 1,6 mm On comprime ensuite en utilisant un poinçon ayant la forme d'un petit bâton On obtient ainsi des comprimés pésant chacun 760 mg et renfermant chacun 500 mg de principe actif. EXE Ml PLE 4. On prépare des comprimés selon l'Exemple 3 Les comprimés ainsi obtenus sont enrobés à l'aide d'une suspension de phtalate de dibutyle, de polyméthacrylate de butyle et diméthylaminoéthyle, de poly 6thylèneglycol 1500, de silice précipitée, de bioxyde de titane et de talc dans un mélange acétone:isopropanol i: 1 ayant une concentration en résidu sec de 10 % environ On obtient ainsi des comprimés enrobés pesant chacun 780 mg et renfermant chacun 500 mg de principe actif. EXEMPLE 5. On prépare un granulé destiné à la reconstitution d'une préparation liquide orale renfermant, en tant que principe actif, un des composés decrits dans les Exemples i et 2, ayant la composition suivante: principe actif 3,60 g saccharose 50,00 g carboxyméthylcellulose sodium 0,80 g acide citrique 0,10 g citrate trisodique 0,90 g benzoate de sodium 0,25 g saccharine sodique 0,15 g aromatisant 0,50 g Le volume du granulé ainsi obtenu est porté à 100 ml avec de l'eau pour sirops Une dose unitaire de 5 ml du sirop extemporané ainsi obtenu contient 180 mg de principe acif. Pour préparer le granulé, on pulverise les quantités calculées de tous les composants, sauf le saccharose, puis on mélange la poudre ainsi obtenue avec le saccharose jusqu'à obtenir un granulé homogène. EXEMPLE 6. On prépare selon l'exemple 5 un granulé destiné à la reconstitution d'une préparation liquide orale ayant la composition suivante: principe actif 7, 00 g saccharose 46,60 g carboxyméthylcellulose sodium 0,90 g acide citrique 0,10 g 2546 168 citrate trisodique 0,90 g benzoate de sodium 0,25 g saccharine sodique 0, 15 g aromatisant 0,50 g Une dose unitaire de 5 ml du sirop extemporané ainsi obtenu contient 350 mg de principe actif. EXEMPLE 7. On prépare selon l'exemple 5 un granulé destiné à la reconstitution d'une préparation liquide orale ayant la composition suivante: principe actif 8, 00 g saccharose 45,60 g carboxyméthylcellulose sodium 1,00 g acide citrique 0,10 g citrate trisodique 0,90 g benzoate de sodium 0,25 g saccharine sodique 0,15 g aromatisant 0,50 g Une dose unitaire de 5 ml du sirop extemporané ainsi obtenu contient 400 mg de principe actif. EXEMPLE 8. On prépare des comprimés à base d'un des composes décrits dans les Exemples 1 et 2, ayant la composition suivante: principe actif 350 mg cellulose microcristalline 100 mg lactose 125 mg stearate de magnésium 10 mg talc 15 mg On fait passer les poudres à travers un tamis de 0,3 mm, puis on mélange les ingrédients jusqu'à ce qu'on obtient un mélange homogène qui est comprime et granule Les granules ainsi obtenus sont utilisés pour former des comprimés par compression Poids d'un comprimé: 600 mg. EXEMPLE 9. Comprimés à base d'un des composés décrits dans les Exemples 1 et 2, ayant la composition suivante: principe actif 150 mg cellulose microcristalline 75 mg talc 15 mg polyvinylpyrrolidone 30 mg silice précipit Se 25 mg stearate de magnésium 5 mg On mélange intimement dans une mêlangeuse-pétrisseuse tous les ingrédients, sauf le lubrifiant, pendant 15 minutes, puis on pétrit par addition graduelle d'eau On fait passer la masse à travers un tamis de 1,25 mm On sèche le granulé dans une étuve à ventilation forcée jusqu'à ce qu'on obtienne une humidité résiduelle relativement réduite (environ 2 %) On uniformise le granule, on ajoute le lubrifiant et on forme des comprimes par compression Poids d'un comprimé: 300 mg. De la même façon on prépare des comprimés contenant 250 mg de principe actif. EXEMPLE 10. On prépare des comprimés enrobes à base d'un des composés décrits dans les Exemples 1 et 2, ayant la composition suivante: principe actif 150 mg carboxyméthylamidon 10 mg cellulose microcristalline 85 mg lactose 135 mg huile de ricin hydrogénée 10 mg stearate de magnesium 5 mg en opérant comme décrit à l'exemple 9 On recouvre les comprimes ainsi obtenus par un revetement ayant la composition suivante: phtalate de butyle 0,300 mg polymétacrylate de butyle et diméthylaminoêthyle 1,850 mg polyéthylèneglycol 1500 0,080 mg silice précipitée 0,020 mg talc 0,900 mg bioxyde de titane 1,850 mg dissous dans un solvant qui est élimine par évaporation dans une étuve à ventilation forcée Poids d'un comprimé: 400 mg. EXEMPLE 11. Suppositoires a base d'un des composés décrits dans les Exemples 1 et 2, ayant la composition suivante: principe actif 300 mg masse pour suppositoires 1 450 mg On met en suspension la substance active finement pulvérisée o, dans la masse pour suppositoires à 370 C et on verse le mélange dans des moules légèrement refroidis au préalable. Poids d'un suppositoire: 1 750 mg. REVENDICATIONS ______________ 1 Une dithiodiac 6 tamide cyclique de formule X N-CO-CH 2-S-S-CH 2 -CO-N X dans laquelle X représente une liaison directe, un atome d'oxygène ou de soufre, un groupe méthylène, un groupe éthylène ou un groupe N-R, o R est un atome d'hydrogène ou un groupe alkyle inférieur, (hydroxy)alkyle inférieur ou alkanoyle inférieur; ou un de ses sels éventuels pharmaceutiquement acceptables. 2 4,4 '-dithiodiacétyldimorpholine. 3 1,1 '-dithiodiacgtyldipyrrolidine - 4 4,4 '-dithiodiacdtyldi-( 1-mgthyl)pipêrazine. Procédé pour la préparation d'un composé selon la revendication 1, caractérisé en ce que l'on traite un dithiodiacétate ou un mercaptoac 6 tate d'alkyle inférieur avec une amine de formule X NE / 1 dans laquelle X est tel que défini dans la revendication 1, à une température de 15 À 60 C et, lorsqu'on utilise un mercaptoacétate d'alkyle inférieur comme produit de départ, on soumet le produit ainsi obtenu à une oxydation; et l'on transforme éventuellement le produit ainsi obtenu dans ses sels pharmaceutiquement acceptables t 6 Composition pharmaceutique pour l'inhibition de la malformation ou de la destruction des érythrocytes due à une modification génétique de l'hémoglobine ou a des parasites caractérisée en ce qu'elle contient,en tant que principe actif, un composé selon une des revendications 1 à 4. 7 Composition selon la revendication 6 caractérisée en ce qu'elle est sous forme d'unité de dosage. 8 Composition selon la revendication 7 caractérisée en ce que chaque unité de dosage contient de 10 à 1000 mg de principe actif.