Brevet FR2536414A1 — publié le 19840525

Anticorps monoclonaux neutralisants à l'égard des structures peptidiques du poliovirus responsables de l'induction d'une immunité antipoliomyélitique'; hybridomes sécréteurs de tels anticorps et procédé pour leur production. L'invention concerne des anticorps monoclonaux à l'égard de ceux des polypeptides structuraux du poliovirus, qui jouent un rôle dans la séroneutralisation virale, donc des structures du virus responsables de l'induction de l'im- munité antipoliomyélitique Elle concerne également les hy- bridomes capables de produire de tels anticorps et un procé- dé pour leur obtention. On sait qu'il existe trois types sérologiques de poliovirus (types 1, 2 et 3) qui ont les mêmes caractères biologiques et la même propriété de provoquer chez l'homme la poliomyélite paralytique Les trois types sont séparables les uns des autres en faisant agir les anticorps dans un test de reconnaissance sérologique En effet, l'anticorps neutralise spécifiquement la propriété du poliovirus de se répliquer dans la cellule animale. Quel que soit le type auquel il appartient, le virus infectieux porte une antigénicité caractéristique, dé- finie comme l'état antigénique "D" Lorsqu'il est soumis à certains traitements physiques ou chimiques (chauffage à 56 C, ultraviolets, p H élevé, traitement par le phénol), le viras perd son antigénicité "D" et acquiert une nouvelle antigénicité appelée "C" C'est l'antigénicité "D" qui iaraît responsable de la formation des anticorps neutra- lisants (BLONDEL B et CRAINIC R ( 1981), Relations entre la structure et les propriétés antigéniques des picornavirus. Bull Inst Pasteur, 79, 79-97). Il sera également fait référence dans ce qui suit à des particules "C" et "D" pour désigner les poliovi- rus présentant ces antigénicités "C" et "D" respectivement. En dépit de l'existence de vaccins antipolio- myélitiques efficaces (vaccins à virus tué, vaccins oraux à virus atténué) , la situation de la poliomyélite dans le monde reste très inquiétante Les statistiques de l'OMS ont enregistré en 1980 42 000 cas paralytiques dans 136 pays (OMS ( 1981) Relevé Epidémiol Hebd, 56, 329). Pour satisfaire les besoins en vaccins antipo- liomyélitiques pour le programme élargi de vaccinations de l'OMS, et pour combattre efficacement la poliomyélite, de grandes quantités de vaccins, à bon marché, seront nécessai- res Une solution de l'avenir devrait être trouvée dans des vaccins dans lesquels le virus entier inactivé ou atténué serait remplacé par une ou plusieurs "sous-unités" virales ou polypeptides purifiés ou obtenus par synthèse, notamment par la mise en oeuvre des techniques du génie génétique. Ces polypeptides de synthèse correspondraient à ceux des polypeptides structuraux qui jouent un rôle essentiel dans l'induction de l'immunité antipoliomyélitique De tels vac- cins sous-unités ne poseront aucun risque potentiel et le contrôle et la caractérisation seront effectués par des mé- thodes immunologiques et biochimiques in vitro. L'invention a pour but la production de moyens, plus particulièrement d'anticorps monoclonaux aisément ac- cessibles, qui permettent la reconnaissance sélective de celles des structures peptidiques qui seraient à leur tour capables d'induire in vivo des anticorps neutralisants à l'égard du virus infectieux, par conséquent de virus por- teurs de l'antigénicité "D". L'invention avait donc pour but la réalisation d'hybridomes capables de permettre la production de tels -anticorps monoclonaux, à partir d'un matériau immunologique ais 6 Ment accessible aux expérimentateurs. On rappellera au préalable que les anticorps monoclonaux actifs contre un antigène déterminé peuvent être produits par des cellules hybrides (hybridomes) obtenues par fusion de cellules spléniques d'un animal immunisé au préa- lable contre cet antigène et de cellules de tumeurs myélo- mateuses Une telle technique a été décrite pour la premiè- re fois par KOHLER G et MILSTEIN C ( 1975) (Continuous cultures of fused cells secreting antibody of pre-defined specificity Nature, 256, 495) De tels anticorps monoclonaux sont dirigés contre un seul déterminant antigé- nique, et constituent donc un matériel de choix pour l'étude de la variation antigénique. Les hybridomes selon 1 'invention sont caractérisés en ce qu'ils produisent des anticorps actifs contre à la fois les particules C et D originaires d'un même poliovirus. L'invention concerne plus particulièrement en- core parmi Ies hybridomes de ce type ceux qui produisent des anticorps monoclonaux sélectivement actifs à l'égard de VP 1, l'un des polypeptides de structure de la capside du poliovirus, ces anticorps monoclonaux étant par consé- quent inactifs à l'égard de VP 2 et VP 3, les deux autres polypeptides de structure de la capside du poliovirus. Cette sélectivité supplémentaire corrobore par conséquent les constatations qui ont été faites par BLONDEL et coll, qui, dans une note à l'Académie des Sciences de Paris (C R Acad Sc Paris, 294, 11 Janvier 1982 Série III 91-94), avaient en effet rapporté que l'induction d'anticorps neutralisants antipoliovirus type 1 (souche - Mahoney) pouvait être obtenue par l'immunisation du lapin avec l'un des polypeptides structuraux de la capside du poliovirus, à savoir VP 1, celui-ci ayant préalablement été isolé du virus et séparé par électrophorèse en gel de poly- acrylamide-dodécylsulfate de sodium et extraction à partir du gel par électroélution Par contre, des sérums anti-VP 2 et anti-VP 3, obtenus par immunisation du lapin avec les deux autres polypeptides structuraux VP 2 et VP 3 préparés au préalable par les mêmes techniques, n'avaient pas montré d'activité séroneutralisante significative. Le procédé de formation des hybridomes selon l'invention est caractérisé en ce que l'on réalise une fu- sion entre des cellules spléniques d'un animal,tel que la souris, préalablement immunisé par un virus ou virion, notam- ment de type 1, ayant acquis une antigénicité "C"' (et ayant par conséquent perdu son antigénicité "D"), et des cellules myélomateuses appropriées, en mettant en oeuvre une tech- nique qui en tant que telle est connue, que l'on cultive lesdites cellules et sélectionne ceux des clones cellulaires qui s'avèrent produire des anticorps monoclonaux actifs non seulement contre lesdits virions à antigénicité "C'i, mais encore aussi contre les virions homologues à antigénicité De préférence encore, on sélectionne parmi les hybridomes ainsi isolés ceux d'entre eux qui produisent des anticorps actifs contre VP 1. Conformément à une variante du procédé selon l'invention, on sélectionne dans la dernière étape du procé- dé ci-dessus ceux des anticorps actifs à la fois contre les virions à antigénicité "C" et contre l'un des peptides struc- turaux de capside VP 1, VP 2 ou VP 3. L'invention concerne évidemment encore les an- ticorps eux-mêmes, ceux-ci étant également définis par leur capacité à neutraliser les différents types d'antigènes susmentionnés. Le fait d'obtenir des anticorps sélectifs, à l'égard tant du virus infectieux que de V Pl, à partir de virions ayant une antigénicité "C", est d'autant plus remar- quable,qu'à l'inverse des expériences menées en parallèle, des hybridomes secréteurs d'anticorps monoclonaux actifs contre les virions à antigénicité "C" ou contre V Pl n'ont pu être obtenus par fusion de cellules spléniques d'un ani- mal préalablement immunisé par un virion à activité "D"', et des mêmes cellules myélomateuses. Ce résultat est encore à considérer à la lu- mière de la publication de J ICENOGLE et coll (Virology, ( 1981), 115, 211-215) Ces auteurs ont en effet indiqué qu'il ne leur avait pas été possible à partir d'hybridomes résultant de la fusion des cellules myélomateuses qu'ils avaient choisies et de cellules spléniques de souris préa- lablement immunisées avec un vaccin antipoliovirus purifié de la souche LSC 2 ab d'obtenir des anticorps monoclonaux actifs contre l'un quelconque des polypeptides VP 1, VP 2, VP 3 et VP 4 libéré par des virions chauffés pendant 5 minutes au sein d'une solution de dodécyl- sulfate de sodium à 1-%, guère davantage à 1 'égard de virus "D" chauffés au préalable et ayant acquis une antigénicité "C". L'invention fournit par conséquent à partir d'un matériau aisément accessible (les particules i'C") des anticorps monoclonaux capables de détecter un déterminant antigénique spécifique commun porté à la fois par les par- ticules "C" et "D" du poliovirus, et-par VP 1, et ce apparem- ment de façon indépendante de la conformation spatiale des régions peptidiques qui l'entourent Ce résultat est d'au- tant plus remarquable que, comme on l'a indiqué plus haut, de tels anticorps monoclonaux n'ont pas été accessibles dans des expérimentations semblables à partir de particules Ces anticorps monoclonaux constituent donc un réactif de choix pour la détection d'une immunogénicité spé- cifique, particulièrement utile dans la recherche des sous- unités peptidiques susceptibles d'induire des anticorps neu- tralisant l'immunogénicité du virus infectieux D'une façon générale, ces anticorps monoclonaux vont permettre: a) l'étude des relations générales entre la structure antigénique du poliovirus et ses propriétés anti- géniques, b) l'inventaire et la topographie des diffé- rents épitopes viraux et leur caractérisation chimique et immunologique, c) l'identification et la purification des po- lypeptides produits, par exemple par les moyens du génie génétique, pour la préparation d'un vaccin poliomyélitique synthétique. Les anticorps monoclonaux selon l'invention peuvent être, obtenus à partir de toutes particules virales ayant acquis une anticenicité "C", de préférence celles obtenues par un traitement thermique préalable, par exemple par chauffage pendant 1 heure à 56 C (particules "C:'). Les anticorps monoclonaux actifs à la fois con- tre les particules de poliovirus "C", et sélectivement con- tre soit VP 1, soit VP 2, soit VP 3, entrent également dans le champ de l'invention, en tant que réactifs biologiques per- mettant de reconnaître tout polypeptide ayant les spécifici- tés antigéniques de VP 1, VP 2 ou VP 3 Aucun des anticorps ac- tifs contre VP 2-et VP 3 ne s'est cependant révélé également actif contre le virus infectieux Entrent également dans le cadre de l'invention les hybridomes sécréteurs de ces anti- corps monoclonaux, également obtenus à partir de particules licol. "c. Des caractéristiques supplémentaires de l'in- vention apparaltront encore au cours de la description d'e- xemples de fabrication d'hybridomes s'créteurs d'anticorps monoclonaux répondant aux caractéristiques sus-définies. 1 PREPAEATION DES HYBRIDOMES. 1 1 Immunisation des souris. 1.1 1 Antigène L'antigène pour l'immunisation des animaux est constitué d'une suspension de poliovirus type 1 (Mahoney) dénaturé thermiquement (particules C). Les virus sont d'abord inoculés sur des cultures de cellules humaines On a -utilisé les cellules H Ep-2 (ATCC CCL 23) qui proviennent d'un cancer humain Lorsque les cellules sont complètement détruites par le virus, on récolte le liquide surnageant qui contient le virus Cette suspension virale est ensuite ultracentrifugée pendant 3 heures à 100 000 g pour concentrer le virus,et chauffée pendant 1 heure à 56 C. La suspension finale doit contenir une quantité de virus équivalente à environ 109 unités infectieuses par millilitre. 1 1 2 Schéma d'immunisation. Des groupes de 3 4 souris Balb/c reçoivent par voie intrapéritonéale une première injection de virus ( 0,2 ml) Après 4 semaines, une deuxième injection avec la même quantité de virus est effectuée, cette fois par voie intraveineuse Trois à quatre jours après la dernière injec- tion, les souris sont sacrifiées et la rate est prélevée et mise en culture. 1.2 Mise en culture, fusion et sélection (myélome + cellu- les de rate). Les cellules spléniques sont fusionnées avec les cellules HGPRT déficientes de la lignée myélomateuse P 3/x 63-Ag 8 (BUTTIN G ( 1978) Lymphocyte hybridomes Current Topics in Microbiology and Immunology 81, Ed Melchers F, Spring Verlag, Berlin, p 27) Les mélanges des cellules parentales sont incubés en présence de polyéthylène glycol (PEG) 100 à 30 % Après élimination du PEG, les cellules sont distribuées dans des plaques à cumules multiples. Après 48 -heures d'incubation, le milieu sélectif contenant de l'azaserine ( 10 PM) et de l'hypoxanthine ( 50 p M) est ajouté Ce milieu ne permet la croissance que des seules cellules hybrides, dont les colonies deviennent visibles vers le 8 ème jour A partir du 14 ème jour, les surnageants des cupules contenant les colonies hybrides suffisamment développées sont testés pour la présence des anticorps anti- polio (voir 2) Les hybridomes positifs sont sous-clonés par la technique des dilutions limites pour, d'une part, s'assurer du caractère monoclonal des anticorps sécrétés et, d'autre part, dans certains cas obtenir la stabilité de la sécrétion. 1.3 Sélection des hybridomes sécrétant des anticorps anti- polio. Tous les clones cellulaires obtenus après la fusion et la sélection ne secretent pas les anticorps sou- haités Il est donc nécessaire de sélectionner: a) les clones cellulaires fabriquant des anti- corps, et b) les clones sécrétant une certaine catégorie d'anticorps. Dans ce but, on a utilisé la réaction immuno- enzymatique appelée aussi ELISA (AVRAMEAS S et TERNYNCK T. ( 1971) Peroxidase labelled antibody and Fab conjugates with enhanced intracellular penetration Immunochem, 8, 1175. VOLLER A, BIDWELL D et BARTLETT A ( 1976) Microplate enzyme immunodiagnosis of virus infection in: Manual of clinical Immunology Ed Rose N R & Friedman H Amer Soc. Microbiol p 506). 2 DETECTION DES ANTICORPS MONOCLONAUX. Test immunoenzymatique. L'antigène de référence (le virus utilisé comme antigène immunisant) est fixé sur un support solide (ex: plaques à 96 cupules en polystyrène, membranes de nitrate de cellulose) Les surnageants des cultures d'hybridomes sont mis en contact avec les surfaces recouvertes d'antigène Si des anticorps monoclonaux (AM) homologues à l'antigène exis- tent, ils vont être retenus par l'antigène Leur présence peut être ensuite détectée avec des anticorps anti-souris marqués à la péroxydase La présence de la péroxydase déter- mine le changement de couleur d'un réactif qui contient le substrat spécifique de l'enzyme (H 202) Donc, tout change- 2 '536414 ment de couleur va indiquer la présence dans le surnageant respectif des AM reconnaissant l'antigène utilisé dans le test. 3 PREPARATION DES ANTICORPS MONOCLONAUX. 3 1 Surnageant de culture d'hvbridome. Les cellules d'hybridome sont mises à pousser en culture in vitro dans du milieu Eagle modifié par Dul- becco, additionné de 10 % de sérum foetal de veau Le li- quide surnageant contenant les anticorps monoclonaux secré-' tés par les hybridomes est récolté quand la densité cellu- laire dépasse 1 x 106 cellules par ml et débarrassé des cellules par centrifugation. 3.2 Liquide d'ascite de souris. Des souris B 9 lb/c sont inoculées par voie in- trapéritonéale avec 1 x 106 1 x 106 cellules d'hyvbridcme, après avoir été sensibilisées par la même voie avec du pristane 1 à 5 semaines avant Le liquide d'ascite contenant les an- ticorps monoclonaux est prélevé par ponction intrapéritonéa- le 10 14 jours après l'inoculation des cellules Il est ensuite clarifié par centrifugation. Le liquide d'ascite contient des anticorps mo- noclonaux à une concentration environ 100 fois plus élevée que le surnageant de c'ulture correspondant. 4 CARACTERISATION DES ANTICORPS MONOCLONAUX. 4 1 Immunopréci Ditation. La spécificité des anticorps monoclonaux dans le liquide d'ascite vis-àvis des polypeptides structuraux (VP 1, VP 2 et VP 3) du poliovirus homologue (le même que celui utilisé pour l'immunisation des souris) a été déterminée par le test d'immunoprécipitation (KESSLER S W ( 1975) Rapid isolation of antigens with a staphylococcal protein A anti- body absorbent J Immunol, 115, 1617-1624) Le même test a été utilisé pour la détection des motifs antigéniques re- connaissables par les anticorps monoclonaux sur les parti- cules C et D du poliovirus homologue. 4.1 1 Immunopr Ecipitation avec des polypeptides structuraux. Le poliovirus marqué à la méthionine 3 'S (CRAI- NIC R, HORODNICEANU F et BARME M ( 1980) Quantitation of cell DNA in the evaluation of heteroploid cell as substrate for the preparation of killed viral vaccine Intervirology, 14, 300-309) a été purifié par centrifugation isopycnique dans un gradient de Cs Cl (particules D) Les particules C ont été préparées par traitement thermique des particules D à la température de 560 C Les polypeptides structuraux ont été séparés par électrophorèse en gel de polyacrylamide ( 12,5 %) en présence de SDS (EGPA-SDS) (LAEMMLI U K ( 1970). Cleavage of structural proteins during the assembly of head bacteriophage T 4 Nature (London), 227, 680-685) Les bandes correspondant aux polypeptides structuraux VP 1, VP 2 et VP 3 ont été localisées en colorant un couloir de chaque côté du gel, puis découpées dans la partie du gel non colorée. Les polypeptides structuraux VPI, VP 2 et VP 3 ÀÀ ', 3 5 S marqués à la méthionine S ont ensuite été électroélués du gel dans du tampon 4 m M Tris-base, 2 m M Na acétate, 2 m M EDTA, p H 8,4, en utilisant un appareil ISCO Des prélève- ments ( 15 pl) de chaque préparation protéique contenant en- viron 8000 cpm ont été dilués dans 0,5 ml de tampon 150 m M Na Cl, 5 m M EDTA, 50 m M Tris, p H 7,4 et 0,02 % Na N 3 (tampon NET) contenant 0,05 % du détergent connu sous la désignation "Nonidet P-40 " (NP 40) et incubés pendant 2 heures à la tem- pérature de la pièce avec 25 p 1 d'ascite Les immunocomple- xes ont ensuite été précipités en utilisant des bactéries Staphylococcus aureus et analysés par EGPA-SDS. L'autoradiographie des gels a montré la spéci- ficité des anticorps monoclonaux contenus dans les ascites testées. i 1 4. 1 2 Immunoprécipitation des ascites avec les particules D et C. Les ascites ont également été testées vis-à-vis des particules D et C du poliovirus marquées à la méthionine 35 S Les particules C ont été obtenues en incubant les par- ticules D purifiées par centrifugation isopycnique en gra- dient de Cs Cl pendant 1 heure à 56 C. Des prélèvements de 15 pl de chaque préparation contenant 25 000 cpm ont été ajoutés respectivement à 0,5 ml de tampon NET contenant 0,05 % de NP 40 et incubés avec 25 pl d'ascite Les immunocomplexes ont été précipités comme dé- crit précédemment, puis la radioactivité précipitée a été mesurée. 4.2 Neutralisation virale. Le surnageant de culture d'hybridome, ou le liquide d'ascite à tester, est mis en contact 2 heures à 37 C avec 100 doses cytopathogènes 50 (DCP 50) de poliovirus homologue (le même que celui utilisé pour l'immunisation des souris) L'effet cytopathogène restant est déterminé sur une culture de cellules H Ep-2 La concentration des anticorps neutralisants est calculée comme l'inverse de la dilution limite qui inhibe l'effet cytopathogène d'une dose de virus ( 100 DCP 50). UTILISATION DES ANTICORPS MONOCLONAUX ANTI-VP. Exemple: Les liquides d'ascite contenant des anticorps monoclonaux antiVP, classifiés par rapport à leur spécificité de polypeptide,ont été testés pour leur capacité à reconnaltre des motifs antigéniques sur les particules C et D du poliovirus homologue (par immunoprécipitation, 4 1) , ainsi que pour leur pouvoir neutralisant sur la particule infectieuse (par neutralisation virale, 4 2). Le degré d'immunoprécipitation des particules C et D a été représenté dans le tableau 1 Les pourcentages ont été calculés d'après les valeurs de radioactivité pré- cipitée par chaque liquide d'ascite testé (valeurs corrigées pour le bruit de fond correspondant au liquide d'ascite "normal" ASN -) provenant d'une souris inoculée avec des cellules de myélome non productrices d'anticorps monoclonaux). La capacité neutralisante des anticorps monoclonaux est enre- gistrée dans la dernière colonne. TABLEAU 1 Liquide Spécificité % immunoprécipitation Titre d'ascite vis-à-vis des particules de neutralisant des protéines poliovirus O structurales C D AS 2 V Pl 87 84 256 AS 3 V Pl 89 78 362 A 54 V Pl 85 O 3 AS 16 V Pl 81 O 3 AS 18 VP 2 74 O NT AS 1 VP 3 91 O 3 AS 8 VP 3 94 O 3 AS 11 VP 3 63 O 3 AS 13 VP 3 88 O NT AS 14 VP 3 89 O 3 ASN O O 3 NT = non testé ASN = ascite provenant d'une souris inoculée avec des cellules de myélome non productrices d'anticorps monoclonaux. Tous les liquides d'ascite testés contiennent des anticorps monoclonaux qui réagissent avec des particules C du poliovirus Seuls deux des anticorps monoclonaux anti- V Pl (AS 2 et AS 3) reconnaissent un épitope sur la particule D (particule infectieuse), ce qui est en parfaite concordance avec leur pouvoir neutralisant. Les hybridomes sécréteurs des anticorps mono- clonaux mis en jeu dans la production de AS 2 et AS 3 ont été déposés à la Collection Nationale des Cultures de Micro- organismes de l'Institut Pasteur de Paris (C N C M) res- pectivement sous les NO I-208 et NO I-209. Comme il va de soi, et comme il résulte d'ail- leurs déjà de ce qui précède, l'invention ne se limite nul- lement à ceux de ses modes de réalisation et d'application qui ont été plus spécialement envisagés; elle en embrasse, au contraire, toutes les variantes A ce titre, elle con- cerne en particulier les anticorps monoclonaux sélectifs qui peuvent être obtenus en ayant recours à des procédures semblables à celles qui ont été décrites, à partir de par- ticules "C" de poliovirus de type 2 ou 3. Il est entendu que toute la littérature technique antérieure, plus particulièrement les publications citées dans le corps de la présente description peuvent être con- sidérées comme faisant partie de celle-ci, en ce qui con- cerne si besoin l'explicitation ou la définition des par- ties de l'état de la technique auxquelles il a été fait référence, mais qui ne font pas, en tant que telles, partie de l'invention. REVENDICATIONS 1 Hybridomes caractérisés en ce qu'ils produisent des anticorps monoclonaux actifs contre à la fois les par- ticules "C" et "D" originaires d'un même poliovirus. 2 Hybridomes selon la revendication 1, caracté- risés en ce que les anticorps monoclonaux qu'ils sont ca- pables de produire sont également actifs à l'égard du poly- peptide structural V Pi 1 de la capside du poliovirus corres- pondant. 3 Hybridomes selon la revendication 1 ou 2, carac- térisés en ce que le poliovirus ou les éléments de structure dérivée de celui-ci,et contre lesquels les susdits anticorps sont actifs, sont du type 1. 4 Procédé de préparation d'un hybridome conforme à l'une quelconque des revendications 1 à 3, caractérisé par la réalisation d'une fusion entre des cellules spléniques d'un animal préalablement immunisé par un virus ou virion présentant une antigénicité "C" et des cellules myélomateuses appropriées, en mettant en oeuvre une technique en soi con- nue, par la culture desdites cellules et par la sélection desdits clones cellulaires qui s'avèrent produire des anti- corps monoclonaux actifs non seulement contre les virions à antigénicité "C", mais également contre les virions homolo- gues à antigénicité "D". Procédé selon la revendication 4, caractérisé en ce que le virus ou virion, contre lequel le susdit animal est préalablement immunisé, est du type 1. 6 Procédé selon la revendication 4 ou 5, caracté- risé en ce que l'on sélectionne parmi les hybridomes sélec- tionnés ceux d'entre eux qui produisent des anticorps en outre actifs contre VP 1. 7 Procédé selon la revendication 6, caractérisé en ce que le poliovirus à antigénicité "C" mis en eouvre est un poliovirus du type 1 (Mahoney). 8 Procédé de formation d'hybridomes, caractéri- se en ce que l'on réalise une fusion entre des cellules spléniques d'un animal préalablement immunisé par un virus ou virion présentant une antigénicité "C" et des cellules myélomateuses appropriées en mettant en oeuvre une technique en soi connue, l'on cultive lesdites cellules et sélectionne lesdits clones cellulaires qui s'avèrent produire des anti- corps monoclonaux actifs non seulement contre les virions à antigénicité "C", mais également contre l'un des peptides structuraux de capside VP 1, VP 2 ou VP 3. 9 Anticorps monoclonaux actifs à la fois con- tre les particules à antigénicité "C" et à antigénicité "D" d'un même poliovirus. Les anticorps selon la revendication 9, caractérisés en ce qu'ils sont également actifs contre le peptide de structure de capside VP 1. 11 Anticorps monoclonaux actifs à la fois con- tre un poliovirus à antigénicité "C" et l'un quelconque des peptides structuraux de capside VP 1, VP 2 ou VP 3. 12 Anticorps selon l'une quelconque des reven- dications 8 à 11, caractérisés en ce qu'ils sont actifs con- tre des poliovirus ou peptides structuraux de poliovirus de type 1, notamment Mahoney. 13 Application des anticorps selon l'une quel- conque des revendications 9 à il à l'identification de sous- unités peptidiques porteurs d'un déterminant antigénique commun aux poliovirus à antigénicité "C" et "D" et aux pep- tides de structure de capside VP 1.