Brevet FR2541306A1 — publié le 19840824

La présente invention concerne un procédé d'inoculation de légumineuses, notamment de légumineuses à nodules caulinaires, par exemple des légumineuses du genre Sesbania. La présente invention sera décri te plus particulièrement en relation avec Sesbania rostrata bien qu'elle ne soit nullement limitée à l'inoculation de cette légumineuse. Sesbania rostrata est une légumineuse à nodulation caulinaire (c'est-à-dire sur la tige) ayant une capacité considérable de fixation de l'azote moléculaire (azote de l'air) pour le transformer en azote fixé assimilable par les plantes. Cette capacité dépasse 200 kg de N2 fixé par hectare en 52 jours. Une autre caractéristique intéressante de S. rostrata est-le fait que la nodulation et la fixation de N2 ne sont pas inhibées par un apport d'engrais azoté, même lorsque ces engrais sont apportés à des doses élevées (100-150 kg h2 1), Cette propriété mérite d'être soulignée puisque S. rostrata est actuellement le seul système fixateur qui ne soit cas inhibé par azote minéral du sol. On a maintenant pu démontrer que ces capacités exceptionnelles de fixation de azote moléculaire sont conférées à S. rostrata par les nodules caulinaires qui proviennent d'interactions complexes lors de la symbiose entre des bactéries du genre Rhizobium et la légumineuse. Bien que l'on ait étudié depuis longtemps la symbiose existant entre les Rhizobiums et le système racinaire des légumineuses qui est trds importante puisqu'aucune légumineuse ne peut fixer l'azote sans la présence de rhizobium (nodule racinaire), jusqu'à présent les nodules caulinaires avaient été ignorés et le rôle des rhizobiums au niveau de ces nodules n'avait pas été explicité. Les études conduites par les inventeurs ont permis de mettre en évidence qu'une inoculation artificielle de S. rostrata par une culture de Rhizobium conduisait à une augmentation de la nodulation caulinaire et augmentait la teneur en azote combiné de la plante améliorant parallèlement ses caractéristiques "d'engrais vert'.' Des expériences conduites en plein champ ont montré que S. rostrata peut doubler le rendement du riz sans aucun apport d'engrais azoté. - On - peut donc considérer que chaque plant de S. rostrata constjtue une usine miniaturisée d'engrais azotés à haut rendement. Bien que les légumineuses à nodulation çaulinaire, telles que S. rostrata, puissent noduler spontanément lorsqu'elles se trouvent placées dans des sols qui comportent les souches de Rhizobium qui lueur sont spécifiquos, on observe que cette nodulation est souvent insuffisante, irrégulière et localisée à la partie inférieure des tiges; pour obtenir une nodulation optimale nécessaire à l'expression du potentiel fixateur d'azote des légumineuses à nodules caulinaires il est indispensable d'effectuer une inoculation artificielle. Toutefois, l'un des problèmes essentiels -dans- le cas de l'inoculation artificielle est la disponibilité des souches de Rhizobium sur les lieux de traitement. Ce type de traitement doit pouvoir être mis en oeuvre loin des lieux de production des Rhizobiums, il est donc exclu d'utiliser le jus des fermenteurs. L'inoculation doit, en outre, pouvoir être mise en oeuvre dans des conditions parfois assez difficiles, il est donc exclu d'utiliser des appareillages dwinoculation ou de conservation très complexes. Enfin, s'il existe actuellement des compositions solides contenant des Rhizobiums et qui peuvent être utilisées pour l'inoculation des racines, ce type d'inoculum solide est tout à fait inadapté pour l'inoculation des tiges. D'ailleurs, il convient de remarquer que l'inoculum solide, même pour l'inoculation des racines, n'assure qu'un contact très aléatoire entre les Rhizobiums et les racines. Il fallait donc mettre au point un procédé permettant une inoculation simple et efficace à l'aide de Rhizobium, notamment l'inoculation de S. rostrata, ledit procédé permettant de conserver les souches un temps assez long dans des conditions non contrôlées. C'est l'objet de la présente invention qui concerne un procédé d'inoculation de plantes par des microorganismes phytoactifs, caractérisé en ce que - on prépare une solution aqueuse colloïdale contenant lesdits microorganismes phytoactifs, par dissolution dans une solution aqueuse d'une poudre constituée de bactéries incluses dans un gel polymère au moins partiellement soluble dans liteau; et - on pulvérise les sites d'inoculation des plantes avec la solution aqueuse colloïdale obtenue. Par "microorganismes phytoactifs1,, on entend désigner les microorganismes vivant en symbiose ou en association avec une plante et qui présentent une action favorable sur cette plante Pour la détermination de ces microorganismes, on pourra par exemple se reporter au brevet français n" 77 10254 qui mentionne les microorganismes telluriques à action rhizosphérique favorable. Dans ce qui va suivre, on s'intéressera plus particulièrement aux Rhizobiums de tige ou de racine. Des gels polymères comportant des bactéries incluses et notamment des bactéries du genre Rhizobium ont déjà été décrits, notamment dans le brevet francais nO 77 10254 et dans le brevet des Etats-Unis d'Amérique nO 4 155 737. Dans ces documents, on décrit des gels de polymères qui sont essentiellement constitués pàr un gel de polyacrylamide ou un gel de silice, ces produits synthétiques particuliers sont peu solubles dans l'eau mais, bien entendu, il est possible d'améliorer la solubilité des gels synthétiques-par des procédés connus. Des gels de polymères comportant des microorganismes inclus sont salement décrits dans la demande de brevet européen n 0 017 565 au nom de la société RHONE-POULENC qui suggère d'utiliser comme matrice un polymbre du groupe des polysaccharides, notamment un alginate, ainsi que dans le brevet français nO 79 28956. Dans le cadre de la présente invention, bien que l'on puisse utiliser un gel de polymère quelconque au moins partiellement soluble dans l'eau, on pré-fèrera utiliser un gel de polysaccharide, et de préférence un alginate., car il s'agit là de polymères souvent solubles dans l'eau et, en outre, qui sont biodégradables donc non polluants. Les différents documents précédents décrivent également les procédés permettant de préparer ces gels de polymères puis de les broyer afin d'obtenir une poudre. Dans le cas de S. rostrata ou autre légumineuse à nodule caulinaire, les souches de Rhizobium inoculées sont de préférence des Rhizobiums de tige et de préférence correspondent à la légumineuse que l'on va inoculer. Ainsi, pour l'inoculation de S. rostrata, on utilisera de préférence des Rhizobiums de tige de S. rostrata, par exemple la souche ORS 571 déposée à 1 ' INSTITUT PASTEUR. Ces souches peuvent être isolées à partir des nodules caulinaires en utilisant les techniques connues décrites pour les nodules racinaires. De façon surprenante, on a constaté que,lors de la mise en solution colloïdale de gels polymères contenant des Rhizobiums inclus dans une solution aqueuse, on obtenait un inoculum tout à fait satisfaisant, en particulier si l'on prenait la précaution d'utiliser une solution aqueuse saline contenant par exemple un tampon salin tel qu'un tampon phosphate, un pH compris entre 6,4 et 7,2 et à une concentration en phosphate comprise entre 0,02 M et 0,1 M, de préférence aux environs de 0,06 M. En outre, il a été démontré que l'époque à laquelle avait lieu la pulvérisation était déterminante -pour accroître la fixation d'azote et la production de la biomasse. On a d'ailleurs démontré, de même, qu'il était préférable de procéder à une inoculation unique entre 28 et 42 jours après le semis, de préférence lors de la cinquième semaine après le semis, plutôt que de procéder à des inoculations multiples. Bien entendu, il est possible d'ajouter à la solution colloldale d'autres adjuvants destinés à amélio- rer l'inoculation, en particulier des agents tensioactifs, mais il conviendra de contrôler dans chacun des cas que ces adjuvants ne nuisent pas à la viabilité des Rhizobiums inclus. On a ainsi pu mettre en évidence le fait que l'adjonction à la solution colloldale d'un pesticide, en particulier d'un pesticide de type organophosphoré, ne nuisait pas à la mise en oeuvre du procédé selon l'invention. Enfin, l'invention concerne une solution colloïdale obtenue par dissolution en solution aqueuse d'une poudre contenant des microorganismes phytoactifs, en particulier des Rhizobiums, ladite poudre étant constituée par des microorganismes inclus dans un gel polymères au moins partiellement soluble dans l'eau, ladite solution étant plus particulièrement destinée à la mise en oeuvre du procédé selon la présente invention. Les exemples ci-après sont destinés à mettre en évidence d'autres avantages et caractéristiques de la présente invention sans pour autant la limiter. Exemple 1 - Préparation d'une solution colloidale de de poudre de Rhizobiums inclus On inclut une souche de Rhizobium ORS 571,maintenue en collection au laboratoire de biologie des sols de l'ORSTOM à Dakar, dans un gel d'alginate selon le procédé décrit dans le brevet français nO 79 28956. La poudre obtenue après séchage est mise en solution colloïdale dans un tampon phosphate dont la concentration et le pH optimum sont déterminés comme indiqué précédemment. On estime l'efficacité de la mise en solution colloïdale de l'inoculum de la façon suivante. On agite 50 mg de poudre sèche de Rhizobium inclus avec 50 ml de différents tampons dans un Erlenmeyer de 100 ml. Après 20 minutes d'agitation (120 coups/minute), on transvase chaque solution colloïdale dans un tube à essai, 25 x 300 mm, et on laisse décanter 10 minutes. On prélève délicatement 5 ml du surnageant sur lequel on mesure la densité optique à 570 nm. On considère que la densité optique est fonction de la quantité de particules d'alginate et de bactéries mises en solution colloïdale après le traitement. On admet en conséquence que le traitement le plus favorable correspond à la densité optique maximale. a) Concentration optimale~du tampon~phosphate On prépare une solution mère de tampon phosphate 0,1 M à pH 7 en mélangeant 200 ml d'une solution de phosphate dipotassique 0,1 M et 120 ml d'une solution de phosphate monopotassique 0,1 M. A partir de cette solution mère, on prépare une gamme de concentration 0 ; 0,02 ; 0,04 ; 0,06 ; 0,08 ; 0,10 M. Les résultats observés sont rassemblés au-tableau 1. Ce tableau 1 montre que la mise en solution colloïdale est la meilleure dans le cas de la concentration 0,06 M. b) pH optimum du tampon phosphate On prépare une gamme de tampons 0,06 M correspondant aux pH suivants : 6,4 ; 6,6 ; 6,8 , 7,0 ; 7,2. Les résultats observés sont rassemblés au tableau 2. Ce tableau 2 montre que le pH optimum est 6,8. TABLEAU 1 INFLUENCE DE LA CONCENTRATION EN PHOSPHATE SCR LA MISE EN SOLUTION COLLOIDALE D'INOCULUM POUDRE (ALGINATE) CONCENTRATION PO4 3 0 0,02 M 0,04 M 0,06 M 0,08 M 0,10 M Dansité optique 0,18 0,35 0,48 0,95 0,83 0,54 TABLEAU 2 INFLUENCE DU pH (TAMPON PHOSPHATE 0,6 M) SUR LA MISE EN SOLUTION COLLOIDALE DE L'INOCULUM EN POUDRE (ALGINATE) 6,2 6,6 6,8 7,0 7,2 Densité optique 0,28 0,57 1,25 0,92 0,82 c) Contrôle de la survie des Rhizobiums ORS 571 dans la suspens~on de la poudre de Rhizobium inclus dans I lginate On part d'une culture de Rhizobium ORS 571 âgée de 48 heures renfermant 109 bactéries vivantes/ml (comptage effectué en boîte de Pétri sur milieu YL additionné de 100 ppm d'ampicilline et 200 ppm d'actidione). L'inclusion dans un gel d'alginate est ensuite effectuée conformément au procédé faisant l'objet du brevet français nO 79 28956. Ce gel. est séché sous courant d'air à 300C puis mis en poudre (poudre de Rhizobium inclus). Après 3 semaines de stockage dans un dessiccateur sur actigel on-met en solution colloldale la poudre dans le tampon au phosphate suivant le procédé décrit précédemment et on procède au comptage des bactéries vivantes par le test d'infection des plantules en tube à essai (Brockwell, 1963). Les plantules stériles sont des plantules de Sesbania rostrata âgées de 2 à 3 jours. Si l'on ramène le nombre de bactéries vivantes déterminé suivant la méthode Brockwell au volume de la culture initiale utilisé pourl'inclusion, on trouve 4 x 108 bactéries vivantes/ml (chiffre très voisin de 109 bactéries/ml renfermées dans la cultuxe initiale de Rhizobium). Ceci confirme la stabilité du produit utilisé. Exemple 2 Détermination des dates optimales d'inoculation de Sesbania rostrata Les plantes sont cultivées dans des cylindres, 30 x 60 cm, fermés à la partie inférieure, enfoncés dans le sol en place jusqu'S 10 cm du bord supérieur et remplis de sol soigneusement, homogénéisé. Ce dispositif simule de façon satisfaisante l'expérimentation au champ classique (Legg et Sloger, 1975). On sème 10 graines par cylindre. Pour obtenir une germination rapide et régulière des graines de Sesbania rostrata, celles-ci sont mises pendant 20 minutes dans un récipient où l'on verse de l'acide sulfurique concentré. Les graines sont ensuite rincées très rapidement et abondamment (pour éviter l'échauffement dû à la réaction de l'eau sur l'acide sulfurique) (Dreyfus et Dommergues, 1980). Lorsque les plantes atteignent 15-20 cm de hauteur, on procède à un démariage de façon à laisser un plant par cylindre. Après cette opération, on arrose plus abondamment de façon à maintenir une lame d'eau de 5 cm environ à la surface du sol dans chaque cylindre. La souche de Rhizobium spécifique et effective (fixatrice d'azote) utilisée est la souche ORS 571 (Dreyfus et Dommergues, 1981 b) maintenue en collection au laboratoire de biologie des sols de l'ORSTOM à Dakar. Cette souche qui est une souche à croissance rapide a été cultivée sur le milieu suivant Milieu YL pour culture de Rhizobium ORS 571 lactate de sodium 5,- g (NH4)2SO4 1,- g K2HPO4 1,67 g KH2P04 0,87 g NaCl 0-,05 g MgS04,7H20 0,10 g CaCl2 40 mg FeCl3 4 mg Extrait de levure 1 g Oligoéléments 1 eau distillée 1000 ml pH ajusté à 6,8 stérilisation à 1200C pendant 20 minutes. Pour déterminer la ou les dates optimales d'inoculation de S. rostrata, on a comparé la fixation d'azote et la production de biomasse de plants de S. rostrata soumis aux 5 traitements suivants - inoculation unique précoce (3ème semaine après le semis) - inoculation unique intermédiaire (5ème semaine après le semis) - inoculation unique tardive (7ème semaine après le semis) - inoculation répétée (3ème, 5ème et 7ème semaine après le semis) - pas d'inoculation. On a effectué 5 rdpétitions. La nodulation est mesurée par le nombre et le poids des nodules. La fixation d'azote est estimée par la méthode de réduction de l'acétylène (Hardy et al., 1981) et exprimée en micromoles de C2H4 produit par heure et par plante. L'accroissement de la fixation d'azote résultant de l'inoculation est, en outre, déterminé par la différence entre les teneurs en azote total des plantes inoculées et des plantes témoin. La production de biomasse est mesurée par le poids sec des plantes. Les résultats obtenus sont rassemblés dans le tableau 3. TABLEAU 3 INFLUENCE DE LA DATE D'INOCULATION DE SESBANIA ROSTRATA SUR LA NODULATION, LA FIXATION D'AZOTE ET LE POIDS DES TIGES ET FEUILLES DEES PLANTES AGEES DE 65 JOURS NODULES FIXATION (1) TIGES ET FEUILLES (par plante) D'AZOTE (ARA) (par piants) INOCULATION Norrbre Poids sec Poids sec Azote total (g) (g) (g) Unique à la 3ème semaine 305 # 69 1,35 # 0,27 67 # 9 42,1 # 4,8 0,86 # 0,09 Unique à la 5ème semaine 653 # 81 1,60 # 0,35 123 # 24 52,0 # 6,9 1,15 # 0,13 Unique à la 7ème semaine 604 # 93 0,94 # 0,24 77 # 18 36,3 # 6,8 0,77 # 0,11 Répétée (3ème, 5ème et 709 # 56 2,00 # 0,36 132 # 35 54,6 # 5,4 1,30 # 0,13 7ème semaine) Témoin (pas d'inoculation) 235 # 41 0,88 # 0,16 32 # 6 33,6 # 5,9 0,75 # 0,09 (1) Micromoles de C2H4 produit par heure et par plante # erreur standard L'examen des résultats figurant au tableau 3 amène aux conclusions suivantes Bien que le témoin soit spontanément nodulé et fixe une certaine quantité d'azote, l'inoculation apparaît indispensable pour accroîtreila fixation d'azote et la production de biomasse. Dans le cas de l'inoculation unique, la date optimale correspond à la 5ème semaine : l'accroissement de la fixation d'azote et de la production de biomasse est maximum pour ce traitement. Des inoculations répétées peuvent accroitre la fixation d'azote et la production de biomasse, mais cette augmentation n'est pas aussi importante qu'on aurait pu le supposer. C'est pourquoi une inoculation unique vers la ème semaine donne les meilleurs résultats. Exemple 3 - Comparaison de l'efficacité de l'inoculum constitué par la solution colloïdale de poudre de Rhizobium inclus et de l'inoculum constitué par la culture liquide de Rhizobium On inocule par pulvérisation les tiges de S. rostrata avec deux types d'inoculum 1) l'inoculum obtenu par mise en solution colloldale de la poudre de Rhizobium inclus (poudre conservée 3 mois), 2) l'inoculum constitué par la culture liquide de Rhizobium (utilisée dès obtention en fermenteur) qui est l'inoculum de référence. On effectue des dilutions de ces inoculums de façon à obtenir 107 et 106 bactéries vivantes par ml de liquide. La comparaison des résultats montre que pour une même dilution les deux types d'inoculum donnent des résultats comparables, aussi bien en ce qui concerne la nodulation (initiation de la symbiose) que la fixation d'azote (fonctionnement de la symbiose), bien que l'inoculum 1 ait été conservé 3 mois. Il apparaît, en outre, que les inoculums, même dilués (107 bactéries vivantes/ml) sont encore très efficaces. Exemple 4 Influence de l'incorporation d'un pesticide l'inoculum La tolérance de ORS 571 à l'incorporation d'un pesticide a été testée dans le cas d d'un ester organophosphoré : Curacron. - a) Influence de l'addition de Curacron au milieu de culture sur la croissance des Rhizobiums On étale 0,1 ml de culture d'ORS 571 en phase exponentielle sur des boites de Pétri renfermant le milieu YL gélosé auquel on a ajouté des doses croissantes de Curacron stérilisé par filtration sur millipore 0, 20, SO, 100, 200, 500 ppm. Le tableau 4 montre que ORS 571 résiste parfaitement à une dose de Curacron élevée (200 ppm). Même à 506 ppm, la croissance est seulement ralentie. TABLEAU 4 Doses de Curacron apportées au milieu (ppm) 0 20 50 100 200 500 Croissance de + Rhizobium ORS 571 + + + + + b) Influence de l'addition de Curacron à la culture liguide de Rhizobium On effectue l'inoculation de plantes âgées de 2 mois cultivées en plein air avec des cultures de Rhizobium ORS 571 renfermant 108, 107 et 106 bactéries/ml, avec et sans addition de Curacron (200 ppm). Les observations et mesures effectuées 21 jours après l'inoculation sont rapportées au tableau 5. Il résulte de cette expérience que l'adjonction de Curacron à l'inoculum ne nuit nullement à la nodulation ni à la fixation d'azote. c > Influence de l'addition de Curacron à la solution colloldale de poudre de Phizobium inclus Cette expérience est effectuée dans les mêmes conditions et en même temps que la précédente mais en remplaçant l'inoculum constitué par la culture liquide de Rhizobium par l'inoculum constitué par la solution colloidale de poudre de Rhizobium inclus.Comme dans le cas précédent, on n'observe aucune modification de l'efficacité de l'inoculum à la suite de l'addition de Curacron. TABLEAU 5 INFLUENCE DE L'ADDITION DE CURACRON A LA CULTURE LIQUIDE ORS 571 SUR LA NODULATION ET LA FIXATION D'AZOTE DE SESEANIA ROSTRATA TRAITEMENT NODULES PAR 10 CM DE TIGE FIXACTION D'AZOTE Nombre de Rhizobium Apport de (umole C2H4/h/g) par ml d'inoculum Curacron Nombre Poids sec NODULE SEC (ppm) (mg) 108 0 67 # 5 89 # 21 166 # 28 107 0 70 # 14 81 # 17 126 # 14 106 0 60 # 8 73 # 17 120 # 19 108 200 69 # 9 63 # 17 163 # 38 107 200 64 # 11 64 # 18 132 # 35 106 200 77 # 11 68 # 11 112 # 7 Ces différents essais démontrent que l'introduction en agriculture de Sesbania rostrata à titre d'engrais vert doit être appelée à se développer considdrablement, tout particulièrement dans les régions tropicales, notamment en riziculture.en extrême-orient. C'est évidemment sous forme d'inoculum déjd conditionné en poudre qui peut être mis facilement en suspension pour l'emploi que la diffusion de ce rhizobium pourra être assurée dans les meilleurs conditions. REFERENCES BROCKWELL J. (1963) Accuracy of a plant-infection technique for counting populations of Rhizobium trifolii; Appl. Microbiol. 11 : 377-383. DREYFUS B. et DOMMERGUES Y.R. (1980) Non-inhibition de la fixation azote atmosphérique par l'azote combiné chez une légumineuse à nodules caulinaires, Sesbania rostrata; C.R. Acad. Sciences Paris, D, 291, 767-770. DREYFUS B. et DOMMERGUES Y.R. (1981 a) Nitrogen-fixing nodules induced by Rhizobium on the stem of the tropical legume Sesbania rostrata; FEMS Microbiol. Letters, 10, 313-317. DREYFUS B.L. et DOMMERGUES Y.R. (1981 b) Stem nodules on the tropical legume, Sesbania rostrata; In: Current Perspectives in Nitrogen Fixation (A.H. Gibson et W.E. Newton eds.);Australian Academy of Science, Canberra. p. 471. HARDY R.W.F. (1980) Translating basic research on biological nitrogen fixation to improved crop production in less-developed countries, a user's view; In: Linking Research to Crop Production; (R.C. Staples et R.J. Kuhr eds.); Plenùm New York. 137-151. LEGG J.O. et SLOGER C. (1975) A tracer method determining symbiotic nitrogen fixation in field studies;In: Proceedings of the Second International Conference on Stable Isotopes; (E.R. Klein et P.O. Klein eds) 661-666. REVENDICATIONS 1) Procédé d'inoculation de plantes par des microorganismes phytoactifs, caractérisé en ce que - on prépare une solution aqueuse colloidale contenant lesdits microorganismes phytoactifs, par dissolution dans une solution aqueuse d'une poudre constitude de bactéries incluses dans un gel polymère au moins partiellement soluble dans l'eau, et - on pulvérise les sites d'inoculation des plantes avec la solution aqueuse colloïdale obtenue. 2) Procédé selon la revendication 1, caractérisé en ce que les microorganismes sont inclus dans un gel de polysaccharide. 3) Procédé selon la revendication 2, caractérisé en ce que le gel de polysaccharide est un alginate. 4) Procédé selon l'une des revendications 1 à 3, caractérisé en ce que le pH de la solution aqueuse colloidale est compris entre 6,4 et 7,2. 5) Procédé selon la revendication 4, caractérisé en ce que le pH de la solution aqueuse colloïdale est de 6,8. 6) Procédé selon l'une des revendications 4 et 5, caractérisé en ce que le pH est tamponné par un tampon phosphate. 7) Procédé selon l'une des revendications 1 à 6, caractérisé en ce que la solution aqueuse colloïdale contient une concentration en phosphate comprise entre 0,02 et 0,1 M. 8) Procédé selon la revendication 7, caractérisé en ce que la concentration en phosphate est voisine de 0,06 M. 9) Procédé selon l'une des revendications 1 à 8, caractérisé en ce que le microorganisme phytoactif est un Rhizobium. 10) Procédé selon la revendication 9 caractérisé en ce que le Rhizobium utilisé est un Rhizobium de tiges. 11) Procédé selon la revendication 10, caractérisé en ce que les Rhizobiums utilisés sont des Rhizobiums de Sesbania rostrata. 12) Procédé selon l'une des revendications 10 et 11, caractérisé en ce qu'on effectue la pulvérisation entre 28 et 42 jours après le semis. 13) Procédé selon l'une des revendications 1 à 12, caractérisé en ce que la solution contient, en outre, un pesticide. 14) Procédé selon la revendication 13, caractérisé en ce que le pesticide est un ester organophosphoré. 15) Solution colloïdale aqueuse obtenue par dissolution dans une solution aqueuse d'une poudre constituée de bactéries incluses dans un gel polymère au moins partiellement soluble dans l'eau. 16) Solution colloïdale selon la revendication 15, caractdrisée en ce que la poudre est constituée d'une souche de Rhizobium incluse dans un gel d'alginate.