Brevet FR2547658A1 — publié le 19841221

La présente invention concerne un tube collecteur de sang ainsi qu'un agent de séparation pour liquides utilisé pour se parer des composants dans des liquides comprenant plus d'un composant de densité différente. Cet agent de séparation pour liquides est utilisé pour séparer un composant spécifique des autres composants en utilisant la différence de densité existant entre le composant spécifique et les autres composants d'un liquide à fractionner, et agent venant s'intercaler entre ces composants. Dans ce but il est souhaité que l'agent de séparation pour liquides ait une densité comprise entre celle desdits composants, qu'il puisse couler pendant la séparation par centrifugation et ne puisse pas couler et soit stable une fois l'opération de séparation par centrifugation terminée. Un agent de séparation pour liquide classique connu de ce genre est une matière du type gel comprenant de l'huile de silicone, de la silice et un agent gélifiant. Mais un agent de séparation pour liquides ayant cette composition soulève des difficultés. Par exemple, parce que les composants qui sont mutuellement insolubles sont mélangés mécaniquement pour obtenir un gel thixotropique au moyen d'un agent gélifiant qui accélère la formation de liaison hydrogène entre les par ticules de silice (agent de réglage de densité.) > la coagula- tion se développe à cause de cete liaison hydrogène devenant de plus en plus forte avec le temps, entratnant une séparation de phases et une faible poussée dans la séparation par centri fug a tion.Pour éviter cela, l'addition d'un tensio-actif pour empocher la séparation de phases a été proposée mais ceci pose un autre problème d'hémolyse par le tensio-actif. En outre, les agents de séparation pour liquides de la composition ci-dessus présentent des inconvénients tels que la tendance à changer leur nature par formation de liaison transversaleset autres changements chimiques pendant la stérilisa tion aux rayons y après encapsulation d'une quantité appropriée dans un tube collecteur de sang. Ceci diminue la ronctlon séparatrice pour liquides et retarde la coagulation du sang et le dépôt des caillots par évaporation des composants à bas poids moléculaire de la matière du type gel rendant hydrophobe la surface intérieure du tube. En outre ces agents de séparation sont assez chers à cause des matières premières particulières utilisées. Un autre agent de séparation pour liquides connu est une matière du type gel à base de polyester. Cette matière n'est pas nécessairement satisfaisante du fait qu'elle rend hydrophobe la surface intérieure du tube entraînant un retard de la coagulation du sang et du dépit des caillots. En outre les agents de séparation pour liquides de ce type ont une odeur désagréable . On a fréquemment observé quand un tube de 7 cm3 pour échantillonage du sang est utilisé que la matière du type gel n'est pas suffisamment fluide à cause d'une contrainte insuffisante pendant l'opération de centrifugation due à la quantité insuffisante de sang ayant été prélevée. La présente invention a pour objet d'éliminer ces problèmes de l'art antérieur et de fournir un agent de séparation pour liquides qui a une excellente stabilité vis-à-vis du changement sur une longue période, qui peut être soumis à la stérilisation par rayon t , qui pratiquement n'est pas hydrophobe, et ne dégage pas des odeurs désagréables et puisse être fabriqué avec des coûts relativement faibles. Pour atteindre les objectifs ci-dessus et d'autres, la présente invention fournit un agent de séparation pour liquides pour fractionner un liquide qui contient plus d'un composant ayant des densités différentes en séparant un composant spécifique au moyen de la différence de densité, agent caractérisé par le fait qu'il comprend comme constituant principal un copolymère a-oléfine dialkylmaléate ayant, à 250C, une viscosité comprise de préférence entre 10.00 et 80.000 centipoises et plus préférablement entre 40.00 et 80.000 centipoises et des agents de réglage de la viscosité et de la densité mélangés avec ce copolymère. La présente invention est illustrée par l'exemple descriptif et non limitatif décrit plus loin en référence aux dessins ci-annexés sur lesquels - la figure 1 est une vue en perspective montrant l'utilisation de l'agent de séparation pour liquides de la présente invention sous forme d'un séparateur de sérum sanguin encapsulé dans un tube collecteur de sang. - la figure 2 est une vue en coupe du tube collecteur de sang montré sur la figure 1, après la séparation par centrifugation. Dans la présente invention le copolymère a-oléfindialkylmaléate a la formule générale dans laquelle R1 représente un groupe alkyle ou un mélange de différents groupes alkyles ayant 2 à 58 atomes de carbone , N et R3 représentent de l'hydrogène, des groupes méthyle, éthyle, butyle et 2-éthylhexyle ; n est un nombre entier qui permet d'obtenir une viscosité dudit polymère comprise entre 40.000 et 80.000 centipoises (à 250C) quand on utilise ledit copolymère comme constituant principal, ou bien n correspond à un nombre d'atomes de carbone allant de 30 à 60 quand on utilise ledit copolymère sous forme de cire. Ce copolymère a-oléfine-dialkylmaléate est jaune clair, transparent, inodore, inerte vis-à-vis du sang, ntabsorbe pas le sang ne s'élue pas, etc. et reste stable pendant de longues périodes de temps. Il permet à la surface intérieure du tube collecteur de sang de rester propre puisqu'il ne donne aucune matière hydrophobe. il ne change sensiblement pas de nature chimique ou physique lors de la stérilisation avec les rayons t ou analogues. Quand l'agent de séparation pour liquides de la présente invention est utilisé pour la séparation du sérum sanguin, la densité de ce copolymère a-oléfine-dialkylmaleate est choisie entre 1 et 1,038, de préférence entre 1,02 et 1,035. Selon la présente invention, les dérivés amines aliphatiques d'argile smectite utilisés comme agents de réglage de la viscosité et de la densité peuvent être des dérivés amines aliphatiques primaires, secondaires ou tertiaires d'argile smectite Ces dérivés amines sont déjà connus. Parmi ces dérivés, les dérivés aminés tertiaires aliphatiques d'argile smectite sont davantage préférés et à titre d'exemple on peut citer la "Bentone 34", "Bentone 38", "Bentone 27" et la "Bentone 128" (sels d'ammonium quaternaires d'argile smectite fabriqués par NL Industry Co.). La poudre fine minérale utilisée comme agent de réglage de la viscosité et de la densité dans la présente invention peut être choisie convenablement parmi la silice calcinée, la silice précipitée, etc. Le produit générateur de la structure utilisé dans la présente invention est ajouté pour maintenir à l'état de gel l'agent de séparation pour liquides et peut être choisi, si on le désire, en fonction du liquide à fractionner. Dans la séparation du sérum sanguin, par exemple, un copolymère diméthyl-polysiloxane-poloxyalkylène (par exemple vendu sous les marques déposées "SH-3771", "SM-l90" et "SE-192" par Toray Silicone Co., Ltd.) ou un "Carbitol" (par exemple l'éthyldiglycol) et produits analogues peuvent être utilisés. Selon la présente invention en plus du copolymère a-oléfinedialkylmaléate, de l'agent de réglage de la viscosité et de la densité, et du produit générateur de la structure, on peut ajouter, si nécessaire, un tensio-actif (par exemple un polyoxyéthylène-monolaurate d'huile de ricin hydrogénée, un polyoxyéthylène-tri-isostéarate d'huile de ricin hydrogénée ou produits analogues). Les compositions de l'agent de séparation pour liquides de la présente invention utilisables pour la séparation du sérum sont indiqués dans les tableaux 1 et 2 ci-après. Dans ces tableaux le copolymère o-oléfine-dialkyl maléate tA) est un copolymère n-a-oléfine-diméthylmaléate Z poids moléculaire moyen 3000 à 4000 ; densité 1,027 à 1,038 (à 250c) ; viscosité 40,000 à 70.000 centipoises (250C)? d'une combinaison de constituants a-oléfine comportant respectivement 12 et 14 atomes de carbone ; le copolymère (B) est un copolymère n-a-oléfine-diméthylmaléate Z poids moléculaire moyen 2000 à 3000 ; densité 1,005 (28 C) ; viscosité lo.oeo à 15.000 centipoises (28dC)~/ d'une combinaison de composants a-oléfine comportant respectivement 6 et 8 atomes de carbone ; et le copolymère (C) est un copolymère n-a-oléfine-diméthylmaléate ayant des composants a-oléfine comportant en moyenne entre 30 et 60 atomes de carbone. Tableau 1 (exemples de compositions d'agents de séparation pour sérum Unité parties en poids Composition numéro : 1 2 3 4 5 6 Copolymére &alpha;-oléfine-dialkylmaléate (A) 100 100 100 100 50 (B) - - - - 50 100 (C) - - 1,0 3.0 - - 2,0 2,0 1,0 Aerosil R-972* Aerosil 200** 10 1,0 - - - Bentone 38*** 1,0 1,0 1,0 3,0 Bentone 34*** 1,0 Bentone 27*** 3,0 Bentone 128*** 2,0 * poudre fine de silice hydrophobe ayant une taille moyenne de particule de 16m , une densité apparente d'environ 60 g/l (fabriquée par NIPPON AEROSIL CO. LTD.) ** poudre fine de silice hydrophile ayant une taille moyenne de particule de 12 m , une densité apparente d'environ 60 g/l (fabriquée par NIPPON AEROSIL CO., LTD) *** Sels d'ammonium quaternaire d'argile smactite (fébriqués par NL Industry CO.U.S.A.) Tableau 2 (exemples de compositions d'agent de séparation pour sérum) Unité parties en poids Composition numéro 7 8 9 10 11 12 Copolymére &alpha;-cléfine-dialkylmaléate (A) 100 100 100 100 50 (B) - - - - 50 100 (C) - - 5,0 5,0 - Aerosil R-972* 6 - 7,0 5,0 7,0 7 Aerosil 200** - 6 - - - 0,5 1,0 1,0 - 1,0 3,0 Produit générateur de la 0,18 0,04 - 0,2 0,5 0,6 structure **** * voir tableau 1 ** voir tableau 1 *** Polyoxyéthylène-monolaurste d'huile de ricin (fabriqué par NIHON EMULSION CO., LTD.) **** "SH 3771" (fébriqué par Toray Silicone Co., Ltd.) copolymère diméthylpolysiloxane polyoxyalkylène ayant une densité de 1,060 à 1,080 (à 20 C) et une viscosité de 260 à 280 centipoises. On va décrire maintenant le procédé de préparation de l'agent de séparation pour liquides de la présente Inven- thon. D'abord le procédé de préparation du copolymère a oléfine-dialkylmaléate consiste en une faible polymérisation de l'éthylène pour obtenir une n-&alpha;-oléfine. Cel3e-cl est ensuite séparée en fractions ayant un nombre d'atomes de car bone par exemple de 4, de 6, de 8 et 10, de 12 et 14, de 16 et 18 et de 30 à 60 par distillation fractionnée.Selon la densité du liquide à fractionner, ces fractions peuvent être utilisées soit seules5 soit combinées, et une fraction ayant un nombre d'atomes de carbone de 12 et 140 ou de 6 et 8, est utilisé de préférence dans la séparation du sérum du point de vue de la viscosité et de la densité. La fraction choisie est soumise à la copolymérisation avec un disîkylmaléate de façon classique pour obtenir le produit désiré. Utilisant ce copolymère a-oléfine dialkylmaléate ayant, a 25 C, une viscosité comprise de préférence entre 10.000 et 80.000 centipoises et plus préférablement entre 40.000 et 80.000 centipoises comme composant principal un agent de réglage de la viscosité et de la densité tel qu'un dérivé amine aliphatique argile smectite ayant 8 à 24 atomes de carbone,et une matière inorganique en poudre telle qu lune poudre de silice fine, un produit générateur de struc ture et une cire constituée par un copolymère a-oléfine- dialkylmaléate sont ajoutés si nécessaire.Le mélange est broyé en utilisant un mélangeur à rouleaux, un broyeur un malaxeur planétaire ou an appareil analogue. L'agent de séparation pour liquides ainsi préparé dol de préférence avoir une viscosité permettant-de l'utiliser da la séparation du sérum, par exemple comprise entre 250000 et 800 centipoises à 250C et une densité comprise entre 1,035 et 1,055. Tous les composants dans les tableaux précédents sont thlxo tropiques, montrant une coulabilité par application d'une force de centrifuge ou d'une force analogue et si non restant sous forme d'un gel homogène stable dans les conditions nomma les. En outre, parce que cet agent de séparation pour liquide ne content pas d' agent de géléfication tel que ceux utilise classiquement, 11 ne risque pas de coaguler avec le temps comme indiqué précédemment, ni de favoriser la séparation de phase ou la diminution de la poussée. Sa densité est relativement élevée et se trouve proche de celle du sérum sanguin, de sorte que même si la séparation de phases a lieu, la couche de base ne flotte pas en suspension dans le sérum. Exemple Comme le montre la figure 1, environ .1,7 ml de chacune des compositions d'agent de séparation pour liquides ci-dessus (n 1 à 12) est placée au fond d'un tube 2 collecteur du sang de 10 cm3. Une toile non tissée 3 en polyester revêtue avec 1 à 5 mg de terre de diatomée (par exemple Caper Flattery Sand, marque déposée "G-200", de Kyoritsu Ceramic matériau Co. Ltd.) ou de poudre de verre très fine est ensuite placée en position inclinée dans chaque tube collecteur de sang. Chacun des tubes est ensuite fermé avec un bouchon 4 en caoutchouc butyl et les tubes sont placés sous pression réduite. Ensuite un échantillon du sang est placé dans chaque tube collecteur de sang et laissé en repos pendant 7 à 8 minutes.Il en résulte que la terre de diatomée se disperse dans le sang pendant l'introduction du sang et accélère la coagulation de celui-ci simultanément avec la toile non tissée 3. Une coagulation appropriée est ainsi obtenue en ce temps court . Chaque tube collecteur de sang est placé dans une centrifugeuse pendant 10 minutes à 700 -.1000 G et les compositions des agents de séparation pour liquides sont réparties d'une façon stable entre la couche de sérum et la couche de caillots. Cet état est montré sur la figure 2. Parce que l'agent de séparation pour liquides est thioxotropique et a une densité comprise entre celle du sérum sanguin 5 et celle des caillots sanguins 6 il reste entre le sérum sanguin et les caillots sanguins 6, formant un gel qui sépare ces deux couches. Puisque la terre de diatomée et la toile non tissée 3 ont des densités plus élevées elles ne sont pas incluses dans la couche de sérum sanguin 5.Ainsi, le sérum sanguin 5 obtenu possède une grande pureté sans entratnement de fibrine. Ce sérum sanguin 5 estiacilement recueilli à partir du tube collecteur de sang par décantation ou par aspiration. Parce que les particules d'argile smectite ne sont pas transparentes à la lumière, leur état de dispersion peut être facilement contrtlé à l'aide d'un microscope, etc., fa militant le centrale de la qualité. Parce que les dérivés amines aliphatiques d'argile smectite augmente la viscosité, le produit générateur de la structure qui est d'habitude essentiel peut être supprimé. L'utilisation de cire dans l'exemple ci-dessus est particulièrement efficace pour empêcher la séparation de phases de l'agent de séparation pour liquides. Parce que le copolymère Q-oléfine-dialkylmaléate est utilisé comme composant principal dans la présente invention, le coût de fabrication est très faible et environ égal au tiers du coût de fabrication de l'agent avec silicone liquide. Quand on l'utilise sous forme d'un séparateur pour sérum, l'agent de séparation pour liquides ne forme pas de pellicule hydrophobe dans le tube collecteur de sang en libérant des substances hydrophobes et par conséquent ne provoque pas de retard à la coagulation du sang. Parce que le tube collecteur de sang est en verre, il accélère la coagulation quand sa surface est mise en contact avec le sang de sorte qu'il est nécessaire de maintenir sa surface intérieure propre. Par conséquent comparée aux agents de séparation pour liquides classiques qui ont l'inconvénient de former une pellicule hydrophobe, la durée nécessaire pour recueillir le sérum sanguin est diminuée. Ceci est même plus efficace en utilisant simultanément la terre de diatomée et la toile non tissée. L'économie de temps peut atteindre.jusqu 'à 30 minutes. Quand l'encapsulationdins un tube collecteur de sang est effectuée, la stérilisation est désirable. Dans les essais cliniques aucun changement chimique ou physique provoquant des effets contraires n'est trouvé après la stérilisation par les rayons Y. ans les exemples ci-dessus, la description concerne l'utilisation de l'agent de séparation pour liquides de la présente invention pour séparer seulement le sérum, mais il doit être bien entendu que les applications similaires pour séparer d'autres liquides sont possibles. REVENDICATIONS 1. Tube collecteur de sang (2) contenant un moyen pour coaguler le sang et pour séparer le sérum, ce moyen comprenant un agent accélérant la coagulation du sang (3) et un agent de séparation pour liquides (1), caractérisé par le fait que l'agent accélérant la coagulation du sang a une densité supérieure à la densité du sérum, que l'agent de séparation pour liquides a une densité supérieure à la densité du sérum et par le fait que l'agent accélérant la coagulation du sang est placé dans le tube collecteur de sang en une position intermédiaire de celle-ci. 2. Tube collecteur de sang selon la revendication 1, caractérisé par le fait que l'agent accélérant la coagulation du sang comprend de la terre de diatomée ou de la poudre de verre très fine. 3. Tube collecteur de sang selon la revendication 2, caractérisé par le fait que la terre de diatomée ou la poudre de verre très fine sont appliquées sur une toile non tissée. 4. Tube collecteur de sang selon l'une quelconque des revendications 1 à 3, caractérisé par le fait qu'un agent de séparation pour liquides agissant comme agent de séparation de sérum est placé dans le tube collecteur de sang. 5. Tube collecteur de sang selon l'une quelconque des revendications 1 à 4, caractérisé par le fait que l'agent de séparation de sérum est sous forme d'un gel ayant une densité intermédiaire entre la densité du sérum et la densité des caillots de sang. 6. Tube collecteur de sang selon l'une quelconque des revendications 1 à 5, caractérisé par le fait que l'agent accélérant la coagulation du sang est placé dans le tube collecteur de sang en position inclinée. 7. Tube collecteur de sang contenant un moyen pour coaguler le sang et pour séparer le sérum comprenant un agent accélérant la coagulation du sang, caractérisé par le fait que l'agent accélérant la coagulation du sang a une densité supérieure à la densité du sérum et il est placé dans le tube collecteur de sang en une position intermédiaire de celle-ci. 8. Tube collecteur de sang selon la revendication 6, caractérisé par le fait que l'agent accélérant la coagulation du sang comprend de la terre de diatomée ou de la poudre de verre très fine. 9. Tube collecteur de sang selon la revendication 7 ou 8, caractérisé par le fait que la terre de diatomée ou la poudre de verre très fine sont appliquées sur une toile non tissée. lo. Tube collecteur de sang selon l'une quelconque des revendications 7 à 9, caractérisé par le fait que l'agent accélérant la coagulation du sang est lacé dans le tube collecteur de sang en position inclinée.