Brevet FR2537131A1 — publié le 19840608

La présente invention est relative à de nouveau; dérivés ctamino-acides, à leurs procédés de préparation et leur application thérapeutique. Les dérivés selon la présente invention sont des inhibiteurs de l'enképhalinase qui est une enzyme dégradant les enképhalines. La méthionine-enképhaline, [Met-E (Tyr-gly-gly-Phe Met), et la leucine enképhaline, Leu-E (Tyr-gly-gly-Phe-Leu) sont des peptides découverts dans le cerveau et qui sont les ligands endogènes du récepteur morphinique (J. Hughes et al., Nature, 258, 577 (1975)/. Leur action est multiple tant au niveau de la transmission des influx nociceptifs qu'au niveau du comportement ou de la sécrétion hormonale. Ils sont considérés comme des neuromédiateurs à action inhibitrice sur la libération d'autres neurotransmetteurs [J. Hughes, Nature, 278, 394 (1979); S.H. Snyder, Nature, 278, 13 (1979)]. Il a été démontré que les enképhalines sont rapidement dégradées dans le cerveau par une carboxydipeptidase qui libère les restes Tyr-gly-gly et Phe-Met (B. Malfroy et al, Natures 276, 523 (1978). Les composés susceptibles d'inhiber l'enképhalinase peuvent donc prolonger les effets des enképhalines enuogènes ou potentialiser l'action d'analogues synthétiques administrés de façon exogène. Ces composés sont donc susceptibles de remplacer les agents morphiniques dans toutes leurs propriétés sans en avoir les graves inconvénients, en particulier au niveau des phénomènes d'accoutumance et de dépendance. Les dérivés selon l'invention répondent à la formule générale dans laquelle A est un groupe carbonyle, méthylène, méthine ou amino; 3 est un groupe méthine; amino éventuellement substitué par un groupe alkyle en Cl à C4; carbonyle ou thio; R1 est un atome d'hy- drogène; un groupe alkyle éventuellement mono- ou polysubstitué par un atome d'halogène; un groupe phényle éventuellement mono- ou polysubstitué par un atome dthalogène, un groupe trifluorométhyle ou hydroxy; un groupe cyclohexyle ou un groupe thiényle; n-est 0 ou 1;R2 est un atome d'hy- hydrogène, un groupe alkyle en Cl à C6 linéaire ou ramifié; un groupe phényle; un groupe benzyle éventuellement monoou polysubstitué par un atome d'halogène; un groupe hydro- xyalkyle; un groupe alcoxyalkyle éventuellement substitué sur la fraction alcoxy par un groupe phényle, benzhydryle ou pyridyleN-substitué par un groupe phénylalkyle dont le noyau phényle est éventuellement substitué par un ou plusieurs atomes d'halogène; un groupe phénoxyalkyle; un groupe mercaptoalkyle éventuellement substitué sur le soufre par un groupe alkyle simple ou ramifié, phényle ou benzyle;R3 est un atome d'hydrogène; un groupe alkyle linéaire ou ramifié en Cl-C8; phényle ou phénylalkyle dont la fraction alkyle est en Ci àC8, ces deux derniers radicaux étant éventuellement mono- ou polysubstitués sur le noyau phényle par un atome d'halogène;Y est un groupe -S-; -NH- ou et X est un atome d'hydrogène; un groupe alkyle en Cl ou C2 substitué par un groupe alcoxyearbonyle carboxy, mercapto, alkylthio éventuellement mono- ou polysubstitué par un atome d'halogène, benzylthio éventuellement mono- ou polysubstitué par un radical choisi parmi un atnie d'halogène et un groupe mono- ou polyhaloalkyle en C1 au benzhydryl thio éventuellement mono- ou polysubstitué par un atome d'halogène, acyle aliphatique (Cl ) thio éven- tuellement mono- ou polysubstitué par un atome d'halogène, benzoylthio éventuellement mono- ou polysubstitué par tun radical choisi parmi un atome d'halogène et un groupe mono- ou polyhaloalkyle en C1 à C4, benzhydryle carbonyîthia éventuellement mono- ou polysubstitué par un atome d'halogène; un groupe acyle aliphatique en C1 à C4 ou benzoyle; un groupe alcoxy-carbonyle; un groupe mercapto; acyle aliphatique (Cl 4) thio ou benzoylthio; et leurs sels d'addition avec des acides ou des bases pharmaceutiquement acceptables. Parmi les composés de formule I définis ci-dessus, une classe préférée de composés comprend les dérivés dans lesquels: A est un groupe carbonyle, méthylène ou amino; B est un groupe amino éventuellement substitué par un groupe alkyle en C1 à C4; carbonyle ou thio; R1 est un atome d'hydrogène; un groupe phényle éventuellement mono- ou polysubs titué par un atome d'halogène; n est 0 ou 1; R2 est un atome d'hydrogène; un groupe alkyle en C1 à C6 linéaire ou ramifié; un groupe benzoyle; un groupe benzyloxyalkyle; R3 est un atome d'hydrogène; un groupe alkyle linéaire ou ramifié en C1 à C8;Y est un groupe -S-; -NH- ou -CH2- ; et X est un atome d'hydrogène; un groupe alkyle en Cl ou C2 substitué par un groupe alcoxycarbonyle, carboxy, mer capte, acyle aliphatique (Cl 4) thio, benzoylthio; un groupe acyle aliphatique en C1 à C4 ou benzoyle; un groupe alcoxy (Cl 4) carbonyle; un groupe mercapto; acyle aliphatique (C1-4) thio ou benzoyl thio. A titre d'atome d'halogène on préfère particulièrement le fluor. Comme groupe acyle aliphatique on peut mentionner les groupes acétyle, propionyle et butyryle, le groupe acétyle étant préféré. On préfère parmi les composés de formule I ceux qui décrivent les structures amino-acides suivantes : leucine, phénylalanine, glycine et sérine. L'invention envisage, à titre de composés spécifiques les dérivés suivants (dans les formules données, on désigne par Et un radical éthyle et par r un groupe phényle) 1) EtO2C-CH2-L-Phe-L-Leu-OCH3 2) HO2C-CH2-L-Phe-L-Lau OH 3) H 02C-CH2-L-Phe-(CH3)-L-Leu OH 4) HO2C-CH2-L-Phe-D Leu OH 5) HO2C-CH2-D-Phe-L-Lau OH 6) HO2C-CH2-D-Phe-D-Leu OH 7) EtO2C-CH2-CH2-L-Phe-L-Leu OCH3 8) HO2C-CH2-CH2-L-Phe-L-Leu OH 9) EtO2C-CH2-L-Phe-L.Ala-OCH3 10) HO2C-CH2-L-Phe-L. Ala-OH 11) HS-CH2-CH2-L-Phe Otbu 12) #-COS-CH2-CH2-L. Phe Otbu 13) #-COS-CH2-CH2-L. Phe OH 14) #-COS-CH2-CH2-L-Phe-L-Leu OCH3 15) ) HS-CH2-CH2-L-Phe-L-Leu- OH 16) HS-CH2-CH2-L-Phe-L-Ala OH Les composés de formule I ont un ou deux atomes de carbone asymétriques. Ils existent donc sous forme de mélange racémique ou sous des formes diastéréoisomères. Tous ces composés entrent dans le cadre de la présente invention. Les synthèses décrites ci-après peuvent utiliser le racémique ou l'un des énantiomèras comme substance de départ. Quand on utilise dans le mode opératoire de synthèse la substance de départ racémique, on peut séparer les stéréoisomères obtenus dans ie produit par des procédés classiques de chromatographie ou de cristallisation fractionnée. En général, l'isomère L par rapport à l'atome de carbone de l'amino-acide constitue la forme isomère préférée. Les composés de formule I forment des sels qui font également partie de cette invention Les sels comprennent les sels d'addition d'acide que l'on forme par réaction avec divers acides minéraux et organiques fournissant des sels d'addition d'acide, comprenant, par exemple, les halohydrates (en particulier le chlorhydrate et le bromhydrate), le sulfate, le nitrate, le borate, le phosphate, I'oxalate, le tartrate, le maléate, le citrate, l'acétate, l'ascorbate, le succinate, le benzènesulfonate, le méthanesulfonate, le cyclohexane sulfonate et le toluènesulfonate. On forme les sels d'addition de base par réaction avec des bases telles que NaOH ou par réaction d'échange d'ions. On forme les sels d'une manière classique en faisant réagir la forme libre du produit avec un ou plusieurs équivalents de la base ou de l'acide approprié fournissant l'anion ou le cation désiré dans un solvant ou un milieu dans lequel le sel est insoluble ou dans l'eau et en éliminant l'eau par lyophilisation. En neutralisant le sel par un acide insoluble comme une résine échangeuse de cations sous forme hydrogène Zpar exemple la résine polystyrène-acide sulfonique-Dowex 50 (Mikes, Laboratory Handbook of Chromatographic Methods (Van Nostrand, 1961) page 2567, en éluant avec un tamponvolatil (par exemple pyridine/acide acétique) et en extrayant avec un solvant organique, on peut obtenir la formule libre et si on le désire on peut former un autre sel. Les composés de la présente invention sont préparés par les divers procédés définis ci-après. Les composés de formule I peuvent être préparés-par une réaction de condensation paptidique classique entre deux restes acides aminés convenablement protégés. Par exemple, le ou les groupes fonctionnels (c'està-dire les groupes amino > carboxy, hydroxy) qui ne sont pas impliqués dans la réaction de formation de la liaison peptide (c'est-à-dire -COZXH) lors de la réaction de condensation peuvent être protégés par un ou des groupes protecteurs avant la réaction de condensation. Comme groupes protecteurs intermédiaires des groupes amino, on emploie des groupes usuels tels que t.butoxycarbonyle (Boc), benzyloxyearbonyle (Z), isobornyloxy carbonyle (IBOC), etc. Les groupes carboxyliques peuvent également être protégés, si nécessaire, par estérification (par exemple esters méthyliques, éthyliques, benzyliques, etc.). On réalise la réaction de condensation en utilisant de préférence le couplage des azotures sans racémisation ou le procédé au dicyclohexyl carbodiimide/l-hydroxy-benzotriazole dit ci-après DCC/HOBt ou DCC/3-hydroxy-4-oxo-3,4- dihydro-1,2,3-benzotriazine (OOBt). On peut utiliser en variante les esters activés des fragments. La réaction de condensation peut eAtre effectuée en présence d'un solvant. Le solvant peut tre choisi parmi ceux qui sont connus pour être utilisables dans les réactions de condensation de- peptides. Ainsi, on- peut mentionner à titre d'exemples les solvants anhydres ou aqueux ciaprès: diméthylformamide, diméthylsulfoxyde, pyridine, chloroforme, dioxane, dichlorométhane, tétrahydrofurane, ainsi que des mélanges appropriés de tels solvants. La température réactionnelle est choisie dans la gamme connue pour les réactions conduisant à la formation des liaisons peptides, par exemple normalement dans la gamme d'environ -200C à environ 300C, De plus, les matières précurseurs (peptides protégés) des composés recherchés -selon la présente invention peuvent également être facilement préparés par des procédés de synthèse en phase solide. Après la fin de la réaction de condensation reeherchée, si le produit porte des groupes protecteurs, ils peuvent hêtre éliminés par des procédés habituels. Parmi de tels procédés habituels, on peut citer: la réduction catalytique en présence d'un catalyseur tel que le noir de palladium, le carbone sur palladium, le platine, etc., la solvolyse au moyen d'acide fluorhydrique, d'acide trifluo roacétique, etc. et la réduction avec le sodium métallique dans l'ammoniac liquida On utilise notamment l'acide trifluoroacétique (TFA) pour éliminer les groupes Boc (amino protecteurs) et une saponification pour éliminer les groupes esters protecteurs des groupes carboxyliques. On peut également préparer les composés de formule I par condensation entre une fraction d'un dérivé halogéné et la fraction correspondante d'un dérivé amino ou mércapto. Selon un premier mode de réalisation, les composés de formule I dans lesquels A = CO, B = NH, Y = NH, X est un groupe allène en C1 ou C2 substitué par un groupe alcoxycarbonyle ou carboxy et R1, R2, R3 et n sont tels que définis ci-dessus, sont préparés par réaction d'un dérivé de formule ROOC - (CH2)m Br tII) dans laquelle R est H ou un groupe alkyle et m est 1 ou 2, avec un dérivé de formule dans laquelle R1, R2 et R3 sont tels que définis ci-dessus et A = CO ; B = NH. Les composés de formule III sont obtenus par les voies classiques de la synthèse peptidique, ctest-à-dire par couplage d'un dérivé protégé avec lester par utilisation des différentes méthodes connues précédemment indiquées telles que HOBT/DCC, anhydride mixte, ester activé. Le groupe protecteur Boc est ensuite éliminé par exemple à l'aida d'acide trifluoroacétique (TFA). Selon un autre mode de réalisation, les composés de formule I dans lesquels A = CH2, B = NH, Y = S, X est un atome d'hydrogène ou un groupe benzoyle, R1 est H, n = 0, R2 et R3 sont tels que définis ci-dessus, sont préparés a) par réaction de thiiranne de formule C H S sur un ester d ' amino-acide de formule b) éventuellement réaction du produit obtenu à 1 'é- tape (a) avec un composé de formule R - CO - Br dans laquelle R est un groupe alkyle inférieur ou phényle et élimination des groupes protecteurs, Selon un autre mode de réalisation de la présente invention, les composés de formule I dans lesquels A = CO, B = NH, Y = NH ou CH2, X est un groupe alkyle en C1 ou C2 substitué par un groupe mercapto, acyle aliphatique thio ou benzoylthio, R1, R2, R3 et n sont tels que définis cidessus, sont préparés une réaction de condensation peptidique entre un composé de formule un ester d'amino-acide de formule Lorsque le composé de formule IV comporte un groupe y qui est un groupe -1XH- , on le prépare comme au mode de réalisation précédent. Lorsque le composé de formule IV comporte un groupe Y qui est un groupe -CH2- , il est obtenu par réaction d'un S-aide thiocarboxylique de formule R-COSH, dans laquelle R est un radical alkyle ou phényle, sur un dérivé d'acide acrylique de formule (préparé selon C, Ma-nnich et K.Ritsert, 1924,:Ber 57, 1116), pour obtenir un composé de formule Selon un autre mode de réalisation de la présente invention, les composés de formule I dans lesquels A = CO, B = NH, Y = S, X est un atome d'hydrogène, un groupe acyle aliphatique en C1 à C4 ou benzoyle et R1, R2, R3 et n sont tels que définis ci-dessus, sont préparés par réaction d'un S-acide thiocarboxylique de formule R-COSH, dans laquelle R est un radical alkyle ou phényle, sur un dérivé halogéné de formule dans laquelle Hal est un atome d'halogène en particulier de brome. Les composés de formule (V) sont obtenus par une réaction de couplage analogue à la synthèse peptidique entre un bromo-acida de formule et un ester d'aino-acre de formule Selon une variante de ce mode de réalisation il est possible de faire tout d'abord réagir le bromo-acide avec le S-thioacide carboxylique, puis de coupler l'acide obtenu avec l'ester d1amino-acide. Selon encore un autre mode de réalisation de la présente invention, les composés de formule I dans lesquels A = CO, B = NH, Y = S, X est un groupe alkyle en Ci ou C2 substitué par un groupe mercapto, acyle aliphatique thio ou benzoyltio et R1, R2, R3 et n sont tels que définis ci-dessus, sont préparés par réaction d'un composé halogéné de formule R-CO-S-(CH2)m-Hal, dans laquelle Hal est un atome d'halogène tel que le brome, R est un groupe alkyle ou phényle et m est 1 ou 2, -avec un dérivé de formule ce dernier composé étant obtenu à partir d'un composé de formule I dont la synthèse a été précédemment décrite, par libération du groupe mercapto terminal. L'obtention des dérivés de formule I à terminaison mercapto est obtenue par saponification à l'aide de soude des dérivés à terminaison acyle (aliphatique ou aromatique) thio. Cette saponification conduit à une prépondérance des composés de duplication à liaison disulfure, cette réaction d'oxydation s'effectuant majoritairement même en employant des solvants dégazés et en opérant sous atmosphère protectrice d'azote. Les composés de formule (I) à terminaison mercapto sont donc obtenus purs en effectuant une réduction in situ à l'hydrogène naissant au terme de la réaction de saponification. Selon un autre mode de réalisation, les composés de formule I dans lesquels A = NH, B = CO, Y = NS, X est un atome dthydrogène, un groupe acyle substitué par un groupe carbone ou mercapto, ou un groupe alcozycarbonyle et R1, R2 et R3 sont tels que définis ci-dessus, sont préparés par une réaction de condensation peptidique entre une diamine N-protégée de formule un monoester malonique de formule La diamine de formule (VI) est obtenue par une réac- tion de Curtius selon M. Chorev et al, [J. Amer. Chem.Soc., 99, 8075 (1977)] sur un amino-acide N-protégé selon le schéma réactionnel suivant Selon un autre mode de réalisation, les composés de formule I dans lesquels A = CH2 > B = S, Y = I, X est un atome d'hydrogène, un groupe alkyle substitué par un groupe carboxy ou mercapto, ou un groupe alcoxycarbonyle et R1, R2, et R3 sont tels que définis ci-dessus, sont préparés par une réaction de condensation entre un dérivé tosylé N-protégé d'amino-acide de formule un ester de acide thioglycolique de formule d'après la méthode de H. Gilman et al., J. Amer. Chem. Soc. 47, 1449 (1925). Les composés de formule VII sont obtenus par réduction au borohydrure de sodium (selon la méthode de H. Seki et al., Chem. Pharm. Bull. 13, 995 - VII - 1965) d'un ester N-protégé d'amino-acide de formule dans lequel R est un groupe allyle, puis transformation de l'alcool obtenu en dérivé tosylé de formule VII par action de l'acide p-toluènesulfonique. Les composés de formule VIII sont obtenus par la méthode de E. Fischer et al. Annalen. 357, 1 (1907) ou décrite dans la DOS 2 349 707 selon le schéma réactionnel suivant Selon un dernier mode de réalisation, les composés de formule I dans lesquels A = -CH2- , B = -NH- , Y = NH X est un atome d'hydrogène, un groupe alkyle substitué par un groupe carboxy ou mercapto,ou un groupe alcoxycarbonyle et R1, R2 et R3 sont tels que définis ci-dessus, sont préparas par une réaction de condensation entre un dérivé tosylé N-protégé d'amino-acide de formule VII (décrit cidessus) et un ester d'amino-acide de formule d'après la technique de V.C. Sekera et al., J. Amer. Chem. Soc. 55, 345 (1933). Les exemples ci-après sont donnés à titre d'illustration des procédés de préparation des composés selon la présente invention. EXEMPLE 1 Ester méthylique de la N(éthoxycarbonyl-méthyl)-L. phényl- alanine--L. leucine On ajoute lentement à froid et sous azote 3 ml de triéthylamine à une suspension de 10 g de trifluoroacétate de dipeptide-ester : L. Phe-L. Leu OCH3 dans 50 ml de benzène anhydre. A la fin de l'addition, la suspension devient limpide. On ajoute alors 3,34 g de bromoacétate d'éthyle et la solution est portée au reflux pendant 12 heures. Après refroidissement, on ajoute goutte à goutte, sur un bain de glace, de la soude 0,25 N, jusqu a pH = 6. La phase aqueuse est rapidement décantée, puis extraite trois fois (25 ml) à l'éther. Les phases organiques (éther et benzène) sont réunies, lavées deux fois avec 50 ml d'eau, puis séchées et évaporées à sec. On obtient 2,6 g de N-(éthoxycarbonyl-méthyl)-L. Phe.-L. Leu OCH3 sous forme d'huile jaune pâle. Rf = 0,77 dans CHCl3/MeOH/H2O/ 9/1/Sa t. EXEMPLE 2 N-(carboe:y-méthv.l) L. Phénylalanine L. leucine 2,5 g de l'ester méthylique du N-(éthoxycarbonyl méthyl)-L. Phe. L. Leu sont mis en solution dans un mélange de 20 ml de méthanol et 10 ml d'eau. On ajoute à OOC, 13 ml de NaOH 1N et on agite 1 heure à OOC, puis 2 heures à 25 C. On évapore le méthanol et additionne HCl 1N, goutte à goutte, à OOC, jusqu'à pH = 2. Le précipité est filtré et recristallisé dans le mélange éther/MeOH 50/50; on obtient 1,35 g de N(carboxyméthyl)-L. Phe-L. Leu. F = 196-2000C. Rf : (BuOH/AcOH/H2O : 4/1/1) = 0,6. EXEMPLE 3 N-(carboxyméthyl) L. phénylalanine-N (CH3) L. leucine En remplaçant l'ester méthylique de la L. leucine par l'ester méthylique de la N(CH3) L. leucine dans le procédé décrit à exemple 1, puis en traitant le produit obtenu selon l'exemple 2, on obtient successivement, l'ex- ter méthylique du N(éthoxycarbonyl-méthyl)-L. Phe-N (CH3) L. Lau, puis le N (carboxy -méthyî)-L. Phe-N (CH3) L. Leu. Lors de cette synthèse le composé de départ le TFA de L. Phe-N (CH3) L. Leu OCH est obtenu par condensation en présence de DCC et HOBt de la Boc Phe avec l'ester méthylique de la N(CH3) L. Lau, suivie de déprotection par le TFA. EXEMPTE 4 N-(carboxy-méthyl)-L. phénylalanine-D. leucine Obtenue comme dans l'exemple 1 en substituant la D, leucine à la forme L dans le composé de départ. On obtient successivement l'ester méthylique du N (éthoxycarbonyl-méthyl)-L-Phe-D. leu, puis le (carboxy méthyl)-L-Phe-D. Lau. F = 2400C. EXEMPLE 5 N-(carboxy-méthyl)-D. phénylalanine-L-leucine Obtenue comme dans l'exemple 1 en substituant la D. phénylalanine à la forme L dans le composé de départ. On obtient successivement lester méthylique de la N-(éthoxycarbonyl méthyl)-D. Phe-L. Lau, puis le N-(carboxy-méthyl) D-Phe-L-Leu. F = 2340C. EXEMPLE 6 N-(carboxy-méthyl)-D. phénylalanine-D. leucine Obtenue comme dans l'exemple 1 en remplaçant la L. leucine et la L. phénylalanine par leurs isomères D. On obtient successivement l'ester méthylique de la N-(éthoxy carbonyl-éthyl)-D-he-D. Leu, puis la N-[(carboxy) mébhyl7 D. Phe-D-Leu. F = 2270C. EXEMPLE 7 Ester méthylique du N-(éthoxycarbonyl-2 éthyl) L. Phe-L. Leu 8,80 g de Phe-Leu OCH3 (obtenu sous forme de base à partir du TFA de Phe-Leu OCH3 par action de la triéthylamine) sont mis en solution dans 200 ml de benzène anhydre sous atmosphère d'azote. On ajoute goutte à goutte à OOC, 5,8 ml de bromopropionate d'éthyle et 2,07 g de K2C03 On chauffe à 800C durant 4 heures. Après refroidissement, la phase benzénique est rapidement séparée. On ajoute alors 20 ml d'H20 et goutte à goutte HCl lN-jusqutà pH = 2. La phase benzénique est séparée, puis la phase aqueuse acide est extraite trois fois avec 50 ml d'acétate d'éthyle. Les phases organiques réunies sont séchées, puis évaporées à sec. On obtient 2,94 g d'huile jaune paille, qui est purifiée par chromatographie sur une colonne de gel de silice avec un mélange Et2O/NeOH, 9/1 comme éluant. On obtient 1,10 g de l'ester méthylique de N(éthoxycarbonyl-2 éthyl) L-Phe-L. Leu, huile incolore, Rf = 0,81, CHCl3/MeOH/H2O, 0/1/Sat. EXEMPLE 8 N-(carboxy-2 éthyl) L. Phe-L. Leu On introduit 720 mg de l'ester méthylique du N (éthoxycarbonyl-2 éthyl) L-Phe-L-Leu dans 10 ml de MeOH. On ajoute à OOC, 7,2 ml de NaOH 1N. On agite 12 heures à température ordinaire. On acidifie par HCl jusqu a pH 3 et on extrait la phase aqueuse avec trois fois 20 ml d'acétate d'éthyle. Les phases organiques séchées et évaporées donnent 510 mg de N(carboxy-2 éthyl) L-Phe-L. Leu sous forme de solide blanc. F = 161 C. Rf = 0,51. BuOH/ AcOH/HSO. EXEMPLE 9 Ester méthylique de N-(éthoxycarbonyl-méthyl) L. Phe-L. Ala. Ce composé est obtenu comme à l'exemple 1 en rempla çant le TFA de L-Phe-L-Leu OCH3 par le TFA de L. Phe-L. Ala OCH3 (5 g). On obtient 1,10 g de l'ester méthylique du N-(éthoxyc2rbonyl-méthyl) L. Phe-L. Ala sous forme d'huile. Rf = 0,71 dans CHCl3/MeOH/H2O,8/1/Sat. EXEMPLE 10 N-(carboxy-méthZl) t. Phe-L. Ala La réaction est effectuée comme à l'exemple 2 en utilisant l'ester méthylique du N- (éthoxycarbonyl-méthyl) L. Phe-L. Ala (1 g). On obtient après saponification et acidification 88 mg de N-(carboxy-méthyl) L-Phe-L. Ala. Rf = 0,37 BuOH/MeOH/H20 4/1/1. EXEMPLE 11 Ester t-butylioue de la N-(mercapto-2 éthyl) L. Phe On ajoute en ampoule 0,9 ml de thiiranne C2H4S, fraîchement distillé, à 8,7 g de L. Phe OtBu huileux obtenu sous forme de base à partir de son chlorhydrate. Le tube est scellé puis chauffé 5 heures à 1000C. Après refroidissement, le tube est ouvert et le liquide sirupeux est distillé. On obtient 3,62 g de l'ester t. butylique de la N (mercapto-2 éthyl) L. Phe. Eb0,5 = 130-134 C. EXEMPLE 12 Ester t-butylique de la N(benzoyl t h i o-2 éthyî)-t-Phe 3,62 g de l'ester t-butylique du N(mercapto-2 éthyl) L-Phe, sont mis en solution dans 15 ml de H20 additionné de 628 mg de K2C03. On ajoute lentement 1,51 ml de bromure de benzoyle dissous dans 15 ml d'éther. On agite 1 heure à température ambiante. Le solide formé est essoré, lavé à l'éther froid, puis à l'eau acide (pH 3-4). On obtient 1,6 g de l'ester t-butylique du N(benzoyl't h i o-2 éthyl)-L-Phe. F = 170-1720C. EXEMPLE 13 N-(benzoyl t h i o-2 éthyl)-L-Phe On mélange 850 mg de l'ester t-butylique de la N (benzoylt h i o -2 éthyl)-L-Phe avec 3,31 ml de TFA au bain de glace et on agite pendant 12 heures à température ordinaire. On filtre le précipité blanc et on le lave à éther jusqu'à pH 5. On obtient 620 mg de N-(benzcyl t h i o -2 éthyl) L-Phe. F = 260 C EXEMPLE 11' Ester méthylique du N-(benzoylt t h i o-2 éthyl)-L-Phe-L-Leu On ajoute 0,40 mî de triéthylamine à une solution de 620 mg de N-(benzoyl t h i o-2 éthyl)-L-Phe, tel que préparé à l'exemple 13, et de 254 mg de chlorhydrate de L-Leu OCH3 dans un mélange de 40 ml de CHCl3 et 10 ml de THF. Après 5 minutes, on ajoute 214 mg de HOBT et 288 mg de DCC. Après agitation pendant 48 heures, on filtre le DCU et après traitement on obtient 250 mg de l'ester méthylique de la N-(benzoyl t h i 0-2 éthyl)-L-Phe-L-Leu. = = 0,42 dans CHG13/Et20, 8/2. EXEMPLE 15 N-(mercapto-2 éthyl)-L-Phe-L-Leu Méthode A 250 mg de l'ester méthylique du N-(benzoyl t h i o 2 éthyl)-L-Phe-L-Leu sont dissous dans 15 ml de MeOH. On ajoute 1,1 ml de NaOH lN, on laisse agiter une nuit à 250C sous azote. On évapore le méthanol, on ajoute 10 ml H20 et on acidifie à pH 2-3. On obtient 65 mg.de cristaux blancs de N-(mercapto2 éthyl)-L-Phe-L-Leu. Rf = 0,9 dans BuOH/AcOH/H20,4/l/l Méthode B 5 g de l'ester méthylique de la L-Phe-L-Leu, sous forme de base sont mis en solution dans 50 ml de benzène anhydre dans une ampoule en verre. On ajoute 5 ml de thiiranne, C2H4S, fraîchement préparé et on scelle l'ampoule. On chaufe à l'étuve à 800C pendant 2 heures. Après refroidissement et ouverture de l'ampoule, on élimine par filtration de la solution un précipité gélatineux, puis on concentre le filtrat sous vide jusqu'à obtention d'une huile jaune qui fournit par chromatographie sur colonne d'alumine 2,2 g de l'ester méthylique du N-(mercapto-2 éthyl)-L-Phe-L-Leu. Ce dernier est saponifié sous atmosphère d'azote dans une solution de MeOH et de NaOH 1N. Après acidification et extraction à l'acétate d'éthyle, on obtient 1,19 g de N-(mercapto-2 éthyl)-L-Phe-L-Leu identique au composé obtenu par la méthode A. EXEMPLE 16 N- (mercaoto-2 éthyl ) -L-Phe-L-Aîa Obtenu comme à l'exemple 15 (méthode B) en rempla çant L-Leu par L-Ala dans l'ester méthylique de départ, on obtient en partant de 3 g d'ester méthylique 720 mg de N-(mercapto-2 éthyl)-L-Phe-L-Ala. F = 6l0C Rf = 0,80 BuOH/MeOH/H20 , 4/1/1 EXEMPLE 17 Ester méthylique de la N/tR,S)-acéty'lthio-39 benzyl-2 propionyl 7-L-leucine On ajoute successivement à une solution refroidie à 0 C de 1,4 g d'acide acétyl thio-3 benzyl-2 propionique obtenu par addition de l'acide thioacétique sur l'acide benzylacrylique obtenu selon C. Mannich et K. Ritsert, 1924, Ber 57, 1116 dans 20 ml de TTIF anhydre, une solution de 1,09 g de chlorhydrate de l'ester méthylique de la L-leucine et de 0,84 ml de triéthylamine dans 20 ml de chloroforme sec, puis une solution de 920 mg d'HOBT dans 20 ml de THF et enfin une solution de 1,22 g de DCC dans 20 ml de CHC13. On agite 4 heures à 0 C, puis 5 heures à 200C. Après filtration du DCU formé, on évapore à sec, reprend le résidu par 40 ml d'acétate d'éthyle. On lave par deux fois avec 20 ml d'eau, une fois avec 20 ml d'une solution saturée de NaCl, deux fois 20 ml d'une solution à 10 d'acide citrique,- trois fois avec 20 ml d'une solution saturée de NaHCO3, deux fois avec 20 ml d'eau, une fois avec 20 ml d'une solution saturée de NaCl et on sèche sur Na2S04 On évapore à sec. On obtient 1,9 g d'une huile jaune foncé. Rendement = 87 % ; Rf : 0,86 dans CHCl3/ MeOH/H2O = 9/1/sat. HPLC - Vr = 28,3 ml dans tampon sulfate 10-M(pH = 4,3)/ CH3CN = 55/45. EXEMPLE 18 N[(R,S)mercapto-3 benzyl-2 propionyl]L-leucine 1,5 g du composé. 17 est mis en solution dans 20 ml de méthanol dégazé. On ajoute à 0 C et sous courant d'a- zote 8,5 ml d'une solution de soude 1N. On agite 1 heure à OOC. On évapore le méthanol sous vide et reprend par 20 ml d'eau dégazée et on extrait au chloroforme. La phase aqueuse est ensuite acidifiée à pH = 1 par une solution d'HCl 2N. Il se forme un précipité blanc qui se dissout après addition de 20 ml de méthanol. On ajoute 500 mg de Zn en poudre et on agite 1 heure à 200C. On filtre le zinc et on le lave avec deux fois 5 ml de MeOH dégazé. On réunit les phases méthanol-eau et on évapore le méthanol sous vide. La phase aqueuse restante est extraite au chloroforme. Après évaporation à sec, on obtient 1 g de N(R,Smercapto-3 benzyl-2-propionyl)L-leucine sous forme d'un produit solide blanc. F = 500C ; Rdt : 79 . HPLC,Vr = 10,56 ml dans tampon acétate 10-M (pH 4,3)/ CH3CN = 60/40. Analyse élémentaire pour C16H23NO3S calculé : C ; 62,1 ; H : 7,49 ; N : 4,53; S : 10,36 trouvé : C : 61,98; H : 7,53 ; N : 4,46; S 10,51 RMN(DMSOd6). On observe des signaux séparés pour les deux diastéréoisomères. HS = 2,03 et 2,15 ppm (disparaissent par addition de D20). (HS)CH2 = 2 multiples centrés sur 2,37 et 2,56 ppm. CH-CH2 () = massif complexe centré sur 2,61 ppm. H (Leu) : 4,06 et 4,17 ppm. CH2ssLeu = 1,30 et 1,44 ppm. CH &gamma; Leu = 1,13 et 1,58 ppm. CH = 0,65 et 0,80 ppm. NH = 8,07 et 8,18 ppm. H aromatique = 7,13 ppm. LE 19 Ester méthylique de la N/tRS) acétyl thio-3 benzyl-2 propionyl] glycine. A une solution de 2,34 g d'acide acétylthio-3 benzyl2 propionique dans 20 ml de THF refroidie à OOC, sont ajoutées successivement une solution de 1,23 g de chlorhydrate de l'ester méthylique de la glycine et de 1,37 ml de triéthylamine dans 25 ml de chloroforme, une solution de 1,50 g d'HOBT dans 15 ml de THF et une solution de 2,22 g de DCC dans 10 ml de CHCl3. On agite 1 heure à 00C, 'puis 5 heures à 200C. Après filtration du-DCU formé on traite par le processus décrit pour le composé 17. On obtient 2,6 g de l'ester méthylique de la NZtR,S) acétyl thio-3 benzyl-2 propionyl] glycine sous forme d'une huile jaune pâle. Rdt = 87 ss ; Rf = 0,76 dans CHCl3/MeOH/H2O = 9/1/sat. HPLC = Vr = 9,12 ml dans tampon acétate 10-M(pH : CH3CN X 55/45. EXEMPLE 20 N-/tR,S) mercapto-3 benzyl-2 propionyl7 glycine 960 mg du composé de l'exemple 19 sont mis en solution dans 20 ml de MeOH dégazé. On ajoute à 0 C et sous atmosphère d'azote 6,6 ml d'une solution de soude 1N, et on agite 1 heure à 0 C. On évapore sous vide le méthanol, reprend le résidu par 15 ml d'eau On extrait deux fois par 5 ml de CHCl3. La phase aqueuse est acidifiée par une solution d'HCl 2N jusqu'à pH : 1. On ajoute 20 ml de MeOH dégazé, puis 300 mg de Zn en poudre et on agite 1 heure à 20 C. On filtre le zinc et on le lave avec deux fois 5 ml de Me OH. Les phases méthanol-eau sont réunies et le méthanol est évaporé sous vide. La phase aqueuse est alors extraite par trois fois 10 ml de CHC13. On évapore à sec et on obtient 500 mg de (R,S-mercapto-3 benzyl-2 propionyl) glycine sous forme d'un solide blanc. F : 13800 ; Rdt : 64 %. HPLC , Vr = 6,48 ml dans tampon acétate 10 2M (pH = CH3CN = 70/30. Analyse pour C12H15N03S % calculé : C : 56,9 ; H = 5,97 ; N : 5, 53 ; S : 12,66 % trouvé : C : 56,6 ; H : 6,01 ; N = 5,62 ; S = 12,48 RMN(DMSOd6) une seule série de signaux pour les deux énantiomères. HS = 2,20 ppm (disparaît par addition de D20). (HS)CH2 = 2,34 et 2,57 ppm. CH-CH2 multiplet centré sur 2,64 ppm. CH2(Gly) = 3,66 ppm. H aromatiques = 7,17 ppm. NH = 8,28 ppm. EXEMPLE 21 Ester méthylique de la NZtR,S) acétyl thio-3 benzyl-2 propionyl]-L alanine A une solution refroidie à 0 C de 1,600 g d'acide acétyl thio-3 benzyl-2 propionique dans 20 ml de THF anhydre on ajoute successivement une solution de 940 mg de chlorhydrate de l'ester méthylique de la L-alanine et de 1 ml de triéthylamine dans 20 ml de CHC13, une solution de 1,03 g de HOBT dans 10 ml de THF et 1,4 g de DCC dans 10 ml de CHCl3. On agite 1 heure à OOC, puis 5 heures à 200C. On traite comme dans les exemples précédents et on obtient 1,75 g d'ester méthylique de la N-/rR,S) acétyl thio-3 benzyl-2 propionyl]-L alanine sous forme d'une huile jaune. Rdt : 80 ss ; Rf = 0,77 dans CHCl3/MeOH/eau : 9/1/sat. HPLC, Vr = 10,32 dans tampon acétate 10-M(pH = CH3CN = 55/45. EXEMPLE 22 N-/tRS) mercapto-3 benzyl-2 propionyl]L alanine -1,54 g du composé de l'exemple 21 sont mis en solution dans 20 ml de méthanol dégazé, on ajoute à 0 C et sous azote 10 ml d'une solution de soude 1N. On agite 2 heures à 0 C. On évapore le méthanol sous vide et on reprend par 20 ml d'eau. On extrait deux fois la phase aqueuse alcaline par 5 ml de chloroforme. La phase aqueuse est acidifiée par HC1 2N jusqu'à pH @ 1. On ajoute alors 20 ml de MeOH dégazé et 300 mg de poudre de Zn. On agite 1 heure à 20 C. On filtre la poudre de zinc et on la lave deux fois avec du méthanol. Les phases aqueuses et méthanolique sont réunies. Le méthanol est évaporé sous vide et la phase aqueuse restante est extraite au chloroforme. On évapore à sec.On obtient l,Ô7. g de N-[(R,S) mercapto-3 benzyl-2 propionyl L alanine sous forme d'un solide blanc. F HPLC, Vr = 5,4 ml dans tampon acétate 10-M (pH = CH3CN = 65/35. Analyse pour C13H17NO3S calculé : C : 58,40 ; H : 6,41 ; N : 5,24 ; S : 11,99 trouvé : C : 58,23; H : 6,60; N : 5,31 ; S : 11,64 RMN(DMSOd6) on observe 1 jeu de signaux pour chaque diastéréoisomère. HS = 2,06 et 2,12 ppm (disparaissent par addition de D20). (HS)CH2 multiplets centrés sur 2,34 et 2,58 ppm. (HS)CH2 (#) massif complexe centré sur 2,75 ppm. NH = 8,17 et 8,27 ppm. H2Ala : 4,o8 et 4,15 ppm. CH3Ala : 1,05 et 1,20 ppm. H aromatiques : 7,17 ppm. EXEMPLE 23 Ester méthylique de la O-benzyl N-[(R,S) benzoylthio-3 benzyl-2 propionyl]L-sérine A une solution refroidie à 0 C de 500 mg d'acide benzoylthio-3 benzyl-2 propionique dans 10 ml de THF anhydre, sont ajoutées successivement une solution de 408 mg de chlorhydrate de l'ester méthylique de la 0benzyl-L-sérine et de 0,24 ml de triéthylamine dans 6 ml de CHC13, une solution de 250 mg de HOBT dans 5 mî de THF anhydre et enfin une solution de 376 mg de DCC dans 5 ml de CHCl3. On agite 1 heure à 0 C et 5 heures à 20 C. Après filtration du DCU formé, on traite comme dans les exemples précédents et on obtient 720 mg d'ester méthylique de la O-benzyl N-ZrRS)benzoylthio-3 benzyl-2 propionyl]L-sérine sous forme d'un solide blanc. Rdt : 88 ss ; F = 62-64 C ; Rf = 0,84 dans CHCl3/MeOH/eau = 9/1/sat. HPLC, Vr = 9,84 ml dans tampon acétate 10-M(pH : CH3CN = 30/70. EXEMPLE 24 O-benzyl, N-/tR,S)mercapto-3 benzyl-2 propionyl]L-sérine 660 mg du composé de l'exemple 23 sont mis en solution dans 10 ml de MeOH dégazé. On ajoute à 0 C et sous azote, 3 ml d'une solution de soude 1N. On agite 1 heure à 0 C. On évapore le méthanol sous vide et reprend par 10 ml d'eau. On extrait deux fois au chloroforme. La phase aqueuse est acidifiée par HC1 2 N jusqu'à pH : 1. On ajoute 10 ml de méthanol et 150 mg de poudre de zn. On agite 1 heure à 20 C. On filtre le zinc, on le lave, avec deux fois 5 ml de MeOH. Les phases aqueuse et méthanolique sont réunies et le méthanol est évaporé sous vide. La phase aqueuse est extraite au chloroforme o Après évaporation, on obtient 350 mg de la 0-benzyl, N-[(R,S) mercapto-3 benzyl-2 propionyl] L-sérine sous forme d'une huile jaune très pâle Rdt : 70 , HPLC, Vr : 6,96 ml dans tampon acétate 10-M(pH : CH3CN = 55/45. RMN (DMSO-d6) HS = 2,02 et 2,12 ppm (disparaissent par addition D20) (HS)CH2 = 2,33 et 2,56 ppm. CHCH2 ( = massifs centrés sur 2,70 ppm. H&alpha;Ser = 4,37 et 4,44 ppm. CH2ss Ser = 3,46 et 3,62 ppm. OCH2 = 4,32 et 4,42 ppm. H aromatiques = 7,17 ppm. NH = 8,25 et 8,33 ppm. Analyse pour C20H23NO4S % calculé : C : 64,32 ; H . 6,21 ; N: 3,75 ; S : 8,58 ss trouvé : C : 64,30 ; H : 6,31 ; N N : 3,87 ; S : 8,66 EXEMPLE 25 Ester méthylique de la N[(R,S) acétyléthio-3 p. fluoro benzyl-2 propiony17L-leucine On ajoute successivement à une solution refroidie à 0 C de 1,54 g d'acide acétyl thio-3 p.fluorobenzyl-2 propionique dans 20 ml de THF anhydre, une solution de 1,15 g de chlorhydrate de l'ester méthylique de la L-leucine et de 0,85 ml de triéthylamine dans 20 ml de chloroforme see, puis une solution de 930 mg d'HOBT dans 20 ml de THF et enfin une solution de 1,24 g de DCC dans 20 ml de CHCl3. On agite 1 heure à 0 C, puis 5 heures à 20 C. Après filtration du DCU formé et traitement comme dans l'exemple 17, on obtient 1,95 g d'huile jaune foncée. Rdt : 88 , Rf: 0,87 CHCl3/MeOH/H2O = 0/1/sat. HPLC, Vr = 30 ml dans tampon acétate 10-M(pH = CH3CN = 55/45. EXEMPLE 26 N-[(R,S) mercapto-2 p.fluorobenzyl-3 propionyl] L-leucine 1,8 g du composé 25 est mis en solution dans 20 ml de méthanol dégazé. On ajoute à 0 C et sous courant d'azote 9,8 ml d'une solution de soude 1N. On agite 1 heure à 0 C. On évapore le méthanol sous vide et on reprend par 20 ml d'eau dégazée et on extrait au chloroforme. La phase aqueuse est ensuite acidifiée à pH = 1 par une solution d'HCl 2N. Il se forme un précipité blanc qui se dissout après addition de 20 ml de méthanol. On ajoute 500 mg de Zn en poudre et on agite 1 heure à 20 C. On filtre le zinc et on le lave avec deux fois 5 ml de MeOH dégazée. Les phases méthanoliques et aqueuses sont réunies et le méthanol est évaporé sous vide. La phase aqueuse est alors extraite par trois fois 10 ml de CHCl3. On évapore à sec et on obtient 1,08 g du composé indiqué dans le titre sous forme d'un solide blanc. Rdt : 68 % ; F HPLC, Vr : 11 ml dans tampon acétate 10- @ (pH = CH3CN - 60/40. RMN(DMSO-d6). HS = 2,04 et 2,12 ppm (disparaissent par addition de D20) (HS)CH2 = 2 multiplets centrés sur 2,40 et 2,58 ppm. CHCH2 (#) massif complexe centré sur 2,63 ppm. Leu = 4,06 t 4,17 ppm. CH2 Leu = 1,31 et 1,44 ppm. CH&gamma;Leu = 1,13 et 1,58 ppm. CH3 = 0,65 et 0,81 ppm. NH = 8,08 et 8,19 ppm. H aromatiques = 2 massifs centrés sur 7,28 et 7,95 ppm. Analyse pour C16 H22 3 NF S ss calculé : C : 58,70 ; H : 6,78 ; N = 4,28 ; S : 9,78 ss trouvé : C : 58,55 ;' -H : 6,60 ; N : 4,32 ; S : 9,98 EXEMPLE 27 N[(S) benzoylthio-2 phényl-3 prbpionyl7-L-leucine On ajoute à une solution de 11,2 g d'acide R, bromo2 phényl-3 propionique dans 30 ml de THF,8,9 g de chlorhydrate de l'ester méthylique de la L-leucine dissous dans un mélange de 100 ml de CHCl3 et 6,86 ml de NEt3. A la solution obtenue on ajoute 7,5 g d'HOBT et 10,1 g de DCC. Après agitation 1 heure à OOC, puis 12 heures à 25 C, on filtre le DCU formé et traite par le processus habituel. On obtient par évaporation de l'acétate d'éthyle, 12,5 g de cristaux blancs d'ester méthylique de la N/gR)bromo- 2 phényl-3 propionyl]-L-leucine. F = 121 C. On ajoute à 0 C,30 ml de NaOH 1N à une solution de 10,5 g du composé précédent dans 100 ml de MeOH. Après agitation 1 heure à OOC, puis 4 heures à 25 C, on acidifie par HCl. Le précipité est recueilli, puis cristallisé dans l'acétate d'éthyle. On obtient 9,07 g de N/tR)bromo- 2 phényl-3 propionyl]-L-leucine. F = 1585C. 1,76 g d'acide thiobenzoSque dissous dans 40 mi d'eau, en présence de 2,17 g de K2C03 sont ajoutés à un mélange de 7,1 g de N[(R)bromo-2 phényl-3 propionyl]-L- leucine dans 30 ml d'eau et 1,74 g de bicarbonate de Na. On agite 12 heures à 25 C. On acidifie par HC1 6N, ce qui fournit une huile jaune pâle qui est extraite par de l'acétate d'éthyle. Après lavage à l'eau, on sèche la phase organique, évapore à sec. On obtient 7,9 g de N[(S)benzoylthio-2 phényl-3 propionyl]-L-leucine sous forme d'huile qui cristallise lentement. F = 74 C-78 C ; Rf = 0,80 dans BuOH/MeOH/H2O, 4/1/1. EXEMPLE 28 N[(S)mercapto-2 phényl-3 propionyl]-L-leucine 2 g de N(S,benzoylthio-2 phényl-3 propionyl)-L-leu cine en solution dans 10 ml de MeOH sont agités à 0 C pendant 1 heure avec 10 ml de NaOH 1N, puis 4 heures à 250C sous azote. On évapore le méthanol, reprend par l'eau et acidifie à pH = 1 par HC1 1N. Il se forme un précipité gommeux que llon extrait à l'acétate d'éthyle. La phase organique est séchée, évaporée sous vide. On obtient 1,45 g de N/tS)mercapto-2 phényl-3 propionyl]-L-leucine qui cristallise lentement. F = 67-710C. EXEMPLE 29 Ester méthylique de la N[(S)acétylthio-2 phényl-3 propio- nyl]-L-leucine 3 g de l'acide S, acétylthio-2 phényl-3 propionique (obtenu par action de l'acide thioacétique sur l'acide R, bromo-2 phényl-3 propionique) en solution dans 30 ml de CHCl3 sont ajoutés à une solution de 2,5 g de chlorhydrate de l'ester méthylique de la L-leucine. On ajoute 5 ml de NEt3, puis 2 g de HOBT et 2,8 g de DCC. Après agitation 1 heure à 0 C, puis 12 heures à 25 C, on filtre le DCU formé et traite par le processus habituel. On obtient 4,1 g de l'ester méthylique de la N-[(S)acéthylthio-2 phényl-3 propionyl,'-L-leucine sous forme d'huile. Rf : 0,85 sans CHCl3/MeOH/H2O, 9/1/Sat. EXEMPLE 30 Ester méthylique de la N[(S)mercapto-2 phényl-3 propionyl] L-leucine 2 g du composé de exemple 29 sont agités 12 heures dans une solution de méthanol saturée d'HCl, sous azote. On évapore à sec, reprend par l'eau et extrait à l'éther. On sèche la phase organique, évapore à sec. On obtient 750 mg de l'ester méthylique de la N[(S)mercapto-2 phényl3 propionyl]-L-leucine sous forme d'huile. Rf : 0,70 dans CHCl3/Et2O, 5/5. EXEMPLE 31 N[(S) acétylthio-2 phényl-3 propionyl]-L-leucine Ce composé est obtenu comme à l'exemple 27 en remplaçant l'acide thiobenzoique par l'acide thioacétique. On obtient une huile jaune parle qui cristallise lentement. F = 50 C ; Rdt : 84 ss ; Rf = 0,80 dans BuOH/MeOH/H20= 4/1/1. EXEMPLE 32 N[(S)mercapto-2 phényl-3 propionyl]-L-Alanine Obte-nu en suivant les méthodes successivement appliquées dans les exemples 27 et 28 en remplaçant l'ester méthylique de la L-leucine par l'ester méthylique de la Alanine. On obtient ainsi le N/tS)mercapto-2 phényl-3 propionyl]-L-Ala, cristaux blancs. F = 42 C. EXEMPLE 33 N[(S)acétylthiométhylthio-2 phényl-3 propionyl]-L-leucine On ajoute 0,42 ml d'acétylthio chlorométhane en solution dans MeOH à un mélange de 1,1 g de N[(S)mercapto- 2 phényl-3 propionyl]-L-leucine obtenue selon l'exemple 28 et de 552 mg de K2C03 dans l'eau. On agite 20 heures à température ordinaire, évapore à sec et reprend par l'acétate d'éthyle. On sèche, évapore. On obtient 252 m de N(acéthylthiométhylthio-2 phényl-3 propionyl)-L-leucine sous fore d'huile après purification par chromatographie sur colonne d'alumine dans le mélange CHCl3/MeOH, 7/3. Rf = 0,77 CHCl3/MeOH, 5/3. EXEMPLE 34 N[(S)benzoylthio éthylthio-2 phényl-3 propionyl]-L-lucine 1,33 g de N[(S)mercapto-2 phényl-3 propionyl7-Lleucine obtenue selon l'exemple 28 sont dissous dans 30 ml d'eau en présence de 685 mg de K2CO3. On ajoute à OOC, 1,32 g de benzoylthio-1 bromo-2 éthane (obtenu par action directe du-bromure de benzoyle sur le thitranne selon B. HANSEN, Acta. Chem. Scand 11, 537 (1957) en solution dans 10 ml de MeOH. On agite 48 heures à 25 C. On filtre d'un léger précipité cotonneux et on acidifie à pH=2 par HCl 6N. -On extrait trois fois avec 20 ml d'acétate d'ééthyle, sèche et évapore à sec. On obtient 1,50 g du composé attendu à l'état d'huile qui cristallise lentement. F = 62-680C. EXEMPLE 35 N[(S)mercapto éthylthio-2 phényl-3 propionyl]-L-leucine On dissout 800 mg du composé de l'exemple 34 dans 10 ml de MeOH et on ajoute sous azote 3,4 ml de NaOH 1N en 30 minutes. On laisse 4 heures à 25 C, toujours sous azote. On ajoute 20 ml d'H20, évapore MeOH, filtre et acidifie par 1101 1N jusqu'à pH = 1. On extrait avec trois fois 20 ml d'éther, sèche et évapore à sec. On obtient 544 mg d'une huile incolore. Rf = 0,92 dans BuOH/AcOH/ H20, 4/1/1, correspondant à N[(S)mercapto éthylthio-2 phényl-3 propionyl]-L-leucine. EXEMPLE 36 N[(S)mercapto éthylthio-2 phényl-3 propionyl]-L-alanine En remplaçant dans l'exemple 34 la N/tS)mercapto-2 phényl-3 propionyl]-L-leucine par la N[(S)mercapto-2 phényl-3 propionyl]-L-alanine obtenue selon l'exemple 32, on obtient la N[(S)benzoylthio éthylthio-2 phényl-3 propionyl]-L-alanine. Ce dérivé, traité comme dans l'exemple 35, fournit la N[(S)mercapto éthylthio-2 phényl-3 propionyl] L-alanine. Huile épaisse qui cristallise lentement. F = 34 C. EXEMPLE 37 Préoaration de N- Boc, N'-(éthoxycarbonyl-2 pronionyl) diamino-1,1 phényl-2 éthane a) N-t butoxycarbonyl, N-benzyloxycarbonyl diamino1,1-phényl-2 éthane 1,5 gde Boc L-Phe-azide sont portés à 800C pendant 1 heure dans 10 ml de toluène anhydre. I1 se forme un isocyanate qui n'est pas isolé. Après refroidissement de la solution, on ajoute 0,55 ml d'alcool benzylique, puis on chauffe à nouveau à 80 C pendant 1 heure. Après refroidissement, la solution laisse cristalliser 0,9 g de N-Boc, N'-Z diamino-1,1 phényl-2 éthane. F = 165 C. b) N-Boc diamino-1,1 phényl-2 éthane 0,4 g de N-Boc, N'-Z diamino-l,l phényl-2 éthane sont mis en solution dans 10 ml de méthanol en présence de 25 mg de pd/C. L'hydrogénatipn à pression ordinaire fournit après filtration et évaporation à sec 0,3 g de N-Boc dia- mino-1,1 phényl-2 éthane. Solide jaune pâle. F = 40-50C. c) Produit énoncé dans le titre 270 mg de monoester méthylique de l'acide méthyle malonique (R,S) en solution dans 10 ml de THF sont ajoutés à une solution de 436 mg de N-Boc diamino-l,l phényl-2 éthane, 283 mg HOBT et 381 mg DCC dans 10 ml CHCl3. Après 4 heures à température ambiante, on filtre le DCU formé et traite la solution dans les conditions habituelles du couplage peptidique. On obtient ainsi 544 mg de solide jaune pâle. Rf = 0,80 dans CHCl3/MeOH/H2O, 9/1/Sat, de N- Boc, N'-(éthoxycarbonyl-2 propionyl) diamino-l,l phényl-2 éthane (SR + SS). EXEMPLE 38 N-Boc, N'(carboxy-2 propionyl)diamino-1,1 phényl-2 éthane 200 mg du composé obtenu à l'exemple 37 sont mis en solution dans 10 ml de MeOH. On ajoute 1,5 ml NaOH 1N, agite 4 heures à température ambiante, évapore MeOH, reprend par H20 et acidifie à pH = 2. On extrait par l'acé- tate d'éthyle, sèche et évapore à sec. On obtient 130 mg de cristaux blancs de N-Boc, N' (carboxy-2 propionyl) diamino-1,1 phényl-2 éthane (SR + SS). F = 170-171 C. EXEMPLE 39 N-(carboxz-2 propionyl) diamino-l,l phényl-2 éthane 100 mg du composé obtenu à l'exemple 38 sont agités avec 0,4 ml de TFA pendant 1 heure à 250C. Après évaporation à sec et reprise par l'éther éthylique, on obtient 6-o mg de N-(carboxy-2 propionyl) diamino-l,l phényl-2 éthane (RR + RS). Rf = 0,35 dans BuOH/AcOH/H20, 4/1/1. EXEMPLE 40 N-carboxyméthyl, N'(c a r b o x y -2 propionyl) diamino1,1 phényl-2 éthane 300 mg du composé obtenu dans l'exemple 37 sont agités 1 heure à 0 C avec 1 ml de TFA. Après évaporation à sec et addition d'éther, le solide blanc obtenu est sé -ché sous vide, puis mis en suspension dans du benzène anhydre et chauffé à reflux 12 heures avec 0,1 ml de bromoacétate d'éthyle. Après filtration, on recueille une.huile jaune pâle de N-éthoxycarbonylméthyl, N' (éthoxycarbonyl-2 propionyl) diamino-l,l phényl-2 éthane, q u i e s t saponifié sans purification pour conduire à 52 mg de N-carboxyméthyl, N'(c a r b o x y -2 propionyl) diamino-l,l phényl-2 éthane (RR + RS). Rf = 0,42 dans BuOH/AcOH/H20 , 4/1/1. EXEMPLE 41 N-(mercapto-2 éthyl), N'(carboxy-2 propionyl) diamino1,1 phényl-2 éthane (RR + RS) Obtenu par action directe du thiiranne entube scellé sur 50 mg du composé de l'exemple 39 en suivant la méthode décrite dans l'exemple 15 (méthode B). F=180-1900C. EXEMPLE 42 Boc amino-2 phényl-3 carboxyméthylthio-1 propane On ajoute 2,3 g de l'ester p.toluène sulfonique du Boc-L phénylalaninol (obtenu par réduction de la t Boc-L Phe en alcool, puis action du chlorure de tosyle) dissous dans 50 ml de MeOH, à une solution aqueuse du sel disodique de l'acide thioglycolique. Après reflux pendant 12 heures, on filtre, acidifie la solution et extrait à l'acétate d'éthyle. On obtient 700 mg d'une huile épaisse qui est chromatographiée sur colonne d'alumine avec un mélange Et2O/MeOH, 7/3. On recueille 550 mg de Boc amino-2 phényl-3 carboxy méthylthio-l propane. F = 95 C. Rf = 0,63 dans CHCl3/MeOH 7/3. EXEMPLE 43 Trifluoroacétate de (amino-2 phényî-3 carboxvméthylthio- 1) propane 400 mg du composé décrit à l'exemple 42 sont agités 1 heure à 25 C avec 1 ml de TFA. Après évaporation à sec et reprise par l'éther, on obtient 300 mg du trifluorcacétate de (amino-2 phényl-3 carboxyméthylthio-l) propane sous forme de poudre blanche. Rf = 0,41 dans BuOH/Me.OH/H20 4/1/1. EXEMPLE 44 Carboxyméthylamino-2 phényl-3 carboxyméthylthio-1 propane 250 mg du composé décrit à l'exemple 43 sont mis en suspension dans 10 ml de benzène anhydre. On ajoute 0,15 ml de triéthylamine et 0,21 ml de bromoacétate d'é- thyle. La solution obtenue est mise au reflux pendant 10 heures. On filtre, sèche et évapore à sec. L'huile obte nue est chromatographiée sur colonne de gel de silice dans le mélange Et2O/MeOH, 8/2. On obtient 125 mg de carboxyméthyl amino-2 phényl3 carboxyméthyl-1 propane. Rf=0,57 dans CHCl3/MeOH, 8/2. EXEMPLE 45 (mercapto-2 éthylamino)-2 phényl-3 carboxyméthylthio-1 propane 150 mg du composé décrit à l'exemple 43 sont-traités comme à l'exemple 15 (méthode B) pour conduire à 42 mg de (mercapto-2 éthyl amino)-2 phényl-3 carboxyméthyl thio-1 propane. F = 201 C. EXEMPLE 46 Ester méthylique de la N-(Boc amino-2 phényl-3 propyl-1) L-leucine On ajoute 2 g de l'ester p.toluène sulfonique du Boc-L Phe-alaninol à une solution de 1,4 g de l'ester méthylique de la L-leucine (sous forme base) dans 10 ml de dioxanne. On porte au reflux pendant 10 heures. On évapore la solution à sec et reprend par de l'éther. Un précipité se forme qui est filtré, puis séché. On obtient ainsi 1,1 g de l'ester méthylique N-( Boc amîno-2 phényl-3 propyl-l) L-leucine. F = 61 C. EXEMPLE 47 N(carboxyméthylamino-2 phényle3 propyl-l) L-leucine 500 mg du composé décrit à l'exemple 46, sont agités 1 heure avec 2 ml de TFA. Après évaporation à sec, et addition d'éther, on recueille un solide blanc qui est séché sous vide. On place ce produit sans purification en suspension dans 20 ml de benzène anhydre et on ajoute 0,2 ml de triéthylamine et 0,15 ml de bromoacétate d'éthyle. Après reflux pendant 15 heures, la solution est filtrée, puis évaporée à sec. L'huile obtenue est purifiée par chromatographie sur colonne d'alumine avec un mélange Et2O/MeOH, 9/1. On obtient 120 mg de l'ester méthylique de le N(carboxyméthylamino-2 phényl-3 propyl-l)L-leucine. F = 40-500C. On dissout 100 mg de ce produit dans 20 ml de méthanol et aboute NaOH jusqu'à pH = 9. Après agitation pendant 2 heures, on acidifie par HCl (pH = 4), puis extrait à l'acétate d'éthyle et évapore à sec. On obtient 23 mg de N-(carboxyméthylamino-2 phényl-3 propy L-le-ucine. F = 147-151 C. EXEMPLE 48 N[(mercapto-2 éthylamino)-2 phényl-3 propyl-1]L-leucine Obtenu comme à l'exemple 15 (méthode B), en remplaçant l'ester méthylique de la L-Phe-L-Leu par 200 mg de l'ester méthylique de la N(amino-2 phényl-3 propyl-l) L-leucine obtenue à partir du composé de-ltexemple 46 par action du TFA. Après action du thiiranne et saponification sous azote, on obtient 32 mg de N/tmercapto-2 éthylamino)-2 phényl-3 propyl-1]L-leucine. F = 48 C. Les résultats des études biologiques et pharmaco logiques rapportées ci-après mettent en évidence les in téressantes propriétés inhibitrices de 1 'enképhalinase, antalgique et hypotensive. La présente invention a donc encore pour objet un médicament ayant notamment des propriétés inhibitrices de l'enképhalinase, antalgique et hypotensive, caractérisée en ce qu'il contient à titre de principe actif un composé de formule I ou un sel d'addition avec un acide ou une base pharmaceutiquement acceptable de ce composé. A) Etude biologique Dosage de l'activité "enképhalinasique" (enképhaline dipeptidylcarboxypeptidasique) et détermination de l'effet des inhibiteurs. La préparation enzymatique utilisée est une fraction membranaire provenant du striatum de rat ou de souris. Cette fraction est obtenue par homogénéisation à 40C dans 20 volumes de tampon Tris-HCl 0,05 M (pH 7,4) suivie de deux centrifugations successives (1000 g x min. et 200.000 g x min.) au terme desquelles le culot de la deuxième centrifugation est retenu. Il est lavé par remise en suspension dans 10 ml du tampon suivie de centrifuga- tion (203.000 g x min.) et le culot obtenu est lui-même lavé superificiellement afin de compléter l'élimination des enzymes solubles. La fraction membranaire ainsi obtenue est reprise dans le tampon à 40C de manière à obtenir une suspension comportant environ 1,5 m de protéines par ml. Une prise aliquote de 50 l de la suspension membranaire est alors incubée dans un volume final de 100 à 25 C en présence de 10 nl^:i de leucine-enképhaline (39 Ci/mmole), préalablement purifiée par chromatographie sur une colonne de Porapak Q (100-120 mesa, Waters.Assoc.) et de 0,1 mM de puromycine, in inhibiteur d'aminopeptidases. La durée des incubations est généralement fixée à 15 mn. de manière à mesurer la vitesse initiale de formation du tripeptide Tyr-Gly-Gly-3H caractéristique de l'activité enképhaline dipeptidylcarboxypeptidasique (enképhalinasique). La réaction est arrêtée par addition de 25 l d'HC1 0,2 N et le tripeptide est isolé par chromatographie sur colonne de Porapak Q ou sur une couche mince de silice suivant des méthodes décrites par Malfroy et al. (B. Malfroy, J.P. Swerts, C. Llorens et J.C. Schwartz, Neuro-Science Letters, 11, 329, 1979). Les résultats obtenus par chacune de ces deux méthodes ont toujours été en bon accord. La mesure de la radioactivité du tripeptide est effectuée par spectrométrie en scintillation liquide. L'effet des inhibiteurs est établi en pratiquant des expériences en présence de concentrations croissantes de ces produits, ce qui conduit à la détermination des concentrations inhibitrices 50 % calculées au moyen de l'analyse des données par la méthode de Parker et Waud (J. Pharmacol. exper. Ther 177, 1, 1971). Dans certains cas la nature compétitive de l'inhibition a été établie par des expériences d'incubation en présence de l1inhibi- teur en concentration fixe et du substrat en concentrations croissantes. Composés N Concentration inhibitrice 50 % 2 1,5 x 10-6 M 5 2 x 10-5 M 27 5 x 10-6 M 28 2 x 10-7 M 32 1 x 10-7 M 35 4 x 10-7 M 33 1 x 10-6 M 18 5 x 10-9 X 20 5 x 10-9 M 22 7 x 10-9 M 24 4 x 10-9 M B) Etude pharmacologique L'étude pharmacologique des produits décrits ci-dessus a permis de mettre en évidence un effet antalgique et un effet hypotenseur propre et une action potentialisatrice des effets d'une enképhaline, la D Ala2Met Enképhaline (notamment antalgique et hypotenseur). Les épreuves pharmacologiques réalisées ont été les suivantes I - Toxicité aiguë La détermination de la mortalité chez la souris est observée à la suite de l'administration unique par voie intra-veineuse de doses croissantes des composés à tester. La DL50, pour tous les composés étudiés,est supérieure à 100 mg/kg/i.v. II - Activité antalgique 1) Test de la plaque chauffante Réflexe de lèchement de la souris sur une plaque chauffée à 55 C selon la méthode de Jacob et coll. (Arch. Int. Pharmacodyn. 122, 287-300, 1959 : 133, 296-300, 1961). Potentialisation de l'effet antalgique de la D Ala2Met Enképhaline a) Par voie intra-ventriculaire (ivt) Le tableau ci-anrès montre que l'ef- fet d'une dose subactive (0,3 &gamma;) de D Ala2Met Enképhaline administrée par voie intra-ventriculaire est significa tivement potentialisée (p b) Par voe intraveineuse Par voie intraveineuse, le n 35 à la dose de 1.00 mg/kg g entraîne une augmentation de 100 ss du temps de lèchement par rapport aux animaux traités avec la D Ala2Met Enképhaline (0,3 &gamma; intra-ventriculaire). TABLEAU I Plaque chaude Potentialisation de l'effet antalgique de la D Ala2Met Enképhaline et antagonisme par la Naloxone Dose Augmentation du temps Produit &gamma; Nbre de lèchement ss par souris de rapport aux @@@@@@ ivt souris DAla2Met enképha line (1) (1) 10 6 274 * +DAla2Met Enképhaline n 29 (1) 10 6 207 X (1) +DAla2Met Enképhaline n 28 10 6 400 * (1) +DAla2Get Enképhaline n 35 (1) 10 10 240 * +DAla2Met Enképhaline n 35 (1) 10 10 18 +DAla2Mt Enképhaline +Naloxone (10mg/kg ss. cut.) -(1) la dose de D Ala2Met Enképhaline est de 0,3 t souris, dose inactive par elle-meme, # P 2) Test chez la souris du retrait de la queue trempée dans l'eau chauffée à 48 C selon la méthode de Sewell et Spencer (Neuropharmacology - 1976 - 15, p. 683-688). Le tableau II montre que les composés 18 et 20 administrés par voie intraveineuse à la dose de 100 mg/kg - présentent un effet antalgique propre, - potentialisent très significativement la D Ala2fiet Enképhaline administrée 15 minutes après par voie intra-ventriculaire, à des doses subactives variant de 10 à 30 ""'/souris. Cet effet est durable et supérieur à 2 heures; il est également observé à la dose de 30 mg/kg pour le n0 20 TABLEAU II Queue de la souris Effet antalgique propre Potentialisation de l'effet antalgique de la D Ala2Met Enképhaline Nbre Pourcentage d'augmentation Produits et dose Voie de du temps de réaction souris 20mn 45mn 60mn 90mn 120mn N 18 - 100 mg/kg i.v. 6 38 80* 120* 61* 90 N 20 - 100 mg/kg i.v. 6 59 196** 150* 88* 85 N 18 - 100 mg/kg + D Ala2Met Enképhaline (30&gamma;ivt) i.v. 6 0 280* 166* 87* 174* N 20 - 100 mg/kg + D Ala2Met Enképhaline (20&gamma;ivt) i.v. 6 239** 528*** 321*** 382*** 322* N 20 - 30 mg/kg + D Ala2Met Enképhaline (15&gamma;ivt) i.v. 6 247** 353*** 283*** 210* 203* * c) Activité hypotensive - propre - potentialisatrice de l'enképhaline, (LAUBIE M., SCHMITT H., VINCENT M., REMON D. Central cardiovascular effects of Morphinometic peptids in dogs. European Journal of Pharmac-ology, Vol. 46, 67-71, 19771. Par la voie intraveineuse, les composés 18 et 24 ont entraîné une diminution de la pression artérielle dès la dose de 0,3 mg/kg. Les résultats de ces études mettent en évidence la faible toxicité et les intéressantes propriétés inhibitrice de l'enképhalinase, antalgique et hypotensive des dérivés de l'invention qui les rendent utiles en médecine humaine et vétérinaire. Le médicament de l'invention est administrable à l'homme par voie orale, parentérale ou rectale. Chaque dose unitaire contient avantageusement de 0,5 à 100 rng de principe actif, les doses administrables journellement pouvant varier de 0,5 à 200 mg de principe actif. REVENDICATIONS 1. Dérivés d'amino-acides répondant à la formule générale suivante dans laquelle R1 est un atome d'hydrogène; un groupe alkyle éventuellement mono- ou polysubstitué par un atome d'ha- logène; un groupe phényle éventuellement mono--ou polysubstitué par un radical choisi parmi un atome d'halogène, un radical trifluorométhyle ou hydroxy; un groupe cyclo hexyle ou un groupe phényle; n est O ou 1; R2 est un atome d'hydrogène, un groupe alkyle en C1 à C6 linaire ou ramifié; un groupe phényle; un groupe benzoyle éventuellement mono- ou polysubstitué par un atome d'halogène; un groupe hydroxyalkyle; un groupe alcoxyalkyle éventuellement substitué sur la fraction alcoxy par un radical choisi parni un radical phényle, benzhydryle ou pyridyle N-substitué par un groupe phénylalkyle dont le noyau phényle est éventuellement substitué par un ou plusieurs atomes d'halogène; un groupe phénoxyalkyle; un groupe mercaptoalkyle éventuellement substitué sur le soufre par un radical choisi parmi un radical al- kyle simple ou ramifié, phényle ou benzyle; R3 est un atome d'hydrogène; un groupe alkyle linéaire ou ramifié en C1-C8; un groupe phényle ou phényl alkyle dont la fraction alkyle est en C1 à C8, ces deux derniers radicaux étant éventuellement mono- ou polysubstitués sur le noyau phényle par un atome d'halogène; Y est un groupe -S-;NH- ou -CH2- ; et X est un atome d'hydrogène; un groupe alkyle en C1 ou C2 substitué par un radical choisi parmi un ra dical alcoxycarbonyle, un radical carboxy, un radical mer capto, un radical alkylthio éventuellement mono- ou polysubstitué par un atome d'halogène, un radical benzylthio éventuellement mono- ou polysubstitué par un groupe choisi parmi un atome d'halogène et un groupe mono- ou polyhalo- alkyle en C1 à Cq, un radical benzhydrylthio éventuellement mono- ou polysubstitué par un atome d'halogène, un radical acyle aliphatique (C1-C4) thio éventuellement monoou polysubstitué par un atome d'halogène, un radical benzoylthio éventuellement mono: ou polysubstitué par un groupe choisi parmi un atome d'halogène et un groupe monoou polyhaloalkyle en C1 à C4, ou un radical benzhydryl carbonylthio éventuellement mono- ou polysubstitué par un atome d'halogène; un groupe acyle-aliphatique en C1 à C ou benzoyle; un groupe alcoxy-carbonyle; un groupe mercapto; un groupe acyle aliphatique (C1-4) thio ou benzoylthio; et leurs sels d'addition avec des acides ou des bases pharmaceutiquement acceptables. 2. Dérivés selon la revendication 1a caractérisés en ce que R1 est un atome d'hydrogène; un groupe phé n::le éventuellement mono- ou polysubstitué par un atome d'halogène; n est 0 ou 1; R2 est un atome d'hydrogène; un groupe alkyle en C1 à C6 linéaire ou ramifié; un groupe benzyle; un groupe benzyloxyalkyle; R3 est un atome d'hydrogène; un groupe alkyle linéaire ou ramifié en C1 à C8; Y est un groupe -S-; -NH- ou -CH2- ; et X est un atome d'hydrogène; un groupe alkyle en C1 ou C2 substitué par un groupe alcoxycarbonyle, carboxy, mercapto, acyle aliphatique (C1-4) thio, ou benzoylthio; un groupe acyle aliphatique en C1 a C4 ou benzoyle; un groupe alcoxy (C1-4) carbonyle; un groupe mercapto; un groupe acyle aliphatique (C1-4) thio ou benzoylthio. 3 Procédé de préparation de dérivés de formule 1a dans lesquels, Y = H, X est un atome d'hy hydrogène, un groupa alkyle substitué par un groupe carboxy ou mercapto, ou un groupe alcoxycarbonyle et R1, R2 sont tels que définis à la revendication 1, caracté en ce quton réalise une réaction de condensation peptidisque entre une diamine N-protégée de formule un moncester malonique de formule 4, ' Médicament ayant notamment des activités inhibitrice de l'enképhalinase antalgique et hypotensive, caractérisé en ce qu'il contint à titre de principe actif un composé selon l'une quelconque des revendications 1 et 2. 5. Médicament selon la revendication 4, . caractérisé en ce qu'il est présenté sous une forme appropriée pour l'administration orale, parentérale ou rectale, le principe action étant associé à un véhicule thérapeutique convenable. 6. Médicament selon l'une quelconque des revendications 4 et 5, caractérisé en ce qu'il est présenté sous forme de doses unitaires contenant de 0,5 à 100 mg de principe actif.