Brevet FR2547728A1 — publié le 19841228

La présente invention concerne l'acide D thiazolidine carboxylique en tant que nouveau médicament. Depuis de nombreuses années, en thérapeutique humaine ou vétérinaire, on utilise l'acide L thiazolidine carboxylique comme agent cytoprotecteur, principalement en hépatologie et en dermatologie. L'acide L thiazolidine carboxylique est obtenu à partir d'un produit naturel, à savoir la L cystéine ou à partir du chlorhydrate de L cystéine par réaction avec du formaldéhyde. Récemment, on a pu obtenir, par synthèse, l'isomère optique de la L cystéine (ou de son chlorhydrate). Cet isomère optique est la D cystéine (ou son chlorhydrate). Selon le même procédé chimique, on peut obtenir l'acide D thiazolidine carboxyligue-4 à partir de la D cystéine suivant le schéma 10) B 20) HCHO (D) cystéine Acide D thiazolidine carboxyl ique-4 On différencie les acides D et L par leurs pouvoirs rotatoires suivants Fonte D 25 (eau) = + 1440,37 D 25 &alpha;D25 (HCl,N)= + 98 ,5 Forme L 25 (eau) =-141 D 25 (HCl,N) =-100 D Cette différenciation permet de déceler ces deux produites. La forme D nla jamais été, à la connaissance de la Demanderesse, utilisée dans le domaine pharmaceutique, seule la forme L étant utilisée r comme indiqué précédemment, en tant qu'agent cytoprotecteur principalement en hépatologie et en dermatologie. Or, il se trouve que la Demanderesse a trouvé, de facon tout à fait inattendue, comme cela ressortira de la description qui va suivre, que la forme D de l'acide thiazolidine carboxylique-4 possédait des propriétés particulières que ne présente justement pas la forme L de cet acide, ce qui tendrait à expliquer la raison pour laquelle ladite forme D n'était pas préconisée dans le domaine pharmaceutique où la forme L s'avérait inopérante. Les essais pharmacologiques ont en effet montré les résultats suivants - Au niveau de la toxicité aiguë Les DL50 sur la souris femelle If fa Crédo de 25 g sont DL50 DL50 Voie orale Voie veineuse Forme L 210 mg/kg 210 mg/kg Forme D 6 000 mg/kg 750 mg/kg - En ce qui concerne l'activité analgésique a) Test du pincement de la gueue de la souris (test de Haffner) Le seuil de la douleur est déterminé par le temps qui s'écoule entre la pose d'unepince (clamp) sur la base de la queue de la souris et le moment où la souris le mord pour essayer de l'enlever. Les animaux naïfs sont testés au préalable afin d'éliminer ceux qui ont une sensibilité trop faible ou trop forte et répartis ensuite en lots homogènes qui reçoivent : - soit l'acide thiazolidine carboxylique L (60 mg/kg per os) - soit la forme D (60 mg/kg et 600 mg/kg per os) Les animaux sont testés 30,60, 90 minutes après le traitement. L'analyse statistique des résultats est réalisée par le "t" de Student par rapport aux valéurs obtenues sur ces mêmes animaux avant traitement. Les résultats font apparaître une activité significative de la forme D à 600 mg/kg à 30 minutes. Le dérivé L n'a aucun moment d'activité sur ce test. b) Test de Roster : crampes provoguées chez la souris par iniection IP d'acide acétigue d 1g25 % L'extérioration de la douleur se traduit par des étirements et des contorsions. Ceux-ci sont observés et comptés parallèlement pour une souris traitée et une souris témoin par intervalle de 5 minutes de la 5e à la 20e minute après injection de l'agent algogène. Le traitement est administré per os - forme L : 60 mg par kg - forme D : 60 et 600 mg par kg. L'étude statistique des résultats est réalisée par le test de t de Student par rapport au témoin. Les résultats font apparaître une activité significative sur ce test - de la forme D (60 mg par kg). La forme L n'a pas dtactivité significative. - En ce qui concerne l'activité anti-inflammatoire L'activité anti-inflammatoire est étudiée chez le rat par le test de l'oedème plantaire à la carragénine. Les animaux reçoivent par injection dans le coussinet plantaire de la patte arrière, 0,05 ml d'une solution à 1 % de carragénine. L'évolution du volume de la patte est suivie par pléthysmographie,1, 2, 4 et 24 heures après injection de carragénine. Les animaux. traités reçoivent au préalable per os les traitements suivants - forme L : 60 mg par kg. - forme D : 60 et 600 mg par kg. L'étude statistique est réalisée par le "t" de Student par rapport à la patte non traitée. Les résultats font apparaître une activité significative de la forme D à 600 mg/kg. La forme L n'a pas d'activité significative sur ce test. - En ce qui concerne un effet dépresseur : test du sommeil au chloral chez la souris Les animaux reçoivent par voie IP, 350 mg par kg d'hydrate de chloral. Le temps d'endormissement ainsi que la durée du sommeil sont enregistrés pour chaque animal. Les animaux reçoivent au préalable per os, les traitements suivants - pour la forme L : 60 mg par kg - pour la forme D : 6.0 mg par kg et 600 mg par kg. L'interprétation des résultats est faite par le "t" de Student. Seul le lot traité à 600 mg par kg a une augmentation significative du temps de sommeil. - En ce qui concerne un effet anti-cholinergiue : test à la Trémorine chez la souris L'injection IP de 20 mg par kg de Trémorine provoque chez les animaux tremblements, sudation, signe de Straub. Les animaux traités au préalable par l'acide thiazolidine carboxylique reçoivent pour - la forme L : 60 mg par kg - la forme D 60 mg par kg et 600 mg par kg La forme D provoque une -diminution du signe de Straub alors que la forme L l'augmente. La forme D provoque une diminution des tremblements et de la sudation. La forme L n'a pas effet apparent sur ces paramètres. En ce qui concerne l'activité psychotrope : test de la planche à trous (Boissier) Les souris naives sont placées individuel lement sur une planche à trous. L'animal explore le fond des trous et la surface de la planche. Le nombre d'explora- tions des trous mesure la curiosité et ses déplacements sur la planche, la motricité. Les animaux sont traités à l'acide thiazo lidine carboxylique - 60 mg par kg pour la forme L - 60 et 600 mg par kg pour la forme D. L'interprétation statistique se fait par le "t" de Student par rapport au lot témoin. La forme L diminue la curiosité de façon significative ainsi que la motricité, mais de façon moins significative. La forme D à 600 mg par kg augmente au contraire la curiosité et la motricité et l'action est statistiquement différente du lot 60 mg par kg forme L. La forme D à 60 mu par kg donne des scores très voisins de ceux du lot témoin. - En ce qui concerne la protection contre la déshydratation provoquée par administration massive de saccharose chez la souris et entraînant la mort : perméabilité cellulaire. L'administration per os à des souris de 40 g par kg de saccharose provoque une mortalité des animaux voisine de 100 %. Le traitement préalable des animaux à l'acide thiazolidine carboxylique a été réalisé à à 25 mg par kg pour la forme L - à 25 et 250 mg par kg pour la forme D Les mortalités s'établissement comme suit - lot témoin : 80 % - forme L,traités 25 mg par kg 70 % - forme D, traités 25 mg par kg : 50 % - forme D, traités 250 mg par kg : 0 %. Seule la forme D protège de façon significative contre la déshydratation mortelle provoquée par l'administration massive de saccharose à la souris. Ces résultats sont résumés au tableau ciaprès, dans lequel NS signifie sinon significatif" et S signifie l'significatifX'. FORME L FORME D Toxicite souris I.C. 25 G per os 210 mg/kg 6 000 mg/kg i.v. 210 mg/kg 750 mg/kg Analgésie Test de Haffner 0 + Test de Koster 0 + Activité anti- NS à 60 mg/kg inflammatoire Signif. à Oedème à la 0 600 mg/kg carragénine à 3 temps Activité dépressive 0 0 à 60 mg/kg Sommeil au Chloral /5 à 600 mg/kg + Activité anti cholinergique Trémorine - Signe de Straub Augmentation Diminution à 60 et 600 mg/kg - Sudation 0 ,. - Tremblements O Activité p sychotrope Planche à trous 0 à 60 mg/kg - curiosité dépresseur à 600 mg/kg - motricité dépresseur 0 à 60 mg/kg # à 600 mg/kg Protection cellulaire contre la déshydrata- 0 + tion (saccharose) De ce qui précède, il ressort que la forme D de l'acide thiazolidine carboxylique est différente de la forme L 1) Au niveau toxicologique : La forme L a une DL50 chez la souris Iffa Crédo femelle de 25 g de 210 mg par kg par voie orale et par voie veineuse. La forme D a une DL50 de 750 mg par kg par voie veineuse et de 6 000 mg par kg par voie orale.- 2) Au niveau pharmacologique : La forme D a des activités pharmacologiques différentes de la forme L comme viennent de le montrer les tests expérimentaux qui précèdent. L'acide D thiazolidine carboxylique possède bien une toxicité et une activité pharmacologique originale. Le tableau ci-dessus met en évidence l'inactivité de la forme L comme analgésique, comme anti inflammatoire, comme dépressif, comme anti-cholinergique, comme agent psychotrope et comme agent de protection contre la déshydratation, alors que la forme D présente une activité certaine dans ces domaines, chose qui n'était pas évidente. Cette forme D peut donc être utilisée en tant que médicament analgésique, anti-inflammatoire, anti cholinergique, agent favorisant lSaugmentation de l'activité dépressive et de l'activité psychique et motriee. Par ailleurs, au niveau de la eellule, on peut déduire des résultats obtenus que la diminution de la perméabilité cellulaire pourra empêcher ou freiner la fuite des éléments vitaux (enzymes, eau, sels minéraux, etc), l'entrée d'éléments externes ou étrangers, la transmission d'informations de stimuli externes à la cellule provenant soit de cellules voisines ou d'un organe, soit étrangers. Cette forme D peut donc être utilisée en tant que médicament analgésique anti-inflammatoire et comme agent provoquant une augmentation de l'activité anti cholinergique ainsi qu'une augmentation de l'activité dépressive, de l'activité psychique et motrice. De plus, elle peut être utilisée comme la forme L, en tant qu'agent cytoprotecteur. Ce médicament peut être administré sous une forme liquide (solution ou suspension) buvable ou injectable ou sous une forme solide à l'état de poudres, comprimés, gélules, suppositoires, sous forme de gel ou de pâte à l'état de crème ou d'onguent. Le mode de préparation de ces formes est à la portée de l'homme de l'art, en faisant appel à tous excipients couramment utilisés pour les obtenir. Suivant les affections à traiter, la posologie sera laissée à l'appréciation du médecin traitant, posologie qui pourra varier de 5 à 40 mg/kg et par jour. Le principe actif, à savoir l'acide D thiazolidine carboxylique, peut être obtenu facilement comme rappelé précédemment, à partir du chlorhydrate de D cystéine ou à partir de la D cystéine base elle-meme. Les deux exemples suivants sont donnés à titre illustratif d'une telle synthèse I - On fait réagir en solution aqueuse, à la température ambiante, le chlorhydrate de D cystéine avec une base minérale de manière à libérer in situ la base cystéine libre et par addition de formaldéhyde, il se forme en milieu aqueux, l'acide D thiazolidine carboxylique que l'on précipite par addition d'alcool éthylique et l'on sépare le précipité par centrifugation, on lave à l'alcool et sèche à l'étuve à 100 C. On recueille le produit obtenu que l'on fait cristalliser. P.F. : 210-2160C (avec décomposition) II - Si l'on part de la D cystéine base, le procédé est identique, à l'exception qu'il n'est pas nécessaire d'ajouter la base minérale. Il va du reste de soi que la présente invention n'a été décrite qutà titre purement explicatif et nullement limitatif et que toute modification utile pourra y être apportée sans sortir de son cadre. REVENDICATIONS 1. A titre de médicament nouveau, l'acide D thiazolidine carboxylique-4. 2. Application du médicament selon la revendication 1, en tant qu'agent cytoprotecteur, agent anti-inflammatoire, analgésique, agent. favorisant l'activité anti-cholinergique, l'activité dépressive, l'activité psychique et motrice, et agent de contrôle des échanges cellulaires.