Brevet FR2537971A1 — publié le 19840622

La présente invention a pour objet de nou- veaux dérivés peptidiques, leur procédé de préparation et leur utilisation pharmaceutique. De façon plus précise, elle concerne des dé- rivés peptidiques de la pentagastrine utilisables no- tamment comme antagonistes vis-à-vis de la gastrine et des 'polypeptides appa entés". On rappelle que la gastrine est une hormone naturelle connu A en particulier pour être responsable de la sécrétion du suc gastrique Son mode d'action sur les organes de IL'appareil digestif est lié, comme celui de la plupart des hormones, à la présence dans ces or- ganes de cellules-cibles dont les membranes plasmiques comportent des récepteurs biologiques spécifiques, susceptibles de fixer les molécules d'hormones et d'en- gendrer sous l'action de ces dernières une cascade de réactions biochimiques aboutissant à la production d'un produit particulier tel que l'acide chlorhydrique On définit, par ailleurs, sous le terme de "polypeptides apparentés", une famille de polypeptides présentant à leur extrémité C-terminale la séquence des quatre acides aminés: L-tryptophanyl-L-méthionyl-L- aspartyl-L-phénylalanine amide, caractéristique de l'activité biologique de la gastrine; ces polypeptides sont de ce fait susceptibles également d'engendrer des réactions biochimiques en se fixant sur des récepteurs spécifiques. On sait qu'une hypersécrétion hormonale peut entraîner certains troubles pathologiques connus, par exemple pour la gastrine, au cours du syndrome de Zollinger-Ellison et suspectés dans de nombreuses au- tres affections. Aussi, depuis quelques années, les recher- ches ont porté sur la préparation de composés capables d'inhiber la sécrétion gastrique Dans ce but, on a 25379 '1 proposé des polypeptides jouant le rôle d'antagonistes vis-à-vis de la pentagastrine, tels que les composés de formule A-W-X-Asp-Y-NHR dans laquelle A est l'hydrogè- ne, un groupe alcanoyle ayant de 2 à 6 atomes de carbo- ne, un groupe succinyle, t-butoxy-carbonyle, benzyl- oxycarbonyle, Dpyroglutamyle ou L-pyroglutamyle; W est le radical tryptophanyle ou Dtryptophanyle; X est le radical mthionylet D:-m;éthionyle n Qrleucyle o Ci D-norleucyle; Y est un radical de formule: p O EN CEH - dans laquelle R' est un radical alkyle en C 1 à C 6 ou un radical alkyle cyclo-alkyle en C 6 à C 7, ou de formule: CE 3 a -NE C C CE 3 et R est l'hydrogène ou un radical alkyle en C 1 à C 6. Dans ces polypeptides, par exemple le N-t-bu- toxycarbonyl-L-tryptophanyl-L-méthionyt-L-aspartyl-D- alanine amide, le remplacement du radical L-phénylala- nyle de la séquence des quatre acides aminés de la gastrine par le radical: CH NE CH -CO- permet d'obtenir cet effet inhibiteur ricain nc 4 012 367 de Robert H Mazur). On a également utilisé comme inhibiteur de la sécrétion gastrique, des polypeptides comportant la sé- quence des quatre acides aminés de la gastrine, mais dont le résidu tryptophanyle a été substitué par le radical orthonitrophénylthio, comme cela est décrit dans le brevet français NI 2 364 659 déposé le 21/9/76 25379; 1 au nom du Commissariat à l'Energie Atomique et de l'INSERM Ainsi, jusqu'à présent, on a pu obtenir cet effet inhibiteur de la sécrétion gastrique, soit en mo- difiant la séquence caractéristique des quatre acides aminés de la gastrine, soit en substituant le résidu tryptophanyle de cette séquence. A la suite d'autres recherches, on a mainte- nant trouvé que l'on pouvait obtenir également un effet inhibiteur en modifiant le résidu aspartyle de la sé- quence des quatre acides aminés de la gastrineo La présente invention a précisément- pour objet de nouveaux dérivés peptidiques comportant sensi- blement la séquelde des quatre acides aminés de la gas- trine et présentant un effet inhibiteur de la sécrétion gastrique, grace à la modification du résidu aspartyle. Le dérivé peptidique de l'invention répond à la formule suivante: g O A Trp B NH CH C -N CH Y (CH 2)m CH 2 X dans laquelle A représente l'hydrogène, un radical dé- rivé d'un acide aminé, un groupement de formule DE o D. représente le radical N-t-butyloxycarbonyle (BOC), tert-amyl-oxycarbonyle (t AOC), Nbenzyloxycarbonyle, N-benzoyle, N-acétyle, N-pivaloyle, N-carbamoyle ou Nsuccinyle, et E représente une simple liaison ou un radical dérivé d'un acide aminé non substitué ou subs- titué par 503 H ou d'un peptide formé de 2 à 5 acides aminés non substitué ou substitué par 503 H, B repré- sente le radical L-méthionyle, D-méthionyle, L-norleu- cyle, D-norleucyle, L-leucyle, D-leucyle, L-norvalyle ou D-norvalyle; Y représente H, CH 20 H, COOR 1 avec R 25379 i 1 représentant l'hydrogène ou un radical alkyle en C 1 à C 4 ou CO-NHR 2 avec R 2 représentant l'hydrogène, un ra- dical alkyle en C 1 à C 4 ou NE 2; m est un nombre allant de O à 6; et Xreprésente un radical de formule: R 3 - N (CH 2)n Z (CH 2)p Q o N est ua: nombze; allant d I a 8, p est unr nombre. allant de O à 3, R 3 représente H ou CH 3, Z représente une simple liaison ou S, et Q représente un radical choisi parmi les-radicaux de formule:: - _R 4- r'l 1-i- N H avec R 4 représentant H ou un radical alkyle en C 1 à C 4, R 5 À NSX avec R 5 représentant H, un radical alkyle en C 1 à C 4 ou CH 3 N' R 6- CH 3 avec R 6 représentant un radical alkylène en C 1 à C 3; et TT RN avec R 7 représentant H, un radical alkyle en C 1 à C 4, CH 3 N R 6 - CH 3 avec R 6 ayant la signification donnée ci-dessusou N = C N 2 N 2 Selon -1 linvention, dans le groupement DE, les radicaux dérivés d'acides aminés susceptibles d'être utilisés, sont les radicaux D ou L pyroglutamyle, L ou D alanyle, 0-alanyle, glycyle, L ou D-prolyle, L ou Dvalyle, L ou D-phénylalanyle, L ou D-homocystéyle, L ou D-aspartyle, L ou D-glutamyle, L ou D-histidyle, L ou D-méthionyle, L ou D-thréonyle, L ou D-séryle, L ou D-cystéyle, L ou D-leucyle, L ou D-isoleucyle, L ou Darginyle, L ou D-tryptophanyle, L ou D-tyrosyle, L ou D-lysyle et L ou D-ornithyle. A titre d'exemple de radicaux dérivés d'un peptide formé à partir de 2 à 5 acides aminés, suscep- tibles d'être utilisés, on peut citer: L ou D-gluta-. myl-L ou D-glutamyl-L ou D-alanyl-L ou b-tyrosylglycy- le, L ou D-alanyl-L ou D-phénylalanyl-L ou D-isoleucyl- glycyle, L ou D-alanyl-L ou D-tyrosylglycyle, L ou D-lysylglycyle, L ou D-tyrosyl-0-alanyle, L ou D-tyro- syl-L ou D-méthionylglycyle, L ou D-tyrosyl-L ou D-thréonylglycyle, L ou D-tyrosyl ( O sulfate)-L ou D- méthionylglycyle, et L ou D-tyrosyl ( O sulfate)-L ou D-thréonylglycyle. A titre d'exemple, A peut représenter les ra- dicaux suivants: pyroglutamyle, N-acétyie, N-benzoy- le, N-t-butyloxycarbonyle, glycyle, N-benzoylglycyle, 253797 i 1 N-benzyloxycarbonylglycyle, 5-alanyle, N-acétyl- 0-alanyle, N-t-butyloxycarbonyl-13-alanyle, N-benzoyl- 0-alanyle, N-benzyloxycarbonyl-0-alanyle, N-pivaloyl- e-alanyle, N-t-butyloxycarbonyl-L ou D-alanyle, N-ben- zyloxycarbonyl-L ou D-prolyle N-t-butyloxycarbonyl-L ou D hau Dcystêrhy 1 e, N-bqn;Zl oxycr Loyl-L /ou D-valyle, Ni-benzyloxycarbonyl-L ou Dphénylalanyle, N-acétyl-y-aminobutyryle, N-c Lbanzyloxycarbonyl-L ou Dlysy Ie, N-Cienzy 1 oxycarbonyl 1-L ou D-lys 31 e-, N-ct-benzyloxycarboanyl-L ou D-lysylglycyle, N-t'=butylo- xycarbonyl-L ou Dr-alanyl L ou D tyrosyglgywcyle, N-ben- zyloxycarhonylr-L oix D,-glutamnyl-L o -D-glut Eamy'l-L ou. D-alanyl-L ou D-tyrosylglycyle -et N-t-butyloxycarbony- 1-L ou D-alanyl-L ou D-phénylalanyl-L ou D-isoleucyl- glycyle. A titre d'exemple, X peut être en particulier l'histamine ou un dérivé de celle-ci répondant à la formule: N=CH NU -CH 2 -CE 2 C\ R dans laquelle R 4 représente l'hydrogène ou CH,. X peut aussi représenter l'un des radicaux suivants CH 2-CH 2 -CH 2 -CH 2 NH- CE 3 c 3 N -CH 2 FLCH 2 S CH 2 -CH 2 NH -,et CH 3 \ / ' CE S CECH 2CN 2 NH X// N C H 2 N NBH 2 De préférence, selon l'invention, B repré- sente le radical L-méthionyle et X représente un radical dérivé d'histamine tel que le radical de formu- le /N_ NH -CH 2 -CH 2 C _ I 2 NH La présence d'un tel substituant permet en particulier de conférer au dérivé peptidique un effet antagoniste non seulement vis-à-vis de la gastrine et des polypeptides apparentés, mais aussi vis-à-vis de l'histamine dans ses effets au niveau du tractus diges- tif. Aussi, selon un mode de réalisation préféré, le dérivé peptidique de l'invention répond à la formule suivante: 8 2537971 Boc 1 Ala Trp Met NH CH CO Phe NH 2 CH 2 C = I (II) CH 2 C. La présente invention a également pour objet un procédé de préparation du dérivé peptidique défini ci-dessus - Ce procédé consiste à faire réagir, en pré- sence d'un catalyseur, un composé de formule: A Trp-B NH CH C NH CH -Y (CH> 2) CH 2 (III) COQE dans laquelle A, B, Y et m ont les significations don- nées ci-dessus avec un composé de formule H-X(IV) dans laquelle X a la signification donnée ci-dessus, ou l'un de ses sels tels que le chlorhydrate, l'acétate ou le trifluoroacétate. Les catalyseurs utilisés ont pour fonction de prévenir la cyclisation du résidu sur lequel sera ac- croché le groupement X On utilise par exemple le 1-hy- droxybenzotriazole ou le N-hydroxysuccinimide Pour. cette réaction, on dissout généralement le composé de formule (III) et le composé de formule (IV) dans un solvant et on ajoute également au milieu réactionnel un agent couplant pour permettre la condensation du carbo- xyle du composé III avec le composé IV. Les 'solvants susceptibles d'être utilisés sont les solvants classiques utilisés en synthèse pep- tidique tels que le diméthylformamide (DMF), le dimé- thylsulfoxyde (DMSO), l'acétate d'éthyle, l'eau et leurs mélanges En milieu aqueux, on s'assure que le p H reste entre 5 et 7 Si nécessaire, on ajuste le p H par addition d'une base organique telle que la triméthyla- mine ou la N-mé thylmorpholine,. Les agents couplants susceptibles d'être utilisés sont ceux utilisés habituellement en synthèse peptidique, par exemple le dicyclohexylcarbodiimide ou le l-cyclohexyl-3 ( 2-morpholinoisoéthyl) c:arbodiimide (CMC) De préférence, pendant la réaction, on maintient le p H du milieu réactionnel à 6 Ceci peut être réalisé par addition d'une base organique telle que la triéthy- lamine. Les composés de formule (III) et (IV) utili- sés comme produitsde départ pour préparer les peptides de l'invention peuvent être préparés par des procédés classiques Le composé de formule (III) peut par exem- ple être synthétisé par la méthode de J M Davey, A.H Laird et Yo S Morley (J Chem Soc C, 555, 1966). La présente invention a également pour objet une composition pharmaceutique caractérisée en ce qu'elle comprend comme ingrédient actif un peptide ré- pondant à la formule: O A Trp B NH CH C NE CH Y (CH 2)m CH 2 1 1 " A Cx X dans laquelle A, B, X, Y et m ont les significations données ci-dessus. Les dérivés peptidiques de l'invention peu- vent être utilisés comme agent de diagnostic ou comme vent être utilisés comme agent de diagnostic ou comme agent thérapeutique En particulier, ils sont actifs pour influer sur la sécrétion gastrique et pancréati- que, la tonicité et la motilité gastriques et intesti- nales. Les peptides de l'invention peuvent égale- ment exercer un effet: sur le transport ou la sécrétion d'eau et d'électro- lyltes sur les aganes: suivan ts: paneréa & foie:, in,- teatin grêle et glandes de Brunner; sur la sécrétion enzymatique (estomac, pancreas, in- testin grele); sur l'absorption du glucose, des électrolytes et de l'eau au niveau de l'intestin grêle; sur la musculature lisse, par exemple, sur les orga- nes stimulés par la gastrine tels que le sphincter oesophagien inférieur, l'estomac, l'intestin grêle, le colon et la vésicule, ou sur les organes inhibés par la gastrine tels que le sphincter pylorique, le sphincter iléo-caecal et le sphincter d'Oddi; sur la circulation sanguine d'organes digestifs comme l'estomac, l'intestin grêle et le pancréas, et sur l'action trophique de la gaitrine vis-à-vis d'u- certain nombre de muqueuses ou d'organes tels que la muqueuse gastrique, la muqueuse de l'intestin grêle et le pancréas - Les dérivés peptidiques de l'invention peu- vent ainsi être utilisés comme agent thérapeutique pour- le traitement d'états pathologiques tels que le syndro- me de Zollinger Ellison, l'ulcère gastro-duodénal dans ses formes typiques et atypiques et l'hypersécrétion gastrique des résections intestinales. Les compositions pharmaceutiques peuvent comprendre en plus du dérivé peptidique de l'invention un ou plusieurs diluants ou excipients acceptables du point de vue pharmaceutique et non toxiques On peut 11 h 2537971 aussi ajouter à la composition pharmaceutique d'autres principes actifs On peut obtenir les compositions pharmaceutiques en faisant appel à des procédés classi- ques et à des excipients classiques Comme composition appropriée, on peut citer par exemple les comprimés en- robés ou non enrobés, des capsules, des solutions ou suspensions aqueuses, des émulsions, des solutions ou suspensions injectables aqueuses ou non aqueuses, des poudres aptes à la dispersion et des compositions de dép 8 ts Les solutions aqueuses peuvent aussi contenir du diméthylsulfoxyde et/ou du ch'orure de sodium. Les compositions préférées sont des solu- tions ou suspensions isotoniques aqueuses injectables et stériles Généralement, pour obtenir les effets re- cherchés, on administre la composition pharmaceutique de façon que la dose totale de dérivé peptidique actif, administrée en une seule fois ou en plusieurs fois soit de 1 à 200 nmol/kg/j. D'autres caractéristiques et avantages de l'invention apparaîtront mieux à la lecture des exem- ples suivants donnés bien entendu à titre illustratif et non limitatif, en référence au dessin annexé, sur lequel: la figure 1 est un diagramme illustrant la cinétique de la réaction de formation du dérivé penta- gastriné-histamine, la courbe I représentant la quanti- té (en % molaire) de pentagastrine en fonction du temps (en h), la courbe II représentant la quantité (en % molaire) de pentagastrine-histamine formée en fonction du temps (en h) et la courbe III illustrant la quantité (en % molaire) de pentagastrine aminosuccinylée (Asc-PG) formée en fonction du temps (en h); la figure 2 représente le spectre d'absorp- tion de la pentagastrine-histamine; la figure 3 illustre les spectres de di- chroisme circulaire de la pentagastrine-histamine, de la pentagastrine et de la pentagastrine aminosucciny- lée, dans le trifluoroéthanol; la figure 4 illustre la réponse sécrétoire en acide chlorhydrique en fonction du temps et des pro- duits injectés (pentagastrine et pentagastrine-hista- mine), lors d'essais effectués s ur des rats; les figuares 5, 6 T sont des courbes illus-. trant l'inhibition des plateaux de sécrétion stimulée par la pentagastrine par injection de pentagastrine- histamine-à différentes doses, et la figure 8 est une courbe d'inhibition du plateau de sécrétion stimulée par l'histamine au moyen de pentagastrine-histamine ou de'cimétidine. EXEMPLE 1: Préparation de pentagastrine-histamine (PG-Hist) a) Préparation de la pentagaatrine: Boa O Ala - Trp Met Asp Phe NH 2 On synthétise tout d'abord le -tripeptide hydrazi- de (BOC-O Ala-Trp-Met-N 2 H 2) puis on dissout 780 mg ( 1,5 mmol) de ce tripeptide hydrazide dans 7 ml de diméthyl formamide (DMF) et on ajoute à la solution 1,5 mmol de Na NO 2 et 3 mmol de H Cl à -250 C pour transformer le tripeptide hydrazide en azide Après 15 min d'agitation à -25 C, on neu- tralise la solution en ajoutant 6 mmol de N-mé- thylmorpholine, puis on ajoute au milieu réac- tionnel 1,5 mmol de dipeptide amide H-Asp-Phe-NH 2 dissous dans 6 ml de DMF et 1 ml d'eau Après 16 h d'agitation à + 4 C, on précipi- te la pentagastrine formée par addition de 200 ml d'une solution H Cl 0, 01 N à O C Après filtration et séchage, on purifie le produit par tritura- tions dans l'acétate d'éthyle, puis on recristal- 25379 '1 lise le produit insoluble dans un mélange de 2-éthoxy-éthanol-eau ( 1/10 en volume) On ob- tient ainsi 770 mg ( 1 mmol) de pentagastrine (PG) dont les caractéristiques analytiques sont iden- tiques à celles de la pentagastrine commerciali- sée par Imperial Chemical Industry. b) Préparation du dériv 4 pefttagas-trine-histam/ne b) % (PG-Hist' db fbrmule (IY On dissout 50 mg ( 65,1 imol) de la pentagastri- ne obtenue précédemment dans 0,3 ml de diméthyl- form amide (j E 4)et on y ajoute 11,8 mg ( 6 t 4,1 umol 1 eq PG) _d'histamine commercialisée par la Société Sigma et 10 1 l d'une solution aqueuse contenant 18 li Ci d'histamine 14 C(U) obtenue par décarboxylation de 14 C(U)-histidine, fraîchement purifiée (RAS= 260 m Ci/mmol) en tant que traceur. On ajoute ensuite au mélange 12,7 mg ( 94 itmol, 1,45 équivalent de PG) de l-hydroxybenzotriazole dans 100 1 i DMF en tant que catalyseur de la réaction, et 23,5 mg ( 114 pmol; 1,75 équivalent PG) de dicyclohexylcarbodiimide comme agent cou- plant On refroidit la solution à 00 C sous agita- tion magnétique On ajuste ensuite le p H du mé- lange réactionnel à 6 par addition de triéthyla- mine On laisse la réaction se poursuivre pendant une heure à 00 C, puis à la température ambiante. On suit le degré d'avancement de la réaction ana- lytiquement à 280 nm par chromatographie sur cou- che mince (CCC) et par chromatographie liquide à * haute performance (HPLC) La cinétique de forma- tion de PG-Hist et de Asc-PG est donnée sur la figure 1 dont les courbes I, II et III illustrent les variations de la concentration (en % molaire) de chaque composé: pentagastrine (PG-courbe I), pentagastrine-histamine (PG-Hist/courbe II) et pentagastrine aminosuccinylée (Asc-PG/courbe III) en fonction du temps. La réaction est terminée après 40 h environ On filtre alors la dicyclohexylurée formée au cours de la réaction (solide blanc) sur un filtre Mil- lipore LS ( 5 i Lm) et on purifie la pentagastrine- histamine sur une colonne de silice 60 d'une lon- gueur db 2: em eet d'ucr d;iii tr d 2,3 es rean lisant l'élution par un gradient de solvant cons- titué par un mélange d'ac étated'éthyl (Eto AC). et de BAN (n-butanol/aci : acétique/eau avec un, rapport en volume 75/10/22) dont la concentration varie de 100 Eto AC /0 BAW à O Eto AC/100 BAW à un débit de 4 ml/min, ce qui permet d'éluer succes- sivement le l-hydroxybenzotriazole en excès, la pentagastrine aminosuccinylée (Asc-PG) formée, la pentagastrine (PG) qui n'a pas réagi, puis le dérivé PG-Hist 14 C (à environ 60 % de-BAW) On analyse chaque pic d'élution par HPLC, comptage de la radioactivité 14 C et spectrométrie d'ab- sorption ' La pentagastrine-histamine (PG-Hist) ainsi ob- tenue n'étant pas parfaitement pure, on réalise une deuxième purification sur une colonne conte- nant du gel LH 20 (Séphadex) et ayantune longueur de 40 cm et un diamètre de 2,5 cm en utilisant comme éluant le mélange acide acétique/métha- nol/eau ( 1/1/1 en volume) à un débit de 0,5 ml/min La fraction correspondant à la penta- gastrine-histamine (PG-Hist) est éluée avec ml de solvant et liophilisée On obtient ainsi 35,6 mg ( 41,4 imol) de pentagastrine-his- tamine, soit un rendement global après purifica- tion de 63 % de la pentagastrine de départ. 25379 - 1 On vérifie la pureté du produit par HPLC, chromatographie sur couche mince, radioenregis- trement et spectrographie Pour la chromatogra- phie analytique HPLC, on utilise du Partisi J. 10-ODS-2 avec différents solvants et différents programmes d'élution. Le tableau 1 ci-degsous-t-illustre les résultats. obtenus par chrommtoraphie Lë 1 iqwides RPLC etrutlsn un débit de 1,2 'ml/min et les programmes d'élution P 14, P 15 et 2 16 du tableau 2 ci-=dessous Les pro:- du te sont détectés pak absor ption opti-que'-a 28 q O' nm sauf pour l'histamine o la détection s'effectue a 215 nm. TABLEAU 1 T Tern -de rétention Produit P 14 2 Pl16 PG 17,03 15,70 15,85 Histamine 2,86 l-hydroxybenzotrizàle6,76 5,40 -2,90 PG-histamfine 14,70 14,01 20,7 a BOC-T tp-Leu-Asp (HI St Q Phe-NH 2 _ ____ 14,50 _________ TABLEAU IE Prog ramm me P 14 d'élution Program me P 15 Program me P 16 _____________________d'éluition d'élution O min 100 %A O%B O min 100 %A O %B0 min 100 %C O%D 3 min " N 3 min " 3 min le fi 23 min O %A 100 %B 19 min 0 % 100 %B 23 min O %C 100 %D Dans le tableau 2, les réf érences A, B, C et D désignent les solvants suivants: 16 25379 rî 1 A Acétonitrile/tampon phosphate-triéthylamine 0,1 M, p H 3,5, 20/80 (v/y), B 80/20 (v/y), C Acétonitrile/acétate d'ammoniumn 0,0 l N, p H 4,7,, 20/80 (v/v), D 80/20 (v/y) Sur le tableau 3 ci-dessous, on a reporté les résultats obtenus par chromatographie sur couche mince, réa*lisée sur plaque-s S'iêO-F 25 '4 pour les prudbifts pen;ta- gastrine (PG) histamine (Hist), pentagastrine-histami- ne (PG-Hist) et -le dér ivé e e S (H S) h - NH 2. TABLEAUMJ -Sur ce tableau 3 les réf érences E, F et G dési gnent les solvants suivants: E mélange de 20 % d'acétate d'éthyle E F G Pentagastxine 0,83 0,84 0,31 UVE,?MD Histamine O O O NTMD,R PG-Histamine 0,30 0,431 0,42 UVE,TMD BOC-Tip-Leu-Asp: (Hist)-Phe-NH 2 0,45 TM Pour cette chromatographie, la révélation des plaques a été effectuée selon des méthodes classiques: par ninhydrine (N), par le réactif d'Ehrlich (E) ( 4-diméthylaminobenzaldéhyde), par le réactif TMD ( 4-4 '-tétraméthyldiaminodiphé- nylméthane) et/ou - par la radioactivité: R Sur la figure 2, on a représenté le spectre d'absorption de la pentagastrine-histamine. Sur la figure * 31 on a représenté les spectres de dichro Isme circulaire de la pentagastrine, de la pentagastrine-histamine et de la pentagastrine amino- succinylée, en solution dans le trifluoroéthanol. Dans le cas de la pentagastrine-histamine, l'intensité supérieure des signaux dichroiques dans la région aromatique suggère une rigidité plus importante du tryptophane Dans l'ultraviolet lointain, l'ampli- tude de la bande positive centrée vers 193 nm (contri- bution des transitions n-n des liaisons peptidiques et de la phénylalanine) est légèrement supérieure dans le. cas de la pentagastrine-histamine, alors que vers -220 nm l'ellipticité de ce composé est plus faible. Toutefois, l'allure générale des deux spectres (PG, PG-Hist) est peu différente, ce qui montre une similitude de conformation globale des deux peptides. EXEMPLE 2 Dans cet exemple, on vérifie l'activité biolo- gique du dérivé pentagastrine-histamine obtenu dans l'exemple 1 sur la sécrétion d'acide chlorhydrique, en utilisant le modèle du rat anesthésié à estomac perfusé selon la technique de Ghosh et Schild modifiée par Lai (Bri J Pharmac 13, 54-61 ( 1958) et Gut 5, 327-333 ( 1964). Dans ces essais, on utilise des rats mâles de type Wistar pesant 300 + 25 g On prive les rats de nourriture solide pendant 18 h mais on leur laisse la possibilité de boire de l'eau à volonté, puis on les anesthésie à l'uréthane ( 1,25 g/kg) par voie intramus- culaire On maintient la température des rats à 34 C au moyen de lampes disposées à 60 cm environ On introduit un cathéter de polyéthylène dans l'oesophage jusqu'au niveau du cardia et un deuxième cathèter pour recueil- lir la sécrétion de l'estomac au niveau du duodénum. Apres lavage de l'estmac, ors D srúâe celui-ca en con- tinu par une solution de chlorure de sodium à 0,9 %, à un débit de 1 ml/min au moyen d 9 une pompe péristatique connectée au catheter de loczszphage, Après une période de stabilisation du système d'environ 1 h 30 min après leintervention, on injecte (ou on perfuse) les composés que l'on veut étudier par voie intraveineuse dans la veine du pénis et on collec- te la sécrétion gastrique par fractions prélevées tou- tes les 20 min, l'intervalle entre ces injections étant au minimum de 90 min On dose l'acidité des fractions prélevées au moyen d'une solution de soude 0,01 N au virage de la phénolphtaline. A) Première série d'expériences: absence d'effet agoniste. On injecte aux rats différentes doses de penta- gastrine-histamine et on compare les résultats obtenus à ceux qu e l'on obtient lorsqu'on injecte la même quan- tité de pentagastrine. La figure 4 illustre les résultats obtenus Sur cette figure, on a porté en abscisse les doses (en nmol/kg) de pentagastrine (PG) ou de pentagastrine-his- tamine (PG-Hist) injectées et on a porté en ordonnée la quantité d'-acide dosée dans les fractions recueillies, exprimée en imol H /40 min Sur cette figure, la courbe I se rapporte à la pentagastrine-histamine (PG- Hist) et la courbe II à la pentagastrine (PG) Comme on peut le voir sur cette figure, la pentagastrine-histamine ne stimule pas de sécrétion d'acide chlorhydrique même à la dose de 62,4 nmol/kg, alors que l'activité de la pentagastrine est maximale dès 20 nmol/kg. Ainsi, le dérivé pentagastrine-histamine n'a aucun effet agoniste De plus, on peut en conclure que la liaison amide entre la pentagastrine et l'histamine n'est pas coupée in vivo car on observerait alors l'ac- t-ivité agx>n-isîte de, lapen;taggetri -né lïbêr 6 e. B) -Deuxième série d'expériences: propriété antago- niste du dérivé pentagastrine-histamine vis -à- vis de la-pentagastrine. Dans ces expériences, on administre aux rats répartis par groupes, une perfusion intraveineuse d'une solution isotonique contenant de la pentagastrine pour stimuler la sécrétion d'acide chlorhydrique Lorsque la sécrétion stimulée devient stable, c'est-à-dire après environ 90 min de perfusion, on administre une dose de pentagastrine-histamine tout en maintenant la perfu- sion de pentagastrine. Les résultats obtenus sont donnés sur les figu- res 5, 6 et 7 Sur ces figures, on a représenté diffé- rentes courbes d'inhibition du plateau de sécrétion stimulée par perfusion de pentagastrine à des doses de 0,16, 1,3-et 5,2 nmol/kg/h Sur ces figures, on a porté en abscisse le temps et en ordonnée le pourcentage d'inhibition du plateau de sécrétion. Les différentes courbes de la figure 5 (PG à 0,16 nmol/kg:h) se rapportent à l'inhibition obtenue avec une dose de 0,16 nmol/kg de pentagastrine-histami- ne (courbe 1), avec une dose de 0,64 nmol/kg de penta- gastrine-histamine (courbe 2), avec une dose de 1,3 nmol/kg de pentagastrine-histamine (courbe 3) et avec une dose de 5,2 nmole/kg de PG-Hist (courbe 4). Sur la figure 6, on a représenté les résultats obtenus lorsque le plateau de sécrétion est obtenu à 25379 1 une dose de 1,3 nmol/kg/h de pentagastrine La courbe 1 se rapporte à l'inhibition obtenue par une dose de pen- tagastrine-histamine de 1,3 nmol/kg et la courbe 2 se rapporte à l'inhibition obtenue pour une dose de 5,2 nmol/kg/h de pentagastrinehistamine. La figure 7 illustre les résultats obtenus lorsque la perfusion contient 5,2 nmol/kg de pentagas- trine Sur cette: figure la courbe 1 se rapporta à i'in- hibition obtenue à la dose de 5,2 nmol/kg de PG-Hist et la courbe 2 se rapporte à l'inhibition obtenue pour une dose de 20,8 nmol/kg de pentagas trine-histazine. Dans le tableau 4 joint on a reporte les moyennes (±ESM) des pourcentages d'inhibition maxima- les obtenues sur un groupe de N rats. Le maximum d'inhibition { 35 à 45 %) est atteint lorsque la dose de PGhist est quatre fois supérieure à celle de la pentagastrineo Si l'on augmente encore la dose de PG-Hist, la durée-de l'inhibition est alors prolongée, et elle d 4 passe 3 h pour les doses de PG-Hist de 5,2 nmol/kg et de pentagastrine à 0,16 nmol/kg/h. Lorsqu'on administre la pentagastrine-histami- ne et la pentagastrine dans un rapport 1/1, l'inhibi- tion maximale du plateau de sécrétion varie de 15 à 25 % et cette inhibition-dure environ 1 h 20 min Lorsque les deux composés sont dans un rapport PG-Hist/PG= 4, l'inhibition maximale du plateau de sécrétion atteint à 45 % et la durée de l'inhibition est alors d'envi- ron 2 heures. C) Troisième série d'expériences; propriété anta- goniste de la pentagastrine-histamine vis-à-vis de l'histamine. Dans ce cas, on utilise le même mode opératoire que dans la deuxième série d'expériences en stimulant la sécrétion par l'histamine Dans ce cas, on injecte une dose d'histamine supérieure ( 13,5 nmol/kg/h). Après apparition du plateau de sécrétion, on injecte de la pentagastrinehistamine à raison de 150 nmol/kg ou à titre de comparaison 150 nmol/kg de cimétidine. La cimétidine qui répond à la formule: NCN C 83 i Cu -CHS- CE Sroee; -Cû -NH Ec 38 N est un composé connu pour son activité antagoniste vis- à-vis de l'histamine. La figure 8 illustre les résultats obtenus Sur cette figure, la courbe 1 se rapporte à l'inhibition obtenue avec la cimétidine et la courbe 2 à l'inhibi- tion obtenue avec la pentagastrine-histamine. On observe que l'injection d'une même dose de cimétidine ou de pentagastrine-histamine entraîne une inhibition très voisine de la réponse à l'histamine tant en intensité (environ 55 % d'inhibition) qu'en durée ( 3 h environ). Dans ces expériences, la moyenne (+ ESM) des pourcentages d'inhibition maximale obtenue est de 56,5 + 7,2 % sur un groupe de 4 rats pour la pentagas- trine-histamine ( 150 nmol/kg) et de 54,4 + 2,7 % sur un groupe de 4 rats pour la cimétidine à la même dose de nmoles/kg. TABLEAU IV Moyennes des pourcentages d'inhibition maximale obtenue sur des groupes de n rats par injection de Pentagastrine-Histamine sur différents plateaux de secrétion de Pentagastrine. Doses de PG-Histam ne injectées Doses de Pentagastçine (nmqp O s/kg/h) en plateaux de secrétion nmoles/kg 0,16 1,3 5,2 0,16 25,2 + 2,3 % n-= 6 0,64 3 S&O + 1,7 % n 6 1,3 33,6 7, 6 % J* 5 e? + 6,3 j,2 32,3 + 7,8 % 46,0 9 g Q 14,1 + 1,2 % n=ln N 6 ,8 I 35,2 + 3,0 % "J " 1 j -'I NO 25379; 1 REVENDICATIONS 1 Dérivé peptidique, caractérisé en ce qu'il ré- pond à la formule suivante: A Trp B -NH CH C NH CH Y (CE 2) CH 2 C 12 dans laquelle: A représente l'hydrogène, un radical dérivé d'un aci- de aminé, un groupement de-formule DE o D représente le radical N-t-butyloxy-carbonyle (BOC), tert-amy- loxycarbonyle (t AOC}, N-benzyloxycarbonyle, N-ben- zoyle, N-acétyle, N-pivaloyle, N-carbamoyle -ou N-succinyle et E représente une simple liaison ou un radical dérivé d'un acide aminé non substitué ou substitué par 503 H ou d'un peptide formé de 2 à 5 acides aminés non substitué ou substitué par SO 3 H; B représente le radical Lméthionyle, D-méthionyle, L-norleucyle, D-norleucyle, L-leucyle, D-leucyle, L- norvalyle ou D-norvalyle; 1 1 Y représente H, CH 2 OH, COOR avec R représentant % 2 l'hydrogène ou un radical alkyle en C 1 a C 4 ou CONHR avec R 2 représentant l'hydrogène, un radical alkyle en C 1 à C 4 ou NH 2; m est un nombre allant de O à 6; et X représente un radical de formule: R 3 N (CH 2)n Z (CH 2)p Q o N est un nombre allant de 1 à 8, p est un nombre allant de O à 3, R 3 représente H ou CH 3, Z représente une simple liaison ou S, et Q représente un radical choisi parmi les radicaux de formule: rn R 4 N NH avec R représentant H ou un radical alkyle en C 1 à- C 4, 5 0 N R 5;, R 5 5 avec R 5 représentant H; un radical alkyle en C 1 à C 4 ou CH 3 6 N R C C 3 ' avec R 6 représentant un radical alkylène en C 1 à C 3; et -25 T-1 N S R 7 avec R 7 représentant H, un radical alkyle en C 1 à C 4, CH N R 6 CH 3 CH 3 avec R 6 ayant la signification donnée ci-dessusou /NH 2 -N = C NH 2 2 Dérivé peptidique selon la revendication 1, caractérisé en ce que B représente le radical L-méthio- nyle. 3 Dérivé peptidique selon l'une-' quelconque des revendications 1 et 2, caractérisé en ce que X repré- sente le radical N =C -NH-CH 2-CH 2-C I 22 C _-NS zz C NH dans laquelle R 4 représente l'hydrogène ou CH 3. 4 Dérivé peptidique selon l'une quelconque des revendications 1 et 2, caractérisé en ce que X repré- sente: //l' CH 2 -CH 2 -CH 2 -CH 2 -NH - Dérivé peptidique selon l'une quelconque'des revendications 1 et 2, caractérisé en ce que X repré- sente: CH 3 t CH 2 S-CH 2 -CH 2 NH - N N H 6 Dérivé peptidique selon l'une quelconque des revendications 1 et 2, caractérisé en ce que X repré- sente: N C S CH CH 2CH 2NH - HC H 2 O c H 2 CH 3 7 Dérivé peptidique selon l'une quelconque des revendications 1 et 2, caractérisé en ce que X repré- sente: IjOH 2 S CH 2 CH 2 NH - N c C H 2 N NH 2 8 Dérivé peptidique de la pentagastrine selon la revendication 1, caractérisé en ce qu'il répond à la formule%: BOC-D Ala-Trp-Met-NH-CH-COPhe-NH 2 CH 2 C=O I NH II 1 CH 2 - A F Hl 9 Procédé de préparation d'un dérivé peptidique selon l'une quelconque des revendications 1 à 8, carac- térisé en ce que l'on fait réagir, en pr 6 sence d'un catalyseur, un composé de formule: A-Trp-B-NH-CH -C NE CH Y I l (H 2) m Cj 2 (III) COOH dans laquelle A, B, Y et m ont les significations don- 27 25379 1 nées dans la revendication 1 avec un composé de formu- le: (HX) IV dans laquelle X a la même signification que dans la revendication 1, ou l'un des sels du composé HX. - Procédé selon la revendication 9,,caracté- risé en ce que le catalyseur est le l-hydroxybenzotria- zole ou le N-hydroxysuccinimide. 11 Composition pharmaceutique, caractérisée en ce qu'elle comprend comme ingrédient actif un dérivé peptidique selon l'une quelconque des revendications 1 à 8. 12 Composition-selon la revenedication 11, ca- ractérisé en ce que le dérivé peptidique répond à la formule: BOC-3 AlaTrp-Met-NH-CH-CO-Phe-NH 2 -CH 2 C 1 C=O t NH CH HH 2 HN N