Brevet FR2533570A1 — publié le 19840330

i Dans un domaine en pleine expansion comme la chimie organométallique moléculaire, les axes d'applications essentiels se sont jusqu'à présent cantonnés à des synthèses organiques stoechiométriques et catalytiques. La présente invention propose un nouveau domaine d'application pour ces dérivés de la chimie organo- métallique moléculaire, il s'agit en particulier de la détection et du dosage des récepteurs hormonaux. L'évènement primaire qui initie l'action de la majorité des hormones peptidiques et stéroldes et des médicaments consiste dans leur association avec une protéine spécifique, appelée "récepteur", localisée sur la membrane cellulaire (cas des hormones peptidiques) ou dans le cytoplasme (pour les hormones stéroides). Dans la mesure o les récepteurs interviennent dans l'action de la substance biochimique ou du médicament, on s'attend à ce que des changements dans la concentration du récepteur reflètent l'état de la maladie. De nombreux systèmes illustrent la justesse d'un tel concept (J P Raynaud, T Ojasoo, M M Bouton et D Philibert, "Drug Design" vol VIII, Acad Press. ( 1979) p 170-214). Par exemple dans le cas des tumeurs humaines du sein, un cas particulier des cancers hormono-dépendants il y a relativement peu de récepteurs oestrogéniques dans le tissu mammaire sain mais la quantité en devient importante dans environ la moitié des cancers primaires du sein Un taux de 73 % de rémission a été obtenu pour des patients dont la tumeur contient de hautes concentrations de récepteurs oestrogéniques tandis qu'un taux de 2 % seulement de rémission a été observé en leur absence (W L Mc Guire, "Hormones and Cancer" vol 14, Raven Press, ( 1980) p 337-343). Jusqu'ici, essentiellement pour des raisons de sensibilité, les méthodes de dosage des récepteurs sont basées sur des techniques radio-isotopiques en dépit de leurs désavantages bien connus (coûts élevés, limi- tations légales, risques pour la santé, variété limitée des isotopes utilisables, difficultés de marquage, instabilités chimique et biochimique>. La présente invention se propose de remplacer les techniques des marquages radio-isotopiques des oestrogènes par un marquage à l'aide de complexes de métaux carbonyle, en utilisant une propriété unique des complexes de métaux carbonyle, à savoir l'existence d'une bande I R v CO dans la région 1900-2000 cm, en fait luste dans la "fenêtre" laissée libre dans les protéines. Pour ce faire, la présente invention propose de nouveaux composés utiles notamment pour la détection et le dosage des récepteurs hormonaux qui sont constitués par des complexes d'oestrogènes comportant un oestrogène ou un dérivé d'oestrogène complexé par un composé organo- métallique possédant aa moins un ligand carbonyle libre, ledit complexe d'oestrogène comportant au moins un radical hydroxy libre et aucun radical hydroxy phénoli- que libre en a du site de fixation du composé organo- métallique. Dans la définition des composés précédents, il faut remarquer: que l'existence d'un radical hydroxy libre est indispensable afin que le complexe obtenu présente un taux de reconnaissance raisonnable du récepteur spécifique; que l'absence de radical hydroxy phénolique en a, c'est-à-dire sur le carbone adjacent, du carbone o se trouve placé le composé organométallique est imposée pour des raisons de stabilité et, enfin que la présence d'un ligand carbonyle libre sur le composé organométallique est indispensable puisque c'est précisément cette fonction qui permettra de détecter le complexe. Parmi les oestrogènes et les dérivés d'oestrogènes utilisables dans le cadre de la présente invention, il convient de citer notamment l'oestradiol, l'oestrone, la 16 a-hydroxy-oestrone, l'oestriol, l'éthynyloestradiol qui sont des stéroides hormonaux, ainsi que des oestrogènes non stéroidienst en particulier les dérivés du diphényléthane et du stillbène, tels que le diéthyl- stillboestrol et l'hexoestrol Comme cela a été indiqué précédemment, il est possible d'utiliser des dérivés d'oestrogènes, en particulier il est possible, si cela est nécessaire, de protéger certaines des fonctions hydroxy afin d'améliorer la stabilité des composés, par exemple par éthérification à l'aide de dérivés de type silane par exemple ou par des groupements alkoxy en C 1 à C 7. Il est également possible, afin d'augmenter la stabilité des composés, de remplacer une fonction hydroxy fixée directement sur le squelette stéroldique par une chaîne hydroxylée, en particulier une chaîne hydroxyalcoxy, de préférence en C 1 à C 7. Lorsque des dérivés d'oestrogènes stéroldiques sont mis en oeuvre, on utilisera, de préférence, des éthers en position 3 ou 17 et/ou des dérivés hydroxy- alcoxy en position 3. Dans la limite de la définition générale, il est possible d'utiliser, dans les composés selon l'invention, un composé organométallique d'un type quelconque, en particulier des composés organométalliques de métaux des groupes V Ia, VI Ia ou VIII de la Classification Périodique, notamment le chrome, le molybdène, le tungstène, le manganèse, le cobalt ou le nickel, le technétium, le rhénium. Les ligands de ces composés organométalliques peuvent être très variés, notamment CO, CS, C Se, CNR 1, P(R 2,R 3,R 4), cyclopentadiényle, R 1 étant notamment un radical alkyle ou -COR 5 et R 2, R 3, R 4 et R 5 étant notamment des radicaux phényle ou phénoxy substitué ou non, alkyle ou alcoxy en C 1 à C 7 substitué ou non ou bien un atome d'halogène, R 5 pouvant être -N{CH 2 CH 2 Cl)2. Parmi ces composés organométalliques, il faut citer plus particulièrement les greffons de formule: M (CO) (L') (L") dans laquelle M est un métal du groupe V Ia et L' et L", indépendamment, sont des ligands mentionnés précédemment, par exemple Cr(CO)3, Cr(CO)2 CS, Cr(CO)2 C Se, Cr(CO)2 CNCO 0, Cr(CO)2 P 03, Cr(CO)2 P( 00)3, Cr(CO)2 PF 3, Mo(CO)3, W(CO)3. Ces composés organométalliques sont plus particulièrement destinés à être fixés sur un cycle aromatique du composé oestrogène. Il est également possible de fixer sur les oestrogènes ou les dérivés d'oestrogènes, en particu- lier lorsque celui-ci comporte une triple liaison, des greffons de formule: (M' M") (L) dans laquelle M' et M" représentent, indépendamment, un métal du groupe V Ia, VI Ia ou VIII, en particulier le manganèse, le cobalt, le nickel, le molybdène, et L représente les ligands qui peuvent être choisis comme indiqué précédemment pour L' et L", par exemple Co 2 (CO)6, Co(CO)3 Ni Cp, Co(CO)3 Mo(CO)2 Cp, Mn(CO)4 Ni Cp (Cp: cyclopentadiényle). Parmi les composés précédents, ceux de formule: xH dans laquelle R est un radical protecteur ou un groupement hydroxy-alcoxy et X est un composé organo- métallique, ce sont révélés particulièrement intéres- sants, notamment lorsque R est un radical silyloxy ou un radical HO(CH 2) n-, N étant compris entre 1 et 7; Les composés selon la présente invention peuvent être préparés par des procédés connus, notamment par action sur le composé oestrogène, ou le dérivé de composé oestrogène, du dérivé organométallique correspondant. Bien entendu, lorsque cela sera nécessaire, certaines des fonctions du composé oestrogène pourront être protégées, notamment par silylation, là encore grâce à des procédés connus. La présente invention concerne également l'application de ces composés au dosage des récepteurs hormonaux par des techniques de spectrographies infrarouge ou Raman notamment. Dans ce type de procédé de détection et de dosage, on met en présence les composés selon la présente invention et les échantillons porteurs de récepteurs spécifiques et on détecte par spectrographie infrarouge ou raman la présence des composés selon la présente invention fixés sur les récepteurs hormonaux par leur bande de fréquence au voisinage de 1860 à 2000 cm Comme cela sera démontré dans les exemples ci-après, ce procédé permet de détecter des quantités très faibles de composés, sans faire appel à des produits radioactifs dont les inconvénients sont bien connus Par ailleurs, le procédé de dosage ainsi mis au point entre parfaitement dans la gamme des sensibilités requises pour les applications actuelles, à savoir notamment la détection des cancers primaires du sein. Ce procédé présente, en outre, l'avantage de ne nécessiter qu'un temps de mesure très bref (environ 1 heure). Les exemples ci-après sont destinés à illustrer la présente invention - Les solvants sont désignés par éther = E; éther de pétrole = Ep Les spectres de RMN ont été relevés sur l'appareil VARIAN EM 360. EXEMPLE 1 a) Synthèse du -oestradiol mono-silyle Dans un ballon purgé d'azote, on met en suspension 1,2 g ( 2,5 10 2 mole) de Na H à 50 % dans 40 ml de THF. On ajoute ensuite doucement 5,54 g ( 2 102 mole) d'oestra- diol dissous dans 40 ml de TH Fo Une demie heure après, -2 3,5 g ( 2,33 10 mole) de t Bu Me 2 Si CI sont ajoutés à l'état solide dans le milieu réactionnel et on laisse tourner pendant 3 heures Le mélange est ensuite versé avec précaution dans l'eau glacée, puis on extrait le produit au CH 2 C 12 Apres lavage et évaporation du solvant, on obtient 7,86 g de solide blanc La recristallisation dans l'éther de pétrole donne facilement 5,7 g du composé-de formule 1; F 158 , 73 %, cristaux blancs. Analyse: C 27 H 3809 Cr Si trouvé C 74,95; H 9,97; calculé C 74,57; H 9, 91; RMN (CD C 13) cycle 6 = 7,2 d, 6,7 dd, 6,61 d; Me 6 = 0,86 S; Me 2 6 = 0,23 S; t Bu 6 = 1,03 s. OH q ( 1) t.Bu (CH 3) 25 i O 8 -2533570 b) Complexation du g-oestradiol mono-silylé -3 Dans un ballon de 250 ml, 3,2 g ( 8,3 10-3 mole) de -oestradiol mono-silylé préparé en a) et 3,7 g ( 1,6 10-2 mole) de Cr(CO)6 sont mis avec 150 ml d'éther dibutylique fraîchement distillé On chauffe à reflux, sous atmosphère d'azote, pendant 8 heures Après évaporation de solvant, le brut réactionnel, 6,18 g, solide jaune, est chromatographiê sur colonne de gel de silice 7734 avec comme éluant E/Ep = 1/1. On isole: fraction de tête: produit 2, 1,27 g, 29 %, F 220 (E/Ep), cristaux jaunes. Analyse: C 27 H 3805 Cr Si, trouvé C 61,82; H 7,27 calculé C 62,05; H 7, 33 RMN (CD C 13) cycle = 5,76 d, 5,03 dd, 4,97 d; Me 6 = 0,73 S; Me 2 = 0, 20 S; t Bu 6 = 0,90 S; fraction de queue: produit 3, 1,8 g, 41,5 %, F 179 (E/Ep), cristaux jaunes. Analyse: C 27 H 3605 Cr Si, trouvé C 62,00; H 7,30 calculé C 62,05; H 7, 33 RMN (CD C 13) cycle 6 = 5,65 d, 4,96 d, 4,90 dd; Me 6 = 0,83 S; Me 2 6 = 0,26 S; t Bu 6 = 0,96 s. OH t.Bu(CH 3)2 Si O omplexe a ( 2) Cr(CO)3 Cr(CO)3 OH ( 3) t.Bu(CH 32 Si O complexe Na H et titre. EXEMPLE 2 a) Complexe a du e-oestradiol disilylé Par silylation du composé 2 avec un excès de de chlorure de silane, on obtient le complexe du Complexe oestradiol mono-silylé 2: 770 mg ( 1,47 10 3 mole), Na H: 600 mg ( 1,2 10 2 mole, t.Bu Me 2 Si Cl: 900 mg ( 6 10 3 mole). Après extraction à l'éther et évaporation du solvant, on obtient 1,9 g de solide jaune que l'on purifie sur colonne de gel de silice 7734 avec un éluant E/Ep = 1/7. On isole finalement 0,9 g de produit, 96 %, F 225 (E/Ep), cristaux jaunes. Analyse: C 33 H 52 Cr 05 Si 2, trouvé C 62,32; H 8,27 calculé C 62,22; H 8,23 RMN (CDC 13) cycle 6 = 5,80 d, 5,03 dd, 4,97 d; Me 6 = 0,73 S; Me 2 = 0,26 s, 0,09 S; t Bu 6 = 0,96 s, 0,90 s. b) Complexe 8 du 8-oestradiol disilylé Le mode opératoire est identique à celui de son diastéréoisomère En partant du composé 3, on obtient le produit avec 93 % de rendement, F 253 (E/Ep), cristaux jaunes. Analyse:C 33 H 52 Cr O 5 Si 2, trouvé C 62,23; H 8,21 calculé C 62,22; H 8,23 RMN (CD C 13) cycle 6 = 5,66 d, 4,94 d, 4,87 dd; Me ô = 0,75 S; Me 2 6 = 0,21 s, 0,05 S; - t.Bu S = 0,90 s, 0,83 s. O Si Me 2 t Bu ( 4) t.Bu Me 25 i O 4 ': Cr(CO)3 en a 4 ": Cr(CO)3 en B EXEMPLE 3 Synthèse du composé 5 On irradie pendant 3 heures une solution d'oestradiol mono-silylé a chrome tricarbonyle (composé 2), 0,52 g ( 10-3 mole), dans 150 ml de benzène et 25 ml de cyclooctène o barbote un courant d'azote On ajoute ensuite 1 g de P(Ph)3 et 25 ml de C 52 et on chauffe à 50 pendant 1 heure 1/2 Après filtration et évaporation, le brut est chromatographié sur colonne de gel de silice Merck 9385 avec comme éluant E/Ep = 3/2. On isole finalement 60 mg du produit désiré, 11 %, F 142 (E/Ep). RMN (CD C 13)cycle 6 = 5,93 d ( 1), 5,24 dd ( 1), 5,11 d ( 1); Me 6 = 0,78 S; Me 2 6 = 0,25 S; t Bu 6 = 0,93 s. OH ( 5) t.Bu Me 2 Si O complexe a Cr C Co/?r cs CO EXEMPLE 4 a) Dérivé propanol éther de l'oestradiol On chauffe à reflux pendant 15 heures 1,08 g -3 d'oestradiol ( 4 103 mole) avec 320 mg de soude -33 ( 8. 10-3 mole) dissous dans 50 cm 3 d'acétone, puis 1,4 g de bromopropanol ( 10-2 mole) est ensuite ajouté et le chauffage est maintenu pendant 2 jours. Après filtration et évaporation, le résidu obtenu est redissous dans CH 2 C 12 La solution obtenue est d'abord lavée à l'eau jusqu'à p H neutre, puis séchée sur Mg SO 4, filtrée et évaporée On a alors un solide blanc que l'on lave au pentane On obtient finalement une masse de 1,3 g. La chromatographie sur couche mince (éluant E/Ep = 2/1) révèle que le produit est pur (Rendement: 100 %). La recristallisation dans l'éther donne des cristaux blancs, F 168 , 900 mg. RMN (CD 3 COCD 3)cycle 6 = 7,31 d ( 1), 6,83 dd ( 1), 6,74 d ( 1); CH 3 6 = 0,83 S ( 3); OCH 2 6 = 4,14 t ( 2). Analyse: C 21 H 3003, trouvéC 76,05; H 9,17 calculé C 76,32; H 9,15. +/C= 3029 / 21 Masse:M /C = 330 M 2197 / a/ = 70,6 (CH 2 C 12, C = 0,51. b) Complexation du dérivé propanoléther de l'oestradiol Dans un ballon de 250 ml, on met 600 mg du composé précédent ( 1,8 10-3 mole), 1,1 g de Cr (CO)6 -3 3 ( 5.10-3 mole) et 150 cm d'éther dibutylique On chauffe à reflux le mélange pendant 6 heures La solution devient jaune limpide. Après évaporation, on obtient 1,24 g d'huile jaune contenant plusieurs produits. La chromatographie sur plaques épaisses de gel de silice 7731 avec éluant THF/Ep = 2/3, permet d'isoler deux produits: en tête: composé 6, complexe a, 270 mg, rendement 32 %, solide jaune La cristallisation dans E/Ep donne des cristaux jaunes, F 130 . RMN (CD 3 COCD 3) cycle 6 = 6,08 d ( 1), 5,40 dd ( 1), ,34 d ( 1); CH 3 6 = 0,67 S ( 3); OCH 2 6 = 4,0 t ( 2). + a 72 D = 41,7 (CH 2 Cl 2, C = 1,08) Masse: 466 = M, 382 = M 3 CO, 330 = M Cr(CO)3. Analyse: C 24 H 3006 Cr, trouvé C 61,30; H 6,68 calculé C 61,79; H 6,48; en queue: composé 7, complexe B, 210 mg, rendement 25 %, solide jaune La cristallisation dans E/Ep donne des cristaux jaunes, F 157 . RMN (CD 3 COCD 3) cycle 6 = 6,00 d ( 1), 5,31 d ( 1), ,23 dd ( 1); CH 3 6 = 0,78 S ( 3), OCH 2 6 = 4,04 t ( 2) / 1 = 70,0 (CH 2 12, C = 1,08) Masse: 466 = M, 382 =M 3 CO, 330 =M Cr(CO)3 Analyse: C 24 H 3006 Cr, trouvé C 61,84; H 6, 60 calculé C 61,79; H 6,48. OH QO 6: Cr(CO)3 en a HO(CH 2)30: 7: Cr(CO)3 en B Cr(CO) 3 EXEMPLE 5 (Ethynyl oestradiol) C 02 (C 0)6 Sous atmosphère d'argon, on ajoute doucement -3 0,6 g d'éthynyl oestradiol ( 2 103 mole) dissous dans ml d'éther anhydre dans une solution de 1,05 -g de C 02 (CO)8 ( 3 10-3 mole) dans 10 ml d'éther On laisse la réaction se poursuivre pendant 1 heure, puis on filtre et évapore le solvant Le brut obtenu est purifié sur colonne de gel de silice Merck 8395 avec éluant E/Ep: 1/1 On obtient finalement 1 g de produit désiré, solide rouge sang Il est difficile de donner un point de fusion exact à cause de la décomposition du produit. RMN (CDC 13) cycle 6 = 6,63 d ( 1), 6,70 dd ( 1), 7,23 d ( 1); 3 OH 6 = 6, 21 S ( 1); CH 3 6 = 1,1 ( 3) Analyse C 26 H 24 C 0208, trouvé-C 53,80; H 4,61; CO 19,70 calculé C 53,62; H 4,15; CO 20,24. HO C -CH 11 ( 8) QF'I T c O Co-Co CO HO C 1 Oc XI I CO HO CO CO EXEMPLE 6 Mise en évidence des récepteurs hormonaux à l'aide des composés selon l'invention Différents composés selon la présente invention ont été testés pour leur pouvoir compétiteur vis-à-vis de l'oestradiol, grâce à des courbes Log/log it, comme décrit dans Rao et al Endocrinology, 92, 1229 ( 1973). Les résultats s Ont rassemblés dans le tableau I ci-après:- Tableau I Composé RBA (%) Oestradiol 100 éthynyloestradiol 71,4 1 il 2 1,05 3 0,36 4 ' aucune compétition 4 " aucune compétition 5 1,5 6 28 7 1,2 8 3,5 Il faut rappeler que,plus la valeur de RBA ("Relative Binding Affinity") s'éloigne de 100, plus le pouvoir compétiteur du stéroide testé est faible. Afin de fixer les idées, notons qu'un médicament aussi utilisé que le tamoxifène (Novaldex) présente un RBA de 3 %. On constate à la lecture de ce tableau que, le marcuage par une entité organo- métallique diminue le pouvoir compétiteur de l'hormone ainsi modifiée. Cependant, les composés selon l'invention présentent, sauf pour le composé 3, une préservation du pouvoir de reconnaissance du récepteur tout à fait compatible avec une utilisation de ces produits à des fins analytiques. Ces complexes de-l'invention sont stables à l'état solide et peuvent être conservés en milieu non-oxydant sans problème. Toutefois, la présence d'une fonction hydroxy phénolique adjacente d'un groupement organométallique est incompatible avec la stabilité du produit, qui se décompose rapidement A ce propos, il convient de noter qu'un composé du type de ceux de l'invention a été décrit par G Pouskouleli, I S Butler et J P Hickey, J Inorg. Nucl Chem, 42, 1659-1662 ( 1980), mais il s'agit précisément d'un composé ayant une fonction phénol adjacente du site de fixation du composé organométallique, ce qui rend ce composé instable. Ce tableau montre que la préservation des fonctions hydroxylées en 3 ou en 17 dans ces produits est nécessaire pour obtenir un bon taux de compétitivité, à titre d'exemple, les composés 4 ' et 4 " ne présentent aucune compétition, il est nécessaire de trouver des solutions conciliant les deux impératifs précédents. Comme cela ressort du tableau, il est d'abord possible d'effectuer la complexation loin du groupement hydroxy phénolique, par exemple en 17 a comme dans le composé 8. Il est possible également de protéger le groupement en position 3 par éthérificationcomme dans les composés 2 et 3 par exemple, tout en conservant la fonction hydroxy en 17 libre. Enfin, il est possible en quelque sorte "d'éloigner" la fonction hydroxy libre en position 3 en greffant dans cette position un radical hydroxy- alcoxy, comme dans les produits 6 et 7. Le résultat le plus spectaculaire est fourni par le produit 6 (RBA 28 %) dans lequel la greffe d'une chaîne (CH 2)30 H en 3 associée à une complexation de la face a à l'aide du groupe Cr(CO)3 offre une solution excellente au problème. EXEMPLE 7 Détection de récepteur spécifique d'oestradiol Les échantillons utilisés dans cet exemple ont été préparés à partir de cytosols utérins de brebis partiellement purifiés par précipitation au sulfate d'ammonium à 35 %, procédé qui présente le double avantage d'atténuer l'absorbance parasite dans la région spectrale à étudier et d'éliminer la majorité des associations protéiniques non liantes avec l'hormone. (J Katznellenbogen et al, "Cytotoxic estrogens in Hormone Receptive Tumors, Acad Press London ( 1980) p 3-38). Pour la préparation des échantillons destinés à l'étude I R, on a utilisé la technique de précipi- tation au sulfate de protamine (A W Steggles et R.J B King, J Biochem 118, 695-701 ( 1970)) qui fournit une poudre blanche utilisable sans autre traitement. Les figures ci-annexées permettent de comprendre les applications des composés selon l'invention. Figure 1 Spectre I R des protéines présentes dans le cytosol de brebis purifiées et traitées comme précisé précédemment Il y a lieu de noter la remarquable "fenêtre" dans la région de 1950 cm 1 et la faible absorbance à cet endroit Le reste de la région spectrale se caractérise par la présence de massifs d'absorption (maxima hors échelle dans le cas présent pour plus de clarté) Le spectre comme les suivants a été obtenu à l'aide d'un appareil I R F T Nicolet 6000 c, l'échantillon solide pesé et pressé est simplement porté par des "micropellets" Si la protéine réceptrice de l'oestradiol est présente dans l'échantillon étudié seul un ligand marqué résonnant de façon intense et spécifique vers 1900 cm 1 en permettra la détection. Figure 2 Spectre I R de l'hormone modifiée 2 en solution On note les deux bandes intenses v CO de modes A 1 et E respectivement à 1959,6 cm 1 et 1876,4 cm 1. Ce produit, à taux de compétition moyen, a été utilisé dans la suite de l'expérience relatée ici. Figure 3 Même échantillon que celui de la figure 1, mais traité par l'hormone 2 On note les deux pics au-dessous de 2000 cm Cette région a été élargie dans un souci de clarté Il faut noter qu'il y a donc bien du récepteur de l'oestradiol dans le mélange des protéines étudiées et que celui-ci est détectable par I R à l'aide d'hormones modifiéés En raison des concentrations en récepteur, on n'attend pas, à ce niveau, une manifestation plus intense de sa présence. Figure 4 Même échantillon que celui de la figure 3 obtenu après soustraction du "blanc" (figure 1) Le résultat est suffisamment spectaculaire (comparer avec l'hormone en solution: figure 2) pour se passer de commentaire. Il faut ajouter que l'on a détecté ici 51 fentomoles-de récepteur par mg de protéine, ce qui représente un taux tout à fait usuel en cancérologie. Au dessous de 10 fm/mg de protéine le dosage est considéré comme ER (seuil de prise en considération) Tandis que des taux dépassant 100 fm/mg de protéine sont fréquents. On est donc avec cette technique dans la gamme des sensibilités requises pour ces analyses fines. Pour fixer les idées, notons que l'on a decelé ici 10 o g de métal sans problème (la limite n'a pas été précisée) alors que par absorption atomique on n'arrive pas en des-sous de 10-6 g de métal avec des précautions draconiennes De plus, la morphologie typique de la courbe (caractéristique d'une symétrie C 3 v; le léger 'splitting" est dû au spectre du solide) constitue une mesure de protection contre les artéfacts éventuels Enfin la présence de chrome dans l'échantillon a été confirmée grâce à des expériences indépendantes d'activation de neutron. REVENDICATIONS 1) Complexe d'oestrogène, caractérisé en ce qu'il est constitué d'un oestrogène ou d'un dérivé d'oestrogène complexé par un composé organométallique comportant au moins un ligand carbonyle libre, ledit complexe d'oestrogène comportant au moins un radical hydroxy libre et aucun radical hydroxy phénolique libre en a du site de fixation du composé organométallique. 2) Complexe d'oestrogène selon la revendication 1, caractérisé en ce que l'oestrogène est choisi parmi l'oestradiol, l'oestrone, le 16 a-hydroxyestrone,. l'oestriol, l 'éthynyloestradiol, le diéthylstillboestrol, l'hexoestrol, ainsi que leurs dérivés. 3) Complexe d'oestrogène selon la revendication 2, caractérisé en ce que les dérivés des oestrogènes stéroidiques sont des éthers en position-3 ou 17 et/ou des dérivés hydroxyalcoxy en position 3. 4) Complexe d'oestrogène selon l'une des revendications 1 à 3, caractérisé en ce que les composés organométalliques sont des composés des métaux des groupes V Ia, VI Ia et VIII de la Classification Périodique. ) Complexe d'oestrogène selon la revendication 4, caractérisé en ce que les composés organométalliques sont dés composés d'un ou plusieurs métaux choisis parmi le chrome, le molybdène, le tungstène, le manganèse, le cobalt et le nickel, le technétium et le rhénium. 6) Complexe d'oestrogène selon l'une des revendications 4 et 5, caractérisé en ce que les ligands des métaux des composés organométalliques sont choisis parmi: CO, CS, C Se, CNR 1, P(R 2,R 3,R 4), cyclopentadiényl, R 1 étant un radical alkyle ou -COR 5, R 2,R 3, R 4 et R 5 étant choisis parmi les radicaux phényle ou phénoxy substitué ou non substitué et les radicaux alkyle ou alcoxy substitué ou non substitué et les atomes d'halogène, R 5 pouvant être -N(CH 2 CH 2 Cl)2. 7) Complexe d'oestrogène selon la revendication 6, caractérisé en ce que les composés organométalliques sont choisis parmi: Cr(CO)3, Cr(CO)2 CS, Cr(CO)2 C Se, et Co(CO)6. 8) Complexe d'oestrogène selon l'une des revendications 1 à 7, de formule: RO X dans laquelle R est un radical protecteur ou un groupement hydroxyalcoxy et X est un greffon organo- métallique. 9) Complexe d'oestrogène selon la revendication 8, caractérisé en ce que X est le radical Cr(CO)3, Cr(CO)2 CS, Cr(CO)2 C Se et R est le radical HO(CH 2)n-, n étant compris entre 1 et 7. 10) Application des composés selon l'une des revendications 1 à 9 au dosage des récepteurs hormonaux par spectrographie. 11) Application selon la revendication 10, caractérisée en ce qu'on utilise la spectrographie infrarouge ou Raman.