Brevet FR2535609A1 — publié le 19840511

À La présente invention a trait à la pharmacie, et plus précisément elle se rapporte à un nouveau médica- ment à action antitumorale, destiné au traitement du cancer du tube digestif, du cancer du sein, ainsi que pour le traitement de la plaie opératoire à la suite de l'ablation totale de la tumeur. On-connalt actuellement différents produits à ac- tion antitumorale D'après leur mécanisme d'action, on divise ces produits en 4 classes: les antimétabolites, les agents alkylants, les agents intercalants et les inhibiteurs de la mitose Le mécanisme d'action des pro- duits mentionnés relève essentiellement de leur effet sur la synthèse et l'activité des acides nucléiniques ("Chimiothérapie des tumeurs malignes", sous la rédac- tion de N N Blokhine, Moscou, Edition Méditsina, 1977). Dans la majorité des cas, les médicaments connus présentent une faible sélectivité d'action sur les cel- lules tumorales, compte tenu de ce qu'ils agissent éga- lement sur le métabolisme des cellules normales, d'o l'apparition de phénomènes toxiques à la suite de leur application clinique Par ailleurs, ces produits n'ont pas d'action efficace sur certaines formes de tumeurs malignes d'incidence fréquente (telles que le cancer bronchique, le cancer gastrique, le cancer du pancréas). On connaît certains polycations, comme par exem- ple la polyéthylénimine, la polypropylimine, la polyly- sine-et autres, qui confèrent une action électrostatique et cytostatique directe sur les cellules cancéreuses qui portent une charge négative plus forte que les cellules normales (H Morosov Polycation treated tumor cells in vivo and in vitro Cancer Res, 1971, v 31, No 3, p. 373-383; F M Mehrishi Effect of lysine polypeptides on the surface change of normal and cancer cells Eur. J Cancer, 1969, v 5, No 3, p 427-435). Toutefois, les composés mentionnés ci-dessus n'ont pas trouvé d'utilisation pratique à cause de leur effi- cacité insuffisante et de l'apparition de différents ef- fets secondaires. Le médicament objet-de la présente invention est un produit original qui n'est pas décrit dans la litté- rature. Le problème, posé dans la présente invention, con- siste à élaborer un nouveau produit anticancéreux ayant un large éventail d'action, présentant un effet sur les formes de cancer résistant aux médicaments connus, et possédant une action de contact sur la cellule cancéreuse. Ce problème est résolu par le fait que le médica- ment à action antitumorale, comportant une matière active et un diluant pharmaceutique, selon l'invention, comporte à titre de matière active le phosphate de polyhexaméthy- lèneguanidine de formule suivante: R (CH 2)6 -f NH C NH (CH 2)6 R IR' I NH dans laquelle N est de 2 à 5; R est un groupe NH 2 ou NH 2 -C NH; et NH R' est un groupe NH 2 ou NH 2 -C NH -. NH Le produit objet de la présente invention peut être utilisé sous diverses formes de présentation (solu- tés injectables, solutions, onguents, sunppositoires). On utilisera de préférence le médicament suivant l'in- vention sous forme de solutés injectables ayant une te- neur en matière active égale à 1,5 % en poids Le pro- duit objet de l'invention comportera, de préférence, à titre de diluant pharmaceutique, de l'eau distillée ou du soluté physiologique. Le produit suivant l'invention est destiné au traitement des malades atteints de cancer du tube diges- 25356 O 9 tif et de cancer du sein Il est actif sur les formes de tumeurs résistantes à l'action des médicaments connus. Le produit possède une action de contact sur la cellule cancéreuse et peut être utilisé pour le traitement di- rect de la plaie chirurgicale à la suite de l'ablation de la tumeur. L'activité antitumorale du produit suivant l'in- vention fut étudiée sur 6 systèmes tests: la leucémie lymphoide L-1210, le carcinosarcome de Walker, l'adéno- carcinome 755, le sarcome 37, le carcinome bronchique de Lewis et le mélanome B 16 La leucémie lymphoide L-1210 était implantée par la voie intraopéritonéale à des sou- ris BDF des deux sexes, à raison de 106 cellules par souris L'adénocarcinome 755 et le mélanome B 16 étaient greffés sur des souris femelles BDF, à raison de 50 mg de suspension tumorale par souris Le sarcome 37 était implanté par la voie intra-abdominale à des souris blan- ches des deux sexes, sans lignée, à raison de 10 cellu- les par souris Le carcinome bronchique de Lewis était greffé sur des souris BDF 1 par la voie sous-cutanée à raison de 50 mg de suspension tumorale par souris Le carcinosarcome de Walker était greffé par la voie sous- cutanée sur des rats blancs sans lignée des deux sexes et à raison de 100 mg de suspension tumorale par animal. La première injection du produit suivant l'invention é- tait réalisée 24 heures après la greffe de la tumeur ou de la leucémie On mettait le produit en solution dans de l'eau distillée de façon extemporanée et on l'admi- nistrait par la voie intrapéritonéale ou intraveineuse une fois par jour Les résultats de l'étude de l'activité antitumorale du produit suivant l'invention sont résumés dans le tableau 1. TABLEAU 1 N Souche tumorale Dose par Jours des Prolongement Voie d'ordre injection, injections de la vie, % d'administration mg/kg 1 Leucémie lympha- tique 24,9 1 175 intrapéritonéale 2 L-1210 4,2 1,2,3,4,7 125 -"- 3 Sarcome 37 3,0 1 85 -"- 4 -" 1,8 1,2,3,4,7 48 -"- -" 2,0 1,5,9 40 intraveineuse 6 Carcinosarcome de Walker 2,3 1,2,3,4,7 55 intrapéritonéale 7 Adénocarcinome 755 5,0 1,2,3,4,7 68 -"- 8 _"_ 5,0 1,5,9 55 intraveineuse 9 Mélanome B 16 5,0 3,4,5,6,7 53 intrapérîtonéale Carcinome bron- chique de Lewis 5,0 1,5,9 20 intraveineuse ru en ts Lo 2535609. Les propriétés antitumorales du produit, objet de la présente invention, furent étudiées sur les modè- les des hétérotrans Dlants subrénaux de tumeurs humaines. On utilisa à cette fin les prélèvements d'échantillons tumoraux cliniquessuivants: cancer du sein 4 échan- tillons, cancer gastrique 2, cancer du rectum 2, cancer bronchique 2 On prélevait de ces échantillons des microfragments de 103 cellules, que-l'on greffait sous la capsule rénale des souris BDF 1 On injectait le produit, suivant l'invention, aux 2, 4 et 6 èmes jours après la greffe tumorale à la dose de 12 mg/kg par in- jection. On assista à une inhibition de la croissance de la masse tumorale de 50 à 100 % dans 3 cas sur 4-pour le cancer du sein, dans 2 cas sur 2 pour le cancer gastri- que et 2 cas sur 2 pour le cancer du rectum L'inhibi- tion fut insignifiante cour le cancer bronchique. On étudia la sensibilité des cellules cancéreuses, prélevées au cours de l'intervention chirurgicale chez 22 oatients souffrant de cancer bronchique, à l'égard du médicament suivant l'invention. A la suite de l'incubation de la suspension des cellules cancéreuses en présence du médicament suivant l'invention, en une quantité correspondant à la dose d'administration ( 5 mg/kg), on détermina au moyen d'un compteur à scintillation en phase liquide et après in- troduction de thymidine et d'uridine marquées le degré de perturbation des processus de synthèse des ADN et ARN dans les cellules cancéreuses par rapport aux cel- lules servant de témoins. La sensibilité des cellules cancéreuses en fonc-, tion de la structure histologique de la tumeur est don- née au tableau 2. TABLEAU 2 N Forme histologique Nombre Sensibles Non sen- d'or du cancer bronchique d'échan au produit sibles dre tillons au étudies Droduit 1 2 3 4 5 2 Epithéliome pavi- menteux 14 9 5 3 Adénocarcinome 6 1 5 4 Epithéliome peu différencié 2 2 - On réalisa l'étude de la toxicité générale du pro- duit de l'invention La DL 50 est égale à 70 mg/kg chez la souris. Les études de l'action biochimique du produit sui- vant l'invention chez des souris hybrides portant la for- me ascitique de la leucémie L-5178 y et L-1210 montrent que l'administration intrapéritonéale à une reprise de la dose thérapeutique ( 5 mg/kg) du produit apporte une inhibition de la biosynthèse des ADN, ARN et de la pro- téine dans les cellules tumorales à un degré plus net que dans les cellules normales des tissus du foie, de la rate, de la muqueuse de l'intestin grêle. Dans les expériences "in vitro", il fut également démontré que le produit, à des concentrations de 1 10-3 1.10-6 M, inhibe de façon significative ( 60 % par rap- port à la série témoin) la biosynthèse des ADN, ARN et de la protéine dans les cellules de l'adénocarcinome d'Erlich et de la lympholeucémie L- 1210 Ceci s'explique par la perturbation du transport des précurseurs radio- actifs de la synthèse des macromolécules dans la cellule tumorale. Les investigations de l'influence du produit objet de l'invention sur les cellules de la lympholeucémie L-5178 y ont établi que le produit, à des concentrations de 25 et 50 microg/ml, réduit la charge négative de la membrane Dlasmatique des cellules tumorales, et à des concentrations de 75 à 500 microg/ml, il recharge la surface des membranes. Aux concentrations mentionnées ci-dessus, on as- siste à l'expulsion des ions K+ et Na+ de la cellule dans le fluide extracellulaire. Toutes ces études montrèrent que le mécanisme d'action du produit suivant l'invention relève de son effet sur la membrane de la cellule cancéreuse. Le médicament suivant l'invention réduit la charge néeative de la membrane plasmatique de la cellule et par là même perturbe le transport des précurseurs de la bio- synthèse des macromolécules dans la cellule cancéreuse, tandis que le mécanisme d'action antitumorale des médi- caments connus s'explique par leur effet sur l'ADN (soit en étant des analogues des substrats, soit en se liant aux principaux centres des ADN en modifiant leur symé- ti-ie). Grâce au mécanisme d'action susmentionné, le pro- duit objet de l'invention exerce son effet sur les formes de cancer résistant à l'action des médicaments; connus. Par ailleurs, à la différence des produits connus, le produit de l'invention possède une action de contact sur la cellule cancéreuse et peut donc être utilisé pour le traitement direct de la plaie chirurgicale après l'abla- tion de la tumeur. Le produit suivant l'invention est destiné à l'ad- ministration par la voie intraveineuse ou intramusculaire ainsi que pour le traitement des plaies opératoires Il peut être utilisé sous forme de solutions, de solutés injectables, de suppositoires et d'onguents. A titre de diluant ou d'excipient pour préparer l'onguent, on peut avoir recours à n'importe quel sol- vant ou excipient pharmaceutique approprié On aura de préférence recours à l'emploi du produit sous forme in- jectable On prépare des solutés injectables ayant une teneur en matière active égale à 1,5 % en poids On uti- lise de préférence à titre de diluant l'eau distillée ou le soluté physiologique La dose journalière du produit suivant l'invention est égale à 150 mg, la dose pour un traitement est de 1500 mg. On prépare le médicament suivant l'invention par les procédés connus. On obtient la substance active du produit suivant l'invention, le phosphate de polyhexaméthylèneguanidine comme suit. On Polymérise des quantités équimoléculaires d'he- xaméthylèneguanidine et de chlorhydrate de guanidine à une température de 160 à 170 C pendant 23 heures Il se forme le chlorhydrate de polyhexaméthylèneguanidine qui a l'aspect d'une masse visqueuse et qui se solidifie après refroidissement On dissout le chlorhydrate de polyhexaméthylèneguanidine dans de l'éthanol, et on ajoute à la solution ainsi obtenue une solution alcooli- que d'éthylate de sodium dans un rapport de chlorhydrate de polyhexaméthylèneguanidine et d'éthylate de sodium égal à 1:5 On filtre le dépôt de chlorure de sodium qui s'est formé et on additionne au filtrat de l'acide phos- phorique dans un rapport de 1:5 respectivement. On filtre le sédiment blanc de phosphate de poly- hexaméthylèneguanidine qui se dépose, on le rince avec de l'éther et on le sèche sous vide On réalise la puri- fication du produit par reprécipitation (eau-éthanol). On sépare par filtration le produit fini, on le rince sur le filtre avec de l'éther et on le sèche sous vide. Le rendement du produit désiré est égal à 71,6 % (en équivalent de chlorhydrate de polyhexaméthylèneguanidine). Le phosphate de polyhexaméthylèneguanidine ainsi obtenu est une substance finement cristalline de couleur blanche, inodore, de consistance solide, de masse molé- culaire moyenne de 1070 à 1130, facilement soluble dans l'eau; insoluble dans les solvants organiques La subs- tance est stable au stockage et après lyophilisation de ses solutions aqueuses. 2535609. REVENDICATIONS 1 Médicament à action antitumorale, constitué d'une matière active et d'un diluant pharmaceutique, caractérisé en ce qu'il comporte à titre de matière ac- tive le phosphate de polyhexaméthylèneguanidine de for- mule suivante: (CH 2)6 -f NH C NH (CH 2)6 R' 2 Il Y 61 nI NH dans laquelle: n-est de 2 à 5; R est un groupe NH 2 ou NH 2 C NH; 2 2 Il NH et R' est un groupe NH 2 ou NH 2 NH -. NH 2 Médicament selon la revendication 1, sous for- me de solutés injectables, caractérisé en ce qu'il con- tient la substance active à raison de 1,5 X en poids. 3 Médicament selon la revendication 1 ou 2, ca- ractérisé en ce qu'à titre de diluant pharmaceutique, il comporte de l'eau distillée ou du soluté physiologique.