Brevet FR2529459A1 — publié le 19840106

La présente invention a pour objet une préparation de fructose-1,6-diphosphate pour l'administration intraveineuse, ayant une action anti-allergique, pour application dans le traitement et la prévention des réactions anaphylactiques, de l'attaque asthmatique aiguë, de l'oedème de Quincke, du bronchospasme, de l'urticaire et des autres manifestations allergiques au moyen d'une stabilisation de la membrane des mastocytes et d'une inhibition de leur dégranulation à la suite de la libération d'histamine et des autres substances vaso-actives et bronchospastiques. La libération d'histamine et d'autres substances vaso-actives et bronchospastiques dans l'anaphylaxie implique la dégranulation et la dislocation des mastocytes sensibilisées par l'antigène (Mota I. et Dias Da Silva W., Nature 186, 245, 1960). Parmi les médicaments disponibles à l'heure actuelle (antihistaminiques, bronchodilatateurs adrénergiques, bronchodilatateurs anticholinergiques, corps théophylliniques, préparations de cortisone, chromoglycate de sodium), seules les deux dernières préparations sont capables d'inhiber le choc anaphylactique, en stabilisant la membrane des mastocytes et en inhibant leur dégranulation et la libération conséquente de substances vaso-actives et bronchospastiques, tandis que les autres médicaments employés dans le traitement de cette pathologie ont une action indirecte, en essayant de s'opposer à l'histamine et aux autres substances libérées, ou à-leurs effets.Les préparations de cortisone administrées par voie générale ont une application limitée (elles ne conviennent pas aux sujets souffrant du diabète, de cardiopathies, d'hypertension, d'ostéoporose, d'ulcère et en particulier d'infections chroniques ou aiguës, etc); d'un autre côté, le chromoglycate de sodium n'est efficace que pour la prévention mais non pour le traitement de l'attaque anaphylactique, et surtout ne peut être administré par voie générale ou en particulier par voie intraveineuse, comme le nécessiterait souvent la gravité de la pathologie et son établissement rapide. En ce qui concerne le problème de s'opposer efficacement avec des moyens appropriés et avec la promptitude nécessaire aux atteintes effectivement provoquées par les réactions anaphylactiques et les manifestations allergiques, et donc le problème de la protection des malades contre l'action de l'histamine et des autres substances vaso-actives et bronchospastiques libérées par suite de la dégranulation et de la lyse des mastocytes, une solution surprenante est fournie par l'invention, consistant en l'emploi, comme moyen thérapeutique du sel sodique du fructose-l,6-diphosphate, produit bien connu dans d'autres domaines pharmacologiques grâce à son activité dans les cardiopathies, les hépatites, les cirrhoses, les toxémies, les états dysmétaboliques et diabétiques; dans le cas présent, le médicament doit etre administré au malade par voie intra-veineuse à une dose au moins égale à 200 mg/kg de poids corporel. L'invention fournit cet avantage qu'elle rend possible de traiter les malades souffrant de manifestations anaphylactiques, allergiques ou brochospastiques avec le sel sodique du fructose-1,6-diphosphate administré par une voie intraveineuse rapide, afin de réduire de manière substantielle les atteintes sérieuses induites par cette pathologie sans les limitations et contre-indications typiques des préparations de cortisone. Le sujet spécifique de l'invention est donc une préparation de fructose-l,6-diphosphate sous la forme de son sel sodique, consistant en une poudre microcristalline de cette substance ou de sa solution dans l'eau apyrogène bi-distillée à injecter par une voie intraveineuse rapide à la dose de 0,20-0,35 g de sel sodique de fructose-1,6-diphosphate par kg de poids corporel. Cette nouvelle utilisation du sel sodique du fructose-1,6-diphosphate dans les manifestations anaphylactiques, l'attaque asthmatique aiguë, l'oedème de Quincke, le bronchospasme, l'urticaire et d'autres manifestations allergiques se fondent sur l'existence d'une activité antérieurement inconnue éprouvée par des recherches expérimentales effectuées dès le départ dans les laboratoires de recherche de BIOMEDICA FOSCAMA à Rome. De ce point de vue, on expose ci-dessous à titre de précision les résultats d'une série de ces expériences faites sur des mastocytes de rat isolés. TESTS PHARMACOLOGIQUES S-UR LES MASTOCYTES DE RAT I) Matériaux Fraction V d'albumine humaine, composé 48/80 (produit de condensation de la N-méthyl-p-méthoxyphénylamine avec le formaldéhyde), dialdéhyde phtalique produit par la Société SIGMA de St Louis. Sel sodique de fructose1,6-diphosphate (Esaphosphine) de Biomedica Foscama de Rome (FDP). Ficoll de Farmacia Fine Chamical d'Upsal (Suède). II) Modes opératoires Isolement de mastocytes et libération d'histamine: Chez des rats mâles Wistar (pesant environ 350-400 g) on prélève des cellules péritonéales en lavant avec une solution composée de 9 volumes de solution physiologique pour 1 volume de tampon phosphaté de Sorensen. On purifie les mastocytes par centrifugation dans un gradient de densité (selon les procédés de Thon et Uvnas: Exp. Cell. Res., 18, 512, 1959) et on lave 3 fois, pour enlever le Ficoll, avec une solution isotonique contenant 10% en volume de tampon phosphaté de Sorensen et de la sérumalbumine humaine (1 mg/ml). On fait pré-incuber une quantité de mastocytes avoisinant 0,5 x 105 en suspension dans 0,4 ml du tampon mentionné ci-dessus pendant 5 minutes à 370C avec du FDP aux concentrations suivantes: nulle (tampon seul), 0,1, 0,5, 1, 5, 10 moles/litre de solution de tampon avant addition du composé 48/80 (1 'ig/ml).- On inclut également des échantillons ne contenant que du FDP et des échantillons témoin pour évaluer la libération spontanée d'histamine. On continue l'incubation pendant encore 10 minutes, puis on arrête en immergeant les tubes à essais dans un bain glacé. On sépare par centrifugation les cellules de la fraction qui flotte, après quoi on évalue la libération d'histamine par le procédé fluorimétrique de Shore (Shore P.A. et coll., J. Pharmac. Expt. Ther. 127, 182, 1959). On mesure l'histamine résiduelle contenue dans les cellules du produit centrifugé après avoir fait bouillir ces cellules pendant 5 minutes dans 0,2 ml d'HCl 0,1 N. La libération d'histamine est exprimée en pourcentage de l'histamine totale mesurée dans les cellules et dans la fraction flottante au cours de 3 expériences différentes. Les expériences sont conduites en double. III) Résultats Les résultats présentés au Tableau I prouvent que même de faibles concentrations de FDP sont capables de s'opposer à la dégranulation des mastocytes, inhibant ainsi la libération d'histamine. De cette manière, on prouve l'efficacité du FDP à agir contre les effets des réactions anaphylactiques et allergiques. TABLEAU 1 % DE LIBERATION D'HISTAMINE % D'INHIBITION DE LA LIBERATION D'HISTAMINE AGENT PHAR- SANS COMPOSE 48/80 AVEC COMPOSE 48/80 MACOLOGIOUE MOYENNE # ERREUR-TYPE MOYENNE # ERREUR-TYPE MOYENNE # ERREUR-TYPE TAMPON SEUL 8,07#0,79 ( N = 10) 28,6 # 2,52 (N = 6) 57,18 # 3,77 (N = 6) P FDP 0,1 mM 7,17#0,53 ( N = 6) 24,06#2,18 (N = 6) 63,98#3,26 (N = 6) P FDP 0,5 mM 7,07#0,62 ( N = 6) 15,1#0,91 (N = 6) 77,40#1,77 (N = 6) P FDP 5 mM 8,25# 0,89 ( N = 6) 9,30#1,31 (N = 6) 86,08#1,96 (N = 6) P LIBERATION D'HISTAMINE DE MASTOCYTES TRAITES AU FDP. ON PROVOOUE LES CELLULES AVEC DIVERSES CONCENTRATIONS DE FDP EN PRESENCE OU EN L'ABSENCE DU COMPOSE 48/80 (1 g/ml). REVENDICATIONS 1. Préparation composée de fructose-1,6-diphosphate caractérisée en ce qu'elle fournit une action antiallergique pour le traitement et-la prévention des réactions anaphylactiques, de l'attaque asthmatique aiguë, de l'oedème de Quincke, du bronchospasme, de l'urticaire et des autres réactions allergiques. 2. Préparation selon la revendication 1, caractérisée en ce qu'elle est administrée Sous la forme de son sel sodique en poudre microcristalline à des doses allant de 0,20 à 0,35 g de sel sodique de fructose-1,6-diphosphate par kg de poids corporel. 3. Préparation selon la revendication 1 caractérisée en ce qu'elle est administrée sous la forme de son sel sodique dans une solution de ladite poudre microcristalline dans l'eau apyrogène bi-distillée injectable par une voie intra-veineuse rapide.