Brevet FR2534929A1 — publié le 19840427

La présente invention concerne un complément de couches nourricières pour la culture sélective de Campylobacter éjuni, lequel complément contient au moins une substance antimicrobienne efficace. Depuis quelques années, on sait que l'espèce bactérienne Campylobacter joue un rôle important à l'origine des gastro-entérites En particulier, le genre Campylobacter faetus Subsp jejuni, que l'on appellera ci-après plus simple- ment Campylobacter jejuni, a été découvert comme étant particulièrement dangereux pour l'homme et de nombreux animaux Il est par conséquent nécessaire de mettre Campylobacter jejuni en culture sélective dans le but d'un diagnostic et/ou de l'examen des médicaments ou respectivement de la résistance O Pour éviter autant que possible que sur une couche nourricière bactériologique, d'autres micro-organismes, outre Campylobacter jejuni, ne se reproduisent de façon importante, on a déja mélangé aux couches nourricières utilisées des substances antimicrobiennes efficaces déterminées, contre lesquelles Campylobacter jejuni présente une résistance élevée par rapport à d'autres micro- organismes On connaît les compléments à mélanger aux couches nourricières qui contiennent, par exemple, une ou plusieurs des substances antimicrobiennes efficaces qui suivent: Polymycine, Rifampicine, Triméthoprim, Actidion, Colistine, Bacitracine, Novobiocine,Cycloheximide, Céphazoline, Amphotéricine. La présente invention a pour conséquent pour tâche de créer un complément de la sorte ci-dessus dont l'effet sélectif pour favoriser Campylobacter jejuni est considérable- ment meilleur que celui des compléments de cette sorte connus jusqu'à maintenant. Le complément selon l'invention, permettant de résoudre la tâche indiquée ci-dessus, se différencie de compléments connus de la sorte ci-dessus par le fait qu'il y a, comme substance antimicrobienne efficace, du jl Céfopérazon. Jusqu'à maintenant, l'on n'aencore jamais utilisé de Céfopérazon comme substance antimicrobienne efficace dans des compléments pour des couches nourricières pour la culture sélective de Campylobacter jejuni On a pu montrer que Céfopérazon pouvait produire un effet sélectif anti- microbien particulièrement valable dans le sens souhaité. De façon utile, le complément selon l'invention contient, comme substances antimicrobiennes efficaces, outre Céfopérazon, de la Rifampicine et avantageusement également de l'Amphotéricine B et de la Colistine. Le complément est utilisé, selon une autre forme de l'invention, en mélange avec une couche nourricière bactério- logique pour la culture sélective de Campylobacter jejuni de façon que pour 1 ml du mélange total, il y ait environ 15 lg de Cefopérazon et environ 10 Fg de Rifampicine et le cas échéant de plus, environ 2 pg d'Amphotéricine B et environ U I de Colistine Une telle composition permet une très bonne croissance de Campylobacter jejuni, tandis que la croissance de la flore non souhaitéequi l'accompagne est empêchée de façon importante De ce fait, l'isolement de l'excitateur pathogène Campylobacter jejuni est considérable- ment facilité. Une bonne solubilité dans l'eau est un autre avantage =du complément selon l'invention. L'invention sera mieux expliquéeen se référant aux exemples qui suivent: EXEMPLE 1 Dans une couche nourricière bactériologique usuelle, se composant d'un litre d'agar de Colombie et de 50 ml de sang de brebis, on a mélangé un complément contenant trois parties en poids de Céfopérazon et deux parties en poids de Rifampicine La concentration a été choisie de façon que pour environ 1 ml du mélange total, il y ait 15 Fg de Céfopérazon et environ 10 pg de Rifampicine Ce mélange pour couche nourricière sera désigné ci-après par " 1-A". Pour une comparaison avec l'état de la technique, on a préparé un deuxième mélange pour couche nourricière désigné ci-après par " 1-B", présentant la composition qui suit: 1 litre d'agar de Colombie, 50-ml de sang de brebis et un complément particulièrement recommandé jusqu'à maintenant, contenant, pour 1 ml du mélange total, 25 U I. de Bacitracine, 50)ig de Cycloheximide, 10 U I de Colistine, pg de Céphazoline et 6 ig de Novobiocineo 759 boîtes stériles de Pétri ont été garnies du mélange pour couche nourricière 1-A et le même nombre de boîtes stérile de Pétri a été garni du deuxième mélange pour couches nourricière 1-B Ensuite, la totalité des boîtes a été incubée à la façon habituelle dans les recherches bactériologiques, avec des échantillons d'une même selle humaine, puis on a laissé toutes les boîtes au repos à 37 C dans une atmosphère se composant de 85 % d'azote, 10 % de gaz carbonique et 5 % d'oxygène. Au bout de 20 heures, on a pu établir, dans 55 boîtes (= 7,24 %) contenant le mélange pour couche nourricière 1-A et dans 56 boîtes (= 7, 37 %) contenant le mélange pour couches nourricière 1-B, la présence de Campylobacter jejuni. Ainsi, on peut obtenir, avec le complément contenu dans le mélange pour couche nourricière 1-A selon l'invention, pratiquement la même bonne croissance de Campylobacter jejuni que celle obtenue avec le complément connu contenu dans le deuxième mélange pour couche nourricière 1-B Cependant, des différences se sont montrées lors de la croissance de la flore d'accompagnement L'on n'a pu établir que dans 65 % des boîtes une croissance à peu près aussi forte de la flore d'accompa- gnement dans les mélanges pour couche nourricière 1-A et 1-B 15 % de toutes les boîtes ont montre une croissance accrue de la flore d'accompagnement dans le mélange pour couche nourricière 1-A tandis que 20 % de toutes les boites ont laissé reconnaître une croissance augmentée de la flore d'accompagnement dans la deuxième couche nourricière 1-B - Les isolements entrepris à la façon habituelle, ont conduit,en ce qui concerne la flore d'accompagnement, aux résultats qui suivent: sur le mélange pour couche nourricière 1-A, il s'est révélé, après le premier isolement 10 %, après deux isolements 3 % et après trois isolements 2 % de toutes les boîtes, une plus forte croissance de la flore d'accompagnement, principalement des levures et des bactéries de E Coli Par contre, avec le mélange pour couche nourricière 1-B, il s'est révélé, après le premier isolement 13 %,après deux isolements 3 % et après trois isolements 4 % de toutes les boîtes une plus forte croissance de la flore d'accompagnement, principalement des coques et Pseudomonas. On reconnaît que sur le mélange pour couche nourricière contenant le complément selon l'invention, le germe pathogène Campylobacter jéjuni pet être mieux séparé de la flore l'accompagnant que sur le mélange pour couche nourricière contenant le complément connu 1-B, tandis qu'évidemment le complément selon l'invention exerce un effet antimicrobien plus fort sur la flore d'accompagnement que le complément connu, sans influencer la croissance de Campylobacter. EXEMPLE 2. i Dans une couche nourricière bactériologique se composant d'un litre d'agar de Colombie et de 50 ml de sang de brebis, on a mélangé un complément qui contenait les substances antimicrobiennes efficaces selon l'invention Céfopérazon, Rifampicine, Amphotéricine B et Colistine. La concentration était telle que pour 1 ml du mélange total, ily ait environ 15 pg de Céfopérazon, 10 lg de Rifampicine, 2 pg d'Amphotéricine B et 10 U I de Colistine Ce mélange pour couche nourricière sera désigné ci-après par " 2-A". Pour une comparaison avec l'état de la technique, on a de nouveau utilisé lemélange pour couche nourricière 1-B indiqué à l'exemple 1. 1570 boites stériles de Pétri ont été garnies du mélange pour couche nourricière 2-A et le même nombre de boîtes stériles de Pétri a été garni du mélange pour couche nourricière connu 1-B Ensuite, toutes les boites ont été incubées à la façon habituelle, avec des échantillons d'une selle humaine, et ensuiteg on a laissé reposer toutes les boîtes dans une atmosphère se composant de 85 % d'azote, % de gaz carbonique et 5 % d'oxygène, à 37 C. Au bout de 18 heures, on a pu établir, dans 148 boîtes (= 9,42 %) avec le mélange pour couche nourricière 2-A et dans 146 boîtes (= 9,29 %) avec le mélange connu pour couche nourricière 1-B, l'augmentation de Campylobacter jéjuni Ainsi, le complément selon l'invention contenu dans le mélange pour couche nourricière 2-A n'a pas d'influence néfaste sur la croissance de Campylobacter jejuni, en comparaison au complément connu dans le mélange pour couche nourricière 1-B. Cependant, des différences de croissance de la flore d'accompagnement sont encore plus remarquables que dans le cas de l'exemple 1 Dans 71,6 % des boites avec le mélange pour couche nourricière 2-A, l'on n'a pu établir aucune croissance de la flore d'accompagnement, tandis que cela n'était le cas que pour 47,5 % des boîtes avec le mélange pour couche nourricière connu 1-B Dans les 28,4 % des boîtes restantes avec le mélange pour couche nourricière 2-A, il s'est montré une flore d'accompagnement, dans le premier quadrantà 23,1 % dans le deuxième quadrant à 3,6 %/dans le troisième quadrant à 1,0 % et dans le quatrième quadrant à 0,7 % de toutes les boites ayant le mélange pour couche nourricière 2-A Par contre, on a établi, pour 54,3 % des bites conteant le mélange pour couche nourricière connu i-B,une croissance de ia flore - d'accompagnement, et à 37,6 % dans le premier quadrant à 10,0 % dans le deuxième quadrant à 2,9 % dans le troisième quadrant et à 3,8 % dans le quatrième quadrantpour toutes les boltes avec le mélange pour couche nourricière 1-B. Il est clair que la culture sélective recherchée de Campylobacter jejuni est considérablement plus efficace avec le mélange pour couche nourricière 2-A contenant le complément selon l'invention qu'avec le mélange pour couche nourricière connu 1-B, tandis que le complément selon l'invention est mieux adapté à diminuer la croissance de la flore d'accompagnement que le complément connu. Le complément décrit à l'exemple 2 contenant les substances antimicrobiennes efficaces Céfopérazon, Rifampicine, Amphotéricine B et Colistine s'est révélé également plus efficace, dans le sens souhaité que le complément décrit à l'exemple 1, qui ne contenait que Céfopérazon et Rifampicine. Par conséquent, le complément selon l'invention indiqué à l'exemple 2 est préféré. Mais la présente invention concerne tous les compléments pour des couches nourricières permettant la culture sélective de Campylobacter jejuni, qui contiennent Céfopérazon et le cas échéant d'autres substances antimicro- biennes efficaces. - REVEND I CATIONS 1.Complément pour couches nourricières pour la culture sélective de Campylobacter jejuni,ledit complément contenant au moins une substance antimicrobienne efficace caractérisé en ce qu'en tant que substance antimicrobienne efficace, il y a du Céfopérazon. 2 Complément selon la revendication 1, caractérisé en ce qu'il contient, comme substancesantimicrobiennesefficaces, outre Céfopérazon, de la'Rifampicine. 3 Complément selon la revendication 2, caractérisé en ce qu'il contient, pour trois parties en poids de Céfopérazon, environ deux parties en poids de Rifampicine. 4 Complément selon la revendication 1, caractérisé en ce qu'il contient, comme substancesantimicrobiennes efficaces,outre Céfopérazon, de la Rifampicine et de 11 Ampho- téricine B. Complément selon la revendication 4, caractérisé en ce qu'il contient, pour quinze parties en poids de Céfopéra- zon, environ dix parties en poids de Rifampicine et environ deux parties en poids d'Amphotéricine B. 6 Complément selon la revendication 1, caractérisé en ce qu'il contient, comme substances antimicrobiennes efficaces, outre Céfopérazon, de la Rifampicine, de l'Amphotéricine B et de la Colistine. 7 Complément selon la revendication 6, caractérisé en ce que les substances antimicrobiennes efficaces sont présentes aux proportions qui suivent: Céfopérazon 10 20 Fg Rifampicine 7 13 pg Amphotéricine B 1 3 pg Colistine 5 15 U I. 8 Complément selon la revendication 6, caractérisé en ce que les substances antimicrobiennes efficaces sont présentes quelque peu aux proportions qui suivent: Céfopérazon 15 pg Rifampicine 10,u Opg Amphotéricine B 2 pg Colistine 10 U I. 9 Complément selon la revendication 1, utilisé en mélange avec une couche nourricière bactériologique pour la culture sélective de Campilobacter caractérisé en ce qu'on utilise, pour 1 ml du mélange total, environ 15 pg de Céfopérazon. 10 Complément selon la revendication 2, en mélange avec une couche nourricière bactériologique pour la culture sélective de Campylobacter caractérisé en ce que l'on utilise, pour 1 ml du mélange total, environ 15 jg de Céfopérazon et environ 10 pug de Rifampicine. 11 Complément selon la revendication 6 utilisé en mélange avec une couche nourricière bactériologique pour la culture sélective de Campylobacter caractérisé en ce que l'on utilise, dans 1 ml du mélange total, environ 15 pg de Céfopérazon, environ 10 pg de Rifampicine, environ 2 pg d'Amphotéricine et environ 10 U I de Colistine.