Brevet FR2533438A2 — publié le 19840330

FR 2533438 A2 19840330 FR 8215559 A 19820915 Le brevet principal cité, concerne de "Nouveaux extraits biologiques utilisables en Cosinétologie et les procédés d'obtention de ces extraits". Ces extraits contiennent des facteurs de croissance, constituants peptidiques- de bas poids moléculaires (500 a 50 000 daltons), thermorésistants jusqu'd 800 C et stables dans une gamme de pH comprise entre 2 et 9. Ils sont obtenus par dégradation thermique, digestion enzymatique et tamisage moléculaire des substances de départ. Les caractéristiques de ces extraits : activité démontrable in vitro, sur des cultures de cellules, innocuité et stabilité sont particulibrement avantageuses pour l'utilisation dans des produits cosmétiques.On a revendiqué dans le brevet principal (revendication 9) l'utilisation de produits possédant une acti vité au moins partielle de "facteurs de croissance Le présent certificat d'addition concerne plus gEnérale- ment, l'utilisation en Cosmétologie des "facteurs de crois- sance" (growth factor, des auteurs anglo-saxons) tels qu'ils sont définis en biochimie et biologie cellulaire, depuis une vingtaine d'années et dont on trouve des revues de synthèse dans les articles suivants, par exemple E.ROZENGURT "Biochemical basis of the early events stilated by serum and mitogenic factors in cultures of quiescent ceps, Cold Spring Harbor Conferences on Cell Proliferation, vol. 6A & 6B, Cold Spring Harbor Laboratory, N.Y., 1978, pp. 773-788 M. PRUNIERS "Recent Advances in Epidermal Cell Cultures Arch. Dermatol. Res., 1979, 164 : 2, 243-248. On rappelle que les facteurs de croissance en biochimie et en biologie cellulaire, sont des substances qui sont capables de stimuler la prolifération des cellules (cBest- d-dire, qui présentent une action mitoydne)O De façon plus pratique, ce sont des substances qui peuvent remplacer au moins en partie le sérum de veau, ou encore, présentent une synergie avec celui-ci, pour la survie et la croissance de lignées de cellules mises en culture dans un milieu nutritif minimum, par exemple le milieu MEM selon HANKS. Les facteurs de croissance peuvent éventuellement présenter des spécificités pour certaines classes de cellules. Les inventeurs ont étudiés en vue d'une utilisation cosmétique des facteurs de croissance, ceux d'entre eux qui présentent une activité mitogène sur des lignées de cellules de peau en culture : cellules épidermiques, fibroblastes et chondrocytes. Le tableau en annexe présente des exemples de facteurs de croissance définis dont l'uti- sisation cosmétique a été étudiée, sans que cette liste ne soit limitative. Les inventeurs ont mis en évidence un parallélisme satisfaisant entre les propriétés in vitro de ces facteurs de croissance et les propriétés chimiques des préparations cosmétiques renfermant ceuxmci. Ils ont découvert que ces substances incorporées a des préparations cosmétiques finies, a faibles doses (0,001 % à 0,1 % de substances actives sèches par rapport a la préparation finie) présentent des activités cosmétologiques remarquables. On a également examiné à cet égard, des extraits biologiques contenant des facteurs de croissance non encore parfaitement identifiés. Ces extraits présentent des propri6- tés mitogènestrès similaires sur des lignées de cellules en culture d'origine cutanée. Ces extraits proviennent entre autres de 1- sérums animaux ou humains 2- peau embryonnaire d'origine animale 3- lait ou lactosérum humain ou bovin Ces trois sources-6tant dOjà concernées par le brevet principal. 4- des milieux de culture conditionnés (c'est-à-dire, où l'on a fait préalablement croitre des cultures de cellules spécialement des cultures de fibroblastes de peau humaine. La croissance de la première culture libérant dans le milieu des facteurs de croissance, actifs vis-avis des cultures subséquentes. 5- des extraits protéolytiques d'organes tels que : - cartilages animaux - peau animale, porcine ou bovine - rate de bovins - foie de bovins - duodénum de porc - embryons de bovins entiers sans que cette liste ne soit limitative. Ces extraits sont obtenus de la même manière décrite dans le brevet principal, å savoir : hydrolyses enzymatiques spécifiques, traitements thermiques et tamisage moléculaire, dans le but d'en recueillir les facteurs de croissance qui ont généralement de faibles poids moléculaires (500 à 50 000 daltons) et d'en-éliminer des composants de hauts poids moléculaires 'qui sont parfois responsables de phénomènes d'inhibition de la croissance cellulaire. A titre de variante, l'hydrolyse des organes précédents peut également être obtenue par fermentation bactérienne. I1 a été mis à.incuber un broyat d'organes, en particulier du tissu cutané animal, avec des cultures de souches bactériennes choisies de façon à ce que l'extrait obtenu, présente des propriétés de facteur de croissance actives sur des lignées de cellules d'origine épidermique ou dermique, humaines ou animales. Après hydrplyse, les extraits protéolysés subissent un ou plusieurs traitements thermiques, puis si nécessaire, un tamisage moléculaire, de manière à récupérer des fragments de bas poids moléculaire (de 500 à 50 000 daltons, comme précédemment). Les extraits biologiques étant déjà connus et pour certains, utilisés en Cosmétologie. La présente invention consiste donc en leur utilisation en tant que facteur de croissance et pour ce faire - premièrement, à ajuster le mode de préparation pour favoriser la formation et la libération de ces facteurs de croissance selon les descriptions précédentes - deuxièmement, à ajuster les doses d'utilisation à des valeurs optimales situées entre 0,01 % et 1 % d'extrait sec d'organes par rapport au produit cosmétique terminé. Facteur de Croissance Origine Structure Poids molécu- courante chimique laire approx. Nom (anglais) Abréviation Facteur de croissance Glande épidermique (epider- EGF submaxil- Polypepti- 6 000 mal growth factor) laire de de acide souris Facteur de croissance cerveau fibroblastique (fibre FGF de bo- Polypepti- 13 000 blast growth factor) vins de basique Facteur de croissance Plaquet plaquettaire (platelet PGF tes du Polypepti- 13 000 growth factor) sang de basique SM-A Milieux Somatomédines A,C,MSA SM-C de cul- Polvpept (MSA = multiplication MSA ture Polypepti- 10 000 à stimulating activity) d'hsspatc- s 20 000 cytes,sé- rum san guin REVENDICATIONS 1- Utilisation en Cosmétologie, d'extraits de substances biolo giques naturelles selon la revendication 1 du brevet princi pal, caracterisés en ce que ces extraits sont des facteurs de croissance, présentant une action mitogène sur des lignées de cellules en culture, d'origine cutanée, humaine ou animale. 2- Utilisation en Cosmétologie de facteurs de croissance selon la revendication 1 ci-dessus, choisis dans la liste suivante: facteur de croissance épidermique EGF, facteur de croissance fibrobiastique FGF, facteur de croissance plaquettaire PGF, somatomédines A ou C ou MSA. 3- Utilisation en Cosmétologie d'extraits d'organes selon l'une des revendications 1 à 4 du brevet principal, caractérisés en ce qu'ils contiennent des facteurs de croissance présentant une action mitogène sur des lignées de cellules en culture d'origine cutanée, animale ou humaine. 4- Utilisation en Cosmétologie, cte.xtraits d'organes selon la revendication 3 ci-dessus, proventTnt d'une ou plusieurs des sources suivantes - sérums animaux ou humains - peau embryonnaire d'origine animale - lait ou lactosérum humain ou boin - milieux de cultures "conditionne" - extraits protéolytiques de cartillage animaux, peau animale porcine ou bovine, rate le @@@@us,foie de bovins, duodénum de porc, elshryons de besoins sans que cette liste ne soit limitative. 5- Procédé de préparation d estralts d'organes selon les rewoen- dications 3 et 4 ci-desst caractérisé en ce que l'étape d'hydrolyse est effectués par fermentation bactérienne. 6-Préparation cosmétique caractérisée en ce qu'elle contient de 0,001 % à 0,1 t de facteurs de croissance selon les revendi cations 1 et 2, en poids sec de facteur de croissance par rapport à la préparation cosmétique terminée. 7-Préparation cosmétique caractérisée en ce qu'elle contient de 0,01 % à 1 t d'extraits d'organes selon les revendications 3 et 4, en poids d'extraits secs d'organes par rapport à la préparation cosmétique terminée.