Brevet FR2529888A1 — publié le 19840113

La présente invention se rapporte à un procédé de pré- paration de composés ayant une activité analogue à celle de la vitamine D et à des composés intervenant comme intermédiaires clés dans ce procédé. On sait que les vitamines D exercent certains effets biologiques,comme la stimulation de l'absorption du calcium dans l'intestin, la stimulation de la résorption minérale os- seuse et la prévention du rachitisme On sait aussi que cette activité biologique dépend de l'altération in vivo de ces vi- tamines, c'est-à-dire de leur métabolisme,en dérivés hydroxylés. Par exemple, on a pu établir que la la,25-dihydroxyvitamine D 3 est la forme active in vivo de la vitamine D 3 et est le composé qui exerce les effets biologiques précités. Les la-hydroxyvitamines D synthétiques analogues, comme la lahydroxyvitamine D 3 et la la-hydroxyvitamine D 2, exercent aussi un effet biologique marqué et ces composésde même que les métabolites naturelsoffrent beaucoup d'intérêt comme agents pour le traitement de différents troubles des os et du métabolisme du calcium, tels que 11 ostéodystrophie, l'os- téomalacie et l'ostéoporose. Du fait que la fonction hydroxyle en position la est essentielle pour conférer l'activité biologique aux vitamines D et à leurs dérivés, les procédés permettant d'effectuer chimi- quement cette hydroxylation ont retenu un intérêt croissant. Sauf un seul procédé suggéré pour la synthèse totale de la lahydroxyvitamine D 3 lLythgoe et al, J Chem Soco, Perkin Trans I, page 2654 ( 197 +)l, toutes les synthèses de vitamines D la-hydroxylées ont impliqué jusqu'à présent la préparation d'un stéroîde la-hydroxylé,à partir duquel, après conversion en le stéroîde la-hydroxy-5,7-diénique correspondant, la vita- mine D désirée est obtenue par des réactions photochimiques bien connues *Ces voids de synthèse comprennent de nombreux stades et sont le plus souvent inefficaces et difficiles. La Demanderesse a découvert à présent un nouveau pro- cédé pour introduire un radical hydroxyle sur l'atome de car- bone n l (position 1 ou C-l) de la vitamine D ou d'un dérivé de la vitamine D et conformément à l'rinvntion une fonction oxygénée est fixée directement en position C-l par oxydation allylique. 4 o De façon générale, dans le procédé de l'inventions on prépare des composés lahydroxylés de formule: R en soumettant des composés (appelés ci-après de façon générale "cyclovitamines D") de formule: R Z à l'oxydation ally 1 ique, en acylant la cyclovitamine la-hydroxy- lée résultante, généralement après isolement, en soumettant le dérivé laO-acylé résultant, généralement après isolement, à la solvolyse catalysée par un acide et en convertissant, géné- ralement par hydrolyse (ou réduction au moyen d'hydrures) la la-Oacylvitamine D résultante, généralement après isolement, en la la-hydroxyvitamine D recherchée, mais l'invention ne cod-. cerne que le stade allylique. Dans les formules ci-dessus, R représente une cha Ine latérale de stéroîdequi est le plus habituellement une chafne latérale de cholestérol substituée ou non substituée ou saturée ou non saturée ou substituée et non saturée (c'est-à-dire sub- stituée et non saturée ou non substituée et noir saturée ou non substituée et saturée) et Z représente un atome d'hydrogène ou 0 o un radical âii 5 A Inférieur ou acyle inférieur ou acyle aromatique tel que par àeiI 8 benzoyle ou benzoyle substitud: Dé pr frrence, R représente une chaîne latérale de cholestérol ou d'ergostérol comprenant un atome d'hydrogène ou un radical hydroxyle sur l'atome de carbone qui occupera la position C-25 dans la molé- cule désirée. Aux fins de l'invention, on qualifie d"'inférieur" un radical alkyle ou acyle de i à environ 4 atomes de carbone qui forment une chaîne hydrocarbonée droite ou ramifiée Dans les formules, une ligne ondulée représentant la liaison d'un substituant indique que celui-ci occupe la position a ou p. Plus spécifiquement, il est préférable que R représen- te une chaîne latérale de cholestérol de formule: R 1 Ri R 3 R 2 o R 1, R 2 et R 3 représentent chacun indépendamment un atome d'hydrogène ou de fluor ou un -radical hydroxyle, alkyle infé 6- rieur, alkyle inférieur substitu, -alkyle inférieur ou 0-al- kyle inférieur substitué Dans la formule de la chaîne latérale que R représente avec une préférence spéciale, R 1 et R 3 représen- tent des atomes d'hydrogène et R 2 représente un radical hydroxy- R 1 le Dans la formule d'autres chaînes latérales préférées, R, R 2 et R 3 représentent des atomes d'hydrogène ou bien R 1 représen- te un radical hydroxyle et R 2 et R 3 représentent des atomes d'hydrogène ou encore R 1 e R 2 représentent des radicaux hydroxy- le et R 3 représente un atome d'hydrogène. Une autre chaîne latérale préférée représentée par R est la chaîne latérale d'ergostérol de formule: R 1 i R R R 2 o R 1, R 2 et R 3 ont chacun la signification qui leur a été don- née ci-dessus et R 4 représente un atome d'hydrogène ou un radi- cal alkyle inférieur Dans la formule de la chaîne latérale d'ergos Yérol que R représente avec une préférence spéciale, R 1 et R 3 représentent les atomes d'hydrogène, R 2 représente-un ra- dical hydroxyle et R 4 représente un radical méthyle ou bien R 1, R 2 et R 3 représentent des atomes d'hydrogène et R 4 représente un radical méthyle, la configuration stéréochimique de R 4 étant celle de l'ergostérol. Il convient de noter que lorsque des radicaux hydro- xyle existent dans la chaîne latérale R de la cyclovitamine D de départ, ils peuvent être acyléspar exemple par des radicaux acyle inférieurscomme acétyle 2 ou acyle inférieurs substitués, comme benzoyle ou benzoyle substituésmais que cette acylation n'est pas nécessaire pour la bonne marche du procédé. Il convient de noter en outre que la chalne latérale R n'appartient pas limitativement aux types énumérés ci-dessus. Le procédé de l'invention est un procédé général applicable à des cyclovitamines D portant de nombreuses parmi les chaines laté- rales courantes de stéroides, par exemple des chaînes latérales de pregnénolone, de desmostérol ou d'acide cholénique ou homocho- lénique, y compris les dérivés de ces acides comme leurs esters. Par cons 6 quent, les cyclovitamines D dont la chaîne latérale R répond, par exemple, aux formules suivantes: > C 00 alkyl, 2 O o OO Oalkyl ou sont des composés de départ qui conviennent pour le procédé de l'invention. La cyclovitamine de départ pour le procédé d'oxyda- tion est préparée avec avantage à partir d'une vitamine D sui- vant le procédé de Sheves et Mazur, J Am Chem Soc 97, 62 i 9 ( 1975) Ce procédé consiste à convertir une vitamine D por- tant un radical hydroxyle en position 3 P en le 3 p-toluènesulfo- nate correspondant,puis à solvolyser ce toluènesulfonate dans un mélange solvant convenablement tamponné, par exemple dans un mélange de méthanol et d'acétone contenant de l'acétate de sodium, pour obtenir la cyclovitamine Sheves et Mazur ont appliqué ce mode opératoire à la vitamine D 3 pour former comme produit prin- 2529888 cipal une cyclovitamine D 3 à laquelle ils attribuent la formule: CH 30 3 1 o) à savoir la 6 R-méthoxy-3,5-cyclovitamine D 3 Une cyclovitamine mineure formée a été identifiée comme étant le composé sembla- ble dont le radical méthoxy est en configuration 65. Au départ de la 25-hydroxyvitamine D 3, on obtient la -hydroxy-6-méthoxy3,5-cyclovitamine D 3 de formule: R CH 31 o R représente la chaîne latérale de 25-hydroxycholestérol et au départ de la vitamine D 2, la même succession de réactions con- duit a la cyclovitamine D 2 de même formule o R représente la chaîne latérale d'ergostérol Ces cyclovitamines sont des com- posés nouveaux Par analogie avec les résultats atteints par Sheves et Mazur (référence précitée), on peut attribuer à la cyclovitamine D formée comme produit majeur au cours de ces réac- tions la configuration stcéréochimique 6 R pour le radical methoxy et à la cyclovitamine mineure ( 5 à l/o) la configuration stéréochimiqt 6 S pour le radical méthoxy I 1 n'est pas nécessaire de séparer ces isomères pour la conduite du procédé de l'inventionmais, y O si la chose est desirée, cette séparation peut être effectuée de manière classique et l'un ou l'autre des épimères en C-6 peut être utilisé, mais pas nécessairement avec la même effica- cité Pour ces différentes raisons, la configuration stéréochi- miquie en C-6 des cyclovitamines D n'est pas précisée. -Ces résultats prouvent qu'une vitamine D portant un radical hydroxyle en position 3 P et l'une des chaînes latérales spécifiées R peut être convertie en cyclovitamine D corres- pondante. Il est par ailleurs évident que par un choix judi- cieux de réactifs ou de conditions convenables, le procédé de l'invention conduit à des cyclovitamines D analogues de la for- mule générale: Z Ou o Z représente un atome d'hydrogène ou un radical alkyle ou acyle et R a la signification qui lui a été donnée ci-dessus. Par conséquent, lorsque 1 'éthanol remplace le méthanol comme milieu de solvolyse, il se forme une cyclovitamine dans la for- mule de laquelle Z représente un radical éthyle De même, d'au- tres cyclovitamines 0-alkylées peuvent être obtenues au moyen de l'alcool approprié dans le mélange de réaction De même en- core, un milieu de solvolyse formé par de l'eau contenant un sol- vant organiquepar exemple un mélange d'acétone et d'eau ou de dioxanne et d'eauen présence d'un acétate salin conduit à la cyclovitamine D de formule ci-dessus o Z représente un atome d'hydrogène Ce produit, si la chose est désirée, peut être con- verti en le dérivé acylé correspondant (c'est-à-dire dans la formule duquel Z représente un radical acyle, par exemple acé- tyle) par acylation dans des conditions classiques (par exemple dans un mélange d'anhydride acétique et de pyridine) La cyclo- vitamine D acylé dans la -formui 'de laquelle Z reprebente un ra- dical acétyle peut aussi apparaître comme produit mineur lors- que la solvolyse est exécutée dans le méthanol anhydre contenant. de l'acétate de sodium La cyclovitamine D dans la formule de laquelle Z représente un radical méthyle est un composé de départ préféré. Dans le procédé de l'invention, l'oxydation allylique est normalement exécutée dans un solvant approprié, par exemple le dichlorométhane, le trichlorométhane, le dioxanne ou le tétra- hydrofuranne,au moyen de dioxyde de sélénium comme oxydant En raison de la nature de cette oxydation, il est hautement préfé- rable de l'exécuter à une température égale ou inférieure à la température ambiante L'oxydation est le plus avantageusement effectuée en présence d'un hydroperoxydecomme le peroxyde d'hy- drogène ou un hydroperoxyde d'alkyle tel que l'hydroperoxyde de t-butyle Le produit d'oxydation, à savoir la la-hydroxycyclovi- tamine D, est aisément isolée du mélange de réaction par extrac- tion et est utilement davantage purifiée par chromatographie Si la chose est désirée, d'autres oxydants allyliques peuvent être utilisés,mais il convient de noter que le rendement en produit peut être différent et qu'il peut être nécessaire d'ajuster les conditions opératoires Les produits de l'oxydation allylique des cyclovitamines D répondent à la formule: R zo OH H o R et Z ont la signification qui leur a été -donnée ci-dessus. avec des quantités mineures du dérivé oxo correspondant_ L'oxydation des cyclovitamines conduit-à des 1-hydro- xycyclovitamines ayant la configuration stéréochimique la désirée parce que cette dernière est la configuration stéréochimique des métabolites 1hydroxylés biologiquement actifs de la vitamine D. 2529888 ' La sélectivité de position et de configuration stéréochimique- de même que l'efficacité remarquable de l'oxydation constituent une découverte surprenante Toutes les la-hydroxycyclovitamines décrites dans le présent mémoire sont des composés nouveaux. IL'acylation de la la-hydroxycyclovitamine D ainsi recueillie est avantageusement exécutée de manière connue à l'aide de réactifs d'acylation classiquescomme l'anhydride acétiquedans un solvant appoprie, comme la pyridine,normalement en quelques heures, par exemple une nuit, A la température ambian- te Le produit de l'acylation est la la-0-acylcyclovitamine D correspondante que l'extraction à partir du milieupuis l'évapo- ration des solvants donnent sous une forme d'une pureté suffisan- te pour les réactions ultérieures Il est à prévoir que les radicaux hydroxyle primaires ou secondaires éventuels de la chai- ne latérale R de la la-hydroxycyclovitamine D soient acylés dans ces conditions ' Lorsque l'acylation complète des radicaux hydroxyle tertiaires (par exemple du radical hydroxyle en posi- tion 25) est désirée, des conditions d'acylation plus rigoureuses sontnormalement requises, par exemple une température élevée' ( 75 à 100 C) Il est alors recommandable d'exécuter la réaction en atmosphère d'azote pour éviter une décomposition des composés labiles Les produits de ces acylations sont de formule: R OY o Y représente un radical acyle inférieur (par exemple acétyle) ou acyle aromatique ( par-'exemple benzoyle) et Z représente un radical alkyle inférieur (par exemple méthyle) ou acyle inférieur et R a la signification qui lui a été donnée ci-dessus, étant entendu que les radicaux hydroxyle secondaires ou primaires existant initialement se présentent sous forme de radicaux 0acyle correspondants et que les radicaux hydroxyle tertiaires existant initialement se présentent sous forme de ra- dicaux hydroxyle ou de radicaux 0-acyle suivant les conditions choisies. La conversion de la la-0-acylcyclovitamine en la-O- acylvitamine D peut être effectuée par solvolyse de la cyclovi- tamine sous l'effet catalytique d'un aoide Ainsi, le chauffage de la la-0-acylcyclovitamine D avec de l'acide p-toluènesulfoni- que dans un solvant convenable (comme un mélange de dioxanne et d'eau) donne la la-O-acylvitamine D Sheves et Mazur ont appli- qué cette réaction à la conversion de la cyclovitamine D 3 en vitamine D 3 lJ Am Chem Soc 9, 6249 ( 1975)l Une nouvelle découverte surprenante qu'aucune indication antérieure ne per- mettait de prévoir est que les la-0-acylcyclovitamines D sont converties par solvolyse acide convenablement en la-0-acylvitami- nae correspondantes- Ce résultat est inattendu parce qu'il était à prévoir que la fonction la-oxygénée allylique d'une la-hydroxy- cyclovitamine D serait labile dans les conditions de la solvolyse. En effet, la solvolyse de la la-hydroxycyclovitamine D est inap- plicable parce qu'elle -conduit à un mélange compliqué de produits et qu'il est nécessaire de protéger la fonction hydroxyle sous forme de fonction la-O-acyle; cette protection constitue un élé- ment important de la découverte Il est important aussi que les fonctions alcooliques tertiaires ou allyliques pouvant exister en chaîne latérale peuvent être protégées sous forme de fonction acylée correspondantes ou d'autres fonctions protectrices appro- priées resistant aux acides La la-0-acylvitamine D obtenue peut être isolée aisément du mélange de solvolyse par extraction en solvantpuis purifiée davantage par chromatographie La solvo- lyse donne non seulement la 1 a-0-acylvitamine D dont la double liaison présente la géométrie naturelle 5,6-cismais aussi la la-O-acylvitamine D correspondante dont la double liaison présen- -te la géométr e 5,6 transdans un rapport d'environ 5:1 Ces composés peuvent être séparés aisément par extraction en solvant et chromatographie pour l'isolement de la la-O-acylvitamine D pure de la formule générale ci-après (et ausside façon éviden- te,de l'isom&re 5,6-trans), -0 2529888 ' R HO OY o Y représente un radical acyle inférieur (Par exemple) acétyle) ou acyle aromatique (-par exemple benzoyle)- et R a la signification qui lui a été donnée ci-dessus, étant en- tendu que toutes les fonctions hydroxyle se présentent sous forme de fonctions 0-acyle correspondantes. Les l-O 0-acylvitamines D sont converties aisément en la-hydroxyvitamines D recherchées par élimination hydrolytique ou réductrice du radical acyle protecteur Le mode opératoire spécifique choisi dépènd de la nature du composé et en particu- lier de la nature de la chalne latérale R et de ses substituants. Par exemple, il est évident que la réduction par les hydruxes n'est pas applicable lorsque la réduction simultanée d'une autre fonction susceptible de réduction,comme une fonction cétone ou ester,doit être évitéesauf si ces fonctions sont convenablement modifiées avant l'élimination des radicaux acyle par réduction. Par conséquent, la réaction du composé aeylé avec un hydrure réducteur convenable (comme l'hydrure de lithiumaluminium) con- duit à la la-hydroxyvitamine D correspondante De même,l'hydro- lyse alcaline modérée (par exemple dans l'hydroxyde de potassium méthanolique) convertit le composé acylé en dérivé la-hydroxylé recherché, étant entendu que lorsque la chaîne latérale porte des radicaux 0-acyle à empêchement stérique (par exemple des radicaux tertiaires), des conditions plus vives peuvent être nécessaires (températures plus élevées et plus grande durée de réaction) La la-hydroxyvitamine D préparée de l'une ou l'autre façon est re- cueillie aisément à l'état de pureté par extraction et chromato- graphie et/ou cristallisation dans un solvant convenable. n procédé nouveau et différent pour la conversion des la-0-acylcyclovitamines D en vitamines D correspondantes con- siste à soumettre à la solvolyse catalysée par un acide la cy- 11 2529888 clovitamine dans un milieu consistant en un acide organique (comme l'acide acétique ou formique) ou en un acide organique et en un cosolvant tel que l'acétone ou le dioxanne, si la chose est nécessaire pour la solubilisation de là cyclovitamine Un avantage particulier de ce mode opératoire est que si la chaîne latérale R contient des radicaux hydroxyle tertiaires (par exem- ple le radical hydroxyle en position 25), la protection de ces fonctions, par exemple par acylationn'est pas nécessaire Dès lors, par exemple,la solvolyse de la la-0-acétoxyvitamine D 3 dans l'acide acétique glacial donne le 3 P-acétate de la-acétoxyvitami- ne D 3 et une certaine quantité du dérivé 5,6-trans correspondant (dans un rapport d'environ 3:1) Ces composés peuvent être sé- parés par chromatographie ou bien leur mélange peut être hydroly- sé en milieu alcalin (par exemple dans l'hydroxyde de potassium méthanolique) pour donner la la-hydroxyvitamine D 3 et la l-hydro- xy-5,6-trans-vitamine D 3 correspondante, lesquelles vitamines peuvent alors être séparées par chromatographie Ce mode opéra- toire est applicable à toute la-0-acylcyclovitamine D portant l'une quelconque des chaines latérales R définies. De façon encore plus avantageuse, la solvolyse des la-O-acylcC lovitamines peut être exécutée dans l'acide formique ou dans l'acide formique additionné d'un cosolvant convenable tel que le dioxanne Ce mode opératoire conduit au 3 P-formiate de la-O-acylvitamine D de formule: 3 o o OY o Y représente un radical acyle inférieur (mais de préférence par le radical formyle ou un radical acyle aromatiqu, et R a la signification qui lui a été donnée ci dessus A nouveau, le composé 5,6-trans se forme comme produit mineur Du fait que le radical 3-0 O-formyle est très aisément hydrolysé dans des conditions o le radical la-0-acyle n'est pas affecté (par exemple par traitement de quelques minutes avec du carbonate de potassium comme illustré par les exemples), le mé- lange des composés 3-0-formylés ci-dessus est aisément converti en la-0-acylvitamine D et en l'isomère 5,6-trans correspondant. Ce m 1 lange peut 8 tre fraotionn 6 ai 6 ment & ce stade par ohroma- tographie pour donner la la-O-acylvitamine D pure et la 5,6-trans- la-0-acylvitamine D correspondante qui peuvent être soumises alors séparément à l'hydrolyse alcaline ou à l'élimination ré- ductrice du radical acyle pour la formation de la la-hydroxyvi- tamine D et de la 5,6-trans-la-hydroxyvitamine D. Une autre variante consiste à convertir la la-hydroxy- cyclovitamine D en le dérivé la-O 0-formylé correspondant (par exemple au moyen d'anhydride acétique-formique dans la pyridine) de la formule: H o R a la signification qui lui a été donnée ci-dessus et Z re- présente un radical alkyle inférieur ou acyle inférieur (y com r pris formyle) puis à soumettre ce composé intermédiaire à la solvolyse dans l'acide acétique glacial conduisant au 3 P-acétate de laformyloxyvitamine D et comme produit mineur à l'isomère ,6-trans correspondant L'élimination du radical formyle con- duit au 3 '-acétate de la-hydroxyvitamine D et à l'isomère 5,6- trans correspondant qui sont séparés aisément à ce stade par chromatographie,puis soumis séparément à l'hydrolyse ou à l'éli- mination réductrice du radical acétate pour la formation de la la-hydroxyvitamine D et de son isomère 5,6-trans. -Dans les exemples ci-après qui illustrent davantage l'invention, les numéros d'identification des composés parti- culiers, par exemple 3 a pour la la-hydroxycyclovitamine D 3,corres- pondent aux indications données ci-après: l n R C 3 2 3 R Il est à remarquer que les pr EXEM'PIJE 1 forme cristallîne la HY 4 oxycvcovitamine D 3 ( 3 a-) On ajourte 7 ulit Tes, dle 1,1 + mg, soit 1,2 x 10 >mole 1,O) m dle dlichlorométhane sec. on ajoute goutte à goutte une so raoie, dle 3,5-cyclovitamine D 3 lc o tamine)-G, (la) par le procédé dle oduits peuvent g'tre obtenus sous Soit 5,1 X 1075 mole, d'une so- t-butyle à une suspension agitée dle dioxyde dle sélénium dans Après 25 minutes (l'agitation, lution de 9 mig, *soit 2,3 x 107 omposé 2 a pxéparé à pa 2 rti I dle vi- Sheves et Mazurg J m Chem Soc. R CH 30 H 3 a: = b: = 92 Z, 6249 ( 1975)l dans 0,-5 ml de dichlorométhane On agite le mélange à la température ambiante pendant encore 25 minutes On y ajoute ensuite 2,0 ml d'hydroxyde de sodium à l CP/o,puis on di- lue le nouveau mélange avec 15 ml-d'éther diéthylique On sépa- re la phase organique et on la lave successivement deux fois avec ml d'hydroxyde de sodium & 1 Co à chaque reprise, deux fois avec 10 ml d'eau à chaque reprise, 3 fois avec 10 ml de sulfate ferreux saturé à chaque reprise et 1 fois avec 15 ml de chlorure de sodium saturé, après quoi on la sèche sur du sulfate de magné- sium Par élimination du solvant sous vide, on obtient un pro-. duit huileux brut donnant,après chromatographie sur plaque min- ce de gel de silice ( 10 cm x 20 cm, 750/u) éluée avec 30 % d'acé- tate d'éthyle dans du Skellysolve B,en quantité de F,5 mgsoit avec un rendement de 43 %,la la-hydroxy-3,5-cyclovitamine D 3 ( 3 a) dont le spectre de masse comprend des signaux pour des valeurs- * de-m/e de 414 ( 30), 382 ( 70), 341 ( 35), 269 ( 20), 247 ( 45), 174 ( 25) , ( 30), 135 ( 65) et dont le spectre de résonance magnétique nu- cléaire comprend des signaux 6 à 0,53 ( 3 H, s, 18-H 3), 0,61 ( 2 Ht' m, 4-H 2), 0,87 ( 6 H, d, 26-H 3 et 27-H 3), 0,92 ( 3 H, d, 21-H 3), 3,26 ( 3 H, s, 6-OCH 3), 4,18 ( 1 H, d, J= 9,0 Hz, 6-H), 4,22 ( 1 H, m, 1-H), 4, 95 (i H, d, J= 9 Hz, 7-H), 5,17 (i H, d, J= 2,2 Hz, 19 (Z)-H), 5,25 ( 1 H, d, J= 2,2 Hz 19 (E)-I 1) et 2 mg de 1-oxocyclovitamine D 3 (M/E a 412) ont été également isolés. EXEMPLE 2 l e-Acétoxwcyclovitamine D 3 (_ 4 a) On dissout 1,5 mg du composé 3 a dans 200 /ulitres de pyridine sèche et 50 /ulitres d'anhydride acétique On conserve le mélange de réaction à la température ambiante jusqu'au lende- mainpuis on le dilue avec 5 ml d'une solution saturée de bicar- bonate de sodium On extrait la nouvelle solution trois fois avec 5 ml d'éther à chaque reprisepuis on lave le mélange des extraits organiques 2 fois avec 10 O ml d'eau à chaque reprise et on le sèche sur du sulfate de magnésium avant d'en chasser le solvant sous vide pour obtenir le composé ha dont le spectre de résonance magnétique nucléaire comprend des signaux 6 à 0,53 ( 3 H, s, 18-H 3), 0,69 ( 2 H, m, 4-H 2), 0,87 ( 6 H, d, 26-H 3 et 27-H 3), 0,92 ( 3 E, d, 21-H 3), 2,10 ( 3 H, S 1-OAC), 3,26 ( 3 H, s, 6-OCH 3), 4,18 ( 1 H, d, J= 9,2 Hz, 6-H), 4,98 ( 1 H, d, J= 9,2 Hz, 7-11), 4,98 ( 1 H, d, J= 2,1 Hz, 19 (Z)-H), 5,23 ( 1 H, m, 1-H), 5,25 (l H, d, J= 2,1 Hz, 19 (E)-H). O EXEMPLE 3 - la-Hvydrox-vitamine D ( 6 a) 3, On chauffe à 5500 une solution de 1,3 mg du composé ( 4 a) dans 0,5 ml d'un mélange 3:1 de 1,i-dioxanne et d'eaupuis on y ajoute 0,2 mg d'acide p-toluenesulfonique dans 4/ulitres d'eau et on poursuit le chauffage du nouveau mélange pendant minutes On arrête la réaction au moyen de 2 ml d'une so- lution saturée de bicarbonate de sodiumpuis on extrait le mé- lange deux fois avec 10 ml d'éther à chaque reprise On sèche les extraits organiques sur du sulfate de magnésium et on chasse le solvant sous vide On chromatographie le produit brut ensui- te sur une plaque de gel de silice de 10 cm x 20 cm qu'on dé- veloppe avec un mélange de 30 lo d'acétate d'éthyle dans du Skelly- solve B pour obtenir 400 /ug du composé 5 a dont le spectre ultra- violet comprend un Xmax à 264 nanomètres, dont le spectre de masse comprend des signaux pour des valeurs de m/e de 442 (M+,. ), 382 ( 70), 269 ( 15), 134 ( 100),et dont le spectre de résonance magnétiq nucléaire comprend des signaux à 0,52 ( 3 H, s, 18-H 3), 0,86 ( 6 H, d, J= 5,5 Hz, 26-H 3 et 27-H 3), 0,91 ( 3 H, d, J= 5,9 Hz, 21-H 3), 2,03 ( 3 H, c, 1-OCOH 3), 4,19 ( 1 H, m, 3-H), 5,04 ( 1 H, d, J= 1,5 Hz, 19 (Z)-H), 5,31 ( 1 H, m(fin), 19 (E)-H), 5,W 9 ( 1 H, m, 1-H), 5,93 ( 1 H, d, J= 11,1 Hz, 7-H), 6,37 ( 1 H, d, J= 11,4 Hz, 6-H). On reprend le produit 5 a dans 0,5 ml d'éther et on ajoute un excès d'hydrure de lithiumaluminium à la solution On arrête la réaction au moyen d'une solution saturée de chlorure de sodium,puis on isole le produit par filtration et évaporation du solvant du filtrat sous vide La chromatographie simultanée du produit unique 6 a et d'un échantillon authentique de lx-hy- droxyvitamine D dans un mélange 97:3 de trichlorométhane et de méthanol permet d'observer que le produit de réaction 6 a a un Rf de O,10,tandisque la la-hydroxyvitamine D 3 a un Rf de 0,10 et que la lp-hydroxyvitamine D 3 a un Rf de 0,15 Ce produit pré- sente dans le spectre ultraviolet un)max à 264 nanomètres et max a un spectre de masse et un spectre de résonance magnétique nu- cléaire qui sont identiques à ceux de la la-hydroxyvitamine D 3 authentique. EXEMPLE 1 L - -H- droxycyclovitamine D 3 ( 2 b) On fait réagir pendant 24 heures à 3 C une solution de 100 mg de 25-hydroxyvitamine D 3 (lb) et de 150 mg de chlorure 16 2529888 de P-tolu&nesulfonyle dans 0,5 ml de pyridine schepuis on ar- êt.e la réaction au moyen de 5 ml de bicarbonate de sodium sa- t Uré On extrait la phase aqueuse deux lois avec 10 m I d'éther à chaque repmisepuis on lave l'extrait éth 6 &é 3 fois avec 10 ml de bicarbonate de sodium satur 6 '& chaque 1 eprise, 2 fois aves ml d'acide chlorhydrique à 3 % à chaque reprise et deux fois avec 10 ml d'e-au a chaque repriseapr&s quoi on le sèche sur du sulfate de magnésium On chasse le solvant sous vide et on re- prend le 3-toluènesulfonate de 25-hydroxyvitamine D 3 brut rési- duel dans 1,5 ml de méthanol anhydre et 0,3 ml d'acétone anhydre, après quoi on ajoute au mélange 170 mg, soit 8 équivalentsd'acé-' tate de sodium et on chauffe la solution pendant 20 heures à 55 0. OC refroidit le mélange, on le dilue avec 10 ml d'eau et on l'ex- trait 3 fois avec 10 ml d'éther à chaque reprise À On lave les extraits organiques trois fois avec 10 ml d'eau à chaque reprise, puis on les sèche sur du sulfate de magnésium et on évapore le solvant sous vide On soumet le résidu brut à la chromatographie en couche mince sur une plaque de gel de silice de 20 cm x 20 cm d'une épaisseur de 750 /u qu'on développe une fois dans un mélan- ge 8:2 de Skellysolve B et d'acétate d'éthyle pour obtenir en quantité de 48 mg, soit avec un -rendement d'ensemble de 45 % sur la base du composé lb, le composé 2 b dont le spectre de masse présente des signaux pour les valeurs de m/e de 4 14 ( 1 +, 40), 399 ( 10), 382 ( 80), 253 ( 50), 59 ( 100) et dont le spectre de réso- riance magnétique nucléaire présente des signaux S à'0,53 ( 3 H, s, 18-HE 3), 0,74 ( 2 H, m, 4-H 2), 0,94 ( 3 H, d, J= 6,2 Hz,' 21-H 3), 1,21 ( 6 H, s, 26-H 3 et 27-H 3), 3,25 ( 3 H, s, 6-o He 3), 4,16 ( 1 H, d, J= 9,2 Hz, 6-H), 4,89 ( 1 H, m(fin), 19 (Z)-H), 4,99 ( 1 H, d, J= 9,3 Hz', 7-H), 5,04 ( 1 H, rm(fin), 19 (E)-Hi). On fait réagir à la température ambiante pendant 30 mi- nutes un mélange de 2,45 mg, soit 0,5 équivalent, de dioxyde de sélénium, de 14/ulitres, soit 2 équivalents, d'hydroperoxyde de t-butyle et de 1,2 ml de dichlorométhane sec On ajoute goutte à goutte au mrlange oxydant la cyclovitamine 2 b dissoute dans 0,5 ml de dichlorométhane et on poursuit la réaction pendant 15 minutes. On arrête la réaction ensuite au moyen de 2,0 ml d'hydroxyde de sodium à l Upuis on dilue le mélange avec 20 ml d' ther diéthy- lique On sépare la phase organique qu'on lave successivement 17 2529888 avec de l'hydroxyde de sodium à l,/o, de l'eau, une solution sa- turée de sulfate ferreux, une solution saturée de bicarbonate de sodium et a I nouveau de l'eau, puis qu'on sèche sur du sulfate de magnésium On chasse le solvant sous vide et on soumet le rési- du brut à la chromatographie en couche mince sur une plaque de gel de silice ( 20 cm x 20 cm, épaisseur de 750 /u)qu'on déve- loppe au moyen d'un mélange 6:4 de Skellysolve B et d'acétate d'éthyle pour obtenir en quantité de ll mg, soit avec un rende- ment de 53 %,1 e composé 3 b dont le spectre de masse comprend des signaux pour des valeurs de m/e de 430 (M+, 15), 412 ( 12), 380 ( 35), 269 ( 10), 59 ( 100) et dont le spectre de résonance magnétique nu- cléaire comprend des signaux S à 0,53 ( 3 H, s, 18-H 3), 0,61 ( 2 H, m, 4H 2), 0,93 ( 3 H, d, J= 6,2 Hz, 21-H 3), 1,21 ( 6 H, s, 26-H 3 et 27-H 3), 3,25 ( 3 H, s, 6-oe CH 3)', 4,17 ( 1 H, d, J= 9,2 Hz, 6-H), 4,20 ( 1 H, m, 1-H), 4,95 ( 1 H, d, J= 9,2 Hz, 7-H), 5,19 ( 1 H, d, J=l,9 Hz, 19 (Z)- H) 5,22 ( 1 H, d, J=l,9 Hz, 19 (E)-H) la 1-oxo-25-hydroxy cyclovitamine D 3 (M/E à 428) a également été isolé ( 15 EXEMPLE 6 -25-Diacétate de la 25-dih-vdroxvcvclovitamine D 3 -acty-b) On ajoute 10/ulitres d'anhydride acétique à une solu- tion de 7 mg du composé 3 b dans 200 ulitres de pyridine sèche. On purge le système à l'azotepuis on le chauffe à 970 C pendant 16,0 heures Après refroidissement, on dilue le mélange avec ml de bicarbonate de sodium saturé On extrait le mélange aqueux deux fois avec 10 ml d'éther à chaque reprisepuis on la- ve la phase organique successivement deux fois avec 10 ml de bi- carbonate ce sodium saturé à chaque reprise et avec 10 ml d'eau. Après séchage sur du sulfate de magnésium, on chasse le solvant et le résidu de pyridine sous vide par distillation azéotropique avec du benzène On soumet le produit brut à la chromatographie en couche mince sur une plaque de gel de silice ( 10 cm x 20 cm, épaisseur de 750 /u) qu'on développe avec un mélange 8:2 de kelltsolve B et d'acétate d'éthyle pour obtenir en quantité de 6 mg, soit avec un rendement de 72 %,le diacétate ( 25-Oacétyl- b) et en quantité de 1,2 mg le dérivé 3-acétoxy-25-hydroxylé correspondant. k 25-Diacetate de l 25-dihvdro_ iitamine D 3 C 250 acetyl5 b)_ On ajoute 8/ulitres d'une solution d'acide p-toluène- sulfonique dani de 5-eau i 38 mg du dîacétate ci-dessus ( 25-0- 18 2529888 acéyl-4 b) en solution dans 400 /ulitres d'un mélange 3:1 de dio- xanne et d'eau qu'on a chauffé au préalable à 55 I Cpuis on pour- suit le chauff Lge pendant 10 minutes On arrête la réaction au moyen de bicarbonate de sodium satur 6,puis on extrait le mélan- ge deux fois avec 10 ml d'éther à chaque reprise On lave la solution éthérée avec deux fractions de 10 ml d'eau à chaque re- prise,puis on la sèche sur du sulfate de magnésium On chasse le solvant sous vide, puis on soumet le résidu à la chromatogra- phie en couche sur une plaque de gel de silice ( 5 cm x 20 cm, épaisseur 250/u) qu'on développe avec un mélange 8:2 de Skelly- solve B et d'acétate d'éthyle pour obtenir en quantité-de 1,8 mg; soit avec un rendement de 45 %o X le composé recherché 'dont le spectre ultraviolet comprend un max a 265 nanomètres dont le spectre de masse comprend des signaux pour des valeurs de m/e de 500 (M+, 25) 440 ( 55), 422 ( 15), 398 ( 10), 380 ( 45), 134 ( 100) et dont le spectre de résonance magnétique nucléaire comprend des signaux 6 & 0,52 ( 3 H, s, 18H 3), 0,92 ( 3 H, d, J= 6,2 Hz, 21-H 3), 1,142 ( 6 H, s, 26-H 3 et 27-H 3) , 1,97 ( 3 H, s, 25-C 00 H 3) 2,03 ( 3 H, s, l-C 000 H 3), 4,18 ( 1 H, m, 3-H), 5,03 (l H,l d, J=l,l Hz, 19 (Z)-H), 5,31 ( 1 H, m(fin), 19 (E)-H), 5,49 ( 1 H, m, 1-H), 5,93 ( 1 H, d, J= 10,7 Hz, 7-H), 6,37 ( 1 H, d, J=ll,4 Hz, 6-H). EXEMPLE 8 - l: 25-Dihbdrox Vyitamine On ajoute 0,5 ml d'une solution éthérée saturée d'hy- drure de lithiumaluminium à une solution agitée de 1,0 mg de 1,25-diacétate de la,25-dihydroxyvitamine D 3 dans 1,5 ml d'éther. Après 10 minutes à la température ambiante, on arrête la réac- tion au moyen d'une solution saturée de chlorure de sodium 2 puis on dissout les sels par addition d'acide chlorhydrique à 3 % On extrait la phase aqueuse à l'éther,puis on lave les extraits éthé- rés avec de l'eau et on les sèche sur du sulfate de magnésium. Par chromatographie en couche mince sur des plaques de gel de silice ( 5 cm x 20 cm, épaisseur de 250/u) au moyen de 5 % de mé- thanol dans du trichlorométhane, on obtient en quantité de 0,6 mg, soit avec un rendement de 7 Y/o,la lo,25-dihydroxyvitamine D 3 ( 6 b)- dont le spectre ultraviolet comprend un max à 265 nanom&tres O n max établit l'identité du composé 6 b comme étant la la,25-dihydroxy- vitamine D 3 par comparaison directe du spectre de masse et du spectre de résonance magnétique nucléaire avec ceux d'un échan- tillon authentique,de même que Dar chromatographie simultanée du 19 2529888. composé 6 b et d'un échantillon authentique de la,25-dihydcroxyvi- tamine D 3 3. EXEMPLE 9 - v Cyclovitamine D 2 '2 c_ QOn fait réagir pendant 24 heures à 3 00 une solution de 100 mg de vitamine D 2 ( 1 l) et de 100 mg de chlorure de p-to- luènesulfonyle dans 0,3 ml de pyridine,puis on arrête la réaction au moyen de 10 ml de bicarbonate de sodium saturé On extrait le mélange aqueux deux fois avec 10 ml d'éther à chaque reprise, après quoi on lave l'extrait éthéré successivement trois fois avec 10 mi de bicarbonate de sodium saturé à chaque reprise,. deux fois avec 10 ml d'acide chlorhydrique à 3 % à chaque reprise et 2 fois avec 10 ml d'eau à chaque reprise, puis on le sè- che sur du sulfate de magnésium Ona chasse le solvant sous vide et on reprend le 3-p-toluènesulfonate de vitamine D 2 brut dans 1,5 ml de méthanol anhydre et 0,3 ml d'acétone anhydre Après addition de 170 mg d'acétate de sodium,on chauffe la solution pendant 20 heures à 550 Après refroidissement, on dilue la solution avec 10 ml d'eau et on l'extrait trois fois avec 10 ml d'éther à chaque reprise On lave les extraits organiques trois fois avec 10 ml d'eau à chaque meprisepuis on les sèche sur du sulfate de magnésium et on en chasse le solvant sous vide On soumet le résidu à la chromatographie en couche sur des plaques de gel de silice ( 20 cm x 20 cm, épaisseur de 750/u) quion élue avec un mélange 8:2 de Skellysolve B et d'acétate d'éthyle pour obtenir en quantité de 60 mg, soit avec un rendement de 59 %,1 a cyclovitamine D 2 dont le spectre de masse comprend des signaux pour des valeurs de m/e de l O(M+, 15), 378 ( 40), 253 ( 40), 119 ( 60)et dont le spectre de résonance magnétique nucléaire comprend des signaux 6 à 0,55 ( 3 H, s, 18-H 3), 0,74 ( 2 H, m, 4-H 2), 0,82 et 0,84 ( 6 H, dd, J= 4,1 Hz, 26-H 3 et 27-H 3), 0,91 ( 3 H, d, J 7,0 O Hz, 21-H 3), 1,02 ( 3 H, d, J= 6,6 Hz, 28-H 3), 3,26 ( 3 H, s, 6-o CH 3), +,13 ( 1 H, d, J= 9,6 Hz, 6-H), 4,89 ( 1 H, m, 19 (Z)-H), 5,00 ( 1 H, d, J= 9,4 Hz, 7-H), 5,IC 4 ( 1 H, m(fin), 19 (E)-H), 5,20 ( 2 H, m, 22-H et 23-H). EXEMPLE 10 - la-Hvdroxyvcyclovitamine D 2 tc On fait réagir pendant 30 minutes un mélange de 2,7 mg de dioxyde de sélénium et de 13,4 /ulitres d'hydroperoxyde de t- butyle à 7 Y%/ dans 1,5 ml de dichlorométhane sec On ajoute alors goutte à goutte une solution de 20 mg du composé 2 c dans 0,5 ml 2529888 l de dichlorométhane et on poursuit la réaction pendant 15 minutes, puis on l'arréte au moyen de 2,0 ml d'hydroxyde de sodium à 11 Oo. On dilue la solution avec 15 ml d'étherpuis on sépare la phase éthérée et on la lave successivement avec de l'hydroxyde de so- dium & l/o,avec de l'eau, avec une solution saturée de sulfate ferreux, avec une solution saturée de bicarbonate de sodium et a nouveau avec de l'eau Après séchage sur du sulfate de magné- sium, on chasse le solvant sous videpuis on soumet le résidu à une chromatographie en couche mince sur une plaque de gel de si- lice ( 20 cm x 20 cm, épaisseur 750 /u) qu'on élue une flois avec un mélange 8:2 de Skellysolve B et d'acétate d'éthyle pour obte- nir en quantité de 9,5 mg,soit avec un rendement de + 5 %,le compo- sé 3 c dont le spectre de masse comprend des signaux pour des valeurs de m/e de 426 (M+, 55), 394 ( 75), 353 ( 30), 269 ( 40), 135 ( 95) et dont le spectre de résonance magnétique nucléaire com- prend des signaux 5 à 0,53 ( 3 H, s, 18-H 3), 0,63 ( 2 H, m, 4-H 2), 0,82 et 0,8 + ( 6 H, dd, 26-H 3 et 27-H 3), 0,92 ( 3 H, d, J= 6,0 Hz, 21-H 3), 1,02 ( 3 H, d, J= 6,4 Hz, 28-H 3), 3,26 ( 3 H, s, 6-OH 3), 4,18 ( 1 H, d, J= 9,6 Hz, 6-H), 4,21 ( 1 H, m, 1-H), 4,94 ( 1 H, d, J= 9,6 Hz, 7-H), 5, 17 ( 1 H, m(fin), 19 (Z)-H),5 e 19 ( 2 H, m, 22-H et 23-H), 5,24 ( 1 H, m(fin), 19 (E)-H). EXEMPLE 11 - 1-Acétate de lac-hdroxvc-vclovitamine D 2 (, On ajoute 150/ulitres d'anhydride acétique à un-mé- lange de 6,5 mg du composé 3 c et de 300 pulitres de pyridine sèche Cn chauffe la solution à 55 C pendant 90 minutes 5 puis on la dilue avec 5 ml de bicarbonate de sodium' saturé, après quoi on extrait le mélange deux fois avec 10 ml d'éther à chaque re- prise On lave les extraits organiques avec du bicarbonate de sodium saturé et de l'eau, après quoi on les sèche sur du sulfa- te de magnésium et on chasse le solvant et le résidu de pyridine sous vide par distillation azéotropique avec du benzène afin d'obtenir le composé 4 c dont le spectre de masse comprend des signaux pour des valeurs de m/e de 468 (M+, 40), 108 ( 20), 376 ( 65), 251 ( 60), 135 ( 100). EXEMPLE 12 - 1-Acétate de la-hydroxyvitamin D 2 ( 5 c) On chauffe à 55 une solution de 5,0 mg de 1-acétate de la-hydroxycyclovitamine D 2 dans 400 uitres d:un mélange 3:1 de dioxanne et d'eau,puis on ajoute 12/ulitres d'une solution aqueuse d'acide p-toluènesulfonique à 50 /ug//ulitre et on pour- suit le chauffage pendant 10 minutes On arrête la réaction en- suite au moyen de bicarbonate de sodium saturé et on extrait le mélange deux fois avec 10 ml d'éther à chaque reprise on lave la phase éthérée sépar 6 e avec 10 ml de bicarbonate de sodium sa- turé et deux fois avec 10 ml d'eau & chaque reprise, puis on la sèche sur du sulfate de magnésium et on en chasse le solvant sous vide Par chromatographie en couche mince préparative sur gel de silice avec élution au moyen d'un mélange 8:2 de Skelly- solve et d'acétate d'éthyle, on obtient en quantité de 1,6 mg, soit avec un rendement de 32 %,le composé 5 c dont le spectre ul- traviolet comprend un max à 265 nanomètresdont le spectre de masse comprend des signaux pour des valeurs de m/e de 454 (M+, 80), 394 ( 80), 376 ( 20), 269 ( 40), 135 ( 100) et dont le spectre de réso- nance magnétique nucléaire comprend des signaux & à 0,53 ( 3 H,s, 18-H 3), 0,81 et 0,84 ( 6 H, d, J= 4,4 Hz, 26-H 3 et 27-H 3), 0,91 ( 3 H, d, J= 7, 0 H Iz, 21-H 3), 1,01 ( 3 H, d, J= 6,7 Hz, 28-H 3), 2,03 ( 3 H, s, 3OCOCH 3), 4,18 ( 1 H, m, 3-H), 5,03 ( 1 H, d, J= 1,5 Hz, 19 (Z)-H), ,19 ( 21 H, m, 22-H et 23-H), 5,3 ( 1 H, m(fin), 19 (E)-H), 5,48 ( 1 H, m,l-H), 5,92 (MI, d, J=ll,0 Hz, 7-H), 6,37 ( 1 H, d, J=ll,0 Hz, 6-1). EE 1 IL 13, ic L-Hydroxv ritsmine 26 On ajoute 0,5 ml d'une solution saturée d'hydrure de iithiumaluminium dans l'éther à une solution de 1,1 mg de 1-acé- tate de la-hydroxyvitamine D 2 dans 1,5 ml d'éther Après 10 mi- nutes à la température ambiante, on arrête la réaction au moyen de chlorure de sodium saturé 5 puis on dissout les sels dans de l'acide chlorhydrique à 3 % On extrait la solution aqueuse à 1 'étherpuis on lave les extraits organiques à l'eau et:on les sèche sur du sulfate de magnésium Par chromatographie en couche mince sur des plaques de gel de silice ( 5 cm x 20 cm, épaisseur de 250 u) qu'on élue avec 5 % de méthanol dans du chloroforme, on obtient en quantité de 0,8 mgsoit avec un rendement de 75 %, la la-hydroxyvïtamine D 2 dont le spectre ultraviolet comprend un Frax à 265 nanom Stres, dont le spectre de masse comprend-des signaux pour les valeurs de m/e de 412 (M+), 394, 376, 287, 269, 251, 152, 134 (pic de base) et dont le spectre de résonance ma- gnetioue nucléaire comprend les signaux à O 56 ( 3 H, s, 18-H 3) 4 O 0,82 e O $ 84 ( 6 Hi, dd J:ii, Hz, 26-H 3 et 27-13)9 0,92 ( 3119 d. 22 2529888 J= 6,6 Hz, 21-H 3), 1,02 ( 3 H, d, J= 6,6 Hz, 28-H 3),),23 ( 1 H, m, 3-H), +,+ 2 ( 1 H, m, i-H), 5,00 ( 1 H, m(fin): 19 (Z)-H), 5,20 ( 2 H, m, 22-H et 23-H), 5,32 ( 1 H, dd, J= 1,4 Hz, 19 (E)-H), 6,02 ( 1 H, d, J= 10,7 Hz, 7-H), 6,38 ( 1 H, d, J= 11,l Hz, 6-H) Ces résultats de spectro- scopie sont en parfait accord avec ceux relevés sur la la-hydroxyvitamine D 2 préparée par une voie entièrement différente lLamn et al Science, 186, 1038-i O 40 ( 1974)l. EXEIÂPLE 14 - Solvolvse de la la-acétoxycyciovitamine D dans l'acide acétique On chauffe à 55 çC pendant 15 minutes une solution de 3,0 mg de 1-acétate de la-hydroxycyclovitamine D 3 (composé -a) dans 200/ulitres d'acide acétique glacial,puis on arrête la- réaction au moyen d'une solution saturée glacée de bicarbonate de sodium On extrait le mélange aqueux à l'éther diéthylique, pui S on lave la phase organique avec du bicarbonate de sodium saturé et de l'eauaprès quoi on la sèche sur du sulfate de ma- gnésium qu'on élimine par filtration pour recueillir une solu- tion de 3-acétate de 5,6-cis-la-acétoxyvitamine D 3 et de 3-acéta- te de 5,6-trans-la-acétoxyvitamine D 3 dont le spectre ultravio- let révèle un X a 267-269 nanomètres A la solution éthérée max séchée, on ajoute une petite quantité,à savoir 1,0 mg,d'hydjure de lithiumaluminiumpuis on arrête la réaction au moyen de chlo- rure de sodium saturé et on filtre le mélange,après quoi on chasse le solvant du filtrat sous vide On soumet l'huile brute à la chromatographie en couche mince sur une plaque de gel de silice ( 5 cm x 20 cm, épaisseur de 250/u) qu'on développe avec 5 % de méthanol dans du chloroforme pour: recueillir en quantité de 1,6 mg un mélange (dont le spectre ultraviolet comprend un max à 267- 269 nanomètres) de la-hydroxyvitamine D 3 ( 6 a) et de l'isomère 5,6trans correspondant ou 5,6-trans-la-hydroxyvitamine D 3 dans un rapport de 3:lcomme l'indique l'examen du spectre de réso- nance magnétique nucléaire Les' ésonances caractéristiques en uni- tés 3 sont les suivantes pour l'isomere cis ( 6 a): 6,38 et 6,01 (d, J= 11,l Hz, 6-H et 7-H), 5,33 (dd, J= 1,5 Hz, 19 (E)-H), 5,01 (fin m, 19 (Z)H), 0,5 + (s, 18-H 3) et pour l'isomère 5,6-trans: 6,58 et 5,88 (d, J=ll,4 Hz, 6-H et 7-H), 5,13 (d, J= 1,4 Hz, 19 (E)- H), 4,98 (fin m, 19 (Z)-H), 0,56 (s 118-H 3). On peut appliquer le même mode opératbire pour ouvrir le cycle de cyclopropane (cycloconversion) d'autres cyclovitami- k O nes ou de leurs composés analogues oxygénés en po sition 1 Ainsi le chauffage de la la-acétoxy-25-hydroxyvitamine D 3 (composé lb ne requérant pas de protection du radical hydroxyle en position ) dans l'acide acétique glacial dans les conditions décrites ci-dessus donne comme produit majeur le 3-acétate de la-acétoxy- 25-hydroxyvitamine D 3 (contenant un peu de l'isomère 5,6-trans correspondant comme produit mineur) et ce mélange peut être hy- drolysé directement au moyen d'hydroxyde de potassium méthanoli- que ou soumis à la réduction par un hydrure comme décrit ci-des- sus pour donner comme produit principal la lc-25-dihydroxyvitami- ne D 3 et comme produit mineur la 5,6-trans-la,25-dihydroxyvita- mine D 3. EXEMPLE 15 - Solvolyse de la la-acétoxvcvclovitamine D 3 sous l'effet cataly- tique de l'acide formique On chauffe à 550 C une solution de la-adétoxycyclovita- mine D 3 (composé 4 a) dans du dioxanne sec et on la fait réagir pendant 15 minutes avec un mélange 1:1 d'acide formique à 98 % et de dioxanne,pris à raison de 50 /ulitres/mg de la cyclovita- mine On arrête la réaction au moyen d'eau glacée et on extrait le mélange à l'éther On lave les extraits éthérés avec de l'eau, avec du bicarbonate de sodium saturé et avec du chlorure de so- dium saturé,puis on les sèche sur du sulfate de magnésium et on en chasse le solvant sous vide On dissout le produit bruta savoir la la-acétoxy-3 P-formylvitamine D 3 et son isomère 5,6- transdans un mélange 1:1 de dioxanne et de méthanol,puis on ajoute une quantité équivalente de carbonate de potassium aqueux à 10 mg/l O O /ulitres Après 5 minutes à la température ambian- te, on dilue la solution avec de l'eau et on l'extrait à plu- sieurs reprises à l'éther On lave les extraits éthérés à l'eau et on les sèche sur du sulfate de magnésiumpuis on en chasse le solvant sous vide On chromatographie ensuite le mélange brut des isomèxrs cis et trans de la l-acétoxy-3-hydroxyvitamine sur une plaque de gel de silice ( 10 cm x 20 cm, épaisseur de 750/u) - qu'on élue avec un mélange 1:3 d'acétate d'éthyle et de Skelly- solve B pour obtenir la cis-la-acétoxyvitamine D 3 pure Par hy- drolyse alcaline au moyen d'hydroxyde de sodium méthanolique, on obtient un produit qu'on chromatographie et dont on établit par spectroscopie l'identité avec un échantillon authentique de la- hydroxyvitamine D 3. REVENDl CAI J ONS I Comiposé 1 -p(-hydroxyl é c a ractéri sé par le úait qu' il Yr-pond à la formule Ox les groupe'ments de for-mule R 1 E 2 R 4 dans l esquel les les groupements R 1, R 2 5 R 3 sont Choisis parmi hydrogène, bydroxy, fluor 5 alkyle'inférieur, 0-alkyle inférieur __ -0-acyle inférieur - - acyle aromatique et R 4 désigne hydrogène ou alikyle inférie-ur sous rése Tve que lorsque R est le groupe- ni e N t et Ri IR 2 désignent chacun indépendailinent l'un de l'autre, hydroq-n ou hydroxy, R 3 ne peut être hvdyooène et lorsque R désigne le groupement R R 2 2529888; et R) et R 3 S ont t ou S cieux' by d ogène>, R 4 lant unlcpi(tn Ly le ayant une crient at ion st érique qui ex St e dans une cliaîne secondaire de J'ergostérol, R 2 ne peut être hydrogène ou hy ai O:y. 2 Comnposé selon la revend c a tion 1, caractér 5 sé par le f ait qu' il y es ulte d'un prore dé c'onsistant à souinettr-e 'un coinpo- se de formule B zo dans laquel le Z désigne hydrogène, alkyle inér 5 eur, acyle i ilf C-i eur ou a cyl e aromati que, B a la si gnif icati on indiquée ci-desousa une oxydation allylique suivie d'une acylation du corpose l-0-h y d yoxyl ê ré sulta-nt de f ormul e pui S de la,0 Ol\'olyse du( 1 c rn P osé I c-O cyl é suivie Ce Jt C e rgent de la convem-sion du p-roduit solvolysé Icorreq ll(-,flt t 3-Ins le co- S 10 oq e by Clrox I Yl é 26, 2529888 3 Conmiposé selon la revendication 1 ou 2, caractérisé par le fait que lorsque RI désigne hydrogène R 2 et R 3 sont tous les deux hydroxy. 4 Comnposé selon la revendication 1 ou 2, caractérisé par le fait que RI et R 2 désignent hydrogène et R 3 hydroxy.