Brevet FR2533440A1 — publié le 19840330

CI -1- Dispositif pour l'élimination ou la récupération de substances bio- logiquement actives à partir du sangson obtention et son utilisation L'invention concerne l'élimination ou la récupération de substances biologiquement actives à partir du sang. Elle a plus particulièrement pour objet un dispositif per- o mettant d'éliminer du sang, de façcn spécifique, des constituants indésirables tels que notamment antigènes ou anticorps "in vitro" et surtout par circulation extracorporelle "in vivo", sans qu'il soit nécessaire d'effectuer au préalable la séparation du plasma et des cellules sanguines, ou d'en extraire des substances biologiquemient actives recherchées notamment en thérapeutique. L'invention a, en outre, pour objet des procédés de trai- tement du sang mettant en oeuvre ce dispositif. La mise au point de procédés d'élimination spécifique de certaines substances à partir du sang, notamment l'élimination "in vivo" d'anticorps circulants, préoccupe depuis un certain nombre d'années un nombre croissant d'immunologistes En effet, dans cer- tains troubles inmunitaires, le rôle d'anticorps ou de complexes antigènes-anticorps pathogènes semble démotré Dans un certain noam- bre d'autres cas, la présence d'anticorps peut se révéler néfaste pendant certaines périodes particulières et il serait extrêmement utile de pouvoir les éliminer oh,-tout au moins, maintenir leur taux à une valeur basse. Des méthodes thérapeutiques ont été proposées comme 11 im- munosuppression et plus récmnent l'inmmunostimulation et les méthodes de soustraction plasmatique Aucune de ces méthodes ne s'est révélée satisfaisante, car toutes présentent des inconvénients importants. Ainsi, l'imrnunosuppression non spécifique donne des résul- tats inconstants et des effets secondaires importants, tandis que l'immxrnmostimulation est incertaine Compte tenu de ces faits, on a développé des thérapeutiques de soustraction plasmatique comme les plasmaphérèses qui se sont révélées efficaces dans le traitement d'af- fections auto-immunes camne le lupus érythénateux disséminé, le syn- drioe de Goodpasture, et plus particulièrement la myasthénie Ces thérapeutiques sont toutefois techniquement lourdes et coûteuses. Elles ne sont pas dénuées de dangers puisqu'elles exposent le patient au risque d'infection par le virus de l'hépatite et à certaines complications hémody- namiques parfois mortelles, et en outre ne permettent pas de discerner précisément les mécanismes conduisant aux ré- sultats thérapeutiques observés Enfin, ces différentes techniqu Erne permettent pas une élimination spécifique. On a donc pensé à avoir recours à l'utilisation de techniques d'immunoadsorption permettant l'élimination spécifique des substances indésirables présentes dans le sang,telles que notamment les-anticorps. De nombreuses techniques de séparation par adsorp- tion biospécifique se sont développéesrécemment Selon ces techniques, un ligand est retenu dans une phase solide (ma- trioe) et mis en contact avec un mnlange dans lequelse trouve un composé à séparer, présentant de l'affinité pour le ligand immobilisé Un complexe se forme alors et ainsi la phase solide retient le composé à séparer On peut ainsi soit bÀepd L et L LC CIL I Lc Ud IC Lba U U 1 #LL Cdllye C, EVJ CL Un 11 l L- lieu complexe en retenant sélectivement un de ses consti- tuants. On a déjà tenté d'éliminer spécifiquement des anti- corps,notamment en circulation extracorporelle sur des animaux de laboratoire, voire sur l'homme. Dans la plupart des cas on a eu recours à des immunoad- sorbants particulaires placés par exemple dans des colonnes de verre Ces immunoadsorbants sont constitués par exemple d'antigènes fixés sur des particules de cellulose, elles- mêmes "piégées" dans de l'agarose, des antigènes retenus sur du collodion adhérent à des particules de charbon de bois ou encore des antigènes fixés sur des microsphères de nylon ou sur de la silice cristalline Pour rendre ces différents systèmes relativement efficaces, il est, en gé- néral, nécessaire de les associer à un séparateur continu plasma/cellules sanguines et de reconstituer le sang après passage du plasma sur l'immunoadsorbant. Malgré la complexité de ces techniques, les taux d'anticorps éliminés restent faibles Au surplus, l'utili- sation de ces matériaux particulaires présente l'inconvé- nient d'un risque d'érosion pouvant entraîner le passage dans le sang de particules indésirables porteuses de substances antigèniques notamment, en particulier dans le cas d'une purification du sang "in vivo" par circulation extracorporelle. Ainsi donc, aucune des techniques déjà proposées ne permet de réaliser sans risque et avec une bonne effica- cité l'épuration du sang, notamment en circulation extra- corporelle. Les recherches effectuées par l'organisme demandeur avaient donc pour but de mettre au point un dispositif ne comportant pas les inconvénients des dispositifs de l'art antérieur, c'est-à-dire en particulier un dispositif com- portant un système d'adsorption de la substance-indésirable à éliminer capable, sous un faible volume, de fixer une quantité importante de substance à éliminer par mise en contact avec du sang complet et ne présentant pas les inconvénients inhérents à l'utilisation d'adsorbants par- ticulaires telles que notamment propriétés mécaniques ne permettant pas de réaliser des bioréacteurs de taille re- lativement importante (tassement), risques d'érosion men- tionnés ci-dessus, phénomènes de coagulation. L'invention résultant de ces recherches permet, au moins en partie, d'atteindre ce but. Ainsi, les recherches effectuées ont permis de cons- tater qu'il est possible de remédier, au moins en partie, aux inconvénients de lrart antérieur exposés ci-dessus grâce à un dispositif comportant un adsorbant non parti- culaire sur lequel est fixé par covalence un ligand sélec- tif pour la substance à éliminer. Plus précisément,l'invention a pour objet un dispositif pour l'élimination ou la récupération de substances biologique- ment actives a parti-r du sang "in vitro" ou par circu- lation extracorporelle "in vivo", caractérisé en ce qu'il est essentiellement constitué d'un faisceau de fibres creuses capillaires à l'intérieur desquelles est fixé par covalence un ligand sélectif pour la substance à éliminer ou récupérer, présente dans le sang. On entend ici, par fibres capillaires, des fibres dont le diamètre intérieur est très faible, essentiellement inférieur à un millimètre - 4- Les fibres capillaires utilisées selon l'invention sont essentiellement constituées d'une matière support présentant une bonne inertie chimique, un grand nombre de fonctions modifiables en vue de l'activation dans des con- *ditions douces et peu sujettes à des interactions non spécifiques. Parmi les matières répondant à cette définition, on peut citer certains polyalcools, polyamides et poly- saccharides tels que notamment l'alcool polyvinylique, les résines synthétiques obtenues par condensation d'un di- acide avec une diamine, connues sous l'appellation de ny- lon, et, en particulier, la cellulose régénérée. A l'intérieur des fibres est fixé, par covalence, un ligand spécifique de la substance à récupérer ou éli- miner à savoir par exemple lorsque la substance est un anticorps, l'antigène correspondant, lorsque la substance est un antigène, l'anticorps correspondant, ou lorsque la substance est un substrat d'enzyme, l'enzyme correspon- dante. En règle générale, le ligand est fixé par covalence sur la matière support, après activation de celle-ci-. L'activation des matières supports portant des fonctions hydroxyle peut notamment être effectuée au moyen de bromure de cyanogène, de trichloro-5triazine, de benzoquinone, d'un bis-époxyranne, d'épichlorhydrine ou de divinylsulfone, suivant le ligand à fixer. L'activation des matières supports comportant des fonctions amide peut être réalisée notamment au moyen de glutaraldéhyde ou d'hydrazine. Les fibres creuses constituées essentiellement de la matière support choisie sont rassemblées en un fais- ceau à l'intérieur d'un logement et le sang circule à l'intérieur de ces fibres creuses. Selon un mode préféré de réalisation de l'invention, les fibres creuses capillaires ont des diamètres internes (diamètres utiles) de 200 à 300 p. Selon un mode tout particulièrement préféré de réali- sation, on utilise en tant que support un faisceau de tubes capillaires en cellulose commercialisé à titre de rein arti- ciel, tel que par exemple celui de la Société CORDIS INC. Corporation p o r t a ntla dénomination C-DAK 1 3 (volume intérieur 100 ml) ou C-DAK 0 60 (volume intérieur 50 ml). Le dispositif selon l'invention permet, grâce à un choix judicieux du ligand et du matériau support, ainsi que de son mode d'activation qui est, pour un matériau et un li- gand donnés,connu de l'homme du métier, d'éliminer ou ex- traire du sang des substances variées, tant "in vitro" que "in vivo" par circulation extracorporelle. Parmi les applications possibles,on pourra citer entre autres 1 l'élimination spécifique d'anticorps Des auto-anticorps sont responsables de lésions et leur élimination au moyen du dispositif selon l'invention peut constituer une thérapeutique dépourvue des inconvé- nients des méthodes employées jusqu'à présent, en parti- culier les thérapeutiques de soustraction plasmatique On- peut citer dans ce domaine des maladies telles que le lupus érythémateux disséminé (présence d'anticorps anti-ADN et de complexes anti-ADN/ADN), le syndrome de Goodpasture (pré- sence d'anticorps anti-membrane basale du glomérule), et surtout la myasthénie Dans cette dernière maladie, la responsabilité des auto-anticorps anti-récepteurs de l'acé- tylcholine a été démontrée et les thérapeutiques de sous- traction plasmatique ont permis d'observer une corrélation étroite entre l'amélioration clinique et la diminution du titre en anticorps. Dans un certain nombre d'autres cas, la présence d'anticorps peut se révéler néfaste pendant certaines périodes particulières et il serait utile de maintenir leur taux à une valeur basse un certain nombre d'hémophiles, polytransfusés, développent des anticorps anti-facteur VIII (le facteur VIII est la glycoprotéine qui normalise la coagulation dans l'hémophilie A) et, de ce fait, peuvent subir lors d'une transfusion ultérieure un choc anaphylactique mortel L'éli- mination temporaire de ce type d'anticorps au moyen du dispositif selon l'invention permettrait les transfusions sans risque d'accident; dans des cas d'immunisation anti-Rh sévère chez des femmes enceintes, la possibilité d'éliminer ces anti- corps anti-Rh pendant une-période o ils sont très dange- reux pour le foetus, serait particulièrement intéressante; dans les cas de greffes de moëlle chez des rece- veurs incompatibles dans le système ABO, on peut envisager d'éliminer les anticorps dirigés contre ces antigènes au moyen du dispositif selon l'invention, en utilisant des stromas globulaires. 2 l'élimination spécifique d'antiaènes Dans certains cas, il peut être nécessaire d'éliminer un antigène On fixe alors sur le support, en tant que ligand, l'anticorps correspondant Cette technique peut s'appliquer par exemple dans les hypercholestérolémies génératrices d'athérosclérose précoce, o la fréquence et l'intensité des complications cardiovasculaires au cours des formes les plus graves nécessitent des traitements plus efficaces que le régime ou les médicaments et moins aléa- toires que certaines autres thérapeutiques ccrnues (anastonose portocave, plasmaphérèse, etc). 3 l'élimination spécifique d'un substrat d'enzyme présent dans le sang, dans les cas d'enzymopathies camoe la phé- nylcétonurie par exanple On peut transformer la phénylalanine du sang qui, en excés, est toxique, au moyen du dispositif selon l'invention dans lequel le ligand est la phénylalanine-ammznia-lyase (PAL). 4 Au niveau industriel notamment, la récupération, à partir du plasma de donneurs immunisés, de certains anticorps spécifiques difficilement accessibles par d'au- tres méthodes que l'immuno-adsorption. Les ligands utilisés seion l'invention peuvent être de type protéique: antigène, anticorps, enzymes comme indiqué ci-dessus, mais également d'autres types, par exemple des acides nucléiques ou des polysaccharides. L'invention vise, par conséquent, en outre un pro- cédé pour purifier le sang "in vitro" ou "in vivo" par circulation extracorporelle, caractérisé en ce qu'il consiste essentiellement à faire passer le sang à purifier dans un dispositif selon l'invention comportant dans sa partie efficace un ligand spécifique pour la substance à éliminer. Elle vise également un procédé pour extraire du sang un constituant biologiquement actif, caractérisé en ce qu'il consiste essentiellement à faire passer du sang ren- fermant le constituant recherché à travers un dispositif selon l'invention, comportant dans sa partie efficace un ligand spécifique pour la substance recherchée et à sépa- rer ensuite, par des moyens connus, ladite substance fixée sur le dispositif par l'intermédiaire dudit ligand. La figure unique annexée représente le schéma de principe d'un mode de réalisation du procédé de purifi- cation du sang "in vivo" par circulation extracorporelle, selon l'invention. Le sang à purifier, prélevé dans l'artère fémorale 1 d'un animal,est envoyé dans une "ligne artérielle" 2 Un dispositif 3 permet d'ajouter une solution d'héparine dans le sérum physiologique au sang circulant dans la "ligne fémorale" Ce sang, après avoir traversé une pompe péris- taltique 4, traverse le dispositif selon l'invention (bio- réacteur) 5 immergé dans un bain-marie à 400 C 6 A la sortie du bioréacteur 5, le sang traverse un piège à bulles 7 destiné à le débarrasser des gaz éventuellement présents et muni d'un manomètre 8 et d'une seringue 9 destinée au contrôle du niveau A la sortie du piège à bulles 7, le sang est renvoyé dans la veine fémorale 10 de l'animal se- lon la "ligne veineuse" 11. L'invention sera mieux comprise à l'aide des exem- ples non limitatifs qui suivent. Exemples Dans les différents exemples, pour des raisons de meilleure accessibilité, on a utilisé, en tant que fais- ceauxde tubes capillaires,des modules constitués d'un fais- ceauxde tubes capillaires en cellulose commercialisés par la société CORDIS DOW Corporation à titre de "reins artifi- ciels"e, C-DAK 1 3 de volume intérieur 100 ml et C-DAK 0 60 de volume intérieur 50 ml. 8 - I Elimination d'anticorps (le ligand est l'antigène corres- pondant). A Choix des antigènes Deux types d'antigènes de nature protéique ont été utilisés: 1) des protéines purifiées solubles dans les mi- lieux physiologiques: albumine d'une part et immunoglobuli- nes d'autre part L'utilisation des immunoglobulines présente un avantage supplémentaire En effet, si ces protéines peu- vent être considérées comme des antigènes vis-à-vis d'une espèce étrangère, ce sont avant tout des anticorps L'ob- tention de bioréacteurs ayant fixé ces protéines est donc d'un intérêt capital si on envisage d'appliquer ces techni- ques à l'élimination spécifique d'antigènes. 2) des protéines complexes insolubles: les expé- riences ont été réalisées avec de strômas d'érythrocytes (membranes des globules rouges) humains ayant conservé les substances antigéniques de groupe sanguin A ou B. B Préparation des "bioréacteurs" 1) Cas des antigènes solubles Les fonctions hydroxyle de la cellulose ont été ac- tivées par la technique classique au bromure de cyanogène. L'activation a été réalisée à l'intérieur et à l'extérieur des fibres de cellulose (parce que cela est techniquement plus facile à réaliser, mais il aurait suffi qu'elle ne le soit qu'à l'intérieur),par circulation d'une solution à % de Br CN maintenue à p H 11,5 par Na OH 10 N Apres ac- tivation, toute trace de Br CN est éliminée par lavage in- tensif à l'eau distillée puis avec du tampon bicarbonate de sodium 0,1 M, p H 9. Une solution protéique ( 20 mg/ml en tampon bicarbo- nate de sodium 0,1 M, p H 9) est ensuite introduite par cir- culation à l'intérieur des fibres pendant 12 heures Après nouveau lavage pour-éliminer toute trace de protéine, les fonctions actives restantes sont bloquées (à l'intérieur et a l'extérieur des fibres) par circulation d'une solution de lysine. -9- 2) Cas des protéines insolubles Le procédé d'activation est le nmme que précédemrent Les protéines qui sont fixées dans les mêmes conditions sont utilisées en suspension fine, c'est-à-dire en suspension de microparticules cb- tenues par broyage de particules an tigéniques insolubles, par ultrascnification. 3) Résultats Taux de fixation: Quelle que soit la nature de la pro- téine, des quantités de 150 à 200 mg et 300 à 500 mg de protéines sont fixées à l'intérieur des fibres, respectivement pour les mod les de o ml et 100 ml. Contrôle de la fixation covalente des protéines: Ces sys- tèmes étant destinés à l'élimination "ex vivo" d'anticorps, il fallait vérifier que des antigènes (protéines fixées) n'étaient pas relargués au cours des différentes manipulations qui suivent la fixation Des essais de fixation ont donc été réalisés à l'aide de protéines (immu- noglobulines humaines) marquées à l 125 I On a pu établir qu'aucune trace de radioactivité ne se retrouvait dans les solutions ayant cir- culé dans le module, après les étapes successives de fixation des pro- téines marquées. De plus, des études en circulation extracorporelle, "lin vivo", chez le chien, pendant 2 et 5 heures respectivementg ont mon- tré qu'aucune radioactivité ne se retrouve au niveau des organes sui- vants: sang, reint foie et thyroïde. Contrôle de l'inocuité du dispositif: Des études "in vi- vo'" chez le chien, ont permis de vérifier l'inocuité du procédé la numération globulaire, la formule leucocytaire et de nombreux para- m Itres sanguins n'ont subi aucune variation significative. C Utilisation des "bioréacteurs" Des antigènes (respectivement identiques à ceux utilisés dans la préparation des modules ci-dessus) ont été injectés à des animaux (lapins et chiens) Ces animaux immunisés ont fourni le sérum ou le sang pour les essais d'adsorption "in vitro" Dans tous les es- sais, le taux des anticorps a été mesuré par une technique sensible d'hémagglutination d'hématies revêtues des antigènes correspondants. 1) Essais "in vitro": Des expériences "in vitro" réalisées avec du sérum de lapins immunisés ont permis de démontrer la forte ca- pacité d'adsorption des bioréacteurs, ainsi que la spécificité de cette adsorption. - Du sang de lapin immunisé, prélevé sur anti-coagulant (hé- parine), a été mis à circuler à l Vintérieur des modules ayant fixé l'antigène ayant servi à immuniser l'animal. Les résultats d'adsorption ont été similaires à ceux ob- tenus avec du sérum Aucun problème de coagulation n'a été enregistré. 2) Essais "in-vivo": Un circuit sanguin extra- corporel comprenant une ligne artérielle, une pompe péris- taltique, le bioréacteur plongé dans un bain-marie, une ligne veineuse, tel que défini plus haut, est mis en pla- ce sur des animaux préalablement immunisés. Les expériences préliminaires ont été réalisées chez le lapin Mais, les plus nombreuses ont été réalisées chez le chien Les animaux avaient un poids compris entre 12 et 20 kg, ce qui a permis une meilleure évaluation des phénomènes, dans l'optique d'une application à la théra- peutique humaine On a, dans la plupart des cas, utilisé des bioréacteurs de volume interne 100 ml Les tableaux I et II suivants résument quelques uns des résultats obte- nus Tableau I Adsorption des anticorps anti-albumine chez un chien immunisé par de l'albumine ( 2 modules sont posés successivement: avec des immunoglobulines fixées puis avec de l'albumine fixée). Temps d'épuration Titre des anticorpi Tmsen mn anti-albumine EX Le titre est défini comme étant la plus grande dilution du sérum qui, après passage de celui-ci à travers le module dans les condi- tions indiquées, est encore capable d'agglutiner des hématies recou- vertes des antigènes correspondants. *0 1/1024 Module avec 15 1/1024 immunoglobulines 30 1/1024 fixées 45 1/1024 Module avec 60 1/4 albumine fixée 75 1/1 1/1 253 '3440 11 - Tableau II Adsorption des anticorps anti-immunoglobulines et anti-albumine chez un chien immunisé par les deux anti- gènes. Temps d'épuraticn Titre des anti Titre des anti- en mn corps anti-ir corps anti-al- l munoglobulines bumine Module avec r O 1/128 1/256 immunoglobines 20 1/32 1/256 fixées 40 1/2 1/256 Module avec 60 1/2 1/2 albumine fixée 75 1/2 1/2 Ces expérienoes montrent: a/ la forte capacité des bioréacteurs à éliminer les anti- corps dont le titre est ramené à des valeurs extrêmement faibles ( 1/1024 à 1/1 en anti-albumine -tableau I; 1/256 à 1/2 en anti-albumine et 1; 128 à 1/2 en anti-immunoglo- bulines -tableau II-); b/ la rapidité de l'adsorption: entre 30 et 40 mn de circulation extracorporelle; ' c/ la spécificité de l'adsorption: la pose pendant 45 mn, d'un module fixant les anti-immunoglobulines sur un animal ayant été immunisé avec de l'albumine, ne modifie pas le taux d'anticorps anti-albumine. II Elimination d'antigènes (le ligand est l'anticorps cor- respondant). Des Ig G ont été isolées d'un sérum de chèvre immunisée contre des apolipoprotéines B et fixées à l'in- térieur de fibres creuses cellulosiques selon le procédé au Br CN décrit plus haut Les taux de fixation ont été similaires à ceux obtenus pour la fixation d'albumine ou d'Ig G humaines. 56 ml de sérum hyper-lipidémique ont été mis à circuler 2 heures à travers le bioréacteur obtenu Le taux d'apolipoprotéines B est passé de 1,75 g/l à 1,01 g/l. 12 - III Elimination de substrats d'enzymes (le ligand est l'en- zyme correspondante). L'enzyme utilisée est la phénylalanine ammonia lyase (PAL) dont le substrat est la phénylalanine. 100 unités enzymatiques (solution à 27 mg/ml de protéines totales avec 3, 6 UI d'enzyme/ml, provenant de la société PL Biochemicals) sont fixées dans un module de ml de volûme interne, avec un rendement de 72 % (métho- de au Br CN). Les expériences ont été réalisées sur du sang humain enrichi en phénylalanine. 1 litre de sang humain contenant 152 mg/litre de phénylalanine a été mis à circuler en circuit fermé dans le réacteur. Un dosage de phénylalanine a permis de constater une décroissance continue de ce substrat en fonction du temps Après 200 mn de circulation, le taux de phénylalani- ne avait été abaissé à 95 mg/ml, soit une diminution de plus de 37 %. Comme il va de soi, et comme il résulte d'ail- leurs déjà de ce qui précède, l'invention ne se limite nul- lement à ceux de ses modes d'application et de réalisation qui ont été plus spécialement envisagés; elle en embrasse, au contraire, toutes les-variantes. En particulier, l'invention vise également l'é- bauche du dispositif selon l'invention telle que résultant de l'activation des fibres creuses capillaires choisies, selon un procédé spécifique du matériau constituant les fibres et du ligand devant être fixé ultérieurement par covalence. 13 - REVENDICATIONS 1 Dispositif pour l'élimination ou la récupé- ration de substances biologiquement actives à partir du sang "in vitro" ou par circulation extracorporelle "in vivo", caractérisé en ce qu'il est essentiellement cons- titué d'un faisceau de fibres creuses capillaires à l'in- térieur desquelles est fixé par covalence un ligand sélec- tif pour la substance à éliminer ou récupérer, présente dans le sang. 2 Dispositif selon la revendication 1, carac- térisé en ce que les fibres capillaires sont essentielle- ment constituées d'une matière support choisie dans le groupe constitué par les polvalcools, les polyamides et les polysaccharides et présentant une bonne inertie chi- mique, un qrand nombre de fonctions modifiables en vue de l'activation dans des conditions douces et peu sujettes à des interactions non spécifiques. 3 Dispositif selon la revendication 2, carac- térisé en ce que les fibres capillaires sont essentielle- ment constituées d'une matière support choisie parmi l'alcool polyvinylique, le nylon et de préférence la cel- lulose régénérée. 4 Dispositif selon la revendication 3, carac- térisé en ce que les fibres capillaires, en cellulose ré- générée, sont celles d'un dispositif commercialisé à ti- tre de rein artificiel. Dispositif pour l'élimination ou la récupéra- tion d'un anticorps à partir du sang "in vitro" ou par circulation extracorporelle "in vivo", caractérisé par le fait qu'il est constitué par un dispositif selon l'une quelconque des revendications 1 à 4 dans lequel le ligand fixé par covalence à l'intérieur des fibres capillaires est l'antigène correspondant à l'anticorps à éliminer ou récupérer. 6 Dispositif pour l'élimination ou la récupé- ration d'un antigène à partir du sang "in vitro" ou par circulation extracorporelle "in vivo", caractérisé par le fait qu'il est constitué par un dispositif selon l'une quelconque des revendications 1 à 4 dans lequel le ligand 14 - fixé par covalence à l'intérieur des fibres capillaires est l'anticorps correspondant à l'antigène à éliminer ou récupérer. 7 Dispositif pour l'élimination ou la récupéra- tion d'un substrat d'enzyme à partir du sang "in vitro" ou par circulation extracorporelle "in vivo", caractérisé par le fait qu'il est constitué par un dispositif selon l'une quelconque des revendications 1 à 4 dans lequel le ligand fixé par covalence à -l'intérieur des fibres capil- laires est l'enzyme correspondant au substrat d'enzyme à éliminer ou récupérer. 8 Procédé pour l'obtention du dispositif selon l'une des revendications 1 à 7, caractérisé en ce qu'il consiste essentiellement à soumettre un faisceau de fibres creuses capillaires, de préférence rassemblées à l'inté- rieur d'un logementiâ une activation spécifique du maté- riau constituant les fibres et du ligand devant être fixé par covalence, puis à fixer ensuite le ligand par covalen- ce à l'intérieur des fibres. 9 Ebauche du dispositif selon l'une des reven- dications 1 à 7, caractérisé en ce qu'elle est essentiel- lement constituée d'un faisceau de fibres creuses capil- laires activées selon un procédé spécifique du matériau constituant les fibres et du ligand devant être fixé par covalence. Procédé pour purifier le sang "in vitro" ou "in vivo" par circulation extracorporelle, caractérisé en ce qu'il consiste essentiellement à faire passer le sang à purifier à travers le dispositif selon l'une des revendications 1 à 7 comportant dans sa partie efficace un ligand spécifique pour la substance à éliminer. 11 Procédé pour extraire du sang un constituant biologiquement actif, caractérisé en ce qu'il consiste essentiellement à faire passer du sang renfermant le cons- tituant recherché à travers un dispositif selon l'une des revendications 1 à 7 comportant dans sa partie efficace un ligand spécifique pour la substance recherchée et à séparer ensuite ladite substance fixée sur le dispositif par l'intermédiaire dudit ligand.