Brevet FR2528036A1 — publié le 19831209

La présente invention concerne des analogues des hormones neurohypophysaires ayant des effets inhibiteurs. Les analogues de l'invention ont un effet d'inhibition de certaines activités biologiques des hormones neurohypophy- saires Ces inhibiteurs peuvent servir pour mettre en évidence les hormones neurohypophysaires dans les liquides de l'orga- nisme et également sont susceptibles d'application médicale, par exemple dans le cas d'une surproduction pathologique d' hormones endogènes. Les deux caractéristiques structurales principales connues à ce jour dont la présence dans la molécule d'ocytocine provo- que des effets inhibiteurs sont: le remplacement du radical hydroxy de la tyrosine en position 2 par un radical méthoxy (Berankov 6 Z, Rychlik I, Jolt K, Rudinger J, Sorm F: Collect Czech, Chem Commun, 26, 2673 ( 1961)), l'effet d'in- hibition pouvant être accru par acétylation simultanée du radical a-amino de la cystéine en position 1 (Jost K, Sorm F: Collect Czech Chem Commun, 36, 297 ( 1971)) L'introduction de deux radicaux méthyles (Schulz H, du Vigneaud V: J Med. Chem, 9, 647 ( 1966)) ou de deux radicaux éthyles (Vavrek R. J., Ferger M F, Allen G A, Rich D H, Blomquist A T, du Vigneaux V: J Med Chem, 15, 124 ( 1972)), ou d'une chaîne polyméthylène (Nestor J J, Ferger M F, du Vigneaux V: J. led Chem, 18, 284 ( 1975)) en la position B de l'acide B - mercaptopropionique, combinée à une alkylation de la tyrosine (Sawer W H, Grzonka Z, Manning M: Mol Cell Endocrinol, 22, 117 ( 1981)), fournit un autre type d'inhibiteurs efficaces partir de ces composés. La demanderesse a découvert que la combinaison mutuelle de modifications structurales, c'est-à-dire l'alkylation de la tyrosine et l'introduction de deux radicaux méthyles dans la position B de la cystéine en position 1 de la chaîne pepti- dique, avec une acétylation éventuelle du radical amino primai- re de la cystéine, fournit des composés qui possèdent des ef- fets d'inhibition importants de l'action de l'ocytocine et de la vasopressine. Egalement, des analogues de la vasopressine ayant un reste pénicillamine dans la position 6 ou les positions 1 et 6 ont des propriétés inhibitrices puissantes semblables. L'invention concerne de nouveaux analogues des hormones neurohypophysaires ayant des effets inhibiteurs répondant à la formule générale 1 A-V-Tyr(B)-X-Gln-Asn-Y-Pro-Z-Gly NH 2 (I), I J dans laquelle tous les amino-acides chiraux appartiennent à la la série L, A est CH 3 CO ou H, V est un reste de pénicillamine (désigné ci-après par l'abréviation Pén) ou Cys, B est CH 3 ou H, X est Ile ou Phé, Y est Cys ou Pén, et Z est Leu ou Lys. L'invention concerne particulièrement les analogues sui- vants; Z 1-N-acétylpénicilamine 7 ocytocine (Ia) Z 1-Pénicillamine, 2-0méthyltyrosine 7 ocytocine (Ib) l-N-acétylpénicillamine, 2-0métyltyrosine 7 ocytocine (Ic) Z 1-Pénicillamine, 8-Lysine 7 vasopressine (Id) Zl-N-acéthylpénicillamine, 8-Lysine 7 vasopressine (Ie) JLPénicillamine, 2-0-méthyltyrosine, 8-lysine 7 vasopressine (If) Zl-Nacétylpénicillamine, 2-0-méthyltyrosine, 8-lysinel vasopressine (Ig) CPénicillamine, 8-lysine Jvasopressine (Ih) /l-Pénicillamine, 6-Pénicillamine, 8-lysinelvasopressine(Ii). Les modifications individuelles relatives aux analogues Ia-Ii indiqués cidessus sont exposées dans le tableau I. Le principe du procédé de production des nouveaux analo- gues de l'ocytocine et de la vasopressine de formule I selon l'invention est une oxydation d'un peptide linéaire de formule II H H g I A-V-Tyr(B)-X-Gln-Asn-Y-Pro-Z-Gly NH 2 (II), dans laquelle A, B, V, X, Y et Z ont les mêmes significations que pour la formule I, selon un procédé connu, pour former une liaison disulfure. Certains effets biologiques des analogues de l'ocytocine et de la vasopressine figurent dans le tableau annexé Les effets d'inhibition des composés dans un essai in vivo sont exprimés par la valeur p A 2, qui est le logarithme négatif de la concentration molaire de l'inhibiteur réduisant la réponse à 2 X unités d'un composé agoniste pour qu'elle soit égale à la réponse à 1 X unité en l'absence d'inhibiteur (Schild H O: Brit J Pharmacol, 2, 189 ( 1947); Dyckes D F, Nestor J J, Ferger M F, du Vigneaud V: J Med chem, 17, 260 ( 1974)). Dans un essai in vitro (utérus in vitro), la valeur p A cor- respond au logarithme négatif d'une constante d'inhibition selon la relation B p A 2 = log (A 50 B -1)/A 50 dans laquelle B est la concentration de l'inhibiteur (M), A 50 est la concentration du composé agoniste conduisant à 50 % de l'effet maximal, et A 50 Best la concentration du composé agoniste conduisant à 50 % de l'effet maximal en présence de l'inhibiteur B (Eggena P, Schwartz I L; Walter R: J Gen. Physiol, 52, 465 ( 1958)). Les méthodes employées dans les exemples ci-après vont maintenant être décrites. On effectue les analyses des amino-acides avec un appa- reil automatique (Ateliers de Mise au Point, Académie des Sciences de Tchécoslovaquie, type 6020) On hydrolyse les échantillons des peptides dans de l'acide chlorhydrique 6 M sous une pression réduite de 150 Pa et à 105 C pendant 20 heures On effectue les oxydations avec de l'acide performique. Pour la chromatographie en couche mince, on utilise des pla- ques de gel de silice (Silufol, Kavalier-Tchécoslovaquie) avec les systèmes suivants: butanol-2/acide formique à 98 %/ eau ( 75/13,5/11,5; 51), butanol-2/ammoniaque à 25 %/eau ( 85/ 7,5/7,5: 52), butanol-l/acide acétique/eau ( 4/1/1; 53), butanoi-l/pyridine/acide acétique/eau ( 15/10/3/6; 54) et méthanol/chloroforme/acide acëtique/eau ( 10/15/3/2; 56) On effectue l'électrophorèse analytique sur du papier Whatman 3 MM dans une chambre humide avec un gradient de potentiel de V/cm pendant 1 heure dans de l'acide acétique 1 M (p H 2,4) et dans du tampon pyridine-acétate (p H 5,7) On effectue 1 ' électrophorèse préparative libre dans le dispositif précédem- ment décrit (Prusik Z, Sedlakov X E, Barth T: Hoppe-Seyler's Z Physiol Chem 353, 1837 ( 1972)) On emploie pour la chro- matographie liquide haute performance un appareil constitué d'éléments du commerce et de colonnes garnies de Separon SI- C 18 (Laboratory Instrument Works, Prague). EXEMPLE 1 Amide de 1 'o-nitrobenzènesulfényl-O-tert-butyltyrosyl- isoleucyl-glutaminyl-asparaginyl-S-benzylcystéinyl-prolyl- leucyl-glycine On ajoute 0,56 g de l'ester N-hydroxysuccinimidique de 1 l'onitrobenzènesulfényl-O-tert-butyltyrosine à une solution de 1,25 g de l'amide de l'isoleucyl-glutaminyl-asparaginyl- S benzyicystéinyl-prolyl-leucyl-glycine (Jost K, Rudinger J, Sorm F: Collect Szech Chem Commun, 26, 2496 ( 1961)) dans ml de diméthylformamide Après 2 jours d'agitation, on ra- joute 0,05 g de l'ester actif et on poursuit l'agitation pen- dant encore 24 heures On évapore le diméthylformamide et on triture le résidu avec de l'éther de pétrole et de l'éther, on filtre et on lave avec de l'eau, de l'acide sulfurique 0,1 M, de l'eau, du bicarbonate de sodium 0,25 M et de l'eau On ob- tient le produit avec un rendement de 1,2 g ( 65 %); p f: 225-229 C; lct D= O (c= 0,2;diméthylformamide); RF 0,51 ( 51), 0,36 ( 52), 0,65 ( 53), 0,74 ( 54) Analyse des amino- acides: Tyr 0,94, Ile 0,94, Glu 1,03, Asp 1,06, Cys(Bzl) 0,95, Pro 0,95, Leu 1,08, Gly 1,04 Pour C 57 H 80 N 1201352 H 20 ( 1223) théorique: 55,96 % C, 6,76 % H, 13,74 % N; trouvé: 55,97 % C, 6,57 % H, 13,70 % N. Amide de la benzyloxycarbonyl-S-benzylpénicillaminyl-tyrosyl- isoleucyl-glutaminyl-asparaginyl-S-benzylcystéinyl-prolyl- leucyl-glycine A une solution de 1,1 g de l'octapeptide préparé ci- dessus dans 15 ml de diméthylformamide, on ajoute 1 ml d'acide chlorhydrique 2,05 M dans l'éther On précipite le chlorhydrate par l'éther après 7 minutes de repos: EG l 5 _His 2,4: 0,5, E 5 is 7:0,33; RF: 0,25 (Sl), 0,17 ( 52), 0,24 ( 53), 0,64 ( 54) On dissous le chlorhydrate dans 10 ml de diméthyl- -formamide, on ajuste le p H avec de la N-éthylpipéridine à 7,5-8,0 (papier p H humide) et on ajoute à la solution 0,4 g d'ester p-nitrophénylique de la benzyloxycarbonyl-S-bensyl- -pénicillamine dans 3 ml de diméthylformamide Apres 2 jours d'agitation, on rajoute 0,04 g de l'ester actif et on poursuit l'agitation pendant encore 2 jours On évapore le diméthyl- -formamide et on triture le résidu avec de l'éther de pétrole et de l'éther, on filtre et on lave avec de l'eau, de l'acide chlorhydrique 1 M, de l'eau, du bicarbonate de sodium 0,25 M et de l'eau On dissout le composé obtenu ( 0,77 g) dans 77 ml d'acide trifluoroacétique, on laisse reposer à la température ordinaire pendant 1 heure, on ajoute 77 ml de toluène au mé- lange réactionnel et on évapore la solution à sec On triture le résidu avec de l'éther, on filtre et on sèche dans un des- siccateur sur P 205 et KOH; on obtient 0,7 g de produit ( 57 %). On'purifie une partie ( 0,5 g) de ce composé par filtration sur gel en deux portions de 0,25 g chacune On isole le produit par évaporation du diméthylformamide et trituration du résidu avec de l'éther On obtient le produit avec un rendement de 0,27 g ( 54 %); p f = 228-231 C; Ca -formamide); RF 0,54 ( 51), 0,33 ( 52), 0,66 ( 53), 0,77 ( 54). Analyse des amino-acides: Pén(Bzl) 0,96, Tyr 0,93, Ile 0,95, Glu 0,99, Asp 1,02, Cys(Bzl) 0,89, Pro 1,04, Leu 1,02, Gly 0,97 Pour C 67 H 90 N 1201452 H 2 O ( 1370) théorique; 58,75 % C, 6,77 % H, 12,27 % N, trouvé: 58,70 C, 6,53 %H, 12,33 % N. Amide de l'acétyl-S-benzylpénicillaminyl-tyrosyl-isoleucyl- glutaminyl-asparaginyl-S-benzylcystéinyl-prolyl-leucyl-glycine A une solution de 245 mg du nonapeptide préparé ci-dessus dans 2 ml d'acide acétique, on ajoute 2 ml d'acide bromhydrique à 35 % dans l'acide acétique On précipite le bromhydrate avec de l'éther après 15 minutes de repos à la température ordinaire E Gly: 0,51; RF 0,42 ( 51),0,09 ( 52), 0,43 ( 53),0,62 ( 54). 2,4 F On dissout le bromhydrate dans 2,5 ml de diméthylformamide, on ajuste le p H de la solution à 7,5-8,0 (papier p H humide) avec de la Néthylpipéridine et on ajoute 106 mg d'acétate de chloro-5 hydroxy-8 quinoléinyle Apres 2 jours d'agitation, on rajoute 20 mg de l'ester actif et on poursuit l'agitation pendant encore 24 heures On évapore le diméthylformamide, on triture le résidu avec de l'éther de pétrole et de l'éther, on filtre et on lave avec de l'eau, de l'acide chlorhydrique 1 Mi, de l'eau, du bicarbonate de sodium 0,25 M et de l'eau. On obtient le produit avec un rendement de 185 g ( 70 %) et on purifie par filtration sur gel pour obtenir 151 mg ( 82 %; ren- dement global 57 %) d'un produit ayant les propriétés suivan- tes p f = 226-231 C: acj D=-39,7 (c= 0,l, diméthylformamide); RF 0,49 (Sl), 0,24 ( 52), 0,58 ( 53), 0,73 ( 54) Pour C 61 H 86 N 12 01352 0,5 H 20 ( 1269) théorique: 57,76 % C, 6,91 % H, 13,25 % N, trouvé 57,73 % C, 6, 89 %H, 13,57 %N. N -acétylil-pénicillaminelocytocine (Ia) On dissout 138 mg du nonapeptide protégé décrit ci-dessus dans 150 ml d'ammoniac liquide bouillant et on réduit avec du sodium jusqu'à ce que la coloration bleue du mélange réaction- nel persiste pendant 10 secondes On décolore ensuite la solu- tion avec du chlorure d'ammonium et on chasse l'ammoniac par lyophilisation On dissout le résidu dans 100 ml d'acide chlorydrique 0,01 M, on dilue avec de l'eau à un volume total de 300 ml et on ajuste le p H de la solution à 7,0 avec de 1 ' hydroxyde de sodium 0,01 M On effectue l'oxydation avec du K 3/e(CN)67 3,3 x 102 M qu'on ajoute jusqu'à ce que la cou- leur jaune du mélange réactionnel persiste pendant 1 heure. Pendant l'oxydation, on maintient le p H du mélange réactionnel dans la région de 6,9-7,0 On acidifie le mélange réactionnel à p H 4,1 avec de l'acide chlorhydrique 1 M et on l'applique à une colonne garnie de 50 ml d'un échangeur d'anions faible- ment basique sous la forme chlorure On élue la colonne avec ml d'eau et on élimine les sels des éluats combinés sur une colonne garnie de Separon SI-C 18 On lave la colonne à l'eau puis on élue le produit avec du méthanol à 90 % On acidifie l'éluat à p H 4,5 avec de l'acide acétique et on évapore le méthanol. On obtient le produit par lyophilisation avec un rendement de 72 mg: on en purifie 35 mg par chromatographie liquide haute pression (méthanol/eau: 4/6) pour obtenir 11 mg de produit pur ia'7 D =-47,0 (c= 0,18; acide acétique 3 M); RF: 0,64 ( 54) 0,76 ( 56) Analyse des amino- acides: Pén(O 3 H)+Cys(O 3 H) ( 2,00), Tyr 0,97 ( 0,66), Ile 1,00 ( 1,00), Glu 0,97 ( 1,00), Asp 0,97 ( 1,00), Pro 1,03 ( 0,77), Leu 1,06 ( 1,00, Gly 1,00 ( 1,00) Les valeurs entre parenthèses correspondent à l'échantillon oxydé par l'acide performique Pour C 47 H 72 N 12013522 3 CH 3 COOH 6 H 20 ( 1305) théorique: 46,92 % C, 7,10 % H, 12,87 % N, trouvé: 46,87 % C, 6,72 % H, 12,81 % N. EXEMPLE 2 Amide de la tert-butoxycarbonyl-O-méthyltyrosyl-isoleucyl- glutaminyl-asparaginyl-S-benzylcystéinyl-prolyl-leucyl-glycine On dissout 2,1 g de l'heptapeptide décrit ci-dessus dans ml de diméthylformamide et on ajoute à la solution 1,1 g de l'ester trichloro-2,4,5 phénylique de la tert-butoxycarbonyl- 0-méthyltyrosine Après 2 jours d'agitation, on rajoute 0,2 g de l'ester actif et on poursuit l'agitation pendant une nuit. On évapore le diméthylformamide, on triture le résidu avec de l'éther de pétrole et de l'éther, on filtre et on lave avec de l'eau, de l'acide citrique à 5 %, de l'eau, du bicarbonate de sodium 0,25 M et de l'eau On obtient le produit avec un ren- dement de 1,9 g ( 67 %); p f = 225-228 C; 7 J'D=-35,2 (c= 0,2; diméthylformamide); RF: 0,50 ( 51), 0,32 ( 52), 0,59 ( 53), 0,72 ( 54) Analyse des amino-acides: Tyr(Mé)+Tyr 0,93, Ile 0,96, Glu 0,99, Asp 1,01, Cys(Bzl) 1,03, Pro 1,02, Leu 1,04, Gly 1,00 Pour C 53 H 79 Nll O 13 S 0,5 H 20 ( 1119) théorique: 56,87 % C, 7,20 % H, 13,76 %N; trouvé 56,62 % C, 7,10 % H, 13,73 % N. Amide de la benzyloxycarbonyl-S-benzylpénicillaminyl-O-méthyl- tyrsyl-isoleucyl-glutaminyl-asparaginyl-S-benzylcystéinyl- prolyl-leucyl-glycine A une solution de 1,5 g de l'octapeptide préparé ci- dessus dans 15 ml d'acide acétique, on ajoute 15 ml d'acide bromhydrite à 35 % dans l'acide acétique On précipite le bromhydrate avec de l'éther après 5 minutes à la température ambiante; E Gly M Hls 2,4: 9,57, E 57: 0, 27; RF 0,23 (Si), 0,20 ( 52), 0,34 ( 53), 0,59 ( 54) On dissout le bromhydrate dans 15 ml de diméthyl- -formanide, on ajuste le p H de la solution à 7,5-8,0 (papier p H humide) avec de la N-éthylpipéridine et on ajoute à cette solution 0,7 g d'ester p-nitrophénylique de la benzyl-oxy- -carbonyl-S-benzylpénicillamine dans 4 ml de diméthylformamide. Apres 4 jours d'agitation, on évapore le diméthylformamide, on triture le résidu avec de l'éther de pétrole et de l'éther, on filtre et on lave avec de l'eau, de l'acide chlorhydrique 1 M, de l'eau, du bicarbonate de sodium 0,25 M et de l'eau. On obtient 1,0 g de produit ( 54 %) que l'on purifie par fil- tration sur gel en 4 parties de 0,25 g chacune On obtient le produit avec un rendement de 0,59 g ( 59 %; rendement global 32 %); p f = 233-239 C; fa 7 D =-40,2 (c= 0,2; diméthyl- -8 -formamide); RF: 0,54 (Si), 0,33 ( 52), 0,66 ( 53), 0,76 ( 54). Analyse des amino-acides: Pén(Bzl) 0,87, Tyr(OMé)+Tyr 0,87, Ile 0,94, Glu 0,99, Asp 1,04, Cys(Bzl) 0,88, Pro 1,04, Leu 1,04, Gly 0,99 Pour C 68 H 92 N 1 201452 H 20 ( 1384) théorique: 59,03 % C, 6,85 % H, 12,15 % N; trouvé 59,05 % C, 6,79 % H, 12,26 % N. L Zi-pénicillamine, 2-0- méthyltyrosine Jocytocine (Ib) On dissout 238 mg du nonapeptide protégé décrit ci- dessus dans 250 ml d'ammoniac liquide bouillant et on réduit avec du sodium jusqu'à ce que la coloration bleue du mélange réactionnel persiste pendant 30 secondes On décolore la solu- tion avec du chlorure d'ammonium, on élimine l'ammoniac par lyophilisation et on dissout le résidu dans 100 ml d'acide chlorhydrique 0,01 M On dilue la solution avec de l'eau à un volume total de 500 ml et on ajuste le p H à 7,0 avec de l'hy- droxyde de sodium 0,1 M On oxyde avec du K 3 Fe(CN)67 3,3 x -2 M qu'on ajoute progressivement jusqu'à ce que la couleur jaune du mélange réactionnel persiste pendant 1 heure On main- tient le mélange réactionnel à un p H de 6,9-7,0 pendant 1 ' oxydation On acidifie la solution à p H 4,5 avec de l'acide chlorhydrique 1 M et on l'applique à une colonne garnie d'un échangeur d'anions faiblement basique sous la forme chlorure. On lave la colonne avec 50 ml d'eau et on lyophilise l'éluat. On purifie le composé obtenu par électrophorèse libre On ob- tient le produit avec un rendement de 23, 1 mg la D= O (c = Gl y = 06 His u D= ( 0,14, acide acétique 3 M); E 2 y 4 = 0,62, Ei 0,23; 62 2,4 '5,7: F=,23; ( 54), 0,56 ( 56) Analyse des amino-acides: Pén( 03 H)+Cys( 03 H) ( 2,09), Tyr( Mé)+Tyr 0,95 ( 0,82), Ile 0,96 ( 0,93), Glu 1,02 ( 1,02), Asp 1,00 ( 1,02), Pro 0,98 ( 1,02), Leu 1,02 ( 1,00), Gly 1,00 ( 1,00) Les valeurs entre parenthèses correspondent à l'échantillon oxydé par l'acide performique Pour C 46 H 72 N 12 012 S 0,5 CH 3 COOH 2,5 H 20 ( 1124) théorique: 50,21 % C, 7,08 % H, 14,95 % N; trouvé: 50,30 % C, 6,72 % H, 14,94 % N. EXEMPLE 3 Amide de l'acétyl-S-pénicillaminyl-O-méthyltyrosyl-isoleucyl- glutaminyl-asparaginyl-S-benzylcystéinyl-prolyl-leucyl-glycine On dissout 190 mg du nanopeptide dans 2 ml d'acide acétique et on ajoute 2 ml d'acide bromhydrique à 35 % dans 1 ' acide acétique On précipite le bromhydrate avec de l'éther après 10 minutes de repos à la température ordinaire; EGY: 0,50; R: 0,47 ( 51), 0,28 ( 52), 0,44 ( 53), 0,63 ( 54). 2,4 ' On dissout le bromnhydrate dans 5 ml de diméthylformamide, on ajuste le p H de la solution à 7,5-8,0 avec de la N-éthyl- -pipéridine (papier p H humide) et on ajoute à la solution 39 mg d'acétate de chloro-5-hydroxy-8 quinoléinyle Après 2 jours d'agitation, on rajoute de l'ester actif et on poursuit l'agi- tation pendant encore 2 jours On évapore le diméthylformamide, on triture le résidu avec de l'éther de pétrole et de l'éther, on filtre et on lave avec de l'eau, de l'acide chlorhydrique 1 M, de l'eau, du bicarbonate de sodium 0,25 M et de l'eau. On obtient le produit avec un rendement de 140 mg ( 79 %) et on le purifie par filtration sur gel pour obtenir 97 mg de pro- duit ayant les propriétés suivantes: p f = 234-238 C; lîa D = -47,2 (c = 0,1; diméthylformamide); RF:0,49 (Si), 0,27 ( 52), 0,55 ( 53), 0,73 ( 54) Pour C 62 H 88 N 1201352 2 H 20 ( 1310) théorique: 56,86 % C, 7,08 % H, 12,83 % N; trouvé: 56,61 % C, 6,84 % H, 12,76 % N. N-acétyl -Pénicillamine,2-0-méthyltyrosine Jocytocine (Ic) On dissout 87 mg du nonapeptide protégé décrit ci-dessus dans 100 ml d'ammoniac liquide bouillant et on réduit avec du sodium jusqu'à ce que la couleur bleue du mélange réaction- nel persiste pendant 10 secondes On décolore la solution avec du chlorure d'ammonium et on chasse l'ammoniac par lyophilisa- tion On dissout le résidu dans 100 ml d'acide chlorhydrique 0,01 M et on dilue à un volume de 400 ml On effectue l'oxyda- tion avec du K 3 i Fe(CN)67 3,3 x 10-2 M qu'on ajoute progressi- vement jusqu'à ce que la couleur jaune du mélange réactionnel persiste pendant 1 heure On acidifie la solution à p H 4,5 avec de l'acide chlorhydrique 1 M et on l'applique à une co- lonne garnie de 50 ml d'un échangeur d'anions faiblement basi- que sous la forme chlorure On élue la colonne avec 50 ml d' eau et on lyophilise l'éluat On purifie de plus le composé par partage à contrecourant dans le système 1/1 sec-butanol/ acide acétique aqueux à 0,05 % Apres 100 transferts de la phase supérieure et 100 transferts de la phase inférieure, on isole le composé des tubes 44 à 56 et on le purifie ensuite par filtration sur gel On obtient un produit ayant un fa JD = -67, 0 (c = 0,10; acide acétique 3 M) avec un rendement de 7,1 mg; RF = 0,64 ( 54), 0,83 ( 56) Analyse des amino-acides: Pén( 03 H)+Cys(O 3 H) ( 2,05), Tyr(Mé)+Tyr 0,98 ( 0,35), Ile 0,98 ( 1,00), Glu 1,05 ( 1,03), Asp 1,00 ( 1,01), Pro 0,96 ( 0,95), Leu 1,00 ( 1,00), Gly 1,00 ( 1,00) Les valeurs entre parenthè- ses concernent l'échantillon oxydé par l'acide performique. Pour C 48 H 74 N 1201352 6 H 20 ( 1199) théorique: 48,07 % C, 7,23 % H, 14,01 % N; trouvé 48,09 % C, 7,34 % H, 14,23 % N. EXEMPLE 4 Amide de l'o-nitrobenzènesulfénylasparaginyl-S-benzylcystéinyl- E: prolyl-N -p-toluènesulfonyllysyl-glycine On dissout 14,0 g de l'amide de la S-benzylcystéinyl- prolyl-Ne-p-toluènesulfonyllsyl-glycine dans 70 ml de diméthyl- -formamide et on ajuste le p H de la solution à 7,5-8,0 avec de la Néthylpipéridine (papier p H humide) On ajoute à la solution 11,0 g de l'ester trichloro-2,4,5 phénylique de l'o- nitrobenzènesulfénylasparagine et on agite le mélange à la température ambiante On rajoute 1,0 g de l'ester actif après 24 heures et on poursuit l'agitation pendant encore 24 heures. On évapore le diméthylformamide et on triture le résidu avec de l'éther de pétrole et de l'éther, on filtre et on lave avec de l'eau, de l'acide sulfurique 0,1 M, de l'eau, du bi- carbonate de sodium 0,25 M et de l'eau On obtient un produit ayant un point de fusion de 175-179 C avec un rendement de 15,1 g ( 76 %) ZÉ 7 D =-62,1 (c = 0,2; diméthylformamide); RF = 0,55 (Sl), 0,39 ( 52), 0,60 ( 53), 0,69 ( 54) Analyse des amino-acides: Asp = 0,97, Cys(Bzl) 0,98, Pro 1,03, Gly 1,01. Pour C 40 H 51 N 901053 ( 914,1) théorique: 52,56 % C, 5,62 % H, 13,79 % N; trouvé 52,23 % C, 5,54 % H, 13,70 % N. Amide de l'o-nitrobenzènesulfénylglutaminyl-asparaginyl-S- benzylcystéinyl-prolyl-N -p-toluènesulfonyllysyl-glycine A une solution de 14,0 g du composé préparé ci-dessus dans 50 ml de diméthylformamide, on ajoute de l'acide chlor- hydrique 2,26 M dans l'éther Après 7 minutes de repos, on précipite le chlorhydrate avec de l'éther et on reprécipite avec de l'éther à partir de la solution dans le diméthyl- formamide pour obtenir 12,3 g du composé; E Gly = 0,76, His 24 E 5,7 = 0,42, RF = 0,23 (Sl), 0,21 ( 52), 0,21 ( 53), 0,64 ( 54). On dissout le chlorhydrate dans 50 ml de diméthylformamide, on ' 11 ajuste le p H de la solution à 7,5-8,0 (papier p H humide) avec de la N-éthylpipéridine et on ajoute 7,9 g d'ester trichloro- 2,4,5 phénylique de l'o-nitrobenzènesulfénylglutamine On rajoute 0,8 g de l'ester actif après 24 heures d'agitation. Après encore 24 heures, on évapore le diméthylformamide et on triture le résidu avec de l'éther de pétrole et de l'éther, on filtre et on lave avec de l'eau, de l'acide sulfurique 0,1 M, de l'eau, du bicarbonate de sodium 0,25 M et de l'eau On ob- tient un produit ayant un point de fusion de 187-192 C avec un rendement de 10,5 g ( 65 %) VJD=-43,0 (c = 0,2, diméthyl- -formamide); RF 0,38 ( 51), 0,24 ( 52), 0,49 ( 53), 0,69 ( 54). Analyse des amino-acides: Glu 1,08, Asp 1,07, Cys(Bzl) 0,72, Pro 1,01, Gly 1,06 Pour C 45 H 59 Nll O 1253 H 20 ( 1060) théorique: ,98 % C, 5,80 % H, 14,53 % N; trouvé: 50,79 % C, 5,74 % H, 14,61 %N. Amide de l'o-nitrobenzènesulfénylphénylalanyl-glutaminyl- asparaginyl-S-benzylcystéinyl-prolyl-N ú p_ toluènesulfonyllysyl_- glycine A une solution de 10 g du composé préparé ci-dessus dans 50 ml de diméthylformamide, on ajoute 8,9 ml d'acide chlorhy- drique 2,26 M dans l'éther Apres 7 minutes de repos, on pré- cipite le chlorhydrate par l'éther et on triture plusieurs f Gly His fois avec de l'éther; E 2,4: 0,70, E 5,7: 0,40, RF = 0,09 ( 51), 0,10 ( 52), 0,09 ( 53), 0,55 ( 54) On dissout le chlorhy- drate dans 40 ml de diméthylformamide, on ajoute le p H de la solution à 7,8-8,0 avec de la N-éthylpipéridine (papier p H humide) et on ajoute 4,6 g d'ester trichloro-2,4,5 phénylique de l'onitrobenzènesulfénylphénylalanine Après 24 heures d' agitation, on rajoute 1,0 g de l'ester actif et on poursuit l'agitation pendant encore 24 heures On évapore le diméthyl- -formamide et on triture le résidu avec de l'éther et de 1 ' éther de pétrole, on filtre et on lave avec de l'eau, de 1 ' acide sulfurique 0,1 M, de l'eau, du bicarbonate de sodium 0,25 M et de l'eau On obtient un produit ayantun point de fusion de 206-209 avec un rendement de 8,5 g ( 74 %); Lc JD=- 24,0 (c = 0,2; diméthylformamide); RF 0,53 (Si), 0,29 ( 52), 0,58 ( 53, 0,72 ( 54) Analyse des amino-acides: Phé 1,05, Glu 1405, Asp 1,03, Cys(Bzl)0,83, Pro 1,03, Gly 1,01, Pour C 54 H 68 N 1201353 0,5 H 2 O ( 1198) théorique 54,12 % C, 5,80 % H, 14,02 % N; trouvé 54,0 % C, 5,64 % H, 14,32 N. Amide de l'o-nitrobenzènesulfényl-O-tert-butyltyrosyl- phénylalanyl-glutaminyl-asparaginyl-S-benzylcystéinyl-prolyl- N -p-toluènesulfonyllysyl-glycine A une solution de 2,4 g de l'heptapeptide décrit ci- dessus dans 100 ml de diméthylformamide, on ajoute 5,1 ml d' acide chlorhydrique 2,05 M dans l'éther Après 7 minutes de repos, on précipite le chlorhydrate par l'éther: E 2,y: 0,63, E Hls 2,4 E 5,7: 0,37; RF: 0,18 (Sl), 0,18 ( 52), 0,17 ( 53), 0,63 ( 54). On dissout le chlorhydrate dans 50 ml de diméthylformamide, on ajuste le p H de la solution à 7,5-8,0 (papier p H humide) avec de la N-éthylpipéridine et on ajoute 1,1 g de l'ester N- hydroxysuccinimidique de l'o-nitrobenzènesulfênyl-O-tert- butyltyrosine Après 24 heures d'agitation, on rajoute 0,2 g de l'ester actif et on poursuit l'agitation pendant une nuit. On évapore le diméthylformamide, on triture le résidu avec de l'éther de pétrole et de l'éther, on filtre et on lave avec de l'eau, de l'acide sulfurique 0,1 M, de l'eau, du bicarbona- te de sodium 0,25 M et de l'eau On obtient un produit ayant un point de fusion de 193-197 C avec un rendement de 2,5 g ( 88 %) r"D =-21,1 (c = 0,2, diméthylformamide); RF: 0,58 (Sl), 0,34 ( 52), 0,63 ( 53), 0,77 ( 54) Analyse des amino-acides Tyr 0,97, Phé 1,02, Glu 1,05, Asp 0,97, Cys(Bzl) 0,85, Pro 1,06, Gly 1,01 Pour C 67 H 85 N 1301553 H 20 ( 1427) théorique: 56,41 % C, 6,18 % H, 12,76 % N; trouvé: 56,24 %C, 6,03 % H, 12,94 % N. Amide de la benzyloxycarbonyl-S-benzylpénicillaminyl-tyrosyl- -phénylalanyl-glutaminyl-asparaginyl-S-benzylcystéinyl-prolyl- E N -p-toluènesulfonyllysyl-glycine On prépare le chlorhydrate de 1,5 g de l'octapeptide se- lon le mode opératoire décrit ci-dessus (on emploie 1,1 ml d' acide chlorhydrique 2,05 M dans l'éther) On dissout le chlor- -hydrate dans 10 ml de diméthylformamide, on ajuste le p H de la solution à 7,5-8,0 (papier p H humide) avec de la N-éthyl- -pipéridine et on ajoute 0,5 g de l'ester p-nitrophénylique de la benzyloxycarbonyl-S-benzylpénicillamine dans 4 ml de diméthylformamide On rajoute 0,05 g de l'ester actif après 2 jours d'agitation et on poursuitl'agitation pendant encore * 2 jours On évapore le diméthylformamide et on triture le ré- sidu avec de l'éther de pétrole et de l'éther, on filtre et on lave avec de l'eau, de l'acide chlorhydrique 1-M, de l'eau, du bicarbonate de sodium 0,25 M et de l'eau On dissout le produit obtenu ( 1,2 g) dans 120 ml d'acide trifluoroacétique, on laisse reposer à la température ambiante pendant 1 heure, on ajoute 120 ml de toluène et on évapore le mélange sous vide On triture le résidu avec de l'éther pour obtenir 1,1 g ( 66 %) du produit; on purifie de plus 1,0 g du produit en 4 portions ( 0,25 g chacune) par filtration sur gel On obtient le produit fondant à 136-141 C avec un rendement de 438 mg ( 58 %); l" 4 D = 31,2 (c= 0,1; diméthylformamide); RF: 0,56 ( 51), 0,30 ( 52), 0,68 ( 53), 0,71 ( 54) Analyse des amino- acides: Pén(Bzl) 0,88, Tyr 0,87, Phé 1,05, Glu 1,01, Asp 0,99, Cys(Bzl) 0, 88, Pro 0,99, Gly 1,01 Pour C 77 H 95 N 1301653 H 2 O -( 1573) théorique; 58,80 % C, 6,22 % H 11,58 % N; trouvé 58,83 % C, 6,10 % H, 11,76 %N. /-pénicillamine,8-lysine Jvasopressine (Id) On dissout 144 mg de l'octapeptide protégé dans 150 ml d'ammoniac liquide bouillant et on réduit avec du sodium jus- qu'à ce que la couleur bleue du mélange réactionnel persiste pendant 20 secondes On décolore le mélange réactionnel avec du chlorure d'ammonium et on chasse l'ammoniac par lyophilisa- tion On dissout le résidu lyophilisé dans 50 ml d'acide chlorhydrique 0, 01 M, on dilue la solution avec de l'eau à 400 ml et on extrait par l'éther On chasse l'éther résiduel sous vide et on oxyde avec du K 3 lFe(CN)67 3,3 x 10 2 M qu'on ajoute progressivement jusqu'à ce qu'une couleur jaune persiste pendant 1 heure; on maintient le mélange réactionnel à un p H de 6,9-7,0 au moyen de Na OH 0,1 M Après acidification du mélange réactionnel à p H 3,5 avec de l'acide acétique on chromato- graphie la solution sur une colonne garnie de 30 ml d'échan- geur de cations de type carboxylate ( 0,149-0,074 mm) On lave la colonne avec de l'acide acétique à 0,25 %, on élue le pro- duit avec de l'acide acétique à 50 % et on lyophilise On puri- fie de plus le résidu obtenu ( 71 mg) par électrophorèse libre pour obtenir 13,5 mg de produit ayant les propriétés suivantes: 7 D= -12,1 (c = 0,14, acide acétique 3 M; E 2 Hls: 0,63,E 57:Hls E 24 506,E 7 0,61; RF = 0,32 ( 54), 0,03 ( 56) Analyse des amino-acides: Pén(O 3 H)+ Cys(O 3 H) ( 1,94) Tyr 0,97 ( 0,58), Phé 1,01 ( 0,96), Glu 1,05 ( 1,03), Asp 1,04 ( 1,03), Pro 0,99 ( 0,93), Gly 1,03 ( 1,00) Les valeurs entre parenthèses concernent l'échantillon oxydé par l'acide performique Pour C 48 H 69 N 1301252 3,5 CH 3 COOH. 6,5 H 20 ( 1412) théorique: 46,80 % C, 6,85 % H, 12,90 % N; trou- vé 46,61 % C, 6,06 % H, 12,82 % N. EXEMPLE 5 Amide de l'acétyl-S-benzylpénicillaminyl-tyrosyl-phénylalanyl- glutaminyl-asparaginyl-S-benzylcystéinyl-prolyl-N E-p-toluène- -sulfonyllysyl-glycine On dissout 200 mg du nonapeptide protégé décrit cidessus dans 2 ml d'acide acétique, on ajoute 2 ml d'acide acétique, on ajoute 2 ml d'acide bromhydrique à 35 % dans l'acide acéti- que, on laisse la solution reposer à la température ambiante pendant 10 minutes et on précipite le bromhydrate par l'éther: E Gly: 0,53; R 055 (S), 0,16 ( 52), 0,54 ( 53), 0,62 ( 54). 2,4: O RF 0,55 On dissout le bromhydrate dans 5 ml de diméthylformamide, on ajuste le p H de la solution à 7,5-8,0 avec de la N-éthyl- -pipéridine (papier p H humide) et on ajoute 56 mg d'acétate de chloro-5 hydroxy-8 quinoléinyle On rajoute une portion d'es- ter actif après 2 jours d'agitation et on poursuit l'agitation pendant encore 2 jours On évapore le diméthylformamide, on triture le résidu avec de l'éther et de l'éther de pétrole, on filtre et on lave avec de l'eau, de l'acide chlorhydrique 1 M, de l'eau, du bicarbonate de sodium 0,25 M et de l'eau pour obtenir 126 mg ( 67 %) de produit ayant les propriétés sui- vantes: p f: 136-140 C; a"D = -7,9 (c = 0,1; diméthyl- -formamide); RF: 0,54 ( 51), 0,24 ( 52), 0,60 ( 53), 0,72 ( 54). Pour C 71 H 91 N 1301553 4 H 20 ( 1535) théorique: 55,56 % C, 6,50 % H, 11,86 % N; trouvé 55,38 % C, 6,02 % H, 11,83 % N. N -acétylflpénicillamine,8-lysine 7 vasopressine (Ie) On dissout 105 mg du nonapeptide protégé dans 100 ml d' ammoniac liquide bouillant et on réduit avec du sodium jusqu'à ce que la couleur bleue du mélange réactionnel persiste pendant secondes On décolore la solution avec du chlorure d'ammo- nium et on chasse l'ammoniac par lyophilisation On dissout le résidu dans 100 ml d'acide chlorhydrique 0,01 M, on dilue avec de l'eau a 400 ml et on extrait avec de l'éther On chasse sous vide l'éther résiduel de la solution On effectue l'oxy- dation avec du K 3 Fe(CN)6 3,3 x 10 2 M qu'on ajoute progres- i 5 sivement jusqu'à ce que la couleur jaune de la solution persis- te pendant 1 heure en maintenant le p H à 6,9-7,0 avec de 1 ' hydroxyde de sodium 0,1 M Apres oxydation, on acidifie le mé- lange réactionnel à p H 3,5 avec de l'acide acétique et on chro- matographie sur une colonne garnie de 20 ml d'un échangeur de cations de type carboxylique ( 0,149-0,074 mm) On lave la co- lonne avec de l'acide acétique à 0,25 % puis on élue le produit avec de l'acide acétique à 50 % On obtient le produit par lyophilisation avec un rendement de 59 mg et on le purifie par électrophorèse libre pour obtenir 14,8 mg de produit ayant les propriétés suivantes: ra D = -51,0 (c = 0, 14, acide acétique 3 M); EG 14: 0,51, E 57 S: 0,38; RF: 0,40 ( 54), 0,26 ( 56). Analyse des amino-acides: Pén( 03 H)+Cys( 03 H) ( 1,88, Tyr 0,94 ( 0,61), Phé 0,96, ( 1,02), Glu 1,05 ( 1,00), Asp 1,12 ( 1,00), Pro 1,21 ( 1,00), Lys 0,96 ( 0,98), Gly 1,02 ( 0,95) Les valeurs entre parenthèses concernent l'échantillon oxydé par l'acide performique Pour C 50 H 71 N 1301352 2 CH 3 COOH 4,5 H 20 ( 1328) théo- rique: 48,86 % C, 6,68 % H, 13,72 % N; trouvé 48,80 % C, 5,94 % H, 13,76 % N. EXEMPLE 6 Amide de la tert-butox;carbonyl-O-méthyltyrosyl-phénylalanyl- glutaminyl-asparaginyl-S-benzylcystéinyl-prolyl-NE-p-toluène- -sulfonyllysyl-glycine On prépare le chlorhydrate à partir de 2,4 g de l'hepta- peptide selon le mode opératoire décrit dans les exemples pré- cédents (on emploie 5,1 ml d'acide chlorhydrique 2,05 M dans l'éther On dissout le chlorhydrate dans 50 ml de diméthylfor- mamide, on ajuste la solution à p H 7,5-8,0 avec de la N-éthyl- -pipéridine (papier p H humide) et on ajoute 1,0 g d'ester trichloro-2,'4,5-phénylique de la tert-butylcarbonyl-O-méthyl- -tyrosine On rajoute 0,2 g de l'ester actif aprês 24 heures d'agitationet on poursuit l'agitation pendant encore 24 heures On évapore le dimnéthyl- -formamide et on triture le résidu avec de l'éther de pétrole et de l'éther, on filtre et on lave avec de l'eau, de l'acide citrique à 10 %, de l'eau, du bicarbonate de sodium 0,25 M-et de l'eau On obtient un produit ayant un point de fusion de 196-200 C avec un rendement de 2,2 g ( 84 %); D = 21,6 (c = 0,2; diméthylformamide); RF: 0,55 ( 51), 0,25 ( 52), 0,46 ( 53), 0,66 ( 54) Analyse des amino-acides: Tyr+Tyr( Mé) 0,92, Phé 0,98, Glu 1,00, Asp 1,00, Cys(Bzl) 0,82, Pro 1,05, Gly 1,00 Pour C 63 H 84 N 1201552 2,5 H 20 ( 1359) théorique: ,70 % C, 6,60 % H, 12,37 % N; trouvé: 55,54 % C, 6,22 % H, 12,43 % N. Amide de la benzyloxycarbonyl-S-benzylpénicillaminyl-O-méthyl- tyrosyl-phénylalanyl-glutaminyl-asparaginyl-S-benzylcystéinyl- prolyl-Nú-p-toluènesulfonyllysyl-glycine On prépare le bromhydrate à partir de 1,35 g de l'octa- peptide décrit ci-dessus dissous dans 10 ml d'acide acétique selon une technique ordinaire (on emploie 5 ml d'acide bromhydrique à 35 % dans l'acide acétique) On dissout le bromhydrate dans 10 ml de diméthylformamide, on ajuste le p H de la solution à 7,5-8,0 avec de la Néthylpipéridine (papier p H humide) et on ajoute 0,51 g de l'ester-pnitrophénylique de la benzyloxycarbonyl-S-benzylpénicillamine dans 2 ml de diméthylformamide On rajoute 0,25 g de l'ester actif dans 2 ml de diméthylformamide après 2 jours d'agitation et on pour- suit l'agitation pendant encore 2 jours On évapore le diméthyl- -formamide, on triture le résidu avec de l'éther de pétrole et de l'éther, on filtre et on lave avec de l'eau, de l'acide chlorhydrique 1 M, de l'eau, du bicarbonate de sodium 0,25 M et de l'eau pour obtenir 1,2 g ( 74 %) de produit On purifie de plus une partie ( 0,75 g) de ce composé par filtration sur gel en 3 portions de 0,25 g chacune On obtient un produit ayant un point de fusion de 202-205 C avec un rendement de 361 mg ( 49 %); la D = -34,6 (c = 0,1; diméthylformamide); RF: 0,60 (SI), 0,31 ( 52), 0,68 ( 53), 0,76 ( 54) Analyse des amino- acides; Pén(Bzl) 1,04, Tyr+Tyr(Mé) 0,94, Phé 1,03, Glu 1,00, Asp 0,99, Cys(Bzl) 0,92, Pro 1,00, Gly 1,00 Pour C 78 H 97 N 13 01653 1,5 H 20 ( 1596) théorique 58,70 % C, 6,31 % H, 11,41 % N trouvé: 58,65 % C, 6,25 % H, 11,57 % N. Zl-pénicçllamine, 2-0-méthyltyrosine,8-lysine 7 vasopressine (If) On dissout 145 mg du nonapeptide décrit ci-dessus dans ml d'ammoniac liquide bouillant et on réduit avec du sodium jusqu'à ce que la couleur bleue de la solution persiste pendant secondes On décolore la solution avec du chlorure d'ammo- nium et on chasse l'ammoniac par lyophilisation On dissout le résidu dans 100 ml d'acide chlorhydrique 0,01 M, on dilue avec de l'eau à 450 ml et on extrait la solution avec de l'éther. On chasse l'éther résiduel sous vide On effectue l'oxydation avec du K 3 lFe(CN)67 3,3 x 10 3 M qu'on ajoute progressivement jusqu'à ce que la couleur jaune du mélange réactionnel persis- te pendant 1 heure Pendant l'oxydation, on maintient le mé- lange réactionnel à un p H de 6,9-7,0 au moyen d'hydroxyde de sodium 0,1 M Après oxydation, on acidifie la solution à p H 4,0 avec de l'acide acétique et on chromatographie sur uhe colonne garnie de 20 ml d'un échangeur de cations de type carboxylate ( 0,149 0,074 mm) On lave la colonne avec de 1 ' acide acétique à 0,25 % et on élue le produit avec de l'acide acétique à 50 % puis on lyophilise pour obtenir 86 mg d'une substance sache qu'on purifie par électrophorèse libre On ob- tient un produit ayant un Za JD = O (c = 0,15; acide acétique _His _i 3 M) avec un rendement de 10,3 mg; E 2,4: 0,63, E 57: 0,60; RF: 0,34 ( 54), 0,05 ( 56) Analyse des amino-acides: Pén( 03 H) +Cys( 03 H) ( 1,94), Tyr+ Tyr( Mé) 0,94 ( 0,82), Phé 1,06 ( 1,04), Glu 0,96 ( 1,00), Asp 1,06 ( 1, 00), Pro 1,00 ( 0,99), Lys 0,97 ( 1,04), Gly 1,00 ( 0,99) Les valeurs entre parenthèses concer- nent l'échantillon oxydé par l'acide performique Pour C 49 H 71 N 1301252 3 CH 3 COOH 6 H 20 ( 1369) théorique: 48,27 % C, 6,85 % H, 13,30 % N; trouvé 48,30 % C, 6,27 % H, 13,42 % N. EXEMPLE 7 Amide de l'acétyl-S-benzylpénicillaminyl-O-méthyltyrosyl- phénylalanyl-glutaminyl-asparaginyl-S-benzylcystéinyl-prolyl- N -p-toluènesulfonyllysyl-glycine On dissout 200 mg du nonapeptide protégé décrit ci-dessus dans 2 ml d'acide acétique et on ajoute 2 ml d'acide bromhydri- que à 35 % dans l'acide acétique On précipite le bromhydrate avec de l'éther après 10 minutes de repos à la température ordinaire; E 2 Gly: 0,49; R: 0,07 ( 52), 0,63 ( 54) On dis- E 2,4 sout le bromhydrate dans 2 ml de diméthylformamide, on ajuste le p H de la solution à 7,5-8,0 avec de la N-éthylpipéridine (papier p H humide) et on ajoute 43 mg d'acétate de chloro-5 hydroxy-8 quinoléinyle On rajoute 15 mg de l'ester actif après 2 jours d'agitation et on poursuit l'agitation pendant encore 2 jours On évapore le diméthylformamide et on triture le résidu avec de l'éther de pétrole et de l'éther, on filtre et on lave avec de l'eau, de l'acide chlorhydrique 1 M, de 1 ' eau, du bicarbonate de sodium 0,25 M et de l'eau pour obtenir 142 mg ( 74 %)de produit qu'on purifie de plus par filtration sur gel On obtient un produit ayant un point de fusion de -195 C avec un rendement de 109 mg; r L 7 JD = 31,20 ( c = 0,1; diméthylformamide); RF: 0,56 (Sl), 0,26 ( 52), 0,59 F ( 53), 0,74 ( 54) Pour C 72 H 93 N 1301553 2,5 H 20 ( 1522) théorique: 56,83 % C,,6,49 % H, 11,96 % N, trouvé: 56,50 % C, 6,30 % H, 11,99 % N. N -acétyl Zl-pénicillamine, 2-0-méthyltyrosine, 8-lysine 7 vaso- -pressine (Ig) On dissout 92 mg du nonapeptide protégé décrit ci-dessus dans 150 ml d'ammoniac liquide bouillant et on réduit avec du sodium jusqu'à ce que la couleur bleue du mélange réactionnel persiste pendant 10 secondes On décolore la solution avec du chlorure d'ammonium et on lyophilise On dissout la substance sèche dans 100 ml d'acide chlorhydrique 0,01 M, on dilue avec de l'eau à 450 ml et on extrait avec de l'éther On chasse sous vide l'éther résiduel de la solution On effectue l'oxy- dation avec du K 3/Fe(CN)67 3,3 x 10-2 il qu'on ajoute progres- sivement jusqu'à ce que la couleur jaune du mélange réaction- nel persiste pendant 1 heure On maintient le mélange réaction- nel pendant l'oxydation à un p H de 6,9-7,0 avec de l'hydroxyde de sodium 0,1 M Apres oxydation, on acidifie la solution à p H 4,0 avec de l'acide acétique et on chromatographie sur une colonne garnie de 25 ml d'un échangeur de cations de type car- boxylate ( 0,149-0,074 mm) On lave la colonne avec de l'acide acétique à 0,25 %, on élue le produit avec de l'acide acétique à 50 % et on lyophilise la solution pour obtenir 60 mg de substance sèche On purifie cette substance sèche On purifie cette substance par électrophorèse libre et on obtient 2,4 mg de produit ayant les propriétés suivantes: f AD = 32, 8 (c = 0,13; acide acétique 3 M); E 2 Gly 4: 0,51, E 57: 0,35; 2,4 5,7 RF 0,43 ( 54), 0,39 ( 56) Analyse des amino-acides: Pén( 03 H)+ Cys(O 3 H) ( 1,96), Tyr+Tyr( Mé) 0,96 ( 0,69), Phé 1,04 ( 0,49), Glu 1,01 ( 1,00), Asp 1,03 ( 1,00), Pro 1,03 ( 0,97) Lys 0,95 ( 0,98), Gly 1,03 ( 1,01) Pour C 51 H 73 N 13013526 CH 3 COOH 7 H 20 ( 1628) théorique: 46,51 % C, 6,88 % H, 11,19 % N; trouvé: 46,40 % C, 6,43 % H, 11,08 % N. Exemple 8 /6-pénicillamine,8-lysinelvasopressine (Ih) On réduit 90 mg du nonapeptide protégé constitué de 1 ' amide de la benzyloxycarbonyl-S-benzylcystéinyl-tyrosyl- phénylalanyl-glutaminyl-asparaginyl-S-benzylpénicillamrinyl- prolyl-N-p-toluènesulfonyllysyl-glycine préparé par édifica- tion progressive de la chaîne peptidique en solution, avec du sodium dans 100 ml d'ammoniac liquide jusqu'à ce que la cou- leur bleue du mélange réactionnel persiste pendant 20 secon- des On décolore la solution avec du chlorure d'ammonium et on chasse l'ammoniac par lyophilisation On dissout le résidu dans 100 ml d'acide chlorhydrique 0,01 M, on dilue avec 50 ml d'eau et on extrait par l'éther On dilue ensuite la solution à 300 mi, on ajuste le p H à 7,0 et on oxyde par addition pro- gressive de K 3 Z Pe(CN)6 3,3 x 10 2 M jusqu'à ce que la couleur jaune du mélange réactionnel persiste pendant 1 heure Pendant l'oxydation, on maintient le p H à 6,9-7,0 Après oxydation, on acidifie le mélange réactionnel à p H 4,5 avec de l'acide acétique et on l'applique à une colonne d'échangeur de cations de type carboxylate On lave la colonne avec de l'acide acéti- que a 0,25 % et on élue le produit avec de l'acide acétique à 50 %, on lyophilise et on purifie par électrophorèse libre On obtient le produit lyophilisé ayant un fa D = + 13,6 (c = 0,13; acide acétique 3 M) avec un rendement de 10,2 mg; E 2 is: 0,66, E His 2,4 57: 0,61; RF: 0,33 ( 54), 0,03 ( 56) Analyse des amino- acides: Cys(O 3 H)+Pén( 03 H) ( 1,94), Tyr 0,92 ( 0,56), Phé 1,00 ( 0,96), Glu 0,92 ( 0,91 > Asp 1,00 ( 1,01), Pro 1,00 ( 1,03), Lys 1,07 ( 0,98), Gly 0,96 ( 1,07) Les valeurs entre parenthèses concernent l'échantillon oxydé avec de l'acide performique. Pour C 48 H 69 N 1301252 5 CH 3 COOH 8 H 20 ( 1529) théorique: 41,81 % C, 6,35 % H, 10,93 % N; trouvé: (corrigé pour 9 % de cendres): 41,50 % C, 6,44 % H, 10,92 % N. EXEMPLE 9 Z Disulfure de l-pénicillamine,6-pénicillamine,8-lysine 7 vaso- -pressine (Ii) On réduit par le sodium dans l'ammoniac liquide 100 mg du nonapeptide protégé constitué de l'amide de la benzyloxy- -carbonyl-S-benzylpénicillaminyl-tyrosyl-phénylalanyl- glutaminyl-asparaginyl-S-benzylpénicillaminyl-prolyl-N -p- tolubnesulfonyllysyl-glycine préparé par édification progres- sive de la chaine peptidique en solution, on oxyde avec du ferricyanure de potassium et on purifie comme décrit dans 1 ' exemple 1 On obtient le produit avec un rendement de 10,5 mg His L D = 11,0 (c = 0,13, acide acétique 3 M); E 2,4: 0,61, EH 57 S 0,60; RF: 0,36 ( 54), 0,04 ( 56) Analyse des amino- acides (les valeurs entre parenthèses concernent l'échantillon oxydé avec de l'acide performique): Pén( 03 H) ( 1,80), Tyr 0,86 ( 0,82), Phé 1,00 ( 1,06), Glu 0,92 ( 0,98), Asp 1,00 ( 0,91), Pro 1,00 ( 1,13), Lys 1,00 ( 0, 98), Gly 1,00 ( 0,99) Pour C 50 H 73 N 1301252 3,5 CH 3 COOH 5 H 20 ( 1443) théorique; 48,57 % C, 6,92 % H, 12,89 % N; trouvé 48,54 % C, 6,80 % H, 12,86 % N. Tableau page suivante Exposé général des modifications gues Ia Ii TABLEAU structurales et de certaines valeurs biologiques des analo- Analogue A V B X Y Z Activité inhibitrice (p A ?dans la détermination de l'efficacité utérotonique pressive galactogogie in vitro in situ Ia CH 3 COPén H Ile Cys Leu 4,4 a inefficace 0,04 b Ib H Pén CH 3 Ile Cys Leu 8,0 6,9 7,2 6,8 Ic CH 3 COPén CH Ile Cys Leu 5,4 a 6,4 045 b 3 3 Id H Pén H Phé Cys Lys 6,6 6,3 6,9 _a Ie CH 3 COPén H Phé Cys Lys 5,5 6,3 inefficace inefficace If H Pén CH 3 Phé Cys Lys 8,1 6,9 7,4 6,8 Ig CH 3 COPén CH 3 Phé Cys Lys a a 6,7 inefficace 3 _ _a Ih H Cys H Phé Pén Lys 6, 00 6,16 6,73 -a Ii H Pén H Phé Pén Lys 6,80 6,80 7,18 - a/ non déterminée b/ activité agoniste en UI/mg u 1 r%) co o W ? 528036 REVENDICATIONS 1 Analogues des hormones neurohypophysaires ayant des effets inhibiteurs caractérisés en ce qu'ils répondent à la formule chimique I A-V-Tyr(B)XGln-Asn-Y-Pro-Z-Gly NH 2 (I) dans laquelle A est CH 3 CO ou H, V est un reste de pénicillami- ne ou de cystéine, B est CH 3 ou H, X est un reste d'isoleucine ou de phénylalanine, Y est un reste de pénicillamine ou de cystéine et Z est un reste de leucine ou de lysine. 2 Analogue des hormones neurohypophysaires de formule I selon la revendication 1, caractérisé en ce qu'il consiste en la Zl-N-acétylpénicillaminejocytocine. 3 Analogue des hormones neurohypophysaires de formule I selon la revendication 1, caractérisé en ce qu'il consiste en la Zl-pénicillamine,2-0-méthyltyrosinelocytocine. 4 Analogue des hormones neurohypophysaires de formule I selon la revendication 1, caractérisé en ce qu'il consiste en en la J-N-acétylpénicillamine 2-0-méthyltyrosinejocytocine. Analogue des hormones neurohypophysaires de formule I selon la revendication 1, caractérisé en ce qu'il consiste en la Zl-pénicillamine, 8-Lysinegvasopressine. 6 Analogue des hormones neurohypophysaires de formule I selon la revendication 1, caractérisé en ce qu'il consiste en la Zl-N-acétylpynicillamine, 8-lysinej 7 vasopressine. 7 Analoaue des hormones neurohypophysaires de formule I selon la revendication 1, caractérisé en ce qu'il consiste en la l 1-pénicillamine,2-0-méthyltyrosine,8-lysinejvasopressine. 8 Analogue des hormones neurohypophysaires de formule I selon la revendication 1, caractérisé en ce qu'il consiste en la ZI-N-acétylpénicillamine, 2-0-méthyltyrosine,8-lysine 7 vaso- -pressine. 9 Analogue des hormones neurohypophysaires de formule I selon la revendication 1, caractérisé en ce qu'il consiste en la l 6-pénicillamine,8-lysinejvasopressine. 10 Analogue des hormones neurohypophysaires de formule I selon la revendication 1, caractérisé en ce qu'il consiste en la ll-pénicillamine,6-pénicillamine,8-lysine 7 vasopressine.