Brevet FR2527777A1 — publié le 19831202

Procédé en vue d'évaluer des additifs alimentaires. La présente invention concerne un procédé en vue dévaluer des additifs dans une nourriture pour animaux, de même qu'une trousse dressai utilisée dans ce procédé. Il est de pratique courante d'incorporer, dans des nourritures pour animaux, des additifs alimentaires contribuant à assurer les qualités nutritives de l'aliment ou favorisant la croissance. Un additif alimentaire de ce type est la monensine qui est un produit largement employé à la fois dans les aliments pour le bétail et la volaille, ce produit étant décrit dans le brevet des Etats-Unis d'Amérique nO 3.501.568. D'autres additifs d'une nature semblable que llon désigne.d:une manière générique par l'appellation "ionophores", engobent, par exemplu, la narasine et la salinomycine. La Demanderesse a découvert une méthode commode permettant dévaluer la tendeur de ces additifs alimentaires dans le procédé de fabrication ou dans des conditions pratiques d'utilisation. L'invention fournit un procédé en vue d'évaluer la quantité d'un ionophore dans une nourriture pour animaux, ce procédé comprenant les étapes consistant à mélanger la nourriture avec un solvant alcoolique, ajouter, à la solution obtenue, un acide ayant une valeur pKa inférieure à 4 et un aldéhyde arylique chromogène, tous deux sous forme solide et à une température suffisante pour engendrer une réaction chromogène, puis comparer la couleur ainsi obtenue avec un étalon. On a trouvé que l'utilisation dlingrédients d'essai solides et, en particulier, d'un acide sous forme solide dans le procédé d'essai apportait des améliorations pratiques. Parmi les aldéhydes aryli ques chromogènes, il y a, par exemple, la vanilline, lséthyl-vanilline, le 2,4-diméthoxybenzaldéhyde, le 3,4-diméthoxybenzaldéhyde, le 2,4,5-triméthoxybenzal- déhyde, le 4-diméthylaminobenzaldéhyde, le cinnamaldéhyde et d'autres aldéhydes acryliques comportant des substituants donneurs d'électrons, la vanilline étant l'aldéhyde de loin préféré. Comme tel > l'aldéhyde ne doit pas nécessairement être un solide, pour autant qu'il soit utilisé sous forme solide, par exemple, lorsqu'il est absorbé sur un support solide. Lorsqu'on utilise des ingrédients liquides dans des essais d'évaluation dlun ionophore, par exemple, des solutions de vanilline et d'un acide liquide, qui sont nécessaires pour catalyser la réac- tion de la vanilline avec l'ionophore, on se heurte à des inconvénients considerables lorsqulune évaluation rapide doit entre effectuée dans des conditions pratiques et l1on a constaté que les résultants obtenus n'étaient pas fiables. De fagon étonnante, le procédé de la présente invention est non seulement plus commode, mais il offre également une plus grande fiabilité.Le procédé de l'invention peut également entre adopté pour confirmer l'absence d'un ionophore dans une nourriture lorsque, par exemple, celle-ci est destinée à des animaux tels que des chevaux, lesquels réagissent défavorablement aux ionophores. Le procédé de l'invention est applicable à l'évaluation-dXionophores tels que, par exemple, la narasine, la salinomycine et, en particulier, la monensine. Parmi les acides solides que l'on peut utiliser, il y a, par exemple, l'acide S-sulfosali- cylique, placide sulfamique, l'acide O-sulfonique d'hydroxylamine et l'acide p-toluène-sulfonique, l'acide 5-sulfosalicylique étant la matière préférée. Le solvant préféré qui est destiné à être mélangé avec la nourriture, est le méthanol, mais on peut utiliser d'autres solvants alcooliques tels que > par exemple, ltéthanol, seuls ou sous forme d'un mélange alcoolique aqueux contenant l'alcool en une quantité suffisante pour extraire -efficacement le composant ionophore. La couleur produite par llinteraction de l'ionophore contenu dans la nourriture avec ltaldéhyde arylique et l'acide est évaluée par comparaison avec un étalon qui peut etre, par exemple, une sous tion colorée préparée en mélangeant une quantité connue d'un ionophore avec un aldéhyde et un acide ou en utilisant une échelle calibrée de teintes. Afin de produire une couleur, il est nécessaire de veiller à ce que la réaction ait lieu à une température appropriée se situant, de préférence, dans l'intervalle de 50 à 700C, en particulier, à une température de 600C, cette température étant obtenue, par exemple, en plongeant un récipient contenant la solution dans un bain-marie chauffé. Dans la pratique, il est souvent préféra ble de décanter la solution formée à la suite du mélange de la nourriture avec le solvant alcoolique, puis de mélanger le produit surnageant avec un aldéhyde et un acide sur un milieu support tel que, par exemple, un disque d'une matière filtrante ou, mieux encore, avec des comprimés d'un aldéhyde arylique et dtun acide. Etant donné que l'on peut se heurter à des difficultés pour formuler le composant acide et l'aldéhyde arylique ensemble sous une forme stable, il est préférable d'utiliser deux comprimés séparés comprenant chacun un des composants. L'acide et l'aldéhyde arylique solides peuvent être aisément préparés tous deux sous forme de comprimés.Dans le cas d'aldéhydes liquides, la matière peut être adsor bée sur des supports appropriés dans la formulation de comprimés. En conséquencess un procédé préféré de llinvention est celui comprenant les étapes consistant à (a) mélanger une nourriture contenant un ionophore positif vis-à-vis de la vanilline avec un solvant alcoolique, (b) décanter une portion du produit surna geant, (c) ajouter, à cette portion du produit surnageant, un ou plusieurs comprimés comprenant un acide solide ayant une valeur pKa inférieure à 4, ainsi qu'un ou plusieurs comprimés comprenant de la vanilline, à une température suffisante pour engendrer une réaction chromogène, et (d) comparer la couleur ainsi formée avec un étalon choisi suivant les quantités et les volumes spécifiques des matières d'essai utilisées. I1 est entendu que la quantité de nourriturne, le volume de solvant et d'autres quantités utilisées doivent etre choisis minutieusement pour concorder avec les conditions requises de l'étalon. Pour des conditions pratiques, la quantité de nourriture sera, de préférence, réglée à une valeur de 3, 4 ou 5 g, valeur que lson peut mesurer, par exemple, en remplissant un récipient tel qutune bouteille ou un tube jusqu'à un repère spécifié. Le volume spécifié de solvant, par exemple, 8 à 12 ml, peut alors etre ajouté et le mélange peut être chauffé pendant une période de 1 à 2 minutes. On décante ensuite une portion spécifiée du produit surnageant (par exemple, 1,5 à 2,5 ml) dans un deuxième récipient dans lequel on ajoute les comprimés de l'acide et de l'aldéhyde arylique (généralement, un de chacun de ces deux composants).Les comprimés contiennent le catalyseur acide ou la vanilline en une quantité appropriée pour produire une réaction chromogène quantifiable en concordance avec la solution colorée étalon ou échelle calibrée de teintes. De préférence, on utilise un excès de l'acide et de la vanilline et, par exemple, par comprimé, la quantité d'acide peut être de 40 à 60 mg, tandis que la quantité de vanilline peut etre de 40 mg à 60 mg. On peut préparer la solution colorée étalon en mélangeant un comprimé comprenant, par exemple, une quantité spécifiée d'ionophore (100, 200 ou 300 mcg) avec une quantité appropriée du solvant. Comme on l'a indiqué ci-dessus, l'essai doit etre effectué à une température suffisante pour produire une réaction chromogène entre les composants. La Demanderesse a trouvé que la température optimale était de 600C et qu'il était de loin plus commode d'appliquer la chaleur aprs avoir ajouté l'aldéhyde arylique et l'acide à la solution alcoolique. Toutefois, en variante, on peut tout d'abord chauffer le solvant à 600C avant de le mélanger avec la nourriture ou on peut ensuite le chauffer immédiatement avant l'addition de l'acide et de l'aldéhyde. Les comprimés utilisés peuvent être préparés par des moyens classiques selon lesquels on mélange l'acide ou l'aldéhyde solide avec une quantité appropriée dlune charge et diun agent tensio-actif. On donnera ci-après des formulations spécifiques pour ces compriies : Comprimé 1 Acide 5-sulfosalicylique 50 mg Stéarate de magnésium 0,25 mg éros il 0,25 mg Comprimé 2 Vanilline 50 mg Stéarate de magnésium 0 > 25 mg éros il 0,25 mg L' invention englobe également une trousse d'essai conçue pour etre utilisée dans le procédé de ltinvention, cette trousse comprenant un récipient dtextraction, de préférence, gradué suivant la quantité de la nourriture à extraire, le volume de solvant à ajouter et le volume de produit surnageant à décanter, un récipient dressai en vue d'observer la couleur du produit surnageant, un récipient contenant un solvant, des comprimés contenant des quantités étalons d'un acide solide et d'un aldéhyde arylique chromogèness ainsi qulune échelle de teintes ou un ou plusieurs comprimés contenant une quantité étalon dtun ionophore. L'invention sera illustrée plus en détail par l'exemple suivant. EXEMPLE On a tout d'abord préparé une solution colorée étalon en mélangeant un comprimé contenant 100 mcg de monensine avec 2 ml de méthanol dans un tube d'essai, en ajoutant 50 mg d'acide 5-sulfosalicylique et 50 mg de vanilline sous forme de comprimés séparés, ainsi qu'en maintenant le mélange à 600C par immersion dans un bain-marie. Lorsque les composants se sont dissous, il sXest formé une coloration rouge. Pour effectuer la comparaison avec cette solution étalon, on a déposé 5 g de nourriture pour bétail contenant une quantité connue, soit 50 parties par million, de monensine dans une bouteille d'extraction, on y a ajouté 10 ml de méthanol on a agité le mélange et on a soumis le produit surnageant à un essai de réaction chromogène. On a versé une certaine quantité (2 ml) du-produit surnageant dans un tube dressai, puis on a ajouté 50 mg d'acide 5-sulfosalicylique et 50 mg de vanilline sous forme de comprimés séparés. On a plongé le tube d'essai dans un bain marie à 600C et on lla maintenu à cette température jusqu'à ce que les deux comprimés se soient dissous. I1 sXest formé une coloration rouge et, lorsquton l'a comparée avec la solution colorée étalon, on a observé que la couleur était moins intense. D'après ces deux conclusions, on a pu déduire que : (a) l'ionophore était présent dans 1 nourriture et (b) ltionophore étant présent à raison de moins de 100 parties par million. REVENDICATIONS 1. Procédé en vue d évaluer la quantité d'un ionophore dans une nourriture, caractérisé en ce qutil consiste à mélanger la nourriture avec un solvant alcoolique, ajouter, à la solution obtenue, un acide ayant une valeur pKa inférieure à 4 et un aldéhyde arylique chromogène, tous deux sous forme solide, à une température suffisante pour produire une réaction chromogène, puis comparer la couleur ainsi obtenue avec un étalon. 2. Procédé suivant la revendication 1, caractérisé en ce que l'aldéhyde arylique chromogène est la vanilline. 3. Procédé suivant l'une quelconque des revendications 1 et 2, caractérisé en ce que l'acide est l'acide 5-sulfosalicylique. 4. Procédé suivant la revendication 1, caractérisé en ce qu'il comprend les étapes qui consistent à (a) mélanger une nourriture contenant un ionophore positif vis-à-vis de la vanilline avec un solvant alcoolique (b) décanter une portion du produit surna- gelant, (c) ajouter, à cette portion du produit surnageant, un ou plusieurs comprimés comprenant un acide solide ayant une valeur pKa inférieure à 4 et un ou plusieurs comprimés comprenant de la vanilline, à une température suffisante pour provoquer une réaction chromogène et (d) comparer la couleur ainsi formée avec un étalon en relation avec les quantités et les volumes spécifiques des matières d'essai utilisées. 5. Procédé suivant l'une quelconque des revendications 1 à 4 en vue d'évaluer la quantité de monensine dans une nourriture. 6. Trousse d'essai conçue pour être utilisée dans un procédé suivant l'une quelconque des revendications 1 à 5, caractérisée en ce quelle comprend un récipient d'extraction, un récipient d'essai en vue d'observer la couleur du produit surnageant, un récipient contenant un solvant, des comprimés de quantités étalons d'un acide solide et d'un aldéhyde arylique chromogène, ainsi qu'une échelle de teintes ou un ou plusieurs comprimés d'une quantité étalon d'ionophore. 7. Trousse d'essai suivant la revendication 6, caractérisée en ce que le récipient d'extraction est gradué suivant la quantité de nourriture à ext ra i- re, le volume de solvant à ajouter et le volume de produit surnageant à decatcr,