Brevet FR2531864A1 — publié le 19840224

L'invention a pour objet un adminiculum pour mito- mycine C et doxorubucine L'invention se rapporte plus par- ticulièrement à un adminiculum augmentant l'activité anti- tumeur de la mitomycine et du chlorhydrate de doxorubi- cine et diminuant les effets secondaires comprenant un ex- trait dans de l'eau ou dans un solvant organique aqueux comme composant actif, d'un produit pharmaceutique brut constitué d'Astragali radix, de Chinnamomi cortex, de Rhe- manniae radix, de Paeoniae radix, de Cnidii rhizoma, d'A- tractylodis lanceae rhizome, d'Angelicae radix, de Ginseng radix, de Hoelen et de Glycyrrhizae radixo La mitomycine C, des cristaux bleuviolacés ou une poudre cristalline de formule moléculaire C 15 H 18 N 405, se combine avec l'ADN d'une cellule de tumeur et dégrade son ADN, et inhibe la synthèse de l'ADN pour supprimer la division des cellules de tumeur (Shibita, So et alo, Biken's J, 1, 193 ( 1958) o Szybalski, W et alo Proco Nat. Acad Sci, 50, 355 ( 1963)o Le chlorhydrate de doxorubici- ne, une poudre cristalline de couleur rouge orangée de for- mule moléculaire C 27 H 29 NO 01 H Cl inhibe le parcours-de syn- thèse de l'ADN de cellule de tumeur et inhibe la division des cellules de tumeur, en particulier il se combine avec l'ADN pour inhiber la polymérase ARN (K Tatsumi, et al, , 237 ( 1974) Comme bien connu, la mitomycine C et le chlorhydrai de doxorubicine présentent de fortes activités anti-tumeur, cependant, leur utilisation clinique a du être limitée à cause de graves effets secondaires comme la leu- copénie et la thrombocytopénie. On a découvert qu'un extrait dans de l'eau ou dans un solvant organique aqueux de produit pharmaceutique brut constitué d'Astragalis radix, de Cinnamomi cortex, de Rehmanniae radix, de Paeoniae radix, de Cnidii rhizoma, d'Atractylodis Lanceae rhizoma, d'Angelicae radix, de Gin- seng radix, de Hoelen ou de glycyrrhizae radix stimule l'activité anti-tumeur de la mitomycine C ou du chlo- hydrate de doxorubicine, et diminue leurs effets secon- daires L'effet seoonrdre selon l'invention désigne la leucopénie. Un objet de l'invention est de fournir un admi- niculum pour mitomycine C et doxorubicine. Un autre objet de l'invention est de fournir un adminiculum qui augmente l'activité anti-tumeur de la mito- mycine C et du chlorhydrate de doxorubicine et qui di- minue l'effet secondaire des deux produits pharmaceutiques. Un procédé de fabrication d'un adminiculum pour agents anti-tumeur, la mitomycine C ou le chlorhydrate de doxorubicine (désigné simplement ci-après comme adminicu- lum de l'invention ou l'admiculum) consiste à utiliser une quantité convenable d'Astragali radix, de Cinnamomi cortex, de Rehmanniae radix, de Paeoniae radix, de Cnidii rhizoma, d'Atractylodis lanceae rhizoma, d'Angelicae radix, de Gin- seng radix, de Hoelen et de Glycyrrhizae radix. En particulier, on préfère utiliser 2,0-4,0 parts d'Astragali radix, 2,0-4,0 parts de Cinnamomi cortex, 2,0- 4,0 parts de Rehmanniae radix, 2,0-4,0 parts de Paeoniae radix, 2,0-4,0 parts de Cnidii rhizoma, 2,0-4,0 parts d'A- tractylodis ianceae rhizoma, 2,0-4,0-parts d'Angelicae ra- dix, 2,0-4,0 parts de Ginseng radix, 2,0-4,0 parts de Hoe- len et 0,5-2,5 parts de Glycyrrhizae radix On peut mention- ner que la combinaison la plus préférable est le médicament chinois traditionnellement connu (herbe médicinale) Jîzen- taihot 6. L'adminiculum de l'invention peut être préparé par extraction des dix sortes ci-dessus de produits pharma- ceutiques bruts avec de l'eau ou un solvant organique aqueux, de préférence l'éthanol, par filtration de l'extrait ainsi obtenu et par séchage au moyen d'un procédé conventionnel de séchage comme un séchage par pulvérisation, une lyophi- lisation ou un séchage par concentration. L'adminiculum peut être préparé par extraction d'un mélange des dix sortes ci-dessus de produits pharmaceu- tiques bruts, ou par mélange des extraits de chaque produit pharmaceutique brut. L'extraction peut être réalisée à température am- biante ou en chauffant, de préférence à 50-100 C. L'adminiculum de l'invention peut être utilisé comme tel, ou peut être prescrit comme une préparation en poudre, en granules, en comprimés ou en capsules en addi- tionnant des véhicules ou additifs conventionnels Les ex- traits peuvent être, facultativement, purifiés par un pro- cédé conventionnel comme une dialyse, une chromatographie ou autres. Des exemples des préparations de l'invention sont donnés pour référence comme suit. Exemple de référence 1. De l'eau ( 285 ml) a été ajoutée à un mélange de produits pharmaceutiques bruts constitués d'Astragali ra- dix ( 3,0 g), de Cinnamomi cortex ( 3,0 g), de Rehmanniae radix ( 3,0 g), de Paeoniae radix ( 3,0 g), de Cnidii rhizo- ma ( 3,0 g), d'Atractylodis lanceae rhizoma ( 3,0 g), d'An- gelicae radix ( 3,0 g), de Ginseng radix ( 3,0 g), de Hoelen ( 3,0 g) et de Glycyrrhizae radix ( 1,5 g) et extraite à 100 C pendant une heure L'extrait a été filtré et séché par pulvérisation pour obtenir une poudre d'extrait sec ( 2,3 g). Exemple de référence 2. De l'éthanol aqueux ( 142,5 ml) a été ajouté à un mélange de produits pharmaceutiques bruts possédant la mi- me teneur que dans l'exemple de référence 1, et reflué à 70 C pendant 30 minutes L'extrait a été filtré et séché pour obtenir l'extrait sec ( 1,9 g). Les données expérimentales montrent l'effet de l'adminiculum qui augmente l'acitivité anti-tumeur de la mitomycine C et du chlorhydrate de doxorubicine et at- ténue la leucopénie De plus, ces données montrent que l'ad- miniculum de l'invention empêche la perte de poids du corps et atténue la mortalité causée par la toxicité. Expérience 1. On a inoculé à des souris mâles BDF 1 (C 57 BL/6 X DBA/2), âge 4-4,5 semaines, intrapéritoinement, des cellu- les de leucémie P-388, 1 X 106, au jour O Les effets de l'adminiculum obtenus dans les exemples de référence 1 et 2 sur la prolongation de vie ont été comparés avec la mi- tomycine C ou le chlorhydrate de doxorubicine seul ou en combinaison. De la mitomycine C ( 3 mg/kg) ou du'chlorhy- drate de doxorubicine ( 2,5 mg/kg) dissous dans du sérum physiologique a été administré intrapéritoinement aux jours 1 et 7 Les adminiculum obtenus dans les exemples de réfé- rence-1 et 2, dissous dans de l'eau distillée, ont été ad- ministrés oralement, 2 g/kg/jours, une fois par jour, à travers une sonde stomacale, à partir du jour 1, pendant la durée de l'expérience. Les résultats sont donnés dans les Tableaux 1 et 2. Le Tableau 1 montre les effets de la mitomycine C, de l'adminiculum obtenu dans les exemples de référence 1 et 2, et de la combinaison de l'adminiculum et de la mi- tomycine sur la durée moyenne de vie de souris auquelles - on a inoculé du P-388 Le Tableau 2 montre les mêmes effets pour le chlorhydrate de doxorubicine. Comme montré dans les Tableaux 1 et 2, l'admini- culumnne présente pas en lui-même d'activité anti-tumeur, cependant les activités anti-tumeur de la mitomycine C et du chlorhydrate de doxorubicine sont extrêmement accrues par une thérapie de combinaison de ceux-ci. Tableau 1. Effet de la mitomycine C, de l'adminiculum obte- nu dans les exemples de référence 1 et 2, et de la combinai- son de ceux-ci sur des souris auquelles on a inoculé de la leucémie P-388. ( ( Groupe traité ( ( Témoin ( ( Adminiculum obtenu dans l'exemple de référence 1 ( ( 1) C Adminiculum obtenu dans ( ( l'exemple de référence 2: ( ( 2) ( ( Mitomycine C (m 4 C) ( MMC + ( 1) (MMC + ( 2) (: Durée moyenne de vie (jour) 9,8 ,6 ,1 14,4 21,0 19,8 :) : T/C (%)*) *) :) *) :) *) :) 108) ) :) s 147) o) : 202) : * T/C (%) = durée moyenne de vie (traité) durée moyenne de vie (témoin) X 100 Tableau 2 Effet du chlorhydrate de doxorubicine (DHC 1), des admi= niculum obtenus dans les exemples de référence 1 et 2, et de la combinaison de ceux-ci sur des souris auquelles on a inoculé de la leucémie P-388 o (:: ) ( Groupe traité: Durée moyenne T/C (%)*) () de vie (jour): ( Témoin 11,4 100 (:) ( Adminiculumr obtenu dans:: ( l'exemple de référence 1 ( ( 1): 11,0 : 96) ( Adminiculum obtenu dans) ( l'exemple de référence 2:) ( ( 2) 11,2 98 (: : ) (:) Chlorhydrate de doxorubi:: ) cine (DH Cl) 18,3 161 ( DH Cl + ( 1): 24, 0: 211) DHC 1 + ( 2) 22,4 196 (:: ) () * T/C (% = durée moyenne de vie (traité) X 100 durée moyenne de vie (contr 8 le) Expérience 2. Les effets de l'extrait séché de produit pharma- ceutique brut obtenu dans les exemples de référence 1 et 2 sur la leucopénie et la perte de poids du corps causées par l'administration de mitomycine C ont été étudiés en utilisant des souris BDF 1 males, âgées de 4-4,5 semaines, possédant un nombre de leucocytes dans un intervalle nor- mal. De la mitomycine C a été administrée, 3 mg/kg, intrapéritoinement au jour 1 et 7 De l'extrait de poudre de produit pharmaceutique brut obtenu dans l'exemple de référence 1 ou 2 a été administré, 2 g/kg/jour, oralement, du jour 1 au jour 17 une fois par jour Le nombre de leu- cocytes et le poids du corps ont été mesurés chaque jour pendant la durée de l'expérience Les résultats sont donnés dans la Fig 1 et la Fig 2. La Fig i montre l'effet des produits pharmaceutiques ex- traits obtenus dans les exemples de référence 1 et 2 sur la leucopénie provoquée par la mitomycine C La Fig 2 montre l'effet des produits pharmaceutiques extraits obte- nus dans les exemples de référence 1 et 2 sur la perte de poids de corps provoquée par la mitomycine C Comme montré dans les Fig 1 et 2, une combinaison de mitomycine C et de l'adminiculum de l'ivention est efficace pour atténuer la leucopénie et la perte de poids du corps. Expérience 3. Les effets de l'extrait séché de produit pharma- ceutique brut obtenu dans les exemples 1 et 2 sur la leu- copénie et la perte de poids de corps provoquée par une seule administration de chlorhydrate de doxorubicine, ad- ministré en une fois intrapéritoinement, 5 mg/kg, en uti- lisant des souris BDF 1 mâles, &gées de 4-4,5 semaines, possédant un nombre de leucocytes dans un intervalle nor- mal Les produits pharmaceutiques obtenus dans les exem- ples de référence 1 ou 2 ont été administrés oralement, 2 g/kg/jour, une fois par jour pendant toute la durée de l'expérience. Le résultat est donné dans la Fig 3 La Fig 3 montre les effets d'un extrait de produit pharmaceutique brut obtenu dans les exemples de référence 1 et 2 sur la leucopénie provoquée par le chlorhydrate de doxorubicine. Comme montré dans la Fig 3, l'adminiculum de l'invention favorise le rétablissement de malades atteints de leucopé- nie provoquée par 1 e chlorhydrate de doxorubicine. Expérience 4. Les effets dela combinaison de mitomycine C et de l'adminiculum en utilisant des souris BDF 1 mâles, âgées de 4-4,5 semaines, ont été étudiés De la mitomycine a été administrée, 9 mg/kg, par administration intrapéritoine unique, ou 3 mg/kg/jour, par administration intrapéritoine répétée au jour 1, 4 et 7 L'extrait séché de produit phar- maceutique brut obtenu dans les exemples de référence 1 ou 2 ci-dessus a été administré oralement 2 g/kg/jour, à par- tir du jour 1 et pendant toute la durée de l'expérience une fois par jour. Les résultats sont donnés dans la Fig 4 et la Fig 5 La Fig 4 montre l'effet du produit pharmaceutique obtenu dans les exemples de référence 1 et 2 sur la courbe de survie à une administration unique de mitomycine C ( 9 mg/kg) La Fig 5 montre l'effet du produit pharmaceuti- que sur la courbe de survie à une administration répétée de mitomycine C ( 3 mg/kg) Comme montré dans les Fig 4 et 5, une thérapie de combinaison de mitomycine C et de l'adminiculum de l'invention est efficace pour retarder ou atténuer l'apparition de mort due à la toxicité de la mitomycine C. La toxicité aigue de l'adminiculum a été étu- diée en utilisant des souris dd Y mâles et des rats Wis- ter mâles Aucune mort n'a été observée à la suite d'une administration orale du produit pharmaceutique obtenu dans les exemples de référence 1 et 2, 15 mg/kg En conséquen- ce, l'adminiculum présente une très faible toxicité et est un produit pharmaceutique très sur. En considérant les données expérimentales et la toxicité aigue, une posologie efficace de l'adminiculum de l'invention, bien que variant suivant les âges, le poids du corps et l'importance de la maladie des patients, est généralement 2 10 g pour une dose, en administration ora- le trois fois-par jour pour un adulte L'adminiculum peut être administré séparément ou prescrit avec de la mitomyci- ne C ou de l'hydrochlorue de doxorubicine. Test clinique: - Une étude clinique de l'adminiculum de l'inven- tion sur une opération chirurgicale du cancer a été réali- sée. L'objet de l'étude était d'étudier un effet de l'adminiculum sur la récupération des facultés essentiel- les après l'opération et la prévention d'effets secondai- res de la chimiothérapie du cancer. Des tests aveugles doubles utilisant la méthode de l'enveloppe ont été effectués en administrant l'admini- culum de l'invention et un agent anti-tumeur (groupe A), et sans administrer l'adminiculum de linvention (groupe B, agent anti-cancer seulement) o L'adminiculum a été administré, i 2 semaines après l'opération chirurgicale d'un cancer, à un moment o une administration orale ou une administration rectale a été possible, 7 v 5 g/jour, en trois prises distinctes, avant les repas, pendant 12 semaines Pendant la même pé- riode, de la mitomycine C et d'autre thérapie de produit pharmaceutique ont été prises Chacun des cas cliniques a été vérifié avant et après l'opération et au moment de l'administration de produit pharmaceutique au jour 0, et ensuite, toutes les quatre semaines pendant 20 semaines. Le groupe témoin (groupe B)'a été traité de la même manière. Le Tableau 3 donne le nombre de cas objectifs. Tableau 3 ( Maladie: Groupe A : Groupe B) ( Cancer de l'oesophage 2 2 (: ( Cancer de l'estomac 4 ( 1): 3) Cancer du mammelon valter 1: ( Cancer du pancréas *:1) ( Cancer du colon I (Cancer du sein: 1 Iléus 1 (:: ( Pancréatite chronique: (:: ( Total 9 ( 1) S ( 10) ( () = cas exclus * = cas non annulé _:) Le tableau 4 donne les &ges des patients. Tableau 4 A ( 9 cas): B ( 10 cas)) ( ') ( âge:53 77 38 83) moyenne 64 61 (: Le tableau 5 donne le sexe, Tableau 5 ( ' A: B) à àààà) (:: ) ( mâle 8: 5) femelle 1 5 ) ( Effets cliniques 1 Symptômes subjectifs et objectifs (Tableau 6) Tableau 6 ( ': FxkX ( Symptômes: groupe A : groupe B) : ( 9 cas) ( 10 cas)) (: : (Augmentation de l'appétit 9 ( 100) 7 ( 70) (Amélioration de la fatigue: 8 ( 89): 6 ( 60)) (Eruption 2 ( 22) 3 ( 30)) (Stomatite: 4 ( 44) : 6 ( 60) ) Comme montré dans le Tableau 6, un effet d'amé- lioration peut apparaltre sur le groupe A. 2 Changement du poids du corps: (Fig 10) Dans le groupe B, une augmentation lente du gain de poids du corps a été observée à partir de la 4 ème semai- ne après l'opération, cependant un rétablissement complet n'a pas été observé après la 20 ème semaine Au contraire, dans le groupe A, à la 12 ème semaine après le début de l'administration de l'adminiculum, un rétablissement du poids du corps au même niveau que celui avant l'opération a été observe Un résultat effectif de l'adminiqulum pour soulager de la perte de poids du corps causée par la mito- mycine C et d'autres chimiothérapeutiques de tumeur peut être observé. 3 Protéine totale et d'albumine: (Fig 11) La quantité du total de protéine et d'albumine ne diffère pas entre les groupes'A et B. 4 Changement d'électrolytes: (Fig 12) Dans des changements d'électrolytes, on a obser- vé que le sodium était plus élevé dans le groupe A, et le potassium plus bas dans le groupe A. Créatine du sang: (Fig 13) La créatiredu sang a semblé augmenter après l'opé- ration à la fois dans les groupes A et B, cependant aucune différence n'a été observée. 6 Variation du GOT et du GPT: (Fig 6) Le GOT et le GPT ont été déterminés pour la fonc- tion du foie Aucun changement extrême n'a été observé à la fois dans les groupes A et B. 7 Nombre d'érythrocytes et quantité d'hémoglogine: (Fig 7) On a observé que le nombre d'érythrocytes et la quantité d'hémoglobine augmentaient plus à la fois dans les groupes A et B, cependant aucune différence n'a été constatée. 8 Nombres de leucocytes et de plaquettes sanguines (Fig 8) -Les nombres de leucocytes dans le groupe B ont décrus pendant l'administration de chimiothérapeutiques, et une légère décroissance a été observée dans le groupe A Le résultat semble indiquer que l'administration de l'adminiculum de l'invention empêche la leucopénie Au- cune différence dans le nombre de plaquettes sanguines n'a été observée. 9 Nombre de lymphocytes et de e -globuline: (Fig 9) Le nombre de lymphocytes a légèrement augmenté dans le groupe A comparé au groupe B. Aucun changement caractéristique n'a été obser- vé dans la t -globuline. Les exemples suivants illustrent l'invention mais ne doivent pas être entendus comme étant limitatifs. Exemple 1. La préparation de produit pharmaceutique produit dans l'exemple de référence 1 ou 2 (désignée ci-après com- me la préparation de produit pharmaceutique) ( 200 g) a été mélangée avec du lactose ( 89 g) et du stéarate de magné- sium 11 g) Le mélange a été comprimé par une machine à comprimé unique pour produire des comprimés de scories qui ont été broyés par une machine oscillante, préparant des granules, et tamisés pour obtenir des granules de ta- mis 20 50 ( 0,84 0,297 mm). Les granules sont prescrites pour la thérapie. d'adminiculum de mitomycine C ou de chlorhydrate de doxo- rubicine, à 3 15 g (correspondants à 2,07 10, 34 g du produit pharmaceutique de l'invention) en une dose, 3 fois par jour, durant la durée du traitement, par admi- nistration orale. Exemple 2. La préparation de produit pharmaceutique ( 200 g) a été mélangée avec de la cellulose cristalline fine ( 20 g) et du -stéarate de magnésium ( 5 g) Le mélange a été compri- mé par une machine à comprimé unique pour produire des com- primés, diamètre 7 mm, poids 225 mg Un comprimé contient mg de la préparation de produit pharmaceutique 10 comprimés ont été pris oralement en une administration, 3 fois par jour. Exemple 3. La préparation de produit pharmaceutique ( 500 mg) a été mise en capsule dans une capsule dures Cette capsule a été administrée, 4 20 capsules en une fois, 3 fois par jour. Exemple 4. La préparation de produit pharmaceutique ( 200 g) et de la mitomycine C ( 100 mg) ont été mélangées avec de la cellulose cristalline fine ( 20 g) et du stéarate de ma- gnésium ( 5 g) Le mélange a été comprimé par une machine à comprimé unique pour produire des comprimés de diamètre * 7 mm, poids 225 mg La préparation de produit pharmaceuti- que ( 200 mg) et la mitocycine C ( 0,1 mg) sont contenues dans un comprimé. 30 comprimés ont été pris en une administra- tion 3 fois par jour. 4 Explication succincte des dessins Fig 1: Effet de la préparation de produit pharmaceutique sur la leucopénie provoquée par la mitomsycine C. Fig 2: Effet de la préparation de produit pharmaceutique sur la perte de poids du corps provoquée par la mitomycine C. Fig 3: Effet de la préparation de produit pharmaceutique sur la leucopénie provoquée par le chlorhydrate de doxoru- bicine. Fig 4: Effet de la préparation de produit pharmaceutique sur la courbe de survie à la suite d'une administration unique de mitomycine C ( 9 mg/kg). Fig 5: Effet de la préparation de produit pharmaceutique sur la courbe de survie à la suite d'une administration multiple de mitomycine C ( 3 mg/kg). Fig 6: Variation du GOT et du GPT. Fig 7: Nombre d'érythrocytes et quantité d'hémoglobine. Fig 8: Nombres de leucocytes et de plaquettes sangui- nes. Fig 9: Nombre de lymphocytes et de Y-globuline. Fig 10: Changement du poids du corps. Fig 11: Protéine totale et d'albumine. Fig 12: Changements d'électrolytes. Fig 13: Créatine du sang. ENDICATIONS ( 1) Adminiculum augmentant l'activité anti-tumeur de la mitomycine C et du chlorhydrate de doxorubicine et dimi- nuant l'effet secondaire comprenant un extrait dans de l'eau ou dans un solvant organique aqueux en tant que com- posant actif, d'un produit pharmaceutique brut constitué d'Astragali radix, de Chinnamomi cortex, de Rehmanniae ra- dix, de Paeoniae radix, de Cnidii rhizoma, d'Atractylodis lanceae rhizoma, d'Angelicae radix, de Ginseng radix, de Hoelen et de Glycyrrhizae radixo ( 2) Adminiculum selon la revendication 1 dans lequel le dit produit pharmaceutique brut est constitué de 2,0-4,0 parts d'Astragali radix, de 2,0-4,0 parts de Chinnamomi cortex, de 2,0-4,0 part de Rehmanniae radix, de 2,0-4,0 parts de Paeoniae radix, de 2,0 04,0 parts de Cnidii rhizo- ma, de 2,0-4,0 parts d'Atractylodis Lanceae rhizoma, de 2,0-4,0 parts d'Angelicae radix, de 2,0-4,0 parts de Gin- seng radix, de 2,0-4,0 parts de Hoelen et de 0,5-2,5 parts de Glycyrrhizae radixo ( 3) Adminiculum selon la revendication 1 dans lequel le dit solvant organique aqueux est de l'éthanol.