Brevet FR2534259A1 — publié le 19840413

1_: Cette invention concerne un nouveau diester d'acide aliphatique à chaîne moyenne en positions 6, 6 ' d'a,C le contenant à titre d'ingrédient actif. L'c tisé divers dérivés de ce composé et on a examiné leurs activités pharmaco- logiques Par exemple, on a indiqué qu'un mélange de différents diesters dans lesquels les acides aliphatiques sont liés en différentes positions présente une activité antitumorale. Au cours de la synthèse de divers diesters d'acide aliphatique en 6, 6 ' d'o OH - dans laquelle N représente un entier de 6 à 10, possède une excellente activité antitumorale, activité antibiotique et action pour l'hypersensibilité du type retardée, et est utile pour la fabrication de produits pharmaceutiques; c'est ce qui constitue la présente invention. En conséquence, c'est un objet de cette invention de fournir un nouveau diester d'acide aliphatique à chaîne moyenne en positions 6,6 ' d'c tréhalose, représenté par la formule (I) ci-dessus. Un autre objet de cette invention consiste à fournir un agent pharma- ceutique contenant à titre d'ingrédient actif un diester d'acide aliphatique a chaîne moyenne en positions 6,6 ' d'c,Q (I) ci-dessus. On peut produire le diester selon l'invention et de formule (I) (désigné par la suite plus simplement comme diester tréhalose-acide alipha- tique à chaîne moyenne) selon cette invention, par exemple, conformément au schéma de réaction suivant: conversion de l'2 tétra-o-benzyl -u HO 'OH OH HO I O E 10 OEH (II) HO O Bn O Bn (III) (V) t catalyseur de réduction CH 3 (C 2) 1 n C O O OHC HO O Ooc (CH-) CEE OH ( 1) o Bn représente un groupe benzyle et N à la même signification que donnée ci-dessus. Dans le procédé ci-dessus, on prépare la 2,3,2 ',3 ' tétra-o-benzyl x, K tréhalose représentée par la formule (III) en faisant réagir la tréhalose représentée par la formule (II) avec le benzaldéhyde d'une manière classique pour former la 4,6,41,6 ' di-o-benzylidène K,i tréhalose puis en faisant réagir ce dernier avec le chlorure de benzyle pour donner un dérivé 2,3,2 ',3 '- tétra-o-benzyle et enfin en faisant réagir ce dernier avec un acide. La réaction entre le composé (III) et l'acide aliphatique à chaine moyenne (IV) ou ses dérivés actifs s'effectue dans la condition habituelle de la réaction d'estérification en faisant réagir l'acide aliphatique à chaine moyenne (IV) ou son dérivé réactif dans un rapport molaire qui est de préférence 1,8 2,4 moles pour I mole du composé (III) en présence d'un éliminateur d'acide tel que la pyridine et la triéthylamine. La réaction se déroule de préférence en présence ou en absence d'un solvant entre O C en refroidissant à l'aide de glace et 30 C pendant 124 heures. Les solvants que l'on utilise ici comprennent, par exemple, le chloru- re de méthylène, le chloroforme, le benzène, le toluène, l'éther, le tétrahydro- furane et le dioxane. La réaction de réduction débenzylation sur le composé (V) ainsi obte- ne s'effectue par l'intermédiaire d'un catalyseur de préférenceà raison de 0,5 1 ( moles pour une mole du composé (V) dans un solvant convenable. O 10 CH 3 (CH 2) cn OO OB CH 3 (CH 2) n COOH OC (Can 2)n C 3 (IV) H O Bn O Bu Le catalyseur de réduction est,par exemple, le noir de palladium, le palladium-carbone et le nickel de Raney Le solvant utilisé ici comprend, par exemple, des alcools tels que méthanol, éthanol et isopropanol; des composés halogénés tels que chloroforme et chlorure de méthylène ainsi qu'un mélange de ces solvants. Les activités pharmacologiques du diester tréhalose acide aliphatique à chaine moyenne (I) selon cette invention sont indiquées ci-après ( 1) Activité cellulicide du diester tréhaloseacide aliphatique à chaine moyenne: (a) on utilise des cellules de Leucémia L-5178 Y et on les conditionne pour avoir 10 cellules/ ml dans un milieu RPMI 1640 contenant 10 % de sérum foetal de boeuf, et on introduit des spécimens dans le milieu à une concentra- tion prédéterminée Après 48 heures de culture dans un incubateur à 37 C sous 5 % de C 02, on compte le nombre de cellules vivantes sous microscope et on compare avec un groupe témoin afin de déterminer les facteurs de multiplication esrésultatssont portés surunfepierdeprobabilitélogarithmique et les valeurs CI 50 sont déterminées sur la courbe ainsi obtenue. La concentration pour chaque spécimen est respectivement 25, 50, 100, 200 et 400 g/ ml. Les résultats sont indiqués dans le tableau 1 TABLEAU 1 (b) On examine de la même manière que dans (a) les activités cellulici- des du diester tréhalose-acide aliphatique à chaine moyenne vis à vis des cellules de Leucémia L-1210 Les résultats sont indiqués dans le tableau 2 - TABLEAU 2 Composé du testdéfini par CI 50 le nombre N dans la formule (I) ( pg/ml) Compos% de 6 350 l'invention 8 255 93 Composés 14 > 400 comparatifs 20 > 400 1 ( 2) Activités anticancéreuses du diester tréhalose-acide aliphatique à chaine moyenne: On utilise des souris males Std-ddy agéesde 5 semaines avec 6 souris par groupe et on transplante des cellules cancéreuses de'sarcoma 180 avec 5 x 106 cellules dans la cavité péritonéale de chaque souris Au bout de 24 heures, on administre par voie intrapéritonéale un composé à tester mis en suspension dans du propylène glycol à 30 % a raison de 150 mg/kg une fois par jour en continu pendant 5 jours 7 jours après la transplantation des cellules cancéreuses, on prélève des échantillons d'ascites abdominales pour déterminer la quantité d'ascites abdominales et le rapport de cellules Le rapport de croissance de tumeurs (T/C ( %)) est déterminé en utilisant le TPCV (volume total de cellules en tas) qui est le produit de la quantité d' ascites abdo- minales et du taux de cellules à partir de la formule spécifiée cidessous et l'activité anticéreuse du composé du test est jugée Les résultats sont indiqués dans le tableau 3. T/C TPCV pour le groupe traité X 100 T/C (%) = X 100 TPCV pour le groupe témoin TABLEAU 3 Comme décrit ci-dessus, le diester tréhalose-acide aliphatique à chaine moyenne possèden me activité anticancéreuse remarquablement plus importante que celle des composés correspondants possédant 16-22 atomes de carbone. ( 3) Activité antimicrobienne: On étudie les concentrations inhibitrices minimum (CIM) des composés de l'invention vis à vis de diverses bactéries Les résultats sont indiqués dans le tableau 4. On effectue les tests selon la méthode de mesure de CIM de la Japan Society of Chem'otherapy et, c 5 mme milieu de culture, on utilise le milieu Mueller-Hinton (laboratoires Difco, U S A) On dissout les composés Composé du test Taux de (défini par le nombre croissance de la n dans la formule (I)) tumeur T/C (%) Composés de 6 9,1 l'invention 8 1,9 6,2 Composés 14 37,7 comparatifs 20 55,8 Groupe témoin 100 1 du test dans DMSO à 25 % pour avoir la concentration de 1 mg/ml, puis on dilue à une concentration prédéterminée avec de l'eau distillée stérile. TABLEAU 4 ( 4) Action sur l'hypersensibilité de type retardé: On prépare plusieurs groupes de souris femelles ICR agées de 6 semaines chaque groupe comprenant 10 souris, et on leur injecte dans la plante de la; patte arrière droite par voie o's-cutanée un milieu contenant des globules rouges de mouton (SRBCI l 3 x 10 cellules/ml de milieu à raison de 0,05 ml de milieu/souris, et inmédiatement apres on injecte les composés du test par voie intrapéritonéale ( Jour O) 4 jours après, on injecte la même quantité de SRBC ( 0,05 ml/souris) par voie sous-cutanée à chaque souris danslaplante de la patte arrière gauche et 24 heures plus tard, on mesure l'épaisseur de la plante gauche avec un pied à coulisse. D'autres groupes auxquels on a administré une solution saline physio- logique à la place des composés à tester sont utilisés comme témoins et d'autres groupes encore seulement soumis à la deuxième injection sont utilisés comme bases. Le taux de gonflement de la plante est obtenu à partir de l'équation suivante: Taux de gonflement (%) = X 100 C B ou T, C et B représentent l'épaisseur de la plante de la patte arrière gauche des groupes du test, des groupes témoins, et des groupes de bases respec- tivement les résultats sont indiqués dans le tableau 5. Composé dtet Valeur C I M (ôg/ml) défini par le nombre défini par le nombre Présente invention Produit comparatif n dans la formule (I) Souchesbactrienne 6 8 14 20 Bacillus subtilis ATCC 6633 50 12,5 > 100 > 100 Staphylococcus aureus ATCC 6538 P 50 12,5 100 > 100 Staphylococcus epidermides ATCC 12228 100 > 100 > 100 > 100 Streptococcus faecalis var 50 > 100 > 100 > 100 gimogenes IFO 3939 Sarcina lutea ATCC 9341 100 > 100 > 100 2100 1 TABLEAU 5 * Dose: 100 mg/kg, Véhicule: Sol saline normale + 1 goutte de Tween 80 Le diester tréhalose -acide aliphatique à chaine moyenne selon cette invention est un conposé patiquementncntoxique et donc sûr comme cela ressort des faits, puisque par exemple, les esters sucrose-acide aliphatique semblables au présent composé sont permis comme additifs alimentaires et largement utilisés comme agents tensioactifs non nuisibles dans le domaine de l'alimentation, des médicaments, des cosmétiques o, des analogues. En outre, le composé de cette invention peut 8 tremis sous la forme de diffé- rents types de préparations en fonction de l'application telle qu' une administration orale ou non-orale, par exemple des préparations orales telles que comprimés, capsules, poudres, granules et liquides ainsi que des préparations non-orales telles qu'une solution injectable pour injection sous-cutanée, intra-musculaire et itra-véneusetransfusion et suppositoires et analogues. On peut réaliser les préparations mentionnées ci-dessus selon n'importe 0 quelles méthodes connues per se Plus précisément, le diester tréhaloseacide aliphatique à chaine moyenne peut être mis sous forme de comprimés, capsules, poudre ou granules en formulant le composé éventuellement en combinaison avec des excipients tels qu'amidon, lactose et mannitol; des liants tels que la carboxyméthyl cellulose de sodium et l'hydroxy propyl cellulose; des agents de désintégration tels que la cellulose cristalline et la carboxyméthyl cellu- lose de calcium; des lubrifiants tels que talc et stéarate de magnésium; des agents pour améliorer la fluidité tels que l'acide silicique anhydre léger et analogues De plus, on peut préparer des liquides et des injections en dissolvant le diester tréhalose-acide aliphatique à chaine moyenne dans des Composé du test défini T Epaisseur de la plante Taux de gonflement par le nombre n dans la formule (I) Composés de 6 3,71 126 l'invention 8 3,75 133 3,82 138 Composés 14 3,61 109 comparatifs 20 3,55 98 Témoin 3,56 100 1 huiles végétales ou analogues pour former une solution injectable soluble dans l'huile, ou en dissolvant ou en mettant en suspension le composé d'une manière classique dans l'eau ouun analogue pour former un sirop On peut encore préparer des suppositoires en dispersant le composé dans les substrats ordinai- rement utilisés, par exemple, le beurre de cacao, les huiles et graisses synthé- tiques ou les analogues puis en les solidifiant Bien que la quan- tité à administrer de diester tréhalose-acide aliphatique à chaîne moyen- ne selon cette invention varie en fonction du degré de la maladie, on l'admi- nistre de préférence chez l'adulte à une dose de 0,1 2000 mg/kg pour l'admi- nistration par voie orale, et de 0,05 1000 mg/kg pour une administration par voie non-orale, en une seule prise ou en portions,plusieurs fois par jour. A présent on va décrire l'invention à l'aide des exemples suivants: Exemple 1 A 2,11 g de 2,3,2 ',3 '-tétra-o-benzyl, tréhalose, on ajoute 20 ml de pyridine et 20 ml de dichlorométhane et on dissout puis on ajoute goutte à goutte en agitant tout en refroidissant avec de la glace à O C 1,26 g de chloure i ccanoyle Après 30 minutes d'agitation, on élève la température jusqu'à la température ambiante et on poursuit l'agitation pendant encore 1 heure On introduit le mélange de réaction ainsi obtenu dans de la glace-eau et on extrait avec du chloroforme que l'on distille ensuite sous pression réduite On purifie le résidu au moyen-d'une chromatographie sur colonne de gel de silice pour obtenir 2,79 g de 2,3,2 ',3 '-tétra-o-benzyl 6,6 '-di-odécanoyl- c, -tréhalose sous la forme d'un produit huileux incolore (rendement: 92 %). Exemple 2 On dissout 2,67 g de 2,3,2 ',3 '-tétra-o-benzyl 6,6 '-di-o-décanoyl, " tréhalose obtenu dans l'exemple 1 dans 40 ml de chloroforme et on soumet la solution à une réduction catalytique pendant une heure en ajoutant 1, 00 g de noir de palladium comme catalyseur et en introduisant du gaz hydrogène dans la solution. On filtre la solution de réaction ainsi obtenue pour éliminer le cata- lyseur puis on concentre et sèche les filtrats sous pression réduite jusqu'à ce qu'il soient solides On recristallise le résidu dans l'isopropanol pour obtenir 1,06 g de 6,6 '-di-o-décanoyl y, 9 -tréhalose sous forme de cristaux d'aiguillesincolores (rendement 62 %). Exemple 3 On obtient de la même manière que dans l'exemple 1 les composés mention nés dans le tableau 6 ci-dessous Le tableau 6 contient également le composé obtenu dans l'exemple 1. RCOO O Bn OOCR n 0 OH Bn; Benzyle Bn R pf (oc) lal 25 c=I, O IR Br cm -1 ( 60 M Hz, CDC 13PPM D chloro ax f orm e t M t CH (CH + 8233 1735 O #86 ( 6 H), 1 PI 26 ( 20 H), 2,26 3 2 6 omis ( 4 H, J= 7 Hz), 3 e 2-4,5 M ( 12 H), 5,15 d huileux ( 2 H, J= 3,5 Hz), 4,65 S ( 4 H), 4 IP 86 d ( 4 H), 7,0-7 e 5 M ( 20 H) O. 8 &t( 6 H), 11,25 M ( 28 H), 2,,30 t CH (CH compose + 65 > 8 1740 M d 3 2 8 ( 4 H, J= 7 Hz), 3,,2-4,5 ( 12 H), 5,20 huileux S d ( 2 H, J= 3,5 Hz), 4,71 ( 4 H), 4,92 ( 4 H), 7 M l-7 ,6 ( 20 H) t M t 0 " 88 ( 6 H), 1,21 ( 36 H), 2 * 23 CH 3 (CH 2 composé + 6635 1740 ( 4 H, J= 7 Hz), 3 2-4 4 M ( 12 H), 5, 11 d huileux Ip op ( 2 H, J= 3,,5 Hz), 4,62 S ( 4 H), 4 d ( 4 H) f 6, 9-7, 3 ' ( 20 H) TAIILEAU 6 ru #A ta r 1 o tn %o Exemple 4 Les composés indiqués dans le taleau 7 sont obtenus de la même manière que dans l'exemple 2 Le tableau 7 contient également les composés obtenus dans l'exemple 2 (H 9) 96 " 9 ' (ZHS'ú=r #HZ) s p OL"S '(ZHL= C 'HP) P 91 01 Z E: Oú 'Z J (H 9 E), ZZ "T (H 9) 88 'OOELT t, '188 T 91 HO) HO ui (H 9) 80 49 " (ZHS = C HZ) SL"S (HZT) Z 1 9-8 4 'ú ' (ZHL= C 'H) ú 9 T p ui OPLT 8480 T 8 ZHO) EHO 4 ZE "Z O (H 8 Z) U 18 T "T " (Hg) '4 8810 LST (H 9)SZT" 9 "(ZH "ú=-r "HZ) p ZL"S (HZ-l) UIT'S-8 E '(ZHL= C "Ht,) TLI 9 Z' E SZ"Z '(HOZ) ZVT '(H 9) os,10 SELT 9 9 TT OLT HO) HO ui a ỉ- xoj tudd 9 (E (OEI -O XOTIID CI TOCID 'ZHW 09) T JEIX 04 T=D)oz 1101 (O) l'd HO HO HO -OTO HO EDOO HO OOD'd Ch &A tu %r m SA (y c I.-I L fivglj V 1 1 Exemple 5: Comprimé On prépare d'une manière classique un comprimé qui contient les ingré- dients suivants chacun dans la quantité indiquée. diester tréhalose-acide aliphatique à chaîne moyenne (décanoate) 100 mg Dmannitol 150 mg Cellulose cristalline 50 mg amidon 28 mg carboxyméthyl cellulose de calcium 16 mg talc 4 mg stéarate de magnésium 2 mg quantité totale 350 mg Exemple 6: capsule On prépare d'une manière classique des granules possédant les ingré- dients suivants chacun dans la quantité indiquée et on-en remplit une capsule n 3. Diester tréhalose-acide aliphatique à chaîne moyenne (caprylate) 25 mg cellulose cristalline 17 mg acide silicique anhydre léger 7 mg stéarate de magnésium 1 mg Exemple 7: solution pour injection On prépare un ensemble d'une solution pour injection à partir des ingré- dients suivants chacun dans la quantité indiquée et ceci d'une manière conven- tionnelle. Diester tréhalose-acide aliphatique à chaîne moyenne (décanoate) 25 mg avec de l'huile d'olive pour compléter à 1 ml Exemple 8: suppositoire On fait fondre et on agite les ingrédients suivants, chacun dans la quantité indiquée, puis on les moule pour qu'ils se solidifient en un suppo- sitoire d'une manière classique. Diester tréhalose-acide aliphatique à chaîne moyenne (laurate) 100 mg beurre de cacao 1100 mg Quantité totale 1200 mg REVENDICATIONS 1 A titre de produit nouveau, un diester d'acide aliphatique à chaîne moyenne en positions 6, 6 ' d'a&,c,-tréhalose représenté par la formule (I) suivante: CH CH 2) COO OH 3 N HO 1 _ 9 OHO CH 2) N _ 3 ( 3) BO l OO c dans laquelle N représente un entier de 6 à 10. 2 Médicament, caractérisée en ce qu'il est constitue par le diester selon la revendication 1. 3 Composition pharmaceutique, caractérisé en ce qu'elle comprend le médicament selon la revendication 2 en association avec un véhicule pharma- ceutiquement acceptable.