Brevet FR2514764A1 — publié le 19830422

La présente invention concerne un nouveau dérivé de l'isopropylamino pyrimidine et un procédé pour la préparation de ce corps. L'invention concerne plus particulièrement l'isopropy- lamino-2-pyrimidine-N-oxyde répondant à la formule: O ainsi que ses sels thérapeutiquement acceptables. Ce composé est particulièrement intéressant dans le domaine de la régénération nerveuse, ainsi que dans le traitement des dystrophies musculaires Selon l'invention, ce composé peut être préparé, à une température comprise entre 15 et 45 C, par oxydation ménagée de l'isopropylamino-2-pyrimidine à l'aide d'agents d'oxydation appropriés, tels que: l'eau oxygénée, l'acide m-chloro-peroxybenzoique, le peroxymonosul- fate de potassium, l'acide chromique, l'acide perphosphorique, l'acide péracétique, le perborate de sodium ou l'hydroperoxyde de tertiobutyle L'agent d'oxydation est utilisé, selon les cas, 2 - soit en proportion stoechiometrique, soit en léger excès ne dépassant pas 10 % par rapport à cette proportion Les sels voulus peuvent être préparés par les méthodes habituelles. L'invention sera d'ailleurs mieux comprise grâce à la description de l'exemple qui suit: EXEMPLE Dans un réacteur de 4 litres équipé de moyens d'agitation et d'une protection au chlorure de calcium, on verse 100 grammes ( 0,728 mole) d'isopropylamino-2-pyrimidine et 2 litres d'acétone On ajoute ensuite, sous agitation, 0,8 mole d'acide m-chloroperoxybenzo Yque et la température s'élève à environ 35 C On maintient l'agitation pendant une heure après cette addition, puis le mélange réactionnel est évaporé à sec sous pression réduite Le résidu est repris par 450 mi d'eau, ce qui donne un précipité, puis par 245 ml ( 2,4 mole) de lessive de soude saturée de chlorure de sodium On traite cette solution par CHC 13, ce qui donne un nouveau précipité que l'on filtre, lave à l'éther éthylique et sèche; on obtient ainsi 99,2 granrrmes (rendement 90 %) d'un produit huileux dont l'analyse élémentaire montre une parfaite correspondance avec la formule C 7 Hil ON 3; le point de fusion de la base est 74-76 C (Tottoli) Ce composé est très soluble dans l'eau, par le méthanol, et a une bonne solubilité dans le chloroforme à la température ambiante Le p H d'une solution acqueuse à 5 % est "comprise entre 6,1 et 6,4 Le chlorhydrate correspondant fond à 94 C Le succinate obtenu par la réaction de l'acide succinique sur la base, dans l'acétone, au reflux, fond à 92 C; les maléate, aspartate et orthophosphate, ont également été préparés par les techniques usuelles; cependant, conme la base elle-même possède une bonne solubilité, une bonne stabilité et des caractéristiques organoleptiques favorables, on peut l'utiliser telle quelle Dans ce qui suit, la base sera désignée par "BN 1041 ". -3- TOXICITE La toxicité a été déterminée sur les rats femelles de souche Wistar par voie I P et P O Les chiffres obtenus par les techniques usuelles en la matière sont de 1,2 g par kilo I 1 P et 1,9 g par kilo P O pour la base (DL 50). PHARMC Oe LOG IE Les diverses expérimentations pharmacologiques entreprises ont permis de démontrer l'intérêt du composé selon l' invention sur la croissance et la régénération des fibres nerveuses Elles ont aussi permis de mettre en évidence une activité analgésique de bon niveau, ce qui est un effet secondaire extrêmement intéressant. 1 O) Action comgp Aré sur la croissance des neurites L'action du composé selon l'invention (BN 1041) a été déterminée de façon comparative avec celle de l'orthophosphate de l'isopropylamino-2-pyrimidine, sur la croissance des neurites de cellules de moelle épinière du rat et sur le développement de leurs ramifications terminales, par la méthode décrite dans "La Nouvelle Presse Médicale", Il, N-16 1238 - 1242 Cette expérimentation in vitro a été conduite sur des cultures de cellules de moelle épinière d'embryons de rats de 14 jours, chaque boîte de culture de 35 rrrn contenant une demi-moelle épinière, soit environ 5 106 cellules Les deux composés ont été testés à des doses décroissantes de lo a 10-9 M afin de déterminer les limites de toxicité, les concentrations conduisant à l'action minimum et maximum sur les pararrètres de croissance des neurones, ainsi que les résultats à 3 jours pour les concentrations optimales Les chiffres correspondants sont portés dans le tableau suivant z 4 - IAPP BN 1041 Limite de 2 toxicité 1 Concentration à laquelle la croissance ap-10 3 M 10-3 M paraît malgré la toxicité Meilleure concentration 10-5 M 10-9 M opératoire , I On peut noter que la croissance appara Tt à la même concentration -de 10-3 M qui est plus (IAPP) ou moins (BN 1041) toxique, quoique les meilleures concentrations opératoires soient différentes: 105 M pour I'I A P P et 10-9 M pour le 'composé selon l'invention A ces concentrations le composé de référence est toxique, tandis que le composé selon l'invention ne présente aucune toxicité. ) Réinnervation du muscle squelettique chez le rat Cette expérimentation a été effectuée également en comparaison avec l'orthophosphate d'isopropylamino-2 pyrimidine à titre de composé de référence, sur des rats mâles adultes, de souche albinos Trois lots de chacun 5 rats ont été utilisés l'un à titre de témoin, l'un pour traitement à l'aide du produit de référence, et le dernier pour le traitement à l'aide du composé selon l'invention. Sur tous les animaux, on a provoqué une lésion du nerf sciatique gauche, en appliquant 3 ou 4 fois localement un cryode à azote liquide (température environ -180 'C) sur la même région du nerf, ce qui a amené la création d'une zone congelée de 2 à 3 nmm de long Cette technique est plus efficace, plus sôre et plus facile à reproduire que la technique bien connue d'écrasement mécanique du nerf; en outre, la récupération s'effectue plus rapidement et de façon plus complète. Le lendemain du jour o la lésion a été provoquée, on injecte I P aux animaux témoins 1 ml/l O Og de soluté physiologique, 300 mg/kilo du composé de référence pour les animaux du deuxième lot, et 100 mg/kilo du composé selon l'invention pour les animaux du troisième lot. L'évolution du processus de régénération nerveuse est contrôlé dans les jours suivants par stimulation électrique du nerf La réinnervation est obtenue au bout de 16 jours pour les animaux du second et du troisième lot, et au bout de 18 jours seulement pour les animaux du lot témoin. A 18 jours, la récupération peut être appréciée en comparant les réactions du muscle gastrocnémique interne gauche avec celles de son homologue droit, par les techniques d'enregistrement intracellulaires des potentiels de la plaque motrice. Sur les animaux sacrifiés (à 18 jours), on peut noter, pour les rats qui ont été traités par les produits selon l'invention, un pourcentage supérieur à 37 % d'innervations 6- multiples; pour les rats qui ont été traités avec le produit de référence, un pourcentage d'environ 30 %, et pour les rats du lot témoin, un pourcentage de seulement 16 % Il y a lieu de remarquer que le produit selon l'invention conduit à une réinnervation plus régulière, portant fréquemment sur 2 à 3 axones par plaque motrice, alors que pour le composé de référence elle ne porte que sur 1 ou 2 axones seulement. 3 ) Activité analgésiue Cette activité a été déterminée par le test de stimulation de la pulpe dentaire chez le singe Rhésus A titre de comparaison, l'expérimentation a été conduite parallèlement avec la glafénine ( 30 et 60 mg/kg par os), l'orthophosphate d'isopropylamino-2 pyrimidine, IAPP ( 30, 60 et 120 mg/kg par os), ainsi qu'avec le composé selon l'invention BN 1041 ( 30, 60 et 120 mg/kg par os), dans cette expérimentation, l'activité analgésique a été décelée en mesurant une inhibition à la réponse douloureuse à une stimulation de la pulpe dentaire sur des signes rhésus femelles adultes Macaca mulatta. Les singes ont été préalablement habitués à se tenir assis sur des sièges individuels, sur lesquels ils sont attachés Le jour d'expérimentation, avant toute administration des composés, les électrodes ont été connectés à un stimulateur Grass, et le seuil de douleur pour chacun des animaux a été déterminé par l'application d'une série de stimuli brefs d'intensité croissante Dans chaque cycle de stimulation la fréquence, le rythme de l'impulsion et la durée de la stimultation ont été constantes et égales respectivement à 10 Hz, 5 ms, et 10 s; le seul paramètre variable était le voltage Le seuil de douleur a été déterminé par la valeur du voltage nécessaire pour amener chez chaque animal des réactions individuelles telles que l'ouverture de la bouche et le léchage des dents Une fois ces seuils déterminés, les différents animaux ont reçu par voie orale les doses indiquées ci-dessus de chacun des produits et les voltages de seuil ont ensuite été appliqués à 15, 30, 60, 90, 120, 150, 180, 240, et 300 mn après l'administration La présence ou l'absence de réactions individuelles lors de l'application du voltage de seuil ont été notées Les animaux étant utilisés pour plusieurs expériences, des intervalles d'au moins une semaine, entre deux expériences étaient prévus. Les composés ont été administrés par gavage oral d'une dose-volume constante de 4 ml/kg dans une suspension aqueuse à 0,5 % de carboxymethyl cellulose à laquelle a été ajoutée la dose d'expérimentation du produit considéré Les animaux témoins ont reçu le même volume de 4 ml/kg de suspension aqueuse de carboxymethyl cellulose, sans aucune autre substance Les effets de l'administration orale des différents composés testés sur la réponse à la douleur par stimulation électrique de la pulpe dentaire c'est-à-dire en fait l'activité analgésique sont reportés dans le tableau 1 ci-après Les DE 50 dérivant des résultats du tableau 1 sont donnés dans le tableau 2. Les trois composés testés ont montré une activité dans cette expérimentation On peut voir dans le tableau 1 que la glafénine a atteint son activité maximum à 30 minutes après administration de la dose, et qu'elle était encore active chez -25 un animal 150 minutes après l'administration Le composé IAPP a atteint son activité maximum 90 minutes après son administration, une activité résiduelle étant encore notée 300 minutes après cette administration Cependant, le composé BN 1041 apparaît plus actif que les deux précédents, en présentant une activité maximum 120 minutes après l'administration, avec une activité résiduelle 300 minutes après administration, au temps o est constatée l'activité maximum, la valeur de la DE 50 est approximativement de 30 mg/kg. TABLEAU 1 Dose Traitement (mg/kg) Nombre de singes sur lesquels une analgésie est constatée p.o mn après dosage 30 60 90 120 150 180 240 300 Excipient 0/4 0/4 014 0/4 0/4 0/4 0/4 014 0/4 0/4 1/4 0/4 1/4 1/4 1/4 1/4 1/4 1/4 Glafénine 60 1/4 2/4 2/4 2/4 2/4 1/4 0/4 0/4 0/4 0/4 0/4 0/4 1/4 0/4 1/4 0/4 0/4 0/4 IAPP 60 0/4 0/4 1/4 1/4 1/4 1/4 1/4 1/4 1/4 1/4 1/4 1/4 2/4 2/4 2/4 2/4 1/4 1/4 1/4 1/4 1/4 1/4 2/4 2/4 1/4 1/4 1/4 BN 1041 60 1/4 2/4 2/4 2/4 3/4 314 3/4 3/4 2/4 0/4 2/4 2/4 4/4 4/4 4/4 3/4 2/4 1/4 i_ 9 - TABLEAU 2 Les valeurs approximatives de la DE 50 ont été calculées par la méthode des moyennes mobiles (Thompson, W R, Bactériological Reviews, ( 1947), 11, 115-145). PRESENTATION POSOLOGIE Ce composé peut être présenté sous toute forme thérapeutique acceptable et, par exemple, sous forme de comprimé ou de gélule contenant chacune 50 mg par unité de dosage, associé à un excipient tel que par exemple le lactose; pour la forme injectable, le produit peut être dosé en ampoules contenant au moins 5 mg de principe actif dissout dans de l'eau La posologie en thérapeutique humaine, par voie orale, Valeurs approximatives de la DE 50 Traitement minutes après administration 30 60 90 120 150 180 240 300 Glafénine > 60 O 60 6 O 60 6 60 > 60 > 60 > 60 IAPP 120 > 120 > 120 120 120 120 120 > 120 I> 120 BN 1041 20 85 85 53 30 30 42 42 ? i - est de 100 mg à 1 gr par jour et,-par voie injectable, de 5 mg à 100 gr par jour. A titre d'exemple on peut donner la formule d'un comprimé: Isopropylamino2-pyrimidine-N-oxyde cellulose microcristalline amidon de blé talc acide salicilique stéarate de magnésium mg mg mg 7 mg 6 mg 2 mg mg \ * 11 REVENDICATIONS 1 ) Isopropylamino-2 pyrimidine-N-oxyde de formule: O I 1 ' et ses sels thérapeutiquement acceptables. 2 ) Un procédé de préparation du composé selon la revendication I consistant à soumettre, à une température comprise entre 15 et 45 C l'isopropylamino-2 pyrimidine, à une oxydation ménagée à l'aide d'une quantité stoechiométrique, ou en excès jusqu'à % par rapport à cette quantité, d'un agent d'oxydation approprié, tel que: l'eau oxygénée, l'acide m-chlro-peroxyben- zolque, le peroxymonosulfate de potassium, l'acide chromique, l'acide perphosphorique, l'acide péracétique, le perborate de sodium ou l'hydroperoxyde de tertiobutyle.