Brevet FR2521164A1 — publié le 19830812

La présente invention concerne un procédé pour produire de la kallikréine humaine. La kallikréine (EC 3 4 21 8) est constituée de plusieurs enzymes de sources différentes et de spécificités différentes ayant la propriété commune de libérer-des pep- tides vasomoteurs (kinines) à partir de leurs précurseurs inactifs (kininogènes) dans le plasma. Les actions pharmacologiques de la kallikréine, c'est-à-dire les actions vasodépressive et hypotonique, la rendent utile comme agent thérapeutique dans les maladies des organes circulatoires, par exemple l'artériosclérose cérébrale ou cardiaque ou l'hypertension; donc les be- soins en kallikréine s'accroissent rapidement. Il est bien connu qu'on obtient la kallikréine à partir d'organes de mammifères, tels que le foie ou le pancréas, ou de liquides de l'organisme de mammifères, tels que le sang, la salive ou l'urine. Comme décrit dans des demandes de brevets,par exemple lest demandes de brevets japonais publiées non exa- minées no 102 495/77 et N O 167 228/80, on a généralement produit à ce jour la kallikréine avec des organes de porc mais en quantité insuffisante pour satisfaire à la demande. Par suite de la réaction de type antigène-anti- corps provoquée par la kallikréine lorsqu'on l'utilise en thérapeutique humaine, l'emploi de la kallikréine dérivant de cellules humaines vivantes est excellent et dépourvu de danger par suite de la moindre antigénicité. Donc, on recherche un procédé peu coûteux pour produire à l'échelle industrielle de la kallikréine humaine. Comme le montre la description qui suit, l'invention satis- fait à ce besoin. L'invention a pour objets un procédé efficace pour multiplier des cellules humaines capables de produire de la kallikréine humaine; un procédé pour produire de la kallikréine hu- maine de titre élevé avec les cellules humaines ainsi ob- tenues; un procédé pour obtenir des cellules hybrides capables de produire de la kallikréine humaine, présentant un taux de multiplication cellulaire et un taux de produc- tion de la kallikréine humaine extrêmement élevés; et un procédé pour accroître la production de kal- likréine humaine par cellule. De façon générale, on atteint ces objectifs ainsi que d'autres selon le procédé de l'invention qui com- prend la multiplication de cellules humaines capables de produire de la kallikréine humaine, en transplantant les dites cellules chez un animal à sang chaud autre que l'hom- me ou sinon en laissant les dites cellules se multiplier dans une chambre de diffusion classique qui apporte aux dites cellules un liquide nutritif de l'organisme d'un ani- mal à sang chaud autre que l'homme, et la production de la kallikréine humaine avec les cellules humaines multi- pliées par l'un ou l'autre des modes de multiplication in vivo ci-dessus. Plus particulièrement, les objectifs de l'inven- tion ont été atteints selon le procédé qui comprend ( 1) la transplantation de cellules humaines capables de produire de la kallikréine humaine chez un animal à sang chaud au- tre que l'homme; l'alimentation de l'animal pour permet- tre aux cellules humaines d'utiliser un liquide nutritif de l'organisme fourni par l'animal pour leur multiplication; l'extraction-et la désagrégation de la tumeur obtenue for- mée chez l'animal pour obtenir les cellules humaines multi- pliées; la culture in vitro des cellules humaines dans un milieu nutritif en présence ou non d'un inducteur de kalli- kréine pendant une période suffisante pour accumuler une quantité notable de kallikréine humaine; et la récolte de la kallikréine humaine accumulée à partir de la culture ou sinon: ( 2) la mise en place d'une suspension de cellules humaines capables de produire de la kallikréine humaine dans une chambre de diffusion de type classique qui four- nit auxdites cellules humaines un liquide nutritif de l'organisme d'un animal à sang chaud autre que l'homme; l'inclusion ou la mise en place de la chambre dans ou sur l'animal à sang chaud autre que l'homme; l'alimentation de l'animal pour permettre aux cellules humaines d'utiliser un liquide nutritif de l'organisme fourni pour leur multi- plication; la récolte des cellules humaines multipliées dans la chambre; la culture des cellules humaines in vitro dans un milieu nutritif en présence ou non d'un inducteur de kallikréine pendant une période suffisante pour accumu- ler une quantité notable de kallikréine humaine; et la ré- colte de la kallikréine humaine accumulée dans la culture. Les modes de réalisation préférés de l'inven- tion vont maintenant être décrits de façon détaillée. L'invention repose sur la découverte que la pro- duction de kallikréine humaine avec des cellules humaines, obtenues par multiplication in vivo de cellules humaines capables de produire de la kallikréine humaine en utili- sant un animal à sang chaud autre que l'homme, est extrê- mement supérieure à celle que l'on obtient avec les cel- lules multipliées in vitro L'invention fournit un procédé pour produire de la kallikréine humaine qui consiste à mul- tiplier des cellules humaines capables de produire de la kallikréine humaine par transplantation des dites cellules chez un animal à sang chaud autre que l'homme ou sinon à laisser les dites cellules se multiplier dans une chambre de diffusion de type classique qui fournit auxdites cellu- les un liquide nutritif de l'organisme d'un animal à sang chaud autre que l'homme et à produire la kallikréine humai- ne désirée avec les cellules humaines ainsi obtenues. Contrairement aux procédés classiques utilisant une culture de tissu in vitro, le procédé réalisé in vivo ne nécessite pas ou bien moins de milieu nutritif contenant du sérum coûteux et rend bien plus facile l'entretien de la culture pendant la multiplication cellulaire et pro- duit de plus une kallikréine humaine de titre bien supé- rieur. Plus particulièrement, dans le procédé selon l'invention qui utilise comme hôte un animal à sang chaud autre que l'homme, on peut facilement multiplier certaines cellules humaines en utilisant un liquide nutritif de l'or- ganisme fourni par l'animal en transplantant ces cellules chez l'animal ou sinon en les plaçant dans une chambre de diffusion de type classique conçue pour recevoir un liqui- de de l'organisme et en incluant ou plaçant la chambre dans ou sur l'animal et en alimentant l'animal de façon habituelle. De plus, le procédé de l'invention se différen- cie des procédés classiques de multiplication cellulaire in vitro du fait qu'on peut obtenir des caractéristiques additionnelles c'est-à-dire une multiplication cellulaire bien plus stabilisée et rapide, une production accrue des cellules et une production extrêmement plus élevée de kalli- kréine humaine par cellule. Les cellules humaines utilisables dans l'inven- tion sont celles qui produisent une quantité notable de kallikréine humaine et que l'on peut multiplier chez un animal à sang chaud autre que l'homme après les y avoir transplantées On peut utiliser de façon favorable dans l'invention des cellules humaines normales de pancréas, de glandes salivaires, de foie, de rein, de vessie et des fi- broblastes pulmonaires; des cellules obtenues par trans- formation des cellules humaines normales par emploi d'un virus carcinogène ou de radiations; des cellules tumo- rales humaines de cancer du pancréas, de tumeur des glandes salivaires, de cancer du foie, de cancer du rein et de can- cer de la vessie; et des lignées cellulaires établies des cellules humaines ci-dessus. Au lieu de l'emploi des cellules humaines dé- crites ci-dessus, l'emploi d'une lignée lymphoblastolde humaine, qu'il est bien plus facile de soumettre à des re- piquages et dans laquelle on peut introduire un ou plu- sieurs gènes humains codant pour la production de la kal- likréine par fusion cellulaire en utilisant du polyéthylè- neglycol ou le virus Sendai ou par des techniques de re- combinaison génétique par emploi de nucléase, de ligase et d'ADNpolymérase, conduit à un accroissement extrême de la vitesse de multiplication cellulaire et/ou de la pro- duction de kallikréine humaine par cellule qui sont envi- ron deux à dix fois supérieures à ce qu'on obtient lors- qu'on emploie les cellules normales ou tumorales décrites ci-dessus. La transplantation d'une telle lignée lymphoblas- toide humaine à l'animal tend à former une ou plusieurs tu meurs massives qui sont très peu contaminées par les cel- lules de l'animal hôte De plus, leur désagrégation après l'extraction est très facile car la récolte des cellules humaines vivantes peut être facilement effectuée. Des lignées lymphoblastoldes humaines provenant de leucémies ou de lymphomes humains, telles que les li- gnées Namalwa, BALL-1, NALL-1, TALL-1 et JBL sont particu- lièrement appropriées à ces objectifs L'animal à sang chaud autre que l'homme que l' on peut utiliser dans l'invention peut être un de ceux chez qui les cellules humaines peuvent être multipliées par exemple des oiseaux tels que le poulet et le pigeon; ou des mammifères tels que le chien, le chat, le singe, la chèvre, le porc, le cheval, le lapin, la vache, le cobaye, le rat, le rat nu, le hamster, la souris ou la souris nue. Comme la transplantation de ces cellules humai- nes à l'animal déclenche une réaction immunitaire indésira- ble, l'emploi d'un animal à sang chaud autre que l'homme à l'âge le plus précoce possible, par exemple à l'état d' oeuf, d'embryon, de foetus, d'animal nouveau-né ou d'ani- mal très jeune est souhaitable pour réduire autant que pos- sible la réaction immunitaire. Avant la transplantation, on peut de plus trai- ter un tel animal par irradiation avec des rayons X ou des rayons Y à raison d'environ 200 à 600 rems ou injecter un antisérum ou un immunosuppresseur pour réduire la réac- tion immunitaire au niveau le plus bas possible - L'emploi d'un animal de laboratoire présentant un déficit immunitaire, tel que la souris nue ou le rat nu, comme animal hôte, produit une réaction immunitaire moins indésirable même lorsque l'animal est adulte et on peut facilement transplanter à l'animal l'un quelconque des types de cellules humaines décrites ci-dessus sans effec- tuer un tel prétraitement et les cellules s'y multiplient rapidement en risquant moins de provoquer la réaction im- munitaire. On peut obtenir à la fois une stabilisation de la multiplication cellulaire et une augmentation de la pro- duction de kallikréine humaine par transplantation répétée en utilisant une combinaison d'animaux à sang chaud autres que l'homme différents Par exemple on peut atteindre les deux objectifs en transplantant tout d'abord les cellules humaines chez le hamster et en les y multipliant puis en retransplantant les cellules humaines multipliées chez la souris nue Dans ce cas, la transplantation répétée peut être effectuée avec des animaux à sang chaud autres que l'homme appartenant à la même classe ou au même ordre ou appartenant à la même espèce ou au même genre. Comme site de transplantation des cellules hu- maines chez l'animal, on peut choisir un site quelconque tant que les cellules s'y multiplient: on peut par exemple utiliser la cavité allantoldienne ou effectuer la transplan- tation par voie intraveineuse, intrapéritonéale ou sous-cu- tanée. Au lieu de transplanter les cellules humaines chez l'animal, on peut multiplier facilement l'un quelcon- que des types de cellules humaines précédemment décrits en les plaçant dans une chambre de diffusion de type classi- que de formes et de tailles diverses munie par exemple d' une membrane filtrante, d'un ultrafiltre ou de fibres creuses ayant une taille nominale des pores d'environ 10 7 à 105 m, empêchant la contamination de la chambre par les cellules de l'animal mais alimentant les cellules humaines en liquide nutritif de l'organisme; en effectuant l'in- clusion par exemple intrapéritonéale de la chambre chez l'animal et en laissant les cellules humaines s'y multi- plier en utilisant le liquide nutritif de l'organisme four- ni par l'animal. De plus, la chambre de diffusion conçue à cet effet peut être placée sur l'animal pour que le liquide nu- tritif de l'organisme et la solution nutritive dans la chambre puissent circuler librement à travers la chambre. De la sorte, on peut observer la culture dans la chambre pendant la multiplication cellulaire à travers une ou plu- sieurs fenêtres latérales transparentes disposées sur une ou plusieurs parois de la chambre et/ou remplacer continuel- lement la chambre par une chambre neuve pour poursuivre la multiplication cellulaire pendant la durée de la vie de l'animal sans le sacrifier et augmenter considérablement la production de cellules par animal. Comme l'emploi d'une telle chambre de diffusion réduit la réaction immunitaire indésirable par suite de l'absence de contact direct entre les cellules humaines et les cellules de l'animal, on peut facilement utiliser comme hôte un animal à sang chaud autre que l'homme quelcon- que sans prétraitement et on peut en recueillir facilement les cellules humaines vivantes multipliées. On peut facilement alimenter l'animal de façon habituelle et aucun soin particulier n'est nécessaire, même après la transplantation. La période requise pour obtenir la multiplica- tion cellulaire maximale est généralement de 1 à 20 semai- nes Lorsque les cellules humaines sont des cellules tumo- rales ou lymphoblastoldes, on peut généralement obtenir la multiplication cellulaire maximale en environ 1 à 5 semai- nes Le nombre des cellules humaines ainsi obtenues peut être d'environ 107 à 1012 ou plus par animal Selon l'in- vention, la production des cellules humaines transplantées est accrue d'environ 102 à 107 fois ou plus, ce qui est su- périeur d'environ 10 à 106 fois ce qu'on obtient selon un procédé de multiplication in vitro utilisant un milieu nu- tritif Donc, les cellules humaines multipliées peuvent ê- tre utilisées de façon favorable pour la production de kallikréine humaine. On peut réguler la reproduction des cellules hu- maines multipliées en les soumettant à une culture tissu- laire in vitro de 1 à 4 jours avant le stade d'induction décrit ci-après. On peut employer dans l'invention un procédé quelconque induisant les cellules humaines multipliées à produire la kallikréine humaine Par exemple, les cellules humaines multipliées obtenues par récolte à partir d'une suspension dans l'ascite ou d'une extraction et d'une dé- sagrégation d'une ou plusieurs tumeurs massives, formées par exemple sous'la peau, sont mises en suspension dans un milieu nutritif préchauffé à une température comprise dans la gamme d'environ 20 à 40 'C pour obtenir une densité cel- lulaire d'environ 104 à 1 o 8 cellules par millilitre et in- cubées pour obtenir la kallikréine humaine Dans ce cas, on peut exposer les cellules humaines à l'action d'un in- ducteur de la kallikréine pour accroître encore la produc- tion de kallikréine L'inducteur de kallikréine utilisable dans l'invention, peut être constitué d'un ou plusieurs de ceux qui induisent la production de kallikréine humaine dans les cellules humaines obtenues par multiplication de cellules humaines par emploi d'un animal à sang chaud autre que l'homme Par exemple on peut utiliser comme in- ducteur de la kallikréine des amino-acides tels que la glycine ou la phénylalanine, des protéines telles que la caséine, des saccharides tels que le glucose, l'inositol, le ribose ou de désoxyribose ou une hormone telle que l'adrénaline. La stabilisation de la kallikréine humaine dans la culture et l'accroissement de la production de la kal- likréine humaine peuvent être obtenus par addition à la culture d'un stabilisant de la kallikréine ou d'un stimu- lateur de la kallikréine tel que la trypsine (EC 3 4 21 4) ou d'un alcaloïde. La kallikréine humaine peut être facilement ré- coltée dans la culture selon des procédés de purification et de séparation qui utilisent des techniques classiques, par exemple la concentration, le relargage, la dialyse, la filtration, la centrifugation et/ou la lyophilisation Si une préparation de kallikréine humaine plus purifiée est souhaitable, on peut obtenir une préparation ayant la pu- reté maximale possible par emploi des techniques décrites ci-dessus en combinaison avec d'autres techniques classi- ques, par exemple l'absorption et la désorption avec un échangeur d'ions, la filtration sur gel, l'électrophorèse, la chromatographie d'affinité et/ou le fractionnement au point isoélectrique. La présente kallikréine humaine est identique sur le plan immunologique à celle provenant de l'urine hu- maine et elle ne contient ni pyrogène ni virus de l'hépa- tite: on peut donc l'utiliser de façon avantageuse isolé- ment ou en combinaison avec un ou plusieurs agents tels qu' une hormone stéroldienne, un anticoagulant ou un agent car- cinostatique pour l'administration interne ou pour l'injec- tion pour la prévention ou le traitement de maladies hu- maines. Dans toute la présente description, les titres de la kallikréine humaine ont été déterminés selon la mé- thode de dosage biologique indiquée par Moriya et coll, Journal of Biochemistry, Vol 58, page 201 ( 1965) avec une légère modification et ils sont exprimés en unités biologiques (UK) déterminées par mesure de l'abaissement de pression sanguine chez un chien après administration de la kallikréine humaine. Plusieurs modes de réalisation de l'invention vont être décrits sans que la portée de l'invention soit limitée de quelconque façon. EXEMPLE 1 On transplante par voie sous-cutanée à des sou- ris nues adultes, une lignée de cellules humaines de can- cer du pancréas, COLO 357, et on les alimente de façon habi- tuelle pendant 4 semaines. Cette transplantation de cellules et l'alimen- tation ultérieure des animaux provoquent la formation sous- cutanée de tumeurs massives pesant chacune environ 10 g que l'on extrait, fragmente et désagrège par mise en sus- pension dans une solution salée physiologique contenant de la trypsine. Ensuite on lave les cellules humaines avec du milieu 199 de Earle (p H 7,2) additionné de 10 % v/v de sé- rum foetal de veau et on met en suspension dans du milieu frais ayant la même composition et contenant de plus envi- ron 1 mg/ml de caséine, pour obtenir une densité cellulaire d'environ 1 x 105 cellules par millilitre puis on incube la culture pendant 10 jours à 37 C pour provoquer la pro- duction de kallikréine humaine Ensuite, on soumet la culture obtenue à un trai- tement par les ultrasons et on détermine le titre en kalli- kréine humaine du surnageant. La production de kallikréine humaine est d'envi- ron 600 UK par ml de culture. 1 61 On réalise le témoin de la façon suivante: On cultive des cellules humaines de cancer du pancréas de la lignée COLO 357 in vitro dans du milieu 199 de Parker (p H 7,2) additionné de 10 % v/v de sérum foetal de veau et on soumet les cellules humaines multipliées à une induc- tion semblable à celle di-dessus La production de kalli- kréine humainen'est que de 20 UK par ml de culture. EXEMPLE 2 On met ensemble en suspension des cellules de la lignée humaine de cancer du pancréas COLO 357 et d'une lignée lymphoblastolde humaine Namalwa, dans un récipient avec une solution salée 140 m M en Na Cl, 54 m M en KC 1, 1 m M en Na H 2 PO 4 et 2 m M enri Ca C 12, pour obtenir des densi- tés cellulaires respectives d'environ 103 cellules/ml A la suspension cellulaire on ajoute, en refroidissant par la glace, une solution salée fraîche ayant la même compo- sition et contenant de plus du virus Sendai préalablement inactivé par irradiation par les ultraviolets Environ 5 minutes après l'addition, on transfère le mélange dans un * incubateur à 37 C et on l'y agite pendant environ 30 minu- tes pour effectuer la fusion cellulaire et introduire la capacité de production de la kallikréine humaine de la li- gnée humaine de cellules de cancer du pancréas dans la li- gnée humaine de cellules lymphoblastoides. On transplante par voie intrapéritonéale les cellulles hybrides obtenues à des souris nues adultes que l'on alimente de façon habituelle pendant 5 semaines. Apres extraction des tumeurs massives obtenues pesant chacune environ 15 g, on soumet la suspension de cellules à une induction de la production de kallikréine humaine comme dans l'exemple 1 si ce n'est qu'on remplace la caséine par 0,1 % p/v de phénylalanine et 0,1 % p/v de glucose. La production de kallikréine humaine est d'en- viron 1 300 UK par ml de culture. Le témoinpour lequel on cultive les cellules humaines hybridées in vitro pour leur multiplication puis traitées comme dans l'exemple 1 pour produire de la kalli- kréine humaine, ne fournit qu'environ 100 UK de kallikré- ine humaine/ml de culture. EXEMPLE 3 On met en suspension des cellules humaines de tumeur rénale que l'on a obtenues par extraction de tis- su de tumeur rénale d'un patient, fragmentation et désa- grégation et des cellules de la lignée lymphoblastolde humaine BALL-1, dans un récipient avec une solution salée mif en Na Cl, 54 m M en K Cl, 1 m M en Na H 2 PO 4 et 2 m M en Ca Cl 2 pour obtenir des densités cellulaires rcspectives d'environ 103 cellules par millilitre On ajoute à la suspension cellulaire en refroidissant par la glace, une solution salée fratche ayant la même composition et conte- nant de plus du virus Sendal préalablement inactivé par irradiation par les ultraviolets On transfère ensuite le mélange dans un incubateur à 370 C environ 5 minutes après l'addition et on l'y agite pendant environ 30 minutes pour effectuer la fusion cellulaire et introduire la capacité de production de la kallikréine humaine des cellules hu- maines de tumeur rénale dans les cellules de la lignée lym- phoblastolde. Après injection d'un antisérum préparé de façon habituelle chez le lapin, à des hamsters nouveau-nés pour réduire leur réaction immunitaire, on transplante les cel- lules hybrides par voie sous-cutanée à ces animaux que l'on alimente de façon habituelle pendant 3 semaines. On traite comme dans l'exemple 1, pour induire la production de kallikréine humaine, la suspension cel- lulaire obtenue à partir des tumeurs massives formées sous la peau et pesant chacune environ 10 g. La production de kallikréine humaine est d'envi- ron 2 100 UK/ml de culture. Le témoin, pour lequel on cultive les cellules BALL-1 hybridées in vitro comme dans l'exemple 1 pour les multiplier, puis on les traite comme dans l'exemple 1 pour produire la kallikréine humaine, ne fournit qu'environ UK de kallikréine humaine/ml de culture. EXEMPLE 4 On transplante par voie intraveineuse à des rats nouveau-nés, des cellules d'une lignées lymphoblas- toide humaine Namalwa hybridées dans lesquelles on a in- troduit la capacité de production de la kallikréine humaine comme dans l'exemple 2 et on alimente les animaux de fa- çon habituelle pendant 4 semaines. Après extraction des tumeurs massives obtenues, pesant chacune environ 40 g, on traite la suspension cel- lulaire comme dans l'exemple 2 pour induire la production de kallikréine humaine. La production de kallikréine humaine est d'envi- ron 1 400 UK/ml de culture. EXEMPLE 5 Après avoir irradié des souris adultes avec des rayons X à une dose d'environ 400 rems pour réduire leurs réactions immunitaires, on transplante par voie sous-cuta- née aux animaux des'cellules de la lignée humaine cancéreu- se COLO 357 et on les alimente de façon habituelle pendant 4 semaines. On extrait les tumeurs massives obtenues for- mées sous la peau pesant chacune environ 15 g et on les traite comme dans l'exemple 1 pour induire la production de kallikréine humaine. La production de kallikréine humaine est d'envi- ron 900 UK/ml de culture. EXEMPLE 6 On met en suspension des cellules de la lignée lymphoblastoide humaine BALL-1 hybridées dans lesquelles on a introduit la capacité de produire la kallikréine hu- maine de la même façon que dans l'exemple 3, dans une cham- bre de diffusion cylindrique en matière plastique ayant un volume intérieur d'environ 10 ml munie d'une membrane filtrante ayant une taille nominale des pores d'environ 0,5 Dam avec une solution salée physiologique et on place la chambre dans le péritoine d'un rat adulte Ensuite on alimente l'animal de façon habituelle pendant 4 semaines et on retire la chambre. La densité des cellules humaines dans la chambre est d'environ 2 x 109 cellules/ml ce qui est supérieur d' environ 10 fois ce qu'on obtient selon une méthode de culture tissulaire in vitro avec un incubateur à C 02. On traite ensuite les cellules humaines comme dans l'exemple 2 pour induire la production de kallikréine humaine. La production de kallikréine humaine est d'envi- ron 1 800 UK/ml de culture. EXEMPLE 7 On transplante dans les cavités allantoidien- nes d'oeufs embryonnés que l'on a préincubés pendant 5 jours à 370 C, des cellules de la lignée lymphoblastoide humaine BALL-1 hybridées dans lesquelles on a introduit la capacité de produire la kallikréine humaine comme, dans l'exemple 3 et on incube les oeufs à cette température pen- dant environ 1 semaine. On recueille les cellules humaines dans les oeufs et on les traite comme dans l'exemple 2 pour induire la production de kallikréine humaine. La production de kallikréine humaine est d'envi- ron 1 200 UK/ml de culture. Revendications 1 Procédé pour produire la kallikréine humaine, ca- ractérisé en ce qu'il comprend les stades qui consistent à: ( 1) transplanter des cellules humaines capables de produire de la kallikréine humaine chez un animal à sang chaud autre que l'homme; laisser les cellules humaines utiliser un liquide nu- tritif de l'organisme de l'animal pour leur multiplication; et laisser les cellules humaines multipliées libérer la kallikréine humaine, ou sinon, ( 2) placer des cellules humaines capables de produire de la kallikréine humaine dans un dispositif leur fournis- sant un liquide nutritif de l'organisme d'un animal à sang chaud autre que l'homme; inclure ou placer le dispositif dans ou sur l'animal; laisser les cellules humaines utiliser le liquide nu- tritif de l'organisme pour leur multiplication; et laisser les cellules humaines multipliées libérer la kallikréine humaine. 2 Procédé selon la revendication 1, caractérisé en ce qu'il comprend les stades consistant à: ( 1) transplanter des cellules humaines capables de pro- duire de la kallikréine humaine chez un animal à sang chaud autre que l'homme; alimenter l'animal pour permettre aux cellules humaines d'utiliser un liquide nutritif de l'organisme de l'animal pour leur multiplication; extraire et désagréger la tumeur obtenue formée chez l'a- nimal pour obtenir les cellules humaines multipliées; cultiver les cellules humaines dans un milieu nutritif in vitro en présence ou non d'un inducteur de kallikréine pendant une période suffisante pour accumuler une quantité notable de kallikréine humaine; et recueillir la kallikréine humaine accumulée à partir de la culture, ou sinon, ( 2) placer une suspension de cellules humaines capa- bles de produire de la kallikréine humaine dans une cham- bre de diffusion de type classique pour alimenter les dites cellules humaines en un liquide nutritif de l'or- ganisme d'un animal à sang chaud autre que l'homme; inclure ou placer la chambre dans ou sur un animal à sang chaud au r/l'homme; alimenter l'animal pour permettre aux cellules humai- nes d'utiliser le liquide de l'organisme pour leur multi- plication; recueillir les cellules humaines multipliées à partir de la chambre; cultiver les cellules humaines dans un milieu nutritif in vitro eri résence ou non d'un inducteur de kallikréine pendant une période suffisante pour accumuler une quantité notable de kallikréine humaine; et recueillir la kallikréine humaine accumulée à partir de la culture. 3 Procédé selon la revendication 1, caractérisé en ce que les dites cellules humaines capables de produire la kallikréine humaine sont des cellules humaines normales choisies parmi le groupe constitué par les cellules humai- nes de pancréas, les cellules humaines de glandes salivai- res, les cellules humaines de foie, les cellules humaines de rein et les cellules humaines lymphoblastoldes-pulmonai- res. 4 Procédé selon la revendication 1, caractérisé en ce que lesdites cellules humaines sont des cellules humai- nes tumorales choisies parmi le groupe constitué par les cellules humaines de cancer du pancréas, les cellules humai- nes de cancer des glandes salivaires, les cellules humaines du cancer du foie, les cellules humaines de cancer du rein, les cellules humaines de cancer de la vessie et celles obtenues par transformation des cellules humaines décrites dans la revendication 3. Procédé selon la revendication 1, caractérisé en ce que lesdites cellules humaines sont des cellules hu- maines hybrides dans lesquelles on a introduit la capacité de produire la kallikréine humaine. 6 Procédé selon la revendication 1, caractérisé en ce que les dites cellules humaines sont des cellules d'une lignée lymphoblastoide humaine hybridées avec l'une quel- conque des cellules humaines décrites dans les revendica- tions 3 et 4 pour introduire la capacité de production de la kallikréine humaine des secondes dans les premières. 7 Procédé selon la revendication 6, caractérisé en ce que ladite lignée lymphoblastoïde humaine fait partie du groupe constitué par les lignées Namalwa, BALL-1, NALL- 1, TALL-1 et JBL. 8 Procédé selon la revendication 1, caractérisé en ce que ledit animal à sang chaud autre que l'homme est un mammifère ou un oiseau. 9 Procédé selon la revendication 1, caractérisé en ce que ledit inducteur de kallikréine est un ou plusieurs éléments du groupe constitué par les amino-acides, les protéines, les sucres et les hormones. 10 Procédé pour produire de la kallikréine humaine comprenant la multiplication de cellules humaines capables de produire la kallikréine humaine et la culture des cellu- les humaines multipliées en présence ou non d'un inducteur de kallikréine pendant une période suffisante pour accu- muler une quantité notable de kallikréine humaine, dans lequel on obtient une augmentation extrême de la vitesse de multiplication cellulaire et de la production de kalli- kréine humaine, caractérisé en ce qu'il consiste à: ( 1) transplanter des cellules humaines capables de produire de la kallikréine humaine chez un animal à sang chaud autre que l'homme; alimenter l'animal pour permettre aux cellules humai- nes d'utiliser un liquide nutritif de l'organisme de l'ani- mal pour leur multiplication; extraire et désagréger la tumeur obtenue formée chez l'animal, pour obtenir les cellules humaines multipliées; cultiver les cellules humaines dans un milieu nutritif in vitro en présence ou non d'un inducteur de kallikréine pendant une période suffisante pour accumuler une quanti- té notable de kallikréine humaine; et recueillir la kallikréine humaine accumulée à partir de la culture, ou sinon, ( 2) placer une suspension de cellules humaines capables de produire de la kallikréine humaine dans une chambre de diffusion de type classique pour alimenter lesdites cellu- les avec un liquide nutritif de l'organisme; inclure ou placer la chambre dans ou sur un animal à sang chaud autre que l'homme; alimenter l'animal pour permettre aux cellules humaines d'utiliser le liquide de l'organisme pour leur multiplica- tion; recueillir les cellules humaines multipliées à partir de la chambre; - cultiver les cellules humaines dans un milieu nutritif in vitrô en présence ou non d'un inducteur de kallikréine pendant une période suffisante pour accumuler une quantité notable de kallikréine humaine; et recueillir la kallikréine humaine accumulée à partir de la culture.