Brevet FR2521858A1 — publié le 19830826

Le Triméthoprim est un agent chimlothérapeutique de synthèse qui agit sélectivement sur la déhydrofolate réductase bactérienne, enzyme essentielle pour les processus de bio- synthèse de la cellule bactérienne. Sa formule chimique est la suivante: TRIMETHOPRIM: 5-l( 3,4,5-triméthoxyphényl)-méthyll-2,4-pyri- midinediamine. O C'Il ci Ho C MI NH c CH HL C e ji I Il 1 i / C ç _ t It) CH O CH h Etant donné que l'action du Triméthoprime est en rapport avec la concentration des déhydrofolates, l'emploi simultané d'un sulfamide diminue cette concentration en renforçant ainsi l'activité antibactérienne, élargissant son spectre d'activité et augmentant l'action bactéricide En outre, l'association Triméthoprime-sulfamide diminue la probabilité de formation de clones résistants. Le Triméthoprime et le sulfamide agissent donc en inhibant dans les cellules l'activité des folates Le Tri- méthoprime est habituellement de 20 à 100 fois plus actif que le sulfamide; toutefois quant le sulfamide est en soi inefficace pour inhiber le développement bactérien, il exerce également son action dans la suspension en inhibant la biosynthèse des folates L'action bactéricide de l'association triméthoprime-sulfamide est due à une ihibition sélective de la synthèse de l'ADN bactérien En associant au sulfamide le Triméthoprime il est possible d'augmenter son efficacité antibactérienne et surtout de diminuer la probabilité-de formation de clones bactériens résistants, en particulier lorsque l'association est constituée de 5 parties en poids de sulfamide plus une partie en poids de Triméthoprime ( 55 + 1 T). Toutefois l'association 5 S + 1 T est insuffisam- ment active contre certaines souches bactériennes surtout du genre Haemophilus, Pseudomonas et Proteus et est à même de sélectionner, en nombre croissant avec le passage du temps, les clones résistants de Bactéries qui rentrent dans le spectre d'action de 5 S + 1 T. En outre les sulfamides provoquent des effets se- condaires notables, surtout des réactions d'hypersensibilité dont l'incidence est notable et très variable. Ces réactions sont caractérisées quelquefois par de la fièvre, un malaise et un prurit cutané, quelquefois par des manifestations intéressant la peau et les muqueuses et d'autres fois par des lésions vasculaires Chez des per- sonnes déjà sensibilisées aux sulfamides, on peut également observer des réactions du type anaphylactique Les effets de la sensibilisation ne peuvent être évitée en changeant le type de sulfamide (cross-sensibility). D'autres effets secondaires peuvent apparaître lorsqu'on emploie les sulfamides: a) des perturbations du système hémoporétique c> des hépatites (qui cependant apparaissent avec une fré- quence plus faible que les autres effets secondaires). Un autre inconvénient des sulfamides est la faci- lité avec laquelle ils interfèrent avec de nombreux autres produits pharmaceutiques importantes. En particulier ils augmentent de façon notable la toxicité des anticoagulants coumariniques, en augmentant de façon imprévisible l'activité des hypoglycémiants oraux (ce qui peut provoquer un comas hypoglycémique) et en outre leur toxicité augmente notablement s'ils sont administrés en même temps que les principales substances pharmaceutiques anti-inflammatoires ou la sulfinpyrazone. C'est pourquoi depuis 1977 des recherches ont été entreprises aux laboratoires de recherche de Biomedica Foscama S p A à Rome, recherches préliminaires dans le but d'identifier un antibactérien en mesure de remplacer le sulfamide dans l'association avec le Triméthoprime, dans le but de former une association à haute synergie-d'action don- nant par rapport à 5 S + 1 T des résultats plus efficaces dans les infections urinaires et dotée d'effets secondaires d'importance mineure On a surtout examiné les antibacté- riens qui inhibent la synthèse de l'ADN bactérien. Ces essais ont mené à une découverte inattendue: en associant l'acide pipémidique (formule II) (qui est consi- déré comme un dérivé de l'acide nalidissique doté d'une action analogue) au Triméthoprime dans des rapports pondé- raux variant entre 5:1 et 20:1, l'association présente une synergie élevée de l'activité antibactérienne des deux com- posants, tandis qu'on ne rencontre pas de synergie notable en substituant dans une telle associat=rà l'acide pipémidique son "chef de file" l'acide nalidissique Cette action syner - gique se manifeste surtout vis-à-vis des bactéries qui pro- voquent des infections urologiques. 2 2 * ffi N N it Hi lCC C Ni l H c c c -c >/Il X X a HH 2 2 x N v 11 1 -) ( 11) L'acide pipémidique de formule (II) est l'acide 8-éthyl-S-oxo-2-( 1-pipérazinyl)-5,8-dihydropyrido-( 2,3-d)- pyrimidine-6-carboxylique, préparé par Pesson et coll. ( 6 7) avec des propriétés chimio-thérapeutiques semblables à celles de l'acide pyromidique et nalidixique. L'acide pipémidique est bien absorbé par voie orale. Chez l'homme l'administration d'une seule dose de 0,4 g fait atteindre des concentrations sériques de 3,17 eg/ml au bout d'l h et de 3,85 ug/ml au bout de 2 h. Un peu plus d'un tiers de l'acide pipémidique est récupéré dans les fèces, et presque tout le reste dans l'u- rine. Une dose de 0,5 g produit des niveaux urinaires de 1116 eg/ml au bout de 2 à 4 h; 0,4 g produisent, à la 5 e h, des niveaux urinaires de 514 ëg/ml Indépendamment de la con- centration, seulement 30 % environ de l'acide pipémidique est lié aux protéines humaines (p H 7,2); cette liaison est facilement réversible Comme pour les composés analogues, l'acide pipémidique inhibe le transfert par conjugaison des plasmides R. L'activité de l'acide pipémidique est généralement plus grande que celle de l'acide pyromidique ou celle de l'acide nalidixique. L'activité de l'acide pipémidique est rarement influencée par l'adjonction de sérum, par la variation du p H, mais est influencée par la taille de l'inoculum L'action bactéricide est voisine de celle qui inhibe le développement. La résistance croisée entre l'acide pipémidique et l'acide pyfomidique ou nalidixique est incomplète. L'action de l'acide pipémidique s'exerce sur de nombreuses bactéries gramnégatives et les souches de E. coli et de Salmonella sont inhibées à des doses très basses ( 0,8-6,25 ug/ml) ( 4 7) Vis-à-vis de Pseudomonas aeruginosa l'activité de l'acide pipémidique est notablement supérieure à celle de l'acide nalidixique mais non complète ( 4 7). Parmi les Proteus les plus résistants sont Proteus vulga- ris et rettgeri Parmi les bactéries gram + les staphyloco- ques sont sensibles, à des concentrations de 6,25-25 kg/ml, mais les entérocoques sont peu sensibles. Les effets secondaires de l'acide pipémidique aux doses thérapeufiques se révèlent de faible importance et la tolérabilité de cet antibactérien aux doses conseillées, se révèle bonne. En outre l'acide pipémidique ne semble pas inter- férer notablement avec l'activité d'autres substances pharma- ceutiques importantes si l'on excepte un certain antagonisme avec l'antibactérien nitrofurantoine. Les recherches confirment la synergie entre le Triméthoprime et l'acide pipémidique associés dans une propor tion pondérale de 1:10 et 1:20. Les recherches ont eu l'orientation expérimentale suivante: 1) Détermination de la concentration minimale inhibt-itrice sur de nombreuses souches gram+ et gram 2) Détermination en particulier des concentrations minimales inhibitrices envers les espèces envers lesquelles les deux substances pharmaceutiques sont les moins actives (entéroco- ques, Proteus et Pseudomonas sp). 3) Evaluation d'une éventuelle action synergique sur les diverses espèces. 4) Influence du p H (en particulier le p H 5,8 qui au niveau urinaire peut influencer in vivo l'activité du produit). 5) Influence du sérum sur l'activité in vitro du produit. 6) Evaluation de l'activité après incubation de 72 h. 7) Etude des niveaux sanguins et urinaires chez des volon- taires en bonne santé après administration unique des asso- ciations Triméthoprime-acide pipémidique 1:10 et 1:20. PARTIE EXPERIMENTALE Matières et modes opératoires 1) Détermination in vitro de l'activité antibactérienne de l'association Triméthoprime-acide pipémidique ( 1:10) contre Staphylococcus aureus et les espèces qram L'activité anti- bactérienne est étudiée au moyen de l'évaluation de la concentration minimale inhibitrice (C M I). L'expérience est effectuée sur les gram+ envers: 61 souches de Staphylococcus pyoqenes souches de Streptococcus faecalis Entre les gram envers: souches de E coli 21 souches du genre Klebsiella 59 souches du genre Proteus ( 21 Proteus mirabilis, 11 P. vulgaris, 11 P rettgeri, 11 PM morganii + 5 Providencia). 55 souches de Pseudomonas aeruginosa. Les cultures bactériennes ont été obtenues dans un bouillon Muller-Hinton (BBL) ou de gélose DST, en obtenant un développement abondant et homogène de toutes les souches susdites. L'activité de l'association Triméthoprime-acide pipémidique 1:10 et 1:20 est comparée avec l'activité des divers composants à savoir l'acide pipémidique et le Trimé- thoprime seuls L'acide pipémidique est tout d'abord dissous avec Na OH 0,1 N en qsp de manière à préparer des solutions mères avec lesquelles on effectue des dilutions dans les bouillons de culture. Le Triméthoprime est solubilisé avec H Cl 0,1 N en qsp. L'ensemencement bactérien est effectué avec la di- lution d'un bouillon de culture de 18 h de développement, de manière à obtenir un inoculum de 2 x 104 bactéries. La lecture des résultats, effectuée après incuba- tion de 18 h à 37 C, permet de connaître les concentrations minimales inhibitrices des agents anti-microbiens exprimées en g/ml, c'est-à-dire la concentration capable d'inhiber le développement des bactéries ensemencées. 2) Détermination de l'action synergique de l'association Triméthorpimeacide pipémidique dans des rapports 1:10 et 1:20. L'action synergique triméthroprime-acide pipémidique est relevée dans des expériences effectuées dans les bouil- lons indiqués ci-dessus et avec les techniques décrites ci- dessus. L'interaction est évaluée au moyen du rapport entre la C M I "attendue" et celle qui est déterminée expérimen- talement On calcule la C M I "attendue" au moyen de la formule C.M I A x C M I B (%A) C M I B + (%B) C M I. (%A) C M I B A en désignant par le pourcentage de A et le pourcentage de B le pourcentage de la concentration des deux agents anti- microbiens. 3) Influence du p H En considérant les indications thérapeutiques de l'association on essaie l'activité de l'association non seulement à p H 7,2 mais aussi à p H 5,8 (p H urinaire) contre les souches bactériennes étudiées. 4) Influence du sérum sur l'activité de l'association Triméthoprime-acide pipémidique. Dans quelques expériences, dans le but d'évaluer l'importance du sérum pour influencer in vitro l'activité inhibitrice exercée par l'association 1:10 et 1:20 on emploie du sérum de cheval à la concentration finale de 20 % en laissant inchangées les autres conditions expérimentales. Les expériences sont effectuées à p H 7,2 et p H 5,8. Les essais sont effectués sur des bactéries gram+ et gram ) Evaluation de l'activité de l'association après incu- bation de 72 h. Dans certaines expériences on effectue une lecture différentielle à 72 h, indiquant l'activité de l'antibio- tique dans le temps. 6) Détermination des niveaux sanguins et urinaires. Dans ce but on se sert de volontaires adultes, en bonne santé des deux sexes qui ne reçoivent pas simultanément d'autres substances pharmaceutiques. A ces mêmes personnes on administre par voie orale une dose de 800 mg d'acide pipémidique + 40 mg de Trimé- thoprime Les mêmes volontaires une semaine-après reçoivent par voie orale 800 mg d'acide pipémidique + 80 mg de Trimé- thoprime On effectue des prélèvements de sang 1, 2, 4, 6 et 8 h après administration de chacune des deux associations. Les échantillons de sang sont transformés en sérum, et les urines après centrifugation sont conservées à -20 C Les prélèvements d'urine sont à 2, 3, 4, 6 et 8 h et à 12 h et 24 h. Le titrage du produit est effectué microbiolo- giquement au moyen de la technique de diffusion en gélose m utilisant le bouillon de gélose DST (oxyde) en déterminant simultanément la courbe standard Comme germe expérimental on utilise Salmonella typhi 3 qui se révèle très sensible (C M I 0,78 ig/ml). Sur la base des valeurs des halc d'inhibition rapportés à la courbe standard il est possible de remonter à la concentration des échantillons examinés. RESULTATS Action de l'association Triméthoprime-acide pipé- midique ( 1:10 et 1:20) contre les coques gram+. Comme il apparaît d'après le tableau 1 les souches de Staphylococci saggiati sont en général très sensibles au Trimethoprime, et beaucoup moins à l'acide pipémidique à p H 7,2 Les associations (malgré les basses concentrations de Triméthoprime) présentent une activité inhibitrice élevée surtout avec le rapport 1:10 auquel se manifeste une synergie élevée ( 4 58). Avec les souches des entérocoques à p H 7,2 (tableau 2) l'activité des associations 1:10 et 1:20 manifeste une synergie très élevée (respectivement de 14,29 et de 15,76) en considération du fait que l'acide pipémidique est peu actif sur les entérocoques Dans d'autres expériences avec des souches plus résistantes au Triméthoprime,la synergie est encore présente (tableau 3), synergie qui se maintient en cas d'incubation prolongée ( 72 h) qui diminue l'activité des antibiotiques A p H acide l'activité inhibitrice du Triméthoprime comme de l'acide pioémidique contre les coques gram+ est plus grande qu'à p H 7, 2 (tableaux 4-5) pour lequel il manque la synergie mais non l'amélioration d'activité de la part des associations qui se révèlent toujours nettement préférable à l'acide pipémidique Si on observe toutefois toujours à p H acide l'effet des incubations prolongées ( 72 h) qui diminuent, même notablement, l'activité des agents anti-microbiens du ?riméthoprime etude l'acide pipé- midique (tableaux 6-7) on met en évidence de nouveau l'activité synergique et les souches plus résistantes dis- paraissent au Tableau 7. Action des associations Triméthorrime-acide pipémidique(l:10 et 1:20) contre les entérozactéries (Coli et Klebsiellae). A p H 7,2 un certain pourcentage de souches de E coli (tableau 8) se révèlent peu sensibl E au Trimétho- prime et à l'acide pipémidique L'action synergique des associations se révèle bonne: la sensibilité moyenne des souches augmente tandis que disparaissent les souches plus résistantes L'action synergique des associations se maintient même dans les incubations prolongées ( 72 h) qui diminuent l'activité des agents anti-bactériens (tableau 9). A p H 7,2 de très nombreuses souches de Klèbsiellae (tableau ) sont peu sensibles au Triméthoprime; avec les associa- tions on obtient une diminution des valeurs moyennes des C N I et surtout la disparition des souches peu sensibles; avec l'association 1:10 on note également une synergie. A p H 5,8 avec E boli (tableau 11) les avantages de l'association (l:10 et 1:20) sont bien évidents car on note une évidente action synergique et les souches plus résis- tantes disparaissent; avec les Klebsiellae (tableau 12) o l'on note une diminution de l'activité de l'acide pipé- midique on note également une synergie et les souches résistantes disparaissent. 252 1858 Même dans ce cas il est toutefois intéressant de noter comment en prolongeant le temps d'incubation, qui détermine une diminution de l'activité inhibitrice des anti- biotiques, on note (tableau 13) une actic synergique de l'association dans le rapport 1:10 également vis-à-vis du genre Klebsiellae. Action des associations Triméthoprime-acide pipémidique ( 1:10 et 1:20) contre le genre Proteus. Comme il apparaît d'après les Tableaux 14 et 15, à p H 7,2 93 % des souches, et la totalité à p H 5,8, resis- tent au Triméthoprime Les associations exercent un effet synergique évident, même si c'est avec un comportement différent. Action des associations Triméthoprime-acide pipémidique ( 1:10 et 1:20) contre le genre Pseudomonas. Le Triméthoprime ne présente pas une activité inhibitrice constante contre les diverses souches de Pseudo- monas; les souches examinées présentent une sensibilité appréciable et il est intéressant de noter comment à p H 5,8 les souches employées sont plus sensibles au Trimétho- prime qu'à l'acide pipémidique. Comme il résulte des tableaux 16 et 17 on note une synergie évidente de la part des associations surtout avec le rapport 1:10 et à p H 7,2 o manquent dans les deux rapports les souches à C M I inférieure à 25 ug/ml. Sont également appréciables la synergie et la disparition des souches plus résistantes même à p H 7,2 avec des incu- bations prolongées qui diminuent l'activité des agents anti- bactériens (tableau 18). Influence su sérum sur l'activité de l'association Trimétho- prime-acide pipémidique. En ce qui concerne l'influence du sérum avec l'as- sociation 1:10, il est intéressant de voir qu'avec les gram tant à p H 7, 2 qu'à p H 5,8 il y ait une augmentation d'activité de l'association Triméthoprime-acide pipémidique en présence de sérum (tableau 14) En ce qui concerne les gram: par l'effet du sérum il y a une légère diminution de l'activité de l'association 1:10 non significative pour les effets pratiques (tableau 20) Avec l'association Triméthoprime-acide pipémidique (rapport 1:20) avec les gram+ l'augmentation d'activité en présence de sérum est limitée à l'action de l'association à p H 5,8, tandis qu'avec les gram+ la diminution de l'activité de l'association se déclare également à p H 7,2 mais n'est pas significative pour les conséquences pratiques (Tableau 22). Essais conduits sur des volontaires en bonne santé (évalua- tion des taux sanguins et urinaires). En ce qui concerne les taux urinaires il est in- téressant de noter comment avec la concentration 1:10 pour l'intervalle de 4 h ( 2-6) il se maintient en général une concentration que l'on peut mettre en relation avec une quantité nn inférieure à 4 eq/ml (tableau 23) En ce qui concerne les taux urinaires avec le rapport 1:10 on obtient un maximum d'activité au bout de 4 h; toutefois il est intéressant de noter que pour la colonne de 6 h ( 2-8) les concentrations descendent endessous d'une quantité qui correspond à 600 mg Même à la 24 e h les taux sont très élevés ( 218 eg/ml) (tableau 24). Avec le rapport 1:20 pour le taux urinaire il y a une plus grande activité dans les 3 premières heures, puis les valeurs jusqu'à 24 h sont inférieures en ce qui concerne le rapport 1:10 ainsi qu'avec le rapport 1:20 les taux urinaires à la 24 heure sont très élevés ( 267 eg/ml) (tableau 25). Avec le rapport 1:20 les taux sanguins sont plus élevés que ceux du rapport 1:10 dans les 4 premières heures, puis jusqu'à la 8 e heure les valeurs sont inférieures sont pratiquement semblables. 252 1858 TABLEAU i Activité antibactérienne des associations Triméthoprime- acide pipêmidique (dans des rapports 1 + 20, 1 + 20 > vis-à-vis de 31 souches de Staphylococcus pyogenes à p H 7,2. c.M I T PF T+P> T-i P 0,y 2 20 + 1 0,4 1 + 21 2 2 0,8 2 + 22 1 + 2 1 +i 2 1,56 2 +i 24 1 14 + 3 4 + 3 3,12 1 + 26 5 + 1 12 + 17 9 + 7 6,25 2 + 27 2 +p 6 12 + 16 12,5 2 + 8 2 + 29 3 + 28 2 + 29 17 + 10 4 + 27 x 2,41 21,92 2 > 77 4,079 C.M I attendue Synergie 12,68 4 " 58 P 82 3,030 Lecture après incubation de 18 h à 27 'C. TABLEAU 2 Activité antibactérienne des associations Triméthoprinte- acide pipémidique de 37 souches de Streptococcus faecalis à p H 7,2. c.M I TriniîîtliopritnAcide î+P T+P (yg/ml) pipémnidique( 11) (+) 0, 05 10 0,1 24 + 10 1 0,2 1 + 34 0,4 18 + 1 7 0,8 12 + 19 9 + 7 1,56 5 + 31 19 + 16 3,12 1 + 35 1 + 35 12,45 1 1 5 1 8- 5 22 + 13 2 + 35 x 1,52 84,416 1,00 1 l,49 C.M I attendue 14,29 23,48 Synergie 14,29 15,76 TABLEAU -3 Activité antibactérienne des associations Triméthoprime- acide pipémidique dans les rapports 1 + 10 et 1 + 20 vis-à-vis de 38 souches de Streptococcus faecalis à p H 7,2, après 18 et 72 h d'incubation à 370 C. 18 h 72 ri (yg/rnl> 1 + 101 + 20 j 1 + 10 1 + 20 0,8 3 111 11 1,56 6 + 3 1 + 12 + 1 2 + 1 1 + 1 1 + 1 2 + 1 3,12 1 + 9 1 + 2 1 + 2 6 J 25 5 + 10 5 + 3 10 + 3 1 + 2 12,5 5 + 313 + 8 10 + 13 1 3 + 1521 + 810 + 219 + 231 + 13 + 3 1 + 3 * 7 + 189 + 297 + 316 + 32 4 + 6 6 + 4 7 + 3 3 + 25 1 + 214 + 1021 + 1024 + 10 10 + 28 5 + 314 + 247 + 31 4 + 34 400 30 + 8 x 72,92 27 > 4520,f 9918,* 85345,72117,99100,8093,152 C.M I attendue 29, 08 28 > 29 125,42 121,81 Synergie 1 > 391 > 50 -1,24 1 >#30 TABLEAU 4 Activité antibactérienne des associations Triméthoprime- acide Pipémidique de 30 souches de Staphylococcus oyogenes à p H 5,8. Lectures effectuées après incubation de 18 h à 370 C. C M I 1 T P T+P 1 I+P 0,2 4 1 0 > 4 18-i 4 I 4 + 1, 0,8 8 + 22 1 + 1 3-i 5 2 1,56 1 + 2 1 + 8 5 + 2 3,12 1 + 3 1 + 9 2 +f 7 6,25 11 + 4 50 15 + 30 83 17 + 9 86 12,5 15 + 15 5 + 25 4 + 26 x 0,O 48 8,74 5,50 5,73 TABLEAU 5 Activité antibactérienne des associations de Triméthoprime - acide pipémidique (dans les rapports 1 + 10, 1 + 20), vis-à-vis de 33 souches de Streptococcus f aecalis à p H 5,8 Trimeuhoprim Acide, o T+P C. M I pipémnidiiue l -0 4 12 + 11 :0,8 5 + 23 1,56 3 + 28 1 3,12 2 + 31 11 + 1 7 6,25 10 + 12 6 + 7 12 " 5 5 15 11 + 22 IOl 15 + 13Bl 6 + 5 5 + 28 22 + 11 x 0,63 39,77 7,15 11,2 TABLEAU 6 Effet du prolongement du temps d'incubation à 72 h à 370 C sur l'activité antibactérienne des associations de Trimé- thoprime-acide pipémidique (dans les rapports 1 + 10, 1 + 200 vis-à-vis de 41 souches de Staphylococcus pyogenes à p H 5,8. T P T+P T+P C.M I. (jg/mi) ( 1 + 10 o) ( 1 + 20) 0,1 11 0,2 0,4 7 + 1 5 + 1 1 0 j 8 5 + 8 2 + 6 2 + 1 1,56 8 + 13 1 + 8 5 + 3 3,12 13 + 21 1 + 9 11-+ 8 6,25 3 + 34 4 7 + 10 1 + 19 12,5 27 * 4 15 + 17 l 6-20 1 7 + 31 7 + 32 3 + 36 2 1 1 2 2 2 x 7,41 19,21 14 " 99 12,81 C.M I attendue 16 X 80 17 X 85 Synergie 1,12 1, 39 TABLEAU 7 Effet du prolongement du temps d'incubation à 72 h à 37 C sur l'activité antibactérienne des associations de Trimétho- prime-acide pipémidique (dans les rapports 1 + 10, 1 + 20) vis- à-vis de 33 souches de Streptococcus Faecalis à p H 5,8. C.M I TrimethoprimAcide I +PT+P pipémidlique (pg/ml) pipémidique 1 + 10) ( 1 + 20) 0,1 2 0,8 3 + 2 1 m 56 7 + 5 3,12 8 + 12 1 6,25 5 + 20 4 + 1' 4 12)5 3 + 25 2 + 5 4 + 4 10 + 7 10 + 8 1 + 28 14 16 + 17 4 + 18 14 + 14 11 + 22 5 400 4 x 53,25 93,94 33,43 49; 24 C.M I attendue 87 X 89 90,54 Synergie 2,63 1, 84 TABLEAU 8 Activité antibactériennie des associations de Triméthoprimne-. acide pipémidique , vis-à-vis de 25 souches d'Escherichia coli à p H 7,2. C.M I T % P % b P T+P (pg/nil) I-10 1 + 20 0,1 21 014 1 + 21 3 0 > 1 + 2212 il 19 + 3 15 1,56 5 + 11 7 + 15 88 3,12 1 + 1668 1 + 2292 6,P 25 12,5 1 1 + 17 1 2 + 18 1 5 + 20 1 1 400 2 x 32,13 25579 61#78 6 > 42 C.M I attendue 2662,0 Synergie 38745 252 1858 TABLEAU 9 Effet du prolongement du temps d'incubation à 72 h à 37 WC sur l'activité antibactérienne de quelques associations de Triméthoprime avec l'acide pipémidique vis-à-vis de 25 souches d'Escherichia coli à p Hi 7,2. C.M I T P T+P T+P (yg/rnî 1 + 10 1 + 20 0,4 5 + 5 0,8 5 + 10 1 8 3 1 > 56 4 + 15 12 + 1 5 + 8 11 + 3 3,12 1 + 19 4 + 13 6,25 2 + 17 4 + 14 12 e 5 2 + 19 3 + 18 1 + 20 2 + 13 3 + 15 1 1 3 3 5 i 1 400 3 1 x 53,6 68,8 22,J 6 23,V 3 C.K I attendue 67 p 1 67,9 Synergie 2,97 2,91 TABLEAU 10 Activité antibactérienne des associations Triméthoprime- acide pipémidique (dans les rapports 1 + 10, 1 + 2 P) vis-à-vis de 21 souches du genre Klebsiellae à p H 7,2. Lectures après incubation de 18 h à 37 'C. C.M I T P T+P T+P (yg/ml) 1-i-I 1 + 20 0,2 0)4 6 1 0 > 8 6 + 6 4 1,> 56 3 + 12 7 + 1 9 + 4 3,12 5 + 8 1 + 13 6,25 1 + 13 1 + 14 12,5 1 + 15 3 + 14 3 1 + 16 3 + 17 1 + 15 4 + 3 33 4 + 17 1 + 20 5 + 16- 400 14 x 279 e 76 îiaa 9,32 14,36 C M I attendue 13,00 12,45 Synergie 1,39 0,87 TABLEAU il Acti Vité antibactérienne des associations de Triméthoprime-. acide eipémidique (dans les rapports 1 + 10, 1 + 20) vis-à vis de 25 souches d'Escherichia coli à p H 5,8. C.M I T P T- -P T+P 0,1 2 0,4 12 + 2 0,8 4 + 14 1,56 3 + 18 6 1 3,12 1 14 + 6 16 + 1 6,25 15 + 1 3 + 20 5 + 17 12 e 5 1 + 16 1 + 22 1 + 21 1 + 23 1 ±i 22 6 + 17 1 + 23 1 + 23 1 + 24 11 ±24 1 + 24 400 2 x 3,5 28,37 11,87 13,80 C.M I attendue 28,89 28,64 Synerg ie 2,43 2,08 TABLEAU 12 Activité antibactérienne des associations acide pipémidique dans les rapports 1 + 10, 21 souches du genre Klebsiellae à p H 5,8. de triméthoprime- 1 + 20 vis-à-vis de Lectures après incubation de 18 h à 38 "C. C.M I T P T+P T+P (JJ 9/nl) 1 l 10 1 + 20 0,2 1 0,4. 0,8 2 1,56 1 + 1 2 3,12 4 + 2 6,25 2 8 + 6 7 + 2 4 + 2 12 t 5 1 + 2 2 + 14 7 + 9 9 + 6 2 + 16 2 + 16 2 + 15 2 + 18 2 + 18 3 + 17 2 + 3 1 + 20 1 + 20 1 + 20 4 + 5 400 12 277,38 16,15 18,23 20,98 TABLEAU 13 Effet du prolongement du temps d'incubation à 72 h à 37 'C sur l'activité antibactérienne des associations Triméthoprime-. acide pipémidique vis-à- vis de 21 souches du genre Klebs ellae à p H 5,8. C M I 1. (pg/ml) 0,2 0,4 1,56 3,12 6)25 1.2,5 - T + 1 P + 1 + 111 + 16 I 1 +P 1 + 10 + 1 4 + 6 8 + 10 T+P 1 + 20 2 + 1 + 3 9 + 8 x 390,48 f 35,72 30 13 f 42 > 93 C.N I attendue 38,90 37 333 Synergie 1,29 0387 TABLEAU 14 Activité antibactérienne des associatio'ns Triméthoprime- acide Pipémidique 0,4 2 1 5 3 0,6 1 + 2 7 + 5 7 + 3 0,8 1 + 3 6 + 7 8 + 1 23 + 12 25 + 10 1,56 22 + 4 17 + 9 12 + 35 15 + 35 3,12 9 + 26 '4 + 47 4 + 50 6,25 12 + 35 79,6 1 + 51 12,5 10 + 47 1 + 52 3 + 54 2 + 57 6 + 53 2 + 57 400 7 800 26 x 400,62 62 5,33 3 p 81 2,54 C.M 4 I attendue Synergie P 84 1,55 > 58 2, 25 Lecture après 18 h d'incubation à 37 WC. TABLEAU 15 Activité antibactérienne des associations Triméthoprime- acide pipémidique (dans les rapports 1 + 10 et 1 + 20) vis-à-vis de 57 souches de Proteus à p H 5,8 ( 21 mirabili, 11 l vulgaris, rettgeri, 11 morganii et 4 providencia) C N I T P S i+P T+P i+ 1 o 1 + 20 0,4 2 0,8 3 + 2 2 1,56 9 26 + 5 20 + 2 3,12 12 + 9 9 + 31 24 + 22 6,25 13 + 21 59,6 10 + 40 1 + 46 12,5 13 + 34 4 + 47 7 + 47 3 + 50 2 + 51 1 + 54 4 + 53 2 + 55 4 + 53 400 57 x 400 12,63 7,18 10,77 C.N I attendue 13,83 13,23 Synergie 1,92 1,22 Lecture après 18 h d'incubation à 37 C. TABLEAU 16 Activité antibactérienne des associations Triméthoprimne- acide pipémidique (dans les rapports 1 + 10, 1 + 20) vis-à-vis de 55 souches de Pseudomonas aeruginosa à p H 7,2. Acide C M I Trirnethopriff ll Pi Démi F+P T+P (pg/rnl) dique 1 + 10 1 +e 20 0,4 3 0,8 25 + 3 1 2 i 1,& 56 8 + 28 10 + 1 26 + 2 8 + 1 3,12 8 + 36 24 + 1-1 9 + 20 19 + 9 6125 3 + 44 5 + 35 7-i 37 8 + 28 12,5 1 + 47 8 + 40 10 + 44 17 + 36 3 + 48 92 7 4,948 4)5 1 + 54 100 2 + 53100 1 + 51 3 1 800 2 37,54 11,32 4,480 7,00 C.M I attendue 12 >% 08 10,33 synergie 2,52 14 TABLEAU 17 Activité antibactériennie des associations Triméthoprlne acide pipémidique (dans les rap, portes 1 + 10, 1 + 20) vis â-vis de 48 souches de Pseudomonas aerugïmosa à p H 5,8 Acide C.M I Trimethoprim ipmdq T+P f T? (ig/mî) 1 + 10 2 0,4 3 0,8 16 + 3 1 1,56 17 19 3 3,12 1 36 4-i 1 8 3 4 6,25 3 + 37 27 15 28-i-i 25 A 4 12,5 2 40 5 + 32 4 39 12:429 4 + 42 95,$ 8 6 31 896 2 + 43 934-u 4193,7 4 3 3 2 I x 12,24 20,72 12, 49 c.it I attendue 19,50 20,IM synergie 1 " 55 lem TABLEAU 18 Effet du prolongement du temps d'incubation à 72 h à 37 C sur l'activité antibactérienne de quelques associations du Triméthoprime avec l'acide pipémidique (dans les rapports 1 + 10, 1 + 20) vis-à-vis de 55 souches du genre Pseudomonas - aeruginosa à p H 7,2. Acide C.M I Trinethoprim ipmidique T+P T+P (Yg/ml) 1 + 10 1 + 20 0,4 1 0,8 2 + 1 1 1 " 56 1 + 3 2 + 1 3,12 11 + 4 22 + 3 25 6 6)25 17 + 15 7 + 25 10 + 25 25 + 6 12)5 2 + 32 5 + 32 10 + 35 17 + 31 8 + 34 6 + 37 7 + 45 4 + 48 3 + 42 5 + 43 1 + 52 1 + 52 4 + 45 2 + 48 2 + 53 2 + 53 3 + 49 5 + 50 *800 3 x 71925 32,34 12,55 13,#41 C.M I attendue 34,01 33} 20 Synergie 2,71 2 e 48 TABLEAU 19 Influence du sérum sur l'activité de l'association Trimé- thoprime-acide pipémidique dans le rapport 1:10 vis-à-vis des bactéries gram-positives à p H 5,8 et 7,2. Lecture après 18 h d'incubation à 37 C. C.M I p H 7,2 p H 5,8 (i Jg/ml) XT+P T+P+ serum T+P T+P+sérum 0,78 15 3 1,56 8 11 + 3 3,12 4 + 8 1 + 14 9 6,25 14-12 5 + 9 12,5 13 + 15 3 + 26 2 + 15 12 + 14 1 + 28 3 + 17 9 + 20 3 + 26 x 6,87 5,17 19,74 12,39 TABLEAU 20 Influence du sérum sur l'activité de l'association Trimé- thoprime-acide pipémidique dans le rapport 1:10 vis-à-vis des bactéries gram-négatives à p H 5,8 et 7,2. Lecture effectuée après 18 h d'incubation à 37 QC. C.M I p H 7 2 p H 5 8 (g/ml), , __ T+P T+P+ sérum T+P T+P+sérum _, 0,39 1 0,78 28 19 + 1 15 1,56 6 + 20 28 11 + 15 3,12 1 + 28 6825 2 + 28 1 + 26 12,5 1 + 30 4 + 27 1 + 26 1 + 29 4 + 27 1 + 30 x 1,51 2 j 61 3,93 4,56 TABLE Au 21 Influence du sérum sur l'activité de l'association Trimé- thoprime-acide pipérnidique dans le rapport 1:20 vis-à-vis des bactéries gram-positives à p Hi 5,8 à 7,2. Lecture effectuée après 10 h d'incubation à 3700. C.N 1 p H 2 {pli 5 8 (yg/m 1) T+P T+P -s&éX Jfr T+P T+Pser L Er 0,* 39 4 0,78 7 + 4 5 1,56 3 + 11 3 8 + 5 4 + 1 3,12 8 + 14 9 + 3 2 + 13 3 + 5 6,25 1 + 22 30 + 12 1 + 15 5 + 8 12,5 6 + 23 7 + 22 1 + 16 12 + 13 6 + 17 4 + 25 6 + 23 x 4,07 6,30 16,94 10,26 TABLEAU 22 Influence du sérum sur l'activité de l'association Trimé- thoprime-acide pipémidique dans le rapport 1:20 vis-à-vis des bactéries gram-négatives à p H 5,8 et 7,2. Lecture effectuée après 18 h d'incubation à 370 C. C M Ip H 7 2 p H 5 8 (g/ml) _l ygml T+P T+P- Serum T+P T+P+sé$ 0 039 16 3 0 > 78 12 + 16 17 + 3 14 1,56 2 + 28 6 + 20 3 9 + 14 3,12 1 + 30 25 + 3 3 + 23 6,25 1 + 28 12,5 5 + 26 1 + 29 2 + 26 1 + 30 3 + 28 x 0,70 2,78 4,08 4,33 TABLEAU 23 Concentrations sériques (de l'association distribuée) exprimées en tg/ml, après administration orale unique de 800 mg d'acide pipémidique + 80 mg de Triméthoprime Germes expérimentaux: Salmonella Typhi 3 Inoculum cellules/ml. / HEURES APRES ADMINISTRATION VOLONTAI 6 1 h 2 h 4 h 6 h 8 h FES D.F 1,56 6,25 6,25 3,12 0,78 B.R 3,12 6,25 6,25 1,56 0,78 C.R 1,56 3,12 6,25 6 X 25 3,12 P.A 0,78 3,12 6,25 3,12 1,56 S.V 0,78 1,56 3,12 3,12 0,78 V.P 3,12 6,25 6,25 3,12 0,78 P.C 3,12 6,25 6,25 6,25 1,56 F.B 3,12 3,12 6,25 3,12 1,56 G.R 0,78 1,56 3,12 3,12 3,12 M.C 1,56 3,12 6,25 6 j 25 1,56 1,95 4,06 5,62 3,90 1,56 TABLEAU 24 Concentrations urinaires (de l'association distribuée) exprimées en ug/ml, après administration orale unique de 800 mg d'acide pipémidique + 80 mg de Triméthoprime. HEURES AFRES ADMINISTIATION VOLONTAI 2 h 3 h 4 h 6 h 8 h 12 h 24 h D.F 400 480 600 800 400 290 250 B.R 560 800 900 1100 1100 600 250 C.R 600 800 1600 800 550 500 450 P.A 800 1600 1500 800 950 360 320 S.V 550 920 900 920 800 500 300 V.P 400 480 600 7 a O 740 600 350 P.C 900 1200 1350 1600 600 500 280 F.B 600 1400 1600 800 780 640 270 G.R 1100 1000 600 440 300 300 220 M.C 240 280 350 420 400 140 120 x 615 896 1000 842 662 443 281 252 1858 TABLEAU 25 Concentrations urinaires (de l'association distribuée) exprimées en ig/ml, après administration orale unique de 800 mg d'acide pipémidique + 40 mg de Triméthoprime. I HEURES APRES ADMINISTRATION V&ONTAI 2 h 3 h 4 h 6 h 8 h 12 h 24 h D.F 400 800 600 800 400 350 175 B.R 800 1500 1050 950 900 550 325 C.R 420 800 520 500 280 200 220 P.A 1100 1050 600 520 370 320 215 S.V 550 850 900 1100 1200 1040 700 V.P 400 720 600 1250 740 550 200 P.C 1600 1600 1100 1050 550 300 280 F.B 2000 1000 700 350 320 300 250 G.R 1200 1400 1300 600 400 320 170 M.C 280 400 620 200 180 160 140 x 875 1012 799 732 534 409 267 5 TABLEAU 26 Concentrations sériques (de l'association distribuée) exprimées en ug/ml, après administration orale unique de 800 mg d'acide pipémidique + 40 mg de Triméthoprime. Germes expérimentaux: Salmonella typhi 3 Inoculum 105 cellules/ml. HEURES APRES ADMINISTRATION W 50 NTAI 1 h 2 h 4 h 6 h 8 h D.F 2,50 5,20 3,90 2,50 0,90 B.R 5,20 7,00 6,50 3,90 1,60 C.R 2,50 5,20 7,80 1,80 0,90 P.A 2,50 3,90 5,20 2,50 0,90 S.V 2,50 7,80 5,20 1,80 0,90 V.P 1,80 7,80 5,20 5,20 1,80 P.C 3,90 5,20 5,20 1,80 0,90 F.B 0,90 2,50 7,80 3,90 2,50 G.R 0,90 3,90 7,80 5,20 1,80 M.C 3,90 5,20 6,50 2,50 1,80 2,66 5,45 6,10 3,10 1,42 Bien que l'activité de l'association ait été expérimentée avec référence particulière aux bactéries qui provoquent des infections urologiques, il est évident que l'association selon l'invention peut être utilisée dans des buts thérapeutiques dans toutes les infections dues à des bactéries gram-positives et gram-négatives. Il est clair que l'association selon l'invention peut être administrée sous toutes les formes pharmaceuti- quement acceptables. REVENDICATIONS 1 Association antibactérienne caractérisée en ce qu' elle contient de l'acide pipémidique de formule (II) en combinaison avec la 5-l( 3,4,5-triméthoxyphényl)-méthyll- 2,4-pyrimidine-diamine, de formule (I), dont le nom qéné- rique est Triméthoprime, avec une synergie élevée de l'activité antibactérienne des deux composants. 2 Association selon la revendication 1 caractérisée en ce que le Triméthoprime est présent en une quantité inférieure à celle de l'acide pipémidique. 3 Association selon les revendications précédentes, carac- térisée en ce qu'on prévoit un rapport pondéral entre l'acide pipémidique et le Triméthoprime compris entre 5:1 et 20:1 et de préférence entre 10:1 et 20:1.