Brevet FR2523126A1 — publié le 19830916

La somatostatine est ini tétradécapeptide de structure et qui inhibe les sécrétions endogènes d'hormones de croissance (GH), d1 insuline et de glucagon. Les abrévia tions utilisécs soeit celles recommandécs pour les aminoacides par la commission de nomenclature biochimique de l'IUP l'@UPAC (Journal of Biological Chemistry, 1972, 247, p. 977) Ce même peptide réduit également de façon notablc les taux de sécrétions digestives La demi-vie biologique de la somatostatine est très courte (4 minutes environ) car elle est très vite hydrolysée in vivo par des enzymes protéolytiques ou bien dégradés par des aminopeptidases et des carboxypeptidases. Dc nombreux analogues ont été décrits par différents auteurs eii vue c'obtenir soit des dissociations d'activité biologique soit une demi-vie biologique prolongée. Les produits de la présente invention ré- pondciît î la formule géiérale dans laquelle , R désigne un 11, un acide aminé, un di peptide comme Ala-Gly par exemple . X1 = (L) Trp ou (D) Trp . X2 = (L) Thr, (D) Phe ou bien liaison simple ; . X3 = (L) Ser ou liaison simple ; . CYS = (L)-Cys ou (D)-Cys . Aza A représente une structure acide , carbone assymétrique de ltalanine a été remplacé par un atome d'azote. - Aza A - = D'une façon générale les produits se pre- sentent sous la forme de sels d'addition par des acides pharmaceutiquement acceptables comme les acétates, chlorhydrates... Ces produits se caractérisent en particulier - Par une meilleure résistance à la protéolyse en particulier grâce à la présence d'un acide &alpha;-aminé exotique (1'Aza A) que les enzymes protéolytiques ne savent pas reconnaître et éventuellement par l'introduction d'acides o Les produits préférés de la présente invention sont représentés, par les formules suivantes CM 14.463 CM 14.467 CM 14.469 CM 14.474 Ces composés sont toujours utilisés sous forme d'un sel d'addition comme le chlorhydrate, le sulfate, phosphate, acétate, maléate, citrate, benzoate, succinate, malate, ascorbate... Ces scls pourront être obtenus en dissolvant le composé dans l'eau en présence de deux équivalents de l'acide et en soumettant ensuite l'ensemble à une lyophilisation. Le sel d'addition préféré reste toutefois 11 acétate. Principes généraux de la synthèse : @@s sont synthétisés selon un procédé mixte entre la synthèse en phase solide et la synthèse en solution. Les opérations de couplage entre 2 aminoacides sont effectuées en phase liquide, c'est-â-dire en solution dans tul solvant polaire conllne le diméthylformamide (DMF). Le produit de la réaction est isolé par addition d'un tiers solvant au milieu réactionnel qui l'insolubilise et permet ainsi de l'isoler par filtration. Le produit brut ainsi obtenu est ensuite soumis à des opérations de lavages en phase solide à l'aide de solvants appropriés dans lesquels il est insoluble. On utilise a cet effeL un groupemellt protecteur de la fonction acide carboxylique sur la cystéine de départ (cystéine 14) qui insolubilise les produits dans les solvants usuels de lavage (eau, alcools, éthers, acétate d'éthyle....). tout en maintenant une solubilité suffisante dans les solvants polaires comme le diméthylformamide permettant ainsi d'effectuer les opérations de couplage en phase liquide. Le groupement protecteur qui permet d'appliquer cette stratégie est le 2-[4-(phénylazo)-benzyl sulfonyl-] -éthyl ester (OPSE) stable en milieu acide et clivablc en milieu basique selon le processus de sséli- mination. L'application de cette technologie à la synthèse de la somatostatine a été décrite dans Biorganic Chemistry 8, p. 429-442, (1979). Les sérine et thréonine intervenant dans ces synthèses ont été utilisées sans protection des fonctions hydroxyléesdans leur chaine latérale. L'amine en # de la ciîaine latérale de la lysinc est protégée pendant les phases d'élongation du peptide par le groupement 2-(méthylsulfonyl)-éthoxycarbon y1 (Mse) stable en milieu acide et clivable en milieu basique. La fonction thiol de la cystéine porte le groupement protecteur acétamide méthyl (Acm) qui est stable en milieu basique ou acide. La déprotection est dans ce cas assurée par traitement à l'aidc d'un sel de métal lourd comme l'argent ou le mercure. Pendallt les phases d'élongation la protection temporaire des amines en position &alpha; du carboxyl est assurée par le groupement protecteur tertiobutyl oxycarbonyl amino (Boc). Ainsi chaque opération de couplage sera suivie d'une opération de déprotection sélective du Boc. Cette déprotection est assurée par un traitement à 11 acide trifluoracétique et est effectuée aussi en solution. Ici également le produit déprotégé sera isolé du milicu réactionnel par addition d'un tiers solvant qui l'insolubilise. Toutefois, afin de minimiser les quantités de solvant utilisées, il sera souhaitable de concentrer au préalable le milieu réactionnel. Après les phases d'élongation le peptide protégé obtenu sera libéré des protections des chaines latérales des lysines et de-la fonction carboxylique terminale par un traitement basique utilisant la soude ou la baryte dans un solvant approprié à base de diméthylformamide. Le peptide ainsi obtenu possède toujours les thiols des cystéines protégées par le groupement acétamidométhyl. Il pourra à ce niveau, selon son degré de pureté, être utilisé tel que pour l'étape finale d'oxydation ou bien soumis à une purification poussée par la technique de la distribution à contre courant ou bien par cliromatographie de partition, Enfin, la cyclisation finale du produit par création d'un pont disulfure entre les deux cystéines sera assurée par les opérations suivantes - déprotection des groupements acétamido méthyl des deux cystéines par un sel de métal lourd (nitrate d ' argent par exemple);; - élimination du métal lourd par un traite meut a 1 'hydrogène sulfuré - dégazage et diltition à l'abri de 11 air de la solution ainsi obtenue - addition de cette solution progressive Illcnt et a pll contrôlé a un milieu d'oxy- dation constitué par un tampon acétate d'ammonium contenallt l'agellt d'oxydation qui est le ferricyanure de potassium. Cette opération sera toujours effectuée dans des conditions de forte dilution (2 litres par S de produit traité) de façon a minimiser les risques de polymérisation, conséquence d'une oxydation intermolé culaire. Le produit final est ensuite débarrassé des ions complexes provenant de la phase d'oxydation par passage sur résine convenable puis dessalé et concentré par fixation suivie d'élution par lut acide acétique sur une autre résine. Le produit brut d'évaporation devra être soumis a une chromatographie de perméation sur gel dans l'acide acétique dilué afin de le débarrasser des polymères qui se sont formés au cours de la phase d'oxydation. Si après cette opération de perméation sur gel la pureté du produit s@ @ avère itisuffisante il pourra être soumis à d'autres techniques de purification comme la chromatographie de partition ou le passage sur résines écitangeuses d' ions.. En ce qui concerne 11 introduction de l'azaamino acide, on sytithétise au préalable un fragment peptidique possédant cette structure. Ainsi par exemple, pour la synthèse de CM 14.467 l'Aza A sera introduit en préparant le tri peptide que I'oii couple # sur le fragment (D) Un tel tripeptide est lui-même obtenu en couplant sur le dipeptide Aza A-Phe-OCH3, produit connu de la littérature (J. Prackt. Chemine, 1974, 71, 74G). Les exemples suivants à caractère non limitatif illustrent ltétat des synthèses qui ont conduit à la préparation des composés de la présente invention. Symboles et abréviations utilisés. Boc DMr : diméthylformamide TFA : acide trifluoracétique ou trifluoracétate THF : tétrahydrofuranne CC : chromatographie sur couches minces de silice Merck 60F 254 I-IPLC : chromatographie liquide haute performance BEW1 : éluant de chromatographie : butanol (72), CH3CO2H (7) ot U20 (21) BPEW1: " " " : butanol (50), pyri dine (12), CH3CO2H (12), 1120 (25) EAPW1 : " " " : acétate d'éthyle (63), pyridine (21), acide formique (10), eau (6) EPAW2 : " " " " acétate d'éthyle (70), pyridine (16), acide formique (10), eau (6) L'analyse en acides aminés des différents produits intermédiaires cités dans les exemples suivants a été réalisée. EXEMPLE 1 : CM 14.463 Schéma réactionnel Préparation de (A). Le produit H-Aza A-Phe-OMe est décrit dans la littérature (J. Prakt. Chemflie, 1974, 316, 746). On en dissout 16,65 g dans 666 ml de DMF et on ajoute à la solution 21,47 g de 16,35 g de dicyclohexyl-carbodiimide et 10,71 g dlOIIBT. On ajuste à pH = 7 par addition de N étiiylmorpholine puis on laisse sous agitation à température ambiante pendant 5 heures. On filtre le précipité de dicyclohexylurée formé, on évapore le filtrat à sec puis On reprend le résidu par un mélange d'acétate d'éthyle et eau saturée de chlorure de sodium, on acidifie à pli 4 par addition d'acide acétique. Après séparation, la phase organique est lavée successivement par une solution tampon de sulfate de potassium et sulfate acide de potassium, une solution saturée de chlorure de sodium, une solution de carbonate acide de sodium et à nouveau tule solution saturée de chlorure de sodium. Après séchage de la solution organique sur sulfate de ma@nésium on évapore à sec. Il se forme une mousse s@@ide qui donne un solide blanc après tritura tison dans J 1 ' éther. Poids : 31,07 g ; rendement 89,2%; CCM / Mélange éluant : butanol 4, acide acétique 1, eau 1, R@ : 0,8. 10 g de 1 sont dissous dans 3,75 nil de dioxane, la solution est refroidie à mie température comprise entre 100C ct 15 C. Oit ajoute 108 ml d'une solution de baryte 0,35 N puis on agite a température ambiante pendant 20 minutes. On acidifie à pH 6 6 par barbottage de gaz carbonique. On évapore à sec, le résidu solide est mis en suspension dans de l'eau. Après centrifugation, le surnageant est extrait 2 fois par l'acétate d'éthyle puis la phase aqueuse est évaporée à sec sous vide. La mousse obtenue est triturée dans l'acétate d'éthyle puis dans l'éther, on obtieiit après essorage 9,63 g d'un solide blanc, soit un rendement de 99% CCM / mélange éluant isobutanol 72, acétone 27, eau 21 RF : 0,59. Préparation de (B) On dissout 700 g de (J. Amer. Chem., 1972, 94, 5456) dans 6 1 de pyridine anhydre, puis on dissout 608 g de Pse OH et on refroidit la solution à OOC. Dans 800 ml de pyridine anhydre on dissout 500 g de dicyclohexylearbodiimide. Ce mélange est ajouté lentement (en 7 heures) à la solution précédente en maintenant la température entre 0 C et 5 C sous agitation. Après une nuit sous agitation, entre 0 C et 5 C, on essore le dicyclohexylurée formé. On évapere le solvant. Le résidu huileux formé est versé dans 15 1 d'un mélange eau ct glace sous agitation. Le produit cristal.lisc, il est lavé plusieurs fois par une solution saturée de carbonate acide de sodium puis par de l'eau et séché. Point de fusion 75-77 C ; CCM/BEW1 Rf : 0.69 [&alpha;]25 D= - 16 (c = 1, acide acétique). sont ajoutés rapidement à une solution dc 1 ml d'acide chlorhydrique concentré dans 100 ml d'acide formique à température ambiante. Après 10 minutes le solvant est évaporé sous vide. Le résidu huileux repris dans 15 ml de méthanol est versé dans 150ml d'éther anhydre agité à 0 C. Le produit formé est filtré, rincé à l'éther et séché sous vide en présence d'anhydride phosphorique. Point de fusion 162-164 C ; CCM/BEW1 Rf : 0,36. 5,15 g de 4 soiit dissous dans 60 ml de DMF pur anhydre auxquels on ajoute 1,05 g de N éthylmorpholine. Après refroidissement à -10 C, on ajoute 2,05 g de N butoxycarbonyl serine puis goutte à goutte 2,47 g de dicyclohexylcarbodiimide et 2,70 g d'O@BT dissous dans 20 ml de DMF. Après une heure à -100 C, on laisse revenir lentement à température ambiante. Au bout de 6 heures, le DMF est évaporé sous vide puis le résidu est repris par 200 ml d'acétate d'éthyle, on filtre le dicyclohexylurée forme puis on lave le solide par des solutions aqueuses de sulfate acide de potassium, sulfate de potassium, eau, carbonate acide de sodium à 5%, eau. Après séchage sur sulfate acide de magnésium, le solvant est conceittré a 50 ml. Après une nuit à 0 C, le produit précipite, i est filtré, rincé par l'acétate d'éthyle, 1' éther anhydre puis séché sous vide. On obtient 5,3 g, soit un rendement de 80%. Point de fusion : 111-113 CCM/BEW1 Rf : 0,63 ; [&alpha;]25 D = - 25 5 (c = 1, alcool méthylique). 38,5 g de 5 sont ajoutés rapidement à 300 ml de TFA préalablement refroidis à 0 C. Après quelques minutes, I t acide est évaporé sous vide, le résidu est repris par de 1' éther anhydre, puis filtré et rincé plu- sieurs fois à l'éther anhydre et séché. On obtient 38,5 g de G, soit titi rendement de 97% ; CCM/BPEW1 Rf : 0,60. 6,80 g de 6 sont dissous dans 100 ml de DMF pur. Tout en refroidissant au bain de glace, on ajoute successivement 2,52 ml de N éthylmorpholine et 3,79g de Boc-Thr-ONsu. Après 2 heures à température ambiante, on évapore le DMF à 30 C, le produit se solidifie en présence de glace, il est filtré sous vide puis lavé a l'eau, par une solution de sulfate acide de potassium et sulfate de potassium à pli = 2, à l'eau, par une solution de carbonate acide de sodium a 5% et 2 fois à l'eau. Après séchage à l'air, puis sur anhydride phosphorique, on obtient 7,5 g de 7, soit un rendement de 98%. Point de fusion : 136 - 138 C ; CCM/BEW1 Rf : 0,69. est obtenu a'- partir de 7 Oit opérant selon la méthode décrite pour la préparation de 6. CCM/EPAW1 Rf : 0,52. 7,81 g de 8 sont dissous dans 90 ml de DMF anhydre et traités t 0 C par 2,52 ml dc N éthylmorpholine puis 4,64 g de Boc-Phe-ONp. Après une nuit au réfrigérateur, le DMF est évaporé sous vide à 30 C, le produit obtenu est lavé à liteau, une solution aqueuse de sulfate de potassium et sulfate acide de potassium, de l'eau, une solution aqueuse de carbonate acide de sodium et de lteåu. Après séchage, on lave à nouveau par l'isopropanol et l'éther. On obtient ainsi 8,22 , soit iui rendement de 90%. Point de fusion : 153 - 155 C ; CCM/BEW1 Rf : 0,75 [&alpha;]25 D = - 16 (c = 1, acide acétique). à partir de 9 en suivant le mode opératoire décrit pour la préparation de 6. CCM/BPEW1 Rf : 0,65; [&alpha;]25 D = - 18 5 (c = 1, méthanol). tenu à partir de 10 par addition de Boc-Thr-ONsu selon le mode opératoire décrit pour la préparation de 7. CCM/BEW1 Rf : O,65 ; Point de fusion: 169 1720C. 2 g de 12 sont obtenus à partir de 2,03 g de 11 en suivant le mode opératoire décrit pour la préparation de 6. CCM/EPAW1 Rf : 0,50. 10,29 g de 12 sont dissous dans 100 mi de DMF anhydro et traités à 0 C par 2,52 ml de N éthylmorpholine et 6,2 9 de Après 15 à 20 heures à température ambiante, le solvant est évaporé sous vide. On agite eit présence de glace, le précipité formé est filtré, puis lavé # l'eau, par une solution aqueuse de sulfate acide de potassium et sulfate de potassium, à l'eau, 2 fois par 100 ml d'isopropanol et enfin abondamment à l'éther puis à l'acétone. CCM/BEW1 Rf : 0,57 ; [&alpha;]25 D = - 19,5 (c = I acide acétique). est obtenu à partir de 13 en suivant le mode opératoire décrit pour la préparation de 6. CCM/EPAW1 Rf : 0,50. 13,075 g de 14 sont mis en solution dans 130 ml de DMF anhydre et traités nu bain de glace par 2,5 ml de N éthyl-morpholine, 5,11 g de Boc-Trp-ONp et 2,70g d'hydroxybenzotriazole. Après une heure environ à température ambiante la réaction est complète, le solvant évaporé, le résidu repris i la glace se solidifie peu i peu; il est broyé finement, filtré, lavé abondamment à l'eau puis après un léger séchage par 2 fois 120 mi d' isopropanol tiède puis par des fractions de 100 ml d'acétone tiède jusqu'à pureté satisfaisante en CCN. On obtient ainsi 12,6 g du produit présentant les caractéristiques suivantes : CCM/EPAW2 Rf : 0,50 ; [&alpha;]25 D= - 17 ,5 (c = 1, acide acétique). Ou prépare au bain de glace le mélange suivant : 130 ml do TFA, 13 ml d'éthane dithiol et 6 ml d'unisole. On lui ajoute rapidement sous agitation 13,3 g de 3 et poursuit l'agitation pendant 20 minutes à tempé- rature ambiante. Après évaporation sous vide le résidu est repris dans 50 ml d'isopropanol qui est ensuite évaporé sous vide, repris une seconde fois par le même solvant duquel il est filtré après trituration et enfin lavé par le mélange isopropanol éther puis par 1'éther seul et séché. On obtient ainsi 13,4 S du sel de (B). CCM/BEW1 Rf : 0,36. 13,4 g de 16 sont mis en solution dans 130 ml de DMF et traité successivement dans un bain de glace par 2,3 ml de N éthylmorpholine, 2,43 g dIOfIBT et 4,25 g de Boc-Phe-ONp. Après 1 heure à température ambiante, le DMF est évaporé sous vide et le résidu agité en présence de glace se solidifie progressivement, il est séché, lavé à l'eau, séché puis lavé 2 fois par l'isopropanol et 3 fois par l'acétone tiède. On obtient 13,6 g de 17. CCM/BPEW1 Rf : 0,69; CCM/BEW1 Rf : 0,67 ; [&alpha;]25 D= - 90 (c = 1, DMF). 18) . (B) 13,4 g de 17 sont ajoutés à un mélange préalablement refroidi à 50C de 130 ml de TFA, 13 ml d'éthanedithiol et 6,5 ml d'anisole. Après 15 minutes à température ambiante, oii évapore sous vide on reprend le produit par du méthanol puis de l'isopropanol suivi de filtration puis de 2 lavages par 5 ml d'isopropanol tiède. Après plusieurs lavages à l'éther anhydre, le protluit est séché. On obtient 13, 1 g, rendemen-t 97% ; CCM/BEW1 Rf : 0,42. Préparation de (C). 3, Il g de 2 sont mis en solution dans 125ml de DMF refroidis à 0 C. On ajoute 1,71 g de dicyclohexyl carbodiimide, 2,73 g d'O@BT et 8,5 g de (B). Le pH est ajusté à 7,2 par addition de N éthylmorpholine. Après retour à température ambiante, on laisse sous agitation une nui.t puis oit essore le précipité formé et on ajoute 3 volumes d'éther. Une huile se dépose que l'on reprend par de l'éther, le solide formé est essoré puis lavé par de l'eau, du carbonate acide de sodium en solution saturée, de l'eau de l'isopropanol chaud puis de l'éther. On obtient ainsi 7,82 g d'un solide jaune. Rendement 75,7% ; CCM/mélange éluant cité pour 2 Rf : 0,75. 7,7 g de 19 sont mis en suspension dans le mélange suivant : 38,5 ml de chlorure de méthylène, 4,62 ml d' éthanedithiol, 2,15 ml d'anisole. On ajoute 46,2 mi de TFA et laisse 30 minutes à température ambiante sous agitation. On évapore sous vide puis on verse l'huile résiduelle dans l'isopropanol, le précipité formé est essoré puis lavé à l'éther. Le solide jaune obtenu pèse 5,87 g, soit un rendement de 75,7% ; CCM/BEW1 Rf : 0,4. Préparation de 21) . 5,8 S de 20 sont dissous dans 150 ml de DMF puis neutralisés par 0,33 ml de N éthylmorpholine. On ajoute 0,75 g d'OHBT et 1,4 g de Boc-Ala-Gly-OTcp. On ajuste à pH - 7,2 par addition de N éthylmorpholine puis on agite à température ambiante pendant @ heures. Le DMF est évaporé sous vide puis on ajoute de l'eau et de la glace au résidu. Le solide obtenu est essoré1 dissous dans l'acétone et précipité par addition d'éther. Après un nouvel essorage, on lave à l'éther, à l'isopropanol et à l'éther puis on sèche. Poids obtenu : 5,20 g ; rendement 85,86@ ; CCM/BEW1 Rf : 0,67. Préparation de (D). g de 21 sont mis en suspension dans un mélange comprenant 21 nil de chlorure de méthylène, 3,24 ml d'éthanedithiol et 1,51 ml d'anisole. On ajoute 32,4 ml de TFA puis on laisse 30 minutes à température ambiante sous agitation. Par évaporation sous vide à 300 il se forme une huile épaisse que l'on verse sur 135 ml d'isopropanol agité. Le précipité formé est essoré puis lavé à l'éther et séché. On obtient 4,65 g, soit un rendement de 85,63% CCM/BEW1 Rf : 0,3. On opère sous atmosphère d'azote; 4,71 g de 22 sont dissous dans 150 ml de DMF contenant 10% de méthanol. La solution est refroidie à 50C, on y ajoute petit à petit 27,73 ml d'une solution de baryte 0,45N, la température ne dépassant pas 120 C. Après 20 minutes à température ambiante, on acidifie à pH compris entre 7,5 et 8 par barbottage de gaz carbonique. On ajoute ensuite 117 ml d'eau et on poursuit le barbottage de gaz carbonique jusqu'à pli = G,5. On centrifuge, on lave les culots à l'eau. Les surnageants sont évaporés à sec, repris par l'acétate d'éthyle, essorés, lavés à l'éther et séchés. Oit obtient 4 g de solide jaune très clair. CCM/BPEW1 Rf : 0,4 24) . (D) On travaille sous atmosphère d'azote et à l'abri de la lumière, tous les solvants sont dégazés. 4 g de 23 sont dissous dans titi mélange d'acide acétique et eau à 50% , oit ajoute 20 ml d'une solution normale de nitrate d'argent, puis on laisse une nuit à température ambiante. On évapore à sec sous viole, le résidu formé est repris par de l'éther, éssoré, trituré dans 500 ml d'eau puis centrifugé. Le solide de décantation est repris dans un mélange de 500 ml d'eau et 500 mi de DMF. On fait barbotter un courant de sulfure d'hydrogène jusqu fin de noircissement de la solution, on centrifuge et on lave les culots. Le surnageant est dégazé sous vide et dilué par 5 litres d'une solution d'acide acétique 0,2 N. On prépare une solution de 1,86 g de ferricyanure de potassium, 7,4 g d'acétate d'ammonium, 2X96 g d'eau dégazée. La solution précédemment obtcnue est ajoutée à celle-ci eit 16 heures sous agitation, le pH est maintenu à 6,88 par addition constante d'ammoniaque 2 N. Après cette opération les conditions citées au départ sont supprimées. On élimine le ferricyanure de potassium par fixation sur résine Biorad AG 3 à pli 5. Le produit est ensuite fixé sur résine Biorex 70, on lave par l'acide acétique à 2,5% puis on élue par l'acide acétique à 50%. La solution acétique est évaporée à sec puis reprise par l'éther, essorée et séchée. Oit purifie par passage sur colonne G 25 de 50 mm de diamètre et 2 m de hauteur, l'éluant étant l'acide acétique à 5%. On obtient 770 mg de produit. CCM/BPEW1 Rf : 0,48 [&alpha;]25 D= - 11,8 (c = 1, acide acétique). EXEMPLE 2 : CM 14.467. Schéma réactionnel. CM 14.467 = (D) Le produit (A) est identique à celui décrit dans l'exemple 1. Préparation de ( B) A 50 g de TFA, H-Cys-OPse en solution dans 500 ml de DMF ; on ajoute successivement 36,7 g de Boc-Phe-ONp et 15 g d'OHBT. Oit ajuste à pH = 7 par addition de N étliyl- morpholine puis on laisse à température ambiante pendant 4 heures sous agitation. On concentre le volume de moitié à 300C sous vide puis on précipite par addition de 5 volumes d'eau glacée. Après essorage, on lave successivement par une solution tampon de sulfate acide de potassium, de lieau, une solution saturée de carbonate acide de sodium, de l'eau puis du pentane acidifié à 5% par de l'acide acétique. On obtient 60,5 g de 1 ; rendement 99,2%; CCM/BEW1 Rf : 0,9. 60,5 g de i sont dissous dans 302 Inl de TFX, après agitation à température ambiante pendant 15 minutes, on évapore à sec sous vide. Le résidu est repris par du pen talle puis essoré, lavé à l'éther et séché. On obticnt 55 g d'une poudre jaunie, soit un rendement de 89%. CCM/BEW1 Rf : 0,5. 33 g de 2 sont dissous dans 330 ml cie DMF. On ajoute S la solution 16,6 g de Boc-Thr-ONsu et 8,05 g de OHBT, le pH est ajusté à 7 par addition de N éthylmorpholine. On agite S température ambiante pendant 4 heures puis oit évapore à sec sous vide à 30 C. Le résidu est repris par de l'eau glacée, il se forme un précipité qui est essore puis lavé par de l'eau, une solution saturée de carbonate acide de sodium, une solution tampon de sulfate acide de potassium ct sulfate de potassium, de l'eau puis du pentane acidifié par de l'acide acétique à 150. Après séchage, on obtient 33,24 g d'une poudre jaune, soit un rendement de 90,13 %; CCM/mélange éluant : trichlorure de méthyle 90 et alcool méthylique 10 Rf : 0,65. est obtenu à partir de 3 par dissolution dans TFA selon le procédé décrit pour obtenir 2. CCM/BEW1 Rf : 0,5. est obtenu à partir de 4 par addition de on suivant le mode opératoire décrit pour la préparation de 3. CCM/BEW1 Rf: 0,69 est obtenu à partir de 5 selon le procédé décrit pour obtenir 2. CCM/BEW1 Rf : à partir de 6 par addition de Boc-(D) Trp-ONp selon le mode opératoire décrit pour la préparation de 3. CCM/BEW1 Rf : o,66. 5 g de 7 sont dissous dans un mélange de 20 ml de TFA, 2 ml d'anisole et 2 ml d'éthane dithiol. Après agitation à température ambiante pendant 20 minutes, oit évapore S sec, sous vide à 30 C. L'huile résiduelle est agitée avec 120 ml d'isopropanol il se forme un précipité qui est lavé à l'éther puis agité l heure dans 200 ml d'éther. On essore à nouveau, on sèche pour obtenir 3;79 g de poudre jaune. CCM/BEW1 Rf : 0,4. est obtenu à partir de 8 par addition de Boc-Phe-ONp selon le procédé décrit pour la préparation de 3. On obtient un s-olide jaune. CCM/mélange éluant : trichlorure de méthyle 90, alcool méthylique 20, acide acétique 3 Rf : 0,9. est obtenu à partir de 9 selon la méthode décrite pour la préparation de 2. CCM/BEW1 Rf : o,66. Préparation de (C). li) . 1,203 g de (A) sont dissous dans 100 ml de DMF, la solution est refroidie dans la glace puis on ajoute 0,67 g de dicyclohexylcarbodiimide, 1,076 g d'hydroxybenzotriazole et 2,74-g de (B). Après avoir sorti la solution de la glace on ajuste à pIt 7,2 par addition de N éthylmorpholine puis on laisse sous agitation une nuit à température ambiante. On filtre le dicyclohexylurée qui a précipité. On concentre la solution à mi-volume sous vide à 30 C puis on préci pite par addition de 3 volumes d'éther. Le surnageant est décanté puis repris par de l'éther. Le solide jaune formé os est lavé par de l'eau, une solution saturée cie carbonate acide de sodium, à nouveau de l'eau puis 250 ml d'isopropanol chaud.Après refroidissement, on essore puis on lave le solide S li l'éther, on obtient 1,9 g de solide jaune. CCM/BEW1 Rf : 0,8. Préparation e (D). 1,85 g de il sont mis en suspension dans 9,25 ml de chlorure de méthylène, 1,11 ml d'éthanedithiol et 0,57ml d1 anisole. On ajoute 11, I mi de TFA puis on agite à température ambiante pendant 30 minutes. On évapore le TFA sous vide puis on verse l'huile résiduelle dans 50 ml d'isopropanol et éther en quantités égales. Le solide formé est essoré, lavé à l'éther et séché. Oit obtient 1,77 g de 12, soit tut rendement de 95% ; CCM/BEW1 Rf : 0,5. 1,75 g de TFA sont dissous dans 75 ml de DMF contenant 10% de méthanol. La solution est refroidie à 5 C, on y ajoute 32 ml d'eau puis on refroidit à nouveau à 50C. On ajoute 18 ml de-solution de baryte 0,35 N en maintenant la température entre 10 C et 120 C. On laisse revenir à température ambiante puis on agite pendant 20 minutes. Pour amener le pH à une valeur comprise entre 7,5 et 8, on fait barbotter du gaz carbonique, on ajoute 59 ml d'eau puis on poursuit le barbottage jusqu'à pH = 6,5. Après centrifugation, oit sépare les culots de carbonate de baryum, on évapore à sec les surnageants. Le résidu est repris par l'acétate d'méthyle puis essoré et lavé par l'acétate d'éthyle et l'éther. Après séchage, on obtient un solide blanc de 1,45 g ; CCM/BPEW1 Rf : 0,6. 14) . (D) Dans cette étape, on travaillera sous azote et à l'abri de la lumière. 1,44 g de 13 sont dissous dans une solution de 145 ml d'acide acétique S 50% préalablement dégazé. On ajoute 7,2 ml d'une solution normale de nitrate d'argent et on laisse reposer une nuit à l'abri de la lumière. Après évaporation à sec sous vide à 30 C, on reprend le résidu par de 1' éLîter puis par 180 ml d'cau. Le solide est essoré puis mis en suspension dans un mélange de 180ml d'eau et 180 ml de DMF préalablement dégazé. On fait passer un courant d'hydrogène sulfuré dans le milieu pendant quelques minutes jusqu'à précipitation complète du sulfure d ' argent . Oit ceittrifuge, on décante, puis on dégaze le surnageant et oit le dilue dans 1,8 litre d'acide acétique 0,2 N. A cette solution on ajoute en 16 heures la solution ayant la composition suivante : 0,67 g de ferri cyanure de potassium 2,G6 g d'acétate d'ammonium, 1,065 lite d'eau dégazée. Le pH du milieu est itaititenu à 6,9 par addition continue d'une solution d'ammoniaque diluée au huit i eme. Après la réaction, on acidifie le milieu à pli 5,5 par de 1' acide acétique concentré. Le ferricyanure de potassium est éliminé par fixatioit surrésine Biorad. Le produit formé est fixé sur résine Biorex 70, oit élue l'acétate d'ammonium par une solution d'acide acétique a 5% et le peptide par une solution d'acide acétique S 50%. La solution peptidique ainsi obtenue est évaporée à sec sous vide à 3 C, le résidu est trituré dans l'éther, essoré puis lavé à l'éther. La purification se fait par chromatographie sur gel (G 25 fine) sur une colonne de 2 m de hauteur. On élue par l'acide acétique à 50% à raison de 43 ml par heure. On receuille uile fraction contenant 210mg du peptide qui est purifié une deuxième fois sur chromatographie de partition; éluant : solution de Partridge butaitol 4, acide acétique 5, eau 1. On obtient 29 mg de peptide contenant 19,45% d'impuretés peptidiques. CCM/BEPW1 Rf : 0,62 [&alpha;]25 D= - 2 (c = 1, acide acétique). EXMEPLE 3 : CM 14.469. Schéma réactionnel. Boc-Cys-Aza A-Phe-OH (A) (A) est identique au (A) décrit dans l'exemple 1. Préparation de (B). 1) . l > réparation de Ce composé est identique au composé 14 décrit dans l'exemple 1. 6 g de 1 sont dissous dans 61 ml de DMF. On ajoute 1,16 ml de N éthylmorpholine, 2,34 g de Boc (D) Trp-ONp et .1,22 g de OHBT. Le pH est ajusté entre 6 et 7 par addition de N éthylmorpholine. Après 3 heures et demi de réaction, on évapore de moitie sous vide, puis on fait précipiter par addition de 3 volumes d'eau froide. Après essorage, on lave le solide successivement par de l'eau, une solution de sulfate acide de potassium, une solution de sulfate de potassium, de l'eau, une solution de carbonate acide de sodium et de l'eau. Après séchage, on lave à nouveau avec 75 ml d'isolé propanol, de l'éther éthylique, 50 ml d'éthanol, de l'éther éthyliques 40 mi d'acétone et à nouveau de l'éther éthylique. On obtient ainsi 4,86 g de 2, soit un rendement de 72% ; CCM/BEW, Rf : 0,68. 3,4 g de 2 soitt dissous dans une solution de 14 ml de TFA, 13 ml d'anisoleet 1,4 ml d'éthanedithiol. Après 20 minutes à température ambiante, on précipite par de l'isopropanol. On obtient 3159 g de 3 soit un rendement de 100%; CCM/BEW1 Rf : 0,48. 3,66 g de 3 sont dissous dans 50 ml de DMF, on ajoute à la solution 1,136 g de Boc-Phe-ONp, 0,516 g d'OHBT. Le pli est ajusté à 7,2 par addition de N éthylmorpholine. Après 5 heures d'agitation à température ambiante, on concentre le DMF de moitié puis on précipite par addition de 3 volumes d'eau glacée. Après essorage on lave à l'eau par une solution tampon de sulfate acide de potassium, de l'eau, une solution saturée de carbonate acide de sodium, de l'eau puis de l'éther, isopropanolf éther, éthanol, éther, acétone et éther. Après séchage on obtient une poudre jaune de 3,58 g, soit InI rendeiiient de 89,8 go ; CCM/BEW1 Rf 0,8. 5) . (B) 3,56 g de 4 sont dissous dans 18 ml de TFA, 1,8 ml d'éthanedithiol et 1,8 mi d'anisole. Après 20 minutes ri température ambiante, on concentre sous vide puis on verse l'huile résiduelle dans 100 ml d'isopropanol agité. Le précipité formé est essoré, lavé à l'éther et séché. Oit obtient 3,26 g de poudre jaune, rendement, 90,8% CCM/BEW1 Rf : 0,5. Préparation de (C). 6) . (C) 1,157 g de (A) sont dissous dans 100 ml de DMF, la solution est refroidie dans la glace puis on ajoute 0,64 g de dicyclohexylearbodiimide, 1,03 g d'OHBT et 3,2 g de (B). Après avoir sorti la solution du hain de glace, oit ajuste soit pH à 7,2 par addition de N éthylmorpholine puis on laisse une nuit à température ambiante. On filtre l'insoluble puis on ajoute au filtrat 5 volumes d'éther. Il se forme un solide jaune qui est essoré puis lavé par l'eau, une solution saturée de carbonate acide de sodium, de l'eau. On ajoute de l'isopropanol à 60% puis on laisse revenir à température ambiante. Après essorage, le solide est lavé à l'éther et séché, il pèse 2,88 g i CCM/BEW1 Rf : 0,75. Préparation de (D). 2,05 g de 6 sont mis en suspeitsion dans un mélange de 10,25 ml de chlorure de méthylène, 1,23 ml d'éthanedithiol, 0,56 ml d'anisole. On ajoute 12,3 ml de TFA, après 30 minutes d'agitation à température ambiante on concentre sous vide jusqu'à obtention d'une huile épaisse que l'on verse dans un mélange, volume pour volume, isopropanol et éther. Le précipité formé est essoré puis lavé à l'éther. On obtient 2, OS g de poudre jaune, soit un rendement de 100%. 2,5 g de 7 soit dissous dans 75 il de DMF contenant 10% de méthanol. La solution est refroidie à 5 C Oit y ajoute lentement 18 ml de baryte 0,35 N, la tempé- rature étant maintenue entre 10 C et 12 C. Après 20 minutes à température ambiante, oit fait barbotter du gaz carbonique jusqu'à pH = 7,5 ou pH = 8, o@ ajoute 59 ml d'eau puis on poursuit le barbottage jusqu'à pH = 6,5. Après centrifugation les culots sont lavés à l'eau. On rassemble les phases I liquides pour les concentrer à sec sous vide à 30 C. Le résidu est repris par l'acétate d'éthyle, essoré, lavé à l'acétate d'éthyle et à l'éther. On obtient 1,32 g de poudre blauche soit un rendement de 88,3% ; CCM/BPEW1 Rf : 0,6. 9) . (D) (D) est obtenu à partir de 8 en opérant selon les conditions décrites pour la préparation. de (D) de l'exemple 2. CCM/BPEW1 Rf : 0,7 ; [&alpha;]D = - 16,4 (c = 1, acide acétique.) EXEMPLE 4 : CM 14.474. Schéma réactionnel. (A) est identique au produit (A) de l'exemple 1. Préparation de (B). 35 ml de DMF auxquels on ajoute 2,57 g de Boc-Phe-ONp et 1,05 g de OHBT et une quantité suffisante de N éthylmorpholine pour amcner le pH entre 6 et 7. Après 4 hêures de réaction à température ambiante, on évapore à sec puis on précipite par 5 volumes d'eau glacée et on lave par une solution de, sulfate acide de potassium une solution de sulfate de potassium, une solution de carbonate acide de sodium, tuie solution de sulfate de potassium, une solution de sulfate acide de potassium, de l'eau et du pentane acidifié par l'acide acétique.Après séchage, on obtient 4,18 g de produit, soit un rendement de 97% CCM/On butanol 96, acide acétique 1, eau 1). Rf : 0,77. Les 4,18 g de 1 obtenus précédemment sont dissous dans 21 ml de TFA. Après 20 minutes à température ambiante, on évapore à sec puis on reprend le résidu par du pentane et on sèche ; Poids 4,18 g ; rendemeitt 99% ; CCM/(trichlor- ure de méthyle 90, alcool méthylique 20, acide acétique 03) Hf : 0,09. Ce composé est obtenu à partir de 2 en suivant le mode opératoire décrit pour la préparation de 1. On obtient 3,69 g de 3, soit un rendement de 78%. CCM/(trichlorure de méthyle 90, alcool méthylique 20, acide acétique 03j 11f : 0,61. 4,3 g de 4 sont obtenus à partir de 4,3 g de 3 par dissolution daims 19 ml de TFA puis évaporation à sec après 20 minutes à température ambiante, le résidu étant repris par de l'éther éthylique. Rendement 98,4% CCM/(Trichlorure de méthyle 90, alcool méthylique 20, acide acétique 03) : 0,18. Ce composé est obtenu à partir de 4 par addition de Boc-Thr-ONSu en suivant le iiode opératoire décrit pour la préparation de 1. En partaut de 3,2 g de 4, on obtient 2,91 g de 5, soit un rendement de 83% ; CCM/(Alcool butylique 96, acide acétique 01, eau 03), Rf : 0,83. 3,8 g de ce composé sont obtenus à partir de 5 (3,7 g) en opérant de la même manière que pour la préparation de 4. Rendement 99,8%; CCM/(mélange de solvants cité pour 2) RF : 0,43. 4,16 g de ce produit sont obtenus à partir de 3,7 g de 6 par addition de selon le procédé décrit pour la préparation de 1; rendement 88,7% ; (mélange de solvants cité pour 2) Rf : 0,87. 4 S de 8 sont obtenus à partir de 7 (4S) selon le mode opératoire décrit pour la préparation de k; rendement 98,9% ; CCM/(mélange de solvants cité pour 2) Rf : 0,14. 9 est obtenu à partir de 8 par addition de Boc-(D)Trp-ONp selon le mode opératoire décrit pour la préparation de 1. 4 S de 8 donnent 4,1 S de 9 ; rendement 90% ; CCM/(mélange de solvants cité pour 2) Rf : 0,82. A 4 g de 9 en suspension dans 20 ml de chlorure de méthylène, on ajoute 2 ml d'anisole, 2 ml d d'éthanedithiol et 20 ml de TFA. Après 20 minutes à température ambiante, on évapore, on reprend par de l'eau puis on lave et on sèche pour obtenir 4 g de 10 : rendement 98@ CCM/(dans le solvant décrit pour 2) Rf : 0,30. 11 est obtenu à partir de 10 par addition de Boc-Phe-ONp selon le iode opératoire décrit pour a préparation de I. CCM/(trichlorure de méthyle 45, alcool méthylique 5, acide acétique 1,5) Rf : 0,5. 12 est obtenu à partir de 11 en suivant le mode opératoire décrit pour la préparation de 2. CCM/BEW1 Rf : 0,45. Préparation de (C). 13) . (C) (C) est obtenu par addition de (A) et (B) en suivant le mode opératoire décrit : pour la préparation de (C) de l'exemple 3. Préparation cie (D). (D! est préparé par les déprotections successives et la formatioit du pontage cystéine-cystéine en suivant les différentes opérations décri tes pour la réparatioit du produit (D) de l'exemple précédent. CCM/BPEW1 Rf : 0,66 ; [&alpha;]25 D= - 100,9 (c = 1, acide acétique). Les peptides de la présente invention ainsi que leurs sels pharmacologiquement acceptables interviennent activement sur le contrôle de la sécrétion d'hormone de croissance tant chez l'animal que chez l'homme (thérapeutique de l'acromégalie). L'action inhibitrice différentielle de ces produits sur la production d'insuline et de glucagon et dans la régulation glycémique les reiid utiles dans le contrôle du diabète sucré insuliiie dépendant ou non insuline dépendant. Ces molécules ont peu ou pas d'action sur les sécrétions digestives, autre facteur de différent@ation par rapport au profil de la somatostatine native. Les produits selon l'invention ont une faible toxicité; dans aucun cas, loi's clos essais, les animaux traités n'ont montré de signes alarmants La gamme posologique d'utilisation clinique cIe ces substances varie avec les effets thérapeutiques recherchés et avec chaque patient ; elle est généralement comprise entre 0,1 et 10 nig de principe actif. Les peptides de la présente invention pourront être administrés par voie intraveineuse, sous-cutanée ou intramusculaire en solution dans un solvant tel que le sérum physiologique (solution saline isotonique) ou dans tut tampon phosphate et toujours dans (les conditions rigoureuses de stérilité; les solutions salines contiennent environ 1 a 5 % en poids de produit selon l'invention. Les produits selon l'invention ont été examinés en ce qui concerne leur activité biologique. Essais biologiques L' inhibition de la sécrétion des hormones pancré- atiques et de l'hormone de croissance (GH) a été déterminez in vivo cItez des rats m@les Spraque Dawley d'origine Charles River de 200 à 220 g. Les dosages d'insuline, glucagon et d'hormone de croissance sont effectués par les techniques radioimmunologiques. L'inhibition de la sécrétion gastrique acide in vitro a été explorée a partir de muqueuses gas triqucs isolées de Cobaye. On détermine dans chaque cas la concentration du peptide itihlbant 50% de la sécrétion hormonaie oti de la sécrétion gastrique. Datis le tableau suivant les résultats so-itt exprimés par rapport à la somatostatine utilisée comme produit de référence. L'activité de la somatostatine ayant été dans chaque cas considérée comme égale à 100, les chiffres relatifs aux peptides de l'invention expri- ment' le rapport de l'activité du peptide considéré à l'activité de la somatostatine. Inhibition de la sécrétion des hormones pancréatiques, de la GII et de la sécrétion gastrique acide par quatre dérivés de la somatostatine en comparaison avec la somatostatine native Insuline Glucagon GH Sécrétion gastrique Somatostatine 100 100 100 100 CM 14.463 18 inactif 153 15 CM 14.469 107 89 118 50 R E V E N D I C A T I 0 N S 1. Analogues de la somatostatine substitués par l'azaalanine caractérisés en ce qutil répondent à la formule générale : dans laquelle . R désigne un H, un acide aminé, un dipep tide comme Ala-Gly par exemple . X1 - (L) Trp ou (D) Trp . X@ = (L) Thr, (D) Phe ou bien liaison simple . X3 = (L) Ser ou liaison simple . CYS = (L)-Cys ou (D)-Cys . Aza A représente une structure acidec né non naturel dans laquelle le carbone assymétrique de l'alanine a étéremplacé par un atome d'azote et les sels, pharmaceutiquement acceptables, de ces produits. 2. Produite selon la revendication 1, caractérisés en ce aue l'analogue de la somatostatine a pour formule : 3. Produits selon la revendication 1, caractérisés en ce que l'analogue de la somatostatine a pour formule 4. Produits selon la revendication l, caractérisés en ce que l'analogue de la somatostatine a pour formule 5. Produits selon la revendication 1, caractérisés en ce que l'analogue de la somatostatine a pour formule 6. Médicaments utiles notamment pour le traitement de maladies résultant d'un dérèglement de la sécrétion d'hormone de croissance, d'insuline ou de glucagon, caractérisés oit ce qu'ils coittieiiiioiit au moins tut produit selon l'une des revendications 1 à 5. 7. Médicaments selon la revendication 6, caractérisés en ce qu'ils sont administrés par injection intraveineuse, sous cutanée ou intramusculaire.