Brevet FR2522501A1 — publié le 19830909

Des procédés de préparation des isothiosemi- carbazones ont été décrits dans Bokin Bobai, Vol 9, n O 12, pages 551-561 ( 1981) En outre, Bokin Bobai indique qoe certains des cctposés utilisables comme composés antivraux dans la présente invention présentent une faible activité antibactérienne Par ailleurs, certaines thiosemicarbazones ou amidinohydrazone C sont connues pour présenter une activité antivirale, comme il est décrit dans Kitasato Arch of Exp Med, Vol 46, - p 73-81 ( 1973); ibid, Vol 48, p 23-30 ( 1975); ibid, Vol 48, p 125-130 ( 1975); ibid, Vol 48, p 165-170 ( 1975); ibid, Vol 48, p 171-181 ( 1975); ibid, Vol 50, p 39-46 ( 1977); et Nature, Vol l 81, p 352- 353 ( 1958). Un des butsde la présente invention est de fournir des compositions antivirales. Un autre but de la présente invention est de fournir des compositions capables d'inhiber la prolifé- ration virale et/ou d'agir comme virusicide. -Un autre but de la présente invention est de fournir-des procédés pour tuer des virus infectueux tels que l'infuenza et/ou pour inhiber leur prolifération - _ Un autre but de la présente invention est de fournir des compositions capables d'empêcher la repro- duction des champignons pathogènes des plantes et capa- bles de les exterminer. Un autre but de l'invention est de fournir des procédés pour éradiquer et/ou pour prévenir l'infec- tion par des champignons pathogènes des plantes. D'autres buts de l'invention ressortiront de la description détaillée ci-après. Conformément à un des modes de réalisation de la présente invention, il est fournit une nouvelle compo- sitior antivirale Plus précisemment, la présente inven- tion concerne une composition antivirale telle qu'un médicament qui contient comme constituant antivi rale- ment actif une isothiosemicarbazone répondant à la formule générale (I) suivante, ou un de ses sels a Vec les acides: Ri-C=N-NH-C=N-R 4 (I) R 2 S-R 3 dans laquelle R 1 représente ui, atome d'halogène, un groupe alkyle inférieur, un groupe hydroxy, un groupe phényle qui peut être ou non substitué parun groue alcoxy en C 1 à C 12, ou un groupe phényléthynyle substi- tué ou non substitué répondant à la formule générale (II): R 5 {II) d CH=CH- R' (dans laquelle R 5 et R 6 peuvent être identiques ou différents, et représentent chacun un atome d'hydrogène, un atome d'halogène, un groupe alkyle inférieur, un groupe hydroxy ou un groupe alcoxy en C C 12); R 2 représente un atome d'hydrogène ou un groupe alkyle inférieur; R 3 représente un groupe alkyle inférieur ou un groupe benzyle; et R 4 représente un atome d'hydrogène ou un groupe alkyle inférieur, et l'utilisation des composés répondant ' la formule (I) ci-dessus pour tuer les virus et/ou empêcher leur prolifération, en parti- culier les virus infectieux tels que le virus de l'in- fluenza. Par un autre de ses aspects, la présente inven- tion fournit des compositions antifongiques contenant une quantité antifongiquement active d'un composé répon- dant à la formule (I) ci-dessus capable d'éradiquer et/ou de prévenir l'infection par des champignons patho- gènes, et l'utilisation de ces composés antifongiquement actifs pour empêcher la reproduction et l'infection cau- sées par des champignons pathogènes, en particulier par des champignons pathogènes des plantes. L'expression "groume alkyle inférieur" désigne ici un groupe alkyle en C 1 C 6, et le terme "halogcène" cor- prend le fluor, le chlore, le brome et l'iode. Les isothiosemicarbazones de l'invention, qui sont représentées par la formule générale (I) décrite ci-dessus, se préparent aisément avec des rendements éle- vés en faisant réagir un aldéhyde ou une cétone répondant à la formule générale Rl-C =O (dans laquelle R 3 et R 2 R 2 ont tous deux la même signification cue dans la fozrmle générale (I)), avec un thiosemicarbazide répondant à la formule générale R 4-NH-C-NH-NH 2 (dans laquelle R 4 a la S même signification que dans la formule générale ( 1 i)) pour donner une thiosemicarbazone répondant à la formule géné- rale R -C=N-NH-C-NH-R 4 (dans laquelle RI, R 2 et R 4 ont i -Ri '"'R 2 R R S tous la même signification que ci-dessus), puis en fai- 2 sant réagir la thiosemicarbazone ainsi préparée avec un halogénure répondant à la formule générale X-R 3 (dans laquelle X représente un atome d'halogène et R 3 a la même signification que ci-dessus) On peut aussi préparer les isothiosemicarbazones en faisant réagir un composé carbonylé répondant à la formule R -C=O, avec R 2 un isothiosemicarbazide répondant à la formule générale R 4-N= -NH-NH 2 (dans laquelle R 3 et R 4 ont respective- ment les mêmes significations que ci-dessus) Ces proc 6- dés de préparation des isothiosemicarbazones ont été décrits dans la revue Bokin Bobai (qui se traduit par Journal des Agents antifongiques et antibactériens), vol 9, n 12, p 551-561 ( 1981). Parmi les composés à utiliser comme consti- tuant antiviral efficace des compositions et des pnrocdés de l'invention, bien qu'un grand nombre d'entre eu: soient des composés connus, les composés portant es numéros de composés 6, 9, 11 à 16, 31, 32, 41 /5, 46 et 47, respectivement, du tableau I ci-après, sont des composés nouveaux qui n'ont pas été décrits dans la littérature La littérature qui précède indique que les composés connus possèdent une faible activité antibacté- rienne Par contre, il n'était pas connu que les isothio- semicarbazones avaient une-activité antivirale A la suite de notre examen des activités des isothiosemi car- bazones sur le virus de l'influenza en utilisant le procédé de culture surr mbrane chorioallantoique d'oeuf de poule, on a trouvé à présent que les isothiosemicarba- zones répondant à la formule générale (I) qui précède possèdent une forte activité d'inhibition de la prolifé- ration et une activité virusicide considérables. Des exemples particuliers des isothiosemicarbazones pouvant être utilisés comme constituant antiviral des compositions et procédés de l'invention sont donnés dans le tableau I ci-après, et ne sont pas destinés à limiter le domaine de la présente invention. SE OOZ-661 40 H H ú 6 T-Z 6 T DH ú 90 ->,D L O ú ú HD E Ra B H \:O:>,3 891 4 DR H 061-68 T 'M il Z lm- z H si TLI-691 (o.) -tio TsilF rod ivlu lé DU il úH 5 W -qà- E u pso&o:) L-a XH sii-s 1 1,Z" 1 úIVR'Iqvl oszz 5 z H -(DO-(Sliz:) H -( O HZD L T- T IDR Z 6 06 9 LT- LT ïDH H 6 Hf 7 D H úRD H tim 6 T ST LT -(DO-ú RD H -Qau ID HO la- C 61-UT H úRD H 6 Riil) H úRD' IDR H H H ST 06 T-88 T Zan szz-tzz -DH ïf) D 16 9 V) ,3 -4 a 6 D zoz- loz H t HO a Mil úl si H EHD a H -H ZT B úHa STZ-M 7- JR lie úHO OZ-úOZ WDR H UOTS-n:f ap 14 U Tad u Psoclmoj 04 Tns i avarlavi L 05 USZ a w 1 -( 40 ID a úH:) EHD EHD TC "Z-ZOZ IDH E OE 6 ZZ 16 DR a úHo 891 7 OR R E P 3 et Ili E Ha 18 I-081 Z JID LIIED a n Zim R ú 113 LOZ-90 Z I-DR 681-82 T IDH sÉza 9 z zzz 14 DR H ' E Il D -( 5 UZZ Z DR Z 6 T-'16 T lê DU ZTZ-TIZ 40 H a lie EHD ST LHED il CD-z Hl)- úBD il Eq 9 EHD R 6 Rh D Ti ello LG 96 CD.) Uo Tsn-Z ap luwd ç u PSOCIMOD 04 TUS 1 'VSIU'Vi L L 05 USZ r 252250 1 "' li - B TABLEAU 1 Suita composé no Point de R 4 HX fusion Vle) H H Ct 176-178 H Hct 222 2 R 3 -M CL et ciel CH 3-> .ll - j CH- I.:4119 C' 3 lîO- 9 > CH 30-> CH 30-> C 2 H 50-> C 5 H 1 JO-> c 5 HJIO-> c 8 HJ'70-> C 10 H 21 O-> Cx-CH=CH- CH ', CH 3 CF 3 ci, 1 3 CH 3 CH 3 CH? CH 3 CH 3 CH 3 CHI H HCL 211-212 H HC;, 200-201 H HCL 155-156 H RCL 214 Cli 3 CH 3 C 4 H 9 CH 3 CH 3 CH 3 H 86 87 H HCL 178-180 54 56 H R RCI 179-181 H 129-131. 43 C 2 H 5 O-CH=CH- CH 3 CH 3 H 99-101 TABLEAU I Suite Composé Point de n 1 RI { fusion 44 C 4 H 90C\-CH=CH CH 3 CH 3 H 115-117 C 6130-s CH=CH CH 3 CH 3 il H Ct 182-1 i 83 -46 CI 2125 O-t FCRH C CH 3 CH 3 H I{CZ 162-163 CH 3 Q 47 C 8 H 170 C(j ' CH CH 3 CH 3 HI HC 169-170 Des exemples de synthèse des composés utili- sés dans la présente invention et des exemples de doter- mination de leur effet antiviral sont donnés ci-après. On peut s'attendre à ce que le composé antiviral de l'invention ait un effet antiviral supérieur à celui du chlorhydrate d'adamantaneamine connu. Dans l'évaluation de la toxicité aigce (DL 50) des composés de l'invention, les composés numéro 4 et numéro 25 du tableau I, respectivement, ont été choisis et soumis à un examen de leur toxicité aig Ue par adminis- tration intrapéritonéale à des souris On a trouvé que les valeurs de DL 50 des cceposés 4 et 25 étaient de 200 mg/kg et 150 mg/kg, respectivement Ces valeurs suggèrent que les composés antiviraux de l'invention peuvent être uti- lisés en toute sécurité. o 30 Le midicarimnt antiviral l'invention peut se préparer sous diverses formes médicamenteuses, par exemple sous forme de médicaments pour l'administration orale, sous forme de médicaments pour l'administration par injection etc, en utilisant des techniques de fabri- cation pharmaceutiques classiques Cependant, le plus ? 2501 commode est d'utiliser le médicament antiviral de l'in- vention sous la forme d'un médicament par voie orale. La posoiogie du médicament pour un individu dépend de la gravité de la maladie, du poids et d'autres facteurs Codmme posologie antivirale suggérée pour les composés de l'invention, on indiquera que 1 'on peut administrer en une seule ou en plusieurs adminis- trations par jour,de 10 3 100 mg par individu. Les exemples de synthèse et les exemples de déterminaticn de l'utilité ci-après sont connés à titre d'illus- tration de l'invention Outre leur activité antivirale, les composés antiviraux de l'invention se sont révélés, lors de l'expérimentation in vivo, présenter un excel- lent effet contre les champignons pathogènes des plantes, par exemple la brûlure du riz, etc Des exemples de détermination de l'utilité de ce pesticide, à savoir de l'effet fongicide, sont également donnés cidessous Les composés répondant à la formule (I) peuvent être utilisés pour préparer diverses compositions liquides, en poudre, en poudre mouillable, etc pour l'administration externe à des plantes D'autres supports, agents tensicactifs etc classiques peuvent être utili- sés par le technicien pour préparer des compositions antifongiques En outre, les exemples ci-dessous illus- trent des intervalles de doses antifongiques. On décrira d'abord plusieurs exemples de syn- thèse des isothiosemicarbazones et de leur sels avec les acides qui doivent être utilisés dans l'invention. Le numéro du composé correspond au numéro du tableau I. Exemple de synthèse 1 Synthèse du chiorhydratede 4 '-chlorobenzal- déhyde-S-méthylisothiosemicarbazone (composé N O 6). A une solution de 1,41 g ( 0,01 mole) de 4- chlorobenzaldehyde et 1,41 g ( 0,01 mole) de chlorhydrate de Smêthylisothiosemicarbazide dans 7 mt de méthanol, ? 2501 on ajoute de -'Lacide chlorhydrique pour acidifier la solution Or chauffe SQUS reflux la solution obtenue pen- dant 30 minutes Puis on la filtre alors qu'elle est chaude On refroidit le filtrat en le laissant reposer au contact de l'air: il s'en sépare des aiguilles incolores On filtre les cristaux, ils ont un point de fusion de 200-201,5 C Le rendement est de 1,75 g On obtient en outre la même substance dans une quantité de 0,21 g en faisant recristalliser le filtrat obtenu dans de l'éther diéthylique Le rendement total est donc de 1,96 g ( 74 %). Les composés portant les numéros 1, 3, 4, 8, 12, 13, 14, 16, 17, 21, 23, 24 25, 26, 27, 29, 30, 33, 34, 35 et 37, respectivement, ont 6 té prépares par synthèse de la même manière que ci-dessus, excepté que les composés carbonylés correspondants ont été uti- lisés à la place du 4-chlorobenzald 6 hyde. Exemple de synthèse 2 Synthèse du ilorydrate de 2 ',4 '-dichloroben- zaldéhyde-S-butylisothiosemicarbazone (composé n 9) A une solution de 1,90 g ( 0,01 mole) de 2,4- dichiorobenzaldéhyde et de 2,75 g ( 0,01 mole) de iod- hydrate de S-butylisothiosemicarbazide dans 25 mt d'étha- nol a 85 %, on ajoute de l'acide chllorhydrique pour aci- difier la solution On chauffe sous reflux la solution obtenue pendant 30 minutes Apres refroidissement, il se sépare un précipité que l'on filtre et l'on obtient 2,9 g de solide On dissout le solide dans de l'étha- nol chard dilué, puis on y ajoute une solution aqueuse contenant 1,7 g d'acétate de plomb trihydraté Il se dépose alors un précipité On filtre le précipité et on acidifie le filtrat avec de l'acide chlorhydrique, puis on le concentre jusqu'à ce qu'il se sépare des cristaux. On filtre les cristaux et on les fait recristalliser dans de l'éthanol a 65 % On obtient ainsi des grains incolores ayant un point de fusion de 203-205 C avec un rendement de 1,6 g ( 54 %). Les composés correspondant aux numéros 15, 19, 32, 36 et 39, respectivement, ont été préparés par synthèse de la même manière que dans l'exemple de syn- thèse 2, excepté que l'on a utilisé des composés carbo- nylés correspondants à la place de 2,4-dichloroberizal- dêhyde. Exemple de synthèse 3 Synthèse du chlorh-drate de 3 ',4 '-dichlorobenzal- déhyde-S-méthylisothiosemicarbazone (composé n 11) A une solution de 2,6 g ( 0,15 mole) de 3,4- dichlorobenzaldéhyde et de 3,5 g ( 0,15 mole) de Jodhy- drate de S-méthylisothiosemicaibazole dans 25 mt d'6tha- nol à 85 %, on ajoute de l'acide chlorhydrique pour acidi- fier la solution On chauffe sous reflux la solution obtenue pendant 30 idnutes Apres refroidissement, il se sépare des cristaux que l'on filtre Une portion de 4,2 g des cristaux ainsi obtenue est dissoute dans de l'éthanol chaud dilué, et on y ajoute une solution aqueu- se contenant 1,6 g d'acétate de plomb trihydrat A de façon à former un précipité On filtre le précipité et on concentre le filtrat, puis on l'acidifie par l'acide chlorhydrique Il se sépare alors des cristaux que l'on filtre et fait recristalliser dans de l'éthanol On obtient ainsi 1,9 g (rendement: 74 %) d'aiguilles inco- * lores ayant un point de fusion de 217-218 C La base libre correspondante peut être extraite du filtrat con- centré par l'éther diéthylique. Les composés numéros 18, 20, 31, 38, 40, 41, 42, 43, 44, 45, 46 et 47, respectivement, ont été prépa- rés par synthèse de la même manière que dans l'exemple de synthèse 3, excepté que l'on a utilisé les composés carbonylés correspondants à la place du dichloroben- zaldéhyde. 25225 Cs Exemple de synlthèse 4 Synthèse du chlorhydrate de benzald 6 hyde-S- benzylisothiosemicarbazone (composé n 2) A une solution de 1,79 g ( 0,01 mole) de benz- aldéhydethiosexnicarbazone dans 10 m de méthanol, on ajoute sous reflux 1,27 g ( 0701 mole) de chlorure -e benzyle et on poursuit le reflux pendant 20 minutes Apres refroidissement, il se dépose des cristaux que l'on filtre, dissout dans du méthanol, puis on y ajoute de l'éther diéthylique (pour la recristallisation) Il se sépare ensuite des aiguilles incolores Point de fusion: 190 C Rendement: 2,44 g ( 80 %) Le composé numéro 22 a été obtenu de la même manière que ci-dessus, excepté qu'on a utilisé de M'acé- tophénonethiosemicarbazone à la place de la benzald 6 hyde- thiosemicarbazone. Exemple de_ s Xnthè se 5 Synthèse du chlorhvdrate de 3 '-chlorobenzaldehhy- de-S-méthyl-4-N-méthylisothiosemicarbazone (compose N _) On acidifie à l'acide chlorhydtique une solution de 2,47 g ( 0,01 mole) d'iodhydrate de S-m 6thyl-4-N- méthylisothiosemicarbazide et de 1,40 g ( 0,01 mole) de 3chlorobenzaldéhyde dans 15 mt de méthanol, et on la chauffe pendant 30 minutes sous reflux Apres refroidis- sement, on ajoute de l'éther diéthylique à la solution, ce qui provoque la formation d'un précipité On filtre le précipité, on le redissout dans une faible quantité d'éthanol et on le neutralise avec une solution d'hy- droxyde de sodium On extrait par l'éther diéthylique la base libre ainsi préparée, on la sèche sur sulfate de sodium anhydre et on y fait barboter de l'acide chlorydrique Il se sépare alors de aiguilles incolores, point de fusion: 191 C Rendement: 1,80 g ( 65 %). On prépare par synthèse les composés numéros 7, 10 et 28 de la même manière que ci-dessus en utilisant les composés carbonylés correspondants, et on les ob- tient sous forme de chlorhydrate, de base libre et d'iodhydrate, respectivement Tous les composés ainsi prépares par synthèse sont identifiés par analyse élé- mentaire et spectrographie infrarouge L'effet antivi- ral des composés de l'invention sera à pr-ent i lustré par les exemples d'examen suivant. Exemplne d'examen 1 Examan de l'activité virusicide et de l'activi- té d'inhibition de la prolifération des virus en utili- sant le procédé de culture sur membrane chorioallanto- ique d'oeuf de poule Les essais 1 à 3 suivants ont été utilisés pour examiner l'activité antivirale en utilisant le procédé connu tel que décrit dans T Nishimura et al, International Congress of Chemotherapy in 1971, p 325- 327;. ( 1) Essai de toxicité pour la membrane chorio- allantoique d'oeuf de poule Un morceau de membrane chorioallantoîque cir- culaire ayant un diamètre de 30 mm est aj 6 uté à 0,9 mt d'une solution de sel équilibrée de Hank (BSS) placée dans un tube de culture sur membrane chorioallantolque. On prépare un certain nombre de ces tubes Dans chaque tube, on introduit une des solutions de composé de l'in- vention préparée par dilution en série au double, à raison de 0,1 me, et on effectue une culture agitée à 36 C pendant 48 heures Après l'incubation, on lave la membrane chorioallantoique avec une solution de tampon phosphate (PBS) plongée dans une solution de bleu Trypan pendant une minute, et on la lave à nouveau soigneusement avec du PBS La concentration à laquelle deux des quatre morceaux de membrane chorioallantolque utilisés pour chaque stade de dilution du médicament sont teints avec une coloration bleu foncé est définie comme la concen- tration de toxicité à 50 %. ( 2) Essais virusicide in vitro On mélange des volumes égaux ( 0,5 mú) de virus de l'influenza, souche Adachi Cu type A 2 (f 1000 DI Mi 100 O/ml) avec 0,5 m Z de chacune des solutions des composés de l'invention préparées par dilution en série au décuple ou au double, et on laisse reposer lle mélange obtenu à la température ambiante pendant 129 minutes Puis on le dilue 100 fois On introduit une portion de 0,2 m Z du mélange dilué dans un tube de culture sur membrane cho- rioallantoique dans lequel on a placé au préalable 0,8 mt de solution BSS de Hank, et on effectue une culture agi- tée à 36 C pendant 48 heures Apres l'incubation, on recherche la présence d'hémagi utination en utilisant l'essai d'hémaglutination, et la concentration virusicide à 50 % est déterminée par la méthode de Reed et Muench. ( 3) Essais d'inhibition de la prolifération des virus On introduit à chaque fois 0,1 mt des solutions des composés de l'invention préparées par dilution en série au double dans un tube de culture sur membrane chorioallantolque dans lequel on a placé au préalable 0,8 mit de solution BSS de Hank, on inocule à la membrane chorioallanto Ique 0,1 mt de virus de l'influenza, souche Adachi du type A 2 ( 100 DIM 100/me), et on effec- tue une culture agitée à 36 C pendant 48 heures. Apres l'incubation, on détermine la concentration d'inhi- bition de la prolifération des virus à 50 % de la même manière que dans l'essai virusicide in vitro. ( 4) Détermination de l'indice virusicide et de l'indice d'inhibition de la prolifération des virus. Un indice irusicide et un indice d'inhibition de la prolifération des virus sont déterminâs en divisant la concentration de toxicité à 50 % du composé pour la membrane chorioallantoique par la concentration virusicide 252250 '1 à 50 %, at la concentrati,) dl'inhib -ition libre de la prolifération des virus à 50 %, respectivemlent. Les résultats des essais décrits ci-dessus sont donnés dans le tableau II ci-dessous. TABLEAU Il Activitô antiviraje fies isoethi-oser'-icarbazones Coecentration toxiqoe poulr convoeé la nirbranc- no Cofrioallantoique (ffrrc/ME) il 19 28 3 > 1 000 632,5 > 1 000 > 1 000 157,5 707,5 354,2 793,8 353,6 1 000 99,4 88,8 concomtration de irhibition de la prolifération des virus à 50 % (xog/n LjlIndioe 1,' 18, 5 19,8 21,3 39,7 12)5 14,4 23)2 21,3 14,32 12 ? 5 l> 540)O l 35,7 l l 33,2 l l 14 O l l > 66, 7 l l> 25,2 l l 12,6 l i 28,3 l i 24,6 l I 12,61 l 7,7 l I 16,61 l 20,01 I 7,01 l 7,13 Concentration virusicide à % I 5,7 l 46.4 l 15,2 l 31.6 l 19,9 l 4 6 4 F 15, 2 Fl 316 F 3 '2 l 215 3,F 215 F 1,7 l l I 1,81 TABLEAU II (suite) Ccnoentration Concentration Concentration toxique tour d'inhibition de virusicide à CC Mpoe la m Mbrane la prolifération 50 % n oo'rioallanto Ique des virus à 50 % (mcg/m) (mcg/m O) (meg/mr) lIndicel:: lindicel::: 38 > 1 000 126 l> 80 l 41 I 000 > 20 Qr 1 l 170 l 4,2 l 43 > 1 000 141 l 7,1 l 316 f 3121 46 > 1 000 85,2 l> 11,7 l 31,6 l> 31,6 l A.m 1 000 32,9 30,4 l 648,8 l 1,5 l 1 A:Chlorhydrate d'adarmantaneamine (rrf rence) : C Les hnombres entre crochets représentent 1 ' indice d' iht bition de la prolifération des virus. : Les nombres entre crochets représentent l'indice virusicide Comme le montre l'examen des résultats du ta- bleau II, les i othiosemicarbazones de l'invention pré- sentent une forte activité d'inhibition de la prolifé- ration des virus et une toxicité plus faible pour la membrane chorioallantoique que le chlorhydrate d'adaman- taneamine utilisé comme échantillon témoin Ceci signi- fie que la présente invention fournit des composés ayant une excellente activité d'inhibition de la proli- fération En outre, contrairement à l'absence d'activi- té virusicide observée dans le cas du chlorhydrate d'ada- mantaneamine, un grand nombre des isothiosemicarbazones de l'invention se sont révélés posséder une forte acti- vité virusicide Par conséquent, les isothiosemicarbazo- nes de l'invention peuvent être utilisés en toute sécu- rité et on peut s'attendre à ce qu'elles aient un meilleur effet antiviral que le chlorydrate d'adamantaneamine utilisé comme échantillon témoin Le terme "antiviral" tel qu'il est utilisé ici comprend l'activité virusicide et/ou l'inhibition de la prolifération virale. Exemple d'examen 2 Essai de lutte contre la brûlure du riz Sur 8 jeunes plants de riz (variété; Jukkoku) cultivés jusqu'au stade de 4 feuilles dans un pot en plastique d'un diamètre de 6,5 cm, on pulvér Xse une solution chimique d'essai préparée en disolvant et en diluant chacun des composés indiqués dans le tableau I de façon à obtenir une concentration prédéterminée nu moyen d'un pistolet de pulvérisation, à raison de 35 mt pour 3 pots Apres séchage dans l'atmosphère ambiante, on place ces jeunes plants dans une chambre hunide main- tenue a 24 C, et on leur inocule par pulvérisation uni- forme une suspension conidiale de champignons de la la brûlure riz (Pyriculazia oryzae) Apres les avoir conservés une nuit dans la chambre humide, on fait passer les pots dans une serre Sept jours après l'inoculation, on détermine le nombre de lésions La valeur protectri- ce du composé chimique d'essai est fournie par l'équa- tion suivante: Valeur protectrice (%) Les résultats tableau 3 ci-dessous. / Nombre-moyen de lésions dans un lot traité = Nombre moyen de 100 lésions dans un d lot non traité de l'examen sont donnés dans le TABLEAU III Contrôle de l'essai sur la brûlure du riz Composé N O Concentration Val (ppm) i n le eur protectrice (%) t,6 ú 6 001 - ú 6 001 - L 6 si - M a D Ti - oaqoad t ar La-lIe-j 8 z L z 9 z sz t'z úZ zz TZ oz L 1 -9 1 si t 1 ú 1 z 1 il 0 1 L 1 M ggodtu OD-. ai à a a a à à à à ai ai à& 4 à 1 à a à J 4 c & a 8 & a a à 4 a 4 4 oc OT à a oot, (Mdd) UOT-4 eaquazuoo ç (e,4 Tns) IIT rivsugvj TABLEAU Ii (suite) Composi 3 No Fongicide de référence - Concentr-ation TP pm i) VI il et fi si fi Il et f'I IV Valeur 89 ' Pas de pulvé- risation O Co:xne fongicide de référence, on a utilisé uin fongicide du ciioer- ce, le Hinosan "mulsion 30 (fabriquaé par la Nihon Tokushu Noyaku Seizo K K, qui contient 30 % de O O-éthyl-S,S-diphérnyldith-i>iosph-ate) Les résultats du tableau III nontrent aue les composés du tableau I ont un excellent effet de lutte contre la brûlure du r iz (rice blast) L'étude de la littérature précedemment décrite ne permettait pas de s'attendre à ces effets Les résultats de l'exemple d'examen 3 confirment en outre la conclusion que l'excel- lent effet contre le brûlure du riz ne pouvait pas être suggéré par les valeurs de CMI données -dans la littérature antérieure. Exemple d'examen 3 Essai de lutte contre la brtlure du riz (Rice Blast) dans le cas d'une faible dose On a utilisé les composés indiqués dans le tableau I à de faibles concentrations de pulvérisation, et on examiné leurs effets respectifs contre la brûlure du riz de la même manière que dans l'exemple d'examen 2 Les résultats obtenus sont donnés dans le tableau IV. _ Ta BLEAU tv Effet contre la brûlure du riz 'Rice Blast) dans le cas d'une fahi Le close : Ootx Concen Valeur Valeur C 1(mcgyxç/- No tration Protectrice dans la littirature&::' (ppm)_ 10 100 67 12,5 " 66 12, 5 18: " 99 19 " 93 20 " 100 - 43 " 97 Fcngicide 300 94 de référence:: Pas de pulvérisation ' O x On a utilisé le même fongicide de référence que dans l'exemple d'examen 2. On a cité les valeurs de CMI données dans la colonne "Pyricularia oryzae" de Bokin Bobai, Vol 9, n 12, pages 551 à 561 ( 1981). Comme le montre les résultats du tableau IV, les composés numéros 10 et 30, dont on a trouvé que les valeurs de CMI étaient de 12,5 mcg/m Z, avaient de faibles valeurs protectrices; par contre les composés numéros 18, 19, 20 et 43, dont on avait jamais observé qu'ils pré- sentaient des effets d'inhibition de la prolifération de l'un quelconque des champignons pathogènes décrits dans la littérature antérieure, présentaient d'excellents effets antifongiques. Exemple d'examen 4 Essai pour déterminer l'effet contre la moisis- sure grise du concombre. Sur trois jeunes plants de concombre (variété: Cucumis sativus L Cultivar, Tokiwa Jibai), élevés jus- qu'au stade de la deuxième feuille dans un pot poreux de taille numéro 3, on pulvérise une solution chimique d'essai préparée en dissolvant et en diluant chaque com- posé indiqué dans le tableau I de façon à obtenir une concentration prédéterminée, en utilisant un pistolet de pulvérisation, 1 raison de 40 ml pour'3 pots Apres séchage à l'atmobshère ambiante, on inocule à ces jeunes plants de concombre des champignons pathogènes de la moisissure grise du concombre (Botrytis cinerea), en pulvérisant uniformément une suspension de morceaux d'hyphes préalablement (préparés en cultivant les champi- gnons pathogènes de la moisissure grise-du concombre (Botrytis'cinerea) pendant 5 jours sur un milieu pommes de terre-sucrose-gélose, en broyant le mycelium ayant ainsi proliféré au moyen d'un homogénéiseur, puis en ajoutant du glucose à une concentration de 0,5 % en vue d'acc élrer l'attaque par le microorganisme) Puis on place les plants dans une chambre humide maintenue à 24 C, et ils sont attaqués par le microorganisme 5 jours après l'inoculation, on examine le degré d'attaque Si aucune attaque du microorganisme n'est observée, cet état est exprimé par l'indice 0; la pourriture des jeunes plants et leur déssèchement est exprimé par l'in- dice 5, et les indices 1, 2, 3 et 4 sont donnés aux états intermédiaires entre les états indiqués ci- dessus suivant le degré de progression du symptome. Une valeur témoin est déterminée par l équation suivante: Indice moyen de la maladie du jeune plant traité Valeur témoin (% Indice moe 1 de -x 1 la maladie du jeune plant non traité Les résultats de l 'examen sont donnés dans le tableau V ci-après. Essai pour contr Oler l'effet sur la itôisissuxe 9 rise du concarbre Co osê no Concentration Valeur téroin (ppm) ") 400 O " O " 56 38 " 90 43 " 87 bon Sicide de 500 83 réfgrence:: Pasde ulvéri O sation Fongicide du coimerce, poudre mouillable Euparen (fabriqué par la N Jihon Tokushu Noyaku Seizo K K, contenant 50 % de N'-dichlo- rofluoroamthylthio) -N,N' -dimthyl-N ' -phénylsulfamide. Les résultats du tableau V montrent l a même tendance que pour la brûlure du riz, à savoir que les composés 30 et 10 qui présentaient une valeur CMI de 12,5 mcg/mrú n'avaient pas d'effet du tout et que, par contre, les composés numéros 38 et 43 qui étaient inac- tifs contre tous les champignons pathogènes des plants dans les expériences in vitro, présentaient un effet marqué. Les résultats ci-dessus révèlent-que l'activi- té antifonrgicide in vitro ne peut pas être reliée à l'effet in vivo. REVENDICATIONS 1 Composition antivirale comprenant une quantité efficace du point de vue antiviral d'une isothiosemicarbazone répondant à la formule générale (I), ou d'un de ses sels avec les acides R -C=N-NE-C=N-R R 2 S-R 3 dans laquelle R 1 représente un atome d'halogène, un groupe alkyle inférieur en C 1 à C 6, un groupe hydroxy, un groupe phényle qui peut être ou non substitué par un groupe alcoxy en C 1 à C 12, ou un groupe phény 16thy- nyle non substitué ou substitué répondant à la formule générale (II): R CH=CH (II) (dans laquelle R 5 et R 6 peuvent être identiques ou différents, et représentent chacun un atome d'hydro- gène, un atome d'halogène, un groupe alkyle inférieur en C 1 à C 6, un groupe hydroxy ou un groupe alcoxy en C 1 à C 12); R 2 représente un atome d'hydrogène ou un groupe alkyle inférieur en C 1 à C 6; R 3 représente un groupe alkyle inférieur en C 1 à C 6 ou un groupe ben- zyle; et R 4 représente un atome d'hydrogène ou un groupe alkyle inférieur en C 1 à C 6. 2 Composition suivant la revendication 1, destinée à traiter l'influenza, caractérisée en ce qu'elle comprend une quantité efficace pour lutter contre l'influenza de cette isothiosemicarbazone. SR 2119 JP/MDT Nouvelles revendications déposées après notifications des 9 mai 1983.