Brevet FR2523125A1 — publié le 19830916

Analogues de la somatostatine à activité biologique modifiée et médicaments en contenant. La somatostatine est un tétradécapeptide de structure et qui inhibe les sécrétions endogènes d'hormones de croissance (GH), d'insuline et de glucagon. Les abréviations utilisées sont celles recommandées pour les aminoacides par la commission de nomenclature biochimique de l'lUPAC (Journal of Biological Chemistry, 1972, 247, page 977). Ce meme peptide réduit également de façon notable les taux de sécrétions digestives. La demi-vie biologique de la somatostatine est très courte (4 min environ) car elle est très vite hydrolysée in vivo par des enzymes protéolytiques ou bien dégradée par des aminopeptidases et des carboxypeptidases. De nombreux analogues ont été décrits par différents auteurs en vue d'obtenir soit des dissociations d'activité biologique,soit une demi-vie biologique prolongée. tes produits de la présente invention répondent å la formule générale dans laquelle R R désigne un H, un acide aminé, un dipeptide comme Ala-Gly par exemple; x1 = (L) Phe, (D) Ala ou liaison simple; * X2 = (L) Phe, (D) Phe ou Gly; . X3 = (L) Phe, (D) Phe ou liaison simple; . Cys = (L) Cys ou (D) Cys; Ces produits se caractérisent en particulier - par une meilleure résistance à la protéolyse grâce à l'introduction d'un ou plusieurs acides aminés de la série (D) en des points judi cieusement choisis de la molécule de façon à conserver ou modifier l'activité biologique de la somatostatine native.Ceci se traduit dans les faits par l'obtention de molécules présentant un effet retard prolongé; - par une dissociation d'activité biologique par rapport à la soma tostatine prise comme produit de référence aussi bien au niveau de l'inhibition des trois hormones de base impliquées dans le diabète qu'au niveau de l'inhibition des sécrétions digestives. Les produits de la présente invention sont représentés par les formules suivantes CN 14.479 CM 14,480 CM 14.481 CM 14.482 CM 14.483 CM 14.498 CM 14.499 CM 14.501 Ces composés sont toujours utilisés sous forme d'un sel d'addition comme le chlorhydrate, le sulfate, phosphate; acétate, maléate,citrate, benzoate, succinate, malate, ascorbate... Ces sels pourront être obtenus en dissolvant-le composé dans l'eau en présence de deux équivalents de l'acide et en soumettant ensuite l'ensemble à une lyophilisation. Le sel d'addition préféré reste toutefois l'acétate. Princiees gdneraux de la synthese. Ils sont synthétisés selon un procédé mixte entre la synthèse en phase solide et la synthèse en solution. Les opérations de couplage entre deux aminoacides sont effectuées en phase liquide, c'est-a-dire en solution dans un solvant polaire comme le diméthylformamide (DMF). Le produit de la réaction est isolé par addition d'un tiers solvant au milieu réactionnel qui l'insolubilise et permet ainsi de l'isoler par filtration. Le produit brut ainsi obtenu est ensuite soumis à des opérations de lavage en phase solide å l'aide de solvants appropriés dans lesquels il est insoluble. On utilise à cet effet un groupement protecteur de la fonction acide carboxylique sur la cystéine de départ (cystéine 14) qui insolubilise les produits dans les solvants usuels de lavage (eau alcools, éthers, acétate d'éthyle...), tout en maintenant une solubilité suffisante dans les solvants polaires comme le diméthylformamide permettant ainsi d'effectuer les opérations de couplage en phase liquide. Le groupement protecteur qui permet d'appliquer cette stratégie est le 2-[4-(phénylazo)-benzylsulfonyl]éthylester (OPSE) stable en milieu acide et clivable en milieu basique selon le processus de ss-élimination. L'application de cette technologie à la synthèse de la somatostatine a été décrite dans Biorganic Chemistry 8, pages 429-442 (1979). Les sérine et thréonine intervenant dans ces synthèses ont été utilisées sans protection des fonctions hydroxylées dans leur chaîne latérale. L'amine en i de la chatne latérale de la lysine est protégée pendant les phases d'élongation du peptide par le groupement 2-(méthylsulfonyl)-éthoxycarbonyle (Mse) stable en milieu acide et clivable en milieu basique. La fonction thiol de la cystéine porte le groupement protecteur acétamidométhyl((Acm) qui est stable en milieu basique ou acide. La déprotection est dans ce cas assurée par traitement à l'aide d'un sel de métal lourd comme l'argent ou le mercure. Pendant les phases d'élongation, la protection temporaire des amines en position a du carboxyle est assurée par le groupement protecteur tertiobutyloxycarbonylamino (Boc). Ainsi, chaque opération de couplage sera suivie d'une opération de déprotection sélective du Boc. Cette déprotection est assurée par un traitement à l'acide trifluoracétique et est effectuée aussi en solution. Ici également, le produit déprotégé.sera isolé du milieu réactionnel par addition d'un tiers solvant qui l'insolubilise. Toutefois, afin de minimiser les quantités de solvant utilises, il sera souhaitable de concentrer au préalable le milieu réactionnel. Après les phases d'élongation, le peptide protégé obtenu sera libéré des protections des chatnes latérales des lysines et de la fonction carboxylique terminale par un traitement basique utilisant la soude ou la baryte dans un solvant approprié à base de diméthylformamide. Le peptide ainsi obtenu possède toujours les thiols des cystéines protégées par le groupement acétamidométhyle. I1 pourra à ce niveau. selon son degré de pureté, être utilisé tel quel pour l'étape finale d'oxydation ou bien soumis à une purification poussée par la technique de la distribution à contre-courant, ou bien par chromatographie de partition. Enfin, la cyclisation finale du produit par création d'un pont disulfure entre les deux cystéines sera assurée par les opérations suivantes - déprotection des groupements acétamidométhyle des deux cystéines par un sel de métal lourd (nitrate d'argent par exemple); - élimination du métal lourd par un traitement à l'hydro gène sulfuré; - dégazage et dilution à l'abri de l'air de la solution ainsi obtenue; - addition de cette solution progressivement et à pH con trblé à un milieu d'oxydation constitué par un tampon acétate d'ammonium contenant l'agent d'oxydation qui est le ferricyanure de potassium. Cette opération sera toujours effectuée dans des condi tions de forte dilution (2 litres par gramme de produit traité) de façon à minimiser les risques de polymérisa tion, conséquence d'une oxydation intermoléculaire. Le produit final est ensuite débarrassé des ions complexes provenant de la phase d'oxydation par passage sur résine convenable, puis dessalé et concentré par fixation suivie d'élution par l'acide acétique sur une autre résine. Le produit brut d'évaporation devra être soumis à une chromatographie de perméation sur gel dans l'acide acétique dilué afin de le débarrasser des polymères qui se sont formés au cours de la phase d'oxydation. Si, après cette opération de perméation sur gel, la pureté du produit statère insuffisante, il pourra etre soumis à d'autres techniques de purification,comme la chromatographie de partition ou le passage sur résines échangeuses d'ions... Les exemples suivants, à caractère non limitatif, illustrent les synthèses qui ont conduit à la préparation des composés de la présente invention. Symboles et abréviations utilisés. Boc CHBT : hydroxybenzotriazole Acm: Msc: ONSu ODse: ONp : deméthylformamide TE : acide trifluoracétique ou trifluoracétate CC!! : chromatographie sur couches minces de silice Merck 60F 254 HPLC : chromatographie liquide haute performance BPEW1 éluant de chromatographie butanol (50), pyridine (12), CH3CO2H (12), H2O (25). L'analyse en acides aminés des différents produits intermédiaires cités dans les exemples suivants a été réalisée. EXEMPLE 1 : CM 14.479 1) Boc-Phe-(D) Cys-OPse Acm 3,5 g de TFA, H-(D) Cys-OPse sont dissous dans 35 ml Acm de DMF auxquels on ajoute 2,57 g de Boc-Phe-ONp et 1,05 g de OHBT et une quantite suffisante de N-ethylmorpholine pour amener le pH entre 6 et 7. Après 4 h de réaction à température ambiante, on évapore à sec puis on précipite par 5 volumes d'eau glacée et on lave par une solution de sulfate acide de potassium, une solution de sulfate de potassium une solution de carbonate acide de sodium, une solution de sulfate de potassium, une solution de sulfate acide de potassium, de l'eau et du pentane acidifié par l'acide acétique à 1%. Après séchage, on obtient 4,18 g de produit, soit un rendement de 97%; CCM/(n-butanol 96, acide acétique 1, eau 1); Rf : 0,77. 2) TFA, H-Phe-(D) Cys-OPse Acm Les 4,18 g'de 1 obtenus précédemment sont dissous dans 21 ml de TFA. Après 20 min à température ambiante, on évapore à sec puis on reprend le résidu par du pentane et on sèche; poids 4,18 g; rendement 99%; CCM/(trichlorure de méthyle 90, alcool méthylique 20, acide acétique 03), Rf : 0,09. 3) Boc-Phe-Phe-(D) Cys-OPse Acm Ce composé est obtenu à partir de 2 en suivant le mode opératoire decrit pour la préparation de 1. On obtient 3,69 g de 3, soit un rendement de 78;1. COM/(trichlorure de méthyle 90, alcool méthylique 20, acide acétique 03), Rf : 0,61. 4) TFA, H-Phe-Phe-(D) Cys-OPse Acm 4,3 g de 4 sont obtenus à partir de 4,3 g de 3 par dissolution dans 19 ml de TFA, puis évaporation à sec après 20 min à température ambiante, le résidu étant repris par de l'éther éthylique. Rendement 98,4%; CCM/(trichlorure de méthyle 90, alcool méthylique 20, acide acétique 03), Rf : 0,18. 5) Boc-Thr-Phe-Phe-(D) Cys-OPse Acm Ce composé est obtenu à partir de 4 par addition de Boc-Thr-ONSu en suivant le mode opératoire décrit pour la prépara- tion de 1. En partant de 3,2 g de 4, on obtient 2,91 g de 5, soit un rendement de 83%; CCM/(alcool butylique 96, acide acétique 01, eau 03) Rf : 0,83. 6) TFA, H-Thr-Phe-Phe-(D) Cys-OPse Acm 3,8 g de ce composé sont obtenus à partir de 5 (3,7 g) en opérant de la même manière que pour la préparation de 4. Rendement 99,8%; CCM/(mélange de solvants cités pour2), Rf : 0,43. 7) Boc-Lys-Thr-Phe-Phe-(D) Cys-OPse Msc Acm 4,16 g de ce produit sont obtenus à partir de 3,7 g de 6 par addition de Boc-Lys-ONp selon le procédé ddcrit pour la Msc préparation de 1; rendement 88,7% CCM/(mélange de solvants cité pour 2), Rf : 0,87. 8) TFA, H-Lys-Thr-Phe-Phe-(D) Cys-OPse Msc Acm 4 g de 8 sont obtenus à partir de 7 (4 g) selon le mode opératoire décrit pour la préparation de 4; rendement 98,9%; CCM/(mélange de solvants cité pour 2), Rf : 0,14. 9) Boc-(D) Trp-Lys-Thr-Phe-Phe-(D) Cys-OPse Msc Acm 9 est obtenu à partir de 8 par addition de Boc-(D) Trp-ONp selon le mode opératoire décrit pour la preparation de 1. 4 g de 8 donnent 4,1 g de o; rendement 90%; CCM/(mélange de solvants cité pour 2), Rf : 0,82. 10) TFA, H-(D) Trp-Lys-Thr-Phe-Phe-(D) Cys-OPse Msc Acm A 4 g dé 9 en suspension dans 20 ml de chlorure de méthylène, on ajoute 2 ml d'anisole, 2 ml d'éthanedithiol et 20 ml de TFA. Après 20 min à température ambiante, on évapore, on reprend par de l'eau puis on lave et on sèche pour obtenir 4 g de 10; rendement 98%; CCM/(dans le solvant décrit pour 2), Rf : 0,30. 11) Boc-Phe-(D) Trp-Lys-Thr-Phe-Phe-(D) Cys-OPse Msc Acm On dissout 105 g de 10 dans le DES, on ajoute à la solution 31 g de Boc-Phe-ONp, puis 9,9 g de OHBT et une quantité suffisante de N-éthylmorpholine pour que la valeur du pH soit 7. Après 1 h d'agitation à température ambiante, on évapore sous vide. L'huile obtenue est reprise dans l'acétate d'éthyle, le précipité solide est essoré, séché puis lavé à l'eau, à l'acétate d'éthyle et séché. On obtient 102 g de 11, soit un rendement de 89%. 12) H-PHe-(D) Trp-Lys-Thr-Phe-Phe-(D) Cys-OPse, TFA Msc Acm On refroidit au bain de glace 400 ml de TFA contenant 10% d'éthanedithiol et 10% d'anisole. On dissout dans cette solution 101 g de 11. Après 20 min à température ambiante sous agitation on évapore sous vide, le solide formé est repris par l'éther, essoré, lavé trois fois à l'éther et séché. On obtient 106 g de 12, soit un rendement de 97%. 13) Boc-(D) Phe-Phe-(D) Trp-Lys-Phe-Phe-(D) Cys-OPse Msc Acm On dissout 10 g de 12 et 2,6 g de Boc-(D) Phe-ONp dans 60 ml de DMF, on ajoute 0,8 g de OHBT et une quantité suffisante de N-éthylmorpholine pour que le pH soit environ 7. Après 1 h d'agitation, on évapore à sec, on dilue par l'acétate d'éthyle, le solide qui précipite est essoré, lavé trois fois à l'eau et séché puis lavé trois fois à l'acétate d'éthyle, trois fois au méthanol et deux fois à l'acétone. On obtient 9 g de 13, soit un rendement de 83% 14) H-(D) Phe-Phe-(D) Trp-Lys-Thr-Phe-Phe-(D) Cys-OPse, TFA l Msc Acm On refroidit à 0 C 40 ml de TFA contenant 10% d'anisole et 10% d'éthanedithiol. On y ajoute sous agitation 8,8 g du produit 13 préparé ci-dessus. Après 20 min à température ambiante sous agitation, le produit est évaporé 9 sec et le résidu repris dans l'éther. Le précipité formé est essoré, lavé trois fois å l'éther et séché. On obtient 9 g, soit un rendement de 100%. 15) Boc-C.ys(D? Phe-Phe-(D) Trp-Lys-Thr-Phe-Phe-(D) Cys-OPse Acm . Msc Acm Ce composé est obtenu à partir de 14 par addition de Boc-Cys-ONp dans le DES selon le procédé décrit pour la préparation Acm de 13. 16) H-Cys-(D) Phe-Phe-(D) Trp-Lys-Thr-Phe-Phe-(D) Cys-OPse, TFA I I Acm Msc Acm Ce composé est obtenu à partir de 15 selon le procédé décrit pour la préparation de 14. 17) H.-Cys-(D) Phe-Phe-(D) Trp-Lys-Thr-Phe-Phe-Cys-OH Acm Acm On dissout 2,02 g de 16 dans 30 ml de DMF, après refroidissement à O6C, on ajoute 10 ml d'eau, puis 15 ml d'une solution de baryte 0,4 N. Après 30 min d'agitation à température ambiante, on ajoute 40 ml d'eau et on neutralise par du gaz car bonique. On centrifuge, les culots sont lavés à l'eau. Les phases aqueuses sont rassemblées puis extraites quatre fois par l'acétate d'éthyle et évaporées à sec.Le solide est lavé par l'acétate d'éthyle, essoré, lavé à l'éther et séché. On obtient 1,4 g, soit un rendement de 95%. 18) H-Cys-(D) Phe-Phe- (D) Trp-Lys-Thr-Phe-Phe-Cys-OII I Ag Ag On dissout 2,02 g de 17 dans 160 ml d'acide acétique à 50%, la solution est dégazée puis additionnée de 13 ml d'une solution aqueuse de nitrate d'argent (108 mg/ml). Après une nuit à température ambiante, à l'abri de la lumière, on evapore à sec à l'abri de la lumière, le résidu est repris par l'éther, essoré, séché puis lavé deux fois à l'eau. 19) CM 14.479 Le sel d'argent obtenu précédemment est dissous dans 100 ml de DMF, la solution est degazee, on fait barboter de l'hydro- gène sulfuré 5 min jusqu'à saturation, puis on centrifuge. Le surnageant est dégazé sous vide, puis on dilue le milieu par addition de 1900 ml d'acide acétique 0,2 N dégazé. On ajoute ensuite en 15 h, sous agitation, sous azote, la zolution suivante, le pH étant maintenu à 6,8 par de l'ammoniaque : 1 litre d'eau dégazée, 800 mg de ferricyanure de potassium, 1,6 g d'acétate d'ammonium. Après essorage, le solide est lavé à l'eau, puis à l'alcool. D'autre part, le filtrat est passé sur résine AG x 3, puis à pH 5 sur résine Amberlite Gc 50 qui fixe le produit. Celui-ci est ensuite élué par l'acide acétique à 80%. La solution est évaporée à sec puis reprise par l'éther, essorée et séchée. Le solide ainsi formé est identique au précédent, ils sont réunis pour etre purifiés par chromatographie sur Sephadex C 15, avec l'acide acétique à 50% comme éluant. CCM/BPEW1, Rf : 0,72. EXEMPLE 2 : CM 14.480 1) H-Phe-(D) Trp-Lys-Thr-Phe-Phe- (D) Cys-Opse, TFA Msc Acm Ce composé est identique au composé 12 décrit dans l'exemple 1. 2) Boc-Phe-Phe-(D) Trp-Lys-Thr-Phe-Phe- (D) Cys-OPse 'Isc Acm On dissout 43 g de 1 et 10,9 g de Boc-Phe-ONp dans 200 ml de DMF, on ajoute 3,4 g de OHBT et suffisamment de N-éthylmorpholine pour que le pli soit égal à 7. Après 1 h d'agitation, on évapore à sec puis on reprend le résidu par de l'acétate d'éthyle, le précipité formé est essoré, lavé trois fois à l'eau, séché puis lavé trois fois à l'acétate d'éthyle, trois fois au méthanol et trois fois à l'acé- tone. Après séchage, on obtient 41 g, soit un rendement de 88%. 3) H-Phe-Phe-(D)-Trp-Lys-Thr-Phe-Phe-(D) Cys-OPse, TFA I I Msc Acm On refroidit au bain de glace 160 mi de TFA contenant 107. d'éthanedithiol, 10% d'anisole et on ajoute 40,5 g-de 2. Après dissolution, on agite 20 min à température ambiante puis on évapore à sec. Le résidu est repris par de l'éther, puis essoré, lavé trois fois à l'éther et séché. 4) Boc-(D) Ala-Phe-Phe-(D)-Trp-Lys-Thr-Phe-Phe-(D) Cys-OPse Msc Acm On dissout 10 g de 3 et 2,19 g de Boc-(D) Ala-OTcp dans 80 ml de DMF auxquels on ajoute 0,730 g de OHBT et une quantite suffisante de N-ethylmorpholine pour que le pH soit égal à 7. Après 60 min d'agitation à température ambiante, le milieu est évaporé à sec, le résidu est repris par L'acétate d'éthyle, essoré, lavé par l'acétate d'éthyle et séché deux fois de suite puis lave deux fois par une solution saturée de bicarbonate de sodium, deux fois à l'eau et deux fois à l'éthanol, puis séché. On obtient 9,65 g de 4, soit un rendement de 93Z. 5) H- (D) -Ala-Phe-Pbe- (D) --:p-Lys-Thr-Phe-Phe-(D) Cys-OPse TFA sc On refroidit à 0 C 40 ml de TFA contenant 10% d'anîsole et 10% d'éthanedithiol, on ajoute 9,6 g de 4, puis on laisse 20 min sous agitation a température ambiante. Après évaporation à sec, il reste une huile qui est précipitée dans l'éther, puis essorée. On lave trois fois à l'éther puis on sèche pour obtenir 9,6 g de produit; rendement 97%. 6) Boc-Cys-(D) Ala-Phe-Phe-(D) Trp-Lys-Thr-Phe-Phe-(D)-Cys-OPse Acm Msc Acn On dissout 9,5 g de 5 et 2,25 g de Boc-Cys-ONp, on l Acm ajoute une quantité suffisante de N-éthylmorpholine pour que le pH soit égal a 7. Après 60 min d'agitation, le milieu est évaporé à sec, le résidu est repris par l'acétate d'éthyle, essoré lavé deux fois à l'éther, deux fois à l'acétate d'éthyle et séché; il est ensuite lavé trois fois par une solution saturée de bicarbonate de sodium, deux fois à l'eau et deux fois au méthanol. On obtient 9,8 g de 6, soit un rendement de 95%. 7) H-Cys-(D) Ala-Phe-Phe-(D) Trp-Lys-Thr-Phe-Phe- (D) Cys-OPse, TFA Acm Msc Acm Ce composé est obtenu à partir de 6 en suivant le mode opératoire décrit pour la préparation de 5. 8) H-Cys-(D) Ala-Phe-Phe-(D) Trp-Lys-Thr-Phe-Phe- (D) Cys-OH Acm Acm On dissout 2,09 g de 7 dans 30 mi de DMF, on refroidit à 0 C puis on ajoute a cette température 10 ml d'eau et 15 ml de solution aqueuse de baryte de 0,4 N. Après 30 min d'agitation à une température voisine de 15 C, on ajoute 20 ml d'eau et on neutralise par du gaz carbonique. Après centrifugation, le surnageant est extrait trois fois à l'acétate d'ethyle, la phase aqueuse est évaporée à sec puis lavée par l'acétate d'éthyle. Le culot de centrifugation est repris dans 50 ml d'acide acétique à 50% et filtré. Le filtrat est évapore à sec, lavé à l'acétate d'éthyle, séché et lavé à l'eau. On rassemble les deux produits obtenus à partir du filtrat et du surnageant et on obtient 1,2.50 g. 9) H-Cys-(D) Ala-Phe-Phe-(D) Trp-Lys-Thr-Phe-Phe-(D) Cys-Oli Ag Ag Ce produit est obtenu par addition de nitrate d'argent en suivant le mode opératoire décrit pour la preparation de 18 dans l'exemple 1. 10) CM 14.480 Le sel d'argent 9 est mis en suspension dans 400 ml de DMF dégazé, on fait barboter 1 h l'hydrogène sulfuré sous agistation, puis on ajoute 100 ml d'eau dégazée. On centrifuge, la saturation en hydrogène sulfuré du surnageant est controlée après un nouveau dégazage, on dilue le milieu par 2,5 1 d'une solution dégazée de DMF et eau (1 volume de DES pour 2 volumes d'eau). Cette solution est ajoutée en 15 h sous azote à la solution suivante dont le pH est maintenu a 6,8 par addition d'ammoniaque diluée au huitième : 1,5 1 de DMF et eau (mélange volume pour volume), 1 g de ferricyanure de potassium, 2 g d'acétate d'ammonium. On obtient une solution trouble qui est filtrée, passée sur résine AG x 3, amenée a pH = 5 par l'acide acétique, puis passée sur résine Biorex 70. La résine est ensuite lavée par l'acide acétique à 2,5% puis par l'acide acétique à 80%. Apres evaporation et sechage du produit, celui-ci est purifié par chromatographie sur Sephadex G 15, l'gluant étant l'acide acétique à 50%. CCM/BPEW1, Rf : 0,72; [&alpha;]25 = -91,60 (c = 0,5, acide D acétique). EXEMPLE 3 : CM 14.481 i) H-Phe-Phe-(D) Trp-Lys-Thr-Phe-Phe-(D)-Cys-OPse > TFA Msc Acm Ce produit est identique au produit 3 décrit dans l'exemple 2. 2) Boc-Phe-Phe-Phe-(D) Trp-lys-Thr-Phe-Phe (D) Cys-OPse Msc Acm Ce produit est obtenu à partir de 10 g de 1 par addition de 2,3 g de Boc-Phe-ONp dans 80 ml de DES. On ajoute 0,730 g de OHBT et suffisamment de N-éthylmorpholine pour que le pH soit egal à 7. Après 60 min d'agitation, le milieu est évapore puis repris par l'acétate d'éthyle. Après essorage, le solide forme est lavé par l'acétate d'éthyle, séché puis lavé à nouveau par l'acétate d'éthyle, l'eau, une solution saturée de bicarbonate de sodium, l'eau, l'éthanol. Après séchage, on obtient 10,43 g de 2, soit un rendement de 97%. 3) H-Phe-Phe-Phe-(D) Trp-Lys-Thr-Phe-Phe-CD) Cys-OPse, TFA l Msc Acm On refroidit à 0 C 40 ml de TFA contenant 10% d'anisole et 10% d'éthanedithiol, on y ajoute 10,3 g de 2 et on laisse sous agitation 25 min à température ambiante. Le milieu est évaporé à sec, repris par l'éther, essoré, lavé trois fois à l'éther et séché. On obtient 10,3 g de produit, soit un rendement de 99%. 4) Boc-)ys-Phe-Phe-Phe- (D) Trp-Lys-Thr-Phe-Phe- (D) Cys-OPse Acm Msc Acm Ce produit est obtenu à partir de 3 par addition de Boc-Cys-ONp Acm en suivant le mode opératoire décrit pour la préparation de 2. 5) H-Cys -Phe-Phe-Phe- (D) Trp-Lys-Thr-Phe-Phe(D)-Cys-OPse, TFA 1 I Acm Msc Acm Ce produit est obtenu à partir de 4 en suivant le mode operatoire décrit pour la préparation de 3. 6) H-Cys-Phe-Phe-Phe-(D) Trp-Lys-Thr-Phe-Phe-(D) Cys-OH Acm Acm Ce composé est obtenu en suivant le mode opératoire décrit dans l'exemple 2 pour la préparation de 8. 7)- H-Cys-Phe-Phe-Phe-(D) Trp-Lys-Thr-Phe-Phe-(D) Cys-OH I I Âg Ag Ce produit est obtenu en suivant le mode opératoire décrit dans l'exemple 2 pour la préparation de 9. 8) CM 14.481 CM 14.481 est obtenu à partir du sel d'argent 7 en suivant le mode opératoire décrit dans l'exemple 1 pour la préparation de 19. CCM/BPEW1, Rf: 0,73; [&alpha;]25 = - 108,3 D EXEMPLE 4 : CM 14.482 1) Il-Phe-(D) Trp-Lys-Thr-Phe-Phe-(D) Cys-OPse, TFA Msc Acm Ce composé est le produit 12 décrit dans l'exemple 1. 2) Boc-Gly-Phe-(D) Trp-tys-Thr-Phe-Phe- CD) -Cys-OPse sc Acm On dissout 9,6 g de 1 dans 50 ml de DMP, on ajoute 1,08 g de Boc-Cly-OH, 2,47 g de OHBT et 1,85 g de dicyclohexylcarbodiimide, le pH est amené à 7 par addition de N-éthylmorpholine. Après 1 h d'agitation, on ajoute 0,700 g de dicyclohexylcarbodiimide tout en controlant le pH, puis on laisse à nouveau sous agitation pendant 3 h. La dichlohexylurée est essorée et le filtrat est évaporé à sec, le résidu est repris dans l'acétate d'éthyle, essoré, lavé trois fois à l'eau, essoré, lavé quatre fois à l'acétate d'éthyle, trois fois au méthanol, trois fois à l'acétone et séché. On obtient 8,2 g, soit un réndement de 83%. 3) H-Gly-Phe-(D) Trp-Lys-Thr-Phe-Phe-(D)-Cys-OPse, TFA Msc Acm On refroidit à 0 C, 40 ml de TFA contenant 10% d'anisole et 10% d'éthanedithiol. On dissout dans ce mélange 9,5 g de 2, on agite 20 min à température ambiante, puis le milieu est évaporé å sec. Le résidu huileux formé est repris par de l'éther, essoré, lavé trois fois à l'éther et séché. On obtient 9,3 g, soit un rendement de 97%. 4) Boc-Phe-Gly-Phe-(D) Trp-Lys-Thr-Phe-Phe- (D) Cys-OPse Msc Acm On dissout 9,15 g de 3 et 2,2 g de Boc-Phe-ONp dans 100 ml de DES. On aJoute 0,670 g de OHBT et la quantité suffisante de OHBT pour atteindre pH = 7. Après 1 h d'agitation a température ambiante, le milieu est évaporé a sec, le résidu est repris dans l'acétate d'éthyle, le solide formé est essoré, lavé trois fois à l'acétate d'éthyle, trois fois à l'eau, trois fois au méthanol, trois fois à l'acétone et séché. On obtient 9,25- g, soit un rendement de 94%. 5) H-Phe-Gly-(D) Trp-Lys-Thr-Phe-Phe-(D) Cys-OPse, TFA WIsc Acm 5 est obtenu à partir de 4 en suivant le mode opératoire décrit pour la préparation de 3. 6) Boc-Cys-Phe-G1 y-Phe-(D) Trp-Lys-Thr-Phe-Phe- (D) Cys-OPse tIsc Acm 6 est obtenu par addition de Boc-Cys-ONp à 5 en sui Acm vant le mode opératoire décrit pour la préparation de 4. 7) H-Cys-Phe-Gly-Phe-(D) Trp-Lys-Thr-Phe-Phe-(D) Cys-OPse l l l Acm Msc Acm 8,9 g de 6 sont mis en suspension dans 20 ml de chlorure de méthylène, ils sont ensuite traités a 0 C dans du TFA selon le mode opératoire décrit pour la préparation de 5. 8) H-Cys-Phe-Gly-Phe-(D) Trp-Lys-Thr-Phe-Phe-(D) Cys-OH I 1 Acm Msc Acm On dissout 3,3 g de 7 dans 50 ml de DES. Après refroidissement à 0 C on ajoute 20 ml d'eau, puis 22,5 ml de baryte 0,4 N. L'agitation est poursuivie 30 min à une température voisine de 15'C puis on neutralise par dit gaz carbonique ct on dilue par 50 ml d'eau. Après centrifugation, le surnageant est extrait trois fois à l'acétate d'éthyle, la phase aqueuse est évaporée à sec, puis le résidu est repris par l'acétate d'éthyle. On essore le solide formé, lave b l'acétate d'éthyle et sèche. On obtient 2,2 g, soit un rendement de 90%. 9) H-Cys-Phe-Gly-Phe- (D) Trp-Lys-Thr-Phe-Phe-Cys-OH Ag Ag On dissout 2,2 g de 8 dans 160 ml d'acide acétique 3 50/, la solution est dégazée, on y ajoute 17 ml de nitrate d'argent en solution aqueuse à 108 mg/ml. Apr-s une nuit à l'abri de la lumière, on evapore à sec, le résidu est repris par l'éther, essore, lave à l'éther et séché. 10) CM 14,482 CN 14.482 est- obtenu à partir du sel d'argent 9 en suivant le mode opératoire décrit pour la préparation de 19 dans l'exemple 1. CCM/BEPW1, Rf : 0,73. EXEMPLE 5 : CM 14.483 CCM/BPEW1, Rf : 0,66; [&alpha;]25 = +9,1 (c = 0,5, acide acétique). D EXEMPLE 6 : CM 14,498 CCM/BPEW1, Rf : 0,68. EXEMPLE 7 : 14.499 CCM/BPEW1, Rf : 0,68; [&alpha;]20 = -38,1 (c = 0,5, acide acétique). D EXEMPLE 8 : 14.501 CCM/BPEW1, Rf : 0,76; [&alpha;]20 = -2,5 (c = 0,5, acide acétique) D les produits des exemples 5 à 8 ont été préparés selon les modes opératoires décrits pour les exemples précédents. Les peptides de la présente invention ainsi que leurs sels pharmacologiquement acceptables interviennent activement sur le controle de la sécrétion d'hormone de croissance tant chez l'ani- mal que chez l'homme (thérapeutique de l'acromégalie). L'action inhibitrice différentielle de ces produits sur la production d'insuline et de glucagon et dans la régulation glycémique les rend utiles dans le contrle du diabète sucré insuline dépendant ou non insuline dépendant. Ces molécules ont peu ou pas d'action sur les sécrétions digestives, autre facteur de différenciation par rapport au profil de la somatostatine native. Les produits de l'invention ont une faible toxicité; dans aucun cas, lors des essais, les animaux traités n'ont montré de signes alarmants. La gamme posologique d'utilisation clinique de ces substances varie avec les effets thérapeutiques recherchés et avec chaque patient; elle est généralement comprise entre 0,1 et 10 mg de principe actif. Les peptides de la présente invention pourront etre administrés par voie intraveineuse, sous-cutanée ou intramusculaire, en solution dans un solvant tel que le sérum physiologique (solution saline isotonique) ou dans un tampon phosphate et toujours dans des conditions rigoureuses de stérilité; les solutions salines contiennent de 1 à 5% en poids de produits selon l'invention. Les produits selon l'invention ont été examinés en ce qui concerne leur activité biologique. Essais biologigues L'inhibition de la sécrétion des hormones pancréatiques et de l'hormone de croissance (GH) a été déterminée in vivo chez les rats males Sprague Dawley d'origine Charles River de 200 9 220 g. Les dosages d'insuline, glucagon et d'hormone de croissance sont effectués par les techniques radioimmunologiques. L'inhibition de la sécrétion gastrique acide in vitro a été explorée a partir de muqueuses gastriques isolées de cobaye. On détermine dans chaque cas la concentration da peptide inhibant 50% de la sécrétion hormonale ou de la sécrétion gastrique. Dans le tableau suivant les résultats sont exprimés par rapport à la somatostatine utilisée comme produit de référence. L'activité de la somatostatine ayant été dans chaque cas considérée comme égale à 100, les chiffres relatifs aux peptides de l'invention expriment le rapport de l'activité du peptide considéré à l'acti vité de la somotostatine. Inhibition de la sécrétion des hormones pancréatiques, de la GH et de la sécrétion gastrique acide par quatre dérivés de la somatostatine en comparaison avec la somatostatine native. Ineuline Clucagon OH Somatostatine 100 100 100 CM 14,480 83 66 inactif CM 14,482 81 inactif 165 CM 14,483 0 inactif 157 CM 14,499 98 inactif 221 REVENDICATIONS 1 - Analogues de la somatostatine, caractérisés en ce qu'ils répondent A la formule générale dans laquelle . R désigne un H, un acide aminé, un dipeptide comme Ala-Gly par exemple; X1 = (L) Phe, (D) Ala ou liaison simple; . X2 = (L) Phe. (D) Phe ou Gly; X3 = (L) Phe, (D) Phe ou liaison simple; . Cys = (L) Cys ou (D) Cys; et les sels d'addition de ces produits, avec des acides pharmaceu-tiquement acceptables. 2 - Produits selon la revendication 1, caractérisés en ce que l'analogue de la somatostatine a pour formule 3 - Produits selon la revendication 1, caractérisés en ce que l'analogue de la somatostatine a pour formule 4 - Produits selon la revendication 1, caractérisés en ce que l'analogue de la somatostatine a pour formule 5 - Produits -selon la revendication 1, caractérisés en ce que l'analogue de la somatostatine a pour formule 6 - Produits selon la revendication 1, caractérisés en ce que l'analogue de la somatostatine a pour formule 7 - Produits selon la revendication 1, caractérisés en ce que l'analogue de la so,rXatostatine a pour formule 8 - Produits selon larevendication 1, caractérisés en ce que l'analogue de la somatostatine a pour formule 9 - Produits selon la revendication 1, caractérisés en ce que l'analogue de la somatostatine a pour formule 10 - Médicaments utiles notamment pour le traitement de maladies résultant d'un dérèglement de la sécrétion d'hormone de croissance, d'insuline ou de glucagon, caractérisés en ce qu'ils contiennent au moins un produit selon l'une des revendications 1 à 9. 11 - Médicaments selon la revendication 10, caractë- risés en ce qu'ils sont administrés par injection intraveineuse, sous-cutanée ou intramusculaire.