Brevet FR2511868A1 — publié le 19830304

FORMULATIONS PHARMACEUTIQUES COMPRENANT DE L'INSULINE HUMAINE, UN C-PEPTIDE HUMAIN ET DE LA PRO-INSULINE HUMAINE. Le diabète sucré est un trouble métabolique caractérisé par le fait que les tissus du corps Lie parvielent% pas à oxydcr les calbohydlates au régime normal Son facteur le plus important est une défi- cience en insuline, Au cours des 60 dernières années, les personnes souffrant du diabète ont été considéra- blement aidées en recevant des quantités réglées dtin- suline Actuellement, l'insuline utilisée par les diabétiques a été isolée du pancréas des animaux, généralement des bovidés et des porcs L'insuline des bovidés et des porcs a une structure différente de celle de 11 linsuline produite par le pancréas humain. Récemment, par la méthodologie de l'ADN (ADN = acide désoxyribonucléique) recombinant, il est devenu pos- sible de préparer de l' insuline identique à celle produite par le paneréas humain L'utilisation de cette insuline permettra, au diabétique, dlimiter le système naturel plus étroitement que ce n'était pos- sible jusqula present. Néanmoins, il est admis depuis longtemps que la seule a(lini ustratb Jon d'linsulinc à un diabéti- que est insuffisante pour rétablir et/ou maintenir l'état métabol ique normal Bien que l'insuline mani- feste son effet sur le métabolisme des carbohydrates, le diabète sucré provoque des troubles supplémentaires dont la plupart, sinon tous, sont en relation avec la structure et la fonction des vaisseaux sanguins Les déficiences conduisant à ces troubles sont rarement corrigées complètement par la thérapie classique à l insuline. Les anomalies vasculaires associées au dia- bète sont souvent appelées "complications du diabète". Elles consistent généralement en changements micro- angiopathiques dormant lieu à des lésions de la rétine et des reins La neuropathie représente unle complica- 2 2511868 tion diabétique supplementail'e qui peut être en rela- tion ou nion, directement ou indirect Lement, avec les changements mi cloangi opathi ques précités Parmi les manifestations spécifiques des complications du dia- bète, il y a, par exemple: ( 1) les maladies de l'oeil, notamment la rétinopathie, la formation de la cataracte, le glaucome et les paralysies musculaires extra-oculai- res; ( 2) les maladies de la bouche, notamment la gingivite, l'apparition accrue de caries dentaires, la périodontite et une plus forte résorption de l'os alvéolaire; ( 3) les neuropathies motrice, sensorielle et autonome; ( 4) la maladie des-grands vaisseaux; ( 5) la micro-angiopathie; ( 6) des maladies de la peau, notamment le xanthome du diabète sucré, la nécro- biose lipordique du diabète sucré, la furonculose, la mycose et le prurit; ( 7) des maladies des reins, notamment la glomérulosclérose diabétique, la néphro- sclérose artériolaire et la pyélonéphrite; et ( 8) des problèmes au cours de la grossesse, notamment un accroissement des naissances de gros bébés, des mises au monde dtenfants morts-nés, des fausses couches, des mortalités néo-natales et d(les défauts congénitaux. Bon nombre et peut-être la totalité des complications diabétiques résultent du fait qu'à elle seule, l'insuline ne parvient pas à ramener le corps à sonl équilibre hormonal naturel. L.a pl'éente i nvelition I colncelrl (les (coliposi- tions pharmaceutiques permettant d atteindre et de maintenir, chez un sujet diabétique, un état p Lus proche de l'homéostase hormonale naturelle que celui pouvant être obtenu par 1 1 administration d'insuline seule. Dès lors, la présente invention concerne une composition pharmaceutique comprenant, en association avec un support pharmaceutiquement acceptable, de l in- 3 2511868 suline humaine, un C-peptide humain et de la pro-insu- line humaine, le rapport molaire entre ltinsuline humaine et ce C-peptide humain étant d'environ 1:4 à environ 4:1, tandis que le rapport pondérai entre $ l'insuline humaine et la pro-insuline humaine se situe entre environ 1:100 et environ 100:1. Les trois constituants essentiels des compo- sitions pharmaceutiques de la présente invention sont l'insuline humaine, le C-peptide humain et la pro- insuline humaine. L'administration d'une combinaison d'insu- line humaine, d'un C-peptide humain et de pro-insuline humaine en utilisant une composition suivant la pré- sente invention permet d'obtenir une utilisation plus naturelle du glucose et un meilleur contrôle du glu- cose qu'avec l'insuline seule, atténuant ainsi les complications diabétiques néfastes qui ont été décri- tes ci-dessus. La pro-insuline humaine peut être obtenue de diverses manières, notamment par synthèse organique, par isolation du pancréas humain selon la méthodologie classique et, plus récemmunent, selon la méthodologie à l'acide désoxyribonucléique recombinant. Dans ses grandes lignes, la production de pro-insuline en adoptant la méthodologie à l'acide désoxyribonucléique recombinant consiste à obtenir, par isolation et/ou par construction, une séquence de codage d'acide désoxyribonucléique pour la sé- quence des acides aminés de la pro-insuline humaine. On introduit ensuite l'acide désoxyribonucléique de pro-insuline humaine en phase de lecture dans un vé- hicule approprié de clonage et d'expression Le vé- hicule est utilisé pour transformer un micro-organis- me approprié, après quoi le micro-organisme transformé est soumis à des conditions de fermentation conduisant à: (a) la production de copies supplémentaires du vecteur contenant le gène de pro-insuline et (b) l'ex- pression de la pro-insuline ou un produit précurseur de la pro-insuline. Si le produit dlexpression est un précur- seur' de plro-insule, il comprendra général ement la séquence des acides aminés de la pro-insuline humaine réunie, à sa termzinaison amino, à un fragment dunme protéine normalement exprimée dans la séquence de gènes dans laquelle le gène de pro-insuline a été inl o insuline est réunie au fragment de protéine par l'in- termédiaire d'un siège spécifiquement clivable, no- tamment la méthionine Ce produit est habituellement appelé "produit génétique fusionné". La séquence des acides aminés de la pro- insuline est clivée du produit génétique fusionné en utilisant du bromure de cyanogène, après quoi les fractions sulfhydryle de la cystéine de la séquence des acides aminàs de la pro-insul ine sont stabilisées par transformation en leurs S-sulfonates correspon- dants. On purifie le S-sulfonate de pro-insuline obtenu, puis on transforme le S-sulfonate de pro- insuline purifié en pro-insuline par formation des trois liaisons disulfure correctement localisées. La pro-insuline obtenue est ensuite purifiée. De même, un deuxième constituant actif de la composition de la présente invention, à savoir l'insuline humaine, peut être obtenu de diverses ma- nières, notamment par synthèse organique, par isola- tion du pancréas humain selon des techniques classi- ques, par transformation d'insuline animale isolée, par transformation de pro-insuline humaine et par la méthodologie à l'acide désoxyribonucléique recombi- 2 2511868 nanrtt. Toutefois, lorsqu'elle est produite, la pro-insuline humaine peut être clivée par voie enzy- mlatique, par cxemplc, en utilisant de la trypsine et de la carboxypeptidase B pour produire l tinsuline humaine. En adoptant la méthodologie à l'acide déso- xyribonlucléique recombinant d'une manière analogue à celle décrite ci-dessus pour la production de pto- insuline humaine, on peut préparer l 1 insuline humaine par 11 'expression et 11 'isolation séparées de la chaîne A et de la chaîne B de l' insuline humaine en formant ensuite leurs liaisons disulfure correctes. L insuline humaine peut égalem cment être pré- parée à partir de l'insuline de porcs L'insuline humaine se différencie de l' insuline de porcs par un seul acide aminé, crest-à-dire l'acide carboxy-amino- terminal de la chaîne B L'alanine, clest-à-dire 1 acide aminé B-30 de 1 'insuline de porcs, est clivée et remplacée par la thréonine A cet égard, on se référera, par exemple, au brevet des Etats-Unis d'Amé- rique n 3 276 961. Un t'oisième counstitttuant actif de la comxpo- sition de la présente invention, à savoir le C-peptide humain, est une portion d'un peptide présent dans la pro-insuline humaine et auquel sont réunies les chai- nes A et B de 1 ' insuline Ce dernier peptide, appelé "peptide de liaison" est éliminé au cours de la pro- duction d'insuline humaine à partir de pro-insuline. Le peptide de liaison présent dans la pro-insuline humaine répond à la formule: Arg-Arg Glu-Ala-Glu-Asp-Leu-Gln-Va 1 G 1 y-Gln-Va l-Glu- Leu-Gly-Gl y-Gl y-Pro-Gl y-Ala-Gly-S er-L eu-Gln-P ro-L eu- Ala-Leu-Glu-Gly-Ser-Leu-Gln-Lys-Arg. 6 2511868 Le C-p-pti de itluiaili présent clains l a compos i- tion II (de l ' ilnvention se (dittel rncie dlu peptide de liai- son l)ar l élimi iniation (le quatve acides aminés, à savoir deux à chaq(lue extrémité Dès lovs, le C-pep Lide humain a a St ructure sui vante: ( 1 lu-AI a-G t u-Asp-Leu-(i lsn-Val -GI y-l lii-Va I -(ll-l eu-I t y- Gl.y-Gly-Pro-Gly-Ala-Gly-S er-Leu-Gln-Pro-Leu-Ala-Leu- Glu-Gly-Ser-Leu-G Ln. Le C-pepti de humainl q(lui est Un constitiualnt de la composition de l 'invention, peut être obtenu par synthèse chimique lvoir, par exemple, N Yanaihlara, C Yanaihara, M Sakagami, N Sakura, T Hashimoto et T Nishida, "Diabetes" 27 (supplément 1), 149-160 ( 1978) j ou à partir de proinsuline humaine par suite de son elivage en vue (ie former l'insuline humaine. Le C-peptide humain peut également être obtenu conjointement avec l'insuline humaine par le clivage enzymatique de la pro-insuline humaine ainsi qu'on I 'a décrit ci-dessus. Les composi tions (le la présente invention contiennent l'insuline humaine, le C-peptide humain et la pro-insuline humaine L, insuline et la pro- insuline humaines sont présentes dans un rapport pon- déral se situant entre environ 1:100 et environ 100:1. De préféren'ce, 1 e rap)lrt pondéral entr'e J l instu ime et la proinsuline humaines se situe entre environ 1:2 et environ 100:1, mmieux encore, enlt'e environ 1:1 et environ 20:1 et, de manière tout particulière- ment préférée, entre environ 4:1 et environ 20:1 On mentionnera ci-après d'autres intervalles préférés pour le rapport pon(ldéra I entre l'insuline et la pro- insuline humaines: environ 1:30 à environ 100:1; environ 1:15 à environ 100:1; environ 1:10 à environ :1; environ 1:30 à environ 20:1; environ 1:15 à environ 20:1 et environ 1:10 à environ 20:1. 1 1868 Dans la coi qpos i Lion de la présente invention, le rapport molaire entve II insuline humaine et le C- peptide lhumain se si Lue entre envivun 1:4 et environ 4:1 De préférence, le rapport molaire entre l'insu- line humaine et le C-peptide humain se situe entre environ 1:2 et envil'ron 2:1, mieux encore, entre envi- ron l:1 et environ 2:1. Comme on l 'a indiqué, les compositions de la présente invention sont utiles pour favoriser ltob- tention de l'homéostase hormonale naturelle et ainsi empêcher ou atténuer ou encore freiner sensiblement les complications diabétiques bien connues qui ont été mentionnées ci-dessus. Il est admis que certains diabétiques sont inaptes à recevoir efficacement de l'insuline par injection sous-cutanée par suite de la présence, à l'endroit de l'injection, de protéases qui détruisent rapidement l'insuline avant qu'elle ait pu être ab- sor-bée dans le courant sanguin et transportée vers les sièges récepteurs Si ces diabétiques doivent absolument recevoir de l'insuline, ils devront la recevoir par injection intraveineuse Les injections intraveineuses répétées et indispensables sont inop- portunes par suite de l'effet néfaste qu'elles exer- Z 5 cent sur les veines du receveur avec les infections qui y sont associées On a découvert que la pro- insuline lhumaaine nétiaait, pas leg aclhe palr ces p'o- téases dégradant l'insuline et que, partant, elle pouvait être administxrée par injection sous-cutanée. Sa stabilité et, dès lors, sa disponibilité favorisent l'obtention dl'une homéostase hormonale naturelle. De plus, étant donné que l insuline et l a pro-insuline ensemble forment qui est dégradable dans d'autres conditions. 8 -2511868 A la suite (d'études recentes lPudlecki et ai., "Diabetes", 31, supplémenlt 2, 126 A ( 1982)l, on a également noté que la pro-insuline humaine se si- tuait à l intérieur de tissus cibles, par exenmple, des cellules de graisse Bien que son action intra- cellulaire particulièr ele à une échelle moléculaire soit encore indéterminée, ces découvertes étayent davantage la description donnée dans la présente spé- cification selon laquelle la pro-insuline humaine joue un rôle actif et est indispensable pour l'obten- tion de l'homéostase hormonale naturelle. Outre le fait qu'elles favorisent l'obten- tion de l'homéostase hormonale naturelle, les composi- tions de l'invention dans lesquelles le rapport pondé- ral entre l'insuline et la pro-insuline humaines est égal ou inférieur à environ 1:1, offrent l'avantage supplémentaire d'exercer un effet hypoglycémique de très longue durée Dans les compositions préférées offrant cet avantage supplémentaire, le rapport pon- déral entre l'insuline et la pro-insuline humaines se situe entre environ 1:100 et environ 1:1 D'autres rapports pondéraux préférés entre l'insuline et la pro-insuline humaines se situent entre environ 1:3 () et environ 1:1, plus particulièrement entre environ 1:30 et environ 1:10 ou entre environ 1:10 et environ 1:1 Grâce à ces compositions, il est moins néces- saire de recourir à des additifs classiques pour l a formulation de l'insuline, par exemple, la protamnine qui est p'résentle dlans I tinsul ine NPII (protamine neutre Hagedorn) ou le zinc en excès qui est présent dans l'insuline retard Ces deux additifs sont artificiels et non physiologiques. Dans "Diabetes" 31, supplément 2, 135 A ( 1982), Schl uter et al décrivent des études démon- trant que la fixation du récepteur d'insuline humaine 9 -25 112511868 est favorisée palr la presence de pro-insuline humaine. Ces résultats étayent également davantage la descrip- tion de la présente spécil' itcation selon laquelle la disponibilité et la présence de la pro-insuline humai- ne favorisent ou rétablissent l' thoméostase hormonale naturel 1 e. Bien entendu, la quantité dans laquelle les compositions de la présente invention doivent être utilisées pour maintenir l lhoméostase hormonale na- turelle ou pour atteindre un état se rapprochant plus étroitement d(le J Ihoméostase hormonale naturelle chez un sujet diabétique, dépendra de la gravité de l'état diabétique De plus, cette quantité variera en fonc- tion du mode dtadministration Enfin, la quantité de composition administrée et la fréquence de cette ad- ministration seront laissées au choix dlu médecin par- ticulier Toutefois, en règle générale, le dosage se situera dans I 'intervalle donnant envi ron 0,02 à envi- ron 5 unités d'activité d'insuline humaine par kg du poids du corps et par jour, de préférence, entre en- vivon 0,1 et environ 1 unité d'activité dtinsulilie humaine par kg du poids du corps et par jour. On administre la composition parl voie pa- rentérale, notamment, par voie sous-cutanée, par voie intramusculaire et par voie intraveineuse Les com- positions de la présente invention comprennent les ingrédlients actifs, à savoir l'insuline humaine, le C-peptide humain et la pro-insuline humaine, ensemble avec un support pharmaceutiquement acceptable pour ces derniers et éventuellement avec d'autres ingrédients thérapeutiques La quantité totale des ingrédients actifs présents dans la composition se situe entre environ 99,99 et environ 0,01 % en poids Le support doit être acceptable en ce sens qu'il doit être coinm- patible avec d'autres composants de la composition et 2511868 i l ne doit pas être ntéfaste pour le receveur d(e celil- ci. Les compositions de la prsenlte inven Ltion, qui sont, appropriées)po 11 r une administrat ion palr voie parentérale, comnprennuent avantageusement des suspen- sions et/ou des solutions aqueuses stériles des in- grédients pharmaceutiquement actifs, ces solutions ot suspensions étant, de préférence, rendues isotoni- ques avec le sang du receveur el utilisant générale- mnient du chlorure de sodium, de la glycérine, du glu- cose, du mannitol, du sorbitol et des agents analogues connus En outre l es compositions peuvent contenir l'un ou I autre adijuvant tel que des agents tampons, des agents de conservation, des agents dispersants, des agents favorisant un début rapide de l'activité, des agents favorisant une prolongation d'activité et d'autres agents connus Comme agents spécifiques de conservation, on mentionnera, par exemple, le phénol, le 'm-crésol, le p-hydroxybenzoate de méthyle et autres. Conmie agents tampons spécifiques, on mentionnera, par exemple, le phosphate de sodium, l'acétate de sodium, le citrate de-soditiumni et autres. De plus, on peut utiliser un acide tel que l'acide chlorhydrique, ou une base telle que llhydro- xyde de sodium pour régler le pli En règle générale, le pli de la composition aqueuse se situera entre en- viron 2 et environ 8, de préférence, entre environ 6,8 et environ 8. Parmi d'autres additifs appropriés, on men- tionnera, par exemple, l'ion zinc bivalent dont la quantité, s'il est présent, se situe généralemîent entre environ 0,01 mg et environ 0,5 mg par 100 unités d'insuline humaine, de même qu'un sel de protamine (par exempl e, sous forme de son sulfate) dont la quantité, s'il est présent, se situe généraleiement 11 2511868 entre environ 0,l mg ";e environ 3 ng par 100 unités d'activité d'linsuline humaine. On donnera ci-après d(les exemples de composi- tions pharmaceutiques particulières suivant la pré- sente invention. Exemple 1 Formulation d 'insuline humaine régulière neutre/ C-peptide humain/proinsuline humaine lrapport molaire entre l'insuline humaine et le Cpeptide humain = 1:4 et rapport pondéral entre llinsuline humaine et la pro-insuline humaine = 100:1 à 40 unités d'insuline par cm 3 l. Pour préparer 10 cmin 3 de la composition, on mélange: Insuline zinc humaine ( 28 unités/mg) 400 unités C-peptide humain 30 mg Pro-insuline humaine 0,14 mg Phénol(distillé) 20 mg Glycérine 160 mg ZO Eau et soit de l t'acide chlorhydrique à 10 %, soit de l'hydroxyde de sodium à 10 %: quantité suffisante pour obtenir une composition d'un volume de 10 cm 3 et d'un pli final de 7-7,8. Exempl e 2 Formulation d'insuline humaine régulière neutllre/ C-peptide humain/pro-insuline humaine lrapport molaire entre 11 insuline humaine et le -C-peptide humain: l:1; rapport pondéral entre l'insuline humaine et la pro- insuline Ihumaine -= 20:1 à 100 unités dtl'insuline par' cm 3 l. Pour pvr 1)paer 10 ecii 3 d(c la comiposition, on mélange: Insuline zinc humaine ( 28 unités/mg) C-peptide humain Pro-insuline humaine 1.000 unités 19 mg 1,8 mg 12 2511868 * Phénol (distillé) 20 mg Glycérine 160 mg Eau et soit de l'acide clh Lorlhydrique à 10 %, soit de l'hydroxyde de sodium à 10 %: quantité suffisante pour obtenir une composition ld'un volume de 10 cm 3 et d'un pli final de 7-7,8. Exemple 3 Formulation d'insul ine humai ne protamine-zinc/C-pepti- de humain/pro-insuline humaine lrapport molaire entre l'insuline humaine et le C-peptide humain = 1:1; rapport pondéral entre llinsuline humaine et la pro- insuline humaine = 20:1 à 40 unités d'insuline par cm 3 l. Pour préparer 10 cm 3 de la composition, on mélange: Insuline zinc humaine ( 28 unités/mg) 400 unités C-peptide humain 8 mg Pro-insuline humaine O,7 mg Phénol (distillé) 25 mg Oxyde de zinc 0,78 mg Glycérine 160 mg Sulfate de protamine 4-6 mg Phosphate de sodium (cristaux) 38 mg Eau et soit de l'acide chlorhydrique à 10 %, soit de l l'hydroxyde de sodium à 10 %: quantité suffisante pour obtenir une composition d'un volume de 10 cm 3 et d'un pll final (le 7,1-7,4. Exemple 4 Formulation d'insuline humaine protamine-zinc/C-pep- tide humain/pro-insuline humaine lrapport molaire entre l'insuline humaine et le C-peptide humain = 2:1; rapport pondéral enlre l'in uuline hl Lai Lne et la pro- insuline humaine = 1:1 à 100 unités d'insuline par cm 3 l. Pour préparer 10 cm 3 de la composition, on mélange: 13 2511868 Insuline zinc humaine ( 28 unités/lmg) 1 000 unités C-peptide humain 9 mg Pro-insuline humaine 36 mg Phénol (distillé) 25 mg Oxyde de zinc 2,0 mg Glycérine 160 mg Sulfate de protamine 10-15 mg Phosphate de sodium (cristaux) 38 mg Eau et soit de l'acide chlorhydrique à 10 %, soit de l'hydroxyde de sodium à 10 %: quantité suffisante pour obtenir une composition d'ul volume de 10 cm 3 et d'un p H final de 7,1-7,4. Exempl e 5 Formulation d' insuline humaine isophane-protaminne- zinc/C-peptide humain/pro-insuline humaine lrapport molaire entre l 'insuline humaine et le C-peptide hu- main = 1:1; rapport pondéral entre l' insuline humaine et la pro-insuline humaine = 4:1 à 40 unités d'tinsuline par cnm 3 l Pour préparer 10 cm 3 de la composition, on mélange: Insuline zinc humaine ( 28 unités/mg) 400 unités C-l)pcptidc Ihuiain 8 mg Pro-insuline humaine 3,6 mg m-crésol (distillé) 16 mg Phénol (distillé) 6,5 mg, Glycérine 160 mg Sulfate de protamine 1,2-2,4 nmg Phosphate de sodium (cristaux) 38 mg Eau et soit de l'acide chlorhydrique à 10 %, soit de l'hydroxyde de sodium à 10 %: quantité suffisante pour obtenir une composition d'un volume de 10 cm 3 et d'un p H final de 7,1-7,4. Exemple 6 Formulation d insuline hllumaine isopliane-prlotamine- zi Jnc/C-pepti(le lhumain/l)ro-insu line uimiai ne lrapport molaire entre l'insuline humaine et le C-peptide humain = 4:1; rapport pondéral entre l'insuline hu- maille et la pro-insulinle hummaine = 1: 2 à 100 unités d'insuline par cm 3 l. Pour préparer 10 cm 3 de la composition, on mélange: Insuline zinc humaine ( 28 unités/mg) 1 000 unités C-peptide humain 5 mg Pro-insuline humaine 71 mg m-crésol (distillé) 16 mg Phénol (distillé) 6,5 mg Glycérine 160 mg Sulfate de protamine 3,0-6,0 mg Phosphate de sodium (cristaux) 38 mg Eau et soit de l'acide chlorhydrique à 10 %, soit de l'hydroxyde de sodium à 10 %: quantité suffisante pour obtenir une composition d'un volume de 10 cm 3 et d'un pli final de 7,1-7,4. Exemple 7 Formulation d'une suspension d'insuline zinc humaine/ C-peptide humain/pro-insuline humaine lrapport molai- re entre l'insuline humaine et le C-peptide humain = 1:2; rapport pondéral entre l'insuline humaine et la pro-insuline humaine = 1:10 à 40 unités d'insuline par cm 3 l. Pour préparer 10 cm 1113 de la composition, on mélange: Insuline zinc humaine ( 28 unités/mg) 400 unités C-peptide humain 15 mg Pro-insuline humaine 143 mg Acétate de sodium (anhydre) 16 mg Chlorure de sodiumi (granulaire) 70 mg 22511868 p-hydroxybenzoate de méthyle 10 mg Oxyde de zinc 0,63 nig Eau et soit de l'acide chlorhydrique à 10 %o, soit de l'hydroxyde de sodium à 10 %: quantité suffisante pour obtenir une composition d'un volume de 10 cm 3 et d'un p H final de 7,2-755. Exemple 8 Formulation d'une suspension dtinsuline zinc humaine/ C-peptide humain/pro-insuline humaine lrapport molaire entre ltinsuline humaine et le C-peptide humain = 1:1; rapport pondéral entre l insuline humaine et la pro- insuline humaine 20:1 à 100 unités d'insuline par cn 3 l. Pour préparer 10 cm 3 de la compositions on mélange: Insuline zinc humaine ( 28 unités/mg) 1 000 unités C-peptide humain 19 mg Pro-insuline humaine 1,8 mg Acétate de sodium (anhydre) 16 mg Chlorure de sodium (granulaire) 70 mg p-hydroxybenzoate de méthyle 10 mg Oxyde de zinc 1,6 mg Eau et soit de l'acide chlorhydriquc à /1 %, soit de l'hydroxyde de sodium à 10 %: quantité suffisante pour obtenir une composition d'un volume de 10 cm 3 et d'un p H final de 7,2-7,5. Exemple 9 Formulation dl'insuline humaine régulière neutre/C-pep- tide huaiîn/pro-insuli'ie humaine lrapport molaire entre l'insuline humaine et le C-peptide humain = 1:4; rapport pondérai entre l insuline humaine et la pro- insuline humaine = 100:1 à 40 unités dtinsuline par cm 3 l Pour préparer 10 cm 3 de la compositions on mélange: 16 2511868 Insuline sodium humnaine ( 28 unités/mg) 400 unités C-peptide humain 30 mg Pro-insuline humaine 0,14 mg Phénol (distillé) 20 mg Glycérine 160 mg Eau et soit de l'acide chlorhydrique à 10 %, soit de l'hydroxyde de sodium à 10 %: quantité suffisante pour obtenir une composition d'un volume de 10 cm 3 et d'un p H final de 7-7,8. Exemple 10 Formulation d'insuline humaine régulière neutre/C-pep- tide humain/pro-insuline humaine lrapport molaire entre l'insuline humaine et le C-peptide humain -= 1:1; rapport pondéral entre l'insuline humaine et la pro- insuline humaine = 20:1 à 100 unités d'insuline par cm 3 l. Pour préparer 10 cm 3 de la composition, on mélange: Insuline sodium humaine ( 28 unités/mg) 1 000 unités C-peptide humain 19 mg Pro-insuline humaine 1,8 mg Phénol (distillé) 20 mg Glycérine 160 mg Eau et soit de l'acide chlorhydrique à 10 %, soit de l'hydroxyde de sodium à 10 %: quantité suffisante pour obtenir une composition d'un volume de 10 cm 3 et d'un p H final de 7-7,8. 3 o REVENDICATIONS 1 Composition pharmaceutique caractérisée en ce qu'elle comprend en association avec un support pharmaceuti- quement acceptable, de l'insuline humaine, un C-peptide humain et de la pro-insuline humaine dans des rapports tels que le rapport molaire entre l'insuline humaine et le C-peptide humain se situe entre environ 1: 4 et environ 4: 1, tandis que le rapport pondéral entre l'insuline humaine et la pro-. insuline humaine se situe entre environ 1: 100 et environ : 1. 2 Composition suivant la revendication 1, carac- térisée en ce que le rapport molaire entre l'insuline humaine et le Cpeptide humain se situe entre environ 1: 2 et environ 2: 1 et de préférence entre environ 1: 1 et environ 2: 1. 3 Composition suivant la revendication 1, carac- térisée en ce que le rapport pondéral entre l'insuline hu- maine et la pro-insuline humaine se situe entre environ 1: 10 et environ 100: 1 et de préférence entre environ 1: 2 et environ 100: 1. 4 Composition suivant l'une quelconque des reven- dications 1 et 3, caractérisée en ce que le rapport pondéral entre l'insuline humaine et la pro-insuline humaine se situe entre environ 1: 1 et environ 20: 1 et de préférence entre environ 4: 1 et environ 20: 1. Composition suivant la revendication 1, carac- térisée en ce qu'elle contient l'ion zinc bivalent. 6 Composition suivant la revendication 1, carac- térisée en ce qu'elle contient un sel de protamine. 7 Composition suivant la revendication 1, carac- térisée en ce que le rapport pondéral entre l'insuline humaine et la proinsuline humaine se situe entre environ 1: 30 et environ 100: 1 et de préférence entre environ 1: 15 et environ 100: 1. 8 Composition suivant la revendication 1, carac- térisée en ce que le rapport pondéral entre l'insuline humaine et la proinsuline humaine se situe entre environ 1: 30 et 18 2511868 environ 20: 1 et de préférence entre environ 1: 15 et environ 20: 1 ou entre environ 1: 10 et environ 20: 1 9 Composition suivant la revendication 1, carac- térisée en ce que le rapport pondérai entre l'insuline humaine et la proinsuline humaine se situe entre environ 1: 100 et environ 1: 1 et de préférence entre environ 1: 30 et environ 1: 1 ou entre environ 1; 10 et environ 1: 1. la Composition suivant la revendication 1, carac- térisée en ce que le rapport pondérai entre l'insuline humaine et la proinsuline humaine se situe entre environ 1: 30 et environ 1: 10. : t