Brevet FR2518531A1 — publié le 19830624

L'invention est relative à un procécé d'amélioration du rendement dans la multiplication in vitro de plantes cultiv l'amélioration du rendement étant obtenue, selon l'invention, par un traitement au moyen de solutions aqueuses de composés d formules générales O *,R (I) \R 2 et/ou H H O I I l l R C 'CH 2 N N R( Dans la formule générale (I), les substituants ont la significi tion suivante: R peut représenter un radical méthyle, chloro méthyle, dichlorométhyle ou trichlorométhyle; R 1 et R 2 peuven être semblables ou différents et représenter un radical alkyle de 1 à 10 atomes de carbone, un radical alcényle de 2 à 10 atomes de carbone, 'un rédical cycloalkyle de 3 à 9 atomes de carbone, un radical phényle ou benzyle ou encore un atome d'hy drogène, sous la réserve de R 1 et R 2 ne peuvent pas être simu: tanément des atomes d'hydrogène, ou bien R et R peuvent form hétéroatomesidentiques ou différents, de préférence des hétéro- atomesd'azote ou d'oxygène Dans la formule générale(II), la signification de R est la même que dans la formule générale (I) et N est un nombre entier de 1 à 8. Les procédés de multiplication de plantes par culture de tissus, opérés in vitro, se sont largement répandus dans la pratique au cours des deus dernières décennies Aux E U A, on Z 518531 a fondé plus de 20 laboratoires importants pour la multipli- cation et aussi en Europe occidentale, il existe de nombreux laboratoires o 100 à 200 000 plantes sont obtenues tous les mois grâce àla micromultiplication par culture de tissus. En pratique, l'essence de la multiplication par cul- turee de tissus réside dans le fait qu'en partant du méris- tème des extrémités de pousses et des extrémités radiculaires on peut, dans des conditions stériles, multiplier des plantes exemptes de tous parasites végétaux, avec une vitesse qui dé- passe de plusieurs ordres de grandeur la vitesse de multipli- cation usuelle, et ceci avec un encombrement en surface notablement réduit et par conséquent plus économiquement. En Hongrie, le procédé de multiplication de plantes par culture de tissus se répand actuellement dans de grandes entreprises. Bien que la multiplication par culture de tissus soit plus économique queles méthodes usuelles de multiplication, on n'a pas pu tirer parti des possibilités qu'elle comporte, étant donné les différents défauts de procédés connus. Le plus grand défaut des procédés connus jusqu'ici réside dans le fait que jusqu'à présent alors que les plantes se mumtiplient de façon illimitée in vitro, 20 à 60 % de plan- tes cultivées dans des conditions stériles périssent selon la culture dont il s'agit lorsqu'on les transplante dans le sol, dans des conditions moins favorables que les conditions antérieures C Broome, Zimmermann; Hort Science, 13, 151 à 153 ( 1978); Earle, Langhans, Hort Science, 10, 608 à 610 ( 1975); Sutter, Langhans, J Am Soc, Hort Science, 104, 494 à 496 ( 1979)l Les chercheurs s'occupant de la question se sont effor- cés, par une amélioration des conditions techniques de la cul- ture in vivo (moindres variations de température, forte humi- dité relative etc), d'améliorer l'efficacité de la mumltipli- cation mais ces mesures n'ont pas conduit au succès désiré. La présente invention s'est fixée pour but d'étudier -251851 le procédé de multiplication avec culture de tissus, et d'éclaircir ce qui cause la mauvaise faculté d'adaptation des plantes multipliées in vitro et le grand pourcentage de plant repiquées qui périssent. Un autre but des recherches entreprises était d'élabc rer un procédé à l'aide duquel on puisse améliorer notablemer l'efficacité de la multiplication et avec lequel la majorité des plantes multipliées in vitro soient également viables in vivo et se développent rapidement. A cet effet, dans des expériences en serre et en plei terre, on a-étudié la composition des cires et des lipides membranaires de plusieurs plantes cultivées (oeillet, gerber E vigne, fougère) ainsi que le processus de biosynthèse de ces constituants cellulaires A la suite de ces expériences, on E constaté que chez les plantes multipliées par culture de tis E on pouvait mettre en évidence des modifications notables de l structure des constituants cellulaires mentionnés. Il est apparu que la synthèse des cires revêtant la surface des feuilles est freinée On a constaté qu'alors que chez les plantes cultivées de façon usuelle, les acides gras fortement insaturés sont synthétisés dans les constituants lipophiles de la membrane cellulaire, la synthèse des acides gras fortement insaturés est freinée chez les plantes multi- pliées par culture de tissu Il s'ensuit que les membranes oellulaires deviennent fragiles et ne peuvent pas accomplir convenablement les différentes fonctions membranaires. Dans une série d'expérience, on a étudié par la tech- nique des isotopes la composition des constituants cireux de E plantes cultivées par le procédé usuel et par le procédé de multiplication in vitro On a traité les plantes par une soli tion de l-14 C-acétate ayant une activité de 10 p Ci/m=ol, à une température de 250 C, par une incubation de 4 heures, puii on a séparé les constituants cireux par chromatographie en couche mince et on a déterminé leurs proportions sur le base de l'activité spécifique. Les résultats des expériences sont récapitulés au tableau suivant: nô c:A-+ 4, hars, Ac c+44- -n 4-e- n,; N Cfli Nt Q ACIDE HYDROXY-ALCOOL ALCOOL ALDE ESTER HYDRAT Ei DICETONE PRIMAI SECON-HYDE DE CAR-, RE DAIRE BONE Témoin 31,13 3,32 19,44 1,53 14,33 5,40 24,84 In vitr 42,56 traces 3,24 2, 04 20,95 2,71 28,48 _ _ 4 2, 56 _ D'après ces résultats de mesure, on peut constater que dans les cires des plantes multipliées in vitro, la distribu- tion des constituants s'écarte nettement des plantes témoins. L'accumulation des acides augmente la perméabilité de la sur- face des feuilles et la diminution de la quantité d'alcools primaires a un effet analogue. Ces deux phénomènes se déroulent simultanément et par suite de leur action, les plantes cultivées in vitro, une fois transplantées en pleine terre (in vivo), ne peuvent pas mainte- nir la teneur en eau des cellules. On a également étudié la composition en acides gras des lipides totaux isolés en partant des plantes cultivées des deux façons Les résultats sont récapitulés au tableau suivant Composition en acides gras des lipides % ACIDE PAL ACIDE PAL -ACIDE ACIDE ACIDE ACIDE MITIQUE MITOLEIQUE STEARIQUE OLEIQUE LINOLE-LINOLE- IQUE NIQUE ombre d'atomes 16 16 18 18 18 18 de carbore Nombre de liaisons O 1 O 1 2 3 insaturées Témoin 14,72 0,79 0,59 5,53 30,29 48,07 In vitro 25,82 3,52 7,11 27,97 17,18 18,04 | _____________________ __________________________________________________ _________________ __________________ __________________ I La modification de la composition en acides gras mon- tre que dans le lipide de la plante cultivée in vitro, l'acide oléique s'accumule dans une mesure élevée Les étapes de désa- turation qui se déroulent, de l'acide oléique à l'acide lino- lénique, sont probablement freinées pour une raison quelconque. Les acides gras polyinsaturés (comme les acides-linoléique et linolénique) jouent un rôle notable dans la flexibilité des membranes cellulaires et donc dans l'adaptabilité des plantes. Si les acides gras insaturés manquent dans les membranes cellu- laires, il s'ensuit que l'adaptabilité des plantes diminue notablement. Ces expériences confirment que chez les plantes mul- tipliées in vitro, la biosynthèse des cires de la surface des feuilles et en premier lieu des acides gras présents dans les membranes cellulaires est amoindrie et c'est pourquoi les plantes retirées du ballon ne sont pas en mesure de supporter même des variations minimes de température et, à cause des dom- mages causés aux membranes, se dessèchent et prérissent pour une part notable même dans un environnement à haute teneur en humidité atmosphérique Une fois ces faits connus, les recher- ches ont visé à découvrir comment la composition des constituant cireux ainsi que le rapport des acides gras des lipides et leur biosynthèse peuvent être influencés dans la multiplication in vitro. Le but de la présente invention était d'élaborer un pro- cédé avec lequel on puisse diminuer notablement le dommage subi après transplantation par les plantes cultivées in vitro et améliorer l'adaptabilité des plantes. Au coures des recherches effèctuées sur une grande échelle, on a trouvé que si l'on traite les plantes, se multi- pliant par ailleurs par culture de tissus de manière en elle- même connue, par la solution aqueuse d'un composé de l'une des formules générales (I) et (II) ou encore par la solution aqueu- se de deux ou plusieurs composés de l'une des formules (I) et (II) ou par la solution aqueuse d'un mélange des deux, le dépé- rissement des plantes cultivées in vitro, une fois transplan- tées in vivo, diminue notablement et qu'un nombre notablement plus grand de plantes survivent à la transplantation et qu'en outre, le développement des plantes survivantes devient plus vigoureux. Pour effectuer le traitement par la solution aqueeuse des composés de formule générale (I) ou (II), on peut dissoudre le composé à une concentration de 1 à 20 mg/l dans le milieu nutritif d'enracinement, mais on peut aussi, avant de trans- planter les plantules cultivées sur le milieu nutritif d'enra- cinement, plonger celles-ci (c'est-à-dire plonger leur système radiculaire) dans la solution aqueuse (concentration de 1 à 20- mg/l) du composé de formule (I) ou (II) On peut aussi, pour effectuer le traitement, transplanter les plantules cultivées in vitro dans un mélange de terre imbibé de la solution aqueuse des composés de formule générale (I) ou (II) On peut aussi, après la transplantation des plantules cultivées in vitro, les arroser, éventuellement même plusieurs fois, avec la solution aqueuse des composés de formule générale (I) ou (II) à une con- centration de 5 à 15 mg/l. Les composés de formule générale (I) et (II) sont connus par les références suivantes, ou peuvent être préparés selon des procédés décrits dans ces références: Res Dicl ( 1976) 143 à 148; J Agric Food Chem ( 1978), 26, 1, 137 à 140; J Agric. Food Chem ( 1979), 27, 3, 543 à 547, et Houben-Weil: "Methoden der organischen Chemie", volume XI/2,2,3 à 37 ( 1958). En outre, on a examiné comment les constituants cireux les plus importants des-plantes traitées par la solution aqueuse des composés de formule générale (I) ou (II) et multipliées par culture de tissus in vitro se modifient en comparaison de plan- tes non traitées et quelle influence le traitement exerce sur la composition en acides gras des lipides totaux de la plante. Dans les expériences, on a utilisé des milieux nutritifs de la composition suivante pour la culture in vitro des plantes Murashige, T Skoog, F Physiol Plant 15, 473 à 497 ( 1962) Ca C 12 À Co C 12 Cu SO 4 À Fe Na EDTA H 3 BO 3 H 3 83 KH 2 PO 4 KJ KNO 3 Mg 504 Mn SO 4 Na H 2 PO 4 Na 2 Mo O 4 NH 4 NO 3 2 H 20 2 H 20 H 20 439,300 0,025 0,025 336,600 mg/1 mg/1 ml/1 mg/1 6,200 mg/1 ,000 mg/i 0,830 mg/1 1900,000 mg/1 7 H 20 4 H 20 2 H 20 370,000 22,300 96,000 mg/1 mg/1 mg/l 2 H 20 0,250 mg/1 1650,000 mg/1 )n dissout les corps Zn SO 4 7 H 20 sucre inositol acide nicotinique chlorhydrate de thiamine chlorhydrate d pyridoxine sulfate d'adé- nine 2 H 20 acide indola- cétique kinétine agar-agar 8,600 mg/l 3-45,000 g/l ,000 mg/1 ,000 mg/1 , 000 mg/1 le ,000 mg/1 0-80,000 mg/1 0-10,000 0-30,000 7-10,000 mg/l mg/1 g/1 énumérés dans de l'eau distillée, on ajuste le p H de la solution à 5,8 puis on ajoute l'agar- agar et on fait bouillir le milieu nutritif jusqu'à clari- fication, après quoi on l'introduit,-dans des conditions stériles, dans les ballons dont on bouche l'ouverture avec un bouchon de papier On place alors les ballons dans un auto- clave et on stérilise le milieu nutritif à une température de 121 C Dans la première série d'expérience, parmi les composés de formule générale (I), on étudie l'action de la dichloracé- thyl-hexaméthylène-imine sur la synthèse des constituants cireux les plus importants de l'oeillet Parallèlement, on cul- tive les plantes par une technique classique ainsi que par une technique de culture de tissus in vitro, sur un milieu nutri- tif de la composition ci-dessus et sur un milieu nutritif auque on a ajouté, avant stérilisation, 6 mg/1 de dichloracétyl-hexa- méthylène-imine A la mffieme phase de développement des plantes on détermine le pourcentage des deux constituants cireux les plus importants, par la méthode déjà décrite plus haut Les valeurs mesurées sont indiquées au tableau suivant: Constituants cireux % Procdé de culture- Procédé de culture acides alcools primaires classique (témoin) 32,11 20, 55 in vitro 45,21 3,05 in vitro selon 30,73 22,18 l'invention Les résultats des expériences montrent nettement que sous l'action de la dichloracétyl-hexaméthylène-imine, la-com- position des constituants cireux de l'oeillet cultivé in vitro s'établit à un niveau similaire à celui des plantes cultivées de façon classique. Dans une série suivante d'expériences, on a examiné comment, parmi les composés de formule générale (I), l'aappli- cation de dichloracétyl-hexaméthylène-imine à différentes con- centrations influence la composition en acides gras des lipides totaux des oeillets cultivés in vitro Lors des expériences, on a cultivé des oeillets in vitro sur le milieu nutritif déjà décrit, à raison de 250 ml chaque fois, additionné de différentes quantités de dichloracétylhexaméthylène-imine et au'méme stade de développement, on a étudié, par la méthode décrite plus-haut, la composition en acides gras des lipides totaux. Les résultats de mesure figurent au tableau suivant: N Concentration Acides gras % de traitement- de traitement acide pal acide acide acide acide acide mg/i mitique palmito-stéari oléi linolé linoléni- léique que que ique que O,00 25,82 3,89 7,11 27,97 17,18 18,04 ,60 25,16 3,09 18,94 32,85 23,96 ,80 23,08 4,37 18,53 25,18 28,85 61,60 24,61 2,50 16,68 32,85 23,26 154,00 21,13 3,38 19,15 29,20 27,04 ,00 26,57 4,00 25,71 25,29 18,43 Les résultats de mesure illustrent bien le fait que sous l'action de lad chloracétyl-hexaméthylene-lmlne appli- à différentes concentrations, la composition en acides gras s'est déplacée dans le sens des acides gras insaturés. L'invention pourra être mieux comprise à l'aide des exemples suivants qui sont donnés uniquement à titre d'illus- tration de l'objet de l'invention, mais n'en constituent en aucune manière une limitation. Exemple 1 Obtention d'oeillets multipliés par culture de tissus. On prépare dans des conditions stériles le méristàme de boutures d'oeillet cultivées en serre selon un procédé en lui-même connu et on le multiplie sur le milieu nutritif Mura- shige-Skoog déjà décrit Les méristèmes d'oeillet commencent d'abord à croître, puis à se diviser Sur chaque extrémité de poussée, 6 semaines après l'introduction dans le milieu nutritif, il se développe 10 à 15 pousses qui si on les place séparément sur un milieu nutritif frais conviennent à la multiplication ultérieure La vitesse de multiplication est de 10 à 15 pousses par mois. Après la phase de division des pousses d'oeillet, on effectue sur un milieu nutritif séparé l'induction de la forma- tion des racines, en utilisant à cet effet un milieu nutritif de base de concentration 5 fois moindre, avec cette différence que l'on ajoute au milieu 0,1 mg/l d'acide indolacétique. En partant du milieu nutritif, en ajoutant différentes quantités de dichloracétyl-hexaméthylène-imine, on prépare une série de concentration et la culture s'effectue sur ces milieux. Lorsque la formation des racines a atteint le degré désiré, on transfère les plantules d'oeillet dans une serre pour la culture in vivo. Les plantules transférées s'adaptent dans une mesure différente aux conditions de la culture in vivo, il y a des plantes qui périssent et des plantes qui s'adaptent, survivent à la transplantation et se développent. Lors de la multiplication in vivo, parmi les-plantules cultivées sur différents milieux nutritifs, on compte le nombre de celles qui ont péri ou survécu et ces pourcentages sont réca- pitulés au tableau suivant: Teneur en dichloracétyl-hexa Survie, % méthylène-imine du milieu nutritif, mg/l 1 45 2 48 4 64 6 96 8 87 75 12 70 14 50 43 O (témoin) 46 Les indications de mesure montrent que dans le cas des oeillets, par l'addition de dichloracétyl-hexaméthylène-imine au milieu nutritif, on peut porter la survie en serre à 96 % avec une concentration de 6 mg/l, donc que l'effet de la tech- nique de multiplication peut être accru de plus de 100 % (plus que doublé), ce qui améliore fortement l'économie du procédé. il On a pu observer que la couleur verte des plantes culti- vées par le procédé selon l'invention présente une nuance plus foncée et que leurs tiges et leurs feuilles sont plus robustes que celles des plantules témoins et qu'en outre, la surface de leurs feuilles est couverte d'une couche de cire plus épaisse. Exemple 2 De façon analogue à l'exemple précédent, on multiplie des oeillets, en multipliant également le méristème sur le milieu nu- tritif de Murashige-Skoog déjà décrit, puis en transplantant sur le milieu nutritif cinq fois plus dilué, contenant 0,1 mg/l d'acide indoléacétique, pour l'induction de la formation des racines On transplante dans une serre les plantules ainsi culti- vées in vitro, dans un mélange de terre que l'on a imbibé comme suit d'une solution aqueuse de dichloracétyl-hexaméthylène-imine l'un des composés de formule (I) selon l'invention On dissout g de dichloracétylhexaméthylène-imine dans 500 ml d'alcool éthylique à 70 %, puis on agite dans 19,5 litres d'eau On ajouti les 20 litres de solution ainsi préparés à 1 m 3 de mélange de te: re, en remuant plusieurs fois à la pelle Dans le sol ainsi prép ré ainsi que dans le sol ne contenant pas le composé de formule (I), on place les piantules cultivées in vitro et on observe, en serre, leur croissance in vivo. On constate qu'alors que sur le sol non traité 58 % dès plantules périssent (donc que 42 % survivent à la transplantatio: sur le sol contenant de la dichloracétyl-hexaméthylène-imine, 8 seulement des plantules périssent, 92 % continuent de se dévelop per vigoureusement. Exemple 3 De façon analogue à l'exemple précédent, on multiplie de oeillets et après développement des racines, on place les plante en serre pour la culture in vivo dans un sol non traité. Puis, après la transplantation, on traite la moitié des plantes par des produits à pulvériser contenant de la dichloracé thyl-hexaméthylène-imine, composé de formule générale (I), puis on traite trois fois de plus avec des pauses de 3 à 4 jours. À 12 Un litre du produit à pulvériser contient 10 mg de dichloracétylhexaméthylène-imine, 0,1 ml d'émulsifiant de marque "Tween" 80 et 0,05 M de tampon Tris-HC 1, son p H est de 6,5 Lors de sa préparation, on dissout la dichloracétyl- hexaméthylène-imine dans quelques gouttes d'alcool à 70 %, puis on l'ajoute à l'eau contenant le tampon et au mélange, on incor- pore l'émulsifiant en agitant. Les expériences montrent que 88 % des plantes traitées par pulvérisation survivent à la transplantation tandis que des plantes non traitées, 42 % seulement survivent. Exemple 4 Obtention de gerbera multiplié par culture de tissus On multiplie in vitro les plants de gerbera, selon la méthodedéjà connue élaborée par Murasnige et Coll LJ Hort Sci 9, 175 à 180 ( 1974)) pour la multiplication et la formation des racines A-une partie du milieu nutritif d'enracinement, on- ajoute 10 mg/1 de dichloracétyl-hexaméthylène-imine et la moi- tié des plantes s'enracinent sur ce milieu On place alors dans une serre les plantes cultivées in vitro et, chez les plantes cultivées ensuite in vivo, on compte celles qui ont péri ou sur- vécu On constate que parmi les plantes s'enracinant sur le mi- lieu nutritif contenant de la dichloracétyl-hexaméthylène-imine à une concentration de 10 mg/l, 98 à 100 % survivent tandis que à 35 des plantes s'enracinent sur le milieu nutritif témoin, non traité, périssent. * Le comportement des -plants de gerbera en ballon présente aussi une modification notable, les plantes traitées sont plus robustes, leurs feuilles plus dures et-plus développées. Exemple 5 Comme dans l'exemple 1, on multiplie des oeillets par culture de tissus, avec cette différence qu'au milieu nutritif de base cinq fois plus dilué, pour provoquer la formation des racines, au lieu de O,1 mg/il d'acide indolacétique on ajoute 0,1 mg/1 d'acide p-chlorophénoxyacétique. On incorpore alors au milieu nutritif les différents 1853 composés de formule générale (I) ou (II), à différentes concen- trations ( 2, 5, 10 ou 20 mg/l) et on cultive les plantes sur le milieu nutritif jusqu'à développement des racines. Lorsque les racines sont assez grandes pour la transplan- tation, on place les plantes dans une serre et on les cultive. Les plantes s'adaptent différemment aux conditions in vivo. Après le développement uniforme et s Qr, on étudie et on compte le nombre ou la proportion des plantes qui ont péri ou survécu Les résultats sont récapitulés au tableau suivant: Désignation chimique Proportion de plantes s'enracinant du composé de formule convenablement ou survivant, % générale (I) ou (II) lorsque la concentration du composé de formule (I) ou (II) est la suivante 2 mg/l 5 mg/l 10 mg/l 20 mg/l Témoin non traité 61 61 61 61 N-acétyl-hexaméthylène- imine 80 81 80 81 N-chloracétyl-hexa méthylène-imine 76 76 76 70 N-dichloracétyl-hexa- méthylène-imine 100 100 100 100 N-trichloracétyl-hexa- méthylène-imine 65 65 63 63 N-dichloracétyl-diiso- butylamide 68 66 77 61 N-dichloracétyl- isopropylamide 72 71 71 71 N-dichloracétyl-tert - butylamide 71 72 72 72 N,N'-bis-(dichloracétyl)- hexaméthylènediamine 95 100 100 100 N-dichloracétyl-hexylamide 94 95 98 100- On voit bien par les indications du tableau que l'acide p-chlorophénoxyacétique, utilisé au lieu de l'acide indolacéti- que, augmente de 46 à 61 % la proportion des plants d'oeillet qui survivent, d'autre part que l'application des solutions des composés de formule générale (I) ou (II) selon l'invention augmente davantage la viabilité apres transplantation. En outre, on a observé que les tiges et les feuilles des oeillets cultivés par le procédé selon l'invention sont plus robustes et que leur couleur verte présente une nuance plus foncée que celle des témoins non traités. Exemple 6 On multiplie des gerbera par culture de tissus comme dans l'exemple 5 La désignation des composés de formule (I) ou (II) appliquée, leur concentration d'application et le pourcentage des plantes survivant à la transplantation sont récapitulés au tableau suivant: Désignation chimique Proportion de plantes s'enracinant du composé de formule convenablement ou survivant, % générale (I) ou (II) lorsque la concentration du composé de formule (I) ou (II) est la suivante 2 mg/l 5 mg/l 10 mg/l 20 mg/l Témoin non traité 63 63 63 63 N-acétyl-hexaméthylène- imine 83 84 83 82 N-chloracétyl-hexa- méthylène-imine 78 82 79 80 N-dichloracétyl-hexa- méthylène-imine 100 100 100 100 N-trichloracétyl-hexa- méthylène-imine 70 69 68 68 N-dichloracétyl-diiso butylamide 73 72 70 70 N-dichloracétyl- isopropylamide 75 73 74 73 N-dichloracétyl-tert - butylamide 75 75 75 72 N,N'-bis-(dichloracétyl)- hexaméthylênediamine 100 100 100 100 34 N-dichloracétyl-hexylaimide 100 100 100 100 100 100 100 25185 * Exemple 7 On utilise le procédé selon l'exemple 5 pour des mares sauvages sans épines Les résultats de mesure sont récapitulés au tableau suivant: Désignation chimique Proportion de plantes s'enracinant du composé de formule convenablement ou survivant, % générale ( 1) ou (II) lorsque la concentration du composé de formule (I) ou (II) est la suivar 2 mg/1 5 mg/l 10 mg/1 20 mc t O Témoin non traité 65 65 65 65 N-acétyl-hexaméthylène- imine 85 86 86 8 ( N-chloracétyl-hexa 80 82 81 8 ( méthylène-imine N-dichloracétyl-hexa- méthylène-imine 100 100 100 10 ( N-trichloracétyl-hexa- méthylène-imine 70 70 70 7 ( N-dichloracétyl-diiso- butylamide 70 68 65 61 N-dichloracétyl- isopropylamide 75 76 i 75 7 N-dichloracétyl-tert - butylamide 76 78 76 7: N,N'-bis-(dichloracétyl)- hexaméthylènediamine 100 100 100 10 N-dichloracétyl-hexylamide 100 100 100 10 Exemple 8 Comme dans l'exemple 5, on multiplie des vignes par culture de tissus Les composés de formule (I) ou (II) appliqués, leur concentrations et le pourcentage des plantes survivantes sont indiqués au tableau suivant: t 8531 Désignation chimique du composé de formule générale (I) ou (II) Témoin non traité N-acétyl-hexaméthylène- imine N-chloracétyl-hexa- méthylène-imine N-dichloracétyl-hexa- 1 méthylène-imine N-trichloracétyl-hexa- méthyl ne-imine N-dichloracétyl-diiso- butylamide N-dichloracétyl- isopropylamide. N-dichloracétyl-tert ' butylamide Proportion de plantes s'enracinant convenablement ou survivant,, % lorsque la concentration du composé de formule (I) ou (II) est la suivante 2 mg/1 4 5 mg/1 i O mg/1 20 mg/1 71 f N,N -'-nis (di cnhloracety Li - hexaméthylènediamine 100 100 100 100 N-dich 1 oracétvl-hexylamide 100 d O p 100 100 Exemple 9 On applique aussi le procédé selon l'exemple 5 à la multiplication de greffons de pommier exempts de virus Les composés appliqués, leurs concentrations et le pourcentage-de plantes survivantes sont indiqués au tableau suivant 251853 ' Désignation chimique Proportion de plantes s'enracinant du composé de formule convenablement ou survivant, % générale ( 1) ou (II) lorsque la concentration du composé de formule (I) ou (II) est la suivante 2 mg/l t 5 mg/1 10 mg/1 20 mg/1 Témoin non traité 70 70 70 70N-acétyl-hexaméth&ène- imine 83 85 85 85 N-chloracétyl-hexa- méthylène-imine 83 79 79 75 O 10 N-dichloracétyl-hexa- méthylène-imine 100 100 100 100 N-trichloracétyl-hexa- méthylène-imine 74 78 78 72 N-dichloracétyl-diiso- butylamide 80 82 80 80 N-dichloracétyl- isopropylamide 80 81 80 79 N-dichloracétyl-tert: - butylamide 90 91 90 89 N,N'-bis-(dichloracétyl)- hexaméthylènediamine 100 10 100 100 2 N-dichloracétyl-hexylamide 100 100 100 100 Le procédé selon l'invention peut servir avec succès à améliorer le rendement lors de la multiplication de plantes aussi bien utilitaires qu'ornementales par culture de tissus, et aussi A augmenter l'aptitude à la survie après transplanta- tion En outre, les tiges et feuilles des plantules traitées sont plus robustes et plus développées, leur couleur est plus intense que celle des plantes non traitées et la couche de cire des feuiiles est plus épaisse. Tin autre avantage du procédé selon l'invention est que les plantes traitées par la solution des composés de formule générale (I) ou (II) commencent plus rapidement à croître après transplantation et dans l'ensemble, atteignent deux 34 semaines plus tôt la grandeur nécessaire au commerce. REVENDICATIONS 1) Procédé d'amélioration du rendement dans la multiplication in vitro de plantes cultivées, caractérisé par le fait que lors de la micromultiplication et/ou de la transplan- tation qui suit, on traite les plantes, ou le sol dans lequel on les plante, par la solution aqueuse d'un ou Dlusieurs composés de la formule générale: 0 R R C-N (I) À \ R 2 Dang laauelle: P peut représenter un radical méthyle, chlorométhyle, dichlorométhyle ou trichlorométyle; R 1 et R 2 peuvent être semblables ou différents et représenter un radical alkyle de 1 à 10 atomes de carbone, un radical alcényle de 2 à O 10 atomes de carbone, un radical cycloalkyle de 3 à 9 atomes de carbone, un radical phényle ou benzyle ou encore un atome d'hydrogène, sous la réserve que R 1 et R 2 ne peuvent pas être simultanément des atomes d'hydrogène, ou bien R 1 et R 2 peuvent former, avec l'atome d'azote voisin, un noyau hétérocyclique saturé comportant 5 à 8 chaînons et qui peut contenir un, deux ou trois hétéro- atomes identiques ou différents, de préférence des hétéro- atomes d'azote ou d'oxygene, ou de la formule générale:- O H H O R-C T,-(CH 2) N C R (II) dang laquelle R a la même signification que dans la for- mule générale (I) et N est un nombre entier de 1 à 8, ou de mélanges de ces deux sortes de composés. 2) Procédé selon la revendication 1, caractérisé par le fait que la solution aqueuse contient 5 à 100 mg/1 de substance active - 3) Procédé selon l'une-des revendications 1 et 2, caractéri- sé par le fait que lors de la multiplication sur milieu nutritif liquide, le milieu contient, outre les consti- tuants connus, un ou plusieurs composés de formule géné- rale (I) et/ou (II) à une concentration de I à 20 mg/1. 4) Procédé selon l'une des revendications I et 2, caractéri- sé par le fait qu'avant la transplantation, on fait trem- per les racines des plantes multipliées sur milieu nutri- tif liquide dans la solution aqueuse d'un ou plusieurs composés de formule générale (I) et/ou (II) ou de mélan- ges à une concentration de 20 à 70 mg/1. ) Procédé selon l'une des revendications 1 et 2, caractéri- sé par le fait que l-'on plante les plantes multipliées in vitro dans un sol qui contient un ou plusieurs compo- sés de formule générale (I) et/ou (II) à une concentra- tion de 20 à t O mg/l. 6) Procédé selon l'une des revendications t et 2, caractéri- sé par le fait qu'après la transplantation, on arrose les plantes multipliées in vitro avec la solution d'un ou plusieurs composé de formule générale (I) et/ou (II) à une concentration de t à 20 mg/l.