Brevet FR2521162A1 — publié le 19830812

La présente invention concerne un dispositif eri-utot permettant de réaliser des cavités cylindriques selon une disposition géométrique donnée dans une couche-de matière gélifiée de consistance variable et de faible cohésion, en vue de la détermination de dosages microbiologiques par diffusion. Un antibiotique possède une activité inhibitrice vis-à-vis des microorganismes vivants et cette propriété peut être mise à profit pour sa détection et son dosage au cours des différentes phases de sa fabrication. Parmi les méthodes classiquement utilisées pour les dosages microbiologiques est la méthode de diffusion qui consiste à placer à la surface de plaques de milieu gélosé et ensemencé, en général en boîtes de Pétri, des solutions de concentrations progressives de l'antibiotique de raison donnée, généralement 1,5 ou 2 Après incubation, il apparaît des zones circulaires d'inhibition dont le diamètre est en relation linéaire avec le logarithme des concentrations Le dosage est réalisé par comparaison des réponses obtenues pour l'échantillon avec celles d'un étalon. En raison du caractère aléatoire des réponses biologiques, un dosage microbiologique doit faire l'objet de répétitions Pour tenir compte de certains facteurs de variation non maîtrisables, il est nécessaire d'adopter des plans expérimentaux permettant de les prendre en considération Ainsi, pour effectuer un seul dosage, il est habituel d'utiliser 10 à 20 boîtes de Pétri correspondant à 30 à 60 réponses pour l'étalon De plus, pour les mêmes raisons, un dosage doit être répété plusieurs jours de suite pour obtenir la précision désirée. Il est particulièrement important de pouvoir automatiser le plus possible la méthode étant donné le grand nombre de déterminations qui doivent être enregistrées Par ailleurs, l'automatisation permet de diminuer de façon notable les risques d'erreurs. Pour la mise en oeuvre de la méthode de diffusion, il est nécessaire de réaliser au sein du milieu nutritif ensemencé des cavités cylindriques, destinés à recevoir les solutions d'antibiotique, qui doivent être identiques, présenter des parois lisses et ne pas contenir de particules de matières résiduelles De plus, lors du découpage de ces cavités, il est particulièrement important de ne pas décoller la matière gélifiée, telle que-la gélose, du fond du récipient qui la contient De cette manière, il est possible d'obtenir une diffusion uniforme de l'antibiotique à travers la matière gélifiée, ce qui permet une limitation nette de la zone d'inhibition. Il a été trouvé, et c'est ce qui fait l'objet de la présente invention, que des cavités présentant les caractéristiques requises peuvent être réalisées simultanément au moyen d'un dispositif semi- automatique décrit plus complètement ci-après qui permet en outre une distribution symétrique de ces cavités à la surface de la matière gélifiée. Le dispositif selon l'invention est constitué par l'assem- blage de plusieurs dispositifs élémentaires dont chacun se compose a) d'un emporte-pièce dont le diamètre extérieur est généralement compris entre 2 et 12 mm et dont l'extrémité inférieure, qui constitue le couteau emporte-pièce, est biseautée vers l'intérieur du cylindre de façon à avoir un bord de coupe très effilé, et b) d'un tube d'aspiration dont le diamètre extérieur est légèrement inférieur au diamètre intérieur de l'emporte-pièce, qui coulisse dans l'emporte-pièce et qui est relié à un système permettant de créer une dépression dans ce tube par l'intermédiaire d'un récipient destiné à recueillir la matière gélifiée éliminée, l'extrémité inférieure du tube d'aspiration étant crénelée. Le schéma d'un dispositif élémentaire est donné par la figure 1 sur laquelle ( 1) représente l'emporte-pièce et ( 2) le tube d'aspiration. Selon l'invention, la réalisation d'une cavité par un dispositif élémentaire s'effectue en quatre phases successives qui sont les suivantes: a) l'emporte-pièce pénètre perpendiculairement à la surface de la gélose Jusqu'à entrer en contact avec le fond du récipient contenant la matière gélifiée. b) le tube d'aspiration, dans lequel est créée une dépression, descend au contact de la matière gélifiée puis 2521 1 62 pénètre jusqu'au voisinage du fond du récipient Compte t-vu d; la dépression créée, la matière gélifiée se trouve aspirée dans le tube au fur et à mesure de sa descente Les crénelures d la partie inférieure du tube d'aspiration permettent à l'air qui se trouve, sous la pression atmosphérique, entre les deux tubes coulissants, de passer dans le tube d'aspiration lorsque celui-ci est en contact avec le fond du récipient. c) le tube d'aspiration remonte puis la pression atmosphé- rique se rétablit à l'intérieur du tube d'aspiration, puis d) l'emportepièce remonte à son tour dégageant ainsi la cavité. Pour que le dispositif fonctionne dans les meilleures conditions afin d'obtenir des cavités de qualité, l'emporte-pièce, qui joue le rôle de couteau, doit répondre à certaines exigences. En particulier, lors de la pénétration dans la couche de gélose, il doit trancher sans comprimer ni déchirer ce qui implique un bord de coupe très effilé et un parfait état de sa paroi extérieure De cette manière, il est possible d'obtenir une cavité dont la paroi est lisse. De plus, l'état de la surface extérieure de l'emporte-pièce doit être tel que l'adhérence de l'emporte-pièce à la matière gélifiée soit minimale afin d'éviter Ie décollement de la matière gélifiée du fond du récipient lors du retrait de l'emporte-pièce Enfin, l'emporte-pièce doit venir en contact avec le fond du récipient et être aussi jointif que possible afin d'éviter la détérioration du fond de la cavité lors de l'aspiration de la matière gélifiée. Le tube d'aspiration central a pour fonction d'aspirer la matière gélifiée découpée par le couteau pendant que ce dernier est maintenu en place. Ce tube d'aspiration central coulisse à l'intérieur de l'emporte-pièce Juste avant l'entrée en contact du tube d'aspiration central avec la matière gélifiée, une dépression est créée à l'intérieur de celui-ci, la pression atmosphérique étant maintenue entre les deux tubes par l'intermédiaire de canaux ménagés dans la paroi de l'emporte-pièce Du fait de la dépression existant dans le tube d'aspiration, la matière gélifiée-est aspirée au fur et à mesure de la descente du tube d'aspiration et elle L. est entraînée jusqu'au récipient récepteur Dans ces conditions, toute la pastille de matière gélifiée est aspirée sans laisser de particules solides Lorsque le tube d'aspiration intérieur remonte et avant que l'emporte-pièce extérieur ne quitte le fond du récipient contenant la matière gélifiée, la pression atmosphérique est rétablie dans le tube d'aspiration. Selon la présente invention, il est possible de réaliser simultanément des cavités identiques réparties symétriquement par rapport au centre du récipient contenant la matière gélifiée. Les tubes d'aspiration intérieurs sont rendus solidaires par l'intermédiaire d'une plaque support montée sur un arbre et coulissant verticalement le long de cet arbre. Les emporte-pièces extérieurs sont supportés par une autre plaque permettant le coulissement de l'ensemble des emporte-pièces extérieurs sur l'ensemble des tubes d'aspiration intérieurs Les emporte-pièces extérieurs sont maintenus vers le bas au moyen de ressorts. Les cavités étant réalisées simultanément, les tubes d'aspiration intérieurs sont raccordés en parallèle au récipient collecteur de matière gélifiée aspirée Les tuyaux souples de raccordement des tubes d'aspiration intérieurs au récepteur de matière gélifiée ne sont pas simplement des canalisations mais ils remplissent une fonction nécessaire pour limiter le débit de l'air aspiré par les tubes d'aspiration intérieurs lorsque toute la matière gélifiée a été emportée, afin d'éviter la création d'une dépression excessive au fond de la cavité et la cassure de la dépression régnant à l'intérieur du récipient récepteur commun alors qu'il ne reste de la matière gélifiée que dans un ou quelques uns seulement des tuyaux de raccordements. L'ensemble du dispositif permet d'obtenir, à l'aide d'un système d'animation unique, la descente des emporte-pièces et leur 2521 162 pénétration dans la matière gélifiée jusqu'au fond du récipient, la descente des tubes d'aspiration intérieurs et leur remontée ainsi que la remontée des couteaux. L'animation verticale de l'ensemble est réalisée, par exemple, au moyen d'un système bielle-manivélle entraîné par un moteur électrique à courant continu qui permet d'obtenir des vitesses variables Le mouvement sinusoïdal obtenu présente l'avantage d'une descente et d'une approche rapide suivies d'un ralentissement pendant les opérations de découpage et d'aspiration de la matière gélifiée. De cette manière la durée totale du cycle peut être réduite de façon appréciable. Généralement la séquence pression atmosphérique-dépression- pression atmosphérique pendant la descente et la remontée du tube d'aspiration intérieur est réalisée au moyen de deux électro-vannes. Une opération de découpage est réalisée en un tour du système biellemanivelle ce qui correspond à une descente et une remontée des emportepièces extérieurs La synchronisation des mouvements est rapportée à la position angulaire du manneton et par conséquent à la cote tube d'aspiration intérieur-récipient par l'intermé- diaire d'un programmateur à came couplé à la rotation du moteur. La figure 2 représente le schéma de fonctionnement d'un dispositif élémentaire Le point 0 correspond au point mort bas (trépan dans gélose) Les trépans sont en contact avec le fond de la boite de -300 à -600. Afin de repérer la position des différentes cavités les unes par rapport aux autres, il est particulièrement avantageux de compléter le dispositif par un système permettant de réaliser une empreinte sur le rebord du récipient contenant la matière gélifiée. Généralement le système est constitué d'un stylet chauffant qui, par application sur le rebord d'un récipient thermoplastique, réalise une encoche qui peut être en forme de V. Ce dispositif complémentaire fonctionne en synchronisme avec le moyen d'animation de l'ensemble emporte-pièce-tube d'aspiration. L'ensemble du dispositif est représenté par la figure 3 sur laquelle ( 1) représente l'emporte-pièce, ( 2) le tube d'aspiration, ( 3) le stylet chauffant et ( 4) le milieu gélosé. 2521 162 b Par ailleurs, lorsque l'on utilise comm, récipient d - matière gélifiée pour cffectucr les dosages un. boite de Pétri, un système h tiroir manuel permet sa mise en place. Lorsque le tiroir est tiré, il autorise l'échange des boîtes sur un support de positionnement Lorsque le tiroir est repoussé, un verrouillage de fin de course positionne exactement la boîte relati- vement à l'ensemble du dispositif de découpage et d'aspiration et enclenche automatiquement les différentes phases de l'opération. 2521 1 62 REVENDICATIONS 1 Dispositif semi-automatique permettant de réaliser des cavités cylindriques selon une position géométrique donnée dans une couche de matière gélifiée de consistance variable et d'une faible cohésion caractérisé en ce qu'il est constitué par l'assemblage de plusieurs dispositifs élémentaires dont chacun se compose: a) d'un emporte-pièce dont l'extrémité inférieure, qui constitue le couteau, est biseautée vers l'intérieur du cylindre de façon à avoir un bord de coupe très effilé, et b) d'un tube d'aspiration, coulissant à l'intérieur de l'emporte-pièce dont l'extrémité inférieure est crénelée qui est relié à un système permettant de créer une dépression à l'intérieur du tube par l'intermédiaire d'un récipient destiné à recueillir la matière gélifiée éliminée, et qui permet la réalisation des quatre phases successives suivantes a) pénétration de l'emporte-pièce extérieur perpendiculai- rement à la surface de la matière gélifiée jusqu'a entrer en contact avec le fond du récipient contenant la matière gélifiée b) descente du tube d'aspiration dans lequel est créée une dépression au contact de la matière gélifiée et pénétration jusqu'au voisinage du fond du récipient c) remontée du tube d'aspiration intérieur et rétablissement de la pression atmosphérique, et d) remontée de l'emporte-pièce extérieur. 2 Dispositif selon la revendication 1 caractérisé en ce que les tubes d'aspiration intérieurs sont rendus solidaires par l'intermédiaire d'un support monté sur un arbre et coulissant le long de cet arbre, et les emporte-pièces extérieurs-sont supportés par un autre support permettant le coulissement de l'ensemble des emporte- pièces extérieurs sur l'ensemble des tubes d'aspiration intérieurs. 3 Dispositif selon la revendication 1 caractérisé en ce qu'il est animé par un système bielle-manivelle entraîné par un moteur électrique à courant continu et que la séquence pression atmosphérique- dépression-pression atmosphérique est réalisée au moyen de deux électrovannes. 4 Dispositif selon la revendication 1 caractérisé en ce qu'il comporte un système constitué d'un stylet chauffant qui réalise un repère sur le rebord du récipient contenant la matière gélosée afin de reconnaître les positions relatives des cavités.