Brevet FR2521303A1 — publié le 19830812

La présente invention concerne un procédé de détermination immunologique d'anticorps de type immunoglobuline de classe spécifique. Les molécules d'immunoglobuline sont constituées d'un ou plusieurs ensembles de quatre chatnes polypeptidiques, deux chalnes lourdes ayant un poids moléculaire d'environ 53 000 daltons et deux chatnes légères ayant un poids moléculaire d'environ 22 000 daltons, unies par des liaisons disulfures. Les immunoglobulines sont generalement subdi- visées en cinq classes: G, M, A, D et E Les immunoglobulines de ces classes sont généralement représentées respectivement par Ig G, Ig M, Ig A, Ig D et Ig E. Les cinq classes d'immunoglobulines sont dif- férenciées par la présence de déterminants antigeniques a chaîne lourde qui sont désignés par la lettre grecque minuscule corres- pondant à la majuscule de l'alphabet romain des immunoglobulines: Il existe également des sous-classes d'Ig G, d'Ig A et d'Ig M correspondant a d'autres déterminants antigeniques, qui sont désignas par des nombres (par exemple yl, al, P 1) Quatre sous- classes d'Ig G ont éte identifiees, deux d'Ig A et deux d'Ig M Toutes ces sous-classes sont présentes dans les sérums de tous les individus normaux. L'Ig G est l'immunoglobuline la plus abondante dans le sérum des humains normaux On la trouve également dans les liquides tissulaires et elle peut traverser le placenta pour passer de la circulation maternelle a la circulation foetale Elle a in vivo et in vitro des activités antibactériennes, antivirales et antitoxiques. C'est un anticorps à réponse tardive. Iunoglobulines Déterminant antigénique & Imrnunoglob ulineschtelue chains lourde Ig G y (gamma) Ig A a (alpha) Ig M ? (mu) Ig D s(delta) Ig E t(epsilon) Le Ig M est caractérisée par l'existence de chalnes lourdes avec des séquences d'aminoacides définissant le détermi- nant antigénique /u Une caractéristique fonctionnelle de l'Ig M. est sa forte activité cytolytique et sa forte activité de fixation du complément qui sont bien supérieures à celles de l'Ig G L'Ig M est généralement le premier anticorps à apparaître chez les animaux ou l'homme après une immunisation Elle est progressivement remplacée par l'Ig G. L'Ig A est l'immunoglobuline dont l'abondance vient juste ensuite dans le sérum humain et c'est l'immunoglobuline sécri- toire principale Elle est utile dans la défense contre les bactéries et les virus respiratoires. L'Ig E est l'immunoglobuline la moins abondante Elle a des propriétés de sensibilisation cutanée et elle est responsable de diverses réactions allergiques des bronches, des voles gastro- intestinales, de la peau et autres. On sait très peu de chose sur la structure et la fonction biologique de l'Ig D Les anticorps de type Ig D ont été observés dans les maladies autoimmunes, chez les patients sensibles au lait de vache et chez les patients atteints de lupus érythémateux disséminé. Les procédés d'isolement des classes ci-dessus d'immuno- globulines sont bien connus Les procédés pour former des anticorps dirigés contre les immunoglobulines sont également connus ainsi que les procédés pour fixer les immunoglobulines à des supports solides Les procédés d'isolement des anticorps et de marquage des anticorps avec des molécules fluorescentes, des molécules radio- actives ou des enzymes pour permettre la mesure des anticorps fixés sont bien connus Il existe également des procédés indirects pour mesurer us anticorps fixé, tels que la réaction de l'anticorps fixé-avec un anticorps marque (à marquage radioactif fluorescent ou enzymatique) spécifique de l'anticorps. La détermination des immunoglobulines spécifiques d'antigènes appartenant à une classe particulière a une grande importance clinique Le brevet des Etats-Unis d'Amérique n' 4 020 151 décrit une détermination immunologique des concentrations d'Ig G, d'Ig A et d'Ig H dans le sérum qui comprend tout d'abord la réaction d'un support solide avec l'échantillon a étudier pour absorber l'Ig G, l'Ig A et l'ISM puis la réaction d'un anticorps marqué dirigé contre l'Ig G, l'Ig A et l'Ig M et la mesure de l'anticorps fixé On peut ega- lement determiner des immunoglobulines spécifiques d'antigènes en utilisant des techniques de détermination immunologique employant des composants immunologiques ayant une affinité de fixation à l'anticorps & déterminer et/ou à détecter Selon de telles techniques, on couple un composant immunologique ayant une activité de fixation à l'anticorps & déterminer à un support solide et on marque un autre composant immunologique spécifique,par exemple, avec un groupe fluorescent, chromophore ou radioactif ou avec une enzyme. Cependant, un inconvénient associé à de telles techniques est que, si le facteur rhumato Tde que l'on peut trouver dans le sérum est présent dans l'échantillon, on peut obtenir des résultats faus- sement positifs Le facteur rhumatolde (FR) a généralement une affinité pour les anticorps de la classe Ig G Le FR se fixe par les régions constantes des chatnes lourdes de la molécule d'Ig G Par exemple, dans un dosage d'une immunoglobuline de la classe Ig M spécifique du virus de la rubéole, le facteur rhumatolde lui-même est également une immunoglobuline de la classe Ig M Comme le facteur rhumatolde appartient généralement à la classe Ig M, il est également fixe par toutes les immunoglobulines anti-Ig M, ce qui provoque des résultats faussement positifs Un procédé pour éviter cette inter- ference du facteur rhumatolde nécessite la séparation des anticorps correspondant aux différentes classes d'immunoglobulines avant l'analyse Cependant, les procédes de séparation des immunoglobulines des différentes classes et, en particulier, des immunoglobulines spécifiques d'antigènes de classes différentes sont généralement compliqués et longs Ces procédés comprennent une chromatographie, une électrophorèse et une séparation avec gradient de densité. Le brevet des Etats-Unis d'Amérique n 4 273 756 décrit une détermination immunologique d'anticorps à spécificité de classe Ig G, Ig Il, Ig A, Ig E et Ig D qui comprend tout d'abord la réaction d'un support solide revêtu d'un anticorps dirigé contre une catégorie spéci- fique d' immmunoglobulines par mise en contact avec un échantllon contenant 2521303. un anticorps à spécificité de classe puis la réaction du complexe obtenu avec un antigène marqué et la mesure de l'antigène marqué fixé. Le brevet des Etats-Unis d'Amérique n 4 292 403 décrit une détermination immunologique d'une immunoglobuline a spécificité $ antigenique de la classe Ig M, Ig A, Ig D et Ig E qui comprend le contact de l'immunoglobuline & spécificité antigénique particulière avec an anticorps insolubilise dirigé contre l'immunoglobuline à specifi- cité antigénique ou avec un fragment fixant les antigènes de cette antiimmunoglobuline, puis le traitement du mélange avec un antigène pour lequel l'immunoglobuline a une affinité spécifique et finale- ment le traitement du mélange avec un fragment marque fixant l'anti- gène d'un anticorps dirigé contre l'antigène, puis la mesure du fragment de marquage Cette réfeérence suggère que l'interférence du facteur rhumatolde est élimineée. Voller et col, British Journal of Experimental Pathology ( 1975), 56, 338, Gravell et col, The Journal of Infectious Disease, vol 136, Supplément ( 1977), 5300 et Cleary et col, Publication de Recherche dans Chemical Pathology and Pharmacology, vol 19, n 2 ( 1978) 281, décrivent des déterminations immunologiques à liaison enzymatique pour la détection d'anticorps diriges contre le virus de la rubéole. L'invention concerne un procéde pour la détermination d'un anticorps du type immunoglobuline d'une classe Ig X dans un échantillon, o X est choisi parmi le groupe constitué par M, A, D et E, caractérise en ce qu'on traite l'échantillon avec une quantité efficace d'un immunoreactif spécifique de l'Ig G et suffisante pour empêcher la fixation du facteur rhumatolde à l'Ig G En particulier, l'invention concerne un procédé pour déterminer un anticorps de type immunoglobuline d'une classe Ig X dans un échantillon o X est -choisi parmi le groupe constitué par M, A, D et E qui comprend: a) le traitement de l'échantillon avec une quantité efficace d'anti-Ig G,; b) le contact de l'échantillon traité avec un réactif d'anticorps de classe spécifique comprenant un antigène pour lequel l'anticorps Ig X est spécifique revêtant un support solide, pour former un complexe antigène-Ig X sur le support solide; c) l'élimination de l'échantillon non fixe; d) le traitement du complexe antigène-Ig X avec de l'anti-Ig X; et e) la détermination de l'anti-Ig X fixe au complexe antigène-Ig X comme mesure de l'Ig X dans l'échantillon. L'invention va maintenant être décrite de façon dé- taillee. Le terme "immunoreactif" utilise ici désigne un antigène, de préférence un anticorps, pour lequel une immunoglo- buline de classe Ig G est spécifique et qui complexe l'Ig G de façon suffisante pour empêcher la fixation du facteur rhumatolde à l'Ig G. On préfère particulièrement employer de l'anti-Ig G comme immuno- reactif dans les procédes de l'invention De plus, on prefère traiter l'échantillon, contenant l'anticorps de type immunoglobuline Ig G auquel on s'intéresse, avant d'effectuer la détermination immuno- logique de l'Ig X On peut emplyer divers types de déterminations immunologiques de l'Ig X dans le cadre du procédé amelioré de l'inven- tion et on préfère employer une technique de détermination immuno- logique dans laquelle on utilise un antigène pour lequel l'anticorps de type immunoglobuline Ig X est spécifique pour former un complexe antigèneIg X Le complexe antigène-Ig X ainsi produit peut ensuite être déterminé, par exemple, par emploi de techniques d'immunopréci- pitation, de détermination de type sandwich ou de détermination compétitive. Bien que l'immunoréactif puisse être employé avant, après ou simultanément avec l'antigène utilise pour former un complexe antigène-Ig X, on préfère employer l'immunoréactif avant le traitement de l'échantillon avec l'antigène. Tel qu'on l'entend ici, le terme "antigène" désigne une molécule à activité biologique capable d'induire une réponse immunitaire chez l'homme ou chez une espèce autre que l'homme Des exemples de tels antigènes comprennent, par exemple, les protéines sériques, les protéines tissulaires, les anticorps, les protéines virales, les lipopolysaccharides bactériens et similaires. Selon un mode de réalisation préféré de l'invention, on traite un échantillon contenant un anticorps de type immuno- globuline appartenant à une classe Ig X, avec une quantité efficace d'anti-Ig G dans une solution tamponnée On incube le mélange obtenu pendant une période suffisante pour permettre qu'essentiellement la totalité de l'immunoglobuline de la classe Ig G de l'échantillon se complexe avec l'anti-Ig G Après la période d'incubation, l'échantil- lon traité est mis en contact avec un réactif d'anticorps de classe spécifique comprenant un antigène spécifique de l'anticorps Ig X auquel on s'intéresse revêtant, un support solide Le mélange obtenu est incubé pendant une période suffisante pour permettre la formation d'un complexe antigène-Ig X sur le support solide On lave le complexe antigène-Ig X sur le support solide avec de l'eau pour éliminer l'échantillon non fixe puis on traite avec de l'anti-Ig X. On incube ensuite le mélange obtenu pendant une période suffisante pour permettre la formation d'un complexe antigène-Ig X-anti-Ig X sur le support solide On lave le complexe antigène-Ig X-anti-Ig X revêtant le support solide avec de l'eau et on détermine la quantité d'anti- Ig X fixée au complexe antigène-Ig X comme mesure de l'Ig X particu- lière dans l'échantillon. Les immunoglobulines de classe Ig X que l'on peut déter- miner selon le procédé de l'invention comprennent les Ig M, Ig A, Ig E et Ig D. Le support solide est une matière polymère insoluble provoquant la sorption de llantigène Des matières connues de ce type comprennent des hydrocarbures polymères, tels que le poly- styrène, le polyethylène, le polypropylène, le polybutylène, un butylcaoutchouc et d'autres caoutchoucs synthétiques D:autres polymères organiques appropriés comprennent an caoutchouc silastic, des polyesters, des polyamides, la cellulose et des dérivés cellu- losiques, des acrylates, des méthacrylates et des polymères de chlorure de vinyle tels que le chlorure de polyvinyle Des copolymères tels que les copolymères greffes du polystyrène sont également utiles En plus des matières précédentes, la surface du polymère solide peut être constituée de gel de silice, de comprimés de silicone, de verre, de protéines insolubles, de métaux, et le support solide peut être sous forme de perles, de tubes, de bandes, de disques, de plaques de microtitrage et similaires. Les antigènes employés dans le réactif d'anticorps de classe spécifique comprennent les antigènes capables de fixer des anticorps de classe spécifique Ig G, Ig M, Ig A, Ig D et Ig E et on peut les obtenir à partir de sources humaines ou non humaines On peut employer des techniques de culture tissulaire pour propager l'anti- gène On revêt des antigènes un support solide et, de préférence, on en revit une perle de polystyrène On peut revêtir le support solide des antigènes selon diverses techniques Pour que l'opération soit facile, on préfère revêtir le support solide de l'antigène en plaçant le support solide & revêtir dans une solutioncontenant l'antigène pendant un certain temps puis en lavant et séchant à l'air le support solide. Le terme "anti'Ig G" désigne un anticorps spécifique de l'Ig G humaine qui est produit chez une espèce autre que l'homme telle que le lapin, la chèvre, le cheval, le mouton, le cobaye, etc. L'addition d'une quantité efficace d'anti-Ig G à l'échantillon fixe toutes les immunoglobulines de type Ig G présentes dans les échantillons La fixation de l'Ig G par l'anti-Ig G avant le contact de l'échantillon avec un réactif d'anticorps de classe spécifique complexe les sites de fixation du facteur rhumatolde sur l'Ig G en empêchant ainsi que le facteur rhumatolde se fixe à l'Ig G De plus, seules les immunoglobulines Ig M, Ig A, Ig D ou Ig E de l'échan- tillon ainsi que le complexe Ig G-anti-Ig G peuvent se fixer à l'anti- gène sur le support solide On incube l'échantillon traite et le réactif d'anticorps de classe spécifique puis on lave avec de l'eau pour éliminer les immunoglobulines non fixées de l'échantillon analyse Donc, les immunoglobulines de classe spécifique Ig X, y compris celles présentes dans le sérum par suite d'une infection et contenant des anticorps contre l'agent infectieux, forment un complexe antigène-Ig X et adhèrent au support solide De plus, le complexe Ig G-anti-Ig G précédemment formé peut former un complexe antigène-Ig G-anti-Ig G et adhérer ainsi au support solide. On fait réagir le complexe antigène-Ig X avec un anti- Ig X connu pour former un complexe antigène-Ig X-anti-Ig X sur le sup- port solide L'anti-Ig X fixé au complexe antigène-Ig X est déterminé comme mesure de l'Ig X dans l'échantillon L'anti-Ig X peut être -8 marqué directement avec des marqueurs fluorescents, enzymatiques ou radioactifs pour permettre la détermination de la quantité fixée ou peut être marque indirectement par réaction complemen- taire, par exemple, avec un anticorps spécifique de l'anti-Ig X qui est marqué avec des marqueurs fluorescents, enzymatiques ou radioactifs selon des procédés classiques L'anti-Ig X employé est généralement une immunoglobuline de type Ig G spécifique de l'Ig X à déterminer et produite chez une espèce autre que l'homme. On préfère employer un marquage enzymatique direct de l'anti-Ig X Des exemples d'enzymes comprennent la catalase, la peroxydase, l'uréase, la glucose-oxydase, la phosphatase et simi- laires Si on emploie un marquage direct de l'anti-Ig X, après la formation du complexe antigène-Ig X-anti-Ig X*, o anti-Ig X* désigne l'anti-Ig X marqué, on ajoute un substrat enzymatique à la phase liquide et/ou solide du mélange réactionnel et on effectue une détermination enzymatique selon des techniques classiques, par exemple par colorimétrie, fluorométrie ou spectrophotométrie pour mesurer l'anti-Ig X marqué fixe Dans le cas du marquage indirect, c'est-à- dire lorsque l'anti-Ig X n'est pas marqué, on lave le complexe antigèneIg X-anti-Ig X pour éliminer l'anti-Ig X non fixe puis on fait réagir avec un anticorps marqué dirigé contre l'anti-Ig X, puis on mesure l'anticorps marque fixe. De plus, l'invention fournit un procédé pour déter- miner l'Ig G dans un échantillon contenant le facteur rhumato 5 de On a constaté que le complexe antigène-Ig G-anti-Ig G qui se forme sur le support solide dans le mode opératoire décrit ci-dessus peut ensuite être traité avec un anti-Ig G* marqué spécifique de l'anti- Ig& fixé sur le complexe antigène-Ig G-anti-Ig G et que l'anti-Ig G* marqué fixe peut itre ensuite déterminé comme mesure de l'Ig G présent dans l'échantillon. Telle qu'on l'entend ici, l'expression "une quantité efficace d'anti-Ig G" désigne une quantité d'anti-Ig G suffisante pour fixer la totalité de l'Ig G dans l'échantillon à analyser en empêchant ainsi toute fixation de l'Ig G et du FR. L'invention est illustrée par les exemples non limita- tifs suivants. EXEMPLE 1 Préparation de perles revêtues d'antigène du virus de la rubéole On produit la souche Gilchrest du virus de la rubéole dans des cellules de BHK 21 Clone 13 dans un milieu nutri- tif On isole les antigènes viraux par ultracentrifugation du milieu. On dilue la suspension au 1/50 avec un Tris 0,1 M à p H 8,6 On uti- lise la solution diluée pour revêtir des perles de polystyrène de 6 mm pendant une nuit à la température ordinaire et on lave chaque ensemble de perles et on sèche à l'air. Détermination des anticorps IM contre le virus de la rubéole 1 On dilue au 1/21 un échantillon de sérum, un témoin positif, un témoin fortement positif et trois témoins faiblement positifs dans une solution 0,1 M en Tris, 0,5 M en chlo- rure de sodium à 0,01 % de Tween 20 et à 1 mg/ml de sérum-albumine bovine à p H 7,6. 2 On ajoute une portion de 20 p l de l'échan- tillon dilué et de chaque témoin dilué dans les cupules appropriées d'une plaque de réaction. 3 Dans chaque cupule contenant l'échantillon dilué ou le témoin, on ajoute 20 /ul d'un mélange contenant 1,5 % d'Ig G de chèvre antihumaine, 53,5 % de sérum de veau, 0,01 % de Tween 20 et 44,99 % d'un mélange de Tris 0,1 M et de chlorure de sodium 0,5 x ajusté pour que le p H final soit de 7,6. 4 On recouvre les plaques de réaction et on incube pendant 60 min à 450 C. Après la période d'incubation, on ajoute dans chaque cupule contenant un échantillon ou un témoin une perle revêtue de l'antigène du virus de la rubéole et on recouvre à nouveau les plaques de réaction et on incube pendant 90 min à 450 C. 6 Après cette seconde incubation, on élimine l'échantillon ou les témoins non fixés des cupules et on lave deux fois les perles avec de l'eau. 7 Dans les cupules contenant les perles lavées, on ajoute 200,ul d'une solution contenant 0,05 à 3 ? g/ml d'Ig M de chèvre antihumaine liée par covalence à de la peroxydase de raifort, du sérum de boeuf à 10 % dans du Tris 0,1 M et du chlorure de sodium 0,15 M. 8 On recouvre les plateaux de réaction et on incube pendant 90 min à 45 C. 9 Après l'incubation, on élimine l'Ig M de chèvre antihumaine-peroxydase de raifort non fixée et on lave deux fois les perles avec 5 ml d'eau. On transfère les perles des cupules contenant à l'origine les échantillons et les temoins dans des tubes a essai auxquels on ajoute 300 /ul d'une solution de substrat fraîchement préparée contenant environ 27 mg d'ophénylènediamine, 2 HC 1 dans 5 ml de tampon citrate-phosphate à p H 5,5 On incube ensuite les tubes pendant 30 min à la température ordinaire. 11 Apres l'incubation, on ajoute 2 ml d'acide chlorhydrique 1 N dans chaque tube et on lit l'absorbance des solu- tions d'échantillons et de témoins obtenues avec un spectrophotomètre à 492 nm. 12 On considère que des valeurs de l'absorbance de l'échantillon supérieures de 1,O 9 fois ou inférieures de 0,91 fois & la moyenne des trois témoins faibles constituent les limites respectives entre les résultats positifs et négatifs Une valeur de l'absorbance comprise entre 1,09 et O > 91 fois la moyenne des trois témoins faibles fait soupçonner une infection rubeoleuse, mais ne la confirme pas. La sensibilité de la détermination décrite dans l'exemple 1 est déterminée par le taux du temoin faiblement positif qu'on emploie Ci- dessus, on emploie un témoin faiblement positif ayant une valeur de l'Ig M qui correspond à la valeur de la limite de sensibilité decrite dans la technique d'essai d'inhibition de l'hémagglutination avec gradient de densité de saccharose décrite par Palmer D F et col, Rubella Hemagglutination-Inhibition Tests, Immunology Series, n 2 (révisé) Center for Disease Control, Atlanta, -* 1977. EXEMPLE 2 On analyse selon les méthodes de l'invention divers échantillons provenant d'individus atteints d'infections virales autres que la rubéole, de patients atteints de myelome multiple et des échantillons positifs en ce qui concerne les anti- corps antinucléaires et/ou le facteur rhumatoïde On n'observe pas de résultats faussement positifs dus à des infections virales, au myélome multiple, aux anticorps antinucléaires ou au facteur rhumatolde. Comme le montrent les techniques décrites ci-dessus, les procédés de l'invention fournissent une détermina- tion immunologique d'immunoglobulines de classe spécifique dans des échantillons contenant le facteur rhumatoide L'invention fournit également une technique de détermination immunologique d'immuno- globulines de classe spécifique dans des échantillons contenant le facteur rhumato Tde sans nécessiter la séparation des diverses immunoglobulines ni l'élimination du facteur rhumatoïde de l'échan- tillon avant la fixation des immunoglobulines au réactif d'anticorps de classe spécifique. Bien entendu, diverses modifications peuvent être apportées par l'homme de l'art aux dispositifs ou procédés qui viennent d'être décrits uniquement à titre d'exemples non limitatifs sans sortir du cadre de l'invention. R E V E ND I CAT I O'N S ___________________________ * 1 Procédé pour déterminer un anticorps de type immunoglobuline d'une classe Ig X dans un échantillon o X est choisi parmi le groupe constitue par M, Ai D et E caractérise en ce qu'il consiste &: a) traiter l'échantillon avec une quantité efficace d'anti-Ig G; b) mettre l'échantillon traite en contact avec un réactif d'anticorps de classe spécifique comprenant un antigène pour lequel l'anticorps de type immunoglobuline Ig X est spécifique revêtant un support solide, pour former un complexe antigène-Ig X sur le support solide; c) éliminer l'échantillon non fixé; d) traiter le complexe antigène-Ig X avec un antiIg X; et e) déterminer l'anti-Ig X fixe au complexe antlg&no-Ig X comme mesure de l'Ig X dans l'échantillon. 2 Procéde selon la revendication 1, caractérisé en ce que la quantité d'anti-Ig G du stade (a) est immunochimiquement supérieure & la quantité d'Ig G dans l'échantillon. 3 Procède selon la revendication 2, caractérisé en ce que l'anti-Ig X est marqué avec une enzyme. 4 Procédé selon la revendication 3, caractérisé en ce que l'anti-Ig X marque non fixe est éliminé avant la détermina- tion de l'anti-Ig X marqué fixe au complexe antigène-Ig X. Procède selon l'une des revendications 1 ou 4, caractérise en ce que l'Ig X est un anticorps de type Ig M contre le virus de la rubéole. 6 Procédé selon la revendication 1, caractérisé en ce qu'on effectue le stade (c) par aspiration de l'échantillon non fixé et lavage du support solide avec de l'eau. 7 Procéde pour déterminer un anticorps de type immunoglobuline d'une classe Ig X dans un échantillon, o X est choisi parmi le groupe constitué par M, A, D et E, caractérise en ce qu'il consiste &: a) traiter l'échantillon avec une quantité efficace d'anti-Ig G; b) mettre l'échantillon traité en contact avec un réactif d'anticorps de classe spécifique comprenant un antigène pour lequel l'anticorps de type immunoglobuline Ig X est spécifique revêtant un support solide, pour former un complexe antigène-Ig X sur le support solide; c) éliminer l'échantillon non fixe; d) traiter le complexe antigène-Ig X avec de l'anti-Ig X marque; e) éliminer l'anti-Ig X marqué non fixe; et f) déterminer l'anti-Ig X marqué fixe au complexe antigène-Ig X comme mesure de l'Ig X dans l'échantillon. 8 Procédé selon la revendication 7, caractérise en ce que l'anti-Ig X marqué est marque avec une enzyme. 9 Procédé selon la revendication 8, caractérisé en ce que l'Ig X est un anticorps de type Ig M dirigé contre le virus de la rubéole. Procéde selon la revendication 7, caractérise en ce que les stades (c) et (e) sont effectués respectivement par aspiration de l'échantillon non fixe et de l'anti-Ig X marque et lavage du support solide. 11 Procéde pour la détermination d'un anticorps de type immunoglobuline d'une classe Ig X dans un échantillon o X est choisi parmi le groupe constitué par M, A, D et E, caractérisé en ce qu'il consiste à: a) traiter l'échantillon avec une quantité effi- cace d'anti-Ig G; b) mettre l'échantillon traite en contact avec un réactif d'anticorps de classe spécifique comprenant un antigène pour lequel l'anticorps de type immunoglobuline Ig X est spécifique revêtant un support solide, pour former un complexe antigène-Ig X sur le support solide; c) éliminer l'échantillon non fixé; d) traiter le complexe antigène-Ig X avec un anti- Ig X; e) éliminer l'anti-Ig X non fixé; f) traiter l'antigène-Ig X-antiIg X avec un anticorps marque dirige contre l'anti-Ig X; g) eliminer l'anticorps marqué non fixe dirigé contre l'anti-Ig X; et h) déterminer l'anticorps marqué fixe au complexe antigène-Ig X-anti-Ig X comme mesure de l'Ig X dans l'échantillon. 12 Procéde selon la revendication 11, caractérisé en ce que la quantité d'anti-Ig G du stade (a) est immunochimiquement supérieure a la quantité d'Ig G dans l'échantillon. 13 Procédé selon la revendication 11, caractérisé en ce que l'anticorps marqué dirige contre l'anti-Ig X est marqué avec une enzyme. 14 Procede selon la revendication 13, caractérise en ce que l'Ig X est un anticorps de type Ig M dirigé contre le virus de la rubéole. Procéde selon la revendication 11, caractérise en ce qu'on effectue les stades (c), (e) et (g) respectivement par aspiration de l'échantillon non fixe, de l'anti-Ig X marqué non fixe et de l'anticorps marque non fixedirigé contre l'anti-Ig X et lavage du support solide. 16 Procéde pour la détermination d'un anticorps de type immunoglobuline de classe Ig G dans un échantillon, caracté- risé en ce qu'il consiste à: a) traiter l'échantillon avec une quantité effi- cace d'anti-Ig G; b) mettre l'échantillon traité en contact avec un réactif d'anticorps de classe spécifique comprenant un antigène pour lequel l'anticorps de type immunoglobuline Ig G spéci- fique revêtant un support solide, pour former un complexe antigène- Ig G-anti-Ig G sur le support solide; c) éliminer l'échantillon non fixe; d) traiter le complexe antigène-Ig G-anti-Ig G avec un anticorps dirige contre l'anti-Ig G; et e) déterminer l'anticorps dirigé contre l'anti- Ig G fixe au complexe antigène-Ig G-anti-Ig G comme mesure de l'Ig G dans {'échantillon. 17 Procédé selon la revendication 16, caracterisé en ce que la quantité d'anti-Ig G du stade (a) est immunochimique- ment supérieure à la quantité d'Ig G dans l'échantillon. 18 Procédé selon la revendication 16, caractérisé en ce que l'anticorps dirigé contre l'anti-Ig G est marque avec une enzyme. 19 Procéde selon la revendication 16, caractérise en ce que le stade (c) est effectue par aspiration de l'échantillon non fixe et lavage du support solide. 20 Procéde selon la revendication 18, caractérise en ce que, dans le stade (e), l'anticorps marque non fixe dirige contre l'Ig G est élimine avant la détermination de la quantité d'anticorps fixe dirigé contre l'anti-Ig G dans l'échantillon. 21 Procédé selon la revendication 20, caractérise en ce que l'anticorps marque non fixe dirige contre l'Ig G est éliminé par aspiration et lavage du support solide. 22 Détermination immunologique améliorée d'un anticorps de type immunoglobuline d'une classe Ig X dans un échan- tillon o X est choisi parmi le groupe constitue par M, A, D et E> caractérise en ce qu'il comprend le traitement de l'échantillon avec une quantité efficace d'un immunoreactif spécifique de l'Ig G et suffisante pour empêcher la fixation du facteur rhumatolde & 1 'Ig G. 23 Procédé selon la revendication 22, caractérise en ce que l'immunoréactif est un anti-Ig G. 24 Procéde selon la revendication 22, caractérise çn ce qu'il comprend: a) le traitement de l'échantillon avec une quantité efficace d'un immunoréactif et d'un antigène pour lequel l'anticorps Ig X est spécifique pour former un complexe antigène-Ig X; et b) la détermination du complexe antigène-Ig X formé. Procéede selon la revendication 24, caractérisé en ce que le complexe antigène-Ig X formé est détermine selon des techniques d'immunoprécipitation, en sandwich ou compétitive. 26 Procéde selon la revendication 25, caractérise en ce que l'immunoréactif est un anti-Ig G. 27 Procedé selon la revendication 26 j caractérise en ce que le stade (a) consiste a: 1) traiter l'échantillon avec une quantité efficace d'immunoréactif; puis 2) mettre l'échantillon traité en contact avec un antigène pour lequel l'Ig X estspécifique. 28 Procéde selon la revendication 27, caractérise en ce que l'antigène pour lequel l'Ig X est spécifique revêt un support solide. 29 Procédé selon la revendication 28, caractérise en ce'que le complexe antigène-Ig X est détermine par: 1) elimination de l'échantillon non fixe; 2) traitement du complexe antigène-Ig X avec un aati-Ig X; et 3) détermination de l'anti-Ig X fixe au complexe antigène-Ig X comme mesure de l'Ig X dans l'échantillon. Procédé selon la revendication 29, caractérise en ce que l'anti-Ig X est marqué avec une enzyme. 31 Procédé selon la revendication 30, caractérisé en ce que l'anti-Ig X marqué non fixe est élimine avant la détermi- nation de l'anti-Ig X marqué fixe au complexe antigène-Ig X. 32 Procédé selon la revendication 31, caractérisé en ce que l'Ig X est un anticorps de type Ig M dirigé contre le virus de la rubéole.