Brevet FR2518546A1 — publié le 19830624

L'invention concerne de nouvelles substances physio- logiquement actives ayant une action hypocholestérolémiante. Plus précisément, l'invention concerne de nouvelles substances physiologiquement actives, les dihydro et tétrahydromonacoli- nes L représentées par la formule générale (I) suivante: HO o (I) CH 3 X CH 3 dans laquelle X est -CH=CH ou -CH 2-CH 2-, ayant une activité hypocholestérolémiante et leurs sels métalliques ainsi que leurs esters alkyliques, représentés par la formule générale (II) suivante, HO OOY b H (II) CH 3 X CH 3 dans laquelle Y est l M(o M est un élément métallique et n n une valence atomique de l'élément métallique), ou un groupe alkyle inférieur ayant de 1 à 6 atomes de carbone, X a la mê- me signification que ci-dessus; un procédé pour leur prépara- tion et une composition pour le traitement de l'hyperlipémie contenant ces substances en tant qu'ingrédient actif. L'hyperlipémie, en particulier l'hypercholestérolémie, est reconnue comme l'un des facteurs importants des troubles cardiaques tels que l'infarctus du myocarde et l'athérosclé- rose La Demanderesse a donc effectué des recherches en vue de trouver de nouvelles substances physiologiquement actives ayant une activité hypocholestérolémiante, à partir de produits microbiens En conséquence, la Demanderesse a réussi à obtenir une substance active, la dihydromonacoline L, à partir du mi- lieu de culture d'une souche de champignons. On a constaté dans une expérience sur des rats, que la présente substance est efficace en tant qu'agent hypocho- lestérolémiant En outre, les substances se sont avérées être de nouvelles substances, comme l'a confirmé un examen des pro- priétés physico-chimiques de ladite substance. La dihydromonacoline L correspond à la formule géné- rale (I) ci-dessus, dans laquelle X est -CH=CH et est repré- sentée par la formule (III) suivante. HO (III) La Demanderesse a en outre trouvé dans le cadre de recherches que la tétrahydromonacoline L représentée par la formule (IV) suivante (IV) CH correspond à la formule générale (I) ci-dessus dans laquelle X est -CH 2-CH 2-, a un effet similaire et que des sels métal- liques et des esters alkyliques des dihydro et tétrahydro- monacolines L sont également d'excellentes nouvelles substan- ces physiologiquement actives ayant une activité hypocholes- térolémiante comme la dihydromonacoline L. L'invention a pour but de fournir de nouvelles subs- tances physiologiquement actives possédant une activité hypo- cholestérolémiante, ainsi qu'un procédé pour la préparation de ces substances. L'invention a encore pour objet de fournir un agent de traitement de l'hyperlipémie, contenant une nouvelle subs- tance physiologiquement active possédant une activité hypo- cholestérolémiante, en tant qu'ingrédient actif. D'autres buts et avantages de l'invention apparaîtront à la lecture de la description ci-après. Aux dessins annexés: la Fig 1 représente un spectre d'absorption infra- rouge (K Br) de la dihydromonacoline L, et les Fig 2 et 3 représentent le spectre de RMN (CDC 13) et le spectre d'analyse de masse de la dihydromona- coline L, respectivement. La dihydromonacoline L fournie par l'invention et re- présentée par la formule (III) suivante HO O 2 O (III) CH 3 CH 3 peut être obtenue par une culture de microorganismes, une sor- te de champignons, en particulier des microorganismes appar- tenant au genre Monascus, et séparation à partir du milieu cultivé. Les microorganismes utilisés dans l'invention sont les souches produisant de la dihydromonacoline L, appartenant au genre Monascus et la souche qui est considérée par la Demande- resse comme particulièrement efficace, est, par exemple, Mo- nascus ruber no 1005, qu'elle a isolée à partir de substances alimentaires produites en Thallande, ladite souche étant dé- posée sous le no d'admission FERM-P 4822 au Fermentation Re- search Institute, Agency of Industrial Science and Technology, Ministry of International Trade and Industry, Japon, et sous le no d'admission ATCC 20657 à l'American Type Culture Collec- tion, US. Il est inutile de préciser que non seulement des va- riantes mais également des souches de mutants des microorga- nismes appartenant au genre Monascus autres que celle indiquée ci-dessus peuvent être utilisées si elles sont capables de pro- duire de la dihydromonacoline L. Les propriétés bactériologiques du microorganisme pro- duisant de la dihydromonacoline L sont les suivantes: I Développement Le développement sur un milieu de pomme de terre-glu- cose-gélose à 25 C est rapide et le diamètre de la colonie at- teint de 5 à 6 cm 10 jours après l'inoculation La colonie est plate et une couche de base relativement mince d'hyphes se dé- veloppe Le développement des hyphes aériens est faible; les hyphes aériens sont blancs et la plupart d'entre eux ont un as- pect laineux De nombreuses créistothécies sont formées sur la couche de base des hyphes et deviennent brun-rougeâtre à la maturité Les surfaceset le revers de la colonie sont bruns à brun-rougeâtre. Le développement sur un milieu de gélose de Sabouraud à 25 OC est très rapide et le diamètre de la colonie atteint de 6 à 6,5 cm 10 jours après l'inoculation La surface de la colonie est très plate et les hyphes de base et les hyphes aériens se développent mieux que sur un milieu de pomme de terreglucose-gélose Le nombre de cléistothécies décomptées est très faible La surface de la colonie est jaune-rougeâtre a brun-rougeâtre et le revers est brun-rouge à brun foncé. Le développement sur de la farine d'avoine-gélose à C est lent et le diamètre de la colonie atteint de 1,5 à 2 cm 10 jours après l'inoculation La colonie est plate Le développement des hyphes aériens et la formation de cléisto- thécies sont tous deux tres faibles La surface et le revers de la colonie sont colorés en rouge foncé à brun-rougeâtre. Le développement sur un milieu de gélose de Czapek à OC est tres lent et le diamètre de la colonie atteint de 1,6 à 1,8 cm 10 jours apres l'inoculation. Les taux de développement sur chacun des milieux ci- dessus à 37 OC sont pratiquement égaux à ceux à 25 C. 2 Propriétés morphologiques Les cléistothécies sont sphériques et ont de 30 à 60 microns de diamètre; leurs parois sont minces et membraneuses; leurs tiges ont des parois septales et chacune consiste en un hyphe de 3, 5 à 4,5 microns de diamètre et de 15 à 80 microns de longueur L'asque consiste en 8 spores et est presque sphé- rique et évanescente Les ascospores sont ovoïdes ou ellipsoi- des; ils ont une dimension de 4 4 x 4 7 microns et leurs surfaces sont unies Les conidiés sont incolores et sphériques ou pyriformes; leur dimension atteint de 6 9 x 6 11 mi- crons; les bases sont tronquées et leurs parois sont relati- vement épaisses et unies Les conidiés sont reliées à partir du haut de façon basipétale Le conidiophore ressemble à un hyphe végétatif et est ramifié ou non-ramifié, les conidiés étant formées sur le dessus Les mycéliums sont ramifiés et ont des parois septales; la plupart d'entre eux ont un dia- metre de 3 à 5 microns. A partir de l'observation de ses caractéristiques, tel que mentionné cidessus, ce microorganisme a été identifié comme une souche de Monascus ruber van Tieghem. -Les propriétés microbiologiques de Monascus ruber ont été rapportées dans la littérature suivante: van Tieghem, Bull Soc Botan France 31, 227 ( 1884); Cole et al, The Ca- nadian Journal of Botany 46, 987 ( 1968), et Takada, Transac- tions of the Micological Society of Japan 9, 128 ( 1969). La dihydromonacoline L est produite par une culture de la souche produisant de la dihydromonacoline L, dans des con- ditions aérobie, dans un milieu nutritif, selon le procédé connu comme procédé de culture des champignons Par exemple, le microorganisme produisant de la dihydromonacoline L est cultivé en série sur le milieu contenant 2 % d'amidon soluble, 1 % de glucose, 2 % de peptone et 2 % d'agar Dans le but de produire de la dihydromonacoline L, les corps cellulaires dé- veloppés sur ce milieu de gélose sont directement inoculés sur le milieu de production et cultivés De plus, les corps cellulaires développés sur le milieu de production sont culti- vés sur un nouveau milieu de production dans lequel la dihydro- monacoline L peut être produite. Le microorganisme produisant de la dihydromonacoline L se développe à une température comprise entre 7 et 40 C; mais on préfère normalement produire la dihydromonacoline L a une température comprise entre 20 et 35 C Pour la culture du microorganisme produisant de la dihydromonacoline L, appar- tenant au genre Monascus, les sources nutritives utilisables pour la culture des champignons et d'autres microorganismes peuvent être toutes utilisées Par exemple, comme source de carbone, on peut utiliser le glucose, le maltose, la destrine, l'amidon, le lactose, le saccharose, la glycérine et similai- res Parmi ces sources de carbone, le glucose et l'amidon re- présentent des sources de carbone favorables pour la produc- tion de dihydromonacoline L. Toutes les sources d'azote connues pour le développe- ment des microorganismes appartenant au genre Monascus ou au- tres, peuvent être utilisées pour la production de dihydromo- nacoline L Par exemple, on peut utiliser la peptone, un ex- trait de viande, une levure, un extrait de levure, de la fa- rine de soja, de la farine d'arachide, un sirop d'infusion de mals, du son de riz et une source d'azote inorganique et si- milaires Dans la production de dihydromonacoline L par cul- ture du microorganisme produisant de la dihydromonacoline L, on ajoute si nécessaire un sel minéral et un sel métallique. On peut également ajouter selon besoin une quantité de métal lourd à l'état de trace. La dihydromonacoline L est obtenue en cultivant le microorganisme produisant de la dihydromonacoline L dans des conditions aérobies, et en utilisant généralement des procé- dés de culture aérobie, par exemple une culture en milieu so- lide, une culture avec agitation, et une culture sous aération et agitation Si un agent antimousse s'avère nécessaire pen- dant la culture ou la stérilisation du milieu, on peut utili- ser des agents antimousse tels qu'une huile de silicone, des agents tensioactifs et similaires Une température de 20 à OC est préférable pour la culture La culture a lieu en continu jusqu'à ce que la dihyciromonacoline L se soit substan- tiellement accumulée et elle dure normalement de 4 à 17 heures. L'extraction de la substance concernée à partir du ma- tériau cultivé peut être effectuée en associant de façon appro- priée divers procédés en fonction des propriétés de la subs- tance telles qu'elles ont été décrites par la Demanderesse. C'est-à-dire que ces procédés comprennent une extraction avec un solvant tel que l'éther, l'acétate d'éthyle, le chlorofor- me, le benzène et similaires; une dissolution dans un sol- vant ayant une forte polarité tel que l'acétone, un alcool, et similaires; une élimination des impuretés par l'utilisa- tion de l'éther de pétrole, de l'hexane et autres solvants de faible polarité; une filtration sur gel en utilisant une colonne de Sephadex; une chromatographie d'adsorption en uti- lisant du charbon actif, un gel de silice et similaires La substance est isolée du milieu de culture sous forme d'une substance homogène en utilisant une association appropriée de ces techniques. Plus concrètement, les substances concernées peuvent être isolées à partir du milieu de culture par l'association des opérations suivantes: extraction à partir du milieu de culture avec un solvant tel que l'acétate d'éthyle et similai- res, évaporation de l'extrait à sec, dissolution de l'extrait dans un solvant organique tel que le benzène et similaires, extraction avec une solution aqueuse d'hydroxyde alcalin, aci- dification de la solution aqueuse en ajoutant un acide et ex- traction de la solution avec un solvant organique tel que l'a- cétate d'éthyle, évaporation de l'extrait à sec, dissolution de l'extrait dans du benzène, séparation des cristaux formés par concentration, évaporation à sec de la solution, dissolu- tion du produit séché dans un solvant organique tel que le benzène et enfin purification du produit brut par chromato- graphie sur colonne ordinaire pour obtenir un produit purifié. Les propriétés physico-chimiques de la dihydromonaco- line L sont décrites ci-dessous. La dihydromonacoline L représentée par la formule géné- rale (III) ci-dessus est une poudre cristalline blanche, so- luble dans les solvants tels que les alcools inférieurs, par exemple le méthanol, l'éthanol, le propanol et similaires, l'a- cétone, le chloroforme, l'acétate d'éthyle, le benzène et si- milaires Elle est insoluble dans l'hexane, l'éther de pétrole et similaires Cette substance est neutre et n'est pas soluble dans une eau neutre ou acide La structure lactone subit une ouverture du cycle par une saponification usuelle avec un al- cali et est convertie en une substance acide soluble dans l'eau. Cette substance acide est extraite avec un solvant tel que l'a- cétate d'éthyle, le chloroforme et similaire dans la gamme de p H acide et reconvertie en dihydromonacoline L par évaporation a sec. L'analyse élémentaire de la dihydromonacoline L indique les valeurs suivantes * carbone 74,50 %; hydrogène 9,85 %; et oxygène 15,65 % La substance a une masse moléculaire de 306 et pour formule moléculaire: C H O Les figures 1, 2 et 3 des dessins annexés montrent respectivement le spectre d'absorption infrarouge, le spectre de RMN et le spectre d'a- nalyse de masse de cette substance. La chromatographie en couche mince en utilisant du gel de silice (fabriqué par Merck et Co no 5715 Gel de silice (e)60-F 254) donne une simple tache à une valeur de Rf de 0,48 en utilisant comme solvant de développement de l'hexane/acéto- ne ( 1:1) Ladite tache peut être décelée par une pulvérisation d'acide sulfurique (coloration en brun rougeâtre par léger chauffage) et de l'iode. La tétrahydromonacoline L représentée par la formule générale mentionnée ci-dessus (IV) est un produit cristallisé blanc et est soluble dans les alcools inférieurs tels que le méthanol, l'éthanol, le propanol et similaires, et d'autres solvants tels que l'acétone, le chloroforme, l'acétate d'éthy- le, le benzène et similaires, mais elle est insoluble dans l'hexane, l'éther de pétrole et similaires Cette substance est neutre et insoluble dans l'eau, mais facilement convertie en une substance acide soluble dans l'eau par ouverture du noyau de la structure de lactone avec un traitement alcalin usuel. L'analyse élémentaire de la tétrahydromonacoline L in- dique les valeurs suivantes: carbone 74,03 %, hydrogène 10,39 %; oxygene 15,58 % Elle a une masse moléculaire de 308 et sa for- mule moléculaire est C 19 H 3203 o La tétrahydromonacoline L peut être obtenue en dissol- vant la monacoline L ou la dihydromonacoline L représentée par la formule générale (III) ci-dessus dans un solvant organique tel que, par exemple le têtrahydrofuranne, l'acétate d'éthyle et similaires, et en hydrogénant le composé dissous en présen- ce d'un catalyseur tel que, par exemple l'oxyde de platine, le palladiumcarbone et similaires L'hydrogénation est effectuée à une température de 10 à 60 C, de préférence entre 15 et 40 C et est normalement terminée en 10 à 24 heures La quantité de catalyseur est normalement de 1 à 60 % en poids, de préférence de 2 à 30 % en poids, par rapport au poids de monacoline L ou de dihydromonacoline L. La monacoline L utilisée comme matériau de départ est un composé connu et peut être obtenue par isolement à partir du milieu de culture de Monascus ruber n 1005 (FERM-P- NO 4822), tel que décrit dans la demande de brevet japonais, mise à l'ins- pection publique N 57798/81. Comme sels métalliques de dihydro et de tétrahydro- monacolines L, on peut citer des sels de métaux alcalins tels que les sels de sodium, de potassium et similaires; des sels de métaux alcalinoterreux tels que les sels de calcium, de ma- gnésium et similaires; les sels d'aluminium, les sels de fer, _ 518546 les sels de zinc, les sels de cuivre, les sels de nickel, et les sels de cobalt et similaires Parmi ces sels, on préfère en particulier les sels de métal alcalin, les sels de métal alcalinoterreux et les sels d'aluminium, et surtout les sels S de sodium, les sels de calcium et les sels d'aluminium. Comme exemples d'esters alkyliques, on peut mentionner les esters méthyliques, éthyliques, n-propyliques, isopropy- lique, n-butylique, n-hexylique et similaires. La liste ci-dessous est représentative de ces composés. 1 Sel de sodium de la dihydromonacoline L 2 Sel de sodium de la tétrahydromonacoline L 3 Sel de calcium de la dihydromonacoline L 4 Sel de calcium de la tétrahydromonacoline L Sel d'aluminium de la tétrahydromonacoline L 6 Ester méthylique de la dihydromonacoline L 7 Ester méthylique de la tétrahydromonacoline L 8 Ester éthylique de la tétrahydromonacoline L La synthèse de ces composés est effectuée de la ma- nière suivante. Un ester alkylique de tétrahydromonacoline L est re- présenté par la formule générale (V) suivante HO- OOR H (V CH. CH 3 dans laquelle R est un groupe alkyle ayant de 1 à 6 atomes de carbone, et est obtenu par réduction par voie catalytique d'un ester de monacoline L ou de dihydromonacoline L correspondant re- présenté par la formule générale (VI) suivante HO 11 COOR OH (VI) CÉ 39 CH 3 CH 3 dans laquelle représente une double liaison dans le cas de la monacoline L et une simple liaison dans le cas de la dihydromonacoline L; R a la même signification que ci-dessus, dans un solvant organique tel que par exemple un alcool, notam- ment le méthanol, l'éthlanol et similaires, le tétrahydrofuran- ne, l'acétate d'éthyle et similaires, en présence d'un cata- lyseur tel que l'oxyde de platine, le palladium-carbone et si- milaires, La réduction est effectuée à une température compri- se entre 10 et 60 Cs, de préférence entre 15 et 40 C Le ca- talyseur est normalement utilisé en une quantité de 1 à 60 % en poids, de préférence de 2 à 30 % en poids par rapport au poids d'ester de monacoline L ou de dihydromonacoline L. L'ester peut également être obtenu en faisant réagir la tétrahydromonacoline L avec un alcool (ROH dans lequel R a la signification indiquée ci-dessus) correspondant à l'ester désiré. On obtient normalement un ester alkylique de dihydro- monacoline L en faisant réagir la dihydromonacoline L avec un alcool correspondant à l'ester désiré Dans la réaction ci- dessus, on utilise comme catalyseur un acide minéral tel que l'acide chlorhydrique, l'acide sulfurique et similaires; le fluorure de bore, une résine échangeuse d'ion acide et similai- res, et comme solvant un alcool du même type ou le benzène, le chloroforme, l'éther et similaires, à condition qu'il ne participe pas à la réaction - Un ester alkylique de monacoline L et un ester alkyli- que de dihydromonacoline L utilisés comme matériaux de dépaxt peuvent être obtenus en faisant réagir la monacoline L ou la dihydromonacoline L avec un alcool correspondant à l'ester désiré. Des sels métalliques de dihydro et de tétrahydromona- colines L sont représentés par la formule générale (VII) HO On M (VII) X dans laquelle X, M et N ont les significations indiquées ci- dessus, et sont synthétisés de la manière suivante; Ils sont obtenus en dissolvant la dihydro ou la tétra- hydromonacoline L représentée par la formule générale (I) CH (I) dans laquelle X représente -CH=CH ou -CH 2-CH 2-, dans un sol- vant tel que le méthanol, l'éthanol, l'acétone et similaires, et en faisant réagir le composé avec un hydroxyde métallique représenté par la formule générale (VIII) M(OH)n (VIII) dans laquelle M représente un métal alcalin tel que le sodium, le potassium et similaires; un métal alcalinoterreux tel que le calcium, le magnésium et similaires; ou un élément métal- lique tel que l'aluminium, le fer, le zinc, le cuivre, le nic- kel, le cobalt et similaires; N est une valence atomique de l'élément métallique L'hydroxyde métallique est normalement utilisé sous forme de solution aqueuse. L'activité Physiologique de la dihydronooacoline L,de la tétriydromo- naooiire L et de leurs dérivés selon l'invention peut être évalus par le procédé suivant dans lequel on détermine l'activité hypocho- lestérolémiante dans le sang chez des rats On injecte du Tri- ton (R)w R-1339 (polymère de 4-( 1,1,3,3-tétraméthylbutyl)phé- nol avec du formaldéhyde et de l'oxirane, un agent tensi Doactif fabriqué par Rohm & Haas Co, US) ayant une activité hypercho- lestérolémiante dans le sang, par voie intraveineuse à un grou- * pe de 5 rats en une dose de 400 mg/kg et en même temps on ad- ministre oralement une certaine quantité de chaque composé. On saigne les rats à mort après 14 heures et on dose le cho- lestérol dans le sang par la méthode classique (Groupe traité). D'autre part, des rats à qui on a seulement administré du Tri- ton (R)WR-1339 par voie intraveineuse, sont traités de la même manière pour doser le cholestérol dans le sang (Groupe témoin). L'effet de la dihydromonacoline 1 peut être déterminé quantita- tivement en comparant les taux de cholestérol dans les deux groupes. L'activité hypocholestérolémiante dans le sérum, la dose efficace et la toxicité sont indiquées ci-après. ( 1) Activité hypocholestérolémiante dans le sérum (A) On a injecté à des rats par voie intraveineuse du Triton(R)WR-1339 en une quantité de 400 mg/kg et en même temps on leur a administré oralement de la dihydromonacoline L, de la tétrahydromonacoline L ou un de leurs dérivés (sous la for- me d'une solution aqueuse ou d'une suspension aqueuse) On a saigné les rats à mort après 14 heures et on a dosé le choles- térol dans le sang par la méthode classique Les résultats sont rapportés dans le Tableau 1. TABLEAU 1 Activité hypocholestérolémiante dans le sérum chez des rats. (B) On a injecté à des rats par voie intraveineuse du Triton(R)WR-1339 en une quantité de 400 mg/kg et en même temps on a administré oralement 10 mg/kg de monacoline L, de dihydro- monacoline L, de tétrahydromonacoline L ou d'un de leurs déri- vés (sous forme d'une solution aqueuse ou d'une suspension aqueuse) On a encore administré oralement une dose de 10 mg/kg de chacun des composés ci-dessus après 8 heures (la dose tota- le atteignant 20 mg/kg) Puis on a saigné les rats à mort après 12 heures ( 20 heures après l'administration de Triton WR-1339) et on a dosé le cholestérol sérique par la méthode classique. Les résultats sont rapportés dans le Tableau 2. Composé Dose Pourcentage de réduction mg/kg du cholestérol sérique (%) Dihydromonacoline L 20 23,4 30,6 Tétrahydromonacoline L 5 21 29 Ester méthylique de la tetrahydromonacoline L 5 19 31 Sel de sodium de la tétrahydromonacoline L 5 20 29 TABLEAU 2 Les résultats ci-dessus montrent que les composés de l'invention possedent une excellente activité hypocholestéro- lémiante et qu'en particulier l'ester méthylique de la dihydro- monacoline Let latétrahydromonacoline L et ses dérivés exer- cent un excellent effet. ( 2) Toxicité aiguë On a déterminé la toxicité aiguë en administrant orale- ment et par voie intrapéritonéale une solution aqueuse ou une suspension aqueuse de dihydromonacoline L, de tétrahydromona- coline L et de leurs dérivés Les résultats sont rapportés dans le Tableau 3. Composes Pourcentage de reduc- tion du cholestérol __ _ -sérigue (%) Monacoline L 18,9 Sel de sodium de la dihydromonacoline L 31,3 Ester méthylique de la dihydromonacoline L 34, 1 Sel de sodium de la tétrahydromonacoline L 34,2 Ester méthylique de la tétrahydromonacoline L 38,0 o TABLAU 3 Toxicité aigus composé Animal Procédé d'administration DL 50 (mg/kg) Souris Voie orale > 1000 Voie intrapéritonéale; 7500 Dihydromonacoline L Voie'orale 71 000 R at_ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ Voie intrapéritonéale 7500 Voie orale '72 000 So Iris Voie intrapérîtoniéale 7500 T 6 trahydronxonacoline L Voie orale 72 000 Rat Voie intrapéritonéale - 500 Souris Voie orale 72 000 Ester méthylique de la Voie intrapériton 4 ale > 7500 têtrahydromonacoline L Rat Voie orale -72 000 Voie intrapéritonéale 7,500 Voie orale > 2 000 Sel de sodium de la Souris tétrahydromnacoline L Voie initrapéritonéale 7500 Voie orale > 2 000 Rat Voie intrapêritonéale > 500 H o' w.b oe LA ON. TABLEAU 3 D'apres le tableau ci-dessus, on a trouvé que la di- hydromonacoline L, la tétrahydromonacoline L et leurs dérivés avaient une très faible toxicité. Tel que mentionné ci-dessus, la dihydromonacoline L, la tétrahydromonacoline L et leurs dérivés possedent une acti- vité hypocholestérolémiante dans le sang et peuvent être uti- lisées comme produits pharmaceutiques, par exemple comme agent anti-hyperlipémie et comme agent anti-athérosclérose. Ces composés sont administrés sous forme d'injection intraveineuse ou par administration orale et similaires La dose varie en fonction de l'âge, du poids corporel, des symp- t 8 mes, du mode d'administration et autres, et normalement la dihydromonacoline L est administrée à des adultes en une dose de 10 à 2 000 mg, de préférence de 50 à 300 mg, par jour en 1 à 3 doses partielles, et la tétrahydromonacoline L ainsi que ses dérivés est administrée en une dose de 5 A 3 000 mg, de préférence de 10 à 300 mg par jour en 1 à 3 doses partielles. Cependant, si nécessaire, d'autres doses peuvent tre adminis- trées. La dihydromonacoline L, la tétrahydromonacoline L et leurs dérivés peuvent être préparés sous la forme de doses d'u- ne manière facultative et courante par analogie avec un autre agent hypolipémiant tel que par exemple le Clofibrate ou le Simfibrate En conséquence, l'invention concerne également la préparation d'une composition contenant au moins une des subs- tances suivantes: la dihydromonacoline L, la tétrahydromona- coline L et leurs dérivés, utilisables comme produits pharma- ceutiques pour des êtres humains Ces compositions peuvent être conçues pour être utilisées d'une manière courante grace à l'adjonction d'un véhicule pharmaceutique facultatif ou né- cessaire, ou d'un excipient. Cette composition est présentée de façon souhaitable sous une forme appropriée pour l'absorption par le tractus gastro-intestinal Des comprimés et des capsules pour une ad- ministration orale constituent une forme de dose unitaire et peuvent contenir des excipients usuels, par exemple des liants comme un sirop, la gomme arabique, la gélatine, le sorbitol, la gomme adraganthe ou la polyvinylpyrrolidone; des excipients tels que le lactose, le sucre, l'amidon de mais, le phosphate de calcium, le sorbitol ou la glycine; des lubrifiants tels que, par exemple, le stéarate de magnésium, le talc, le poiy- éthylene glycol, ou la silice; ies agents de désintégration tels que, par exemple l'amidon de pomme de terre, ou des agents mouillants autorisés, tels que par exemple le lauryl sulfate de sodium Les comprimés peuvent être enduits par le procédé classique connu dans la technique La préparation liquide pour utilisation orale peut être sous la forme d'une suspension, d'une solution, d'un sirop, d'un élixir aqueux ou huileux et similaires ou peut être un produit sec prêt à être redissous avec de l'eau ou d'autres véhicules appropriés avant l'emploi. Ces préparations liquides peuvent contenir dès additifs usuel- lement utilisés, par exemple des agents de suspension tels qu'un sirop de sorbitol, la méthylcellulose, un sirop de glu- cose/sucre, la gélatine, l'hydroxyéthylcellulose, la carboxy- méthylcellulose, un gel de stéarate d'aluminium ou une grais- se comestible hydrogénée; des émulsifiants tels que la léci- thine, le mnnoolate de sorbitanne, ou la gomme arabique; des véhicules non-aqueux tels que l'huile d'amande, l'huile de co- prah fractionnée, un ester huileux, le propylene glycol ou l'alcool éthylique; des agents de conservation tels que le p-hydroxybenzoate de méthyle, le p-hydroxybenzoate de propyle ou l'acide sorbique. Une composition injectable est fournie sous la forme d'une ampoule contenant une dose unitaire ou d'un récipient pour des doses multiples, un agent de conservation ayant été ajouté à la composition La composition peut être sous la for- me d'une suspension, d'une solution, d'une émulsion dans un véhicule huileux ou aqueux, et peut contenir un agent prescrit tel qu'un agent de suspension, un stabilisant et/ou un agent de dispersion D'autre part, l'ingrédient actif peut être une poudre prête à être redissoute dans un véhicule approprié, par exemple de l'eau apyrogene et stérilisée, avant l'emploi. Les exemples et les exemples de préparation non-limi- tatifs suivants sont donnés à titre d'illustration de l'in- vention. EXEMPLE 1 On inocule Monascus ruber no 1005 (FERM-P 4822, ATCC 20657) dans un milieu liquide contenant 3 % de glucose, 1 % de peptone, 3 % de poudre de soja dégraissé, 7 X de glycérol, 0,2 % de nitrate de sodium et 0,1 % de sulfate de magnésium heptahydraté (Mg SO 4 7 H 20) et on cultive à 28 OC dans des conditions aérobies pendant 10 jours Au filtrat résultant de la culture ( 50 1), on ajoute de l'acide chlorhydrique 6 N pour obtenir un p H de 3, puis on extrait le filtrat avec une quan- tité égale d'acétate d'éthyle On concentre l'extrait à sec et on dissout le résidu dans 1 litre de benzene, puis on sépa- re la substance insoluble par filtration On lave le filtrat avec 2 fois 500 ml d'une solution aqueuse de bicarbonate de sodium à 5 %o A la solution benzénique, on ajoute ensuite 1 li- tre d'une solution d'hydroxyde de sodium 0,2 N et on agite le mélange résultant à la température ambiante On sépare une cou- che aqueuse apres confirmation de la disparition de dihydromo- nacoline L de la couche benzénique par chromatographie en cou- che mince On ajuste le p H de cette couche aqueuse a une va- leur de 3,0 avec de l'acide chlorhydrique 6 N et on extrait avec 2 fois 1 litre d'acétate d'éthyle On concentre l'extrait à sec pour obtenir 3,1 g d'un matériau huileux On dissout ce matériau huileux dans du benzene et on soumet à une cristalli- sation pour précipiter la monacoline K produite simultanément. On seche la liqueur mère à partir de laquelle on a séparé les cristaux, on dissout le résidu dans du benzène et on adsorbe sur une colonne garnie de 80 g de gel de silice (gel Wako C-200) On développe la colonne avec successivement 400 ml de dichlorométhane, 5 litres d'un mélange de dichlorométhane et d'acétate d'éthyle ( 9:1) et 7 litres d'un mélange de dichloro- méthane et d'acétate d'éthyle ( 8:2) On dissout dans du ben- zene une fraction contenant la dihydromonacoline L (une frac- tion donnant une tache brune par pulvérisation d'acide sulfuri- 18546 que et chauffage à 120 C à la valeur Rf de 0,45, développée par chromatographie en couche mince sur du gel de silice n 5715, Gel de silice (R)60 F 254 /fabriqué par Merck & C /, sol- vant CH 2 C 12/acétone = 9:1) et on adsorbe sur une colonne garnie de 40 g de gel de silice (gel Wako C-200), puis on dé- veloppe avec 250 ml d'hexane et 4 litres d'un mélange d'hexa- ne et d'acétone ( 9:1) On sèche une fraction contenant de la dihydromonacoline L et on dissout dans 60 ml de benzène avant de laver avec deux fois 30 ml d'une solution de bicarbonate de sodium à 5 % On sèche ensuite la solution benzénique et on concentre à sec pour obtenir 30 mg d'une poudre blanche. On soumet cette poudre blanche à une chromatographie en phase liquide à grande vitesse (colonne de gel de silice de type ODS, développement avec un solvant constitué d'acétonitrile - solution d'acide phosphorique à 0,1 %, 1:1) pour recueillir une fraction de dihydromonacoline L Après avoir chassé le solvant par distillation, on obtient 18 mg de dihydromonacoli- ne L sous la forme d'une poudre blanche cristalline. Analyse élémentaire: Calculé: C 74,50 %; H 9,85 % Trouvé: C 74,63 %; H 9, 79 % Masse moléculaire: 306 (C 19 H 3003). EXEMPLE 2 - On dissout 100 mg de monacoline L dans 5 ml de tétra- hydrofuranne sec et à cette solution on ajoute 5 mg d'oxyde de platine et on soumet la solution résultante A une hydrogé- nation avec de l'hydrogène en agitant à la température ambiante pendant 15 heures On sépare le catalyseur par filtration et on cristallise le produit résultant dans un mélange d'acétate d'é- thyle et d'hexane pour obtenir 63 mg de cristaux blanc de té- trahydromonacoline L. Analyse élémentaire: Calculé: C 74,03 %; H 10,39 % Trouvé: C 74,13 %; H 10,42 % Masse moléculaire: 308 (C 19 H 3203) Spectre d'absorption ultraviolette (Me OH): absorption ter- minale Spectre d'absorption infrarouge (k Br): v 3500, 1730 cm 1 Point de fusion: 101 à 105 OC. EXEMPLE 3 On dissout 60 mg de dihydromonacoline L obtenue selon le procédé de l'exemple 1 dans 5 ml de tétrahydrofuranne sec et à la solution résultante on ajoute S mg d'oxyde de platine. On répete ensuite le procédé de l'exemple 2 pour obtenir 33 mg de cristaux blancs de têtrahydromonacoline L. Analyse élémentaire: Trouvé: C 74,11 %; H 10,44 % Masse moléculaire: 308 Spectre d'absorption ultraviolette: absorption terminale Spectre d'absorption infrarouge (k Br) : 3500, 1730 cm EXEMPLE 4 On dissout 200 mg d'ester méthylique de monacoline L dans 30 ml de méthanol et on ajoute 10 mg d'oxyde de platine comme catalyseur avant de réduire la solution résultante par voie catalytique selon le procédé classique Apres avoir sé- paré le catalyseur, on purlfle le résidu concentré par chroma- tographie sur gel de silice (benzene-acetate d'éthyle, mélan- ges 9:1 et 8:2) pour obtenir 195 mg d'ester méthylique de té- trahydromonacoline L sous la forme d'une substance huileuse. Analyse élémentaire: Calculé: C 70,59 %; H 10,59 Trouvé: C 70,60 %; H 10, 61 % Masse moléculaire: 340 (C 20 H 3604) Spectre d'absorption ultraviolette (méthanol): absorption terminale Spectre d'absorption infrarouge: -3200, 1740, 1730 cm EXEMPLE 5 On dissout 120 mg de tétrahydromonacoline L dans 5 ml de benzène et on ajoute 0,4 ml d'une solution d'hydroxyde de sodium 0,1 N, puis on agite le mélange résultant à 40 C pen- dant 2 heures On sépare une couche aqueuse du mélange et on lave avec 3 fois 2 ml de benzène avant de lyophiliser pour obtenir 104 mg du sel de sodium de tétrahydromionacoline L sous la forme d'une poudre blanche. Analyse élémentaire: Calculé: C 65,52 5; H 9,48 % Trouvé: C 65, 98 %; H 9, 61 % Spectre d'absorption ultraviolette (H 20): absorption termina- le Spectre d'absorption infrarouge (k Br): 3420, 2930, 1720, 1650 cml En répétant le procédé de cet exemple et en remplaçant la tétrahydromonacoline L par la dihydromonacoline L, on ob- tient le sel de sodium de dihydromonacoline L e Analyse élémentaire: Calculé: C 65,87 %; H 9,02 % Trouvé: C 66,16 %; H 9,14 % Spectre d'absorption ultraviolette (H 20): absorption terminale Spectre d'absorption infrarouge (k Br): 3420, 2930, 1720 ef -1 1650 cm En utilisant l'hydroxyde de calcium ou l'hydroxyde de magnésium au lieu de l'hydroxyde de sodium dans l'exemple ci- dessus, on obtient respectivement le sel de calcium et le sel de magnésium. EXEMPLE 6 Synthèse de l'ester méthylique de dihydromonacoline L: On dissout 90 mg de dihydromonacoline L dans 10 ml de méthanol et à la solution résultante on ajoute 200 mg d'une résine échangeuse d'ion acide (Dowex(R)50, type H) et on agite le mélange entre 60 et 70 C pendant 3 heures Lorsque la réac- tion est terminée, on sépare la résine du mélange par filtra- tion et on soumet le filtrat à une évaporation sous pression réduite pour chasser le solvant, puis on purifie le résidu obtenu par chromatographie sur colonne en utilisant 10 g d'un gel de silice (solvant de développement; benzene-acétate d'é- thyle, mélanges 9:1 et 8:2) pour obtenir 63 mg d'ester méthy- lique de dihydromonacoline L sous la forme d'une substance hui- leuse. Analyse élémentaire: Calculé: C 70,97 %; H 10,12 % Trouvé: C 71,37 %; H 10,83 % Spectre d'absorption ultraviolette (H 20): absorption terminale Spectre d'absorption infrarouge (k Br):, 3100, 1740 et -1 1725 cm Exemple de composition 1 Capsules pour administration par voie orale: Tétrahydromonacoline L 250 mg Lactose 75 mg Stéarate de magnésium 15 mg Total 340 mg On mélange la poudre correspondant à la formule ci-des- sus et on fait passer sur un tamis ayant une ouverture de mail- les de 0,250 mm, puis on introduit 340 mg de la poudre dans une capsule de gélatine n 1 pour obtenir la composition en capsule. Exemple de référence Synthèse de l'ester méthylique de monacoline L: On dissout 1 g de monacoline L dans 15 ml de méthanol et à cette solution on ajoute 2 g d'une résine changeuse d'ion, acide, (Dowex(R)50 W, type H, sous forme sèche), puis on chauf- fe le mélange résultant et on agite entre 60 et 70 C pendant 3 heures Lorsque la réaction est terminée, on sépare la rési- ne du mélange par filtration, on évapore le filtrat sous pres- sion réduite pour chasser le solvant et on purifie le résidu obtenu par chromatographie sur colonne en utilisant 10 g de gel de silice (solvant de développement: benzène-acétate d'té- thyle, mélanges 9:1 et 8:2) pour obtenir 650 mg d'ester méthy- lique de monacoline L sous la forme d'une substance huileuse. Analyse élémentaire: Calculé: C 71,39 %; H 9,59 % Trouvé: C 71,44 %; H 9, 68 % Spectre d'absorption ultraviolette (H 20): absorption ter- minale Spectre d'absorption infrarouge 3400, Z-3100, 1710 cm 1 N E V E N D I C A T I O N S 1 Dihydro et tétrahyaromonacoline L représentées par la formule générale (I) suivante HO (I) CH 3 dans laquelle X représente -CH=CH ou -CH 2-CH 2-, ainsi que les sels métalliques et les esters alkyliques des dihydro et tétrahydromonacolines L représentés par la formule générale (II) suivante HO Y (Ii) CH 3. X dans laquelle Y est -M (o M est un élément métallique et n n est une valence atomique de l'élément métallique) ou un grou- pe alkyle ayant de 1 à 6 atomes de carbone et X a la signifi- cation indiquée ci-dessus. 2 Dihydromonacoline L selon la revendication 1, dans laquelle X est CH=CH-et représentée par la formule HO O \ (III) CH H 3 3 Têtrahydromonacoline L selon la revendication 1, dans laquelle X est -CH 2-CH 2 et répondant à la formule HO O (IV) a CH 3 CH 3 4 Sel métallique de dihydro et de tétrahydromona- colines L selon la revendication 1, caractérisé en ce que le sel est un sel de sodium, un sel de calcium ou un sel d'alu- minium. Ester méthylique des dihydro et têtrahydromonaco- lines L selon la revendication 1. 6 Procédé pour la préparation de la dihydromonaco- line L représentée par la formule (III) suivante Ho \,0 t (III) CH 3 caractérisé en ce qu'il consiste à cultiver un microorganisme produisant de la dihydromonacoline L, appartenant au genre Monascus, sur un milieu nutritif et à isoler la dihydromona- coline L produite. 7 Procédé selon la revendication 6, caractérisé en ce que le microorganisme produisant de la dihydromonacoline L, appartenant au genre Monascus, est Monascus ruber. 8 Procedé selon la revendication 7, caractérisé en ce que le Monascus ruber est Monascus ruber n 1005 (FERM-P 4822, ATCC 20657). 9 Procédé pour la préparation de la tétrahydromonaco- line L représentée par la formule (IV) suivante ou un de ses esters alkyliques représenté par la formule générale (V) sui- vante HO CH 3. HO O (IV) (V) CH 3 CH 3 dans laquelle R représente un groupe alkyie ayant de 1 à 6 atomes de carbone, caractérisé en ce qu'il consiste à réduire par voie catalytique la monacoline L ou la dihydromonacoline L ou un de leurs esters alkyliques dans un solvant organique. Procéde pour la préparation-d'un sel métallique ou d'un ester alkylique de la dihydro ou de la tétrahydro- monacoline L représentée par la formule générale (VII) HO (VII) CH 3 X i dans laquelle Y représente -M (ou M est un élément métallique n et N est une valence atomique de l'élément métallique) ou un groupe alkyle ayant de 1 à 6 atomes de carbone; et X est -CH=CH ou -CH 2 -H 2 caractérisé en ce qu'il consiste à dissoudre la dihydro ou la tétrahydromonacoline L représentée par la formule générale (I) suivante (I) dans laquelle X a la signification indiquée ci-dessus, dans un solvant organique et à faire réagir le composé dissous avec un alcool aliphatique ayant de 1 à 6 atomes de carbone ou un hydroxyde métallique représenté par la formule générale (VIII) M(OH)n (VIII) dans laquelle M et N ont les significations indiquées ci- dessus. 11 Composition pour le traitement de l'hyperlipémie contenant un composé selon l'une quelconque des revendications 1 à 5, en tant qu'ingrédient actif.