Brevet FR2522327A1 — publié le 19830902

La présente invention concerne un composé nouveau à action anti- virale, à savoir le phosphonacétate de 1-N-t 2-( 2-diméthylaminoéthoxy) acétyl- aminoadamantane, répondant à le formule (I) ci-après: MI-com 27 O H 27 822 (Ci 53)2 2 3 2 ROOC"CH 2-PO 3 H 2 L'action anti-virale de l'acide phosphonacétique contre l'herpès de vaccin, l'herpès du Type 1 et l'herpès du Type 2 est connue depuis long- temps déjà A cet égard, on peut se référer à: N L Shipkowitz et al,Appl Ilicrob 26, 264-267 ( 1973); J.E Sugar et al, Invest Ophthalmol 12,532534 ( 1973; D.D Gerstein et al, Antimicrob Agents and Chemoth 1, 285-288 ( 1975); R F Meyer, ibid 2, 308-311 ( 1976 >. L'action du 1-N-2-( 2-diméthylaminoéthoxy)acétyl-aminol-adamantane, également connu sous le nom de tromantadine, contre les memes virus est égale- ment décrite (D Peteri & W Sterner, Arzneimittelforsch 23,577 ( 1973); G May & D Peteri,ibid 23, 718 ( 1973)). On a maintenant constaté que le composé (I)ou phosphonacétate de tromantadine possède une activité 6 tonnamnent forte contre les virus de l'herpès par comparaison avec les deux composants mentionnés plus haut, et une action du meme ordre de grandeur contre le virus de vaccin L'invention concerne également des compositions pharmaceutiques ayant une action anti-virale et contenant le composé (I) à titre de principe actif. L'invention concerne enfin un procédé de préparation de phosphona- cétate de tromantadine, caractérisé en ce qu'on fait réagir l'acide phosphona- cétique et la tromantadine, dans un rapport molaire sensiblement égal à 1:2, dans des solvants polaires tels que l'eau ou, de préférence, des alcools inférieurs et en ce qu'on isole le sel ainsi formé par évaporation de la solution ou par addition de non solvants de celui-ci On effectue la réaction à la température ambiante L'exemple suivant sert à illustrer le procédé selon l'invention sans aucunement en limiter la portée. EXEPLE (a) 1-N-( 2-chloracétyl -amino)-adamantane On place 50 g de chlorhydrate de 1-aminoadamantane dans une solution aqueuse à 10 % de 21,3 g d'hydroxyde de sodium; puis, sous agitation magnétique et avec refroidissement à la glace à une température inférieure à 5 C, on ajoute une solution de 21,5 ml de chlorure de chloracéthyle dans 100 ml de CH 2 C 12 On laisse le mélange de réaction sous agitation tourbillonnaire pendant 2 heures environ; on sépare la phase organique, la lave à l'eau, la sèche sur sulfate de magnésium et on évapore le solvant sous pression réduite On recristallise le résidu dans un mélange d'éther diisopropylique et d'isopropanol ( 80:20) On obtient le produit désiré avec un rendement de 80 %, P F 122-123 C. (b) 1-N-l 2-( 2-dimétbylaminoéthoxy)acétyl-aminoj adamantane (tromantadine) A une solution de 31,3 g ( 0,35 mole) de diméthylaminoéthanol dans ml de tétrahydrofuranne anhydre, on ajoute sous agitation et à une tempé- rature de 15 à 20 C, 8,4 g ( 0,35 mole) de Na H Une fois que le dégagement d'hy- drogène cesse, on ajoute 40 g ( 0,17 mole) de 1-N-( 2-chloracétyl-amino) adaman- tane et on chauffe le tout sous reflux pendant 15 heures, puis on verse sur de la glace On extrait la phase organique avec de l'éther éthylique, la lave à l'eau et la sèche sur K 2 Co 3 On évapore le solvant sous pression réduite et on purifie le résidu par chromatographie sur silice, en éluant d'abord avec de l'éther diéthylique puis avec de l'éthanol On isole le produit pur (huile épaisse jaunâtre) avec un rendement de 53 %. (c) Phosphonacétate de tromantadine (I) On dissout 20 g ( 0,142 mole) d'acide phosphonacétiqueet 80 g ( 0,285 mole) de tromantadine dans 120 ml d'éthanol absolu On évapore la solu- tion à siccité sous vide On obtient ainsi un produit solide cristallin à bas point de fusion (P F = env 33 à 40 C), très hygroscopique et hautement soluble dans l'eau, le méthanol et l'éthanol. Analyse élémentaire Pour C 34 H 61 N 4 PO 9 (Poids moléculaire = 700,83) Calculé (%) C = 58,26; H = 8,77; N = 7,99 Trouvé (%) C = 57,78; H = 9,o 4; N = 7,82 Spectre IR (pâte au nujol; les valeurs des bandes d'absorption sont exprimées en cm 1): élongation N H) bandes larges 3550 2500 0-H) élongation C = O (acide)) bande large 1700 1670 C = (amide)) Spectre RMN H 1 (enregistré dans CD Cl 3, référence interne TMS; les valeurs des déplacements chimiques sont exprimées en) : 2,4 (s, 12 H, 2 (CH 3)2); 2,63 (m, 4 H, 2 (CH 2-N)); 3,3-3,9 (m, 10 H, 2 (C 0-CH 2-0); 2 (CH 2-0); P-CH 2 COOH); 6,8 (s, 1 H, COH mobile) 8,3 (s, 4 H, NH mobile). Les propriétés toxicopharmacologiques du phosphonacétate de tromanta- dine (qu'on appellera ci-après dans un but de brièveté AFP 723) sont résumées ci-après: Toxicité à l'égard des cellules On utilise le procédé d'incorporation du rouge neutre, qui permet de fournir une indication de la vitalité des cellules mises en contact avec le médicament ' Pour une détermination plus précise du type et de l'importance de l'inhibition, on détermine également les paramètres suivants: (a) temps de croissance et capacité de division des cellules; (b) incorporation de thimidine 3 H dans le DNA; (c) incorporation d'uridine 3 H dans le RNA; (d) incorporation de leucine 14 C dans les protéines. Les résultats obtenus font ressortir une absence de toxicité jus- qu'aux valeurs de 250/Ug de médicament/ml du milieu. Au-dessus de ces concentrations, on observe une réduction progressive de l'incorporation des marqueurs radioactifs utilisés, avec environ 50 % de blocage de la synthèse des protéines au-dessus de 500,4 eg/ml. L'inhibition de DNA semble être beaucoup moins forte; elle est réduite de 50 % seulement à des concentrations d'environ 10 Owg/ml. On utilise les cellules diploïdes humaines (WI-38) en cultures primaires ou secondaires et des cellules de reins de singes en culture con- tinue. Les valeurs de toxicité indiquées plus haut, en raison de l'activité pharmacologique élevée qui sera décrite plus loin dans le paragraphe intitulé "Activité anti-virale", sont transformées en un coefficient thérapeutique très favorable. Tolérance locale On la détermine en utilisant à la fois une solution aqueuse contenant % du composé et un onguent à 5 % dans la vaseline blanche. On applique aussi bien la solution aqueuse que l'onguent deux fois par jour pendant quatre semaines sur les dos de lapins de Nouvelle Zélande, après les avoir rasés à l'aide d'un rasoir électrique On détermine chaque jour l'importance d'éventuels érythèmeset oedèmes; au vingtième jour de traite- ment seulement, sur un faible pourcentage ( 10 %) des lapins traités avec la solution aqueuse, on constate un léger érythème provisoire qui ne s'accentue pas durant les jours suivants et jusqu'à la fin de l'expérience. Absence d'effets systémiques On utilise les mêmes lapins que dans l'essai précédent A la fin de quatre semaines de traitement, on détermine les effets éventuels sur la cir- culation et la respiration On détermine en outre les principaux paramètres hématochimiques et biochimiques On prélève les principaux organes et on effectue un examen histologique On ne constate aucun effet sur la circulation et la respiration; les paramètres hématochimiques et biochimiques sont dans les limites normales et la recherche histologique ne fait ressortir aucun changement pathologique. Activité anti-virale On utilise les cellules diplo des humaines (WI 38) et les cellules de reins de singes cultivées dans des boîtes de Pétri Comme virus d'infection, on utilise trois virus à DNA (vaccin, herpès 1, herpès 2) et trois virus à RNA (virus A de la grippe, virus de la polio et virus synovial). Le composé AFP 723 inhibe le vaccin à DNA et les virus d'herpès à des concentrations de 1 à 5 et 10 00 9/m 1 respectivement avec une valeur TCID 50 d'environ 5044 g/ml. Quand on traite au préalable les cellules pendant 15 heures avec 5.ig/ml de AFP 723, la baisse du caractère infectieux est de 99,9 % (depuis 106 à moins de 103). L'action anti-virale du composé s'exerce par voie intracellulaire à un stade intermédiaire de la morphogénèse virale, comme on peut le cons- tater par un examen au microscope électronique A des concentrations de 50 à 100 i 4 g/ml, AFP 723 bloque le virus de vaccin quand il est sous une forme non développé et il bloqueles virus d'herpès 1 et d'herpès 2 au stade capsidi- que intranucléaire A une concentration de 10 à 50,,,g/ml, le produit inhibe entièrement la production des virus qui infestent les plaques. Le tableau ci-après contient les données ci-dessus sous une forme schématique en comparaison avec des doses équimolaires d'acide phosphonacéti- que (PPA) et de la tromantadine. L'activité anti-virale de AFP 723 sur les virus d'herpès est éton- nammentélevée par comparaison à celle des médicaments utilisés à titre com- paratif, alors que son activité sur le virus de vaccin est du mme ordre de grandeur. Ces caractéristiques laissent penser que AFP 723 pourrait trouver une utilisation sélective pour le traitement des infections virales du type herpès et plus précisement, Herpes labialis, Herpes genitalis et Herpes cor- nealis. L'invention concerne également tous les aspects industriellement applicables en liaison avec l'emploi de AFP 723 pour le traitement des infec- tions virales du type herpès Ainsi un aspect essentiel de l'invention concer- ne des compositions pharmaceutiques contenant des proportions prédéterminées de AFP 723 On peut administrer ce composé par voie locale, par exemple sous forme d'une crème, d'un gel, d'un stick ou d'une solution, avec une concentra- tion de 0,5 à 5 % de principe actif. Virus d'infection Vaccin Herpès 1 Herpès 2 AFP 723 +++ +++++ +++++ PPA +++ ++ ++ Tromantadine + +++ +++ + REVENDICATIONS 1 Nouveau produit industriel, caractérisé en ce qu'il est consti- tué par le phosphonacétate de 1-N-t 2-( 2-diméthylaminoéthoxy)acétylamino 3- adamantane répondant à la formule: NH-CD-OEà-O CH 2 " 2-N(CH 3-)2 2 2 2 23 A R 2 K-P 02 FY 3 E 2 2 Procédé de préparation du composé selon la revendication 1, caractérisé en ce qu'il consiste à faire réagir l'acide phosphonacétique et le 1-N-t 2-( 2-diméthylaminoéthoxy)acéthyl-aminol-adamantane (tromantadine) dans un rapport molaire sensiblement égal à 1:2 dans des solvants polaires tels que l'eau ou, de préference, des alcools inférieurs et à isoler le sel ainsi formé par évaporation de la solution ou par addition de non solvants de celui- ei. 3 Médicament anti-viral, caractérisé en ce qu'il est constitué par le composé défini à la revendication 1. 4 Compositions pharmaceutiques pour le traitement des infections d'herpès, en particulier Herpes labialis, Herpes genitalis et Herpes cornealis, caractérisées en ce qu'elles contiennent à titre de principe actif le compose selon la revendication 1.