Brevet FR2522268A1 — publié le 19830902

La présente invention concerne une prdpara- tion de vaccin anti-ourlien vivant, et plus particulièrement une préparation de vaccin anti-ourlien, caract6- risE en ce qu'on ajoute une quantité efficace pour stabiliser une praparation de vaccin anti-ourlien vivant, d'albumine et/ou de gélatine à la préparation de vaccin anti-ourlien vivant. Le vaccin anti-ourlien est préparé en inactivant le virus des oreillons ou en rdduisant sa toxicité. Le virus des oreillons est connu comme un virus provoquant la parotidite dpidémique. Après la découverte de ce virus par Johnson et al. en 1934, sa culture est devenu possible sur oeuf de poule, membrane vitelline, ca vité amniotique, etc..., et un vaccin anti-ourlien inactivé ainsi qu'un vaccin anti-ourlien vivant (désigné ciaprès par "LMV") ont été préparé a partir de celui-ci. On dispose aujourd'hui d'un XLMV" ne causant guère d'effets secondaires et présentant un titre élevé, de sorte que le vaccin anti-ourlien inactivé a presque perdu tout intêret pratique. Bien que le "LMV" ait étd initialement mis au point et utilisé comme vaccin pour lutter contre le virus des oreillons, la valeur du "LMV" en tant que médicament éveille actuellement un intérêt croissant, car son action anticancérigène a été cliniquement dEmon- trée par la suite en plus de son rôle initial. En vue d'améliorer la stabilité de la préparation de "LMV" qui a acquit une telle utilité la demanderesse a effectuée des études approfondies sur la stabilisation de ce produit, qui a été fournie jusqu'ici sous la forme d'un produit liquide, et sur la stabilisation de ce produit au moment du traitement de lyophilisation, et sur la stabilisation d'un échantillon sec au cours du temps. Ces études ont conduit a cette découverte que le "LMV" devient remarquablement stable en présence d'albumine, de gélatine ou de leurs mélanges, non seule ment en milieu aqueux, mais encore à l'état de solides secs. La présente invention repose sur cette découverte. Conformément à la prdsente invention, il est donc fournit une composition de "LMV" comprenant du "LMV" et une quantité stabilisante d'au moins un stabilisant choisi parmi l'albumine et la gélatine. La composition de "L9J" de l'invention peut être une suspension aqueuse de "LMV" ou un solide pulvérulant. Elle peut contenir des adjuvents, de prSfdrence utilisables pour l'administration à l'homme. Dans la préparation d'une composition solide à partir de cette suspension aqueuse, la diminution de l'activité du "LMV" peut être évitée par l'emploi de la technique de hyophilisation. Comme albumine utilisable dans l'invention, on préfère l'albumine humaine, en raison de son pouvoir antigénique. Cependant, l'albumine utilisée n'est pas limitée à l'albumine humaine, et on peut utiliser sans rSserve des albumines du commerce très variées pouvant être administrées a l'homme en vue d'un traitement médical. Comme gélatine, on peut utiliser sans réserve n'importe quelle gélatine dans la mesure ot elle est utilisable pour un traitement médical. On préfère que cette gélatine est une composition uniforme. Le "W" de la présente invention n'est pas déterminant, il peut entre n'importe quel "LMV" dans la mesure où sa toxicité est affaiblie par le procédé bien connu pour la préparation du "LMV", et où il est purifié à un degré permettant son utilisation dans un traitement médical. Dans le présent mémoire, on mentionnera le "LMV" provenant fl'une souche d'Urabe offerte par Biseibutus Kenkyujo, Osaka Daigaku (Reserach Institute of Micro-organisms, Université d'Osaka). Plus la quantité de stabilisant telle que l'albumine, la gélatine, etc... est forte, et plus l'ef fet stabilisant est marqué, bien que cet effet dépende aussi de la quantité de "LMV" dans la préparation. Lorsqu'on ajoute le stabilisant dans un milieu aqueux, la concentration finale en stabilisant doit être de 1 a 10 P/V. Lorsqu'il est ajouté à une poudre, sa concentration finale doit être de 5 à 20 % P/P. Lorsqu'on utilise l'albumine et la gélatine en association dans un milieu aqueux, leur concentration finale individuelle doit étre de 0,1 à 5 % P/V et leur concentration finale totale doit être de 1 à 10 % P/V. Lorsqu'elles sont utilisées en association dans une poudre, leur concentration finale individuelle doit être de 1 à 10 % P/P et leur concentration finale totale doit être de 5-à 20 % P/P. On expliquera ci-dessous l'invention plus en détail en se référant aux exemples expérimentaux et aux exemples. Les p.f.u. (unité formatrice de plaque de lyse titre du "LMV"), utilisées dans les exemples expérimentaux ont été déterminées conformément à la description de "Virrus Jikkengaku (Experimental Virology)", ditE par Gakuyukai of Kokuritsu Yobo Eisei Kenkyujo (The National Institute of Health, Japan) et publié par Xaruzen (1967). Exemple expérimental 1 : effet stabilisant sur un milieu aqueux contenant du "LMV". Divers stabilisants sont ajoutés à 6,5 x 105 p.f.u./ml (solution aqueuse à 0,9 % de chlorure de sodium) de chacune des suspensions de LMV, Sur les m- langes ainsi obtenus, on détermine la stabilité en les laissant séjourner dans un bain-marie thermostaté maintenu à 200C. Les résultats sont donnés dans le tableau 1. TABLEAU 1 Concentration Titre résiduel Stabilisant finale au bout d'un t (P/U) mois à 200C (%) Albumine 1 40 9 50 Gélatine 2 43 n 8 59 Albumine + Présente Gélatine 0,1 + 2 49 invention n 0,5 + 1 42 " 1,0 + 1 46 2,0 + 0,1 52 " 5,0 + 0,1 62 Témoin Aucun Expérimental 2 : effet stabilisant sur un "LMV" lyophilisé. Divers stabilisants sont mélangés à un "LMV" lyophilisé ayant une activité totale de 1,8 x 105 p.f.u. Les mélanges sont soumis à un essai de stabilité en laissant reposer à -100C pendant un mois. Les résultats sont donnés dans le tableau 2. TABLEAU 2 Concentration Stabilisant dans le pro- Titre duit sec % résiduel (P/P), Albumine .5 84 Gélatine 5 83 n 10 96 Albumine + Présente Gélatine 1 + 1 84 invention n I + 10 96 n 1+ 15 97 10 + 1 96 5 + 10 95 n e+ 8 97 Témoin Aucun Exemple 1 5 On dilue le "LMN" à un titre de 2 x 105 p.f.u./ ml avec une solution physiologique de chlorure de sodium (100 ml) à laquelle on ajoute 5 % P/V d'albumine et 0,5 % P/V de gélatine. On stérilise le mélange obtenu et on le filtre. On verso le filtra par portion et on le lyophilise. Le "LMV" lyophilisé ainsi obtenu présente un titre de 6,9 x 105 p.f.u./mg. I1 conserve une activité de 6,8 x 108 p.f.u./mg même après avoir été stocké à -100C pendant-l mois. Exemple 2 On prépare un "LMV" lyophilisé en répétant le mode opératoire de l'exemple 1, excepté que les 5 % P/V d'albumine et les 0,5 % P/V de gélatine utilisés dans l'exemple 1 sont remplacés par 8 % P/v d'albumine. REVENDICATION Composition de vaccin anti-ourlien lyophilisé, caractérisée en ce qu'elle comprend un vaccin antiourlien vivant et 5 à 20 P/P d'au moins un stabilisant choisi parmi l'albumine et la gélatine.