Brevet FR2516087A1 — publié le 19830513

La présente invention concerne certains nouveaux dérivés du cholestane et leurs utilisations thérapeutiques en tant qu'inhibiteurs de la biosynthèse du cholestérol. Les composés selon l'invention répondent à la formule I CH 3 r"'J CH C 33 I R 3 R 20 H dans laquelle R 1 et R 2 représentent: a) l'hydrogène ou b) un radical estérifiant de formule HO-C(O)-(CH 2)n-C(O); R 1 et R 2 pouvant avoir des significations identiques ou différentes, n est un nombre allant de 1 à 3, et R 3 représente: a) un halogène, ou b) un groupe alkyle contenant de 1 à 6 atomes de carbone inclus. Comme exemples de groupes alkyle contenant de 1 à 6 atomes de carbone inclus, on citera les groupes méthyle, éthyle, propyle, butyle, pentyle et hexyle et leurs formes isomères; on préfère les groupes méthyle Comme exemples d'halogènes, on citera le fluor, le chlore et le brome Comme exemples de radicaux esté- rifiants, on citera les radicaux 2-carboxyl-l-oxoéthyle, 3-carboxyl- 1-oxopropyle et 4-carboxyl-l-oxobutyle. Les composés selon l'invention présentent de l'intérêt en thérapeutique en ce qu'ils inhibent l'activité de la 3-hydroxy- 16087 3-méthyl-glutaryl-coenzyme A-réductase (HMGCQA) et inhibent la formation du cholestérol du sérum L'HMGCOA est une enzyme qui contrôle la vitesse à laquelle le cholestérol est synthétisé dans le foie des mammifères (l'une des deux sources principales in vivo du cholestérol du sérum) Ainsi, les composés selon l'invention sont capables d'inhiber la biosynthèse des stérols chez les individus prédisposés à l'hypercholestérolémie familiale du type II L'importance de ces composés est largement admise cf Breslow et collaborateurs, Biochem et Biophys Acta, 398, 10 ( 1975); Betteridge et collaborateurs, Brit Med J 4 500 ( 1975); et Brown et collaborateurs, J Biol Chem 249, 7 306 ( 1974). L'activité inhibitrice des composés selon l'inven- tion sur l'HMGCOA et sur la formation du cholestérol du sérum peut être mise en évidence par le mode opératoire normalisé suivant: on répartit des rats mâles Charles River CD pesant à l'origine 180 à 250 g chacun par groupes de 6 au hasard, on les place dans une chambre à cycle de lumière ( 12:12) inversé et on les maintient à un régime normal pour rats et de l'eau accordée à volonté A chaque animal d'un groupe, après au moins 3 jours mais pas plus de 6 jours, on administre 5 mg/kg de 20,25-diaza- cholestérol en solution dans 0,2 ml de sérum physiologique conte- nant 0,1 % de monooléate de sorbitanne polyoxyéthyléné (Tween 80) par voie intragastrique, une fois par jour pendant 7 jours consé- cutifs; pendant les 4 derniers jours de ce cycle, on administre concurremment et de manière identique le composé soumis aux essais à une dose quotidienne choisie au préalahle (couramment 5 mg/kg par voie intragastrique) Un second groupe d'animaux traités de manière identique mais en supprimant le composé soumis aux essais constitue le groupe témoin Dans un délai de 2 à 4 h après la fin du traitement, et de 5 à 7 h dans le cycle d'obscurité, on anes- thésie les animaux par le l,l'-oxy-bis-éthane et on les sacrifie. On prélève rapidement les foies, on les lave par un milieu d'homo- généisation réfrigéré (qu'on peut préparer en dissolvant 102,7 g de saccharose, 3,8 g de sel de sodium de l'acide éthylène-diamino- 16087 tétracétique et 0,8 g de dithiothréitol dans l'eau en quantité suffisante pour compléter à 1 litre), on les sèche au papier- filtre, on les pèse et on homogénéise (avec 2 ml du milieu réfri- géré ci-dessus par g de foie) On centrifuge les homogénéisais à 40 C et 15 000 x g pendant 15 min, on sépare les liquides surna- geants et on les centrifuge à 40 C et 100 000 x g pendant 60 min. On rejette les liquides surnageantset on met les résidus en suspen- sion dans la moitié du volume du milieu d'homogénéisation utilisé au préalable (c'est-à-dire 1 ml par g de résidu) On détermine l'activité de 1 'HMGCOA pratiquement selon les modes opératoires décrits par W White et collaborateurs dans Biochemistry, 9, 2 713 ( 1970); M S Brown et collaborateurs, Biochim Biophys Acta, 409, 39 ( 1975). On détermine la protéine par le mode opératoire d'O H Lowry et collaborateurs J Biol Chem 193, 265 ( 1951). Les chiffres obtenus sont convertis en activité spécifique (millimole/20 min/mg de protéine) pour chaque animal, à partir de laquelle on calcule la ou les moyennes par groupe et la varia- tion % par rapport aux témoins Une réponse signifiante du point de vue statistique (P 0,05) est le critère d'une inhibition/ stimulation de l'HMGCOA. Pour des buts thérapeutiques, les composés selon l'invention sont habituellement combinés avec un ou plusieurs adjuvants appropriés à la voie d'administration indiquée Pour l'administration per os, on peut les mélanger avec du lactose, du saccharose, de l'amidon en poudre, des esters cellulosiques d'acides alcanotques, des éthers alkyliques de la cellulose, du talc, de l'acide stéarique, du stéarate de magnésium, de la magné- sie, des sels de sodium et de calcium des acides phosphorique et sulfurique, de la gélatine, de la gomme de caroube, de l'algi- nate de sodium, de la polyvinylpyrrolidone et/ou de l'alcool polyvinylique et les mettre ainsi à l'état de comprimés ou de capsules convenant pour l'administration; on peut aussi les dissoudre ou les mettre en suspension dans l'eau ou un liquide d'inocuité comparable L'administration parentérale peut être 16087 4. pratiquée au moyen de mélanges liquides stériles avec de l'eau, du polyéthylène-glycol, du propylène-glycol, de l'éthanol, de l'huile de mats, de l'huile de coton, de l'huile d'arachide, de l'huile de sésame, de l'alcool benzylique, du chlorure de sodium et/ou des tampons variés Les autres adjuvants et modes d'admi- nistration sont bien connus dans l'art pharmaceutique: cf par exemple F W Martin et collaborateurs "Remington's Pharmaceutical Sciences", 14 Ed, Merck Publishing Company, Eaton, Pa, 1965 E tats-Unis d'Amérique. Les dosages appropriés dans chaque cas dépendent naturellement de la nature et de la sévérité de la condition traitée, du mode d'administration et de l'espèce du mammifère traité, de sa taille et des idiosyncrasies individuelles éventuelles. Les composés selon l'invention peuvent être préparés comme illustré dans les schémas A et B ci-après Les produits de départ peuvent être eux-mêmes préparés par les procédés décrits soit dans le brevet des Etats-Unis d'Amérique N O 4 230 621, soit dans la demande de brevet des Etats-Unis d'Amérique N O 06/278 276 dont les enseignements sont considérés comme intégrés à la présente demande, à partir de produits de départ connus et appropriés Les dérivés du cholène répondant à la formule II dans laquelle R est F, un groupe alkyle ou hydroxy, sont hydrogénés pour préparation du composé dihydroxylé de formule III Celui-ci peut ensuite être estérifié par les modes opératoires décrits dans les publications précitées Lorsque R 3 représente le chlore ou le brome, le dérivé du cholène est hydrogéné avant introduction de l'halogène, comme c'est le cas pour l'alcool de formule XI à site protégé Le composé à site protégé est ensuite hydrogéné, ce qui donne le composé de formule XII, puis le chlore ou le brome introduit en position 25 (formule XIII) Le composé obtenu peut être désacétylé par l'hydrure de lithium et d'aluminium et le tétrahydrofuranne: on obtient le composé dihydroxylé de formule XIV qui peut à son tour être converti en le composé estérifié XVI. Les exemples qui suivent illustrent l'invention sans toutefois en limiter la portée; dans ces exemples, les indications de parties et de % s'entendent en poids sauf mention contraire. Exemple 1 25-méthyl-5 a-cholestane-3 t,22-diol. On chauffe pendant 25 h à 60 C le 25-méthyl-cholesta- -ène-35,22-diol et 0,3 g de palladium à 10 % sur charbon dans ml d'alcool isopropylique sous une pression d'hydrogène de 4,2 bars On élimine le solvant sous vide; on obtient 0,6 g envi- ron d'une substance solide blanche qu'on recristallise dans le mélange acétate d'éthyle/méthanol puis dans le méthanol et fina- lement dans le système acétate d'éthyle/solvant Skelly B; on obtient le composé recherché à l'état pur fondant à 195-1960 C. Analyse élémentaire: calculé: H: 12,04; C: 80,32 % trouvé: H: 11,82; C: 80,39 %. Exemple 2 3-hydrogénobutane-dioate du 25-méthyl-5 a-cholestane-3,- 22-diol. On chauffe au bain-marie pendant 24 h 200 mg du composé obtenu dans l'exemple 1 et 0,1 g d'anhydride succinique dans 3 ml de pyridine On ajoute ensuite de l'eau et de l'acide chlorhydrique N et on recueille le précipité formé ( 250 mg) On recristallise ce précipité dans le méthanol aqueux; après refroi- dissement, on obtient 155 mg du composé recherché fondant à 194-198 C. Analyse élémentaire: calculé: H: 10,49; C: 74,09 % trouvé:-H: 10,51; C: 74,28 %. Exemple 3 3,22-diacétate du cholestane-3 P,22,25-triol. On chauffe pendant 18 h à 60 C sous une pression d'hydro- gène de 4,2 bars, 1,0 g de 3,22-diacétoxy-25-hydroxy-cholestérol et 6,2 gde catalyseur d'hydrogénation Pt/O 2 dans 30 ml d'alcool isopropy- lique; on filtre ensuite la solution et on concentre le filtrat sous vide; on obtient 0,98 g d'une substance solide blanche qui est le composé recherché. Exemple 4 diacétate du 2-chloro-cholestane-33,225-diol. On agite à température ambiante pendant 1/2 h 2,6 g du produit de l'exemple 3, 1,2 g de chlorure de zinc, 4 ml de chlorure de thionyle et 180 ml de toluène On lave ensuite avec une solution de carbonate de sodium à 5 % puis à l'eau, on sèche sur sulfate de magnésium et on filtre On concentre le filtrat sous vide; on obtient un résidu huileux qu'on fait cristalliser dans le méthanol; rendement-: 1,85 g d'une substance solide cristalline blanche qui est le composé recherché. Exemple 5 25-fluoro-5 a-cholestane-3,225-diol, On chauffe à 60 C pendant 24 h sous une pression d'hydrogène de 4,2 bars, le 25-fluorocholesta-5ène-3 O,22-diol et 25 mg de palladium à 10 % sur charbon dans 150 ml d'alcool isopropylique On sépare le catalyseur par filtration du mélange de réaction et on élimine le solvant sous vide; on obtient 0,5 g d'une substance solide blanche qu'on recristallise dans le méthanol aqueux; on obtient le composé recherché pur à l'état d'hydrate fondant à 174-176 C. Analyse élémentaire: calculé: H: 11,21: C: 73,59 7. trouvé: H: 11,02: C: 73,29 %. Exemple 6 25-chloro-5 a-cholestane-3 f,225-diol. Dans une fiole de 100 ml équipée d'un agitateur magnétique, en atmosphère d'azote, on place 300 mg d'hydrure de lithium et d'aluminium en suspension dans 15 ml de tétra- hydrofuranne On reprend par ailleurs 1,8 g de 3-acétate du -chlorocholestane-3 p,22-diol dans 15 ml de tétrahydrofuranne et on l'ajoute dans la fiole en atmosphère d'azote, en 10 min. On agite le mélange à température ambiante pendant 1 h, on traite par 1,5 ml d'eau et on agite à température ambiante pendant 2 h. On filtre le mélange et on concentre le filtrat au bain-marie à sec; on obtient un résidu semi-solide qu'on fait cristalliser deux fois dans le méthanol; on obtient le composé recherché à l'état de substance solide blanche fondant à 165-167 O C. Analyse élémentaire: calculé: H: 10,79; C: 73,85 % trouvé: H: 10,84; C: 73,79 %. Exemple 7 bis-(hydrogénobutane-dioate) du 25-méthylcholestane-3 P,- 22-diol. A 4 parties de 3-hydrogénobutane-dioate du 25-méthyl- cholestane-35,22-diol, on ajoute 40 parties de pyridine, 2 parties d'anhydride succinique et 1,4 partie de 4-diméthylaminopyridine et on chauffe le mélange de réaction à 90 C environ pendant 6 h. Après refroidissement, on coule le mélange de réaction dans une solution d'acide chlorhydrique à 5 % et on extrait cette solution à trois reprises par l'acétate d'éthyle On lave les extraits combinés par une saumure saturée et on sèche sur sulfate de magné- sium On traite ensuite la solution sèche par le charbon actif et on filtre L'élimination du solvant donne un rédidu solide qui, par recristallisation dans le méthanol aqueux, donne le composé recherché à l'état pur. Exemple 8 bis-(hydrogénobutane-dioate) du 25-chloro-5 a-cholestane- 3 P,22-diol. On peut préparer ce composé à partir du produit de départ approprié par les modes opératoires décrits ci-dessus. Ho no alú,4 Tt,,j=ú H. H HO HO HO Xxo-ip Kq no a T -qlt jjj H HO HD HO H -HD ao v umqqo S v Z 809 LSZ au no jl) Ise Id AX AIX HO EH DVO au no To Ise c U ilix j H 9 uanjoj/2 iuz/easos no auanjoi/2 T Duz/e TDOS Ovo iix ix ODV 9 voeffls l':Hl C HD Z 809 LSZ R E V EN D I C A T I O N S 1 Dérivés du cholestane caractérisés en ce qu'ils répondent à la formule TR CH 3 R 2 I H dans laquelle R et R 2 représentent: a) l'hydrogène, et b) un radical estérifiant de formule HO-C(O)-(CH 2)n-C(O); R 1 et R 2 pouvant avoir des significations identiques ou différentes; n est un nombre allant de 1 à 3, et R 3 représente: a) un halogène, b) un groupe alkyle contenant de 1 à 6 atomes de carbone inclus. 2 Composés selon la revendication 1, caractérisés en ce que R 3 représente un halogène. 3 Composé selon la revendication 2, choisi dans le groupe formé par les suivants: -fluoro-5 a-cholestane-3 P,225-diol, -chloro-5 a-cholestane-35, 225-diol, bis-(hydrogénobutane-dioate) du 25-chloro-5 a-cholestane-3 p, 225-diol, 4 Composés selon la revendication 1, caractérisés en ce que R représente un groupe alkyle en C 1-C 6. 3 1 6 ' Composé selon la revendication 4, choisi dans le groupe formé par les suivants: -méthyl-5 a-cholestane-33,22-diol, 3-hydrogénobutane-dioate du 25-méthyl-5 a-cholestane-3 D,22-diol, bis-(hydrogénobutane-dioate) du 25 méthyl-5 a-cholestane-3 D,22-diol. 6 A titre de médicaments nouveaux, utiles notamment en tant qu'inhibiteurs de la biosynthèse du cholestérol, les composés selon l'une quelconque des revendications 1 à 5. 7 Compositions thérapeutiques contenant, en tant que substance active, au moins un composé selon l'une quelconque des revendications 1 à 5. 8 Formes d'administration des compositions thérapeutiques selon la revendication 7.