Brevet FR2521565A1 — publié le 19830819

La présente invention concerne généralement des phases lamellaires lipidiques hydratées et leurprocédé de fabrication, ainsi que des compositions notamment à usage pharmaceutique, cosmétique ou analogues comprenant ces phases lamellaires lipidiques. La présente invention a plus spécialement pour objet un procédé de préparation de mélanges pulvérulents de constituants lipidiques amphiphiles et de constituants hydrophobes, ledit mélange étant utilisé notamment pour la production de phases lamelaires lipidiques hydratées. Les phases lamellaires lipidiques hydratées ont été abondamment décrites dans les publications scientifiquies notamment par Perron R, (Revue Française du Corps Gras 1980, 27 ( 4) 173-183) Leur formation résulte d'une proprié- té caractéristique de certains lipides amphiphiles en présence d'un milieu aqueux Les molécules des lipides amphiphiles sont constituées d'une partie hydrophile polaire ou non polaire et d'une partie hydrophobe D'après M M Rieger (Cosmetics and Toiletries 1981, 96 35-38) une des conditions pour que le lipide amphiphile soit susceptible de former des phases lamellaires et pas seulement des *légats micellaires est qo 3 'encombrement de sa partie hydrophobe doit être au moins aussi important que celui de sa partie hydrophile. Ces lipides sont susceptibles de former des couches lipidiques bimoléculaires (lamelles ou bicouches), séparées les unes des autres par une quantité plus ou moins importante d'eau ou de solution aqueuse qui peut être réduite à un simple film interstitiel Les molécules desdits lipides formant les couches lipidiques sont placée les unes à côté des autres et orientées de manière à ce que leur partie hydrophobe soit située à l'intérieur de ladite couche On appelle l'ensemble de ces couches lipidiques et du milieu aqueux interstitiel, une phase lamellaire lipidique hydratée. Le liposome est une configuration particulière d'une phase lamellairese présentant sous la forme d'une sphérule lipidique constituée d'une ou plusieurs bicouches concentriques alternant avec des compartiments aqueux -Les liposomes sont dispersés dans un milieu aqueux, et constituent une phase lamellaire très hydratée Les conditions suivant lesquelles des lipides amphiphiles non polaires peuvent former des liposomes, ouaniosomesbont été exposées par G Vanlerberghe et al, (Colloques Nationaux du CNRS n 938, Bordeaux 1978, Ed. CNRS 1979, p 303-311). On sait également que les liposomes peuvent être obtenus par dispersion dans un milieu aqueux d'une phase lamellaire, suivant divers procédés, notamment au moyen d'ultra-sons. Les liposomes ont fait l'objet d'un grand nombre de publications, telles que par exemple les articles déjà cités et les articles suivants: Sessa G et al, J Lipid Res 1968, 9, 310-318, Bangham A D et al. Meth Membr Biol 1974, 1-68; D A Tyrrell et al, Biochim Biophys Acta 1976, 457, 259-302; Strianse S.J Cosmetics & Toiletries 1978, 93, 37-41; Puisieux F, LaboPharma 1978, 281, 899-904, Nicolau C et al, La Recherhce 1981, 123, 748-749. L'interêt industriel des liposomes ou des phases lamellaires hydratées, réside dans le fait que des substances possédant des propriétés intéressantes peuvent être incorporées, soit dans les bicouches lipidiques pour les substances partiellement ou totalement hydro- phobes, soit en solution dans le milieu aqueux situé entre deux bicouches ou encapsulées dans des liposomes pour les substances hydrosolubles. Les applications de ces produits sont très nombreuses en particulier en alimentation, cosmétique ou pharmacie. Des substances très variées peuvent être incorporées aux phases lamellaires ou aux liposomes, notamment dans un but de protection des substances fragiles contre les agents extérieurs, ou d'amélioration de la pénétration de certaines substances dans les tissus biologiques Il est également possible de modif L Er les propriétés physico-chimiques des phases lamel Laire ou des liposomes eux-mêmes par incorporation aux bicouches lipidiques de certains composés comme les stérols, par exemple le cholestérol (Vanderberghe G et al., cité ci-dessus; Grégoriadis G, Biochem J 19, 196, 591) pour notamment contrôler la perméabilité et la stabi- lité des bicouches lipidiques. L'addition des composés hydrophobes comme les Sérols augmente le rapport groupement hydrophobe/groupement hydrophile dans la phase lamellaire, ce qui est en accord avec la condition de stabilité des phases lamellaires exposée par M M Rieger (cité ci-dessus) Ainsi, l'addition de tels composés hydrophobes rend possible la formation de phases lamellaires avec des lipides amphiphiles qui ne pourraient en former s'ils étaient employés seuls. Il est également possible d'incorporer aux phase lamellaires des composés amphiphiles dont la partie hydrophile sera chargée positivement ou négativement (demandes de brevets françaises N O 78-22985 et 78-13632) par exemple, le phosphate de dicétyle attribue aux liposomes une charge négative, tandis que la stéarylamine apporte une charge positive. Un certain nombre de procédés deprxctimndete Uespbams lamellaires, et de liposomes sont déjà connus Un des procédés -le plus couramment utilisé consiste dans un premier temps à dissoudre le ou les lipides amphiphiles et éventuellement la ou les substances hydrophobes dans un solvant volatil approprié La solution obtenue est placée dans le ballon d'un évaporateur rotatif Après évaporation du solvant on obtient un film adhérent à la paroi du ballon On introduit alors dans ce dernier de l'eau ou éventuellement la solution aqueuse à encapsuler 4 2521565 et l'on soumet le tout à une vigoureuse agitation On obtient alors une suspension de liposomes qui peut être, éventuellement, homogénéisée par ultra-sons Un des inconvénients de ce procédé réside dans l'obtention du film qui ne peut être obtenu que très difficilement à une échelle industrielle. Selon un autre procédé décrit notamment dans la demande française no 7822985, la solution aqueuse à encapsuler est dispersée dans un solvant insoluble ou peu solble dans l'eau en présence d'un lipide ou d'un surfactif amphiphile, il se forme alors des microgouttes de ladite solution aqueuse que l'on émulsifie ensuite dans un milieu aqueux en présence d'un excès d'un lipide ou surfactif qui peut être identique ou différent de celui utilisé précédemment Le solvant insoluble est éliminé avant ou après l'émulsification, par exemple par insuflation d'air à la surface du liquide Ce procédé nécessite une élimination totale du solvant utilisé ce qui présente de nombreuses difficultés, notamment à une échelle industrielle De plus, il ne permet pas la produc- tion de phases lamellaires peu hydratées. Il est également possible de préparer des liposo- mes selon le procédé du brevet Suisse No 623,236 en mettant en contact, d'une part, au moins un lipide amphiphile liquide dispprsible dans l'eau, dont la partie hydrophile est ionique, et d'autre, part, la phase aqueuse à encapsuler. Le mélange est alors soumis à une agitation vigoureuse pxw obtenir une phase lamellaire qui peut être par la suite dispersée dans l'eau ou une solution aqueuse Dans ce procédé, pour incorporer des composés hydrophobes, il est nécessaire d'employer des composés tensio-actifs à propriété émulsifiante d'autant plus forte que le caractère hydrophobe du composé à incorporer est plus marqué Ces tensio-actifs sont très souvent incompatibles avec de nombreuses applications des liposomes par exemple pharma- ceutiques ou cosmétiques. Selon un autre procédé décrit dans la demande Française NO 78-13632, on prépare une solution contenant au moins un lipide amphiphile, au moin un composé bitkq mt actif et éventuellement au moins un adjuvant On lyphidioe cette solution pour éliminer le solvant et le mélange des constituants est obtenu sous forme d'une poudre qui peut être conservée dans des récipients scellés jusqu'à son utilisation pour former notamment des liposomes Cette dernière étape consiste à disperser ladite poudre dans un milieu aqueux convenable Ce procédé présente des inconvénients liés notamment aux techniques classiques de lyophilisation qui sont relativement complexes et onéreuses et de plus qui ont un débit de production relativement limité. Les différents procédés connus décrits ci- dessus présentent donc de nombreux inconvénients ne permettant pas notamment une production industrielle aisée ou peu coûteuse de phases lamellaires Ces inconvénients sont principalement dus aux difficultés pour obtenir un mélange intime des constituants de base formant les phases lamellaires, en d'autres termes les lipides amphiphiles,et éventuellement les substances hydrophobes Pour faciliter la dispersion des constituants de base des phases lamella Lm, dans un milieu aqueux, il est souvent nécessaire d'utiliser des produits additionnels à propriété tensio-active Comme ces produits ont souvent des effets indésirables, par exem- ple vis-àvis de l'organisme, il est nécessaire de les éliminer complètement, ce qui n'est pas toujours possible même par dialyse On entend par l'expression "constituants de base", les composés utilisés pour former les couches lipidiques de la phase lamellaire lipidique, à ir aumai un lipide amphiphile ou un mélange de un ou plusieurs lipides amphiphiles et éventuellement d'un ou plusieurs composés partiellement ou totalement hydrophobes. La Frésente invention a pour but de remédier à tous ces inconvénients en proposant un nouveau procédé de préparation de phases lamellaires lipidiques hydratées, et plus particulièrement un nouveau procédé de préparation d'un mélange pulvérulent de constituants lipidiques amphiphiles avec éventuellement des constituants hydrophobes ou partiellement hydrophobes Ce procédé est d'une grande simplicité et permet de produire en continu de grandes quantités de mélanges et donc de phases lamellaires lipidiques hydratées ou de liposomes, sans pour cela nécessiternotamment l'utilisation de produits additionnels à propriété tensio-active. A cet effet, la présente invention a pour objet un procédé de préparation d'un mélange pulvérulent d'au moins un constituant lipidique amphiphile et éventuel- lement d'au moins un constituant à caractère hydrophobe ou partiellement hydrophobe, ledit mélange étant notamment utilisé pour la formation de phases lamellaires lipidiques hydratées telles que par exemple des liposomes, ou analogues, ledit procédé consistant à dissou- dre le ou lesdits constituants lipidiques amphiphiles et éventuellement le ou les constituants hydrophobes dans un solvant pour former une solution desdits constituants, caractérisé en ce qu'on atomise ladite solution dans un courant d'un fluide gazeux pour produire ledit mélange pulvérulent Ainsi, il est possible d'obtenir une poudre em 1 rmement fine qui peut ttre très facilement disper- sée dans un milieu aqueux par des méthodes connues de dispersion, pour donner naissance à une phase lamellaire plus ou moins hydratée suivant le rapport quantité de produit dispersé/quantité du milieu aqueux utilisé. De plus, ce procédé permet d'obtenir un produit en poudre qui peut être facilement stocké en vue de son utilisation ultérieure, et donc ainsi de produire la phase lamellaire lipidique hydratée par dispersion de la poudre dans un milieu avueux covenable, contenant évtie 1 l Eeient un =oosé tiràexqui Ioe immédiatement avant son utilisation par exem- ple comme médicament, ou produit traitant en dermatologie, cosmétique ou analogues, et plus particulièrement quand le composé à propriété active intéressante est relativement instable et ne peut être préparé qu'immédiatement avant son utilisation. Le procédé de l'invention consiste donc à dissoudre dans un solvant ou un mélange de solvants appropri 6 sles constituants de base, en d'autres termes au moins un lipide amphiphile et éventuellement un constituant hydrophobe ou partiellement hydrophobe que l'on souhaite incorporer aux bicouches lipidiques. La solution obtenue est alors atomisée Cette opération consiste notamment à introduire sous forme de goittelettes très fines, par exemple au moyen d'un gicleur, la solution dans une enceinte traversée par un fluide gazeux porté à une température supérieure au point d'ébullition du solvant utilisé Sous l'action de la chaleur, le solvant est vaporisé et entraîné par le curant gazeu Damsla one pr&te de 1 ppareil c lat empature d carantc L fluide gux/ viert inférieure à la température de transition du mélange desdits constituants de base une poudre extrèmement fine se forme, cette poudre étant récupérée parun dispf parexempleun cyclone et ruielà la base de cedispsitf Le ménage ainsi recumelii des coeitituants de base dissous dans la solution de départ est homogène et constitué de particules extrêmement fines. Ainsi, le procédé de l'invention permet de traiter des quantités importantes de solution et donc de produire industriellement un mélange pulvérulent qui peut être notamment utilisé pour la production de phases lamellaires lipidiques hydratées tel que des liposomes ouanalogues En effet, comme les constituants de base sont dissous dans un solvant, il n'existe aucun problème d'agitation d'un volume important de solution, et il est possible d'atomiser un débit relativement élevé de solution sans utiliser un appareillage complexe et onéreux De plus, la puissance énergétique nécessaire à l'atomisation d'une solution et l'évaporation du solvant est nettement inférieure à la puissance énergé- tique consommée par la technique antérieure de lyophili- sation. Avantageusement, la température d'atomisation Et comprise entre environ 60 C et environ 100 C. Il est bien entendu possible d'atomiser selon le procédé de l'invention une solution contenant qu'un seul constituant, c'est-à-dire un lipide amphiphile, si l'on désire produire des bicouches lipidiques constituées que de ce seul constituant Toutefois, les bicouches lipidiques plus généralement utilisées sont constituées par un mélarnge de plusieurs constituants, par exemple au moins un consti- tuant lipidique amphiphile et éventuellement au moins un constituant hydrophobe ou partiellement hydrophobe. Tout lipide amphiphile susceptible de former des phases lamellaires peut être utilisé dans le procédé de l'invention Toutefois, il est nécessaire que ces lipi- des amphiphiles soit seul, soit en présence de substance partiellement ou totalement hydrophobes, puissent se prêter à l'atomisation, c'est-à-dire que la température de transition du lipide amphiphile ou du mélange soit con- venable pour obtenir un atomisat sous forme de poudre. Dans le cas de la production d'un mélange conteant au moins une substance hydrophobe ou partiellement hydropho- be, pour permettre la formation de phases lipidiques lamellaires, la proportion pondérale du ou des constituants lipidiques amphiphiles dans l'ensemble des constituants de base dissous dans la solution de départ, c'est-à-dire l'ensemble des constituants lipidiques amphiphiles et constituants hydrophobes, doit être supérieure à 50 % au macns,etde préférence supérieure à 70 % environ. Comme lipide amphiphile convenable, on peut utiliser par exemple des composés appartenant à la famille des phospholipides, des glycolipides ou phospho-amino- lipides tels que par exemple une lécithine d'oeuf ou de soja, une phosphatidylsérine, un cérébroside ou une sphyngomyéline. Les substances hydrophobes ou partiellement hydrophobesqui sont convenables pour être mélangées à au moins une substance lipidique amphiphile dans la solution avant atomisation, sont extrèmement variées et sont choisies en fonction des propriétés que l'on recherche à conférer d'une part au mélange pulvérulent, et d'autre part, aux phases lamellaires ou aux liposomes produits à partir du mélange pulvérulent. A titre d'exemple, les substances hydrophobes ou partiellement hydrophobes qui peuvent être utilisées, sont des stérols ou leurs esters, tels que le cholesterol, le t sitosterol, l'Etradiol, le lanostérol, le stigma- stérol, le -oryzanol i des acides gras aliphatiques ou leurs esters tels que par exemple l'acide stéarique, l'acide ximéninique, le myristate d'isopropyle ou analogues; des acides gras triterpéniques ou leurs esters tels que pare Kemple l'acide glycyrrhétinique ou analogues; des alcools gras primaires ou secondaires ou leurs esters tels que par exemple le phosphate dicétylique; des amines grasses aliphatiques teflesque par exemple la stéarylamine; des acides aminés acylés par un acide gras tels que par exemple l'acide stéaroyl -L-glutamique, des polypeptides tels que par exemple des polypeptides d'hydrolysat d'élastine; des vitamines pare Kempleuint Dooxi Iavantsgeusement lk-toccphol;des eraitsd'cigineamle ou végétale tels queparexeple desedraitsembryonnaires,ou d Esextraits d'aloès; ou des phénols pouvant comporter un ou plusieurs substituants parmi les groupes radicaux alcoxy, alkyle comprenant de 1 à 4 atomes de carbone, carboxy, formyle, tels que par exemple la vanilline Toutefois, cette liste de constituants hydrophobes pouvant être utilisés pour former un mélange pulvérulent selon le procédé de l'invention n'est pas limitative. De plus, il peut être avantageux mais non indispen- sable de choisir comme constituant lipidique amphiphile et/ou comme constituant hydrophobe, un composé biologi- quement actif et/ou possédant des propriétés organoleptiqces et/ou physico-chimiques intéressantes. Par ailleurs, le solvant destiné à préparer la solution devant être atomisée est choisi d'une part selon sa capacité de dissolution des constituants de base décrits ci-dessus, et d'autre part en fonction de son point d'ébul- lition qui ne doit pas être trop élevé afin d'éviter l'utilisation d'une température d'atomisation qui risque- rait de dégrader lesdits constituants de base Il est également possible, selon l'invention, d'utiliser un mélange de solvants miscibles entre eux dans des proportions appropriées pour répondre aux conditions énoncées cidessus La dissolution des constituants est effectuée avant ou après le mélange des solvants, cette dissolution pouvant demander éventuellement un chauffage léger, par exemple à une température d'environ 400 C. Les solvants couramment employés sont le chloroforme, le méthanol, l'éthanol ou un mélange chloro- forme-méthanol, chloroforme-éthanol à 33 % de méthanol ou d'éthanol respectivement. Selon une autre caractéristique de l'invention, le fluide gazeux utilisé dans l'atomisation doit être sen- siblement et chimiquement inerte vis-à-vis des constituants de base dissous dans la solution de départ Toutefois, comme l'opération d'atomisation est relativement brève, le temps de contact entre les constituants de base et le gaz vecteur est très court, il est possible d'utiliser généralement de l'air sans risque d'oxydation desdits constituants Bien entendu, ilpeut être nécessaire de choisir des gaz plus inertes que l'air, par exemple de l'azote ou analogue notamment dans le cas o la température d'atomisation est relativement élevée, ou l'un des constituants de base est très sensible à l'oxydation. Avantageusement, le débit gazeux est réglé de façon à éviter qu'une partie de la poudre formée ne soit perdue par entraînement dans le courant de fluide gazeux. Comme déjà décrit précédemment, le fluide gazeux doit être, à l'entrée de l'enceinte de l'appareil d'atomisation à une température, appelée température d'atani- sationia 4 e*ie-e à celle d'ébullition du solvant utilisé. Toutefois, la température de ce fluide gazeux ne doit pas empêcher la formation de la poudre dans la zone prévue de l'appareil, c'est-à-dire que dans cette zone, le fluide gazeux doit être à une température inférieure à la tem- pérature de transition du mélange de constituants dissous dans la solution de départ. Bien entendu, le procédé de production d'un mélange pulvérulent selon l'invention'peut être réalisé de façon continue ou discontinue, la poudre étant recueillie directement à la sortie du cyclone soit pour être stockée comme produit, soit pour être utilisée mméiatemm Entni Dflmmtp Pr laform E Uion de phases lamellaires hydratées tels que des liposomes. L'invention a également pour objet un mélange pulvérulent de constituants lipidiques avec éventuellement au moins un constituant hydrophobe ou partiellement hydrophobe obtenu par le procédé décrit ci-dessus Ce mélange présente notamment la caractéristique depoumir être tstfdlement dispersé dans une solution aqueuse. L'invention a encore pour objet un procédé de préparation de phases lamellaires lipidiques hydratées telles que des liposomes, ou analogues, caractérisé en ce qu'il consiste à disperser le mélange pulvérulent décrit ci-dessus dans un milieu aqueux convenable. Le mélange pulvérulent obtenu par atomisation est dispersé dans le milieu aqueux par une méthode classique telle que par exemple, le brassage l'homogénéisation ou la sonication. Avantageusement, le mélange pulvérulent Irécité peut itre recueilli directement dans le récipient o s'effectue l'opération de dispersion dans le milieu aqueux précité, après le moyen de récupération de la poudre, par exemple après le cyclone, à sa partie inférieure Ainsi, on réa- lise une production en continu soit de phases lamellaires peu hydratées, soit de liposomes. Les différents milieux aqueux utilisés pour la préparation de phases lamellaires hydratées peuvent être soit de l'eau, soit des solutions de diverses substances dont le choix dépendra des propriétés que l'on désire conférer aux phases lamellaires hydratées Par exemple, la solution aqueuse destinée à -être encapsulée dans les phases lamellaires ou liposomes peut contenir des substaices ayant des propriétés biologiques, organoleptiques, physico- chimiques ou physiologiques intéressantes A titre d'exemfie non limitatif, la solution à encapsuler peut contenir des enzymes, des antibiotiques, des polypeptides tels que des polypeptides d'élastine Le milieu de dispersion peut être également une solution de chlorure de sodium isotonique. Selon un premier mode de réalisation de 1 'inven- tion,il est possible de disperser le mélange pulvérulent obtenu par atomisation directement dans une quantité relativement importante du milieu aqueux pour obtenir directement la concentration pondérale désirée en phases lamellaires. Par exemple on disperse le mélange pulvérulent atomisé dans un milieu aqueux dans lequel est dissoute éventuellement une substance à encapsuler pour obtenir une concentration pondérale en melange pulvérulent dans la suspension inférieure à 5 o%ea Tin m i obtiezt ainsi une suspel B 3 n de phases lamellaires très hydratées dans lesquelles la substance dissoute est encapsulée On préfère réaliser des suspensions de concentration pondérale en mélange pulvérulent comprise entre 10 % environ et 25 % environ. Ainsi, le rendement d'encapsulation de la subs- tance dissoute dans le milieu aqueux est compris entre % environ et 50 % environ Ce rendement d'encapsulation est élevé car il est possible pour obtenir des phases lamellaires hydratées, de disperser le mélange pulvérulent atomisé dans une quantité relativement faible de milieu aqueux. Suivant une variante du procédé de l'invention, on disperse le mélange pulvérulent atomisé dans une quantité relativement faible d'un milieu aqueux contenant avantageusement les substances que l'on souhaite encapsu- ler, ladite dispersion étant homogénéisée pour assurer un très bon mélange, par exemple à l'aide d'un broyeur à rou- leaux La concentration'pondérale en mélange pulvérulent dans le mélange obtenu est par exemple supérieure à 50 % environ On obtient ainsi une phase lamellaire peu hydratée. Cette phase lamellaire peut être soit utilisée directement comme produits industriels, et à ce moment-là, la concentration pondérale en mélange pulvérulent est comprise avantageusement entre 60 % environ et 75 % environ, soit cette phase lamellaire peu hydratée peut être diluée dans une nouvelle quantité du milieu aqueux déjà utilisé, ou dans un nouveau milieu aqueux de dispersion, pour former une phase lamellaire très hydratée, c'est-à-dire une suspen- sion de liposomes, avantageusement pour obtenir une concen- tration pondérale en mélange pulvérulent comprise entre 0,1 %. environ et 10 % environ Ainsi, dans cette variante, on obtient un rendement d'encapsulation très élevé qui est supérieur à 50 % environ. Selon un mode préféré de réalisation de l'inven- tion, le milieu aqueux de dispersion précité est iso-osmo- tique vis-à-vis de la solution aqueuse à encapsuler. Par ailleurs, ce procédé permet d'obtenir des phases lamellaires ou liposomes de taille très petite, par exemple inférieure ou égale à 3 microns, ce qui a pu être vérifié par une étude au microscope électronique. Il est également possible, si on le désire, d'obtenir une homogénéisation plus poussée de là suspension de liposomes, par exemple au moyen d'une sonication préIsgée. La présente invention a encore pour objet des phases lamellaires lipidiques hydratées telles que des liposomes ou analogues préparées selon le procédé décrit ci-dessus Avantageusement, les phases lamellaires contien- nent des substances encapsulées possédant des propriétés utiles, notamment dans les domaines pharmaceutique,cosmé- tique, alimentaire ou autre. Enfin, l'invention a également pour objet des compositions pharmaceutiques ou cosmétiques, contenant des phases lamellaires lipidiques préparées selon le procédé ci- dessus, notamment comme véhicule pour des substances activo. Selon le procédé de l'invention, il est possible de réaliser un mélange intime des constituants de base des phases lamellaires lipidiques, à savoir un mélange d'un ou de plusieurs composés lipidiques axpht Ife etd In ou plusieu 2 rs composés hydrophobes, sans nécessiter l'utilisation de composés additionnels tels que des composés tensio-actifs. En outre, il est possible de produire des phases laoella L es lipidiques hydratées à partir du mélange pulvérulent -tom 1 é de l'invention,par dispersion de celui-ci dans une quantité de milieux aqueux relativement faible et en conséquence d'obtenir un rendement d'encapsulation des composés dissous dans le milieu aqueux, élevé. Par ailleurs, ce procédé permet de produire des phases lamellaires lipidiques hydratées selon une méthode de fabrication continue ou discontinue Il peut être de pli B utilisé très aisément à échelle industrie IL, avec un prix de rwient de fabricclon inférieur à ceux des procédés connus. Par ailleurs, le mélange pulvérulent obtenu par atomisation peutêire facilement dispersé dans un milieu aqueux ce qui permet d'obtenir des phases lamellaires lipi- diques peu hydratées ou des phases lamellaires lipidiques très hydratées. L'invention sera mieux illustrée et d'autres caractéristiques, détails etavantages de celle-ci apparaîtront plus clairement au vu des exemples suivants non limitatifs, et donnés uniquement à titre d'illustra- tion de la présente invention. Exemple 1 Dans un bécher de 100 ml on introduit 9 g de phosphatidylsérine et 1 g de béta-sitostérol que l'on dissout, à l'aide d'une agitation magnétique, dans 50 ml de chloroforme A la solution obtenue (solution A) on ajoute, en maintenant l'agitation, 0,1 g de stéaroyl- glutamate de sodium en solution dans 25 ml de méthanol (solutions) Le mélange obtenu est vaporisé dans l'enceinte d'un atomiseur alimentée par de l'air dont on aura réglé la température à 750 C On recueille dans un récipient placé à la base de l'appareil une très fine poudre blanche. Cette poudre ainsi obtenue est introduite dans un bécher de 500 ml contenant 100 ml d'une solution conte- nant 2 % d'hyaluronidase et 0,9 % de chlorure de sodium (solutionç) L'homogénéisation du mélange est assurée à température ordinaire grâce à une agitation magnétique maintenue pendant une heure On obtient une dispersion ayant l'aspect d'un gel Celle-ci, transvasée dans un ré- cipient de 1,5 1 muni d'une agitation à hélice est diluée dans 900 ml de soluté physiologique (solution aqueuse à 0,9 % de chlorure de sodium) On réalise ainsi une suspension opalescente. L'observation au microscope électronique de cette suspension révèle la présence de liposomes de taille inférieure à 3 microns. Exemple 2 Dans un bécher de 100 ml contenant un mélange composé de 50 ml de chloroforme et de 25 ml de méthanol, on introduit 9,9 g de sphingomyéline et 0,1 g de phosphate dicytélique et on agite La solution obtenue est atomisée comme dans l'exemple précédent à 750 C La poudre recueillie à la sortie de l'appareil est intimement mélangée à 100 ml d'une solution aqueuse à 1 % d'alpha-chymotrypsine et 0,9 % de chlorure de sodium, à l'aide d'une agitation magnétique pendant une heure suivi d'une sonication pendant 20 minutes, On dilue, comme dans l'exemple précédent, dans 900 ml de soluté physiologique On obtient une solution bleutée La taille des liposomes, déterminée par évalua- tion du mouvement Brownien des particules (appareil du type Nano-Sizer), est légèrement inférieure à 0,1 micron. On détermine le rendement d'encapsulation de li -chymotrypsine après filtration sur gel (sépharose CL-4 B) de la solution bleutée Le rendement d'encapsula- tion de l'0 c -chymotrypsine par rapport à l'c -chymotrypsine dissoute dans la solution aqueuse de dispersion est de o %. Exemples 3 à 9 On effectue des préparations de liposomes, suivant la méthode décrite à l'exemple 1, avec les constituants indiqués au Tableau I ci-joint. Tableau I Ex SOLUTION A SOLUTION B C o SOLUTIONC Atomi Quantité uti- dans 50 ml de chloroforme dans 25 ml demédiaml sationlisée 100 ml No nature du Poids Nature du poids Nature du Poids o C Nature des pro- produit (g) produit (g) produit (g) duits et con- _____________ ______________ _______ cen tra tio N s 3 Cérébroside 8 Cholestérol 2 Néant 75 Streptomycine 0,1 % Na Cl 0,9 % 4 Lécithine de 9 oestradiol i Néant 75 Na Ci 0,99 Soja Lécithine de 9,9 Néant Vanilline 0, 1 60 Na Cl 0,9 % Soja 6 Lécithine de 9 1 oryzanol Néant __ 80 Na Cl % Soja 7 Lécithine de 8 Cholestérol 2 Néant 75 Extrait d'aloès Soja 10 % Na Cl 0,9 % 8 Lécithine de e - ze extzmt em- Soja 9,5 Cholestérol 0,5 Néant 75 brjci 1 %,> Na Cl 0,9 % Lécithine de 8, 9 Cholestérol 1 soja ç-tocophàrl 0,1 Na ul Ln o) Ln 18 2521565 Exemple 10 - La préparation d'une poudre atomisée est réalie i suivant la méthode décrite à l'exemple 1 à partir de 15 g de lécithine de Soja et 3 g de Lanostérol dans 50 ml de chloroforme L'atomisation est conduite à 75 C On mélange : à la spatule la poudre jaune pâle obtenue avec 6 ml d'une l solution aqueuse contenant 5 % de Pyrrolidone-carboxylate de sodium,5 % de lactate de sodium et 0,9 % de chlorure de sodium,puis on hoem ie à l'aide dun broyeir à rouleaux. On obtient une phase lamellaire ayant la consis- tance d'un gel visqueux dont les caractéristiques sont -i vérifiées par diffraction aux rayons X Cette phase lamel- laire pourra être utilisée sous cette forme, notamment pour la préparation de produits cosmétiques. Il est également possible de disperser cette phaoe - lamellaire lipidique peu hydratée dans 200 ml d'une solution aqueuse contenant 0,9 % de chlorure de sodium pour obtenir - une suspension de phases lamellaires très hydratées ou 1 ip- somes Le rendement d'encapsulation mesuré de Pyrrolidone- carboxylate de sodium est de 60 %. Exemple 11 Dans un bêcher de 500 ml, on introduit 0,17 g d'hydrolysat d'élastine dissous dans 100 ml déanol à 96 %. On ajoute ensuite tout en agitant 200 ml de chloroforme et 0,34 g de lécithine de soja Le mélange est atomisé à 80 C. La poudre blanche obtenue est mise en suspension dans 50 ml ?.; de soluté physiologique au moyen d'une agitation magnétique pendant une heure L'observation au microscope électronique -révèle l'existence de liposomes de taille inférieure au micron La sonication de cette suspension permet d'obtenir une solution opalescente bleutée contenant des liposomes dont la taille ne dépasse pas 0,2 microns. Exemple 12 Dans un bécher de 500 ml on introduit 90 g de lécithine de soja et 10 g de cholestérol On disperse ce mélange dans 400 ml de chloroforme La solution ainsi obtenue est atomisée à 750 C L'atomisat, qui apparaît comme une poudre blanche, est directement receuilli dans 1 litre de solution de chlorure de sodium à 0,9 %, contenant 1 g de superoxydismutase (S O D), soumis à une vigoureuse agitation magnétique A la fin de l'atomi- sation, on poursuit l'agitation pendant une heure à tempé- rature ambiante La suspension laiteuse obtenue est ensuite dispersée dans 9 litres de solution de chlorure de sodium à 0,9 % On agite à l'homogénéisateur à rotor à palettes pendant 15 minutes à température ambiante. L'observation au microscope électronique permet de visualiser des liposomes de taille moyenne de l'ordre du micron. Exemple 13 Dans un bêcher de 100 ml on introduit 5 g de lécithine de soja, 4 g de cholestérol et 1 g de Y oryzanol On dissout ce mélange dans 75 ml de chloro- forme La solution ainsi obtenue est atomisée à 750 C L'atomisat est recueilli directement dans 100 ml d' une solution de chlorure de sodium à 0,9 % contenant 1 g d'hydrolysat de collagène On soumet le mélange ainsi obtenu à une homogénéisation puis la suspension obtenue est ensuite dispersée dans 900 ml d'une solution de chlorure de sodium à 0,9 %. Exemple 14 Dans un bécher de 100 ml on introduit 4 g de lécithine de soja, 4 g de sphyngomyéline et 2 g de cholestérol dissous dans 75 ml de chloroforme La solution ainsi obtenue est atomisée à 750 C L'atomisat est directement recueilli dans un litre d'une solution à 0,5 % de d-glucose On soumet cette solution à une vigoureuse agitation pour obtenir une homogénéisation. Les exemples 15 à 20 suivants indiquent des compositions utilisées notamment en cosmétique,réalisées à partir de suspensionsde phases lamellaires ou de phases lamellaires elles-même obtenues par le procédé de l'inven- tion qui sont mélangées à un excipient compatible avec l'organisme humain, et notamment avec la peau, et permettant une application de cette suspension sur la peau. Ainsi, le constituant actif est incorporé ou encapsulé dans les phases lamellaires produites industriellement par le procédé de l'invention, La suspensionprécitée oula phase lamellaire est mélangée à un excipient convenable pour produire par exemple des crèmes, des laits ou baumes pouvant être appliqués notamment sur la peau. Selon un procédé analogue il peut être également fabriqué des compositions pharmaceutiques, le constituant encapsulé ou incorporé ayant des propriétés intéressantes d'un point de vue biologique ou physiologique Ces compositions peuvent être sous une forme solide, pâteuse, liquide selon l'excipient utilisé. Exemple 15 Préparation d'une crème de soin de la eau hydratante _ ____-_ Composition: Suspension à l'élastine (selon l'exemple 11) log Excipient émulsionné huile dans eau 90 g Utilisation: applications quotidiennes sur la peau. Exemple 16 * Crème de soin de la peau _à roeriétés stimulantes 7 _ ___ _____-_l 2 __ 1 __________________ 1 og Composition: Suspension à l'oryzanol (selon l'exemple 6) Excipient émulsionné huile dans eau 90 g Utilisation:applications quotidiennes sur la peau Exemple 17 Crème de soin de la peau à propriétés protectrices Composition: Suspension au Tocophérol (selon l'exemple 9) 10 g Excipient émulsionné huile dans eau 90 g Utilisation:applications le soir pour préparer la peau à l'exposition aux intempéries le lendemain. Exemple 18 Lait hydratant pour le corps Composition: Suspension à l'extrait d'Aloès (selon l'exemple 7) Excipient émulsionné huile dans eau Utilisation:application après le bain ou après-soleil. Exemple 19 Baume t Ecteu pour les lèvres g g Exemple 2 C Composition: Phase lamellaire au Lsnosirol (selon l'exemple 10) Excipient gras Utilisation: application sur les lèvres pour protéger des intempéries. D Traitement stimulant anti-rides Composition: Suspension à l'extrait embryonnaire (selon l'exemple 8) Excipient gélifié Utilisation:application sur le visage une fois par semaine. g g o 50 g g 22 2521565 R E V E N D I C A T I O N S 1 Procédé de préparation d'un mélange pulvérulent d' au moins un constituant lipidique amphiphile et éventuel- lement d'au moins un constituant à caractère hydrophobe ou partiellement hydrophobe, ledit mélange étant notamment utilisé pour la formation de phases lamellaires lipidiques hydratées telles que par exemple, liposomes, ou analogues, ledit procédé consistait à dissoudre le ou lesdits constituants lipidiques amphiphiles et éventuelle- ment le ou les constituants hydrophobes dans un solvant pour former une scition desdits constituants, caractérisé en ce qu'il consiste à atomiser ladite solution dans un courant d'un fluide gazeux pour produire ledit mélange pulvérulent. 2 Procédé selon la revendication 1, caractérisé en ce quela température d'atomisation est sensiblement supérieure à la température d 'ébullition du solvant précité, et en ce que dans la zone de formation de la poudre la température du courant de fluide gazeux précité est inférieure à la température de transition du mélange précité de constituants lipidiques amphiphiles et éventuel- lement de constituants hydrophobes. 3 Procédé selon la revendication 2,caractérisé en ce que la température d'atomisation est comprise entre environ 600 C et environ 1000 C. 4 Procédé selon l'une des revendications précédentes, caractérisé en ce que la proportion pondérale du ou des constituants lipidiques amphiphiles précités dans l'ensemble des constituants dissous dans le solvant avant atomisation est supérieure à 50 % 6. 5 Procédé selon la revendication 4, caractérisé en ce que la proportion pondérale précitée en constituant lipidique amphiphile, est supérieure à 7096. 6 Procédé selon l'une des revendications des revendications précédentes, caractérisé en ce qu'au 23 2521565 moins l'un des constituants lipidiques amphiphiles ou au moins l'un des constituants hydrophobes précités est un composé b Miogiquement actif et/ou possède des propriétés organoleptiques, et/ou physico-chimiques. 7 Procédé selon l'une des revendications précé- dentes,caractérisé en ce que les constituants lipidiques amphiphiles précités sont choisis parmi les composés appartenant à la famille des glycolipides, phospholipides ou phospho-amino-lipides. 8 Procédé selon la revendication 7,caractérisé en ce que les constituants lipidiques amphiphiles précités sont choisis parmi le groupe comprenant:la ldithine desjaou d'oeuf, une phosphatidylsérine, un cérébroside ou une sphyngomyéline. 9 Procédé selon l'une des revendications précédentes, caractérisé en ce queles constituants à caractère hydrophobes ou partiellement hydrophobes précités sont choisis parmi le groupe comprenant les stérols ou leurs esters, les acides gras aliphatiques ou leurs esters, les acides gras triterpéniques ou leurs esters, des alcools gras primaires ou secondaires ou leurs esters, des amines gras- ses aliphatiques, des acides aminés acylés par un acide gras, des polypeptides, des vitanines, des extraits d'ori- gine animale ou végétale, ou des phénols pouvant comporter un ou plusieurs substitants parmi les groupes alcoxy, alkyle, comprenant 1 à 4 atomes de carbone, carboxy ou formyle. Procédé selon la revendication 9, caractérisé en ce que les constituants hydrophobes précités sont choisis par le groupe comprenant le cholestérol, le A - sitostérol, l'oestradiol, le lanostérol, le stigmastérol,le Y.oryzanol, l'acide stéarique, l'acide ximéninique, le myristate d'isopropyle, l'acide glycyrrhétinique, le phosphate dicétylique, la stéarylamine, l'acide stéaroyl - L-glutamique, des polypeptides d'hydrolysat d'élastine, un tocophérol, des extraits embryonnaires, des extraits d'aloès ou la vanilline. 11 Procédé selon l'une des revendications précédentes, caractérisé en ce que le solvant précité est constitué d'un solvant ou d'un mélange de solvant dont au moins un est un solvant des constituants lipidi- ques amphiphiles et/ou des anstituants hydrophobes préci- tés,ledit solvant ou mélange de solvant ayant un point d'ébulli\tion inférieur àla température de dégradation des- dits constituants amphiphiles ou hydrophobes dissous. 12 Procédé sebn la revendication 11, caractérisé en ce que les solvants sont choisis parmi le groupe compzeart le dfloroformlemethaol, l'éthanc L ou des mélan- ges chloroforme-méthanol, chloroforme-éthanol, de préféren- ce comportant 33 % de méthanol ou d'ethanol. 13 Procédé selon l'une des revendications précédentes, caractérisé en ce que le fluide gazeux utilisé pour atomiser la solution précitée est un gaz sensiblement chimiquement inerte vis à vis des constituants dissous dans ladite solution, par exemple l'air ou l'azote. 14 Mélange pulvértlent d'au moins un constituant lipidique amphiphile et éventuellement d'au moins un constituant à caractère hydrophobe ou partiellement hydrophobe, caractérisé en ce qu'il est obtenu par le procédé selon l'une des revendications précédentes. 15 Procédé de préparation de phases lamellaires lipidiques hydratées telles que des liposomes par exemple caractérisé en ce qu'il consiste à disperser le mélange pulvérulnt selon la revendication 14, dans un milieu aqueux convenable. 16 Procédé selon la revendication 15, caractérisé en ce que le mélange pulvérulent est recueilli directement dans le milieu aqueux précité soumis à une agitation pour disperser ledit mdange pulvérulent. 17 Procédé selon lesrevendications 15 ou 16, caractérisé en ce qu'on disperse le mélange pulvérulent dans une quantité déterminée du milieu aqueux précité pour obtenir une concentration pondérale désirée en mélarge pulvérulent. 18 Procédé selon l'une des revendications 15 à 17, caractérisé en ce que le milieu aqueux précité contient au moins une substance biologiquement active et/ou ayant des propriétés organoleptiques, et/ou physico-chimiques. 19 Procédé selon la revendication 17 ou 18, caractérisé en ce que la concentration pondérale précitée en mélange pulvérulent dans la suspension de phases lamel- laires lipidiques hydratées est égale au plus à 50 % envirar_ de préférence est comprise entre 10 % environ et 25 % envion 6 Procédé selon la revendication 19,caractérisé en ce que le rendement d'encapsulation dans les phases lamellaires lipidiques hydratées précitées de la substance précitée dissoute dans le milieu aqueux précité, est comprise entre 20 % environ et 50 % environ. 21 Procédé selonlune des rexendications 15,16, 17 ou 18 caractérisé en ce qu'on disperse le mélange pulvérulent précité dans une faible quantité de milieu aqueux pour obtenir des phases lamellaires peu hydratées. 22 Procédé selon la revendication 21,caractérisé en ce que la concentration pondérale en mélange pulvérulent dans le milieu aqueux précité est comprise entre 60 % et % environ. 23 Procédé selon la revendication 21 ou 22, caractérisé en ce que lesdites phases lamellaires peu hydratées sont obtenues par dispersion du mélange pulvéru- lent précité dans le milieu aqueux précité par broyage, par exemple au moyen d'un broyeur à rouleaux. 24 Procédé selon l'une des revendications 21 à 23, caractérisé en ce que la phase lamellaire peu hydratée précitée est dispersée dans le milieu aqueux précité ou un autre milieu aqueux convenable, pour obtenir une concentration pondérale en mélange pulvérulent comprise entre 0,1 % et 10 % environ. Procécé selon la revendication 24, caractérisé en ce que le rendement d'encapsulation dans les phases lamellaires lipidiques hydratées précitées de la substance précitée dissoute dans le milieu aqueux précité de forma- tion des phases lamellaires peu hydratées, est supérieur à 50 % environ. 26 Phases lamellaires lipidiques hydratées, caractérisées en ce qu'elles sont obtenues par le procédé selon l'une des revendications 15 à 25. 27 Composition pharmaceutique contenant une dose thérapeutiquement efficace d'un constituant actif, caractérisé en ce que ledit constituant actif est incorporé ou encapsulé dans des phases lamellaires lipidiques hydra- tées selon la revendication 26, lesdites phases lamellaires étant mélangées avec au moins un excipient acceptable par l'organisme. 28 Composition à usage cosmétique comprenant une quantité efficace d'une substance active, caractérisée en ce que ladite substance est incorporée ou encapsulée dans des phases lamellaires lipidiques hydratées selon la revendication 26, lesdites phases lamellaires lipidiques étant mélangées à au moins un excipient convenable pour obtenir un lait, une pommade, une crème, un baume, par exemple. 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