Brevet FR2518406A1 — publié le 19830624

Nouveau procédé d'obtention de substances vaso-actives extraites des feuilles de GINKGO. La présente invention a pour objet un nouveau procédé d'obtention des principes actifs du Ginkgo biloba. Elle a plus particulièrement pour objet un nouveau procédé de préparation par épuisement des feuilles vertes de Gingko Biloba et purification selective de l'extrait recueilli. Les feuilles de Gingko Biloba renferment un grand nombre de constituants dont certains sont actifs sur la circulation, comme par exemple des Ginkgolides et des flavonoides, (The Chemistry of Natural Products Vol 4 ( 1907) 89) et d'autres sont seulement un ballast inactif Parmi les flavonoides du Ginkgo Biloba on a determiné la présence de gallocatechine, de galloepicatichine, de pro-delphinidines, de glycosides de flavones et de composés bis-flavoniques. Tous ces composés ne sont pas intéressants du point de vue thérapeutique et l'objectif du procédé d'extraction est d'être le plus selectif possible On cherche, en particulier, à éliminer des substances à caractère phénolique, qui constituer une charge inutile, et des substances lipophiles Ces dernières substances nuisent à la stabilité des compositions pharmaceutiques injectables. C'est pourquoi le procédé décrit dans le brevet allemand 1.767 098 comportant une phase d'épuisement avec une cétone aqueuse puis une phase d'extraction de l'extrait cétonique pai un solvant chloré, permet d'obtenir un'totum qui convient seulement à la fabrication de formes pharmaceutiques ingérable mais qui ne convient pas pour la fabrication de formes pharmaceutiques injectables. / Le brevet français 2 132 761 décrit un perfectionnement à ce procédé qui consiste à traiter le totum de principes actifs extraits par le sulfate d'ammonium, à procéder à un nouvel épuisement par la methylethylcétone, à séparer la solution cétonique que l'on amène à sec, à reprendre le résidu par une solution alcoolique, à soumettre cette solution alcoolique par un sel insoluble de plomb, à filtrer le précipité; à traiter à nouveau le filtrat par du sulfate d'ammonium, à extraire à nouveau la methylethylcétone à concentrer cette solution organique et à la traiter-avec un polyamide pulvé- rulent à haut poids moléculaire (Nylon 6) On sépare ainsi par adsorption des substances gênantes Le filtrat amlené à sec est repris par l'éthanol j Des principes actifs précipitent au repos. On obtient ainsi après une cascade d'extractions d'évaporation puis de reprises par des solvants 1200 g de substances actives au départ de 100 kg de feuilles de Gingko Biloba grossièrement broyées Ce procédé se caractérise, donc, par la multiplicité des étapes et par conséquent par un rendement faible en principe actif En outre,, la précipitation par le plomb est peu sélective Elle précipite des composés autres que les phénols, sans pour autant éliminer tous les produits phénoliques. La présente invention concerne donc un procédé amélioré qui comporte moins d'étapes, qui assure une purification plus facile et plus sélective et enfin qui assure un meilleur rendement en principes actifs. Ce nouveau procédé se caractérise en ce que l'on soumet les feuilles encore vertes de Gingko Biloba à un épuisement par un solvant hydrocarboné permettant d'éliminer d'emblée des substances lipophiles, recueille l'insoluble que l'on extrait avec un solvant cetonique aqueux, sépare la phase cetonique, l'additionne de sulfate d'ammonium et d'-une cetone aliphatique insoluble dans l'eau, concentre la phase cetonique * / puis la dilue avec un alcanol aqueux, l'acidifie par addition d'un acide minéral ou organique aqueux traite la solution hydroorganique par addition d'un polymère insoluble de vinyl pyrrolidone préalablement purifié, sépare l'insoluble par filtration ou centrifugation puis neutralise le filtrat ou le surnageant que l'on amène à siccité. On obtient ainsi un rendement final plus élevé en principes actifs plus purs et utilisables pour toutes les formes d'administration pharmaceutique Ce nouveau procédé se caractérise encore par les modes d'exécution suivants actuellement préférés: a) le solvant d'extraction hydrocarboné est un hydrocarbure liquide ou un mélange liquide d'hydrocarbures à poids moléculaire élevé comme l'ether de pétrole, la ligroine ou le Kérosène. b) le solvant cétonique aqueux est l'acétone diluée avec une quantité d'eau comprise entre 20 et 60 %. c) la cétone aliphatique insoluble est la methylethylcetone, la diethylcetone ou la methylisobutylcetone. d) l'acidification est contrôllée de telle sorte que le p H soit compris entre 3 et 4 et de préférence soit de 3,5. e) l'alcanol aqueux est un mélange d'un alcanol de bas poids moléculaire, comme le méthanol, l'éthanol ou le propanol, et d'eau f) le polymère insoluble de vinylpyrolidone est une polyvinylpyrolidone de poids moléculaire moyen de 70 000 comme celle vendue sous la marque KOLLIDON CE 5145 par la firme BASF ou une polyvinylpolypyrolidone pontée comme celle vendue sous la marque POLYCLAR AT par la firme General Aniline and Film Corp. g) le polymère insoluble de vinylpyrrolidone est purifié au préalable par traitement par le ferricyanure de potassium e milieu alcalin. 2 5184 06 h) le filtrat ou le surnageant de centrifugation est neutralisé par addition très ménagée de soude ou de carbonate de sodium. i) Le filtrat amené à sec est repris par l'éthanol, filtré et amené à sec à nouveau pour fournir le mélange de principes actifs. L'extrait ainsi obtenu manifeste des propriétés vaso- dilatatrices et spasmolytiques prononcées et trouve de ce fait un emploi en thérapeutique Il est employé sous forme de compositions pharmaceutiques notamment pour la voie buccale telles que comprimés nus ou enrobés, gouttes,-solutions ou suspensions buvables en ampoules ou en flacons. L'exemple suivant illustre -l'invention Il ne la limite en aucune façon. 10 kg de feuilles encore vertes (les feuilles jaunes sont plus riches en biflavonoides) de GINKGO BILOBA sont réduites en poudre grossière et apuisées par 150 1 d'éther de pétrole -65 à-l'aide d'un appareil-de Soxhlet, pendant 48 heures en continu Les lipides et les pigments (chlorophylle et xanthophylle) sont aussi éliminés Le solvant est ensuite - récupéré par distillation. Le marc, étalé sur une surface plane, est séché à l'air, puis extrait par 40 litres d'acétone aqueuse 70: 30, à reflux. La température est de l'ordre de 55 O C Après huit heures, l'extrait est filtré et la marc pressé fortement. La solution-hydro-acétonique est additionnée de 3 kg de sulfate d'ammonium, et de 3 1 de Méthylethylcetone La phase aqueuse ainsi relarguée est soutirée et la phase cétonique recueillie. est séchée complètement par addition de 2 kg de sulfate d'ammonium Après contact d'une heure, les cristaux sont séparés par filtration sous vide, lavés par 3 1 d'acétone. Le filtrat et le solvant de lavage, réunis,-sont concentrés à l'évaporateur rotatif sous vide jusqu'à l'obtention d'un concentrat de 0 5 vol. / 25184 00 Ce résidu est additionné d'alcool à 50 pour avoir une concentration 1,5 vol. La solution ainsi obtenue, contient 10 % de résidu sec. A ce stade, il est nécessaire de séparer la fraction phénolique. La solution alcoolo-acétonique à environ 10 % est diluée au 1/10 et amenée à p H = 3 5 par addition d'une solution aqueuse N d'acide acétique On ajoute alors 0 1 p de poly vinyl pyrrolidone insoluble, purifiée comme suit Ce traitement vi E à la priver des impuretés réductrices et à lui conférer une granulométrie convenable. Purification lavage par une solution aqueuse contenant 20 % de Na 2 CO 3, 9 % de Na Cl, 0 25 % de ferricyanure de K Le lavage se fait par quatre parties de solution pour une partie de poly vinyl pyrrolidone, sous agitation jusqu'à décoloration de la solution Après filtration sous vide, le lavage est repris par une nouvelle quantité de solution de purification. Ces lavages successifs sont poursuivis jusqu'à ce qu'il n'y ai plus décoloration de la solution après une agitation d'au moir trois heures Enfin, la poly vinyl pyrrolidone est lavée successivement avec à chaque fois une agitation d'une heure, par l'eau distillée, une solution de Na 2 CO 3 à 10 %, une solution de HCI à 10 %, de l'eau distillée et de l'acétone. Le polymère (Kollidon CE 5145 commercialisé par la firme BASF) est alors séché à l'air à 600 C, tamisé sur un tamis de 40 Mesh et conservé à l'exsiccateur. Après addition du polymère à l'extrait de GINKGO BILOBA, une agitation d'une demi-heure est maintenue Puis le polymère est séparé par centrifugation à 3000 tours pendant 20 minutes, ou filtration sous vide. Le filtrat (ou le surnageant) est neutralisé par une faible quantité d'un agent alcalin (Soude de carbonate mais ce dernier fournissant de la mousse,il est nécessaire d'ajouter quelques gouttes d'un agent anti-mousse, concentré sous vide- à l'évaporateur rotatif jusqu'à siccité Le résidu sec est dissout dans 41,5 vol d'éthanol. / Après repos de douze heures, cette solution est filtrée et le filtrat concentré sous pression réduitejusqu'à siccité. On obtient un rendement final de 1 5 %-environ. 7 â 518406 REVENDICATIONS 1 Un nouveau procédé d'obtention des substances vaso-actives des feuilles de GINGKO BILOBA caractérisé en ce que l'on soumet les feuilles encore vertes de GINGKO BILOBA à un épuisement par un solvant hydrocarboné, recueille l'insoluble que l'on extrait par un solvant cétonique aqueux, sépare la phase organique que l'on additionne de sulfate d'ammonium et d'une cétone aliphatique insoluble dans l'eau, sépare la phase cétonique, concentre celle-ci puis la dilue avec un alcanol aqueux, l'acidifie par addition d'un acide minéral ou organique aqueux, traite cette solution acide par un polymère insoluble de Vinylpyrrolidone préalablement purifié, sépare le polymère par filtration ou centrifugation, neutralise le filtrat ou le supernageant et l'amène à sec. 2 Un mode d'exécution du procédé selon la revendi- cation 1 dans lequel le solvant d'extraction hydrocarboné est un hydrocarbure liquide, ou un mélange d'hydrocarbure à poids moléculaire élevé. 3 Un mode d'exécution du procédé selon la revendi- cation 1 dans lequel le solvant cétonique aqueux est l'acétor diluée avec une quantité d'eau comprise entre 20 et 60 %. 4 Un mode d'exécution du procédé selon la revendi- cation 1 dans lequel l'acétone aliphatique insoluble est la méthylisobutylcétone, la diethylcétone ou la méthylisobutyl cétone. 5 Un mode d'exécution du procédé selon la revendi- cation 1 dans lequel l'acidification est contrôlé 1 de telle sorte que le p H soit compris entre 3 et 4 et de préférel soit de 3,5. 6 Un mode d'exécution du procédé selon la revendi- cation 1 dans lequel l'alcanol aqueux est un mélange d'un al nol de bas poids moléculaire et d'eau - 7 Un mode d'exécution du procédé selon la revendi- cation 1 dans lequel le polymère insoluble de vinylpyrolidoni est une polyvinylpyrolidone de poids moléculaire poyen de 70. ou une polyvinylpolypyrrolidone 2518406. -' 8- 8 Un mode d'exécution du procédé selon la revendi- cation 1 dans lequel le polymère insoluble de vinylpyrrolidone est purifié au préalable par traitement par le ferricyanure de potassium en milieu alcalin -