Brevet FR2520365A1 — publié le 19830729

i L'invention a pour objet des glycosides d'anthracycline répondant à la formule I suivante: H 3 ( Ri NH 2 dans laquelle X représente un atome d'hydrogène ou un groupe hydroxy, R 1 représente un atome d'hydrogène ou un groupe méthyle, l'un quelconque de R 2 et R 3 représente un groupe méthoxy et l'autre de R 2 et R 3 représente un atome d'hydrogène. L'invention concerne aussi un procédé de préparation de ces corps ainsi que leur emploi comme médi- caments de même que leurs sels d'addition acide pharmaceu- tiquement acceptables. Les composés en question sont les suivants: 4-déméthoxy-4 '-0-méthyldaunorubicine (la: R 1 =R'3 =X=H, R 2 = O CH 3), 4-déméthoxy-4 '-épi-4 ' 0-méthyl-daunorubicine (rb: R 1 =R 2 =X=H, R 3 =OCH 3), 4-déméthoxy-2,3diméthyl-4 '-0-méthyl-daunorubicine (Ic: R 1 =CH 3, R 2 =OCH 3, R 3 =X=H), 4-Mrrëthoxy-2, 3-diméthyl-4 ' -épi-4 '-C-m-thvl-dau Lnoru-bicine (Id: R 1 =CH 3, R 2 =X=H, R 3 OCH 3), Adgr - thoxy 4 S -0-mèthyl doxorubicine (Ie: R 1 =R 3 =H, R 2 =OCH 3, X=OH), 4 dé-îtéthoxy-4 ' -épi-4 '-0-rréthyl doxorubicine I 2 = HR 3 =OC 3,XO) -d Cém 4thoxy-2, 3-diniéthyl-4 '-0-miéthyl-doxorubicine (Ig: R 1 =CH 3, R 2 =OCH 3,R 3 =H, X=OH), and 4-déié thoxy-2, 3-dimnéthyl 4 '-épi-4 -0-mé thyl-doxorubi cine ( 1 h: R 1 =CH 3, R 2 =H, R 3 OCHPX=OH>. Le procédé de l'invention consiste à condenser la 4-dénméthoxy-daunomycinone ou la 2,3 -diméthyl-4-démnéthoxy- daunomycinone chlorure de 2,3, 6-tridésoxy-3-trifluoroacétamido-4-0-méthyl- -L-arabino-hexopyranosyle (voir le brevet des Etats-Unis d' Amérique no 4 183 919) pour obtenir les CG-glycosides protégés des formules I Ia à I Id: R 1 OH I Ia: R 1 =R 3 =H; I Ib: R 1 = 2 =H; I Ic: R 1 =CH 3; I Id: R 1 =CH 3; R 2 =OCH 3 R 3 =OCH 3 R 2 =OCH 3; R 3 =H R 2 =H; R 3 =OCH 3 On élimine le groupe protecteur N-trifluoro- acétyle par une hydrolyse alcaline douce pour obtenir le dérivé correspondant de daunorubicine Ia à Id et, éventuel- lement, on convertit le dérivé de daunorubicine en dérivé correspondant de doxorubicine Ie à Ih par bromation et traitement du dérivé 14-bromo résultant au moyen de formiate de sodium aqueux. La conversion des dérivés de daunorubicine Ia à Id en dérivés correspondants de doxorubicine Ie à Ih se fait selon le procédé décrit dans le brevet des Etats-Unis d'Amérique n 3 803 124. L'invention couvre aussi les compositions pharmaceutiques utilisables comme médicament et comprenant un glycosides d'anthracycline de formule I ou un sel pharma- ceutiquement acceptable de ce corps en mélange avec un diluant ou un véhicule pharmaceutiquement acceptable. On donnera maintenant, sans intention limita- tive, la description de plusieurs exemples d'application du procédé de l'invention et les résultats d'essais biologiques. H 3 C R 3- R 2 Exemple 1 4-déméthoxy-4 '-0 O-méthyl-daunorubicine (Ia) Une solution de 3,68 g de 4-déméthoxy-dauno- mycinone dans 400 ml de dichlorure de méthylène anhydre contenant 1,4 g de 1-chloro-4-0-méthyl-N-trifluoroacétyl- -daunosamine a été agitée vigoureusement en présence de tamis moléculaires ( 30 g, 4 A Merck) et de 1,3 g de trifluorométhane-sulfonate d'argent Après 10 minutes à la température de la pièce, on a neutralisé le mélange en réaction à l'aide de 0,55 ml de sym-collidine Après 40 minutes on a filtré la suspension et on a lavé la phase organique avec une solution aqueuse 0,01 N d'acide chlorhydrique, avec de l'eau, avec une solution aqueuse saturée de bicarbonate de soude et finalement avec de l'eau jusqu'à neutralité Le résidu obtenu par évaporation du solvant sous vide a été mis en solution dans 150 ml d'acétone, traité à l'aide de 600 ml d'hydroxyde de sodium aqueux 0,2 N et dilué avec 450 ml d'eau Après 5 heures à 0 C on a ajusté à 8,5 le p H de la solution et on l'a soumise à extraction à l'aide de chloroforme jusqu'à ce que les extraits chloroformiques ne présentent plus de coloration. Les extraits organiques ont été combinés et acidifiés jusqu'au p H 5 à l'aide d'acide chlorhydrique méthanolique 0,1 N Par évaporation sous vide jusqu'à un faible volume ( 150 ml) on a fait cristalliser de la 4-déméthoxy-4 '-0- -méthyl-daunorubicine pure ( 0,6 g) La liqueur mère a été purifiée sur une colonne de gel de silice tamponnée au p H 7 à l'aide d'un tampon phosphaté M/15, en utilisant le mélange solvant chloroforme:méthanol:eau ( 10:2:0,2 en volume). L'éluat, qui contenait le composé pur, a été dilué avec de l'eau et la phase organique a été séparée, lavée à l'eau et soumise à évaporation jusqu'à un faible volume puis acidi- fiée jusqu'au p H 5 à l'aide d'acide chlorhydrique méthano- lique 0,1 N Une quantité supplémentaire ( 0,4 g) de chlorhydrate de 4déméthoxy-4 '-0-méthyldaunorubicine a été obtenue; p f 189-190 C (avec décomposition) CCM sur plaque de Kieselgel (Merck F 254) à l'aide du mélange solvant chloroforme:méthanol:eau ( 10:2:0,2 en volume). Chromatographie liquide à haute performance; analyse expérimentale: colonne microbondapack C 18; phase mobile: eau:acétonitrile ( 69:31 en volume) au p H 2 avec de l'acide orthophosphorique à 10 %: débit 1,5 ml/mn, temps de rétention 22 minutes FD-MS: m/z 511 (M). Exemple 2 4-déméthoxy-4 '-0 méthyl-doxorubicine (Ie) Une solution de 0,5 g de 4-déméthoxy-4 '-O- -méthyl-daunorubicine, préparée comme décrite à l'exemple 1, dans un mélange de méthanol ( 8 ml) et de dioxane ( 20 ml) a été traitée avec du brome pour donner le dérivé 14-bromo. Le traitement de ce dernier à l'aide d'une solution aqueuse de formiate de sodium à la température de la pièce pendant 18 heures a donné 0,310 g de 4-déméthoxy-4 '-0-méthyl- -doxorubicine que l'on a isolé sous forme de chlorhydrate p.f 164-165 C (avec décomposition); CCM sur plaque de Kieselgel (Merck F 254) mélange solvant chloroforme: :méthanol:eau ( 10:2:0,2 en volume); Rf 0,18. Chromatographie liquide à haute performance; conditions expérimentales: colonne microbondapack C 18; phase mobile eau:acétonitrile ( 69:31 en volume) au p H 2 avec de l'acide orthophosphorique à 10 %; débit 1,5 ml/mn; temps de rétention 10 minutes. Exemple 3 4-déméthoxy-2,3-diméthyl-4 '-O-méthyl-daunorubicine (Ic) Une réaction de couplage exécutée entre la 4-déméthoxy-2,3-diméthyl-daunomycinone et la 1-chloro-4-0- -méthyl-N-trifluoroacétyl-daunosamine, dans les conditions décrites à l'exemple 1, a permis d'obtenir le composé indiqué en titre. Exemple 4 4-déméthoxy-2,3-diméthyl-4 '-0-méthyl-doxorubicine (Ig) On a réalisé la conversion du composé Ic en composé indiqué en titre en suivant le processus décrit à l'exemple 2. Exemple 5 4-déméthoxy-4 '-épi-4 '-O-méthyldaunorubicine (Ib) et 4-déméthoxy-2,3diméthyl-4 '-épi-4 '-0-méthyl-daunorubicine(Id Les réactions de couplage, telles que décrites à l'exemple 1, de la 4-déméthoxy-daunomycinone et de ia 4-déméthoxy-2,3-diméthyl-daunomycinone avec le chlorure de 2,3,6-tridésoxy-3-trifluoroacétamido-4-0-méthyl-L-arabino- -hexopyranosyle ont permis d'obtenir, après hydrolyse du groupe N-protecteur,les composés indiqués en titre. Exemple 6 4-déméthoxy-4 '-épi-4 '-0-méthyldodorubicine (If) et 4-méthoxy-2,3diméthyl-4 '-épi-4 '-0-méthyl-doxorubicine (Ih) Les composés Ib et Id ont été convertis, par l'intermédiaire de leurs dérivés 14-bromo, dans les condi- tions décrites à l'exemple 2, en composés If et Ih respectivement. Activité biologique de Ia et de Ie Les composés Ia et Ie ont été essayes en comparaison des composés apparentés, respectivement la daunorubicine (DNR) et la doxorubicine (DX), dans divers milieux expérimentaux, afin de vérifier leur cytotoxicité, leur activité antitumorale et leur toxicité cardiaque sur des animaux d'expérience. Les résultats portés sur le tableau 1 qui suit montrent que Ia est environ 5 fois plus cytotoxique que DNR et que Ie est environ 9 fois plus cytotoxique que DX. Une sélection primaire in vivo a été exécutée sur les souris CDF-1 portant la leucémie ascitique P 388 ( 10 cellules/souris) Les résultats sont portés sur le tableau 2 qui suit Les deux composés Ia et Ie se sont révélés plus toxiques et plus puissants que les composés apparentés La comparaison des doses maximales tolérées (Mx TD) a montré que Ia est aussi efficace que DNR (assurant un accroissement similaire de la durée de vie de la souris) et que Ie a une bonne activité antitumorale qui est du même ordre de grandeur que celle de DX. Différentes études ont été effectuées sur la souris C 3 H portant la leucémie de Gross injectée par voie i.v ( 2 xl O cellules/souris) Les résultats procurés par Ia sont portés sur le tableau 3 qui suit Administré par voie i v le jour 1 après l'inoculation de la tumeur, Ia s'est montré notablement plus toxique et plus puissant que DNR A la dose Mx TD de 1,25-1,3 mg/kg, Ia s'est montré plus efficace que DX à la dose Mx TD de 10 mg/kg Il est bien connu que DNR n'est pas actif quand il est administré par voie orale, à moins que l'on donne des doses très élevées (> 50 mg/kg) Les renseignements portés sur le tableau 3 montrent que Ia possède une bonne activité antitumorale contre la leucémie de Gross même quand il est donné par voie orale Administré oralement le jour 1 seulement, Ia est actif à la dose de 1,25-1,3 mg/kg, qui est aussi la dose optimale dans le cas du traitement par voie i v Ce résultat suggère que l'absorption de Ia à travers le système gastro-intestinal est très'efficace. Administré les jours 1, 2 et 3 par voie orale, Ia est plus actif que quand il est administré le jour 1 seulement à la dose optimale de 0,66 mg/kg/jour, il a montré une activité antitumorale du même ordre de grandeur que celle de la 4-déméthoxy-daunorubicine, qui a été étudiée parallè- lement à la dose optimale de 1,9 mg/kg/jour L'observation que la dose optimale de Ia est inférieure à celle de la 4-déméthoxy-daunorubicine suggère aussi une absorption plus efficace comparativement à celle de ce dernier à travers le système gastro-intestinal. Les résultats relatifs à l'activité antitumo- rale du composé Ie en comparaison de celle de DX contre la leucémie de Gross sont portés sur le tableau 4 qui suit. Les composés ont été administrés le jour 1 après l'inocula- tion des cellules tumorales; DX a été administré par voie i v; Ie a été administré par voie i v et par voie orale. Quand il a été administré par voie i v, à la dose Mx TD de 1 mg/kg, Ie a montré une bonne activité antitumorale sem- blable à celle observée après traitement avec DX En plus, Ie est actif aussi quand il a été administré par voie orale à des doses partant de 1,3 mg/kg. Ie a été essayé contre la leucémie L 1210 qui a été inoculée à des souris CDF-1 par voie i p (forme ascitique) ou par voie i v ( 10 cellules/souris) Le trai- tement a commencé le jour 1 après l'inoculation des cellules tumorales, par voie i p ou par voie i v, respectivement. Les résultats reportés sur le tableau 5 qui suit montrent que, dans les essais par voies i p -i p, Ie à la dose Mx TD de 0,83 mg/kg a été aussi actif que DX à la dose Mx TD de 4,4 mg/kg Dans les essais par voies i v i v, Ie aux doses tolérées de-l et de 1,3 mg/kg a montré une activité antitumorale supérieure à celle de DX. Afin d'évaluer l'activité antitumorale contre une tumeur solide, Ie a été essayé en comparaison avec DX contre le carcinome mammaire des femelles C 3 H On a utilisé la technique de la transplantation d'une tumeur à la troi- sième génération Le traitement a commencé 15 jours après la transplantation de la tumeur et a été effectué par voie i.v une fois par semaine pendant 4 semaines La mesure de la.tumeur a été faite chaque semaine à l'aide'd'un compas. Des souris ne portant pas de tumeur ont été traitées en parallèle afin de permettre d'évaluer la toxicité générale et la toxicité cardiaque qui ont été recherchées sur 5 souris traitées aux doses les plus élevées des deux composés et tuées 5 semaines après le dernier traitement Les résul- tats de cet essai sont reportés sur le tableau 6 qui suit. Le composé DX s'est montré très efficace et il a inhibé la croissance de la tumeur de 93 à 94 % (en comparaison des témoins non traités) aux deux doses des essais ( 6 et 7,5 mg/ /kg) Dans les souris dépourvues de tumeur, traitées avec DX à la dose de 7,5 mg/kg, on a observé des morts par toxicité ( 2/3) et toutes les souris examinées ont montré des lésions cardiaques détectables histologiquement Le composé Ie à la dose de 0,4 mg/kg s'est révélé légèrement actif; à la dose de 0,6 et de 0,75 mg/lg il a inhibé notablement la croissance de la tumeur Chez les souris dépourvues de tumeur traitées avec Ie à la dose de 0,75 mg/ /kg, aucune lésion de l'atrium n'a été observée et seulement 2 souris sur 5 ont montré des lésions ventriculaires détec- tables qui étaient moins sévères que celles observées après traitement avec DX. Les résultats présentés ici montrent que les composés Ia et Ie sont de nouveaux analogues d'anthracycline doués de propriétés biologiques très intéressantes Quand on le compare à DNR, Ia est environ 3 fois plus puissant quand il est administré par voie i p et environ 8 fois plus puissant quand il est administré par voie i v A la dose Mx TD il a une activité antitumorale contre la leucémie ascitique P 388 et la leucémie systémique de Gross égale à celle de DNR En plus, il est actif aussi quand il est administré io par voie orale, particulièrement quand le traitement est exécuté pendant 3 jours consécutifs à des doses inférieures à celles de la 4-déméthoxy-daunorubicine. Ie est environ 10 fois plus puissant que DX in vivo La comparaison à la dose Mx TD montre qu'il est, par rapport à DX, également actif contre la leucémie ascitique P 388 et la leucémie L 1210, la leucémie systémi- que de Gross et les carcinomes mammaires solides, et qu'il est plus efficace que DX contre la leucémie systémique L 1210 (injectée par voie i v) En plus, ce composé est actif contre la leucémie de Gross quand il est administré par voie orale; dans des essais préliminaires de cardio- toxicité sur la souris C 3 H traitée de manière chronique par voie i v il n'a été la cause que de minimes lésions cardiaques L'effet du composé Ia a été étudié sur des cellules de la leucémie P 388 résistantes à la doxorubicine (P 388/DX) in vitro et in vivo Des cellules de leucémie P 388 résistantes à la doxorubicine (DX) (reçues par dr. Schabel) ont été conservées par transfert en série sur la souris traitée avec DX par voie i p A des fins expé- rimentales on a injecté par voie i p à une souris BDF-1 104 cellules leucémiques et on l'a traitée par voie i p le jour 1 après l'inoculation de la tumeur Les résultats, reportés sur le tableau 7, montrent que la daunorubicine (DNR) n'a pas été active contre cette tumeur cependant que le composé Ia, à la dose optimale de 0,8 mg/kg, a augmenté la durée de vie de la souris traitée Des cellules leucémi- ques P 388 et P 388/DX ont été recueillies du fluide ascitique de la souris et adaptées en vue de leur croissance en suspension in vitro Des essais de cytotoxicité ont été effectués par exposition de ces cellules à des concentra- tions diverses de médicament pendant 48 heures; à la fin des périodes d'exposition, les cellules ont été comptées à l'aide d'un compteur de cellules Coulter, et on a calculé la dose ID 50 (dose qui produit une réduction de 50 % du nombre des cellules en comparaison des témoins non traités). Les résultats, reportés sur le tableau 8 qui suit, montrent que le composé Ia a été environ deux fois plus cytotoxique que DNR sur les cellules leucémiques P 388 et qu'il a été très actif aussi sur les cellules leucémiques P 388/DX cependant que DNR a été 163-152 fois moins actif sur les cellules résistantes que sur les cellules sensibles. L'effet du composé Ie a été étudié en plus sur le carcinome mammaire de la souris C 3 H Des souris portant une tumeur mesurable (transplantation à la 3 ème génération) ont été traitées une fois par semaine pendant 4 semaines par voie i v à l'aide du composé Ie ou à l'aide de DX. Des souris normales ont été traitées en parallèle pour l'évaluation de la toxicité Les résultats reportés sur le tableau 9 confirment que Ie a été environ 10 fois plus puissant que DX et qu'il a eu dans cette expérience une activité antitumorale remarquable à des doses non toxiques alors que DX était toxique. Du fait de sa bonne activité antitumorale contre le carcinome mammaire, le composé Ie a été essayé contre deux tumeurs solides: les adénocarcinomes 26 et 38 du côlon, transplantées respectivement par voie sous-cutanée chez la souris BALB/c et chez la souris BDF-1 Le traitement a commencé le jour 1 après l'inoculation de la tumeur (état précoce) ou quand la tumeur était déjà palpable (état avancé) et a été effectué par voie i v une fois par semaine ou tous les 6 jours, 3 ou 4 fois La croissance de la tumeur a été évaluée par mesure au compas. Des souris ne portant pas de tumeur ont été traitées en parallèle, pour l'évaluation de la toxicité, et ont été observées pendant 90 jours Les résultats des trois essais sont portés sur le tableau 10 Contre la il tumeur 26 du côlon à l'état précoce, le composé Ie s'est montré à la dose maximale tolérée de 0,9 mg/kg/jour plus actif que DX à la dose maximale tolérée de 7,5 mg/kg/jour. Contre la tumeur 26 du côlon à l'état avancé, le composé Ie ne s'est pas montré toxique à la dose maximale essayée de 0,7 mg/kg/jour et a produit une inhibition de la croissance de la tumeur supérieure à celle produite par DX à la dose maximale tolérée de 6 mg/kg/jour Contre la tumeur 38 du côlon à l'état avancé, le composé Ie essayé à la dose maximale de 0,9 mg/kg/jour s'est montré aussi actif que DX à la dose de 9 mg/kg/jour pour l'inhibition de la croissance de la tumeur mais a produit une forte élévation de la durée de survie. En conclusion, tous les renseignements recueillis confirment que les composés Ia et Ie sont de nouvelles anthracyclines extrêmement intéressantes, douées d'une puissance élevée, d'activité par voie orale, d'activité contre des tumeurs résistantes à l'anthracycline (Ia), d'activité contre des tumeurs solides supérieure à celle de'DX et non cardiotoxiques (Ie). Tableau 1 Essai d'inhibition de colonies contre les cellules Hela in vitro (traitement pendant 24 heures) a nombre de colonies; % destémoins non traités. composée Dose a ID 50 (ng/ml) % (ng/ml) DNR 12,5 42 6,2 66 12 3,1 121 Ia 25 O 6,2 O, 2,5 1,5 73 DX 12,5 20 6,2 79 ' 9 3,1 177 Ie 10 O 2,5 9,9 1 0,62 82 0,15 84 Tableau 2 - Activité antitumorale contre la leucémie P 388 Traitement par voie i p le jour a Durée médiane de survie; traités. % par rapport aux témoins non b Survivants à long terme (> 60 jours) c Evaluées d'après les constatations d'autopsie sur les souris mortes. d d Résultat de deux essais. e Ceci est la dose maximale tolérée de DX dans ce processus expérimental. Dose T/Ca LT Sd Morts parc Composé T (mg/kg) % toxicité DN Rd 2,9 154 0/10 0/10 4,4 140; 154 0/20 4/20 6,6 109; 163 0/20 13/20 Ia 0,5 127 0/10 0/10 0,64 127 0/10 0/10 0,8 172; 127 0/20 1/20 1,0 145 0/10 0/10 1,3 95 0/10 10/10 DX 4,4 180 0/10 O /10 6,6 200 2/10 O O/10 ,Oe 315 4/10 0/10 Ie 0,44 180 0/10 0/10 0,66 215 0/10 0/10 1,0 250 0/7 1/7 1,5 245 2/10 4/10 Tableau 3 Activité de Ia contre la leuzérie de Gross Traitement _____ i ot C 4 par Voie Porne Composé mgc/k g/jour -txct j Pr r 1 a DNR Ia 4 déméthoxy DNR Ia _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ 22, 5 0, 58 0, 76 1,0 1,25-1,3 1, 56 1,95 1,1 i,,25-1,3 1,56-1,6 1,95-2,0 1,31 1,58-1 1,9 2,5 3,3 0,44 0, 66 1,0 1, 25 133; 150 e; 191; 216 133 J 158; 16 ( 1 183:205 133; 166 166; 166 ; 183 133; 150 133; 190 ; 220 O/; 10 0;' 10 0/20 6/10 0/10 1/20 3/20 2/20 0/10 1/20 1/20 2/10 6/10 0/9 0/10 9/20 8/10 a Jours après l'inoculation de la tumeur. b,c voir tableau 2. iV. iv V orale orale orale i 1,2,3 1, 2, 3 Tableau 4 Activité de Ie contre la leucémie de Gross Traitement a T/C b Morts parc T/Cb Voie Composé mg/kg toxicité i.v DX 10 200 2/8 13 200; 216 2/18 16,9 250; 266 3/18 Ie 1,0 183; 233 0/18 1,3 192; 208 4/18 1,7 217; 200 7/18 2,2 142 7/10 orale Ie 1,0 125 0/8 1,3 150 0/8 1,7 166 0/8 2,5 166 0/8 a L Le jour 1 après l'inoculation de la tumeur. b,c voir tableau 2. Tableau 5 Activité de Ie contre la leucémie L 1210 Voie d'inocu Traitement C Onrposé mg/kg T/C LT Sb orts par lation toxicité de L 1210 i. p i p DX 4,4 150 0/9 0/9 6,6 150 0/10 1/10 ,0 162 0/10 1/10 l Ie 0,83 162 2/10 0/10 1,0 187 1/10 1/10 1,2 393 4/10 3/10 i.v i v DX 10,0 120 0/10 0/10 13,0 120 0/10 0/10 16,9 133 0/10 0/10 Ie 1,0 200 0/10 0/10 1,3 173 0/10 0/10 1,7 > 580 5/10 0/10 abc voir tableau 2. Tableau 6 Activité contre le carcinome mammaire chez C 3 H, toxicité et toxicité cardiaque de Ie en comparaison avec DX Souris avec tumeur Souris sans tumeur Lésions cardiaques Ccmposé Inhibition de la A V mg/kg/jour Croissance de croissancade la T/C la tumeur %a tumeur % MS Tc % Morts n G n G _ _ 4845 53 DX 6 318 93 77 145 n d. 7,5 277 94 74 140 2/3 4/4 1,3 5/5 1,5 Ie 0,4 1740 64 65 123 n d. 0,6 748 85 76 143 n d. 0,75 344 93 81 153 1/4 0/5 O 2/5 0,2 a Poids de la tumeur le jour 43/poids de la tumeur au début du traitement, x 100. * b 10-O Croissance de la tumeur des souris traitées/croissance de la tumeur des témoins,x 100/ c Durée médiane de survie (en jours) d Observées pendant 90 jours e A=atrium; V=ventricules; n =nombre de coeurs montrant une lésion/total; G: gravité des lésions. O% r Ul 0 n ru CD L 4 os Ut Tableau 7 Effet in vivo sur la leucémie P 388 résistante à la doxorubicine a Durée médiane de survie; % par rapport aux témoins non traités. b Survivants à long terme (> 60 jours). c Evaluées d'après les constatations d'autopsie sur les souris mortes. Composé Dose T/Ca b Morts par: (mg/kg) DNR 2,9 93 0/10 0/10 4,4 87 0/10 1/10 6,6 84 0/10 3/10 Ia 0,53 133 0/10 0/10 0,8 142 1/10 0/10 1,2 106 0/10 4/10 Tableau 8 Effet in vitro sur les leucémies P 388 sensible et résistante à la doxorubicine b ID 50 (ng/ml) e Composé R P 388 P 388/DX d DNR 5,8 -2,3 950 -350 163 -152 Ia 0,35 -1,3 1,4 -5 4 -3,8 a Résultat de deux essais. b Dose donnant 50 % de réduction du nombre des cellules en comparaison des témoins non traités. c Cellules de la leucémie P 388 sensibles à DX. d Cellules de la leucémie P 388 résistantes à DX. e Rapport entre ID 50 sur P 388/DX et ID 50 sur P 388. 50 Tableau 9 Activité de Ie contre le carcinome mammaire de la souris 3 H Souris avec tumeur Souris sans Composé mg/kg/jour Poids T/C b MST c T/C d tumeur de laa % % morts tumeur (mg) 651 115,5 0/10 DX 6,0 238 37 149 129 1/10 7,5 209 32 100 87 7/10 Ie 0,6 422 65 118 103 0/10 0,75 263 40 126,5 110 0/10 N- "o a Evalué 1 semaine après le dernier traitement, par mesure au compas. b Poids de la tumeur chez les souris traitées/ poids de la tumeur chez les témoins, x 100. c Durée médiane de survie (jours). d MST des souris traitées/MST des témoins (x 100). e Les souris ont été observées pendant 90 jours. Mji U 1 o' ru 1 U 4 O Tableau 10 - Effet de Ie et de DX contre deux colonies de carcinomes transplantés chez la souris Moment du début du traitement développement de la tumeur. par rapport au Jours d'administration par voie i v. c % d'inhibition de la croissance de la tumeur en comparaison des témoins non traités. d Durée médiane de survie des souris traitées/ /durée médiane de survie des témoins, x 100. e Evaluation sur des souris sans tumeur traitées en parallèle et observées pendant 90 jours. Tumeur Etata Programmeb Ccposé Dose % c T/C morts pare (mg/kg) inhib % toxicité Côlon 26 prxécoceq 7 dx 4 DX 6 56 217 0/10 7,5 82 224 0/10 9,3 81 161 9/10 Ie 0,6 81 258 0/10 0,75 85 227 0/10 0,9 93 246 1/10 avancé q 6 dx 3 DX 6 34 237 0/9 962 237 4/9 Ie 0,6 48 232 0/9 0,7 52 195 0/9 Côlon 3-8 avancé q 7 dx 4 DX 6 65 92 0/10 9 83 144 1/10 Ie 0,6 55 133 0/10 0,75 60 129 0/10 0,9 81 184 0/10 a REVENDICATIONS 1 Composés glycosides d'anthracycline répon- dant à la formule générale I: o O OH CH 2 X O R 3- NH 2 (I) R 2 dans laquelle X représente un atome d'hydrogène ou un groupe hydroxy, R 1 représente un atome d'hydrogène ou un groupe méthyle, l'un de R 2 et R 3 est un groupe méthoxy pendant que l'autre de R 2 et R 3 est un atome d'hydrogène, ainsi que les sels d'addition acide pharmaceutiquement acceptables de ces composés. 2 Composés selon la revendication 1 constitués par l'un des suivants: 4-déméthoxy-4 '-0méthyl-daunorubicine 4-déméthoxy-4 '-0-méthyl-doxorubicine 4-déméthoxy-4 '-épi-4 '-0-méthyl-daunorubicine 4-déméthoxy-4 '-épi-4 '-0-méthyldoxorubicine 4-déméthoxy-2,3-diméthyl-4 '-0-méthyl-daunorubicine 4déméthoxy-2,3-diméthyl-4 '-0-méthyl-doxorubicine 4-déméthoxy-2,3-diméthyl4 '-épi-4 '-0-méthyl-daunorubicine 4-déméthoxy-2,3-diméthyl-4 '-épi-4 '-0méthyl-doxorubicine 3 Procédé pour la préparation des composés de la revendication 1 caractérisé en ce qu'on fait réagir de la 4-déméthoxy-daunomycinone ou de la 2,3-diméthyl-4- -déméthoxy-daunomycinone, en solution dans du dichlorure de méthylène anhydre, avec le chlorure de 2,3,6-tridésoxy- -3-trifluoroacétamido-4-0méthyl-L-lyxo-hexopyranosyle ou avec le chlorure de 2,3,6-tridésoxy-3-trifluoroacétamido- -4-0-méthyl-L-arabino-hexopyranosyle, en présence de trifluorométhane-sulfonate d'argent et de tamis molécu- laires, pour obtenir les oc-glycosides protégés par N-trifluoroacétyle, on élimine le groupe protecteur N-trifluoroacétyle par une hydrolyse alcaline douce à l'aide d'hydroxyde de sodium aqueux 0,2 N et on obtient les dérivés correspondant de daunorubicine (I:X=H) que l'on convertit éventuellement en dérivés correspondants de doxorubicine (I:X =OH) par bromation et par traitement des 14-bromo-intermédiaires ainsi formés à l'aide de formiate de sodium aqueux. 4 Composition pharmaceutique caractérisée en ce qu'elle comprend une quantité efficace thérapeutiquement d'un glycoside d'anthracycline de la revendication 1 en mélange avec un véhicule inerte. Glycoside protégé de formule Rl OH R 3 NHCOCF CH OH O J R 2 dans laquelle R 1 est un atome d'hydrogène ou un groupe méthyle, R 2 est un atome d'hydrogène ou un groupe méthoxy et R 3 est un atome d'hydrogène ou un groupe méthoxy à condition que R 2 et R 3 ne soient pas identiques. e