Brevet FR2508314A1 — publié le 19821231

:1 La trypanosomiase est un terme utilisé pour décrire un groupe de maladies protozo Iques, toutes dues à une infection par une espèce du genre Trypanosoma Ces maladies sont d'une grande importance en Afrique o leur présence sous forme enzootique empêche l'élevage des animaux domestiques dans la plus grande partie du continent entre 150 de latitude Nord et 20 de latitude Sud On considère que les trypanosomes pathogènes d'Afrique sont surtout associés aux mouches tsé- tsé (Glossina) qui se nourrissent du sang des vertébrés. La tsé-tsé est le vecteur ainsi que l'hôte o se produit une partie du cycle vital du trypanosome Partout o l'on trouve des mouches tsé-tsé, on trouve également une trypano- somiase dans une partie de la population de mammifères. Les observations cliniques sont typiquement celles d'une maladie d'épuisement avec fièvre intermittente, anémie, oedème et cachexie En outre, chez l'homme, dominent les signes neurologiques y compris la somnolence. Les trypanosomes pathogènes importants pour les animaux domestiques sont T congolense, T vivax, T simiae, T suis T equiperdum et T brucei Ce dernier trypanosome est morphologiquement identique à T gambiense et T rhodesiense qui provoquent la "maladie du sommeil" chez l'homme en Afrique Les trypanosomes T evansi et T vivax sont égale- ment transmis mécaniquement par des insectes suceurs de sang. Un problème récurrent dans la chimiothérapie de la trypa- nosomiase est celui du malade ou de l'animal qui fait une rechute après traitement Si le médicament ne peut éliminer la parasitémie circulante ou si les parasites réapparaissent dans le courant sanguin après une phase aparasitémique, il se peut que la posologie du médicament ait été insuffisante, qu'il soit apparu une résistance au médicament ou que le para- site soit situé dans un site non atteint par le médicament. Si cependant il y a une phase aparasitémique prolongée après chimiothérapie avant la réapparition finale du parasite, ceci, 250831 4 dans de nombreux cas, a été attribué à une réinfection si l'animal est resté dans la zone endémique. Ceci a été décrit plus en détail dans le cas de l'infection à T brucei 667/1 chez la souris par Jennings, Whitelaw & Urquhart, Parasitol, 75, 143-153 ( 1977), qui ont trouvé que l'on pouvait guérir de façon permanente les infec- tions de la souris par cette souche si l'on commençait le traitement au début de l'infection ( 3 à 7 Jours) mais que si on le retardait ( 14 à 21 jours), presque toutes les souris finissaient par faire des rechutes bien qu'on les ait traitées avec une quantité dépassant de beaucoup la dose médicamenteuse recommandée. Un certain nombre de nitroimidazoles comme ceux décrits dans les brevets américains n 3 711 495; 3 915 978; 4 010 176; 3 646 027 et 3 737 547 présentent une activité trypanocide. Les médicaments que l'on trouve dans le commerce et que l'on emploie communément pour traiter la trypanosomiase chez l'animal comprennent le bromure d'homidium, le bromure de pyrithidium, le chlorure d'isométamidium, l'acéturate de diminazène (Berenil) et la suramine qui est également le médicament de choix pour traiter la trypanosomiase humaine. D'autres médicaments utilisés en thérapeutique humaine sont le Melapsoprol et la Pentamidine L'emploi de l'acéturate de diminazène ou Berenil en combinaison avec certains des nitro- imidazoles est reconnu dans la demande de brevet anglais n O 2 024 008 A comme ayant un effet bénéfique par rapport à l'emploi d'acéturate de diminazène seul dans le traitement de la trypanosomiase. Aujourd'hui, avec l'invention, il est fourni des combi- naisons de suramine et de certains nitroimidazoles et un procédé de traitement de la trypanosomiase avec ces combinai- sons chez l'animal et chez l'homme Les combinaisons présentent un effet bénéfique amélioré de par le plus grand degré appa- rent de co-action entre leurs composants. L'invention concerne denouvelles compositions et de nouveaux procédés pour le traitement des infections chro- niques de trypanosomiase Les compositions comprennent les 2 ou 5-nitroimidazoles substitués et la suramine Les 5- nitroimidazoles substitués compris dans les nouvelles conpo- sitions sont ceux qui présentent une activité anti-trypanoso- mique et qui sont décrits dans le brevet américain n 3 711 495, de préférence ceux qui ont un substituant alcoyle inférieur en C 1 à C 6 en position 1 et un substituant en position 2 qui est une A -isoxazoline condensée en position 4 '1,5 ' avec un noyau alcoyle saturé à 6 à 8 chaînons, et certains de leurs métabolites hydroxyles. Les nitroimidazoles utiles dans les nouvelles combinai- sons de l'invention et les plus appréciés ont les structures et les noms suivants: 2 N-s CH 3 3-( 1-méthyl-5-nitroimidazol-2-yl)-3 a,4,5,6,7,7 a- hexahydro-1,2-benzisoxazole MK-436 O NH * 2 H N>No II 3-( 1-mythyl-5-nitroimidazol-2-yl)-cis-5,6- dihydroxy-3 a,4,5,6,7,7 a-hexahydro-1,2-benzisoxazole N 02 N O OH III OH 3-(l-méthyl-5-nitroimidazol-2-yl)-cis-6,7- dihydroxy-3 a,4,5,6,7,7 a-hexahydro-l,2-benzisoxazole 02 N j N CH 3 IV 3-( 1-méthyl-5-nitroimidazol-2-yl)-4,5-hexa- méthylene-A 2-isoxazoline Les nitroimidazoles décrits ci-dessus, ayant une activité anti-trypanosomique, se combinent également bien avec la suramine dans les présentes nouvelles compositions qui sont utiles pour le traitement de la trypanosomiase récurrente. La suramine, l'autre composant actif dans les nouvelles compositions, est un composé connu utilisé dans le traite- ment de la trypanosomiase chez l'animal et chez l'homme. Elles est commercialisée par I C I sous le nom d'Antrypol. Les exemples non limitatifs suivants servent à préciser l'invention. Les souris utilisées sont des femelles CFLP adultes pesant environ 25 à 30 g et auxquelles on donne un régime alimentaire standard de laboratoire dans toutes les expérien- ces. On utilise deux souches dans toutes les expériences, la principale étant T brucei TREU 667/1 obtenue originel- lement auprès du Dr A R Gray à Edimbourg et l'autre T brucei LUMP 1001 auprès du Professeur W H R Lumsden, à Londres On les entretient cryogéniquement comme décrit antérieurement dans Jennings, Whitelaw'& Urquhart, Parasitol, 75, 143-153 ( 1977). On inocule à toutes les souris par voie intrapéritonéale 1 x 10 trypanosomes préparés à partir de la culture stable dans du sel physiologique glucosé et phosphaté à p H 8,0. On commence la chimiothérapie à divers moments après l'inoculation On pèse chacune des souris et on lui administre par voie intrapéritonéale la dose nécessaire de médicament en un volume de 0,1 ml/kg de poids corporel. On utilise les composés I et IV sous forme de poudres cristallines On commence par broyer finement celles-ci dans un mortier en agate puis on les met en suspension dans du sel physiologique aux fins d'injection intra-péritonéale. On ajoute aux suspensions une goutte de détergent (Tween 80) pour faciliter l'humectation Au cours de l'administration on prend garde que les suspensions soient correctement dis- persées, et étant donné l'existence d'un léger dépôt iné- vitable dans la seringue, on fait toujours les injections aux souris au hasard et, habituellement, à partir d'une seringue remplie de suspension médicamenteuse, on ne fait pas d'injection à plus de trois souris Comme le schéma poso- logique est généralement de 4 doses quotidiennes à la concen- tration médicamenteuse respective, toute erreur éventuelle est également répartie. L'autre médicament connu utilisé est la suramine B P. R (ANTRYPOL, ICI) Onl'utilise selon les instructions du fabricant et on l'injecte par voie intrapéritonéale. On examine les souris pour y détecter les parasites le e e Jour du début du traitement (généralement le 3 ou le 21 e jour de l'infection) en examinant une goutte de sang caudal sous y 250831 4 -6 un objectif grossissant 400 fois (technique du frottis humide). Après traitement on les examine tous les deux jours pendant 6 jours puis une fois par semaine jusqu'à apparition d'une rechute ou jusqu'à la fin de l'expérience (dans certains cas au bout de 6 à-7 mois). On retire de leur groupe expérimental les souris qui présentent une parasitémie récurrente et on les met dans une cage séparée après qu'elles aient présenté un frottis sanguin humide positif en deux occasions séparées. Exemple 1 Effet des composés I et IV sur les infections précoces de T brucei TREU 667/1. On utilise les deux composés, I et IV, à divers niveaux posologiques contre une infection précoce par T brucei TREU 667/1 chez les souris CFLP On commence le régime posologique 3 jours après l'infection et on administre quoti- diennement les injections intrapéritonéales de suspension médicamenteuse Les résultats sont donnés au Tableau 1 TABLEAU 1 Efficacité des composés I et IV administrés à des souris infectées pendant 3 jours avec Trypanosoma brucei TREU 667/1. Médicament Nombre et niveau des doses Nombre d'animaux guéris+ quotidiennes sur le nbe total traité I 4 x 5 mg/kg 0/8 4 x 20 mg/kg 2/8 I* 4 x 80 mglkg 10/10 IV 4 x 5 mg/kg 2/8 4 x 20 mg/kg 8/8 *Expérience séparée La guérison indique l'absence de rechute, c'est-à-dire l'absence complète de parasites dans le sang pendant au moins 90 jours après traitement ou jusqu'à la fin de l'expérience. Le composé IV à raison de 4 doses de 20 mg/kg donne une guérison à 100 % d'une infection vieille de 3 jours On note une certaine indication d'activité lorsque le composé I est administré en 4 doses de 20 mg/kg et pour cette raison on répète l'expérience en utilisant 4 doses de 80 mg/kg qui donnent également un taux de guérison de 100 %. Exemple 2 Effet des composés I et IV seuls et en combinaison contre les infections chroniques dues à T brucei TREU 667/1 On teste les composés I et IV semblant prometteurs contre des infections de 3 jours dans l'exemple 1 contre dea infec- tions de 21 Jours par T brucei TREU 667/1 dont des travaux antérieurs ont montré qu'elles réaparaissaient après 250831 4 traitement à ce moment de l'infection avec nombre de médicaments classiques seuls (Berenil, Ethidium, Prothidium, Samorin) même lorsqu'on les utilise à des doses de nombreuses fois supérieurs aux doses efficaces contre les infections précoces Les composés I et IV sont utilisés seuls et dans diverses combinaisons et les résultats sont donnés au Tableau 2. TABLEAU 2 Efficacité des composés I et IV seuls et combinés lorsqu'on les administre à des souris infectées pendant 21 jours par Trypanosoma brucei TREU 667/1 Nombre et Nombre d'animaux guéris+ niveau des sur le nombre total d'animaux Médicament doses quotidiennes traités IV 4 x 20 mg/kg 0/9 4 x 20 mg/kg 0/10 4 x 80 mg/kg 0/10 IV* 4 x 20 mg/kg 0/8 I* 4 x 20 mg/kg 0/9 I +simultanément IV* 4 x 20 mg/kg chacun 1/10 I + 4 x 20 mg/kg I IV* suivis par 4 x 20 mg/kg IV 1/10 IV + 4 x 20 mg/kg IV I* suivis par 4 x 20 mg/kg I 1/10 * ré Constitue une seule expérience O + C La guérison indique qu'il n'y a pas de rechute, c'est-à-dire qu'il y a absence complète de t parasites dans le sang pendant au moins 90 Jours après traitement ou Jusqu'à la fin de . l'expérience. Dans chaque cas les composés I et IV, utilisés seuls ou dans diverses combinaisons, échouent à guérir les infec- tions vieilles de 21 jours 'à,T brucei TREU 667/1 en ce que des rechutes se produisent à partir de 5 jours après trai- tement. Exemple 3 Effet de la suramine ( 0,5 mg/kg) et du composé IV sur les infections à T brucei TREU 667/1 On administre la suramine ( 0,5 mg/kg) et le composé IV aux doses et aux jours montrés dans le Tableau 3 Les résul- tats sont également donnés au Tableau 3 1 1. TABLEAU 3 Effet de la suramine ( 0,5 mg/kg) et du composé IV sur les infections à T brucei TREU 667/1 TRAITEMENT PRIMAIRE TRAITEMENT SECONDAIRE Nb d'animaux stade de l'infection auquel stade de l'infection guéris sur le le traitement commence auquel le traitement nb total commence traités Médicament Dose Médicament Dose Jour 21,22,23,24 Suramine O 0,5 mg/kg 0/10 Jour 21,22,23,24 Jour 21,22,23,24 Suramine O,5 mg/kg Composé IV 80 mg/kg 9/9 Jour 21,22,23,24 Jour 28,29,30,31 Suramine O,5 mg/kg Composé IV 80 mg/kg 9/10 Jour 21,22,23,24 Jour 28,29,30,31 Suramine O,5 mg/kg Composé IV 20 mg/kg 1/10 Jours alternés Jour 21,23,25,27 Jour 22,24,26,28 Suramine O,5 mg/kg Composé IV 20 mg/kg 4/9 250831 4 La recherche montre que la suramine ( 0,5 mg/kg) admrinis- trée en 4 doses quotidiennes ( 4 x 0,5 mg/kg) sur une infec- tion à T brucel TREU 667 vieille de 21 jours n'a pratiquement pas d'effet sur les trypanosomes circulant et que toutes les souris sont à nouveau parasitémiques 5 jours apres la dernière dose de médicament Cependant si l'on administre cette même dose de suramine ( 4 x 0,5 mg/kg) en commençant le troisième jour de l'infection, toutes les souris sont guéries de façon permanente. Si l'on administre la suramine ( 0,5 mg/kg) avec ou avant le nitroimidazole, composé IV, ( 80 mg/kg) à une infection vieille de 21 jours, alors 9 souris sur 9, et 9 sur 10, sont guéries, respectivement On trouve également que l'on ne peut réduire le niveau de composé IV à 20 mg/kg car la suramine ( 4 x 0,5 mg/kg) suivie par le composé IV ( 4 x 20 mg/kg) ne guérit de façon permanente qu'une souris sur En administrant la suramine et le composé IV un jour sur deux, on guérit 4 souris sur 9. Exemple 4 Effet de la suramine ( 20 mg/kg) et du composé IV sur les infections à T brucei TREU 667/1. On administre la suramine ( 20 mg/kg) et le composé IV aux doses et aux jours montrés au Tableau 4 qui donne égale- ment les résultats. TABLEAU 4 Effet de la suramine ( 20 mg/kg) et du composé IV sur les infections à T brucei TREU 667/1 TRAITEMENT PRIMAIRE stade de l'infection auquel le traitement commence TRAITEMENT SECONDAIRE stade de l'infection auquel le traitement commence Nb d'animaux guéris sur le nb total traités Jour 21 Suramine mg/kg 3/10 Jour 21,22,23,24 Suramine 20 mg/kg 10/10 Jour 21 Jour 25 Suramine 20 mg/kg Composé IV 80 mg/kg 10/10 Jour 21,22,23,24 Jour 27,28,29,30 Suramine 20 mg/kg Composé IV 80 mg/kg 10/10 Jour 21 Jour 25 Suramine 20 mg/kg Composé IV 20 mg/kg 5/10 Si l'on porte la suramine à 20 mg/kg, une seule dose à ce niveau guérit 3 souris sur 10 et 4 doses à 20 mg/kg guérissent 10 souris sur 10 infectées pendant 21 jours avec T brucei 667 Si l'on combine le traitement à la suramine avec le composé IV, une seule dose de suramine ( 20 mg/kg) suivie par une seule dose de composé IV ( 80 mg/kg)guérit souris sur 10 mais si l'on réduit la dose unique du com- posé IV à 20 mg/kg, on ne guérit que 5 souris sur 10. Exemple 5 Efficacité de la suramine et du composé IV contre T bucei LUMP 1001 Le traitement des infections à T brucei LUMP 1001 avec des régimes posologiques de suramine et de composé IV de la manière décrite au Tableau 5 souligne la différence de sensibilité des deux organismes T brucei. TABLEAU 5 Efficacité de la suramine et du composé IV contre T brucei LUMP 1001 TRAITEMENT PRIMAIRE TRAITEMENT SECONDAIRE Nb d'animaux stade de l'infection stade de l'infection guéris sur le auquel le traitement auquel le traitement nb total commence commence traités Médicament Dose Médicament Dose Jour 21 Suramine 20 mg/kg 0/10 Jour 21,22,23,24 Suramine 20 mg/kg 3/10 Jour 21 Jour 25 Suramine 20 mg/kg Composé IV 80 mg/kg 5/10 Jour 21,22,23,24 Jour 27,28,29,30 Suramine 20 mg/kg Composé IV 80 mg/kg 9/9 Jour 21 Jour 25 Suramine 20 mg/kg Composé IV 20 mg/kg 0/10 250831 4 1 6 T brucei LUMP 1001 est moins sensible au traitement à la suramine que T brucei 667 (Tableau 4) car un niveau de mg/kg pour quatre traitements quotidiens ne guérit que 3 souris sur 10, par opposition à 10 guérisons sur 10 à ce niveau dans une infection à T brucei TREU 667. Les compositions de l'invention ont un intérêt parti- culier dans la lutte contre la trypanosomiase chez les animaux domestiques Dans ce but, ils peuvent être adminis- trés sous des formes posologiques unitaires telles que les bols ou les potions La quantité de composition nécessaire pour le traitement de la trypanosomiase récurrente varie selon des facteurs tels que la composition particulière employée, l'espèce d'animal à traiter, l'espèce de parasite infectant et la gravité de l'infection En général, les compositions de l'invention comprenant de la suramine et un nitroimidazole substitué, lorsqu'on les administre aux animaux domestiques à des doses quotidiennes allant d'environ 5 mg à environ mg de suramine et d'environ 10 mg à 800 mg de nitroimidazole par kg de poids corporel de l'animal sont très efficaces pour traiter la trypanosomiase récurrente sans effets toxiques intolérables On obtient de bons résultats lorsqu'on traite les animaux avec une dose allant d'environ 1,0 mg à environ 80 mg de suramine et d'environ 20 mg à environ 320 mg de nitroimidazole et de préférence de 2 mg à 50 mg par kg de poids corporel de suramine et une dose de 20 mg 160 mg du composé nitroimidazole L'administration de la suramine et du nitriimidazole peut se faire sous la forme d'une seule formulation, mais l'administration peut aussi se faire de façon séparée en même temps, le même jour ou avec un inter- valle d'environ 3 jours L'administration peut se faire en une seule dose ou répartie en plusieurs doses plus faibles pendant une période de 24 heures ou de plusieurs jours. Lorsqu'on désire un traitement prophylactique et que les composés sont administrés de façon continue, on obtient des résultats satisfaisants lorsque les animaux ingèrent des 250831 4 doses quotidiennes, d'environ 0,1 mg à 100 mg des compositions combinées par kg de poids corporel On peut facilement préparer les formes posologiques unitaires par des techniques de formulation classiques, et ces formes sont particulière- ment utiles lorsque l'administration doit se faire en une seule dose ou par doses fractionnées pendant une période de 24 h. La quantité exacte d'ingrédient actif à employer dans les compositions ci-dessus peut varier pourvu qu'une quantité suffisante soit ingérée pour donner la dose nécessaire En général, on peut employer de façon satisfaisante des comprimés, des bols ou des potions contenant d'environ 5 à 70 % en poids d'ingrédient actif pour fournir la dose désirée. Lorsqu'on utilise la suramine et les nitroimidazoles substitués de l'invention dans la prévention et le traitement de la "maladie du sommeil" chez l'homme,-les composés peuvent être administrés sous forme d'agents prophylactiques à raison de 2 à 12 mg/kg de poids corporel tous les 1 à 8 mois. Lorsqu'on utilise en thérapeutique les nouvelles composi- tions de l'invention pour traiter des infections bien établies de trypanosomiase, un procédé de traitement préféré consiste à administrer la suramine dans un intervalle posologique d'environ 2 mg à environ 50 mg par kg de poids corporel et de 20 mg à 160 mg par kg de poids corporel du nitroimidazole administré de façon concomitante. Rl EVENDICATIONS 1 Composition pharmaceutique comprenant un support pharma- ceutiquement acceptable, de 100 mg à environ 2500 mg de suramine et de 1000 mg à environ 8000 mg d'un nîtroimidazole choisi Parmi les composés suivants- I 3-(l-méthyl-5-nitroimidazol 2 yl) 3 a a 4,5,67, a-hexahydro-1, 2-benzisoxazole; il 3-( 1-mthyl-5-nitroimidazo 12 2 yl)-cis S 5,6 di hydroxy-3 a, 4,5,6,7, 7 a-hexahydro-1,2- benzisoxazole; III 3-(l-mnthyl-5-nitroimidazo ol-22-yl)-cis- 6,7-di-. hydroxy-3 a,4,5,6,7,7 a-hexahydro-1,2-. benzisoxazole; e t IV 3-(l-xnéthyl-5-nitroimidazol 2 yl) -4,5-hexameeth- ylene-A -isoxazoline. 2 Composition de la revendication i o le nitroimidazole est la 3- 4,5-hexamélthylefne-A _ soazlie 3 Composition-de la revendication 1, ou le nitroi Midazole est le 3-( 1-méthyl-5-nitroimnidazol-2-yl)- 3 a,4,5,6,7 ',7 a-hexahydro-1,2-benzisoxazole. I 4 Médicament pour le traitement des infections de trypano- somiase chez l'homme et l'animal comprenant des doses unitaires pour l'alimentation d'une combinaison d'environ 5 mg/kg à environ 100 mg/kg de suramine et d'environ 10 mg/kg à environ 800 mg/kg d'un nitriimidazole choisi parmi les composés suivants: 3-( 1-m 4thyl-5-nitroimidazol-2-yl)-3 a,4,5,6,7,7 a- hexahydro-1,2-benzisoxazole; 3-( 1-méthyl-5-nitroimidazol-2-yl)-cis-5,6-di- hydroxy-3 a,4,5,6,7,7 a-hexahydro-l,2-benzisoxazole; 3-( 1-méthyl-5-nitroimidazol-2-yl)-cis-6,7-di- hydroxy-3 a,4,5,6,7,7 a-hexahydro-l,2-benzisoxazole; et 3-( 1-méthyl-5nitroimidazol-2-yl)-4,5-hexaméthylne -A 2-isoxazoline. Médicament de la revendication 4 comprenant des doses unitaires pour l'administration d'environ 10 mg/kg à environ mg/kg de suramine et d'environ 20 mg/kg à environ 320 mg/kg de nitriimidazole. 6 Médicament de la revendication 4 comprenant des doses unitaires pour l'administration d'environ 2 mg/kg à environ mg/kg de suramine et d'environ 20 mg/kg à environ 150 mg/kg d'un nitroimidazole. 7 Médicament de l'une des revendications 4,5 ou 6 o le nitro- imidazole est le 3-( 1-méthyl-5-nitroimidazol-2- yl)-3 a,4,5,6,7,7 a-hexahydro-l,2-benzisoxazole. 8 Médicament de l'une des revendications 4,5 ou 6 o le nitroimidazole est la 3-( 1-méthyl-5-nitroimidazol-2- Y)-45-hexamthylne-A-is Oxazline yl) -4,5-hexamî 4thylefle-A -isoxazoline. 9 Composition comprenant de 100 mg à environ 2500 mg de suramine et de 1000 mg à environ 8000 mg d'un nitro- imidazole choisi parmi ceux qui sont énumérés dans la revendication 1, lorsqu'on l'utilise dans le traitement des infections de trypanosomiase chez l'homme et l'animal.