Brevet FR2508905A1 — publié le 19830107

La présente invention a pour objet de nouveaux dérivée de stilbène radioactifs marqués à l'iode, leur procédé de préparation et leur application aux dosages radiolmmunologi- ques, Elle a pour objet les dérivés de stilbène de formule générale I C HOB C O Q 9 O-(CH 2)3-CONH-R ( 1) CAH k CH 3 dans laquelle A et B représentent chacun de l'hydrogène ou représentent ensemble une double liaison et R représente le reste d'un acide aminé RNH 2 ou le reste d'un dérivé de ce dernier, ce reste étant accepteur d'iode. L'invention a plus particulièrement pour objet, les dérivés de stilbène radioactifs marqués à l'iode de formule générale I dans laquelle R représente le reste d'un acide aminé RNH 2 oule rested'un dérivé decedernier, choisi dans le groupement constitué par l'histidine, la tyrosine, l'histamine, la tyramine et le tyrosimate de méthyle marqués à l'iode 125 -ou 131 Parmi les produits de formule générale I, on citera notamment le dienestrol 4-0-monocarboxypropyl, couplé à l' ( 125 I) histamine de formule 2- dans laquelle le signe * indique qu'il s'agit d'iode 125 radioactif, lequel iode 125 peut être en position 2 ou 5; l'hexestrol 4-0-monocarboxypropyi, couplé à l' ( 125 I) histamine de formule dans laquelle le signe * indique qu'il s'agit d'iode 125 radioactif, lequel iode 125 peut être en position 2 ou 5. L'invention a également pour objet, un procédé de préparation répondant à la formule générale I ci-dessus. Ce procédé est caractérisé en ce que on fait réagir un produit de formule générale II C AH H H dans laquelle et dans ce qui suit, A et B ont les signi- fications précitées, avec un halogeéno butyrate d'alcoyle, en présence d'une base, et obtient l'éther de formule générale I Ii H A HR e O)(CH 2) 3-0 R 1 III -3- dans laquelle R 1 représente un radical alcoyle ayant au plus 6 atomes de carbone, dont on saponifie la fonction ester, Puis fixe sur la fonction acide du produjt résultant de for- mule III dans laquelle R 1 représente de l'hydrogène, un groupement activateur de la fonction carbonyle et obtient le produit de formule générale III C AH HO X t HB t o-(CH 2)3-? III CA 1 3 H 3 dans laquelle R 1 représente un groupement activateur de la fonction carbonyle que l'on fait réagir avec un acide aminé accepteur d'iode ou avec un dérivé d'un tel acide et obtient le produit cherché de formule générale I. Ce procédé est encore caractérisé en ce que l'acide aminé accepteur d'iode ou le dérivé d'acide aminé est choisi dans le groupe constitué par l'histidine, la tyrosine, l'histamine, la tyramine ou le tyrosinate de méthyle. on fixe sur la fonction acide du produit de formule générale III, dans laquelle R 1 représente de l'hydrogène, un groupement activateur de la fonction carbonyle, en faisant réagir le produit de formule III avec un halogénoformiate d'alcoyle, en présence d'une base tertiaire, en milieu anhydre et sous atmosphère inerte et obtient le produit de formule générale III III 4- dans laquelle R 1 est un groupement activateur de la fonction carbonyle représenté par un radical de formule -CO-O-ALK, ALK étant un radical alcoyle ayant au plus 6 atomes de carbone. Dans les conditions préférentielles de mise en oeuvre,-le procédé de l'invention est caractérisé par les points suivants: l'halogénobutyrate d'alcoyle que l'on fait réagir sur le produit de formule générale II est le bromobutyrate d'éthyle et on opère en présence de carbonate de potassium. on saponifie la fonction ester du composé de formule générale III, dans laquelle R 1 représente un radical alcoyle, au moyen dela soude méthanolique. -l'halogénoformiate d'alcoyle que l'on fait réagir avec le produit de formule générale III, dans laquelle R 1 représente de l'hydrogène, est le chloroformiate d'isobutyle-et l'on opère en présence de tri-n-butylamine, dans le dioxane anhydre et sous atmosphère inerte. l'acide aminé ou son dérivé que l'on fait réagir avec le produit de formule générale III C AH HO B \ 3 2 o B Ilt O-(CH 23@ O R 1 AH \ H 3 - dans laquelle R 1 représente un groupement activateur de la fonction carbonyle,-est l'histamine marquée à l'iode 125 ou 131,sous atmosphère inerte. La fixation de la fonction carbonyle du produit de formule générale III, dans laquelle R 1 représente de l'hydrogène, peut aussi être réalisée en faisant agir sur celui-ci le N-hydroxy succinimide ou le dicyclohéxylcar- bodiimide, générateur des groupements activateurs de ladite fonction carbonyle. Le procédé décrit permet d'obtenir au départ du dienestrol: dienestrol. 5- 1 i dienestrol 4-0-monocarboxypropyl couplé à l'( 125 I)- histamine de formule CH HO HO Q Q 30 (CH 2) 3-CONH-CH 2-CH D H 3 dans laquelle le signe * indique qu'il s'agit d'iode 125 radioactif, lequel iode 125 peut être en position 2 ou 5. au départ de l'hexestrol: l'hexestrol 4-0-monocarboxypropyl couplé à 1 '( 125 I) - histamine de formule CH HO D H c-(CH 23-C NH-CH 2-CH( l dans laquelle le signe * indique qu'il s'agit d'iode 125 radioactif, lequel iode 125 peut être en position 2 ou 5. L'invention a également pour objet l'application des produits de formule générale I, objet de l'invention, aux dosages radioimmunologiques du diénestrol, de l'hexestr ainsi que du diéthylstilbestrol, dans la bile, l'urine- les f'ces, le plasma et les tissus des animaux ou de l'homme, ainsi que dans les aliments des animaux ou de l'homme. L'invention a également pour objet à titre de pro- duits industriels nouveaux et notamment à titre de produit intermédiaires nécessaires à l'exécution du procédé de l'invention, les produits de formule générale III 2508905 - -6- CH 2) 3 COOR 1 dans laquelle A et B représentent chacun de l'hydrogène ou représentent ensemble une double liaison et R 1 représente de l'hydrogène, un radical alcoyle inférieur ou un groupement activateur de la fonction carbonyle. Ce groupement activateur de la fonction carbonyl peut être un radical de formule -CO-0-ALK, dans laquelle ALK représente un radical alcoyle ayant au plus 6 atomes de carbone. Parmi ces produits, on citera les produits suivants: le diénestrol 4-0monocarbéthoxypropyl de formule CH HO O O '-(CH 2)3 COOC 2 H 5 3 et l'hexestrol monocarbthoxypropyl de formule et l'hexestrol 4-0monocarbéthoxypropyl de formule COOC 2 H 5 -7 2508905 le diénestrol 4-0 G-monocarboxypropyl de formule CH HO HO H HO H 3 et l'ahexedroldeo-mixte dubdixyeropl de O moocrboule p CIC HOq H o-(H 2)- Oo H 23 , l'anhydride mixte du dixestrol 4-O-ronocarbox>,ypropyl ae avle f ormiate d dîso obutyl e domuefoml CH H HO H o-(CH 2)3- de départ utiles pour la préparation d'antigènesnécessai- res également aux dosages radioimmunologiques du diéthyl- stilbestrol, du diénestrol et d'hexestrol. Leur application en tant que telle fait également l'objet de la présente invention et est caractérisée en ce que l'on conjugue un de ces produits avec de l'albumine sérique bovine (BSA) ou avec de l'albumine sérique humaine (Hs A) et obtient l'antigène cherché. Dans des conditions préférentielles de mise en oeuvre l'application des produits de formule générale III, dans laquelle R 1 représente de l'hydrogène, est caractérisée par les points suivants: On fait réagir un produit de formule générale III, AH HO B BQ A 0-(CH 2)3 OR 1 III AH \H 3 dans laquelle, et dans ce qui suit, A et B ont des signi- fications déjà citées, et R 1 représente de l'hydrogène, en vue de l'activation de la fonction carbonyle avec un halogénoformiate d'alcoyle, en présence d'une base tertiai- re, en milieu anhydre et sous atmosphère inerte, Obtient l'anhydride mixte de formule III AH HO B B -(C 2)3 III CAH 8 - dans laquelle Ri représente un radical de formule -CO-O-Alk, Alk étant unradical alcoyle ayant au plus 6 atomes de carbone, que l'on conjugue avec l'albumine sérique bovine (BSA) ou humaine (HSA) et obtient l'antigène cherché. L'application des produits de formule générale III, notamment de ceux dans laquelle R 1 représente de l'hydrogène est encore caractérisÉ par les modes d'exécution suivants: l'halogéno formiate d'alcoyle que l'on fait réagir avec le produit de formule générale III, dans laquelle R 1 représente de l'hydrogène, est le chloroformiate d'isobutyle et on opère en présence de tri-n-butylamine, dans le dio- xane anhydre et sous atmosphère inerte vers + 4 C. on fait réagir l'anhydride mixte de formule générale III, dans laquelle R 1 représente un radical de formule -CO-0-Alk, avec l'albumine sér'ue bovine ou humaine en ayant préala- blement dissout cette dernière dans un mélange eau-dioxane sous atmosphère inerte. L'application décrite permet d'obtenir respectivement au départ du dienestrol 4-0-monocarboxypropyl de formule CH HO O %H les antigènes de formules (BSA) IV (CH 2) 3-CG - dans laquelle N = 20 à 40; et CH HO- C)ci -(CH 2)3- Q 250 R 905 v -QIS ) n dans laquelle N = 20 à 40. et au départ de l'hexestrol 4-0-monocarboxypropyl de for- mule HO 0 J -(CH 2)3- COOH ou les antigènes de:formule - -(BSA) VI dans laquelle N = 20 à 40 11 - CH yo 10c I 1 0-(c H 2)3-co -(HSA) Vil dans laquelle N = 20 à 40 L'invention à également pour objet, à titre des pro- duits industriels nouveaux, les antigènes obtenus lors de l'application décrite ci-dessus, et notamment les produits de formules générales IV, V, VI et VII précités: L'invention a également pour objet l'application des antigènes ci-dessus, à la préparation des anticorps. Les produits de formule générale I, objet de l'in- vention et notamment le dienestrol-0-monocarboxypropyl ( 1251) histamine et l'hexestrol-0-monocarboxypropyl ( 125 i) histamine sont utilisés comme déjà dit, lors du dosage radioimmunologique du diînestrol, de l'hexestrol, ainsi que du diéthylstilbestrol. Ils permettent le dosage de ces stilbèfles dans les liquides et tissus biologiques et dans l'alimentation humai- ne et animale. Le dosage radioimmunologique a été effectué selon la méthode décrite par S A Bergson et R S Yalow HORMONE 4 p 557 ( 1964) et G E Abraham "Journal of Chemical endocri- nonal metab 29 p 866 ( 1969). Les antigènes de formule IV, V, VI et VII précités, également objet de l'invention, sont utilisés au dévelop- pement d'anticorps Injectés chez l'animal en présence d'un adjuvant, ils permettent en effet d'obtenir chez celui-cides sérums contenant des anticorps contre l'hexestrol, le diénestrol ainsi que contre le diéthylstilbestrol. Les exemples suivants illustrent l'invention sans toutefois la limiter. Exemple I: 4-0-monocarboxyvpropyl didnestrol couplé à l'( 25 I) histamine. 12 - Stade A: Dienestrol-4-O-monoéthoxycarbonvl ro Dvl On prépare une solution de 20 g de dienestrol, 7 g de bromobutyrate d'éthyle et 4,6 g de carbonate de potassium sec dans 300 ml d'acétone, porte cette solution au reflux pendant 17 heures environ, la laisse refroidir ensuite à température ambiante, la verse dans l'eau, extrait à l'acé- tate d'éthyle, lave les phases organiques réunies, à l'eau, les sèche, traite au charbon actif, évapore le solvant et sèche sous pression réduite On recueille 24,4 g d'un résidu semi cristallisé que l'on purifie par chromatographie sur silice sous pression, avec élution par le mélange:chlorure de méthylène/méthanol ( 95/5) et obtient 6,36 g de produit cherché, P F vers 86 C. Spectre IR (chloroforme) -1 OH vers 3590 cm C = O vers 1728 cm Aromatique vers 1610 em 1590 cm -1 1573 cm -1 1510 cm Stade B: Dienestrol 4-0-monocarboxypropyl. On introduit dans 155 ml de méthanol 6,16 g de produit obtenu au stade précédent et 31 ml de soude 2 N, porte la solution résultante au reflux pendant 1 heure, après refroidissement à température ambiante, on amène le p H à 5-6 par addition de 7 ml d'acide acétique, verse le mélange réactionnel dans l'eau, extrait à l'acétate d'éthyle, réunit les phases organiques, les lave à l'eau, les sèche, traite au charbon actif, évapore le solvant concentre à sec sous pression réduite et obtient 5,48 g de produit brut attendu On purifie ce produit par le passage au sel de sodium et le retour à 1 'acide libre et obtient ,16 g de produit cherché; P F = 158 C _Anlyse: C 22 H 2404 C % H% Calculé 74,98 6,86 Trouvé 74,7 7,0 Stade C: Anhydride mixte de formiate d'isobutyle et diénestrol-4-0-monocarboxypropyl 13 -2508905 On mélange succéssivement 2,5 mg de produit préparé au stade précédent, 50 1 i de dioxane, 10 il d'un mélange dioxane-tri-n-butylamine ( 5: 1) et 10 pl de mélange dioxane -chloroformiate d'isobutyle ( 10: 1) La solution est agitée pentaxr O minut es sous atmosphère inerte, puis on ajoute 3,4 mi de dioxane On obtient une solution du produit cheichl que l'on utilise telle quelle pour le stade suivant de la synthèse. Stade D: Dienestrol 4O-monocarboxypropyl couplé à l'( 125 i) histamine. Iodation de l'histomine: On prépare 10 pl d'une solution d'histamine 10 4 M dans une solution tampon de phosphate de sodium 0,5 M de p H 8, puis on ajoute successivement I m Ci de iodure 125 de sodium (activité spécifique 2000 Ci/m mol) dans 5 il d'eau distillée et 50 g de chloramine T dans 10 Il d'eau distillée. On agite le mélange réactionnel pendant 75 secondes, ajoute une solution de 300 p g de métabisulfite de sodium dissous dans 10 pl d'eau distillée, et obtient une solution aqueuse du produit cherché, Rf = 0,1 (chromatographie sur silice, système de solvant méthanol-triéthylamine 98: 2) Condensation: - On ajoute à cette solution 50 pl de la solution d'an- hydride mixte obtenue au stade précédent, agite et laisse à l'obscurité pendant deux heures à une température proche de 4 C On dilue ensuite le mélange réactionnel dans 0,3 ml d'une solution aqueuse de bicarbonate de sodium 10-1, extrait par 1,5 ml de chlorure de méthylène, évapore la phase organique sous atmosphère inerte, reprend le résidu par 100 de chlorure de méthylène, chromatographie sur silice et en él par le mélange dibroforme-méthanol ( 97: 3) et réunit les fractions contenant le produit Le produit obtenu présente une activité totale de 100 i Ci. Exemple II: Hexestrol 4-0-monocarbox Yropyl couplé à 1 ' ( 125 I) histamine. En procédant comme décrit dans l'exemple I et au départ de l'hexestrol on obtient: 6,7 g d'hexestrol 4-0-monoethoxycarbonyl proiyl. PF vers 1100 C Spectre IR (chloroforme) 14 - -1 OH vers 3590 cm 1 C = O vers 1725 cm Aromatique 1610 cm 1 -1 1594 cm -1 1580 cm 1508 cm 4,5 g d'hexestrol 4-0-monocarbcxypropyl. PF vers 1830 C Analyse pour C 22 H 2804 Calculé C % H % Calculé 74,13 7, 92 Trouvé 74,4 8,1 l'anhydride mixte de l'hexestrol 4-0-monocarboxypropyl avec le formiate d'isobutyle 125 de l'hexestrol 4-0-monocarboxypropyl couplé à l'( I) histanine, pré sentant une activité totale de 100 A Ci. Exemple III: Préparation d'antigène par conjugaison du dienestrol 4-0monocarboxypropyl et d'albumine sérique bovine (BSA). Stade A: L'anhydride mixte du dienestrol 4-0-mono- carboxypropyl avec le formiate d'isobutyle. On dissout 352 mg de dienestrol 4-0-monocarboxypropyl dans 10 ml de dioxane, puis ajoute 0,46 ml de tri-n-butylami- ne et agite le mélange sous atmosphère inerte On abaisse la température à 12 C et ajoute 0,126 ml de chloroformiate d'isobutyle et maintient l'agitation pendant 30 minutes à 120 C On obtient la solution du produit cherché que l'on utilise telle quelle pour le stade suivant. Stade B:Dissolution de la BSA. On prépare un mélange de 44 ml d'eau glacée et de 4 ml de dioxane, puis ajoute, sous agitation et à une température voisine de O C, 1,54 g d'albumine sérique bovine On transverse ensuite la solution résultante dans un dispositif à dialyse et laisse pendant 72 heures en dialyse à une température située entre 1 et 5 C, avec un contre-courant de 30 1 d'eau On extrait ensuits le dialysat obtenu (p H 7,9) par le chloroforme glacé, sépare les phases organiques, les lave à l'eau, On réunit les phases aqueuses, les congèle, puis - les lyophilise pendant 20 heures sous vide de 0,01 mm Hg, et obtient 1,4 g de produit. Stade C: Conjugaison: On dissout à 09 C ce résidu dans 40 ml de dioxane glacé, puis ajoute 1,35 ml de Na OH N et aussitôt l'anhydride mixte préparé au stade A On ajuste le p H à 8,9 par addition d'acide chlorhydrique N/10, abandonne le mélange réactionnel pendant 4 heures sous agitation, à une température proche de 0 C On le soumet ensuite à la dialyse pendant 18 heures, à une température comprise entre 10 et 50 C, à contre-courant d'eau Après le passage de 30 1 d'eau le dialysat est trans- vasé, acidifié à p H 4,1 par l'acide chlorhydrique N puis N/10, congelé pendant une nuit vers -18 C, puis dégelé lentement sans dépasser + 5 C. Un précipité se forme et la solution surnageant est éliminée par filtration Le précipité est repris par 100 ml d'une solution de bicarbonate de sodium à 1 %, et la solution est soumise à la dialyse pendant 72 heures dans les condi- tions précitées On extrait ensuite le dialisat par le chloroforme glaçé, et lave la phase organique à l'eau, les phases aqueuses réunies sont congelées, puis lyophilisées pendant 20 heures sous un vide de O,O 1 mm Hg pour donner 1,4 g d'antigène cherchée Ce produit contient 37 à 38 groupes dienestrol liés par mole. Exemple IV: Préoaration d'antig par conjuaison d'hexes- trol-4-O-monocarboxvropyl et d'albumine séripue bovine (BSA). En procédant comme décrit à l'exemple III, en partantde 356 mg d'hexestrol-4-O-monocarboxypropyl et de 1,54 g d'albumine sérique bovine (BSA), on obtient 1,3 g d'antigène cherché Ce produit contient 31 à 32 groupes d'hexestrol par mole. Exemple V: Préparation d'antigène par conjugaison d'hexestrol -4-O-monocarboxy Mropyl et d'albumine séripue humaine (HSA). En procédant comme décrit à l'exemple III, en partant de 356 mg d'hexestrol-4-0-monocarboxypropyl et 1,54 g d'albumine sérique humaine (HSA) on obtient 1,17 g de l'an- tigène cherché Ce produit contient 21 groupes dhexestrol liés par mole. 16 _ REVENDICATIONS 1) Dérivés de stilbène radioactifs marqués à l'iode 131 ou 131-de formule générale I C AH HO O B 0-(CH 2)3-CONH-R I) AH C 3 dans laquelle A et B représentent chacun de l'hydrogène ou représentent ensemble une double liaison et R représente le reste d'un acide aminé RNH 2 ou le reste d'un dérivé de ce dernier, ce reste possédant un groupe accepteur d'iode et étant marqué à l'iode 125 ou 131. 2) Dérivés de stilbène radioactifs marqués à l'iode de formule générale I selon la revendication 1 dans laquel- le R représente le reste d'un acide aminé R NH 2 ou le reste d'un dérivé de ce dernier choisi dans le groupe constitué par l'histidine, la tyrosine, l'histamine, la tyramine et le tyrosynate de méthyle marqués à l'iode 125 ou 131. ( 12) le diénestrol 4-0-monocarboxypropyl, couplé à 1 ' ( 12 I)histamine de formule dans laquelle le signe * indique qu'il s'agit d'iode 125 radioactif, lequel iode 125 peut être en position 2 ou 5; 4) l'hexestrol 4-O-monocarboxypropyl, couplé -à l' ( 15 l) histamine de formule CH H 2 HO H HHO O-(CH 2)3-CONH-CH 2-CH yjl H 3 dans laquelle le signe * indique qu'il s'agit d'iode 125 radioactif, lequel iode 125 peut être en position 2 ou 5, ) Procédé de préparation des produits définis aux revendications 1, 2, 3 ou 4, caractérisé en ce que l'on fait réagir un produit de formule générale II CH AH HO XB Q OH II BAHO H CA dans laquelle et dans ce qui suit, A et B ont les signi- fications précitées, avec un halogéno butyrate d'alcoyle, en présence d'une base et obtient l'éther de formule générale III C AH HO_ AH B o-(CH 2)3- R 1 III H 3 _ 17 _ dans laquelle R 1 représente un radical alcoyle ayant au plus 6 atomes de car'one, dont on saponifie la fonction ester, puis fixe sur la fonction acided U produit résultant de for- mule I Ii dans laquelle R 1 représente de l'hydrogène, un groupement activateur de la fonction carbonyle-et obtient le produit de formule générale II CH AH HO B- B O -(CH 2)3 R III CAR XCH 3 dans laquelle R 1 représente un groupement activateur de la fonction carbonyle, que l'on fait réagir avec un acide aminé accepteur d'iode ou avec un dérivé d'un tel acide et obtient le produit cherché de formule générale I. 6) Procédé selon la revendication 5 caractérisé en ce que l'acide aminé accepteur d'iode ou le dérivé d'acide aminé est choisi dans le groupe constitué par l'histidine, la tyrosine, l'histamine, la tyramine ou le tyrcsinate de méthyle. 7) Procédé selon les revendications 5 et 6, caractérisé en ce que l'on fixe sur la fonction acide du produit de formule générale III, dans laquelle R 1 représente de l'hydrogène, un groupement activateur de la fonction carbonyle, en faisant réagir le produit de formule III avec un halogénoformiate d'alcoyle, en présence d'une base tertiaire, en milieu anhydre et sous atmosphère inerte et obtient un produit de formule générale III CH AH HO B O o-(CH 2)3e R dans laquelle R 1 est un groupement activateur de la fonction carbonyle représenté par un radical de formule -CO-O-ALK, ALK étant un radical alcoyle ayant au plus 6 atomes de carbone. 8) Procédé suivant l'une quelconque des revendications 5 à 7, caractérisé en ce que l'halogénobutyrate d'alcoyle que l'on fait réagir sur le produit de formule générale II est le bromobutyrate d'éthyle et on opère en présence dé carbonate de potassium. 9) Procédé suivant l'une quelconque des revendications 5 à 8, caractérisé en ce que l'on saponifie la fonction ester du composé de formule générale III, dans laquelle R 1 représente un radical alcoyle, au moyen de la soude méthanolique. ) Procédé suivant l'une quelconque des revendications 5 à 9, caractérisé en ce que l'halogénoformiate d'alcoyle que l'on fait réagir avec le produit de formule générale III, dans laquelle R 1 représente de l'hydrogène, est le chloroformiate d'isobutyle et l'on opère en présence de tri-n-butylamine, dans le dioxane anhydre et sous atmosphère inerte. 11) Procédé suivant l'une quelconque des revendications à 10, caractérisé en ce que l'acide aminé-ou son dérivé que l'on fait réagir avec le produit de formule générale III CH v"AH HO B B O-(CH 2)_ R CAHv -(CH> 3 -OR 1 III CAH \CH 3 dans laquelle R 1 représente un groupement activateur de la fonction carbonyle,-est l'histamine marquée à l'iode 125 ou 131 sous atmosphère inerte. 12) Procédé suivant l'une quelconque des revendications 5 à 11, caractérisé en ce que b 1 _ 20 _ le produit de départ étant le dienestrol, on obtient 1 l dienestrol 4-0-monocarboxypropyl couplé à l'( 125 I)- histamine de formule CH H HOQ to-(CH 2), -C C Ho 3 Nl Nl-CH 2-CH S H 3 dans laquelle le signe * indique qu'il s'agit d'iode 125 radioactif, lequel iode 125 peut être en position 2 ou 5. 13) Procédé suivant l'une quelconque des revendications à 11, caractérisé en ce que le produit de départ étant l'hexestrol, on obtient 12 , l'hexestrol 4-O-monocarboxypropyl couplé à 1 l'( 125 I) - histamine de formule Cl H Hi HO () H C) O-(CH 2 C 3-CONH-CHI 2 C H dans laquelle le signe * indique qu'il s'agit d'iode 125 radioactif, lequel iode 125 peut être en position 2 ou 5. 14) Application des produits tels que décrits aux revendications 1,2,3 et 4 aux dosages radioimmunologiques du dienestrol, de l'hexestrol ainsi que du diéthylstilbestrol, dans les liquides et les tissus biologiques et dans l'ali- mentation humaine et animale.