Brevet FR2510406A1 — publié le 19830204

La présente invention concerne des compositions perfectionnées pour inhiber l'agrégation des plaquettes sanguines. Plusieurs agents antiinflammatoires non stéroidiques tels que l'acide acétylsalicylique (aspirine), le zomépirac, l'ibuprofène, le naproxène, la sulfinpyrazone, la phénylbutazone et l'indométhacine, se sont révélé être des inhibiteurs de l'agrégation des plaquettes sanguines. Le mécanisme d'action présumé de ces agents est l'inhibi- tion de l'enzyme des plaquettes sanguines appelé cyclo- oxygénase, qui aboutit finalement à l'inhibition de l'agrégation des plaquettes induite par le collagène. L'aspirine et la sulfinpyrazone ont été évaluées clinique- ment dans la lutte préventive contre l'apoplexie et la crise cardiaque et l'aspirine a été adoptée pour prévenir des attaques ischémiques cérébrales transitoires et l'apoplexie. L'anagrelide, répondant au nom chimique de 6,7-dichloro-1,5-dihydroimidazo/ 2,1-b_ 7 quinazoline-2 ( 3 H)- one et qui répond à la formule: H C Cl a été récemment rapporté comme un puissant inhibiteur de l'agrégation des plaquettes induite par divers agents. Cette puissante activité a été observée in vitro dans un plasma riche en plaquettes, ex vivo à la suite de l'inges- tion orale chez des animaux et chez plusieurs modèles animaux in vivo à la suite d'une administration orale Il a été démontré également que l'anagrelide inhibait l'agré- gation lorsqu'il était administré par voie orale à l'homme (Circulation 62: III-277, 1980) L'anagrelide semble différer remarquablement des agents anti-inflammatoires non stéroidiques en ce qu'il produit un effet à large spectre, c'est-à-dire qu'il inhibe non seulement la libé- ration et l'agrégation induites par le collagène et la seconde phase de l'agrégation induite par l'ADP (adénosine- diphosphate), mais aussi la première phase d'agrégation induite par l'ADP de même que l'agrégation induite par la thrombine, l'acide arachidonique et un complexe antigène- anticorps (Thrombosis Research 15: 373-388, 1979) Les études récentes indiquent que l'anagrelide agit en partie par inhibition sélective de la phosphodiestérase de l'AMP (adénosine-monophosphate) cyclique à faible valeur K des m plaquettes sanguines (J Lab Clin Med 95 ( 2): 241-257, 1980). On a trouvé que certains agents anti-agrégation des plaquettes sanguines montraient une interaction sur- additive lorsqu'ils étaient associés Des exemples repré- sentatifs de ces associations sur-additives sont donnés ci-après: 1 Platelets and Thrombosis, A Scriabine et S Sherry (éditeurs), Baltimore, University Park Press, 1974, pages 247-262, mentionne page 256 qu'une association entre l'acide acétylsalicylique et la prostaglandine E 1 déploie une interaction sur-additive contre l'agrégation des plaquettes induite tant par le collagène que par l'ADP. 2 Fed Proc 38 ( 3): 419 ( 1979) rapporte qu'une interaction sur-additive est manifestée entre des 3 associations d'anagrelide et de prostaglandine 2 et des associations d'anagrelide et de prostaglandine I 2-S (anaet des associations d'anagrelide et de prostaglandine 12-S (ana- logue 6,9-thia de la prostaglandine 12) relativement à l'agrégation induite par l'ADP ou par le collagène. 3 Br J Exp Path 58: 474-477 ( 1977) fait connaître un effet sur-additif in vivo entre l'acide acétylsalicylique et l'agent antithrombotique SH 1117, relativement à l'agrégation induite par l'ADP. 4 J Lab Clin Med 95 ( 2): 241-257 ( 1980) révèle que l'anagrelide exalte l'effet inhibiteur de la prostaglandine E 1 sur la fonction des plaquettes et sur l'élévation induite par la prostaglandine E 1 du taux de base du 3 ',5 '-adénosine-monophosphate cyclique (c-AMP). Le brevet des Etats-Unis d'Amérique N 4 080 447 révèle l'interaction suradditive entre l'acide acétylsalicylique et la ticlopidine relativement à une activité anti-agrégation des plaquettes sanguines. 6 Le brevet des Etats-Unis d'Amérique N 4 206 214 révèle qu'une association de dipyridamole et de sulfinpyrazone exerce un effet antithrombotique sur- additif. 7 Le brevet français N 2 390 959 (Farmdoc 14511 B/08) fait connaître entre autres l'activité anti- agrégation sur-additive de l'acide acétylsalicylique et du dipyridamole. 8 Acta Univ Carol Med Monogr 72: 199- 210 fait connaître une interaction sur-additive in vitro avec certaines associations de cinq médicaments, à savoir métergoline, dipyridamole, acide acétylsalicylique, nimer- goline et 5-adénosylméthionine. On vient de découvrir conformément à la pré- sente invention que l'on observait une activité sur- additive contre l'agrégation des plaquettes sanguines en associant l'anagrelide avec les agents anti-inflammatoires non stéroldiques qui sont des inhibiteurs de cyclo-oxygénase plaquettaire Les effets sur- additifs de ces associations, déployés dans des tests tant in vitro qu'in vivo, permet- tent de mettre au point de nouvelles compositions et de nouveaux procédés de traitement tant thérapeutique que prophylactique de la thrombose et d'autres troubles liés à l'agrégation des plaquettes sanguines. Sur les dessins annexés: la figure-1 reproduit une analyse isobologra- phique montrant les activités sur-additives contre l'agré- gation des plaquettes de plusieurs mélanges d'anagrelide et d'acide acétylsalicylique; la figure 2 est une analyse isobolographique reproduisant les activités sur-additives contre l'agréga- tion des plaquettes de plusieurs mélanges d'anagrelide et d'ibuprofène; la figure 3 est une analyse isobolographique montrant les activités suradditives contre l'agrégation des plaquettes de plusieurs mélanges d'anagrelide et de naproxène; la figure 4 est une analyse isobolographique montrant les activités sur-additives contre l'agrégation des plaquettes de plusieurs mélanges d'anagrelide et de zomépirac; la figure 5 est une analyse isobolographique montrant les activités sur- additives contre l'agrégation des plaquettes de plusieurs mélanges d'anagrelide et de sulfinpyrazone; et la figure 6 montre l'interaction sur-additive de l'anagrelide et de l'acide acétylsalicylique sur la thrombose induite par un biolaser dans la microcircula- tion en chambre auriculaire de lapin. Selon l'un de ses aspects, la présente inven- tion a trait à l'inhibition de l'agrégation des plaquettes sanguines par administration orale à un mammifère néces- sitant un tel traitement, simultanément ou successivement, d'anagrelide et d'un agent anti-inflammatoire non stéroîdi- que capable d'inhiber la cyclo-oxygénase des plaquettes sanguines. Selon un autre de ses aspects, l'invention a trait à des compositions pharmaceutiques orales compre- nant, comme ingrédient actif, de l'anagrelide et un agent anti-inflammatoire non stéroidique capable d'inhiber la cyclo-oxygénase des plaquettes sanguines, lesdites compo- sitions exerçant une activité inhibitrice (sur-additive) améliorée sur l'agrégation des plaquettes sanguines. La Demanderesse a découvert le fait surprenant que lorsque de l'anagrelide et un agent anti-inflammatoire non stéroidique capable d'inhiber la cyclo-oxygénase des plaquettes sanguines sont administrés ensemble à un mammi- fère, notamment à un patient humain, une puissante activité inhibitrice sur-additive sur l'agrégation des plaquettes sanguines est produite, les effets de cette association contre l'agrégation étant supérieurs à la somme des effets produits par chaque composant agissant seul Cette inter- action sur-additive inattendue rend possible une activité anti-agrégation extrêmement puissante pour le traitement prophylactique et thérapeutique de la thrombose et d'autres troubles associés à l'agrégation des plaquettes A titre de variante, l'effet sur-additif permet de réduire sensi- blement la dose d'anagrelide qui serait normalement néces- saire pour atteindre un niveau déterminé d'activité anti- agrégation, en atténuant ainsi les effets secondaires qui pourraient être produits avec de fortes doses de ce médi- cament. L'effet sur-additif de l'anagrelide et d'inhi- biteurs de cyclo-oxygénase anti-inflammatoires non stérol- diques a été démontré in vivo contre l'agrégation des plaquettes induite par le collagène dans un plasma de lapin riche en plaquettes par la méthode de la densité optique de Born (J Physiol 162: 67 P, 1962) modifiée par Mustard et collaborateurs (J Lab Clin Med 64: 548, 1964) En outre, l'association d'un anagrelide et d'acide acétylsalicylique a été évaluée in vivo dans le modèle de thrombose intravasculaire impliquant un biolaser et une chambre auriculaire de lapin (Platelets and Thrombosis, A Scriabine et S Sherry (éditeurs), Baltimore, University Park Press, 1974, page 247). Bien que, par commodité, le terme simple d'"anagrelide" ait été ordinairement utilisé dans le pré- sent mémoire, il est bien entendu que l'invention couvre l'utilisation de sels d'addition d'acides non toxiques pharmaceutiquement acceptables de l'anagrelide et le terme "anagrelide" englobe par conséquent tous ces sels ainsi que le composé de base Des sels convenables de l'anagrelide sont révélés dans le brevet des Etats-Unis d'Amérique N 3 932 407 et comprennent le chlorhydrate, le bromhydrate, l'iodhydrate, des (alkyle inférieur)sulfates, des (alkyle inférieur) et arylsulfonates, le phosphate, le sulfate, le maléate, le fumarate, le succinate, le tartrate et le citrate Le chlorhydrate d'anagrelide est un sel d'addi- tion d'acide particulièrement apprécié. De même, bien que les termes simples tels que "acide acétylsalicylique", "zomépirac", "ibuprofène", "naproxène", "sulfinpyrazone", "phénylbutazone" et "indo- méthacine" soient utilisés dans le présent mémoire pour désigner certains inhibiteurs de cyclo-oxygénase anti- inflammatoires non stéroidiques appréciés, il est bien entendu que l'invention couvre l'utilisation de sels non toxiques pharmaceutiquement acceptables de ces agents. Tous les agents mentionnés ci-dessus peuvent former des sels avec des bases pharmaceutiquement acceptables et ces sels sont couverts, sauf spécification contraire, par le nom générique du composé de base Le terme sulfinpyrazone est le nom générique désignant la 1,2-diphényl-4-( 2-phényl- sulfinyléthyl)pyrazolidone-3,5-dione qui est décrite ainsi que ses sels dans le brevet des Etats-Unis d'Amérique N 2 700 671 Le terme indométhacine est le nom généri- que désignant l'acide 1-( 4-chlorobenzoyl)-5-méthoxy-2- méthyl-1 H-indole-3-acétique qui est décrit dans le brevet des Etats-Unis d'Amérique N 3 161 654 Le terme naproxène est le nom générique de l'acide d-2-( 6-méthoxy-2-naphtyl)- propionique qui est décrit ainsi que ses sels (y compris le sel de sodium qui est préconisé) dans le brevet des Etats-Unis d'Amérique N 3 904 682 Le terme phénylbutazone est le nom générique de la 4-butyl-1,2-diphényl-3,5- pyrazolidine-dione qui est décrite dans le brevet des Etats-Unis d'Amérique N 2 562 830 Le terme ibuprofène est le nom générique de l'acide 2-( 4-isobutylphényl)- propionique qui est décrit dans le brevet des Etats-Unis d'Amérique N 3 385 886 Le terme zomépirac est le nom générique donné à l'acide 5-(p-chlorobenzoyl)-1,4-diméthyl- pyrrole-2-acétique qui est décrit de même que ses sels (y compris le sel de sodium qui est préconisé) dans le brevet des Etats-Unis d'Amérique N 3 752 826. Dans la mise en oeuvre de la présente inven- tion, l'anagrelide et l'agent anti-inflammatoire non stérol- dique sont de préférence administrés oralement Dans la préparation de formes posologiques orales solides, l'une quelconque des substances pharmaceutiques usuelles telles que des agents de granulation, des lubrifiants, des liants, des agents de désintégration, des amidons, des sucres, etc. peut être utilisée pour préparer des formes posologiques telles que des comprimés, des capsules ou des poudres. Pour des préparations orales liquides, on peut utiliser l'eau, des glycols, des huiles, des alcools, etc, ainsi que des agents colorants, des préservateurs, des parfums, etc, pour préparer des solutions, des élixirs, des sirops, des suspensions, etc. Le rapport en poids de l'agent anti-inflamma- toire non stéroldique à l'anagrelide qui a pour résultat l'interaction sur-additive peut varier entre de larges limites. Les rapports précis que l'on doit utiliser pour une association particulière peuvent être aisément déterminés par la méthode classique de mesure de l'agré- gation in vitro (densité optique) telle que décrite ci- dessous Pour les associations préférées, les rapports de l'agent antiinflammatoire à une partie en poids d'anagrelide sont les suivants: (a) Ibuprofène 67-3524 parties en poids, de préférence 150-2400 parties en poids (b) Naproxène 261-831 parties en poids, de préférence 275 à 750 parties en poids (c) Acide acétylsalicylique -2468 parties en poids, de préférence 150-2400 parties en poids (d) Zomépirac 22-178 parties en poids, de préférence 25-175 parties en poids (e) Sulfinpyrazone 262-3013 parties en poids, de préférence 400-3000 parties en poids. Les doses individuelles d'agents anti-inflamma- toires non stéroidiques préconisées et d'anagrelide que l'on préfère pour des êtres humains sont les suivantes: Anagrelide: 0,025-1,0 mg, de préférence 0,1-0,5 mg, notamment 0,25 mg Acide acétylsalicylique: 150-600 mg Ibuprofène: 150-600 mg Sulfinpyrazone: 100-400 mg Naproxène: 125-375 mg Zom 4 pirac: 50-200 mg Des doses avantageuses d'autres composants antiinflammatoires convenables peuvent être aisément déterminées d'après la littérature, c'est-à-dire les doses normales utilisées à des fins antiinflammatoires La dose particulière d'anagrelide et de composant antiinflammatoire que l'on doit administrer varie naturellement en fonction de facteurs tels que l'hôte en traitement (c'est-à-dire l'espèce animale, l'âge, le poids, l'état de santé général), la gravité des symptômes, la maladie particulière en trai- tement, le type (éventuel) de traitement simultané avec d'autres médicaments, la fréquence du traitement, etc. Ces doses sont de préférence administrées jusqu'à deux fois par jour et notamment une fois par jour. Pour obtenir une association sur-additive, on choisit des doses de l'agent anti-inflammatoire non stérol- dique et d'anagrelide de manière que ( 1) le rapport en poids de l'association se situe dans la plage synergique de rapports en poids indiquée ci-dessus et que ( 2) les doses des composants se situent dans les plages acceptables de doses efficaces pour l'hôte en traitement Par exemple pour des patients humains, la dose préconisée d'anagrelide va d'environ 0,025 mg à 1 mg, de préférence de 0,1 à 0,5 mg et elle est notamment de 0,25 mg environ La dose d'acide acétylsalicylique, par exemple, à associer avec l'anagrelide est choisie de manière que ( 1) le rapport en poids de l'acide acétylsalicylique à l'anagrelide soit d'environ -2468 (de préférence d'environ 150-2400) parties en poids d'acide acétylsalicylique par partie en poids d'anagrelide et que ( 2) la dose d'acide acétylsalicylique se situe entre des limites sûres et efficaces pour des patients humains, c'est-à-dire 150-600 mg Ainsi, une association convenable pourrait comprendre 0,25 mg d'anagrelide et 150 mg d'acide acétylsalicylique De même, des doses humaines convenables d'autres associations appréciées sont indiquées ci- après: Ibuprofène: 0,25 mg d'anagrelide mg d'ibuprofène Naproxène: 0,25 mg d'anagrelide mg de naproxène Zomépirac: 0,5 mg d'anagrelide mg de zomépirac Sulfinpyrazone: 0,25 mg d'anagrelide mg de sulfinpyrazone Attendu que l'utilisation d'anagrelide et de l'agent anti- inflammatoire non stéroidique en association produit un effet sur-additif anti-agrégation, on considère que les doses d'anagrelide et/ou d'agent anti-inflammatoire utilisées peuvent être celles qui n'ont elles-mêmes qu'un minimum d'efficacité dans l'inhibition de l'agrégation des pla- quettes. Bien que la présente invention envisage que l'anagrelide et les composants anti-inflammatoires puissent être administrés séparément, il est particulièrement avan- tageux et pratique de formuler des compositions d'anagre- lide et de l'agent anti-inflammatoire sous une forme posologique unitaire, c'est-à-dire sous la forme d'unités physiquement distinctes qui contiennent chacune la quantité d'anagrelide et d'agent antiinflammatoire calculée pour produire l'effet sur-additif désiré, conjointement avec tout excipient pharmaceutique désiré Ces formes unitaires peuvent être des capsules, des pilules, des comprimés, des sachets de poudre, des cachets, des cuillerées à café, des cuillerées à soupe, etc. Les compositions et les procédés de la présente invention peuvent être utilisés de la même manière que les agents connus s'opposant à l'agrégation des plaquettes sanguines Ainsi, l'anagrelide et l'agent anti-inflammatoire non stéroidique peuvent être ajoutés à du sang entier pour des applications in vitro telles que la conservation de sang entier dans des banques de sang et à du sang entier destiné à être utilisé dans des machines coeur-poumon. Des applications in vivo comprennent l'administration à des êtres humains et à d'autres animaux tels que des souris, des rats, des chiens, des chats, des chevaux, etc pour empêcher la formation d'un caillot, par exemple à la suite d'une intervention chirurgicale (pour prévenir la thrombose post-opératoire), chez des patients traités en gériatrie pour prévenir des attaques ischémiques transitoires et dans la prophylaxie à long terme à la suite d'infarctus du myocarde et de crises d'apoplexie. Tests de détermination de l'activité anti-agrégation des plaquettes sanguines A Test in vitro Les médicaments utilisés dans cette étude ont été le chlorhydrate d'anagrelide, le sel de sodium de zomépirac, le naproxène, l'acide acétylsalicylique, l'ibuprofène et la sulfinpyrazone. L'étude des activités inhibitrices d'agréga- tion des plaquettes des associations anagrelide/zomépirac, anagrelide/naproxène, anagrelide/acide acétylsalicylique, anagrelide/ibuprofène et anagrelide/sulfinpyrazone, ainsi que des médicaments individuels, a été conduite selon la méthode classique de mesure de l'agrégation par la densité optique selon Born (J Physiol 162: 67 P-68 P, 1962) modi- fiée par Mustard et collaborateurs (J Lab Clin Med_ 64: 548-559, 1964), avec agrégation des plaquettes induite par le collagène dans un plasma riche en plaquettes de lapin. On a préparé un plasma riche en plaquettes à partir de sang de lapin prélevé dans des seringues conte- nant 3,8 % de citrate de sodium ( 1 ml de citrate/9 ml de sang) et en effectuant ensuite une centrifugation d'une durée de 10 minutes à 920 tr/min ( 200 x g) Toute la verrerie utilisée pour la préparation du plasma riche en plaquettes était traitée avec une silicone Du collagène ( 0,05 ml de tendon d'Achille de boeuf en solution de Tyrode (voir Evans et collaborateurs, J Exp Med 128: 877-894, 1968) a été utilisé pour induire l'agrégation dans des échantillons de plasma riche en plaquettes de 0,9 ml Les composés testés ou le véhicule ( 0,005 ml) ont été ajoutés à l'aide d'une seringue en microlitres à l'échantillon de plasma riche en plaquettes 3 minutes avant l'addition du collagène On a évalué l'inhibition de l'agrégation des plaquettes en comparant les variations maximales de densité optique d'échantillons de plasma riche en plaquettes traités au moyen du médicament, avec des échantillons de plasma riche en plaquettes traités avec le véhicule, en utilisant un appareil de mesure d'agrégation de Payton (Payton Assoc, Inc, Buffalo, N Y) On a utilisé du diméthylsulfoxyde comme véhicule pour les tests in vitro L'effet contre l'agrégation des plaquettes a été mesuré par détermination de la dose EC 50 (concentration de médicament qui inhibe de 50 % l'agrégation maximale induite des plaquettes) On a déterminé les valeurs EC 50 d'après des équations de régression engendrées dans un ordinateur sur la base de l'analyseprobit et de la méthode de Finnye (Probit Analysis, pages 50-80, 230-268, University Press, Cambridge, Grande- Bretagne, 3 ème édition, 1971) Une interaction contre l'agrégation des plaquettes peut être observée par la méthode isobolographique de Loewe (Arzneim Forsch 9 429-456, 1956) modifiée par Gessner et Cabana (J Pharmacol. Exp Ther 174: 247-259, 1969). Diverses concentrations déterminées d'anagrelide ont été combinées avec chacun des agents anti-inflammatoi- res qui ont ensuite été soumis à une évaluation d'activité contre l'agrégation induite des plaquettes, en fonction de la réponse à la dose On a ensuite déterminé des valeurs EC 50 pour l'association et on a calculé le rapport des composants pour chaque EC 50 Ainsi, en utilisant l'analyse isobolographique de Loewe, on peut déterminer si les valeurs EC 50 observées sont notablement différentes de celles que l'on attend sur la base des effets des médicaments indi- viduels, et si cette interaction représente une action sur-additive, sous-additive ou additive. Les analyses isobolographiques des effets in vitro des diverses associations de médicaments en fonction de l'agrégation des plaquettes induite par le collagène sont illustrées sur les figures 1-5 des dessins annexés. La valeur EC 50 de l'inhibiteur de cyclo-oxygénase anti- inflammatoire non stéro Idique seul est portée en ordonnées (ktg/ml), tandis que la valeur EC 50 pour l'anagrelide seul est portée en abscisses Ces points sont ensuite reliés par une droite qui est la droite isobolographique Si deux composés agissent ensemble de façon additive, toutes asso- ciations des deux qui produisent un effet à 100 %O doivent, théoriquement, se trouver sur la droite isobolographique. Les deux droites en traits interrompus de part et d'autre de la droite isobolographique représentent ses limites de confiance à 95 % Si les composés agissent ensemble de ma- nière sur-additive, les points doivent tomber sur la gauche de la droite isobolographique En revanche, si les deux com- posés s'antagonisent réciproquement, les points doivent tomber sur la droite de la droite isobolographique Dans le cas de l'anagrelide et de l'acide acétylsalicylique, on obser- ve une interaction sur-additive prononcée avec les trois associations, tombant très sur la gauche de la droite iso- bolographique Les autres associations de médicaments étudiées ontégalement présenté une interaction sur-additive, bien que le degré d'interaction n'ait pas été aussi prononcé que celui qui a été observé avec l'association entre l'anagrelide et l'acide acétylsalicylique. Une comparaison des valeurs de EC 50 observées et attendues est donnée sur le tableau ci-dessous. Agents tes en associa Anagrelide Acide acét Anagrelide T A B L E A U Comparaison des valeurs de EC 50 anti-agrégation attendues et observées Valeurs EC 50 in vitro + limites de confiance à 95 % tés seuls et (g/ml de composant variable) Ltion Valeur observée Valeur attendue B 1 0,08 ( 0,07-0,10) :ylsalicylique 13,8 ( 12,5-15,3) ( 0,03) + 0,89 ( 0,71-1,09)* 8,6 ( 7,1-10,7) acide acétylsalicylique Anagrelide ( 0,015)1 + acide acétylsalicylique Anagrelide ( 0,0025)1 + acide acétylsalicylique 3,17 ( 2,58-3,79)* 6,17 ( 5,31-7,11)* 11,2 ( 9,8-13,0) 13,3 ( 12,0-14,9) Rapport en poids 1:30 * 1:211 * 1:2468 * Sulfinpyrazone 70,3 ( 56,5-87,3) Anagrelide ( 0,05)1 + 13,1 ( 7,1-20,0)* 26,0 ( 16-43) 1:262 * sulfinpyrazone Anagrelide ( 0,03)1 + 26,6 ( 21,2-33, 0)* 44 ( 32,5-61) 1:887 * sulfinpyrazone Anagrelide ( 0,015)1 + 45,2 ( 36, 0-56,6)* 61,5 ( 48,5-78,5) 1:3013 * sulfinpyrazone Anagrelide ( 0,0025)1 + 64,9 ( 50,8-82,1) 68 ( 54,5-85) 1:25 960 sulf inpyrazone Ibuprofène 11, 45 ( 9,61-13,66) Anagrelide ( 0,03) + 2,00 ( 1,64-2,41)* 7,1 ( 5,5-9,5) 1:67 * ibuprofène Anagrelide ( 0,015)1 + 7,64 ( 6,30-9,25)* 9,3 ( 7,65-11, 60) 1:509 * ibuprofène Anagrelide ( 0,0025)1 + 8,81 ( 7,11-10,9)* 11,1 ( 9,3-13,35) 1:3524 * ibuprofène T A B L E A U (Suite) Comparaison des valeurs de EC 50 anti-agrégation attendues et observées Valeurs EC 50 in vitro + limites de confiance à 95 % stés seuls et (gg/ml de composant variable) ition Valeur observée Valeur attendue 3,26 ( 2,52-4,27) e ( 0,03)1 + 0,66 ( 0,50-0,85)* 2,05 ( 1,40-3,0) zomépirac Anagrelide ( 0, 015)1 + zomépirac Anagrelide ( 0,01)1 + zomépirac Anagrelide ( 0,0025)1 + zomépirac 1,51 ( 1,19-1,92)* 1,77 ( 1,45-2,16)* 3,15 ( 2,39-4,17) 2,65 ( 1,98-3,65) 2,85 ( 2,15-3,85) 3,15 ( 2,38-4,18) Rapport en poids 1,22 * 1,101 * 1:178 * 1:1260 Naproxène 27,1 ( 19,4-38,6) Anagrelid ( 0,03)1 + 7,84 ( 5,55-10,84)* 16,5 ( 11,0-26,7) 1:21 naproxène Anagrelide ( 0,015) + 12,47 ( 9,02-17,06)* 21, 7 ( 15,2-32,6) 1:8: naproxène Anagrelide ( 0,01)1 + 17,8 ( 15,0-21,1) 23, 5 ( 16,7-34,5) 1:1 naproxène Anagrelide ( 0,0025)1 + 21,3 ( 15,3-29,8) 26, 0 ( 19,8-37,5) 1:8 naproxène * Interaction sur-additive importante la valeur EC 50 observée de l'association tombe en dessous des limites de confiance à 95 % de la valeur attendue 1 Dose déterminée d'anagrelide (gg/ml) utilisée dans l'association Agents tes en associa Zomépirac Anagrelidi u- 61 * 31 * c-' CD B Test in vivo L'association entre l'anagrelide (sous la forme du chlorhydrate) et l'acide acétylsalicylique (ASA) a été évaluée in vivo sur le modèle de thrombose intravasculaire induite par un biolaser dans la microcirculation de la chambre auriculaire de lapin (J Pharmacol Exp Ther 194: 435, 1975). Une observation microscopique directe des effets du médicament sur là formation et l'issue de thrombi plaquet- taires intravasculaires provoqués a été effectuée chez des lapins à oreilles demi-pendantes non anesthésiés, au moyen de chambres auriculaires transparentes à implantation chroni- que, du type décrit par Sanders et collaborateurs dans Brit J Exp Path 35: 331, 1954 La chambre a été modifiée de manière qu'elle ne comporte pas la cheville amovible Les lapins ont été conditionnés de manière qu'ils restent couchés tranquillement en position de supi- nation Un microscope ("Ortholux" Leitz, Ernst Leitz Gmb H, Wetzlar, Allemagne) a été utilisé pour focaliser un fais- ceau laser à rubis, à une seule impulsion (biolaser "TRG" modèle 512, Hadron Inc, Westbury, N Y) dans la lumière d'un vaisseau de 10 à 30 Dm de diamètre La brûlure micros- copique résultante a entrainé la formation d'un léger thrombus qui consistait en plaquettes accumulées autour d'un noyau formé d'un ou deux globules rouges endommagés. Les aires des thrombi ont été déterminées comme représen- tant le produit de deux mesures perpendiculaires (longueur et diamètre) au moyen d'un oculaire micrométrique L'aire moyenne des thrombi (am 2)obtenus dans dix essais a été utilisée comme valeur témoin Ensuite, les composés d'essai ont été administrés oralement aux doses désirées et, 2 heures plus tard, une seconde série de thrombi induits par le laser a été formée Les résultats exprimés par des aires de thrombi ont été comparés à des témoins au moyen du test "t" pour des données appariées. Il est connu que l'acide acétylsalicylique produit une inhibition, en relation avec la dose, de la thrombose intravasculaire induite par un biolaser (Throm- bosis Research 15: 373, 1979) Toutefois, l'acide acétyl- salicylique est inactif dans ce modèle de test dans une large plage de doses orales ( 30-150 mg/kg) Si des doses d'anagrelide au-dessous du seuil (par exemple 0,5 mg/kg par voie orale) sont associées avec diverses doses d'acide acétylsalicylique, on observe une inhibition importante de la thrombose expérimentale Les résultats reproduits sur la figure 6 indiquent que lorsque l'acide acétyl- salicylique et l'anagrelide sont associés dans le rapport de 300:1, on observe une inhibition importante de la thrombose pour deux associations différentes, à savoir 100 mg/kg d'acide acétylsalicylique par voie orale + 0,33 mg/ kg d'anagrelide par voie orale et 150 mg/kg d'acide acétyl- salicylique par voie orale + 0,5 mg/kg d'anagrelide par voie orale. Sur cette figure, toutes les doses d'acide acétylsalicylique (ASA) sont exprimées en mg/kg par voie orale L'axe des ordonnées indique l'aire moyenne des thrombi en gm 2 + l'écart type. REVENDICATIONS 1 Composition pharmaceutique orale douée d'activité inhibitrice de l'agrégation des plaquettes sanguines, caractérisée en ce qu'elle comprend comme ingrédients actifs une quantité d'Anagrelide efficace pour inhiber l'agrégation des plaquettes sanguines en association avec une quantité exaltant son activité d'un agent anti-inflammatoire non stéroidique capable d'inhiber la cyclo-oxygénase des plaquettes sanguines. 2 Composition suivant la revendication 1, caractérisée en ce que l'agent anti-inflammatoire non stéroidique est choisi dans le groupe comprenant l'acide acétylsalicylique, le zomépirac, l'ibuprofène, le naproxène, la sulfinpyrazone, la phénylbutazone et l'indométhacine. 3 Composition pharmaceutique orale douée d'activité inhibitrice de l'agrégation des plaquettes sanguines, caractérisée en ce qu'elle comprend essentiel- lement de l'Anagrelide et de l'acide acétylsalicylique, le rapport en poids de l'acide acétylsalicylique à l'Ana- grelide ayant une valeur d'environ 30:1 à environ 2468:1, la quantité d'Anagrelide étant de préférence d'environ 0,025 à 1 mg et la quantité d'acide acétylsalicylique étant de préférence d'environ 150 à 600 mg dans une forme posologique unitaire. 4 Composition pharmaceutique orale douée d'activité inhibitrice de l'agrégation des plaquettes sanguines, caractérisée en ce qu'elle est essentiellement formée d'nagrelide et de zomépirac, le rapport en poids du zomépirac à l'Anagrelide étant d'environ 22:1 à envi- ron 178:1, la quantité d'Anagrelide étant de préférence d'environ 0,025 à I mg et la quantité de zomépirac étant de préférence d'environ 50 à 200 mg dans une forme poso- logique unitaire. Composition pharmaceutique orale douée d'activité inhibitrice de l'agrégation des plaquettes sanguines, caractérisée en ce qu'elle est essentiellement formée d'Anagrelide et de naproxène, le rapport en poids du naproxène à l'Anagrelide étant d'environ 261:1 à envi- ron 831:1, l'Anagrelide étant de préférence présent en quantité de 0,025 à 1 mg et le naproxène étant de préfé- rence présent en quantité d'environ 125 à 375 mg dans une forme posologique unitaire. 6 Composition pharmaceutique orale douée d'activité inhibitrice de l'agrégation des plaquettes sanguines, caractérisée en ce qu'elle est essentiellement formée de l'Anagrelide et d'ibuprofène dans un rapport en poids de l'ibuprofène à l'Anagrelide d'environ 67:1 à environ 3524:1, la quantité d'Anagrelide étant d'envi- ron 0,025 à 1 mg et la quantité d'ibuprofène étant d'en- viron 150 à 600 mg dans une forme posologique unitaire. 7 Composition pharmaceutique orale douée d'activité inhibitrice de l'agrégation des plaquettes sanguines, caractérisée en ce qu'elle est essentiellement formée d'Anagrelide et de sulfinpyrazone dans un rapport en poids de la sulfinpyrazone à l'Anagrelide d'environ 262:1 à environ 3013:1, l'Anagrelide étant présent en une quantité d'environ 0,025 à 1 mg et la sulfinpyrazone étant présente en une quantité d'environ 100 à 400 mg dans une forme posologique unitaire. 8 Composition suivant l'une quelconque des revendications 3 à 7, caractérisée en ce qu'elle contient en outre un excipient pharmaceutiquement acceptable. 9 Composition pharmaceutique orale sous une forme posologique unitaire, caractérisée en ce qu'elle comprend comme ingrédient actif une association de 0,25 mg d'Anagrelide et, respectivement, de 150 mg d'acide acétyl- salicylique ou 150 mg d'ibuprofène ou 200 mg de sulfin- pyrazone ou 50 mg de zomépirac ou 125 mg de naproxène.