Brevet FR2505656A1 — publié le 19821119

L'utilisation du sulfate de chondroitine "ac- tif" A et C, et de mélanges de ces médicaments est bien connue dans le traitement de divers troubles cardiovas- culaires et comme thérapeutique préventive de ces trou- bles Ces médicaments, y compris leur procédé de produc- tion, sont décrite dans lesbrevets des Etats-Unis d'Amérique Nô 3 895 106 et N O 3 895 107 Un procédé perfectionné de production de ces médicaments est décrit dans la deman- de de brevet des Etats-Unis d'Amérique Nô 82 045 déposée le 5 Octobre 1979 et Nô 118 211 du 4 Février 1980. On a maintenant découvert que le sulfate de chondroltine "actif" A, le sulfate de chondroitine "actif" C, et leurs mélanges ont des applications théra- peutiques remarquables et très différentes Il a été in- diqué dans la littérature que dans de nombreux cas, les transplants d'organes ou de tissus sont susceptibles d'un rejet par le receveur humain Ce problème est égale- ment présent, à un certain degré, en ce qui concerne les implants inanimés tels que les implants dentaires, les prothèses de la hanche, les implants intra-oculaires, les valvules du coeur, etc On suppose généralement que le phénomène de rejet des transplants est associé au sys- tème immun du corps et/ou des procédés physiologiques ou des processus chirurgicaux Le système immun recon- nait le tissu transplanté comme étranger et produit des anticorps qui attaquent l'objet étranger au receveur humain Ces défaillances chirurgicales et physiologi- ques peuvent être associées à un endommagement méca- nique des tissus, caillotement avec diminution du flux de sang, etc On a tenté de diverses façon de réduire ou d'éliminer le problème de rejet ou de défaillance. On a trouvé que le sulfate de chondroitine "actif" A, le sulfate de chondroitine "actif" C, ou des mélanges de ces médicaments semblait réduire notable- ment la tendance du corps humain à rejeter les transplants et à augmenter l'acceptation des implants. Le rejet des implants est dû à d'autres facteurs comprenant une lésion mécanique directe des tis- sus adjacents, une dévascularisation des tissus avec pour conséquence un médiocre apport d'oxygène, un rejet par les tissus du corps étranger soit dû à un manque direct d'adhérence des cellules adjacentes, un manque de force électrostatiques propres soit à une mauvaise régénéra- tion des tissus. Le revêtement des corps étrangers et/ou le traitement du receveur avec les médicaments de la pré- sente invention réduisent le rejet et peuvent entraîner une meilleure acceptation de l'implant par les tissus environnants. On estime que le développement représente un progrès important dans ce domaine de La thérapeuti- que. Le revêtement des instruments chirurgicaux réduit un endommagement des tissus provenant du contact avec des intruments De même, le revêtement de cathéters ou d'aiguilles implantés réduit un endommagement méca- nique des cellules endothéliales contiguës du canal vas- culaire. On estime que ce développement représente un progrès important dans ce domaine de la thérapeuti- que. En bref, la présente invention fournit un procédé qui comprend l'administration d'une quantité ef- ficace de sulfate de chondroitine "actif" A, de sulfate de chonr 3 roîtine "actif" C ou de leurs mélanges à des êtres humains, juste avant, pendant et/ou après la trans- plantation ou implantation dans le corps de tissus ou d'organes provenant du même être humain ou animal, ou d'êtres humains ou animaux différents, et d'appareils de prothèse ou orthopédiques inanimés, d'instruments chirurgicaux,-etc, afin de de réduire le rejet ou dé- faillance du transplant ou implant. L'invention a pour but de fournir un nou- veau mode de thérapeutique. L'invention se propose également de fournir une thérapie nouvelle et améliorée pour corbattre le problème du rejet, et pour stimuler et favoriser l'acceptation par le corps humain de transplants ou implants vivants et inanimés. Plus particulièrement, la présente invention a pour but de fournir une nouvelle application importan- te des médicaments connus sous le nom de sulfate de chon- droltine "actif" A, sulfate de chondroitine "actif" C et de combinaisons de ces médicaments. Tels qu'utilisés dans le présent mémoire, les termes "transplants" ou "transplantation" désignent la greffe de tissus prélévés à la même personne ou à une per- sonne différente Plus particulièrement, il désigne l'o- pération de transplantation ou application d'une partie des tissus du corps prélevés d'un autre corps ou d'une autre partie du corps de la même personne La présente invention couvre l'ensemble de ces processus et est par- ticulièrement utilisée dans les greffes du coeur, du rein, du poumon et de la peau Le terme ' implant " ou " implan- tation " désigne la mise en place dans les tissus du corps d'une substance étrangère, généralement inanimée. Une articulation de la hanche, une valvule mécanique du coeur, des agrafes chirurgicales et une lentille intra- oculaire sont des exemples L'implantation de tissu de porc à des êtres humains pour la reconstitution d'une valvule du coeur est également envisagée par la présen- te invention, soit en tant qu'implant soit en tant que transplant L'"implant" n'est pas obligatoirement per- manent Ainsi, le terme "implant" au sens du présent mé- moire est plus étendu qu'au sens habituel et-englobe l'utilisation des médicaments servant à enduire les ins- truments chirurgicaux juste avant leur usage temporaire dans le corps humain Un cathéter ou aiguille implanté peut avantageusement être revêtu des médicaments juste avant la mise en place sur le malade Il en est de même pour les tubes IV, les sutures et mêmes les instruments chirurgicaux L'enduction ou revêt ment d'implants tels que des tiges de titane utilisées comme os et des articulations métalliques du genou ou de la hanche est d'une importan- ce considérable Telle qu'on l'utilise dans le présent mémoire, le terme de dispositif de prothèse" désigne tout substitut artificiel remplaçant une partie manquan- te, par exemple les dents, la main, la jambe ou un oeil. Bien qu'elle ne désire pas se lier par une théorie quelconque, la Demanderesse pense que la pré- sente invention améliore l'implantation d'appareils ina- nimés en raison du fait que le médicament présente une charge électrique négative et que les implants portent une char- ge superficielle positive On suppose que les médicaments conduisent à une neutralisation de la charge positive ou créent une charge négative résultante qui provoque un moindre endommagement des cellules ou tissus contigus. Un autre facteur favorable réside dans les propriétés de lubrification des médicaments qui semblent augmenter la compatibilité de l'implant avec les tissus vivants voisins et empêchent une lésion mécanique directe des cellules Les propriétés de lubrification des médica- ments par l'application directe aux surfaces ou struc- tures intrapéritonéales au moment des processus chirur- gicaux de l'abdomen peuvent réduire l'apparition d'adhé- rences post-opératoires. Ces buts de l'invention ainsi que d'autres ressortiront de la description détaillée qui va suivre. La présente invention s'applique à la trans- plantation, d'un être humain à un autre, d'un animal à un être humain, de tous organes et tissus comprenant le rein, le coeur, les poumons, la peau, etc Elle sem- ble également être utile dans le cas de fixation de tis- sus ou organes, par exemple dans les cas nécessitant le recollement de la cornée ou de la rétine. le médicament peut être administré en com- mençant trois à quatre jours avant la transplantation et peut être avantageusement utilisé pendant des semaines des mois, ou même des années ensuite En tout cas, le médicament est administré essentiellement simultané- ment à la transplantation Le mode d'administration se fait par solution aqueuse injectable, par voie orale, etc L'administration dans le cas de transplants d'or- ganes plusimportants se fait par voie intrapéritonéale, intraveineuse, orale, ou sous forme de poudre, pommade, gouttes pour les yeux, ou en solution aqueuse La poso- logie est une quantité efficace de l'ordre de 0,1 à 10 grammes ou plus par 24 heures. Il est également avantageux de plonger, d'in- fuser, d'enduire ou d'incuber le transplant ou implant, c'est-à-dire la peau, le coeur, le rein ou le poumon ou les dispositifs artificiels de synthèse avec le médica- ment juste avant la transplantation ou l'implant dans le corps humain. Dans le cas d'implants inanimés pour l'oeil ou les articulations, par exemple une lentille intra- oculaire, un implant dentaire, un implant du genou, des plaques ou broches orthopédiques, une prothèse de la hanche, le transplant ou implant inanimé peut avantageu- sement être enduit avec le médicament juste avant la mi- se en place dans le corps humain, et renforcé périodi- quement par des applications ou injections locales, etc du médicament "actif". L'immersion ou l'enduction que l'on vient de décrire sont généralement effectuées en plus de l'admi- nistration systémique retardée du médicament que l'on vient de décrire La solution utilisée pour le revête- ment est une solution anormalement aqueuse, compatible physiologiquement à 1 à 30 % en poids du médicament Le médicament peut être appliqué à l'oeil sous forme de gouttes Les médicaments peuvent aussi être combinés avec des supports classiques pour former une pommade visqueu- se et être appliqués sur un transplant de peau pour ré- duire le rejet Les médicaments utilisés dans la mise en oeuvre de la présente invention sont préparés de la façon suivante: EXEMPLE 1 On découpe 45,5 kg de trachée de boeuf parée en tronçons de 6,45 cm 2 que l'on ajoute à environ 190 litres d'eau désionisée contenue dans un récipient Le p H est ajusté à environ 4,5 par addition d'environ 400 ml d'acide acétique glacial La suspension résultante est soumise à agitation tandis que le contenu du récipient est porté à 50 *C environ On ajoute 0, 567 kg de pepsine et on poursuit l'agitation pendant 30 minutes On ajoute encore 190 litres d'eau désionisée dans le récipient et on continue d'agiter doucement pendant 12 heures à O'C jusqu'à ce que le cartilage trachéal soit dé- barrassé du tissu conjonctif La température de la sus- pension est alors portée à 80 C et une couche de grais- se se forme à la surface du liquide La liqueur de di- gestion s'écoule à travers une centrifugueuse à panier et est jetée. Les matières solides restantes sont lavées deux fois avec 190 litres d'eau chaude ( 60-80 "C) Une so- lution d'hydroxyde de sodium est préparée par addition de 0,680 kg de Na OH à 19 litres d'eau désionisée conte'- nue dans un récipient Les solides lavés deux fois sont ajoutés à la solution d'hydroxyde de sodium, et le volu- me est ajusté avec de l'eau désionisée à 45,5 litres et le p H à 9-10 On agite le contenu du récipient pendant 12 heures à 37 'C On ajuste ensuite le p H à 6,5 avec de l'acide acétique glacial Le liquide est chauffé à l'é- bullition, puis mis à refroidir On filtre le liquide dans une centrifugueuse à panier, on recueille le fil- trat et Onl le garde On ajoute à ce filtrat 0,680 kg de chlorure de cétylpyridinium, puis on agite pendant minutes On laisse le liquide reposer pendant 16 heures. Il se forme un précipité On sépare par décantation la liqueur surnageante et on recueille le précipité par cen- trifugation continue dans une centrifugeuse de Sharples. Le précipité recueilli est dissous dans 19 litres d'hydro- xyde de sodium 0,5 N On ajoute 38 litres de méthanol et on laisse reposer pendant 12 heures à la température am- biante Le précipité formé estde nouveau receuilli par centrifugation continue et lavé avec 19 litres de métha- nol On le dissout dans 7,56 litres d'eau distillée, on ajuste le p H à 7, 0 avec de l'acide acétique glacial et on ajoute 0,113 kg de chlorure de sodium, puis on agite. On ajoute 15 'litres de méthanol et on agite pendant 15 minutes Après-repos de 12 heures à la température am- biante, il se forme un précipité qu'on recueille par cen- trifugation On sèche le précipité sous vide L'analyse révèle que le précipité est essentiellement du sulfate de chondroitine A (CSA) La matière manifeste une prolonga- tion de formationde thrombus de plasma 6 à 12 heures a- près l'administration à des lapins comme décrit par la méthode de la boucle de Chandler, de plus de 80 %. Un solution stérile convenant pour une injec- tion intraveineuse ou une application-locale est obtenue en dissolvant 125 mg du médicament dans 2,5 ml d'eau stéri- le de qualité du Codex pour injection Eventuellement, la solution peut être finalement stérilisée par passage dans un filtre à membrane stérilisante Lorsque la peau du donneur humain est plongée pendant 5 minutes dans cette solution et appliquée à la surface d'une brûlure du troi- sième degré, le rejet est réduit. Une pommade contenant les médicaments est préparée par addition de 1 à 30 % en poids environ du mé- dicament à un véhicule ou support qui est normalement visqueux, par exemple de la vaseline ou est rendu vis- queux par addition d'émulsifiants ou épaississants à l'eau Le véhicule ou support se compose généralement de divers mélanges de graisses, cires, huiles animales ou végétales, et hydrocarbures solides ou liquides. EXEMPLE 2 Une matière de départ pour la préparation de sulfate de chondroitine "actif" A est la trachée de boeuf Cette matière s'obtient auprès des abattoirs aussitôt que possible après l'abattage des animaux On la congèle ensuite jusqu'au traitement Pour le traite- ment, elle est parée pour la débarrasser des tissus et elle est finement broyée Ce tissu broyé est dégraissé avec 5 parties d'acétone On effectue deux extractions pour réduire la teneur en graisses à environ 1 pour cent ou moins La matière dégraissée est séchée et broyée à nouveau On prépare une solution à 5 pour cent de cet- te matière dans un tampon à l'acétate de calcium 0,1 M contenant 1 pour cent de papaine plus du chlorhydrate de cystéine 0,005 M et du versénate disodique 0,005 M comme activateurs enzymatiques Le mélange entier est maintenu à 62 C + 3 C pendant 24 à 30 heures sous agita- tion modérée On obtient une solubilisation d'environ à 95 % de la trachée Cette liqueur surnageante est isolée par décantation et est précipitée avec deux vo- lumes d'acétone La liqueur acétonique surnageante est séparée par décantation La matière précipité restante est dissoute dans une solution saline isotonique pour obtenir une solution de 3 à 5 pour cent On ajoute à cette dernière une solution saturée de permanganate de potassium en portions de 2 à 5 ml sous agitation cons- tante, en ajoutant chaque portion jusqu'à ce que la cou- leur pourpre ait totalement disparu Selon les diverses matières brutes de départ, il peut être nécessaire d'u- tiliser de 50 à 200 ml de solution de permanganate de potassium pour 2,72 kg de matière brute de départ Lors- que dans l'intervalle situé entre l'addition et la dis- parition', la couleur tarde à disparaître (plus de 5 mi- nutes), on n'ajoute plus de permanganate On laisse en- suite reposer la solution pendant 16 heures pour per- mettre une floculation du bioxyde de manganèse et l'a- chèvement de toute réaction Le bioxyde de manganèse est éliminé par centrifugation ou filtration à l'aide d'un papier-filtre grossier Le gâteau de bioxyde de manganè- se est lavé avec une solution saline isotonique supplé- mentaire Dans certains cas, l'addition d'une petite quantité de formaldéhyde ou de méthanol provoque une floculation du bioxyde de manganèse qui est ensuite pré- cipité avec un volume d'acétone Le précipité huileux résultant est recueilli par décantation, le solvant est évaporé ou bien le gâteau est dissous dans une quantité minimale d'eau, et le produit final est obtenu par lyo- philisation Il apparaît par chromatographie sur le pa- pier qu'il-s'agit de sulfate de chondro Ytine A essen- tiellement pur L'analyse du produit révèle une courbe typique d'absorption spectrophotométrique dans l'infra- rouge correspondant au sulfate de chondroitine A La détermination du pouvoir rotatoire donne des valeurs de (a)D = -24; teneur en azote, 3,3 %. EXEMPLE 3 Une matière de départ pour la préparation du sulfate de chondroitine "actif" C est du cartilage de requin Cette matière obtenue sous forme sèche est broyée et dégraissée avec 3 à 5 parties d'acétone Une extraction suffit généralement Ce cartilage de requin extrait est ensuite traité comme indiqué ci-dessus pour la trachée de boeuf séchée après l'étape de dégraissa- ge. Les médicaments préparés comme dans les Exemples 2 et 3 sont utiles dans tous les processus décrits ci-dessus. REVENDICATIONS 1 Composition thérapeutique pour éviter ou réduire le risque de rejet ou une défaillance du transplant ou implant, lors de la transplantation ou de l'implantation dans le corps de tissus ou d'organes provenant du même être humain ou animal ou d'un être humain ou d'un animal différents, ou de prothèses ou d'appareils orthopédiques inanimés, ou d'instruments chirurgicaux, etc, caractérisée en ce qu'elle contient à titre de principe actif du sulfate de chondroitine actif A ou du sulfate de chondroitine actif C ou leurs mélangessous une forme appropriée pour injection intraveineuse ou- intrapéritonéale ou pour application directe aux struc- tures péritonéales ou pour enduction du transplant ou de l'implant. 2 Composition selon la revendication 1, ca- ractérisée en ce qu'elle est présentée sous une forme appropriée pour injection intraveineuse. 3 Composition selon la revendication 1, caractérisée en ce qu'elle est présentée sous une forme appropriée pour injection intrapéritonéale ou application directe aux structures péritonéales. 4 Composition selon la revendication 1, ca- ractérisée en ce qu'elle est présentée sous une for- me appropriée pour l'enduction du trans-lant ou de l'ir Lr Dlant juste avant la mise en place dans le re- ceveur humain. Composition selon la revendication 1, ca- ractérisée en ce qu'elle est utilisée sous la forme d'une solution stérile. 6 Composition selon la revendication 1, ca- ractérisée en ce qu'elle est utilisée sous la forme d'une solution aqueuse. il 7 Composition selon la revendication 1, caractérisée en ce qu'elle est utilisée sous la forme d'une pommade. 8 Implant ou transplant revêtu d'une colposi- tion selon la revendication 1.