Brevet FR2510558A1 — publié le 19830204

La présente invention se rapporte d'une façon générale à de nou- veaux dérivés de l'acide chénodésoxycholique et elle concerne plus parti- culièrement l'acide 7-acylchénodésoxycholique de formule (I) li C CH 3 c cep I A UCOOH HO C-R o dans laquelle RCO représente le reste d'un acide carboxylique linéaire, qui peut être saturé ou insaturé et qui contient de 3 à 18 atomes de carbone ou bien le reste d'un acide cycloalcanecarboxylique contenant de 3 à 7 atomes de carbone dans-le noyau cycloalcane. Plus précisément, le groupe RCO peut représenter le reste acylique d'acide acétique, butyrique, caprylique,-laurique, palmitique, stéarique, oléique, linoléique, arachidonique, cyclopropanecarboxylique, cyclobutane- carboxylique, cyclopentanecarboxylique ou cyclohexanecarboxylique. Le traitement de la calculose biliaire par l'acide chénodésoxycho- lique est déjà bien connu (Coyen et al, New England Journal of Medicine, 292, 604, 1975) L'acide chénodésoxycholique enrichit les acides biliaires de la bile cholécystique, diminue progressivement la lithogénèse et peut provoquer la dissolution des calculs biliaires enrichis en cholestérol X Plus récemment, on a tenté l'utilisation de l'acide chénodésoxycholique pour 1 e t r ai t em e nt de la diskinésie biliaire et de l'hypertriglycéridémie (Angelin et al J Lipid Res 19, 1017, 1978). L'action contre la lithiase de l'acide chénodésoxycholique, notamment contre la formation de calculs biliaires, est limitée chez l'homme en raison des effets collatéraux secondaires de caractère subjectif, par exemple de nausée et de diarrhées, ainsi que par suite du métabolisme luimême de l'acide biliaire qui subit ou bien une 7-alpha-déshydroxylation ou bien une oxydation pour aboutir à un dérivé 7-céto qui est inactif. Cette oxydation qui a lieu au niveau intestinal a lieu sous l'effet des produits enzymatiques d'origine bactérienne (Ferrari et al, FEBS Lett 75, 176, 1977) et bloque le circuit entérohépatique de l'acide chénodésoxycho- lique, de sorte que des produits inactifs sont obtenus et que l'efficacité thérapeutique de l'agent anti-lithiase est limitée On suspecte également que la formation de métabolites de l'acide chénodésoxycholique peut aboutir à des produits ayant une toxicité directe pour l'intestin, comme on a pu le démontrer par plusieurs séries de recherches expérimentales (Sauer et al, Zschr Gastroenterol, 17, 236, 1979). Il est donc très important de réaliser une thérapie de longue durée de la calculose biliaire et d'obtenir des dérivés qui permettent un recyclage continu de l'acide chénodésoxycholique, avec une diminution des risques d'inactivation au niveau intestinal. On a trouvé que les dérivés 7-acvliques de formule (I) qu'on désignera ciaprès " 7-esters de CDC" résistent à l'inactivation sur un mode imprévisible, ce qui permet une réduction importante des doses journalières et/ou une augmentation notable des intervalles entre les administrations successives. On a trouvé que les dérivés acyliques de formule I sont pra- tiquement dépourvus de toxicité chez les animaux et, au cours d'essais - avec une calculose expérimentale, ces composés ont fait preuve d'une acti- vité anti-lithiase qui est, en particulier à certains égards, notablement supérieure à celle de l'acide chénodésoxycholique En outre, les esters de formule (I), c'est-à-dire les 7-esters de CDC, possèdent une activité d'hypotriglycéridémisation intéressante. En conséquence l'invention vise également à fournir des compo- sitions pharmaceutiques pour le traitement de la calculose biliaire, de la diskinésie biliaire et de l'hypertriglycéridémie, contenant un ou plusieurs 7-esters de CDC de formule (I) à titre d'ingrédients actifs. L'invention a encore pour objet l'utilisation des composés de formule (I) pour le traitement de la calculose biliaire, de la diski- nésie biliaire et de l'hypertriglycéridémie L'expression "utilisation" dans le présent mémoire couvre toutes les opérations concernant la prépa- ration des composés, notamment leur purification, la préparation des compositions pharmaceutiques pouvant être administrés et/ou le condi- tionnement dans des enveloppes susceptibles elles-mêmes d'administration. Finalement, l'invention concerne un procédé de préparation de 7-esters de CDC de formule (I), qui consiste à hydrolyser sélectivement dans des conditions alcalines des composés de formule (II), c'est-à-dire les dérivés 3,7-diacyliques de l'ester méthylique d'acide chénodésoxy- cholique, comme indiqué dans le schéma de réaction ci-après: = 3 o H c 1 H 3 ^\E (II) dans lequel R-CO a la même signification que ci-dessus. L'hydrolyse sélective qui apparaît dans le schéma ci-dessus se fait avec de l'hydroxyde de sodium ou de potassium dans un solvant cons- titué de mélanges d'alcools inférieurs et d'eau ou de "méthylcellosolve" et d'eau ou de mélanges analogues. Pour la préparation des composés selon l'invention, on peut pré- parer les composés de formule (II), c'est-à-dire les dérivés 3,7diacyliques, par acylation de l'ester méthylique de l'acide chénodésoxycholique avec des dérivatifs actifs d'un acide de formule R-COOH, comme par exemple le chlo- rure ou un anhydride de l'acide, y compris des anhydrides mixtes, avantâ- geusement en présence d'une substance se comportant comme un accepteur d'acides Un procédé particulièrement approprié pour la diacylation, qui est très simple et qui permet des bons rendements, consiste à faire réagir le chénodésoxycholate de méthyle avec un chlorure ou un anhydride d'acyle dans la pyridine. Après l'hydrolyse sélective représentée ci-dessus, on isole les composés de formule-(I), c'est-à-dire les 7-esters de CDC de formule (I) et on les purifie par cristallisation ou bien, quand ils sont liquides à température ambiante, on les purifie par chromatographie sur une colonne, commodément une colonne de silice. Les exemples suivants, dans lesquels toutes les proportions sont en poids sauf stipulation contraire, servent à illustrer l'invention sans aucunement en limiter la portée: Exemple 1 Acide ?-butyryl-chénodésoxycholique (formule I dans laquelle R = npropyle) a) On fait réagir une solution de 1 millimole de chénodésoxycholate de méthyle dans 1,42 cm 3 de pyridine avec 9,8 millimoles d'anhydride butyrique. On chauffe le mélange sous reflux pendant 3 heures, puis on le verse avec agitation sur de la glace et on acidifie à p H 1 avec une quantité égale de H Cl On extrait le précipité avec CH 2 Cl; on lave la solution organique avec une solution saturée de Na HC 03, puis avec de l'eau jusqu'à neutralité. On sèche la solution sur du sulfate de sodium et on évapore sous vide jusqu'à un poids constant On utilise -le produit ainsi obtenu, c'est-àdire l'ester méthylique d'acide 3,7-dibutyrylchénodésoxycholique, sans aucune purification supplémentaire pour la réaction suivante - b) On ajoute une solution de 1 millimole du dérivé diacylique obtenu selon le paragraphe (a) dans 4,46 cm 3 de méthanol à 2,23 cm 3 d'eau et 0, 23 cm 3 de KOH en solution aqueuse d'une concentration de 50 % On chauffe la matière à ébullition en atmosphère inerte jusqu'au point o un examen chromatographique indique que l'hydrolyse a bien eu lieu ( 60-à 90 minutes); on évapore ensuite le méthanol sous vide, on acidifie le résidu à p H 2 avec une quantité égale de H Cl et on extrait avec du chlorure de méthylène. On sèche l'extrait sur du sulfate de sodium et on évapore ensuite à siccité. On obtient le produit désiré-à l'état par recristallisation dans le méthano J P.F 192-194 C (les données-analytiques apparaissent dans le tableau I). Exemple 2 Acide 7-palmitoyl-chénodésoxycholique (formule I dans laquelle R = CH (CH 2)14) 3 2 i 14-) a) On fait réagir une solution de 1 millimole d'ester méthylique d'acide chénodésoxytoyle dans 2 cm de pyridine avec 2,5 millimoles de chlorure de palmytoyle On chauffe le mélange sous reflux pendant 1 heure et ensuite on le verse sur de la glace, on acidifie avec une quantité égale de H Cl à p H 1 et on isole le produit, c'est-à-dire l'ester méthylique d'acide 3,7-dipalmytoylchénodésoxycholique, de la même façon que dans l'exemple 1 (a) b) On fait réagir le produit brut ainsi obtenu avec de l'hydroxyde de potassium dans du méthanol aqueux par le même procédé que dans l'exemple 1 (b) On chromatographie l'huile obtenue à l'achèvement de l'opération sur une oolonne de silice dans un rapport de I: 20 en utilisant comme éluant un mélange d'hexane et d'acétate d'éthyle dans un rapport de pola- rité de 9: 1 à 6: 4. Le tablean I résume certaines priorités caractéristiques des composés de formule (I), c'est-à-dire des 7-esters de CDC, qu'on obtient par le procédé selon l'invention. w t J w o o r O -n O TABLEAU 2 Solvant de re ANALYSE COMPOSE P F (OC) cristallisation FORMULE ANALYSE Calculé % Trouvé 7-butyrate 192-94 méthanol CH C 72,73 73,01 1 '92-94 méthanol C 28 H 4605 de CDC 28465 H 9,96 10,22 7-cyclopropane carboxylate 173-75 méthanol/eau C 28 H O 73,04 72,87 de CDC 4 9,57 9,48 ___, , 7-caprylate q 74,13 73,89 133-35 méthanol/eau CH de CDC 133-35 méthanol/eau 32 54 5 10,42 10,61 7-laurate éther diéthyl/ C H C 75,26 75, 09 de CDC 197-99hexane 36 62 5 H 10,80 10,96 I,, ", 7-palmitate C 76,19 76,37 huile C H de CDC C 40 H 70 5 H 11,11 10,97 7oléate huile C H O C 76,83 77,00 de CDC _ 42 72 5 H 10,98 11,05 7linoléate -_ huile C H O C 77,06 77,02 o de CDC 42705 Ln d C 7 H 10,70 10, 90 t Ln Go Les 7-esters de CDC dont il est question plus haut, quand on les soumet à une analyse par RMN (dans CDC 13, référence interne TMS), four- nissent les données caractéristiques suivantes: 3,15/3,27 3,80/4 00 ( 1 H, m, > CHOH); 4,70/4,85 5,00/5 90 ( 1 H, m, > CH-O-OC-R) ,90/6,65 6,30/7 10 ( 2 H, m, -COOH, -OH). En outre, l'oléate et le linoléate donnent des signaux à 5,27-5,60 ( 2 H, m, CH=CH) et à 5,05-5,75 ( 4 H, 2 CH=CH) respectivement. Lors d'une analyse I R, tous les composés de formule I indiquent l'absorption à 3540 et 3420 cm 1 (OH) et à 1720 cm 1 (bande agrandie COOH, O-OC-R). On a testé l'activité biologique des composés selon l'invention sur une calculose biliaire chez les Cricétides Syriens -Pour ce test (Dam and Christensen, Acta Path Microbiol Scand 30, 236, 1952), on a exposé les animaux à une alimentation semi-purifiée qui contenait-74,3 % de saccharose, 20 % de caséine, 5 % d'un mélange de sels, 0,5 % d'un mélange de vitamines et 0,2 % de chlorure de choline On a administré ia nourriture ainsi que l'acide chénodésoxycholique et ses dérivés pendant 53 jours A la fin du traitement on a sacrifié les animaux et on a examiné la bile pour déterminer si elle était limpide ou opaque Naturellement on a compté les animaux ayant des calculs biliaires. Les résultats qui-apparaissent dans le tableau II montrent que l'acide chénodésoxycholique administré en une proportion de 0,2 % de là nourriture ne produit aucun effet notable sur les propriétés de la bile ou sur l'incidence de la calculose Toutefois, on constate une très faible toxicité, ce qui a pour effet de réduire le nombre d'animaux ayant survécu ( 19 sur 25) Les dérivés ayant des substituants à chaîne relativement courte, tels que l'acétate, le laurate et le butyrate, réduisent le nombre de calculs biliaires mais d'une façon qui n'est pas statistiquement évi- dente Les dérivés ayant un substituant insaturé à cha ne longue (oléate et linoléate) préservent une bile limpide chez la plupart des animaux et peuvent même empêcher entièrement l'apparition de calculose. TABLEAU 2 Incidence de calculose chez les Cricétides traités avec une alimentation lithogène donnant des calculs (Groupe de 25 animaux traités pendant 53 jours) % de Bile Bile Calculs diète limpide opaque Témoins 8/25 7/25 10/25 ( 32 %) ( 28 %) ( 40 %) - Acide chénodesoxy 0,200 5/19 6/19 8/19 cholique (CDC) ( 26 %) ( 32 %) ( 42 %) 7-acetate ( ) 0,214 9/20 5/20 6/20 de CDC ( 45 %) ( 25 %) ( 30 %) 7laurate 0,293 7/22 7/22 8/22 de CDC ( 32 %) ( 32 %) ( 36 %) 7-butyrate 0, 236 3/24 15/24 6/24 de CDC ( 13 %) ( 63 %) ( 25 %) 7-oléate 0,335 16/25 9/25 0/25 de CDC ( 64 %) ( 36 %) ( 0 %) 7-linoléate 0,336 16/24 8/24 0/24 de CDC ( 67 %) ( 33 %) ( O %) (O) E Hanser, E Baumgartner, K Meyer, Helvetica Chemica Acta. On a testé la toxicité expérimentale des composés sur des souris du type Swiss, pesant en moyenne 25 à 30 g pour les maies et 20 à 25 g pour les femelles Pour déterminer la toxicité on a administré les composés en des dosages compris entre 10 et 2000 mg/kg en suspension dans la carboxy- méthylcellulose de manière à administrer 0,5 cm 3 de suspension à une souris pesant 20 g Après des administrations individuelles de chaque composé, on a surveillé les animaux pendant 10 jours Aucun des composés testés, c'est-à-dire l'acide chénodésoxycholique (CDC), le 7-acétate de CIC, le 6-laurate ce CDC, le 7-butyrate de CDC, le 7-oléate de CDC et le 7-linoléate de CDC, n'a provoqué la mort au cours du test décrit plus haut de sorte que la DL 50 doit être considérée comme supérieure à 2000 mg/kg Pendant l'essai m/g de détermination de la toxicité aigu, les animaux n'ont manifesté aucun signe évident de toxicité. On peut donc conclure que les esters en position 7 de l'acide chénodésoxycholique avec des acides gras ayant une longue chalne insaturée, ne font preuve d'aucune toxicité aiguë sur des animaux de laboratoire et sont d'une remarquable activité dans la calculose expérimentale des Cricé- tides alors que l'acide chénodésoxycholique est pratiquement inactif en une dose équivalente. On peut administrer les composés de formule (I) à des malades souffrant de calculose biliaire, de diskinésie biliaire ou d'hypertrigly- céridémié à des dosages de 50 à 500 mg qu'on administre de 1 à 4 fois par jour Les formes d'administration sont les mêmes que pour les compositions pharmaceutiques usuelles, mais on préfère particulièrement les gelules Scherer. On peut incorporer les excipients inertes classiques pharmaceu- tiquement compatibles dans les compositions pharmaceutiques selon l'invention. REVENDICATIONS 1 Acide 7-acyl-chénodésoxycholique, caractérisé en ce qu'il répond à la formule (I) H 3 C. CH 3 H f, I COOH , ao/. CH HO' o-0 o daxs laquelle e-CO représente le reste d'un acide carboxylique linéaire saturé ou insaturé contenant de 3 à 18 atomes de carbone ou le reste d'un acide cycloalcanecarboxylique contenant 3 à 7 atomes de carbone dans le noyau cycloalcane. 2 Acide selon la revendication 1, caractérisé en ce qu'il est choisi parmi les acides suivants: acide 7-butyryl-chénodésoxycholique, acide 7-(cyclopropyl-carbonyl) chénodésoxycholique, acide 7-capryloyl- chénodésocholique, acide 7-lauroyl-chénodésoxycholique, acide 7-palmotoyl- chénodésoxycholique, acide 7-oleyl-chénodésoxycholique et acide 7linoleyl- chénodésoxycholique. 3 Procédé de préparation d'un composé selon la revendication 1, caractérisé en ce qu'on hydrolyse sélectivement l'ester méthylique d'acide 3,7-diacylechénodésoxycholique de formule (II) dans laquelle R-CO a la même signification que dans la revendication 1, dans des conditions alcalines selon le schéma suivant: 251055 ' 1 1 H 3 c R-C-O''';>o OPC- g'' o o o O (II) 4 Procédé selon la revendication 3, caractérisé en ce qu'on effectue l'hydrolyse avec de l'hydroxyde de sodium ou de potassium. Procédé selon la revendication 3 ou 4, caractérisé en ce qu'on effectue l'hydrolyse dans un solvant qui est un mélange d'alcools inférieurs avec de l'eau ou un mélange d'éthylglycol méthylique et d'eau. 6 Composition pharmaceutique pour le traitement de la calculose biliaire, de la diskinésie biliaire et d'hypertriglycéridémie sous forme de dosages unitaires, caractérisée en ce qu'elle comprend de 50 à 500 mg par unité de dosage du composé selon la revendication 1 et un excipient inerte pharmaceutiquement compatible.