Brevet FR2511005A1 — publié le 19830211

rz 25 i l Od 5 PROCEDE DE PREPARATION DE DERIVES D'ESTERS INTERNES DE GANGLIOSIDES ET COMPOSITIONS PHARMACEUTIQUES CONTENANT CES DERIVES. La présente invention a pour objet un procédé de préparation de dérivés d'esters internes de gangliosides, et se rapporte à des composi- tions pharmaceutiques contenant de tels dérivés Les compositions pharma- ceutiques selon la présente invention sont utilisées pour le traitement de troubles du système nerveux résultant d'accidents ou d'affections ayant entrainé une lésion du tissu nerveux. Les gangliosides forment un groupe de glycosphingolipides et pré- sentent une structure dont une partie est un hydrate de carbone auquel est liée une céramide et le résidu d'un acide sialique La partie cor- respondant à l'hyorate de carbone comporte au moins un résidu galactose ou glucose et au moins un résidu N-acétylglucosamine ou Nacétylgalactosamine. La structure générale d'un ganglioside peut donc être représentée par la formule suivante: une mole de céramide au moins une mole de galactose une mole diun acide sialique ou de glucose au moins une mole de N-acétyl- glucosamine ou de N-acétyl- * galactosamine dans laquelle tous les résidus sont liés par une liaison glucosidique. De nombreux gangliosides ont été identifiés et on a constaté qu'ils sont particulièrement abondants dans les tissus nerveux, notamment dans les tissus du cerveau Différentes études ont montré que les acides sialiques trouvés en la plus grande proportion dans lés gangliosides,sont l'acide N acétyl-neuraminique (NANA) et, à un degré moindre, l'acide-N- glycolylneuraminique Parmi les nombreux gangliosides qui ont été identi- fiés, les gangliosides suivants, définis par leurs symboles internationaux, se sont révélés être présents en proportions significatives dans les mélanges de gangliosides extraits des tissus de cervelles de bovins: G Dlb ( 16 %) I Ga MC -ú 3)Gat NAC(l -È. 4)Ga(k A 4 >G Lc(l -L 1)Céramide ( 3 NANA NANA G Tb ( 19 %) Gat( 1 3)Ga LNAC GF ( 21 %) a Gat ( -ú 3)Ga LNAC(l -e 4)Gat(l I 31 e 4)Gtc(l -ú 1)Céramide NANA G Dl ( 40 %) Ga L Ci -9 3)'Ga LNAC(l -f 4)Gat( 11 4)Gtc(l -ú 1)Céramide ( 3} ( 3) NANA NANA -schémas dans lesquels Gtc représente le glucose, Ga LNAC représente la Nacétylgalactosamine, Ga L représente le galactose, NANA représente l'acide N-acétyl-neuraminique, et les pourcentages entre parenthèses indiquent la quantité de chaque ganglioside trouvé dans le mélange de gangliosides extraits de tissus de cervelles de bovins. 11005 Il est connu que les gangliosides jouent un rôle important dans le système nerveux et il a été récemment possible de démontrer que les gan- gliosides sont utiles dans le traitement de troubles du système nerveux périphérique et du système nerveux central - lActa psychiat Scand, 55, 102, ( 1977); Eur Med Phys, 13, 1, ( 1977); Ric Sci Educ Perm 9, 115, ( 1978); Adv Exp Biol 71, 275, ( 1976); Electromyogr Clin Neurophysiol, 19, 353, ( 1979); Minerva Medica, 69, 3277, ( 1978); Minerva Stomat, 27, 177, ( 1978); Med del Lavoro, 68, 296 ( 1977); Brain Res 197, 236, ( 1980)l. L'action thérapeutique des gangliosides semble-essentiellement con- sister en un phénomène de bourgeons stimulants du tissu nerveux et d'ac- tivation des enzymes de membrane intervenant dans la conduite des stimulis nerveux, par exemple de l'enzyme (Na+, K+)AT Pase/lBrain Res, 197, 236, ( 1980); Leon et al J of Neurochem, 37, 350 ( 1981)l. Les bourgeons des nerfs stimulés par les gangliosides favorisent alors les régénération et reconstitution du tissu nerveux endommagé. D'autres études ont porté sur la découverte de composés qui peuvent être plus efficaces que les gangliosides dans le traitement des troubles du système nerveux. On a pu constater, conformément à la présente invention, que certains dérivés de gangliosides sont plus actifs que les gangliosides eux-mêmes pour stimuler la formation des bourgeons sur les nerfs et activer les enzymes d E membrane intervenant dans la transmission nar conduction du stimulus nerveux tel que l'enzyme (Na+, K+)AT Pase De façon spécifique, on a constaté que les dérivés d'esters internes de gangliosides sont particulièrement actifs pour le traitement de troubles du système nerveux et sont plus actifs que les gangliosides dont ils proviennent originellement Des tests in vitro et in vivo ont montré que les dérivés d'esters internes sont supérieurs aux gangliosides dont ils proviennent pour la stimulation du bourgeonnement des nerfs et l'activation de l'enzyme de membrane (Na+, K+)AT Pase impliquée dans la conduction du nerf. Seuls certains des dérivés d'esters internes possibles des ganglio- sides ont jusqu'à présent été isolés, ceci uniquement en de très faibles proportions, dans les tissus du cerveau. Les esters internes des gangliosides sont formés par la réaction entre le radical carboxyle du résidu de l'acide sialique et un groupe hydroxyle de l'un des résidus d'hydrates de carbone ou d'un autre acide sialique contig U de la même molécule de ganglioside lJ of Neurochemistry, 34, 1351, ( 1980); Bull of Molecular Biology and Medicine, 3, 170, ( 1978)1. A titre d'exemples possibles, on peut citer un dérivé d'ester interne d'un ganglioside que l'on représente par la structure suivante: R O H n I 111 I c à il C CH 2-C-N _o / -OH / -OH t I) â 3 CH 2 O H H O Ho / / CH 2 HCH 3 OO OH CI/ 2- Q ; Hgof o_ CH,2) CH I CH-OH CH 2 OH HOH CH 2 OH I CH 2 CH-NH-CO-R, HO OH I 0 O O O H O-CH 2 H H O lH H OH H H H o OH, H HHH H OH H H H OH N-CO-CH 3 H dans laquelle R dans le résidu de l'acide sialique est H ou OH, et R 1 dans le groupe céramide est un acide gras, tel qu'un acide oléique, stéarique ou linoléique. 1 1005 Le dérive d'ester interne de ganglioside (I) est un exemple d'un dérivé dans lequel le groupe carboxyle de l'acide sialique est lié par un ester à un groupe hydroxyle de l'un des résidus d'hydrates de carbone, plus spécifiquement le galactose La formation de la liaison d'ester interne en même temps que de la liaison glucosidique normale entre l'acide sialique et le résidu d'hydrate de carbone, crée un cycle lactonique comprenant de façon typique cinq ou six atomes, caractéristique de la structure des dérivés des esters internes du ganglioside. Alors que la formule (I) a été donnée à titre d'exemple, il faut noter que d'autres cycles lactoniques comprenant 5 ou plus de 5 atomes dans la structure du cycle, peuvent être formés lorsque le groupe carboxyle de l'ester de l'acide sialique se lie au groupe hydroxyle d'un résidu d'hydrate de carbone. Ainsi qu'il a été indiqué ci-dessus, les dérivés de l'ester interne des gangliosides peuvent également être formés lorsque le groupe carboxyle de l'ester de l'acide sialique se fixe sur un acide sialique voisin auquel il est lié par la fonction glucosidique dans le ganglioside parent de départ. Une telle structure peut être représentée par la formule suivante: o H I II (Il) CH 3-C-N O (II) CH,OH H O H HO H CH 3-C-N COOH H H :H 2 H HO H R 2 dans laquelle: R 2 représente le résidu d'hydrate de carbone qui est lié par une fonction glucosidique au résidu d'acide sialique. 251 1005 Un autre dérive de l'ester interne de ganglioside possible peut être représenté par la formule suivante: OH n I CH 3-C-N H o HI C ( I I I) U H -R 3 dans laquelle: R 3 représente le résidu de l'hydrate de carbone auquel l'acide sialique voisin est lié par un ester. La formule (III) représente alors un dérivé d'ester interne de ganglioside dans lequel un acide sialique est lié par une liaison d'ester à un acide sialique voisin qui est lui-même lié par un ester à un résidu d'hydrate de carbone Il est par conséquent évident que de nombreuses variations des dérivés decrits ci-dessus peuvent être obtenues, de sorte que les dérivés de l'ester interne des gangliosides sont en général formés d'un résidu d'hydrate de carbone, d'au moins une céramide et d'au moins un résidu d'acide sialique, un ou plusieurs des acides sialiques étant liés par un ester à un résidu d'hydrate de carbone et/ou un ou plusieurs des acides sialiques étant liés par une liaison ester à un acide sialique voisin. De nombreux dérivés d'esters internes de gangliosides sont donc possibles, et ceux qui sont décrits ci-dessus ne sont donnés qu'à titre d'exemples non limitatifs PROCEDE DE PREPARATION Certains procédés antérieurs de préparation des dérivés d'esters internes de gangliosides sont connues et consistent en les suivantes: 1 La formation des esters internes par simple contact des ganglio- sides avec une solution d'acide acétique ou trichloroacétique lSphingolipids, Sphingolipidoses and Allied Disorders, Adv Exp Med. Biol 19, 95 ( 1972), J Neurochem 28, 1133, ( 1977)l. Conformément à cette méthode, il est nécessaire d'opérer en présence de proportions très élevées d'acide acétique/ganglioside, et une telle transformation des gangliosides ne peut être obtenue. Pour cette raison, une étape de purification finale est nécessaire et est en général réalisée par une résine d'échange ionique, telle que la résine Sephadex. 2 La réaction d'un carbodiimide soluble dans l'eau avec des gangliosides dans un milieu aqueux lCarbohydr Res hl, 344, ( 1975)l. Par cette méthode, il n'est également pas possible d'obtenir une complète transformation des gangliosides du fait que la réaction est réalisée en milieu aqueux L'emploi de cette méthode conduit à de très faibles ren- dements et une purification finale de l'ester interne est nécessaire. La présente invention a pour objet une méthode nouvelle et perfec- tionnée de préparation de dérivés d'esters internes de gangliosides con- duisant à de hauts rendements en les dérivés recherchés. Le procédé selon la présente invention consiste à faire réagir des gan- gliosides avec un réactif delictonisation dans un solvant organique non- aqueux sous conditions anhydres Des solvants organiques convenables susceptibles d'être utilisés dans la présente invention sont notannent les dimiéthy Tsilfoxyde (DMSC), dimnéthylformamide (DMF), sulfolane, tétrahydro- furane, diméthoxyethane et pyrydine ou leurs mélanges. Des réactifs de lactonisation convenables consistent en des carbodiimides solubles dans des solvants organiques tels que dicyclohexylcarbodiimide, benzylisopropylcarbodiimide, benzyléthylcarbodiimide, sels de 2-chloro- 1méthyl-pyridinium, éthoxyacétylène et réactif de Woodward consistant en N-éthyl-5-phénylisoxazolium-3 '-sulfonate). Alors que les méthodes de l'art antérieur de réaction des gangliosides avec un carbodiimide dans un milieu aqueux conduisent à de très faibles rendements en les dérivés d'esters internes, on a constaté que le procédé selon la présente invention qui consiste à faire réagir des gangliosides dans un milieu non-aqueux conduit à des rendements très élevés, c'est-à- dire à des rendements pratiquement quantitatifs en les dérivés d'esters internes recherchés, dont les proportions sont supérieures à celles que l'on a pu obtenir avec les méthodes de l'art antérieur. Les composés de gangliosides de départ utilisés dans le procédé selon la présente invention sont extraits du tissu de la cervelle de mammifères, et plus précisément de bovins. Les exemples suivants représentent des Drocédés conformes à la pré- sente invention de préparation de dérivés d'esters internes de gangliosides. EXEMPLE 1 Un mélange de gangliosides est obtenu par extraction de cervelles de bovins et 5 g de ce mélange sont dissous dans 50 ml de DMSO Ensuite, 4 g d'une résine de type styrénique anhydre (acide sulfonique, passant au tamis d'ouverture de maille de 0,29 cm à 0,15 cm, sous forme protonée), sont ajoutés au mélange et le système résultant est agité durant 30 minutes à température ambiante Ce traitement par une résine d'échange ionique convertit la totalité des groupes carboxyliques du ganglioside en groupes carboxyliques (-COOH) La conversion totale des groupes carboxyliques est confirmée par une méthode d'analyse physique appropriée, par exemple, par absorption atomique La résine est alors filtrée sous vide et la solution est traitée par 1,5 g de dicyclohexylcarbodiimide et maintenue au repos durant une heure La dicyciohexylurée qui précipite est éliminée par fil- tration et la solution restante est traitée par 100 ml d'acétone, ce qui provoque la précipitation des dérivés de l'ester interne de ganglioside. Ce procédé conduit à l'obtention de 4,6 g d'ester interne (environ 90 à 95 % de la valeur théorique). La présence des dérives de l'ester interne est confirmée par spectros- copie infrarouge et par chromatographie en couche mince. Spectroscopie infrarouge: Effectuée sur des pellets de K Br; la liaison ester/lactone produit une raie à 1750 cnr 1. Chromatographie en couche mince: Effectuee sur des plaques de silica gel, le solvant étant formé par le mélange CHCL 3/Mt Ie OH/Ca CL 2 à 0,3 % ( 55/45/10, en volume); la valeur de Rf du mélange des esters internes est comprise entre 0,7 et 0,85. La valeur Rf des produits finaux dépasse la valeur Rf du mélange des composés de départ. Les résultats de la chromatographie montrent, donc, l'absence de toute matière de départ dans les produits de á réaction Par traitement à l'aide d'une solution O,1 N de Na 2 CO 3 à 600 C durant 1 heure, les liaisons esters sont clivées, et le mélange original des gangliosides de départ peut être obtenu. EXEMPLE 2 9 g d'un mélange de gangliosides (sel de sodium) sont dissous dans ml d'eau distillée, et passés dans une colonne remplie de 20 g de Dowex 50 W x 8 (forme triéthylammoniée, 100 à 200 mesh soit 0,29 à 0,15 cm). Ce produit, rendu anhydre sous vide élevé, est dissout(à l'aide d'un bain de sonication) dans 200 ml de tétrahydrofuranne anhydre con- tenant 8 ml de triéthylamine. Cette solution est lentement ajoutée à 600 ml de tétrahydrofuranne anhydre ( 4 heures) contenant 40 m M de sel de 2-chloro-1-méthyl- pyridinium (dont l'anion peut, par exemple, consister en iodure, toluene- 4-sulfonate, trifluorométhane sulfonate, etc), sous agitation continue et maintien à température constante de 45 C. Cette réaction est effectuée durant 18 heures à 45 C. Le réactif en excès est séparé par filtration et le mélange est concentré dans un courant d'azote; le résidu est redissout dans ml d'un mélange de chloroforme/méthanol 1/1, et précipité dans 450 ml d'acétone Le produit est enfin séché sous un vide élevé. On obtient ainsi 7,9 g ( 89,7 % du rendement theoriqueduproduitrecherché). Chromatographie en couche mince: Effectuee sur des plaques de gel de silice, le système solvant consistant en un mélange chloroforme/méthanol/Ca Cl 2 à 0,3 % ( 55/45/10); la valeur de Rf du mélange d'esters internes est comprise entre 0,7 et 0,85. La valeur Rf des produits finaux dépasse la valeur Rf du mélange des composés de départ. 251 1005 l O Les résultats de la chromatographie montrent, par conséquent, l'absence de toute matière de départ dans les produits de réaction Par traitement à l'aide d'une solution 0,1 N de Na 2 CO 3 à 60 C durant 1 heure, les liaisons estérées sont clivées, et le mélange original des gangliosides de départ peut être obtenu. Le spectre infrarouge des esters internes du mélange de gangliosides, effectué sur des pellets K Br, présente la raie typique d'absorption de l'ester à 1750 cm-'. EXEMPLE 3 8 g de GM: (sel sodé) sont dissous dans 80 ml d'eau distillée, et passés dans une colonne remplie de 10 og de Dowex 50 W x 8 (forme triéthyl- ammoniée, 100 à 200 meshsoit 0,29 à 0,15 cm). Ce produit, rendu anhydre sous vide élevé, est dissout (à l'aide d'un bain de sonication) dans' 200 ml de tétrahydrofuranne anhydre conte- nant 4 ml de triéthylamine. Cette solution est lentement ajoutée à 600 ml de tétrahydrofuranne anhydre ( 4 heures) contenant 20 m M de sel de 2-chloro-1-méthyl- pyridinium (o l'anion peut, par exemple, consister en iodure, toluène-4- sulfonate, trifluorométhane sulfonate, etc), sous agitation continue et maintien à température constante de 45 C. Cette réaction est effectuée durant 18 heures à 45 C. Le réactif en excès est séparé par filtration et le mélange est concentré dans un courant d'azote; le résidu est redissout dans 80 ml d'un itelange chloroforme/méthanol 1/1, et précipité dans 400 ml d'acétone. Le produit est enfin séché sous un vide élevé. On obtient ainsi 7,0 g ( 88,4 % du rendement théoriqueduproduitrecherché). Ce produit est analysé par: Chromatographie en couche mince: Effectuée sur plaques de silica gel, le système solvant consistant en un mélange chloroforme/méthanol/Ca C 12 à 0,3 % ( 55/45/10); la valeur Rf du produit final ( 0,70) dépassant la valeur de Rf ( 0,65) du composé de départ. Les résultats de la chromatographie montrent, par conséquent, l'absence de toute matière de départ dans les produits de réaction Par traitement à l'aide d'une solution 0,1 N de Na 2 CO 3 à 60 C durant 1 heure, la liaison ester est clivée et le ganglioside original est récupéré. Le spectre infrarouge de l'ester interne de GM 1, effectué sur des pellets de K Br, présente la raie typique d'absorption de l'ester à 1750 cm-'. la EXEMPLE 4 9 g d'un mélange de gangliosides (sel sodé) sont dissous dans 80 ml d'eau distillée, et passés dans une colonne remplie de 20 g de Dowex W x 8 (forme pyridinium, 100 à 200 mesh soit 0,29 à 0,15 cm), Ce produit, rendu anhydre sous vide élevé, est dissout dans 800 ml de tétrahydrofuranne anhydre et 4,2 g ( 60 m M) d'éthoxyacétylène. Ce mélange est maintenu au reflux durant 3 heures; la colonne de reflux est refroidie à -10 C et est pourvue d'une valve d'anhydrification. Apres l'élimination des solvants et de l'excès d'éthoxyacétylène, le résidu est dissout dans 80 ml d'un mélange chloroforme/méthanol 1/1, et précité dans 400 ml d'acétone. On obtient ainsi 8,1 g ( 92,0 % du rendement théorique du produit recherché) Ce produit est analysé par: Chromatographie en couche mince: Effectuée sur plaques de silica gel, le système solvant consistant en un mélange chloroforme/méthanol/Ca C 12 à 0,3 % ( 55/45/10); la valeur Rf du mélange d'esters internes est comprise entre 0,7 et 0,85. La valeur Rf des produits finaux dépasse la valeur Rf du mélange des composés de départ. Les résultats de la chromatographie montrent, par conséquent, l'absence de toute matière de départ dans les produits de réaction Par traitement à l'aide d'une solution 0,1 N de Na 2 CO 3 à 60 C durant 1 heure, les liaisons estérées sont clivées, et le ganglioside original est récupéré. Le spectre infrarouge des esters internes du mélange de gangliosides, effectué sur des pellets K Br, présente la raie d'absorption typique des esters à 1750 cm-1. EXEMPLE 5 8,0 g de GM 1 (sel sodé) sont dissous dans 80 ml d'eau distillée, et passés dans une colonne remplie de 10 og de Dowex 50 W x 8 (forme pyridinium, à 200 mesh soit 0,29 à 0,15 cm). Ce produit, rendu anhydre sous vide élevé, est dissout dans 800 ml de tétrahydrofuranne anhydre et 2,1 g ( 30 r M) d'éthoxyacétylène. Ce mélange est maintenu au reflux durant 3 heures; la colonne de reflux est refroidie à -10 C et est pourvue d'une valve d'anhydrification. Après l'élimination des solvants et de l'excès d'éthoxyacétylène, le résidu est dissout dans 80 ml d'un mélange'chloroforme/méthanol 1/1, et précipité dans 400 ml d'acétone. On obtient ainsi 7,2 g ( 91,0 ' du rendement théorique du produit recherché). 100 s Ce produit est analysé par: Chromatographie en couche mince: Effectuée sur plaques de silica gel, le système solvant consistant en un mélange chloroforme/méthanol/Ca C 12 à 0,3 % ( 55/45/10); la valeur Rf du produit final ( 0,70) dépasse la valeur Rf ( 0,65) du produit de départ. Les résultats de la chromatographie montrent, par conséquent, l'absence de toute matière de départ dans les produits de réaction Par traitement à l'aide d'une solution 0,1 N de Na 2 CO 3 à 60 C durant I heure, la liaison ester est clivée et le ganglioside original est récupéré. Le spectre infrarouge de l'ester interne de GMI, effectué sur des pellets K Br, présente la raie d'absorption typique de l'ester à 1750 cm'. EXEMPLE 6 99 d'un mélange de gangliosides (sel sodé) sont dissouts dans 80 ml d'eau distillée, et passes dans une colonne remplie de 20 g de Dowex W x 8 (forme pyridinium, 100 à 200 mesh) 0,29 à 0,15 cm. Ce produit, rendu anhydre sous vide élevé, est dissout dans 200 ml de pyridine anhydre et est ajouté à une suspension de 5,52 g ( 10 m M) du réactif Zwitterionique de Woodward lN-ethyl-5-phenylisoxazolium-3 'sulfonate, Woodward et al, J Am Chem Soc 83, 1010-1012, ( 1961)l dans 200 ml de pyridine anhydre Ce mélange réactionnel est agité durant 10 jours a température ambiante. Après filtration de l'excès de réactif et complète élimination du solvant, le résidu est dissout dans 90 ml d'un mélange chloroforme/méthanol 1/1 et précipité dans 450 ml d'acétone. On obtient ainsi 7,2 g ( 81,8 % du rendement théorique duproduit recherché). Ce produit est analysé par: Chromatographie en couche mince: Effectuée sur plaques de silica gel, le système solvant consistant en un mélange chloroforme/méthanol/Ca Clz à 0,3 % ( 55/45/10); la valeur Rf du mélange d'esters internes est comprise entre 0,7 et 0,85. La valeur Rf des produits finaux dépasse la valeur Rf du mélange des composés de départ. Les résultats de la chromatographie montrent, par conséquent, l'absence de toute matière de départ dans les produits de réaction Par traitement à l'aide d'une solution 0,1 N de Na 2 CO 3 à 60 C durant 1 heure, les liaisons esters sont clivées et le ganglioside original est récupéré. Le spectre infrarouge des esters internes du mélange de gangliosides, effectué sur des pellets K Br, présente la raie d'absorption typique de l'ester à 1750 cm-1. 2 511005 EXEMPLE 7 8 g de GM, (sel sodé) sont dissouts dans 80 ml d'eau distillée, et passés sur une colonne remplie de 109 g de Dowex 50 W x 8 (forme pyridinium, à 200 mesh) 0,29 à 0,15 cm. Ce produit, rendu anhydre sous vide élevé, est dissout dans 200 ml de pyridine anhydre, et est ajouté à une suspension de 1,26 g ( 5 m M) du, réactif Zwitterionique de Woodward lN 6 Thyl-5-ph 6 ny-isoxazolium-3 'sulfonatel dans 200 ml de pyridine anhydre Ce mélange réactionnel est agité durant jours à température ambiante. Après filtration de l'excès de réactif et complète élimination du solvant, le résidu est dissout dans 80 mi d'un mélange chloroforme/méthanol 1/1 et précipité dans 400 ml d'acétone. On obtient ainsi 6,3 g ( 79,5 % durendementthéoriquedu produit recherché). Ce produit est analysé par: Chromatographie en couche mince: Effectuée sur plaques de silica gel, le système solvant consistant en un mélange chloroforme/méthanol/Ca C 12 à 0,3 % ( 55/45/10); la valeur Rf du produit final ( 0,70) dépasse la valeur Rf ( 0,65) du composé de départ. Les résultats de la chromatographie montrent, par conséquent, l'absence de toute matière de départ dans les produits de réaction Par traitement à l'aide d'une solution 0,1 N de Na 2 CO 3 à 60 C durant i heure, la liaison ester est clivée et le ganglioside original est récupéré. Le spectre infrarouge de l'ester interne de GM 1, effectuée sur des pellets K Br, présente la raie d'absorption typique de l'ester à 1750 cmr. PROPRIETES PHARMACOLOGIQUES Quoique certains dérivés d'esters internes de gangliosides et des méthodes d'obtention de ces dérivés ont été discutés dans l'art antérieur, on ne connaît aucune description antérieure relative à l'activité biolo- * gique ou, éventuellement, à l'usage pharmaceutique des dérivés d'esters internes Cependant, la présente invention a permis de constater que les dérivés d'esters internes de gangliosides ont une très forte activité dans le traitement de troubles du système nerveux et, en fait, ont une activité bien plus forte que celle des gangliosides eux-mêmes. Les dérives d'esters internes de gangliosides peuvent être employés pour traiter une certaine variété de troubles nerveux et, notamment, des troubles du système nerveux central et périphérique, résultant de maladies ou d'accidents Les composés peuvent également être employés en thérapie post-opératoire après des opérations chirurgicales qui ont affecté les nerfs, telles que par exemple des opérations sur hémorrhoïdes. Les propriétés pharmacologiques supérieures de dérivés d'esters internes de gangliosides qui sont l'objet de la présente invention peu- vent être déterminees par comparaison avec des gangliosides à l'aide des essais suivants: i Bourgeonnement neuronal sur une ligne de cellules phéocromicitome (PC 12). 2 Activité (Na+K+)AT Pase de la membrane neuronale. 3 Récupération de l'électrorétinogramme après éblouissement. 1 Effet des dérivés d'esters internes de gangliosides sur le bourgeon- nement neuronal PC 12 - * Matières et méthodes Les bourgeons ou le bourgeonnement neuronal peuvent être considérés comme une différentiation neuronale localisée, et le mécanisme biochimique à l'aide duquel les moléculesdegangliosides produisent l'effet précipité peut être étudié par évaluation sur un modèle de culture de cellules in vitro (cellule PC 12 dérivant du sous- clone 1 A fourni -par le Dr P Calissano lC N R Laboratorijo di Biologia Cellulare Roma, Italyl - l"Gangliosides in Neurological and Neuromuscular Function, Development and Repair", Ed by M M I Rappor I énd A Gorio, Raven Press, iew York (i) 11)l. Dans ce modèle, des gangliosides ou dérivés des esters internes de ganglio- sides sont ajoutes au milieu de culture PC 12 en même temps que le facteur de croissance du nerf (NGF) (un inducteur spécifique de différentiation PC 12 pour stimuler le bourgeonnement neuronal) Le bourgeonnement neuronal, stimulé par les gangliosides peut alors être comparé à celui qui est stimulé par les dérivés d'esters internes de gangliosides. De façon spécifique, les cellules ( 100 000/plaque) sont maintenues à 37 C dans un incubateur de type Heraeus ( 95 % d'air humidifié et 5 % de C 02) et plaquées sur une culture d'un tissu revêtu de collagène, 60 mm de plaques dites "Integrid Falcon", en présence du milieu de culture suivant: % de RPM 1640 (Gibco), % d'un sérum de cheval inactivé à la chaleur (Gibco), % de sérum de veau foetal (Gibco), 50 U/ml de pénicilline, etmg/l de streptomycine. Le milieu est changé toutes les 48 heures. Dans de telles conditions, les cellules se divisent mais ne forment pas de neurons L'addition de NGF ( 50 ng/ml) produit l'arrêt de la proli- fération des cellules, la formation de neurons et se différencie dans les à 10 jours Cet effet est déterminé par comptage du nombre de cellules comportant des neurons à partir du 5 éme jour et ensuite tous les 2 jours. Les gangliosides et leurs dérivés ( 1 m M) sont ajoutés au milieu de culture simultanément avec NGF et leur effet est déterminé au 7 émeet 9 ème jours par comptage du nombre de cellules contenant des bourgeons neuronaux. * Résultats Les résultats des essais comparatifs sur le bourgonnement neuronal sont résumés dans le Tabteau I ci-après. Les résultats obtenus montrent que les dérivés d'esters internes de gangliosides selon la présente invention ont la capacité de stimuler le bourgeonnement neuronal et se révllent être plus actifs que les gangliosides pour produire cet effet, à la fois au 7 ème jour et au 9 ème jour. TABLEAU I Effet des dérivés de gangliosides sur le bourgeonnement neuronal de cellules PC 12. Pourcentage du nombre de cellules comportant Composé d Ligne Milieu Concentration des bourgeons de cellule après 7 jours après 9 jours * Témoin PC 12 85 % RPM 1640, 31 35,7 % de sérum de cheval inactive à la chaleur, % de sérum de veau foetal, U/ml de pénicilline, et mg/ml de streptomycine. * Gangliosides PC 12 1 m M 49,5 62,3 , I,,,, * Esters internes PC 12 1 m M 56,3 69,2 de gangliosides rt oi o D 2 Effet des dérives de gangliosides sur l'activité (Na 4,K+)AT Pase de la membrane neuronale - La capacité de gangliosides ou de dérivés d'esters internes de gan- gliosides à activer l'enzyme (Na+,K+)AT Pase de la membrane peut être déterminée in vitro sur une préparation de membrane neuronale lJ of Neurochein, cité ci-dessusl. * Matières et méthodes a Préparation d'une fraction mitochondrique brute d'une cervelle de rat LO (Fraction P 2). Le procédé utilise pour préparer la fraction P 2 dérive de celui de Morgan et al, Biochem Biophys Acta 241, 737 ( 1971) (Toutes les opérations sont effectuées à 0-4 C; les valeurs x g étant les moyennes des forces centrifuges) Des rats m&les adultesde race Sprague Dawley (provenant de Charles RIVEP), pesant 150 à 175 g chacun) sont décapités et leurs cervelles rapidement retirées et lavées à l'aide d'une solution isotonique glacée Après excision du cérébellum, les cervelles sont homogénéisées par 12 va-et-vient d'un homogénéiseur en verre Téflon, fonctionnant à l'aide d'un moteur (jeu radial prévu 0,25 mm; 800 tour/min) , faisant emploi de 4 volumes de la solution d'homogénéisation ( 0,32 mole de sucrose, contenant 1 m M d'un tampon de phosphate de potassium et 0,1 n M d'EDTA bisodé, p H 7,27). L'homogénat est dilué à 10 % (poids er N volume) et la solution homogénéisée est filtrée à travers quatre couches d'un tamis en tissu (du type utilisé pour la filtration du fromage) et centrifugée à une valeur de 1000 x g durant 15 minutes. Le pellet résultant est lavé à l'aide du même volume qu'au départ de solution homogénéisée, et centrifugée ainsi qu'il est indiqué cidessus. Les surnageants combinés sont centrifugés à 17 500 x g durant 25 min (ces conditions gravitationnelles sont employées afin d'obtenir le maximum d'enrichissement des extrémités de nerfs de la fraction) et le pellet est lavé à quatre reprises par 9 volumes (à chaque fois) d'une solution homo- généisée, puis centrifugé ( 17 500 x g durant 25 min) Le pellet final, que l'on appelle "Fraction P 2 " contient, en tant que constituant majeur, des mitochondries non-cassées et des extrémités de nerfs Le pellet final est resuspendu de façon homogène dans un volume approprié d'une solution homogénéisée à l'aide de l'homogénéiseur en verre Téflon précité, puisest immédiatement utilisé pour le test Afin d'éviter des erreurs résultant du stockage, des fractions fralches de P 2 sont toujours préparées préala- blement à l'emploi. 1 P. Les préparations de fraction de P 2 présentent une teneur en gangliosides de 33,9 + 2,8 (S D) nmoles liées à Neu Ac/mg de protéine. b Test AT Pase. L'activité AT Pase est déterminée par spectrophotométrie selon la méthode de Wallicket al l(J Pharm Exptl Therap 189, 434, ( 1974)l. Le mélange réactionnel, à moins qu'il ne soit indiqué autrement, est forméde m M de sucrose, 0,2 m M d'EDTA bisodé (ajusté à un p H de 7,4), m M de Na Ci, 5 m M de Mg C 12, M de KC 1, 2 nm M de sel monopotassicue de phospho(enol) pyruvate (PEP) (ajusté à p H 7,4), 3 m M d'ATP, Mt de TRIS-HC 1 (à p H 7, 4), 0,33 m 4 de NADH, pig/ml de pyruvate-kinase (PK), et pig/ml de lactate-déhydrogénase (LDH), pour atteindre un volume final de 3 ml et un p H final de 7,2. La réaction est mise en oeuvre par addition de 50 à 75 pg (sous forme de protéine) de la fraction P 2 L'activité (Na+,K+)AT Pase est obtenue par la différence entre l'AT Pase totale et l'AT Pase dépendante Mg 2 + déterminée en présence de 3 x 10-5 M d'ouabaîne La durée requise pour chaque test individuel est de 3 e 5 minutes. L'activité AT Pase est exprimée dans le système d'Unités Internationales (pmoles ATP hydrolysées/mg de protéine/minute). L'activité des dérivés de gangliosides ( 50 n M) est déterminée avant l'incubation sur les membranes neuronales à 37 C durant deux heures. * Résu Ltats Les résultats des tests comparatifs d'activité AT Pase sont résumés dans le Tab Leau II, ci-après. Les résultats obtenus montrent que les dérivés d'esters internes de gangliosides selon la présente invention ont la capacité d'activer l'enzyme de membrane neuronale (Na+,K+)AT Pase, et se sont révélés être bien plus efficaces que les gangliosides dans les mnimes conditions de concentration molaire. Effet des TABLEAU II dérivés de gangliosides sur l'AT Pase (Na+,K+) de ta membrane neuronale. Durée Température Concentration % d'augmentation Composé d'incubation d'incubation (n M) de l'activité (Na+,K+)AT Pase * Témoin 120 min 37 C 100 * Gangliosides 120 min 37 C 50 142 ,,,, , * Esters internes 120 min 37 C 50 174 de gangliosides # " _, en Ln -.- O> CI k r 11005 3 Effet des dérivés de gang Liosides sur La récupération de L'étectro- rétinogramme endommagé par éb Louissement - La capacité des gangliosides ou des dérivés d'esters internes de gan- gliosides d'accélérer la récupération de l'activité électrique rétinale peut être évaluée après occasionnement de dommages physiques (éblouissement) à des lapins Dans ce modèle, les gangliosides ou les dérivés d'esters internes de gangliosides sont administrés par voie parentérale (intraveineuse) l"Int Symposium on the Neurochemistry of the Retina", Athens, August 28 - September 1 ( 1979) (Communication)l- l("Satellite Meeting on Biochemical and Pharmacological Implications of Gangliosides Functions", Cortona, August 28 31 ( 1975) (Communications)l. À Méthodes et matières Des lapins de Nouvelle Zélande, dont le poids est de l'ordre de 1,9 à 2 kg sont employés l"Int Symp on the Neurochemistry of the Retina' Athens, August 28 September 1 ( 1979)l. L'anesthésie de la cornée est induite par une application topique de 0,4 % de Novésine L'électrorétinogramme est enregistré par application d'une électrode cornéale (selon Henkes), fixée à un dispositif à succion douce L'1 électrode de référence est formée d'une aiguille insérée de façon sous-cutanée dans la zone frontale. Les appareilssuivant sont utilisés:Un amplificateur de courant alternatif de marque Tektronics 5 A 22 N ( 10 Hz filtres à courant continu); Un analyseur Biomédica Neuroaverager 1172 OTE; Un appareil d'enregistrement à lignes XY, de type L 800 Linseis; Un photostimulateur Biomedica 1273 OTE. La photostimulation est effectuée à l'aide de cinq éclairs de 0,2 watt /seconde, pendant une durée de 10 secondes et 0,5 Hertz de fréquence. La durée de base de l'enregistrement est de 100 ms (pré-réqlane = 5). Les animaux sont maintenus dans une enceinte sombre durant 30 min pour s'adapter aux conditions d'obscurité, d'air, de température et de bruit constant. Les déterminations suivantes sont effectuées: 1 Trois contrôles de base, toutes les 15 min, sont effectués sur tous les animaux La moyenne des ondes a + b (pic à pic) est calculée. 2 Les animaux sont alors soumis à un éblouissement durant 20 se- condes par utilisation d'une lampe Schott Mainz KL 150 B, disposée à une distance d'1 cm de l'électrode de cornée. TABLEAU III Effet des dérivés de gangtiosides sur La récupération de léLectrorétinogramme. Nr: L 1 n % de récupération ERG par rapport au témoin Composé Animaux Dosage i.v. min 40 min 60 min À Gangiiosides Lapin, 33 nmoles/kg + 5 + 9, 0 + 13,0 * Esters internes Lapin 33 nmoles/kg + 8 I + 12,T + 20,5 de gangliosides 11005 Après cette période, la récupération de l'électrorétinogramme (ERG) est déterminée par mesure de l'amplitude d'ERG à 20, 40 et 60 minutes après la période d'éblouissement Ceci permet de déterminer les conditions de base qu'il faut appliquer à l'animal. Les animaux sont alors traités ultérieurement avec des composés, et min après, à nouveau ils sont soumis à un éblouissement, et on enre- gistre ERG dans les conditions identiques à celles indiquées ci-dessus. Les composés sont administrés à raison de 33 nmoles/kgpar injection intraveineuse. * Résu Ltats Les résultats des essais comparatifs sur le taux de récupération de l'électrorétinogramme sont résumés dans le Tableau III, ci-avant + Les résultats ainsi obtenus montrent que les dérivés de l'ester interne de la présente invention augmentent la récupération de l'électro- rétinogramme et montrent qu'une plus grande activité est obtenue pour les gangliosides pour tous les essais effectués. UTILISATION THERAPEUTIQUE Les dérivés d'esters internes de gangliosides de la présente invention peuvent être utilisés en tant que médicaments pour différentes thérapies de traitement du système nerveux, notamment du traitement des troubles nerveux périphériques et des pathologies du système nerveux central. Pl Its particulièrement, les dérivés d'esters internes de gangliosides peuvent être utilisés dans le traitement de troubles du système nerveux périphérique dus à des causes toxi-infectieuses, dégénératives, compressives ou trauma- tiques,envuede la stimulation de la régénération nerveuse et la récupération de la fonction neuromusculaire ou le traitement de désordres du système nerveux central provenant de causes toxi-infectieuses, dégénératives, anoxiques ou traumatiques en vue de la stimulation du bourgeonnement neuronal pour la récupération fonctionnelle. Ces troubles ou lésions ont, jusqu'à présent, été traités à l'aide des gangliosides; cependant, les tests décrits ci-dessus montrent que les dérivés d'esters internes de gangliosides ont une activité bien supérieure à celle des gangliosides eux-mêimes. 11005 Les composés des esters internes de gangliosides selon la présente invention peuvent être utilisés en tant que médicaments dans des prépara- tions pharmaceutiques administrées aux humains ou aux animaux par voie intramusculaire, sous-cutanée ou intradermique, par injection intraveineuse ou infusion Les préparations peuvent être des solutions des composés ou encore une poudre lyophilisée des composés associés à un ou plusieurs supports ou diluants pharmaceutiquement acceptables et contenus dans des milieux tamponnés, a un p H défini, et dans des fluides physiologiques isohosuotiques Le dosage administré dépendra de l'effet recherché et des zones d'administration choisies Par exemple (ce qui n'est pas limitatif), la dose peut être comprise entre 0,05 et 5 mg du composé actif par kilo de poids par jour, à raison de doses unitaires entre 0,05 et 2 mg/kg de poids du corps. Les compositions thérapeutiques selon la présente invention sont en général préparées à l'aide d'un mélange de différents dérivés d'esters internes de gangliosides, mais peuvent être également préparées de façon à ne contenir qu'un seul de ces dérivés actifs isolés. Par exemple, à titre illustratif, le Tab Leau IV, ci-après, montre certaines préparations de compositions pharmaceutiques susceptibles d'être utilisées et préparées sous la forme d'une solution pour le traitement de troubles ou désordres du système nerveux. Les préparations consignées dans ce Tableau IV peuvent être directe- ment administrées aux animaux ou humains par n'importe laquelle des voies précitées En addition, les compositions peuvent contenir d'environ 2 % à environ 50 % en poids de substance active. TABLEAU IV Exemp Les de solutions injectables de la composition pharmaceutique selon l'invention. à Preparation No 1 une ampoule de 2 m L contient: substance active chlorure de sodium tampon à base de citrate ayant un p H 6 dans du pyrogène distillé exempt d'eau mg 16 mg q.s p 2 ml * Préparation No 2 une ampoule de 2 ml contient: substance active chlorure de sodium tampon à base de citrate ayant un p H 6 dans du pyrogène distillé exempt d'eau mg 16 mg q.s p 2 ml a Préparation No 3 une ampoule de 4 ml contient: substance active chlorure de sodium tampon à base de citrate ayant un p H 6 dans du pyrogène distillé exempt d'eau mg 32 mg q.s p 4 ml 2511005 Encore à titre d'exemple illustratif, le Tableau V montre certaines préparations à base d'une compositicn pharmaceutique, susceptibles d'être faites extemporanément pour le traitement de lésions ou troubles du système nerveux, Ces systèmes à base de composition pharmaceutique sont préparés extemporanément à l'aide des deux volumes. Dans le premier conteneur, la substance active qui y est introduite contient environ 10 à 90, en Doids d'une poudre lyophilisée de la substance active en même temps qu'un excipient convenable du point de vue Dharmaceutioue tel que glycine et mannitol. Dans le deuxième conteneur, est contenu un'deuxième solvant contenant la quantité requise de solvant, tel que chlorure de sodium et tampon à base de citrate. Juste avant l'administration, les contenus des deux conteneurs sont mélangés et la poudre à base de substance active lyophilisée se dissout rapidement pour oroduire une solution injectable La préparation de composition pharmaceu- tique comprenant un premier conteneur contenant la poudre lyonhilisée de subs- tance active est la composition pharmaceutique qui est utilisée de préférence dans le cadre de la présente invention, car la substance active à base de dérivés d'esters internes de pangliosides est plus stable dans cet état que lorsqu'elle est sous la forme de solutions. TABLEAU V Exemples de préparation extemporanée de compositions pharmaceutique * Préparation n O 1 a 2 ml de lyophilisat contient substance active 5 mg glycine 30 mg b une ampoule de 2 ml contient: chlorure de sodium 16 mg tampon à base de citrate dans du pyrogène distillé exempt d'eau q s a 2 ml y Préparation n 2 a 3 mt de lyophitisat contient substance active 5 mg mannitol 40 o mg b une ampou Le de 2 mt contient: chlorure de sodium 16 mg tampon à base de citrate dans du pyrogène distille exempt d'eau q s a 2 ml 2 il TABLEAU V (suite) * Préparation n 3 a une ampoule de lyophilisat de 3 ml contient substance active 50 mg glycine 25 mg b une ampoule de 3 mi contient: chlorure de sodium 24 mg tampon à base de citrate dans du pyrogène distillé exempt d'eau q s a 3 ml i Préparation n O 4 a une ampoule de lyophilisat de 3 ml contient substance active 50 mg mannitol 20 mg b une ampoule de 3 ml contient: chlorure de sodium 24 mg tampon à base de citrate dans du pyrogène distillé exempt d'eau q s a 3 ml a Dreparation n O 5 a une fiole de tyophilisat de 5 ml contient substance active 100 mg glycine 50 mg b une ampoule de 4 mi contient: chlorure de sodium 32 mg tampon à base de citrate à p H 6 dans du pyrogène distillé exempt d'eau q s a 4 ml a Préparation no 6 a une fiole de lyophilisat de 5 ml contient substance active 100 mg mannitol 40 mg b une ampoule de 4 ml contient: chlorure de sodium 32 mg tampon à base de citrate à p H 6 dans du pyrogène distillé exempt d'eau q s a 4 ml IL j 1 1 O 5 REVENDICATIONS 1. Procédé de préparation de dérivés d'un ester interne de ganglio- side consistant: (a) à dissoudre dans un solvant aprotique un ganglioside ou un mélange de gangliosides provenant d'un mammifère; (b) à convertir les groupes carboxylates desdits gangliosides en des groupes carboxyliques ou en leurs sels par action d'une résine échangeuse d'ions; (c) à traiter le ganglioside ou mélange de gangliosides résultant par un réactif de lactonisation pour former au moins une liaison lactonique dans lesdits dérivés d'ester interne de ganglioside. 2. Procédé selon la revendication 1, caractérisé en ce que ledit mélange de gangliosides de l'étape (a) a été obtenu à partir d'une cervelle de bovin. 3 Procédé selon la revendication 1, caractérisé en ce que le solvant aprotique est choisi dans le groupe comprenant le diméthyl sulfoxyde, le diméthylformamide, le sulfolane, le tétrahydrofuranne, le diméthoxyéthane et la pyridine. 4. Procédé selon la revendication 1, caractérisé en ce que le réactif de lactonisation est choisi dans le groupe comprenant les carbodiimides solubles dans les solvants organiques, les sels de 2-chloro-1-méthyl-pyri- dinium, l'éthoxyacétylène et le N-éthyl-5-phénylisoxazolium-3 '-sulfonate. 5. Procédé selon la revendication 1, caractérisé en ce que ledit carbodiimide est le dicyclohexylcarbodiimide, le benzylisopropylcarbodiimide ou le benzyléthylcarbodiimide. 6. Procédé selon la revendication 1, caractérisé en ce que le dérivé d'ester interne de ganglioside obtenu dans l'étape (c) est précipité à l'aide d'acétone. 7. A titre de médicament, une composition pharmaceutique pour le traitement de troubles ou lésions du système nerveux périphérique prove- nant de causes toxi-infectieuses, compressives, dégénératives ou trauma- tiques, en vue de la stimulation de la régénération nerveuse et la récu- pération de la fonction neuromusculaire ou le traitement de désordres du système nerveux central provenant de causes toxi-infectieuses, dégénéra- tives, anoxiques ou traumatiques, en vue de la stimulation du bourgeonne- ment neuronal pour la récupération fonctionnelle, qui comprend un 251 1005 support ou diluant acceptable du point de vue pharmaceutique et une quan- tité efficace pour le traitement du système nerveux d'au moins un dérivé d'ester interne de ganglioside, ce dérivé de ganglioside comprenant: (a) une partie à base d'hydrate de carbone, au moins une céramide et au moins un résidu d'acide; (b) ladite partie à base d'hydrate de carbone comprend au moins un résidu de N-acétylgalactosamine ou de N-acétylglucosamine et au moins un résidu de glucose ou de galactose; (c) ledit résidu d'acide comprend au moins un acide N-acétyl-neurami- nique ou N-glycolylneuraminique; et (d) le groupe carboxyle d'au moins un desdits résidus d'acides est lié par une liaison ester à un groupe hydroxy de l'un desdits hydrates de carbone ou d'un desdits résidus d'acide pour former un noyau lactonique. 8. Composition pharmaceutique selon la revendication 7, caractérisée en ce que: (a) la partie hydrate de carbone desdits dérivés de gangliosides présente-la structure: (Gal)(Gal NAC)(Ga L)(Glc)(Céramide) dans laquelle: Gat est un résidu de galactose, Ga LNAC est un résidu de Nacétylgalactosamine, et G Lc est un résidu de glucose. 9. Compositionçselon lawrevendication 7 ou 8, caractérisée en ce que ledit dérivé de ganglioside présente au moins un acide N-acétyl- neuraminique lié à au moins un desdits résidus Gal. 10. Composition selon la revendication 7, caractérisée en ce que: (a) au moins un desdits dérivés de gangliosides présente la structure: (Ga L)(Ga LNAC)(Ga L)(G Lc)(Céramide) -NANA dans laquelle: Gal est un résidu de galactose, Ga LNAC est un résidu de Nacétylgalactosamine, Glc est un résidu de glucose, et NANA est un résidu d'acide N-acétylneuraminique, et (b) ledit NANA est un ester lié audit Ga L. 11. Procédé selon la revendication 7 ou 10, caractérisé en ce que ledit résidu d'acide consiste en acide N-acétyl-neuraminique. 12. Composition selon la revendication 7, caractérisée en ce que la partie hydrate de carbone consiste en des résidus de galactose, de glucose et de N-acétylgalactosamine. 13. Composition selon la revendication 7, caractérisée en ce que ledit dérivé de ganglioside consiste en un mélange de: (a) (Gal)(Gal NAC)(Gat)(Glc)(Céramide) l NANA (b) (Gal)(Gal NAC)(Gal)(Glc)(Céramide) I 1 NANA NANA (c) (Gal)(Gal NAC)(Gal)(Glc)(Céramide) I NANA I NANA et (d) (Gal)(Ga LNAC)(Ga L)(Gtc)(Céramide) I l NANA NANA NANA étant entendu que: Gat représente un résidu de galactose, Ga LNAC représente un résidu de N-acétylgalactosamine, G Lc représente un résidu du glucose, et NANA représente un résidu d'acide N-acétyl-neuraminique, - et en ce qu'au moins un desdits résidus NANA est lié par une liaison ester à un groupe hydroxy d'un résidu de galactose et/ou d'un résidu NANA adjacent pour former un noyau lactonique. 14 Composition pharmaceutique selon l'une quelconque des reven- dications 7 à 13, caractérisée en ce qu'elle est sous forme d'une solution injectable. 15. Composition pharmaceutique selon l'une quelconque des reven- dications 7 à 14, dans laquelle ledit support ou diluant est un mélange de chlorure de sodium et d'un tampon à base de citrate. 16. Composition pharmaceutique selon l'une quelconque des reven- dications 7 à 15, caractérisée en ce que ledit dérivé du ganglioside est présent en une quantité comprise entre environ 2 et environ 50 % en poids. 17. A titre de médicament nouveau, une nrénaration extemnoranée à base d'une composition oharmaceutique destinée au traitement de troubles ou lésions du système nerveux périphérique provenant de causes toxiinfectieuses, compressives, dégénératives ou traumatiques, en vue de la stimulation de la régénération nerveuse et la récupération de la fonction neuro- musculaire ou le traitement de désordres du système nerveux central provenant de causes toxi-infectieuses, dégénératives,_anoxiques ou trau matiques, en vue de la stimulation du bourgeonnement neuronal pour la récupération fonctionnelle, qui consiste en un premier conteneur contenant un système solvant et en un deuxième conteneur contenant un excipient solide et une poudre lyophilisée, en une proportion efficace pour le traitement du système nerveux, d'au moins un dérivé d'ester interne de ganglioside, lesdits dérivés de ganglioside comprenant: (a) une partie à base d'hydrate de carbone, au moins une céramide et au moins un résidu d'acide; (b) ladite partie à base d'hydrate de carbone comprend au moins un résidu de N-acétylgalactosamine ou de N-acétylglucosamine et au moins un résidu de glucose ou de galactose; (c) ledit résidu d'acide comprend au moins un acide N-acétyl-neurami- nique ou N-glycolneuraminique; et (d) le groupe carboxyle d'au moins un desdits résidus d'acides est- lié par une liaison ester à un groupe hydroxy de l'un desdits hydrates de carbone ou d'un desdits résidus d'acides pour former un noyau lactonique, le contenu desdits récipients étant mélangé pour former ladite composition pharmaceutique. 18 Préparation à base d'une composition pharmaceutique selon la reven- dication 17, caractérisé en ce que le premier conteneur contient du chlo- rure de sodium et un tampon à base de citrate. 19. Préparation à base d'une composition pharmaceutique selon la reven- dication 17, caractérisé en ce que l'excipient solide est de la glycine. 20 Préparation à base d'une composition pharmaceutique selon la reven- dication 17 ou 19, caractérisé en ce que l'excipient solide est du mannitol. 21. Préparation à base d'une composition pharmaceutique selon la reven- dication 17, caractérisé en ce que le second conteneur contient ledit dérivé du ganglioside en une quantité comprise entre environ 10 et environ 90 % en poids. 11005 22.-Préparation à base d'une composition pharmaceutique selon l'une quelconque des revendications 17 à 21, caractérisé en ce que: (a) la partie hydrate de carbone desdits dérivés de gangliosides présente la structure: (Gal)(C Ga LNAC)(Ga L)(Glc)(Céramide) dans laquelle: Gai est un résidu de galactose, Ga LNAC est un résidu de N- acétylgalactosamine, et G Lc est un résidu de glucose. 23 Préparation à base d'une composition pharmaceutique selon la reven- dication 22, caractérisé en ce que ledit dérivé de ganglioside présente au moins un acide N-acétyl-neuraminique lié à au moins un desdits résidus Gal. 24. Préparation à base d'une composition pharmaceutique selon l'une quelconque des revendications 17 à 21, caractérisé en ce que: Ca) au moins un desdits dérivés de gangliosides présente la structure: (Gal)(Gal NAC)(Gal)(Glc)(Céramide) NANA dans laquelle: Gal est un résidu de galactose, Ga LNAC est un résidu de N-acétylgalactosamine, G Lc est un résidu de glucose, NANA est un résidu d'acide N-acétylneuraminique, et (b) ledit NANA est un ester lié audit Gal. 25. Préparation à base d'une composition pharmaceutique selon la reven- dication 14, caractérisé en ce que ledit résidu d'acide consiste en acide N-acétylneuraminique. 26. Préparation à base d'une composition pharmaceutique selon l'une quelconque des revendications 17 à 21, caractérisé en ce que la partie hydrate de carbone consiste en des résidus de galactose, de glucose et de N-acétyl-galactosamine. 27. Préparation à base d'une composition pharmaceutique selon l'une quelconque des revendications 17 à 21, caractérisé en ce que ledit dérivé de ganglioside consiste en un mélange de: (a) (Gatl)(Ga LNAC)(Ga L)(G Lc) (Céramide) I NANA (Gal)(Ga LNAC)(Gal)(Glc)(Céramide) I I NANA NANA (Ga L) C Ga LNAC)(Ga L) (Glc)(Céramide) I NANA NANA et (Gat) (Gal INAC)(Gal)(Glc)(Céramide) I I NANA NANA NANA étant entendu que: Gal représente un résidu de galactose, Gal NAC représente un résidu de N-acétylgalactosamine, Glc représente un résidu de glucose, et NANA représente un résidu d'acide N-acétyl-neuraminique, et en ce qu'au moins un desdits résidus NANA est lié par une liaison ester à un groupe hydroxy d'un résidu de galactose et/ou d'un résidu NANA adjacent pour former un noyau lactonique.