Brevet FR2502147A1 — publié le 19820924

-1 - La présente invention concerne des composés intermédiai- res nécessaires à la préparation des peptides de formule A-B-C (1), ainsi que de leurs sels pharmaceutiquement accep- tables; dans cette formule: A est choisi parmi la classe comprenant le groupe L-pyroglutamyle (L-H-(pyro)-Glu), le groupe D-pyroglutamyle (D-H-(pyro)-Glu) et le groupe L-homo- pyroglutamyle (L-H-homo-(pyro-Glu);B est choisi parmi la classe comprenant le groupe L-histidyle (L-His), le groupe D-histidyle (D-His), le groupe L-3'méthylhistidyle (L-N - 3-MeHis), le groupe L-phénvlalanyle (L-Phe), le groupe L-p- aminophényl-alanyle (L--NH2Phe), et le groupe L-( pyrazolyl- 1)-alanyle (L-B-(pyrazolyl-1)Ala); et C est choisi parmi la classe comprenant la glycine et ses esters alkyliques inférieurs (Gly-OR o R représente un atome d'hydrogène ou un groupe alkyle inférieur), le glycine-amide et les alkyl inférieur-amides de glycine (Gly-NHR o R représente un atome d'hydrogène ou un groupe alkyle inférieur), le groupe 2-amino-1-hydroxyéthyle (Gly-d1), la D-alanine (D-Ala), la L-e-(2-thiényl) alanine, et NHR1 ou Rl'représente un groupe alkyle inférieur, à condition que C ne puisse être la glycine ou le glycine-amide lorsque A est un groupe L-pyroglutamyle et que B est un groupe L-histidyle. Ces composés sont utiles comme agents anorexigéniques chez les mammifères dans des procédés de traitement de l'obésité et d'autres états patho- logiques pour lesquels une réduction de l'ingestion de nourriture est indiquée, de même que dans des procédés de traitement d'états pathologiques associés à une sécrétion excessive d'acide gastrique ou de fluide pancréatique, par exemple, les ulcères gastriques ou duodénaux ou encore la pancréatite aiguë, ainsi que dans certains états critiques du système nerveux central, par exemple, la réduction de l'état de conscience ou le coma résultant de lésions du cerveau. Les abréviations utilisées dans la présente spécifica- tion pour désigner les acides aminés ou leurs radicaux, de -2- même que les groupes protecteurs sont généralement basées sur les recommandations de la "IUPAC-IUB Commission on Bio- chemical Nomenclature" (voir "Biochemistry" 11, 1726 (1972)); par exemple: (pyro)-Glu = 5-oxoproline ou acide pyrogluta- mique; homo-(pyro)-Glu = acideihomopyroglutamique; His = histidine; Nim-3-MeHis = 3'-methylhistidine; Phe = phé- nylalanine; p-NH2 Phe = p-aminophénylalanine, 5-(pyrazolyl- 1)Ala = B-(pyrazol-l-yl)-alanine; Gly = glycine; Gly-ol = 2-aminoéthanol et Thi = B-(2-thiényl)alanine. Sauf indica- tion contraire, tous les acides aminés ont la configuration naturelle ou la configuration L; D-His est le radical de la D-histidine; D-(pyro)-Glu est le radical de l'acide D-py- roglutanique et D-Ala est le radical de la D-alanine. Les abréviations Me et Et sont utilisées respectivement pour dé- signer le groupe méthyle et le groupe éthyle. Les abrévia- tions utilisées pour les groupes protecteurs sont, par exem- ple: Boc = t-butyloxy-carboRyle; Z = benzyloxycarbonyle; Tos = tosyle; Dnp =,dinitrophényle. Nim désigne l'atome d'azote d'imidazole de l'histidine et Y désigne un groupe de fixation approprié utilisé dans la synthèse en phase so- lide en liaison avec un support constitué d'une résine so- lide, de préférence: -0-CH support -O-CH2 résine Le contrôle humoral de l'appétit, en particulier, via l'hypothalamus, a fait l'objet de discussions pendant de nombreuses années (voir, par exemple, le rapport de Schally et al., "Am. J. Med. Sci." 248, (1), 79 (1964) et les réfé- rences y citées). A ce moment, on savait que l'hypothalamus intervenait dans la régulation de l'ingestion de nourritur- re. La stimulation électrique de la région hypothalamique latérale produit une hyperphagie et sa destruction aboutit à une aphagie. En revanche, la stimulation du noyau ventro- -3 - -médian diminue l'ingestion de nourriture et la destruction de ce noyau aboutit à l'hyperphagie et à l'obésité. Le syndrome d!obésité qui découle de l'administration de thioglucose d'or est, en partie, la résultante de l'hy- perphagie associée aux lésions hypothalamiques produites par cet agent. Les théories relatives au contrôle neural de la faim, de l'appétit et de la satiété ont été révisées effi- cacement par d'autres chercheurs et plusieurs mécanismes ont été suggérés: 1) la théorie. thermostatique. Suivant cette théorie, l'action dynamique spécifique de la nourriture et ses effets sur la température du corps règlent l'appétit. 2) Théories chimiostatiques. Selon ces théories, l'ap- pétit est réglé par des teneurs intracellulaires ou extra- cellulaires en glucose (théorie glucostatique), en lipides (théorie lipostatique) et également par la concentration de certaines métabolites, telles que les acides-aminés du sérum. 3) Selon un autre groupe de théories, les sensations provenant des voies digestives en association avec l'inges- tion de nourriture et la présence de nourriture dans l'es- tomac et l'intestin règlent l'appétit. Parmi les facteurs intervenant dans l'impression de satiété ou la cessation de l'ingestion de nourriture, il y a la distention provoquée dans l'estomac par la nourriture ou des substances non nu- tritives. Les contractions gastriques peuvent être en rela- tion avec le comportement vis-à vis de la faim, mais ces contractions sont les mêmes chez les animaux devenus apha- giques ou hyperphagiques suite à des lésions hypothalamiques que chez des animaux normaux privés de nourriture et d'eau. Ces théories n'expliquent pas tous les faits expéri- mentaux parmi lesquels on peut mentionner qu'un animal dia- bétique peut avoir faim. Schally et al. mentionnés ci-dessus suggèrent alors que l'obésité observée chez^les animaux à la suite de lésions hypothalamiques pourrait être modérée par un mécanisme humoral plutôt que par un mécanisme neurogène 4 - et que l'hypothalamus peut élaborer une substance interve- nant dans un contrôle central de l'appétit. On cite une preuve préliminaire suggérant la présence, dans l'extrait neurohypophysaire, d'une substance influençant la phase dy- namique du gain de poids chez dés souris traitées au thio- glucose d'or. Un bref rapport plus récent de l'état des recherches relatives au contrôle hypothalamique de l'ingestion de la nourriture et de l'obésité est donné par Schally et al. ("Recent Progress in Hormone Research" (= Progrès récents réalisés dans la recherche des hormones), "Proceedings of the 1967 Laurentian Hormone Conference", 24, 497 (1968), en particulier, pages 570-571 et les références y citées). Par- mi ces références, il y a le document donné par Schally et al. dans "Science" 157, 210 (1967) o il est démontré que l'administration d'entérogastrone purifiée à partir du duo- dénum de chien réduit l'ingeÉtion de nourriture chez des souris privées de nourriture pendant'17 heures. Cet effet a atteint son maximum au cours des trente premières minutes, mais la réduction cumulative s'est poursuivie pendant au -moins 4 heures. D'autres peptides préparés à partir du co*lon ou du duodénum de chien, de même que la glucagone, la sécré- tine, le glucose et l'albumine de sérum bovin sont ine.ffica- ces. Les auteurs stipulent que cet effet pourrait être dû à une élimination directe des contractions gastriques provo- quées par la faim ou qu'il pourrait être modéré, en agissant par l'intervention du système nerveux central, notamment par libération de substances hypothalamiques, encore qu'actuel- lement, on ne dispose toujours pas d'une preuve positive dé- montrant que les neurohumeurs hypothalamiques sont responsa- bles du contrôle direct ou indirect de l'appétit. Il semblerait que cette preuve positive ait été fournie par Trigstad et al., "Acta Endocrinologica" 89, 196 (1978) qui ont isolé, de l'urine de patients souffrant de lipody- strophie générale congénitale due à un syndrome hypothalami- -5- que, un certain nombre de peptides produisants des effets sur le comportement métabolique. La névrose anorexique est associée à des troubles hypothalamiques. Dans le névrose a- norexique hypothalamique primaire, l'axe pituitaire hypotha- lamique est perturbé, entraînant ainsi une lente libération des gonadotropines, l'aménorrhée, la perte du rythme diurne pour la sécrétion de l'hormone adrénocorticotrope, une sé- crétion réduite de la thyrotropine, ainsi qu'un accroisse- ment initial et une diminution ultérieure de la sécrétion de la somatotropine. On a soumis des précipités d'échantillons d'urine pré- levée de 25 patients chei lesquels on a diagnostiqué une né- vrose anorexique, à une chromatographie dans des colonnes de gel "Sephadex G-25" et on a pu les diviser en quatre types différents: l'un était semblable à celui de témoins nor- maux, un autre était semblable à celui observé chez des pa- tients atteints de schizophrénie, un troisième type a été ob servé chez 5 patients atteints d'une:.névrosè de type hysté- riforme, tandis que l'on a observé également des chromato- grammes spécifiques chez 10 sujets féminins considérés comme atteints d'une névrose anorexique de type "hypothalamique7 primaire. Des fractions influençant l'appétit chez les sou- ris ont été trouvées dans le dernier groupe seulement. Deux peptides influençant l'appétit ont été purifiés au cours de plusieurs étapes de chromatographie. L'un a augmenté l'appé- tit et l'autre l'a réduit chez des souris auxquelles on les avait injectés. Les peptides sont enveloppés dans des pro- téines supports et, dès lors, ils sont protégés contre la dégradation enzymatique, permettant ainsi de les isoler de l'urine. La structure du peptide anorexigénique a été éclaircie par Reichelt et al., "Neuroscience" 3, 1207 (1978) qui ont travaillé en collaboration étroite avec Trygstad mentionné ci-dessus et il a été déterminé que ce peptide était le tii- peptide: "H-(pyro)-Glu-His-GlyOH"; cet-te structure a été également confirmée par synthèse. - 2502147 -6- Une dose de 12 nmoles du peptide freinant l'appétit, que l'on a injecté quotidiennement à des souris pendant 20 jours, a réduit la consommation de nourriture de 5,7 à 3 g par jour pendant environ 6 mois. Le poids du corps est tom- bé d'une moyenne de 35 g à un minimum de 24 g. Le tripeptide n'exerce aucun effet aigu sur les teneurs en glucose du sang ou en insuline du sérum et il semble agir sur des récepteurs localisés dans les centres hypothalami- ques contrôlant l'appétit. Le peptide stimulant l'appétit augmente quotidiennement la consommation de nourriture à plus de 10 g et le poids moyen du corps saute à 57 g. La structure du peptide stimu- lant l'appétit n'a pu être identifiée. Deux facteurs analogues provoquant un accroissement et une réduction de l'ingestion de nourriture ont été également isolés chez des patients atteints d'obésité métabolique gé- nétique. La Demanderesse a trouvé que les peptides de formule (1) A-B-C dans laquelle A, B et C ont les significations dé- finies ci-dessus, avaient une activité supérieure et de plus longue durée pour réduire l'appétit et inhiber l'ingestion de nourriture que le tripeptide pyroglutamyl-histidyl-gly- cine (H-(pyro)-Glu-His-Gly-OH) isolé de l'urine par Trygstad et al., ainsi que par Reichelt et al. (citées ci-dessus). En conséquence, les peptides de formule (1) et leurs sels phar- maceutiquement acceptables, qui sont biologiquement équiva- lents aux peptides ci-dessus eux-mêmes, sont utiles comme agents anorexigéniques dans le traitement de l'obésité et des états pathologiques associés exigeant une réduction de l'ingestion de nourriture. Ces peptides réduisent également la sécrétion gastrique et la sécrétion pancréatique, si bien qu'ils sont utiles pour le traitement d'états pathologiques associés à une production excessive d'acide gastrique et/ou de fluide pancréatique. De plus, ils exercent certaines ac- tivités sur le système nerveux central, de sorte qu'ils -7- sont utiles pour le traitement d'états aigus de conscience réduite. Comparativement aux tripeptides naturels, ils possèdent l'avantage d'exercer une plus forte activité pendant une plus longue durée et ces deux caractéristiques sont d'une importance pratique, car les plus faibles doses efficaces minimales réduisent les effets secondaires et les coOts de préparation des composés, tandis que les propriétés relati- ves à l'activité prolongée réduisent la fréquence de l'ad- ministration. Compte tenu de l'équivalence biologique des peptides de formule 1 et leurs sels pharmaceutiquement acceptables, il est entendu que les références ci-dessus et ci-après relati- ves aux peptides de formule 1 couvrent à la fois ces pepti- des et ces sels. Les composés de, la présente invention sont choisis par- mi le groupe comprenant des composés de formule (1) A-B-C dans laquelle A, B et C ont.les significations définies ci- dessus, ainsi que leurs sels pharmaceutiquement acceptables et également les produits intermédiaires protégés reliés à un support résineux solide utilisé dans la préparation des composés ci-dessus de formule (1) Les groupes protecteurs utilisés dans les synthèses par étapes en phase solide des produits intermédiaires sont choisis parmi ceux pouvant être éliminés par un ou plusieurs traitements chimiques sans altérer le composé désiré de for- mule (1). De plus, ces groupes protecteurs sont également choisis de façon à pouvoir être éliminés en une seule étape conjointement avec d'autres groupes protecteurs, par exem- ple, avec le groupe de fixation Y défini ci-dessus. Un grou- pe protecteur particulièrement approprié pour le groupe a- mino terminal de n'importe quel acide aminé utilisé lors de la synthèse par étapes ou en phase solide des produits in- termédiaires ci-dessus, est le radical R2, à savoir le groupe t-butyloxycarbonyle (Boc); parmi les groupes protzc- -8-_ 2502147 teurs appropriés pour l'atome d'azote d'imidazole de l'his- tidine, il y a le radical R3, de préférence, le groupe tosy- le (Tos) ou le groupe dinitrophényle (Dnp); un groupe pro- tecteur approprié pour le groupe phénylamino de la p-amino- phénylalanine est le radical R4, à savoir le groupe benzylo- xycarbonyle (Z) et un grDupe approprié pour la fixation au suppcrt résineux est le groupe Y défini ci-dessus, par exem- ple, le groupe -O-CH2-. Les groupes protecteurs ci-dessus sont stables vis-à vis des réactifs, ainsi que dans les con- ditions réactionnelles adoptées pour éliminer le groupe pro- tecteur du groupe amino terminal, ainsi que lors de la réac- tion ultérieure de couplage. L'expression "groupe alkyle inférieur" désigne un grou- pe alkyle à chaîne droite ou ramifiée contenant 1 à 3 atomes de carbone. On prépare les peptides dé formule (1) moyennant une synthèse par étapes en phase'solide,en partant du groupe carboxy terminal. En résumé, la protection de l'acide aminé particulier choisi pour représenter C ou B lorsque C est NHR o R1 est un groupe alkyle inférieur comportant un groupe a-amino protégé de manière appropriée, ainsi que d'autres groupes protecteurs qui y sont éventuellement fixés (cet acide aminé étant également fixé sur le support rési- neux au moyen du groupe Y défini ci-dessus), est éliminée du groupe aamino et cet acide aminé est couplé avec l'acide aminé particulier choisi pour B ou pour A lorsque C est NHR ainsi qu'on l'a défini ci-dessus, en utilisant un dialkyl- carbodiimide ou un dicyclo-alkyl-carbodiimide approprié com- me réactif de couplage. On répète le procédé ci-dessus jus- qu'à ce que le nombre désiré d'acides aminés soient couplés ensemble. On élimine ensuite la protection du groupe amino terminal, on élimine également les autres groupes protec- teurs éventuellement présents, de même que le groupe de fi- xation Y et l'on obtient le peptide brut désiré en éliminant le solvant. On purifie le produit brut-par chromatographie, -9-- par exemple, par filtration sur gel, afin d'obtenir le pep- tide désiré à l'état pur. Les matières de départ pour les peptides de formule 1 sont disponibles dans le commerce ou On peut avantageusement les préparer par des procédés connus en soi. C'est ainsi que tous les acides aminés utilisés dans les synthèses des pep- tides ci-dessus sont disponibles dans le commerce, hormis les exceptions suivantes: on prépare l'acide homo-(pyro)- glutamique comme décrit par Greenstein et Winitz dans "Che- mistry of the Amino Acids', pages 2407-2462, J. Wiley, New York, 1961; tandis que l'on prépare la B-(2-thiényl) alani- ne comme décrit ibid. page 2707. Les supports résineux solides appropriés sont des rési- nes chlorométhylées ou hydroxyméthylées, les premières étant préférées. La préparation d'une résine hydroxyméthylée est décrite par M. Bodansky et J. T. Sheehan, "Chem. Ind." (Lon- dres) 36, 1597 -(1966).' Une résine chlôrométhylée est vendue dans le commerce par "Bio Rad Laboratories", Richmond, Cali- fornie, E.U.A. Lorsqu'on utilise la résine chlorométhylée, il se forme un groupe de fixation d'ester avec l'acide aminé C 1 t protégé sur le groupe a-amino (ou B si C est NHR comme dé- fini ci-dessus) comportant, au besoin, des groupes protec- teurs supplémentaires, comme indiqué ci-après: (C ou B protégé)-O-CH2 suppor résineux Un procédé approprié pour transformer le peptide proté- gé et relié en (alkyl inférieur)-amide sur l'atome de carbone terminal consiste à cliver le peptide protégé de la résine par traitement avec une alkyl inférieur-amine (voir D.H. Coy et al., "Biochem., Biophys. Res. Commun.'", 7, 335 (1974) pour obtenir l'(alkyl inférieur)-amide de peptide protégé -10- correspondant. Ensuite, on élimine les groupes protecteurs de l'(alkyl inférieur) amide de peptide obtenu par traite- ment avec du sodium et de l'ammoniaque liquide ou, de pré- férence, en procédant à un clivage au fluorure d'hydrogène pour obtenir le peptide correspondant de la présente inven- tion. Un autre procédé consiste à effectuer le clivage par transestérification avec un alcanol inférieur, de preféren- ce, le méthanol ou l'éthanol, en présence de triéthylamine pour obtenir l'ester correspondant. On peut transformer cet ester en (alkyl inférieur) amide correspondant, pour en éli- miner ensuite la protection comme décrit ci-dessus. Lors- qu'on désire obtenir l'aeide carboxylique libre, il est pré- férable d'effectuer le clivage avec du fluorure d'hydrogène dans de l'anisole et, lorsqu'on désire obtenir l'amide d'a- cide, on effectue le clivage avec de l'ammoniaque (voir éga- lement J.M. Stewart et J.D. Young, "Solid Phase Peptide Syn- thesis" W.H. Freeman & Co., San Francisco, 1969, pages 40- 49). Plus spécifiquement, dans une forme de réalisation de la présente invention, on couple une glycine protégée sur le groupe a-amino, de préférence, la t-butyloxycarbonyl-glyc-i- ne, avec une résine chlorométhylée à l'aide d'un catalyseur, de préférence le bicarbonate de césium ou la triéthylamine. Apres le couplage,de la glycine protégée sur le groupe a- amino avec le support résineux, on élimine le groupe protec- teur du groupe a-amino, par exemple, en utilisant de l'aci- de trifluoracétique dans du chlorure de méthylene, de l'a- cide trifluoracétique seul ou de l'acide chlorhydrique dans du dioxanne. L'élimination de la protection s'effectue à une température comprise entre environ 0 C et la température am- biante. On peut adopter d'autres conditions et d'autres ré- actifs classiques de clivage pour éliminer ces groupes spé- cifiques protecteurs de groupes a-amino comme décrit par E. Schroder et K. Lubke, "The Peptides", volume 1, "Academic Press", New York, 1965, pages 72-75. Après élimination du groupe protecteur du groupe a-amino, on couple, par étapes -1 1- et dans l'ordre désiré, les autres acides aminés protégés sur les groupes a-amino afin d'obtenir le peptide désiré. On introduit chaque acide aminé protégé dans le réacteur en phase solide en un excès à peu près triple et l'on effectue le couplage dans un milieu constitué de chlorure de méthy- lène ou d'un mélange de diméthylformamide dans du chlorure de méthylène. En cas de couplage incomplet, on répète le procédé de couplage avant l'élimination du groupe protecteur du groupe a-amino et avant le couplage de l'acide aminé sui- vant dans le réacteur en phase solide. On contrôle le succès de la réaction de couplage à chaque étape de la synthèse par la réaction à la ninhydrine comme décrit par E. Kaiser et al., "Analyt. Biochem." 34, 595 (1970). Après avoir effectué la synthèse de la séquence désirée d'acides aminés, on élimine le peptide protégé du support résineux par traitement avec une (alkyl inférieur) amine pour obtenir l' (alkyl inférieur) amide de peptide protégé correspondant et, lorsqu'on a utilise le groupe dinitrophé- nyle ou le groupe tosyle comme groupe protecteur pour le ra- dical histidyle, on élimine également le groupe protecteur dinitrophényle ou tosyle au cours du traitement avec l'(al- kyl inférieur) amine. On peut également séparer le peptide de la résine par transestérification avec un alcanol infé- rieur, de préférence, le méthanol ou l'éthanol, en présence de triéthylamine, après quoi on purifie l'ester récupéré par chromatographie sur du gel de silice. On peut soumettre la fraction recueillie à un traitement avec une (alkyl infé- rieur) amine pour transformer l'ester alkylique inférieur, de préférence, l'ester méthylique ou l'ester éthylique, en (alkyl inférieur) amide sur la terminaison carboxy; il est à noter que, s'il est présent sur le radical histidyle, le groupe dinitrophényle ou le groupe tosyle sera également clivé. Les autres groupes protecteurs des chaînes latérales de l'alkyl-amide protégé sont ensuite clivés par des procé- dés du type décrit ci-dessus, par exemple, par traitement - 2- avec du sodium dans de l'ammoniaque liquide ou au moyen de fluorure d'hydrogène. On peut également éliminer le peptide protégé du support résineux avec de l'ammoniaque pour obte- nir l'amide correspondant, ou avec du fluorure d'hydrogène et de l'anisole pour obtenir l'acide libre correspondant. On prépare des peptides de formule (1) dans laquelle C repré- sente un groupe 2-aminohydroxyéthyle (Gly-ol), par clivage d'une A-Bdipeptide - résine avec du 2-aminoéthanol; il est à noter que, s'il est présent sur le radical.histidyle, le groupe dinitrophényle'bu le groupe tosyle sera également é- liminé par ce procédé. Les peptides de formule 1 suivant la présente invention peuvent être obtenus sous forme de sels d'addition d'acide. * Parmi ces sels, il y a, par exemple, ceux obtenus avec des acides organiques tels que l'acide acétique, l'acide lacti- que, l'acide succinique, l'acide benzolque, l'acide salicy- lique, l'acide méthane-sulfonLque ou l'acide toluène-sulfo- nique, ainsi qu'avec'des acides polymères tels que l'acide tannique ou la carboxyméthyl-cellulose, de même que les sels obtenus avec des acides inorganiques tels que les hydracides halogénés, par exemple, l'acide chlorhydrique, ou encore l'acide sulfurique ou l'acide phosphorique. On transforme é- ventuellement un sel d'addition d'acide particulier en un autre sel d'addition d'acide, par exemple, un sel avec un autre sel non toxique et pharmaceutiquement acceptable, par traitement avec la résine appropriée échangeuse d'ions de la manière décrite par R.A. Boissonnas et al., "Helv. Chim. Acta", 43, 1349 (1960). Parmi les résines appropriées échan- geuses d'ions, il y a les échangeurs de cations à base de cellulose, par exemple, la carboxy-méthyl-cellulose ou des échangeurs de cations à base de dextrane réticulé et modifié chimiquement, par exemple, les échangeurs du type de la ré- sine "Sephadex C", de même que les résines échangeuses d'a- nions fortement basiques, par exemple, celles énumérées par J.P. Greenstein et M. Winitz dans "Chemistry of the Amino -13- Acids", John Wiley and Sons, Inc., New York et Londres, 1961, volume 2, page 1456. Les peptides de formule 1 et leurs sels possèdent des propriétés anorexigéniques intéressantes et de longue durée, de même que des propriétés d'inhibition des secrétions gas- triques et pancréatiques et également des propriétés d'ac- tivation du système nerveux central. On détermine les propriétés anorexigéniques et de ré- duction de l'appétit que possèdent les peptides de formule 1, dans des expériences de distribution de nourriture chez les souris, les rats ou les chiens comme décrit par Trygstad et al., ainsi que par Reichelt et al. (mentionnés ci-dessus} Les propriétés d'inhibition des secrétions gastriques et/ou pancréatiques des peptides de formule 1 sont déterminées chez des rats conscients ou, de préférence, chez des chiens conscients présentant des fistules oesophagiennes, gastri- ques et pancréatiques, de même que chez des chiens présen- tant des sacs de Heidenhain (voir, par exemple, B.P. Babkin, "Secretion Mechanism of Digestive Glands", 2ème édition, P.B. Hoeber, New York, 1950, cité dans "Physiology", E. Selkurt, Editor, Little, Brown and Company, Boston, 1963, pages 542-544; L. Olbe "Gastroenterology" 32: 460, (1959); Antin et al., "Journal of Comparative and Physiological Psy- chology" 89: 784 (1975) et Liebling et al., ibid. 89: 955 (1975)). Les activités des peptides de formule 1 sur le sys- tème nerveux central, en particulier, leur spectre caracté- ristique d'effets neurotropes peuvent être déterminés par différents essais sur le système nerveux central comme dé- crit, par exemple, par A.J. Kastin, R.D. Oison, A.V. Schal- ly et D.H. Coy, Life Sciences 25: 401 (5) (1975); A.J. Prange, G.R. Breese, J.M. Cott, B.R. Martin, B.R. Cooper, I.C. Wilson et N.P. Plotnikoff, Life Sciences 14: 447 (1974) et M. Brown et W. Vale, "Endocrinology" 96: 1333 (1975). La souris, le rat ou le chien est l'animal expérimental préféré pour déterminer les propriétés de réduction de l'ap- pétit ou les propriétés anorexigéniques des médicaments, de même que pour déterminer leurs propriétés d'inhibition des sécrétions gastriques et/ou pancréatiques; par ailleurs, un excellent parallélisme entre des études pratiquées sur animaux et des résultats cliniques observés chez l'être hu- main a été démontré dans de nombreux cas, par exemple, chez des êtres humains sous ingestion contrôlée d'un régime ali- mentaire liquide par voie orale ou par voie intragastrique (voir, par exemple, H.A. Jordan, "Journal of Comparative and Physiological Psychology" 68, 498 (1969); G.A. Bray et F.L. Greenway, "Clinics in Endocrinology and Metabolism" 5 (2), 455 (1976) et H.D. Janowitz, "Role of gastrointestinal tract in regulation of food intake" cité dans "Handbook of Physiology", section 6, Alimentary Canal. C.F. Code et W. Heidel, Editors, American Physiological Society, Washington, 1967). L'efficacité des peptides de formule 1 et de leurs sels pharmaceutiquement acceptables pour réduire l'appétit et en tant qu'agents anorexigéniques peut être démontrée en utilisant des rats. Le rat est un des animaux expérimentaux préférés pour démontrer l'activité de médicaments inhibant l'ingestion de nourriture et un parallélisme entre des ré- sultats obtenus chez des rats et chez des êtres humains a été établi par de nombreux auteurs différents. Par exemple, dans "The Obese Patient", volume IX de "Major Problems in Internal Medicine" par W.B. Saunders Company, Philadelphie, Londres, Toronto, 1976, au chapitre 9 intitulé "Drug Thera- py for the Obese Patient", au paragraphe "Pharmacology - Effects on the Central Nervous System", page 364, tableau 9-4, G.A. Bray donne des résultats obtenus chez des rats, ces résultats démontrant, entre autres, la réduction de l'ingestion de nourriture due à un certain nombre de médi- caments anorexigéniques; par ailleurs. au paragraphe "Clinical Use of Anorectic Drugs", tableau 9-7, page 369, -15- il est indiqué que tous les médicaments repris dans le ta- bleau 9-4 mentionné ci-dessus sont également cliniquement utiles. En raison des propriétés mentionnées ci-dessus, les peptides de formule 1 sont utilement administrés aux mammi- fères tant en médecine vétérinaire qu'en médecine humaine. Les propriétés anorexigéniques et de réduction de l'ap- pétit sont utiles pour le traitement de l'obésité et notam- ment pour la réduction pré-opératoire du poids du corps qui est fréquemment requise chez des patients obèses avant une intervention chirurgicale importante. Ces propriétés sont également utiles pour le traitement d'autres états patholo- giques exigeant une réduction de l'ingestion de nourriture et du poids du corps, par exemple, dans certaines formes de diabètes ou de troubles circulatoires. Les propriétés des peptldes de formule 1 pour réduire la sécrétion de l'acide gastrique et-du fluide pancréatique sont utiles pour le traitement d'états pathologiques asso- ciés à une hypersécrétion gastrique et/ou pancréatique d'a- cide gastrique ou de gastrine, de pepsine ou d'histamine, par exemple, les ulcères gastriques ou duodénaux ou encore la pancréatite aiguë. Les effets des peptides de formule 1 sur le système nerveux central présentent un profil neurotrope d'activités qui est sensiblement différent des profils présentés par les médicaments classiques et par les médicaments antidé- presseurs tricycliques. Grace à l'activation exercée par les peptides de formule 1 sur le système nerveux central, ces peptides sont utiles pour le traitement d'états de conscience réduite ou de coma suite à des lésions du cer- veau, par exemple, dans des cas de tumeurs ou de traumatis- mes cérébraux, pour le traitement de gelures graves ou dans certains états post-opératoires, de même quke dans des états de conscience réduite résultant de certaines maladies vas- culaires ou d'une ingestion excessive de médicaments, par -16- 2502147 exemple, lors d'intoxications provoquées par des médica- ments. Lorsqu'on utilise un des peptides de formule 1 ou un de leurs sels pharmaceutiquement acceptables chez des mam- mifères comne agent de réduction de l'appétit pour la nour- riture ou comme agent anorexigénique pour le traitement de l'obésité et d'autres états pathologiques exigeant une ré- duction de l'ingestion de nourriture, comme agent destiné à inhiber les sécrétions gastriques ou pancréatiques excessi- ves ou encore comme agent d'activation du système nerveux central, par exemple, chez des souris, des rats ou des chiens, on peut l'utiliser seul ou en combinaison avec des supports pharmaceutiquement acceptables dont la proportion est déterminée par la solubilité et la nature chimique du composé, le mode d'administration choisi et la pratique bio- logique courante. Par exemple, le composé peut-être adminis- tré par voie orale en une quantité efficace pour réduire l'appétit et/ou l'ingestion de nourriture et ce, sous une forme solide contenant des excipients tels que l'amidon, le sucre, certains types d'argiles et analogues. De même, cette quantité peut également être adminis- trée par voie orale sous forme de solutions ou de suspen- sions ou encore, le composé peut être injecté par voie pa- rentérale. Pour l'administration orale ou parentérale, le composé peut être utilisé sous forme d'une solution ou d'u- ne suspension sterile dans un support liquide pharmaceuti- quement acceptable tel que l'eau, l'éthanol, le propylène- glycol ou le polyethylène-glycol, cette solution ou cette suspension contenant d'autres solutes ou d'autres agents de mise en suspension, par exemple,.du glucose-ou une solution saline en.une quantité suffisante pour rendre.la solution i- sotonique, des. sels biliaires, de l!acacia, de. la gélatine, du mono-olêate de sorbitanne, du polysorbate 80 (ester olé- ate de sorbitol et ses anhydrides copolymérisés-. avec l'oxyde d'éthylène) c'est-à dire-le "Tween 80" (marque commerciale déposée) et analogues. Le dosage des peptides de formule 1 de la présente in- vention variera en fonction de la forme d'administration et du composé particulier choisi. De plus, il variera en fonc- tion de l'hôte particulier traité. En règle générale, on entame le traitement avec de faibles dosages sensiblement inférieurs à la dose optimale du composé. Ensuite, on aug- mente le dosage par petits incréments jusqu'à ce qu'on at- teigne l'effet optimum dans les circonstances auxquelles on a affaire. En règle générale, les composés de la présente invention sont le plus avantageusement administrés en une concentration donnant des résultats efficaces pour la réduc- tion de l'appétit et/ou de l'ingestion de nourriture, pour l'inhibition des secrétions gastriques et/ou pancréatiques ou encore pour l'activation du système nerveux central sans produire des effets secondaires nuisibles ou néfastes, de préférence, en une concentration se situant dans l'interval- le allant d'environ 1 à enviTon 250mcg/kg du poids du corps /jour, encore que des modificationspuissen-t être apportées ainsi qu'on l'a mentionné ci-dessus. Toutefois, pour obte- nir des résultats efficaces, on emploie le plus avantageu- sement un dosage se situant dans l'intervalle allant d'envi- ron 5 à environ 100 mcg/kg/jour, de préférence, en doses di- visées. Les activités de réduction de l'appétit et/ou de l'in- gestion de nourriture, de même que les propriétés d'inhibi- tion des sécrétions gastriques et/ou pancréatiques et éga- lement les activités exercées sur le système nerveux central par les peptides de formule 1 sont, en poids, de loin supé- rieures à celles d'un certain nombre de médicaments bien connus habituellement utilisés à des fins identiques. De plus, la plupart des agents anorexigéniques cliniquement u- tiles ont des structures apparentées à celle de la phéné- thylamine et ils exercent un certain nombre d'effets secon- daires inopportuns associés à cette dernièire structure. Les peptides de formule 1 ne sont pas apparentées à la phéné- thylaxine et ils présentent l'avantage de ne pas exercer -18- 2502147 les effets secondaires inopportuns connus associés à cette dernière structure. De plus, ils ont une faible toxicité, et, dès lors, ils peuvent être administrés dans des condi- tions sûres. Lorsqu'on emploie un peptide de formule 1, de préfé- rence,tous forme d'un de ses sels d'addition d'acide, en mé- decine humaine, on peut l'administrer par voie systémique, soit par injection intraveineuse, sous-cutanée ou intramus- culaire, soit encore par administration sublinguale ou na- sale, dans des compositions dans lesquelles on emploie con- jointement un support ou un véhicule pharmaceutiquement ac- ceptable. Des compositions pharmaceutiques des composés de for- mule 1 peuvent également être formulées en vue d'une admi- nistration par voie orale. A cet effet, on peut mélanger l'ingrédient actif avec des excipients pharmaceutiques con- nus et appropriés et on peut l'incorporer, par des moyens connus, dans des formulations telles que des comprimés, des capsules, des suspensions, des émulsions, des solutions ou des poudres dispersables. On peut remplir des capsules avec des formulations so- lides en vue d'une administration par voie orale. Ces for- mulations appropriées pour remplir des capsules peuvent contenir l'ingrédient actif solide en mélange avec des ma- tières solides exerçant un effet tampon, par exemple, l'hy- drogénophosphate de calcium ou l'hydroxyde d'aluminium.col- loidal ou encore avec un solide inerte tel que le lactose. Conformément à la technique connue, on peut préparer des formulations des compositions contenant les composés de formule 1 sous forme de comprimés qui peuvent être enrobés et qui peuvent être effervescents ou non. On utilise des supports ou des diluants inertes, par exemple, le carbona- te de magnésium ou le lactose, conjointement avec des a- gents désintégrants classiques, par exemple, l'amidon de 1 9- mais et l'acide alginique, ainsi que des agents lubrifiants, par exemple, le stéarate de magnésium. En vue d'une administration par voie nasale sous forme de gouttes ou de pulvérisations, il est préférable d'utili- ser les peptides de formule 1 en' solution dans un véhicule aqueux stérile qui peut également contenir d'autres solutés tels que des tampons ou des agents de conservation, de même que du glucose ou des sels pharmaceutiquement acceptables en quantités suffisantes pour rendre la solution isotonique. Des doses pour une administration par voie intranasale se situent entre 1 et 250 mcg/kg/jour ou, de préférence, entre environ 5 et environ 100:mcg/kg/jour. Les peptides de formule 1 peuvent également être admi- nistrés sous forme de poudres nasales ou d'insufflations. A cet effet, on administre le peptide de formule 1 sous forme solide finement divisée conjointement avec un support soli- de pharmaceutiquement acceptable, par exemple, un polyéthy- lène-glycol finement divisé ("Carbowax 1540"), un lactose finement divisé ou une silice très finement divisée ("Cab- 0-Sil"). Ces compositions peuvent également contenir d'au- tres excipients sous une forme solide finement divisée, par exemple, des agents de conservation, des tampons ou des a- gents tensio-actifs. Les peptides de formule.1 peuvent également être ad- ministrés sous une des formes de dosage à activité prolon- gée, à libération lente ou à effet dépôt que l'on décrira ci-après et ce, de préférence, par injection intramusculai- re ou par implantation. Ces formes de dosage sont conçues pour libérer environ 5 à environ 100 mcg/kg du poids du corps /jour. Il est souvent souhaitable d'administrer les peptides de formule 1 en continu pendant des périodes prolongées sous des formes de dosage àactivité prolongée,, à libération lente ou à effet dépôt. Ces formes de dosage peuvent conte- -20- nir un sel pharmaceutiquement acceptable du composé, ayant un faible degré de solubilité dans les liquides du corps, par exemple, des sels obtenus avec l'acide pamoique ou l'a- cide tannique ou encore la carboxyméthyl-cellulose; de mê- me, ces formes de dosage peuvent contenir le peptide de for- mule 1 sous forme d'un sel hydrosoluble conjointement avec un support protecteur empêchant une libération rapide. Dans ce dernier cas, par exemple, le peptide de formule 1 peut être formulé avec une gélatine non antigène et partiellement hydrolysée sous forme d'un liquide visqueux; on peut encore l'absorber sur un support solide et pharmaceutiquement ac- ceptable, par exemple, l'hydroxyde de zinc, avec ou sans protamine et on peut l'administrer en suspension dans un véhicule liquide et pharmaceutiquement acceptable; de mê- me, les peptides de formule 1 peuvent être formulés dans des gels ou des suspensions avec un hydrocolloide protecteur non antigène, par exemple, la carboxyméthyl-cellulose de so- dium, la polyvinylpytrolidone, l'alginate de sodium, la gé- latine, les acides polygalacturoniques, par exemple, la pec- tine, ou certains mucopolysaccharides, conjointement avec des agents tensio-actifs, des agents de conservation ou des véhicules liquides aqueux ou non aqueux et pharmaceutique- ment acceptables. Des exemples de ces formulations sont donnés dans des textes pharmaceutiques classiques, par e- xemple, dans "Remington's Pharmaceutical Sciences", "Mack Publishing Co.", Easton, Pa., 1975. On peut également obte- nir des préparations des peptides de formule 1 à activité prolongée et à libération lente en les enfermant dans des microcapsules constituées d'une matière d'enrobage pharma- ceutiquement acceptable, par exemple, la gélatine, l'alcool polyvinylique ou l'éthyl-cellulose. D'autres exemples de matières d'enrobage et de procédés adoptés pour l'enrobage en microcapsules sont décrits par J.A. Herbig dans "Ency- clopedia of Chemical Technology", volume 13, 2ème édition, Wiley, New York, 1967, pages 436-456. Ces formulations, de même que des suspensions de sels des peptides de formule 1, -21- qui ne sont que peu solubles dans les liquides du corps, sont conçues pour libérer environ 5 à environ 100 mcg du peptide par kg du poids du corps et par jour et elles sont administrées, de préférence, par injection intramusculaire. En variante, certaines des formes de dosage solides énumé- rees ci-dessus, par exemple, certains sels peu solubles dans l'eau ou certaines dispersions ou certains produits d'ad- sorption (respectivement dans ou sur des supports solides) des sels des peptides de formule 1, par exemple, des disper- sions dans un hydrogel neutre d'un polymère de méthacrylate d'éthylène-glycol ou de monomères semblables réticulés com- me décrit dans le brevet des Etats-Unis d'Amérique n0 3.551. 556 accordé le 29 décembre 1970 aux noms de K. Kliment et al., peuvent également être formulées sous forme de pastil- les libérant à peu près les mêmes quantités que celles indi- quées ci-dessus et elles peuvent être implantées par voie sous-cutanée ou par voie intramusculaire. Certains peptideés de formule l,'>qui sont peu solubles dans l'eau, peuvent être formulés sous forme de suspensions dans une base aqueuse ou dans une base d'émulsion. On pré- pare des suspensions à base aqueuse à l'aide d'agents mouil- lants, par exemple, des produits de condensation d'alkyl- phénols, d'alcools gras ou d'acides gras sur de l'oxyde de polyéthylène, de même que des aaents de mise en suspension, par exemple, des colloides hydrophiles tels que la polyvi- nylpyrrolidone. On prépare des suspensions à base d'émul-. sions en mettant le peptide de formule l Jà l'aide d'agents mouillants et d'agents de mise en suspension) en suspension dans la base d'émulsion que l'on prépare à l'aide d'agents émulsionnants tels que ceux décrits cidessus. En outre, les formulations en suspension peuvent contenir des agents de tamponnement et/ou des agents édulcorants, des agents a- romatisants, des matières colorantes, des agents de conser- vation et des antioxydants. -22- Comme on l'a indiqué ci-dessus, les compositions phar- maceutiques des composés de formule 1 ou de leurs sels pharmaceutiquement acceptables en vue d'une admcinis- tration par voie orale ou par voie parentérale sont prépa- rées pour libérer 5-100 mcg/kg/jour, de préférence, en do- ses divisées, et elles peuvent contenir 0,3 à 15 mg de l'in- grédient actif par forme de dosage unitaire. Pour l'adminis- tration par voie parentérale, il est préférable d'utiliser un peptide hydrosoluble de formule 1 ou un sel hydrosoluble d'un peptide de formule 1 peu soluble dans l'eau, dans une solution aqueuse stérile. On peut ajouter des agents de con- servation appropriés, par exemple, le p-hydroxybenzoate de méthyle ou le p-hydroxybenzoate de propyle, de même que d'autres solutés, par exemple, du glucose ou du chlorure de sodium en une quantité suffisante pour rendre la solution isotonique. Les peptides de formule l qui sont peu solubles dans-l'eau, peuvent également être administrés par voie in- tramusculaire dans de.s solutions ou des suspensions dans des supports liquides stériles autres que l'eau, par exem- le, des huiles végétales ou animales appropriées, en utili- sant ou non d'autres solutés ou agents de mise en suspen- sion tels que ceux énumérés ci-dessus. L'acide aminé à terminaison carboxy que l'on. choisit pour représenter C ou B lorsque C représente NHR comme dé- fini ci-dessus, est protégé sur le groupe a-amino, de pré- férence, avec un groupe t-butoxycarbonyle (R, Boc) et l'on couple l'acide protégé avec une résine hydroxyméthylée ou, de préférence, une résine chlorométhylée à l'aide d'un ca- * talyseur, de préférence, le bicarbonate de césium ou la triéthylamine.Après le couplage ci-dessus de l'acide proté- gé sur le groupe a-amino, on élimine le groupe protecteur, par exemple, en utilisant l'acide trifluoracétique dans du chlorure de méthylène comme décrit ci-après ou par n'impor- te lequel des autres procédés mentionnés ci-dessus. De pré- férence, on effectue l'élimination de la protection à une température se situant entre 0C et la température ambian- -23- te. La résine chlorométhylée préférée (réticulée à 1 %) est celle vendue dans le commerce par "Bio Rad Laboratories", Richmond, Californie, E.U.A. On dépose l'acide aminé à terminaison carboxy choisi pour représenter C ou B si C représente NHR comme défini ci-dessus (cet acide étant fixé au support résineux au moyen du groupe de fixation y défini ci-dessus) dans le récipient réactionnel d'un synthétiseur automatique de peptides pro- rammmé pour effectuer le cycle de lavage suivant: (a) chlorure de méthylène; (b) acide trifluoracétique à 33 % dans le chlorure de méthylène (2 fois); (c) chlorure de méthylène; (d) éthanol; (e) chloroforme; (f) triéthy- lamine à 10% dans le chloroforme et (h) chlorure de méthylène. Ensuite, on agite la résine lavée dans du chlorure de méthylène avec l'acide aminé protégé de manière appropriée et choisi pour représenter B ou A lorsque C représente NHR1 comme défini ci-dessus. Le groupe protecteur préféré pour la fonction a-amino est le groupe tbutoxycarbonyle (Boc); dans les acides aminés choisis pour représenter B, le groU- Iw pe protecteur préféré pour l'atome d'imidazole (Nim) de l'histidine est le groupe tosyle (Tos), tandis que le grou- pe protecteur préféré pour le groupe phénylamino de la p- aminophénylalanine est le groupe benzyloxycarbonyle (Z); la 3-méthylhistidine, la e-(pyrazolyl-l)alanine et la B- (2-thiényl)alanine ne nécessitent aucune protection, sauf sur le groupe aamino. On ajoute une quantité pratiquement équimolaire d'un réactif de couplage, notamment le dicyclo- hexylcarbodiimide ou, de préférence, le diisopropylcarbo- diimide, on agite le mélange à la température ambiante (22- 250C) pendant 2 heures, puis on lave successivement 3 fois la résine sur laquelle est fixé l'acide aminé, avec CH2C12. On élimine la protection de l'acide aminé fixé avec de l'a- cide trifluoracétique à 33 % dans du chlorure de méthylène -24- (2 fois), puis on effectue les étapes (c) à (h) comme décrit dans le cycle de lavage ci-dessus. On répète les mêmes étapes que celles mentionnées ci- dessus avec l'acide aminé protégé de manière appropriée et choisi pour représenter A lorsque C est un acide aminé et on lave la résine définitivement obtenue comme décrit ci-des- sus et sur laquelle est fixé le peptide protégé, avec du chlorure de méthylène (3 fois) puis avec du méthanol (3 -fois après quoi on la sèche sous pression réduite et l'on obtient ainsi pratiquement tout le gain de poids théorique (96% ou +) Lorsqu'on désire préparer un peptide de formule 1 dans laquelle C représente NHA comme défini ci-dessus, ou un peptide de formule 1 dans laquelle C représente un alkyl inférieur-amide d'un acide aminé, on met la résine sur la- quelle est fixé le peptide protégé, en suspension dans l'al- lyl inférieur-amine appropriée à 00C et on agite pendant plusieurs heures. Ensuite, on laisse s'évaporer l'excès d'alkylamine à la température ambiante et on élimine le pep- tide clivé de la résine par lavage avec du diméthylforma- mide. On précipite ensuite le peptide protégé par addition d'acétate d'éthyle et on le filtre pour obtenir le peptide protégé dans lequel C représente NHR1 comme défini ci-dessus ou l'alkyl inférieur-amide de l'acide aminé respectif. Lorsqu'on désire obtenir les peptides protégés dans lesquels C représente un amide d'un -acide aminé ou un ester alkyli- que inférieur d'un acide aminé comme défini dans le premier cas, on effectue le même procédé que celui décrit ci-dessus en utilisant de l'ammoniaque ou l'alcool respectif plus la triéthylamine en lieu et place de l'alkyl inférieur-amine. 30. Pour éliminer les groupes protecteurs du peptide pro- tégé préparé comme décrit ci-dessus, on traite la matière obtenue ci-dessus avec du fluorure d'hydrogène et de l'ani- sole à 00C pendant 15-60 minutes, de préférence, pendant environ 30 minutes. On élimine le fluorure d'hydrogène sous -25- pression réduite, tandis que l'on élimine l'anisole par la- vage avec de l'éther. Lorsqu'on désire obtenir les peptides de formule 1 dans laquelle C est un acide aminé libre, on traite la résine respective sur laquelle est fixé le pepti- de protégé, avec du fluorure d'hydrogène et de l'anisole comme décrit cidessus. De la sorte, on élimine en même temps les groupes protecteurs et la fixation sur le support résineux, tandis que l'on obtient le peptide désiré de for- mule 1 dans laquelle C est un acide aminé libre. Lorsqu'on désire obtenir les peptides de formule 1 dans laquelle C est un groupe 2-aminohydroxyéthyle (Gly-ol), on traite la résine sur laquelle est fixé le dipeptide A-B, avec du 2-aminoéthanol pour obtenir directement le peptide désiré de formule 1 dans laouelle C représente Gly- ol; on élimine en même temps le groupe protecteur dinitrophényle ou tosyle s'il est présent sur un radical histidyle. Essais biologiques On détermine les activités anorexigéniques ou de réduc- tion de l'appétit et de l'ingestion de nourriture qu'exer- cent les peptides de formule 1 en procédant à des expérien- ces d'ingestion de nourriture chez des souris ou des rats, pratiquement de la manière décrite par Trygstad et al., ainsi que par Reichelt et al. (cités ci-dessus). On mesure la consommation quotidienne de nourriture à 0,1 g près, tan- dis que l'on détermine les poids du corps à 1 g près à in- tervalles réguliers. A des moments choisis, on peut égale- ment déterminer d'autres paramètres tels que la consomma- tion d'oxygène, la température du corps, les teneurs en in- suline et/ou en glucose du plasma, ainsi que des aminogram- mes quantitatifs. On détermine les effets exercés par les peptides de formule 1 sur la sécrétion gastrique et/ou pancréatique chez les rats, ou, de préférence, chez des chiens compor- tant des fistules oesophagiennes, gastriques et pancréati- ques comme décrit par Babkin ou par Liebling et al. ou en- -26- core Par Olbe (tous cités ci-dessus). Une alimentation fac- tice chez les chiens donne lieu à un net accroissement de la production d'acide qui atteint des valeurs représentant 82% de la production maximum d'acide que l'on peut obtenir par l'administration de 320 mca d'histamine/kg/heure aux ani- maux (13,55 + 1,8 milliéquivalent/15 minutes); en même temps, on observe également un net accroissement des teneurs en gastrine du sérum d'une valeur de base de 32 + 5 pg/wl à 73 + 10 pg/ml. Une alimentation factice produit également un net accroissement de la sécrétion de protéine pancréati- que atteignant environ 71 % des valeurs maxima que l'on peut obtenir par l'administration de 0,5 mcg de céruléine/kg/Heu- re (650 + 86 mg/15 minutes). Les peptides de formule 1, ad- ministrés par infusion intraveineuse en doses de 25-50 mcg/ kg/heure trente minutes avant et pendant l'administration de nourriture factice réduisent la production maximum d'aci- de d'environ 34 % sans provoquer des changements importants dans les teneurs en gastrine du sérum, tout en réduisant également la sécrétion de protéine pancréatique d'environ 38 %. Chez des chiens présentant une fistule gastrique et des sacs de Heidenhain, l'administration gastrique d'une farine d'extrait de foie a donné lieu à un net accroissement de la production d'acide qui a atteint environ 90 % de la produc- tion maximum pouvant être obtenue par l'administration d'histamine à des chiens présentant une fistule gastrique, ainsi qu'environ 35 % du maximum pouvant être atteint chez des chiens présentant des sacs de Heidenhain, tandis que les teneurs en gastrine du sérum se sont élevées de manière très significative à plus du double de la valeur de base, soit de 29 + 5 pg/ml à 76 + 12 pg/ml. Les peptides de for- mule 1 administrés par infusion intraveineuse au cours de la sécrétion d'acide provoquée par la platée de farine, en doses de 50 mcg/kg/heure pendant 1 heure ont- réduit les ré- ponses précitées à la farine d'extrait de foie de 35 % chez les chiens présentant une fistule gastrique et de 41 % -27- chez les chiens présentant des sacs de Heidenhain sans pro- voquer des changements importants dans les teneurs en gas- trine du sérum. Les peptides de formule i inhibent égale- ment l'accroissement des teneurs en insuline et en gastrine en réponse à l'ingestion de nourriture. Chez des chiens présentant une fistule pancréatique, l'alimentation ordinaire a stimulé le HCO3 pancréatique à 80 % de la valeur maximum pouvant être obtenue par l'ad- ministration de 3 KU/kg/heure de sécrétine, tout en stimu- lant la sécrétion de protéine à 92 % de la valeur maximum pouvant être obtenue avec 0,5 mcg/kg/heure de céruléine. Les peptides de formule i, administrés comme décrit ci-des- sus au cours de la deuxième heure après l'ingestion de la nourriture ont réduit la production de HCO3 de 35 % et la production de protéine 'enzyme) de 46 % sans provoquer des vomissements ou d'autres effets secondaires. Les résultats ci-dessus 'indiquent clairement que les peptides de formule i inhibent les phases céphaliques, gas- triques et intestinales de lq sécrétion gastrique et de la sécrétion pancréatique, probablement par la suppression des mécanismes neuro-hormonaux responsables de ces sécrétions. La phase céphalique est la phase neurale, psychique ou d'ap- pétit de la sécrétion gastrique et son inhibition reflète la suppression de l'appétit et par l'activité anorexigéni- que des peptides de formule 1. Les exemples non limitatifs ci-après illustrent cer- tains procédés choisis pour la préparation des composés uti- lisés suivant la présente invention, ainsi que des procé- dés de préparation de formes de dosage pharmaceutiquement utiles de ces composés. -28- EXEMPLE 1 D-Pyroglutamyl-L-histidyl- (tosyl) -glycyl-O-CH2-réSine, D-H- (pyro)-GluHis(N l-R)-Gly-O-CH2-résine, R = Tos. On dépose 2,7 g (1 millimole le glycine) de Boc-Gly- cine -résine de formule: Boc-Gly-O-CH2-résine dans le récipient réactionnel d'un synthétiseur automatique de peptides de "Beckman", modèle 990 programmé pour effec- tuer le cycle de lavage suivant: (a) chlorure de méthylène; (b) acide trifluoracétique à 33 % dans du chlorure de méthylène (2 fois pendant 1 et 25 minutes chaque. fois).; (c) chlorure de méthylène; (d) étha- nol; (e) chloroforme; (f) triéthylamine à 10 % dans du chloroforme (2 fois pendant 2 minutes chaque fois); (g) chloroforme; (h). chlorure de méthylène. Ensuite, on agite la résine lavée avec 3 millimoles de t-butyloxycarbonyl-ttsyl-histidine dans du chlorure de mé- thylène et on ajoute 3 millimoles de di-isopropylcarbodii- mide. On agite le mélange à la température ambiante pendant une heure et on soumet la peptide-résine aux étapes (a) à (h) décrites dans le cycle de lavage ci-dessus. Ensuite, on couple 3 millimoles d'acide Dpyroglutamique en adoptant le même cycle pour obtenir le composé sous rubrique. On lave la tripeptide-résine définitive avec du chlo- rure de méthylène (3 fois), puis avec du méthanol (3 fois) et on sèche pour obtenir ensuite 2,89 g de matière. La glycine-réside utilisée dans cet exemple est obte- nue à partir d'une résine chlorométhylée disponible dans le commerce (réticulée à 1%, "Bio Rad Labs", Richmond, Cali- fornie, E.U.A.). EXEMPLE 2 D-Pyroglutamyl-L-histidyl-glycine On met 2,89 g de la tripeptide-résine dont le tripep- tide est protégé et qui est obtenue comme décrit à l'exem- ple 1, en suspension dans 40 ml de fluorure d'hydrogène et ml d'anisole à 0O pendant 45 minutes. On évapore le flu- -29- orure d'hydrogène sous un courant d'azote gazeux sec et on élimine l'anisole par lavage avec de l'éther. On purifie le peptide brut par filtration sur gel dans une colonne (2,5 x 95 cm) de "Sephadex G 15" (dextrane réti- culé et modifié chimiquement, de qualité fine) et on lyophi- lise des fractions appropriées (320-340 ml) pour obtenir 320 mg de D-H-(pyro)-Glu-His-Gly-OH sous forme d'une poudre flo- conneuse incolore. A la chromatographie sur couche mince dans quatre sys- tèmes de solvants sur des plaques de gel de silice, le pro- duit apparaît homogène lorsqu'on applique des charges de 20- mcg sous forme de taches et lorsqu'on les visualise par exposition au chlore gazeux en procédant ensuite à une pul- vérisation avec un réactif d'amidon. On obtient les valeurs Rf ci-après: 1-butanol: acide acétique: eau (4:1:5, phase supérieure), 0,08; acétate d'éthyle: pyridine: acide acé- tique: eau (5:5:1:3), 0,28; 1-butanol: acide acétique: eau: acétate d'éthySe (1:1:1:1), 0,18; 2-propanol: acide acétique lM (2:1), 0,20. L'analyse des acides aminés donne les résultats suivants: Glu, 1,03; Gly, 1,00; His, 0,99. EXEMPLE 3 On dissout 3 parties de D-pyroglutamyl-L-histidyl-gly- cine dans 1.000 parties d'eau distillée exempte de pyrogé- nes et on ajoute une quantité suffisante de chlorure de so- dium pour rendre la solution isotonique. On stérilise le mé- lange par traitement en autoclave et on remplit des fioles avec ce mélange pour obtenir une solution pour infusion à des fins thérapeutiques. EXEMPLE 4 On comprime, en boules, un mélange de 12 parties de D- pyroglutamyl-Lhistidyl-glycine et de 500 parties de carbona- te de magnésium léger, ainsi que de 20 parties de stéarate de magnésium. on broie les boules ainsi obtenues en granu- les que l'on fait passer à travers un tamis à 8 mailles, pour les soumettre ensuite à une compression. On obtient -30- ainsi des comprimés appropriés pour une administration par voie orale à des fins thérapeutiques. EXEMPLE 5 On granule un mélange de 12 parties de D-pyro-glutamyl- L-histidyl-glycine et de 500 parties de carbonate de magné- sium léger en le mélangeant avec une solution de 2 parties de dioctyl-sulfosuccinate de sodium dans une quantité suf- fisante de méthanol. On fait passer les granules à travers un tamis à 12 mailles et on les sèche à 50-550C. Ensuite, on fait à nouveau passer les granules à travers un tamis à 12 mailles et on ajoute 8 parties de stéarate de magnésium, puis on comprime le mélange. On obtient ainsi des comprimés appropriés pour une administration orale à des fins théra- peutiques. EXEMPLE 6 -On comprime, en boules, un mélange de 24 parties de D- pyroglutamyl-L-histidyl-glycine, de 475 parties de lactose, de 94 parties d'amidon de mais et de 3 parties de stéarate de magnésium. On broie les boules ainsi obtenues en granu- les que l'on fait ensuite passer à travers un tamis à 8 - mailles. On enrobe alors les granules d'une quantité suffi- sante d'une solution de 15 parties de shellac et de 3 par- ties d'huile de ricin dans 800 parties d'alcool éthylique; on ajoute ensuite 3 parties de stéarate de magnésium aux granules, après quoi on comprime ces derniers pour obtenir des comprimés appropriés pour une utilisation orale à des fins thérapeutiques. EXEMPLE 7 Dans un broyeur à boulets, on mélange 24 parties de D- pyroglutamyl-L-histidyl-glycine avec 576 parties de lacto- se et on remplit des capsules de gélatine avec ce mélange pour obtenir une forme de dosage appropriée pour une admi- nistration orale à des fins thérapeutiques. -31- REVENDICATIONS 1. Composé répondant à la formule R2-A-(P3-B)C-O-CH2- résine o R représente Boc, R représente Dnp ou Tos et A estchoisi parmi la classe comprenant le croupe L-pyroclu- tamyle, le groupe D-pyroglutamyle et le groupe 1,-homo- pyroglutamyle; B est choisi parmi la classe comprenant le groupe Lhistidyle, le groupe LT,-3'-méthylhistidvle, le groupe D-histidyle, le groupe L-phénylalanyle, le groupe L-p-aminophénylalanyle et le qroupe L- (pyrazolyl-1) alanyle et C est choisi parmi la classe comprenant la glycine, le glycine-amide, les (alkyl inférieur)amides de glycine, les esters alkyliques inférieurs de glycine, le groupe 2-amino-lhydroxyéthyle, la D-alanine, la L-8-(2-thiényl)alanine et le groupe NHP o R est un grou- pe alkyle inférieur, à condition que C ne puisse être la glycine ou le glycine-amide lorsque A est un groupe L- pyroglutamyle et que B est un groupe L-histidyle. 2. Composé répondant à la formule R -A-(R -B)-C-0-CH- 2 4- - 2 résine dans laquelle'R représente Boc, R représente Z, tandis que A, B et C ont les significations définies dans la revendication 1. 3. t-butyloxycarbonyl-D-pyroglutamyl-L-(N im-tosyl)- histidyl-glycyl-O-CH2-résine suivant la revendication 1.