Brevet FR2510458A1 — publié le 19830204

Caisse-boïte à gants permettant le conditionnement, le transport et le repiquage "in vitro" an conditions simples de stériliste. La présente invention concerne le travail de culture "in vitro" en conditions stériles et plus précisemment la rationalisation du remplissage, du rangement et du bouchage des tubes, de leur stérilisation et de leur ensemence- ment à partir de souches en permettant de réaliser la phase initiale des opéra- tions dans des ateliers hautement automatisés et la phase finale qui nécessite la main et l'intelligence humaine, dans les lieux les plus divers et notanrient à domicile, le transport entre l'atelier de préparation et le lieu d'ensemence- ment manuel étant assuré par l'objet même de l'invention. Dans les laboratoires effectuant actuellement les travaux préparatoires a la culture proprement dite, on met en oeuvre un équipement de lavage des récipients de culture, de préparation des milieux, de remplissage, de bouchage et de stérilisation à la fois onéreux, délicat à contrôler et peu automatisable compte-tenu des relativement faibles quantités mises en oeuvre par chaque laboratoire pris séparément pour ali'rinter un personnel de repiquage "in vitro" forcément limité par le nombre de hottes de filtration d'air. Le dispositif suivant l'invention permet d'éviter ces inconvénients en dissociant géographiquement les lieux de "repiquage" du lieu de préparation des récipients de culture. En supprimant l'équipement onéreux des hottes de filtration d'air, il permet le repiquage en conditions stériles dans n'importe quel lieu, le nombre d'employés au repiquage n'étant plus limité que par la possibilité de trouver de la main d'oeuvre manuellement habile et par le nombre de caisses-boites à gants disponibles. La standardisation du conditionnement des récipients de culture dans les caisses objets de l'invention, permet en outre d'envisager de grandes séries et l'acquisition par l'atel er de préparation des robots permettant l'automati- sation de l'ensemble de la préparation, du remplissage des tubes et de leur bouchage dans des conditions d'éconcmie difficilement atteintes par les labora- tcires traditionnels pris séparément. Le dispositif, objet de l'invention permettant de parvenir à ces résul- tats, consiste en une caisse formée de plusieurs parties dont certaines peuvent être solidarisées dans certaines réalisations selon l'invention Triais que nous supposerons amovibles pour la clarté de la description. le fond de la caisse réalisé en matière légère étanche et résistante aux chocs a une forme de carré ou rectangle et une profondeur légèrement inférieure à la hauteur des récipients de culture qu'il est destiné à contenir lorsque ces récipients sont rangés dans les alvéoles d'une claie de rangement. Une claie de rangement permettra le logement des récipients de cultures généralement tubes en verre dits tubes à essais Chaque alvéole couvant être gravée d'un numéro, permettra le repérage des divers récipients de culture à travailler et leur individualisation. La claie de rangement doit permettre le maintien des tubes dans les alvéoles même si par inadvertance, la caisse était transportée en position inversée. Pour y parvenir, divers dispositifs peuvent être adoptés selon l'invention soit en dotant chaque alvéole de freins élastiques sous forme de lamelles ou autres, soit en couvrant l'alvéole d'un film plastique perforé en croix au niveau de chaque ouverture d'alvéole et agissant par frottement doux sur les tubes, soit en disposant entre les tubes un dispositif gonflable.La claie de rangement doit permettre à l'opérateur du repiquage d'extraire et replacer chaque tube dans son alvéole au cours de son travail sans efforts exagérés. le fond solidarisé ou non à la claie de rangement joue le rôle de portoir de récipients groupés pour l'automatisation des opérations de lavage des tubes, remplissage, bouchage dans les machines à hautes performances dont pourra être dotés l'atelier central de préparation. Au fond de la claie de rangement des récipients de culture, on adjoint pour former un volume sensiblement parallélépipédique un capot en matière transparente résistant aux procédés de stérilisation habituellement utilisés dans les laboratoires de culture "in vitro" : autoclavage ou stérilisation parirradiations ionisantes. Le capot est fixable hermetiquement sur l'embase de la caisse grave à un joint et à des dispositifs classiques de fixation amovibles à ressorts puissants. le capot une fois fixé sur l'embase, la caisse peut être stérilisée.Grâce à une ouverture équipée d'un dispositif approprié pour permettre l'équilibrage des pressions en cours d'autoclavage sans pour autant permettre le passage des germes vivants microscopiques, il est possible d'introduire en conditions stériles les récipients contenant les souches vivantes destinées à être disséquées et réparties entre les tubes vierges de culture qui garnissant la claie de rangez sent solidarisée ou non au fond de la caisse. On introduira en même temps un flacon de liquide desinfectant pur nettoyer les outils de désinfection et transplantation entre chaque récipient de souche pour réduire les risques de contami- nation.Dans un logement spécial du capot, on trouvera également l'outillage nécessaire aux travaux de dissection et de transplantation, pinces et scalpels qui auront d'ailleurs été stérilisés par le fait sese de l'autoelavage ou de l'irradiation. Le capot de la caisse comporte en outre deux orifices destinés au passage des avant -bras et portant, côté interne à la caisse, deux gants souples à nanches plissées, qui, allongés permettront aux mains de l'opérateur d'accèder aux tubes ou récipients de cultures rangés dans les coins extrêmes de la caisse et de les y replacer une fois l'opération d'ensemencement terminée. Ce capot comporte une partie souple plissée en soufflet, une face transparente plane qui permet une vision non déformée du champ opératoire. Cette vision pourra être améliorée grâce à des appareils d'optique grossissants tels réseaux ou loupes placés à l'intérieur ou à l'extérieur du capot et à des spots d'éclairage intense placés à l'extérieur ou incorporés à l'intérieur. Pendant les transports sur grande distance, le capot transparent pourra être protégé par une coque mécaniquement plus résistante que les matériaux en plastique transparent actuellement disponibles. le dessin annexé illustre à titre d'exemple un mode de réalisation du dispositif conforme a la présente invention. Tel qu'il est représenté, le dispositif complet mis en oeuvre sur la f. figure 1 se subdivise comme sur la figure 2 en un fond en forme de cuvette résistante et étanche (1) dans lequel on loge une claie de rangement en tiges de métal plastifié (2) dans les alvéoles de laquelle sont placés les récipients de culture bouchés(10)ici des tubes de culture. Un dispositif de blocage de tube comme une feuille de plastique perforée en croix marque chaque emplacement des tubes (3). L'ensemble est roeouvert au moment de la stérilisation globale d'un capot (4) en plastique ou matériau transparent autoclavable. le capot est associé au fond grâce à un joint étanche aux micro organismesmais pouvant être poreux aux gaz (5) et par des organes de fixation à ressorts puissants (6). le capot transparent porte à l'intérieur un logement pour l'outillage de dissection et de transplantat'on, un sas (7) pour l'introduction en conditions stériles après stérilisation des souches vivantes contenues dans leurs tubes, des moyens de stérilisation de l'outillage de transplantation, deux orifices équipés de gants à longues manches plissées souples (8). L'ensemble ainsi décrit constitue une caisse permettant le transport entre l'atelier de préparation et le point quelconque où s'opérera l'opération dite du "repiquage" (Fig 1). le dispositif objet de l'invention peut être utilisé en appoint dans les laboratoires classiques. I1 peut surtout être utile aux médecins, pharmaciens, pépiniristes et biologistes en général qui reculent devant les frais entrainés par l'équipement en matériels et personnels spécialisés, nécessi- tés pour la préparation des milieux de culture stériles et leur mise en oeuvre en conditions de stérilité convenables. les possibilités d'automatisation gracie à la présentation standardisée des récipients de culture permet l'abaissement des frais de personnel et la possibilité de faire réaliser le travail de repiquage loin du point de préparation industrielle par un tain d'oeuvre non specia- lisée et travaillant à domicile. les frais de transport peuvent être réduits grave au repliement du soufflet disposé à la base du capot (Fig 2-9). REVENDICATIONS 1) Caisse-boîte à gants permettant le conditionnement automatisé, le transport et le repiquage "in vitro" en conditions simples de stérilité, caractérisée par le fait qu'elle comporte une caisse stérilisable dans son ensemble dans laquelle on place avant stérilisation les récipients de culture à ensemencer, et dans laquelle apres stérilisation, on peut introduire en conditions stériles, les souches vivantes à propager manuellement et stérilement dans les récipients de culture. Cette activité de repiquage pouvant s'effectuer dans un endroit géographiquement éloigné du point de la stérilisation, la caisse servant alors de moyen de transport et de conservation des conditions stériles entre le point de prepa- ration et le point d'utilisation. 2) Dispositif selon la revendication 1, caractérisé par le fait que le moyen pour transporter les récipients de culture entre le point de préparation et le point d'utilisation est une caisse comportant un fond mécaniquement résistant et étanche sur lequel on applique un capot en matière transparente de façon hermétique par un joint souple pouvant être perméable aux gaz mais non aux microorganis- mes de l'air. le capot peut être rigide ou sounle,ou en partie souple. 3) Dispositif conforme aux revendications 1 et 2 et selon lequel dans l'embase de la caisse on dispose de façon solidaire ou désolidarisable une claie de rangement des récipients de culture permettant une fixation suffisante des tubes en position réperée par numéro mais, permettant l'extraction et la remise en place manuelle au cours des opérations de repiquage, la fixation amovible étant obtenue par friction ou par blocage par vessie gonflable et dégonflable. 4) Dispositif conforme aux revendications 1, 2 et 3 et comportant un capot transparent fixé sur l'embase, le dit capot étant muni d'un pertuis obturable pour l'introduction en conditions stériles mais après la stérilisation globale de la caisse et de son contenant, des souches vivantes destinées à être propagées dans les tubes ou conteneurs de culture logés dans la claie de rangement. 5) Dispositif conforme aux revendications 1, 2, 3 et 4 selon lequel le capot transparent fixé sur l'embase et la claie de rangement délimite un espace de travail sterilisé dans lequel il est possible de manipuler grâce à deux pertuis équipés de gants à longues manches plissées, permettant d'atteindre tous les tubes de la claie de rangement, de les déboucher et d'y introduire les fragments disséqués des souches, de les reboucher et ranger à nouveau dans leur alvéole de départ. 6) Dispositif conforme aux revendications 1, 2, 3, 4 et 5 selon lequel il est possible de travailler dans l'espace stérile precedemment défini grâce à une lame plane du capot évitant les déformations optiques et permettant éventuelle ment la fixation d' élément optique grossissant et d'appareil d' éclairage d'appoint du champs de dissection et d'ensemencement. 7) Dispositif selon les revendications 1, 2, 3, 4, 5 et 6 selon lesquelles l'espace stérile né nécessaire au travail peut être augmenté grâce à l'existence sur le capot d'une zone plissée ou soufflet, intercalée entre l'embase et la partie transparente du capot. Le déploiement du soufflet étant obtenu soit mécaniquement soit pneumatiguement par libération d'une réserve de gaz comporimé stérile dispo- sée préalablement dans le capot. 8) Dispositif, selon les revendications 1, 2, 3, 4, 5, 6 et 7 caractérisé par l'incorporation au capot de systdne d'éclairage permettant le travail en n'impor- te quel lien disposant d'une alimentation en courant électrique. 9) Dispositif selon les revendications 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7 et 8 selon lequel les postes de travail en conditions stériles peuvent être utilisés pour ltorganisa- tion d'un'travail à domicile" trace à l'espace stérile transportable qui caracte- rise l'invention.