Brevet FR2499429A1 — publié le 19820813

La présente invention concerne un procédé pour au moins réduire les pyrogènes dans diverses substances qu'ils contaminent. Les pyrogènes sont des substances pyrétogènes qui font monter de façon anormale la température du corps d'un animal homéotherme à une très faible quantité. Lorsqu'un pyrogène est directement mélangé au sang dans le corps humain, par exemple par injection intraveineuse d'un médicament conta- miné par lui, en-dehors de la principale action du médica- ment, le pyrogène provoque une fièvre intense. On dit que lorsque cette action du pyrogène devient grave, elle provoque une fièvre prononcée qui s'accompagne de frissons et de tremblements et peut occasionner la mort à la suite d'un choc. On connaît comme pyrogènes de nombreuses substances comme des substances bactériennes, des substances inflamma- toires, des polysaccharides végétaux, des substances de type sanguin, etc. Parmi elles, ce sont les substances bactérien- nes qui ont l'influence la plus importante sur la fièvre et on leur donne le nom de toxines bactériennes. Généralement, les toxines bactériennes sont classifiées en exotoxines et endotoxines. En particulier, une endotoxine agissant comme ce qu'on appelle antigène O, dont le principal composant est un lipopolysaccharide de la paroi cellulaire (LPS) d'une bactérie gram-négative, a la pyrogénicité la plus forte. Une fois qu'une substance est contaminée avec un tel pyrogène, il est très difficile de l'en séparer. On savait déjà que l'on peut retirer les pyrogènes par divers procédés, par exemple (1) en utilisant du charbon de bois, une résine échangeuse d'ions, etc, pour adsorber un pyrogène, (2) en décomposant un pyrogène avec un acide ou une base, (3) en décomposant par oxydation un pyrogène avec un agent oxydant comme le permanganate de potassium, le peroxyde d'hydrogène aqueux, l'hypochlorite de sodium, etc, (4) en enlevant un pyrogène par filtration avec une membrane d'ultra-filtration, etc. Cependant, il est difficlie de retirer entièrement un pyrogène en une opération par ces procédés classiques. De plus, ceux-ci présentent certains inconvénients. Par exemple, un médicament dont il s'agit de retirer un pyrogène est également adsorbé par le procédé physique cidessus (1) ou est également décomposé par les procédés chimiques (2) et (3) ci-dessus. Dans ces circonstances, on a procédé à des études inten- sives et maintenant trouvé que les pyrogènes sont spécifique- ment adsorbés par un adsorbant comprenant un composé hétéro- cyclique contenant de l'azote lié à un support insoluble dans l'eau directement ou par l'intermédiaire d'un espaceur. Selon l'invention, il est fourni un procédé pour au moins réduire la teneur en pyrogène d'une solution contenant un pyrogène en mettant la solution en contact avec un adsor- bant comprenant un support insoluble dans l'eau et un composé hétérocyclique contenant de l'azote de formule R- A- X (I) o R est un groupe hétérocyclique contenant de l'azote; A est une liaison simple, alcoylène ou alcénylène; X est un hydrogène ou un groupe fonctionnel comme un groupe amino, carboxyle ou hydroxy; et le groupe hétérocyclique et l'alcoylène peuvent être éventuellement substitués par un ou plusieurs substituants, par exemple un carbonyle ou un hydroxy, le composé étant lié au support directement ou par l'intermédiaire d'un espaceur, c'est-à-dire d'une molécule introduite entre le support insoluble dans l'eau et le composé hétérocyclique contenant de l'azote pour espacer ou éloigner le composé du support. On peut préparer l'adsorbant à utiliser dans l'invention p. ex. en liant de façon covale5:te un composé hétérocyclique contenant de l'azote (I) à un support insoluble dans l'eau directement ou par l'intermédiaire d'un espaceur. Les exemples de composé hétérocyclique contenant de l'azote de l'inventioh sont ceux de formule (I) o R est un groupe hétérocyclique contenant de l'azote ayant par exem- ple un noyau imidazole, un noyau pyrazole, un noyau pyrimidi- ne, un noyau pyridazine, un noyau pyrazine, un noyau purine, un noyau acridine, un noyau triazole, un noyau oxadiazole, un noyau tétrazole, un noyau indazole, un noyau benzotriazole, un noyau benzopyridazine, un noyau benzopyrimidine, un noyau benzopyrazine ou un noyau naphtyridine; A est une liaison simple, un groupe alcoylène ayant de 1 à 12 atomes de carbo- ne, p. ex. méthylène, éthylène, propylène, butylène, hexylè- ne, octylène, décaméthylène ou dodécaméthylène, ou un groupe alcénylène ayant de 2 à 12 atomes de carbone, p. ex. vinylè- ne, allylène, buténylène, hexénylène ou octénylène; et X est par exemple un hydrogène, un amino, un hydroxy ou un carbo- xyle. Le groupe hétérocyclique contenant de l'azote de R et un groupe alcoylène de A peuvent être éventuellement substi- tués par un ou plusieurs substituants (p. ex. carboxyle, oxo, alcoyle, hydroxy, amino, alcoxy). Les exemples préférés de composé contenant de l'azote sont ceux de formule (I) o R est un groupe hétérocyclique contenant de l'azote et ayant un noyau imidazole, pyrimidine, purine ou acridine, A est une liaison simple, un éthylène ou un éthylène substitué par un carboxyle, et X est un hydrogène, un amino, un carboxyle ou un hydroxy. En particulier, le composé de for- mule (I) préféré est l'histidine, l'histamine, l'acide uro- canique, la cytosine, la 5-méthyl-cytosine, la 2-amino-4,6- diméthylpyrimidine, l'adénine ou la 6,9-diamino-2-éthoxy- acridine. Comme support insoluble dans l'eau, on peut utlliser dans l'invention n'importe quel support qui peut être lié au composé hétérocyclique contenant de l'azote (I) directe- ment ou par l'intermédiaire d'un espaceur. Les exemples représentatifs de support insoluble dans l'eau sont ceux ayant un groupe hydroxy, un groupe amino, un groupe carbo- xyle ou un atome d'halogène. Les exemples préférés de supports insolubles dans l'eau ayant un groupe hydroxy sont un poly- saccharide (p. ex. la cellulose, l'agarosse, le dextran réticulé, etc), une résine hydroxyalcoylpolystyrène (p. ex. un copolymère styrène hydroxyalcoylé-divinylbenzène, etc), un polyvinylalcool, etc. Les exemples de support insoluble dans l'eau ayant un groupe amino sont un aminoalcoylpolysa- ccharide (p. ex. une aminoalcoylcellulose comme l'amino- éthylcellulose ou l'aminohexylcellulose, une aminoalcoyl- agarose comme l'aminohexylagarose, etc), un p-aminobenzyl- polysaccharide (p. ex. la p-aminobenzylcellulose, le p-amino- benzylagarose, etc), le chitosan, une résine aminoalcoyl- polystyrène (p. ex. un copolymère styrène aminoalcoylé- divinylbenzène), un polyacrylamide, un aminoalcoylpoly- acrylamide (p. ex. l'aminoéthylpolyacrylamide, etc), et un verre aminoalcoyl-poreux (p. ex. le verre aminopropyl-poreux, etc). Comme exemples de support insoluble dans l'eau ayant un groupe carboxyle on peut citer un carboxyalcoylpolysaccha- ride (p. ex. le carboxyalcoylagarose comme le carboxyhexyl- agarose ou le carboxypentylagarose, une carboxyalcoylcellu- lose comme la carboxyméthylcellulose, un dextran carboxy- alcoyle réticulé comme le dextran carboxyméthyl- réticulé, etc), un carboxyalcoylpolyacrylamide (p. ex. le carboxyméthyl- polyacrylamide, etc), et une résine acide carboxylique (p. ex. un copolymère acide acrylique-divinylbenzène, etc). Comme exemples de support insoluble dans l'eau ayant un atome d'halogène, on peut citer une résine halogéno-alcoyl-poly- styrène (p. ex. un copolymère styrène chlorométhylé-divinyl- benzène, etc). Lorsqu'on utilise une résine halogéno-alcoyl-polystyrène, on peut l'utiliser telle quelle ou la transformer sous une forme plus activée. Par exemple, on peut transformer une résine halogénoalcoylpolystyrène en une résine dialcoylthioalcoyl- polystyrène ayant une activité supérieure à celle de la résine halogénoalcoylpolystyrene en faisant réagir la résine avec du sulfure de dialcoyle. Avant de lier le support insoluble dans l'eau au composé hétérocyclique contenant de l'azote (I), on peut introduire un espaceur dans le support ou le composé (I). Comme exem- ples représentatifs de l'espaceur on peut citer les composés de formules: NH2(CH2)nNH2, HOOC(CH2)nCOOH (ou un anhydride d'acide de ces corps), NH2(CH2)nCOOH, ou NH2(CH2)nOH o n est un nombre entier allant de 1 à 12. L'introduction de l'espaceur dans le support peut s'effec- tuer, par exemple, par un procédé décrit dans "KOTEIKA KOSO", Dir. publ. I. Chibata, p 11 à 41, Kodan-sha, Tokyo (1975); "JIKKEN TO OYO AFFINITY CHROMATOGRAPHY", Dir. publ. I. Chibata et coll., p 86 à 90, Kodan-sha, Tokyo (1976); "Affinity Chromatography", C.R. Lowe et al. pages 205 à 245, John Wiley & Sons, Londres, New York, Sydney, Toronto (1974); ou brevet américain n 4 090 919. Par exemple, lorsque l'espaceur est introduit dans le support ayant un groupe hydroxy ou le composé hétérocyclique contenant de l'azote (I) ayant un groupe hydroxy, le support ou composé est activé p. ex. par un halogénure de cyanogène (p. ex. le bromure de cyanogène, etc), un monoépoxyde (p. ex. l'épichlorhydrine, etc), un bis-époxyde (p. ex. le 1,4-bis(2,3-époxypropoxy)butane, etc), un halogénure d'halo- génoacétyle (p. ex. le chlorure de chloroacétyle, etc), puis on fait réagir le support ou composé activé résultant avec l'espaceur ayant un groupe amino ou un groupe hydroxy, p. ex. NH2(CH2)nNH2, NH2(CH2)nCOOH, NH2(CH2)nOH. Lorsque l'espaceur est introduit dans le support ayant un groupe amino ou le composé hétérocyclique contenant de l'azote (I) ayant un groupe amino, (1) le support ou composé est activé par réac- tion avec un dialdéhyde aliphatique (p. ex. le glutaraldéhy- de, etc) puis le support ou composé activé résultant est mis à réagir avec l'espaceur ayant un groupe amino, p. ex. NH2(CH2)nNH2, NH2(CH2)nCOOH, ou (2) le support ou compo- sé est mis à réagir avec l'espaceur ayant un groupe carboxyle, p. ex. HOOC(CH2) nCOOH, NH2(CH2)nCOOH pour former un amide d'acide. Lorsque l'espaceur est introduit dans le support ayant un groupe carboxyle ou le composé hétérocyclique contenant de l'azote (i) ayant un groupe carboxyle, le support ou composé est mis à réagir avec l'espaceur ayant un groupe amino, p. ex. NH2(CH2)nNH2, NH2(CH2)nCOOH pour former un amide d'acide. En outre, lorsque l'espaceur est introduit dans le support ayant un atome d'halogène, le support est condensé avec l'espaceur ayant un groupe amino, un groupe carboxyle ou un groupe hydroxy, p. ex. NH2(CH2)nNH2, NH2(CH2)nCOOH, NH2(CH2)nOH. Afin de préparer l'adsorbant utilisé dans l'invention en utilisant le support ci-dessus et le composé hétérocy- clique contenant de l'azote, on emploie les procédés décrits dans les références ci-dessus, "KOTEIKA KOSO", p 11 à 41, "JIKEN TO OYO AFFINITY CHROMATOGRAPHY", p 30 à 82 et le brevet américain n 4 090 919. Par exemple, lorsqu'on utilise le support ayant un groupe hydroxy (présenté ci-dessous comme Q -OH ou % OH) le support est activé par exemple avec un halogénure de cyano- gène (p. ex. le bromure de cyanogène, etc), un monoépoxyde (p. ex. l'épichlorhydrine, etc), un bis-époxyde (p. ex. le 1,4-bis(2,3-époxypropoxy)butane, etc), un halogénure d'halogèn- acétyle (p. ex. le chlorure de chloroacétyle, etc), puis on met à réagir le support activé résultant avec le composé hétérocyclique contenant de l'azote ayant un groupe amino (c'est-à-dire R - A - NH2), ou le composé hétérocyclique contenant de l'azote dans lequel l'espaceur ayant un groupe amino a été introduit (ci-dessous, les deux composés sont présentés sous la forme 0 -NH2} ou les composés hétérocy- clyques contenant de l'azote ayant un groupe hydroxy (c'est- à-dire R - A - OH) ou le composé hétérocyclique contenant de l'azote dans lequel l'espaceur ayant un groupe hydroxy a été introduit (ci-dessous, ces deux composés sont présentés sous la forme Q -OH). Selon ces procédés, on peut obtenir les adsorbants ayant les formules suivantes: p C = N - (O -OCO-NH- @ o& -OC-NH- I il O -o-cH2CH(oH)CH2NHX NH -O-CH2CH(OH)CH2-(CH2)m-CH2CH(OH)CH2NH- ( -o-CH2CONH-(D ( -O-COCH2NH-Q O -o-CH%2CH(OH)CH2-o- Q -O-CH2CH(OH)CH2-CH2)-CH2CH (O)CH2-(CH2m-CH2CH(OH)CH2-O- o Q et O sont tels que définis ci-dessus et m est un nombre entier allant de 1 à 16. Lorsqu'on utilise le support insoluble dans l'eau ayant un groupe amino (présenté ci-dessous sous la forme Q -NH2), (1) on active le support avec un dialdéhyde aliphatique (p. ex. le glutaraldéhyde, etc), on fait réagir le support activé avec le composé hétérocyclique contenant de l'azote de Q -NH2 o Q est tel que défini ci-dessus, puis on réduit la base de Schiff résultante avec un agent réducteur (p. ex. le brorhydrure de sodium, etc); (2) on fait réagir le support avec le composé hétérocyclique contenant de l'azote ayant un groupe carboxyle (c'est-à- dire R - A -COOH) ou le composé hétérocyclique contenant de l'azote dans lequel l'espaceur ayant un groupe carboxyle a été introduit (ci- dessosu ces deux composés sont présentés sous la forme -COOH) pour former un amide d'acide; (3) on active le support avec un monoépoxyde ou un bis-époxyde puis on fait réagir le support activé résultant avec le composé hétéro- cyclique contenant de l'azote de -NH2 ou Q -OH; (4) on active le support avec un halogénure cyanurique (p. ex. le chlorure cyanurique) puis on fait réagir le support acti- vé résultant avec le composé hétérocyclique contenant de l'azote de Q NH2; ou (5) on diazotise le support puis on le fait réagir avec le composé hétérocyclique contenant de l'azote de Q -NH2. Selon ces procédés, on peut obtenir les adsorbants de formules suivantes: 0 -NHCH2 (CH2) mCH2-NH-G Q -NH-CO- ( (i)-NH-CH2CH (OH) CH2NH- O -NH-CH2CH (OH) CH2-O-0 G "NH--CH2CH (OH)CH2 (CH2) mCH2CH (OH)CH2NH-G -NH-CH2CH (OH) CH2 (CH2) mCH2CH (OH) CH2-O- Q O1NHIfN 5 -NH-@ N (-N = N -(.9 o, et m sont tels que définis ci-dessus. Lorsqu'on utilise le support insoluble dans l'eau ayant un groupe carboxyle (présenté ci-dessous sous la forme -COOH), on fait réagir le support avec le composé hétéro- cyclique contenant de l'azote de O -NH2 pour former un amide d'acide. Selon ce procédé, on peut obtenir l'adsorbant de formule: e -CONH- d o et @ sont tels que définis ci-dessus. En outre, lorsqu'on utilise le support ayant un atome d'halogène (présenté ci-dessous sous la forme -X, o X est un halogène), on fait réagir le support avec le composé hétérocyclique contenant de l'azote de O -NH2, O -OH ou G -COOH. Selon ce procédé, on peut obtenir l'adsorbant de formules ci-dessous: -NH- O - -S -OOC- o Q et @sont tels que définis ci-dessus. Lorsqu'on utilise le compsé hétérocyclique contenant de l'azote de Q -NH2 ou -OH, l'adsorbant utilisé dans l'invention peut également être obtenu en faisant réagir le composé avec un composé époxy puis en faisant réagir le composé activé résultant avec le support de Q -NH2 ou O -OH. De plus, lorsqu'on utilise l'uracile comme composé hétérocyclique contenant de l'azote, on peut également obte- nir l'adsorbant en activant le support de G -NH2 ou Q -OH avec un composé époxy puis en le faisant réagir avec l'uracile. Dans l'adsorbant utilisé dans l'invention, le composé hétérocyclique contenant de l'azote (I) qui est le coordinat est lié de préférence en une quantité d'environ 2 à 300 micro- moles pour 1 g (forme humide) de l'adsorbant. Comme l'adsorbant insoluble dans l'eau ainsi obtenu adsorbe spécifiquement un pyrogène, on peut obtenir une solu- tion apyrogène à partir d'une solution contenant un pyro- gène en mettant en contact la solution contenant le pyrogène avec l'adsorbant, puis en séparant la solution de l'adsor- bant. Une solution contenant un pyrogène, à mettre en contact avec l'adsorbant, a de préférence un pH de 4 à 10 et une conductivité spécifique de 0 à 10 mho. Lorsqu'une solution ne présente pas ces valeurs, on peut effectuer un pré-trai- tement comme par exemple un dessalage, une dilution ou une neutralisation pour ajuster l'état de la solution. Lorsqu'on met en contact une solution contenant un pyrogène avec l'adsorbant on peut employer soit un procédé continu utilisant une colonne, soit un procédé discontinu, par exemple. Ainsi, lorsqu'on utilise une colonne, on peut charger l'adsorbant dans la colonne et laver avec une solution salée, de l'eau, une solution tampon, puis on fait passer une solution contenant un pyrogène à travers la colonne pour adsorber le pyrogène sur l'adsorbant et pour obtenir une solu- tion apyrogène comme effluent. Dans ce cas, on fait passer de préférence une solution contenant un pyrogène à travers la colonne à un débit tel que généralement VS devient 2 à 13;.Le rapprt d'une solution contenant un pyrogène à l'adsorbant est-de préférence d'environ 5 à 1500 ml de la solution pour 1 ml de l'adsorbant (VS = vitesse spatiale). D'un autre côté, lorsqu'on réalise un procédé discontinu, on ajoute une solution contenant un pyrogène à l'adsorbant, on agite le mélange résultant pour adsorber le pyrogène sur l'adsorbant puis on sépare la solution de l'adsorbant pour obtenir une solution apyrogène. Dans ce cas, le rapport d'une solution contenant un pyrogène à l'adsorbant est de préférence d'environ 5 à 50 ml de la solution pour 1 ml d'adsorbant. Il est préférable de conduire le procédé entre 4 et 50*C, dans les deux cas d'un procédé continu et d'un procédé dis- continu. Etant donné qu'on peut retirer de l'adsorbant un pyrogène adsorbé sur l'adsorbant en le lavant successivement avec du désoxycholate de sodium aqueux, de l'hydroxyde de sodium aqueux, du chlorure de sodium aqueux, etc, l'adsorbant peut il être utilisé de façon répétée. Le procédé de l'invention peut être employé pour réduire la teneur en pyrogène d'une substance physiologiquement active contenant un pyrogène, p. ex. un acide aminé (p. ex. l'histidine, l'alanine, la praline, etc), une base d'acide nucléique (p. ex. la cytosine, etc), un antibiotique (p. ex. la pénicilline, etc), une hormone (p. ex. l'insuline, etc), une vitamine (p. ex. le flavine-adénine-dinucléotide, etc), une protéine sérique (p. ex. l'albumine, etc), une enzyme (p. ex. l'urokinase, lasparaginase, le lysozyme, etc), ou un anticorps (p. ex. l'immunoglobuline, etc). De plus, on peut utiliser le procédé de l'invention pour produire de l'eau apyrogène. Les préparations et. exemples qui suivent précisent l'in- vention en détail mais ne doivent pas être compris comme en limitant la portée. Dans les exemples, on mesure la concentration de pyrogène par le procédé enzymologique en utilisant l'enzyme dans l'ex- trait de cellules sanguines de Limulus et son substrat de synthèse (J. med. Enzymol., 3, 43-60 (1978)) et, éventuelle- ment, par la combinaison du test Limulus et du test du pyro- gène utilisant des lapins décrits dans la Pharmacopée japonaise IX, P-681. Dans les préparations, on calcule la teneur en composé hétérocyclique contenant de l'azote dans l'adsorbant d'après la différence entre le résultat de la réaction à la ninhydri- ne ou l'absorption UV de la solution contenant le composé avant la réaction dans la préparation et celle des eaux de lavage après la réaction. Préparation 1 (1) On lave à fond du Sepharose CL-4B (marque déposée d'un dérivé d'agarose fabriqué par Pharmacia Fine Chemicals, 30 g, forme humide) avec du chlorure de sodium aqueux 1 M puis de l'eau et on met en suspension dans l'eau (45 ml). On ajoute à la suspension de l'hydroxyde de sodium aqueux 2 N (19,5 ml) et de l'épichlorhydrine (4,5 ml) et on agite le mélange à C pendant 2 h. Après la fin de la réaction, on filtre le mélange et on lave le résidu avec de l'eau pour obtenir l'époxy-Sepharose CL-4B. On met en suspension l'époxy- Sepharose CL-4B ainsi obtenu dans une solution aqueuse à 0,625% d'hexaméthylènediainine (120 ml) et on agite la suspen- sion à 60 C pendant 2 h. On filtre le mélange réactionnel et on lave le résidu avec de l'eau pour obtenir l'aminohexyl- Sepharose CL-4B (32,8 g, forme humide). Lorsqu'on mesure la teneur en aminohexyle du Sepharose résultant par titrage, elle est d'environ 65 micromoles/g (forme humide). (2) On met en suspension de l'Aminohexyl-Sepharose CL-4B (6 g, forme humide) dans un tampon phosphaté 0,05 M (15,2 ml, pH 7,0). On ajoute à la suspension une solution aqueuse à % de glu'araldêhyde (6,4 ml) et on agite le mélange à la température ambiante pendant 2 h. Après la fin de la réaction, on filtre le mélange, et on lave le résidu avec du chlorure de sodium aqueux 1 M (env. 200 ml) puis on le met en suspen- sion dans un tampon phosphaté 0,1 M (19,5 ml, pH 7,0). On ajoute à la suspension du borohydrure de sodium (100 mg) et on agite le mélange à la température ambiante pendant 1 h. On filtre le mélange réactionnel et on lave à fond le résidu avec du chlorure de sodium aqueux 1 M et de l'eau pour obte- nir l'adsorbant insoluble dans l'eau (6,0 g, forme humide) de formule: [agaroseOO-C2C2CH(OH)CH2NH(CH2) 6NH (CH2)5-NH(CH2)2 - NN HN N La teneur en histamine pour 1 g (forme humide) de l'adsorbant ainsi obtenu est de 6,5 micromoles. Préparation 2 (1) On met en suspension de la cellulose (90 g, forme humide) dans de l'hydroxyde de sodium aqueux 1 N (900 ml). On ajoute de l'épichlorhydrine (100 ml) à la suspension et on agite le mélange à 60 C pendant 30 minutes. Après la fin de la réaction, on ajoute de l'eau glacée au mélange réac- tionnel. On filtre le mélange et on lave le résidu avec de l'eau pour obtenir de la cellulose époxy-activée (82 g, forme humide) et on agite le mélange à 60 C pendant 2 h. On filtre le mélange réactionnel et on lave le résidu avec de l'eau pour obtenir de l'aminohexyl-cellulose (78 g, forme humide). Lorsqu'on mesure la teneur en aminohexyle de la cellulose obtenue par titrage, elle est d'environ 69,4 micro- moles/g (forme humide). (2) On met en suspension l'aminohexylcellulose ainsi obtenue (2 g, forme humide) dans un tampon phosphaté 0,05 M (15,2 ml, pH 7,0) et on ajoute à la suspension une solution aqueuse à 25% de glutaraldéhyde (6,4 ml) puis on agite le mélange à la température ambiante pendant 2 h. Après la fin de la réaction, on filtre le mélange, et on lave à fond le résidu avec un tampon phosphaté 0,1 M (19,5 ml, pH 7,0). On agite la suspension à la température ambiante pendant 2 h. On filtre le mélange réactionnel et on lave le résidu avec du chlorure de sodium aqueux 1 M (env. 200 ml) puis on le met en suspension dans un tampon phosphaté 0,1 M (10 ml, pH 7,0). On ajoute du borohydrure de sodium (100 mg) à la suspension et on agite à la température ambiante pendant 1 h. On filtre le mélange réactionnel et on lave à fond le résidu avec du chlorure de sodium aqueux 1 M et de l'eau pour obte- nir un adsorbant insoluble dans l'eau (2,0 g, forme humide) de formule: {cellulosej-O-CH2CH(OH)CH2NH(CH2) 6NH(CH2) 5-NH(CH2) 2 H - HN N La teneur en histamine pour 1 g (forme humide) de l'adsor- bant ainsi obtenu est de 11,2 micromoles. Préparation 3 On répète le même procédé que celui décrit dans la préparation 2 sauf qu'on substitue l'histidine à l'histamine pour obtenir l'adsorbant insoluble dans l'eau (2,0 g, forme humide) de formule: cellulose O-CH2CH (OH)CH2NH (CH2) 6NH(CH2) 5-NHCH-CH2 - -- COOH H La teneur en histidine pour 1 g (forme humide) de l'adsor- bant est de 8,6 micromoles. Préparation 4 On répète le même procédé que celui décrit dans la pre- paration 2 sauf qu'on substitue la cytosine à l'histamine pour obtenir l'adsorbant insoluble dans l'eau (2,0 g, forme humide) de formule: Icellulose L-O-CH2CH (OH) CH2NH (CH2) 6NH (CH2) 5-NH NM H La teneur en cytosine pour 1 g (forme humide) de l'adsorbant est de 8,6 micromoles. * rJ 2499429 Préparation 5 On répète le même procédé que celui décrit dans la pré- paration 2 sauf qu'on substitue la 5-méthylcytosine à l'his- tamine pour obtenir l'adsorbant insoluble dans l'eau (2,0 g, forme humide) de formule: [ cellulose O-CH2CH(OH)CH2NH(CH2) 6NH(CH2) 5-NH CH3 NX O @ N H La teneur en 5-méthylcytosine pour 1 g (forme humide) de l'adsorbant est de 9,3 micromoles. Préparation 6 On répète le même procédé que celui décrit dans la préparation 2 sauf qu'on substitue la 2-amino-4,6-diméthyl- pyrimidine à l'histamine pour obtenir l'adsorbant insoluble dans l'eau (2, 0 g, forme humide) de formule: CH3 |cellulose O-CH2CH(OH)CH2NH(CH2) 6NH(CH2)5-NH N CH La teneur en 2-amino-4,6-diméthylpyrimidine pour 1 g (forme humide) de l'adsorbant est de 10,0 micromoles. Préparation 7 On répète le même procédé que celui décrit dans la pré- paration 2 sauf qu'on substitue la 2--amino-4-hydroxy-6- méthyl-pyrimidine à l'histamine pour obtenir l'adsorbant insoluble dans l'eau (2,0 g, forme humide) de formule: OH [cellulose O-CH2CH(OH) CH2NH(CH2) 6NH(CH2)5-NH 1 CH La teneur en 2-amino-4-hydroxy-6méthylpyrimidine pour 1 g (forme humide) de l'adsorbant est de 8,8 micromoles. Préparation 8 On répète le même procédé que celui décrit dans la préparation 2 sauf qu'on substitue l'adénine à l'hista- mine pour obtenir l'adsorbant insoluble dans l'eau (2,0 g, forme humide) de formule: cellulose -O-CH2CH(OH)CH2NH(CH2)6NH(CH2)5-NH H N La teneur en adénine pour 1 g (forme humide) de l'adsorbant est de 5,0 micromoles. Préparation 9 On répète le même procédé que celui décrit dans la pré- paration 2 sauf qu'on substitue la 6,9-diamino-2-éthoxy- acridine à l'histamine pour obtenir l'adsorbant insoluble dans l'eau (2,0 g, forme humide) de formule NH /OC2H5 celluose i O-CH2CH (OH)CH2NH (CH2) 6NH (CH2)5-NH --, N3 Ou los 1 2CHOH) CH2NH(CH2) 6NH(CH2) 5-NH H2N - N La teneur en 6,9-diamino-2-éthoxyacridine pour 1 g (forme * humide) de l'adsorbant est de 6,8 micromoles. Préparation 10 On met en suspension du CH-Sepharose 4B (marque déposée d'un dérivé d'agarose fabriqué par Pharmacia Fine Chemicals, 6 g, forme humide) dans une solution aqueuse de 5-méthyl- cytosine 20 mM (9,9 ml) et on ajuste le pH de la suspension à 4,5 à 5,0 avec de l'acide chlorhydrique 0,5 N. On agite la suspension à la température ambiante pendant 20 h. On filtre le mélange réactionnel et on lave le résidu avec du chlorure de sodium aqueux 1 M (200 ml) pour obtenir l'adsor- bant insoluble dans l'eau (6,0 g, forme humide) de formule: agar se _o C = N(CH2)5CO-NH 2 5 CH3 N 3 H La teneur en 5-méthylcytosine pour 1 g (forme humide) de l'ad- sorbant est de 3,0 micromoles. Préparation 11 On ajoute de l'hydroxyde de sodium aqueux 1 N (10 ml) et de l'épichlorhydrine (2 ml) à une résine hydroxyméthyl- polystyrène (copolymère styrène-hydroxyméthylé-divinyl- benzène, 5 g, forme humide) et on agite le mélange à 600C pendant 1 h. Après la fin de la réaction, on filtre le mélange et on lave le résidu avec de l'eau pour obtenir une résine hydroxyméthylpolystyrène époxyactivée. On ajoute à la résine une solution aqueuse d'histamine 15 mM et de bicarbonate de sodium 1 M (19,8 ml) et on agite le mélange à 60 C pendant 2 h. On filtre le mélange réactionnel et on lave le résidu avec du chlorure de sodium aqueux 1 M (200 ml) pour obtenir l'adsorbant insoluble dans l'eau (5,0 g, forme humide) de formule: copolymère styrèneI-CH2O-CH2CH(OH)CH2NH(CH2)2 2 divinylbenzène 1 HN N La teneur en histamine pour 1 g (forme humide) de l'adsorbant est de 12,5 micromoles. Préparation 12 On met en suspension du verre aminopropyl-poreux (1 g, forme sèche) dans un tampon phosphaté 0,05 M (15,2 ml, pH 7,0). On ajoute à la suspension une solution aqueuse à 25% de glutaraldéhyde (6,4 ml) et on agite le mélange à la tem- pérature ambiante pendant 2 h. On filtre le mélange réaction- nel, et on lave le résidu à fond avec un tampon phosphaté 0,1 M (pH 7,0) puis on le met en suspension dans une solu- tion d'histamine 20 mM dans un tampon phosphaté 0,1 M (9,9 ml, pH 7,0). On agite le mélange à la température am- biante pendant 2 h. On filtre le mélange réactionnel, on lave le résidu avec du chlorure de sodium aqueux 1 M puis on le réduit avec du borohydrure de sodium comme il est dit dans la préparation 1 pour obtenir l'adsorbant insoluble dans l'eau (1,8 g, forme humide) de formule: fiverre poreux ? (CH2) 3NH(CH2) 5NH (CH2) 2--T- HN 10N La teneur en histamine pour 1 g (forme humide) de l'adsorbant est de 10,1 micromoles. Préparation 13 On met en suspension du Sepharose CL-4B activé avec du bromure de cyanogène (6 g, forme humide) dans une solution aqueuse d'histamine 20 mM et de bicarbonate de sodium 1 M (9,9 ml) et on agite la suspension à la température ambiante pendant 20 heures. Après la fin de la réaction, on filtre le mélange et on lave le résidu avec du chlorure de sodium aqueux 1 M (200 ml) pour obtenir l'adsorbant inso- luble dans l'eau (5,9 g, forme humide) de formule: sagr selÈC = N(CH_) HN N La teneur en histamine pour 1 g (forme humide) de l'adsor- bant est de 30,8 micromoles. Préparation 14 On dissout du dichlorhydrate d'histamine (1,84 g) dans une solution mixte de méthanol (30 ml) et d'hydroxyde de sodium aqueux 2 N (20 ml) et on met en suspension dans cette solution une résine chloruméthylpolystyrène (copolymère styrène chlorométhylé-divinylbenzène, 3 g, forme sèche). On fait refluer la suspension à 70 à 80 C pendant 4 h. Après la fin de la réaction, on filtre le mélange et on lave à fond le résidu avec de l'eau pour obtenir l'adsorbant insoluble dans l'eau (5,0 g, forme humide) de formule: copolymère styrene- -CH2NH (CH2)2 1 di vi nyl hnèn I2 HN N La teneur en histamine pour 1 g (forme humide) de l'adsor- bant est de 251 micromoles. Préparation 15 On lave de la cellulose (29 g, forme humide) avec de l'eau (1 litre) et la met en suspension dans l'eau (150 ml). On ajuste la suspension à pH 11 à 12 avec de l'hydroxyde de sodium aqueux 10 N. On ajoute à la suspension une solution de bromure de cyanogène (6 g) dans l'eau (120 ml) en plusieurs fois tout en agitant tandis qu'on maintient le pH de la suspension entre 11 et 12. Après la fin de la réaction, on filtre le mélange et on lave le résidu avec de l'eau froide (1 litre) et une solution aqueuse glacée de bicarbonate de sodium 0,1 M pour obtenir de la cellulose activée par du bromure de cyanogène (21 g, forme humide). On ajoute la cellulose activée par du bromure de cyanogène ainsi obtenue (7 g, forme humide) à une solution d'éthylènediamine -(préparée en ajustant une solution aqueuse d'éthylènediamine 50 mM et de bicarbonate de sodium 0,1 M (50 ml) à pH 8) et on agite à la température ambiante pendant 20 h. On filtre le mélange réactionnel et on lave à fond le résidu avec du chlorure de sodium aqueux 1 M et de l'eau pour obtenir de l'aminoéthyl- cellulose (4,5 g, forme humide). On répète le même procédé que celui décrit dans la préparation 2 sauf qu'on substitue l'aminoéthylcellulose ainsi obtenue (2 g, forme humide) à l'aminohexylcellulose pour obtenir l'adsorbant insoluble dans l'eau (2,0 g, forme humide) de formule: |cellulose _OC =c N (CH2)2NH(CH2)5NH(CH2)2 I--] 1 - 2 2 2 5 2 2HN N La teneur en histamine pour 1 g (forme humide) de l'adsorbant est de 8,5 micromoles. Préparation 16 On ajoute de la cellulose activée par du bromure de cyano- gène (16,4 g, forme humide) obtenue dans la préparation 15 à une solution de butylènediamine (préparée en ajustant une solution aqueuse de butylènediamine 40 mM et de bicarbonate de sodium 0,1 M (50 ml) àpH 10) et on agite le mélange à la température ambiante pendant 20 h. Après la fin de la réac- tion, on filtre le mélange et on lave à fond le résidu avec du chlorure de sodium aqueux 1 M et de l'eau pour obtenir de l'aminobutylcellulose (10,7 g, forme humide). On répète le même procédé que celui décrit dans la préparation 2 sauf qu'on substitue i'aminobutylcellulose ainsi obtenue (2,0 g, forme humide) à l'aminohexylcellulose pour obtenir l'adsorbant insoluble dans l'eau (2,0 g, forme humide) de formule: ce ollul1se lZ C = N(CH2)4NH(CH2)sNH(CH2)2-1---! La teneur en histamine pour 1 g (forme humide) de l'adsorbant est de 10,3 micromoles. Préparation 17 On met en suspension de la cellulose (177 g, forme hu- mide) dans de l'hydroxyde de sodium aqueux 1 N (1800 ml) à 60 C. On ajoute à la suspension de l'épichlorhydrine (200 ml) et on agite la suspension à 60 C pendant 30 minutes. On ajoute de l'eau glacée au mélange réactionnel. On filtre le mélange et on lave le résidu avec de l'eau pour obtenir de la cellulose époxy-activée (150 g, forme humide). On ajoute une solution aqueuse d'éthylènediamine (100 ml, contenant ,26 mmoles d'éthylènediamine et ajustée à pH 11) à la cellulose époxy-activée ainsi obtenue (25 g, forme humide) et on agite à 60 C pendant 2 h. Après la fin de la réaction, on filtre le mélange et on lave à fond le résidu avec de l'eau pour obtenir de l'aminoéthylcellulose (22 g, forme humide). On répète le même procédé que celui décrit dans la prépara- tion 2 (2) sauf qu'on substitue l'aminoéthylcellulose ainsi obtenue (2,0 g, forme humide) à l'aminohexylcellulose pour obtenir l'adsorbant insoluble dans l'eau (2,0 g, forme humide) de formule cellulose O-CH2CH (OH) CH2NH (CH2) 2NH (CH2) 5NH (CH2)2 NN La teneur en histamine pour 1 g (forme humide) de l'adsorbant est de 11,5 micromoles. Préparation 18 On répète le même procédé que celui décrit dans la pre- paration 17 sauf qu'on substitue la buLylènediamine à l'éthyl- ènediamine pour obtenir l'aminobutylcellulose (22 g, forme humide). On substitue l'aminobutylcellulose ainsi obtenue (2 g, forme humide) à l'aminohexylcellulose dans le procédé de préparation 2 (2) pour obtenir l'adsorbant insoluble dans l'eau (2,0 g, forme humide) de formule: [ce est de 12,8 micromoles. Préparation 19 On répète le même procédé que celui décrit dans la préparation 17 sauf qu'on substitue l'hexaméthylènediamine à l'éthylènediamine pour obtenir l'aminohexylcellulose (22 g, forme humide). On substitue l'aminohexylcellulose ainsi obtenue (2 g, forme humide) à l'aminohexylcellulose dans le procédé de préparation 2 (2) pour obtenir l'adsorbant inso- luble dans l'eau (2,0 g, forme humide) de formule: icellulose O-CH2CH(OH) CH2NH(CH2)6NH(CH2)5NH(CH2)2,N HN N La teneur en histamine pour 1 g (forme humide) de l'adsorbant est de 13,6 micromoles. Préparation 20 On répète le même procédé que celui décrit dans la préparation 17 sauf qu'on substitue l'octaméthylènediamine à l'éthylènediamine pour obtenir l'aminooctylcellulose (22 g, forme humide). On substitue l'aminooctylcellulose ainsi ob- tenue (2 g, forme humide) à l'aminohexylcellulose dans le procédé de la préparation 2 (2) pour obtenir l'adsorbant in- soluble dans l'eau (2,0 g, forme humide) de formule: cellulose O-CH2CH(OH)CH2NH(CH2)8NH(CH2) 5NH(CH2)2-- I-- HN N La teneur en histamine pour 1 g (forme humide) de l'adsorbant est de 12,6 micromoles. Préparation 21 On ajoute une solution de décaméthylènediamine (préparée en ajustant une solution de 5,26 mMoles de décaméthylènediamine dans de l'éthanol à 50% (100 ml) à pH 11) à de la cellulose époxy-activée obtenue dans la préparation 17 (25 g, forme humi- de) et on agite à 60 C pendant 2 h. On filtre le mélange réactionnel et on lave à fond le résidu avec de l'éthanol aqueux à 50% et de l'eau pour obtenir de l'aminodécyl- cellulose (22 g, forme humide). On substitue l'aminodécyl- cellulose ainsi obtenue (2 g, forme humide) à l'aminohexyl- cellulose dans le procédé de la préparation 2 (2) pour obte- nir l'adsorbant insoluble dans l'eau (2,0 g, forme humide) de formule cellulose-O-CH2CH(OH)CH2NH(CH2)10NH(CH2)5NH(CH2)2 1 _1 HN N La teneur en histamine pour 1 g (forme humide) de l'adsorbant est de 10,8 micromoles. Préparation 22 On répète le même procédé que celui décrit dans la pre- paration 21 sauf qu'on substitue la dodécaméthylènediamine à la décaméthylènediamine pour obtenir l'aminododécylcellulose (22 g, forme humide). On substitue l'aminododécylcellulose ainsi obtenue (2 g, forme humide) à l'aminohexylcellulose dans le procédé de la préparation 2 (2) pour obtenir l'adsor- bant insoluble dans l'eau (2,0 g, forme humide) de formule: cellulose 1-OCH2CH(OH)CH2NH(CH2)12NH (CH2) 5NH(CH2)2 N N La teneur en histamine pour 1 g (forme humide) de l'adsorbant est de 11,3 micromoles. Préparation 23 On met en suspension de la résine chlorométhylpolysty- rène (copolymère styrène-chlorométhylé-divinylbenzène, 5 g, forme sèche) dans une solution mixte de dichlorométhane (15 ml) et de méthanol (15 ml), on on ajoute à la suspension de la triéthylamine (1,42 ml). On fait refluer le mélange entre 70 et 80 C pendant 4 h et on retire la résine par filtration et on la lave à fond avec de l'eau. On dissout du dichlorhydrate d'éthylènediamine (2,66 g) dans un sol- vant mixte de méthanol (30 ml) et d'hydroxyde de sodium aqueux 2 N (20 ml) , et on met en suspension la résine obtenue ci-dessus dans la solution résultante. On fait refluer la suspension entre 70 et 80 C pendant 4 h. On filtre le mélange réactionnel et on lave à fond le résidu avec de l'eau pour obtenir une résine (8,4 g, forme humide). On met en suspension la résine (5,0 g, forme humide) dans un tampon phosphaté 0,05 M (12 ml, pH 7,0) et on ajoute à la suspension une solu- tion aqueuse à 25% de glutaraldéhyde (12 ml). On agite le mélange à la température ambiante pendant 2 h. On filtre le mélange réactionnel et on lave à fond ler ésidu avec un tampon phosphaté 0,1 M (pH 7,0). On met en suspension le résidu dans une solution d'hitamine 15 mM dans un tampon phosphaté 0,1 M (19,5 ml, pH 7,0) et on agite à la tempé- rature ambiante pendant 2 h. Après la fin de la réaction, on filtre le mélange, et on lave le résidu avec du chlorure de sodium aqueux 1 M (env. 200 ml) puis on met en suspension dans un tampon phosphaté 0,1 M (10 ml, pH 7,0). On ajoute à la suspension du borohydrure de sodium (100 mg). On agite le mélange à la temperature ambiante pendant 1 h. On filtre le mélange réactionnel et on lave à fond le résidu avec du chlorure de sodium aqueux 1 M et de l'eau pour obtenir l'adsorbant insoluble dans l'eau (5,0 g, forme humide) de formule copolymere styrene- i idivinylbenzène -CH NH(C22 25 22 1 -CH_____ 2NH (CH2) 2NH (CH2) 5NH (CH2) 2 __________ _________ N N La teneur en histamine pour 1 g (forme humide) de l'adsorbant est de 28,6 micromoles. Préparation 24 On répète le même procédé que celui décrit dans la prépara- tion 23 sauf qu'on substitue l'hexaméthylènediamine (2,32 g) au dichlorhydrate d'éthylènediamine pour obtenir l'adsorbant insoluble dans l'eau (5,0 g, forme humide) de formule: I copolymere styrène- -C2NH(CH2) 6NH(CH2)5NH(CH2)2 divinylbenzène 2 2 6 2 5 2 2 HN N La teneur en histamine pour 1 g (forme humide) de l'adsorbant est de 58,8 micromoles. Préparation 25 (1) On dissout de l'acide N-t-butoxycarbonyl-F--amino- caproïque (2,31 g), du l-hydroxybenzotriazole (1,49 g) et du dicyclohexylcarbodiimide (2,27 g) dans le tétrahydrofuranne (10 ml). On ajoute à la solution de dichlorhydrate d'hista- mine (1,84 g) et de la triéthylamine (2,84 ml) et on agite le mélange à la température ambiante pendant 5 h. Après la fin de la réaction, on sépare par filtration le précipité formé et on extrait le filtrat avec de l'acétate d'éthyle. On lave l'extrait avec de l'acide chlorhydrique à 1% puis du bicarbonate de sodium aqueux saturé, on sèche et on enlève le solvant par distillation pour obtenir la N-t-butoxycarbonyl- ú-aminocaproyl-histamine sous la forme d'une huile. L'huile présente une seule tache (Rf: 0,76) en chromatographie en couche mince (solvant: chloroforme-méthanol-acide acétique (95:5:3)).On traite l'huile ainsi obtenue avec de l'acide trifluoroacétique (5 ml) à la température ambiante pendant minutes et on ajoute de l'éther au mélange pour obtenir la a-aminocaproyl-histamine (1,12 g) sous la forme d'une huile. L'huile présente une seule tache (Rf: 0,47) à la chro- matographie en couche mince (solvant: n-butanol-acide acétique- eau (4:1:1)). (2) On met en suspension une résine chlorométhyl- polystyrène (copolymère styrène chlorométhylé-divinyl- benzène, 5 g, forme sèche) dans une solution mixte de dichlorométhane (15 ml) et de méthanol (15 ml). On ajoute à la suspension de la triéthylamine (1,42 ml) et on fait refluer le mélange entre 70 et 80 C pendant 4 h. On filtre la résine et on la lave à fond avec de l'eau. On dissout 1' E-amino- caproyl-histamine obtenue en (1) ci-dessus (1,12 g) dans une solutin mixte de méthanol (30 ml) et d'hydroxyde de sodium aqueux 2N (20 ml) et on met en suspension la résine ainsi obtenue dans cette solution. On fait réagir le mélange à 45 à 50 C pendant 24 h. Après la fin de la réaction, on filtre le mélange et on lave à fond le résidu avec de l'eau pour obtenir l'adsorbant insoluble dans l'eau (8,4 g, forme humide) de formule: copol yme styrene- ldivinylbenzne -CH2NH(CH2)5CONH(CH2) 2 I 1 HN N La teneur en histamine pour 1 g (forme humide) de l'ad- sorbant est de 59,5 micromoles. Préparation 26 On met en suspension de l'aminohexyl-Sepharose CL-4B (6 g, forme humide, préparé dans la préparation 1 (1)) dans une solution aqueuse d'acide urocanique 30 mM (9,9 ml). On é( ajuste la suspension à pH 4,5 à 5,0 avec de l'acide chlorhy- drique 0,5 N et on ajoute goutte à goutte à la suspension pendant 10 minutes une solution aqueuse à 40% de 1-éthyl- 3-(3-diméthylaminopropyl)carbodiimide (1 ml), tandis qu'on maintient la suspension à pH 4,5 à 5,0 par addition d'acide chlorhydrique 0,5 N. Après addition, on agite le mélange réactionnel à la température ambiante pendant 20 h. On filtre le mélange réactionnel et on lave le résidu avec du chlorure de sodium aqueux 1 M (environ 200 ml) pour obtenir l'adsorbant insoluble dans l'eau (6,0 g, forme humide) de formule |agar se]-O -CH2CH(OH)CH2NH(CH2)6NHOCCH=CH HN N La teneur en acide urocanique pour 1 g (forme humide) de l'adsorbant est de 3,1 micromole. Préparation 27 On répète le même procédé que décrit dans la prépara- tion 26 sauf qu'on substitue une solution aqueuse d'acide orotique 10 mM (19,9 ml) à une solution aqueuse 30 mM d'acide urocanique (9,9 ml) pour obtenir l'adsorbant inso- luble dans l'eau (6,0 g, forme humide) de formule: lagarose -O-CH2CH(OH) CH2NH(CH2) 6HN NHOC 2 2 2 6 HN NH Y O La teneur en acide orotique pour 1 g (forme humide) de l'adsorbant est de 15,3 micromoles. Préparation 28 On met en suspension de l'aminohexyl-Sepharose CL-4B (6 g, forme humide, préparé dans la préparation 1 (1)) dans l'eau (9 ml). On ajoute à la suspension de l'hydroxyde de sodium aqueux 2 N (3,9 ml) et de l'épichlorhydrine (0,9 ml) et on agite le mélange à-40 C pendant 2 h. On filtre le mélange réactionnel et on lave le résidu avec de l'eau pour obtenir l'aminohexyl-Sepharose CL-4B époxy-activé. On met en suspension l'aminohexyl-Sepharose CL-4B époxy-activé ainsi obtenu dans une solution aqueuse d'uracile 30 mM (9,9 ml, ajustée à pH 12 avec de l'hydroxyde de sodium 2 N) et on agite la suspension à 60 C pendant 2 h. Après la fin de la réaction, on filtre le mélange et on lave le résidu avec du chlorure de sodium aqueux 1 M (200 ml) pour obtenir l'adsorbant inso- luble dans l'eau (6,0 g, forme humide) de formule O agrose -O-CH2CH(OH)CH2NH(CH2) 6NHCH2CH(OH)CH2-N) N H agarose -O-CH2CH(OH)CH2NH(CH2) 6NHCH2CH(OH)CH2-N NH agarosei--O-CH2CH(OH)CH2NH(CH2)6NHCH2CH(OH)CH2-o N OH Ou agarose]-OCH2CH(OH)CH2NH(CH2) 6NHCH2CH(OH)CH- t N OH La teneur en uracile pour 1 g (forme humide) de l'adsorbant est de 4,1 micromoles. Préparation 29 (1) On dissout du sulfure de diméthyle (20 g) dans une solution mixte de dichlorométhane (60 ml), de méthanol (60 ml) et d'eau distillée (90 ml) et on met en suspension dans la solution une résine chlorométhylpolystyrène poreuse (copolymère styrène chlorométhylédivinyibenzène, 20 g, forme sèche). On fait refluer la suspension à 60 C pendant 48 h. Après la fin de la réaction, on filtre le mélange et on lave à fond le résidu avec de l'eau et du méthanol pour obtenir une résine diméthylthiométhylpolystyrène (33 g, forme humide). (2) On dissout du dichlorhydrate d'histamine (1,84 g) dans une solutin mixte d'hydroxyde de sodium aqueux 2 N (20 ml) et de méthanol (10 ml) et on met en suspension dans cette solution la résine diméthylthiométhylpolystyrène obtenue en 1 ci-dessus (5 g, forme humide). On fait refluer le mélange entre 80 et 85 C pendant 21 h. On filtre le mélange réactionnel et on lave à fond le résidu avec de l'eau pour obtenir l'adsorbant insoluble dans l'eau (5,0 g, forme humide), de formule tcopolymère t-Y-rèn N(H)1-I -CH NH (CH2)2 divinylbenzene 2N2 2 - N La teneur en histamine pour 1 g (forme humide) de l'adsor- bant est de 179 micromoles. Préparation 30 On met en suspension la résine polystyrène aminoéthylée (5, 0 g, forme humide) obtenue de la même manière qu'il est dit dans la préparation 23 dans une solution aqueuse 30 mM d'acide urocanique (9,9 ml) , et on ajuste le pH de la suspension à 4,5-5,0 avec de l'acide chlorhydrique 0,5 N. On ajoute goutte à goutte une solution aqueuse à 40% de 1- éthyl-3-(3-diméthylaminopropyl)carbodiimide (1 ml) à la suspension pendant environ 10 minutes tandis qu'on maintient le pH de la suspension à 4,5 à 5,0 par addition d'acide chlorhydrique 0,5 N. On agite la suspension à la température ambiante pendant 20 h. On filtre le mélange réactionnel, et on lave le résidu avec du chlorure de sodium aqueux 1 M (200 ml) pour obtenir l'adsorbant insoluble dans l'eau (5,0 g, forme humide) de formule copolyvmère styrène- -CH NH(CH2) 2NHCOCH=CH ---_- divinylbenzène I 2 2 HN N La teneur en acide urocanique pour 1 g (forme humide) de l'adsorbant est de 44,3 micromoles. Préparation 31 On répète le même procédé que celui décrit dans la préparation 30 sauf qu'on substitue une solution aqueuse mM d'acide orotique (19,9 ml) à la solution aqueuse mM d'acide urocanique (9,9 ml) pour obtenir l'adsor- bant insoluble dans l'eau (5,0 g, forme humide) de formule Icopolyrare styrène- -CH2NH (CH) NHCOjON 0 divinylbenzène 2 2 2 HN NH o La teneur en acide orotique pour 1 g (forme humide) de l'adsorbant est de 27 micromoles. Préparation 32 On répète le même procédé que celui décrit dans la préparation 30 sauf qu'on substitue la résine polystyrène aminohexylée (5, 0 g, forme humide) obtenue de la même manière qu'il est dit dans la préparation 24 à la résine polystyrène aminoéthylée pour obtenir l'adsorbant insoluble dans l'eau (5,0 g, forme humide) de formule copolymère styrène- 1-CH NH (CH) NHCOCH=CH N divinylbenzène 2 2 6 HN N La teneur en acide urocanique pour 1 g (forme humide) de l'adsorbant est de 33 micromoles). Préparation 33 On répète le même procédé que celui décrit dans la pré- paration 31 sauf qu'on substitue la résine polystyrène- aminohexylé (5,0 g, forme humide) obtenue de la même manière que décrit dans la préparation 24 à la résine polystyrène aminoéthylée pour obtenir l'adsorbant insoluble dans l'eau (5,0 g, forme humide) de formule: copolymère styrène- f-CH NH (CH) NHCO 0 divinylbenzène 2 2 6 HN NH o La teneur en acide orotique pour 1 g-(forme humide) de l'ad- sorbant est de 17,2 micromoles. Préparation 34 On répète le même procédé que celui décrit dans la pré- paration 23 sauf qu'on substitue la 5-méthylcytosine à l'his- tamine pour obtenir l'adsorbant insoluble dans l'eau (5,0 g, forme humide) de formule: copolymère styrène- I-CH2NH (CH2) NH (CH2) NH divinvlbenzene 2 2 CH3 ON H La teneur en 5-méthylcytosine pour 1 g (forme humide) de l'adsorbant est de 1,7 micromole). Préparation 35 On traite une résine chlorométhylpolystyrène (copoly- mère styrène-chlorométhylé-divinylbenzène) de la même manière qu'il est dit dans J. Am. Chem. Soc. 98, 7357 (1976) pour ob- tenir une résine polystyrène aminométhylée. On met en suspension la résine polystyrène aminométhylée (5,0 g, forme sèche) ainsi obtenue dans une solution aqueuse 0,1 M de tétraborate de sodium (40 ml), et on y ajoute du chlorure cyanurique (3,69 g). On agite le mélange à la température ambiante pendant 2 h. On filtre le mélange réactionnel, et on lave le résidu avec du méthanol et de l'eau pour obtenir une résine (13,2 g, forme humide). On ajoute à la résine (6,6 g, forme humide) obtenue ci- dessus une solution aqueuse histamine 25 mM - tétraborate de sodium 0,1 M (19,9 ml), et on agite le mélange à la température ambiante pendant 2 h. On filtre le mélange réactionnel, et on lave le résidu avec du chlorure de sodium 1 M (200 ml) pour obtenir l'adsor- bant insoluble dans l'eau (6,6 g, forme humide) de formule lcopolymère styrène- -CH2NHNir NH(CH2)2_IN I I divinylbenZène N N2 2 HN N Cl La teneur en histamine pour 1 g (forme humide) de l'adsor- bant est de 64,4 micromoles. Préparation 36 On ajoute la résine (6,6 g, forme humide) obtenue en faisant réagir la résine polystyrène aminométhylée avec du chlorure cyanurique de la même manière qu'il est dit dans la préparation 35 à une solution aqueuse acide E-amino- caproïque 500 mM-tétraborate de sodium 0,1 M (20,3 ml). On agite le mélange à la température ambiante pendant 2 h. On filtre le mélange réactionnel et on lave le résidu avec une solution aqueuse 1 M de chlorure de sodium (200 ml) pour obtenir une résine (6,6 g, forme humide). On met en suspen- sion la résine ainsi obtenue dans une solution aqueuse mM d'histamine (9, 9 ml), et on traite la suspension de le même manière qu'il est dit dans la préparation 30 pour obtenir l'adsorbant insoluble dans l'eau (6,6 g, forme humide) de formule copolymre styrène- -CH NHY -N, NH(CH2)5CONH(CH2) 2 N divinylbenzène N HN N Cl La teneur en histamine pour 1 g (forme humide) de l'adsorbant est de 5,3 micromoles. Préparation 37 (1) On ajoute une solution aqueuse 3 N d'hydroxyde de sodium (10 ml) et d'épichlorhydrine (10 ml) à du Toyopearl HW-55 (marque déposée d'un alcool polyvinylique fabriqué par Toyo Soda Manufacturing Co. Ltd.) (13 g, forme humide). On agite le mélange à 50 C pendant 2 h. On filtre le mélange réactionnel, et on lave le résidu avec de l'eau pour obtenir de l'époxy-Toyopearl HW-55 (13,7 g, forme humide). On met en suspension l'époxy-Toyopearl HW-55 (13,7 g, forme humide) dans une solution aqueuse concentréed'ammoniaque (20 ml), et on agite la suspension à 50 C pendant 1 h. On filtre le mélange réactionnel, et on lave le résidu avec de l'eau pour obtenir le Toyopearl HW-55 aminopropylé (14,3 g, forme humide). La teneur en groupe aminopropyle pour 1 g (forme humide) du Toyopearl HW-55 aminopropylé est d'environ 125 micromoles. (2) On met en suspension du Toyopearl HW-55 aminopropylé (6 g, forme humide) dans une solution 0,05 M de tampon phos- phaté (pH 7,0, 12 ml), et on y ajoute une solution aqueuse à 25% de glutaraldéhyde (12 ml). On agite la suspension à la température ambiante pendant 30 minutes. Onr filtre le mélange réactionnel, et on lave le résidu avec une solution de tampon phosphaté 0,1 M (pH 7,0). On met le résidu en suspension dans une solution histamine 15 mM-tampon phospha- té 0,1 M (pH 7,0, 19,8 ml) et on agite la suspension à la température ambiante pendant 2 h. On filtre le mélange réactionnel et on lave le résidu avec une solution aqueuse 1 M de chlorure de sodium (environ 200 ml). On met le résidu en suspension dans une solution 0,1 M de tampon phos- phaté (pH 7,0, 10 ml), et on y ajoute du borohydrure de sodium (100 mg). On agite la suspension à la température ambiante pendant 1 h. On filtre le mélange réactionnel, et on lave le résidu avec une solution aqueuse 1 M de chlorure de sodium et de l'eau pour obtenir l'adsorbant insoluble dans l'eau (6,0 g, forme humide) de formule: 1i 1 |p lyvinyl _-OCH2CHCH2NH(CH2)5NH (CH2)2 HN N OH OH La teneur en histamine pour 1 g (forme humide) de l'adsorbant est de 18,2 micromoles. Préparation 38 (1) On met en suspension de l'époxy-Toyopearl HW-55 (9,0 g, forme humide) obtenu de la même manière qu'il est dit dans la préparation 37 (1) dans une solution aqueuse à 0,625% d'hexaméthylènediamine (36 ml), et on agite la suspension à 60 C pendant 2 h. On filtre le mélange réactionnel, et on lave le résidu avec de l'eau pour obtenir l'aminohexyl- Toyopearl HW-55 (8,5 g, forme humide). La teneur en groupe aminohexyle pour 1 g (forme humide) de l'aminohexyl-Toyopearl HW-55 est d'environ 174 micromoles. (2) On répète le même procédé que décrit dans la prépara- tion 37 (2) sauf qu'on substitue l'aminohexyl-Toyopearl HW-55 à l'aminopropyl-Royopearl HW-55 pour obtenir l'adsorbant in- soluble dans l'eau (6,0 g, forme humide) de formule: ipolyvinyl -OCH2CHCH2NH (CH2) NH(CH2) 5NH (CH2)2 2 Jalc o o l 2 2 6 2 5 2)2 HN N OH La teneur en histamine pour 1 g (formehumide) de l'adsorbant est de 21,8 micromoles. Préparation 39 (1) On dissout du chitosan (5 g, forme sèche) à 50 C dans l'acide chlorhydrique 0,1 N (350 ml), et on ajoute à la solution de l'acide chlorhydrique concentré. On recueille les précipités par filtration, puis on les disperse dans une solution aqueuse 6 N d'hydroxyde de sodium (200 ml). On ajoute à la dispersion du mnéthanol (300 ml), et on recueille les précipités par filtration. On lave les précipités ainsi obtenus avec du méthanol, on sèche puis on les fait passer à travers un tamis (0,840 mm d'ouverture de maille pour obtenir du chitosan mercerisé (3,44 g, forme sèche) (2) On répète le même procédé que celui dans la prépa- ration 37 sauf qu'on substitue le chitosan mercerisé au Toyopearl HW-55 pour obtenir l'adsorbant insoluble dans l'eau (3,3 g, forme humide) de formule: rChitosan jCH2CHCH2NH(CH2)5N (CH2 - LEosanc21 2 2 22H N OH La teneur en histamine pour 1 g (forme humide) de l'adsorbant est de 59,7 micromoles. Exemple 1 On lave l'adsorbant obtenu dans la préparation 1 (coordi- nat: histamine, support: aminohexylagarose, 8 ml) avec du chlorure de sodium aqueux 1,5 M et on l'introduit dans une colonne stérilisée (diamètre interne: 13 mm, longueur: 100 mm). On lavela colonne successivement avec du chlorure de sodium aqueux 1,5 M (250 ml), de l'eau pure (100 ml) et du chlorure de sodium aqueux 0,05 M (100 ml), tous ces corps étant apyrogènes. On fait passer une solution de chaque pyrogène (100 microgrammes) provenant de divers types de bactéries dans du chlorure de sodium aqueux 0,05 M (100 ml) à travers la colonne à un débit de 12 SV. Dans ce cas, on n'utilise qu'une seule colonne et on réutilise la colonne usée en la lavant successivement avec de l'hydroxyde de sodium aqueux 0,2 N (16 ml), une solution aqueuse à 0,5% de désoxycholate de sodium (32 ml), de l'hydroxyde de sodium aqueux 0,2 N (160 ml), de l'eau pure (50 ml), du chlorure de sodium aqueux 1,5 M (250 ml) et de l'eau pure (100 ml) pour reproduire l'adsorptivité du pyrogène de l'adsorbant. On mesure la concentration du pyrogène dans l'effluent et on effectue sur celui-ci le test Limulus. Les résultats sont donnés au Tableau 1. Dans le Tableau 1, on utilise comme pyrogène dérivé de Klebsiella pneumoniae du LPS préparé selonle procédé de Westphal (Angwt, Chem., 66, 407, (1954)) et les autres pyrogènes sont des LPS préparés par Difco Lab., USA. Tableau 1 Exemple 2 On introduit chacun des adsorbants obtenus dans les préparations 2 à 9 (8 ml) dans une colonne (diamètre interne: 13 mm, longueur: 100 mm) et on lave la colonne de la même manière qu'il est dit dans l'exemple 1. On fait passer une solution d'un pyrogène dans du chlorure de sodium aqueux 0,05 M (100 ml, contenant 1 000 ng d'Escherichia ccli 0128: B 12, LPS pour 1 ml de la solution) à travers la colonne à un débit de SV = 12. On mesure la concentration du pyrogène dans l'effluent. Les résultats sont donnés au Tableau 2. IPyrogèn test Pyrogenes derivis Concentration de Limulus de bactéries pyroge> (ng/ml effluent) Escherichia coli 0128: 0 2 - B12, LPS Klebsiella pneumoniae, 0 - LPS Salmonella abortus equi, 06 LPS Salmonella enteritidis, 0 6 LPS Salmonella flexineri, 0 - LPS Salmonella minnesota 0;1 - *9700, LPS Tableau 2 Adsorbants Concentration No de pyrogène ng/ml d'effluent) 1 Adsorbant de la préparation 2 (coordinat: histamine, support: aminohexyl-cellulose) 0, 1 2 Adsorbant de la préparation 3 (coordinat: histidine, support: aminohexyl-cellulose) 0,1 3 Adsorbant de la préparation 4 (coordinat: cytosine, support: aminohexyl-cellulose) 0,5 4 Adsorbant de la préparation 5 (coordinat: -méthylcytosine, suppor L: aminohexyl- cellulose) 0,6 Adsorbant de la préparation 6 (coordinat: 2-amino-4,6- diméthylpyrimidine, support: aminohexylcellulose) 0,5 6 Adsorbant de la préparation 7 (coordinat: 2-amino-4-hydroxy-6-méthylpyrimidine, support: aminohexylcellulose) 0,9 7 Adsorbant de la préparation 8 (coordinat: adénine, support: aminohexylcellulose) 4,0 8 Adsorbant de la préparation 9 (coordinat: acrinol, support: aminohexylcellulose) 1,6 Exemple 3 On charge l'adsorbant obtenu dans la préparation 10 (coordinat: 5méthylcytosine, support: carboxyhexylagarose, 8 ml) dans une colonne (diamètre interne: 13 mm, longueur: 100 mm) et on lave la colonne dela même manière qu'il est dit dans l'exemple 1. Lorsqu'on fait passer une solution d'un pyrogène dans du chlorure de sodium aqueux 0,05 M (100 ml, contenant 1 000 ng d'Escherichia coli 0128: B 12, LPS pour 1 ml de la solution) à travers la colonne à un débit de SV = 12, la concentration du pyrogène dans l'efflu- ent est de 1,2 ng/ml. Exemple 4 On charge l'adsorbant obtenu dans la préparation 11 (coordinat: histamine, support: copolymère styrène hydroxy- méthylé-divinylbenzène, 8 ml) dans une colonne (diamètre interne: 13 mm, longueur: 100 mm) et on lave la colonne de la même manière qu'il est dit dans l'exemple 1. Lorsqu'on fait passer une solution d'un pyrogène dans du chlorure de sodium aqueux 0,05 M (100 ml, contenant 100 ng d'Escherichia coli 0128: B 12, LPS pour 1 ml de la solution) à travers la colonne à un débit de SV = 12, la concentration du pyrogène dans l'effluent est de 4,8 ng/ml. Exemple 5 On met en suspension l'adsorbant obtenu dans la prépa- ration 12 (coordinat: histamine, support: verre poreux, 1 g, forme sèche) dans une solution d'un pyrogène dans le chlorure de sodium aqueux 0,05 M (50 ml, contenant ng de Klebsiella pneumoniae, LPS pour 1 ml de la solution). Lorsqu'on agite la suspension pendant 2 h et qu'onla laisse reposer, la concentration du pyrogène dans le surnageant est de 2 ng par ml. Exemple 6 On charge l'adsorbant obtenu dans la préparation 13 (coordinat: histamine, support: agarose, 8 ml) dans une colonne (diamètre interne: 13 mm, longueur: 100 mm) et on lave la colonne de la même manière qu'il est dit dans l'exemple 1. Lorsqu'on charge une solution d'un pyrogène dans du chlorure de sodium aqueux 0,05 M (100 ml, contenant ng d'Escherichia coli 018: B 12, LPS pour 1 ml de la solution) à travers la colonne à un débit de SV = 12, la concentration du pyrogène dans l'effluent est de 9 ng/ml. Exemple 7 On charge l'adsorbant obtenu dans la préparation 14 (coordinat: histamine, support: copolymère styrène-divinyl- benzène, 8 ml) dans une colonne (diamètre interne: 13 mm, longueur: 100 mm) et on lave la colonne de la même manière qu'il est dit dans l'exemple 1. Lorsqu'on fait passer une solution d'un pyrogène dans du chlorure de sodium aqueux 0,05 M (100 ml, contenant 100 ng de Salmonella flexineri, LPS pour 1 ml de la solution) à travers la colonne à un dé- bit de SV = 12, la concentration du pyrogène dans l'effluent est de 4,6 ng/ml. Exemple 8 On lave la colonne utilisée dans l'exemple 1 (chargée avec l'adsorbant, le coordinat étant l'histamine et le support étant l'aminohexylagarose) successivement avec de l'hydroxyde de sodium aqueux 0,2 N (16 ml),une solution aqueu- se à 0,5% de désoxycholate de sodium (32 ml), de l'hydroxyde de sodium aqueux 0,2 N (160 ml), de l'eau pure (50 ml), du chlorure de sodium aqueux 1,5 M (250 ml) et de l'eau pure (100 ml), tous ces corps étant apyrogènes. On fait passer une solution aqueuse à 2% de L-histidine (100 ml, contenant ng d'Escherichia coli 0128: B12, LPS pour 1 ml de la solution) à travers la colonne à un débit de SV = 3. Dans l'effuent, on recueille plus de 90% de la L-histidine et le test Limulus de l'effluent est négatif (-). Lorsqu'on soumet l'effluent au test du pyrogène à une dose de 10 ml/kg, la température du corps des lapins montede 0 C, 0,1 C et 0,25 C, respectivement, et on estime que la pyrogénicité de l'effluent est négative. En outre, lorsqu'on dilue direc- tement la solution aqueuse de L-histidine 5 fois avec de l'eau sans la soumettre au traitement de la colonne puis qu'on la soumet au test du pyrogène à une dose de 1 ml/kg, la température du corps des lapins monte de 1,15 C, 1,15 C et 1,30 C, respectivement, et on estime que la pyrogénicité de la solution est positive. Exemple 9 On lave la colonne utilisée dans l'exemple 1 de la même manière qu'il est dit dans l'exemple 8. On fait passer une solution aqueuse à 2% de Lalanine (100 ml, contenant 100 ng d'Escherichia coli 0128: B 12, LSP pour 1 ml de la solution) à travers la colonne à un débit de SV = 3. On recueille dans l'effluent plus de 90% de la L-alanine et la concentration du pyrogène dans l'effluent est de 0,1 ng/ml. Le test Limulus de l'effluent est négatif (-). Exemple 10 On lave la colonne utilisée dans l'exemple 1 de la même manière qu'il est dit dans l'exemple 8. On fait passer une solution aqueuse contenant 0,08%5 d'acide 6-aminopénicillani- que et 0,08% de citraLe de sodium (100 ml, contenant 100 ng d'Escherichia coli 0128: B 12, LPS pour 1 ml de la solution) 3travers la colonne un débit de SV = 3. on recueille plus àtravers la colonne à un débit de SV = 3. On recueille plus de 90% de l'acide 6-aminopénicillanique dans l'effluent et le test Limulus de l'effluent est négatif (-). Exemple 11 On lave la colonne utilisée dans l'exemple 1 de la même manière qu'il est dit dans l'exemple 8. On fait passer une solution aqueuse à 0,25% de flavine adénine dinucléotide (FAD) (100 ml, contenant 100 ng d'Escherichia coli 0128: B 12, LPS pour 1 ml de la solution) à travers la colonne à un débit de SV = 3. On recueille plus de 85% de FAD dans l'effluent et le test Limulus de l'effluent est négatif (-). Exemple 12 On lave la colonne utilisée dans l'exemple 1 de la même manière qu'il est dit dans l'exemple 8. On fait passer une solution aqueuse à 0,5% de cytosine (100 ml, contenant 100 ng d'Escherichia coli 0128: B 12, LPS pour 1 ml de la solution) à travers la colonne à un débit de SV = 3. On recueille plus de 95% de la cytosine dans l'effluent et la concentration du pyrogène dans l'effluent est de O ng/ml. Le test Limulus de l'effluent estnégatif (-). Exemple 13 On lave la colonne utilisée dans l'exemple 1 de la même manière qu'il est dit dans l'exemple 8. On fait passer une solution aqueuse à 5% de glucose (100 ml, contenant 100 ng d'E. coli 0128: B 12, LPS pour 1 ml de la solution) à travers la colonne à un débit de SV = 3. On recueille plus de 90% du glucose dans l'effluent et le test Limulus de l'eff]uent est négatif (-). Exemple 14 On lave la colonne utilisée dans l'exemple 1 de la même manière qu'il est dit dans l'exemple 8. On fait passer une solution de L-proline brute obtenue à partir d'un fil- trat dans une fermentation de L-proline (50 ml, contenant % de L-proline) à travers la colonne à un débit de 25 ml/h. La concentration du pyrogène dans l'effluent est de 0 ng/ml et le test Limulus de l'effluent est négatif (-). En outre, la concentration en pyrogène de la solution de L-proline brute est de 8,8 ng/ml et son test Limulus est positif (++). Exemple 15 On lave la colonne utilisée dans l'exemple 1 de la même manière qu'il est dit dans l'exemple 8. On fait passer une solution de chlorure de lysozyme (0,5 g) dans un tampon au chlorhydrate de Tris 0,005 M (100ml, pH 9,0) contenant environ 10 ng/ml de pyrogène à travers la colonne à un débit de SV = 3. On recueille plus de 90% du lysozyme dans l'effluent et la concentration du pyrogène dans l'effluent est de O,1 ng/ ml. Lorsqu'on soumet l'effluent à un test du pyrogène à une dose de 10 ml/kg, la température du corps des lapins s'élève de 0 C, 0,20 C et 0,20 C, respectivement et on considère que la pyrogénicité de l'effluent estnégative. En outre, lorsque la solution de lysozyme est directement soumise au test du pyrogène à une dose de 10 ml/kg (sans qu'on la soumette au traitement de la colonne), la température du corps des lapins s'élève de 1,00 C, 1,15 C et 1,20 C, respectivement et on considère que la pyrogénécité de la solution est positive. Exemple 16 On charge l'adsorbant obtenu dans la préparation 2 (coordi- nat: histamine, support: aminohexylcellulose) dans une colonne (diamètre interne: 20,8 mm, longueur: 27 mm) et on fait passer une solution d'urokinase brute (150 mg) dans un tampon phosphaté 0,01 M (35 ml, pH 8,0) . (Test Limulus ++) à travers la colonne à un débit de SV = 4. On recueille 64% de l'urokinase dans l'effluent et le test Limulus de l'effluent est négatif (-). Exemple 17 On charge l'adsorbant obtenu dans la préparation 10 (coordinat: 5méthylcytosine, support: carboxyhexylagarose) dans une colonne (diamètre interne: 20,8 mm, longueur: 27 mm) et on fait passer une solution d'asparaginase cristalline (116 mg) dans du chlorure de sodium aqueux 0, 05 M (20 ml) (test Limulus: ++) à travers la colonne à un débit de SV= 4. On recueille 94% de l'asparaginase dansl'effluent et le test Limulus de l'effluent est négatif (-). Exemple 18 On lave la colonne utilisée dans l'exemple 1 de la même manière qu'il est dit dans l'exemple 8 et on fait passer une solution d'immunoglobuline G (50 mg) dans un tampon phosphaté 0,01 M (50 ml, pH 7,5) (test Limulus: ++) à travers la colon- ne à un débit de SV = 3. On recueille 76% de ''immunoglobuline G dans l'effluent et le test Limulus de l'effluent est négatif (-). Exemple 19 On lave la colonne utilisée dans l'exemple 1 de la même manière qu'il est dit dans l'exemple 8 et on fait passer une solution d'insuline de boeuf (100 mg) dans l'acide chlorhydrique 0,004 N (50 ml) contenant 5 ng/ml d'un pyrogène à travers la colonne à un débit de SV = 3. On recueille 85,6% de l'insuline dans l'effluent et la concen- tration du pyrogène dans l'effluent est de 0,4 ng/ml. Exemple 20 On charge l'adsorbant obtenu dans la préparation 14 (coordinat: histamine, support: copolymère styrène-divinyl- benzène, 8 ml) dans une colonne (diamètre interne: 13 mm, longueur 100 mm) et on lavela colonne de la même manière qu'il est dit dans l'exemple 1. On fait alors passer de l'eau pure contenant 4 ng/ml d'un pyrogène (1 litre, test Limulus: ++) à travers la colonne à un débit de 100 ml/h. La concentration du pyrogène dans l'effluent est de 0,4 ng/ml et le test Limulus de l'effluent est négatif (-). Exemple 21 On conduit l'opération suivante en utilisant les adsor- bants obtenus dans les préparations 10 et 15 à 21. On lave chaque adsorbant (8 ml) avec du chlorure de so- dium aqueux 1,5 M et on le charge dans une colonne stérilisée (diamètre interne: 13 mm, longueur: 100mm). On lave la colon- ne successivement avec du chlorure de sodium aqueux 1,5 M (250 ml), de l'eau pure (100 ml) et du chlorure de sodium aqueux 0,05 M (100 ml), tout ces corps étantapyrogènes. On fait passer une solution de un pyrogène dans du chlorure de sodium aqueux 0,05 M (400 ml,contenant 1 OOO ng d'E. coli 0128: B 12 LPS pour 1 ml de la solution) à travers la colon- ne à un débit de SV = 12. On mesure la concentration de pyrogène dans i'effluent. Les résultats sont donnés au Tableau 3. Tableau 3 N Adsorbants Concentration de pyrogène (ng/mI d'effluent 1 Adsorbant de la préparation 10 (coordi- nat: 5-méthylcytosine, support: carboxy- hexylagarose) 5,0 2 Adsorbant de la préparation 15 (coordi- nat: histamine, support: aminoéthyl- cellulose) 4,6 3 Adsorbant de la préparation 16 (coordi- nat: histamine, support: aminobutyl- cellulose) 0,46 4 Adsorbant de la préparation 17 (coordi- nat: histamine, support: aminoéthyl- cellulose) 0,06 Adsorbant de la préparation 18 (coordi- nat: histamine, support: aminobutyl- cellulose) 0,24 6 Adsorbant de la préparation 19 (coordi- nat: histamine, support: aminohexyl- cellulose) 0,05 7 Adsorbant de la préparation 20 (coordi- nat: histamine, support: aminooctyl- cellulose) 0,18 8 Adsorbant de la préparation 21 (coordi- nat: histamine, support: aminodécyl- cellulose) 1,6 Exemple 22 On charge l'adsorbant obtenu dans la préparation 23 (coor- dinat: histamine, support: copolymère styrène-divinylbenzène, 8 ml) dans une colonne (diamètre interne: 13 mm, longueur: 100 mm) et onlave la colonne de la même manière qu'il est dit dans l'exemple 1. Lorsqu'on fait passer une solution d'un pyrogène dans le chlorure de sodium aqueux 0,05 M (100 ml, contenant 100 ng d'E. coli 018: B 12, LPS pour 1 ml de la solution) à travers la colonne à un débit de SV = 12, la concentration du pyrogène dans l'effluent est de 1,4 ng/ml. Exemple 23 On charge l'adsorbant obtenu dans la préparation 24 (coordinat: histamine, support: copolymère styrène-divinyl- benzène, 8 ml) dans une colonne (diamètre interne: 13 mm, longueur: 100 mm) et on lave de la même manière qu'il est dit dans l'exemple 1. Lorsqu'on fait passer une solution d'un pyrogène dans du chlorure de sodium 0,05 M (100 ml, contenant 100 ng d'E. coli 0128: B 12, LPS pour 1 ml de la solution) à travers la colonne à un débit de SV = 12, la concentration du pyrogène dans l'effluent est de 1,8 ng/ml. Exemple 24 On charge l'adsorbant obtenu dans la préparation 25 (coordinat: histamine, support: copolymère styrène- divinylbenzène, 8 ml) dans une colonne (diamètre interne: 13 mm, longueur: 100 mm) et on lave la colonne de la même manière qu'il est dit dans l'exemple 1. Lorsqu'on fait passer une solution d'un pyrogène dans du chlorure de sodium aqueux 0,05 M (100 ml, contenant 100 ng d'E. coli 0128: B12 LPS pour 1 ml de la solution) à travers la colonne à un débit de SV = 12, la concentration du pyrogène dans l'effluent est de 1,3 ng/ml. Exemple 25 On charge chacun des adsorDants obtenus dans les prepa- rations 26 à 28 (8 ml) dans une colonne (diamètre interne: 13 mm, longueur: 100 mm) et on lave la colonne de la même manière qu'il est dit dansl'exemple 1. On fait passer une solution d'un pyrogène dansle chlorure de sodium aqueux 0,05 M (400 ml, contenant 1000 ng d'E. coli 0128: B 12, LPS pour 1 ml de la solution) à travers la colonne à un débit de SV = 12. On mesure la concentration du pyrogène dans l'effluent. Les résultats sont donnés au Tableau 4. Exemple 26 On charge l'adsorbant obtenu dans la préparation 29 (coordinat: histamine, support: copolymère styrène- divinylbenzène, 8 ml) dans une colonne (diamètre interne: 13 mm, longueur: 100 mm) et on lave la colonne de la même manière qu'il est dit dansl'exemple 1. Lorsqu'on fait passer une solution d'un pyrogène dans du chlorure de sodium aqueux 0,05 M (100 ml, contenant 100 ng d'E. coli 0128: B 12, LPS pour 1 ml de la solution) à travers la colonne à un débit de SV = 12, la concentration du pyrogène dans l'effluent est de 4,9 ng/ml. Exemple 27 On charge chacun des adsorbants obtenus dans les prépara- tions 31, 33 et 37 (8 ml) dans une colonne (diamètre interne: 13 mm, longueur: 100 mm) et on lavela colonne de la même manière qu'il est dit dans l'exemple 1. On fait passer une solution d'un pyrogène dans du chlorure de sodium aqueux 0,05 M (100 ml, conte- nant 100 ng d'E. coli 0128: B 12, LPS pour 1 ml de la solution) à travers la colonne à un débit de SV = 12. On mesure la concentration du pyrogène dans l'effluent. Les résultats sont donnés au Tableau 5. Tableau 4 N Adsorbants Concentration de pyrogène (ng/ml d'ef- fluent) 1 Adsorbant de la préparation 26 (coordi- nat: acide urocanique, support: amino- hexyl-agarose) 0,02 2 Adsorbant de la préparation 27 (coordi- nat: acide orotique, support: amino- hexylagarose) 0,15 3 Adsorbant de la préparation 28 (coordi- nat: uracile, support: aminohexyl- agarose 11 Tableau 5 Nu Adsorbants Concentration de pyrogène (ng/ml d'ef- fluent) 1 Adsorbant de la préparation 31 (coordi- nat: acide orotique, support: copoly- mère styrène aminoéthylé-divinylbenzène) 8,4 2 Adsorbant de la préparation 33 (coordi- nat: acide orotique, support: copoly- mère styrène aminohexylé-divinylbenzène) 9,9 3 Adsorbant de la préparation 37 (coordi- nat: histamine, support: alcool polyvinylique aminopropylé) 7,6 REVENDICATIONS 1. Procédé pour enlever un pyrogène d'une solution contenant un pyrogène, dans lequel on met en contact la solution avec un adsorbant pour adsorber le pyrogène, caractérisé en ce que l'adsorbant comprend un support insoluble dans l'eau et un composé hétérocyclique contenant de l'azote de formule R - A - X (I) o R est un groupe hétérocyclique contenant de l'azote; A est une liaison simple, alcoylène ou alcénylène; X est un hydrogène ou un groupe fonctionnel; et le groupe hétérocycli- que et l'alcoylène peuvent être éventuellement substitués par un ou plusieurs substituants, et le composé (I) étant lié au support directement ou par l'intermédiaire d'un espaceur. 2. Procédé selon la revendication 1, o le composé hétéro- cyclique contenant de l'azote est le composé (I) o R est un groupe hétérocyclique contenant de l'azote ayant un noyau imidazole, un noyau pyrazole, un noyau pyrimidine, un noyau pyridazine, un noyau pyrazine, un noyau purine, un noyau acridine, un noyau triazole, un noyau oxadiazole, un noyau tétrazole, un noyau indazole, un noyau benzotriazole, un noyau benzopyridazine, un noyau benzopyrimidine, un noyau benzopyrazine ou un noyau naphtyridine; A est une liaison simple, un groupe alcoylène ayant de 1 à 12 atomes de carbone ou un groupe alcénylène ayant de 2 à 12 atomes de carbone; X est un hydrogène, un amino, un hydroxy ou un carboxyle; et le groupe hétérocyclique contenant de l'azote de R et le groupe alcovlène de A peuvent être éventuellement substitués par un ou plusieurs substituants. 3. Procédé selon la revendication 1, o le composé hétéro- cyclique contenant de l'azote est le composé (I) o R est un groupe hétérocyclique contenant de l'azote ayant un noyau imidazole, un noyau pyrimidine, un noyau pyrine ou un noyau acridine; A est une liaison simple, un éthylène ou un éthylène substitué par un carboxyle; et X est un hydrogène, un amino, un carboxyle ou un hydroxy. 4. Procédé selon la revendication 1, o le composé hétéro- cyclique contenant de l'azote (I) est choisi parmi l'histi- dine, l'histamine, l'acide urocanique, l'uracile, l'acide orotique, la cytosine, la 5-méthylcytosine, la 2-amino-4,6- diméthylpyrimidine, la 2-amino-4-hydroxy-6-méthylpyrimidine, l'adénine et la 6,9-diamino-2-éthoxy-acridine. 5. Procédé selon la revendication 1, o le composé hétérocy- clique contenant de l'azote (I) est l'histidine, l'histamine ou l'acide urocanique. 6. Procédé selon la revendication 1, 2, 3, 4 ou 5, o le support insoluble dans l'eau est un supprt insoluble dans l'eau ayant un groupe hydroxy, un groupe amino, un groupe carboxyle ou un atome d'halogène dans sa molécule. 7. Procédé selon la revendication 1, 2, 3, 4 ou 5, o le support insoluble dans l'eau est choisi parmi le groupe constitué par un polysaccharide, une résine hydroxyalcoyl- polystyrène, un alcool polyvinylique, un aminoalcoyl- polysaccharide, un p-aminobenzylpolysaccharide, le chitosan, une résine aminoalcoylpolystyrène, un polyacrylamide, un aminoalcoylpolyacrylamide, un verre aminoalcoyl-poreux, un carboxyalcoylpolysaccharide, un carboxyalcoylpolyacrylamide, une résine d'acide carboxylique et une résine halogénoalcoyl- polystyrène. 8. Procédé selon la revendication 1,2, 3, 4 ou 5, o le support insoluble dans l'eau est un polysaccharide ayant un groupe hydroxy, un groupe amino ou un groupe carboxyle dans sa molécule. 9. Procédé selon la revendication 1, 2, 3, 4 ou 5, o le support insoluble dans l'eau est choisi dans le groupe constitué par un polysaccharide, un aminoalcoylpoly- saccharide et un carboxyalcoylpolysaccharide. 10. Procédé selon la revendication 1,2, 3, 4 ou 5, o le su- port insoluble dans l'eau est choisi dans le groupe constitué par la cellulose, l'agarose, L' aminoalcoyl- cellulose, l'aminoalcoylagarose, la carboxyalcoylcellulose et la carboxyalcoylagarose. 11. Procédé selon la revendication 6, o l'adsorbant est le composé hétérocyclique contenant de l'azote (I) lié au support insoluble dans l'eau directement ou par l'inter- médiaire d'un espaceur par une liaison diazoique ou une liaison amide d'acide ou au moyen d'au moins un des corps du groupe constitué par un halogénure de cyanogène, un mono- époxyde, un bis-époxyde, un halogénure d'haloacétyle, un halogénure cyanurique et un dialdéhyde aliphatique. 12. Procédé selon la revendication 6, o l'adsorbant estle composé hétérocyclique contenant de l'azote (I) lié au sup- port insoluble dans l'eau directement ou par l'intermédiaire d'un espaceur par une liaison diazoïque ou une liaison amide d'acide ou au moyen d'au moins un composé du groupe constitué par le bromure de cyanogène, l'épichlorhydrine, le chlorure cyanurique et le glutaraldéhyde. 13. Procédé selon la revendication 11 ou la revendication 12, o l'espaceur est choisi dans le groupe constitué par NH2(CH2)nNH2, NH2(CH2) nCOOH, NH2(CH2) OH et HOOC(CH2)nCOOH, o n est un nombre entier allant de 1 à 12. 14. Procédé selon la revendication 1, o l'enlèvement d'un pyrogène s'effectue en faisant passer une solution contenant un pyrogène à travers une colonne chargée avec l'adsorbant pour adsorber le pyrogène sur l'adsorbant.