Brevet FR2509308A1 — publié le 19830114

i Dans de nombreux pays, l'accroissement accéléré et incontrôlé de la population des animaux de compagnie a atteint des proportions inquiétantes On peut admettre que l'une des causes principales de cette situation rési- de dans l'absence de méthodes sûres, commodes et bon marché pour contrôler la fécondité des animaux A l'heure actuelle, on n'emploie, dans le domaine vétérinaire, que des composés hormonaux pour i:Vt-errompre des qrossesoses non souhaitées (oestrogène 3) ou pour sup prirmer ou retar- der la période d'oestrus (prostiner et N gès) Cependant, leur uiiaie n'ent,par exempts c 1 s risques, de cnrifdvto etde -Paina ailleurs, les recherches cnis insqu'idisu r les agents contraceptïfs nonx hormonaux (eiroiuset prostaglandines> n'ont ibouti C auc-iune api licat 11 cn pratique (J 8 chle, W, Folia "jet L& 4 e 7 GO 5 i 174). Il a été décrit r 4 cemment une notu,,elle c las se de composés non hoqaxcui sont capqb 1 es d'Jiterrom-û pre la grossesse, à dcsc 7 non to> 4 c 1 S -e divere espèces animales aprè>s itnpl Uâ:tdticni des ba Lose sur les trompes utérines 1 V 7 (l S-3 A-4 075 3141, intîitulé "'Composés de phênyl isoquiinolêine") Ces copo so t leur itaxitnuw d' effica- cité pendant la phase initiale du dilpse embryon- naire, leur effet contraceptif s'exerce su: r le, ocmplexe utéroplacentaire et se traduit par la g nsec et, selon l'espèce animale, le, êsro ou 1 l'e-xpulsion subséquente des produits de ic conception (G ilan et al, Arzneîm Forsch ij-riug Res, 30,972,1980). Les études qui on-tté faites mr les rele- tions structure/activitê dans cet Le cla Ess ont condluit à la sélection du compoosé -4 h 1 réy)s-îaoc Z-5,1-ajisoquinoléine ayant la formule suivante N M 1 comme étant l'un des composés les plus actifs de toute la classe Ainsi qu'il a été relaté dans le susdit brevet US, ce composé manifeste une remarquable activité contraceptive lorsqu'il est administré en doses multi- ples Plus particulièrement, le US-A-4 075 341 rapporte le résultat d'expériences que l'on a effectuées sur des hamsters femelles en administrant ce composé, dissous dans de l'huile de sésame, pendant cinq jours consécu- tifs au cours de la période d'activité maximale (du jour 4 au jour 8 de la grossesse). Ce résultat, rapporté au tableau II de ce brevet US, montre qu'en donnant une dose journalièrede 0,08 mg/kg, on obtient l'interruption de grossesse sur 50 % des hamsters (DE 50) Des expériences analogues, effectuées sur les rates en administrant le composé dissous dans de l'huile de sésame, du jour 6 au jour 10 de la grossesse, ont donné une DE 50 de 1 mg/kg/jour Malgré l'activité contraceptive très élevéemise en évidence par ces tests, le besoin d'une administration multiple et sur- tout la nécessité d'administrer ce composé pendant un intervalle de temps particulier (phase de post-implanta- tion) ont rendu ce composé impropre à une application vétérinaire de grande ampleur. Il vient d' être constaté maintenant qu'en une utilisant sous/forme particulière, c'est-à-dire la forme micronisée ou micropulvérisêe, le composé 2-( 4-chlorophényl)-5-triazolo i,1-a 7 isoquinoléine, on peut préparer des formulations convenables, à décharge prolongée, qui éliminent les désavantages susindiqués. Ladite formulation, contenant de la 2-( 4-chlorophényl)-5-triazolo /,1-ajisoquinoléine mi- cronisée, permet au composé d'être fort efficace après une seule injection intramusculaire, sur une période de grossesse plus étendue Des études effectuées sur les chiennes ont mis en évidence le fait que, en fonction de la dose administrée, cette période peut courir du jour de l'accouplement (voire à partir de 10 jours avant l'accouplement) au jour 15-20 de là grossesse. La 2-( 4-chlorophényl)-5-triazolo/5,1-a J- isoquinoléine micronisée est une poudre blanche impal- pable, sans odeur et sans saveur, insoluble dans l'eau ( particules aient des dimensions différentes. Les dimensions des particules du produit ont été mesurées avec le système HIAC Dans ce système, la détermination des dimensions des particules est fondée sur l'ombre portée par une particule qui est frappée par un rayon lumineux. L'instrument de mesure est constitué essentiel- lement d'un capteur qui est formé par une source lumi- neuse et un photodétecteur, séparés par la cellule de comptage Une suspension aqueuse de la poudre à tester traverse cette cellule dont les dimensions varient en fonction de la gamme de dimensions à évaluer Chaque particule interrompt individuellement une partie d'un rayon lumineux en engendrant un signal qui est propor- tionnel à la surface de l'ombre de cette particule. Convenablement mis en corrélation avec le diamètre d'une particule sphérique standard qui donnerait la même absorption de lumière, ce signal électrique est filtré et donne le nombre des particules ayant un diamètre choisi à l'avance L'instrument peut diviser la plage de mesure ( 1 à 300 A) en intervalles de dimensions fixées arbitrairement à l'avance Par cette méthode, il est possible de calculer le nombre des particules pour chaque plage de mesure et de mettre ce nombre en corré- lation avec le nombre total des particules contenues dans l'échantillon Les valeurs ainsi obtenues sont alors converties en une valeur unique qui représente les dimensions des particules de la poudre. La valeur qui est utilisée le plus communé- ment pour représenter les dimensions des particules d'une poudre, selon l'évaluation du système HIAC, est le diamètre de volume médian (DVM) qui correspcnd à la valeur du diamètre de la médiane ( 50 % en volume) du volume cumulé. Les dimensions des particules de la 2-( 4-chlorophényl)-5-triazolo,,1-alisoquinoléine micro- nisée, exprimées en DVM, sont toujours inférieures à 15 A. On prépare la 2-( 4-chlorophényl)-5-triazolo- Z 5,1-alisoquinoléine micronisée en soumettant à une opération mécanique de micronisation, le composé 2-( 4-chlorophényl)-5-triàzolo%,1 aisoquinoléine, obtenu par n'importe quel procédé décrit dans la littérature technique (voir par exemple le brevet US 4 075 341 et les demandes de brevet italien 26868 A/79 et 26803 A/79) On peut effectuer cette micronisation en utilisant des machineries fondées sur des principes divers, comme il est bien connu des spécialistes en la matière Selon un mode de réalisation préféré de l'invention, cette micronisation est effectuée dans un broyeur ou microniseur à énergie de fluide Avec cet appareil, le composé à microniser est entrainé dans un circuit par un violent courant de gaz Les colli- sions des particules du composé contre les parois du circuit ainsi que les collisions des particules entre elles provoquent la pulvérisation de celles-ci Cet appareil peut aussi être équipé d'un dispositif de recy- clage qui ramène à la chambre de broyage les plus grosses particules, insuffisamment pulvérisées Le principal avantage du broyeur à énergie de fluide réside dans le fait que les particules de la poudre micronisée ainsi obtenue ont-des dimensions très homogènes, c'est-à-dire que la gamme de dimensions des particules est très étroite. La 2-( 4-chlorophényl)-5-triazolo,l,-a- isoquinoléine micronisée peut être convenablement formulée en préparations galéniques qui sont adaptées à l'adminis- tration parentérale, les dimensions des particules de la poudre initiale étant maintenues, et qui permettent une lente absorption du principe actif, ce qui prolonge son action La formulation de la 2- véhicule huileux de raîic-i. Ces suspctsifsr otir n Itérai&Z i à 10 %, de préférence enviro-n _ 7 ' er pcoi 'zde principe actif par volume, la valleur op Lma Ie dépeudar 4 t' nièe en- tendu de la dosze choisîç an fonction des caractères et/ou de la taille de lain 1 En vue l étderiinfluence der icnaulcition (dimensions -des partic-tale et véhicule) sur ato contraceptive, on a scwcr 15 le ops 2-e 4-ehcrc ohdr-yl)-5- triazolorb, 1 -ajisoquxcjioléin(e â' un broyage iia-nuie et une opération m 4 canti Aque de pirnt'Di re- mière de ces mto ru, o a pil-6 le cmf d axs un, mortier et on, l'a fait uaso: travez unïi>,ê dant des ouvertures 7 j 3 Luçozi b oben es particules suffisammuen-t homcg;ènes ayant les detin désirées Dans la deuxième de ces méthodes, on iza utilisé le microniseur Micronett 1-e M 50 (GUSEO, Milan, Italie> en opérant avec une pression d'alimentat-ion de 2 Iar S ét une pression de micronisation de 7 kare S Par les méthodes décrites ci-dessus, on a préparé trois- lots de 2-( 4-chlorophényl)-5-triazolo E 5,1-ajisoquinoléine dont les particules ont respectivement les dimensions suivantes: 10 A, 39 A et 134 A Ces trois lots de 2-( 4-chlorophényl)-5-triazolo 5,1-a 7 isoquinoléine ont été formulés (sous forme de suspension contenant 5 % de principe actif) d'une part dans un véhicule huileux (huile de sésame contenant 0,2 % d'alcool benzylique) et d'autre part dans un véhicule aqueux (solution phy- siologique contenant 2 % de Tween 8 A. On a d'abord vérifié sur des rates l'influence des dimensions des particules du principe actif et celle du véhicule d'injection sur l'action embryolétale du composé On a utilisé à cet effet des rates Sprague- Dawley, pesant 200-280 g Ces rates ont été logées avec des mâles adultes pendant une nuit Le lendemain matin, les accouplements ont été mis en évidence par la pré- sence de sperme dans le frottis vaginal Le jour même o le sperme a été décelé (jour 1 de la grossesse), on a administré aux rates, par voie intramusculaire, une dose de 10 mg/kg de 2-( 4-chlorophényl)-5-triazolo- Z',1-avisoquinoléine On a examiné les effets du com- posé sur les conceptus en tuant les animaux au jour 16 de leur grossesse A l'autopsie, on a isolé les utérus et déterminé le nombre des sites d'implantation, le nom- bre des embryons ou des foetus morts et le nombre des foetus vivants. Il a été considéré que la grossesse avait été interrompue lorsque les trompes utérines ne contenaient pas de foetus vivants et que la présence des cicatrices d'implantation indiquait que les rates avaient été fécondées. Les résultats obtenus sur les rates sont résu- més au Tableau I. TABLEAU I Influence des dimensions des particules sur l'activité de la 2-( 4chlorophényl)-5-triazolo,-i,1-aisôquinoléine chez les rates, après administration i m de 10 mg/kg au jour 1 de la grossesse. (: Dimensions : Nombre: % Interrup-) ( Véhicule: particules: de: tions) (: (DVM)* rates: grossesse) (: :: ) (: ::) ( Huile de sésame+: 10: 20: 65) (: ::) ( 0,2 %alcool benzylique: 39: 10: 30) (: ::) ( ( 0,2 ml/kg): 134: 15: 6,7) (: :-) () ( t 10 **Q ( ààà: ) (::) ( Solution physiolo-:: :) (gique +: 10: 10: 20) ( i:: :) ( 2 % Tween 80:: :) ( ( 0,2 ml/kg): 39: 6 16,7) (::: ) (: 134: 11: O) (:6 :) (: : 6 ** O) (: :) * Diamètre de volume médian, exprimé en A * Animaux traités avec le véhicule seulement. En analysant ces résultats, on peut constater que la plus forte activité se manifeste lorsqu'on administre de la 2-( 4-chlorophényl)-5-triazolo,1al isoquinoléine micronisée, suspendue dans le véhicule huileux Avec ce véhicule, il a été observé que l'activité décroît progres- sivement à mesure que les dimensions des cristaux croissent. Au contraire, les résultats obtenus avec les trois formu- lations en véhicule aqueux sont tous négatifs. Au vu des résultats ci-dessus, on a effectué aussi des expériences sur les chiennes, en étudiant l'ac- tivité des suspensions huileuses seulement et en administrant le composé à des doses quatre fois plus faibles que celles utilisées chez les rates, c'est-à-dire 2,5 mg/kg. Ce choix a été suggéré par le fait que les chiennes sont bien plus sensibles que les rates à l'action de ces nouveaux contraceptifs (G Galliani et al Acta Endocrinol. , Suppl 212,199,1977). Dans cette étude, on a utilisé un total de 24 chiennes adultes, de différentes races, pesant de 6 à kg Pendant la phase d'oestrus, les animaux ont été accouplés, puis à nouveau deux jours plus tard, avec - des mâles de fécondité prouvée; le jour compris entre les deux accouplements est considéré comme le jour zéro de la grossesse On a administré aux chiennes une seule dose i m de 2,5 mg/kg au cours des six premiers jours de la gestation et on les a maintenues en observation pour voir s'il avait été mis fin à leur grossesse ou si celle-ci était interrompue. Les résultats des expériences effectuées sur les chiennes est rapporté au Tableau II: TABLEAU II Influence des dimensions des particules sur l'activité de la 2-( 4chlorophényl)-5-triazolo 5,1 ajisoquinoléine chez les chiennes à qui l'on en a administré 2,5 mg/kg i m. suspendus dans un véhicule huileux*pendant les six premiers jours de la gestation**. Dimensions Nombre de: % Interruptions) particules) (Dv^)>*** chiennes grossesse) ( 10 10: 100 (:: ) 39 4 50 (:) 134 4 O (:: ) ( véhicule 6 O =à *Huile de sésame contenant 0,2 % d'alcool benzylique t O,05 ml/kg) **Une seule injection dans la période indiquée. ***Diamètre de volume médian exprimé en A. En accord avec les résultats obtenus chez'les rates, les meilleurs résultats ( 100 % d'interruptionsde grossesse) sont obtenus aussi, chez les chiennes avec la suspension contenant le composé micronis on a répété les expériences d-4 ri tes cidessus e -n utilisaint des formulations contenant de Th i-c 1 rphoyl-s par des dimensi-nrs deprto S cei xne (MVD = 14,4 g L et MMVL (k séan de S résultats ctru" o'-ess Des étudesî s'l' 5 r-e r Cette formulation ontre" i-c l Zci - laire de 2,5 -ng/kg iî z'2 e * au cours des 15rne i i (du jour O au Jour 15 Cie lra c:II''ns) 'ir"v une interruption de grcsse-se Derp Il; e' dos E, -plus é 11 e vé 6 e ( 5 i g/k q S f icac- ( 93 % de rs Vapsti; ï sr entre 'le di j Durie 3vj t le aur 20 de la grossesse. uin Zuireouirme 4 J- ;t ix tion est dolic un u Iee*irI' non souhaitées chez le-r 'o'pc uél Pzo- cédé consiste à àduitl' inép'-e 11 cz:nzu injection i Jnt rr usc Ula î rc m"e g; f c de- dont les parties oft er REVENDICATIONS 1 2-( 4-chlorophényl)-5-triazolo L/5,1-a 7- isoquinoléine micronisée, dont les particules ont des dimensions, exprimées en diamètre de volume médian (DVM), inférieures à 15 A. 2 Formulation à usage vétérinaire qui contient le composé de la revendication 1 ', en tant que principe actif, suspendu dans un véhicule huileux. 3 Formulation selon la revendication 2 qui contient de 1 à 10 O % (poids/volume) de principe actif. 4 Formulation selon la revendication 3 qui contient environ 5 % (poids/volume)de principe actif. Formulation selon l'une quelconque des revendications 2 à 4, caractérisée en ce que le véhicule huileux est de l'huile de sésame. 6 Procédé pour interrompre des grossesses non souhaitées chez les animaux de compagnie, lequel pro- cédé consiste à administrer à l'animal, en une seule injection intramusculaire, une quantité efficace de 2-( 4-chlorophényl)-5-triazolo 5,1 a-7 isoquinoléine micro- nisée, dont les particules ont des dimensions, exprimées en DVM, inférieures à 15 gs et qui est suspendue dans un véhicule huileux. A 8 ':-T M LEM Ol NE n bd des Batignolle 9 O 9 &W