Brevet FR2500755A1 — publié le 19820903

Compositions de plasmine stabilisée et leur procédé de préparation. La présente invention concerne des compo- sitions utiles pour la préparation d'un agent de balayage scintigraphique dans lequel le radionucléide est le technétium-99m; l'invention concerne égale- ment un procédé de préparation de ces compositions. Plus spécifiquement, la présente invention concerne de nouvelles compositions comprenant de la plasmine stabilisée comme support éventuel pour le technétium-99m, de même qu'un procédé de préparation de ces compositions de plasmine. La plasmine mar- quée au technétium-99m s'est avérée particulièrement utile comme agent de balayage scintigraphique pour la détection de la thrombose veineuse profonde localisée dans les membres d'un patient, en particulier, dans les jambes. Qu'elle s'accompagne ou non d'une embolie pulmonaire, la thrombose veineuse profonde est une complication virtuellement sérieuse de bon nombre d'états chirurgicaux-et médicaux et elle exige un diagnostic précoce qui constituera la base d'un trai- tement prompt et approprié en vue de combattre les séquelles graves. L'incidence de la thrombose vei- neuse profonde est importante dans des états trauma- tiques tels que ceux associés aux opérations chirur- gicales importantes ou aux fractures osseuses (en particulier, la fracture du col du fémur). De plus, il est bien connu que le risque de développement d'une thrombose veineuse profonde augmente lorsqu'on a affaire à des états d'immobilité forcée tels que l'âge avancé, l'obésité, le néoplasme et les défail- lances ou l'infarctus cardiaques. Le diagnostic clinique correct de la throm- bose veineuse profonde est empêché par le fait que ses symptômes et signes cliniques ont tendance à être plutôt non spécifiques et souvent non fiables. Dès lors, il s'est souvent avéré que l'on obtenait des résultats positifs erronés à la suite d'un diag- nostic clinique de la thrombose veineuse profonde basé sur des sympt8mes tels que la distension veineu- se, la douleur, la sensibilité douloureuse à la palpa- tion et l'enflure du membre affecté avec élévation de la température de la peau. En revanche, il a été également constaté que même une thrombose veineuse profonde grave pouvait se produire en absence de signes physiques perceptibles si les veines princi- pales ne sont pas complètement occluses et que, en fait, un nombre important de patients atteints d'une thrombose veineuse profonde n'en présentent pas l'évidence clinique. Du fait que les examens cliniques sont ina- déquats, on a été amené à rechercher des essais diag- nostiques objectifs en vue de détecter la thrombose veineuse profonde. Au cours des ans, la profession médicale a pu disposer de différents essais allant de la phlébographie radiographique à la localisation de thrombi au moyen de produits radiopharmaceutiques en passant par des procédés basés sur le contrôle du débit sanguin (par exemple, la technique aux ultra- sons de Doppler ou la pléthysmographie par impédance). Dans le groupe d'essais de localisation de thrombi au moyen de produits radiopharmaceutiques, ces der- niers ont la capacité de s'accumuler dans des caillots fibrineux, permettant ainsi de les détecter, par exemple, par des procédés de balayage scintigraphiques. Parmi ces produits radiopharmaceutiques, il y a, par exemple, le fibrinogène radio-iodé et la plasmine marquée au technétium-99m. Alors que le fibrinogène marqué s'incorpore assez lentement dans le thrombus en développement, on a constaté que la plasmine étran- gère marquée s'accumulait rapidement même dans des caillots fibrineux établis. Le sang des mammifères contient un système enzymatique qui est appelé "système enzymatique fibri- nolytique". Dans des conditions normales, on observe le maintien d'un équilibre dynamique dans lequel des dépôts de fibrine sont dissous par activation locale du système enzymatique fibrinolytique. Des activa- teurs endogènes, par exemple, l'activateur tissulaire dit plasminogène, transforment le plasminogène en circulation en plasmine enzymatique à activité fibri- nolytique ayant une haute affinité vis-à-vis de la fibrine. Parmi les activateurs exogènes du système enzymatique fibrinolytique, on peut mentionner la streptokinase qui est produite par certaines souches S15 de streptocoques hémolytiques, l'urokinase qui est récupérable de l'urine humaine ou qui est produite dans une culture tissulaire, de même que la trypsine. En raison de son effet fibrinolytique, ltinfusion de plasmine exogène a été adoptée comme variante d'autres procédés en thérapie thrombolytique. Afin de répondre aux conditions requises pour de telles fins thérapeutiques, la plasmine peut être préparée à partir de plasminogène purifié par activa- tion avec la streptokinase ou, plus fréquemment, avec lturokinase ou la trypsine. A des fins diagnostiques, la détection de thrombi contenant de la fibrine peut être effectuée par injection de petites quantités de plasmine radio- marquée. En raison de l'tassociation rapidement éta- blie de la plasmine radiomarquée avec des caillots fibrineux, en particulier comparativement avec des agents tels que le fibrinogène radioiodé, l'essai à la plasmine marquée au technétium-99m s'est révélé être un procédé hautement sensible et universel qui est bien adapté pour le dépistage de routine relative- ment rapide de patients présentant une thrombose vei- neuse profonde en développement ou une thrombose vei- neuse profonde bien établie (voir British Journal of Radiology, volume 53 (1980), page 673, J.M. Deacon et al.). S Dans la même référence, on décrit un néces- saire de plasmine marquée au technétium-99m dans le- quel la plasmine est mélangée avec du chlorure de sodium conjointement avec du chlorure stanneux comme agent réducteur de 99Tcm-pertechnétate. Ce procédé de marquage de la plasmine avec le technétium-99m a été décrit pour la première fois par R.B.R. Persson et L. Darte ("Int. Journal of Applied Radiation and Isotopes", volume 28 (1977), page 97). Ce nécessaire de plasmine marquée au tech- nétium-99m, qui comprend un mélange lyophilisé de plasmine et de chlorure stanneux, a été fourni pen- dant un certain temps à des hôpitaux engagés dans des programmes d'essais dirigés vers l'évaluation de l'essai à la plasmine marquée au technétium99m en guise de procédé de dépistage pour le diagnostic de la thrombose veineuse profonde. Ce nécessaire a été fourni par "NOVO INDUSTRI A/S", Copenhague, sous la dénommination "LYSOFIBRIN kit for 99Tcm-labelling" ("LYSOFIBRIN" est une marque commerciale déposée pour la plasmine porcine hautement purifiée). Toutefois, on a constaté que la plasmine incorporée dans ce nécessaire niétait pas suffisam- ment stable pour l'utilisation envisagée à moins que ce nécessaire ne soit conservé en permanence à une température ne dépassant pas -20 C. Dès lors, à la température ordinaire du réfrigérateur, soit O5 C, l'inactivation de la plasmine se produit à un rythme d'environ 5% par mois. Etant donné que, comme on le pense, la rétention de l'activité protéolytique de la plasmine est une condition préalable pour son affinité vis-à-vis de la fibrine (cette propriété conférant une spécificité à la plasmine radiomarquée pour les thrombi), le problème de l'instabilité doit être éliminé avant que le nécessaire précité soit disponi- ble pour une utilisation clinique générale. Un objet de la présente invention est d'élaborer des compositions de plasmine conditionnées pour le marquage au technétium-99m, ces compositions ne présentant pas les inconvénients de la composition décrite ci-dessus. Un autre objet de la présente invention est de fournir un procédé en vue de préparer des composi- tions de plasmine de ce type dans lesquelles la plas- mine est stabilisée à un point tel que la composition est appropriée pour l'utilisation envisagée même après conservation pendant une période prolongée dans des conditions ambiantes. La réalisation de ces objets est basée sur la découverte selon laquelle, lorsqu'ils sont incor- porés dans la composition, certains composés poly- hydroxy exercent un effet stabilisant prononcé sur la plasmine qui y est contenue sans cependant alté- rer sensiblement ni le rendement de la plasmine mar- quée au technétium-99m et obtenue dans un procédé ultérieur de marquage effectué dans des conditions normalisées, ni la pureté radiochimique du produit radiopharmaceutique obtenu. Comme stabilisant de la plasmine, on utilise le glycérol en solution aqueuse, habituellement en une concentration d'environ 50% de la solution, c'est-à-dire largement en excès vis-à-vis de la plas- mine et sur une base pondérale. Toutefois, on n'en- visage pas des composés polyhydroxy liquides pour les compositions de la présente invention et ce, en raison de la présence obligatoire, dans ces composi- tions, d'un agent fortement réducteur pouvant être susceptible de se détériorer en phase liquide. Dès lors, les compositions de plasmine stabilisée de la présente invention sont sous forme solide. De plus, on peut mentionner que les stabilisants pouvant être utilisés à des fins de marquage doivent généralement être physiologiquement acceptables, qu'ils ne doivent pas être eux-mêmes marqués dans des conditions de marquage préférées et qu'ils ne doivent pas gêner le marquage de la plasmine. Des composés polyhydroxy tels que des su- cres et des alcools de sucres sont des stabilisants connus pour les enzymes protéolytiques, en particu- lier, dans leurs formulations liquides, et l'on pense que l'inactivation y est due principalement à l'auto- digestion enzymatique. Toutefois, le problème auquel la Demanderesse a eu à faire face dans le cas présent, est différent, en premier lieu du fait que les compo- sitions de plasmine de la présente invention sont solides et, en second lieu, du fait qu'on prépare et utilise ces compositions dans des conditions acides dans lesquelles la plasmine qui y est contenue, est protéolytiquement inactive. En conséquence, ltinacti- vation doit être provoquée par des facteurs autres que l'autodigestion. Ainsi qu'on le soulignera ci-après, de façon étonnante, on a trouvé que les composés polyhydroxy suivant la présente invention empêchaient ou du moins contrecarraient l'agglomération de la plasmine. Etant donné que, comme on le pense, ces agrégats de plasmine constituent les stades initiaux de la plas- mine dénaturée, leur présence dans les compositions de la présente invention est inopportune. Suivant son premier aspect, la présente invention fournit une composition de plasmine de forme solide adaptée au marquage par le technétium-99m en y mélangeant un agent réducteur au pertechnétate, cette composition comprenant une quantité efficace d'un composé polyhydroxy stabilisant la plasmine et choisi parmi le groupe comprenant le xylitol et le ribitol (pentitols); le méso-inositol; le glucose, le mannose, le galactose, le fructose et le sorbose S (mono-saccharides); de même que le sucrose et le maltose (disaccharides). Suivant son deuxième aspect, la présente invention fournit un procédé de préparation d'une composition de plasmine de forme solide adaptée pour le marquage par le technétium-99m en y mélangeant un agent réducteur de pertechnétate, ce procédé consis- tant à mélanger, en solution, de la plasmine et une quantité efficace d'un composé polyhydroxy stabili- sant la plasmine et choisi parmi le groupe comprenant le xylitol et le ribitol (pentitols); le méso-inosi- tol; le glucose, le mannose, le galactose, le fruc- tose et le sorbose (mono-saccharides); de même que le sucrose et le maltose (disaccharides), pour pro- céder ensuite à une lyophilisation du mélange en vue de l'amener à une forme solide. Suivant un autre aspect, on prévoit un agent de balayage scintigraphique à des fins diagnos- tiques, cet agent comprenant la composition de la présente invention marquée par le technétium-99m. Suivant un autre aspect encore, on prévoit également l'utilisation, comme agent de balayage scintigraphique, d'une composition suivant l'inven- tion marquée au technétium-99m. Il est entendu que,tout au long de la pré- sente spécification et des revendications ci-après, l'expression "plasmine" englobe également des com- posés qui, tout en conservant leurs propriétés bio- logiques, dérivent de la plasmine par fragmentation. Un exemple de composés de ce type est la "miniplasminett qui exerce une activité fibrinolytique (voir U. Chris- tensen et al. (lBiochim. Biophys. Acta" 567 (1979), pages 472-481)-dont il est fait mention ici à titre de référence). La source de plasmine utilisée lors de la mise en oeuvre de la présente invention n'est pas essentielle. Elle peut être récupérée du plasma sanguin prélevé chez diverses espèces de mammifères, y compris l'homme. Toutefois, la plasmine hautement purifiée d'origine porcine est préférée. Une qualité purifiée de plasminogène peut être obtenue par le procédé décrit par D.G. Deutsch et E.T. Metz (Science, volume 170 (1970), pages 1095-1096). La transforma- tion du plasminogène en plasmine sous l'action de l'urokinase peut être effectuée conformément au procédé de B. Wiman et P. Wallen (t"Europ. J. Bio- chemistry", volume 36 (1973), pages 25-31) et avec la trypsine comme décrit par K. Jacobsen ("Acta. Chem. Scand.", volume 7 (1953), pages 430-434). Une préparation préférée de plasmine est effectuée par lyophilisation d'une solution aqueuse acide de plasmine ayant une activité d'au moins 3 unités NOV0 (UN) par mg. L'activité (en unités) de la plasmine est l'activité qui, dans des conditions spécifiques (c'est-à-dire 350C et un pH de 7,5) au cours de 20 minutes, donne lieu à la formation, à partir d'une préparation de caséine classique, de peptides solu- bles dans l'acide perchlorique en une quantité équi- valant à un accroissement de 1 de la capacité d'absorp- tion à 275 nm. Pour de plus amples références, voir: "IPharmaceutical Enzymes" (éditeur: R. Ruyssen et A. Lauwers), E. Story-Scientia 1978, pages 123 et sui- vantes. Un certain nombre d'agents réducteurs de pertechnétate (tant organiques qu'inorganiques) sont bien connus dans la technique. A cet égard, on peut mentionner les sels stanneux, ferreux et chromeux d'acides inorganiques, en particulier, de l'acide chlorhydrique et de l'acide sulfurique, ainsi que de l'acide ascorbique. Dans une forme de réalisation préférée de la présente invention, l'agent réducteur de pertechnétate est un sel stanneux, de préférence, le chlorure stanneux. La quantité d'agent réducteur de pertechnétate incorporé dans les compositions de la présente invention doit être réglée de façon à as- surer, dans des conditions de marquage par ailleurs optimales telles que celles spécifiées ci-après, la plus haute efficacité de marquage possible du radio- nucléide (en l'occurrence, le technétium-99m dans ses états de valence inférieurs à +7). L'agent réducteur doit être présent en une quantité efficace à cet ef- fet. D'autre part, il convient d'éviter ltincorpora- tion de quantités excessives d'agents tels que les sels stanneux ou chromeux en raison de leur toxicité générale. La quantité de chlorure stanneux incorporé suivant une forme de réalisation préférée de la pré- sente invention doit être choisie dans l'intervalle allant de 0,8 à 16, de préférence, de 2 à 8% en poids de plasmine, la quantité de plasmine étant calculée ci-après sur la base d'un produit d'une activité de 3,5 UN par mg. Le rapport pondérai entre le composé poly- hydroxy et la plasmine dans les compositions de la présente invention doit normalement se situer dans l'intervalle allant de 0,1:1 à 10:1, de préférence, de 0,5:1 à 5:1, les limites extrêmes étant détermi- nées par l'obtention d'un effet stabilisant de la plasmine qui est satisfaisant pour toutes les appli- cations pratiques, par exemple, des conditions dans lesquelles le produit est susceptible d'être exposé au cours de sa distribution et de sa conservation. Au passage, on peut mentionner qu'il a été constaté qu'aucun des composés polyhydroxy choisis pour la mise en oeuvre de la présente invention n'exerçait des effets néfastes sur l'activité enzymatique de la plasmine en quantités allant jusqu'à 10 fois celle de cette dernière. Toutefois, il n'est pas recommandé dtincor- porer un composé polyhydroxy en quantités supérieures à 10 fois celle de la plasmine car, pour de telles compositions, le point de stabilité maximale est géné- ralement surpassé. On peut préparer les compositions de la présente invention en dissolvant la plasmine avec l'agent réducteur de pertechnétate et le composé poly- hydroxy stabilisant la plasmine, dans de l'eau dis- tillée qui est constamment refroidie et maintenue désoxygénée au moyen d'un courant d'azote. Dalns la forme de réalisation préférée dans laquelle l'agent réducteur de pertechnétate est un sel stanneux, on règle le pH de la solution à 3, après quoi on trans- fère des parties aliquotes contenant chacune, par exemple, 35 UN (soit environ 10 mg) de plasmine dans des fioles stériles que l'on congèle et lyophilise rapidement. En utilisant le chlorure stanneux comme agent réducteur de pertechnétate, le marquage est généralement effectué à un pH de 2-2,2, habituelle- ment avec 0,5 mCi (18,5 MBq) de pertechnétate par unité d'activité de plasmine, le pertechnétate étant élué d'un générateur disponible dans le commerce au moyen d'une solution isotonique de chlorure de so- dium. De plus amples détails relatifs à un procédé de marquage habituellement adopté ont été publiés dans la littérature, par exemple, par J.M. Deacon et al. (voir ci-dessus) et par L. Darte et R.B.R. Persson ("Journal of Liquid Chromatography", volume 2 (1979), page 499). Résultats de marquage Le procédé décrit dans cette dernière réfé- rence pour le contrôle de la qualité (principalement en termes de rendement de marquage et de pureté radio- chimique) de préparations de plasmine marquée au technétium-99m est également applicable à l'essai de rendement de marquage des compositions de plasmine de la présente invention. A cet effet, il s'est avéré particulièrement utile de recourir au procédé de balayage par chromatographie sur gel dans lequel on soumet la préparation marquée à une chromatogra- phie dans une colonne de IlSephadex G-251, après quoi les constituants radio-actifs répartis le long de la colonne sont détectés par balayage scintigraphique, leurs quantités relatives étant ensuite déterminées d'après le profil de balayage enregistré. Le tableau I ci-après donne les résultats obtenus après application de ce procédé d'essai (et d'une variante de ce dernier dans laquelle la chromatographie sur gel est remplacée par la chroma- tographie sur couche mince, voir Darte et Persson ci-dessus) à des préparations de plasmine marquées en présence de différents composés polyhydroxy ou en vue d'effectuer des expériences de contrôle sur ces composés polyhydroxy en absence de plasmine. TABLEAU I Marquage au Marquage au 99Tcm du 99Tcm de l'a- complexe plasmine/plas- gent stabili- minogène en presence de gent stabili-m sant 2,5 parties d'agent stabilisant Rendement Interfé- de marquage rence pro- (%) venant de liagent ______jstabilisat Pentitols. Xylitol Néant 81 Non détec- Ribitol " -79 table Hexitols Sorbitol Néant 56 Mannitol " 70 Importan' Hexoses Glucose Néant 78 Mannose l 80 Galactose 80 Non détec- Fructose " 82 table Sorbose 79 Disacchari- des d'she- xoses Sucrose Néant 87 Maltose " 82 Non détec- Lactose Important - table I Inositols j Méso-ino- sitol Néant 85 Non détec- table 3o Considérant qu'un rendement de 80% a été mentionné à la suite du marquage du glucose par le technétium-99m à un pH de 4 (demande de brevet bri- tannique n 2.016.198), il est surprenant de cons- tater qu'aucun marquage des composés polyhydroxy de la présente invention nla été observé dans les condi- tions cd marquage préférées suivant l'invention, clest- à-dire un pH de 2-22,2. Agglomération de plasmine naturelle On a étudié la formation d'agrégats de plasmine en soumettant des compositions de plasmine (marquées ou non) à une électrophorèse sur disques de polyacrylamide (7,5%) dans un tampon de pH 4,5 contenant de l'urée 3M suivant le procédé de R. Mauerer (Disk Electrophorese, Walter de Gruyter, Berlin 1968). Le fait que l'on a obtenu des diagrammes électrophorétiques identiques pour des préparations de plasmine non marquées et marquées (développement par coloration et balayage scintigraphique respecti- vement) démontre qu'en lui-même, le marquage ne pro- voque pas des transformations de la plasmine naturel- le. Toutefois, un balayage quantitatif d'électro- phorégrammes obtenus à partir de l'ancienne composi- tion (contenant du chlorure de sodium) après marquage révèle qu'il s'est produit une forte transformation de la plasminc. On a soumis un autre échantillon (20 1) à une chromatographie liquide sous haute pression dans une colonne d'analyse de protéines de Waters 1-125 ("Waters Associates, Inc.", Mass., E.U.A.), l'élution étant effectuée avec de l'acide phosphorique (0,2M) à un débit de 0,25 ml/minute (pression maximale 14 kg/cm2) avec un contr8le à 276 nm. Le chromatogramme a indiqué qu'il s'était produit une forte transformation de plasmine en agrégats ou en composés de poids moléculaire élevé. De plus, un comptage des fractions recueillies (chacune de 125 il) a démontré un important marquage de la plasmine agglomérée. L'application des mêmes analyses aux compo- * sitions de plasmine de la présente invention a inva- riablement démontré une importante suppression de la formation dt agrégats et elle a démontré qu'en outre cet ef- fet inhibiteur était optimum lorsque les concentrations du stabilisant se situaient dans les intervalles préfé- rés de la présente invention. Les données analyti- ques révèlent également que le marquage des composi- tions suivant l'invention a lieu principalement sur la plasmine naturelle, donnant ainsi des compositions marquées d'une pureté radiochimique nettement supé- rieure à celle des compositions connues dans la tech- nique. La pureté radiochimique la plus élevée a été obtenue avec des mono-saccharides et des disac- charides. En conséquence, dans une forme de réalisa- tion préférée de la présente invention, le composé polyhydroxy stabilisant est un mono-saccharide ou un disaccharide. Un composé polyhydroxy choisi parmi le groupe comprenant le fructose, le sucrose et le mal- tose est davantage préféré. L'importance de ces découvertes est souli- gnée par les résultats d'autres expériences desquel- les on peut déduire que la plasmine naturelle a, comparativement à la plasmine agglomérée, une affi- nité nettement supérieure vis-à-vis de la fibrine. En outre, il existe certaines indications relatives à l'effet selon lequel la plasmine agglomérée se différencie de la plasmine naturelle vis- à-vis de sa biorépartition, la première s'accumulant principale- ment dans le foie, tandis que la seconde est répartie plus uniformément entre le foie et les reins. En conséquence, la formation d'agrégats de plasmine est également inopportune du point de vue dosimétrique. La présente invention sera illustrée de manière plus détaillée par les exemples suivants qui nten limitent toutefois nullement le cadre. EXEMPLE 1 On prépare une composition de plasmine con- tenant un composé polyhydroxy stabilisant et de la plasmine dans un rapport pondéral de 2,5,de la ma- nière suivante: On soumet 500 ml d'eau distillée, acidifiée avec 100 fl d'acide chlorhydrique N, à une désoxygé- nation par ébullition pendant 30 minutes, puis on la refroidit dans de l'eau glacée tout en la maintenant exempte d'oxygène au moyen d'un courant d'azote. On règle le pH à 3 avec de l'acide chlorhydrique N. On prélève et pèse 2,50 g de plasmine (plasmine (ou fibrinolysine) lyophilisée ayant une activité d'au moins 3 unités NOVO par mg, fournie par "Sigma Chemical Co.", MO, E.U.A.), 6,25 g d'agent stabilisant et 113 mg de chlorure stanneux à 2 molé- cules d'eau, après quoi on procède à une dissolution dans 250 ml de l'eau désoxygénée et préparée comme indiqué ci-dessus, tout en faisant passer constamment de l'azote à travers la solution. Après réglage du pH à 3 (avec de l'acide chlorhydrique ou de l'hydro- xyde de sodium), on transfère des parties aliquotes de 1 ml de la solution dans des fioles de 5 ml aux- quelles on adapte ensuite des bouchons de lyophili- sation. On congèle rapidement les contenus des fio- les dans de la glace carbonique, puis on les lyophi- lise. On ferme les fioles sous une atmosphère d'azo- te, puis on y adapte immédiatement des capsules. On procède à des essais accélérés de sta- bilité en conservant les compositions ainsi préparées à 350C pendant un mois, après quoi on mesure l'acti- vité résiduelle de plasmine par rapport à celle des mêmes préparations conservées à.20 C. A titre de comparaison, on effectue le même essai avec la com- position de la technique antérieure dans laquelle le composé polyhydroxy est remplacé par du chlorure de sodium (14,5 mg). Les résultats obtenus sont donnés dans le tableau II ci-après - TABLEAU II EXEMPLE 2 Par un procédé analogue à celui décrit à ltexemple 1, on prépare des compositions de plasmine dans lesquelles les teneurs en plasmine et en chlo- rure stanneux sont maintenues constantes,tandis que lion fait varier le rapport pondéral entre le stabi- lisant et la plasmine. Agent stabilisant Activité résiduelle moyenne (%) Pentitols Xylitol 73 Ribitol 75 Hexoses Glucose 95 Mannose 93 Galactose 88 Fructose 93 Sorbose 96 Disaccharides d' hexoses Sucrose 99 Maltose 100 Inositols Mésoinositol 95 Composition de la technique antérieure (chlorure de sodium) 35 I On prépare ces compositions avec du fruc- tose, du sucrose et du méso-inositol comme agents stabilisants et on le soumet à l'essai accéléré de stabilité décrit à l'exemple 1. Les résultatssont donnés dans le tableau III ci-après. TABLEAU III Agent stabilisant Rapport pon- Activité rési- déral entre duelle moyenne l'agent sta- (%) après un bilisant et mois à 35 C la plasmine 0,5 99 1,5 103 Sucrose 2,5 103 99 102 o,5 95 Fructose 2,5 93 75 0,5 96 Méso-inositol 2,5 95 92 Composition de la technique antérieu- - 35 re(NaCl, 14,5 mg) EXEMPLE 3 On prépare du miniplasminogène à partir de plasminogène porcin conformément au procédé dé- crit par L. Sottrup-Jensen et al. ("'Progress in Chemical Fibrinolysis and Thrombolysis", volume, (éditeurs: J.F. Davidson et al.), Raven Press, New- York 1978, pages 200 et suivantes) avec cette seule modification que la solution de plasminogène porcin est diluée à 2,5 fois avec un tampon de carbonate d'ammonium avant digestion avec de l'élastase, tandis que les concentrations de cette dernière et de l'in- hibiteur de trypsine pancréatique sont maintenues aux valeurs prescrites dans cette référence. On effectue la transformation du minoplas- minogène en miniplasmine comme décrit par U. Chris- tensen et al. ("Biochim. Biophys. Acta", voir ci- dessus) pour obtenir ainsi une préparation ayant une activité de plasmine de 6,2 unités NOVO par mg. D'une manière analogue à celle décrite à l'exemple 1, on forme deux séries de préparations de miniplasmine, à savoir l'une avec du sucrose et l'au- tre, avec du chlorure de sodium, cette dernière cor- respondant à la composition de plasmine connue. Cha- que fiole contient 6,2 mg de miniplasmine, soit 11 mg de plasmine (3,5 unités NOVO/mg). Les autres cons- tituants sont les suivants: 3o Préparation 1 2 (sucrose) (NaCl) Chlorure stanneux (mg) 0,45 0,45 Stabilisant (mg) 25 - Chlorure de sodium (mg) - 14,5 pH (avant la lyophilisation) 3,0 2,0 On effectue des essais de stabilité comme décrit à l'exemple 1. On effectue le marquage au technétium-99m conformément au procédé décrit dans l'exemple 4 ci-après, tandis que l'on évalue le ren- dement de marquage des préparations de miniplasmine par balayage scintigraphique comme décrit ci-dessus. Les résultats obtenus sont les suivants: EXEMPLE 4 Le procédé de marquage est le même quel que soit le composé polyhydroxy stabilisant incorporé. Dans chaque fiole, on ajoute, dans l'ordre suivant et dans des conditions aseptiques, des solutions sté- riles de: acide chlorhydrique (O,1N, 0,3 ml), 99Tcm-pertechnétate (1 ml, soit environ mCi (550 MBq)) élué d'un générateur de pertechné- tate disponible dans le commerce (fourni par "The Radiochemical Centre, Ltd.", Amersham, Grande-Bretagne) avec 0,9% de chlorure de sodium, et chlorure de sodium (2,20 ml d'une solution à 0,9%). On laisse reposer les fioles à la tempéra- ture ambiante pendant une heure pour achever le pro- cessus de marquage. On compte ensuite l'activité totale des con- tenus des fioles. Le dosage devant être administré à chaque patient (habituellement 0,5 mCi ou 18,5 MBq) peut être calculé d'après l'activité totale en tenant compte que la demi-vie du 99Tcm est de 6 heures. Préparation Activité résiduelle Rendement de moyenne (%) après marquage un mois à 35 C (%) 1 (sucrose) 98 72 2 (NaCi) 92 65 REVENDICATIONS 1. Composition de plasmine sous forme soli- de adaptée pour le marquage au technétium-99m en la mélangeant avec un agent réducteur de pertechnétate, caractérisée en ce qu'elle comprend une quantité effi- cace d'un composé polyhydroxy stabilisant la plasmine, choisi parmi le groupe comprenant le xylitol et le ribitol (pentitols); le méso-inositol; le glucose, le mannose, le galactose, le fructose et le sorbose (mono-saccharides); ainsi que le sucrose et le mal- tose (disaccharides). 2. Composition suivant la revendication 1, caractérisée en ce que la plasmine est dtorigine por- cine. 3. Composition suivant la revendication 1, caractérisée en ce que l'agent réducteur de pertech- nétate est le chlorure stanneux. 4. Composition suivant la revendication 3, caractérisée en ce que la quantité de chlorure stan- neux se situe dans l'lintervalle allant de 0,8 à 16% en poids de plasmine, la quantité de plasmine étant calculée sur la base d'un produit ayant une activité de 3,5 unités NOVO par mg. 5. Composition suivant la revendication 4, caractérisée en ce que la quantité de chlorure stan- neux se situe dans l'intervalle allant de 2 à 8% en poids. 6. Composition suivant l'une quelconque des revendications 1 à 5, caractérisée en ce que le rapport pondérai entre le composé polyhydroxy et la plasmine se situe dans l'intervalle allant de 0,1:1 à 10:1. 7. Composition suivant la revendication 6, caractérisée en ce que le rapport pondéral se situe dans l'intervalle allant de 0,5:1 à 5:1. 8. Composition suivant l'une quelconque des revendications 1 à 7, caractérisée on ce que le composé polyhydroxy est un mono-saccharide ou un disaccharide choisi, de préférence, parmi le groupe comprenant le fructose, le sucrose et le maltose. 9. Procédé de préparation d'une composition de plasmine sous forme solide adaptée pour le marquage par le technétium-99m en la mélangeant avec un agent réducteur de pertechnétate, caractérisé en ce qu'il com- prend le mélange,en solution,de la plasmine et d'une quan- tité efficace d'un composé polyhydroxy stabilisant la- plas- mine choisi parmi le groupe comprenant le xylitol.. et le ribitol (pentitols); le méso-inositol; le glucose, le mannose, le galactose, le fructose et le sorbose (mono-saccharides); de même que le sucrose et le maltose (disaccharides), suivi de la lyophilisation du mélange en une forme solide. 10. Agent de balayage scintigraphique à des fins diagnostiques, caractérisé en ce qu'il comprend la composition suivant la revendication 1 marquée par le technétium-99m.