Brevet FR2511357A1 — publié le 19830218

La présente invention concerne une forme micro- cristalline stable du cis-platine, rapidement soluble, et ses formulations en mélange à sec qui, après reconsti- tution avec de l'eau stérilisée, sont utilisées par injec- tion dans la chimiothérapie du cancer. Les composés du platine constituent un groupe remarquable de composés au sein du groupe des agents anti- néoplastiques Rosenberg et ses collaborateurs ont pour la première fois remarqué en 1965 un effet antibiotique /B Rosenberg et collaborateurs, Nature (Londres), 205, 698-699 ( 1965) 7 et c'est également Rosenberg et ses collaborateurs qui ont ensuite trouvé qu'il s'agissait de puissants agents antitumoraux chez les animaux /-B. Rosenberg et collaborateurs, Nature (Londres), 222, 385- 386 ( 1969)_ 7. Du point de vue structural, ils représentent un complexe formé d'un atome central de platine et entouré de divers arrangements d'atomes de chlore et de groupes ammoniac en relation cis ou trans par rapport au plan. Deux des composés du platineles plus couramment étudiés sont représentés ci-dessous: C- Cl 1 _ N, ci -" 3 Cl | -3 / ?. CI Cis-Platine (Il) CisPlatine (IV) dichlorodiammine tétrachlorodiammine Comme on peut le voir, le composé appelé cis- platine (II) dichlorodiammine a tous ses groupes chloro et amino dans un même plan Ce composé, à présent nommé cis- platine selon le United States Adopted Name (USAN), a été synthétisé conformément à la réaction suivante: NH 4 Cl K 2 lPt C 14 l + 2 NH 3 > cis-lPt(NH 3)2 C 12 l + 2 KC 1 / voir G B Kauffman et collaborateursdans Inorganic Synthesis, J Kleinberg (Ed), pages 239-245, McGraw-Hill Book Co, Inc, New York, 1963 _ 7. Y G Breusova-Baidala et collaborateurs décrivent dans Akademia Nauk SSSR, N 6, pages 1239-1242 (Juin 1974), le passage de la cis-platine (II) dichlorodiammine à la forme trans par lente isomérisation en solution aqueuse. J W Reishus et D S Martin décrivent dans le Journal of The American Chemical Society, 83, 2457-2462 ( 1961) l'hydrolyse acide du cis-platine à 25 C et à 35 C Ces études ont été conduites dans des solutions aqueuses à des concentrations de 1,5 x 10-3 M, 2,5 x 10-3 M et 5,0 x 10-3 M, qui correspondent, respectivement, à 0,45 mg/ml, 0,75 mg/ml et 1,5 mg/ml Les auteurs affirment qu'il existe une cer- taine ambiguité pour la localisation de l'origine (c'est-à- dire le "point zéro") des courbes d'hydrolyse parce que les échantillons mettent 10 à 30 minutes à se dissoudre complè- tement même à ces basses concentrations. M Rozencweig et collaborateurs analysent dans Annals of Internal Medicine, 86, 803-812 ( 1977) les résultats de diverses recherches précliniques et cliniques sur l'utilisation du cis-platine dans des tumeurs expérimen- tales chez les animaux de même que divers types de tumeurs humaines Ils indiquent que le médicament utilisé dans les recherches, procuré à des chercheurs qualifiés dans le cadre du Programme d'Evaluation pour la Thérapeutique du Cancer, Branche de Recherches sur les Médicaments, de l'Institut National du Cancer, aux Etats-Unis d'Amérique, a été fourni sous la forme d'une poudre lyophilisée blanche dans des fioles contenant 10 mg de cis-platine, 90 mg de chlorure de sodium, 100 mg de mannitol (U S P) et de l'acide chlorhydrique pour ajuster le p H Lors de la recons- titution avec 10 ml d'eau stérilisée pour l'injection (U S P), chaque ml de la solution résultante doit contenir 1 mg de cis-platine, 10 mg de mannitol et 9 mg de Na Cl. R W Talley et collaborateurs décrivent dans Cancer Chemotherapy Reports, 57, 465-471 ( 1973) les résul- tats de leur étude clinique en Phase I sur l'utilisation du cis-platine dans le traitement de 65 patients humains atteints d'une grande variété de néoplasmes Comme dans la publication précédente, le médicament leur a été pro- curé par l'Institut National du Cancer en fioles contenant 10 mg de cisplatine, 90 mg de chlorure de sodium et 100 mg de mannitol en vue de la reconstitution avec 10 ml d'eau stérilisée. A H Rossof et collaborateurs décrivent dans Cancer, 30, 1451-1456 ( 1972) les résultats qu'ils ont obtenus en utilisant le cis-platine dans le traitement de 31 patients humains atteints de différents types de tumeurs. Ils précisent que le médicament fourni par l'Institut National du Cancer a été préparé par la firme Ben Venue Laboratories, Inc et contenait, par fiole, 10 mg de cis- platine, 10 mg (sic) de mannitol et 9 mg (sic) de Na Cl, et que la poudre d'un blanc jaunâtre se dissout aisément dans 8-10 ml d'eau stérilisée. Certaines informations concernant la chimie et la formulation pharmaceutique du cis-platine sont données pages 1-5 et 31-32 de la publication intitulée "CLINICAL BROCHURE, CIS-PLATINUM (II) DIAMMINEDICHLORIDE (NSC-119875)", H Handelsman et collaborateurs, Investigational Drug Branch, Cancer Chemotherapy Evaluation Program, Division of Cancer Treatment, National Cancer Institute (version révisée en Août 1974) Les pages 31 et 32 de cette publi- cation concernent la formulation du cis-platine fourni gratis par le N C I aux médecins pour qu'ils en fassent l'évaluation clinique dans la chimiothérapie du cancer, et le texte en est le suivant: DONNEES PHARMACEUTIQUES NSC-119875 Cis-platine (II) dichlorodiammine Formulation posologique mg/fiole: Le contenu de chaque fiole en verre flint de 20 ml se présente sous la forme d'une masse lyophilisée d'un blanc sale Chaque fiole contient 10 mg de NSC-119875; 90 mg de chlorure de sodium; mg de mannitol et de l'acide chlor- hydrique pour ajuster le p H. Préparation de la solution mg/fiole: Après reconstitution avec 10-ml d'eau stérilisée pour injectables, U S P, chaque ml de la solution résultante contient 1 mg de NSC-119875, 10 mg de mannitol et 9 mg de chlorure de sodium ayant une plage de p H de 3,5-4,5. Conservation: Les fioles sèches non ouvertes doivent être conservées aux températures de réfrigération ( 4-8 C). Stabilité: Les fioles vierges ont une stabilité provisoire d'un an lorsqu'elles sont conservées à la température de réfrigé- ration ( 4-8 C) Les recommandations concernant la stabilité peuvent être modifiées à l'issu d'une étude de con- servation d'une durée de 2 ans La re- constitution, telle que recommandée, donne une solution jaune pale qui est stable pendant 1 heure au maximum à la température ambiante ( 22 C) lorsqu'elle est exposée à l'éclairement normal de la pièce et pendant 8 heures au maximum à la température ambiante ( 22 C) lors- qu'elle est protégée de la lumière Des solutions reconstituées peuvent former un précipité au bout de 1 heure à la température de réfrigération ( 4-8 C). Précautions à prendre Les formulations posologiques lyophilisées ne contiennent pas de préservateurs et il est donc recommandé de jeter des solutions 8 heures après leur reconstitu- tion. Août 1974 Section de Distribution des Médicaments à usage Clinique Branche de Recherche sur les Médicaments. La présente invention propose une forme micro- cristalline stable de cis-platine qui se dissout rapide- ment dans l'eau, et un procédé permettant de l'obtenir La présente invention propose également un mélange sec, stable et stérile de ladite forme microcristalline du cis-platine qui convient à la reconstitution rapide avec de l'eau stérilisée et à l'administration intraveineuse à l'homme; ledit mélange sec contenant éventuellement une source inor- ganique stérile non toxique pharmaceutiquement acceptable d'ions chlorure en une quantité à celle qui est produite par la présence de chlorure de sodium à une con- centration d'environ 1 à environ 20 mg et de préférence d'environ 9 mg, par mg de cis-platine microcristallin; le- dit mélange sec contenant aussi, le cas échéant, un exci- pient classique inoffensif, physiologiquement acceptable, qui est de préférence le mannitol, à une concentration d'environ 2 à environ 150 mg et de préférence d'environ mg par mg de cis-platine microcristallin, ledit mélange sec étant entièrement soluble dans l'eau stérilisée en une période d'environ 3 minutes (et d'ordinaire en 2 minutes environ) à une concentration de 1 mg de cis-platine micro- cristallin par ml d'eau stérilisée. La présente invention propose également un mélange sec stable stérile de cis-platine microcristallin dans un récipient scellé tel qu'une ampoule ou une fiole, sous une forme posologique unitaire, qui convient à la reconstitu- -tion rapide avec de l'eau stérilisée et à l'administration intraveineuse à l'homme; ladite formulation en mélange sec comprenant, par ml d'eau stérilisée devant être utilisée pour la reconstitution, environ 0,1 à environ 1 mg et de préférence environ 1 mg de cis-platine microcristallin stérile; ledit mélange sec contenant éventuellement, par ml d'eau stérilisée devant être utilisée pour la reconstitution, une source inorganique stérile non toxique, pharmaceuti- quement acceptable, d'ions chlorure en une quantité équi- valant à celle qui est produite par la présence d'environ 1 à environ 20 mget de préférence d'environ 9 mg de chlo- rure de sodium; ledit mélange sec contenant aussi éven- tuellement, par ml d'eau stérilisée devant être utilisée pour la reconstitution, environ 2 à environ 150 mg et de préférence environ 10 mg d'un excipient classique inoffen- sif, physiologiquement acceptable, qui est de préférence le mannitol; ledit mélange sec étant entièrement soluble dans l'eau stérilisée en 3 minutes environ (et d'ordinaire en 2 minutes environ) à une concentration de 1 mg de cis- platine microcristallin par ml d'eau stérilisée. La présente invention propose en outre un procédé de préparation de cisplatine microcristallin, qui comprend les étapes successives consistant a) à prendre une première solution comprenant un amide organique liquide et de préférence un amide tertiaire, notamment le diméthylformamide, contenant en volume envi- ron 1 à environ 20 % et de préférence environ 10 % d'acide chlorhydrique aqueux ayant une concentration d'environ 6 à environ 12 N et de préférence d'environ 12 N; b) à dissoudre du cis-platine dans ladite première solution en une quantité d'environ 10 à environ 60 g et de préférence d'environ 40 g/l de ladite première solution pour obtenir une seconde solution; c) à ajouter à la seconde solution, en agitant, environ 0,5 à environ 5 volumes et de préférence environ 0,75 à environ 2,5 volumes, notamment environ 2 volumes d'eau ou d'acide chlorhydrique aqueux dilué de concentra- tion allant jusqu'à environ 0,2 N et de préférence environ 0,1 N, à une température d'environ 10 à environ 40 'C et de préférence à une température de l'ordre de la température ambiante, pour former du cisplatine microcristallin; d) à recueillir le cis-platine microcristallin par filtration; e) à laver le cis-platine microcristallin recueilli avec de l'eau ou de l'acide chlorhydrique aqueux de concentration allant jusqu'à environ 0,2 N et de pré- férence environ 0,1 N; f) à laver ensuite éventuellement le cis-platine microcristallin avec un solvant organique volatil non réac- tif, miscible à l'eau, de préférence choisi entre des alcanols inférieurs et des di-(alkyle inférieur)-cétones; et g) à sécher éventuellement le cis-platine micro- cristallin lavé. Des considérations d'ordre pratique indiquent qu'un nmdicament qui nécessite une reconstitution avec de l'eau pour former une solution avant l'administration par un médecin soit rapidement soluble dans la quantité appro- priée d'eau, de manière à éviter au médecin ou son assis- tant des périodes longues et fastidieuses d'agitation par secousses Le cis-platine, tel qu'on l'obtient par des procédés classiques de préparation, met normalement 10 à minutes à se dissoudre dans l'eau à une concentration de 1 mg/ml, même s'il a tout d'abord été tamisé en parti- cules de 74 Dam La même période est nécessaire pour dis- soudre du cis-platine à la même concentration dans un véhi- cule aqueux contenant 9 mg/ml de chlorure de sodium et mg/ml de mannitol ou pour dissoudre un mélange de cis- platine, de chlorure de sodium et de mannitol (dans une proportion en poids de 1:9:10) dans l'eau à une concentra- tion de 1 mg de cis-platine par ml. Le cis-platine est disponible dans le commerce à l'heure actuelle pour la chimiothérapie du cancer sous la marque déposée "PLATINOL" Il est fourni sous la forme posologique unitaire en fiole sous la forme d'une poudre lyophilisée contenant 10 mg de cis-platine, 90 mg de chlo- rure de sodium et 100 mg de mannitol et il doit être re- constitué avec 10 ml d'eau stérilisée La reconstitution de ce produit peut être effectuée en 3 minutes d'agitation par secousses Toutefois, le procédé de production nécessite la lyophilisation des fioles individuelles d'une solution aqueuse de cis-platinede chlorure de sodium, de mannitol 11357 et de H Cl dilué, ce qui est un processus discontinu coûteux et prenant du temps Ainsi, une opération-de lyophilisation à l'échelle industrielle portant par exemple sur 40 000 fioles nécessiterait une durée d'exécution d'environ 4 à 6 jours Cette opération nécessite le chargement des fioles sur les étagères de la chambre, la lyophilisation des solu- tions, le maintien de la chambre sous vide jusqu'à ce que la lyophilisation soit achevée, le réglage de la tempéra- ture de la chambre au-dessus de la température ambiante pour accomplir la déshydratation, l'admission d'air dans la chambre, le bouchage des fioles et le déchargement de la chambre On peut s'attendre par ailleurs à ce qu'une opération classique de chargement à sec dans des condi- tions stériles, utilisant une seule machine pour charger 200 mg de matières solides par fiole, produise environ 000 fioles chargées et bouchées par période de travail de 8 heures En outre, du fait que la solubilité du cis- platine n'est que d'environ 1 mg/ml, le coût de la prépa- ration de formes posologiques en fioles contenant chacune plus d'environ 25 mg de cis-platine par lyophilisation devient prohibitif à cause du grand volume d'eau à éliminer. Toutefois, de telles formes posologiques peuvent être pré- parées aisément par des techniques de remplissage à sec dans des conditions stériles D'autres inconvénients de la lyophilisation comprennent l'éventualité d'une défail- lance de la source d'énergie pendant la longue durée des opérations, ce qui signifierait normalement que le lot entier de cis-platine devrait être jeté De même, le gaz chlorhydrique libéré au cours de la lyophilisation peut corroder la chambre et le circuit de l'appareil de lyophi- lisation. La fiche de données pharmaceutiques du N C I. pour le cisplatine et la circulaire officielle d'emballage pour le "PLATINOL" (cisplatine) dont il a été question ci-dessus mentionnent toutes deux que la fiole non ouverte du produit lyophilisé doit être conservée à la température du réfrigérateur Des tests de stabilité portant sur le cis- platine microcristallin et ses formulations en mélange à sec indiquent une bonne stabilité à la température ambiante Des tests de stabilité portant sur trois lots de cis-platine micro- cristallin ont montré chacun une perte de moins de 1 % après vieillissement pendant 3 mois à 560 C et à 450 C, 4 mois à 37 WC et 10 mois à 250 C, lorsque le produit a été conditionné dans des fioles en verre de couleur ambrée bouchées avec des bouchons en caoutchouc revêtu de "Teflonu I et logées dans des boîtes en carton Une perte de moins de 1, 7 % est apparue dans le cas de cis-platine microcristallin emballé dans des fioles en verre de couleur ambrée munies de bouchons en caoutchouc revêtu de "Teflon", lorsque les tests ont été effectués dans des conditions accélérées d'exposition à la lumière à la température ambiante pendant 1 mois sans boîtes en carton. Des tests de stabilité ont aussi été conduits sur des formulations de cisplatine microcristallin en mélange à sec contenant 10 mg de cis-platine microcristallin, mg de chlorure de sodium et 100 mg de mannitol, condi- tionnées dans des fioles en verre de couleur ambrée bouchées avec des bouchons de caoutchouc à revêtement de "Teflon". Les pertes de puissance observées après vieillissement pendant 2 et 3 mois à 56 OC et à 450 C ont été inférieures à 7 %; les pertes après 4 et 6 mois à 37 WC ont été infé- rieures à 5 %; et les pertes après 10 et 11 mois à 250 C ont été inférieures à 6 %. Le cis-platine microcristallin proposé par la présente invention a une distribution de diamètres de par- ticules d'au moins environ 80 % dans la plage de 0-5 Nom et de moins d'environ 20 % dans la plage de 5-20 Nom, avec essentiellement aucune particule supérieure à 20 gm Lors- que le cis-platine microcristallin est préparé dans les meilleures conditions, il ne contient normalement pas de particules supérieures à 10 Nm Cette dimension de diamètre des particules est du même ordre que pour un cis-platine qui a été lyophilisé à partir d'acide chlorhydrique dilué et elle est notablement plus faible que les diamètres habituels de particules de produits pharmaceutiques micro- nisés à la machine Le tableau I ci-dessous montre l'éva- luation microscopique des diamètres de particules de 3 lots de cisplatine microcristallin, d'un lot de cis-platine lyophilisé (à partir de H Cl 0,07 N) et d'un lot caracté- ristique de benzathine-céphapirine du commerce micronisée à la machine. TABLEAU I Distribution des diamètres de particules (%) Matière Micromètres 0-5 5-10 10-20 10-730 Cis-platine micro- cristallin (N 759) 96 4 O - Cis-platine micro- cristallin (N 315) 82 14 4 Cis-platine micro- cristallin (N 277) 85 15 O Cis-platine lyophi- lisé (N 276) 97 3 O - Benzathine-céphapirine micronisée à la machine (N 158) 11,3 85,5 3,4 Bien que des études de distribution des diamètres de particules indiquent que les diamètres de particules du cis-platine microcristallin sont du même ordre que ceux du cis-platine lyophilisé, et que de simples examens micros- copiques montrent que le cis-platine microcristallin diffère nettement, par les diamètres de particules, du cis-platine courant (en vrac), les données sont inversées en ce qui concerne la structure cristalline Les diagrammes de dif- fraction des rayons X (poudre) montrent que le cis-platine microcristallin et le cis-platine lyophilisé sont des formes cristallines nettement différentes, et que le cis-platine microcristallin et le cis- platine habituel ont la même forme cristalline (des différences minimes des diagrammes de diffraction étant dues à la différence des diamètres de particules, du tassement dans le tube capillaire, etc). Le tableau II reproduit les résultats obtenus dans des études de diffraction des rayons X sur des poudres (radia- tion KS filtrée du cuivre, 0,154051 nanomètre) du cis- platine habituel, du cis-platine microcristallin et du cis- platine lyophilisé. TABLEAU II Valeurs obtenues aux rayons X pour des rentes de cis-platine formes diffé- Dans la préparation ducis-platine microcristallin de la présente invention, du cis-platine normal (en vrac) est tout d'abord dissous dans une solution d'un amide orga- nique liquide et d'acide chlorhydrique Des amides convenables sont évidents pour l'homme de l'art, les conditions requises Echantillon 2 e Intensité Distances (degrés) relative interplanaires (nanomètres) 13,89 100 0,6370 ,00 49 0,5901 Cis-platine 16,30 28 0,5433 courant (N 389) 26,84 40 0,3319 28,37 18 0,3143 38,30 3 0,2348 12,51 5 0,7070 12,76 5 0,6932 13,88 100 0,6375 Cis-platine 14,13 100 0,6263 lyophilisé 19,90 6 0,4458 (N O 359) ,19 66 0,4394 28,11 8 0,3172 28,71 9 0,3107 31,90 4 0,2803 13,81 100 0,6407 14,93 84 0,5929 16,26 71 0,5447 Cis-platine 24,05 27 0,3697 micro- micrilo 26,57 22 0,3352 cristallin (N 705) 28,37 16 0,3143 ,35 13 0,2943 33,14 15 0,2701 étant la stabilité de l'amide et une solubilité suffisante du cis-platine dans le mélange d'amide et de H Cl Des amides avantageux à utiliser dans ce procédé comprennent, par exemple,le formamide, le N-méthylformamide, le N,N-diméthyl- formamide, le N-éthylformamide, le N,N-diéthylformamide, le N,N-diméthylacétamide, le N,N-diéthylacétamide, le N- ( 2-hydroxyéthyl)-acétamide, la N-méthyl-2-pyrrolidinone, etc On préfère utiliser des amides tertiaires tels que les N,N-dialkylformamides et les N,N-dialkylacétamides. L'amide de choix est le N,N-diméthylformamide On préfère utiliser dans ce procédé un amide de grande qualité Dans des essais parallèles effectués en utilisant (a) du DMF de qualité "réactif" et (b) du DMF de qualité technique, c'est-à-dire de faible qualité, on a constaté que le DMF de qualité inférieure abaissait le rendement en produit d'environ 4 % et prolongeait le temps de dissolution du produit à environ 5 minutes. La composition de la solution amido-chlorhydrique peut aller d'environ 1 % (en volume) à environ 20 % (en volume) d'acide chlorhydrique et la concentration de l'acide chlorhydrique peut varier d'environ 6 N à environ 12 N La composition optimale de la solution amido-chlorhy- drique pour tout amide donné peut être aisément déterminée par l'homme de l'art, par des essais classiques Avec l'amide préféré, à savoir le N,Ndiméthylformamide, on préfère utiliser une solution amido-chlorhydrique compre- nant environ 90 % (en volume) d'amide et environ 10 % (en volume) de H Cl 12 N environ Il y a lieu de remarquer qu'une trop forte concentration en H Cl peut provoquer une certaine dégradation du cis-platine. Selon l'amide particulier utilisé et la composi- tion de la solution amido-chlorhydrique, environ 10 à envi- ron 60 g de cis-platine peuvent être dissous par litre de solution amidochlorhydrique Avec de nombreuses solutions amido-chlorhydriques, beaucoup plus de 60 g de cis-platine peuvent être dissous physiquement par litre, mais on a trouvé qu'une cristallisation subséquente dans des solutions trop fortement concentrées donnait un produit qui ne se dissol- 251 135 ? vait pas complètement en 3 minutes A la limite inférieure, on a trouvé qu'une quantité inférieure à environ 10 g de cis-platine par litre donnait habituellement des rendements très réduits et nécessitait évidemment des volumes dispro- portionnés de solution pour une quantité donnée de produit. Lorsqu'on choisit la solution préférée de DMF et de H Cl concentré (environ 9:1 en volume), on préfère utiliser en- viron 40 g de cis-platine par litre. L'opération de cristallisation peut être conduite à une température d'environ 10 à environ 350 C Aux tempé- ratures plus hautes, le rendement en produit est plus faible à cause d'une plus grande solubilité Aux températures in- férieures à environ 100 C, on a trouvé que le produit avait souvent des temps de dissolution de plus de 3 minutes On pense que cela est dû au fait que le produit est trop rapidement "chassé" de la solution au lieu de développer un peu plus lentement le cis-platine microcristallin cor- rect Mais cela n'est qu'un concept théorique et ne fait pas partie de l'invention Il est naturellement plus pra- tique de conduire l'opération de cristallisation à la tem- pérature ambiante et, puisque d'excellents rendements en cis-platine microcristallin de très bonne qualité sont obtenus à la température ambiante (par exemple 20-250 C), cela constitue la température de cristallisation que l'on préconise. * La cristallisation est conduite par mélange de la solution amido-chlorhydrique du cis-platine avec envi- ron 0,5 à environ 5 volumes d'eau ou de H Cl dilué dont la concentration peut atteindre environ 0,2 N La solution de cis-platine peut être ajoutée à l'eau (ou à la solution aqueuse diluée de H Cl), ou l'inverse Chaque façon de pro- céder donne sensiblement le même rendement et la même qua- lité en cis-platine microcristallin Le volume optimal d'eau (ou de H Cl aqueux dilué) que l'on doit adjoindre à la solution de cis-platine dépend de l'amide particulier que l'on utilise ainsi que de la composition de la solu- tion amido-chlorhydrique de cis-platine Le volume optimal pour toute solution de cis-platine donnée peut être déter- miné par des essais classiques Généralement, on préfère utiliser environ 1,5 à environ 2,5 volumes d'eau (ou de H Cl aqueux dilué) par volume de solution amido-chlorhydrique de cis-platine Lorsqu'on utilise la solution préférée à environ 40 g de cis-platine par litre dans le mélange à 9:1 en volume de DMF et de H Cl concentré, on préfère uti- liser environ deux volumes d'eau (ou de H Cl aqueux dilué) par volume de solution de cis-platine dans le mélange DMF- H Cl Il y a lieu de remarquer que l'utilisation d'un trop grand volume d'eau (ou de H Cl aqueux dilué) tend également à faire cristalliser des impuretés qui étaient présentes dans le cis-platine de départ, par exemple le trans- platine. Comme indiqué ci-dessus, du cis-platine micro- cristallin peut être cristallisé dans sa solution amido- chlorhydrique par l'addition d'eau ou de H Cl aqueux dilué. Le choix entre les deux n'est pas déterminant, et on pré- fère se baser sur la quantité et la concentration de H Cl dans la solution amido-chlorhydrique de cis-platine Par conséquent, si cette solution contenait une quantité rela- tivement faible de H Cl, près de la limite inférieure d'en- viron 1 % de H Cl 6 N, on préférerait utiliser H Cl environ 0,2 N pour effectuer la cristallisation Inversement, si la solution amidochlorhydrique de cis-platine contenait une grande quantité de H Cl, près de la limite supérieure de 20 % de H Cl 12 N, on préférerait utiliser de l'eau pour effectuer la cristallisation Lorsqu'on utilise la solution préférée contenant par litre environ 40 g de cis-platine dans le mélange DMF-H Cl concentré ( 9:1), on préfère utiliser H Cl environ 0,1 N pour effectuer la cristallisation. Le cis-platine microcristallin offert par la présente invention (après stérilisation) peut être emballé seul dans un récipient fermé tel qu'une ampoule ou une fiole, de préférence sous une forme posologique unitaire, en vue de la reconstitution avec de l'eau stérilisée (au moins 1 ml/mg de cis-platine microcristallin) pour produire une solution qui convient à l'administration intraveineuse A titre de variante, le cis-platine microcristallin peut être mélangé avec une source inorganique stérile non toxique, pharmaceutiquement acceptable, d'ions chlorure en une quantité équivalant à celle qui est produite par la pré- sence de chlorure de sodium à une concentration d'environ 1 à environ 20 mg (et de préférence d'environ 9 mg) par mg de cis-platine microcristallin De préférence, la source d'ions chlorure est le chlorure de sodium Dans une autre forme de réalisation, le cis-platine microcristallin sté- rile peut être mélantgé avec un excipient stérile inoffensif usuel, physiologiquement acceptable, qui est de préférence le mannitol, en une quantité d'environ 2 à environ 150 mg (et de préférence d'environ 10 mg) par mg de cis-platine microcristallin stérile Dans une autre forme de réalisa- tion, le cis-platine microcristallin stérile peut être mélangé à la fois avec la source d'ions chlorure et l'exci- pient mentionnés ci-dessus, en les quantités indiquées. Chacun de ces mélanges à sec est ensuite emballé dans un récipient scellé tel qu'une ampoule ou fiole, de préférence sous une forme posologique unitaire, en vue de la recons- titution avec de l'eau stérilisée (au moins 1 ml par mg de cis-platine microcristallin) pour produire une solution qui convient à l'administration intraveineuse Les mélanges secs mentionnés ci-dessus peuvent être préparés par simple mélange à sec des ingrédients désirés ou par des techni- ques de granulation par voie humide, ces deux possibilités étant bien connues dans la pratique Dans le cas d'opéra- tions de granulation par voie humide, il est préférable d'effectuer une granulation de tous les ingrédients excepté le cis-platine et de mélanger la granulation après séchage avec la quantité désirée de cis-platine microcristallin. Le cis-platine microcristallin de la présente invention et ses mélanges secs se dissolvent bien dans l'eau stérilisée (au moins 1 ml par mg de cis-platine micro- cristallin en 3 minutes environ La solution reconstituée, si elle n'est pas utilisée immédiatement, doit être conservée à une température de l'ordre de la température ambiante. Une réfrigération à des températures inférieures à environ C entraîne la cristallisation du cis-platine qui n'est pas sous la forme microcristalline Ce cis-platine est extrêmement difficile à redissoudre à la température am- biante, mais la dissolution peut être obtenue par chauffage à environ 35400 C. Le cis-platine est un composé inorganique dont on a remarqué tout d'abord l'aptitude à empêcher la réplication de E coli, et on a trouvé par la suite qu'il possédait une activité antitumorale Ce médicament exerce son effet d'in- terférence avec la synthèse de l'ADN en provoquant la réti- culation de brins complémentaires de l'ADN Il exerce son activité sur divers systèmes tumoraux tels que L 1210, Sarcome 180, carcinosarcome de Walker 256, des tumeurs mammaires induites par le DMBA et le mélanosarcome asciti- que B 16 Ce composé est particulièrement intéressant en ce qu'il déploie un synergisme avec un grand nombre d'agents chimiothérapeutiques d'emploi courant Des études de toxico- logie portant sur de grands animaux ont révélé une nécrose tubulaire rénale, de l'entéro-colite, une hypoplasie de la moelle osseuse et une atrophie lymphoide Des études de Phase I ont révélé les toxicités suivantes: myélosuppres- sion, insuffisance rénale, autotoxicité à grande fréquence et intolérance gastro-intestinale Les doses couramment utilisées, avec une toxicité allant de modérée à modérément acceptable, se situent dans la plage de 60100 mg/m 2 par voie intraveineuse en une seule prise ou réparties sur 3 à 5 jours, et devant être répétées à des intervalles de quatre semaines Les premiers essais cliniques ont révélé certaines réponses au médicament dans des tumeurs des cellu- les germinales, des lymphomes, des sarcomes et des carcinomes siégeant au sein, à la tête et au cou. Une dose de 60 mg/m 2 équivaut grossièrement à 1,5 mg/kg, cette quantité étant à son tour grossièrement équivalente à 105 mg pour un patient pesant 70 kg. Le cis-platine microcristallin de la présente invention ou ses mélanges secs, après reconstitution, sont utilisés de la même manière et aux mêmes fins que les indi- cations données ci-dessus et dans les autres publications ainsi que dans l'abondante littérature médicale traitant de ce sujet Comme indiqué dans cette littérature, on utilise 11357 fréquemment un traitement simultané avec d'autres agents chimiothérapeutiques pour obtenir les meilleurs résultats. Le cas échéant, les solutions de la présente invention peuvent être ajoutées immédiatement avant usage à un diluant aqueux stérile pharmaceutiquement acceptable tel qu'une solution de glucose ou de sel L'administration est effectuée, soit par injection intraveineuse directe, soit par infusion intraveineuse. Le terme "Platinol" est une marque déposée de la firme Bristol-Myers Company pour le cis-platine. Le terme "Darco" est une marque déposée de la firme Atlas Chemical Industries pour un carbone activé. Le terme "Millipore" est une marque déposée de la firme Millipore Corporation pour des filtres à membrane. Exemple 1 Préparation du cis-platine microcristallin On ajoute 280 mg de cisplatine à une solution de 0,7 ml de H Cl 1 N et de 6,3 ml de diméthylformamide (DMF) et on agite le mélange pendant 1 heure sans obtenir la dissolution totale On ajoute encore 2 ml de DMF et 0,7 ml de H Cl concentré, et on agite la solution résultante pendant 1 heure, puis on la divise en deux parties. (a) On ajoute à 1 partie de la solution ci-dessus ( 4,9 ml), 20 ml de H Cl 0,1 N et on délaie le précipité résultant pendant 15 minutes On recueille la matière solide par filtration, on la lave avec 1,5 ml de H Cl 0,1 N et 3 ml d'acétone et on la sèche sous vide à 20 C pendant 18 heures Le rendement en cis-platine microcristallin est de 93 mg ( 66 %) L'analyse selon Karl Fischer montre que le produit ne contient pas d'eau et l'analyse par résonance magnétique nucléaire montre qu'il est dépourvu de DMF et d'acétone. Analyse: H % N % Cl% Calculé pour Pt H 6 N 2 C 12:2, 02 9,34 23,63 Trouvé 1,89 9,33 22,59 On pèse 10 mg du cis-platine microcristallin ci- dessus dans une fiole de 17 ml ainsi que 90 mg de Na Cl et mg de mannitol On ajoute à ce mélange 9,9 ml d'eau stérile et on obtient la dissolution totale après 1 minute d'agitation par secousses Une autre portion de 10 mg du cis-platine microcristallin ci-dessus est agitée par secousses avec 10 ml d'une solution aqueuse de Na Cl ( 90 mg/10 ml) et de mannitol ( 100 mg/10 ml) et elle se dissout complètement en 1 minute. (b) L'autre partie de la solution ci-dessus ( 4,8 ml) est ajoutée à 20 ml de H Cl décinormal et le précipité résul- tant est délayé pendant 15 minutes La matière solide est recueillie par filtration, lavée avec 1,5 ml de H Cl 0,1 N et 3 ml d'acétone et séchée sous vide à 20 C pendant 18 heu- res Le rendement en cis-platine microcristallin est de 98 mg ( 70 %) Une portion de 10 mg de ce produit est agitée par secousses avec 10 ml d'une solution aqueuse de Na Cl ( 90 mg/10 ml) et de mannitol ( 100 mg/10 ml) et elle se dissout complètement en 1 minute. Exemple 2 Préparation de cis-platine microcristallin On dissout 280 mg de cisplatine dans 7,0 ml de solution de DMF-H Cl préparée en mélangeant 0,7 ml de H Cl concentré et 6,3 ml de DMF La solution est agitée pendant 1 heure, puis additionnée de 14 ml de H Cl 0,1 N Le précipité résultant est délayé pendant 15 minutes les matières solides sont ensuite recueillies par filtration, lavées avec 2 ml de H Cl 0,1 N à O C et 4 ml d'acétone, et séchées sous vide à C pendant 20 heures Le rendement en cis-platine micro- cristallin est de 225 mg ( 80 %) Un échantillon de 10 mg de ce produit est agité par secousses avec 10 ml d'une solution aqueuse de Na Cl ( 90 mg/10 ml) et de mannitol ( 100 mg/10 ml) et elle se dissout complètement en 3 minutes. Un autre échantillon de 10 mg du produit est mélangé avec mg de Na Cl et 100 mg de mannitol et cette formulation de mélange sec est entièrement soluble dans 9,9 ml d'eau en 3 minutes. Exemple 3 Préparation de cis-platine microcristallin On ajoute 210 mg de cisplatine à 3 ml de solution DMF-H Cl préparée en mélangeant 0,3 ml de HC 1 concentré et 2,7 ml de DMF La dissolution totale n'est pas obtenue au bout de 1 heure d'agitation, si bien que l'on ajoute encore 0,1 ml de H Cl concentré et 0,9 ml de DMF La solution résul- tante est agitée pendant 1 heure, puis additionnée de 8 ml de H Cl 0,1 N Le précipité résultant est délayé pendant minutes et les matières solides sont ensuite recueillies par filtration, lavées avec 1,5 ml de H Cl 0,1 N et 2 ml d'acé- tone et séchées sous vide à 20 C pendant 20 heures Le ren- dement en cis-platine microcristallin est de 162 mg ( 77 %). Exemple 4 Préparation du cis-platine microcristallin On dissout 210 mg de cisplatine dans 5,25 ml de solution de DMF-H Cl ( 9:1) La solution est agitée pendant 1 heure, puis additionnée de 10,5 ml de H Cl 0,1 N Le pré- cipité résultant est délayé pendant 15 minutes et les matières solides sont ensuite recueillies par filtration, lavées avec 1 ml de H Cl 0,1 N et 2 ml d'acétone, et séchées sous vide à 20 C pendant 18 heures Le rendement en cis- platine microcristallin est de 168 mg ( 80 %) 10 mg de ce produit sont agités par secousses avec 10 ml d'une solution aqueuse de Na Cl ( 90 mg/10 ml) et de mannitol ( 100 mg/10 ml) et ils se dissolvent complètement en 2 heures On mélange encore 10 mg de ce produit avec 90 mg de Na Cl et 100 mg de mannitol et le mélange sec est entièrement soluble dans 9,9 ml d'eau stérile, en 2 minutes d'agitation par secous- ses. Exemple 5 Préparation de cis-platine microcristallin On dissout 1,0 g de cisplatine dans 25 ml de solution DMF-H Cl ( 9:1) La solution claire est agitée pen- dant 1 heure sous une atmosphère d'azote et elle est ensuite additionnée de 50 ml de H Cl 0,1 N Le précipité résultant est délayé pendant 15 minutes et les matières solides sont ensuite recueillies par filtration et lavées avec 5 ml de H Cl 0,1 N à 4 C et 10 ml d'acétone Le quart environ des matières solides est séché sous vide à 40 C pendant 18 heures en donnant 0,120 g de produit Le reste des matières solides est séché sous vide à 20 C pendant 18 heures en donnant 0,682 g de produit Le rendement total en cis-platine micro- cristallin est de 0,802 g ( 80 %). Un échantillon de 10 mg de chacun des produits séchés est agité par secousses avec 10 ml d'une solution aqueuse contenant Na Cl ( 90 mg/10 ml) et du mannitol ( 100 mg/ ml) et on observe que chacun est entièrement soluble en 3 minutes. La chromatographie sur couche mince (CCM) des deux produits n'y fait apparaître aucune impureté La chromatographie en phase liquide à haute performance (CLHP) des deux produits indique une puissance de 984 gg/mg pour la matière séchée à 40 C et une puissance de 1027 gg/mg pour la matière séchée à 20 C. Analyse: H % N % Cl % Calculé pour Pt H 6 N 2 C 12:2,02 9,34 23,63 Trouvé (produit séché à 40 C): 1,77 9,31 23,29 Trouvé (produit séché à 20 C) 1,79 9,21 23,13 Exemple 6 Préparation de cis-platine microcristallin On dissout 2,5 g de cisplatine dans 62,5 ml de solution DMF-HC 1 (préparée en dissolvant 15 ml de H Cl concentré dans 135 ml de DMF) On agite la solution pen- dant 1 heure sous atmosphère d'azote et on ajoute ensuite ml de HC 1 0,1 N Le précipité résultant est délayé pendant 15 minutes et les matières solides sont ensuite recueil- liespar filtration,lavées avec 12 ml de H Cl 0,1 N et 25 ml d'acétone et séchées sous vide à 20 C pendant 18 heures Le rendement en cis-platine microcristallin est de 2,0 g ( 80 %). Un échantillon de 10 mg du produit est agité par secousses avec 10 ml d'une solution aqueuse contenant Na Cl ( 90 mg/ ml) et du mannitol ( 100 mg/10 ml) et il se dissout en- tièrement en 2 minutes. Une formulation en mélange sec est préparée par mélange intime de 750 mg du produit ci-dessus (particules de 74 Dm), 6,75 g de Na Cl ( 74 gm) et 7, 5 g de mannitol ( 74 Dm). Exemple 7 Préparation de chlorure de sodium stérile apyrogène On dissout 18,5 g de Na Cl dans 62 ml d'eau dis- tillée On ajoute à cette solution 1,85 g de carbone activé ("Darco KB") et on agite le mélange pendant 0,5 heure On enlève le carbone par filtration sur du papier-filtre dur et on ajoute lentement le filtrat à 62 ml de H Cl concentré sous agitation rapide Le précipité résultant est délayé pendant une demi-heure, recueilli par filtration sur papier- filtre dur et séché à 100 'C pendant 18 heures Le rendement en produit est de 13,8 g ( 75 %). Exemple 8 Préparation de mannitol stérile apyrogène On dissout 10 mg de mannitol dans 67 ml d'eau distillée On ajoute 1,0 g de carbone activé ("Darco KB") et on agite le mélange pendant une demi-heure On filtre ensuite le mélange sur du papier-filtre dur et on ajoute lentement le filtrat à 335 ml d'acétone sous agitation rapide Le précipité résultant est délayé pendant une demi- heure, recueilli par filtration sur papier-filtre dur et séché à 100 'C pendant 18 heures Le rendement en produit est de 8,0 g ( 80 %). Exemple 9 Préparation de cis-platine stérile à charge sèche pour l'injection ( 10 mg de cis-platine par fiole) A Préparation de cis-platine microcristallin stérile Précautions à prendre Tout le personnel impliqué dans la manipulation de ce produit doit se protéger comme suit: (a) porter un masque facial, une protection des yeux, des gants et un vêtement protecteur au cours de la préparation, du traitement et de l'emballage. (b) éviter tout contact avec le médicament par inhalation ou tout contact avec la peau. (c) nettoyer abondamment tout l'appareillage et l'aire de préparation pour supprimer une con- tamination possible par le médicament. Mode opératoire 1 Placer dans un récipient convenable en verre et maintenir sous couche d'azote 90 ml de diméthylformamide (le diméthylformamide doit être dépourvu de diméthylamine et sa pureté doit être approximativement l'équivalent de celle du diméthylformamide des Burdick and Jackson Labora- tories, diméthylformamide distillé en flacon de verre ou certifié Fisher (ACS), liste D-119) Mettre en route et maintenir une agitation rapide Ajouter lentement 10 ml d'acide chlorhydrique concentré U S P Maintenir la tempé- rature dans la plage de 20 à 270 C. 2 Continuer d'agiter rapidement les 100 ml de solution fraîchement préparée sous une atmosphère d'azote en maintenant la température dans la plage de 20-270 C. 3 Ajouter lentement 4 g de cis-platine en un intervalle de 5 minutes Poursuivre une agitation rapide sous atmosphère d'azote pendant 1 heure On obtient une dissolution totale ou quasi totale. 4 En utilisant une pression d'azote, transférer la solution,à travers un filtre "Millipore" stérile de 0,22 micromètre, dans un récipient en verre stérile con- venable apyrogène par une technique aseptique en milieu stérile. Ajouter au filtrat maintenu sous agitation rapide, en un intervalle de 5 minutes, 200 ml d'acide chlorhydrique 0,1 N stérile apyrogène, à 20-270 C Des cristaux microscopiques jaunes denses se forment Agiter pendant 15 minutes. 6 En utilisant une technique aseptique, isoler les cristaux par une filtration convenable Traiter le gâteau du filtre par succion jusqu'à siccité apparente. Ne pas faire passer d'air en excès à travers le gâteau du filtre Garder le filtrat. 7 Laver le gâteau du filtre avec 10 ml d'acide chlorhydrique 0,1 N stérile apyrogène à 20-270 C Ajouter la liqueur de lavage au filtrat de l'étape No 6 Traiter le gâteau du filtre par succion jusqu'à siccité apparente. Ne pas faire passer d'air en excès à travers le gâteau du filtre. Laver le gâteau du filtre avec 20 ml d'acétone stérile apyrogène Ajouter la liqueur de lavage au filtrat. Traiter le gâteau du filtre par succion jusqu'à siccité apparente Ne pas faire passer d'air en excès à travers le gâteau du filtre (Garder les filtrats rassemblés On isole le cis-platine du filtrat de la manière décrite dans l'étape 9 ci-après). 8 En utilisant une technique asèptique, isoler et sécher sous vide poussé le cis-platine microcristallin (à l'abri de la lumière) pendant 24 heures à 37-42 C. Rendement: environ 3,3-3,5 g (rendement 80-86 %) Conser- ver les microcristaux jaunes dans un récipient en verre opaque convenable stérile apyrogène bouché à l'aide d'un capuchon métallique vissable renfermant une garniture en "Teflon" ou en polyéthylène à température ambiante régulée, à l'abri de la lumière. 9 (a) Refroidir le filtrat de l'étape 7 ci-dessus à 0-4 C sous agitation Des conditions aseptiques ne sont pas exigées Maintenir le mélange sans l'agiter pendant 48 heures à 0-4 C Des cristaux dorés se déposent Séparer les cristaux par filtration Laver les cristaux avec 20 ml d'acétone et les sécher sous vide poussé (à l'abri de la lumière) à 37-42 C pendant 24 heures Rendement: environ 0,2 g (rendement 5 %) Ces cristaux n'ont pas les propriétés en solution de la forme microcristalline et doivent être traités à nouveau par le mode opératoire ci-dessus pour donner le cis-platine microcristallin. (b) Les composés de platine restant dans le fil- trat peuvent être recueillis par distillation de l'eau et du diméthylformamide. Propriétés du cis-platine microcristallin stérile tel que préparé par le mode opératoire ci-dessus 1 Epreuve de chromatographie en phase liquide à haute performance: un seul pic d'une durée de rétention de 2,8 minutes ( 1028 gg/mg). 2 Spectre infrarouge: concorde avec la structure. 3 Résonance magnétique nucléaire: dans T F A; aucun indice d'acétone ou de diméthylformamide. 251135 ? 7 4 Analyse élémentaire: Concorde avec la for- mule; le produit se révèle anhydre. Morphologie des cristaux: A l'examen au micros- cope polarisant, à un grossissement de 250 X dans l'huile minérale, les microcristaux apparaissent comme de très petits bâtonnets présentant une extinction spécifique Le cis-platine apparenté se présente en très grandes lamelles irrégulières (pouvant atteindre des centaines de fois la taille des microcristaux) présentant une biréfringence du spectre coloré. B Préparation du chlorure de sodium stérile 1 Introduire 90 ml d'eau stérilisée pour injec- tables, U S P, dans un récipient en verre convenable Mettre un agitateur en route et maintenir la température dans la plage de 20-260 C Ajouter et dissoudre 27 g de chlorure de sodium Maintenir l'agitation jusqu'à ce que la dissolution soit obtenue. 2 Poursuivre l'agitation et ajouter 2,7 g de carbone activé u Darco KB" Maintenir l'agitation pendant 1,0 heure. 3 Enlever le carbone par filtration Laver le gâteau de carbone avec 5 ml d'eau stérilisée pour injec- tables Ajouter la liqueur de lavage au filtrat. 4 En utilisant une pression d'azote et une technique aseptique, transférer le filtrat à travers un filtre "Millipore"-stérile convenable apyrogène, de 0,22 micro- mètre, dans un récipient en verre convenable, stérile, apyrogène Cela représente la solution A. En utilisant une technique aseptique, ajouter cinq volumes (environ 550 ml) d'acétone qui a été filtrée sur filtre "Millipore" stérile de 0,22 micromètre à la solu- tion A sous agitation rapide, filtrée sur "Millipore", en un intervalle de 10 minutes (A titre de variante, la solu- tion A peut être ajoutée à 550 ml d'acétone sous agitation rapide, qui a été filtrée sur un filtre "Millipore" stérile de 0,22 micromètre) Les cristaux se forment. 6 Maintenir l'agitation à la température ambiante pendant une demi-heure. 11357 7 Séparer les cristaux par une filtration con- venable, en utilisant une technique aseptique. 8 Laver les cristaux sur le filtre avec deux portions de 40 ml d'acétone qui a été filtrée sur un filtre "Millipore" stérile de 0,22 micromètre 9 En utilisant une technique aseptique, enlever les cristaux du filtre et les sécher à l'air à 115-1250 C pendant 24 heures Rendement: environ 21,5 g (rendement %). 10 Conserver les cristaux dans un récipient'en verre opaque convenable stérile et apyrogène, boucher à l'aide d'un capuchon métallique vissable contenant une garniture en "Teflon" ou en polyéthylène. Propriétés du chlorure de sodium stérile préparé par le procédé ci-dessus 1 Pas d'acétone d'après le spectre de résonance magnétique nucléaire. 2 Eau (Karl Fisher) = normalement environ 1 %. C Préparation de mannitol stérile 1 Placer 90 ml d'eau stérilisée pour injectables, U.S P, dans un récipient en verre convenable Mettre un agitateur en route et maintenir la température dans la plage de 20-26 o C Ajouter et dissoudre 13,6 g de mannitol. Maintenir l'agitation jusqu'à ce que la dissolution soit obtenue. 2 Poursuivre l'agitation et ajouter 1,4 g de carbone activé "Darco KB" Maintenir l'agitation pendant 1 heure. 3 Enlever le carbone par filtration Laver le gâteau de carbone avec 5 ml d'eau stérilisée pour injec- tables, U S P Ajouter la liqueur de lavage au filtrat. 4 En utilisant de l'azote sous pression et une technique aseptique, transférer le filtrat à travers un filtre "Millipore" stérile convenable apyrogène de 0,22 micro- mètre dans un récipient en verre apyrogène stérile convenable. En utilisant une technique aseptique, ajouter au filtrat, en agitant rapidement et en un intervalle de minutes, 500 ml d'acétone qui a été filtrée sur un filtre "Millipore" stérile de 0,22 micromètre Des cristaux se forment (A titre de variante, le filtrat peut être ajouté en un intervalle de 10 minutes à 500 ml d'acétone sous agitation rapide, qui a été filtrée sur un filtre "Milli- pore" stérile de 0,22 micromètre) Maintenir sous agitation pendant une demi-heure à la température ambiante. 6 Séparer les cristaux par filtration convenable en utilisant une technique aseptique. 7 Laver les cristaux sur le filtre avec deux portions de 20 ml d'acétone qui a été filtrée sur un filtre "Millipore" stérile de 0,22 micromètre. 8 En utilisant une technique aseptique, enlever les cristaux du filtre et les sécher à l'air à 100-115 'C pendant 24 heures Rendement: environ 11,4 g (rendement 84 %). 9 Conserver les cristaux dans un récipient en verre opaque convenable stérile et apyrogène bouché à l'aide d'un capuchon métallique vissable contenant un joint de "Teflon". * Propriétés du mannitol stérile préparé par le mode opéra- toire ci-dessus 1 Pas d'acétone d'après le spectre RMN. 2 Eau (Karl Fisher) = normalement environ 0,4- 1 %. D Préparation d'un granulé stérile de mannitol et de chlo- rure de sodium destiné à être utilisé dans du cis-platine microcristallin stérile à charge sèche pour l'injection Formule Pour une fiole à Pour 10 000 10 mg de cis fioles à 10 mg platine de cis-platine Mannitol stérile 0, 1000 g 1000,00 g Chlorure de sodium stérile 0,0900 g 900,00 g Eau stérile pour injec * * tables, U S P 0,025 ml 250,00 ml * La quantité d'eau utilisée peut varier en fonction de l'obtention d'un produit granulé humide ayant une consis- tance convenable L'eau est éliminée au cours du traite- ment. Instructions pour la préparation (observer les consignes de sécurité indiquées ci-dessous) 1 En utilisant une technique aseptique et un appareillage apyrogène stérile approprié, broyer séparé- ment le mannitol apyrogène stérile et le chlorure de sodium apyrogène stérile de manière que les particules traversent un tamis de 0,42 mm d'ouverture de maille. 2 En utilisant une technique aseptique, charger les quantités désirées de mannitol et de chlorure de sodium apyrogènes stériles broyés dans un mélangeur apyro- gène stérile approprié Un mélangeur en V ou un mélangeur à cône à chemise, fonctionnant sous vide et équipé d'un barreau agitateur, est avantageux Agiter pendant 1 heure. 3 Ajouter par petites portions une quantité suffisante d'eau apyrogène stérile pour injectables, U S P *, en utilisant le barreau agitateur, le mélangeur étant main- tenu en rotation jusqu'à la formation de granulés de consis- tance convenable Après chaque addition d'eau pour injec- tables, faire fonctionner le barreau agitateur pendant deux périodes de 5 minutes durant une période de mélange d'une demi-heure. *Remarque La quantité d'eau indiquée dans la formule a été déterminée dans un essai de laboratoire à petite échelle. Selon l'appareillage utilisé pour la production de lots plus importants, la quantité d'eau nécessaire pour préparer un produit granulé de consistance convenable peut varier par rapport à la quantité indiquée. 4 Lorsqu'une granulation convenable a été obtenue, maintenir le mélangeur en rotation en immobilisant le bar- reau agitateur et sécher sous vide dans le mélangeur en réglant l'eau de chauffage dans la chemise à 50-70 'C pendant 24 heures ou jusqu'à ce que la teneur en eau soit inférieure à 0,3 %. A titre de variante, le mélange peut être déchargé du mélangeur et séché à 50-60 'C dans une étuve à vide "Devine" stérile pendant 48 heures. En utilisant une technique aseptique, faire passer le mélange séché dans un broyeur apyrogène stérile convenable équipé d'une toile métallique stérile apyrogène à mailles de 0,250 mm ou d'un tamis équivalent. 6 Introduire le produit granulé stérile broyé dans un mélangeur apyrogène stérile convenable et agiter pendant une demi-heure ou jusqu'à ce que l'uniformité de la teneur ait été obtenue La poudre peut être titrée pour déterminer la teneur en chlorure périodiquement pour véri- fier l'uniformité de la teneur. 7 Conserver la poudre dans des récipients en verre opaque apyrogènes stériles convenables bouchés à l'aide d'un capuchon métallique vissable renfermant un joint de "Teflon" ou de polyéthylène A titre de variante, la quantité désirée de mélange stérile peut être laissée dans le mélangeur et la quantité désirée de cis-platine microcristallin peut être ajoutée pour produire du cis- platine injectable. Consignes de sécurité Tout le personnel impliqué dans la manipulation de ce produit doit se protéger comme suit: (a) porter un masque facial, une protection des yeux, des gants et un vêtement protecteur au cours de la préparation, du traitement et de l'emballage. (b) éviter tout contact avec le médicament par inhalation ou tout contact avec la peau. (c) nettoyer abondamment tout l'appareillage et l'aire de préparation pour supprimer une con- tamination possible par le médicament. E Cis-platine stérile à charge sèche pour l'injection ( 10 mg de cis- platine par fiole) /L'étiquette porte l'indication 10 mg de cis- platine II dichlorodiammine (cis-platine) par fiole 7. Précautions à prendre, Tout le personnel impliqué dans la répartition du lot de ce produit doit se protéger correctement comme suit (a) porter un masque facial, une protection des yeux, des gants et un vêtement protecteur pendant la préparation, le traitement et 11357 l'emballage. (b) éviter toute inhalation du médicament ou tout contact avec la peau. (c) nettoyer correctement tout l'appareillage et l'aire de préparation pour exclure une con- tamination future éventuelle. Formule Ingrédient cis-platine microcristallin apyrogène stérile chlorure de sodium apyrogène stérile ( 0,42 mm) mannitol apyrogène stérile Pour une fiole * 0,0100 g 0,0900 g Pour 100 fioles 1,00 g 9,00 g ( 0,42 mm) 0, 1000 g 10,00 g 0,2000 g 20,00 g * Ce poids de cis-platine assume une puissance de 1000 gg/mg Pour calculer la quantité de cis-platine à utiliser, appliquer la formule suivante: 1000 x 0,01009 1000 x 0,0100 g = grammes de cis-platine puissance du cis-platine par fiole en im/mgpar fiole en gm/mg Consignes pour la préparation 1 En utilisant une technique aseptique et un appareillage apyrogène stérile approprié, broyer séparé- ment le mannitol apyrogène stérile et le chlorure de sodium apyrogène stérile en particules traversant un tamis de 0,42 mm. 2 Mélanger les quantités désirées de chlorure de sodium et de mannitol apyrogènes stériles tamisés dans un appareillage mélangeur ou malaxeur apyrogène stérile appro- prié pendant 1 heure Un mélangeur en V ou un mélangeur à cône équipé d'un barreau agitateur est avantageux. 3 Faire passer le cis-platine microcristallin à travers un tamis stérile de 0,42 mm d'ouverture de maille pour éliminer tous les blocs Ajouter au mélangeur contenant le mélange venant de l'étape précédente (ou le produit granulé de l'étape D ci-dessus), la quantité désirée de cis- platine microcristallin apyrogène stérile en trois portions séparées et à peu près égales Agiter pendant 30 minutes après chaque addition Faire passer le mélange à travers un tamis stérile de 0,42 mm d'ouverture de maille et le renvoyer au mélangeur Agiter pendant 30 minutes ou davan- tage jusqu'à l'obtention d'un mélange uniforme. 4 Verser le mélange dans des récipients en verre opaque apyrogènes stériles convenables bouchés à l'aide d'un capuchon métallique vissable contenant un joint de "Teflon" Conserver l'ensemble à l'obscurité. 5 Introduire la quantité désirée de mélange dans des fioles en verre opaque apyrogènes stériles convenables. Boucher hermétiquement à l'aide d'un bouchon de caoutchouc apyrogène stérile convenable à revêtement de "Teflon" et sceller à l'aide de capsules d'aluminium Conserver les fioles à l'obscurité. 6 La fiole à 10 mg de cis-platine doit être reconstituée avec au moins 10 ml d'eau stérilisée pour injection, U S P, à 22-30 'C Une solution claire doit être obtenue en 3 minutes par agitation par secousses On note un p H de 4,0 à 5,5 Des solutions de cis-platine à une concentration supérieure à 0,5 mg/ml ne doivent pas être réfrigérées, attendu que le cis-platine se sépare en cris- taux dans la solution. REVENDICATIONS 1 Cis-platine microcristallin stable, caractérisé en ce qu'il présente une distribution de diamètres des par- ticules d'au moins environ 80 % de particules inférieures à environ 5 micromètres, moins d'environ 20 % dans la plage de 5 à 20 micromètres et essentiellement aucune particule de diamètre supérieur à 20 micromètres, la forme cristalline du cis-platine microcristallin étant aisément différenciée de celle du cis-platine lyophilisé par son diagramme de diffraction des rayons X (poudre) et le cis-platine micro- cristallin étant entièrement soluble dans l'eau en 3 minu- tes environ à une concentration de 1 mg/ml. 2 Cis-platine microcristallin suivant la reven- dication 1, caractérisé en ce qu'il présente un diagramme de diffraction des rayons X (poudre) correspondant sensi- blement aux valeurs ci-après: 2 e (degrés) Intensité Distances relative interplanaires (nanomètres) 13,81 100 0,6407 14,93 84 0,5929 16,26 71 0,5447 24,05 27 0,3697 26,57 22 0,3352 28,37 16 0,3143 ,35 13 0,2943 33,14 15 0,2701 3 Cis-platine microcristallin suivant l'une des re- vendications 1 et 2,caractérisé en ce qu'il est stérile. 4 Cis-platine microcristallin stable stérile contenu dans un récipient scellé sous la forme posologique unitaire, reconstituable avec de l'eau stérilisée en 3 mi- nutes environ à une concentration de 1 mg de cis-platine microcristallin par ml d'eau stérilisée, et convenant à l'administration intraveineuse à l'homme, ledit cis-platine microcristallin ayant une distribution de diamètres des par- ticules d'au moins environ 80 % de particules inférieures à environ 5 micromètres, moins d'environ 20 % dans la plage de 5 à 20 micromètres et essentiellement aucune particule supérieure à 20 micromètres, la forme cristalline dudit cis-platine microcristallin étant aisément différenciée de celle du cis-platine lyophilisé par le diagramme de diffraction des rayons X (poudre). 5 Forme posologique unitaire stérile de cis- platine microcristallin suivant la revendication 4, carac- térisée en ce que le cis-platine microcristallin a un diagramme de diffraction des rayons X (poudre) présentant sensiblement les valeurs suivantes: 2 e (degrés) Intensité Distances relative interplanaires _____ ______ __(nanomètres) 13,81 100 0,6407 14,93 84 0,5929 16,26 71 0,5447 24,05 27 0,3697 26,57 22 0,3352 28,37 16 0,3143 ,35 13 0,2943 33,14 15 0,2701 6 Mélange sec stable stérile de cis-platine microcristallin dans un récipient fermé sous la forme poso- logique unitaire, reconstituabie avec de l'eau stérilisée en 3 minutes environ à une concentration de 1 mg de cis- platine microcristallin par ml d'eau stérilisée et convenant à l'administration intraveineuse à l'homme, ledit mélange sec contenant également une source inorganique stérile non toxique pharmaceutiquement acceptable d'ions chlorure en une quantité équivalant à celle qui est produite par la présence de chlorure de sodium à une concentration d'envi- ron 1 à environ 20 mg par mg de cis-platine microcristallin; ledit cisplatine microcristallin ayant une distribution de diamètres des particules d'au moins environ 80 % de par- ticules inférieures à environ 5 micromètres, moins d'envi- ron 20 % dans la plage de 5 à 20 micromètres et essentielle- ment aucune particule supérieure à 20 micromètres, la forme cristalline dudit cis-platine microcristallin étant aisé- ment différenciée de celle du cis-platine lyophilisé par son diagramme de diffraction des rayons X (poudre). 7 Mélange sec suivant la revendication 6, carac- térisé en ce que la source inorganique d'ions chlorure est le chlorure de sodium. 8 Mélange sec suivant la revendication 7, carac- térisé en ce que le chlorure de sodium est présent à une concentration d'environ 9 mg/mg de cis-platine microcris- tallin. 9 Mélange sec stable stérile de cis-platine microcristallin dans un récipient fermé, sous la forme posologique unitaire, reconstituable avec de l'eau stéri- lisée en 3 minutes environ à une concentration de 1 mg de cis-platine microcristallin par ml d'eau stérilisée, et convenant à l'administration intraveineuse à l'homme, ledit mélange sec contenant également un excipient classique inoffensif,physiologiquement acceptable,à une concentration d'environ 2 à environ 150 mg/mg de cis-platine microcris- tallin, ledit cis-platine microcristallin ayant une dis- tribution de diamètres des particules d'au moins environ % de particules inférieures à environ 5 micromètres, moins d'environ 20 % dans la plage de 5 à 20 micromètres et essentiellement aucune particule supérieure à 20 micro- mètres, la forme cristalline dudit cis-platine microcris- tallin étant aisément différenciée de celle du cis-platine lyophilisé par son diagramme de diffraction des rayons X (poudre). Mélange sec suivant la revendication 9, carac- térisé en ce que l'excipient est le mannitol. 11 Mélange sec suivant la revendication 10, caractérisé en ce que le mannitol est présent à une con- centration d'environ 10 mg par mg de cis-platine micro- cristallin. 12 Mélange sec stable stérile de cis-platine microcristallin dans un récipient fermé sous la forme poso- logique unitaire, reconstituable avec de l'eau stérilisée en 3 minutes environ à une concentration de 1 mg de cis-platine microcristallin par ml d'eau stérilisée, et convenant à l'administration intraveineuse à l'homme, ledit mélange sec contenant aussi une source inorganique stérile non toxique, pharmaceutiquement acceptable,d'ions chlorure en une quantité équivalant à celle qui est produite par la présence de chlo- rure de sodium à une concentration d'environ 1 à environ mg/mg de cisplatine microcristallin et un excipient classique inoffensif physiologiquement acceptable à une concentration d'environ 2 à environ 150 mg/mg de cis-platine microcristallin, ledit cis-platine microcristallin ayant une distribution de diamètres des particules d'au moins environ 80 % de particules inférieures à environ 5 micro- mètres, moins d'environ 20 % dans la plage de 5 à 20 micro- mètres et essentiellement aucune particule supérieure à micromètres, la forme cristalline du cis-platine micro- cristallin étant aisément différenciée de celle du cis- platine lyophilisé par son diagramme de diffraction des rayons X (poudre). 13 Mélange sec suivant la revendication 12, caractérisé en ce que la source inorganique d'ions chlorure est le chlorure de sodium et l'excipient est le mannitol. 14 Mélange sec suivant la revendication 13, caractérisé en ce que le chlorure de sodium est présent à une concentration d'environ 9 mg/mg de cis-platine micro- cristallin et le mannitol est présent à une concentration d'environ 10 mg/mg de cis-platine microcristallin. Mélange sec suivant l'une quelconque des revendications 6 à 14, caractérisé en ce que le cis-platine microcristallin a un diagramme de diffraction des rayons X (poudre) présentant sensiblement les valeurs suivantes 2 e (degrés) Intensité Distances inter- relative planaires (manomètres) 13,81 100 0,6407 14,93 84 0,5929 16,26 71 0,5447 24,05 27 0,3697 26,57 22 0,3352 28,37 16 0,3143 ,35 13 0,2943 33,14 15 0,2701 16 Procédé de préparation de cis-platine micro- cristallin, caractérisé en ce qu'il comprend les étapes successives consistant: a) à prendre une première solution comprenant un amide organique liquide renfermant, en volume, environ 1 à environ 20 % d'acide chlorhydrique aqueux ayant une concentration d'environ 6 N à environ 12 N; b) à dissoudre du cis-platine dans ladite pre- mière solution en une quantité d'environ 10 à environ 60 g/l de ladite première solution pour obtenir ume seconde solu- tion; c) à ajouter à la seconde solution, en agitant, environ 0,5 à environ 5 volumes d'eau ou d'acide chlorhy- drique aqueux dilué ayant une concentration atteignant environ 0,2 N à une température d'environ 10 à environ 400 C pour former du cis-platine microcristallin; d) à recueillir le cis-platine microcristallin par filtration; e) à laver le cis-platine microcristallin recueilli avec de l'acide chlorhydrique aqueux dont la concentration peut atteindre environ 0,2 N; f) à laver ensuite éventuellement le cis-platine microcristallin avec un solvant organique volatil inerte miscible à l'eau; et g) à sécher éventuellement le cis-platine micro- cristallin lavé. 17 Procédé suivant la revendication 16, carac- térisé en ce que l'amide organique liquide est un amide tertiaire. 18 Procédé de préparation de cis-platine micro- cristallin, caractérisé en ce qu'il comporte les étapes successives consistant a) à prendre une première solution comprenant un amide tertiaire organique liquide renfermant, en volume, environ 5 à environ 15 % d'acide chlorhydrique aqueux ayant une concentration d'environ 12 N; b) à dissoudre le cis-platine dans ladite première solution en une quantité d'environ 40 g/l de ladite première solution pour obtenir une seconde solution; c) à adjoindre à ladite seconde solution, en agitant, environ 2, 5 volumes d'eau ou d'acide chlorhydrique dilué à la température ambiante pour former du cis-platine microcristallin; d) à recueillir le cisplatine microcristallin par filtration; e) à laver le cis-platine microcristallin recueilli avec de l'acide chlorhydrique aqueux ayant une concentration allant jusqu'à environ 0,2 N; f) à laver ensuite éventuellement le cis-platine microcristallin avec un solvant organique volatil inerte miscible à l'eau; et g) à sécher éventuellement le cis-platine micro- cristallin lavé. 19 Procédé suivant la revendication 18, carac- térisé en ce que l'amide organique tertiaire liquide est un N,Ndialkylformamide, un N,N-dialkylacétamide ou la N-méthyl-2-pyrrolidinone. Procédé de préparation d'un cis-platine micro- cristallin, caractérisé en ce qu'il comprend les étapes successives consistant a) à prendre une première solution comprenant du diméthylformamide renfermant, en volume, environ 10 % d'acide chlorhydrique aqueux ayant une concentration d'en- viron 12 N; - b) à dissoudre du cis-platine dans la première solution en une quantité d'environ 40 g/l de ladite pre- mière solution pour obtenir une seconde solution; c) à adjoindre à la seconde solution, en agitant, environ 2 volumes d'acide chlorhydrique aqueux dilué ayant une concentration d'environ 0,1 N à une température de l'ordre de la température ambiante pour former du cis- * -platine microcristallin; d) à recueillir le cis-platine microcristallin par filtration; e) à laver le cis-platine microcristallin recueilli avec de l'acide chlorhydrique aqueux ayant une concentration d'environ 0,1 N; f) à laver ensuite éventuellement le cis-platine microcristallin avec un solvant organique volatil inerte miscible à l'eau choisi entre des alcanols inférieurs et des di-(alkyle inférieur)-cétones; et g) à sécher éventuellement le cis-platine micro- cristallin lavé.