Brevet FR2504929A1 — publié le 19821105

La présente invention a pour objet un sel mixte de sulfate de glucosamine et de chlorure de sodium, un procédé pour sa préparation et son utilisation dans la préparation de formes pharmaceutiques impossibles ou difficiles à obtenir autrement à partir du sulfate de glucosamine. Le sulfate de glucosamine est une substance bien connue et extrêmement importante dans le traitement de la fièvre rhumastismale, des douleurs arthritiques et arthrosiques, à la fois sous les formes aigués et chroniques, et, d'une manière générale, de tous les états pathologiques dérivant de troubles métaboliques du tissu ostéo- articulaire. La synthèse du sulfate de glucosamine a été décrite par Breuer en 1898 (Chem Ber 31, page 2197) et un procédé industriel fait l'objet du brevet britannique n'1 056 331, du brevet des Etats- Unis d'Amérique N O 3 683 076 et du brevet suisse N O 525 861, tous au nom de la demanderesse. Cependant, il n'a pas été possible jusqu'à présent d'éliminer plusieurs propriétés défavorables de ce composé, en parti- culier sa nature fortement hygroscopique et la facilité avec laquelle son groupe amino s'oxyde s'il n'est pas complètement salifié. Ces propriétés défavorables donnent lieu à des difficul- tés et des limitations dans l'utilisation pratique du sulfate de glucosamine Par exemple, les formes pour l'administration orale, telles que comprimés ou capsules, nécessitent la présence dans leur composition d'antioxydants, tels que l'hyposulfite de sodium, mais ces substances, bien que bloquant l'oxydation du groupe amino,laissent sans solution le problème de la nature hygroscopique du sulfate; ceci nécessite la préparation de ces formes dans des milieux d'humidité relative ne dépassant pas 307, avec des résultats qui sont même alors-insuffisants et une durée de stabilité qui est prati- quement insuffisante pour leur utilisation Des commentaires semblables sont valables pour les formes par voie rectale (suppositoires) qui, même maintenues à l'état réfrigéré et sec, se dégradent avec une rapidité considérable. Il reste les formes injectables qui sont assez délicates à préparer mais qui sont suffisamment stables pour les applications pratiques Il n'est pas possible de fabriquer des préparations séchées par congdlation, puisque l'on obtient de manière invariable des produits ayant l'aspect et la consistance d'huiles visqueuses, qui sont donc pratiquement inutilisables. La demanderesse a maintenant découvert selon l'invention qu'il est possible de stabiliser le sulfate de glucosamine par for- mation d'un sel mixte avec le chlorure de sodium Ce résultat est certainement surprenant en ce qu'il n'était pas prévisible qu'un sel hygroscopique, tel que le sulfate de glucosamine, puisse être stabi- lisé par le chlorure de sodium qui est un autre sel hygroscopique. Le sel mixte qui fait l'objet de l'invention et qui est dénomdmé ci-aprs en abrégé "glucosamine-SP" est constitué par un réseau ionique dans lequel les cations sont constitués par la gluco- samine protonée et Na, et les anions sont Cl et SO 4 Ces cations et anions étant distribués d'une manière telle que la formule la + + 2 plus simple est 2 (C 6 H 14 NO 5) z 2 Na,504 2 C 1 et la formule développée est: CH 2 OH 0H O OH H+ 2 OH 20 t,2 Na+,504,2 C 1 ' H NH(D N 3 Son point de fusion est supérieur à 300 C et sa sensibilité à l'humidité relative ambiante, même à températures élevées (comme on le verra ci-dessous), est pratiquement négligeable. Le procédé de préparation de la glucosamine-SP comprend essentiellement les étapes suivantes: dissolution du chlorure de sodium en particules sèches avec agitation dans une quantité d'eau distillée qui peut varier entre 5,5 et 7,5 fois (de préférence 6,5 fois) le poids du chlorure de sodium lui-même, à une température de 50 à 70 C (de préférence 60 C); dissolution dans la solution obtenue de la quantité stoechiométrique de sulfate de glucosamine à une température de la solution de 35 à 450 C (de préférence 400 C)- en agitant; précipitation de la glucosamine-SP par addition d'un précipitant liquide qui est miscible avec l'eau et dans lequel la glucosamine-SP a une solubilité ne dépassant pas 0,1 % en poids par volume, tout en opérant avec agitation à une température de 40 à 'C (de préférence 450 C); achèvement de la précipitation à une température réduite; et récupération de la glucosamine-SP précipitée. Les précipitants liquides qui peuvent être utilisés sont, par exemple, l'acétone, l'éthanol, l'acétonitrile, le tétra- hydrofuranne et le dioxanne, et on les ajoute de préférence en quantitésde 5 à 7 volumes (de préférence 6 volumes) pour 1 volume de l'eau distillée utilisée pour la dissolution des sels de départ. Avantageusement, l'addition du précipitant liquide est effectuée en une durée de 2 h 30 min à 3 h 30 min (de préférence 3 h), après quoi la suspension résultante de glucosamine-SP est maintenue sous agitation lente pendant une nouvelle durée variable entre 12 et 24 h (de préférence 18 h) et à une température de 25 à 350 C (de-préférence 'C) pour permettre à la fois la précipitation complète et la croissance correcte des cristaux Lorsque la durée nécessaire s'est écoulée, on refroidit encore la masse réactionnelle à une température de O à 10 'C (de préférence 50 C) et on sépare par filtration les cristaux de glucosamine- SP et on les sèche dans un four à circulation d'air, par exemple à une température de 45 à-650 C (de préférence 550 C) pendant une durée qui peut varier de 12 à 24 h (de préférence 18 h). Le sulfate de glucosamine qui est utilisé avec le chlorure de sodium dans la synthèse peut être préparé sensiblement comme décrit dans le brevet suisse N O 525 861 par libération de la gluco- samine de son chlorhydrate dans un milieu hydroalcoolique en présence de triéthylamine et traitement ultérieur de la base obtenue dans un milieu acétonique par la quantité stoechiométrique d'acide sulfurique concentré pour donner le sulfate de glucosamine Dans le brevet cité ci-dessus, on utilise l'éther éthylique mais, dans des préparations industrielles à grande échelle, on préfère utiliser l'acétone qui est beaucoup moins dangereuse et, en outre, donne un produit ayant les mêmes caractéristiques que celles décrites dans ce brevet. Les exemples suivants illustrent l'invention sans toutefois en limiter la portée. EXEMPLE 1 Préparation de la glucosamine-SP utilisant l'acétone comme agent précipitant. On charge 75 ml d'eau distillée dans un ballon à quatre tubulures d'un volume utile de 750 ml, muni d'un agitateur à palettes, d'un thermomètre et d'un condenseur et on chauffe le ballon à une température de 600 C dans un bain chauffé électriquement On ajoute avec agitation modérée ( 170 + 10 tr/min) 11,68 g ( 0,2 mole, PM 58,4) de chlorure de sodium préalablement séché à poids constant dans un four à 70 C et on maintient la masse en agitation à 60 C jusqu'à ce que le solide soit totalement dissous, ce qui dure environ 20 min. D'une manière générale, on doit effectuer l'agitation de manière à éviter à la fois le dépôt de particules dans le fond du ballon et leur projection contre les parois puisque, dans l'un ou l'autre cas, la dissolution deviendrait plus difficile. Lorsque le solide est complètement dissous, on abaisse la température à 40 'C et on ajoute 45,64 g ( 0,1 mole, PM 456,4) de sulfate de glucosamine (préalablement préparé et maintenu dans un milieu à une humidité relative ne dépassant pas 30 % et une tempé- rature ne dépassant pas 15 'C), en maintenant la température et l'agitation à 170 10 tr/min pour les raisons indiquées ci-dessus. Pendant cette étape, une température de plus de 45 WC entraînerait un jaunissement du produit, tandis que, b une température inférieure à 350 C, le sulfate de glucosamine se dissoudrait trop lentement pour les applications pratiques. Dans les conditions recommandées, le sulfate se dissout complètement en environ 45 min, après quoi on amène la température à 45 WC et on effectue la précipitation A des températures inférieures à 450 C, la précipitation a lieu trop rapidement avec formation d'agglomérats cristallins qui peuvent encapsuler un peu de solvant et d'impuretés, tandis que, audessus de 50 C, il peut se produire un jaunissement indésirable de la suspension On effectue la préci- pitation en utilisant 450 ml d'acétone que l'on ajoute goutte à goutte 2 0 449 29 en une durée de 3 h En moins de 2 h 30 min, la précipitation a lieu trop rapidement, tandis qu'une durée de plus de 3 h 30 min n'offre pas d'avantage pratique On effectue l'agitation à 10 tr/min pendant la précipitation, ce qui assure un équilibre correct entre l'homogénéisation des phases et la formation de la quantité optimale de germes de cristallisation. Lorsque l'addition de l'agent précipitant est terminée, la précipitation est achevée et le précipité est conditionné par abaissement de la température à 300 C et réduction de la vitesse d'agitation à 100 10 tr/min pendant une durée de 18 h On obtient dans ces conditions un produit de pureté élevée,puisque la température de 30 C dans le stade de conditionnement favorise l'expulsion des éventuelles impuretés et la réorganisation des cristaux, avec absorption des ions restant éventuellement dans la solution, tandis que l'agitation douce permet de maintenir constamment toute la masse précipitée en contact avec la solution sans altérer l'uniformité de la masse cristalline La durée indiquée ci-dessus est celle nécessaire pour permettre l'achèvement des processus décrits ci-dessus Après 18 h, la température est abaissée à 50 C à l'aide d'un bain glace-eau et on filtre la masse cristalline obtenue sur un entonnoir Buchner. Après avoir bien pressé la masse pour éliminer la plus grande quantité possible de liqueur mère, on la transfère dans un four à circulation d'air et on sèche à 550 C pendant 18 h. On obtient 50,5 g (rendement 88,1 Z) de cristaux blanc crémeux d'un goût amer. La glucosamine-SP ainsi préparée a les caractéristiques suivantes: Microanalyse pour C 1228 Ci 2 N 2 Na 25 014 calculée, %X trouvée, % carbone 25,14 25,02 hydrogène 4,92 4,70 azote 4,88 4,85 titre en glucosamine 97,5 102,5 % (d'après Elson L A - Morgan W T J: Biochen J, 27, page 1824 ( 1933)) titre en sulfate 97,5 102, 5 %(par précipitation par Ba C 12 et titration par I'EDTA dans un milieu alcalinisé par NH 3, en présence de "Noir-Eriochrome T"-rhodizonate de sodium 2:1 comme indicateur). titre en chlorure 97,5 102,5 % (méthode argentométrique). titre en sodium 97,5 102,55 ' (photométrie de flamme). Aspect, couleur, odeur: Poudre cristalline, couleur crème brillant, pas d'odeur et goût très amer. Solubilité (% en poids par volume à 25 C): On effectue cet essai en préparant des solutions saturées de glucosamine-SP dans divers solvants et en déterminant la concentration de la glucosamine par la méthode colorimétrique d'Elson-Morgan mentionnée ci-dessus. Eau: très soluble (,YJ 40 %). Méthanol: légèrement soluble (,/ 1 %). Ethanol: très légèrement soluble ( -x 0,03 %). Acétone, acétonitrile, tétrahydrofuranne, dioxanne: pratiquement insoluble ( Benzène, chloroforme, tétrachlorure de carbone, chlorure de méthylène, essence de pétrole, éther éthylique: insoluble. Valeur de p H: Le p H d'une solution aqueuse saturée de glucosamine-SP à 20 C est de 3,0 0,2. Coefficient de partage (K): Le coefficient de partage (K) de la glucosamine-SP, mesuré à 25 C dans un mélange de tampon au phosphate (p H 6,8) et de n-octanol, a une valeur qui tend vers l'infini. Point de fusion: > 300 C (avec décomposition partielle au-dessus de 2000 C). Rotation spécifique:llO = + 52,1 (à l'équilibre en solution aqueuse à 10 %). Perte de poids au séchage: O O,57 (à 40 C/21,5-24,2 mobar pendant 8 h en prdsence de trioxyde de soufre). EXEMPLE 2 Préparation de glucosamine-SP utilisant l'éthanol comme agent précipitant. Le mode opératoire est comme décrit à l'exemple 1, sauf qu'on utilise l'éthanol absolu au lieu d'acétone On obtient 48,9 g (rendement 85,3 %) de glucosamine-SP ayant les mêmes caracté- ristiques que celles décrites à l'exemple 1. EXEMPLE 3 Préparation de la glucosamine-SP utilisant I'acétonitrile comme agent précipitant. Le mode opératoire est comme décrit à l'exemple f, sauf qu'on utilise l'acétonitrile au lieu d'acétone On obtient 51,2 g (rendement 89,3 %) de glucosamine-SP ayant les caractéristiques décrites à l'exemple 1. EXEMPLE 4 Préparation de glucosamine-SP utilisant le tétrahydrofuranne comme agent précipitant. Le mode opératoire est comme décrit à l'exemple 1, sauf qu'on utilise le tétrahydrofuranne au lieu d'acétone On obtient 48,1 g (rendement 83,9 %) de glucosamine-SP ayant les caractéristiques décrites à l Vexemple 1. EXEMPLE 5 Préparation de la glucosamine-SP utilisant le dioxanne comme agent précipitant. Le mode opératoire est comme décrit à l'exemple 1, sauf qu'on utilise le dioxanne au lieu d'acétone On obtient 47,6 g (rendement 83,04 %) de glucosamine-SP ayant les caractéristiques décrites à l'exemple 1. En vue d'établir nettement la différence de stabilité entre la glucosamine-SP préparée par la méthode décrite ci-dessus et le sulfate de glucosamine (préparé comme décrit dans le brevet suisse n 525 861 cité précédemment), on effectue des essais comparatifs de stabilité dans diverses conditions de température et d'humidité relative. On prend en considération deux paramètres pour l'évaluation, à savoir l'aspect extérieur des substances essayées et le titre en glucosamine en pourcent, déterminé par la méthode calorimétrique d'Elson-Morgan préalablement citée. L'aspect extérieur du sulfate de glucosamine est évalué selon une échelle graduée de 1 à 6, dont la signification est la suivante: 1:poudre microcristalline de couleur blanc-crème 2:léger jaunissement avec formation de quelques grumeaux 3:net jaunissement avec de nombreux grumeaux plus foncés 4:coloration brun brillant et consistance pâteuse :pâte visqueuse de couleur brune 6:liquide brun foncé Cette échelle ne s'avère pas nécessaire pour la gluco- samine-SP,puisque son aspect reste le même dans tous les essais et, en conséquence, la valeur qui lui est attribuée est toujours 1. Les résultats obtenus sont indiqués dans les tableaux I à VI ci-après. Il ressort clairement des résultats indiqués dans les tableaux I à VI que le sulfate de glucosamine est une substance particulièrement instable puisqu'il est facilement oxydé et fortement hygroscopique Il est clair que les conditions dans lesquelles on le conserve sont très importantes (en particulier l'humidité relative ambiante) et doivent âtre rigoureusement réglées On ne peut obtenir une stabilité d'environ 4 à 5 mois qu'à des températures de moins de 150 C, avec une humidité relative de pas plus de 30 %, tandis que, à 250 C dans les mêmes conditions d'humidité relative, des signes de dégradation se manifestent mâme après environ 60 jours En outre, si les conditions de température et d'humidité sont celles que l'on considère comme normales ( 250 C et 607 d'humidité relative), les premiers signes de dégradation apparaissent même après 4 h et le sulfate de glucosamine est complètement décomposé après à peine 36 h. Au contraire, la glucosamine-SP se révèle particuliè- rement stable à la chaleur et à l'humidité et elle est donc facile à conserver et parfaitement utilisable dans des techniques pharmaceutiques On voit d'après les essais décrits ci-dessus que, après un an à 25 C et une humidité relative de 60 %, il est parfaitement conservé et, en outre, les essais montrent que c'est seulement en opérant dans des conditions extrêmement rigoureuses, c'est-à-dire à 40 C et 85 % d'humidité relative, qu'il est possible d'observer un léger foncement de la couleur et un faible abaissement du titre en glucosamine (environ 3 à 47) après 12 mois et celui-ci reste ensuite constant dans les mêmes conditions de conservation pendant les 12 mois suivants. Partie pharmacotoxicologique Bien qu'il y ait des différences nettes dans les caractéristiques physico-chimiques, la stabilité et les conditions de conservation du sulfate de glucosamine et de la glucosamine-SP, leurs propriétés pharmacotoxicologiques sont pratiquement identiques. On donne ci-dessous comme confirmation les procédés et les résultats des essais des deux substances à la fois "in vitro" et "in vivo" quant à leurs activités pharmacobiologiques, outre les résultats des essais de toxicité aigué effectués sur deux espèces animales par des techniques différentes d'administration. ACTIVITE BIOLOGIQUE "IN VITRO" Stimulation de la synthèse des glucosamino-glucanes (GAG) dans les cultures de fibroblastes d'embryons de souris évaluation effectuée par absorption de 355. Les fibroblastes sont des cellules embryonnaires qui, par différenciationssuccessives, donnent lieu à des types différents du tissu conjonctif et, par conséquent, du tissu ostéo-cartilagineux. Ces cellules fournissent donc un modèle expérimental très intéressant pour l'évaluation des éventuels effets pharmaco- biologiques (tant positifsque négatifs) induits par des substances étudiées sur les tissusrésultant de ce substrat cellulaire, et en particulier sur le tissu articulaire. On donne ci-après les techniques et les résultats d'un essai concernant l'absorption de 35 S par les mucopolysaccharides sulfatés (GAG), principalement le sulfate de chondro tine, à la fois au niveau cellulaire et au niveau extra-cellulaire, o l'absorption de 35 S est par conséquent proportionnelle à la vitesse à laquelle les GAG sont synthétisés par les fibroblastes A cet effet, on prépare des cultures primaires de fibroblastes d'embryons de souris (souche C 57 BL/6 st Crl) par dissociation mécanique et enzymatique (dans un mélange Trypsine-Versène, de la Société Microbiological Associates) des embryons prélevés sur la mère au 18 e jour de gestation Le milieu de culture est le milieu de Eagle modifié par Dulbecco et avec un supplément de 15:' de sérum de foetus de veau L'atmosphère d'incubation consiste en 5 % de dioxyde de carbone dans l'air à 37 C Au bout de 24 h apr:s l'inoculation, on remplace le milieu par un nouveau milieu ctnrenant le médicament étudié et le précurseur radioactif (Na 35 SO) pour la nesure de la synthèse des GAG à la fois solubles et fixés at Lxtissus;on laisse incuber la culture pendant encore 24 h et ensuite on sépare le milieu de culture (contenant le GAG soluble) et les fibroblastes (contenant les GAG fixés auxtissus). On isole les GAG solubles du milieu de culture par précipitation par une solution d'acide trichloroacétique à 5 % 7 dans l'eau glacée, tandis que l'on dissout dans le "Dimilume" ou dans le "Versène" (Edétate de Na) les résidus de fibroblastes contenant les GAG liés auxtissus, après lavages répétés par des solutions physio- logiques. La quantité de 35 S incorporée à la fois dans les GAG solubles et dans les GAG fixés au Lxtissusest évaluée par les méthodes habituelles de scintillation et exprimée en coups par minute. Les essais sont effectués cinq fois pour chaque échan- tillon en vue de permettre l'évaluation statistique des résultats. Les résultats obtenus sont indiqués dan: les tableaux VII et VIII ci-après. Dans ces tableaux, la signifiance statistique est évaluée par l'essai "t" de Student. Donc, les valeurs "t" de Student concernant la compa- raison entre des groupes de valeurs étudiées sont données dans les colonnes t et t 2 tandis que les colonnes let P 2 indiquent les probabilités statistiques que les groupes comiparés de valeurs appar- tiennent à la même population. Donc, la notation N S indique que les groupes de valeurs comparées ne présentent pas, du point de vue statistique, une différence significative. On suppose cependant que deux groupes de valeurs comparées sont statistiquement différents lorsque p est égal à 0,05, en fonction de la valeur "t" et des degrés de liberté. En outre, dans les tableaux VII et VIII ( 1) t 1 et p 1 concernent la comparaison entre les groupes traités et les groupes non traités. ( 2): t 2 et P 2 concernent la comparaison entre des groupes traités avec des doses égales, à savoir: sulfate de glucosamine à 10 y/ml, glucosamineSP à 12,5 y/ml, etc. ( 3): teneurs en sulfate de glucosamine 12,5, 62,5 et 125 y/ml. D'après les résultats indiqués dans les tableaux VII et VIII, on peut voir que le sulfate de glucosamine et la glucosamine-SP, à la même concentration, ont la même activité de stimulation de la synthèse des GAG solubles et fixés auxtissoe par les fibroblastes d'embryons de souris. ACTIVITE PHARMACOLOGIQUE "IN VIVO" Activité antiinflammatoire dans les essais sur le granulome induit par des boulettes de coton. L'essai consiste à évaluer la capacité des substances étudiées à inhiber la formation du granulome consécutive à l'implan- tation sous-cutanée de corps étrangers, dans ce cas des boulettes de coton ("pellets"). On utilise 40 rates albinos de la souche Sprague Dawley, ayant un poids d'environ 130 g, subdivisées au hasard en 5 groupes de 8 animaux. On utilise un groupe d'animaux comme groupe témoin Les 4 autres groupes sont traités par voie orale avec des doses de 300 et 600 mg/kg de sulfate de glucosamine et des doses de 375 et 750 mg/kg de glucosamine-SP (correspondant à 300 et 600 mg/kg,respectivement, de glucosamine). Après l'implantation sous-cutanée de deux boulettes de- coton d'un poids de 20 mg chacune dans la région dorsale, on administre journellement aux animaux pendant 4 jours consécutifs les substances étudiées aux doses indiquées ci-dessus. Après la fin du traitement, on prélève les granulomes sur les animaux qui ont été sacrifiés par anesthésie prolongée à l'éther, puis on les sèche dans un four à une température de 6 00 C pendant 24 h et ensuite on les pèse. Les résultats obtenus sont indiqués dans le tableau IX ci-après. On peut voir d'après les résultats indiqués dans le tableau IX que le sulfate de glucosamine et la glucosamine-SP ont également la même activité pharmacologique "in vivo". Plus précisément, pour la même dose, les deux substances sont équivalentes du point de vue pharmacologique. TOXICITE AIGUE A Chez la souris On utilise pour chaque dose et pour chaque mode d'administration des souris Swiss NMRI ayant un poids moyen de 20 2 g, subdivisées en groupes de 10 animaux ( 5 femelles et 5 mâles). Les méthodes d'administration sont: administration orale par sonde gastrique, intramusculaire et endoveineuse dans la veine caudale. La durée d'observation après chaque administration est de 10 jours. Les doses utilisées et les résultats obtenus sont indiqués dans le tableau X ci-après. B Chez le rat: On utilise pour chaque dose et pour chaque méthode d'administration des rats albinos Sprague Dawley ayant un poids moyen d'environ 150 g, divisés en deux groupes de 10 animaux ( 5 femelles et 5 mâles). Les méthodes d'administration: par voie orale au moyen d'une sonde gastrique, intramusculaire et endoveineuse dans la veine caudale. La durée d'observation après administration est de 10 jours. Les doses utilisées et les résultats obtenus sont indiqués dans le tableau XI ci-apr Zs. Comme on peut le voir dans les tableaux X et XI ci-après, même à des teneurs de toxicité aiguê, on ne trouve pas de différence entre le sulfate de glucosamine et la glusamine-SP Pour toutes les méthodes d'administration et toutes les espèces d'animaux essayées, les deux composés ont une toxicité si faible qu'il n'y a pas de mortalité, même à des doses très élevées, de sorte qu'il est diffi- cile d'établir exactement une valeur précise de la DL 50. Du fait que la glucosamine-SP a les mêmes caractéris- tiques pharmacotoxicologiques et pharmacocinétiques que le sulfate de glucosamine, il estclair que la première, grâce à ses propriétés de stabilité et de facilité de préparation, représente un net progrès dans l'état de la technique En conséquence, on donne ci-après un certain nombre d'exemples de compositions de préparations pharmaceu- tiques contenant de la glucosamine-SP On notera qu'elles diffèrent des compositions décrites dans le brevet des Etats-Unis d'Amérique n O 3 863 076 pour les formes contenant du sulfate de glucosamine en ce qu'elles ne contiennent pas d'ingrédients stabilisants ou conser- vateurs ou d'antioxydants,puisqu'elles ne présentent pas de problèmes quant à leur préparation, leur conservation ou leur stabilité. Préparations de formes pharmaceutiques pour l'administration orale 1 Capsules Glucosamine-SP 314 mg Amidon de maïs 60 mg Lactose 28,5 mg Stéarate de magnésium 5 mg Talc 2,5 mg On mélange les composants jusqu'à obtenir un mélange homogène, on tamise au tamis de 0,59 mm et on en remplit des capsules de gélatine. Chaque capsule contient 410 mg de poudre, ce qui cor- respond à 314 mg de glucosamine-SP. 2 Comprimés Clucosamine-SP 314 -g Lactose 42 Polyvinylpyrrolidone 20 ig Carboxyméthoxycellulose de sodium 10 mg Dioxyde de silicium 5 mg Stéarate de magnésium 5 rg Talc 4 mg On forme une pâte de glucosamine-SP, polyvinylpyrr lidone et lactose avec l'éthanol à 95 %, on sèche la pâte à 45 C, on granule et on tamise au tamis de 0,84 l:ml On ajoute les autres ingrédients aux granulés obtenus et on mélange jusqu'à ce que le méldange soit homogène. On moule ensuite le mélange par compression pour former des comprimés ayant un poids de 400 mg et contenant 314 mg de glucosamine- SP. 3 Dragées Glucosamine-SP 314 mg Amidon de ma'is 50,4 mg Polyvinylpyrrolidone 6,4 mg Monostéarate de glycéryle 12,8 mg Méthylcellulose 3,6 mg Acide stéarique 4 mg Dioxyde de silicium 0,8 mg Saccharose 65,3 mg Talc 90,9 mg Carbonate de calcium 25 mg Gomme arabique 4,3 mg Stéarate de magnésium 5,6 mg Gomme-laque 16,7 mg Huile de ricin 0, 3 Y mg Dioxyde de titane 3,8 ng Cire d'abeilles blanche 0,05 mg On mélange la glucosamine-SP, l'amidon, la polyvinyl- pyrrolidone, le monostdarate de glycéryle, la méthylcellulose, l'acide stéarique et le dioxyde de silicium jusqu'e un mélange homogène, on passe au tamis de 0,59 mm et on moule par compression pour former des noyaux de 392 mg On enduit les noyaux ainsi préparés: dans une machine d'enrobage, avec une suspension de talc, de stéarate de magnésium, de gomme-laque et d'huile de ricin dans-l'éthanol à 95 % et on sèche ensuite pendant 12 h à 35 O C. On obtient des dragées primaires de 415,7 mg que l'on enduit encore avec une suspension aqueuse préalablement préparée contenant le saccharose, du talc, le carbonate de calcium, la gomme arabique et le dioxyde de titane Après séchage à 30-35 C pendant 12 h, on obtient desdragées de 603,95 mg qui sont enfin polies avec la cire d'abeilles. Le poids final des dragées est de 604 mg et la teneur en glucosamine-SP est de 314 mg. Préparationsde formes pharmaceutiques pour l'administration rectale Glucosamine-SP 314 mg Glycérides semi-synthétiques 1586 mg Monostéarate de polysorbitanne 80 mg H 20 distillée 20 mg On fait fondre les glycérides semi-synthétiques à 45 C avec agitation constante; toujours en agitant, on ajoute un mélange préalablement préparé d'eau et de monostéarate de sorbitanne et enfin on ajoute la glucosamine-SP qui a été préalablement micronisde à une dimension de particules de 5 à 20/u. On laisse le mélange sous agitation pendant 30 min, c'est-à-dire jusqu'à dispersion complète, puis on l'injecte dans des enveloppes en chlorure de polyvinyle qui sont soudées après refroi- dissement. On obtient des suppositoires pesant 2000 mg contenant 314 mg de glucosamine-SP. Préparations de formes pharmaceutiques utilisables pour les injections intramusculaires, intraveineuses et intra-articulaires 1 Fioles Fiole A: Glucosamine-SP 502,5 mg Chlorhydrate de lidocaine 10 mg H 20 pour injection qsp 2 ml Fiole B Diéthanolamine 24 mg H 20 pour injection qsp 1 m I Préparation de la fiole A On dissout dans l'eau la glucosamine-SP et le chlorhydrate de lidocaine dans les proportions indiquées, en agitant, on filtre sous atmosphère de gaz inerte à travers une membrane filtrante ayant une porosité de 0,45, et on introduit la solution dans des fioles de 3 ml qui sont enfin stérilisées à 115-1200 C pendant 30 min dans un autoclave à courant de vapeur. Préparation de la fiole B: On dissout la diéthanolamine dans l'eau en agitant dans la proportion indiquée, on filtre sous atmosphère de gaz inerte à travers une membrane filtrante ayant une porosité de 0,45 et l'on introduit la solution dans des fioles de 1 ml qui sont enfin stéri- lisées à 115-120 o C pendant 30 min dans un autoclave à courant de vapeur. On obtient des paires de fioles de 3 Ml et 1 ml, dont on mélange immédiatement le contenu avant l'emploi Ce recours est dû au fait que le p H naturel de la glucosamine-SP, aux concentrations indiquées, est d'environ 3 et donc inacceptable physiologiquement. Pour atteindre un p H physiologiquement tolérable, il est nécessaire d'ajouter une base (telle que la diéthanolamine) avec libération conséquente du groupe amino de la glucosamine qui, comme on l'a indiqué ci-dessus, est facilement décomposable Donc, pour des raisons de stabilité, on utilise des paires de fioles dont on mélange le contenu immédiatement avant l'emploi, avec le double avantage d'avoir un produit qui est stable dans le temps (fiole A) et qui, par addition de la base (fiole B), donne un p H physiologique et, par conséquent, tolérable. 2 Préparation séchée par congélation Glucosamine-SP 502,5 mg Chlorhydrate de lidocaine 10 mg Diéthanolamine 20 mg On dissout les composants dans le volume désiré d'eau stérile pour injection, on filtre sous atmosphère de gaz inerte à travers une membrane filtrante ayant une porosité de 0,45/u et on sèche par congélation dans de petits ballons On obtient un résidu solide blanc qui, à l'emploi, est-dissous dans 2 ml d'eau stérile pour injection avec une durée de pas plus de 30 S (p H 6,8). Il est entendu que l'invention que l'invention n'est pas limitée aux modes de réalisation préférés décrits ci-dessus à titre d'illustration et que l'homme de l'art pourra y apporter des modifications sans sortir du cadre de l'invention. TABLEAU I S'tabilité de la glcosamnine-SP et du sulfate de glucosamine à 150 C et 307 d'humidité relative Temps Sulfate de Glucosïamine-SP (jours) glucosamine Aspect Titre Aspect Ti tre O 1 98 7 7 1 99, 3 1 100,7 % i 98,4 % 1 101,> 5 % 30 i 99,3 % i 101,1 % i 98,1 i I 100,4 % 2 97,2 % 101,9 % 360 2-3 84,1 % 100,7 % *TABLEAU Il Stabilité de la glucosamine-SP et du glucosamine à 15 'C et 45 % 7 d'humidité sulfate de relative Temps Sulfate de Glucosamine-SP (jours) glucosamine Aspect E'i tre Aspect Titre O i 99,5 % 1 100,7 % 7 i 98 3 % 1 99,1 % 1 100 2 % i 99,58 % i 99, 4 %i 100,4 % 2 86,2 % 198,6 % 4 42 J> 9 % 99,1 % 360 6 non déter 98,94 % _________ miné _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ TABLEAU III Stabilité de la glucosamiine-SEP et du sulfate de glucosamîne à 15 'C et 60 % d'humidité relative Temps Sulfate de Glucosamine-SP glucosamine (jours) Aspect Titre Aspect Titre O i 99,5 % 1 101,12 % 3 1 98,4 % 1 10118 % 6 3 76,2 % 1100,5 % 12 5 31, 4 % 1 99, % 24 6 non déter 199,5 % miné 36 6 " "I 101,3 % 48 6 " 1100,17 %a 2 504929 TABLEAU IV Stabilité de la glucosamine-SP et du sulfate de glucosamine à 250 C et 30 % d'humidité relative Temp s S Sulfate de Glucosarnine-SP (jours) glucosamirne _____ Aspect Titre Aspect 1 Titre O i 99,6 % 1 99 >l % 7 i 99,1 % 1 99 7 % i 98,3 % 3 98, 5 % i 99,5 % i 99,9 % 2 87,8 % i 100 > 4 % 3 75,2 % i 98) 2 % 360 4 40 > 4 % i 99,19 % TABLEAU V Stabilité de la glucosamine-SP et du sulfate de glucosamine à 250 C et 457 d'humidité relative Temps Sulfa-te de Glucosainine-SP (jours) glucosamine ______ ______ Aspect Titre Aspect Titre o i 100,5 à 89 3 1 100 > 3 % I 99,5 % 6 1 99,8 % 1 98,6 % 12 2 90)3 % i 97)7 % 24 3 -74,5 % i 98,1 % 36 S 29 6 % i 97 > 7 % 48 6 non déter i 98 > miné _ __ _ _ _ 2 -04929 -TABLEAU VI:Stabilité de la glucosamine-SP et du sulfate de glucosamine à 250 C et 607 / d'humidité relative Temps Sulfate de Glucosamine-SP glucosatiine ( inivr Q' Aspect j Itr i,r 99 3 non déter- miné il il tnon déter- Aspect Ti t r'r 1 t %: f. 1 non déterminé 1 I il 1 iul, 1 1: ' 1 non déterminé o i'- 1- 1 - TABLEAU VII:-Stimulation de la production de GAG solubles dans des cultures de fibroblastes d'embryonsde souris Evaluation par l'absorption de s Concen- tra ti on 1 ,:: -, j Synthèse de GAG 'solubles (en coups/minute) A par rapport aux tê,,ioins + j _t ', j + 1 - f j j, ,8 j_ 1 + 1 Il i >'i. 1 t 1,,: -,_ 1) i 1,, 1 ____ moyenne t, i) Pl + a- 583 C. 7- 5 1 (-, 1 _ ZI , -1 r, 1, 1 1 , q 1 2011 1 447 3 témoins non traités Sulfate de glucosaffilne 3 ulfate de glucosamine 3 ulfate de:g Iticosanine 1 t 2 ',7 1 C 2 j C 1 -, j U 4 1 r. I i J,11 1 -r 1 j -1 1 j, rl%) ui C) -P- r\) %O TABLEAU VIII: Stimulation de la production de GAG fixes aux tissus dans des cultures de fibroblastes d'embryons de souris Evaluation par absorption de 355 SUBST Ail CES Témoins non traités Sulfate de glucosamine Sulfate de glucosamine Sulfate de glucosamine Glucosarnmine-SP Glucosamine-SP G llucosamnine-SP Synthèse de GAG solubles (en coups/minute) z A % moyenne ( 1) ( 1) t ( 2) ( 2) par rapport t mo e 1 ()P( 1) 2 ( 2) P 2 ( 2) aux témoins non traités 4680 + 664 + O 6210 + 779 1,49 N S + 32,7 8220 + 1003 2,94 9110 + 879 4,02 5490 + 604 0,90 N S O 073 N S + 17 > 3 7780 + 612 3,38 8320 + 1295 2 > 50 50 N S + 77,8 r 4 ri C> ré- TABLEAU IX: Activité anti-inflammatoire du sulfate de glucosamine et de la glucosamine-SP dans l'essai au granulome induit chez le rat par des boulettes de coton. 4 > Les significations de tlplt 2 p 2 ( 1) ( 2) sont les mêmes que dans les tableaux VII et VIII. ( 3) 375 et 750 mg/kg de glucosamine-SP correspondent à 300 et 600 mg/kg de sulfate de glucosamine, respectivement. o ro Poids moyen à sec ()( 1) ( 1) t ( 2) p( 2)Inhibition TRAITEMENT Dose du granulome t 1 Pl 2 2 % (mlg/kg/os)l (moyenne t Cr) Témoins non traités 154:2 + 1129 _ _ + O Sulfate de glucosamine 300 91 J 2 + 10 X 8 3)92 22 N S 38) 7 (; lucosamine-SP 750 ( 3) 64 > 8 + 7 X 0 6; 47 avec diverses voies d'administration. 21):i i v /),-'i et 525 o gk de glucosamine-SP correspondent à 1500, 3000 et sulfate de glucosamine, respectivement. 5000 mg/kg de SUKP 7 AICKMéthode Dose maximale administrée Mortalité, 5 L O d'administration (mg/kg) 7 (mg/kg) Sulfate de cylucosamin Orale 5000 O > 5 OO O C> Sulfate de glucosamin Intramusculaire 3000 O > 30 N 00 Sulfate de glucosamin Endoveineuse 1500 O > 15 ( O 1 U C () nri S P Orale 6250 ( 1) O > 6250 C;uc,) 3ir' S P Intramusculaire 3750 (i > 75 l c O o isam iS P Endoveineuse 1875 (O Ä 1875 O TABLEAU XI: Toxicité aigulé du sulfate de glucosamine et de la glucosamine-SP chez les rats avec différentes méthodes d'administration. CM I:75 V 1 Jet gk de glucosarnine-SP correspondent à 1500, 3000 et 5000 de glucosamine, respectivement. mg/kg de sulfate Dose maximale J U B se -A j CM&thode administrée Mortalité, j L 5 c, d'administration 5 "i/k)'yn (mg/g) Sulfate de glucosamine Orale 5000 O ' Sulfate de glucosamine Intramusculaire 3000 P i G Sulfate de glucosamine Endoveineuse 1500 G C' a:k Orale 6250 ( 1 N >:nir-P Endoveineuse 1875 ' > ( 8 U Ni "O R E V E N D I C A T I ONS 1 Sel mixte de sulfate de glucosamine et de chlorure de sodium, caractérisé en ce qu'il répond à la formule: CH 2 OH H _ O O O H 2 Na+> 2 2 C- OH H,2 N ,504 ,2 C 1 H NH _ _ 2 2 Procédé pour la préparation du sel mixte de sulfate de glucosamine et de chlorure de sodium selon la revendication 1, caractérisé par les étapes suivantes: (a) dissolution du chlorure de sodium sec dans 5,5 à 7, 5 parties en poids d'eau distillée par partie de chlorure de sodium à une température de 50 à 70 C en agitant; (b) dissolution dans la solution obtenue à l'étape (a) de la quantité stoechiométrique de sulfate de glucosamine à une tempé- rature de 35 à 45 C en agitant; (c) précipitation du sel mixte par addition d'un précipitant liquide qui est miscible avec l'eau et dans lequel ledit sel mixte a une solubilité de pas plus de 0,1 % 7 en poids par volume, en opérant avec agitation à une température de 40 à 50 C; (d) achèvement de la précipitation par abaissement de la température du mélange; et (e) récupération du sel mixte précipité. 3 Procédé selon la revendication 2, caractérisé en ce que le précipitant liquide est l'acétone, l'éthanol, l'acétonitrile, le tétrahydrofuranne ou le dioxanne. 4 Procédé selon la revendication 2 ou 3, caractérisé en ce que le précipitant liquide est ajouté en proportion de 5 à 7 parties en volume par rapport à l'eau utilisée dans l'étape (a) en une durée de 2 h 30 min à 3 h 30 min. Procédé selon la revendication 2 ou 3, caractérisé en ce que le sel mixte récupéré est séché dans un four à circulation d'air à 45 C. 6 Composition pharmaceutique douée d'activité antirhumas- timale, anti-arthrosique et anti-arthritique, caractérisée en ce qu'elle contient comme produit actif le sel mixte de sulfate de glucosamine et de chlorure de sodium selon la revendication 1.