Brevet FR2510569A1 — publié le 19830204

Composé cytostatique et procédé de préparation. La présente invention concerne-un composé cytostatique et un procédé de préparation, et son application à la médecine, en particulier à l'oncologie. I1 est bien connu par la littérature concernant les composés organiques utiles comme médicaments que différents types d'amines ont des actions biologiques intéressantes. En particulier, des amines ont de nombreuses actions biologiques intéressantes chez l'homme et sont utiles, en particulier comme agents hypotenseurs et cytostatiques. De nombreux agents hypotenseurs (apparentés à la benzylaniline, à la pipérazine, à la cholamine, aux éthers du benzhydrol et à la phénothiazine) ont été decrits après la commercialisation de la réserpine. Parmi ces agents, ceux qui donnent les meilleurs ré- sultats ont des caractéristiques structurales-simples et sont dépourvus d'actions secondaires indésirables. Il y a quelque temps, on a publié un article décrivant l'isolement d'un composé supposé nouveau appelé odoratine à partir du végétal Viola odorata (Frenclowa Irena "Origin of odoratine" Acta Polon. Pharm. 21(2), 155-8 ; 1964). Ce produit n'avait pas en réalité d'exis- tence propre et on a démontré Mue sa structure était semblable à celle de la triacétonamine. Un groupe polonais a établi que ce composé sous forme du p-toluènesulfonate (désigné sous le nom de Tempidone) est un agent hypotenseur par suite de son effet ganglioplégique. (Deleva L. "Interaction of Tempidone and Methaqualone in vivo" Tr. Nauchoissled Khia Farm. Ind. 8,213-18, 1972 et Deleva L. et colls "Attempt to elucidate the central depressive action of tempidone" Neuropharmacology 11(6), 801-5, 1972). Portion Portion acide triacétonamine p-toluènesulfonique TEMP IDONE En plus de son action hypotensive, on a utilisé la Tempidone à doses élevées (300-400 mg) pour le traitement du délire alcoolique. (Atanasov V. et colt. "Tempidone : ampoules comparatives studies of aleoholic predelirium and delirium treatment" Medic. Biol. Inform. (Belg) pages 20-23, 1977). D'autre part, les données expérimentales concernant son action antitumorale sur le sarcome de Yoshida sont négatives (Todorov O. "Effect of tempidone and methotrimepiamine on the action of cyclophosphamide on Yoshida's sarcoma" Prob Umkol. 2, 51-6, 1974). Le produit de l'invention est apparenté à la Tempidone par sa portion triacétonamine, mais il correspond à un sel d'un acide minéral (l'acide chlorhydrique) contrairement à la Tempidone qui comporte un anion organique complexe (acide p-toluènesulfonique). Cet anion organique complexe peut, et c'est en pratique le cas, ajouter des actions secondaires indésirables ou modifier celles qui dépendent du noyau fondamental du composé , ceci doit être la raison qui explique que la Tempidone n'a pas d'activité antitumorale alors que le produit de l'invention a une activité antitumorale nettement positive. L'invention vise à améliorer le traitement de dif- férents types de tumeurs telles que les mélanomes, les carcinomes, les hématomes et les adéno-carcinomes par emploi d'un composé ayant une certaine activité vis-àvis des tumeurs et qui possède de plus une activité antimétastatique et anti leucémique. L'invention concerne un agent cytostatique qui est le chlorhydrate de triacétonamine qui sera dans la suite désigné par Vincubine, qui répond à la formule suivante VINCUBINE ainsi qu'un procédé pour obtenir ce produit. Selon ce procédé, on ajoute à un mélange d'acétone et d'ammoniac, une matière végétale quelconque séchée et broyée ou du chlorure de calcium, de l'acétate de sodium ou tout autre agent déshydratant. Après 3 à 7 jours de repos, on décante 3a phase supérieure et on chasse l'excès de solvant par distillation. On acidifie le résidu avec un acide fort quelconque, on filtre et on alcalinise avec une base forte quelconque. On lave la solution alcaline avec des solvants organiques non apolaires. On seche le solvant et on le chasse par distillation.On dissout le résidu dans l'acétone et on précipite le produit sous forme du chlorhydrate que l'on purifie par recristallisation. L'invention va maintenant etre décrite de façon détaillée, d'une part en ce qui concerne la synthèse, d'autre part en ce qui concerne l'activité antitumorale du composé selon l'invention. 1. Synthèse. Un mélange d'ammoniaque concentrée et d'acétone (en volumes égaux) est ajouté à un matériau végétal séché et broyé, dépourvu d'alcalolde ou à du chlorure de calcium anhydre ou à de l'acétate de sodium anhydre ou à n'importe quel agent déshydratant ayant une certaine activité (correspondant à 1/5ème en poids du mélange original). Le mélange est placé dans un récipient hermétique et est laissé à l'obscurité pendant 3 à 7 jours. La présence de triacétonamine en quantités appréciables est déterminée par chromatographie sur couche mince sur du silica gel G en ayant recours à un mélange acétate d'éthyle et méthanol, comme solvant dans les proportions 4/1 et pour développer la couche, on utilise une solution de réactifs de Dragendorff ayant un Rf de 0,6-0,7. La couche supérieure du mélange contenant la triacétonamine est transportée dans un récipient approprié et on élimine l'excès dtacétone par distillation. Le résidu est dilué avec 5 volumes d'eau et on ajoute de l'acide chlorhydrique jusqu'à l'obtention d'un pH acide. La solution résultante est filtrée si nécessaire et alcalinisée avec une base, par exemple de la soude, et on lave la triacétonamine libérée avec un solvant organique insoluble dans l'eau présentant une certaine polarité, tel que l'éther diéthylique. Les extraits organiques sont recombinés, séchés de façon appropriée, filtrés et le solvant en excédent est éliminé par distillation. On dissout le résidu huileux-rouge foncé dans de l'acétone sèche. On fait barboter de l'acide chlorhydrique gazeux dans la solution jusqu'à ce que le pH soit acide. On congèle la solution acide jusqu'à l'obtention de cristaux bruts de Vincubine. Par recristallisation dans le même solvant, on obtient de la Vincubine pure. 2. Activité antitumorale. Evaluation. Pour les tumeurs solides, on opère par pesée directe ; pour les tumeurs ascitiques, on utilise la méthode dé numération cellulaire de Benso et Balducci et pour les tumeurs formant des métastases, on effectue une évaluation photographique. Dans toutes les expériences, on note le pourcentage de survie. Mélanome de Harding-Pasey. On effectue les évaluations portant sur cette tumeur avec des groupes-- de six à huit souris albinos. Un groupe constitue le standard de comparaison et l'autre le groupe d'essai antitumoral. Les doses utilisées dans les différents essais sont comprises entre 25 et 270 mg/kg de poids corporel. Les résultats montrent une inhibition de 70 à 90 % et une survie de 83 à 100 %. Les résultats de cet essai sont remarquables. Adéno-carcinome mammaire 755. On effectue les évaluations portant sur cette tumeur sur des groupes de six à huit souris C 57 BL. Un groupe constitue le standard de comparaison et l'autre le groupe d'essai antitumoral. Les doses utilisées dans les différents essais sont comprises entre 90-et 250 mg/kg de poids corporel. Les résultats montren-t une inhibition de 20 à 70 % et une survie de 66 à 100%. Les résultats de cet essai sont convenables. Hépatome 22. On effectue les évaluations portant sur cette tumeur sur des groupes de six à huit souris C 3 H. Un groupe constitue le standard de comparaison et l'au-tre le groupe d'essai antitumoral. Les doses utilisées dans les différents essais sont comprises entre 90 et 270 mg/kg de poids corporel. Les résultats montrent une inhibition de 35 à 50 % et une survie de 66 à 100 %. Les résultats de cet essai sont moyennement convenables. Carcinome ascitique d'Erlich. On effectue les évaluations relatives à cette tumeur sur des-groupes de six à huit souris albinos. Un groupe constitue le standard de comparaison et l'autre le groupe d'essai antitumoral. Les doses utilisées dans les différents essais sont comprises entre 100 et 380 mg.kg de poids corporel. Les résultats montrent une inhibition de 40 à 85 % et une survie de 66 à 100 %. Les résultats de cet essai sont remarquables. Carcinome de Brown-Pearce. On effectue les évaluations relatives à cette tumeur sur des groupes de trois lapins. Un groupe constitue le standard de comparaison et l'autre le groupe d'essai antitumoral. Les doses utilisées dans les dif férents essais sont comprises entre 15 et 150 mg.kg. On détecte l'inhibition par la réduction des métastases due à la poursuite du traitement. Pendant la poursuite du traitement, on détecte par opération chirurgicale une diminution remarquable de l'importance de la tumeur primaire. Les résultats de cet essai sont très remarquables et d'une importance capitale. Activité antimitotique. L'effet~qui consiste à ajouter à du sérum de malades atteints de leucémie des solutions de colchicine pour bloquer la multiplication cellulaire à la métaphase est bien connu. Lorsqu'on effectue cet essai de façon comparative avec de la Vincubine et de la colchicine, on constate que les solutions de Vincubine don, nent des résultats semblables à ceux obtenus avec les solutions de colchicine. Ce résultat peut expliquer l'action antimitotique possible. Prénaration et étude d'un échantillon expérimental. a) Svnthèse. On mélange avec de l'acétone et de l'ammoniac avec une certaine quantité d'alcool méthylique, une matière végétale séchée et broyée (dépourvue d'alca laides) ou du chlorure de calcium, de l'acétate de sodium ou un agent déshydratant quelconque assez puissant. On laisse le mélange reposer à l'abri de la lumière pendant 3 à 7 jours. On filtre le mélange et on distille la phase organique pour éliminer les solvants ajoutés (acétone et alcool méthylique). On ajoute au résidu de l'eau et de l'acide chlorhydrique ou due l'acide sulfurique, on filtre la solution s'il est nécessaire et on alcalinise avec une base forte, par exemple l'hydroxyde de sodium. La triacétonamine se sépare sous forme d'une phase huileuse que l'on reprend avec un solvant organique quelconque non apolaire, par exemple le benzène, l'éther ou le chloroforme. Après avoir séché le solvant organique, on l'élimine par distillation. On réprend le résidu huileux rouge par de l'ace- tone déshydratée. On fait barboter de l'acide chlorhydrique gazeux dans ia solution. On congèle la solution acide dans l'acétone pour obtenir des cristaux bruts de Vincubine. Par recristallisation dans un mélange de méthanol et d'acétone, on oient la Vincubine pure avec un rendement de 80-85 %. Absorption infrarouge. 3 400-3 500 (NH) ; 2 700-3 000 (CH) ; 2 520 (azote quaternaire) ; 1 720 (absorption carbonylique) ; 1 5601 580 (CH2) ; 1 420-1 465, 1 200-1 220 cm 1 (absorption de déformation). Absorption ultraviolette. Néant. Résonance magnétique nucléaire. On observe des signaux à 1,7-1,8 et 2,8 ppm (quatre radicaux méthyles et deux- radicaux méthylènes) ainsi qu'un signal large à 9,4-10,1 ppm (NH). Masse. La spectroscopie de masse donne les résultats suivants : 155 (ion moléculaire), 140 (perte du radical méthyle), 139 (perte du radical méthyle et transfert d'hydrogène), 112 (perte de méthylcétone) et des signaux de rupture de cycle à 98, 84 et 83. Point de fusion. Sous forme du chlorhydrate : 195-196 C (décomposition). Rotation ontique. 0 ; T = 300C C - 15,4 mg.ml dans l'eau. Analyse élémentaire. Elle correspond bien à la formule générale CgH17NO.HCl. b) Essais bioloaiques. On administre la Vincubine sous forme d'une solution aqueuse stérile injectable à des groupes de six à huit animaux, un groupe servant de standard de comparaison et l'autre servant à l'essai antitumoral. Tumeur Adminis- % d'inhi- % de survie tration -bition mg/ kg de oids Mélanome de Harding Pasey 25-270 70-90 83-100 Carcinome ascitique d'Erlich 100-380 40-85 66-100 Carcinome de Brown- -plus de Pearce 15-150 positif 150 jours Hépatome 22 90-270 35-50 66-100 Adéno-carcinome mammaire 755 + 90-250 20-70 66-100 Le composé selon l'invention est dépourvue.de toxicité. Les résultats concernant la DL50 sont les suivants Dol50 (administré par voie intrapéritonéale) .pour des souris est de 350-400 mg/kg de poids corporel DL50 (administré par voie intrapéritonéale) pour des rats est de 600-700 mg/kg de poids corporel ; DL50 (administré par voie intraveineuse) pour des souris est de .850-950 mg/kg de poids corporel. Dans le cadre-des applications thérapeutiques (notamment pour les différentes tumeurs et autres traitements) les doses de principe actif administrées sont dans la gamme de 0,30 à 0,85 pour les différentes tumeurs traitées. REVENDICATIONS 1. Nouveau composé caractérisé en ce qu'il consiste en le chlorhydrate de triacétonamine. 2. Nouveau médicament utile notamment pour le traitement de différents types de tumeurs telles que des mélanomes, des carcinomes, des hépatomes, des adéno-carcinomes et ayant de plus une activité antimétastatique, hypotensive et antimitotique, caractérisé en ce qu' il contient à titre de substance active le chlorhydrate de triacétonamine selon la revendication 1. 3. Compositions thérapeutiques caractérisées en ce qu'elles renferment comme ingrédient actif le médicament selon la revendication 2. 4. Procédé pour préparer le chlorhydrate de tiracétonamine selon la revendication 1, caractérisé en ce qu'il consiste à ajouter à un mélange d'acétone et d'ammoniac une matière végétale séchée et broyée quelconque ou du chlorure de calcium, de 11 acétate de sodium ou un autre agent déshydratant, à décanter la phase supérieure après 3 à 7 jours de repos, à chasser l'excès de solvant par distillation, à acidifier le résidu avec un acide fort quelconque, à filtrer et à alcaliniser avec une base forte quelconque, à laver la solution alcaline avec des solvants organiques non apola ires, à sécher le solvant et à le chasser par distillation, à dissoudre le résidu dans l'acétone et à précipiter le produit sous forme du chlorhydrate que l'on purifie par recristallisation.