Brevet FR2490223A1 — publié le 19820319

Nouveau peptide, son procédé de préparation et culture du microorganisme utilisé dans ce procédé. La présente invention concerne un nouveau peptide B-52653 qui est un composé biOlogiquement actif et un procédé pour sa préparation. I1 est bien connu que les microorganismes du sol isolés d'un échantillon de sol produisent divers composés ac- tifs biologiquement comprenant des antibiotiques. En recher- chant de nouveau composés biologiquement actifs, les auteurs de la présente invention on recueilli un grand nombre d'échan- tillons de sol, cultivé les microorganlsmes isolés des échan- tillons et décelé les cultures pour l'activité inhibitrice de la synthèse de la paroi cellulaires et contre la collagéno- proline hydroxylase dans le bouillon de culture. Un nouveau peptide blologiquement actif a été découvert dans le bouillon de culture d'un microorganisme. Les inventeurs ont découvert que ce composé non seulement empochait le développement des bactéries gram-positives et gram-négatives par son activité inhibitrice de la synthèse de la paroi cellulaire mais égale- ment avait une activité inhibitrice contre la collagéno-pro- line-hydroxylase c'est-à-dlre un microorganisme appartenant au genre Streptomyces, c'est-à-dire que le peptide pouvait être produit et accumulé dans le bouillon de culture en culti- vant ledit microorganisme dans un milieu de culture approprié, dans des corditonsappropriées de culture, et que ledit produit pouvait être désigné sous le de L-alanyl-L- (3R)-5-hydroxy-2- oxopyrrolidin-3-yl7glycine. La présente invention a été réali- sée en se basant sur les découvertes mentionnées ci-dessus. Les auteurs de la présente invention on désigné le nouveau peptide ci-dessus par "B52653". Les découvertes ci-dessus et les études ultérieures ont résulté en la présente invention. La présente invention est dirigée par conséquent vers (1) un nouveau peptide B-52653 ayant la formule -H2 NH HO2C C z2 2 H/ \ H3C-CH-CONH-CH-C CH-OH \C -- N O' H et(2) un procédé de préparation de ce peptide B=52653, caractérisé par le fait qu'on cultive une souche du genre Strep tomces donnant le 3B52653 pour amener ainsi la souche à élaborer et à accumuler le B-52653 dans le bouillon de culture et qu' on récolte le B-52653 à partir de ce bouillon. La présente invention est réalisée pratiquement en utilisant un microorganlsme du genre streptomyces qui est capable d'élaborer le nouveau peptide B-52653. Comme exemple de ce microorganisme produisant le B-52653, on peut mention- ner la souche Streptomyces sp. n B-52653 qui est une souche isolee à partir d'un échantillon de sol obtenu dans Akashi City, Hyogo Prefecture, Japon par les présents inventeurs. Dans cette spécification le nouveau peptide B-52653 mentionné ie-dessus sera désigné pour abrégé par "B-52653"' et ladite souche Streptomyces spo n -52653 sera désignée par " souche n B-52653". A) Caractéristiques microbiologiques de la souche n B-52655. Les caractéristiques mlcrobiologiques de la souche n B-52653 ont été recherchées par le procédé de Schirling et Gottlieb (International Journal of Systematic Bacteriology 16, 3513-340, 1966). Les résultats suivants ont été obtenus avec une culture de la souche à 28 C pendant 21 jours. 1) Propriétés morphliques Généralement sur milieu d'agar la souche donne un mycelium végétatif qui est bien ramifié et allongé, avec un mycelium aérien qui est rami- fié à partir d'un pied. Un grand nombre des chalnes de spores forme un spirale ou une boucle et cer- taines sont flexibles. Dans un grand nombre de cas chaque chalne de spores est composée de plus de spores. Les spores sont ovales ou elliptiques et ont de 0,8 à 1,2 pim x 1,0 à 1,5 ptm avec une sur- - face épineuse. On n'observe ni flagelle ni sporange. ei d) euuenunoen: (dS) x (Giç) 4uaB si (quepuoqe:(oI) 4uepuoqe: (O) JVe2e euloAup eupiej (q aied aune uniq no 'unone: (as) 3E(qlg) qWold sla9 e(Ir#) joqseeo sla ';uepuoqe:(xV) 4uepuoqe: (o) je2e qjew ap 4lui4xa gainAal ap qlealta (O unone: (aS) _(eq ) aiaad q oueIq '9gPom:(XwV) O0 9apPOm:(O) J14tlanu jese( y(0g) ajeqenox.S:Is:(Cs) (opg) asoi slax 2 (eoz) J.reio.voM ',aJ9apow:(Wv) Jeagpom:(0) ga aV2e eaulsoJix (a unone: (as) I(ejç-) 4ue2ze exS2 'z1.uepuoqe:(1V) gJapow: (0) eBe 'uopTWV (p Oa (DSo) aelo uol:(as) (e$_);ue2Ja StI2 'uepuoqe:(wv) 9agpom:(.) zie éditlon, Container Corporation of America, 1958. Propriétés physiologiques a) Gamme de températures pour le développement! 9 - 40 C b) Liquéfaction de la gélatine (glucose, peptone, gélatine): positive (faible) c) hydrolyse de l'amidon: positive d) Coagulation du lait écrémé: peptonisé e) Production de pigments mélanoides: Tyrosine, agar: faiblement positive Peptone, levure, agar: négative 4) Assimilation de sources de OCarbone L-arabinose + D-xylose + D-glucose +++ D-fructose +++ Saccharose ++ Inositol +++ L-rhamnose + Rafflnose - D-mannitol +++ Témoin + (Note) +++: Développement abondant - ++: Développement bon +: Développement +: Développement faible En ce qui concerne les propriétés de la souche n B-52653 mentionnées ci-dessus, on se réferera à: S.A. Waksman: The Actinomycetes, Vol. 2 (The Williams and Wilkins Co., 1961; R. E. Buchanan et N.E. Gibbons (ed.), Bergy's Manual of Determinative Bacteriology, 8th Edition, 1974; Internatio- nal Journal of Systematic Bacteriology Voll. No.2, pp. 69-189 and No. 4, pp. 279 - 392 (1968), ditto Vol. 19, No. 4, pp.391 - 512 (1969) and ditto Vol. 22, No. 4, pp 265- 394 (1972), et autre bibliographie. La position taxonomique de cette souche basée sur ses propriétés mentionnées ci-dessus fait qu'elle appartientapparem- ment à la section des Spirales ou Rétinacuriapelti et à la série de Gray comme proposé par Pridham et Col. (.Applied Microbiology 6 52 - 79, 1958). Comme espèce connue qui parait être la plus voisine de la souche de la présente inven- tion, on peut mentionner le Streptomyces albulus. Par conse- quent, on fait une comparaison de la souche n B-52653 avec le Streptomyces albulus IFO 13410 (ISP 5492). La souche n B-52653 produit un mycelium aérien gris-brun clair sur saccharose, nitrate, agar, et un mycelium aérien grisJaune clair sur glucose, nitrate, agar. Quand elle est cultivée sur malate de calcium, agar, la même souche produit un pigment soluble brun clair. En outre, cette souehe se développe en utilisant le L-rhamnose et le saccharose. D'autre part, le Streptomyces albulus produit un mycelium aérien blanc sur le saccharose, nitrate, agar, et ne produit par de pigment so- luble sur malate de calcium, agar. En outre, cette dernière souche n'assimile pas le L-rhamnose ou le saccharose et, par conséquent, ne se développe pas sur ces sources de earbone. Les résultats ci-dessus fbnt supposer que la souche n B-52653 est une nouvelle sous-espèce du Streptomyces albulus et, par conséquent, on a proposé de lui donner le nom de Streptomyces albulus subsp. ochragerus subsp.nov. Cette souche n B-52653 a été déposée au "Fermentation Research Institute, the Agency of Industrial Science and Technology" (FERM), Ibaragi, Japan sous le n "FERM-P n 5677" à l"'Institute for Fermentation", Osaka (IFO) Japon sous le n d'admission de "IFO 14072" et à l'"American Type culture Collection" 'ATCC) U.S.A. sous le n d'admission ATCC 31713. Toutefois, comme on l'a mentionné ci-dessus, la souche n B-52653 est une nouvelle souche du genre Streptomyces et elle peut subir des variations et des mutations, comme c'est le trait général du microorganisme, soit spontanément, soit sous l'influence de mutagène. Par exemple, des mutants de la souche peuvent être obtenus au moyen des rayons X, des rayons gamma, la lumière ultraviolette ou d'autres radiations, de séparation monospore, de traitement avec divers produits chi- miques, de culture sur des milieux contenant ces produits chi- miques, etc. Ces mutants, ainsi que les mutants spontanés, peuvent aussi 8tre utilisés pour le but de la présente inven- tion, à moins au'ils soient considérés essentiellement comme etant de nouvell espèces en ce qui concerne les propriétés microbiologlques, mentlonnés cl-dessus ou mentionnés cîl-après, et dans la mesure o ils sont capables d'élaborer le B-52653. A titre d'exemple, quand la souche n B-52653 est soumiseà divers traitements engendrant la mutation, on obtIent des mutants qui produisent des mycelia aériens jaunes ou bleus, Le milieu de culure, utilisé pour la culture de la presente invention, peut 8tre liquide ou solide, seulement seil contient des produits nutritifs que la souche employée est capable d'utiliser. Cependant, quand la production en masse est envisagée, un milleu liquide est plus avantagesu. Dans le mi- lieu, sont incorporées les sources de carbone et dVazote que la souche peut assimiler et digérer, des matieres minerales et des traces de produits nutritifs. Les sources de carbone peuvent comprendre par exemple le glucose, lactose, saccharose, maltose, la dextrine, l'amidon, la glycérine, le mainntol, sorbitol, des huiles et des graisses (par exemple l'huile de soja, l'huile de lard, l'huile de poulet, et.eo), et les sources d'azote peuvent comprendre, entre autres3 l'extrait de viande, l'extrait de levure, la levure séchée, la farine de soja> les liqueurs de macération du mais, peptone, la farine 2^ de graines de coton, les mélasses épuisées, l'7rée, les sels d'ammonium (par exemple sulfate d'ammonium, chlorure d'ammo- nium, nitrate d'ammonium, acétate d'ammoniumL etc.), En outre, sont incroporées des quantités appropriées de sels de sodium, de potassium, de calcium, de magnésium, etc.), des sels de 03 fer, de manganèse, de zinc, de cobalt, de nickel, etco, des sels d'acide phosphorique, d'acide borique, etc., et des sels d'acides organiques tels que des sels d'acide acétique, d'acide propionique, etc, On peut ajouter également des aminoacides (par exemple acide glutamique, acide aspartique, l'alanine, la lysine, la valine, la méthionine, la proline, etc.), des peptides (par exemple des dipeptides, des tripepti- des, etc.), des vitamines (par exemple les vitamines B1, B2, l'acide nicotinique, les vitamines B12, C, etc.), des acides nucléiques et des composés qui s'y rapportent (par exemple des dérivés de la purine ou de la pyrimidine). Bien entendu, en vue de régler le pH du milieu, des acides minéraux ou organiques, des produits alcalins, des tampons, etc. peuvent être aJoutés au milieu. Des quantités appropriées d'huile, de tensio-actifs, etc., peuvent aussi être ajoutées comme produits antimousses. La culture peut être effectuée en culture stationnaire, culture sous agitation, culture immergée ou autre procédé de culture connu. Pour la fermentation en masse, le procédé dit "culture immergée" est naturellement avantageux. Cependant, bien entendu, les conditions de culture dépendant de la condition et de la composition du milieu, de la souche particulière utilisée, du procédé de culture, etc; la culture est habituellement conduite à une température de 20 à 350 C et avec un pH initial compris entre environ 5 et 8. Les conditions préférées sont 230 à 32 C avec un pH de 5,5 à 7,0 (initial). Cependant, la durée de la culture dépend également des conditions mentionnées ci-dessus; la culture est de préférence continuée Jusqu'à ce que la quantité de peptide de la présente invention, produite, atteigne le maximum. La durée nécessaire pour obtenir une telle concentration maximum est normalement d'environ 2 à 8 Jours dans le cas de la culture sous agitation aérée, en utilisant un milieu liquide. Le pH approprié pour la production du peptide de la présente invention est faiblement acide, la gamme optimum du PH est 5,5 à 7,0 et la production de la substance peut être augmentée en réglant le pH du milieu avec un acide ou un pro- duit alcalin. Donc le rendement de la substance peut etre augmenté considérablement en ajoutant des phosphates minéraux à une concentration de 50 à 1000 ppm au milieu ou en utilisant des saccharides tels que le glucose, l'amidon et/ou le saccha- rose comme sources de carbone en même temps que des sources d'azote sélectionnés et des sels minéraux. Toutefois, la proportion de la substance varie avec les conditions de la culture; le B-52653 est habituellement accumulé en dehors des cellules, environ 10% du rendement total étant quelquefois décelés dans les cellules. Le peptide de la présente invention ainsi produit dans le bouillon de culture peut être examiné par le procédé du puits d'agar, ou par le procédé du disque de papier en utilisant un mutant de Staphylococcus aureus résistant aux produits chimiques comme organisme d'essai et le B52653 comme étalon de référence. Le milieu A glucose 3%, glutamate de sodium 0,5%, K2HP04 0,05 %, MgS04.7H20 0,05%, KlC1 0,05%, extrait de levure (Difco) 0,05%, acide aminé dérivé de la caséine (Difco) 0,02%, agar (Difco) 7. Le peptide de la présente invention est principalement obtenu dans le filtrat du bouillon de culture. Le B-52653 ainsi obtenu peut être isolé par les procédés classiques utilisés pour la récolte des métabolites microbiens à partir des bouillons de culture, soit utilisés simplement ou dans une combinaison soit sous forme appliquée en répétition, Ainsi par exemple, on peut utiliser des procédés tels que filtration, centrifugation, dialyse, concentration, séchage, lyophilisation, adsorption et désorption, des moyens utilisant une différence de solubilité dans différents solvants (par exemple précipita- tion, cristallisation, recristallisation, extraction, réparti- tion à contre-courant etc.), chromatographie, etco Plus particulièrement puisque le B-52653 est produit et accumulé en dehors des cellules le plus souvent, ce peptide est de préférence récupéré à partir de la fraction liquide du bouillon de culture après avoir éliminé la fraction cellulaire. En outre, parce que ce peptide est un composé amphotère solu- ble dans l'eau, ayant des fonctions carboxyle et aminées, il peut être isolé et purifié avantageusement à partir de la frac- tion liquide du bouillon en profitant de cette propriété. La chromatographie, rappelée ci-dessus, peut être avantageusement conduite en utilisant des échangeurs de cations et des échangeurs d'anions, (par exemple résines échangeuses d'ions, échangeurs d'ions "Sephadex", cellulose échangeuse d'ions, etc.), des supports pour imprégnation de gel.par exemple "Sephadex" (Pharmacia Fine Chemicals, Sweden), "Biogel" (Bio-Rad Laboratories U.S.A.) de préférence "Sephadex LHl-20" (Pharmacie Fine Chemicals, Sweden)7, du charbon actif, des polymères très poreux Lpar exemple de préférence "Amberlite XAD-2" (Rohm and Haas Co. U.S.A.), "Diaion HP-10" (Mitsub1hi Kasei Kogyo, Japon)/, alumine, florisil, silica gel, cellulose, etc. Les auteurs de la présente invention ont isolé et purifié le présent eomposé par les procédés mentionnés cl- dessus, ont recherché ses propriétés physicochimiques et également par une recherche indépendante on trouvé qu'il est la L-alanyl-L-/(3R)-5hydroxy-2-oxopyrrolidin-3-ilJglycine, un nouveau composé ayant la formule structurelle suivante: NH 1 2 H C - C - C MH C il O HO C 2y - N- C H à H H2 H C H % / 'x / - C - C\ /Cx OH C-N 0/ H Le B-52653 peut être préparé de la façon ci-dessus. Ses propriétés physicochimiques, telles que mesurées avec les échantillons produits selon les exemples 1 et 2 signalés plus loin, sont les suivantes: (1) Poudre blanche (2) Analyse élémentaire C9H15N305-2H20: C, 38143; H, 6 81; Calculé pour: N, 14,94 Trouvé: C, 38,44; H, 6134; N, 14,78 (3) Poids moléculaire (équivalent de neutralisation) et pKa' L'équivalent de neutralisation déterminé à partir de la courbe de dissociation (titrage dans une solution aqueuse contenant HC1 0,1 N avec NaOH 0,1 N) est de 140 + 10, et le PH de la solution du point de demi- équivalent déterminé à partir de la courbe de dissociation est pH = 8,3 + 0,5. Cette courbe de dissociation est considérée comme étaat un ensemble de courbes de dissociation de deux groupes dissociables ayant des valeurs pKa' voisines l'une de l'autre (on suppose environ 7,6 et environ 8,8, bien que les valeurs pKa' exactes ne puissent pas être mesurées à cause de l'absence d'un point d'inflection). Par conséquent le poids moléculaire du peptide de la présente invention est supposé être 180 + 20 (281,5 pour C9H15sN305.2HO20). Quand HC1 1N est ajouté à une solution aqueuse de cette substance et que le titrage est effectué avec NaOH 1N comme indiqué ci-dessus, un groupe dissociable ayant une valeur pKa d'environ 3,15 est également décelé. (4) Pouvoir rotatoire [1]25 + 500 50 (c = 1 O T 20) D]D - [i25 + 62 +5 (C = l'0' 01!N.Coi) [aD [a1]25 + 50 +5 (c = 0, OiN NaOH) D (5) Spectre d'absorption dans l!ultraviolet Le spectre d'absorption dans i'ultraviolet de la présente substance en solution aqueuse ne ruontre aucun maximum d'absorption earactéristique2 sauf lGs absorptions finales, entre 220 et 560 nm. (6) Spectre d'absorption infrarouge Les nombres d'onde (cm) des pics d'absorptîon prin- cipaux dans le spectre infrarouge (KBr) sont les suivants 3400, 1690, 1610, 1395, 1265, 1205, 1080 (7) Spectre de résonance magnétique nucléaire Le spectre de résonance magnétique nucléalre suivant est observe dans l'oxyde de deutérium en utilisant un spectro- mètre "Varian EM-390"' (90 f{flz)o 6: lr70 (3H, d, J = 7); 1y75 (nm), 2526 (m), 2/78 (m) (total 211); 3124 (1H, m), 4;.26 (1H, q, J = 7), 4 71 (1H, d, J = 45), 5,38 (1H, m). (8) Réactions colorées Réaction avec la ninhydrine - positive Réaction des peptides de Greig=Leaback: positive Réaction de Sakaguchl: négative Réaction Anthrone acide sulfurique négative Réaction Orcine-acide sulfurique % négative (9) Solubilité Facilement soluble dans l'eau mais seuleent faiblement soluble ou insoluble dans les solvants oeganiques tels que mèthanol, éthanols acétone, chloroforme, acétate d'éthyle, benzène, éther éthylique, éther de pétrole, pyrldine, acide acétique glacial, diméthylforiamide, diméthylsulfoxyde, etc. (10) Chromatographie en couche mince. (Plaque TLC de Merck's prérev8tue, gel de silice F-254) Systèmessolvant Rf 1-butanol acide acétique eau (3:1:1) 0,15 1-butanol-pyridine acide acétique eau 0,08 (4.i.Z:22) l-propanol-eau (7:3) 0,13 2-propanol-diisopropyléther- acide formique à 60% (4:3:3) 0,16 Chloroforme-méthanol ammonaque à 17% (2:2:1) 0,17 Activité microbicide Dans les essais utilisant des bactéries comme orga- nismes d'essai, une boucle de 10O6 CFU (.unité de formation de cellules) ml est utilisée comme inoculum et la concentration inhibitrice minimum (MIC) est déterminéeaprès une incubation à 37 C pendant 18 à 20 heures. Dans le cas des champignons et des levures, une boucle de chaque microorganisme est malaxée énergiquement; une boucle de la suspension résultante est ino- culée et la MIC est déterminée après incubation à 28 C pendant 2 ou 3 Jours. La mesure de la MIC est effectuée par le procédé de dilution sur l'agar en utilisant les milieux indiqués dans le tableau. On voit d'après le tableau que le B-52653 manifeste une forte activité vis-à-vis des bactéries gram-positives et gram- négatives et que cette substance est active aussi bien contre les divers microorganismes résistants aux antibiotiques que contre les souches sensibles correspondantes. On a également montré que la présente substance manifeste une forte activité contre certaines bactéries phytopathogènes. Organisme essayé Milleu MIC _._ - (Ug/ml) Staphylococcus aureus IFO 13276 I 0,39 Staphylococcus epidermidis FS 5010 I 0139 Bacillus subtilis PCI 219 II 6 25 Bacillus cereus IFO 3001 II 3t13 Bacillus megaterium IFO 3970 II 0 l Escherichia coli NIHJ JC-2 II 3,13 Escherichia coli 0-111 II 6t25 Escherichia coli K-12 W3110 II 3.13 Escherichia coli TN 647 II 3t13 Proteus vulgaris IFO 3988 II l156 Proteus mirabilis IFO 3847 II 1156 Proteus morganii IFO 3168 II 3113 Klebsiella pneumoniae IFO 3512 II 12f 5 Klebsiella pneumoniae GN 3848 II 6t25 Citrobacter fréundii TN 457 II 1 56 Citrobacter freundii TN 564 II 3l13 Enterobacter cloacas IFO 12937 II 25 Enterobacter aerogenes TN 582 II 6125 Salmonella typhimurium LT-2 II 0178 Salmonella enteritidis IFO 3313 II 0T2 Serratia marcescens IFO 12648 II 0 78 Serratia marcescens TN 24 II 0 2 Pseudomonas aeruginosa IFO 3080 II > 100 Pseudomonas aeruginosa J-31 II >100 Alternaria kikuchiana IFO 7515 II >100 Pyricularia oryzae KHG-1 mI 10 Cochlioborus miyabeanus IFO 5277 II 100 Botrytis cinerea TKF-12 m 50 Sclerotinia sclerotiorum IFO 9395 mI 1 Pellicularia sasakii KHG-2 Im 20 Penicilliuri chrysogenun IFO 4626 IV > 100 Aspergil]lus niger IFO 4066 IV >100 Saccharom;ycc-s cerevisiae IFO 0209 IV 12f5 Candida albicans IF0 0538 IV >100 Milieu I: glucose 3%, glutamate de sodium 0,5%, K2HPO4 0,05%, MgS04.7H20 0,05%, KC1 0,05%, extrait de levure (Difco) 0,05%, acide aminé dérivé de la caséine 0,02 %, agar 1,5% (PH 7,0). Milieu II: glucose 0,5%, extrait de levure 0,01%, (NH4)2S04 0,1 %), MgSO4. 7H20 0,01%, citrate de sodium 0,05% KH2P04 0,2 %, K2HP04 0,7%, agar 1,5% (pH 7,0) /_-F.R. Ather- ton et Coll. Antimicrobial Agents and Chemotherapy 15, n 5, 677-683 (197917. Milieu III pommes de terre, saccharose, agar Milieu IV milieu agar modifié de Peffer: saccharose 3%, L-asparagine 0,2%, NH4NO3 0,3%, KH2P04 0,1%, MgS04. 7H20 0,1% "VIersenol" e 0,001, agar 1,5% (pH7,0, [méthanol- éthylènediamine-triacétate de fer et de sodium 50% 7. Le milleu IV est additionné avec les substances suivantes (pour 100 ml) avant utilisation: chlorhydrate de vitamine B1 100 pg, vitamine B2 100 ug, pantothéate de calcium >ig, amide nicotinique 100 "g, biotine 0,5 ytg, acide folique "g, chlorhydrate de vitamine B6 200 ig, acide p-aminoben- zoTque 50}tg, vitamine B12 0,2 tg Effets anti-infectieux chez les souris Des souris males de la souche ICR/SLC, âgées de 4 semaines, sont infectées par voie intrapéritonéale avec des cellules de 2 x 108 CFU à partir d'une culture sur toute une nuit de Staphylococcus aureus E-97, dans un bouillon d'infu- sion cerveau-coeur (Difco). Immédiatement après une solution aqueuse de B52653 est administrée par vole intrapéritonéale en une seule dose. Comme indiqué ei-dessous, ce traitement a un effet prophylactique contre l'infection. 3O 3r13 6r25 1215 25 50 100 ED50 (mg/kg) S/T 1/5 2/5 2/5 3/5 3/5 5/5 17 1 7 S nombre d'animaux surviants T nombre de souris soumises à l'essai. Activité inhibitrice contre la collageno-proline- hydroxylase La fibrose des organes, y compris la cirrhose hépati- que et la fibrose pulmonaire, a été considérée comme une mala- die due à un surdéveloppement pathologique de collagène, et on a pensé utiliser un inhibiteur de lV enzyme ci-dessus pour supprimer eette fibrose. L'activité inhibitrice contre la collagéno=proline- hydroxylase, du B-52653, est essayée par le procédé de R.E. l0 Rhodas et Coll. JMéVhods in Enzymology XVII B, 306 (1971io L'examen révèle que cette substance produit 50% d'inhibition à la concentration de 270 ig/mlo Ensuite 1 Vaction inhibitrice contre la biosynthèse du collagène, du B-52653, chez les rats est recherchée par le procédé B de Ishimaru et Collo(IshimaruT., Kanamari1, T. et Okazakil H., les procèsverbaux dit Congés de 1979 de la Japanese Society of Agricultural Chemistry, P.373). Lee r.ésultaó- indiquent que les taux d'inhibition contre la synthèse du collagène chez les rats adminitrés à raison de m.g'kg, 100 mg/kg et 200 mg/kg, sont respectivement de 30 l, 43 % et 55 ó. Il a été suggéré d'utiliser éventuellement la substance de la présente invention come agent contre la fibrose Toxicité Dans les essais de toxicité aigue dans lesquels le B B-52653 est administré aux souris par voie intraveineuse et intrapéritonéale, il ne s'est produit aucune mort mBme à dose élevée de 1000 mg/kg, ni constaté d'anomalie quelconque par- ticulière pendant une période d'observation de sept Jours après l'administration ou bien à l'autopsie. Par conséquent on considère que le B-52653 est une substance très faiblement toxique Comme décrit en détail ci-dessus, la substance B-52653 de la présente invention a des activités biologiques telles que l'activité microbicide et l'activité supprimant la fibrose des tissus animauxo La substance de la présente invention sous la forme d'une solution aqueuse contenant environ lO à environ l00g/ ml peut 8tre utilisée comme désinfectant des cages d' oiseaux, de l'équipement des laboratoires, des mains de l'homme, etc. Lorsque la présente substance a une activité pour empêcher l'activité de la collagèno- prolinehydroxylase, elle est valable comme réactif pour étudier le mécanisme de la biosynthèse du collagène. Une application également encoura- geante pour la présente substance consiste à dissoudre aseptiquement 2 à 10 g dans une saline physiologique stérile et à administrer 20 à 100 ml/Jour de cette solution à l'homme par perfusion intraveineuse pour empêcher le développement de la fibrose hépatique. La présente invention est illustrée par les exemples descriptifs et non limitatifs ci-après. Exemple 1 La souche n B-52653 (IFO 14072, ATCC 31713) est inoculée sur glucose, asparagine, agar, et mise en incubation à 24 C pendant 10 Jours. Les spores développées sont grattées dans de l'eau stérile pour préparer une suspension de spores (cellules viables 3 x 108/ml), qui est stockée dans un réfri- gérateur pour être utilisée comme Inoculum. Un millilitre de l'inoculum est inoculé dans un ballon de Sakaguchi de 2 litres contenant 500 ml d'un milieu de préculture stérilisé (liqueur de macération du mals 35 g, "Proflo" lOg, K2HP04 lg, CaCO3 15 g, glucose 20g, eau du robinet 1 litre; pH 6,s5), et leballon est mis en incubation sur un agitateur à secousses à mouvement de va-et-vient à 28 C pendant 40 heures. Une portion de 500 ml de la culture résultante est transféréedans un appareil de fermentation en acier inoxydable, de 200 litres, contenant 100 litres d'un milieu de préculture stérilisé simi- laire au milieu ci-dessus, et la culture est effectuée à 28 C pendant 24 heures avec aération (50 1/minute) et agitation tours/minute; agitateuravec une hélice dont le diamètre est la moitié du diamètre de la cuve (1/2 DT)_7 et sous une pression interne de 1 bar. La culture de semences obtenue (100 litres) est transférée ensuite dans un appareil de fer- mentation en acier inoxydable de 2000 1 contenant 900 litres d'un milieu de fermentation principal stérilisé constitué par: DL-alanine 500 g, DLméthionine i kg, FeS04 lkg, ZnS04 500 g, MgS04.7H20 200 g, MnSO4 100 g, KH2P04 1,3 kg, "Proflo" 25 kg, farine de soJa 5 kg, NH4C1 5 kg, CaCO3 12, 5kg et glucose 100 kg (stérilisés séparément). La fermentation est effectuée à 28 C pendant 54 heures avec aération (1000 1/minute) et agitation (200 tours/minute; agitateur à deux hélices chacune ayant un ciamètre égal au 1/3 de celui de la cuve, deux étages de 1/3 DT-2)3 sous une pression interne de 1 bar. On obtient 254,g/ml de B-52653 dans le bouillon. Exemple 2 A 980 i du bouillon de culture obtenu dans l'exemple 1 l0 on aJoute 30 kg de "Topcolite n 34" (Toko Perlite Kogyo Japon) comme auxiliaire de filtration, et le mélange est filtré en utilisant un dispositif de filtration sous vide continu. A 1 du filtrat obtenu on ajoute 1,4 kg d'acide oxalique et, après avoir agité pendant 30 minutes, on ajoute 5 kg de "To "Topoolite", puis on filtre. Le filtrat résultant (1450 ml) est absorbé sur une colonne (350 1) d'Amberlite 200 (forme H +) et, après avoir lavé aveo de l'eau, l'élution est effectuée avec de l'ammoniaque 0,5 N. Les fractions actives sont recueil- lies et concentrées sous pression réduite. Le eoncentré (20 litre) est adsorbé sur une colonne (200 1) de charbon actif (hirasagi for Chromatography, Takeda Chemical Industries, Ltd Japon) et l'élution est effectuée avec de l'eau. Les fractions actives sont rassemblées et concentrées à 1,5 1. Une portion de 750 ml du concentré est adsorbée sur une colonne (3,1) d'alumine (Merck, Allemagne de l'Ouest, alumlne activée 9D, neutre, activité I) et, après avoir lavé avec de l'eau, l'élution est effectuée avec de l'ammoniaque 0,2 N. Les fractions actives sont recueillies et concentrées à siccité sous pression réduite. Le résidu (environ 30 g) est dissous dans 60 ml d'eau, la solution est traitée par chroma- tographie sur charbon actif (1 litre) et l'élution est effec- tuée avec de l'eau. Les fractions actives sont recueillies et concentrées sous pression réduite. Le concentré est encore adsorbé sur une colonne de (700 ml) d'Amberlite IRA 68" (Rohm and Haas Co. U.S.A.) et, après avoir lavé avec de l'eau et avec de l'acide acétique 0,1 M, l'élution est effectuée avec de l'acide acétique 0,2 M. Les fractions actives sont - recueillies et concentrées sous pression réduite. Le concen- tré est adsorbé sur une colonne (500 ml) de charbon actif et élué avec de l'eau. Les fractions actives sont rassemblées et concentrées sous pression réduite pour obtenir 3,9 g d'une poudre blanche, (pureté: environ 93%). La poudre blanche ci-dessus (1 g) est dissoute dans 4 ml de méthanol aqueux à 50%, diluéeavec 4 ml de méthanol à 70% et soumise à la chromatographie sur colonne sur du "Sephadex LH-20" (Pharmacia Fine Chemicals, Suède; gonflé avec du méthanol aqueux à 70 %. Les fractions actives sont rassem- blées et le méthanol est chassé par distillation sous pression réduite. La solution aqueuse résultante est lyophilisée pour donner 0,gg du produit désiré B-52653. REVENDICATIONS I. Peptide B-52653 ayant la formule H2 H/cC NH2 HO2c H / 1 î CH-OH _ H3C-CH-CONH-CH-C CH C-N "zz H_ O 2. Procédé pour la préparation du peptide B-52653, caractérisé par le fait qu'il comprend la culture d'un micro- organisme appartenant au genre Streptomyces et capable de produire le peptide B-52653 dans un milieu de culture contenant des sources de carbone Assimilables et des sources d'azote digestibles jusqu'à ce que le peptide B-52653 soit essentiel- lement accumulé dans le bouillon de culture, puis la récolte de ce produit. 3. Procédé selon la revendication 2, caractérisé par le fait que le microorganisme est le Streptomyces albulus. 4. Procédé selon la revendication 2, caractérisé par le fait que le microorganisme est le Streptomyces albulus subsp ochragerus subsp. nov. (IFO 14072). 5. Culture biologiquement pure du microorganisme appartenant au genre Streptomyces ayant les propriétés identi- fiables avec le IFO 14072, ladite culture étant capable de produire dans un milieu de culture contenant des sources de carbone assimilables et des sources d'azote digestibles une quantité récupérable de peptide B-52653o