Brevet FR2488801A1 — publié le 19820226

"Extraits à l'eau chaude de l'écorce du margousier, possédant une activité antinéoplastique." La présente invention concerne de nouveaux extraits à l'eau chaude de l'écorce du margousier. Les extraits à l'eau chaude de l'écorce du margousier selon la présente invention possèdent une activité antinéoplastique et sont utilisés comme agents anti-mitotiques. Comme résultat des études poussées sur les actions phar- macologiques des constituants contenus dans les matières du margousier, il a maintenant été découvert que des substances empêchant la croissance des néoplasmes, en particulier des tumeurs malignes, sont obtenues en traitant l'écorce du mar- gousier, avant l'extraction, avec de l'eau à une température de 0 à 400C ou, avant ce traitement, en traitant ces matiè- res avec un solvant organique polaire ayant une constante diélectrique de 15 à 35 et avec un solvant organique non polaire ayant une constante diélectrique de 10 ou plus fai- ble, puis en soumettant le résidu du prétraitement à l'extrac- tion avec de l'eau chaude, et que l'activité pharmacologique est augmentée en purifiant l'extrait résultant par précipita- tion avec un alcool ou par dialyse. Par conséquent, l'objet de la présente invention est la fourniture des extraits à l'eau chaude de l'écorce de margou- sier possédant une activité empêchant potentiellement la crois- sance vis-à-vis des néoplasmes malins, en particulier vis-à-vis des tumeurs malignes. Jusqu'à présent, on sait que les extraits de margousier contiennent divers constituants actifs du point de vue phar- macologique. En fait, ont été révélés: un procédé de fabrica- tion de produits cosmétiques pour la peau partant de l'écorce, des feuilles, des fleurs, des fruits, des branches, de l'épi- derme des racines ou de la résine du margousier, en extrayant ces parties avec de l'eau ou un solvant hydrophile ou bien en les pulvérisant finement (publication des brevets japonais n0 28853/77, 28854/77 et 101125/78); un procédé de préparation, à part de ces matières du margousier, des constituants possé- dant des activités améliorant les fonctions gastro-intestina- les et hépatiques en extrayant ces matières avec un solvant hydrophile et/ou avec de l'eau chaude (publication du brevet japonais no 10124/78); et un procédé de préparation, à partir de ces matières du margousier, des constituants qui sont effi- caces pour la thérapie des maladies dermatologiques et rhuma- tismales, en extrayant les matières avec un solvant hydropho- be (publication du brevet japonais n0 13 689/78. Ces procédés de l'art antérieur sont distincts de la présente invention en ce qu'ils sont utilisés en vue d'obtenir les constituants actifs non pas par prétraitement mais seulement par extrac- tion directe. La présente invention concerne des extraits à l'eau chau- de de l'écorce du margousier, possédant une activité antinéo- plastique, qui sont obtenus en traitant l'écorce du margousier, avant l'extraction, avec de l'eau à une température de 0 à WC, et en soumettant le résidu du prétraitement à l'extrac- tion avec l'eau chaude et, si on le désire, en purifiant l'ex- trait à l'eau chaude par précipitation avec un alcool ou par dialyse. De plIs, la présente invention concerne des extraits à l'eau chaude de l'écorce du margousier, possédant une activité antinéoplastique, qui sont obtenus en traitant l'écorce du margousier, avant l'extraction, avec un solvant organique po- laire ayant une constante diélectrique de 15 à 30, et, si on le désire, avant ce traitement, en traitant cette écorce avec un solvant organique non polaire ayant une constante dié- lectrique de 10 ou plus faible, puis en traitant le résidu du ou des prétraitement(s) avec de l'eau à une température de 0 à 400C, en soumettant le résidu provenant des prétraitements ci- dessus à l'extraction avec de l'eau chaude, et, si on le dé- sire, en purifiant l'extrait à l'eau chaude par précipitation avec un alcool ou par dialyse. Comme décrit ci-dessous, les extraits du margousier se- lon la présente invention montrent une activité anti-mitotique dans les oeufs fécondés d'oursins ainsi qu'une action empêchant la croissance visà-vis des tumeurs ascitiques et des tumeurs pleines du sarcome 180 de la souris et vis-à-vis des cellules L-5178Y de la souris. Le margousier est un grand arbre de 10 mètres ou plus de hauteur qui est originaire des tropiques et dont le nom en botanique est Melia azadirachta. Son écorce est utilisée dans la présente invention. L'écorce est de préférence séchée et finement broyée pour être utilisée dans la présente inven- tion. Selon la présente invention, l'écorce du margousier avant l'extraction des constituants actifs, est d'abord traitée avec de l'eau à une température de 0 à 400C. Le traitement, avant l'extractionest effectué pendant plusieurs heures à un jour de façon classique. Ensuite, le résidu provenant de ce prétraitement est traité avec de l'eau chaude pour extraire les ingréd ents actifs. Ce stade est effectué soit en ajoutant de l'eau/à l'écorce de margousier, soit en ajoutant de l'eau à l'écorce de margousier puis en chauffant le mélange à l'ébul- lition. Ce chauffage peut être effectué dans un bain d'eau bouillant ou par chauffage direct. La durée d'extraction est habituellement de 1 à 48 heures bien qu'elle puisse être fixée d'une façon appropriée en fonction de la qualité de la matiè- re et des autres conditions. Une fois l'extraction terminée, le mélange d'extraction est filtré pour obtenir un extrait. Quand l'extrait est soumis à l'évaporation à siccité, à la lyophilisation, au séchage avec un sécheur par pulvérisation ou à des procédés analogues, on obtient l'extrait à l'eau chau- de de l'écorce du margousier selon-la présente invention sous forme de poudre brune. Bien que l'extrait de l'écorce du margousier ainsi obte- nu puisse être utilisé tel quel pour la thérapie des néoplas- mes malins, il peut être purifié par précipitation avec un al- cool ou à l'aide d'une membrane perméable pour obtenir un ex- trait d'écorce du margousier plus pur. La précipitation par l'alcool est réalisée en ajoutant un alcool à une solution aqueuse d'extrait d'écorce du margousier telle qu'obtenue ci- dessus ou à l'extrait à l'eau chaude. Par ailleurs une matière insoluble est isolée en traitant directement l'extrait pulvé- rulent mentionné ci-dessus avec une solution hydro-alcooli- que. Comme alcool il est préférable d'utiliser le méthanol ou l'éthanol qui est ajouté de préférence en une quantité telle, que la concentration de l'alcool dans la solution aqueuse de l'extrait, ou dans la solution de l'extrait, est de 20 à 90 %, en particulier d'environ 80 %. Le précipité formé dans la so- lution aqueuse est isolé par des procédés classiques, par exemple par centrifugation. Le précipité ainsi obtenu est lavé avec une solution hydro-alcoolique ayant la même con- centration que ci-dessus et, si on le désire, avec un alcool presque à 100 % puis avec de l'éther et séché ensuite avec de l'air en mouvement ou séché sous vide. Le procédé utilisant un diaphragme est effectué en pla- çant l'extrait de margousier comme mentionné ci-dessus, o la solution aqueuse dudit extrait dans un diaphragme pour effectuer la dialyse des constituants non désirés. Comme dia- phragme on utilise celui à travers lequel les substances ayant un poids moléculaire de 50 000 ou plus faible puissent être fractionnées ou passées. Par exemple, les appareils "Spectra Por 1-6" (fabriqués par Spectrum Medical Industries Co.), ou le tube de Visking (fabriqué.par UCC) sont de préférence uti- lisés. Le plus approprié est l'appareil"Spectra Por 6" (frac- tion de poids moléculaire 50 000). Les constituants actifs sont isolés à partir du dialysat interne par un procédé clas- sique. L'extrait d'écorce-de margousier souhaité est obtenu en concentrant le dialysat interne à siccité ou en lyophili- sant celui-ci. Pendant les stades d'extraction selon la présente inven- tion, l'écorce de margousier, avant le prétraitement avec l'eau à 0 400C, peut être traitéeavec un solvant organique polaire ayant une constante diélectrique de 15 à 35, ou bien, encore avant ce traitement, avec un solvant organique non polaire ayant une constante diélectrique de 10, ou plus faible, pour obtenir un extrait d'écorce de margousier ayant une plus grande activité. Le solvant organique polaire utilisé -dans le prétraite- ment mentionné ci-dessus est un alcool tel que le méthanol, éthanol, propanols et n-butanol, la pyridine, l'acétone et pro- duits analogues. Comme exemple du solvant organique non polai- re, on peut citer le benzène, toluène, xylènes, n-hexane, chloroforme, tétrachlorure de carbone, l'acétate d'éthyle et produits analogues. Les stades de prétraitement mentionnés ci-dessus sont effectués en ajoutant un solvant prédéterminé à l'écorce de margousier de départ. Les extraits d!écorce de margousier de la présente inven- tion ont les caractéristiques suivantes 1) Aspect poudre brune 2) Poids moléculaire 000 ou supérieur basé sur la dialyse avec l'appareil Spectra Por 6': 3) Spectre d'absorption IR Comme le montre la figure 4 (pour l'extrait de l'exemple 12). IR KBr cm environ 3400, 1620, 1020. 4) Spectre d'absorption UV Comme montré sur la figure 5 (pour l'extrait de l'exemple 12). Comme solvant on utilise l'eau UV %max. 274 nm ) Teneur en sucre (telle que déterminée par le procédé phénol-acide sulfurique) 82,4 % (exprimés en amidon soluble). Les extraits d'écorce du margousier de la présente inven- tion sont utilisés pour la thérapie de divers néoplasmes ma- lins. Ils peuvent être administrés par voie parentérale, par exemple par injection sous-cutanée, intraveineuse ou intra- musculaire, ou bien par voie orale sous la forme de comprimés, de capsules, de granulés, de poudre, de sirops ou produits analogues. La dose d'extraits de la présente invention est d'environ 1 à 5 g par jour pour des adultes mâles, bien qu'elle puisse être variée en fonction de l'âge, du poids du corps, et de l'état du patient administré. Les extraits de la présente invention sont formulés de façon classique. Par exemple les poudres séchées du présent extrait sont placées dans un récipient tel qu'un flacon. Sépa- rément une solution saline physiologique, une solution aqueuse de glucose ou une suspension de carboxyméthylcellulose (CMC), est préparée dans un récipient tel qu'une ampoule. La poudre est dissoute ou mise en suspension quand on veut l'utiliser. D'une autre façon, l'extrait en émulsion peut être injecté. Dans le cas d'une émulsion eau dans l'huile (w/o), par exem- ple une combinaison d'une huile minérale telle que la paraffi- ne liquide ou d'une huile végétale telle que l'huile de sésame, ou l'huile d'arachides, avec un tensio-actif tel qu'un ester aliphatique de sorbitane, est utilisée. On va maintenant décrire les figures. Les figures 1, 2 et 4 montrent les spectres d'absorption IR des extraits à l'eau chaude de l'écorce du margousier, obte- nus dans les exemples 1, 6 et 12 respectivement. Les figures 3 et 5 montrent les spectres d'absorption UV des extraits à l'eau chaude de l'écorce du margousier obtenus dans les exem- ples 6 et 12 respectivement. La présente invention est illustrée par les exemples descriptifs et non limitatifs ci-après qui sont des exemples de préparation, d'essais et de formulation. EXEMPLE 1 A 10 g d'écorce du margousier sèche, on ajoute 100 ml de benzène. Le mélange est laissé au repos pendant 1 heure en le secouant de temps à autre pour accélérer l'extraction. Le mé- lange résultant est filtré et au résidu on ajoute 100 ml de benzène. Le mélange est traité de la même façon que ci-dessus. L'extraction avec le benzène est répétée en tout trois fois. Les extraits benzéniques combinés sont concentrés à siccité pour obtenir une poudre. Au résidu provenant des extractions benzéniques, o- ajoute 100 ml de méthanol, et le mélange est soumis au même procédé que décrit avec le benzène. Au résidu provenant de l'extraction au méthanol, on ajoute 100 ml d'eau (désionisée) à la température ordinaire, et le même procédé que ci-dessus est répété. Au résidu provenant de l'extraction avec l'eau, on ajoute encore 100 ml d'eau, et le mélange est soumis à trois extractions dans un bain d'eau bouillante de la même façon que ci- dessus. Les extraits à l'eau chaude ainsi obtenus sont concentrés à siccité sur un évaporateur rotatif. On obtient 270,5 mg de poudre sèche de la fraction eau chaude. 2488C,01 EXEMPLE 2 L'extraction est effectuée avec 10 g d'écorce du margou- sier sèche en utilisant un procédé différent de celui de l'exemple 1. Les traitements sont exactement les mêmes que ceux de l'exemple 1 sauf qu'on n'effectue pas d'extraction avec le benzène et que l'éthanol est utilisé à la place du méthanol. On obtient 364n5 mg de poudre sèche de la fraction eau chaude. EXEMPLE 3 Les mêmes traitements par extraction avec l'eau et à l'eau chaude que ceux des exemples ci-dessus sont effectués avec 10 g d'écorce du margousier. Cependant on n'effectue pas de procédé d'extraction utilisant le benzène et le méthanol ou l'éthanol. On obtient 421,8 mg de poudre sèche de la frac- tion eau chaude. Bien que l'eau utilisée dans les exemples ci-dessus soit de l'eau désionisée, on peut utiliser une eau quelconque tel- le que par exemple l'eau du robinet, l'eau de source, l'eau distillée, l'eau RO (obtenue en utilisant une membrane osmoti- que inverse) ou eau du même genre donnant des résultats simi- laires. La température de l'eau peut être de 0 à 401C et elle est de préférence la température ordinaire. On préfère éliminer les ingrédients extractibles par l'eau aussi complètement que possible. Les extraits à l'eau chaude de l'écorce du margousier obtenus comme décrit dans les exemples ci-dessus sont essayés pour déterminer leur activité vis-à-vis des oeufs d'oursins, des collules L-5178Y de la souris, des tumeurs ascitiques et des tumeurs pleines du sarcome 180. Les effets pharmacologi- ques, les doses et les comparaisons avec des agents anti-mito- tiques connus sont décrits ci-dessous. ESSAI I L'activité anti-mitotique des extraits de margousier de la présente invention est déterminée en utilisant des oeufs d'oursins de la façon suivante: Des oeufs fécondés d'oursins Hemicentrotus pulcherrimus ou Anthocidaris crassispina sont placés à raison de 200 à 300 avec 2 ml d'eau de-mer dans un tube à l'essai. Immédiatement après, une solution aqueuse ou dans le DMSO (diméthylsulfoxy- de) des matières à essayer obtenues dans les exemples ci- dessus, est ajoutée au tube à essai. La division cellulaire des oeufs fécondés est ensuite observée au microscope. Les résultats sont indiqués dans le tableau ci-dessous. Dans ce tableau les signes +++, ++, *, a et - représentent respec- tivement l'inhibition complète de la division des oeufs, en- viron 50 et 80 % d'inhibition de la division des oeufs, une ou deux divisions des oeufs obtenues, l'inhibition de la di- vision des oeufs après blastulation et pas d'inhibition de la division des oeufs. TABLEAU I: Effet sur la division cellulaire des zygotes d 'oursins. Partie Fraction Concentration de la solution à essayer du ILr- (mg/ml) gousier(Exemple No) 0,1 0,2 1,0 2,0 -_.-I eau (1) * ++ eau (2) - A * ++ Ecorce._ eau'cfiaude (1) * ++ +++ +++ - eau chaude (2) * ++ +++ +++ ad (2) - - - * eau: (2)__* Èeuilleà - eau chaude(2) - - * * On peut voir d'après les résultats de l'essai cidessus, dans le tableau 1, que les fractions eau chaude ont des du- rées d'activité supérieures à celles des fractions eau et que les fractions provenant de l'écorce ont une activité plus forte que celle: des feuilles. Les résultats des essais décrits ci-dessus révèlent que les extraits du margousier selon la présente invention empê- chent non seulement la division cellulaire mais également la fécondation des oeufs. Ces ingrédients actifs du point de vue pharmacologique qui empêchent la fécondation et la divi- sion des oeufs peuvent trouver un domaine étendu d'applica- tions comme produits chimiques agricoles et pharmaceutiques. La dose efficace, la formulation, et la toxicité à prendre en compte, peuvent être déterminés selon la zone d'utilisation envisagée. ESSAI II (Effet sur les cellules L-5178Y de la souris) (1) Préparation des cellules Un milieu contenant 1 x 105 cellules/ml est préparé en utilisant des cellules L-5178Y de souris cultivées pendant 3 jours sur un milieu RPMI -1640 contenant 10 % de sérum foetal de bovins. Le milieu est placé dans une microplaquette de type U à 96 creux, à raison de 50 >l par creux. (2) Mode d'évaluation Une partie de la matière à essayer, qui est celle des extraits selon la présente invention décrits dans les exemples ci-dessus, est dissoute dans le milieu jusqu'à avoir une con- centration finale dans le milieu indiquée dans le tableau II ci-dessous. La quantité de la solution par creux est de 50 Pl. La matière à essayer ainsi préparée est mise en incubation dans un incubateur à gaz carbonique, à 370C, pendant deux jours. Une fois l'incubation terminée, les cellules sont recueillies et comptées creux par creux et les nombres de cellules sont comparés avec le nombre de cellules du témoin qui ne contient pas de matière à essayer. Le nombre de cellules du témoin est d'environ 8,6 x 105/ml. Afin de confirmer les effets des matiè- res à essayer, le même essai est fait avec la mitomycine C (MMC) ou la bléomycine (BLM). Les résultats des essais sont indiqués dans le tableau II ci-dessous. Dans ce tableau ci- dessous, T/C représente le rapport du nombre de cellules trai- tées avec la matière à essayer à celui des cellules ne conte- nant pas de matière à essayer. ID50 est la concentration de la matière à essayer nécessaire pour ramener la concentration des cellules à la moitié de celle du témoin. TABLEAU II Effets sur les cellules L-5178Y de la souris Partie de Fraction ID50 margousier (Exemple NO) (ug/ml) eau chaude (1) 50 Ecorce eau chaude (2) 58 eau chaude (3) 45 MMC 0,09 BLM 7,8 (3) Résultats On obtient les résultats d'essais montrés dans le ta- bleau II avec diverses fractions eau chaude dans les exemples ci-dessus et les agents pour comparaison. Les fractions eau chaude des extraits de l'écorce du margousier selon la pré- sente invention ont une valeur ID50 si faible que le produit dans l'un quelconque des exemples possède nettement une ac- tivité empêchant la croissance possible vis-à-vis de la cel- lule mitotique, bien que l'activité soit inférieure à celle de la MMC ou de la BLM. On suppose que l'activité serait augmentée si la fraction eau chaude est purifiée pour l'in- grédient actif. ESSAI III (effet sur la tumeur ascitique du sarcome 180) (1) Préparation de'la matière à essayer. Une partie de chacune des fractions d'extraction est mise en suspension ou dissoute dans une suspension à 0,5 % de carboxyméthylcellulose (CMC) dans une solution de saline tam- ponnée au phosphate (PBS vendue par les laboratoires GIBCO, contenant environ 9,5 mM de phosphate), à une concentration prédéterminée. (2) Transplantation des cellules mitotiques du sarcome 180. Les cellules mitotiques du sarcome 180 de la souris qui ont été repiquées par voie intrapéritonéale dans des souris ICR, sont retirées de la souris en même temps que l'ascite et diluées avec une solution de saline physiologique jusqu'à avoir un nombre de cellules de 108 par ml. La suspension de cellules mitotiques ainsi préparée est transplantée à l'aide 248S801 d'une seringue par voie intrapéritonéale dans des souris mâ- les ICR âgées de 4 semaines, à raison de 0,1 ml. En conséquen- ce le nombre de cellules transplantées par souris est de 1 x 10 (3) Administration de la matière à essayer. La matière à essayer préparée cidessus est administrée par voie intrapéritonéale à raison de 0,1 ml par souris pen- dant 4 jours, une fois par jour, à partir du jour qui suit la transplantation des cellules mitotiques du sarcome 180 de la souris. Un groupe de 6 souris est utilisé pour chacune des concentrations de chaque matière à essayer. Comme témoins ac- tifs on utilise la MMC, la BLM, l'actinomycine D (ACD), le -fluorouracile (5-Fu) et le cyclophosphamide (CYP) pour ef- fectuer des essais similaires. Comme témoin on administre seulement la PBS contenant la CMC décrite ci-dessus de la même façon que ci-dessus. La dose est exprimée en poids par kg de poids du corps de souris. (4) Mode d'évaluation Au 7ème jour de la transplantation des cellules mitoti- ques, le poids (X) de chaque souris est mesuré. Ensuite, l'as- cite est complètement retiréede la souris, puis le poids (Y) est mesuré. X-Y est considéré comme la quantité d'ascite. L'ascite retirée est ensuite introduite dans un tube hématocrite puis centrifugée à 15 000 G pendant 5 minutes en utilisant un rotor pour hématocrite à basse température. On détermine ainsi la valeur ascitocrite, c'est-à-dire la propor- tion des cellules présentes dans l'ascite qui correspond à la valeur hématocrite en hématologie. La valeur multipliée par le volume de l'ascite donne le volume des cellules présentes dans l'ascite. Ce volume est désigné comme le volume total des cellules enveloppées (TPCV). Dans le cas du témoin le volume total de l'ascite est de 6 à 10 ml, et le TPCV est de 1,6 à 2,5 ml. L'effet sur la tumeur est noté inefficace (-) quand le rapport TPCV du traité au témoin (T/C) est de 100 à 66 %, par (+) quand il est de 65 à 41 %, par (++) quand il est de 40 à 11 %, et par (+++) quand il est de 10 à O %. Les résultats d'essai pour les matières provenant de l'extraction à l'eau chaude de l'écorce du margousier selon la présente invention, en comparaison avec les matières de l'art antérieur, sont in- diqués dans le tableau III ci-dessous. TABLEAU III: Effets sur la tumeur ascitique du sarcome 180 Matière à Fraction essayer (Exemple N O) ÀEau' chaude- (1) Dose (jg/kg) T/c (%) 58 1 5 3 2 t 5 7]0 Evaluation + ++ Eau chaude (2) 25 284 ++ 53 +++ Eau chaude (3) MMC o015 1t5 5 ++ BLM 10 0 +++ ACD 0Q1 0 +++ -Fu 20 0 +++ CYP (5) Résultats D'après les résultats d'essais mentionnés ci-dessus, il est évident que les extraits à l'eau chaude de l'écorce du margousier selon l'invention possèdent une activité éldvée, bien qu'elle soit inférieure à celle de la MMC, de la BLM et autres produits utilisés comme témoins. La dose efficace mi- nimum pour la fraction eau chaude (1) dans le tableau ci-des- sus a été trouvée à partir de la relation dose-T/C comme étant environ de 6,5 mg/kg. Comme décrit en détail ci-dessous, la fraction eau chaude de la présente invention est quelque peu toxique chez les souris à des doses plus élevées dans les essais décrits ci-dessus. Bien que les extraits d'écorce du Ecorce Témoin *2488O 1 margousier de l'invention n'aient pas été complètement puri- f!és, l'activité est suffisamment élevée comme indiqué ci- dessus. L'activité pourrait être augmentée si la matière était encore purifiée. ESSAI IV (Effet sur la tumeur pleine du sarcome 180) (1) Préparation de la matière à essayer Les matières à essayer sont préparées de la même façon que décrite dans le point (1) de l'essai III. (2) Transplantation des cellules de la tumeur pleine du sarcome 180. Une suspension de cellules contenant 1 x 108 cellules par ml est préparée de la même façon que décrite dans le point (2) de l'essai III. Des souris ICR âgées de-4 semaines sont inoculées par voie sous-cutanée sur le dos avec 0,1 ml de la suspension, à l'aide d'une seringue (3) Administration de la matière à essayer Comme dans le point (3) de l'essai III, un groupe de 6 animaux est utilité pour chacune des concentrations de cha- que matière à essayer. (4) Mode d'évaluation. Le tissu de la tumeur développée est réséqué les 15ème et 2lème jours de la transplantation des cellules de la tu- meur et pesé. Une moyenne pour le groupe de 6 animaux est prise pour l'évaluation. L'effet est évalué en se basant sur le rapport du poids moyen des animaux traités à celui des animaux témoins (T/C). Le poids moyen est de 1,5 à 4,5 g pour les animaux témoins. Le rapport (T/C) de 100 à 71 % est noté inefficace par (-), de 70 à 51 % par (+), de 50 à 21 % par (++) et de 20 à 0 % par (+++). Les résultats avec les matières à essayer à partir des extraits à l'eau chaude de l'écorce du margousier selon la présente invention et à par- tir des agents de l'art antérieur sont indiqués dans le ta- bleau IV-ci-dessous. TABLEAU IV: Effets sur la tumeur pleine du sarcome 180. Partie du Fraction margousier (Exemple N Eau chaude (1) -Eau chaude (2) Eau chaude(3) MMC Dqse (mg/kg) 0J5 1 5 T 76 T 7 ,0 ,5 32t2 54t 8 71T0 32t5 Evaluation ++ + ++ + ++ BLM 10 43r5 ++ ACD 0 1 1024 - -Fu 20 47;8 + CYP 0 +++ Toxicité La valeur LD50 pour la fraction eau chaude de l'écorce du margousier, administrée par voie intrapéritonéale dans les souris mâles ICR pesant 19 à 21 g est de 200 mg/kg de poids du corps. EXEMPLE 4 A 50 mg d'écorce de margousier sèche on ajoute 500 ml d'eau à 20 C. Le mélange est laissé au repos à la température ordinaire pendant environ 24 heures pour le traitement d'ex- traction. Le mélange d'extraction obtenu est filtré et au ré- sidu d'extraction on ajoute 500 ml d'eau à 20 C. Le mélange est traité de la même façon que ci-dessus. Le procédé d'ex- traction est répété trois fois en tout. Au résidu des extrac- EcOrce tions on ajoute 500 ml d'eau, suivis d'une extraction à l'eau chaude par ébullition du mélange, sur un brûleur à gaz, pen- dant environ 2 heures. Le mélange d'extraction est ensuite filtré pour obtenir un extrait et un résidu d'extraction. On répète le procédé d'extraction à l'eau chaude trois fois en tout. Les extraits combinés sont concentrés à siccité pour obtenir 1418 mg de poudre, 1000 mg de la poudre ainsi obtenue sont dissous dans 200 ml d'eau, et à la solution aqueuse ré- sultante on ajoute par portions de l'éthanol absolu, en agi- tant à la température ordinaire, jusqu'à avoir une concen- tration en éthanol de 80 % dans la solution aqueuse. Une fois l'additionterminée, l'agitation est continuée pendant une courte période de temps supplémentaire. Le précipité formé est alors recueilli, lavé avec deux portions d'éthanol à 80 %, deux portions d'éthanol absolu puis deux portions d'é- ther, et séché sous vide pour donner 671,3 mg d'un extrait d'écorce du margousier. EXEMPLE 5 A 50 g d'écorce de margousier sèche sont ajoutés 500 ml de méthanol. Le mélange est laissé au repos à la température ordinaire pendant environ 24 heures en vue du traitement par extraction. Le mélange d'extraction résultant est filtré et, au résidu d'extraction, on ajoute 500 ml de méthanol. Le mélange est traité de la même façon que ci-dessus. Le procé- dé d'extraction est répété trois fois en tout. Le résidu d'extraction ainsi obtenu est-traité de la même façon que dans l'exemple 4. On obtient 1409 mg de poudre en soumettant le résidu d'extraction à des traitements d'extraction avec de l'eau à 200C, puis en soumettant le résidu d'extraction à l'extraction à l'eau chaude, et en recueillant et concentrant à siccité les extraits résultants. Dans 200 ml d'eau on dis- sout-:1000 mg de poudre et à la solution résultante on ajoute de l'alcool absolu. Le précipité alors formé est recueilli pour donner 668,2 mg d'un extrait d'écorce du margousier. EXEMPLE 6 On répète le même procédé que dans l'exemple 5 sauf que la concentration à siccité de l'extrait à l'eau chaude utilisé est remplacé par une concentration ddit extrait à 300 ml puis par l'addition d'éthanol absolu au concentré. On obtient 134,1 mg d'extrait d'écorce du margousier. EXEMPLE 7 On répète le même procédé que dans l'exemple 5 sauf que l'éthanol est utilisé comme agent d'extraction à la place du méthanol pour donner 1371, 8 mg d'un extrait à l'eau chaude pulvérulent. A une solution de 1000 mg d'une poudre dans ml d'eau, on ajoute de l'éthanol absolu et le précipité alors formé est isolé pour obtenir 654,8 mg d'extrait d'é- corce du margousier. EXEMPLE 8 A 50 g d'écorce de margousier sèche on ajoute 500 ml de benzène. Le mélange est laissé au repos à la température ordinaire pendant environ 24 heures en vue de l'extraction. Le mélange d'extraction est filtré, et le résidu provenant de l'extraction est traité de la même façon que dans l'exem- ple 5. Le traitement consiste à extraire le résidu d'extrac- tion avec du méthanol, à soumettre le résidu de cette extrac- tion à une extraction avec l'eau à 200C, à soumettre le ré- sidu de cette dernière extraction à une extraction avec de l'eau chàude et à concentrer à siccité l'extrait ainsi-obtenu. Celui-ci donne 1353,3 mg de poudre. A une solution de 1000 mg de poudre dans 200 ml d'eau, on ajoute de l'éthanol absolu et le précipité alors formé est isolé pour obtenir 695,3 mg d'extrait d'écorce du margousier. EXEMPLE 9 On répète le même procédé que dans l'exemple 5, sauf que l'éthanol absolu est ajouté jusqu'à ce qu'on obtienne une concentration en alcool de 50 % au lieu d'une concentration en alcool de 80 % utilisée dans l'exemple 5. On obtient 272,2 mg d'un extrait du margousier. EXEMPLE 10 On répète le même procédé que dans l'exemple 5, sauf que l'éthanol absolu est ajouté jusqu'à ce qu'on obtienne une concentration en alcool de 25 % au lieu d'une concentration en alcool de 80 % utilisée dans l'exemple 5. On obtient 243,8 mg d'extrait d'écorce du margousier. Les extraits du margousier obtenus dans les exemples ci- dessus sont essayés pour vérifier leur effet sur les tumeurs 248 C 01 ascitiques et pleines du sarcome 180 selon les procédés dé- crits dans les essais mentionnés précédemment. Les résultats sont indiqués dans le tableau V ci-dessous. TABLEAU V: Effets sur les tumeurs du sarcome 180 transplantées matière à essayer Tumeur ascitique Tumeur pleine mg/kg T/C Evaluation T/C Evaluation Exemple5 A 10 58 5 + 91,2 - 32Y5 ++ 767 - 7t040 +++ 400++ B 10 77,6 - 720 - 63t1 + 4714 ++ 455 + 36T0 ++ 31rO ++ 2514 ++ Exemple6 B 10 8415 - 7315 ++ 67.5 - 542 - 44,0 + 43T0 + 39,9 ++ 24,6 ++ Exemple7 A 100 741 ++ 39.6. B 50 428 + 29T8 ++ Exemple 8 A 100 6r8 +++ 41T8 ++ B 10 79,2 - 73r3 61l0 + 49.4 ++ 44T8 + 381++ 3377 ++ 23.0 ++ +..DTD: Exemple. 9 B t8 41r2 + + 68,0 49r2 + ++ Exemple 10 B 50 47,6 + 69.2 + 40rl ++ 58.3 + Mytomycin C Nota: * La matière indiquée par A représente en concentrant à siccité l'extrait à la poudre obtenue l'eau chaude. 1; 5 o 38r9 ++ 248o3QO1 ** La matière indiquée par B représente un produit obtenu en isolant le précipité formé par addition d'un alcool à extrait à l'eau chaude ou en dissolvant la matière A men- tionnée ci-dessus dans l'eau, en ajoutant un alcool à la S solution aqueuse résultante et en isolant le précipité ainsi formé. La dose efficace minimum pour les extraits non aqueux de l'écorce du margousier selon la présente invention dans les tumeurs du sarcome 180 est indiquée dans le tableau VI. TABLEAU VI: Dose efficace minimum pour les tumeurs du sarcome 180.(mg/kg, chez la souris) Matière à essayer Tumeur ascitiaue Tumeur pleine Exemple 5 A 6,5 30,0 B 20,8 12,0 Exemple 6 B 24,5 12,5 Exemple 8 B 20,0 10,6 Les résultats indiqués cidessus montrent nettement que les extraits à l'eau chaude de l'écorce du margousier selon la présente invention possèdent une forte activité vis-àvis des tumeurs du sarcome 180. Bien que l'activité vis-à-vis de la tumeur ascitique soit diminuée avec le précipité par l'alcool des extraits à l'eau chaude comparée au concentré de ces extraits séchés, l'activité vis-à-vis de la tumeur plei- ne est beaucoup augmentée. EXEMPLE 11 A 50 g d'écorce de margousier sèche on ajoute 500 ml d'eau à 200C. Le mélange est laissé au repos à la température ordinaire pendant environ 24 heures en vue de l'extraction. Le mélange d'extraction ainsi obtenu est filtré et au résidu pro- venant de l'extraction on ajoute 500 ml d'eau. Le mélange est traité de la même façon que ci-dessus. Le procédé d'extraction est répété trois fois en tout. Au résidu d'extraction résultant on ajoute 500 ml d'eau, suivi d'une extraction à l'eau chaude par ébullition du mélange sur un brûleur à gaz, pendant environ 2 heures. Le mélange d'extraction est ensuite filtré pour 248t-01 obtenir un extrait et un résidu d'extraction. Le procédé d'ex- traction à l'eau chaude est répété trois fois en tout. Les extraits combinés sont concentrés à siccité sur un évapora- teur rotatif pour obtenir 1418 mg de poudre. Une solution de 500 mg de la poudre ainsi obtenue dans 50 ml d'eau est ensui- te placée dans l'appareil "Spectra Por 6" (fraction de poids moléculaire 50 000) en vue de la dialyse contre l'eau. La concentration à siccité de la solution de dialyse interne sur un évaporateur rotatif donne 317,6 mg d'extrait d'écorce du margousier. EXEMPLE 12. A 50 g d'écorce de margousier sèche on ajoute 500 ml de méthanol et le mélange est laissé au repos à la température ordinaire pendant environ 24 heures en vue de l'extraction. Le mélange d'extraction est filtré. Au résidu provenant de l'extraction on ajoute 500 ml de méthanol et le mélange est traité de la même façon que ci-dessus. Le procédé d'extraction est répété trois fois en tout. Le résidu d'extraction ainsi obtenu est traité de la même façon que dans l'exemple 11. Le traitement consiste à soumettre ledit résidu d'extraction à une extraction avec l'eau à 200C, à soumettre le résidu d'ex- traction à une extraction avec de l'eau chaude, à recueillir et concentrer à siccité les extraits. On obtient4409 mg de poudre. Une solution de 500 mg de la poudre dans 50 ml d'eau est traitée avec l'appareil "lSpectra Por 6" (fraction de poids moléculaire 50 000) pour obtenir 322,7 mg d'un extrait d'écor- ce du margousier. EXEMPLE 13 On répète le même procédé que dans l'exemple 12, sauf que l'extrait à l'eau chaude est concentré à 300 ml et que le con- centré ainsi obtenu est traité avec l'appareil "Spectra Por 6" (fraction de poids moléculaire 50 000) à la place de la concen- tration à siccité du même extrait utilisé dans l'exemple 12. On obtient 341 mg d'extrait d'écorce du margousier. EXEMPLE 14 On répète le même procédé que dans l'exemple 12, sauf que l'éthanol est utilisé à la place du méthanol utilisé dans l'exemple 12 comme agent d'extraction. On obtient 1371,8 mg d'un extrait à l'eau chaude en poudre. Une solution de 500 mg de la poudre ainsi obtenue dans 50jml d'eau est traitée avec l'appareil "Spectra Por 6" (fraction de poids moléculaire 000) pour obtenir 302,5 mg d'extrait d'écorce du margou- sier. EXEMPLE 15 A 50 g d ' d c o r c e de margousier sèche on ajoute 500 ml de benzène, et le mélange est laissé au repos à la température ordinaire pendant environ 24 heures en vue de l'extraction. Le résidu d'extraction ainsi obtenu est traité de la même façon que dans l'exempl- 12. Le traitement consis- te à soumettre ledit résidu d'extraction à une extraction avec le méthanol, à soumettre le résidu d'extraction avec le méthanol à une extraction avec l'eau à 20 C, à soumettre le résidu d'extraction avec l'eau à une extraction avec de l'eau chaude, et à concentrer à siccité l'extrait à l'eau chaude. On obtient 1353,3 mg de poudre. Une solution de 500 mg de cette poudre dans 50' ml d'eau est traitée avec l'appareil "Spectra Por 6" (fraction de poids moléculaire 50 000) pour obtenir 310,9 mg d'un extrait d'écorce du margousier. EXEMPLE 16 On répète le même procédé que dans l'exemple 12, sauf - que le tube de Visking est utilisé à la place de l'appareil "Spectra Por 6" utilisé dans l'exemple 12. On obtient 370,9 mg d'un extrait d'écorce du margousier. Les extraits du margousier obtenus dans les exemples ci-dessus sont essayés pour leur effet sur les tumeurs asci- tiques et les tumeurs pleines du sarcome 180 selon les pro- cédés décrits dans les essais mentionnés précédemment. Les résultats sont mentionnés dans le tableau VII. TABLEAU VII: Effets tées. sur les tumeurs de sarcome 180 transplan- Matière à essayer Dose (mg/kg) Tumeur ascitique T/C Evaluation Tumeur pleine T/C Evaluation Exemple 12 A 58t5 32,t5 + 91 2 ++ 76ç7 !0 7 0 +++ ** B 54, 2 34r9 10,0 12r5 + 68;0 ++ 54f2 ++ 38ó5 ++ 26,1 MytomycineC i.5 0 +++ 3819 ++ Nota: * La matière indiquée par A représente la poudre obtenue en concentrant à siccité l'extrait à l'eau chaude. ** La matière indiquée par B représente un extrait à l'eau chaude de l'écorce du margousier en traitant la matière A ci-dessus avec un diaphragme. La dose efficace minimum de l'extrait d'écorce de mar- gousier obtenu dans l'exemple 12 vis-à-vis des tumeurs du sarcome 180 est indiquée dans le tableau VIII. TABLEAU VIII: Dose efficace minimum pour les tumeurs du sarcome 180 (mg /kg chez les souris) Matière à essayer Tumeur ascitique Tumeur pleine Exemple 12 A 6,5 30,0 Exemple 12 B 6,7 10,3 Les résultats ci-dessus montrent que les extraits à l'eau chaude selon la présente invention possèdent une acti- vité élevée vis-à-vis des tumeurs du sarcome 180. Il faut + + ++ 4--'particulièrement noter une activité beaucoup plus grande, vis-à-vis de la tumeur pleine, de l'extrait traité avec un diaphragme comparé avec le concentré séche de l'extrait à l'eau chaude. REVENDICATIONS 1.- Extraits à l'eau chaude de l'écorce du margousier possédant une activité antinéoplastique, caractérisés par le fait qu'ils sont obtenus en traitant l'écorce du margousier (Melia azadirachta) avec de l'eau à une température de O à 400C et en soumettant le résidu dudit traitement à une extrac- tion avec de l'eau chaude. 2.- Extraits à l'eau chaude de l'écorce du margousier possédant une activité antinéoplastique, caractérisés par le fait qu'ils sont obtenus en traitant l'écorce du margousier avec de l'eau à une température de O à 40 C, en soumettant le résidu dudit traitement à une extraction avec de l'eau chaude et en purifiant ledit extrait par précipitation avec un alcool ou par dialyse. 3.- Extraits à l'eau chaude de l'écorce du margousier selon la revendication 2, caractérisés par le fait que la précipitation avec un alcool est effectuée en utilisant de l'éthanol. 4.- Extraits à l'eau chaude de l'écorce du margousier selon la revendication 3, caractérisés par le fait que la précipitation avec un alcool est effectuée en ajoutant de l'éthanol en une quantité suffisante pour obtenir une concen- tration en alcool de 80 %. 5.- Extraits à l'eau chaude de l'écorce du margousier selon la revendication 2, caractérisés par le fait que la dialyse est effectuée en utilisant un diaphragme capable de fractionner les molécules ayant un poids moléculaire de 000 ou plus faible. 6.- Extraits à l'eau chaude de l'écorce du margousier selon la revendication 5, caractérisés par le fait que le diaphragme est un "Spectra Por 6" (produit de Spectrum Medical Industries Co). 7.- Extraits à l'eau chaude de l'écorce du margousier possédant une activité antinéoplastique, caractérisés par le fait qu'ils sont obtenus en traitant successivement l'écor- ce de margousier avec un solvant organique polaire ayant une constante diélectrique de 15 à 35 et avec de l'eau à une température de O à 400C, en soumettant le résidu provenant desdits traitements à une extraction avec de l'eau chaude et en purifiant ledit extrait par précipitation avec un alcool ou par dialyse. 8.- Extraits à l'eau chaude de l'écorce du margousier selon la revendication 7, caractérisés par le fait que ledit solvant organique polaire est un alcool. 9.- Extraits à l'eau chaude de l'écorce du margousier selon la revendication 8, caractérisés par le fait que ledit alcool est le méthanol. 10.- Extraits à l'eau chaude de l'écorce du margousier selon la revendication 8, caractérisés par le fait que ledit alcool est l'éthanol. 11.- Extraits à l'eau chaude de l'écorce du margousier possédant une activité antinéoplastique, caractérisés par le fait qu'ils sont obtenus en traitant successivement l'écorce du margousier avec un solvant organique non-polaire ayant une constante diélectrique de 10 ou plus faible, un solvant orga- nique polaire ayant une constante diélectrique de 15 à 35 et avec de l'eau à une température de 0 à 400C, en soumettant le résidu provenant desdits traitements à une extraction avec de l'eau chaude et en purifiant ledit extrait par pré- cipitation avec un alcool ou par dialyse. 12.- Extraits à l'eau chaude de l'écorce du margousier selon la revendication 11, caractérisés par le fait que ledit solvant organique non-polaire est le benzène. 13.- Médicament possédant une activité antinéoplastique, caractérisé par le fait qu'il est constitué par un extrait à l'eau chaude d'écorce du margousier obtenu selon l'une quel- conque des revendications précédentes. 14.- Composition pharmaceutique, caractérisée par le fait qu'elle comprend à titre d'ingrédient actif un extrait à l'eau chaude d'écorce du margousier obtenu selon l'une quelconque des revendications 1 à 12, conjointement avec des excipients pharmaceutiquement acceptables.