Brevet FR2487677A1 — publié le 19820205

La présente invention concerne la dépilation d'animaux par des moyens chimiques. Le brevet australien n' 492923 et la demande de brevet australien n0 59755/80 au nom de la demanderesse décrivent l'utilisation de composés tels que la mimosine et divers phtalimidino- pentanes pour faciliter la dépilation des moutons. Leur effet est de retarder la croissance de la laine, de sorte que, selon la dose, il se crée une zone de faiblesse dans les fibres de laine, ou bien la toison tombe, ces deux conditions pouvant faciliter la récolte mécanique de la laine par une main-d'oeuvre non spécialisée. Cependant, l'utilisation à grande échelle de ces agents ne serait pas sans poser de problème, parce que les doses minimales pour la tonte sont très voisines des doses auxquelles il peut se produire des troubles métaboliques graves. L'invention repose sur la découverte que certaines substances d'origine animale agissent sur les fibres de la laine ou du poil de manière semblable aux composés ci-dessus mentionnés, mais peuvent être administrées en sûreté dans une large gamme de doses. Une substance caractéristique, isolable des glandes salivaires de la souris mâle, est connue sous le nom de facteur de croissance épidermique ou FCE. On sait, depuis de nombreuses années, que le FCE peut inhiber la vitesse de croissance de l'organisme et ralentir la croissance du poil lorsqu'on l'injecte à des souriceaux nouveaux-nés, mais son aptitude à régler la croissance de la laine n'a pas été indiquée précédemment. Le FCE est un polypeptide à 53 aminoacides (FCE 1-53). Bien que l'invention concerne en particulier le FCE, les composés qui peuvent être dénommés "analogues du FCî" présentent des propriétés semblables et peuvent être utilisés au lieu du FCE comme agents de tonte. De même que le FCE humain, le terme "analogue du FCE" utilisé dans la présente description désigne les substances sui- vantes de l'homme, du mouton et d'autres espèces:urogastrone (URO)et ses fragments, en particulier URO 1-47, URO 1-52, FCE 1-47, FCE 1-48 et FCE 151. Plus généralement, le terme comprend tous les dérivés synthétiques et naturels de la famille de polypeptides FCE qui contiennent une suite d'aminoacides (ou de succédanés d'aminoacides) efficaces pour régler la croissance du poil. En conséquence, dans son aspect le plus large, l'invention concerne un procédé pour la dépilation des animaux, qui consiste à administrer aux animaux du FCE ou un de ses analogues. Dans la présence description, le ternie "dépilation" signifie l'enlèvement de la laine ou du poil à des animaux qui sont dans une phase métabolique de production active de fibres de laine ou de poil. Les agents de dépilation selon l'invention peuvent être administrés de diverses -manières, mais de préférence par voie sous- cutanée et on peut mettre au point des programmes d'administration satisfaisant les exigences des moyens particuliers de récolte. Bien que l'invention soit applicable à de nombreuses espèces animales telles que moutons, chèvres et lapins, elle est principalement décrite ci-après en référence aux moutons. Un moyen de définir le degré d'affaiblissement de la fibre de laine est la référence à la force d'arrachage (N/ktex) nécessaire pour enlever la toison. Des procédés pour effectuer cette mesure sont 'décrits par A. J. Gordon, Aust. J. of Exp. Agric. Anim. Husb. 20, pages 40-49, et Moore et coll. Search, 12, pages 128-129. La demanderesse a trouvé que, pour la plupart des techniques de récolte qui peuvent être envisagés, si une fibre peut être enlevée avec une force d'arrachage comprise entre 2 et 6 N/ktex, la tonte peut être effectuée sans provoquer de blessure ou de fatigue inac- ceptable chez l'animal. Un autre aspect de l'invention est donc un procédé de tonte qui consiste à administrer au mouton du FCE ou un de ses analogties en quantité suffisante pour réduire la force moyenne d'arrachage de la fibre à 6 N/ktex ou moins. On a trouvé que la perfusion-sous-cutanée est un moyen particulièrement satisfaisant pour administrer le FCE à des doses efficaces. Par exemple, dans des essais indiqués ci-après, la perfusion de FCE à des taux ne dépassant pas 0,16 mg deFCE/kg 075 (kg '75 = poids corporel métabolique) permet nettement d'enle- ver facilement la toison aux animaux traités. Dans ces expériences, l'administration se fait au moyen d'une sonde placée sous la peau. D'autres techniques envisageables comprennent, par exemple, la perfusion par libération lente à partir d'une capsule ou analogue implantée, l'injection sous-cutanée ou l'administration orale. L'invention est décrite plus en détail ci-après en référence à des essais dans lesquels on a soumis à divers tr3i- tements un certain nombre de moutons mérinos adultes. Préparation des produits On prépare le FCE à partir des glances sous- maxillaires de souris mâles adultes par la méthode de Savage et Cohen (J. Biol. Chem, 247, pages 7609-7611). On prépare le dérivé FCE 1-45 par digestion tryptique du peptide intact de la manière suivante: on fait digérer environ25 mg deFCE dans un faible volume de tampon au phosphate O,05 M à pH 7 par la trypsine (50 y,Worthington Biochemical Corporation, traitée par la Lr(l- tosylamido-2-phényléthyl)chlorôméthylcétone ou TPCK) pendant 4 h à 370C. Ensuite, on ajoute encore 50 yet on répète l'incubation. Le pro- duit digéré est dialysé pendant une nuit à 10'C dans une membrane SpectraPor 6 (poids moléculaire moyen 1 000) et le produit dialysé est lyophilisé en vue du stockage jusqu'à son utilisation. Animaux Des moutons mérinos adultes sont placés à l'abri dans des parcs individuels ou des cages métaboliques. On offre aux animaux une ration d'entretien de 600 g d'un mélange en "pellets" (petits comprimés cylindriques) de 60%. de luzerne et 40%h d'avoine en un repas par jour. On donne de l'eau à boire à volonté. Administration par perfusion sous-cutanée On prépare les moutons pour des expériences de perfusion par l'insertion d'une sonde de polyéthylène sous la peau, de manière que l'orifice se trouve au voisinage du centre d'une zone tatouée de 10 x 10 cm sur la région moyenne du côté droit du corps. L'agent de tonte est dissous dans une solution stérile de sérum physiologique et celle-ci est perfusée au moyen d'une pompe Harvard fournissant un débit de 0,030 ml/min. Les animaux témoins reçoivent une perfusion de la solution de sérum physiologique seule. Les résultats obtenus sont indiqués en détail dans le tableau ci- après. De manière générale, cependant, on observe que la perfusion de quantités supérieures à environ 0,25 mg de FCE/kg ' entraIne la chute de toute la toison en environ 7 jours. Avec des perfusions de moins de 0,25 mg de FCE/kg 0'75 les toisons restent, mais les fibres peuvent être facilement enlevées à la main. Les quantités de laine récoltées sur la zone tatouée de quelques animaux sont indiquées dans la figure unique du dessin annexé, dans laquelle les différentes courbes ont les significa- tions suivantes mouton n0 1; mouton n0 3; mouton n0 7; EI----] mouton n' 12; ê- mouton n1 17; O--- valeurs moyennes pour les témoins traités au sérum physiologique 0,75 A des doses telles que 0,74 et 1,86 mg de FCE/kg ' la production de laine baisse jusque près de zéro 2 semaines après le début de la perfusion. Le retour aux valeurs avant perfusion est observé 2 semaines plus tard. A des doses plus faibles, l'inhibition de la croissance de la laine est notablement moindre, l'effet maximal enregistré étant d'environ 80%. d'inhibition de la croissance de la laine. Ceci se produit environ 4 semaines après la perfusion, mais la croissance normale de la laine est atteinte environ 2 semaines après. On trouve que les perfusions du peptide analogue FCE 1-45 donnent des résultats étroitement semblables. Pendant le cours des essais ci-dessus, on prélève sur les animaux choisis des échantillons de sang à intervalles d'environ 30 min après le début du traitement. Une corrélation entre les déterminatior radioimmunologiques des concentrations de FCE dans le plasma et les forces nécessaires ultérieurement pour arracher la laine de la peau du mouton montrent l'intérêt d'établir une concentration en FCE dans le plasma d'au moins environ 10 ng/ml pendant une durée d'au moins environ 15 h pour modifier suffisamment la croissance de la laine afin que la toison puisse Étre facilement enlevée à la main. TABLEAU Perfusion sous-cutanée de FCE, FCE 1-45 ou de sérum physiologique. Poids Dose de FCE MoutOn Durée de Force d'arrachage n Traitement corpoperfusion (N/ktex) Résultat rel Totale mg/kgf (h) ler jour 9e jour (kg) I FCE 36,3 27,5 1,86 66 12,2 0,1 la toison tombe 2 Sérum physiologique 37,0 - - 66 10,4 9,0 pas d'effet 3 FCE 41,0 11,7 0,74 28 8,9 0 la toison tombe 4 FCE - 11,7 - 28 3,4 O,3C7ejour) la toison tombe FCE - 10,0 - 28 4, 1 O,2(7e jour) la toison tombe 6 sérum physioogique 41,0 - - 28 14,3 - pas d'effet 7 FCE 49,0 5,8 0,32 28 7,5 0,4 la toison tombe 8 FCE 47,6 4,7 0,26 28 21,3 2,1 la toison tombe 9 FCE 47,4 4,7 0,26 28 12,5 1,4 la toison tombe FCE 42,0 4,7 0,28 26,5 7,6 0,1 la toison tombe 11 s9rum physiclgique 48,0 - - 28 6,0 7,5 pas d'effet 12 FCE 45,4 2,9 0,17 28 6,6 0,6 fibre affaiblie 13 FCE 30,6 2,4 0,19 25 11,3 2,1 fibre affaiblie 14 FCE 29,4 2,0 0,16 26,5 9,3 1,5 fibre affaiblie sérum physiologique 40,1 - - 28 3,1 5,8 pas d'effet 16 FCE - 1,O - 28 5,5 3,6 fibre affaiblie 17 FCE 40,8 1,O 0,06 28 10,6 8,7 pas d'effet 18 sérum physidogique 38,6 - - 28 8, 5 6,6 pas d'effet 19 FCE 31,8 5,0 0,37 7 7,0 0,4 la toison tombe FCî 41,0 5,0 0,31 7 17,9 1,0 la toison tombe 21 FCE 41,9 5,0 0,30 7 11,4 0,8 la toison tombe 22 FCE 45,0 5,0 0,29 7 9,0 1,0 la toison tombe 23 FCE 50,6 5, 0 0,26 7 12,7 2,8 la toison tombe 24 FCE 28,6 2,4 0,20 48 14,8 3,2 fibre affaiblie FCE 28,4 2,4 0,19 48 11,7 2,4 fibre affaiblie 26 FCE 1-45 42,0 4,9 0,30 26,5 5,6 0,3 la toison tombe 27 FCE 1-45 - 1,0 - 28 4,1 3,1 fibre affaiblie ta Co 1-J 1-j Il est entendu que l'invention n'est pas limitée aux modes de réalisation préférés décrits ci-dessus à titre d'illus- tration et que l'homme de l'art peut y apporter diverses modifica- tions et divers changements sans toutefois s'écarter du cadre et de l'esprit de l'invention. 24877 7 R E V E N D I C A T 0 N S 1 - Procédé pour la dépilation d'animaux, caracté- risé en ce qu'il consiste à administrer à ces animaux le facteur de croissance épidermique ou FCE ou ses analogues. 2 - Procédé selon la revendication 1, caractérisé en ce que l'analogue du FCE est une urogastrone. 3 - Procédé selon l'une quelconque des revendica- tions précédentes, caractérisé en ce que l'on administre le FCE ou son analogue à une dose suffisante pour réduire la force de dépila- tion à 6 N/ktex ou moins. 4 - Procédé selon la revendication 1 ou 2, carac- térisé en ce que l'on administre le FCE ou son analogue à une dose suffisante pour établir une concentration en FCE dans le plasma d'au moins environ 10 ng/ml pendant au moins environ 15 h. 5 - Procédé selon l'une quelconque des revendica- tions précédentes, caractérisé en ce que la dose de FCE ou de son 0,75 analogue est d'au moins 0,25 mg/kg 6 - Procédé selon l'une quelconque des revendica- tions précédentes, caractérisé en ce que le FCE ou son analogue est administré par voie sous-cutanée. 7 - Procédé selon l'une quelconque des revendica- tions précédentes, caractérisé en ce que l'animal est un mouton. 8 - Application du FCE ou d'un de ses analogues pour la dépilation des animaux.