Brevet FR2497230A1 — publié le 19820702

La présente invention concerne un procédé de préparation d'esters monoalkyliques d'acide f -(S)-aminoglutarique, optiquement actifs. Les esters monoalkyliques optiquement actifs d'acide P -(S)-aminoglu- tarique sont des matières de départ de grande utilité pour la synthèse des antibiotiques 6 -lactamiques du type carbapénème tels que la thiénamycine qui exigent une activité optique; il en résulte que le développement d'un procédé de préparation aisé et bon marché des esters optiquement actifs était très attendu. M. Ohno, l'un des inventeurs de la présente invention, et d'autres chercheurs ontmis au point un procédé de préparation d'un ester monométhylique optiquement actif d'acide P -(S)- aminoglutarique (VI) dans lequel l'ester diméthylique optiquement inactif de l'acide P -benzyloxylxycarbonylaminoglutarique (IV) est hydrolysé selon le mode asymétrique avec l'estérase provenant de foie de porc pour préparer un ester monoéthylique optiquement actif d'acide r -(S)benzyloxycarbonylamincglutarique (V), le produit étant ensuite soumis à une hydrogénolyse catalytique pour éliminer le groupe benzyloxycarbonyle et obtenir le produit désiré. Le processus réactionnel peut se schématiser de la manière suivante: Z Z I I HN eH -N H c HC H CH2 CH2 CH2 CH2 MeOOC COOMe MeOOC COOH (IV) (V) H2N,H C CH2 CH2 1 12 MeOOC COOH (VI) Z reprsentant le groupe C-OCH2Ph et Me reprsentant CH3 (demande de brevet Z représentant le groupe C-00H2P et Me représentant CH3 (demande de brevet japonais nO 146344/1980 au nom de Ohno et al.; Ohno et al. J. Am. Soc. 1981, 103, 2405 à 2406). La Demanderesse a effectué des recherches pour obtenir un procédé permettant la production en masse d'esters monoaikyliques optiquement actifs d'acide P -(S)-aminoglutarique, selon lequel on effectue une hydrolyse asymétrique à l'aide de microorganismes; à la suite de ces recherches, la Demanderesse a constaté qu'il existe de nombreux microorganismes capables d'effectuer une hydrolyse stéréospécifique seulement de l'un des groupes esters parmi les esters dialkyliques protégés en P de l'acide aminoglutarique afin de transformer les diesters en esters monoalkyliques de l'acide (S)-aminoglutarique protégé en P. La présente invention concerne un procédé de préparation d'esters monoalkyliques optiquement actifs d'acide P-(S)-aminoglutarique répondant à la formule (I): H2N H / 2 2 C / C\H2 (I) I I ROOC COOH dans laquelle R représente un radical alkyle contenant de 1 à 4 atomes de carbone, procédé selon lequel on soumet un ester dialkylique d'acide amino- glutarique protégé en p et répondant à la formule (II): A I HN H C 2/ 1CH2 (II) I I ROOC COOR dans laquelle R est tel que défini plus haut et A représente un groupe amino- protecteur susceptible d'être éliminé par hydrogénolyse catalytique ou une hydrolyse douce, à l'action d'un bouillon de culture, de cellules ou de cellules traitées d'un microorganisme capable d'hydrolyser stéréosélectivement seulement l'un des groupes esters dudit ester dialkylique de l'acide amino- glutarique protégé en, ce microorganisme appartenant au genre Candida, Pichia, Trichosporon, Geotrichum, Aspergillus, Absidia, Actinomucor, Helin- costylum, Mucor, Montierella, Paecilomyces, Zygorhynchus, Fusarium, Cricinella, Cunninghamella, Rhizopus, Penicillium, Proteus, Nocardia, Micrococcus, Hafnia, Brevibacterium, Torulopsis, Debaryomyces, Endomyces, Saccharomycopsis, Crypto- coccus, Pachysolen, Sporobolomyces, Syringospora, Corynebacterium, eeudomonas, Arthrobacter, Bacillus, Staphylococcus ou Streptococcus, pour produire respectivement des esters monoalkyliques optiquement actifs d'acide (S)amino- glutarique protégé en, répondant à la formule (III) A I HN H c C li C 4CXII (III) 12 1C2 * I I ROOC COOH dans laquelle R et A sont tels que définis ci-dessus et élimine ensuite le groupe amino- protecteur du produit (III). Le groupe amino-protecteur (A) des esters dialkyliques d'acide amino- glutarique protégé en p (II) utilisés comme composés de départ selon l'inven- tion est choisi pour pouvoir être éliminé par une hydrogénolyse catalytique ou une hydrolyse douce; ainsi ce groupe peut être, par exemple, un radical aralkyle tel que benzyle ou benzhydryle; un radical aralkyloxycarbonyle tel que benzyloxycarbonyle; un radical aralkyloxycarbonyle substitué tel que p-nitrobenzyloxycarbonyle, p-méthoxybenzyloxycarbonyle ou pchlorobenzyloxy- carbonyle; ou un radical alcoxycarbonyle de 4 à 8 atomes de carbone tel que t-butoxycarbonyle ou t-amyloxycarbonyle. La matière de départ, c'est-à-dire l'ester dialkylique d'acide amino- glutarique protégé enp (II), peut être préparée de la façon indiquée sur le schéma de réaction ci-après, c'est-à-dire par réaction d'un ester dialkylique d'acide 3-cétoglutarique (VII) avec de l'acétate d'ammonium pour former un composé aminé insaturé (VIII) ou (IX), réduction de ce composé aminé insaturé par du cyanoborohydrure de sodium pour préparer un ester dialkylique d'acide aminoglutarique (III) et introduction d'un groupe amino-protecteur (A) dans le groupe amino du produit (III) (demande de brevet japonais n 146343/1980 au nom de Ohno et al.; Ohno et al., J. Am. Chem. Soc. 1981, 103, 2405-2406) ROOC-CH ROOC-CH2 o Il C H\ CH2-COOR CH3COONH4 (VII) NH2 /c ROOC-CH2 CH-COOR (VIII) NaBH3CN H2N H C --- ROOC-CH2 2 ROOC-CH2 0oH -C ROOC-CH2 CH2-COOR (IX) A HN C ROOC-CH2 (III) H CH -COOR (II) Dans le schéma ci-dessus, R et A sont tous deux tels que définis plus haut. En variante, on peut préparer la matière de départ (II) en synthétisant un ester dialkylique d'acide 3-aminoglutarique à partir d'un ester dialkylique d'acide malonique EH. Fever et W.A. Swarts, JA.C.S., 77, 5427 (1955)], après quoi on introduit dans le produit le groupe amino-protecteur. En ce qui concerne le microorganisme utilisé dans le procédé selon l'invention, celui-ci doit être capable d'hydrolyser stéréosélectivement seulement l'un des groupes esters de l'ester dialkylique d'acide aminoglutarique protégé en 5 (II) et on peut citer notamment les microorganismes suivants: Candida arborea IAM 4147, Candida rugosa IFO 0750, Pichia farinosa IFO 0534, Trichosporon beigelii ATCC 22310, Trichosporonbrassicae IFO 1584, Geotrichum vanryiae CBS 439.64, Aspergillus niger IAM 3008, Absidia hyalospora HUT 1025, Actinomucor repens HUT 1049, Helicostylum nigricans HUT 1106, Mucor alternans NH HUT 1115, Mortierella isabellina HUT 10lllO, Paecilomyces varioti HUT 4018, ZygorhYnchus moelleri HUT 1305, Fusarium merismoides IFO 30040, Cricinella mucoroides HUT 1079, Cunninghamella elegans HUT 1098, Mucor javanicus HUT 1155, RhizopUs javanicus HUT 1252, Penicillium digitatum IFO 9370, Proteus mirabilis IFO 3849, Nocardia corallina IFO 3338, Micrococcus luteus IFO 12708, Hafnia alvei IFO 3731, Brevibacterium linens IFO 12142, Torulopsis candida IFO 0380, Torulopsis inconspicua IFO 0621, Torulopsis pinus IFO 0741, Debaryomyces marama IFO 0668, Debaryomyces hansenii IFO 0794, Endomyces tetrasperma CBS 765.70, Saccharomycopsis lipolytica IFO 0746, Cryptococcus albidus IFO 0378, Pachysolen tannophilus IFO 1007, Sporobolomyces salmonicolor IAM 12249, Syringospora claussenii IFO 0759, Corynebacterium sepedonicum IFO 13763, Corynebacterium xerosis IFO 12684, Pseudomonas riboflavina IFO 13584, Pseudomonas aeruginosa IFO 13130, Arthrobacter paraffineus ATCC 21218, Bacillus megaterium ATCC 10778, Staphylococcus aureus IFO 3060, Streptococcus faecalis IFO 12964. IAM: Institut de Microbiologie Appliquée de l'Université de Tokyo, Japon IFO: Institut de Fermentation à Osaka, Japon HUT: Faculté d'Ingéniérie de l'Université d'Hiroshima, Japon ATTC: American Type Culture Collection, U. S.A. CBS: Centraalbureau voor Schimmelcultures Baar, Pays-Bas. On effectue habituellement la culture de ces microorganismes dans un milieu liquide mais celle-ci pourrait également être réalisée sur une surface solide. Comme milieu de culture, on utilise un milieu dans lequel on peut incorporer de façon appropriée des sources de carbone organique, des sources d'azote, des vitamines et des sources minérales. On effectue la culture à une température de 20 à 50 C à un pH de 3 à 11. On peut favoriser la croissance des microorganismes par aération et agitation. Pour l'hydrolyse stéréosélective du substrat, c'est-à-dire des esters dialkyliques de l'acide aminoglutarique avec protection en, on peut faire agir les microorganismes par l'une des techniques suivantes: (1) un procédé dans lequel on effectue l'hydrolyse parallèlement à la culture des microor- ganismes en ajoutant le substrat au milieu de culture dès le début de la culture ou (2) un procédé selon lequel on effectue l'hydrolyse en mettant le substrat en contact avec un bouillon de culture, des cellules ou des cellules traitées, de microorganismes provenant d'une culture préalable des micro- organismes. Du point de vue de l'isolement du produit après l'achèvement de la réaction, il est souhaitable d'ajouter le substrat à une suspension hautement concentrée en cellules, obtenue en concentrant un bouillon de culture des microorganismes par centrifugation ou une technique équivalente. Pour rendre le traitement plus commode, on peut aussi utiliser les cellules des micro- organismes à l'état lyophilisé; on peut aussi les utiliser sous forme d'un homogénat ou d'un extrait exempt de cellules. La concentration du substrat, c'est-à-dire de l'ester dialkylique d'acide aminoglutarique protégé en 5, dans le mélange de réaction peut aller de 0,01 % à une valeur aussi élevée qu'environ 50 %. Les esters dialkyliques d'acide aminoglutarique avec protection en, ne sont en règle générale que difficilement solubles dans l'eau, mais ce facteur ne gêne nullement la réaction envisagée si l'on maintient un contact suffisant par agitation, entre le substrat et un bouillon de culture, des cellules ou des cellules traitées, d'un microorganisme; toutefois, on obtient de meilleurs résultats en ajoutant un solvant miscible à l'eau tel que l'acétone ou un agent tensio-actif tel que "Triton X-100"1 (éther alkylarylique de polyéthylène-glycol) ou "Tween 80" (monooléate de polyoxyalkylène-sorbitanne) au milieu en une quantité qui ne gêne pas la réaction. Le pH au moment de la réaction d'hydrolyse stéréosélective par les microorganismes est de 3 à 11 et, de préférence, de 6 à 8. Quand on effectue la réaction avec une forte concentration de cellules, il est cependant recommandé de maintenir le pH à une valeur optimale par addition d'un réactif de neutralisation étant donné que le pH baisse à mesure de l'accumulation pro- gressive dans le milieu de réaction du produit, c'est-à-dire de l'ester monoalkylique d'acide (S)-aminoglutarique avec protection en p. La tempé- rature de la réaction d'hydrolyse stéréosélective est choisie de façon à se conformer au microorganisme en question, cette température étant normalement de 15 à 50 C. On peut isoler les esters monoalkyliques de l'acide (S)-aminoglutarique protégé en P obtenus par la réaction d'hydrolyse stéréosélective, à partir du mélange de réaction par les techniques ordinaires. Par exemple, après élimination dessibstances insolubles telles que les cellules, par centri- fugation, on règle le pH du mélange de réaction à 1 et on extrait avec de l'acétate d'éthyle. On sèche cet extrait sur du sulfate de sodium anhydre et le concentre pour obtenir un ester monoalkylique huileux d'acide (S)amino- glutarique protégé en P (III). On purifie le produit par chromatographie sur colonne de gel de silice en utilisant un solvant approprié pour l'élution. L'élimination du solvant à partir de l'éluat laisse des cristaux d'ester monoalkylique d'acide (S)-aminoglutarique protégé en P (III). On élimine ensuite le groupe amino-protecteur (A) du produit (III) par utne hydrogénolyse catalytique ou une hydrolyse douce et on obtient le composé désiré (I). Quand le groupe amino-protecteur (A) est un radical aralkyle, aralkyloxy- carbonyle ou aralkyloxycarbonyle substitué, on peut l'éliminer par hydrogénolyse catalytique alors que dans le cas d'un groupe alcoxycarbonyle de 4 à 8 atomes de carbone, on utilise une hydrolyse douce. On effectue l'hydrogénolyse catalytique en mettant en contact le composé (III) avec de l'hydrogène gazeux au sein d'un solvant tel qu'un alcool aliphatique inférieur, par exemple le méthanol ou l'éthanol, ou encore un mélange d'un alcool aliphatique inférieur et d'eau, en présence d'un catalyseur tel que le charbon de bois palladié (5 à 20 %) ou le noir de palladium (5 à 20 %), à température ambiante et sous pression atmosphérique pendant une durée de 0,5 à 2 heures. Une fois l'hydrogénolyse catalytique terminée, on peut isoler le produit (I) sous forme d'une poudre en filtrant le mélange de réaction et en concentrant ensuite le filtrat. D'autre part, on effectue l'hydrolyse douce en faisant réagir le composé (III) avec de l'acide chlorhydrique dans un solvant organique tel que l'acétate d'éthyle, l'éthanol, l'acide acétique ou le dioxanne à tempé- rature ambiante pendant 30 à 60 minutes, ou bien en faisant réagir le composé (III) avec l'acide trifluoroacétique dans l'anisole ou en l'absence d'un solvant à température ambiante pendant 0,5 à 2 heures. Une fois l'hydrolyse terminée, on peut isoler le produit (I) en éliminant le solvant et l'acide par concentration et chromatographie par échange d'ions. Les exemples suivants, dans lesquels toutes les proportions sont en poids, servent à illustrer l'invention sans aucunement en limiter la Dortée. EXEMPLE 1 On prépare un milieu nutritif aqueux ayant la composition suivante 4 % de glucose, 0,3 % d'extrait de levure, 0,3 % d'extrait de viande, 0,3 % de peptone, 0,2 % de (NH4)2 PO4, 0,1 % de KH2PO4, ph 7,0. On verse 400 ml de ce milieu dans un ballon d'agitation d'une contenance de 2 litres et on stérilise l'ensemble à 1200 C pendant 15 minutes. On inocule le milieu de culture dans le ballon, avec 10 ml de l'une des cultures d'ensemencement de microorganismes énuméréesdans le tableau I, soumises au préalable à une culture dans un milieu de même composition que ci-dessus. On incube le milieu de culture inoculé avec agitation à 30 C pendant 24 heures. On prépare dix cultures pour chaque souche pour obtenir chaque fois 4 litres de bouillon de culture. On récolte les cellules du bouillon par centrifugation. A une suspension de cellules dans 1 litre de tampon phosphaté M/15 (pH 7,0), on ajoute une solution de 3 g d'ester diméthylique d'acide P -benzyloxycarboxylaminoglutarique dans 30 ml d'acétone. On place le mélange dans un mini-fermenteur d'une capacité de 3 litres et on effectue la réaction à 30 C pendant 6 heures. Une fois la réaction terminée, on règle le pH du surnageant obtenu par centrifugation, à une valeur de 1 et on extrait avec 2 litres d'acétate d'éthyle. Après séchage de l'extrait sur du sulfate de sodium anhydre, on évapore le solvant sous pression réduite, on dépose le résidu sur une colonne de gel de silice préparée par mise en suspension du gel de silice dans le benzène et on élue avec un mélange de benzène et d'acétone (10:1). On recueille des fractions d'ester monométhylique d'acide P benzyloxycarbonylaminoglutarique et on évapore le solvant sous pression réduite pour obtenir des cristaux blancs de l'ester monométhylique d'acide f benzyloxycarbonylaminoglutarique. Le spectre RMN et la valeur RF sur le chromatogranme en couche mince de gel de silice (acétate d'éthyle: éthanol: eau = 5:1:1) sont en accord avec ceux d'un échantillon authentique préparé par le procédé d'Ohno en utilisant l'estérase provenant du foie de porc (demande de brevet japonais n 146344/ 1980). La rotation spécifique de tous les produits pour chaque microorganisme est dans l'intervalle de [i]D = + 0,55 à 0,71 (C=6, CHCt3), montrant que tous les produits sont des esters monométhyliques d'acide P -(S)benzyloxy- carbonylaminoglutarique. Dans 20 ml de méthanol, on dissout 200 mg de l'ester monométhylique cidessus. Après addition de 40 mg de charbon de bois palladié à 10 %, on agite la solution en atmosphère d'hydrogène pendant 30 minutes. On filtre le mélange de réaction et on concentre pour obtenir 75 à 97 mg de cristaux blancs de l'ester monométhylique d'acide P -(S)-aminoglutarique dont le spectre RMN est en accord avec celui d'un échantillon authentique et dont la rotation sp2cifique est []5 = 5,0 5,61 (C3, H20). spécifique est [VJaD -5,40 à 5,610 (C3 H2 J* TABLEAU I Production d'ester Production d'ester Souche monométhylique monométhylique d'acide t-(S)- d'acide /-(S)- benzyloxycarbonyl- aminoglutarique (*) glutarique(mg) (mg) Candida arborea IAM 4147 2150 93 Candida rugosa IFO 0750 457 85 Pichia farinosa IFO 0534 1940 97 Trichosporon beigelli 415 75 ATCC 22310 Trichosporon brassicae 383 79 IFO 1584 Geotrichum vanryiae 970 82 CBS 439.64 Aspergillus niger IAM 3008 230 76 Absidia hyalospora 421 95 HUT 1025 Actinomucor repens 290 75 HUT 1049 Helicostylum nigricans 301 83 HUT 1106 Mucor alternans HUT 1115 246 89 Mortierella isabellina 532 91 HUT 1110 Paecilomyces varioti 279 83 HUT 4018 Zygorhynchus moelleri 296 78 HUT 1305 Fusarium merismoides 252 87 IFO 30040 Cricinella mucoroides 209 85 HUT 1079 Cunninghamella elegans 754 89 HUT 1098 _________________________________ J _____________________.1 ______________________ Production d'ester Production d'ester monométhylique monométhylique Souche d'acide P-(S)- d'acide 9-(S)- benzyloxycarbonyl- aminoglutarique (*) glutarique (mg) (mg) Mucor javanicus HUT 1155 773 93 Rhizopus javanicus 319 77 HUT 1252 Penicillium digitatum 630 81 IFO 9370 Proteus mirabilis 212 76 IFO 3849 Nocardia corallina 711 91 IFO 3338 Micrococcus luteus 320 79 IFO 12708 Hafnia alvei IFO 3731 430 91 Brevibacterium linens 315;89 IFO 12142 Torulopsis candida 450 89 IFO 0380 Torulopsis inconspicua 521 95 IFO 0621 Torulopsis pinus 1930 91 IFO 0741 Debaryomyces marama 1930 90 IFO 0668 Debaryomyces hansenii 1785 92 IFO 0794 Endomyces tetrosperma 389 86 CBS 765.70 Saccharomycopsis lipolytica 534 91 IFO 0746 Cryptococcus albidus 295 85 IFO 0378 1 1 Production d'ester Production d'ester monométhylique monométhylique Souche d'acide i -(S)- d'acides -(S)- belzyloxycarbonyl- aminoglutarique (*) glutarique () (mg) (mg) l l(g __ Packysolen tannophilus 369 96 IFO 1007 Sporobolomyces salmonicolor 568 92 IAM 12249 Syringospora claussenii 492 87 IFO 0759 Corynebacterium spedonicum 396 92 IFO 13763 Corynebacterium xerosis 563 91 IFO 12684 Pseudomonas riboflavina 1956 96 IFO 13584 Pseudomonas aeruginosa 1150 95 IFO 13130 Arthrobacter paraffineus 976 93 ATCC 21218 Bacillus megaterium 286 87 ATCC 10778 Staphylococcus aureus 315 94 IFO 3060 Streptococcus faecalis 425 87 IFO 12964 (*) On effectue la déprotection par hydrogénolyse catalytique de chaque mg d'ester monométhylique d'acide p -(S)-benzyloxycarbonylglutarique provenant de la réaction avecchaque microorganisme. Les quantités d'ester monométhylique ainsi obtenu sont indiquées. EXEMPLE 2 On prépare des suspensions de cellules en cultivant chacun des micro- organismes suivants: Candida arborea IAM 4147, Pichia farinosa IFO 0534, Geotrichum vanryias CBS 439.64, Torulopsis pinus IFO 0741, Debaryomyces marama IFO 0668 et Pseudomonas riboflavina IFO 13584 par la même technique que dans l'exemple 1. A chaque litre de chaque suspension, on ajoute 3 g d'ester diméthylique d'acide P -t- butoxycarbonylaminoglutarique et on effectue la réaction dans un mini- fermenteur d'une contenance de 3 litres avec agitation à 30 C pendant 6 heures. Après l'achèvement de la réaction, on extrait le produit qui est l'ester monométhylique de (S)-t-butoxycarbonylaminoglutarique et on purifie comme dans l'exemple 1. On fait alors réagir le produit avec cm3 d'acide trifluoroacétique en l'absence de solvant à température ambiante pendant 1 heure. On concentre le mélange sous pression réduite, on isole le produit et on le purifie par chromatographie par échange d'ions pour obtenir des cristaux blancs deester monométhylique d'acide f,-(S)- aminoglutarique en quantités indiquées dans le tableau II. Le spectre RMN de chaque produit est en accord avec celui d'un échantillon authentique et la rotation spécifique est [ 25]D -5,50 à 5,610 (C=3, H20) de sorte que les produits sont bien tous des esters monométhylique3 de l'acide P -(S)-aminoglutarique. TABLEAU II Production d'ester monométhylique Souche d'acide -(S)-aminoglutarique Candida arborea IAM 4147 1020 mg Pichia farinosa IFO 0534 975 mg Geotrichum vanryiae 867 mg CBS 439.64 Torulopsis pinus IFO 0741 880 mg iDebaryomyces marama830 mg i IFO 0668 Pseudomonas riboflavina IFO 13584 __________________________________________________________________________ ________ J 958 mg EXEMPLE 3 On cultive chacun des microorganismes suivants: Candida arborea IAM 4147, Pichia farinosa IFO 0534, Geotrichum vanryiae CBS 439.64, Torulopsis pinus IFO 0741, Debaryomyces marama IFO 0668 et Pseudomonas riboflavina IFO 13584, de la même façon que dans l'exemple 1 pour préparer 2 litres de sus- pension cellulaire de chaque souche. On divise chaque suspension en deux parties. A la première, on ajoute 3 g d'ester diéthylique d'acide P benzyloxy- carbonylglutarique et à la seconde partie, on ajoute 3 g d'ester diéthylique d'acide P -t-butoxycarbonylaminoglutarique. On effectue chaque réaction avec agitation dans un mini-fermenteur à pH 7,0 et à une température de 30 C pendant 24 heures. Une fois la réaction terminée, on effectue l'extraction et la purification du produit comme dans les exemples 1 et 2 et on obtient l'ester monoéthylique d'acide P benzyloxycarbonylglutarique et l'ester monoéthylique d'acidep -tbutoxycarbonylaminoglutarique. On effectue la déprotection de chaque ester monoéthylique comme dans les exemples précédents afin d'obtenir dans chaque cas une substance huileuse en quantité indiquée dans le tableau III. Le spectre RMN est en accord avec celui d'un échantillon authentique d'ester monoéthylique d'acideP -(S)-aminoglutarique. La rotation spécifique de la substance est de [ 2]D = 3,80 à - 3,85 (C=4, H20). On confirme ainsi que la substance est l'ester monoéthylique d'acide -(S)- aminoglutarique. TABLEAU III Production d'ester Souche Substrat monoéthylique d'acide P -(S)-amino- glutarique Candida arborea IAM 4147 970 mg Ester Pichia farinosa IFO 0534 diéthylique 850 mg d'acide Geotrichum vanryiae 5 -benzyloxy- 742 mg *- CBS 439.64 carbonylamino- glutarique Torulopsis pinus IFO 0741 g 620 mg Debaryomyces marama 590 mg IFO 0668 Pseudomonas riboflavina 710 mg IFO 13584 Candida arborea IAM 4147 Ester 732 mg diéthylique Pichia farinosa IFO 0534 d'acide 690 mg -t-butoxy- Gestrichum vanryiae carbonylamino- 703 mg CBS 439.64 glutarique Torulopsis pinus 523 mg IFO 0741 Debaryomyces marama 465 mg IFO 0668 Pseudomonas riboflavina 550 mg IFO 13584 REVENDICATIONS 1.- Procédé de préparation d'un ester monoalkylique optiquement actif d'acide -(S)-aminoglutarique répondant à la formule (I): H2N H C CH 2 CH2 (I) 1 2 ROOC COOH dans laquelle R représente un radical alkyle de 1 à 4 atomes de carbone, caractérisé en ce qu'il consiste à soumettre un ester dialkylique d'acide aminoglutarique protégé enp, répondant à la formule (II): A HN H C 12 1 2 l2 (I ROOC COOR dans laquelle R est tel que défini plus haut et A représente un groupe amino- protecteur éliminable par hydrogénolyse catalytique ou par une hydrolyse douce, à l'action d'un bouillon de culture, de cellules ou de cellules traitées, d'un microorganisme capable d'hydrolyser stéréosélectivement seulement l'un des groupes esters dudit ester dialkylique d'acide aminoglutarique protégé en p (II) et appartenant au genre Candida, Pichia, Trichosporon, Geotrichum, Asper- gillus, Absidia, Actinomucor, Hilicostylum, Mucor, Mortierella, Paecilomyces, Zygorhynchus, Fusarium, Cricinella, Cunninghamella, Rhizopus, Penicillium, Proteus, Nocardia, Micrococcus, Hafnia, Brevibacterium, Torulopsis, Debaryomyces, Endomyces, Saccharomycopsis, Cryptococcus, Pachysolen, Sporobolomyces, Syringospora, Corynebacterium, Pseudomonas, Arthrobacter, Bacillus, Staphylo- coccus ou Streptococcus, pour produire un ester monoalkylique optiquement actif d'acide (S)-aminoglutarique protégé en p répondant à la formule (III) A I HN H C / CH (III) jH2 1 2 ROOC COOH dans laquelle R et A sont tels que définis plus haut, puis à éliminer le groupe amino-protecteur du produit (III). 2.- Procédé selon la revendication 1, caractérisé en ce que A représente un radical araikyle, aralkyloxycarbonyle, araikyloxycarbonyle substitué ou alcoxycarbonyle de 4 à 8 atomes de carbone. 3.- Procédé selon la revendication 2, caractérisé en ce que le radical aralkyle est le radical benzy]e ou benzhydryle. 4.- Procédé selon la revendication 2, caractérisé en ce que le radical aralkylcxycarbonyle est le radical benzyloxycarbonyle. 5.- Procédé selon la revendication 2, caractérisé en ce que le radical aralkyloxycarbonyle substitué est le radical p-nitrobenzyloxycarbonyle, p-méthoxybenzyloxycarbonyle ou p -chlorobenzyloxycarbonyle. 6.- Procédé selon la revendication 2, caractérisé en ce que le radical alcoxycarbonyle de 4 à 8 atomes de carbone est le radical tbutoxycarbonyle ou t-amyloxycarbcnyle. 7.- Procédé selon l'une quelconque des revendications 1 à 6, caractérisé en ce que R est le radical méthyle ou éthyle. 8.- Procédé selon l'une quelconque des revendications précédentes, caractérisé en ce qu'on élimine le groupe A par hydrogénolyse catalytique ou par hydrolyse douce. 9.- Procédé selon la revendication 1, caractérisé en ce que A représente un radicalaralkyle, aralkyloxycarbonyle ou aralkyloxycarbonyle substitué et en ce que l'on effectue son élimination par hydrogénolyse catalytique. 10.- Procédé selon la revendication 9, caractérisé en ce qu'on effectue l'hydrogénolyse catalytique en présence de charbon de bois palladié ou de noir de palladium à titre de catalyseur. 11.- Procédé selon la revendication 1, caractérisé en ce que A représente un radical alcoxycarbonyle de 4 à 8 atomes de carbone et en ce qu'on l'élimine par hydrclyse douce. 12.- Procédé selon la revendication 11, caractérisé en ce qu'on effectue l'hydrolyse douce en utilisant de l'acide chlorhydrique dans un solvant organique. 13.- Procédé selon la revendication 11, caractérisé en ce qu'on effectue l'hydrolyse douce avec de l'acide trifluoroacétique. 14.- Procédé selon l'une quelconque des revendications précédentes, carac- térisé en ce qu'on soumet le composé (II) à l'action d'un bouillon de culture, de cellules ou de cellules traitées, du microorganisme à un pH de 6 à 8. 15.- Procédé selon l'une quelconque des revendications précédentes, caractérisé en ce qu'on soumet le composé (II) à l'action d'un bouillon de culture, de cellules ou de cellules traitées, du microorganisme à une tempé- rature de 15 à 500 C.