Brevet FR2489343A1 — publié le 19820305

Nouveaux polymères de lysine utilisables comme supports pour la préparation de produits de diagnostic et produits obtenus. La présente invention concerne de nouveaux poly- mères de lysine utilisables comme supports pour la préparation de produits de diagnostic et, en particulier,pour la préparation de pénicilloyl-polylysines pour le diagnostic des allergies aux péni- cillines et autres antibiotiques du type -lactame. Elle concerne également un procédé de préparation de tels polymères de lysine et les produits de diagnostic obtenus en utilisant lesdits polymères. En 1960, des produits de dégradation de la péni- cilline, et en particulier l'acide benzylpénicillanique furent identifiés comme responsables de la formation de déterminants anti- gènes impliqués dans l'allergie à la pénicilline. Le déterminant antigène principal responsable a été alors identifié comme étant le groupe benzylpénicilloyle (BPO). En 1962, Parker et de Weck préparaient pour la première fois un conjugué des groupes benzyl- penicilloyle avec un polymère de la L-lysine. Ce réactif fut ensuite bientôt utilisé comme test cutané pour déceler l'hypersensibilité des malades allergiques à la pénicilline. Depuis lors, de nombreuses études sur ce type de réactif, habituellement connu sous l'abré- viation PPL,ont été publiées aussi bien aux Etats-Unis d'Amérique qu'en Europe. Bien qu'on admette en général l'utilité du PPL comme réactif cutané pour déceler l'allergie à la pénicilline, plusieurs facteurs ont empêché jusqu'à maintenant sa production à l'échelle industrielle. Ces facteurs sont les suivants: Tout d'abord les polymères de L-lysine utilisés jusqu'à maintenant comme véhicules des groupes BPO sont préparés par une polymérisation au hasard, selon un procédé connu (Katchalski et col., Prot. Chem. 13, 243,-1958). Ceci a pour résultat une très grande hétérogénéité dans la répartition des poids moléculaires des polynères de L-lysine ainsi obtenus et probablement également dans le degré de substitution des molécules individuelles par les groupes BPO. Même dans des conditions contrôlées, la répartition des poids moléculaires des préparations de PPL est difficile à reproduire d'un lot à Vautre. L'hétérogénéité des préparations de PPL couramment utilisées jusqu'à maintenant est probablement la cause principale des divergences observées dans les résultats obtenus avec diverses préparations. Il est donc apparu souhaitable, pour la préparation de ces produits de diagnostic,de disposer d'un support poly-lysine reproductible et parfaitement bien défini, donnant ainsi des résultats constants sur le plan biologique. C'est l'un des objets de la présente invention. D'autre part, on a déjà montré, il y a quelques années, que, pour que les BPO-poly-lysines provoquent sur la peau des malades ou des animaux hypersensibles aux pénicillines, les réactions d'érythème et de papules recherchées, les petites molé- cules bivalentes de BPO ne sont pas très efficaces, tandis qu'une réactivité optimale semble être due à la présence de molécules de BPO de taille moyenne, contenant de 3 à 6 groupes BPO par molécule. (Levine B.B., Fellner M.J. J. Allergy, 36, 342, 1965). De récentes études avec des BPO-poly-L-lysines homogènes préparées par une synthèse par étape selon le procédé faisant l'objet de l'invention ont révélé que des molécules possédant de 8 à 12 groupes BPO sur un squelette correspondant de 8 à 12 radicaux lysine sont efficaces de façon optimale pour provoquer les réactions allergiques immé- diates spécifiques du BPO. Bien que des molécules plus petites telles que BPO2Lys2 ou BPO4Lys4 soient également capables de provoquer des réactions immédiates du type allergique, il semble dangereux de les utiliser, car de telles molécules peuvent provoquer, lors de tests cutanés chez un individu sensible, une réaction allergique généralisée au lieu d'une réaction strictement localisée de la peau. Des molécules de BP0-poly-L-lysine plus petites que 6 unités provoquent régulièrement de telles réactions généralisées chez les cobayes sensibilisés. Par conséquent, les études effectuées avec les pré- parations de BPO-poly-lysine homogènes de diverses tailles molécu- laires, selon l'invention, ont permis pour la première fois de caractériser la taille et la configuration optimales des pénicilloyl- poly-lysines (PPL) à utiliser dans les teàts cutanés pour déceler l'allergie à la pénicilline. Ainsi, on a trouvé que, pour obtenir des résultats reproductibles avec les tests cutanés, tout en ne risquant pas de provoquer des réactions généralisées, il faut, d'une part, obtenir un support de polymère de Llysine homogène, c'est-à-dire dont toutes les molécules ont le même degré de polymérisation, et, d'autre part, que ces polymères de lysine comportent entre 8 et 20 et, de préfé- rence, de 8 à 12 maillons de L-lysine, de façon à fixer de 8 a 12 groupes BPO pour former les pénicilloyl-poly-lysines selon l'in- vention. On a montré que les préparations selon l'invention se comparent favorablement avec des préparations de PPL hétérogènes obtenues a partir de poly-lysine polymérisée au hasard et présen- tant 20 maillons lysine (moyenne des poids moléculaires) dans les réactions cutanées immédiates chez les malades sensibles à la péni- cilline: ces résultats sont consignés dans le tableau ci-après. Réactions d'érythème et LBLEAU de papules à divers PPL Homogène Hétérogène PL, P PP PP PL Dérivé BPO du composé PPL55 PPL)O PPL9 PPL8 PPL M 559j 8' n E D A B t Malades ayant présenté une allergie à la pénicilline l 15848/80: I ++ + + + 15864/80 +.. +± + ± + 4 +++ 15906/804 + M i l5906/8O4-1- ++4 (+) (+) - 15927/80 H1+ ±++ + Malades n'ayant jamais l présenté d'allergie à la t pénicilline! 20 malades - _ que ceux uti- MDM: Mélange déterminant mineur (benzylpenicilline 1000 U/ml et sodium benzylpénicilloate 0,5 mg/ml). PPL: PPL hétérogène (moyenne 20 restes lysine, tel n lisés dans les tests cutanés de 1962 a 1980). On a montré également que les composés selon l'in- vention présentent l'avantage d'être éliminés rapidement par voie rénale et de ne pas présenter d'immunogénicité (c'est-à-dire de sensibilisation après des tests répétés). Puisqu'une réactivité croisée entre divers anti- biotiques du type Plactames avec diverses chaînes latérales repose sur la présence d'anticorps dirigés contre le noyau P-lactame, les pénicilloylpolylysines préparées avec la benzylpénicilline permettent également de déceler des allergies aux autres antibio- tiques P-lactames. Cependant, chez quelques malades qui ont été sensibilisés par d'autres antibiotiques du type P-lactame, une sensibilité exclusive à la chaîne latérale correspondante se produit. Dans de tels cas, on utilisera des préparations selon l'invention obtenues en conjuguant des poly-lysines homogènes avec des antibio- tiques P-lactames autres que la benzylpénicilline. La présente invention concerne donc tout d'abord, en tant que produits nouveaux utilisables comme support pour la préparation deproduits de diagnostic, les polymères de L-lysine dont toutes les molécules ont le même degré de polymérisation et contiennent de 8 à 20 maillons de Llysine. Comme exemples de supportsainsi utilisés, on peut citer les polymères suivants: A: H-Lys80H B: Acétyl-Lys8-OH C: H-Lys 1o-OH D: HLys200H E: CH -CO-Lys -OH CH2-CO-Lys5 -OH CH2CO-Lys5-O formules dans lesquelles l'expression Lys représente un radical lysine de formule: NH2 -(CH2)4-CH --NH- " _CO- Le procédé de préparation d'un polymère de lysine selon l'invention est caractérisé en ce qu'on utilise une méthode à deux phases; en partant d'un dérivé de lysine sur le carbone terminal, on forme une chaîne oligomère de lyuine étape par étape dans un solvant hydrophobe, en ajoutant un dérivé de lysine convanabment activé et protégé à une chaîne protégée dont l'azote C' terminal est débloqué, à chaque cycle d'élongation. On peut uti- liser, par exemple, comme dérivés de lysine convenablement actives et protégés, d'une part, l'ester trt-bktylique de lysine dont l'azote en L est protégé par un groupe tert-butyloxycarbonyle, de formule: R-NHI (Boc)NH -(CH2)4 -C 4 -COO(t-Bu) et, d'autre part, la lysine dont l'azote en a est protégé par le groupe p-nitrophényl-sulfényle et l'azote en c est protégé par le groupe tert-butyloxycarbonyle de formule: NH(Nps) (Boc)NH(cH2)4-CH' COOH La purification des intermédiaires est effectuée par une extraction liquide-liquide. En utilisant des solvants conve- nables tels que le chlorure de méthylène, le chlorure de méthylène mélangé au diméthylformamide ou le diméthylformamide mélangé au diméthylsulfoxyde, on obtient ainsi, par étape, des polymères de lysine du type: H-Lys -OH, formule dans laquelle n peut aller - n jusqu'à 8 à 10, c'est-à-dire les octa- et déca-lysines. On peutconden- ser ces oligomères de lysine en chaînes plus longues, après dépDtectonh partielle respectivement de l'azote et du carbone terminaux en utilisant comme agent de condensation les carbodiimides en présence de benzo- triazole. On peut également obtenir des chatnes plus longues du type: CH2CO-Lys,-OH 1 2 n CH2-CO-Lysn,-OH (formule dans laquelle n' est un nombre entier de 4 à 10) en condensant ces oligomères convenablement protégés et après dépro- tection partielle de l'azote terminal, avec des'molécules de pontage telles que l'acide succinique, et d'autres molécules bifonctionnelles. Les molécules de poly-lysine entièrement protégées sont totalement débloquées par des méthodes qui dépendent des groupes protecteurs, la plupart du temps par acidolyse et, en particulier, par acidolyse par l'acide trifluoroacétique ou par l'acide chlorhydrique dans les solvants organiques quand le groupe protecteur de l'azote est le groupe tertbutyloxycarbonyle (Boc) et quand le groupe protecteur de la fonction carboxylique est un ester de tert-butyle (OtBu). L'invention concerne également, en tant que produits de diagnostic, les dérivés pénicilloyles des polymères de lysine selon l'invention, la réaction de pénicilloylation peut s'effectuer par incubation des polymères de lysine dissous en milieu alcalin avec une pénicilline, une céphalosporine ou, plus généralement, un antibiotique du type P-lactame. Dans ce cas il se produit une - liaison stable entre le groupe a-carboxylique de l'acide pénicil- loique et les groupes amino des molécules du support (Schneider & de Weck, Helv. Chim. acta 49, 1695 (1966)). Les exemples ci-après sont destinés à illuster le procédé de préparation, d'une part, des polymères de lysine et, d'autre part, des produits de conjugaison avec les pénicillines, selon l'invention. Dans ce qui suit, les abréviations utilisées ont les significations suivantes: Boc = tert-butyloxycarbonyle; Nps = p-nitrophénylsulfényle; OtBu = tert-butylester; DCHA = dicyclo- hexylamine; EDCD = N-éthyl-N'-(3-diméthylaminopropyl)-carbodiimide.HCl; Et3N = triéthylamine; HOBt: 1-hydroxybenzotriazole; TFA = acide trifluoroacétique; THF = tétrahydrofuranne; DMF = diméthylformamide. La caractérisation des produits a été faite par chromatographie en couche mince (TLC) sur plaque de silice 60 F254 vendue par Merck Darmstadt et sur papier (MN 214, Machery-Nagel, DUren) avec des quantités de 50 à lOOg. Le système solvant A est un mélange de chloroforme et de méthanol 9/I. EXEMPLE 1 Synthèse de Lys(Boc)-Lys(Boc)-Lys(Boc)-Lys(Boc)-Lys(Boc)-OtBu ester tertbutylique de penta-L-lysine dont tous les groupes amino sont protégés, sauf le groupe amino terminal. Etape 1: On extrait le Lys(Boc)-Otbu.acétate (2,0 g, soit ,5 millimoles) dans 100 ml de chlorure de méthylène avec du carbonate de potassium 0,3 M dans l'eauj sèche sur sulfate de sodium et reprend à sec sous vide pour obtenir le résidu I a. On extrait a-Nps-5-Boc- Lys-OH.DCHA (3,2 g, soit 5,5 millimoles) dans 200 ml de chlorure de méthylène avec 1,5 équivalent d'une solution de sulfate acide de sodium et avec de l'eau, sèche sur sulfate de sodium et reprend à sec sous vide pour obtenir le résidu I b. On mélange les résidus I a et I b avec 1,2 g de EDCD (excès de 10%) + 820 mg (soit 5,5 millimoles) de HOBt et de Et3N j us qu ' à pH > 7 dans 20 ml de THF; on laisse réagir pendant 1 h, à 0 C, puis 4 h à température ambiante. On dilue le mélange réactionnel avec 400 ml de chlorure de méthylène, l'extrait avec 3 litres d'acide chlorhydrique 0,1 M, 1 litre d'eau, 3 litres de carbonate de potassium 0,3 M et 2 litres d'eau. La solution est séchée avec du sulfate de sodium et évaporée sous vide. On obtient le produit I, soit 3,74 g (99%) sous forme d'une mousse jaune. TLC dans le solvant A: tache principale Rf 0,71 (jaune), taches sous forme de traces: Rf 0,78 et Rf 060 (UV). On opère ensuite la déprotection de la façon sui- vante: le produit I (3,74 g) dans 150 ml de chlorure de méthylène + 20 ml d e m éth anol 1 + 20 ml d'acide acétique + 1,85 g d'acide 1-(2méthylindolyl)-acétique + 840 mg de sulfocyanure d'ammonium sont agités pendant 40 min à l'obscurité; on dilue avec 400 ml de CH2C12, extrait avec 4 litres de carbonate de potassium 0,3 M, 2 li- tres d'eau et sèche sur sulfate de sodium. L'évaporation sous vide laisse un produit I (déprotégé): 2,75 g (soit 5,2 millimoles) sous forme de mousse jaune. TLC dans le solvant A, tache principale, Rf 0,18 (fluram, ninhydrine), une tache sous forme de trace Rf 0,76 (UV). Etape II: On mélange 2,75 g de produit I (déprotégé) et ,3 millimoles de a-Nps-t-Boc-Lys-OH + 1,1 g de EDCD + 800 mg d e HO B t + Et3N jusqu' à pH > 7 dans 20 ml de THF, on laisse réagir 1 h à 0 C, puis 20 h à température ambiante. On dilue le mélange réactionnel avec du chlorure de méthylène, l'extrait avec 3 litres de HCI 0,1 M, 1 litre d'eau, 3 litres de carbonate de potassium 0,3 M et 2 litres d'eau. On sèche la solution sur sulfate de sodium et évapore -sous vide. On obtient le produit II: 4, 66 g (5,1 millimoles) mousse jaune. TLC dans le solvant A: tache principale Rf 0,58 (jaune), trace à Rf O,77 (UV). On effectue la déprotection du produit II de la façon suivante: on mélange 4,66 g de produit II dans 150 ml de chlorure de méthylène + 20 ml de méthanol + 20 ml d'acide acétique + 1,85 g d'acide 1-(2-méthylindolyl)acêtique + 780 mg de sulfocyanure d'ammonium et on agite à l'obscurité pendant 40 min; on dilue avec le chlorure de méthylène jusqu'à 300 ml, extrait avec 4 litres de carbonate de potassium 0,3 M, 2 litres d'eau et sèche sur sulfate de sodium. L'évaporation sous vide laisse un produit II (déprotégé): 3,63 g (soit 4,8 millimoles) mousse jaunâtre. TLC dans le solvant A: tache principale, Rf 0,18 (fluram, ninhydrine), trace de Rf 0,79 (UV). Etape III On mélange 3,63 g de produit II (déprotégé) et 5,0 millimoles de a-Nps-E-Boc-Lys-OH + 1,1. g de EDCD + 750 mg de HOBt+ Et3N à pH > 7 dans 20 ml de THF. On laisse réagir 1 h à 0 C et 65 h à température ambiante. On traite ensuite le mélange réactionnel comme dans l'étape Il et on obtient le produit III: ,6 g (4,9 millimoles) mousse jaune. TLC dans ie solvant A: tache principale,Rf 0,54 (jaune), trace à Rf 0,77 (UV). Déprotection: on ajoute 5,6 g de produit III dans 150 ml de chlorure de méthylène + 20 ml de méthanol + 20 ml d'acide acétique + 1,80 g d'acide 1(2-méthylindolyl)-acétique + 760 mg de sulfocyanure d'anmnonium et on agite dans l'obscurité pendant 40 min; on dilue avec du chlorure de méthylène jusqu'à 300 ml, extrait avec 4 litres de carbonate de potassium 0,3 M, 2 litres d'eau et on sèche sur sul- fate de sodium. L'évaporation sous vide laisse un produit III (déprotégé) 4,66 g (soit 4,7 millimoles) mousse jaunâtre. TLC dans le solvant A tache principale, Rf 0,18 (fluram, ninhydrine), trace à Rf 0,78 (UV). Etape IV: On mélange 4,66 g de produit III (déprotégé), 4,8 millimoles de a-Nps-t.-Boc-Lys-OH + 1,05g de EDCD + 720 mg d e HOB t + E t.3 N à pH > 7 dans iO ml de THF + 2 ml de DEF; on laisse réagir 1 h à 0 C, puis 18 h à température ambiante. On traite le mélange réactionnel comme dans l'étape II et on obtient le produit IV: 6,4 g (4,7 millimoles) mousse jaune. TLC dans A: tache principale, Rf 0,51 (jaune), trace de Rf 0,77 (UV). On opère la déprotection du produit IV en ajoutant 4,9 g de produit IV (3, 6 millimoles) dans 100 ml de chlorure de méthylène + 15 ml de méthanol + 15 ml d'acide acétique + 1,33 g d'acide 1-(2-méthyl- indolyl)-acétique + 530 mg de sulfocyanure d'ammonium et on agite dans l'obscurité pendant 45 min, dilue avec le chlorure de méthylène jusqu'à 200 ml et extrait avec 2,5 litres de carbonate de potassium 0,3 M, 1,5 litre d'eau et sèche sur sulfate de sodium.L'évaporation sous vide laisse un produit IV déprotégé: 4,1 g (3,4 millimoles) mousse jaunâtre. TLC dans A: tache principale Rf 0,18 (fluram, ninhydrine), trace à Rf 0,78 (UV). EXEMPLE 2 Procédé de préparation de CH2-CO-Lys5-OH CH2-CO-Lys5-OH On fait réagir 2, 0 g, soit 1,65 millimoles) de produit IV (déprotégé), soit: H-[Lys(Boc)]5OtBu dans 10 ml de THF/DMF (3:2) avec 200 mg (2 millimoles) d'anhydride succinique en ajoutant Et3N pour maintenir le pH à approximativement 8. Apres 2 h, on ajoute 0,1 ml de diéthylaminoéthylamine et on agite de façon continue pendant encore 1 h. Après dilution jusqu'à 300 ml avec du chlorure de méthylène, on extrait la solution réactionnelle avec 0,6 litre de HC1, 0,1 M, 0,4 litre d'eau, on sèche sur sulfate de sodium et on évapore sous vide et obtient 2,1 g d'un résidu jaunâtre de pentapeptide succinylé. TLC dans le solvant A: une tache de Rf 0,12, dans le dioxanne/eau (5:1); une tache Rf 0,80 (dans le 2,6-dichlorophénol-indophénol, ninhydrine après chauffage). Ce produit dans 10 ml de DIT est neutralisé par Et3N et mélangé avec 350 mg de EDCD (10% d'excès) ajoutés en trois portions pendant 1 h. Après 1 h encore, on concentre la boue jusqu'à moitié de son volume sous vide à 30 C et maintient la tem- pérature ambiante pendant 72 h. Après dilution avec 20 ml de DMF, la solution claire est ajoutée goutte à goutte à 500 ml d'eau avec agitation. On recueille le précipité par filtration, le remet en suspension dans l'eau pendant 30 min et le filtre de nouveau. Après séchage à la trompe à eau, on obtient 3,60 g (1,43 millimole) d'une poudre amorphe, légèrement jaunâtre. TLC dans le solvant A: tache principale Rf 0,40 (réactif de Hoppe-Reindel; ninhydrine après chauffage prolongé), trace Rf 0,18 (fluram), Rf 0,0 (réactif de Hoppe-Reindel). Le succinyldipentalysine protégé (3,60 g) est main- tenu dans 30 ml de T'FA pendant 1 h à la température ambiante, puis évaporé sous vide et le résidu huileux mis en suspension dans l'éther. La masse solidifiée est séparée du solvant par décantation, lavée trois fois à l'éther, filtrée et séchée sous vide; on obtient 4,2 g d'une poudre blanchâtre. L'électrophorèse sur couche mince de cellulose F (Merck) donne une zone principale, 72 mm vers la cathode, une trace, 81 mm (ninhydrine), pyridine/acide acétique/eau (1/9/90) pH 3,6, 36 volts/cm, 20 min. On mélange le trifluoroacétate de succinyl-dipenta- lysine déprotégée obtenu (3,75 g, 14 millimoles de groupes NH 2) dans 20 ml d'eau avec 10 ml d'acide chlorhydrique 2 N et on évapore la solution sous vide. Cette évaporation est répétée deux fois après addition d'eau. Le résidu est repris dans 30 ml d'eau, neutra- lisé avec de la soude 1 N et maintenu pendant 30 min avec du char- bon après dilution jusqu'à 200 ml par l'eau. On filtre la suspension sur Celite et le filtrat est passé, après concentration jusqu'à 5 ml, au travers d'une colonne de Sephadex-G-25 M de 2,5 x 10 cm à la vitesse de 30 ml/h au moyen d'eau, afin d'éliminer la plus grande partie des sels. Le pic caractérisant l'oligolysine fut décelé par analyse colorimétrique de Folin. Les fractions correspondantes furent recueillies, concentrée jusqu'à 5 ml et le concentrat passé au travers d'une colonne de Sephadex G-25 M de 2,5 x 48 cm, à la vitesse de 50 ml/h au moyen d'eau. Le produit élué décelé par colorimétrie de Folin fut récupéré par lyophilisation pour donner 2,7 g d'un produit très hygroscopique mousseux et blanchâtre. Electrophorèse: sur papier (MN 214, Machery-Nagel): zone unique, 52 mm vers la cathode, 20 min; sur cellulose F en couche mince: zone unique, 72 mm vers la cathode, 20 min; sur gel de silice en couche mince (FG 60 F254, Merck) zone unique, 10 mm vers la cathode, 30 min. Pyridine/acide acétique/eau (1/9/90), pH 3,6, 36 volts/cm. Détection à la ninhydrine. EXEMPLE 3 Préparation de CH2-CO-[Lys(BPO)]5-OH CH2-CO-[Lys(BPO)]5-OH CH -CO-Lys -OH 120 ml du décachlorhydrate de CH2-CO-Lys5-OH dans 1 ml d'eau sont amenés à pH 10 avec du carbonate de potassium 2 M, puis on ajoute 260 mg du sel de potassium de benzylpénicilline de même que de la soude 5 N pour maintenir le pH au-dessus de 11. Après 2 h à température ambiante, on ajoute une portion supplémen- taire de 260 mg de pénicilline. Après 24 h à pH 11, on abaisse le pH à 8 aec de l'acide chlorhydrique 1 N et on dilue la solution jusqu'à 4 ml avec de l'eau. On chromatographie cette solution sur une colonne de Sephadex-G-25 M de 2,5 x 28 cm à la vitesse de.22 ml/h avec du PBS 0,01 M à pH 7,4. Les fractions présentant des valeurs de pénamaldate stables (Schneider & de Weck, Helv. Chim. Acta 49, 1689 (1966)) sont réunies et évaporées sous vide à 30 C pour obtenir un résidu blanchâtre que l'on dissout dans 4 ml d'eau et passe au travers d'une colonne de Sephadex-G10 de 1,9 x 30 cm à la vitesse de 20 ml/h avec de l'eau. Les fractions présentant des valeurs de pénamaldate stables sont réunies et lyophilisées: on obtient 300 mg d'un produit blanc (perte de poids par séchage sous vide sur potasse à 45 C: 3%). TLC dans le mélange butanol/acide acétique/eau (4/1/1): une tache Rf 0,58; dans acétate d'éthyle/ acide acétique/eau (3/1/1): une tache Rf 0,76; dans le dioxanne/eau (3/1): une tache Rf 0,61 (réactif de Hoppe-Reindel; iodazide). Electrophorèse sur papier sous haut voltage: zone unique 69 mm vers l'anode (réactif de Hoppe-Reindel; iodazide; négative avec le fluram) 36 volts/cm, 30 min. Valeur de pénamaldate (PVmolaire): -1 -1 moae 176000 l. mol.cm; stabilité pénamaldate (PS1o): 95%. Une partie aliquote est convertieen acide libre par précipitation d'une solu- tion aqueuse avec le sulfate acide de potassium. Le précipité est centrifugé, lavé à l'eau et séché sous vide sur P205: C224H306N40054S10 (4743,9) Calculé N 11,81, S 6,76% Trouvé ( corrigé pour 1,66% cendres): N 11,53, S 6,50% R E V E N D I CATI ON S 1 - Polymères de lysine, utiles comme supports pour la préparation de produits de diagnostic, caractérisés en ce que, dans un polymère, toutes les molécules présentent le même nombre de radicaux de L-lysine, lequel est compris entre 8 et 20. -2 - Polymères selon la revendication 1, caractérisé en ce qu'ils répondent à l'une des formules suivantes: H-Lysn-OH et CH2-CO-Lys,-OH CH2CO-Lys,-OH dans lesquelles n est un nombre entier de 8 à 20 et, de préférence de 8 à 12, n' est un nombre entier de 4 à 10 et Lys représente le radical'de la L-lysine: /NH- NH2-(CH2)4-CH-- 3 - Produits de diagnostic utiles pour les tests cutanés destinés à déceler une allergie à une pénicilline ou un autre antibiotique du type Plactame, caractérisés en ce qu'ils sont constitués par les produits de conjugaison de l'un des polymères selon l'une des revendications 1 et 2, avec la benzylpénicilline, ou un autre antibiotique du type P-lactame, toutes les molécules de l'une quelconque de ces produits contenant le mâme nombre de restes benzylpénicilloyle ou de restes correspondants de l'antibiotique, ce nombre étant compris entre 8 et 20. 4 - Procédé de préparation des polymères de lysine selon l'une des revendications 1 et 2, de formule: H-Lys -OH n dans laquelle n est un nombre entier de 8 à 20, caractérisé en ce qu'on effectue une synthèse peptidique par étape, en allongeant la molécule de 1 radical de L-lysine à chaque étape, et en opérant selon un procédé à deux phases liquides pour isoler chaque intermédiaire par extraction liquide-liquide. - Procédé selon la revendication 4, caractérisé en ce qu'on part d'un dérivé de la lysine dont le groupe carboxylique est protege, et qu'à chaque étape d'élongation on forme un oligo- mère de lysine dans un solvant hydrophobe, en ajoutant, en présence d'un agent de condensation, un dérivé de lysine convenablement activé et protégé, à la chaîne protégée obtenue dans l'étape précédente et dont s eu 1 l'azoteyterminal a été préalablement débloqué. 6 - Procédé selon l'une des revendication 4 et 5, caractérisé en ce qu'on utilise comme agent de condensation un carbodiimide en présence de benzotriazole. 7 - Procédé selon l'une des revendications 4 à 6, caractérisé en ce qu'on utilise comme solvant hydrophobe le chlorure de méthylène, un mélange de celui-ci et de diméthylformamide, ou un mélange de diméthylformanide et de diméthylsulfoxyde. 8 - Procédé de préparation de polymères de lysine selon l'une des revendications 1 et 2, de formule: GH2-CO-Lys,-OH 2 n CH2-GO-Lys,-OH 2 n dans laquelle n' est un nombre entier de 4 à 10, caractérisé en ce qu'on condense deux molécules d'un polymère de lysine obtenu après l'une des étapes du procédé selon l'une des revendications 4 à 7 et dont seul l'azote.4erminal est débloqué, avec une molécule d'anhydride succinique- qu'on isole le produit formé par extraction liquide-liquide et qu'on opère ensuite la libération des groupes aminés et carboxyliques protégés, d'une manière connue en soi. 9 - Procédé-de préparation de produits selon la revendication 3, caractérisé en ce qu'on fait réagir les polymères selon l'une des revendications 1 et 2, avec la benzylpénicilline ou un autre antibiotique P-lactame, en milieu alcalin.