Brevet FR2497800A1 — publié le 19820716

-1- 2497800 La présente invention a trait à de nouveaux dérivés de nitrosourée qui présentent un degré élevé d'activité inhibitrice contre la leucémie et les tumeurs, à leur procédé de préparation et aux compositions pharmaceutiques les contenant. Il existe toute une variété de composés qui ont été pro- posés comme étant efficaces pour empêcher la leucémie et les tumeurs dont une classe est constituée par les dérivés de nitrosourée. Parmi les dérivés de nitrosourée, la streptozotocine L N-(N'-méthyl-N'- nitrosocarbamoyl)-D-glucosamine7 et ses dérivés tels que les méthyl glucosaminides sont des exemples typiques récemment développés (cf. brevets américains n 3.577.406 et 3.767.640, par exemple), mais ils ne sont pas totalement satisfaisants du fait d'une activité insuffi- sante contre la leucémie et les tumeurs et/ou leurs effets secondaires indésirables. Une autre classe de dérivés de nitrosourée est constituée par les haloalcoylnitrosourées, dont un exemple représentatif est le 1,3-bis (2-chloroéthyi)-l-nitrosourée (en abrégé BCNU) Z cf, par exem- ple A. Goldin et autres, Cancer Chemotherapy Rept., 40 57 (1964) et T.P. Johnston et autres, Journal of Medicinal Chemistry 9, 892-911 (196617. Des recherches ont également été conduites sur la synthèse et les propriétés chimiques et pharmacologiques d'une grande variété de nitrosourées et on a récemment proposé, comme série très intéres- sante de ces composés, les dérivés glycosyles de nitrosourées (cf T. Suami et autres, brevets américains n 4.086.415, 4.157.439 et 4.220.643) et les dérivés cyclohexyles, hydroxy substitués, de nitro- sourées (cf. brevet américain n 4.180.655). Le composé le plus in- téressant de la première série est la 1-(2-chloroéthyl)-3-(t-D- glucopyranosyl)-l-nitrosourée (en abrégé GANU) et celui de la seconde série est la 1-(2-chloroéthyl)-3(1,3/2N-dihydroxycyclohexyl)-l- nitrosourée (en abrégé DONU), qui possèdent tous les deux un large spectre d'activité antitumorale vis-à-vis d'une large variété de leucémies et de tumeurs expérimentales avec une bonne probabilité d'efficacité dans la chimiothérapie du cancer humain. On a maintenant découvert une nouvelle série de dérivés de nitrosourée qui possèdent également une activité inhibitrice élevee à l'égard de la leucémie et des tumeurs avec une faible toxicité comme ceci a été corroboré par des essais in vivo. Selon la présente invention, il est donc proposé, en tant que nouveaux composés dérivés de nitrosourée, ceux répondant à la formule (Ia): -2- R4 R1 I R2 NCOYNCONCH2CH2X (Ia) R2 / |1 2 2 NO dans laquelle R1, R2 et R4 qui peuvent être identiques ou différents, représentent chacun un atome d'hydrogène ou un groupe alcoyle, aryle, aralcoyle, alkanoyle ou un groupe héterocyclique; Y représente R3 1 -H- ou un groupe alkylêne de 2 à 3 atomes de carbone, R3 représentant un groupe présent sur l'atome de carbone a d'un at-amino-acide; et X représente un atome d'halogène choisi parmi le cilore, le fluor et le brome. Selon une première variante, les composés selon l'in- vention répondent à la formule (I): R3R4 R1 I I N COC'i{CONCH2CH2X (I) R2 NO 0 2 4 dans laquelle R1, R et R qui peuvent être identiques ou différents, représentent chacun un atome d'hydrogkne ou un groupe aleoyle, aryle, aralcoyle, alkanoyle ou un groupe hëtérocylique; R3 représente le groupe présent sur l'atome de carbone A d'un a-amino-acide; et X représente un atome d'halogène choisi parmi le chlore, le fluor et le brome. Dans la définition qui précede de R3, les mots " groupe pré- sent sur l'atome de carbone a d'un -amino-acide" signifient un groupe qui forme un a-anino-acide lorsqu'il est reli. un atome de carbone, auquel un groupe amino, un groupe carboxyle et un atome d'hydrogène ont été fixés. Ainsi, le groupe R signifie un groupement résiduel d'un a-amino acide qui est formé ou dérive lorsque le groupe "-amino et le groupe acarboxyle sont éliinirs de la m.olécule d'un a-amino acide. Par exemple, le groupt p3 eut être de 'ormule H-, c'est-à-dire -CH2- et dérive de la glycine par élimination des groupes amino et car- boxyle de la molécule de glycine, ou de formule; -3- et d3rive de l'alanine, ou de formule - H- et dérive de l'alanine, ou de formule: H2 H- et dérive de la phénylalanine, ou de formule: H 2d H - H- et dérive de la sérine, ou de formule: _IH2CONH2 -H- et dérive de l'asparagine, etc. Des exemples représentatifs de tels groupes résiduels R3 sont ceux présents sur l'atome de carbone a de la glycine, de l'alanine, de la phénylalanine, de la sarcosine, de la sérine, du tryptophane, de la proline, de la méthionine, de la cystéine, de la tyrosine, de la valine, de la leucine, de l'isoleu- cine, de la thréonine, de l'acide aspartique, de l'asparagine, de l'acide glutamique, de la glutamine, de la lysine, de l'hydroxylysine de l'histidine et de l'arginine. Selon une seconde variante les composés selon l'invention, répondent à la formule (II): R4 R1 I R2>NCO (CH2) nNCONCH2CH2X R NO dans laquelle R, R R et X ont les mêmes définies ci-dessus et n représente 2 ou 3. Selon une troisième variante, les répondent à la formule (III): rOH 0 HCCH2TCNCH2CH2C2 OH / O ONO ( HO ' NHAc o Ac représente un groupe alkanoyle. (II) significations que celles composés selon l'inventic III) -4- Dans les formules (I) et (II) qui précèdent, R1, R2 et R4 sont chacun de préférence un groupe alcoyle inférieur ayant 1 a 4 atomes de carbone tels que méthyl, éthyl, propyl et butyl, un groupe phényl non substitué ou substitué par un alcoyle inférieur (en parti- culier méthyl), un alkoxy inférieur (en particulier méthoxy) ou un halogène (en particulier le chlore); un groupe aralcoyle dont le ra- dical alcoyl a de 1 à 4 atomes de carbone, en particulier le groupe phénylalcoyle dont le radical alcoyle a de 1 à 4 atomes de carbone, un groupe alkanoyle inférieur dont le radical alcoyle a de 1 à 4 atomes de carbone (en particulier acétyle); et des groupes furyle, thiényle, pyridyle, pyrimidyle, imidazolyle et acridinyle et simi- laires. Conformément à la présente invention, les dérives de nitrosourée de formule (Ia) et plus particulièrement ceux des for- mules (I) et (II) peuvent être préparés de deux manières différentes. Ainsi, selon un premier procédé on fait réagir un composé de formule (IVa) : R4 R (IVa) (IVa) R 2 2 4YN dans laquelle R1, R2, R et Y ont les mêmes significations que celles données ci-dessus, avec du p-nitrophényl N-(2-haloéthyl)-N-nitroso- carbamate à une température de 0 C à 50 C dans un solvant approprié tel que du tétrahydrofurane. Selon le second procédé on fait réagir un composé de formule (Va): R4 R1 R4 NCOYNCOIHCH2CH2X (Va) R2 2H2 o R1,, R4, X et Y ont les mêmes significations que celles données ci-dessus, avec un agent de nitrosation dans-un solvant approprié. Tout agent de nitrosation classique tel que le nitrite de sodium, l'anhydride azoteux, le peroxyde d'azote, le chlorure de nitrosyle et analogues peut être utilisé. Des exemples de solvant pouvant être utilisés pour cette réaction sont des solvants organiques tels que -5- 2497800 l'acide formique, l'acide acétique et analogues. La température de réaction est généralement comprise entre 00C et 800C. Les composés ainsi préparés selon l'un ou l'autre de ces deux procédés peuvent facilement être séparés de la solution de réac- tion et être purifiés d'une manière classique en soi comprenant un traitement avec une résine échangeuse d'ions, une chromatographie sur colonne et une recristallisation dans un solvant organique. Lorsque l'on souhaite obtenir les composés de formule (I) ci-dessus les composés de départ selon les deux procédés mentionnés ci-dessus sont respectivement ceux correspondant aux formules R>NCO HL (IV) et Rl r34 ÄNCOCH CONHCH2CH2X (y) R dans lesquelles R, R, R, R et X ont les mêmes significations que celles définies ci-dessus. Lorsque l'on souhaite obtenir les composés de formule (II) ci-dessus les composés de départ selon les deux procédés mentionnés ci-dessus sont respectivement ceux correspondant aux formules R1 4 R>NCO(CH2)nNH (VI) et R R 3> NCO(CH2) NCONHCH2CH2X (VII) 1 2 4 dans lesquelles R, R, R, X et n ont les mêmes significations que celles définies ci-dessus. Selon la formule (III) précédente, Ac est de préférence un groupe alkanoyle inférieur dont le radicale alcoyle a de 1 à 4 atomes de carbone, en particulier un groupe acétyle. Les dérivés de nitrosourée de formule (III) peuvent être préparés, selon la présente invention, selon le schéma réactionnel suivant: -6bydrogenation pept idation catalytique NHIc (VIII) LOAc P- 0o NIICCH, NE7. \l -1' OAc / 1\ / Elimir AcO du qrou avec N-glycine irotegge. (ix) OH NHAe protecteur. (x) HO (XI) OH ELimination du / O\! 2 groupe Z protec- teur. HO NHAc (XII) rOH 0^ NHC\CH2 IHGNCHlCH C2 OH O ONO HO NHAc (III) 2 ' " 'C O NC H2 aH,C.e NO (z= groupe benzyloxycarbonvle) iatioia e me OEI -7- L'hydrogénation catalytique du dérivé azothydrure (VIII) en dérivé amino (IX) peut être effectuée d'une manière classique, par exemple en présence de catalyseur au nickel de Raney dans du méthanol. Pour la peptidation ultérieure du dérivé amino (IX) la glycine-N protégée peut de préférence être utilisée sous la forme d'un ester actif qui est préparé en faisant réagir la glycine-N protégée avec le N-hydroxy-succinimide en présence de dicyclohexyl- carbodiimide (DCC) dans un solvant approprié d'une manière connue. La peptidation est effectuée en faisant réagir le dérivé amino (IX) avec l'ester actif à une température de 0 C à 50 C en présence d'une base telle que la triéthylamine, la N,N-diméthylamine et la monoéthyl amine dans un solvant approprié tel que le diméthylformamide, le méthanol, l'éthanol et le dioxane pour conduire au composé (X). L'élimination du groupe OH protecteur du composé (X) peut être réalisée d'une manière usuelle, par exemple en faisant réagir le composé avec du méthylate de sodium dans un solvant approprié. Ensuite, l'élimination du groupe N-protecteur Z (groupe benzyloxy- carbonyle) du composé (XI) ainsi obtenu peut être effectuée d'une manière usuelle par exemple par hydrogénation catalytique en présen- ce de noir de palladium pour donner le composé (XII). L'étape finale de peptidation peut être réalisée en faisant réagir le composé (XII) avec du p-nitrophényl N-(2-chloroéthyl)-N- nitrosocarbamate à une température comprise entre 0 C et 50 C en présence d'une base telle que la triéthylamine dans un solvant approprié tel que le tétrahydrofurane pour conduire au composé (III). L'isolement du composé (III) de la solution de réaction et sa purification peuvent être effectués d'une manière similaire à celles mentionnées pour les composés (I) et (II). Parmi les dérivés de nitrosourée de formule (I), on peut en particulier mentionner: le N-YN'-(2-chloroéthyl)-N'-nitrosocarbamoyl7 glycine amide; le N-ZN'-(2-chloroéthyl)-N'-nitrOsocarbamoyl7 sarcosine amide; le N-N' - (2-chloroéthyl)-N'-nitrosocarbamoyl7-L- phénylalanine amide; le N-N' (2-chloroéthyl)-N'-nitrosocarbamoyl/-L- tyrosine amide; -8- le N-LN'-(2-chloroéthyl)-N'-nitrosocarbamoyl7-L- valine amide-; le N-LN'-(2-chloroéthyl)-N'-nitrosocarbamoy7l/-DL- leucine amide; le N-IN'-(2-chloroéthyl)-N'-nitrosocarbanoy17-L- serine amide; le N-AN'-(2-chloroéthyl)-N'-nitrosocarbamoyl7-L- methionine amide et le N-EN'-(2-chloroéthyl)-N'-nitrosocarbamoyl/-proline amide. Parmi les dérivés de nitrosourée de formule (II) on peut en particulier citer: le N- le N-N'-(2-chloroéthyl)-N'-nitrosocarbaiaoy/-a-arminobutyra- mide. Comme composés représentatifs des dérivés de nitrosourée de formule (III) on peut en particulier citer le 2-acétamide-1- j t Z(2-chloroéthyl) nitroso-amino7carbonyl7amino7-1,2-dideoxy-- D-glucopyranose. L'activité antileucémique d'un dérivé de nitrosourée type de formule (Ia-I) selon la présente invention a été testée chez la souris sur la souche Leukemia L 1210 dans les conditions données ci- après. Composé N-LN'-(2-chloroéthyl)-N'-nitrosocarbamoy-lglycine amide. Animaux Des souris mâles BDF1, agées d'environ 7 semaines et pesant 22 + 1 g ont été utilisées par groupes de cinq animaux pour chaque test. Cellules tumorales Des cellules Leukemia L 1210 ont été inoculées par voie in- trapéritonéale à une concentration de 1 x 106 cellules/0,05 ml/souris. Procédé Le composé à tester est dissous dans une solution saline physiologique pour donner une série de solution à des concentrations prédéterminées et 0,1 ml de chaque solution a été administrée intra- péritonéalement à chaque souris une fois par jour à partir de la 24ème heure après l'inoculation de la cellule tumorale et ceci pendant trois jours consécutifs. L'activité antileucémique du composé testé a été mise en évidence par la moyenne des jours de survie et par le pourcentage d'augmen- tation de la durée de vie. Le pourcentage d'augmentation de la durée de vie (ADV) est calculée comme suit T- C ADV (%) = C x 100 T: Moyenne des jours de survie des animaux traités C: Moyenne des jours de survie des animaux non traités. Le test de contrôle a été réalisé de la même manière que celui utilisé pour le composé à tester sauf que 0,1 ml de la solution saline physiologique a été administrée à la place de la solution du composé à tester. Les résultats des tests sont rassemblés dans le tableau suivant. _ On peut se rendre compte à partir des résultats des tests ci-dessus que les nouveaux dérivés de nitrosourée selon la présente invention présentent une valeur élevée d'ADV à des doses très faibles pour un volume nul d'ascites et par conséquent peuvent être considé- rés comme utiles en chimiothérapie humaine de maladies leucémiques et tumorales. Les dérivés de nitrosourée de formule (I), (II) et (III) selon la présente invention sont en outre caractérisés par leur faible toxicité. Ainsi, la toxicité aigUe LD50 de certains composés caracté- ristiques de formule (I), lorsqu'ils sont administrés intrapéritonèa- lement (i.p.) ou par voie intraveineuse (i.v.) à des souris mâles BDF1 âgées d'environ 6 semaines et observée après 21 jours selon le procédé de Lichtfield-Wilcoxon, est la suivante Dose de composé Moyenne des jours de survie ADV (%) (mg/kg) traité / contrôle 16 >60,0/7,7 >679,2 8 >60,0/7,7 >679,2 2 14,0/7,7 81,8 1 10,6/7,7 37,7 0,5 10,2/7,7 32,5 -10- Selon un autre aspect de la présente invention, il est pro- posé une composition pharmaceutique comprenant une quantité thérapeu- tiquement active d'un dérivé de nitrosourée de formule (I), (II) ou (III) en association avec un excipient, un support ou un diluant pharmaceutiquement acceptables. Les compositions pharmaceutiques peuvent représenter sous une forme connue et appropriée pour une administration par voie orale ou par injection chez l'homme ou par voie orale, injection ou adminis- tration intrapéritonéale chez l'animal. En général, les compositions pharmaceutiques peuvent repré- senter sous forme d'ampoules, de tablettes, de poudre, de granules ou sous toute autre forme appropriée pour une administration orale ou par injection. Les exemples suivants illustrent la préparation des dérivés de nitrosourée selon la présente invention ainsi que la préparation des composés de départ et des intermédiaires. Exemple 1 Préparation du N-LN'-(2-chloroéthyl)-N'-nitrosocarbamoyl7 glycine amide. H2 NCH2NH2 - 2N Cri2NHÉCH2CH2Cr O NO Composé IDA (mg/kg) L50(m/g i.p. i.v. N-/N'-(2-chloroéthyl)-N'- nitrosocarbamoy17 glycine amide 21,2 22,4 N-ZN'-(2-chloroéthyl)-N'- nitrosocarbamoyl7 sarcosine amide 392,0 426,6 N-ZN'-(2-chloroéthyl)-N'- nitrosocarbamoyl7proline amide 219,6 195,4 -11- Du chlorhydrate de glycine amide (200 mg, 1,81 mmol.) est dissous dans de l'eau (10 ml). De l'Amberlite IRA-400 (forme OH), résine échangeuse d'anions fortement basique fabriquée et vendue par la Société Rohm et Haas Company, (5,4 ml) est ajoutée à la so- lution et le mélange est agité pendant 15 minutes en vue d'obtenir la glycine amide sous forme libre. La résine est ensuite éliminée par filtration, le filtrat est concentré sous vide pour laisser un résidu huileux. Le résidu est dissous dans du méthanol (3 ml), auquel est ajoutée goutte à goutte une solution de pnitrophényl N-(2-chloroéthyl)-N-nitrosocarbamate (520 mg, 1,05 moles par mole du composé de départ) dans du tétrahy- drofurane (7 ml) à l'abri de la lumière et sous agitation. Après 30 minutes, la solution réactionnelle est analysée par chromatrographie sur couche mince (CCM) avec un système révélateur constitué de chloroforme-méthanol (5:1 en volume). Lorsque la formation d'un pro- duit de condensation donnant une seule tâche au Rf 0,62 est confirmée la solution réactionnelle est concentrée sous vide pour laisser un résidu huileux jaune foncé. Le résidu est purifié par chromatographie sur colonne de gel de silice (Wako-gel C-300, 5 g, vendu par la Société Wako Pure Chemical Co., Ltd.) avec un système éluant de chloroforme-éthanol (8:1 en volume), l'éluat provenant de la colonne de gel de silice est recueilli par fractions et les fractions conte- nant le produit désiré sont rassemblées et concentrées sous vide pour donner un résidu huileux jaune pâle (350 mg). Le résidu est cristallisé à partir d'éther éthylique suivi d'un lavage avec de l'éthanol, donnant ainsi du N-EN'-(2-chloroéthyl)-N'-nitrosocarba- moyl7glycine amide (275 mg) sous la forme de cristaux jaune pâle en forme de prismes. Rendement: 72,9%; point de fusion 125-126 C (Dec.) Analyse élémentaire Calculée pour C5H9N403C1, P.M. = 208,611: C 28,79, H 4,35, N 26,86, CI 17,00% Trouvé: C 29,00, H 4,35, N 26,56, Cl 17,35% Exemple 2 Préparation du N-LN'-(2-chloroéthyl)-N'-nitrosocarbamoyi7 sarcosine amide. H C FH3 îf 3 CZCH2 NHNCH2CONH2 CZCH2 2NCH2CONH2 -12- -12- 2497800 Du N-LN'-(2-chloroéthyl)carba!royle7 sarcosine amide (100 mg, 0,516 mmol.) est dissous dans de l'acide formique à 9% (0,7 ml) sous refroidissement à la glace, auquel est lentement ameuté du nit-rite de sodium (53,4 mg, 1, 5 moles par mole du compost initiai) et le mélange est maintenu sous agitation pendant 30 minutes pour achever la réac- tion. Ensuite, de l'Amberlite IR-120 (forme H+), resine ch-angeuse de cations fortement acide, fabriquée et vendue par la Société Rohm & Haas Company, (1 ml) et du méthanol (l ml) sont ajoutés I la solu- tion réactionnelle résultante et le mélange est agité pendant 10 mi- nutes. Apres élimination de la résine par filtration, la solution réactionnelle est concentrée sous vide pour laisser un résidu huileux. Le résidu est purifié par chromatographie sur colonne de gel de silice (Wako-gel C-300) avec un système éluant de toluène-étianol (3:1 en volume) , et l'éluat est recueilli par fraction s et l-s ft tions contenant le produit principal sont rasse mbées et conceniLres sous vide pour donner du N-ZN'-(2-chloroéthyl)-N'-nitrosocarbamoyl7 sarco- sine amide (62 mg) sous la forme d'un residu cristallin}lanc. Rendement 53,9%; point de fusion 86-88'C (-Dec.) Analyse élémentaire: Calculée pour C6HllN403C1, P.24.:^222,637 C 32,37, H 4,9?, N 25,17, CL i5, 93% Trouvé C 32,14, H 4,88, N 24,81, C- lt,18%. Exemple 3 Préparation du 2-acétamido-ú-Z Z t Z(2-chloroDt:hyl) nitroso- amino7carbonyl7glycyi7amino7-1, 2-didoxye--D-glucopyranose. -13- -13- 2497800 o f O o oNTCONNOHCHI6HO *OH *' OH HO mH t / NHCOCH3 NHCOCH3 (XI) (XII) rOH NHCCCHHN HCNCH2CH2CX (XI) (XII)Il II H - OH O ONO HO NHCOCH3 (III) Le composé (XI) (210 mg, 0,51 mmol.) qui est préparé selon le procédé de A. Yamamoto et aures (Chem. Pharm. Bull. 13 (1965) 1036) est dissous dans du méthyl cellosolve (15 ml) et la solution est hydrogénée catalytiquement en présence de noir de palladium (25 mg) sous une pression d'hydrogène initiale de 3,5 kg/cm2 pendant une nuit pour former le composé (XII) libre. Après élimination du catalyseur par filtration, la solution réactionnelle est concentrée sous vide pour laisser un gel blanc. Le gel est mis en suspension dans du méthanol (7 ml) auquel est ajoutée de la triéthylamine (25,8 mg, 0,5 moles par mole du composé de départ, puis une solution de p-nitrophényl N-(2-chloroéthyl)-N-nitrosocarba- mate (419 mg, 3 moles par mole du composé de départ) dans du tétrahy- drofurane (7 ml) est ajoutée goutte à goutte pendant environ 15 minutes sous agitation et à l'abri de la lumière. Le mélange est maintenu à la température ambiante sous agitation pendant encore trois heures pour achever la réaction, après quoi la solution réac- tionnelle est analysée par CCM avec un système révélateur de chloro- forme-méthanol (3:1 en volume) qui confirme la présence d'une tâche principale au Rf 0,37 pour le produit désiré ayant une absorption UV, -14une tâche secondaire au Rf 0,18 pour un sous-produit et une légère tâche à l'origine pour le composé initial. La solution réactionnelle est ensuite concentrée sous vide à température ambiante pour laisser un résidu huileux jaune foncé qui est ensuite traité avec un mélange méthanol/éther isopropylique d'une manière usuelle pour laisser un résidu solide jaune pâle. Le résidu est purifié par chromatographie sur colonne de gel de silice (Wako-gel C-300, 10 g) avec un système éluant chloroforme-éthanol (8:1 en volume) puis avec un système éluant chloroforme-méthanol (4:1 en volume), le chargement de la in colonne étant réalisé avec un mélange chloroforme-méthanol (2:1 en volume). Les fractions correspondant au Rf 0,37 avec une absorption UV sont rassemblées, concentrées sous vide et solidifiées à du mélange acetone- acétate d'éthyle pour conduire au composé (III) attendu (96 g). Rendement 45,7%; point de fusion 122 C Z-c 720 Rotation spécifique / + 34, 50 (c 0,4, méthanol); Analyse élémentaire: Calculée pour C13H22N503Cl; P. M. = 411,303% C 37,91, H 5,39, N 17,01, CI 8,61% Trouvé C 37,88, H 5,72, N 16,62, Cl 8,23% Exemple 4 Préeparation du N-N'I-(2-chioroethyl)-N'-nitrosocarbamoyl7 -3-alanine amide. (1) N-Benzyloxycarbonyl-a-alanine amide. HC9.H2NCH2CH2COOCH3 -_ Z-NHfH 2CH2CN 2 2 23 11('-12CH2CN > (Z = groupe benzyloxycarbonyl) Du chlorhydrate de l'ester méthylique de la -alanine (1,00 g, 7,16 mmol.) est dissous dans de l'eau (3,5 ml), auquel sont ajoutés du chloroforme (40 ml) et une solution A 33% de chlorure de benzyloxycarbonyle dans du toluène (4,5 ml), puis goutte à goutte une solution aqueuse de carbonate de sodium 2N (16,5 ml) sous agita- tion vive et refroidissement à la glace. Le mélange résultant est main- tenu pendant 30 minutes dans les mêmes conditions que ci-dessus puis à la température ambiante pendant 30 minutes pcur achever la réaction. Le mélange réactionnel est laissé reposer pour séparer les couches. La couche aqueuse est lavée avec du chloroforme (I0 mi x 2). Toutes les couches chloroformiques séparées sont rassemblées et séchées sur du sulfate de sodium anhydre. Après élimination du sulfate de sodium, l'extrait chloroformique est concentré et séché sous vide pour donner du N-benzyloxycarbonyl-P-alaninate de méthyle -15- sous la forme d'un résidu huileux. Le résidu est dissous dans du mé- thanol saturé de gaz ammoniac (20 ml) à 0 C et la solution résultant est laissée reposer à température ambiante pendant 5 jours en vase clos. S La solution réactionnelle est ensuite analysée par CCM avec un système révélateur benzène-éthanol (9:1 en volume), ce qui a permis de confirmer que la tâche au Rf 0,48 du N-benzyloxycarbonyl- 8-alaninate de méthyle avait disparu et qu'une tâche principale au Rf 0, 14 pour le composé recherché ainsi qu'une tâche secondaire au Rf 0,35 pour une petite quantité d'un sous-produit s'étaient formées Les petits cristaux sous forme de prismes déposés du composé attendu sont séparés par filtration (795 mg). Le filtrat est concentré puis conservé dans un réfrigérateur, donnant ainsi une quantité supplé- mentaire (494 mg) du composé attendu également sous forme de cris- taux. Rendement total: 1,289 g; rendement 81,0%; point de fusion: 164-165 C Analyse élémentaire: Calcule pour CllH14 2O3 P.M. = 222,238: C 59,45, H 6,35, N 12,61% Trouvé C 59,67, H 6,41, N 12,44%. (2) N-IN'-(2-chloroéthyl)-N'-nitrosocarbamoyl7-8-alanine amide. ZNHCH2CH2CON2 CZCH2CH2fNHCH2CH2CONH2 NO Le composé obtenu dans l'étape (1) ci-dessus (300 mg, 1,35 mmol) est dissous dans du méthyl cellosolve (10 ml) et la solution est hydrogénée catalytiquement en présence de noir de palladium (30 mg) sous une pression d'hydrogène initiale de 3,5 kg/cm2 pendant une nuit. Après élimination du catalyseur par filtration, le filtrat est concentré sous vide pour laisser un résidu huileux. Le résidu est dissous dans du méthanol (3 ml), auquel est ajoutée de la triéthylamine (68 mg) puis une solution de p-nitrophényl N-(2- chloroéthyl)-N-nitrosocarbamate (443 mg, 1,2 moles par mole du composé de départ) dans du tétrahydrofurane (5 ml) que l'on ajoute goutte à goutte pendant environ 5 minutes sous agitation à l'abri de la lumière. Le mélange est alors maintenu à température ambiante pendant 60 minutes sous agitation pour achever la réaction. -16- 2497800 La solution réactionnelle est ensuite analysée par CCM avec un sys- tème révélateur chloroforme-méthanol (7:1 en volume), confirmant qu'un composé sensiblement unique s'est formé avec une tâche au Rf 0,40 présentant une absorption UV. La solution réactionnelle est concentrée sous vide pour laisser un résidu huileux jaune foncé. Le résidu est purifié par chromatographie sur colonne de gel de silice (Wako-gel C-300, 15 g) avec un système éluant chloroforme-éthanol (8:1 en volume). Les fractions contenant le produit attendu sont rassemblées et concentrées sous vide pour donner un résidu huileux jaune pâle. Le résidu est alors cristallisé à partir d'éther éthylique, donnant 176 mg du composé recherché. Rendement: 58,6%; point de fusion 95-97 C (Dec.); Analyse élémentaire: Calculée pour C6HllN403C1, P.M. =222,637. C 32,37, H 4,98, N 25,17, Cl 15,93% Trouvé C 32,14, HI 4,96, N 24,95, C1 16,07%. Exemple 5 Préparation du N-AN'-(2-ehloroéthyl)-N ' -nitrosocarbamoyl/ -y-aminobutyramide. (1) N-Benzyloxycarbonyl-y-aminobutyramide. HC.H2NCH 2 2CH2C00CH 3--->Z-NHCH2CH2CH2CON2 Du chlorhydrate de y-aminobutyrate de méthyle (1,5 g, 9,76 mmol) est soumis à une benzyloxycarbonylation de la même manière que celle décrite à l'Exemple 4 (1) pour donner du N-benzyloxycarbonyl- y-aminobutyrate de méthyle sous la forme d'un résidu huileux. Le re- sidu est dissous dans du méthanol saturé de gaz ammoniac (30 ml) à 0 C et la solution est laissée reposer à température ambiante pen- dant 5 jours en vase clos. La solution réactionnelle est ensuite analysée par CCM avec un système révélateur benzène-éthanol (9:1 en volume), confirmant que la tâche au Rf 0,50 pour le N-benzyloxycarbonyl-y-aminobutyrate de méthyle a disparu et qu'une tâche principale au Rf 0,12 pour le produit attendu ainsi qu'une tâche secondaire au Rf 0,39 pour une petite quantité d'un sous-produit se sont formées. La solution réactionnelle est concentrée sous vide pour laisser un résidu cristallin blanc auquel une petite quantité de méthanol est ajoutée et l'ensemble est filtré pour donner le com- posé recherché (1,45 g). -17- 2497800 Rendement 62,9%; point de fusion 128-130 C; Analyse élémentaire: Calculée pour C12H16N203, P.M. = 236,264 C 61,00, H 6,83, N 11,86% Trouvé C 61,43, H 7,10, N 11,73%. (2) N-IN'- (2-chloroéthyl)-N'-nitrosocarbamoyl7-y- aminobutyramide. ZNHCH 2CH2CH2CONH2 CQCH CH2LHCH2CH2CH 2CONH2 NO Le composé obtenu au cours de l'étape (1) ci-dessus (300 mg, 1,27 mmol) est dissous dans du méthyl cellosolve (10 ml) et la solution est hydrogénée catalytiquement en présence de noir de palladium (30 mg) sous une pression d'hydrogène initiale de 3,5 kg/cm2 pendant une nuit. Après élimination du catalyseur par filtration, le filtrat est concentré sous vide pour laisser un résidu huileux. Le résidu est dissous dans du méthanol (3 ml), auquel est ajoutée de la trié- thylamine (64 mg, 0,5 mole par mole du composé de départ) puis ensuite une solution de p-nitrophényl N-(2-chloroéthyl)-N-nitroso- carbamate (417 mg, 1,2 mole par mole du composé de départ) dans du tétrahydrofurane (5 ml) que l'on ajoute goutte à goutte pendant en- viron 5 minutes sous agitation et à l'abri de la lumière. Le mélange est alors maintenu à température ambiante sous agitation pendant 60 minutes pour achever la réaction. La solution réactionnelle est ensuite analysée par CCM avec un système révélateur chloroforme- méthanol (7:1 en volume), confirmant qu'un composé sensiblement unique s'est formé avec une tâche au Rf 0,39 présentant une absorp- tion UV. La solution réactionnelle est concentrée sous vide pour laisser un résidu huileux jaune foncé. Le résidu est purifié par chromatographie sur colonne de gel de silice (Wako-gel C-300, 15 g) avec un système éluant chloroforme-éthanol (8:1 en volume). Les fractions contenant le produit attendu sont rassemblées et concen- trées sous vide pour laisser un résidu solide cristallin jaune pâle. Le résidu est lavé avec de l'éther éthylique donnant 190 mg du composé recherché. Rendement:63,2%, point de fusion: 102-103,5 C (Dec.); -18- 2497800 Analyse élémentaire: Calculée pour C7H13N403Cl, P.M. = 236,663 C 35,52, H 5,54, N 23,68, Cl 14,98% Trouvé C 35,83, H 5,58, N 23,82, Cl 14,65%. Exemple 6 Préparation du N-IN'-(2-chloroéthyl)-N'-nitrosocarbamoyi7 -L-phénylalanine amide. (1) N-LN'-(2-chloroéthyl)carbamoyl7-L-phénylalanine amide. v CH2CHCONH2 NH2 - CHCH2-CONH2 NHCNHCH2CH2C l " lI Du L-phénylalanine amide (produit commercial vendu par Sigma Chemical Co. 400 mg, 2,44 mmol) est dissous dans du méthanol (6 ml) auquel est ensuite ajouté goutte à goutte du 2-chloroéthyl isocyanate (0,24 ml, 1,2 moles par mole du composé de départ) à la température ambiante sous agitation et le mélange est maintenu dans ces conditions pendant 20 minutes pour achever la réaction. La solution réactionnelle est analysée par CCM avec un système révélateur chloroforme-méthanol (7:1 en volume) confirmant que la tâche au Rf 0,21 pour le composé de départ avait disparu et qu'une tâche unique au Rf 0,42 pour le produit attendu s'était formée. La solution réactionnelle est concentrée sous vide pour laisser un résidu solide cristallin blanc qui est ensuite lavé avec de l'isopropanol, donnant 553 mg du composé recherché. Rendement: 84,1%; point de fusion 158-162 C; -/D2 + 3,0Q (c0,54 méthanol); Analyse élémentaire: Calculée pour C12H16N302C1, P.M. = 269,729 C 53,43, H 5,98, N 15,58, Cl 13,15% Trouvé C 53,49, H 6,02, N 15,34, Cl 12,90%. (2) N-N'-(2-chloroéthyl)-N'-nitrosocarbamoyl7-L-phényl- alanine amide. -19- @>ff-H2CHCONH2 NHCNHCH2CH2C ú Il - Q CH2CHCONH2 NHCNCH2CH2CI Il I1 ONO Le composé obtenu au cours de l'étape (1) ci-dessus (400 mg 1, 48 mmol) est dissous dans de l'acide formique à 99% (3 ml) auquel est ensuite ajouté en environ 5 minutes sous agitation et refroidis- sement à la glace du nitrite de sodium (113 mg, 1,1 moles par mole du composé de départ. Le mélange réactionnel est ensuite maintenu dans ces conditions pendant 30 minutes en vue d'achever la réaction. La solution réactionnelle est alors analysée par CCM avec 1ln système révélateur chloroforme-méthanol (9:1 en volume), confir- mant que la tâche au Rf 0,33 pour le composé de départ avait disparu et qu'une tâche unique au Rf 0,51 pour le produit attendu s'était formée présentant une absorption UV. De l'Amberlite IR-120 (forme H) (5 ml) en suspension dans du méthanol est ensuite ajouté à la solution réactionnelle et le mélange est agité pendant 20 minutes. Après élimination de la résine par filtration, le filtrat est concentré sous vide et ensuite dis- tillé azéotropiquement avec de l'éthanol pour laisser un résidu solide cristallin. Le résidu est lavé avec de l'éther éthylique, donnant 310 mg du composé recherché. Rendement 70,0%; point de fusion 113-115 C (Dec.); --22 ZL22 - 30,6 (c 0,36, DMF). D Analyse élémentaire: Calculée pour C12H15N403C1, P.M. = 298,729: C 48,24, H 5,06, N 18,76, C1 11,87% Trouvé C 47,94, H 5,01, N 18,44, C1 11,58%. -20- Exemple 7 Préparation du N-LN'-(2-chloroéthyl)-N'-nitrosocarbamoyl7- L-tyrosine amide. (1) N-/N'-(2-chloroéthyl)carbamoyl7-L-tyrosine amide. Ho Q CH2CHCONH2 NH2 - HO Q -CH2CHCONH2 NHCNHCH2CH2C ú Du L-tyrosine amide (produit commercial vendu par Sigma Co., 400 mg, 2,22 mmol) est dissous dans du méthanol (8 ml), auquel est ensuite ajouté goutte à goutte du 2-chlorcéthyl isocyanate (0,22 ml) à température ambiante sous agitation, durant laquelle des cristaux blancs se précipitent après plusieurs minutes à compter du début de l'addition. Apres 20 minutes, le liquide surnageant est analysé par CCM avec un système révélateur chloroforme-methanol (7:1 en volume) confirmant que la tache au Rf 0,09 pour le composé de départ avait disparu et qu'une tâche unique au Rf 0,24 pour le produit attendu s'était formée. Le solide cristallin blanc ainsi précipité est filtré et lavé avec du méthanol chaud pour donner une première récolte du com- posé attendu (296 mg). Le filtrat est ensuite concentré sous vide pour laisser une masse solide blanche qui est lavée avec du méthanol chaud pour donner une seconde récolte du composé attendu (252 mg). Poids total obtenu: 548 mg, Rendement: 86,4%; point de fusion 187-189 C (Dec.); 722 + 0,40 (C 0,5, DMF); D Analyse élémentaire: Calculée pour C12H16N303C1, P.M. = 285,729: C 50,44, H 5,64, N 14,71, C1 12,41% Trouvé C 50,18, H 5,68, N 14,47, Cl 12,10%. (2) N-EN'-(2-chloroéthyl)-N'-nitrosocarbamoyl7-L-tyrosine amide. -21- HO- CH2CHCONH2 NHCINHCH2CH2C It O- HO CH2CHCONH2 NHCNCH2CH2Ci I I 2 ONO Le composé de l'étape (1) ci-dessus (200 mg, 0,64 mmol) est dissous dans de l'acide formique à 99% (1,5 ml), auquel est ensuite ajouté du nitrite de sodium (48, 6 mg, 1, 1 moles par mole du composé de départ) en environ 5 minutes sous agitation et refroidissement a la glace. Le mélange réactionnel est alors maintenu dans ces conditions pendant 30 minutes pour achever la réaction, temps pendant lequel le mélange s'est fortement coloré en brun rougeâtre. La solution réactionnelle est analysée par CCM avec un sys- tème révélateur chloroforme-méthanol (7:1 en volume) confirmant que la tâche au Rf 0,24 pour le composé de départ a disparu et qu'il s'est formée une tâche principale au Rf 0,48 pour le produit attendu présen- tant une absorption UV ainsi qu'une tâche secondaire au Rf 0,69 pour un sous-produit ayant également une absorption UV. De l'Amberlite IR-120 (forme H) (5 ml) en suspension dans du méthanol est ensuite ajouté à la solution réactionnelle et le mélange est agité pendant 20 minutes pour laisser un résidu huileux brun rougeâtre foncé. Le résidu est alors purifié par chromatographie sur colonne de gel de silice (Wako-gel C-300, 10 g) avec un système éluant chloroforme-méthanol (7:1 en volume). Les fractions contenant le produit attendu sont rassemblées, concentrées sous vide puis dis- tillées azéotropiquement avec de l'éthanol pour laisser un résidu solide cristallin. Le résidu est lavé avec de l'éther isopropylique, donnant 113 mg du composé recherché. Rendement 51,3%; point de fusion 135,5-137 C (Dec.); -722 - 30,40 (c 0,5, DMF): Analyse élémentaire: -22- Calculée pour C12H 15N404C1, P.M. = 314, 729: C 45,75, H 4,80, N 17,80, CL 11,27% Trouvé C 45,53, H 4,99, N 17,57, CI 1],45%. Exemple 8 Préparation du N-/N'-(2-chloroét'hy'l)-N'-nitrosocarbamoyl7-L- valine amide. (1) N-/N'- (2-chloroéthyl) carba:loyl7-L-valine amide. CH CH_ S3CH >CHCHCONH2-CH>CHCHCNH2 CH 1 CH3 I 3 NH2 HC 3 NHICNHCH2CH2Cú Du chlorhydrate de L-valine amide (produit commercial vendu par Sigma Co., 200 mg, 1,31 mmol) est dissous dans du méthanol (6 ml), auquel est ensuite ajouté de l'Amberlite IRA 400 (forme OH) (4 ml) en suspension dans du méthanoi et le mélange est agité pendant 20 minutes envue d'obtenir le L-valine amide sous forme libre. Après élimination de la résine par filtration, le filtrat est concentré en un volume d'environ 2 ml, auquel est ajouté goutte à goutte du 2chloroéthyl isocyanate (0,16 m!, 1,5 moles par mole du composé de départ). Après quelques minutes, des cristaux blancs pré- cipitent. Après 20 minutes, ie liquide surnageant est analysé par CCM avec un système révélateur chloioform-!-6éthanol (5:1 en volume) con- firmant que la tache au Rf 0,36 pour le composé de départ a disparu et qu'une tâche unique au Rf 0,74 pour le produit attendu s'est formée. Les cristaux ainsi précipités sont recueillis par filtation et lavés avec du méthanol pour donner une première récolte du composa attendu (135 mg). Le filtrat est alors concentré sous vide pour laisser des cristaux blancs, qui sont recristallises; partir de méthanol pour donner une seconde récolte du composé attendu (114 mg). Poids total obtenu: 249 mg; Rendement: 85,7, point de fusion 197-199 C; /722 + 48,90 (c 0,45, DMF); Analyse élémentaire: Calculée pour C8H16N302C1, P.M. = 221,689: C 43,34, H 7,28, N 18,96, Cl 15,99% Trouvé C 43,29, H 7,15, N 18,75, C1 16,15% (2) N-N'-(2-chloroéthyl)-N'-nitrosocarbamoyl7-L-valine imide. -23- CH CH CH>CHCHCONH 3>CHCHCONH CH | CH tN2 3 NHCNHCH2CH2 NHCNCH2CH2c i 0 ONO Le composé obtenu à l'étape (1) ci-dessus (200 mg, 0,90 mmol est dissous dans de l'acide formique à 99% (1,5 ml), auquel est en- suite ajouté du nitrite de sodium (93 mg, 1,5 moles par mole du com- posé de départ) en environ 5 minutes sous agitation et refroidissement à la glace. Le mélange réactionnel est alors maintenu dans ces con- ditions pendant 30 minutes en vue d'achever la réaction. La solution réactionnelle est analysée par CCM avec un sys- tème révélateur chloroforme-méthanol (9:1 en volume) confirmant que la tâche au Rf 0,27 pour le composé de départ a disparu et qu'une tâche unique au Rf 0,50 pour le produit attendu s'est formée présen- tant une absorption UV. De l'Amberlite IR-120 (forme H) (4 ml) en suspension dans du méthanol est ensuite ajouté à la solution réactionnelle et le mé- lange est agité pendant 20 minutes. Apres que la résine ait été éli- minée par filtration, le filtrat est concentré sous vide au-dessous dE 30 C pour laisser un résidu solide cristallin jaune pâle. Le résidu est lavé avec de l'éther éthylique, donnant le composé attendu (181 me Rendement 80,0%; point de fusion 115-117 C (Dec.); LZ722+ 60,7 (c 0,6, DMP); D Analyse élémentaire: Calculée pour C8H15N403Cl, P.M. = 250,689 C 38,33, H 6,83, N 22,35, Cl 14,14% Trouvé C 38,26, H 6,55, N 22,53, Cl 14,35%. Exemple 9 Préparation du N-EN'-(2-chloroéthyl)-N'-nitrosocarbamoy17- DL-leucine amide. (1) N-LN'-(2-chloroéthyl)carbamoyl7-DL-leucine amide. CH3>CHCH2CHCONH2 > CH3>CHCH2CHCONH2 CH2 I CH 2 3 NH2 * HC 3 NHCNHCH2CH2CI 2i 2 2 I -24- Du chlorhydrate de DL-leucine amide (produit commercial vendu par Sigma Co., 200 mg, 1,20 mmol) est dissous dans du méthanol (6 ml), auquel est ensuite ajouté de l'Amberlite IRA 400 (forme OH-) (3,6 ml) en suspension dans du méthanol et le mélange est agité pen- dant 20 minutes en vue d'obtenir le DL-leucine amide sous forme libre. Après que la résine ait été éliminée par filtration, le filtrat est concentré en un volume d'environ 2 ml, auquel est ajouté goutte à goutte du 2-chloroéthyl-isocyanate (0,16 ml, 1,5 moles 19 par mole du composé de départ) à température ambiante avec agitation et le mélange est maintenu dans ces conditions pendant 20 minutes pour achever la réaction. La solution réactionnelle est analysée par CCM avec un sys- tème révélateur chloroforme-méthanol (5:1 en volume) confirmant que la tâche au Rf 0,25 pour le composé de départ a disparu et qu'une tâche unique au Rf 0,57 pour le produit attendu s'est formée. La solution réactionnelle est concentrée sous vide pour laisser un résidu solide cristallin blanc qui est recristallisé à partir d'éthanol pour donner une première récolte (196 mg) et une seconde récolte (33 mg) du composé attendu. Poids total obtenu: 229 mg; Rendement 80,9%; point de fusion 156-158 C; Analyse élémentaire: Calculée pour C9H18N302C1, P.M. = 235,715: C 45,86, H 7,70, N 17,83, C1 15,04% Trouvé C 46,05, H 7,67, N 17,56, Cl 15,28%. (2) N-LN'-(2-chloroéthyl)-N'-nitrosocarbamoyl7-DL- leucine amide. CH CH 0CH3-CHCHCONH 3cHCH2CHCONH2 CH5 21 CH3 2 *3 NHCNHCH2CH2C 3 NHCNCH2CH2Cl O ONO Le composé obtenu à l'étape (1) ci-dessus (400 mg, 1,70 mmol) est dissous dans de l'acide formique à 99% f2,5 ml), auquel est ensuite ajoute du nitrite de sodium (129 mg, 1,1 moles par mole du composé de départ), en environ 5 minutes sous agitation et refroi- dissement à la glace. Le mélange réactionnel est alors maintenu dans -25- ces conditions pendant 30 minutes en vue d'achever la réaction. La solution réactionnelle est analysée par CCM avec un sys- tème révélateur chloroforme-méthanol (9:1 en volume) confirmant que la tâche au Rf 0,23 pour le composé de départ a disparu et qu'une tâche principale au Rf 0,49 pour le produit attendu ayant une absorp- tion UV ainsi qu'une tâche secondaire au Rf 0,39 pour un sous-produit se sont formées. De l'Amberlite IR-120 (forme H) (6 ml) en suspension dans du méthanol est ensuite ajouté à la solution réactionnelle et le mé- lange est agité pendant 20 minutes. Après élimination de la résine par filtration, le filtrat est concentré sous vide au-dessous de C pour donner un résidu huileux jaune pâle. Le résidu est laissé reposer dans un dessicateur pendant plusieurs jours pour achever le dépôt de cristaux. Les cristaux sont lavés avec de l'éther isopropy- lique pour donner le composé attendu (298 mg).(Pour une seconde opé- ration et d'autres opérations ultérieures, la cristallisation peut être initiée par adjonction de cristaux précédemment obtenus). Rendement 66,3%; point de fusion 82-84 C; Analyse élémentaire: Calculée pour C9H17N403Cl, P.M. = 264,715: C 40,83, H 6,47, N 21,17, C1 13,39% Trouvé C 40,60, H 6,43, N 20,98, C1 13,20%. Exemple 10 Préparation du N-LN'-(2-chloroéthyl)-N'-nitrosocarbamoyi7- L-sérine amide. (1) N-LN'-(2-chloroéthyl)carbamoyi7-L-sérine amide. HOCH2CHCONH2 HOCH2CHCONH2 I 1 NH HCú NHCNHCH2CH2Cú Il Du chlorhydrate de L-sérine amide (produit commercial vendu par Sigma Co, 300 mg, 2,13 mmol) est dissous dans du méthanol (20 ml) auquel est ensuite ajouté de l'Amberlite IRA 400 (forme OH) (6,4 ml) ea suspension dans du méthanol et le mélange est agité pendant 20 minutes en vue d'obtenir le L-sérine amide sous forme libre. Après élimination de la résine par filtration, le filtrat est concentré en un volume d'environ 5 ml, auquel est ajouté goutte à goutte du 2chloroéthyl-isocyanate (0,21 ml, 1,2 moles par mole du composé de départ) à température ambiante et sous agitation. Le -26- mélange est alors maintenu dans ces conditions pendant 20 minutes en vue d'achever la réaction. La solution réactionnelle est analysée par CCM avec un système révélateur chloroforme-méthanol (4:1 en volume) confirmant que la tâche au Rf 0,1 pour le composé de départ a disparu et qu'une tâche unique au Rf 0,33 pour le produit attendu s'est formée. La solution réactionnelle est alors concentrée sous vide pour laisser un résidu solide cristallin blanc qui est ensuite lavé avec de l'isopropanol, domnnant le composé attendu (338 mg). Rendement: 75,6%; point de fusion]31-132 C; -a722 + 35,70 (c 0,6, méthanol); D Analyse élémentaire: Calculée pour C6H12N303C1, P.M. = 290, 637: C 34,37, H 5,77, N 20,05, C1 16,91% Trouvé C 34,14, H 5,78, N 19,80, CI 17,13%. (2) N-IN'-(2-chloroéthyl)-N'-nitrosocarbamoyl7-L-sérine amide. HOCH2CHCONH2 - HOCH2CHCONH2 Hi 2 NHCNHCH2CH2Cú NHCNCH2CH2Cú il li t 0 ONO Le composé obtenu à l'étape (1) ci-dessus (200 mg, 0,954 mmol) est dissous dans de l'acide formique à 99% (1,5 ml), auquel est ajouté du nitrite de sodium (72 mg, 1,1 moles par mole du composé de départ) en environ 5 minutes sous agitation et refroidissement à la glace. Le mélange réactionnel est alors maintenu dans ces condi- tions pendant 30 minutes en vue d'achever la réaction. La solution réactionnelle est analysée par CCM avec un sys- tème révélateur chloroforme-méthanol (7:1 en volume) confirmant que la tâche au Rf 0,15 pour le composé de départ a disparu et qu'une tâche unique au Rf 0,35 pour le produit attendu ayant une absorption UV s'est formée. De l'Amberlite IR-120 (forme H) (3 ml) en suspension dans du méthanol est ensuite ajouté à la solution réactionnelle et le me- lange est agité pendant 20 minutes. Après que la résine ait été éliminée par filtration, le filtrat est concentré sous vide à 30C et ensuite distillé azéotropiquement avec un mélange chloroforme- méthanol (9:1 en volume) pour laisser un résidu solide cristallin -27- 2497800 jaune pâle. Le résidu est lavé avec de l'acétate d'éthyle, donnant ainsi le composé attendu (151 mg). Rendement: 66,3%; point de fusion 117-120 C (Dec.); -722 + 57,6 (c 0,7, méthanol); D Analyse élémentaire: Calculée pour C6HlN404C1, P.M. = 238, 637: C 30,20, H 4,65, N 23,48, Cl 14,86% Trouvé C 30,43, H 4,80, N 23,25, Cl 15,05%. Exemple 11 Préparation du N-IN'-(2-chloroéthyl)-N'-nitrosocarbamoyl/- L-méthionine amide. (1) N-IN'-(2-chloroéthyl)carbamoyl7-L-méthionine amide. CH3SCH2CH2CHCONH2 - CH3SCH2CH2CHCONH2 t I NH2.HCú NHCNHCH2CH2CI Il on Du chlorhydrate de L-méthionine amide (produit commercial vendu par Sigma Co., 200 mg, 1,08 mmol) est dissous dans du méthanol (6 ml), auquel est ensuite ajouté de l'Amberlite IRA 400 (forme OH) (3,2 ml) en suspension dans du méthanol, et le mélange est agité pen- dant 20 minutes en vue d'obtenir le L-méthionine amide sous forme libre. Après élimination de la résine par filtration, le filtrat est concentré en un volume d'environ 3 ml, auquel est ajouté goutte à goutte du 2chloroéthyl-isocyanate (0,11 ml, 1,2 moles par mole du composé de départ) à la température ambiante sous agitation. Le mélange est alors maintenu dans ces conditions pendant 20 minutes en vue d'achever la réaction. La solution réactionnelle est analysée par CCM avec un système révélateur chloroforme-méthanol (5:1 en volume) confirmant que la tâche au Rf 0,28 pour le composé de départ a disparu et qu'un, tâche unique au Rf 0,58 pour le produit attendu s'est formée. La solution réactionnelle est alors concentrée sous vide pour laisser un résidu solide cristallin blanc. Le résidu est recris tallisé à partir d'éthanol pour donner une première récolte (198 mg) et une seconde récolte (39 mg) du composé recherché. Rendement total: 237 mg; rendement: 86,2% point de fusion 150-151 C; Z722 + 5,2 (c 0,42, méthanol D -28- Analyse élémentaire: Calculée pour C8H16N302C1S, P.M. = 253,749: C 37,86, H 6,36, N 16,56% Trouvé C 37,71, H 6,18, N 16,33%. (2) N-/N'-(2-chloroéthyl)-N'-nitrosocarbamoyl7-L-méthionine amide. CH 3SCH2CH2CHCONH2 - CH3SCH2CH2CHCONH2 NHCNHCH2CH2C NHCNCH2CH2C ú 0 ONO Le composé obtenu à l'étape (1) ci-dessus (700 mg, 2,76 mmol) est dissous dans de l'acide formique à 99% (6 ml) auquel est ensuite ajouté du nitrite de sodium (210 mg, 1,1 moles par mole du com- posé de départ) pendant environ 5 minutes sous agitation et refroi- dissement à la glace. Le mélange réactionnel est alors maintenu dans ces conditions pendant 30 minutes en vue d'achever la réaction. La solution réactionnelle est analysée par CCM avec un sys- tème chloroforme-méthanol (9:1 en volume) confirmant que la tâche au Rf 0, 33 pour le composé de départ a disparu et qu'une tâche principale au Rf 0, 65 pour le produit attendu ayant une absorption UV ainsi qu' une tâche secondaire au Rf 0,51 pour un sous-produit sont formées. De l'Amberlite IR-120 (forme H) (9 ml) en suspension dans du méthanol est ensuite ajouté à la solution réactionnelle (qui est légèrement colorée en brun) et le mélange est agité pendant 20 minutes. Apres élimination de la résine par filtration, le filtrat est concentré sous vide à 30 C ou moins et est ensuite distille azéotropiquement avec un mélange de méthanol et d'éther isopropylique pour donner un résidu solide cristallin. Le résidu est lavé avec de l'éther éthylique, donnant le composé attendu (555 mg). Rendement: 71,2%; point de fusion 95-97eC; t--22 + 18,7 (c 0,45, DMF); D Analyse élémentaire: Calculée pour C8H15N403ClS, P.M. = 282, 749: C 33,98, H 5,35, N 19,82% Trouvé C 34,27, H 5,40, N 19,63%. -29- REVENDICATIONS 1. Dérivés de nitrosourée, caractérisés par le fait qu'ils répondent à la formule (Ia) suivante: R4 R1 J 2 NCOYNCONCH2CH2X (Ia) R2/12 NO 1 2 4 dans laquelle R1, R2, et R qui peuvent être identiques ou différents, représentent chacun un atome d'hydrogène ou un groupe alcoyle, aryle, aralcoyle, alkanoyle ou un groupe hétérocyclique; Y représente -1- ou un groupe alkylène ayant de 2 à 3 atomes de carbone o R3 représente un groupe présent sur l'atome de carbone a d'un a-amino acide; et X représente un atome d'halogène choisi parmi le chlore, le fluor et le brome. 2. Dérivés de nitrosourée selon la revendication 1, caractérisés par le fait qu'ils ont pour formule: R3R4 R1 I I > NCOCHNCONCH2CH2X R2 C CTC c2c NO 2 4 dans laquelle R1, R2, et R4 qui peuvent être identiques ou différents, représentent chacun un atome d'hydrogène ou un groupe alcoyle, aryle, aralcoyle, alkanoyle ou un groupe hétérocyclique; R3 représente le groupe présent sur l'atome de carbone a d'un a-amino acide; et X représente un atome d'halogène choisi parmi le chlore, le fluor et le brome. 3. Dérivés de nitrosourée selon la revendication 1, caractérisés par le fait qu'ils ont pour formule: R4 R1 I (II) R2> NCO(CH2)nNCONCH2CH2X R NO dans laquelle R1, R2, R et X ont les mêmes significations que celles données aux revendications 1 et 2 et n représente 2 ou 3. -30- 2497800 4. Dérivés de nitrosourée selon l'une quelconque des reven- dications i à 3, caractérisés par le fait que le radical R3 est un groupe résiduel présent sur l'atome de carbone a d'un a-amino acide pris dans le groupe constitué par la glycine, l'alanine, la phényl- alanine, la sarcosine, la serine, le tryptophane, la proline, la méthionine, la cystéine, la tyrosine, la valine, la leucine, l'iso- leucine, la threonine, l'acide aspartique, l'asparagine, l'acide glutamique, la lysine, l'hydroxylysine, l'histidine et l'arginine. 5. Dérivés de nitrosourée selon l'une quelconque des re- vendications 1 à 3, caractérisés par le fait que les radicaux RI, R2 et R4 identiques ou différents représentent un atome d'hydrogène ou un groupe alcoyle inférieur ayant de 1 à 4 atomes de carbone, un groupe phényl non substitué ou substitué par un alcoyle inférieur, un alkoxy inférieur ou un halogène; un groupe aralcoyle dont le radical alcoyle a de 1 à 4 atomes de carbone, un groupe alkanoyle dont le radical alcoyle a de 1 à 4 atomes de carbone, un groupe furyle, thiényle, pyridyle, pyrimidyle, imidazolyde ou aridinyle. 6. Dérivés de nitrosourée selon l'une quelconque des re- vendications 1, 2, 4 et 5, caractérisés par le fait qu'ils sont pris dans le groupe constitué par: le N-LN'-(2-chioroéthyl)-N'-nitrosocarbamoyl7 glycine amide; le N-LN'-(2-chloroéthyl)-N'-nitrosocarbamoyi7 sarcosine amide; le N-N'-(2-chloroéthyl)-N'-nitrosocarbamoyl-L- phénylalanine amide; le N-IN'-(2-chloroéthyl)-N'-nitxosocarbamoy!7-L- tyrosine amide; le N-/N'-(2-chloroéthyl)-N'-nitrosocarbamoyl7-L- valine amide; le N-LN'-(2-chloroéthyl)-N'-nitrosocarbamoyl7 -DL- leucine amide; le N-/N'-(2-chloroéthyl)-N'-nitrosocarbamoyl7-L- serine amide; le N-N'-(2-chloroéthyl)-N'-nitrosocarbamoyll-L- méthionine amide, et le N-EN'-(2-chloroéthyl)-N'-nitrosocarbamoyl/proline amide 7. Dérivés de nitrosourée selon l!une quelconque des re- vendications 1,3, 4 et 5, caractérisés par le fait qu'ils sont pris dans le groupe constitué par: -31- le N-IN'-(2-chloroéthyl)-N'nitrosocarbamoyl7-e-alanine amide; et le N-IN'-(2-chloroéthyl)-N'-nitrosocarbamoyl7-a-amino- butyramide. 8. Dérivés de nitrosourée selon la revendication 1, caractérisés par le fait qu'ils ont pour formule: OH JoQ NHICCH2NHCNCH2CH2C2 I llI ?H / O ONO (III) EH HO M ( INHAc dans laquelle Ac représente un groupe alkanoyle. 9. Dérivés de nitrosourée selon la revendication 8, carac- térisés par le fait qu'il est le: 2-acétamido-1-Z t t -(2-chloroéthyl) nitroso-amino7carbonyl7amino7 -1,2-dideoxy-B-D-glucopyranose. 10. Procédé de préparation des dérivés de nitrosourée selon l'une quelconque des revendications 1 à 7 de formule générale R4 R1 I -R NCOYNCONCH2CH2X (Ia) R NO dans laquelle R1, R2, R identiques ou différents, représentent chacun un atome d'hydrogène ou un groupe alcoyle, aryle, aralcoyle, alkanoyle ou un groupe hétérocyclique; Y représente 3 -1- ou un groupe alkylène de 2 à 3 atomes de carbone, R3 repré- sentant un groupe présent sur un atome de carbone a d'un a-amino acide et X représente un atome d'halogène choisi parmi le chlore, le fluor et le brome, caractérisé par le fait qu'il comporte la mise en réaction d'un composé de formule (IVa) R4 > NCOYNH (IVa) R4 -32- dans laquelle R1, R2, R4 et Y ont les mêmes significations que ci- dessus, avec du p-nitrophényl N-(2-haloéthyle)-N-nitrosocarbamate dans un solvant approprié. 11. Procédé de préparation des dérivés de nitrosourée selon l'une quelconque des revendications 1 à 7 de formule générale: R4 R1 { > NCOYNCONCH2CH2X (Ia) R2 2 ]0 NO dans laquelle R1, R2, R, identiques ou différents, représentent chacun un atome d'hydrogène ou un groupe alcoyle, aryle, aralcoyle, alkanoyle ou un groupe hétérocyclique; Y représente R3 I 3 -CH- ou un groupe alkylène de 2 à 3 atomes de carbone, R repré- sentant un groupe présent sur un atome de carbone a d'un a-amino acide; et X représente un atome d'halogène choisi parmi le chlore, le fluor et le brome, caractérisé par le fait qu'il comporte la mise en réaction d'un composé de formule (Va) R4 R2> NCOYNCONHCH2CH2X (Va) dans laquelle R1, R2, R4, X et Y ont les mêmes significations que ci-dessus, avec un agent de nitrosation dans un solvant approprié. 12. Composition pharmaceutique, caractérisée par le fait qu'elle contient dans un excipient, un support ou un diluant pharma- ceutiquement acceptable, une quantité thérapeutiquement active d'un dérivé de nitrosourée selon l'une quelconque des revendications 1 à 9 ou préparé selon l'une quelconque des revendications 10 et 11.