Brevet FR2488800A1 — publié le 19820226

"Extraits d'écorce du margousier possédant une activité anti- néoplastique." La présente invention concerne de nouveaux extraits d'é- corce du margousier. Les extraits d'écorce du margousier selon l'invention possèdent des activités antinéoplastiques et sont utilisés comme agents anti-mitotiques. Comme résultat des études poussées sur l'action pharma- cologique des constituants contenus dans les matières du mar- gousier, il a été découvert que des traitements consécutifs de l'écorce du margousier avec deux solvants de constantes diélectriques différentes entraînent les constituants possé- dant d'excellentes activités antinéoplastiques. Par conséquent l'objet de la présente invention est la fourniture de nouveaux extraits d'écorce du margousier qui sont efficaces pour la thérapie des néoplasmes malins, en particulier des tumeurs malignes. Jusqu'ici on sait que les extraits du margousier contien- nent divers constituants actifs du point de vue pharmacologi- que. En fait, on connaît un procédé pour fabriquer des pro- duits cosmétiques pour la peau à partir de l'écorce, des feuilles, des fleurs, des fruits, des branches,de l'épiderme des racines ou de la résine du margousier, qui consiste en l'extraction de ces parties avec de l'eau ou un solvant hydro- phile, ou en la pulvérisation fine de ces parties (publication des brevets japonais NO 28853/77, 28854/77 et 10125/78): un procédé pour la préparation, à partir de ces produits du mar- gousier, de constituants possédant une activité améliorant les fonctions gastro-intestinales et hépatiques qui consiste à extraire ces produits avec un solvant hydrophile et/ou de l'eau chaude (publication du brevet japonais NO 10124/78); et un procédé de préparation, à partir de ces produits du margousier, de constituants qui sont efficaces pour la thérapie des mala- dies dermatologiques et rhumatismales, qui consiste à extraire ces produits avec un solvant hydrophobe (publication du brevet japonais NO 13689/78). Ces procédés sont distincts de la pré- sente invention du fait qu'ils sont appliqués en vue de produi- re les constituants actifs sans prétraitement mais seulement par un procédé direct d'extraction. La présente invention concerne des extraits d'écorce du margousier possédant une activité antinéoplastique qui sont obtenus en soumettant l'écorce du margousier à un procédé d'extraction avec un solvant organique ayant une constante dié- lectrique de 10 ou plus faible, puis en soumettant le résidu provenant de la première extraction à une extraction avec un solvant organique hydrophile ayant une constante diélectrique de 15 à 35. Comme décrit ci-dessous, les extraits du margou- sier selon l'invention montrent une activité anti-mitotique dans des oeufs d'oursin fécondés ainsi que dans des actions inhibitrices de la croissance vis-à-vis de la tumeur ascitique et de la tumeur pleine du sarcome 180 de la souris et des cel- lules L5178Y de la souris. Le margousier est un grand arbre de 10 mètres de haut, ou encore plus élevé, qui est originaire des tropiques et dont le nom en botanique est Melia azadirachta. Son 'écorce est uti- lisée dans la présente invention. L'écorce est de préférence séchée et finement broyée pour être utilisée dans l'invention. Selon la présente invention, un procédé d'extraction dans lequel l'écorce du margousier est traitée avec un solvant orga- nique ayant une constante diélectrique de 10, ou plus faible, est utilisé comme prétraitement pour extraire les constituants actifs. Comme solvants de ce genre, on peut citer le benzène, le toluène, les xylènes, le n-hexane, le chloroforme, le tétra- chlorure de carbone, l'acétate d'éthyle et produits analogues. Le traitement avant l'extraction est effectué pendant une du- rée de plusieurs heures à toute une nuit. Le résidu provenant de la première extraction est extrait avec un solvant organique hydrophile. Comme exemples de solvants utilisés dans ce stade, on peut mentionner les alcools inférieurs, tels que méthanol, éthanol, propanols et n-butanol, la pyridine, l'acétone et pro- duits analogues. L'extraction est effectuée pendant plusieurs heures à toute une nuit d'une façon classique. L'élimination du solvant de l'extrait, par exemple par distillation, donne l'ex- trait d'écorce du margousier selon la présente invention. L'ex- trait d'écorce du margousier ainsi obtenu peut être utilisé tel quel dans la thérapie des néoplasmes malins. Par ailleurs, l'extrait peut être purifié pour avoir l'extrait d'écorce du margousier plus pur en utilisant le procédé suivant. L'extrait d'écorce du margousier obtenu comme mentionné ci-dessus est dissous dans un alcool inférieur aqueux tel que du méthanol ou de l'éthanol aqueux, en mettant en contact la solution résultante avec une résine non-polaire pour la chromatographie par adsorption telle que par exemple "Amberlite XAD-2", "XAD-4" (Rohme and Haas), "Bio Beads SM-1", SM-2" (Biorad); "Diaion HP-10", "'Hp-20'l, HP30" (Mitsubishi Chemical Industries) ou produits analogues et la résine d'adsorption est traitée avec le méthanol aqueux à 10 %, suivi d'une élution des matières adsorbées avec du méthanol aqueux avec 50 %. L'élimination du solvant de l'éluat, par exemple par distillation, donne l'ex- trait d'écorce du margousier désiré. Les extraits d'écorce du margousier de la présente inven- tion ont les caractéristiques suivantes. 1) Aspect Poudre brune, 2) Spectre d'absorption IR Comme montré sur les figures 1 et 2. IR VBr cm 1: 3400, 1600, 1435 max. 3) Spectre d'absorption UV Comme montré sur la figure 3, le méthanol est utilisé comme solvant UV >mas.: 279 nm. min. 259 nm. 4) Solubilité environ 40 mg/ml dans l'eau, 50 mg/ml dans le méthanol, environ 20 mg/ml dans l'éthanol, environ 1,5 mg/ml dans l'acétone et faiblement insoluble dans le benzène, le chloroforme, l'acétate d'éthyle ou le n-hexane. ) Traitement à pH variables. Le présent extrait ne perd pas son activité antinéoplasti- que quand il est traité à 600C pendant 30 minutes dans une solution aqueuse dont le pH est de 2, 7 ou 9. Les extraits d'écorce du margousier de la présente invention sont utilisés pour la thérapie de divers néoplasmes malins. Ils peuvent être administrés par voie parentérale, par exemple par injection sous-cutanée, intraveineuse ou intramusculaire, ci-dessus, est dissoute dans le milieu jusqu'à ce qu'on ob- tienne une concentration finale dans le milieu indiquée dans le tableau II ci-dessous. La quantité de solution par creux est de 60 >1. La matière à essayer ainsi préparée est mise en incubation dans un incubateur à gaz carbonique à 37 C pendant 2 jours. Une fois l'incubation terminée, les cellu- les sont recueillies et comptées creux par creux et les nom- bres de cellules sont comparés avec le nombre de cellules du témoin qui ne contient pas de matière à essayer. Le nombre de cellules du témoin est d'environ 8,6 x 10 /ml. Pour comparer l'activité le même essai est fait avec de la mito- mycine C (MMC) ou de la bléomycine (BLM). Dans le tableau ci-dessous, T/C représente le rapport du nombre des cellules traitées avec la matière à essayer au nombre de cellules ne contenant pas de matière à essayer. ID50 est la concentration de la matière à essayer exigée pour ramener la concentration des cellules à la moitié de celle du témoin. TABLEAU II: Effets sur les cellules L5178Y de la souris. Partie de Fraction Concentration de la matière à T/C ID50 margousier (exemple NO) essayer (g/l é gm essayer (/m) %) (pg/ml Benzene (1) 100 98f1 30 105 114 acétate d'éthyle.'(3) 100 945 9918 - 10010 t Ecorce Methanol (1) 100 1 0 15x9 21 6010 Ethanol (4) 100 1715 31 58 0 38 83 0 Partie de Fraction Concentration de marousier (exemple N)la matière à T/C ID50 margousier (exemple NO)esar Fgm) M.g/) essayer (cg/ml) (%) (pg/ml) Benzene (2) 100 10214 31 10r3 - 108t4 feuilles Methanol (2) 100 94 8 31 9912 - 115 iC 1 0 13 r4 0.3 24.7 0f09 011 47.9 témoin BLM 100 8 1 8 4611 7X8 5771 (3) Résultats Les résultats avec les diverses fractions obtenues dans les exemples ci-dessus et les agents comparatifs sont indiqués dans le tableau II. La fraction benzénique et la fraction acétate d'éthyle de l'écorce du margousier et la fraction mé- thanolique des feuilles montrent respectivement une légère activité. On estime que l'activité est très faible avec les valeurs ID50 très élevées. Par ailleurs, la fraction méthano- lique ou éthanolique est fortement active. Bien que l'activité soit inférieure à l'activité de la MMC et de la BLM, on peut considérer qu'elle est suffisamment élevée quand on tient compte de l'ingrédient actif contenu dans la fraction méthano- lique ou éthanolique. ESSAI IV (Effets sur la tumeur ascitique du sarcome 180) (1) Préparation de la matière à essayer Une partie de chacune des fractions d'extraction est mise en suspension ou dissoute dans une suspension à 0,5 % de car- boxyméthylcellulose (CMC) dans une solution de saline tamponnée au phosphate ("PBS" vendu par les laboratoires GIBCO contenant -10 environ 9, 5 mM de phosphate), jusqu'à ce qu'on obtienne une concentration prédéterminée. (2) Transplantation des cellules mitotiques du sarcome 180. Les cellules mitotiques du sarcome 180 de la souris qui ont été repiquées par voie intrapéritonéale dans des souris ICR, sont retirées de la souris en même temps que l'ascite et diluées avec une solution de saline physiologique jusqu'à ce qu'on obtienne un nombre de cellules de 10 /ml. La suspen- sion des cellules mitotiques ainsi préparée est transplantée au moyen d'une seringue par voie intrapéritonéale dans des souris mâles ICR âgés de 4 semaines à une dose de 0,1 ml. En conséquence, le nombre de cellules transplantées par souris est de 1 x 10 (3) Administration de la matière à essayer. La matière à essayer préparée ci-dessus est administrée par voie intrapéritonéale à une dose de 0,1 ml/souris pendant 4 jours, une seule fois par jour, à partir du jour qui suit la transplantation des cellules mitotiques du sarcome 180 de la souris. Un groupe de six souris est utilisé pour chacune des concentrations de chaque matière à essayer. Comme témoins actifs, on utilise la MMC, la BLM, l'actinomycine D (ACD), le -fluorouracile (5-Fu) et le cyclophosphamide (CYP). Comme témoin est administrée seulement la PBS contenant de la CMC comme décrit ci-dessus de la même façon que ci-dessus. La dose est exprimée en poids par kg de poids du corps de souris. (4) Mlode d'évaluation 7 jours après la transplantation des cellules mitotiques, le poids (X) de chaque souris est déterminé. Ensuite l'ascite est complètement enlevée de la souris puis le poids (Y) est mesuré. X-Y est considéré comme la quantité d'ascite. L'ascite retirée est introduite dans un tube hématocrite puis centrifugée à 15 000 G pendant 5 minutes en utilisant un rotor pour hématocrite, à basse température. Ainsi est faite la détermination de la valeur ascitocritique, c'est-à- dire la proportion des cellules présentes dans l'ascite qui correspond à la valeur hématocrite en hématologie. La valeur multipliée par le volume de l'ascite donne le volume des cel- lules présentes dans l'ascite. Ce volume est désigné comme le volume total des cellules enveloppées (TPCV). Dans le cas du témoin, le volume total de l'ascite est de 6 à 10 ml, et le TPCV est de 1,6 à 2,5 ml. L'effet sur la tumeur est noté inefficace (-) quand le rapport TPCV du traité au témoin (T/C) est de 100 à 66 %, (+) quand il est de 65 à 41 %, (++) quand il est de 40 à 11 %, et (+++) quand il est de 10 à 0 %. Les résultats d'essai pour les matières selon la présente invention en comparaison avec les matières de l'art antérieur sont indiquées dans le ta- bleau III ci-dessous. Tableau III: Effets sur la tumeur ascitique du sarcome 180 Partie Fraction de (Exemple NO) margousier Ecorce Dose (mg/kg) T/C (%) Evaluation Benzene (1) 100 97t6 - Benzene (4) 100 95r2 - acétate d'ethyle (3) 100 96r8 Methanol (1) 20 94X8 - 84.8 - 34r3 ++ 32t2 ++ 48 +++ 1018 ++ 12r4 ++ Methanol (3) 100 8,5 +++ Ethanol (4) 100 14 f 8 ++ 1815 ++ Partie de Fraction Dose T/C Evaluation margousier (exemple N ) (mg/kg) (%) Benzene (2) 100 94 8 - Feuilles éethanol (2) 100 76f8 - MMC 0 5 0 +++ it5 0 +++ Témoin BLM 10 0 +++ ACD 0C1 0 +++ -Fu 20 0 +++ CYP 33 0 +++ 67 0 +++ (5) Résultats On n'observe pas d'effet avec les fractions benzénique et acétate d'éthyle de l'écorce du margousier ni avec toutes les fractions de feuilles du margousier. Par ailleurs, on observe une activité élevée, particulièrement avec les fractions mé- thanolique et éthanolique de l'écorce du margousier. Bien que l'activité soit inférieure à l'activité des témoins actifs MMC, BLM, etc., on peut la considérer suffisamment élevée quand on tient compte de l'ingrédient actif contenu dans cette fraction. Une purification ultérieure de ces fraction pour obtenir un ingrédient actif plus pur entraînerait une augmen- tation de l'activité. La dose efficace minimum pour la fraction méthanolique (1) a été trouvée d'après la relation dose-T/C dans le tableau ci-dessus,comme étant environ de 30 mg/kg. ESSAI V (Effets sur la tumeur pleine du sarcome 180) (1) Préparation de la matière à essayer Les matières à essayer sont préparées de la même façon que décrite dans le point (1) de l'essai IV. (2) Transplantation des cellules de la tumeur pleine du sarcome 180. Une suspension de cellules contenant 1 x 108 cellules par mi est préparée de la même façon que dans le point (2) de l'essai IV. Des souris ICR âgées de 4 semaines sont innoculées par voie sous-cutanée sur le dos avec 0,1 ml de la suspension, au moyen d'une seringue. (3) Administration de la matière à essayer. Comme dans le point (3) de l'essai IV, un groupe de six animaux est utilisé pour chacune des concentrations de chaque matière à essayer. (4) Mode d'évaluation. Le tissu développé de la tumeur est réséqué du 15ème au 21 ème jours de la transplantation des cellules mitotiques et pesé. La moyenne pour le groupe de six animaux est prise pour l'évaluation. L'effet est évalué en se basant sur le rapport du poids moyen des animaux traités à celui des ani- maux témoins. Le poids moyen est de 1,5 à 3,5 grammes pour les animaux témoins. Le rapport (T/C) de 100 à 71 % est noté inefficace (-), de 70 à 51 % par (+), de 50 à 21 % par (++), et de 20 à 0 % par (+++). Les résultats avec les matières à essayer selon la présente invention et les produits de l'art antérieur sont indiqués dans le tableau IV ci-dessous. Tableau IV: Effets sur la tumeur pleine du sarcome 180. Partie de Fraction Dose T/C margousier (Exemple N ) (mg/kg) (%) Evaluation Benzene (1) 100 86,4 Benzene (4) acetate d' tbyle (3) Methanol (1) Methanol (3) Ethanol (4) _Feuilles Benzene (2) 100 93t8 - Methanol (2) 100 95r9 - 4IMC 0r5 71r0 i 5 3215 ++ 5012 + BLM 10 43r5 ++ -Témoin 52T3 + ALD 071 102t4 - -Fu 20 47t8 + CYP 33 0 +++ 67 0 +++ Ecorce -50 92r 0 94 2 t4 128T2 83 9 24i1 T8 68 2 51 3 ++ + ++ + + + (5) Résultats Bien qu'on n'observe pas du tout d'effet avec les frac- tions benzénique et acétate d'éthyle de l'écorce du margousier, ni avec toutes les fractions de feuilles du margousier, les fractions méthanoliques de l'écorce du margousier montrent une activité élevée. La dose minimum efficace pour la fraction méthanolique (1) a été trouvée à partir de la relation dose- T/C comme étant environ de 65 mg/kg. Bien que l'activité soit faible, comparée avec les témoins actifs tels que MMC et BLM, la purification ultérieure des extraits selon l'invention pour les ingrédients actifs conduirait à une activité plus grande. Toxicité aiguë La valeur LD50 de la fraction méthanolique administrée par voie intrapéritonéale dans des souris mâles ICR pesant 19 à 21 g est de 1 100 mg/kg de poids du corps. EXEMPLE 5 A 100 g d'écorce de margousier sèche on ajoute 1 1 de benzène. Le mélange est laissé au repos pendant 5 heures en secouant de temps à autre pour accélérer l'extraction. Le mé- lange résultant est filtré et au résidu on ajoute 1 litre de benzène. Le mélange est ensuite traité de la même façon que ci-dessus. L'extraction avec le benzène est répétée trois fois en tout. A partir des extraits benzéniques combinés, on élimine le solvant sur un évaporateur rotatif pour obtenir 3,9 g d'un extrait en poudre sèche. 2,1 g de l'extrait pulvé- rulent ainsi obtenu sont dissous dans' e litre de méthanol à % puis mélangés intimement avec 300 ml d'"Amberlite XAD-2". Avec le mélange on remplit une colonne de 3,0 x 40 cm. A travers la colonne, on fait passer du méthanol aqueux à 10 %, du méthanol aqueux à 50 % et du méthanol à 100 %, successive- ment. Chacun des éluats est ensuite concentré à siccité. On obtient respectivement 0,81 g de la fraction méthanolique %, 0,84 g de la fraction méthanolique 50 % et 0,22 g de la fraction méthanolique 100 %. EXEMPLE 6 On répète le'même procédé que dans l'exemple 5 sauf qu'on utilise 1 1 d'éthanol à la place de 1 1 de méthanol qui y est utilisé pour l'extraction. On obtient respectivement 0,69 g de fraction méthanolique 10 %, 0,81 g de fraction mé- thanolique 50 % et 0,33 g de fraction méthanolique 100 % sous forme d'extrait en poudre. EXEMPLE 7 On répète le même procédé que dans l'exemple 5, sauf que 1 litre d'acétate d'éthyle est utilisé à la place de 1 li- tre de benzène utilisé dans l'exemple 5 pour le traitement par extraction. On-obtient respectivement 0,78 g de fraction méthanolique 10 %, 0,82 g de fraction méthanolique 50 % et 0,24 g de fraction méthanolique 100 % sous forme d'extrait en poudre. Les extraits du margousier obtenus dans les exemples à 7 ci-dessus sont essayés pour déterminer leurs effets sur les cellules L-5178Y sur les tumeurs ascitiques et les tu- meurs pleines du sarcome 180 selon les procédés décrits dans les essais II à IV. Les résultats sont indiqués dans les tableaux V et VI. TABLEAU V: Effets sur les cellules L-5178Y Matières à essayer ID50 (yg/ml) Exemple NO Fraction méthanolique MeOH à 10 % - 100 Exemple 5 MeOH à 50 % 16,5 MeOH à 100 % 67,5 Exemple 6 MeOH à 50 Z 35,0 Exemple 7 MeOH à 50 % 18,0 TABLEAU VI: Effets sur les tumeurs de sarcome 180 transplan- tées (souris) Matiere sa ye Type de la Matière à essayer Dose Exemple N ' Fraction méthanolique mg/kg) MeOH à 10 % T/C Eva- (%) luation '5 99t2 Exemple 5 Tumeur ascitique Exemple 6 Tumeur pleine 77r5 - MeOH à 50 % 50 3810 ++ 7 9 +++ MeOH à 100 % ÀMe- à a50 % 107T3 41T3 ,2 + +++ 40 2 ++ Exemple 7 MeOH à 50 % 100 8 r5... 10113 - MeCti à 10 5v ç50 8912 - 7659 - 6316 + ExempleO à 5 0 % 50 60r7 + 37 5 ++ 999 9 MeOH à-It0 % 50 98%4 91r7 - -Exemple 6 50 59r0 + MeOH a 50 % 100 45to ++ 0 4 5. ++ MeOH à 50 % 41y2 + ++ Exemple ' 7 On voit nettement d'après les tableaux V et VI que la fraction méthanolique 50 % possède une activité antinéoplas- tique élevée. L'extrait est actif avec une dose efficace mi- nimum de 30 mg/kg chez les souris pour la tumeur ascitique et avec une dose efficace minimum de 25 mg/kg chez les souris pour la tumeur pleine. La toxicité aiguë en-termes de LD50 chez les souris mâles est de 390 mg/kg de poids du corps par voie d'administration intrapéritonéale. Exemple de formulation 1 Dans 500 ml d'une solution de glucose à 5% stérile pour l'injection, on met en suspension 1000 mg de l'extrait d'écor- ce du margousier obtenu dans l'exemple 1. La suspension est répartie d'une façon aseptique dans des flacons à raison de ml par flacon et lyophilisée. On obtient une formulation contenant 10 mg de l'extrait d'écorce du margousier par flacon. Quand on veut l'utiliser, on la met en suspension dans de l'eau distillée pour l'injection. Exemple de formulation 2 Une formulation pour flacons est préparée de la même façon que dans l'exemple ci-dessus. On utilise 500 ml d'une suspension à 0,5 % de CMC J.P. dans une solution de saline physiologique pour injection à la place des 500 ml de solution * stérile de glucose à 5 % pour injection. Quand on veut l'uti- liser, on emploie une suspension dans l'eau distillée pour injection. REVENDICATIONS 1.- Extrait d'écorce du margousier possédant une activité antinéoplastique, caractérisé par le fait qu'il est obtenu en traitant l'écorce du margousier (Melia azadirachta) avec un solvant organique ayant une constante diélectrique de 10, ou plus faible, et en soumettant le résidu provenant dudit trai- tement à une extraction avec un solvant organique hydrophile ayant une constante diélectrique de 15 à 35. 2.- Extrait d'écorce du margousier selon la revendication 1, caractérisé par le fait que le solvant organique ayant une constante diélectrique de 10, ou plus faible, est le benzène. 3.- Extrait d'écorce du margousier selon la revendication 1, caractérisé par le fait que le solvant organique ayant une constante diélectrique de 10, ou plus faible, est l'acétate d'éthyle. 4.- Extrait d'écorce du margousier selon l'une quelcon- que des revendications 1 à 3, caractérisé par le fait que le solvant organique hydrophile ayant une constante diélectrique de 15 à 35 est le méthanol. 5.- Extrait d'écorce du margousier selon l'une quelcon- que des revendications 1 à 3, caractérisé par le fait que le solvant organique ayant une constante diélectrique de 15 à est l'éthanol. 6.- Extrait d'écorce du margousier, caractérisé par le fait qu'il est obtenu en traitant l'écorce du margousier Melia azadirachta avec un solvant organique ayant une cons- tante dié-ectrique de 10 ou plus faible, en soumettant le ré- sidu dudit traitement à une extraction avec un solvant organi- que hydrophile ayant une constante diélectrique de 15 à 35, en éliminant le solvant dudit extrait, en dissolvant le résidu dans un alcool inférieur, en mettant en contact la solution résultante avec une résine non-ionique pour la chromatographie par adsorption, en traitant ladite résine d'adsorption avec du méthanol aqueux à 10 %, suivi d'une élution avec des solutions contenant 30 à 50 % de méthanol et en éliminant le solvant dudit éluat. 7.- Extrait d'écorce du margousier selon la revendication 6, caractérisé par le fait que le solvant organique ayant une constante diélectrique de 10i ou plus faible, est le benzène. 8.- Extrait d'écorce du margousier, selon la revendication 6, caractérisé par le fait que le solvant organique ayant une constante diélectrique de 10, ou plus faible, est l'acétate d'éthyle. 9.- Extrait d'écorce dumargousier selon l'une quelconque des revendications 6 à 8, caractérisé par le fait que le sol- vant organique hydrophile ayant une constante diélectrique de à 35 est le méthanol. 10.- Extrait d'écorce du margousier selon l'une quelcon- que des revendications 6 à 8, caractérisé par le fait que le solvant organique hydrophile ayant une constante diélectrique de 15 à 35 est l'éthanol. 11.- Médicament possédant une activité antinoéplastique, caractérisé par le fait qu'il est constitué par un extrait d'écorce du margousier obtenu selon l'une quelconque des re- vendications précédentes. 12.- Composition pharmaceutique, caractérisée par le fait qu'elle comprend à titre d'ingrédient actif un extrait d'écorce du margousier obtenu selon l'une quelconque des re- vendications 1 à 10, conjointement avec des excipients pharma- ceutiquement acceptables. o c' oc Co co -r t-J FIG.I Z IoV (:) n , 70 u 60 z uc w C 40 w oD 20- 4000 3500 M00 2500 2000 1600 1400 1200 1000 800 600 400 250 cm' 24 88200 3/3 E1% Icm FIG.3 LONGUEUR D'ONDE (nm) o0 aaaa. * a * a m a a a a a a a a a a a a a * a a a * a * a m a * * a * a a a * a a a m.a Numéro de pubL icatior..2488801 Date d sa i s i e de. s re',ise i g(qemnss 08/10/86 opérat-'eur LUC92 poste 2 rnom d.u lot 2-010-08/10/86 Ttpe de document A1 Ex i st'L,:nce.i d ' un résumé NON Nomb:re total. de pgs........._. 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