Brevet FR2486941A1 — publié le 19820122

La présente invention concerne un procédé de préparation de la mangiférine. La mangiférine (glucoside de xanthone) peut être utilisée en thérapeutique en tant que médicament pour le traitement -es maladies virales de la peau et des muqueuses. Il existe plusieurs procédés de fabrication de la mangiférine. Un de ces procédés consiste à extraire avec de l'éthanol à 80 % les glucosides de la xanthone dans une herbe broyée du genre Hedysarum alpinum L. On effectue l'extraction sous ébullition au bain-marie. On utilise la matière première et l'agent d'extraction à raison de 1 kg de matière première par 10 1 d'agent d'ex- traction, L'extrait obtenu est partiellement évaporé. L'extrait évaporé est traité à l'eau, puis purifié au chloroforme. Il se forme alors deux couches, dont la cou- che supérieure contient les glucosides de xanthone. On sépare les deux couches. On isole la mangiférine dans la couche supérieure par un procédé chromatographique au polyamide. On place la couche supérieure dans une colonne et on lave à l'eau et avec un mélange hydro-alcoolique. Les éluats alcooliques contenant la mangiférine sont éva- porés et recristallisés dans un mélange dioxane-eau (le rapport en volume étant de 1:1). Le rendement en mangifé- rine obtenue selon ce procédé est de 0,5 % du poids de la matière première de départ (V.B. Kuvsev, V.I. Glyzin, G.S. Glyzina, A.I. Bankovsky, "Ressources végétales", 1972, v.8). En mettant en oeuvre ce procédé, on obtient une mangiférine d'un degré de pureté assez élevé. Toutefois, l'utilisation, dans le schéma technologique, du procédé de sorption pour la purification et la séparation des glucosides de xanthone rend ce procédé d'obtention de la mangiférine difficile et économiquement désavantageux. On connait un autre procédé de préparation de la mangiférine. Suivant ce procédé, on extrait plusieurs fois (jusqu'à 4) les glucosides de xanthone avec de l'éthanol aqueux a 80 % dans l'herbe broyée de plantes du genre Hedysarum alpinum L. ou Hedysarum flavescens Rgl. et Schmalh, à la température de 70 C. On évapore les ex- traits réunis. On place l'extrait évaporé, après filtra- tion, dans un entonnoir à séparation et on traite avec un solvant non polaire, par exemple le chloroforme. On effec- tue cette opération pour éliminer dans l'extrait la chlo- rophylle et d'autres composés non polaires, contenus dans la matière végétale. Il se forme alors deux couches. On sépare les couches. La couche supérieure (couche aqueuse) contient les glucosides de xanthone. On place ensuite la couche supérieure dans un entonnoir, on ajoute de l'alcool butylique, on agite et on soumet à une décantation. La couche butanolique (couche supérieure), qui est une solu- tion de glucosides de xanthone dans du butanol, est sépa- rée. On répète plusieurs fois l'extraction des glucosides de xanthone. On évapore les solutions butanoliques réunies jusqu'à un volume déterminé. La mangiférine alors préci- pite. La mangiférine obtenue est recristallisée dans un mélange solvant dioxane-eau, le rapport en volume étant de 1:1. Le rendement en mangiférine selon ce procédé est de 0,66 % du poids de la matière première de départ (S.V. Rusakova, V.I. Glyzin, S.I. Kocherga, O.V. Soldatova, V.M. Mulevich, "Certificat d'auteur"N 596242, 15.11.77). Un des avantages de ce procédé tient à la sub- stitution du procédé de séparation chromatographique com- plexe et coûteux de la mangiférine dans la colonne par une extraction liquide-liquide à un solvant organique. Cela permet d'augmenter le rendement en mangiférine. Cependant, le rendement reste insuffisamment élevé. Cela est dû à ce que, pendant l'extraction des glucosides de xanthone à l'alcool butylique, les substances étrangères, à savoir les O-glucosides-flavonoliques, passent avec la mangifé- rine dans l'extrait. Leur présence dans l'extrait rend difficile l'isolement de la mangiférine dans la solution butanolique évaporée. De plus, la mise en oeuvre de ce procédé exige une extraction multiple avec de l'éthanol à 80 % de la matière première végétale. On connait également un procédé d'extraction des glucosides de xanthone à partir des plantes du genre Hedysarum avec un mélange acétone-eau. L'extraction avec ce mélange se fait rapidement et n'exige alors pas de tem- pérature élevée (voir "Vsesojuznaja konferentsia po exkstraktsii". Izdanie "Zinjate", Rige, 1977). La présente invention a pour but de fournir un procédé de préparation de la mangiférine à partir de plan- tes du genre Hedysarum permettant d'obtenir le produit visé avec un rendement plus élevé. La solution de ce problème consiste en ce que, dans le procédé suivant l'invention de préparation de la mangiférine à partir des plantes du genre Hedysarum alpi- num L., Hedysarum flavescens Rgl. et Schmalh. comprenant l'extraction des glucosides de xanthone à partir de la partie aérienne des plantes avec un mélange acétone-eau, à un rapport en volume des composants du mélange de 1:0,5-2 respectivement, l'évaporation de l'extrait obtenu, la filtration de l'extrait évaporé, le traitement de l'extrait avec un solvant organique non polaire avec formation de deux couches, dont la couche supérieure est une couche aqueuse contenant les glucosides de xanthone, un traite- ment ultérieur de cette couche supérieure à l'alcool buty- lique avec formation de deux couches, dont la couche supé- rieure est une solution des glucosides de xanthone dans l'alcool butylique, l'évaporation de cette couche butano- lique supérieure, avec séparation subséquente de la mangi- férine précipitée et sa recristallisation, conformément à l'invention, avant le traitement de l'extrait au solvant organique non polaire, on y ajoute de l'acide sulfurique jusqu'à un pH de 2-4 et on fait bouillir, puis on filtre. Comme indiqué plus haut, avant le traitement de l'extrait au solvant organique non polaire, on y ajoute de l'acide sulfurique jusqu'à un pH de 2-4 et on fait bouillir. Dans ces conditions a lieu l'hydrolyse des 0- glucosides accompagnant la mangiférine. Les aglycones qui se forment par suite de l'hydrolyse sont isolés par fil- tration. Ces modes opératoires permettent d'accroître de façon considérable le rendement en produit à obtenir. Le procédé suivant l'invention de préparation de la mangiférine permet de préparer le produit souhaité avec un rendement de l'ordre de 1 % du poids de la matière première végétale initiale (de 34 à 50 % supérieur au ren- dement des procédés connus). Le procédé de préparation de la mangiférine est simple à réaliser et il est mis en oeuvre de la façon sui- vante. L'herbe du genre Hedysarum alpinum L. ou Hedysarum flavescens-Rgl. et Schmalh est battue et broyée pour former des particules de dimensions comprises entre 2 et 5 mm et traitée sous agitation continue par un mélange acétone-eau (le rapport en volume est choisi dans les limites de 1:0,5-2) à la température ambiante. Le rapport matière première- solvant est choisi dans les limites de 1:10-20. L'extrait hyd'ro-acétonique obtenu est évaporé jusqu'à 1/4 à 1/6 du volume initial et est séparé par fil- tration de la chlorophylle précipitée, des résines, etc. L'extrait filtré et évaporé est acidifié en le mélangeant à de l'acide sulfurique jusqu'à obtention d'un pH de 2 à 4; on le fait bouillir pendant 0,5 à 2 heures, on le refroidit jusqu'à la température ambiante pendant 1 à 3 heures jusqu'à dépôt complet du précipité. Ensuite, on procède à la filtration du précipité. Au précipité séparé par filtration, on ajoute un solvant non polaire, par exemple du dichloro-éthane, ou dans plu- sieurs exemples, du chloroforme. Il en résulte la formation de deux couches. Dans la couche supérieure aqueuse se trouvent les glucosides de xanthone. On sépare les couches, on ajoute à la couche su- périeure de l'alcool butyrique saturé d'eau. Il en résulte la formation de deux couches. La couche supérieure est une solution de glucosides de xan- thone dans l'alcool butyrique. On sépare les couches. On réalise au total 3 à 7 extractions de ce type. On évapore les solutions butanoliques réunies jusqu'à 1/20 à 1/60 du volume initial. Il y a formation d'un précipité de mangiférine que l'on refroidit pendant 12 à 24 heures à une température de 3 à 12 C, que l'on filtre et que l'on recristallise dans un mélange dioxane- eau (1:0,5-1:2). EXEMPLE 1. kg d'herbe battue broyée de Hedysarum alpinum L., avec des particules non supérieures à 3 mm, sont trai- tés sous agitation continue par un mélange acétone-eau (1:1) avec un rapport matière première/solvant de 1:17, à la température ambiante, pendant 15 minutes. On obtient 1 d'extrait hydro-acétonique. On extrait à nouveau la matière végétale dans les mêmes conditions et avec le même mélange pris à raison de 140 1. On utilise le deuxième ex- trait hydro-acétonique pour l'extraction d'une portion franche de la matière première. On évapore le premier ex- trait hydro-acétonique sous vide jusqu'à ce que le volume du résidu de cuve soit égal à 1/5 du volume initial de l'extrait. On sépare par filtration l'extrait évaporé de la chlorophylle précipitée, des résines, etc. On acidifie l'extrait filtré avec de l'acide sulfurique jusqu'à pH 2, 9 et on fait bouillir pendant 1 heure, puis on refroidit jusqu'à la température ambiante sous agitation pendant 2 heures. On effectue ensuite la filtration de l'extrait du précipité formé. On ajoute 3 fois à l'extrait filtré du chloroforme par portions de 10 1, 5 1 et 5 1 chaque en 30 minutes. Il se forme alors deux couches, dont la supérieu- re (aqueuse) renferme les glucosides de xanthone. On sé- pare les couches, on ajoute à la couche supérieure de l'al- cool butylique saturé d'eau, en plusieurs portions, on in- troduit pour la première extraction 10 1, pour la deuxième et pour toutes les extractions subséquentes - 15 1 chaque fois. On effectue en tout 5 extractions, chacune s'effec- tuant pendant 30 minutes. On évapore les solutions butano- liques réunies sous vide jusqu'à ce que le volume du rési- du de cuve soit égal à 1/40 du volume initial. Après l'éva- poration, il se forme un précipité de mangiférine. On filtre la mangiférine, on sèche, on broie et on recris- tallise dans un mélange dioxane-eau (1:1). On obtient 0,1 kg de mangiférine. Le rendement en mangiférine est de 1 % du poids de la matière de départ. EXEMPLE 2. kg d'herbe battue broyée de Hedysarum alpinum L., à dimension de particules non supérieure à 5 mm, sont traités sous agitation continue pendant 30 minutes, à la température ambiante, par un mélange acétone-eau (1:2), avec un rapport matière première/solvant de 1:20. On ob- tient 170 1 d'extrait hydro-acétonique. On extrait à nou- veau la matière première dans les mêmes conditions avec 1 du même mélange. On utilise le deuxième extrait hydro-acétonique pour l'extraction d'une portion fralche de la matière première. Le premier extrait hydro-acétoni- que est évaporé sous vide jusqu'à ce que le volume du ré- sidu de cuve soit égal à 1/6 du volume initial. On sépare par filtration l'extrait évaporé de la chlorophylle, des résines, etc. On acidifie l'extrait filtré avec de l'aci- de sulfurique jusqu'à pH = 2 et on fait bouillir pendant 0,5 heure, puis on refroidit à la température ambiante sous agitation pendant 1 heure. On sépare ensuite par filtration l'extrait du précipité formé. On ajoute à l'extrait filtré du dichloro-éthane, trois fois, par por- tions de 10, 5 et 5 1, pendant 30 minutes. Il en résulte deux couches dont la couche supérieure contient les gluco- sides de xanthone. On sépare les couches, et on ajoute à la couche supérieure de l'alcool butylique saturé d'eau, en plusieurs portions, on introduit pour la première ex- traction 10 1, pour la deuxième et pour toutes les extrac- tions ultérieures 15 1 chaque fois. On effectue au total 3 extractions pendant 15 minutes chacune. On évapore sous vide les solutions butanoliques réunies jusqu'à ce que le volume du résidu de cuve soit égal à 1/20 du volume ini- tial. Après l évaporation, il se forme un précipité de mangiférine, qu'on place dans un réfrigérateur pendant 12 heures. On filtre la mangiférine, on sèche, on broie, on recristallise dans un mélange dioxane-eau (1:0,5). On ob- tient 0,1 kg de mangiférine. Le rendement en mangiférine est de 1,0 % du poids de la matière première. EXEMPLE 3. kg d'herbe battue broyée de Hedysarum alpinum L., à dimensions de particules non supérieures à 2 mm, sont traités sous agitation continue par un mélange acétone-eau (1:O,5), à la température ambiante, pendant 10 minutes, avec un rapport matière première/solvant de 1:15. On ob- tient 120 1 d'extrait hydro-acétonique. On extrait à nou- veau la matière première dans les mêmes conditions avec 1 du même mélange. On utilise le deuxième extrait hy- dro-acétonique pour l'extraction d'une portion fraîche de la matière première. On évapore le premier extrait hydro- acétonique sous vide jusqu'à ce que le volume du résidu de cuve soit égal à 1/4 du volume initial de l'extrait. On sépare par filtration l'extrait évaporé de la chloro- phylle précipitée, des résines, etc. Sous agitation, on acidifie l'extrait filtré avec de l'acide sulfurique jus- qu'à pH = 4,0 et on fait bouillir pendant 2,0 heures, puis on refroidit jusqu'à la température ambiante sous agita- tion pendant 3 heures. On réalise ensuite une séparation par filtration de l'extrait du précipité formé. L'extrait filtré est additionné de dichloro-éthane, 3 fois, par por- tions de 10 1, 5 1 et 5 1, pendant 30 minutes. Il se forme alors deux couches dont la couche supérieure ren- ferme les glucosides de xanthone. On sépare les couches, on ajoute à la couche supérieure de l'alcool butylique saturé d'eau, en plusieurs portions, on introduit pour la première extraction 10 1, pour la deuxième et pour toutes les extractions ultérieures 15 1 chaque fois. On réalise au total 7 extractions pendant 40 minutes chacune. On éva- pore les solutions butanoliques réunies sous vide jusqu'à ce que le volume du résidu de cuve soit égal à 1/60 du vo- lume initial. Après l'évaporation, il se forme un précipi- té de mangiférine, qu'on place dans un réfrigérant pendant 24 heures. On filtre la mangiférine, on sèche, on broie, on recristallise dans un mélange dioxane-eau (1:2). On obtient 0,1 kg de mangiférine. Le rendement en mangiférine est de 1,0 % du poids de la matière de départ. EXEMPLE 4. kg d'herbe battue broyée de Hedysarum flaves- cens Rgl. et Schmalh, à dimensions de particules non supé- rieures à 3 mm, sont traités sous agitation continue avec un mélange acétone-eau (1:1), à la température ambiante, pendant 15 minutes, avec un rapport matière première/sol- vant de 1:17. On obtient 140 1 d'extrait hydro-acétonique. On extrait à nouveau la matière première dans les mêmes conditions avec 140 1 du même mélange. On utilise le deu- xième extrait hydro-acétonique pour l'extraction d'une portion fraîche de la matière première. On évapore le pre- mier extrait hydro-acétonique sous vide jusqu'à ce que le volume du résidu de cuve soit égal à 1/5 du volume ini- tial de l'extrait. On filtre l'extrait évaporé pour éli- miner la chlorophylle précipitée, les résines, etc. On acidifie l'extrait filtré avec de l'acide sulfurique jus- qu'à pH = 2,9 et on fait bouillir pendant 1 heure, puis on refroidit jusqu'à la température ambiante sous agita- tion pendant 2 heures. On effectue ensuite la filtration de l'extrait pour le séparer du précipité formé. On ajoute à l'extrait filtré du dichloro-éthane, 3 fois, par por- tions de 10 1, 5 1 et 5 1 pendant 30 minutes. Il se forme alors deux couches dont la couche supérieure contient les glucosides de xanthone. On sépare les couches, on ajoute à la couche supérieure de l'alcool butylique saturé d'eau, en plusieurs portions, on introduit pour la première ex- traction 10 1, pour la deuxième et pour toutes les extrac- tions ultérieures 15 1 chaque fois. On effectue au total extractions pendant 30 minutes chacune. On évapore les solutions butanoliques réunies sous vide jusqu'à ce que le volume du résidu soit égal à 1/40 du volume initial. Après l'évaporation, il se forme un précipité de mangiférine, qu'on place dans un réfrigérateur pendant 17 heures. On filtre la mangiférine, on sèche, on broie, on recristal- lise dans un mélange dioxane-eau (1:1) et on obtient 0,1 kg de mangiférine. Le rendement en mangiférine est de 1,0 % du poids de la matière première de départ. EXEMPLE 5. kg d'herbe battue broyée de Hedysarum flaves- cens Rgl. et Schmalh, à dimensions de particules non supé- rieures à 5 mm, sont extraits sous agitation continue avec un mélange acétone-eau (1:2), avec un rapport matière première/solvant de 1:20, à la température ambiante, pen- dant 30 minutes. On obtient 170 1 d'extrait hydro-acétoni- que. On extrait à nouveau la matière première dans les mêmes conditions avec 170 1 du même mélange. On utilise le deuxième extrait hydroacétonique pour l'extraction d'une portion fraîche de la matière première. On évapore le premier extrait hydro-acétonique sous vide jusqu'à ce que le volume du résidu de cuve soit égal à 1/6 du volume d'extrait initial. On filtre l'extrait évaporé pour le séparer de la chlorophylle précipitée, des résines, etc. On acidifie l'extrait filtré avec de l'acide sulfurique jusqu'à pH = 2,0, on fait bouillir pendant 0,5 heure, puis on refroidit jusqu'à la température ambiante sous agitation pendant 1 heure. Ensuite, on sépare par filtra- tion l'extrait du précipité formé. L'extrait filtré est additionné de dichloro-éthane, 3 fois, par portions de 1, 5 1 et 5 1 pendant 30 minutes. Il se forme alors 2 couches dont la couche supérieure contient les glucosides de xanthone. On sépare les couches, on ajoute de l'alcool butylique saturé d'eau à la couche supérieure, en plu- sieurs portions, on introduit pour la première extraction 1, pour la deuxième et pour toutes les extractions ultérieures 15 1 chaque fois. On effectue au total 3 ex- tractions pendant 15 minutes chacune. On évapore les so- lutions butanoliques réunies sous vide jusqu'à ce que le volume du résidu de cuve soit égal à 1/20 du volume ini- tial. Il se forme après l'évaporation un précipité de mangiférine, qu'on place dans un réfrigérateur pendant 12 heures. On filtre la mangiférine, on sèche, on broie, on recristallise dans un mélange dioxane-eau (1:0,5) et on obtient 0,1 kg de mangiférine. Le rendement en mangi- férine est de 1,0 % du poids de la matière première ini- tiale. EXEMPLE 6. kg d'herbe battue broyée de Hedysarum flaves- cens Rgl. et Schmalh, à dimensions de particules non supé- rieures à 2 mm, sont traités sous agitation continue avec un mélange acétone-eau (1:0,5), avec un rapport matière première/solvant de 1:15, à la température ambiante, pendant 10 minutes. On obtient 120 1 d'extrait hydro- acétonique. On extrait de nouveau la matière première dans les mêmes conditions avec 120 1 du même mélange. On utilise le deuxième extrait hydro-acétonique pour l'ex- traction d'une portion fraiche de la matière première. On évapore sous vide le premier extrait hydro-acétonique jusqu'à ce que le volume du résidu de cuve soit égal à 1/4 du volume d'extrait initial. On sépare par filtration l'ex- trait évaporé de la chlorophylle précipitée, des résines, etc. On acidifie l'extrait filtré avec de l'acide sulfu- rique jusqu'à pH = 4,0, on fait bouillir pendant 2,0 heures, puis on refroidit jusqu'à la température ambiante sous agitation pendant 3 heures. Ensuite, on réalise la séparation par filtration de l'extrait du précipité formé. L'extrait filtré est additionné de dichloro-éthane, 3 fois, par portions de 10 1, 5 1 et 5 1, pendant 30 minutes. Il se forme alors deux couches dont la couche supérieure con- tient les glucosides de xanthone. On sépare les couches, on ajoute de l'alcool butylique saturé d'eau à la couche supérieure, en plusieurs portions, on introduit pour la première extraction 10 1, pour la deuxième et pour toutes. les extractions ultérieures 15 1 chaque fois. On effectue au total 7 extractions pendant 40 minutes chacune. On éva- pore les solutions butanoliques réunies sous vide, jusqu'à ce que le volume du résidu de cuve soit égal à 1/60 du volume initial. Il se forme, après l'évaporation, un pré- cipité de mangiférine, qu'on place dans un réfrigérateur pendant 24 heures. On filtre la mangiférine, on sèche, on broie, on recristallise dans un mélange dioxane-eau (1:2) et on obtient 0,1 kg de mangiférine. Le rendement en mangiférine est de 1,0 % du poids de la matière première initiale. REVENDICATION Procédé de préparation de la mangiférine à par- tir de plantes du genre Hedysarum alpinum L. ou Hedysarum flavescens Rgl. et Schmalh, comprenant l'extraction des glucosides de xanthone dans l'herbe (partie aérienne des plantes) avec un mélange acétone-eau, avec un rapport en volume des composants du mélange de 1:0,5-2 respectivement, l'évaporation de l'extrait obtenu, la filtration de l'ex- trait évaporé, le traitement de l'extrait par un solvant organique non polaire avec formation de deux couches dont la couche supérieure (couche aqueuse), contient les gluco- sides de xanthone, avec un traitement ultérieur de cette couche supérieure par de l'alcool butylique, avec forma- tion de deux couches dont la couche supérieure est une so- lution de glucosides de xanthone dans le butanol et on évapore la couche butanolique supérieure avec séparation ultérieure de la mangiférine précipitée et recristallisa- tion de celle-ci, caractérisé en ce que, avant le traite- ment de l'extrait par un solvant organique non polaire, on y ajoute de l'acide sulfurique jusqu'à un pH de 2-4 et on fait bouillir, puis on filtre.