Brevet FR2495935A1 — publié le 19820618

L'invention est relative i des fractions de mucopolysaccharides possédant des propriétés biologiques leur permettant notamment de contrôler de manière spécifique certaines étapes de la coagulation sanguine. Elle concerne également leurs procédés d'obtention et leurs applications en tant que principes actifs de médicaments. L'invention est plus particulièrement relative à des fractions possédant une activité plus spécifique que l'héparine vis- -vis de certains facteurs dela coagulation et notamment vis- -vis du facteur X activé, ou facteur Xa du sang. La recherche de moyens permettant de disposer de telles fractions a amené les inventeurs a étudier leurs possibilités d'obtention à partir de dérivés d'héparine. On notera que le terme héparine est utilise dans la description et les revendications dans son sens le plus large. Ce terme désigne ainsi indifféremment une préparation d'héparine- commerciale, de qualité pharmaceutique, ou une héparine brute, telle qu'obtenue par extraction a partir de matériaux biologiques, en particulier de tissus de mammifères. I1 peut s'agir de préparations où l'heparinese trouve sous forme acide ou encore sous forme de sels, notamment de sels de sodium. On sait que l'héparine présente un intérêt considérable en raison de ses remarquables propriétés anticoagulantes. De nombreux travaux ont porté sur l'étude de sa structure et des sites qui seraient responsables de son activité. Il est admis, à ce jour, que l'héparine est un polysaccharide forme de chaines oligosaccharidiques de composition et de poids moléculaire hétéroqène. On considère qu'elle renferme principalement des motifs d'acide 2-O-sulfate-L-iduronique et de N-sulfate-D-glucosamine (6-O-sulfatée ou non) et, dans une moindre mesure,des motifs d'acide D-glucuronique, d'acide L-iduronique et de N-acétyl D-glucosamine (6-O-sulfatée ou non). Les proportions de ces motifs et leur teneur notamment en groupe sulfate peut en outre varier largement selon l'origine de l'héparine. Divers moyens permettant d'isoler des fractions à partir de l'héparine ont été proposés. On a ainsi rapporte des techniques de dépolymérisation par voie chimique ou enzymatique ou encore des procédés de séparation par électrophorèse ou d'extraction a l'aide d'un mélange de solvants. Les inventeurs ont cherché à mettre au point un procédé de fractionnement plus efficient que ceux de l'art antérieur, notamment permettant d'obtenir avec un rendement plus satisfaisant des chaines naturelles d'héparine (c'est-a-dire des chaînes non modifiées dans leur structure) et conduisant à de nouvelles fractions possédant les propriétés biologiques évoquées ci-dessus. Les recherches effectuées dans ce domaine ont amené les inventeurs à étudier une technique de fractionnement basée sur l'obtention et la séparation de fractions insolubles a partir de fractions solubles. Ces travaux ont montre qu'on pouvait appliquer avec avantage une technique de ce type en mettant en oeuvre le matériau héparinique à fractionner sous forme d'un dérivé répondant à certaines caracteristiques et en effectuant le fractionnement selon certaines conditions. Il est alors apparu qu'il est possible, dans ces conditions, de séparer à partir du matériau héparinique de départ, des fractions à activité anticoagulante anti-Xa (exprimées en unités Yin-Wessler) élevée, et a' faible activité anticoagulante globale selon le test USP. On rappelle que l'activité Yin Wessler est plus spécialement representative de l'aptitude des fractions actives à potentialiser l'inhibition du facteur Xa du sang par l'antithrombine III ou l'AT III dans le test correspondant et le titre USP du pouvoir des fractions actives à inhiber la coagulation totale du sang ou du plasma (c'est-à- dire a inhiber un grand nombre de facteurs de la coagulation). Le titre Yin-Wessler est mesuré selon la méthode decrite par ces auteurs dans J.Lab.Clin.Med. 1976,81,298 à 300 et le titre U.S.P. selon la méthode décrite dans "Pharmacopea of the Uni tex States of America" pages 229 et 230 (voir également le deuxième supplément U.S.P.-NF,page 62 et le quatrième supplément U.S.P., page 90, intitulé respectivement "Drug substances" et "Dosage Forms"). Selon un aspect de grand intéret, l'étude pharmacologique des fractions de l'invention a montré qu'elles possédaient une activité antithrombotique in vivo dents le test de Wessler et al décrit dans J. of alpin. pllysiol. 1959. 14,943-946. L'invention a donc pour but de fournir de nouvelles frac tions de mucopolysaccharides à activité anti-Xa elevée et et présentant une grande spécificité à l'égard du facteur Xa dans le cadre des réactions enzymatiques successives qui caractérisent le processus de coagulation. Elle vise également a fournir un procédé d'obtention de ces fractions, de mise en oeuvre aisée et à rendement satisfaisant. L'invention a en outre pour but de fournir des principes actifs de médicaments et les médicaments eux-memes capables, notamment, d' inhiber le facteur Xa selon un degré de sélectivité élevé alors que leur activité sur la coagulation globale peut être maintenue à un niveu très faible. Elle vise plus particulièrement à fournir des médicaments utilisables,en raison de leurs propriétés pharmacologiques, pour des traitements antithrombotiques, sans entrainer de risques hémmoragiques. Les fractions, selon l'invention, sont du type de celles pouvant être obtenues par un procédé qui comprend au moins une étape de - mise en suspension, dans un milieu aqueux, d'un matériau héparinique à activité anticoagulante,sous forme d'un dérive d'héparine, comprenant des constituants, ou produits, insolubles dans l'eau, et des produits solubles dans l'eau, certains au moins de ces produits solubles dans l'eau pos sédant des coefficients de solubilité différents dans un mélange donné d'eau et d'un solvant organique et étant alors susceptibles de se séparer de ce mélange d'eau et de solvant selon la concentration en solvant organique du mélange, ladite étape de mise en suspension étant réalisée dans des conditions permettant la dissolution d'au moins une partie desdits produits solubles dans l'eau - la recupf; ;ration, d'uns part, des produits restés en suspension, d'autre part, de la solution restante - le traitement de cette solution afin d'en séparer une fraction de composés mucopolysaccharidiques, ce traitement comportant l'addition a la solution en question, d'un solvant organique, dn des conditions permettant de provoquer la séparation d'une fraction, se traduisant plus spé cia] (m(nt par l'apparition - la récupération, d'une part, des produits tns- tituant le trouble, d'autre part, de la solution, ce processus étant avantageusement répété sur les solutions surcessivement obtenues, et ce, notamment jusqu'a l'obtention d'une olution ne donnant plus lieu à 11 apparition d'un trouble par addition supplémentaire du solvant organique considéré. Le matériau héparinique de départ est sous forme de dérivés minéraux ou organiques. D'une manière avantageuse, le dérivé d'héparine est constitué par un sel. Les sels de métaux alcalino-terreux de l'héparine, plus spécialement les sels de baryum s'avèrent particulièrement appropriés,en was- son de leur faible solubilité dans les mélanges eau-alcool, ce qui permet de manipuler des volumes relativement faibles de solvants. Les sels de métaux alcalins lourds convien- nent également. Parmi les autres sels appropriés, on peut citer les sels de pyridinium. Le dérivé d'héparine peut également se trouver sous forme d'un dérivé organique, par exemple de pyridine. Il est recomnandé d'utiliser des dérivés d'héparine e grande pureté afin d'augmenter la sensibilité du fraction- nement et de disposer de fractions plus particulièrement appropriées à leur utilisation en thérapeutique Les fractions de l'invention, telle qu'obtenues selon ceprocédé, sont donc sous forme de dérivés, notamment de sels. Elles sont aisément transformées selon les techniques classiques en d'autres sels ou dérivés physiologiquement acceptables ou encore sous forme libre.Les fractions cor- respondantes entrent naturellement dans le cadre de l'invention Un groupe de fractions de l'invention, correspondant plus spécialeflent a celles se séparant en premier lien dans te procédé evoqué ci-dessus comporte une majeure partie de résidus sulfates, a savoir, d'acide L-iduronique 2-sulfate et de 2-déoxy-2-sulfamino-D-glucose-6-sulfate. Un groupe préféré, correspondant aux fractions ob t@nues aprés plusieurs additions de solvant organique, appa redît plus riche en résidus non sulfatés et notamment tes sidus d'acide D-glucuronique, d'acide L-iduronique et de 2-acétamido-2-déoxy-D-glucose D'une manière génerale, ces fractions sont solubles dans l'eau a 40C environ. Les fractions de l'invention sont caractérisées par un titre Yin-Wessler (Y-W) avantageusement voisin de 200ui/mg ou même supérieur, à savoir, de l'ordre de 400-450 ou de plus de 600. Des fractions préférées sont caractérisées , en outre, par une faible activité anticoagulante globale, pouvant être avantageusement inférieure à 100, telle que mesurée selon la méthode USP Le rapport de leurs titres Y-W et USP est alors avantageusement au moins voisin de 2, et de nreférence, suporiour à 4,et même pouvant dépasser 10. L'invention vise éqalect un procédé d'obtention des fractions mucopolysaccharidiques en question, à activité anti Xa elevée et à faible activité anticoagulante globale. Ce procédé, dans son aspect général, comprend les étapes indiquées ci-dessus. Les divers paramètres intervenant pour effectuer un tel fractionnement physico-chimique basé sur les solubilités différentes des fractions, en particulier le pH, la température, la durée, les concentrations en matériau à fractionner et en solvant de précipitation, sont ajustées les unes aux autres afin d'obtenir les fractions désirées dans des conditions satisfaisantes. Les conditions rapportées ci-après se sont avérées avantageuses en permettant d'effectuer une separation remarquablement fine et d'obtenir des fractions possédant les pro priétés biologiques souhaitées. Mais, il est clair qu'un ou plusieurs des paramètres considérés peuvent être modifiés entraînant un ajustement d'un ou plusieurs autres paramètres en conséquence, de telles modifications ne sortant pas pour autant du cadre de l'invention. Conformément à la première étape, du procédé de l'invention, on met en suspension le matériau héparinique de départ dans de l'eau et ce, dans des conditions permettant la dissolution d'au moins une partie des produits qui sont solubles dans l'eau. Les étapes de séparation ultérieures apparaissent plus aisées à réaliser lorsqu'on amène le pH de la suspension des valeurs supérieures à la neutralité, notamment, supérieures a 7,5, avantageusement entre 7,5 et 8 , un pH approprié présente une valeur de 7,7 à 7,8. L'ajustement du pH est réa i té commodémment par addition de l'hydroxyde du métal correspondant au sel de l'héparine,plus@spécialement, par de i1hydroxyde te baryum,lorsqu'on traite des sels de baryum d'héparine. Des concentrations en matériau héparinique de l'ordre da 5% apparaissent satisfaisantes. Afin de séparer ceux des produits quis'avèrent inso lubles dans l'eau dans les conditions utilisées, on a avan tageusement recours à au moins une opération de centrifu galion. L'utilisation des techniques de centrifugation atin de récupérer les produits insolubles selon la première tape du procédé de l'invention, ou rendus insolubles par addition de solvant, dans la suite du procédé, facilite la réalisation d'un fractionnement très fin. La recherche de conditions experimentales permettant d'effectuer le fractionnement désiré dans des conditions avantageuses a amené à opérer à température inferieure à l'ambiante, de préférence inférieure à 100C et avantageusement choisie entre O et 10 C et ce de manière a éviter,notamment, toute contamination par des microorganismes.Dans cette gamme,une température de l'ordre de 4 C,s'est avérée satisfaisante pour les séparations souhaitées. Mais, il est naturellement possible d'opérer à d'autres températures, ce qui amènerait a ajuster au moins certains des autres paramètres intervenant dans le processus de séparation. A la température correspondant à l'intervalle indiqué ci-dessus, on obtient la séparation des produits insolubles en operant à une vitesse supérieure à 7000 t/m et ce durant plus d'une heure. A titre indicatif, en opérant à 9000 t/mn, on poursuit la centrifugation entre 1 et 2 h, de préférence environ 80-90 mn. Cette opération peut être recommencée lorsque le surnageant n'apparait pas clair. L'isolement de différentes fractions de mucopolysaccharides à partir du surnageant ainsi obtenu est réalisé par addition d'un solvant organique capable de provoquer dans des conditionsdéterminées, notamment, de température et pH, la sé pariltion, @ous forme d'un @ .ger trouble, d'une fraction donnée de nilLepo lysaccharides, cette opération étant répétée sur chacun des surnageants successivement obtenus. Les solvants alcooliques, en particulier l'méthanol s'avèrent spécialement appropriés pour effectuer ce type de séparation.Mais d'autres solvants organiques conviennent,notamment des solvants polaires tels que le diméthylformamide ou le diméthylsulfoxyde. D'une manière particulièrement avantageuse, les dispositions évoquées ci-dessus permettent d'effectuer une séparation très fine des differentes fractions entrant dans la constitution de l'héparine. On obtient ainsi directement des fractions biologiquement actives,correspondant à des chaînes naturelles de l'héparine, à pureté élevée, sans qu'il soit nécessaire de recourir à des étapes supplémentaires de séparation et de purification, et pouvant être ai sément transformées en dérivés ou sels physiologiquement acceptables. Selon un aspect de grand intérêt, le procédé de l'invention conduit à l'obtention de ces fractions avec un rendement intéressant, ce qui constitue un élément parti culierement précieux pour une exploitation à l'échelle industrielle. L'étude pharmacologique des fractions de l'invention a montre qu'elles possfident une action nettement plus selec- tive que celle del'héparine, notamment, au niveau de l'inhibition du facteur Xa. D'une manière avantageuse, il apparaît que cette activité anti-Xa, telle qu'exprimée en unités Yin-Wessler, traduit une activité antithrombotique puissante. Comme le montrent les exemples, l'activité anticoagulante globale, mesuree selon la méthode USP est avantageusement faible. L'invention fournit donc des fractions qui sont capables d'éliminer pratiquement les risques d'hémorragie. L'activité antithrombotique a été étudiée in vivo. A titre indicatif, on rapporte ci-après les résultats obtenus sur le lapin,en utilisant la méthode de Wessler et al dont question plus haut. Selon cette methode, on provoque la formation de caillots dans la veine jugulaire du lapin en injectant un complexe de prothrombine activée Pour étudier l'effet préventif, vis-a-vis de la formation de caillots, des fractions de l'invention, on injecte une traction, avant l'injection de 25 unites/kg de complexe thrombogénique. On constate qu'en injectant, avant le complexe de prothrombine activée, de 150 à 250 unités/mg (Yin-Wessler) de fraction, on obtient une protection élevée vis-a-vis de la formation de caillots Avantageusement, les fractions de l'invention sont d'une grande innocuité. L'administration de 10 000 u/kg (titre Yin-Wessler) d'une fraction selon l'invention ne provoque chez le lapin aucune réaction toxique, ni d'effet pyrogénique dans le test de pyrogénicité chez le lapin conforme a la pharmacopée française. L'administration à des souris de doses aussi importantes que 3200 mg/kg n'ont pas permis déterminer la DL-50. Le composition@ melon l'invention sont alors particulibrement appropriées pour le contrôle spécifique de certaines étapes de la coagulation chez l'homme ou l'animal, en particulier, lorsqu'on souhaite effectuer une inhibition sélective de l'activité du facteur Xa du sang (par exemple chez les patients qui ont subi, ou qui vont subir une opération, dans le car de maladiesathéromateuses, de perturbations de mécanismes de la coagulation par des activateurs bactériens ou enzymatiques etc.). L'invention est donc relative à des préparations pharmaceutiques qui renferment lesdites fractions muco saccharidîques à activité anti-Xa élevée. Elle est plus particulièrement relative à des préparations pharmaceutiques dépourvues de substances pyrogéniques contenant une quantité efficace de principes actifs en association avec des excipients pharmaceutiques. En particulier, elle concerne les compositions dans lesquelles le véhicule pharmaceutique est approprié pour l'administration par voie orale. Des formes d'administration de l'invention appropriées pour l'administration par voie orale peuvent être avantageusement des gélules gastrorésistantes, des comprimés ou tablettes ou des pilules, ou encore présentées sous forme de liposomes. D'autres compositions pharmaceutiques comprennent ces fractions en association avec les excipients appropriés pour l'administration par voie rectale. Des formes d'administration correspondantes sont constituées par des suppo- sitoires. D'autres formes d'administration de l'invention sont constituées par des aérosols ou des pommades. L'invention concerne également des compositions pharmaceutiques injectables, stériles ou stérilisables. Ces solutions renferment avantageusement 1 000 à 100 000 u (Yin-Wessler)/ml de fractions de préférence de 5 000 a 50 000, par exemple de 25 000 u/ml, lorsque ces solutions sont destinées a ltinjection par voie sous-cutanée. Elles peuvent contenir, par exemple, de 500 a 10 000, notamment 5 000 u/ml de fractions mucopolysaccharidiques lorsqu'elles sont destinees a l'injection par voie intraveineuse ou par perfusion. Avantageusement, de telles préparations pharmaceutiques sont présentes sous la forme de seringues non récuperables, pretes a l'emploi. L'invention concerne également les compositions pharmaceutiques contenant lesdites fractions en association avec un autre principe actif, utilisable en particulier pour la prophylaxie et le traitement de thrombose, tel qu'un agent veinotonique comme la dihydroergotamine, un sel d'acide nicotinique ou un agent thrombolytique comme l'urokinase. Les fractions de l'invention sont avantageusement sous la forme de sels d'au moins un métal physiologiquement acceptable tel que le sodium et/ou le calcium et/ou le ma gndsium. les compositions pharmaceutiques de l'invention sont particulièrement adaptées pour le contrôle (préventif ou curatif) de certaines- étapes de la coagulation du sang chez l'hojnme ou l'animal, notamment dans le cas ou le patient est soumis à des risques d'hypercoagulabilité résultant notamment de la libération par l'organisme de thromboplastines, par exemple, de thromboplastines tissulaires (opérat-ions chirurgicales, processus atheromateux, développement de tumeurs et troubles de la coagulation par des activateurs bactériens ou enzymatiques, etc.). Afin d'illustrer l'invention, on indique, ciaprès, un exemple de posologie utilisable chez l'homme cette posologie comprend, par exemple, l'administration au patient de 1 000 à 25 000 u par voie sous-cutanée, deux ou trois fois par jour, selon le niveau des risques d'hypercoagulabilité ou la condition thrombotique du patient ou de l 000 à 25 000 u/24 heures par voie intraveineuse. en administrations discontinues à intervalles réguliers, ou continues par perfusion, ou encore de 1 000 à 25 000 u (trois fois par semaine) par voie intramusculaire (ces titres sont exprimés en unité Yin-Wessler). Ces doses peuvent être naturellement ajustées pour chaque patient en fonction des résultats et des analyses de sang effectuées auparavant, la nature des affections dont il souffre et, d'une manière générale, son état de santé. D'autres caractéristiques et avantages de 1' inven- tion apparaîtront dans les exemples qui suivent et en se reportant aux figures I et 2 sur lesquelles on a représenté les spectres RMN de deux fractions selon l'invention. EXEMPLE I - aration de sels de baryum d'héparine On utilise une héparine commerciale de muqueuse de porc qui se trouve sous forme de sels de sodium. Dans une première étape, on la traite avec des résines échangeuses d'ions pour l'obtenir sous forme acide puis, on fait réagir la forme acide avec de l'hydroxyde de baryum aux fins d'obtention des sels de baryum en question. 10 Obtention de la forme acide On dissout 2 g d'héparine commerciale de muqueuse de porc, qui se trouve sous forme de sels de sodium, dans 30 ml d'eau. Cn fait passer la solution dans une colonne échangeuse d'ions, de 52 ml remplie d'une résine du type Amberlite IR - 120 (H+). On procede à l'étape d'élution avec de l'eau jusqu'à pH neutre. On obtient 80 ml environ de la solution (pH 1,2). 20 Transformation en sels de baryum On neutralise la solution obtenue par addition goutte à goutte d'une solution saturée d'hydroxyde de baryum Ba (OH)2 jusqu'a obtention d'un pH de 7,2. On filtre la solution de Ba (OH)2 durant l'addition afin d'éliminer les impuretés de carbonate solide. On obtient une solution trouble qu'on lyophilise. EXEMPLE 2 - Fractionnement des sels de baryum de l'héparine Le matériau de départ soumis à l'opération de fractionnement est constitué par une suspension de 2,321 g du lyophilisat de sels de baryum d'héparine, obtenu selon l'exemple I dans 40 ml d'eau. On ajuste le pH à 7,7-7,8 avec une solution saturée de Ha (OH)2. Le fractionnement effectué comprend les étapes suivantes - ultracentrifugation de la suspension de départ, ce qui conduit à une fraction Ai et un surnageant S1 ; et - isolement de fractions à partir du surnageant Si. 1 Ultracentrifugation de la suspension de départ On soumet la suspension trouble de sels de baryum à une opération de centrifugation pendant 80 mn à 40C. On obtient - d'une part une fraction A1 (de 1,139 g) - d'autre part une solution opaque qui constitue le surnageant S1. 20 Isolement de fractions à partir de S1 - Obtention de A2 et de On répète sur le surnageant S1, l'opération de centrifugation réalisée précédemment ce qui conduit - à une fraction A2 (de 0,250 g), et - à un surnageant S2 formant une solution claire. On sépare la fraction A2 de la solution claire du surnageant. On laisse le surnageant reposer environ 14 heures à 4 C. il devient alors trouble (il redevient clair a température ambiante). Avant d'effectuer l'étape suivante, on le laisse au moins 2 heures a 40C. - Obtention de A3 et de 53 On ajoute 1,2 ml d'méthanol à 100 % à sous agitation magnétique vigoureuse jusqu'a apparition d'un trouble On centrifuge pendant 80 mn à 9 000 t/mn, à 4"C. On sépare la fraction A3 (0,287 g) du surnageant liquide S3. On dissout A3 dans de l'eau et on le lyophilise. Avant d'effectuer une nouvelle addition d'éthanol, on laisse refroidir S3. -Obtention de A4 et de S4 On provoque l'apparition d'un trouble dans S3 en ajoutant 1,0 ml d'éthanol à 100 %, puis on centrifuge durant 90 mn à 40C. On sépare la fraction A4 (0,360 g) du surnageant S4, on le dissout dans l'eau puis on le lyophilise. A4 présente un titre USP de 140 ui /mg et un titre YW de 255 ui/mg. Les autres fractions A5 à A8 sont obtenues selon ce même processus a 4 C,par addition d'éthanol et centrifu- gation pendant 90 mn, à 9 000 t/mn. Dans le tableau qui suit, on indique la quantite d'éthanol, en 1, ajoutée au surnageant pour l'obtention de chacune des fractions A5 à A8 (la valeur entre parenthèses correspond à la quantité d'éthanol en 8 en volume dans ce surnageant) , la quantité pondérale, en g, de fraction recueillie, les titres USP et Yin-Wessler en ui/mg. fractions quantité poids de titre titre obtenues d'éthanol fraction USP Yin-Wessler ajoutée obtenue en g. A5 1,3ml (8,0%) 0,138 118 251 A6 0,9 (9,9%) 0,048 91 434 A7 3,2 (16%) 0,078 56 639 A8 15,9 (28,4%) 0,021 L'analyse électrophorétique dans de l'acétate de baryum des fractions obtenues montre que A3 et A4 donnent lieu à des tâches semblables (il s'agit des trois taches intermédiaires que l'on peut observer avec une héparine du commerce) mais d'importance différente. Avec les fractions A5 à A8, on observe une tâche, corres pondant à celle qui migre le plus lors de l'électropho- rèse d'une héparine commerciale. On indique,ci-après, les % en poids des fractions considérées ci-dessus (sous forme de sels de baryum) : A-2 (10,8) ; A-3 (12,4) ; A-4 (15,5) ; A-5 (5,9) ; A-6 (5,9) ; A-7 (3,4) ; A-8 (0,9). EXEMPLE 3 - Transformation des sels de baryum des fractions - de type A en sels de sodium On dissout chaque fraction dans del'eau et on les fait pisser sur une colonne remplie de résine fraîche de type Ambertite II-120 (H+). On neutralise avec des solutions de oude (préparées å partir de Acculute Anochenia) jusqu'3 PH 7,7 puis en lyophilise. EXEMPLE 4 - Caractérisa@@ @ par RMN de fractions de l'invention Sur les figures 1 et 2, on a rapporté une partie des spectres RMN, de deux fractions de l'invention sous forme de leurs sels de sodium. Ces fractions ont été obtenues, à partir d'héparine de muqueuse de porc, selon un processus du type de celui de l'exemple 2, mais réalisé à température ambiante par sédimentation après addition respectivement de 4% d'e thanol (figure 1) et 21% d'éthanol (figure 21. On peut con sidérer que ces fractions sont respectivement du type des fractions A2 et A7 considérées dans l'exemple 2. Les mesures de RMN, (pour le proton 1H) ont été effectuées dans D20 à 70 C. On compère les intensités des différents signaux en utili sant à titre de référence le signal du groupement N-acétyle (désigné par N-Ac sur les figures). Les signaux les plus importants sont les suivants (les motifs auxquels ils correspondent sont indiqués entre parenthèses). I-ls et I-5s (acide iduronique 2-0 sulfate) A-ls et A-2s (glucosamine N-sulfate). Ainsi, dans la fraction la moins soluble dans l'alcool, on trouve une plus forteproportion de motifs du type acide &alpha;-L-idopyranuronique-2-sulfate et 2-déoxy-2-sulfamino &alpha; -D- glucopyranose 6-sulfate (motif 1) Les fractions les plus solubles apparaissent au contraire relativement plus riches en motifs acide$-D-glucopyranuro- nique (motif 2) et 2-acétamido-2-déoxy-&alpha;-D-glucopyranose (motif 3) comme le montre l'importance relative (par rapport aux signaux considérés précédemment) des signaux G-1 'acide glucuronique) , A-la, A-2a et N-A c (acétyl-glucosamine). Une intégration des signaux I-ls et N-Ac des figures 1 et 2 donne des rapports entre les motifs 1 et 3, respectivement de 6 : 1 et de 2 : 1. On remarque dans les spectres des deux fractions, des signaux 1-1 et I-5 qui peuvent etre-attribués à un reste d'acide iduronique ne comportant pas de groupe 0-sulfate sur le carbone en position 2, La proportion d'une telle espèce apparaît nettement supérieure dans la fraction la plus soluble. Le rapport entre ce dernier motif et celui du motif acide iduronique 2-sulfate, (dans le motif 1) est de 1 : 3 dans le spectre de la figure 2 et de 1 : 8 dans le spectre de la figure 1. 13 Des mesures RMN effectuées pour le carbone 13 ( C) sur les sels de baryum correspondants à 50 MHz donnent des résultats analogues. REVENDICATIONS 1.- Fractions mucopolysaccharidiques,à activité anti Xa (Yin-Wesslér) élevée et à faible activité anticoagulante, caractérisées par le fait qu'il s'agit de fractions du type de celles pouvant être obtenues par un procédé qui concerne au moins une étape de - mise en suspension, dans un milieu aqueux, d'un maté riau héparinique a activité anticoagulante,sous forme d'un dérivé d'héparine, comprenant des constituants, ou produits, insolubles dans l'eau, et des produits solubles dans l'eau, certains au moins de ces produits solubles dans l'eau pos sédant des coefficients de solubilité différents dans un mélange donne d'eau et d'un solvant organique et étant alors susceptibles de s séparer de ce mélange d'eau et de sol vant selon la concentration en solvant organique du mélange, ladite étape de mise en suspension étant réalisée dans des conditions permettant la dissolution d'au moins une partie desdits produits solubles dans l'eau ;; - la récupération, d'une part, des produits restés @n suspension d'autre part, de la solution restante - le traitement cie cette solution afin d'en séparer une fraction de composés mucopolysaccharidiques, ce traite ment comportant l'addition à la solution en question, d'un solvant @r@@@ique, dans des conditions permettant de provo quer la séparation d'une fraction, se traduisant plus spé cialement par l'apparition d'un trouble ;; - la récupération, d'une part, des produits cons tit@ant le trouble, d'autre part, de la solution, ce proces@us étant avantageusement répété sur les solutions suc cessivement obtenues, et ce, notamment jusxlu'a l'obtention d'une solution @e donnant plus lieu à l'apparition d'un t rouble par addition supplémentaire du solvant organique considéré. 2.- Fractions selon la revendication 1,carac térisées en -ce que le matériau héparinique de départ est sous forme d'un dérivé organique ou d'un sel. 3.- Fractions selon la revendication 2, caractérisées en ce qu'il s'agit d'un sel de baryum. 4.- Fractions selon la revendiation 1, caractérisées par le fait qu'elles se trouvent sous la forme de dérivés ou de sels physiologiquement acceptables. 5.- Fractions selon l'une quelconque des revendications 1 à 4, caractérisées par un titre Yin-Wessler (Y-W) avantageusement voisin de 200 ui/ma ou même supérieur, à savoir, de l'ordre de 400-450 ou de plus de 600,et par une faible activité anticoagulante selon le test USP Douvant être avantageusement inférieure à 100 ui/mg USP. 6.- Fractions selon l'une quelconque des reven dication i à 5, caractprisées par un rapport de leur titre Y-W à leur titre USP d'au moins voisin de 2, de préférence supérieur à 4 et même pouvant dépasser 10. 7.- Procédé d'obtention de fractions mucopolysaccharidiques à activité anti-Xa élevée et à faible activité anticoagulante selon le test USP répondant aux caractéristiques définies dans la revendication 1, 2 ou 3 8.- Procédé selon la revendication 7, caractérisé en ce qu'on amène le pH de la suspension réalisée conformément à la première étape à des valeurs supérieures à la neutralite, notamment, supérieures à 7,5, avantageusement entre 7,5 es 8, de preférence 7,7 à 7,8. 9.- Procédé selon la revendication 7 ou 8, caractérisé en ce que les produits insolubles dans l'eau obtenus dans l'étape de mise en suspension et les produits rendus insolubles par addition ultérieure de solvant sont récupérées par centrifugation. 10.- Procédé selon l'une quelconque des revendications 7 à 9, caractérisé en ce qu'on utilise comme solvant organique un solvant alcoolique, en particulier l1éthanol ou des solvants polaires tels que le diméthylformamide ou le diméthylsulfoxyde. 11.- Procédé selon l'une quelconque des reven dications 7 à 10, caractérisé à ce qu'on opère à température inférieure à l'ambiante, de préférence inférieure à 10 C, notamment à 40C. 12.- Procédé selon la revendication 11, caractérisé en ce qu'on sépare les produits insolubles par centrifugation à une vitesse supérieure à 7000 t/mn, durant plus d'une heure, avantageusement à 9000 t/mn environ pendant 80-90 mn environ 13.- Procédé selon la revendication 7,caractériséen ce qu'on met en oeuvre comme matériau héparinique fractionner, une héparine commerciale, notamment de muqueuse de porc, sous forme de sels de baryum; on soumet ce matériau à une température de 40C a un fractionnement comprenant sa mise en suspension dans l'eau, à une concentration de 5% en poids/volume, avec ajustement du pH,à 7,7-7,8, la centrifugation de la suspension ainsi formée afin de séparer les produits insolubles dans l'eau à 40C, cette opération étant éventuellement renouvelée, l'addition au surnaqeant obtenu qui est clair à 40C, d'éthanol à 100z, jusqu'à l'apparition d'un trouble, la centrifugation de la suspension trouble obtenue étant réalisée dans des conditions permettant d'isoler les produits constituant le trouble ; ces étapes d'addition d'éthanol et de séparation par centrifugation des produits instituant le trouble étant répétées jusqu'à l'obtention d'une solution de sur- nageant ne donnant plus lieu à l'apparition d'un trouble par addition supplémentaire d'éthanol. 14.- Composition pharmaceutique contenant une quantité efficace d'au moins une fraction selon l'une quelconque des revendications 1 à 6, ou du type de celle obtenue selon le procédé de l'une quelconque des revendications 7 à 13, sous une forme pharmaceutiquement acceptable, en association avec un véhicule pharmaceutique. 15.- Composition selon la revendication 14, utilisable pour le contrôle de certaines etapes de la coagulation sanguine, caractérisée en ce qu'elle se présente sous la forme d'une solution concentrée stérile injectable contenant de 1000 a 100 000 ui/ml (Yin-Wessler) de mucopolysaccharides, de préférence de 5000 à 50 000, par exemple, de 25 000 ui/ml, lorsqu'elle est destinée à l'injection par voie sous-cutanée, ou contenant encore par exemple de 500 à 10 000, notamment de 5 000 ui/ml de mucopolysaccharides, lorsqu'elle est destinée à l'administration par voie intraveineuse ou par perfusion.