Brevet FR2496270A1 — publié le 19820618

Procédé pour la détermination de la transferrine et composi- tion adaptée à ce procédé. La présente invention se rapporte à un nouveau procé- dé pour la détermination de la faculté de la transferrine à fixer le fer; elle concerne aussi une composition réactive particulière adaptée à cet obJectif. La transferrine est une glycoprotéine contenue dans le sang et elle sert au transfert du fer. Chaque molécule protéique peut fixer deux ions ferriques. Les taux sanguins en transferrine peuvent être déter- minés soit directement par des procédés immunologiques, soit par la vole de la détermination de sa faculté à fixer le fer, par des procédé chimiques. En ce qui concerne ces derniers procédés, on connatt, par "Chim. Clin. Acta, 2, 221 (1957)", un procédé qui comporte les stades suivants: - saturation de la transferrine qui est présente dans l'échan- tillon, habituellement un échantillon de sérum, par une solu- tion acide qui contient un excès d'ions ferriques; - élimination, après un temps d'incubation, les ions ferriques en excès, par addition de carbonate de magnésium solide, et - dosage, après centrifugation de la bouillie ainsi obtenue, du fer lié à la transferrine qui est contenue dans le liquide surnageant, au moyen d'un réactif adapté à la détermination du fer contenu dans le sérum. -D'autres procédés dosent, inversement, dans des con- ditions appropriées, les ions ferriques en excès et calculent, par différence, le fer éliminé parla transferrine, la quantité de transferrine étant ensuite déterminée arithmétiquement. Les auteurs de la présente invention ont maintenant trouvé qu'il est tout à fait possible de doser la transferrine contenue dans un échantillon sans saturer au préalable l'échan- tillon avec un excès d'ions ferriques dans un milieu acide. Un premier obJectif de la présente invention est, en fait, de fournir un procédé qui permet la détermination de la faculté de la transferrine à fixer le fer, ce procédé prévoyant l'utilisation d'un seul mélange qui est composé d'une solution d'un sel ferrique et d'une bouillie d'un adsorbant solide ap anbiseq aequoqavD el 4unueadmoo adnoaS el suep sslsogZO xneo guos qnq ao s9depe sapilos sqealsqns sa a,$ np uol-eulwaq4p el arod enbla$4wTaoloo Jiq -ou9i un jed 'Issne 4uGMOTiianueAG 4e '6 la 8 aeua Hd ae lu Sú -agulem op aiqeduo naTlul un,p iuamUall9nguOA9 'gplIOS 4Ua4sqns un ans eqaospe enbaieaJ les unp uol4nlos aun aed gnqrq -suoa Ti4oeeat Inas un u3 aqs4suoo Inb,a tuol4ueAul aqao op aqueua49u; aelqed Tssne 4Ie$ Inb 'eeallnoIaEd uollsodwooo eun esnssep-Io gsslnbse apgooad el jasIleai jnod 'aaJnooid ap $s3 0ú uoiqueaul ajuGsasd eT op luenjodmI qaço puoaas un À ueaeuans aplnbll eI suep enuesuoo 4sa Inb aulaie$suva el 9I1 aa$ np a2esop - ge 'snuaeqo IsuIe aIeul$ eTIIInoq el ap uoî4e2n$iaquea - 6 ge 8 ailue gladmoo lid un q 'uolqdjospv,p g? apllos eseqd eun,p a anbiaae$ ls un,p uoInIos aun ue uueq -s$suoo a ueglm Ines unEp aaJesss B UOiiueqDo, I& uolqlppe - : sgueAns sapeqS Sal ea, aGgSïlUat lsa Uo-gUGAU; aquasgid el uolas 9pgooid eL 6&eIeqip snId aglueum ao nalag4ue %ael ap sgpgooad oc sal suep aeanoa4 sed Ined au uoI and uolulwaa-gp el ap uols -Iogad aun 'a uoIo;Iis a un guau4eaque se$ seo anb qsa UOIJUeAUl a4uGsgJd el 6p Szina4np sap agAl-om uoluldo,1 $j el axTI auTlaJiasueaq VI ap 94Tnoez el inod pladoidde snId el 4uti4 ewmoo eanqeag4I l 9I jed 9a92ns 4ueg aXuaop aa 'anblseq Hd un ga sanblaeaj suol sep ZGa? uoli;luequpl sucp aginqes 4se aulaze$sueil UI - a 'aiql4onpoadea snd 4se s-oean sap a2esop al - IGUUGOgo Dai GOU.ielfGit1 SuBp apTIos aao"J snos wnmIspu2w ep a4euoqat al aalnpoaguî,p aiessaeou snld 4sau 01 Ilnbslnd qIeBssaO uOS aop sapeqs ap sulow - À neI9$ul 4se suol, -eqnoul,p la sapeus op ejqwou el ga 9l$1ldmls qsa p9oooad el - : xe aiue,p sjileoT$iu2is snId sal 4ins aemoo aew -nsga ined uo ga n jade un quuop E uo guop aneIaSue $ae,i ap S 9ppooad al ans sse2ueAe,p eaqwou puea2 un uaesqo uo 4ueaeeuins aplnbII aT suep nuaquoa qsa Inb auTiaeasueai eI 1 91 ae$ el euimae4gp uol la 92n$ia4ueoa $se aeuelgw al qnol sInd 'uoillIueuglpI p4nore 4uie la-IniaD 'IgaIdoadde OZZ9692 magnésium et CaCO0; le carbonate de magnésium basique est le préféré. Le tampon éventuel, adapté à maintenir le PH à une valeur constante est un produit choisi dans le groupe comprenant H3P04, H2P04, l'acide barbiturique, les barbituriques; NaH2PO4 est le préféré. Si on utilise un réactif colorimétrique, celui-ci sera de préférence choisi parmi ceux suggérés dans la technique habi- tuelle, ou bien ce peut être également le réactif décrit et revendiqué dans la demande de brevet italienne n 20 177A/80 de la demanderesse. Des détails complémentaires et les modes opératoires pour Tréaliser la détermination de-la transferrine apparattront à l'examen minutieux des exemples illustratifs mais non limitatifs rapportés ci-dessous. Exemple 1 préparation d'une suspension de réactif Dans 100 ml d'eau, on dissout 828 mg de NaH2P04.H20, puis, 2,5 g de MgCO3 basique y sont délayés; à la suspension ainsi préparée, on aJoute, tout en agitant, 1 ml de HC1 0,01 normal contenant 500 mg/dl de Fe+++ (milligramme pour 0,1 litre). On laisse reposer le réactif Jusqu'à ce que le pH soit stabilisé. Exemple 2 On utilise le réactif décrit dans l'exemple 1 pour déter- miner le pouvoir de fixation du fer d'une quantité de sérum humain pendant 48 fois et on obtient une valeur moyenne de 293,71 microgrammes/dl de fer, avec un.V. de 3,48%. Le procédé que l'on a adopté était le suivant: - Suspension de réactif 1 ml - Sérum de sang humain 0,2 ml - Lncubation: 5 minutes à la température ambiante - Centrifugation: 10 minutes à 4.000 tours par minute On extrait le fer dans le liquide surnageant et on l'a dosé avec un réactif habituel. Exemple 3 Dans les échantillons fractionnés d'un sérum de base dans lequel on a déterminé le pouvoir de fixation du fer, on a aJouté des quantités progressivement croissantes de transferrine de l'homme. ea;i/2o 0oo0 o ap _0tOdéH IP/2w 001 g Iap +++ai Ip/2 0: - g'o: enbTseq' wnspusew ap eieuoqjeo : jqoega np siuenqsuoo sap uo e14uuaouoo op seulwoS snssep-lo sa.ajoddej saoqtp sau2TI sep suolqenbg sel ans SeAA -oeadse.a suo1deoeaqu sep snaleA sael oeAe:uesjsless paoooe ua que5;9 SanelAm xnep Sao 'îp/sawwielolaorw ZLZ op ies"a ella Xusmua ep apgoo.d ael eA e 'Ip/sl. awueao-olw 18 ap Iewr uol!ueaul aquase.d el ep pppooJd el ad eapuowaqa9p aseq oz ap mnJas np SaJ np uopex;j ap ooAnod np anea-, el L66'o = uoOST9aaoo ap;uaeoejjaoo un oaAe p/sammeJ2o-omw g'LLz + x 16'0 = S úesmeUi ap gppooad 866'o = uoc9eIlJSoo ep luaToTjjeoo un O8Ae ip/saweww2oaxwm a'LLú + x o6'o = w : UOUAUT aIeaO UO[eS p900,aXct 9Anol$ JSeJ ap Ip/sewmeao.zow ep seazwe ua.aej np uoIex$j ap.joAnod = ú OQ e9lno eu aaejsueag ap (2w) seww8aSIlllw = x : saque.,Ins uosseaJ29 ap saueII sael nuaqqo e uo ia aogno ve euliajsuv4 el eap splod ua 9gI; -uenb el oeaAe uoIel9aaoo ua sesTw quos s5gp0ood xnap sal.ed sanuaeqo 9iP,uo Inb Jaj np uolTexlj ap.zoAnod np sJnalA seal Àsnssap-TO 9aoa '(LS61) laa ' 'euov eaouilD eomwlqo Suep;a.9p Xeswea Sp 9p9ooJd aI JanbDidde inod 4à snssap-jo aIdWexaIl suep TAins 9p0oo0d eaI.anbTldde &nod suolllgueqto9 awwoo sTJd aqq juo slqDoua e suwe wnaps ap suoIVqueTao9 sel 0OZ96tZ REVENDICATIONS 1. Procédé pour la détermination de la transferrine comprenant les stades d'addition à l'échantillon à essayer d'un réactif consistant en une solution d'un sel ferrique adsorbé sur une suspension d'un substrat solide, de centrifu- gation du mélange ainsi obtenu, et de dosage du fer fixé par la transferrine dans la liqueur surnageante. 2. Procédé pour la détermination de la transferrlne selon la revendication 1, caractérisé par le fait que le substrat solide est un produit choisi dans le groupe comprenant le carbonate de magnésium basique, et le carbonate de calcium. 3. Procédé pour la détermination de la transferrine selon les revendications 1 et 2, caractérisé par le fait que le réactif constitué par la solution du sel ferrique et la suspension du substrat solide contient un tampon capable de maintenir le pH entre 8 et 9. 4. Procédé pour la détermination de la transferrine selon la revendication 3, caractérlsé par le fait que l'agent tampon est un produit choisi dans le groupe comprenant H3P04, H2P04-, l'acide barbiturique et les barbituriques. 5. Composition adaptée à la détermination de la trans- ferrine consistant en une solution d'un sel ferrique combiné avec une phase solide adsorbante, un agent tampon capable de maintenir le pH entre 8 et 9, et éventuellement un réactif colorimétrique pour la détermination du fer. 6. Composition adapté à la détermination de la trans- ferrine selon la revendication 5, caractérisée par le fait que la phase adsorbante solide est un produit choisi dans le groupe comprenant le carbonate de magnésium basique et le carbonate de calcium 7. Composition adaptée à la détermination de la transferrine selon les revendications 5 et 6, caractérisée par le fait que l'agent tampon est un produit choisi dans le groupe comprenant l'acide phosphorique, les phosphates, l'acide barbiturique et les barbituriques.