Brevet FR2487200A1 — publié le 19820129

24872OO La présente invention concerne un procédé pour la stéri- lisation des mammifères. Pour limiter la reproduction des animaux errants et du bétail, on opère généralement par castration. On effectue également chez l'homme des opérations de stérilisation comportant une vasectomie et une ligature des canaux déférents. La nature extrême de ces interventions et la nécessité d'opérations chirurgicales délicates ont conduit à suggérer d'autres modes de stérilisation des mammifères. Par exemple, on a proposé de nombreuses compositions hormonales constituées d'anti-androgènes et d'androgènes pour supprimer la spermatogénèse ou entraver la matura- tion des spermatozoïdes. Dans des essais cliniques antérieurs, ces compositions se sont révélées avoir des effets secondaires indésirables, y compris une suppression de la libido et une assuétude à la prise continue d'hormones stéro!des. L'invention permet d'obtenir l'aspermatogénèse chez des mammifères sans trouble de la libido et des teneurs hormonales. L'invention rend inutile une intervention chirurgicale, permet une stérilisation plus humaine des sujets males et sa mise en pratique peut être effectuée par des personnes moyennement expérimentées. Selon l'invention, on effectue une injection intratesti- culaire du bacille de Calmette et Guérin (BCG) en une quantité au moins suffisante pour obtenir l'aspermatogénèse. Le BCG est bien connu et on l'utilise comme vaccin pour protéger l'homme et les animaux contre la tuberculose. Il ne semble cependant pas que l'on ait précédemment suggéré qu'il est possible d'obtenir une aspermatogénèse par injection intratesticulaire de BCG à des animaux males. L'utilité du BCG pour obtenir une aspermatogénèse est totalement inattendue connaissant les emplois et les propriétés du BCG. Sans se lier pour cela à une quelconque théorie relative à la manière dont le BCG provoque une aspermatogénèse selon l'invention, des essais effectués par la demanderesse ont montré que le BCG pro- voque dans le testicule une réponse inflammatoire qui amène aux sites locaux les cellules compétentes pour provoquer une réponse immuni- taire. La réponse immunitaire est dirigée sélectivement contre les antigènes présents sur les spermatocytes et les stades intermédiaires du développement des spermatozoïdes, si bien que la spermatogénèse est bloquée. Le procédé de l'invention s'est révélé efficace chez toutes les espèces étudiées, y compris des espèces très différentes telles que le rat, le cobaye, le lapin, le chien, le bélier, le cerf et le singe rhésus. Les essais préliminaires ont également montré l'effi- cacité et l'utilité du procédé pour bloquer la spermatogénèse chez l'homme. On n'a pas observé d'effet secondaire indésirable du traitement. Dans tous les cas étudiés, les animaux ont conservé leur libido et les teneurs sanguines en androgènes n'ont pas été modifiées par le traitement. L'examen histologique a également montré que les cellules de Sertoli et de Leydig étaient normales, la normalité des cellules de Leydig étant également confirmée par l'élévation des teneurs plasmatiques en androgènes après administration de gonadotro- phines. De plus, on n'a pas observé de toxicité apparente, de baisse du poids corporel ou d'autres signes de morbidité et les dosages chimiques du sang sont demeurés normaux, ce qui indique la normalité des fonctions endocriniennes, organiques et métaboliques. L'invention présente un grand intérêt pratique pour la limitation de la reproduction des animaux errants et du bétail ainsi que pour la limitation de la population humaine. Il est très facile de se procurer le bacille de Calmette et Guérin qui est relativement peu coûteux, si bien que l'on peut effectuer l'application à grande échelle. L'absence apparente de tout effet secondaire indésirable, en particulier les effets secondaires très gênants que sont la baisse de la libido et la baisse des teneurs en androgènes qui accompagnent les procédés antérieurs, rend le procédé de l'invention particulière- ment avantageux. La dose administrée par injection intratesticulaire est au moins égale à la quantité provoquant l'aspermatogénèse et généra- lement elle est bien supérieure à la quantité minimale. La quantité minimale utilisée varie selon l'espèce à stériliser. La quantité de BCG utilisée est généralement au moins égale au triple environ de la dose des inject:ns antituberculeuses administrées à l'homme normal, ce qui correspond à au moins environ 1,5 x 1O micro-organismes. Des quantités supérieures à 1 000 fois la dose humaine (5 x 1010 micro- organismes) n'apportent généralement pas d'avantage complémentaire, bien qu'on puisse, si on le désire, les utiliser. L'injection est efficace après peu de temps, généralement moins de 30 jours. L'invention est illustrée par les exemples non limitatifs suivants. EXEMPLE 1 - chiens On injecte dans chaque testicule de plusieurs chiens moles adultes pesant entre 13 et 20 kg, des échantillons de vaccins BCG constitués de quantités de bacilles vivants lyophilisés allant de 7 à 110 fois la dose humaine (0,35 à 5,5 mg; 3,5 x 108 à 55 x 10 micro-organismes) en suspension dans des quantités croissantes de solution salée (0,15 % en NaCl dans l'eau) allant de 0,05 ml à O,3 ml. Des doses supérieures à 14,0 mg/testicule n'ont pas d'effet addition- nel ou plus rapide. On détermine la stérilisation par l'éjaculation de semence dépourvue de spermatozoïdes qui apparait 21 à 30 jours après l'injection. On n'observe pas d'effet secondaire comme le montre la détermination des paramètres suivants: (a) le poids corporel est constant jusqu'à 10 mois, (b) la libido demeure intacte pendant au moins 10 mois, (c) le volume de la semence est pratiquement inchangé, (d) les teneurs plasmatiques en testostérone et en cor- tisol sont essentiellement normales, (e) les caractères hématologiques, y compris la teneur en hémoglobine, l'hématocrite et la numération leucocytaire sont inchangés, (f) -les fonctions hépatiques (bilirubine, ALP, SGPT et IDH) sont inaltérées, (g) les fonctions rénales (urée sanguine et créatinine sérique) sont inchangées, (h) d'autres fonctions métaboliques que l'on a surveillées se sont révélées inaltérées (glucose sanguin, cholestérol sérique, protéines totales sériques, sérum-albumine et sérum-globulines. EXEMPLE 2 - béliers On administré à trois béliers 1 000 doses humaines normales de BCG (environ 50 x 109 micro-organismes) dans chaque testicule. Les échantillons de semence montrent qu'après au maximum 4 semaines il ne demeure plus de spermatozoïdes viables. Trois béliers témoins main- tenus dans la même région et n'ayant pas reçu d'injection ne présentent pas de modification du nombre ou de la motilité des spermatozoïdes. EXEMPLE 3 - primates non humains On injecte à trois singes miles du vaccin BCG (50 à 100 doses humaines normales; 2,5 à 5 mg; 2,5 x 109 à 5 x 109 micro- organismes) dans chaque testicule. La surveillance des fonctions méta- boliques montre que les singes demeurent en parfaite santé. L'examen histologique par biopsie montre que la spermatogénèse a cessé. EXEMPLE 4 -autres espèces On a traité de nombreuses autres espèces avec du vaccin BCG à des doses comprises entre 3 et 1000 fois la dose humaine normale. Ces espèces consistaient en des rats, des cobayes et des lapins. Dans tous les cas, les fonctions métaboliques sont demeurées inaltérées et l'examen histologique de biopsies a montré que la spermatogénèse avait cessé. La dose moyenne était égale à 10 fois la dose humaine normale. En résumé, l'invention concerne un procédé de stérilisation qui, de façon totalement inattendue, utilise le BCG. Bien entendu, diverses modifications peuvent être apportées par l'homme de l'art aux dispositifs ou procédés qui viennent d'être décrits uniquement à titre d'exemples non limitatifs sans sortir du cadre de l'invention. R E V E N D I C A T I O N S 1. Nouveau médicament utile pour la stérilisation de mammifères males, caractérisé en ce qu'il consiste en bacilles de Calmette et Guérin sous une forme adaptée à l'injection intratesticulaire et qui conduit à une 7 10 concentration préférée de 1,5.10 à 5.10 bacilles/ testicule, voire supérieure. 2. Application du bacille de Calmette et Guerin comme agent de stérilisation des espèces de mammifères.