Brevet FR2481290A1 — publié le 19811030

La pr6sente invention concerne un nouveau procédé de pr6paration de la 3' d6soxykanamycin A. La 3' désoxykanamyciMeA est un antibiotique semi- synthétique utile, actif contre les bactéries qui résistent la kanamycineA. L'invention a plus spécialement pour objet une nouvelle voie permettant de préparer la 3' désoxykanamycirneA, de façon efficace et facile, à partir d'un dérivé 2', 2''-di- -0-acylé-3 '-0-sulfonylé-tétra-N-protégé de kanamycir A de 1 formule (I): 6' CH NHCOOR NHCOOR 12 NHCOOR , 3 NHCOOR 4' HO2 3' 5 OX 6" HOH2C O Ut/\ / (I) NHCOOR HO 12" 3" OX 3o dans laquelle R est un groupe alkyl tel qu'un alkyl de 1 a 6 atomes de carbone, un groupe aralkyl tel qu'un groupe phtnyl, un groupe alkyl inférieur tel que le groupe benzyl ou un groupe aryl tel que le groupe phényl ou m6thcyXmphényl, W est un groupe mésyl, tosyl ou benzylsulfonyl et X est un groupe alcanoyl spécialement ceux contenant de 2 à 4 atomes de carbone tel que le groupe acétyl ou un groupe aroyl tel que le groupe benzoyl, par traitement avec une base en solu- tion dans un alcanol inférieur pour effectuer l'époxydation en 2', 3' aussi bien que l'6poxydation en 3', 4' et l'él- mination simultanée des groupes acyl en 2' et 2'' (X) (c'est-à-dire dans]. es groupes alcanoyl ou aroyl)., suivi de réduction des produits époxydés c'est-à-dire les dériv6s anhydro -ainsi formés soit avec de l'hydrogène en présence d'un catalyseur d'hydrogènation connu, soit avec du borohydrure de sodium pour obtenir un dérivé de kanamycie A d6soxygéné en 3', puis d'élimination des groupes amino- protecteurs restants (-COOR) (o ils existent) pour obtenir la 3' désoxykanamycineA désirée de formule: CH2NH2 NH2 2 2 H0 OH CH20H 0 HO HO OH On sait que la 3' désoxykanamycir A qui a tout d'abord 6té préparée par voie semi-synth6tique par H. UMEZAWA et al. (demande de brevet japonais publiée N 33109/76; brevet U. S. N 3929761), présente une activité antibactérienne contre toute une gamme de bactéries résistant à la kanamycineA nettement améliorée comparativement à cette dernière. Le dérivé l-N-a-hydroxy4 aminoacylé de la 3' désoxykanamycine A présente une activité antïbacterienne fortement améliorée contre les bact6ries r6sistant; la kanamycine A (Demande de brevet japonais KOKAI N 127045/76 brevet U. S. N 4104372). En particulier un d6riv6 l-N- aminoacylé6 de la 3' d6soxykanamycine A dans lequel le groupe 1-amino a 6t6 acylé avec le groupe (S)-4-amino-2- hydroxybutyryl, c'est-à-dire la 3' désoxyamikacine montre une activité anti-bactérienne contre les bactéries résistant à la kanamycine supérieure à celle de l'amikacine, c'est-à-dire la 1-N E(S)-4-amino-2hydroxybutyryl]-kanamycine A qui a déjà été utilisée cliniquement. La 3' désoxykana- mycine A est donc une substance utile en elle-même et constitme une substance int6ressante comme matériau de départ pour la préparation d'autres substances antibacté- riennes semi-synthétiques. La Kanamycine A contient un groupe hydroxy en position 2' en plus des groupes hydroxy en 3' et 4' dans la molécule et est à cet égard différente de la néamine, de la kanamycine B et de la ribostamycine qui contiennent un groupe amino en position 2' et dont la d6soxygénation en 3' a été mentionnée. Pour cette raison, il est difficile de protéger de façon préférentielle les groupes hydroxy en 2' et 4' avec un groupe hydroxy protecteur connu, tout en laissant non protégé le groupe hydro.y en 3' de la kanamy- cine A. D'autres raisons ont en outre conduit à un retard dans le développement du procédé de désoxiygnation en 3' de la kanamycine A. C'est ainsi que la kanamycine A ne peut être désoxygénée en 3' par des méthodes connues pour.ce faire, et applicables avec succès à l'élimination sélective du groupe hydroxy en 3' de la néamine, de la kanamycine B 248129O et de la ribostamycine, et qui sont habituellement men6es a bien par sulfonylation du groupe hydroxy en 3' avec un agent de sulfonylationi connu, remplacement du groupe sulfonyloxy en 3' obtenu par un groupe halo ou un anion thiol puis élimination par réduction de ce groupe halo ou de cet anion thiol pour terminer la d6soxygénation en 3'. Ceci est principalement du au fait-qu'il est difficile d'effectuer le remplacement du groupe sulfonyloxy en 3' par un groupe halo ou un anion thiol en raison de l'empêchement st6rique ou de la répulsion électrostatique induite par la présence de la liaison 1-a-glucoside dans la molécule de kanamycine A. Comme méthode de synthèse de la 3'désoxykanamycine A on peut mentionner celle du brevet U. S. 3929761 ou de la demande de brevet japonais N 33 109/76 dans laquelle on condense le chlorure de 6-azido-2,4-di-0-benzyl-3,6-didé- soxy-a-D-ribohexopyranosyl- avec la 6-0-(2-0-benzyl-3-désoxy 3-éthoxycarbonylamino-4,6-O-isopropylidène)-N,N'- diéthoxycarbonyl-2-désoxystreptamine, et le produit de condensation r6sultant est traité en plusieurs étapes pour en éliminer les groupes amino-protecteurs et les groupes hydroxy-protecteurs et donner la 3'désoxykanamycine A. On a récemment proposé une méthode comportant deux procédés au choix (demande de brevet japonais N 139 798/79 demande de brevet U. S. N 198 612 et demande de brevet U. K. N 80 35 016). Le premier procédé comporte l'imidazolylthiocarbonylation des groupes hydroxy en 3'et 2" de la! 6"-O-cyclohexylidène-4'-O:6'-N-carbonyl-5,2'-O- isopropylidène-13,3,3"-tri-N-tosylkanamycine A; l'élimination préférentielle du groupe imidazolythiocarbonylo.xy en 3' avec l'hydrure de tributyl étain pour la désoxyg'nation en 3', suivied'élimination du groupe 2"-O-imidazolylthiocarbonyl avec une solution aqueuse d'ammoniaque, l'élimination des groupes N-tosyl avec un métal alcalin ou alcalinoterreux dans l'ammoniaç liquide, la fission hydrolytique de l'anneau carbamate cyclique en 4', 6' et]'élimination simultan6e des groupes 5,2'-0-isonropylidène et 4", 6"-0- cyclohexylidène;le second procédé comporte l'acétylation sélective du groupe hydroxy en 2" du dit dérivé protégé de kanamycine A avec du chlorure d'acétyl dans de la pyridine, la trifluorométhanesulfoxylation du groupe hydroxy en 3', 3 suivi de l'élimination simultanée des groupes 3'-trifluoro- méthanesulfonylQxy et N-tosyl avec un métal alcalin dans l'ammoniac liquide, l'élimination du groupe 2"-0 acétyl en même temps que la fission hydrolytique du carbamate cyclique en 4', 6' et l'élimination hydrolytique des groupes 5, 2'-0 isopropylidéne et 4", 6"-0-cyclohexylidène. La méthode décrite dans le brevet U. S. N 3 929 761 est inefficace et fournit le produit de condensation avec un faible rendement; la méthode décrite dans la demande de brevet japonais N 139 798/79 ou dans la demande de brevet U. S. 198 612 nécessite des réactifs d'un prix élevé et des conditions opératoires dangereuses. Toutes ces méthodes doivent donc être modifiées pour être utilisables à l'échelle industrielle. Les inventeurs ont donc entrepris des recherches poussées pour trouver un procédé nouveau et plus efficace de préparation de la 3'-désoxykanamycine A qui puisse être mené à bien de façon simple, bon marché et sûre et permette d'obtenir avec un rendement élevé le produit désiré. Ils ont découvert au cours de ces recherches que quand on traitait avec une base telle qu'un alcoolate de métal alcalin dans un alcanol inférieur un dérivé 2',2"-di-O-acyl-3'-osulfonyl-tétra -N-protégé de kanamycine A de formule (I): CH2NHCOOR NHCOOR NHCOOR Ox OX HO OX dans laquelle R, W et X ont les significations mentionnées ciavant, il se produisait des époxydations en 2', 3' et 3', 4' en même temps qu'une élimination des groupes acyl en 2' et 2" et que, quand on soumettait la solution réaction- nelle contenant ces dérivés 6poxydés (que l'on appellera ci-après aussi dériv6s anhydroi soit à une r6duction avec de l'hydrogène en pr6sence d'un catalyseur d'hydrog6nation connu tel que le nickel de Raney ou un catalyseur métallique du groupe du platine, soit à une réduction avec du borohydrure de sodium, on pouvait obtenir de façon préf6rentielle le dérivé 3'-d6soxygén6 de kanamycine A, mais que, contrairement à ce à quoîl'on s'attendait, il ne se formait pas comme sous produits de dérivés 2'-d6soxy-3'-épi- et 4'-d6soxY-3'-6pi de kanamycine A. Les inventeurs ont donc mis au point un nouveau mode de préparation de la 3' désoxy- kanamycine A à partir d'un dérivé prot6g6 de kanamycine A, el-ipeut être mis en oeuvre facilement et avec un nombre É'tapes relativement r6duit. L'invention a donc pour objet un procédé de préparation de la 3'd6soxyIzanamycine A qui consiste: faire rcagir le dériv6 protég6 de kanamycine A de formule (T) NHCOOR OR o OX (1) OX dans laquelle R est un groupe alkyl, aralkyl ou aryl, V est un groupe mésyl, tosyl ou benzylsulfonyl et X est un groupe alcanoyl ou aroyl avec une base telle qu'un alcoolate de m6tal alcalin dans un alcanol inférieur pour effectuer simultanément les époxydations en 2', 3'- et en 3', 4'- et l'élimination des groupes acyl en 2' et 2", à r6duire les dérivés anhydro ainsi formés en solution-dans le dit alcanol avec de l'hydrogène en présence d'un catalyseur d'hydrog6nation connu ou avec du borohydrure de sodium pour obtenir le dérivé N-protégé 3'-désoxyg6né correspondant de kanamycine A puis a éliminer les groupes aminoprotecteurs restant (-COOR) (là o ils existent) de façon connue pour obtenir la 3'-désoxykanamycine A. Le dérivé protég6 de kanamycine A cidessus mentionné de formule (I), utilis6 comme matériau de départ dans le procédé selon l'invention, peut être préparé à partir d'un dériv6 prot6g6 de kanamycine A de formule (II): HO OX NHCOOR O( NHCOOR OH (Il) dans laquelle R et X ont les définitions données ci-avant et Y est un groupe alkylidène ou arylidène de formule: p c/ \ Pi dans laquelle P et P' sont chacun un atome d'hydrogène, un groupe alkyl ou aryl, ou Y est un groupe cycloalkylfdène ou tetrahydropyranylidène. Dans le compose de formule (II), le groupe amino-protecteur -COOR est un groupe aminoprotecteur classique du type formateur d'ur6thane tel qu'un groupe 0 alcoxycarbonyl, aryloxycarbonylcu a'alkyloxycarbonyl connu pour protéger les groupes amino des kanamycines. Le dériv6 protég6 de kanamycine A de formule (II) a 6t6 obtenu dans le procé6dé de préparation d'un dérive 3', 4'-anhydro-4'--pi de kanamycine A (demande de brevet japonais N 21 666/80, demande de brevet U. S. d6pos cle 18 f6vrier 1981, et demande de brevet britannique N 8105315) que l'on a trouve être un interm6diaire utile pour la préparation de la 3',4' didésoxykanamycine A ou de la 4' désoxykanamycine A. Pour préparer le dérivé protégé de kanamycine A de formule (II), on traite tout d'abord la kanamycine A pour en protéger les quatre groupes amino avec un groupe type uréthane, de façon connue en soi, ce qui donne un dérivé tétra-N-protégé de formule (III) CH2NHCOOR NHCOOR NHCOOR O OH 0 O HO0O - OH HOCH2 O 0 (III) NHCOOR HO0 OH dans laquelle R a les significations ci-avant. Le composé de formule (III) est ensuite traité pour protégoesélectivement les groupes hydroxy en 4" et 6" en le faisant réagir avec un agent d'alkylidénylation, d'aralkylidénylation de cyclo- alkylidénylation ou de tétrahydropyranylidénylation en tant qu'agent hydroxy-protectaur connu. On effectue de préférence la réaction en traitant le composé de formule (III) avec l'agent hydroxyprotecteur dans un solvant tel que le diméthylformamide en présence d'une quantité catalytique d'acide p-toluenesufonique à température ambiante (entre et 250 C) pendant 15 à 20 heures. L'agent hydroxy- p.rotecteur peut être un agent d'alkylidénylation ou d'aralkylidénylation connu tel que l'acétaldéhyde, le 2,2- diméthoxypropane, l'anisaldéhyde, le benzaldéhyde, et le diéthylacétal, ou un agent de cycloalkylidénylation connu tel que le 1,1diméthoxycyclohexane ou un agent de tétrahydropyranylidénylation connu tel que le 1,1-diméthoxy- tétrahydropyranylidène. Les étapes d'amino-protection et f d'hydroxyprotection ci-dessus mentionnées peuvent être effectuées comme décrit dans la demande de brevet japonais KOKAI N 71445/77 ou ie brevet U. S. N 1 537 905. Il se forme un d6rivé 4",6"-O-protégé de formule (IV): CH2NHCOOR NHCOOR 0 NHCOOR OH HO I 6- OH OCH2 (IV) \ NHCOORv OH dans laquelle R et Y ont les significations mentionnées précédemment. Le composé de formule (IV) est ensuite traité pour protégrs6électivement les groupes hydroxy en 2',3' et 2" avec un groupe hydroxy-protecteur de type acyl. Cette étape peut habituellement être effectuée en faisant réagir le composé de formule (IV) avec un agent d'acylation tel qu'un chlorure d'acyl dans la pyridine à basse température, en dessous de 5 C. On peut utiliser comme agent d'acylation un chlorure d'un acide carboxylique convenable,-et plus particulièrement d'un acide alcanoique ayant de 2 à 4 atomes de carbone, tel que le chlorure d'acétyl et/ou le chlorure de benzoyl. Dans cette étape, le chlorure de benzoyl est un agent d'acylation préféré. Puisque dans cette étape, le groupe hydroxy en 4' reste non acylé, il se forme le dérivé 2',3',2"-tri-O-acyl de formule (II) : CH2NHCOOR I- 3' NHCOOR OX (II) n U' -f2" 0x dans laquelle R et Y ont lm significations données ci-avant et X est un groupe acyl, par exemple, un alcanoyl inférieur tel que le groupe acétyl ou un aroyl tel que le groupe benzoyl. Le dérivé de formule (II) est ensuite traité pour protéger. le groupe hydroxy en 4 avec un groupe hydroxy- protecteur connu de type pyranyl. Dans ce but, on peut effectuer la réaction de 1'-O-pyranylation en faisant réagir le composé de formule (II) avec le 3',4'-dihydro-2H-pyrane ou le 5,6-dihydro-4-méthoxy-2H-pyrane dans un solvant tel que le diméthylformamide en présence d'une quantité catalytique d'acide p-toluènesulfonique a température ambiante, habi- tuellement à 15-25 C. Il se forme alors un dérivé pyranylé en 4'-0 de formule (V): 3o 248.1?90 - 12 CH2NHCOOR NHCOOR NHCOOR 41 0 OH ZO 3? OX OH C O o 0( \+o O NCOOR 2" OX dans laquelle R, X et Y ont les significations mentionnées ci-avant et Z est un groupe pyranyl. L.'6tape suivante est l'élimination des groupes acyl en 2'-,3'- et 2"- (X) en tant que groupes hydroxyprotecteurs du dériv6 4'-O-pyranylé (V). Cette étape de déprotection peut être effectuée en dissolvant le dérivé 4'-O-protégé de formule (V) dans un alcanol inférieur de 1 à 4 atomes de carbone tel que le méthanol, l'éthanol ou similaire et en le traitant dans la solution avec un alcoolate de métal alcalin (sodium ou potassium par exemple), particulièrement un alkoxyde inférieur tel qu'un méthoxyde ou un éthoxyde entre 15 et 25 C. On préfère le méthoxyde ou l'éthoxyde de sodium. Il se forme ainsi un compose partiellement déprotégé de formule (VI): CH NHCOOR NUCOOR NHCOOR ZO (VI) \ dans laquelle R, Y avant. et Z ont les définitions donn6es ci- Le composé de formule (VI) est ensuite trait6 pour protéger s6électivement les groupes hydroxy en 2' et 2" toujours avec le groupe hydroxy-protecteur de type acyl (X). Cette 6tapé peut être effectu6e en faisant réagir le composé de formule (VI) avec un agent d'acylation tel qu'un chlorure d'acide, particulièrement un chlorure d'alcanoyl de 2 à 4 atomes de carbone dans la pyridine à une temp6rature inférieure à la temp6rature ambiante, de préférence en dessous de 10 C. On peut utiliser comme agent d'acylation un chlorure d'un acide carboxylique convenable, particuliè- rement d'un acide alcanoique ayant 2 à 4 atomes de carbone tel que le chlorure d'ac6tyl, et le chlorure de benzoyl, qui est le même que celui employé dans la pr6paration du compos6 (II). Dans cette 6tape, le chlorure de benzoyl est un agent d'acylation préféré. L'agent d'acylation est de pr6f6rence utilis6 dans une quantit6 de 2,3 à 2,5 mols par mois de composé (VI). Il se forme ainsi un d6riv6 2',2"-di-0 acyl 3'-0 protégé de formule (VII): CH2NHCOOR NHCOOR COOR 3Ox I OR2C Z '' 0 y (VII) ox dans laquelle R, Y et Z ont les significations mentionnées ciavant et X est un groupe acyl, par exemple un groupe alcanoyl inférieur tel que le groupe ac&tyl ou aroyl tel que le groupe benzoyl qui provient de l'agent d'acylation employé dans cette étape. L'étape suivante est la sulfonylation du groupe hydroxy en 3' du composé de formule (VII) la sulfonylation en 3'-0 peut être effectuée en faisant réagir le composé de formule (VII) avec du chlorure de mésyl, de tosyl ou de benzylsulfany'l dans de la pyridine. La température réactionnelle se situe entre 50 et 800 C. Comme agent de sulfonylation en 3'-0 dans cette étape, on préfère le chlorure de m6syl. Il se forme ainsi un dériv6 sulfonyl6 en 3I-0 de formule (VIII): CH2NHCOOR NHCOOR o zo OX o (VIII) y OX dans laquelle R, X et Z ont les définitions mentionnées ci-avant et V est un groupe mésyl, tosyl ou benzylsulfonyl. Le compos6 de formule (VIII) est ensuite traité avec un acide pour éliminer simultanément le groupe hydroxy- protecteur en 4' (Z) et le groupe 0-hydroxy-protecteur divalent en 4",6" (Y) par hydrolyse acide. Cette 6tape de d6protection pour l'élimination des groupes hydroxy en 4' et 0-hydroxy en 4",6" peut tre effectuée de façon connue par traitement du compos6 de formule (VIII) avec un acide organique tel que l'acide acetique ou trifluora- c6tique ou avec un acide min6ral tel que l'acide chlorhy- drique dans un alcanol intérieur de 1 à 4 atomes de carbone, tel que le méthanol ou l'éthanol entre 20 et 50 C. Il se forme ainsi le dérivé 2',2"-di-0-acyl-3'-O-sulfonyl-tétra-N- protégé de kanamycine A de formule (I): CH2NHCOOR NHCOOR NHCOOR o10 HO-H2C 1 2>o NHCOOR HO Ox dans laquelle R, X et V ont les définitions mentionnées ci-avant et qui est utilisé comme composé de départ dans le procédé de la présente invention. Dans le procédé selon l'invention, on traite le composé' de formule (I) avec une base telle qu'un alcoolate de métal alcalin dans un alcanol inf6rieur dans la première étape du procédé, puis on le transforme en ses dérivés anhydro avec scission simultanée des groupes acyl en 2' et 2" (X). On sait quequand on fait réagir un dérivé 3-O-sulfonylé et 2,4-di-0-non protégé d'un sucre ayantune configuration de glucose avec un alcoolate de métal alcalin, il se produit une époxydation donnant en même temps le dérivé 2,3-anhydro- 3-épi et le dérivé 3,4-anhydro-3-épi (F. H. NEWTH, Quart. Rev. 13, 30 (1959)). Le composé de formule (I) utilisé dans le présent procédé est la substance sucre qui contient le groupe sulfonyl en 3'-O-,le groupe hydroxy non protégé en 4' et le groupe hydroxy en 2'protégé avec le groupe protecteur du type acyl; le groupe hydroxy-protecteur du type acyl est très susceptible d'être scindé en conditions alcalines pendant l'époxydation. On pense donc que la première étape du présent procédé, l'époxydation du composé (I),doit amener simulta- nément la formation du dérivé 2',3'-anhydro-3'-épi et du 2 81 ? 90 dérivé 3',4'-anhydro-3'-épi. Il n'est pas pourtant véritablement envisageable de séparer ces dérivés anhydro de la solution réactionnelle de l'étape d'époxydation. Ceci est du probablement au fait que les dérivés anhydro ainsi formés sontplutôt instables dans les dites conditions réactionnelles et sont peu cristallisables. L'étape d'époxydation du présent procéde peut être menée à bien en dissolvant le composé de formule (I) dans un alcanol inférieur de 1 à 4 atomes de carbone tel que le méthanol ou l'éthanol en le traitant, dans la solution, avec une base et particulièrement un alcoolate de métal alcalin, par exemple sodium ou potassium et plus particulièrement un alcoxyde inférieur tel qu'un méthoxyde ou un éthoxyde. On préfère à cet 6gard employer le m&thoxyde ou l'éthoxyde de sodium. L'époxydation peut être effectuée pendant I à 5 heures à température ambiante - habituellement 15-300 C. L'élimination hydrolytique des groupes acyl en 2' et 2" se produit simultanément à cette 6poxydation. Il se forme ainsi dans la solution réactionnelle, le dérivé 2',3'-anhydro-3'- épi de formule (IX): NHCOOR NIICOOR NUCOOR oO HO / H0 o (ix) NHCOO HO 248 1290 dans laquelle R a les significations d6jà mentionnées et le dérivé 3',4'anhydro-3'-épi de formule (X): COOR NHCOOR N HCO O O OHHO 0(X) H dans laquelle R a les significations déjà mentionnées. Dans la seconde étape du procédé selon l'invention, la solution réactionnelle contenant les d6rivés anhydro en 2',3' et 3',4' de formules(IX) et (X) est soumioe à une réduction avec de l'hydrogène en présence d'un catalyseur d'hydrogénation connu, p. ex. le nickel de RANEY ou un métal du groupe du platine tel que le platine ou le palladium pour former le dérivé de kanamycine A N-protégé 3'-d6soxygé6né correspondant. L'hydrogénation peut être effectu6e à une pression de 1.013 x 10 à 3.039 x 10 Pa d'hydrogène et à température ambiante ou à une température pouvant atteindre 50 C. Alternativement on peut effectuer la réduction avec du borohydrure de sodium en solution dans du diglyme ou du dioxane entre 40 et 100 C. Il se forme alors le d6rivé de kanamycine A N-protég6 3'-désoxygén6 de formule (XI): CH NHCOOR NHCOOR 2 o NHCOOR o OH HHc OH 110112 o O (XI) NHCOOR HO0 0E OH dans laquelle R a les significations mentionnées ci-avant Simultanément A lthydrogénation,le groupe amino-protecteur (-COOR) peut occasionnellement être éliminé, selon sa nature. Enfin on traite le dérivé désoxygné en 3' de formule (XI) de façon connue pour en éliminer le groupe amino- protecteur, ce qui donne comme produit final la 3'-désoxy- kanamycine A de formule: CH H2 NH2 HO OH CH20H / ( NS2 0 H \ OH L'invention va maintenant être illustr6e à l'aide de l'exemple suivant d6crivant l'ensemble des 6tapes de la préparation de la 3'désoxykanamycine A en partant de la kanamycine A. Exemple (1) Pr6paration de la t6tra-N-éthoxycarbonylkanamycine A A une solution de monosulfate de kanamycine A (40 g) dans un mélange d'eau (400 ml) et de méthanol (200 ml) on ajoute de l'hydroxyde de sodium (30 g). On mélange le mélange obtenu à du chloroformiae d'kthyl (690 ml) comme r6atif introducteur du groupe 6thoxycarbonyl et on agite pendant 24 heures sous refroidissement à la glace. La masse pr6cipitée est r6cupér6e par filtration, lav6e à l'eau et séch6e; on obtient 45,7 g du compos6 d6siré. Rendement 86 %. Le produit obtenu est purifi6 par chromatographie sur colonne de carbone. Il a les propri6t6s suivantes: f[a]20 + 48,30 (c 0,5, diméthylformamide) pt. f. 2660 - 2670 C (avec décomposition). Analyse élémentaire: Trouvé: C 45,92, H 6,79, N 7,05 % Calculé pour:C30 H52 N4 019: C 46,62, H 6,80, N 7,25 % (2) Préparation de la 2',3',2"-tri-0-benzoyl-4",6"-0- cyclohexylidène-tétra-N-éthoxycarbonylkanamycin A Le composé (1,8 g) obtenu dans l'étape (1) ci-dessus est dissous dans le diméthylformamide (36 ml) auquel on ajoute ensuite de l'acide p-toluenesulfonique monohydrate (130 mg) et du 1,1-diméthoxycyclohexane (4,2 ml); on concentre à plus faible volume le mélange obtenu. Le concentrat ainsi obtenu est dissous dans de la pyridine (30 ml). Une fois la solution refroidie à 0-5 C, on y ajoute du chlorure de benzoyl (0,85 ml) et on effectue la r6action d'acylation pendant 3 heures à 0-5 C. La fin de la r6action est confirm6e par chromatographie en couche mince (gel de silice, Merck & Co.). On ajoute ensuite de l'eau (0, 5 ml) au mélange réactionnel pour d6composer tout excès dé chlorure de benzoyl. Une fois le mélange réactionnel concentré sous pression réduite, on le verse dans l'eau (100 ml), on filtre le précipité formé, on le lave à l1eau et on sèche pour obtenir 2,44 g d'un produit brut. Rendement 95 %. Ce produit est purifié par chromatographie sur gel de silice pour donner le composé désiré ayant les propriétés suivantes:C] D2 + 109,4 (c 1,0 chloroforme) pt. f. - 1950 C. Analyse élémentaire: trouvé: C 57,87, H 6,27, N 4$62 % calculé pour C H 57 72 N4 022: C 58,74, H 6,24, N 4,81 % (3) Préparation de la 2',3',2"-tri-0-benzoyl-4",6"-0- cyclohexylidene-4'-0-tétrahydropyranyl-tétra-N- éthoxycarbonylkanamycine A. Le composé obtenu dans l'étape (2) ci-avant c'est-à-dire la 2',3',2"-tri-0-benzoyl-4",6'-0-cyclohexylidène-tétra-N- éthoxyçarbonylkanamycine A (1,85 g) est dissous dans de la diméthylformamide (15 ml) auquel on ajoute du 3,4-dihydro- 2H-pyrane (1,7 ml) et de l'acide p-toluenesulfonique monohydrate (60 mg); on agite le- mélange obtenu à température ambiante pendant 18 heures pour effectuer la réaction de pyranylation du groupe hydroxy en 4'. Le mélange réactionnel est neutralisé à la triéthylamine concentrée à faible volume sous pression réduite puis versé dans l'eau (40 ml). On filtre le précipité qui se dépose, on lave à l'eau et on sèche pour obtenir 1,9 g du composé désiré. Rendement 95 %. Spectre de résonnance magnétique nucléaire (RMN) (dans CDCl3): &7.3 - 8.2 (m. 15H) benzoyl S0.63- 2.33(m.30H) cyclohexylidène 10H tétrahydropyranyl 6H -OCH2CH3x4 12H DSA C-2-2H Analyse élémentaire: trouvé:C 59,49, H 6,65, N 3,94 % calculé pour:C H N 0 : 62 H80 N4 023: C 59,59, H 6,47, N 4,48 % (4) Préparation de la 4",6"-0-cyclohexylidène-4'-0- 248 1290 tétrahydropyranyl-tétra-N- éthoxycarbonylkanamycine A. Le composé (1,35 g) obtenu dans l'étape (3) ci-dessus est dissous dans du méthanol (30 ml) auquel on ajoute du méthylate de sodium (0,4 g); on agite le mélange à tempé- rature ambiante pendant une heure pour effectuer la réaction d'élimination des groupes benzoyl en 2',3' et 2". Le mélange réactionnel est neutralisé avec de l'acide chlorhy- drique concentré sous refroidissement à la glace et concen- tré à faible volume. Le concentrat ainsi obtenu est dissous dans du chloroforme (100 ml), lavé deux fois à l'eau, sèche sur sulfate de sodium anhydre et distillé sous pression réduite pour éliminer le chloroforme. Le concentrat est puri- fié par chromatographie sur gel de silice pour donner 0,54 g du composé désiré. Rendement 54 %. * Analyse élémentaire: trouvé: C 51,61, H 7,18, N 5,52 % calculé pour: C41 H6 N 20 : 41 H68 N4 020: C 52,54, H 7,33, N 5, 98 % (5) Préparation de la 2',2"-di-0-benzoyl-4",6"-0O-cyclohexy- lidène-4 '-O-tétrahydropyranyl-tétra-N-éthoxycarbonyl- kanamycine A Le composé (4,0 g) obtenu dans l'étape (4) ci-dessus est dissous dans la pyridine (60 ml). Une fois la solution refroidie à 5 -10 C, on ajoute du chlorure de benzoyl (1,74 ml) à la solution et on effectue la réaction d'acyla- tion des groupes hydroxy en 2' et 2"t' pendant 3 heures à -10 C. On vérifie la fin de la réaction par chromato- graphie en couche mince (gelde silice, Merck & Co). On ajoute alors de l'eau (1 ml) au mélange réactionnel pour décomposer tout excès de chlorure de benzoyl. Le mélange réactionnel est alors concentré à faible volume, mélangé à de l'acétate d'éthyl (200 ml), lavé avec une solution aqueuse 1N de bicarbonate de sodium puis avec de l'eau et séché sur sulfate de sodium anhydre. Le mélange réactionnel est distillé sous pression réduite pour éliminer l'acétate d'éthyl ce qui donne 4,75 g d'un produit brut. Celui-ci est purifié par chromatographie sur gel de silice et l'on obtiint a, 3,3 g du compos6 d6siré. Rendement 68 %. R. M. N. (dans CDCl3): u0,65-2,35 (30H) cyclohexylidène 0OH t6trapyranyl 6H -O-CH2CH3 X4 12H DSA C-2-2H f7,3 - 8,2 (10H) benzoyl Analyse élémentaire: trouvé: C 56,79 - H 6,70 - N 4,52 % calcul6 pour: C55H76N 022: C 57,67 - H 6,70 - N 4,89% (6) Pr6paration de la 2', 2"-di-O-benzoyl-4",6"=O-cyclo- hexylidène-4'-O-t6trahydropyranyl-3'-O-mésyl-t6tra=N- éthoxycarbonylkanamycine A. On dissout le composé (0,92 g) obtenu dans l'étape (5) ci-avant dans de la pyridine (15 ml) à laquelle on ajoute alors du chlorure de m6syl (0,25 mIl) et on effectue la réaction d'acylation du groupe hydroxy en 3' à 600 C pendant une heure. On ajoute de l'eau (0,2 ml) au mélange réactionnel pour décompoeertout excès de chlorure de m6syl. Le mélange réactionnel est alors concentr6 a faible volume et le concentrat ainsi obtenu est versé dans l'eau (20 ml). Le pr6cipité formé est rassemblé par filtration, lavé à lteau et sèch6 pour donner 0,92 g du compos6 recherché. Rendement 94 %. Le compos6 est purifié par chromatographie sur gel de silice pour donner le composé recherché ayant les propriétés- physiques suivantes: R. M. N. (dans CDC13): 32,83 (singlet) 3,10 (singlet) 3H-SO2CH3 Analyse élémentaire: trouvé: C 53,98 - H 6,23 - N 4, 52 - S 3,34 % calculé pour:C56H78N4024 S: C 54,94 - H 6,44 - N 4,58 - S 2,62 % (7) Pr6paration de la 2',2"-di-0-benzoyl-3'-0-m6syl-tétra-N- 6thoxycarbonylkanamycine A. Le composé (500 mg) obtenu dans l'étape (6) ci- dessus est dissous dans du méthanol (10 ml) auquel on ajoute alors de l'acide trifluoracétique (0,1 ml) et on maintient le mélange réactionnel à 50 C pendant 2 heures pour effectuer l'élimination simultanée du groupe hydroxy-protecteur en 4' et du groupe hydroxy- protecteur divalent en 4",6". Le mélange réactionnel est alors concentré à faible volume et le concentrat ainsi obtenu est purifié par chromatographie sur gel de silice pour donner 273 mg du composé recherché. Rendement 63 %. (a3O + 106,70 (c 0,8 méthanol) pt f. - 189 C (avec décomposition). Analyse élémentaire trouvé: C 50,57 - H 5,87 - N 5,12 - S 3,43 % calculé pour: C45 H62N4 23S: C 51,00 - H 5,91 - N 5,29 - S 3,02 % (8) Epoxydation de la 2',2 "-di-0-benzoyl-3'-0-mésyl-tétra- N-éthoxycarbonylkanamycine A, et préparation de la tétra-N-éthoxycarbonyl-3'-désoxykanamycine A. Cette étape et celle qui suit correspondent au procédé selon l'invention. (i) Le composé (500 mg) obtenu dans l'étape (7) ci- avant est dissous dans du méthanol (15 ml) auquel on ajoute du méthylate de sodium (0,2 g) et on agite le mélange à température ambiante pendant 3 heures pour ef- fectuer la réaction d'époxydation pour former le déri- vé 2',3'-anhydro-3'-épi et le dérivé 3',4'-anhydro-3'- épi. Le mélange réactionnel résultant contenant les dé- rivés 2',3' et 3',4' d'anhydro formés est ensuite réduit catalytiquement avec de l'hydrogène sous pression par- tielle d'hydrogène de 2,026 x 10 Pa en présence de nickel de Raney (1 ml) (produit par NIKKO RIKA Co, R-100). Après filtration du mélange réactionnel pour éliminer le nickel de Raney, on le concentre sous faible volume; on le verse dans l'eau. Le précipité obtenu est filtré, lavé à l'eau et séché pour donner un produit brut conte- nant la tétra-N-éthoxycarbonyl-3'-désoxykanamycine A. Celle-ci est à nouveau vers6e dans de l'eau pour puri- fication. Le précipité est filtré, lavé à l'eau et sé- ch6 pour donner 232 mg du composé d6sir6. Rendement %. '1]2 + 92,1 (c 0,9, dim6thylformamide). Pt f. 260-280 C (avec d6composition). Analyse élémentaire Trouvé: C 47,27, H 6, 99, N 7,04 % Calculé pour: C30H52N4018 C 47,60, H 6,94, N 7,40 % (ii) Dans le procédé ci-avant (8) (i), la réduction des dériv6s 2',3'- et 3',4'-anhydro formés est effectuée par hydrogénation catalytique avec de l'hydrogène sur nickel de Raney. La réduction peut aussi être effectuée avec du borohydrure de sodium. Le composé (500 mg) ob- tenu dans l'étape (7) ci-avant est alors dissous dans du méthanol (15 ml) auquel on ajoute du méthylate de so- dium (0,2 g) et on agite le mélange à température am- biante pendant 3 heures pour effectuer la réaction d'époxydation et former les dérivés 2',3e-anhydro-3'- épi et 3',4'-anhydro-3'-épi. Le mélange réactionnel est neutralisé à l'acide chlorhydrique 2N, la solution ob- tenue concentrée jusqu'à donner un sirop qui est alors mélangé à du diglyme (10 ml) puis à du borohydrure de sodium (220 mg). Le mélange ainsi obtenu est agité à 650C pendant 8 heures. Après neutralisation à l'acide chlorhydrique 2N, la solution réactionnelle est con- centrée jusqu'à donner un sirop, puis on y ajoute un peu d'eau. Le précipité est rassemblé par filtration, lavé à l'eau et séché pour donner un produit brut con- tenant la tétra-N-éthoxycarbonyl-3'-désoxykanamycine A. Ce produit est ensuite trait6 comme dans l'étape (8) (i) ci-avant pour donner 94 mg du composé désiré. Rendement Ia22 + 92,1 (c 0,9, diméthylformamide). Pt f. 260-2800C (avec d6composition). (9) Préparation de la 3'-désoxykanamycine A. Le composé (200 mg) obtenu dans l'étape (8) ci- avant est mis en suspension dans de l'eau (5 ml) à la- 248 190 quelle on ajoute ensuite de l'hydroxyde de baryum octa- hydrate (400 mg); on traite pendant 3 heures sous re- flux le composé pour effectuer l'élimination des quatre groupes aminoprotecteurs. Une fois cette réaction de déprotection effectuée, on neutralise le mélange réac- tionnel par passage de gaz carbonique, on élimine la substance insoluble obtenue par filtration et on la lave à l'eau. On fait passer la liqueur-mère et les li- quides de lavage à travers une colonne de 5 ml d'Amberlite CG-50 (NH4+) (Amberlite est une marque déposée pour les résines échangeuses d'ions tendues par Rohm & Haas C ) pour adsorption de la substance active. On effectue une purification chromatographique avec une solution aqueuse d'ammoniaque 0,3 N comme éluent et on obtient 89 mg du composé recherché. L a20 + 146 (c 1,0, eau). Rende- ment 71 %. Analyse élémentaire: Trouvé: C 41,68, H 7,95, N 10,59 % Calculé pour: C18H36N4010.1/2H2C03, 2H20 C 41,48, H 7,73, N 10,46 % - REVENDICATIONS - i - Procédé de pr6paration de la 3'-désoxykana- mycine A, caractéris6 en ce qu'il consiste à faire réagir un d6riv6 protég6 de kanamycine A de formule: CH2NHCOOR NHCOOR 0 NHCOOR H 0 OX HOH2C.(I 0X HO HCR Ox dans laquelle R est un groupe alkyl, aralkyl ou aryl, V est un groupe m&syl, tosyl ou benzylsulfonyl et X est un groupe alcanoyl ou aroyl avec une base telle qu'un alcoolate de métal alcalin dans un alcanol inférieur pour effectuer simultanément les époxydations en 2',3'- et en 3',4'- et l'élimination des groupes acyl en 2' et 2", à réduire les dérivés anhydro ainsi formes en solution dans ledit alcanol avec de l'hydrogène en pr6sence d'un catalyseur d'hydrogènation connu ou avec du borohydrure de sodium pour obtenir le dérivé N-protégé 3'-désoxygéné correspondant de kanamycine A puis à éliminer les groupes amino-protecteurs restant (-COOR) (là ou ils existent) de façon connue pour obtenir la 3'-désoxykanamycine A. 2 - Procédé selon la revendication 1, caractérisé en ce que l'on fait réagir le dérivé de kanamycine A 2' 2"-di-0-acyl-3'-0-sulfonyl-tétra-N-protégé de for- mule I en solution dans un alcanol inférieur avec un alcoolate de métal alcalin à une température de 15 à C pendant 1,5 heure et que l'on réduit les dérivés - -. ' * 248 1290 '28 anhydro ainsi formes avec de l'bydrogène en présence d'un catalyseur d'hydrog6nation à une température entre la température ambiante et 50 C pour obtenir la 3'-d6soxy- kanamycine A N-prot6gée correspondante qui est alors soumise à une élimination classique des groupes amino- protecteurs résiduels. 3 - Procédé selon la revendication 1, caractéri- sé en ce que l'on fait réagir la 2',2"-di-0-benzoyl-3'- 0-mésyl-tétra-N-éthoxycarbonylkanamycine A en solution dans le méthanol ou l'éthanol avec du méthoxyde ou de l'ethoxyde de sodium ou de potassium à 15-300C pendant 1 à 5 heures et-que les dérivés anhydro ainsi formés restant dissous dans le solution réactionnelle dans le méthanol ou l'éthanol sont réduits avec de l'hydrogène sous une pression partielle d'hydrogène de 13.10 sous uepesopateldhyognd 1013.10 *a 3039.102 Pa à une température allant de la température ambiante à 501C sur du nickel de Raney pour obtenir la tétra-N-éthoxy -carbonyl-3'-désoxykanamycine A dont on élimine ensuite les groupes éthoxycarbonyl par hydro- lyse alcaline ménagée. 4 - Procédé selon la revendication 1, caractérisé en ce que l'on fait réagir le dérivé de kanamycine A 2',2"-di-0-acyl-3'-0-sulfonyl-tétra-N-protégé de for- mule I en solution dans un alcanol inférieur avec un alcoolate de métal alcalin à une température entre 15 et 30 C pendant 1 à 5 heures et que l'on réduit les dérivés anhydro ainsi formés avec du borohydrure de so- dium dans du diglyme ou du dioxanne à une température entre 40 et 100 C pour obtenir la 3-désoxykanamycine A N-protégée correspondante qui est ensuite soumise à un processus classique d'élimination des groupes amino- protecteurs résiduels.