Brevet FR2484450A1 — publié le 19811218

La présente invention se rapporte à un procédé de production de L-tryptophane ou ses dérivés par des micro- organismes, ainsi qu'a4icro-organilses utilisés dans ce but. Ltryptophane estl'un des aminoacides essentiels constituant les corps des animaux et il eat important comme médicament, aliment ou comme additif pour les aliments pour animaux. Certains dérivés de L-tryptophene fonctionnent comme un antagoniste contre le métabolisme de L-tryptophane et contiennent des substances physiologi- quement actives que l'on peut utiliser pour préparer des produits pharmaceutiques affectant le système nerveux central. Ce L-tryptophane et ses dérivés peuvent $tre produits par des procédés connus de synth&sea processus biologique et de nombreux autres procédés. On peut citer conmme procédés connus pour la production de L[tryptop!ee en utilisant des microorganismes: (1) une fomentation directoe en utilisant des sucres pear accumuler Lt OtOpen dans une culture; et (2) l'additiond'indole ou d'u acide anthranilique simultanément avec le sucre à m culture, et en permettant L-trptophane de s.ouler dans la culture. Le L-tryptophane peut également etre produit à partir d'indole et de sérine ou à partir d9indole, d' acide pyruvique et de l'ion ammonium en utilisant une tzyptophanase (enzyme) produite par mun micro-organisme. Ce procédé d'utilisation de tryptophanase présente l'avantage qu'en faisant varier le type du composé d'indole, divers dérivés correspondants de L-tryptophane peuvent 8tre produits et que par conséquent, on peut choisir la réaction la mieux adaptée à un but particulier. On connaît de nombreux procédés pour la production de L-tryptophane en utilisant la tryptophanase. Dans la publication du brevet japonais No. 46917/74 est décrit un procédé o du L-tryptophane est produit à partir dsindole et de, sérine ouàpartir d'indole, d'acide pyruvique et de l'ion ammonium en utilisant un micro-organisme de genre Escherichia, de genre Proteus, de genre Pseudomonasde f 2 2484450- genre Aerobacter ou de genre Erwinia, et dans le - brevet français No. 1207437, la demande de brevet au Japon OPI (demande de brevet publiée avant examen) No. 39693/72 et la publication du brevet Japonais No.1836/78 est décrit un procédé o du L-tryptophane est produit à partir d'indole et de sérine en utilisant un micro- organisme de gendre Escherichia, de genre Claviceps, de genre Neurospora, de genre Saccharomyces,de genre Bacillus, de genre Achromobacter ou de genre Alcaligenes. On connart également plusieurs procédés pour produire des dérivés de Ltryptophane qui correspondent à divers composés d'indole: dans la publication du brevet Japonais No. 46917/74 est décrit un procédé de production de -hydroxytryptophane en utilisant un micro-organisme de genre Proteus, de genre Escherichia, de genre Pseudomonas, de genre Aerobacter ou de genre Erwinia; dans la publication du brevet Japonais No. 1835/78 est décrit un procédé de production de 5-hydroxytryptophane en utilisant un micro-organisme de genre Achromobacter, de genre Escherichia, de genre Pseudomonas, de genre Alcaligenes ou de genre Proteus; et dans les publications de brevets Japonais No. 5479/76 et 8400/77 est décrit un procédé de production de 5-hydroxytryptophane et de méthoxytryptophane en utilisant un micro-organisme de genre Corynebacterium ou de genre Brevibacterium. Ces procédés qui-utilisent des micro-organismes sont avantageux par rapport à celui pour la production de L-tryptophane ou ses dérivés par synthèse chimique parce qu'ils ne donnent que des composés de forme L qui sont optiquement actifs. Ils permettent la production de grandes quantitésde L-tryptophane ou de dérivés de L-tryptophane à partir de matériaux industriels comme des composés d'indole, la sérine ou l'acide pyruvique. On a maintenant trouvé un nouveau micro-organisme dans le sol de la forêt de Fuji, Shizuoka, Japon, qui produit du L-tryptophane et ses dérivés à un bon rendement. En utilisant ce micro-organisme, l'invention décrite ici a été accomplie. La présente invention concerne un procédé de production de L-tryptophane ou son dérivé. Dans le procédé, on fait réagir un composé dIidole avec de la sérine ou avec de l'acide pyruvique et/ou son sel, et l'ion ammonium, en présence d'une culture ou d'une culture traitée de genre Enterobacter SP.AST 49-4 ayant la désignation FEPM-P 5543 et la désignation ATCC 31901. Dans la présente Invention, on utilise le genre Enterobacter SP. AST 49-4 ayant la désignation FEN-P 5543 et la désignation ATCC 31901, qui produit du L-tryptophane ou ses dérivés à partir de composés d'indole et de sérine ou à partir de composés d'indole, d'acide pyruvique et/ou son sel, et de l'ion ammonium. On sait traditionnellement qu'tun mcro-organeismer de l'espèce Klebsielle qui contient le genre Enterobaoter produit la tryptophanase (voir Bergev's Nanual of Determina- tive Bacteriolog, 8Sème Edition, page 294). On sait également que divers micro-organismes produisent la tryptophanase, qui décompose le Ltryptophane pour former l'tndoleo Cependant, tous les micro-organismes produisant la tryptophanase n'ont pas la capacité de produire une quantité importante de L-tryptophane. Les micro-organismes qui produisent la tryptophanase et qui produisent efficace- ment le L-tryptophane ou ses dérivés à partir de composés d'indole et de sérine ou à partir de composés d'indole, d'acide pyruvique et/ou son sel, et de l'ion ammonium, doi- vent répondre aux conditions selon lesquelles la tryptopha- nase produitedans lesmicro-organismes a une forte activité, les microorganismes ne décomposent pas les matières premières, comme les composés d'indole, la serine et l'acide pyruvique, et les micro-organismes ne décomposent pas le L-tryptophane résultant ou ses dérivés autrement que par la tryptophanase. Par suite de recherches intensives d'un certain nombre de microorganismes produisant la tryptophanase, les inventeurs ont trouvé un nouveau micro-organisme de genre Enterobacter qui produit le Ltryptophane ou ses dérivés à une forte efficacité. Désigné par Enterobacter..SP. AST 49-4, ce micro-organisme a été déposé au Fermentation Research Institute, the Agency of Industrial Science and Technology (FERM) sous le No. FERM-P 5543 le 28 Mai 1980 et a été déposé à l'ATCC sous le No. 31901 le 29 Mai 1981. Les propriétés mycologiques d'Enterobacter SP. AST 49-4 sont indiquées ciaprès: (A) Propriétés morphologiques (incubation dans un bouillon de cultue à 32oC pendant 24 heures) forme: tige courte tiges simples ou chaine de deux tiges, avec flagelles de peritriches dimensions: 1,0 - 1,2 V x 1,5 - 3,0 motilité: présente coloration Gram: négative solidité de la coloration à l'acide: négative spores: non formées pléomorphisme: aucun (B) Croissance dans le milieu (32oC) Bouillon de culture: bonne, pellicule relative- ment épaisse formée, avec précipité de cellules agglomérées, liquide transparent, pas de pigment formé Culture surplaque agar comme milieu nutitif: bonne, contour irrégulier, surface rugueuse et ondulée, élevée, pourtour ondulé, avec brillant, légère coloration de papier bulle (c'està-dire de couleur légèrement brnatre ou chamois), pas de pigment formé, légèrement visqueuse C.ulture sur plaque oblique agar comme milieu nutritif: bonne, filiforme, avec brillant, légère coloration de papier bulle, pas de pigment formé Culture sur baton de gélatine comme milieu nutritif (20 C): bonne croissanceà la partie supérieure, légère coloration de papier bulle, croissance à la partie en bAton, pas de gaz formé à la partie en bâton, pas de liquéfaction (C) Propriétés physiologiques température de croissance: croissance à 1342 C, pas de croissance à 450C pH de croissance: 5-9 nécessité d'oxygène: facultativement anaérobie essai OF (milieu de Hugh Leifson): fermentation production de gaz (milieu de glucose): producG tion de gaz lait de tournesol: bonne croissance, pellictle relativement épaisse formée à la surface, tournesol décolorée, lait coagulé liquéfaction de 2a gLatine: pas de liquéfaction production de sulfure hydrogène: pas de production décomposition. de l'amidon: pas de décomposition réduction du nitrate: acide ntreux produit activité de la catalase: positive activité de l'oxydase: négative activité de l'uréase: négative activité de la phénylalanine déaminase: n'gative activité de la lysine décarboxylase négative activité de l'alginine dihydrolase: négative activité de l'ornithine décarboxylase - négative production d'indole: positive production dtammoniac: positive réaction VP: positive essai MR: négatif dénitrification: positive utilisation de l'acide citrique: milieu de Koser: utilisé milieu de Christensen: utilisé solidité au chlorure de sodium: croissance dans NaCl à une concentration pouvant atteindre 2% production de pigment (milieu King A): pas de production utilisation des sources d'azote: sel deammonium et nitrate utiliss v6 2484450' utilisation des sucres, et production d'acide et de gaz: voir tableau 1 TABLEAU 1 Croissance Production Production de _____ d'acide gaz D-glucose + + + Dfructose + + + D-mannose + + + D-galactose + + + D-rÉamnose + + + D-arabinose - - - L-arabinose + + + D-xylose + + + Sucrose + + Lactose + Maltose + + + Tr6halose + + + Raffinose - - - D-inositol + + + D-mannitol + + + D-adonitol - - - D-sorbitol + + + Salicine + + + Glycérine + - - Ethanol - - - Isolé de: sol forestier à Fuji-shi, Shizuoka, Japon. Ce sont les propriétés mycologiques d'Enterobacter SP. AST 49-4 selon l'invention. L'identification en se référant à Bergey's Manual of Determinative Bacterîology, 8ème édition, 1974 montre ce qui suit: le micro-organisme appartient à la famille Enterobacteriaceae parce que c'est un bacille Gram négatif, parce qu'il a des flagelles de peritriches, qu'il est facultativement anéorobie, qu'il est positif par l'activité de la catalase, négatif par l'activité de ltoxydase,qu'il produit un acide à partir de glucose et réduit l'acide nitrique en acide nitreux, et il appartient très raisonnablement au genre Enterobacter de l'espèce Klebsielleae parce qu'il est positif par la réaction VP, négatif à l'essai MR, négatif à l'activité de la phénylala- nine déaminase, qu'il cro t à une gamme de température de 13 à 42 C et il a une motilité. Enterobacter Aerogenes ATCC 8724 et Enterobacter Liquefaciens AJ 2661 sont les seuls deux bactéries de genre Fterobacter qui soient connues comme produisant du L-tryptophane à partir d'indole, d'acide pyruvique et de l'ion ammonium (voir Agicultural and Biologia Chemistry, volume 36, page 2523, 1972). Dans le tableau 2 sont comparées les propriétés d'Enterobacter SPo AST 494 avec celles de ces deux bactéries et dEnterobacter Cloacaeq autres bactéries de genre Enterobacter, décrites dens Berae 's Nanual of Déterminative Bacterol2ogy 8ème édition. Propriétés taxologiques Production d'indole Liquéfaction de la gélatine Activité de la lysine décarboxylase Activité de l'alginine dihydrolase Activité de l'ornithine décarboxylase Utilisation du malonate Utilisation de l'aesculine Production d'acide inositol Glycérine D-arabinose Raffinose Adonitole Lactose Production de gaz Inositol Glycérine TABLEAU 2. AST 49-4 + Micro-oranismne Entero Entero- Enterobctpe bacter bacter Liquefa- Cloacae Aropgenes ciens - + tve _* - faible faible + + + + + + + +1 + + + + + + + + + +,_-* + + + + + + + + + + + + J-,To %ned uo espTod ue %0 1.e 1'0 uo-TAUe ealzue esTadmoo 9a.Tuenb aeun ue %ualeeu9gu92 naTeTm un m soeenos %uos euoqazo ep seonos seD eaenbuToons apTouil ae enbTTBm epToe#T çç enbTaumn$ epToIT 'enbTl.To apToe#T 'anbTIeoe apToni emmoo senbTumsao sepTo saep %a ' Touumm eal.e IoTq-os etl 'euTJaol MT ermmoo eaons ep sToooTM sep ' sass1e9m sel ie esoLArx 'esoloellS 'esojong 'esouumm 'easoon; esoonl. eamoo esaJons sep 'euoq.o ep seoznog emmoo Oú zeTo Inead uo -.uemmoo lae.Y1au no enb%aeqpuXs naelçTm un ans eainLno ue sTm eaizg %ned emsTue.So-oaoTpm el *snssep-To oep eT uo emmoo '-67 LTV aSV aeoqoteIuS usT n ue s99ATagp sags e aeqTdoqcz'l. ep uoTIonpoad ap 9p9good neenaou un r eaqzoddua as uoTueauT aeues9,zd ml Sz *eIopuTp 1/2 Oz ep aTia e.Tnpold 91.TUut * 9'81 i--67 1SV c*dS -eoqo.oaeug 01 199Z úV suaTojenbTFlba qoaI eoe l ZE.8 D.; L9seueGoZeav.zXeoqo.zeuHOZ (T/:s).euetco%,x%- ap %uemepuaH emsTtteso-oioT ÀuoTueAuT euesead ue SuBp, 9sTTTIn emSTUueSoozoTm np aeTeTxzsnpuT anesuo uT ealSuomgP Tnb ao 'uoT;ofe, op suoTT-puoo semom SeT suep ?LA61 ZZ e2ud '9ú emnioA 'asTmaqD tuoTlot0TE puue tITnnoTMV suIp sTao9p 199Z úV sueTo-eTenbT'I xloeq0oaqxe -0 7ZZ,8 DaV seueojeV.1eosqo.azeynb euuqdodza%-,i op 9AeI9 sntd OL %uomeTqeaepTsuoo ueumepuao un,rlueqoip qameLd uoT:uoAUTaT suep 9sTtl.n -6+i lSV "CI i O. OsaSdu-To nueequt el ea.uom ale eamoo 'uoTTP e me8 'Oomoloeaog e aTeulTmPLeeG eo tnuuw s&oezae su-p sea.Trop aeouqoazeu eaue2S ep sae.z9%. oq sep eunoUqo op %ueasgjTp emsTuueSgo-oaoTm un %Te%9 7-6.7.SV *dS.azoeqoaoeu2,nb emnlouoo us rdIui'sen8bToloxe. s9%TaZdaOd sel mgs sag:uuop sao ms %uuseq as US %seuTUeo 4seJos *sesueATpeodmoo e dse" z.tuea 55UuTsao '5GaZ0s 555J5K p azodmoo eoaasesa * Os9tM comme sources d'azote des ammoniacs comme le chlorure d'ammonium, le sulfate d'ammonium, le phosphate d2ammonium, le nitrate d'ammonium, l'acétate d'ammonium et l'eau d'ammoniac; et des sources d'azote organique comme l'urée, l'extrait de viande, la peptonec lvacide Casamino, la liqueur de trempage de mais, la farine de soja dégraissée et l'hydrolysat de protéine. On ajoute, de préférence, au milieu, des substances favorisant la cro àsaneo. du micro. organisme. Ces substances peuvent être inorganîques ou organiques. On peut citer comme exemples Lnorganiques, le monophosphate de potassium, le diphosphate de potassim, l'acide phosphorique, le chlorure de potassium, le sulfate de magnésium et le chlorure de sodium, ainsi que des ions de métaux tels que le fer, le zinc,le manganèse, le cuivre et le calcium. On peut citer comme exemples organiques, les aminoacides, les vitamines, les acides organiques, les acides aliphatiques ainsi que les substances naturelles comme la peptone, l'extrait de levure, l'extrait de viande, la levure séchée, la liqueur de trempage de ma!s, la caséine et l'hydrolysat de soja dégraissé. La tryptophanase produite par Enterobacter SP. AST 49-4 est considérée comme un enzyme adaptîf, et on ajoute de préférence L-tryptophane au milieu pour la préparation d'une culture du micro-organisme en une quantité de l'ordre de 0,1 à 0,7% en poids. On fait incuber le micro- organisme dans le milieu résultant à une température comprise entre 25 et 370C pendant 16 à 96 heures, La culture ainsi préparée du micro-organisme a un système enzymatique qui produit L-tryptophane ou ses dérivés à partir d'un composé d'indole et de sérine ou à partir d'un composé d'indole, de l'acide pyruvique et/ou son sel et de l'ion ammonium. La culture peut être utilisée immédiatement dans la réaction enzymatique souhaitée ou on peut l'utiliser après des traitements préliminaires appropriés. Par exemple, les cellules du micro-organisme peuvent être séparées de la culture par centrifugation ou analogue. Les cellules peuvent également être séchées, traitées avec des ondes ultrasoniques, autolysées ou homogénéisées. Au contraire, la tryptophanase produite peut Otre extraite et purifiée par des moyens traditionnels. Alternativement, les cellules o l'enzyme séparés peuvent être utilisés comme des cellules ou'un enzyme immobilisés obtenus en les polymérisant avec un monomère d'amide d'acide acrylique ou analogue. Les cellules ainsi préparées contenant la tryptophanase, les cellules traitées et les cellules immobilisées, ainsi que la tryptophanase purifiée et la tryptophanase immobilisée sont utilisées comme catalyseur pour la réaction enzymatique dans une liqueur de réaction qui contient un composé d'indole et de la sérine ou uncomposé d'indole, de l'acide pyruvique et/ou son sel, et l'ion ammonium pour la production de L- tryptophane ou ses dérivés. En plus des composés d'indole, de la sérine, de l'acide pyruvique et/ou son sel, et de l'ion ammonium que l'on utEise comme substrat, la liqueur de réaction contieit de préférence de l'acide éthylènediaminetétracétique et du phosphate de pyridoxal pour obtenir un rendement supérieur de L-tryptophane ou ses dérivés. Il n'y a pas de limite particulière à la quantité du substrat utilisé, et elle est généralement comprise entre 0,1 et 10% en poids. La réaction enzymatique est habituellement accomplie à un pH de l'ordre de 5 à 11 et à une température de l'ordre de à 60 C. On peut citer comme exemples du composé d'indole à ajouter au système réactionnel, l'indole, le 5-hydroxyindole, le 5-chloroindole, le 5-bromoindole, le 5-aminoindole, le 5-méthoxyindole, le 5-métoxy-2- méthylindole, et le 2-méthylindole. Le L-tryptophane ou ses dérivés produits dans la liqueur de réaction peut être isolé par des procédés traditionnels comprenant une adsorption avec une résine échangeuse d'ions, du charbon activé et autres Le L-tryp- tophane et ses dérivés produits peuvent être vérifiés et quantifiés par chromatographie liquide à haute pression ou chromatographie en couche mince sur du gel de silice. La présente invention sera maintenant décrite en plus de détail en se référant aux exemples qui suivent qui ne sont donnés que pour lillustrer et ne doivent en aucun cas en limiter le cadre. Exemple 1 On a introduit 5 millilitres dîun milieu ayant la formule indiquée au tableau 4 dans des éprouvettes dsun diamètre de 18 mm et on a stérilisé à 1200C pendant minutes. Chacun des milieux stérilisés;a été inoculé d'une goutte d'Enterobacter SP. AST 49-4, et on a mis en culture à 32 C pendant 20 heures tout en agitant On a transféré 5 ml de la culture ainsi germée à un milieu de fermentation préparé en stérilisant 100 ml daul milieu (le même que celui indiqué au tableau 4) à 1200C pendant 10 minutes dans un ballon vibratoire de 500 al, et la fermentation a été entreprise à 32C pendant 20 heures tout en agitant. A la fin de la fermentation, on a centrifugé I litre de la culture pour récupérer les cellules de micro- organisme, et les cellules ont été mises en suspension dans 200 ml d'une liqueur de réaction (pour la formules voir tableau 5), et ensuite on a chauffé à 320C pendant 48 heures tout en agitant pour effectuer une réactic enzymatique. A la fin de la réaction, on. a mélangé 10 ml de la suspension à 10 ml de méthanol sous une agitation vigoureuse, et le mélange a été centrifugé, Le liquide surnageant résultant a été soumis à une chromatographie liquide à haute pression; on a trouvé que 18,6 g/l de L-tryptophane avaient été produits dans la liqueur de réaction. TABLEAU 4. Peptone 2% en poids Acides Casamino 1 Extrait de levure 0,5 Liqueur de trempage de mass 5 L-tryptophane 0,2 KH2P04 0,05 MgS04. 7H20 0,05 FeSO4.7H20 0,003 12 2484450 MnS04.4H20 0,003 pH 7.2 TABLEAU 5. Indole 20 g Pyruvate de sodium 20 g Acétate d'ammonium 20 g Phosphate de pyridoxal 100 mg Acide éthylènediaminetétracétique 2 g Eau 1l pH 9,0 A la fin de la réaction, on aejouté 200 mlde soude caustique, à la liqueur de réaction, pour amener son -pH à 10, et ensuite on a centrifugé pour retirer les cellules de micro-organisme et donner un liquide surnageant contenant du L-tryptophane. On a fait passer le liquide surnageant à travers une colonne de résine échangeuse d'ions fortement acide du type ammoniac, et le L-tryptophane adsorbé a été élué avec de l'eau d'ammoniac à 2N. L'éluat a été concentré pour former un cristal de L-tryptophane brut, qui a été lavé avec de l'acétone et séché pour donner 2,8 g d'un cristal de L-tryptophane. Exemple 2. Cnaait fermenter Enterobacter SP. AST 49-4 comme à l'exemple 1, sur un milieu ayant la formule indiquée au tableau 4. A la fin de la fermentation, on a centrifugé un litre de la culture pour récupérer les cellules de micro-organisme, et les cellules ont été mises en suspension dans 200 ml d'une liqueur de réaction ayant un pH de 9,0 et consistant en 2 g d'indole, 3 g de L-sérine, mg de phosphate de pyridoxal, 200 mg d'acide éthylène- diaminetétracétique et 100 ml d'eau. La suspension a été chauffée à 32 C pendant 36 heures tout en agitant pour effectuer une réaction enzymatique. A la fin de la réaction, on a mélangé 10 ml de la suspension à 10 ml de méthanol sous agitation vigoureuse, et le mélange a été centrifugé. Le liquide surnageant résultant a été soumis à une chromatographie liquide à haute pression; on a trouvé que 21,5 g/1 de L-tryptophane avaientété produits dans la liqueur de réaction. Exemle 3. On a fait fermenterEnterobacter SP. AST 49-4 comme à l'exemple 1 sur un milieu ayant la formule indiquée au tableau 4. A la fin de la fermentation, on a centrifugé 2 1 de la culture pour récupérer les cellules de micro- organisme et ces cellules ont été mises en suspension dans 210 ml d'une liqueur de réaction ayant un pH de 9,0 et consistant en 2 g de pyruvate de sodium, 2 g d'acétate d'ammonium, 10 mg de phosphate de pyridoxal, mg d'acide éthylènediaminetétreétique et 100 ml d'eau. La suspension a été subdivisée en sept quantités égales et on a mélangé 30 ml de chaque suspension à 600 mg des composés d'indole indiqués au tableau 6, et chaque mélange a été chauffé à 32 C pendant 60 heures sous agitation pour effectuer une réaction enzymatique. A la fin de la réaction, une analyse des dérivés de Latryptophane produitsa été entreprise par chromatographie liquide à haute pression comme à l'exemple 1. Les dérivés de L-tryptophane correspondant aux composés dqindole utilisés ont été produits, tableau 6. Composé d'indole -hydroxyindole 5-chloroindole -bromoindole -aminoindole méthoxyindole -méthoxy-2- méthylindole 2-méthylindole et leurs quantités sont indiquées au TABLEAU 6 Dérivé de L-tryptophane rnoduit -hydroxytryptophane -chlorotryptophane bromotryptophane -aminotryptophane -méthoxytryptophane -méthoxy-2-méthyltryptophane 2-méthyltryptophane Quantité 3,8 1,9 1,7 2,1 1,2 1,3 2,4 2484450' Exemple 4. On a fait fermenterEnterobacter SP. AST 49-4 comme a l'exemple I sur un milieu ayant la formule indiquée au tableau 4. A la fin de la fermentation, on a centrifugé 2 1 de la culture pour récupérer les cellules de micro- organisme, et les cellules ont été mises en suspoesion dans 210 ml d'une liqueur de réaction ayant un pH de 9,0 et consistant en 1,5 g de L-sérine, 10 mg de phosphate de pyridoxal, 200 mg d'acide éthylènediaminetétracétique et 100 ml d'eau. La suspension a été subdivisée en sept quantités égales et on a mélangé 30 ml de chaque suspension à 600 mg des composés d'indole indiqués au tableau 7, et chaque mélange a été chauffé à 30 C pendant 60 heures tout en agitant pour effectuer une réaction enzymatique. A la fin de la réaction, l'analyse des dérivés de L- tryptophane produitsa été entreprise par chromatographie liquide à haute pression comme à l'exemple 1. Des dérivés de L-tryptophane correspondant aux composés d'indole utilisés ont été produits, et leurs quantités sont indiquées au tableau 7. Composé d'indole -hydroxyindole 5-chloroindole -bromoindole -aminoindole méthoxyindole -méthoxy-2- méthylUidole 2-méthylindole TABLEAU 7.. Dérivé de L-tryptophane produit -hydroxytryptophane -ohlorotryptophane bromotryptophane -aminotryptophane -méthoxytryptophane -méthoxy-2-méthyltryptophane 2-méthyltryptophane Quantité ,2 2,6 2,5 2,7 1,8 3,4 REVENDICATIONS --------------------------- 1. Procédé de production de L-tryptophane ou son dérivé, caractérisé en ce qu'on fait réagir unc omposé d'indole avec de la sérine, ou avec de l'acide pyruvique et/ou son sel et l'ion ammonium, en présence d'une culture ou d'une culture traitée du micro-organisme du genre Enterobacter SP. AST 49-4 désigné sous le No. FEM-P 5543 et déposé à lt'ATCC sous le No. 31901. 2. Procédé selon la revendication 1, caractérisé en ce que le composé d'indole précité est choisi dans le groupe consistant en indole, 5hydroxyindole, 5-chloroindble, -bromoindole, 5-aminoindole, 5=méthoxyindole, 5-méthoxy-2- méthylindole, et 2-méthylindole. 3. Procédé selon l'une quelconque des revendications i ou 2, caractérisé en ce que la réaction précitée est effectuée à une température de 25 à 370C pendant 16 à 96 heures. 4. Culture biologiquement pure d'Enterobacter SP. AST 49-4 ayant la désignation FERM-P 5543 et la dési- - gnation ATCC 31901, caractérisée en ce qu'elle a la capacité de produire du L-tryptophane ou son dérivé à partir d'uncomposé d'indole et de sérine ou à partir d'un composé d'indole, de l'acide pyruvique et/ou son sel, et deltion ammonium, en utilisant des sources assimilables de carbone, d'azote, et de substances organiques ou inorganiques favorisant la croissance du micro-organisme.