Brevet FR2476125A1 — publié le 19810821

Supports pour l'immobilisation de substances biologiques actives et adsorbants sélectifs, électrodes sélectives et colonnes d'analyse utilisant lesdits supports. La nr4sAnte invention concerne des supports pour l'immobilisation de substances qui présentent une activi- té physiologique (ci-après dénommées "substances biologiques actives"), ainsi qu'à des adsorbants sélectifs, des électrodes sélectives et des colonnes de chromatographie qui contiennent ces supports et les substances biologiques actives immobilisées sur ces derniers. L'immobilisation d'une substance biologique active sur un tel support permet de réaliser sur ce ernier une réaction biochimique spécifique dans laquelle la substance biologique active intervient. L'expression "substances biologiques actives" telle qu'elle est utilisée dans la présente demande s'applique à des substances telles que des tissus, des cellules, des enzymes, des antigènes, des anticorps, des complexes immunitaires, des compléments et autres protéines du sérum ou des polysaccharides ou leurs complexes. On sait que la réaction de substances biologiques actives sur un support d'immobilisation permet le dosage quantitatif et sélectif d'une substance réactive en présence de certains anticorps ou antigènes, aussi bien in vivo qu'in vitro, ou la séparation sélective de certaines substances dans le cours d'une réaction chimique, de sorte que ce type de réaction effectuée sur un support possède des applications étendues dans les domaines phusicochimiques et médicaux. Parmi les supports de ce type utilisés couramment antérieurement, on peut citer le verre poreux et des macropolymères tels que le produit commercialisé sous la marque "SEPHAROSE" fabriquée par la Société Pharmacia Fine Chemicals, Suède), des billes de polystyrène et des matières analogues dans lesquelles on a introduit des groupes fonctionnels capables de se lier à des molécules d'une substance biologique active. Toutefois, les applications de ces supports se sont trouvées limitées car ils n'ont pas une spécificité suffisante pour refouler toutes les substances autres que la substance biologique active visée. Ainsi, lorsqu'on tente d'introduire dans une telle matière de support des groupes fonctionnels et qu'on provoque la fixation de la substance biologique active visée sur le support, la matière qui n'a pas réagi est l'objet d'une adsorption non spécifique et n'est pas totalement éliminée mais reste sur le support. Par ailleurs, lorsqu'on provoque une réaction entre une telle substance biologique active immobilisée et une solution (y compris des liquides physiologiques tels que le sang, le plasma, le sérum, l'urine) d'une autre substance (par exemple le substrat dans le cas d'une réaction enzymatique ou l'antigène ou l'anticorps dans une réaction immunologique), il se produit inévitablement une adsorption non spécifique de substances autres que les substances visées, avec diminution concomitante de la spécificité de la réaction. Dans le cas particulier o la substance biologique active immobilisée est utilisée dans des applications thérapeutiques, la matière qui n'a pas réagi est transportée dans l'organisme en tant que substance hétérologue, les facteurs de coagulation et plaquettes du sang sont adsorbés, provoquant la formation de caillots ou l'activation du système des lymphocytes, au point que ce type de réaction n'a pas pu être mis en application dans la pratique clinique. L'invention concerne en premier lieu un support pour l'immobilisation de substances biologiques actives pour lequel l'adsorption non spécifique est réduite au minimum et qui permet donc de remédier aux inconvénients décrits ci-dessus. L'invention a pour objet 1) un support pour l'immobilisation de substances biologiques actives qui comprend un support de base revêtu d'un copolymère de a) un monomère acrylique ou méthacrylique hydrophile répondant à la formule générale CH2 = C(R)CO2R2OR3 H2 R1 C2 2 3 dans laquelle R1 représente l'hydrogène ou un groupe méthyle; R2 représente un radical alcoylène divalent de 2 ou 3 atomes de carbone éventuellement substitué par des groupes alcoyles inférieurs, OH, NH2 ou analogues, ou un groupe poly-(oxyalcoylène) dont le motif répété est un groupe oxyalcoylène ayant 2 ou 3 atomes de carbone, le nombre de ces motifs répétés ne dépassant pas 30; R3 représente un atome d'hydrogène ou un groupe alcoyle ayant 2 ou 3 atomes de carbone portant éventuellement des substituants polaires tels que OH, NH2 et analogues, et b) un acide carboxylique insaturé copolymérisable répondant à la formule générale CH2 = C(R1)CO2H dans laquelle R1 représente un atome d'hydrogène ou un groupe méthyle, ou bien c) une amine insaturée copolymérisable de formule générale CH2 = C(R1)CO2R2NHR3 dans laquelle R1 représente l'hydrogène ou un groupe méthyle; R2 représente un radical alcoylène divalent de.2 ou 3 atomes de carbone et R3 représente l'hydrogèhe ou un groupe alcoyle de 1 à 3 atomes de carbone, ce composant copolymérisable étant présent en proportions d'environ 1 à 50% en poids par rapport au poids total des monomères; 2) un adsorbant sélectif ou une électrode sélective comprenant le support ci-dessus et une substance biologique active immobilisée sur ce dernier, et 3) une colonne d'analyse comprenant ledit support et une substance biologique active immobilisée sur ce dernier. Le monomère acrylique ou méthacrylique hydro- phile de formule générale CH2 = C(R1)CO2R20R3 utilisé conformément à l'invention peut consister, entre autres, en acrylate de bêta-hydroxyéthyle, acrylate de gamma-hydroxypropyle, acrylate de bêta-alcoxyéthyl, acrylate de gamma-alcoxypropyle, acrylate d'am-inoalcoxy- éthyle, acrylate d'aminoalcoxypropyle, acrylate d'hydroxy- alcoxyéthyle et en monomères analogues, ou en les métha- crylates correspondants. L'acide carboxylique insaturé de formule générale CH2 = C(R1)CO2H est l'acide acrylique ou l'acide méthacrylique. L'amine insaturée de formule générale CH2 = C(R1)CO2R2NHR3 peut consister par exemple en acrylate d'aminoéthyl, acrylate d'aminopropyle, acrylate de monoalcoylamino- éthyle, acrylate de monoalcoylaminopropyle ou en un monomère analogue, ou en les méthacrylates correspondants. Le rapport de copolymérisation de l'acide carboxylique insaturé ou de l'amine peut représenter de 1 à 50% en poids, par rapport au poids total des monomeres; il est de préférence d'environ 10 à 40% en poids Le support de base sur lequel on applique le copolymère ci-dessus en revêtement peut consister en l'une quelconque des matières variées qu'on choisit selon l'application prévue mais qui, d'une manière générale, comprennent des matières minérales telles que le verre, 5. le charbon actif, la silice, l'alumine et les matières analogues, les macropolymères de synthèse tels que le polystyrène, le polyéthylène, le chlorure de polyvinyle, le Nylon, les polyesters, le polyméthacrylate de méthyle et les matières analogues, ou encore des macropolymères d'origine naturelle comme la cellulose. Ces matières sont avantageusement utilisées sous la forme de grains, de toiles, de feuilles, de tubes, d'électrodes et sous des formes analogues. De préférence, ces matières de base sont utilisées sélectivement en fonction des applications prévues. Ainsi par exemple, si l'application finale consiste en un adsorbant clinique sélectif, la matière de base est de préférence sous la forme de grains à un diamètre individuel de 0,05 à 5 mm. Les billes de verre conviennent tout sépcialement car elles résistent à la rupture par frottement lors de l'utilisation et on ne risque pas que des fragments pénètrent dans le sang ou soient dissous dans le sang et transportés dans l'organisme. Lorsque l'application finale prévue consiste en un adsorbant pour la chromatographie d'affinité ou en une colonne pour l'analyse chromatographique, la matière de base est de préférence sous la forme de grains ou sous la forme d'un tube de verre ou de résine synthétique. Si la matière de base est une électrode, le support peut être utilisé pour le dosage quantitatif de substances spécifiques par des réactions faisant intervenir des substances biologiques actives telles que des antigènes, des anticorps, des compléments, des enzymes et des substances analogues. En outre, pour les matières de base particulaires, on préfère les matières poreuses à forte surface spécifique parce qu'elles permettent d'immobiliser une grande quantité de substances biologiques actives par unité de poids. Parmi les substances biologiques actives qu'on peut immobiliser sur le support selon l'invention, on peut citer des tissus biologiques, des cellules, des antigènes, des anticorps, des complexes antigène- antiçorps, des compléments, des enzymes et des substances analogues. Parmi les antigènes, on citera les protéines du sang telles que l'albumine, les immunoglobulines et les protéines analogues, des acides nucléiques comme 1'ADN; l'ARN et les acides analogues, les protéines produites par des bactéries comme la Protéine A, et des polysaccharides extracellulaires bactériens. Les anti- corps sont les divers anticorps correspondant aux antigènes qu'on vient de citer. Parmi les compléments utilisables, on citera tous les compléments ayant de 1 à 9 atomes de carbone et parmi les récepteurs on citera le récepteur Fc, le récepteur de l'acétylcholine et divers récepteurs d'hormones. Les enzymes peuvent consis- ter en acétylcholine-estérase, alcool-déshydrogénase, phosphatase alcaline, aminopeptidase, alpha-amylase, aspartate-aminotransférase, catalas%, cellulase, cholestérol-estérase, alpha-chymotrypsine, désoxyribonu- cléase, glucose-oxydase, L-glutamate-décarboxylase, lactatedéshydrogénase, lipase, lysozyme, nucléase, pepsine, peroxydase, protéase, ribonucléase, ligase, trypsine, uréase et enzymes analogues. On peut préparer le support pour immobiliser les substances biologiques actives selon l'invention de la manière suivante: on prépare d'abord une solution du copolymère par la technique habituelle de polymérisation en solution à partir du monomère acrylique ou méthacryli- que hydrophile mentionné ci-dessus et de l'acide carboxylique insaturé ou de l'amine insaturée copolyméri- sable également décrits ci-dessus, et on applique cette solution de copolymère en revêtement à la surface de la matière de base par une technique classique d'enduction ou de dép8t telle que la pulvérisation, l'immersion, la séparation de phase ou une technique analogue. On peut également préparer cette solution de copolymère avec adjonction d'une petite quantité d'un monomère contenant des groupes époxy comme l'acrylate de glycidyle, le méthacrylate de glycidyle ou un monomère analogue, en tant que composant copolymérisable, ou ajouter un tel composant copolymère à la solution du copolymère. Dans les deux cas, un traitement de réticulation effectué après-le revêtement empêchera une élution à partir de -la couche déposée. Lorsque la matière de base a été revêtue de la manière décrite ci-dessus, elle est recouverte d'une surface hydrophile portant des groupes carboxyles ou amino et on peut alors immobiliser des substances biologiques actives, soit directement sur ces groupes carboxyles ou amino, soit par l'intermédiaire d'autres groupes à poids moléculaire relativement bas. Dans le premier cas, c'est-à-dire le couplage direct, on peut combiner les groupes amino et carboxyles du support et - les substances biologiques actives par une condensation en présence d'un agent de condensation tel que le dicyclohexylcarbodiimide (DCC), le chlorhydrate du 1-éthyl-3-(3-diméthylaminopropyl)-carbodiimide (EDC) ou un agent analogue. Cependant, on peut aussi transformer chacun des groupes carboxyles du support en un ester ACTIF de N-hydroxysuccinimide et introduire ensuite la substance biologique active par substitution. L'ester actif en question est relativement stable et par conséquent, on peut le conserver. Dans le cas du couplage indirect, on peut fixer de l'acide i -amino- caproique sur les groupes carboxyles et immobiliser la substance biologique active par l'acide carboxylique terminal en utilisant la technique à l'ester actif décrite ci-dessus. On peut encore combiner du diamino- heptane avec le groupe carboxyle puis coupler le groupe amino terminal et une substance biologique active à l'aide du glutaraldéhyde ou d'un carbodiitide.. On peut encore coupler les groupes amino du support à la substance biologique active à l'aide du glutaraldéhyde. Après immobilisation de la substance biologique active, on peut éliminer facilement les matières qui n'ont pas réagi en lavant avec une solution tampon; l'efficacité du lavage peut-être confirmée par l'examen du spectre ultraviolet ou par une réaction colorée effectuée sur les lavages. Une application importante du support pour immobilisation de substances biologiques actives obtenu comme décrit ci-dessus réside dans l'utilisation en tant qu'adsorbant sélectif clinique ou thérapeutique.. Pour cette application, les substances biologiques actives utilisables comprennent les antigènes, les anticorps, les enzymes, les compléments et les substances analogues. Naturellement, on choisit une substance convenant pour la maladie à traiter. Ainsi par exemple, les agents causant des maladies autoimmunitaires tels que l'anémie hémolytique auto-immunitaire, la glomérulonéphrite, l'arthrite rhumatoide chronique, le lupus érythémateux systémique et les maladies analogues, sont des auto- anticorps ou complexes immunitaires qu'il faut éliminer du système circulatoire. Pour éliminer ces auto- anticorps et complexes immunitaires, on immobilise sur le support la protéine A produite par certaines souches de Staphylococus aureus, les récepteurs Fc existant dans les parois cellulaires des lymphocytes et des plaquettes, le composant C 1 du complément, les anticorps anti- immunoglobulines et des substances analogues qui fixent de manière spécifique les agents causant la maladie et dont il a été question cidessus et on utilise le support comme adsorbant sélectif thérapeutique. Chez les patients souffrant de déficience rénale parce que l'urée du sang n'est pas métabolisée mais s'accumule, on peut utiliser comme adsorbant thérapeutique sélectif un support sur lequel on a immobilisé de l'uréase, l'enzyme capable de décomposer l'urée. Chez les cancéreux, on a pu montrer que plusieurs facteurs immunosuppressifs agissant contre les cellules tumorales existaient dans le sang; comme ces facteurs immunosuppressifs existent dans la fraction des anticorps et la fraction des 2476 125 protéines antigènes à un intervalle de poids moléculaires de 10.000 à 100.000, on immobilise les anti- corps à ces antigènes, la Protéine A, les récepteurs Fc des parois cellulaires et les anticorps anti-immunoglo- bulines sur le support et on les utilise comme adsorbants thérapeutiques sélectifs. Si, dans un tel adsorbant thérapeutique, il se produit une adsorption non spécifique de protéines, les substances biologiques actives immobilisées sont non seulement celles qui sont immobilisées par des liaisons covalentes mais celles qui sont adsorbées physiquement et lorsque l'adsorbant entre ensuite en contact avec le sang ou le plasma par exemple, il y a désorption des substarnces adsorbées physiquement qui sont transportées dans l'organisme o elles agissent comme antigènes, provoquant des réactions immunologiques. L'utilisation répétée d'un tel adsorbant est dangereuse parce qu'elle peut conduire a un choc anaphylactique. Par contre, l'adsorbant thérapeutique sélectif selon l'invention ne pose pas de problèmes parce que le copolymère recou- vrant la matière de base empêche toute adsorption non spécifique de protéines. En outre, avec l'adsorbant thérapeutique sélectif selon l'invention, l'adsorption se produit avec une très forte sélectivité de sorte que l'adsorption simultanée de composants utiles du sang ou du plasma est exclue avec succès. Une autre application du support pour immobili- sation selon l'invention réside dans l'utilisation en tant qu'adsorbant pour chromatographie d'affinité, à utiliser pour la séparation et la purification de protéines, d'acides nucléiques, de polysaccharides, d'hormones, de vitamines, de cellules et de substances analogues. Pour cesxapplications, la substance biologique active à immobiliser est choisie en fonction de la nature de la substance à purifier. Ainsi, par exemple, si l'on cherche à séparer les cellules T des cellules B ou inversement, on recueille d'abord les lymphocytes du sang par une 2 4 7 6 12 5 technique classique telle que la centrifugation à gradient de densité. On met ensuite une suspension de la fraction des lymphocytes en contact avec un adsorbant pour chromatographie d'affinité portant des anticorps anti- immunoglobulines immobilisés sur la matière de base; il y a alors adsorption sélect-ive des cellules B sur l'adsorbant, cependant que les cellules T en émergent. Les cellules B adsorbées sont désorbées à l'aide d'une solution d'immunoglobuline. Par ailleurs, si l'on met en contact un antisérum ou une solution contenant une hormone ou une vitamine avec un adsorbant pour chromato- graphie d'affinité selon l'invention sur lequel on a immo- bilisé de l'albumine ou de l'immunoglobuline ou un anti- corps ou récepteur de l'hormone ou de la vitamine, il y a adsorption sélective sur l'adsorbant de l'anticorps anti-albumine ou de l'anticorps anti-immunoglobuline ou de l'antisérum ou de l'hormone ou de la vitamine. La substance recherchée peut alors être éluée à l'aide d'une solution tampon à un pH autre que le pH phy-isiologi- que, à l'aide d'une solution saline concentrée ou à l'aide d'une solution d'agent tensio-actif. S'il se produit une adsorption non spécifique sur l'adsorbant pour chromatographie d'affinité, il y a adsorption de substances autres que la substance voulue, et ces substances sont également éluées avec la substance recherchée, de sorte que l'opération de purification échoue. Cependant, l'adsorbant pour chromatographie d'affinité selon l'invention ne donne pas lieu a adsorption non spécifique et, par conséquent, à l'intro- ducti'n d'impuretés dans l'éluat, de sorte qu'il permet un haut degré de purification. Une autre application du support pour immobili- sation selon l'invention réside dans l'utilisation en tant qu'électrode sélective comprenant une électrode métallique, par exemple une électrode de noir de platine, de cuivre ou une électrode analogue, une électrode de verre à pH, un élément sensible FET constitué de nitrure de silicium ou d'une matière analogue en tant que matière de base portant, immobilisé sur sa surface, une enzyme, un antigène, un anticorps, un complément ou une substance analogue. Ainsi, lorsque la substance biologique active immobilisée à la surface d'une telle électrode réagit avec la substance à déceler, il y a production d'un courant électrique dans l'électrode ou variation du potentiel électrique autour de l'électrode, ce qui permet de détecter sélectivement la substance spécifique réactive à l'égard de la substance biologique active. Ainsi par exemple, avec une électrode sélective obtenue par immobilisation d'uréase à la surface d'une électrode à pH en verre, on peut doser l'urée dans un échantillon parce que l'uréase convertit l'urée en ammoniaque qui excite l'électrode à pH. Avec une électrode obtenue par immobilisation d'un antigène tel que l'ADN ou l'albumine ou d'un anticorps tel qu'un anticorps anti-immunoglobuline à la surface d'un élément sensible FET au pH, on peut déceler sélectivement un anticorps tel que l'anticorps anti-ADN, l'anticorps anti-albumine ou un anticorps analogue, ou un antigène tel que l'immunoglobuline. Si, dans une telle opération, il se produit une adsorption non spécifique de protéines ou de substances analogues sur l'électrode, il se produit une impulsion ou un bruit parce que l'adsorption sur la surface de l'électrode des substances autres que la substance visée provoque également une variation de potentiel ou d'intensité. L'impulsion ou le bruit gêne une détermination stable et fidèle. Avec l'électrode sélective selon l'invention, on ne constate pas d'adsorption non spécifique de protéines ou substances analogues, de sorte qu'on peut procéder à des déterminations stables et reproductibles. Une autre application pour le support à immobilisation selon l'invention réside dans une colonne pour analyse, spécialement une colonne permettant l'analyse continue d'échantillons multiples dans de courtes durées. La colonne peut consister en une colonne de verre, d'un polymère organique ou de métal garnie de grains ou de billes de verre ou d'un polymère organique ou en une colonne dont la paroi intérieure sert de support pour une substance biologique active. Les substances biologiques actives utilisées dans cette application sont choisies parmi les antigènes, les anti- corps, les compléments et les enzymes selon l'application prévue. Ainsi par exemple, on peut préparer une colonne pour analyse en garnissant la moitié d'une colonne de verre du c8té de l'entrée de la colonne, par le support selon l'invention comprenant des billes de verre sur lesquelles on a immobilisé de la glucose-oxydase et l'autre moitié par un support analogue sur lequel on a immobilisé de la peroxydase.; lorsqu'on fait passer dans cette colonne un échantillon contenant du glucose, la glucoseoxydase décompose le glucose en acide gluconique et peroxyde d'hydrogène. La peroxydase réagit ensuite quantitativement avec le peroxyde d'hydrogène, provoquant la copulation par oxydation du phénol et de la 4-amino- antipyrine, avec formation d'un colorant rouge. Pour estimer la concentration du glucose dans l'échantillon, on mesure l'absorption à 505 nm dans la cellule à écoulement d'un spectrophotomètre. Si on immobilise sur la colonne d'analyse selon l'invention l'anticorps d'une alphafétoprotéine trouvée dans le sang de cancéreux et qu'on fait passer un échantillon de plasma ou de sérum dans la colonne, seule l'alphafétoprotéine est retenue dans la colonne. Si, après lavage de.la colonne, on introduit dans cette dernière le produit de conjugaison covalent dé l'anticorps à l'alpha-fétoprotéine et de la peroxydase, la colonne retient la quantité de peroxydase correspondant à la quantité d'alpha-fétoprotéine retenue. On lave la colonne pour en éliminer la peroxydase non retenue et on fait passer ensuite un mélange réactif de phénol et de 4-aminoantipyrine; il y a alors formation d'un colorant rouge en quantité correspondant à la quantité de peroxydase. Pour estimer la concentration d'alphafétoprotéine dans l'échantillon, on mesure alors l'absorption à 505 nm au spectrophotomètre. Après cette détermination, il suffit de laver l'adsorbant à l'aide d'une solution d'agent tensio-actif ou d'une solution saline concentrée pour désorber l'alpha-fétoprotéine, l'oxydase et les autres substances retenues, et la colonne est alors prête pour l'analyse d'un nouvel échantillon. Si par contre, il se produit dans la colonne d'analyse une adsorption non spécifique de protéines ou autres substances, la substance biologique active immobilisée est recouverte des substances adsorbées et n'est plus suffisamment réactive, ou bien encore les protéines et autres substances adsorbantes provoquent des réactions qui gênent la réaction voulue avec l'échantillon ou qui gênent les déterminations colorimé- triques. Ces phénomènes conduisent à des analyses inexactes et écourtent la durée de service de la colonne d'analyse. Cependant, la colonne d'analyse selon l'invention ne donne pas lieu à l'adsorption non spéci- fique de protéines ou autres substances et permet donc des analyses stables pendant de nombreuses heures. Les exemples suivants illustrent l'invention sans-toutefois la limiter; dans ces exemples, les indications de parties et de % s'entendent en poids sauf mention contraire. On immerge le produit désigné dans le commerce sous le nom AMBERLITE XAD7 adsorbant poreux à base de méthacrylate, fabriqué par la firme Rohm and Haas Co.,Ltd dans une solution à 0,5% dans l'éthanol aqueux d'un copolymère de 20% d'acide méthacrylique, 79,5% de méthacrylate d'hydroxyéthyle et 0,5% de méthacrylate de glycidyle et, après séchage, on provoque une réaction de durcissement en 2 heures à 120C. L'examen des résul- tats rapportés dans les tableaux I et II ci-après montre que si l'Amberlite XAD-7 non revêtue adsorbe des quantités appréciables de sérum-albumine de bovins et de sérum- gamma-globuline de bovins, l'Amberlite XAD-7 revêtue comme décrit cidessus n'adsorbe pratiquement pas ces deux protéines. TABLEAU 1 S Adsorption de la sérum-albumine de bovins, à 37 C, ml de sérum physiologique tamponné au phosphate/ 1 g d'Amberlite XAD-7 sèche. Concentration d'albumine dans le liquide surnaceant (q/dl) Concentration au bout de 2 heures initiale XAD-7 non revêtue 1,5 0,5 XAD-7 revêtue 1,8 1,7 TABLEAU 2 Adsorption de la gamma-globuline de bovins (mêmes conditions que pour lé tableau 1) Concentration de gamrma-globuline dans le liquide surnageant (q/dl) Concentration au bout de 2 heures initiale __ - XAD-7 non revêtue 1,5 0,9 XAD-7 1,-5 1,5 revêtue On a fait réagir l'Amberlite XAD-7 revêtue avec le Nhydroxysuccinimide dans le dioxanne, formant ainsi l'ester actif; on a ensuite fait réagir avec de 1'uréase dans du tampon phosphaté pour l'immobilisation. L'uréase a été-immobilisée sans perdre son activité enzymatique; le produit obtenu présente l'activité uréasique indiquée dans le tableau III ci-après. La surface spécifique BET de la résine XAD-7 non revêtue est de 480 m2/g et celle de la résine XAD-7 revêtue est de 410 m2/g, ce qui ne représente qu'une petite diminution de surface. TABLEAU 3 Activité uréasique à 37"C Concentration de l'urée, mq/dl Concentration au bout de _initiale 2 heures Amberlite XAD-7 (ex. 1) 50 14 support CPG-10700 85 24 (ex. 2) Exemple 2.- On traite le verre poreux du commerce CPG-10-700 de la firme Electro-Nucleonics, Inc., par le 3-aminopro- pyltriéthoxysilane puis on applique en revêtement le même copolymère que dans l'exemple 1. Les résultats rapportés dans les tableaux IV et V ciaprès montrent que si le verre CPG-10-700 non revêtu adsorbe des quantités appréciables de sérum-albumine de bovins et de gamma- globuline de bovins, le même verre revêtu n'adsorbe pratiquement pas ces protéines. Lorsqu'on immobilise sur ce support de l'uréase comme décrit dans l'exemple 1, il n'y a pratiquement pas de diminution de l'activité uréasique: voir tableau 3 ci-dessus. TABLEAU 4 Adsorption de la sérum-albumine de bovins (mêmes conditions que pour le tableau 1) Concentration de l'albumine dans le liquide surnageant, q/dl Concentration au bout de _ initiale 2 heures support CPG-10- 700 non revêtu 1,8 1,0 support CPG-10- 700 revêtu 1,8 2,0 La surface spécifique BET et le volume de pores du verre CPG-10-700 non revêtu sont respectivement de 37 m2/g et 1,25 cm3/g;les valeurs correspondantes pour le même verre revêtu sont de 32 m /g et 1,11 cm3/g. Ainsi donc, la diminution de porosité est négligeable. Exemple 3.- On immerge des billes de verre de 0,2 à 0,6 mm de diamètre dans de l'acide fluorhydrique à 50%, à température ambiante pendant 1 heure, puis on traite à C pendant l heure dans une solution 10 M de NaOH. On applique ensuite sur les billes de verre, en pulvéri- sation, une solution éthanolique à 0,5% d'un copolymère de 79% de méthacrylate d'hydroxyéthyle, 20% d'acide méthacrylique et 1% de méthacrylate de glycidyle. Le poids de copolymère déposé représente environ 0,5% du poids des billes de verre. On obtient ainsi un support pour l'immobilisation de substances biologiques actives, qui n'absorbe ni la sérum-albumine de bovins ni la gamma- globuline de bovins. On active 20 g de ce support comme décrit dans l'exemple 1 et on immobilise 50 mg de sérum-albumine de bovins sur ce support. On garnit une colonne de ce support et on fait circuler dans la colonne, au débit de 6,2 ml/mn, un échantillon de 20 ml de plasma canin ACD contenant environ 6,9 mg de l'anticorps anti-sérum- albumine de bovins (de la firme Miles Laboratories, Inc.). Avant cette circulation, le plasma donnait des précipités avec des slutions de sérum-albumine de bovins à 20 mg/dl dans du sérum physiologique tamponné au phosphate; après 2 heures de circulation, le plasma ne donne plus ces précipités. Ainsi donc, le support sur lequel on a immobilisé conformément à l'invention de la sérum- albumine de bovins permet d'adsorber et d liminer correctement l'anticorps anti-sérum-albumine de bovins contenu dans le plasma canin. Exemple 4.- On garnit une colonne de 15 g d'un support sur lequel on a immobilisé, comme décrit dans l'exemple 3, environ 2,3 mg d'anticorps anti-sérumalbumine de bovins et on fait circuler dans la colonne 10 ml de sérum physiologique tamponné au phosphate contenant 2,2 mg de sérum-albumine de bovins. Alors qu'une dilution au quart de la solution, avant circulation, forme des précipités avec une solution aqueuse à 46 mg/dl d'anticorps antisérum-albumine de bovins, une dilution au quart de la solution après 1 heure de circulation ne donne plus ces précipités. Ainsi donc, le support sur lequel on a immobilisé conformément à l'invention l'anti-sérumalbumine de bovins permet d'adsorber et de séparer correctement la sérumalbumine de bovins contenue dans la solution. En opérant comme décrit dans l'exemple 3, on couple un anticorps antisérum-albumine de bovins (lapin, Miles Laboratories, Inc.) avec le produit du commerce Amberlite XAD-4, une résine de styrène poreuse de la firme Rohm and Haas Co., Ltd., obtenant ainsi un adsorbant pour la chromatographie d'affinité. On introduit 15 g de cet adsorbant dans une colonne de polpropylène équipée d'une grille de support aux deux extr6mités. Après avoir lavé la colonne avec soin avec du sérum physiologique tamponné au phosphate, (STP, pH 7,4), on fait passer dans la colonne 100 ml d'une solution contenant 5 mg/dl de sérum-albumine de bovins (de la firme Sigma Chemicals, Fraction V) et 5 mg/dl de sérumgamma-globuline de bovins (Sigma Chemicals, Fraction II). On lave la colonne avec le STP puis on fait passer 100 ml d'une solution thiocyanate de potassium 3M/STP. On dialyse l'éluat contre le STP à 4"C pendant 24 heures. On mesure la concentration totale en protéines de cette solution par la méthode au biuret et la concentration en albumine par la méthode au vert de bromocrésol, ce qui permet de déterminer la pureté de l'albumine et la quantité récupérée en % de la quantité initiale. Les résultats obtenus sont les suivants: protéines totales: 2,0 g; albumine: 2,0 mg; pureté de l'albumine: 100%, albumine récupérée: 40%. Exemple 6.- On immerge une électrode de verre à pH (de la firme Hitachi-Horiba) dans une solution éthanolique à % du copolymère de 79% de méthacrylate d'hydroxyéthyle, 20% d'acide méthacrylique et 1% de méthacrylate de glycidyle puis on sèche dans un courant d'air chaud. On répète trois fois au total cette opération. Sur le support revêtu, on immobilise ensuite, dans du tampon phosphaté, de l'uréase en présence de chlorhydrate du 1-éthyl-3-(3-diméthylaminopropyl)-carbodiimide; on obtient ainsi une électrode permettant de déceler l'urée. On relie cette électrode à un pH-mètre Hitachi-Horiba F-S et on procède à des observations sur des solutions d'urée et une solution ne contenant pas d'urée. On constate que la solution d'urée présente un pH qui augmente pratique- ment proportionnellement à la concentration de l'urée. Ces résultats montrent que l'électrode permet le dosage continu de l'urée. Exemple 7.- On traite 1 g de la résine Amberlite YAD-7 reve- tue comme décrit dans l'exemple 1 par de la glucose- oxydase (Miles Laboratories, Inc., activité 25 U/mg) dans du tampon phosphaté (à pH 7,4); on traite par ailleurs 1 g de la même résine par de la peroxydase (Miles Laboratories, de raifort, activité 100 U/mg). On prépare une colonne de chromatographie en introduisant en séries ces deux enzymes immobilisées dans une colonne de verre de diamètre intérieur de 6 mm. L'extrémité de sortie de la colonne, du côté de laquelle se trouve la peroxydase, est reliée à la cellule à écoulement d'un spectrophotomètre Hitachi 220. Lorsqu'on introduit à l'autre extrémité de la colonne (du côté o se trouve la glucose-oxydase) une solution contenant du glucose, il y a augmentation de l'absorption à 505 nm. Cette augmenta- tion d'absorption est proportionnelle à la concentration en glucose de la solution. La colonne d'analyse peut donc être utilisée pour un dosage quantitatif du glucose. REVENDICATIONS 1. Support pour l'immobilisation de substances biologiques actives comprenant une matière de base revêtue d'un copolymère de a) un monomère acrylique ou méthacrylique hydrophile de formule générale CH2=(R1) CO2R20R3 dans laquelle R1 représente l'hydrogène ou un groupe méthyle, R2 représente un radical alcoylène divalent de 2 à 3 atomes de carbone substitués ou non ou un radical poly(oxyalcoylène) R3 représente un atome d'hydrogène ou un radical alcoyle de 1 à 3 atomes de carbone qui peut éventuellement porter des substituants polaires, et b) un acide carboxylique insaturé copolymérisable de formule générale CH2= C(R1)CO2H dans laquelle R1 représente l'hydrogène ou un-groupe méthyle, ou bien c) une amine insaturée copolymérisée de formule générale CH2 C(R1)CO2R2NHR3 dans laquelle R1 représente l'hydrogène ou un groupe méthyle, R2 représente un radical alcoylène divalent de 2 à 3 atomes de carbone et R3 représente l'hydrogène ou un radical alcoyle de 1 à 3 atomes de carbone, ledit composant copolymérisable étant présent en proportions d'environ 1 à 50% du poids des monomères totaux. 2. Support pour l'immobilisation de substances biologiques actives selon la revendication 1, caractérisé en ce que la matière de base est choisie dans le groupe formé par le verre, le charbon actif, la silice, l'alumine et les composés organiques à haut poids moléculaire et eri ce que ladite matière de base est utilisée sous la forme de grains, de billes, de tissus, de feuilles ou de tubes. 3. Support pour l'immobilisation de substances biologiques actives selon la revendication 1, caractérisé en ce que la matière de base est un verre poreux ou non poreux en particules de diamètre allant de 0,05 à 5 mm. 4. Support pour l'immobilisation de substances biologiques actives selon la revendication 1, caractérisé en ce que le copolymère contient en outre un-monomère portant des groupes époxy en quantité suffisante pour permettre une réticulation du revêtement du copolymère lors du durcissement subséquent. 5. Support pour l'immobilisation de substances biologiques actives selon la revendication 1, caractérisé en ce que le composant copolymérisable est - présent dans le copolymère en proportions d'environ 10 à 40% en poids. 6. Adsorbant sélectif clinique comprenant une substance biologique active immobilisée sur une matière de base revêtue d'un copolym*ère selon la revendication 1. 1S 7. Adsorbant sélectif clinique selon la revendication 6, caractérisé en ce que la matière de base est un verre poreux ou non poreux en particules dont le diamètre va de 0,05 à 5 mm. 8. Adsorbant sélectif clinique selon la revendication 6, caractérisé en ce que la substance biologique active est choisie dans le groupe formé par les antigènes, les anticorps, les compléments, les récepteurs et les enzymes. 9. Adsorbant sélectif clinique selon la revendication 6, caractérisé en ce que la substance biologique active est choisie dans le groupe forme par la Protéine A, le récepteur Fc des parois cellulaires, le composant Cl du complément, un anticorps anti- immunoglobuline et l'immunoglobuline. 10. Adsorbant pour la chromatographie d'affinité comprenant un antigène, un anticorps, un complément ou une enzyme immobilisé sur une matière de base en particules ou tubulaire revêtue d'un copolymère selon la revendication 1. Il. Adsorbant pour chromatographie d'affinité selon la revendication 10, caractérisé en ce que la matière enparticules consiste en billes de verre ou d'un.composé organique à haut poids moléculaire, à une dimension de particules de 0,05 à 5 mm selon la revendication 1. 12. Adsorbant pour chromatographie d'affinité selon la revendication 10, caractérisé en ce que la matière tubulaire est un tube de verre ou d'un polymère organique. 13. Electrode sélective portant sur sa surface un revêtement d'un copolymère selon la revendication 1 et un antigène, un anticorps, un complément ou une enzyme immobilisé sur la.urface revêtue. 14. Colonne pour analyse dont une partie ou la totalité comprend une surface formée de billes ou d'un tube de verre ou d'un polymère organique portant en revêtement un copolymère selon la revendication 1 et, sur la surface revêtue, un antigène, un anti-corps, un complément ou une enzyme, immobilisé.