Brevet FR2480603A1 — publié le 19811023

t400603 La présente invention concerne une composition pharmaceutique pour administration par voie orale et contenant la cytidine- diphosphocholine (qu'on abrégera ci-après CDP-choline). Plus particulièrement, l'invention concerne une telle composition pharmaceutique pour administration par voie orale qui contient la CDP- choline en association avec des substances du groupe des phospholipides. A ce jour, la cytidine-diphosphocholine est utilisée pour le traitement de certaines maladies pathologiques chez l'homme. Plus précisément, les indications thérapeutiques de la CDP-choline concernent essentiellement les pertes totales ou partielles de-la conscience à la suite des traumatis- mes craniens ou d'affections endogènes telles que, par exemple, des hémorragies,,des thromboses cérébrales, des cérébropathies dues à l'athé- rosclérose. La CDP-choline se révèle également utile pour le traitement de la maladie de Parkinson et des syndromes analogues au parkinsonisme. Pour expliquer l'action thérapeutique de la CDP-cholineon doit prendre en considération le fait que cette substance est un précurseur dans la biosynthèse des phospholipides. A cet égard, la capacité biochimique de la CDP-choline est bien reconnue des spécialistes. Chez l'homme on admi- nistre la CDP-choline à une dose journalière de 100 à 1000 mg. Le mode le plus usuel d'administration est la voie parentérale, sous forme d'une solution aqueuse contenant de 5 à 25 % (pds/vol.) de l'ingrédient actif. En tous cas, les compositions pharmaceutiques contenant la CDP- choline utilisées à l'heure actuelle ne conviennent pas pour une administration par voie orale. Il en est aini par suite d'une aptitude médiocre à l'absorption du composé tel quel et de la facilité avec laquelle il peut être dégradé dans l'appareil gastro-intestinal par les enzymes présentes dans cet appareil. Il va sans dire que l'absence des compositions administrables par voie orale et contenant de la CDP-choline constitue une limitation importante de l'emploi en thérapeutique du composé lui-même. En conséquence, l'invention a pour but de fournir une composition pharmaceutique contenant la CDP- choline ou un sel de cette dernière à titre d'ingrédient actif, composition qui permet de surmonter les inconvénients mentionnés. Pour réaliser cet objectif, l'invention fournit une composition pharmaceutique contenant la CDP-choline ou un sel de cette dernière en association chimico-physique ou en combinaison moléculaire avec une substance du groupe des phospholipides, comme par exemple les lécitines. On prépare, de préférence, l'association en mélangeant une solution qui contient la CDP-choline ou un sel de cette dernière avec des phospholi- pides à l'état solide ou sous forme d'émulsions ou de solutions. Pour amélio- rer la stabilité de la composition, on peut aussi incorporer avantageusement des matières protéiniques et des agents de réticulation. En ce qui concerne le rapport CDP-choline/phospholipides, il varie avantageusement entre 1: 20 et I: 0,5 (pds/pds). Comme on le verra dans les exemples ci-après (exemples qui servent à illustrer l'invention sans aucunement en limiter la portée), les nouvelles compositions pharmaceutiques sont dotées d'avantages remarquables par rapport aux solutions aqueuses usuelles de la CDP-choline qu'on utilisait couramment en thérapeutique jusqu'à présent. En fait, on constate un renforcement certain de l'effet thérapeutique de la CDP- choline, sans parler de la possibilité de l'administrer par voie orale. Tous ces facteurs ressortent à la lecture des exemples suivants dans lesquels on étudie les compositions pharmaceutiques contenant la CDPcholine marquée au 14C. EXEMPLE I Préparation de la CDP-chbline en association avec des phospholipides On obtient l'association de la CDP-choline avec des phospholipides par des procédés qui permettent d'obtenir une composition homogène du point de vue chimico-physique et qui convient pour administration par voie orale. Le procédéde préparation peut être par exemple comme suit: on dissout g de sel de sodium de la CDP-choline dans 100 ml d'eau. Séparément, dans un récipient muni d'un agitateur, on prépare 400 g de phospholipides végétaux en granules. On agite de façon uniforme lesdits granules de phospholipides et, tout en poumsuivant cette agitation, on pulvérise sur les granules la solution aqueuse du sel de sodium de CDP-choline, puis on sèche les granules dans une étuve à 70-80'C sous vide ou sans application de vide. La composition ainsi obtenue fait apparaître après extraction une teneur uniforme en CDP-choline dans les diverses parties de la composition. Sensiblement par le même procédé que ci-dessus, on peut modifier les rapports CDP-choline/phospholipides au cours de plusieurs essais et on obtient ainsi des compositions qui contiennent les deux ingrédients dans des proportions pondérales comprises entre 1: 20 et 1: 0,5. Comme il a été indiqué, on peut améliorer la stabilité chimico- physique des compositions pharmaceutiques en ajoutant des matières protéini- ques et des agents de réticulation. Comme autre exemple représentatif, on présente la composition suivante. EXEMPLE 2 Comme il a été décrit dans l'exemple 1, on pulvérise une solution de 100 g de CDP-choline dans 100 ml d'eau contenant 5 g d'une albumine sérique (ou bien une albumine d'oeuf ou une autre protéine comestible) sur 400 g de granules de phospholipides. On pulvérise de nouveau les granules ainsi enrobés, sous agitation, avec 100 ml d'eau contenant 5 % de formaldéhyde à titre d'agent de réticulation. On sèche finalement la matière obtenue comme expliqué plus haut. Absorption orale et distribution de la CDP-choline marquée au C associée avec des phospholipides. On prépare des compositions analogues à celle décrite dans l'exemplel mais on ajoute à la solution initiale une CDP-choline marquée au C. L'atome de carbone marqué est celui du groupe méthyle du fragment choline. En général, la radioactivité est de 50 microcuries/gramie de la CDP- choline totale. a) On administre par gavage gastrique à des rats pesant en moyenne 200 g des solutions aqueuses de CDP-choline marquée au 14C ou des suspensions de compositions de CDP-choline '4C/phospholipides obtenues comme dans l'exemple 1. Les doses administrées correspondent à 50 mg de CDP-choline. A des intervalles de temps variés, on recueille une certaine quantité de sang et, 24 heures après le début de l'expérience, on sacrifie les animaux.On mesure la radioactivité dans des volumes ou poids prédéter- minés de sérum de divers organes ou tissus. Les résultats qui apparaissent dans le tableau I et sur le dessin annexé indiquent que la radioactivité enregistrée dans le sérum et les tissus après administration de la composition pharmaceutique contenant la CDP-choline marquée au C et les phospholipides est beaucoup plus élevée que celle enregistrée après l'administration de la CDP-choline marquée au 4C dans l'eau. Les données qui ressortent de cet exemple montrent clairement que les compositions pharmaceutiques contenant la CDP-choline et préparées comme décrit dans l'exemple 1 sont d'un intérêt particulier pour l'administration par voie orale. Les avantages thérapeutiques sont ainsi évidents: non seulement on dispose d'un mode plus agréable d'administration, mais aussi on est assuré d'un effet de longue durée après une seule administration, comme on peut le déduire en constatant le maintien de niveaux élevés de radioacti- vité dans le sérum. Sur le dessin annexé, la radioactivité (en ordonnées) est exprimée en millicuries par minute (c.p.m. x 103) par unité de temps (en abscisse), le symbole (0) désignant une solution aqueuse de CDP-choline marquée au C alors que le symbole (O) désigne la composition pharmaceutique selon l'in- vention contenant la CDP-choline marquée au 14C. TABLEAU I Valeurs de la radioactivité dans différents organes et tissus 24 heures après l'administration par voie orale d'une solution aqueuse de CDP- choline marquée au C et de CDP-choline en association avec des phospholipides. Les valeurs son exprimées en c.p.m. x 10 /gramme d'organe ou de tissu. Tissu CDP-choline- 14C dans i O CDP-choline- 14C plus phospholipides Cerveau 1,55 6,53 Faie 65,4 164,7 Rein 46,3 52,2 Muscle 3,1 6,1 b) Dans un autre essai, on a administré par voie intraveineuse à des singes femelles Cynomolgus pesant environ 2 kg, une seule dose de 25 mg/kg de CDP-choline marquée au 14C ayant une activité spécifique de 0,1 /'-Ci/mg. On a recueilli le sang aux temps suivants: O (valeur de base) et 5, 10, 15, 30, 60 minutes, 2, 4, 7, 24 et 30 heures après administration. A partir de l'extrémité des courbes concentration de sérum/ temps, on a pu calculer la constante de la vitesse d'élimination apparente à partir de l'organisme ainsi que la radioactivité relative. On a utilisé ces valeurs pour calculer les AUC T 30 heures > T pour le total des courbes concentration/temps chez le même animal. On a calculé le AUC T - T30 heures à l'aide des méthodes au trapèze. Après un minimum de 10 à 15 jours d'intervalle, on a administré aux mêmes animaux deux doses différentes de la composition selon l'invention et deux doses correspondantes de CDP-choline à titre de témoin (doses témoins). Les doses exprimées en CDP-choline étaient 200 mg/kg et 400 mg/kg ce qui correspond respectivement à 2/" Ci/kg et 4/t Ci/kg. Pour chaque dose, on a utilisé une technique d'intersection fortuite. On a recueilli des échantillons sanguins.sériques jusqu'à 30 heures après chaque administration. A partir des courbes individuelles concentration/temps, on a pu calculer les AUC T 0 > T30 heures Après chaque administration y compris l'intraveineuse, on a recueilli les urines aux intervalles de temps ciaprès O - 24 heures, 24 - 48 heures et 48 - 72 heures. Les résultats obtenus pour chaque animal apparaissent dans les tableaux Il et III et sur lus figures 2 et 3, tandis que le tableau IV désigne les moyennes et les écarts types relatifs des deux animaux. Sur la figure 4, on a étudié la comparaison entre la courbe concentration moyenne/temps qui suit l'administration intraveineuse de CDP- choline et les courbes concentration moyenne/temps qui suit l'administration des deux doses ci-dessus de la composition selon l'invention ("ASONIC"). Enfin, la figure 5 désigne une comparaison entre les facteurs cinétiques des deux doses orales de la composition pharmaceutique selon l'invention et de deux doses témoins correspondantes de CDP-choline. Aux doses testées, la composition pharmaceutique qui fait l'objet de l'invention fait preuve d'une absorption remarquable par voie orale, comme on peut le constater à partir du pic de concentration maximum qui est atteint plus t6t qu'avec l'administration des doses témoins. La concentration maximale qu'on peut atteindre avec les deux doses de la composition selon l'invention est décidemment plus élevée que celle qu'on peut atteindre avec les doses témoins de CDP-choline, la différence étant particulièrement marquée à des doses plus faibles. La bio-disponibilité absolue de la composition pharmaceutique selon l'invention chez les singes s'est révélée plus élevée que 50 %: on a obtenu les valeurs F ci-après aux doses suivantes de CDP-choline mg/kg) F = 0,5109 400 mg/kg - F = 0,7781 alors que la bio-disponibilité absolue des doses témoins de CDP-choline était beaucoup plus faible, les valeurs F obtenues étant mg/kg - F = 0,2143 400 mg/kg > F = 0,6174 La composition pharmaceutique selon l'invention est ainsi absorbée dans une grande mesure et il semble que le pourcentage d'absorption augmente avec la dose. Singe Cynomolgus n I TABLEAU II "ASONIC" (CDP-choline + phospholipides) Sexe femelle Poids: 2 kg Comparaison avec CDP-choline Concentrations de sérum DPM/ml Temps CDPcholine CDP-choline x os "ASONIC" per os mg/kg i.v. 200 mg/kg 400 mg/kg 200 mg/kg 400 mg/kg = 2.5 pCi/kg 2 uCi/kg 4 uCi/kg 2/uCi/kg 4 uCi/kj 5' 8708 ' 3169. ' 2226 45 35 116 75 ' - 53 - 46 - 60' 1629 88 52 57 80 ' - - -29 - 172 2 h 2165 - 75 102 138 3 h - - 187 - 294 4 h 2760 172 401 1072 815 6 h - 1590 - 2753 7 h 3120 852 2712 3784 4560 8 h - - 4092 - 5495 9 h - 743 5175 3049 5399 3024 h 1812 339 622 358 481 h 1749 385 540 360 385 0 O0315 - - - 1/2 22 h, - - - UC0 72475 14053 59643 4283 89465 AUC 127999 26275 76786 54268 102087 ,........, _...... _.. _ TABLEAU II (suite) 1 0 Elimination urinaire cumulative, % de la dose administrée. 0-24 h. 49 38,4 24,7 44,4 35,9 24-48 h. 1,8 6,2 6,0 3,9 5,4 48-72 h. 0,4 0,7 0,6 1,1 0,9 0-72 h. 51,2 45,3.31,3 49,4 42,2 TABLEAU III Singe Cynomolgus n 2 "ASONIC" (CDP-choline + phospholi- Sexe femelle pides) Poids: 2 kg Comparaison avec CDP-Choline Concentrationg de sérum DPM/ml mg/kg i.v. 200 mg/kg 400 mg/kg 200 mg/kg o400 mî, r1, !_ =215 pCi/kg = 2 uCi/kg = 4 uCi/kçq = 2 tlCi- k = _ __t =25 juci/kg92jCikr ' 12 414. . 15' 5 007 61 - - - ' 3 467 - - 135 64 ' - 59 - 78 - ' 2 625 94 69 93 45 ' - - 52 - 152 2h 2630 - 81 159 100 3h - - 174 - 250 4h 3369 135 495 884 545 6 h. - 1 401 - 2 491 7 h 4 013 696 2560 4150 4 204 8h - - 4235 - 5345 9 h - 595 4450 3250 5360 24 h 2 258 417 449 452 393 30 h 2 145 - 303 401 483 415 0X02949 -. 1/2 23,5 - h AUC0 86 516 12 688 51 491 46 772 62 635 AUCO' 159 254 22 963 65 089 63 151 7 70& _ TABLEAU III (suite) Elimination urinaire cumulative, % de la dose administrée 0-24 h. 52,3 47,1 37,9 43,5 38,8 24-48 h. 3,2 2,2 5,2 7,8 9,3 48-72 h. 0,3 0,4 0,9 1,2 1,6 0-72 h. 55,8 49,7 44,0 52,5 49,7 TABLEAU IV CINETIQUE DE "ASONIC" CHEZ LES SINGES CYNOMOLGUS Comparaison avec CDP-choline Concentrations plasmatiques, (moyennes et écarts types chez 2 animaux) DPM/ml de sérum CDP-choline CDF-choline x os ASONICO x os Temps 25 mg/kg i.v. 200 mg/kg 400 mg/kg 200 mg/kg 400 mg/kr = 2.5 pci/kg = 2 aCi/kg 4 uCi/kg = 2,Ci/kg = 4.C/c, ' 10 561+2620 ' 4 088+1299 61 - - - ' 2 846+877 45 35 125+13i4 6995+718 ' - 56+4 - 62+23 - ' 2 127+704 91+492 61+12 75+25 6275+25 ' - - 40+16 - 162+14 2 h -2 397+329 ' - 78+412 131+4073 119+27 3 h - - 181+952 - 272+31 4 h 3 064+431 154+26 448+66 978+133 272+31 6 h - - 1496+134 - 680+191 7 h 3 566+ 631 774+110 2636+107 3967+259 4382+252 h - - 4163+101 - 5420+106 h9 - 669+ 105 4813+513 3149+142 3379+28 24 h 2 035+315 378+55 536+122 405+66 437+62 0 h 1- 947+280 344+58 470+98 421+87 400+21 0o03049+0,0014 /2 22175+1 06 UC0 79495+9924 13370+965 55567+5764 44806+2781 76250+192 UC 143626+22100 24619+2342 70937+8271 58709+6281 89397+179( I0 TABLEAU IV (suite) ru Co oe on w Elimination urinaire cumulative, % de la dose administrés 0-24 h 50565+2.33 42575+6,15 31 3+973 43,j95+0,64 37, 35+2,05 24-48 h 2,5 +0 99 492 +2983 5t6 +0,56 5.85 +2176 7.35+2q76 48-72 h 035+0,07 0155+0,21 0,75+0O21 1 15 +0107 1,25+0,49 0-72 h 5315+3125 4755 +3111 37765+8j98 50,95 +2,19 45,95+593 c CONCLUSIONS 1) Les résultats obtenus avec les singes démontrent que la composition pharmaceutique selon l'invention possède une bonne bio-disponibilité absolue par comparaison avec la CDP-choline administrée par voie intraveineuse, la valeur étant supérieure de 50 % au plus faible dose et de prés de 80 % à une dose plus élevée. D'autre part, les études effectuées sur les rats ont fait ressortir une absorption presque totale de la quantité administrée. 2) Les facteurs cinétiques et la bio-disponibilité orale de la composi- tion pharmaceutique qui fait l'objet de l'invention, sont considérablement améliorés car l'absorption intervient plus rapidement et est saturée aux faibles doses. En outre, le pourcentage d'absorption chez les singes est plus élevé qu'avec les doses témoins de CDP-choline. Il va de soi qu'on peut apporter diverses modifications aux modes de mise en oeuvre qui ont été décrits, sans sortir pour cela du cadre de l'invention. REVENDICATIONS 1. Composition pharmaceutique pour administration par voie orale, caractérisée en ce qu'elle contient la cytidine-diphosphocholine (CDPcholine) ou un sel de cette dernière en association avec une matière contenant des phospholipides. 2. Composition selon la revendication 1, caractérisée en ce que la CDP-choline ou son sel se présente sous la forme d'une solution mélangde avec les phospholipides à l'état solide, en émulsion ou en solution. 3. Composition selon la revendication 1 ou 2, caractérisée en ce qu'elle contient également des matières protéiniques et des agents de réticulation. 4. Composition selon la revendication 1, 2 ou 3, caractérisée en ce que le rapport pondéral de la CDP-choline ou de son sel aux phospholipides est compris entre 1: 20 et I: 0,5.