Brevet FR2483622A1 — publié le 19811204

DESCRIPTION Cette méthode de dosage s'applique en particulier au dosage du choles tdrol dans le sang et les autres milieux biologiques. Les méthodes colorimétriques actuelles utilisant les réactions de LIESERMANM-BURCEtRD, de SALKOWSEI, de ZLATKIS et ZAK ou de USCHUGAEFF manquent de sensibilité et surtoutde spécificité. Les méthodes enzymatiques, d'apparition plus récente, sont plus sensibles, mais très couteuses, tout en restant peu spécifiques. La spectrophotométrie en lumière infra-rouge ou ultraviolette, la spectrométrie de masse associée à la dilution isotopique, et surtout la chromatographie en phase gazeuse, apparaissent toutes comme des techniques à la fois sensibles, précises et spécifiques, mais dont l'empli est peu compatible avec la manipulation de nombreux échantillons.Plus récemment a été décrite une réaction colorée utilisant l'ortho-phtalaldéhyde, qui s'est révélée stable et sensible, mais manquant de spécificité. La méthode que nous proposons utilise le naphtalène dialdéhyde-2,3 (figure i), qui est l'homologue naphtalénique de l'orthophtalaldehyde, et qui fournit, en milieu acéto-acétique, une coloration bleue intense avec le cholestérol. Cette méthode allie la simplicité et la rapidité d' exécution à une excellente spécificité et un faible coft de revient. En outre la réaction colorée apparait comme la plus sensible de toutes les réactions colorées du cholestérol connues à ce jour, tout en étant particulièrement stable. Elle est donc bien adaptée au dosage du cholestérol dans les milieux biologiques. fig .1 Le prothcole opératoire est le suivant : on introduit successivement, dans un tube à essais parfaitement sec - 2 ml de solution de naphtalène dialdéhyde-2,3 dans l'acide acétique ou l'acide propionique (les solutions 0,25 à 1 mmol/l peuvent convenir) - une prise d'essai de l'échantillon à doser contenant entre 0 et 60 de cholestérol (soit 10 pour ce qui concerne le sérum sanguin). - I ml d'acide sulfurique pur pro analysi . On agite après chaque addition. La coloration bleue ze développe treks ra pincent : elle atteint son maximum d'intensité dès la 5 e minute et reste stable 90 minutes. Une courbe d'ét-lonnage réalisée dans les mêmes conditions permet de quantifier la réaction. Un autre protocole opératoire consiste à employer un mélange extemporané de la solution de naphtalène dialdéhyde-2,3 précédemment décrite et d'acide sulfurique pur (2 : I, V/V). On ajoute alors la prise d'essai d'échantillon à doser directement dans ce mélange réactionnel porté à la température de 600 C. Cette méthode peut être utilisée dans tous les cas où une recherche et/ou un dosage précis et spécifique de cholestérol est nécessaire. Des applications particulièrement intéressantes concernent les laboratoires d'analyse médicale pour le dosage du cholestérol dans le sang et les autres milieux biologiques. D'autres ap-licatiors sont possibles dans l'industrie chimique, l'industrie pharmaceutique ou l'analyse des aliments. R E V E N 1 I C A T I O N S 1. Méthode de dosage du cholestérol, caractérisée par le fait qu'elle utilise à froid une solution de naphta- lène dialdéhyde-2,3 dars l'acide acétique ou l'acide propionique. 2. Méthode de dosage du cholestérol, caractérisée par le fait qu'elle emploie, à la température de 600 C, une solution -éto-sulfurique de naphtalène dialdéhyde-2,3.