Brevet FR2482107A1 — publié le 19811113

L'invention concerne un nouveau dérivé de-l'istamy- cine A, la di-N6,03-déméthylistamycine A (c'est -à-dire la 6'-N,3-0-didéméthylistamycine A) qui est un antibio- tique aminoglycosidique synthétique utile comme agent antibactérien, ainsi qu'un procédé pour sa préparation et ses utilisations thérapeutiques. La demanderesse a déjà décrit et revendiqué de nou- veaux antibiotiques utiles, l'istamycine A et tl'istamycine B, produits par culture d'une nouvelle espèce de Strep- om2yces, la souche StretoMes tenjimariensis S 939 (FERM-P 4932 ou ATCC 31603) qui sont hautement actifs vis- à-vis de toute une variété de bactéries gram-négatives et gram-positives (Cf. le "Journal of Antibiotics", 32, 964- 966 Septembre 1979, demande de brevet anglais 2 048 855 A publiée le 17 décembre 1980). Elle a étudié de façon ap- profondie la production synthétique de l'istamycine A en partant de la 3',4'-didésoxynéamine (Cf. "Journal of An- tibiotics", 32, 1365-1366 (1979)). Lors de prolongement de cette étude, les inventeurs ont préparé avec succès 6' 3À. un nouveau dérivé de l'istamycine A, la di-N,03 -démthyl- istamycine A et ils ont d6couvert que ce produit présente une activité antibactérienne élevée vis-à-vis de toute une gamme de bactéries gramnégatives et gram-positives et particulièrement sont plus actifs vis-àvis de Pseudomonas aeruginosa que l'istamycine. L'invention a donc tout d'abord pour objet un nouveau dérivé antibiotique de l'istamycine A qui est utile comme agent antibactérien pour le traitement thérapeutique des affections bactériennes chez l'homme ainsi que pour la sté- rilisation du matériel et des instruments chirurgicaux. L'invention a également pour objet un procédé pour la syn- thèse de ce nouveau dérivé antibiotique de l'istamycine A. Elle a enfin pour objet une composition pharmaceutique renfermant, comme ingrédient actif, le nouveau dérivé an- tibiotique de l'istamycine A. L'invention a donc tout d'abord pour objet une nou- velle substance antibiotique, la di-N6,03-d6mthylistamy- cine A de formule développée: 6' O0 (I) ainsi que ses sels d'addition acide. L'istamycine A présente la formule d6veloppée sui- vante: 6' H3C: 4' t NH2 OH COCH2NH2 Le composé de formule I correspond donc à un d6rivé de l'istamycine A dont on a élimin6 les deux groupes me- thyl du groupe méthoxy en position 3 et du groupe méthyl- amino en position 6'. Le nouveau compos6 de formule I selon l'invention présente les propri6tés physico-chimiques et biologiques suivantes Le monocarbonate de di-N6,03déméthylistamycine A se trouve sous forme d'une poudre incolore sans point de fusion d6fini, qui se décompose à 138-145 C, donne une ro- tation optique spécifique de D + 136 (C 0,36 dans l'eau); les résultats de l'analyse élénentaire sont les suivants: Trouvé: C 45,39; 7,963; N 16, 42 %1, ce qui correspond aux valeurs théoriques de CISH3N505o 2CO3 (C 45, 38; H 7,85; N 16,54 S). La spectrométrie de masse du monoearbonate montre le pic de (M + 1) a m/e = 362 et la chromatographie en couche mince sur gel de silice une tache unique (positive à la ninhydrine) à Rf 0,06, avec développement avec la phase inferieure d'un melange ch!oroúor e-meth anolammoniaque-à 28 % (2:1:1 en volume) ou à Rf 0,46 avec développement avec un mélange butanol- 6thanol-chloroformesamoniaque aà 17 %' (4:5:2:5 en volume). Le compose6 de formule I présente une aetivit mnt.i- bacterienne élev e vis-à-vis d'une game importante de bactceries grasnégatives et gram-positives, comme il ressort des spectres antzbactériens rassembles à la Table I ci-apres, ceur de l'istamycine A étant egalee indiques à titre de comparaisono Les concentrations inhibitoires mi- nimum ont été déterminées selon une méthode standard de di- lution en s6rie sur plaques d'agar nutritif incub es a 37 C pendant 17 heures. Les résultats de la table I révà- lent que la di-déméthylistamycine A selon l'invention est nettement plus active que l'istamycine A vis-à-vis de Pseudomonas aeruginosa. 2 4 8 2 1 0 7 TABLE 1 TABLE 1 Concentrations inhibitoires Minimum (mcg/ml) Microorganismes d'essais Di-déméthyl- istamycine A Staphylococcus aureus FDA 209P 1,56 " " w Smith " K-12 ML 1629 3,13 Il f" K-12 ML 1630 12,5 " " K-12 ML 1410 6,25 " K-12 ML1410 R81 3,13 " " K-12 LA290 R55 12,5 " " t K-12 LA290 R56 3,13 i" " K-12 LA290 R 64 3,13 " " W677 3,13 "Y "t JR66/W677 6,25 "t l K-12 c600 R135 >100 "t t" JR 225 3,13 Klebsiella pneumoniae PC 1602 3,13 " Ti 22 4 3038 12,5 Shigella dysenteriae JS 11910 12,5 Istamycine A 0,78 100 1,56 1,56 3,13 3,13 Shigella flexneri 4B JS 11811 Shigella sonnei JS 11756 Salmonella typhi T-63 Salmonella enteritidis 1891 Proteus vulgaris OX19 Proteus rett2eri GN311 " " CGN466 Serratia marcescens Serratia sp. SOU Serratia sp. 4 Providencia sp. Pv16 Providencia sp. 2991 12,5 6,25 3,13 6,25 1,56 12,5 12,5 > 100 12,5 12,5 Pseudomonas aeruginosa A3 3,1 t" " N 012 25 Yi " H9 12,5 t" "t Hi1l1 50 " " TI-13 i12,5 " " * GN 315 25 " " 99 >100 " " B-13 >100 " " 21-75 >100 " " s PST 1 50 " ROS 134/ 50 PV 21 " " K-Ps 102 12,5 Pseudononas maltophilia GN 907 >100 6,25 6,25 0, 78 3,13 0,78 6,25 6,25 >100 o 6,25 6,25 > 100 > 100 > 100 >100 Le compos6 selon l'invention, la di-N6,3-dmthy- istamycine A, est habituellement obtenu sous forme de base libre ou d'hydrate ou de carbonate qui peut être trans- formé en tout sel d'addition acide pharmaceutiquement ac- ceptable par r6action, de façon classique, avec un acide pharmaceutiquement acceptable. Comme exemple d'acide pharmaceutiquement acceptable utilisable dans ce but, on peut citer les acides minéraux tels que les acides chlor- hydrique, bromhydrique, sulfurique, phosphorique et ni- trique, et les acides organiques tels que les acides acétique, maléique, citrique, ascorbique et méthane-sul- fonique. L'invention a 6galement pour objet un procédé de préparation du composé de formule I qui consiste à blo- quer simultanément avec un groupe amino-protecteur les trois groupes amino en position 1, 2' et 6' du composé de formule développée: - 6' H2N 4 0 2 O S NH tV _ X à faire réagir-le dérivé tri-N protégé obtenu avec la glycine ou une glycine N-protégée dont le groupe amino a été bloqué avec un groupe amino-protecteur, ou avec un équivalent fonctionnel de ladite glycine pour acyler le groupe méthylamino non protégé en position 4 du composé (VIII) et à éliminer tous les groupes amino-protecteurs restant du produit d'acylation. Le procédé selon l'in- vention peut comporter une étape de transformation du com- pogsé (I) ainsi obtenu en son sel d'addition acide ou en transformant un sel d'addition acide du composd en base libre ou en un autre sel d'addition acide par une méthode classique. Le composé de départ de formule (VIII) à utiliser dans le présent procédé, qui est la N4-déglycyl-di-N6,03- d&méthyl-istamycine A peut être prépar6 à partir de la 2682t0I 3' 'dideso=yineaine qui9 à son tour, peut être obtenue par une techaique connue comme décrit dans le "Journal of Antibiotics" 24, 711i-712 (1971) ou le "'Bulletin of the Chesmical Society of Japan'" 46, 3507-3510 (1973) o La meéthode de préparation du composé initial (VIII} est résumée ciaprso. Les quatre groupes amino existaet dans la 3e,4-di--dso yncamime de formule -5 \_ (Il), sont bDloqués avec u gxroupe ai o-p ca rd trpe fo@ re at6eor d'uenthane p3is trgnY'fOr.es en deria carbatato ; cycliqite eso %,6 du conposé N-Protcéz (1) par traaitenent av.ec une base telle qu e%ni hydrure de métal alcalino Le gjoupe _Lydroe/ en position 5 du dérivé carbanate cycl que en 1,6 est bloqué a-rec sn eroupe hydropouproteteur pon doner un cosposé de orm: uIe R1OC-N_ 6 te H \- OR1 O. 1 xO' " C 2 (III) 3 N Co l' OR- co \ -k OR - O dans laquelle chaque R 10C0 représente un groupe amino- protecteur monovalent du type formateur d'uréthane, R1 étant un groupe alkyl (par ex. de I à 6 atomes de carbone), un groupe cycloalkyl (par exemple de 5 à 6 atomes de car- bone) ou un groupe aralkyl (par ex. alkyl-phényl-Cl_4 tel que le benzyl) et R représente un groupe alkyl (par ex. de I a 6 atomes de carbone), un groupe benzyl ou tétra- hydropyranyl en tant que groupe hydroxy-protecteur. On traite ensuite le composé de formule (III) avec une base telle qu'une solution aqueuse d'hydroxyde de sodium ou de baryum pour hydrolyser l'anneau carbamate cyclique en 1,6, opération que l'on fait suivre d'une protection du groupe amino libre en position 1 obtenu avec un groupe amino-pro- tecteur de type formateur d'uréthane différent du groupe R 1OCOprécédemment mentionné et d'une sulfonylation du groupe hydroxy libre en position 6 obtenu avec un réactif de sulfonylation de formule R SO 3H ou un équivalent réac- tif pour obtenir un composé de formule g6nérale: 6' ORR1 t (Iv) OS02R dans laquelle R et R ont les significations mentionnées ci-avant, R30CO- est le groupe amino-protecteur monova- lent du type formateur d'uréthane dans lequel R3 est un groupe alkyl (par ex. de 1 a 6 atomes de carbone), un groupe cycloalkyl (par ex. de 5 à 6 atomes de carbone) ou un groupe aralkyl (par ex. benzyl), mais différent du 1 4 groupe R, et R est un groupe alkyl (par ex. de 1 à 4 atomes de carbone), aryl (par ex. phènyl ou méthylphényl) ou aralkyl (par ex. benzyl). Le composé de formule (IV) est alors traité avec une base telle qu'un alcoolate de mé- tal alcalin pour former un composé portant un anneau aziri- dine de formule g6nérale: R1OC-N 6 Il H O CO R, OR OR1 CO oR3 1 2 - 1l, NH CO 1 N (v) dans laquelle R R et R3 ont les d6finitions ci -avant. Le compos6 de formule (V) est ensuite trait6 avec un sel de métal alcalin d'un acide organique tel qu'un acide al- canolque inf6rieur ou l'acide benzo[que pour ouvrir l'an- neau aziridinique, ce qui donne un compos6 de formule: R OC-N 6' IlH \ co 4 OR Co >' 1 6NH 2 (VI) J NHCOOR\ CO 2 OR5OR dans laquelle R, R2 et R3 ont les définitions ci-avant et l2 et R5 est un groupe acyl tel que le groupe-alcanoyl ou benzoyl qui vient de l'acide organique employoé. Les groupes hydroxy-protecteurs (R et R5) aux positions 3- et 5 du composé (VI) sont éliminés de ce dernier de façon classi- que. Si nécessaire, c'est-à-dire si le groupe amino-pro- tecteur en 4,COOR3 a 6t6 6éliminé pendant le traitement avec le sel de m6tal alcalin de l'acide organique ou en même temps qu'ont été éliminés les groupes hydroxy-pro- tecteurs(R2 et R5), on introduit un autre groupe amino-pro- la tecteur (-COOR3) du type formateur d'urethane dans le groupe amino libre en 4 potr obtenir un compos de for mule générale i6' O -25 6 OR1 *1 O\ 4 dans laquelle P. et R3 ont les significations données ci- avant. Les groupes amino-protecteurs (-COOR en position 1-, 2" et 6' du compos6 (VII) sont ensuite 6limin&s de façon classique, mais en maintenant à le'tat d5prot6g6 le groupe amino-protecteur eon 4 (-COO&3), puis on réduit avec un hydrure métallique pour transformer le groupe ano-proteg6 en 4 (-NICOOR3) en groupe 4-M6thylamino. 33 On obtient ainsi le composé de formule (VIII). On décrit ci-après un mode de r6alisation avanta- geuse de la méthode de préparation du composé de départ (VIII). Dans la première étape les quatre groupes amino en positions 1-, 3-, 2'et 6'- de la 3',4'-didésoxyn6amine de formule II sont bloqués avec un groupe amino-protecteur connu du type formateur d'uréthane pour donner un dérivé N-protégé de 3',4'-didésoxynéamine de formule gén6rale: R1 OC-N,6 O OR1 Co Nt 2 (II') NHCOOR 1 l0 OR dans laquelle chaque-R -OCOO est un groupe amino-protec- teur monovalent du type formateur d'uréthane dans lequel R est un groupe alkyl, cycloalkyl ou aralkyl comme d6crit ci-avant. Le groupe aminoprotecteur à utiliser dans ce but est un groupe capable de réagir avec le groupe hydroxy adjacent (quand il existe) Pour former un anneau carbamate cyclique quand il sera traité avec une base dans l'étape suivante. Comme exemples de groupe amino-protecteur con- venant dans ce but on peut citer les groupes alkyloxycar- bonyl de 2 à 7 atomes de carbone tels que les groupes tert- butoxycarbonyl et tert-amyloxycarbonyl; les groupes cyclo- alkyloxycarbonyl de 6 à 7 atomes de carbone tels que les groupes cyclohexyloxycarbonyl et aralkyloxycarbonyl tels que les groupes benzyloxycarbonyl et para-méthoxybenzyloxy- carbonyl. Parmi ceux-ci on préfère utiliser un groupe amino- protecteur du type formateur d'uréthane qui soit facilement éliminable sans couper le groupe amino-protec- teur -COOR3 que l'on introduira plus tard dans le groupe amino en 1 du composé de formule (IV). On recommande à cet effet de choisir tm groupe aralkyloxycarbonyl que l'on puisse éliminer par hydrogénolyse. L'introduction du groupe amino-protecteur -OCOR1 peut être facilement effectuée par tout processus classique, par exemple par réaction avec un réactif amino-protecteur connu sous forme d'un halogénure d'acide, d'un azide d'acide ou d'un ester actif. Dans la seconde étape, le composé de formule (II') est traité avec une base telle qu'un hydrure métallique pour donner un composé sous la forme d'un carbamate cyclique en 1,6 ayant la formule suivante: R1 __6' RiOC-N // H 0 OR1 \4', I. O O Xt 0 (I" C\ t Co ' 2', 2 1" 4N( O6 co \ HO dans laquelle R a la définition ci-avanto Parmi les qua- tre groupes amino-protecteurs du composé N-protégé (II'), le groupe aminoprotecteur en position I réagit facilement même à basse température, par exemple en-dessous de 0OC avec le groupe hydroxy adjacent en position 6 pour former le carbamate cyclique quand il est traité avec une base telle qu'un hydrure de métal alcalin, par ex. l'hydrure 24 8 2 1 0 7 de sodium ou l'hydrure de lithium dans un solvant or- ganique approprié tel que le diméthylformamide anhydre. Dans la troisième étape, le groupe hydroxy en posi- tion 5 du composé carbamate cyclique (II") est bloqu6 avec un groupe hydroxy-protecteur connu, de façon classique, pour donner un composé de formule (III) donnée ci-avant. Cette étape est suivie par un traitement avec un produit alcalin aqueux pour hydrolyser l'anneau carbamate cycli- que en 1,6 ce qui donne un composé de formule: go R1OC-N 6'. Il H O \ 0 i R1 OR 5'H Le groupe protecteur (R2)_ qui bloque le groupe hy- droxy en 5 du composé II"t doit être insensible aux con- Co ditions dans lesquelles doit être effectuée ladite hydro- lyse alcaline du compos carbamate cyclique en,6 (III). Parmi les groupes hydroxy-protecteurs connus, on choisit 4NH 3 N Co 1N ceux du type ther tels que es alkyl-thers et es ben- OR 5 OH Le groupe protecteur (R 2Y qui bloque le groupe hy- droxzyl-thers, en 5 du comeuxdu type I doit être insensible ttraux con- hydropyrns danyl, tous cquelles groupes pouêant tre effectuée ladite hydro- lyse alcaline du composé carbamate cyclique en 1,6 (III). Parmi les groupes hydroxy-protecteurs connus, on choisit ceux du type éther tels que les alkyl-éthers et les ben- zyl-6thers, et ceux-du type acétal tels que le tétra- hydropyranyl, tous ces groupes pouvant être introduits dans le groupe hydroxy en 5 par toute technique connue d'hydroxy-protection. En particulier, pour le groupe hydroxy-protecteur R2, on pr6fère utiliser le groupe té- trahydropyranyl qui est facilement 6éliminable par hydro- lyse en conditions acides modérées. 482 107 L'hydrolyse subséquente du carbamate cyclique en 1,6 (III) peut être effectuée par traitement dans une solution aqueuse diluée d'un hydroxyde de métal alcalin ou alcalino- terreux tel que l'hydroxyde de sodium ou de baryum et on obtient ainsi l'ouverture de l'anneau carbamate cyclique en 1,6 sous la forme d'un aminoalcool libre de formule (III'). L'hydrolyse est de préférence effectuée à une température de 40 à 600C et à une concentration en alcali inférieure ou égale à 0,1 M. Ces conditions réactionnelles nie conduiront pas à l'élimination des autres groupes amino- et hydroxy-protecteurs, mais bien à la formation préfé- rentielle du 1,6-aminoalcool de formule (III'). Ensuite le groupe amino en 1 ainsi libéré du composé (III') est bloqué avec un groupe amino-protecteur (-COOR3) du type formateur d'uréthane qui est différent du groupe a OCO- existant pour bloquer les groupes amino du composé (iI) et le groupse hydroxj en 6 est sulfonylé par réaction avec un réactif de sulfonylation, par exemple unhalogé- nure de sulfonyl de formule R SO2X dans laquelle R est un groupe alkyl, aryl ou aralkyl et X est un atome de chlore ou de brome. On obtient ainsi un composé de for- mule (IV). Comme groupe type formateur d'uréthane pour la pro- tection du groupe 1-amino du composé (III') on préfère utiliser un groupe alkyloxycarbonyl puisque ce dernier peut être retenu sélectivement dans le composé à obtenir lors du dernier traitement pour l'élimination des autres groupes amino-protecteurs en positions 3-, 2'- et 6' et qu'il est intéressant pour l!a formation réductrice du groupe méthyl-amino en position 4 du composé (VII) cosmme indiqué ultérieurement. La sulfonylation ci-dessus mentionnée du groupe hydro- xy en 6 peut être effectuée avec ménagement9 à température ambiante avec un bon rendement par réaction, dans un sol- vant organique convenable, tel que la pyridine sèche avec un réactif connu de sulfonylation tel quun halogénure sulfonyl de formule RSO2X spécialement le chlorure de 2 spcaeetl houed méthanesulfonyl, de para-toluènesulfonyl ou de benzyl- sulfonyl. Dans l'étape suivante, le composé de formule (IV) est traité avec une base pour former un composé de for- mule (V) portant l'anneau aziridine, puis on traite en- suite avec un sel de métal alcalin d'un acide organique pour ouvrir l'anneau aziridine. Le composé aziridine (V) peut être obtenu avec un bon rendement en traitant le compos6 (IV) avec une base telle qu'un alcoolate de m6tal alcalin, par ex. un al- coolate de sodium, sp6cialement le m6thylate de sodium dans un solvant organique anhydre tel que le t6trahydrofu- ranne sec. La r6action de formation de l'anneau aziridine peut se produire même à basse temp6rature, de 0 à 10C, * temp6rature à laquelle la r6action est g6n6ralement ter- min6e en 24 heures. Le compos6 aziridine (V) ainsi produit, qui est un' nouvel interm6diaire important pour la pr6paration du com- pos6 objet de l'invention peut être soumis directement (c'est-à-dire sans purification) à la r6action suivante d'ouverture de l'anneau. L'ouverture de l'anneau aziridine dans le compos6 (V) peut être effectu6e avec un rendement favorable par r6action avec un sel de m6tal alcalin d'un acide organique tel qu'un acide alcanoique inf6rieur ou l'acide benzoique et sp6cialement, par exemple, avec le benzoate ou l'acé6- tate de sodium dans un solvant organique anhydre tel que le dim6thylformamide sec. La r6action donne une forme d'aminocyclitol de formule g6n6rale: I(I ROC-N 6' (VI) H OR1 2 2 1' 6 NH I NHCOOR' OR 5 R dans laquelle R1 R2 et R3 ont la d'finition ci-avant et Z R5 est un groupe acyl tel qu'un groupe alcanoyl ou un groupe benzoyl qui provient de l'acide organique eupoye. Comme il ressort des formules (IV) et (VI), lvéchan- ge se produit entre la position du groupe amino et celle du groupe. thydroxy à l'ouverture de l'anneau aziridine, quand le groupe protecteur du type uréthane reste dans le groupe amino alors que le groupe acyl venant de leacide organique utilisé pour la réaction d'ouverture de l'anneau est introduit dansile groupe hydroxy comme montre dans la formule (VI) ci-avant. En ce qui concerne la nouvelle for- me d'aminocyclitol (d6riv6 1,-diamino-l,2,4-tridvsé yci- nocyclitol) de formule (VI),la numérotation du radical aminocyclitol est bas6e sur celle de la fortimicine et de l'istamycine; la même numérotation s'applique aux formules (VII), (VII) et (VIII). En ce qui concerne les composés aminocyclitol de formules (I) - (V) (dérivés 1,3-diamino- 1,2,3-tri-soxyaminocyclitol), leur numérotation est basée sur celle de la 2-désoxystreptamine. Les groupes hydroxy-protecteurs (R2 et R5) en posi- tion 3 et 5 du compos6 (VI) sont ensuite éliminés de ce dernier pour donner le composé de formule (VII).Le groupe acyl R5, en tant que groupe hydroxy--protecteur en position 3 peut être facilement 6élimin6 par hydrolyse alcaline avec une base classique telle qu'une solution méthanolique d'ammoniac, alors que le groupe hydroxy-protecteur R en position 5, tel que le groupe tétrahydropyranyl peut être éliminé par hydrolyse acide, en conditions douces.comme déja mentionné, par exemple par traitement avec une solu- tion aqueuse d'acide trifluorac&tique à basse température 0 à 10 C. Dans certains cas, le groupe amino-protecteur (-COOR3) en position 4 peut être scind6 au cours de la réaction pré- cédente pendant l'ouverture de l'anneau aziridine ou quel- quefois simultanément à l'élimination des groupes hydroxy- protecteurs(R2, R5). Il est alors nécessaire de réintroduire dans le groupe amino en 4 libre le groupe amino-protecteur du type formateur d'uréthane qui est différent de celui (-OCOR) utilisé pour bloquer les groupes amino en 1-,2 - et 6 -. C'est par exemple le cas quand le groupe amino- protecteur en position 4 est le groupe tert-butoxycarbonyl qui peut être scindé en même temps qu'est éliminé le groupe 2. hydroxy-protecteur R en position 5 par hydrolyse acide mnagée. Le groupe amino-protecteur (-COOR3) du type forma- teur d'uréthane à réintroduire dans ce cas dans le groupe amino en 4 sera de préférence non susceptible de réagir ensuite dans la réaction d'élimination des autres groupes amino-protecteurs (-OCOR1) en position 1, 2 - et 6 - et devra être disponible pour la formation du groupe méthyla- mino en position 4. Comme exemples préférés, on cite les groupes méthoxycarbonyl et éthoxycarbonyl. Ensuite, les groupes amino-protecteurs(-OCOR) en position 1-, 2'- et 6'- du composé (VII) sont éliminés sé- lectivement par une technique classique de déprotection comme pour l'élimination des groupes protecteurs -OCOR mais non efficace pour l'élimination du groupe protecteur -COOR3 en position 4, ce qui permet d'obtenir une N -déglycil-tri- N4,N6',03-déméthylistamycine A protégée en 4 N de formule 4 32 1 0Y e 19 6' H2N --\ (vI') HO dans laquelle R3 a la définition donnée ci-avant. Dans l'étape finale, le composé (VII')est réduit avec un hydrure métallique afin de transformer le groupe amino en 4 protégé (-NCOORP3) en groupe 4-Eaéthylamino (c'est-à-dire, une méthylation en 4-N), ce qui donne la N -déglycyl-diN,0 -déméthylistamycine A de formule 2 52 3' O3 OH La méthylation en 4-N peut être effectuée par réduc- tion du composé (VII) avec un hydrure métallique tel que l'hydrure de lithium-aluminium ou l'hydrure de bore dans un solvant organique anhydre tel que le tétrahydrofurane sec. La réaction est généralement effectuée à une température de 40 à 600C pendant une période de 10 heures ou plus. 4- 6r 3_, La N -deglycyl-di-N,0 -demethylistamycine A ainsi produite, qui est utilisée comme matériau de départ dans O le procéd6 selon l'invention, a les propri6t6s suivantes: Le monocarbonate de N -déglycyl-di-N6,O3-dm6thy- listamycine A se trouve sous forme d'une poudre incolore qui n'a pas de point de fusion défini, se d6compose à 115-118 C, C)22 a une rotation optique spécifique -)D + 102 (c 0.65,eau); non analyse élémentaire donne C, 46,15; H, 7,97; N, 15,37 % ce qui coïncide avec les valeurs théoriques de C13H25N404. H2C03 (C, 45,89;H, 8,25; N, 15,29 %). La spectrométrie de masse du monocarbonate donne le pic M+ à m/e = 304, et la O10 chromatographie en couche mince sur gel de silice une tache simple (positive a la ninhlydrine) à Rf 0.12, après develop- pement avec la phase inférieure d'un mélange chloroforme- méthanol-ammoniaque aqueuse à 28 % (2: 1: 1i en volume) ou à Rf 0.50 après développement avec un mélange butanol- éthanol-chloroforme ammoniaque aqueuse à 17 % (4: 5: 2: en volume). Selon le procédé de l'invention, le composé objet de ladite invention, la di-N, 03-déméthylistamycine A de formule (I) est préparé par acylation avec de la glycine (glycylation) du groupe méthylamino en position 4- du com- posé (VIII). Afin d'effectuer la glycylation sélective du groupe m&thylamino en 4 avec un rendement élevé, il est nécessaire de bloquer préalablement les autres groupes amino en position 1-, 2 - et 6 - avec un groupe amino-protecteur. Il existe heureusement une différence considérable de r6ac- tivité entre ces trois groupes amino et le groupe amino en 4. On peut ainsi pr6parer avec un rendement élevé, par une mé- thode classique d'introduction d'un groupe amino-protecteur connu, par exemple, en faisant réagir.-le composé (VIII) avec des équivalents 3 - 3.5 molaires, d'un réactif amino-protec- teur connu sous forme d'un halog&éure d'acide, -'un azf-c, d'acide, d'un ester actif ou d'un anhydride d'acide, un dérivé N. protégé du composé (VIII) dont trois groupce amian en position 1-, 2 - et 6 ont été bloqués. Les exemples de groupes amino-protecteurs connus dans ce but comprennent les grpupes alkoxycarbonyl tels que les groupes tert-butoxycar- bonyle et tert-amyloxycarbonyle; les groupes cycloalkylo- 2482=107 xycarbonyl tel que le groupe cyclohexyloxycarbonyl; les groupes aralkyloxycarbonyl tel que le groupe benzyloxycar- bonyl; les groupes acyl tels que les groupes trifluoroac6- tyl et O-nitroph&noxyacétyl; les groupes phosphinothioyl tels que les groupes diphénylphosphinothioyl et diméthyl- phosphinothioyl et les groupes phosphinyl tel que le groupe diph6nylphosphinyl. On peut 6galement utiliser des groupes amino-protecteurs divalents connus pour bloquer les groupes amine sous forme de base de Schiff. Le dérivé tri-N protégé en 1, 2 et 6' de la N -dégly- cyldi-6' 3_dm-h yitaycn cyl-di-N, 03-déméthylistarycine A ainsi préparé, peut être utilisé directement sans purification pour la glycylation subséquente du groupe méthylamino en 4. La N-glycylatioan en 4 peut être effectuée en utilisant la glycine elle-même ou un de ses équivalents fonctionnels selon toute téchnique connue utilisée pour la synthèse des peptides. Les équiva- lents fonctionnels de la glycine utilisés dans ce but com- prennent les d6cyclohéxylcarbodiimides, les anhydrides d'acide mixtes, les azides et les esters actifs de la gly- cine.On préfère bloquer préalablement le groupe amine de la glycine avec un groupe amino-protecteur qui peut être sembla- ble à ou différent de celui utilisé pour les groupes amino du composé (VIII). Comme exemples pr6f6rés de groupe amino- protecteur, on cite le groupe benzyloxycarbonyl élimirable par hydrogénolyse en présence d'un mataliyeur tel que le palladium ou l'oxyde de platine, ou le groupe tert-butoxycar- bonyl qui est éliminable par hydrolyse acide, par exemple, dans une solution aqueuse d'acide trifluoracétique ou acéti- que ou une solution diluée d'acide chlorhydrique. Dans un mode préféré de réalisation de procédé selon l'invention, en effectue la réaction de glycylation en 4 N avec un ester actif d'une glycine N-protegée à une tempéra- ture entre 40 et 600C dans un solvant organique adapté tel que le dioxanne. COmme ester actif de réactivité élevée, on peut mentionner le N-hydroxysuccinimide ester de la N-benzy- loxycarbonyl glycine qui peut être obtenu de façon classique et qui peut être utilisé pour la glycylation dans une pro- portion de 1 à 1,5 équivalent molaire. Une fois la glycylation terminée, tous les groupes amino- protecteurs restant dans le produit réactionnel sont élimi- nés par une méthode conventionnelle telle que, par exemple, l'hydrogénolyse ou l'hydrolyse acide comme indiqué ci-avant, ce qui permet d'obtenir le composé de formule (I). Comme déjà mentionné, le composé de formule (I) selon la présente invention possède une activité anti-bactérienne élevée vis-à-vis de toute une variété de bactéries. Ce com- posé présente en outre une faible toxicité pour les animaux; en effet des souris ont toléré une administration intravei- neuse de 100 mg/Kg de ce composé. Ce composé est donc utile comme agent anti-bactérien et est généralement formulé sous forme d'une composition pharmaceutique qui peut être admi- nistrée à l'homme ou à l'animal de toute manière conme en soi. L'invention a donc également pour objet une composi- tion pharmaceutique contenant une quantité efficace du point de vue thérapeutique ou bactéricide du composé de formule (I), ou un des sels d'addition acide pharmaceutiquement acceptable en combinaison avec un support ou un adjuvant pharmaceutiquement acceptable; une méthode d'inhibition de la croissance bactérienne chez un animal consiste à adminis- trer une quantité efficace du point de vue thérapeutique ou bactéricide du composé (I) ou de l'un de ses sels phar- maceutiquement acceptable à un animal infecté ou suscepti- ble d'être infecté par des bactéries. Il est bien entendu que la quantité convenable d'ingrédient actif à administrer dépendra de la composition formulée, du mode d'administration, du terrain à traiter et de la nature des bactéries. A titre d'indication générale, l'ingrédient acti.f sera administré à une dose de 0.5 - 5 mg/Kg de poids de l'animal. La présente invention sera mieux comprise à l'-aide des exemples suivants qui l'illustrent sans la limiter Exemple 1 Synthèses de la di-N6,03-déméthylistamycin A de formule (I) (a) Préparation de la 1,3,2,6 -tétra-N-benzyloxycarbonyl- 3,} -didésoxynéamine (R = benzyl dans la formule I'I) On dissout 2.10 g (7.23 mmol) de 3,4 -didésoxynéamine dans 100 ml d'un mélange eau/méthanol (1 5 en volume)et on ajoute à la solution 11.9 g (4.3 mol) de benzyl 4,6- diméthylpyrimidyl-2-thiolcarbonate et 2.3 ml de triéthyla- mine, puis on agite à température ambiante pendant 15 heures. La solution réactionnelle obtenue est concentrée à siccité sous pression réduite, et le résidu lavé successivement avec 300 ml d'eau et 200 ml d'éther éthylique pour donner 6.0 g (100 %) du composé désiré sous formc d'une poudre jaune pale. Point de décomposition 237 - 2380Co o3 20+ 450 (c 2 CHCl3). D, ,D3 (b) Préparation du 3,2,6 -tri-N-benzyloxycarbonyl-3 4 - didésoxynéamine 1,6-carbamate (R = benzyl dans la for- mule Il) On dissout 1.34 g (1.62 mmol) du produit obtenu dans l'étape (a) ci-dessus dans 13 ml de diméthylformamide anhydre on ajoute 235 mg (4.9 =mol) d'hydrure de sodium (50 %A de suspension dans l'huile) sous refroidissement à la glace et atmosphère d'argon. Le mélange est agité à température am- biante pendant 4 heures après quoi on neutralise la solution reactionnelle obtenue avec de l'acide acétique et l'on verse le toutsdans 500 ml d'eau glacée pour séparer un précipité. Le précipité est rassemblé par filtration et purifié par chromatographie sur colonne de gel de silice (50 g de %rako- gel C-200, Wakojunyaku Japon) développée amec des mélanges, chloroforme/acétone (2: 1 et 1: 1 en volume) pour donner 683 mg (62 %) du composé désiré. [CID 1+ 580 (c 2, CHCI 3 Rú0,25 en chromatographe en couche mince (CG4) sur gel de silice développé avec chloroforme éthanol (20: 1). (c) Préparation du 3,2,6 -tri-N-benzyloxycarbonyl-3,4 didésoxy-5-0tétrahydropyranylnéamine 1,6-carbamate 1 2 (R1 = benzyl et R = tétrahydropyranyl dans la formule III 3.7 g (5.15 mmol) du produit obtenu dans l'étape (b) ci- avant sont dissous dans 50 ml de diméthylformamide, et l'on ajoute à la solution 1.3 g (15.5 mmol) de 3,4-dihydro-2H- pyranne et 196 mg (1.14 mmol) d'acide para-toluéne-sulfonique anhydre. On laisse le mélange reposer 72 heures à température ambiante et l'on ajoute à la solution réactionnelle 1 ml de triéthylamine, puis on &évapore sous pression.réduite pour obtenir un résidu. Ce dernier est chromatographi6 sur gel de silice (300 g de Wako-gel C-200) en utilisant, comme sol- vant de développement, un mélange chloroforme-éthanol (100: l) pour obtenir 2,4 g (57 %) du composé désiré. Point de décomposition 79 - 83-C. [ D2 + 330 (c 0,5, CHCl3). Rf 0,51 en CCM sur gel de silice d6veloppé avec un mélange chloroforme-éthanol (15: 1). (d) Préparation de la 3,2,6 -tri-N-benzyloxycarbonyl- !! lO 1-N-tert-butoxycarbonyl-3, 4 -didésoxy-6-0-mésyl-5- O-t6trahydropyranyln6amine (R = benzyl, R = tetra- 3 4 hydropyranyl, R = tert-butyl et R = m6thyl dans la formule IV). On dissout 2,3 g (2,86 mmol) du produit venant de l'étape (c) ci-dessus dans 80 ml de dioxanne et on ajoute à la solution obtenue 25 ml d'une solution aqueuse 0,05 M d'hydroxyde de baryum. Le mélange est agité à 600C pendant minutes, puis on y ajoute encore 30 ml d'une solution 0,05 M d'hydroxyde de baryum et l'on agite une heure. Une autre addition de 30 ml d'une solution aqueuse 0,05 M d'hydroxyde de baryum est alors effectuée et le mélange est agit6 pendant une heure pour ouvrir 1l'anneau carbamate cyclique en 1,6. Une fois la r6action terminée, on fait passer dans la solution réactionnelle du dioxyde de carbone gazeux; on sépare ainsi un précipité que l'on filtre. Le filtrat est évapor6 sous pression réduite et le r6sidu extrait avec 200 ml de chloroforme. L'extrait est concentré à siccité sous pression r6duite pour donner 2,24 g d'une poudre jaune pâle de 3,2,6 -tri-Nbenzyloxycarbonyl-3, 4 -did6soxy-5-0-t6trahydropyranyln6amine (R = benzyl et R = tétrahydropyranyl dans la formule III). La poudre ainsi obtenue est dissoute dans 50 ml de méthanol, puis on ajoute 0,4 ml de triéthylamine et 1,35 g (5,7 mmol) de tert-butyl 4,6-diméthylpyrimidyl-2-thiolcar- bonate. Après agitation du mélange à temp6rature ambiante pendant une nuit entière, on évapore la solution réactnnelle sous pression réduite pour obtenir un résidu que l'on reprend dans 20 ml de toluène, puis on y ajoute du n- hexane pour obtenir un pr6cipité. Le précipité est rassem- blé par filtration et lavé à l'eau pour donner 2,24 g d'une poudre de 3,2, 6 -tri-N-benzyloxycarbonyl-1-N-tert- I, butoxycarbonyl-3,4 -didésoxy-5-O-tétrahydropyranylnéamine. On mélange une solution de cette poudre dans 50 ml de pyridine avec 574 mg (5,7 mmol) de chlorure de m6thane- sulfonyl, et l'on agite le mélange une nuit entière à température ambiante. La solution réactionnelle obtenue est concentrée à siccité et le résidu purifié par chromatograe phie sur colonne de gel de silice (150 g de lfako-gel C-200) d'veloppée avec un mélange toluène-acétone (5:1) pour donner 1,65 g (60 %) du composé désiré. Point de décomposi- tion 101 - 105 C. a2+ 290 (c 0,44, CE3). (e) Préparation de la 3-O-benzoyl-l,2,6 -tri-N-benzyloxy- carbonyl-4-N-tert-butoxycarbonyl-5-0-tetrahydropyranyl- 4- 46' 3.1. N -d'glycyl-tri-N4,N6,03-déméthylistamycin A (R = benzyl, R = tétrahydropyranyl, R3 = tert-butyl et R= benzoyl dans la formule VI) On dissout 1X-37 g (1,43 mmol) du produit venant de. l'étape (d) ci-avant dans 55 ml de t6trahydrofuranne sec et l'on ajoute à la solution 194 mg (3,6 mmol) de méthylate de sodium a 0 C sous atmosphère d'argon. Le mélange obtenu est- agité pendant 30 minutes puis on le laisse reposer à 100C pendant 15 heures. La solution réactionnelle obtenu est mé- langée a un excès de chlorure d'ammonium et d'eau, puis on extrait avec du chloroforme. L'extrait est concentré à siccité pour donner 1,23 g d'une poudre du dérivé aziridine (R = benzyl, R2 = t6trahydropyranyl et R3 = tert-butyl dans la formule V) [J22+ 10_ (c 0,5, CHC13). Rf 0,41 en CCM sur gel de silice développée avec un mélange benzène- acétate d'éthyl (1: 1). On dissout 1,12 g de la poudre ainsi obtenue dans 50 ml de diméthylformamide, à laquelle on ajoute ensuite 1,3 g de benzoate de sodium et on laisse le mélange reposer à température ambiante pendant 10 heures pour effectuer la coupure de l'anneau aziridine. La solution réactionnelle obtenue est mélangée à 300 ml de chloroforme et lavée deux fois avec une solution aqueuse saturée de chlorure de sodium. La couche de chloroforme est séparée, séchée sur sulfate de sodium anhydre et concentrée à siccité. Le résidu est purifié par chromatographie sur colonne de gel de silice (180 g de Wako-gel C-200) développée avec un mélange toluène-acétate d'éthyl (5: 2) pour donner 878 mg (76 %)du composé désiré. Point de décomposition 84-860C. La) D2 + 61 (c 0,49, CHCl3). Rf 0,54 en CCM sur gel de silice développée avec un mélange benzène-acétate d'éthyl (1: 1). (f) Préparation de la tri-N 'N,N -benzyloxycarbonyl- N4-tert-butoxycarbonyl-05-tétrahydropyranyl-N -dégly- cyl-tri-N,N6',03-déméthylistamycin A (R = benzyl, 2 = tétrahydropyranyl, R3 = tert-butyl et R5 = H dans la formule (IV). On dissout-860 mg (0,88 mmol) du produit obtenu dans l'étape (e) dans 20 ml d'un mélange méthanol/ammoniac à 12 % et on laisse reposer la solution à température ambiante pendant 40 heures pour effectuer l'élimination dd groupe 3-0-benzoyl. La solution réactionnelle obtenue est concen- trée à siccité et le résidu chromatographié sur gel de silice (70 g de Wako-gel C 200) avec, comme solvant de dé- veloppement un mélange benzène-acétate d'éthyl (1 1) pour obtenir 693 mg (90 %) du composé désiré. Point de décomposition 88 - 90 C. [I 22 + 440 (c 0,5, CHCl3). R D Y' f 0,18 en CCM sur gel de silice développée avec un mélange benz&ne-acétate d'éthyl (1:1). (g) Préparation de la N4-déglycyl-di-N6,03-déméthylista- mycine A (composé de formule (VIII). On dissout 680 mg (0,78 mmol) du produit venant de l'étape (f) dans 10 ml d'une solution aqueuse à 90 % d'acide trifluor4c&tique à 0 C et on laisse de côté 2 heures pour effectuer l'élimination hydrolytique du groupe tétrahydro- pyranyl avec élimination éventuelle du groupe tert-butoxycar- bonyl. La solution réactionnelle est alors concentrée à 2482 '07 siccité. Le r6sidu obtenu est repris dans 50 ml de chlorofor- me et lavé successivement avec de la soude N et de l'eau. La couche chloroformique est séparée, séchée sur sulfate de sodium anhydre et concentr6e à siccité. Le résidu est puri- fié par Chromatographie sur colonne de gel de silice (50 g de Wako-gol C 200) développée avec un mélange chloroforme- méthanol-ammoniaque 17 % (80: 10: 1) pour donner 350 mg I 2' 6, ((65 %) d'une poudre de N,N,N -benzyloxycarbonyl-N - deglycyl-tri-N4,N6,03-déméthylistamycin A. On ajoute à une solution dans 5 ml de méthanol de 293 eg (0,42 miol) de cette poudre une solution de 27 mg de carbonate de sodium dans 0,5 ml d'eau, puis 55 mg (0,5 - mmol) de chloroformeiate d'éthyl à 0 C. Le mélange obtenu est agité à température ambiante pendant deuxz heures pour effectuer l'introduction du groupe éthoxycarbonyl, après quoi on concentre à siccité la solution réactionnelle et on reprend le résidu dans 30 ml de chloroforme et on lave à l'eau. La couche de Chloroforme est alors séchée sur sulfate de sodiun anhydre puis concentr6e à siccité pour donner 1- 2' 318 rmg (98 %) d'une poudre de tri-N,N,NN' -benzylouy- k4 4 69 3 carbonryl_-N -eéthoxycarbonyl-N -déglycyl-tri- N6 N 3 - d&méthylistamycin A (R = bemazyl et R3 = thyl dans la formule 'VII) Rf 0, 62 en CCM sur gel de silice développée avec un mélange chloroformemethamol-ammoniaque a 7 1 (80: 10: 1). La poudre ainsi obtenue est dissoute dans 8 ml deun mélange méthanol-eau acide ac&tique (2: 1 1) auquel on ajoute 100 mg d'un catalyseur d'hydrogénolyse 5 palladium- carbone; on maintient le mélange pendant deux heures sous un courant d'hydrogène pour effectuer l'élimination des grou- pes benzyloxycarbonyl. Le catalyseur est ensuite éliminé du mélange réactionnel qui est alors concentre à siccité. On fait passer une solution-du résidu dissous dans l'eau à tra- vers une colonne de 11 ml d'Amberlite CG-50 (forme NH, produit par Rohm & Haas Co., USA). La colonne est successi- vement lavée avec de l'eau et de l'ammoniaque 0,1 M puis élu6e avec de l'ammoniaque 0,2 M. L'éluat est concentr6 à siccité pour donner 143 mg (95 %) d'une poudre de N4- éthoxycarbonyl-N -déglycyl-tri-N,N,03-déméthylistamycin A (R = éthyl dans la formule VII'). Rf 0,55 en CCM sur gel de silice développée avec un mélange chloroforme-méthanol ammoniaque à 17 % (3: 3: 1). On dissout 130 ig (0,36 mmol) de la poudre ci-dessus dans 6 ml d'acide trifluorac&tique anhydre à 0 C, on con- centre la solution à siccité et on reprend le résidu dans 3 ml de tétrahydrofuranne sec. On ajoute à la solution obtenue 15 Ml d'un complexe hydrure de bore M/tétrahydro- * furanne (un produit de Aldorich Co., USA) et on agite le mélange à 50 C pendant 18 heures pour effectuer la conver- sion par réduction du groupe éthoxy-carbonylamino en groupe méthyl-amino. On ajoute de l'eau à la solution réactionnelle que l'on concentre ensuite à siccité et on reprend le résidu dans 10 ml d'eau. Le pH de la solution aqueuse est réglé à 8 par addition d'ammoniaque aqueuse et on la fait passer à travers une colonne de 30 ml d'Amberlite CG-50 (forme NH4). La colonne est successivement lavée avec de l'eau et des solutions aqueuse d'ammoniaque 0,2 M, 0,3 M et 0,4 M, puis éluée avec de l'ammoniaque 0,5 M. L'éluat est rassemblé et concentré à siccité pour donner 45 mg (40 %) du monocarbonate du composé désiré sous forme de poudre. Point de décomposition 115 - 118 C. 22 + 102 (c o,65, H20). Spectrométrie de masse: m/e 304 (M+). CCM sur gel de silice: Rf 0,12 si le développement est fait avec la couche inférieure d'un mélange chloroforme- méthanol-ammoniaque à 28 % (2: 1: 1) et Rf 0,50 si le développement- est fait avec un mélange butanol-éthanol- chloroforme-ammoniaque à 17 % (4: 5: 2: 5). Exemple 2 Préparation de la di-N6,03-déméthylistamycine A (composé final de formule I) On dissout 45 mg (0,123 mmol) du monocarbonate de N4-déglycyl-di-N6,03déméthylistamycine A obtenu dans l'étape (g) de l'exemple 1 dans 3 ml de méthanol et l'on ajoute à la solution 0,017 ml (0,123 rmol) de triéthylamine et 94,9 mg (0,38 mmol) de N-benzyloxycarbonyloxysuccinimide o ( A N-OOC - O - CH On laisse reposer le mélange obtenu à température ambiante pendant 6,5 heures pour effectuer l'introduction des grou- pes benzyloxycarbonyl en tant que groupes amino-protecteurs. 1 2' 6' La solution réactionnelle contenant la tri-N,N ,N - benzyloxycarbonyl-N -déglycyl-di-N,0 3-d6méthylistamycin A est alors concentrée à siccité et le résidu repris dans 3 ml de dioxanne, puis on ajoute 67,9 mg (0,18 mol) d'es- ter N-hydroxysuccinimide de N-benzyloxycarbonylglycineo Le mélange ainsi obtenu est maintenu pendant 6 heures à 600C pour effectuer l'introduction du groupe glycyl, après quoi on concentre à siccité6 la solution r6actionnelle con- tenant la tétra-N1,N2 N6,N2 -benzyloxycarbonyl-di-N6,03 déméthylistamycin A ainsi form6e et le résidu est dissous dans 4 ml d'un mélange acide ac6tique méthanol et eau (2: 1: 1). On ajoute à la solution obtenue 50 mg de palladium % -carbone comme catalyseur d'hydrog6nolyse et on laisse reposer pendant 4 heures le mélange sous un courant d'hy- drogène pour effectuer la réaction de d6protection pour l'élimination des groupes benzyloxycarbonyl. Le mélange réactionnel est filtr6 pour éliminer le catalyseur, le filtrat est concentré à siccité et le résidu repris à l'eau. On fait passer la solution aqueuse obtenue à travers une colonne de 6 ml d'Amberlite CG-50 (forme NH4) et on lave la colonne successivement avec de l'eau, de l'ammoniaque 0,1 M et de l'ammoniaque 0,3 M puis on élue avec de l'am- moniaque 0,4 M. L'6luat est rassemblé en fractiosde 1 ml et l'on combine les fractions actives N 4 -10, que l'on concentre à siccité pour obtenir 15 mg (29 %) du monocarbonate de di-N6 -03 -déméthylistamycine A sous forme de poudre. Point de fusion 138 - 145 C (d6comp.), [a] 22 + 136 (c 0,36, eau). 2482 07 - RE VENDICATIONS - 1. Nouveau dérivé de I'istamycine A caractérisé en ce qu'il est la di-N6, O3-dém3thylistamycine A de formule développée: g H2 N (1) OH1I eoCE2NEI ainsi que ses sels d'addition acide. 2. Proc6dé de préparation du composé selon la revendication 1 caractérisé en ee qu'il consiste à btoquer simultané- ment avec un groupe amino-protecteur les trois groupes !! amino en position 1, 2 et 6 du eomposé de-formule dûVelop- pee p5: 6, H2N 3o 4., (VIII) OH HO à faire réagir le dérivé tri-N protégé obtenu avec la gly- cine ou une glycine N-protégée dont le groupe amino a été bloqué avec un groupe amino-protectetur, ou avec un équiva- lent fonctionnel de ladite glycine pour acyler le groupe m6thylamino non prot6g6 en position 4 du compos6 (VIII) et à éliminer tôus les groupes amino-protecteurs restant du produit d'acylation. 3. Procédé selon la revendication 2 caract6risé en ce que le groupe aminoprotecteur servant au blocage des trois k0 groupes amino est le groupe benzyloxycarbonyl. 4. Procédé selon:la revendication 3 ou la revendication 4 caractérisé.en ce qu'on fait réagir le dérivé protégé du composé (VIII) avec l'ester Nhydroxysuccinimide de la N-benzyloxycarbonylglycine. 5. Procéd6 selon l'une quelconque des revendications 2 à 4 caract6risé en ce que les groupes amino-protecteurs r6siduels sont élimin6s par hydrogénolyseï 6. Compesition pharmaceutique comportant comme ingrédient actif une quantité thérapeutiquement efficace du compos6 de formule (I) ou de l'un de ses sels d'addition acids pharn:a- ceutiquement acceptable, en combinaison avec un support ou un adjuvant pharmaceutiquement acceptable. -25