Brevet FR2483078A1 — publié le 19811127

ispositif d'analyse simultanée perfectionné L'invention concerne un dispositif d'analyse, du type de ceux utilisant un support solide d'accrochage destiné à capter suecessi vement une quantité d'un premier réactif tel qu'un liquide biologique (sérum ou plasma par exemple) contenant la substance à dose, puis une quantité d'un deuxième réactif contenant une protéine sur laquelle est fixé un indicateur biologique (par exemple un enzymeS ou un radioisotope pour la radio-immunologie). Les techniques actuelles utilisent un support solide d'accrochage qui est usuellement une bille sphérique en polystyrène recousent d'une protéine ayant des propriétés de type anti-corps (par exemple un polypeptide provenant d'un animal vacciné). Il a déjà été proposé par le demandeur dans la demande de brevet français nO 79 26615 déposée le 26 octobre 1979 un dispositif fiable, de conception simple, et parfaitement adapté à une analyse simultanée avec plusieurs dosages, avec le minimum de manipulations, essentiellement constitué d'un rotor d'analyse comportant d'une part une pluralité de cellules périphériques contenant chacune au moins une bille d'accrochage, et d'autre part des moyens permettant l'acheminement d'un liquide de lavage vers chaque cellule, chacune desdites cellules étant munie d'un orifice périphérique d'éjection de liquide, et présen- tant une portion supérieure munie d'un orifice d'admission d'un réactif et une portion inférieure recevant ledit réactif et dont le fond permet de remonter la ou les billes sensiblement au niveau dudit orifice périphérique lorsque le dispositif est soumis à une centrifugation de façon à pouvoir rincer énergiquement la ou les billes au moyen du liquide de lavage admis dans ladite cellule. Ce dispositif d'analyse peut présenter en outre l'une au moins des caractéristiques suivantes - les moyens permettant l'acheminement du liquide de lavage sont essentiellement constitués par un orifice central d'admission duquel partent des conduits radiaux reliant ledit orifice central à chacune des cellules périphériques ; de préférence, les conduits radiaux sont dans un plan essentiellement perpendioulaire à l'axe de rotation du dispositif, et débouchent dans chaque cellule sensi blement au même niveau que l'orifice périphérique d'éjection de liquide de ladite cellule, - les orifices d'admission du réactif sont équidistants de l'axe du rotor, - le rotor est obtenu par superposition de deux portions coaxiales dont les bords périphériques en contact définissent directement les orifices périphériques des cellules. Dans le mode de réalisation décrit dans la demande de brevet précitée, le fond de chaque cellule présente une allure générale inclinée déterminée de telle façon que d'une part la portion inférieure de la cellule présente un volume suffisant pour recevoir une bille et la quantité de réactif la recouvrant, et que d'autre part ladite bille soit guidée sensiblement jusqu'au niveau de l'orifice périphérique de ladite cellule lors de la centrifugation ; il a été en outre indiqué que, de préférence, les parois définissant la portion inférieure de chaque cellule permettent une analyse photométrique simultanée. L'invention a pour but de simplifier le dispositif décrit cidessus. Dans le dispositif selon la présente invention, le support solide d'accrochage est constitué par la paroi de la portion inférieure de chaque cellule, dont les faces interne et externe sont parallèles, la face externe présentant en outre un déversoir latéral terminé par l'orifice d'éjection et permettant l'évacuation totale du liquide de lavage lors de la centrifugation. D'autres caractéristiques et avantages de l'invention apparaitront plus clairement à la lumière de la description qui va suivre, donnée à titre illustratif mais nullement limitatif, en référence aux figures du dessin annexé, où : - la figure 1 est une coupe axiale partielle montrant schématiquement le dispositif conforme à l'invention. - la figure 2 est une vue en perspective de la portion inférieure d'une cellule du dispositif selon l'invention. Comme dans la demande de brevet précitée, le dispositif d'analyse conforme à l'invention, est essentiellement constitué d'un rotor comportant d'une part une pluralité de cellules périphériques 2, et d'autre part de moyens permettant l'acheminement d'un liquide de lavage vers chaque cellule. Plusieurs moyens sont possibles pour acheminer un liquide de lavage : on a illustré ici une possibilité particulièrement simple et efficace en prévoyant un orifice central d'admission 4 duquel partent des conduits radiaux 5 reliant ledit orifice central à chaque cellule périphérique 2, lesdits conduits étant dans un plan essentiellement perpendiculaire à l'axe de rotation 6 du dispositif ; on pourrait aussi bien prévoir une gouttière annulaire à la place de l'orifice central 4, de laquelle partiraient des conduits de raccordement radiaux vers chaque cellule périphérique.Il est à noter que les conduits radiaux 5 sont ici définis par deux portions complémentaires formées sur chacune des deux parties formant le rotor 1, mais que tout autre type de conduit serait envisageable, tel par exemple qu'un bord plat sur une partie du rotor (donc sa face interne) et une rainure sur l'autre partie. Chaque cellule 2 est par ailleurs munie d'un orifice périphérique 7 d'éjection de liquide, ici défini directement par superposition des bords périphériques des deux portions coaxiales-formant le rotor, et présente une portion supérieure munie d'un orifice 8 d'admission. L'homme de l'art choisira tout moyen pour la liaison et le positionnement respectif des deux portions formant le rotor. Selon l'invention, le support solide d'accrochage est constitué par la paroi de la portion inférieure des cellules 2 qui est recouverte d'une protéine ayant des propriétés de type anti-corps. Avantageusement les faces interne 21 et externe 22 de la cellule au niveau de cette portion inférieure sont parallèles. De plus la face externe 22 présente un déversoir latéral 23 terminé par l'orifice d'éjection 7, ce déversoir étant positionné, comme représenté, à la partie postérieure de la cellule par rapport au sens de rotation. Comme dans le dispositif décrit dans la demande précitée, le rotor est disposé sous un dispositif d'alimentation, de façon à injecter dans chaque cellule 2 par son orifice 8, un volume (de préférence calibré) d'un premier réactif tel que sérum, plasma ou tout autre liquide biologique contenant la substance à doser ; après cette injection, on laisse reposer pendant le temps d'incubation nécessaire. Le rotor est ensuite mis en rotation par des moyens d'entrai- nement tout à fait classiques, et on injecte du liquide de lavage par -l'orifice central 4. Avantageusement on prévoit à la sortie des conduits 5 des moyens 24 formant chicanes de manière à bien diriger le liquide de lavage vers le fond de la cellule. Pour chaque cellule, la centrifugation a pour effet d'éjecter l'excès de réactif par l'orifice périphérique 7. En outre, le liquide de lavage, dont la bonne répartition peut être favorisée par la présence d'une protubérance centrale 14, passe par les conduits radiaux 5, et vient laver énergiquement les parois de la portion interne de chaque cellule 2, ledit liquide s'échappant par les orifices périphériques 7, l'évacuation étant complète du fait de la présence du déversoir latéral 24. Après le lavage on peut procéder facultativement à un séchage en coupant l'admission du liquide de lavage tout en maintenant la centrifugation. Ces opérations sont ensuite réitérées avec le deuxième réactif, qui contient une protéine sur laquelle est fixé un indicateur biolo giquetel par exemple qu'un enzyme ou un radio-isotope. Une fois le rotor arrêté, on peut procéder une analyse simultanée, analyse directe avec un compteur si l'on utilise des radio-isotopes, ou indirecte si l'on utilise en plus un réactif coloré et éventuelle ment un réactif de stoppage de réaction. Le parallélisme des faces interne et externe de la portion inférieure des cellules facilite bien évidemment les analyses photo métriques au niveau de chaque cellule. REVENDICATIONS 1/ Dispositif d'analyse utilisant un support solide d'accrochage destiné à capter successivement une quantité d'un premier réactif tel qu'un liquide biologique contenant la substance à doser, puis une quantité dgun deuxième réactif contenant une protéine sur laquelle est fixé un indicateur biologique; comportant un rotor d'analyse présentant d'une part une pluralité de cellules périphériques, et d'autre part des moyens permettant l'acheminement d'un liquide de lavage vers chaque cellule, chacune desdites cellules étant munie d'un orifice périphérique d'éjection de liquide, et présentant une portion supérieure munie d'un orifice d'admission d'un réactif et une portion inférieure recevant ledit réactif, caractérisé par le fait que ledit support solide d'accrochage est constitué par la paroi de la portion inférieure de ladite cellule, les faces interne et externe à ce niveau étant parallèles, la face externe présentant en outre un déversoir latéral terminé par l'orifice d'éjection et permettant l'évacuation totale du liquide de lavage. 2/ Dispositif d'analyse selon la revendication 1, caractérisé par le fait que ledit déversoir est positionné à la partie postérieure de la cellule par rapport au sens de rotation. 3/ Dispositif d'analyse selon l'une des revendications 1 et 2, carac terisé par le fait que les moyens permettant l'acheminement du liquide de lavage sont essentiellement constitués par un orifice central d'admission duquel partent les conduits radiaux reliant ledit orifice central à chacune des cellules périphériques. h/ Dispositif d'analyse selon la revendication 3; caractérisé par le fait que les conduits radiaux sont dans un plan essentiellement perpendiculaire à l'axe de rotation du dispositif. 5/ Dispositif selon l'une des revendications précédentes, caractérisé par le fait qu'au débouché des conduits radiaux on prévoit des moyens formant chicanes pour diriger le liquide de lavage vers le fond des cellules. 6/ Dispositif d'analyse selon l'une des revendications précédentes, caractérisé par le fait que le rotor est obtenu par superposition de deux portions coaxiales dont les bords périphériques en contact définissent directement les orifices périphériques des cellules.