Brevet FR2477546A1 — publié le 19810911

-477546 1 - "Composés carbapénènmes et leurs procédés de fabrication." La présente invention concerne de nouveaux composés car- bapénèmnes ayant la formule CH3 H H CH3-C.Cs-Cc X-NtCOCH13 R-0 CooI( dans laquelle R est un groupe -SO3H ou l'hydrogène, ou bien un sel de ces composés physiologiquement acceptables, qui ont une valeur comme agents bactéricides. Le composé. objet de la formule (I) ou son selphysiologique- ment acceptable (désigné par la suite par "composé (I)") peut être préparé en soumiettant à une réaction de réduction un composé ayant la formule (Ii) C'13 tlI Il3}H $ 20.CH13- C_ S c (INI R-O O.i-. 3 0 R COOH dans laquelle R a la même signification que ci-dessus ou son sel, (désigné par la suite par "composé (II)"). Dans la formule (lI), le composé dans lequel R est un groupe -SOt3H est désigné sous le nom d'"antibiotique C-119393S2" et le composé dans lequel R est de l'hydrogène est désigné sous le noma "antibiotique C-193931-1H2". Conmmue exemple de réaction de réduction ci-dessus, on peut mentionner la réduction catalytique. Dans cette réduc- tion catalytique, les procédés classiques peuvent être adop- tés et comme exemples de catalyseurs, on peut mentionner les catalyseurs au platine tels que le fil de platinEla ncus.e de platine, le noir de platine, l'oxyde de platine et le pla- tlne colloïdal; les catalyseurs au palladium, -tels que la mousse de palladium, le noir de palladium, l'oxyde de palla- dium, le sulfate mixte de palladium et de baryum, le carbo- nate mixte de palladium et de baryum, le pallasium sur charbon, le palladium sur gel de silice, et le palladium colloidal, et les catalyseurs au nickel tels que le nickel réduit, l'oxyde de nickel, le nickel Raney, et le nickel Urushibara. Des exem- ples de solvants utilisables comprennent des solvants pouvant dissoudre le composé de départ (II), tels que l'eau et les mé- langes d'eau et de solvants organiques polaires, par exemple dioxane, tétrahydrofurane, diméthylformamide, méthanol, étha- nol, propanol, etc. La réaction est conduite de préférence à 00-50 C sous une pression d'hydrogène de 1 à 2 bars. Une fois la réaction terminée, le composé en question (I) de la pré- sente invention peut être facilement séparé des matières de départ n'ayant pas réagi, ou des sous-produits de la réaction, en éliminant le catalyseur du mélange réactionnel par un pro- cédé approprié tel que la filtration, et en soumettant le mélange à la chromatographie sur colonne qui comprend l'adsorption sur une résine adsorbante en polystyrène telle que la résine "'Amberlite XAD-II" (Rohm & Haas CO., U.S.A.) et en éluant avec de l'eau ou une solution hydro-alcoolique comme solvant d'élu- tion. Typiquement, la détection de la fraction éluée à partir de la résine "XAD-II" est effectuée en injectant une partie de ladite fraction sous forme d'un échantillon dans un systè- me de chromatographie en phase liquide sous haute pression utilisant-un détecteur d'UV à 254 nm et du "Microbondapak C18" (Water Associates Inc., USA). Les sels des composés (I) et (II) comprennent par exemple ceux de métaux alcalins, tels que sodium, potassium, et li- thium; ceux de métaux alcalino-terreux tels que magnésium, calcium et baryum, et ceux d'amines organiques telles que triméthylamine, triéthylamine et pyridine. Le composé de départ (II) de la présente invention est préparé par exemple en cultivant la souche C-19393 de Streptomyces sp. (FERMP-P n 4774, IFO 13886, ATCC 31486) dans un milieu contenant des produits de nutrition que le mi- cro-organisme peut consommer, et est désigné sous le nom Antibiotic C19393 S2 et H2 (brevet allemand publié n 03 624). Le spectre bactéricide du composé de formule (I) dans [477546 laquelle R est un groupe -SO3H, tel qu'obtenu dans l'exem- ple 1 (décrit plus loin) est indiqué dans le tableau 1. Tableau 1 Organismes essayés Concentration inhibitrice minimale ( /ml) Escherichia coli NIHJ Salmonella typhimurium IFO 12529 Klebsiella pneumoniae IFO 3318 Proteus vulgaris IFO 3988 Proteus mirabilis ATCC 21100 Serratia marcescens IFO 12648 Alcaligenes faecalis IFO 13111 Pseudomonas aeruginosa IFO 3080 Comamonas terrigena IFO 13299 Staphylococcus aureus 209P Sarcina lutea IFO 3232 Bacillus cereus FDA 5 Note) milieu: Bouillon agar 6,25 6,25 6,25 12,5 > 25 >25 6,25 12,5 3,13 6,25 Le spectre bactéricide du composé de formule ( I) dans laquelle R est de l'hydrogène, tel qu'obtenu dans l'exem- ple 2 est montré dans le tableau 2. Tableau 2 Organismes essayés il Eseherichia coli NIHJ Salmonella thyphimurium IFO 12529 Klebsiella pneumoniae IFO 3318 Proteus vulgaris IFO 3988 Proteus mirabilis ATCC 21100 Serratia marcescens IFO 12648 Alcaligenes faecalis IFO 13111 Pseudomonas aeruginosa IFO 3080 Comamonas terrigena IFO 13299 Staphylococcus aureus 209P Sarcina lutea IFO 3232 Concentration ihibitrice minimale ( yg/ml) 0,31 0,31 0,31 > -10 2,5 1,25 >10 0,31 2,5 0, 62 0,31 - a477546 Bacillus cereus FDA 5 > 10 Note) Milieu: Bouillon agar. Le composé (I) obtenu selon la présente invention, comme on peut le voir d'après le spectre bactéricide ci-dessus, montre une activit5bactéricide contre les bactéries gram- positives et gram-négatives. Par conséquent, le composé (I) peut être utilisé pour le traitement des infections bacté- riennes chez les mammifères (par exemple souris, rats, chiens, être humains, etc.) et les animaux domestiques,(par exemple volaille, canards, etc.). Pour utiliser le composé (I) comme agent de traitement, par exemple des infections dues à E. coli, le composé (I) est dissous dans la solution saline physiologique pour pré- parer une solution injectable qui puisse être administrée par voie parentérale, par exemple sous-cutanée ou intra- musculaire à une dose de 0,1 à 200 mg/kg/jour, de préféren- ce de 1 à 50 mg/kg/jour. Egalement pour l'administration orale, le composé (I) est mélangé avec du lactose et mis en capsule pour préparer une préparation en capsule qui puisse être administrée à une dose de 1 à 500 mg/kg/jour, de préférence de 5 à 200 mg/kg/jour. En outre, le composé (I) obtenu selon la présente in- vention peut être utilisé comme désinfectant. Par-exemple, une préparation liquide qui peut être préparée en dissol- vant le composé (I) dans l'eau distillée à une concentra- tion de 0,01 à 1 % (poids/volume) ou une pommade contenant 0,5 à 50 mg, de préférence de 2 à 20 mg de composé (I) par gramme de vaseline blanche ou de lanoline comme base, peu- vent être-utilisées comme bactéricides ou désinfectants pour les mains, les jambes, les yeux, les oreilles, etc. des animaux ci-dessus. Le composé (I) montre une activité inhibitrice de la béta-lactamase, et, par conséquent, augmente remarquable- ment la sensibilité des bactéries,résistant à la pénicil- line ou à la céphalosporine,vis-à-vis de l'ampicilline ou du céfotiame,due à son aptitude à produire la béta-lactamase. Z477546 Par conséquent, le composé (I) peut être utilisé pour le traitement des infections chez les mammifères, (par exemple les souris, les rats, les chiens, l'homme), et pour les espèces aviaires, par exemple (volailles, canards), en par- ticulier les infections bactériennes dues aux bactéries résistant à l'antibiotique béta-lactame en combinaison avec les antibiotiques pénicillines ou céphalosporines. Quand le composé (I) est utilisé en combinaison avec d'autres agents du type béta-lactame, pour le traitement des infections, par exemple par 1'E coli résistant à l'antibio- tique bêta-lactame, des quantités égales du composé (I) et d'ampicilline sont dissoutes dans la saline physiologi- que pour préparer une sélection injectable qui peut être administrée par voie parentérale, par exemple sous-cutanée ou intramusculaire, à une dose de 0,1 à 20 mg/kg/jour, de préférence de 0,5 à 5 mg/kg/jour. Le composé (I) peut aussi être administré par voie orale à une dose de 1 à 200 mg/kg/ jour, de préférence de 5 à 100 mg/kg/jour, sous forme de ca- chets contenant chacun une proportion égale du composé (I) et de céphalaxine. Quand le composé (I) est utilisé conne désinfectant, une préparation liquide, par exemple une solution aqueuse con- tenant le composé (I) à une concentration de 0,1 à 10 % (poids/volume) et de benzylpénicilline à une concentration de 0,1 à 1 % (poids/volume) ou un baume contenant 5 à 20 mg du composé (I) et 5 à 20 mg de benzylpénicilline par gramme de vaseline blanche ou de lanoline comme base, peu- vent être utilisées comme bactéricides ou désinfectants pour les mains, les jambes, les yeux, les oreilles, etc. des animaux ci-dessus. Le composé (I) est également attendu pour être très uti- lisable comme intermédiaire pour la synthèse de nouveaux types de produits pharmaceutiques. Les composés de la pré- sente invention sont stables en solution aqueuse dans la zone des pH neutres. La présente invention est illustrée par les exemples références et les exemplesdescriptifs et non limitatifs ci-après; dans les exemples références les pourcentages sont exprimés en poids/volume, sauf indications contraires. Exemple référence 1 Une culture de la souche C-19393 (IFO 13886, ATCC 31486) de Streptomyces sp. est développée sur 200 ml d'un milieu comprenant 2 % de farine d'orge, 2 % de pâte de tomates, 0,2 % de "Bovril" (fabriqué par Bovril, Angleterre) et 2 % d'agar (pH 7) chargé dans un flacon Erlenmeyer de 1 1 pour obtenir des spores. Les spores résultants sont ensuite mis en suspension dans de l'eau stérilisée à une concentration de 1,2 x 108 cellules vivantes/ml. La suspension de spores est diluée avec de l'eau stérilisée à un volume égal à 10 fois le volume original et 1 ml de la suspension diluée est utilisée pour ensemencer 40 ml d'un bouillon de culture dans un Erlenmeyer de 200 ml. Le bouillon de culture ense- mencé est ensuite cultivé sur un agitateur rotatif à 28WC pendant 2 jours. La culture résultante est utilisée pour ensemencer 500 ml d'un bouillon de culture à ensemencer chargé dans un flacon à agitateur "Sakaguchi" de 2 litres et le bouillon de culture, ensemencé est cultivé sur une secoueuse à va-et-vient à 28WC pendant 2 jours. La culture de germ6 ainsi obtenue est transférée dans un bac de fermen- tation en acier inoxydable de 50 litres contenant 30 litres d'un bouillon de culture renfermant 15 ml d'"Actocol" (Take- da Chemical Industrie, Ltd., Japon),et cultivée à 281C pen- dant 3 jours, avec une aération de 30 litres/minute et une agitation de 280 tours/minute. Le bouillon de culture est transféré dans un bac de fermentation de 2 m3 de capacité contenant 1,2 m3 d'un bouillon de culture principal et cul- tivé à 300C pendant cinq jours tout en aérant à raison de 840 1/minute et en agitant à 180 tours/minute. Le bouillon de culture utilisé ci-dessus est composé de 20 g de glucose, g d'amidon soluble, 10 g de farine de soja brut, 10 g de liqueur de macération du mais, 5 g de "Polypeptone" (Daigo Nutritive Chemicals, Ltd., Japon), 3 g de chlorure de sodium et 5 g de carbonate de calcium précipité par rapport à 1 litre du bouillon qui a été réglé à un pH 7 avant la stérilisation, et le bouillon de culture principal utilisé ci-dessus est composé de 30 g de glucose, 30 g E477546 d'amidon soluble, 15 g de farine de soja dégraissée, 15 g de farine de graines de coton, 0,25 g de monophosphate de potassium, 0,6 g de diphosphate de potassium, 0,002 g de chlorure de cobalt, et 0,5 g dl'"Actocol" par litre de bouillon qui a été réglé à pH 7 avant la stérilisation. Tous les bouillons utilisés ci-dessus sont stérilisés à la va- peur à 120 C pendant 20 minutes. Le bouillon de fermentation ainsi obtenu est filtré avec "Hyflo-Supercel" (Johnes Manville Co., U.S.A.) pour obtenir 1230 1 d'un filtrat qui a été réglé à pH 6,3 et passé à travers une colonne remplie de 100 1 de charbon ac- tif. Ensuite, les C-19393S2 et H2 sont élués de la colonne respectivement avec 300 litres d'eau et 700 litres d'une solution aqueuse à 7 % d'isobutanol. L'éluat conte- nant le C-19393S2 est passé à travers une colonne de "Doivex" 1 x 2 (Dow Chemical Co., U.S.A., forme Cl, 2 1.), et la colonne est lavée avec 6 litres d'eau et éluée avec 32 li- tres d'une solution aqueuse à 5 % de chlorure de sodium. L'éluat est réglé à pH 5 et est passé à travers une colon- ne remplie de 4 litres de charbon actif. Après lavage avec 12 litres d'eau, l'antibiotique désiré est élué avec 7 litres de solution aqueuse à 8 % d'isobutanol et 12 litres d'un mélange isobutanol: ammoniaque N/20 (8:92), et l'éluat est concentré à un volume de 150 ml sous pression réduite. 1350 ml de méthanol sont ajoutés au concentré et le précipité ainsi formé est éliminé par filtration. Le filtrat est concentré à un volume de 200 ml et passé à travers une colonne remplie avec 300 ml de "Sephadex-DEAE A-25" (Pharmacia Co., Suède, forme Cl-). La colonne est lavée successivement avec des solutions aqueuses de chlo- rure de sodium 0,1 M et 0,2 M (chacune 900 ml) puis la substance antibiotique désirée est éluée avec 1500 ml d'une solution aqueuse de chlorure de sodium 0,4 M. L'éluat est réglé à pH 5 et passé à travers une colonne remplie avec 500 ml de charbon actif. Après lavage avec 1,5 1 d'eau, la colonne est éluée avec 2,5 1 d'un mélange iso- butanol: ammoniaque N/20 (8:92), et l'éluat est concentré à siccité et de l'acétone est ajoutée au résidu pour obte- nir 2,4 g d'une poudre jaune pâle. Après dissolution de la poudre résultante dans une petite quantité d'eau, la solution est passée à travers une colonne remplie avec 1,2 litre d"'Amberlite XAD II" mailles 100 à 200) et éluée par frac-s tions avec de l'eau. Les fractions qui manifestent un pou- voir antibiotique sont rassemblées et concentrées et le concentré est passé à travers une colonne remplie avec 200 mhl de "QAiE-Sephadex A-25" (Pharmacia Co, Suède, de forme Cl). Après lavage avec 600 ml d'une solution aqueuse de chlorure de sodium 0,1 M, la colonne est éluée avec 1,2 litre d'une solution aqueuse de chlorure de sodium 0,2 M. L'éluat est réglé à pH 5 et est passé à travers une colonne remplie avec 600 ml de charbon actif. Après l'avoir lavée avec 1, 8 litre d'eau, la colonne est éluée avec 3 litres du mélange isobu- tanol: ammoniaque N/20 (8:92). L'éluat est concentré à sic- cité et l'acétone est ajoutée au résidu pour obtenir 1,07 g d'un produit pulvérulent. Une portion de 620 mg de la poudre ainsi obtenue est dissoute dans une petite quantité d'eau et la solution est passée à travers une colonne remplie avec 300 ml dl "Amberlite XAD-II" (maille 100 à 200). la colonne est ensuite éluée et fractionnée avec de l'eau, et chacune des fractions qui manifeste un pouvoir antibiotique est soumise à l'analyse par chromatographie en phase liquide comme dé- crit ci-dessus. Les fractions qui montrent un pic simple sont rassemblées et concentrées à siccité, et l'acétone est ajoutée au concentré pour obtenir 136 mg du sel disodique de l'antibiotique C-19393S2 sous forme d'un produit pulvé- rulent blanc. Pouvoir rotatoire spécifique du produit g) 22 -1520+150 (C = 0,5,-;eau). Exemple référence 2 L'éluat de C-19393H2 obtenu dans l'exemple référence 1 est passé à travers une colonne de "Dowex" 1 x 2 (forme Cl 12 1), et la colonne est lavée avec 6 litres d'eau et éluée avec 180 litres d'une solution aqueuse à 5 % de chlorure de sodium. L'éluat est passé sur une colonne remplie avec 25 litres de charbon actif. Après lavage avec 75 litres d'eau, l'antibiotique désiré est élué avec 175 litres d'un mélange d'isobutanol: eau (7:93), et l'éluat est ramené à un volume de 2 à 3 litres sous pression réduite. 15 litres de méthanol sont ajoutés au concentré et le précipité ainsi formé est éliminé par filtration. Le filtrat est ramené à un volume de 2 litres et passé sur une colonne remplie avec 5 litres de résine"Diaion HP-20"type à forte porosité (Mitsubichi Chemical Industries, Japon, désigné par la suite par "Diaion HP-20Ir, maille 50). La colonne est ensuite éluée et fraction- née avec 5 litres d'eau puis avec 10 litres d'un mélange méthanol: eau (1: 9). Les fractions ainsi obtenues sont rassemblées et concentrées, et le concentré est passé sur une colonne rem- plie avec 3 litres de "DEAE-Sephadex A-25" (forme Cl-). La colonne est lavée avec 9 litres d'une solution aqueuse de chlorure de sodium 0,02 M et l'antibiotique désiré est élué et fractionné avec 12 litres d'une solution aqueuse de chlo- rure de sodium 0,05 M. Les fractions actives sont passées sur une colonne remplie avec 2 litre de "Diaion HP-20" (mail- le 50) qui a été traitée avec 4 litres d'une solution aqueu- se de chlorure de sodium et, après l'avoir lavé avec 10 li- tres d'une solution aqueuse à 5 X de chlorure de sodiumle principe actif est élué et fractionné avec 10 litres de mé--- lange méthanol:solution aqueuse à 5 % de chlorure de sodium (5:95), et 10 litres d'un mélange méthanol:solution aqueuse à 5 % de chlorure de sodium (1:9). Les fractions actives sont passées sur une colonne remplie avec 500 ml de charbon actif et, après lavage avec ",5 litre d'eau, sont éluées avec 2,5 litres d'une solution aqueuse à 7 % d'isobutanol. L'é- luat est concentré et le concentré est passé sur une colon- ne remplie avec 1 litre de "Diaion HP-20" (maille 50 à ) et élué et fractionné avec de l'eau. Les fractions ayant un pouvoir antibiotique sont rassemblées et concentrées et le concentré est passé sur une colonne remplie avec 200 ml de "QAE Sephadex A-25" (forme Cl) qui a été traité avec 400 ml d'une solution aqueuse 0,02 M de chlorure de sodium. La colonne est ensuite éluée successivement avec des solu- tions aqueuses de chlorure de sodium 0,02 M, 0,03 M et 0,04 M. (1 litre de chaque solution). Les fractions actives sont passées sur une colonne remplie avec 200 ml de charbon actif et, après lavage avec 0,6 litre d'eau, sont éluées E477546 avec 1 litre d'une solution aqueuse à 7 % d'isobutanol. L'éluat est concentré et du propanol est ajouté au concentré pour préparer une solution aqueuse à 90 % de propanol qui est ensuite soumise à une chromatographie sur colonne d"'Avicel" qui a été traitée avec une solution à 90 X de propanol. La colonne est éluée avec une solution aqueuse à % de propanol. Les fractions actives sont concentrées et le concentré est soumis à la chromatographie sur colonne sur 350 ml d'"'Amberlite XAD-II" (maille 100 à 200) et la colonne est éluée avec de l'eau. Les fractions actives sont concentrées etle concentré est soumis à une chromato- graphie préparative en phase liquide sous haute pression utilisant le produit'IRP-181" (E. Merck & Cie, Allemagne de l'Ouest) en temps que support et élué avec du méthanol à 10 X dans un tampon phosphate 0,02 M (pH 6,3). Les fractions actives sont passées sur une colonne remplie avec 40 ml de "DIAION HP-20" (maille 100 à 200) et éluées par fractions avec de l'eau. Chacune des fractions qui révèlent un pouvoir bactéricide est soumise à l'analyse par chromatographie en phase liquide comme décrit ci-dessus. Les fractions qui mon- trent un pic simple sont rassemblées et lyophilisées pour obtenir 12 mg du sel de sodium de C--19393H2 sous forme d'un produit pulvérulent blanc. Pouvoir rotatoire spécifique du produit ( (C = 0,156, eau). EXEMPLE 1 La poudre brute (30 % de pureté, 60 mg) du sel disodique de l'antibiotique C-19393S2 est dissoute dans une solution aqueuse à 10 % de méthanol (20 ml) et la solution résultan- te est ajoutée à un mélange de méthanol aqueux à 10 % (10 ml) et de palladium à 10 % sur du charbon (20 mg), dans lequel l'hydrogène a été introduit auparavant pendant 30 minutes. Ensuite, l'hydrogène est introduit dans le mélange résultant, à la température ordinaire, sous une pression de 1 bar pendant 3 heures pour effectuer la réduction, et le catalyseur est ensuite éliminé par filtration, suivi d'une concentration du filtrat sous vide à un volume de 2 ml. La solution concentrée est passée sur une colonne remplie il avec 50 ml d'"Amberlite XAD-II" (maille 100 à 200) et le composé en question est adsorbé sur l'adsorbant puis élué avec de l'eau. Les fractions comprises entre 45 ml et 150 ml qui contiennent le composé cherché sont rassemblées et lyophilisées, ce qui permet d'obtenir 7,3 mg d'une poudre de [5R, 6R) -3- [(E)-2-acétamido-éthénylthioj-6-t1-(hydroxy- sulfonyloxy)-1--méthyléthyl-7-oxo-l-azabicyclot3,2,6Ojhepto-- 2-ène-2-carboxylate disodique. o UV: >max H20)228 et 309 nm o IR: Ymax(KBr) 1760, 1620, 1240, 1050 cm 1 Chromatographie en couche mince[Cellulose f (Tokyo Kasei Co., Ltd.): Rf = 0,65 (système solvant: propanol: eau = 4:1); chromatographie en phase. liquide, sous haute pression (Waters Associates Inc.): Rt = 4,4 min. U'Microbondapak C l/méthanol 14 %-tampon phosphate 0,02 M (pH 6,3), 2 ml/ min./cm (14 bars)2 o Rt du composé de départ dans les mêmes conditions est de 2,2 minutes. o RMN;S (100 MHz, D20,TMS): 1,63(3H,S, C8-CH3), 1,70 (3H,S,C8-CH3), 2, 10(3H,S,COCH3), 3,05(1H,dd,J=lO,19,C4-H), 3,82 (1H,dd10,5,19,C4-H), 3, 88(1H,d,J=6,C6-H); 4,20(1H,m, C5-H), 6,10(1Hd,J=14,N-CH=), 7,20(1H,d,S-CH=). - EXEMPLE 2 Une poudre crue (30 % de pureté, 8 mg) du sel de sodium de l'antibiotique C-19393 H2 est dissoute dans du méthanol aqueux à 10 % (10 ml) et la solution est ajoutée à un mé- lange de méthanol aqueux à 10 % (10 ml) et de palladium à 10 % sur du charbon (20 mg) dans lequel de l'hydrogène a été introduit au préalable pendant 30 minutes. Ensuite, l'hydrogène est encore introduit dans le mélange résultant à la température ordinaire sous une pression de 1 bar pen- dant 3 heures pour effectuer la réduction, et le cataly- seur est ensuite éliminé par filtration, puis le filtrat est concentré sous vide à un volume de 2 mlo La solution concentrée est passée sur une colonne (10 ml) d'"Amberlite XAD-II" (maille 100 à 200) et le composé cherché est adsorbé sur l'adsorbant. Après avoir lavé la colonne avec de l'eau (50 ml), l'élution est effectuée avec un mélange méthanol 20 %-eau, et les fractions contenant le composé cherché sont rassemblées. Le méthanol des fractions actives est chassé par distillation et le résidu est lyophilisé ce qui donne 1,0 mg de poudre de L5R, 6R -3-U(E)-2-acétamidé- thénylthio -6-[1-hydroxy-1-méthyléthyl3 -7-oxo-1-azabicyclo-- 3,2,d hepto-.2-ne-2-carboxylate de sodium. o UV: Amax (H20) 229 et 310 nm -1 o IR: Vmax (KBr) 1760, 1620 cm o Chromatographie en couche mince [Cellulose f (Tokyo Kasei Co., Ltd.): Rf = 0,87. (Système solvant: propanol: eau = 4: 1). Chromatographie en phase liquide sous haute pression (fa- briqué par Waters Associates Inc., USA): Rt = 8,2 minutes "Microbondapak C18 /méthanol 14% -tampon phosphate 0,02 M (pH 6,3), 2 ml/min/cm (140 bars)] o Rt du composé de départ dans les mêmes conditions est de 4,3 minutes. o RMN: e(1OOMHz, D20, TMS): 1,33(3H,s,C8-CH3), 1,44(3H, sC8-CH3), 2,10(3H, s,COCH3), 3,03(1H,dd,J=10,19,C4-H), 3,85(1H,dd,J=10,5,19,C4-H), 3,72(1H,d, J=6,C6-_H); 4,28(1H, m,C5-H), 6,10(1H,d,J=14,N-CH=), 7,20(1H,d,S-(CH_) 2O REVENDICATIONS 1.- Composé de formule: CH 3HH CH3- C S ^C=CH 3 HJJ HNHCOCH3 R-OO COOH dans laquelle R est un groupe -SO3H ou de l'hydrogène, ou bien un sel physiologiquement acceptable de ce composé. 2.- Procédé pour la préparation d'un composé de formule CH3 H H - H 1 == -- ' C jC CH3-C aI- - NHCOCH3 R-O O N COOH dans laquelle R est un groupe -SO3H ou de l'hydrogène, ou bien un sel physiologiquement acceptable de Ge canposé, carac- térisé par le fait qu'il comprend la soumission à une réac- tion de réduction d'un composé ayant la formule: 0 CH3 H H H CH3-C [ H:.C.CH dans laquelle R a les significations mentionnées ci-dessus, ou bien d'un sel de ce composé.