Brevet FR2479232A1 — publié le 19811002

Nouvelle substance antibiotique des séries SF-2107 et procédé pour la préparer. L'invention concerne une nouvelle substance anti- biotique et un procédé pour la préparer. Plus particu- lièrement, elle concerne une nouvelle substance de la série des antibiotiques SF-2107 et également un procé- dé pour préparer une nouvelle substance des séries d'antibiotiques SF2107, procédé comprenant la culture d'un microorganisme produisant une substance des sé- ries antibiotiques SF-2107 et appartenant au genre dactylosporangium dans un milieu de culture et l'iso- lement de ladite substance antibiotique des séries SF-2107 du bouillon de culture résultant. Dans la présente demande, la "substance antibio- tique des séries SF-2107" signifie une substance SF- 2107 A-1, une substance SF-2107 B et/ou une substance SF-2107 C. Les inventeurs ont trouvé qu'il se produit dans le bouillon de culture d'une certaine souche une sub- stance qui présente une activité antibactérienne à la fois contre les bactéries gram-positives et les bacté- ries gram-négatives. Ils ont ensuite isolé ladite sub- stance active à l'état pur et étudié ses propriétés et par suite confirmé qu'elle est une nouvelle substance antibiotique différente des substances connues. On a appelé la substance une substance antibiotique des séries SF-2107 et plus particulièrement une substance SF-2107 A-1, une substance SF-2107 B ou une substance SF-2107 C. Comme microorganisme produisant la nouvelle sub- stance antibiotique des séries SF-2107, on peut utili- ser n'importe laquelle de celles pouvant produire une quantité de la substance des séries SF-2107 suffisante pour pouvoir être isolée dans un bouillon de culture, mais, comme exemple de ces souches, on peut mentionner la souche SF-2107 isolée pour la première fois par les inventeurs à partir d'un échantillon de sol re- cueilli au Temple Jorinji à Komaoka-cho, Tsurumi-ku, Yokohama-shi Kanagawa-ken, Japon. On trouvera ci-des- sous les nropriétés morphologiques de cette souche. I. Caractéristiques morphologiques: Le mycélium substrat est bien ramifié, allongé avec des ondulations et d'un diamètre d'environ 0,5- 0,6 p. Habituellement, on n'observe pas de mycéliums substrat ramifiés ni en milieu gélose, ni en milieu liquide. on n'observe guère de mycélium aérien et il ne semble pas qu'il s'en forme réellement. La souche SF-2107 forme un sporange ou un sporange touffu à la surface du milieu gélose. On peut observer de nombreux sporanges dans le milieu gélose d'amidon, dans un mi- lieu gélose de glycérol-asparagène et des milieux sem- blables. Le sporange a la forme d'un doigt et une di- mension d'environ 0,8 1,1 x 2,5 - 4,0 p. Chaque spo- range contient à l'intérieur 3 - 4 spores sur une ligne. Quand on enlève en grattant la partie superficielle d'un sporange contenant un milieu gélose, qu'on le suspend dans de l'eau aseptique, qu'on le laisse au moins 30 minutes et qu'on l'observe sous microscope, on peut observer que les spores montrent une mobilité active. Quand on regarde de tels spores sous le micro- scope électronique, les spores sont elliptiques ou en forme de cylindre court et leur surface est lisse et on observe à l'une de leurs extrémités plusieurs fla- gelles. II. Caractéristiques de culture dans différents milieux de culture: Le tableau suivant montre les caractéristiques de culture de la souche SF2107 dans différents milieux de culture. On a utilisé comme norme pour le symbole donné entre crochets f 7 en ce qui concerne l'indication e de couleur le numéro de nuance indiqué dans le "Color Harmony Manual" que l'on peut obtenir de la Container Corporation of America. On a effectué les observations après culture à 28 C pendant 14-21 jours. Milieu Croissance Sporange Mycelium Pigment et couleur aérien soluble Gélose de nitrate Mince, très rare aucun aucun de saccharose faible, in- colore Gélose d'aspara- Très faible,Abondant " gine-glucose incolore Gélose de glycé- Faible, in- " " rol-asparagine colore Gélose d'amidon Faible, in- " "" colore à rose beige pâle[4 ecj Gélose de farine Faible, in- " " d'avoine colore à jaune très pâle Gélose maltosée Modérée, Aucun " à la levure ambre à orange pale [3 ec: Gélose de Modérée, Abondant " tyrosine jaune melon nga v 3ea] Gélose nutritive Faible, in- Aucun. " colore Gélose de BENNETT Modérée, " " " jaune melon à ambre [3 ea7 Gélose au malate Très faible, Rare ". de calcium incolore III. Propriétés physiologiqcues: (1) Domaine de température de croissance: croissance dans un milieu de gélose maltosée à la levure dans un domaine de température de 20 à 42 C, bonne croissance à 28 à 37 C. (2) Liquéfaction de la gélatine: négative (20 C, cul- tivé pendant 21 jours). (3) Hydrolyse de l'amidon: négative (280C, cultivé pendant 14 jours). (4) Réduction de nitrate: positive (280C, cultivé pen- dant 14 jours). (5) Peptonisation du lait: négative (28 C, 370C, cul- tivé pendant 14 jours). Coagulation du lait: négative (280C, 370C, culti- vé pendant 14 jours). (6) Halotolérance: croissance à 1,5 %, mais pas de croissance à moins de 3,0 %. (7) Formation de mélanine: négative. IV. Utilisation de sources de carbone: Source de carbone Croissance Dglucose ++ D-xylose + D-fructose ++ D-mannitol + L-arabinose + L-rhamnose + i-inositol + saccharose ++ mélitriose + glycérol + néant + ++ Bonne croissance (utilisation: +) + Faible croissance (utilisation: -) Milieu de base utilisé: Extrait de levure (Difco Co., Ltd): 1 g Carbonate de calcium: 0,2 g Gélose (Difco Co., Ltd): 15 g Eau distillée: 1000 ml V. Composition des parois de cellule: D'après le résultat des analyses selon la méthode de Becker et Coll. (voir Appln. Microbiol. 13:236 (1965)) l'acide diaminopimelique dans les composants des parois des cellules était surtout d'un type hydroxy. D'après les propriétés ci-dessus, on a identifié la souche SF-2107 comme une souche appartenant au genre dactylosporangium. La demanderesse a appelé cette souche SF-2107 dac- tylosporangium sp. SF-2107. On a déposé la souche dans l'Institut de Recherche sur la Fermentation, Agence de Science Industrielle et de Technologies Ministère du Commerce International et de l'Industrie, Japon, et son nombre d'accès pour une demande dans l'Institut de Recherche dans la Fermenta- tion est FERM N 5351. On a également déposé la souche correspondante à l'American Type Culture Collection sous le numéro d'accès de ATCC N 31744. On a déposé la première souche le ler Avril 1980 et la deuxième le 6 Novembre 1980. La souche SF-2107 est capable de changer de pro- priétés comme on peut le voir dans le cas de nombreu- ses souches d'actinomycètes et on peut les faire va- rier par des procédés de changement artificiels, par exemple en utilisant un rayon ultraviolet, un rayon X, un rayonnement, un agent chimique et des agents analo- gues. Toutefois, même tous les variants peuvent être utilisés dans le procédé selon la présente invention pour autant qu'ils sont capables de produire la sub- stance des séries SF-2107 et qu'ils appartiennent au genre dactylosporangium. Dans le procédé selon la présente invention, on peut cultiver la souche sus-mentionnée sur un milieu de culture contenant les substances nutritives utili- sables par les microorganismes ordinaires. Comme source de nourriture, on peut utiliser n'importe quelle ma- tière bien connue à ce jour pour pouvoir être utilisée pour la culture d'antinomycètes. Par exemple, on peut utiliser comme source de carbone du glucose, du glycé- rol, du saccharose, de l'amidon, de la dextrine, du sirop d'amidon, des mélasses, de l'huile de soja, etc. D'un autre côté, on peut utiliser comme source d'azote une bouillie de soja, de l'embryon de froment, de l'ex- trait de viande, de la peptone, de l'extrait de levure, de la levure sèche, du sirop de macération de mais, des tourteaux de graines de coton, de la bouille de poisson, du sulfate d'ammonium, du nitrate de sodium, de l'urée, etc. De plus, on peut ajouter des sels miné- raux tels que le carbonate de calcium, le chlorure de sodium, le chlorure de cobalt, des phosphates, etc. si c'est nécessaire et de plus, on peut incorporer avanta- geusement des substances organiques et minérales pou- vant aider la croissance de la souche et la production de la substance des séries SF-2107. Pour cultiver, on peut utiliser n'importe laquelle des méthodes de culture dans des conditions aérobies similaires à la méthode pour la production de sub- stances antibiotiques en général, mais on peut faire surtout la culture submergée. Des températures de culture convenables peuvent être de 25 à 370C, mais dans de nombreux cas, il est préférable de conduire la culture autour de 280C - 320C. On peut réaliser l'accumulation maximale en 3 - 10 jours dans la pro-- duction de la substance des séries SF-2107 soit par culture avec agitation, soit par culture en réservoir. Dans un essai de la substance des séries SF-2107, on utilise un essai biologique avec le Vibrio percolans ATCC 8461. Selon cet essai, la substance des séries SF-2107 montre une relation linéaire entre sa concen- tration logarithmique et la dimension de sa zone d'in- hibition à 1000 mcg/ml - 31,3 mcg/ml, pendant qu'on peut voir des diamètres des cercles d'inhibition res- pectivement de 26 - 14 mm, selon une méthode au disque en papier. La substance des séries SF-2107 a les propriétés* physico-chimiques indiquées ci-dessous et par suite, on peut l'extraire et la purifier en utilisant de telles propriétés, mais on peut réaliser une extrac- tion et une purification plus efficace selon la procé- dure indiquée ci-dessous. Plus précisément, on peut extraire le composant actif qui existe surtout dans la partie solide obtenue après enlèvement d'une por- tion liquide d'un bouillon de culture par filtration, de la portion solide par de l'acétone aqueux, du métha- nol aqueux et de mélanges analogues, et après, qu'on ait chassé le solvant organique, extrait par un sol- vant tel que l'acétate d'éthyle ou une substance ana- logue. Dans le cas a le composant actif existe aussi dans le filtrat, on peut l'extraire d'un filtrat de culture par un solvant tel que l'acétate d'éthyle ou un composé analogue. Après, on concentre le solvant, par exemple la couche d'acétate d'éthyle contenant le composant actif à sec et on peut obtenir la substance des séries SF-2107 sous forme pure par toute combinai- son convenable de chromatographie utilisant comme sup- port du silica gel, de l'alumine, du Sephadex LH-20 (Pharmacia Fine Chemicals), du Florisil, etc, et une méthode de distribution à contrecourant. La substance des séries SF-2107 obtenue peut donner une seule tache dans toute méthode de chromatographie en couche mince utilisant différents systèmes de solvant et on peut donc la considérer comme étant sous forme pure. Les propriétés physico-chimiques de la substance des séries SF-2107 obtenues dans le Drocédé ci-dessus sont comme suit: les figures 1, 3 et 5 montrent cha- cune un spectre d'absorption ultraviolet de la sub- stance SF-2107 A-1-i de la substance SF-2107 B et de la substance SF-2107 C respectivement, mesuré dans une solution méthanolique de 25 mcg/ml; les figures 2, 4 et 6 montrent chacune un spectre d'absorption infra- rouge respectivement de la substance SF-2107 A-1, de la substance SF-2107 B et de la substance SF-2107 C, mesuré dans un comprimé de bromure de potassium: I. Substance SF-2107 A-1. Analyse élémentaire: C, 58,39 % en poids; H, 7,88 % en poids. (La substance ne contient pas d'azote, de soufre, de phosphore ni d'halogène). Masse moléculaire: 900 - 1100 (méthode par filtration sur gel). Température de fusion: 170 C - 184 C (fusion lente). Pouvoir rotatoire spécifique: = + 200 (c = 0,2, méthanol). Spectre d'absorption ultraviolet: 1% Maximums d'absorDtion à 250 nm (Ecm = 72). 342 nm (206), (dans le méthanol). g 9 Spectre d'absorption infra-rouge: Bandes absorption caractéristiques à 3460, 2950, 1730, 1630, 1610, 1460, 1380, 1300, 1280, 1130, -1 1100, 1040, 910, 860, 820, 790, 750, 740, 690 cm (méthode avec pastille de KBr). Réaction colorée: Réaction de l'iode, réaction de Lemieux, positive, réaction à la ninhydrine, au chlorure ferrique, négative. Etat: Poudre jaune pâle. Neutralité, acidité ou basicité: Agit comme une substance neutre ou faiblement acide (électrophorèse). Chromatographie en couche mince sur gel de silice: Rf = 0,67 (chloroforme: méthanol = 5: 1) = 0,56 (acétone: benzène = 5 1). Solubilité: Soluble dans le méthanol, l'acétone. Peu soluble dans le benzène, le chloroforme, la n-hexane, l'eau. II. Substance SF-2107 B. Analyse élémentaire: C, 53,66 % en poids: H, 6,75 % en poids. (La substance ne contient pas d'azote, de soufre, de phosphore ni d'halogène). Masse moléculaire: 900 - 1100 (méthode par filtration sur gel). Température de fusion: 170 - 175 C (fusion lente). Pouvoir rotatoire spécifique: 23 = -50 (c = 1, méthanol). Spectre d'absorption ultraviolet: Maximums d'absorption à 242 nm (E1m = 52), lcm35 343 (206), (dans le méthanol). 343 (206), (dans le méthanol). Spectre d'absorption infra-rouge: Bandes absorption caractéristiques à 3450, 2970, 2930, 1720, 1600, 1440, 1370, 1270, 1170, 1130, 1040, 980, 790, 750, 690 cm-1 (méthode avec pas- tille de KBr). Réaction colorée: Réaction à l'iode, réaction de Lemieux, positive, réaction à la ninhydrine, au chlorure ferrique, négative. Etat: Poudre jaune pale. Neutralité, acidité ou basicité Agit comme une substance neutre ou faiblement acide (électrophorèse). Chromatographie en couche mince sur gel de silice: Rf = 0,34 (chloroforme: méthanol = 5: 1) = 0,51 (acétone: benzène = 5: 1). Solubilité: Soluble dans le méthanol, l'acétone. Peu soluble dans le benzène, le chloroforme, la n-hexane, l'eau. III. Substance SF-2107 C. Analyse élémentaire: C, 57,50 % en poids; H, 7,04 % en poids. (La substance ne contient pas d'azote, de soufre, de phosphore ni d'halogène). Masse moléculaire: 900 - 1100 (méthode par filtration sur gel). Température de fusion: 155 - 168 C (fusion lente). Pouvoir rotatoire spécifique: 23 = + 29,80 (c = 1, méthanol) Spectre d'absorption ultraviolet: 1% Maximum d 'absorption à 345 nm (Elcm = 258) Spectre d'absorption infra-rouge: Bandes absorption caractéristiques à 3430, 2930, il 1720, 1620, 1600, 1440, 1370, 1300, 1270, 1130, 1100, 1050, 900, 790, 750, 690 cm-1 (méthode avec pastille de KBr). Réaction colorée: Réaction à l'iode, réaction de Lemieux, positive, réaction à la ninhydrine, au chlorure ferrique, négative. Etat: Poudre jaune pâle. Neutralité, acidité ou basicité Agit comme une substance neutre ou faiblement acide (électrophorèse). Chromatographie en couche mince sur gel de silice Rf = 0,27 (chloroforme: méthanol = 5: 1) = 0,07 (acétone: benzène = 5 1). Solubilité: Soluble dans le méthanol, l'acétone. Peu soluble dans le benzène, le chloroforme, la n-hexane, l'eau. Le tableau I suivant donne les concentrations mi- nimales d'inhibition (MIC) de la substance de série SF-2107 envers différentes bactéries comme établies par une méthode de dilution à la gélose; ce tableau démontre l'efficacité de la substance tant envers les bactéries gram-positives, qu'envers les bactéries gram- négatives. Des essais de toxicité aiguë de la présente substance sur la souris ont montré que tous les animaux ont survécu à l'administration de 90 mg/kg par voie intrapéritonéale. Il en résulte que la substance anti- biotique des séries SF-2107 est utile pour des substan- ces pharmaceutiques, pour des médicaments pour animaux, pour des bactéricides et des désinfectants ainsi que pour des matières de transformation de ces classes de substances. - 35 On a effectué des comparaisons en ce qui concerne les propriétés physico-chimiques et les activités bio- logiques entre la substance des séries SF-2107 et des substances antibiotiques connues, essais qui ont prou- vé qu'il n'existe pas de substances correspondantes et par suite que la substance selon l'invention doit être évidemment une nouvelle substance antibiotique. On donnera ci-dessous des exemples de production de la substance des séries SF-2107, mais il faut noter qu'il est possible d'y apporter des variations ou mo- difications sans sortir du cadre de la présente inven- tion. TABLEAU I MIC (mcg/mr) Organisme d'essai SF-2107 A-1 B C Staphylococcus aureus JC-1 3.13 25 0.78 StaphyZococcus epidermidis 3.13 50 6.25 ATCC4900 3.13 50 6.25 ATCC 14900 Bacillus anthracis NO 119 0.78 12.5 0.39 Escherichia coli JC-2 > 100 > 100 > 100 Escherichia coli RGN 823 0.78 50 6.25 Salmonella typhi D-901-W 25 > 100 > 100 K}ebsie tZa pneumoniae > 100 - > 100 > 100 Proteus vulgaris OX 19 6.25 50 6.25 Serratia marcescens 25 > 100 > 100 MB-3838 25 > 100 > 100 MB-3838 Pseudomonas cepacia M-0527 3.13 50 6 25 eudmnab s 0a6 0tophliaz0.20 100 6, 25 M-0627 Milieu: gélose à l'extrait de coeur (Eiken Chemical Ltd). EXEMPLE 1. On a utilisé comme semence de culture une souche de dactylosporangium SF2107 (FERM NO 5351 ou ATCC NO 31744) et comme milieu de culture des semences, un milieu contenant 1,0 % de glucose, de l'amidon soluble, 1,0 X, de la polypeptone, 0,5 X, de l'extrait de vian- de 0,2 %, de l'extrait de levure 0,3 %, de la bouillie de soja 0,2 % et du carbonate de calcium 0,2 % (pH 7,0 avant stérilisation). On a inoculé à 7 boucles en platine de la culture de semence qui avait été cultivée dans un milieu de gélose maltosée à la levure à 280C pendant 14 jours dans 20 ml du milieu de culture de semence mentionné plus haut dans un récipient Erlenmeyer de 100 ml de volume et on a effectué ensuite une culture à secous- ses à 280C pendant 6 jours. On a utilisé ceci comme première culture de semence et on a cultivé dans 3 flacons. Ensuite, on a inoculé cette culture de semence dans 80 ml de milieu de culture de semence dans chacun de 6 flacons Erlenmeyer de 500 ml à des portions de 8 ml et on a effectué ensuite une culture à secousse à 280C pendant 3 jours. On a utilisé ceuxci comme seconde culture de semence. On place dans chacun de 100 flacons Erlenmeyer de 500 ml de volume 80 ml d'un milieu de production dans lequel on a inoculé la seconde culture de semence men- tionnée ci-dessus avec un pourcentage de 5 %. On a utilisé comme milieu de production un milieu ayant la composition suivante: glucose 2,5 %, graines de tournesol (produit par Suntory Ltd) 0,5 % et chlo- rure de sodium 0,25 % (pH 7,0 avant stérilisation). On a effectué la culture par culture à secousse à 280C pendant 7 jours à l'aide d'un agitateur rotatif (220 tours/mn). Après la fin de la culture, on a effec- tué une filtration pour enlever le filtrat, on ajoute 6 litres d'acétone à 80 % dans l'eau au solide résul- tant et on agite ensuite pour extraire la substance SF-2107 A-1. On chasse l'acétone sous pression rédui- te de l'extrait, on dissout le résidu dans l'eau pour obtenir 1,3 litre d'une solution aqueuse, on ajuste le pH de la solution résultante à 9 et on effectue l'ex- traction 2 fois par des portions de 1 litre d'acétate d'éthyle. On réunit les extraits, on concentre à sec sous pression réduite pour obtenir 300 mg d'une sub- stance huileuse. On la dissout dans 3 ml de méthanol, on la fait passer sur une colonne remplie de 100 ml de Sephadex LH-20 (Farmacia Fine Chemicals) et on élue par le méthanol pour séparer des fractions actives que l'on concentre ensuite sous pression réduite et qu'on sèche pour obtenir 120 mg d'une substance pulvérulente. * On fait passer la substance pulvérulente résultante sur une colonne remplie de 20 ml de Wako Gel G-200 (Wako Pure Chemical Industrie Ltd), puis on élue par un mélange de chloroforme-méthanol (50: 1). Des frac- tions actives, on concentre à sec celles qui exhibent une seule tache en chromatographie en couche mince pour donner 16 mg d'une poudre jaune pâle de la sub- stance SF-2107 A-1. EXEMPLE 2. On utilise comme semence de culture la souche de dactylosporangium sp. SF2107 (FERM NO 5351 ou ATCC N0 31744) et comme milieu de culture de semence un mi- lieu contenant de l'amidon soluble 2,0 %, de glucose 1,0 Y%,de l'embryon de froment 0,6 %, de la bouillie de soja 0,2 %, de la polypeptone 0,5 %, de l'extrait de levure 0,3 %, de l'extrait de viande 0,2 % et de car- bonate de calcium 0,1 % (pH 7,0 avant stérilisation). On inocule 5 boucles de platine de la culture de graines qui avait été cultivée sur un milieu de gélose maltosée à la levure à 28WC pendant 14 jours dans ml du milieu de culture de semence mentionné plus. haut dans un récipient Erlenmeyer de 100 ml de volume et on effectue ensuite une culture par secousse à 320C pendant 96 heures. On a utilisé ceci comme première culture de semence. Ensuite, on inocule ce bouillon de culture de semence par portion de 8 ml dans 80 ml d'un milieu de culture de semence dans chacun des 10 flacons Erlenmeyer de 500 ml de volume et on effectue une culture par secousse à 320C pendant 72 heures. On a utilisé ceci comme deuxième culture de semence. On place dans un fermentateur à secousse de 30 litres de volume 20 litres d'un milieu de production et on y inocule 800 ml de'la seconde culture de semen- ce mentionnée plus haut. Comme milieu de production, on utilise un milieu ayant la composition: glucose 1,7 %, saccharose 1,5 X, embryon de froment 2,0 %, extrait de levure 0,2 %, bouille de glutène 0,3 %, chlorure de sodium 0,25 % (pH 7,0 avant stérilisation). on a effectué la culture dans des conditions de culture agitée en présence d'air à 28WC pendant 164 heures. Après avoir complété la culture, on a effectué une filtration pour enlever le filtrat, on ajoute 12 litres d'acétone à 80 % dans l'eau au solide et on agite pour extraire un ingrédient actif. On chasse l'acétone sous pression réduite, on dissout le résidu dans l'eau de façon à obtenir 2 litres d'une solution aqueuse que l'on ajuste ensuite à pH 9 et qu'on extrait 2 fois par des portions de 1,5 litre d'acétate d'éthyle. On réunit les extraits et on concentre à sec sous pres- sion réduite pour obtenir 800 mg d'une substance hui- leuse. On la dissout dans 5 ml de méthanol et on la fait passer sur une colonne remplie de 500 ml de Sephadex LH-20 (Pharmacia Fine Chemicals), puis on l'élue par le méthanol pour séparer des fractions acti- ves. On concentre ces fractions à sec pour obtenir 280 mg d'une substance pulvérulente. On fait passer cette substance pulvérulente sur une colonne remplie de 100 ml de Wako Gel C-200 (Wako tPure Chemical Industrie Ltd) que l'on élue en plusieurs fois, d'abord par 1000 ml d'un mélange de chloroforme- méthanol (25: 1) et ensuite par 2000 ml d'un mélange de chloroformeméthanol (15: 1) pour recueillir des fractions de 20 ml chacune en utilisant un collecteur de fraction. On a trouvé des fractions actives aux fractions n 41 - 65, n 76 - 89 et n 95 - 120. On soumet les fractions actives ainsi obtenues à une chromatographie en couche mince sur gèl de silice en utilisant le système solvant (I) de chloroforme-métha- nol (5: 1) et le système de solvant (II) d'acétone- benzène (5: 1). On combine la fraction présentant un Rf = 0,67 dans le système (1) et la fraction présentant un Rf = 0,56 dans le système (II) et on concentre à sec sous pression réduite pour obtenir 60 ml d'une substan- ce pulvérulente SF-2107 A-1. On combine la fraction présentant un Rf = 0,34 avec le système (I) et la frac- tion de Rf = 0,51 avec le système (II) et on concentre à sec sous pression réduite pour obtenir 52 mg de substance SF-2107 B. De plus, on réduit la fraction présentant un Rf = 0,27 avec le système (I) et la frac- tion présentant un Rf = 0,07 avec le système (II) et on les concentre à sec sous pression réduite pour ob- tenir 93 mg de substance SF-2107 C. EXEMPLE 2 - 1. On dissout 60 mg de la substance pulvérulente SF-2107 A-1 obtenue selon l'exemple 2 dans le méthanol à une concentration d'environ 2 % et on la fractionne par chromatographie à haute performance, en utilisant une colonne de Micropondapak C 18 (Waters Co.) et comme éluant un mélange de méthanol-acétonitrile-eau (7: 1: 3). On concentre à sec les fractions résul- tantes sous pression réduite pour obtenir 36 mg d'une poudre jaune pâle de substance pure de la substance SF-2107 A-1. EXEMPLE 2 - 2. On dissout 52 mg de la substance SF-2107 B et 93 mg de la substance SF-2107 C obtenue selon l'exem- ple 2 respectivement dans une petite quantité de mé- thanol et on les fait passer séparément sur une colon- ne remplie de 50 ml de Sephadex LH-20 (Pharmacia Fine Chemicals) que l'on développe ensuite par le méthanol. On soumet les fractions actives à une chromatographie en couche mince en utilisant le système des deux sol- vants mentionnés plus haut et on réunit les fractions présentant une seule tache et oh les concentre à sec sous pression réduite pour obtenir 38 mg de substance pure de la substance SF-2107 B et 76 mg de substance pure de la substance SF-2107 C respectivement. REVENDICATIONS 1. Substance antibiotique SF-2107 A-1, caracté- risée par les propriétés physico-chimiques suivantes: Analyse élémentaire: C: 58,39 % en poids H: 7,8 % en poids (ne contenant pas d'azote, d'halogène, de soufre, ni de phosphore). Masse moléculaire: 900 - 1100 (méthode de filtration sur gel). Température de fusion: - 184 C (fusion lente). Pouvoir rotatoire spécifique: Z-25 = + 20 (c = 0,2, méthanol). Spectre d'absorption ultraviolet: maxima d'absorption à 250 nm (Ecm = 72). 342 nm (206) (dans le méthanol). Spectre d'absorption infra-rouge: Bandes absorption caractéristiques à 3460, 2950, 1730, 1630, 1610, 1460, 1380, 1300, 1280, 1130, -1 1100, 1040, 910, 860, 820, 790, 750, 740, 690 cm (méthode avec pastille de KBr). Réaction colorée: Réaction de l'iode, réaction de Lémieux, positive, réaction à la ninhydrine, au chlorure ferrique, négative. Etat: - Poudre jaune pâle. Neutralité, acidité ou basicité: Agit comme une substance neutre ou faiblement acide (électrophorèse). Chromatographie en couche mince sur gel de silice: Rf = 0,67 (chloroforme: méthanol = 5: 1) = 0,56 (acétone: benzène = 5: 1). Solubilité: Soluble dans le méthanol, l'acétone. Peu soluble dans le benzène, le chloroforme, la n-hexane,l'eau. 2. Substance antibiotique SF-2107 B ayant les propriétés physicochimiques suivantes Analyse élémentaire: C: 53,66 % en poids H: 6,75 % en poids (la substance ne contient pas d'azote, de soufre, de phosphore ni d'halo- gène). Masse moléculaire 900 - 1100 (méthode par filtration sur gel). Temnpérature de fusion: - 175 C (fusion lente). Pouvoir rotatoire spécifique: Ai23 5= 0 (c = 1, méthanol). Spectre d'absorption ultraviolet: maxima d'absorption à 242 nm (E1cm = 52). 343 (206) (dans le méthanol). Spectre d'absorption infra-rouge: Bandes absorption caractéristiques à 3450, 2970, 2930, 1720, 1600, 1440, 1370, 1270, 1170, 1130, 1040, 980, 790, 750, 690 cm-1 (méthode avec pas- tille de KBr). Réaction colorée: Réaction de l'iode, réaction de Lémieux, positive, réaction à la ninhydrine, au chlorure ferrique, négative. Etat: Poudre jaune pâle. Neutralité, acidité ou basicité Agit comme une substance neutre ou faiblement acide (électrophorèse). Chromatographie en couche mince sur gel de silice Rf = 0,34 (chloroforme: méthanol = 5: 1) = 0,51 (acétone: benzène = 5 1). Solubilité: Soluble dans le méthanol, l'acétone. Peu soluble dans le benzène, le chloroforme, la n-hexane,l'eau. 3. Substance antibiotique caractérisée par les propriétés physicochimiques suivantes: Analyse élémentaire C: 57,50 % en poids H: 7,04 % en poids (la substance ne contient pas d'azote, de soufre, de phosphore ni d'halo- gène). Masse moléculaire: 900 - 1100 (méthode par filtration sur gel). Température de fusion: - 168 C (fusion lente). Pouvoir rotatoire spécifique: 23 = + 29,8 (c = 1, méthanol). Spectre d'absorption ultraviolet: maximum d'absorption à 345 nm (E1cm 258) (dans le méghanol). Spectre d'absorption infra-rouge: Bandes absorption caractéristiques à 3430, 2930, 1720, 1620, 1600, 1440, 1370, 1300, 1270, 1130, 1100, 1050, 900, 790, 750, 690 cm-1 (méthode avec pastille de KBr). Réaction colorée: Réaction de l'iode, réaction de Lémieux, positive, réaction à la ninhydrine, au chlorure ferrique, négative. Etat: Poudre jaune pâle. Neutralité, acidité ou basicité: Agit comme une substance neutre ou faiblement acide (électrophorèse). Chromatographie en couche mince sur gel de silice: Rf = 0,27 (chloroforme: méthanol = 5: 1) = 0,07 (acétone: benzène = 5: 1). Solubilité: Soluble dans le méthanol, l'acétone. Peu soluble dans le benzène, le chloroforme, la n-hexane,l'eau. 4. Procédé pour préparer une nouvelle substance antibiotique SF-2107, caractérisé par le fait que l'on cultive un microorganisme appartenant au genre dactylosporangium produisant une substance antibioti- que des séries SF-2107 et que l'on isole du bouillon de culture une substance antibiotique des séries SF-2107, constituées par la substance SF-2107 A-l, la substance SF-2107 B et/ou la substance SF-2107 C. 5. Procédé selon la revendication 4 dans lequel le microorganisme produisant la substance des séries SF-2107 est le dactylosporangium sp. SF-2107.