Brevet FR2474493A1 — publié le 19810731

COMPOSITIONS ANTITUMORALES. La présente invention a pour objet un sel nouveau et de nouvelles compositions le contenant ayant des applications antitumorales. Le nouveau sel d'acide et les compositions de la présente invention pré- sentent les mêmes propriétés antitumorales avantageuses que le composé sous forme de base libre connu et, en outre, ils présentent, de façon inattendue, une très haute solubilité dans l'eau, ce qui permet la préparation de doses utilisables pour l'administration par voie intraveineuse. Cain et al., dans la Revue Européenne J. Cancer 10, p. 539-549 (1974) ont signalé que le dérivé de l'acridine"m-AMSA"[4'-9-acridinylamino-méthane sulfon-m-anisidide] possède une activité antitumorale importante vis-àvis de systèmes tumoraux chez l'animal. Depuis, on a soumis ce composé à des études cliniques dont les premiers résultats sont prometteurs. Quand on utilise un agent antitumoral comme le m-AMSA en clinique chez l'homme, on a constaté que la solubilité du produit est souvent le facteur de- terminant lorsqu'on décide de la voie d'administration et de la posologie. Par exemple, il est en général possible d'administrer un produit hydrosoluble par voie intraveineuse tandis qu'avec une substance insoluble dans l'eau, on doit se limiter aux autres formes d'administrations parentérales que sont les voies intramusculaires et sous-cutanées. -L'hydrosolubilité de l'agent thérapeutique facilite en outre la préparation de formes administrables à l'homme par voie orale ou parentérale non-intraveineuse. Il est donc mani- festement avantageux de disposer d'un agent thérapeutique hydrosoluble, en particulier lorsque l'on estime que le moyen le plus direct d'obtenir une teneur sanguine thérapeutique suffisante d'un médicament chez l'homme est l'administration intraveineuse. La base libre du m-AMSA a une solubilité dans l'eau des plus limitées et on ne peut donc l'utiliser pour préparer des doses administrables par voie intraveineuse. On a essayé de préparer des sels d'acides en vue de résoudre ce problème de solubilité mais le monochlorhydrate et le mono- méthane sulfonate se sont également révélés insuffisamment hydrosolubles pour l'emploi clinique. La formulation utilisée actuellement en clinique est constituée de deux liquides stériles que l'on combine juste avant l'emplo Une ampoule renferme une solution de m-AMSA dans le N,Ndiméthylacétamide anhydre. Un flacon séparé renferme une solution aqueuse d'acide lactique destinée àservir de diluant. Sitôt le mélange effectué, on administre la solution de m-AMSA par perfusion intraveineuse (i.v.). Bien que cette formulation clinique permette d'obtenir des doses pour l'administration intraveineuse, elle présente plusieurs inconvénients. Outre les difficultés évidentes de préparation et d'administration, il con- tient du diméthylacétamide en tant que véhicule. On a signalé que le diméthyl- acétamide déclenche divers symptômes de toxicité chez l'animal et il s'est donc révélé inacceptableou pour le moins indésirable, comme véhicule pharma- ceutique. La présente invention a donc pour objet des formes hydrosolubles, stables et thérapeutiquement acceptables du m-AMSA, administrables par voie intra- veineuse - ou autres - et ne renfermant ou n'exigeant pas de diméthylacétamide en tant que véhicule pharmaceutique. Les buts et avantages de la présente invention apparaltront plus claire- ment à la lecture de la description suivante et des figures en annexe. La présente invention a pour objet un nouveau sel hydrosoluble du m-AMSA, qui, après reconstitution à l'aide d'eau stérile ou d'un véhicule aqueux stérile, peut être administré par voie intraveineuse etqpi ne présente pas lgs inconvénients associés aux formes i.v. connues de cet agent. Plus particulièrement, l'invention se rapporte au monogluconate cristallisé du m-AMSA. La présente invention a egalement pour objet une composition stable, solidehydrosoluble permettant de reconstituer une solution stable de mAMSA à l'aide d'eau ou d'un véhicule aqueux ladite composition renfermant un mélange d'environ 1 mole de monogluconate de m-AMSA et de 1 à 3 moles d'un acide organique - ou d'un de ses précurseurs - choisi parmi l'acide gluco- nique, la gluçonolactone et leurs mélanges. L'invention se rapporte, en outre, aux procédés de préparation du sel et des compositions ci-dessus. La Figure 1 représente le spectre infra-rouge du gluconate cristallisé dans une pastille de KBr. La Figure 2 représente le spectre infrarouge d'une composition hydro- soluble type dans une pastille de KBr. De nombreux sels classiques pharmaceutiquement acceptables du m-AMSA ne se sont montrés que légèrement solubles dans l'eau et donc, inappropriés à l'administration par voie intraveineuse à l'homme. Ceci est manifeste d'après les publications scientifiques relatives aux chlorhydrate et méthane sulfonate de m-AMSA, ainsi que d'après les essais de solubilité effectués sur des sels tels que les lévulinate, citrate et lactobionate. Au cours de recherches relatives à la solubilité de sels d'acides du mAMSA, on a constate avec surprise qu'un sel particulier cristallisé du m-AMSA présente une solubilité dans l'eau suffisante à la température am- biante pour être mis sous la forme de doses administrables par voie intra- veineuse. Ainsi donc, on a constaté que le gluconate de m-AMSA de la pré- sente invention présente une solubilité de l'ordre de 25 mg/ml à la tempé- rature ambiante. On a également constaté que ce gluconate présente une sta- bilité suffisante, aussi bien sous forme de solide cristallisé qu'après reconstitution. On effectue la préparation du gluconate de m-AMSA cristallisé de la façon suivante: (1) On forme une solution de m-AMSA et d'un acide organique - ou un de ses précurseurs - tel que l'acide gluconique (acide D-gluconique), la glu- conolactone (6-lactone de l'acide D-gluconique) et de leurs mélanges, dans un solvant organique polaire inerte; le rapport molaire de l'acide organique au m-AMSA est de l'ordre de 1/1 à 2/1. (2) On cristallise le gluconate recherché à partir de la solution ainsi obtenue. La nature du solvant organique polaire utilisé pour dissoudre le m-AMSA- base n'a pas d'importance et le choix ne pose pas de problème. On utilise de préférence des alcools ou cétones polaires tels que méthanol, éthanol, n-propanol, isopropanol, acétone, n-butanol, 2-butanone, n-pentanol, nhexanol, diéthylène glycol, méthyl isobutyl cétone, 3-pentanone, etc. L'éthanol convient tout particulièrement. Le solvant peut renfermer un faible pourcentage (par exemple de l'ordre de 0,5%) d'eau qui peut être introduit dans le solvant organique ou apporté, de préférence, sous forme de solution aqueuse d'acide gluconique ou de gluconolactone. Dans la présente description, on entend par l'expression "acide organique", l'acide gluconique per se ou l'un de ses précurseurs qui s'hydrolyse en acide gluconique en solution aqueuse, tel que, par exemple, la gluconolactone. Il est difficile d'obtenir l'acide gluconique sous une forme cristallisée bien définie, de sorte qu'on vend l'acide gluconique en solution à 50% dans l'eau. D'autre part, la gluconolactone est une substance cristallisée bien definie qui s'hydrolyse facilement dans l'eau en acide gluconique. Puisqu'on peut se procurer commodément la gluconolactone cristallisée, on l'emploie de préférence comme source d'acide gluconique pour la préparation du gluconate. On peut ajouter la gluconolactone à une solution aqueuse de solvant organique polaire pour engendrer l'acide gluconique ou bien l'ajouter en solution aqueuse au solvant organique. 2474493. La température de formation de la solution n'a pas d'importance; elle peut être comprise entre le point de congélation et le point d'ébullition du système de solvant. Il est plus avantageux d'opérer à la température ambiante ou à son voisinage. On a constaté que la solubilité est optimisée si on porte le mélange à la température du reflux. On peut employer l'acide gluconique ou la gluconolactone à raison de 1 à 2 moles par mole de m-AMSA-base. Toutefois, on obtient le meilleur produit lorsqu'on met en oeuvre des quantités équimoléculaires de m-AMSA et d'acide organique. O Après avoir préparé la solution de m-AMSA et d'acide, il est préférable d'effectuer une filtration avant de laisser la cristallisation se faire. On peut alors faire appel à toute technique classique de cristallisation afin d'obtenir le gluconate recherché. On peut ajouter des cristaux du gluconate à la solution afin de l'ensemenser, induire et/ou accélérer la cristallisation. Après isolement, on lave le sel cristallisé (par exemple à l'éthanol) et on le sèche selon les techniques classiques. On peut procéder à une recristal- lisation (par exemple dans l'éthanol) pour obtenir un produit de haute pureté. Selon un autre aspect, l'invention permet d'obtenir une composition stable, solide, hydrosoluble, capable de donner une solution stable de mAMSA après reconstitution à l'aide d'eau ou de tout autre véhicule aqueux; cette composition comporte un mélange d'environ 1 mole de monogluconate de m-AMSA pour 1 à 3 molesd'un acide organique ou de son précurseur tels que l'acide gluconique, la gluconolactone ou leurs mélanges. On peut utiliser cette composition sous la forme de charge sèche ou de produit lyophilisé; de préférence, la composition est un mélange lyophilisé. On peut reconstituer convenablement et facilement la composition à l'aide d'eau stérile ou d'-un véhicule aqueux stérile et obtenir ainsi une solutionvraie à au moins 5 mg/ml de m-AMSA jouissant d'une stabilité excellente. La préparation de la composition hydrosoluble peut s'effectuer convena- blement par toute méthode classique de lyophilisation. Ainsi, on prépare une solution aqueuse de m-MASA et d'un excès d'acide gluconique ou d'une source d'acide gluconique (c'est-à-dire une substance organique qui s'hydrolyse dans l'eau pour donner l'acide gluconique) et on soumet la solution à une opération classique de lyophilisation pour obtenir la composition solide recherchée. On utilise l'acidegluconique (ou équivalent) à raison de 2 à 4 moles par mole de m-AMSA-base et, de préférence, d'environ 2,5 moles. Puisque, comme indiqué ci-dessus, on ne trouve pas d'acide gluconique du commerce sous forme cristallisée bien définie, on utilise de préférence la glucono- lactone en tant qu'acide organique. La gluconolactone s'hydrolyse rapidement dans l'eau en acide gluconique. Au cours de la lyophilisation, l'acide gluconique se transforme, au moins en partie, en gluconolactone. Par conséquent, le produit lyophilisé renferme un mélange de mono-glyconate de m-AMSA avec 1 à 3 moles d'excès d'acide gluconique, ce dernier étant en partie sous forme d'acide gluconique, en partie sous forme de gluconolactone. Après avoir préparé la solution aqueuse de m-AMSA et d'acide, il est préférable de filtrer le mélange réactionnel avant la lyophilisation. On peut effectuer cette lyophilisation dans des lyophiliseurs industriels ou de laboratoire. On procède à la lyophilisation dans les conditions sui- vantes: - Précongélation... à -550C, - CongéLation...... à -50'C pendant 2 heures, - Sublimation...... à -400C pendant 68h environ, sous 4x10 -2 torr environ - Séchage.......... à +300C pendant 48h environ. Le gluconate cristallisé et la composition hydrosoluble de la présente invention offrent quasiment les mêmes propriétés antitumorales que le mAMSA sous les formes connues. Mais, du fait de leur grande solubilité dans l'eau, on peut les utiliser à la préparation de doses pour l'administration intraveineuse, ne renfermant pas de véhicules indésirables comme le diméthyl- acétamide. En outre, on peut employer le sel ou la composition pour préparer une charge sèche ou un produit lyophilisé dans un seul récipient reconstituable à l'aide d'eau stérile ou d'un véhicule aqueux stérile. Le véhicule employé de préférence pour la reconstitution du gluconate est une solution aqueuse d'acide gluconique. Le sel de m-AMSA et la composition de la présente invention peuvent servir à préparer des doses pour l'administration orale ou parentérale non i.v. ainsi que le produit préféré administrable par voie intraveineuse. Le sel et la composition ont une stabilité acceptable, aussi bien sous forme solide qu'en solution aqueuse et leur solubilité dans l'eau est suffisante pour permettre l'administration d'une dose efficace de m-AMSA dans un volume relativement faible de solution injectable (ce qui autorise donc des injec- tions i.v.bolus). La présente invention sera d'ailleurs mieux comprise à la lecture de la description des exemples suivants, donnés à titre illustratif mais non- limitatif. EXEMPLE 1 * Préparation du monogluconate de m-AMSA- On dissout la delta gluconolactone (0,89g; 0,005 mole) dans 0,5 ml d'eau. On ajoute la m-AMSA base (1,95g; 0,005 mole) et 100 ml d'éthanol et on porte le mélange au reflux pendant quelques minutes (5 à 10 mn). On laisse reposer la solution une quinzaine d'heures; il se sépare un produit cristallisé de la solution. On recristallise le produit dans 100 ml d'éthanol et on obtient 1,10g de monogluconate de m-AMSA cristallisé. I Propriétés du gluconate: * Teneur en m-AMSA par U.V..... = 62,6% (la teneur théorique est de 66,6%) . * Teneur en acide gluconique par U.V... = 36,9%. * Teneur en gluconolactone par U.V.... = 1,1%. * Solubilité dans l'eau.... = 30 mg/ml à 50-60 C; 25 mg/ml à température ambiante. En solution dans l'eau à une concentration de 7,1 pg/ml, le gluconate présente des pics d'absorption en ultraviolet à: * 208 nm (D.O.: 0,527), * 247,5 nm (D.0. = 0,567), * 263 nm (D.0. = 0,425), et * 412 nm (D.0. = 0,121). Le spectre infrarouge (I.R.) du gluconate encapsulé dans de KBr est repre- senté dans la Figure 1 en annexe. EXEMPLE 12 I Préparation d'une composition hydrosoluble de m--AMSA- (Pour préparer des flacons dosés à 75 mg de m-AMSA) Formule par flacon par litre * m-AMSA base........ 75 mg 5g - gluconolactone (8-lactone de l'acide gluconique) 93,46 mg 6,23g * eau pour l'injection........ q.s.p. 15 ml q.s.p. 1 ú - Mode de préparation pour 1 litre - 1. Préparation d'une solution à 10% de gluconolactone: - Peser 10g de gluconolactone. - Sous agitation, introduire la lactone dans un récipient en verre renfermant 80 ml d'eau pour l'injection. Agiter jusqu'à dissolution totale. - Compléter à 100 ml avec de l'eau pour injection. - Agiter 5 minutes. On utilise la solution après l'avoir laissée reposer 24h à température ambiante. 2. Peser 5g de m-AMSA-base. 3. Dans un récipient en verre approprié renfermant 600 ml d'eau pour injec- tion, ajouter, sous agitation, 25 ml de solution de gluconate à 10%. 4. Sous agitation énergique, introduire lentement 50g de m-AMSA-base dans le récipient en verre. Poursuivre l'agitation pendant 30 minutes. 5. Sous agitation, ajouter 20 ml de solution à 10% de gluconolactone au mélange réactionnel. Agiter pendant 30 minutes. b. Ajouter lentement le reste de la solution de gluconolactone à 10% (17,3 ml) au mélange réactionnel. Poursuivre l'agitation jusqu'à disso- lution totale. 7. Compléter à 1 litre à l'aide d'eau pour injection. 8. A l'aide d'une surpression d'azote, faire passer la solution à travers un filtre de 0,22p. q. Mettre la solution dansdes flocons deverre de plomb de 30 à 38mlde capacité (15 ml de solution par flacon). Boucher partiellement à l'aide de bouchons pour lyophilisation 10. Soumettre les flacons à un séchage par le froid dans les conditions suivantes: * Pr6congélation... à -550C, * Congélation...... à -50 C pendant 2h * Sublimation...... à -40 C pendant 68h environ sous 4.10-2 torr environ, * Séchage.......... à +300 C pendant 48h environ. 11. Obturer les flacons sous vide ou sous atmosphère d'azote et les sceller. 12. Pour la reconstitution, utiliser 20 ml d'eau stérile par flacon. i Propriétés de la composition lyophitisée: * Temps de reconstitution avec 20 ml d'eau: 4 à 5 minutes * pH de la solution...................... : 3,65 * Analyse du produit lyophilisé: pour 0,172g de composition........ ..: environ 72 mg de m-AMSA; environ 93 mg d'acide gluconique total (potentiomètre) dont hO mg environ de 6-gluconolacton (chromatographie en phase vapeur..DTD: Les teneurs en impuretés sont inférieures aux seuils de détection. % iI20 (K.F.)._--_-__-__-_- = 0,8 La stabilité dans l'eau du produit reconstitué est satisfaisante après 24h. La perte d'activité est à peine perceptible et on n'observe aucune impureté. En solution dans l'eau à une concentration de 12,17 pg/ml, la composition lyophilisée présente des bandes d'absorption en U.V. à: * 209 nm (D.0. = 0,607), * 247,5 nm (D.0. = 0,607), * 266 nm (D.0. = 0,534), * 413 nm (D.0. = 0,145), et * 435 nm (D.0. = 0,143). La Figure 2 représente le spectre infrarouge (IR) de la composition lyophilisée en pastille de KBr. Bien entendu, la présente invention n'est nullement limitée aux exemples et modes de mise en oeuvre mentionnés ci-dessus; elle est susceptible de nom- breuses variantes accessibles à l'homme de l'art, suivant les applications envisagées et sans que l'on ne s'écarte de l'esprit de l'invention. REVENDICATIONS 1.- A titre de produit pharmaceutique nouveau, le gluconate de m-AMSA. 2.- Composition solide, stable, hydrosoluble, reconstituable à l'aide d'eau, ou d'un véhicule aqueux pour donner une solution stable de m-AMSA, caractérisée en ce qu'elle renferme un mélange d'environ 1 mole de gluconate de m-AMSA pour 1 à 3 moles d'un acide organique tel que l'acide gluconique, la gluconolactone ou leurs mélanges. 3.- Composition selon la revendication 1, caractérisée en ce qu'elle renferme environ 1 mole de gluconate de m-AMSA pour 1,5 mole d'acide organique. 4.- Procédé de préparation d'une composition stable, solide, hydrosoluble, que l'on reconstituera à l'aide d'eau ou d'un véhicule aqueux, pour obtenir une solution de m-AMSA stable, caractérisé en ce que: (1) on prépare une solution aqueuse de m-AMSA et d'un acide organique tel que l'acide gluconique, la gluconolactone et leurs mélanges, le rapport mo- laire de l'acide organique ou m-AMSA étant compris entre 2/1 et 4/1 en- viron; et (2) on lyophilise la solution aqueuse ainsi obtenue. 5.- Composition selon la revendication 4, caractérisée en ce que l'on utilise environ 2,5 molesd'acide organique par mole de m-AMSA. 6.- Composition selon la revendication 4 ou 5, caractériséeen cequel'acid organique est la gluconolactone. 7.- Composition selon la revendication 4 ou 5, caractériséeen ce que la solution aqueuse de l'Etape 1 est obtenue par réaction de 5g environ de mAMSA et 6,23g de gluconolactone par mole de solution. 8.- Procédé de préparation du gluconate de m-AMSA, caractérisé en ce que: (1) on prépare une solution de m-AMSA et d'un aeide organique tel que l'acide gluconique, la gluconolactone et leurs mélanges, dans un solvant organique polaire aqueux, le rapport molaire de l'acide organique au mAMSA étant comprise entre 1/1 et 2/1 environ; et (2) on cristallise le gluconate attendu à partir de ladite solution. 9.- Procédé selon la revendication 8, caractérisé en ce que l'acide or- ganique est la gluconolactone. 10.- Procédé selon la revendication 8, caractérisé en ce que l'acide or- ganique est l'acide gluconique. 11.- Procédé selon la revendication 8, caractérisé en ce que l'on emploie environ 1 mole d'acide par mole de m-AMSA. 12.- Procédé selon la revendication 8, caractérisé en ce que le solvant organique est l'éthanol. 13.- Procédé selon la revendication 8, caractérisé en ce que l'on effectue l'Etape 1 à la température du reflux. - 14.- Procédé selon la revendication 8, caractérisé en ce que l'on filtre la solution obtenue dans l'Etape 1 avant d'effectuer la cristallisation. 15.- Procédé de préparation d'une composition stable, solide, hydrosoluble, que l'on reconstitue à l'aide d'eau ou d'un véhicule aqueux en une solution stable de m-AMSA, caractérisé en ce que: (1) on prépare une solution aqueuse de m-AMSA et d'un acide organique tel que l'acide gluconique, ou la gluconolactone ou leurs mélanges, le rapport molaire de l'acide-organique au m-AMSA étant compris entre 1/1 et 4/1 environ; et (2) on lyophilise la solution aqueuse ainsi obtenue. 16.- Procédé selon la revendication 15, caractérisé en ce que l'acide organique est la gluconolactone. 17.- Procédé selon la revendication 15, caractérisé en ce que le rapport molaire acide organique/m-AMSA est de l'ordre de 2,5/1. 18.- Procédé selon la revendication 15, caractérisé en ce que l'on filtre la solution de l'Etape 1 avant de la soumettre à la lyophilisation. -