Brevet FR2474497A1 — publié le 19810731

La présente invention concerne un ester alkylique inférieur de N-(dl-3- transcarboxyoxirane-2-carbonyl)-L-leucine, un sel non toxique de celui-ci, un procédé de production de cet ester et un médicament contre les infarctus du myocarde qui contient un tel ester ou sel. L'infarctus du myocarde est provoqué par la mort partielle du myocarde par suite d'une diminution de l'arrivée du sang, comme cela est décrit dans "Terms Used in Cardiovascular Diseases" (U.S. Department of Health, Education and Welfare, Public Health Service, 196h). L'infarctus du myocarde, comme le esncer et l'hypertension, est une maladie typique des personnes âgées, son traitement médical étant une question de grande importance. On ne connaît aucun médicament capable de guérir direc- tement l'infarctus du myocarde, bien qu'il existe différents médicaments destinés à supprimer les maladies annexes telles que l'insuffisance cardiaque, l'arythmie ou la maladie ischémique du coeur. On voit donc qu'il continue à exister la nécessité de la mise au point d'un médicament efficace contre les infarctus du myocarde. A là suite de recherches poussées concernant un médicament efficace contre les infarctus du myocarde, la Demanderesse a établi que certains esters alkyliques inférieurs de N-(dl-3-transcarboxyoxirane-2-carbonyl)-Lleucine nouveaux et leurs sels non toxiques font preuve d'un effet inhibiteur très important contre les infarctus du myocarde et cette découverte est à l'origine de la présente invention. Certains dérivés de N-(dl-3-trans-carboxyoxirane-2-carbonyl)-L-leucine ont déjà été décrits dans la demande de brevet japonais publiée no 53-108 923. Cependant, ces composés sont décrits comme ne possédant que des effets médicaux pour la suppression de l'activité des enzymes protéolytiques et aucune mention n'est faite au sujet de leur effet contre les infarctus du myocarde. Parmi les composés décrits dans le document ci-dessus, l'ester éthylique de N-( dl-3-trans-éthoxycarbonyloxirane-2-carbonyl)-L-leucine et la N-(dl-3-trans-carboxyyoxirane-2-carbonyl)-L-leucine ont les structures les plus proches de celles des composés objet de la présente invention. Il a toutefois été confirmé qu'en dépît de cette similarité de structure, les composés connus sont peu efficaces dans le traitement de l'infarctus du myocarde. En conséquence, les principaux buts de l'invention sont de fournir: - certains esters alkyliques inférieurs de N-( dl-3-trans-carboxyoxirane- 2-carbonyl)-L-leucine nouveaux et leurs sels non toxiques; - un procédé de production de ces esters alkyliques inférieurs de N-(dl-3-transcarboxyoxirane-2-carbonyl)-L-leucine et de leurs sels non toxiques; et un médicament nouveau pour le traitement des infarctus du myocarde, contenant un ester alkylique inf6rieur de N-(dl-3-trans-carboxyoxirane-2- carbonyl)-I-eucine ou un sel non toxique de celui-ci. On pr6pare un ester alkylique inférieur de N-( dl-3-trans-carboxyo- xirane-2-carbonyl)-L-leucine répondant à la formule (I): CH CONHCHCOOR HOOC O- H CH 2 CH CH3 CH3 (I) dans laquelle R représente un radical aikyle inférieur choisi parmi les radicaux méthyle, éthyle, n-propyle, n-butyle et isobutyle, en protégeant l'un des groupes carboxyliques de l'acide trans-6poxysuccinique, en faisant réagir un tel acide trans-époxysuccinique avec un ester alkylique inf6rieur de L-leucine répondant à la formule (II): CH3 CH 3CH CH -CH CH CH - COOR (II) CH' 2 NH2 dans laquelle R a la même signification que ci-dessus, et en enlevant le groupe protecteur du groupe carboxylique après la réaction. Selon une variante, le composé de formule (I) peut tre préparé par condensation directe de l'acide trans-époxysuccinique sur un ester alkylique inférieur de L-leucine. Iereste ester du mono-ester de l'acide trans-époxysuccinique peut être un radical t-butyle ou un radical benzhydryle. Le reste mono-ester doit être un radical susceptible d'enlèvement par l'acide trifluoroacétique ou un composé analogue, étant donné que ce reste doit être enlevé sans faire disparaître le radical ester alkylique inférieur de L-leucine ou son groupe alkylique inférieur. Le groupe alkyle inférieur peut être le radical méthyle, éthyle, n-propyle, n-butyle ou isobutyle. On peut préparer le mono-ester de l'acide trans-époxysuccinique en faisant réagir l'acide trans-époxysuccinique avec un dérivé -t-butyle activé, comme par exemple la pseudo-urée O-(t-butyl)-N,N'-diisopropylique dans un solvant organique tel que le tétrahydrofuranne, le chlorure de méthylène, le chlorure d'éthylène, le chloroforme ou le benzène, à une température 2474497. de O à 50 C et, de préférence, à la température ambiante, pendant une durée de 5 à 20 heures. On effectue la réaction du mono-ester de l'acide trans-époxysuccinique avec l'ester alkylique inférieur de L-leucine en présence d'un agent de condensation tel que la N-hydroxy-succinimide et la N,N'-dicyclohexylcarbodiimide ou la N-hydroxyphtalimide et la N,N'-dicyclohexylcarbodiimide, au sein d'un solvant organique tel que le tétrahydrofuranne, le chlorure de méthylène, le chlorure d'éthylène, le chloroforme ou le benzène, à une température de O à 50 C, de préférence à la température ambiante, pendant une durée de 5 à 20 heures. La réaction de condensation directe de l'acide trans-époxysuccinique avec l' ester alkylique inférieur de L-leucine est effectuée en présence d'un agent de condensation tel que la N-hydroxysuccinimide et la N,N'dicyclohexyl carbodiimide, ou la N-hydroxyphtalimide et la N,N'dicyclohexyl carbodiimide, dans un solvant organique tel que le tétrahydrofuranne ou le diméthylformamide, à une température de O à 50 C, de préférence à une température ambiante pendant une durée de 5 à 20 heures. On effectue l'enlèvement du reste mono-ester, par exemple du groupe tbutyle ou benzhydryle, du composé de départ ou du mono-ester de l'acide trans-époxysuccinique en faisant réagir le produit de réaction de condensation avec, par exemple, l'acide trifluoracétique à une température de -10 à 50 C pendant 0,5 à 5 heures. On peut convertir l'ester alkylique inférieur de N-(dl-3-trans-carboxyoxi- rane-2-carbonyl)-L-leucine ainsi obtenu en un sel non toxique correspondant par une technique traditionnelle, si on le juge nécessaire. Les sels non toxiques appropriés sont les sels de métaux alcalins, par exemple, de sodium et de potassium, et les sels de calcium. Pour déterminer l'efficacité dans le traitement des infarctus du myocarde ainsi que la toxicité aigrie de certains composés selon l'invention, on a fait appel aux méthodes suivantes: on a étudié l'efficacité contre les infarctus du myocarde sur un infarctus-du myocarde expérimental provoqué chez des lapins. En même temps, on a étudié l'efficacité du chlorhydrate de Vérapamile et du chlorhydrate de propanolol, qui sont des médicaments connus de suppression de la maladie ischémique du coeur. On a étudié la toxicité aigUe sur les souris. On indique ci-dessous le type d'infarctus du myocarde, le procédé expérimental de détermination de la toxicité aigUe et les résultats obtenus. Test expérimental 1 On a anesthésié des lapins blancs mâles pesant environ 2 kg en utilisant 2474497 J du pentobarbital sadique (3,5 mg/kg, i.v.). On a ouvert le thorax tout en appliquant la respiration artificielle et on a ligaturé l'artère coronaire antérieure descendante gauche (environ à 7 mm au-dessous de son point d'origine). Au bout de 24 heures, on a sorti le coeur et on a découpé le myocarde en tranches en parant du sommet du coeur jusqu'à la portion ligaturée pour obtenir ainsi un échantillon ayant 2 mm d'épaisseur.. On a teint la portion morte par le procédé de Lake et al Histochemical-J., 2441 (1970) et on a calculé le rapport de cette portion à la surface du ventricule gauche. On a administré des substances médicinales 3 minutes après la ligature (5 mg/kg, i.v.) pendant 1 heure à compter immédiatement après la ligature (10 mg/kg/h, infusion au goutte à goutte), 8 heures après la ligature (Smg/kg, i.p.) et 20 heures après la ligature (5 mg/kg, i.p.), respectivement. A un groupe d'animaux témoins, on a administré une solution de 0,9 % de chlorure de sodium avec les mêmes intervalles de temps que ceux pour les animaux recevant les substances médicinales. Les résultats obtenus sont répertoriés dans le tableau I. Animaux Essai 1 TABLEAU I % de mortalité A(25 mg/kg) B (3,5mg/kg) 11,8 19,6 ,5 11,2 0 10,9 3,8 15,1 4,9 9,2 Moyenne + erreurs normalisées 5,2+1,9 13,2+1,9 A: Sel de potassium de l'ester éthylique de carbonyl)-L-leucine (en dissolution dans chlorure de sodium). B: Chlorhydrate de Vérapamile (dissous dans chlorure de sodium). - C: Chlorhydrate de propanolol [on a utilisé (marque déposée)]. 14,9+1,9 16,5+2,0 N-(dl-3-trans-carboxyoxirane-2- une solution physiologique de une solution physiologique de une injection d"'Indéral" Test expérimental 2 Détermination de la--oxicité aigie: On a utilisé des souris du type ddN pesant de 20 à 28 g. On a administré C (Smg/kg) 18,3 16,7 9,1 11,9 18,5 Témoins 19,8 19,3 9,1 ,5 18,9 les médicaments par voie intraveineuse par les queues des animaux. Comme on peut le voir dans le tableau II, on a administré l'agent médicinal selon l'invention jusqu'à une dose de 1 g/kg. Les résultats obtenus apparaissent dans le tableau II. TABLEAU II Composés testés DL 50 (mg/kg, .v.) A MDL > 1 000 B 15 C 28 A, B et C ont les mêmes significations que ci-dessus. A l'examen des résultats des tests expérimentaux 1 et 2, on peut constater que lorsqu'on administre 25 mg/kg du composé selon l'invention ou d'un sel non toxique de celui-ci, on obtient un effet inhibiteur extrêmement efficace contre l'infarctus expérimental du myocarde chez les lapins, l'effet étant supérieur de près de 70 % à celui obtenu sans une telle administration d'autre part dans le test de toxicité aigrtchez les souris, on n'a constaté aucune mortalité même avec administration de 1 000 mg/kg, pas plus d'ailleurs qu'aucun autre sympt8me nuisible. On peut donc s'attendre à ce que les composés selon l'invention et leurs sels non toxiques constituent des médicaments d'une sécurité très élevée et particulièrement efficaces contre les infarctus du myocarde. La dose du composé selon l'invention peut varier selon les sympt8mes de l'infarctus du myocarde. Cependant l'administration usuelle à un patient peut aller de 100 mg à 1 g par jour environ. La voie d'administration peut être intraveineuse, intramusculaire, orale ou hypodermique ou du type perfusion ou goutte à goutte. On peut administrer le produit sous une forme appropriée quelconque, par exemple sous forme d'injection, de poudre, de gélule, de comprimé ou de granulés. Pour préparer les compositions, on peut les combiner avec un véhicule minéral tel que le carbonate de magnésium, l'anhydride d'acide silicique, le silicate d'aluminium synthétique ou le phosphate de calcium ou un véhicule organique tel que le lactose, l'amidon de mais ou la cellulose, ou tout autre véhicule d'usage courant. En outre, dans le cas de l'injection, le produit peut être dissous dans un milieu d'usage courant, tel que l'eau distillée, une solution physiologique de chlorure de sodium ou une solution de lidocaine pour injections. Les exemples suivants servent à illustrer l'invention sans aucunement en limiter la portée: EXEMPLE 1 Ester éthylique de N-(dl-3-trans-carboxyoxirane-2-carbonyl)-L-leucine. Dans 15 ml d'une solution de tétrahydrofuranne contenant 709 mg d'ester mono-t-butylique d'acide trans-époxysuccinique et 434 mg de Nhydroxysuccini- mide, on introduit 777 mg de N,N-dicyclohexyl-carbodiimide et on agite à température ambiante pendant 3 heures. Séparément, dans 15 ml d'une suspension dans le tétrahydrofuranne de 737 mg de chlorhydrate d'ester éthylique de L- leucine, on introduit 0,53 ml de triéthylamine. A ce mélange, on ajoute la solution de tétrahydrofuranne décrite plus haut tout en filtrant pour séparer les substances insolubles. On agite le mélange pendant une nuit à température ambiante, puis on élimine le solvant par distillation et on ajoute de l'acétate d'éthyle. On lave la solution organique résultante avec une solution aqueuse saturée de bicarbonate de sodium et une solution normale d'acide chlorhydrique, puis on sèche sur du sulfate de sodium. On élimine le solvant et on purifie le résidu par chromatographie sur colonne de gel de silice (éluant: benzène/ acétate d'éthyle = 10/1), de sorte qu'on obtient 472 mg d'ester éthylique de N-(dl-3-trans-t-butoxy carbonyloxirane-2-carbonyl)-L-leucine sous forme d'une substance huileuse incolore (rendement 38 %). nature -1 IR max cm: 1735, 1670, 1520, 1150, 895 max RMN (CDCt3): 0,95 (6H, d, J=5Hz, CH3) 1,28 (3H, t, J=7Hz, CH2CH3 2 1,52 (9H, s, t-butyle) 1,64 (3H, m, -CH2CH 2) 3,32 (0,5H, d, J=2 Hz, 7'H) 0- 3,42 (0,5H, d, J=2Hz, O'H) 0 - 3,61 (1H, d, J=2 Hz, 7 H) 4,16 (1H, q, J=7Hz, 0-CH2) 4,18 (1H, q, J=7Hz, O-CH2) 4,58 (1H, m, NHCHOO) ,37 (1H, m, NH) A 472 mg de l'ester éthylique de N-(dl-3-trans-t-butoxy-carbonyloxirane- 2-carbonyl)-L-leucine, ainsi obtenu, on ajoute 5 ml d'acide trifluoracétique et on agite pendant 1 heure tout en refroidissant à la glace. On élimine l'acide trifluoracétique par distillation et on ajoute une solution aqueuse saturée 2474497 J de bicarbonate de sodium. On lave la solution aqueuse avec du chloroforme, on acidifie avec HC1 1N, on extrait avec de l'acétate d'éthyle, on sèche sur du sulfate de sodium et on élimine le solvant, de sorte qu'on obtient 375 g d'ester éthylique de N-(dl-3-trans-carboxyoxirane-2-carbonyl)-Lleucine sous forme d'une substance huileuse incolore (rendement 95 %). IR nature max RMN (CDCI 3) -l cm : 1730, 1660, 1540, 1200, 895 : 0,94 1,27 (6H, d, J=5Hz, CH3) (3H, t, J=7Hz, CH2CH3) 1,61 (3H, m, -CH CH c) 3, 54 (0,5H, s, H) 3,60 (0,5H, s, V H) 3,78 (1H, s, 1H) 4,16 (2H, q, J=7Hz, C-CH2) 4,56 (1H, m, NCHCO) 6,88 (0,5H, d, J=8Hz, NH) 7,09 (0,5H, d, J=8Hz, NH) EXEMPLE 2 10,18 (1H, large, COOH) A une solution de 39,6 g d'acide trans-époxysuccinique dans 100 ml de diméthyl- formamide et 300 ml de tétrahydrofuranne, on ajoute 34,5 g de Nhydroxysuccinimide, puis on ajoute lentement une solution de tétrahydrofuranne (100 ml) de 61,8 g de dicydohexl carbodiimide, le mélange obtenu étant agité à température ambiante pendant 2 heures. A ce mélange, on ajoute 48,8 g d'ester éthylique de L-leucine et on agite le tout à température ambiante pendant une nuit. On élimine les substances insolubles par filtration et on concentre le filtrat. Au résidu, on ajoute de l'acétate d'éthyle et on extrait la solution organique résultante avec une solution aqueuse de bicarbonate de sodium saturée. On acidifie l'extrait aqueux avec une solution d'acide chlorhydrique 1N, puis on extrait avec de l'acétate d'éthyle. On répète l'extraction de la solution d'acétate d'éthyle avec une solution aqueuse de bicarbonate de sodium, on acidifie l'extrait avec de l'acide chlorhydrique 1N et on extrait à nouveau au moyen d'acétate d'éthyle. On lave deux fois la solution d'acétate d'éthyle avec une solution aqueuse de chlorure de sodium et on sèche sur sulfate de sodium. L'élimination du solvant conduit à 30 g d'ester éthylique de N-(dl-3-trans-carboxyoxirane2-carbonyl)-L-leucine, qui se présente sous la forme d'une substance huileuse incolore (rendement 37 %). 2474497 j EXEMPLE 3 Sel de potassium de l'ester éthylique de N-(dl-3-trans-carboxyoxirane- 2-carbonyl)-L-leucine. A une solution aqueuse (1 ml) contenant 137 mg d'hydrogénocarbonate de potassium, on ajoute une solution d'acétate d'éthyle (10 ml) contenant 375 mg d'ester éthylique de N-(dl-3-transcarbôxyoxirane-2-carbonyl)-L-leucine, on agite pendant 10 minutes, on sèche complètement sous pression réduite et on obtient ainsi 462mg d'un sel de potassium d'ester éthylique de N-(dl-3trans- carboxkiorane-2-carbonyl)-L-leucine sous forme d'une poudre hygroscopique blanche (rendement quantitatif). KBr IRKQB cm 1: 1730, 1670, 1610, 1540, 1380, 1200, 895 Max RMN (DMSO-d6) : o,84 (6H, m, CH3) 1,15 (3H, t, J=7Hz, CH2CH3) 1,52 (3H, m, CH2CH_=) 2, 94 (1H, m, - /H) O 3,24 (1H, m, 77'\H) O 4,01 (2H, q, J=7Hz, 0-CH2) 4,20 (1H, m, NHCHC0) 8,25 (1H, d, J=8Hz, NH) EXEMPLE 4 Sel de sodium d'ester éthylique de N-(dl-3-trans-carboxyoxirane-2-carbo- nyl)-L-leucine. A une solution aqueuse (%ml) contenant 27 mg d'hydrogénocarbonate de sodium, on ajoute une solution d'acétate d'éthyle (5ml) contenant 87mg d'ester éthylique de N-(dl-3-trans-carboxyoxirane-2-carbonyl)-L-leucine, on agite pendant 10 minutes à température ambiante, on sèche complètement sous pression réduite et on obtient ainsi 94 mg d'un sel de sodiumd'ester éthylique de N-(dl-3-trans-carboxyoxirane-2-carbonyl)-L-leucine, sous forme d'une poudre hygroscopique blanche (rendement quantitatif). KBr -1 IRVmax cm: 1730, 1650, 1615, 1540, 1380, 1200, 895 RMN (DMS0-d6): 0,86(6H, m, CH3) 1,16(3H, t, J= 7Hz, CH2CH3) 1,55(3H, m, CH2CH) 2,99(1H, m, V-7'-H) 3,28(1H, m, 0 H) o 2474497 i 4,01(2H, q, J=7Hz, O-CH2) 4,20(lH, m, NHCHCO) 8,28(lH, d, J=7Hz, NH) EXEMPLE 5 Composition (comprimés) On prépare des comprimés avec pellicules d'enrobage et contenant les ingrédients suivants par comprimé (220 mg): Sel de potassium de N-(dl-3-trans-carboxyoxirane- 2-carbonyl)-L-leucine 50 mg Lactose 100 mg Cellulose cristalline 50 mg Stéarate de magnésium 1 mg Hydroxypropylméthylcellulose 15 mg Hydroxypropylcellulose h mg EXEMPLE 6 Composition (forme granulaire) Dans chaque gramme de la composition granulaire sont incorporés les ingrédients suivants: Ester éthylique de N-(dl-3-trans-carboxyoxirane- 2-carbonyl)-L-leucine 200 mg Lactose 500 mg Amidon de mais 300 mg REVENDICATIONS 1.- Dérivé d'acide époxysuccinique, caractérisé en èqu'il répond à la formule (I) H CONHCHCOOR CH HOQ O H CH21 HOOC 0 | CH (I) /\ CH3 CH3 dans laquelle R représente un radical alkyle inférieur choisi parmi les radicaux méthyle, éthyle, n-propyle, n-butyle et isobutyle, ou un sel non toxique de ce dérivé. 2.- Dérivé selon la revendication 1, caractérisé en ce qu'il est un ester alkylique inférieur de N-(dl-3-trans-carboxyoxirane-2-carbonyl)L- leucine, dont le radical alkyle inférieur est choisi parmi les radicaux méthyle, éthyle, n-propyle, n-butyle et isobutyle, ou un sel non toxique de ce dérivé. 3.- Dérivé selon la revendication 1 ou 2, caractérisé en ce que le radical alkyle inférieur est le radical éthyle. 4.- Procédé de préparation d'un dérivé d'acide époxysuccinique de formule (I) telle que définie dans la revendication 1 ou d'un sel non toxique de ce dérivé, caractérisé en ce qu'il consiste à faire réagir un ester aLkylique inférieur de leucine de formule (II) CH3 CH-CH - CH2 - CH - COOR (II) CH3 1 NH2 o R a la meme signification que dans la revendication 1, avec un mono-ester d'acide trans-époxysuccinique; à éliminer ledit reste monoester après la réaction; et à convertir éventuellement le dérivé ainsi obtenu en son sel non toxique par un procédé connu. 5.- Procédé de préparation d'un ester alkylique inférieur de N-(dl-3- trans-carboxyoxirane-2-carbonyl)-L-leucine selon la revendication 4, caractérisé en ce qu'on fait réagir un ester alkylique inférieur de Lleucine avec un mono-ester d'acide dl-trans-époxysuccinique. 6.- Procédé de préparation d'un ester éthylique de N-(dl-3-trans-carboxy- 2474497 1' oxirane-2-carbonyl)-L-leucine selon la revendication 4 ou 5, caractérisé en ce qu'on fait réagir l'ester éthylique de L-leucine avec un mono-ester d'acide dl-trans-époxysuccinique. 7.- Procédé de préparation des dérivés de formule (I) tels que définis dans la revendication 1, caractérisé en ce qu'il consiste à faire réagir un ester alkylique inférieur de leucine avec l'acide trans-époxysuccinique, puis éventuellement à convertir le dérivé obtenu en son sel non toxique. 8.- Procédé de préparation d'un ester alkylique inférieur de N-(dl-3- trans-carboxyoxirane-2-carbonyl)-L-leucine selon la revendication 7, caracté- risé en ce qu'il consiste à faire réagir un ester alkylique inférieur de L-leucine avec l'acide dl-trans-époxysuccinique. 9.- Procédé de préparation de l'ester éthylique de N-(dl-3-trans- carboxyoxirane-2-carbonyl)-L-leucine selon la revendication 7 ou 8, caracté- risé en ce qu'il consiste à faire réagir l'ester éthylique de L-leucine avec 1 'acide dl-trans-époxysuccinique. 10.- Médicament pour le traitement des infarctus du myocarde, caractérisé en ce qu'il contient un dérivé d'acide époxysuccinique tel que défini dans l'une quelconque des revendications 1 à 3 ou un sel non toxique d'un tel derive. 11.- Médicament selon la revendication 10, caractérisé en ce qu'il contient un ester alkylique inférieur de N-(dl-3-trans-carboxyoxirane-2- carbonyl)-L-leucine ou son sel non toxique, le groupe alkyle inférieur étant choisi parmi les suivants: méthyle, éthyle, n-propyle, n-butyle, isobutyle. 12.- Médicament selon la revendication 10 ou 11, caractérisé en ce que le dérivé est l'ester éthylique de N-(dl-3-trans-carboxyoxirane-2carbonyl)-L- leucine ou un sel non toxique de celui-ci.