Brevet FR2475395A1 — publié le 19810814

La présente invention se rapporte à un procédé permettant de manipuler et d'augmenter le taux naturel d'ovulation déterminé génétiquement du bétail. Ln particu- lier, elle concerne l'immunisation du bétail contre les stéroldes androgènes et oestrogènes de façon que l'ovulation puisse être accrue à un degré dépassant de façon importante les valeurs naturelles. Elle concerne de plus la préparation et l'utilisation de compositions immunogènes pouvant produire les effets biologiques selon l'invention. Du fait de leur importance économique considérable, des études sur la biologie de la reproduction des animaux domestiques sur pied ont depuis longtemps été dirigées vers des procédés permettant de manipuler la fécondité individuelle des animaux de ferme et en particulier, permettant d'augmenter le taux d'ovulation des femelles. Le taux d'ovulation contr8le nécessairement le nombre maximum d'animaux pouvant être produits dans une gestation donnée. Le bétail a un très faible taux naturel d'ovulation, c'est-à-dire le nombre d'ovulations par animal se produisant dans le cycle oestral; pour la plupart des races, le taux d'ovulation se trouve entre 1,00 et 1,01. Seules dans les races peu courantes, on peut voir des valeurs telles que 1,07. Ainsi, le bétail est très différent, par ce point de vue, de nombreuses autres espèces domestiques sur pied o des races ont souvent des taux d'ovulation de 2 et plus. En clair, pour augmenter la fécondité naturelle des animaux sur pied, il doit y avoir, àla fécondation, un taux accru d'ovulation. On sait déjà dans l'art antérieur que, en augmentant artificiellement le taux d'ovulation, dans une espèce domestique sur pied, par l'administration de gonadotrophîne de sérum de jument gravide (PMSG) par exemple, il est possible d'augmenter le taux d'ovulation >,> et finalement la fécondité totale de l'espèce. Cependant, ce procédé souffre du problème que le nombre d'oeufs produits ne peut être contrôle et que le nombre d'oeufs produits par une vache traitée au moyen de PMSG peut varier de aucun jusqu'à 20. Dans la demande de brevet australienne en cours iO PE 2274/80, on démontre également que par l'immunisation des moutons et des chèvres pour produire des anticorps dirigés contre certaines hormones endogènes, le taux d'ovulation de ces animaux peut être accru. Les hormones sont des stéroldes de la classe des oestrogènes et des androgènes. Cependant, de façon surprenante, le bétail ou les bovins n'ont pas répondu à ces immunisations avec une bonne production d'anticorps ni avec des changements du taux d'ovulation quand les mêmes immunogènes que ceux produisant des augmentations de taux d'ovulation chez les moutons et les chèvres, sont injectés aux bovins. La présente invention concerne un procédé pour augmenter le taux d'ovulation chez les femelles du bétail et consiste à administrer, au bétail, une composition immunogène contenant (i) un conjugué d'un dérivé d'androgène stérolde ou d'un dérivé d'oestrogène stérolde avec une protéine immunogène et (ii) des anhydrides d'acide des dérivés de stérolde, la composition contenant de 10 à 90% du fragment stérolde sous forme des anhydrides, afin de produire un titre d'anticorps moyen liant le stérolde dans le bétail femelle de 1 sur 100 à 1 sur 5.000 au moment de l'ovulation. Selon un autre aspect, la présente invention concerne une composition de matièresefficace pour augmenter le taux d'ovulation lors d'une administration à du bétail femelle comprenant (i) un conjugué d'un dérivé d'androgène stéroïde ou d'un dérivé d'oestrogène stérolde et d'une protéine immunogène et (ii) des anhydrides acides du dérivé de stérolde, la composition contenant de 10 à 90f%0 du fragment stérolde sous forme des anhydrides. Dans la présente description, les termes qui suivent ont les significations indiquées ci-après: Androgène stérolde: toute substance stérolde qui stimule l'expression des caractéristiques sexuelles secondaires du mâle. L'activité androgène peut être déterminée en mesurant la recroissance de la crête involutée d'un coq castré à la suite de l'administration d'androgènes ou nn mesurant la réponse à la croissance des vésicules séminales chez des rats mâles castrés à la suite d'une administration d'androgènes. Oestrogène stérolde: toute substance stérolde autre que l, oestradiol-171, qui stimule l'expression des caractéristiques sexuelles secondaires chez la femelle. L'activité oestrogène peut être déterminée en mesurant la croissance utérine ou la cornification de l'épithélium vaginal à la suite d'une administration d'oestrogènes à des rats ou des souris femelles châtrés. Les immunisations contre l'oestradiol-17 se sont révélées rendre les animaux femelles anoestraux du fait de la neutralisation des effets hormonaux puissants et ce produit n'est par conséquent pas adapté à une utilisation dans la présente invention. Titre d'anticorps: défini ici comme la dilution de l'ant sérum qui lie 505 de la quantité maximum du stéroîde marqué lis par l'antisérum ou par l'antisérum témoin de qualité de référence standard pendant l'incuba- tion d'environ 50 picogrammes du stérolde pendant environ 18 heures à 4 C en utilisant ensuite soit du charbon de bois enduit de dextrane ou du polyéthylène glycol pour séparer le stérolde lié à l'anticopps. Les immunisations selon l'invention sont effectuées avec des substances et des processus individuellement connus mais qui, en combinaison, sont nouveaux. Ainsi, pour rendre les androgènes ou les oestrogènes immunogènes, des dérivés acides appropriés sont synthétisés et ils sont liés par des moyens chimiques, de façon covalente, à une protéine immurugène comme l'albumine de sérum humain, l'ovalbumine, la gélatine ou des t-globulines, typiquement. Four obtenir des effets sur les fonctions ovariennes et l'ovulation dans le bétail, on a découvert, de façon surprenante, que les immunogènes devaient être préparés avec des niveaux particulièrement élevés de stérolde incorporé ou associé aux protéines comme véhicule. Cela est obtenu en faisant réagir chimiquement un excès molaire important du stérolde avec la protéine comme véhicule. Cependant, une forte incorporation de stéroIde seul n'est pas une propriété suffisante de l'immunogène pour obtenir les effets selon l'invention. Couramment, le stérolde en excès utilisé pour faciliter une forte incorporation molaire de stérolde est délibérément retiré du conjugué par dialyse avec des solvants aqueux ou organiques aqueux ou par chromatographie en colonne. On a trouvé, de façon surprenante, que les compositions immunogènes permettant d'obtenir les effets de l'invention étaient obtenues si cette dialyse n'était pas entreprise jusqu'à la fin pour retirer toutes les substances dialy- sables. C'est une partie de la nouveauté que l'isolement de la composition immunogène est obtenu simplement par dialyse incomplète du mélange réactionnel avec de l'eau seule pendant 8 à 24 heures et en faisant suivre, de façon optimale, d'une lyophilisation. L'analyse chimique de la composition immunogène.- ainsi formée révèle qu'elle se compose d'un conjugué covalent stérolde-protéine avec un anhydride d'acide- du stérolde librement lié à la protéine et une faible proportion du dérivé de stérolde ntayant pas réagi. De façon surprenante, la présence des anhydrides favorise, particulièrement la réponse immunogène au complexe stérolde-protéine (tableau 1). On a trouvé que pour produire une meilleure réponse, la composition de l'immu- nogène devait contenir 10-90% et de préférence 50-80% du fragment stérolde sous forme de l'anhydride d'acide. Les compositions selon l'invention possèdent une immunogéni- cité qui est sensiblement plus importante que ce à quoi pourraient s'attendre ceux qui sont compétents en la matière à partir de la connaissance de la teneur en haptène lié de façon covalente. Le processus chimique utilisé pour lier l'androgène ou l'oestrogène à la protéine immunogène peut être tout processus connu pouvant en même temps former la quantité nécessaire de l'anhydride d'acide du stérolde. Des compositions immunogènes ainsi formées sont administrées aux animaux et leur réponse immune à ceux-ci, est rendue plus puissante par des adjuvants tels que DEAE-Dextrane, l'immunogène étant en solution ou en suspension, ou avec l'immunogène en suspension plutôt qu'émulsifié, dans un adjuvant incomplet ou complet de Freund. De façon surprenante, on a trouvé que les émulsions de l'immunogène dans l'adjuvant de Freund étaient souvent faiblement efficaces, ce qui peut être dû au fait qu'il est difficile de préparer une émulsionaux concentrationsrequisesde l' immunogène, qui soit stable et qui reste stable suffisamment longtemps pour produire les réponses immuno- logiques après injection. Dans la préparation des compositions immunogènes, on peut utiliser des substances déjà connues. Ainsi, les immunogènes androgènes préférés sont préparés par conjugaison, à la protéine, de dérivés de 4-androstène- 3,17-dione fonctionnalisés avec un groupe acide aux positions 1, 7, 11 ou 15 du noyau stérolde, par exemple. Pour l'immunisation contre la testotérone, on peut utiliser des dérivés fonctionnalisés avec un groupe acide aux positions 3 ou 17. La gamme de titresd'anticorps pour l'androstènedione ou la testostérone qu'il faut atteindre pour obtenir une augmentation du taux d'ovulation dans le bétail doit de préférence se trouver entre 1:100 et 1: 5.000 en moyenne pour le troupeau. Avec des titres S0 d'anticorps pour ces hormones qui sont considérablement plus faibles que cette gamme, l'incidence d'ovulations multiples aura tendance à diminuer et s'approchera de celle caractéristique des animaux non immunisés. Des immunisations appropriées avec l'oestrogène, l'oestrone, peuvent également favoriser une augmentation du taux d'ovulation du bétail si les titres se trouvent entre 1 sur 100 et 1 sur 5.000, en moyenne pour le troupeau. Les dérivés préférés de stérolde sont ceux qui, après conjugaison avec la protéine et l'administration à un animal, produisent un anticorps spécifique à l'oestrone. On peut citer, comme exemples non limitatifs de ces dérivés d'oestrone déjà connus, l'oestrone-3-hémisuccinate, i'oestrone-3-carboxyméthyléther, 1'oestrone-6-carboxyméthyl- oxime et la 15-carboxyméthyloestrone. La présente invention n'impose aucune limite sur la protéine utilisée pour former l'antigène immunisant selon l'invention mais l'albumine de sérum humain s'est révélée efficace. On reconnait, dans l'invention, que la gamme des titres d'anticorps peut varier avec l'hormone utilisée dans l'immunisation et avec la race du bétail qui est immunises Le choix du titre d'anticorps le plus préféré dans la gamme ci-dessus est par conséquent une question d'expérience dans les circonstances particulières de toute application particulière de ce procédé. La composition immunogène est de préférence administrée par des injections espacées d'une période de 1 à 5 semaines. Dans le cas d'un animal qui a été précé- demment immunisé, seule une injection peut être requise. Il est considéré qu'il est souhaitable de permettre à un cycle oestral complet de se passer entre l'immunisation, ou la seconde immunisation si cela se produit, et l'accouplement de l'animal. Le matériau immunogène doit par conséquent être tel que le titre d'anticorps souhaité soit obtenu lors de l'ovulation dans un cycle oestral séparé du moment de l'immunisation par au moins la longueur d'un cycle oestral complet, Dans les exemples donnés, les effets biologiques obtenus sont une conséquence du développement des anti- corps anti-stéroldes parce que les immunisations des animaux témoins contre la protéine comme véhicule seule, n'ont pas d'effet important sur le taux d'ovulation0 En appliquant ces effets à la reproduction du bétail ou des bovins, ceux qui sont compétents en la matière reconnaîtront que cela peut avantageusement être combiné à une synchronisation du cycle, par exemple avec des prosta- glandines ou des progestagènes, avec ensuite une insémination artificielle auquel cas il n'est pas nécessaire que le bétail présente un rut et l'enregistrement du rut n'est pas essentiel. Par ailleurs, on peut avantageusement combiner la synchronisation du cycle oestral et l'utilisation de l'hormone libérant l'hormonqlutéinisante, typiquement 66-90 heures après le dernier traitement de synchronisation, avec ensuite une insémination artificielle 6 à 12 heures plus tard afin d'améliorer la fertilité pendant le temps de l'ovulation ainsi que d'assurer un taux optimum d'ovulation. Le cadre de l'invention n'est pas limité à des procédés employant des protocoles d'immunisation active, car des immunisations passives en utilisant des anticorps anti-stéroldes produits chez des animaux donneurs peuvent être utilisées pour obtenir les augmentations de taux d'ovulation selon l'invention. Toutes les technologies antérieures d'immunisa- tion que l'on peut utiliser pour obtenir les titres d'anti- corps anti-stéroldes critiques et la réponse biologique de l'invention sont concernées par les procédés selon l'invention. Les exemples qui suivent sont donnés pour illustrer les procédés préférés dans le cadre général de l'invention. EXEMPLE 1 (a) Préparation de compositions immunogènes stérolde-protéine A une quantité de 360 mg d'oestrone-3-carboxyméthyl- éther dissous dans 36 ml de dioxane, on ajoute, goutte à goutte et tout en agitant, une solution fratchement préparée de 162 mg de 1-éthyl-3(3-diméthylaminopropyl)- carbodiimide chlorhydrate (ECDI) dissous dans 10,8 ml d'eau distillée. On laisse la réaction se passer pendant 30 minutes $ à 25 C et ensuite, on ajoute, goutte à goutte, tout en agitant, une solution de 360 mg d'albumine de sérum humain (Húx) dissous dans 48 ml d'un tampon au phosphate à un pH de 7,80, 0,05 M. Au bout de 18 heures, on mélange une autre solution de 180 mg d'oestrone-3-carboxyméthyléther dans 12 ml de dioxane, à 54 mg de ECDI dans 3,6 ml d'eau, on laisse au repos pendant 30 minutes à 25 C et on ajoute au mélange réactionnel principal. On laisse la réaction continuer pendant 4 heures et demie et ensuite on ajoute encore 108 mg de ECDI sous forme solide, directement, et tout en agitant, dans le mélange. Au bout de 3 heures supplémentaires à 25 C, le mélange réactionnel est transféré aux-tubes de dialyse et est dialySé avec de l'eau distillée. L'eau est changée au bout d'environ 1 heure, I heure et demie, 2 heures et 12 heures. Le produit (composition immunogène d'oestrone) retenu dans le sac de dialyse est alors lyophilisé et pesé. Le rendement est de 400 mg. La teneur en stéroïde dans l'immunogène stérolde-protéine est calculée en incorporant une trace d'oestrone-3-carboxyméthyléther marqué 3H dans- la réaction. Par comptage de scintillation liquide de quantités dosés dudérivé de stérolde et de l'immunogène, on trouve que 120 moles équivalentesde stéroide par.mole de protéine sont présentes dans la composition immunogène; 35 moles de stérolde par mole de protéine sont liées de façon covalente, le restant étant-de l'anhydride d'acide de stérolde librement lié à la protéine. Dass une préparation semblable, 7 -carboxyéthyl- thio-4-androstène-3,7-dione est liée à de l'albumine de sérum humain pour donner 380 mg de produit (composition immunogène d'androstènedione) ayant 90 moles équivalentes de stérolde par mole de protéine présente, dont 32 moles sont liées de façon covalente,le restant étant de l'anhydride de stérolde librement lié à la protéine. Dans une préparaton semblable,delatestostérone-3- carboxyméthyloxime est liéeà de l'albumine de sérum humain pour donner 380 mg de produit (composition immunogène de testostérone) ayant 102 moles d'équivalent stérolde par mole de protéine présente, dont 33 moles sont liées de façon covalente, le restant étant de l'anhydride d'acide de stérolde librement lié à la protéine. (b) Immunisation du bétail à la composition immunogène stérolde d'essai On transforme en pâte 100-250 mg de compositions iimnunogènes d'oestrone, androstènedione ou testostérone dans 1 ml d'une solution saline stérile à 0,9%' et on iG produit un volume total de 15 ml de solution saline stérile à 0,9%. Alors, on ajoute 15 ml d'une solution DEAE-dextrane. La solution est préparée en dissolvant 15 g dans 100 ml d'eau et en ajustant le pH à 7,5-7,7 en utilisant un tampon saturé de tri(hydroxyméthyl)-méthylamine (500 g/l d'eau). Le volume final de la solution de DEAE-dextrane est alors ajusté à 150 ml. Alternativement, on transforme en pate 100-250 mg de compositions immunogènes stéroldes dans 1 ml d'adjuvant de EFeund et on transforme en suspension dans un volume total de 30 ml d'adjuvant de Freund. Chaque animal ( de racesHereford et Hereford- Friesan) est injecté de 3 ml du vaccin, contenant 10 ou mg d'immunogène, chaque animal recevant des injections à environ 10 sites sous-cutanés sur la région du cou. Une injection intra-musculaire de 1,5 ml de vaccin pertussis est également administrée. Le traitement d'injection est répété 4 semaines plus tard. Des échantillons de sang sont prélevés par ponction à la veine de la queue une semaine après le second traitement. Le sang est recueilli dans des tubes heparinisés, et stocké sur de la glace et centrifugé à 4 C. Le plasma ainsi obtenu est stocké à -10 C jusqu'à l'analyse du titre d'anticorps de stérolde. Les titres obtenus à partir des compositions immunogènes (a) sont indiqués au tableau 1, ainsi que les faibles valeurs obtenues avec les conjugués stérolde-protéine préparés traditioLnnellement. EXEMPLE 2 Immunisation du bétail contre les stéroides et effet sur la dimension et l'activité ovariennes En utilisant les compositions immunogènes et les procédés décrits à l'exemple 1, du bétail est traité et examiné. Les changements ovariens sont déterminés par palpation per rectum dans la période de 8 à 17 semaines suivant le début du traitement et le nombre et la dimension de follicules ou corps jaunes sur les ovaires gauche et droit sont notés. La présence du cycle oestral dans le bétail est déterminéeen utilisant des détecteurs d'augmen- tation de température K-Mar; le bétail continue généralement à montrer un cycle oestral à la suite du traitement. Les résultats de l'immunisation sont donnés au tableau 2, montrant une augmentation marquée de l'activité ovarienne, du nombre de follicules et du nombre de corps jaunes avec une immunisation contre l'oestrone et l'androstènedione, en comparaison aux animaux témoins. TABLEAU 1 Immunogénicité améliorée des compositions contenant des anhydrides d'acides de stéroldes en plus des conjugués stérolde-protéine Dérivé de Fragment Teneur Nombre Titre d'anti- stérolde steroide en ha- d'ani- corps moyen utilisé total tèéne lié maux de stérordes Pour Pr-esnt de façon traités produit * former la covalente pour le composition groupe immunogène Moles/mole protéine Testostérone 33 4 33 5 3-carboxy- méthyloxime 102 + 33 8 1:865 Androstène- 33 # 33 6 / 1:50 dione- 7P - carboxyéthyl- thioéther 90 + 32 6 1:300 Oestrone-3- 120 + 35 6 1:6420 carboxyméthyl- éther * Suivant 2 traitements, primaire et secondaire + ces préparations contiennent une forte proportion d'anhydrides d'acide de Stéroide 4 Préparations d'un conjugué stérolde-protéine dialysé de façon traditionnelle pour retirer totalement les anhydrides d'acide de stérolde en excès. TABLEAU 2 Changements ovariens chez le bétail, 11 semaines après début du traitement 0 Dérivé de Nombre Animaux avec Animaux av stérolde d'animaux ovairées multiples utilise grs jaunes ou Pur former la immunogène oestrone-3- carboxy méthyléther Androstène- dione- 7c - carboxy- éthylthioéther Témoins (non- traités) plusieurs grands folli- cules sur les ovaires EXEMMPLE 3 En utilisant les compositions immunogènes et les procédés décrits à l'exemple I pour maintenir les titres mais avec des traitements répétés, une autre série d'essais avec des immunisations contre la testostérone, l'androstène- dione ou l'oestrone a été effectuée. La palpation per rectum a indiqué des réponses ovariennes et ces réponses ont été ensuite confirmées et détaillées par examen endoscopique du bétail (tableau 3), o les ovaires ont été visualisés et la taille, les nombres de follicules et de corps jaunes ont été enregistrés. DC orp TABLEAU 3 Examen endoscopique du bétail suivant l'immunisation aux stéroldes et montrant les augmentations résultantes du taux d'ovulation. Immunisation Nombre titre Nombre d'animaux d'anidcorps contre d'animoyea.ns avant 2 ou 3 (st roides) maux de s&otes ovulations- en groupes Testostérone 7 270 3 Androstenedione 6 300 2 Oestrone 8 I 500 1 Total des 21 - 6 (29%) animaux immunisés Témoins 2 0 0 (référence) Seul un petit groupe témoin est prévu dans cette série car il est bien établi que le taux d'ovulation multiple dans le bétail non traité de races Hereford ou Hereford Friesan est très faible et qu' environ 1% du bétail non traité a un taux d'ovulation de 1,01 en comparaison avec le taux d'ovulation du total des animaux immunisésdans cet exemple de 1,29. Bien entendu, l'invention n'est nullement limitée aux modes de réalisation décrits qui n'ont été donnés qu'à titre d'exemple. En particulier, elle comprend tous les moyens constituant des équivalents techniques des moyens décrits ainsi que leurs combinaisons si celles-ci sont exécutées suivant son esprit et mises en oeuvre dans le cadre de la protection comme revendiquée, R E V E N D I C A T I 0 N S 1.- Procédé pour augmenter le taux d'ovulation des femelles dans le bétail, caractérisé en ce qu'il consiste à administrer, au bétail, une composition immunogène contenant (i) un conjugué d'un dérivé d'androgène stéroide ou d'un dérivé d'oestrogène stérolde avec une protéine immunogène et (ii) des anhydrides d'acide des dérivés de stéroide, ladite composition contenant de 10 à 90% du fragment stérolde sous forme des anhydrides, afin de produire un titre d'anticorps liant le stérolde moyen chez les femelles, de l'ordre de 1 sur 100 à 1 sur 5.000, au moment de l'ovulation. 2.- Procédé selon la revendication 1, caractérisé en ce que la composition immunogène précitée contient de 50 à 80% du fragment stérolde sous forme de l'anhydride. 3.- Procédé selon l'une quelconque des revendica- tions 1 ou 2, caractérisé en ce que l'androgène stérolde précité est choisi dans le groupe consistant en 4-androstène-3,17-dione et testostérone. 4.- Procédé selon l'une quelconque des revendications I ou 2, caractérisé en ce que l'oestrogène stéroïde précité est de l'oestrone. 5.- Procédé selon l'une quelconque des revendications précédentes, caractérisé en ce que la protéine immunogène précitée est choisie dans le groupe consistant en sérum humain, albumine, ovalbumine, gélatine et (-globuline. 6.- Procédé selon l'une quelconque des revendications précédentes, caractérisé en ce que le conjugué précité contient 25 à 35 moles de dérivé d'androgène ou d'oestrogène stérolde par mole de protéine immunogene. 7.- Proc6dé selon l'une quelconque des revendications précédentes, caractérisé en ce que la composition immunogène précitée est administrée en même temps qu'un immunoadjuvant. 8.- Procédé selon la revendication 7, caractérisé en ce que l'immunoadjuvant précité est choisi dans le groupe consistant en diéthylaminoéthyldextrane, adjuvant complet de Freund et adjuvant incomplet de Freund. 9.- Procédé selon la revendication 3, caractérisé en ce que le dérivé d'androgène stérolde précité est choisi dans le groupe consistant en 4-androstène-3,7-dione-7s - carboxyéthylthioéther et testostérone-3-carboxyméthyloxime. 10.- Procédé selon la revendication 4, caractérisé en ce que le dérivé d'oestrogène stérolde précité est de 1l'oestrone-3-carboxyméthyléther. 11. - Procédé selon l'une quelconque des revendications précédentes, caractérisé en ce que le rut chez le bétail est synchronisé avec les prostaglandines ou les progestagènes et en ce que le bétail est artificiel- lement inséminé de 72 à 96 heures après l'administration de ces prostaglandines ou progestagènes. 12.- Procédé selon l'une quelconque dee revendications 1 à 10, caractérisé en ce que le rut dans le bétail est synchronisé avec les prostaglandines ou les progestagènes et en ce que l'hormone libérant l'hormone lutéinisante est administrée au bétail de 66 à 90 heures ensuite et le bétail est artificiellement inséminé de 6 à 12 heures après l'adminsitration de l'hormone libérant l'hormone lutéinisante. 13.- Procédé pour augmenter le taux d'ovulation des femelles du bétail, caractérisé en ce qu'il consiste à administrer par voie passive, au bétail, un anticorps produit chez des animaux donneurs par un procédé selon l'une quelconque des revendications 1 à 12 afin de produire un titre d'anticorps liant le stéro!de moyen, chez la femelle, de 1 sur 100 à 1 sur 5.000, au moment de l'ovulation. 14.- Composition de matières efficace pour augmenter le taux d'ovulation lors d'une administration aux femelles d'un bétail, caractérisée en ce qu'elle contient: (i) un conjugué d'un dérivé d'androgène stérolde ou d'un dérivé d'oestrogène stérolde et d'une protéine immunogène et (ii) des anhydrides d'acides du dérivé de stérolde, ladite composition contenant de 10 à 90%' du fragment stérolde sous forme des anhydrides. 15.- Composition selon la revendication 14, caractérisée en ce que 50 à 30% du fragment stérolde précité est sous la forme de l'anhydride. 16.- Composition selon l'une quelconque des revendications 14 ou 15, caractérisée en ce que l'androgène stérolde précité est choisi dans le groupe consistant en 4-androstène-3,7-dione et testostérone. 17.- Composition selon l'une quelconque des revendications 14 ou 15, caractérisée en ce que l'oestrogène stérolde précité est de l'oestrone. 18.- Composition selon l'une quelconque des revendications 14 à 17, caractérisée en ce que la protéine immunogène précitée est choisie dans le groupe consistant en sérum humain, albumine, ovalbumine, gélatine et T -globuline. 19.- Composition selon l'une quelconque des revendications 14 à 18, caractérisée en ce que le conjugué précité contient 25 à 35 moles de dérivé d'androgène ou d'oestrogène stérolde par mole de protéine immunogène. 20.- Composition selon l'une quelconque des revendications 14 à 19, caractérisée en ce qu'elle contient également un immunoadjuvant. 0 21.- Composition selon la revendication 20, caractérisée en ce que l'immunoadjuvant précité est choisi dans le groupe consistant en diétDylaminoéthyldextrane, adjuvant complet de Freund et adjuvant incomplet de Freund. 22.- Composition selon la revendication 16, caractérisée en ce que le dérivé d'androgène stérolde est choisi dans le groupe consistant en 4-androstène-3,7- dione-7 -carboxyéthylthioéther et testostérone-3- carboxyméth-loxime. 25.- Composition selon la revendication 17, caractériséeen ce que le dérivé d'oestrogène stérolde précité est de 1'oestrone-3-carboxyméthyléther. l ...CLMF: ..-..-..CLMF: