Brevet FR2474828A1 — publié le 19810807

L'invention concerne le domaine du traitement de matières à base de caséine. Elle a plus particulièrement pour objet un procédé de traitement d'une telle matière contenant des phosphocaséinates de cations bivaleuts, tels que les phosphocaséinates de calcium et/ou de magnésium.De telles substances se trouvent présentes,par exemple,dans le lait ou dans des matières premières laitières,telles que les rétentats d'ultrafiltration du lait. L'invention concerne également les produits obtenus par un tel procédé,en parti- culier des phosphopeptides et des peptides non phosphorylés. L'invention a encore pour objet les applications des produits ainsi obtenus,spécialement celles des phosphopeptides qui peuvent être avantageusement utilisés dans le domaine alimen- taire pour répondre à des besoins spécifiques nutritionnels. On sait que les caséines des matières premières laitières,et tout particulièrement du lait,contiennent des phosphosérines qui confèrent aux peptides dans lesquels elles se trouvent des propriétés physico-chimiques,technolo- giques et physiologiques intéressantes. On trouvera notamment des indications sur les protéines du lait,dans l'ouvrage de Mc KENZIE H.A. (1971) intitulé "Milk proteins" Vol.l et 2 Academic Press New-York. L'ultrafiltration sur membranes,étant donné les progrès réalisés tant dans les appareillages que dans la 2A compréhension des phénomènes observés,s'est largement répan- due dans l'industrie laitière,pour le traitement du lait (voir par exemple Maubois J.L., Mocquot G. (1971)-Préparation de fromages à partir de pré-fromages liquides obtenus par ultrafiltration du lait-Revue "LE LAIT" fascicule 51 508,495- 533). Lors du passage du lait sur la membrane d'ultrafiltra- tion,l'eau,les sels minéraux solubles,le lactose,les composés azotés de faible poids moléculaire (peptides,acides aminés libres)et les vitamines hydrosolubles,traversent la membrane sous forme d'ultrafiltrat ou perméat, alors que les protéines et les constituants associés (calcium,phosphore), les globules gras et les éléments lipophiles sont retenus et se concen- trent au fur et à mesure de l'élimination de la phase aqueuse: ils constituent le rtentat ou cencentr protique.L'obtentiode ils constituent le rétentat ou cencentré protéique.L'obtention/ 2 24-74828 concentres protéiques de pureté élevée,nécessite la mise en oeuvre d'une ultrafiltration ainsi que d'une diafiltra- tion. Dans la diafiltration,on effectue une addition d'eau ou de solution aqueuse contenant des sels,en continu ou en discontinu,dans le rétentat d'ultrafiltration. On élimine simultanément ou successivement une quantités équivalente de perméat. Une telle opération a pour conséquence d'appau- vrir le rétentat en éléments filtrables. L'avantage de la technique d'ultrafiltration sur membranes est de conserver les protéines du lait/leur état natif. Le procédé de l'invention tire profit de l'ultra- filtration sur membranes pour opérer un fractionnement des constituants des matières premières à base de caséine,mais en combinant cette ultrafiltration à une opération d'hydroly- se enzymatique. On connait un certain nombre de procédés pour l'hydrolyse des protéines,par exemple des protéines de lait. L'hydrolyse acide conduit effectivement à l'obtention de solutions d'acides aminés libres,mais elle en détruit cer- tains. L'hydrolyse alcaline préserve le tryptophane mais entraine une insolubilisation qui diminue fortement la valeur nutritionnelle des concentrés protéiques initiaux. La protéolyse enzymatique est connue et pratiquée depuis fort longtemps à des fins analytiques ou à des fins alimentaires,le but principal étant de solubiliser les protéi- nes. La littérature fait largement état de nombreuses utili- sations alimentaires d'hydrolysats de protéines de soja / Voir ARAI. S. NOGUCHI M. KUROSAWA S. KATO H. et FUJIMAKI M. (1970) Applying proteolytic enzymes on soybean,6-Deodoriza- tion effect 7,des protéines de poissons:/ voir HEVIA P., WHITAKER J.R. et OLCOTT H.S. (1976)-Solubilization of a fish protein concentrate with proteolytic enzymes. J. Agric. Food Chem. Vol 24 (2) 383-385 7 ou de colza,par action de protéases animale,microbienne ou végétale. L'application de ces techniques aux protéines lai- tières au niveau industriel reste cependant très limitée. La protéolyse enzymatique ne présente pas les inconvénients des méthodes chimiques. Les conditions d'hydrolyse sont modérées et préservent ainsi la qualité nutritionnelle des produits. En général,l'hydrolyse conduit à des peptides ayant un goût amer prononcé. Ce caractère limite l'utilisation de ces hydrolysats en alimentation humaine. L'intensité de l'amertume d'un hydrolysat dépend principalement de la natu- re du substrat protéique et de la spécificité des enzymes. Pour éliminer l'amertume, on a suggéré de faire agir des exopeptidases. Voir par exemple ARAI S., YAMASHITA MKATO H.,FUJIMAKI M. (1970) -Agric. Biol. Chem.34,729,ainsi que CLEGG K.M.,SMITH G. et WALKER A.L.(1974)Production of an enzymatic hydrolysate of casein on a kilogram scale. J. Food Technol.9, 425-431. On a également proposé de modifier les peptides par addition d'acide glutamique avant réaction plastéique. Il est également possible de recourir à une élimination des acides aminés hydrophobes. Cependant,toutes ces techniques connues ne sont pas satisfaisantes et ne peuvent pas répondre aux besoins de l'invention. En effet,une solubilisation poussée,causée par la mise en oeuvre d'exopeptidasegaugmente le taux d'acides ami- nés libres et plus spécialement l'arginine,la lysine,la tyro- sine,la valine,la phénylalanine,la méthionine et la leucine, ce qui aurait pour effet direct d'encombrer les systèmes de transport,au niveau de la barrière intestinale,des acides aminés libreset donc d'entraîner une moindre efficacité nu- tritionnelle des hydrolysats. Par ailleurs,la qualité intrin- sèque des hydrolysats est modifiée car l'équilibre en acides aminés est lui-même changé,ce qui nécessite une supplémenta- tion en acides aminés libres. Sur le plan technologique,l'hydrolyse enzymatique fait le plus souvent appel à un système de réacteur disconti- nu. L'enzyme est ajoutée à la solution protéique à traiter. Après un temps de séjour plus ou moins long,dans des condi- tions favorables à l'activité enzymatique et à l'attaque du substrat,le pH est modifié et un traitement thermique lé- ger inactive l'enzyme.Une centrifugation peut être faite pour éliminer la fraction insoluble non digérée. Mais,selon cette technique de réaction d'hydrolyse enzymatique disconti- nue,il est difficile d'utiliser un rapport enzyme/substrat élevé. Or, on connait,voir ROBINS R.C. (1978)- Effect of ratio of enzymes to substrate on amino acid patterns released from proteins in vitro. Internat. J. Vit. Nutr.Res. 48, 44-52,1'influence décisive du rapport enzyme/substrat sur la nature des acides aminés libres et'les peptides libé- rés lors de la protéolyse. Avec un procédé discontinuil faut détruire les enzymes en fin d'hydrolyse lorsque celles-ci sont en excèsyce qui serait indispensable avec les rapports élevés précités. On a également proposé d'utiliser des réacteurs à enzymes fixées.Cependantceux-ci présentent de notables in- convénients sur le plan pratique. En effet,les conditions optimales d'activité des enzymes,en particulier les condi- tions de pHse déplacent,de sorte que le fonctionnement du réacteur ne donne pas satisfaction en permanence. On constate également des problèmes bactériologiques,le colmata- ge des lits de fixation ainsi que l'adsorption des protéines sur le support. En outrela réaction enzymatique a tendance à s'inhiber au cours du temps en raison de la formation de complexe enzyme-fragment protéique. L'inhibition peut être également due à la nature du support. Il est par ailleurs très difficile d'utiliser des systèmes multi-enzymes en raison des phénomènes de compétition des enzymes vis-à-vis du support et de la stabilité différente des enzymes au cours du temps. L'invention a mis a profit les moyens déjà connus dans certaines autres applications et qui consistent à faire appel à des réacteurs enzymatiques à membranes. On peut se référer par exemple à l'article de CHEFTEL C. (1972)_Solu- bilisation enzymatique continue du concentré protéique de poisson. Essai de recyclage des enzymes. Ann. Technol. Agric. 21,(3) 423-433 qui décrit un réacteur à membranes, appliqué à la protéolyse de concentrés protéiques de poisson. La membrane d'ultrafiltration permet de retenir.l'enzyme en solution dans le réacteur ainsi que le substrat protéique. Seuls les produits de l'hydrolyse,les peptides,sont éliminés au fur et à mesure de leur formation. Cependant, dans la pratique,la mise en oeuvre d'un tel réacteur n'est pas aisée,comme le souligne CHEFTEL. Le substrat doit être complètement solubilisable par l'enzyme et la solution protéique doit présenter une qualité bactériologi- que irréprochable. La présente invention a pour objet un procédé de traitement d'une matière première à base de caséine, dans laquelle les ions bivalents,tels que le calcium et/ou le magnésium,sont complexés par les phosphosérines,comme c'est le cas par exemple du lait et du rétentat d'ultrafil- tration du lait. Le procédé de l'invention est basé sur le fait que les phosphosérines présentent une aptitude à com- plexer les ions alcalinoterreux,tels que les ions calcium et/ou magnésium, de sorte que l'on peut séparer,dans les produits résultant de l'hydrolyse enzymatique,les phospho- peptides et les peptides non phcsphorylés. La complexation des cations bivalents facilite l'agglomération des phcsphopeptides entre eux,ce qui permet de les séparer des peptides non phosphorylés. Sous sa forme la plus générale,l'invention a pour objet un procédé pour le traitement d'une matière première à base de caséine contenant des phosphocaséinates de ca- tions bivalents,tels que les phosphocaséinates de calcium et/ou magnésium, caractérisé en ce qu'on soumet la matière première à une hydrolyse enzymatique à l'aide d'au moins une enzyme protéolytique capable de reconstituer la digestion protéique qui prend place in vivo dans l'organisme humain, en ce qu'on récupère l'hydrolysat obtenu,en ce qu'on soumet celui-ci à au moins une ultrafiltration sur des membranes capables de retenir les phosphopeptides,tout en laissant passer les peptides,l'ultrafiltrat contenant ainsi les pep- tides non phosphorylés,en ce qu'on récupère le rétentat d'ultrafiltration, en ce qu'on effectue un traitement de disagrégation des phosphopeptides contenus dans le rétentat, et en ce qu'on soumet celui-ci à au moins une nouvelle ultrafiltration sur des membranes ne retenant pas les 6 2474828 phosphopeptides,lesquels sont ainsi séparés de l'enzyme et peuvent être récupérés en tant que produit. Les matières premières susceptibles d'être soumises au procédé de l'invention sont des matières à base de caséi- ne d'origine quelconque,contenant des phosphocaséinates de cations bivalents. Le lait naturel constitue une source convenable dans laquelle les phosphocaséinates de calcium et de magnésium se trouvent présents tous les deux. Une forme plus purifiée de matière première convenant aux besoins de l'invention est constituée par un rétentat d'ultrafiltration du lait,lequel contient aussi les phosphocaséinates d'alcali- no-terreux. Il est également possible d'utiliser comme matière première des phosphocaséinates purifiés au préalable par tout moyen connu de l'homme de l'art,du type des phospho- caséinates d'alcalino-terreux,par exemple de magnésium ou de calcium,qui sont aptes à être traités selon l'invention. Si l'on utilise un rétentat d'ultrafiltration du lait colmme matière première dans le procédé,l'ultrafiltration préalable qui permet de produire le rétentat n'a pas besoin d'être poussée à un taux de concentration élevé. Par exemple des taux de concentration de l'ordre de 1,5 à 3 sont convenables. Dans la pratiqueon choisit un taux de concen- tration de l'ordre de 2. On peut également faire suivre l'ultrafiltration proprement dite d'une diafiltration qui permet de purifier le rétentat et d'augmenter le rapport protéines/matières sèches. Quelle que soit la matière première utilisée,elle est soumise, conformément au procédé de l'invention,à une hydrolyse enzymatique à l'aide d'au moins une enzyme protéo- lytique. Ainsi qu'on l'a mentionné précédemment,une telle hydrolyse est avantageusement mise en oeuvre dans un dispo- sitif qui combine un équipement d'ultrafiltration à un réacteur enzymatique permettant ainsi une réalisation continue. Dans un tel mode de réalisation,l'hydrolyse enzyma- tique est réalisée en continu en introduisant la matière première à base de caséine dans une zone de réaction en vue d'une mise en contact-intime avec l'enzyme,on soutire en 7 2474828 continu le produit de réaction en l'amenant de la zone de réaction dans une zone d'ultrafiltration,et l'on soutire de celle-ci,également en continu,un perméat qui constitue l'hydrolysat peptidique. Dans le cadre du procédé de l'invention,l'hydrolyse enzymatique est réalisée sur des solutions protéiques dans lesquelles les ions bivalents, en particulier le calcium et/ou le magnésium,sont complexés par les phosphosérines. Au cours de l'hydrolyse enzymatique)le pH doit être ajusté entre 7 et 9. A cet effet,on introduit en continu ou en discontinu dans la zone de réaction,un composé basique qui peut être l'hydroxyde ou le carbonate de sodium,l'hydroxyde ou le carbonate de potassium,l'hydroxyde de calcium,l'hydro- xyde d'ammonium ou un mélange de ces produits. Le choix d'un composé basique particulier dépendra de la destination du produit final. A titre d'enzyme,on met en oeuvre de préférence au moins une enzyme protéolytique capable de reconstituer la digestion protéique qui prend place in vivo dans l'orga- nisme humain. On utilise donc avantageusement la pancréatine, qui est un mélange complexe contenant de la trypsine,de la chymotrypsine et d'autres enzymes protéolytiques secondaires. Dans la pratiquelon peut faire appel à un extrait pancréati- que naturel disponible sur le marché et aisément accessible. Toutefois,si besoin est,on peut également mettre en oeuvre des enzymes résultant d'un mélange synthétique,par exemple d'alphachymotrypsine et de trypsine.De préférence,on utilise un mélange synthétique dont la composition se rapproche de la pancréatine,avec par conséquent présence des enzymes secondaires contenuesdans l'extrait pancréatique naturel. On a trouvé selon l'invention qu'au pH compris entre 7 et 9, et de préférence entre 7 et 8,5,par exemple à 8,la pancréati- ne et autres enzymes malogues répondant aux besoins de l'invention présentaient une stabilité maximale. Il convient d'observer également des conditions assez strictes de température dans la zone d'hydrolyse enzy- matique. On a constaté en effet que l'activité des enzymes était davantage influencée par la température que par le pH. 8 2474828 Des essais ont montré notammentselon l'invention,qu'avec la trypsine la température maximale au cours de l'hydrolyse enzymatique ne devait pas être supérieure à 54 C,et avec la chymotrypsine cette température ne devait pas dépasser 45 C. Dans la pratique,lorsque l'on utilisera la pancréatine, on adoptera un compromis tenant compte à la- fois des conditions optimales de la protéolyse intestinale in vivo (température de l'ordre de 370 C)et du fait que des tempéra- tures plus élevées sont moins favorables au développement des germes et permettent d'obtenir des débits d'ultrafiltra- tion supérieurs. En général on choisit des températures de l'ordre de 37 à 40 C,et de préférence encore voisines de 37 C. Il va sans dire que les paramètres de la réaction, c'est-à-dire le pH et la température d'hydrolyse enzymatique, sont liés. L'homme de l'art pourra donc choisir les condi- tions les plus favorables dans chaque cas d'espèce. Pour réaliser une hydrolyse enzymatique optimale, soin il convient également de choisir avec/la membrane d'ultrafiltration à utiliser en relation avec le réacteur enzymatique. Les membranes utilisées sont de type quelconque, organique ou inorganique. Une organisation des membranes ayant donné de bons résultats est celle des modules à fibres creuses. A titre particulierYon peut utiliser les membranes de la Société AMICON disponibles sur le marché sous la déno- mination HlOP5 (seuil de coupure 5000) et HlOPlO(seuil de coupure 10.000) ainsi que les membranes de la Société ROMICON disponibles sur le marché sous la dénomination PM2(seuil de coupure 2000) ou PM 50 (seuil de coupure 50.000). La seule condition à respecter est que la membrane, en fonctionnement,retienne efficacement l'enzyme,tout en présentant des performances satisfaisantesen particulier sur le plan de la longévité. Le procédé de l'invention peut être mis en oeuvre en deux étapes séparées:une première étape consistant en l'hydrolyse enzymatique,et une deuxième étape consistant en l'ultrafiltration associée à ladite hydrolyse. Les équipe- ments pour la mise en oeuvre de chacune de ces opérations 9 2474828 peuvent être séparés ou intégrés. Mais,en variante,le procédé peut également être exécuté en continu,les deux étapes ci-dessus étant réalisées dans un appareillage uni- que. Pendant les premiers instants de fonctionnement,par exemple pendant une heure environ,le perméat (liquide pas- sant à travers la membrane) est recyclé dans la zone d'hydrolyse afin d'obtenir le taux d'hydrolyse désiré de la matière à base de caséine. Apres l'hydrolyse,on introduit dans le réacteur la matière première à base de caséine à traiter à un débit identique à celui du perméat. Dans la pratiquelon peut utiliser du lait cru ou écrémé, de n'imnporte quelle origine. L'hydrolyse est avanta- geusement effectuée en réacteur enzymatique à 377C en présence de 2 g. par litre d'enzyme pancréatique sur du lait cru écrémé dont le pH est ajusté à 8 par addition d'hydroxy- de de sodium. En variante,on peut traiter un lait cru et écrémé, concentré au préalable par ultrafiltration jusqu'à un taux de concentration voisin de 2. On porte alors le pH de ce rétentat à une valeur voisine de 8 par addition d'hydroxyde de sodium et on le soumet à une hydrolyse en réacteur enzymatique à 37 C en présence de 4 g /litre d'enzyme pancréatique. Après l'hydrolyse,la solution résiduelle du réacteur enzymatique est concentrée par ultrafiltration. Au cours de cette étape,la solution du réacteur contenant l'enzyme,les protéines non hydrolysdes,les fractions insolubles et les phosphopeptides associés par le calciumest mise en contact avec une membrane capable de retenir les phosphopeptides tout en laissant passer les peptides non phosphorylés. A cet effeton utilisera des membranes quelconques organiques ou inorganiques,dont le seuil de coupure est compris entre 2000 et 50000 environ. L'ultrafiltration associée à l'hydrolyse enzymati- que est avantageusement suivie d'une diafiltration qui permet d'épuiser la fraction peptidique non phosphorylée. Au cours de la diafiltration,le produit mis en contact avec la membrane est additionné d'eau ou d'une solution saline convenable. Dans la pratique il s'est avéré que l'ultrafil- trat de lait,préparé au cours d'une opération préalable, ou provenant d'une autre source,peut être avantageusement utilisé comme solution de diafiltration.Pour obtenir de bons résultats,on peut porter le pH de cet ultrafiltrat à des valeurs comprises entre 7 et 8. Le résultat des opérations précédentes du procédé- de l'invention est d'une part une fraction (perméat)com- prenant les peptides non phosphorylés,et d'autre part un rétentat contenant les phosphopeptides. La séparation entre les peptides non phosphorylés et les phosphopeptides a été en effet effectuée au cours de l'hydrolyse enzymatique.Les étapes consécutives d'ultrafiltration et de diafiltration permettent de séparer physiquement ces composés. Dans l'étape suivante du procédé de l'invention,on effectue un traitement de désagrégation des phosphopeptides contenus dans le dernier rétentat. Selon un mode de réalisa- tion pratiquement préféré,on acidifie le rétentat de manière à solubiliser les ions bivalents complexes aux phosphopepti- des. A titre d'acideon peut utiliser n'importe quel acide minéral ou organique compatible avec les buts de la présente invention et la destination des Moduits. On utilisera donc avantageusement des acides acceptés sur le plan alimentaire. Des exemples d'acides convenables sont l'acide chlorhydrique, l'acide phosphorique,l'acide sulfurique,l'acide lactique, l'acide acétique et autres acides analogues. On a obtenu de bons résultats avec l'acide lactique. On acidifie le rétentat jusqu'à l'obtention d'un pH voisin de 4, 6,valeur à laquelle on est certain que la totalité des ions calcium et/ou magné- sium a été solubilisée. En variante,au lieu d'une acidification,on peut réaliser la désagrégation des phosphopeptides par action de complexants du calcium et/ou du magnésium. Au sens de la présente inventionon entend par complexants des composés qui possèdent l'aptitude à fixer le calcium et/ou le magné- sium lorsqu'ils sont mis en contact avec les phosphopeptides contenus dans le rétentat. Il s'agit donc en général de substances ayant une action chélatante. Compte tenu de la destination des produits de l'invention,on fera avantageuse- ment appel à des composés acceptés sur le plan alimentaire, en particulier les citrates de sodium ou de potassium. Lorsqu'on part d'une matière première à base de caséine consistant en du lait écrémé cru ou d'un rétentat d'ultrafiltration d'un tel lait,on a obtenu les meilleurs résultats par acidification du contenu du réacteur enzymati- que à l'aide d'acide lactique (à 50%) jusqu'à un pH de 4,6. Au cours de la dernière étape du procédé de l'in- vention,on sépare physiquement une fraction contenant les phosphopeptides en réalisant une dernière ultrafiltration dans des conditions permettant d'obtenird'une partles phos- phopeptides et, d'autre part,les sous-produits tels que les résidus protéiques et l'enzyme résiduele.Au cours d'une telle opération il est avantageux que l'ultrafiltration soit suivie d'une diafiltration, opération connue de l'homme de l'art,en vue de la récupération des produits. Dans le cas de la présen- te étape,une diafiltration à l'eau pure s'est avérée la meilleure. Les phosphopeptides ainsi obtenus à l'issue du procé- dé de l'invention constituent le produit de valeur le plus intéressant. Il présente en effet une teneur élevée en phospho- sérines et une faible teneur en acides aminés aromatiques (phénylalanine, tyrosine,tryptophane). La fraction obtenue riche en phosphopeptides peut donc se caractériser par sa composition particulière en acides aminés ainsi que par une teneur élevée en matière minérale (cendres) par rapport à l'azote totalétant donné que la fraction phosphopeptidique contient toute la fraction minérale associée aux caséines de la matière première d'ori- gine (lait ou rétentat de lait). Le tableau I qui suit définit les caractéristiques essentielles des nouveaux phosphopeptides selon l'invention. La colonne gauche du tableau I indique les valeurs correspondantes dans le lait,à titre de comparaison. 12 2474828 TABLEAU I : Lait Peptides: Phosphopep- : non phosphorylés: tides Somme des acides aminés aromatiques 12% > 12% 4% ::: Serine 5,7% 8% Ca + Mg +P TN + (*.0,07: NT (1): Acides aminés libres - 4 10% dans le domaine alimentaire. Les produits de l'invention (phosphopeptides)sont utiles dans l'alimentation,en particulier dans l'alimenta- tion humaine et dans la nutrition thérapeutique.On sait en effet queedans le lait humain,le phosphore dit organique, c'est-à-dire lié aux protéines et'lié aux lipides,est rela- tivement plus important que dans d'autres laits,notamment le lait de vache. Ainsi,le rapport phosphore organique phosphore total est d'environ 0,83 dans le lait humain contre 0,34 dans le lait de vache. Plus précisémentle rapport phosphore organique lié à l'azote est d'environ 0, 70 dans phosphore inorganique le lait humain contre 0,36 dans le lait de vache. Les produits de l'invention trouvent donc application dans le domaine connu sous le nom de maternisation des laits. Maispd'une façon générale,il est reconnu que la qualité essentielle des protéines du lait de femme est d'assu- rer un anabolisme azoté remarquable associé à une charge osmotique rénale et une charge en ions H+ particulièrement *faible s. Or, cette conjonction anabolisme azoté très élevé, et. + charge osmotique rénale/ charge en ions H faible,est par- ticulièrement recherchée en réanimation et en nutrition thérapeutique o coexistent très souvent des besoins d'anato- lisme élevé et une insuffisance rénale fonctionnelle. Les produits de l'invention,pour certaines applica- tions, ont une teneur insuffisante en certains acides aminés essentiels (phênylalanine,tyrosine,tryptophane,cystine). Ils peuvent alors avantageusement être associés à d'autres protéines ou peptides ou homologues alpha-céto-acides ou alpha(OH)acides d'acides aminés essentiels,pour que soit rétabli un bon équilibre en acides aminés aboutissant à une valeur biologique optimale. On notera aussi que de tels produits (phosphopepti- des),ont une affinité élevée vis-à-vis des macroéléments (calcium,magnésium)et des oligoéléments tels que,particu- lièrelient,le fer,le zinc,le cuivre,le chrome,le nickel,le cobalt,le manganèse et le sélénium. Les phosphopeptides selon l'invention peuvent être avantageusement transformés en sels desdits éléments par des moyens usuels. Ainsi,pour obtenir un tel sel organophosphor6,on peut utiliser,à titre de solution de diafiltration lors de la purification des phosphopeptides, une solution du sel contenant l'élément à introduire,par exemple une solution de chlorure de fer dans le cas du fer. Ces sels organophosphorés sont très solrbles et peuvent avantageusement être utilisés pour véhiculer les éléments en cause. Les produits del'invention répondent aux besoins nutritionnels des malades souffrant d'insuffisance pancréati- que,de maladies métaboliques,d'insuffisance ou de détresse nutritionnelle, associée ou non à une insuffisance rénale fonctionnelle ou organique,en particulier lorsqu'ils sont associés à des peptides,des acides aminés essentiels ou des homologues d'acides aminés essentiels. L'invention trouve donc une application directe dans des aliments diététiques ou des produits de nutrition thérapeu- tique parfaitement assimilables par l'organisme humain. 14 2474828 Quelle que soit la source de protéines,de peptides ou d'acides aminés utilisés,ces phosphopeptides permettent de réguler, de la manière la plus souhaitable,le taux de phosphore organique lié à l'azote dans la formule que l'on désire créer. L'invention sera encore illustrée sans être aucu- nement limitée par la description qui suit et des exemples concrets de réalisation. La description ci-après est faite en référence aux dessins annexés sur lesquels: Fig.l représente un schéma de réalisation du pro- cédé de l'invention appliqué à une matière première à base de caséine consistant en du lait; Fig.2 est un schéma analogue à celui de la figure 1,illustrant l'application du procédé de l'invention à un rétentat d'ultrafiltration de lait; Fig.3 représente d'une manière schématique le réac- teur enzymatique à membrane susceptible d'être mis en oeuvre pour les besoins de l'invention. La figure 1 est un schéma de réalisation du procé- dé de l'invention appliqué au traitement d'une matière pre- mière à base de caséine consistant en du lait cru écrémé. Cette matière première est désignée par la référence lait A. Conformément à l'invention,le lait est soumis à une réac- tion d'hydrolyse enzymatique en présence d'au moins une en- zyme protéolytique,telle que la pancréatine,en milieu basi- que,par exemple à un pH voisin de 8. La température est avantageusement de 37 C. On a matérialisé l'étape d'hydroly- se en réacteur enzymatique par la référence 1. A la fin de l'hydrolyse,la-solution du réacteur contenant l'enzyme,les protéines non hydrolysées,les frac- tions insolubles et les phosphopeptides associés au calcium, a été concentrée par ultrafiltration(référence 2).Consécuti- vement,on a réalisé une diafiltration en mettant en contact le rétentat issu de l'ultrafiltration 2 avec un module d'ultrafiltration,tout en l'additionnant en continu d'un ultrafiltrat de lait ajusté à pH 8. L'opération de diafiltra- tion est matérialisée au dessin par la référence 3. Les ultrafiltrats respectifs des opérations 1, 2 et 3 ci-dessus sont rassemblés et constituent ensemble une fraction consistant en des peptides non phosphorylés (référence B). Le rétentat provenant de la diafiltration 3 est d'abord soumis à une désagrégation des phosphopeptides qu'il contient,avantageusement par acidification à pH 4,6,en particulier avec de l'acide lactique. Cette opération est matérialisée par la référence 4. Ensuite,on a représenté par la référence 5 l'étape finale d'ultrafiltration qui comporte aussi une diafiltration à l'eau et à l'issue de laquelle on séparesd'une partsune fraction C de phosphopeptides et, d'autre part,une fraction F contenant l'enzyme résiduelle ainsi que le résidu protéique. En partant de 1000 litres de lait,conformément au schéma réactionnel de la figure 1,on peut obtenir 900 à 950 litres de solution peptidique à 27 g/litre et environ 50 litres de phosphopeptides à 80 g/litre. Dans la variante de l'invention représentée à la figure 2,on soumet tout d'abord le lait A cru et écrémé à une ultrafiltration(référence 6) jusqu'à un taux de concentra- tion voisin de 2. On sépare ainsi un perméat D et un rétentat E. C'est le rétentat qui sert alors de matière première à base de caséine. Le rétentat E est amené à pH 8 par addition d'un composé basique et hydrolysé en réacteur enzymatique en présence d'une enzyme protéolytique (par exemple avec 4 g / litre d'enzyme pancréatique à une température de 37 C).Comme sur la figure l,l'étape d'hydrolyse est matérialisée par la référence 1. En fin d'hydrolyse,la solution résiduelle du réacteur enzymatique a été concentrée par ultrafiltration (référence 2) et diafiltrée (référence 3) avec de l'ultrafil- trat à pH 7,0 afin d'épuiser la fraction peptidique non phos- phorylée. Les divers ultrafiltrats des ultrafiltrations 1,2 et 3 sont rassemblés et constituent la fraction peptidique non phosphorylée B'. De même qu'aà la figure l,le contenu du réacteur subit un traitement destiné à désagréger les phosphopeptides, avantageusement une acidification jusqu'à un pH de 4,6,par 16 2474828 exemple par addition d'acide lactique à 50% (référence 4). La solution contenue dans le réacteur est alors soumise à une ultrafiltration et une diafiltration à l'eau,matéria- lisées par-la référence 5,ce qui permet de séparer les phosphopeptides (C')et une fraction résiduelle protéique- enzyme (F'). En travaillant conformément au schéma réactionnel de la figure 2,et en partant de 1000 litres de lait,on peut obtenir 400 à 450 litres de solution peptidique à 57 g/litre et environ 50 litres de solution de phosphopepti- des à 80 g/litre. La figure 3 représente un réacteur enzymatique à membrane qui peut être utilisé pour le procédé de l'inven- tion. Celui-ci comporte d'abord une cuve à réaction dési- gnée par la référence générale 15. L'alimentation continue en phosphocaséinates se fait par la canalisation 16.Un appareil 17 sert à la fois à mesurer et à maintenir le pH dans la cuve de réaction en neutralisant les ions H+ libérés lors de la coupure des liaisons peptidiques. L'appareil était un pH-stat Mettler comprenant un amplificateur de potentiel,un présélecteur du point d'équivalence et une burette automatique de distribution du réactif,ce dernier étant un composé basique tel que mentionné ci-dessus.Aucun encrassement excessif de l'électrode n'a été constaté. Le produit d'hydrolyse priélevé dans la cuve de réaction par la canalisation 18 est acheminé par une pompe pneumatique 19 à membrane. Un exemple pratique est la pompe modèle AMICON LP 20 A, capable de débiter 720 1/h à 1,7 bar. Au refoule- ment de la pompe,le produit passe dans une canalisation 20 et est amené sur un préfiltre 21 ayant une porosité de 150 microns. La référence 22 désigne le module d'ultrafiltration. Dans un exemple spécifique,on a utilisé le système DC 10 S de la Société AMICON comprenant des cartouches d'ultrafiltra- tion à fibres creuses. Le perméat était récupéré dans une canalisation 23 et constituait l'hydrolysat peptidique re- cherché. Le rétentat du module 22 était prélevé par la cana- lisation 24,introduit sur un échangeur 25 et acheminé par la 17 2474828 canalisation 26 pour être recyclé dans la cuve de réaction 15. Les membranes utilisées étaient du type fibres creuses ayant les caractéristiques suivantes: TABLEAU II Type Seuil de coupure: Surface: Fabricant H 10 P 5 5.000 0,9 m2 Amicon H 10 P 10: 10.000 PM 2 2.000 1,4 m2: Romicon PM 50 50.000 EXEMPLE 1 Cet exemple est relatif à l'utilisation de lait à titre de matière première. Le lait cru êtait,après écrémage,hydrolysé dans un réacteur enzymatique identique à celui représenté sur la figure 3;les membranes utilisées étaient du type XM 50 (fibres creuses). L'enzyme (pancréatine d'origine bovine d'activité 4 NF) provenait de SIGMA et sa concentration était de 2 g/litre. Le pH du réacteur était maintenu à 8 par addition d'hydroxyde de sodium 2 N. L'hydrolyse était conduite à 37 C. L'ultrafiltrat recueilli au cours de l'hydrolyse constituait la fraction qualifiée de peptides non phosphory- lés. En fin d'hydrolyse,le contenu du réacteur était concen- tré 3,4 fois afin de diminuer le volume i diafiltrer. La diafiltration a été réalisée avec de l'ultrafiltrat obtenu par traitement du lait sur membrane XM 50 à 25 C et amené à pH 8 avec de la soude 2N. La diafiltration avait pour but d'épuiser le contenu du réacteur en peptides non phosphorylés. La solution résiduelle du réacteur enzymatique contenant l'enzyme et les phosphopeptides agglomérés était alors acidifiée jusqu'à pH 4,6 par addition d'acide lactique à 50%. Les phosphopeptides dissociés étaient recueillis dans le perméat. Les analyses chimiques des différents produits obtenus au cours de cette fabrication sont rassemblées dans les tableaux III et IV suivants. TABLEAU III Composition chimique (g/kg) : E.S.: NT: Ca: P : --:.' Lait départ 90;0 29,3 1,20. 1,02 : 1,20. Contenu du réacteur en fin: d'hydrolyse: 88,5 31,2 1,20 1,02 Contenu du réacteur concen- : tré par ultrafiltration 112,4 40,7 3,81: 2,65 Contenu du réacteur après: diafiltration 87,0 14,4 4,17 3,08 Peptides non phosphorylés 80,0 27,0 0,14 0,35 Phosphopeptides 89,0 8,2: 3,40. 2,40 X E.S.: extrait sec xx NT= azote total. x 6,38 EXEMPLE 2 Cet exemple est relatif à l'utilisation de réten- tat d'ultrafiltration du lait,à titre de matière première. Le lait cru était,après écrémage,concentré 2 fois par ultrafiltration à 25 C sur membrane XM 50. Le pH du ré- tentat était alors ajusté> 8 par addition d'hydroxyde de sodium 2N. Le rétentat était ensuite hydrolysé dans le réac- teur enzymatique (figure 3). La nature de l'enzyme était identique à celle utilisée à l'exemple 1 et sa concentration était de 4 g/litre. L'hydrolyse était conduite à 37 C et le pH de la solution était maintenu à 8 par addition d'hydroxyde de sodium 2N. L'ultrafiltrat recueilli au cours de l'hydrolyse constituait la fraction qualifiée de peptides non phosphory- lés. En fin d'hydrolyse,le contenu du réacteur enzymatique TABLEAU IV Composition en acides aminés peptides non phosphorylés 6,92 3,55 3,58 9, 07 19,40 1,71 2,83 ,57 phosphopeptides 9,22 4,50 11,80 ,88 ,80 2,38 2,96 7,12 peptides non phos- phorylés Cys Met Ile Leu Tyr Phe Lys His Arg 0,68 2,01 4,42 8,92 4,92 4, 46 7,56 2,60 3,09 phosphopep- tides ú 0,58 7,58 4,95 2474828 était concentré 3 fois par ultrafiltration;la diafiltration a été effectuée dans ce cas avec de l'ultrafilirat de lait à pH 7 afin d'épuiser la solution du réacteur en pep- tides non phosphorylés. Le contenu du réacteur était alors acidifié à pH 4,6 avec de l'acide lactique à 50%. Les phos- phopeptides dissociés étaient alors recueillis dans le perméat. Les analyses chimiques et la composition en acides aminés des différents produits obtenus figurent dans les tableaux V et VI ci-après. Des exemples illustratifs concernant l'application des produits de l'invention seront indiqués ci-après,à titre nullement limitatif. EXEMPLE 3 Cet exemple concerne un produit de réanimation destiné à un usage par voie entérale chez des, malades néces- sitant un apport protéique de l'ordre de 7 à 15% de l'Apport Calorique Total (ACT),par exemple dans les affections suivan- tes:mucoviscidose ou fibrose kystique du pancréas,insuffi- sance rénale,malades présentant une atteinte infectieuse ou inflammatoire de la paroi intestinale,détresse nutrition- nelle exigeant un anabolisme intense, une charge rénale osmotique et une charge en ions H+ réduites. Ces protéines sont amenées de préférence sous forme pré-digérée. exemple de formule centésimale: -mélange de petits peptides selon l'invention hosphopeptides de 4 à 8 % 3 Peptides de lacto-) sérum 60% 2, 50 g 30. Peptides de caséi-) ne de 32 à 36% 3 CMP de 0 à 4%) -lipides: mélange à parties égales de: 35.huile de beurre 0,5 g) triglycérides) à chaine moyenne)40 g (TCM) 0,5g) ) huile de mats 0,5g ohuile de tournesol 0,5 g monostéarate de glycérol 2i1 g -glucides polymères de glucose glucose galactose g 1,5 g 1,5 g -vitamines A, D, E, B1, B2 PP,B5, B6,B12,acide folique, Biotine,Vit.C -éléments minéraux (calcium,sodium, potassium, magnésium,phosphore,zinc,fer, cuivre,manganèse,chlore,iode) eau distillée EXEMPLE 4- selon les recommandations FAO/OMS ) 0,455 g q.s.p.100 Cet exemple concerne un produit de réanimation destiné à un usage par voie entérale chez des malades nécessitant un apport protéique de l'ordre de 12 à 25% de l'Apport Calorique Total,sous forme de protéines. Une telle alimentation est appropriée à toute situation nécessi- tant un anabolisme azoté important et une surcharge en P organique. exemple de formule centésimale -mélange de petits peptides selon l'invention de 3 à 6,25 g Phosphopeptides de 8 à 28%) ) Peptides de lacto) de 3 à 6,25 g sérum de 22 à 60%) peptides de caséine de 12 à 705 -lipides- "T.C.M. 2,3( huile très riche en acides gras essentiels 0,5( émulsifiant O, 1( glucides: petits polymères de glucose de 8,25 à g35glucose de 2 à galactose de 2 à )g 3 ) ) ) Og) )g) ,5 g 2,5 g 2,5 g 2,90 g de 12,25 à 15, 5 g ) } 13,00 g 2Z 2474828 -vitamines A, D, E, B1, B2, PP, B5, B6 B12, acide folique,Biotique 3 Vitamine C selon -éléments minéraux (calcium,sodium,potassium, magnésium,phosphore,zinc, fer,cuivre,manganèse, chlore, iode) -eau distillée EXEMPLE 5- les recommandations FAO/OMS ) ) ) ) 0,455 g q.s.p. 100 Cet exemple concerne un produit de réanimation destiné à un usage par voie entérale chez des malades nécessitant un apport protéique de l'ordre de 7 à 12% de l'A.C.T.,notamment dans les affections suivantes:mucovisci- dose ou fibrose hystique du pancréas,insuffisance rénale, malades présentant une atteinte infectieuse ou inflammatoire de la paroi intestinale,détresse nutritionnelle exigeant un anabolisme intense et une surcharge rénale osmotique, une Fureharge en ions H+ réduite. Ces protéines sont amenées de préférence sous forme prédigérée. f exemple de formule centésimale: -Mélange de petits peptides selon phosphopeptides 4% peptides de caséine 36% peptides de lactosérum40%) ) CMP 20%) -lipides mélange à parties égales de: huile de beurre 0,5g) ^TCM - 0,5 g 3 huile de mais 0,5 g 35.huile de tournesol 0,5 g monostéarate de glycé- roi 2,1 g 5 1' invention 2,50 g 4,10 g -glucides polymères de glucose 10 g) glucose 1,5 g)13,00 g galactose 1,5 g) -vitamines A, D, E,B1,B2,PPIB5,B6) B12,acide folique,Biotine,Vit.C selon recommandations * FAO/OMS -éléments minéraux (calcium,sodium,potassium,magnésium, phosphore,zinc, fer,cuivre,manganèse,J chlore,iode). 0,455 g -eau distillée q.s.p.lOO Le mélange de peptides contenant les phosphopepti- des de l'invention peut avantageusement comprendre les peptides obtenus conformément au procédé décrit dans la demande de brevet français déposée le 26 Juin 1979 sous le n 79 16 483 au nom de l'Institut National de la Recherche Agronomique pour "Hydrolysat enzymatique total de protéines de lactosérum,obtention et applications". On rappellera qu'un tel hydrolysat peptidique ne contient pratiquement pas de protéines résiduelles et que 50% des peptides contiennent 2 à 5 acides aminés. Plus particulièrementl'hydrolysat contient 70 à 90% de l'azote présent sous forme de peptides ayant un nombre d'acides aminés inférieur à 10. Sous une forme spécifique,l'hydrolysat répond à l'aminogramme ci- après: Aminogramme: Ile 6,0 - Arg 2,7 Leu 9,9 - His 1,7 Lys 9,2 - Ala 4.9 Cys 1,8 -Asp 9,5 Phe 3,2 - Glu 17,6 Thr 6,7 - Gly 1,7 Tyr 3,6 - Pro 6,2 Trp 2,0 - Ser 5,5 Val 5,5 - Met 2,0 Le procédé pour l'obtention d'un tel hydrolysat consiste à effectuer d'abord l'ultrafiltration du lactosé- rum puis son hydrolyse enzymatique et il est plus particu- lièrement remarquable en ce qu'on met en contact le rétentat d'ultrafiltration avec une enzyme protéolytique capable de reconstituer la digestion protéique qui prend place in vivo dans l'organisme humain, ladite enzyme étant de préférence la pancréatine,l'hydrolyse étant conduite jusqu'à ce que le produit ne contienne plus de protéines résiduelles,c'est-à-dire ne présente aucun azote précipitable par l'acide trichloroacétiqueà 12%,après quoi on récupère l'hydrolysat obtenu qui représente l'hydrolysat enzymatique total recherché. Lait Rétentat Contenu du réacteur en fin d'hydrolyse après ultrafiltrat Contenu du réacteur après diafiltration Peptides non phosphorylés Phosphopeptides TABLEAU V Composition chimique (g/kg) : E.S. N : T: : ,0: 30,0: : r > : 122,9: 59,8: tion: 148,5 73,5 ,0 14,34: * 104,0 * 53,3 : 74,3: 7,5 Ca 1,15 1,90 p 1,00 1,63 ,09 3,39 0,20 2,55 3,97 2,70 0,40 1,69 cn r, - PI-J -il Co fj m TABLEAU VI COMPOSITION EN ACIDES AMINES peptides non: phosphopepti- phosphorylés: des : peptides non. phosphopeptides: phosphorylês 0,66 2,44 4,73 9,70 ,20 4,88 7,79 2,84 3,74 1,49 7,71 ,17 1,25 : 1,80 4,90 1,47 2,10 Asp Thr Ser, Pro Glu Gly Ala Val 7,32 4,56 3,97 9,30 ,61 1, 88 3,16 ,95 8,02 4,42 11,98 ,29 26,50 2,73 3,15 7,42 Cys Met Ile Leu Tyr Phe Lys His Arg OD r1j 41, Co o"' REVENDICATIONS l.Procédé pour le traitement d'une matière première à base de caséine contenant des phosphocaséinates de cations bivalents,tels que les phosphocaséinates de calcium et/ou de magnésium,caractérisé en ce qu'on soumet la matière pre- mière à une hydrolyse enzymatique à l'aide d'au moins une enzyme protéolytique capable de reconstituer la digestion pro- téique qui prend place in vivo dans l'organisme humain,en ce qu'on récupère l'hydrolysat obtenu,en ce qu'on soumet celui- ci à au moins une ultrafiltration sur des membranes capables de retenir les phosphopeptides,tout en laissant passer les peptides,l'ultrafiltrat contenant ainsi les peptides non phosphorylés,en ce qu'on récupère le rétentat d'ultrafiltra- tion,en ce qu'on effectue un traitement de désagrégation des phosphopeptides contenus dans le rétentat,et en ce qu'on soumet celui-ci à au moins une nouvelle ultrafiltration sur ne des membranes/retenant pas les phosphopeptides,lesquels sont ainsi séparés de l'enzyme et peuvent être récupérés en tant que produit. 2. Procédé selon la revendication l,caractérisé en ce que,à titre de matière première à base de caséine,on utili- se du lait,un rétentat d'ultrafiltration du lait,ou encore des phosphocaséinates de cations bivalents isolés au préala- ble, tels que des phosphocaséinates d'alcalino-terreux,par exemple de calcium ou de magnésium. 3.Procédé selon la revendication 2,caractérisé en ce qu'on utilise comme matière première un rétentat obtenu par ultrafiltration de lait,à un taux de concentration de 1,5 à 3,par exemple de 2 environ,cette ultrafiltration pou- vant être suivie d'une diafiltration. 4. Procédé selon l'une quelconque des revendica- tions 1 à 3,caractérisé en ce qu'on effectue l'hydrolyse enzymatique dans un dispositif qui combine un équipement d'ultrafiltration à un réacteur enzymatique,constituant ainsi un réacteur enzymatique à membrane. 5. Procédé selon la revendication 4,caractérisé en ce qu'on réalise en continu l'hydrolyse enzymatique en introduisant la matière première à base de caséine dans une zone de réactionen vue d'une mise en contact intime avec l'enzyme,on soutire en continu le produit de réaction en l'amenant de la zone de réaction dans une zone d'ultrafil- tration,de laquelle on soutire également en continu un perméat qui constitue l'hydrolysat peptidique. 6.Procédé selon l'une quelconque des revendica- tions 1 à 5,caractérisé en ce qu'on ajuste le pH entre 7 et 9,de préférence entre 7 et 8,5,par exemple à 8 environ,au cours de l'hydrolyse enzymatique. 7. Procédé selon 1 'une quelconque des revendica- tions i à 6,caractérisé en ce qu'à titre d'enzyme,on utilise une pancréatine sous forme d'extrait pancréatique naturel, avec des mélanges synthétiques de trypsine et d'alphachymo- trypsine. 8. Procédé selon l'une cquelconque des revendica- tions 1 à 7,caractérisé en ce que la température d'hydrolyse est choisie entre 37 et 45 C,de préférence entre 37 et 40 C et, avantageusement,de l'ordre de 37 C. 9. Procédé selon l'une quelconque des revendica- tions 1 à 8,caractérisé en ce que,dans le réacteur enzymatique à membrane, on utilise des membranes capables de retenir efficacement l'enzyme. 10. Procédé selon l'une quelconque des revendica- tions 1 à 9,caractérisé en ce qu'après l'hydrolyse,la solu- tion résiduelle du réacteur enzymatique est soumise A une ultrafiltration sur des membranes capables de retenir les phosphopeptides,tout en laissant passer les peptides non phosphorylés,par exemple des membranes dont le seuil de cou- pure est compris entre 2000 et 50.000 environ. 11. Procédé selon la revendication 10,caractérisé en ce qu'on fait-suivre l'ultrafiltration d'une diafiltration en vue d'épuiser la fraction peptidique non phosphorylée en additionnant le produit,mis en contact avec la membrane, d'eau ou d'une solution saline et,avantageusement,d'un ul- trafiltrat de lait porté à un pH entre 7 et 8. 12. Procédé selon l'une quelconque des revendica- tions 1 à ll,caractérisé en ce que le traitement de désagré- gation des phosphopeptides contenus dans le rétentat est 2474828' effectué par acidification,par exemple jusqu'à un pH voisin de 4,6, à l'aide d'un acide minéral ou organique,de préférence accepté sur le plan alimentaire,avantageusement l'acide lactique. 13. Procédé selon l'une quelconque des revendica- tions 1 à ll,caractérisé en ce que le traitement de désa- grégation des phosphopeptides contenus dans le rétentat est effectué par action de complexants du calcium et/ou du magnésium,tels que des citrates. 14. Procédé selon l'une quelconque des revendica- tions 1 à 13,caractérisé en ce qu'au cours de la dernière étape du procédé,on sépare physiquement,par ultrafiltration, une fraction contenant les phosphopeptides désirés,des rési- dus protéiques et de l'enzyme résiduelle. 15. Produits tels qu'obtenus par le procédé selon l'une quelconque des revendications 1 à 14,en particulier des phosphopeptides et des peptides non phosphorylds. 16. Phosphopeptides selon la revendication 15, caractérisés par les paramètres ci-après: Somme des acides aminés aroma- Ca + Mg + P tiques. 4%; rapport C g 0,2 NT Taux de sérines supérieur à 8% e teneur en acides aminés 2 et inférieur à 20% libres 3% 17. Application des produits selon l'une des re- vendications 15 ou 16,comme aliments ou compléments alimen- taires répondant à des besoins spécifiques nutritionnels. 18. Aliments diététiques ou de nutrition thérapeuti- que contenant un phosphopeptide selon l'une des revendica- tions 15 ou 16 en association éventuelle avec un véhicule neu- tre convenant à l'alimentation orale ou entérale. 19. Aliments selon la revendication 18 contenant en outre des sources complémentaires d'acides aminés essen- tiels. 20.Aliments selon l'une des revendications 18 ou 19 dans lesquels les phosphopeptides sont présents sous forme de sels organophosphorés.