Brevet FR2464960A1 — publié le 19810320

I La présente invention concerne des perfectionnements apportés à la production et à l'isolement du sel de sodium de l'acide (6R,7R)-3-acétoxyméthyl-7-LtZ)-2-(fur-2-yl)-2- méthoxyiminoacétamido7céph-3-ème-4-carboxylique. L'acide (6R, 7R)-3acétoxyméthyl-7-LtZ)-2- ( fur-2-yl)- 2-méthoxyiminoacétamido7céph-3-ème-4carboxylique possède une activité anti-bactérienne contre toute une série d'or- ganismes Gram-positif et Gram-négatifs, associée à une stabilité particulièrement élevée vis-à-vis des p-lacta- mases produites par divers organismes Gram-négatifs et peut s'utiliser comme antibiotique à large spectre. Au surplus, l'acide (6R,7R)-3-acétoxyméthyl-7-ZTZ)-2-(fur-2- yl)-2-méthoxyiminoacétamido7céph-3-ème-4-carboxylique constitue un intermédiaire important pour la production d'autres céphalosporines antibiotiques qui possèdent une chaine latérale du type 7-ZTZ)-2-(fur-2-yl)-2-méthoxyimino- acétamido7. Un de ces antibiotiques qui a une grande im- portance commerciale est la céfuroxime décrite dans le brevet britannique N 1 453 049. La préparation de la 3-acétoxyméthyl-céphalosporine susmentionnée est décrite, par exemple, dans le brevet britannique N 1 399 086, le procédé impliquant essentiel- lement l'acylation de l'acide (6R,7R)-7-aminocéphalos- poranique par le chlorure de (Z)-2-(fur-2-yl)-2-méthoxy- iminoacétyle. La céphalosporine peut être récupérée sous la forme d'un sel de sodium qui manifeste l'activité phar- maceutique intéressante susmentionnée. Le sel de sodium est d'une importance toute particulière, étant donné qu'il facilite la préparation des compositions pharmaceutiques. Le sel de sodium n'était antérieurement obtenu que sous une forme hygroscopique, appelée dans le présent mémoire forme B, par traitement de solutions de l'acide libre dans de l'acétate d'éthyle par une solution de 2- éthylhexanoate de sodium dans le même solvant. La forme B du sel de sodium ainsi obtenu contient environ 4 molesc/ mole (m/m) d'eau à l'humidité atmosphérique normale (humidité relative d'approximativement 45 %); la teneur en eau s'accroit jusqu'au-délà de 15 m %/m à une humidité relative de 83 %. Par conséquent, la forme B du sel de sodium est quelque peu inappropriée à l'utilisation comme produit pharmaceutique, étant donné que sa teneur en eau varie considérablement en fonction de l'humidité ambiante et qu'il est difficile d'obtenir un produit pharmaceutique ayant des caractéristiques régulières. La demanderesse a découvert à présent que l'on pouvait avantageusement préparer l'acide (6R,7R)-3-acétoxyméthyl- 7-/TZ)-2-(fur-2-yl)-2-méthoxyiminoacétamido7céph-3-ème-4- carboxylique et l'isoler sous la forme d'un sel de sodium sensiblement non hygroscopique et, par conséquent, ce sel constitue l'une des caractéristiques de la présente in- vention. Dans le présent mémoire, ce sel de sodium non hygros- copique porte le nom de forme A et on a constaté que cette forme était bien plus cristalline que la forme B connue jusqu'à présent, qui ne semble pas exister sous une forme cristalline vraie. Le sel de sodium de forme A contient moins de 1 m %/m d'eau et la demanderesse a constaté qu'il était non hygroscopique à des humidités relatives variant de 25 à 83 %. La demanderesse a établi que la forme A possède une stabilité à long terme supérieure à celle de la forme B et qu'en raison de cette caractéristique comme aussi de sa faible hygroscopicité, la forme A convient bien mieux à l'utilisation dans des compositions pharma- ceutiques. Les conditions précises dans lesquelles se forme le sel de sodium de forme A peuvent être déterminées de manière empirique et on a constaté qu'en pratique un cer- tain nombre de procédés convenaient parfaitement. Selon une autre de ses caractéristiques, la présente invention a également pour objet un procédé de préparation du sel de sodium de la forme A, caractérisé en ce que l'on cristallise le sel à partir d'une solution d'un sel de sodium de l'acide (6R,7R)-3-acétoxyméthyl-LtZ)-2-(fur-2- yl)-2-méthoxyiminoacétamido7-céph-3-ème-4-carboxylique ou d'un solvate de celui-ci dans un milieu solvant éthanoli- que ne contenant pas plus d'environ 6 % en volume d'eau. Ainsi, par exemple, cette forme non hygroscopique du sel de sodium peut se préparer par cristallisation dans des conditions réglées. En particulier, on peut préparer la forme A du sel de sodium à partir de l'acide correspondant ou par recristallisation d'un sel de sodium préalablement isolé ou d'un solvate de celui-ci. !O Lorsque la matière de départ pour la préparation de la forme A souhaitée du sel de sodium est l'acide corres- pondant, un procédé de préparation préféré implique le traitement d'une solution de l'acide dans un solvant orga- nique, comme l'alcool industriel dénaturé au méthanol (c'est-à-dire un mélange ne contenant pas moins de 95 % en volume d'éthanol, 3,5 à 5 5,o en volume de méthanol et pas plus de 1 % en volume d'eau) ou l'acétate d'éthyle humide, par une solution d'un sel de sodium d'un acide organique, tel que le 2-éthylhexanoate de sodium, dans de l'alcool industriel dénaturé au méthanol, de manière à ce que la forme A souhaitée du sel de-sodium cristallise directement. On peut aussi extraire la solution de l'acide de départ dans une solution aqueuse d'un sel de sodium d'un acide organique faible, tel que, par exemple l'acide acétique, commodément en petit volume, cette extraction étant suivie d'une dilution de l'extrait aqueux par de l'alcool indus- tirel dénaturé au méthanol jusqu'à ce que la teneur en eau de la solution finale ne soit pas supérieure à environ 6 % en volume, si bien que le sel de forme A cristallise. D'autres sels de sodium d'acides organiques que l'on peut utiliser dans ces procédés de préparation comprennent, par exemple, le sel de sodium de l'acide lactique et le sel de sodium de l'acide hexancique. Lorsque le matière de départ pour la préparation de la forme A souhaitée du sel de sodium est le sel de sodium de forme B ou un solvate de ce dernier, un procédé dzè p:réarstion préféré implique la dilution d'une solution concentrée (par exemple 30 à 40 m %/m) du sel de sodium de départ dans de l'alcool industriel dénaturé au méthanol conte- nant 25 à 50 % en volume d'eau, par de l'alcool industirel dénaturé au méthanol ne contenant pas plus de 1 %i en vo- lume d'eau, jusqu'à ce que la concentration en eau ne soit pas supérieure à environ 6 % en volume, la forme A souhai- tée du sel de sodium cristallisant de cette manière. L'alcool industriel dénaturé au méthanol aqueux utilisé pour dissoudre la matière de départ peut être remplacé par du méthanol. On peut encore commodément préparer la forme A du sel de sodium à partir de la forme B du sel de sodium ou d'un solvate de ce dernier par cristallisation à partir d'alcool industriel dénaturé au méthanol, contenant jusqu'à environ 6 % en volume d'eau, le sel de sodium étant généralement insuffisamment soluble aux teneurs en eau inférieures et i] rendement en sel de forme A souhaitée diminuant rapidement aux teneurs en eau supérieures à environ 6 % en volume. On peut également préparer la forme A du sel de sodium en mettant un sel de sodium de forme B ou un solvate de ce dernier en suspension dans de l'alcool industriel dénaturé au méthanol, dans des conditions telles que la forme A souhaitée du sel cristallise. Si on le souhaite, la forme A du sel de sodium pré- parée par mise en oeuvre de n'importe lesquels des procédés décrits cidessus peut encore être recristallisée, par exemple, par mise en oeuvre de procédés similaires à ceux décrits plus haut à propos de la préparation du sel de forme A à partir du sel de sodium de forme B. On peut également commodément préparer le sel de sodium de forme A à partir d'un solvate du (6R,7R)-3-acétoxy- méthyl-7-/TZ)-2-(fur-2-yl)-méthoxyiminoacétamido7céph-3- ème-4-carboxylate de sodium, par exemple le solvate avec 2e dioxanne, par mise en oeuvre des procédés décrits dans le présent mémoire. Comme on l'a-indiqué plus haut, la forme non hygroscopique A du sel de sodium conforme à l'invention peut s'utiliser à titre d'antibiotique à large spectre et peut, par conséquent, être préparéeen vue de son admi- nistration de toute manière commode, comme par analogie à d'autres antibiotiques. Par conséquent, la portée de la présente invention s'étend également aux compositions pharmaceutiques qui contiennent la forme sensiblement non hygroscopique A du sel de sodium de l'acide (6R,7R)-3- acétoxyméthyl-7-LtZ)-2-(fur-2-yl)-2-méthoxyiminoacétamido7 céph-3-ème-4carboxilique, convenant à l'usage en médecine humaine ou vétérinaire. On peut présenter de telles compo- sitions en vue de les utiliser d'une manière classique, à l'aide de n'importe quel véhicules ou excipients néces- saires pouvant s'utiliser en pharmacie humaine ou vétéri- naire. La forme A du sel de sodium peut entrer dans des compo- sitions pour injection et peut être présentée sous la forme de doses unitaires dans des ampoules ou bien on peu l'in- troduire dans des récipients qui en contiennent des doses multiples, au besoin avec un conservateur additionnel. Les compositions conformes à l'invention peuvent également adopter la forme de suspensions, de solutions ou d'émul- sions dans des véhicules huileux ou aqueux et peuvent contenir des agents de mise en composition, comme des agents de mise en suspension, des agents stabilisants et/ ou dispersants. L'ingrédient actif peut également se pré- senter sous la forme d'une poudre à laquelle on doit ajou- ter un véhicule convenable, par exemple de l'eau apyrogène stérile, avant son emploi. On peut également présenter les compositions sous la forme de suppositoires, par exemple, contenant des bases pour suppositoires classiques, comme le beurre de cacao ou d'autres glycérides. On peut administrer le composé conforme à l'invention en combinaison avec d'autres agents thérapeutiques compa- tibles, comme d'autres antibiotiques, tels que les pénicillines, les céphalosporines et les tétracyclines. Les compositions destinées à être utilisées en méde- cine vétérinaire peuvent, par exemple, se présenter.sous la forme d'injections intramammair6 dans des bases à li- bération rapide ou à libération prolongée de la substance médicamenteuse. Si on le souhaite, les injections intramammaires peu- vent contenir d'autres ingrédients actifs, par exemple un corticostéroide, ou un autre antibiotique, par exemple une céphalosporine ou une pénicilline. Les préparations intramammaires peuvent se présenter sous la forme de suspensions ou de solutions stériles dans des véhicules aqueux ou huileux, mais afin d'obtenir des produits possédant une durée de vie en pot approprié, on les présente généralement sous la forme de suspensionsdans des véhicules huileux. Ces produits peuvent être fabriqués de manière aseptique en dispersant le ou les ingrédients actifs stériles dans le véhicule huileux qui a préalable- ment été stérilisé à la chaleur ou éventuellement par filtration. Le ou les ingrédients actifs eux-mêmes peuvent être fabriqués de manière aseptique ou être stérilisés après leur fabrication par mise en oeuvre de procédéscomme une irradiation par des rayons gamma ou une exposition à l'oxyde d'éthylène. Tout constituant thermolabile du pro- duit peut être stérilisé par mise en oeuvre de ces pro- cédés. Si on le souhaite, le produit final peut être présenté sous forme de doses unitairesdans des tubes en métal pouvant être écrasés ou dans des seringues en matière plastique avec un ajutage lisse effilé, afin de faciliter l1introduction dans le canal du trayon. Les huiles uti- lisées dans les véhicules pour injection intramammaire peuvent être des huiles minérales (comme la paraffine liquide) ou des huiles végétales (comme l'huile d'arachide ou l'huile de graines de coton). On peut aussi utiliser des triglycérides ou des diesters du propylène-glycol et d'acides gras saturés dérivés d'huiles végétales. Les huiles peuvent contenir un agent épaississant ou de mise en suspension, comme les paraffines molles ou dures, la cire d'abeille, la 12-hydroxy stéarine, l'huile d'ara- chide hydrogénée, les stéarates d'aluminium ou le mono- stéarate de glycéryle. Lorsque l'on utilise les produits chez des animaux en lactation, il est souhaitable de dis- perser rapidement le véhicule et le médicament dans le tissu mammaire, afin qu'il soit rapidement excrété dans le lait. Pour faciliter cette caractéristique, on peut in- corporer des matières hydrophiles, comme des polyéthylène- glycols ou des agents surfactifs non ioniques, tels que le polysorbate 60, le monostéarate de sorbitan, le mono- stéarate de glycérine ou le cétomacrogol 1000. Les in- jections intramammaires peuvent également contenir une substance servant de traceur, comme un colorant, à savoir le bleu brillant FCF. D'autres constituants encore des injections intramammaires peuvent être des stabilisants (comme la procaîne), des antioxydants (par exemple des gallates) ou des conservateurs (par exemple le chlorocrésol) Lorsque les compositions vétérinaires sont destinées à l'injection parentérale, elles se présentent généralement sous la forme de solutions stériles ou, plus avantageuse- ment encore, de suspensions dans un véhicule huileux et, à cette fin, conviennent particulièrement bien l'oléate d'éthyle, les triglycérides ou les huiles végétales sus- mentionnées. En général, la viscosité du produit doit être faible afin de faciliter son passage à travers une aiguille d'injection, mais l'incorporation aux composi- tions en question d'agents de mise en suspension comme le stéarate d'aluminium ou le monostéarate de glycéryle, peut être souhaitable. Un tel produit peut être présenté dans un récipient qui en contient des doses multiples, au besoin avec un conservateur additionnel. Dans l'ensemble, les compositions peuvent contenir depuis 0,1 %, par exemple 0,1 à 99 LO,de préférence de 2 à % de la matière active, en fonction du mode d'administration choisi. Lorsque les compositions se présentent sous la forme de doses unitaires chaque dose unitaire contient, de préférence, de 50 à 1500 mg d'in- grédient actif. Les compositions destinées à l'injection intramammaire contiennent, de préférence, de 100 à 300 mg de l'ingrédient actif, par exemple de 150 à 200 mg d'in- grédient actif. La dose utilisée pour le traitement de l'être humain adulte varie, de préférence, de 500 à 400Ong par jour, en fonction du mode et de la fréquence d'adminis- o10 tration. Les préparations et les exemples qui suivent servent à illustrer la préparation de la forme A du sel de sodium suivant l'invention ainsi que des compositions pharmaceu- tiques utilisables en médecine humaine et vétérinaire qui la contiennent. Dans ces préparations et exemples, toutes les températures apparaissent en degrés Celsius. PREPARATION 1 On a préparé une solution d'acide (6R,7R)-7-ZtZ)-2- (fur-2-yl)-2-méthoxyiminoacétamido7céph-3-ème-4-carboxy- lique par l'acylation de toluène-4-sulfonate dihydraté d'acide (6R,7R)-7amino céphalosporanique (19,0 g) à l'aide de chlorure de (Z)-2-(fur-2-yl)-2-méthoxyimino- acétyle dans un mélange de dichlorométhane (120 ml) et de N,Ndiméthylacétamide (30 ml). On a ajouté de l'eau (150 ml) et on a agité le mélange pendant 5 minutes à une température de 20 à 25 . On a séparé la phase aqueuse et on a de nouveau lavé la phase organique avec de l'eau (150 ml). On a extrait les liqueurs de lavage aqueuses l'une après l'autre par du dichlorométhane frais (25 ml) et on a réuni ces derniers extraits à la phase organique principale. On a concentré la phase organique globale sous vide, on y a ajouté de l'alcool industriel dénaturé au méthanol (50 ml) et on a poursuivi la concentration jusqu'à un volume résiduel de 50 ml. On a agité le pro- duit concentré tout en y ajoutant une solution de 2-éthyl- hexanoate de sodium (10 g) dans de l'alcool industriel dénaturé au méthanol (40 ml), cette addition étant immé- diatement suivie de celle de dioxamne (10 ml). On a arrêté le fonctionnement de l'agitateur et on a laissé la cristallisation se poursuivre à partir de la solution statique. Après deux heures, on a séparé le solide cris- tallin par filtration, on l'a lavé avec du dioxarre à 10 % en volume dans de l'alcool industriel dénaturé au métha- nol (2 x 25 ml) et on l'a séché sous vide, de façon à obtenir le (6R,7R)-7-ZtZ)-2-(fur-2-yl)-2-méthoxyimino- acétamido7céph-3-ème-4-carboxylate de sodium sous forme de solvate avec le dioxanre(18,2 g). L"7D + 56,7. La chromatographie en phase gazeuse-liquide a ré- vélé que le produit isolé contenait 15 % p/p de dioxanne. PREPARATION 2 On a agité une solution d'acide (6R,7R)-7-ZZ)-2-(fur- 2-yl)-2-méthoxyiminoacétamido7céph-3-ème-4-carboxylique (environ 42 g) préparée dans de l'acétate d'éthyle humide (environ 1,7 % d'H20) (545 ml) et on y a ajouté une so- lution de 2- éthylhexanoate de sodium (18,3 g) dans de l'acétate d'éthyle (180 ml). On a agité la solution pen- dant 30 minutes de manière à obtenir une suspension épaisse. On a isolé le produit par filtration, on l'a lavé à l'acétate d'éthyle (4 x 50 ml) et on l'a séché à sous vide de façon à obtenir la forme B souhaitée du sel de sodium contenant 4,4 m %/m d'eau (selon le procédé de Karl Fischer) (35,4 g). On a ensuite soumis un échantillon de la forme B du sel de sodium contenant 3,9 m %/m d'eau (Karl Fischer) préparé par mise en oeuvre du procédé ci-dessus à une diffraction des rayons X sur poudre de Debye-Scherrer. On a photographié l'échantillon de la forme B du sel dans des capillaires d'un diamètre de 0,3 mm dans une chambre de diffraction sur poudre d'un diamètre de 114,6 mm, en utilisant le rayonnement Co Ka. On a comparé les inten- sités des lignes à une série de standards et on les a converties en intensités relatives présentées dans le tableau I de la page 17. EXEMPLE 1 On a extrait une solution d'acide (6R,7R)-7-ZTZ)- 2-(fur-2-yl)-2-méthoxyiminoacétamido7céph-3-ème-4-car- boxylique (environ 21 g) préparée dans de l'acétate d'éthyle (150 ml) par une solution d'acétate de sodium anhydre (6 g) dans de l'eau (22 ml), de façon à obtenir une couche aqueuse contenant le sel de sodium de la céphalosporine. On a séparé cette solution aqueuse limpide et on l'a ajoutée à de l'alcool industriel déna- turé au méthanol (95 % d'éthanol) (600 ml) et on a en- semencé la solution limpide et on l'a agitée à la tempé- rature ambiante pendant 30 minutes. On a conservé la suspension ainsi obtenue à 0 pendant 20 heures et on a ensuite recueilli le produit cristallin par filtration, on l'a lavé à l'alcool industriel dénaturé au méthanol (4 x 30 ml) et on l'a séché à 40 sous vide pendant heures, de façon à obtenir la forme A voulue du sel de sodium (14,52 g). Impuretés-(par chromatographie en couche mince) 1,0 % Impuretés (selon la chromatographie en phase liquide à haute performance) 2,7 % Eau (selon Karl Fischer) 0,3 % Solvants (par chromatographie en phase gazeuse- liquide) 0,25 % (éthanol) o7D (1 % dans H20) +66 E1% dans tampon à pH 7,0 à 2,74 nm 411 1cm Cendre sulfatée 15,8 % m/m DIFFRACTION DES RAYONS X On a conservé le produit de cet exemple à 2 C pendant 14 heures avant dele soumettre à l'action des rayons X dans des capillaires d'un diamètre de 0,3 mm. On a ensuite préparé une photographie de diffraction sur poudre de Debye-Scherrer dans une chambre d'un diamètre de 114,6 mm en utilisant le rayonnement Co Ka. On a comparé les intensités des lignes vis-à-vis d'une 2 64960 série de standards et on les a converties en intensités relatives présentées dans le tableau II des pages 17 et 18. Il apparaîtra que ces chiffres diffèrent sensible- ment de ceux obtenus ci-dessus pour le produit de la préparation 2 (forme B). SPECTRE INFRA-ROUGE On a obtenu le spectre infra-rouge du produit de cet exemple dans du Nujol et ce spectre est représenté sur le dessin annexé. On a utilisé ce spectre comme référence pour les produits des exemples suivants. EXEMPLE 2 On a agité une solution d'acide (6R,7R)-3-acétoxy- méthyl-7-Z[Z)-2-(fur-2-yl)-2-méthoxyiminoacétamido7céph- 3-ème-4-carboxylique (environ 22 g) préparée dans de l'acétate d'éthyle (200 ml) contenant 2,3 % d'eau, à la température ambiante et on a ajouté une solution filtrée de 2-éthylhexanoate de sodium (9,13 g) dans de l'alcool industriel dénaturé au méthanol (95 % d'éthanol) (200 ml) en l'espace de 5 minutes, de façon à obtenir une solution limpide d'un pH de 7,4. On a lentement agité cette solution pendant 2 heures et on a conservé la suspension cristalline à 0 pendant 20 heures. On a recueilli le produit par filtration, on l'a lavé à l'alcool industriel dénaturé au méthanol (5 x 25 ml) et on l'a séché à 40 sous vide de façon à obtenir la forme A voulue du sel de sodium (17,7 g). Le spectre infra-rouge (Nujol) res- semble au spectre de référence. EXEMPLE 3 On a agité du (6R,7R)-3-acétoxyméthyl-7-ZZ)-2-(fur- 2-yl) -2-méthoxyiminoacétamido7céph-3-ème-4-carboxylate de sodium, Forme B, (4,4 % =/m H20) (2,0 g) dans de l'alcool industriel dénaturé au méthanol (95 % d'éthanol) (30 ml d'éthanol), à la température ambiante, pendant 1 1/2 heure. On a recueilli le solide par filtration, on l'a lavé à l'alcool industriel dénaturé au méthanol (4 x 5 ml) et on l'a séché sous vide à 40 , de façon à obtenir la forme A 2I64960 voulue du sel de sodium (1,80 g). Le spectre infra-rouge (Nujol) ressemble au spectre de référence. EXEMPLE 4 On a dissous du (6R,7R)-3-acétoxyméthyl-7-/TZ)-2- (fur-2-yl)-2-méthoxyiminoacétamido7céph-3-ème-4-carboxy- late de sodium (contenant une certaine quantité de Forme A) (60 g) dans de l'eau (60 ml) et de l'alcool industriel dénaturé au méthanol (95 % d'éthanol) (60 ml). On a cla- rifié la solution par filtration et on l'a ajoutée à 1,2 1 d'alcool industriel dénaturé au méthanol. On a ensemencé la solution limpide et on l'a agitée pendant minutes à la température ambiante et on l'a ensuite conservée à 0 pendant 68 heures. On a recueilli le solide cristallin précipité par filtration, on l'a lavé à l'alcool industriel dénaturé au méthanol (4 x 50 ml) et on l'a séché à 40 sous vide pendant 18 heures de façon à obtenir la Forme A voulue du sel de sodium (41,55à Le spectre infra-rouge (Nujol) ressemble au spectre de référence. EXEMPLE 5 On a dissous du (6R,7R)-3-acétoxyméthyl-7-ZTZ)-2- (fur-2-yl) -2-méthoxyiminoacétamido7céph-3-ème-4-carboxy- late de sodium (solvate avec le dioxmoe) (3 g) dans de l'eau (3 ml) et de l'alcool industriel dénaturé au métha- nol (95 % d'éthanol) (3 ml). On a ajouté cette solution à de l'alcool industriel dénaturé au méthanol (60 ml) et on l'a agitée pendant 30 minutes à la température ambiante. On a conservé la suspension cristalline à 0 pendant 3 heures et on a ensuite recueilli le solide précipité par filtration, on l'a lavé à l'alcool industriel dénaturé au méthanol (4 x 3 ml) et on l'a séché à 30 sous vide pen- dant 18 heures de façon à obtenir la Frome A voulue du sel de sodium (1, 64 g). Le spectre infra-rouge (Nujol) ressemble au spectre de référence. EXEMPLE 6 On a dissous du (6R,7R)-3-acétoxyméthyl-7-ZTZ)-2- (fur-2-yl)-2-méthoxyiminoacétamido7céph-3-ème-4-carboxyate de sodium (solvate avec le dioxanoe) (20 g) dans de l'eau (20 ml) et de l'alcool industriel dénaturé au méthanol (95 % d'éthanol) (40 ml). On a agité la solution avec du charbon de bois (1 g) pendant 15 minutes et on l'a ensuite filtrée à travers du kieselguhr et on a lavé le lit de filtration avec un mélange d'alcool industriel dénaturé au méthanol (30 ml) et de l'eau (1 ml). On a agité le filtrat limpide et on y a ajouté de l'alcool industriel dénaturé au méthanol (350 ml). On a ensemencé la solution et on l'a agitée pendant 15 minutes et conser- vée à 0 pendant 20 heures. On a recueilli le produit cristallin ainsi obtenu par filtration, on l'a lavé avec de l'alcool industriel dénaturé au méthanol (4 x 10 ml) et on l'a séché à 40 sous vide pendant 18 heures de manière à obtenir la Forme A voulue du sel de sodium (8,45 g). Le spectre infra-rouge (Nujol) ressemble au spectre de référence. On a obtenu une seconde récole de produit (4,95 g) par concentration des liqueurs. EXEMPLE 7 On a dissous du (6R,7R)-3-acétoxyméthyl-7-LTZ)-2- (fur-2-yl)-2-méthoxyiminoacétamido7céph-3-ème-4-carboxy- late de sodium, Forme B, (4,4,6 m/m H20) (2,0 g) dans un mélange d'eau (2 ml) et d'alcool industriel dénaturé au méthanol (95 % de méthanol) (4 ml). On a agité la solu- tion et on y a ajouté rapidement de l'alcool industriel dénaturé au méthanol (96 ml). On a conservé la solution * limpide à 0 pendant 18 heures et on a recueilli le pro- duit cristallin par filtration, on l'a lavé à l'alcool industriel dénaturé au méthanol (4 x 3 ml) et on l'a séché à 40 de façon à obtenir la Forme A voulue du sel de sodium (1,30 g). Le spectre infra-rouge (Nujol) res- semble au spectre de référence. EXEMPLE 8 On a dissous du (6R,7R)-3-acétoxyméthyl-7-JZ)-2- (fur-2-yl)-2-méthoxyiminoacétamido7céph-3-ème-4-carboxylate de sodium, Forme B, (4,4 % m/m H20) (1,0 g) dans du méthanol (12,5 ml) à 40 . On a ajouté de l'alcool in- dustriel dénaturé au méthanol (95 % d'éthanol) (25 ml) et on a laissé reposer la solution limpide à 0 pendant 18 heures. On a recueilli le produit cristallin par fil- tration, on l'a lavé à l'alcool industriel dénaturé au méthanol (4 x 2 ml) et on l'a séché à 40 sous vide de façon à obtenir la Forme A voulue de sel de sodium (0,10 g) Le spectre infrarouge (Nujol) ressemble auspectre de référence. EXEMPLE 9 On a évaporé une solution d'acide (6R,7R)-3-acétoxy- méthyl-7-LTZ)-2-(fur-2-yl)-2-méthoxyiminoacétamido7céph- 3-ème-4-carboxylique (environ 21 g) dans du dichloro- méthane (215 ml) et du diméthylformamide (15 ml) sous pression réduite et on a dissous le résidu dans de l'alcool industriel dénaturé au méthanol (150 ml). On a agité la solution avec du charbon de bois (2 g) pendant 30 minutes, on l'a filtrée à travers du kselguhr et on a lavé le lit avec de l'alcool industriel dénaturé au méthanol (50 ml). On a agité le filtrat et on y a ajouté une solution filtre de 2-éthylhexanoate de sodium (9,13 g) dans de l'alcool industriel dénaturé au méthanol (200 ml). On a ensemencé la solution ainsi obtenue et on l'a agitée à la tempéra- ture ambiante pendant 16 heures. On a recueilli le produit par filtration, on l'a lavé à l'alcool industriel dénaturé au méthanol (5 x 25 ml) et on l'a séché à 40 sous vide de façon à recueillir la Forme A voulue du sel de sodium (18,96 g). Le spectre infra-rouge (Nujol) ressemble au spectre de référence. EXEMPLE A Poudre sèche pour injection On a introduit la Forme A stérile du (6R,7R)-3-acé- toxyméthyl-7-ZTZ)-2-(fur-2-yl)-2-méthoxyiminoacétamido7 céph-3-ème-4carboxylate de sodium dans des fioles en verre, le contenu de chaque récipient étant équivalent à 500 mg et 1,00 g de l'acide céphalosporinique libre. On a effectué le remplissage de manière aseptique sous at- mosphère d'azote. On a fermé les fioles en se servant de disques ou bouchons en caoutchouc maintenus en posi- tion par des capsules d'étanchéité en aluminium, de manière à empêcher tout échange gazeux ou tout entrée de microorganismes. Le produit est destiné à être ajouté à de l'eau pour injections ou à tout autre véhicule stérile approprié peu de temps avant son administration. EXEMPLE B Injection intramammaire (vétérinaire) (6R,7R)-3-acétoxyméthyl-7-/JZ)-2- (fur-2-yl)-2-méthoxyimino acétamido7 céph-3-ème-4-carboxylate de sodium, Forme A 150 mg Polysorbate 60 3,0 % p/p) Cire d'abeille blanche 6,0 % p/p) jus' 3,00 g Huile d'arachide 91,0 % p/p) On a chauffé les trois derniers ingrédients ensemble à 150 C pendant 1 heure et on les a ensuite refroidis jusqu'à la température ambiante sous agitation. On a ajouté l'antibiotique broyé stérile à ce véhicule de manière aseptique et on a affiné la préparation à l'aide d'un mélangeur à haute vitesse. On a introduit ce pro- duit de manière aseptique dans des seringues en matière plastique stérif en utilisant une charge de 3,00 g par récipient. EXEMPLE C Injection pour utilisation vétérinaire (6R,7R)-3-acétoxyméthyl-7-/ZTZ)-2(fur-2-yl) -2-méthoxyiminoacétamido7céph-3-ème-4- carboxylate de sodium, Forme A 15,0 % p/v Distéarate d'aluminium 1,5 % p/v) jus- Oléate d'éthyle jusqu'à 100 % p/v) qu'à 100,0 % p/v On a dispersé le stéarate d'aluminium dans de l'oléate d'éthyle, puis n l'a séchéà 150 pendant 1 hère sus egitatic. 2?64960 et on a ensuite refroidi la suspension jusqu'à la tem- pérature ambiante. On a ajouté l'antibiotique broyé et stérile au véhicule>de manière aseptique et on a affiné la préparation à l'aide d'un mélangeur à haute vitesse. On a introduit le produit de manière aseptique dans des fioles pour injection que l'on a fermées à l'aide de bagues ou de bouchons en caoutchouc maintenus en position par des capsules d'aluminium. úL P9 9ú: S ( OOI/I) GAFqulaI naVWsuaqIE - - II nivra7gv LI z z E: 6E: zr il I LT zz 6E gg LI il rr L9 6ú LI II (00I/'7) @a.Ial p,!suaquIj- I iflVmI ú'9 6Sc 9 '9 6LC9 91L6 6'6 ú 'ZI Ad 1 (VY), P Inal CZ 81 'r EL C 08 E 16' r tO cE 81 'E Oz 'E OúE'ú 8úE cú 8E'ú LL CE S8' ú 96' E >l7'a LE" 1 7 IIc il c9 9S c9 /6'9 L cO 8T'0 LZ s 8 -["O, (v) 096899Z oç Oz 01O Valeur 'd' 6,11 4,92 4,69 4,49 4,20 4,00 3 91 3,78 3,64 3Y55 3) 36 3,30 3>25 3 116 3,08 2,86 2,81 2,76 2,60 2 56 2,45 2,42 2 36 2,'31 2, 262 2 188 2,054 2,025 2. 000 1,915 1,800 13 728 (A) Intensité relative (I/I100) 21 64960 On donnera ci-après des résultats d'essais pharmacologiques effectué avec l'acide (6R, 7R)-3-acétoxy- méthyl-7-/(Z)-2-(fur-2-yl)-2-méthoxyiminoacétamido/céph-3- èm-4-carboxylique, acide dont dérive le sel de sodium selon l'invention. 1 - Détermination de la concentration inhibitrice minimale. On prépare une série de dilution par deux à partir de solutions d'essais fraichement préparées du composé testé dans de la casitone -agar avec ou sans enrichissement et on les verse dans des boites de Petri. On inocule les plaques à l'aide d'un inoculateur multipoint avec un inoculum conte- nant approximativement 105 unités formant colonie des micro- organismes indiqués au tableau III, qui sont tous des micro- organismes isolés en clinique. On détermine la plus faible concentration qui inhibe la croissance (CIM) en microgram- mes/ml après 18 heures d'incubation à 37 C. Pour H influenzae on a utilisé une méthode de di- lution au bouillon étant donné que les conditions de culture de ce microorganisme sont plus strictes. 2Z64960 TABLEAU III Microorganisme CIM pg/ml Gram Staph. aureus 604E 1,25 Positif Staph. aureus 1414E 0,5 Staph. aureus 853E+ OT5 Staph. aureus - 663E 075 Micrococcus spp. 1810E 0;5 E. coli E. coli S. typhimurium Shigella sonnei E. cloacae - K. pneumoniae K. pneumoniae Pr. mirabilis Pr. morganii Pr. vulgaris Ps. aeruginosa Ps. aeruginosa Ps. aeruginosa Ps. aeruginosa S. marcescens Providence spp. H. influenzae H. influenzae 1193E+ 851E 804E 1608E 1321E 1082E 1522E 431E 1606E 1808E 1371E E 1607E 1615E 1324E 1497E 1184E 1788E+ > 250 > 250 > 250 > 250 On a déterminé par spectrophotométrie la sta- bilité aux R -lactamases en suivant l'absorption UV du noyau à-lactame (normalement dans la région 260 - 265 nm) pour le composé testé en présence d'enzyme partiellement purifiée et on l'a exprimé par comparaison avec la Cephalo- ridine (à qui on a attribué la valeur 1 vis à vis de chaque enzyme). TABLEAU IV: Stabilité aux 2-lactamases - lactamase P99 Kl TEM composé testé 00 5,3 16,3 3 - Protection de la souris (DE 50) On a administré à des groupes de 5 souris des microorganismes par voie intraperitonéale dans 0,5 ml d'une suspension de levure inactivée à 1,5 %. Deux doses du com- Dosé testé sont administrés par voie souscutanée 1 et 5 heures après le microorganisme, dans 0,2 ml de solution physiolo- gique. On compte le nombre de survivants 5 jours après l'in- oculation et l'activité du composé testé est exprimé en DE 50. TABLEAU V DE 50 (mg/kg/dose) du composé testé Staph.aureus 853E E.coli 851E 3,6 6,2 4 - Toxicité On a administré le composé testé par voie intraperitonéale à une dose unique de 500 mg/kg à des groupes de 5 souris femelles CRH albino (pesant 18 - 22 g). On a observé les animaux pendant 14 jours. TABLEAU VI composé testé DL50 i.p. (mg/kg/dose) (sous forme de sel de sodium) v 500 REVENDICATIONS 1. Sel de sodium sensiblement non hygroscopique de 1 'acide (6R,7R)-3-acétoxyméthyl-7-LtZ)-2-(fur-2-yl)-2- méthoxyiminoacétamido7céph-3-ème-4-carboxylique. 2. Sel de sodium de l'acide (6R,7R)-3-acétoxyméthyl- 7-ZtZ)-2-(fur-2-yl)-2-méthoxyiminoacétamido7céph-3-ème- 4-carboxylique contenant moins de 1 m %/m d'eau et non hygroscopique à des humidités relatives qui varient de à 83 %. 3. Sel de sodium de l'acide (6R,7R)-3-acétoxyméthyl- 7-ZJZ)-2-(fur-2-yl)-2-méthoxyiminoacétamido7céph-3-ème-4- carboxylique qui présente sensiblement les valeurs 'd' et les intensités relatives suivantes lorsqu'il est soumis à une diffraction des rayons X sur poudre de Debye-Scherrer dans une chambre d'un diamètre de 114,6 mm en utilisant le rayonnement Co Ka: Valeur 'd' (A) Intensité relative (I/I100) 14,4 55 12,3 100 9 9 45 7,16 36 6,79 64 6,59 73 6,35 9 6,e11 5 4,92 27 4,69 100 4X49 41 4,20 9 4,00 45 3,91 36 3,78 36 3,64 90 2Z64960 Intensité relative (I/I100) et/ou le spectre infra-rouge dans du Nujol représenté sur le dessin annexé. 4. Procédé de préparation du sel de sodium de l'acide (6R,7R)-3-acétoxyméthyl-/TZ)-2-(fur-2-yl)-2-méthoxyimino- acétamido]céph-3-ème-4-carboxylique suivant l'une quelcon- que des revendications 1 à 3, caractérisé en ce que l'on cristallise le sel à partir d'une solution du sel de sodium de l'acide (6R,7R)-3-acétoxyméthyl-JTZ)-2-(fur-2-yl)-2- méthoxyuminoacétamido7céph-3-ème-4-carboxylique ou d'un solvate de ce dernier dans un milieu solvant éthanolique ne contenant pas plus d'environ 6 % en volume d'eau. Valeur O d' (A) 3,55 3,36 3,30 3,25 3,16 3,08 2,86 2,81 2,76 2,60 2,56 2, 45 -2,42 2,36 2,31 2,262 2,188 2,054 2,025 2,000 1,915 1,800 1,728 ?2t64960 5. Procédé suivant la revendication 4, caractérisé en ce que le sel de sodium de départ ou son solvate est mis en suspension dans de l'alcool industriel dénaturé au méthanol, si bien que le sel de sodium souhaité cris- tallise. 6. Procédé suivant la revendication 4, caractérisé en ce que l'on dissout d'abord le sel de sodium de départ ou son solvate dans un alcool industriel dénaturé au méthanol aqueux contenant de 25 à 50 % en volume d'eau et en ce que l'on amène le sel de sodium voulu à cris- talliser de cette solution par dilution de la solution avec de l'alcool industriel dénaturé au méthanol ne contenant pas plus de 1 % en volume d'eau, jusqu'à ce que la concentration en eau ne soit pas supérieure à environ 6 % en volume. 7. Procédé suivant la revendication 4, caractérisé en ce que le sel de sodium de départ est d'abord formé in situ. 8. Procédé suivant la revendication 7, caractérisé en ce que l'on traite une solution d'acide (6R,7R)-3- acétoxyméthyl-LtZ)-2-(fur-2-yl)-2-méthoxyiminoacétamido7 céph-3-ème-4-carboxylique dans un solvant organique conte- nant éventuellement de l'eau par une solution d'un sel de sodium d'un acide organique dans de l'alcool indus- triel dénaturé au méthanol, si bien que le sel de sodium souhaité cristallise. 9. Procédé suivant la revendication 7, caractérisé en ce que l'on extrait une solution d'acide (6R,7R)-3- acétoxyméthyl--5Z)-2-(fur-2-yl)-2-méthoxyiminoacétamido7 céph-3-ème-4-carboxylique dans un solvant organique conte- nant éventuellement de l'eau par une solution aqueuse d'un sel de sodium d'un acide organique faible et en ce que l'on dilue ensuite l'extrait aqueux par de l'alcool industriel dénaturé au méthanol jusqu'à ce que la teneur en eau de la solution ainsi obtenue ne soit pas supé- rieure à environ 6 % en volume, si bien que le sel de 2a64960 sodium souhaité cristallise. 10. Procédé de préparation du sel de sodium de l'aci- de (6R,7R)-3-acétoxyméthyl-LtZ)-2-(fur-2-yl)-2-méthoxy- iminoacétamido7céph-3-ème-4-carboxylique suivant l'une quelconque des revendications 1 à 3, caractérisé en ce que l'on forme le (6R,7R)-3-acétoxyméthyl-LZZ)-2-(fur- 2-yl)-2-mêthoxyiminoacétamido7céph-3-ème-4-carboxylate de sodium en solution à partir d'acide (6R,7R)-3-acétoxy- méthyl-ZTZ)-2-(fur-2-yl)-2-méthoxyiminoacétamido7céph-3- ème-4-carboxylique et on cristallise le sel de sodium souhaité à partir d'un milieu éthanolique ne contenant pas plus de 6 % en volume d'eau. 11. Compositions pharmaceutiques caractérisées en ce qu'elles contiennent le sel de sodium suivant l'une quelconque des revendications 1 à 3, adaptées à l'usage en médecine humaine. 12. Compositions pharmaceutiques, caractérisées en ce qu'elles comprennent le sel de sodium suivant l'une quelconque des revendications 1 à 3, adaptées à l'usage en médecine vétérinaire. 13. Compositions suivant la revendication 12, carac- térisées en ce qu'elles se présentent sous une forme de préparation convenant à l'injection. 14. Compositions suivant la revendication 13, carac- térisées en ce qu'ellesseprésentent sous une forme conve- nant à l'injection intramammaire contenant de 100 à 300 mg du sel de sodium en question.