Brevet FR2470160A1 — publié le 19810529

On connaît un procedé de clarification de liquides aqueux, basé sur l'action d'enzymes protéolytigues dérivés de la culture de "Streptomyces", et, plus particulièrement de Streptomyces fradias", sur des solutions et suspensions de protéines dans un milieu aqueux. Dans l'application de ce procédé, on a constaté I'effficacit de ce traitement enzymatique sur des paramètres tels que viscosité, filtrabilité et dégradation protéique de solides en solutions aqueuses, ces facteurs prenant part de façon décisive dans la séparation et l'insolubilisation de produits ayant une activité biologique, non dégradables par l'enzyme protéolytique,(tels que glucides, glucosides, hormones, lipides, etc.) Ces produits sont fréquemment retenus entre des structures protéiques animales ou végétales, et leur isolement est extrêmement intéressant pour la thérapeutique, tant humaine qu'animale, pour la diététique et pour d'autres applications de caractère industriel. La présente invention concerne des mesures propres à l'obtention de ces produits par des améliorations apportées au procédé connu dans son principe. Ces produits ou substances actives employés en thérapeutique et obtenus à partir de jus ou extraits d'organes ou tissus animaux sont dénommés "produits opothératique et sont généralement inclus ou englobés dans les structures de soutien protéiques ou lipideprotéiques. Pour l'isolement de ces produits ou substances actives, il est nécessaire que cette structure de soutien ou "édifice" protéique qui retient le produit actif recherché soit décomposée par des agents sélectifs assez puissants et spécifiques pour, sans alterner la structure compliqu du produit actif, produire une dissolution dans la structure de soutien, de sorte que celle-ci se fragmente (digestion de la protéine solide de support, diminution de la -v-s-cdsit^é structures de protéines gélifiables, etc.) et que le produit actif ou opothérapique soit libéré, sans quersa structure propre soit altérée, et qu'il devienne facilement séparable du milieu de digestion, par les techniques usuelles de la chimie (filtrage, précipitation, extraction, etc.). Comme agents du traitement dégradateur on utilise, conformément à l'invention, les produits enzymatique obtenus par culture de"Streptomyces"et, plus concrètement, du "Streptomyces frediae", dont les spéciales propriétés d'action et innocuité le rendent particulièrement utile dans la préparation des produits opothérapiques recherchés. En effet, ces protéases ou produits enzymatiques de traitement peuvent être obtenus sans présenter d'effets collatéraux toxiques, sans contaminants antibiotiques et sans présenter d'activités enzymatiques subsidiaires indésirables (amilasique, lipasique, invertasique, etc ) qui pourraient endommager le produit qu'il s'agit de séparer de la structure protéique de soutien au moyen de l'attaque enzymatique. Une autre qualité de ces enzymes est l'ampleur de leur spectre de dissolution protéique car, du fait que les enzymes de "Streptomyces fradiae" constituent un complexe iso-enzymatique avec différentes fractions qui varient en grandeur moléculaire, point iso-electrique et action endo et exo-peptidasique, ils permettent de disposer d'un ensemble opérationnel efficace, capable de catalyser enzymatiquement l'hydrolyse de protéines dissoutes ou suspendues en milieu aqueux, soient de nature animale (comme, par exemple, kératine, globine, mucoprotéines, myosine, gélatine, etc), ou végétale (par ex. glyadine,-hordéine, etc.). En disposant d'un complexe avec action exo-peptidasique, on peut agir sur des liaisons peptidiques terminales de la chaîne protéique.Les actifs de l'enzyme avec action endo-peptidasique briseront les structures en maillons internes, ce qui permettra non seulement d'obtenir une dégradation plus à fond de la structure, mais de créer, dans les fragments de rupture, de nouveaux terminaux amino-acidiques d'un possible accès à l'action de la fraction exo-peptidasique, qui sera ainsi renforcée par l'action des endo-peptidases. Ce mécanisme synergique d'endo-et exopeptidase justifie l'ampleur du spectre de dissolution de nombreux enzymes de Streptomyceset, concrètement, du Streptomyce fradiae, capable d'hydrolyser des structures aussi molles que l'albumine ou des protéines plus structurées, comme la kératine, inattaquable par la plupart des protéases végétales, animales ou provenant de la fermentation de micro-organismes. En outre, ce type d'enzyme offre l'avantage de sa stabilité à l'oxygène ambiant, D'autres protéases (comme par ex., la sulphridilenzyme, où sont inclus de nombreux enzymes végétaux) sont labiles, par oxydation, ce qui oblige. es employer et à les stocker dans des conditions anaérobies ou à les utiliser conjointement avec des substances réductrices, parfois indésirables pour le processus d'isolement de l'actif opothérapique. Par contre, les enzymes de streptomyces sont sérinenzymes oxyde-stables pour les normales potentielles redox des processus d'obtention de ces produits et il ne faut pas prendre avec eux de précautions particulières de stockage manipulation et usage, autres que celles habituelles en produits chimiques, par ex., éviter l'humidité excessive en stock, etc. Une autre caractéristique des sérinenzymes de Streptomyces fradiae est leur thermolabilité qui, étant suffisante pour qu'à des températures normales d'action (0-600C) ils maintiennent leur activité à des PH ordinaires (4-9) en solution aqueuse tamponnée et en présence de Ca++, ils offrent en outre la possibilité, une fois l'action bienfaisante exercée, d'inactiver l'enzyme par simple élévation thermique, soit pour fréiner sôn actiolithique ou de dissolution, soit pour éliminer totalement dans le produit à activité biologique qu'on veut obtenir une autre activité biologique concomitante (enzymatique). Il est aussi facile d'éliminer l'activité enzymatique par changement brusque de pH aux zones extrêmes acides ou alcalines. Enfin, puisque les produits opothérapiques sont obtenus à partir de macérés protéiques qui sont d'authentiqùes bouillons de culture, et puisque dans l'attaque enzymatique on opère à des températures idéales pour la proli- fération de germes même pathogènes, il est important que l'enzyme de "Streptomyces fradiae" puisse être stérilisé à sec, étant donné qu'il ne se dégrade pas sensiblement à des températures de l'ordre de 1000 pendant un temps supérieur à deux heures ; c'est-à-dire que l'on puisse prévenir une contamination bactérienne causée par l'addition du produit enzymatique. REVENDICATION Procédé pour ltobtention de produits opothérapiques à activité biologique par traitement enzymatique de solutions aqueuses, procédé caractérisé en ce que l'on soumet les structures protéiques présentes dans le liquide aqueux à l'action dégradatrice d'un produit enzymatique obtenu par culture de "Streptomyces" et, plus spécifiquement, du "Streptomyce fradiae" et on poursuit ensuite le traitement traditionnel pour provoquer la dispersion de ces structures et la libération des produits biologiquement actifs ou opothérapiques enfermés dans ces structures.