Brevet FR2468643A1 — publié le 19810508

La présente invention concerne l'identification de micro-organismes et elle a plus particulièrement trait à un coffret renfermant des traces de réactifs pour l'identifi- cation de micro-organismes. Pour identifier d'une manière générale des micro-organismes, il est nécessaire d'opérer en isolant les micro-organismes au moyen de milieux d'isolement, en les inoculant dans plus de 20 milieux différents de confirmation comprenant des bactéries isolées à l'état pur, en les cultivant dans un incubateur à 370C pendant 24 à 48 heures, puis en détectant les propriétés biochimiques de la bactérie à étudier. En conséquence, il est nécessaire d'opérer dans des conditions aseptiques pour préparer les milieux et l'opération est compliquée par l'identification des micro- organismes cultivés de la sorte. La Demanderesse vient de mettre au point un coffret pour l'identification de micro-organismes, comme résultat de diverses études conduites en vue de faciliter l'identification des bactéries à étudier. L'un des buts principaux de l'invention est donc de trouver un coffret pour l'identification de micro- organismes, qui permette de remédier aux inconvénients de l'identification classique de micro-organismes et qui permette d'identifier avec exactitude les micro-organismes et leurs propriétés biochimiques sans erreur d'appréciation, et en peu de temps. Un autre but de l'invention est de réaliser un coffret pour l'identification de micro-organismes qui puisse être inoculé simplement avec une suspension bactérienne en une seule manipulation. Un autre but de la présente invention est de réaliser un coffret pour l'identification de micro- organismes, dans lequel une suspension bactérienne puisse être uniformément distribuée. Un autre objectif de la présente invention est de réaliser un coffret pour l'identification de micro- organismes, permettant de distribuer uniformément une suspension bactérienne dans chaque cellule. Le coffret de l'invention est réalisé par formage d'une matière plastique ou comprend un corps en mati-'re plastique ou en verre et un couvercle transparent de manière à réaliser une cellule pour suspension bactérienne à disposition longitudinale dans le corps du coffret et plusieurs petites cellules (par exemple 20 cellules) perpendiculairement à la cellule destinée à renfermer la suspension bactérienne. Chacune des cellules de culture communique par une crête avec la cellule à suspension bactérienne. Il est préférable de prévoir plusieurs cloisons S'étendant vers la cellule à suspension bactérienne de manière à diviser la portion d'accès du passage présentant la crête afin d'introduire uniformément la suspension bacté- rienne dans les petites cellules respectives dans la portion d'acces. on dispose, dans chaquje petite cellule, des réactifs du type en poudre ou en comprimés correspondant à la nature des caractéristiques biochimiques à étudier, en une quantité correspondant à la quantité nécessaire pour un test. Lorsque la suspension bactérienne a été versée dans une petite cellule par l'intermédiaire de la cellule à suspension bactérienne, la couleur du réactif change en raison des caractéristiques biochimiques des microorganismes. Il est parfois nécessaire d'ajouter encore plusieurs types de réactifs à la petite cellule conformément au type de la réaction biochimique. Toutes propriétés capables d'identifier les micro-organismes peuvent être exploitées dans la présente invention. Ces propriétés biochimiques sont par exemple l'aptitude à la production d'indole, la réaction de Voges- Proskauer, le pouvoir de décomposition de l'urée, la disponi- bilité des citrates, l'utilisation des malonates, le 0- nitrophényl-H--P-galacturopyranoside il l'aptitude à la décarboxylation de l'arginine, l'aptitude à la décarboxyla- tion de l'ornithine, l'aptitude à la décarboxylation de la lysine, l'aptitude à la dégradation du saccharose, l'aptitude à la dégradation de 1'adonitol, l'aptitude à la dégradation de l'arabinose, l'aptitude à la dégradation du sorbitol, l'aptitude à la dégradation du rhamnose, l'aptitude à la dégradation de l'inositol, l'aptitude à la dégradation du dulcitol, l'aptitude à la dégradation du mannitol, l'aptitude à la dégradation du xylose, etc. Conformément à l'invention, des bactéries isolées à l'état pur sont mises en suspension dans du sérum physiologique ou un liquide similaire, une quantité déterminée de suspension bactérienne est versée dans la cellule à suspension bactérienne, le coffret est maintenu horizontalement pour niveler uniformément la suspension bactérienne dans la cellule correspondante puis le coffret entier est incliné de manière que la suspension bactérienne passe de la cellule qui les renferme aux petites cellules par les passages respectifs présentant une crête. Ensuite, un couvercle transparent est disposé sur le coffret devant être soumis à l'incubation, de manière que des réactions se développent conformément au type de propriétés biologiques. Une identification correcte peut être obtenue par l'observation des réactions biochimiques s'accompagnant d'une variation correspondante de couleur dans les petites cellules. D'autres caractéristiques et avantages de la présente invention ressortiront de la description détaillée qui va suivre, faite en regard du dessin annexé sur lequel: la figure 1 est une représentation en perspective d'une forme de réalisation appréciée du coffret, en partie arrachée au niveau du couvercle, de la présente invention; - la figure 2 est une vue partielle en plan agrandie du corps du coffret illustré sur la figure 1; - la figure 3 est une représentation en coupe du corps du coffret suivant la ligne III-III de la figure 2. La figure 1 du dessin annexé représente une forme de réalisation appréciée du coffret dont le couvercle a été en partie arraché et la figure 2 présente un agrandissement partiel du corps de coffret représenté sur la figure 1, les parties identiques étant affectées des mêmes références numé- riques. Le coffret de l'invention comprend un corps rectangu- laire 1 en forme de boîte aplatie et un couvercle 2. Une cellule pour suspension bactérienne 3 est formée longitudina- lement au corps 1 du coffret, d'un côté de celui-ci, et plusieurs petites cellules 4 sont formées perpendicu- lairement à la cellule à suspension bactérienne 3. Chacune des petites cellules 4 communique par un passage d'accès 5 présentant une crête avec la cellule à suspension bactérienne 3. Le corps 1 du coffret est fabriqué en une matière plastique telle que chlorure de vinyle, polypropylène, etc. , et il est mis en forme par moulage sous vide ou par compression, la feuille de matière plastique ayant une épaisseur inférieure à 0,5 mm ou à une grandeur de cet ordre. Il y a lieu de remarquer que lorsque la feuille de matière plastique a une épaisseur supérieure à 0,5 mm, les cellules respectives et les passages ne sont pas formés d'une manière anguleuse qui provoquerait ainsi un écoulement incorrect de la suspension bactérienne. Plusieurs cloisons 6 s'étendent vers la cellule à suspension bactérienne 3 pour introduire de préférence la suspension par le passage d'accès 5 en crête dans les petites cellules 4 respectives. Comme le font apparaître les figures 2 et 3, chacun des passages d'accès 5 en crête est plus étroit que la largeur de la petite cellule 4 et comprend une portion ou passage d'accès 8 montant selon un gradient constant prédéterminé depuis la cellule à suspension bactérienne 3, une crête 7 formée au sommet de la portion d'accès montante 8 et une portion descendante ou passage 9 en U recourbé vers le bas longitudinalement au passage 5 à sa base, partant de la crête 7 pour venir coincider avec le fond de la petite cellule 4 à sa partie la plus basse en forme de U de manière à empêcher un écoulement en retour de la suspension bactérienne comme l'indique la représentation en coupe verticale de la figure 3. Il y a lieu de remarquer que bien que le passage 9 s'infléchisse depuis la partie se trouvant juste au-dessous de la crête 7 en forme de U à sa base comme indiqué sur la figure 3, il peut également présenter une gorge oblique à fond rectangulaire dirigée vers la petite cellule 4 depuis la crête 7 et recourbée depuis une partie se trouvant légèrement plus bas que la crête 7 de manière que le fond de la partie courbe ait une section transversale en U. Il y a également lieu de remarquer que bien que la petite cellule 4 décrite ci-dessus soit bien moins profonde que la cellule à suspension bactérienne 3, s'il advient que la petite cellule 4 soit de même profondeur que la cellule à suspension bactérienne 3, la suspension bactérienne peut être distribuée uniformément dans les petites cellules 4 et elle est prête à fonctionner même lorsque le corps 1 du coffret est rehaussé. Il y a lieu de remarquer également que bien qu'il existe une dépression 10 peu profonde formée sensiblement au centre de chacune des petites cellules 4 et destinée à contenir un réactif, cette dépression n'est pas toujours indispensable à cet endroit. Un réactif stérilisé pour la conduite d'un test biochimique peut aussi être utilisé à l'état sec, et il est introduit dans les petites cellules en vue de stériliser par un gaz la totalité du coffret. Lorsqu'on sèche le réactif, il est préférable d'utiliser un courant de gaz chaud. Dans le cas d'un réactif en poudre, on mélange de la polyvinylpyrrolidone en quantité convenable avec les réactifs de manière à les empêcher ainsi de se détacher ou de se diffuser au cours de leur processus de séchage. Le couvercle 2 recouvrant le corps 1 du coffret est transparent et il présente plusieurs échancrures 11 permettant de le saisir commodément lorsqu'il est en place et de manipuler le corps 1 du coffret. Des numéros ou des symboles caractérisant le réactif peuvent aussi être prévus audessus ou sur le côté des petites cellules respectives 4 du corps 1 du coffret ou bien les numéros du réactif peuvent être marqués sur le côté du corps 1, et le symbole peut être marqué sur le couvercle 2 dans la position qui y correspond. Au moment de l'utilisation du coffret ainsi réalisé, des réactifs destinés à des tests biochimiques sont introduits préalablement dans les petites cellules. Ensuite, l'isolat pur à analyser, en suspension à une concentration correcte dans du sérum physiologique, est versé dans une cellule à suspension bactérienne 3 en quantité prédéterminée, le corps 1 du coffret est maintenu horizontalement pour niveler uniformément la suspension bactérienne dans la cellule 3, puis le corps 1 du coffret est entièrement incliné de manière que la suspension bactérienne atteigne l'extrémité supérieure, o la cellule incurvée contenant la suspension bactérienne se surélève en introduisant ainsi la suspension dans les petites cellules respectives 4 par-dessus les passages d'accès 5 à crête. Il y a lieu de remarquer que le couvercle 2 peut être placé sur le corps 1 du coffret après que la suspension bactérienne a été versée ou qu'il peut être placé sur le corps 1 après l'inoculation. Ensuite, les bactéries inoculées sont cultivées par le processus classique de manière à réagir ainsi conformément à la nature des caractéristiques biochimi- ques, et le changement de couleur peut être observé. Ainsi, ce coffret permet d'identifier exactement les propriétés biochimiques des bactéries en peu de temps, sans erreur de manipulation. Lorsqu'on utilise le coffret 1, on applique un surfactant hydrophile ou on l'imprime sur la cellule à suspension bactérienne 3. et on applique ou imprime un agent tensio-actif hydrophobe ou une huile siliconée ou une substance similaire sur le passage d'accès à crête pour distribuer ainsi uniformément la suspension bactérienne dans les petites cellules et, lorsque le corps 1 du coffret est incliné, cela peut empêcher la suspension de retourner en s'écoulant de la petite cellule 4 dans la cellule à suspension bactérienne 3. On peut encore améliorer la distribution de la suspension bactérienne dans les petites cellules en versant une solution de surfactant dans l'alcool et en volatilisant l'alcool pour laisser le surfactant. Lorsque le surfactant est dissous dans la suspension bactérienne et qu'un surfactant hydrophile est appliqué sur le passage d'accès menant à la crête, on peut obtenir un résultat encore meilleur. Dans le cas d'une suspension bactérienne anaérobie, les petites cellules 4 sont obturées à leur surface supérieure par un film transparent et le corps -1 du coffret est tenu verticalement de manière à placer ainsi de la paraffine liquide sur la solution de suspension bactérienne pour cultiver les bactéries dans des conditions anaérobies tout en maintenant le dispositif dans la position verticale dans laquelle il se trouve de manière à l'examiner de la sorte. L'exemple comparatif suivant concerne un coffret à dix petites cellules, l'étude comparative portant sur la quantité de suspension bactérienne distribuée (quantité de bactéries inoculées). Sur le tableau suivant, la référence A désigne les résultats obtenus dans la petite cellule et dans les cellules pour suspension bactérienne revêtues de "Triton X405"1 (produit de la firme Rohm & Haas Company) sur le passage présentant la crête et dans les petites cellules revêtues d'huile siliconée sur le passage d'accès du côté des petites cellules. A B A C rSuspension Solutior. de Solution de Solution de sel Solution de À actérienne sel I+ surfactant se suu- N ombre --___'.; tant des petites 'sel (mI) sel' (m) (mi (m) cellules 1 -. 0 + 0t18 + 0,16 + 0,19 2 -- 0 +01,17 + 0t18 + 0119 3 - 0 + 0 20 + ' 0 20 + 0 19 4. _ 010 + 0119 + 0;22 + 02 0,1O 0,20 4H- 0150 + 0?21 + 0,19 + 0;20 6 - 0,50 + 0,20 + 0121 + 0;20 7 v 0,40 + 0,20 + 0 17 + 0;20 8 - 0110 + 0/19 + 0;21 + 0;20 9 01 + 0018 + 018+ 021 _ O + 021 + 0;20 + 0I19 Quantité distribuée 2,00 2,00 2 00 2,00 Quantité récupérée 1i60 1!93 1 92 (NOTE: + = positif, - = négatif) o0 ri oD 0% uL Comme l'a fait ressortir le tableau I, par comparaison du corps de coffret en matière plastique avec le corps de coffret revêtu d'un surfactant et d'huile siliconée, la quantité inoculée de suspension bactérienne est irrégulière pour le corps de coffret non traité, l'aptitude du corps du coffret à la conduite d'une culture étant ainsi affectée par l'irrégularité de quantité. En revanche, la quantité de suspension bactérienne inoculée de solution physiologique de sel contenant un surfactant ou l'application de surfactant et d'huile siliconée sur le coffret donne de meilleurs résultats en ce qui concerne la culture des bactéries. Dans le cas de C ci-dessus, c'est-à-dire le cas o la partie descendante du passage d'accès présentant la crête est en forme de H à sa base, on peut obtenir le même résultat en omettant l'application d'un revêtement d'une huile siliconée. Il ressort de la description donnée ci-dessus que, du fait que les étapes de l'utilisation du coffret de l'invention consistent à verser une quantité prédéterminée de suspension bactériennne dans la cellule correspondante, à maintenir la cellule horizontalement puis à incliner l'une de ses extrémités pour inoculer ainsi les petites cellules respectives par franchissement du passage d'accès présentant une crête, en exécutant simplement une seule opération, la bactérie se développe alors que le couvercle recouvre le coffret, ce qui permet donc d'effectuer la discrimination rapide des propriétés biochimiques des bactéries ou des micro-organismes en réaction à la nature des caractéristiques biochimiques que présente la petite cellule. REVENDICATIONS 1. Plateau destiné à l'identification de micro- organismes, caractérisé en ce qu'il comprend un corps 1 réalisé en matière plastique ou en verre et un couvercle 2, le corps 1 comportant sur toute sa surface une cellule longitudinale 3 destinée à recevoir une suspension bactérienne, plusieurs petites cellules 4 communiquant par un passage d'accès 5 présentant une crête avec la cellule 3 renfermant la suspension bactérienne. 2. Plateau pour l'identification de micro- organismes suivant la revendication 1, caractérisé en ce que la surface oblique au niveau du côté des petites cellules 4 respectives du passage d'accès 5 présentant une crête a une section transversale en U. 3. Plateau suivant la revendication 1, caractérisé en ce que la portion d'accès du passage 5 présentant la crête comprend une cloison s'étendant vers la cellule 3 de la suspension bactérienne en vue d'introduire uniformément ladite suspension dans les petites cellules 4 respectives dans la portion d'accès du passage 5 présentant la crête. 4. Coffret suivant l'une des revendications 1 et 2, caractérisé en ce qu'un surfactant hydrophile est appliqué sur la surface oblique de la cellule 3 à suspension bactérienne du côté du passage d'accès 5 à crête, et un surfactant hydrophobe et une huile siliconée sont appliqués ou imprimés sur la surface oblique opposée du côté de la petite cellule 4. 5. Coffret suivant la revendication 1, caractérisé -en ce que la portion présentant les petites cellules est obturée en vue de l'identification de bactéries anaérobies, la suspension bactérienne étant versée de la même façon, le corps du coffret est ensuite disposé verticalement et de la paraffine liquide *est déposée par le dessus de manière à cultiver ainsi les bactéries dans des conditions anaérobies. 6. Coffret suivant l'une quelconque des revendications 1 à 5, caractérisé en ce que chacune des il petites cellules 4 présente au mioins une dépression peu profonde.