Brevet FR2473723A2 — publié le 19810717

FR 2473723 A2 19810717 FR 8000583 A 19800111 Dispositif d'analyse simultanée La présente addition concerne un dispositif d'analyse, du type de ceux utilisant un support solide d'accrochage destiné à capter successivement une quantité d'un premier réactif tel qu'un liquide biologique (sérum ou plasma par exemple) contenant la substance à doser, puis une quantité d'un deuxième réactif contenant une protéine sur laquelle est fixé un indicateur biologique (par exemple un enzyme, ou un radio-isotope pour la radio-immunologie). On a décrit au brevet principal un dispositif d'analyse utilisant un support solide d'accrochage destiné à capter successivement une quantité d'un premier réactif tel qu'un liquide biologique contenant la substance à doser, puis une quantité d'un deuxième réactif contenant une protéine sur laquelle est fixé un indicateur biologique, caractérisé par le fait qu'il est essentiellement constitué d'un rotor d'analyse comportant d'une part une pluralité de cellules périphériques contenant chacune au moins une bille d'accrochage, et d'autre part des moyens permettant l'acheminement d'un liquide de lavage vers chaque cellule, chacune desdites cellules étant munie d'un orifice périphérique d'éjection de liquide, et présentant une portion supérieure munie d'un orifice d'admission d'un réactif et une portion inférieure recevant ledit réactif et dont le fond permet de remonter la bille sensiblement au niveau dudit orifice périphérique lorsque le dispositif est soumis à une centrifugation de façon à pouvoir rincer énergiquement ladite bille au moyen du liquide de lavage admis dans ladite cellule. On rappelle également que le dispositif d'analyse de l'invention peut présenter en outre l'une au moins des caractéristiques suivantes - les moyens permettant l'acheminement d'un liquide de lavage sont essentiellement constitués par un orifice central d'admission duquel partent des conduits radiaux reliant ledit orifice central à chacune des cellules périphériques ; de préférence, les conduits radiaux sont dans un plan essentiellement perpendiculaire à l'axe de rotation du dispositif, et débouchent dans chaque cellule sensiblement au même niveau que l'orifice périphérique d'éjection de liquide de ladite cellule, - les orifices d'admission d'un réactif sont équidistants de l'axe du rotor, - le fond de chaque cellule présente une allure générale inclinée déterminée de telle façon que d'une part la portion inférieure de la cellule présente un volume suffisant pour recevoir la bille et la quantité de réactif la recouvrant, et que d'autre part ladite bille soit guidée sensiblement jusqu'au niveau de l'orifice périphérique de ladite cellule lors de la centrifugation ; de préférence, les parois définissant la portion inférieure de chaque cellule permettent une analyse photométrique simultanée, - chaque cellule s'affine vers son bord périphérique extérieur de façon à favoriser le positionnement de la bille au niveau de l'orifice périphérique de ladite cellule, - le rotor est obtenu par superposition de deux portions coaxiales dont les bords périphériques en contact définissent directement les orifices périphériques des cellules. La présente addition se propose de perfectionner le dispositif décrit audit brevet principal. L'invention a donc pour but un dispositif d'analyse selon la revendication 1 du brevet principal, du type utilisant un support solide d'accrochage destiné à capter successivement une quantité d'un premier réactif tel qu'un liquide biologique contenant la substance à doser, puis une quantité d'un deuxième réactif contenant une protéine sur laquelle est fixé un indicateur biologique, dispositif essentiellement constitué d'un rotor d'analyse comportant d'une part une pluralité de cellules périphériques contenant chacune au moins une bille d'accrochage, et d'autre part des moyens permettant l'acheminement d'un liquide de lavage vers chaque cellule, chacune desdites cellules étant munie d'un orifice périphérique d'éjection de liquide, et présentant une portion supérieure munie d'un orifice d'admission d'un réactif et une portion inférieure recevant ledit réactif et dont le fond permet de remonter la bille sensiblement au niveau dudit orifice périphérique lorsque le dispositif est soumis à une centrifugation de façon à pouvoir rincer énergiquement ladite bille au moyen du liquide de lavage admis dans ladite cellule, caractérisé en outre par le fait qu'il comporte une barrière disposée dans chaque cellule en regard dudit orifice périphérique d'éjection, ladite barrière étant apte à retenir des billes de très petites dimensions au cours de ladite centrifugation. D'autres caractéristiques et avantages de l'invention apparaitront plus clairement à la lumière de la description qui va suivre, donnée à titre illustratif mais nullement limitatif, en référence aux figures du dessin annexé, où - la figure 1 est une vue partielle en perspective illustrant un dispositif d'analyse conforme au brevet principal, - la figure 2 est une coupe axiale partielle montrant ltobtention du dispositif de la figure 1, - la figure 3 est une vue de dessus partielle du même dispositif, - les figures lIA et 4B illustrent le dispositif selon la présente addition ainsi que son fonctionnement. En référence aux figures 1 à 3, on rappelle que le dispositif d'analyse illustré, conforme au brevet principal est essentiellement constitué d'un rotor 1 comportant d'une part une pluralité de cellules périphériques 2 contenant chacune au moins une bille d'accrochage 3 classique (en polystyrène recouvert d'une protéine ayant des propriétés de type anti-corps), et d'autre part des moyens permettant l'acheminement d'un liquide de lavage vers chaque cellule.Plusieurs moyens sont possibles pour acheminer un liquide de lavage : on a illustré ici une possibilité particulièrement simpie et efficace en prévoyant un orifice central d'admission 4 duquel partent des conduits radiaux 5 reliant ledit orifice central à chaque cellule périphérique 2, lesdits conduits étant dans un plan essentiellement perpendiculaire à l'axe de rotation 6 du dispositif ; on pourrait aussi bien prévoir une gouttière annulaire à la place de l'orifice central 4, de laquelle partiraient des conduits de raccordement radiaux vers chaque cellule périphérique.Il est à noter que les conduits radiaux 5 sont ici définis par deux portions complémentaires formées sur chacune des deux parties 1A, 1B formant le rotor 1 (voir figure 2), mais que tout autre type de conduit serait envisageable, tel par exemple qu'un bord plat sur une partie du rotor (donc sa face interne) et une rainure sur l'autre partie. Chaque cellule 2 est par ailleurs munie d'un orifice périphérique d'éjection de liquide, ici défini directement par superposition des bords périphériques des deux portions coaxiales lA, 1B formant le rotor 1, et présente une portion supérieure munie d'un orifice 8 d'admission et dont le fond 9 permet de remonter par centrifugation la bille 3 sensiblement au niveau dudit orifice périphérique 7 lorsquè le dispositif est mis en rotation (cette dernière caractéristique tout à fait fondamentale sera expliquée plus loin au regard des figures lIA et 4B). L'homme de l'art choisira tout moyen pour la liaison et le positionnement respectif des deux portions 1A, 1B formant le rotor 1 on a illustré ici à titre d'exemple l'emploi d'une rainure annulaire 10 et de tétons de centrage 11, mais de nombreuses autres possibilités sont envisageables. Les caractéristiques du dispositif concernant en particulier la forme des cellules vont être rappelées en même temps que le fonctionnement dudit dispositif ainsi que l'objet de la présente addition, afin de mieux percevoir la fonction quelles remplissent En se référant à la figure lIA on voit que chaque cellule périphérique 2 du rotor 1 comporte une pluralité de petites billes 3 dont le diamètre est de l'ordre de 10 à 20 microns pratiquement. Par ailleurs, la référence 20 désigne une barrière apte à retenir les billes au cours de la rotation du dispositif, cette barrière étant encastrée ou collée dans des échancrures aménagées dans les portions 1A et 1B formant le rotor 1. Avantageusement, une telle barrière est du type filtre moléculaire. En conséquence chaque cellule périphérique 2 munie de ses billes associées 3 (les billes de chaque cellule pouvant correspondre à un dosage particulier) est disposée (comme décrit au brevet principal) sous un dispositif d'alimentation, de façon à injecter dans chaque cellule par son orifice 8, un volume (de préférence calibré) d'un premier réactif tel que sérum, plasma ou tout autre liquide biologique contenant la substance à doser ; après cette injection, qui peut être obtenue par exemple en faisant successivement tourner le rotor de l'angle correspondant pour placer chaque orifice 8 sous le dispositif d'alimentation, on laisse reposer pendant le temps d'incubation nécessaire. Il est à noter que le fond 9 de chaque cellule présente un volume suffisant pour recevoir les billes 3 et le réactif sans que le niveau de celui-ci atteigne les conduits 5. En référence à la figure 4B, le rotor 1 est mis en rotation par des moyens d'entratnement saillants 13 tout à fait classiques (figure 2), et on injecte du liquide de lavage par l'orifice central 4 (figures précédentes) : pour chaque cellule, la centrifugation a pour effet d'éjecter l'excès de réactif par l'orifice périphérique 7, et de déplacer les billes 3 jusqu'à ce qu'elles soient arrêtées par la barrière 20 grâce au fond 9 d'allure générale inclinée.En outre, le liquide de lavage, dont la bonne répartition peut être favorisée par la présence d'une protubérance centrale 14, passe par les conduits radiaux 5, et vient laver énergiquement les billes 3 dont la position est tout à fait favorable sous l'effet de la centrifugation, grâce en particulier à la forme de préférence affinée vers la périphérie pour chaque cellule, ledit liquide s'échappant par les orifices périphériques 7 après avoir entouré les billes (en les faisant d'ailleurs tourner sur elles-mêmes). Ces opérations sont ensuite réitérées avec le deuxième réactif, qui contient une protéine sur laquelle est fixé un indicateur biologique tel par exemple qu'un enzyme ou un radio-isotope. Alors, une fois le rotor arrêté, les billes de chaque cellule redescendent et sont prêtes à servir pour une analyse simultanée (les parois définissant la portion inférieure des cellules étant prévues pour une telle analyse), analyse directe avec un compteur si l'on utilise des radio-isotopes, ou indirecte si l'on utilise en plus un réactif coloré et éventuellement un réactif de stoppage de réaction. Le dispositif selon la présente addition présente bien entendu les avantages mis en lumière au brevet principal. Il faut cependant noter que la présence de nombreuses billes de faible diamètre permet d'augmenter notablement la surface d'accrochage du réactif et la fiabilité. Il va de soi que l'invention n'est nullement limitée aux exemples qui en ont été donnés à titre purement illustratif, mais comprend toute variante reprenant avec des moyens équivalents la définition générale figurant aux revendications. REVENDICATIONS 1/ Dispositif d'analyse selon la revendication 1 du brevet principal, du type utilisant un support solide d'accrochage destiné à capteur successivement une quantité d'un premier réactif tel qu'un liquide biologique contenant la substance à doser, puis une quantité d'un deuxième réactif contenant une protéine sur laquelle est fixé un indicateur biologique, dispositif essentiellement constitué d'un rotor d'analyse comportant d'une part une pluralité de cellules périphériques contenant chacune au moins une bille d'accrochage, et d'autre part des moyens permettant l'acheminement d'un liquide de lavage vers chaque cellule, chacune desdites cellules étant munie d'un orifice périphérique d'éjection de liquide, et présentant une portion supérieure munie d'un orifice d'admission d'un réactif et une portion inférieure recevant ledit réactif et dont le fond permet de remonter la bille sensiblement au niveau dudit orifice périphérique lorsque le dispositif est soumis à une centrifugation de façon à pouvoir rincer énergiquement ladite bille au moyen du liquide de lavage admis dans ladite cellule, caractérisé en outre par le fait qu'il comporte une barrière disposée dans chaque cellule en regard dudit orifice périphérique d'éjection, ladite barrière étant apte à retenir des billes de très petites dimensions au cours de ladite centrifugation. 2/ Dispositif selon la revendication 1, caractérisé par le fait que ladite barrière est du type filtre moléculaire. 3/ Dispositif selon l'une des revendications 1 ou 2, caractérisé par le fait que lesdites billes présentent un diamètre compris entre 10 et 20 microns sensiblement.