Brevet FR2468609A1 — publié le 19810508

' - 1 - La présente invention se rapporte à un procédé de pré- paration de l'acide 6-D- & -amino-p-hydroxyphénylacétamido péni- cillanique, qui est un antibiotique généralement connu sous le nom d'amoxicilline. L'amoxicilline est un produit déjà bien connu par un brevet anglais n 978.178. Suivant ledit brevet, l'amoxicilline est préparée par synthèse de l'acide 6-aminopénicillanique (cour- ramment désigné sous le nom de 6-APA) avec l'anhydride mixte for- mé par réaction du chloroformate d'éthyle avec la O,N-dibenzylo- xycarbonyle-p-hydroxy phénylglycine et l'élimination ultérieure des groupes protecteurs par hydrogénation catalytique. Il existe de nombreux autres procédés de production de l'amoxicilline qui sont de peu d'intérêt du point de vue écono- mique. Le brevet belge n 737.848 décrit la synthèse de l'amo- xicilline à partir de 6-APA et de l'anhydride mixte obtenu par un sel de Dane de la p-hydroxyphénylglycine et de l'éthyle chloro- formate Les produits intermédiaires qui sont formés dans cette réaction sont isolés. Il n'est pas possible de calculer les ren- dements totaux d'amoxicilline. Un procédé analogue est décrit dans la demande de brevet allemand publiée DOS 2.520.647, o grâce à l'emploi d'un catalyseur tel que l'hydrochlorure de diméthylacé- tamide, on obtient des rendements allant jusqu'à 78%. Aucune mention n'est toutefois faite concernant la pureté du produit final. Le brevet britannique n 1.241.844 illustre un procédé dans lequel le groupe aminique de la p-hydroxyphénylglycine est protégé au moyen du groupe carbobenzyloxy et l'emploi d'hydro- chlorure de p-hydroxyphénylglycine chlorure par une réaction avec 6-APA en phase aqueuse; les rendements ne sont pas indiqués. Suivant le brevet américain n 3.980.637, on utilise d'autre part l'hydrochlorure de p-hydroxyphénylglycine chlorure avec le dérivé mono et disilyl de 6-APA dans un solvant organique. Les rendements sont élevés, mais l'amoxicilline ainsi obtenue doit être purifiée par des résines du fait de l'emploi de diméthylaniline. Le procédé décrit dans le brevet américain n 4.127.571 utilise également l'hydrochlorure de p-hydroxyphényl-glycine chlorure, en réaction avec le 6-APA O,N-bisubstitué avec des - 2 - dérivés cycliques du bore. Le brevet européen n 1.133 décrit un procédé dans lequel on fait réagir le dérivé silyle de 6-APA avec un anhydride mixte d'un sel de Dane de la p-hydroxyphényl- glycine avec l'aide d'un mélange de solvants et de co-solvants. Comme co-solvants, on indique la diméthylformamide, le sulfolane, le tétrahydrofurane, le N-méthylpyrrolidone, le 1,4- dioxane, l'acétonitrile, le diméthylacétamide et le tétraméthy- lurée. Le produit final (amoxicilline) obtenu par le procédé con- forme audit brevet européen présente des impuretés qui résultent de l'emploi du dérivé silyle de 6-APA (telles que l'hexaméthyl- disiloxane), qui sont très difficiles à éliminer par suite de leur insolubilité dans l'eau. Les auteurs de la présente demande, afin de supprimer les inconvénients mentionnés ci-dessus, ont essayé de remplacer le dérivé silyle de 6-APA par d'autres dérivés de 6-APA sans obtenir de résultats appréciables. Parmi ces dérivés du 6-APA, les deman- deurs ont utilisé les dérivés au bore du 6-APA (décrits dans le brevet américain 4.127.571 et la demande de brevet italien no 26.865 A/79) mais les rendements obtenus n'ont pas présenté un intérêt industriel quelconque. On a alors trouvé d'une manière surprenante, que si, au lieu d'utiliser le mélange de solvants et de co-solvants décrit dans le brevet européen, on fait réagir un dérivé au bore du 6-APA avec un anhydride mixte d'un sel de Dane de P-hydroxyphénylglycine préparé dans un solvant pris dans le groupe comprenant le diméthyl- formamide utilisé seul, et le diméthylsulfoxyde en mélange avec le chlorure de méthylène et le chloroforme, on obtient des rendements élevés pour le produit final, qui peut être isolé à l'état très pur. La présente invention concerne donc un procédé de pro- duction de l'acide 6-D-d--amino-p-hydroxyphényl-acétamido pénicil- lanique, caractérisé par le fait qu'on fait réagir un dérivé au bore du 6APA de formule: R-NH-Ch__Ch/ / H3 1 _\ C c- N / IjI CHMCH 0 CH () COOB -O (CH2)n -3- dans laquelle R est -H ou -B (CH2)n et n est 2 ou G'O'(C2)net n est 2 ou 3, avec une quantité au moins équimolaire d'un agent acylatant dérivé de la D(-)-p-hydroxyphénylglycine de formule (II): ?I il HO \_CH-C-O-C-OR1 NH (II) /C% CH3 CH-COR2 dans laquelle R1 est un radical alkyle tel que le méthyle, l'éthyle et l'isobutyle et R2 est un radical alkoxy, tel que le méthoxy et l'éthoxy, dans un solvant pris dans le groupe composé du diméthylformamide seul et du diméthylsylfoxyde avec du chlorure de méthylène et du chloroforme, le mélange de réaction est hydro- lysé avec de l'eau en donnant deux phases; le groupe énaminique est enlevé par abaissement du pH du mélange de réaction à une valeur comprise entre 0,8 et 1,8 par addition d'une solution aqueuse d'un acide, à partir de la solution aqueuse comprenant del' hydrochlorure d'amoxicilline, le trihydrate d'axocilline étant isolé par des techniques connues. Les composants de la formule (I) sont préparés suivant les procédés décrits dans le brevet américain 4.127.571 et la demande de brevet italien n 26.865 A/79. Les dérivés de la p-hydroxyphénylglycine de formule (II) sont connus en soi et sont décrits dans le brevet belge n 737.848. De préférence, ils sont préparés en conformité avec le procédé décrit dans le brevet européen n 1.133, suivant lequel on fait réagir le sel de Dane correspondant de la D(-)-p-hydroxy- phénylglycine (sélectionné à partir de ceux qui sont formés par condensation de la p-hydroxy-phénylglycine avec de l'acétoacétate de méthyle ou avec de l'acétoacétate d'éthyle), avec un chloro- formate pris dans le groupe composé du chloroformate d'éthyle, du chloroformate de méthyle, et du chloroformate d'isobutyle, en presence de N-méthylmorpholine ou de N,N-diméthylbenzylamine comme catalyseurs. L'enlèvement du groupe énaminique portecteur à la fin de la réaction, s'effectue en utilisant l'acide chlorhydrique - 4 - de concentration environ 37%. Les phases sont séparées et la phase aqueuse contenant le chlorhydrate d'amoxicilline en solution est purifiée. A partir de la phase aqueuse purifiée, le trihydrate d'amoxicilline est isolé par précipitation par l'addition d'une base minérale telle que l'hydroxyde d'ammonium dilué, l'hydroxyde de sodium dilué ou l'hydroxyde de potassium dilué, jusqu'à ce que le pH du mélange atteigne une valeur de 4,7 à 5,2. Le produit résultant est alors filtré, lavé et séché à l'air. L'un des avantages du procédé de l'invention réside dans le degré élevé de pureté du produit obtenu; en fait, les produits dérivés de l'hydrolyse des esters du bore sont extrêmement solu- bles dans l'eau. Un autre avantage consiste dans le fait qu'on obtient une transformation de l'amoxicilline présente dans la solution d'environ 97% et un rendement en amoxicilline, après isolement, d'environ 84%, ces rendements étant ainsi plus élevés que ceux obtenus dans les procédés connus. En outre, par rapport aux autres brevets qui utilisent l'hydrochlorure de p-hydroxyphénylglycine chlorure qui est très cher et instable (il n'autorise pas de longues périodes de sto- ckage) le procédé de la présente invention à l'avantage d'utiliser les sels de Dane de la p-hydroxyphénylglycine, qui sont stables et qui peuvent être emmagasinés pour des périodes longues. L'invention sera mieux comprise à l'aide d'un certain nombre d'exemples donnés à titre illustratif. Exemple 1 a) Préaration d'un acétate d'éthoxy carbonle D-:_-:1-carbometho- xyeBo9e!yl:}amino-:hdrexEheny!e_(deformule IIl. Dans un flacon à fond rond de 2 l. on charge 37,4 g. (0,123 moles) du sel de Dane de potassium méthyle de p-hydroxyphé- nylglycine dans 220 ml de CH2CI2 (K.F. 0,0015%); on ajoute 26 ml. de diméthylsulfoxyde (DMSO) et, en agitant, on refroidit le mélange à 40 C. On ajoute alors 13,9 g. de chloroformate d'éthyle et 0,35 ml de N-méthylmorpholine. L'exothermie de la réaction est maintenue dans la limite de -35 C et on laisse le mélange réagir à -35 C pendant deux heures. Le mélange de réaction est refroidi à -50 C. - 5 - b) Prëparation d'une suspension d'ester de bore du 6-APA dans un solvant Dans un flacon à fond rond on place 266 ml. de CH2Cl2 anhydre (K. F. 0,0015%); le solvant est refroidi à -50 C et l'on ajoute, à cette température, 80 g. du produit obtenu en conformité avec le procédé décrit dans la demande de brevet italien No 26.865 A/79, contenant un intermédiaire 6-APA égal à 26,6 g. de base 6-APA titré HPLC; On note à l'analyse I.R. la disparition de la bande carboxylique à 1600 nm. c) Préparation de l'amoxicilline Le mélange (b), refroidi à -50 C, est additionné aussi vite que possible à la suspension de l'anhydride mixte obtenu dans (a); l'exothermie est maintenue à l'intérieur de -50 C et le-mé- lange est maintenu à cette température pendant 1 heure. 1 ml de mélange de réaction est retiré et hydrolysé avec une solution de 4 ml H20 et 1 ml d'acétone; on place 30 - 50 - 1Os1l de la solu- tion sur une plaque de gel de silice GF 254 aveccomparaison de l'amoxicilline et du 6-APA. L'élution s'effectue dans CH3-CN 20 ml: H20 3,5 ml: HCOOH 2ml. La plaque est développée avec de laninhydrine puis on note l'apparition d'une tache d'amoxicilline et l'absence de 6- APA non réagi. A la fin de la condensation, on ajoute un mélange de 133 ml H20 et 40 ml d'acétone; puis à 0 C, on ajoute goutte à goutte une solution HCl (concentration 37%) pour hydrolyser l'- énamine à un pH constant dans la gamme de i à 1,3; après 1 heure, à pH constant, les deux phases se séparent. La phase organique est extraite de nouveau à un pH de 1 à 1,3 avec un mélange de 133 ml H20 et 40 ml d'acétone. Les phases aqueuses combinées contenant l'amoxicilline sont filtrées et l'amoxicilline est déterminée par HPLC et micro- biologiquement. Le résultat s'avère égal à 95% du produit théorique. Par cristallisation aux moyens de techniques connues on obtient 42,3 g. de trihydrate d'amoxicilline ayant une pureté microbio- logique de 847 mcg/mg, avec un rendement de 82%. Exemple 2: a) Préparation d'acétate d' éthoxn carbon lae 4D- 1-carbométhoxy- Dans un flacon à fond rond on charge 42,2 g. (0,1388 - 6 - moles) de sel de Dane du méthyle de potassium de la p-hydroxyphé- nylglycine dans 250 ml de CH2Cl2 anhydre (K.F. 0,0015%); on ajoute alors 30 ml de DMSO et, tout en agitant, le mélange est refroidi à -40 C. On ajoute ensuite 15,7 g. (0,144 moles) de chloroformate d'éthyle et 0,4 ml de N-méthylmorpholine. L'exothermie est maintenue à -50 C et on laisse réagir le mélange de réaction à -35 C pendant 2 heures. Le mélange de réaction est alors refroidi à -50 C. b) Préearation de l'ester de bore de 6-APA (de formule I). Dans un flacon à fond rond on introduit 300 ml de CH2 C12 anhydre (K.F. 0, 0015%); on ajoute alors 30 g. (0,1388 moles) de 6-APA à la température ambiante, puis 28,05 g. (0,277 moles) de TEA et le mélange est agité à la température ambiante pendant 1 heure. Le mélange est alors refroidi à 50 C, pendant 30 minutes; on ajoute goutte à goutte une solution de chlorure de méthylène contenant 29,49 g. de chloroboronate d'éthyle (256 ml contenant 11,52 g/100 ml). A la fin de l'addition, le mélange est laissé à -50 C pendant 2 heures. Sur une petite partie aliquote on effectue alors le contrôle I.R. qui montre la disparition de la bande carboxy à 1600 nm. c) Prê2aration d'amoxicilline Le mélange de réaction obtenu en (b), refroidi à -500C, est additionné aussi vite que possible à la suspension de l'anhy- dride mixte préparée dans (a). L'exothermie est maintenue à -35 C et le mélange de réaction est maintenu à cette température pen- dant 1 heure. On effectue alors un TLC en suivant la technique décrite dans l'exemple 1 (c), détectant la présence d'amoxicilline et l'absence de 6-APA non-réagi. A la fin de la condensation, on ajoute un mélange prérefroidi à 0 C, de 150 ml de H20 et 45 ml d'acétone et à 0 C l'énamine est hydrolysée par addition de 37% de HCl pour abaisser le pH à une valeur constante comprise entre 1 et 1,3. Le mélange est alors laissé à l'état d'agitation pendant 1 heure à pH constant. Les phases sont séparées et la phase organique est ex- traite de nouveau à une valeur de pH comprise entre 1 et 1,3, avec un mélange de 150 ml H20 et 45 ml d'acétone. Les phases aqueuses sont combinées et filtrées. Le volume exact est mesuré et sur une petite partie aliquote, on effectue un titrage HPLC. Dans la solution sont présents 56,7 g., ce qui équivaut à un rendement théorique de 97,5%, valeur qui est également confirmée microbiologiquement. Aux eaux riches refroidies à 00C, on ajoute une solution de 10% NaOH pour ajuster le pH à une valeur comprise entre 5 à 5,2. L'ensemencement s'effectue pour commencer la phase de cristallisation et, une fois que la cristallisation est termi- née, le mélange est laissé pendant 5 heures sous agitation. Le précipité est enlevé par filtrage, lavé avec 100 ml H20: acétone= 1: 1, puis avec de l'acétone. Aprés dessication sous vide, on obtient 48,3 g., équivalent à un rendement théorique de 83%, avec une pureté micriobiologique de 845 mcg/mg. ú-' En préparant l'anhydride mixte du sel de Dane (formule Il) décrit dans le paragraphe (a) en utilisant seulement CH2Cl2, on n'obtient pas la formation de l'anhydride mixte. Il n'est pas possible de conduire une telle réaction dans DMSO seul, du fait qu'à une température de 18'C, il se soli- difie et il est ainsi impossible d'obtenir les températures basses nécessaires pour la synthèse. Pour la synthèse, il est nécessaire d'avoir une température de -500C et, pour obtenir ce résultat, il est donc nécessaire de mélanger le DMSO avec un solvant qui em- pêchera sa solidification. On a trouvé que pour cet usage, on pouvait se servir de chlorure de méthylène et de chloroforme. Exemple 3 On utilise le même procédé qu'à l'exemple 2, à l'ex- ception du fait que, dans la phase (a), on utilise 20 ml de DMSO au lieu de 30 ml. Le produit final est cristallisé à partir de la solution aqueuse en refroidissant à 0 C et en amenant le pH entre 5 à 5,2 avec 10% d'une solution de KOH. La cristallisation est ob- tenue par ensemencement avec 0,1 g. du produit et on laisse cris- talliser la solution à 0 C. pendant 5 heures. Le résultat solide est filtré, lavé avec 100 ml d'eau: acétone (1: 1), puis avec ml d'acétone. Ensuite, le résidu est séché à 400C dans un - 8 - four à air en obtenant 48,8 g., ce qui est égal à 84% du rende- ment théorique, d'amoxicilline ayant une pureté de 98,8%, titrée par la voie mercuriométrique,-FC__D = +302 à l'état sec, KF 13,8%. Exemple 4 On utilise le même procédé qu'à l'exemple 2, à l'exception du fait qu'à la phase (a) on utilise 36 ml de DMSO au lieu de ml. Le produit est isolé par cristallisation pour donner 46,2 d'amoxicilline, ce qui correspond à un rendement de 79,5% du rendement théorique, avec une pureté mesurée microbiologiquement de 846 mcg/mg, K.F. 14,1%. /---- D = +300 à l'état sec. Exemple 5 a) Preparation d'acétate de 2-éthoxycarbonïl _ Dans un flacon à fond rond de 2 1., on charge 44,31 g. (0,145 moles) de sel de Dane de potassium méthyle de p-hydroxy- phénylglycine dans 250 ml de chlorure de méthylène anhydre (KF. 0,0015%); on ajoute alors 30 ml de DMSO et, tout en agitant à -25 C, on ajoute 16,5 g. (0,152 moles) de chloroformate d'éthyle et 0,4 ml de Nméthylmorpholine. L'exothermie est maintenue à -20 C. Le mélange de réaction est alors maintenu à -20 C pendant 1 heure, puis refroidi à -50 C. b) Préparation de l'ester au bore de 6-APA (de formule I) On utilise le même procédé et les mêmes quantités stoé- chiométriques qu'à l'exemple 2, partie (b). c) Préparation de trihydrate d'amoxicilline On utilise le même procédé qu'à l'exemple 2, partie (c). Les eaux riches sont titrées au moyen de HPLC et micro- biologiquement l'on obtient 56,1 g., ce qui correspond à 96,5% du rendement théorique. A la cristallisation, on obtient 47,7 g. d'amoxicilline, ce qui correspond à 82% du rendement théorique, avec une pureté de 98,8%, déterminée par HPLC et microbioligi- quement, de 851 mcg/mg, K.F. 13,8%/: S= +302 à l'état sec. Exemple 6 a) Pr 2tiondu _dh!actate de l'éthoxy carbonyle! D;k1! carbométhox prE9 nyle!-amino:9: ydr xy_(formule II). Dans un flacon à fond rond de 2 1., on charge 46,4 g. (0,152 moles) de sel de Dane de potassium méthyle de p-hydroxy- - 9 - phénylglycine dans 250 ml de chlorure de méthylène anhydre (K.F. 0,0015%); on ajoute alors 30 ml de DMSO et, sous agitation, le mélange est refroidi jusqu'à -30 C. On ajoute ensuite 17,269. (0,159 moles) de chloroformate d'éthyle et 0,4 ml de N-méthyl- morpholine. L'exothermie est maintenue à -25 C et le mélange de réaction est maintenu à -25 C pendant 1 heure. Le mélange de réac- tion est alors refroidi à -50 C. b) Préearation de l'ester au bore de 6-APA (de formule I) On utilise le même procédé qu'à l'exemple 2, partie (b). c) Prê2aration de trihydrate d'amoxicilline On utilise le même procédé qu'à l'exemple 2, partie (c). Les eaux riches en produit, titrées dans HPLC, contiennent 56,4 g. d'amoxicilline, ce qui correspond à 97% du rendement théorique. On isole le trihydrate d'amoxicilline (47,2 g.), ce qui correspond à 81,5% du rendement théorique, avec une pureté, mesurée par des techniques connues, de 98,7%. Exemple 7 a) Préearation du _henyl_ acétate de l'éthoxy carbonyle D-o t1-carbométh oro 2nyle1:amino-2:hydroxy {de formule Il). Dans un flacon à fond rond, on charge 42,2 g. (0,1388 moles) de sel de Dane de potassium méthyle de p-hydroxyphényl- glycine dans 90 ml de diméthylformamide anhydre (DMF.) Le mélange est refroidi à -40 C et l'on ajoute 15,7 g. de chloroformate d'éthyle et 0,4 ml de N-méthylmorpholine. L'exothermie est main- tenue à -35 C et l'on laisse le mélange réagir à -35 C pendant 2 heures. Le mélange de réaction est alors refroidi à -50 C. b) PréEaration de l'ester au bore 6-APA- de formule _I) Pour la préparation de cet ester on utilise le même pro- cédé et les quantités décrites à l'exemple 2, partie (b). c) Pré2aration du trihydrate d'amoxicilline A la suspension préparée en (a), refroidie à -50 C, on ajoute aussi rapidement que possible le mélange de réaction pré- paré en (b). L'exothermie est maintenue à -25 C et le mélange est maintenu à -25 C pendant 1 heure. On retire alors 1 ml de la suspension qui est hydrolysé avec 5ml de H20: acetone (4: 1). On effectue un test TLC suivant la technique décrite à l'exemple 1. Avec de la ninhydrine on détecte la présence d'amoxicilline et on vérifie l'absence de 6-APA non réagi. Le mélange de réaction - 10 - est traité en suivant la même technique et avec les mêmes quanti- tés qu'à l'exemple 2 (c). La solution des eaux riches contenant le produit, titrée au moyen de HPLC, se révèle contenir 56,4 g. d'amoxicilline, ce qui équivaut à 97% du rendement théorique. A partir de ces eaux riches, on obtient par cristalli- sation 48,8 g., ce qui équivaut à 83,8% du rendement théorique, avec les caractéristiques analytiques suivantes: K.F. = 13,8% i'g _D = +302 à l'état sec. Titre spectrophotométrique = 98,8%, à l'état sec. Titre microbiologique = 851 mcg/mg. Exemple 8 On utilise le procédé de l'exemple 2, à l'exception du fait qu'à la phase (a) on utilise 220 ml de chloroforme au lieu de 250 ml de CH2Cl2. Les eaux riches sont refroidies à 0 C. On obtient, par cristallisation, 46,8 g. de trihydrate d'amoxicilline, ce qui cor- respond à un rendement de 80,5% du rendement théorique. Exemple 9 a) Préearation du _hénl acétate d'éthoxy carbonyle D_:o meth x_9Dylamin d formule II). Dans un flacon à fond rond de 2 1. on charge 250 ml. de CH2Cl2 anhydre (K. F. 0,0015%) et 44,3 g. (0,145 moles) de sel de Dane de potassium méthyle de p-hydroxyphénylglycine. En agitant, on ajoute 30 ml de DMSO et le mélange est refroidi à -40 C. On ajoute alors 16,5 g. (0,151 moles) de chloroformate d'éthyle et 0,4 ml de N-méthylmorpholine. L'exothermie est maintenue à -35 C et le mélange est alors laissé réagir à -35 C pendant 2 heures. Le mélange de réaction est ensuite refroidi à -50 C. b) Pré2aration de l'ester au bore de 6-APA de formu le I). Dans un flacon de réaction à fond rond on introduit 300 ml de CH2Cl2 anhydre (K.F. 0,0015%) et on ajoute alors 30 g. (0,1388 moles) de 6-APA et 25,15 g. (0,249 moles) de TEA à la température ambiante. On laisse le mélange à la température am- * biante pendant 1 heure. On le refroidit alors à -45 pendant une période de 30 minutes; on ajoute, goutte à goutte, une solution de 26,5 g. (0,249 moles) de chlorobonate d'éthylène dans du chlo- rure de méthylène (230 ml contenant 11,52 g/100 ml). - 11 - A la fin de l'addition, le mélange est laissé pendant 2 heures à -45 C. Sur une petite partie aliquote de celui-ci, on effectue un contrôle I.R. qui montre la disparition de la bande carboxy à 1600 nm. c) Préparation de trihydrate d'amoxicilline On suit la même technique et l'on utilise les mêmes quantités qu'à l'exemple 2, partie (c). Les eaux riches titrées par HPLC contiennent 55,3 g. de trihydrate d'amoxicilline, ce qui équivaut à 95% du rendement théorique. Par cristallisation, on obtient 47,3 g., ce qui équivaut à 81,3% du rendement théo- rique, avec une pureté, mesurée spectrophotométriquement, de 99,2% K.F. 14,2%. Exemple 10 a) Préparationde hvnylacétate d'éthoxy carbonvl e D-i - -carbo- - ---xXrEéyepténïl etated'ox(ehoxqrmule ------- I) On le prépare en utilisant les mêmes techniques et quan- tités qu'à l'exemple 9, partie (a). b) Préparation de l'ester au bore de 6-APA fde formule I1 Dans un flacon de réaction à fond rond on introduit 300 ml de CH2Cl2 anhydre (K.F. 0,0015%) et on ajoute 30 g. (0,1388 moles) de 6-APA et 21 g. (0,207 moles) de TEA à la tempé- rature ambiante. Le mélange est maintenu à la température ambiante pendant 1 heure. Il est alors refroidi à une température de -50 C, pendant une période de 30 minutes; l'on ajoute goutte à goutte une solution de 22,12 g. (0,208 moles) de chloroborate d'éthylène dans le chlorure de méthylène (192 ml contenant 11,52 g/100 ml). A la fin de l'addition, le mélange est laissé à -50 C, pendant 2 heures. Le contrôle I.R. révèle la disparition de la bande carboxy à 166 nm. c) Préparation de trihXdrate d'amoxicilline Suivant la technique et en utilisant les quantités décrites à l'exemple 2, partie (c), on obtient 44,2 g. de trihy- drate d'amoxicilline cristallisée, ce qui équivaut à 76% du ren- dement théorique, avec une pureté microbiologique de 851 mcg/mg et K.F. 13,8%. Exemple 11 a) Preparyation du phényle acetate d'éthoxy carbonyle D- __ __ __ __ __ __x_n y le__a_ _ _ __i_ __ _ _ bomRé.thox.?rypényle) amino p-hydroxy (de formule II). La préparation s'effectue en utilisant la même - 12 - technique et les mêmes quantités qu'à l'exemple 9, partie (a). b) Pré2aration de l'ester au bore de 6-APA _de formule I1. En utilisant la technique décrite à l'exemple 2 (b), on obtient un ester au bore de 6-APA en utilisant 30 g. (0,1388 moles) de 6-APA, 30,84 g. (0, 304 moles) de TEA et 32,45 g. de chloroboro- nate d'éthylène dans le chlorure de méthylène (281 ml contenant 11,52 g/100 ml). c) Preparation de trihydrate d'amoxicilline En suivant la même technique et en utilisant les mêmes quantités qu'à l'exemple 2 (c), on obtient 46,5 g. de trihydrate d'amoxicilline, avec un rendement de 80% du rendement théorique et avec une pureté mesurée microbiologiquement de 852 mcg/mg, K.F. 13,3%, t--TD = +300 à l'état sec. Exemple 12 a) PrépEaration de _hén@le acetate d' éthoxy carbonle-D-: -_l -car- bométhoxy propényl1 aino_.:-ydroxyI(deformule Il. On le prépare en utilisant la même technique et les mêmes quantités qu'à l'exemple 9 (a). b) Préparation d'ester au bore de 6-APA lde formuleI1 De la même manière décrite à l'exemple 2 (b), on obtient l'ester au bore de 6-APA en utilisant 30 g. (0,1388 moles) de 6-APA, 26,6 g. (0,263 moles) de TEA et 26,5 g. (0,249 moles) de chloroboronate d'éthylène dans le chlorure de méthylène (230 ml contenant 11,52 g/100 ml). c) PrépEaration de trihydrate d'amoxicilline En suivant la même technique et en utilisant les mêmes quantités qu'à l'exemple 2 (c), on obtient 46,8 g. de trihydrate d'amoxicilline avec un rendement de 80,4% du rendement théorique et une pureté, mesuré spectrophotométriquement de 98,7% et K.F. 14%. En reproduisant les mêmes procédés qui ont été décrits ci-dessus, mais en utilisant comme solvants, pour la préparation du produit de formule (II) décrite dans la partie (a), des mélan- ges de solvants et de co-solvants décrits dans le brevet européen n 1. 133, à la place de DMSO+CH2Cl2, on obtient des rendements beaucoup plus faibles, de l'ordre d'environ 40%, à la seule ex- ception du mélange de diméthylformamide et de chlorure de méthy- lène; dans ce cas, c'est le diméthylformamide qui favorise la réaction (voir exemple 7) du fait que le chlorure de méthylène - 13 - est un solvant inerte. En conformité avec les exemples qui précèdent, on ob- tient un trihydrate d'amoxicilline dont les caractéristiques analy- tiques sont les suivantes: Apparence: poudre blanche cristalline. I.R.: identification positive en comparaison avec un étalon. Humidité: (K.F.) 13,3%. pH (100 mg/ml): 4,9 titre HPLC: 99,5% b.w. (à l'état sec) titre amino: 99% b.w. titre jodométrique: 98,8% b.w. titre acide: 101% titre spectrophotométrique: 99,1% b.w. rotation spécifique:L_20: + 3030 b.w. trans-mittance (1% HCl 1N 400 mA): 85% b.w. Solvants déterminés pour GLC: Diméthylaniline (non décelable) Chlorure deméthylène (0,08%) Acetone (0,1%) Triéthylamine (0,03%) titre microbiologique: 855 mcg/mg. stabilité 65 x 7 jours: 845 mcg/mg toxicité: non toxique. - 14 - REVENDICATIONS 1. Procédé de fabrication de l'acide 6-D- i -amino-p- hydroxyphénylacétamido pénicillanique, dans lequel, dans des conditions anhydres et à une température comprise entre -20 C et -60 C, on fait réagir un composé de formule: R-NH-CV7H C / - / CH (I) COOB.. / (CH2)n dans laquelle R est -H ou -B. \ 7(CH2)n et n est 2 ou 3, avec un 2n composé de formule: O HO J- I--OR - CH-O-C-OR1 INH (I) CH3 CH-COR2 dans laquelle R1 est un radical alkyle et R2 est un radical alkoxy, dans un solvant pris dans le groupe composé du diméthylformamide seul et du diméthylsulfoxyde en mélange avec du chlorure de méthy- lène ou du chloroforme, le mélange de réaction obtenu étant traité comme suit: a) le mélange est hydrolisé avec de l'eau pour obtenir deux phases; b) le pH du mélange de réaction est abaissé à environ 0,8 à 1,8 par addition d'une solution aqueuse d'un acide pour enlever le groupe anaminique; c) la phase aqueuse est séparée et traitée par des moyens connus pour transformer l'hydrochlorure d'amoxicilline qu'elle contient en trihydrate d'amoxicilline, et - 15 - d) le produit résultant est isolé. 2. Procédé suivant la revendication 1, caractérisé en ce que la solution acide aqueuse est une solution d'acide chlorhy- drique à une concentration d'environ 37%. 3. Procédé suivant la revendication 1, caractérisé en ce que la température à laquelle le composé de formule (I) réagit avec le composé de formule (II) est d'environ -350C. 4. Procédé suivant la revendication 1, caractérisé en ce que R1 est un radical pris dans le groupe composé du méthyle, de l'éthyle et de l'isobutyle. 5. Procédé suivant la revendication 1, caractérisé en ce que R2 est un radical pris dans le groupe composé du méthoxy et de l'éthoxy.