Brevet FR2464964A1 — publié le 19810320

La présente invention concerne de nouveaux concentrés de stérols de couleur claire, un procédé pour leur préparation à partir de résidus de la transformation industrielle des huiles et/ou graisses animales et/ou végétales, et leur utilisation dans la transformation des stérols, par fermentation, en produits de valeur, en particulier des produits intermédiaires de la préparation de stéroïdes. Il existe un besoin croissant en produits intermédiaires de la préparation des stéroides destinés eux-mêmes à la préparation de substances pharmaceutiques actives. Ce besoin est couvert en proportions croissantes par des produits de dégradation de stérols obtenus par fermentation. Jusqu'à maintenant, pour une telle dégra- dation microbienne, on utilisait les stérols à l'état pur ou à l'état très fortement enrichi. L'adjonction d'agents émulsionnants permet de veiller à une répartition appropriée des stérols dans la solution aqueuse nutritive. Il faut être sûr que les produits d'accompagnement des stérols non seulement provoquent l'homogénéisation recherchée du milieu nutritif, mais ne gênent pas la croissance des micro- organismes, ni la dégradation recherchée des stérols. La préparation à l'état pur de stérols d'origine natu- relle à partir d'huiles et/ou graisses végétales et/ou animales dans lesquelles ils existent, à l'état de produits d'accompagnement, à faible concentration, constitue une opération pénible et coûteuse. Selon le brevet britannique n0 489.623, on soumet des huiles ou graisses naturelles à la distillation moléculaire. On obtient une fraction enrichie en stérol à partir de laquelle on peut isoler le stérol au moyen de solvants sélectifs, le cas échéant après saponification des produits d'accompagnement contenus dans cette fraction. Le brevet britannique n0 493.948 traite également, entre autres, de la distillation de stérols sous haut vide. Dans ce brevet, on propose d'ajouter à la distillation des agents d'entral- nement qui bouillent dans le même intervalle que les stérols et passent avec eux. Il faut que l'agent d'entraînement puisse être ensuite séparé des stérols par des procédés physiques ou chimiques. Un procédé analogue est décrit dans le brevet des Etats-Unis d'Amérique n0 2.146.894. Dans ce procédé, pour faciliter la distil- lation sous vide des substances naturelles à haut point d'ébullition, on utilise des agents d'entraînement d'origines les plus variées et on cite par exemple des acides gras, des esters tels que des phtalates aliphatiques, le phtalate de benzyle, le tétrapropionate du diglycérol, des fractions d'huiles minérales, des terpènes et d'autres encore. Dans ce procédé également, on prévoit de séparer l'agent d'entraîne- ment de la substance naturelle qui a passé en même temps, mais il n'y a pas d'inconvénient à ce que des quantités limitées de la substance naturelle restent dans l'agent d'entraînement, car celui- ci est réutilisé. Dans la demande de brevet de la République Fédérale d'Alle- magne publiéesous le n0 DOS 2.656.208, on décrit un procédé pour isoler des stérols à partir de résidus de distillation de la trans- formation industrielle des matières grasses, procédé dans lequel on libère les stérols par transestérification à l'aide du méthanol et on les isole du mélange de transestérification par formation d'adducts avec le chlorure de calcium dans un solvant aprotonique sous légère adjonction d'un solvant protonique. La présente invention part, par contre, de l'idée d'enrichir en quantité limitée seulement les stérols d'origine naturelle dans des concentrés de stérols qui devraient pouvoir Etre utilisés immédiatement comme produits de départ de la conversion des stérols par fermentation. Dans ces nouveaux concentrés, il ne faut pas que les produits d'accompagnement des stérols gênent la transformation des stérols par fermentation et, au contraire, il faudrait qu'ils facilitent la conversion par fermentation. Dans un autre aspect des buts recherchés conformément à l'invention, on veut utilisercomme produits de départ de la préparation des nouveaux concentrés de stérols, des résidus de distillation des transformations industrielles des huiles et/ou graisses animales et/ou végétales, qui représentent des quantités considérables et qui, jusqu'à main- tenant, étaient pratiquement toujours considérés comme des matières résiduaires et rejetés. D'autres buts et avantages de l'invention apparaîtront à la lecture de la description ci-après. La demanderesse a constaté avec surprise qu'on pouvait obtenir à partir des résidus de la transformation industrielle des matières grasses du type décrit ci-dessus, par une nouvelle combi- naison simple d'opérations, des concentrés de stérols de couleur claire qui, à des teneurs en stérols ne dépassant pas 50% en poids, peuvent Atre utilisés directement à la fermentation et sont à considérer dans cette utilisation comme des produits de départ de haute valeur. L'invention concerne en conséquence, dans un premier mode de réalisation, un procédé pour préparer un concentré contenant des stérols d'origine naturelle, concentré qui convient à l'utilisa- tion comme produit de départ de la conversion des stérols par fermentation, ce procédé se caractérisant en ce que l'on soumet des résidus de distillation de la transformation industrielle des huiles et/ou graisses naturelles à transestérification par un alcool inférieur, on soumet le produit de réaction à une distillation à court trajet et on sépare dans cette distillation une fraction principale contenant jusqu'à environ 50% en poids de stérol et qui constitue le produit recherché. La quantité de stérol contenue dans le distillat représente environ 80 à 90% de la quantité de stérol contenue à l'origine dans le résidu de fabrication. Les produits qui accompa- gnent le stérol dans les concentrés obtenus selon l'invention ne gênent pas la fermentation; ils confèrent même aux concentrés la bonne capacité à l'émulsion recherchéedans la solution aqueuse nutritive. En tant que substances chimiques grasses, ils peuvent être digérés par les microorganismes et sont dégradés dans le cours de la fermentation comme les agents émulsionnants chimiques gras qu'on ajoute habituellement dans de tels cas. L'utilisation des concentrés selon l'invention permet d'éviter, pour la fermenta- tion, la préparation des stérols à l'état pur, très pénible et très coûteuse. Les produits de départ du procédé selon l'invention pour la préparation de concenrés de stérols de couleur claire sont les résidus de distillation des acides gras provenant de la scission industrielle des matières grasses ou les résidus de distillation d'estoes d'acides gras, par exemple d'esters méthyliques, obtenus par trans- estérification industrielle des matières grasses. Les matières grasses d'origine peuvent consister en matières grasses animales ou végétales ou encore en résidus de raffinage, en condensats de vapo- riseurs ou en acides gras de potes de neutralisation. Normalement, dans la pratique, les résidus de distilla- tion sont soumis à scissions ou transestérifications et distillations répétées, ceci dans le but de parvenir à des taux de scission ou de transestérification aussi forts que possible. Conformément à l'invention, ces résidus de distillation obtenus après transestéri- fications ou scissions répétées conviennent particulièrement comme produits de départ. Dans les résidus de distillation qu'on préfère en tant que produits de départ conformément à l'invention, les stérols et dérivés sont enrichis, sous forme de composés peu vola- tils, à des concentrations d'environ 5 à 15% en poids. Ils sont principalement sous la forme d'esters d'acides gras. La même obser- vation s'applique aux stérols des résidus de la transestérification car, aux températures élevées de distillation des esters, il se produit une estérification en retour des stérols libérés auparavant. Ces résidus de distillation sont des substances noires, en partie liquides, en partie solides à température ambiante, mais fondant au-dessous de 50'C. Dans le cas des résidus de la distilla- tion des acides gras, les indices d'acide sont d'environ 20 à 80, les indices de saponification d'environ 120 à 160. Pour les résidus de transestérification de la distillation des esters méthyliques, les indices d'acide sont inférieurs à 10 et les indices de saponi- fication sont d'environ 140 à 180. Si la teneur en stérol.d'un tel résidu n'est pas suffisamment forte, on peut la porter au niveau voulu dans le cadre de l'invention par une scission à l'eau à haute température avec distillation subséquente des acides gras. Dans un premier stade opératoire important pour le procédé selon l'invention, les stérols contenus dans les résidus de distillation mis en oeuvre sont libérés à l'autoclave par trans- estérification à l'aide d'alcools inférieurs. Les alcools inférieurs sont de préférence le méthanol, l'éthanol, le propanol ou même le butanol. Dans le cadre de l'invention et pour ce stade opératoire, -le méthanol présente un intérêt particulier. De préférence, les proportions relatives en poids entre le méthanol et le résidu dans ce stade opératoire se situent dans l'intervalle de 0,5 à 3:1, et il est particulièrement recommandé de travailler à des proportions relatives d'environ 1:1. Il n'y a pas de limite réelle vers le haut à ce rapport car en principe on peut utiliser des quantités de méthanol aussi fortes qu'on désire. La réaction elle-même est effectuée dans un autoclave; les températures opératoires qui conviennent se situent dans l'intervalle de 180 à 240C et on opère de préférence à des températures de 200 à 220'C. La transestérification est de préférence effectuée en présence de catalyseurs et plus spécialement de catalyseurs alcalins. On peut utiliser des alcoolates alcalins, par exemple le méthylate de sodium, ou des-hydroxydes alcalins, par exemple KOH; les quantités de catalyseurs qui conviennent vont par exemple jusqu'à 0,5% du poids du résidu de distillation mis en oeuvre. Toutefois, la réaction se produit également sans catalyseur mais, bien entendu, elle est considérablement ralentie dans certains cas. Habituellement, la durée de réaction est d'environ 3 heures à 220C et d'environ 6 heures à 1800C. Après la réaction, on neutralise le catalyseur alcalin. On utilise à cet effet en particulier des acides minéraux dilués, par exemple l'acide sulfurique dilué. On élimine ensuite l'alcool libre et l'eau du mélange de réaction. Cette opération peut être réalisée simplement par évaporation à des températures allant jusqu'à 120C. Le produit résiduel dont on dispose alors est lavé à l'eau et séché à des températures allant jusqu'à 120C. Le produit obtenu est une masse peu mobile à température ambiante ou un liquide très visqueux. Si le lavage est difficile, on peut également, après réaction du résidu de distillation avec le méthanol, séparer une phase méthanolique par addition d'une quantité d'eau limitée, en supprimant tout autre lavage. Le produit de transestérification obtenu dans ces conditions est soumis, dans le deuxième stade opératoire important pour le procédé selon l'invention, à une distillation à court trajet sous haut vide. Les appareils qui conviennent à cet effet sont en particulier les évaporateurs à couche mince de types connus. On utilisera de préférence les évaporateurs à couche mince dans lesquels le trajet du produit à vaporiserdepuis la surface de vaporisation de la pellicule mince de substance jusqu'au condenseur, est relativement court et, dans la plupart des cas,par exemple de l'ordre de quelques centimètres. Dans les appareillages, on sait que cette condition peut être respectée par exemple dans une disposition coaxiale verticale de deux parois cylindriques. Le cylindre intérieur a alors la forme d'un doigt réfrigérant, et la surface intérieure chauffée du cylindre extérieur constitue la surface de vaporisation. La substance qui s'écoule vers le bas est répartie sur la paroi sous forme d'une pellicule régulière au moyen d'un dispositif d'essuyage rotatif. Le distillat se rassemble sur la surface refroidie du cylindre intérieur et s'écoule vers le bas. Les résidus de transestérification contenant les stérols libérés sont distillés avantageusement à l'évaporateur à couche mince à des températures supérieures à 200 C et sous un vide infé- rieur à 0,5 mbar. Ainsi, par exemple, des températures de distil- lation dans l'intervalle de 200 à 3000C, plus spécialement de 220 à 280C, et des pressions de 0,01 à 0,5 mbar, conviennent. Il s'est en outre avéré avantageux dans la plupart des cas de procéder à une distillation préalable avant l'isolement de la fraction concentrée en stérols recherchée; dans cette distilla- tion préalable, on sépare une quantité limitée d'une fraction de tète. Cette distillation préalable peut tre effectuée sous un vide d'environ 0, 5 à 1 mbar. Dans un intervalle de température d'environ 120 à 200'C, on sépare des têtes représentant environ à 40% du poids du produit soumis à la distillation. On assure ainsi un plus haut rendement en stérols dans la distillation prin- cipale. Industriellement, les deux distillations peuvent être effectuées dans deux évaporateurs placés à la suite. Les t&tes consistent principalement en esters méthyliques d'acides gras. On recueille en fraction principale ensuite le concentré de stérols de couleur claire recherché conformément à l'invention. Ces concentrés de stérols constituent un autre objet de l'invention. Ils consistent de préférence essentiellement en une proportion allant jusqu'à environ 50% en poids de stérols avec jusqu'à 50% environ en poids d'esters méthyliques d'acides gras; ils contiennent en outre principalement des esters méthyliques d'acides gras hydroxylés et dihydroxylés ainsi que, en très faibles quantités, des glycérides partiels. Les mêmes observations s'appli- quent naturellement lorsqu'on utilise d'autres alcools inférieurs à l'opération de transestérification. Le produit solide à semi-solide à température ambiante présente une coloration jaune d'or. Son indice de saponification se situe en général dans l'intervalle de 50 à 170; l'indice d'hydroxyle, à l'état non saponifié, peut se situer habi- tuellement dans l'intervalle d'environ 40 à 150 et de préférence de à 120. Cet indice d'hydroxyle du distillat non saponifié est dé en partie aux stérols et en partie aux esters méthyliques d'acides gras hydroxylés présents également dans le mélange. On peut le démontrer en saponifiant, en isolant et en identifiant les acides gras. Dans les modes de réalisation préférés des nouveaux concentrés de stérols selon l'invention, leur teneur en stérols se situe dans l'intervalle d'environ 10 à 40% en poids, de préférence d'environ 15 à 40% en poids, par rapport au poids total de la fraction distillée. Dans la plupart des cas, la fraction principale contient plus de 20% en poids de stérols mais, pour l'utilisation subséquente du concentré, il peut également être avantageux de travailler à une teneur en stérols allant jusqu'à 20% en poids environ. Les produits d'accompagnement présents en mélange avec les stérols dans le concentré non seulement ne sont pas nuisibles pour l'utilisation subséquente du concentré dans la transformation des stérols par fermentation, mais présentent au contraire un effet surprenant d'activation de la conversion microbienne des stérols. Les esters d'acides gras hydroxylés présents dans le concentré mélange confèrent à celui-ci une très bonne aptitude à l'émulsion. Si on le désire, on peut encore augmenter la proportion d'esters hydroxylés. On y parvient avantageusement en diminuant par distilla- tion la proportion des esters dtacides gras non hydroxylés, compara- tivement plus volatils. On peut encore améliorer de cette manière l'aptitude à l'émulsion du concentré dans les solutions aqueuses nutritives et accroître la quantité de stérols présente dans le concentré. Naturellement, il y a aussi augmentation de l'indice d'hydroxyle. En principe,cependant, les distillats simples d'évapora- teurs en couche mince, à environ 20% de stérols, constituent des substrats parfaitement appropriés à la transformation des stérols par fermentation. Dans un autre mode de réalisation, l'invention concerne l'utilisation des concentrés de stérols obtenus par le procédé décrit ci-dessus, à teneur limitée en stérols, en tant que produits de départ de la transformation des stérols par fermentation, transfor- mation dans laquelle, au moyen de micro-organismes déterminés, on provoque intentionnellement une modification de la structure chimique du stérol. Les micro-organismes choisis sont soumis à incubation et culture de la manière habituelle dans un milieu nutritif aqueux, et on ajoute les concentrés de stérols selon l'invention au liquide de fermentation. Il peut être à cet égard avantageux d'utiliser ces concentrés comme source principale ou même source unique de carbone. La fermentation est effectuée habituellement dans des conditions aérobies. On pourra, pour les détails relatifs à ces opérations, se reporter aux nombreuses indications figurant dans la littérature technique antérieure. On citera par exemple à cet égard W. Charney et H.L. Herzog, Microbial Transformation of Steroids, Academic Press, New York, 1967. Actuellement, les procédés pour la dégradation sélective en chatne latérale des stéroides par voie microbiologique ont pris une importance particulière. On trouvera un aperçu sur ces travaux dans Adv. Appl. Microbiol. 22, 29 (1977), 29-58, Christoph K.A. Martin "Microbial Cleavage of Sterol Side Chains". L'utilisation des concentrés de stérols selon l'inven- tion présente une importance particulière dans la préparation de dérivés a-propioniques de stéroids en C 17 par dégradation sélec- tive des chaînes latérales sur des substrats consistant en stéroides à chaîne latérale en C 17, comme décrit en particulier dans les demandes antérieures de brevets de la demanderesse: la demande de brevet européen 79 101 036.6 et la demande de brevet autrichien 17 09/79. Ces procédés permettent en particulier de préparer l'acide 3-oxo-prégna-4-ène-20carboxylique (t -4 BNC) et/ou l'acide 3-oxo-prégna-1,4-diène-20carboxylique (A -1,4 BNC) à partir de substrats consistant en stéroides à longs substituants en position C 17 par fermentation. Comme microorganismes pour ce type de procédé travaillant de préférence sans inhibiteur, on utilise des souches mutantes obtenues à partir de certaines souches natu- relles sélectionnées avec mutation et sélection subséquentes. Parmi les souches de mutants défectifs de micro-organismes convenant à cette utilisation, on citera en particulier les souches ATCC 31385, ATCC 31456, ATCC 31457, ATCC 31459, ATCC 31460, DSM 4035, DSM 1437, DSM 1439, DSM 1442, DSM 1443, DSM 1444 et DSM 1445. Pour plus de détails, on pourra se reporter aux demandes antérieures de brevets de la demanderesse mentionnées ci-dessus. Les exemples suivants illustrent l'invention sans toutefois la limiter; dans ces exemples, les indications de parties et de pourcentages s'entendent en poids, sauf mention contraire. EXEMPLE 1 On part de 1000 g d'un résidu de la préparation des acides gras de suif, obtenu après trois scissions et distillations; caractéristiques: indice d'acide 19, indice de saponification 124, indice d'hydroxyle 18, indice d'iode 65, teneur en cholestérol 14%. A ce résidu, on ajoute 1000 g de méthanol et 16,7 g d'une solution méthanolique de méthylate de sodium à 30%. On chauffe le mélange 3 heures à l'autoclave sous agitation à 220C. On neutra- lise le produit évacué de l'autoclave par 45,3 g d'acide sulfurique aqueux à 10%. On ajoute en outre 100 g d'eau. Il se sépare une phase méthanolique plus légère. On sépare la phase grasse plus lourde et on la sèche: on distille les résidus de méthanol et d'eau; vers la fin de la distillation, on applique le vide de la trompe à eau et on porte la température de liquide à 1200C. On obtient 960 g d'une substance noire solide à température ambiante, indice d'acide 4, indice de saponification 110, indice d'hydroxyle 69, indice d'iode 64. On soumet 900 g du produit de transestérification obtenu ci-dessus à distillation à l'évaporateur à couche mince de laboratoire (distillation à court trajet: distance entre le doigt réfrigérant et la paroi portant la pellicule de substance: 1,7 cm) en deux stades opératoires: dans la première opération, on obtient à 120'C environ/ 1 mbar environ 40 g de distillat liquide presque exempt de cholestérol. Dans la deuxième opération, on distille à 2400C/0,4 mbar. On obtient 570 g d'un distillat jaune d'or et 240 g d'un résidu noir. Dans le distillat, on trouve par chromatographie 21,7% de cholestérol libre. Caractéristiques du distillat: indice d'acide 6,4, indice de saponi- fication 127, indice d'hydroxyle 79,4, indice d'iode 55,6. Le dosage de la glycérine indique 0,16% de glycérine libre et combinée. Sur un petit échantillon, on isole les acides gras par saponification. Leurs caractéristiques sont les suivantes: indice d'acide 192, indice d'hydroxyle 48. Une augmentation importante des températures de distil- lation provoque un déplacement considérable de la répartition des fractions: on distille les tÈtes à 200C/environ 1 mbar, au lieu de 1200C: on recueille 38% de tttes à 6,6% de stérol (dosage du stérol selon V.C. Mehlenbacher: The Analysis of Fats and Oils (1960), page 592); la distillation de la fraction principale à 2700C au lieu de 2400C donne 28% de coeur ou concentré à 43% de stérol (m me méthode de dosage): indice d'acide 3,6, indice de saponification 69,9, indice d'hydroxyle 110,9, indice d'iode 57,7, 34% de résidu. EXEMPLE 2 On part de 1000 g d'un résidu de la préparation des acides gras de sojatournesol obtenu après double scission et distillation; caractéristiques: indice d'acide 71,5, indice de saponification 160, indice d'hydroxyle 4,1, indice d'acide 102, teneur en stérols 9,9%. Composition des stérols: 60,9% de sitostérol, 21,1% de campestérol, 15,4% de stigmastérol et 20% de cholestérol. A ce résidu, on ajoute 1000 g de méthanol et 16,7 g de solution méthanolique de méthylate de sodium à 30%. On chauffe le mélange 3 heures à l'autoclave sous agitation à 220'C. On neutralise le produit évacué de l'autoclave par 45,3 g d'acide sulfurique aqueux à 10%. On distille ensuite le méthanol sous agitation jusqu'à une température de liquide de 120 C. On lave le résidu à l'eau à 80OC à plusieurs reprises. On distille les restes d'humidité sous le vide de la trompe à eau et sous agitation jusqu'à une température de liquide de 120 C. On obtient 950 g environ d'une substance noire pratiquement encore liquide à température ambiante, indice d'acide 11,7, indice de saponification 145, indice d'hydroxyle 58, indice d'iode 101. On soumet 900 g du produit de transestérification obtenu ci-dessus à distillation à l'évaporateur à couche mince (distillation à court trajet: distance entre le doigt réfrigérant et la paroi portant la pellicule de substance: 1,7 cm); on distille à environ 220 C/0,4 mm Hg; on obtient 570 g d'un distillat jaune d'or et 305 g d'un résidu noir. Dans le distillat, on trouve à la digitonine 15,2% de stérols. Caractéristiques du distillat:indice d'acide 8,1, indice de saponification 145,4, indice d'hydroxyle 65,3, indice d'iode 96,4. EXEMPLE 3 On part de 1000 g d'un résidu obtenu après transestéri- fication méthanolique du suif et double scission et distillation; teneur en stérol: 9,1% (environ 4% de stérol libre), indice d'acide 3,3, indice de saponification 159, indice d'hydroxyle 40,5, indice d'iode 61,5. On soumet le résidu à transestérification comme décrit dans l'exemple 2 puis à distillation comme décrit dans l'exemple 1. La distillation donne 220 g de têtes et 580 g de coeur. Le coeur contient 12,8% de stérol libre; caractéristiques:indice d'acide 4, indice de saponification 161, indice d'hydroxyle 47,5, indice d'iode 64. EXEMPLE 4 On part de 1000 g d'un résidu de la transestérification méthanolique du suif après double transestérification et distillation; teneur en stérol 7, 4% (environ 4% de stérol libre), indice d'acide 2, indice de saponification 165, indice d'hydroxyle 16, indice d'iode 60. On soumet d'abord le résidu à scission des esters en 4 heures à 220 C à l'autoclave au moyen de 2000 g d'eau. On distille la phase grasse sous un vide d'environ 0,1 mbar. A la température de liquide de 210 C, on interrompt la distillation; on obtient en résidu de distillation 460 g de produit à 14,6% de stérol. On soumet ces 460 g de résidu à transestérification comme décrit dans l'exemple 2. On obtient un produit possédant les caractéristiques suivantes:indice d'acide 15, indice de saponifica- tion 131, indice d'hydroxyle 56, indice d'iode 70. On soumet le produit de transestérification à distilla- tion à l'évaporateur à couche mince comme décrit dans l'exemple 1. On obtient 50 g de têtes et une fraction de coeur jaune d'or de 270 g qui se solidifie lentement au-dessous de 60 C. La fraction de coeur contient 21% de cholestérol libre; caractéristiques: indice d'acide 9,5, indice de saponification 132, indice d'hydroxyle 63, indice d'iode 59. A l'analyse, on trouve 0,05% de glycérol libre et combiné. EXEMPLE 5 On part de 1000 g d'un résidu d'huile de poisson après double scission et distillation: 7,9% de cholestérol, indice d'acide 72, indice de saponification 161, indice d'hydroxyle 19, indice d'iode 152. On soumet ce résidu à transestérification par 1000 g de méthanol sans catalyseur en 3 heures à 220 C. Sur le produit de transestérification, sans lavage préalable, on élimine le méthanol par évaporation. On soumet le résidu d'évaporation à distillation à l'évaporateur à couche mince à 240 C/0,1 mbar. On obtient 696 g d'un distillat à 9,3% de stérol libre, indice d'acide 1,8, indice de saponification 156, indice d'hydroxyle 59,5, indice d'iode 134. EXEMPLE 6 On a soumis les concentres de stérols des exemples 1, 2, 4 et 5 à fermentation en présence ou non de l'agent émulsionnant du commerce BRIJ 35 (éther monolaurylique polyhydroxyméthyléné de la Firme Serva/Heidelberg, RFA) dans le but de former de la 20-carboxy- 1,4-prégnadiène-3-one- ("BN'C"). On utilise à cet effet des micro- organismes de la souche ATCC 31385. Les rendements obtenus sont rapportés dans le tableau ci-dessous. Substrat (réglé à Agent émulsionnant Rendement en 0,1% de stérol) (0:1% de BRIJ 35*) BNC, % de l'exemple la + 84 de l'exemple la - 85 de l'exemple 4 + 77 de l'exemple 4 - 47 de l'exemple 5 + 73 de l'exemple 5 - 67 cholestérol + 82 cholestérol - 56 de l'exemple 2 + 62 de l'exemple 2 - 26P-sitostérol + 30 - 40 +avec agent émulsionnant - sans agent émulsionnant En détail, on a opéré comme suit: Culture préalable: la souche Chol 73-Mll, Corynebacterium spec (ATCC 31385) a d'abord été soumise à culture préalable dans 100 ml de bouillon nutritif stérile (1, 56% de peptone, 0,28% d'extrait de levure, 0,56% de NaCl, 0,1% de D(+)- glucose, pH 7,2) à 30 C pendant 48 heures sur l'incubateur à secousses (fréquence: 140 tr/min). Culture principale: on a ensemencé,à l'aide de 2% en volume de la culture préalable de 48 heures, 100 ml de solution nutritive stérile (erlenmeyers de 500 ml à quatre chicanes).à la composition ci-après: 0,05 M de tampon K-Na-P04 (pH 7,2), 0,8% de peptone, 0,9% d'extrait de levure, 0,3% de D(+) -glucose. Après 42 à 48 heures d'incubation à 30 C (conditions de culture comme ci-dessus), on ajoute 0,1% d'agent émulsionnant et/ou 0,1% de substrat contenant le stérol. Auparavant: la suspension de substrat stérilisée a été homogénéisée par ultrasons. Après 144 heures de culture, on récolte les produits, on prélève des échantillons, on règle à pH 2,0, on extrait à l'acétate d'éthyle au rapport de 1:1 et on analyse par chromatogra- phie quantitative sur couche mince. Les résultats obtenus dans les divers essais sont rapportés dans le tableau ci-dessus. R E V E N D I C A T I O N S 1. Procédé pour préparer un concentré contenant des stérols d'origine naturelle et convenant à l'utilisation en tant que produit de départ de la transformation des stérols par fermentation, caracté- risé en ce que l'on soumet des résidus de distillation de la trans- formation industrille des huiles et/ou graisses naturelles à trans- estérification par un alcool inférieur et on soumet le produit de réaction à une distillation à court trajet dans laquelle on sépare une fraction de coeur contenant jusqu'à environ 50 % en poids de stérols qui constitue le produit recherché., 2. Procédé selon la revendication 1, caractérisé en ce que l'on part de résidus de distillation à une-teneur en stérol de 5 à % en poids. 3. Procédé selon la revendication 1 ou 2, caractérisé en ce que l'on part de résidus de distillation d'une scission répétée de matières grasses. 4. Procédé selon l'une quelconque des revendications 1 à 3, caractérisé en ce que l'on soumet les résidus de distillation à trans- estérification par le méthanol. 5. Procédé selon l'une quelconque des revendications 1 à 3, caractérisé en ce que l'on obtient un produit contenant des esters méthyliques d'acides gras mono- et/ou polyhydroxylés, présentant, à l'état non saponifié, un indice d'OH de 40 à 150, étant précisé que, si l'on veut régler le produit à des indices d'OR plus élevés, on peut rejeter des têtes de distillation contenant essentiellement des esters méthyliques d'acides gras non hydroxylés. 6. Procédé selon l'une quelconque des revendications 1 à 5, caractérisé en ce que la distillation à court trajet est effectuée dans un évaporateur à couche mince. 7. Concentrés de stérols obtenus par distillation à partir de résidus de la transformation industrielle des matières grasses traités par transestérification méthanolique, présentant un indice de saponification de 50 à 170 et un indice d'OH (à l'état non sapo- nifié) de 40 à 150, de préférence de 40 à 130, consistant essentiel- lement en une proportion allant jusqu'à 50 % en poids environ de stérols, jusqu'à 50 % en poids d'esters méthyliques d'acides gras non hydroxylés et, pour le restant, en esters méthyliques d'acides gras mono- et/ou polyhydroxylés et petites proportions de glycérides partiels. 8. Utilisation des concentrés de stérols préparés par un procédé selon l'une quelconque des revendications 1 à 6, en tant que produits de départ de la transformation des stérols par fermen- tation, et en particulier pour la dégradation partielle en chaîne latérale des stéroYdes en C17.