Brevet FR2468615A1 — publié le 19810508

1. La pr6ésente invention concerne un procéd6 nouveau de préparation de la 3'-d6soxykanamycine A, qui est utile comme agent antibactérien. La 3'-désoxykanamycine A est une substance active contre les bactéries qui résistent à la kanamycine A, comme décrit dans la Publication de Brevet Japonais N 33 109/76 ou dans le brevet U.S. N 3 929 761. Le dérivé 1-N-a-hydroxy-0-aminoacylé de la 3'-d6soxykanamycine A présente une activité antibactérienne meilleure à l'égard des bactéries qui résistent à la kanamycine A (cf. Pré- publication "Kokai" de demande de brevet japonais N 127 045/76 ou brevet U.S. NO 4 104 372). En particulier, le dérivé de la 3'-désoxykanamycine A obtenu en acylant le groupe 1-amino de celle-ci avec le groupe (S)-4-amino- 2-hydroxybutyryle, c'est-à-dire la 3'-désoxyamikacine, présente une activité antibactérienne plus grande que celle de l'amikacine, c'est-à-dire la 1-N-((S)-4-amino- 2-hydroxybutyryl)-kanamycine A à l'égard de toute bacté- rie résistante à la kanamycineo Cependant, la production de la 3'-désoxyamikacine nécessite la préparation préala- ble de la 3'-désoxykanamycine Ao Jusqu'ici toutefois, on n'a pu produire la 3'désoxykanamycine A que par une métho- de inefficace décrite dans le brevet U.So N 3 929 761 ou dans la Publication de brevet japonais N 33 109.76 déja mentionnés, dans laquelle on condense du chlorure de 6- azido-2,4-di-0-benzyl-3,6-didésoxy-c-D-ribohexopyranosyle avec de la 6-0-(2-0-benzyl-3-désoxy-3-éthoxycarbonylamino- 4,6-O-isopropylidène)N) Nt-diéthoxycarbonyl-2-désoxystrep- tamine et l'on traite le produit de condensation obtenu en quelques étapes pour en éliminer les groupes amino-pro- tecteurs et les groupes hydroxy-protecteurs et obtenir ainsi la 3'-désoxykanamycine A. Il existe donc une deman- de pour que la 3'-désoxykanamycine A soit produite par synthèse directement à partir de la kanamycine A. Cette demande est maintenant satisfaite pour la première fois par la présente invention. D'autre part, les auteurs de la présente invention ont déjà développé la méthode de 3Ldésoxygénisation de la néamine, de la kanamycine B et de la ribostamycine (cf. brevet U.S. N 3 929 762). La méthode décrite dans ce bre- vet U.S. n'est toutefois pas applicable à la kanamycine A pour sa 3'désoxygénation. Cette méthode comporte une éta- pe au cours de laquelle le groupe 3'-hydroxyle de la néa- mine, de la kanamycine B ou de la ribostamycine est sélec- tivement alkyl-, aryl- ou aralkylsulfonylé, tous les grou- pes amino ainsi que les groupes hydroxyles en 4" et en 6" de ces antibiotiques ayant été protégés par les groupes protecteurs connus. Si la kanamycine A, qui contient dans sa molécule le groupe hydroxyle en 2' à côté du groupe hy- droxyle en 3', est soumise à l'étape de sulfonylation de la méthode décrite dans le brevet U.S. précité, il peut arriver que le groupe hydroxyle en 2' soit sulfonylé, a- vec pour conséquence inévitable une 2'-désoxygénation et la 3'-désoxykanamycine ne peut pas être obtenue comme dési- ré. Par ailleurs, il n'avait pas été possible jusqu'ici de mettre au point une procédure par laquelle on pouvait pro- téger sélectivement le groupe 2'-hydroxyle de la kanamyci- ne A pour le préserver de la sulfonylation. Les auteurs de l'invention ont déjà réussi la syn- thèse de la 3',4'-didésoxykanamycine B à partir de la ka- namycine B (Publications de brevet japonais N s 7579/75 et 46110/76; brevet U.S. N 3 753 973) et ils ont effectué des recherches en vue de préparer synthétiquement la 3',4' -didésoxykanamycine A à partir de la kanamycine A (cf. la demande de brevet japonais N 11402/79 de la Déposante, la demande de brevet U.S. N 114 779, la demande de brevet britannique N 8003417, le brevet belge N 881 251, enre- gistré le 15 février 1980). Au cours de ces recherches, ils ont constaté que lorsque la kanamycine A est simple- ment soumise à la méthode de désoxygénation qui consiste en une 3',4'-di0-sulfonylation et à traiter ensuite 1' ester d'acide 3',4'-di-0sulfonique qui en résulte avec de l'iodure de sodium et de la poudre de zinc et pouvait être appliquée avec succès à la préparation semi-synthéti- que de la 3',4'-didésoxykanamycine B, on ne pouvait cepen- dant obtenir de la 3',4'-did&soxykanamycine A comme on le désirait. La raison en est que la moléculeé-de kanamycine A contient deux groupes hydroxyles adjacents en e' et en 3', de sorte que le groupe 2'-hydroxyle peut être sulfonylé en même temps que s'effectue la sulfonylation des groupes 3' et 4'-hydroxyles, avec pour conséquence que ce groupe 2'- hydroxyle, une fois sulfonylé, peut être éliminé de la mo- lécule en même temps que sont éliminés les groupes 3- et 4'-hydroxyles par traitement avec l'iodure de sodium et la poudre de zinc. En développant leurs recherches en vue de la synthè se de la 3',4'-didésoxykanamycine A à partir de la kanamy- cine A, les auteurs de l'invention ont en outre constaté que la 3',4'didésoxykanamycine A ne peut être produite par synthèse à partir de la kanamycine A en en appliquant la même méthode de désoxygénation que celle adoptée pour la synthèse de la 3',4'-didésoxykanamycine B à partir de la kanamycine B à moins de pouvoir préparer et fournir, pour le soumettre à la didésoxygénation précitée, un déri- vé protégé de la kanamycine A dont les groupes 3e- et 4'- hydroxyles dans la molécule de cette dernière restent à l'état non protégé, tandis que le groupe 2'-hydroxyle voi- sin et tous les autres groupes hydroxyles, ainsi que tous les groupes amine existent à l'état protégé ou bloqué. On n'observe toutefois pas de grande différence entre les groupes 2'-, 3'- et 4'-hydroxyles de la kanamycine A en ce qui concerne leur réactivité et il a donc été très difficile de découvrir une procédure quelconque permettant de protéger le groupe 2'-hydroxyle tout en maintenant à l'état non bloqué les groupes 3'- et 4'-hydroxyles. Les auteurs de l'invention ont effectué des re- cherches approfondies dans leur tentative en vue de pro- duire ce dérivé approprié de la kanamycine A. Ils ont aboutit à la constatation que ce dérivé protégé de la ka- namycine A, dans lequel les groupes 3'- et 4'-hydroxyles ne sont pas bloqués, le groupe ?"-hydroxyle est protégé ou non protégé et le groupe 2'-hydroxyle, ainsi que tous les groupes amino sont bloqués, peut être préparé en uti- lisant une combinaison d'un choix ingénieux de la nature des groupes hydroxy-protecteurs.et amino-protecteurs em- ployés et d'un agencement minutieusement étudié de la suc- cession des étapes respectives de protection de chaque groupe amino et de chaque groupe hydroxyle, de façon que le groupe 6'-amino'de la kanamycine A, qui est le plus ré- actif parmi les quatre groupes amino de celle-ci,soit bloqué le premier par un groupe alcoxycarbonyle, un grou- pe aralkyloxycarbonyle, spécialement le groupe benzyloxy- carbonyle, ou un groupe-aryloxycarbonyle connu comme un des groupes aminoprotecteurs traditionnels, puis les groupes 1-, 3- et 3"-amino de la kanamycine A sont proté- gés par un groupe alkylsulfonyle, un groupe arylsulfonyle ou un groupe aralkylsulfonyle, les groupes 4"- et 6"-hy- droxyles sont bloqués simultanément en introduisant entre eux un groupe cyclohexylidène, le groupe 4'-hydroxyle li- bre et le groupe 6'-amino aralkyloxycarbonylé ou aryloxy- carbonyl1 sont ensuite condens6 l'un avec l'autre sous la forme d'un carbamate cyclique en traitant avec un hydrure de métal alcalin, par exemple l'hydrure de sodium, avec pour résultat une protection simultanée des groupes 4'- hydroxyle et 6'-amino, le groupe 5-hydroxyle et le groupe 2'-hydroxyle sont sélectivement et simultanément bloqués en introduisant entre eux comme pont un groupe hydroxy- protecteur divalent connu, comme un groupe alkylidène, spécialement le groupe isopropylidène, le groupe benzyli- dène ou le groupe tétrahydro-4-pyranylidène, après quoi le noyau carbamate form6 en 4' et 6' est rompu par traite- ment avec un alcali pour redonner le groupe 4'-hydroxyle libre et le groupe 6'-amino libre et, finalement, le grou- pe 6'-amino libre est bloqu6 avec un groupe alcoxycarbony- le ou un groupe aralcyloxycarbonyle ou un groupe alcanoyle comme l'acétyle. Ils ont ainsi réussi à préparer le dériv6 prot6gé approprié et d6siré de la kanamycine A et, en con- s6quence, ils ont réussi à trouver une voie pour la pré- paration semi-synth6tique de la 3',4'-did6soxykanamycine A. Au cours des travaux de mise au point d'un procédé de synthèse de la 3',4'did6soxykanamycine A, les auteurs de l'invention ont pr6paré un dérivé protég6 de la kanamy- cine A ayant pour formule 6' HNH C 0 = 4'1 O 2'\ 3' I_ c-- 0 6" (I) yc CH3 CH3 3 3 Do O, 3 0 3" H qui est la 4",6"-0-cyclohexylidène-4'-0:6'-N-carbonyl-5, 2'-0-isopropylidène-l,3,3"-tri-N-tosylkanamycine A (cf. Exemple 1 de la demande de brevet japonais N 11402/79 de la Déposante, la demande de brevet U.S. N 114 779 et la demande de brevet britannique NI 8003417). Ils ont réussi à produire semi-synth'tiquement la 3'-désoxykanamycine A en partant de ce d6rivé protégé de la kanamycine A de formule (I). Ainsi, ils ont constaté que les groupes 3'- et 2"- hydroxyles de ce d6rivé protég6 peuvent être imidazolyl- thiocarbonylés par r6action avec une proportion molaire égale à 2 ou plus de thiocarbonyl di-imidazole dans un solvant organique pour donner le produit bis-imidazolyl- thiocarbonylé correspondant, qu'on peut ensuite faire r6- agir avec de l'hydrure de tri-butylétain (C4H9)3SnH pour éliminer préf6rentiellement le groupe imidazolylthiocarbn- nyloxy de la position 3' dans ce produit bis-imidazolyl- thiocarbonylé et donner ainsi le produit 3'-désoxyg6n6 correspondant, et qu'on peut soumettre ce produit 3'-d6s- oxygéné à des opérations successives pour éliminer le groupe 2"-0imidazolylthiocarbonyle en traitant avec de l'ammoniaque, pour éliminer les groupes tosyles en trai- tant avec du sodium métallique dans l'ammoniac liquide, pour la rupture du noyau de 4'6'!carbamate cyclique par hydrolyse basique et pour éliminer concurremment le grou- pe 5,2'-0-isopropylidène et le groupe 4",6"-0-cyclohexy- lidène par hydrolyse acide et obtenir ainsi la 3'-d6soxy- kanamycine A désir6e. Ils ont constat6 aussi que le groupe 2"-hydroxyle du dérivé protégé de kanamycine A correspon- dant à la formule (I) peut être acétyl1 pr6f6rentiellement pour sa protection par réaction avec une proportion molai- re de 1 environ de chlorure d'acétyle dans de la pyridine pour donner le produit 2"-0-ac6tylé correspondant, qu'on peut ensuite faire réagir avec de l'anhydride trifluoro- m6thanesulfonique dans de la pyridine pour trifluorom6tha- nesulfonyler le groupe 3'-hydroxyle, et que le produit 3'- 0-trfluorométhanesulfonylé ainsi obtenu peut être soumis à des opérations successives pour éliminer concurremment le groupe 3'trifluorométhanesulfonyloxy et les groupes tosyles en traitant avec du sodium m6tallique dans l'am- moniac liquide, pour éliminer du produit 3'-désoxygéné résultant le groupe 2"-0-acétyle et provoquer simultané- ment la rupture du noyau 4',6'-carbamate cyclique par hy- drolyse basique, et pour éliminer concurremment le groupe ,2 -Oisopropylidène et le groupe 4",6"-cyclohexylidène par hydrolyse acide et obtenir ainsi la 3'-désoxykanamyci- ne A désirée. L'objet principal de la présente invention est de fournir un procédé nouveau de préparation semi-synthétique de la 3'- désoxykanamycine A à partir de la kanamycine A qui puisse être mis en oeuvre facilement et donne un ren- dement intéressant du produit désiré. D'autres objets de l'invention seront mis en 6vi- dence par la description qui suit. Sous un premier aspect, le procédé selon l'inven- tion consiste à:. (a) faire un dérivé protégé de la kanamycine A ayant pour formule: HNH C 2 NHTs O NHTs o o 7_CH) CH/ (3) / H2C OO OH2 dans laquelle Ts d6signe le groupe tosyle, avec au moins 2 proportions molaires de thiocarbonyl di-imidazole dans un solvant organique à une température comprise entre 40 et 1500C pour effectuer l'introduction de groupes imida- zolylthiocarbonyles dans les groupes 3'- et 2"-hydroxyles du dérivé protégé de kanamycine A (I) et obtenir le pro- duit bis-imidazolylthiocarbonylé correspondant, (b) éliminer préférentiellement le groupe 3'-imidazolyl- thiocarbonyloxy du produit bis-imidazolylthiocarbonylé en le faisant réagir avec l'hydrure de tri-butylétain dans un solvant organique à une température comprise entre 40 et 150 C pour produire le produit 3'désoxygène de formule 6' >NH2C NHTs O=C\o 3 2'C/) O'-- C-C CH 3 3 NNHTs 6" 0 0H2C / 0 / 3' X 2 't 5 -i oo/ 0 3H CH 3 dans laquelle Ts a la même définition que ci-dessus, (c) à éliminer le groupe 2"-0-imidazolylthiocarbonylé du produit 3'-désoxygéné ci-dessus par réaction avec l'am- moniaque, (d) éliminer les groupes N-tosyles (Ts) par réaction avec un métal alcalin ou alcalino-terreux dans l'ammoniac liqui- de de manière connue, (e) effectuer la rupture du noyau de 4',6'-carbamate cy- clique par hydrolyse basique de manière connue, et (f) éliminer concurremment le groupe 5,2'-0-isopropylidè- ne et le groupe 4",6"-0-cyclohexylidène par hydrolyse aci- de, d'une manière connue, pour produire la 3'-désoxykana- mycine A, de formule - H2NH2C 4, O-- 3v o HOH C oO H OH Selon un second aspect, le procédé selon l'inven- tion consiste à: (a) faire r6agir un dériv6 protégé de la kanamycine A, ayant pour formule 6' 10 AH2é ?HTs - 3 HTs HTs oC 3s ('\j>(,,- -- CH3 CH3 CH3 3 6tt / (I) 6"I() OH2C / / / O 3" 4 OH OH C dans laquelle Ts désigne le groupe tosyle, avec de 1 à 4 proportions molaires de chlorure d'acétyle dans de la py- ridine à une température comprise entre -20 C et la tempé- rature ambiante pour ac6tyler pr6férentiellement le groupe 2"-hydroxyle du dérivé (I) de la kanamycine A et donner le produit 2"-O-ac6tylé correspondant, (b) faire réagir ce produit 2"-O-ac6tylé avec de l'an- hydride de l'acide trjfluorom6thanesulfonique dans de la pyridine à une température comprise entre -20 C et 50 C pour trifluorom&thanesulfonyler le groupe 3'-hydroxyle et donner le produit 3'-O-trifluorométhanesulfonylé cor- respondant de formule NH2C Ts 0= 4'O, C 3' 2'. SO2C 0 0OH o 31 5 CH3 O 42X 3" 8-COCH, - 3" dans laquelle Ts désigne le groupe tosyle, (c) éliminer concurremment le groupe 3'-trifluorométhane- sulfonyloxy et les groupes N-tosyles du produit 3'-O-tri- fluorométhanesulfonyle de formule (III) en faisant réagir ce dernier avec un métal alcalin ou alcalino-terreux dans de l'ammoniac liquide A une température comprise entre -800C et 0 C pour donner le produit 3'-désoxygéné corres- pondant, (c) hydrolyser ce produit 3'-d6soxygéné dans des condi- tions alcaline pour en éliminer le groupe 2t'-O-acétyle et provoquer concurremment la rupture du noyau de 4',6'- carbamate cyclique, et (d) éliminer concurremment legroupe 5,2 '-0isopropylidène et le groupe 4",6"-O-cyclohexylidène par hydrolyse acide pour obtenir la 3'-désoxykanamycine désiréeo Les modes de mise en oeuvre du procédé suivant le premier aspect de l'invention sont décrits maintenant. - Dans la première étape, le dérivé protégé de la kanamy- cine A représenté par la formule (I) est pris comme matiè- re de départ et mis A réagir avec le thiocarbonyl-di-imi- dazole de formule N L VNCS-N Cette réaction est effectuée dans un solvant organique dans lequel les réactifs sont solubles et en particulier un solvant organique de type éther et un solvant organique de type Cellosolve, le tétrahydrofuranne et le dioxanne étant par exemple des solvants convenables. La réaction est conduite à une température de 40 à 150 C et de préfé- rence de 50 à 1009C pendant une durée de 6 à 24 heures et elle a lieu sous pression si cela est nécessaire. Le thio- carbonyl di-imidazole est employé à raison de 2 moles-ou davantage pour 1 mole du produit de départ de formule (I), bien qu'il puisse être employé en excès. Il est commode de faire dissoudre le composé de départ (I) dans un solvant organique comme le tétrahydrofuranne, de mélanger la solu- tion obtenue au thiocarbonyl di-imidazole, puis de chauf- fer la mixture de façon à déclencher la réaction d'intro- duction du groupe imidazolylthiocarbonyle dans les deux groupes 3'-hydroxyle et 2"-hydroxyle du composé de départ. Le produit bis-imidazolylthiocarbonylé ainsi formé est re- présenté par la formule 6' HNH NIITs 0... C3 CH3 (Iv) 6" OH C 4t. fNHTs "O 2,--//2" 3", OA dans laquelle Ts désigne le groupe tosyle et A désigne le groupe imidazolylthiocarbonyle -N -C S-N1 Dans la deuxième étape de ce procédé, le produit bisimidazolylthiocarbonyle (IV) est mis à réagir avec de l'hydrure de tributyltain en chauffant dans un solvant organique dans lequel les deux réactifs sont solubles et qui peut être du même type que celui employé dans la pre- miere étape du proc6dé. La réaction peut être conduite à une température comprise entre 4O et 1501C, de préférence entre 100 et 120"C pendant une durée de 1 à 10 heures. L' hydrure de tributylétain est de préférence employé dans une proportion d'au moins 2 moles pour 1 mole du produit (IV) et la réaction peut avoir lieu sous pression si cela est nécessaire. La r6action peut être conduite commodément de telle façon que le produit (IV) est mis à dissoudre dans un solvant organique tel que le tétrahydrofuranne ou autre similaire, puis la solution obtenue est mélangée à l'hydrure de tributylétain, après quoi on chauffe le m6- lange. Par cette réaction, le groupe qui se trouve en po- sition 3' dans le produit de formule (IV) est sélective- ment réduit ce qui implique l'élimination du groupe 3'- imidazolylthiocarbonyloxy, mais toucher à la position 2". Cette manière de procéder pour la désoxygénation a été mise au point par Barton et al (D.H.R. Barton et S.W. McCombic: "J. Chem. Soc." Parkin I, page 1574 (1975)), mais les auteurs de l'invention ont confirmé par expéri- * mentation que parmi les différents réactifs proposés par Barton et al, seul l'emploi combiné de thiocarbonyl di- imidazole et d'hydrure de tributylétain peut être utilisé efficacement pour la 3Ldésoxygénation du dérivé de formule (IV) de la kanamycine A et que les autres réactifs ne peu- vent être utilisés avec efficacité comme agents de désoxy- génation pour de composé de kanamycine A. Par ailleurs, selon la théorie de Barton et al, on pouvait s'attendre à ce que le groupe 2"-imidazolylthiocarbonyloxy soit élimi- né lui aussi. Or, contrairement à cette attente, les au- teurs de l'invention ont découvert que le groupe 2"-imida- zolylthiocarbonyloxy n'est pas éliminé et que la 2"-déso- xygénation n'a pas lieu dans le composé de kanamycine A lorsqu'on suit le procédé selon l'invention. En conséquen- ce, il est tout à fait unique que la 3'-désoxygénation dé- sirée ait lieu sélectivement dans le procédé selon l'inven- tion. On produit ainsi le dérivé 3'-désoxy-2"-O-imidazo- lylthiocarbonyle de formule (II) et ce produit est ensuite traité avec de l'ammoniaque au cours de l'étape suivante ou troisième étape du procédé pour obtenir l'élimination du groupe 2"-O-imidazolylthiocarbonyle. Au cours des éta- pes suivantes, les groupes protecteurs restants, à savoir les groupes Ntosyles, le noyau 4',6'-carbamate, le groupe 4",6'-cyclohexylidène et le groupe 5,2'-O-isopropylidène sont éliminés successivement en appliquant une technique de "déprotection" connue, jusqu'à ce qu'on obtienne la 3'- désoxykanamycine A désirée. L'ordre de succession dans lequel les divers groupes protecteurs restants sont élimi- 2 4 68615 nés est en principe facultatif, mais l'ordre mentionné ci- dessus est commode. Dans la troisième étape du procédé, le produit 3'- désoxy-2"'-0-imidazolylthiocarbonylé de formule (II) peut être traité avec de l'ammoniaque à une température compri- se entre 0' et 50'. L'ammoniaque peut être utilisée sous la forme de son mélange avec un solvant organique appro- prié, comme le têtrahydrofuranne et l'éthanol, et la con- centration de l'ammoniac dans ce mélange peut être compris entre 5 et 20% en poids. Le groupe 2"-0-imidazolylthiocar- bonyle est ainsi éliminé. Dans les autres étapes de déprotection du procédé selon l'invention, les groupes N-tosyles présents dans les groupes amino du dérivé de la 3'désoxykanamycine A puu- vent être éliminés en traitant avec un métal alcalin, spé- cialement avec du sodium métallique ou un métal alcalino- terreux dans de l'ammoniac liquide d'une manière connue, par exemple en procédant de la manière décrite dans le brevet U.S. i 169 939. Pour utiliser dans le traitement dans l'ammoniac liquide, on peut utiliser un ou plusieurs métaux alcalins choisis parmi le lithium, le sodium et le potassium, ainsi que des métaux alcalino-terreux choisis parmi le calcium, le magnésium et le baryum. La réaction peut être conduite à une température comprise entre -80'C et 00C, par exemple, dans--un tube scellé ou un récipient sous pression. La durée de la réaction peut être choisie convenablement entre 0,5 et 24 heures. La proportion de métal alcalin ou alcalino-terreux utilisée pour cette ré- action peut être convenablement de 10 à 100 moles par mole de composé de kanamycine A à déprotéger et elle peut aussi être ajoutée soit en une seule fois, soit en petites por- tions au mélange réactionnel. Après la réaction d'élimina- tion des groupes tosyles (Ts) amino-protecteurs restants, on ajoute au mélange réactionnel une certaine quantité d' eau, un alcanol ou du chlorure d'ammonium pour épuiser 1' excès de métal alcalin ou alcalinoterreux, après quoi on élimine le solvant (ammoniac liquide) par évaporation, o- fait dissoudre le résidu solide dans l'eau et l'on soumet la solution qui en résulte à un processus de purification, par exemple à une chromatographie pour augmenter le degré de pureté. Au cours d'une étape suivante de déprotection du procédé selon l'invention, on peut opérer la rupture du noyau 4',6'-carbamate par hydrolyse alcaline d'une manie- re connue et décrite dans le "Journal of Antibiotics", vol. 25, N 12, pages 741 et 742 (1972). Par exemple, on peut soumettre le produit détosylé obtenu A l'étape précé- dente à l'hydrolyse dans des conditions alcalines, dans un solvant organique aqueux, par exemple du dioxanne aqueux contenant une certaine quantité d'un carbonate de métal alcalin, tel que du carbonate de sodium, ou de l'hydroxy- de de baryum pour ouvrir le noyau 4',6'-carbamate du com- posé de kanamycine A. L'hydrolyse peut être effectuée à u- ne température de 20 à 100 C (cf. brevet U.S. NO 4 124706Y Comme conséquence de la rupture hydrolytique du noyau 4',6'-carbamate, le groupe 4'-hydroxyle libre et le groupe 6'-amino libre sont libérés de ce dernier. L'élimination du groupe 4",6"-0-cyclohexylidène et du groupe 5,2'-0-isopropylidène comme groupe hydroxy-pro- tecteur peut être réalisée simultanément par hydrolyse a- cide d'une manière connue, par exemple en utilisant de 1' acide acétique aqueux, tel qu'une solution aqueuse conte- nant de 50 A 90% d'acide acétique. Cette hydrolyse acide peut être effectuée à une température comprise entre 50 et 100 C. En utilisant ce premier aspect du procédé selon l'invention, on peut obtenir la 3'désoxykanamycine A avec un rendement global d'environ 15%, calculé en se basant sur la kanamycine A initiale. Sous le second aspect de l'invention, le procédé de préparation de la 3'désoxykanamycine A peut être mis en oeuvre de la manière suivante: Au cours de la première étape du procédé, on fait réagir le dérivé protégé de la kanamycine A représenté par la formule (I) avec au moins une proportion molaire égale à 1 et de préférence comprise entre 1,5 et 4 de chlorure d'acétyle dans de la pyridine à une température inférieure à la température ambiante et de préférence com- prise entre 0 C et -20 C pendant une durée de 1 à 5 heures, pendant laquelle le groupe 2"-hydroxyle du composé de ka- namycine A peut être acétylé préférentiellement. Ceci a été découvert la première fois par les auteurs de l'inven- tion. Cette 2"-0-acétylation sélective n'a pas lieu si 1' on utilise l'anhydride acétique comme on le fait habituel- lement pour l'acétylation du groupe hydroxyle. Au cours de la deuxième étape du procédé, on fait réagir le produit 2'v-O-acétylé ainsi obtenu avec de l'an- hydride d'acide trifluorométhanesulfonique dans de la py- ridine en procédant de la manière décrite par les auteurs de l'invention (cf. Tschuiya, Nakamura et Umezawa; "Tetra- hydron Letters"' 2805, (1975)). Par cette réaction, le grou- pe trifluorométhanesulfonyle est introduit dans le groupe 3'-hydroxyle pour donner le produit 3'-O-trifluorométhane- sulfonylé de formule (III). On peut employer l'anhydride d'acide trifluorométhanesulfonique dans une proportion de 1,2 à 6 moles par mole de composé de kanamycine A. La tri- fluorométhanesulfonylation peut être effectuée à une tempé- rature comprise entre -20 C et 50 C pendant une durée de 0,5 à 5 heures. Après cette introduction du groupe 3'-0-trifluoro- méthanesulfonyle, on l'élimine au cours de l'étape suivan- te ou troisième étape du procédé en traitant avec un métal alcalin ou alcalino-terreux dans de l'ammoniac liquide en procédant de la même manière que celle décrite pour la troisième étape de la première forme de mise en oeuvre du procédé selon l'invention, de façon à réaliser la 3'-dés- oxygénation désirée. Concuremment à cette élimination du groupe 3'-trifluorométhanesulfonyloxy, on peut aussi éli- miner les groupes tosyles en tant que groupes amino-pro- tecteur. Dans ce traitemant dans l'ammoniac liquide, il est préférable d'employer le sodium métallique. La réactiom peut être conduite à une température comprise entre -80 C t8 et O'C pendant une durée de 0,5 à 3heures en utilisant de à 100 moles de sodium métallique par mole de composé de kanamycine A. Il convient de signaler que les auteurs de l'invention ont observé expérimentalement que lorsque le groupe 3'hydroxyle du composé 2"-0-acétylé de la kanamy- cine A ci-dessus mentionné a été sulfonylé par réaction a- vec un groupe alkyl-, aralkyl- ou arylsulfonyle autre que le groupe trifluorométhanesulfonyle spécifiquement employé dans le procédé selon l'invention, le groupe 3'-sulfonyl- oxy ainsi obtenu ne peut être éliminé et donc la 3'-dés- oxygénation ne peut être réalisée en traitant avec un mé- tal alcalin ou alcalino-terreux, en particulier avec le sodium métallique dans l'ammoniac liquide, opération qui seule permet de rétablir le groupe 3'-hydroxyle libre. Après l'étape ci-dessus de 3'-désoxygénation et d' élimination simultanée des groupes N-tosyles, le composé de 3'-désoxykanamycine A obtenu est soumis à d'autres éta- pes de déprotection pour éliminer les groupes protecteurs restants, c'està-dire le groupe 2"-0-acétyle, le noyau 4',6'-carbamate, le groupe 4",6"0-cyclohexylidène et le groupe 5,2'-0-isopropylidène,par une technique de déprotec- tion connue. L'élimination du groupe 2"-0-acétyle peut ê- tre réalisée par hydrolyse alcaline. La rupture du noyau 4',6'-carbamate et l'élimination des groupes cyclohexyli- dène et isopropylidène peuvent être réalisées en procédant de la manière décrite plus haut pour la première forme de mise en oeuvre du procédé selon l'invention. En utilisant cette seconde forme de mise en oeuvre du procédé selon 1' invention, on peut obtenir la 3'-désoxykanamycine A avec un rendement global d'environ 12%, calculé en se basant sur la quantité de kanamycine A de départ. La préparation du dérivé protégé de kanamycine A correspondant à la formule (I) est maintenant décrite et sera illustrée plus loin à l'Exemple 3. On utilise la kanamycine A comme matière première et l'on protège son groupe 6'- amino par alcoxycarbonyla- tion, aryloxycarbonylation ou aralkyloxycarbonylation sélective de ce groupe, en procédant de manière connue, pour introduire le groupe alcoxycarbonyle, aryloxycarbony- le ou aralkyloxycarbonyle amino-protecteur. Comme le grou- pe 6'-amino est beaucoup plus réactif que les autres grou- pes amino de la kanamycine A, on peut y introduire préfé- rentiellement le groupe amino-protecteur de type alcoxy- carbonyle, aryloxycarbonyle ou aralkyloxycarbonyle, par exemple en faisant réagir une proportion de 1 mole de ka- namycine A (base libre) dans de l'eau pour 0,5 à -3-môles d'un chloroformiate de formule: BCL,9 dans laquelle B représente un groupe alcoxycarbonyle com- portant 2 A 6 atomes de carbone, un groupe aryloxycarbony- le comme le phényloxycarbonyle, ou un groupe aralkyloxy- carbonyle comme le benzyloxycarbonyle, A-une température de 0 à 1O C conformément A la méthode de XKawaguchi et al décrite dans le "Journal of Antibiotics", 25, 695 à 708 (1972) ou le brevet U.S. N 3 781 268, par exemple. Il est alors pratique de préparer, par exemple, la 6'-N-benzyloxy- carbonylkanamycine A en utilisant la méthode de l'Exemple 1 du brevet US N 3 925 353 La 6-N-alcoxycarbonylkanamy- cine A, 6'-N-aralkyloxycarbonylkanamycine A ou 6'-N-arylo- xycarbonylkanamycine A ainsi préparée peut être transfor- m6e en 1,3,3"-tri-N-tosylkanamycine A correspondante en la tosylant dans un solvant organique comme le dioxanne aqueux. La préparation du dérivé 1, 3,3"-tri-N-tosylé de la kanamycine A peut être effectuée, par exemple, de la ma- nière suivante. On fait réagir la kanamycine A amino-pro- tég6e en 6' avec une quantité sensiblement stoechiométri- que (c'est-A-dire une proportion molaire égale ou supérieu- re A 3) de chlorure de tosyle dans un solvant organique comme le dioxanne ou une solution aqueuse de dioxanne A u- ne température comprise entre 30 et 50 C en présence d' une quantité d'un alcali comme le carbonate de sodium pour donner la 6'-N-protégée-1,3, 3"-tri-N-tosylée kanamycine A. On fait ensuite réagir ce dérivé aminoprotégé et tosylé de la kanamycine A avec un agent cyclohexylidénylant, le 1,1-diméthoxycyclohexane à une température comprise par exemple entre 10 et 800C pour protéger le groupe 4"-hydro- xyle et le groupe 6"-hydroxyle avec le groupe hydroxy- protecteur divalent d'une manière connue, décrite dans la publication de brevet japonais N 7595/75 ou le brevet U.S. N 3 929 762. En procédant ainsi, on bloque simultané- ment par un groupe cyclohexylidène les groupes 4"- et 6"- hydroxyles. On fait dissoudre le dérivé 4",6"-0-protégé de la kanamycine A préparé comme ci-dessus dans un solvant orga- nique approprié comme le dim6thylformamide, puis on le met à réagir avec un réactif basique, en particulier un hydru- re de métal alcalin comme l'hydrure de sodium, comme dans la méthode connue décrite dans le "Journal of Antibiotics" vol. 25, NI 12, pages 741 et 742 (1972) ou dans lesbrevets U.S. N s 3 925 354 et 4 125 706 pour obtenir le 4',6'- carbamate cyclique correspondant. Si l'on omet l'6tape de formation du 4',6'-carbamate cyclique et si l'on fait seu- lement réagir directement la-tétra-N-tosylkanamycine A a- vec du 2,2-diméthoxypropane ou du 1,1-diméthoxycyclohexane, on ne peut alors bloquer sélectivement le groupe 2'-hydro- xyle du composé de kanamycine A. En conséquence, on a ima- giné une procédure dans laquelle on forme tout d'abord le 4',6'-carbamate cyclique, puis on bloque les groupes hy- droxyle en 2' et en 5 par 5,2'-isopropylld6nation. Le d6riv6 4',6'-carbamate cyclique préparé comme ci-dessus est ensuite mis à dissoudre dans un solvant or- ganique inerte appropri6 comme le dichloréthane, puis mis à réagir avec le 2,2-diméthoxypropane dans des conditions anhydres en pr6sence d'un catalyseur acide comme l'acide toluènesulfonique ou l'acide sulfurique pour protéger les groupes 5- et 2'-hydroxyles du compos6 de kanamycine A a- vec le groupe hydroxy-protecteur divalent, le groupe iso- propylidène. Au cours de cette r6action, il se forme le dérivé 5,2'-0-protégé de formule (I) et un dérivé 2',3'- O-prot6g6 dans des proportions sensiblement 6gales. Le premier composé peut être séparé du dernier en utilisant leur différence de solubilité dans un solvant organique approprié comme le chloroforme. On peut utiliser aussi pour cette séparation une méthode chromatographique. L'invention est maintenant illustrée par les exem- ples suivants, qui n'ont aucun caractère limitatif, L' exemple 1 illustre la première forme de mise en oeuvre du procédé, tandis que l'exemple 2 illustre la seconde. Exemple 1 O10 (1) Préparation de la 4'-N:6-O-carbonyl-4",6"-O-cyclohe- xylidène-5,2'-O-isopropylidène-3',2"-O-bis(imidazolyl- thiocarbonyl)-1,3,3"-tri-N-tosylkanamycine Ao On fait dissoudre 1,0 g de 4'-N:6'-0-carbonyl-4",6" -O-cyclohexylidène-5,2'-O-isopropylidène-1,3, 3"-tri-N-to- sylkanamycine A (cf. Exemple 3 du présent mémoire descrip- tif) dans 15 ml de t&trahydrofuranne et l'on ajoute 970 mg de thiocarbonyl di-imidazole a la solution qui en résulte. On chauffe le mélange à 55 C pendant 12 heures et l'on con- centre la solution réactionnelle a un plus petit volume, puis on ajoute un volume d'éther ordinaires On sépare par filtration le précipité qui s'est déposé, puis on lave bien avec de l'éther ordinaire pour obtenir 1, 2 g du composé de l'intitulé sous la forme d'un solide incolore. Le rende- ment est de 99%. Le pouvoir rotatoire est (OED + 130 (c = 0,2, acétone). Analyse élémentaire: trouvé:C 51,96; H 5,26; N 8,37; S 11,92 %. calculé pour C57H68N80 18S5 C 52,12; H 5,22; N 8953; S 12,20% (2) Préparation de la 4'-N:6'-O-carbonyl-4',6"-O-cyclohe- xylidène-3'-désoxy-5, 2 -O-isopropylidène-2"-O-imidazo- lylthiocarbonyl-1, 3,3"-tri-N-tosylkanamycine Ao On fait dissoudre 580 mg du produit obtenu à l'éta- pe (1) dans 14 ml de tétrahydrofuranne, puis on ajoute 1,16 g de l'hydrure de tributylétain à la solution qui en résulte. On chauffe le mélange obtenu à 110 C pendant 3 heures dans un tube de verre scellé. On concentre la solu- tion r6actionnelle en r6duisant son volume et l'on mélange à un volume d'éther ordinaire. On sépare par filtration le précipité qui s'est déposé et on lave bien avec de l'éther ordinaire pour obtenir 480 mg du composé de l'intitulé sous la forme solide. Rendement: 90%. Pouvoir rotatoire: " 25 (oD +650 (c = O,3,acétone) Analyse élémentaire: trouvé: C 53,81; H 5, 76; N 6,81; S 10,91% calculé pour C53H66N6017S4: C 53,61; H 5,60; N 7,08; S 10,80%. (3) Préparation de la 4'-N:6'-0-carbonyl-4",6"-cyclohexy- lidène-3'-désoxy-5,2'-0-isopropylidène-1,3,3"-tri-N- tosylkanamycine A. On fait dissoudre 285 mg de la substance obtenue à l'étape (2) dans 1 ml d'un mélange d'ammoniaque concentrée, de tétrahydrofuranne et d'éthanol (4/1/2,5 en volume) et on laisse reposer pendant deux heures à la température am- biante la solution qui en résulte pour réaliser l'élimina- tion hydrolytique du groupe 2"-O-imidazolylthiocarbonyle. On concentre à un plus petit volume la solution réaction- nelle puis on mélange à un volume d'eau. On sépare par filtration le précipité qui s'est déposé, puis on lave a- vec de l'eau pour obtenir 252 mg du composé de l'intitulé sous la forme solide. Le rendement est de 97%. Pouvoir rotatoire: ()25 +34 (c = 0,5, acétone). Analyse élémentaire: trouvé: C 54,37, H 6,17; N 5,42; S 9,03% calculé pour C49H64N40173 C 54,63; HI 5,99; N 5,20; S 8,93%. (4) Préparation de la 3'-désoxykanamycine A. - On fait dissoudre 148 mg de la substance obtenue à l'étape (3) dans 10 ml d'ammoniac liquide à -50 C, puis on y ajoute 100 mg de sodium métallique. On agite le mélan- ge pendant 1 heure et 20 minutes à -50 C pour réaliser 1' élimination des groupes tosyles. On ajoute encore au mélan- ge un volume de tétrahydrofuranne contenant 5% d'eau, jus- qu'à ce que la couleur bleue du mélange disparaisse et que le sodium m6tallique résiduel soit complètement consommé. On concentre le mélange réactionnel par évaporation de 1' ammoniac liquide et l'on ajoute un volume d'eau, après quoi on chauffe à 850C pendant 1 heure9 au cours de laquel- le s'effectue la rupture du noyau 4',6'-carbamate restant dans le produit détosylé. On passe la solution r6actionnel- le restante dans l'eau à travers une colonne de 5g d'une résine cationique fortement acide, Dovex 50 W x 2 (forme S03H+) produite par Dow Chemical Coo, UoSo.A., pour l'ad- sorption du produit désiré. On lave la résine avec de 1' eau, puis on élue avec de l'ammoniaque a 1 N et l'on con- centre l'éluat à siccité pour obtenir un solide. On fait dissoudre cette substance solide dans de l'acide acétique aqueux à 80%, puis on chauffe à 80 C pendant une heure et vingt minutes pour effectuer l'élimination simultanée du gsroupe 4"9,69-O-cyclohexylidène et du groupe 5,2'-O-isopro- pylidène. On concentre la solution réactionnelle sous pression réduite et l'on obtient la 3'odésoxykanamycine brute sous forme solide. On fait dissoudre ce solide dans 1 ml d'eau et 1' on fait passer la solution aqueuse obtenue à travers une colonne d'agent de filtration de gel CM-Sephadex C-25 (forme NH +) produit par Pharmacia Fine Chemical Co., Suè- de.On lave la colonne de Sephadex avec de l'eau, puis on chromatographie par paliers en utilisant comme éluant de l'ammoniaque à une concentration qui passe progressivement de 0903 N à 0,15 No On combine entre elles uniquement les fractions de l'éluat qui contiennent la 3'-désoxeanamyci- ne A désirée, puis on concentre à siccité pour obtenir 44 mg de monocarbonate de 39-désoxykanamycine A sous la forme d'un solide incolore. Rendement 61%. Pouvoir rota- tiore ( 25 +119 (c= 0,5, eau). Analyse élémentaire: trouvé: C 43,00; H 7,49; N 10,60% calculé pour C18H36NO10. H2CO 3 C 43,01; H 7,22, N 10,56%. Le produit obtenu coincide avec un échantillon au- 246 861 5 thentique de 3'-désoxykanamycine A en ce qui concerne les propriétés physico-chimiques et l'activité antibactérien- ne. Exemple 2 (1) Préparation de la 2"-0-acétyl-4'-N:6'-0-carbonyl-4",6" -O-cyclohexylidène-5,2'-0-isopropylidène-1,3,3"-tri-N- tosylkanamycine A. On fait dissoudre 100 mg de 4'-N:6'-0-carbonyl-4t", 6"-O-cyclohexylidène-5,2'-0-isopropylidène-1,3,3"-tri-N- tosylkanamycine A dans 4,0 ml de pyridine et on mélange la solution qui en résulte à 0,018 ml de chlorure d'acétyle à une température de -17 C. On laisse le mélange obtenu reposer pendant 1 heure 20 minutes à -17 C pour que s'ef- * fectue la 2"-O-acétylation préférentielle. On mélange en- suite la solution réactionnelle à 0,04 ml d'eau, on concen- tre à un volume plus petit et l'on mélange ensuite à un grand volume de solution aqueuse à 5% de carbonate acide de sodium. On sépare par filtration le précipité qui s'est déposé et on lave avec de l'eau pour obtenir 103 mg du composé de l'intitulé sous forme solide. Rendement: 99%. Pouvoir rotatoire 4D5 +4 0 (c = 0,4, acétone). Analyse élémentaire: trouvé: C 53,68; H 5,83; N 4,69; S 8,19% calculé pour C 1H66N019S3 C 53,96; H 5,86; N 4,94; S 8,47%. (2) Préparation de la 2"-0-acétyl-4'-N:6'-0-carbonyl-4", 6"-O-cyclohexylidène-5,2'-0-isopropylidène-1,3,3"-tri- N N-tosyl-3'-0-triflurométhanesulfonylkanamycine A. On fait dissoudre 206 mg de la substance obtenue à l'étape (1) ci-dessus dans 2,0 ml de pyridine et l'on mé- lange 'la solution qui en résulte à 0,079 ml d'anhydride d' acide trifluorométhanesulfonique à -18 C, après quoi on agite à -18 C pendant 20 minutes. On laisse ensuite repo- ser le mélange à +3 C pendant 20 minutes, puis à la tempé- rature ambiante pendant 1 heure et 25 minutes pour réali- ser la 3'-0-trifluorométhanesulfonylation. Après avoir a- jouté au mélange réactionnel une solution de 50 mg de car- bonate de sodium dans 1,5 ml d'eau, on concentre a un plus petit volume et l'on mélange la solution concentrée à un large volume de solution aqueuse à 5% de carbonate acide de sodium. On recueille par filtration le précipité qui s' est déposé et on lave avec de l'eau pour obtenir 116 mg du composé de l'intitulé sous forme solide. Rendement: 97% Pouvoir rotatoire:)25 +480 (c=O,4 acétone). Analyse élémentaire: trouvé: C 48,95; H 5,38; N 4,12; S 9,95 calculé pour C52H65N4021S4F3 F 4,13 % C 49,28; H 5,17; N 4,42; S 10,12 F 4,50% (3) Préparation de la 3 désoxykanamycine A. On fait dissoudre 62,5 mg de la substance obtenue A l'étape (2) dans 5 ml deammoniac liquide à -50 C, puis on y ajoute 80 mg de sodium métallique, On agite le tout pen- dans 1 heure et 10 minutes A -50'C pour que s'effectue 1' élimination du groupe 3v-trifluorométhanesulfonyloxy con- cumrement avec l'élimination des groupes tosyleso On ajou- te encore au mélange un volume de tétrahydrofuranne conte- nant 55% d'eau jusqu'A ce que la couleur bleue du mélange disparaisse et que le sodium métallique résiduel soit con- sommé entièrement. Puis on concentre le mélange réaction- nel A un plus petit volume par évaporation de l'ammoniac liquide, après quoi on chauffe a 850C pendant 1 heure, au cours de laquelle s'effectuent lélimination du groupe 2"- O-acétyle et la rupture du noyau 4V,6-carbamate. On fait passer la solution reactionnelle dans l'eau à travers une colonne de résine cationique Dowex 50 W i 2 (forme SO3H+) produite par Dow Chemical Coo. UoS.Ao pour l'adsorption du produit désiré. Après lavage avec de l'eau de la colonne de résine, on élue avec de l'ammoniaque A 1 N et on con- centre 19luat A siccité pour obtenir une substance soli- de contenant de la 4",6"O-0-cyclohe:lidène-5,2 -O-isopro- pylidène-3'-désoxykanaiycine Ao On fait dissoudre cette substance solide dans de l'acide acétique aqueux A 80%, puis on chauffe A 800C pendant 2 heures pour que s'effec- tue l'élimination simultanée du groupe cyclohexylidène et du groupe isopropylidène. On concentre la solution réac- tionnelle sous pression réduite pour obtenir la 3'-désoxy- kanamycineA brute sous forme solide. On fait dissoudre cette substance solide dans 1 ml d'eau et on fait passer la solution aqueuse obtenue A tra- vers une colonne d'agent de filtration de gel, CM-Sephadex C-25 (forme NH +) produit par Pharmacia Fine Chemical Co., Suède. On lave la colonne de Sephadex avec de l'eau puis on élue par paliers en utilisant comme éluant de l'ammonia- que dont la concentration augmente progressivement de 0,03 N A 0,15 N. On combine entre elles uniquement les frac- tions qui contiennent le produit désiré et l'on concentre A siccité pour obtenir 11,5 mg de monocarbonate de 3'-dés- oxykanamycine A sous la forme d'un solide incolore. Le rendement est de 44%. Ce produit coïncide avec un échantillon authentique de 3'désoxykanamycine A en ce qui concerne les propriétés physico-chimiques et l'activité antibactérienne. Exemple 3 Cet exemple montre la préparation du composé de dé- part de formule (I) utilisé dans le procédé selon l'inven- tion. (1) Préparation de la 6'-N-benzyloxycarbonyl-1,3,3"-tri-N- tosylkanamycine A On fait dissoudre 1,79 g de 6'-N-benzyloxycarbonyl- kanamycine A (base libre)(cf. Journal of Antibiotics" vol. , pages 695 à 708 (1972)) et 1,1 g de carbonate de so- dium anhydre dans 50 ml d'un mélange d'eau et de dioxanne (1/3 en volume) et l'on ajoute à la solution qui en résul- te 2,0 g de chlorure de p-toluène-sulfonyle en agitant. On continue d'agiter le mélange obtenu toute une nuit A la température ambiante pour que s'effectue la tri-N-tosyla- tion, puis on concentre à un volume r6duit. On mélange la solution concentr6e à un volume d'eau et l'on recueille par filtration le précipit6 qui s'est d6pos6, on le lave à l'éther ordinaire et l'on sèche pour obtenir-le produit 4 68615 de l'intitulé sous forme solide. Le rendement est de 3,14g (98%). Pouvoir rotatoire: (25)D + 10' (c = 0,4, acétone). Analyse élémentaire: trouv6: C 52,10; H 5,56; N 5,12; S 8,68% calculé pour C 47H60N4O19 S3: C 52,21; H 5,59; N 5,18; S 8,90% (2) Préparation de la 6'-N-benzyloxycarbonyl-4",6"-O-cy- clohexylidène-1,3,3"-tri-N-tosylkanamycine A. On place 1,29 g de la substance obtenue à l'étape (1) dans 4 ml de diméthylformamide et l'on ajoute a la so- lution qui en résulte 45 mg d'acide toluène-sulfonique et 0,86 ml de 1,1-diméthoxycyclohexane. On laisse reposer à la température ambiante pendant 6 heures le mélangerobtenu (pour que s'effectue la 4",6"- O-cyclohexylidénation) Puis on verse le mélange réaction- nel dans un large volume d'une solution de carbonate acide de sodium dans l'eau et l'on sépare par centrifugation le précipit6é qui s'est déposé. On lave bien a l'eau et l'on sèche. Le rendement est de 1,35 g (98%). Pouvoir rotatoire: ( 0 250o (c = 0,5,acétone). Analyse élémentaire: trouvé: C 54,89; H 6,10; N 4,63; S 8,52% calculé pour C53H68N4019S3: C 54,81; H 5,90; N 4,82; S 8,28%. (3) Préparation de la 4"1,6"-O-cyclohexylidène-1,3,3"-tri- tosyl-4'-0:6' -N-carbonylkanamycine A HNH2C NHT O=. o0 NHTs O=c OH /1O OHO OHC o y,, i / 2 - O " NHTs (Ts= tosyle) OH On fait dissoudre 911 mg de la substance obtenue à l'étape (2) dans 18 ml de dim6thylformamide et l'on ajou- te à la solution ainsi obtenue 337 mg d'hydrure de sodium à 50% dans l'huile. On agite le m6élange touteune nuit à la température ambiante, puis on y incorpore 3,5 ml d'acide acétique aqueux à 4N, ainsi que 50 ml de toluène. On dis- tille le tout pour éliminer les solvants et l'on obtient un sirop 6pais qu'on mélange à un large volume d'eau. On recueille par filtration le précipit6 qui se d6pose, on lave à l'6ther ordinaire et l'on sèche pour obtenir une substance solide incolore qui contient le composé de 1' intitulé. Le rendement est de 685 mg (85%). (4) 4"t,6"-O-cyclohexylidène-4'-0:6' -N-carbonyl-5,2 '-O- isopropylidène-1,3, 3"-tri-N-tosylkanamycine A HN'H C NHTs H2C 0 NHTs O=C OH OH _ _ _ C H 0,C CH3 H 3 I O /OH2C On met 100 mg de la substance obtenue à l'étape (3) en suspension dans un mélange de 4 ml de dichlorométhane et de 2,5 ml de tétrahydrofuranne et l'on ajoute 2 ml de 2,2-dimétheocpropaneo On incorpore au mélange ainsi obte- nu 6 ml d'une solution d'acide chlorhydrique à 0,035 N dams du dichlorométhane, après quoi on chauffe pendant 17 &minutes sous refluz[ (pour que s'effectue la 5,21-isopro- pylid&nation). Cette réaction est conduite dans un réac- teur équipé d'une colonne de reflux- à sa partie supérieure une colonne contenant 5 ml d'un tamis mo16culaire dénommé "lMolecular Sieves 5A91(un produit à base de zéolite dl Union Carbide Co., U.S.A.) étant interposée entre le fond de la colonne de reflux et un orifice de sortie à la par- tie supérieure du réacteur de façon que la vapeur résul- r5 ant de la distillation de la solution réactionnelle con- tenue dans ce récipient puisse monter à travers un tube à bras latéral raccordé directement entre le réacteur et le 24686 15 fond de la colonne de reflux, pour que la vapeur condensée contenant du méthanol qui descend dans cette dernière puis- se s'écouler à travers la colonne de tamis moléculaire et que seul le méthanol soit éliminé par adsorption par ce tamis. Le solvant condensé débarrassé du méthanol peut ainsi retourner dans le réacteur. Si la solution réaction- nelle ci-dessus était chauffée simplement sous reflux sans élimination de la vapeur de méthanol au moyen de la colon- ne de tamis moléculaire, il se formerait comme sous-produit le dérivé 2',3'-0-isopropylidène dans une proportion beau- coup plus grande que le dérivé 5,2'-0-isopropylidène dési- ré, de sorte que le rendement de ce dernier produit serait très faible et qu'on ne pourrait en récupérer une quantité intéressante. On refroidit avec de la glace le mélange réaction- nel ci-dessus et on le verse ensuite dans un large volume d'un mélange de dioxanne et d'ammoniaque à 1N, puis on concentre le mélange qui en résulte. On dilue la solution concentrée obtenue avec un volume d'éther ordinaire pour provoquer la précipitation d'une substance solide incolo- re. On recueille cette substance par filtration, on lave avec de l'eau et l'on sèche pour donner 85 mg d'une subs- tance solide. On place cette substance dans 3 ml de chlo- roforme et on chromatographie la solution qui en résulte dans une colonne de 5ml de gel de silice en développant avec un mélange de chloroforme et d'éthanol (10/1 en volume) comme éluant, à des fins de purification. On con- centre à siccité sous vide l'effluent qui sort de la co- lonne de gel de silice et l'on obtient 61 mg de substance solide. On place cette substance dans 5 ml de chloroforme et l'on chauffe. Pendant ce chauffage, le dérivé 2',3'-O- isopropylidène indésirable se dépose. On laisse reposer le tout à la température ambiante pendant une nuit et 1' on filtre. On concentre le filtrat à siccité et l'on ob- tient 32 mg du produit de l'intitulé. Pouvoir rotatoire: té 2 +200 (c = 0,5, acétone). 2 4 6 8 6 15 - REVENDICATIONS - 1.- Procédé de préparation de ne A caractérisé en ce qu'il consiste rivé protégé de la kanamycine A ayant HNH2C NHTs =/ 2 0\ O= la 3'-désoxykanamyci- à transformer un dé- pour formule: S NHTs (I) dans laquelle Ts désigne le groupe tosyle9 en 4', 691-O-cy- cloheylidène-5,2 '-O-ieopropylidène-3'-désoxykanamycine A, puis à éliminer simultanément le groupe 5,2'-O-isopropyli- dène et le groupe 4",6"-O-cyclohe:ylidène par hydrolyse acide d'une manière connue, pour obtenir la 3'-désoxykana- mycine A désirée. 2.- Procédé selon la revendication 1, caractérisé en ce que la transformation en 4",6"-0-cyclohexylidène-5, 2'-0-isopropylidènekanamycine A est réalisée (a) en faisant réagir le dérivé protégé de la kanamycine A avec au moins 2 proportions molaires de thiocarbonyl di- imidazole dans un solvant organique à une température com- prise entre 40 et 150 C pour effectuer l'introduction des 2 4 6 8 6 15 groupes imidazolylthiocarbonyles dans les groupes 3'- et 2"-hydroxyles du dérivé de formule (I) et donner le pro- duit bis-imidazolylthiocarbonylé correspondant, (b) en 6liminant préférentiellement le groupe 3'-imidazo- lylthiocarbonyloxy du produit bis-imidazolylthiocarbonylé par réaction avec l'hydrure de tributylétain dans un sol- vant organique à une température comprise entre 40 et 1500C pour obtenir le produit 3'-désoxyg6né de formule 6, 0=C' 4' - o0-.- NHTs 3 ' NHTs i !,, i o1 2' O- - ' (II) 02" t --I il S - dans laquelle Ts a la même définition que ci-dessus, (c) en éliminant le groupe 2"-0-imidazolylthiocarbonyle de ce produit 3'-désoxygéné par réaction avec l'ammonia- que, (d) à éliminer ensuite les groupes N-tosyles par réaction avec un métal alcalin ou alcalino-terreux dans l'ammoniac liquide de manière connue, et (e) en provoquant la rupture du noyau du 4',6'-carbamate cyclique par hydrolyse basique, de manière connue. 3-- Procédé selon la revendication 1, caractérisé en ce que la transformation en 4",6"'-O-cyclohexylidène-5, 2'-O-isopropylidènekanamycine A est réalisée (a) en faisant r6agir le dérivé protégé de la kanamycine A avec 1 à 4 proportions molaires de chlorure d'acétyle dans de la pyridine à une température comprise entre -20 C et la température ambiante pour acétyler préférentiellement le groupe 2"-hydroxyle du dérivé ci-dessus et donner le produit 2"-O-acétylé correspondant, O10 (b) en faisant réagir ce produit 2"-O-acétylé avec du 1' anhydride d'acide trifluorométhanesulfonique dans de la pyridine à une température comprise entre -20 C et 50 C pour trifluorométhanesulfonyler le groupe 3'hydroxyle et donner le produit 3'-O-trifluorom6thanesulfonylé de formu- le 6' HNH 2C NHTs /2 0 / > o 3.N HTs 0 ' 4- OSO C 3' I 5 1 Y C YCH / CH3 H3 / 6" (III) OH 2C IfNHTs O-COCH3 dans laquelle Ts désigne le groupe tosyle9 (c) en éliminant simultanément le groupe 3'-trifluoromé- thanesulfonyloxy et les groupes N-tosyles du produit 3'-0-trifluorométhanesulfonylé de formule (III) par réac- tion avec un métal alcalin ou alcalino-terreux dans de 1' ammoniac liquide à une température comprise entre -80 C et 0 C pour obtenir le produit 3'-désoxygéné correspondant, et (d) en hydrolysant le produit 3'-désoxygéné dans des con- ditions alcalines pour éliminer le groupe 2"0O-acétyle et simultanément rompre le noyau du 4',6'-carbamate cyclique. 4.- Produit intermédiaire du procédé selon la re- vendication 2, caractérisé en ce qu'il est la 4'-N:6'-0- carbonyl-4",6"-0-cyclohexylidène-5,2'-0-isopropylidène-,3', 2"-0-bis(imidazolylthiocarbonyl)-1,3,3"-tri-N-tosylkanamy- cine A. 5.- Produit intermédiaire du procédé selon la re- vendication 3, caractérisé en ce qu'il est la 2"-0-acétyl- 4'-N:6'-0-carbonyl-4",6"-0-cyclohexylidène-5,2'-0-isopro- pylidène-1,3,3"-tri-N-tosylkanamycine A. 6.- Produit intermédiaire du procédé selon la re- vendication 3, caractérisé en ce qu'il est la 2"-0-acétyl- 4'-N:6'-0-carbonyl-4",6"-0-cyclohexylidène-5,2'-0-isopro- pylidène-l,3,3",tri-N-tosyl-3'-0-trifluorométhanesulfonyl- kanamycine A.