Brevet FR2466988A1 — publié le 19810417

En raison de l'incidence très répandue de la vaginite, l'utilisation d'antifongiques locaux a augmenté considérablement pendant ces années. Jusqu'à une époque relativement récente, les anti- fongiques les plus couramment utilisés étaient des antibiotiques du type polyène, la nystatine et l'amphotéricine B. On a maintenant trouvé que certains dérivés d'imidazole possèdent une activité anti- fongique, antibactérienne et antiprotozoaire. On a utilisé couramment comme agents antifongiques trois dérivés d'imidazole, le miconazole, l'éconazole et le clotrimazole. Les agents antifongiques dérivés de l'imidazole en cours d'utilisation sont actifs contre Candida albicans lorsqu'on les administre par voie locale, oraiement et en perfusion intraveineuse. L'utilisation actuelle de ces composés est cependant limitée, le plus souvent à l'application locale. Cette limitation d'utilité est due à des considérations pratiques telles que des effets secondaires néfastes et un métabolisme important. Bien que l'on pense que Candida albicans est le prin- cipal agent causal de la vulvovaginite, Trichomonas vaginalis a éga- lement été impliqué comme agent causal et, malheureusement, les imi- dazoles antifongiques n'ont pas une bonne activité contre ce micro- organisme. On obtient une activité synergique contre Candida albicans et Trichomonas vaginalis lorsque l'on combine un imidazole antifongique avec un agent antimicrobien choisi parmi l'anisomycine, l'ascomycine, l'azalomycine F, la bréfeldine A, la copiamycine EM4940A ou EM4940B. L'anisomycine ou 3-acétate de 2-(p-méthoxybenzyl)-3,4- pyrrolidinediol est un agent antiprotozoaire décrit dans le brevet des Etats-Unis d'Amérique n 2 691 618 et dans J.A.C.S., 76, page 4053 (1954). Ce composé présente une activité contre Trichomonas vaginalis, mais pas contre Candida albicans. L'ascomycine est un agent antifongique décrit dans le brevet des Etats-Unis d'Amérique n 3 244 592,délivré le 5 avril 1966. Ce brevet indique que "l'ascomycine est nettement inefficace contre Candida". I1 n'y a pas, dans ce brevet, de mention de l'activité de l'ascomycine contre Trichomonas. L'azalomycine F est un agent antimicrobien à large spectre qui est décrit dans le brevet des Etats-Unis d'Amérique n 3 076 746,délivré le 5 février 1979. Ce brevet indique des résul- tats d'essais biologiques montrant que le composé est actif contre Candida albicans et Trichomonas vaginalis. La bréfeldine A, également connue sous le nom d'asco- toxine, de décumbine et de cyanéine, est un agent antifongique décrit dans le brevet des Etats-Unis d'Amérique n 3 896 002, délivré le 22 juillet 1975. Comme décrit dans Helv. Chim, Acta., 46, page 1235 (1963), la bréfeldine A est active contre Candida albicans. La copiamycine est un agent antifongique apparenté mais non identique à l'azalomycine F (voir appl. Microbiol. 21 (6) pages 986-989 (1971)). Comme l'azalomycine F, elle présente une acti- vité contre Candida albicans et Trichomonas vaginalis. Le brevet des Pays-Bas n 65 11 353 décrit la préparation du composé. l'EM4940A et]'EM494OB, isomères 2,4-trans et 2,4-cis du 3,4-dihydro-4-hydroxy-5-(3-hydroxy-2-pyridinyl)-4-mé thyl-2H- pyrrole-2-carboxamide respectivement sont décrits dans la demande de brevet des Etats-Unis d'Amérique, Serial n 70 287 du 27 août 1979. Les composés sont actifs contre Trichomonas vaginalis. Le dérivé d'imidazole du mélange synergique de l'inven- tion doit être actif contre Candida albicans. Bien que, dans ses aspects les plus larges, l'invention vise l'utilisation de n'importe quels dérivés d'imidazole anti- fongiques satisfaisant les critères ci-dessus comme composant de sa composition synergique, certaines classes d'imidazoles sont préférées. Un groupe préféré d'imidazoles que l'on peut utiliser selon l'invention comprend les l-(P-aryl)éthylimidazole-éthers et -amines. Comme décrit dans le brevet des Etats-Unis d'Amérique n 3 717 655 délivré le 20 février 1973, on rencontre une activité antifongique et antibactérienne chez les dérivés d'imidazole de for- mule générale N RR Ijj,... R3 (I) Ri-C--C-X-(CH2)n-Ar2 R Ar1 2466988. et leurs sels thérapeutiquement actifs, dans lesquels R1, R2 et R3 représentent chacun l'hydrogène ou un groupe alkyle en C1-C6; X est un atome d'oxygène ou un groupe -NH-; n est égal à 0, 1 ou 2; Ar1 est un groupe phényle, phényle substitué par au moins un atome d'halogène ou un groupe alkyle ou alcoxy en C1-C6, thiényle ou halogénothiényle; Ar2 est un groupe phényle, phényle substitué par au moins un atome d'halogène ou un groupe alkyle ou alcoxy en C1-C6, cyano, nitro ou amino, ou a- tétralyle; R4 est un atome d'hydrogène ou un groupe méthyle ou éthyle; et R3 est un atome d'hydrogène ou un groupe méthyle; avec les conditions supplémentaires que: (i) lorsque X est un groupe -NH-, R3 est l'hydrogène; (ii) lorsque Ar2 est un groupe phényle substitué par au moins un groupe nitro ou amino, X est l'oxygène et n est égal à 0; (iii) lorsque Ar2 est un groupe a-tétralyle, X est un groupe -NH- et n est égal à 0; et (iv) lorsque X est l'oxygène et Ar2 est un groupe phényle ou phényle substitué par au moins un atome d'halogène ou un groupe alkyle ou alcoxy en C1-C6 ou cyano, n est égal à 1 ou 2. Le]-[2-(2,4-dichlorophényl)-2-(2,4-dichlorophényl)- méthoxyéthyl]-lH-imidazole (miconazole) et le 1-[2-(4-chlorophényl)- méthoxy-2-(2,4-dichlorophényl)éthyl]-lH-imidazole (éconazole), deux agents antifongiques du commerce répondant à la formule I,sont les 1-(Paryl)éthylimidazole-éthers pe frtés. Les éthers de formule I sont préférés aux amines. Un second groupe préféré de dérivés d'imidazole sont des dérivés imidazolyléthoxy de pyrazolo[3,4-b]pyridine-5-méthanols. Comme décrit dans le brevet des Etats-Unis d'Amérique n 4 159 380 délivré le 26 juin 1979, on observe une activité antifongique et antibactérienne chez les imidazoles de formule générale R R I N-CH -C-0 C-- A. -- 1 (II) LRCH2 R13 13 iL (1') R13 et leurs sels d'addition d'acides acceptables en pharmacie, dans lesquels R. est l'hydrogène ou un groupe alkyle en C1-C7 o 1 7' phényle ou phényl-alkyle en Cl-C4,ou cycloalkyle en C3-C7; R7, R9, RlO et Rll représentent chacun un hydrogène ou un groupe alkyle ou phényle; R8 représente l'hydrogène ou un groupe hydroxy, alcoxy en C1-C7, alkylthio en C1-C7, phénoxy, phényl-alcoxy en C1-C7 un atome d'halogène ou un groupe azoté basique -N- R14 dans lequel IR15 R14 et R15 représentent chacun l'hydrogène ou un groupe alkyle, phényle ou phényle substitué par un atome d'halogène ou un groupe hydroxy, alcoxy en C1-C7, alkyle en C1- C7, mercapto, alkylthio en C1-C7 cyano ou nitro; et R12 et R13 représentent chacun un atome d'hydrogène ou d'halogène ou un groupe hydroxy, alkylthio en C1-C7s alkyle en C1-C7 ou nitro. On préfère les composés de formule II dans laquelle R12 et R13 sont des atomes de chlore en ortho et para respectivement. Comme composés préférés de formule II, on citera le 4-chloio-5-[1-(2,4-dichlorophényl)-2-(lH-imidazole-l-yl)-éthoxy- méthyl]-l-éthyl-3-méthyl-lH-pyrazolo[3,4-b]pyridine et ses sels et, plus particulièrement, le monochlorhydrate. Un troisième groupe préféré de dérivés d'imidazole comprend les dérivés imidazolyléthoxy de pyridine-5-méthanols. Comme décrit dans le brevet des Etats-Unis d'Amérique n 4 191 831 délivré le 4 mars 1980, on observe une activité antifongique et antibactérienne chez les dérivés d'imidazole de formule générale R 5X N-.C1 N9.. 16 18 R -0-CH-CH -2N (III) R1 R R17 R20 R21 et leurs sels d'addition d'acides acceptables en pharmaciedans lesquels R16 R17 R18 Rl9, R20et R21 représentent chacun un atome d'hydrogène ou d'halogène ou un groupe hydroxy, alcoxy en C1-C7, alkylthio en C1-C7, ou alkyle en C1-C7. Comme composés préférés de 2466988 t formule III, on citera la 2,4-dichloro-5-[1-(2,4-dichlorophényl)-2- (IH-imidazole-l-yl)éthoxyméthyl]pyridine, et ses sels, plus particu- lièrement le monochlorhydrate. Un quatrième groupe préféré d'imidazoles que l'on peut utiliser selon l'invention comprend les N-tritylimidazoles. Comme décrit dans les Brevets des Etats-Unis d'Amérique n 3 660 577, délivré le 2 mai 1972,et 3 705 172,délivré le 5 décembre 1972, on observe une activité antifongique chez les imidazoles de formule générale R3 i R24 R24 N R22 N (R25)n 27 (26) } (R26)n26 et leurs sels acceptables en pharmacie, dans lesquels R22, R23 et R24 représentent chacun un atome d'hydrogène ou un groupe alkyle en C1-C4 ou phényle; R25, R26 et R27 représentent chacun un atome d'halogène ou un groupe alkyle en C1-C12, nitro, trifluorométhyle, cyano, alkylthio en C1-C4 ou alcoxy en C1-C4 et n25, n26 et n27 sont chacun égaux à 0, 1 ou 2. Dans la classe de composés représentés par par la formule IV, une sous-classe préférée comprend les composés de for- mule IV dans lesquels R22, R23 et R24 sont chacun l'hydrogène. Une autre sous-classe préférée comprend les composés de forrnule IV dans lesquels R22, R23 et R24 sont chacun l'hydrogène et n25 et n27 sont égaux chacun à 0., La sous-classe la plus appréciée comprend les composés de formule IV dans laquelle R22, R23 et R24 représentent chacun l'hydrogène, n25 et n27 sont chacun égaux à 0, n26 est égal à 1 et R26 est un atome d'halogène ou un groupe nitro, trifluoro- méthyle, cyano, méthylthio ou méthoxy. Le composé préféré de for- mule IV est le 1-[(2-chlorophényl)diphénylméthyl]-ll-imidazole ou clotrimazole. 2466980, Un cinquième groupe préféré d'imidazoles que l'on peut utiliser dans l'invention comprend les N-alkylimidazoles substitués. Comme décrit dans le brevet des Etats-Unis d'Amérique n 4 0783 071, délivré le 7 mars 1978, on observe une activité anti- fongique, antibactérienne et antiprotozoaire chez les composés de formule générale R8 -CH-(CH2) qNL (V) Y-R 2 y29"\- et leurs sels d'addition d'acides acceptables en pharmacie, dans lesquels R28 et R9 représentent chacun un groupe phényle, phényl- alkyle à chalne droite en Cl-C8 ou phényl-alcényle à chatne droite en C2C8, ou bien l'un des groupes ci-dessus substitué au noyau par un ou plusieurs atomes d'halogène ou groupes alkyle en Cl-C4, ou trifluorométhyle; Y est l'oxygène ou le soufre; et m est un entier de 1 à 8; avec la condition supplémentaire que lorsque R28 est un groupe phényle ou phényla substitué, m est un entier de 2 à 8. Comme composé préféré de formule V, on citera le 1-2-(2,6- dichlorophénylthio)-4-(4-chlorophényl)butyl]imidazole, ou butoco- nazole et ses sels, plus particulièrement le mononitrate. Un sixième groupe préféré d'imidazoles que l'on peut utiliser dans l'invention comprend les l-aryl-2-(t-imidazolyl)- alkyléthers et thioéthers. Comme décrit dans le brevet des Etats-Unis d'Amérique n 4 062 966, délivré le 13 décembre 1977, on observe une activité antifongique chez les composés de formule générale \ 31 R33 -C---C--c---z-(CH2) -R35 (V) _ p 32 34 et leurs sels d'addition d'acides acceptables en pharmacie, dans lesquels R..O R31, R32 et R33 sont chacun l'hydrogène ou un groupe alkyle en C1-C6; R34 est un groupe thiényle, halogénothiényle, phényle ou phényle substitué par des halogènes ou des groupes alkyle en C1-C6, ou alcoxy en C1-C6; Z est l'oxygène ou le soufre; p est égal à 1 ou 2; et R35 est un groupe hétérocyclique aromatique ou un groupe hétérocyclique substitué par des halogènes ou des groupes alkyle en C1-C6 ou alcoxy en C1-C6. Une sous-classe préférée d'imidazoles de formule VI comprend les composés dans lesquels R34 est un groupe phényle ou phényle substitué, de préférence 2,4-dichlorophényle; R30, R31, R32 - et R33 sont chacun l'hydrogène; p est égal à 1 et R35 et un groupe thiényle ou halogénothiényle. Comme composé préféré de formule VI, on citera le 1-[2-[(chloro-3-thiényl)méthoxy]-2-(2,4-dichlorophényl)- éthyl]-lH-imidazole ou tioconazole. Un septième groupe préféré d'imidazole que l'on peut utiliser dans l'invention comprend les 1-(1,3-dioxolane-2-ylméthyl)- lH-imidazoles. Comme décrit dans le brevet des Etats-Unis d'Amérique n 4 144 346 délivré le 13 mars 1979, on observe une activité anti- fongique et antibactérienne chez les composés de formule générale CH2 R36 > 0 0R - 737 -CH 2 / et leurs sels d'addition d'acides acceptables en pharmacie, dans lesquels R36 est un groupe phényle ou phényle substitué par 1, 2 ou 3 atomes d'halogène ou groupes alkyle en Cl-C6 ou alcoxy en C1-C6; R37 est un groupe -N--C=S, amino, ou amino substitué par 1 ou 2 groupes Z alkyle en C1-C6, ou un groupe -NR-C-(Zl)q -R39 dans lequel Z est un atome d'oxygène ou de soufre, Z1 est un atome d'oxygène ou un groupe -NHl-, q est égal à Oou l 1; et R39 est un atome d'hydrogène ou un groupe alkyle en C1-C6 mono- ou dihalogénoalkyle en C1-C6, phényle ou phényle substitué par 1 ou 2 atomes d'halogène ou groupes alkyle en C1-C6 ou alcoxy en C1-C6, avec les conditions supplémen- taires que: (i) lorsque Z est l'oxygène, Z1 est un groupe -NH- et q est égal à 1, et (ii) lorsque Z1 est l'oxygène et q est égal à 1, R39 est autre que 1 39 l'hydrogène; ou un radical de formule -N Z2dans laquelle Z2 est une liaison directe, un groupe -CH2-, un atome d'oxygène ou un groupe,N-R40, o10 dans lequel R40 est un atome d'hydrogène ou un groupe alkyle en C1-C6, hydroxyalkyle en C1-C6 (alcoxy en C1-C6)-alkyle en C1-C6, alcanoyle en C 1-C6, alkylsulfonyle en C1-C6, benzylsulfonyle, alcoxycarbonyle en C2-C7, alcoxycarbonylméthyle en C3-C8, phénoxy- carbonyle, aminocarbonyle, ou aminocarbonyle substitué par 1 ou 2 groupes alkyle en C1-C6, aminocarbonylméthyle, alkylaminocarbonyl- méthyle en C3-C8, (alkyl en Cl-C6)aminothioxométhyle, (alkylthio en C1-C6) thioxométhyle, phényle, benzyle, benzoyle ou benzoyle substitué par 1 ou 2 atomes d'halogène ou groupes benzoyle ou benzoyle substitué par 1 ou 2 atomes d'halogène ou groupes alkyle en C1-C6 ou alcoxy en C1-C6 et R38 est un atome d'hydrogène ou un groupe nitro, avec la condition supplémentaire que, lorsque R38 est un groupe nitro, R37 est un groupe amino. Les composés préférés de formule VII sont ceux dans lesquels R38 est l'hydrogène et R36 est un groupe mono- ou di- 38 3 halogénophényle, de préférence 2,4-dichlorophényle. On citera en particulier la cis-l-acétyl-4--4-[2-(2,4-dichlorophényl)-2-(lH- imidazole-l-ylméthyl)-l,3-dioxolanne-4-ylmêthoxy]phényl}pipérazine ou kétoconazole. Un huitième groupe préféré d'imidazoles que l'on peut utiliser dans l'invention comprend les dérivés imidazolyl- éthoxy de quinoléine-3-méthanols. Comme décrit dans le brevet des EtatsUnis d'Amérique n 4 202 985 délivré le 13 mai 1980, on observe une activité antibactérienne et antifongique chez les composés répondant à la formule générale R N>x-R41 R J46 R T'c C-o-C.-c. -N C (VIII) 44 2 R43 42 R/ 47 R48 et leurs sels d'addition d'acides acceptables en pharmacie, dans lesquels R41' 42 R43 R44 R45 R46, R47 et R48 représentent chacun un atome d'hydrogène ou d'halogène ou un groupe hydroxy, alkyle en C1-C7, alcoxy en C1-C7 ou alkylthio en C1-C7. Les composés préférés de formule VIII sont ceux dans lesquels R41J R42, R43, R44, R45, R46 R47 et R48 représentent chacun un atome d'hydrogène R441 46147 R48 ou d'halogène ou un groupe alkyle en C1-C4. On préfère en parti- culier ceux dans lesquels R41, R43 et R46 sont chacun l'hydrogène ou un halogène, en particulier l'hydrogène; R42, R44, R45 et R48 sont chacun l'hydrogène ou un halogène, en particulier un halogène, plus spécialement le chlore; et R47 et R48 sont fixés en positions 2 et 4 du noyau phényle. On citera à titre d'exemples de composés de formule VIII le monochlorhydrate de 4,6-dichloro-3-[1-(2,4- dichlorophényl)-2-(lH-imidazole-l-yl)éthoxyméthyllquinoléine, le dichlorhydrate de 4,7-dichloro-3-[1-(2,4-dichlorophényl)-2-(lH- imidazole-il-yl)éthoxyméthyl]quinoléine et la 3-[1-(2,4-dichloro- phényl)-2-(lH-imidazole-l-yl)-éthoxyméthyl]quinoléine. Les compositions imidazole antifongique- agent antimicrobien selon l'invention sont utiles pour le traitement de la vulvovaginite et des dermatophytoses superficielles chez les mammifères, en particulier en médecine humaine. Elles sont parti- culièrement efficaces contre Candida albicans et Trichomonas vaginalis. Le rapport pondéral de l'imidazole à l'agent antimicro- bien est compris dans l'intervalle de 1:10 à 10:1 et ordinairement de 1:5 à 5:1. Les compositions de l'invention sont destinées à l'administration locale et peuvent être formulées dans n'importe 2466966. quel véhicule pharmaceutique convenable, dans une large gamme de concentrations, ordinairement entre environ 0,1 et 10,0%7. en poids de la composition. Des formules de crèmes,pommades et lotions sont toutes connues dans la technique et peuvent chaque fois servir de système fournissant la composition de l'invention. D'autres systèmes sont également connus dans la technique et sont intéressants pour les compositions de l'invention. Par exemple, les compositions peuvent prendre la forme d'une tablette pour l'usage intravaginal ou d'un liquide pour l'imprégnation d'un tampon pour l'usage intravaginal. La description ci-dessus de véhicules n'est donnée qu'à titre d'illus- tration sans nullement limiter le cadre de l'invention. Essais biologiques On décrit ci-après le mode opératoire du "tableau de contrôle" de dilution sur gélose ou bouillon utilisé pour démontrer les propriétés synergiques des compositions de l'invention. Synergisme anti-Candida Inoculum: On prépare des cultures d'une nuit des micro- organismes (souches de Candida albicans et d'autres espèces de Candida) en inoculant environ 10 ml de bouillon F-4 avec les micro-organismes prélevés sur tranche de gélose au moyen d'une boucle de platine. On fait incuber les bouillons inoculés h 37 C pendant 18 -20 h, ce qui donne une densité de micro-organismes d'environ 108 unités formatrices de colonie (CFU)/ml. La teneur de l'inoculum dans l'essai est 10 CFU. Juste avant l'emploi, on dilue les cultures sur bouillon dans le rapport 1:10 dans le bouillon F (avec production de 10 CFU/ml). On place ensuite les micro-organismes dans un godet calibré et on les imprime sur des plaques de gélose préparées, en utilisant l'ino- culateur multipoint A-400 de la Société Denley Instruments, Sussex, Angleterre. L'inoculateur Denley fournit 0,001 ml de chaque godet, produisant ainsi un inoculum de 10 CFU pour chaque organisme. Préparation des plaques: On dissout l'agent antimicro- bien et l'imidazole à essayer dans un diluant approprié, par exemple eau, tampon, diméthylsulfoxyde (DMSO), etc. Si l'on utilise un diluant tel que le DMSO, on fait des dilutions suffisantes pour que la concen- tration finale du DMSO dans la plaque ne soit pas inhibitrice. On présente un schéma pour essayer chaque médicament à 25s 12,5, 6,3, 3,1, 1,6, 0O8, 0,4, 0,2 et 0,1 y/ml et à toutes les combinaisons de ces valeurs dans le mélange de l'agent antimicrobien et de l'imidazole. On prépare l'agent antimicrobien et l'imidazole en dissolvant 1 mg dans 2 ml d'eau. On prépare huit dilutions à 1:2 de chaque dans le bouillon F-4. On ajoute ensuite 1 ml de chaque concen- tration au tube à essais approprié, comme indiqué ci-dessous. Concentra- tion maxi- -) male d'agent antimicro- bien Agent anti- microbien A A-I1 A-2 A-31 A-4 A-51 A-61 A-7 j A-81 A-9 A-10 fB B-i B-2 B3 B-4 B-51 B-6j F c c-1 C-2 c-3 D D-1 D- F... i.f-.: E. ; F -.-.-..-...-.- G ' ' 2 3 4 5 6 718 9 10 Imidazole t Concentration maximale d 'imidazole A chaque tube dans la colonne verticale 1 et la rangée horizontale J, on ajoute 1,0 ml de bouillon F-4: J-1 reçoit donc 2,0 ml de bouillon F-4 et ne contient pas de médicament. A la rangée horizontale A (tubes A-1 à A-10), on ajoute 1, 0 ml de la concentration 0,5 mg/ml de l'agent antimicrobien (concentration la plus élevée). A la rangée horizontale B, on ajoute 1,0 ml de la première dilution en série de l'agent antimicrobien (0,25 mg/ml). On répète ce mode opératoire avec les tubes des rangées horizontales restantes en utilisant les dilutions en série suivantes (concentra- tions en ordre décroissant). La rangée A a donc la concentration la plus élevée d'agents antimicrobiens, la rangée I la concentration la plus faible. La rangée J ne reçoit pas d'agent antimicrobien. A la colonne verticale 10 (tubes A-10 à J-10), on ajoute 1,0 ml de la concentration 0, 5 mg/ml d'imidazole (concentration la plus élevée en imidazole). Dans la rangée verticale 9, on ajoute 1,0 ml de la première dilution en série d'imidazole (0,25 mg/ml). On répète ce mode opéra- toire avec les autres rangées verticales en utilisant les dilutions en série suivantes (concentrations dans l'ordre décroissant). La rangée 1 ne reçoit pas d'imidazole. Tous les tubes doivent alors avoir un total de 2,0 ml. On étiquette des bottes de Petri A-1 à A-10, B-1 à B-10,... et J-1 à J-10. On joute 1,0 ml du tube approprié à la botte correspondante. Dans chaque boîte,on ajoute ensuite 9,0 ml de gélose F-4 refroidie à environ 50C. On agite le contenu des bottes pour mélanger vigoureusement les médicaments et la gélose. On laisse refroidir les bottes. On prépare une botte "départ", une botte "entre" et une botte "arrêt" contenant chacune 10,0 ml de gélose F-4. Ces bottes sont des bottes de contrôle de la croissance. Mise en oeuvre de l'essai: On inocule chaque botte avec 10 CFU de chaque micro-organisme d'essai et on incube à 370C pendant 18-20 h. Les micro-organismes sont notés (+), (+) ou (-). Les notes (+) et (+) indiquent la croissance, tandis que l'inhibition complète de la croissance est indiquée par (-). Interprétation des résultats: Les rangées 1 et J donnent les concentrations inhibitrices minimales respectives de l'agent antimicrobien et de l'imidazole seuls. La concentration inhibitrice minimale (MIC) est définie comme la concentration la plus faible d'un composé donnant une inhibition complète de la crois- sance, c'est-à-dire une note (-). La présence d'interactions synergiques entre les deux médicaments d'essai peut être déterminée par analyse de V'isbo- logramme. Dans la construction d'un isobologramme pour deux médica- ments, on mesure les doses des deux médicaments respectivement sur des échelles le long de deux axes perpendiculaires et on porte sur le diagramme les points expérimentaux représentant les paires de doses produisant une réponse biologique déterminée (dans ce cas, l'inhibition complète de la croissance du micro-organisme d'essai). La courbe joignant les points est dénommée isobole. Le type d'action combinée des médicaments, synergie, addition ou antagonisme, peut être déterminé par la région de l'isobologramme dans lequel se situe l'isobole. Lorsque les deux médicaments sont actifs séparé- ment (c'est-à-dire lorsque chacun seul produit la réponse considérée), l'isobole relie un point A sur un axe de l'isobologramme à un point B sur l'autre axe (diagramme). Les points A et B représentent les C.I.M. respectives de l'agent antimicrobien et de l'imidazole. Si l'iso- bole est une ligne droite AB pour deux médicaments, on dit qu'ils présentent une action additive ou addition. Si, au contraire, l'iso- bole se situe à l'intérieur du triangle OAB, on dit qu'il y a syner- gisme et, si l'isobole est à l'extérieur du rectangle OACB, il y a antagonisme entre les deux médicaments. Antagonisme B-.-------------------------C Synergisme A Synergisme anti-dermatophyte et anti-trichomonas. On utilise le mode opératoire décrit ci-dessus du tableau de contrôle de dilution sur bouillon (on remplace Candida albicans et l'autre espèce Candida par Trichophyton mentagrophytes et Trichomonas vaginalis) pour démontrer les propriétés synergiques des compositions de l'invention. Les tableaux I, Il et III ci-après résument le travail expérimental effectué en utilisant les modes opératoires ci-dessus, pour démonter le synergisme des compositions de l'invention. TABLEAU I Synergisme azalomycine F - imidazole contre Candida albicans ! Souches Moyenne géométrique de la CIM Souches inhi- Moyenne géométrique de la CIM Imidazole!essayées (y/ml) contre les souches bées par (y/ml)pour chaque composé dans la essayées synergisme combinaison présentant le syner- I|j _ _ _ _ gisme contre les souches Azalomycine F Imidazole Azalomycine F Imidazole Econazole 10 6,2 3,8 10 1,3 0,4 Miconazole 10 6,2 4,7 10 0,7 0,5 SQ 80 3651 10 6,2 25,0 10 0,9 3,5 q2,01 0, 3, SQ 80 9762 9 6,2 6,2 9 1,0 0,5 SQ 80.8983 10 5,8 8,2 10 1,0 0,5 i 4 SQ 81 037 10 9,4 12,5 10 1,0 1,3 * Clotrimazole 6 3,9 2,5 6 0,3 0,3 i Tioconazole 10 3,8 12,5 10 0,7 1,4 Kétoconazole 10 5,4 50,0 10 1,0 0,5 SQ 80 558. 10 6,2 10,1 10 1,0 1,3 SQ 80 9556 10 6,2 8,2 10 0,9 1,0 SQ 80 896 710 9,4 6,2 10 1,5 1,1 SQ 80 986 10 6,2 7,1 10 1,3 1,1 ______ 1, 1, t I=a ru 0% o' CD Notes du tableau I 1. SQ 80 365 = chlorhydrate 1:1 de la 4-chloro-5-[rl-(2,4- dichlorophényl) -2-(lH-imidazole-l-yl)éthoxy]méthyl]-l- éthyl-3-mdthyl-lH-pyrazolo[3,4-b]pyridine. 2. SQ 80 976 = chlorhydrate 1:1 de la 4-chloro-5-[[1-(2,4- dichlorophényl)-2-(lH-imidazole-l-yl)éthoxy]mdthyl]l-m1-thy1- lH-pyrazolo[3,4-b]pyridine. 3. SQ 80 898 = chlorhydrate 1:1 de la 2,4-dichloro-5-[[l-(2,4- dichlorophényl)-2-(lH-imidazole-l-yl)éthoxy]méthyl]pyri- dine. 4. SQ 81 038 chlorhydrate 1:1 de la 4,6-dichloro-3-[[1-(2,4- dichlorophdnyl)-2-(lH-imidazole-l-yl)éthoxy]méthylJ-2- m thylpyridine. 5. SQ 80 558 = chlorhydrate 1:1 de la 4,7-dichloro-3-[[rl- -2,4-dichlorophényl)-2-(U11-imidazole-1-yl)dthoxy]méthoxy]- quinoléine. 6. SQ 80 955 = chlorhydrate 1:1 de la 4,6-dichloro-3-[[1-(2,4- dichlorophényl)-2-(1H-imidazoie-l-yl)éthoxy]méthyl]quino- léine. 7. SQ 80 896 = chlorhydrate 1:1 de la 1-(3-chloro-10l,11- dihydro-5H-dibenzo[a,d]cycloheptène-5-yl)-lH-imidazole. 8. SQ 80 986 = chlorhydrate de 1-(10,11-dlhydro-3-méthyl-5RH- dibenzo[a,d]cycloheptène-5-yl)-lH-imidazole. TABLEAU II Synergisme azalomycine F-éconazole. Souc'.es Moyenne géométrique de la Souches Moyenne géométrique de la CIM CIM (y/ml) contre les inhibées (y/ml) pour chaque composé dans Microorganisme essayées souches essayées par syner- la combinaison présentant le gisme synergisme contre les souches Azalomycine F Econazole Azalomycine F Econazole Candida albicans 10 5,6 5,6 10 1,3 j 0,3 Candida tropicalis 3 6,2 12,5 3 1,3 2,1 Candida krusei 2 6,2 1,6 2 2,2 0,3 Candida parakrusei 24,4 2,2 2 2,0 0,6 Candida pseudotropicalis 1 3,1 3,1 1 0,9 0,9 Candida guilliermondii 1 3,1 0,4 1 1,6 0>2 Candida stellatoidea 1 6,2 12,5 1 1,2 2,4 Trichomonas vaginalis 1 7,8 15,6 1 3,0 4,4 Trichomonas foetus 1 15,6 31,2 1 5,9 9,8 Trichophyton mentagrophytes 1 1, 6 0,003 1 0,8 0,0015 _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _._ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ I._ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ t- a% FQ o CD CD oe. TABLEAU III Synergisme synergiste-éconazole contre Candida albicans Souches Moyenne géométrique de la CIM Souches inhi- Moyenne géométrique de la CIM (y/ml) contre les souches bées par (y/ml) pour chaque composé dans la Synergiste essayées essayées synergisme combinaison présentant le syner- gisme contre les souches Synergiste | Econazole Synergiste Econazole Azalomycine F 10 5,6, 5,6 10 1,3 0,3 Anisomycine 10 34,2 5,6 10 5,7 0,4 Brefeldine A j 10 20,1 5,6 10 0,7 0,1 EM 4940 A 10 100 4,7 10 16,5 0,2 EH 4940 Aet B 10 100 12,5 10 25,0 0,5 EM 4940 B 10 ' 100 11,7 10 25,0 0,8 -4 Ch 0% 0% o CD CD 2466980. On décrit ci-après en détail l'essai de détermi- nation par diffusion utilisé pour démontrer les propriétés syner- giques d'une composition contenant de l'ascomycine et de l'éconazole. Estimation qualitative. On utilise une détermination par diffusion sur. gélose. Essentiellement, on incorpore l'imidazole dans un milieu de gélose ensemencé par Candida à une concentration bien inférieure à sa concentration inhibitrice, par exemple 1/5 ou 1/10 de la CIM. On prépare diverses concentrations de l'agent antimicrobien et on les place sur des disques de papier filtre que l'on applique sur des bottes avec et sans imidazole. Si la zone d'inhibition produite par l'agent antimicrobien en présence d'imidazole est supérieure à celle observée en l'absence d'imidazole, il y a-synergisme. Mode opératoire: On prépare une culture d'une nuit de Candida albicans en inoculant environ 10 ml de bouillon F-4 avec le micro-organisme prélevé sur une tranche de gélose au moyen d'une boucle de platine. On incube les bouillons inoculés à 370C pendant 18-20 h, ce qui donne une densité de micro-organisme d'environ CFU/ml. On prépare trois fioles de gélose F-4. Dans une fiole, on ajoute 1/5 de la concentration inhibitrice minimale de l'imida- zole pour la souche d'essai de Candida. Dans la seconde fiole, on ajoute 1/10 de la CIM de l'imidazole et, dans la troisième fiole, on n'ajoute pas de médicament. Les trois fioles reçoivent ensuite un inoculum à 1% d'une dilution à 1:10 de la culture d'une nuit de Candida albicans. Ceci donne une densité de 10 CFU/ml du micro- organisme d'essai dans les plaques. On verse la gélose ensemencée avec et sans imidazole dans des boites de Petri et on laisse soli- difier. On dissout l'agent antimicrobien et on applique des concentrations déterminées sur des disques de papier filtre (6,35 mm de diamètre). Après séchage, on applique des jeux de disques sur les bottes. On incube ensuite les bottes à 370C pendant 18-20 h et on mesure les zones d'inhibition produites par l'imidazole. Les résultats sont portés sur un diagramme en concentration d'imi- dazole en fonction du diamètre de la zone d'inhibition. L'augmentation dans les zones d'inhibition observée avec l'ascomycine en présence de concentrations d'éconazole inférieures à la concentration inhibitrice indique que ces deux médicaments ont une interaction synergique contre Candida albicans. Milieu F-4 La composition du milieu F-4 utilisé dans les essais ci-dessus est la suivante: Tryptone Extrait de malt Glucose Extrait de levure Eau distillée g 3 g g 3 g q.s.p. 1 litre On stérilise à 121 C pendant 15 min. Si l'on désire un milieu solide, on ajoute 15 g de gélose par litre. REVENDICATIONS R E V E N D I C A T I 0 N S 1 - Composition synergique pour le traitement d'une infection fongique, caractérisée en ce qu'elle contient une combinai- son d'un agent antimicrobien choisi parmi l'anisomycine, l'ascomycine, l'azalomycine F, la bréfeldine A, la copiamycine, les isomères 2,4- trans et 2,4-cis du 3,4-dihydro-4-hydroxy-5-(3-hydroxy-2-pyridinyl)- 4-méthyl-2H-pyrrole-2-carboxamide et d'un dérivé d'imidazole anti- fongique actif contre Candida albicans, dans un rapport pondéral agent antimicrobien/dérivé d'imidazole antifongique d'environ 10:1 à 1:10. 2 - Composition selon la revendication 1, caractérisée en ce que le dérivé d'imidazole antifongique est un composé de for- mule générale R5 L R L--3N 4 (I) R Ri-_-C-X-(CH2)n _Ar2 1, 2 n 2 R2Ar1 ou un de ses sels, dans lequel R1, R2 et R3 représentent chacun l'hydrogène ou un groupe alkyle en C1-C6; X est un atome d'oxygène ou un groupe -NH-; n est égal à 0, 1 ou 2; Ar1 est un groupe phényle, phényle substitué par au moins un atome d'halogène ou un groupe alkyle ou alcoxy en C1-C6, thiényle ou halogénothiényle; Ar2 est un groupe phényle, phényle substitué par au moins un atome d'halogène ou un groupe alkyle ou alcoxy en C1-C6, cyano, nitro ou amino, ou atétralyle; R4 est un atome d'hydrogène ou un groupe méthyle ou éthyle; et R3 est un atome d'hydrogène ou un groupe méthyle; avec les conditions supplémentaires que: (i) lorsque X est un groupe -NH-, R3 est l'hydrogène; (ii) lorsque Ar2 est un groupe phényle substitué par au moins un groupe nitro ou amino, X est l'oxygène et n est égal à O; (iii) lorsque Ar2 est un groupe a-tétralyle, X est un groupe -NH- et n est égal à O; et (iv) lorsque X est l'oxygène et Ar2 est un groupe phényle ou phényle substitué par au moins un atome d'halogène ou un groupe alkyle ou alcoxy en C1-C6 ou cyano, n est égal à 1 ou 2. 3 - Composition selon la revendication 2, caractérisée en ce que ledit dérivé d'imidazole antifongique est le miconazole. 4 - Composition selon la revendication 2, caractérisée en ce que ledit dérivé d'imidazole antifongique est l'éconazole. - Composition selon la revendication 1, caractérisée en ce que le dérivé d'imidazole antifongique est un composé de formule générale (11) R3 ou un de ses sels, dans lequel R6 est l'hydrogène ou un groupe alkyle en C1-C7) phényle ou phényl-alkyle en C1-C4 ou cycloalkyle en C3-C7; R7, R9, R1i et Rll représentent chacun un hydrogène ou un groupe alkyle ou phényle; R8 représente l'hydrogène ou un groupe hydroxy, alcoxy en C1-C7, alkylthio en C1-C7, phénoxy, phényl-alcoxy en C1-C7, un atome d'halogène ou un groupe azoté basique -N' R14 dans lequel R15 R14 et R15 représentent chacun l'hydrogène ou un groupe alkyle, phényle ou phényle substitué par un atome d'halogène ou un groupe hydroxy, alcoxy en C1-C7, alkyle en C1- C?, mercapto, alkylthio en C1-C7, cyano ou nitro; et R12 et R13 représentent chacun un atome d'hydrogène ou d'halogène ou un groupe hydroxy, alkylthio en C1-C7, alkyle en C1-C7 ou nitro. 6 - Composition selon la revendication 5, caractérisée en ce que le dérivé d'imidazole antifongique est la 4-chloro-5-[[1- (2,4-dichlorophényl)-2-(lH-imidazole-l-yl)éthoxy]méthyl]-l-éthyl-3- méthyl-lH-pyrazolo[3,4-b]pyridine, ou un de ses sels. 22 - 7 - Composition selon la revendication 1, caractérisée en ce que le dérivé d'imidazole antifongique est un composé de formule générale R N R ; >R1 R2O-0CH CH-NC (III) 17 $ 20 R R21 ou un de ses sels, dans lequel R16' R17, R18, R19, R20 et R21 repré- sentent chacun un atame d'hydrogène ou d'halogène ou un groupe hydroxy, alcoxy en C 1-C7, alkylthio en C1-C?7 ou alkyle en C1-C?. 8 - Composition selon la revendication 7, caractérisée en ce que le dérivé d'imidazole antifongique est la 2,4-dichloro- -[[1-(2,4-dichlorophényl)-2-(lH-imidazole-l-yl)éthoxy]méthyl]pyri- dine, ou un de ses sels. 9 - Composition selon la revendication 1, caractérisée en ce que le dérivé d'imidazole antifongique est un composé de for- mule générale R23 R (R25)n R 27(R) 2727 (IV) (R26)n26 ou un de ses sels, dans lequel R22, R23 et R24 représentent chacun un atome d'hydrogène ou un groupe alkyle en C1-C4 ou phényle; R25, R26 et R27 représentent chacun un atome d'halogène ou un groupe alkyle en C 1-C2, nitro, trifluorométhyle, cyano, alkylthio en C1-C4 ou alcoxy en C1-C4 et n25 '126 et n27 sont chacun égaux à 0, 1 ou 2. 4p - Composition selon la revendication 9, caracté- risée en ce que le dérivé d'imidazole antifongique est le clotri- mazole. 11 - Composition selon la revendication 1, caracté- risée en ce que le dérivé d'imidazole antifongique est un composé de formule générale R 8-CH- (CH) --N (V) Y-R29 ou un de ses sels, dans lequel R28 et R29 représentent chacun un groupe phényle, phényl-alkyle à chaîne droite en C1-C8 ou phényl- alcényle à chatne droite en C2-C8, ou bien l'un des groupes ci- dessus substitué au noyau par un ou plusieurs atomes d'halogène ou groupes alkyle en C -C4 ou trifluorométhyle; Y est l'oxygène ou le 1 4 ' soufre; et m est un entier de 1 à 8; avec la condition supplémen- taire que, lorsque R28 est un groupe phényle ou phényle substitué, m est un entier de 2 à 8. 12 - Composition selon la revendication 11, caracté- risée en ce que le dérivé d'imidazole antifongique est le butoco- nazole. 13 - Composition selon la revendication 1, caracté- risée en ce que le dérivé d'imidazole antifongique est un composé de formule générale N R R 31 33 R30 N-C -----C-Z-(CH2) -R35 (VI) R32 R34 ou un de ses sels, dans lequel R3, R31, R32 et R33 sont chacun l'hydrogène ou un groupe alkyle en C1-C6; R34 est un groupe thiényle, halogénothiényle, phényle ou phényle substitué par des halogènes ou des groupes alkyle en C1-C6, ou alcoxy en Cl-C6; Z est l'oxygène ou le soufre; p est égal à 1 ou 2; et R35 est un groupe hétérocyclique aromatique ou un groupe hétérocyclique substitué par des halogènes ou des groupes alkyle en C1-C6 ou alcoxy en C1-C6. 14 - Composition selon la revendication 13, caracté- risée en ce que le dérivé d'imidazole antifongique est le tioco- nazole. - Composition selon la revendication 1, caracté- risée en ce que le dérivé d'imidazole antifongique est un composé de formule générale CH2 36 > O R0 l l CH2- (VII) ou un de ses sels, dans lequel R 36 est un groupe phényle ou phényle substitué par 1, 2 ou 3 atomes d'halogène ou groupes alkyle en C1-C6 ou alcoxy en C1-C6; R37 est un groupe -N=C-S, amino, ou amino substitué par 1 ou 2 groupes alkyle en C1-C6, ou un groupe Z I -NH-C-(Z1) q -R39 dans lequel Z est un atome d'oxygène ou de soufre, Z1 est un atome d'oxygène ou un groupe -NH-, q est égal à O ou à 1 et R39 est un atome d'hydrogène ou un groupe alkyle en C1-C6, mono- ou dihalogénoalkyle en C1-C6, phényle ou phényle substitué par 1 ou 2 atomes d'halogène ou groupes alkyle en C1-C6 ou alcoxy en C1-C6, avec les conditions supplémentaires que: i 63 (i) lorsque Z est l'oxygène, Z1 est un groupe -NH- et q est égal à 1, et (ii) lorsque Z1 est l'oxygène et q est égal à 1, R39 est autre que l'hydrogène; ou un radical de formule -N / 2 dans laquelle Z2 est une liaison directe, un groupe -CH2-, un atome d'oxygène ou un groupeN-R40, dans lequel R40 est un atome d'hydrogène ou un groupe alkyle en C1-C6, hydroxyalkyle en C1-C6 (alcoxy en C 1-C6) alkyle en C1-C6, - alcanoyle en C1-C6, alkylsulfonyle en C1 -C6, benzylsulfonyle, alcoxycarbonyle en C2-C7, alcoxycarbonylméthyle en C3-C8, phénoxy- carbonyle, aminocarbonyle, ou aminocarbonyle substitué par 1 ou 2 groupes alkyle en C1-C6, aminocarbonylméthyle, alkylaminocarbonyl- méthyle en C3-C8, (alkyl en C1-C6)aminothioxométhyle, (alkylthio en C1-C6) thioxométhyle, phényle, benzyle, benzoyle ou benzoyle substitué par 1 ou 2 atomes d'halogène ou groupes benzoyle ou benzoyle substitué par 1 ou 2 atomes d'halogène ou groupes alkyle en C1-C6 ou alcoxy en C1-C6 et %8 est un atome d'hydrogène ou un groupe nitro, avec la condition supplémentaire que, lorsque R38 est un groupe nitro, R37 est un groupe amino. 16 - Composition selon la revendication 15, caracté- risée en ce que le dérivé d'imidazole antifongique est le kéto- conazole. 17 - Composition selon la revendication 1, caracté- risée,en ce que le dérivé d'imidazole antifongique est un composé de formule générale R46 R J-O--CH-CH (VIII) 3 R42 R48 ou un de ses sels, dans lequel R41, R42, R43, R44, R45, R46, R47 et R48 représentent chacun un atome d'hydrogène ou d'halogène ou un groupe hydroxy, alkyle en C1-C7, alcoxy en C1-C7 ou alkylthio en C1-C7. 18 - Formes d'administration des compositions selon l'une quelconque des revendications 1 à 17, caractérisées en ce qu'elles se présentent notamment en crèmes, pommades et lotions conte- nant 0,1 à l10/ en poids des ingrédients actifs. 19 - Formes d'administration selon l'une quelconque des revendications 1 à 17, caractérisées en ce qu'elles se présentent sous forme de tablettes ou de liquides pour l'imprégnation de tampon pour l'emploi vaginal.