Brevet FR2468616A1 — publié le 19810508

L'invention concerne un nouveau procédé de produc- tion de la tobramycine ou 3'-désoxykanamycine B 'à partir d'un dérivé protégé de kanamycine B, et les produits in- termédiaires obtenus au cours de ce procédé. La demanderesse a déjà décrit un procédé de synthèse de la 3'désoxykanamycine B a partir de la kanamycine B (cfPrépublication de brevet japonais"'Kokai"n 80 038/74 et brevet US 3 929 762). Selon ce procédé, les cinq grou- pes amino de la kanamycine B sont tous protégés avec un groupe amino-protecteur du type alkyloxycarbonyl, aral- kyloxycarbonyl ou aryloxycarbonyl, par exemple un groupe éthoxycarbonyl ou benzyloxycarbonyl, ou du type base de Schiff, par exemple le groupe salicylidène, et les groupes hydroxy en 4" et 6" de la kanamycine B sont protégés avec un groupe hydroxy protecteur bivalent tel que le groupe cyclohexylidène ou le groupe tétrahydropyranylidène. On fait alors réagir le dérivé protégé ainsi obtenu & une température inférieure à 100 C avec un halogénure d'alkyl- sulfonyl, d'aralkylsulfonyl ou d'arylsulfonyl, ou un an- hydride sulfonique correspondant, dans une proportion in- férieure ou égale à 1,5 mole dans un solvant organique ba- sique, de préférence la pyridine séche; le groupe hy- droxy en 3' du dérivé de kanamycine B est ainsi sélecti- vement sulfonylé sans sulfonylation simultanée du groupe hydroxy en 4'. On fait réagir le produit 3'-mono-O-sulfo- nyJé ainsi obtenu avec une solution à 50 % ou plus de bro- mure ou d'iodure de sodium ou de lithium dans un solvant organique aprotique pour transformer le groupe sulfonyl- oxy en 3' en radical bromo ou iodo, qui est alors remplacé par réduction par un atome d'hydrogène pour produire un dérivé désoxy en 3' de kanamycine B. Ce dernier est en- suite soumis a une déprotection pour éliminer le groupe protecteur résiduel, ce qui donne la 3'-désoxykanamycine B. Ce procéde connu présente pourtant un inconvénient: il faut 24 heures ou plus pour effectuer la transformation du composé 3'-O-sulfonylé en composé 3'-halo, même quand cette transformation est effectuée par réaction avec un bromure ou un iodure de métal alcalin à une concentration de 50 % ou plus à une température de 100 C ou supérieure ce qui conduit à la formation de sous-produits indésira- bles et/ou de dégradation du produit désiré. On a trouvé que, quand cette transformation est effectuée dans des conditions réactionnelles plus ménagées ou à une concen- tration en halogénure de métal alcalin inférieure à 50 %, la réaction se poursuit trop lentement pour que le procédé soit applicable pratiquement. La demanderesse a effectué d'autres études pour pallier ces inconvénients et elle a découvert que, quand on choisit un groupe arylsulfonyle et spécialement le groupe tosyl comme groupe amino protecteur dans la N-protec- tion de la kanamycine B, parmi les groupes amino protec- teurs connus du type sulfonyl tels que les groupes alkyl- sulfonyles, aralkylsulfonyles et arylsulfonyles à la place des groupes alkyloxycarbonyles, aralkyloxycarbonyles ou aryloxycarbonyles utilisés comme groupes amino-protecteurs dans le procédé de la prépublication de brevet japonais "Kokai"ln 80 038/74 ou dans le brevet US 3 929 762 ci-des- sus mentionnés, non seulement on peut effectuer la sulfo- nylation préférentielle du groupe hydroxy en 3' de la kana- mycine B par réaction avec l'agent de sulfonylation de la manière décrite dans les documents ci-dessus mais qu'il est également possible d'effectuer la réaction du produit 3'-0- sulfonylé résultant avec un iodure ou un bromure d'un métal alcalin ou autre pendant une durée de réaction réduite, de minutes à 2 heures, à une température entre 0 C et 150 C, pour terminer la bromuration ou l'ioduration en 3' même à une concentration en halogénure inférieur, entre 3 et 50 %, ce qui permet de réduire considérablement la durée de réac- tion nécessaire à l'halogénation en 3'; de plus, l'utili- sation du groupe arylsulfonyl comme groupe amino protec- teur permet de transformer le dérivé 3'-0-sulfonylé de ka- namycine B en dérivé chloré en 3' correspondant par réac- tion avec un chlorure d'un métal alcalin ou autre, con- trairement aux expériences préalablement acquises du pro- cédé décrit dans le brevet US 3 929 762. C'est sur ces découvertes que repose la présente invention. En outre, la demanderesse a déjà mis au point et revendiqué un procédé de synthèse de la 3',4'-didésoxy- kanamycine B à partir de la kanamycine B (Publications de brevets japonais n 7595/75 et 46110/76 et brevet US 3 753 973) ainsi qu'un autre procédé pour cette synthèse (brevet britannique n 1 555 661 ou brevet US 4 156 078). Dans ce dernier procédé les cinq groupes amino de la ka- namycine B sont tous protégés avec un groupe amino-protec- teur du même type sulfonyl que mentionné ci-avant et les groupes hydroxy en 4" et 6" sont protégés avec un groupe hydroxy protecteur bivalent. On fait alors réagir le dé- rivé protégé ainsi obtenu avec un halogénure d'acide alkyl-, aryl- ou aralkylsulfonique, spécialement avec le chlorure de benzylsulfonyl dans la pyridine sèche à une température relativement basse, de -30 C à +30 C pour benzylsulfonylrà la fois les groupes hydroxy en 3'- et 4'-, puis on fait réagir l'ester 3',4'-disulfonique résultant avec l'iodure de sodium pendant 30 minutes à 3 heures, à une température entre 50 et 150 C pour effectuer la dé-sulfonyloxylation et produire un dérivé 3',4'-éno (le dérivé non saturé en 3',4'). La liaison non saturée en 3,4' dudit dérivé éno est hydrogénée pour donner un dé- rivé protégé de 3',4'-didésoxykanamycine B que l'on traite alors avec du. sodium métallique dans l'ammoniac liquide ou similaire pour éliminer les groupes sulfonyles amino- protecteurs résiduels, ce qui permet d'obtenir la 3',4'- didésoxykanamycine B. En étudiant le procédé décrit dans le brevet britannique 1 555 661, la demanderesse a dé- couvert que quand on fait réagir un dérivé protégé de ka- namycine B dont les cinq groupes amino sont tous protégés avec le groupe amino-protecteur du type sulfonyl et dont les groupes hydroxy en 4" et 6" sont bloqués avec un groupe hydroxy-protecteur bivalent, avec une proportion 2 molaire de chlorure de benzylsulfonyl dans de la pyri- dine à une température relativement basse, entre -30 C et C pendant toute une nuit, on peut benzylsulfonyler à la fois les groupes hydroxy en 3' et 4' de la kanamy- cine B pour obtenir l'ester de l'acide 3',4'-di-O-sul- fonique. On a découvert que, quand on fait r6agir le d6riv6 de kanamycine B semblablement N-sulfonylé et 4",6"-O-protégé avec une proportion environ 1 molaire ou plus d'un halogénure d'acide alkyl-, aryl- ou aral- kyl-sulfonique dans de la pyridine sèche à une temp6ra- ture entre -4O C et environ 100 C pendant une dur6e al- lant de 30 minutes à 24 heures, le groupe hydroxy en 3' du composé de kanamycine B pouvait être pr6férentielle- ment alkyl-, aryl- ou aralkylsulfonylé sans occasionner de sulfonylation du groupe hydroxy en 4', donnant, comme produit principal de sulfonylation, le dériv6 3'-mono-O- sulfonylé de kanamycine B. La pr6sente invention a donc pour objet un nouveau procédé de production de la tobramycine ou 3'-désoxy- kanamycine B de formule: CH NH Ml 2 2 2 2NH2 NH2 CH2]NH2 O H NH2 HOH2C 0 H0 HO OH selon lequel on fait réagir un dériv6 de kanamycine B penta-Nprotégé 3'-mono-O-alkyl-, aralkyl- ou arylsulfonylé dans lequel les groupes amino en 1,3,2' et 3"n et éven- tuellement le groupe amino en 6' ont été prot6g6s par un groupe arylsulfonyl et spécialement le groupe tosyl, le groupe hydroxy en 3' a eté alkyl-, aralkyl- ou arylsul- fonylé, les groupes hydroxy en 4" et 6" ont été bloqués avec un groupe hydroxy protecteur bivalent et éventuel- lement le groupe hydroxy en 4' et le groupe amino en 6' ont été bloqués par formation entre eux d'un carbamate cyclique en 4',6, avec un halogénure métallique de for- mule X (II) dans laquelle M est un métal et particuliè- rement un métal alcalin et X est l'iode, le chlore ou le brome, dans un solvant organique, à une température entre 50 et 150 C, pendant une durée de 30 minutes à 2 heures pour obtenir un dérivé halogêné en 3', on réduit le groupe halo en 3' pour le remplacer par l'hydrogène pour obtenir le composé correspondant de 3 -désoxykanamy- cine B que l'on traite ensuite9 le cas échéant, pour couper l'anneau carbamate en 4e,6', puis on élimine les groupes amino-protecteurs et hydroxy protecteurs résiduelso Selon un premier aspect, l1'invention a pour objet un procéd6 de production de tobramycine qui comporte les étapes suivantes: - réaction d'un dérivé 1,3,2',6',3"-N-protégé, 4 ",6"- 0-protégé et 3 '-0-sulfonylé de kanamycine B de formule générale 6' ZHNCH2 NHZ 6"/ 2 O C H 4' (I) dans laquelle R est un groupe alkyl, particulièrement un groupe alkyl de 1 à 4 atomes de carbone, un groupe aralkyl, particulièrement un groupe phènylalkyl de 7 à Il atomes de carbone, spécialement le groupe benzyl ou un groupe aryl, spécialement le groupe phényl, Y est un groupe alkylidène de 1 à 6 atomes de carbone, un groupe aralkylidène ou un groupe tétrahydropyranylidène comme groupe hydroxy protecteur bivalent et chaque Z est un groupe arylsulfonyl, spécialement le groupe tosyl, comme groupe amino protecteur, avec un halogénure de métal alcalin de formule: MX (II) dans laquelle M est un métal et particulièrement un métal alcalin et X est l'iode, le chlore ou le brome, dans un solvant organique à une température entre 50 et 150 C pen_ dant une durée allant de 30 minutes à 2 heures pour don- ner le composé halogéné en 3' de formule: ZHNCH2 NHZ 0 NHZ HO x iz XH2 0 Hz (1H) dans laquelle X, Y et Z ont les définitions ci-dessus; - réduction du groupe halo en 3' (X) du composé (III) de manière connue pour remplacer le groupe halo en 3' par l'hydrogène et produire le composé de 3'-désoxy-kanamycine B correspondant et - élimination de ce dernier des groupes amino-protec- teurs (Z) et hydroxy-protecteurs (Y) résiduels, de ma- nière connue. Le procédé selon l'invention consiste donc en une première application à la production semi-synthétique de la tobramycine à partir de la kanamycine B de la décou- verte de la demanderesse selon laquelle un composé com- portant un radical 2-amino-2-désoxy-a-D-glucopyranoside dont le groupe amino est arylsulfonylé (spécialement tosylé) et le groupe hydroxy en 3 est alkyl-, aryl- ou aralkylsulfonylé et susceptible d'être facilement halogé- né (c'est-à-dire chloré, bromé ou iodé) en position 3 pour donner le dérivé 3-halo et que ce dérivé 3-halo peut être soumis à une substitution par réduction conventionnelle avec l'hydrogène pour achever la 3t-désoxygénation, don- nant le dérivé 3-désoxy correspondant. Cette découverte est nouvelle et sa première application est originale. La préparation du dérivé N,O-protégé et 3'-mono-O- sulfonylé de kanamycine B de formule I employé comme ma- tériau de départ peut être effectuée de la façon décrite ci-après. La kanamycine B est donc employée comme matériau de départ et ses cinq groupes amino sont tous arylsulfonyl&, puis les groupes hydroxy en 4t et 6" sont protégés avec un groupe hydroxy protecteur bivalent pour préparer le dérivé penta-N-arylsulfonylé en 4",6"-0-protégé de ka- namycine B selon les procédés décrits dans le brevet britannique n 1 555 661 ainsi que dans "tCarbohydrate Research" 49, 141 (1976). Ce dérivé protégé de kanamycine B est dissous dans un solvant organique, par exemple dans la pyridine sèche puis on le fait réagir avec un halogénure d'acide alkyl-, aryl- ou aralkylsulfonique de formule: RS02X dans laquelle R est un groupe alkyl inférieur, un groupe aryl ou un groupe aralkyl, ou avec un anhydride correspon- dant particulièrementun halogénure ou un anhydride d'acide arylsulfonique de façon à ce que soit effectuée la sulfo- nylation sélective du groupe hydroxy en 3' pour donner le compos6 (I). C'est la pyridine qui est le solvant orga- nique convenant le mieux pour la 3'-mono-0-sulfonylation sélective quoique l'on puisse utiliser tout solvant neutre aprotique, solvant organique basique tel que la picoline, la N-alkylmorpholine ou la triéthylamine dans lequel le- dit compos6 protégé puisse se dissoudre totalement ou partiellement. Comme exemples de solvants, on peut donner la diméthylformamide, la dim6thylac6tamide, le diméthyl- sulfoxyde, le t6trahydrofuranne, le dioxanne, l'6ther 6thylique, le chloroforme, le benzène et le sulforane. L'halogénure ou l'anhydride d'acide sulfonique est utili- s6 dans une proportion allant de 1 à 5 moles par mole de dérivé protégé de kanamycine B. Comme exemple préféré de l'agent de sulfonylation (RS02X) on peut citer le chlorure de tosyle, l'anhydride p-toluène sulfonique, le chlorure de benzylsulfonyl et le chlorure de m6thanesulfony]l La 3'-mono-0-sulfonyla- tion peut être effectuée à une température allant de -40 C à + 100 C de préférence de -20 C à +25 C pendant une dur6e allant de 30 minutes à 24 heures. La 3'-mono-0-sulfonylation du composé de kanamycine B peut occasionnellement s'accompagner de réactions an- nexes telles que la sulfonylation du groupe hydroxy en 4' ou la sulfonylation du groupe hydroxy en 2". Mais les dériv6s 3',4'-di-0sulfonylé6 et 3',4',2"-tri-0-sulfonylé ainsi sous-produits sont utiles comme matériaux de dé- part dans la synthèse de la 3',4'-did6soxykanamycine B (dibékacine) selon la méthode d6crite dans le brevet US 3 753 973 et, à cet 6gard, le procédé selon l'invention produit une nouvelle voie pour la pr6paration de la to- bramycine dans laquelle il n'y a aucun sous-produit inutile. Quand on effectue le procédé selon le premier aspect de l'invention, on fait r6agir, pour effectuer l'halog6na- tion en 3' le composé protégé de kanamycine B de départ (I) avec un halogénure de métal alcalin de formule (II) dans lequel l'halogène X peut être le chlore, le brome, ou l'iode mais ne peut pas être le fluor, et le métal M peut être un métal alcalin, alcalino-terreux ou un métal lourd. Pratiquement ce sont les chlorure, bromure et iodure de lithium ainsi que l'iodure de sodium qui sont les mieux adaptés. L'halogénure métallique est générale- ment utilisée en une quantité variant entre 1 et 100 mo- les et spécialement 2 et 10 moles par mole du composé de départ (1). La réaction (3'-halogénation) est habituellement effectuée dans un solvant organique dans lequel les deux réactifs peuvent être dissous. On peut citer comme exem- ples de solvants la diméthylformamide, 1 théxaméthyl phos- phorique triamide, et le diméthylsulfoxyde, ou un mé- lange de ces solvants avec un solvant organique neutre aprotique comme mentionné précédemment pour la 3'-mono-O- silfonylation. La reaction est effectuée à une tempéra- ture de O à 150 C pendant une période allant de 30 mi- nutes à environ 2 heures. Le composé 3'-halogéné de for- mule (III) ainsi obtenu est alors soumis à une déhalogéna- tion réductrice en position 3' par une technique conven- tionnelle telle que l'hydrogénation catalytique avec de l'hydrogène ou une réduction avec un agent réducteur d'ha- logène tel qu'un hydrure de trialkylétain par exemple l'hydrure de tributylétain, ou un traitement avec un métal alcalin dans l'ammoniac liquide. On obtient ainsi le dérivé protégé de 3'-désoxykanamycine B dans lequel le groupe 3'-halo a été remplacé par l'hydrogène. Les groupes amine protecteurs du type arylsulfonyl qui restent dans le dérivé protégé de la 3'-désoxyImnamycine B ainsi obtenu peuvent être éliminés de ce dernier par une métho- de de déprotection connue, typiquement par traitement avec un métal (de préfeérence le sodium métallique) dans l'ammoniac liquide comme décrit dans le brevet britan- nique n 1 555 661 de la demanderesse. Le groupe 4",6"-o- protecteur bivalent (c'est-à-dire un groupe alkylidène, cycloalkylidène, aralkylidène ou tétrahydropyranylidène) qui subsiste en général dans ledit dérivé protégé peut être éliminé, de manière connue, par hydrolyse acide pour donner le produit désiré, la 3'-désoxykanamycine B, c'est- à-dire la tobramycine. Alternativement, si le composé halogéné en 3' (III) est directement traité avec un métal ou un amalgame métal- lique (sodium ou amalgame de sodium) dans l'ammoniac li- quide, l'élimination des groupes amino-protecteurs (Z) peut se produire en même temps que le remplacement réduc- teur du groupe 3'-halo (X) par l'hydrogène. Le dérivé de 3'-désoxykanamycine B partiellement déprotégé ainsi ob- tenu peut ensuite être soumis à une hydrolyse acide pour éliminer le groupe hydroxy protecteur bivalent (Y) don- nant la 3'-désoxykanamycine B désirée. Selon le premier aspect du procéd6 selon linven- tion, la 3'-mono-0-sulfonylation pour préparer le com- pos6 de départ (I) peut être associée jusqu'à un certain point à la réaction secondaire selon laquelle le groupe hydroxy en 4' est sulfonylé comme indiqué ci-avant. On peut parfaitement pourtant éviter cette possibilité par une protection sélective du groupe hydroxy en 4'. Au cours de la mise au point d'un procédé de synthèse de la 3',4'didésoxykanamycine A à partir de la kanamycine A (voir demande de brevet japonais n 11402/79, demande de brevet US SN 114 779, brevet belge n 881 251), la demanderesse a découvert que le groupe hydroxy en 4' de la kanamycine A peut être bloqué par traitement avec de l'hydrure de sodium comme dérivé de kanamycine A non O-protégé en 4' et N protégé en 6' dont le groupe amino en 6' est protégé par un groupe alkyloxycarbonyl, aral- kyloxycarbonyl ou aryloxycarbonyl de façon à former un dérivé carbamate cyclique en 4',6'. Les inventeurs ont découvert que le procédé ci- dessus de protection du groupe hydroxy en 4' de la kana- mycine A par transformation sous forme de carbamate cy- clique en 4',6' peut également être appliqu6 à un dérivé de kanamycine B non 0-protégé en 4' et N-protégé en 6', et ils ont réussi à préparer le dérivé carbamate protégé en 4',6' de kanamycine B convenant comme matériau de dé- il part pour la production de la tobramycine. Selon un second aspect, l'invention concerne donc également un proc6d6 de production de la tobramycine qui comporte les étapes suivantes: - réaction d'un dérivé 1,3,2',3" N protégé, 6'-N:4'-O- carbonylé et 3'-0- sulfonylé de kanamycine B de formule générale: HCH2 NHZ 0- NHZ OSO2R O O oX o NHZ/ O c 2 o y (IV) dans laquelle R est un groupe alkyl, aralyl ou aryl, R1 est soit un atome d'hydrogène, soit un groupe alkylsulfonyl, aralkylsulfonyl ou arylsulfonyl semblable au groupe -SO R de la formule, Y est un groupe alkylidéne de 1 & 6 atomes de carbone, un groupe cycloalkylidène de 3 à 6 atomes de carbone, un groupe aralkylidéne ou un groupe tétrahydro- pyranylidéne, en tant que groupe hydroxy-protecteur et chaque Z est un groupe arylsulfonyl, particulièrement le groupe tosyl, en tant que groupe amino-protecteur, avec un halogénure métallique de formule XX (II) dans laquelle M est un métal, particulièrement un métal alcalin et X est l'iode, le chlore ou le brome, dans un solvant organique à une température entre 50 et 150 C pendant 30 minutes à 2 heures pour produire le composé 3'-halogéné de formule: HH CH2 NZ 2 NHZ / go NEZ 0o O0 X NEZ OH2C le/ 0 O y H (V) O\1 OR1 dans laquelle X, Y, Z et R ont les définitions ci-dessus. - réduction du groupe 3'-halo du composé V de ma- nière connue pour remplacer le groupe 3'-halo par-l'hydro- gène et produire le composé de 3'-désoxy-kanamycine B cor- respondant qui est encore sous la forme de carbamate cyclique en 4',6' et - traitement de ce dernier, de façon connue pour cou- per l'anneau carbamate en 4',6' et éliminer les groupes amino-protecteurs (Z) et le groupe hydroxy-protecteur (Y) résiduels. Le dérivé protégé de kanamycine B, sous forme de 4',6'-carbamate selon la formule (IV) qui est utilisé comme mat6riau de départ dans le proc6dé selon le second aspect de l'invention peut être prépar6 selon les proc6d6s suivants, illustr6s par l'exemple ci-après. On soumet d'abord la kanamycine B à une m6thode con- nue de protection sélective du seul groupe amino en 6' avec un groupe alcoxycarbonyl, aryloxycarbonyl ou aral- kyloxycarbonyl. Puisque le groupe amino en 6' est plus r6actif que les autres groupes amino de la kanamycine B on peut introduire de façon préférentielle dans ce groupe amino en 6' un groupe amino-protecteur du type alcoxycar- bonyl, aryloxycarbonyl ou aralkyloxycarbonyl par exemple 2 4 6 8 6 1 6 en faisant r6agir la kanamycine B (base libre) dans l'eau à une temp6rature de O à 10 C avec une proportion molaire de 0,5 à 3 d'un alcoxycarbonyl- aryloxycarbonyl- ou aralkyloxycarbonylchloroformiate selon la m6thode de Ka- waguchi et al décrite par exemple dans le "Journal of Antibiotics", 25, 695-708, 1972 ou le brevet US 3 781 268. Dans ce but, les conditions réactionnelles peuvent être similaires à celles utilisées pour la préparation de la 6'-Nbenzyloxycarbonylkanamycine A selon la méthode de !O l'exemple 1 du brevet US 3 925 353. Les inventeurs ont constate expérimentalement que le dérivé protégé en 6'-N de la kanamycine B est obtenu avec un rendement élevé quand le groupe amino en 6' de la kanamycine B est se- lectivement protégé soit par la méthode de Nagabhusan et al décrite dans le brevet US 4 136 25 soit par la metiode de la demande de brevet japonais 138O02/78 de la demanderesse (correspondant à la demande de brevet US 591, a la demande de brevet britannique 7938 894 et au brevet belge 879 925). Selo, la première mé-hode, on fait tout d'abord réagir la kanamycine B avec un cation de metal de transition bivalent, par exemple le cuivre (Il), le nickel (II) ou le cobalt (II) pour former un complexe métallique ou un chélate de kaamycine B dans lequel les groupes amino en i- et 3" ont été bloqués par formation de complexe avec le cation de métal bivalent puis I'on fait réagir le complete de kanamycine aintsi formé avec un réactif amine-protecteur pour protéger le groupe amino en 6' et on élimine le cation métallique dudit complexe. par exemple par traitement avec l'hydrogène sulfuré ou une solution aqueuse d'ammoniaqueo Selon la dernière méthode (brevet belge 879 925) le d&riv6 6=-N protégé est préparé come dans la premiere methode miais on utilise le zinc * à la place du métal de transition bivalent. On fait réagim la 6'-N alcoxycarbonyl-, l'aryloxy- carbonyl- ou l'aralkyloyearbonylkanamycine B ainsi obte- nue avec 4 moles ou plus d'un chlorure d'arylsulfonyle dans un solvant organique pour obtenir le dérivé 6'-N-al- coxy-, aryloxy- ou aralkyloxycarbonyl-1,3,2',3"-tétra-N- aryl-sulfonylkanamycine B. Ce dernier peut être préparé par exemple en faisant réagir ladite kanamycine B 6-N- prot6g6e avec une quantité pratiquement stoechiométrique d'un chlorure d'arylsulfonyk, spécialement le chlorure de tosyle, dans un solvant organique tel que le dioxanne à une température entre -30 C et + 50 C en pr6sence d'un alcali tel que le carbonate de sodium. On protège ensuite les groupes hydroxy en 4" et 6" du composé tétra-Narylsulfonylé de kanamycine B avec un groupe hydroxy protecteur bivalent (Y) par transfor- mation en acétal ou cétal comme décrit ci-avant ou comme également décrit dans la Publication de brevet japonais n 7595/75 ou dans le brevet US 3 929 762 par exemple. Comme exemples sp6cifiques de groupe hydroxy protecteur bivalent on peut citer un groupe alkylidène contenant de 1 à 6 atomes de carbone tel que le groupe méthylène, 6thylidène et isopropylidène; un groupe cycloalkylidène contenant de 3 à 6 atomes de carbone, notamment le groupe cyclohexylidéne; un groupe aralkylidéne tel que le groupe benzylidène; et le groupe tétrahydro-4-pyranyli- dène. C'est ainsi que l'on peut effectuer de pr6férence la protection des groupes hydroxy en 4",6" par r6action- à une temp6rature relativement basse, par exemple entre 10 et 800C avec du formol ou du 2,2-dim6thoxypropane pour l'alkylidénation, avec du benzald6hyde pour l'aralkylidé- nation ou du 1,1-dim6thoxycyclohexane pour la cycloalkyli- dénation en pr6sence d'un catalyseur acide tel que l'acide p-toluène-sulfonique ou l'acide sulfurique, de façon con- nue, comme décrit dans le brevet US N 3 929 762. Le d6riv6 4",6"-0 protég6 ainsi produit peut être dissous dans un solvant organique appropri6, par exemple le diméthylformamide et mis en réaction avec un r6actif basique tel que l'hydrure de sodium pour former le dériv6 carbamate cyclique en 4',6', de façon connue, comme d6crit dans le "Jal of Antibiotics" 25, n 12, 741-742, 1972 ou les brevets US 3 925 354 ou 4 125 706. La méthode de transformation du dériv6 4",6"-0-protégé en carbamate cyclique en 4',6' est décrite en détal également dans la publication de brevet japonais n 24415/78 et les pré- publications de brevet japonais ("Kokai") n 80039/74, 101355/74, 127046/76 et 25043/77. On fait alors réagir le dériv6 carbamate cyclique en 4',6' ainsi obtenu avec un halogénure ou un anhydride alkyl, aralkyl ou arylsulfonique de formule: RS02Y ou (RS0 2)20 (VII) dans laquelle R et'X ont les définitions ci-avant, comme décrit dans le brevet britannique n 1 555 661. On sul- fonyle ainsi le groupe hydroxy en 3' et éventuellement le groupe hydroxy en 2" du dériv6 carbamate pour former le dériv6 3'-mono-0-sulfonylé de kanamycine B de formule (IV) dans laquelle R est l'hydrogène, soit seul, soit en association avec un dériv6 3',2"-di-0-sulfonylé de kanamycine B de formule IV dans laquelle R1 est le groupe -S 02R. Le mélange des dériv6s 3'-mono-0-sulfonyl&- et 3',2"- di-O-sulfonylé de kanamycine B pr&paré ainsi peut être directement utilisé comme tel dans le proc6dé selon le second aspect de l'invention ou peut9 si on le désire, être s6par6 par chromatographie sur colonne de gel de silice développé avec un mélange chloroforme-méthyléthy- lcétone (1:2) de façon à isoler le dérive 3'-mono-0-sulfo- nylé de kanamycine-B du dérivé 3',2"-di-0-sulfonylé de kanamycine B et chacun de ces produits est utilisé comme matériau de départ (IV) dans le procédé selon le second aspect de l'invention. Dans le procédé selon le second aspect de l'inve tion, on fait réagir le dérivé de kanamycine B de for- mule IV dans laquelle R est l'hydrogène et le dérivé de kanamycine B de formule IV dans laquelle R est le groupe sulfonyl -SO2R, soit seuls, soit en mélange, avec un ha- logènure métallique de formule II comme décrit dans le procédé selon le premier aspect de l'invention, de sorte que le groupe sulfonyloxy en 3' est halogéné. Le produit halogéné en 3' ainsi obtenu est réduit comme dans le procédé selon le premier aspect de l'invention pour rem- placer le groupe 3'-halo par l'hydrogène donnant la 3'- désoxykanamycine---B qui correspond à un composé de for- mule V dans laquelle le groupe X a été transformé en atome d'hydrogène. Quand on soumet le composé de 3'-dé- soxykanamycine B protégé à la technique connue de dé- protection comme décrit ci-avant dans le procédé selon le premier aspect de l'invention, on obtient la 3'-désoxy- kanamycine B, c'est-à-dire la tobramycine. Même quand on utilise comme composé de départ IV dans le présent procédé le composé de kanamycine B 3',2"-di-0-sulfonylé, le groupe 2"-0-sulfonyl peut être facilement éliminé dans la der- nière étape de déprotection du présent procédé par exem- ple par traitement avec du sodium métallique dans l'am- moniac liquide, ce qui permet d'obtenir la tobramycine avec un rendement élevé. Que ce soit selon le premier ou selon le second aspect du procédé selon l'invention, le produit final, la tobramycine, peut être obtenue avec un rendement glo- bal d'environ 30 %, calculé à partir de la kanamycine B de départ, et ceci correspond à une amélioration du ren- dement global en tobramycine comparativement avec la technique antérieure de la pr6publication de brevet ja- ponais "Kokai" n 80038/74 ou du brevet US N 3 929 762 ci- avant mentionn6s dans lesquels le rendement global en to- bramycine est habituellement de l'ordre de 25 %, calculé à partir de la kanamycine B de départ. Il faut noter en outre que les procéd6s selon l'invention ne n6cessitent qu'une durée allant de 30 minutes à au plus 2 heures dans l'6tape de 3'-halog6nation alors que la méthode ant6rieure du brevet US 3 929 762 n6cessitait 24 heures ou plus pour l'étape de 3'-halogénation. Dans les premier et second aspects du procédé selon l'invention, il est possible de remplacer le groupe 3'-halo du produit 3'-halog6né de formule III ou V par de l'hydro- gène par traitement avec du sodium m6tallique dans de l'ammoniac liquide quand on effectue simultanément l'éli- 2 4 6 8 6 1 6 mination des groupes sulfonyles amino-protecteurs (Z) et le cas échéant celle du groupe 2"-O-sulfonyl (quand il est présent) ce qui réduit le nombre des opérations néces- saires pour l'étape d'élimination de tous les groupes pro- tecteurs du composé intermédiaire (III) ou (V), compara- tivement à celles nécessaires dans la méthode du brevet US 3 929 762. Les opérations nécessaires, dans les étapes respectives des procédés selon l'invention sont de plus plus simples et plus faciles, ce qui es rend applicables à la production commerciale de la tobramycine. Dans ces procédés il est très indiqué d'effectuer les étapes de réduction du groupe 3'-halo et d'élimination des groupes protecteurs de telle façon que l'on fasse réagir le groupe 3'-halo (III) ou (V) avec du sodium métallique dans l'am- moniac liquide pour effectuer simultanément la réduction du groupe 3'halo (X) en hydrogène et l'élimination des groupes aryl-sulfonyles aminoprotecteurs (Z), et que l'on mélange le mélange réactionnel dans lVamoniac li- quide avec du méthanol puis que l'on distille pour éli- miner!'aîmoniac résiduel; le résidu est dissous dans l'eau et chauffé pour effectuer la coupure de l'anneau carbamate cyclique en 4,6' qui reste quand on utilise le composé (V), et la solution obtenue est mélangée à l'eau et neutralisée avec une résine échangeuse de ca- tions fortement acide contenant des fonctions sulfoniques pour effectuer l'élimination du groupe hydroxy-protecteur bivalent (Y), ce qui donne la tobramycine. Le procédé selon le premier aspect dellinvention forme un nouveau composé intermédiaire utile pour la pro- duction de la tobramycine, le composé de kanamycine B 1,3,2',6',3S'-penta-N-sulfonylé, 4",6"-0-protégé et 3'-halo- géné de formule: ZHNCH2 NIZ HO X NHZ y\ (III) OH dans laquelle X est un groupe halo, Y est un groupe alky- lidène de 1 à 6 atomes de carbone, un groupe cycloalkyli- dène de 3 à 6 atomes de carbone, un groupe aralkylidène ou tétrahydropyranylidène, en tant que groupe hydroxy-pro- tecteur bivalent, et chaque Z est un groupe arylsulfonyl, spécialement le groupe tosyl comme groupe amino-protecteur. Un exemple particulier du composé intermédiaire ci- dessus est la 4"1,6"-O-cyclohexylidène-3'-désoxy-3'-iodo- 1,3,2',6',3"-penta-N-tosylkanamycine B. Le procédé selon le second aspect de l'invention fournit, comme composé nouveau et utile, le composé de kanamycine B 1,3,2',3"-tétra-N-sulfonylé, 41",6"-0-protégé, 6'-N:4'-0carbonylé et 3' halogén6 de formule: HNCH 2HZ 0Co NHZ 0' X NHZ OH2c OB2C 0 OR dans laquelle X est un groupe halo, R est soit un atome d'hydrogène, soit un groupe alkylsulfonyl, aralkylsulfo- nyl ou arylsulfonyl, similaire au groupe -SO2R de la for- mule, Y est un groupe alkylidène de 1 à 6 atomes de car- bone, un groupe cycloalkylidène de 3 à 6 atomes de car- bone, un groupe aralkylidène ou tétrahydropyranylidlne en tant que groupe hydroxy-protecteur bivalent et chaque Z est un groupe arylsulfonyl, sp6cialement le groupe tosyl9 en tant que groupe amino-protecteur. Comme exemples particuliers du composé intermé- diaire de formule V on pent citer: (1) La 6'-N:4'-O-carbonyl-4",6"-O-cyclohexylidène- 3 '-=désoxy-3'-iodo-1,3,2',3"-t6tra-N-tosylkanamycine B (2) La 2"-O-benzylsulfonyl-6'-N:4'-O-carbonyl-3'- chloro-4"t,6"-O-cyclohexylidène-3' =désoxy-1,3,2',3"-tétra- N-tosyllcanamycine B.; (3) La 6'-N:4'-O-carbonyl-3 -chloro-4",6t6"-O-cyclo- hexylidène-3'-désoxy-1,3,2',3"-tétra-N-tosyl-kanamycine B. Les exemples suivants illustrent l'invention sans toutefois la limiter. Exemple 1 (i) Pr6paration de la 3'-O-benzylsulfonyl-4%",6--O- cyclohexylidène-1,3,2',6',3"-penta-N-tosylkanamycine B. On dissout la 4",6"-0-cyclohexylidène-1,3,2',6',3"- penta-N-tosylkanamycine B (1,56 g) (préparée comme décrit dans "Carbohydrate Research" 49, 141-151, 1976) dans 31 ml de pyridine sèche et on refroidit la solution à -20 C puis on la mélange à 225 mg de chlorure de benzylsulfonyl. On maintient le mélange à -20 C pendant 21 heures pour effectuer la 3'mono-0-benzylsulfonylation. La solution réactionnelle est mélangée à 0,11 ml d'eau et concentrée sous forme de sirop qui est repris dans un volume de chlo- roforme pour donner 100 ml de solution dans le chloroforme. La solution est lavée avec une solution aqueuse à 5 % de bicarbonate de sodium puis avec de l'eau, concentrée à siccité et séchée sur sulfate de sodium anhydre pour donner 1,78 g de produit solide. Ce solide est chromato- graphié en chromatographie en couche mince sur gel de si- lice développé avec un mélange chloroforme-méthyléthyl- cétone (1:1 en volume) pour donner 391 mg (23 %) du com- posé désiré sous forme de solide purifié g)D = -2o (c = 1 dans le chloroforme). -- Analyse élémentaire Trouvé C 53,20; H 5,51; N 4,52; S 12,71 % Calculé pour C66H81N5022S6 C 53,25; H 5,48; N 4,70-; S 12,92 % (ii) Préparation de la 3'-0-tosyl-4",6"-0-cyclo-he- xylidène-1,3,2',6',3"-penta-N-tosylkanamycine B. On dissout la 4",6"-cyclohexylidène-1,3,2',6',3"- penta-N-tosyl-kanamycine B (104 g) dans 2 ml de pyridine sèche à laquelle on ajoute alors 74,6 mg de chlorure de tosyl. On maintient le mélange à 70 C pendant 12 heures pour effectuer la 3'-mono-0-tosylation. La solution réac- tionnelle obtenue est ensuite traitée comme dans le pro- cédé (i) ci-dessus pour donner 98,6 mg (85 %) du composé désiré sous forme solide. "D5 = -3 (c = 1 dans le chloroforme). Exemple 2 - Synthèse de la tobramycine (a) Préparation de la 4",6"-O-cyclohexylidène-3'-dé- soxy-3-iodo-1,3,2',6',3"-penta-N-tosylkanamycine B. (i) On dissout 64,8 mg du produit obtenu dans l'exemple 1 (i) dans 1,3 ml de dim6thylformamide, puis on additionne 650 mg d'iodure de sodium et on agite à 100 C pendant une heure pour effectuer l'ioduration en 3'. On laisse ensuite la solution r6actionnelle reposer à tem- pérature ambiante pour la solidifier et l'on met le so- lide en suspension dans 20 ml de chloroforme. La suspen- sion est lavée successivement avec de l'eau, une solution aqueuse à 10 % de thiosulfate de sodium et de l'eau,puis concentrée à un faible volume et soumise à une distilla- tion azéotropique avec du xylène. Le résidu obtenu est dissous dans du chloroforme, séch6 sur sulfate de sodium anhydre et 6vaporé pour donner 62,8 mg d'un solide brut. Ce solide est purifié par chromatographie sur colonne de gel de silice développée avec un mélange de benzène et d'acétate d'éthyle (2:3)pour donner 51,2 mg (83 %) du compos6 d6sir6 sous forme de solide incolore. 5 = + 11 (c = 1 dans le chloroforme). Analyse é6lmentaire Trouvé C 49,06; H 5,16; N 4,85.' Calculé pour C59H7N5019ST: C 49,18; H 5,18; N 4,69 % (ii) On dissout 107 mg du produit obtenu dans l'exemple 1 (ii) ci-dessus dans 2 ml de diméthylformamide auquel on ajoute 1,1 g d'iodure de sodium et on agite le mélange à 100 C pendant 40 minutes pour effectuer l'iodu- ration en 3.o La solution réactionnelle est ensuite trai- tée selon le processus de l'exemple 2 (i) pour donner 93,6 mg (90 %) du composé ci-dessus. (b) Préparation de la 4A,96-O-cyclohexylidène-3'-désoxy- 1,3,2',6',3"-penta-N-tosylkanamycine B. On dissout 51,1 mg duproduit obtenu dans l'étape (a) ci-dessus de l'exemple 2 dans 1 ml de dioxanne; on ajoute ensuite à la solution 0,1 ml d'hydrure de tri-n-butylétain puis 5 ml de a,O'-azobisisobutyronitrile (comme catalyseur). Le mélange obtenu est maintenu à 800C pendant 2 heures sous atmosphère d'azote pour mener à bien le remplacement réducteur du groupe 3'-iodo par l'hydrogène. La solution réactionnelle est ensuite concentrée en un sirop que l'on mélange à de l'éther éthylique pour précipiter un produit solide. Ce produit est filtré, lavé à l'éther éthylique et séché pour donner 33 mg (84 %) du composé désir&. [a)25 = + 10 . (c = 0,5 dans le diméthylformamide). D (c) Production de 3'-désoxykanamycine B (tobramycine) On dissout 47,9 mg du produit provenant de l'étape (b) ci-dessus de l'exemple 2 dans 5 ml d'ammoniac liquide A -50 C, on ajoute A la solution obtenue 50 mg de sodium m6tallique et on agite le mélange à la même temp6rature pendant une heure pour effectuer l'élimination du groupe amino-protecteur (groupe tosyl). La solution réactionnelle obtenue est mélangée avec du m6thanol, agitée à temp6ra- ture ambiante, puis l'ammoniac est éliminé par distilla- tion sous pression réduite. Le r6sidu est repris à l'eau et la solution neutralisée par addition d'une résine 6changeuse de cations fortement acide, Dowex 50 W x 2 (forme H)(Dow Chemical C , USA), ce qui conduit à l'éli- mination du groupe 4",6"-0-cyclohexylidène. La résine est chargée dans une colonne qui est alors éluée avec de l'ammoniaque N. L'éluat est rassemblé en fractions de 1 ml et les fractions positives à la ninhydrine sont combinées et concentrées à siccité pour donner 25,9 mg de 3'-désoxy- kanamycine B sous forme solide et brute. Le solide est dissous dans l'eau et l'on fait passer la solution au travers d'une colonne de CM-Sephadex C25 (forme NH) (Pharmacia Fine Chemicals C , Suède). La colonne est alors soumise à une 1élution par gradients avec de l'ammonia- que 0--0,15N Ces fractions sont combinées et concentrées à siccité pour donner 12,0 mg (62 %) de monocarbonate de 3'-désoxykanamycine B. a5 = 125 (c = 1 dans l'eau). Analyse élémentaire Trouvé C 42,95; H 7,62; N 13,01 % Calculé pour 1837 509 H2C3 C 43,09; H 7,42; N 13,23 % Exemple 3 (a) Préparation de la 6'-N-benzyloxycarbonylkanamy- cine B. On met en suspension 500 mg de kanamycine B (base libre) dans 20 ml de diméthylsulfoxyde et on ajoute à la suspension 0,76 g d'acétate de zinc dihydrate. Le mélange est agité à température ambiante jusqu'à formation d'une solution homogène. On ajoute à la solution contenant un complexe kanamycine B cation zinc ainsi formée 280 mg de Nbenzyloxycarbonylsuccinimide et on laisse le mélange toute une nuit à température ambiante pour effectuer la N-benzyloxycarbonylation. La solution réactionnelle ob- tenue est versée en petites portions dans un grand volume d'éther éthylique, la partie surnageante est décantée puis on lave la phase intérieure sirupeuse à l'éther éthylique et on sèche pour obtenir un sirop. On charge le sirop dans une colonne de CMsSéphadex C-25 (forme NH+ 603 mg (90 %) du composé désiré sous forme de son hémi- carbonatef) 25 = + 109 . (c 1 dans l'eau). D Analyse élémentaire Trouvé C 48,84; H 6,94; N 10,50 % - Calculé pour 26H43N5 121/2H2 C3 C2H3N5012oi2HC3: C 49,07; H 6,84; N 10,80 % (b) Préparation de la 6'-N-benzyloxycarbonyl-1,3,2', 3"-tétra-Ntosylkanamycine Bo On ajoute 1,01 g de l'hémicarbonate obtenu dans l'étape (a) ci-dessus de l'exemple 3 et 0,693 g de carbo- nate de sodium anhydre à 20 ml d'un mélange eau/dioxanne (1:1) puis on ajoute 1,36 g de chlorure de p-tolu&nesul- fonyl sous agitation. On continue à agiter le mélange ob- tenu à 5 C pendant deux heures de plus pour effectuer la tétra-N-tosylation, puis on concentre la solution réac- tionnelle à un faible volume. Le concentrat est mélangé à l'eau pour précipiter un solide qui est lavé à l'éther éthylique et séché pour donner 1,93 g de produit solide. Ce produit est purifié par chromatographie sur colonne de gel de silice en utilisant comme solvant de dévelop- pement un mélange chloroforme-éthanol (10:1) pour donner 1,39 g (72 %) du composé désiré sous forme d'un solide incolore. [)25 = + 19 (c = 1 dans le diméthylformamide). Analyse élémentaire Trouvé C 51,86; H 5,29; N 5,35; S 10,18 % Calculé pour C H NO S H: 54 67 5 26 4 2 C 51,79; H 5,55; N 5,59; S 10,24 % (c) Préparation de la 6'-N-benzyloxycarbonyl-4'",6"- O-cyclohexylidène-1,3,2',3"-tétra-N-tosylkanamycine B. On dissout 1 g du produit obtenu dans l'étape (b) ci-dessus de l'exemple 3 dans 10 ml de diméthylformamide auquel on ajoute alors une quantité catalytique (28 mg) d'acide p-toluène sulfonique et 0,13 ml de 1,1-diméthoxy- cyclohexane. Le mélange est agité à 50 C et sous une pression réduite de 35 mm Hg pendant une heure pour ef- fectuer la 4",6"-0-cyclohexylidènation. On mélange ensuite la solution réactionnelle à 1,3 ml d'une solution aqueuse à 5 % de bicarbonate de sodium et on concentre sous forme de sirop. On ajoute de l'eau à ce dernier pour former un précipité qui est éliminé par filtration et séché pour donner 1,08 g d'un produit solide. On purifie ce produit par chromatographie sur colonne de gel de silice avec, - comme solvant de développement, un mélange acétate d'éthyl- benzène (3:1) pour donner 986 mg (92 %) d'un solide inco- lore du composé désiré. [a35 = + 3 (c = 1 dans le chloroforme). Analyse élémentaire Trouvé C 54,62; H 5,66; N 5,26; S 9,68 % Calculé pour C6oH75N5020S4 C 54,82; H 5,75; N 5,33; S 9,76 % d) Préparation de la 6'-N:4'-0O-carbonyl-4',6"-o- cyclohexylidène-1,3,2',3"-tétra-N-tosylkanamycine B. On dissout 1,77 g de produit venant de l'étape (c) ci-avant de l'exemple 3 dans 35 ml de diméthylformamide, la solution est refroidie à la glace puis on y ajoute 581 mg d'hydrure de sodium à 50 % dans l'huile. Après 2 heures d'agitation, le mélange est encore agité toute une nuit à température ambiante pour former le dérivé carbamate cyclique en 4',6'. Le mélange réactionnel est alors mélangé à 0,69 ml d'acide acétique et évaporé; le produit solide obtenu est lavé à l'eau, séché et re- précipité à partir d'un mélange acétone-éther éthylique pour donner 1,42 g (89 %) d'un produit solide brun-pâle, qui est le composé désiré. [ac25 =.23 (c = 1 dans le diméthylformamide). Analyse élémentaire Trouvé C 52,50; H 5,53; N 5,79; S 10,45 % Calculé pour C53H67N5019S4: C 52,78; H 5,60; N 5,81; S 10,63 % e) Préparation de la 3'-O-benzylsulfonyl- et de la 3',2"-di-O-benzylsulfonyl-6'-N:4-O-çarbonyl-4",6"-O-cy- clohexylidène-1,3,2',3'-tétra-N-tosylkanamycine B. On dissout 107 mg du produit venant de l'étape (d) ci-dessus de l'exemple 3 dans 2 ml de pyridine sèche et on refroidit la solution obtenue à -20 C, après quoi on ajoute à la solution 34 mg de chlorure de benzylsulfonyl. On maintient le mélange obtenu deux heures à -20 C, la réaction principale de 3'-mono-O-benzylsulfonylation se produisant en même temps qu'une certaine réaction de 3',2"-di-O-benzylsulfonylation. La solution réaction- nelle est mélangée à 0,02 ml d'eau et évaporée pour don- ner un sirop qui est alors repris dans du chloroforme pour donner 20 ml de solution. La solution dans le chloroforme est lavée avec une solution aqueuse de bicarbonate de so- dium à 5 %, puis avec de l'eau et ensuite concentrée à siccité pour donner 134 mg de produit solide. Ce produit solide est purifié par chromatographie sur colonne de gel de silice d6veloppée avec un mélange chloroforme-méthyl- éthylcétone (1:2) pour donner 92,9 mg (77 %) du composé 3'-mono-0-benzylsulfonyl et 9,8 mg (7 %) du composé 3',2"- * di-O-benzylsulfonyl, sous forme de solide incolore. A - Compos6 3'-O-benzylsulfonyl [a)5 = -380 (c D= dans le diméthylformamide) - Rf = 0,4 en chromatographie en couche mince de gel de silice d6veloppée avec un mé- lange chloroforme-acétone (2:3). Analyse élémentaire Trouvé C 52,12; H 5,27; N 4,94; S 11,39 % Calculé pour C60H73N5021S5H20: C 52,27; H 5,48; N 5,08; S 11,63 % B - Composé 3',2"-di-O-benzylsulfonyl: [ D = _ 520 (c = 1 dans le chloroforme) - Rf = 0,7 avec le système décrit dans A ci-dessus. Analyse élémentaire Trouvé C 53,01; H 5,17; N 4,78; S 12,40 % Calcul6 pour CH NO S 67H79N5023S6:6 C 53,13; H 5,26; N 4,62; S 12,70 % Exemple 4 - Synthèse de la tobramycine a) Production de la 6'-N:4'-O-carbonyl-4",6"-O-cy- clohexylidène-3'-désoxy-3 '-iodo-1,3,2',3"-tétra-N-tosyl- kanamycine B. On dissout 471 mg du composé 3'-mono-O-benzylsulfo- nyl obtenu dans l'exemple 3 (e) ci-avant dans 9,4 ml de diméthylformamide et on ajoute à la solution 4,7 g d'io- dure de sodium. Le mélange est agité continuellement à C pendant 2 heures pour effectuer l'ioduration en 3'. La solution r6actionnelle obtenue est ensuite trait6e comme dans l'exemple 2 (a) (i) pour donner 203 mg d'un produit solide. Ce produit est purifié6 par chromatographie sur colonne de gel de silice d6veloppée avec unmélange chloroforme-méthyléthylcétone (1:2) pour donner 161 mg (79 %) du produit désiré sous forme de solide incolore a0]25 =-32 (c = 1 dans le dim6thylformamide). Analyse élémentaire 2 4 6 8 6 1 6 Trouv6 C 47,92; H 4,93; N 5,31 % Calculé pour C53H66N50 l8S4I.H20: C 47,71; H 5,14; N 5,25 % b) Production de la 6'-N:4'-O-carbonyl-4",6"-O- cyclohexylidène-3'-désoxy-1,3,2',3"-tétra-N-tosylkana- mycine B. On dissout 145 mg du produit obtenu dans l'étape (a) ci-avant de l'exemple 4 dans 2,9 ml de dioxanne sec au- quel on ajoute 0,29 ml d'hydrure de tri-n-butylétain, sui- vi d'addition de 14,5 mg de a-a'-azobisisobutyronitrile. On maintient le mélange à 800C pendant 30 minutes sous atmosphère d'azote pour effectuer le remplacement réduc- teur du groupe 3'-iodo par l'hydrogène. La concentration de la solution réactionnelle donne un sirop que l'on mé- lange à un volume d'éther éthylique pour précipiter un produit solide. Ce produit est lavé à l'éther éthylique et séché pour donner 127 mg (97 %) du composé d6siré sous forme de solide incolore La)25 200 (c = 0,5 dans le D= dim6thylformamide). Analyse élémentaire Trouv6 C 53,70; H 5,65; N 5, 66; S 10,47 % Calculé pour CqH7NqO1RS: c) Production i -,- - C 53,48; H 5,67; N 5,88; S 10,77 % de la 3'-désoxykanamycine B (tobramy- cine) (i) On dissout 104 mg du produit obtenu dans l'étape (b) ci-avant de l'exemple 4 dans 5 ml d'ammoniac liquide à - 50 C, on ajoute environ 150 mg de sodium m6tallique à la solution dans l'ammoniac liquide et on agite le mé- lange à - 50 C pendant une heure pour effectuer l'élimi- nation des groupes N-tosyl. La distillation de l'ammoniac est effectu6e comme dans l'exemple 2 (c) ci-avant pour donner le résidu contenant le produit d6-tosylé. Ce rési- du est dissous dans l'eau puis chauff6 à 800C pendant une heure pour effectuer la rupture de l'anneau du carbamate cyclique en 4',6'. La solution réactionnelle ainsi obte- nue est mélangée à 3 g d'une r6sine échangeuse d'ion fortement acide, le Dowex 50 W x 2 (forme H+) pour la neutralisation et l'élimination du groupe 4",6"-0-cyclo- hexylidène. Le traitement subséquent de la résine et la purification du produit brut obtenu selon le processus dé- crit dans l'exemple 2 (c) ci-avant donne 26,0 mg (56 %) de monocarbonate de 3'-d6soxykanamycine B sous forme de solide incolore. Analyse élémentaire Trouvé C 42,70; H 7,53; N 13,46 % Calculé pour C18H 37N09.1H2Co3: C 43,09; H 7,42; N 13,23 % (ii) On dissout immédiatement 300 mg du produit iod6 en 3' obtenu dans l'exemple 4 (a) ci-avant dans ml d'ammoniac liquide à -50 C puis on ajoute 50 mg de sodium m6tallique, et on agite à - 50 C pendant une heure pour effectuer le remplacement réducteur du groupe iodo en 3' par l'hydrogène en mnême temps que l'élimina- tion des groupes N-tosyl. La coupure subséquente de l'anneau carbamate cyclique en 4',6', l'élimination du groupe 4",6"-0-cyclohexylidène et la purification sont effectuées selon le processus décrit dans l'étape (c) (i) de l'exemple 4 pour donner 76,3 mg (2 %)de monocarbonate de 3'd6soxykanamycine B. Exemple 5 - Synthèse de la tobramycine a) Pr6paration de la 2"-0-benzylsulfonyl-6'-N 4'- O-carbonyl-3 '-chloro-4",6"-0-cyclohexylidène-3 '-d6soxy- 1,3,2', 3 "-t6tra-N-tosylkanamycine B. On dissout 50,0 mg du compos6 3',2"-di-0-benzylsul- fonyl obtenu dans l'exemple 3 (e) ci-dessus dans 0,8 ml de dim6thylformamide; on ajoute 14,0 mg de chlorure de lithium à la solution obtenue et on agite le mélange à C pendant 1,5 heure pour effectuer la chlorwation en 3'. La solution résultante est alors concentrée et soumise à une distillation az6otropique avec du xylène pour donner un r6sidu sirupeux mis en suspension dans ml de chloroforme. La suspension est lav6e à l'eau, concentr6e à siccit6 et s6chée pour donner 42,Omg d'un produit solide. Ce produit est purifié par chromatographie sur colonne de gel de silice avec comme solvant de dé- veloppement un mélange chloroforme-méthyléthylcétone 1:1 pour donner 23,8 mg (53 %) du compos6 désiré sous forme de produit solide incolore. -2 43= (c dans le chloroforme). Analyse élémentaire Trouvé C 52,36; H 5,31; N 4,89 % Calculé pour C60 72 5 20 5C C 52,26; H 5,26; N 5,08 % b) Production de 3'-désoxykanamycine B On traite 51,5 mg du produit venant de l'étape (a) ci-avant de l'exemple 5 avec du sodium métallique dans l'ammoniac liquide par le procéd6 d6crit dans l'exemple 4 (c) (i) pour effectuer simultan6ment l'élimination du groupe N-tosyl, la r6duction du groupe 3'-chloro et l'élimination du groupe 2"-O- benzylsulfonyl. On effectue en outre la rupture de l'anneau carbamate cyclique en %',6t et l'élimination du groupe 4",6v-0-cyclohexylidène par le procédé décrit dans l'exemple 4 (c) (i). On obtient ainsi 12,2 mg (66 %) de monocarbonate de 3'-désoxykana- mycine B. Exemple 6 Production de 3'-désoxykanamycine B (tobramycine) On fait r6agir 287 mg de 6'-N:4'-O-carbonyl-4",6"- O-cyclohexylidène-1,2,2',3"-tétra-N-tosylkanamycine B prépar6e comme décrit dans l'exemple 3 (d) ci-avant avec mg de chlorure de benzylsulfonyle comme décrit dans l'exemple 3 (c) pour former 328 mg de produits mixtes de benzylsulfonylation, que l'on dissout alors dans 6 ml de dim6thylformamide. La solution r6sultante est mélangée à 102 mg de chlorure de lithium et le mélange est agit6 à 120 C pendant une heure pour effectuer la chlornration en 3'. Le traitement subséquent, tel que d6crit dans l'exemple 5 (a) ci-avant donne 300 mg d'un produit so- lide qui est alors traité et purifi6 comme d6crit dans l'exemple 4 (c) ciavant. On obtient ainsi 66,6 mg de 2 4 6 8 6 1 6 monocarbonate de 3'-désoxykanamycine B. Rendement 53 % (calculé à partir du produit benzylsulfonylé mixte em- ployé). Exemple 7 a) Pr6paration de la 6'-N:4'-0-carbonyl-4",6"-0- cyclohexylidène-1,3,2',3"-tétra-N-tosyl-3 '-0-tosylkana- mycine B. On dissout 611 mg de 6'-N:4'-O-carbonyl-4",6"-0- cyclohexylidène-1,3,2 ', 3 "-tétra-N-tosylkanamycine B, c'est-à-dire le produit obtenu dans l'exemple 3 (d) ci- dessus dans 12 ml de pyridine sèche, à laquelle on ajoute alors 880 mg de chlorure de tosyl et on maintient le mélange à 50 C pendant 24 heures pour effectuer la 3'-0-tosylation. Le post-traitement et la purification selon le procédé décrit dans l'exemple 3 (e) ci-dessus donnent 356 mg (52 %) du composé désiré sous forme d'un solide incolore. [O5 = - 300 (c = 1 dans le diméthylfor- mamide. Analyse élémentaire Trouvé C 51,75; H 5,32; N 5,30; S 11,5 Calculé pour C:HoN0O,,S: 7 % C 52,97; H 5,41; N 5,15; S 11,78 % b) Préparation de la 6'-N:4'-0-carbonyl-4",6"-0- cyclohexylidène-3 '-désoxy-3'-iodo-1,3,2',3"-t6tra-N-tosyl- kanamycine B. On dissout 60,5 mg du produit provenant de l'étape (a) ci-avant de l'exemple 7 dans 1,2 ml de diméthylforma- mide, on ajoute à la solution obtenue 606 mg d'iodure de sodium et on agite le mélange à 100 C pendant 2 heures pour effectuer l'ioduration en 3'. La solution réaction- nelle obtenue est alors traitée et purifiée comme décrit dans l'exemple 2 (a) (i) pour obtenir 29,9 mg (58 %) du composé d6siré sous forme de produit solide incolore. Exemple 8 a) Préparation de la 6'-N:4'-0-carbonyl-4"-6"-0- cyclohexylidène-3'-0-m6syl-1,3,2', 3 "-tétra-N-tosylka namycine B. On dissout 201 msg du dérivé carbamate cyclique en 4',6' obtenu dans l'exemple 3 (d) dans 4 ml de py- ridine sèche, on refroidit la solution à -20 C puis on la mélange à 0,03 ml de chlorure de mésyl. On maintient le mélange toute une nuit à température ambiante pour effectuer la 3'-mono-O-mésylation. Le mélange réaction- nel est ensuite trait6 comme décrit dans l'exemple 3 (e) pour donner 218 mg d'un produit solide que l'on purifie par chromatographie sur colonne de gel de silice déve- lopp6e avec un mélange chloroforme-éthanol (12: 1) pour donner 114 mg (53 %) du composé d6siré sous forme de solide incolore. [a32 = - 25 . (c = 1 dans le diméthyl- formamide). Analyse 6élmentaire Trouvé C 50,18; H 5,33; N 5,15; S 12,18 % Calculé pour C5H69N021S5 H 54 69-5 21 5 C 50,49; H 5,41; N 5,45; S 12,48 % b) Préparation de la 6-N:4O-0-ecarbonyl-4'",6"-O- cyc!ohexylidène-3 '-dsoxy-3 iodo 13,2' 9 3"=ttra-N=to- sylkanamycine B. On traite 50,0 mg du produit venant de l'étape (a) de cet exemple 8 avec de l'iodure de sodium en suivant le proc6dé d6crit dans l'exemple 7 (b)0 On obtient le composé d6sir6 avec un rendement de 60 % (25,5 mg) sous forme de solide incolore. Exeple 9 - Synthèse de la tobraycine a) Pr6paration de la 6'-N:4'-O-carbonyl-3'-chloro- 4",6"-0-cyclohexylidène-3'-désoxy-1,3,2',3,"-ttra-N-tosyl- kanamycine A. (i) On dissout 509 mg du composé 3'-mono-O-benzyl sulfonyl pr6par6 dans l'exemple 3 (e) ci-avant dans 94 ml de diméthylformamide, on ajoute à cette solution 159 mg de chlorure de lithium et on agite le mélange à 1200C pendant 30 minutes pour effectuer la chloruration en 3'. La solution réactionnelle est concentrée par évaporation puis soumise à une distillation az6otropique avec du xylène pour donner un r6sidu sirupeux qui est ensuite mis en suspension dans 90 ml de chloroforme. La suspension dans le chloroforme est lavée à l'eau, concentr6e à siccit6 et s6chée pour donner 485 mg d'un produit solide. Ce produit est purifié par chromatographie sur gel de silice avec, comme solvant de développement, un mé- lange chloroforme-méthyléthylcétone (1:2) pour donner 396 mg (84 %) du compos6 désir6 sous forme de solide incolore. [a)D5 =- 780 (c = 1 dans le chloroforme). Analyse élémentaire Trouv6 C 51,69; H 5,31; N 5,71 % Calcul6 pour C53H66N5018S4ci C 51,97; H 5,43; N 5,72 % (ii) Le compos6 est pr6paré avec un rendement de 83 % (76,4 mg) à partir de 102 mg du produit obtenu dans l'exemple 7 (a) selon le même procédé que celui décrit dans l'étape (i) précédente. (iii) Le composé désir6 est également prépar6 avec un rendement de 84 %(16,7 mg) à partir de 20,9 mg du produit obtenu dans l'exemple 8 (a) selon le même procédé que celui décrit dans l'étape (i) préc6dente, à l'excep- tion de la durée de traitement qui est de 1,5 heure. b) Production de 3'-d6soxykanamycine B (tobramycine) On soumet 204 mg du produit venant de l'6tape (a) ci-avant de cet exemple 9 au traitement avec le sodium m6tallique dans l'ammoniac liquide pour élimination des groupes N-tosyl et réduction du groupe 3'-chloro puis à la déprotection par coupure de l'anneau carbamate cycli- que en 4',6' et élimination du groupe 4",6"-0-cyclohexy- lidène par des procédés similaires à ceux décrits dans l'exemple 4 (c). On obtient ainsi 67,6 mg (76 %) de mo- nocarbonate de 3'-désoxykanamycine B. e468861 - REVENDICATIONS - 1 - Procédé de production de la tobramycine ou 3'- désoxykanamycine B de formule: CH NH2 NH2 HO 2 NH2 HOH2C OH caractérisé en ce que l'on fait ràagir un dérivé de kana- mycine B penta-N-protégé 3'-mono-O-alkyl-, aralkyl. ou arylsulfonylé dans lequel le groupes amino en 1,3,2' et 3" et éventuellement le groupe amino en 6' ont été pro- tégés par un groupe arylsulfonyl et spécialement le groupe tosyl, le groupe hydroxy en 3' a été alkyle, aralkyl- ou arylsulfonylé, les groupes hydroxy en i" et 6"' ont été bloqués avec un groupe hydroxy-protecteur bivalent et éventuellement le groupe hydroxy en 4' et le groupe amino en 6' ont été bloqués par formation entre eux d'un carbamate cyclique en 4?,6', avec un halogénure métal- lique de formule g. (II) dans laquelle M est un métal et particulièrement un métal alcalin et X est l'iode, le chlore ou le brome, dans un solvant organique, à une tem- pérature entre 50 et 150 C, pendant une durée de 30 mi- nutes à 2 heures pour obtenir un dérivé halogéné en 3', on réduit le groupe hala en 3' pour le remplacer par l'hydrogène pour obtenir le composé correspondant de 3'- désoxykanamycine B que l'on traite ensuite, le cas échéant, pour couper l'anneau carbamate en '1,6', puis on élimine les groupes aminoprotecteurs et hydroxy-protecteurs résiduels. 2 - Procédé de production de la tobramycine selon la revendication 1, caractérisé en ce qu'il comporte les étapes suivantes: - réaction d'un dérivé 1,3,2',6',3"-N- protégé, 4",6"-O-protégé et 3'-O-sulfonylé de kanamycine B de formule générale: 6' ZHNCH2 NHZ 4 0 O H o HO O dans laquelle R est un groupe alkyl, particulièrement un groupe alkyl de 1 à 4 atomes de carbone, un groupe aralkyl, particulièrement un groupe phénylalkyl de 7 à Il atomes de carbone, spécialement le groupe benzyl ou un groupe aryl, spécialement le groupe phényl, Y est un groupe alkylidène de 1 àZ 6 atomes de carbone, un groupe aralkylidèné ou un groupe tétrahydropyranylidéne comme groupe hydroxy-protecteur bivalent et chaque Z est un groupe ary1sulfonyl, spécialement le groupe tosyl, comme groupe amino-protecteur, avec un halogénure de métal alcalin de formule: dant une durée allant de 30 minutes à 2 heures pour donner OH dans laquelle R est un groupe alkyl, particulièrement un groupe alkyl de I A 4 atomes de carbone, un groupe aralkyl, particulièrement un groupe phénylaikyl de 7 à l atomes de carbone, spécialement le groupe benzyl ou un groupe aryl, spécialement le groupe ph&nyl, Y est un groupe alkylid&ne de I A 6 atomes de carbone, un groupe aralkylidne ou un groupe tétrahydropyranylidne commre groupe hydroxy-protecteur bivalent et chaque Z est un groupe arylsulfonyl, spécialement le groupe tosyl, comme groupe amino-protecteur, avec un halog&nure de métal alcalin de formule: dans laquelle M est un métal et particulirement un m&tal alcalin et X est l'iode, le chlore ou le brome, dans un solvant organique A une température entre 50 et 150 C pen- dant une durée allant de 30 minutes à 2 heures pour donner le compos6 halog6n& en 3' de formule: HO ZHNCEI If 2 X NEZ 0 Y NHZ \ol\;9 / - (III) OH dans la4uelle X, Y et Z ont les définitions ci-dessus, - réduction du groupe halo en 3' (X) du composé (III) de manière connue pour remplacer le groupe halo en 3' par 1l'hydrogène et produire le composé de 3'-d6soxy-kana- mycine B correspondant, et - 6limination de ce dernier des groupes amino-pro- tecteurs (Z) et hydroxy-protecteurs (Y) résiduels, de manière connue. 3 - Proc6dé de production de la tobramycine selon la revendication 1, caractérisé en ce qu'il comporte les 6tapes suivantes: - r6action d'un dériv6 1,3,2',3" N prot6gé, 6'-N:4'-O- carbonylé et 3 '-O-sulfonyl de kanamycine B de formule g6nérale: HNCH NHZ 11HZ C= OSO2R OH N1HZ Y/ OR dans laquelle R est un groupe alkyl, aralkyl ou aryl, R est soit un atome d'hydrogène, soit un groupe alkyl- sulfonyl, aralkylsulfonyl ou arylsulfonyl semblable au groupe -S02R de la formule, Y est un groupe alkylidène de 1 à 6 atomes de carbone, un groupe cycloalkylidène de 3 à 6 atomes de carbone, un groupe aralkylidène ou un grou- pe tétrahydropyranylidène, en tant que groupe hydroxy protecteur et chaque Z est un groupe arylsulfonyl, par- ticulièrement le groupe tosyl, en tant que groupe amino- protecteur, avec un halogénure métallique de formule: MX (II) dans laquelle M est un métal, particulièrement un métal alcalin et X est l'iode, le chlore ou le brome, dans un solvant organique à une température entre 50 et 150 C pen- dant 30 minutes à 2 heures pour produire le composé 3'- halogéné de formule: HNCH2 NHZ NHZ O =C X NEZ 0H2C/ / 011 NHZ t (V) 1 OR dans laquelle X, Y, Z et R ont les définitions ci- dessus. - r6duction du groupe 3'-halo du composé V de ma- nière connue pour remplacer le groupe 3'-halo par l'hy- drogène et produire le composé de 3'-désoxy-kanamycine B correspondant qui est encore sous la forme du carba- mate cyclique en 4',6' et - traitement de ce dernier, de façon connue pour couper l'anneau carbamate en 4',6' et éliminer les grou- pes amino-protecteurs (Z) et le groupe hydroxy-protecteur (Y) résiduels. 4 - Procédé de production selon l'une quelconque des revendications 1 à 3, caractéris6 en ce que 1'halo- g6nure métallique MX est l'iodure de sodium ou le chlo- rure de lithium. 5 - Proc6d6 de production selon l'une quelconque des revendications 1 à 3, caractérisé en ce que la r6- duction du groupe halo en 3' est effectuée par réaction avec un hydrure de trial1ylétain en présence d'a,a'- azobisisobutyronitrileo 6 - Procédé de production selon l'une quelconque des revendications 1 à 3, caractérisé en ce qu'on fait r6agir le groupe halo en 3' avec du sodium métallique dans l'ammoniac liquide pour effectuer simultanément la réduction du groupe halo en 3' (X) en hydrogène et l'é- limination des groupes arylsulfonyles amino-protecteurs (X), et on mélange le mélange réactionnel dans l'ammo- niac liquide avec du méthanol, on distille sous pression r&éduite pour éliminer l'ammoniac résiduel, on dissout le résidu dans l'eau et on chauffe pour effectuer la rupture de l'anneau carbamate cyclique en 4',6' restant 6ventuellement, puis on mélange la solution obtenue avec de l'eau et on neutralise avec une résine échangeuse de cations fortement acide contenant des fonctions sul- foniques pour effectuer l'élimination du groupe hydroxy- protecteur bivalent (Y) produisant ainsi la tobramycine. 7 - Composé intermédiaire obtenu au cours du pro- cédé selon la revendication 2, caractérisé en ce qu'il est un composé de kanamycine B 1,3,2',6',3"-penta-N- sulfonylé,4t,6"-O-protégé et 3'-halog6n6 de formule: ZHNCH2 NHZ o 0O HH X NHZ (III) dans laquelle X est un groupe halo, Y est un groupe alkylidène de 1 & 6 atomes de carbone, un groupe cyclo- alkylidène de 3 à 6 atomes de carbone, un groupe aralky- lidène ou tétrahydropyranylidène, en tant que groupe hydroxy-protecteur bivalent, et chaque Z est un groupe arylsulfonyle, sp6cialement le groupe tosyl comme groupe amino-protecteur. 8 - Compos6 selon la revendication 7, caract6ris6 en ce qu'il est la 4",6"-O-cyclo-hexylidène-3'-désoxy- 3 '-iodo-1,3,2',6',3"-penta-N-tosylkanamycine B. 9 - Composé intermédiaire obtenu au cours du pro- cédé selon la revendication 3, caractérisé en ce qu'il est un composé de kanamycine B 1,3,2',3"-tétra-N-sul- fonylé,4",6"-O-protégé,6 '-N:4 '-0-carbonylé et 3' halogé- né de formule: HNCH2 NHZ 0= 0 oi C NHZ O=O X NHZ OH C ( 02 C O (V) 1 dans laquelle X est un groupe halo, R est soit un atome d'hydrogène, soit un groupe alkylsulfony!4 aralkylsul- fonyleou arylsulfonyle, similaire au groupe -S022 de la formule, Y est un groupe alkylidène de 1 à 6 atomes de carbone, un groupe cycloalkylidène de 3 à 6 atomes de carbone, un groupe aralkylidène ou tétrahydropyranyli- dène en tant que groupe hydroxy-protecteur bivalent, et chaque Z est un groupe arylsulfonyle, spécialement le groupe tosyl, en tant que groupe amino-protecteuro - Composé selon la revendication 9, caractérisé en ce qu'il est choisi parmi la 6'-N:4'-O-carbonyl-4",6"- 0-cyclohexylidène-3'-désoxy-3'-iodo-1,3,2',3"-tétra-N- tosylkanamycine B, la 2"-0-benzylsulfonyl-6'-N:4'-O-car- bonyl-3'-chloro-4",6"-0-cyclohexylidène-3'-désoxy-1,3,2', 3"-tétra-N-tosylkanamycine B, la 6'-N:4'-O-carbonyl-3'- chloro-4",6"-0-cyclohexylidène-3'-désoxy-1,3,2',3"-tétra- N-tosylkanamycine B.