Brevet FR2463773A1 — publié le 19810227

La présente invention est relative à un nouveau com- posé désigné B-41D, qu'on peut préparer en cultivant des microorganismes du genre Streptomyces et qui a de précieu- ses activités acaricides et anthelmintiques. Dans le brevet britannique n 1.390.336, la Demande- resse a indiqué que des microorganismes du genre Strepto- myces, et notamment de la souche de Streptomyces B-41-146 (Ferm 1438), peuvent produire une substance antibiotique dite B-41, qu'on peut séparer en 9 constituants différents qui, dans ledit brevet, sont désignés A1, A2, A3, A4, B1, B2, B3, C1 et C2o On a ultérieurement découvert que quatre autres composés ayant une structure similaire pouvaient être obtenus en cultivant la même souche de Streptomyces. La structure et les propriétés des treize composés sont décrites, entre autres, dans J. Antibiotics 29 (3), pages 76-14 à 76-16 et 29 (6), pages 76-35 à 76-42. Dans le brevet britannique n 1.390.336, il est indi- qué que le complexe constitué par l'ensemble des substan- ces B-41 ainsi que les substances considérées individuelle- ment présentent des propriétés insecticides et acaricides. Ultérieurement, dans le brevet des E.U.A. n 4.144.352, il a été indiqué que ces substances et autres substances appa- rentées ont également une activité anthelmintique. Dans le brevet des E.U. A. n 4.144.352, les substances B-41 sont appelées "milbémycines". Pour plus de clarté, la Deman- deresse désignera également les composés antérieurs par le nom de "milbémycines", étant bien ententu toutefois que certains de ces composés sont identiques aux composés constituant la substance B-41, comme décrit dans le brevet britannique n 1.390.336. Divers dérivés de milbénmycine sont décrits dans les brevets des E.U.A. n 4.093.629 et 4.134.973. Les treize composés de type milbémycine qui peuvent être obtenus par culture de Streptomyces B-41-146 répon- dent aux formules (I), (II) et (III). La structure des milbémycines K1 à 10 est indiquée par la formule (I) suivante: I1l Les définitions des groupes R1, R2, R3, R4 et R5 fi- gurent au tableau 1 suivant qui indique également, le cas échéant, la désignation B-41 correspondante, telle qu'uti- lisée dans le brevet britannique n 1.390.336. Parmi les treize composés connus produits par la souche de Strepto- myces B-41-146, ce sont les milbémycines 41 à 10 dont la structure est la plus voisine de celle du nouveau com- posé B-41D suivant la présente inve tions appropriées des groupes R1à s'appliquent au composé B-41D, sont au tableau 1. ntion, et les défini- R5, telles qu'elles également indiquées TABLEAU 1 Milbémycine! R | R2| R3 | 4 5 B-41 v 1 | H H CH3 CH3 OH A3 d2!H H CH3 CH3 OCH3 B2 23 3 H CH H C2H5 CH3 OH A4 cç. H H C25 CH3 OCH3 B3 4 OH MH CH3 i CH3 OH A2 OH MH! CH3 CH3 OCH3 B 6 3 3OH ! OH M CH CH OH - 7 OHi CaH 5 3 C3 OH MH C2H5 CH3 OCH3 48 2i iH H CH PC OH C1 *H H. CH PC OH C 25 2 - ---------- H------------------ C------- ====== D------ H i H CH(CH3)2 nH D 3)2O DH Dans le tableau ci-dessus, on utilise les suivantes: abréviations R5 MH désigne un groupe 2-méthylhexanoyloxy répondant à la formule: 0 CH Il 13= -0 - C - CH - C4H9 PC désigne un groupe 2-pyrrolylcarbonyloxyméthyle répon- dant à la formule: H Les structures des milbémycines [1 sentées par la formule (II): CH3 '. CH3 O) R6 CH3 et [2 sont repré- (lt) dans laquelle R6 représente, dans le cas de la milbémycine elun groupe méthyle et, dans le cas de la milbémycine 32, un groupe éthyle. La milbémycine (1 correspond au composé B-41A1 du brevet britannique n 1.390.336. La structure de la milbémycine 93 est représentée par la formule (III): CH3 CH3 O CH3 CH3 f _ g 0 OH La Demanderesse a maintenant découvert un nouveau composé pouvant être obtenu par le même mode de fermenta- tion que celui utilisé pour produire les milbémycines, mais qui présente une meilleure activité acaricide et anthelmintique. C'est ainsi que la présente invention a pour objet un composé B-41D répondant à la formule: CH3 CH3 O S oCH,,CH3i CH3 'OX CH3 ol Èso O"CH3- OH L'invention vise également un procédé de préparation du composé B-41D, consistant à cultiver un microorganisme producteur décomposé B-41D, du genre Streptomyces, dans un milieu de culture approprié et à séparer le composé B-41D du milieu de culture. L'invention a également pour objet un procédé de pré- paration d'une composition anthelmintique et acaricide, consistant à cultiver un microorganisme producteur du composé B-41-D, du genre Streptomyces, dans un milieu de culture approprié et à concentrer et purifier le milieu de culture afin d'obtenir une composition contenant au moins 25% en poids du composé B-41D. Le composé B-41D répond à la formule ci-dessus et présente les caractéristiques physico-chimiques suivantes: (1) Aspect: poudre amorphe ou cristaux. (2) Analyse élémentaire: pour C33H4707: C H O Calculé %: 71,09 8,80 20,11 Trouvé %: 71,40 8,82 20,22 (3) Masse moléculaire: 556 (4) Spectre d'absorption UV (comme représenté à la FIG.1 du dessin annexé. Maxima d'absorption à 237 m" (épaulement, ú= 29400) et 243 m" ( & = 30500). (5) Spectre d'absorption IR (comprimé de KBr): comme indiqué à la FIG.2 du dessin annexé. (6) Spectre de R4N à 100 MHz dans CDC13 en utilisant le tétraméthylsilane comme étalon interne: comme indiqué à la FIG.3 du dessin annexé. (7) Solubilité: très soluble dans l'acétate d'éthyle, l'acétone, l'éthanol et le méthanol. Très peu soluble dans l'eau. (8) Chromatographie en couche mince sur gel de silice (Kieselgel 60 F254' Merck Co.) (développement à.L'-aie d'un mélange 18/82 en volume de dioxanne et de tétra- chlorure de carbone: Rf = 0,40. On peut préparer le composé B-41D en cultivant un microorganisme du genre Streptomyces, mais en particulier la souche de Streptmces B-41-146 (Ferm 1438). Les carac- téristiques morphologiques, de culture et physiologiques ainsi que les propriétés taxonomiques de la souche B-41- 146 sont décrites en détails dans le brevet britannique n' 1.390.336. Cette souche a été déposée auprès du Fermanta- tion Research Institute, Agency of Industrial Science and Technology, Ministère du Commerce International et de l'Industrie du Japon, d'o on peut l'obtenir sous le n0 d'accession Ferm 1438 (également connu comme "Bikoken- Kinki 1438"1).. Comme on le sait bien, les Streptomyces présentent une tendance à la mutation à la fois de façon naturelle et par application d'opérations artificielles comme, par exemple, l'irradiation à l'aide d'un rayonnement ultra- violet, à l'aide d'un rayonnement ionisant, ou par un traitement chimique. Il en va de même dans le cas de la souche B-41-146 utilisée dans le procédé suivant l'in- vention. Il s'ensuit que tout mutant producteur de B-41D de la souche de Streptomyces B-41-146 peut être utilisé pour obtenir le composé suivant l'invention. On peut obtenir le composé suivant la présente inven- tion en cultivant la souche de Streptomyces B-41-146 dans un milieu approprié, puis en séparant le composé résultant du bouillon de fermentation. On peut utiliser tout élé- ment nutritif utilisé à ce jour pour la culture de micro- organismes du genre Streptomyces. D'une façon générale, -2463773 comme bien connu dans la technique, ce milieu de culture doit contenir au moins une source de carbone assimilable et une source d'azote assimilable. Comme sources de car- bone appropriées, on citera: le glucose, le saccharose, l'amidon, la glycérine, l'extrait de malt, la mélasse et l'huile de soja. Le glucose est une source de carbone particulièrement préférable, de préférence en une propor- tion représentant jusqu'à 8% et, mieux, de 6 à 8% pds/vol du milieu de culture. En plus du glucose, il est préférable d'utiliser une ou plusieurs sources de carbone choisies parmi le lactose, le maltose et l'amidon de mais (de pré- férence en une proportion de 0,5 à 2,0% pds/vol) comme source de carbone supplémentaire. Afin de maintenir un pH constant, il est préférable d'ajouter un supplément de glucose tout au long de la culture. Comme sources d'azote appropriées, on citera: la farine de soja, le germe de blé, l'extrait de viande, la peptone, la levure fraîche, la liqueur de macération de mais, le sulfate d'ammonium et le nitrate d'ammonium. La source d'azote particulièrement préférable est une association de farine de soja et de lait écrémé de préfé- rence de 0,5 à 1,0% pds/vol de farine de soja et de 1,0 à 2,0% pds/vol de lait écrémé. On peut éventuellement incor- porer un aminoacide (comme la glycine ou l'arginine) dans le milieu de culture. On peut éventuellement ajouter des sels minéraux, comme le carbonate de calcium, le chlorure de sodium, le chlorure de potassium ou des phosphates, ainsi que d'au- tres substances organiques ou minérales destinées à aider la prolifération microbienne et à promouvoir la produc- tion du composé cherché. De façon surprenante, on peut obtenir le composé B-41D avec de bons rendements en utilisant un milieu de culture contenant de 6 à 8% pds/vol de glucose; de 0,5 à 2% pds/vol de lactose et/ou de maltose et/ou d'amidon de mais; de 0,5 à 1,0% pds/vol de farine de soja; et de 1,0 à 2,0% pds/vol de lait écrémé. Bien qu'on puisse faire appel à tout mode de culture de la souche de Streptomyces B-41-146, comme dans le cas d'une fermentation destinée à prod ire d'autres substan- ces biologiquement actives, une culture liquide et, en particulier, une culture submergée est le mode opératoire préféré. Il est préférable qu'il s'agisse d'une culture aérobie et à une température pouvant varier dans des limites étendues, de façon appropriée de 22 à 30 C et, de préférence, à 28 C environ. La production du composé B-41D cherché atteint un maximum au bout de 5 à 10 jours de culture, en secouant ou dans une cuve. On peut doser le composé B-41D dans le bouillon de culture comme suit. On introduit une quantité connue, par exemple 3 g, du bouillon de culture dans un petit tube à essai, puis on introduit 10 ml d'acétone et on extrait le mélange en secouant puis en centrifugeant. A la solution surnageante ainsi obtenue on ajoute de l'acétone jusqu'à obtention d'un volume total de 10 ml. On applique la solu- tion résultante en une position prédéterminée sur une plaque de chromatographie en couche mince (CCI-)(gel de silice, par exemple Kieselgel 60 F254, fourni par E. Merck) en une proportion, par exemple, de 10 à 20 p litre. Puis on développe la plaque pendant 4 heures à l'aide d'un mélange 18/82 en volume de dioxanne et de tétrachlorure de carbone. On mesure ensuite l'échantillon par CCM (avec balayage à double longueur d'onde) à une longueur d'onde de 245 rN (l'essai à blanc à 380 mp). On compare l'absor- bance avec celle d'un échantillon étalon connu du composé, ce qui permet de calculer la quantité de composé B-41D. On peut séparer le composé B-41D du bouillon de cul- ture en utilisant un adsorbant naturel (comme du carbone activé, de l'alumine ou du gel de silice), un adsorbant synthétique (comme Diaion HP20, produit par Mitsubishi Chemical Industries, Limited), un absorbant (comme Avicel, produit par Asahi Chemical Industry Co., Limited, ou du papier filtre), une résine réchangeuse d'ions, un filtre à base de gel échangeur d'ions, etc.. Toutefois, le mieux consiste à recueillir le composé en faisant appel au mode opératoire suivant. Tout d'abord, on filtre le bouillon de fermentation, en utilisant un adjuvant de filtration (comme de la terre de diatomées) afin d'obtenir un gâteau qu'on extrait au méthanol afin de dissoudre la substance cherchée dans une solution hydro-méthanolique. On ajoute ensuite de l'eau à la solution hydro-méthanolique et on extrait la solution résultante à l'aide d'hexane. On sépare la phase d'hexane et on concentre par évaporation sous pression réduite, obtenant ainsi une substance huileuse contenant le composé B-41D cherché. On introduit cette substance huileuse dans une colonne contenant du gel de silice (par exemple Wakogel C-200) et on 'élue à l'aide d'un mélange approprié, par exemple 95/5 en volume d'hexane et d'acé- tone, afin de recueillir les fractions contenant le compo- sé cherché. On concentre ces fractions par évaporation sous pression réduite, ce qui fournit à nouveau une subs- tance huileuse qu'on dissout dans une petite quantité de méthanol et introduit dans une colonne de Sephadex LH-20 (marque déposée pour un produit fourni par Pharmacia Co.) et on élue au méthanol. On recueille les fractions conte- nant la substance cherchée, on élimine le solvant et on dissout le résidu dans une petite quantité de méthanol. On ajoute de l'eau et on abandonne le mélange à températu- re ambiante. On obtient le composé B-41D résultant sous la forme d'une mousse ou de bulles qui, après rupture, donne(nt) une poudre amorphe. Après recristallisation dans un mélange 20/1 en volume d'hexane et d'acétate d'éthyle, on obtient le composé B-41D sous la forme de petites ai- guilles fondant à 186-1880C. Bien que le composé B-41D puisse être séparé et puri- fié aux fins d'utilisation, par exemple comme décrit ci- dessus, il est également possible d'interrompre le pro- cessus de purification à tout stade souhaité et d'utiliser le produit brut, qui contient un mélange de milbémycines ainsi que le composé B-41D. Si on utilise un mélange con- tenant deux ou plus de ces composés sans effectuer une séparation complète, il suffit qu'il soit purifié à un degré permettant l'obtention d'un effet acaricide à une concentration de 5 ppm. Dans ce cas, la teneur en composé B-41D dans le mélange brut est de préférence d'au moins % en poids et, mieux, d'environ 50% en poids, le res- tant étant constitué par des impuretés provenant du bouillon et autres milbémycines. Le composé suivant la présente invention a une remar- çquable activité acaricide contre les adultes et les oeufs d'acariens comme l'araignée rouge des cultures (Tetranv- chus urticae), l'araignée rouge des arbres fruitiers (Panonychus ulmi), l'araignée rouge des agrumes (Panonychus citri) et les acariens des agrumes (par exemple des genres Acul ou Aculus), qui sont des parasites des fruits, des légumes et des fleurs. Il est également actif contre l'es acariens des genres Ixodidae, Dermanyssidae et Sarcoptidae qui sont des parasites des animaux.Le composé est égale- ment très actif contre des ectoparasites comme Oestrus, Lucilia, Hypderma, Gasterophilus, les puces, les poux,etc. ainsi que contre des insectes importants d'un point de vue hygiène (comme les blattes ou les mouches) et autres insectes, nuisibles en horticulture et en agriculture, com- me les aphidiens et les larves d'insectes de l'ordre des Lépidoptèreso En outre, il est actif contre des nématodes, comme ceux du genre Meloidogyne, et des acariens des bulbes, comme ceux du genre Rhizoglyphus qu'on trouve dans le sol. Aux fins d'utilisation comme préparation acaricide ou insecticide, le composé suivant l'invention est de préfé- rence dilué à l'aide d'un véhicule afin d'obtenir des préparations comme des poudres, des poudres grossières, des granulesdes granules fins, des poudres mouillables, des concentrés emulsionnables ou des huiles. Le véhicule utilisé pour préparer ces compositions peut être synthétique ou naturel, minéral ou organique et, d'une façon générale, tout véhicule classiquement ajouté aux insecticides ou acaricides pour permettre à l'ingré- dient actif de mieux atteindre l'objet à traiter (par exemple: plantes, acariens ou insectes nuisibles) ou pour faciliter le magasinage, le transport ou la manipulation de l'ingrédient actif est utilisable. Comme exemples de véhicules solides appropriés, on citera: des substances minérales comme l'argile, le talc, la terre de diatomées, le kaolin, la bentonite, le carbo- nate de calcium ou le silicate de calcium synthétique; des résines naturelles ou synthétiques comme les résines de coumarone, les résines alkydes et les chlorures de polyvi- nyle; des cires comme la cire de carnauba et la cire de paraffine; des coques de noix; ou de la farine de soja. Comme exemples de véhicules liquides appropriés, on citera: l'eau; des alcools comme l'éthanol ou l'isopropa- nol; des glycols comme l'éthylène glycol; des éthers gly- coliques comme l'éther monophénylique de l'éthylène glycol ou l'éther monoéthylique du diéthylène glycol; des cétones comme l'acétone, la méthyl isobutyl cétone, la cyclohexa- none, l'acétophénone ou l'isophorone; des éthers comme le tétrahydrofuranne ou le dioxanne; des hydrocarbures aroma- tiques comme le benzène, le toluène, le xylène ou le méthylnaphtalène; des hydrocarbures chlorés comme le tri- chloréthylène et le tétrachlorure de carbone; ainsi que des fractions de pétrole à point d'ébullition bas, moyen et élevé contenant du kérosène, des huiles légères ou des hydrocarbures aromatiques. Le composé suivant l'invention peut également être présenté sous la forme d'aérosols, auquel cas le véhicule est un propulseur. Comme exemples de propulseurs appro- priés on citera les hydrocarbures fluorés (comme ceux fournis sous la marque "Fréon"), le gaz de pétrole liqué- fié, l'éther diméthylique et le chlorure de vinyle mono- mère. La préparation peut aussi éventuellement contenir un agent tensioactif afin d'émulsionner, disperser, mouiller ou étaler le composé actif, et cet agent tensio-actif peut être ionique ou anionique. Comme exemples d'agents tensio- actifs anioniques appropriés, on citera: les sels de so- dium et de calcium de l'acide lignosulfonique; les sels de sodium et de potassium de l'acide oléique; le sel de so- dium de l'acide laurylsulfonique; ainsi que lés sels de sodium et de calcium de l'acide dodécylbenzènesulfonique. Comme exemples d'agents tensio-actifs cationiques appro- priés, on citera: les amines aliphatiques supérieures et les condensats d'amines aliphatiques supérieures et d'oxy- de d'éthylène. Comme exemples d'agents tensio-actifs non- ioniques appropriés, on citera: des glycérides d'acides gras; des esters de saccharose et d'acides gras; des con- densats d'oxyde d'éthylène et d'alcools aliphatiques supé- rieurs; des condensats d'oxyde d'éthylène et d'acides gras supérieurs; des condensats d'oxyde d'éthylène et d'alcoyl phénols ou d'alcoylnaphtols; ainsi que des copolymères d'oxyde d'éthylène et d'oxyde de propylène. La composition acaricide ou insecticide suivant l'in- vention peut, sinon ou en outre, contenir un collolde protecteur (comme la gélatine, la gomme arabique, la ca- séine, l'alcool polyvinylique ou la carboxyméthylcellulose) ou un agent thixotropique (comme un polyphosphorate de so- dium ou la bentonite). La préparation peut également con- tenir d'autres composés ayant une activité acaricide, par exemple le #/,-diméthyl acrylate de 2-(l-méthylpropyl)- 4,6-dinitrophényle, le di-(p-chlorophényl)cyclopropylcarbinyle, la N'-(4chloro-2-méthylphényl)-N,N-diméthylformamidine, la 2,4,4',5-tétrachlorodiphényl sulfone, le 1,1-bis(p- chlorophényl)-2,2,2-trichloroéthanol, le N-méthylcarbamate de 2-secbutylphényle, le N-méthylcarbamate de m-tolyle ou de l'huile minérale, afin d'améliorer l'activité de la prépa- ration; dans certains cas, on peut prévoir leobtention d'un effet de synergie. Bien entendu, il est également possible d'utiliser le composé suivant la présente invention en mélange avec d'au- tres fongicides, herbicides, régulateurs de la croissance des végétaux, engrais, leurres, etc. Le composé B-41D est également très actif comme para- siticide pour le traitement de l'homme et autres animaux. Les maladies couramment appelées "parasitaires" sont pro- voquées chez l'hôte animal malade par des organismes méta- zoaires couramment appelés Helminthes. Les parasites peu- vent attaquer le cheptel, les volailles et les animaux familiers ou domestiques (comme les porcs, les moutons, les chèvres, les vaches, les chevaux, les chiens, les chats et les poulets)en provoquant une épidémie et peu- * vent être la cause d'importants dommages économiques. Parmi les Helminthes, un groupe de parasites, les Némato- des en particulier, peuvent attaquer divers animaux et souvent provoquer des infections graves. Comme exemples représentatifs de genres de Nématodes pouvant infecter les animaux précités, on citera: Haemonchus, Trichostron- gylus, Ostertagia, Nematodirus, Cooperia, Ascaris, Bunos- tomum, Oesophagostomum, Chabertia, Trichuris, Strongylus, Trichonema, Dictyocaulus, Capillaria, Heterakis, Toxocara, Ascaridia, Oxyuris, Ancylostoma, Uncinaria, Toxascaris, Parascaris et Strongyloides. Certains des parasites des genres Nematodirus, Coope- ria et Oesophagostomum attaquent les intestins, tandis que les parasites des genres Hemonchus et Ostertagia atta- quent l'estomac, et qu'on trouve dans les poumons des pa- rasites du genre Dictyocaulus. On trouve des parasites de la famille des Filariidés ou des Sétariidés dans le coeur, les vaisseaux sanguins et des tissus et organes tels que les tissus sous-cutanés et les vaisseaux lymphati- ques. Le composé suivant la présente invention a un large spectre d'activité contre de nombreux endoparasites chez divers animaux et, par exemple, est efficace contre des pa- sites-des genres Dirofilaria chez le chien, Nematospiroi- des, Syphacia et Aspiculuris chez les rongeurs. Le composé B-41D est également utilisable contre di- vers parasites qui provoquent des infections chez l'homme. Comme exemples représentatifs de ces parasites qu'on peut trouver dans le tube digestif de l'homme, on citera des parasites appartenant aux genres Ancylostoma, Necator, Ascaris, Strongyloides, Trichinella, Capillaria, Trichuris et Enterobius. Comme autres parasites médicalement significatifs qu'on trouve dans le sang, les tissus ou d'autres organes que le tube digestif, on citera des parasites appartenant aux genres Wuchereria, Brugia, Onchocerca et Loa de la famille des Filariidés, Dracunculus de la famille des Dra- chunculidés et Strongyloiîdes et Trichinella qui sont extraordinairement normalement ectoparasites mais sont sou- vent endoparasites dans le tube digestif. Lorsqu'on veut utiliser le composé B-41D comme parasi- ticide chez l'homme et autres animaux, il est préférable de l'administrer oralement, sous forme de potion ou de gélule. On peut le présenter sous la forme d'une solution aqueuse, ou d'une solution dans un autre solvant non toxi- que approprié, ou sous la forme d'une suspension ou dis- persion contenant un adjuvant de suspension et un agent mouillant comme la bentonite, ou autres constituants. D'une façon générale, la potion contient également un agent anti-moussant. La Demanderesse préfère normalement que la potion contienne le composé actif en une proportion pondé- rale de 0,01 à 0,5% et, mieux, de 0,01 à 0,1%. Il est également possible d'administrer le composé B-41D sous la forme de doses unitaires, par exemple sous la forme de gélules, pilules ou comprimés solides et secs contenant une quantité prédéterminée du composé actif. On peut obtenir ces compositions en mélangeant le composé actif, de façon homogène, avec uneou plusieurs substances finement pulvérisées, notamment des diluants, des charges, des agents de désintégration ou des liants (comme l'amidon, le lactose, le talc, le stéarate de magnésium ou une gomme végétale). Le poids et la concentration de l'ingrédient actif dans ces formes de doses unitaires sont très varia- bles, suivant le type d'animal à traiter, le degré d'infec- tion, la nature du parasite et le poids corporel de l'animal. Le composé B-41D peut être administré aux animaux en le dispersant uniformément dans leur nourriture, ou peut être utilisé en le répandant à la surface des aliments ou sous la forme de pastilles. Pour obtenir une activité antiparasitaire satisfaisante, il est souhaitable que l'alimentation finalement obtenue contienne le composé actif en une proportion pondérale de 0,0001 à 0,02%. Le composé B-41D peut également être dissous ou dis- persé dans un véhicule liquide et administré par voie pa- rentérale aux animaux, par injection dans le proventricule, les muscles, les poumons, ou sous la peau. Pour l'adminis- tration par voie parentérale, le véhicule utilisé est de préférence une huile végétale, comme l'huile d'arachide ou l'huile de graine de coton. Pour-l'administration par voie parentérale, le composé actif est de préférence pré- sent en une proportion représentant de 0,05 à 50% du poids de la composition. On peut également administrer- le composé B-41D par voie topique, auquel cas il est préférable de mélanger le composé actif avec un véhicule approprié, comme le dimé- thyl sulfoxyde ou un solvant hydrocarboné. La composition résultante peut être directement appliquée sur la peau externe des animaux, par exemple par pulvérisation. La quantité optimale de composé B-41D permettant d'obtenir les résultats les meilleurs varie suivant l'ani- mal à traiter, le type de l'infection parasitaire et le degré d'infection mais, d'une façon générale, il est pré- rérable d'administrer le composé actif en une proportion de 0,01 à 100 mg/kg de poids corporel de l'animal et, mieux, lorsqu'il s'agit d'une administration par voie orale, de 0,1 à 50 mg/kg. Le composé peut être administré sous la forme d'une prise unique ou de plusieurs prises et, normalement, il n'est nécessaire de traiter l'animal que pendant un laps de temps relativement court, par exem- ple de 1 à 5 jours. Les exemples non limitatifs suivants sont donnés à titre d'illustration de l'invention. Les exemples 1 et 2 illustrent la préparation du composé B-41D, les exemples 3 à 6 illustrent des compositions acaricides le contenant, les exemples 7 à 9 illustrent son activité acaricide et les exemples 10 à 14 illustrent son activité anthelminti- que. EXEMPLE 1 Préparation du composé B-41D Dans un Erlenmeyer de 2 litres, on introduit 600 ml d'un milieu de pré-culture contenant 2% pds/vol de glucose, 1% pds/vol de farine de soja, 0,5% pds/vol de liqueur de macératio nde mais (produit fourni par Corn Products Co.) et 0,2% de chlorure de sodium. On inocule le milieu à l'aide d'une pleine boucle de spores de Streptomyces sou- che B-41-146, puis on cultive pendant 48 heures à 27 C. Au bout de ce temps, on transfère le contenu de 2 de ces Er- lenmeyer de 2 litres dans un bocal de fermentation ayant une capacité de 30 litres qui contient déjà 20 litres d'un milieu de culture soigneusement stérilisé contenant 4% pds/vol de glucose, 1% pds/vol de farine de soja, 0,5% pds/vol d'amidon de mais, 1% pds/vol de lait écrémé, 0,2% pds/vol de liqueur de macération de mais et 0,3% de chlo- rure de sodium. Le pH du milieu a une valeur de 7,2 à 7,5 avant stérilisation. Puis on fait incuber la culture à 28 C, sous une pression interne de 0,5 kg/cm2, pendant 10 jours. Au bout de ce temps, on amène 20 litres du bouillon de culture à un pH de 3, par addition d'acide sulfurique, puis, après avoir ajouté 1 kg de Celite (marque déposée pour un adjuvant de filtration), on filtre le mélange sous pression, obtenant ainsi environ 3 kg d'un gâteau. On ex- trait ce gâteau à l'aide de 15 litres de méthanol et on filtre l'extrait. On dilue 15 litres de la solution métha- nolique ainsi obtenue avec 5 litres d'eau et on extrait à l'aide de 20 litres d'hexane. On sèche la solution hexani- que obtenue sur sulfate de sodium anhydre et on concentre par évaporation sous pression réduite sur un bain-marie maintenu à 40-45 C, obtenant ainsi 22 g d'une substance huileuse. On dissout la substance huileuse dans 30 ml d'hexane et on adsorbe sur une colonne contenant 2 kg de gel de silice équilibrée à l'aide d'hexane. On élue la colonne à l'aide d'un mélange 95/5 en volume d'hexane et d'acéto- ne. On obtient 2 litres d'une fraction contenant le compo- sé cherché; on la concentre sous pression réduite sur un bain-marie maintenu à une température de 40 à 450C, ce qui fournit 550 mg d'une substance huileuse. On dissout cette substance dans 1 ml de méthanol et on introduit la solu- tion dans une colonne contenant 200 ml de Sephadex (marque déposée) LH-20, qui a été équilibrée à l'aide de méthanol. On élue ensuite la colonne au méthanol, obtenant ainsi 65 ml d'une fraction contenant le composé cherché. On con- centre cette fraction par évaporation sous pression rédui- te à 450C, on dissout le résidu résultant dans 2 ml de méthanol et on dilue la solution méthanolique à l'aide de 2 ml-d'eau. On abandonne le mélange à la température am- biante, ce qui fournit 110 mg de composé B-41D sous la forme d'une poudre amorpheayant les propriétés précédem- ment décrites. EXEMPLE 2 Préparation du composé B-41D On inocule, à l'aide d'une pleine boucle de spores de Streptomyces souche B-41-146, un ballon de 2 litres contenant 600 ml d'un milieu de pré-culture contenant 1% pds/vol de saccharose, 0, 35% pds/vol de polypeptone et 0,05% à'orthophosphate dipotassique, puis on cultive le microorganisme pendant 48 heures à 270C. On transfère en- suite le contenu de trois de ces ballons dans une cuve de fermentation de 600 litres dans lequel on a préalablement introduit 300 litres d'un milieu de culture soigneusement stérilisé contenant 8% pds/vol de glucose, 1% pds/vol de farine de soja, 0,5% pds/vol d'amidon de mais, 1% pds/vol de lait écrémé, 0,2% pds/vol de liqueur de macération de mais, 0,3% pds/vol de chlorure de sodium et 0,05% pds/vol de carbonate de calcium. On maintient le pH du milieu à une valeur de 7,2 à 7,5. Puis on cultive à 280C, en agitant à une vitesse de 150 à 200 tours/minute et sous une pression interne de 0,5 à 1 kg/cm2 pendant 12 jours. Au bout de ce temps, la quantité de composé B-41D dans le milieu est de 180 pg/ml. On amène 300 litres du milieu de culture résultant à un pH de 3, par addition d'acide sulfurique, on ajoute 15 kg de Célite (adjuvant de filtration) et on filtre le mélange sous pression, obte- nant ainsi 40 kg de gateau. On extrait le gâteau à l'aide de 200 litres de méthanol et on filtre. On ajoute 150 li- tres d'eau à l'extrait méthanolique et on extrait le mé- lange résultant deux fois, chaque fois à l'aide de 250 li- tres d'hexane. On sèche la solution hexanique résultante sur sulfate de sodium anhydre et on concentre par évapora- tion sous pression réduite sur un bain-marie maintenu à une température de 40 à 450C, ce qui fournit 350 g d'une huile. On dissout l'huile dans 400 ml d'hexane et on fait adsorber sur une colonne contenant 3 kg de gel de silice qui a préalablement été équilibrée à l'hexane. On élue la colonne à l'aide d'un mélange 95/5 en volume d'hexane et d'acétone, obtenant ainsi 8 litres d'une fraction d'éluat contenant le composé cherché. On concentre cette fraction par évaporation sous pression réduite sur un bain-marie maintenu à une température de 40 à 450C, obtenant ainsi 33 g de cristaux bruts. On dissout ces cristaux dans un mélange 20/2 en volume d'hexane et d'acétate d'éthyle, dans lequel ils recristallisent en donnant 17,4 g de com- posé B-41D sous la foime d'aiguilles incolores fondant à une température de 186 à 1880C et ayant les propriétés précédemment décrites. EXEMPLE 3 Poudre On ajoute 10 parties en poids de composé B-41D, sous 1à forme d'une poudre amorphe, à 5 parties de carbone blanc et on mélange de façon homogène. On additionne le mélange résultant de 50 parties en poids de talc et 35 parties d'argile. On mélange le tout de façon homogène, on pulvérise trois fois dans un pulvériseur de type à impact et on mélange à nouveau de façon homogène, obtenant ainsi une poudre. EXEMPLE 4 Poudre mouillable On mélange, en poids, 40 parties de composé B-41D sous la forme d'une poudre amorphe avec 20 parties de car- bone blanc. On ajoute, en poids, 5 parties de dodécylbénzè- ne sulfonate de sodium, 2 parties d'alcool polyvinylique et 33 parties d'argile, et on mélange soigneusement. On pulvérise le mélange, trois fois, à l'aide d'un pulvéri- seur de type à impact, après quoi on mélange à nouveau de façon homogène, obtenant ainsi une poudre mouillable. EXEMPLE 5 Concentré émulsionnable On mélange, en poids, 3 parties du composé B-41D sous la forme d'une poudre amorphe, 7 parties d'éther nonylphénylique et de polyoxyéthylène, 3 parties de dodécylbenzènesulfonate de calcium et 87 parties de xylène et on filtre, obtenant ainsi une solution utilisable comme concentré émulsionnable. EXEMPLE 6 Préparation à base d'huile On dissout, en poids, 10 parties de composé B41D sous la forme d'une poudre amorphe dans 10 parties de xy- lène, puis on ajoute 80 parties en poids d'huile pour ma- chines à la solution et on filtre le mélange, obtenant ainsi une préparation à base d'huile. EXEMPLE 7 Activité acaricide sur Tetranychus urticae On prépare un concentré émulsionnable à 3% en poids en opérant comme décrit à l'exemple 5. On dilue le concen- tré à l'eau afin d'obtenir les concentrations en composé actif indiquées au tableau 2. Sur des feuilles de pois à vaches contenant des adultes femelles de Tetranychus urti- cae on pulvérise la solution d'essai, à raison de 5 cm3 e pour 2 feuilles, à l'aide d'un pulvérisateur de type Mizuho (Mizuho Rikagaku Kikai Co. Limited). On sèche les feuilles à l'air et on abandonne dans une pièce réglée à C à l'aide d'un thermostat, pendant 72 heures, après quoi on calcule la mortalité des acariens. Le nombre d'adultes est de 30 à 35 par feuille et on utilise 2 feuilles dans chaque essai. On effectue l'essai en utilisant le composé B-41D et, comme témoins, les milbécynes d et d,3 (B-41A3 et A4 du brevet britannique n 1.390.336) et Kelthane (marque dépo- sée d'un acaricide agricole connu à base de 1,1-bis(chlo- rophényl) -2,2,2-trichloroéthanol). Les résultats obtenus sont rapportés au tableau 2, exprimés en pourcentage de mortalité des adultes. TABLEAU 2 EXEMPLE 8 Activité acaricide sur les oeufs de Tetranichus urticae Dans cet essai, on utilise des oeufs de 1 jour de Tetranychus urticae préalablement déposés (sous forme d'oeufs) sur des feuilles de pois à vaches. On traite les feuilles à l'aide du composé suivant l'invention et des autres composés décrits à l'exemple 7. Le nombre d'oeufs est d'environ 100 par feuille. 2 semaines après le traite- ment, on compte le nombre d'oeufs non éclos. Les résul- tats obtenus sont rapportés au tableau 3 en pourcentage du nombre total d'oeufs. Composé Concentration des solutions d'essai (ppm) d'essai 30 10 3 1 0,3 Composé B-41D 100 100 100 89 32 Milbémycine 61 100 85 43 il 0 Milbémycine c3i 100 90 45 8 1 Kelthane 74 25 3 - :.1 _.. .- TABLEAU 3 Composé Concentration des solutions d'essai (ppm) d'essai 30 10 i 3 0,3 Composé B-41D 100 100 96 52 10 ilbémycine l -i 98 85 60 30 0 il 891 55 20 ilbémycine 3 93 89 55 20 5 Kelthane j 19 I 0i - EXEMPLE 9 Activité acaricide sur Panonychus citri On opère comme décrit à l'exemple 7, mais en utili- sant des feuilles de mûrier portant des adultes femelles de Panonychus citri. Les résultats obtenus sont rapportés au tableau 4. TABLEAU 4 r Composé Concentration des solutions d'essai (ppm) d'essai 10 3 1 0,3 10, 1 0,03 3 0,3 10,1 013 Composé B-41D 100 100 100 95 90 50 Milbëmycine c(1 100 98 82 68 55 3 Milbémycine c,. 100 95 82 70 48 7 Kelthane -75.. L_ _ _ _ _ _. _ _.;_ _ Outre les résultats rapportés au tableau 4, on teste également une émulsion de Kelthane à une concentration de ppm, mais, même à cette concentration, le taux de mor- talité n'est que de 93%. Il découle de ces résultats que le composé B-41D a une activité acaricide extrêmement élevée, par comparaison avec les milbémycines 1 et ç3 qui, pour leur part, sont sensiblement supérieures au Kelthane, un acaricide connu. EXEMPLE 10 Activité anthelmintique sur Nematospiroides dubius Des souris mâles de 4 semaines, de souche RFVL, pe- sant chacune d'environ 18 à 22, sont infectées par voie orale par Nematospiroides dubius. On répartit les souris en groupes de 5 animaux chacun et on les alimente à l'aide d'une nourriture contenant le composé d'essai en les proportions indiquées au tableau 5, pendant 7 jours après l'infection, après quoi on leur donne des aliments non traités. 14 jours après l'infection, on sacrifie les animaux et on compte le nombre de parasites présents dans l'intestin grêle et on le compare avec celui d'un groupe témoin infecté de façon similaire mais non traité. Les résultats, exprimés en activité anthelmintique, sont rap- portés au tableau 5. TABLEAU 5 Il découle des résultats rapportés au tableau 5 le composé B-41D a un effet anthelmintique d'environ ordres de grandeur supérieur à celui des mélanges de bémycines avec lesquels on le compare. EXEMPLE 11 que deux mil- Activité anthelmintique sur Toxocara cati Les animaux utilisés dans cet essai sont 18 chatons (3 mâles et 15 femelles) pesant de 1,6 à 3,0 kg et natu- rellement infectés par Toxocara cati.A chacun des chatons on administre par voie orale une dose unique du composé B-41D dispersé dans de l'huile d'olivé, en les proportions suivantes: 5 mg/kg de composé à 2 chatons; 2, 5 mg/kg à 3 chatons; 1 mg/kg à 2 chatons; 0,5 mg/kg à 3 chatons; 0,25 mg/kg à 3 chatons; 0,1 mg/kg à 2 chatons; et 0,05 mg/kg à 3 chatons. Avant le traitement, le nombre de OPG (oeufs Composés Quantité Activité d'essai dans anthelmintique l'alimentation 0,05% 100% Composé B-41D 0,005% 100% 0,0005% 96% Mélange de milbémycines 0,03% 32% C2 et 0(4 Mélange de milbé- mycines à1 à6r 0,03% 27,6% 9' l0 Oet P1l 24637f3 par gramme de fèces) est de 150 à 16.250. Une semaine après le traitement, l'OPG est de zéro chez tous les cha- tons et le nombre total de vers expulsés au cours de cette semaine est de2 à 40. A l'autopsie, tous les chatons s'avèrent complètement exempts de vers. EXEMPLE 12 Activité anthelmintique sur Toxocara canis Les animaux utilisés dans cet essai sont 13 chiots (3 mâles et 10 femelles) de 1,2 à 13,7 kg naturellement infectés par Toxocara canis. On administre à chaque chiot, par voie orale, une dose unique du composé B-41D dispersé dans de l'huile d'olive, en les proportions sui- vantes: 5 mg/kg à 1 chiot; 0,25 mg/kg à 2 chiots; 0,1 mg/kg à 4 chiots; 0, 05 mg/kg à 3 chiots; 0,025 mg/kg à 2 chiots, et 0,01 mg/kg à 1 chiot. Avant traitement, l'OPG est de 100 à 18.400. Une semaine après le traitement, l'OPG est dé zéro chez tous les chiots et le nombre total de vers expulsés au cours de cette semaine est de 2 à 36 par chiot. A l'autopsie, tous les chiots s'avèrent complè- tement exempts de vers. EXEMPLE 13 Activité anthelmintique sur Trichuris vulpis Les animaux utilisés dans cet essai sont 5 chiens (2 femelles et 3 mâles) de 6,2 à 11,5 kg de 2 ou 3 ans. A chaque animal on administre par voie orale une dose uni- que de 1 ou 5 mg/kg de composé B-41D sous la forme de gé- lules enrobées de gélatine. Ces chiens étaient naturelle- ment infectés par Trichuris vulpis. Avant le traitement, l'OPG était de 100 à 3.500. Une semaine après le traite- ment, 1'OPG est de 0 à 200 et le nombre total de vers expulsés au cours de la semaine est de 8 à 451. A l'auto- psie, le nombre de vers restant est de 0 à 33, ce qui représente un pourcentage d'élimination de 92 à 100. Il est bien connu que les infections par Trichuris vulpis dans le caecum sont très difficilesà combattre et, ainsi, le pourcentage d'élimination réalisé à l'aide d'une dose unique et relativement modérée du composé suivant l'in- vention indique une activité extrêmement efficace et pré- cieuse contre ce parasite. EXEMPLE 14 Activité anthelmintique sur Ancylostoma canium Les animaux utilisés dans cet essai sont 5 chiens (2 femelles et 3 males) de 7,0 à 11,5 kg de 2 ou 3 ans. Tous les chiens sont naturellement infectés par Ancylosto- ma canium. A chaque chien on administre par voie orale une dose unique de composé B-41D sous la forme d'une gélule à enrobage de gélatine, en les proportions suivantes: 0,5 mg/kg à 2 chiens; 1 mg/kg à 2 chiens; et 5 mg/kg à 1 chienr Avant le traitement, 1'OPG est de 200 à 1.550. Une semaine après le traitement, 1iOPG est de zéro chez tous les chiens et le nombre total de vers expulsés au cours de cette semaine est de 4 à 82 par chien. A l'autopsie, tous les chiens s'avèrent complètement exempts de vers. REVENDICATIONS 1. Composé dit B-41D, caractérisé en ce qu'il répond à la formule: CH3 / CH3 3.,' O'J'> CH3- C H TO -CHC CH3à Ycp.3 T 'CH3 OH. 2. Procédé de préparation du composé suivant la re- vendication 1, caractérisé en ce qu'on cultive un micro- organisme producteur du composé B-41D,du genre Streptomy- ces, dans un milieu de culture approprié et on sépare le composé B-41D ainsi obtenu du milieu de culture. 3. Procédé suivant la revendication 2, caractérisé en ce que le microorganisme est la souche B-41-146 de Strep- tomyces. 4. Procédé suivant la revendication 2 ou 3, caracté- risé en ce que le milieu de culture contient du glucose comme source de carbone. 5.Procédé suivant la revendication 4, caractérisé en ce-que le glucose est présent en une proportion pouvant atteindre 8% pds/vol. 6. Procédé suivant la revendicatio n5, caractérisé en ce que le glucose est présent en une proportion de 6 à 8% pds/vol. 7. Procédé suivant l'une quelconque des revendica- tions 4, 5 et 6, caractérisé en ce que le milieu de cultu- re contient en outre de 0,5 à 2% pds/vol d'un ou plusieurs ingrédients choisis parmi le lactose, le maltose et l'ami- don de mais. 8. Procédé suivant l'une quelconque des revendica- tions 2 à 7, caractérisé en ce que le milieu de culture contient de la farine de soja et du lait écrémé comme source d'azote. 9. Procédé suivant la revendication 8, caractérisé en ce que la farine de soja est présente en une propor- tion de 0,5 à 1% pds/vol et le lait écrémé est présent en une proportion de 1 à 2% pds/vol, par rapport au milieu de culture. 10. Procédé suivant l'une quelconque des revendica- tions 2 à 9, caractérisé en ce que la culture est effec- tuée à une température de 22 à 30'C. 11. Procédé suivant la revendication 10, caractérisé en ce que la température est de 280C environ. 12. Procédé suivant l'une quelconque des revendica- tions 2 à 11, caractérisé en ce qu'on purifie le milieu de culture de façon à obtenir un mélange ayant une acti- vité anthelmintique et acaricide et contenant au moins 25% en poids du composé B-41D. 13. Procédé suivant la revendication 12, caractérisé en ce qu'on effectue la purification de façon à obtenir un mélange contenant environ 50% en poids de composé B-41D. 14. Procédé suivant l'une quelconque des revendica- tions 2 à 11, caractérisé en ce qu'on effectue la purifi- cation de façon à obtenir le composé B-41D sous une forme pratiquement pure. 15. Composition ayant notamment une activité acaricide, insecticide et anthelmintique, caractérisée en ce qu'elle est obtenue en concentrant et purifiant un bouillon de culture de la souche de Streptomyces B-41-146 jusqu'à obtention d'une concentration en composé B-41D d'au moins 25% en poids. 16. Composition suivant la revendication 15, caracté- risée en ce que la concentration en composé B-41D est d'environ 50% en poids.