Brevet FR2463185A1 — publié le 19810220

La présente invention concerne des poly- saccharides doués d'activité anti-cancéreuse ainsi qu'un procédé permettant de les obtenir. L'invention à plus particulièrement trait à des polysaccharides doués d'activité anti-cancéreuse et à un procédé de production de ces polysaccharides à partir d'un extrait de mycélium et/ou de stroma d'une souche qui est capable de produire un polysaccharide anti-cancéreux et qui appartient au genre Isaria de la classe des hyphomycètes ou à partir d'un milieu de culture dans lequel cette souche a été soumise à l'incubation. Conformément à la présente invention, on peut utiliser toute souche d'espèces appartenant au genre Isaria de la classe des hyphomycètes et capable de produire un polysaccharide anti-cancéreux. Toutefois, dans les formes de réalisation de l'invention qui seront décrites ci-après, on a utilisé une souche d'Isaria atypicola Yasuda K2583 qui a été obtenue par culture d'un stroma (tissu) d'une espèce de champignon recueillie à "Kiyotaki", préfecture de Kyoto, Japon, au cours de l'été 1965. L'identification de cette espèce a été effectuée au moyen des ouvrages suivants: Icones of Japanese Fungi", édité par Seiichi Kawamura (publié par Kazama-shobo, Tokyo, Japon) 8, 854-857, 1968; "Colored Illustrations of Fungi of Japan" édité par Rokuya Imazeki et Tsugio Hongo (publié par Hoiku-sha, Osaka, Japon) 1965. Les caractéristiques de cette souche sont donc les suivantes: cette souche se développe aux dépens de Kishinouyeus typicus Kishida (sorte d'arachnide) et le cadavre de cet arachnide est recouvert du mycélium de cette souche dans le sol et sert de substrat au développement du stroma. Ce dernier a une hauteur de 5 à 8 cm et a la forme d'un cylindre blanc charnu. Au sommet de la tige qui mesure 2,5 à 4,0 mm de diamètre et qui présente une surface lisse se trouve un organe fructifère légèrement épais et de forme plus allongée que la tige. L'organe fructifère porte des spores légèrement veloutées, de teinte violette, dont chacune est un cylindre incolore à moitié lisse, mesurant 4-5 x 1,5-2,0 pm. D'après ces caractéristiques et en se référant aux ouvrages mentionnés cidessus, on a identifié cette souche à Isaria atypicola Yasuda. Cette souche a été déposée au Fermentation Research Institute, Agency of Industrial Science and Technology, Japon, sous la référence FERM-P 5086 (date de dépôt: 25 Juillet 1979) ainsi qu'à l'American Type Culture Collection sous la référence ATCC 20603 (date de dépôt: 15 Juillet 1980). Le polysaccharide anti-cancéreux de la présente invention peut être obtenu à partir d'un extrait liquide de stroma et/ou de mycélium de cette souche que l'on a fait incuber ou à partir d'un bouillon de culture filtré dans lequel ce mycélium a été soumis à l'incubation. Toutefois, il n'est pas commode de recueillir ce stroma en une quantité suffisamment grande dans la nature. Par conséquent, il est avantageux de faire incuber la souche pour obtenir une grande quantité de stroma. L'incubation peut être conduite d'une manière bien connue pour l'incubation de champignons de la classe des hyphomycètes, par exemple dans un milieu à base de poussière de bois ou de sciure de bois. Ainsi, par exemple, on mélange correctement 200 g de sciure, g de son de riz et 300 ml d'eau pour préparer un milieu de culture que l'on charge dans un récipient convenable et que l'on stérilise. La souche qui a été cultivée séparément, sur un milieu de culture incliné, est soumise à l'incubation sur le milieu de culture préparé ci-dessus, d'une manière classique, à 25-27WC pendant environ 1 mois de manière que le mycélium se développe suffisamment. On laisse ensuite reposer le milieu de culture pendant environ 1 mois à 20-250C de manière que le stroma s'y développe. Le stroma ainsi développé est recueilli et utilisé comme matière de départ de la présente invention. Le mycélium destiné à être utilisé dans la présente invention peut être obtenu par une méthode classique de culture, par exemple une culture solide ou une culture liquide. Dans la culture solide, par exemple, on peut utiliser de la -gélose, de la gélatine, de l'amidon, du bois en poudre ou en pâte, un autre milieu de culture solide 3 2463185 classique ou un mélange de ces milieux. Dans une culture liquide, on peut utiliser un milieu liquide de culture contenant diverses substances nutritives qui sont bien connues dans le domaine de la culture des micro-organismes. Ainsi, le milieu liquide de culture peut contenir une source de carbone telle que glucose, maltose, lactose, saccharose, amidon, mélasses, etc., une source d'azote (de nature organique ou inorganique), par exemple peptone, extrait de levure, levure, extrait soluble de mais, urée, sels d'ammonium, etc., et un ou plusieurs sels organiques et inorganiques tels que phosphates, sels de magnésium, etc. Le cas échéant, on peut aussi ajouter une autre matière nécessaire au développement, par exemple des vitamines. Ces matières pour milieux solides et liquides de culture -sont bien connues dans le domaine de la culture des champignons, et il n'est pas nécessaire d'en donner une description plus détaillée. La culture liquide peut être conduite de toute manière classique, par exemple en culture stationnaire, en culture sous agitation par secousses ou en culture en immersion. Du point de vue économique et pratique, la culture liquide est plus avantageuse que la culture solide. Dans la conduite de la culture liquide, on peut utiliser les conditions suivantes: pH initial 2 - 9 température d'incubation 15 - 350C période d'incubation 3 - 30 jours En cas de culture immergée, le milieu est soumis à une aération à une vitesse d'aération de 0,1-2,0 1/l/min et une vitesse d'agitation de 30 à 500 tr/min. Le mycélium obtenu par culture solide ou liquide est recueilli d'une manière classique et utilisé comme matière de départ de l'invention. Par exemple, dans le cas d'une culture liquide, on peut recueillir le mycélium en soumettant le milieu de culture liquide résultant à une opération classique de séparation telle que centrifugation, filtration, etc. Le filtrat obtenu par cette opération de séparation est appelé bouillon filtré, et on peut aussi l'utiliser comme matière de départ dans la présente invention. Conformément à l'invention, lé stroma et/ou le mycélium recueillis de la manière indiquée ci-dessus sont soumis à une extraction avec un solvant aqueux. Dans ce cas, le stroma et/ou le mycélium tels quels peuvent être soumis directement à l'extraction. Le cas échéant, avant cette extraction, le stroma et/ou le mycélium peuvent être soumis à un traitement préalable tel qu'un lavage à l'eau, un séchage à l'air, un broyage (pulvérisation) ou une extraction avec un solvant non polaire. Le solvant aqueux destiné à être utilisé dans l'extraction est l'eau ou un mélange d'eau et d'au moins une matière hydrosoluble telle qu'un acide, une base, un sel ou un solvant organique. Dans la conduite de l'extraction, le stroma ou mycélium prétraité ou non prétraité est mélangé avec le solvant aqueux. La température du solvant n'est pas déter- minante si elle est maintenue au-dessous de 1200C. L'appréciation de la température peut être basée sur un point de vue économique. L'extraction est conduite pendant une période suffisante pour atteindre le but recherché. Généralement, à une température élevée, la durée d'extraction peut être plus courte. Dans la plage préférée de températures indiquée ci-dessus, l'extraction est conduite de préférence pendant une période de 30 minutes à 10 heures. L'extraction est conduite de préférence sous agitation dans un récipient qui peut être en verre, un récipient à garniture de verre, un récipient émaillé ou un récipient en acier inoxydable. La quantité de solvant peut aussi varier dans une large plage, mais élle est généralement égale à 10-100 fois le poids (sur base sèche) du stroma et/ou du mycélium. L'utilisation de stroma ou de mycélium pulvérisé est préférable pour l'extraction. Après l'extraction, le mycélium ou le stroma et toute autre matière solide sont éliminés de l'extrait liquide par toute opération convenable telle que filtration ou centrifugation. L'extrait liquide est concentré, par exemple par évaporation sous vide ou d'une façon similaire en vue du traitement ultérieur. Généralement, l'extrait aqueux est concentré entre le tiers et le dixième de son volume initial. 2463185 L'extrait obtenu comme décrit ci-dessus est ensuite soumis à une purification de la manière expliquée ci- dessous, et il en résulte la précipitation et la séparation du polysaccharide désiré. L'expression "extrait liquide" utilisée dans le présent mémoire désigne un filtrat ou un liquide de centrifugation résultant de l'élimination du mycélium et/ou du stroma et des autres matières solides de l'extrait. Le bouillon filtré peut aussi être utilisé, et on l'utilise de préférence pour la purification illustrée dans ce qui suit, et il en résulte la précipitation et la séparation du polysaccharide désiré. L'expression "bouillon - filtré" utilisée dans le présent mémoire désigne un filtrat contenant l'ingrédient actif, c'est-à- dire le polysaccharide et obtenu par élimination du mycélium et d'autres matières solides du bouillon de culture, c'est-à-dire le milieu de culture dans lequel la souche a été soumise à l'incubation par culture liquide de la manière expliquée précédemment. Le bouillon filtré est concentré, par exemple, par évaporation sous vide ou d'une façon similaire en vue du traitement subséquent. Généralement, le bouillon filtré est- concentré entre le tiers et le dixième de son volume initial. Le bouillon filtré concentré est ensuite soumis à une purifica- tion. L'extrait liquide et le bouillon filtré peuvent être soumis séparément à la purification, ou bien l'extrait liquide et le bouillon filtré peuvent être réunis de manière que le mélange soit soumis à la purification. La purification peut être conduite par l'une quelconque des opérations suivantes. (A) Précipitation de la substance désirée par addition d'un solvant organique très polaire (tel que des alcools et des cétones inférieurs, par exemple méthanol, éthanol, propanol, butanol, acétone, etc.) ou par relargage (par addition de sels minéraux hydrosolubles tels que sulfate d'ammonium, chlorure de sodium, chlorure de potassium, etc.). (B) Elimination d'acides, d'ions et de substances de bas poids moléculaire par toute opération de 6 2 463185 dialyse, de filtration sur gel (en utilisant un gel de dextrane ou de polyacrylamide tel que "Sephadex", "Bio-Gel", etc.), de traitement par une résine d'échange ionique (en utilisant, par exemple, diverses résines commerciales d'échange anionique et cationique telles que "Amberlite", "Dowex", "Duolite", etc.) et/ou d'ultrafiltration pour produire une solution sensiblement pure de laquelle la substance active désirée est isolée. (C) Traitement en vue de l'élimination de protéines libres, par exemple par le procédé "Sevag", le procédé au trifluorotrichlorométhane, traitement par une protéase, etc. Ces opérations sont bien connues dans l'art antérieur. Le cas échéant, on peut combiner deux ou plusieurs d'entre elles. Toutefois, en général, l'extrait liquide ou le bouillon filtré, après concentration, est soumis à une opération choisie entre un traitement par une résine d'échange ionique, une dialyse, une filtration sur gel, une ultrafiltration et une association de ces opérations pour effectuer la décoloration, la désacidification et l'élimination de substances de bas poids moléculaire. La substance active désirée peut être recueillie dans la solution purifiée par une opération convenable telle qu'une lyophilisation. Le cas échéant, l'opération ou les opérations mentionnées ci-dessus peuvent être répétées en vue d'atteindre le degré désiré de purification. La substance ainsi obtenue présente les carac- téristiques suivantes: (1) Cette substance est une poudre blanche ou légèrement brune, non dialysable. (2) La réaction de Molisch, la réaction à l'anthrone et la réaction à la ninhydrine sont positives. (3) La réaction d'Elson-Morgain est légèrement positive ou négative. (4) La réaction à l'iode et la réaction de Bial sont négatives. (5) Cette substance est soluble dans l'eau et dans une solution aqueuse d'un corps hydrosoluble, par 7 2463185 exemple un solvant organique, un acide, un sel basique, etc., mais insoluble dans un solvant organique tel que l'éther de pétrole, l'éther éthylique, le benzène, l'acétone, l'éthanol, le méthanol, etc. (6) Cette substance n'a pas un point de fusion bien défini et elle se carbonise lorsqu'elle est fortement chauffée. v (7) L'hydrolysat de cette substance obtenu par dissolution de cette dernière dans de l'acide sulfurique aqueux décinormal et chauffage de la solution (contenant 0,5 % en poids de ladite substance) à 100WC pendant 5 heures renferme au moins un ou plusieurs sucres tels que glucose, galactose et mannose, la nature du ou des sucres variant en fonction du type ou du degré de purification. (8) L'analyse élémentaire de cette substance est la suivante: C = 35,78 %, H = 6,28 %, N = 0,65 %. D'après les caractéristiques indiquées ci- dessus, on admet que cette substance est un polysaccharide de haut poids moléculaire composé du sucre mentionné ci-dessus et dont le poids moléculaire est au moins égal à 8000 et a une moyenne d'environ 2 x 105. Le polysaccharide de l'invention ne présente ni la cytotoxicité ni les effets secondaires que l'on observe couramment en relation avec l'utilisation d'agents classiques, par exemple la réduction du nombre de leucocytes, l'anémie du foie et d'autres organes, l'atrophie de la rate, la perte de poids corporel et la perte de l'appétit. La toxicité aiguë (DL50) de ce polysaccharide chez la souris est supérieure à 2000 mg/kg, par injection intrapéritonéale. Le polysaccharide de l'invention est doué d'activité anti-cancéreuse. L'activité anti-cancéreuse a été confirmée et mise en évidence par le test suivant. Dans ce test, on inocule une souris de souche ICR-JCL pesant 20 + 2 g, par voie intrapéritonéale, avec des cellules cancéreuses du sarcome 180 ou des cellules cancéreuses d'Ehrlich. Au bout d'une semaine comptée à partir de l'inoculation, on observe chez la souris un accroissement suffisant de la production de liquide d'ascite. Les cellules cancéreuses qui s'y trouvent sont transplantées par voie sous-cutanée dans la région axillaire des autres souris en proportion de 4 millions de cellules par souris. Ces souris sont divisées en plusieurs groupes de 5 à 8 souris chacun. On n'administre qu'une solution de sel au premier groupe (groupe témoin), tandis qu'on administre à chacun des autres groupes le polysaccharide de l'invention. La première administration de solution de sel ou du polysaccharide est effectuée par voie intrapéritonéale un jour après la transplantation et l'administration subséquente est répétée cinq fois tous les deux jours. On effectue une observation du cancer solide transplanté aux souris et un jour après la dernière adminis- tration (c'est-à-dire le 18ème jour), on mesure le gain moyen de poids corporel, puis on procède à une étude anatomique pour contrôler les effets secondaires et pour déterminer le poids des tumeurs prélevées dans le groupe témoin ainsi que dans les groupes traités au polysaccharide. Le "taux d'inhibition" (TI) indiqué sur les tableaux suivants a été calculé d'après la formule: TI (%) = (C - T)/C x 100 dans laquelle C représente un poid moyen des tumeurs prélevées sur chacune des souris du groupe témoin et T représente le poids moyen des tumeurs prélevées sur les souris du groupe traité au polysaccharide. On a également déterminé l'activité anti- cancéreuse contre une tumeur syngénique chez les souris. La méthode d'essai a été la même que celle qui est décrite ci- dessus, sauf en ce qui concerne l'utilisation de la tumeur, la souche de souris et la méthode d'administration. Ensuite, le sarcome induit par le 3-méthylcholanthrène (Meth.A) d'origine BALB/C a été utilisé sous la forme solide chez des souris syngéniques. La souche de souris utilisée dans cet essai a été la souche BALB/C des laboratoires d'élevage Charles River au Japon. L'administration a été effectuée par voie intratumorale. Il a été confirmé que le polysaccharide de l'invention déploie une forte activité anti-cancéreuse contre le sarcome 180, le carcinome d'Ehrlich et le sarcome Meth.A. L'invention est illustrée en détail par les exemples suivants dont la description s'appuie en partie sur les dessins annexés dont les figures 1, 2 et 3 reproduisent des spectres infrarouges de polysaccharides conformes à la présente invention (méthode au comprimé de KBr). EXEMPLE 1 On fait incuber une souche (FERM-P 5086, ATCC 20603) d'Isaria atypicola Yasuda dans le milieu de culture liquide suivant: Glucose 20 g Polypeptone (Daigo) 5 g Extrait de levure (Difco) 1 g Phosphate de potassium (primaire) 1 g Sulfate de magnésium (7H20) 0,5 g Eau 1 litre pH initial 5,6-5,8 (non ajusté) On conduit l'incubation en chargeant 100 ml du milieu de culture ci-dessus dans des fioles d'Erlenmeyer de 500 ml. On bouche les fioles avec du coton et on les stérilise pendant 30 minutes à 120 C. Après refroidissement, on procède à l'inoculation de manière classique avec ladite souche, qui a été cultivée séparément dans un milieu de culture incliné renfermant 2 % de glucose, 0,5 % de "Ebios" et 1,5 % de gélose. Après incubation sous agitation par secousses pendant 7 jours à 27 C, on utilise le contenu des fioles en vue de l'incubation subséquente. On stérilise à C pendant 30 minutes 20 litres du milieu de culture liquide décrit ci-dessus dans un fermentateur à récipient en acier inoxydable de 30 litres, et on les refroidit. Ensuite, on inocule le contenu des fioles obtenu ci-dessus dans le milieu de culture se trouvant dans ledit fermentateur. On soumet le milieu à une incubation aérobie sous agitation (250 tr/min) pendant 16 jours à 27 C, à une vitesse d'aération de 0,5 litre/litre/minute. Le bouillon cultivé ainsi obtenu est filtré en donnant 1700 g de mycélium (humide) et 15 litres de bouillon filtré. On lave le mycélium avec 1 litre d'eau et on réunit le liquide de lavage et le bouillon filtré. Le mycélium lavé est mélangé avec 2 litres d'eau et le mélange est chauffé à 1201C pendant 30 minutes dans un récipient fermé. On laisse ensuite refroidir le mélange à la température ambiante et on le filtre ensuite, puis on concentre le filtrat à 1 litre. L'extrait liquide concentré est dialysé avec de l'eau, puis lyophilisé en donnant 4,0 g de substance pulvérulente allant d'une teinte blanche à une teinte légèrement brune. Le spectre infrarouge de cette substance est reproduit sur la figure 1. Le bouillon filtré (16 litres) est concentré à 2 litres et dialysé avec de l'eau, puis lyophilisé en donnant 26,5 g d'une substance pulvérulente allant d'une teinte blanche à une teinte légèrement brune. Le spectre infrarouge de cette substance correspond à la figure 2. Les activités anti-cancéreuses de ces substances polysaccharidiques correspondent aux indications données sur les tableaux I et II suivants. TABLEAU I SbtnevnnduSubstance venant du mycélium Substance venant du bouillon filtré Dose mg/kg/jour Voie d'admi- Régression TI, % Dose mg/kg/jour Voie d'admiRégression TI, % nistration totale nistration totale ip 2/8 83,8 0,5 ip 0/8 - 9,8 ip 7/8 94,1 5 ip 3/8 73,0 250 ip 4/8 79,5 50 ip 7/8 96,0 Cellules cancéreuses: sarcome 180, 4 x 106 cellules/souris Souche animale: ICR-JCL, 20 g + 2 g Traitement: administration intrapéritonéale un jour après la transplantation (témoin: eau salée) 5 fois Détermination: poids de tumeurs de type solide TI (taux d'inhibition) = ( C - T)/C x 100 C: Poids total de tumeurs prélevées sur le groupe témoin T: Poids total de tumeurs prélevées sur le groupe traité au polysaccharide cm Co ut TABLEAU II Substance venant du mycélium Substance venant du bouillon filtré Dose mg/kg/jour Voie d'admi- Régression TI, % Dose mg/kg/jour Voie d'admiRégression TI, % nistration totale nistration totale ip ip ip 2/8 7/8 /8 81,5 94,3 ,9 0,5 ip ip ip 0/8 4/8 7/8 - 9,7 ,2 96,3 Cellule cancéreuse: carcinome d'Ehrlich, 4 x 106 cellules/souris La souche animale, le traitement et la détermination correspondent aux indications données pour le tableau I. o% co Ln EXEMPLE 2 On fait incuber la souche de FERM-P 5086, ATCC 20603 dans un fermentateur à cuve de la même manière que dans l'exemple 1. Le bouillon filtré (16 litres) est ensuite soumis à l'opération suivante de purification: le bouillon filtré est concentré à un volume de 2 litres par évaporation sous vide et le concentré est dialysé pendant 24 heures dans l'eau courante. Le dialysat (2,5 litres) est additionné d'hydroxyde de sodium en solution aqueuse pour ajuster le pH à 8,0, puis il est soumis à un traitement sur "DEAE- Sephadex". Le pH du liquide ayant traversé la colonne de "DEAE-Sephadex" est ajusté à 3,5 par addition d'acide chlorhydrique, puis le liquide est soumis à un traitement sur "SP-Sephadex". Le liquide ayant traversé le produit "SP- Sephadex" est additionné d'éthanol de manière que sa concentration en alcool atteigne 50 % pour former un précipité qui est dissous dans 1 litre d'eau et la solution est à nouveau soumise à une dialyse dans l'eau courante pendant 24 heures. On lyophilise le dialysat pour obtenir 24,9 g de substance solide (polysaccharide) qui est une substance pulvérulente allant d'une teinte blanche à une teinte légèrement brune et qui est composée de glucose, de galactose et de mannose. Le spectre infrarouge de cette substance correspond à la figure 3. Les activités anti-cancéreuses de ces substances chez les souris sont les suivantes: (A) Activité anti-cancéreuse chez la souris (sarcome 180) Cellule cancéreuse * Sarcome 180, 4 x 106 cellules/souris Souche animale:ICR-JCL 20 + 2 g Traitement:Administration intrapéritonéale un jour après la transplantation (témoin: eau salée), 5 fois Détermination:Poids de tumeur de type solide TI (taux d'inhibition) = (C T) /C x 100 C: poids moyen de tumeurs prélevées sur le groupe témoin T: poids moyen de tumeurs prélevées sur le groupe traité au polysaccharide. (B) Activité anticancéreuse chez la souris (sarcome 180) Traitement: Administration intraveineuse un jour après la transplantation (témoin: eau salée), cinq fois. La cellule cancéreuse, la souche animale et la méthode de détermination correspondent aux indications données en (A). (C) Activité anticancéreuse chez la souris (Meth.A) Cellule cancéreuse Souche animale Traitement Détermination : Meth.A, 2 x 104 cellules/souris : BALB/C 20 g + 2 g : Administration intratumorale un jour après la transplantation (témoin: eau salée), dix fois. : comme en (A). TABLEAU III (A) Dose, mg/kg/jour 0,15 0,80 4,00 ,00 témoin Voie d'administration Régression totale ip ip ip ip ip 2/5 4/5 /5 /5 0/6 (B) Dose, mg/kg/jour Voie d'administration 0,02 0,10 0,50 2,50 témoin iv iv iv À iv iv Régression totale 0/5 1/5 6/6 6/6 0/7 Ti, % 79,0 98,2 ,0 ,0 Ti, % -19,8 46,2 ,0 ,0 _ (c) Dose, mg/kg/jour Voie d'administration Régression totale Ti, % 10 témoin ip = voie intrapéritonéale iv = voie intraveineuse it = voie intratumorale it it it 3/6 0/7 0/7 ,0 16,0 REVENDICATIONS 1. Un polysaccharide doué d'activité anti- cancéreuse, isolé d'un extrait liquide de stroma et/ou de mycélium d'une souche capable d'élaborer un polysaccharide anti-cancéreux et appartenant au genre Isaria de la classe des hyphomycètes, ou d'un milieu de culture dans lequel on a fait incuber cette souche. 2. Polysaccharide suivant la revendication 1, caractérisé en ce que la souche est une souche de l'espèce Isaria atypicola. 3. Polysaccharide suivant la revendication 2, caractérisé en ce que la souche est une souche d'Isaria atypicola Yasuda (FERM-P 5086 déposée le juillet 1979, ATCC 20603 déposée le 15 juillet 1980. 4. Polysaccharide suivant l'une quelconque des revendications 1 à 3, caractérisé en ce que la réaction de Molisch, la réaction à l'anthrone et la réaction à la ninhydrine sont positives, la réaction à l'iode et la réaction de Bial sont négatives et la réaction d'Elson-Morgan est faiblement positive ou négative, l'hydrolysat de ce polysaccharide contenant au moins l'un des sucres tels que galactose, glucose et mannose. 5. Procédé de production d'un polysaccharide doué d'activité anticancéreuse, caractérisé en ce qu'il consiste à former un bouillon filtré à partir d'un milieu de culture ou d'un extrait liquide de stroma ou de mycélium d'une souche qui est capable de produire un polysaccharide anticancéreux et qui appartient au genre Isaria de la classe des hyphomycètes, et à recueillir le polysaccharide du bouillon filtré ou de l'extrait liquide sous une forme purifiée. 6. Procédé suivant la revendication 5, caractérisé en ce que la souche appartient à l'espèce Isaria atypicola. 7. Procédé suivant la revendication 6e caractérisé en ce que la souche appartient à l'espèce Isaria atypicola Yasuda (FERM-P 5086, ATCC 20603). 8. Procédé suivant l'une quelconque des revendications 5 à 7, caractérisé en ce que le polysaccharide est conforme à l'une quelconque des revendications 1 à 4. 9. Composition pharmaceutique, caractérisée en ce qu'elle est constituée par ou en ce qu'elle contient un polysaccharide suivant l'une quelconque des revendications 1 à 4.