Brevet FR2466472A1 — publié le 19810410

"E-5-(2-halogénovinyl)-2'-désoxycytidines, leur procédé de préparation et leur utilisation dans des compositions phar- maceutiques pour le traitement de maladies à virus. La présente invention concerne les E-5-(2-halogénovinyl)- 2'-désoxycytidines, par exemple la E-5-(2-bromovinyl)-2'-dé- soxycytidines et la E-5-(2-iodovinyl)-2'-désoxycytidine. En outre elle concerne la synthèse chimique de ces composés et leur utilisation dans des compositions pharmaceutiques. La E-5-(2-bromovinyl)-2'-désoxycytidine et la E-5-(2- iodovinyl)-2'-désoxycytidine ou d'une façon plus systémati- que la E-5-(2-bromovinyl)- et la E-5(2-iodovinyl)-1-(2'- désoxy-/3 -D-érythro-pentofuranosyl)-4-amino-1,2-dihydropy- rimidin-2-one, sont des composés chimiques qui peuvent être représentés par la formule structurelle 1 mentionnée sur la planche de formules cijointe dans laquelle Hal est un atome de brome ou d'iode. Il faut noter que dans cette for- mule 1 les groupes voisins de la double liaison vinylique de la chaine latérale halogénovinyle sont en configuration trans, c'est-à-dire E, et que le noyau pyrimidine est en position béta par rapport au groupe pentofuranosyle. Les composés de la formule 1 peuvent être préparés de plusieurs façons, par exemple en introduisant une chaine latérale E-5-(2-halog8novinyl),par exemple E-5-(2-iodovinyl)- dans la 2'-désoxycytidine, ou bien en condensant un dérivé 2-désoxy-Dérythro-pentofuranosyle réactif>protégé sur un dérivé trialkylsilyle de la E-5-(2-bromovinyl)- ou de la E-5- (iodovinyl)-cytosine. Les recherches ont indiqué que la E-5-(2-br m vinyl) - 2'-désoxycytidine et la E-5-(2-%odovinyl)-2'-désoxycytidine sont douées d'une activité antivirale qui est très spécifi- que vis-à-vis du virus simplex de l'herpès. De plus ces pro- duits montrent un manque apparent de toxicité dans la culture des cellules, entraînant ainsi un indice antiviral élevé contre ce type de virus et les rendant utiles pour le trai- tement des maladies dues au virus simplex de l'herpès, chez l'homme et les animaux. L'état de l'art comprend déjà quelques composés désoxy- cytidine du même groupe et plusieurs composés désoxycytidine apparentés, tous possédant une activité antivirale. Une étu- de d'ensemble de ces composés a été donnée par E. De Clercq et coll. dans J. Carbohydrates -Nucleosides, Nucleotides, 5 (3) 187-224 (1978) sur laquelle on attire l'attention pour plus de détails. Toutefois, il faut noter que l'activité antivirale de la plupart de ces composés n'est pas très spécifique puisqu'ils agissent également bien contre les divers virus acide-désoxyribonucléique (ADN), tel que le virus vaccinal et le virus simplex de l'herpès. De plus la toxicité de la plupart de ces composés, et particulièrement celle du composé classique communément utilisé, la 5-iodo-2'-désoxy-uridine, ne peut pas être négligée. Par conséquent, il est tout à fait surprenant que les composés E-5-(2-bromovinyl)-2'-désoxycytidine et E-5- (2-iodovinyl)-2'-désoxycytidine aient une telle activité anti- virale spécifique contre un type de virus (le virus simplex de l'herpès) et que leur toxicité dans la culture des cellules puisse être nulle comme on l'a dit ci-dessus. Il faut encore noter que l'activité antivirale spécifique contre le virus simplex de l'herpès ainsi que sa faible toxicité dans la culture des cellules ont été également mentionnées tout à fait récemment pour la E-5(2-iodovinyl)-2'-désoxy-uridine et la E-5-(2-bromovinyl)-2'-désoxyuridine.Voir l'article de E. De Clerq et collaborateurs dans "Proceedings National Academy of Science USA, 76, N 6 2947-2951 (1979). Lorsqu'on les compare avec les analogues désoxy-uridine, les composés de la présente inventicnsemblent au moins également spécifiques et de plus moins toxiaues et ainsi aptes à être uti- lisés dans des compositions pharmaceutiques et dans le traitement des maladies dues au virus simplex de l'herpès chez l'homme et les animaux. Par conséquent, la présente invention fournit les E-5- (2-halogénovinyl)-2'-désoxycytidines par exemple la E-5-(2- bromovinyl)-2'-désoxycytidine et la E-5-(2-iodovinyl)-2'- désoxycytidine. 'De plus, la prente inventzmLfu-rit un procédé de préparation d!JLne E-5-(2-hogévin l)-Z'-désoxycytidine qui ccraprend 1 'in- troduction d'une chatne latérale E-5-(2-halogénovinyl) dans la 2'-désoxy- cytidine, ou bien la condensation d'un dérivé 2-désoxy-D-érythropentofuranosyle réactif, avec ses groupes hydroxyle protégés, sur un dérivé trialkylsilyle de la E-5- (2-halogénovinyl)-cytosine. La présente invention fournit également une composition pharmaceutique qui contient au moins une E-5-(2-halogénovinyl) -2'-désoxycytidine, de préférence la E-5(2-bromovinyl)-2'-désoxycytidine ou la E-5-(2-iodovinyl)-2'- désoxycytidine, comme ingrédients actifs dans un excipient. La présente invention fournit également un procédé pour la pré- paration d'une telle composition comprenant la combinaison d'une E-5-(2halogénovinyl)-2'-désoxycytidine, de préférence la E-5-(2-bromovinyl)-2'-désoxycytidine ou de la E-5-(2-iodo- vinyl)-2'-désoxycytidine avec un excipient. La synthèse chimique des composés de la présente invention sera décrite maintenant en détail. Une voie préférée de la synthèse chimique est montrée sur la planche des formules ci-après et comprend les formules 2,3, 4 et 1. Cette voie implique l'introduction d'un groupe E-5- (2-halogénovinyle) dans la 2'-désoxycytidine en passant par une suite de trois opérations. Dans la première opération pour cette voie préférée, on fait réagir la 5chloromercuri-2'-désoxycytidine de formule 2 avec l'acrylate d'éthyle en présence du chlorure de palla- dium et de lithium pour former la E-5-(2-carbéthoxyvinyl)-2'- désoxycytidine de formule 3. La réaction se déroule lentement à la température ordinaire, ou légèrement au-dessus de cette température, et dans un solvant approprié tel que le méthanol absolu. D'autres solvants, par exemple l'acétonitrile peuvent être utilisés à la place. Le mélange réactionnel peut être traité avec un agent réducteur, par exemple H2S ou NaBH4, afin de précipiter les sels réduits de palladium et mercure. Le produit de la réaction peut être obtenu avec un bon rendement et possède une configuration trans, c'est-à-dire E, comme le montre la formule 3. A la place de l'acrylate d'éthyle, on peut utiliser l'a- crylate de méthyle ou un autre acrylate d'alkyle inférieur, correspondants. Cette première opération est analogue à un stade de réaction utilisé pour préparer les dérivés 2'-désoxy- uridine comme le décrivent Bergstrom et Ogawa dans J.A.C.S., , 8106 (1978) . La matière de départ de formule (2) est connue en elle-même et a été décrite par Bergstrom et Ruth dans J. Carbohydrates-Nucleosides, Nucleotides, 4 (5), 257- 269 (1977). Dans la seconde opérationpour la voie de synthèse pré- férée, le dérivé E-5-(2-carbéthoxyvinyl) de formule 3 est hydrolysé en son dérivé correspondant E-5-(2-carboxyvinyl) de formule 4. Cet hydrolyse peut être effectuée dans des conditions alcalines ou acides mais les conditions acides sont de préférence évitées dans ce cas à cause du risque de réactions secondaires(par exemple séparation du substituant fixé sur la position 5 ou séparation de la partie sucre). L'hydrolyse dans des conditions alcalines peut être effec- tuée avec divers agents basiques, par exemple KOH, NaOH, K2C03, Na2C0O3, etc. mais on préfère utiliser KOH. Dans la troisième opération pour la voie de synthèse préférée, le dérivé E-5-(2-carboxyvinyl) de fonrmule 4 est transformé en son dérivé correspondant E-5-(2-halogénovinyl) de formule 1. Ceci peut être réalisé par halogénation dans des conditions telles que le groupe carboxyle soit éliminé. Plusieurs agents d'halogénation peuvent être utilisés, par exemple: l'halogène-élémentaire, les hydracides halogénés, les oxy-acides halogénés et les agents organiques d'halogé- nation (par exemple les N-halogénosuccinimides). Parmi ces produits les hydracides halogénés et les N-halogénosuccini- mides sont préférés parce qu'ils donnent les meilleurs ré- sultats. En outre, un solvant approprié, par exemple l'eau, le diméthylformamide, le diméthylsulfoxyde, etc., peut être utilisé comme milieu réactionnel. Le choix de l'agent d'halogénation et du milieu réac- tionnel dépend de plusieurs facteurs tels que la solubilité et la stabilité de l'agent d'halogénation, et la solubilité de la matière de départ dans le solvant. Ainsi le N-bromo- succinimide peut être utilisé avec de bons résultats en milieu aqueux, mais le N-iodosuccinimide ainsi que le brome et l'iode élémentaires sont de préférence utilisés dans des conditions anhydres, par exemple dans le diméthylformamide sec. En outre le dérivé de départ carboxyvinyle a une faible solubilité dans l'eau mais ce problème peut être résolu par traitement avec une solution aqueuse d'acétate de potassium pour former le sel de potassium facilement soluble, ou bien en partant directement de la solution aqueuse qui a été for- mée pendant l'opération d'hydrolyse précédente. La solubili- té de la matière de départ dans le diméthylformamide est sen- siblement meilleure que dans l'eau mais néammoins une combi- naison d'acétate de potassium et d'agent d'halogénation peut également être préférée dans ce cas. Comme résultat de la synthèse en trois opérations ci- dessus la E-5-(2-halogénovinyl)-2'-désoxycytidine désirée peut être obtenue avec un bon rendement. Ce produit final est un j-anomère parce que la position / désirée du noyau pyri- midine par rapport à la partie sucre est déjà présente dans la matière de départ-, En outre, ce produit montre une confi- guration E de l'atome d'halogène et du noyau pyrimidine par rapport à la double liaison vinylique par suite du mode opé- ratoire choisi. Ces deux faits sont avantageux et rendent le procédé en trois opérations ci-dessus préférable. Une seconde voie de synthèse mais moins préférée est montrée sur la planche de formules ci-après et les formules , 6 et 1. Cette voie comprend une réaction de condensation entre un dérivé trialkylsilyle de la E-5-(2-halogénovinyl)- cytosine (formule 5) et un dérivé 2-désoxy--érythro-pentofu- ranosyle réactif dont les groupes hydroxyle sont protégés (formule 6), pour former le produit final désiré. Dans ces -formules R est un groupe alkyle, de préférence méthyle; R1 est un groupe facilement déplaçable, de préférence soit un groupe méthoxy soit un groupe chloro; R2 et R3 sont des grou- pements protégeant les groupes hydroxyle, de préférence para- toluoyle; Hal est par exemple du brome ou de l'iode, et le signe r,- représente la configuration alpha et/ou béta. La réaction de condensation se déroule doucement sous l'influence d'un catalyseur acide de Lewis tel qu'un tamis moléculaire, le chlorure ou le bromure stanniques ou mercu- riques, ou un triméthylsilyl-perfluoro-alkylsulfonate. De 2466472. plus un solvant peut être présent qui est inerte vis-à-vis des réactifs et du produit et qui dissout de préférence les réac- tifs et le catalyseur à un point suffisant. Des solvants ap- propriés sont par exemple l'acétonitrile, le benzène, le toluène, le dichlorométhane, le 1-2-dichloro-éthane et le tétrachlorure de carbone. La réaction doit être effectuée dans une atmosphère sèche pour empêcher l'hydrolyse du déri- vé trialkylsilyle de formule 5. La température de la réaction n'est pas critique mais le plus souvent ce sera la tempéra- ture ordinaire ou une température plus basse. Une fois la réaction et le traitement du mélange réac- tionnel terminés, les groupements protecteurs peuvent être éliminés du produit résultant par les procédés classiques, par exemple par l'hydrolyse ou alcoolyse. Cette seconde voie de synthèse chimique donne généra- lement un mélange d'anomères alpha et béta, mélange qui doit etre séparé puisque seul l'anomère béta est désiré. Cette séparation est le plus souvent effectuée avant d'éliminer les groupements protecteurs des groupes hydroxyle et peut- être réalisée par cristallisation fractionnée et/ou par chromatographie sur gel de silice. Cependant, l'opération complète de séparation présente plutôt un inconvénient et, par conséquent, la seconde voie de synthèse est moins pré- férée. f eree. Les matières de départ de formule 6 ont été décrites précédemment et peuvent être préparées à partir du 2-désoxy- D-érythropentofuranose par méthylation du groupe 1-hydroxyle, incorporation des groupements protecteurs des groupes hydro- xyle sur les positions 3 et 5 et, si nécessaire, par rempla cement du groupe 1-méthoxy par un atome de chlore (voir par exemple C.C. Bath, dans Synthetic Procedures in Nucleic Acid Chemistry, by Tipson R.S. et Zorbach W.W. éditeurs, Interscience, Vol. 1, 521-522 (1968). L'autre matière de départ peut être préparée par sily- lation de la E-5-(2-halogénovinyl)-cytosine (formule 5) avec un agent de silylation tel que l'hexaméthyldisilazane ou le triméthylchlorosilane, ou des mélanges de ces produits (voir A.S. Jones et collaborateurs, Tetrahedron Letters, 28 2459-2460 (1977) pour une réaction similaire). La E-5-(2- halogénovinyl)-cytosine peut simplement être obtenue par bromation ou iodation de la 5-vinylcytosine, puis par élimination à chaud de HBr ou de HI. (voir R.C. Bleakley et collabora- teurs, Tetrahedron, 32, 2795-2797 (1976) pour une réaction analogue sur le 5-vinyluracile). En outre ladite E-5-(2- halogénovinyl)-cytosine peut être obtenue à partir de la 5- formylcytosine par réaction de l'acide malonique pour former la E-5-(2-carboxyvinyl)cytosine puis par halogénation appro- priée de la même façon que décrite ci-dessus pour la pre- mière voie de synthèse. il àcrylate d'éthyle Li2PdCl4 OH t- -COOC2H5 Hydrolyse /COOH C H c===c H A Halogenation -! N1I2 Hal =- c x. NH + H HO. 1OH 1 OHI La première voie de synthèse chimique ainsi que les constantes physiques des produits terminés sont illustrées, en outre, dans les exemples ci-après donnés à titre descriptif et non limitatif. EXEMPLE 1 a) E-5-(2-carbéthoxyvinyl)-2'-désoxycytidine (formule 3) Dans un ballon à fond rond de 250 ml on combine 4,62 g (10 mmoles) de 5-chloromercuri-2'désoxycytidine, (formule 2), 6 g (60 mmoles) d'acrylate d'éthyle et Li2PdCl4 à 0,1 M dans 100 ml de méthanol absolu et on agite sous atmosphère d'azo- te pendant 24 heures pour obtenir une suspension noire. Cette suspension est filtrée et le précipité noir est recueilli. Ce dernier est chauffé dans 100 ml de méthanol et filtré. Les filtrats rassemblés sont traités avec NaBH4 jusqu'à ce que la précipitation de la substance noire soit complète et que la solution soit incolore. Après une autre filtration la solution est concentrée sous pression réduite jusqu'à 30 ml à partir desquels le composé en titre cristallise (1,4 g, 43 %) - Spectre UV (éthanol): min 237 nm (t 8,230)>m 268 nm (t 17,430) X 297 nm min 2max min (E8,250) - a327 nm ( _13,920) à pH 2; max221 nm (ú 21,670) max max Amin 245 nm(E 8,560) > max 275 nm(L 13, 730) min 297 nm ( 8,050) -max 326 nm (E 14,260) à pH 7. Spectre RMN: S(d6 DMSO); 8,50(s, 1H,H-6), 7,57(d, 1H, H vinyique, J=16 Hz) 7,42(s,2H, NH2)6,21 (d,lH, H vinylique; J=16 Hz) 6,10 (t, 1H, H-1') 5, 16(d, 1H, OH-3') 5,14(t, 1H, OH-5')4,20 (m, 1H, H-3') 4,13(g,2H, CH2-CH3) 3,79(m, 1H, H-4')3,62(m, 2H, H-5') 2,13(m, 2H, H-2')1,24(t,3H, CH2-CH3). La matière de départ: la 5-chloromercuri-2'-désoxy- cytidine a été obtenue par le procédé de Bergstrom et Ruth, J. Carbohydrates-Nucleosides, Nucleotides, 4 (5), 257-269 (1977) b) E-5-(2-carboxyvinyl)-2'-désoxycytidine (formule 4) On met en suspension 325 mg (1 mmole) de carbéthoxyvi- nyldésoxycytidine dans 40 ml d'une solution de NaOH 0,5 M et on agite à la température ordinaire pendant 2 heures. La solution claire est neutralisée en ajoutant du "Dowex-50" forme H+ à pH 7 et on filtre. Cette solution est directe- ment utilisée pour préparer la E-5-(2-bromovinyl)2'- désoxycytidine. c) E-5-(2-bromovinyl)-2'-désoxycytidine (formule 1, Hal=Br) La solution obtenue par hydrolyse de 325 mg (1 mmole) de carbéthoxyvinyldésoxycytidine décrite ci-dessus est trai- tée avec 178 mg (1 mmole) de N-bromosuccinimide et agitée à- la température ordinaire pendant 15 heures. Après avoir chassé le solvant le résidu est purifié sur 50 g de SiO2 avec comme éluant un mélange CHCl3MeOH (80:20), donnant mg du composé en titre, rendement 48 %, Rf= 0,32. spect5e UV (eau) Xmax44 nm{L 16,090) min 280 nm ( 5,260) k max 302 nm (7, 610) à pH 2; max 250 nm(t 15,830) min 286 nm (t 6,390)- max 292 nm(î 6, 590) à pH 7;X max 249 nm ( 17,360) min 283 nm( 7,300) Amax 292 nm(J 7,660) à pH 11. Spectre RMN: &(d6 DMSO); 8,10(s, 1H, H-6)7,21(large, 2H, NH2)7,05(d, 1H, H vinylique, J= 13 Hz) 6,70(d, 1H, H vinylique.; J=13 Hz) 6,10(t, 1H, H- 1') 5,05(large, 2H, OH-3' et OH-5')4,10 (m, 1H, H-3')3,75(m, 1H, H-4')3, 60(m,2H, H-5')2,10(m,2H, H-2'). EXEMPLE 2 a) On prépare la E-5-(2-carbéthoxyvinyl)-2'-désoxycytidine de la même façon que décrite dans l'exemple 1 (a). b) On prépare la E-5-(2-carboxyvinyl)-2'-désoxycytidine par hydrolyse comme indiqué dans l'exemple 1 (b) sauf que, après la neutralisation et la filtration, le solvant est chassé sous vide de la solution et le résidu est séché sur P205. c) E-5-(2-iodovinyl)-2'-désoxycytidine (formule 1, Hal = I) Le résidu provenant de l'opération 2 (b) est mis en suspension dans 20 ml de DMF sec et on ajoute 225 mg (1 mmo- le) de N-iodosuccinimide. Le mélange est agité à la tempé- rature ordinaire pendant 4 heures et traité comme d'habitude pour donner le composé en titre (105 mg, 28 %). Spectre UV (éthanol) /Xmax 258 nm ( 17,282) %sh 200 nm( 7,504) à pH 7; X max 256 nm (i 15,610) min293 nm( 4,700),\ max 315nm (E 6,216) à pH 2. Spectre RMN $ (d6DMSO); 8,06(s, 1H, H-6)7,26 (d, 1H, H vinylique; J = 14 Hz) 7,20 (large, 2H, NH2)6,64(d, 1H, H vinylique, J=14 Hz) 6,08(t,1H, H1')5,11 (d, 1H, OH-3')5,03(t, 1H, OH-5') 4,20 (m, 1H, H-3')3,76(m, 1H, H4') 3,58(m, 2H, H-5') 2,08(m, 2H, H-2'). Essais biologiques On fera maintenant référence à une série d'essais bio- logiques pour montrer l'activité antivirale spécifique, la faible toxicité et l'indice antiviral élevé des composés de la présente invention. Dans ces essais, on mesure l'effet de la E-5-(2-balogé- novinyl)-2'-désoxycytosine et des composés apparentés sur la croissance et le rendement des virus dans Les cultures de cellules. Les composés essayés sont la E-5-(2,-bromovinyl)-2'- désoxyctidine et la E-5-(2-iodovinyl)-2'-désoxycytid:lne (prpI)Éées selon les exemples précédents); la E.-5-(2-bromo- vinyl)-2')désoxy-uridine, et la E-5-(2-iodovinyl)-2' -désoxy- uridine; et la 5-iodo-2'-désoxy-uridine (fournie par Ludeco, Bruxelles). Tous les composés sont des P-anomères. Les composés sont essayés sur le virus vaccinal et trois souches de virus simplex-1 de l'herpès (souche KOS, souche McIntyre et souche F). On fait croltre ces virus dans des cultures de cellules de reins primaires de lapin (RPL) et de fibroblaste de la peau humaine (FPH). La technique pour mesurer la croissance des virus dans les cultures de cellules a été décrite par De Clercq et col- laborateurs, Biochem. Pharmacol. 24, 523 527 (1975). Essai 1 Dans cet essai l'activité inhibitrice des E-5-(2-halo- génovinyl)-2'-désoxycytidines et des composés apparentés vis- à-vis du virus vaccinal et du virus simplex-1 de l'herpès, dans les cultures de cellules RPL et FPH est mesurée. Les cellules ont été cultivées jusqu'à confluence sur des lamel- les en plastique. (RPL, FPH). Quand les cellules ont conflué, elles sont inoculées avec 100 CCID50 de virus vaccinal ou de virus simplex-l de l'herpès. Une CCID50 qui signifie "dose-50 in- fectant la culture des cellules",est la dose de virus néces- saire pour infecter 50 % des cultures de cellules. Une heure après l'inoculation du virus, les composés sont ajoutés à des concentrations variables (allant de 0,001 pg/ml à pg/ml. Pour chaque système viruscellules, la ID50 est déterminée. ID50 qui signifie"dose-50 inhibitrice" est la concentration du composé nécessaire pour supprimer 50 % de l'effet cytopathique sur le virus. Cet effet cytopathique (ECP) est enregistré dès qu'il devient complet dans les cul- tures de cellules non traitées infectées par le virus (gé- néralement 3 jours après que les cellules ont été inoculées par le virus). Les résultats sont indiqués sur le tableau 1, o les valeurs représentent la moyenne de 3 essais séparés. TABLEAU 1 Activité antivirale des E-5-(2-halogénovinyl-2'-désoxycytidines et des composés voisins dans des cultures de cellules RPL et FPH. ID50 (Pg/ml) Virus vac- cinal (PRK) Virus vac- cinal (HSF) Virus simplex-1 de l'her- pès souche K0O RPL Virus simplex-1 de l'her- pès souche KOS FPL Virus simplex-1 de l'her- * pès souche McIntyre RPL Virus simplex-1 de l'her- pès souche F RPL E-5-(2-bromovinyl)-2'-désoxycytidine 10 2 0,07 0, 07 0, 07 0,1 E-5-(2-bromovinyl)-2-désoxy-uridine 7 0,7 0,007 0,01 0,01 0,01 E-5(2-iodovinyl)-2'-désoxy-uridine 10 7 0,1 0,07 0,07 0,2 E-5-(2-iodovinyl)2'-désoxy-cytidine 10 1 0,01 0,02 0,01 0,01 -iodo-2'-désoxy-uridine 0,02 0,2 0,1 0,2 0,15 0,2 ro o% M a% 14> Composé i- D'après le tableau i on peut voir que les E-5-(2-halo- génovinyl)-2'-désoxycytidines, bien que sensiblement moins actives que leurs analogues désoxy-uridines, sont également actives, ou légèrement plus actives, contre le virus simplex- 1 de l'herpès que le composé classique 5-iodo-2'-désoxy- uridine. En outre, on peut voir que contrairement au composé classique, les E-5-(2halogénovinyl)-2'-désoxycytidines ont une activité antivirale qui est très spécifique à l'encontre du virus simplex-1 de l'herpès.La spécificité de ces cyti- dines est sensiblement la même que celle de leurs analogues désoxyuridines. Essai 2 En outre, l'effet inhibiteur des E--5-(2-halogénovinyl)- 2'-désoxycytidines et d'un composé apparenté sur la multi- plication du virus simplex-1 de l'herpès (souche KOS) dans les cultures de cellules RPL est mesuré. Des couches élémentaires de cellules RPL confluentes dans des boites de Pétri en plastique (diamètre: 55 mm) sont inoculées avec le virus simplex1 de l'herpès (4,5 log10 UFT/ 0,5 ml/boite de Pétri) pendant 1 heure à 37 C puis immédiate- ment traitées avec 0,1 >g/ml de chacun des composés à essa- yer. Les cultures de cellules sont ensuite mises en incuba- tion pendant des temps variables (1,2 ou 3 jours) à 37 C. A la fin de la période d'incubation les cellules sont conge- lées à -70 C et les homogénéisats de cellules sont examinés pour leur teneur en virus par la formation de taches dans les cultures de cellules VERO (VERO = ligne cellulaire continue de cellules de cercopithèque). Les résultats sont donnés dans le tableau 2 en tant que différences dans le rendement en virus entre les cultures de cellules traitées infectées par les virus et les cultures de cellules non traitées in- fectées par les virus.UFTr signifie unités de formation de taches. TABLEAU 2 Effet inhibiteur des E-5(2-halogénovinyl)-2'-désoxycytidines sur la multiplication du virus simplex-1 de l'herpès(souche KOS)dans les cultures de cellules RFL Diminution de la production de virus Composé (log UFT/ml) comparé aux cultures de c lules témoins(infectées par le virus et non traitées) jours après infection ÀDose a/ml 2 3 E-5-(2-bromovinyl)- 2'-désoxycytidine 10 3,8 2,9 2,2 E-5-(2-iodovinyl)- 2'-désoxycytidine 10 4,3 2,8 2,0 -iodo-2'-désoxy- uridine 10 4,0 2,6 1,9 On peut voir d'après le tableau 2 que la diminution dans la production des virusapportée sensiblement par les E-5-(2-halogénovinyl)-2'désoxycytidine est comparable à celle du composé classique 5-iodo-2'-désoxy-uridine. Essai 3 L'activité antimétabolique des E-5-(2-halogénovinyl)-2' désoxycytidines et des composés apparentés dans les cultures de cellules RPL est mesurée. A cette fin, l'incorporation de certains précurseurs d'ADN marquésradioactifsdans l'ADN des cellules, et l'effet des 5-(2-halogénovinyl)2'désoxycytidines et des composés apparentés sur celui-ci, sont déterminés. La technique a été décrite par De Clercq et collaborateurs, dans Biochemical Pharmacology, 26, 794-797 (1977) et par De Clercq et colla- borateurs dans Molecular Pharmacology, 14, 422-430, (1978) Les précurseurs d'ADN utilisés sont la (méthyl- H)-(2'- désoxycythymidine) (TDR) et la (2- 14C)-(2'-désoxy-uridine) (UdR). Les cellules sont exposées à 0,12 yCi: 0,01 nmole (méthyl-3H) TdR (pour 10 cellules) ou à 14 pCi/250 nmoles (2- 14C) UdR (pour 10 cellules) pendant 16 heures en présence de concentrations variables des composés (concentrations al- lant de 1 à 200 pg/ml). L' incorporation du précurseur mar- qué radio-actif est ensuite mesurée tel que décrit et l'ID50 est déterminée. L'ID50 correspond à la dose-50 inhibitrice, c'est-à-dire à la concentration du composé nécessaire pour inhiber l'incorporation soit du (méthyl-3H)TdR soit du (2-14C)UdR à 50 %. Les résultats sont indiqués dans le ta- bleau 3. TABLEAU 3 Activité antimétabolique des E-5-(2-halogénovinyl)-2'désoxy- cytidines et des composés voisins dans les cultures de cellules RPL. ID50 (yg/ml) Composés Incorporation Incorporation dans cellule5 dans cellules ADN de (méthyl- ADN de H)TdR (2-14C)UdR E-5-(2-bromovinyl)-2'désoxy- 2 cytidine >)200 > 200 E-5-(2-bromovinyl)-2 '-désoxy- uridine ioo (70) 100(70) E-5-(2-iodovinyl)-2'-désoxy- cytidine ' 200 200 E-5-(2-iodovinyl)-2 '-désoxy- uridine 80 (70) 150(70) -iodo-2'-désoxy-uridine (2,5) (1,2) t N.B.. Les résultats entre parenthèses ont été obtenus dans des essais séparés rapportés par De Clercq et colla- borateurs, dans Proceedings of the National Academy of Sciences (USA), 76, 2947-2951 (1979)) D'après le tableau 3, on peut voir que ni l'une ni l'autre des E-5-(2-halogénovinyl)-2'-désoxycytidines ne pro- voquent une quelconque inhibition de l'incorporation de (méthyl- H)TdR ou de (2- 14C)UdR dans l'ADN cellulaire, même Z466472 à la concentration la plus élevée essayée de 200yg/ml. Essa Finalement l'indice antiviral des E-5-(2-halogénovinyl)- 2'-désoxycytidines et des composés apparentés dans les cul- tures de cellules RPL est déterminé comme résultat des me- sures faites dans l'essai précédent. L'indice antiviral est déterminé comme étant le rapport de 1'ID50 pour l'incorporation de (2- 14C)UdR dans l'ADN cel- lulaire à l'ID50 pour la reproduction du virus Simplex-l d'herpès (souche KOS) (comparer les tableaux 1 et 3). Les résultats sont donnés dans le tableau 4. TABLEAU 4 Indice antiviral des E-5-(2-halogénovinyl)-2 '-désoxycytidines et des composés voisins dans les cultures de cellules RPL. Composés Indice antiviral E-5-(2-bromovinyl)-2'-désoxycytidine > 3000 E-5(2-bromovinyl)-2'-désoxy-uridine 14300 (10000) E-5-(2-iodovinyl)-2'désoxycytidine >2000 E-5-(iodovinyl)-2'- désoxy-uridine 15000 (7000) iodo-2'-désoxy-uridine (12) N.B. Voir la note sous le tableau 3 pour les nombres indiqués entre parenthèses. D'après le tableau 4;on peut voir que l'indice antiviral pour les E-5-(2-halogénovinyl)-2'-désoxycytidines de la pré- sente invention est de loin supérieur à 2000-3000. Comme ces composés ne montrent pas de toxicité aux concentrations essa- yées les plus élevées (200 yg/ml), leur indice antiviral exact n'a pas pu être déterminé d'une façon précise. D'après ce qui précède, on peut remarquer que la E-5-(2- bromovinyl)-2'-désoxycytidine et la E-5-(2-iodovinyl)-2'désoxy- cytidine sont douées d'une activité antivirale excellente et fortement spécifique contre le virus simplex de l'herpès et que leur toxicité dans les cultures de cellules est apparemment nulle. Comparé aux E-5-(2halogénovinyl)-2'-désoxy-uridines correspondantes, les produits de la présente invention peuvent avoir une spécifité supérieure vis-à-vis du virus simplex de l'herpès et une toxicité inférieure pour les cellules vivantes dans les cultures de cellules. Bien que la valeur absolue de leur activité anti-'virale puisse être sensiblement inférieure à celle de leurs analogues 2'-désoxy--uridines leur manque apparent de toxicité dans la culture de cellu- les laisse suggérer que ces composés peuvent donner éventuel- lement des indices thérapeutiques qui sont aussi élevés et même supérieurs à ceux obtenus par les analogues 2'-désoxy- uridines. Ainsi ils peuvent être utilisés avantageusement pour la préparation de compositions pharmaceutiques et pour le traitement des maladies provoquées par le virus simplex de l'herpès chez l'homme et les animaux. Les compositions pharmaceutiques renfermant la E-5- (2-bromovinyl)-2'-désoxycytidine ou la E-5-(2-iodovinyl)-2'- désoxycytidine comme ingrédient actif peuvent être sous la forme de poudres, de suspensions, de solutions, d'émulsions ainsi que sous forme de pommades et de pâtes et peuvent être utilisés pour des injections parentérales (intradermi- ques, intramusculaires, intrathécales), des administrations orales, rectales, intravaginales et intranasales ou des ap-- plications locales (par exemple sur des lésions de la peau, des ruqueuses et des yeux). Ces compositions peuvent être pré- parées en combinant le ou les ingrédient(s) actifs) avec des excipients acceptables pharmaceutiquement qui sont normale- ment utilisés pour ce but. Ces excipients peuvent comprendre des solvants aqueux ou non-aqueux, des stabilisants, des agents de mise en suspension, des dispersants, des agents mouillants et des produits analogues et sont bien connus de l'homme de l'art. En outre, la composition peut comprendre tout additif approprié tel que polyéthylèneglycols et, si né- cessaire, des colorants, des parfums et produits analogues. Les compositions pharmaceutiques contiennent normalement au moins 0,1 % en poids/volume de l'ingrédient actif. La con- centration réelle dépendra de la maladie et du choix de la voie d'administration. En général, cette concentration sera comprise entre 0,1 % et 100 %. J9 1;v 1) 1. C r( R E V: N I] C A T I O N S 1.- Unc 1-5-(2-hlalogjénovinyl) -2' -dsoxycytidine. 2.- La i -5- (2-bromoviny 1) - 2 ' -dsoxycy tidi ne. 3.- l.a J-5- (2-iodovinyl) -2'-dJsoxycytidine. I4.- Procédé de préparationr d'une 1-5- (2-halogjénovinyl) - 2'désoxycytidine caractLérisé par le fait qu'il comprend J.'introduction d'un groupe E-5-(2-halogénovinyle) dans la 2' -désoxycylidcinc. 5.- IProcédé selon la revendication 4, caractérisé par le fait qu'il comprend la réaction dce la 5-ch.loromercuri-2'- desoxycyLidine avec un acrylatc d'alky.Le et un catalyseur à base de chlorure de paladium et de lithium, 'hydrolyse de la E-5-(2carbéthloxyvinyl.)-2 '--cldésoxycytidine résultante et 1 haloogjènaLion de la E-5-(2-caLboxyvini'yL)-2'-désoxycytidine obtenue pour former la E-5-(2-ha.lotjnovinyi)-2'-désoxycytidi- ne. 6.- Procédé cde préparation d'une 1.-5- (2-halogénovinyl)- 2'-désoxycytidine, caractérisé par le fait qu'il comprend la réaction d'un dérivé réactif du 2-dèésoxy-_)-èrythro-pento- furanose dont les groupes hydroxyle sont protégés avec un dérivé tria]. kylsilyle de la L-5-(2-halogèrnovinyl)-cytosine puis l' é].imination de tous les groupements protecteurs. 7.- Composition pharmaceutique comprenant au moins un composé selon 1 ' une quelconque des revendications 1, 2 et 3 comnmre ingrédient actlif dans un excipient pharmaccutiquemnient acceptable. 8.- Procédé de préparation d'unc coimposition pharmaceu- tique, caractlrisé par le fait qu'il comprend la combinaison d au roeins un composé selon 1 'une quelconque des revendica- tions 1., 2 elt 3, avec un excipient pharmaceutiquement accep- table.