Brevet FR2464956A1 — publié le 19810320

1. La leucémie est une maladie aiguë ou chronique d'étiologie inconnue chez l'homme et chez d'autres animaux homéothermes. Elle est caractérisée par un accroissement anormal du nombre de leucocytes immatures dans les tissus corporels et dans le sang en circulation. Cette maladie affecte manifestement les organes hématopoïétiques, et ses formes sont classées d'après le type de leucocytes qui est touché par une prolifération anormale. Elle est l'une de plu- sieurs formes de maladies néoplastiques, et l'étude de médi- caments permettant d'atténuer la maladie ou d'y apporter un remède a attiré l'attention des organismes de recherche depuis de nombreuses années, sans succès appréciable jusqu'à ces toutes dernières années. Actuellement, de nombreuses formes de leucémie peuvent être traitées efficacement avec des médicaments. Dans le cas d'une chimiothérapie de combi- naison pour le traitement de la leucémie lymphoide aiguë chez les enfants, on obtient un fort pourcentage (50 à 60 %) de cas de survie pendant cinq ans, et la maladie est à présent considérée comme curable. Le brevet des Etats-Unis d'Amérique n0 2 342 732 propose une méthode d'atténuation de la leucémie, ainsi que d'autres affections malignes, y compris des tumeurs d'ascite, chez les animaux inférieurs homéothermes par l'administra- tion de 10-déazaminoptérine, analogue important du métho- trexate qui est le médicament usuel de choix pour le traite- ment médical de la leucémie, et on espère que ce composé aura un effet similaire sur les êtres humains. - La présente invention propose des dérivés 10- alkyliques de 10-déazaminoptérine qui sont également effi- caces pour le traitement de la leucémie et d'autres affec- tions malignes, y compris les tumeurs d'ascite, chez les animaux inférieurs homéothermes et, vraisemblablement, chez les humains. Les 10-alkyl-10-déazaminopterines de l'invention répondent à la formule: 2. BNH2 Ri CWXH | CHC 0_- CO',HAH I H2N CH12 - dOOH Dans la 10-déazaminoptérine, R1 et R2 représen- tent tous deux de l'hydrogène. Dans les dérivés alkyliques, R1 ou R2 ou R1 et R2 peuvent être des radicaux alkyle ayant 1 à environ 8 atomes de carbone, de préférence 1 ou 2 atomes de carbone. Lorsqu'une seule des variables R1 et R2 est un groupe alkyle, l'autre est un atome d'hydrogène. Des exemples de groupes alkyle représentant R1 et R2 comprennent les groupes méthyle, éthyle, propyle, isopro- pyle, butyle, isobutyle, sec.-butyle, tertiobutyle, amyle, iso-amyle, sec. -amyle, tertio-amyle, hexyle, isohexyle, heptyle, isoheptyle, octyle, isooctyle, 2-éthylhexyle et tertio-octyle. Les 10-alkyl-10-déazaminoptérines sont consi- dérées comme étant des composés nouveaux. La relation qui existe entre la N-déazamino- ptérine et le dérivé N-10-méthylé de l'aminoptérine, c'est-à- dire le méthotrexate, ressort de la formule suivante: 00H Ni2 IOOH CH2N_ / CONHCH M Y' 0C1HR CII2 3. L'acide 4-amino-4-déoxy-10-déazaptéroique, composé intermédiaire clé pour la synthèse de la 10-déaza- minoptérine, a été préparé pour la première fois par DeGraw, Brown, Kisliuk et Gaumont, comme décrit dans Journal of Medicinal Chemistry 14, 866 (1971). DeGraw, Tsakotellis, Kisliuk et Gaumont, Journal of Heterocyclic Chemistry 8, 105 (1971), ont rapporté la puissante activité inhibitrice de croissance de l'acide 10-déazaptéroique et de son dérivé tétrahydro contre Streptococcus faecium, organisme sous la dépendance des folates. L'activité a été grandement améliorée par réduction en le composé tétrahydro. Cela a donc incité à l'expérimentation des 2,4diaminoptéridines, parce qu'elles devraient être mieux capables, vraisemblablement, d'une pénétration cellulaire, et parmi les 2,4diaminoptéridines préparées se trouvait l'acide 4-amino-4-déoxy-10-déazap- téroique, c'est-à-dire le composé illustré dans le schéma I, série d, page 867 de l'article précité. DeGraw, Kisliuk, Gaumont, Baugh et Nair ont publié dans le Journal of Medicinal Chemistry, 17, 552 (1974) un article sur la synthèse de la 10déazaminoptérine et sur son activité contre les folates. Les activités antimicro- bienne et antitumorale des puissants inhibiteurs de réductase dihydrofolique que représentent l'aminoptérine et son dérivé N-10-méthylé, c'est-à-dire le méthotrexate, sont bien connues et de nombreux analogues ont été préparés en vue d'amé- liorer les propriétés d'activité, de pénétration cellulaire et de toxicité de ces composés. Dans le cadre d'un programme continu d'études des relations structure-activité des analo- gues de l'acide folique, DeGraw et collaborateurs se sont intéressés aux effets produits par le remplacement de l'atome d'azote des chaînes latérales de l'aminoptérine et ont publié les résultats qu'ils ont obtenus sur la synthèse et l'activité biologique de la 10- déazaminoptérine. La poursuite des travaux sur la 10-déazaminoptérine et sur ses dérivés 10- alkyliques a à présent abouti à la découverte de leur activité antileucémique, et à leur efficacité dans le traitement de diverses formes de tumeurs d'ascite, ce qui constitue l'objet de la présente invention. 4. La méthode de traitement de la leucémie et des tumeurs d'ascite, conformément à l'invention, consiste à admi- nistrer à un animal homéotherme ayant une proportion anormale de leucocytes, ou présentant d'autres signes d'une affection maligne, une quantité thérapeutique non toxique d'un composé -alkylé de la 10déazaminoptérine, comme défini ci-dessus, tel quel ou sous la forme d'un sel correspondant, acceptable du point de vue pharmaceutique. Ces sels sont formés avec un ou plusieurs groupes NH2 libres de la 10-alkyl-10-déazamino- ptérine. Le procédé de l'invention pour la préparation de composés de la 10-déazaminoptérine, à savoir tant la 10- déazaminoptérine que ses dérivés 10-alkyliques, est une synthèse comprenant les étapes suivantes, dont le point de départ est un méthoxyméthylacétylène (éther de méthyle et de propargyle): CH3OCH2C - CH oCH3OCH = C=cH2 Etape i 2 CH30OCH= C= CH2 H C30CH= CHCH2Cl Etape 2 R1 H-: +OOH R2' 1'-I R1 CI30CH=CHCH2C LDA R H3CH=CHCH2C-'D -CocALie Etape 3 12 R1 O R1 CH30CH=CHCH)2C ? L_ OL Br2-pH 7-8 HCCHCH21 COOH iH0> CHCH2C-Kl 2 5 OOH EtaDe 4 m 5. H"NH2 0 R1 HICHCH2î-KCOOH H2 H2 Br 2 Etape 5 ni NH2 m )H/CH2Cç-COOH -X- R1 H2N n Etape 6 R. -L. H2NH CO -3uOCOCl/EtN -" 1 C H Et glutamate H2N Etape 7 NH NO H2PN R1 COOEt NH-2 CHC 4H2C- CONHCH R2 l H2 CH2 8 COEt NaOH N / R1 COOH NH2 j -C - CH2C S--CONHCH N R/%Nlg 2 CH2 H2N I CH2 9 l COOH Etape 8 i 6. R 1 et R 2 représentent de l'hydrogène ou des groupes alkyle ayant 1 à environ 8 atomes de carbone, comme indiqué cidessus à propos de la formule I. L'étape 1 est essentiellement une transposition de l'éther de méthyle et de propargyle en le 1-méthoxyallène correspondant. La transposition s'effectue dans des condi- tions anhydres, en présence d'une base alcaline telle que, par exemple, un alcoolate de métal alcalin, une base inorga- nique ou un métal alcalin avec addition d'alcool. On peut utiliser comme alcoolate tout alcanol inférieur tel que l'alcool méthylique, l'alcool éthylique, l'alcool propylique et l'alcool butylique et leurs isomères iso, secondaires et tertiaires. Le sodium et le potassium constituent les métaux alcalins préférés. La réaction est conduite à température élevée, et l'utilisation d'un reflux constitue un moyen pratique de limiter la température. L'oxygène doit être exclu du mélange réactionnel, afin d'éviter une réaction avec les groupes insaturés. On peut utiliser une atmosphère inerte, par exemple une atmosphère d'azote. Dans l'étape 2, du chlorure d'hydrogène est fixé par addition de part et d'autre des doubles liaisons alléni- ques du 1-méthoxy-allène. On peut utiliser tout alkoxy-allène tel que le 1-éthoxy-allène. La réaction est conduite dans des conditions anhydres, à basses températures. L'addition s'effectue à basse température, audessous d'environ -25WC et avantageusement au-dessous de -700C, en donnant le composé de formule: ci CH3O-CHCH=CH2 mais la température est ensuite élevée à 00C de manière à produire la transposition en CH3OCH=CHCH2Cl. Cette réaction nécessite elle aussi l'exclusion de l'oxygène, et on peut donc la conduire dans une atmosphère inerte, par exemple une atmosphère d'azote. Une solution de HCl anhydre, dans un solvant inerte tel que l'éther de diéthyle, est ajoutée lente- ment à la solution de 1-méthoxy-allène dans le même solvant. 7. Le mélange réactionnel peut être utilisé directement dans l'étape 3. Dans l'étape 3, l'atome de carbone C-10 du groupe acide benzo!que de la 10-déazaminoptérine est alkylé par le 3-chloro-1-méthoxypropène venant de l'étape 2. Le processus d'alkylation nécessite la réaction préalable d'un acide p- alkylbenzoique avec un catalyseur consistant en un alkyl- amidure de lithium de manière à former un -réactif à anion actif. Le groupe p-alkyle répond à la formule R1 NCH... R2 correspondant au groupe C-10 de la 10-déazaminoptérine présentant un atome d'hydrogène libre. Ce procédé (qui provoque également l'ionisation du proton du groupe carboxyle) nécessite des températures assez basses auxquel- les il évolue lentement, par exemple pendant une durée atteignant 30 heures. La réaction est de préférence conduite dans des conditions anhydres sous atmosphère d'azote en présence d'un solvant polaire inerte tel que le tétrahydro- furanne. La présence de triamide hexaméthylphosphorique (HMPA) comme co-solvant accélère le processus d'ionisation. Par exemple, lorsque R1 et R2 sont tous deux des groupes alkyle, la présence de HMPA comme co-solvant et une température de réaction de l'ordre de 15 à 250C sont nécessaires pour obte- nir une ionisation totale en une période de 15 à 30 heures. Après la formation de l'anion actif, le 3-chloro-1-méthoxy- propène peut être ajouté lentement au mélange réactionnel renfermant le réactif anionique, là encore à la température ambiante ou à une température plus basse. Puisque l'anion réactif est très coloré et que le produit réactionnel est incolore, on peut suivre -la réaction par le changement de couleur, et la réaction est terminée lorsque le mélange réactionnel est incolore. Les solvants peuvent alors être chassés et le produit réactionnel peut être traité. 8. Dans l'étape 4 de la synthèse, un groupe bromacétaldéhyde est formé par bromation et hydrolyse du substituant méthoxypropylène du produit réactionnel de l'étape 3. Cette réaction est conduite à un pH choisi dans la plage d'environ 7 à environ- 9. Attendu que la solution réactionnelle aqueuse venant de l'étape 3 est alcaline, elle est carbonatée à l'anhydride carbonique gazeux, de manière à réduire le pH dans la plage d'environ 8 à environ 9. La réaction peut être conduite à une température comprise dans la plage d'environ 0 à environ 500C, mais on la conduit de préférence à une température de 0 à 51C. La réaction s'effectue avec addition de brome sur le groupe éthylène, et entraîne la transformation hydroly- tique du groupe bromométhoxy en un groupe aldéhyde, avec perte de HBr. La présence d'un solvant inerte- tel que le dichlorométhane facilite la dispersion du brome et l'observa- tion du changement de couleur du brome. La réaction est terminée lorsque l'absorption de brome atteint la valeur théorique d'addition d'un atome de brome au produit de réaction de l'étape 3. Périodiquement, une addition d'un tampon tel que du bicarbonate de sodium solide peut être nécessaire pour maintenir le pH au-dessus de 7. Le mélange réactionnel est ensuite acidifié par addition d'acide chlorhydrique aqueux jusqu'à un pH d'environ 2. Le mélange réactionnel est traité par extraction dans un solvant organique et élimination du solvant, et on obtient ainsi à l'état brut le produit réactionnel acide bromacétaldéhydique dont la formule est indiquée dans le schéma de synthèse ci- dessus. Dans l'étape 5, ce produit de réaction est amené à réagir avec la 2,4,5,6-tétra-aminopyrimidine dans l'acide acétique aqueux, ce qui a pour effet de cycliser ses groupes ,6-amino avec le groupe aldéhyde et le brome du produit réactionnel de l'étape 4, en formant ainsi un noyau de dihydroptéridine. Le noyau de ptéridine est ensuite déshydro- géné dans l'étape 6 avec formation d'acide 4-amino-4-désoxy- -déazaptéroique par réaction avec KI3 et l'iode dans l'iodure de potassium. 9. Le sulfate de 2,4,5,6-tétra-aminopyrimidine utilisé comme composé de départ dans l'étape 5 est tout d'abord amené à réagir avec du chlorure de baryum et de l'eau, en vue d'éliminer le groupe sulfate avec formation d'un précipité de sulfate de baryum. Ce précipité peut être enlevé par filtration et le filtrat peut ensuite être utilisé dans la réaction de l'étape 5. La réaction de cyclisation de l'étape 5 est conduite à un pH acide, de préférence compris dans la plage de 3 à 5, et on peut donc utiliser un solvant acide tel qu'une solution aqueuse d'acide acétique. L'acide acétique aqueux donne un pH acide et l'effet de co-solvant organique de l'acide acétique facilite la solubilisation des bromal- déhydes. La réaction est conduite à des températures modéré- ment élevées, comprises dans la plage de 35 à 75WC, ce qui entraîne la formation de la dihydroptéridine. Ce produit réactionnel obtenu dans la réaction de l'étape 6 est déshydrogéné avec KI3, que l'on obtient par dissolution d'iode dans une solution aqueuse d'iodure de potassium. Le composé KI3 peut être ajouté lentement à la dihydroptéridine et la réaction peut être suivie par le changement de couleur de la solution de KI3. Lorsque le changement de couleur cesse, la réaction est terminée. D'autres agents oxydants convenables tels que le peroxyde d'hydrogène ou le permanganate de potassium peuvent être utilisés. Le produit de réaction est insoluble dans le mélange réactionnel et il se sépare. Lors du traitement, la matière peut être filtrée, lavée puis séchée. Le cas échéant, le précipité peut être repris dans de l'hydroxyde d'ammonium dilué, puis reprécipité avec un acide dilué tel que l'acide acétique. L'acide 4-amino-4-désoxy-10-déazaptéroique résultant est ensuite transformé en le composé de 10-déaza- minoptérine en deux étapes, à savoir les étapes 7 et 8. Tout d'abord, le produit est amené à réagir avec le chloroformiate d'isobutyle, puis avec le L-glutamate de diéthyle, en transformant ainsi le groupe acide ptéroique en l'ester 10. diéthylique de glutamide correspondant, et les groupes éthyle estérifiants sont ensuite hydrolysés par réaction avec une base alcaline aqueuse telle qu'une solution aqueuse d'hydro- xyde de sodium en formant le groupe diacide sans glutamide du composé de 10-déazaminoptérine. La réaction de l'étape 7 nécessite la présence d'un accepteur d'acide pour absorber le chlorure d'hydrogène libéré. On peut conduire la réaction de l'étape 7 avec d'autres chloroformiates d'alkyle tels que des chlorofor- miates de méthyle, d'éthyle, etc. Les accepteurs d'acides sont de préférence des bases organiques telles que des amines tertiaires ou des pyridines substituées, par exemple la tri- éthylamine, la tributylamine, la N-méthylmorpholine, la collidine et la lutidine. Le glutamate de diéthyle peut être ajouté sous la forme de la base libre ou sous la forme du chlorhydrate en présence d'un équivalent additionnel de l'accepteur d'acide. La réaction est conduite à la température ambiante ou à une température plus basse, de préférence de 0 à -50C, et on peut utiliser un solvant inerte. Le chlorofor- miate d'isobutyle peut être ajouté lentement au mélange réactionnel et, lorsque la réaction est terminée, on peut ajouter le L-glutamate de diéthyle, une amine organique et davantage de solvant, et on poursuit la réaction à la même température jusqu'à ce qu'elle soit achevée. On traite le mélange réactionnel en chassant le solvant par évaporation, de préférence sous vide, et en agitant le résidu avec une solution aqueuse modérément alca- line telle qu'une solution aqueuse de bicarbonate de sodium. Le diester est insoluble et on peut le recueillir par filtra- tion, tandis que l'acide ptéroique qui n'a pas réagi se dissout dans la solution alcaline. L'hydrolyse des groupes Méthyle estérifiants est conduite avec une base alcaline aqueuse à la température ambiante ou à une température plus haute. Le diester peut être dissous dans un solvant convenable tel que le 2-méthoxy- éthanol et la solution peut être maintenue en présence de la base alcaline aqueuse jusqu'à ce que l'hydrolyse soit termi- 2A64956 11. née. Le composé acide de 10-déazaminoptérine est soluble dans les bases alcalines aqueuses et peut ensuite être précipité par addition d'un acide tel que l'acide acétique cristalli- sable. Le précipité peut être recueilli, lavé et séché. Les exemples suivants illustrent l'application de la synthèse à la préparation de composés de la 10-déaza- minoptérine. EXEMPLE I 1-méthoxy-allène (2) On agite au reflux pendant 4 heures sous un très lent courant d'azote un mélange de 100 ml d'éther de méthyle et de propargyle (déshydraté sur des tamis moléculaires 4A) et de 3 g de tertiobutylate de potassium. Le spectre infra- rouge indique que la transposition est essentiellement achevée. Le liquide est distillé avec un appareil de distil- lation moléculaire et est recueilli dans un ballon refroidi à la neige carbonique; on obtient ainsi 72 g de 1-méthoxy- allène; spectre infrarouge 1950 et 850 cm-1. 3-chloro-1-méthoxypropène (3) On fait passer un courant de gaz chlorhydrique anhydre dans 700 ml d'éther anhydre refroidi au bain de glace. Après avoir ajouté 45 g de HCl, on ajoute encore 267 ml d'éther frais. On ajoute ensuite goutte à goutte sous atmosphère d'azote une portion oliquote de 541 ml (25,2 g, 0,69 mole de HCl) à une solution de 48,2 g (0,69 mole) de 1- méthoxy-allène dans 240 ml d'éther à -78 C. L'addition dure deux heures et demie et la température interne est maintenue au-dessous de -70 C. Au bout de 30 minutes, on introduit la solution dans un réfrigérateur à 0- 5 C o on la maintient pendant 24 heures et on l'utilise directement dans l'étape suivante. Acide 4-amino-4-désoxy-10-déazaptéroique (7) Une solution de 192,8 ml (1,38 mole) de di- isopropylamine fraîchement distillée dans 1928 ml de THF anhydre est refroidie à 0-5 C et une solution de 862 ml (1,38 mole) de butyllithium 1, 6 M dans l'hexane est ajoutée 12. goutte à goutte, la température étant maintenue autour de 0 à C. Le mélange est agité pendant encore 30 minutes et une solution de 93,5 g (0,69 mole) d'acide p-toluique anhydre (R1 et R2 = H) dans 385 ml de THF anhydre y est ajoutée goutte à goutte, à une température de 0 à 51C. Le mélange rouge est agité à cette température pendant 3 heures et demie, puis il est maintenu à 0-51C dans une chambre froide pendant 24 heures. La solution dans l'éther du 3-chloro-1-méthoxy- propène ci-dessus est ensuite ajoutée goutte à goutte en une période de une heure et demie à une température de 0 à 5WC; l'atténuation de la couleur rouge est achevée à la fin de la période d'addition. Au bout de 2 heures, les solvants sont chassés sous vide et le résidu est partagé entre 1 litre d'eau et 1 litre d'éther. La portion aqueuse contenant le produit (4) est refroidie, traitée avec de l'anhydride carbo- nique gazeux jusqu'à ce que son pH soit égal à 8-9, et 240 ml de CH2C12 sont ajoutés. On ajoute ensuite goutte à goutte, à une température de 0 à 50C en agitant, une mole de Br2 dans CH2C12, jusqu'à persistance de la couleur rouge (on observe une absorption de 87 % de Br2). On ajoute éventuellement du bicarbonate de sodium solide pour maintenir le pH à une valeur de 7 à 8. On acidifie le mélange à un pH de 2 environ par addition d'environ 50 ml de HCl 6N. La phase chloro- méthylénique est séparée et la phase aqueuse est extraite avec encore 200 ml de CH2Cl2. Les extraits organiques rassem- blés sont déshydratés sur du sulfate de magnésium et évaporés sous vide en donnant 180,2 g d'un résidu semi-solide de couleur orangée de l'acide bromaldéhydique (5) brut. On agite à la température ambiante pendant une heure et demie un mélange de 156,2 g (0,66 mole) de sulfate de 2,4,5,6-tétra-aminopyrimidine (Aldrich), 160,3 g (0,65 mole) de BaCl2.2H20 et 3 litres d'eau. On chauffe le mélange à 701C, on le filtre à chaud et on laisse refroidir le filtrat à la température ambiante. On ajuste le pH du filtrat à une valeur de -3 à 4, par addition d'hydroxyde de sodium à 10 %, on le fait tiédir à 450C et on le traite en minutes par addition du bromaldéhyde ci- dessus dans 1075 ml d'acide acétique cristallisable. On agite le mélange 13. à 45-50 C pendant une heure et demie, on le verse par décan- tation pour enlever un peu de gomme insoluble et on le laisse refroidir à la température ambiante. La solution contenant la dihydroptéridine (6) est traitée par addition goutte à goutte de KI3 aqueux (préparé à partir de 81,9 g d'iode, 156,2 g de KI et 1075 ml d'eau), la décoloration du KI3 cessant après addition d'un volume de 700 ml. On laisse reposer la solution pendant 24 heures et on recueille le précipité jaune, on le lave à l'eau et à l'éthanol et on le sèche pour obtenir 36 g de matière. On agite cette dernière avec 1800 ml d'eau conte- nant 20 ml de NH40H concentré, pendant 2 heures, puis on filtre. On acidifie le filtrat avec de l'acide acétique pour précipiter le produit (7) que l'on recueille, qu'on lave avec de l'eau et qu'on sèche pour obtenir 25,5 g de substance; X, pH 13, 230 nm (22 100), 253 (25 400), 370 (6400). Le rende- ment est égal à 12 %, mais des rendements atteignant 25 % ont été obtenus dans des essais similaires. -déazaminoptérine (9) On chauffe à 80 C sous agitation un mélange de 18,1 g (0,058 mole) d'acide ptéroique (7), 15,8 ml de tri- éthylamine (0,116 mole) et 900 ml de DMF anhydre jusqu'à ce qu'on ait obtenu une dissolution pratiquement totale. On refroidit la solution à 05 C au bain de glace et on la traite par addition goutte à goutte de 15,0 ml de chloro- formiate d'isobutyle (0,116 mole). Après avoir maintenu le mélange pendant une heure et demie à 0-50C, on le traite avec un mélange de 28,0 g (0,116 mole) de chlorhydrate de L- glutamate de diéthyle, 15,8 ml de triéthylamine (0,116 mole) et 100 ml de DMF anhydre. On agite le mélange pendant 2 heures au bain de glace et à la température ambiante pendant 24 heures. On évapore le diméthylformamide sous pression réduite (environ 133,3 Pa) et on agite le résidu avec 400 ml de NaHCO3 à 5 % et 400 ml d'éther pendant 1 heure. On filtre le mélange et on lave le résidu avec de l'eau et de l'éther, puis on le sèche pour obtenir 26 g du diester (8). L'acidification de la solution dans le bicarbonate ne permet de recueillir que 2,8 g d'acide ptéroique (7). 14. Le diester (26 g) est dissous dans 200 ml de 2- méthoxy-éthanol et la solution est traitée avec 100 ml de NaOH 1N. On maintient la solution à la température ambiante pendant 4 heures et demie, puis on la dilue avec un litre d'eau. On acidifie la solution à l'acide acétique cristalli- sable jusqu'à ce que la précipitation soit terminée. On recueille le précipité par filtration. Le résidu est remis en suspension dans de l'eau sous agitation, filtré et séché en donnant 15,5 g de 10-déazaminoptérine brute; l'analyse par chromatographie en phase liquide sous haute pression indique que le produit contient 91 % de 10déazaminoptérine (9) et 9 % de l'acide ptéroique n'ayant pas réagi. Le rendement est de 61 %. X (pH 13) 254 nm (33 170), 375 (7460). La purification finale de la 10-DA est effectuée par chromatographie en phase liquide sur une matière adsor- bante à phase inversée avec élution par l'eau ou par des tampons à un pH de 6 à 8. L'acide ptéroique et la 10-déazaminoptérine sont identiques à des composés connus déjà préparés par d'autres procédés, comme indiqué comparativement par la chromato- graphie en phase liquide sous haute pression et l'analyse ultraviolette. EXEMPLE II 1-méthoxy-allène On agite au reflux pendant 4 heures sous un très léger courant d'azote un mélange de 100 ml d'éther de méthyle et de propargyle (déshydraté sur des tamis 4A) et 3 g de tertiobutylate de potassium. Le spectre infrarouge indique que la transposition est essentiellement totale. Le liquide est distillé dans un appareil de distillation moléculaire et le produit est reçu dans un collecteur refroidi à la neige carbonique; on obtient 72 g de 1-méthoxy-allène; spectre infrarouge 1950 et 850 cm 1. 3-chloro-1-méthoxypropène On fait passer un courant de gaz chlorhydrique anhydre dans 700 ml d'éther anhydre refroidi au bain de glace. Après avoir ajouté 45 g de HCl, on ajoute encore 15. 267 ml d'éther frais. On ajoute ensuite goutte à goutte, sous atmosphère d'azote, une portion aliquote de 541 ml (25,2 g, 0,69 mole) de HCl à une solution de 48,2 g (0, 69 mole) de 1-méthoxy-allène dans 240 ml d'éther à -781C. L'addition dure 2,5 heures et la température interne est maintenue au-dessous de -70WC. Au bout de 30 minutes, on garde la solution dans un réfrigérateur à 0-50C pendant 24 heures, puis on l'utilise directement dans l'étape suivante. Acide 4-amino-4-désoxy-10-méthyl-10-déazaptéro!que Une solution de 192,8 ml (1,38 mole) de di- isopropylamine fraîchement distillée dans 1928 ml de tétra- hydrofuranne anhydre est refroidie à une température de 0 à C et une solution de 862 ml (1,38 mole) de butyllithium 1,6M dans l'hexane est ajoutée goutte à goutte, la tempéra- ture étant maintenue autour de 0 à 50C. Le mélange est agité pendant encore 30 minutes et une solution de 103,5 g (0,69 mole) d'acide péthylbenzoique anhydre (R1 = H, R2 = CH3) dans 385 ml de tétrahydrofuranne anhydre est ajoutée goutte à goutte à une température de 0 à 50C. Le mélange de couleur rouge est agité à cette température pendant 3 heures et demie puis maintenu à 0-5C dans une chambre froide pendant 24 heures. La solution dans l'éther du 3-chloro-1- méthoxypropène ci-dessus est ensuite ajoutée goutte à goutte en une heure et demie à une température de 0 à 5C; l'atté- nuation de la couleur rouge est achevée à la fin de la période d'addition. Au bout de 2 heures, les solvants sont chassés sous vide et le résidu est partagé entre 1 litre d'eau et 1 litre d'éther. La portion aqueuse estrefroidie, traitée avec de l'anhydride carbonique gazeux jusqu'à ce que son pH ait une valeur de 8 à 9, et additionnée de 240 ml de chlorure de-méthylène. On ajoute ensuite goutte à goutte sous agitation, à une température de 0 à 50C, du brome 1M dans le chlorure de méthylène jusqu'à persistance de la couleur rouge (on observe une absorption de brome de 85 %). On ajoute périodiquement du bicarbonate de sodium solide pour maintenir le pH à 7-8. On acidifie le mélange à un pH égal à 2 environ par addition d'environ 50 ml d'acide chlorhydrique 6N. On 16. sépare la phase chloroformique et on extrait la phase aqueuse avec encore 200 ml de chlorure de méthylène. Les extraits organiques rassemblés sont déshydratés sur du sulfate de magnésium et évaporés sous vide en laissant un résidu semi- solide de couleur orangée formé de l'acide bromaldéhydique brut. On agite à la température ambiante pendant une heure et demie un mélange de 156,2 g (0,66 mole) de sulfate de 2,4,5,6-tétra-aminopyrimidine (Aldrich), 160, 3 g (0,65 mole) de BaCl2.2H20 et 3 litres d'eau. On chauffe le mélange à 70 C, on le filtre à chaud et on laisse refroidir le filtrat à la température ambiante. On ajuste le pH du filtrat à 3-4 par addition de NaOH à 10 %, on le fait tiédir à C et on le traite en 10 minutes avec le bromaldéhyde ci- dessus dans 1075 ml d'acide acétique cristallisable. On agite le mélange à 50 C pendant une heure et demie, on le verse par décantation pour enlever un peu de gomme insoluble, et on le laisse refroidir à la température ambiante. La solution contenant la dihydroptéridine est traitée par addition goutte à goutte de KI3 aqueux (obtenu à partir de 81, 9 g de I2, 156,2 g de KI et 1075 ml d'eau), jusqu'à décoloration du KI3. On laisse reposer la solution pendant 24 heures et on recueille le précipité jaune, puis on le lave avec de l'eau et de l'éthanol. On agite la matière avec 1800 ml d'eau contenant 20 ml d'hydroxyde d'ammonium concentré, pendant 2 heures, puis on filtre. On acidifie -le filtrat avec de l'acide acétique pour précipiter le produit que l'on recueille, qu'on lave avec de l'eau et qu'on sèche; le rendement est de 32 % et l'analyse du produit donne les résultats suivants: Formule Analyse X max, nm (E), À max, nm (E) (poids molé- Calculé Trouvé dans HC1 0,1N dans NaOH 0,1N culaire) C16H16N602. C 54,69 C 54,39 242 (27 995) 255 (24 294) 3/2 H20 H 5,45 H, 5,05 (351,370) N 23,92 N 23,95 338 (9 303) 369 (6 741) 17. -méthyl-10-déazaminoptérine On chauffe à 80 C sous agitation un mélange de ,4 g (0,058 mole) d'acide ptéroique, 15,8 ml de triéthyl- amine (0,116 mole) et 900 ml de DMF anhydre jusqu'à ce qu'on ait obtenu la dissolution à peu près totale. On refroidit la * solution à 0-5 C au bain de glace et on la traite par addi- tion goutte à goutte de 15,0 ml (0,116 mole) de chlorofor- miate d'isobutyle. Après avoir maintenu le mélange pendant une heure et demie à une température de 0 à 5 C, on le traite avec un mélange de 28,0 g (0,116 mole) de chlorhydrate de L- glutamate de diéthyle, 15,8 ml (0,116 mole) de triéthylamine et 100 ml de DMF anhydre. On agite le mélange pendant 2 heures au bain de glace et à la température ambiante pendant 24 heures. On évapore le diméthylformamide sous pression réduite (environ 133,3 Pa) et on agite le résidu avec 400 ml de NaHCO3 à 5 % et 400 ml d'éther pendant 1 heure. On filtre le mélange et on lave le résidu avec de l'eau et de l'éther, puis on le sèche pour obtenir le diester. On dissout le diester dans 200 ml de 2-méthoxy- éthanol et on traite la solution par addition de 100 ml de NaOH 1N. On maintient la solution à la température ambiante pendant 4 heures et demie, puis on la dilue avec 1 litre d'eau. On acidifie la solution à l'acide acétique cristal- lisable jusqu'à ce que la précipitation soit terminée. On recueille le précipité par filtration. On remet le résidu en suspension dans l'eau en agitant, on le filtre et on le sèche pour obtenir la 10-méthyl-10déazaminoptérine brute; la chromatographie en phase liquide sous haute pression indique que le produit contient 90 % de 10-méthyl-10-déazamino- ptérine et 10 % de l'acide ptéroique n'ayant pas réagi. Le rendement est égal à 38 %. Après purification par chromatographie prépara- tive en phase liquide sous haute pression, l'analyse du produit donne les résultats suivants: 18. Formule Analyse X max, nm (E), À max, nm (E) (poids molé- Calculé Trouvé dans HCl dans NaOH culaire) O0,N O,1N C21H23N705. C 52,01 C 52,07 242 (29 612) 255 (30 465) 7/4H20 H 5,51 H 5,12 (484,989) N 20,22 N 19,88 338 (10 318) 371 (7 433) EXEMPLE III 1-méthoxy-allène On agite au reflux pendant 4 heures sous un très faible courant d'azote un mélange de 100 ml d'éther de méthyle et de propargyle (1, déshydraté sur un tamis 4A) et 3 g de tertiobutylate de potassium. Le spectre infrarouge indique que la transposition est essentiellement totale. Le liquide est distillé au moyen d'un appareil de distillation moléculaire dans un ballon refroidi à la neige carbonique; on obtient 72 g de 1-méthoxy-allène; spectre infrarouge 1950 et 850 cm 1. 3-chloro-1-méthoxypropène On fait passer un courant de gaz chlorhydrique anhydre dans 700 ml d'éther anhydre refroidi au bain de glace. Lorsque 45 g de HCl ont été ajoutés, on ajoute encore 267 ml d'éther frais. Une portion aliquote de 541 ml (25,2 g, 0,69 mole) de HCl est ensuite ajoutée goutte à goutte sous atmosphère d'azote-à une solution de 48,2 g (0,69 mole) de 1- méthoxy-allène dans 240 ml d'éther à -78 C. L'addition dure 2 heures et demie et la température interne est maintenue au- dessous de -70 C. Au bout de 30 minutes, la solution est placée dans un réfrigérateur o elle est maintenue à 0-5 C pendant 24 heures, et elle est utilisée directement dans l'étape suivante. Acide 4-amino-4-désoxy-10-éthyl-10-déazaptéroique On refroidit à une température de 0 à 5 C une solution de 192,8 mI (1,38 mole) de diisopropylamine fraîchement distillée dans 1928 ml de THF anhydre et on ajoute goutte à goutte une solution dans l'hexane de 862 ml (1,38 mole) de butyllithium 1,6M en maintenant la température à une valeur de l'ordre de 0 à 5 C. On agite le mélange pendant encore 30 minutes et on y ajoute goutte à goutte, à 19. 0-5 C, une solution de 113 g (0,69 mole) d'acide p-propyl- benzoique anhydre (R1 = H, R2 = C2H5) dans 385 ml de THF anhydre. On agite le mélange de couleur rouge à cette tempé- rature pendant 3 heures et demie, puis on le maintient à 0- 5 C dans une chambre froide pendant 25 heures. La solution dans l'éther du 3-chloro-1-méthoxypropène ci-dessus est ensuite ajoutée goutte à goutte en 1 heure et demie à 0- C; l'atténuation de la couleur rouge est achevée à la fin de la période d'addition. Au bout de 2 heures, les solvants sont chassés sous vide et le résidu est partagé entre un litre d'eau et un litre d'éther. La portion aqueuse est refroidie, traitée avec de l'anhydride carbonique gazeux jusqu'à-ce que son pH soit égal à 8-9 et 240 ml de CH2Cl2 sont ajoutés. On ajoute ensuite goutte à goutte à 0-5 C, en agitant, du brome 1M dans du chlorure de méthylène jusqu'à ce qu'on observe la persistance de la couleur rouge (absorption de 85 % de Br2). On ajoute éventuellement du bicarbonate de sodium solide pour maintenir le pH à 7-8. On acidifie le mélange à un pH égal à 2 environ par addition d'environ 50 ml de HC1 6N.On sépare la phase chlorométhylénique et on extrait la phase aqueuse avec encore 200 ml de chlorure de méthylène. Les extraits organiques rassemblés sont déshydratés sur du sulfate de magnésium et évaporés sous vide en laissant un résidu sirupeux de couleur orangée formé de l'acide bromal- déhydique brut. Un mélange de 156,2 g (0,66 mole) de sulfate de 2,4,5,6-tétraaminopyrimidine (Aldrich), 160,3 g (0,65 mole) de BaCl2.2H20 et 3 litres d'eau est agité à la température ambiante pendant une heure et demie. Le mélange est chauffé à 70 C, filtré à chaud et le filtrat est refroidi à la tempéra- ture ambiante. On ajuste le pH du filtrat à 3-4 par addition d'hydroxyde de sodium à 10 %, on fait tiédir le filtrat à C et on le traite en y ajoutant en 10 minutes le bromal- déhyde ci-dessus dans 1075 ml d'acide acétique cristal- lisable. On agite le mélange à 50 C pendant 1 heure et demie, on le décante pour séparer un peu de gomme insoluble, et on le laisse refroidir à la température ambiante. La solution contenant la dihydroptéridine est traitée par addition goutte 20. à goutte de KI3 aqueux (préparé à partir de 81,9 g de I2, 156,2 g de KI et 1075 ml d'eau) jusqu'à décoloration du KI3. On laisse reposer la solution pendant 24 heures et on recueille le précipité jaune, on le lave à l'eau et à l'éthanol et on le sèche. On agite la matière pendant 2 heures avec 1800 ml d'eau contenant 20 ml d'hydroxyde d'ammonium concentré et on filtre. On acidifie le filtrat à l'acide acétique pour précipiter le produit que l'on recueille, qu'on lave à l'eau et qu'on sèche; le rendement est de 32 % et l'analyse donne les résultats suivants, apres cristallisation dans le méthanol. Formule Analyse X max, nm (E), À max, nm (E) (poids molé- Calculé Trouvé dans HCl 0,1N dans NaOH 0,1N culaire) C17H18N602. C 59,51 C 59,83 242 (22 622) 255 (26 281) 2/5CH30H H 5,62 H 5,39 (351,178) N 23,93 N 23,62 338 (6 568) 370 (6398) -méthyl-10-déazaminoptérine On chauffe à 80 C un mélange de 19,6 g (0,058 mole) de l'acide ptéroique, 15,8 ml (0,116 mole) de triéthylamine et 900 ml de DMF anhydre en agitant jusqu'à ce que la dissolution soit sensiblement totale. On refroidit la solution à 0-5 C au bain de glace et on la traite en y ajou- tant goutte à goutte 15,0 ml (0,116 mole) de chloroformiate d'isobutyle. Au bout d'une heure et demie à 0-5 C, on traite le mélange par addition d'un mélange de 28,0 g (0,116 mole) de chlorhydrate de L-glutamate de diéthyle, 15,8 ml (0,116 mole) de triéthylamine et 100 ml de DMF anhydre. On agite le mélange pendant 2 heures au bain de glace et pendant 24 heures à la température ambiante. On évapore le diméthylformamide sous pression réduite (environ 133,3 Pa) et on agite le résidu avec 400 ml de NaHCO3 à 5 % et 400 ml d'éther pendant une heure. On filtre le mélange et on lave le résidu avec de l'eau et de l'éther, puis on le sèche pour obtenir le diester. 21. On dissout le diester dans 200 ml de 2-méthoxy- éthanol et on traite la solution avec 100 ml de NaOH 1N. On maintient la solution à la température ambiante pendant 4 heures et demie, puis on la dilue avec 1 litre d'eau. On acidifie la solution par addition d'acide acétique cristal- lisable jusqu'à ce que la précipitation soit totale. On recueille le précipité par filtration. On remet le résidu en suspension dans l'eau en agitant, on filtre la suspension et on sèche le résidu pour obtenir la 10-éthyl-10-déazaminop- térine brute; la chromatographie en phase liquide sous haute pression indique que le produit contient 90 % de 10-éthyl-10- déazaminoptérine et 10 % de l'acide ptéroique n'ayant pas réagi. Le rendement est de 30 %. Après purification par chromatographie prépara- tive en phase liquide sous haute pression, l'analyse du produit donne les résultats suivants: Formule Analyse X max, nm (E), X max, nm (E) (poids molé- Calcule Trouvé dans HCl 0,1N dans NaOH 0,1 culaire) C22H25N705. C 52,95 C 53,43 242 (29 134) 255 (30 731) 7/4 H20 H 5,41 H 5,43 (494,515) N 19,63 N 19,23 (338 (10 102) 370 (7582) EXEMPLE IV 1-méthoxy-allène Un mélange de 100 ml d'éther de méthyle et de propargyle (composé 1, déshydraté sur des tamis 4A) et de 3 g de tertiobutylate de potassium est agité au reflux pendant 4 heures sous un très faible courant d'azote. Le spectre infrarouge indique que la transposition est essentiellement totale. Le liquide est distillé au moyen d'un appareil de distillation moléculaire et il est recueilli dans un ballon refroidi à la neige carbonique; on obtient 72 g de 1- méthoxy-allène (spectre infrarouge 1950 et 850 cm 1). 3-chloro-1-méthoxypropène On fait passer un courant de gaz chlorhydrique anhydre dans 700 ml d'éther anhydre refroidi au bain de 22. glace. Après avoir ajouté 45 g de HC1, on ajoute encore 267 ml d'éther frais. Une portion aliquote de 541 ml (25,2 g, 0,69 mole) de HC1 est ensuite ajoutée goutte à goutte sous atmosphère d'azote à une solution de 48,2 g (0,69 mole) de 1- méthoxy-allène dans 240 ml d'éther à -78WC. L'addition dure deux heures et demie et la température interne est maintenue au-dessous de -700C. Au bout de 30 minutes, la solution est placée dans un réfrigérateur à 0-51C o elle est maintenue pendant 24 heures et elle est utilisée directement dans l'étape suivante. Acide 4-amino-4-désoxy-10,10-diméthyl-10-déazaptéroîque Une solution de 192,8 ml (1,38 mole) de diiso- propylamine fraîchement distillée dans 1928 ml de THF anhydre est refroidie à 0-50C et une solution de 862 ml (1,38 mole) de butyllithium 1, 6M dans l'hexane est ajoutée goutte à goutte, la température étant maintenue autour de 0 à 51C. Le mélange est agité pendant encore 30 minutes et une solution de 113 g (0,69 mole) d'acide p-isopropylbenzolque anhydre (R1 et R2 = CH3) dans 300 ml de HMPA anhydre est ajoutée goutte à goutte à 0-50C. Le mélange de couleur rouge est agité à cette température pendant une heure, puis maintenu à la température ambiante pendant 15 heures. La solution dans l'éther du 3-chloro-1-méthoxypropène ci-dessus est ensuite ajoutée goutte à goutte en une heure et demie à 0-5WC; l'atténuation de la couleur rouge est achevée à la fin de la période d'addition. Au bout de 2 heures, les solvants sont chassés sous vide et le résidu est partagé entre un litre d'eau et un litre d'éther. La portion aqueuse est refroidie, traitée avec de l'anhydride carbonique gazeux jusqu'à ce que son pH soit égal à 8-9, et 240 ml de chlorure de méthylène sont ajoutés. On ajoute ensuite goutte à goutte en agitant, à 0- 50C, du brome 1M dans le chlorure de méthylène jusqu'à ce qu'on observe la persistance de la couleur rouge (absorption de 82 % de brome). On ajoute éventuellement du bicarbonate de sodium solide pour maintenir le pH à une valeur de 7 à 8. On acidifie le mélange à un pH de 2 environ par addition d'environ 50 ml de HCl 6N. On sépare la phase chlorométhylé- nique et on extrait la phase aqueuse avec encore 200 ml de 23. CH2Cl2. Les extraits organiques rassemblés sont déshydratés sur du sulfate de magnésium et évaporés sous vide en laissant un résidu sirupeux de couleur orangée formé de l'acide bromaldéhydique brut. Un mélange de 156,2 g (0,66 mole) de sulfate de 2,4,5,6-tétraaminopyrimidine (Aldrich), 160,3 g (0,65 mole) de BaCl2.2H20 et 3 litres d'eau est agité à la température ambiante pendant une heure et demie. Le mélange est chauffé à C, filtré encore chaud et le filtrat est refroidi à la température ambiante. On ajuste son pH à 3-4 par addition de NaOH à 10 %, on le fait tiédir à 45 C et on le traite en minutes avec le bromaldéhyde ci-dessus dans 1075 ml d'acide acétique cristallisable. On agite le mélange à 50 C pendant une heure et demie, on le décante pour enlever un peu de gomme insoluble, et on le laisse refroidir à la tempéra- ture ambiante. La solution contenant la dihydroptéridine est traitée par addition goutte à goutte de KI3 aqueux (préparé à partir de 81,9 g de I2, 156,2 g de KI et 1075 ml d'eau) jusqu'à décoloration du KI3. On laisse reposer la solution pendant 24 heures et on recueille le précipité jaune, on le lave à l'eau et à l'éthanol et on le sèche. On agite la matiè- re avec 1800 ml d'eau contenant 20 ml de NH40H concentré, pendant 2 heures, puis on filtre. On acidifie le filtrat à l'acide acétique pour précipiter le produit que l'on recueil- le, qu'on lave à l'eau et qu'on sèche; on obtient le produit en un rendement de 13 %, et l'analyse donne les résultats suivants: Formule Analyse X max, nm (E), À max, nm (] (poids molé- Calculé Trouvé dans HCl 0,1N dans NaOH 0 culaire) C17H18N602. C 57,88 C 57,70 242 (27 082) 255 (26 432) 4/5 H2O H 5,60 H 5,27 (352 786) N 23,82 N 23,40 337 (9 109) 370 (6441) 24. ,10-diméthyl-10-déazaminoptérine On chauffe à 80 C en agitant un mélange de 19,6 g (0,058 mole) d'acide ptéroique, 15,8 ml (0,116 mole) de triéthylamine et 900 ml de DMF anhydre, jusqu'à ce qu'on ait obtenu la dissolution pratiquement totale. On refroidit la solution à 0-5 C au bain de glace et on la traite en y ajoutant goutte à goutte 15,0 ml (0,116 mole) de chloro- formiate d'isobutyle. Après avoir maintenu le mélange pendant une heure et demie à 0-5 C, on le traite en y ajoutant un mélange de 28,0 g (0,116 mole) de chlorhydrate de L-glutamate de diéthyle, 15,8 ml (0,116 mole) de triéthylamine et 100 ml de DMF anhydre. On agite le mélange pendant 2 heures au bain de glace et pendant 24 heures à la température ambiante. On évapore le diméthylformamide sous pression réduite (environ 133,3 Pa) et on agite le résidu avec 400 ml de NaHCO3 à 5 % et 400 ml d'éther pendant une heure. On filtre le mélange et on lave le résidu avec de l'eau et de l'éther, puis on le sèche pour obtenir le diester. On dissout le diester dans 200 ml de 2-méthoxy- éthanol et on traite la solution avec 100 ml de NaOH 1N. On maintient la solution à la température ambiante pendant 4 heures et demie, puis on la dilue avec 1 litre d'eau. On acidifie la solution à l'acide acétique cristallisable jusqu'à ce que la précipitation soit terminée. On recueille le précipité par filtration. On remet le résidu en suspension dans l'eau en agitant, on filtre la suspension et on sèche le résidu pour obtenir la 10,10-diméthyl-10-déazaminoptérine brute; la chromatographie en phase liquide sous haute pression indique que le produit contient 90 % de 10,10- diméthyl-10-déazaminoptérine et 10 % de l'acide ptérolique n'ayant pas réagi. Le rendement est égal à 26 %. Après purification par chromatographie prépara- tive en phase liquide sous haute pression, l'analyse du produit donne les résultats suivants: 25. Formule Analyse X max, nm (E), X max, nm (E) (poids molé- Calculé Trouvé dans HC1 0,1N dans NaOH 0,1] culaire) C22H25N705. C 51,56 C 51,26 242 (28 647) 255 (29 583) /2 H20 H 5,90 H 5,52 (512 531) N 19,13 N 18,61 338 (10 115) 370 (7112) La 10-alkyl-10-déazaminoptérine peut être admi- nistrée telle quelle ou en association avec un diluant ou véhicule acceptable du point de vue pharmaceutique. En consé- quence, l'invention concerne également une composition pharmaceutique sous la forme posologique unitaire renfermant 0,1 à environ 500 mg de 10alkyl-10-déazaminoptérine, par unité posologique, en association avec un support ou diluant inerte non toxique acceptable du point de vue pharmaceutique. La 10-alkyl-10-déazaminoptérine peut être utilisée telle quelle ou sous la forme d'un sel d'addition d'acide. Ces sels d'addition d'acides sont formés avec un ou plusieurs groupes NH2 libres de la molécule de la 10-alkyl- 10-déazaminoptérine. Les sels d'addition d'acides sont de préférence les sels d'addition non toxiques, acceptables du point de vue pharmaceutique, formés avec des acides convenables tels que des acides inorganiques, par exemple les acides chlorhy- drique, bromhydrique, nitrique, sulfurique et phosphorique, et avec des acides organiques tels que des acides carboxy- liques, par exemple les acides glycolique, maléique, hydroxy- maléique, malique, tartrique, citrique, salicylique, o- acétyloxybenzoique, nicotinique et isonicotinique, et des acides sulfoniques organiques, par exemple les acides méthanesulfonique, éthanesulfonique, 2-hydroxy-éthanesul- fonique, toluène-p-sulfonique et naphtalène-2-sulfonique. Un sel d'addition d'acide peut être converti en le composé libre par des procédés connus, par exemple par traitement avec une base, telle qu'un hydroxyde ou un alcoo- late métallique, par exemple un hydroxyde de métal alcalin ou alcalinoterreux tel que l'hydroxyde de lithium, l'hydroxyde de sodium, l'hydroxyde de potassium ou l'hydroxyde de 26. calcium; avec un carbonate métallique tel qu'un carbonate ou un bicarbonate de métal alcalin ou de métal alcalino-terreux, par exemple les carbonates ou bicarbonates de sodium, potas- sium et calcium; avec l'ammoniac, ou avec une résine d'échange d'ions hydroxyle, ou avec tout autre réactif conve- nable. Un sel d'addition d'acide peut aussi être converti en un autre sel d'addition d'acide conformément à des procédés connus; par exemple, un sel d'un acide inorga- nique peut être traité avec un sel métallique, par exemple un sel de sodium, de baryum ou d'argent, d'un acide dans un diluant convenable, dans lequel un sel inorganique formé est insoluble et qui peut donc être éliminé du milieu réaction- nel. Un sel d'addition d'acide peut aussi être converti en un autre sel d'addition d'acide par traitement avec une prépara- tion d'échange d'anions. La 10-alkyl-10-déazaminoptérine ou son sel peut être administré à l'animal par toute voie disponible, à savoir par voie orale et par voie parentérale (intraveineuse, intrapéritonéale, sous-cutanée et intramusculaire). La quantité administrée est suffisante pour atténuer la leucémie ou la tumeur d'ascite et elle dépend du type de leucémie, de l'espèce animale et du poids de l'animal. Par exemple, dans le cas de l'administration en médecine humaine, une dose de 10-alkyl-10- déazaminoptérine d'environ 0,1 à environ 500 mg/kg par jour doit être suffisante. Les doses situées dans la partie supérieure de cette plage, s'approchant de 500 mg/kg, sont normalement administrées conjointement avec du leucovoran (tétrahydrofolate de dl-5-formyle) pour réduire la toxicité. Dans le traitement d'animaux inférieurs de laboratoire, une plage posologique similaire est thérapeu- tique. La limite supérieure de la dose est celle qui est imposée par des effets secondaires de toxicité et on peut la déterminer par une méthode empirique pour l'animal à traiter, y compris pour les êtres humains. Pour faciliter l'administration, on peut préparer la 10-alkyl-10diazaminoptérine ou l'un de ses sels sous la forme d'une composition, de préférence sous une forme 27. unitaire posologique. Bien que le composé puisse être admi- nistré sous sa forme propre, on l'administre d'ordinaire conjointement avec un support acceptable du point de vue pharmaceutique, qui dilue le composé et facilite sa manipu- lation. L'expression "acceptable du point de vue pharmaceu- tique" signifie que le support ou véhicule (de même que la composition résultante) est stérile et dépourvue de toxicité. Le support ou diluant peut être solide, semi- solide ou liquide et peut servir de véhicule, d'excipient ou de milieu pour le composé de 10-déazaminoptérine. Des exemples de diluants et de supports comprennent le lactose, le dextrose, le saccharose, le sorbitol, le mannitol, les amidons, la gomme arabique, le phosphate de calcium, l'huile minérale, le beurre de cacao, l'huile de Theobroma, les algi- nates, la gomme adragante, la gélatine, les sirops, la méthylcellulose, le monolaurate de polyoxyéthylènesorbitanne, l'hydroxybenzoate de méthyle ou de propyle, le talc ou le stéarate de magnésium. Pour la commodité de la manipulation, la 10- alkyl-10-déazaminoptérine et le support ou diluant peuvent être enfermés ou encapsulés dans une capsule, un cachet, de la gélatine, un récipient en papier ou en une autre matière, notamment lorsqu'on désire l'utiliser en unités posologi- ques. Les unités posologiques peuvent par exemple affecter la forme de comprimés, de capsules, de suppositoires ou de cachets. Les exemples suivants illustrent diverses formes d'unités posologiques sous lesquelles la 10-alkyl-10-déaz- aminoptérine ou ses sels peuvent être présentés EXEMPLE 1 Formulation pour comprimés mg/comprimé - 10-alkyl-10-déazaminoptérine 15 lactose 86 - amidon de mais (séché) 45,5 - gélatine 2,5 - stéarate de magnésium 1,0 28. La 10-alkyl-10-déazaminoptérine est pulvérisée et tamisée puis mélangée correctement avec le lactose et mg d'amidon de mais, ces deux composants étant tamisés également. Le mélange en poudre est trituré avec une solu- tion chaude de gélatine, préparée par agitation de 'la gélatine dans l'eau et chauffage pour former une solution à % en poids/poids. La pâte obtenue est granulée par passage à travers un tamis et les granulés humides sont séchés à 400C. Les granulés séchés sont regranulés par passage à travers un tamis et le reste de l'amidon et du stéarate dé magnésium est ajouté et incorporé au mélange. - Les granulés sont pressés pour former des compri- més pesant chacun 150 mg. EXEMPLE 2 Formulation pour comprimés mg/comprimé - 10-alkyl-10-déazaminoptérine 100 - lactose 39 - amidon de mais (séché) 80 - gélatine 4,0 - stéarate de magnésium 2,0 Le procédé de préparation est identique à celui de l'exemple 1 à la différence qu'on utilise 60 mg d'amidon dans le processus de formation des granulés et 20 mg d'amidon pendant la formation des comprimés. EXEMPLE 3 Formulation pour capsules - 10-alkyl-10-déazaminoptérine - lactose mg/capsule On fait passer la 10-alkyl-10-déazaminoptérine et le lactose à travers un tamis et on mélange intimement les poudres avant d'introduire le mélange dans des capsules en gélatine dure de diamètre convenable de manière que chaque capsule contienne 400 mg de mélange en poudre. 2L64956 29. EXEMPLE 4 Suppositoires mg/suppositoire - 10-alkyl-10-déazaminoptérine 50 - huile de Theobroma 950 On pulvérise la 10-alkyl-10-déazaminoptérine et on la tamise, puis on la triture avec du beurre de cacao fondu à 45 C pour former une suspension homogène. Le mélange est correctement agité et versé dans des moules, ayant chacun une capacité nominale de 1 g, pour produire des suppositoires. EXEMPLE 5 Cachets mg/cachet - 10-alkyl-10-déazaminoptérine 100 - lactose 400 On tamise la 10-alkyl-10-déazaminoptérine, on la mélange avec du lactose préalablement tamisé et on charge le mélange dans des cachets de diamètre convenable de manière que chacun d'eux contienne 500 mg de mélange. EXEMPLE 6 Injection intramusculaire (suspension stérile en véhicule aqueux) mg - 10alkyl-10-déazaminoptérine 10 - citrate de sodium 5,7 - carboxyméthylcellulose sodique (de qualité - "faible viscosité") 2,0 - parahydroxybenzoate de méthyle 1,5 parahydroxybenzoate de propyle 0,2 - eau pour injectables, quantité suffisante pour 1,0 ml EXEMPLE 7 Injection intrapéritonéale, intraveineuse ou sous-cutanée (solution stérile dans un véhicule aqueux) mg - sel d'addition d'acide chlorhydrique d'une 10-alkyl-10-déazaminoptérine 15 - citrate de sodium 5, 7 carboxyméthylcellulose sodique (de qualité "faible viscosité") 2,0 30. -parahydroxybenzoate de méthyle 1,5 - parahydroxybenzoate de propyle 0, 2 eau pour injectables, quantité suffisante pour 1,0 ml Les exemples suivants illustrent l'administra- tion de 10-alkyl-10-déazaminoptérine, par une méthode d'essai normalisée: EXEMPLES 8 et 9 On ajoute de l'hydroxyde de sodium (0,2 ml de solution 0, 1 N) à 5 mg de 10-méthyl-10-déazaminoptérine. On ajoute ensuite de l'eau distillée, on ajuste le pH à 7,0, puis on dilue la solution à 10 ml par addition d'eau distil- lée. Cette solution est administrée dans l'exemple 8. On prépare une solution de la même manière à partir de 10-éthyl-10déazaminoptérine. Cette solution est administrée dans l'exemple 9. Les deux lots de solutions résultantes et de leurs dilutions sont administrés en portions aliquotes de 0,1 ml par injection intrapéritonéale à des femelles de souris BD(2) F1 leucémiques L1210 (A.R. Schmid, Madison, Wis.). Les injections sont effectuées à la cadence d'une par jour, trois fois par semaine (lundi, mercredi, vendredi) à partir du lendemain de la transplantation de la tumeur (106 cellules/souris). Le traitement est poursuivi jusqu'à la mort des animaux. A des fins comparatives, et à titre de témoin, on conduit simultanément une série parallèle de tests en utili- sant des femelles de souris BD(2)F1 leucémiques L1210, exac- tement dans les mêmes conditions expérimentales, en adminis- trant du méthotrexate au lieu de 10-méthyl-10-déazaminop- térine ou de 10-éthyl-10-déazaminoptérine. La méthode d'expérimentation et l'entretien et la transplantation de la leucémie L1210 sont conformes à la méthode décrite par D.J. Hutchinson, D. C. Robinson, D. Martin, O.L. Ittensohn et Dillenberg dans le Journal Cancer Res. 22 57-72 (1962). L'activité antileucémique de la 10- méthyl-10-déazaminoptérine et de la 10-éthyl-10-déazaminop- térine a été évaluée par rapport au méthotrexate sur la base 31. de la prolongation de la durée moyenne de vie que l'on obtient à diverses doses, jusqu'au niveau maximal toléré, comparativement à des témoins non traités. La toxicité des diverses doses a été évaluée d'après l'étendue de la perte de poids avec issue fatale sans apparition de tumeur. Les résultats représentatifs obtenus contre la leucémie L1210 sont les suivants: Leucémie L1210 - Inoculum: 106 cellules - Hôte: femelles de souris BD(2)F1 - Véhicule: sérum physiologique tamponné - Programme de traitement: cinq fois tous les deux jours. 8 9 -méthyl-10-déaza- 10-éthyl-10-déaza- Souris Dose Méthotrexate minoptérine minoptérine Exp. xPD Exp. x g/ TS PDV TES PDV T^^S PDV (jour(jours)(jours) () (jours) (%) x 2 6,7: 0,7 - 6+ 0,7 _O 6,7+0,7 x2 6 13,8_+ 1,2 +105 x2 9 15,8+t1,7 +135 x2 12 16,9+ 1,5 + 149 18, 1+1,9 +170 18,3+1,7 +172 x 2 18 17,3+ 1,8 +158 22,2+1, 6 +230 21, 8+1,4 +220 x 2 24 15, 3_+ 2, 1 +127 TMS: temps moyen de survie PDV: prolongation de la îurée de vie Il ressort des résultats donnés ci-dessus que la durée de vie des souris d'essai a été considérablement prolongée par l'administration de 10-méthyl-10-déazaminop- térine et de 10-éthyl-10-déazaminoptérine. Des doses plus fortes conduisent à des durées de vie prolongées, la durée de vie maximale étant obtenue avec la dose maximale d'environ 22 mg/kg, pour laquelle une légère toxicité a été observée, comme cela est mis en évidence par une réduction de la varia- 32. tion de poids. Les résultats montrent que la 10-méthyl-10- déazaminoptérine et la 10-éthyl-10-déazaminoptérine sont supérieures, à dose égale, au méthotrexate et, attendu que le méthotrexate est considéré comme efficace, on peut s'attendre à ce que la 10-méthyl- et la 10-éthyl10-déazaminoptérine soient au moins aussi efficaces que le méthotrexate dans des conditions similaires, et probablement un peu plus puissantes à doses égales. La grande activité antileucémique de la 10- méthyl-10-déazaminoptérine et de la 10-éthyl-10-déazaminop- térine ressort de ces résultats d'essais. Dans des conditions semblables à celles qui ont été indiquées dans le brevet des Etats-Unis d'Amérique n 2 342 732 précité en ce qui concerne la 10-déazaminop- térine, les 10-alkyl-10-déazaminoptérines peuvent être utilisées pour le traitement de diverses formes de tumeurs d'ascite. 2b64956 33. REVENDICATIONS 1. - Procédé de préparation de la 10-déazaminop- térine et de ses dérivés 10-alkyliques, caractérisé en ce qu'il consiste: (1) à faire réagir le 3-chloro-1-méthoxypropène avec le produit de réaction entre un alkyllithium et un acide p- alkylbenzoique dans lequel le groupe alkyle répond à la formule: R 1 HC- L2 correspondant au groupe porté par l'atome de carbone en position 10 de la 10-déazaminoptérine désirée, o R1 et R2 sont choisis chacun entre l'hydrogène et un radical alkyle ayant 1 à 8 atomes de carbone, en présence d'un accepteur d'acide tel qu'une amine tertiaire, à une tem- pérature inférieure à 0 C à laquelle la réaction s'effectue en présence d'un solvant inerte dans des conditions anhydres, de manière à substituer un groupe méthoxypropylène au niveau du groupe p-alkyle de l'acide; (2) à transformer le groupe méthoxypropylène en un groupe bromo-acétaldéhyde par réaction avec le brome tout en maintenant le pH dans la plage d'environ 7 à environ 8, avec addition éventuelle d'un tampon pour maintenir le pH au-dessous de 8; (3) à faire réagir ce produit réactionnel avec la 2,4,5,6- tétra-aminopyrimidine à un pH acide dans la plage d'environ 3 à environ 5 et à une température élevée dans la plage d'environ 35 à environ 75 C, pour cycliser ses groupes 5,6-amino avec le groupe aldéhyde et le brome de ce produit réactionnel et pour former un noyau de dihy- droptéridine comprenant les atomes d'azote en positions et 6, 34. (4) à déshydrogéner le noyau de ptéridine par réaction avec le réactif iodure de potassium/iode KI3, de manière à former l'acide 4-amino-4-désoxy-10déazaptéroique correspondant; (5) à faire réagir l'acide 4-amino-4-désoxy10-déazapté- roique avec le chloroformiate d'isobutyle en présence d'un accepteur d'acide à une température de 0 à -5 C; à ajouter du chlorhydrate de L-glutamate de diéthyle au mélange réactionnel et à poursuivre la réaction à une température comprise dans la plage de 0 à - 5 C de manière à transformer le groupe acide ptéroique en l'ester diéthylique de glutamide correspondant; puis (6) à éliminer par hydrolyse les groupes éthyle estérifiants par réaction de l'ester avec une base alcaline aqueuse diluée, pour former le diacide libre du groupe glutamide et pour achever la formation du composé de 10-déazami- noptérine. 2. - Procédé suivant la revendication 1, carac- térisé en ce qu'il consiste à transposer l'éther de méthyle et de propargyle en le 1-méthoxy-allène correspondant dans des conditions anhydres en présence d'une base, de préférence un alcoolate de métal alcalin, à une température élevée sous une atmosphère inerte, puis à fixer par addition du chlorure d'hydrogène de part et d'autre des doubles liaisons alléni- ques du 1-méthoxy-allène dans des conditions anhydres à une température inférieure à environ -250C sous une atmosphère inerte, le 1-méthoxyallène étant en solution dans un solvant inerte; et à utiliser directement dans l'étape (1) le mélange réactionnel obtenu contenant le 3-chloro-1-méthoxy- propène. 3. - Procédé suivant la revendication 1, carac- térisé en ce que la réaction de l'acide p-alkylbenzoique avec l'alkyllithium est conduite à une température de 0 à 5 C et le 3-chloro-1méthoxypropène en solution dans un solvant inerte est ajouté lentement au mélange réactionnel puis la réaction est poursuivie jusqu'à ce que le mélange réactionnel soit incolore. 35. 4. - Procédé suivant la revendication 1, carac- térisé en ce que le produit réactionnel bromacétaldéhydique de l'étape (1) est lavé et traité en solution aqueuse avec de l'anhydride carbonique gazeux pour réduire son pH dans la plage d'environ 8 à environ 9. 5. - Procédé suivant la revendication 1, carac- térisé en ce que dans l'étape (2), du bicarbonate de sodium solide est ajouté pour maintenir le pH au-dessous de 8 et le mélange réactionnel est ensuite acidifié à un pH d'environ 2 par addition d'acide chlorhydrique en solution aqueuse. 6. - Procédé suivant la revendication 1, carac- térisé en ce que l'étape (3) est conduite dans un solvant acide organique à une température comprise dans la plage de à 750C. 7. - Procédé suivant la revendication 1, carac- térisé en ce que dans l'étape (5), l'accepteur d'acide est la triéthylamine, et l'acide 4-amino-4-désoxy-10-déazaptéro!que est en solution dans un solvant inerte, -le chloroformiate d'isobutyle est ajouté lentement au mélange réactionnel et, lorsque la réaction est terminée, du chlorhydrate de L-gluta- mate de diéthyle, une amine organique et une quantité addi- tionnelle de solvant sont ajoutés et la réaction est poursui- vie à la même température jusqu'à ce qu'elle soit terminée, le diméthylformamide qui est libéré est éliminé et le résidu est mélangé avec une solution tampon aqueuse alcaline dans laquelle le diester est insoluble. 8. - Procédé suivant la revendication 1, carac- térisé en ce que l'acide p-alkylbenzoique répond à la formule R1 H- C- -COOH 2 le produit réactionnel de l'étape (1) répond à la formule: 36. R1 CH30CH= CHCIC -Ij- COO(DLis le produit réactionnel de l'étape (2) répond à la formule: O R1 JHCCHCWH2C - -COOH Br R2 le produit réactionnel de l'étape (3) répond à la formule: R1 2O2 H2N le produit réactionnel de l'étape (4) répond à la formule: NH2 R1 X CH2; @ COOH N - H2N le produit réactionnel de l'étape (5) répond à la formule: NIl2 R1 COOEt CH2c K>-CNC A NY R2 CH2* H2N l CH2 COOEt 37. et le composé de O10-déazaminoptérine obtenu comme produit répond à la formule: COOH 1 0H2CH2C _-(j>-C CH RA2 1H2 H2N CH2 00H dans laquelle R1 et R2 sont de l'hydrogène ou des radicaux alkyle ayant 1 à environ 8 atomes de carbone. 9. - Des 10-alkyl-10-déazaminoptérines de formule: RIl COOH HEI Ha 1 CBA I CHl-2C \/ -CONH-CH- /H2C{) -2 112N 0112 | cU00H dans laquelle R1 et R2 sont choisis dans le groupe formé de l'hydrogène et de radicaux alkyle ayant 1 à environ 8 atomes de carbone et l'un au moins des groupes R1 et R2 est un radi- cal alkyle. 10. - 10-alkyl-10-déazaminoptérines suivant la revendication 9, caractérisées en ce que l'une des variables R et R2 est un groupe alkyle, de préférence éthyle ou méthyle, et l'autre est un atome d'hydrogène, ou bien R1 et R2 sont chacun un groupe alkyle, de préférence méthyle. 38. 11. - Des 10-alkyl-10-déazaminoptérines obtenues par le procédé suivant la revendication 1. 12. - Composition pharmaceutique sous la forme posologique unitaire destinée au traitement de la leucémie ou d'une tumeur d'ascite, caractérisée en ce qu'elle comprend une 10-alkyl-10-déazaminoptérine ou de l'un de ses sels d'ad- dition d'acides ou de ses dérivés d'ammonium quaternaire acceptables du point de vue pharmaceutique en une quantité comprise dans la plage d'environ 0,1 à environ 500 mg par unité posologique, thérapeutiquement efficace pour atténuer une leucémie ou la tumeur d'ascite, en association avec un support ou diluant non toxique convenable, acceptable du point de vue pharmaceutique. 13. - Composition pharmaceutique suivant la revendication 12, caractérisée en ce qu'elle est sous la forme d'un comprimé, d'une capsule, d'un suppositoire, d'un cachet ou sous une forme aqueuse stérile telle qu'une solu- tion ou dispersion, etc.