Brevet FR2466250A1 — publié le 19810410

"Médicament anticoccidien et procédé de vaccination des vo- lailles avec ce médicament." La présente invention concerne un médicament anti- coccidien capable de combattre par immunologie la coccidiose des volailles et un procédé pour vacciner les volailles avec ce médicament anticoccidien. La coccidiose des volailles est une maladie infec- tieuse due à l'infection des volailles avec certaines espèces de protozoaires parasites et qui est largement répandue dans toutes les parties du monde. Les oiseaux et les animaux in- fectés avec le protozoaire parasite présentent des symptmes tels que diarrhée, excréments hémorragiques, etc., et souvant meurent dans le cas o ceux qui ont été infectés n'ont pas été soumis rapidement à un traitement destiné à alléger ces sympt8mes, ou bien là o les symptômes se sont sérieusement développés. Ainsi la coccidiose est connue comme une maladie qui entratne les plus grands dommages pour les aviculteurs parce que les volailles infectées ne peuvent plus se dévelop- per même quand elles ont tout juste échappées à la mort. L'administration par voie orale des médicaments y compris les vaccins, a été Jusqu'ici adoptée pour empêcher la coccidiose comme mentionnée cidessus. Le terme"vaccin" destiné à prévenir la coccidiose dont il est question ici, sert à désigner une composition liquide mélangée comprenant plusieurs types d'oocystes qui sont aptes à provoquer la coccidiose, et les volailles dans les basses-cours sont vaccinées par voie orale avec cette composition. Ces mesures préventives se fondant sur l'administration de médicaments présentent toutefois des inconvénients tels que celui dû au fait que les médicaments ainsi administrés perdent peu à peu leur effet préventif au fur et à mesure que les protozoaires parasites se développent en devenant de plus en plus résis- tants aux médicaments, et entratnent ainsi des difficultés. La mesure préventive vaccinale possède également les incon- vénients dus au fait que la durée de l'immunité est courte et que la prévention n'est pas parfaite pendant la période d'im- munité. Les auteurs de la présente invention ont conduit 246'6250 leur recherche pour résoudre les difficultés mentionnées ci-dessus associées aux mesures préventives de l'art anté- rieur contre la coccidiose,et éventuellement ont découvert que la prévention contre la coccidiose des volailles peut être réalisée en vaccinant ces volailles par leur cloaque avec des sporozoites d'Eimeria tenella, qui est un des protozoaires patogènes de la coccidiose des volailles. Le sporozolte concerné par la présente invention est une forme du cycle de vie d'Eimeria tenella, ledit sporozoIte étant maintenu en vie. La préparation de ce sporozolte utilisé dans la présente invention est illustré ci-après. Les sporocystes sont obtenus en brisant la membrane des oocystes sporulés d'Eimeria tenella isolés des excréments, des parois du caecum et du contenu du caecum des volailles infectées par la coccidiose due à l'Eimeria tenella. Ensuite, les sporocystes ainsi obtenus sont traités avec de la bile de volaille et de la trypsine pour extraire les cystes des sporozoites. Le produit d'extraction des cystes ainsi obtenu contient principalement des sporozoItes et, de plus, comprend également des oocystes et des sporocystes et des membranes d'oocystes et de sporocystes,respectivement. Les volailles sont ensuite vaccinées avec les sporozot- tes obtenus de la façon ci-dessus. Dans la pratique de la vac- cination, les sporozoites sont mis en suspension dans un tampon tel qu'une soluté physiologique tamponnée au phosphate et la suspension résultante est inoculée dans les volailles par voie orale, musculaire ou par le cloaque. La vaccination par le cloaque est particulièrement préférée et consiste à introduire goutte à goutte la suspension dans l'anus des volailles ou de l'injecter dans leur cloaque. Les volailles- sont de préférence vaccinées avec les sporozoItes Jusqu'a une dose d'environ 500 sporozottes par volaille. Du fait de l'utilisation du médicament anticoccidien, selon la présente invention, la coccidiose des volailles due à 1' Eimeria Tenella peut être presque parfaitement empêchée sans produire de réaction secondaire indésirable. De plus, l'effet préventif de l'infection du médicament anticoccidien 246'6250 de la présente invention est remarquablement dominant, par exemple, quand un poussin de 1 jour est vacciné avec ce médicament, l'effet dure pendant plus de 11 semaines. La présente invention est illustrée par les exemples descriptifs et non limitatifs ci-après. Exemple 1 Procédé d'essai. poussins n'ayant pas encore 1 Jour (de Hubbardj destinés. etre élevs comme volaillesà rotir) sont vaccinés individuellement goutte à goutte par l'anus avec un échantil- lon mentionné ci-dessous. Ensuite, les poussins sont infec- tés à l'âge de 21 Jours avec la coccidiose par administration orale de 200 000 oocystes sporulés d'Eimeria tenella par poussin. Les poussins pris comme témoins sont simplement in- fectés de la meme façon mais non vaccinés.8 Jours après l'in- fection on examine les lésions du caecum, le nombre de oocys- tes dans les excréments, les excréments hémorragiques et la mortalité pour avoir les résultats mentionnés dans le tableau 1. l'évaluation suivant cet examen est effectuée de la façon mentionnée plus loin. Echantillon Présente invention 10 000 sporozoltes d'Eimeria tenella sont mis en suspension dans une soluté physiologique tamponnée au phosphate (-). Exemple comparatif (1): 5000 sporocystes (calculésen 000 sporozoites) d'Eimeria tenella sont mis en suspension dans une soluté physiologique tamponnée au phosphate (-). 2466250 ' Exemple comparatif (2): 1250 oocystes (calculésen 000 sporozoites) d'Eimeria tenella sont mis en suspension dans une soluté physiologique tamponnée au phosphate (-). Exemple comparatif (5): l'échantillon mentionné ci- dessus de la présente invention - est chauffé à 60 C pendait 30 minutes. Exemple comparatif (4): 10 000 sporozoItes d'Eimeria - tenella sont placés dans une solution de formol à 10%, laissés au repos pendant 30 minutes puis séparés par cen- trifugation7et le dép8t obtenu est mis en suspension dans une soluté physiologique tam- ponnée au phosphate (-). Les-oocystes, sporocystes et sporozoltes utilisés dans les échantillons mentionnés ci-dessus, respectivement, sont préparés selon le procédé décrit dans "J. Protozool," Vol. 9 (2) pages 154-161 (1962) de la façon suivante. Les excréments, les parois du caecum et le contenu du caecum des volailles administrées par voie orale avec des oocystes sporulés d'Eimeria tenella sont recueillis, mis en suspension dans une solution de bichromate de potassium à 3% et mis en incubation à 28 C pendant 2 Jours. La solution ainsi obtenue contenant les oocystes sporulés est soumise à la séparation par centrifugation (à une vitesse de 3000 tours/minute, pendant 10 minutes) et le dépôt résultant est recueilli. Ensuite, le dépôt ainsi recueilli est rincé à l'eau et chargé avec une solution saline saturée. La solution résul- tante est centrifugée à la vitesse de 3000 tours/minute pendant 10 minutes, le liquide surnageant qu'on recueille est dilué avec de l'eau puis centrifugé à 1000 tours/minute pendant 3 minutes pour recueillir le dép8t résultant. Ce dépit est constitué presque exclusivement par des oocystes -les oocystes sont utilisés dans l'exemple comparatif (2)_7. Aux oocystes ainsi obtenus, on ajoute de l'eau et une solution d'hypochlo- rite de sodium à 5% puis on laisse reposer pendant 15 minutes et on sépare par centrifugation à 2000 tours/minute pendant 3 minutes. Le dépôt résultant est rincé à l'eau, puis broyé avec un homogénéiseur. Le produit broyé ainsi obtenu n'est constitué presque exclusivement que par des sporocystes /-les sporocystes sont utilisés dans l'exemple comparatif (127. Les sporocystes ainsi obtenus sont additionnés de 5% de bile de volailles, de 0,25% de trypsine et d'une soluté physiolo- lO gique tamponnée au phosphate (-), puis mis à digérer dans un bain d'eau chaude à 40 C pendant environ 1 heure 1/2. Le li- quide de digestion ainsi obtenu est séparé par centrifugation afin de recueillir un dép8t et le dépôt ainsi recueilli est rincé avec de la soluté physiologique au phosphate (-). Le dép8t ainsi traité n'est constitué presque que par des sporo- zoites (les sporozoltes sont utilisés dans la présente inven- tion). Procédé d'évaluation Lésion caecale e l'importance de l'atrophie et de l'hémorragie du caecum et les quantités d'exsudat inflamma- toire sont représentés ainsi. -jt: Importante *: Moyenne +: Légère : Très légère : Aucune Excréments hémorragiques: l'évaluation est faite selon le procédé adopté pour la lésion caecale. Nombre d'oocystes dans les excréments:le nombre d'oocystes dans 1 g d'excréments est ainsi représenté. 24662.50 TABLEAU 1 Lésion caecale I Hémor- Exsu-1 ragie dat t I i Fèces hémor- ragi- ques Nombre de Taux de oocystes par mortali- gramme de fè- té ces 4 ( %) (x l0 f ragments)(%) Présente invention Exemple compara- tif (1) Exemple compara- tif (2) Exemple compara- tif (3) Exemple compara- tif (4) Témoin + H -4 4H- "4 * III| Exemple 2 Procédé d'essai poussins (la meme race que ceux utilisés dans l'exemple d'essai 1) sont vaccinés chacun avec les échantil- lons mentionnés cidessous, respectivement, de la même façon qu'indiqué plus loin. Les poussins sont infectés de la même façon que dans l'exemple d'essai 1, et l'observation est 0 réalisée de la même manière. Les poussins utilisés comme témoins ne sont pas vaccinés avec les échantillons, mais sont purement et simplement infectés de la même façon que dans l'exemple d'essai 1. Les résultats obtenus sont indiqués dans le tableau 2, o le m8me procédé d'évaluation que dans l'exemple d'essai 1 est adopté. Atro phie JL t + M- + o0 o + + 4* 117 I Echantillons et vaccination Présente invention (1): Présente invention (2): Présente invention (3) Exemple comparatif 000 sporozoltes par volaille sont inoculés dans l'anus de celle -ci. 000 sporozottes par volaille sont inoculés par voie orale. 000 sporozoltes par volaille sont injectés à travers les muscles pec- toraux des volailles. 1 250 oocystes par vo- laille sont inoculés par voie orale. Les sporozoltes et oocystes utilisés comme échantillons sont préparés de la même fagon que dans l'exemple 1. TABLEAU 2 Lésion caecale Fèces Atro Hémor- Exsu- hémor- ph&ie ragie dat ragl- ques Nombre de oocystes dans les fè- ces 4 (x 10 fragments) Présente invention (1) Présente invention (2) Présente invention (3) Exemple comparatif 1- - !t + -P + * + - + *! -R- Témoins* 44 -W 1+ o Témoins REVENDICATION- Médicament anticoccidien comprenant comme ingrédient actif des sporozoltes d'Eimeria tenella.