Brevet FR2435715A1 — publié le 19800404

La présente invention est relative à des produits con juguésentre une substance à activité immunologique et du verre, à un procédé pour l'obtention de ces produits et à des réactifs de diagnostic contenant ce produit ainsi qu 'à un processus pour 1 essai physiologique de substances actives en utilisant ces produits.L'invention vise plus particulièrement des conjugés de substances immunologiques-verre givré adaptés à l'application pour analyse de substances physiologiquement actives à très haute sensibilité dans les fluides corporels tels que les hormones et les protéines, à un procédé pour leur préparation, à des réactifs de diagnostic les contenant et à un processus pour l'a- nalyse de substances physiologiquement actives utilisant ces produits. L'analyse des substances à activité physiologique (telles que les hormones et les protéines) contenues dans les fluides corporels (tels que l'urine ou le sérum sanguin) est importante du point de vue du diagnostic et peut être réalisée soit par radio-immuno-essai (connu sous l'abréviation RIA) ou par enzymeimmuno-essai (connu suus l'abréviation EIA). Le RIA et le EIA sont basés sur le meme principe , à savoir la spécificitédes réactions antigènes-anticorps. Des systèmes dtessais ou d'analyse utilisables et couramment employés pour le RIA et 1'EIA sont des systèmes en phase solide utilisant des substances immunologiquement actives insolu biliées, avec l'aide de supports insolubles dans l'eau. Les supports insolubles dans l'eau utilisés jusqu'à présent sont (1) des matières plastiques telles que le polystyrène et le polyéthylène, (2) des polymères naturels tels que la sépharose et la cellulose et (3) les verres et analogues. L'emploi des matières plastiques (telles que le polystyrène et le polyéthylène) comme véhicules insoluhles dans l'eau est désavantageux du fait que la stabilité au stockage et la précision de l'analyse ne sont pas satisfaisantes.Les substances immunologiquement actives liées à des polymères naturels tels que la sépharose et la cellulose sont floculantes ou floconneuses et difficiles à traiter, ce qui exige beaucoup d'habileté dans leur application à l'analyse ou à l'essai biologique.Enfin, les verres sont différents des supports insolubles dans l'eau en ce qu'on peut fixer sur eux des substances immunologiquement actives par des liaisons cova lentes et en ce que les substances immunologiquement actives liées à des verres sont stables et très aisées à manipuler.Ces produits présentent cependant encore des inconvénients en ce que la quantité de substances immunologiquement actives qui peut être fixée à un verre est faible de sorte que la sensibilité et la précision ne sont pas entierement satisfaisantes et que l'intervalle d'analyse est assez étroit. Dans ces conditions, les inventeurs ont procédé à des recherches approfondies pnur éliminer ces inconvénients et sont parvenus à la présente invention. Cette invention vise des conjugués substance immu-. nologiquement active -verre possèdant une sensibilité et une précision très élevées dans leur application à l'analyse de substances physiologiquement actives dans les fluides corporels et vise également un procédé pour leur préparation et les réactifs de diagnostic les contenant. L'invention vise également des conjugués substance immunologiquement active -verre rendant possible des analyses de substances physiologiquement actives dans les fluides corporels dans un plus large intervalle, ainsi qu'un procédé pour leur préparation et les réactifs pour diagnostic qui les contiennent. L'invention vise enfin un processus pour l'analyse des substances physiologiquement actives dans les fluides corporels,ce processus possèdant une sensibilité et une précision très élevées grâce aux produits conjugués substance immunologiquement active -verre selnn l'invention. Ces objectifs de l'invention, ainsi que d'autres tels qu'ils apparaîtront plus clairement dans la suite de la description, ont été atteints grâce à descnjugués substance immunologiquement active -verre comprenant des composés ou substances à activité immunologique fixés par voie physique ou chimique sur la surface d'un verre givré, des procédés pour leur préparation, les réactifs pour diagnostic les contenant et un processus pour l'analyse des substances physiologiquement actives dans les fluides corporels les utilisant. Dans la description de l'invention, on se réfère au dessin annexé sur lequel - la figure 1 est une courbe standard analyse de l'insuline humaine par la méthode du EIA en sandwich (voir exemple 3) et - la figure 2 est une courbe standard pour l'analyse de l'alpha fétoprotéine par la méthode du EIA en sandwich (voir exemple 7). La substance immunologiquement active utilisable dans le cadre de la présente invention n'est pas particulièrement critique. Des substances convenables sont les antigènes et les anticorps. Des exemples d'illustration des antigènes sont les hormones telles que l'insuline, la gonadotropine, les 17-cétostérodes, l'hormone de croissance, la thyroxine, la triiodothyronine, et lthormone thyroido-stimulatrice; les protéines telles que l'IgG, l'IgA, l'IgM, l'IgE, l'alpha-fétoproétine, la CEA (antigène carcino-embryonique) et les protamines ; et les composants antigènes et pathogènes tels que les bactéries pathogènes (par exemple les streptocoques),les virus (par exemple le virus de l'hépatite et le virus de la rubéole), les protozoaires (par exemple le toxoplasma gondii et les parasites malariens) et analogues.Les anticorps convenables sont par exempleles antisérums que l'on peut obtenir de manière classique en immunisant des mammifères (tels que le lapin et la chèvre) par les antigènes précités. De préférence les anticorps sont ceux obtenus à partir des anti-sérums par les méthodes de purification classique telles que le fractionnement en utilisant le sulfate d'ammonium saturé, une colonne de chromatographie sur DEAE-cellulose et la chromatographie par affinité. Le verre givré utilisable selon l'invention n'est pas particulièrement critique. On peut utiliser parexemple des verres givrés physiquement (mécaniquement) et des verres givrés chimiquement tels que décrits dans Encyclopedio chimica, vol.5, page 999 (Kyoritsu Publishing Cb, 1963). D'une manière générale, ces verres présentent une surface présentant des irrégularités très fines provoquées par un traitement physique ou chimique. Un traitement physique convenable est par exemple l'abrasion de la surface du verre au moyen d'une matière abrasive (par exemple un poudre abrasive, un papier abrasif ou un textile enduit d'abrasif) , la pulvérisation d'une matière abrasive (par exemple l'émeri ), grâce à de l'air comprimé sur la surface du verre (sablage) ou par abrasion de la surface du verre au moyen d'une matière abrasive par exemple avec une meule. Un traitement chimi que convenable est par exemple l'attaque par l'acide fluorhydri-- que , le fluorure d'ammonium ou un alcali. Du point de vue de la commodité et de l'efficacité du givrage, la méthode au sablage et la méthode par attaque par une solution contenant de l'acide fluorhydrique ou du fluorure d'ammonium sont préférables, parmi les méthodes physiques ou chimiques respectivement. La forme des corps en verre n'est pas critique mais des formes convenables sont le cylindre, la sphère, le tube et le cube La taille des corps en verre n'est pas- particuliërement critique mais le diamètre maximum est habituellement de 1 à 20 mm et le diamètre minimum est habituellement de 1 mm ou plus. Des verres givrés convenables sont ceux possèdant un degré de givrage qui est généralement de 1,5 à 10,0 et de préfé- rence de 2,0 à 9,0. Dans le cadre de l'invention, on définit le degré de givrage comme étant le rapport entre l'activité enzymatique d'une enzyme fixée sur le verre givré ,à celle d'une enzyme fixée sur le verre non givré (ayant la même taille et la même forme). Dans ce qui précède, on détermine les activités enzymatiques par les méthodes suivantes (i) Préparation des conîugés enzyme-verre On immerge dans une solution à 10% de gamma-aminopropylt triéthoxysilane dans de l'acétone des quantités égales du verre givré et de verre non givré ayant la même forme et la même taille que celles du verre givré.Après -incubation à 250C pendant une heure, on sépare ces verres par filtra tion et on les lave à l'eau déionisée. A ces verres traités, on ajoute une solution aqueuse à 20% de glutaraldéhyde. Après repos à250C pendant une heure, on lave les verres avec de l'eau déionisée. Les verres ainsi traités sont ensuite immer gés dans une solution aqueuse à 0,5 mg/ml de glucose-oxydase (GOD)(activité enzymatique de 34,0 U/mg, vendu par la firme Toyo Boseki K.K.). Après incubation à 250C pendant une heure puis à 40C pendant 15 heures, on recueille les verres par filtration et on les lave avec de l'eau déionisée pour obte nir un conjugué GOD-verre givré et un conjugé GOD-verre non givré pour en mesurer l'absorbance. (ii) Mesure de l'absorbance On place dans chacun de 10 tubes à essai un certain nombre (en général un) de conjuguésGOD-verre givré. On ajoute dans chaque tube une solution d'enzyme sur substrat conte nant du béta-D-gluoose puis une solution pour coloration contenant du chlorhydrate de 3-méthyl-2-benzothiazolinone hydrazone (MBTH), de la N,N-diéthylaniline (DEA) et de la péroxydase (POD). Après incubation, on mesure les absor bances à 590 nm des couches surnageantes dans chaque tube à essai. On répète le processus précédent sauf que l'on utilise un conjugué GOD-verre non givré à la place du conju gé GOD-verre givré. On estime une moyenne des absorbances à 590 nm des couches surnageantes dans chacun des tubes à essai comme étant activité enzymatique duconjugué enzyme-verre givré et du conjugué enzyme-verre non givré, respectivement. On calcule le degré de givrage 1du verre givré (x) par l'équation suivante (1) x = actiyitéenzymatiguee-l'enzymefixeau verre- givré (1) activité enzymatique de l'enzyme fixé au verre non givré Le rapport pondéral de la substance immunologiquement active au verre givré pouvant être utilisé n'est pas particulièrement critique et peut varier dans un grand intervalle selon les besoins. On peut par exemple utiliser de 10 à 1000 parties mais de préférence 50 à 300 parties d'une solution d'une substance immunologiquement active pour 100 parties de verre givré, la concentration de la solution étant hahituellement de 0,001 à 40g/100 ml et de préférence de 0,1 à 0,1g/100 ml. Selon l'invention, il est ess-entield'utiliser un véhicule spécifique , à savoir un verre givré,pour insolubiliser la substance immunologique. Les méthodes pour-ìxer la substance immunologiquement. active sur le verre givré ne sont pas particulièrement critiques. La substance immunologiquement active peut être fixée sur la surface du verre givré par des moyens physiques au chimiques. On préfère les derniers en raison de la grande quantité de la substance immunologiquement active fixée solidement et de façon permanente au verre givré. Onpeut atteindre la fixation par une méthode physique et plus spécialement par adsorption physique (adsorption VAN DER WAALS). Ainsi , on peut immerger le verre givré dans une solution de la substance immunologiquement active et le faire incuber ou le laisser reposer pendant une période de temps appropriée pour créer la fixation physique. La solution peut avoir une concentration généralement de 0,001 à 40 g/100 ml et de préférence de 0,01 à 0,1g/100 ml. Le traitement par immersion peut être réalisé par exemple à une température de 0 à 450C pendant 1 à 48 heures. Comme méthode chimique convenable, on peut mentionner celle consistant à fixer la substance immunologiquementactive à la surface du verre givré àl'aide d'un agent de couplage du type silane et,au besoin d'un agent de réticulation. On peut utiliser n importe quel silane comme agent de couplage dès lors qu'il possède dans sa molécule à la fois un groupe fonctionnel réactif avec le verre givré et un groupe fonctionnel réactif avec la substance immunologiquement active et/ou l'agent de réticulation. Des exemples de groupes fonctionnels réactifs avec le verre givré sont ceux réagissant avec un groupe silanol du terre givré . Ce sont par exemple les groupes alcoxysilyle (tels que les groupes méthoxy- ou éthoxy-substituéssilyle), les groupes halosilyle (tels que les groupes silyle chloro-substitués), et analogues. Des exemples de groupes fonctionnels réactifs avec la substance immunologiquement active et/ou l'agent de réticulation sont ceux réagissant avec les groupes amino,carboxyle et/ou thiol , et ce sont par exemple les groupes carboxyle, époxy, haloalkyle (tels que chloroéthyle et chloropropyle), aldéhyde, amino (primaire et secondaire), thiol,isocyanate,carboxylate,imino et nitrile (ou cyano), et analogues.Plus spécialement, des exemples de groupes fonctionnels convenables réactifs avec le groupe amino sont les groupes carboxyle,époxy, haloalkyle et aldéhyde ; les groupes fonctionnels convenables réactifs avec le groupe carboxyle sont par exemple le groupe amino (primaire et secondaire) et époxy ; et les groupes fonctionnels convenables réactifs avec le groupe thiol sont les groupes thiol, époxy, haloalkyle et aldéhyde et analogues. Des exemples illustratifs d'agents de couplage convenables du type silane sont (1) les agents de couplage du type silane contenant des groupes amino et alcoxysilyle : aminoalkyl-trialcoxysilanes (tels que le gamma-aminopropyl-triméthoxysilane, le gamma-amino propyl-triéthoxysilane), le N-(béta-aminoéthyl)-gamma-amino- propyl-méthyl-diméthoxysilane, le N-(béta-aminoéthyl)-gamma- aminopropyl-triméthoxysilane et analogues ; (2) les agents de couplage du type silane contenant des groupes thiol et alcoxysilyle : les mercaptoalkyl-trialcoxysilanes (tels que le gamma-mercaptopropyl-triméthoxysilane) et analo gues; (3) les agents de couplage du type silane contenant des groupes époxy et alcoxysilyle : le gamma-glycidoxypropyl-triméthoxy silane, le triéthoxysilylméthyl-éthylène-oxyde, le béta- (3,4-époxycyclohexyl) éthyl-triméthoxysilane et analogues; (4) les agents de couplage du type silane contenant des groupes carboxyle et alcoxysilyle : l'acide 2-(triméthoxysilyl)propio- nique et analogues; (5) les agents de couplage du type silane contenant des groupes haloalkyle et alcoxysilyle : le gamma-chloropropyl-triméthoxy silane et analogues. Dans la fixation de la substance immunologiquement active sur le verre givré, l'agent de couplage dutype silane peut être utilisé seul ou avec un agent de réticulation. L'agent de réticulation peut être choisi en fonction du type de silane utilisé comme agentde couplage et du type de substance immunologiquement active devant être fixée. On peut utiliser n'importe quel agent de réticulation pnuvant se réticuler avec le silane utilisé comme agent de couplage et avec la substance immunologiquement active. Comme agent de réticulation, on peut mentionner les composés pouvant se réticuler avec les groupes amino, carboxyle ou thiol du silane utilisé comme agent de couplage et avec le groupe amino, carboxyle ou thiol de la substance immunologiquement active, tels que ceux susceptibles de créer une réticulation entre le groupe thiol et le groupe thiol ou entre le groupe amino et le groupe thiol.Des exemples de composés convenables pouvant créer une réticulation entre le groupe amino et le groupe amino sont les dialdéhydes aliphatiques (tels que le glyoxal, le malonaldéhyde, le succinaldéhyde ou le glutaraldéhyde) et les dichlorotriazines (tels que la 2-amino-4,6-dichloro-striazine), et analogues. Des agents de réticulation entre le groupe thiol et le groupe thiol sont, par exemple, les dimaléimides (tels que la N,N'-o-phénylènedimaléimide, et la N,N'-m-phénylènedimaléimide). Des agents créant une réticulation entre le groupe amino et le groupe thiol sont par exemple les esters du type maléimidocarboxyl-N-hydroxy-succinimide (tels que l'ester mmaléimidobenzoyl-N-hydroxysuccinimide et l'ester 4- (maléimido- méthyl)cyclohexane-1 -carboxyl-N-hydroxysuccinimide). Pour préparer les conjugués selon la présente invention par des procédés chimiques, il existe deux procédés 1) fixer la substance à activité immunologique sur la surface du verre givré par l'agent de couplage du type silane et 2) fixer la substance à activité immunologique sur la surface du verre givré par l'agent de couplage du type silane et l'a gent de réticulation. Conformément au premier procédé, on peut préparer le produit donjugué par exemple par le processus suivant : on fixe tout d'abord l'agent de couplage du type silane sur le verre givré en traitant ce dernier par l'agent de couplage de manière que cet agent réagisse avec le groupe silanol de la surface du verre givré, puis on fait réagir le produit intermédiaire résultant avec la substance à activité immunologique de manière à créer une liaison entre cette substance et le verre givré par I'intermédiaire de l'agent de couplage du type silane. Quand on utilise un agent de couplage du type silane contenant un groupe amino, il forme une liaison peptide avec le groupe carboxyle de la substance à activité immunologique.L'emploi d'-un agent de couplage du type silane contenant un groupe carboxyle conduit à la formation d'une liaison peptide avec le groupe amino de la substance à activité immunologique, l'emploi d'un agent de couplage du type silane contenant un groupe époxy provoque une réaction d'addition avec le groupe amino, carboxyle ou thiol de la substance à activité immunologique,l'emploi d'un agent de couplage du type silane contenant un groupe thiol conduit à la formation d'une liaison S-S avec le groupe thiol de la substance à activité immunologique, l'emploi d'un agent de couplage du type silane contenant un groupe haloalkyle provoque une réaction de substitution électrophile sur le groupe amino ou thiol de la substance à activité immunologique et l'emploi d'un agent de couplage du groupe silane contenant un groupe aldéhyde conduit à la formation d'un thioacétal ou d'un hémithioacétal avec le groupe thiol de la substance à activité immunologique. Du point de vue de la solidité et de liaison permanente de la substance à activité immunologique avec le verre givré, l'agent de couplage du type-silane contenant un groupe amino ou un groupe alcoxysilyle ou un groupe carboxyle et un groupe alcoxysilyle sont préférables.La réaction qui se produit généralement entre l'agent de couplage du type silane et la substance à activité immunologique est une réaction de formation de peptide et il est préférable d'utiliser en cette occasion un carbodiimide soluble servant d'agent de condensation et de déshydratation,tel que la N-éthyl-N'-diméthylaminocarbodiimide, la I-éthyl-3-diisopropylaminocarbodiimide ou la 1 -cyclohexyl-3- (2-morpholinoéthyl)-carbodiimide. Selon le second procédé, on peut préparer le produit conjugué par exemple par le processussuivant : en premier lieu, on fixe les agents de couplage du type silane sur le verre givré, puis on fait réagir le produit de réaction silane-verre avec l'agent de réticulation et enfin on fait réagir le produit intermédiaire résultant avec la substance à activité immunologique. Du point de vue de la solidité et de la permanence de la liaison entre la substance à activité immunologique et le verre givré, les agents de couplage du type-silane préférés sont les agents du type silane contenant des groupes amino et alcoxysilyle et plus spécialement aminoalkyl-trialcoxysilanes, et les agents de réticulation préféréssont les dialdéhydes aliphatiques et plus spécialement le glutaraldéhyde. La quantité de l'agent de couplage du type silane à utiliser dans les méthodes chimiques n'est p es critique et peut varier largement dans le cadre de l'invention. La proportion pondérale d'une solution de agent de couplage du type silane par rapport au verre givré peut être par exemple 30/100-1000/100, la solution ayant une concentration d'environ 0,01 à 50 vol.% et de préférence de 0,1 à 10 vol;%. La quantité d'agent de réticulation utilisée dans le second procédé n'est pas critique et peut également largement varier. La proportion en poids d'une solution d'agent de réticulation/verre givré peut être par exemple de 30/100 - 1000/100,la solution ayant une concentration d'environ 0,0001 à 50 % en poids et de préférence de 0,1 à 20% en poids. Les processus pour la fixation de la substance à activité immunologique sur le verre givré à l'aide de l'agent de couplage du type silane et au besoin de l'agent de réticulation peuvent être semblables à ceux qui sont connus, à l'exception du fait quel'on utilise comme vehicule du verre givré. Ainsi un exemple illustratif d'un tel processus dans lequel on fixe une substance à activité immunologique sur la surface du verre givré par l'intermédiaire d'un agent de couplage du type silane selon le premier procédé est le suivant. On immerge le verre givré dans une solution de l'agent de couplage du type silane ayant une concentration de 0,01 à 50 % en volume (de préférence 0,1 à 10% en volume) dans un solvant organique (tel que l'acétone ou le toluène), à une température de 00C à 80"C pendant 10 mn à 24 heures, pour permettreà l'agent de couplage de réagir avec le verre givré. Le verre givré ainsi traité est séparé du mélange réactionnel,puis lavé soigneusement, successivement avec du méthanol et de l'eau déionisée.A ce verre givré, on ajoute 10 à 1000 parties (et de préférence 50 à 300 parties) d'une solution de la substance à activité immunologique ayant une concentration de 0,001 à 40 g/100 ml (de préférence de 0,01 à 0,1 g/100 ml) pour 100 parties du verre givré et on laisse se dérouler la réaction à environ 0-40 C pendant 10 mn à 24 h (de préférence pendant 1 à 3 heures) de sorte que le verre givré et la substance à activité immunologique puissent être liés par l'intermédiaire de l'agent de couplage du type silane. Il est preférable d'utiliser une solution d'une carbodiimide soluble dans l'eau à une concentration de 0,1 à 10 g/ 100 ml pour faire réagir la substance à activité immunologique avec le verre givré sur laquelle a été fixé un agent de couplage du type silane portant un groupe amino ou carboxyle. On donne ci-après des exemples illustratifs de procédés dans lesquels on fixe la substance à activité immunologique sur la surface du verre givré avecl' aide d'un agent de couplage du type silane et un agent de réticulation conformément au second procédé. On;immerge le verre givré dans une solution del'agent de couplage du type silane ayant une con centration de 0,01 à 50% en volume (et de préférence de 0,1 à 105 en volume) dans un solvant organique (tel que l'acétone ou le toluène) à une température de 0 à 800C pendant 10 mn à 24 h de telle sorte que l'agent de couplage du type silane puisse réagir avec le verre givré et être fixé sur lui. On sépare ensuite le verre givré du mélange réactionnel et on le lave soigneusement successivement au méthanol et à l'eau déionisée.On immerge alors ce verre givré dans une solution aqueuse de l'agent de réticulation ayant une concentration de 0,0001 à 50% en poids (de préférence 0,1 à 20% en poids) à environ 0 à 400C pendant 30 minutes à 10 heures, de sorte que l'agent de réticulation soit fixé sur l'agent decouplage du type silane lequel a été fixé-au verre givré. Le verre givré ainsi traité est séparé du mélange réactionnel et est lavé soigneusement à l'eau déionisée.Au verre givré,on ajoute 10 à 1000 parties (de préférence 50 à 300 parties) d'une solution de la substance à activité immunologique ayant une concentration de 0,001 à 40 g/100 ml (de préférence 0,01 à 0,1 g/100 ml) pour 100 parties du verre givré , et on laisse la réaction se dérouler à environ 0 à 400C pendant 10 mn à 24h (de préférence 1 à 3 heures),à la suite de quoi la substance à activité immunologique est fixée sur le verre givré par l'agent de couplage et l'agent de réticulation. Les conjùgÜes substance à activité immunologique-verre obtenus selon l'invention peuvent habituellement contenir 0,1 à 1000bu, de préférence 50 à 500)4g(par gramme du verre givré) de la substance immunologique liée au verre. La quantité de l'agent de couplage du type silane fixé au verre givré dans la méthode chimique peut être par exemple de 10 5 à rmole (et de préférence 10 4 à 10 rmole) par gramme de verre. La quantité de ltagent de réticulation lié au produit conjugué dans le second modeest de préférence la quantité stoichiométrique nécessaire pour réticuler le groupe fonctionnel du silane au groupe fonctionnel de la substance immunologique mais peut varier par exemple-de 20 à 100% par rapport à la quantité stoichiométrique. Le produit conjuguésubstance immunologique active-verre givré préparé selon cette manière est stable et peut être stocké pendant plus d'une année dans une solution saline physiologique tamponnée au phosphate 0,01 M (pH 7,2) contenant 1% de nitrite de sodium et 1% d'albumine de sérum bovin, à 40C par exemple. Les produits conjuguéssubstance à activité immunologiqueverre givré selon ltinvention peuvent~être utilisés comme réactifs pour diagnostics pour l'analyse dessubstances physiologiquement actives des fluides corporels tels que l'urine et le sérum. Des exemples de ces substances physiologiquement actives susceptibles d'être analysées grâce aux produits conjugés selon l'in -vention sont les hormones telles que l'insuline, la gonadotropine, les 17-cétostéroides, l'hormone de croissance,la thyroxine, la triiodothyronine et l'hormone thyroido-stimulante; les protéines telles que l'IgA, l'IgG, l'IgE, l'TgM, l'alpha-fétroprotéine, la CEA et les protamines ; les éléments ou fractions antigènes des bactéries pathogènes, les virus et les protozoaires tels que le spectrocoque, le virus de l'hépatite, le virus de la rubéole, les Toxoplasma gondii et les parasites malariens; et les anticorps vis-à-vis des bactéries, des virus, des protozoaires, des médicaments etc... Les produits conjugués substance à activité immunologiquement-verre givré selon l'invention peuvent être utilisés pour l'analyse des substance physiologiquement actives des fluides corporels par des méthodes classiques de RIA ou de EIA en utilisant des systèmes solides. Des exemples typiques de ces méthodes sont (1) la méthode de réaction compétitive , consistant à faire réa gir une substance à analyser avec une certaine quantité d'une substance immunologiquement active marquée par enzyme ou par isotope (cette substance étant la même que celle à soumettre à l'analyse) compétitivement vis-à-vis d'un pro duitconjugué substance à activité immunologiquement-verre givré dans laquelle unantigène ou un anticorps vis- à-vis de la substance à analyser est fixé sur du verre givré, puis à déterminer l'activité enzymatique ou la radio-activité de lasubstance qui a été soit fixée, soit non fixée sur le pro duitconjugué substance à activité immunologique-verre givré et à comparer le résultat de cette détermination avec les résultats obtenus par le même processus en utilisant les procédés connus de la même substance que celle qui doit être analysée pour obtenir un résultat d'analyse. (2) la méthode en sandwich consistant à faire réagir une subs tance àsoumettre à l'analyse avec un conjugué substance à activité immunologique-verre givré dans laquelle un antigène ou un anticorps vis-à-vis de la substance à analyser est fixée sur du verre givré puis à faire réagir la substance fixée avec une substance à activité immunologique (antigène ou anticorps vis-à-vis de la -substance à analyser) marquée par une enzyme ou un isotope, puis à déterminer l'activité enzymatique ou la radio-activité de la substance qui a été fixée vis-à-vis du produit conjugué substance à activité immu nologique-verre givré et à comparer le résultat de la déter mination avec les résultats obtenus par le même processus en utilisant des quantités connues de la même substance que celle à soumettre à l'analyse pour obtenir le résultat de l'analyse et (3) une méthode qui consiste à faire réagir une substance à soumet tre à l'analyse et une certaine quantité d'une substance à activité immunologique marquée à l'enzyme ou à l'isotope(cet te substance étant initialement la même que celle à soumettre à l'analyse) compétititivement avec un antigène ou un anti corps vis-à-vis de la substance à essayer, puis à faire réa gir l'antigène ou l'anticorps fixé avec un produit conjugué substance à activité immunologique-verre givré dans lequel un anticorps vis-à-vis de l'antigène ou de l'anticorps est fixé sur un verre givré, pour déterminer l'activité enzyma tique ou la radio-activité de la substance qui a été fixée ou qui n' a pas été fixée vis-à-vis de ce produit conjugué substance à activité immunologique-verre givré, et à comparer le résultat de la détermination avec les résultats obtenus par le même processusen utilisant des quantités connues de la même substance que celle à soumettre à l'analyse pour obtenir le résultat d'analyse. Naturellement les méthodes à appliquer aux produits conjugués selon l'invention ne sont pas limités à celles qui sont énumérées. Les produits conjuguéssubstance à activité immunologiqueverre givré selon la présente invention peuvent être utilisés à la place de diverses substances immunologiquement actives insolubilisées dans le EIA et le RIA. Ainsi, les produits conjugués selon l'invention peuvent être utilisés par exemple à la place de: (1) l'anti-CEA fixés tube de polystyrène dans la méthode dé crite par S.Hammarstrom et al dans Proc.Nat.Acad.Sci.USA,72 1528 (1975); (2) l'anti-lapin gamma G fixé sur cellulose ou l'anti-HCG fixé sur cellulose dans la méthode décrite par B.K.Van Weeman et al. dans FEBS Letters , 15, 232 (1971); (3) l'anti-AFP fixé sur tube de polystyrène dans la méthode décri te par L.Belangard et al. dans Clin.Chim.Acta, 48, 15 (1973); (4) l'anti-HBS fixé sur plaque d'hemagglutination sur polystyrène dans la méthode décrite par G.Wolters et al dans J.Clin.Path, 29, 873 (1976); (5) l'anti-IgE fixé sur tube de polystyrène dans la méthode dé crite par D.R.HOFFMAN dans J.Allergy Clin.Immunol,51,303 (1973); (6) l'anti-insuline fixée sur dextrane dans la méthode décrite par K.Kato et al dans J.Biochem, 78, 235 (1975); (7) l'anti-corps spécifique fixésur tube de polystyrène dans la méthode décrite par SITE. Salmon dans J.Immunol.103,129(1969)et (8) l'anti-hormone de croissance humaine fixée sur disque de polytétrafluoroéthylène-g-isothiocyanatostyrène dans la métho- de décrite par K.Catt. dans J.Lab.Clin.Med,70, 820 (1970). Les produits conjugués substance à activité immunologique-verre givré selon l'invention contiennent de grandes quantités de substancesà activité immunologique qui sont fixées de fa çon ferme etstable et, quand elles sont utilisées comme substances à activité immunologique insolubilisées, assurent une sensibilité et une précision très élevées dans l'analyse,aussi bien qu'un très large éventail de domaines d'analyse ainsi que d'autres avantages, tels que le fait qu'ils peuvent être stockés pendant une période de temps prolongée et manipulés aisément au cours de l'analyse ainsi que le fait qu'ils peuvent être aisément préparés commercialement.Ainsi, ils sont très utiles dans le domaine de la médecine de diagnostic. Au surplus les produits conjugués substance à activité immunologique-verre givré selon l'invention donnent lieu à peu d'adsorption des réactifs d'analyse, colorants ou pigments ainsi que des substances dans lesfluides corporels, susceptibles de provoquer des interférences dans l'analyse et de gêner l'activité des produitsconjugués ; par suite, ils assurent une meilleure précision dans l'analyse (en particulier dans l'EIA) par comparaison avec les produits coniuguéssubstance à activité immunologique fixés sur verre poreux qui conduisent à une adsorption d'une plus grande quantité de ces substances interférentes .Au surplus, les produits conjugués substance à activité immunologique-verre givré selon l'invention ayant des tailles relativement plus grandes (diamètre maximum habituellement de 1 à 20 mm et diamètre minimum d'environ 1 mm ou plus),peuvent être facilement manipulés (en particulier ils peuvent être mis ou pris dans des tubes à essai par des pinces) tandis que les produitsconjugués qui sont fixés sur verre poreux sont généralement beaucoup plus petits et sont difficiles à manipuler. L'invention venant d'être décrite d'une manière générale,on va maintenant la comprendre mieux grâce à la référence à un certain nombre d'exemples spécifiques qui sont donnés ici à titre d'illustration et n'ayant bien entendu aucun caractère limitatif. Les verres givrés utilisés dans les exemples suivants sont les suivants (lr Verre givré I (perles de verre givré par méthode physi que ). On sable 300 perles de verre (d'un diamètre de 6 mm) par pul vérisation avec des meules d'émeri de 60 mailles (matériau abrasif) sur les perles de verre sous une pression d'air de 5 kg/cm2 pendant 15 mn. On lave ensuite l'émeri qui adEere aux perles de verre pour obtenir des perles givrées ayant des surfaces uniformément givrées et un degré de givrage de 4,5 déterminé par la méthode suivante Mesure du degré de givrage du verre givré On immerge 50 échantillons de perles de verre givré et 50 échantillon de perles de verre non givré (ayant la même taille et la même forme) dans 25 ml d'une solution à 10% de gamma aminopropyl-triéthoxysilane dans l'acétone. Après incubation à 250C pendant une heure, on filtre ces perles et on les lave soigneusement à l'eau déionisée.On immerge alors 100 échantillons de ces perles de verre (au total) dans 25ml d'une solution aqueuse à 20% de glutaraldéhyde. Après incubation à 25"C pendant une heure, on lave soigneusement ces perles traitées à l'eau déionisée. Les perles de verre ainsi traitées sont ensuite immergées dans 25 ml d'une solution aqueuse contenant 12,5 mg de glucose oxydase (GOD) (activité enzymatique de 34,0 U/ml). Après incubation à 250C pendant une heure puis à 4"C pendant 15 heures, on lave ces perles à l'eau déionisée pour obtenir un produit conjugué-perles de verre givré-GOD et un produit conjugué GOD-perles de verre non givré. Dans chacun de 10 tubes à essai, on place une perle de GOD-verre givré- et dans chacun de 10 autres tubes à essai, on place. une perle de GOD-perle de verre non givré. Dans chacun de ces 20 tubes à essai, on introduit 2 ml d'eau déionisée, on agite le contenu en utilisant un mélangeur et on aspire le liquide surnageant. On répète deux fois ce processus de lavage. On ajoute dans chaque tube à essai 0,3 ml d'une solution tampon à l'acétate de sodium 0,01 M (pH 5,1), 2,0 ml d'une solution MBTH-DEA (10 mg d'éthylènediaminetetraacetate de sodium, 1,7 mg de chlorhydrate de 3-méthoxy-benzothiazolinone-hydrazone, 0,004 ml de N,N-diéthylaniline dans 100 ml d'une solution aqueuse d'acide acétique à 0,îM )et 0,5 ml d'une solution de péroxydase (POD) (60 U.de POD dans îml d'une solution aqueuse à 0,1 M d'acétate de sodium).Après pré-incubation à 37 Cpen- dant 5 mn, on ajoute dans chaque tube à essai 0,5 ml d'une solution à 15g/100 ml de béta-D-glucose dans une solution à 0,1M . Après incubation avec agitation à 370C pendant 6mn exactement, on ajoute dans chaque tube à essai îml d'acide chlorhydrique à 0,5 N pour stopper la réaction. Qn mesure l'absorbance à 590 nm du liquide surnag-eant résultant dans chaque tube à essai. On calcule-le degré de givrage selon l'équation (1), en utilisant la moyenne des absorbances des 10 liquides surnageants des produits conjuguésGOD-verre givré et des produits conjuguésGOD-verre non givré comme activités enzymatiques. (2) Verre givré II (tubes de verre givré par une méthode chimique) On immerge 100 petits tubes de verre (6 mm de diamètre exté rieur, 4 mm de diamètre intérieur et 10 mm de longueur)dans 200 ml d'une solution givrante contenant 2 ó d'acide fluorhy drique et 1% de fluorure d'ammonium à température ambiante pendant une heure. On prélève alors les tubes de verre et on les lave à l'eau pour obtenir des tubes de verre givré ayant des surfaces uniformément givrées et un degré de givrage de 3,2 , déterminé par une méthode semblable à celle décrite ci-dessus en (1). EXEMPLE 1 Préparation d'un produit conjuguésubstance à activité immunologique -verre givré On immerge les 100- tubes de verre givré (verre givré II) dans 100 ml d'une solution à 0,5 de gamma-aminopropyl-triéthoxysilane dans l'acétone. Après incubation à température ambiante pendant 10 heures, on filtre les tubes et on les lave au méthanol puis à l'eau. Ces 100 tubes de verre givré, sur lesquels le silane contenant des groupes aminocomme agent de couplage a été fixé sont immergés dans 40 ml dtune solution saline normale.On y ajoute une solution de 50 mg de IgG humain dans 10 mld 'une solution saline physiologique et une solution contenant 0,2% de N-éthyl-N'-diméthylaminopropylcarbodiimide dans 10ml de solution saline physiologique.Après traitement en immersion à 370C pendant 2 heures, on lave les tubes successivement à l'eau, avec Unesolution~aqueuse1M d'acide propionique et à l'eau jusqu a ce que l'on ne åétecte plus de protéines dans les lavages.On obtient ainsi un produitconjugué ayant une teneur en protéines fixées de 63fg/g de verre, déterminée comme suit Mesure de la teneur en protéine fixée Belon la méthode décrite par S.Moore et al dans Methods in Enzymology 6, 819 (1963), Oll immerge 10 échantillons du produit coniuguéprotéine-verre dans une solution d'acide chlorhydrique 6N et on scelle le système sous pression réduite puis on le chauffe à 1100C pendant 30 heures. mesure la teneur enprotéines par la coloration à la nihydrine. EXEMPLE 2 Préparation d'un produit conjuguésubstance immunologiquement active-verre givré On immerge 200 perles de verre givré (I) dans 100 ml d'une solution à 0,5t de gamma-aminopropyl-triéthoxysilane dans le toluène et on soumet à l'ébullitionpendant 7 heures. On filtre les perles et on les lave au méthanol et à l'eau. Aux 200 perles de verre givré sur lesquelles a été fixé l'amino-silane comme agent de couplage, on ajoute100 ml d'une solution aqueuse à 2% de glutaraldéhyde. Après repos pendant 2h à 40C, on lave les perles à l'eau déionisêe, 4 s 6 fois jusqu'à ce qu'elles ne transportent plus l'odeur de glutaraldéhyde.On immerge alors les 200 perles de verre givré dans 40 ml d'une solution saline normale.On y ajoute une solution de 50 mg d'anti-insuline humaine (lapin) dans 10 ml d'une solutzon~saline physiologique. Après avoir laissé la réaction se dérouler à 300C pendant 2h, on lave soigneusement les perles à l'eau jusqu a ce qu'on ne détecte plus de protéines dans les lavages. On obtient ainsi un produit conjugué portant une teneur enprotéines fixéessur le verre de 148pjZg de verre, par mesure de façon semblable à l'exemple 1. EXEMPLE 3 Analyse d'une substance à activité immunologique (insuline humaine) au moyen du'un produit conjugué substance à activité immunologique-verregivré (sandwich EIA) On réalise une analyse del'insuline par la méthode à l'EIR en sandwich, en utilisant des produits conjugués anti-insuline humaine (lapin)-perles de verre givré, préparés à l'exemple 2. On place ainsi dans chacun d'une série de tubes à essai (0,9 x 10 cm) 0,3 ml d'une solution tampon à 0,01 M de phosphate de sodium (pH 7,3) contenant 0,85% de chlorure de sodium et 0,1% d'albumine de sérum bovin (cettesolution étant désignée par "solution tampon A" ci-après ). On place danschaque tube à essai l'une des perles de produit coniugué anti-insuline humaineverre givré préparé à l'exemple 2. On prépare diverses dilutions d'insuline humaine avec la solution tampon A et on les ajoute dans les tubes à essai (0,1 ml/tube). Après avoir secoué à température ambiante pendant 1 h, on ajoute dans chaque tube à essai 0,1 ml d'anti-insuline humaine marquée à la phosphatase.Après encore secouage et incubation pendant 1 h, on ajoute dans chaque tube à essa-i environ 5 ml de solution saline normale, on agite le contenu du tube en utilisant un mélangeur et on aspire le liquide surnageant avec un aspirateur. On répète à quatre reprises le processus de lavage. On ajoute ensuite dans chaque tube à essai 2- ml d'un réactif constitué par une enzyme sur substrat (contenue dans un nécessaire d'analyse ALP, commercialisé par la Chugai Pharmaceutical CQ ltd). On provoque l'incubation ou la réaction à 37 C pendant 30 mn en secouant. On ajoute ensuite dans chaque tube à essai 2,0 ml d'une solution colorante (contenue dans le même nécessaire d'analyse ALP).Après encore une incubation additionnelle avec secouage à 370C pendant 30 mn, on mesure l'absorbance à 57 nm de manière à déterminer l'activité enzymatique. La figure 1 du dessin annexé représente la courbe d'analyse standard pour l'insuline humaine quand on utilise le produit con gué anti-insuline humaine (lapin)-perle de verre givré. EXEMPLE 4 Evaluation des qualités du produitconju-guç substance à activité immunologique-verre givré On prépare un produit conjugué anti-insuline humaine (lapin) -verre givré cnnformément à l'exemple 2 mais en utilisant des perles de verre non givré (6 mm de diamètre) et on le compare au produit conjugue anti-insuline humaine-verre givré préparé à l'exemple 2 en ce qui concerne la quantité de protéine fixée. La teneur en protéine fixée est déterminée conformément au procédé décrit à l'exemple 1. Les résultats sont réunis au tableau î ci-après. TABLEAU 1 Echantillon Protéine fixée( jg de perles de verre Produit conjuguéanti-insuline 148 humaine(lapin)-perle de verre givré Produit C*Onjuguéanti-insuline 32 humaine (lapin) -perle de verre non givré Comme il ressort dutableau 1, une plus grande quantité de substance à activité immunologique peut être fixée sur des perles de verre givré que sur des perles de verre non givré. EXEMPLE 5 Evaluation des qualités du produit conjuguésubstance à activité immunologique-verre givré-2 On prépare un produitc-onjugué anti-insuline humaine (lapin) -perles de verre non givré conformément à l'exemple 2 sauf que l'on utilise des perles de verre non givré. En utilisant ce produit conjugué et le produit conjugué anti-insuline humaine lapin-perle de verre givré de l'exemple 2, on détermine l'insuline humaine conformément à la méthode de l'exemple 3 et on compare les deux produits conjugués en ce qui concerne la sensibilité, l'intervalle d'essai et la précision, Les résultats sont reproduits au tableau 2. TABLEAU 2 Analyse de l'insuline Analyse de l'in humaine avec un pro- suline humaine duitconjugué anti- avec un produit insuline humaine(lapin) conjuguéanti- perle de verre givré insuline humaine (lapin)-perle de verre non givré Sensibilité (PqU/ml) 0,2 20 Intervalle d'essai( U/ml) 0,2 - 450 20 - 250 Précision(quand on soumet 1185 ssU/ml 110± U/ml à l'analyse 12QU2/ml d'in- (coefficient de (Coe ficient suline humaine variation::4,2%) de variation = 27,3%) Comme on peut le voir du tableau 2, le produit conjugué substance à activité immunologique-perle de verre givré prépare à partir de perles de verre givré est de loin supérieur en sensibilité et en intervalle d'essai aussi bien qu'en précision à celui préparé avec les perles de verre non givré. EXEMPLE 6 Préparation d'un produitconjuguésubstance à activité immunologiqueverre givré (10) Réduction de l'anti alpha-fétoproétine humaine (anti AFP humaine) A 10 ml -d'une solution aqueuse de 100 mg d'anti AFP humaine (lapin)(DAKO-Immunoglobulins Ltd,Danemark ), on ajoute 1 ml d'une solution aqueuse de 0,1 M de 2-mercaptoéthylamine et on poursuit l'incubation à 370C pendant 90 mn. L'anti AFP humaine ainsi réduite est séparée et purifiée: sur une co lonne de Séphadex G-25 (1 x 40 cm) tamponnée au tampnn d'acé tate de sodium 0,1 M (pH 5,0). (20) Préparation d'un produitconjugué substance à activité immu- nologique (ànti AFP humaine)--perlesde verre givre On immerge 200 perles de verre givre (I) dans 100 ml d'une solution à 0,5t de gamma-mercaptopropyl-triméthoxysilane dans le toluène et on laisse la réaction se dérouler sous reflux pendant 8 heures.On filtreles perles et on les lave à méthanol puis à l'eau. Aux 200 perles de verre givré sur lesquelles on a fixé le silane contenant des groupes thiol comme agent de couplage, on ajoute 100 ml d'une solu tion saturée de N,N'-o-phénylènedimaléimide dans une solu tion tampon à 0,1 M d'acétate de sodium (pH 5,0). On poursuit l'incubation à 300C pendant 2 heures.On lave les perles à quatre reprises avec de l'eau déionisée. Les 200 perles ainsi traitées sont alors immergées dans 90 ml d'une solution tampon à l'acétate de sodium 0,1M (pH 5,0) et on ajoute 50 mg de l'anti AFP humain réduit préparé dans l'étape (1) ci-dessus dans 10 ml de tampon à l'acétate de sodium 0,1M (pH 5,0). Après réaction à 300C pendant 2 heures, on lave soigneusement les perles de verre givré à l'eau jusqu a ce que l'on ne puisse plus détecter deprotéines dans les lavages. On obtient ainsi un produitconjugué anti AFP humain-verre givré ayantune teneur en protéine fixée de 103 g par gramme de verre déterminée par la méthode décrite à l'exemple 1. EXEMPLE COMPARATIF 1 En suivant le processus de l'exemple 6, mais en utilisant des perles de verre non traité (non--givrép(de 6 mm de diamètre),on obtient un produitconjugué anti AFP humaine-perlesde verre non givré ayant une teneur en protéine de 19 g/gramme de verre, déter- miné par la méthode décrite à l'exemple 1. EXEMPLE 7 Analyse d'une substance à activité physiologique (alpha-féto protéine-humaine) par application d'un produit cOnjuguésubstance à activité- immunologique-verre par la méthode de ETA en sandwich Enutilisant le produitconjugué anti-AFP humaine-perlesde verre givré et le produitconjugué anti-AFP humaine-perlesde verre non givré ,on réalise l'analyse de l'AFP humaine en suivant la de l'EIA en sandwich. On placedans chacun d'une sériede tubes à essai (0,9 x 10 cm), 0,3 ml de la solution tampon A de l'exemple 3 et une perle du produit sonjuguéanti-AFP humaineperlesde verre givré de l'exem ple 6 ou du produit conjugùé anti-AFP humaine- perl-ede de verre non givré de l'exemple comparatif 1. On prépare diverses dilutions d'AFP humaine avec la solution tampon A et on en ajoute des portions de 0,1 ml dans chacun des tubes à essai. On réalise l'incubation à température ambiante pendant 1heure. Après la réaction, on ajoute environ 5 ml d'une solution saline physiologique, on agite le mélange avec un mixeur et on aspire le liquide surnageant avec un aspirateur pour assurer le lavage de la perle.On ajoute alors dans chaque tube à essai 0,1 ml d'anti AFP humaine marquée à la péroxydase et 0,3 ml de la solution tampon A et on réalise l'incubation à température ambiante pendant 1 heure. Après la réaction, on ajoute environ 5ml d'une solution saline physiologique, on agite le mélange en utilisant un mixeur et on aspire le liquide surnageant en utilisant un aspirateur pour assurer le lavage de la perle. On ajoute dans chaque tube à essai des réactifs aux enzymes sur substrat 2,5 ml d'une solution fraîchement préparée d'acide 5-aminosalicylique (0,6mg/ ml)et de péroxyde d'urée (0,2 mg/ml) dansun tampon au phosphate de sodium 0,03 M (pH 6,09 ors .Après une heure d'incubation à 370C, on ajoute dans chaque tube à essai une solution aqueuse à 10% d'azide de sodium pour interrompre la réaction et on mesure l'absorbance à 500 nm et on la relie à l'activité enzymatique. La courbe d'essai standard pour l+APP humaine quand on utilise le produit conjugué à anti-AFP humaine sur perles de verre givré et quand on utilise le produit conjugué à anti-AFP humaineperles de verre non givré- est représentée à la figure 2 par la ligne en traits pleins et la ligne en traits interrompus respectivement. Les deux produits conjuguéssont comparés pour ce qui concerne la sensibilité, la largeur de plage d'essai et la précision. Les résultats sont réunis au tableau 3. TABLEAU 3 Analyse d'AFP humaine Analyse d'AFP hu avec un-produit conju- maine avec un pro gué anti AFP humaine duit conjuguéanti perles de verre givré AFP humaine-perles de verre non givré Sensibilité (ng/ml) 0,5 10 Intervalle d'essai 0,5 - 500 10 - 100 (ng/ml) Précision(quand on 79- 3 ng/ml 76± 28 ng/ml utilise 80ng/ml par (coefficient de (coefficient de AFP humaine variation=3,8%) variation=36,8%) il est clair de la figure 2 et du tableau 3 que le produit conjugué substance à activité immunologique-verre givré préparé en utilisant les perles de verre givré est bien supérieur en sensibilité, en intervalle d'essai et en précision que celui préparé avecles perles de verre non givré. REVENDICATIONS 1. Produit conjuguésubstance à activité immunologique-verre caractérisé en ce qu'il se compose d'une substance à activité immunologique fixée par voie chimique ou physique sur du verre givré. 2. Produitconjugué selon la revendication l,caractérisé en ce que la substance à activité immunologique et le verre givré sont fixés grâce à un agent de couplage du type silane et si nécessaire un agent de réticulation. 3. Produitconjugué selon la revendication 2,caractérisé en ce que l'agent de couplage du type silane possède à la foisun groupe fonctinnnel réactif avec un groupe silanol et un groupe fonctionnel réactif avec un groupe amino, carboxyle ou thiol. 4. Produit conjugué selon la revendication 3,caractérisé en ce que le groupe fonctionnel réactif avec un groupe silanol est un groupe alcoxysilyle ou halosilyle. 5. Produit conjuguéselon la revendication 3,caractérisé en ce que le groupe fonctionnel réactif avec un groupe amino, carboxyle ou thiol est un groupe carboxyle, époxy, haloalkyle, aldéhyde,amino,thiol,isocyanate,carboxylate,imino ou nitrile. 6. Produitconjugué selon l'une quelconque des revendications 2 à5, caractérisé en ce que agent de couplage du type silane est un silane contenant un groupe alcoxy silyle possèdant au surplus un groupe amino,thiol,époxy, carboxyle ou haloalkyle. 7. Produitconjugué selon'une quelconque des revendications 2 à 6,caractérisé en ce que l'agent de réticulation est un composé susceptible de provoquer une réticulation entre un groupe ami no,carboxyle ou thiol du silane et un groupeamino,carboxyle ou thiol la substance à activité immunologique 8. Produit conjuguéselon l'une quelconque des revendications 2à7, caractérisé en ce que l'agent de réticulation est un composé susceptible de provoquer une réticulation entre des groupes aminés, des groupes thiol ou entre un groupe amino et un groupe thiol. 9. Produit cenjuguéselon l'une quelconque des revendications 2 à 8, caractérisé en ce que l'agent de réticulation est un dialdéhyde aliphatique, une dichlorotriazine, un composé dimaléimide ou un ester maléimidocarboxyl-N-hydroxysuccinimide. 10. Produitconjugué selon l'une quelconque des revendications 1 à 9,caractérisé en ce que la substance à activité immuno logique est un antigène. 11. Produitconjugué selon la revendication 10,caractérisé en ce que l'antigène est une hormone,une protéine ou un composant antigène d'un pathogène. 12. Produitconjugué selon la revendication 11,caractérisé en ce que le produit antigène du pathogène est une bactérie pathogène, un virus ou un protozoaire. 13. Produitconjugu-é selon l'une quelconque des revendications 1 à 9,caractérisé en ce que la substance àactivité immunologi que est un anticorps. 14. Produit conjugué selon la revendication 13,caractérisé en ce que l'anticorps est un antisérum obtenu par immunisation d'un mammifère au moyen d'un antigène. 15. Produit conjuguéselon l'une quelconque des revendications 1 à 14,caractérisé en ce que le verre givré est un verre givré physiquement ou chimiquement. 16. Produitconjugué selon l'une quelconque des revendications 1 à 15,caractérisé en ce que le verre givré a la forme d'un corps en verre cylindrique, sphérique, cubique ou tubulaire. 17. Produitconjugué selon l'une quelconque des revendications 1 à 16,caractérisé en ce que le verre givré est constitué par un corps en verre ayant un diamètre maximum de 1 à 20 mm et un diamètre minimum de 1 mm ou plus. 18. Produitconjugué selon l'une quelconque des revendications là 17,caractérisé en ce que le verre givré possède un degré de givrage de 1,5 à 10,0. 19. Procédé pour la préparation d'un produitconjugué substance à activité immunologique-verre caractérisé en ce qu'il consiste à faire réagir une substance à activité immunologique et un verre givré avec un agent de couplage du type silane et au besoin avec un agent de réticulation. 20. Procédé selon la revendication 19,caractérisé en ce qu'il consiste à faire réagir un verregivré avec un agent de coupla ge du type silane puis à faire réagir le produit résultant avec une substance à activité immunologique et au besoin par l'intermédiaire d'un agent de réticulation. 21. Procédé pour l'immobilisation d'une substance à activité im munologique caractérisé en ce qu'il consiste à faire réagir une substance àactivité immunologique avec du verre givré traité par un agent de couplage du type silane et au besoin par l'intermédiaire d'un agent de réticulation. 22.Réactif pour diagnostic caractérisé en ce qu'il consiste en unproduit conjugué substance à activité immunologique-verre comprenant une substance à activité immunologique fixée sur du verre givré. 23.Réactif selon la revendication 22,caractérisé en ce que le réactif est utîlisépourl'analyse d',une substance physiologi quement active d'un fluide corporel. 24.Procédé pour l'analyse d'une substance physiologiquement acti ve dans un fluide corporel en utilisant comme système en phase solide un produit conjugué constitué par une substance immuno logiquement active fixée sur du verre givré. 25.Procédé selon la revendication 24,caractérisé en ce que l'analyse est réalisée par enzyme-immuno-essai ou radio immuno-essai