Brevet FR2451194A1 — publié le 19801010

La présente invention a pour objet un nouveau médicament et les compositions pharmaceutiques le contenant. L'invention a plus précisément pour objet un nouveau médicament permettant de traiter, à titre prophylactique ou à titre curatif, les diarrhées aiguës et notamment le choléra. Le médicament de l'invention est caractérisé par le fait qu'il est constitué d'un support sur lequel est fixé un ganglioside ou un dérivé de ganglioside doué d'affinité pour les toxines produites par les bactéries responsables des diarrhées et en particulier pour la toxine cholérique. Les supports utilisables sont tous ceux qui sont compatibles avec des utilisations par voie orale, qui possèdent une affinité forte, de préférence irréversible pour les gangliosides. Ils doivent présenter de préférence une surface spécifique élevée (utilisation de supports poreux). Ils doivent en outre permettre un contact satisfaisant entre le ganglioside et les toxines à neutraliser. Les supports sont choisis par exemple dans le groupe constitué par : le charbon activé, le latex, la cellulose modifiée ou non, et les supports minéraux poreux tels que la silice, l'alumine, l'oxyde de titane, ou leurs dérivés naturels ou synthétiques tels que des verres, des silicates, le kaolin, etc... De préférence, le support est le charbon activé de qualité pharmaceutique, et en particulier le charbon commercialisé sous la dénomination ACTI-CARBONE WL 3S. D'une manière générale, tous les charbons de qualité pharmaceutique peuvent convenir. On sait que parmi les divers gangliosides, le ganglioside G1 et certains de ses dérivés sont doués d'une affinité de type biochimique forte et spécifique pour les toxines cholériques et les toxines structurellement apparentées. Cette affinité est également observée avec certains dérivés du ganglioside GM1 C'est en particulier le cas du lysoganglioside GM1. Le lysoganglioside GM1 est obtenu par hydrolyse alcaline du ganglioside selon le procédé décrit par HOLMGREN, MANSSON et SVENNERHOLM, Medical Biology (1974), 52, 229-233. Cette hydrolyse alcaline a pour but de transformer les deux fonctions N-acétyle et la fonction N-acyle du ganglioside GM1 en fonction amine NH2. D'autres dérivés de gangliosides ont également une affinité pour la toxine cholérique. Dans la présente demande, on appellera par convention "dérivé du ganglioside GMl" ou GM1, tout dérivé de ganglioside qui a une affinité pour la toxine cholérique, et notamment les produits résultant d'une hydrolyse partielle ou totale des groupements N-acyle ou N-acétyle en groupements -NH2, du ganglioside GMl1 mais aussi les mono- ou a-sialo gangliosides résultant du traitement acide des gangliosides ou de leurs dérivés (notamment de leurs dérivés résultant de l'hydrolyse totale ou partielle des groupements N-acyle ou N-acétyle). On a en outre découvert que certaines bactéries responsables de diarrhées aiguës, et en particulier certaines souches de Escherichia coli, sont susceptibles de libérer des entérotoxines qui peuvent se lier aux dérivés de gangliosides, en particulier au ganglioside GMi. Généralement, le médicament de l'invention contient de 1 à 20 micromoles environ, et en particulier de 3 à 10 micromoles environ, de gangliosides ou de dérivés de gangliosides par gramme de support. Le support est généralement sous forme d'un matériau particulaire. Les dimensions des particules du matériau support peuvent varier par exemple de 0,1 à 1000 micromètres. L'invention a également pour objet un procédé de préparation du médicament tel que défini précédemment. Ce procédé est caractérisé par le fait que l'on fixe le ganglioside G et/ou ses dérivés sur le support. Cette fixation peut être réalisée soit par l'établissement d'une liaisonchimique, soit en mettant à profit un phénomène d'affinité quelconque, par exemple un phénomène d'adsorption. Dans ce dernier cas, il suffit de mettre en contact le support avec une solution de gangliosides ou de dérivés de gangliosides. Une telle solution de gangliosides ou de dérivés de gangliosides peut être notamment obtenue selon le procédé décrit dans la demande de brevet français nO 76.23176. Après un temps de contact suffisant pour coupler le ganglioside au support, on sépare le produit couplé par centrifugation puis on lave le précipité obtenu. En variante, on peut, par exemple avant centrifugation, transformer le ganglioside en un autre dérivé de ganglioside, notamment par hydrolyse acide qui permet de transformer la majorité des polysialogangliosides en monosialogangliosides. Généralement, la fixation du ganglioside ou de ses dérivés sur le support est suffisamment résistante. Elle peut éventuellement être complétée par une réaction chimique de couplage. En ce qui concerne les particules de charbon actif, la simple fixation par adsorption est suffisante. Le ganglioside G ou ses dérivés est facilement adsorbé. Pour fixer le ganglioside GM1 sur des particules de latex, on opère à pH alcalin, alors que ce pH alcalin n'est pas nécessaire pour coupler le lysoganglioside GM1. Lorsque le latex est porteur de fonctions NH2, il est utile de le prétraiter avec un dérivé carbonylé, un tel prétraitement favorisant la fixation du ganglioside ou de ses dérivés. Comme indiqué ci-dessus le médicament de l'invention possède des propriétés pharmacologiques intéressantes qui permettent de l'utiliser notamment par voie orale, dans le traitement préventif ou curatif du choléra et d'autres diarrhées aiguës. On a en effet découvert que le médicament de l'invention pouvait être utilisé par voie orale et qu'il permettait de fixer la toxine cholérique ainsi que d'autres toxines bactériennes, éventuellement présentes dans l'intestin. On sait que le ganglioside GM1 et ses dérivés ont une affinité notamment pour la toxine cholérique. Toutefois, une utilisation thérapeutique de cette affinité n'était pas évidente, car il fallait trouver un mode d'administration particulier permettant d'introduire le GM1 sous une forme non soluble, dans l'intestin, de façon à ce que le GM1 ne soit pas adsorbé, ou absorbé par les cellules de la paroi intestinale, ce qui favoriserait au contraire l'action de la toxine. I1 était donc particulièrement important de trouver une forme d'administration qui permettait de fixer solidement le GM1 sur son support insoluble, tout en gardant accessibles les sites actifs nécessaires à la neutralisation de la toxine. On a trouvé que ces conditions étaient bien réunies dans le médicament de l'invention. Ce médicament est stable et la liaison support-ganglioside résiste à un traitement acide, à l'ébullition en milieu aqueux acide, et à l'action des sels biliaires. Le médicament de l'invention est donc compatible avec une utilisation thérapeutique par voie orale, et manifeste une forte affinité pour les toxines mentionnées ci-dessus. La présente invention a également pour objet une composition pharmaceutique caractérisée par le fait qu'elle renferme comme principe actif un médicament tel que défini précédemment. La composition pharmaceutique de l'invention peut être constituée par le médicament défini précédemment, sans excipient. Toutefois, elle contient généralement, en outre, un excipient permettant de la mettre sous une forme galénique compatible avec l'administration par voie orale. De préférence, la composition pharmaceutique de l'invention contient de 0,1 à 20, et en particulier de 0,1 à 10 micromoles environ de gangliosides ou de dérivés de gangliosides par gramme de composition. Ces compositions peuvent se présenter notamment sous la forme de paquets ou de sachets de poudre, de cachets, de gélules, de granulés, de comprimés (à croquer, à avaler ou à dissoudre dans de l'eau), de suspensions buvables ou de capsules molles. La composition pharmaceutique de l'invention peut également contenir en outre au moins un produit actif choisi parmi des antiseptiques intestinaux (benzonaphtol, hexamine, quinoléine), des antibiotiques, des antispasmodiques, etc... La composition pharmaceutique de l'invention peut également contenir en outre des susbtances tensioactives, physiologiques ou non, permettant d'assurer une meilleure répartition du médicament dans le tube digestif et donc d'accroitre son efficacité. Ces compositions pharmaceutiques sont préparées selon les techniques usuelles de fabrication des formes galéniques. Lorsque le support est le charbon activé, la fabrication des formes galéniques est analogue à la fabrication des formes d'administration contenant le charbon activé seul. En particulier, les comprimés sont de préférence obtenus en comprimant un granulé contenant un liant et d'autres excipients, encore à l'état humide puis en séchant les comprimés ainsi préparés. L'invention a également pour objet le procédé de préparation des compositions pharmaceutiques telles que définies ci-dessus. Ce procédé est principalement caractérisé par le fait que l'on mélange le médicament de l'invention, les autres principes actifs, éventuellement présents, et l'excipient, puis que l'on donne à la composition obtenue la forme désirée, selon les méthodes usuelles. Comme indiqué ci-dessus, le médicament de l'invention, présenté notamment sous la forme des compositions telles que définies précédemment, peut être utilisé dans le traitement du choléra et d'autres diarrhées aiguës, soit à titre prophylactique, soit à titre curatif. L'invention a en particulier pour objet un procédé de traitement des diarrhées aiguës et notamment du choléra, ou des diarrhées à Escherichia coli, caractérisé par le fait que l'on administre par voie orale, à un humain ou à un animal souffrant ou risquant de souffrir de telles diarrhées, le médicament défini précédemment. Outre le choléra, d'autres diarrhées aiguës sont fréquemment produites par des bactéries productrices d'entérotoxines, telles certaines souches d'Escherichia coli, qui sont susceptibles de libérer notamment une toxine thermolabile dont la structure est proche de la toxine cholérique et qui peut se lier au ganglioside GM1. Le médicament et le procédé de traitement de l'invention peuvent donc être efficaces, à titre prophylactique ou curatif, notamment contre les diarrhées à Escherichia coli. Selon un mode d'exécution particulier, le procédé de traitement de l'invention est caractérisé par le fait que l'on administre le médicament à titre prophylactique, en quantité correspondant généralement à l'administration quotidienne de 2 à 50 micromoles de gangliosides ou de dérivés de gangliosides environ. Selon un autre mode d'exécution du procédé de traitement de l'invention, on administre à titre curatif le médicament, en quantité correspondant à une administration quotidienne de 10 à 200 micromoles de gangliosides ou de dérivés de gangliosides environ. La posologie varie notamment en fonction de l'effet thérapeutique recherché (prophylactique ou curatif), de l'intensité du syndrome diarrhéique, et de l'age du sujet. La posologie indiquée ci-dessus correspond à celle qui est généralement efficace pour un humain adulte. Les exemples suivants illustrent l'invention sans toutefois la limiter. EXEMPLE 1 : TECHNIQUE A partir de cervelles de veau, ou de boeuf, on prépare un extrait aqueux de gangliosides. Ces gangliosides sont purifiés sur colonne de Sphérosil -DEAE-Dextran comme décrit dans la demande de brevet français nO 76.23176. L'élution est réalisée par un tampon acétate de potassium 0,5 M, dans du méthanol. A cet éluat on ajoute du charbon activé (CECA, qualité WL3S), à raison de 1 gramme par 10 micromoles de gangliosides (ou bien 1 à 20 micromoles). Après centrifugation et lavage, le produit couplé est soumis à une hydrolyse acide à 800C pendant 2 heures, avec une solution d'acide formique 0,1M. La majorité des polysialogangliosides fixée sur le charbon est transformée en monosialogangliosides. Après lavage à l'aide d'une solution de bicarbonate de potassium et séchage, on obtient une poudre appelée ci-après charbon -G. CARACTERI F IQUES DU PRODUIT Aspect : Poudre de charbon. Identification : 1 . Extraction : par ébullition au bain-marie bouillant pendant 1 heure dans un mélange chloroforme/méthanol/eau (60/30/4,5 volume à volume). 20. Par chromatographie en couches minces de l'extrait traité sur colonne de Séphadex G 25, qui montre une tache principale correspondant au G purifié. Dosage : Sur une aliquote de l'extractum précédent, on effectue le dosage de l'acide sialique selon la méthode de SVENNERHOLM, B.B.A, 1957, 24, 604. Activité Exprimée en microgrammes de toxine cholérique pure étalon (OMS), fixée par gramme de charbon-GM1. Pour la détermination de cette activité, un test in vitro ou un test in vivo peut être utilisé. Test in vitro : neutralisation d'un taux exact connu de toxine cholérique par le charbon-GM1, puis titrage de la toxine résiduelle par immunodiffusion (technique de MANCINI) et/ou par hémagglutination (agglutination de globules rouges de mouton recouverts de GM1). Test in vivo : neutralisation d'un taux exact connu de toxine cholérique par le charbon-G et inoculation de la suspension dans l'anse iléale de lapin (technique classique de l'anse iléale de lapin). Stabilité Conservation en flacon fermé, à température ambiante. Le produit est stable. Le produit n'est pas affecté par une conservation à 500C. La liaison charbon-GM1 n'est pas affectée par des conditions de pH acide ou alcalin, ni par l'action des sels biliaires. EXEMPLE 2 Préparation de granulés vermiculés Composition : Poudre de charbon-GM1 ...... 100 g Sucre glace .............. 740 g Sirop simple ...(environ)... 250 g On mélange sucre glace et charbon dans un mortier; on ajoute peu à peu le sirop pour obtenir une pâte qui donne des granulés vermiculés par passage au travers des mailles d'un tamis. EXEMPLE 3 Préparation de granulés Composition : Poudre de charbonG1 50 g Saccharose ................. 44 g Gomme arabique ............. 6 g On mouille le charbon maintenu sous agitation à l'aide d'un sirop amenant 70 g d'eau purifiée, 44 g de saccharose et 6 g de gomme arabique. On granule. On sèche en étuve à 500C. La gomme arabique intervient comme liant. On peut également utiliser à sa place un des nombreux amidons prégélatinisés du commerce, modifiés ou non. EXEMPLE 4 Préparation de comprimés Composition : Poudre de charbon-GM1 40 g Saccharose .................. 54 g Amidon de mals prégélatinisé 6 g On introduit le charbon-GM1 dans un mortier. On mouille par un sirop apportant 60ml d'eau, 54 g de saccharose et 6 g d'amidon prégélatinisé. On granule. On sèche partiellement le granulé à 500C en étuve ventilée pendant environ 1 heure. On comprime le granulé encore treks légèrement humide. On sèche à 5O0C pendant 18 heures les comprimés obtenus. On prépare ainsi des granulés très durs, peu friables, mais qui se délitent en moins de 15 minutes selon le protocole d'essais de la Pharmacopée Française 9ème édition. EXEMPLE 5 Administration du médicament On utilise une composition à base de charbon contenant 5 micromoles de GM1 par gramme. A titre prophylactique, on administre 2 g par jour de cette composition. A titre curatif, en période de diarrhées aiguës, on administre 1 g toutes les 1 à 2 heures, puis 1 g toutes les 4 à 6 heures. REVENDICATIONS 1. Nouveau médicament, caractérisé par le fait qu'il est constitué par un support sur lequel est fixé un ganglioside ou un dérivé de ganglioside doué d'affinité pour les toxines produites par des bactéries responsables des diarrhées, et notamment pour la toxine cholérique. 2. Médicament selon la revendication 1, caractérisé par le fait que le support est choisi dans le groupe constitué par le charbon activé, le latex, la cellulose modifiée ou non, les supports minéraux poreux tels que la silice, l'alumine, l'oxyde de titane, ou leurs dérivés naturels ou synthétiques tels que des verres, des silicates ou le kaolin. 3. Médicament selon l'une quelconque des revendications précédentes, caractérisé par le fait que le ganglioside ou le dérivé de ganglioside est choisi dans le groupe constitué par le ganglioside GM1, le lysoganglioside GM1, les produits d'hydrolyse partielle du ganglioside GM1, et les mono- ou a-sialo gangliosides résultant du traitement acide des gangliosides ou de leurs dérivés. 4. Médicament selon l'une quelconque des revendications précédentes, caractérisé par le fait que le support est constitué de particules de charbon activé. 5. Médicament selon l'une quelconque des revendications précédentes, caractérisé par le fait qu'il contient de 1 à 20 micromoles environ de gangliosides ou de dérivés de gangliosides, par gramme de support. 6. Médicament selon la revendication 5, caractérisé par le fait qu'il contient environ 3 à 10 micromoles de gangliosides ou de dérivés de ganglioside par gramme de support. 7. Composition pharmaceutique, caractérisée par le fait qu'elle renferme comme principe actif un médicament tel que défini dans l'une quelconque des revendications précédentes. 8. Composition selon la revendication 7, caractérisée par le fait qu'elle contient en outre un excipient permettant de mettre ladite composition sous une forme galénique compatible avec l'administration par voie orale. 9. Composition selon l'une quelconque des revendications 7 et 8, caractérisée par le fait qu'elle contient de 0,1 à 20, et en particulier 0,1 à 10 micromoles environ de gangliosides ou de dérivés de gangliosides par gramme de composition. 10. Composition pharmaceutique selon l'une quelconque des revendications 7 à 9, caractérisée par le fait qu'elle se présente sous la forme de paquets ou sachets de poudre, de cachets, ou gélules, de granulés, de comprimés, de suspensions buvables ou de capsules molles. 11. Composition pharmaceutique selon l'une quelconque des revendications 7 à 10, caractérisée par le fait qu'elle contient en outre au moins un autre produit actif choisi parmi les antiseptiques intestinaux, les antibiotiques et les antispasmodiques. 12. Composition selon l'une quelconque des revendications 7 à 11, caractérisée par le fait qu'elle contient en outre au moins une substance tensio-active. 13. Procédé de préparation du médicament tel que défini dans l'une quelconque des revendications 1 à 6, caractérisé par le fait que l'on fixe ledit ganglioside et/ou ses dérivés sur le support. 14. Procédé de traitement des diarrhées aiguës et notamment du choléra ou des diarrhées à Escherichia coli, caractérisé par le fait que l'on administre par voie orale, à un humain ou à un animal souffrant ou risquant de souffrir de telles diarrhées, le médicament tel que défini dans l'une quelconque des revendications 1 à 6. 15. Procédé de traitement selon la revendication 14, caractérisé par le fait que l'on administre ledit médicament à titre prophylactique, en quantité correspondant à l'administration quotidienne de 2 à 50 micromoles de gangliosides ou de dérivés de gangliosides environ. -16. Procédé de traitement selon la revendication 14, caractérisé par le fait que l'on administre à titre curatif, ledit médicament, en quantité correspondant à une administration quotidienne de 10 à 200 micromoles de gangliosides ou de dérivés de gangliosides environ.