Brevet FR2436603A1 — publié le 19800418

La présente invention concerne la microbiologie vétérinaire, et plus précisément, un vaccin pour la prophylaxie et le traitement des maladies clostridiales chez les animaux et les volatiles. On connaît déjà un vaccin antigénique polyvalent contre les maladies clostridiales chez les animaux qui consiste en antigènes qui sont des anacultures de : Cl. perfringens des types B, C, D, CLoedematiens, Cl. septicum, Cl tetani, Cl. Shauvoei, en huile minérale, en un émulsifiant lipophile non ionique et un ëmulsifiant hydrophile non ionique (brevet des Etats-Unis d'Amérique nO 3 579 633). La présence des cellules microbiennes au sein du produit influe défavorablement sur les processus de désintoxication et de purification en réduisant l'activité antigénique et immunogène du produit, en augmentant ses caractéristiques allergènes et engendrant essentiellement une immunité antimicrobienne. On connaît déjà une anatoxine polyvalente déposée qui contient une anatoxine purifiée des cellules microbiennes de Cl. perfringens du type A, des anacultures de : Cl. perfringens des types 3, C, D, Cl. oedematiens, Cl. septicum. A titre d'adsorbant ce produit contient le gel d'hydroxyde d'aluminium. l'activité de l'anatoxine Cl. perfringens du type A est mesurée en unités internationales (UnIo) au milliolitre de vaccin et est égale à 20 U.I. le nombre d'unités internationales des anatoxines est un indice de leur activité antigénique et immunogène. On adopte comme unité internationale la quantité d'anatoxine testée aux divers stades de sa production capable de se fixer sur une unité antitoxique de sérum spécifique. On détermine l'activité spécifique des anatoxines exprimée en unités internationales par la méthode décrite par G.P. Tcherkas (1958) et I.M. Khaustova (1959). L'activité de chacune des toxines des anacultures de départ entrant dans la composition du vaccin susnommé est déterminée par D7~/ml (dose léthale minimale) et se chiffre en moyenne à raison de 400 à 1000 Dlm/ml de vaccin (pour la souris blanche) ("Prophylaxie spécifique de l'entérotoxémie anaérobie chez les veaux", revue "Vétérinaria", nO 11, 1974). Ce produit présente des caractéristiques antigéniques et immunogènes insuffisantes et crée essentiellement une immunité antimicrobienne et une immunité antitoxique très faible contre les agents : Clostridium perfringens des types B, C, D, Cl. oedematicus, Cl. septicum. l'immunité se forme au sein de l'organisme des animaux très lentement et s'y maintient pendant un laps de temps assez court : il baisse rapidement au bout de 1 à 2 mois ce qui exige d'augmenter le volume du vaccin et d'accroître la fréquence des injections. On connait un vaccin tel que la dianatoxine destinée à une prophylaxie spécifique de l'entérotoxémie chez le veau et qui contient les anatoxines purifiées de cellules microbiennes de Clostridium perfringens des types A et D pour une activité antigénique par millilitre de vaccin égale à 100 U.I. pour chacune desdites anatoxines, un adsorbant et un solvant. A titre d'adsorbant le produit contient un gel d'hydroxyde d'aluminium alors qu'à titre de solvant il contient du sérum physiologique. Le vaccin susdit ne peut pas être utilisé pour le traitement et la prophylaxie de l'association des microorganismes les plus répandus tels que les Clostridions étant donné qu'il ne contient que des anatoxines actives contre deux des agents. Un but de la présente invention consiste à éliminer les susdits inconvénients. On s'est donc proposé de créer un vaccin destiné à la prophylaxie et au traitement des maladies clostridiales chez les battes et les volatiles par sélection d'anatoxines appropriées libérées des cellules microbiennes des Clostridions qui présentent des propriétés antigéniques, immunogènes et non allergènes et qui provoque une haute immunité antitoxique chez les animaux vaccines. La solution au problème ainsi posé consiste en ce que le vaccin pour la prophylaxie et le traitement des maladies clos très diales chez les bêtes et les volatiles contenant des anatoxines libérées de cellules microbiennes de Clostridium perfringens des types A et D, un adsorbant et un solvant contient additionnellement suivant l'invention des anatoxines libérées de cellules microbiennes de Clostridium perfringens type B, Clostridium oedematiens, Clostridium septicum, l'activité antigénique desdits constituants exprimée en unités internationales (U.I.) au millilitre de vaccin étant la suivante anatoxine de Cl. perfringens type A 2 à 100 anatoxine de Cl. perfringens type B 2 à 100 anatoxine de Cl. perfringens type D 1 à 80 anatoxine de Cl. oedematiens 1 à 80 anatoxine de Cl. septicum 2 à 100 sorbant 1 à 10 mg solvant le reste Le susdit vaccin est utilisé contre les maladies suivantes des équidés, du gros bétail à cornes (des bovidés, des ovins, des porcins, des bêtes à fourrure et'des volatiles la gangrène gazeuse, l'oedème alvin, les endométrites, les vaginites, les mastites, les avortements,la gastromycose (ou bradsot) des ovins et l1entrotoxêmie des jeunes animaux des espèces animales susdites provoquées nar l'association des susdits agents pathogènes. La mise en oeuvre du vaccin au sein duquel l'activité antigénique des,constîtuants est inférieure à leurs doses minimales n' est pas avantageuse étant donné l'impossibilité de créer une immunité antitoxique au niveau protecteur chez les animaux et les volatiles vaccinés. l'emploi d'un vaccin dont l'activité antigénique des constituants est supérieure à leurs doses maximales n' est pas avantageuse car lors de son administration l'organisme de l'animal vacciné devient le siège d'une inhibition excessive de la production des antitoxines (de l'immunité antitoxique). il est préférable que le vaccin contienne additionnellement l'anatoxine de Cl-tetani libérée des cellules microbiennes, son activité antigénique exprimée en unités internationales (U.I.) au millilitre de vaccin étant de 1 à 80. le vaccin revendiqué est utilisé contre l'entérotoxémie chez les jeunes animaux, essentiellement des nouveaux-nés de tous les genres d'animaux domestiques et des volatiles chez les juments, les vaches, les brebis, les truies - contre les maladies gynécologiques (endométrites, vaginites, mastites), les complications consécutives aux blessures, la gangrène gazeuse, l'oedème malin, la gastromycose (ou bradsot) des ovins dus à la susdite association des agents pathogènes - Clostridions. il est avantageux que le vaccin contienne additionnellement des anatoxines de Cl. botulinum libérées des cellules microbiennes, d'au moins deux des types A, B, C, E, F, dont l'activité antigénique est exprimée en unités internationales (U.I.) au millilitre de vaccin anatoxine de Cl. Botulinum type A 2 à 100 anatoxine de Cl. Botulinum type B 0,2 à 80 anatoxine de Cl. Botulinum type C 0,2 à 80 anatoxine de Cl. Botulinum type D 0,2 à 80 anatoxine de Cl. Botulinum type E 0,2 à 80 anatoxine de Cl. Botulinum type F 0,2 à 80. On utilise le vaccin revendiqué pour la prophylaxie et le traitement de l'intoxication alimentaire, de I'entérotoxémie anaérobie, des affections gynécologiques et des complications consécutives aux 'blessures. L'introduction dans le vaccin des anatoxines de Cl. tetani, Cl. botulinum des types A, B, C, E, F s'explique par la nécessité de la prophylaxie et du traitement des maladies clostridiales qui sont provoquées par les susdits agents pathogènes. le choix des doses minimales et maximales d'activité antigénique des anatoxines Cl. botulinum et Cl. tetani dans le vaccin est dicté par les raisons susindiquées pour les anatoxines de Cl. perfringens des types A, B, D, Cl. oedematiens, Cl. septicum. il est avantageux que le vaccin contienne à titre d'adsorbant le gel d'hydroxyde d'aluminium. L'adsorbant revendiqué permet de réaliser l'adsorption complète des anatoxines sans exercer d'effets néfastes sur l'organisme. il est avantageux que le vaccin contienne à titre de solvant un mélange de tampon phosphaté et de sérum physiologique pris dans le rapport en poids de 1/1. le produit de vaccination revendiqué est un fluide qui se sépare par décantation en un liquide incolore (couche surnageante) et en un précipité blanc, brun clair ou jaunatre. Après secouage 10 précipité doit former une suspension homogène sans grumeaux ni impuretés étrangères. le produit a été testé sur de petits animaux de laboratoire et sur des animaux domestiques (bovidés, ovins, porcins, équidés, etc.), sur des porcelets, agneaux veaux nouveaux-nés, sur des volatiles (poules), sur des bêtes à fourrures (visons). les observations effectuées sur les animaux ont montré que la formation active d'une immunité intense stimulait la production d'un titre élevé d'antitoxines par rapport à chaque constituant du produit et que ce phénomène intervenait chez les animaux en cas dune immunisation primaire dans un délai de 10 à 25 jours et après vaccination, dans les 5 à 10 jours. l'étude de la durée et de l'intensité d'immunité en cas d'administration du vaccin est effectuée sur 100 animaux que l'on contamine 1, 2, 4, 6, 10, 12 mois et 2, 4, 5 ans après l'immunisation par une culture virulente ou une toxine correspondante entrant dans la composition du produit revendiqué. On prend pour le contrôle des animaux qui n'ont pas été atteints de maladies, qui n'ont pas été immunisés, et qui ont été sélectionnés parmi des animaux analogues. On effectue l'immunisation des animaux en conformité avec le schéma dtimmunisation qui a été étudié pour chaque espèce d'animaux et de volaille. Aussitôt qu'on a dépisté dans une exploitation un ou plusieurs agents pathogènes on effectue la vaccination prophylactique de tout le cheptel rentable et sain des vaches, génisses, truies, brebis, juments, chameaux, volailles, visons et autres espèces d'animaux indépendamment de leur période de gestation. Dans les fermes suspectes où le vaccin est mis en oeuvre pour la première fois on effectue la vaccination des bovidés, des chevaux, des porcins, des moutons, une à trois fois. On dose le vaccin chez les animaux et les volatiles à raison de 0,5 à 5 ml par voie parentérale ou sous forme d'aérosol. On effectue la revaccination de toutes les espèces d'animaux et de volailles 3 à 6 mois après la vaccination primaire en l'attachant à la période de naissance des veaux, aux périodes où les truies et les visons mettent au monde de nombreuses portées de petits, ou bien en tenant compte des indices tels que les rechutes de l'intoxication par les aliments, etc. En cas d'une prophylaxie d'urgance de l'entérotoxémie anaérobie chez les animaux nouveaux-nés, lorsque la vaccination des femelles risque d'être trop tardive, on vaccine les nouveauxnés des animaux non vaccinés. Dans ce cas, on administre le produit à deux reprises. Le produit n'exerce pas d'effets négatifs sur l'organisme de l'animal vacciné, ni sur sa descendance. il est inoffensif, et ne donne pas d'effets allergiques ; les animaux naissent sains, robustes, viables et engraissent rapidement. le produit protège entièrement contre les maladies sus indiquées dues aux agents pathogènes Clostridium perfringens types A, B, D, Cl. oedematiens, Cl. septicum, Cl. tetani, Cl. botulinum à 100%. Par contre dans les groupes d'animaux de contrôle auxquels on n'administre pas de vaccin on dénote 100% de cas de maladie ainsi qu'une mortalité des sujets malades de 80 à 10oxo. la durée de validité du vaccin est de 5 ans au maximum. On prépare le vaccin suivant l'invention pour la prophylaxie et le traitement des maladies clostridiales chez les animaux et les volatiles de la manière suivante. On introduit séparément dans un milieu nutritif composé de sources d'azote, de carbone, de phosphore, de sels minéraux, des cul-tures de Clostridium perfringens de types A, 3, D, Cl. oedematiens, Cl. septicum, Cl. tetani, Cl. botulinum des types A, 3, C, D, E, F. On effectue la culture dans des conditions anaérobie pour un pH du milieu de 5 à 10 et à une température de 35 à 380C, par ailleurs la durée de la culture est fonction du genre et du type des agents, en moyenne de 2 heures à 10 jours. Après l'achèvement de la culture, on sépare la suspension de culture de chaque genre et type de micro-organisme en liquide de culture et matière cellulaire (microbienne). L'activité des toxines exprimée en D1 /ml pour la souris blanche est de toxine Cl. perfringens type A 800 à 1200 toxine Cl. perfringens type B 1000 à 3000 toxine Cl. perfringens type D 1000 à 3000 toxine Cl. oedematiens 12000 à 20000 toxine Cl. septicum 800 à 1000 On sépare le liquide de culture contenant la toxine et on le filtre sur des filtres de type SEITZ. Ensuite on effectue une désintoxication partielle de la toxine par addition fractionnée au liquide de culture en une ou deux étapes, à raison de 0,4 à 0,5% en volumes d'une solution à 40% de formaldéhyde, le pH étant de 7,00 à 7,02, la température étant de 37. à 380C pendant t à 20 jours suivant le genre et le type du microorganisme qui sécrète la toxine. Une exception est constituée par les toxines de Cl. perfringens type B, Cl oedematiens et Cl. septicum qui sont désintoxiquées en totalisé par le formaldéhyde pendant 1 à 30 jours et sont transformées dans ce cas en anatoxine. En partant du liquide de culture on concentre la toxine partiellement désintoxiquée (ou bien l'anatoxine). et on la purifie en la précipitant par une solution à 45 - 60% de sulfate d'ammonium ou par l'hexamétaphosphate de sodium en présence d'une solution normale d'acide-chlorhydrique. On dissout la toxine ou l'anatoxine obtenue sous forme de précipité dans un mélange de tampon phosphaté et de sérum physiologique pris dans un rapport pondéral de 1/1. On stérilise la solution obtenue en la filtrant sur des filtres de type "SEITZ". On transforme la toxine partiellement désïntoxiquée en anatoxine, en ajoutant à la susdite solution une solution à 40% de formaldéhyde à une température de 37 à 3B C. On contrôle l'anatoxine obtenue au'point de vue innocuité spécifique sur des cobayes ; on contrôle également leur activité antigénique exprimée en unités de fixation et leur stérilité. L'activité antigénique des anatoxines de Clostridium perfringens-des types A, 3, D, de Cl. oedematiens est de 80 à 100 unités de fixation au millilitre de Cl. septicum 100 à 400 unités internationales au millilitre, de Cl. botulinum des types A, B, D, E, F 80 à 300 unités au millilitre. On mélange les monoanatoxines préparées par le procédé précédemment décrit et libérées des cellules microbiennes et on les adsorbe par le gel d'hydroxyde d'aluminium. Au besoin on peut introduire dans le produit final l'agent de conservation, à savoir la solution de merthiolate de sodium (1/10.000). On contrôle le produit final du point de vue de sa stérilité, de son innocuité, de sa teneur en Al O et de son 23 aptitude (pouvoir) immunogène. le produit revendiqué présente des hauts caractères au point de vue antigénique et immunogénique et crée chez les animaux vaccinés une forte immunité antitoxique par rapport à tous les constituants entrant dans sa composition pour un délai de 1 à 2 ans, et pour certains constituants jusqu'à 5 ans. la dose de vaccination est réduite de moitié. les titres des antitoxines chez les animaux pour toutes les mono-anatoxines sont multipliés par 8 à 10, en outre, la formation des antitoxines intervient deux fois plus vite. Après la première immunisation au cours de toute l'existence des animaux on ne pratique la vaccination qu' une seule fois (revaccination) ou bien on l'effectue suivant les indications épizootiques (intervalle de 2 à 5 ans). l'intensité de l'immunité est de 15 à 2Q fois plus élevée que pour itanatosine polyvalente existante. le produit est inoffensif et ne provoque pas d'allergie aussi bien chez les animaux à vacciner que chez l'homme (en cas de la consommation du lait et de la viande en provenance de l'animal vacciné). La durée de conservation du vaccin a été prolongée 'jusqu'à 5 ans. Par comparaison avec les produits existants le nouveau vaccin est exempt de substances de charge (cellules microbiennes, protides non spécifiques). L'activité du produit est contr8lé .d'après les unités internationales (U.I.) au cours de toute la durée de préparation et d'application du produit ce qui en garantit l'efficacité. le contrôle du produit a été perfectionné, surtout en ce qui concerne la vérification de son activité immunog6- ne et de son innocuité.L'application du vaccin pour la prophylaxie dans les fermes douteuses quant aux maladies mentionnées des animaux, particulièrement dans les ensembles d'élevage industriels et spécialisés a démontré son caractère universel, le produit en question étant utilisé chez toutes les espèces d'animaux et de volatiles par petites doses contre les cinq à onze agents pathogènes largement répandus dans la nature. le vaccin protège le cheptel femelle contre les intoxications dues aux fourrages, les complications consécutives aux blessures, les complications dues aux naissances, etc. Simultanément le vaccin protège et traite les animaux nouveaux nés par l'intermédiaire du colostrum sur les femelles mères vaccinées, contre l'~entérotoxémie anaérobie, garantit la guérison des malades et la prophylaxie spécifique chez les mères contre les susdits agents pathogènes à 100%.Certains cas de maladies évoluent sous une forme très légère et, en cas de traitement symptomatique, conduisent à une rapide guérison. les animaux nés des femelles vaccinees sont viables, robustes et engraissent rapidement. les fermes douteuses au point de vue infection redeviennent parfaitement normales et saines, quant à ces affections. Pour les fermes et les gros ensembles d'élevage industriel et spécialisé le vaccin garantit la constitution d'un troupeau exempt du cinq à onze agents pathogènes responsables des maladies et largement répandus dans la nature et capablesde- nuire sensiblement races établissements. D'autres caractéristiques et avantages de l'invention seront mieux compris à la lecture de la description qui va suivre de plusieurs exemples de sa réalisation et notamment de préparation et d'utilisation du vaccin revendiqué. Exemple 1. On introduit dans un milieu nutrifif à base de caséine stérilisé à une température de 1120C pendant 30 minutes, pris à raison de 10 litres, une culture de Clostridium perfringens du type A à raison de 2 du volume du- milieu nutnfif On effectue le processus de la culture à une température de 38oC pendant. 2-10 heures, à pH 5-10 dans les conditions anaérobies. Parallèlement on réalise dans le susdit milieu la culture séparée de de Cl. perfringens type 3, D Cl. oedematiens, Ci. septicum, Cl. tetani, Cl. botulinum des types, 3, C, Dx E, F d'une manière analogue à ce qui a été décrit plus haut à cette différence près que la durée correspondante pour chaque type et espèce est de 2 heures, jusqu'à 10 jours. le-processus de culture de Cl. perfringens type D est effectué d'une façon analogue à celle qui a été décrite dans ce qui précède à cette exception près que l'on soumet la culture à une activation par une solution à 2% de pancréatine prise à raison de 200 cm3. La culture terminée, on sépare 12 litres de suspension de culture de chaque espèce et de chaque type de micro-organisme en une liqueur de culture et une masse cellulaire. On soumet 11,5 litres de liqueur de culture contenant la toxine à la séparation et à la filtration sur filtres de type "SEITZ . Ensuite or. effectue la désintoxication de la toxine par une solution à 40% de formaldéhyde. On effectue la désintoxication partielle de la toxine de Clostridium perfrigens du type A par une solution à 40fiv de formaldéhyde à pH 7,0 à 7,2 à une température de 37 à 380C, pendant 1-30 jours. On ajoute par ailleurs la solution de formaldéhyde en deux étapes à raison de 0,2 en volume à un intervalle de 1 jour. On effectue la désintoxication de la toxine de Cl. perfrirens du type B et sa transformation en anatoxine par une solution å 40% de formaldéhyde à pH de 7,0 à 7,2, saune température de 37 ç-s 380C pendant 1 à 3 jours, en l'introduisant une seule fois à raison de 0,4 à o,% en volumes. Une désintoxication partielle de la toxine de Cl. perfringens du type D est effectuée avec une solution à 40% de formaldéhyde à pH de 7 à 7,2, à une température de 37 à 380C pendant 4 à 6 jours, son introduction étant réalisée à deux reprises à raison de 0,2% en volumes à un intervalle de 1 à 2 jours. la désintoxication des toxines de Cl. oedematiens, Cl. septicum, et leur transformation en anatoxines se font d'une manière analogue à ce qui a été décrit pour Cl. perfringens du type B. On obtient à partir du liquide de culture pris à raison de 11,6 litres de la toxine partiellement désintoxiquée ou de l'anatoxine que l'on purifie et concentre par précipitation avec une solution à 25 d'hexamétaphosphate de sodium à raison de 0,5 à 1% en volumes en présence d'une solution normale d'acide chlorhydrique, à pH de 3,0 à 3,8. La toxine ou l'anatoxine obtenue sous forme de précipité à raison de 100 grammes est dissoute dans 3 litres d'un mélange de tampon phosphaté et de sérum physiologique (1/1). Ensuite on stérilise la solution obtenue par filtration sur des filtres de type "SElTZ1,. On obtient en définitive des solutions concentrées d'anatoxines libérées de cellules microbiennes de Cl. perfringens du type B, de Cl. oedematiens, Cl. septicum et des solutions concentrées de toxines partiellement désintoxiquées de Cl. perfringens des types A, D. On transforme la solution concentrée de toxine partiellement désintoxiquée de CI. perfringens du type A en anatoxine par addition d'une solution à 40% de formaldéhyde à raison de 0,2% en volumes pendant 14 à 20 jours. La transformation de la toxine partiellement- désintoxi- quée de Cl. perfringens du type D en anatoxine se fait d'une manière analogue à celle qui a été décrite pour Cl. perfringens du type A. On contrôle les mono-anatoxines obtenues, libérées de cellules microbiennes au point de vue de la stérilité, de 11 innocuité, de la spécificité et de l'activité antigénique. L'activité antigénique de chacune des solutions d1anato- vines concentrées obtenues et libérées de cellules microbiennes exprimée en unités internationales au millilitre de ladite solution se chiffre respectivement par anatoxine de Cl. perfringens du type À 350 anatoxine de Cl. perfringens du type A 300 anatoxine de Cl. perfringens du type D 500 anatoxine de Cl. oeaema-tiens 500 anatoxine de Cl. septicum 200. les solutions concentrées des monoanatoxines libérées de cellules microbiennes et préparées par le susdit procédé sont diluées par un sérum physiologique (solution à 0,85 de Nazi) jusqu'à l'activité antigénique suivante exprimée en unités internationales (U.J.) au millilitre de vaccin anatoxine de Cl. perfringens du type À 2 anatoxine de Cl. perfringens du type B 2 anatoxine de Cl. perfringens du type D 1 anatoxine de Cl. oedematiens 1 anatoxine de Cl. septicum 2 Pour préparer 25 litres de vaccin on mélange 200 cm3 de chacune des solutions diluées de mono-anatoxine libérées de cellules microbiennes qui présentent l'activité antigénique susdite.On ajoute au mélange obtenu le gel dthydroxyde d'aluminium à raison de 400 cm3 calculé pour Au203 et on effectue l'adsorption. le vaccin final contient les constituants suivants, leur activité antigénique exprimée en unités internationales (U.I.) au millilitre de vaccin étant la suivante : anatoxine de Cl. perfringens du type A 2 anatoxine de Cl. perfringens du type.3 2 anatoxine de Cl. perfringens du type D 1 anatoxine de Cl. oedematiens 1 anatoxine de Cl. septicum 2. gel d'alumine (calculé par rapport à val203) 1 ml mélange de tampon phosphaté et de sérum physiologique (1/1) le reste. On contrôle le vaccin par des procédures généralement adoptées au point de vue de l'adsorption, la stérilité, l'innocuité et l'activité immunogénique sur la souris. le vaccin est stérile, inoffensif et actif au point de vue immunogénie. Afin de réaliser la prophylaxie spécifique de l'entérotoxémie anaérobie des veaux et des porcelets dans des. fermes suspectes au point de vue infection où cette maladie (en présence de dyspepsie) concernait 100% de jeunes animaux, la mortalité atteignant 100%, on effectuait l'immunisation du cheptel femelle des bovidés et des porcins. Les maladies des jeunes animaux sont caractérisées par les symptomes suivants : au deuxième ou au trqisieme jour après la naissance de l'animal, celui-ci souffre d'une diarrhée abondante accompagnée parfois de sang ; il refuse la nourriture, reste inactif, accuse une perte de poids rapide, la mort suivant au bout de 2 à 3 jours. Chez les animaux-mères on observe les endométrites et les mastites. On a effectué l'immunisation par le vaccin indiqué de 100 vaches et de 150 truies qui se trouvaient à l'état de gestation. On a introduit le vaccin par voie parentérale à la dose de 5 millilitres à deuxreprises. A titre de contrôle, on a pris comme animaux analogues 20 vaches et 50 truies auxquelles on n'a pas administré de vaccin. les vaches non immunisées ont donné naissance à 95 veaux et les truies non immunisées ont donné naissance à 12GO porcelets. Parmi ces jeunes animaux, 50 veaux ont été touchés par la maladie sous une forme légère, 10 veaux sont morts. 50 porcelets ont été atteints par la maladie sous une forme légère, 25 sont morts, 100 de jeunes animaux descendant des animaux de contrôle ont été touchés par la maladie et 10056 de ces animaux sont morts. Exemple 2. Le vaccin contient les constituants suivants dont l'activité antigénique est exprimée en unités internationales (U.I.) au millilitre de vaccin anatoxine de Cl. perfringens du type A 1 O anatoxine de Cl. perfringens du type B 10 anatoxine de Cl. perfringens du type D 5 anatoxine de Cl. oedematiens 4 anatoxine Cl. septicum io gel d'hydroxyde d'aluminium (calculé pour Au205) -5 mg mélange de tampon phosphaté et de sérum physiologique (1/1) le reste. On prépare le vaccin considéré par un procédé analogue à celui décrit dans l'exemple 1. Le vaccin final est stérile, inoffensif et immunogène. Il est utilisé pour la prophylaxie et le traitement- des jeunes animaux (des veaux et des porcelets) contre l'entérotoxémie anaérobie en présence de dyspepsie, les caractères cliniques de la maladie étant analogues à ce qui a été décrit dans l'exemple 1. On a effectué l'immunisation par le susdit produit de 100 vaches et 230 truies qui se trouvaient à I0état de gestation. On a introduit le produit par voie parentérale à la dose de 5 mI, à deux reprises. Pour le contrôle on a pris comme animaux analogues, 20 vaches et 30 truies, auxquelles on n'a pas introduit de vaccin. les vaches immusisées ont donné naissance à 97 veaux et les truies immunisées à 1796 porcelets. On n'a pas observé de cas de maladies et de mort parmi les veaux et les porcelets. Les vaches non immunisées ont donné naissance à 18 veaux, dont 18 sont tombés malades (sous une forme grave) et 12 veaux sont morts. 30 truies non immunisées ont donné naissance à 205 porcelets, dont 200 sont tombés malades (forme grave) et 150 sont morts). Exemle 3.- le vaccin contient les constituants suivants, dont l'activité antigénique est exprimée en unités internationales (U.I.) au millilitre de vaccin anatoxine de Cl. perfringens du type A 100 anatoxine de Cl. perfringens du type B 100 anatoxine de Cl. perfringens du type D 80 anatoxine de Cl. oedematiens 80 anatoxine de Cl. septicum 100 gel d'hydroxyde d'aluminium (calculé pour Al203) 10 mg trélange de tampon phosphaté et de sérum physiologique (1/1) le reste. On prépare le vaccin revendiqué par un procédé analogue à celui qui a été décrit dans l'exemple 1. le produit est stérile, inoffensif, immunogène et s'emploie pour la prophylaxie et le traitement des jeunes animaux (veaux et porcelets) contre l'entérotoxémie anaérobie en présence de dyspepsie, avec des caractères de la maladie analogues à ceux décrits dans l'exemple 1. On a immunisé par le produit susindiqué 50 vaches et 100 truies, à l'état de gestation. On a introduit le produit par voie parentérale à la dose de 5 millilitres, à deux reprises. Pour le contrôle on a pris comme animaux analogues 20 vaches et 50 truies, auxquelles on n'a pas introduit de vaccin. Les vaches immunisées ont donné naissance à 50 veaux, les truies ont donné naissance à 960 porcelets. Parmi ces jeunes animaux, 25 veaux ont été atteints sous une forme légère et 10 sont morts. 200 porcelets ont été atteints sous une forme légère, 50 sont morts. On a observé chez les jeunes animaux de contrôle 100% de cas de maladie et une mortalité de 100%. Exemple 4. le vaccin prêt contient les constituants suivants dont l'activité antigénique est exprimée en unités internationales (U.I.) au millilitre de vaccin anatoxine de Cl. perfringens du type A 2 anatoxine de Cl. perfringens du type B 2 anatoxine de Cl. perfringens du type D 1 anatoxine de C1. oedematiens 1 anatoxine de Cl. septicum 2 anatoxine de Cl. tetani 1 gel d'hydroxyde d'aluminium i mg (calculé par rapport à A1205) mélange de tampon phosphaté et de sérum physiologique (1/1) le reste. On contrôle le produit fini sur la souris suivant les procédures universellement adoptées pour la stérilité, l'innocuité, l'activité immunogène. le vaccin est stérile, inoffensif, immunogène. Pour la prophylaxie et le traitement de ltentérotDxémie anaérobie des jeunes bovidés, porcins, ovins, équidés, ainsi que des endométrites, vaginites, mastites, des complications consécutives aux blessures,de l'oedème malin, de la gastromycose (ou bradsot des avins, etc.,dans les fe=- suspectes quant à 1' infection on a effectué la vaccination du cheptel des femelles des bovides, porcins, équidés, ovins. les affections du cheptel des femelles sont caractérisées par des écoulements purulents de la matrice et du vagin, par des mastites, des avortements, de l'oedème malin avec un taux de malades de 50 à 70% du cheptel total du troupeau (de l'ensemble). Les affections des jeunes animaux se présentent sous forme d'une entérotoxémie grave anaérobie, dont les caracteristiques- cliniques sont analogues à celles'de l'exemple i . les affections sont accompagnées de troubles nerveux graves conduisant à la perte de 100% de jeunes animaux pendant 1 à 3 jours. On a effectué l'immunisation par le susdit vaccin de 200 vaches, 219 truies, 120 brebis, 80 juments se trouvant à 11 état de gestation. On a introduit le produit par voie parentérale à la dose de 5 millilitres, de 1 à 3 fois (selon la situation épizootique). Pour le contrôle, on a pris comme animaux analogues 20 truies, 20 juments, 20 vaches auxquelles on n'a pas administré de vaccin. 150 truies immunisées ont donné naissance à 1350 porcelets, les juments ont mis au monde 60 poulains, les brebis 15D agneaux, les vaches 1-98 veaux. 79 porcelets ont été atteints de la maladie sous une forme légère, 70 porcelets ont subi la maladie sous une forme grave, 28 porcelets sont morts. 30 poulains ont été atteints de la maladie sous une forme légère, deux poulains sont morts. 60 agneaux sont tombés malades sous une forme légère, 5 sont morts. la mise en oeuvre du vaccin sur le cheptel femelle des espèces d'animaux susindiqués en vue de la prophylaxie des affections telles que les vaginites les endométrites, les avortements, les complications consécutives aux blessures a supprimé les maladies à 75% alors que ces maladies n'ont pas été supprimées chez les femelles de contrôle. On a constaté 100% de maladies et une mortalité à 100% chez les jeunes animaux descendant des animaux de contrôle. Exemple 5. le vaccin contient les constituants suivants dont l'activité antigénique est exprimée en unités internationales (U.I.) au millilitre de vaccin anatoxine Cl. perfringens type A 10 anatoxile Cl. perfringens type 3 10 anatoxine Cl. perfringens type D 5 anatoxine Cl. oedematiens 4 anatoxine Cl. septicum 10 anatoxine Cl. tetani 5 gel d'hydroxyde d'aluminium 5 mg (calculé par rapport à Àl203 ) mélange de t tampon phosphaté et de sérum physiologique (1/1) le reste. On prépare le susdit vaccin par un procédé analogue à celui qui a été décrit dans l'exemple i. le produit fini est stérile, inoffensif, immunogène et on l'utilise pour la prophylaxie et le traitement des jeunes animaux (agneaux, poulains, veaux, porcelets, etc.), ainsi que du cheptel femelle contre les affections indiquées dans l'exemple 4. On a effectué l'immunisation au moyen du vaccin indiqué de 242 truies, 200 brebis, 150 juments, 400 animaux du cheptel femelle des bovidés à l'état de gestation. On introduit le vaccin par voie parentérale à la dose de 5 millilitres, de 1 à 3 fois (suivant la situation épizootique). A titre de contrôle on a pris des animaux analogues à raison de 24 têtes pour cloque espèce d'animaux auxquels on n'a pas administré de vaccin. les truies immunisées ont donné naissance à 1630 porcelets, les brebis à 180 agneux, les juments à 80 poulains, les vaches à 389 veaux. On n'a pas constaté d'affections telles que précédemment citées, ni de mort chez les jeunes animaux et le cheptel femelle. Ces affections.n'ont pas été supprimées chez le cheptel femelle de contrôle. On a constaté 1-00% de maladies et une -mortalité de 100% chez la jeune descendance des animaux de contrôle. Exemple 6. le vaccin contient les constituants suivants dont l'activité antigénique suivante est exprimée en unités internationales (U.I.) au millilitre de vaccin anatoxine de Cl. perfringens du type A 10 anatoxine de Cl. perfringens du type B 10 anatoxine de Cl. perfringens du type I) 5 anatoxine de Cl. oedematiens 4 anatoxine de Cl. septicum - 10 anatoxine de Cl. tetani 5 anatoxine de Cl. botulinum du type A 10 anatoxine de Cl. botulinum du type B 2 anatoxine de Cl. botulinum du type C 2 anatoxine de Cl. botulînum du type D 2 anatoxine de Cl. botulinum du type E 2 anatoxine de Cl. botulinum du type F . 2 gel d'hydroxyde d'aluminium (calculé par rapport à Al203) 5 mg mélange de tampon phosphaté et de sérum physyologique (1/1) le reste. On prépare le vaccin susdit par un procédé analogue à celui qui a été décrit dans l'exemple 1. le vaccin final est stérile, inoffensif et immunogène. Pour effectuer la prophylaxie et le traitement de l'intoxication alimentaire, les complications consécutives aux blessures, la gangrène gazeuse, les complications post-partum et l'entérotox-.émie dans les fermes douteuses au point de vue injection, on effectue l'immunisation des bêtes à fourrure et des volatiles. les affections chez les bêtes à fourrure et les volatiles sont caractérisées par des symptomes d'intoxication entraînant une mort rapide. On a effectué l'immunisation par le vaccin indiqué de 100 visons, 500 volatiles, et 150 truies. On a introduit le vaccin chez les visons par voie parentérale à des doses de 1 à 2 millilitres en une seule fois avec revaccination ultérieure ou à des doses de 2 à 3 millilitres par aérosol, les truies ont été immunisées deux fois par 5 ml. Chez les volatiles (poules et canards) on a introduit le vaccin par voie parentérale à des doses de 0,5 à 2 millilitres, de 1 à 2 fois, suivant la situation épizootique ou à des doses de 1 à 3 millilitres par aérosol. Pour le contrôle on a pris comme sujets analogues : 100 visons, 250 volatiles et 20 truies, auxquels le produit n'a pas été administré. les visons immunisés ont donné naissance à 150 petits, les truies immunisées à 1350 porcelets, chez lesquels on n'a observé ni maladies, ni mortalité. Chez 10 à 15% des volatiles immunisés, l'affection a été observée sous une forme légère et pendant un court laps de temps (1 à 2 jours). On n'a pas constaté de mortalité. Chez les visons et les volatiles, les truies, de contrôle, et chez les jeunes animaux on a par contre observé 95% de maladies et une mortalité de 95%. Exemple 7. le vaccin contient les constituants suivants dont l'activité antigénique est exprimée en unités internationales (U.I.) au millilitre de vaccin anatoxine de Cl. perfringens du type A 10 anatoxine de Cl. perfringens du type B 10 anatoxine de Cl. perfringens du type D 5 anatoxine de Cl. oedematiens .4 anatoxine de Cl. septicum 10 anatoxine de Cl. tetani 5 anatoxine de Cl. botulinum du type A 10 anatoxine de Cl. botulinum du type C 2 gel d'hydroxyde d'aluminium 5 mg (calculé par rapport à Ai203) mélange de tampon phosphaté et de sérum physiologique (1/1) le reste. On prépare le vaccin susdit par une procédure analogue à celle qui a été décrite dans l'exemple 1. le vaccin final est stérile, inoffensif, immunogène et il est employé pour la prophylaxie et le traitement des animaux à fourrure et des volatiles contre les maladies dues à l'association de microbes indiquée. On a immunisé par le vaccin susindiqué, 150 visons et 300 volatiles. On a vacciné les visons par voie parentérale avec une dose de 1 à 2 millilitres, une fois, avec revaccination ultérieure ou avec une dose de 2 à 3 millilitres par aérosol. On vaccine les volatiles (poules, canards) par voie parentérale avec une dose de 0,5 à 2 millilitres, 1 à 2 fois suivant la situation épizootiqus ou à la dose de 1 à 3 millilitres par aérosol. Pour le contrôle on a pris comme sujets analogues 50 visons et 100 volatiles auxquels ce produit n' a pas été administré. les visons immunisés donnent naissance à 100 petits, qui n'ont pas souffert de maladies et ne sont pas morts. Chez les volatiles immunisés on n'a constaté ni maladie ni mortalité. Par contre, chez les visons de contrôle et les volatiles de contrôle on a constaté 90 à 100% de cas de maladies et de cas mortels. REVENDICATIONS 1. Vaccin pour la prophylaxie et le traitement des maladies clostridiales chez les animaux et les volatiles contenant des anatoxines libérées de cellules microbiennes de Clostridium perfringens des types A et D, un adsorbant et un solvant, caractérisé en ce qu'il contient additionnellement les anatoxines libérées de cellules microbiennes de Cl. perfringens type 3, Cl. oedematiens, Cl. septicum, l'activité antigénique desdits constituants exprimée en unités internationales (U.I.) au millilitre de vaccin étant de anatoxine Cl. perfringens du type A 2 à 100 anatoxine Cl. perfringens du type B 2 à 100 anatoxine Cl. perfringens du type D 1-à 80 anatoxine Cl. oedematiens 1 à 80 anatoxine Cl. septicum 2 à 100 sorbant 1 à 10 mg solvant .le reste. 2. Vaccin selon la revendication 1, caractérisé en ce qu'il contient additionnellement l'anatoxine de Cl. tetani libéré de cellules microbiennes, son activité antigénique exprimée en unités internationales (U.I.) au millilitre de vaccin étant de 1 à 80. 3. Vaccin selon la revendication 1 ou- 2, caractérisé en ce qu'il contient additionnellement les anatoxines libérées de cellules microbiennes de Cl. botulinum d'au moins deux des types A, 3, C, D, F, dont l'activité antigénique exprimée en unités de fixation (U.I.) au millilitre de vaccin est la suivante anatoxine de Cl. botulinum du type A 2 à 100 anatoxine de Cl. botulinum du type B 0,2 à 80 anatoxine de Cl. botulinum du type C 0,2 à 80 anatoxine de Cl. botulinum du type D 0,2 à 80 anatoxine de Cl. botulinum du type E 0,2 à 80 anatoxine de Cl. botulinum du type F 0,2 à 80. 4. Vaccin suivant l'une quelconque des revendications 1 à 3, caractérisé en ce qu'il contient à titre de solvant un mélange de tampon phosphaté et de sérum physiologique pris dans les-proportions en poids de 1/1. 5. Vaccin suivant l'une quelconque des revendications 1 à 4, caractérisé en ce que à titre d'adsorbant il contient le gel d'hydroxyde d'aluminium.