Brevet FR2442238A1 — publié le 19800620

La présente invention concerne un nouveau procédé pour isoler l'ajmalicine et pour la formation ultérieure de sels d'addition acide. L'isolement de l'ajmalicine alieu à partir des racines des-plantes Catharanthus roseus. L'ajmalicine, également connue sous le nom de & Yohimbine ou Raubasine, est un alcaloïde agissant comme hypotenseur, sédatif et tranquillisant, qui peut être isolé à partir des plantes Corynanthe johimbe, Rauwolfia serpentin et Catharanthus roseus. Pour l'obtention d'ajmalicine à partir des plantes Catharanthus roseus, les procédés suivants sont connus Masao Shimizu et collaborateurslChem. Pharm.Bull. Tokyo 6. 324 (1958); Chem. Abstr. 53. 428d (19598 ont obtenus par extraction un mélange d' ajmalicine, tétrahydroalstonine et serpentine et ils ont isolés les composants de ce mélange les uns des autres par chromatographie sur colonnes. Bonati et collaborateurs Fitoterpia 37, 98 (1966); Chem. Abstr. 69, 65104f (1968)J ont éxtrait un mélange d' Xmalicine, alstonine, tétrahydroalstonine et serpentine, ils ont identifié les composants particuliers par méthode chromatographique en couche mince sur une couche de gel de silice et ils les ont séparés les uns des autres à l'aide d'un liquide d'élution se constituant des quatre composants. Ciulei et collaborateurs EFarmacia, Bucarest, 13, 321 (1965); Pharmacie 20, 522 (1965)] ont chromatographié un mélange d'alcaloidesobtenu à partir de racines de plantes sur une colonne d'oxyde d'aluminium et ils ont élué à partir de la colonne à 1 'aide de benzène ou bien de mélanges de benzène et d'éther 5 alcaloidesdifférents.L'ajmalicine était obtenue partiellement à partir de l'éluat au benzène, partiellement à partir d'une fraction de l'éluat obtenu à l'aide de benzène/éther, dans des rendements d'environ 0,18 (par rapport au poids des racines). Markiewicz gDissertationes Pharm. Krakow, 16, 207 (1964)0 a décrit une méthode de détermination de la teneur totale en alcaloidesse trouvant dans les racines principaloe et secondairesdes plantes, toutefois les alcaloïdes particuliers n'ont pas été séparés les uns des autres. Selon la demande de brevet allemande DOS 26 39 879, l'ajmalicine et la serpentine peuvent également etre obtenues à partir d'une culture en cellules des plantes Catharanthus roseupar extraction et ensuite séparation chromatographique. Les procédées jusqu'ici mentionnés ont l'inconvénient commun qu'ils utilisent à l'échelle du fonctionnement des méthodes de séparation chromatographigues difficilement réalisables. Selon Kohlmünzer (brevet polonais n 74 439; Chem. Abstr. 84, 28213e), l'ensemble de la plante est extrait à l'aide d'acide acétique chaud à 15% et ensuite les alcaloides solubles dans les hydrocarbures chlorés sont recristallisés à partir de l'extrait dans le dîchloréthane. La solution de dichloréthane est neutralisée par l'ammoniac et le solvant est séparé par distillation; le résidu d'évaporation a été considéré par l'auteur comme l'ajmalicîne. En réalité, toutefois, ce résidu d'évaporation est un mélange de divers alcaloides. Selon les observations de la demanderesse, l'ajmalicine n'est pas seule soluble dans le dichioréthane, également les alcaloïdes faiblement basiques, par exemple la tétrahydro- alstonine, se laissent très bien dissoudre dans les acides ainsi qu'également dans le dichioréthane et passent de ce fait dans les conditions indiquées conjointement à l'ajmalicine d'une phase dans l'autre. Cette méthode est par suite non appropriée pour l'obtention d'ajmalicine pure. L'objectif de la présente invention est par suite la mise au point d'un procédé selon lequel l'ajmalicine peut être obtenue avec une pureté appropriée, sans application d'opération de séparation chromatographique à partir des racines de la plante Catharanthus roseus. La demanderesse a maintenant trouvé qu'on obtient par extraction des racines de la plante avec un alcanol contenant de 1 à 5 atomes de carbone, par évaporation partielle de l'extrait et addition d'une solution aqueuse d'un acide faible formant des sels d'alcaloid facilement solubles, une solution des sels d'alcaloSdesdans laquelle l'ensemble des alcaloïdes de la plante sont présents parmi lesquels également les alcaloses faiblement basiques, comme ajmalicine et tétrahydroalstonine. A l'opposé, dans cette solution aqueuse acide, ceux des composants hydrophobes également présents, qui réservaient des difficultés ultérieures lors de l'isolement de l'ajmalicine, ne sont pas dissous.Ainsi, ces composants également présents, indésirés peuvent être séparés d'une manière simple, par exemple par filtration ou sédimentation de la solution des alcaloides. La demanderesse a en outre trouvé qu'à partir de la solution aqueuse faiblement acide, obtenue de la manière ci-dessus, les alcaloides faiblement basiques, comme l'ajmalicine et la tétrahydroalstonine, peuvent être séparées directement par épuisement à l'aide d'un solvant non miscible à l'eau et ainsi être isolées des composants fortement basiques restants,du mélange d'alcaloldes,par exemple de la serpentine et de l'alstonine, ainsi que de la partie prédominante des diverses substances ballaste basiques colorées. La demanderesse a également trouvé que 1' qjmalicine ne se dissout pas dans les hydrocarbures comme éther de pétrole, benzine, benzène et homologues du benzène, ainsi que dans l'hexane, heptane et autres, tandis que les autres alcaloïdes faiblement basiques, parmi lesquels également la tétrahydroalstonine, sont très bien solubles dans les hydrocarbures cités; que la solution d'alcaloidesaqueuse faiblement acide obtenue de la manière ci-dessus est d'abord épuisée à l'aide d'un tel hydrocarbure de sorte que seulement les derniers alcaloides passent dans la phase organique tandis que l'ajmalicine reste non dissoute et peut ainsi être également séparée des alcaloides. Ensuite, l'ajmalicine peut être extraite sélectivement à partir de la solution aqueuse faiblement acide à l'aide de solvant organiques appropriés, par exemple à l'aide d'hydrocarbureschlorésou à l'aide d'esters; les impuretés éventuellement encore présentes dans l'extrait organique obtenu,peuvent être éliminées d'une manière simple par des méthodes de changement de phases et/ou d'adsorption (par exemple par clarificatioX, de sorte que finalement seulement 1' qmalicine reste dans la solution organique. De cette manière, 1' ajmalicine peut également être obtenue à l'état pur, sans que l'on ait à appliquer pendant l'ensemble du procédé des méthodes chromatographiques. L'objet de la présente invention est ainsi un procédé pour isoler l'ajmalicine à partir des parties de plantes Catharanthus roseus, caractérisé en ce qu'il consiste à extraire les racines des plantes Catharanthus roseus à l'aide d'un alcanol contenant 1 à 5 atomes de carbone, à concentrer en partie si on le désire l'extrait, ensuite à l'additionner de la solution aqueuse d'un acide faible, à extraire ce mélange d'abord à l'aide d'un hydrocarbure, ensuite à l'aide d'un hydrocarbure chloré ou d'un ester, à isoler si on le désire, de la solution d'hydrocarbure la tétrahydroalstonine d'une manière connue en soi, à purifier l'extrait obtenu à l'aide de l'hydrocarbure chloré ou ester si on le désire par des méthodes de changement de phases et/ou d'adsorption et à isoler à partir de cet extrait l'ajmalicine d'une manière connue en soi et si on le désire à la transformer en un sel d'addition acide. Selon ce procédé, 1' ajmalicine est préparée de la manière suivante : les racines de plantes Catharanthus roseus sont broyées, ensuite extraites à l'aide d'un alcanol contenant de 1 à 5 atomes de carbone, avantageusement avec le méthanol ou l'éthanol. L'extrait obtenu avec l'alcanol est, si on le désire, partiellement évaporé, ensuite il est additionné d'un acide faible formant des sels facilement solubles dans l'eau avec l'ajmalicine.Comme tels acides on considère en premier lieu l'acide citrique, l'acide tartrique,l'acide acétique ou l'acide phosphorique. L'acide peut etre ajouté à l'extrait alcanolique de façon appropriée sous forme d'une solution aqueuse diluée à environ 0,4 à 4,0%. La solution acideapaeuse obtenue de cette manière est ensuite extraite à l'aide d'un solvant organique du type hydrocarbure, par exemple à l'aide d'éther de pétrole, benzine, hexane, heptane, benzène, ou à l'aide d'un homologue du benzène. Simultanément, la tétrahydroalstonine, ainsi que les autres alcaloïdes faiblement basiques, à l'exception de 1' aljmalicine, en outre également les impuretés non basiques difficilement solubles dans l'eau, sont précipitées dans la phase organique et peuvent par suite être isolées selon les méthodes connues en soi. Ensuite, la phase alcanolique acide aqueuse séparée est extraite à l'aide d'un solvant organique dissolvant bien 1' admalicine, de faon appropriée avec un hydrocarbure chloré ou avec un ester. Comme hydrocarbures chlorés, on considère dichlorométhane, chloroforme, tétrachlorure de carbone, dichloréthane, et composés analogues, comme esters peuvent être utilisés par exemple l'acétate d'éthyle ou l'acétate de butyle. La solution obtenue à l'aide de l'hydrocarbure chloré ou de l'ester peut être,si on le désire, purifiée d'une manière connue en soi, par exemple par changement de phaseset/òu par application des méthodes d'adsortion.Ainsi, lors de l'élimination des éventuelles impuretés non basiques de l'ajmalicine, la solution obtenue à l'aide de l'hydrocarbure chloré peut être extraite à l'aide d'un acide fort, formant des sels solubles dans l'eau avec 1' ajmalicine. Comme acides forts, peuvent être utilisés dans ce but, par exemple acide sulfurique, acide nitrique ou acide chlorhydrique. Les acides sont introduits de façon appropriée sous forme de solutions aqueuses diluées, par exemple sous forme de solutions aqueuses à 0,5-5%. La phase acide aqueuse est ensuite rendue alcaline, ajustée de façon appropriée à pH = 7 à & 9, ensuite cette solution aqueuse à peu près neutre ou faiblement alcaline est de nouveau épuisée à l'aide d'un hydrocarbure chloré ou à l'aide d'un ester. La phase organique purifiée peut éventuellement être encore purifiée par application de méthodes d'adsorption. Par méthode d'adsorption" onn'entend ici aucune méthode d'adsorption chromatographique mais seulement des méthodes d'adsorption différentes de celle-ci, par exemple clarification à l'aide d'un adsorbant. Comme adsorbants, peuvent être utilisés dans ce but le charbon actif ou en particulier l'oxyde d'aluminium.L'efficacité de l'adsorption des impuretés peut être contrôlée, par exemple par chromatographte sur couches minces. A partir de la solution purifiée de la manière cidessus, l'ajmalicine peut ensuite être obtenue par évaporation du solvant; l'åjmalicinevobtenue sous forme de résidu peut, si on le désire, être transformée en un sel d'addition acide. Une autre purification encoxe désirée éventuellement peut être entreprise par recristallisation et/ou par libération de la base à partir des sels d'addition acide. La présente invention est illustrée par les exemples non limitatifs ci-après. Exemple 1 4,5 kg de racines séchées à l'air, broyées de Catharanthus roseus sont extraits durant 8 fleures en trois portions de chacune 1,500 kg dans un extracteur Soxhlet à l'aide de 20 1 de méthanol. Les extraits méthanolîques obtenus sont combinés et concentrés à un volume de 500 à 2600 ml sur un bain d'eau à 40-500C sous pression-réduiite. Le produit de concentration est additionné de 2,4 1 d'une solution d'acide citrique aqueuse à 1%, ensuite le métfianol restant encore est séparé par distillation. Le résidu dedistillation est séparé par filtration et la solution aqueuse d'acide citrique obtenu est extraite 6 fois avec chaque fois 300 ml de benzène.Les phases organiques sont extraites en retour, ensuite avec 100 ml de solution d'acide citrique aqueuse à 1%. La phase benzénique séparée contient 3,7 g de substance sèche à partir de laquelle 600 mg de tetrahydroalstonine brute peuvent être obtenus de la manière habituelle. Les solutions d'acide citriquerasswblées sont extraites cinq fois avec chaque fois 300 ml de chloroforme. Les phases chloroformiques sont rassemblées, concentrées à un volume de 300 ml et extraites d'abord une fois avec 150 ml, ensuite qutre fois avec chaque fois 70 ml de solution aqueuse d'acide sulfurique 1 N. Les phases acide-aqueuses-séparées sont rassemblées, ajustées à pH = 8 et extraites en retour d'abord une fois avec 150 ml, puis trois fois avec chaque fois 70 ml de chloroforme. Les phases chloroformiques sont rassemblées et additionnées pour l'adsorption des impuretés de 250 g d'oxyde d'aluminium. L'oxyde d'aluminium est séparé par filtration et la solution clarifiée de cette manière est évaporée à siccité. Comme résidu on obtient 8,9 g d'ajmalicine (0,197%). Point de fusion: (recristalliséedans le méthanol) :255-257 C. pu 20 = 610 (c = 1, dans chloroforme). W (dans éthanol): # = 228, 278, 288 nm. max Rf (sur oxyde d'aluminium, solvant de développement : mélange 98 : 2 de benzène et d'éthanol): 0,61. L'ajmalicine obtenue de la manière ci-dessus est un produit bien défini chromatographiquement. Exemple 2 8,9 g d'ajmalicine (préparée selon l'exemple 1) sont dissous dans 5 ml d'éthanol à 40-50 C, la solution est additionnée de 25 ml de solution aqueuse d'acide chlorhydrique 1 N et la solution obtenue de cette manière du sel d'ajmalicine, le chlorhydrate, est laissée au repos pour la cristallisation. Les cristaux obtenus sont séparés par filtration et séchés. On obtient de cette manière 4,4 g de chlorhydrate d'ajmalicine. Le produit se décompose au-dessus de 25O0C. [&alpha;]D20 = Oo (c = 1, dans eau). D W (dans éthanol): X = 228, 278, 288 nm. max REVENDICATIONS 1. Procédé d'obtention d' ajmalicine, a partir des plantes Catharanthus roseus,et des sels d'addition acide de celle-ci, procédé caractérisé en ce qu'il consiste à extraire les racines des plantes Catharanthus roseus à laide d'un alcanol contenant 1 à 5 atomes de carbone, à concentrer en partie si on le désire l'extrait, ensuite à l'additionner d'une solution aqueuse d'un acide faible, à extraire ce mélange d'abord avec un hydrocarbure, ensuite avec un hydrocarbure chloré ou avec un ester, à isoler si on le désire de la solution d'hydrocarbure la tétrahydroalstonine d'une manière connue en soi, à purifier si on le désire par changement de phaseset/ou par adsorption l'extrait obtenu à l'aide de l'hydrocarbure chloré ou de l'ester et à isoler de l'extrait d'une manière connue en soi l'ajmalicine et, Si on le désire, à la transformer en un sel d'addition acide. 2. Procédé selon la revendication 1, caractérisé en ce que l'on extrait les racines des plantes à l'aide de méthanol. 3. Procédé selon la revendication 1, caractérisé en ce que l'on utilise 1'acide citrique comme acide faible. 4. Procédé selon la revendication 1, caractérisé en ce que l'on utilise le benzène, le toluène ou le xylène comme hydrocarbure. 5. Procédé selon la revendication 1, caractérisé enoe que l'on utilise le chloroforme ou le dichlorométhane comme hydrocarbure chloré. 6. Procédé selon la revendication 1, caractérisé en ce que l'on élimine les impuretés présentes par traitement de la solution d'ajmalicine à l'aide d'un agent d'adsorption, en particulier l'oxyde d'aluminium.