Brevet FR2431130A1 — publié le 19800208

Un des secteurs où se trouve la orincipale er- plication du procédé électrochimique dénommé "électrophorèse" est celui de la diagnostique chimie-clinique : -l'electropho- rèse est ici utilisée pour obtenir la séparation des différents composés de liquides biologiques, et parmi ceux-ci il y en a quelques uns qui sont soumis à ce procédé de façon habituelle : par exemple le sérum et le plasma du sans, et c'est cette application que plus particulièrement l'invention vise. L'argumentation suivante est limitée à l'elec- trophorèse des lipoprotéines, car celle-ci principalement, a été l'objet d'expérimentations, ayant pour but d'élaborer une méthode qui consiste à obtenir des résultats indiqués dans ce nui suit. utilisant des supports définis par " acétates secs". I1 est nécessaire à ce stade d'indiquer les points préliminaires suivants A - Définition des supports employés dans l'électrophorèse du sérum du sang. La grande majorité d'analystes utilise comme cupp3rt pour l'électrophorèse du sérum de sang, des bandes en acétate de cellulose qui peuvent être de deux façons différentes 1) bandes en acétate de cellulose à l'état sec ( ou acétates secs 1 2) bandes en acétate de cellulose à l'état humide ( ou acétates humides ). n - Classification des lipoprotéines du sérum à hétérogénéité moléculaire de l'Alpha lipoprotéine ou HnL t high density linoprotein : liqoprotéine à haute densité ). I1 y a trois types t fractions ) de lipoprotéines présents dans le sérum etX séparables au moyen de l'électrophorèse : 1 ) les becta lipoprotéines ou LDL t low density lipoprotein liooprotéine à basse densité ) qui ont un contenu très élevé en cholestérol 2 ) les pré-bêta lipoprotéines ou VLDL ( very low density lipoprotein = lipoprotéine à très basse densité ), avec un contenu élevé en triglycérides 3 Oles Alpha lipoprotéines ou HDL thith density lipoprotein = Ilooprotéine à haute densité)avec tri haut contenuenchcspholipides. Quelques auteurs ont relevé une héterorénéité électronhorétique présente dans le cadre de la fraction " al- pha lipoprotéique " et en fonction de cette hétérornnéite, cette fraction se révèle composée de deux sous-fractions anpelées LpA (fraction rapide) et LpB (fraction lente). En effectuant l'électrophorèse des lipoproteines, en utilisant pour support une bande en acétate humide, en ce qui concerne la fraction Alpha, on neut voir la nrc;s'Ên- ce de deux sous-fractions LnA et Lpn bien distinctes et visiblement appréciables. En effectuant le même procédé, utilisant au contraire pour support une bande en "acétate sec", on rema r- que la présence d'une seule fraction alpha (et plus précisément la LpP) suivie vers l'anode par un halo d'une non distincte appréciabilité optique et instrumentale. Dans la première figure annexe, on a reproduit un résultat obtenu sur une bande en acétate de cellulose sec on remarque la présence en 5 des beta lipoprotéines, en PB la présence des pré-bêta lipoprotéines en en A les Alpha lipoprotéines délimitées au type LpS, et de toute façon, sans délimitation de deux zones. On peut attribuer le phénomène au fait que la structure chimico-physique de l'acétate de cellulose sec et les phénomènes qui en dérivent durant le procédé électropho optique, ne permettent pas de contenir la migration de la fraction rapide LpA dans un espace morphologiquement bien délimité, et ceci ne permet pas une individuation optique et instrumentale d'une telle'fraction. L'invention vise à obtenir un résultat meilleur de celui actuel et illustré an figure 1, tout en utilisant une bande d'acétate sec. On est intervenu sur la structure chimico-physique de l'acétate de cellulose à l'état sec, provoquant en lui des modifications aptes à réduire la vitesse de migration de la fraction rapide LpA et à en permettre l'individuation dans un espace réduit bien délimité et et compatible aux exigences d'une évalutation optique et instrumentale. L'objet de cette invention est donc un procédé de traitement des bandes d'acétate de cellulose sec pour permettre la détermination dans un espace réduit -de la fraction rapide LpA des Alpha lipoprotéines, d'où rendre compatible l'évaluation optique et instrumentale des fractions LpA et LpB de ces Alpha lipoprotéines,- pour lequel la bande d acétate sec est soumise à un traitement avec un solvant qui agit sur l'acétate de cellulose, en empechant en lui des modifications chimico-obysiques selon une forme d'exécu- tison, l'intervention sur la structure de l'acétate sec a été effectuéeen utilisant comme substance capable d'attaquer chimiquement ce composé, la dimetyl cétone, communément appelé "acétone".En pratique les bandes en acétate de cellulose à l'état sec sont soumises à un bain constitué par un mélange d'-un égal volume d'eau et d'acétone. Après un tel bain on peut procéder immédiatement à l'utilisation de la bande après imbir bition dans une solution tamponnée. Un résultat semblable peut etre obtenu tout en remplaçant - selon d'autres modèles de l'invention - le bain d 'ac(tone-H20 avec d'autres solvants qui peuvent attaquer l'acétate de cellulose et qui ne sont pas miscibles avec l'eau, comme l'alcool éthylique, l'acide acétique anhydre, l'acétate de méthyle.Par exemple il s'est révélé utile un traitement avec un mélange ainsi constitué - alcool méthylique = ml. B10 - acide acétique enhydre = ml. 90 - méthyl acétate = ml. 100 Suivant les modifications chimico-nhysiques provoquées à charge de l'acétate de cellulose sec à partir du traitement susdit, la fraction LpA reste contenue dans un es pacte bien délimité, on en empêche la dispersion vers l'anode et Dar conséquent on a la possibilité d'apprécier par voie optique ou instrumentale une telle portion de lipides contenus dans le sérum. Dans la figure 2 est démontré le résultat d'une analyse de sérum sanguin dans lequel les fractions lipoproté mues sont montrées d'une façon évidente et sélectionnées sur une bande d'acétate de cellulose sec soumise à un traitement préventif au mélange acétone et eau selon l'invention. On y relève la fraction B des Bêta lipoprotéi nes. la fraction P9 des Pré-bêta lipoprotéines, et sont bien délimitées des deux fractions LpA et LpB des Alpha lipoprotéines. REVENDICATIONS 1. Procédé de traitement des bandes d'acétate de cellulose sec pour permettre le repérage dans un espace réduit de la fraction rapide LpA des Alpha lipoprotéines, et de là rendre compatible l'évaluation optique et instrumentale des fractions LpA et LpB de ces Alpha lipoprotéines, caractérisé en ce que la bande d'acétate sec est soumise à un traitement avec un solvant qui agit sur l'acétate de cellulose en lui imposant des modifications chimico-physiques 2. Procédé selon la revendication 1, caractérisé en ce que le solvant est un solvant non miscible avec l'eau ; 3. Procédé selon les revendications 1 ou 2, caractérisé en ce que l'acétate de cellulose sec est traité avec la dimethyl-cetone (acétone) mélangé avec l'eau 4. Procédé selon la revendication 3, caractérisé en ce cue le traitement est effectué par un bain constitué d'une mélange égal en volume d'acétone de l'eau tv/v) 5. Procédé selon les r-evendications 1 ou 2, caractérisé en ce que l'acétate est traité avec un solvant ou un mélange de solvants choisi parmi les suivants : alcool mé thyliaue ; alcool éthylique ; acide acétique anhydre ; acéta- te de méthyle ; acétate d'éthyle.