Brevet FR2434172A1 — publié le 19800321

La présente invention concerne de nouveaux coaposés chimiques et un procédé de préparation de ces composés ainsi que leur application en tant qu'intermédiairos de synthèùse Il est connu depuis un certain tenps que des alcaloïdes naturels, tels que la vinblastine ou la vincristine qui répondont a' la formule R = CH3 : vinblastine, R v CHO : vincristine) et qui peuvent être isolés de plusieurs espèces de Catharauthus, en particulier de C. roseus présentent des propriétés anti turncrales. Compte tenu du fait que ces alcaloïdes ne sont pré- sent oL"en très faible quantité dans la plante, on a cherché a préparer des dérivés plus actifs de ces composés, voir ainsi les BSM 5487 M, 6668 M, le brevet français 22218 095.On a également proposé, voir les brevets français ?4 43221 et 77 11081, des procédés de synthèse ouvrant la voie à de nouveaux composés de.structure identique mais diversement substitués Néanmoins dans l'ensemble de la technique antérieure les composés proposés conservaienttoujours le squelette de base de la vinblastine. La présente invention a pour objet des composés intermédiaires utiles dans la synthèse de composés chimiques nouveaux possédant notamment une activité antitumorale. Les composés intermédiaires de la présente invention sont des ions immonium de formule I dans laquelle : Rs1 xeprésente un atome d'hydrogène ou un radical alcoxy, acyle, forniyle ou halogénoacyle, R'2 représente un atome d'hydrogène ou un radical alcoyle, R'3 et R"3 identiques ou différents, représentent un atome d'hy- hydrogène ou un radical hydroxyle, alcanoyloxyle, ou bien R'3 et R"3 forment ensemble un groupement carbo nyle, ou bien R'3 et R'5 forment ensemble un pont époxy ou une double liaison, R représente un atome d'hydrogène ou un radical alcoyl oxycarbonyle, hydroxyméthyle, alcanoyloxyméthyle ou R'5 et R"5 identiques ou différents, représentent un atome d'hydrogène ou un radical hydroxyle, alcanoyloxyle, éthyle ou hydroxy-2 éthyle, R'6 représente un atome d'hydrogène ou un radical éthy le, hydroxy-2 éthyle on acétyle, R1 représente un atome d'hydrogène ou un radical alcoy le, formyle ou acyle, R2 représente un atome d'hydrogène ou un radical alcoxy, R3 représente -un atome d'hydrogène ou un radical hydroxyle ou ou alcanoyloxyle ou bien, R3 et R4 forment ensemble un p-ont époxy ou une double liaison, R4 représente un atome d'hydrogène ou un radical hydroxyles alcanoyloxyle ou bien, R4 et R5 forment ensemble un pont époxy, R6 représente un radical alcoyloxycarbonyle, hydrazido acétamido, hydroxyméthyle ou alcanoyloxyméthyle, R5 et 37 représentent un atome d'hydrogène ou un radical hydro- xyle ou alcanoyloxyle, X est l'anion d'un acide organique ou inorganique. Les radicaux alcoyles mentionnés dans la présente description sont de préférence des radicaux alcoyles inférieurs droits ou ramifiés ayant de 1 à 5 atomes de carbone, comme les radicaux méthyl et éthyle Les radicaux alcoxy mentionnés dans la présente des cription sont de préférence des radicaux alcoxy inférieurs correspondant aux radicaux alcoyles précédents, c'est-à-dire par exemple les radicaux méthoxy et éthoxy. t Les radicaux acyles cités dans la présente descrip- tion sont par exemple les radicaux acyles provenant des acides carboxyliquos inférieurs, saturés ou non saturés, tels que les ;*radicaux acétyl ou propionyl. De même, les radicaux alcanoyloxy sont de préférence des radicaux correspondant aux radicaux acyles précédents, comme le radical acétyloxy. Les radicaux alcoyloxycarbonyle sont de préférence des radicaux dans lesquels la partie alcoyle correspond à la définition préférée donnée précédemment, par exemple le radical méthoxycarbonyle. Parmi- les anions d'acide organique ou inorganique représente par X , il faut citer en particulier les anions des acides carboxyliques halogénés, en particulier fluorés, en particulier de l'acide trifluoroacétique. La formule I représente la forme sous laquelle les composés de l'invention sont le plus facilement utilisables mais dans certaines conditions de pH, les composés de formule I peuvent se présenter sous forme de composés non ioniques de formule I' La formule X recouvre donc les composés de formule I aussi bien sous forme d'ton immonium que sous la forme non ionique de la formule I'. Parmi les -composés particulierement intéressants de la présente invention, il faut citer les composés dans lesquels le carbone en position 16', c'est-a-dire le carbone portant le substituant R'4, a la conffguration naturelle, c'est-à-dire celle de la vinblastine ou de la vincristine qui est la configuration S. Et c'est l'un des avantages du procédé selon la présente invention de conserver la configuration du carbone en position 16'. D'invention concerne plus particulièrement les composés de formule la dans laquelle R'3 représente un atome d'hydrogène ou-unradical hydroxyt R'5 représente un atome d'hydrogène ou un radical hydroxy ,. ou R'3 et R'5 représentent ensemble un pont époxy ou une double liaison R"5 représente un atome d'hydrogène ou un radical éthyle, R1 représente un atome d'hydrogène, un radical alcoyle, formyle ou ac-yle R2 représente un atome d'hydrogène ou un radical métho xy ; R7 représente un radical alcanoyloxyle, la ligne pointillée représente une double liaison éventuelle xe a la signification donnée précédemment. La présente invention concerne également un procédé de préparation de composé de formule I, caractérisé en ce que l'on fait réagir un composé de formule Il dans laquelle les substituants ont la signification-donnée précédemment, en présence d'un réactif formateur d'ion immonium,et en ce que l'on isole ou non le composé selon l'inven- tion de formule I. Parmi les agents formateurs d'ion ammonium, on utilise de préférence les halogénures, anhydrides ou sels d'acides organiques ou inorganiques en particulier d'acides carboxyliques halogénés (en particulier fluorés) ou non. Les réactifs formateurs d'ion immonium sont par exemple l'anhydride d'acide acétique ou trifluoroacétique. La réaction est conduite de préférence dans un solvant organique anhydre tel qu'un solvant chloré, chlorure de méthylène, dichloroéthane ou chloroforme. La.réaction est conduite de préférence a une tempéra- ture comprise entre -50C et +50C par exemple 0 C. L'ion immonium de formule I peut être par exemple mis en réaction avec de l'eau pour conduire à la formation d'un com- posé de formule (A) dans laquelle les substituants ont les significations données précédemment. La préparation des composés de formule (A) b partir des composés de formule I est mise en oeuvre de préférence a l'aide d'un ou plusieurs solvants organiques non nucléophiles contenant de l'eau Comme solvant non nucléophile on utilise de préfé- rence le tétrahydrofuranne ou le dioxanne. Cette réaction peut être conduite a température ambiante. Lors de la préparation des composés de formule A il 'est pas nécessaire d'isoler le composé de formule I a la fin de son procédé de préparation, et la plupart du temps, le composé de formule I pourra être utilisé après une simple évaporation du solvant réactionnel ou bien même dans son solvant réactionnel, car dans ce cas bien que le mélange réactionnel obtenu puisse contenir d'autres produits de réaction, ceux-ci ne gêne pas les réactions subséquentes. La préparation du composé de formule A comportera alors deux étapes, l'étape a) de formation du composé de formule I et l'étape b) de préparation de A. lorsque l'on utilise un solvant différent dans l'étape. a) et dans ltétape b), il est nécessaire de chasser le solvant du mélange réactionnel de l'étape a) avant la mise en oeuvre de l'étape b), on peut par exemple le distiller. Il est possible également de conduire l'étape a) et l'étape b) dans un même solvant r dans ce cas l'étape a) est conduite dans le solvant anhydre et on rajoute de l'eau pour la mise en oeuvre de l'étape b). La séparation de A- peut être conduite par tout moyen connu de séparation, par exemple on peut extraire le produit de formule A par un solvant chloré tel que le chloro forme, puis séparer le composé de formule A de la phase chlo roformioue par chromatographie prépara*ive, La séparation conduit en général à 11 obtention d'un sous-produit qui, par réduction, donne un composé de formule III mentionné ci-dessous qui peut etre recyclé. les composés de formule II sont connus (voir les brevets cités précédemment) ou peuvent entre obtenus à partir de composés de formule III par des procédés connus dans ce domaine en particulier par oxydation par exemple à l'aide d'acides perbenzoïques dans un solvant notamment l'acide m-chloroperbenzoïque dans le chloroforme ou dans le chlorure de méthylène. Les composés de formule III sont connus ou peuvent être préparés par des procédés décrits dans les brevets pré cédemment cités. D'autres.caractéristiques de mise en oeuvre du procédé selon la présente invention pourront être déduites des exemples suivants : - EXEMPLE (schéma page 10). a) Préparation du Mb' oxyde de #15' deshydroxy-20' vincaleucoblastine (II') A une solution de #15' deshydroxy-20' vincaleucoblastine (III') (748 mg ; 0,94 mmole) dans 10 ml de chlorure de méthylène à 0 C sous agitation et sous argon, on ajoute en une seule fois 180 mg (1,04 mmole) d'acide méta chloro-perbenzoïque. On laisse en contact 30 mm à 0 C. Puis on reprend le milieu réactionnel par 100 ml de chloroforme et on lave la phase organique 4 fois avec 3 ml d'une solution aqueuse de bicarbonate de sodium à 40 g/l. La phase organique est ensuite lavée à neutralité par de l'eau saturée de chlorure de sodium (3 fois 10 ml), séchée par du sulfate de sodium, filtrée et évaporée sous vide pour fournir 712 mg de Nb' oxyde de #15' deshydroxy -20' viracaleucoblastine (Rdt : 93%). U.V. (#nm,#) : 213, 268, 289, 293, 310. RMN1H (400 MHZ ; # = OPPEM.TMS ; J : Hz) 9,50 (#,1H)C16-OH ; 8@19(#,1H)Na'-H ; 7,70 (d,1H, J#7,5)C9, H ou C12,H ; 7,19 et 7,14010, H et C11,H ; 7,07 (d, J#7,5)C12,H ou C9,H ; 6,43 (#,1H)C9H ; 6,11(#,1H)C12H ; 5,84 (dd, 1H,J14,15#1OHz et J3,14# 4,5C14H ; 5,44 (1H)C15,H, 5,41 (#,1H)C17-H ; 5,27 (d,1H, J14, 15#10Hz)C15H ; 4,51 (m,2H) 4,32 (d,1H) et 3,98 (d,1H) :Nb'CH ; 3,84 (#,3H), 3,78(#,3H) et 3,69 (#,3H)C11OCH3, C16CO2CH3 et C16,CO2CH3 2,62 (#,3H)NaCH3; 2,09(#,3H)OCOCH3 ; 1,06 (t,3H,J18',19' : 7Hz)C18,H et 0,64 (t,3H,J18,19#C18H - S.M. : 808, 806, 792 (M-16), 777,761,733, 669,633,631,612,611,610,510,469,282,222,200,193,144,136,135, 122,121 (pic dc base), 108,107. b) Préparation de la nor-6'#15' desbydroxy-20' bincalcucoblastine A une solution du Nb, oxyde précédent (345 mg ; 0,43 mmole)dans 2 mi de chlorure de méthylène sec à 0 C sous agi tation et sous argon, on ajoute 276 l d'anhydride trifluoro acétique (1,89 mmole). On laisse en contact 2 h à 0 C. Le -milieu réactionnel est évaporé à sec à la pompe électrique. On obtient le composé de formule I'. Le résidu est repris par 8 ml de tétrahydrofuranne et 30 ml d'eau, agité à température ambiante pendant 1 heure, repris par 50 ml de chloroforme et lavé avec une solution aqueuse saturée de chlorure de sodium. La phase organique est ensuite séchée et évaporée Le produit brut ainsi obtenu est purifié par chromatographie sur plaque épaisse de silice (éluant CHCl3 . MeOH 90 : 10). Le produit le moins polaire (90 mg ; 278) correspond au composé du titre, qui est un composé de formule générale A. [&alpha;D] = +52,4 (c=3,24) CHCl3 U.V. (#nm,#) : 215 (36.700), 268 (11.000), 282 (9,500), 293 (7.600), 310 (4.400). D.C. (#nm,##) : 312 (+3,4), 305 (+3,2), 258 (+13,3), 230 (+31,6) 210 (-44,3). RMNH (400MHZ ; # = OPPM.TMS ; J:Hz) ; 8,50 (#,1H) OH ou NH ; 7,77 (d, 1H,J=8) NH ou aromatique ; 7,15 (m, 4H) aro matiques ; 6,4 (#,1H)C9H ; 6,08 (#,1H)C12-H ; 5,83 (dd, 1H, J=3,5 et 9,5)C14H ; 5,76 (m,1H)C15,-H ; 5,37 (#,1H)C17H ; 5,25 (d,1H, J=9,5)C15H ; 4,58 (m,1H) et 4,41 (d,1H)C6,H eT C6,H' ; 3,83 (#,3H) ; 3,13 (#,3H) ; 3,68 (#,4H)C16CO2CH3,C11 OCH3, C16,CO2CH3 et C21H ; 2,69 (#,3H)Na-CH3 ; 2,57 (#,1H) C2H ; 2,06 (#,3H)OCOCH3 ; 1,07 (t,3H,J=7) ; 0,70 (t,3H, J = 7) C18,H et C18 H. S.M. : 794,792,748,656,598,522,480,450,436, 331,282,240,222,210,165,152,144,136,135,122. I.R. (-7 cm-1) : 1740, 3420. .Le produit le plus polaire (275 mg) repris par du MeOH (3 ml) ; réduit par un excès de borohydrure de sodium, extrait et purifié comme plus haut- fournit- 200 mg de deshydroxy-20' vincaleucoblastine (III) qui peut être recyclé. Les composés de formule A susceptibles d'être obtenus à partir des composés de la présente invention, présentent des propriétés antitumorales et peuvent donc ëtre utilisés dans le traitement de diverses aîfections tomo raies telles que les leucémies. On donne ci-après les résultats des études pharmacologiques in-vitro et in vivo conduites sur le compose de la nor-6' #15' deshydroxy-20' vincaleucobiastine. 1) Inbibition de la polymérisation de la tubuline Le récepteur des alcaloïdes indoliques antitumoraux de@type vinblastine est la tubuline. Rlle est facilement extraite du cerveau de porc où elle représente 10% des protéines solubles. La polymérisation de la tubuline en microtubules peut entre facilement suivie au moyen d'un spectrophomètre W en observant à 350 nm. ta vitesse maximale de polymérisation est ainsi déterminée ; celle-ci est diminuée par l'addition d'inhibiteurs du type de la vinblastine et une concentration, I50, diminuant de moitié la vitesse est obtenue pour chaque. substance essayée. Un deuxième effet de ces produits est pris en considération: à des doses plus élevées, après inhibition totale de la polymérisation, une spiralisation de la tubuline est observée (vérifié par microscopie électronique) et une nouvelle concentration, S50, correspondant à l'apparition de 505 du phénomène est déterminée. 'les résultats de claque produit sont toujours compa rés Ci ceux de la vinblastine utilisée comme référence. Tableau X RESULTATS I50 mole/l S50 mole/1 omposé de 13 x 10-6 inactif 'Exemple vinblastine 1,7 x 10-6 9 x Le produit de l'Exemple n'a pas d'activité "spira -lisante" bien qu'il ait une activité semblable à la vinblas- tine en ce qui concerne l'inhibition de la polymérisation. 2) Activité sur le test de la leucémie P388 de la souris A titre d'exemple on présente dans le Tableau II les résultats obtenus avec le composé de l'Exemple sous forme de tartrate dans le traitement de la leucémie P 388 Tableau II t I Sérum physiolo- 5 mg/kg 10 mg/kg 25 mg/kg que (témoin) Nombre de souris 10 10 10 10 Pemps moyen de survie (jours) 10,5+0,4 13s-6+0,8 17s9 FOs9 > / 24,3 I.'l.so T - C -----z e e e = 100 29,tu 7os5 > 4 c a=-î1oe 129,5 170,5 > /231,4 0 T = vie moyenne (on jours) des souris du lot traité C = vie moyenne (en jours) des souris du lot témoin souris : DBA/2 # Greffe : P388 (106 cell./souris ip.) traitement: i.p. Délai greffe traitement : 24 h. 3) Activité sur le test de la leucémie L1210 de la souris. Le tableau III résume les résultats obtenus avec le composé de l'exemple sous forme de tartrate dans le traitement de la leucémie L1210. Tableau III Sérum physiolo- 5 mg/kg 10 mg/kg/ 25 mg/kg gique (témoin) Nombre de souris 10 10 10 10 Temps moyen de 8,6+0,4 . 13,5+0,9 14,2+0,7 survie (jours) 8,6#0,7 12,0#0,9 12,9#1,3 13,5#0,7 I.L.S. 57 65 T - C/C x 100 40 50 57 157 165 T/C x 100 140 150 157 Souris : DBA/2 9 Greffe : L1210 Traitement : i.p. Délai greffe # traitement : : 24 h. Conc 0,5 et 1 mg/ml dans du sérum physiologique. 4) Toxicité du produit de l'exemple sous forme de tartrate. Des souris DBA/2 2 reçoivent par voie intrapéritonéale en une fois une dose de produit en expérimentation et on étudie la mortalité sur 35 jours. On obtient les résultats suivants Tableau IV Dose Nombre Etalement de la mortalité (J) Mortalité (mg/kg) de en souris 1 3 4 6 9 35 j 25 5 0 50 5 1 1 1 1 4/5 75 5 3 1 1 5/5 100 3 3 3/3 On observe donc une DLo = 25 mg/kg qui est a comarer avec une DL1o = 3 mg/kg pour la vincristine, DL50 = 2 mg/kg pour la vincristine (i.v.), DL50 = 17 mg/kg pour la vinblastine (i.v.). De l'ensemble de ces expériences, il résulte que le composé de l'exemple est plus actif que la vincristine et la vinblastine sur les leucemies étudiées, tout en étant beaucoup moins toxique. La présente invention concerne également les composi- tions pharmaceutiques contenant un nouveau composé de formule I ou un de ses sels, éventuellement en association avec tout autre produit pharmaceutique compatible, pouvant être inerte ou physiologiquement actif. Ces compositions peuvent etre présentées sous toute forme appropriée à'la voie d'administration prévue. La voie parentale est la voie d'administration préférentielle, notamment la voie intraveineuse. Les compositions selon l'invention pour administraparentérale peuvent être des solutions stériles aqueuses ou non aqueuse, des suspensions ou des émulsions. Comme solvant ou véhicule, on peut employer le propylène glycol, le polyéthy- lène glycol, les huiles végétales, en particulier l'huile - d'olive, les esters organiques injectables, en particulier l'o- léate:d'éthyle'. Ces compositions peuvent également contenir des adjuvants pn particulier des agents mouillants, émulsifiants et -dispersants. La stérilisation peut se faire de plusieurs façons par-exemple à l'aide d'un filtre bactériologique, en incorporant à la composition des agents stérilisants, par irradiation ou par chauffage.Elles peuvent être également préparées sous forme de compositions solides stériles qui peuvent être dissoutes ou dispersées au moment de l'emploi dans de l'eau stérile ou tout autre milieu stérile injectable. 'les composés nouveaux ou leurs sels sont actifs dans le traitement des tumeurs solides ou liquides et plus particu fièrement des cancers humains à des doses journalières compri- ses entre 10 et 20 mg par jour pour un adulte. D'exemple suivant illustre une composition selon l'invention. EXEMPLE On prépare une solution contenant 10 mg/cm3 de matière active en dissolvant lg du produit - de l'Exemple dans 100 cm3 de soluté physiologique apyrogène. La solution obtenue est répartie aseptiquement en ampoules de 2 cm3 à raison de l cm3 par ampoule. Les ampoules sont scellées et contiennent chacune 10 mg de principe actif. REVENDICATIONS 1) Composes de formule générale dans laquelle: R'1 représente un atome d'hydrogène ou un radical alcoxy, acyle, formyle ou halogéncacyle, R'2 représente un atome 'hydrogène ou un radical alcoyle, R'3 et R"3 identiques ou différents, représentent un atome d'hydrogène ou un radical hydroxyle, alcanoyloxyle, ou bien R'3 et R"3 forment ensemble un groupement carbonyle, ou bien R'3 et R'5 forment ensemble un pont époxy ou une double liaison/ R'4 représente un atome d'hydrogène ou un radical alcoyles . oxycarbonyle, hydroxyméthyle, aloanoyloxyméthyle ou R'5 et R"5 identiques ou différents, représentent un atome . d'hydrogène ou un radical hydroxyle, alcanoyloxyle, éthyle ou hydroxy-2-éthyle, R'6 représente un atome d'hydrogène ou un radical éthyle, hydroxy-2 éthyle ou acétyle, R1 représente un atome d'hydrogène ou un radical alcoy le, formyle on acyle, R2 représente un atome d'hydrogène ou un radical alcoxy, R3 représente un atome d'hydrogène ou un radical hydroxyle ou alcanoyloxyle ou. bien R3 et R4 forment ensemble un pont époxy ou une double liaison, R4 représente un atome d'hydrogène ou un radical hydroxyle, alcanoyloxyle ou bien R4 et R5 forment ensemble un pont époxy, R6 représente un radical alcoyloYycarbonyle, hydrazido, acétamido, hydroxyméthyle ou alcanoyloxyméthyle, R5 et R7 représentent un atome d'hydrogène ou un radical hydro- xy le ou alcanoyloxyle, X est l'anion d'un acide organique ou inorganique. 2) Composés selon la revendication 1 de formule Ia dans laquelle R'3 représente un atome d'hydrogène ou un radical hydroxy; R'5 représente un atome d'hydrogène ou un radical hydroxy; et R'5 représentent ensemble un pont époxy ou une double liai son R"5 représente un atome d'hydrogène ou un radical éthyle, R1 représente un atome d'hydrogène, un radical alcoyle, formyle ou acyle ; R'2 représente un atome d'hydrogène ou un radical mêthoxy R7 représente un radical alcanoyloxyle ; la ligne pointillée représente une double liaison éventuelle, ou l'un de ses sels d'addition avec les acides, ou bien de ses sels d'ammonium quaternaire. 3) Composé selon la revendication l, caractérisé en ce que X représente l'anion d'un acide carboxylique halogéné. 4) Composé selon l'une des revendications l à 3, caractérisé en ce que le carbone portant le substituant R'4 a @@ configuration naturelle (c'est-à-dire la configuration 16'S dans le cas du composé de formule La). 5) Un procédé de préparation des composés selon l'uns des revendications i à 4, caractérisé en ce que l'on fait réagi un composé de formule II dans laquelle les substituants ont la signification donnée précédemment, en présence d'un réactif formation d'ion immonium. 6) Procédé selon la revendication 5, caractérisé en ce que le réactif formateur d'ion immonium est un halogénure, anhydride ou sel d'acide organique ou inorganique. .73 Procédé selon la revendication 6; caractérisé en ce que le réactif formateur d'ion immonium est un halogé- Dure, anhydride ou sel d'acide carboxylique halogéne. 8) Procédé selon la revendication 7, caractérisé en ce que le réactif formateur d'ion immonium est l'anhydride trifluoroacétique. 9) Procédé selon l'une des revendications 5 à 8, caractérisé en ce ,que la réaction est conduite dans un solvant anhydre. ,io3 Procédé selon la revendication 9, caractérisé en ce que le solvant : anhydre est un solvant chloré. 11) Procédé selon la revendication 10 caractérisé en ce que ,le solvant chloré est le chlorure de méthylène, le dichloroéthane ou le chloroforme. 12) Procédé selon l'une des revendications 5 à 11, caractérisé en ce que la réaction est- conduite à une tempéra ture comprise entre -5 C et +5 C. 13) Des composés obtenus par la mise en oeuvre du procédé selon l'une des revendications 5 à 12. 14) Application des composés selon l'une des revendications l à 4 et 13 à la préparation de composés de formule par action de l'eau sur les composés de formule I. 15) Application selon la revendication 14, caractérisée en ce que le composé de formule T est .traité par un mélange de solvant organique non-nucléophile et d'eau. 16) Application selon la revendication 15-, caractérisée en ce que le solvant organique non-nucléophile est le tétrahydroT furanne ou le dioxanne. 17) Application selon l'une des revendications 14 à 16, caractérisée en ce que le composé de formule A est séparé du mélange réactionnel par extraction par un solvant chloré et chromatographié.