Brevet FR2430610A1 — publié le 19800201

La présente invention est relative à un procédé et un dispositif pour déterminer la sensibilité de bactéries et levures aux produits antibiotiques. I1 est connu depuis longtemps de déterminer la sensibilité de bactéries ou levures aux antibiotiques par la technique de la culture sur gélose en botte de Pétri. Dans cette techniques on dépose un "disque d'antibiotique contenant une quantité dosée de l'antibiotique à étudier sur une couche de gélose ensemencée au préalable avec la bactérie ou levure. L'antibiotique diffuse dans la gélose, où se crée un gradient de concentration, et après un séjour dans des conditions appropriées, le disque d'antibiotique est entouré d'une zone d'inhibition circulaire d'autant plus large que la bactérie ou levure est plus sensible à l'antibiotique considéré. Dans cette zone, la gélose parait intacte, alors quten dehors,ses propriétés optiques sont altérées et elle a un aspect dépoli.Il est connu de mesurer le diamètre de la zone d'inhibition avec des moyens de mesure très simples gradués en millimètres, éventuellement à l'aide d'un agrandisseur de profil. Cette méthode, toutefois, eSt manuelle et demande du temps. I1 est apparu des méthodes automatiques de détermination de sensibilité des bactéries et levures aux antibiotiques, mais ces méthodes utilisent d'autres techniques, à savoir des techniques où on opère en milieu liquide et on mesure la transmission de la lumière à travers des éprouvettes dans lesquelles on a introduit, outre les bactéries ou levures, une solution de l'antibiotique. Pour obtenir l'équivalent d'un gradient de concentration, il faut une série d'éprouvettes contenant des concentrations différentes de l'antibiotique. Ces méthodes sont donc conteuses. Le-but de la présente invention est de fournir un procédé et un dispositif automatique quipgmettent d'obtenir très rapidement, et pour des frais réduitslune indication chiffrée de la sensibilité. Le procédé selon l'invention pour déterminer la sensibilité des bactéries et levures à des antibiotiques comprend la mesure du diamètre des zones dtinhibition obtenues par la technique des cultures sur gélose en botte de Pétri, ou toute technique analogue dans laquelle les différences de sensibilité se traduisent par des différences de diamètre d'une zone circulaire ayant des propriétés optiques différentes de ce qui les environne.Dans le procédé selon l'invention, on fait défiler les zones dtinhibition, ou zones circulaires analogues1 entre un émetteur d'un rayonnement pour lequel le facteur de transmission est différent dans la zone d'inhibition et en dehors de cette zone, et un capteur sensible à l'intensité du rayonnement transmis, le défilement ayant lieu suivant un trajet rectiligne tel que la région traversée par le rayonnement passe par le centre de la zone d'inhibition, et les signaux correspondant aux intensités de rayonnement reçues par le capteur sont traités par une électronique appropriée qui en extrait des valeurs de diamètre. L'appareil n'a toute son efficacité que si les disques d'antibiotique, ou autres moyens qui fixent le centre du cercle d'in hibition,sont mis en place par un appareil automatique qui détermine avec précision leur position, car alors le défilement peut aisément être fait de manière automatique. Par exemple, il existe des appareils simples qui assurent la mise en place de 16 disques d'antibiotique sur une boîte de Pétri carrée, selon un réseau à maille carrée. Dans ce cas, on fera défiler la boîte dans la direction d'une diagonale du carré, devant une série de 7 capteurs, avec sources associées. Le fait d'adopter un défilement en diagonale assure une meilleure détermination de la valeur du rayonnement reçu en dehors des zones d'inhibition (niveau de référence). Suivant une modalité intéressante, pour obtenir une détermination encore plus sûre de cette valeur, on laisse un "blanc", ou témoin, ctest-à-dire qu'on ne met aucun antibiotique à l'un des emplacements du réseau. Il a été constaté que les meilleurs résultats étaient obtenus en utilisant non pas le rayonnement visible, mais un rayonnement infrarouge dans la gamme de 950 nanomètres. L'appareil selon l'invention comprend - un organe de lecture qui comporte un émetteur de rayons infra-rouge à la longueur d'onde 950 nm, un capteur 2 sensible à la même longueur d'onde, une mécanique pour déplacer linéaire 3 ment les boîtes de Pétri/entre capteur et émetteur avec un moteur 4 pas-à-pas couplé avec l'électronique, et des moyens de commande, - des moyens de fixation du niveau de référence, soit à l'avance 7 soit à partir de mesures faites sur la boite de Pétri elle-meme, en particulier au voisinage de l'emplacement d'un disque manquant, - un microprocesseur 5 qui commande le moteur pas-à-pas1 séquence les mesures transmises par le capteur, fait les calculs statistiques à partir de ces mesures et imprime les résul-tats sous forme dtun tableau 6 donnant les valeurs de diamètres et/ou des indications simplifiées telles que : sensible-résistant - intermédiaire. Les calculs statistiques effectués par le microprocesseur comprennent en particulier la détermination de la valeur du niveau de référence et de son écart-type1 et les memes déterminations à l'intérieur des zones d'inhibition. I1 est aisé ensuite d'en tirer des valeurs de diamètre soit enchiffres,soit de façon simplifiée comme indiqué ci-dessus. I REVENDICATIONS l.Procédé pour déterminer la sensibilité de bactéries et levures à des produits antibiotiques selon la technique des'cultures sur gélose en boite de Pétri,-parmesure du diamètre des zones d'inhibition qui apparaissent autour d'un disque d1antibiotque,dans lequel on fait défiler lesdites zones d'inhibition suivant un trajet rectiligne entre un émetteur d'un rayonnement pour lequel le facteur de transmission est différent dans une telle zone et en dehors de celle-ci et un capteur sensible audit rayonnement,et on traite le rayonnement reçu par le capteur dans un électronique appropriée qui en extrait des valeurs de diametre,caractérisé en ce qu'on détermine l'intensité du rayonnement reçu par le capteur lorsque la région traversée par le rayonnement passe par le centre de la zone d'inhibition,et en ce que le diamètre de ladite zone est déduit da la valeur de ladite intensité de rayonnement. 2. Procédé selon la revendication l,caractérisé en ce que les disques d'antibiotique sont mis en place par un appareil automatique,qui détermine avec précision leur position,et en ce que le défilement des zones d'inhibition est fait de manière automatique 3. Dispositif selon la revendication 2,caractérisé en ce qu'on utilise un appareil qui place 16 disques suivant un réseau carré dans une boite de Pétri également carrée ,et en ce qu'on fait défiler les disques suivant un trajet parallèle à une diagonale de ce carré. 4.Procédé selon l'une des revendications 1 à 4,caractérisé en ce que le rayonnement est un rayonnement infra-rouge, de préférence dans la gamme de 950 nm. 5. Procédé selon l'une des revendications 3 ou 4, caractérisé en ce qu'on supprime un disque sur la série d'une meme boite de façon à avoir un témoin pour le niveau de base. 6. Procédé selon l'une des revendications 1 à 5, caractérisé en ce qu'on utilise un moteur pas à pas,commandé par 1'électronique,pour déplacer les zones d'inhibition.