Brevet FR2431129A1 — publié le 19800208

Domaina de l'invention L'invention appartient au domaine des mesures effectuées dans les laboratoires pharmaceutiques sur les suspensions érythrocytaires. Elle concerne un procédé de mesure de la déformabilité des érythrocytes maintenus en suspension dans un milieu physiologique, ainsi qu'un appareil pour la mise en oeuvre de ce procédé. Technique antérieure Il est connu de caractériser la déformabilité des érythrocytes par le rapport des temps de filtration, dans un ensemble de filtration spécialement choisi, d'une part d'un volume d'une solution sanguine à n% d'érythrocytes (n étant choisi de 2 à 45) et d'autre part d'un même volume de plasma pur, le filtrage des deux échantillons s'effectuant sous pression permanente de l'ordre de quelques centimètres d'eau.Un appareil connu sous le nom d'ap- pareil du professeur SCHMID SCHNbEIN, existe pour la mise en oeuvre de ce procédé. I1 comporte une partie supérieure en forme d'entonnoir fermé par une membrane traversée d'un tube amenant en permanence l'air comprimé nécessaire à la filtration sous pres sion, une partie centrale comprenant une membrane filtrante dont les pores ont en général de 5 . à air., et une partie inférieure comportant un réceptacle en communication avec l'air. Les trois parties de l'appareil stemboîtent l'une dans l'autre. Un échantillon à filtrer est introduit par une serins munie d'une aiguille piquée à travers la membrane fermant la partie supérieure, l'introduction de l'échantillon n'entraînant pas de modification de pression à l'intérieur de l'appareil. L'origine e la mesure des temps de filtration est choisie au moment de l'introduction de l'aiguille de la seringue et la fin de la mesure des temps est fixée par le moment où l'échantillon atteint un niveau déterminé dans le réceptacle de la partie inférieure de l'appareil. La méthode de filtration sous pression constante, cidessus décrite, présente l'inconvénient de ne pas permettre une très grande précision de la mesure des temps. I1 n'y a pas, en ef fet, concordance exacte entre le moment de l'introduction de l'aiguille de la seringue à travers la membrane et le moment du début de filtration. Un décalage existe entre ceB deux temps, décalage dont il est pratiquement impossible de tenir compte. D'autre part les quantités mises en jeu sont si faibles qu'il est difficile d'apprécier le niveau du liquide filtré dans le réceptacle non gradué. Exposé de l'invention, L'invention concerne un procédé de mesure ayant le même objet que celui qui est décrit ci-dessus, mais dans la mise en oeuvre duquel le début de la filtration de la solution est déclen ché, une fois celle-ci introduite au-dessus d'un ensemble de filtration, par un abaissement subit de la pression rèynant en-dessous de cet ensemble. Ce procédé permet donc de déterminer avec exactitude le début de la mesure des temps de filtration. Le procédé de l'invention, pour la mesure de la déformabilité des -érythrocytes d'une suspension sanguine par mesure cu temps de passage d'un échantillon d'un volume déterminé d'une telle suspension à travers un ensemble de filtration comprenant une membrane filtrante séparant un appareil de filtration en deux encein tes superposées > est caractérisé en ce qutil comporte la successicn des opérations suivantes : établissement d'une meme pression dans chacune des enceintes séparées par la membrane filtrante ; intro- duction de l'échantillon dans l'enceinte supérieure sans modification de la pression qui y règne ; établissement momentané, dans l'enceinte inférieure, d'une dépression constante de l'ordre de quelques centimètres d'eau et début simultané de la mesure ou temps de filtration ; fin de la mesure du temps de filtration. L'invention concerne aussi un appareil pour la irise en oeuvre du procédé. Cet appareil comporte une partie centrale, formant support de membrane filtrante identique à celle de l'appareil SCHMID SCHONDEIN. I1 comporte aussi deux parties formant enceinte supérieure et enceinte inférieure de part et d'autre du support de membrane filtrante, enceintes qui sont constituées de manière à apporter une bien plus grande précision des mesures effectuées. Suivant une caractéristique de l'invention > l'enceinte supérieure forme un dôme en verre au-dessus du support de la membrane filtrante, muni d'un orifice fermé par un opercule en caoutchouc. Une tubulure latérale relie le dôme à une source d'air sous pression. A l'intérieur de cette enceinte supérieure est un petit entonnoir débouchant dans le support de la partie filtrante, et destiné à recevoir la solution à filtrer. L'appareil de lrin- vention permet ainsi d'appliquer le procédé de mesure sur des quantités de l'ordre du microlitre, alors que les appareils connus actuellement, dont la partie supérieure forme elle-mAme entonnoir, exigent des quantités de solution de l'ordre du millilitre au minimum. Selon une autre caractéristique de l'invention l'enceinte inférieure de l'appareil comporte une éprouvette graduée recevant la solution filtrée. Cette disposition permet d'une part une grande précision des mesures et d'autre part facilite l'entretien de l'appareil. La partie inférieure est reliée, par une tubulure fermée par un robinet, à une zone de pression inférieure à celle donnée par la tubulure reliant la partie supérieure à la source d'air sous pression. ,Suivant une autre caractéristique de l'invention, les deux enceintes sont munies d'un pas de vis et enserrent entre elles un joint qui porte en son centre l'ensemble filtrant. Une bagues se vissant de manière indépendante sur les deux pas de vis, réunit entre elles les différentes parties de l'appareil. Cette disposition favorise elle aussi ltentretien de l'appareil. L'emploi de l'appareil de l'invention se fait de la manière suivante : établissement d'une pression uniforme dans l'appareil, le robinet de la tubulure inférieure étant fermé; introduction par seringue munie d'une aiguille de la solution à mesurer dans l'entonnoir supérieur ; ouverture du robinet de la tubulure inférieure, création d'une dépression dans l'enceinte inférieure entraînant le début de filtration et début de la mesure des temps ; filtration de la solution et recueil dans l'Eprou- vette graduée ; fermeture du robinet entraînant l'arrêt de la filtration et fin du comptage des temps. De façon préférentielle un nombre pair, six par exemple, d'appareils de l'invention sont montés en parallèle sur un même support, permettant ainsi la mesure simultanée de trois échantillons d'une solution érythrocytaire et de trois échantillons plasmatiques. La figure jointe montre en coupe un exemple de réalisation d'un appareil de l'invention, à laquelle se réfère la description détaillée ci-après. Description détaillée On voit sur la Fig. 1 un appareil pour la mise en oeuvre du procédé de l'invention. Cet appareil comporte une partie centrale 20, une enceinte supérieure 21 et une enceinte inférieure 22. La partie centrale 20 est constituée par un joint 23, en caoutchouc par exemple, enserrant dans sa partie centrale un ensemble de filtration 24 à membrane filtrante 25. L'enceinte supérieure 21 est en forme de d8me de verre, elle est munie d'un orifice supérieur 26 fermé par un opercule 27, en caoutchouc de préférence. Sur le cté une tubulure latérale 28 permet l'arrivée d'air comprimé d'un compresseur non représenté. La partie inférieure est fileté 'un pas de vis 29. A l'intérieur se trouve un entonnoir 30. L'enceinte inférieure 22 est de mime diamètre que l'enceinte supérieure, et elle comporte elle aussi un pas de vis 31 qui est de m8me pas que le pas de vis 29. Dans le fond de l'en- ceinte 22 une cupule cylindrique 32 reçoit une éprouvette gradue 33. Sur le côté une tubulure 34 permet de mettre l'enceinte inférieure 22 en contact avec l'atmosphère. La tubulure 34 comporte un robinet 35. Le ioint 23-est d'une dimension telle au'il -e --e être est enserré par les deux enceintes 21 et 22. Une bague 36/filetée intérieurement d'un pas de vis 37 de méme pas que les deux pas de vis 29 et 31. Le procédé de mesure de l'invention consiste à effec tuer les opérations suivantes - monter l'appareil par vissage de la bague 36 sur les deux pas de vis 29 et 31 - fermer le robinet 35 - mettre l'intérieur de l'appareil, par l'intermédiaire de la tubulure 28,sous une pression supérieure à la pression atmosphérique d'environ 5 cm d'eau - introduira dans l'appareil par une seringue 38 munie d'une aiguille 39 une quantité déterminée de solution en perçant l'oper- cule 27, ceci sans modification de la pression intérieure. Par l'entonnoir 30 la solution s'établit dans l'ensemble de filtration 24 - ouvrir le robinet 35ce qui entrarne le début de la filtration, etcommencerle comptage des temps} la solution filtrée est recueillie dans 11 éprouvette 33 - quand le filtrat a atteint une hauteur déterminée dans l'éprou- vette 33, fermer le robinet 35 et arrêter le comptage des temps. EVENDICATI0NS 1.- Procédé de mesure de la déformabilité des érythrocytes d'une suspension sanguine par mesure du temps de passage d'un échantillon d'un volume déterminé d'une telle suspension à travers un ensemble de filtration comprenant une membrane filtrante séparant un appareil de filtration en deux enceintes superposées, caractérisé en ce qu'il comporte la succession des opérations suivantes - établissement d'une même pression dans chacune des enceintes séparées par la membrane filtrante' - introduction de l'échantillon dans l'enceinte supérieure sans modification de la pression qui y règne, - établissement momentané, dans l'enceinte inférieure, d'une dépression constante de l'ordre de quelques centimètres d'eau et début simultané de la mesure du temps de filtration, - fin de la mesure du temps de filtration. 2.- Appareil pour la mise en oeuvre du procédé de la revendication 1, comprenant un ensemble de filtration à membrane filtrante séparant l'appareil en deux enceintes superposées, des moyens d'établissement d'une même pression dans les deux encein tes 'caractérisé: - en ce qu'il comporte des moyens pour modifier la pression dans l'enceinte inférieure sans la modifier dans l'enceinte supérieure. 3.- Appareil selon la revendication 2, caractérisé - en ce que les moyens pour modifier la pression dans l'enceinte inférieure sont constitués d'un dispositif reliant l'enceinte inférieure à une zone de pression inférieure à la pression formée par les. moyens d'établissement de la même pression dans les deux enceintes. 4.- Appareil selon la revendication 3, caractérisé : - en ce que le dit dispositif est un robinet branché sur une canalisation reliant l'enceinte inférieure à la dite zone de pression inférieure. 5.- Appareil selon la revendication 4, caractérisé - en ce que l'enceinte supérieure contient un entonnoir débouchant sur la membrane filtrante. 6.- Appareil selon l'une des revendications 4 et 5 caractérisé - en ce que l'enceinte inférieure comporte une éprouvette graduée amovible.