Brevet FR2444682A1 — publié le 19800718

L'invention est relative à des dérivés adênyliques de thioglycdralddhyde-sulfoxide, à des réactif s biologiques les constituant et à des compositions associant ces dérivés à des véhicules pharmaceutiques, ces dérivés et compositions ayant des propriétés biologiques et pharmacologiques, notamment antivirales et antitumorales g plus particulièrement à ltégard de tumeurs induites par des virus oncogènes On rappellera tout d'abord que la méthylation des protéines des acides nucléiques et de nombreux métabolites est une réaction bien connue, au cours de laquelle des enzymes spécifiques, dites méthylases ou méthyl-transférases, effectuent le transfert d'un groupement méthyle fourni par la S-adénosylméthionine en certains points précis du substrat, notamment des bases azotées ou des sucres intervenant dans la constitution des acides nucléiques I1 a été montré que les tissus tumoraux contiennent des proportions de bases nucléiques méthylées plus importantes que les tissus normaux. En particulier, il a été constaté qu'il existe une relation entre l'hyperméthylation des acides nucléiques et la transformation des cellules normales en cellules malignes.En corrélation avec ce phénomène, on sait que le RNA messager de certains virus tumorigènes contient des bases méthylées I1 a déjà été constaté qu'un certain nombre de substances synthétiques, notamment des-5'-thioéthers de l'adénosine, sont capables d'inhiber la transformation oncogène de cellules, des infections virales et notamment celles causées par des virus oncogènes, des divisions cellulaires par des mitogènes, toutes propriétés qui paraissent dues à leur capacité d'exercer une action inhibitrice à l'égard des méthyl-transférases in vivo L'invention concerne des produits nouveaux, susceptibles d'être obtenus notamment à partir de tels 5'-thioethers . ils possèdent des propriétés analogues.Ils présentent aussi une solubilité en général nettement plus élevée dans l'eau, ce qui est de nature à rendre leur utilisation plus aisée dans la pratique Les dérivés selon 1 'invention sont plus particulièrement caractérisés par la formule générale dans laquelle X est un atome d'hydrogène ou un groupe tendant à prévenir la désamination du groupe adénine, notamment un groupe contenant de 1 à 7 atomes de carbone ou un groupe benzoyle , R est un groupe dans lequel R1 et R2 sont respectivement des groupes hydrocarbonés, identiques ou différents, comprenant de 3. à 7 atomes de carbone, et n est égal à O ou i Des composés préférés de cette classe de composés sont ceux dans lesquels R est un groupe hydrocarbure, saturé ou non, ramifié ou non,comp nant do 3. 5 atomes de carbone, tel qu'isopropyle ou isobutyle Une autre catégorie de produits préférés sont ceux dans lesquels X est un groupe alcoyle, notamment méthyle, ou un groupe renforçant encore la solubilité dans l'eau des composés selon l'invention, tel que carboxyméthyle, methyl-carboxyméthyle ou éthyl-carboxyméthyle Des produits caractéristiques de ce groupe, indiqués à titre d'exemples,sont ceux dans lesquels R a lune des significations suivantes -CH2-CH (CH3)2 ; -CH(CH3) CH2CH3 - CH2C (CH3) = CH2 ; -CH(CH3)2 - CH2-CH = CH2 , etc et dans lesquels X a une des significations suivantes : -H - COC6H5 - CH2COOH - CH2COO CH3 - CH2 COO C2H5 Les produits selon 1 'invention peuvent être obtenus par oxidation periodique des dérivés adényliques de thioglyceraldéhyde correspondants, de formule Ces derniers sont eux-m & es susceptibles d'être obtenus à partir des 5'-thioethers de l'adénosine de formule : Dans les formules II et III qui précèdent, X et R ont lei significations indiquées en rapport avec la formule I Les susdites réactions d'oxidation sont pratiquement stoechiométriques.Elles s'effectuent à température ambiante, en solution notamment aqueuse Partant des susdits 5'-thioéthers de ladénosine, on peul obtenir directement en une seule étape les dérivés adényliques d thioglycéraldéhyde-sulfoxide à condition d'opérer en présence d'un excès de réactif periodique, notamment d'un periodate de métal alcalin, par exemple de sodium, vis-à-vis des proportions 5'-thioéther, nécessaires à l'obtention des dérivés adényliques de thioglycéraldéhyde correspondant à la formule Il Une grande partie des 5'-thioéthers de l'adénosine de départ ont déjà été décrits.D'une façon générale on rappellera cependant qu'un procédé d'obtention de ces compositions consiste à d é pl ac e r à 1' ai de d' un th io al cool at e de formule RSH dans lequel R a la signification sus indiquée, le groupe p-toluènesulfonate en 5'dU2';3'-O-isopropylidène51~0~ p-toluènesulfonyl-adénosine, dont l'un des hydrogènes en position N6 avait, le cas échéant, auparavant été substitué, de façon en soi connue, par un groupe X tel que ci-dessus défini. La réaction est avantageusement réalisée au sein de diméthylformamide ou d' ammoniac liquide. L'activité des susdites substances se traduit par une prévention de la transformation de cellules normales en cellules malignes en présence d'agents oncogènes ou, lorsque des cellules malignes se sont déjà développées, par une interruption de leur multiplication. On observe certes que les agents selon l'invention peuvent également induire un ralentissement de la multiplication des cellules normales.Les effets sont cependant reversi bles en ce qui concerne le développement des cellules normales, mais irréversibles en ce qui concerne les cellules malignes Ces effets se manifestent notamment par l'effet inhibitet que manifestent des substances selon l'invention à l'égard de la transformation o n c o g è n e induite d a n s des cellules par le virus du Sarcome de Rous (RSV), comme illustré par les résultats des essais pharmacologiques décrits plus loin et obtenus à l'aide d'une substance préférée de l'invention,considérée à titre d'exemple. Leur action peut également être appréciée par l'inhibitio in vivo dans les souris du virus de Friend, ce qui se constate par la prolongation de la survie des souris traitées ayant auparavant été infectées avec ce virus Elles sont également actives à l'égard du virus du Polyorr dans les conditions expérimentales décrites par A. RAIES et al. FEBS Letters, (1976),72,48, ou encore à l'égard du virus de l'herpès dans les conditions décrites par B. JACQUEMONT et J. HUPPERT, Lyon, J;Virol.(1977),22,160. Les substances selon l'invention inhibent également la blastogenèse stimulée par des mitogènes tels que la concanavalir A dans les conditions décrites par BONA et al., BBRC (1976),70, 622 . Elles ont également une activité à l'égard des parasites tels que le plasmodium falciparum (malaria) dans des cultures in vitro sur erythrocytes, notamment dans les conditions décrites par W.TRAGER, ROCCEFELLER, Univ.,FEBS Letters,(s74 On indiquera ci-après, à titre d'exemple, un mode de préparation d'une des substances préférées selon l'invention et représentative de l'ensemble des substances définies par la formule générale I ci-dessus, ainsi que les activités biologiques plus particulièrement observées dans un test d'inhibition du virus du Sarcome de Rous On ajoute goutte à goutte à une solution de 500 mg de 5'-deoxy-5'-S-isobutyl-thioadénosine (plus loin dénommé SIBA) dans deux litres d'eau, une solution de 0,9 équivalent de meta périodate de sodium.La réaction est suivie par chromatographie en couche mince (en solution daris un mélange de 8 volumes d'acétate d'éthyle et de 2 volumes d'alcool méthylique) Le mélange de réaction est 24 heures plus tard soumis à évaporation . Le résidu obtenu est dissous dans un volume minimum d'eau et extrait par du chloroforme chaud. On obtient par évaporation du chloroforme sous pression réduite, le 2-0-tiormyl (9-adényl) methyl]-3-déoxy-3-S-isobutyl-3-thio- glycéraldehyde de formule Le rendement est de 40 % .Le produit se présente sous la forme d'un solide amorphe présentant les caractéristiques analytiques suivantes : 20 Rf : 0,75 (EtOAc : MeOH, 8 :2) ; ?Imax 260 nm (H20) [&alpha;]D20 = -120 (c=0,5 ,DMSO) ; pmr (DMSO + D20, STEMS = O) S 0,9 (6H, m, CH3), 2 (1H, m, CH), 2,6 (2H, d, CH2S), 3 (2Hparge s, CH2), 5 et 5,6 (2H, m, Ha et Ha') 8,2 et 8,4 (2H, 2s, H2 et H8 de l'adénine ms (Ionisation chimique, isobutane) : m/e = 338 (!4H+), m/e = 136 (B + 2H) réduction par le borohydrure de sodium3. Ce composé est transformé en le 2-O-[ formyl (9-adényl)méthyl]-3-déoxy-3-S-isobutyl-3- thiogly-céraldehyde- sulfoxide de formule A cet effet le composé de formule(IV) est oxydé en solution aqueuse sous l'action d'un équivalent de métaperiodate de sodium. Après agitation pendant 24 heures la solution est soumise à évaporation partielle sous vide. Le précipité formé est dissous dans le volume minimum d'eau. Par addition de méthanol on induit la précipitation du periodate . Le filtrat est ensuite évaporé à sec. On obtient le produit selon l'invention sous la forme d'un solide amorphe avec un rendement de 40 % (calculé vis à vis du produit de formule (IV ) . Ses caractéristiques sont les suivantes : 20 Rf : 0,2 (EtOAc : MeOH, 8:2) ; [&alpha;]D 20 = -9 (c=O,9 DM50) pmr (DMSO + D20 STEMS = O) ir : 870 cm-1, 1000 cm-1 (sulfoxide). Propriétés biologiques : Effets biologiques de la substance représentative des composés selon l'invention a) Action sur des cellules normales : On ensemence des cultures de fibroblastes d'embryons de poulets à raison de 5 x 105 cellules par botte de Falcon et on ajoute la substance à tester 24 heures plus tard à la concentration désirée. Plusieurs cultures ont ainsi été réalisées en présence de concentrations différentes de la substance à tester.Les cultures sont incubées à 370C et lon compte toutes les 24 heures les cellules dans chaque culture Pour distinguer entre les effets cytostatiques et cytotoxiques, le milieu contenant l'inhibiteur est ensuite remplacé par le milieu de culture standard et après plusieurs incubations on procède à un nouveau comptage des cellules un ou deux jours plus tard . il peut entre considéré que si le nombre de cellules dans une culture témoin a double, de 24 à 48 heures après le renouvellement du milieu, la dose de produit utilisée n'a qu'un effet cytostatique réversible. Des essais ont également été faits avec la SIBA, un produit connu pour son activité inhibitrice à l'regard de la transfor mation viro-induite des cellules testées. b) Action à l'regard de la transformation oncogène des cellules: Pour étudier le degré d'inhibition de la transformation oncogène des cellules, on a formé des cultures, comme dans le cas précédent, et on les a infectées un jour plus tard avec une suspension de virus à une concentration induisant de l'ordre de 100 foyers de cellules transformées par boite chez les témoins. Les cultures ont ensuite été recouvertes par de la gélose à 0,8%. On a ensuite ajouté les substances identifiées dans le tableau ciaprès, au-dessus de la couche de gel, immédiatement après l'adsorption du virus. Aux doses également indiquées dans le tableau, les substances étudiées n'ont qu'un effet cytostatique reversible à l'égard de cellules normales. Des cultures témoins n'ont été re couvertes que d'un milieu exempt de substances inhibitrice.Après deux jours on remplace la couche liquide contenant l'inhibiteur pa le milieu de culture standard et l'on compte 8 jours plus tard un nombre de foyers transformés tant dans les cultures testées que dans les cultures témoins. TABLEAU I Concentration de subs- % d'inhibition de la tance Cen mM) multiplication des cellules transformées par le virus oncogène SIBA 0,50 100 0,10 65 composé de l'invention 0,25 90 (v) Il faut souligner que les inhibitions de la transformation des cellules malignes sont définitives par opposition au ca ractère réversible de l'effet cytostatique des substances à l'ég des cellules témoins. La comparaison des résultats de la SIBA et du composé de l'invention fait apparaître que ce dernier présente une activité sensiblement du même ordre de grandeur. Ej dç~tocité : La substance selon l'invention, en solution dans du sérum physiologique a été administrée à des souris de 20 à 25 g à raison de 200 mg par kg. Les souris sont examinées plusieurs heures après l'injection . La mortalité est nulle. il en est encore de même plusieurs semaines plus tard. tes compositions selon l'invention présenit donc une Innocuité rendant leur utilisation possible en tant que principe actif de médicament chez le mammifère D'une façon générale, les composés selon l'invention constituent des principes actifs pour la prévention ou l'inhibition du développement de tumeurs malignes et plus particulièrement de celles quii sont induites par des virus oncogènes. Elles sont également utiles pour le traitement des infections virales et paastaires Elles peuvent également être utilisées en raison de leur propriétés antimitogènes pour la constitution de médicaments appliqués au traitement ou à la prévention de leucémies et de myélomes . Les résultats qui ont été indiqués sont particulièrement significatifs car il est connu que les transformations au niveau cellulaire, telles qu'envisagées dans les tests sus-mentionnés,sont représentatives des transformations que sont susceptibles. de subir des cellules normales in vivo à l'occasion de processus de cancérisation, particulièrement sous l'action de virus oncogènes L'invention concerne donc des compositions pharmaceutiques comprenant des composés tels que ci-dessus définis à des doses efficaces en association avec des véhicules physiologiques acceptables. En particulier elle concerne des compositions dans lesquelles les principes actifs de l'invention sont associés avec des véhicules solides ou liquides appropriés à l'administra tion orale ou encore avec des véhicules, notamment des glycérides,appropriés à l'administration par voie rectale Des compositions préférées sont celles destinées à l'administration par voie parentérale. L'invention concerne donc plus particulièrement des compositions liquides dans lesquelles les composés de l'invention sont associés à un véhicule liquide injectable stérile Les doses qui peuvent être utilisées en chimiothérapie devront naturellement être ajustées en tenant compte de l'état de l'hôte. Elles devront donc être sous le contrôle étroit du thérapeute.La dose à utiliser est supérieure à la dose minimum efficace pour combattre le développement des tumeurs oncogènes ou des virus parasites pathogènes. A titre d'exemple, on peut indiquer que les doses peuvent se situer entre environ 2 et environ 100 mg par kg de l'hâte par jour. L'invention concerne également les réactifs biologiques dont le composé actif est formé d'un composé selon l'invention, notamment comme réactif ou de référence par exemple pour l'étude des propriétés inhibitrices de la transformation oncogène de cellules normales ou, d'une façon générale, des propriétés antivirales d'autres substances. L'invention concerne également les dérivés diol de formule II, à titre de produits intermédiaire pour la fabrication des dialdéhydesde formule I. Comme il va de soi, et comme il résulte d'ailleurs déjà de ce qui précède, l'invention ne se limite nullement à ceux de ses modes d'application et de réalisation qui ont été plus spécialement envisagés; elle en embrasse, au contraire, toutes les variantes. REVENOICATIONS 1. Composés caractérisés par la formule générale dans laquelle X est un atome d'hydrogène ou un groupe tendant à prévenir la désamination du groupe adénine, notamment un groupe contenant de 1 à 7 atomes de carbone ou un troupe benzovle, R est un groupe dans lequel R1 et R2 sont respectivement des groupes hydrocarbonés, identiques ou différents, comprenant de 1 à 7 atomes de carbone, et n est égal à O ou 1. 2. Composés selon a revendication1, caractérisés en ce que R a l'une des significations suivantes: - CH2-CH (CH3)2; -CH(CH3- CH2CH3: - CH2C tCH3) = CH2; -CH(CH3)2: - CH2-CH = CH2' et X a l'une des significations suivantes: -H; - COC5H5; - CH2COOH - CH2COO CH3 - CH2COO C2H5. 3. Le 2-0-[formyl[9-adényl)méthyl]-3-déoxy-3-5-isobutyl- 3-thioglycéraldehyde-sulfoxide de formule LI. Application d'un composé conforme à l'une quelconque des revendications 1 à 3, en tant qu'inhibiteur de méthyltransférases. 5. Application selon la revendication 4, en tant qu'inhibiteur de la transformation oncogène de cellules, notamment sous l'effet de virus oncogènes. 6. Application selon la revendication 4 à l'inhibition d'infections virales au niveau cellulaire. 7. Application selon la revendication 4 à l'inhibition des divisions cellulaires sous effet de mitogènes. 8. Composition pharmaceutique, notamment pour la mise en oeuvre des applications selon l'une quelconque des revendications 4 à 7, sur le plan thérapeutique, caractérisée par l'association d'un composé conforme a l'une quelconque des revendications 1 à 3, avec un véhicule physiologiquement acceptable. 9. Procédé de fabrication des composés selon l'une quelconque des revendications 1 à 3, caractérisé par ltoxydation pério dique de dérivés adényliques de thioglycéraldéhyde de formule dans laquelle les groupes X et R ont les significations indiquées pour ces mêmes groupes dans l'une quelconque des revendications 1 à 3. 10. Les dérivés adényliques de thioglycéraldéhyde de formule dans laquelle les groupes X et R ont les significations indiquées pour ces mêmes groupes dans l'une quelconque des revendications 1 à 3, ces composés étant destinés à la mise en oeuvre du procédé selon la revendication 9.