Brevet FR2460292A1 — publié le 19810123

La présente invention est relative à la préparation de nouveaux tripeptidamides actifs sur le système nerveux central, qui répondent à la formule générale I ci-après: Glp - X - Y - NH - A (I) dans laquelle: X représente un groupe L-norleucyle, L-leucyle, L-norvalyle, D-leucyle, Lprolyle, L-2-aminobutyryle, L-valyle, L-thréonyle, L-isoleucyle, L-2aminodécanoyle, L-cyclohexyl-alanyle ou L-tert.-butyl-séryle et Y représente un groupe L-prolyle, ou X représente un groupe L-histidyle et Y représente un groupe L-homoprolyle ou D-pipécolyle;de plus A représente un atome d'hydrogène ou un groupe alcoyle com- portant de 1 à 10 atomes de carbone ou un groupe alcoyle comportant -1 à 3 atomes de carbone, substitué par un groupe diméthylamine, mais lorsque X représente un groupe L-leucyle, A est différent d'un atome d'hydrogène, ainsi qu'à la préparation de complexes de ces composés. Les nouveaux tripeptidamides qui correspondent à la formule générale définie ci-dessus sont des analogues du L-pyroglutamyl-L-histidyl-Lprolinamide (Glp-His-Pro-NH2) connu également sous le nom d' "hormone libérant la thyrotropine" (TRH), dans lesquels, cependant, un amino- acide et plus précisément le groupe L-histidyle qui se trouve en position 2- ou le groupe L-histidyle qui se trou- ve en position 3- est remplacé par un autre amino-acide indiqué dans la définition ci-dessus. L'existence de la TRH était déjà connue dans les années 1960, mais sa structure n'a été élucidée que dans les années 1969 ou 1970 par les groupes de chercheurs de R. GUILLEMIN et de A. SCHALLY, respectivement, presque simultanément, mais indépendamment l'un de l'autre Zcf. Bowers, C.Y., etc., Endocrinology 86, 1143 (1970) et R. Burgus, etc., C.R. Acad. Sci. (PARIS) 269, 1870 (1969)7. Le tripeptide TRH a été décrit à l'origine comme un facteur régularisant la libération de la TSH (ou thyro- stimuline) dans l'hypophyse des mammifères; la recherche s'intéressant à cette hormone s'est orientée cependant dans une nouvelle direction lorsqu'il fut reconnu que la fonction biologique de ce tripeptide n'était pas limitée à la régularisation de la libération de la thyrostimuline, mais consistait également en une action sur le système ner- veux central Zcf. N.P. Plotnikoff et ses collaborateurs, Science 178, 417 (1972) et A.J. Prange et ses collabora- teurs, Lancet 2, 999 (197217. On a alors constaté que la TRH, à côté de la fonction hormonale déjà mentionnée, diminue considérablement la durée du sommeil provoqué par des barbituriques ou par l'alcool et réduit également l'hypothermie provoquée par différents médicaments et ac- croit l'activité locomotrice. Un autre facteur important de l'action exercée par la TRH sur le système nerveux cen- tral est l'inhibition de la catalepsie provoquée par l'halopéridol-. Il a semblé, par conséquent, désirable pour la pratique thérapeutique de préparer des analogues de la TRH qui n'aient qu'une faible action sur l'hypophyse, mais qui aient par contre et môme surpassent l'action de la TRH sur le système nerveux central. C'est en vue de cet objectif qu'ont été préparés les composés décrits dans les Demandes de Brevets Allemands publiées avant examen 2 343 035, 2 343 037, 2 449 167, 2 514 381, 2 609 154 et 2 639 393 ainsi que dans le Brevet Belge 819 198. La re- che3rche y relative effectuée jusqu'iciodont les expérien- ces et les résultats ont été résumés par A.J. Prange et collaborateurs ("The Role of hormones in Depression", Life Sciences 20, 1305 (1977)) et par A.V. Schally et collaborateurs ZHypothalamic Regulatory Hormones", Ann. Rev. Biochem. 47, 89 (19781/, n'a pu cependant conduire à des résultats satisfaisants à tous les points de vue pour les besoins de la pratique thérapeutique. Il a.été trouvé à présent par la Demanderesse que l'on peut par le remplacement systématique de certains amino-acides de la molécule de la TRH édifiée à partir de trois amino-acides, obtenir que l'action hormonale du tripeptide soit totalement supprimée ou du moins considé- rablement réduite, tandis que l'action exercée sur le système nerveux central est conservée ou même considéra- blement augmentée. Les analogues de la TRH qui contiennent en position 2à la place du groupe L-histidyle, un groupe amino-acide aliphatique comportant une chalne carbonée droite ou ramifiée, se sont avérés particulièrement avan- tageux de ce point de vue. De tels analogues de la TRH pré- sentent, pour une absence pratiquement complète de l'ac- tion hormonale, une action sur le système nerveux central qui dépasse plusieurs fois l'action de cette nature de la TRH. Les analogues de la TRH dans lesquels le groupe L-histidyle reste inchangé en position 2-, mais o le groupe L-prolyle de la TRH qui se trouve en position 3- est rem- placé par un groupe L-homoprolyle ou D-pipécolyle, se sont, en outre, également avérés avantageux. Pour préparer les nouveaux tripeptidamides de for- mule générale. I, on part, conformément à l'invention, d'un amide d'aminoacide substitué de formule générale Y-NH-A, dans laquelle Y et A ont les significations indiquées à pro- pos de la formule générale I, qui contient à la place de Y le groupe amino-acide du produit final désiré; à cet amide, on couple tout d'abord pas à pas, en mettant en oeuvre les méthodes peptidochimiques usuelles, le L-amino- acide désiré à la place de X, puis le groupe L-pyro- glutamyle qui se trouve en position 1- dans le produit fi- nal, après quoi l'on sépare éventuellement les groupes pro- tecteurs introduits dans les réactions de couplage men- tionnées plus haut. Pour préparer les tripeptidamides de formule générale I contenant un groupe L-histidyle à la place de X, on peut également procéder à l'acylation du composé de départ de formule générale Y-NH-A directement à l'aide de l'azide protégé préparé à partir de l'hydrazide ZGln-His-NH-NH2, o Z signifie un groupe protecteur benzyloxycarbonyle et soumettre le tripeptidamide pro- tégé de formule générale Z-Gln-His-Y-NH-A obtenu à une hydrogénation catalytique, puis - chauffer la solution dans l'acide acétique obtenue à 60-70 C, après séparation du catalyseur par filtration, le groupe glutamyle étant cyclisé dans un temps de réaction d'environ 30 minutes pour donner un acide pyroglutamique. Les tripeptidamides de formule générale I préparés de cette manière peuvent être isolés par cristallisation ou lyophilisation à partir du mélange réactionnel; si on le désire, les produits obtenus peuvent être transformés en des complexes à la manière habituelle. Lors de l'édification de la molécule du tripeptide de formule générale I, qui a lieu pas à pas, le composé de départ de formule générale Y-NH-A qui est avantageusement introduit en excès.est acylé à l'aide d'un dérivé activé, avantageusement à l'aide d'un pentafluorophénylester, ou bien on le fait réagir, le cas échéant, avec un anhydride mixte d'un L-amino-acide protégé de formule générale Boc-Y-OH. Lorsque l'on utilise des pentafluorophénylesters, les dérivés dipeptides protégés correspondants de formule générale Boc-X-Y-NH-A sont obtenus dans un temps de réac- tion extrêmement court, en l'espace de quelques minutes, le produit pouvant être isolé facilement et le plus souvent sous une forme ne requérant pas de purification ultérieure. On peut alors obtenir des dipeptides correspondants, libres à leur groupe terminal, par acidolyse à partir des dérivés dipeptides protégés obtenus de cette manière; on fait alors réagir ces dipeptides libres avec des pentafluorophényl- esters de l'acide L-pyroglutamique protégé de formule géné- rale Z-Glp-OPFP, permettant ainsi l'obtention du tripeptide protégé de formule générale Z-Glp-X-Y-NH-A, d'o le groupe protecteur Z peut être éliminé, avantageusement par hydro- génation catalytique. Les amides libres de formule générale H-Y-NH-A con- tenant un groupe L-homoprolyle ou un groupe D-pipécolyle à la place de Y peuvent également être avantageusement acylés à l'aide des azides préparés à partir des hydrazides de formule générale Z-Gln-His-N2-H3. Ce processus offre l'avantage particulier que les hydrazides sont des produits intermédiaires facilement cristallisables qui sont, de ce fait, susceptibles d'être isolés sous une forme très pure. Au cours de la dernière étape du procédé, le groupe pro- tecteur Z peut également, dans ce cas, avantageusement être séparé par hydrogénation catalytique, la solution étant en- suite chauffée à 60-700C et le groupe glutamyle étant, par suite, transformé en groupe pyroglutamyle. La purification du produit final obtenu peut avoir lieu par simple cristallisation ou reprécipitation ou si c'est nécessaire, par chromatographie sur colonne. Dans certains cas, le produit final peut également être terminé par simple lyophilisation après l'élimination des produits secondaires. Les activités pharmacologiques des tripeptides pré- parés conformément à l'invention, ont été examinées à l'aide des méthodes biologiques décrites dans ce qui suit: 1. Inhibition de la catalepsie par l'halopéridol sur les rats (cf. J. Delay et P. Deniker, Compt. Rend. Cong. Med. aliénistes neurologistes, 19, 497, Luxembourg 1952). mg/kg d'halopéridol, c'est-à-dire de 4-(p-chloro- phényl)-1-L3-(p-fluorobenzoyl-propyle7-pipéridine-4-ol ont été administrés aux animaux par voie sous-cutanée et l'appa- rition de la catalepsie a été contrôlée au bout de 120 minu- tes; les rats ont ensuite été divisés en groupe de dix et on leur a administré par voie intraveineuse des doses de TRH et des nouveaux tripeptides analogues à la TRH, respec- tivc"ent. Les animaux des groupes témoins ont été traités par une solution physiologique de chlorure de sodium. L'ef- fet de suppression de la catalepsie des différents compo- sés a été vérifié 15, 30, 90 et 120 minutes après le trai- tement. Les animaux qui, après que l'on ait placé leurs pattes antérieures sur une colonne d'une hauteur de 7 cm n'ont pas corrigé leur position en l'espace de 30 secondes, ont été considérés cataleptiques. Les valeurs de DE50 correspondantes ont été détermi- nées par analyse "Probit" pour les différents constituants actifs, à partir du nombre des animaux ne présentant pas de catalepsie. Ces expériences ont été exécutées sur des rats Wistar males d'un poids de 160 à 180 g. 2. Potentialisation de l'activité 'locomotrice provoguée par le L-Dopa sur des souris (cf. "The Thyroid Axis, Drugs and Behavior" p. 116, A.J. Prage Jr., Raven Press, New York, 1974). On a administré aux animaux tout d'abord 40 mg/kg de N-méthyl-N-propargylbenzilamine (Pargyline), puis mg/kg de TRH et,respectivement, les mêmes doses des nouveaux tripeptides à étudier, puis enfin 400 mg/kg de L-Dopa, tous par voie intrapéritonéale. L'activité locomo- trice des animaux a été mesurée 30, 60, et 90 minutes après ce traitement-; les valeurs obtenues sont indiquées dans le Tableau ci-après,en pourcentages rapportés aux valeurs obtenues sur les animaux traités par la TRH. 15 souris mâles d'un poids de 18 à 22 g ont été utilisées dans cha- cune de ces expériences. 3. Action d'inversion de _l'hyp2othermieprovoueparla reserpine sur des souris Zcf. B.M. Askew, Life Sci. 2, 725-730 (1963!7. On administre à des souris mâles d'un poids de 18 à 22 g divisées en groupes de dix, 5 mg/kg de réserpine par voie intrapéritonéale; après 16 heures, on administre aux animaux- des doses de 20 mg/kg de TRH et du tripeptide à étudier, respectivement. La température rectale des animaux est mesurée avant le traitement par la réserpine (dans le tableau sous "norm"), après -16 heures de traitement par la réserpine (dans le tableau sous "rés") et une ou deux heures après l'adminis- tration du tripeptide à étudier (dans le tableau sous "après-le traitement"). Le tableau donne les valeurs moyen- nes des températures rectales mesurées sur 10 souris. 4. Influence de la durée du sommeil provogué_parl'hexo- barbital On administre à des souris males divisées en groupes de dix, 60 mg/kg d'hexobarbital-Na ("Evipan Bayer", Marque, déposée) par voie intraveineuse; au bout de 10 minutes, on administre aux animaux des doses de 20 mg/kg du tri- peptide à examiner, par voie intrapéritonéale. Les durées du sommeil sont indiquées dans le tableau ci-dessous en pourcentages rapportés aux valeurs mesurées sur les animaux du groupe témoin (valeurs moyennes de 10 animaux chaque fois). 5. Narcoseprpoyoguéepar léthanol Zcf. J.M. Cott et autres, J. Pharmacol. Exp. Ther. 196, 594 (1976)7. On administre 4,5 g d'éthanol par voie intrapérito- néale à des souris des deux sexes d'un poids de 18 à 22 g, divisées en groupes de 20; au bout de 10 minutes, on admi- nistre aux animaux, par voie intrapéritonéale, des doses de mg/kg du tripeptide à étudier. Les durées du sommeil sont indiquées dans le tableau ci-dessous en pourcentages rappor- tés aux valeurs mesurées sur les animaux du groupe témoin (valeurs moyennes sur 20 animaux chaque fois). 6. Activité hormonale (action TSH_ sur les rats Des rats Wystar males, d'un poids d'environ 200 g, sont divisés en groupes de 7 à 8 animaux et on leur admi- nistre par voie intraveineuse, des doses de 20 mg/kg de TRH et du tripeptide à étudier, respectivement. On déter- mine par radioimmuno essai à partir du plasma des animaux, la réaction TSH des animaux 15 minutes après le traitement par la TRH et par les nouveaux composés analogues à la TRH, respectivement. Les taux d'action relatifs sont cal- culés selon la méthode des quatre points à l'aide d'un cal- culateur TOA 101, le taux d'action de la TRH étant consi- déré comme égal à 100. Les données relatives aux actions biologiques des composés de formule générale I les plus importants, déter- minées selon les méthodes pharmacologiques décrites ci- dessus, sont rassemblées dans le tableau qui va suivre. ul o CD o CD t1 Ln1 o tn TABLEAU w T.A B L t A U inhibition de Potentialisation de' Inversion de l'hypoDurée du Durée du j Glp-X-Y-IM-A la catalepsie l'activité locomo- thermie provoquée par la sommeil pro- sommeil y À provoquée par trice provoquée. par réserpine; température voqué par provoqué Action l'halopétidol le Ldopa anras rectale, oC lhexobarbital par l'étha- de la nol TRH DE Temps % des animaux D50 Tep..% des ani- /kg mf 30' 60' 90' normale rés. après trai- témoins m d a- mg/kg mh | maux té- tement moins i,__ _ _ __ _ _ _ _ _ _ _ _ lh 2h. i rTva Pro H 11,4 120 254 156 214 36,2 25,9 36,4 32,0 114 77 O I.leu Pro H 16,8 120 249 105 112 36, 3 27,1 37,6 32,2 77 74 3,8 "' I ...I; ' ',! '. i I. I eu Pro Et 56,6 30 102 90 201 36,2 28,7 30,7 33,4 126 65 0 H His HPro H 13,7 120 209 85 110 36,5 28,5 35,3 35,4 63 114 68,6 Abu Pro H 80 15 27 14 18 1 36,3 19,7 22,2 25,4 84 39 0,02 TPRE 80 15 100 100 100 36,2 25,9 35,5 30,2 56 35 100,0 __________________________________, i________________________________________________________ _____________________ ___________________ Durée du sommeil provoquée par 1l' hexobarbital Durée du sommeil provoqué par l'éthanol (R + (R + SE): SE): 38,4 + 1,36 min. 46,9 + 2,17 min. O r% c Il ressort des données qui figurent dans ce tableau que le remplacement de l'His par un amino-acide aliphatique comportant des chaînes carbonées droites ou ramifiées, dans la molécule de TRH provoque l'arrêt ou au moins une réduc- tion considérable de la libération de la TSH, par exemple leinhibition de la catalepsie provoquée par l'halopéridol est de 2 à 7 fois plus forte. Certains des nouveaux analo- gues de la TRH présentent également une potentialisation impor- tante de l'activité locomotrice ou, respectivement, une réduction importante de la durée du sommeil provoqué par l'hexobarbital ou par l'éthanol. Il est également remarqua- ble que les nouveaux analogues du TRH qui contiennent l'His, s'ils conservent environ 70 % de l'action hormonale, présen- tent en même temps, en contrepartie, des effets notables sur le système nerveux central. Les nouveaux tripeptides qui peuvent être préparés conformément à l'invention ainsi que leurs sels ou leurs complexes utilisables en pharmacie, peuvent être utilisés en thérapeutique sous la forme de préparations médicamen- teuses usuelles. Ces préparations pharmaceutiques contien- nent les constituants actifs conformes à l'invention accom- pagnés de substances de support minérales ou organiques qui conviennent à l'administration par voie digestive ou paren- térale. Les préparations médicamenteuses peuvent, par exem- ple, être préparées sous la forme de lyophilisats solides, dans lesquels des composés qui ne réagissent pas avec les peptides, par exemple des hydrates de carbone, peuvent être utilisés; elles peuvent, cependant, également, être prépa- rées sous la forme de suspensions concentrées ou diluées ou d'émulsions ou encore de comprimés ou de préparations à in- jecter. La mise en oeuvre pratique du procédé conforme à l'invention, à savoir la fabrication chimique des nouveaux analogues de la TRH conformes à l'invention, sera mieux com- prise à l'aide des exemples qui vont suivre. Les abrévia- tions utilisées dans ces exemples correspondent aux abrévia- tions classiques en usage dans la chimie des peptides. Cf. J. Biol. Chem. 247, 977 (1972). On utilisera, en outre, les autres abréviations suivantes: Ada acide L-2-amino-décanoique Abu acide L-2amino-butyrique Cha L-cyclohexylalanine Pip acide L-pipécolinique HPúo Lhomoproline DAE 2-diméthylamino-éthyl DCC dicyclohexylcarbodiimide PFPOH pentafluorophénol DCU dicyclohexylurée DMFA diméthylformamide Les points de fusion des composés indiqués dans les exemples ont été déterminés au moyen d'un appareil de mesure des points de fusion selon le Dr. Tottoli (BUchi). Les pou- voirs rotatoires optiques ont été mesurés à l'aide d'un polarimètre du type Perkin-Elmer 141. Dans les examens et les séparations par chromatographie en couche mince, on a utilisé des plaques de gel de silice "Kiesel G nach Stahl" (E. Merck, Darmstadt). Pour le développement des chromato- grammes, on a fait appel aux mélanges de solvants suivants (1) Chloroforme: méthanol 9:1 (2) Acétate d'éthyle: (pyridine:acide acétique:eau :6:11) 9:1 (3):Acétate d'éthyle: (pyridine:acide acétique:eau 20:6:11) 8:2 (4)---Acétate d'éthyle:(pyridine:acide acétique:eau :6:11) 3:2 Une solution de ninhydrine a été utilisée pour le dé- veloppcment des taches; après l-a pulvérisation, les pla- - ques ont été séchées pendant environ 5 minutes à 105 C. Les chromatogrammes ont ensuite été placés dans une atmosphère gazeuse de chlore et développés, après aération, à l'aide d'une solution de o-tolidine-iodure de potassium. Pour la purification par chromatographie sur colonne des produits, on a utilisé le gel de silice "Kieselgel G" (E. Merck) d'une granulométrie de 0,062 à 0,2 mm. Un évaporateur à vide "Rotavapor R" (Bichi) a été utilisé pour l'évaporation sous vide des solutions; l'éva- poration a été exécutée à des températures ne dépassant pas 506C. Les pentafluorophénylesters des amino-acides proté- gés par le Boc ont été préparés par la méthode de L.Kisfaludy et autres, Ann. 1973, 1421. Il doit être bien entendu, toutefois, que ces exemples sont donnés uniquement à titre d'illustration de l'objet de l'invention, dont ils ne constituent en aucune manière une limitation. EXEMPLE: Lpyroglutamyl-L-norleucyl-L-prolinamide lre étape: Chlorhydrate de Lnorleucyl-L-prolinamide 2,28 g (20 mMoles) de H-Pro-NH2 et 3,97 g (10 mMoles) de DOC-Nle-OPFP Lcf. Kisfaludy et Coll. Hoppe-Sayler: Z. Physiol. Chemie 359, 887 (1978)7 sont dissous dans 40 ml de DMFA et après 5 minutes de repos, la solution est évapo- rée sous vide. L'huile obtenue en tant que résidu est dis- soute dans 50 ml de chloroforme, la solution est épuisée en la secouant trois fois avec 10 ml de solution N d'acide chlorhydrique, puis trois fois avec 10 ml de solution N de carbonate acide de sodium et finalement une fois avec mil d'eau, puis elle est séchée à l'aide de sulfate de sorix-% anhydre et évaporée. Le résidu d'évaporation est dissnus dans 5 ml d'acétate d'éthyle et la solution est additionnée de 10 ml de solution 5 N d'acide chlorhydrique dans -de l'acétate d'éthyle. Au bout de 30 minutes, le mélange réactionnel est dilué par de l'éther, le précipité form 6-est séparé par filtration et séché sous vide sur de l'hydroxyde de sodium anhydre. On obtient de cette manière 2,48 g-de H-Nle-Pro-NH2.HCl (94 % du rendement théorique calculé par rapport au BOC-Nle-OPFP; R(4) = 0,20). 2ème étape: Benzyloxycarbonyl-L-pyroglutamyl-L-norleucyl-L- prolinamide 1,05 g (4 mMoles)de H-Nle-Pro-NH2.HCl sont dissous dans 10 ml de DMFA et la solution est additionnée, sous re- froidissement par la glace et agitation, de 0,56 ml (4 mMoles) de triéthylamine et de 1,89 g (4,4 mMoles) de Z-Glp-OPFP. Après 5 minutes d'agitation, on ajoute encore 0,56 ml (4 mMoles) de triéthylamine; le mélange est agité pendant 20 autres minutes et est ensuite évaporé sous vide jusqu'à siccité. Le résidu d'évaporation est dissous dans 40 ml de chloroforme, la solution est épuisée en la secouant deux fois avec 10 ml de solution N d'acide chlorhydrique, trois fois avec 10 ml de solution N de carbonate acide de sodium et finalement une fois avec 10 ml d'eau, puis elle est séchée sur du sulfate de sodium anhydre et évaporée sous vide. On cristallise l'huile obtenue en tant que rési- du dans de l'éther et le produit brut obtenu de cette ma- nière (1,52 g) est recristallisé dans 8 ml d'acétate d'éthyle. On obtient 1,36 g de Z-Glp-Nle-Pro-NH2 (72 % de la théorie); F. 46- 48 0,__5 -79 F. 146-1480C; R3= 0,32 ' = 79,8 (c = 1, dans l'acide acétique). Analyse pour C24H3206N4 (poids moléculaire 472,55) calculé: C 61-,00 %, H 6,83 %, N 11,86 %; trouvé: C 60,90 %, H 7,04 %, N 11,87 %. 3ème étape: TL-pyroglutamyl-L-norleucyl-L-prolinamide 1,16 g (2,46 mMoles) de Z-Glp-Nle-Pro-NH2 sont dis- sous dans 25 ml de méthanol, la solution est additionnée de 0,2 -j de catalyseur à base de charbon actif à 10 % de palladium et on fait circuler de l'hydrogène pendant 30 minutes à travers la solution. Le catalyseur est ensuite séparé-par filtration et le filtrat est évaporé. Le résidu amorphe solide est trituré avec de l'éther et séparé par filtration. Le produit brut obtenu de cette manière (0,72 g) est dissous dans de l'eau, la solution est clarifiée au charbon actif et la solution limpide est lyophilisée. On obtient 0,66 g de Glp-Nle-Pro-NH2 (79,5 % de la théorie); R(4) = 0,43; [25 = -77,1 (c = 1, dans l'acide acétique). fD Analyse de l'amino acide: Glu 0,96 (1,0), Nie 1,00 (1,0), Pro 1,00 (1,01). EXEMPLE 2: L-pyroglutamyl-L-norvalyl-L-prolinamide lère étape: Chlorhydrate de L-norvalyl-L-prolinamide 2,2 g (20 mMoles) de H-Pro-NH2 et 3,83 g (10 mMoles) de BOC-Nva-OPFP ZcfP L. Kisfaludy et coll. HoppeSeyler: Z. Physiol. Chemie 395, 887 (1978)7 sont dissous dans 40 ml de DMFA, on laisse reposer la solution pendant 5 minutes et on l'vapore ensuite sous vide. L'huile obtenue en tant que résidu est dissoute dans 50 ml de chloroforme, la solu- tion est épuisée en la secouant trois fois avec 10 ml de solution N d'acide chlorhydrique, trois fois avec 10 ml de solution N de carbonate acide de sodium et finalement une fois avec 10 ml d'eau, puis elle est séchée sur du sul- fate de sodium anhydre et évaporée. Le résidu d'évaporation est dissous dans 5 ml d'acétate d'éthyle et additionné de ml d'une solution 5 N d'acide chlorhydrique dans de l'acétate d'éthyle. Après 30 minutes, le mélange réaction- nel est dilué par de l'éther, le précipité obtenu est séparé par filtration et séché sous vide sur de l'hydroxyde de so- dium anhydre. On obtient de cette manière 1,83 g de H-Nva-Pro-NH2.HCl (73 % du rendement théorique calculé par rapport-au BOC-Nva-OPFP); Rf4) = 0,10). f 2ème 6tape: Benzyloxycarbonyl-L-pyroglutamyl-L-norvalyl-L- prolinamide 1,25 g (5 mMoles) de H-Nva-Pro-NH2.HCl sont mis en suspension dans 15 ml de DMFA et additionnés, sous refroi- dissement par de la glace et agitation, de 0,7 ml (5 mMoles) de Lqú!thylamine et de 2,15 g (5 mMoles) de Z-Glp-OPFP. Au bout de 5 minutes, on ajoute encore 0,7 ml (5 mMoles) de triéthylamine, le mélange est agité pendant 20 autres minu- tes et est ensuite évaporé sous vide. Le résidu d'évapora- tion est dissous dans 50 ml de chloroforme, la solution est épuisée en la secouant trois fois avec 10 ml de solution N d'acide chlorhydrique, trois fois avec 10 ml de solution N de carbonate acide de sodium anhydre et finalement une fois avec 10 ml d'eau, puis elle est séchée à l'aide de sulfate de sodium anhydre et évaporée. On fait cristalliser l'huile obtenue en tant que résidu, dans de l'éther et le produit brut obtenu de cette manière (1,80 g) est recris- tallisé dans un mélange d'éthanol et d'éther. On obtient 1,66 g de Z-GlpNva-Pro-NH2 (72 % de la théorie); F. 166-167C; R 3) = 0,29; (a)25 = 87,5 (C = 1 dans l'acide acétique). Analyse pour C23H3006N4 (poids moléculaire 458,52) calculé: C 60,25 %, H 6,59 %, N 12,22 %; trouvé: C 60,08 %, H 6,70 %, N 12,15 %. 3ème étape: L-pyroglutamyl-L-norvalyl-L-prolinamide 1,42 g (3,1 mMoles) de Z-Glp-Nva-Pro-NH2 sont dis- sous dans 30 ml de méthanol, la solution est additionnée de 0,2 g de catalyseur à base de charbon actif à 10 % de palla- dium et on fait circuler de l'hydrogène pendant 30 minutes à travers la solution. Le catalyseur est ensuite séparé par filtration et le filtrat est évaporé. Le résidu amorphe solide est trituré avec de l'éther et séparé. Le produit * brut obtenu de cette manière est dissous dans l'eau, la so- lution est clarifiée à l'aide de charbon actif et la solu- tion limpide est lyophilisée. On obtient 0,95 g de Glp-Nva-Pro-NH2 (94 % de la théorie): R(4) = 0,36; - 2f C51i = -87 (c = 1, dans l'acide acétique). Analyse de l'amino-acide: Glu 0,97 (1,0), Nva 1,09 (1,0), Pro 1,00 (1,0). EXEMPLE 3: L-pyroglutamyl-L-prolyl-L-prolinamide lère étape: Chlorhydrate de L-pnolyl-L-prolinamide 2,28 g (20 mMoles) de H-Pro-NH2 et 3,81 g (10 mMolesi de BOC-Pro-OPFP sont dissous dans 40 ml de DMFA, la solution est épuisée en la secouant trois fois avec 10 ml d'une solu- tion N d'acide chlorhydrique, trois fois avec 10 ml d'une solution N de carbonate acide de sodium et finalement une fois avec 10 ml d'eau, puis elle est séchée à l'aide de sul- fate de sodium anhydre et évaporée. Le résidu d'évaporation est dissous dans 5 ml d'acétate d'éthyle et additionné de ml de solution 5 N d'acide chlorhydrique dans l'acétate d'éthyle. Au bout de 30 minutes, le mélange réactionnel est dilué par de l'éther, le précipité obtenu est séparé par filtration et séché sous vide sur de l'hydroxyde de sodium anhydre. On obtient de cette manière 2,06 g de H-Pro-Pro-NH2.HC1 (83 % du rendement théorique calculé par rapport au BOC-Pro-OPFP); R) = 0,05. 2ème étape Benzyloxycarbonyl-L-pyroglutamyl-L-prolyl-L- prolinamide 0,75 g (3 mMoles) de H-Pro-Pro-NH2.HCl sont mis en suspension dans 10 ml de DMFA et additionnés, sous refroi- dissement par de la glace et agitation, de 0,42 ml (3 mMoles) de triéthylamine et de 1,35 g (3,15 mMoles) de Z-Glp-OPFP. Au bout de 5 minutes, on ajoute encore 0,42 ml (3mMoles) de triéthylamine et au bout de 10 autres minutes d'agitation la suspension -épaisse obtenue est évaporée sous vide. Le résidu d'évaporation cristallin est trituré avec 8 ml d'étha- nol et abandonné pendant 3 heures au réfrigérateur. Le pré- cipité obtenu est ensuite séparé par filtration et séché. On obtient de cette manière 1,0 g de Z-Glp-Pro-Pro-NH2 (73 % de la théorie); F. 247-248 C (décomposition); R(3) = 0,19-; 25= -82,8 (c = 1, dans l'acide acétique). f = Analyse pour C23H2806N4 (poids moléculaire 456,50); calculé: C 60,52 %, H 6,18 %, N 12,27 %; trouve: C 60,03 %, H 6,20 %, N 12,20 %. 3ème étape: L-pyroglutamyl-L-prolyl-L-prolinamide 1,0 g (2,2 mMoles) de ZGlp-Pro-Pro-NH2 est dissous dans 5-0 ml d'acide acétique, on ajoute 0,2 g de catalyseur à bazZ de charbon actif à 10 % de palladium et on fait cir- culer de l'hydrogène pendant une heure à travers le mélange. Le catalyseur est alors séparé par filtration, le filtrat est évaporé et le résidu d'évaporation est trituré avec de l'éther. Le produit brut amorphe obtenu de cette manière 0,60 g) est dissous dans l'eau, la solution est clarifiée à l'aide de charbon actif et la solution limpide est lyophi- lisée. On obtient 0,50 g de Glp-Pro-Pro-NH2 (70 % de la théorie); R4) = 0, 10; Da)25 = -223 (c = 1 dans l'acide acétique). EXEMPLE 4: Lpyroglutamyl-L-valyl-L-prolinamide lère étape: Chlorhydrate de L-valyl-Lprolinamide 0,49 g (4,2 mMoles) de-H-Pro-NH2 et 0,82 g (2,14 mMoles) de BOC-Val-OPFP sont dissous dans 10 ml de DMFA et après minutes de repos, la solution est évaporée sous vide. L'huile obtenue en tant que résidu d'évaporation est dis- soute dans 10 ml de chloroforme, la solution est épuisée en la secouant deux fois avec 3 ml de solution N d'acide chlorhydrique, trois fois avec 3 ml de solution N de car- bonate acide de sodium et finalement une fois avec 3 ml d'eau, puis elle est séchée à l'aide de sulfate de sodium anhydre et évaporée. Le résidu d'évaporation est dissous dans 3 ml d'acétate d'éthyle et additionné de 3 ml de solu- tion N d'acide chlorhydrique dans l'acétate d'éthyle. Après une heure de repos, le mélange réactionnel est dilué par C. l'éther, le précipité est séparé par filtration et séché sous vide sur de l'hydroxyde de sodium anhydre. On obtient de cette manière 0,51 g de H-Val-Pro-NH2.HCL (95 % du ren- dement théorique calculé par rapport au BOC-Val-OPFP-; R(4) = 0,10). 2ème étape: Benzyloxycarbonyl-L-pyroglutamyl-L-valyl-L- prolinamide On met 0,38 g (1,52 mMoles) de H-Val-Pro-NH2.HCL en suspension dans 10 ml de DMFA et on ajoute à cette suspension sous refroidissement par de la glace et agitation, 0,22 ml (1,52 nd4oles) de triéthylamine et 0,69 g (1,6 mMoles)de Z-C!} Z'FP. Au bout de 10 minutes, on ajoute encore 0,22 ml (1,52 mMoles) de triéthylamine et après 30 autres minutes d'aaittion, le mélange réactionnel est évaporé sous vide. Le résidu d'évaporation est dissous dans 15 ml de chloro- forme: la solution est épuisée en la secouant deux fois avec ml de solution N d'acide chlorhydrique, trois fois avec 5 ml de solution N de carbonate acide de sodium et finale- ment une fois avec 5 ml d'eau, puis elle est séchée à l'aide de sulfate de sodium anhydre et évaporée sous vide. On fait cristalliser le résidu huileux dans de l'éther; on obtient de cette manière 0,54 g de Z-Glp-ValPro-NH (77 % de la théorie); F. 116-118 C; R() 0,30; L0 D5 =-100,5 fD (c = 1 dans l'acide acétique). 3ème étape: L-pyroglutamyl-L-valyl-L-prolinamide 9,65 g (21,2 mMoles) de Z-Glp-Val-Pro-NH2 sont dissous dans 300 ml d'eau et après addition de 2 g de cata- lyseur à base de charbon actif à 10 % de palladium, on fait circuler de l'hydrogène pendant 5 heures à travers la solu- tion. Le catalyseur est ensuite séparé par filtration et le filtrat est évaporé. On dissout l'huile obtenue en tant que résidu dans l'éthanol, on évapore la solution et cette opé- ration est encore répétée à deux reprises. Le résidu amorphe solide finalement obtenu est trituré avec de l'éther; on obtient de cette manière 4,47 g de Glp-Val-Pro-NH2 (85 % de la théorie); R 4)= 0,34; a25 = 104,9 (c = 1 dans l'acide acétique). Analyse de l'amino-acide: Glu 1,03 (1,01), Val 1,00 (1,0), Pro 0,94 (1,0). EXEMPLE 5 L-pyroglutamyl-L-isoleucyl-L-prolinamide lère étape: Benzyloxycarbonyl-L-isoleucyl-L-prolinamide 51,4 g (0,1 mole) de Z-IleOPFP et 12,5 g (0,11 mole) de H-Pro-NH2 sont dissous dans 250 ml de DMFA et on ajoute à la solution 14,0 ml (0,1 mole) de triéthylamine. On laisse reposer le mélange réactionnel pendant une nuit et on l'éva- pore sous vide le jour suivant. L'huile obtenue en tant que résidu est dissoute dans 500 ml de chloroforme, la solution -cst épuisée en la secouant deux fois avec 100 ml d'une so- lution N d'acide chlorhydrique, deux fois avec 100 ml d'une solution N de carbonate acide de sodium et finalement une fois avec 100 ml d'eau, puis elle est séchée à l'aide de sun3fe de sodium anhydre et évaporée. On fait cristalliser le résidu huileux à l'aide d'un mélange de 100 ml d'éther et 100 ml de n-hexane. Le produit brut obtenu de cette ma- nière (31,7 g) est recristallisé dans un mélange de 60 ml d'acétate d'éthyle et 60 ml de n-hexane. On obtient 30,32 g de Z-Ile-Pro-NH2 (84 % de la théorie); F. 127-128 C; R (2) = 0,54. f 2ème étape: Chlorhydrate de L-isoleucyl-L-prolinamide 24,0 g (66,5 mMoles) de Z-Ile-Pro-NH2 sont dissous dans 470 ml de méthanol, on ajoute 30 ml de solution 2,4 N d'acide chlorhydrique méthanolique et 4 g de catalyseur à base de charbon actif à 10 % de palladium à la solution et on fait circuler de l'hydrogène pendant une heure à travers le mélange. Le catalyseur est ensuite séparé par filtration et le filtrat évaporé. Le résidu d'évaporation est trituré avec de l'éther et le produit brut obtenu de cette manière (20 g) est recristallisé dans un mélange de méthanol et d'éther. On obtient 16,05 g de H-Ile-Pro-NH2.HCl (81 % de la théorie); F. 135-140 C; R f 3ème étape: Benzyloxycarbonyl-L-pyroglutamyl-L-isoleucyl-L- prolinamide On met 0,90 g (3,5 mMoles) de H-Ile-Pro-NH2.HCl en suspension dans 20 ml de DMFA et on ajoute à cette suspen- sion sous refroidissement par de la glace et agitation, 0,49 ml (3,5 mMoles) de triéthylamine et 1,57 g (3,7 mMoles) de Z-Glp-OPFP. Au bout de 5 minutes, on ajoute encore 0,49 ml (3,5 mMoles) de triéthylamine et après 20 autres minutes d'agitation, le mélange réactionnel est évaporé sous vide. Le résidu d'évaporation est dissous dans 30 ml de chloro- forme, la solution est épuisée en la secouant trois fois avec 7 ml d'une solution N d'acide chlorhydrique, trois fois avec 7 ml d'une solution N de carbonate acide de so- dium et finalement une fois avec 7 ml d'eau, puis elle est séchée à l'aide de sulfate de sodium anhydre et évaporée. L'huile obtenue en tant que résidu est taitée à plusieurs reprises avec de l'éther et l'éther est décanté; on fait enfin rristalliser le produit brut à l'aide d'éther, puis on le sépare, on le dissout dans de l'acétate d'éthyle et on le précipite à nouveau, par addition d'éther. On obtient de cctte manière 1,18 g de Z-Glp-Ile-Pro-NH2 (71,5 % de (3) _= 2 la théorie); F. 87-89 C; R 0,36 %; [aJD25 = -91,4 f D (c = 1, dans l'acide acétique). Analyse pour C24H3206N4 (poids moléculaire 427,55): calculé: C 61,00 %, H 6,83 %, N 11,6 % trouvé: C 59,19 %, H 6,88 %, N 11,16 %. 4ème étape: L-pyroglutamyl-L-isoleucyl-L-prolinamide 4,72 g (10 mMoles) de Z-Glp-Ile-Pro-NH2 sont dissous dans 100 ml de méthanol. On ajoute à cette solution 1 g de catalyseur à base de charbon actif à 10 % de palladium et on fait circuler de l'hydrogène pendant une heure à tra- vers le mélange. Le catalyseur est alors séparé par filtra- tion, le filtrat est évaporé et le résidu est trituré avec de l'éther. Le produit brut obtenu de cette manière (3,22 g) est dissous dans l'eau et la solution est clarifiée à l'aide de charbon actif. La solution limpide est lyophilisée; on obtient 3,03 g de Glp-Ile-Pro-NH2 (98 % de la théorie) ; 4) = 0,45; [J5 = -100,7 (c = 1 dans l'acide acétique). Analyse de l'amino-acide: Glu 0,95 (1,0), Ile 1,00 (1,0), Pro 1,02 (1,0). EXEMPLE 6: L-pyroglutamyl-L-a-aminobutyryl-L-prolinamide lère étape: Pentafluorophénylester de l'acide tert.-butyloxy- carbonyl-L-a-aminobutyrique On met 7,7 g (20 mMoles) de BOC-Abu-OH.DCMA en suspension dans 60 ml d'éther, on ajoute à cette suspension 20 ml de solution 2 N d'acide sulfurique et on agite jus- qu'à la dissolution de la substance en suspension. La phase éthérée est ensuite séparée, épuisée en la secouant avec ml de solution 2 N d'acide sulfurique, puis avec 20 ml d'eau, séchée à l'aide de sulfate de sodium anhydre et éva- porée. L'huile obtenue en tant que résidu (4,14 g) et 3,7 g (20 mMoles) de PFPOH sont dissous dans 25 ml d'acétate d'éthyle, la solution est refroidie au-dessous de 5 C et additionnée, sous agitation, de 3,92 g (19 mMoles) de DCC. Le mélange réactionnel est agité pendant une heure au bain glacé, puis le DCU est séparé par filtration et le filtrat est évaporé. L'huile obtenue en tant que résidu est dissoute dans le n-hexane et on laisse reposer la solution pendant une heure au réfrigérateur. Le DCU qui s'est encore déposé, est séparé par filtration et le filtrat est concentré jus- qu'à un volume de 20 ml. Apres le commencement de la sépa- ration des cristaux, la suspension est placée dans un ré- frigérateur et y est abandonnée pendant une nuit; les cris- taux sont séparés par filtration le jour suivant. On obtient de cette manière 5,57 g de BOC-Abu-OPFP (76 % de la théorie): F. 83-840C; Rfw - 0,86: [aD= _32, 8 (c = 1, dans l'acétate d'éthyle). Analyse pour C15H1604NF5 (poids moléculaire 369,29): calculé: C 48,79 %, H 4,37 %, N 3,79 %, F 25,72 %; trouvé: C 48,55 %, H 4,28 %, N 3,70 %, F 25,44 %. 2ème étape: Chlorhydrate de L-a-aminobutyryl-L-prolinamide 3,2 g (28 mMoles) de H-Pro-NH2 et 5,16 g (14 mMoles) de BOC-Abu-OPFP sont dissous dans 60 ml de DMFA et après minutes de repos, la solution est évaporée sous vide. L'huile obtenue en tant que résidu est dissoute dans 100 ml de chloroforme, la solution est épuisée en la secouant deux fois avec 20 ml d'une solution N d'acide chlorhydrique et deux fois avec 20 mi d'une solution N de carbonate acide de sodium, puis elle est séchée à l'aide de sulfate de sodium anhydre et évaporée. L'huile obtenue en tant que résidu est dis- soute dans 20 ml d'acétate d'éthyle et additionnée de 20 ml d'une solution 6 N d'acide chlorhydrique dans l'acétate d'éthyle. Au bout d'une heure, le mélange réactionnel est dilué par de l'éther, le précipité obtenu est séparé par filtration et séché sous vide sur de l'hydroxyde de sodium ----nhydre. Le produit brut obtenu de cette manière (3,86 g) est trituré avec 20 ml de DMFA froid. On obtient 2,40 g de H-Abul-Pro-NH2.HCl (73 % du rendement théorique calculé par rapport au BOC-Abu-OPFP); R4)= 0,10. f 2mz étape: Benzyloxycarbonyl-L-pyroglutamyl-L-a-aminobutyryl-L- prolinamide On met 2,13 g (9 mMoles) de H-Abu-Pro-NH2.HCl en sus- pension dans 30 ml de DMFA et on ajoute à cette suspension sous refroidissement par de la glace et agitation, 1,26 ml (9mMoles) de triéthylamine et 3,95 g (9,2 mMoles) de Z-Glp-OPFP. Au bout de 5 minutes, on ajoute encore 1,26 ml (9 mMoles) de triéthylamine et après 20 minutes encore d'agi- tation, le mélange réactionnel est évaporé sous vide. Le résidu cristallin est trituré avec 20 ml d'éthanol, abandonné pendant une nuit au réfrigérateur, puis séparé par filtra- tion. On obtient de cette manière 3,30 g de Z-Glp-Abu-Pro-NH2 (82 % de la théorie); F. 175-176 C; R(3) = 0,28; [aJ = -99,6 (c = 1 dans l'acide acétique). 4ème étape: L-pyroglutamyl-L-a-aminobutyryl-L-prolinamide 2,67 g (6 mMoles) de Z-Glp-Abu-Pro-NH2 sont dissous dans 100 ml d'acide acétique, on ajoute à la solution 0,5 g de catalyseur a base de charbon actif à 10 % de palladium et on fait circuler de l'hydrogène pendant une heure à tra- vers le mélange. Après séparation du catalyseur par filtra- tion, le filtrat est évaporé et le résidu est trituré avec de l'éther. Le produit brut amorphe obtenu de cette manière (1,82 g) est dissous dans l'eau, la solution est clarifiée à l'aide de charbon actif et la solution limpide est lyophi- lisée. On obtient 1,70 g de Glp-Abu-Pro-NH2 (91 % de la théorie): RD4) = 0,24;]5 = 102,5 (c = 1, dans l'aci- de acrtique). EXEMPLE 7: L-pyroglutamyl-L-a-aminodécanoyl-L-prolinamide lère étape: Chlorhydrate de L-o-aminodécanoyl-L-prolinamide On dissout 1,37 g (12 mMoles) de H-Pro-NH2 et 2,72 g (6 mMoles) de BOC-Ada-OPFP dans 20 ml de DMFA et après 5 mi- nutes de repos, on évapore la solution sous vide. L'huile obtenue en tant que résidu est dissoute dans 50 ml de chlo- roforme, la solution est épuisée en la secouant trois fois avec 10 ml d'une solution N d'acide chlorhydrique, trois fois avec 20 ml d'une solution N de carbonate acide de so- dium et finalement deux fois avec 10 ml d'eau, puis on la sèche à l'aide de sulfate de sodium anhydre et on l'évapore. L'huile obtenue en tant que résidu est dissoute dans 3 ml d'acétate d'éthyle et la solution est additionnée de 5 ml de solution 6 N d'acide chlorhydrique. Apres une heure de rcpos, le mélange réactionnel est dilué par de l'éther, le précipité qui se forme est séparé par filtration et séché sous vide sur de l'hydroxyde de sodium anhydre. On obtient de cette manière 1,75 g de H-Ada-Pro-NH2.HCl (91 % du ren- dement théorique calculé par rapport au BOC-Ada-OPFP); R f 2ème étape: Benzyloxycarbonyl-L-pyroglutamyl-L-a-aminodécanoyl- L-prolinamide 1,75 g (5,5 mMoles) de H-Ada-Pro-NH2.HCl et 2,58 g (6 mMoles) de Z-Glp-OPFP sont dissous dans 30 ml de DMFA et la solution est additionnée de 0,77 ml (5,5 mMoles) de triéthylamine; Au bout de 5 minutes, on ajoute encore 0,77 g (5,5 mMoles) de triéthylamine et après 20 minutes encore d'agitation, le mélange réactionnel est évaporé sous vide. Le résidu d'évaporation est dissous dans 50 ml de chloro- forme, la solution est épuisée en la secouant trois fois avec 10 ml d'une solution N d'acide chlorhydrique, trois fois avec 20 ml d'une solution N de carbonate acide de sodium et finalement deux fois avec 20 ml d'eau, puis elle est séchée à l'aide de sulfate de sodium anhydre et éva- porée. L'huile moussante obtenue en tant que résidu est triturée avec de l'éther, la suspension sous forme de gel obtenue est abandonnée pendant environ 2 heures au réfri- gérateur, puis le précipité est séparé par filtration et séché. Le produit brut obtenu de cette manière (2,61 g) est recristallisé dans 20 ml d'acétate d'éthyle. On obtient 2,45 g de Z-Glp-Ada-Pro-NH2 (84 % de la théorie): F. 103-105 C; R(2) = 0,19; [ai5 =_63,7 (c = 1, dans :aide acétique). Analyse pour C28H4006N4 (poids moléculaire 528,65): can: C 63,62 %, H 7, 63 %, N 10,60 %; trcta 3ème étape: L-pyroglutamyl-L-a-aminodécanoyl-L-prolinamide On dissout 1,9 g (3,6 mMoles) de Z-Glp-Ada-Pro-NH2 dans 40 ml d'acide acétique, on ajoute à la solution 0,2 g de catalyseur à base de charbon actif à 10 % de palladium et on fait circuler de l'hydrogène pendant une demi-heure à travers le mélange. Le catalyseur est alors séparé par filtration, le filtrat est évaporé et le résidu d'évapora- tion dissous dans l'eau. La solution aqueuse est clarifiée à l'aide de charbon actif et évaporée. L'huile obtenue en tant que résidu est dissoute dans 30 ml de chloroforme, la solution est séchée à l'aide de sulfate de sodium anhydre et évaporée. Le résidu amorphe solide moussant est trituré avec de l'éther, séparé par filtration et séché. On obtient de cette manière 1,20 g de Glp-Ada-Pro-NH2 (82 % de la théo- rie); R 4) = 0,55; úsj5 = _66,2 (c = 1, dans l'acide acétique). EXEMPLE 8: L-pyroglutamyl-L-cyclohexylalanyl-L-prolinamide lère étape: Pentafluorophénylester de tert.-butyloxycarbonyl-L- cyclohexylalanine On met 9,04 g (20 mMoles) de BOC-Cha-OH-DCHA en sus- pension dans 80 ml d'éther et on ajoute à la suspension ml de solution 2 N d'acide sulfurique. Le mélange est agité jusqu'à la dissolution de la substance solide, puis la phase éthérée est séparée, lavée avec 20 ml de solution 2 N d'acide sulfurique et ensuite avec 20 ml d'eau, séchée à l'aide de sulfate de sodium anhydre et évaporée. L'huile obtenue en tant que résidu (5,7 g) est dissoute dans 30 ml d'acétate d'éthyle, additionnée de 3,7 g (20 mMoles) de PFCH, le mélange est refroidi jusqu'à 5 C au maximum et ad-'ionné de 4,12 g (20 mMoles) de DCC. Le mélange réac- !_..el est agité à cette température pendant une heure, puis le DCU précipité est séparé par filtration, le filtrat est évaporé et l'huile obtenue en tant que résidu est dis- soute dans 30 ml de n-hexane. La solution est abandonnée pendant une heure au réfrigérateur, le DCC qui s'est encore déposé est lui aussi séparé par filtration et le filtrat est dilué par 70 ml de n-hexane. La solution diluée est épuisée en la secouant cinq fois avec 40 ml d'une solution N de carbonate acide de sodium et deux fois avec 40 ml d'eau, puis elle est séchée à l'aide de sulfate de sodium anhydre et évaporée. L'huile obtenue en tant que résidu cristallise au repos. On obtient de cette manière 8,48 g de BOC-Cha-OPFP (97 % de la théorie); F. 75-77 C; R(l) = 0,88. f Analyse pour C20H2404NF5 (poids moléculaire 437,41): calculé: C 54,92 %, H 5,53 %, N 3,20 %, F 21,72 %; trouvé: C 54,67 %, H 5,66 %, N 3,11%, F 21,43 %. 2ème étape: Chlorhydrate de L-cyclohexylalanyl-L-prolinamide 2,28 g (20 mMoles) de H-Pro-NH2 et 4,37. g (10 mMoles) de BOC-Cha-OPFP sont dissous dans 40 ml de DMFA et après minutes de repos, la solution est évaporée sous vide. L'huile obtenue en tant que résidu est dissoute dans 80 ml de chloroforme, la solution est épuisée en la secouant trois fois avec 20 ml de solution N d'acide chlorhydrique, trois fois avec 20 ml de solution N de carbonate acide de sodium et finalement une fois avec 20 ml d'eau, puis elle est séchée à l'aide de sulfate de sodium anhydre et évaporée. L'huile obtenue en tant que résidu est dissoute dans 8 ml d'acétate d'éthyle, additionnée de 10 ml de solution 5 N d'acide chlorhydrique dans l'acétate d'éthyle et au bout d'une heure, le mélange réactionnel est dilué par de l'éther. Le précipité qui se dépose est séparé par filtration et sé- ché sous vide sur de l'hydroxyde de sodium anhydre. On ob- tient de cette manière 2,98 g de H-Cha-Pro-NH2.HCl (97 % a rendement théorique calculé par rapport au BOC-Cha-OPFP); R4 = 0,33. lace 1tape: Benzyloxycarbonyl-L-pyroglutamyle-L-cyclohexylalanyl- prolinamide 2,43 g (8 mMoles) de H-Cha-Pro-NH2-HCl et 3,60 g ( mMoles) de Z-Glp-OPFP sont dissous dans 25 ml de DMFA et la solution est additionnée de 1,12 ml (8 mMoles) de triéthylamine. Au bout de 5 minutes, on ajoute encore 1,12 ml (8 mMoles) de triéthylamine et au bout de 20 minutes encore d'agitation, le mélange réactionnel est évaporé sous vide. Le résidu d'évaporation est dissous dans 80 ml de chloro- forme, la solution est épuisée en la secouant trois fois avec 20 ml de solution N d'acide chlorhydrique, trois fois avec 20 ml de solution N de carbonate acide de sodium et finalement avec 20 ml d'eau, puis elle est séchée à l'aide de sulfate de sodium anhydre et évaporée. On cristallise l'huile obtenue en tant que résidu à l'aide d'éther; le produit brut obtenu de cette manière (3,88 g) est recris- tallisé dans 30 ml d'acétate d'éthyle. On obtient 3,32 g de Z-Glp-Cha-ProNH2 (81 % de la théorie); F. 165-166 C; Rf2) - 0,17; a325 = -67,3 (c = 1, dans l'acide acétique). fD AnlsporCHO Analyse pour C27H3606N4 (poids moléculaire 512,61): calculé: C 63,26 %, H 7,08 %, N 10,93 % trouvé: C 63,15 %, H 7,04 %, N 10,91%. 4ème étape: - L-pyroglutamyl-L-cyclohexylalanyl-L-prolinamide 3,07 g (6 mMoles) de ZGlp-Cha-Pro-NH2 sont dissous dans 60 ml d'éthanol, on ajoute à la solution 0,6 g de catalyseur à base de charbon actif à 10 % de palladium et on fait circuler de l'hydrogène pendant 2 heures à tra- vers la solution. Après la séparation du catalyseur par filtration, le filtrat est évaporé et le résidu est trituré avec de l'éther. On obtient de cette manière 2,15 g de Glp-Cha-Pro-NH2 amorphe solide (95 % de la théorie); R(4) =0,50; Caj5 = -70,9 (c = 1, dans l'acide acétique). EAEMPLE 9: L-pyroglutamyl-L-thréonyl-L-prolinamide Jere étape: Chlorhydrate de O-benzyl-L-thréonyl-L-prolinamide 1,43 g (12,5 mMoles) de H-Pro-NH2 et 2,98 g (6,27 mMoles) de BOC-Thr(Bzl)-OPFP sont dissous dans 20 ml de DMFA et, après 5 minutes de repos, la solution est éva- porée sous vide. L'huile obtenue en tant que résidu est dis- soute dans 30 ml de chloroforme, la solution est épuisée en la secouant deux fois avec 10 ml de solution N d'acide chlorhydrique, trois fois avec 10 ml de solution N de carbonate acide de sodium, puis elle est séchée à l'aide de sulfate de sodium anhydre et évaporée. L'huile obtenue en tant que résidu d'évaporation est dissoute dans 4 ml d'acé- tate d'éthyle et additionnée de 5 ml de solution 5 N d'acide chlorhydrique. Apres une heure de repos, le mélange réaction- nel est dilué par de l'éther, le précipité qui se forme est séparé par filtration et séché sous vide sur de l'hydroxyde de sodium anhydre. On obtient de cette manière 2,05 g de H-Thr(Bzl)-Pro-NH2.HCl (95 % de la théorie); R f 2ème étape: Benzyloxycarbonyl-L-pyroglutamyl-L-O-benzyl-thréonyl- L-prolinamide 2,05 g (6 mMoles) de H-Thr(Bzl)-Pro-NH2.HCl et 2,69 g (6,27 mMoles) de Z-Glp-OPFP sont dissous dans 20 ml de DMFA, on ajoute goutte-àgoutte à la solution, 0,84 ml (6 mMoles) de triéthylamine et après 5 minutes de repos, on ajoute en- core 0,84 ml (6 mMoles) de triéthylamine. Apres 20 minutes d'agitation, le mélange réactionnel est évaporé sous vide, le résidu est dissous dans 50 ml de chloroforme, la solu- tion est épuisée en la secouant deux fois avec 10 ml de solution N d'acide chlorhydrique et trois fois avec 10 ml de spolution N de carbonate acide de sodium, puis elle est séchée à l'aide de sulfate de sodium anhydre et évaporée. L'huile obtenue en tant que résidu est traitée par de l'éther et refroidie, provoquant ainsi la prise en masse du produit à l'état amorphe. Le produit brut obtenu de cette manière (2,76 g) est dissous dans l'acétate d'éthyle et clarifié à l'aide de charbon actif. Apres séparation par filtration, le filtrat est évaporé et le résidu amorphe solide moussant est trituré avec de l'éther. On obtient 2,47 g de Z-Glp-Thr(Bzl)-Pro-NH2 (75 % de la théorie). 3ème étape: L-pyroglutamyl-L-thréonyl-L-prolinamide 2,04 g (3,7 mMoles) de Z-Glp-Thr(Bzl)-Pro-NH2 sont dissous dans 40 ml d'acide acétique, on ajoute à la solution 0,4 g de catalyseur à base de charbon actif à 10 % de pal- ladium et on fait circuler de l'hydrogène pendant 4 heures à travers le mélange. Après la séparation du catalyseur par filtration, le filtrat est évaporé et le résidu est trituré avec de l'éther. Le produit brut amorphe obtenu de cette manière (1,31 g) est placé sur une colonne contenant 30 g de gel de silice (granulométrie: 0,063 - 0,2 mm) et élué par le mélange de solvants (3). Les fractions d'éluat contenant du produit pur sont réunies et évaporées et le produit brut obtenu comme résidu est traité par de l'éther. On obtient 0,72 g de Glp-Thr-Pro-NH2 (59,5 % de la théorie); =0 R(4) 0,16; a = 90,0 (c = 1, dans l'acide acétique). Analyse de l'amino-acide: Glu 1,00 (1,0), Thr 0,99 (1,0), Pro 1,03 (1,0). EXEMPLE 10: L-pyroglutamyl-O-tert.-butyl-L-séryl-L- prolinamide lère étape: Hémioxalate d'O-tert.-butyl-L-séryl-L-prolinamide 8,0 g (70 mMoles) de H-Pro-NH et 16,0 g (34,7 mMoles) t 2 de Z-Ser( Bu)OPFP sont dissous dans 120 ml de DMFA et après minutes de repos, la solution est évaporée sous vide. L'huile obtenue comme résidu est dissoute dans 300 ml de chloroforme, la solution est épuisée en la secouant trois fois avec 80 ml de solution N d'acide chlorhydrique, trois fois avec 80 ml de solution N de carbonate acide de sodium et finalement une fois avec 80 ml d'eau, puis elle est sé- chée à l'aide de sulfate de sodium anhydre et évaporée. L'huile obtenue comme résidu (18 g) et 4,37 g (34,7 mMoles) d'acide oxalique dihydrate sont dissous dans 300 ml de méthanol, la solution est additionnée de 3 g de catalyseur à -:- '.e charbon actif à 10 % de palladium et on fait cir- cul= d' l'hydrogène pendant une heure à travers le mélange. Apres la séparation du catalyseur par filtration, le filtrat est -.poré, le résidu est trituré avec de l'acétate d'éthyle et serhé sous vide. On obtient de cette manière 10,8 g de H-Ser( tBu)-Pro-NH2.(COOH)2 (90 % du rendement théorique 2' 2 t calculé par rapport au Z-Ser( Bu)-OPFP) sous la forme d'une substance hygroscopique amorphe; R f 2ème étape Benzyloxycarbonyl-L-pyroglutamyl-O-tert.-butyl-L- séryl-L-prolinamide 6,43 g (18,5 mMoles) de H-Ser( Bu)-Pro-NH2.(COOH)2 et 7,95 g (18,5 mMoles) de Z-Glp-OPFP sont dissous dans ml de DMFA et la solution est additionnée de 5,18 ml (37 mMoles) de triéthylamine. Après 5 minutes de repos, le mélange réactionnel est évaporé sous vide et le résidu cristallin est trituré avec de l'éther. Le produit brut obtenu de cette manière (9,53 g) est recristallisé dans ml de méthanol. On obtient 7,70 g de Z-Glp-Ser(iu)-Pro-NH2 (83 % de la théorie); F. 226-229 C; R 235 71 [I = 71,6 (c = 1, dans l'acide acétique). Analyse pour C25H3407N4 (poids moléculaire 502,57): calculé: C 59,75 %, H 6,82 %, N 11,15 % trouvé: C 59,55 %, H 6,95 %, N 11,09 %. 3ème étape: L-pyroglutamyl-O-tert.-butyl-L-séryl-L-prolinamide 4,02 g (8 mMoles) de Z-Glp-Ser( Bu)-Pro-NH2 sont dissous dans 160 ml de méthanol, la solution est addition- née de 0,8 g de catalyseur à base de charbon actif à 10 % de palladium et on fait circuler l'hydrogène pendant 30 minutes à travers le mélange. Après la séparation du cata- lyseu.par filtration, le filtrat est évaporé. L'huile obtenue comme résidu est cristallisée dans de l'éther; les crstaux sont séparés par filtration et séchés. On ob- t tient de cette manière 2,50 g de Glp-Ser(tBu)-Pro-NH2 (85 % de la théorie); F. 186-187 C; R -4) =0,45; r]> r-60,8 (c = 1 dans l'acide acétique). tAnalyse de l'amino-acide: Glu 1,03 (1,0), Ser 1,00 *(1,0), Pro 1,00 (1,0). Analyse pour C17H2805N4 (poids moléculaire 368,44): calculé: C 55,42 %, H 7,66 %, N 15,21%; trouvé: C 55,07 %, H 7,61%, N 14,94 %. EXEMPLE 11: L-pyroglutamyl-D-leucyl-L-prolinamide lère étape: Pentafluorophénylester de tert.-butyloxycarbonyl-D- leucine 4,62 g (20 mMoles) de BOC-D-leu-OH et 4,23 g (22 mnMoles) de PFPOH sont dissous dans 50 ml d'acétate d'éthyle et la solution est additionnée, sous refroidisse- ment par de la glace et agitation, de 4,12 g (20 mMoles) de DCC. Le mélange réactionnel est agité pendant une heure dans un bain glacé, puis la dicyclohexylurée qui se dépose est séparée par filtration et le filtrat est évaporé. L'huile obtenue comme résidu est dissoute dans 100 ml de n-hexane, la solution est abandonnée pendant une heure au réfrigérateur et la dicyclohexylurée qui s'est encore dé- posée est, elle aussi, séparée par filtration. Le filtrat est épuisé en le secouant cinq fois avec 50 ml de solution N de carbonate acide de sodium et deux fois avec 50 ml d'eau,puis elle est séchée à l'aide de sulfate de sodium anhydre et évaporée.L'huile obtenue comme ré- sidu cristallise en l'espace d'une nuit.On obtient de cette manière 7, 0gde BOC-D-Leu-OPFP (85 % de la théorie); F. 53-55 C; R(1) = +31,7 (c = 1, dans l'acétate d'éthyle). f Analyse pour C17H2004NF5 (poids moléculaire 397,35): calculé: C 51,39 %, H 5,07 %, N 3,53 %, F 23,91%; trouvé: C 51,51%, H 4,68 %, N 3,66 %, F 23,65 %. 2ème étape: Chlorhydrate de D-leucyl-L-prolinamide 3,42 g (30 mMoles) de H-Pro-NH2 et 60,0 g (15 mMoles) de BOC-D-Leu-OPFP sont dissous dans 60 ml de DMFA et après minutes de repos, la solution est évaporée sous vide. Le résidu d'évaporation est dissous dans 100 ml de chloro- forme, la solution est épuisée en la secouant deux fois avec ml de solution N d'acide chlorhydrique, trois fois avec ml de solution N de carbonate acide de sodium et finale- ment une fois avec 20 ml d'eau, puis elle est séchée à l'ai- de de sulfate de sodium anhydre et évaporée. L'huile obtenue comme résidu est dissoute dans 10 ml d'acétate d'éthyle, la solution est additionnée de 15 ml de solution 4 N d'acide chlorhydrique dans l'acétate d'éthyle; au bout d'une heure, le mélange réactionnel est dilué par de l'éther, le préci- pité obtenu est séparé par filtration et séché sous vide sur de l'hydroxyde de sodium anhydre. On obtient de cette manière 3,66 g de H-DLeu-Pro-NH2.HCl (92,5 % du rendement théorique calculé par rapport au BOCD-Leu-OPFP); R -4) = 0,26. f 3ème étape: Benzyloxycarbonyl-L-pyroglutamyl-D-Leucyl-L- prolinamide 3,66 g (13,9 mMoles)de H-D-Leu-Pro-NH2.HCl et 6,43 g (15 mMoles) de Z-Glp-OPFP sont dissous dans 50 ml de DMFA et on ajoute à la solution, sous refroidissement par de la glace et agitation, 1,95 ml (13, 9 mMoles) de triéthylamine. Le mélange est agité pendant 5 minutes et on lui ajoute encore 1,95 ml (13,9 mMoles) de triéthyl- amine. Apres 20 autres minutes d'agitation, le mélange réactionnel est évaporé sous vide. Le résidu d'évaporation est dissous dans 120 ml de chloroforme, on épuise la solu- tion en la secouant trois fois avec 30 ml de solution N d'acide chlorhydrique, trois fois avec 30 ml de solution N de carbonate acide de sodium et finalement une fois avec ml d'eau, puis on la sèche à l'aide de sulfate de sodium anbI-ytre et on l'évapore. On cristallise l'huile obtenue comme résidu par traitement par de l'éther. Le produit brut obte- nu de--cette manière (6 g) est recristallisé dans 30 ml d'éthanol. On obtient 5,48 g de Z-Glp-D-Leu-Pro-NH2 (77-% de la théorie); F. 189-194 C; R 3) = 0,48; f ae25 = -33,2 (c = 1, dans l'acide acétique). D 4ème étape: L-pyroglutamyl-D-leucyl-L-prolinamide 3,78 g (8 mMoles) de Z-Glp-D-Leu-Pro-NH2 sont dissous dans 150 ml de méthanol, on ajoute à la solution 0,8 g de catalyseur à base de charbon actif à 10 % de palladium et on fait circuler de l'hydrogène pendant une heure à tra- vers le mélange. Apres la séparation du catalyseur par fil- tration, le filtrat est évaporé et le résidu est trituré avec de l'éther. Le produit brut obtenu de cette manière (2,5 g) est dissous dans l'eau, clarifié à l'aide de char- bon actif et la solution limpide est lyophilisée. On ob- tient 2,35 g de Glp-D-Leu-Pro-NH2 (87 % de la théorie); R4) = 0,48; []25 = -83,3o ( c = 1 dans l'acide acéti- que). EXEMPLE 12: L-pyroglutamyl-Lleucyl-L-proline-éthylamide lère étape: Chlorhydrate de L-leucyl-Lproline-éthylamide On met 1,67 g (7,2 mMoles) de H-Pro-NH-Et.(COOH)2 en suspension dans 20 ml d'acétate d'éthyle et on ajoute à la sus-rnsion 2,0 ml (14,4 mMoles) de triéthylamine et 2,38 g (6 mMoles) de BOC-Leu-OPFP. Au bout de 5 minutes, on épuise le mélange réactionnel en le secouant deux fois avec 5 ml de solution N d'acide chlorhydrique, trois fois avec 5 ml de solution N de carbonate acide de sodium et finalement une fois avec 5 ml d'eau, puis on le sèche à l'aide de sulfate de sodium anhydre et on l'évapore. L'huile obtenue comme résidu est traitée par 10 ml de solution 5 N d'acide chlorhydrique dans l'acétate d'éthyle, au bout de minutes le mélange est dilué par de l'éther, le préci- pité:st séparé par filtration et séché sous vide sur de l'hydroxyde de sodium anhydre. On obtient de cette manière 1,46 g de H-Leu-Pro-NH-Et.HCl hygroscopique (83 % du rende- ment théorique calculé par rapport au BOC-Leu-OPFP); R(4) = 0,43. f 2ème étape: Benzyloxycarbonyl-L-pyroglutamyl-L-leucyl-L- prolinamide 1,17 g (4 mMoles) de H-Leu-Pro-NH-Et.HCl et 1,72 g (4 ir. %oles) de Z-Glp-OPFP sont dissous dans 15 ml de DMFA et on ajoute à la solution 0,56 ml (4 mMoles) de triéthyl- amine. Au bout de 5 minutes, on ajoute encore 0,56 ml (4 mMoles) de triéthylamine et on évapore le mélange sous vide. On dissout l'huile obtenue comme résidu, dans 40 ml de chloroforme, on épuise la solution en la secouant deux fois avec 10 ml de solution N d'acide chlorhydrique, trois fois avec 10 ml de solution N de carbonate acide de sodium et finalement une fois avec 10 ml d'eau, puis elle est sé- chée à l'aide de sulfate de sodium anhydre et évaporée. Le résidu est trituré avec du n-hexane et filtré. On obtient de cette manière 1,61 g de Z-Glp-Leu-Pro-NH-Et amorphe - 0,50; r0O (80,5 % de la théorie); Rf3) 0,50; 5 -89,0 (c = 1, dans l'acide acétique). 3ème étape: L-pyroglutamyl-L-leucyl-L-proline-éthylamide 1,07 g (2,14 mMoles) de Z-Glp-Leu-Pro-NH-Et sont dissous dans 30 ml d'eau, on ajoute à la solution 0,25 g de catalyseur à base de charbon actif à 10 % de palladium et on fait circuler de l'hydrogène pendant une demi-heure à travers le mélange. Apres la séparation du catalyseur par filtration, le filtrat est évaporé, le résidu huileux est dissous dans 20 ml de chloroforme, la solution est sé- chée à l'aide de sulfate de sodium anhydre et évaporée. Le résidu qui se solidifie après le moussage, est trituré avec un mélange d'éther et de n-hexane. On obtient de cette manière 0,52 g de Glp-Leu-Pro-NH-Et (66 % de la théo- rie); R4) = 0,57; [a 25 = _94,5 (c = 1, dans l'acide f D acétique). EXEMPLE 13: L-pyroglutamyl-L-leucyl-L-proline-n-décylamide lère -tape: Benzyloxycarbonyl-L-proline-n-décylamide ,0 g (20 mMoles) de Z-Pro-OH sont dissous dans 50 ml de DMFA, on ajoute à la solution 2,8 ml (20 mMoles) de triéthylamine et on la refroidit à -10 C. On ajoute tout d'abord, goutte-à-goutte, 2,8 ml (21,5 mMoles) d'isobutyl- ester de l'acide chlorocarbonique à la solution, puis au bout de 10 minutes, également goutte-à-goutte, 4,4 ml (22 mMoles) de n-décylamine. Apres la fin de l'addition, le mélange est agité pendant 30 minutes à 0 C puis pendant 2 heures à la température ambiante. La suspension obtenue est séparée par filtration, le filtrat est évaporé et le résidu est dissous dans 100 ml d'acétate d'éthyle. On épuise la solution en la secouant quatre fois avec 50 ml de solu- tion N d'acide chlorhydrique, deux fois avec 50 ml de solu- tion N de carbonate acide de sodium et finalement une fois avec 50 ml d'eau, puis on la sèche à l'aide de sulfate de sodium anhydre et on l'évapore. On cristallise l'huile ob- tenue comme résidu d'évaporation par traitement par du n-hexane. On obtient de cette manière 5,43 g de Z-Pro-NH-C10H21 (70 % de la théorie); F.78-80 C; R(2) = 0,75. f 2ème étape: Hémioxalate de L-proline-n-décylamine ,0 g (12,9 mMoles) de Z-Pro-NH-C10H21 et 2,02 g (16 mMoles) d'acide oxalique dihydrate sont dissous dans ml de méthanol, la solution est additionnée de 0,8 g de catalyseur à base de charbon actif à 10 % de palladium et on fait circuler de l'hydrogène pendant 2 heures à tra- vers le mélange. Après la fin de l'hydrogénation, on chauf- fe le mélange réactionnel, on élimine le catalyseur par filtration et on évapore le filtrat. Le résidu cristallin est trituré avec de l'éther et filtré. On obtient de cette manière 3,9 g de H-Pro-NH-C10H21.(COOH)2 (88 % de la théorie) F. 152-154 C; R(3) = 0,16. f 3ème étape: Chlorhydrate de L-leucyl-L-proline-n-décylamide 3,44 g (10 mMoles) de H-Pro-NH-C10H21.(COOH)2 et 2,0 g (5 mMoles) de BOC-Leu-OPFP sont dissous dans 30 ml de DMFA et la solution est additionnée de 2,8 ml (20 mMoles) de triéthylamine. Après 5 minutes de repos, on évapore le mélange réactionnel et l'huile obtenue comme résidu est dis- soute dans 50 ml de n-hexane. On épuise la solution en la secouant cinq fois avec 30 ml de solution N d'acide chlor- hydrique, trois fois avec 30 ml de solution N de carbonate acide de sodium et finalement une fois avec 30 ml d'eau, et on l'évapore. L'huile obtenue comme résidu est dissoute dans 10 ml d'une solution 5 N d'acide chlorhydrique dans l'acétate d'éthyle, on laisse reposer la solution pendant minutes, après quoi on l'évapore. Le résidu amorphe moussant sous vide est trituré avec du n-hexane, séparé par filtration et séché sous vide sur de l'hydroxyde de so- dium anhydre. On obtient de cette manière 1,05 g de H-Leu-Pro-NH-C10H21. HCl (60 % du rendement théorique calculé par rapport au BOC-Leu-OPFP); R f 4ème étape: Benzyloxycarbonyl-L-pyroglutamyl-L-leucyl-L-proline- n-décylamide 1,03 g (2,55 mMoles de H-Leu-Pro-NH-C10H21 sont dis- sous dans 10 ml de DMFA et la solution est additionnée de 0,36 ml (2,55 mMoles) de triéthylamine et de 1,1 g (2,55 mMoles) de Z-Glp-OPFP. Le mélange est agité pendant minutes et on lui ajoute encore 0,36 ml (2,55 mMoles) de triéthylamine et après 20 minutes encore d'agitation le mé- lange réactionnel est évaporé sous vide. Le résidu est dis- sous dans 20 ml de chloroforme, on épuise la solution en la secouant cinq fois avec 10 ml de solution N d'acide chlor- hydrique, deux fois avec 10 ml de solution N de carbonate acide de sodium et finalement une fois avec 10 ml d'eau, puis on le sèche à l'aide de sulfate de sodium anhydre et on l'évapore; on cristallise l'huile obtenue comme résidu à l'aide d'éther et on filtre les cristaux obtenus. On ob- tient de cette manière 1,22 g de Z-Glp-Leu-Pro-NH-C10H22 (78 % de la théorie); F. 108-109 C; R a]D 25=_-74,5O (c = 1 dans l'acide acétique). Analyse pour C34H5206N4 (poids moléculaire 612,82): calcul.: C 66,64 %, H 8,55 %, N 9,14 %; trouvé: C 66,43 %, H 8,84 %, N 9,13 %. ème étape: L-pyroglutamyl-L-leucyl-L-proline-n-décylamide 1,22 g (2 mMoles) de Z-Glp-Leu-Pro-NH-C10H21 sont dissous dans 30 ml de méthanol, on ajoute à la solution 0,2 g de catalyseur à base de charbon actif à 10 % de palladium et on fait circuler de l'hydrogène pendant 30 minutes à travers le mélange. Après la séparation du cata- lyseur par filtration, le filtrat est évaporé et on cris- tallise l'huile obtenue comme résidu par traitement par du n-hexane. Le produit brut obtenu de cette manière (0,85 g) est recristallisé dans 4 ml d'acétate d'éthyle. On obtient 0,74 g de Glp-Leu-Pro-NH-C10H21l (77 % de la théorie); F. 140-141'C; R fD de acétique). Analyse de l'amino-acide: Glu 0,97 (1,0), Leu 1,00 (1,0), Pro 1,01 (1,0). EXEMPLE 14: L-pyroglutamyl-L-leucyl-L-proline-(2-diméthyl- aminoéthyl)-amide lère étape: Tert.-butyloxycarbonyl-L-proline-(2-diméthyl-amino- éthyl)-amide 11,43 g (30 mMoles) de BOC-Pro-OPFP sont dissous dans ml d'éther et on ajoute à la solution 6,54 ml (60 mMoles) de N,N-diméthylaminoéthylamine. On laisse reposer la solu- tion pendant 10 minutes, on l'épuise ensuite en la secouant trois fois avec 30 ml d'eau, on réunit les phases aqueuses, on ajuste leur pH à 10 par addition de carbonate de sodium solide et on l'extrait à quatre reprises avec 20 ml d'acé- tate d'éthyle. Les phases organiques séparées sont réunies à la solution organique initiale, lavées avec 20 ml d'eau, séchées à l'aide de sulfate de sodium anhydre et évaporées. L'hu:ile obtenue comme résidu cristallise au repos. On ob- tient de cette manière 6,71 g de BOC-Pro-NH-CH2-CH2-N(CH3)2 (78iô. % de la théorie); R(4) = 0,29. f 2ème Rtape: Dichlorhydrate de L-leucyl-L-proline-(2-diméthyl- aminoéthyl)-amide 6,71 g (23,5 mMoles) de BOC-Pro-NH-CH2-CH2-N(CH3)2 sont traités pendant 30 minutes par 30 ml de solution N d'acide chlorhydrique dans l'acétate d'éthyle, puis le mélange est évaporé. L'huile obtenue comme résidu est dis- soute dans 50 ml de chloroforme et additionnée de 2,8 ml (20 mMoles) de triéthylamine. On ajoute à la solution lim- pide obtenue, 6,74 g (17 mMoles) de BOC-Leu-OPFP et après une heure de repos, on lui ajoute goutte-à-goutte encore 2,8 ml (20 mMoles) de triéthylamine. On laisse reposer le mélange pendant une nuit et on l'évapore le jour suivant. L'huile obtenue en tant que résidu est dissoute dans-50 ml d'eau, le pH de la solution est ajusté à 10 par addition de carbonate de sodium solide et le dipeptide protégé est ex- trait de la phase aqueuse à l'aide d'acétate d'éthyle. La phase dans l'acétate d'éthyle séparée est séchée à l'aide de sulfate de sodium anhydre et évaporée. L'huile obtenue comme résidu est traitée pendant une heure par 30 ml de solution 5 N d'acide chlorhydrique dans de l'acétate déthyle, puis le mélange réactionnel est évaporé et le ré- sidu d'évaporation est trituré avec de l'éther. Après la séparation par filtration, le produit amorphe, fortement hygroscopique, est séché sous vide sur de l'hydroxyde de sodium anhydre. On obtient de cette manière 4, 5 g de H-Leu-Pro-NH-CH2-CH2-N(CH3)2 2HCl (12,1 mMoles); R4) = 0,05. 3ème étape: L-pyroglutamyl-L-leucyl-L-proline-(2-diméthyl- aminoéthyl)-amide 2,6 g (7 mMoles) de H-Leu-Pro-NH-CH2-CH2-N(CH3)2.2HCl sont dissous dans 30 ml de DMFA et la solution est addition- née de 1,96 ml (14 mMoles) de triéthylamine. Le précipité obtenu est séparé par filtration et le filtrat est ajouté goutte-à-goutte, sous refroidissement par de la glace et agitation, à une solution de 3,29 g (7, 7 mMoles) de Z-Gip-OPFP dans 10 ml de DMFA. Après la fin de l'addition on 2aisse reposer le mélange réactionnel pendant 4 heures, puis on l'évapore sous vide. L'huile obtenue en tant que résidu est dissoute dans 50 ml d'eau, la solution est aci- difiée à pH 3 à l'aide d'acide chlorhydrique concentré et elle est épuisée en la secouant trois fois avec 20 ml d'acé- tate d'éthyle. Le pH de la solution aqueuse est ensuite ajus- té à 10 par addition de carbonate de sodium solide et la so- lution alcalinisée est extraite à cinq reprises par 30 ml d'acétate d'éthyle. Les phases organiques sont réunies, sé- chées à l'aide de sulfate de sodium anhydre et évaporées. Le dipeptide protégé huileux obtenu de cette manière (3,05 g, 5,6 mMoles) est dissous dans 60 ml d'eau, la solu- tion est additionnée de 5,6 ml de solution N d'acide chlor- hydrique et de 0,6 g de catalyseur à base de charbon actif à 10 % de palladium et on fait circuler de l'hydrogène pen- dant 30 minutes à travers le mélange. Après la séparation du catalyseur par filtration, le filtrat est évaporé, l'huile obtenue en tant que résidu est dissoute dans un mélange de ml de chloroforme et 20 ml de solution N de carbonate acide de sodium. Les phases sont séparées, la phase dans le chloroforme est séchée à l'aide de sulfate de sodium anhydre et évaporée. Le résidu d'évaporation est trituré avec du n-hexane et séparé par filtration. Le produit brut amorphe obtenu de cette manière (2,0 g) est dissous dans l'eau, la solution est clarifiée à l'aide de charbon actif et la solution limpide est lyophilisée. On obtient 1,72 g de Glp-Leu-Pro-NH-CH -CH2-N(CH3)2 (60 % de la théorie); R -4) = 0,06; 14 D5 = -71,7 (c = 1, dans l'acide acétique). f D Analyse de l'amino-acide: Glu 1,02 (1,0), Leu 1,00 (1,0), Pro 1,03 (1,0). EXEMPLE 15: L-pyroglutamyl-L-histidyl-D-pipécolinamide lère étape: Benzyloxycarbonyl-D-pipécolinamide 13,15 g (50 mMoles) de Z-D-Pip-OH Zcf. L. Balaspiri et Coll. Monatsh. Chem. 101 1177 (1970)7 sont dissous dans ml d'acétate d'éthyle et additionnés de 7,0 ml (50 mMoles) de triéthylamine. Le mélange est refroidi à -20 C et on lui ajoute goutte-à- goutte sous agitation, 6,5 ml (50 mMoles) d'isobutylester de l'acide chlorocarbonique, à cette tempé- rature. Après 15 minutes encore d'agitation, on fait cir- culer du gaz ammoniac à -10 C pendant une heure et demie dans le mélange. Apres séparation du précipité par filtra- tion, le filtrat est épuisé en le secouant avec une solution N d'acide chlorhydrique, puis avec une solution N de car- bonate acide de sodium et finalement avec de l'eau, puis on le sèche à l'aide de sulfate de sodium anhydre et on l'éva- pore. Le résidu d'évaporation est cristallisé dans un mélan- ge d'acétate d'éthyle et d'éther; on obtient de cette ma- nière 11,5 g de Z-D-Pip-NH2 (88 % de la théorie); F. 114-115 C; R, 2)5 = + 32,0 (c = 1 dans l'acide acétique). Analyse pour C14H1803N2 (poids moléculaire 262,30): calculé: N 10,68 %; trouvé: N 10,63 %. 2ème étape: D-pipécolinamide 3,93 g (15 mMoles) de Z-DPip-NH2 sont dissous dans ml de méthanol, la solution est additionnée de 0,5 g de catalyseur à base de charbon actif à 10 % de palladium et on fait circuler de l'hydrogène pendant une heure à travers le mélange. Après la séparation du catalyseur par filtra- tion, le filtrat est évaporé et le résidu d'évaporation est trituré avec de l'éther. On obtient de cette manière 1,70 g de H-D-Pip-NH2 (90 % de la théorie); F. 161-163 C; R(4) = 0,10; i25 = +31,0 (c = 1 dans le méthanol). f; (ciD 3ème étape: Benzyloxycarbonyl-L-glutaminyl-L-histidine-hydrazide 71,0 g (0,165 mMole) de Z-Gln-His-OMe Zcf. H.Kappeler: Helv. Chim. Acta 44, 476 (1961)7sont dissous dans 700 ml de DMFA et la solution est additionnée de 33,6 ml (0,495 mMole) d'hydrate d'hydrazine. On laisse reposer le mélange réac- tionrel pendant 3 jours, puis on le dilue par 600 ml d'acé- tate d'éthyle et on le maintient pendant une nuit au réfri- gérateur. Le précipité est séparé par filtration le jour suivant. Le produit brut obtenu de cette manière (71,65 g) est cristallisé dans 1800 ml de méthanol. On obtient 55,1 g de Z-Gln-His-N2H3 (78 % de la théorie); F. 198-200 C; R(4) = 0,28. f Analyse pour C19H2505N7 (poids moléculaire 431,40): calculé: C 52,90 %, H 5,84 %, N 22,72 %; trouvé: C 52,21%, H 5,73 %, N 22,78 %. 4ème étape: Benzyloxycarbonyl-L-glutamyl-L-hidtidyl-D- pipécolinamide On met 5,39 g (12,5 mMoles) de Z-Gln-His-N2H3 en sus- pension dans 100 ml de DMFA et on ajoute à la suspension 4,6 ml (37,5 mMoles) de solution 8,1 N d'acide chlorhydrique dans du dioxane. La solution obtenue est refroidie à -20 C et est ensuite additionnée goutteà-goutte, sous agitation, à -15 C, de 1,63 g (13,7 mMoles) de nitrite de tert-butyle. Le mélange réactionnel est agité pendant 20 minutes à -10 C, puis on lui ajoute goutte-à-goutte 3,5 ml (25 mMoles) de triéthylamine, puis une solution de 1,57 g (12,5 mMoles) de H-D-Pip-NH2 et finalement encore 1,75 ml (12,5 mMoles) de triéthylamine. Après la fin de l'addition, le mélange réac- tionnel est agité pendant une heure à -10 C, puis on le laisse reposer pendant une nuit à 2 C au réfrigérateur. Le précipité est séparé par filtration le jour suivant et le filtrat est évaporé sous vide. Le résidu amorphe est tri- turé avec de l'acétate d'éthyle. Le produit brut obtenu de cette manière est placé sur une colonne de gel de silice et élué à l'aide du mélange de solvants (2). Les fractions contenant du produit pur sont réunies et évaporées et le résidu est trituré avec de l'éther et séparé par filtration. On obtient 2,76 g de Z-Gln-His-D-Pip-NH2 amorphe (42 % de la théorie); R4) = 0,10. f ème étape: L-pyroglutamyl-L-histidyl-D-pipécolinamide 2,63 g (5 mMoles) de Z-Gln-His-D-Pip-NH2 sont dis- sous dans 50 ml d'acide acétique, la solution est addition- née CB 0,5 g de catalyseur à base de charbon actif à 10 % de palladium et on fait circuler de l'hydrogène pendant une heure à travers la solution. Après la séparation du cataly- seur par filtration, le filtrat est chauffé à 60-70 C et est ensuite évaporé sous vide. Le résidu d'évaporation est dilué dans l'eau, la solution est traitée par de la résine Dowex-2 dans le cycle OH et est évaporée. Le produit brut obtenu de cette manière est placé sur une colonne de gel de silice et est élué à l'aide du mélange de solvants (1). Les fractions contenant du produit pur sont réunies et évaporées, le rési- du est dissous dans l'eau, la solution est clarifiée à l'ai- de de charbon actif et la solution limpide est évaporée. Le résidu amorphe est séché sous vide sur du pentoxyde de phosphore. On obtient 704 mg de Glp-His-D-Pip-NH2 (51 % de la théorie); R 4) = 0,10; L]25 = +16,0 (c = 1 dans l'eau). fD Analyse de l'amino-acide: Glu 1,03 (1,0, His 1,00 (1,0), Pip 0,96 (1,0). EXEMPLE 16: L-pyroglutamyl-L-histidyl-L-homoprolinamide lère étape: Tert.butyloxycarbonyl-L-homoprolinamide 2,29 g (10 mMoles) de BOC-HPro-OH sont dissous dans ml d'acétate d'éthyle, la solution est additionnée de 1,4 ml (10 mMoles) de triéthylamine et refroidie à -10 C. On lui ajoute goutte-à-goutte 1,3 ml (10 mMoles) d'isobutyl- ester de l'acide chlorocarbonique, à cette température. Apres minutes d'agitation, on fait circuler du gaz ammoniac pendant une demi-heure à 10 C dans le mélange réactionnel, puis on laisse reposer le mélange pendant 2 heures à une température de 0 C - 5 C. Le précipité est ensuite séparé par filtration et l'huile obtenue comme résidu est dissoute dans 30 ml de chloroforme. On épuise la solution en la secouant deux fois avec 10 ml de solution N d'acide chlor- hydrique, deux fois avec 10 ml de solution N de carbonate acide de sodium et finalement une fois avec de l'eau, puis on la sèche à l'aide de sulfate de sodium anhydre et on l'évapore. On cristallise l'huile obtenue comme résidu par traitement par le n-hexane. Le produit brut obtenu de cette _25 manière (1,96 g) est recristallisé dans un mélange d'acé- - tate d'éthyle et d'éther. On obtient 1,78 g de BOC-HPro-NH2 (78 % de la théorie); F. 138-140 C; Rf2) = 0,43; 25 = _24,85 (c = 1 dans l'acide acétique). Analyse pour CllH2003N2 (poids moléculaire 228,29): calchié: C 57,87 %, H 8,83 %, N 12,27 %; trouve: C 57,60 %, H 8,89 %, N 12,11%. 2ème étape: Chlorhydrate de L-homoprolinamide 1,6 g (7 mMoles) de BOCHPro-NH2 sont dissous à chaud dans 10 ml d'acétate d'éthyle. La solution est refroidie jusqu'à la température ambiante et additionnée de 10 ml de solution 6 N d'acide chlorhydrique dans l'acétate d'éthyle. On laisse reposer le mélange réactionnel pendant une heure, puis il est dilué par de l'éther, le précipité obtenu est trituré et séparé par filtration. On obtient de cette ma- nière 1,05 g de H-HPro-NH2.HCl (91 % de la théorie); F. 178-180 C; R (6) = 0,32; E325 = +26,2 ( c = 1, dans le méthanol). 3ème étape: Benzyloxycarbonyl-L-glutamyl-L-histidyl-L- homoprolinamide On met 5,39 g (12,5 mMoles) de Z-Gln-His-N2H3 (voir exemple 15 3ème étape) en suspension dans 100 ml de DMFA et on ajoute à la suspension 4,6 ml (37,5 mMoles) de solu- tion 8,1 N d'acide chlorhydrique dans du dioxane. La solu- tion obtenue est refroidie à -20 C et est ensuite addition- née goutte-à-goutte sous agitation à -15 C, de 1,63 ml (13,7 mMoles) de nitrite de tert.-butyle.Le mélange réac- tionnel est agité pendant 20 minutes à -10 C, puis il est additionné de 3,5 ml (25 mMoles) de triéthylamine. Entre- temps, on dissout 2,07 g (12,5 mMoles) de H-HPro-NH2.HCl dans 10 ml de DMFA et on ajoute à cette solution 1,75 ml (12,5 mMoles) de triéthylamine. Après la séparation du précipité par filtration, la solution obtenue est ajoutée goutte-à-goutte à -10 C, à la solution d'azide ci-dessus et on ajoute encore finalement 1,75 ml (12,5 mMoles) de triéthylamine au mélange. Le mélange réactionnel est en- suite agité pendant une heure à -10 C, puis on le laisse reposer pendant une nuit à 2 C. Le précipité est séparé par filtration le jour suivant, le filtrat est évaporé sous vide et le résidu amorphe est trituré avec de l'acé- tate d'éthyle. Le produit brut obtenu de cette manière est placé sur une colonne de gel de silice et est élué à l'aide du mélange de solvants (2). Les fractions contenant du pro- duit pur sont réunies et évaporées et le résidu d'évapora- tion est trituré avec de l'éther. On obtient 2,35 g de Z-Gln-His-HPro-NH2 (36 % de la théorie); Rf4) = 0,30. 4ème étape: L-pyroglutamyl-L-histidyl-L-homoprolinamide 2,1 g (4 mMoles) de Z-Gln-His-HPro-NH2 sont dissous dans 40 ml d'acide acétique, la solution est additionnée de 0,4 g de catalyseur à base de charbon actif à 10 % de palladium et on fait circuler de l'hydrogène pendant une heure à travers le mélange. Le catalyseur est ensuite séparé par filtration, on chauffe le filtrat à 600C-70 C, on le maintient à cette température pendant 30 minutes, puis on l'évapore sous vide. Le produit brut obtenu comme résidu est traité de la manière décrite dans l'Exemple 15, 5èmeétape, à l'aide d'une résine échangeuse d'ions et purifié sur une colonne de gel de silice. On obtient 618 g de Glp-His-HPro-NH (56 % de la théorie) ; R(4) = 0,08; 2 2 f ai]25 = -24o (c = 1, dans le méthanol). Analyse de l'amino-acide: Glu 0,97 (1,0), His 1,00 (1,0), HPro 0,91 (1,0). Ainsi que cela ressort de ce qui précède, l'inven- tion ne se limite nullement à ceux de ses modes de mise en oeuvre, de réalisation et d'application qui viennent d'être décrits de façon plus explicite; elle en embrasse, au contraire, toutes les variantes qui peuvent venir à l'esprit du technicien en la matière, sans s'écarter du cadre, ni r -a portée, de la présente invention. REVENDICATIONS 1 - Tripeptidamides caractérisés en ce qu'ils répon- dent à la formule générale I ci-après: Glp - X - Y - NH - A (I) dans laquelle: X représente un groupe L-norleucyle, L-leucyle, L-norvalyle, Dleucyle, L-prolyle, L-2-aminobutyryle, L-valyle, L-thréonyle, Lisoleucyle, L-2-aminodécanoyle, L-cyclohexylalanyle ou L-tert.-butylséryle et Y représente un groupe L-prolyle, ou X représente un groupe Lhistidyle et Y représente un groupe L-homoprolyle ou D-pipécolyle; en outre, A représente un atome d'hydrogène ou un groupe alcoyle com- portant de L à 10 atomes de carbone, ou un groupe alcoyle comportant de 1 à 3 atomes de carbone substitué par un résidu amino-diméthyle, mais lorsque X représente un groupe L-leucyle, A est différent d'un atome d'hydrogène, ainsi que les complexes de ces tripeptidamides utilisables en.thérapeutique. 2 - Tripeptidamide de formule générale I selon la Revendication 1, caractérisé en ce qu'il s'agit du L-pyroglutamyl-L-prolyl-L-prolinamide. 3*-Tripeptidamide de formule générale I selon la Revendication 1, caractérisé en ce qu'il s'agit du Lpyroglutamyl-L-norleucyl-L-prolinamide. 4 - Tripeptidamide de formule générale I Revendication 1, caractérisé en ce qu'il s'agit L-pyroglutamylL-norvalyl-L-prolinamide. 5 - Tripeptidamide de formule générale I Revendication 1, caractérisé en ce qu'il s'agit L-pyroglutamyl-L-leucyl-Lproline-éthylamide. 6 - Tripeptidamide de formule générale I Revendication 1, caractérisé en ce qu'il s'agit L-pyroglutamyl-L-histidyl-L-homoprolinamide. 7 - Tripeptidamide de formule générale I Revendication 1, caractérisé en ce qu'il s'agit selon la du selon la du selon du la selon la du Lpyroglutamyl=L-a-aminobutyryl-L-prolinamide. 8 - Tripeptidamide de formule générale I selon la Revendication 1, caractérisé en ce qu'il s'agit du L-pyroglutamyl-L-histidyl-D-pipécolinamide. 9 - Procédé de préparation de tripeptidamides de la formule générale I selon la Revendication 1, caractérisé en - ce qu'on édifie des tripeptidamides de formule générale I, dans lesquels X, Y et A ont les significations indiquées ci-dessus, à partir des amino-acides correspondants ou des dérivés d'amino-acides à l'aide de méthodes peptidochimi- ques connues en elles-mêmes et en ce qu'on transforme, le cas échéant, le produit obtenu en un complexe utilisable en thérapeutique. - Procédé selon la Revendication 9, caractérisé en ce qu'on N-acyle un amide d'amino-acide de formule générale Y-NH-A, dans laquelle Y et A ont les mêmes signi- fications que ci-dessus, à l'aide d'un résidu L-amino-acide X éventuellement protége, en mettant en oeuvre les méthodes peptidochimiques usuelles et en ce qu'on N-acyle le dipeptide obtenu à l'aide de l'acide L-pyroglutamique ou d'un dérivé protégé et/ou activé de celui-ci et en ce qu'on sépare éven- tuellement les groupes protecteurs présents. 11 - Procédé selon la Revendication 9 pour la prépara- tion de tripeptidamides de formule générale I contenant un groupe Lhistidyle à la place de X et dans lesquels Y et A ont les mêmes significations que ci-dessus, caractérisé en ce qu'on acyle un amide d'amino-acide de formule générale Y-NH-A, dans laquelle Y et A ont les mêmes significations que ci-dessus, à l'aide de l'azide protégé obtenu à partir de l'hydrazide de formule Z-Gln-His-NH-NH2, dans lequel Z représente un groupe benzyloxycarbonyle et en ce qu'on cyclise le groupe glutamyle dans le tripeptidamide obtenu après la séparation du groupe protecteur Z, en un groupe pyroglutamyle; par traitement thermique. 12 - Procédé selon la Revendication 10, caractérisé en ce qu'on N-acyle le dipeptidamide obtenu au cours de la première étape de la réaction à l'aide d'acide ú L-glutamique à la place de l'acide L-pyroglutamique et en ce qu'on cyclise le groupe glutamyle en groupe pyroglutamyle, dans le tripeptide obtenu.