Brevet FR2407932A1 — publié le 19790601

La présente invention est relative à un procédé pour l'obtention de dérivés aminés en position 3 de la rifamycine S. Les propriétés antibiotiques de la rifamycine S et de certains de ses dérivés tels que la rifamycine SV et la rifampicine sont bien connues. Parmi les dérivés de la rifamycine S, les dérivés aminés en position 3 présentent un intérêt particulier en raison de leur activité antibiotique élevée. Ces composés sont décrits dans le brevet allemand 1.670.377, la demande de brevet publiée en Allemagne Fédérale sous le numéro DOS 1.670.479 et dans la publication Chimica Acta, 56, 2368 (1973) et ils sont obenus par réaction entre la rifamycine S et une amine; selon ce procédé, les 3-amino-rifamycines sont obtenus avec un rendement très faible, inferieur à 1%. LaDeposante a déjà décrit dans le brevet US 4.007.169 un procédé selon lequel il est possible d'obtenir la 3-aminorifamycine S et la 3-azido-rifamycine S avec un rendement commercial élevé, toutefois un tel procédé présente l'inconvénient d'exiger l'emploi d'azoture de sodium comme réactif, composé qui, comme on le sait, est une substance très toxique et peut provoquer la formation de sels explosifs par réaction avec des métaux tels que le cuivre, le fer, le plomb et analogues. Par suite,cette méthode est très délicate et doit etre mise en oeuvre avec un appareillage spécial et coûteux. Lå présente invention vise un procédé que l'on peut aisément mettre en oeuvre à ltéchelle industrielle pour la production avec un rendement élevé de dérivés aminés en position 3 de la rifamycine S caractérisés par la formule dans laquelle Y représente -H ou -COCH3 et X représente un radical choisi dans le groupe constitué par les radicaux amino; alkylamino comptant de 1 à 4 atomes de carbone, allylamino;anilino;phénylamino comportant dans le cycle au moins un atome d'hydrogène substitué par un groupe constitué par un halogène, un méthyle , un méthoxyle et un hydroxyle ; cycloalkylamino contenant de 3 à 6 atomes de carbone;benzylamino;pipéridino; pirrolidino; morpholino; pipérazino;imidazolo;4-méthyl-thiazol-2 amino;dialkylamino contenant de 2 à 8 atomes de carbone; N',N'dialkylamino alkylamino contenant de 4 à 8 atomes de carbone; furfurylamino; tétrahydrofurfurylamino; alkoxyalkylamino contenant de 3 à 8 atomes de carbone; alkylamino à 5 atomes de carbone;hydro- xyalkylamino contenant de 2 à 6 atomes de carbone. Ces composés sont obtenus selon l'invention par un procédé consistant à dissoudre un composé de formule dans laquelle Y a la signification précédente, dans un solvant choisi entre le tétrahydrofurane; le 1,4-dioxane ; le benzène; le toluène; le xylène; le chloroforme ; le dichlorométhane, le 1,2-dichloroéthane, et à le faire réagir à une température de 0 à 100 C et pendant une durée de 5 minutes- à 10 heures, avec une amine choisie entre l'hexamêthylène tétramine et une amine de formule H-X dans laquelle X a la signification précédente. Le composé de formule (II) et sa préparation sont connus en eux mêmes, et sont décrits par exemple dans la demande de brevet d'Allemagne Fédérale publiée sous le numéro DOS 2.548. 128 au nom de la Déposante. Dans le but d'exposer plus complètement lescaractéristiques de la présente invention on va maintenant décrire'le procédé d'obtention de certains des composés qu'elle permet d'obtenir, à titre d'exemplesnon limitatifs. Les chromatographies en couches minces auxquelles on se réfère dans les exemples sous la référence Rf sont conduites sur des plaques de gel de silice en utilisant comme éluant un mélange benzène:acétate d'ethyle:methanol (20:8:7). Les spectres ultra-violets sont réalisés en solution dans méthanol : nm (log.E). EXEMPLE 1 On ajoute 12,5 ml de cyclopropylamine à une solution agitée de 100g de 3-bromo-rifamycine S dans 460 ml de tétrahydrofurane tout en refroidissant au bain d'eau de manière à maintenir la température à 400C; on agite le mélange réactionnel à température ambiante pendant une nuit. Après filtration des sels insolubles, la solution organique est c aicentrée jusqu'à environ 200ml puis diluée par 500 ml de chloroforme. La solution organique est lavée à l'acide citrique aqueux puis à liteau, séchée sur sulfate de sodium, évaporée à sec sous pression réduite et finalement recristallisée dans 200 ml d'éthanol. On obtient ainsi 58g de 3-cyclopropylamino-rifamycine S pur sous forme de cristaux rouges. Rf : 0,75 Spectre ultra-violet : 525 (3,17), 376 (3,82), 319 (4,16), 265 (4,47), 234 (4,44). EXEMPLE 2 On ajoute goutte à goutte 15 ml de propylamine à 200C à une solution agitée de 50g de 3-bromo-rifamycine Sdans 400 ml de tétrahydrofurane. On poursuit l'agitation pendant 30 mn à 200C puis on ajoute 50 ml d'une solution de 15g de chlorure de sodium et 15g d'acide citrique dans l'eau, àla solution réactionnelleque lton agite pendant 15 minutes.Après décantation, on décharge la couche inférieure et on sèche la solution organique sur du sulfate de magnésium et on l'évapore à sec sous pres fusion réduite puis on la recristallise dans le méthanol pour obtenir 34,5g de 3-propylamino-rifamycine S pur sous forme de cristaux violets. Rf:0,75 Spectre ultra-violet : 516(3,15) > 371 (3,81), 318 (4,10), 266 (4,41), 235 (4,45). EXEMPLE 3 A une solution agitée de 50g de 3-bromo-rifamycine S dans 400 ml de tétrahydrofurane réchauffé à 380C, on ajoute 25 ml de o-toluidine. On agite le mélange pendant 1 heure et onle dilue par 500 ml de chloroforme ; on lave plusieurs fois la solution avec une solution aqueuse d'acide citrique, on la sèche sur sul fate de sodium et on l'évapore à sec sous pression réduite pour obtenir un résidu bleu foncé que l'on dissout dans 250 ml d'éthanol.On ajoute à la solution 25g d'acide ascorbique et 25 ml d'eau et on la laisse repose jusqu'à demain à OOC ; la 3-o-toluidi no-rifamycine SVcristallise ainsi et on la filtre sur aspiration, on la lave avec du méthanol à 90% et on la dissout dans 500 ml de chloroforme ; on l'oxyde ensuitepar une solution -aqueuse de ferricyanure ; on sépare la couche organique, on la lave à liteau, on la sèche sur sulfate de sodium et on l'évapore sous pression réduite ce qui donne un résidu bleu foncé que l'on triture avec de l'éther isopropylique et que l'on filtre. On obtient ainsi 32g de 3-o-toluidino-rifamycine S sous forme de cristaux bleux. Rf : 0,79. Spectre ultra-violet :555(3,36), 375 (épaulement), 323 t4,20), 267(4,49), 212 (4,58). EXEMPLE 4 On met à réagir 50g de 3-bromo-rifamycine S dissout dans 400 ml de tétrahydrofurane avec20 ml d'aniline à 300C pendant une heure ; le produit est recueilli selon un processus décrit à l'exemple 3 et on obtient ainsi 37,6g de 3-anilino-rifamy cine pur sous forme de cristaux bleux. Rf : 0,78. Spectre ultra-violet : 560 (3,39), 380 (épaulement), 329 (4,22), 269 (4,48), 230 (épaulement). EXEMPLE 5 Si l'on répète la réaction décrite à l'exemple 3 mais en y remplaçant la o-toluidine par 25g de p-chloroaniline, on obtient 35g de 3-p-chloro-aniline-rifamycine S sous forme de cristaux bleux. Rf : 0,8. Spectre ultra-violet : 564 (3,39), 370 (3,85), 328 (4,17), 267 (4,24), 215 (4,47). EXEMPLE 6 On ajoute 20 ml de méthanol et 30g d'hexaméthylèneentetramine à une solution agitée de 50g de 3-bromo-rifamycine Sdans 250 ml de chloroforme, on soumet le mélange au reflux pendant 8 h, on le refroidit et on sépare par filtration les substances insolubles. On lave la solution chloformique à trois reprises par de l'eau, on la sèche sur sulfate de sodium et évapore le chloroforme sous pression réduite ce qui donne une poudre noire que l'on recristallise dans le 2-méthoxyéthanol de telle sorte que l'on obtient ainsi 38g de 3-amino-rifamycine S pur sous forme de cristaux noirs. Rf : 0,77 Spectre ultra-violet : 523 (2,96),)365 (3,86), 312 (4,09), 265 (4,48), 227 (4,483. Si l'on conduit la réaction dans le dichlorométhane au lieu du chloroforme, on obtient le même produit avec le même rendement. Si l'on conduit la réaction dans le tétrahydrofurane au lieu du chloroforme, on obtient également le mêmeproduit mais avec un rendement inférieur (23g). EXEMPLE 7 On met en suspension 5g de 3-bromo-rifamycine Sdans 30 ml de benzène et on agite tout en ajoutant goutte à goutte 5 ml de benzylamine à 200C. Après agitation pendant une heure, la réaction est achevée et le solide est complètement dissout; on lave plusieurs fois le mélange réactionnel avec une solution aqueuse d'acide citrique, on le sèche sur sulfate de sodium et on le concentre à environ 15 ml. On purifie le produit par chromatographie sur colonne, en éluant au moyen d'un mélange benzène-acétone (85:15)ce qui donne ainsi 2,5g de 3-benzylamino-rifamycine S pur. Rf : 0,81. Spectre ultra-violet :505 (épaulement), 367(3,82), 313(4,18),261 (épaulement), 236(4,51). EXEMPLE 8 A une suspension agitée de 5g de 3-bromo-rifamycine S dans 30 ml de benzène, on ajoute 5 ml de cyclohexylamine à température ambiante. Au bout d'une heure le solide est complètement dissout et on lave à plusieurs reprises le mélange réactionnel au moyen d'une solution aqueuse d'acide citrique, on sèche la solution organique sur sulfate de sodium et on évapore le solvant à sec, on triture avecde l'éther isopropylique ce qui donne 1,8g de 3cyclohexylamino-rifamycine S pur sous forme d'une poudre noire. Rf : 0,77. Spectre ultra-violet :526(3,30), 368 (3,85), 32f (4,24),267(4,47), 229(4,52). EXEMPLE 9 On- dissout 10g de 3-bromo-rifamycine S dans 50 ml de tétrahydrofurane et on ajoute 4 ml d'isopropylamine à température ambiante tout en agitant. On agite le mélange réactionnel pendant 3 heures puis on ajoute 10 ml d'eau saturée de chlorure de sodium ,on décante et on rejette la couche aqueuse, on lave la solution tétrahydrofuranipar 10 ml d'une solution aqueuse saturée de chlorure de sodium contenant 3g d'acide citrique; on sèche la solution tétrahydrofu ranique sur du sulfate de magnésium et on évapore le solvant sous pression réduite. Le résidu solide est dissout dans 30 ml de benzène et est purifié par chromatographie sur gel de silice(éluant: benzène : acétone : 85:15). On obtient ainsi 4,8g de 3-isopropylamino-rifamycine S pur sous forme de cristaux rouge foncé. Rf:0,77. Spectre ultra-violet: 526(3,20), 367(3,85), 315 (4,06), 267 (4,36), 228 (4,36). EXEMPLE 10 On dissout 50g de 3-bromo-rifamycine S dans 50 ml de tétrahydrofurane, on réchauffe à 300C et on y ajoute 25 ml de 3-chloroaniline. La température s'élève à 400C et on agite le mélange réactionnel pendant 2 heures à cette température puis on le refroidit à 200C et on le dilue par 500 ml de chloroforme. On lave la solution organique par 10 ml d'acide chlorhydrique diluée par 500 ml puis à trois reprises à liteau, on le sèche sur sulfate de sodium. et on évapore le solvant par pression réduite pour obtenir une poudre bleu foncé que l'on dissout dans 200 ml de méthanol; on ajoute ensuite 20g d'acide ascorbique.Il se cristallise ainsi soudainement un produit orange que l'on filtre sur aspiration que l'on lave par du méthanol à 90% et que l'on dissout dans 200 ml de chloroforme. On agite la solution et on ajoute 200 ml d'une solution aqueuse à 15 de ferricyanure, on agite pendant 1 heure, on décante et on rejette la couche aqueuse; on lave à l'eau la couche chloformique, on la sèche sur sulfate de sodium,on évapore à sec et on triture le résidu avec de l'éther isopropylique ce qui donne ainsi 32g de 3-m -chloro-anilino-rifamycine S pur. Rf. : 0,81. EXEMPLE 11 A une solution agitée de 10g de 3-bromo-rifamycine S dans 100 ml de tétrahydrofurane, on ajoute 8 ml de N-méthyl-pipérazine. Après 20 minutes, on filtre le mélange réactionnel et on dilue la solution ainsi obtenue par 150 ml de chloroforme, on la lave avec de l'acide citrique aqueux puis à l'eau. On la sèche, on l'évapore à sec sous pression réduite et on la triture avec de l'éther de pétrole, on la filtre ensuite sur aspiration et on obtient ainsi 9,9g de 3-(4'-méthyl-pipérazino -)-rifamycine S pur. Rf. : 0,54. Spectre ultra-violet : 528(3,32), 365 (épaulement), 316 (4,17), 270(4,48), 220(4,54). EXEMPLE 12 On dissout 5g de 3-bromo-rifamycine S dans 40 ml de tétrahydrofurane et on les fait.réagir avec 2,5g de p-aminophénol à 400C. On soumet le mélange réctionnel au reflux pendant une heure et on le refroidit à 200C, on le filtre et on dilue la solution tétrahydrofuranique foncée au moyen de 50 ml de chloroforme, on la lave avec 50 ml d'eau contenant 2 ml d'acide c-hlorhydrique concentré puis à plusieurs reprises avec de l'eau, on la sèche sur sulfate de sodium:et on évapore à sec sous pression réduite ; on dissout le solide ainsi obtenu dans 20 ml de benzène et on le purifie par chromatographie sur gel de silice (benzène : acétone à 80:20). On obtient 2,5g de 3-(4'-hydroxy)-aniline rifamycine S pur. Rf. : 0,70. EXEMPLE 13 On ajoute 25g de 3-amino-phénol à une solution agitée de 50g de 3-bromo-rifamycine S dans 400 ml de tétrahydrofurane à 600C. Au bout de 15 mn, la réaction est achevée (ce que l'on contrôle par TLC), on refroidit à température ambiaate et on isole le produit comme décrit à l'exemple 3, ainsi on obtient 30,5 g de 3-m-hydroxy-anilino-rifamycine S pur. Rf. : 0,70. Spectre ultra-violet : 578 (3,48), 380 (épaulement), 329(4,19). 267(4,48), 210 (4,60). EXEMPLE 14 On dissout 5g de 3-bromo-rifamycine S dans 40 ml de tétrahydrofurane et on les chauffe à 400C, puis on y ajoute 2,5g de 4méthyl-2-amino-thiazole. On soumet le mélange réactionnel au reflux pendant 6heures et on le refroidit à 200C puis on le filtre. On dilue alors la solution tétrahydrofuranique par 50 ml de chloroforme et on la lave une fois au moyen de 50 ml d'une solution aqueuse à 1% d'acide chlorhydrique puis plusieurs fois à liteau, on la sèche sur sulfate de sodium, on évapore le solvant à sec sous pression réduite et on dissout le résidu solide dans 15 ml de benzène et on le purifie par chromatographie sur gel de silice(benzène : acétate à 80:20), ce qui donne ainsi 0,2g de 3-(4' -méthyl-2'-amino-thiazole-2' -yl)-rifamycine S sous forme de cristaux noirs. Rf. : 0,75. EXEMPLE 15 Quand, dans la réaction décrite à l'exemple 3, on remplace la o-toluidine par de la m-toluidine, on obtient 15,6g de 3-m-toluidino-rifamycine S sous forme de cristaux bleux. Rf. : 0,82. EXEMPLE 16 On soumet au reflux 10g de 3-bromo-rifamycine S dans 50 ml de chloroforme pendant 5 heures en présence de îg dtimidazole; après refroidissement et filtration, on lave la solution réactionnelle à l'eau, on la sèche sur sulfate de sodium,on l'évapore à sec sous pression réduite et l'on purifie le résidu par chromatographie sur gel de silice(benzène : acétone 80:20), ce qui donne ainsi 1,2g de 3-imidazolo-rifamycine S pur sous forme de cristaux bruns. Rf. : 0,50. EXEMPLE 17 On fait réagir10 g de 3-bromo-rifamycine S dans 50 ml de tétrahydrofurane à 40"C avec 5 mg de morpholine pendant 15 minutes. On refroidit ensuite le mélange réactionnel et on le filtre. On dilue la solution tétrahydrofuranique par 200 ml de chloroforme, on la lave à l'acide citrique aqueux puis à l'eau, on la sèche sur sulfate de sodium et on l'évapore à sec sous pression réduite ; on triture le résidu avec de l'éther isopropylique et on le filtre ce qui donne ainsi 9,5g de 3-morpholino-rifamycine S pur sous forme de cristaux bleu foncé Rf. : 0,77 Spectre ultra-violet : 516(3,30), 372 (épaulement), 319 (4,17), 269(4,45), 208 (4,54). EXEMPLE 18 Quand, dans la réaction décrite à l'exemple 17, on remplace la morpholine par de la pyrrolidine, on obtient 8g de 3-pyrrolidinorifamycine S. Rf. : 0,77 P.F.:192 -1950C Spectre ultra-violet : 525(332), 367(épaulemen), 323(4,19),268 (4,46), 215(4,47). EXEMPLE 19 On dissout 5g de 3-bromo-rifamycine S dans 30 ml de tétrahydrofurane et on y ajoute 2,5 ml de 4-amino-butyraldéhyde diéthylacétal. Au bout d'une heure, on dilue le mélange réactionnel par 50 ml de chloroforme, on le lave avec de l'acide citrique aqueux et ensuite avec de l'eau. La solution organique ainsi obtenue est séchée sur sulfate de sodium et est évaporée à sec, le résidu est dissout dans 15 ml de benzène et, après chromatographie sur gel de silice, on recueille 1,8g de 3-(4Ldiéthoxr-butylamino)- rifamycine S sous forme de cristaux violet foncé. Rf. : 0,75. Spectre ultra-violet : 528(3,23), 365(3,89),313 (4,19), 266(4,52) 229(4,53). EXEMPLE 20 A une solution agitée de 10g de 3-bromo-rifamycine S dans 50 ml de tétrahydrofurane, on ajoute 5 ml de furfurylamine. On agite le mélange réactionnel pendant une heure puis on ajoute 3g de dioxyde de manganèse et on agite pendant encore 60 minutes. On filtre le mélange réactionel et on verse goutte à goutte le filtrat dans 200 ml agités d'acide citrique aqueux à 5% ; on ajoute ensuite 200 ml de chloroforme ; on décante la solution chloroformique, on la sépare, on la lave à lieu, on la sèche sur sulfate de sodium et enfin on l'évapore à sec sous pression ré duite. On triture le résidu foncé avec de l'éther isopropylique et on le filtre ce qui donne 8,4g de 3-furfurylamino- rifamycine S. Rf. : 0,77. EXEMPLE 21 On fait réagir pendant 15 minutes une solution de 5g de 3-bromo rifamycine S dans 25 ml de tétrahydrofurane avec 2,5 ml de tétra hydrofurfurylamine à 250C. Après dilution avec du chloroforme, on lave la solution organique avec de l'acide citrique aqueux puis avec de l'aau, on la sèche sur sulfate de sodium et l'évapore à sec sous pression réduite. On soumet le résidu à une chromatogra phie sur une colonne de silice (benzène : acétone : 85:15) ce qui donne 2,2g de 3-tétrahydrofurfurylamino-rifamycine S pur. Rf. : 0,73. Spectre ultra-violet : 518(3 > 17) > 365(3,83), 316(4,17), 264(4,43), 226(4,49). EXEMPLE 22 A une solution agitée de 5g de 3-bromo-rifamycine S dans 30 ml de tétrahydrofurane, on ajoute à température ambiante 2,5g de 1-butyn-3-méthyl-3-amine. On soumet le mélange réactionnel au reflux'pendant 2 heures, on le refroidit à 20 C, et on le dilue avec 100 ml de chloroforme ; on lave la solution organique avec de l'acide citrique aqueux puis avec de l'eau, on la sèche sur sulfate de sodium et on l'évapore à sec sous pression réduite. Le produit brut ainsi obtenu (4,8g) est purifié par chromato graphie sur une colonne de gel de silice (benzène : acétone 85:15), pour obtenir ainsi 2,9g de 3-(1'-diméthyl-2'-butyn-amino)- rifamycine S sous forme de cristaux violets. Rf. : 0,78. Spectre ultra-violet : 522(3,37), 370(3,75), 321 (4,08),265 (4,37), 212 (4,47). EXEMPLE 23 Quand dans la réaction décrite à ltexemple 22 on remplace la 1butyn-3-méthyl-3-amine par de la N,N-diéthyl-éthylènediamine, on obtient 0,2g de 3-(2'-diéthylamino-éthylamino)-rifamycine S pur. Rf. : 0,60. EXEMPLE 24 dans Quand/la réaction décrite à l'exemple 23 on remplace la N,N-diéthyl- éthylènediamine par de ltéthanolanine,on obtient 0,1g de 3-(2'hydroxyéthylamino)-rifamycine S sous forme d'une poudre orange foncé. Rf. : 0,63. EXEMPLE 25 A une solution agitée de 50g de 3-bromo-rifamycine S dans 500ml de tétrahydrofurane, on ajoute à température ambiante 25 ml de diméthylamine. On agite le mélange pendant 1 heure et on le filtre ; on lave la solution organique par une solution aqueuse saturée de chlorure de sodium,on la sèche sur sulfate de magnésium et on l'évapore à sec. On purifie 5g du produit brut par chromatographie sur une colonne de gel de silice, commedécrit précédemment, pour obtenir 3,7g de 3-diméthylamino-rifamycine S pur sous forme d'une poudre verdâtre. Rf. : 0,75. Spectre ultra-violet : 546 (3,25), 370(épaulement), 323(4,12), 271(4a38), 231(4,36), 215 (4,33). EXEMPLE 26 A une solution agitée de 50g de 3-bromo-rifamycine S dans 380ml de tétrahydrofurane, on ajoute 10 ml de triéthylamine à 150C puis on ajoute goutte à goutte une solution de 5,5 ml d'allylamine dans 20 ml de tétrahydrofurane à 150C. On agite le mélange réactionnel à 150C pendant 25 minutes puis on le filtre. On lave le filtrat par une solution de 15g de chlorure de sodium et 10g d'acide citrique dans 50 ml d'eau puis au moyen d'une solution aqueuse saturée de chlorure de sodium, puis on la sèche sur du sulfate de magnésium et enfin on l'évapore à sec sous pression réduite ce qui donne 43,9g de 3-allyl-amino-rifamycine S brut. On purifie 5g de ceproduit par chromatographie sur colonne de gel de silice (benzène : acétone 85:15), pour obtenir 3,2g de 3-allylamino-rifamycine S pur sous forme d'une poudre violette (rendement 56% en poids). Rf. : 0,75. Spectre ultra-violet : 520(épaulement), 365(3,81), 315(4,13), 265(4,41), 229t4,47)- REVEND I CATI ON Procédé pour la préparation de dérivés aminés en position 3 de la rifamycine S possèdant la formule dans laquelle Y représente -H ou -COCH3 et X représente un radical choisi dans le groupe constitué par les radicaux amino;alkylamino comptant de 1 à 4 atomes de carbone, allylamino; anilino;phénylamino comportant dans le cycle au moins un atome d'hydrogène substitué par un groupe constitué par un halogène, un méthyle, un méthoxyle et un hydroxyle;cycloalkylamino contenant de 3 à 6 atomes de carbone; benzylamino;pipéridino;pirrolidino; morpholino; pipérazino; imidazolo; 4-méthyl-thiazol-2amino; dialkylamino contenant de 2 à 8 atomes de carbone; N,N'dialkylamino alkylamino contenant de 4 à 8 atomes de carbone;fur furylamino ;tétrahydrofurfurylamino; alkoxyalkylamino contenant de 3 à 8 atomes de carbone; alkylamino à 5 atomes de carbone; hydro xyalky.lamino contenant de 2 à 6 atomes de carbone, caractérisé en ce que dans un premier temps, on dissout un composé de formule dans laquelle Y a la signification précédente dans un solvant choisi entre le tétrahydrofurane; le 1,4-dioxane; le benzène; le toluène; le xylène;le chloroforme;le dichlorométhane; le 1,2 dichloroéthane,puis on le fait réagir à une température de 0 à 1000C et pendant une durée de 5 minutes à 10 heures, avec une amine choisie entre l'hexaméthylène tétramine et une amine de formule : H-X