Brevet FR2399843A1 — publié le 19790309

Il est connu qu'immédiatement après la parturition, les mammifères emettent des substances anti-oestrogdniques qui se retrouvent en particulier dans leurs humeurs, sang, lymphe et colostrum. Les propriétés anti Jstrogdniques se manigestent en particulier par leurs effets d'inhibition sur les oestrogènes naturels ou synthdtiqueatadministrés à la souricette impubère. Des études sont actuellement en cours pour déterminer la nature et la structure du principe anti-oestrogénique responsable de cet effet, et il sera appelé dans ce qui suit "le principe". I1 est utilisable en thérapeutique humaine et vétérinaire dans tous les cas où l'on désire combattre les effets néfastes d'oestrogènes sécrétés par l'organisme ou administrés. La présente invention concerne l'extraction du principe des humeurs, sang, lymphe et colostrum et éventuellement urines des femelles de mammifères, è l'exclusion de son utilisation comme médicament. Dans le brevet d'invention français numéro 1.569.698, Monsieur M. XARTINM indique un procédé d'extraction dit industriel d'une fraction insaponifiable de la partie lipidique du colostrum dont il indique une possible utilisation en hormonothérapie et dont il dose l'activité selon la réaction de Zimmerman qui est une méthode de dosage non spécifique des 17-céto-etéroPdes. La né- thode proposée conduit cependant à des rendements faibles et aléatoires en 17-cdto-stéroides, ou composés identifiables selon la réaction de Zimmerman et dont les propriétés anti-oestrogé- niques sont peu accusées, ce qui donne à penser que les propriétés utilisables en hormonothérapie du produit de Monsieur MARTINET ne sont pas loves propriétés anti-oestrogéniques du principe de la présente invention. Selon l'invention, on commence par éliminer l'eau de l'humeur, sang, lymphe, colostrum ou urine de femelle de mammifère utilisé comme matière première, et ceci sans dépasser 302C et de préé- rence par lyophilisation. On a en effet constaté que le principe se dégradait b la chaleur en milieu neutre ou acide. Le résidu de dessication est alors extrait dans un solvant organique, de préférence alcoolique et on procède à la sapontfi- cation de cet extrait en milieu alcalin fort, milieu dans lequel le principe est relativement stable. Si lthydrolyse est courte et douce, par exemple une heure a 70nu, le rendement en principe est élevé, de l'ordre de 70%, mais il est souillé de lipides. Au contraire si l'hydrolyse est dure, par exemple six heures è 90oC, le rendement en principe steffondre i environ 25%, mais les lipides sont complétement hydrolysés. Ainsi, suivant l'invention, suivant le degré de pureté du principe désirée, on procède a une hydrolyse plus ou moins longue et plus ou moins dure. De toutes façons l'hydrolyse ne sépare pas le principe d'importantes quantités de cholestérol estérifié ou non, et il peut être intéressant, afin d'améliorer le rendement en principe d'éviter complètement cette hydrolyse. Si l'on procède a l'hydrolyse, le mélange peut être évaporé ou non avant d'étire étendu i l'eau de façon à dissoudre les savons hydrosolubles formés et de préfdrence, après avoir ajouté un additif anti-mousse, on extrait l'insaponifié avec un solvant organique, de préférence non ou peu inflammable tel que le chlorure de méthylène. Après lavage jusqu'à pII neutre, on séche et évapore le solvant sans dépasser 30pu. Si l'on ne procède pas è l'hydrolyse, on se contente d'évaporer le solvant d'extraction du résidu de dessication. Que l'on ait procédé ou non à l'hydrolyse, on peut se contenter de stabiliser le résidu d'évaporafion, On peut également poursuivre la purification du principe par extraction sélective ou chromatographie préparative. Suivant l'invention, les alcools moyens tels que le butanol normal sont d'excellents solvants sélectifs du principe, ce qui permet de le concentrer b partir du résidu d'évaporation, et d'éliminer en conséquence d'importantes quantités de lipides non estéifiés et de cholestérol, estérifié ou non. A titre d'exemple non limitatif, on lira ci-dessous une façon d'extraire le principe du colostrum de vache qui est l'une des humeurs de femelles de mammifères les plus accessibles industriellement. On lyophilise 1,25 litre de colostrum de vache récolté dans les 48 heures suivant la parturition. Il reste un résidu de 180 g environ. Ce résidu est extrait en-continu avec 400 ml d'éthanol, sous pression réduite et en refroidissant le serpentin de condensation avec une saumure de façon à ne pas dépasser la température de 30 C.. A la fin de l'extraction, la circulation de saumure du serpentin de refroidissemnt est coupée et on distille L'méthanol sous vide. Il reste un résidu cireux d'environ 12 g contenant le principe souillé de lipides etde cholestérol principalement estérifié. On procède alors à une nouvelle extraction à 50-35C avec 40 ml de butanol normal. Après évaporation du butanol normal à la mdme température, il reste une huile visqueuse jaune d'en- viron 1,2 g qui est l'extrait du principe recherché. Le principe est identifié par son effet anti-oestrogénique sur la souris impubère. I1 faut environ 3 mg de l'extrait de principe décrit dans l'exemple ci-dessus pour contrebalancer l'effet de 1 mg d'oestradiol. REVENDICATIONS l).Nouveaux procédés de concentration du principe anti-oestrogénique des humeurs, sang, lymphe, colostrum et urines de femelles de mammifères récoltés dans les jours qui suivent la parturition caractérisés en ce que l'on extrait le principe anti-oetrogénique dans un solvant organique à une température de préférence douce, inférieure i 40nu, tant que l'on se trouve en milieu neutre ou acide. 2). Nouveaux procédés suivant la revendication caractérisés en ce que l'on commence par déhydrater la matière première t une température inférieure à 40ex, de préférence par lyophilisation. 3). Nouveaux procédés suivant l'une quelconque des revendications 1 ou 2 caractérisés en ce que l'on procède à l'hydrolyse partielle ou totale des lipides présents dans la phase organique d'extraction en milieu alcalin fort. 4). Nouveaux procédés suivant l'une quelconque des revendications 1 ou 2 caractérisés en ce que l'on n'hydrolyse pas les lipides présents dans la phase organique d'extraction. 5). Nouveaur procédés suivant l'une quelconque des revendi cations 1, 2, 3, 4uo* caractérisés en ce que l'on pousuit la purification du principe anti-oestrogénique par chromatographie. 6). Nouveaux procédés suivant l'une quelconque des revendications 1, 2, 3, 4 ou 5 caractérisés en ce que l'on poursuit la purification du principe anti-oestrogénique par extraction sélective. 7). Les nouveaux extraits anti-oestrogéniques caractérisés en ce qu'ils sont préparés suivant l'une quelconque des procédés de l'une quelconque des revendications 1, 2, 3, 4, 5 ou 6.