Brevet FR2408579A1 — publié le 19790608

La présente invention concerne un procédé de préparation de l'antibiotique négamycine. La négamycine est un antibiotique de toxicité peu élevee qui possède une activité efficace in vivo aussi bien qu'in vitro contre des bacteries à Gram positif et particulièrement à Gram négatif, y compris les souches Pseudomonas. Elle a été isolée pour la premiere fois des filtrats de culture de trois souches de Streptomyces (S. KONDO, H. YAMAMOTO, K. MAEDA et H. UMEZAWA, J. Antibiotics, 1971, 24, 732). Plus tard, la structure et la stéréochimie de la negamycine ont été déterminées (S. KONDO, S. SHIBAHARA, S. TAKAHASHI, K. MAEDA, H. UMEZAWA et M. OHNO, J. Amer. Chem. Soc., 1971, 93, 6305) et confirmées par synthèse chimique (S. SHIBAHARA, S. KONDO, K. MAEDA, H. UMEZAWA et M. OHNO, J. Amer. Chem. Soc., 1972, 94, 4354); La négamycine possède la formule I : La négamycine naturelle est dextrogyre et les deux centres asymétriques, numérotés 3 et 5 dans la formule I, possèdent la configuration absolue (R).La nomenclature systématique qui désigne la negamycine naturelle dextrogyre est donc : acide g(3 R, 5 R)-diamino-3,6 hydroxy-5 hexanoyl)-2, méthyl-1 hydrazinoj acetique. La synthèse déja publiée de la négamycine utilise comme produit de départ l'acide D-glucuronique qui contient un nombre de centres asymetriques dont deux doivent être épimérisés afin d'obtenir la stéréochimie imposée, et le procédé entier se deroule en un minimum de dix-sept étapes différentes. Or, nous avons découvert, et c'est notre invention, qu'un des centres asymétriques de la négamycine peut être créé pendant la synthèse et, en outre, que le nombre d'étapes nécessaire peut être considérablement réduit ; on arrive ainsi à une méthode qui permet d'obtenir la negamycine dans des quantites de l'ordre de plusieurs-grammes par voie synthétique. Selon la présente invention, il en découle un procedé pour la preparation d'un composé qui répond à la formule I ci-dessus, soit sous forme de mélange racémique, soit sous forme optiquement active et dont la configuration absolue est (3 R, 5 R), procédé caractérisé par a) la réduction sélective du groupe cétonique dans un compose de'la formule II qui est racémique ou qui possede la configuration absolue (3 R) et dans lequel le reste A est un groupe protecteur d'amine labile par hydrogénolyse, et le reste R' est un groupement alkyl contenant de 1 à 6 atomes de carbone ou un groupement aryl-alkyl contenant jusqu'à 10 atomes de carbone ;; b) la séparation de l'isomère de la configuration relative voulue (3 R, 5 R/3 S, 5 S) ou de la configuration absolue voulue (3 R, 5 R) de l'isomère inutile qui possède la configuration relative (3 R, 5 S/3 S, 5 R) ou la configuration absolue (3 R, 5 S) ; c) la protection du reste hydroxyle créé dans l'étape (a) avec un groupe protecteur rendu labile par les acides. d) l'hydrolyse de la fonction ester de la formule COOR' e) la copulation de l'acide qui résulte de l'hydrolyse avec une molécule de formule III dans laquelle le reste B est un groupe protecteur d'acide carboxylique qui peut etre enleve par hydrogénolyse f) le clivage du groupe protecteur sur le groupement hydroxyle avec un acide ; g) la reduction catalytique de la molécule de formule IV qui en résulte. Il est entendu que, dans les formules I, II et IV, la stéréochimie indiquée peut être la stéréochimie relative ou la stéréochimie absolue, selon que le procedé mène à la préparation du produit racémique ou à la preparation du produit optiquement actif. Donc, la réduction catalytique d'une substance de formule IV (qui est un melange racémique constitué de quantités équimolaires de la substance ayant la stéréochimie absolue désignée par la formule IV et de son image spéculaire) donne le produit racémique ayant la configuration relative désignée par la formule I.Parallèlement, la réduction d'une substance de formule IV, dans laquelle la configuration absolue représentée rend compte de l'activité optique, donne le produit optiquement actif avec la configuration absolue représentée par la formule I. Dans le stade (a), le reste A peut représenter, par exemple, le radical benzyloxycarbonyle. Le reste R' peut être, par exemple, méthyle, éthyle, phényle ou, de préférence benzyle. La réduction peut être effectuée avec n'importe quel réactif qui réduit une cetone en présence d'un ester, par exemple le diborane. La réduction avec le diborane est effectuée de préférence dans le tétrahydrofuranne. Dans le stade (b), la separation de l'isomère possédant la stéréochimie imposée est effectuée facilement par chromatographie, par exemple sur gel de silice désactive en colonne sèche avec un mélange d'éther éthylique et de chlorure de méthylène (15 : 85 v/v) comme gluant. Dans le stade (c), le groupe protecteur sensible aux acides peut être l'un quelconque des groupes protecteurs décrits dans un traité de chimie organique comme l'ouvrage de McOmie, intitulé "Protective Groups in Organic Chemistry", Plenum, Press London, 1973. Le groupement protecteur tètrahydropyranyle est utilise préférentiellement. Dans le stade (d), l'hydrolyse peut être effectuée avec une base comme, par exemple, la soude aqueuse ou la soude hydrométhanolique ou hydroéthanolique. Dans le stade (e), le couplage peut être effectue par une methode quelconque de couplage peptidique, par exemple à l'aide d'un réactif tel que le dicyclohexylcarbodiimide, ou à l'aide d'une reaction de couplage par anhydride mixte. Une méthode de choix emploie l'anhydride mixte forme à l'aide d'un chloroformiate d'éthyle dans le tétrahydrofuranne, Le reste B est de préférence le radical benzyle. Dans le stade (f), l'acide est, de préférence, un acide minéral en solution diluée ou un acide organique faible, tel que l'acide acétique. Dans le stade (g), la réduction est, de préférence, effectuée à l'aide d'un catalyseur tel que le palladium sur charbon. La réduction est de préférence conduite à pression atmosphérique et dans un solvant tel que le méthanol dilué avec de l'acide acétique aqueux. Les produits intermédiaires de formules Il et IV représentées ci-dessus sont de grande importance dans la production de la negamycine racemique ou optiquement active, et constituent donc un trait supplementaire de l'invention. L'invention est illustrée par les exemples, non limitatifs, suivants. Dans les exemples, le symbole Rf fait allusion à la chromatographie en couche mince sur des plaques de gel de silice. Les systèmes d'éluants utilisés sont les suivants : chloroforme/acétate d'ethyle 4 : 1 v/v (Rf A), cyclohexane/acetate d'ethyle 1: 1 v/v (Rf B), acide acétique/méthanol/chloroforme 1:45:5 v/v (Rf C), chlorure de methylène/éther ethylique 13:3 v/v (Rf D), chloroforme/methanol 9 : 1 v/v (Rf E). Exemple 1 : Schéma (#)-Négamycine racémique : tous les composés sont racémiques ; seul l'un des antipodes est mentionne dans les formules ci-dessous. Exemple 1 Préparation de 1'azido-6 benzyloxycarbonylamino-3 oxo-5 hexanoate de benzyle (compose 2) On additionne par petites fractions de l'azoture de sodium solide (4,3 g ; 0,066 mole), en 15 minutes, à une solution refroidie (0-5"C) et sous agitation, de benzyloxycarbonylamino-3 chloro-6 oxo-5 hexanoate de benzyle 12,87 g ; 0,031 mole) dans la diméthylformamide (60 ml ). L'agitation est maintenue pendant deux heures, avec un bain de glace et 12 heures supplémentaires à température ambiante. On dilue le mélange obtenu avec de l'acétate d'éthyle (400 ml ) et on lave bien avec de l'eau pour éliminer la dimethylformamide. On sèche sur sulfate de magnesium et on évapore la phase organique, ce qui donne un composé huileux qui cristallise lentement. On obtient une substance de point de fusion 68-70 (12,4 g, 95 X). Préparation du (3 R, 5 R/3 S, 5 S)-azido-6 benzyloxycarbonylamino-3 hydroxy-5 hexanoate de benzyle (composé 3) On ajoute une solution 0,9 M de diborane dans le tetrahydrofuranne (50 ml ; 0,045 mole) à une solution d'azido-6 benzyloxycarbonylamino-3 oxo-5 hexanoate de benzyle (12,4 g ; 0,03 mole) dans le tétrahydrofuranne anhydre (150 ml sous atmosphère d'azote, en I heure. L'agitation est maintenue une heure supplé- mentaire ; on additionne de l'eau et quelques gouttes d'HCl 2 N pour détruire l'excès de diborane. On extrait plusieurs fois la solution avec de l'éther éthylique. Les divers extraits sont mélangés, lavés avec de l'eau, séchés sur sulfate de magnésium et évaporés. On obtient un mélange de deux diastéréoisomeres possibles du produit. Ces composés ont des valeurs de Rf A de 0,31 et 0,47. C'est le moins polaire des deux qui a la configuration (3 R, 5 R/3 S, 5 S) et qui conduit au composé final décrit dans cette synthèse. Les deux diastéréoisoméres sont facilement sépares par chromatographie sur colonne sèche avec du gel de silice désactivé (15 parties d'eau)en éluant avec un mélange ether/chlorure de méthylène 15 : 85 v/v. Une moyenne de 70 g de gel de silice par gramme de composé conduit a une complète séparation.Le compose désiré (3,6 g), l'isomère le moins polaire est obtenu sous forme d'huile (avec un rendement de 58 X) qui cristallise dans le mélange éther éthylique/éther de pétrole et a un point de fusion de 52-55"C Il donne une 6-lactone ayant un point de fusion de 53-55"C par cristallisation dans le mélange éther éthylique/éther isopropylique. L'autre isomère qui a la configuration (3 R, 5 S/3 S, 5 R) est écarté. Preparation de l'acide (3 R, 5 R/3 S, 5 S)-azido-6 benzyloxycarbonylamino-3 tetrahydropyrannyl-5 hexanoïque (composé 4) On additionne, sous atmosphère d'azote secet en présence de quelques grammes de tamis moléculaire de 4 , àune solution (3 R, 5 R/3 S, 5 S)-d'azido-6 benzyloxycarbonylamino-3 hydroxy-5 hexanoate de benzyle (2,4 g ; 5,8 x 10 3mole) et de dihydropyranne (1,3 ml ; 14,5 x 10-3 mole) dans le chlorure de méthylène (24 ml-), de l'acide paratoluène sulfonique (1 ml en solution à 1 X (p/v) dans le tétrahydrofuranne). Après maintien à temperature ambiante pendant 15 heures, la solution est traitee avec de la triéthylamine (3 gouttes), puis filtrée. Le filtrat concentré sous vide donne une huile jaune (2,7 g) qui est utilisée sans purification pour la préparation suivante. Une chromatographie indique la presence d'un composé majoritaire, sous forme d'une tache intense (en révélant avec de la vanilline ou de l'acide phosphomolybdique) ayant un Rf B de 0,6. Préparation de l'acide (3 R, 5 R/3 S, 5 S)-azido-6 benzyloxycarbonylamino-3 tétrahydropyrannyl-5 hexanoique (composé 5) On additionne, sous agitation, à l'acide (3 R, 5 R/3 S, 5 S)-azido-6 benzyloxycarbonylamino-3 tétrahydropyrannyl-5 hexanoïque (2,7 g ; 5,5 10-3 mole) en solution dans le methanol (40 ml ) une solution aqueuse 1 N de soude (8,3 ml ; 8,3 x 10-3mole). La saponification est contrôlée par chromatographie sur couche mince, système B, avec de l'acide phosphomolybdique comme révélateur et, quand elle est complet, le methanol est évaporé sous vide à 35 C. On dilue le résidu avec de l'eau et on le lave avec de l'éther éthylique. La solution aqueuse est alors neutralisée soigneusement par addition d'acide acétique 1 N, en présence d'acetate d'éthyle.On sèche la phase organique (MgSO4) et l'évaporation sous vide conduit à un produit huileux (1,9 g) qui se solidifie lentement ; le point de fusion est de 59-60 C après recristallisation dans l'éther isopropylique. Preparation du (3 R, 5 R/3 S, 5 S)-((azido-6 benzyloxycarbonylamino-3 tétrahydropyrannyl-5 hexanoyl)-2,méthyl-1 hydrazino] acétate de benzyle (composé 6) On dissout sous atmosphère d'azote dans le tétrahydrofuranne anhydre l'acide (3 R, 5 R/3 S, 5 S)-azido-6 benzyloxycarbonylamino-3 tétrahydropyrannyl-5 hexanolque (0,96 g ; 2,4 x 10-3mole). On refroidit à -20 C (bain de carboglace/ tétrachlorure de carbone) et on agite magnétiquement. On ajoute de la N-méthylmorpholine sèche (0,26 g ; 2,4 x 10 3mole), puis du chloroformiate d'éthyle (0,26 g ; 2,4 x 10 3mole). Apres une agitation d'environ 5 minutes, on additionne une solution de p-toluène sulfonate d'a-méthyl hydrazino acétate de benzyle (0,87 g ; 2,4 x 10 3mole) et de N-méthylmorDholine (0,26 g ; 2,4 x 10 3mole) dans le tétrahydrofuranne anhydre (40 ml ). Ce mélange est maintenu sous agitation 2 heures à -20 C, et 2 heures à température ambiante. On dilue la solution avec de l'acétate d'éthyle et on filtre les sels précipités. On lave plusieurs fois le filtrat avec de l'eau, une solution saturée de bicarbonate de sodium, à nouveau de l'eau et finalement avec de la saumure. On seche sur sulfate de magnésium et après évaporation, on obtient une huile (1,25 g). Preparation du (3 R, 5 R/3 S, 5 S)-p(azido-6 benzyloxycarbonylamino-3 hydroxy-5 hexanoyl)-2, méthyl-1] hydrazino acétate de benzyle (composé 7) On ajoute de l'acide acétique (20 ml) au (3 R, 5 R/3 S, 5 S) [(azido-6 benzyloxycarboxylamino-3 tétrahydropyrannyl-5 hexanoyl)-2, méthyl-1 hydrazino] acétate de benzyle (1,25 g ; 2,1 x 10-3 mole) et on agite jusqu'à obtenir une solution. On ajoute de l'eau (20 ml) et la solution est chauffée à l'aide d'un bain marie à 350C pendant 90 minutes. On dilue la solution à l'eau et on extrait l'acétate d'éthyle. Les extraits organiques sont réunis, laves avec une solution saturée de bicarbonate de sodium, puis à l'eau, séchés et évaporés pour fournir le produit sous forme d'huile (1,0 g). Préparation de l'acide (3 R, 5 R/3 S, 5 S)-[(diamino-3,6 hydroxy-5 hexanoyl)-2 methyl-1 hydrazine acétique (composé 8 ( On fait passer lentement un courant d'hydrogene dans une solution de (3 R, 5 R/3 S, 5 S)-[(azido-6 benzyloxycarbonyl-3 hydroxy-5 hexanoyl)-2 methyl-1 hydrazino acétate de benzyle (1,0 g ; 2 x 10 mole) dans de l'acide acétique aqueux (1 partie d'eau pour 4 d'acide acétique) à laquelle on avait ajouté du palladium à 5 X (p/p) sur charbon (0,24 g). Apres 2 heures de réaction, la solution est balayée par un courant d'azote et filtrée.Le filtrat est évaporé sous vide à 40 C pour fournir une huile hydrosoluble qui est introduite sur une colonne d'Amberlite CG 50 (NH4+) (100 g) et éluée avec de l'ammoniaque à 0,1 %. On collecte des fractions de 10 ml qui sont contrôlées en électrophorèse sur gel de silice en utilisant un mélange d'eau (900 parties), d'acide acétique (75 parties) et d'acide formique (25 parties)comme électrolyte à 900 volts. Les fractions indiquant une tache unique (ninhydrine) avec un Rf de 1,02 (lysine = 1,00) sont réunies et lyophilisés en une poudre blanche (0,2 g ; 42 %), transparente en U.V. Ce produit commence à fondre à 980 ; la fusion (avec décomposition) est totale à 1230C. Il est identique à la (+)-negamycine naturelle en analyse électrophorétique. Le traitement de ce composé avec le benzylthiocarbonate de dimethyl-4,6 pyrimidile-2 donne le dérivé N,N'-bis benzyl oxycarbonyli que g=103-50C) qui est transforme en ester méthylique (F = 90 C) avec le diazométhane. Exemple 2 : Schéma II (+)-négamycine : tous les composés sont optiquement actifs ; les formules représentent la configuration absolue. Schéma II (suite) Préparation du (3 R)-benzyloxycarbonylamino-3 diazo-5 oxo-4 pentanoate de benzyle (compose 10) Le (L)ss-benzyloxycarbonyl aspartate de benzyle (5,0 g ; 14 x 10-3 mole) prépare à partir de l'acide L-(+)aspartique est dissout dans de l'acétate d'éthyle (200 ml) sous atmosphère d'azote, et la solution est refroidie à -10 C. Sous une bonne agitation, on ajoute de la N-méthylmorpholine (1,55 g ; 15,4 x 10-3 mole), puis du chloroformiate d'éthyle (1,67 g ; 15,4 x 10-3mole). On maintient l'agitation à -10 C pendant deux heures et demi, puis on filtre le mélange rapidement sous azote. On refroidit le filtrat, maintenu sous azote, par un bain de glace. On ajoute une solution éthérée 0,5 M de diazométhane (56 ml ; 28 x 10 3mole) sous agitation. On maintient a solution pendant 6 heures à froid (bain de glace), puis à température ambiante pendant 15 heures. On concentre sous vide la solution pour fournir quantitativement le produit attendu qui a un Rf A de 0,54. IR (film) : 3320 (large), 2120 (aigu et intense), 1735 large et intense, 1650, 1530 cm-1. Préparation du (+) (3 R)-benzyloxycarbonylamino-3 monoglutarate de benzyle (compose 11) A/ Par Synthèse On met en solution dans du dioxanne (15 ml) le (3 R)-benzyloxycarbonylamino-3 diazo-5 oxo-4 pentanoate de benzyle (5,3 g ; 14 x 10-3 mole) et on ajoute la solution, sous agitation, à un mélange chauffé à 55 C d'oxyde d'argent (0,7 g ; 2,9 x 10-3mole), de carbonate de sodium (1,5 g ; 4 x 10-3mole) et de thiosulfate de sodium (1 g ; 4 x 10-3mole) dans l'eau (60 ml). On maintient l'agitation et le chauffage pendant 2 heures, la réaction étant contrôlée en couche mince. Si, à ce moment, il reste du produit de depart, on ajoute à nouveau de l'oxyde d'argent (100 mg). Quand la réaction est complète, le mélange est refroidi et filtré. Le filtrat est lavé à l'acétate d'éthyle. La phase aqueuse est acidifiee avec de l'acide nitrique dilué et extraite à l'acétate d'éthyle. On sèche et on evapore les extraits pour obtenir une huile brune qui est purifiée par chromatographie sur silice (180 g) en éluant avec un mélange de chloroforme et de méthanol 2 : 1 v/v. Les fractions d'éluat montrant une tache unique avec un Rf C de 0,46 sont reunies et concentrées pour fournir 1,5 g (28 t) du produit attendu sous forme solide, F = 80-84 C, [&alpha;n20 + 1,5 (C = 10, éthanol). B/ Par dédoublement du (#)-benzyloxycarbonylamino-3 monoglutarate de benzyle Le benzyloxycarbonylamino-3 monoglutarate de benzyle racémique est dédoublé n utilisant la phenyl-1 éthylamine optiquement active comme base pour former un mélange de sels diastéreoisomeres qui sont separes par recristallisation dans l'éthanol selon les techniques usuelles. L'acidification, par exemple avec de l'acide sulfurique, de la solution aqueuse d'un des sels purifié permet d'obtenir le benzyloxycarbonylamino-3 monoglutarate de benzyle optiquement actif. L'emploi de la (-)phényl-1 éthylamine conduit convenablement au (+)benzyloxy carbonylamino-3monoglutarate de benzyle, F = 8-85 C, [&alpha;]D20 +1,58 (C =10, éthanol).La préparation de ce composé à partir de l'acide (+)-aspartique decrit précédemment montre que cet antipode a la configuration R. De la même façon, l'emploi de la (+)phényl-1 éthylamine fournit l'antipode (-), F = 84-850C, [&alpha;]n20 -1,6 (C = 10, ethanol). Preparation du (+) (3 R)-benzyloxycarbonylamino-3 diazo-6 oxo-5 hexanoate de benzyle (composé 12) On traite à froid (-10 C) une solution du (+)(3 R)-benzyloxycarbonylamino-3 glutarate de benzyle (8,5 g ; 23 x 10-3 mole) dans l'acétate d'éthyle (200 ml) sous atmosphère d'azote avec de la N-méthylmorpholine (2,56F9 25,3 x 10 3mole), puis avec du chloroformiate d'éthyle (2,75 g ; 25,3 x 10-3 mole), et on filtre au bout de 3 heures d'agitation. On refroidit le filtrait, maintenu sous azote, par un bain de glace et on traite avec une solution éthérée 0,5 M de diazométhane (92 ml ; 46 x 10 3mole). On maintient 3 heures la solution dans le bain de glace; le solvant est évaporé et le résidu huileux est chromatographié sur silice en éluant avec un mélange de cyclohexane (1 partie) et d'acétate d'éthyle (1 partie). L'évaporation des fractions appropriées fournit un solide blanc cristallisé (5,8 g ; 65 %), Rf B 0,4. [&alpha;]D23+15,36 (C = 2,2, éthanol). IR (CH2Cl2) 3420, 2120 (intense), 1730 (large et intense), 1690, 1510, 1515 cm Preparation du (+) (3 R)-benzyloxycarbonylamino-3 chloro-6 oxo-5 hexanoate de benzyle (compose 13) On additionne goutte à goutte, sous agitation, une solution d'éther chlorhydrique (72 x 10 3mole, 130 mi ) à une solution refroidie de benzyloxycarbonylamino-3 diazo-6 oxo-5 hexanoate de benzyle (5,7 g ; 14,4 x 10 3mole) dans le chlorure de méthylène en 30 minutes.Après une agitation supplémentaire de 30 minutes, on évapore la solution à sec, on obtient ainsi un solide blanc montrant une tache unique en chromatographie sur couche mince et ayant un [a]D3 + 2,68 (C = 5 dans l'ethanol) Préparation du (+) (3 R)-azido-6 benzyloxycarbonylamino-3 oxo-5 hexanoate de benzyle (composé 14) On traite une solution de (+) (3 R)-benzyloxycarbonylamino-3 chloro-6 oxo-5 hexanoate de benzyle (5,7 g ; 14,1 x 10 3mole) dans le diméthylformamide (30 ml) avec ae l'azoture de sodium (1,9 g ; 29 x 10-3 mole) selon la méthode decrite dans exemple 1 pour la preparation du composé 2.Le produit obtenu a un pouvoir rotatoire [&alpha;]23 + 8,680(C = 5 dans l'éthanol). Preparation du (3 R, 5 R)-azido-6 benzyloxycarbonylamino-3 hydroxy-5 hexanoate de benzyle (composé 15) On réduit le groupement cetonique de (+) (3 R)-azido-6 benzyloxycarbonylamino-3 oxo-5 hexanoate de benzyle (5,6 g ; 13,6 x 10-3mole) avec le diborane dans le tètrahydrofuranne comme solvant selon la méthode décrite pour la préparation du composé 3 dans l'exemple I. On sépare les deux isomères produits par une chromatographie sur gel de silice (375 g). L'isomère le moins polaire (Rf A 0,47 ; ou Rf D 0,6) est conservé pour l'étape suivante. Préparation de l'acide (+ [((3 R, 5 R)-diamino-3,6 hydroxy-5 hexanoyl)-2 méthyl-1 hydrazino] acétique [(+)-négamycine] (composé 20) Les étapes chimiques suivantes par lesquelles la (+)-négamycine est obtenue partir du composé 15, sont effectuees selon les méthodes 'décrites dans l'exemple 1 pour la transformation du composé 3 en composé 8. On obtient le dérivé tétrahydropyrannylique(composé 15) Rf B 0,6, à partir du (3 R, 5 R)-azido-6 benzyloxycarbonyl amino-3 hydroxy-5 hexanoate de benzyle optiquement actif (compose 15) ; ce dérivé tétrahydropyramylique , par une réaction de couplage avec l'a-méthylhydrazinoacétate de benzyle donne le composé 18, Rf E 0,55. On enlève le groupe tétrahydropyrannylique à l'aide de l'acide acetique aqueux pour obtenir l'alcool (composé 19) Rf E 0,32. Une hydrogénation catalytique donne le composé 20 que l'on purifie par une chromatographie sur résine Amberlite CG 50 (forme NH4+) éluée avec de l'ammoniaque aqueux à 0,1 t. Le produit final est récupéré de l'gluant par lyophilisation ]23 + 1,50 (C = 3,3 dans l'eau). Ce produit est identique à la (+)-nègamycine naturelle, par comparaison en électrophorèse. REVENDICATIONS 1. Un procédé pour la préparation du composé dit negamycine repondant à la formule et qui peut être sous forme racémique ou sous forme optiquement active avec la configuration absolue (3 R, 5 R). Ce procédé est caractérisé par le fait qu'il consiste a) à réduire sélectivement le groupement cétonique dans un compose de formule qui peut être sous forme racémique ou sous forme optiquement active et de configuration (3 R).Dans cette formule le reste A signifie un groupement protecteur d'amine qui peut être enlevé par hydrogénolyse, et le reste R' signifie un radical alkyle de 1 à 6 atomes de carbone, un radical a-arylalkyle renfermant jusqu'à 11 atomes de carbone ou un radical aryle renfermant jusqu'à 10 atomes de carbone ; b) a séparer l'isomère recherché de configuration absolue (3 R, 5 R/ 3 S, 5 S) ou (3 R, 5 R) et l'isomère non voulu de configuration (3 R, 5 S/ 3 S, 5 R) ou 3 R, 5 S) ; c) à protéger le radical hydroxyle, créé au stade (a), avec un groupe protecteur labile aux acides ; d) à hydrolyser la fonction ester de formule COOR' ;; e) à faire réagir dans une réaction de type couplage peptidique l'acide qui résulte du stade (d) avec une molécule de formule dans laquelle le reste B signifie un groupe protecteur d'acide carboxylique qui peut étre enlevé par hydrogénolyse ; f) à cliver le groupe protecteur du radical hydroxyle avec un acide ; g) à'réduire d'une manière catalytique la substance de formule qui résulte du stade (f) 2. Un procédé suivant la revendication 1 dans lequel la réduction au stade (a) est effectuée à l'aide de diborane. 3. Un procédé suivant les revendications 1 ou 2 dans lequel le reste A représent le radical benzyloxycarbonyle, les restes R' et B représentent des radicaux benzyles, et le radical hydroxyle protégé sous forme d'éther tétrahydro pyrannyl ique. 4. Un procédé suivant une des revendications 1 à 3 dans lequel le composé de formule II possède la configuration absolue (3 R). 5. L'intermédiaire répondant à la formule II nécessaire pour la mise en oeuvre du procédé selon la revendication 1. 6. L'intermédiaire répondant ala formule IV nécessaire pour la mise en oeuvre du procédé selon la revendication 1.