Brevet FR2419727A1 — publié le 19791012

La présente invention est relative à l'obtention de vaccins polyvalents contre la lèpre et à leurs procédés de préparation. La lèpre est une maladie infectieuse, endémique dans certains pays, et contagieuse, due au bacille de Hansen. Le bacille de Hansen est une bactérie acido-résistante, c'est-à-dire une bactérie qui une fois qu'elle a été colorée par la fuchsine de Ziehl, résiste aux tentatives ultérieures de décoloration par des acides minéraux. Le bacille de la lèpre a été découvert en 1868 par Hansen et bien qu'il ait été l'un des premiers organismes pathogènes à être décrit, l'on sait jusqu'à présent fort peu de choses à son sujet, et, en tous cas, guère plus qu'au moment de sa découverte.De nombreuses tentatives ont été faites pour le cultiver et on a isolé de nombreux organismes différents des tissus lépreux, mais il ne semble pas que l'on soit parvenu jusqu'à présent, à obtenir des cultures pures de longue durée de l'organisme causal réel de la maladie. En effet, si les bacilles acido-résistants non-chromogènes qui ont pu être obtenus par différents Chercheurs,en cultures à multiplication limitée, quantitativement et dans le temps, ont pu etre identifiés comme étant effectivement des bacilles de la lèpre, il a pu être mis en évidence, toutefois, que bien qu'un développement de colonies ait pu être obtenu dans les deux ou trois premiers repiquages, les tentatives d'obtention de cultures indéfinies de ces bacilles par repiquages ont pratiquement toutes échoué.Ces échecs avaient amené les Chercheurs à conclure que les bacilles de la lèpre ne pourraient croître en milieu artificiel que tant qu'il subsiste dans les cultures successives par repiquages, au moins un peu du tissu lépromateux humain d'origine et que les bacilles tireraient leur nourriture pratiquement totalement des produits d'autolyse de ce matériel protéinique d'origine humaine. I1 est de ce fait regrettable qu'un certain nombre de cultures qui sont déposées dans différentes collections soient désignées sous le nom de "Mycobacterium leprae", car il est probable que la plupart des souches déposées sont des bacilles acidorésistants saprophytes ordinaires, en sorte que leur description sous un nom erroné ne peut que créer des confusions préjudiciables à la poursuite des recherches, tant en ce qui concerne l'identification du véritable agent causal de la lèpre que sur le plan thérapeutique. On distingue généralement deux principales formes de lèpre : la lèpre lépromateuse et le lèpre tuberculoide. L'examen de tissus malades prélevés chez des lépromateux montre de nombreux amas de bacilles de Hansen, alors qu'on ne trouve pas, ou de rares,bacilles de Hansen à l'examen au microscope des tissus (biopsies) des lépreux tuberculoides. Divers traitements thérapeutiques ont été proposés pour lutter contre la lèpre t en particulier, de nombreuses préparations de lutte contre la lèpre ont été proposées, notamment la tuberculine, des bacilles acido-résistants tués provenant de lésions lépreuses, les organismes contenus dans les nodules de la lèpre, des bacilles tuberculeux autolysés et la nastine préparée par extraction par l'éther d'un streptothrix acido-résistant. Toutefois, aucune de ces préparations n'a donné de résultats. Certains léprologues ont recommandé une politique de vaccination prophylactique par le BCG, mais une telle prophylaxie ne parait pas justifiée, car il n'y a aucune preuve que l'infection préalable par la tuberculose protège de la lèpre et il n'a été mis en évidence aucune immunité croisée entre ces deux affections. Parmi les traitements chimiothérapiques proposés, on citera le traitement à l'huile de chaulmoogra, actuellement remplacé par le traitement aux sulfones, et notamment à la diaminodiphényl-sulfone ou aux sulfamides-retard, qui procurent dans certains cas, des améliorations cliniques et même bactériologiques, mais n'ont pas une action destructrice définitive sur l'agent causal de la lèpre. Pour faire progresser les connaissances relatives à la lèpre et au développement d'une thérapeutique efficace contre la lèpre, deux problèmes doivent donc être résolus : le premier est constitué par l'identification du facteur causal de la lèpre et le second par la mise au point de moyens de lutte contre ce facteur causal. Conformément à l'Art antérieur, des tentatives récentes ont été faites pour obtenir des cultures de bacilles acidorésistants (BAAR) de Hansen. En particulier MUROHASHI et YOSHIDX obtiennent depuis 4972, une multiplication limitée des bacilles acido-résistants (BAAR) provenant de broyats de lépromes, après incubation très prolongée (2 ans à 2 ans et demi) à 370C en milieux de culture semi-solides ou liquides dont le pH est ajusté 6,6-6,8 avec NaOH, qui présentent la composition suivante KH2P04 4 g Na2HP04, 12H2O...................... 3 g * Citrate de Na....................... 2 g CaCl2 ............... 0,0025 g MgSO4, 7H2O.......................... 0,1 g Pyruvate de Na....................... 3 g Glucose 10 g Glutamate de Na...................... 3 g Asparagine 3 g Pantothénate de Na................... 0,1 g ** Tween 80............................. 0,1 g Levure RNA........................... 100 g Albumine de sérum bovin, Fraction V 5 g Eau distillée qsp 1000 ml Le pH est ajusté à 6,6-6,8 avec NaOH. * éventuellement supprimé ** éventuellement porté à 2 g, avec suppression du NaHP04 et addition de leucine 2 g. Toutefois, ces cultures ne présentent qu'un intérêt scientifique, leur intérêt pratique étant inexistant en raison du faible rendement en BAAR et de la durée extrêmement longue d'incubation de ces cultures. SKINSNESS, MATSUO, CHANG et ANDERSON ont mis au point, par ailleurs, une technique de culture de BAAR, qui comprend les opérations suivantes 1) inoculation à la souris, par voie intrapéritonéale, de sus pensions bacillaires (BAAR) issues de broyats de léprome. Les BAAR sont mélangés à une solution d'acide hyaluro nique à 0,1 % en sérum physiologique. 2) inoculation hebdomadaire, pendant un an, d'acide hyaluronique au niveau du premier site d'inoculation à la souris. 3) récupération des BAAR qui se sont développés dans la cavité péritonéale de la souris et ensemencement dans le milieu L A-3 dont la composition est donnée ci-dessous Milieu L A-3 Tampon phosphate 0,066 M, pH 6,24...................... 81 ml Glycérol 3 ml Acide hyaluronique (sel de sodium, qualité IIIS;provenant de cordon ombilical humain, Sigma)................ 100 mg Albumine de sérum bovin (Cohn,Fraction V,Sigma) 6 g Extrait de levure franche (aseptic Microbiological Associates, Inc. Bethesda, Maryland) 16 ml Pénicilline D (sel de potassium;Eli Lilly and Co.) en suspension dans du tampon de citrate de sodium,0,6 ml.. 20 000 u PreratI9n du milieu SOLUTION A On mélange 31 ml du tampon phosphate, 3 ml de glycérol, 100 mg d'acide hyaluronique et on autoclave à 1200C pendant 15 mn. SOLUTION B (Milieu de culture L A-3) On mélange A et B, et on ajoute 16 ml d'extrait de levure franche et 20 000 unités de pénicilline. Le milieu est alors passé sur filtre Seitz et réfrigéré jusqu'au moment de l'utilisation. Il est réparti à raison de 4-6 ml dans des tubes de 17 x 100 mm ou dans des tubes à capuchon que l'on ne serre pas trop fortement afin de permettre une certaine aération. Incubation à 37 OC. Les inconvénients de la technique de SKINSNESS et Coll. sont nombreux t) inoculation préalable des bacilles de Hansen à la souris qui peut déjà héberger d'autres mycobactéries. 2) inoculation des germes suivie de 52 autres inoculations d'aci de hyaluronique. 3) coat très élevé de l'acide hyaluronique. 4) milieu de culture compliqué dans sa préparation et de prix de revient très élevé, ce qui ne permet des essais en laboratoi re qu'avec des tubes ne renfermant que 4 à 6 ml de milieu nutritif. L'Inventeur a procédé pour sa part, au Centre de Recherches Biologiques sur la Lèpre de la Faculté des Sciences de Dakar, qu'elle dirige, à des travaux tendant à identifier le facteur causal de la lèpre. Dans ce but, elle a procédé à des essais de culture de Mycobacterium leprae. Jusqu'à ses travaux, mis à part les travaux de MUROHASHI et YOSHIDA d'une part, et SKINSNESS et Coll. d'autre part, mentionnés plus haut, les essais de cultures de Mycobacterium leprae étaient demeurés négatifs. L'Inventeur a ensemencé des suspensions bacillaires issues de broyats de lépromes (non traités par des décontaminants) en divers limieux nutritifs soit directement, soit après fixation par l'eau albuminée à 0,1 % sur des demi-lames immergées [technique de Nakaura,lntern. Journ. Learosy, (1970), 35, p. 505-509 ] et a pu mettre, ainsi, en évidence, que certains bacilles acidorésistants, granuleux, initialement présents dans le broyat de léprome prélevé,sont susceptibles de se transformer en éléments polymorphes qui correspondent aux formes 2 du cycle végétatif des mycobactéries et qui sont capables de se multiplier activement s'ils sont cultivés sur des milieux spéciaux lltels que l'extrait de terre, par exemple : cf.Annales de la Faculté des Sciences de l'Université de Dakar, (1972) 25, pages 19-21 et pages 27-343. L'Inventeur a également pu faire réverser les formes 2 vers la forme acido-résistante classique qui représente l'une des formes parasites du bacille de Hansen [cf. Ibid, pages 23-26 et Acta Leprologica 1975, 59, pages 77-813, et a pu établir l'existence d'un cycle évolutif des BAAR, forme parasite, vers des formes essentiellement saprophytes, mais parfois rencontrées chez les sujets lépromateux (forme 2) Recueil des Travaux du Laboratoire de Recherches Biologiques sur la lèpre (1975), pages 5-133 et vers d'autres formes parasites (forme 3) [Ibid.pages 71-811. Ces dernières evoluent à leur tour facilement vers le BAAR classique.De plus, l'inventeur a également pu isoler des microorganismes correspondant aux formes 2 des mycobactéries, à partir de fragments cutanés prélevés chez des malades atteints de lèpre tuberculoïde, lui permettant ainsi de vérifier son hypothèse selon laquelle les lésions tubercu bides qui, à l'examen, ne présentent pratiquement pas de bacilles de Hansen acido-résistants, contiennent des microorganismes correspondant à d'autres étapes du cycle,non décelables par les méthodes de routine, et susceptibles d'évoluer, selon les milieux de culture,soit vers la forme 2, soit vers le BAAR classique.Ces éléments seraient responsables de la genèse des lésions tuberculoides. En cultivant des sérums lépreux, tant lépromateux que tuberculodes ou provenant de lèpres indéterminées, sur des milieux sélectifs appropriés, l'inventeur a pu observer le développement d'éléments cyanophiles provenant des formes 3, qui évoluent ensuite jusqu'au stade des bacilles acido-résistants (BAAR) typiques. L'inventeur a en outre pu déduire de ses travaux, que si les traitements chimiothérapiques appliqués aux malades lépromateux font disparaitre les BAAR, ils n'entravent pas le développement des formes 2 et des formes 3, leur insuffisance constituant un risque de nouvelle production de BAAR en cas de défaillance de l'organisme, si lton considère la forme 3 comme une forme de survie capable de redonner des BAAR, ainsi que l'Inventeur a pu l'observer in vitro. Les travaux de l'Art antérieur ont fait apparaitre que le bacille de Hansen à sa sortie de l'organisme, est incapable de se multiplier sur les milieux nutritifs classiques, les plus complets soient-ils. Les travaux de l'inventeur lui ont cependant permis d'obtenir en milieux pauvres et sélectifs, en particulier à partir de sérums lépreux et de suspensions bacillaires de lépromes, la prolifération de germes cyanophiles évoluant vers les BAAR classiques, et lui ont permis non seulement de mettre en évidence la complexité du cycle végétatif du Mycobacterium leprae, mais aussi et surtout d'identifier les différentes formes que prend le Mycobacterium leprae au cours de ce cycle Sur la base de ses travaux, l'inventeur a donc visé à obtenir des cultures sélectives stables et de longue durée des différentes formes de Mycobacterium leprae, dans le but de développer des moyens de lutte contre la lèpre, constitués par des vaccins efficaces. La présente invention a en conséquence pour but de pourvoir à des vaccins polyvalents contre la lèpre, à leur procédés de préparation, aux cultures des diverses formes de Mycobacterium leprae mises en oeuvre dans cés procédés et aux milieux de culture utilisés pour obtenir lesdites cultures. La présente invention a pour objet des vaccins polyvalents contre la lèpre, caractérisés en ce qu'ils sont constitués par au moins l'une des formes du bacille de Hansen, à savoir BAAR, forme cyanophile, forme 2, forme 3 ou par des mélanges déterminés de plusieurs ou de toutes ces formes, obtenus initialement par culture, dans des milieux de culture sélectifs awronriés, d e sérums lépreux, de suspens ions bacillaires issues de lépromes, de filtrats de suspensions bacillaires issues de lépromes (non traités par les décontaminants), de broyats de léprides, de filtrats de cultures de BAAR lysées sur milieu de Loewenstein, de cultures de BAR âgées, lesquelles sources ou inoculums lépreux, sont utilisées séparément ou en mélanges, puis repiquages des souches lépreuses obtenues, dans des milieux d'entretien appropriés et arrêt de la multiplication des cultures par tous procédés de stérilisation appropriés. Les inoculums lépreux énumérés plus haut, utilisés comme sources de microorganismes lépreux dans la présente invention, seront désignés dans ce qui va suivre, par l'expression "inoculums lépreux". Selon un mode de réalisation avantageux des vaccins conformes à la présente invention, ceux-ci sont constitués par l'association de formes BAAR avec des formes cyanophiles précurseurs des BAAR et des formes inframicroscopiques, obtenues par culture d'inoculums lépreux sur des milieux sélectifs appropriés, repiquages des souches lépreuses obtenues, sur des milieux d'entretien adéquats et arrêt des cultures par des moyens de stérilisation appropriés. Selon un autre mode de réalisation avantageux des vaccins conformes à la présente invention, ceux-ci sont constitués par des formes cyanophiles précurseurs des BAAR, obtenues par culture d'inoculums lépreux sur des milieux de culture sélectifs appropriés, repiquages des souches lépreuses obtenues, sur des milieux d'entretien adéquats et arrêt des cultures par des moyens de stérilisation appropriés. Selon encore un autre mode de réalisation avantageux des vaccins conformes à la présente invention, ceux-ci sont constitués par des formes 3, ou formes inframicroscopiques, obtenues par culture d'inoculums lépreux dans des milieux de culture sélectifs appropriés, repiquages des souches lépreuses obtenues, sur des milieux d'entretien adéquats et arrêt des cultures par des moyens de stérilisation appropriés. Selon une disposition avantageuse de ce mode de réalisation, les vaccins constitués uniquement par des formes inframicroscopiques, ou formes 3, sont obtenus par culture d'inoculums lépreux dans des milieux de culture sélectifs appropriés, puis arrêt des cultures par des moyens de stérilisation appropriés, lorsqu'elles ont atteint le degré de multiplication voulu, sans qu'il soit besoin de procéder à des repiquages. Selon un autre mode de réalisation avantageux des vac cins conformes à la présente invention, ceux-ci sont constitués par des formes 2 ou post-acido-résistantes, obtenues par culture d'inoculums lépreux dans des milieux de culture sélectifs appropriés, repiquages des souches lépreuses obtenues, sur des milieux d'entretien adéquats et arrêt des cultures par des moyens de stérilisation appropriés. L'Inventeur a en effet démontré qu'il est possible d'obtenir en inoculant des inoculums lépreux dans des milieux de culture sélectifs appropriés, d'abondantes cultures de BAAR et de formes prébacillaires cyanophiles, qui, repiquées dans des milieux d'entretien appropriés, donnent des cultures bactériennes dont le développement est orienté de façon sélective et permet d'obtenir à volonté, les formes bactériennes recherchées, soit isolément soit en mélanges. Les cultures obtenues par ensemencement d'inoculums lépreux dans des milieux sélectifs appropriés, comportent des microorganismes variés, et notamment - des germes acido-résistants, tels que des BAAR typiques, des navettes acido-résistantes, des bacilles à rayures, des bacil les punctiformes acido-résistants, des cocci, des coccobacil les et des courts bâtonnets trapus, acido-résistants, des myceliums filamenteux du type actinomycète, - des formes cyanophiles colorables par le Ziehl-Gram dans dif férents tons de bleu (cocci, coccobacilles, bâtonnets) ;; - des germes invisibles, non décelables à l'examen direct à l'état frais et non colorables par les méthodes usuelles, et dont un certain nombre de photographies ont été obtenues en microscopie électronique, les cultures non colorables étant ame nées à évoluer et à devenir visibles et colorables par repi quages dans des milieux de culture appropriés, dans lesquels les cultures devenues colorables obtenues sont constituées de bâtonnets, de spores, de filaments, de myceliumsdu type acti nomycète, de cocci, de coccobacilles, de bacilles à rayures cyanophiles, et de BAAR classiques. L'inventeur a mis en évidence que les éléments cyanophiles de grande taille correspondent à la forme 2, alors que les cocci, coccobacilles et fins bacilles qui sont capables d'évoluer jusqu'au stade des BAAR typiques sont issus des formes 3, les formes 2 pouvant également être issues des formes 3, selon les milieux d'ensemencement mis en oeuvre. Si l'on tient compte du fait que sur le plan clinique, la bacillémie (présence de BAAR), n'est observée que dans les cas de lèpre lépromateuse, tandis qu'elle n'a pas été observée dans les cas de lèpre tuberculoide, si l'on tient compte, en outre, du fait que l'inventeur obtient des cultures comportant des BAR, des formes cyanophiles, des formes 2 et des formes 3, précurseurs des BAAR, quelle que soit l'origine de l'inoculum ensemencé (lèpre lépromateuse, lèpre tuberculoide ou lèpre indéterminée), il apparaît donc que la forme 2 qui est la forme de survie des BAAR, et que la forme 3 qui est à la fois une forme de survie et la forme évolutive des BAAR, donc la forme la plus dangereuse parce que la plus virulente, doivent astre présentes dans un vaccin de lutte contre la lèpre au même titre que les BAAR, en sorte que le fait de pouvoir préparer des vaccins polyvalents dont on peut faire varier à volonté la composition en les différents éléments du cycle végétatif et évolutif du bacille de Hansen, présente un intérêt majeur car il permet une lutte prophylactique contre les diverses formes de la maladie. La présente invention a également pour objet un procédé de préparation de vaccins polyvalents contre la lèpre, caractérisé en ce que : - des inoculums lépreux prélevés chez des malades atteints de lèpre lépromateuse, de lèpre tubercu bide ou autre forme de lèpre sont ensemencés dans un milieu sélectif approprié et incubés pendant trois semaines à trois mois au bout desquels on récolte une culture, qui est la souche lépreuse et qui renferme tout d'abord des formes inframicroscopiques en voie de développement, auxquelles viennent s'ajouter suivant l'age de la culture, des formes cyanophiles pre-AR et des bacilles acido-résistants ; - en ce que la culture récoltée est repiquée dans un milieu d'entretien sélectif approprié, dont la composition est choisie en fonction de la forme ou de l'association de formes que l'on vise à obtenir, dans lequel elle est entretenue pendant 48 heures à 6 semaines au bout desquelles on constate une multiplication abondante des germes recherchés, qui se traduit, en milieu liquide, par une multiplication d'au moins 2 à 3 milliards de germes ou d'unités formant colonies/ml de milieu liquide et, en milieu solide, par la formation d'une couche épaisse de culture microbienne ;;-et en ce que la culture ayant atteint ce stade de multiplication,est arrêtée par tous moyens de stérilisation appropriés, tels qu'action de la chaleur, agents de stérilisation chimiques, - après quoi les cultures tuées et éventuellement lyophilisées sont mises sous forme de doses unitaires utilisables comme vaccins. Selon un mode de réalisation avantageux du procédé objet de l'invention, le milieu d'ensemencement d'inoculums lépreux pour l'obtention de souche lépreuse est constitué par un milieu liquide comprenant du milieu de Sâhngen, qui est un milieu contenant des sels minéraux et qui est connu en luimême, additionné d'huile de paraffine éventuellement ultrasonée, dans une proportion comprise entre 2,0 et 20 ml environ par litre, en solution aqueuse, ou bien par un milieu liquide comprenant le milieu de Sôhngen susdit et du squalène présent à raison de 2,0 à 20 ml environ par litre, en solution aqueuse. Selon un autre mode de réalisation avantageux du procédé objet de l'invention, le milieu d'ensemencement d'inoculums lépreux est constitué par de l'extrait de pomme de terre additionné de squalène, à raison de 2,0 à 20 ml environ par litre, en solution aqueuse, à 5 à 25 % environ d'extrait de pomme de terre. Selon encore un autre mode de réalisation avantageux du procédé objet de l'invention, le milieu d'ensemencement d'inoculums lépreux est constitué par de l'extrait de cordon ombilical humain additionné d'huile de paraffine, éventuellement ultrasonée, à raison de 2,0 à 20 ml environ par litre, en solution aqueuse, ou par du milieu de Sôhngen additionné de fragments d'oeil de mammifères (notamment iris, cornée, conjonctive, nerf optique), d'extrait de levure à 0,05 % environ, et éventuellement de facteur de croissance obtenu à partir de souches lépreuses acido-résistantes traitées de façon appropriée. Selon une disposition avantageuse de ce mode de réalisation, le facteur de croissance inclus, de préférence à raison de 0,2 ml % environ dans les milieux d'ensemencement d'inoculums lépreux constitués par du milieu de Sôhngen additionné de fragments d'oeil de mammifères et d'extrait de levure à 0,05 % environ, est obtenu à partir de souches de Mycobacterium leprae, et notamment à partir de cultures âgées de BAAR, entretenues sur extrait de pomme de terre gélosé, puis repiquées en milieu de Sôhngen additionné de squalène, les cultures ainsi obtenues par repiquages étant ensuite traitées, après culture pendant une quinzaine de jours environ,par 3 à 8 % environ d'un alcool in férieur, tel que l'éthanol de préférence, puis stérilisées et filtrées sur membrane. Les milieux d'ensemencement définis ci-dessus, contenant le facteur de croissance, favorisent le développement des différentes formes du bacille de Hansen, et en particulier le développement des formes 3. Selon encore un autre mode de réalisation avantageux du procédé objet de l'invention, le milieu d'ensemencement d'inoculums lépreux est constitué par un milieu végétal comprenant une décoction aqueuse de bois de palmier séché, à 2,5 % environ de bois sec. Selon encore un mode de réalisation avantageux du procédé objet de l'invention, le milieu d'ensemencement d'inoculums lépreux est constitué par une solution aqueuse contenant du milieu de Sôhngen additionné de 2,0 à 20 ml environ par litre d'huile de paraffine et d'un agent tensio-actif, essentiellement constitué par des glycolipides, présent à raison de 5 à 30 mg par litre. Selon encore un autre mode de réalisation avantageux du procédé objet de l'invention, le milieu d'ensemencement des inoculums lépreux est constitué par du milieu de Söhngen additionné d'huile de paraffine à raison de 2,0 à 20 ml environ par litre, de milieu coeur-cervelle à raison de 0,20 à 0,50 % environ, et de lait de coco à raison de 0,05 à 0,15 % environ. Selon un autre mode de réalisation avantageux du procédé objet de l'invention, le milieu d'ensemencement d'inoculums lépreux est constitué par du liquide aspergillaire, et plus particulièrement par du filtrat de culture d'Aspergillus fumigatus en milieu liquide, tel que le milieu "Trypticase Soy" additionné de 20 à 30 % d'extrait de pomme de terre. Conformément à l'invention, la culture obtenue par ensemencement d'inoculums lépreux dans un milieu sélectif approprié est réalisée à une température comprise de préférence entre 30 et 370C, et à un pH compris entre 5,4 et 8. Conformément à l'invention, la souche lépreuse obtenue par ensemencement dans des milieux appropriés,est entretenue par repiquages sur des milieux sélectifs appropriés, et notamment sur les milieux suivants : A - pour le dévelopPement de cultures mixtes comprenant des BbAR, des formes cyanophiles pré-RR et des formes -inframicrosco- piques 1) sur des milieux liguides, et plus particulièrement - a) sur une solution aqueuse contenant du milieu de Sâhngen additionné d'huile de paraffine,- telle que définie plus haut, - b) sur une solution aqueuse contenant du milieu de Sâhngen additionné de squalène, telle que définie plus haut, - c) sur une solution aqueuse contenant du milieu de Sôhngen additionné de squalane, dans les memes proportions que ci-dessus, - d) sur une solution aqueuse contenant du milieu de Sôhngen additionné de cétane ,dans les mêmes pro portions que ci-dessus. 2) sur des milieux solides - a) sur du milieu de Söhngen -huile de paraffine, gélosé à 20 p.mille, - b) sur du milieu au sulfate ferreux gélosé à 20 p mille, après repiquages sur des milieux au formate, puis éventuellement sur des milieux au sulfate ferreux liquide. B - pour le déveloPpement de cultures composées uniquement des formes cvanophiles pré-AR, sur les milieux suivants 1) extrait de pommes de terre gélosé à 20 % dans l'eau, à pH 6,8 à 7,0 2) milieu "Eugonagar BBL". C - pour le développement de formes 2 ou post-AR 1) dans un milieu solide contenant des extraits végétaux, par exemple de l'extrait de pomme de terre gélosé à 5-25 % environ, de l'extrait de malt gélosé à 5-25 % environ, de l'extrait d'algues(Chara Foetida), de l'extrait de cham pignons, etc.. 2) dans un milieu solide constitué par de la gélose nutri tive ou par le milieu commercialisé par la Société DIFCO, U.S.A., sous le nom de "Sporulating agar" 7 3) dans un milieu liquide constitué par de l'extrait de terre liquide, de l'extrait de pomme de terre liquide, de 1' "Eugobroth" (DISCO), de l'extrait coeur-cervelle BBL contenant de 5 à 20 % de sérum de cheval. Selon un mode de réalisation avantageux du procédé objet de la présente invention, le développement des cultures de formes inframicroscopiques, ou formes 3, est obtenu, de préfé- rence, par ensemencement d'inoculums lépreux dans l'un des milieux définis ci-après 1) dans un milieu comprenant du milieu de Sôhngen addition né d'huile de paraffine, dans les proportions définies plus haut 2) dans une solution à 2 g p. mille environ de fragments de nerfs périphériques de mammifères, à pH 5,4 à 6,0 environ 3) dans un milieu constitué par une solution aqueuse conte nant environ 2 g p.mille de fragments de nerfs périphé riques de mammifères et 2 à 20 ml environ de squalène, à pH 5,4-7,0 4) dans un milieu constitué par une solution aqueuse à 2 g p. mille environ de fragments de nerfs périphériques de mammifères et 0,05 à 0,1 g p.mille environ d'extrait de levure,à pH 6 à 7 5) dans un milieu constitué par du milieu de Sôhngen addi tionné de fragments d'oeil de mammifères, d'extrait de levure à 0,05 % environ, et de facteur de croissance obtenu par un traitement approprié de souches lépreuses acido-résistantes, les cultures étant arrêtées lorsqu'elles ont atteint le degré de multiplication voulu, par des agents de stérilisation appropriés, et sans qu'il soit besoin de procéder à des repiquages. Egalement conformément à l'invention, on fait évoluer les cultures obtenues dans les milieux d'entretien susdits, pour obtenir d'autres formes, par repiquages dans d'autres milieux d'entretien. En particulier, les cultures de formes cyanophiles pré-AR développées dans des milieux constitués par de l'extrait de pommes de terre gélosé ou par de l'Eugonagar BBL, donnent des cultures formées presque uniquement de BAAR par repiquages en milieu comprenant du milieu de Sôhngen additionné de squalène. Selon un mode de réalisation avantageux du procédé ob jet de l'invention, les cultures développées dans des milieux de culture appropriés sont arrêtées lorsque la multiplication des germes recherchés a atteint une proportion qui se traduit, en milieu liquide, par une multiplication d'au moins 2 à 3 milliards de germes ou d'unités formant colonies/ml de milieu liquide, et en milieu solide, par la formation d'une couche épaisse de culture microbienne, par tous procédés de stérilisation appropriés, et notamment par traitement thermique, ou par action de divers agents chimiques, tels que le chloroforme, l'éther, le formol, la 2 -propiolactone, etc... Conformément à l'invention, les cultures tuées par stérilisation sont mises sous forme de doses unitaires utilisables comme vaccins polyvalents contre la lèpre. Outre les dispositions qui précèdent, l'invention comprend encore d'autres dispositions qui ressortiront de la description qui va suivre. L'invention sera mieux comprise à l'aide du complément de description qui va suivre, qui se réfère à des exemples de mise en oeuvre des procédés objet de la présente invention. Il doit être bien entendu, toutefois, que ces exemples de mise en oeuvre, sont donnés uniquement à titre d'illustration de l'objet de l'invention,dont ils ne constituent en aucune manière une limitation. I - EXEMPLES DE PREPARATION DE SOUCHES LEPREUSES PAR ENSEMENCE MENT DE MILIEUX APPROPRIES. EXEMPLE 1 Des sérums lépreux prélevés chez des malades atteints de lèpre (lèpre lépromateuse, lèpre tuberculoîde ou lèpre indéterminée), sont ensemencés dans un milieu minéral de Sôhngen enrichi d'huile de paraffine (S-HP), présentant la composition suivante K2HPO4.......................................... 0,5 g MgSO4, 7H2O..................................... 0,2 g NH4 Cl.......................................... 0,5 g Na2CO3.......................................... traces Eau déminéralise................................ 1 000 ml Huile de paraffine (préalablement stérilisée) 2,5 ml Le pH de la solution de milieu est de l'ordre de 6,8 il est stérilisé, avant ensemencement, à 1200C pendant 20 mn. Le sérum lépreux est ensemencé à raison de 5 gouttes dans dés flacons renfermant 100 ml de la solution minérale de Sôhngen additionnée de 0,25 mi d'huile de paraffine. L'incubation est poursuivie à 320C pendant deux mois et demi, au bout desquels on obtient une culture renfermant simultanément des BR, des formes cyanophiles pré-AR et des formes inframicroscopiques en voie de développement. EXEMPLE 2 On procède comme décrit à l'Exemple 1, en remplaçant le milieu S-HP par le milieu suivant Solution minérale de Sâhngen dans l'eau déminéralisée Squalène * 0,25 ml pour 100 ml de solution de Sôhngen. Au bout de deux mois et demi d'incubation à 32 0C dans ce milieu (qui sera appelé ci-après milieu S-SL), on recueille des cultures renfermant simultanément des BAAR, des formes cyanophiles pré-AR et des formes inframicroscopiques en voie de développement. EXEMPLE 3 L'on procède comme décrit à l'Exemple 1 en utilisant toutefois comme milieu de culture une solution aqueuse contenant le milieu de Sôhngen additionné de 2,0 à 3,0 ml par litre d'huile de paraffine ultrasonée pendant 2 heures. EXEMPLE 4 L'on procède comme décrit à l'Exemple S en utilisant toutefois comme milieu de culture une solution aqueuse contenant de 2,0 à 3,0 ml par litre d'huile de paraffine ultrasonée, et 10 à 30 mg par litre d'uq agent tensio-actif à base de glycolipides. EXEMPLE 5 On ensemence des suspensions bacillaires issues de broyats de lépromes (non traités par les méthodes de décontamination) dans du milieu coeur-cervelle BBL additionné de 20 % de sérum de cheval. Après 6 à 12 mois d'incubation, certains bacilles évoluent vers la forme 2. EXEMPLE 6 On ensemence des suspensions bacillaires issues de broyats de lépromes (non traités par les méthodes de décontamination) dans de l'extrait de pommes de terre. Après une incubation de 6 à 12 mois, on procéde à des repiquages comme décrit à l'Exemple Il ci-dessous. EXEMPLE 7 On ensemence des suspensions bacillaires issues de broyats de lépromes (non traités par les méthodes de décontamination) dans du milieu de Sôhngen additionné de conjonctive d'oeil de zébu et d'extrait de levure à 0,05 %. Après 6 à 8 semaines, des formes 2 sporulées sont présentes dans le milieu. EXEMPLE 8 On ensemence des broyats de léprides dans un milieu constitué par du liquide aspergillaire, et plus précisément par un-filtrat de culture d'Aspergillus fumigatus en milieu "Tryp- ticase Soy Broth" additionné de 20 à 30 O/c d'extrait de pommes de terre ; on incube pendant 6 à 12 mois au bout desquels on procède à des repiquages comme décrit à l'Exemple 13 ci-dessous. La préparation du liquide aspergillaire utilisé comme milieu d'ensemencement dans le présent Exemple, est obtenue comme suit On ensemence Aspergillus fumigatus (souches IP864 de l'INSTITUT PASTEUR DE PARIS et AL216 de l'ECOLE NATIONALE SUPE RIEURE AGRONOMIQUE DE GRIGNON) en milieu "Trypticase Soy Broth". Après 8 jours de culture, on autoclave pendant 20 mn à 1200C. L'on filtre ensuite sur papier, puis sur membrane Seitz. Il - EXEMPLES DE PREPARATION DE CULTURES SELECTIVES DE GERMES DANS DES MILIEUX D'ENTRETIEN. EXEMPLE 9 Les souches lépreuses obtenues- aux Exemples 1 à 4, sont repiquées dans un milieu liquide constitué par une solution aqueuse présentant la composition ci-après K2HPO4............................................ 0,5 g MgSO4, 7H2O....................................... 0,2 g NH4 Cl............................................ 0,5 g Na2CO3............................................ traces Eau déminéralisée................................. 1 000 ml Huile de paraffine (préalablement stérilisée) 2,5 ml à pH 6,8, stérilisée à 1200C pendant 20 mn. Les souches lépreuses sont entretenues dans le milieu ci-dessus pendant 5 à 6 semaines,au bout desquelles,lorsque la multiplication des germes a atteint 2-3 milliards, on récolte une culture mixte contenant des BAAR; des formes cyanophiles pré-AR et des formes inframicroscopiques. EXEMPLE 10 Les souclles lépreuses obtenues à l'Exemple 5 ci-dessus sont repiquées en milieu constitué par de l'extrait de terre ou par de l'extrait de pommes de terre, permettant ainsi d'obtenir la multiplication des formes 2 t celles-ci, repiquées et clonées sur un milieu constitué par de l'extrait de pommes de terre gélosé, donnent des cultures de tormes 2, d'entretien facile. EXEMPLE Il Les souches lépreuses obtenues à 1'Exemple 6 sont repiquées en extrait de terre ou en extrait de pommes de terre. Les formes 2 issues des BAAR se multiplient s on repique sur extrait de pommes de terre gélosé comme dans l'Exemple 10 ci-dessus. EXEMPLE 12 Les formes 2 sporulées obtenus à l'Exemple 7 sont clonées, puis entretenues sur un milieu constitué par de l'ex- trait de pommes de terre gélosé. EXEMPLE 13 Les souches lépreuses obtenues à l'Exemple 8 sont repiquées en extrait de terre ou en extrait de pommes de terre ; les formes 2 obtenues sont ensuite repiquées sur extrait de pommes de terre gélosé (EPG). EXEMPLE 14 Les souches lépreuses obtenues aux Exemples 1 à 4 sont repiquées dans un milieu liquide constitué par une solution qui a la même composition minérale que le milieu de l'Exemple 9, mais dans laquelle l'huile de paraffine est remplacée par du squalène à raison de 2,5 ml p.mille. Les souches lépreuses sont entretenues dans le milieu ci-dessus pendant 5-6 semaines au bout desquelles, lorsque la multiplication des germes a atteint 2 à 3.1ou unités formant colonies/ml, on récolte une culture mixte contenant des BAAR, des iormes cyanopniles pré-AR et des formes inframicroscopiques. EXEMPLE 15 Les souches lépreuses obtenues à l'Exemple 1 sont repiquées dans un milieu solide constitué par du milieu de Sbhngen additionné d'huile de paraffine, gélosé, et sont entretenues comme décrit à 1'Exemple 14 ci-dessus, pour obtenir une culture mixte contenant des BAAR et des formes cyanophiles pré-AR. EXEMPLE 16 Les souches lépreuses obtenues à l'Exemple 1 sont repiquées dans un milieu liquide constitué par du milieu de Söhngen- huile de paraffine-suspension-dilution de terre (S-HP-T) qui a la composition suivante K2HP04 0,5 g MgSO4, 7H20 , 0,2 g NH4Cl 1.................. 0,5 g Na2CO3............................................. traces Suspension-dilution de terre préalablement stériliseée............................................. 2 ml Eau distillé q.s.p................................. 1 000 ml pH = 6,8 Les souches lépreuses sont entretenues dans ce milieu comme décrit à l'Exemple 14, pour obtenir une culture mixte contenant des BhAR et des formes cyanophiles pré-AR. EXEMPLE 17 Les souches lépreuses obtenues à l'Exemple 1 sont repiquées dans un milieu au formate (S-F) qui présente la com-position suivante K2HPO4............................................. 0,5 g MgSO4, 7H2O........................................ 0,2 g NH4Cl 0,5 g Na2C03 traces Formate de Na..................................... 3,4 g Suspension-dilution de terre filtrée (et préala blement autoclavée) obtenue à partir d'un filtrat provenant de la macération de 400 g de terre de jardin dans 500 ml d'eau distillée > 2 ml Eau déminéralisée qap............................. 1 000 ml Ce milieu, stérilisé à 120 C pendant 20 mn, a un pH de 6,8. Après développement des cultures dans le milieu cidessus, pendant 3 mois, celles-ci sont repiquées dans un milieu au sulfate ferreux tS-SF) qui présente la composition suivante Solution A K2HP04 0,5 g MgSO4,7H2O........................................ 0,2 g NH4Cl............................................. 0,5 g Eau distillée..................................... 1 000 ml On stérilise à 1200c pendant 20 mn. Solution B (solution mere) NaH CO3........................................... 15 g Eau distillée..................................... 200 ml On stérilise par filtration Seitz. On ajoute stérilement 1 ml de la solution B à la solution A. Solution C solution mere) FeSO4, 7H2O....................................... 0,49 g Eau distillée..................................... 100 ml On stérilise par tiltration Seitz. On ajoute stérilement lo ml de la solution C à la so- lution A. pH final = 7,3. Après développement des cultures dans ce milieu pendant 8 semaines. on repique celles-ci dans un milieu au sulfate ferreux gélosé (S-SF-G), qui présente la composition suivante - Solution A du milieu S-SF gélosée à 20 p.mille et stérilisée à 120 C pendant 20 mn. - on aboute stérilement les solutions B et C du milieu S-SF. à la solution A gélosée, refroidie à 600C. Les cultures développées sur S-SF-G sont recueillies, lorsque la multiplication a recouvert le milieu solide (4 mg/ml poids frais), en vue de la préparation de vaccins conformes à l'invention. Les cultures développées sur le milieu S-SF-G peuvent être lyophilisées d1une manière connue en elle-même, pour être conservées à volonté, préalablement à la préparation des vaccins conformes à l'invention. Les cultures développées sur S-SF-G sont repiquables en milieux S-BP et S-SL dans lesquels elles produisent des cultures abondantes. EXEMPLE 18 Les souches lépreuses développées en milieux S-HP ou S-SL conformément aux Exemples I et 2 ci-dessus, sont repiquées dans un milieu d'extrait de pommes de terre gélosé (EPG), présentant la composition suivante s Jus de pomme de terre, précipité a l'autoclave à 120 C et filtré................................. 200 ml Eau distillée..................................... 800 ml Gélose 20 g dont le pH est ajusté à 6,8 à l'aide de Na0H. Lorsque les cultures développées dans ce milieu ont donné une culture abondante a la surface du milieu nutritif solide, au bout de 4 jours. on récolte des cultures composées uniquement de formes cyanophiles pré-AR. Les cultures ainsi obtenues sont aisément lyophilisables. Ces cultures sont repiquables en milieu S-SL, dans lequel elles donnent des cultures formées presque uniquement de BAR. EXEMPLE 19 L'on obtient également des cultures composées uniquement de formes cyanophiles pré-AR1 en développant des souches lépreuses obtenues à l'Exemple I ou à l'Exemple 2, sur un milieu d'Eugonagar BBL pendant 4 jours. Ces cultures sont repiquables en milieu S-SL, dans lequel elles donnent des cultures formées presque uniquement de BAAR. EXEMPLE 20 L'on obtient également des cultures composées uniquement ae formes cyanophiles pré-AR1 en développant aes soucnes lépreuses obtenues à l'Exemple 1 ou à l'Exemple 2. sur du milieu de Söhngen additionné de conjonctive d'oeil de zébu et d'extrait de levure à 0,05 %, en 8 à 10 jours. EXEMPLE 21 L'on obtient des cultures composées uniquement ae formes cyanopniles pré-AR, en développant des soucnes lépreuses obtenues à l'Exemple 1 ou à l'Exemple 2, sur du milieu de Sonnyen additionné de cornée d'oeil de zébu et d'extrait ae levure a 0,05 %, en 8 à 10 jours. EXEMPLE 22 L'on obtient des cultures composées uniquement de formes cyanophiles pré-AR, en développant des souches lépreuses obtenues à l'Exemple I ou à l'Exemple 2 sur du milieu de Söhngen additionné d'iris d'oeil de zébu et d'extrait de levure à 0,05 % en 8 à 10 jours. EXEMPLE 23 Des souches lépreuses obtenues conformément à l'Exemple 5 ou à l'Exemple 8 sont entretenues sur un milieu constitué par de l'extrait de pommes de terre gélosé (EPG) dont la composition est donnée à l'Exemple 16 ci-dessus. On poursuit la culture-pendant 4 jours afin d'obtenir les formes 2 sporulées. On les recueille atin de préparer des suspensions à 4 my/ml (poids frais). EXEMPLE 24 Des souches lépreuses obtenues conformément aux Exemples 5 à 8 sont entretenues dans le milieu suivant Bouillon-Coeur-Cervelle BBl........................... 80 ml Sérum de cheval....................................... 20 ml On poursuit la culture pendant 48 heures jusqu'à ce que la multiplication ait atteint une densité optique égale à 0.75 a 500 m au spectrophotocolorimètre COLEMAN, pour obtenir des cultures de tormes 2 ou post-AR sous formes de bâtonnets ou de longs filaments. III - EXEMPLES DE PREPARATION DE CULTURES DE FORMES INFRAMICROS- COPIOUES,OU FORMES 3, PAR ENSEMENCEMENT DE MILIEUX APPRO PRIES EXEMPLE 25 Des cultures de BAR agées sont filtrées sur une membrane Millipore 0,45 : le filtrat obtenu est ensemencé dans un milieu S-SL, ce qui provoque le développement d'une culture des formes 3, ou formes inframicroscopiques,-qui est recueillie lorsque son taux de multiplication donne une densité optique (D.O.) égale à 0,28 à 350 m au spectrophotocolorimetre COLEMAN, après 3 a 4 mois de culture. EXEMPLE 2. Des cultures de BAAR agées sont filtrées sur une membrane Millipore 0,45 , le filtrat obtenu est ensemencé dans un milieu NC, qui présente la composition suivante Fragment de nert..................................... 0,20 g (nerf de zébu du Sénégal) Eau déminéralisée.................................... 100 ml pH non ajusté environ 5,4. On autoclave 20 minutes à 120 C. Après 3 ê'4 mois, on obtient une culture constituée uniquement de formes inframicroscopiques donnant une couche superficielle de 4 à 5 mm dans des flacons de 500 ml renfermant 100 ml de milieu. EXEMPLE 27 Des cultures de BAAR âgées sont filtrées sur une membrane Millipore 0,45 ; ; le filtrat obtenu est ensemencé dans un milieu NC-SL présentant la composition suivante Fragment de nerf..................................... 0,20 g (nerf de zébu du Sénégal) Squalène............................................. 0,25 ml Eau déminéralisée 100 ml Ce milieu qui est à pH 6,8 est mis dans des flacons de 100 ml, et ensemencé de 5 gouttes de filtrat. Le développement de la culture est poursuivi jusqu'à ce que la multiplication des germes ait donné une couche 'super- ficielle de 4-5 mm t on obtient des cultures qui se composent uniquement de cultures de formes 3 ou formes inframicroscopiques. EXEMPLE 28 On obtient des cultures de formes 3 ou formes inframicroscopiques en procédant comme décrit a l'Exemple -précédent, mais en remplaçant le milieu de culture par le milieu suivant (NC-SL-SV) s Fragment de nert..................................... 0,20 g (nerf de zébu du Sénégal) Squalene.............................................. 0,25 ml Extrait de levure..................................... 0,05 % Eau déminéralisée..................................... 100 ml pH 6,8. EXEMPLE 29 Des cultures de BAAR lysées sur milieu de Loewenstein sont filtrées sur membrane Millipore 0,45 p 7 le filtrat obtenu est ensemencé sur milieu de Sôhngen additionné d'iris d'oeil de zébu, d'extrait de levure a 0,05 % et de facteur de croissance préparé a partir de cultures agrées de BAAR, présent à raison de 0,2 ml %. Après 8 a 15 jours, correspondant au début de lyse des fragments d'iris, la culture est constituée de formes 3. Si l'on prolonge la culture, il apparat des formes cyanophiles de tres petite taille. EXEMPLE 30 Des cultures de BAAR et de formes cyanophiles pré-AR obtenues conformément à l'Exemple 16, sont repiquées sur milieu de Loewenstein-Jensen lysé, pour donner des formes 3, filtrables. EXEMPLE 31 Les cultures obtenues en mettant en oeuvre les modes opératoires décrits aux Exemples 9 a 29 sont tuées, en vue de la préparation de vaccins, par tous moyens appropriés, et notamment par traitement thermique a 1200C pendant O H 30, ou par introduction d'agents chimiques dans les cultures, et notamment par introduction de chlorotòrme, de formol ou d'éther. Le chloroforme et l'éther sont aJoutés aux germes recueillis, à raison de 2 volutes/1 volume ; on agite, on laisse en contact pendant 4 jours, on provoque l'évaporation du solvant. Lorsque l'agent de stérilisation chimique mis en oeuvre est du formol, l'on procède comme suit : on ajoute aux germes recueillis, du formol a 10 % à raison de 2 volumes/1 volume. On agite, on laisse en contact pendant 4 jours, on centrifuge et on lave à l'eau physiologique. IV - PREPARATION DE VACCINS POLYVALENTS CONTRE LA LEPRE. EXEMPLE 32 On prépare un vaccin contenant des BAAR, des formes cyanophiles pré-AR et des formes inframicroscopiques,par ensemencement de milieux S-HP ou S-SL (cf. Exemples 1 et 2) par du sérum lépreux, repiquages des souches lépreuses obtenues, sur de nouveaux milieux de meme composition (S-HP ou S-SL). La teneur en germes de ces vaccins est de 3.106 unités formant colonies (UFC) par ml. EXEMPLE 33 On prépare un vaccin contenant des BAAR, des formes cyanopniles pré-AR, des formes inframicroscopiques et des formes 2, qui ont été cultivées et repiquées séparément dans des milieux S-HP ou S-SL pour les BAAR, les formes cyanophiles pré-AR et les formes inframicroscopiques, dans un milieu EPG pour les formes 2. La teneur en germes de ces vaccins est de 3.106 UFC/ml pour les BAAR, les formes cyanophiles pré-AR et les formes 3, et de 5,1O5 UFC/ml pour les formes 2. EXEMPLE 34 L'on obtient un vaccin dans lequel la teneur en formes cyanophiles pré-AR a été renforcée, par mélange du vaccin décrit à l'Exemple 32 avec un vaccin contenant des formes cyanophiles pré-AR, qui a été repiqué dans un milieu EPG. La teneur en germes de ce vaccin est la suivante 3.106 UFC/ml pour les BAAR, les formes cyanophiles pré-AR et les formes 3, 5.105 UFC/ml pour les formes cyanophiles pré-AR obtenues par re piquages en milieu EPG. EXEMPLE 35 On prépare un vaccin dans lequel la teneur en formes inframicroscopiques a été renforcée, par- mélange du vaccin décrit à i'Exemple 32, avec un vaccin contenant des formes 3, -le vaccin de l'Exemple 32 ayant été obtenu par culture d'inoculums lépreux et repiquages des souches obtenues, dans des milieux S-HP ou S-SL, tandis que le vaccin contenant uniquement les for- mes 3 a été obtenu par ensemencement d'inoculums lépreux dans des milieux S-HP ou S-SL. Pour préparer le vaccin à teneur renforcée en formes iniramicroscopiques, on ajoute au vaccin de l'Exemple 32, 0,5 ml d'une suspension de formes 3 de densité optique (DO.) égale à 0,28 à 350 m au spectrophotocolorimAtre de COLEMN. EXEMPLE 36 On prépare un vaccin contenant uniquement des formes inframicroscopiques,ou formes 3,par ensemencement d'inoculums lépreux dans des milieux NC,NC-SL ou NC-SL-LV;on prélève la couche superficielle,qui est utilisée à la dose de 0,5 ml pour renforcer le vaccin préparé selon l'Exemple 32. EXEMPLE 37 On prepare un vaccin dans lequel la teneur en formes cyanophiles pré-AR et en formes 3 a été renforcée, en mélangeant le vaccin obtenu à l'Exemple 34 avec un vaccin contenant uniquement des formes 3, le vaccin de l'Exemple 34 étant obtenu par culture dans des milieus S-HP ou*S-SL, puis repiquage dans un milieu EPG, tandis que le vaccin contenant uniquement des formes 3 est obtenu comme décrit à llExemple 35 ou à l'Exemple 36. L'on ajoute au vaccin obtenu à l'Exemple 34, 0,5 ml d'une suspension de formes 3 dont la densité optique mesurée au spectrophotocolorimètre de COLEME, est égale à 0,28 à 350 m > i.- V - TESTS D'IDENTIFICATION DES SOUCHES LEPREUSES OBTENUES CON FORMEMENT A L'INVENTION. 1) Les soucnes lépreuses obtenues conformément à l'invention,par ensemencement de milieux sélectifs, et en particulier de milieux sélectifs pauvres (notamment S-HP et S-SL) représentent une espèce nouvelle - régulierement isolée à partir des patients lépreux, - isolée à plusieurs reprises chez un même sujet lé preux: 2) Les souches lépreuses obtenues conformément à l'i- vention, par ensemencement de milieux sélectifs pauvres (en particulier S-HP et S-SL) contiennent des acides mycoliques en C22 et C24, dont la teneur en carbone correspond à celle des acides mycoliques présents chez les bacilles de Hansen récoltés à partir de lépromes humains, et mis en évidence par ETEMADI et CONVIT (Infection and Immunity, 1974, 10 , pages 236-239).Ces données sont en faveur de l'identité des souches lépreuses obtenues conformément à l'invention, avec Mycobacterium leprae. 3) Les souches lépreuses obtenues conformément à l'invention sont sensibles aux antibiotiques et aux agents thérapeutiques anti-lépreux classiques, les résultats ainsi obtenus étant parallèles aux résultats obtenus en clinique numaine, ainsi que dans le test d'infection expérimentale du coussinet plantaire de la souris. 4) La sensibilité des souches lépreuses obtenues conformément à l'invention aux bromures de phosphonium, qui sont des produits de synthèse chimique, est identique à la sensibilité de suspensions de bacilles de Hansen issus de lépromes humains, vis-à-vis des mêmes produits. Les bromures de phosphonium, qui exercent une activité anti-bactérienne très intense sur les souches lépreuses obtenues conformément à l'invention, se sont avérés exercer une activité anti-bactérienne très minime sinon inexistante sur les autres mycobactéries testées à titre comparatif, a savoir : sflycobacterium tuberculos is, Mycobacterlum thamnopheos, Nycobacterium smegmatis et Mycobacterium phlei. 5) Le test d'allergie à la lépromine, mis au point pour le bacille de Hansen, a été utilisé pour déterminer l'identité des soucnes lépreuses conformes à l'invention : ce test d'allergie s'est révélé positif en ce que les cobayes préalablement inoculés avec les souches lépreuses conformes à l'invention, ont réagi fortement à l'injection ultérieure de lépromine. VI - COTE-RENDU DE TESTS D'EFFICACITE DES VACCINS POLYVALENTS CONFORMES A L'INVENTION. Les rechercnes sur la lèpre cumulent toutes les dit cultés - essais de culture du bacille de Hansen infructueux pendant cent ans, - absence d'animal sensible, à l'exception du tatou (animal rare) chez lequel la maladie, dans les cas favorables, se déclare alors trois ans d'incubation. La lèpre est-une attention essenttellement humaine. Afin de vériiier cependant l'activité immunisante des germes conformes à la présente invention, ne expérimentation sur les souris a été effectuée de la manière suivante A - Vérification de l'activité immunisante des vaccins contormes ------------------------------------------------------ à l'invention. Des lots de 10souris âgées d'un mois ont été vaccinés avec 3 injections de vaccin contenant des BAAR et des bacil les cyanophiles, tués par divers procédés : chaleur, chloro forme, éther (0,1 ml d'une suspension contenant 4 mg de ger mes par ml). L'injection d'épreuve comportait de 150 000 à 200 000 germes -virulents. Après un an, les animaux ont été sacritiés. Ce temps a été choisi par comparaison avec la durée des expérimentations effectuées sur les coussinets plantaires. Le rapport poids de la rate poids de la souris a donné les résultats suivants 1) vaccin tué au chloroforme O,o019 2) vaccin tué à l'éther 0,0021 3) vaccin tué à la chaleur 0,0028 43 souris non vaccinées et inoculées 0,0032 Il semble donc que le vaccin tué au chloroforme ait bloqué au mieux l'infection ou favorisé la disparition des yermes puisque les rates présentent le plus petit volume, ce qui traauirait la non-nécessité d'une activité de défen se immunitaire. B - Vérification de la tolérance des vaccins conformes à l'inven tion. 1) 4 lapins pesant de 2,100 kg à 2,500 kg ont reçu 5 injec tions alternativement sous-cutanées et intra-péritonéales, de 0,5 ml d'une suspension de BAAR, formes cyanophiles pré-AR et formes 3 contenant environ 4 milliards UFC/ml (tués par la chaleur). Aucune intolérance n'a été observée. 2) 6 cobayes ont reçu deux injections sous-cutanées de 0,2 ml d'une suspension de BAAR, formes cyanophiles pré-AR et tormes 3 (tués par la chaleur), à la concentration de 4 mg/ml. Aucune intolérance n'a été observée. 3) 120 souris ont reçu 4 injections sous-cutanées de 0,1 ml d'une suspension de BAAR, formes cyanophiles pré-AR et formes 3 (tués par la cnaleur), à la concentration de 4 mg/ml. Aucune intolérance n'a été observée. 4) 150 souris ont reçu 2 injections intra-péritonéales de 0,1 ml d'une suspension de formes 2, à la concentration de 4 mg/ml. Aucune intolérance n'a été observée. Il résulte ae la description qui précède que, quels cue soient les modes de mise en oeuvre, de réalisation et d'application adoptés, l'on obtient des vaccins polyvalents contre la lèpre et leurs procédés de préparation, qui présentent par rapport aux tentatives de l'Art antérieur, l'avantage de permettre la mise au point de vaccins polyvalents efficaces contre la lèpre, sur le plan prophylactique, lesdits vaccins étant efficaces à l'égard de toutes les formes de lèpre en raison de la pos sibilité de faire varier à volonté leurs compositions en les différentes formes du cycle végétatif et évolutif du bacille de Hansen.Les vaccins polyvalents contre la lèpre conformes à la présente invention, présentent, en outre, l'avantage de pouvoir être obtenus par des procédés relativement simples, applicables a l'échelle industrielle, en utilisant des milieux nutritifs relativement peu comateux et permettant d'obtenir des cultures de germes dans des délais relativement rapides, et d'o- tenir des vaccins pratiquement exempts de risques de souillure par leurs milieux de culture. Ainsi que cela ressort de ce qui précède, l'invention ne se limite nullement à ceux de ses modes de mise en oeuvre, de réalisation et d'application qui viennent d'être décrits de façon plus explicite ; elle en embrasse au contraire toutes les variantes qui peuvent venir à l'esprit du technicien en la matière, sans s'écarter du cadre, ni de la portée, de la présente invention. REVENDICATIONS 1. Vaccins polyvalents contre la lepre, caractérisés en ce qu'ils sont constitués par au moins l'une des formes du bacille de Hansen, à savoir BAAR, formes cyanophiles, forme 2, forme 3 ou par des mélanges déterminés de plusieurs ou de toutes ces formes, obtenus initialement par culture dans des milieux de culture sélectifs appropriés,d'inoculums lépreux pris dans le groupe qui comprend notamment les sérums lépreux, les suspensions bacillaires issues de lépromes, les filtrats de suspensions bacillaires issues de lépromes (non traités par les décontamiantes), les broyats de léprides, les filtrats de cultures de BAAR lysées sur milieu de Loewenstein, les cultures de BAAR agées, lesdits inoculums étant utilisés séparément ou en mélanges, puis repiquages des souches lépreuses obtenues, dans des milieux d'entretien appropriés et arrêt de la multiplication des cultures par tous procédés de stérilisation appropriés, et mise sous forme de doses unitaires applicables à la prophylaxie de la lèpre. 2. Vaccins polyvalents contre la lepre, selon la Revenaication i, caractérisés en ce qu'ils sont constitués par l'association de formes BAAR avec des formes cyanophiles précurseurs des BAAR et des formes inframicroscopiques obtenues par culture d'inoculums lépreux sur des milieux sélectifs appropriés, repiquages des souches lépreuses obtenues, sur des milieux d'entretien adéquats et arrêt des cultures par des moyens de stérilisation appropriés. 3. Vaccins polyvalents contre la lèpre, selon la Revendication 1, caractérisés en ce qu'ils sont constitués par l'association de formes BER avec des formes cyanophiles précurseurs des BAZAR, obtenues par culture d'inoculumslépreux sur des milieux sélectifs appropriés, repiquages des souches lépreuses obtenues, sur des milieux tentretien adéquats et arret des cultures par des moyens de stérilisation appropriés. 4. Vaccins selon la Revendication 1, caractérisés en ce qu'ils sont constitués par- des formes cyanophiles précurseurs des BAR, obtenues par culture d'inoculums lépreux sur des milieux de culture sélectifs appropriés, repiquages des soucheslépreuses obtenues, sur des milieux d'entretien adéquats et arrêt des cultures par des moyens de stérilisation appropriés. 5. Vaccins selon la Revendication 1, caractérisés en ce qu'ils sont constitués par des formes 3, ou formes inframicroscopiques, obtenues par culture d'inoculums lépreux dans des milieux de culture sélectifs appropriés, repiquages des souches lépreuses obtenues, sur des milieux d'entretien adéquats et arrêt des cultures par des moyens de stérilisation appropriés. 6 . Vaccins selon la Revendication 5, caractérisés en ce qu'ils sont constituée par des formes 3 ou formes inframicros- piques, obtenues par culture d'inoculums lépreux dans des milieux de culture sélectifs appropriés, puis arret des cultures par des moyens de stérilisation appropriés, lorsqu'elles ont atteint le degré de multiplication voulu. 7. Vaccins selon la Revendication 5, caractérisés en ce qu'ils sont constitués par des formes 3, ou formes inframicroscopiques, obtenues par culture d'inoculums lépreux dans des milieux de culture sélectifs appropriés, repiquages des souches lépreuses obtenues, sur un milieu d'entretien adéquat fournissant des cultures de BAR, ultrafiltration desdites cultures de BER, culture du filtrat obtenu dans un milieu de culture adéquat et arret de la culture par des moyens de stérilisation appropriés. 8. Vaccins selon la Revendication 5, caractérisés en ce qu'ils sont constitués par des formes 3, filtrables, obtenues par culture d'inoculums lépreux dans des milieux de culture sélectifs appropriés, repiquages des souches lépreuses obtenues, sur un milieu d'entretien adéquat fournissant des cultures de BAR et de formes cyanophiles pré-AR, repiquages desdites cultures de BAR et de formes cyanophiles pré-AR dans un milieu de culture adéquat et arret de la culture par des moyens de stérilisation appropriés. 9. Vaccins selon la Revendication 1, caractérisés en ce qu'ils sont constitués par des formes 2 ou post-acido-résistantes, obtenues par culture d'inoculums lépreux dans des milieux de culture sélectifs appropriés, repiquages des souches lépreuses obtenues, sur des milieux d'entretien adéquats et ar ret des cultures par des moyens de stérilisation appropriés. 10. Vaccins selon la Revendication 1 caractérisés en ce qu'ils sont constitués par des formes 2 sporulées, obtenues par culture d'inoculums lépreux dans des milieux de culture sélectifs appropries, repiquages des souches lépreuses obtenues sur des milieux d'entretien adéquats et arret des cultures par des moyens de stérilisation appropriés. il. Procédé Qe préparation de vaccins polyvalents contre la lepre, selon l'une quelconque des Revendications 1 à 8, caractérisé en ce que - des inoculums lépreux prélevés chez des malades atteints de lèpre lépromateuse, de lèpre tuberculode ou autre forme de lèpre, sont ensemencés dans un milieu sélectit approprié et incubés pendant trois semaines à trois mois au bout desquels on récolte une culture, qui est la souche lépreuse et qui renferme tout d'abord des formes inframicroscopiques en voie de développement, auxquelles viennent s'ajouter, suivant l'age de la culture, des formes cyanophiles pré-AR et des bacilles cido-résistants t - en ce que la culture récoltée est repiquée dans un milieu d'entretien sélectif approprié, dont la composition est choisie en fonction de la forme ou de-l'association de formes que l'on vise à obtenir, dans lequel elle est entretenue pendant 48 h à 6 semaines au bout desquelles on constate une multiplication abondante des germes recherchés, qui se traduit en milieu liquide par une multiplication d'au moins 2 à 3 milliards de germes ou d'unités formant colonies/ml de milieu liquide, et, en milieu solide, par la formation d'une couche épaisse de culture microbienne ; - et en ce que la culture ayant atteint ce stade de multiplication, est arrêtée par tous moyens de stérilisation appropriés, tels qu'action de la chaleur, agents de stérilisation chimiques, - après quoi les cultures tuées, et éventuellement lyophilisées, sont mises sous forme ae doses unitaires utilisables comme vaccins. 12 . Procédé selon la Revendication 11,caractérisé en ce que le nilieu d'ensemencement d'inoculums lépreux pour l'obtention de soucheslépreuses,est constitué par un milieu liquide comprenant du milieu de Söhngen, qui est un milieu contenant des sels minéraux, connu en lui-meme, additionné d'huile de paraffine, éventuellement ultrasonée, dans une proportion comprise entre 2,0 et 20 ml environ par litre, en solution aqueuse. 13 . Procédé selon la Revendication 11,caractérisé en ce que le milieu d'ensemencement d'inoculums lépreux pour l'obtention de souches lépreuses, est constitué par un milieu liquide comprenant du milieu de Söhngen et du squalene présent à raison de 2,0 à 20 ml environ par litre, en solution aqueuse. 14 . Procédé selon la Revendication 11,caractérisé en ce que le milieu d'ensemencement d'inoculums lépreux pour l'obtention de soucnes lépreuses, est constitué par de l'extrait de pom mes de terre additionné de squalène, à raison de 2,0 à 20 ml environ par litre, en solution aqueuse, à 5 à 25 % environ d'extrait de pommes de terre. 15 . Procédé selon la Revendication 11, caractérisé en ce que le milieu d'ensemencement d'inoculums lépreux pour l'obtention de soucnes lépreuses, est constitué par de l'extrait de cordon ombilical humain additionné d'huile de paraffine, éventuellement ultrasonée, à raison de 2,0 à 20 ml environ par litre, en solution aqueuse. 16 Procédé selon la Revendication 11,caractérisé en ce que le milieu d'ensemencement d'inoculums lépreux pour l'obtention de souches lépreuses, est constitué par du milieu de Söhngen additionné de fragments d'oeil de mammifères (notamment de fragments d'iris et/ou de cornée et/ou de conjonctive et/ou de nerts optiques), et d'extrait de levure à 0,05 % environ. 17-. Procédé selon la Revendication 11, caractérisé en ce que le milieu d'ensemencement d'inoculums lépreux pour l'obtention de souches lépreuses, est constitué par du milieu de Sôhngen aaditionné de fragments d'oeil de mammifères (notamment d'iris et/ou de cornée et/ou de conjonctive et/ou e nerfs optigues), d'extrait de levure à 0,05 % environ et de facteur de croissance obtenu à partir de souches lépreuses acido-résistantes traitées de façon appropriée, lequel facteur de croissance est présent,de préiérence, à raison de 0,2 ml %' environ. 18. A titre de produit industriel nouveau utile pour la préparation de vaccins selon l'une quelconque des Revenaications 1 à 9, le facteur ae croissance présent dans lesiuilieux d'ensemencement d'inoculums lépreux selon la Revendication 14. 19. Procédé -. de préparation du tracteur de croissance selon la Revendication 18, caractérisé en ce que des soucnes de Mycobacterium leprae, et notamment des cultures âgées de BAAR, sont entretenues sur extrait de pommes de terre gélosé, puis repiquées en milieu de Söhngen additionné de squalene, les cultures ainsi obtenues par repiquages étant ensuite traitées, après culture pendant une quinzaine de jours environ, par 3 à 8 ,~ environ d'un alcool intérieur, puis stériliaées et filtrées sur mem- brane. 20 . Procédé selon la Revendication 11, caractérisé en ce que le milieu d'ensemencement d'inoculums lépreux pour l'obtention de soucnes iépreuses, est constitué par un milieu végétal compre nant une décoction aQueuse cie bois de palmier séché, à 2,5 % en- viron de bois sec. 21 , Procédé selon la Revendication 11, caractérisé en ce que le milieu d'ensemencement d'inoculums lépreux pour l'obtention de souches lépreuses, est constitué par une solution aqueuse contenant du milieu de Söhngen additionné de 2,0 à 20 ml environ par litre d'huile de paraffine et d'un agent tensio-actif, essentiellement constitué par des glycolipides, présent à raison de 5 à 30 mg par litre environ. 22. Procédé selon la Revendication 11, caractérisé en ce que le milieu d'ensemencement d'inoculums lépreux pour l'obtention de souches lépreuses, est constitué par du milieu de Söhngen additionné d'nuile de paraffine à raison de 2,0 à 20 ml environ par litre, de milieu coeur-cervelle à raison de 0,20 à 0,50 % environ, et de lait de coco à raison de 0,05 à 0,15 % environ. 23. Procédé selon la Revendication 11, caractérisé en ce que le milieu d'ensemencement d'inoculums lépreux pour l'obtention de soucnes lépreuses, est constitué par du liquide aspergilla ire, et plus particulièrement par du filtrat de culture d'Aspergillus fumigatus en milieu liquide, additionné de 20 à 30 % en vircn d'extrait de pommes de terre. 24. Procédé selon l'une quelconque des Revendications 11 à 23, caractérisé en ce que la culture obtenue par ensemencement d'inoculums lépreux dans un milieu sélectif approprié, est réalisée à une température comprise entre 30 et 370C, et à un pH compris entre 5,4 et 8. 25. Procédé selon la Revendication 11,caractérisé en ce que les soucnes lépreuses obtenues conformément à l'une quelconque des Revendications 12 à 24, sont entretenues dans un milieu constitué par une solution aqueuse contenant du milieu de Söhngen additionné d'huile de parattine présente à raison de 2,0 à 20 ml environ par litre, pour obtenir des cultures mixtes comprenant des BAAR, des formes cyanophiles pré-AR et des formes inframicroscopiques. 26. Procédé selon la Revendication 11,caractérisé en ce que les souches lépreuses obtenues conformément à l'une quelconque des Revendication; 12 à 24, sont entretenues dans un milieu constitué par une solution aqueuse contenant du milieu de Söhngen additionné de squalène présent à raison de 2,0 à 20 ml environ par litre, pour obtenir des cultures mixtes comprenant des BAAR, des formes cyanopniles pré-AR et des formes inrramicroscopioues . 27. Procédé selon la Revendication 11+caractérisé en ce que les souches lépreuses obtenues conformément à l'une quelconque des Revendications 12 à 24, sont entretenues dans un milieu constitué par une solution aqueuse contenant du milieu de Sôhngen additionné de squalane présent à raison de 2,0 à 20 ml environ par litre, pour obtenir des cultures mixtes comprenant des BAAR, des formes cyanophiles pré-AR et des formes inframicroscopiques. 28. Procédé selon la Revendication 11,caractérisé en ce que les souches lépreuses obtenues coniormément à l'une quelconque des Revendications 12 à 24, sont entretenues dans un milieu constitué par une solution aqueuse contenant du milieu de Sôhngen additionné de cétane présent à raison de 2,0 à 20 ml environ par litre, pour obtenir des cultures mixtes comprenant des BAAR, des formes cyanophiles pré-AR et des formes inframicroscopiques. 29. Procédé selon la Revendication 11,caractérisé en ce que les soucnes lépreuses obtenues conformément à l'une quelconque des Revendications 12 a 24, sont entretenues sur un milieu solide constitué par du milieu de Sohngen-huile de paraffine gélo sé. à 20 p. mille environ, pour obtenir des cultures mixtes comprenant des BAAR, des formes cyanophiles pré-AR et des formes inframicroscopiques. 30. Procédé selon la Revendication 11,caractérisé en ce que les souches lépreuses obtenues conformément à l'une quelconque des Revendications 12 à 24,sont entretenues dans un milieu solide au sulfate ferreux gélosé à 20 p.mille environ, pour obtenir des cultures mixtes comprenant des BAAR, des formes cyanopniles pré-AR et des formes inframicroscopiques. 31. Procédé selon la Revendication 11, caractérisé en ce que, préalablement à leur repiquage dans un milieu au sulfate ferreux gélosé, les souches lépreuses obtenues conformément a l'une quelconque des Revendications 12 à 24sont tout d'abord repiquées dans un milieu au formate, puis éventuellement dans un milieu au sulfate ferreux liquide. 32) Procédé selon la Revendication 11, caractérisé en ce que les souches lépreuses obtenues conformément à l'une quelconque des Revendications 12 à 24, sont entretenues sur un milieu de Söhngen-huile de paraffine-suspension-dilution de terre, pour obtenir des cultures mixtes de bacilles acido-résistants et de formes cyanophiles pré-AR. 33 . Procédé selon la Revenaication 11,caractérisé en ce que les soucies lépreuses obtenues conformément à l'une quelconque des Revendications 12 à 24, sont entretenues dans un milieu constitué par de l'extrait de pomme de terre gélosé à 20 % environ, dans l'eau, à pH 6,8 à 7,0 environ, pour obtenir des cultures composées uniquement de formes cyanophiles pré-AR. 34 . Procédé selon la Revendication 11,caractérisé en ce que les souches lépreuses obtenues conformément a 1' une quelconque des Revendications 12 à 24, sont entretenues dans un milieu Eugonagar BBL, pour obtenir des cultures composées uniquement de formes cyanophiles pré-AR. 35 . Procécié selon la Revendication 11,caractérisé en ce que les soucnes lépreuses obtenues conformément à l'une quelconque des Revendications 12 à 24,sont entretenues dans un milieu solide comprenant des extraits végétaux pris dans le groupe qui comprent notamment l'extrait de pommes de terre gélosé à 5-25 % environ, l'extrait de malt gélosé à 5-25 % environ, l'extrait d'algues, l'extrait de champignon, pour obtenir des cultures com posées uniquement de formes 2 ou post-AR. 36 . Procédé selon la Revendication 11,caractérisé en ce que les souches lépreuses obtenues conformément à l'une quelconque des Revendlcations 12 à 24,sont entretenues dans -un milieu solide constitué par de la gélose nutritive, pour obtenir des cultures composées uniquement de formes 2 ou post-AR. 37 . Procédé selon la Revendication 11,caractérisé en ce que essouches lépreuses obtenues conformément à l'une quelconque des Revendications 12 à 24,sont entretenues dans un milieu so lide constitué par le milieu connu sous la dénomination comme ciale de "Sporulating agar", pour obtenir des cultures composées uniquement de formes 2 ou post-AR. 38. Procédé selon la Revendication 11,caractérisé en ce que les soucnes lépreuses obtenues conformément à l'une quelconque des Revendications 12 à 24, sont entretenues dans un milieu liquide constitué par de l'extrait de terre, pour o b t e n i r des cultures composées uniquement de formes 2 ou post-AR. 39. Procédé selon la Revendication 11, caractérisé en ce que les soucnes lépreuses obtenues conformément a l'une quelconque des Revendications 12 à 24, sont entretenues dans un milieu liquide constitué par de l'extrait de pommes d e t e r r e, pour obtenir des cultures composées uniquement de formes 2 ou post-AR. 40. Procédé selon la Revendication 11, caractérisé en ce Que les soucies lépreuses obtenues conformément à l'une quelconque des Revendications 12 d 24, sont entretenues dans un milieu liquide constitué par le milieu connu sous la dénomination commerciale d"'Eugobroth", pour obtenir des cultures composées uniquement de formes 2 ou post-AR. 41 . Procédé selon la Revendication Il, caractérisé en ce que les souches lépreuses obtenues conformément à l'une quelconque des Revendications 12 à 24, sont entretenues dans un milieu liquide constitué par de l'extrait coeur-cervelle BBL contenant de 5 à 25 % de sérum de cheval, pour obtenir des cultures composées uniquement de formes 2 ou post-AR. 42. Procédé de préparation de vaccins polyvalents contre la lèpre selon la Revendication 6, caractérisé en ce que le développement des cultures de formes inframicroscopiques ou formes 3, est obtenu par ensemencement d'inoculums lépreux dans un milieu sélectif approprié, les cultures étant arrêtées lors- qu'elles ont atteint le degré de multiplication voulu, par des moyens de stérilisation appropriés. 43X. Procédé selon la Revendication 42, caractérisé en ce cue le développement des cultures de formes inframicroscopiques ou formes 3, est obtenu par ensemencement d'inoculums lépreux dns un milieu comprenant du milieu de Sönngen additionné d'huile de paraffine présente à raison d'environ 2,0 à 20 ml environ par litre, en solution aqueuse. 44. Procédé selon la Revendication 42, caractérisé en ce que le développement des cultures de formes inframicroscopiques ou formes 3, est obtenu par ensemencement d'inoculums lépreux dans un milieu constitué par une solution a 2 g p.mille environ de fragments de nerfs périphériques de mammiteres, à pH 5,4 à 6,0 environ. 45. Procédé selon la Revendication 42, caractérisé en ce que le développement des cultures de formes inframicroscopiques ou formes 3, est obtenu par ensemencement d' inoculums lépreux dans un milieu constitué par une solution aqueuse contenant environ 2 g p.mille de trayments de nerfs péripnériques de =.ammite- res, et 2,0 à 20 ml environ de squalene, à pH 5,4-7,0 environ. 46. Procédé selon la Revendication 42, caractérisé en ce que le développement des cultures de formes inframicroscopiques ou formes 3, est obtenu par ensemencement ii'inoculums lépreux dans un milieu constitué par une solution aqueuse à 2 g mille environ de fragments de nerfs périphériques de mammifêres et 0,05 à o,1 g p.mille environ d'extrait de levure, à pH 6 à 7 environ. 47. Procédé selon la Revendication 42, caractérisé en ce que le développement des cultures de formes inframicroscopiques ou formes 3, est obtenu par ensemencement d'inoculums lépreux dans un milieu constitué par du milieu de Söhngen additionné de fragments d'oeil de mammiteres,d'extrait de levure à 0,05 % environ, et du facteur de croissance selon la Revendication 15. 48. Procécé selon la Revendication 33 ou la Revendication 34, caractérisé en ce que les cultures de formes cyanophiles pré-AR obtenues, sont repiquées en milieu comprenant du milieu de Sôhngen additionné de squalêne, pour donner des-cultures formées presque uni BRAR. 49. Procédé selon l'une quelconque des Revendications Il à 48, caractérisé en ce que les cultures développées dans des milieux d'entretien ou de culture selon 1-' une quelconque des Revendications 25 à 48, sont arrêtées lorsque la multiplication des germes recherchés a atteint une proportion qui se traduit, en milieu liquide, par une multiplication d'au moins 2 à 3 milliards de germes ou d'unités formant colonies/ml de milieu liquide, et en milieu solide par la formation d'une couche épaisse de culture microbienne, par tous procédés de stérilisation appropriés, et notamment par traitement thermique ou par action de divers agents cnimiques pris dans le groupe qui comprend en particulier, le chloroforme, l'éther, le formol, la ss-propiolactone. 50. Procédé selon la Revendication 49, caractérisé en ce que les cultures tuées par stérilisation, sont lyophilisées. 51. Procédé selon la Revendication 49 ou la-Revendication 50, caractérisé en ce que les cultures tuées par stérilisa- tion et éventuellement lyophilisées, sont mises sous forme de doses unitaires en vue de leur utilisation comme vaccins polyvalents contre la lèpre. 52. Cultures de souches lépreuses obtenues en mettant en oeuvre le procédé selon l'une quelconque des Revendications Si à 51. 53. Cultures de Mycobacterium S5 R14 LT selon la Revendication 52, correspondant à une culture mixte de bacilles acidorésistants et de formes cyanophiles pré-AR,obtenuesen mettant en oeuvre le procédé selon la Revendication 32, déposées auprès de la Collection de Cultures de Microorganismes tenue par le Laboratoire de MICROBIOLOGIE de DELFT, PAYS-BAS, sous le nO LMD 78.6, en date du 14 Mars 1978. 54. Cultures de Mycobacterium S10 R14 LT selon la Revendication 52, correspondant à une culture mixte de BAAR et de formes cyanophiles pré-AR, obtenues en mettant en oeuvre le procédé selon la Revendication 32, déposées auprès de la Collection de Cultures de Microorganismes tenue par le Laboratoire de MICROBIO LOGIE de DELFT, PAYS-BAS, sous le nO LMD 78.7, en date du 14 Mars 1978. 55. Cultures de Mycobacterium S5 R14 LT-CY selon la Revendication 52, correspondant à une culturede formes cyanophiles, obtenues en mettant en oeuvre le procédé selon la Revendication 33 ou la Revendication 34, déposées auprès de la Collection de Cultures de Microorganismes tenue par le Laboratoire de MICROBIOLOGIE de DELFT, PAYS-BAS, sous le nO LMD 78.8, en date du 14 Mars 1978. 56. Cultures de Mycobacterium S10 R14 LT-CY selon la Revendication 52, correspondant à une culture de formes cyanophiles, obtenues en mettant en oeuvre le procédé selon la Revendication 33 ou la Revendication 34, déposées auprès de la Collection de Cultures de Microorganismes tenue par le Laboratoire de MICROBIOLOGIE de DELFT, PAYS-BAS, sous le nO LMD 78.9, en date du 14 Mars 1978. 57. Cultures de Mycobacterium DIAW-LT selon la Revendication 52, correspondant à une culture de formes 2 sporulées, obtenues à partir d'inoculums lépreux ensemencés sur du liquide aspergillaire, selon la Revendication 23, déposées auprès de la Collection de Cultures de Microorganismes tenue par le Laboratoire de MICROBIOLOGIE de DELFT, PAYS-BAS, sous le nO LMD 78.10, en date du 14 Mars 1978. 58. Cultures de Mycobacterium LD - LL selon la Revendication 52, correspondant à une culture-de formes 2 sporulées, obtenues à partir d'inoculums lépreux ensemencés sur du liquide aspergillaire, selon la Revendication 23, déposées auprès de la Collection de Cultures de Microorganismes tenue par le Laboratoire de MICROBIOLOGIE de DELFT, PAYS-BAS, sous le n" LMD 78.11, en date du 14 Mars 1978. 59. Cultures de Mycobacterium S5 R14 LT - F3 selon la Revendication 52, correspondant à une culture de formes 3 filtrables, obtenues en mettant en oeuvre le procédé selon la Revendication 47, déposées auprès de la Collection de Cultures de Microorganismes tenue par le Laboratoire de MICROBIOLOGIE de DELFT, PAYS-BAS, sous le n LMD 78.12, en date du 14 Mars 1978. 60. Cultures de Mycobacterium S10 R14 LT - F3 selon la Revendication 52, correspondant à une culture de formes 3, filtrables, obtenues en mettant en oeuvre le procédé selon la Revendication 47, déposées auprès de la Collection de Cultures de Microorganismes tenue par le Laboratoire de MICROBIOLOGIE de DELFT, PAYS-BAS, sous le n L2dD 78.13, en date du 14 Mars 1978.