Brevet FR2400029A1 — publié le 19790309

De nouveaux carboxamides en C-3 de la leurosine , de la leuroformine,de la 4-désacétyl-leurosine et de la 4-desacGtyl-leuroformine sont utiles comme agents antitumoraux. Plusieurs alcaloïdes naturels que lton obtient a partir de Vinca rosea se sont révélés être actifs dans le traitement de tumeurs malignes expérimentales chez les animaux. Parmi ceux-ci citons la leurosine ( brevet des E.U.A. No. 3.370.057 ), la vincaleucoblastine ( vinblastine ou VLB ) ( brevet des E.U.A No. 3.097.137 ), la leurosidine (vinrosidine) et la leurocristine C VCR ou vincristine ( toutes deux dans le brevet des E.U.A. No. 3,205.220 ), la désoxy VLB "A" et "B", Tetrahedron Letters, 783 (1968) ( l'hydrazide de la dEsacétyl-leurosine est également décrit dans cette référence la 4-désacétoxyvinblastine ( brevet des E.U.A. No. 3.954.773 la 4-désacétoxy-3'-hydroxyvinblastine ( brevet des E.U.A. No. 3.944.544 ) ; la leurocolombine ( brevet des E.U.A. No. 3.890.325 ), la leuroformine ( N-formyl-leurosine, voir le brevet belge No. 811.110 ) et la vincadioline ( brevet des E.U.A. No. 3.887.565 ), Deux de ces alcaloides, la VLB et la vincristine, sont maintenant vendus comme médicaments pour le traitement des tumeurs malignes chez l'homme, en particulier les leucémies et les maladies apparentées. Les alcaloïdes d'indole-dihydroindole dimères les plus abondants que l'on peut obtenir à partir de Vinca Rosea-peuvent être représentés par la formule Dans la formule précédente, quand X1 est un groupement acétoxy, X un groupement méthyle, X un groupement hydroxy, X4 un groupement éthyle et X5 un atome d'hydrogène, la VLB est représentée quand X1 est un groupement acétoxy, x2 un groupement formyle, X3 un groupement hydroxy, X4 un groupement éthyle et X5 un atome d'hydrogène, la vincristine est représentée ; quand X1 est un groupement âcétoxy, X2 un groupement méthyle, X3 un groupement éthyle, X4 un groupement hydroxy et X5 un atome dthydrogène, la leurosidine est représentée ; quand X est un groupement acétoxy, X2 un groupement méthyle, X3 et X5 des atomes d'hydrogène et X4 un groupement éthyle, la désoxy VLB "A" est représentée ; quand X1, X2 et X5 sont les mêmes que dans la désoxy " A ", mais que X3 est un groupement éthyle et X un atome d'hydrogène, la désoxy VLB "B est représentée ; et quand X1 est un groupement acétoxy, X2 un groupement méthyle, X3 un groupement éthyle et X4 et X5 pris ensemble forment un cycleok-époxyde, la leurosine est représentée. La leuroformine a la même structure que la leurosine sauf que X est un groqC.ent formyle et non méthyle. La leurocolombine et la vincadioline sont respectivement la 2'-hydroxy VLB et la 3'hydroxy VLB ; la 4-dêsacétoxy VLB a la même structure que la VLB sauf que x1 est H au lieu d'un groupement acétoxy ; et la 3.1 hydroxy-4-désacétoxy VLB pourrait également être appelée 4-dEsac6- toxy vincadioline. La modification chimique des alcaloldes de Vinca a été plutôt limitée. En premier lieu, les structures moléculaires impliquées sont extrêmement complexes et des réactions chimiques qui modifient seulement une fonction spécifique de la molécule sont difficiles à mettre au point. Ensuite, on a recueilli à partir des fractions de Vinca rosea des alcaloïdes ne possédant pas les propriétés chimiothérapeutiques désirables, et la détermination de leur structure a conduit à la conclusion que ces composés sont très proches des alcaloïdes actifs. Ainsi, l'activité anti-néoplastique semble être limitée à des structures très spécifiques, et les chances d'obtenir des médicaments plus actifs par modification de ces structures semblent entre par conséquent faibles.Parmi les modifications intéressantes des alcaloïdes physiologiquement actifs, se trouve la préparation de la dihydro VLB ( brevet des E.U.A. No. 3.352.868 ) et le remplacement du groupement acétyle en C-4 ( carbone No.4 du système cyclique de la VLB, voir la formule développée numérotée ci-dessus ) par des groupements alcanoyle supérieurs ou par des groupements acyle non apparentés. ( Voir le brevet des E.U.A. No. 3.392.173 ). Plusieurs de ces dérivés permettent de prolonger la vie de souris auxquelles on a inoculé la leucémie P 1534. Un des dérivés dans lequel un groupement chloroacétyle remplace le groupement acétyle en Ç-4 de la VLB est également un intermédiaire utile pour la préparation de dérivés de VLB à structure modifiée dans lesquels, par exemple, un groupement N,N-dialkylglycyle remplace le groupement acétyle en Ç-4 de la VLB ( voir le brevet des E.U.A. No. 3.387.001 ).Un composé intermé- diaire, la 4-désacétyl VLB, est produit pendant les réactions chimiques conduisant à ces derniers dérivés. I1 est indiqué que cet intermédiaire qui ne possède pas le groupement acyle en C-4, ce qui laisse un groupement hydroxy non estérifié, est une subs tance toxique ayant une faible activité chimiothérapeutique in vivo vis-à-vis de la leucémie P1534 sur 1es muridés selon Hargrove Lloydia, 27, 340 (1964). Des travaux plus récents cependant ont montré que la 4-désacétyl VLB est un agent antitumoral actif, voir Owellen Fed. Proc. 34, 808 (1975) et Cullinan et al., 9th International Congress of Chemotherapy, London, 1975, Abstract SC-19. L'une des modifications chimiques les plus récentes et les plus utiles des alcaloïdes d'indole-dihydroindole dimères de Vinca a été le remplacement de la fonction ester en C-3 par une fonction amide ou hydrazide, souvent avec la perte concomitante du groupement acétyle en C-4 ( groupement qui peut être remplacé ). Les amides des alcaloïdes : VLB, leurosidine,-vincristine, désoxy VLB "A" et B,leurocolombine, vincadioline, 4-désacétoxy-VLB, 3' hydroxy-4-désacétoxy-VLB, etc...,sont décrits dans le brevet belge No. 837.390. Deux des alcaloides précédents, la VLB et la vincristine, sont maintenant vendues sur le marché pour le traitement de tumeurs malignes chez l'homme, et deux autres, la leuroformine et le carboxamide en c-3 de la 4-désacétyl VLB ( vindésine ) subissent actuellement des essais cliniques en Europe et aux Etats-Unis d'Amérique en tant que médicaments "anticancéreux " potentiels. La présente invention fournit des composés de formule : dans laquelle R est un atome dthydrogane ou un groupement CH3 ou CHO ; R est un groupement NH2, N3, NH-alk ou NH-CH2(CH2)nX od n vaut 1 ou 2 et X est un groupement OH, O-alk, O-CO-alk ou SY où Y est H, un groupement alk ou une liaison, ladite liaison réunissant deux moitiés de formule I par le groupement carboxamido en C-3 (R2) ; et R3 est un groupement OH ou acétoxy. Le terme " alk " tel qu'utilisé ici est défini comme étant un groupement alkyle en C1 -C3 et comprend les groupements méthyle, éthyle, n-propyle et isopropyle. Les sels d'addition d'acide pharmaceutiquement acceptables des bases alcaloïdes précédentes sont également compris dans le domaine de cette invention. On prépare les composés de formule I par un procédé caractérisé en ce qu'on fait réagir un composé de formule dans laquelle R4 est un atome d'hydrogène ou un groupement CH3 cu CHO ; R5 est NHNH2; et R6 est un groupement OH ou acétoxy ; avec le nitrite de sodium, et on fait éventuellement réagir le composé résultant dans lequel R5 est N3, avec un composé de formule NH2E TII dans laquelle E est H, alk ou CH2-(CH2}nX où X est tel que défini pour la formule I, ou bien E est CH2CH2S, et deux groupements de formule III sont liés par les atomes S ;; ou bien on fait reagir un composé de formule II dans laquelle R4 et R6 sont tels que définis précédemment et R5 est OCH3, avec un composé de formule NH2E IV dans laquelle E est H ou alk ; et on recueille le produit sous forme de la base libre ou d'un de ses sels d'addition d'acide pharmaceutiquement acceptables. Dans la formule I ci-dessus, quand R1 est un groupement méthyle et R3 un groupement OH, des dérivés de 4-désacétyl-leurosine sont représentés, et quand R1 est un groupement CHO et R3 un groupement OH, des dérivés de 4-désacétyl-leuroformine sont représentés. Quand R1 est un atome d'hydrogène et R3 un groupement OH, les composés représentés sont des dérivés de l-déformyl-4-désacétylleuroformine. Les composés de formule I dans laquelle R est H ou CH3 et R un groupement azide, sont essentiellement sinon exclusivement utiles comme intermédiaires comme il sera indiqué ci-apres. Les sels d'addition d'acide pharmaceutiquement acceptables des composés de cette invention comprennent des sels provenant d'acide minéraux comme l'acide chlorhydrique, l'acide nitrique, l'acide phosphorique, l'acide sulfurique, l'acide bromhydrique, l'acide iodhydrique, l'acide nitreux, l'acide phosphoreux, etc..., ainsi que les sels d'acides organiques comprenant les acides mono et dicarboxyliques aliphatiques, les acides phényl-alcanoiques, les acides hydroxy-alcanolques et alcanedioSques, les acides aromatiques, les acides sulfoniques aliphatiques et aromatiques, etc....Ces sels pharmaceutiquement acceptables comprennent donc les sulfate, pyrosulfate, bisulfate, sulfite, bisulfite, nitrate, phosphate, phosphate monoacide phosphate diacide, métaphosphate, pyrophosphate, chlorure, bromure, iodure, acétate, propionate, décanoate, caprylate, acrylate, formate, isobutyrate, caprate, heptanoate, propiolate, oxalate, malonate, succinate, subérate, sébacate, fumarate, maleate, benzoate, chlorobenzoate, méthylbenzoate, dinitrobenzoate, hydroxybenzoate, méthoxybenzoate, phtalate, téréphtalate, benzènesulfonate, toluènesulfonate, chlorobenzènesulfonate, xylènesulfonate, phénylacétate, phénylproprionate, phénylbutyrate, citrate, lactate, 2-hydroxybutyrate, glycollate, malate, tartrate, méthanesulfonate, propanesulfonate, naphtalène-lsulfonate, naphtalène-2-sulfonate, etc.. Des composés types appartenant au domaine de cette invention comprennent Le N-( p-méthoxyéthyl)-Carboxamide en C3 de la 4-désacétyl- leuroformine, le N-( -isoropoxyéthyl)carboxamide en C3 de la leurosine, le N-(P -méthylmercaptoéthyl)earboxamide en C3 de la 4désacétylleuroformine, Le N-( p -mercaptoéthyl) earbo::ramide en C3 de la leurosine, ne N-méthylcarboxamide en C3 de la 4-désacétylleuroformine, le N-(ss -éthoxyéthyl)carboxamide en C3de la 4-désacétylleuro- sine, le N-(-hydroxyéthyl)carboxamide en C3 de la leuroformine et le N-( p -n-propoxyéthyl) carboxamide en C3 de la 4-desacetyl- leurosine. Les substances de départ convenant à la préparation des composés destructeurs des cellules cancéreuses selon cette invention, représentés par la formule I ( à l'exclusion de ceux dans lesquels R1 est H ou ai3 et R2 est N3 ) sont le cabbohydrazide en C3 de la 4-désacétylleurosine ou le carbohydrazide en C3 de la 1-deformyl-4- dêsacétylleuroformine. La transformation de ces hydrazides en azides correspondants par le-traitement par l'acide nitreux puis par réaction avec l'ammoniac ou une amine primaire désirée particulière comprenant la méthylamine, la 2 -hydroxyéthylamine, une B(alkyl- mercapto en C1-C3) éthyl (ou propyl ) amine, fournit un 4-désacétylcarboxamide en C3 ( formule I quand R1 est CH3 et R3 est OH > ou un 4-désacétyl-l-déformylcarboxamide en C3 ( formule I quand R1 est H et R3 est OH ). Cette transformation hydrazideazideamide suit le mode opératoire décrit initialement par Stohl et Huffman, Helv. Chie. Acta., 26, 944 (1943) -- voir également les brevets des E.U.A. No. 2.090.429 et 2.090.430. Les composés dans lesquels le groupement R2 contient une fonction ester, comme dans le groupement NH-CH2-CH2O-CO-alk, où alk est tel que défini précédemment, sont de préférence préparés en estérifiant lthydroxyethyl ( ou propyl )-amide avec un anhydride d'acide approprié (alk-cO)2O. 2 On peut préparer les composés dans lesquels R est NH-CH2 (CH2)n -SY, par réaction du carboazide en C3 de la 4-désacétylleurosine avec des p-mercaptoalkylamines. Le mercaptan subit cependant une oxydation dans des conditions de réaction alcalines en donnant le disulfure correspondant dans lequel deux groupements de formule I sont liés par les liaisons Y. En utilisant le mode opératoire de synthèse classique des azides, on isole habituellement les mercaptoalkylamides et les disulfures correspondants sous forme d'un mélange facilement séparable par chromatographie. La synthèse du mercaptoalkylamide exempt du disulfure accompagnant comprend la réaction d'un carboazide en C3 avec le composé de formule NHZ-CH2'(CH2) -S-trityle où le groupement trityle est un groupement triphénylméthyle. Le traitement du N-tritylmercaptoalkylcarboxamide en C3 par un sel de métal lourd comme l'acétate mercurique suivi de l'enlèvement du sel métallique sous forme d'un sulfure insoluble fournit le mercaptoalkylamide désiré pratiquement exempt du dîsulfure On peut également utiliser comme groupements de blocage des dérivés triméthylphényliques trissubstitués.On prépare le disulfure de façon non ambiguë par réaction de 2 moles du carboazide en C3 de la 4-désacétylleurosine et la cystamine (NH2-CH2-CH2-S)2. On prépare de façon analogue le mercaptopropylamide et le disulfure correspondant. Une façon de préparer les composés de cette invention dans lesquels Rss est un groupement acétoxy, consiste à réacyler un 4-désacétylamide ( formule I dans laquelle R est OH ) avec l'anhydride acétique ou le chlorure d'acétyle dans la pyridine pour former l'acétate en C4 correspondant. Le mode opératoire d'acylation préféré est celui décrit dans le brevet des E.U.A. No. 3.392.173 pour la VLB ou la leurocristine, dans lequel un dérivé diacylé est le premier produit de la réaction, et on hydrolyse sélectivement ce dérivé pour obtenir un composé 4-acétoxylé. D'autres modes opératoires comprenant une acétylation sélective ou une acétylation multiple suivie d'une hydrolyse sélective peuvent être utilisés pour préparer les dérivés 4-acétoxylés de cette invention. I1 y a cependant certaines précautions qu'il faut garder à l'esprit quand on envisage un mode opératoire d'acylation. Si le groupement carboxamide en C3 contient un groupement acylable, c'està-dire un groupement hydroxy ou amino, le mode opératoire d'acétylation en C4 doit être effectué avant la réaction azideamine qui fournir le groupement carboxamide en C3 final. Le mode opératoire préféré ici consiste à acyler en C4, par les modes opératoires précédents, un carbohydrazide en C3, en protégeant d'abord le groupement hydrazide lui-même, qui serait sinon également acétylé. Le groupement protecteur préféré du groupement hydrazide est le groupement isopropylidène formé par réaction de la portion NH2 de l'hydrazide avec l'acétone.Ce groupement peut facilement être enlevé par traitement par un acide, ou de préférence on peut faire réagir directement le dérivé isopropylidénique lui-même directement avec l'acide nitreux pour former un groupement azide ( voir l'exemple 7 du brevet des E.U.A. No. 3.470.210 ). De plus, le carboazide en C3 du dérivé 4-acEtoxyle ainsi préparé subit une réaction avec NH3 et diverses amines primaires en donnant des composés ayant le groupement amide R2 désiré. D'autres modes opératoires comprenant une acétylation sélective ou une acétylation multiple suivie d'une hydrolyse sélective, ou une protection sélective d'une fonction acétylable suivie d'une acétylation et d'une élimination ultérieure du groupement protecteur, seront évidents pour l'homme de l'art. La preparation des carboxamides en C3 de la leuroformine necessite quelques considérations supplémentaires. La réaction de la leuroformine avec l'hydrazine non seulement forme un carbohydrazide en C3, mais hydrolyse également les deux groupements acétyle en C4 et formyle en N1. Ainsi, la substance de départ habituelle de préparation d'une leuroformine ou d'un carboxamide en C3 de la 4-désacétylleuroformine, est le carbohydrazide en C3 de la 4-désacétyl-1-déformylleuroformine. Ce composé peut être transformé en azide correspondant avec l'acide nitreux.La réaction de l'azide avec NH3 ou une amine primaire appropriée fournit un carboxamide en C3 qui doit ensuite être formylé à nouveau pour donner un carboxamide en C3 de la 4-désacétylleuroformine ou réacylé et formylé à nouveau pour former un carboxamide en C3 de la leuroformine de formule I. Ou bien, on peut oxyder un carboxamide en C3 de la leurosine de la 4-désacétylleurosine, à -600C dans un mélange d'acétone et d'acide acétique avec CrO3 ( mode opératoire du brevet des E.U.A. No. 3.889.493 ) pour obtenir le dérivé N-l- formylé directement ( formule I, R1 est CHO ) ou un composé N-l- déformylé ( formule I, R1 est H ) que l'on peut à son tour formyler à nouveau.Ce mode opératoire peut ne pas convenir aux amides contenant des groupements oxydables, bien que les oxydations de routine par Cr03 se fassent très lentement si elles se font à -60 C. Les bases alcaloïdes de cette invention et leurs sels d'addition d'acide, en particulier les sulfates, sont des solides cristallins blancs. La Leurosine qui est la dernière substance de départ pour la préparation des composés de cette invention est obtenue à partir de Vinca rosea par les modes opératoires décrits dans les brevets des E.U.A. No. 3.370.057 et 3.225.030. La leurosine, par repos à l'air, s'oxyde en dérivé 5'-hydroxylé. Ainsi, quand on désire utiliser la leurosine comme substance de départ dans une réaction, une étape de purification préliminaire de la leurosine est nécessaire.Cette opération peut être effectuée comme suit On chauffe pendant une heure dans 4 litres d'éthanol 150 g de leurosine brute contenant environ 50% de 5'-hydroxyleurosine. On refroidit la solution éthanolique et on sépare par filtration la substance cristalline résultante, 80 g. On dissout ensuite la substance cristalline dans du dichlorure de méthylène et on chromatographie la solution de dichlorure de méthylène sur 1,5 kg de silice. On développe le chromatogramme avec un mélange solvant 2:1:2 d'acétate d'éthyle, de méthanol et de dichlorure de méthylène. On réunit les premières fractions d'éluat et la CCM indique qu'elles contiennent la 5'-hydroxyleurosine et l'on obtient 24 g de 5'-hydroxyleurosine purifiée. On réunit les coupes ulterieures dont une CCM montre qu'elles contiennent la leurosine et l'on obtient 6 g de leurosine. Les coupes intermédiaires fournissent 42 g d'un mélange des deux alcaloïdes à partir duquel on peut récupérer davantage de composés purifiés. La préparation des composés de formule I est illustrée par les exemples spécifiques suivants. EXEMPLE I Préparation du carbohydrazide en C3 de la 4-désacétylleurosine. On chauffe dans une bombe en verre scellée pendant 3 jours à 500C un mélange réactionnel contenant 450 mg de leurosine, 15 ml de tétrahydrofuranne (THF), 8 ml d'hydrazine anhydre et 6 ml de méthanol. On ouvre la bombe, on chasse les solvants sous vide et on dissout dans du dichlorure de méthylène le résidu résultant comprenant le carbohydrazide en C3 de la 4-désacétylleurosine formé dans la réaction précédente. On lave à l'eau la solution de dichlorure de méthylène et on la sèche.L'élimination du solvant sous vide fournit le carbohydrazide en C3 de la 4-désacétylleurosine sous forme d'un résidu dont une CCM montre qu'il contient des traces de leurosine et de 4-désacétylleurosine, On prépare le carbohydrazide en C3 de la 4-désacétylleurosine pur ( substance à une tache ) en chromatographiant le résidu sur silice en utilisant comme éluant un mélange 1:1:1 de dichlorure de méthylène, d'acétate d'éthyle et de méthanol. On réunit les fractions dont une CCM montre qu'elles contiennent le carbohydrazide en C3 de la 4-désacétylleurosine. Le composé a les caractéristiques physiques suivantes : spectrographe de masse : m/e 766 ( ion moléculaire ), 649, 427 ; infra-rouge (chloroforme) : pics à 3480, 3440, 1730 et 1670 cm 1 ; pKa ( dans le DMF à 662 ) à 5,32 et 7,12. EXEMPLE 2 Préparation du carboazide en C3 de la 4-désacétylleurosine On dissout environ 800 mg du carbohydrazide en C3 de la 4 désacétylleurosine dans 120 ml d'acide chlorhydrique aqueux 1N que l'on a préalablement refroidi à OOC. On ajoute 180 mg de nitrite de sodium et on agite le mélange réactionnel pendant 10 minutes à OOC. On alcaline la solution aqueuse acide avec une solution aqueuse de bicarbonate de sodium et on extrait la solution alcaline deux fois avec du chloroforme. On sépare les extraits chloroformiques et on les réunit et on sèche les extraits réunis. L'évaporation du chloroforme fournit le carboazide en C3 de la 4-désacétyl- leurosine sous forme d'une poudre amorphe jaune brun.Spectre infrarouge ( dans le chloroforme ) pics d'absorption à 2135 et 1725 cm EXEMPLE 3 Préparation du carboxamide en C3 de la 4-désacétylleurosine On ajoute une solution dans le dichlorure de méthylène du carboazide en C3 de la 4-désacétylleurosine de l'exemple 2 à 250 ml de dichlorure de méthylène que l'on a préalablement saturé avec de l'ammoniac gazeux à 100C. On garnit le récipient de réaction d'un tube de séchage et on protège le mélange réactionnel de la lumière. On maintient le mélange réactionnel à la température ambiante pendant une nuit puis on chasse les constituants volatils par évaporation sous vide. On dissout dans du dichlorure de méthylène le résidu résultant contenant le carboxamide en C3 de la 4-désacétyl- leurosine formé dans la réaction précédente, et on lave la solution de dichlorure de méthylène deux fois avec de l'eau et on la sèche. La chromatographie sur gel de silice en utilisant un mélange solvant 3:1 d'acétate d'éthyle et d'méthanol comme éluant donne des fractions contenant le carboxamide en C3 de la 4-désacétylleurosine purifie, comme le montre la CCM. On réunit ces fractions et on en chasse le solvant par évaporation sous vide. On obtient le carboxamide en C3 de la 4-désacétylleurosine sous forme d'une poudre amorphe jaune brun avec les caractéristiques physiques suivantes : spectrographe de masse (m/e) : ion moléculaire = 751, également pics à 692, 649 et 412.Spectre infra-rouge : pics à 3520, 3485, 3410, 1740 et 1695 cm EXEMPLE 4 Préparation du N-( p-hydroxyethylXcarboxamide en C3 de la 4-désacétylleurosine En suivant le mode opératoire de l'exemple 3, on fait réagir le carboazide en C3 de la 4-désacétylleurosine avec l'éthanolamine dans le dichlorure de méthylène pour obtenir le N-( P-hydroxyéthyl)- carboxamide en C3 de la 4-désacétylleurosine. On purifie le composé par chromatographie sur gel de silice en utilisant comme éluant un mélange 1:1 d'acétate d'éthyle et de méthanol. La poudre amorphe jaune brun résultante a les caractéristiques physiques suivantes : spectre de masse (m/e) : ion moléculaire à 795 ; spectre infra-rouge : pics à 3480, 3410, 1735 et 1670 cm 1 EXEMPLE 5 Préparation du N-méthyl-carboxamîde en C3 de la 4-de-sacétyl- leuros ine On transforme environ 0,25 g de sulfate de leurosine en base libre en dissolvant le sel dans de l'eau et-en alcalinisant la solution résultante. La base libre est insoluble dans la couche alcaline aqueuse et on l'extrait avec du chloroforme. L'évaporation du chloroforme fournit la base libre leurosine sous forme d'un résidu. On dissout la base libre de leurosine ainsi préparée ( correspondant à 0,25 g de sulfate de leurosine ) dans 100 ml de méthanol anhydre auxquels on a ajouté 21 g de méthylamine à -780C. On scelle le récipient de réaction et on le chauffe à 500C pendant 5 jours. On ouvre le recipient de réaction et on en évapore sous vide les constituants volatils. On dissout dans du dichlorure de méthylène le résidu résultant comprenant le N-méthylcarboxamide e C3 de la 4-désacétylleurosine formé dans la réaction précédente. On lave la solution de dichlorure de méthylène 3 fois avec de l'eau puis on la sèche. L'évaporation du dichlorure de méthylène fournit le N-méthylcarboxamide en C3 de la 4-désacétylleurosine sous forme d'une poudre, dont on chromatographie une solution sur des plaques de chromatographie sur couche mince préparative de gel de silice. On développe le chromatogramme avec un mélange solvant 1:1 d'acétate d'éthyle et d'éthanol. On enlève à la main la bande correspondant au N-méthylcarboxamide en C3 de la 4-désacétylleurosine et on élue l'alcaloïde du gel de silice avec du méthanol. L'évaporation du méthanol donne le N-méthylcarboxamide en C3 de la 4-désacétyl- leurosine sous forme d'une poudre amorphe jaune brun ayant les caractéristiques physiques suivantes : spectre de masse (m/e) 765 ( ion moléculaire ) , 779 ( ion moléculaire + 14 ) , 607 426, 353 ; spectre infra-rouge : pics à 2,84, 5,75 et 5,97 microns. EXEMPLE 6 Autre préparation; du N-methylcarboxamide en C3 de la 4 désacétylleurosine En suivant le mode opératoire de l'exemple 3, on prépare le N-méthylcarboxamide en C3 de la 4-désacétylleurosine à partir de la méthylamine et du carboazide en C3 de la 4-désacétylleurosine dans le dichlorure de méthylène. EXEMPLE 7 Préparation du N-( -mercaptoéthyl)carboxamide en C3 de la 4-désacétylleurosine En suivant le mode opératoire de l'exemple 3, on fait réagir la 2-mercaptoéthylamine avec le carboazide en C de la 4-désacétylleurosine dans le dichlorure de méthylène. On prépare la -mercapto- éthylamine en dissolvant son chlorhydrate dans de l'hydroxyde de sodium aqueux 1N, en saturant la couche aqueuse avec du.chlorure de sodium et en extrayant la couche aqueuse deux fois avec chacun des solvants suivants : acétate d'éthyle, éther et dichlorure de méthylène.On réunit les six extraits, on les sèche et on les filtre, et on chasse les solvants par évaporation On chauffe le mélange azide et -mercaptoethylamine dans le dichlorure de méthylène à la température de reflux au bain de vapeur pendant 5 minutes puis on le refroidit. On ajoute 5 ml de pyridine et on agite le mélange réactionnel à la température ambiante pendant une nuit. On ajoute une solution aqueuse à 5 de bicarbonate de sodium et on sépare les couches organique et aqueuse . On lave la couche organique deux fois avec de l'eau et on la sèche.L'élimination du solvant sous vide laisse comme résidu un mélange de N-( ss-mercapto- -éthyl)carboxamide en C3 de la 4-désacétylleurosine et du disulfure de bis rt-(4-désacetylleurosine-carboxamido en C3) éthyle0. on dissout le résidu dans du dichlorure de méthylène, on lave la solution de dichlorure de méthylène trois fois avec de l'eau et on chasse le solvant par évaporation sous vide. On chromatographie sur silice le résidu comprenant le mélange précédent et on développe le chromatogramme avec un mélange solvant 1:1:1 de chlorure de méthylène, d'acétate d'éthyle et de méthanol. On réunit les fractions dont la CCM montre qu'elles contiennent le N-(-mercaptoéthyl)carboxamide en C3 de la 4-désacétylleurosine et on en chasse les solvants sous vide. Le N-( -mercaptoéthyl)- carboxamide en C de la 4-désacétylleurosîne est un solide amorphe jaune brun ayant les caractéristiques physiques suivantes spectre de masse ( m/e) : 825, ( ion moléculaire + 14 ) - transméthylation, 486, 353, 299, 152. Spectre infra-rouge dans le chloro forme : pics à 1730 et 1665 cm 1 On réunit les fractions dont on montre qu'elles contiennent le disulfure de bis ss3 (4-désacétyl- leurosine-carboxamido en c3)éthyîej et on en évapore les solvants. Le résidu est un solide amorphe jaune brun ayant pratiquement les mêmes caractéristiques physiques que le mercaptan décrit dans l'exemple 9. EXEMPLE 8 Préparation du carboxamide en C3 de la 4-désacétylleuroformine On prépare une solution à partir de 3,4 g de carboxamide en C3 de 4-désacétylleurosine, de 40 ml de dichlorure de méthylène et de 450 ml d'acetone. On refroidit la solution à -61 C et on ajoute 50 ml d'acide acétique glacial. Puis on ajoute en 20 minutes une solution de 4 g d'oxyde chromique dans 8 ml d'eau et 40 ml d'acide acétique glacial. Une fois l'addition terminée, on agite la solution pendant une heure supplémentaire à -610C et on laisse venir à -300C. On maintient le mélange réactionnel à cette temp6- rature pendant une heure puis on le refroidit à nouveau à -610C. On ajoute de l'hydroxyde d' ammonium 14N et de l'eau. On sépare la couche organique et on lave la couche aqueuse trois fois avec du dichlorure de méthylène. On réunit les extraits de dichlorure de méthylène, on les lave une fois avec de l'eau et on les sèche. L'évaporation du solvant fournit un résidu que l'on sépare en ses composants par chromatographie sur silice en utilisant comme éluant un mélange 1:1:1 de dichlorure de méthylène, de méthanol et d'acétate d'éthyle. On détecte deux composants. La RMN indique que celui se déplaçant le plus vite èst le carboxamide en C3 de la 5-acétonyl 4-désacétylleuroformine, et la RMN indique que le composé plus lent, plus polaire est le carboxamide en C3 de la 4-désacétylleuroformine.Le carboxamide en C3 de la 4-désacétylleuroformine a les caractéristiques physiques suivantes : spectre de masse (m/e) = 765 (FD) ; IR (CHCl3) 1730, 1680 cm-1 Le second composant, le carboxamide en C3 de la 5'-acétonyl 4-désacétylleuroformine, a les caractéristiques physiques suivantes: spectre de masse ( m/e) = 821 ( FD) : RMN similaire à celle du carboxamide en C3 de la 4-désacétylleuroformine avec un pic supplémentaire à62,12 ( méthyle du groupement acétyle ) ; IR ( CHCl3) 1730, 1680 cm-1. EXEMPLE 9 Préparation du disulfure du bis4-désacétylleurosine- carboxamido en C31ethyle) On transforme 5 g du carbohydrazide en C3 de la 4-désacétylleurosine en carboxazide en C3 correspondant par le mode opératoire de l'exemple 2 en utilisant 250 ml de HCl 1N et 500 mg de NaNO2. On isole l'azide sous forme d'une solution dans le chlorure de méthylène. A cette solution, on ajoute 45Q mg de cystamine (NH2- CH2-CH2-S)2 dans 20 ml de THF. On agite le mélange réactionnel à la température ambiante pendant une nuit puis on le traite comme dans l'exemple 3.On purifie le résidu obtenu comprenant le disulfure de bis [p-(4-désacétylleurosine-carboxamido en C3)éthyli formé dans la réaction précédente, par chromatographie sur gel de silice en utilisant comme éluant un mélange solvant 1:1:1 de dichlorure de méthylene, d'acétate d'éthyle et de méthanol. On réunit les fractions dont la ca montre qu'elles contiennent le disulfure et on en chasse les solvants par évaporation. On transforme le résidu en sulfate par le mode opératoire de l'exemple 10 ci-dessous. La base libre a les caractéristiques physiques suivantes : spectre de masse ; pics à 825, 839, 486 ; spectre infra-rouge D = 1730, 1670 cm 1 ; RMN du carbone 13C : résonance supplémentaire à 37,5 et 39,2 ppm par rapport au carboxamide en C3 de la 4-déscétyIleurosine. Titrage : PKa à 5,3, 7,0 Poids moléculaire par osmose : 1479. EXEMPLE 10 Préparation des sels On prépare les sulfates des amides précédents en dissolvant l'amide particulier dans de l'méthanol absolu et en ajustant le pH de la solution résultante à environ 4,5 avec de l'acide sulfurique ethanolique à 2%. On prépare d'une façon analogue d'autres sels, comprenant les sels formés avec des ions minéraux comme le chlorure, le bromure, le phosphate, le nitrate, etc... ainsi que les sels formés avec des ions organiques comme le benzoate, le méthane- sulfonate, le maléate, le tartrate, etc... Les composés de formule I sont actifs vis-à-vis des tumeurs transplantées chez les souris in vivo et induisent l'arrêt de la métaphase chez des cellules ovariennes de hamster chinois maintenues par culture sur tissu, dans un mode opératoire adapté de celui de Siminoff, Applied Microbiology, 9, 66-72 (1961). Pour démontrer l'activité des médicaments de formule I vis-àvis des tumeurs transplantées chez les souris, on utilise un protocole qui comprend l'administration du médicament, généralement par voie intrapéritonéale, à raison de 12,6 et 3 mg/kg par jour, pendant 9 jours après l'inoculation avec la tumeur. Le tableau 1 suivant donne les résultats d'expériences dans lesquelles on traite avec succès par un composé de cette invention des souris portant des lymphosarcomes de Gardner transplantés. Dans le tableau, la colonne 1 donne le nom du composé ; la colonne 2 donne la dose et la colonne 3 le pourcentage d'inhibition de la croissance de la tumeur. Le disulfate du disulfure de bis [ -(4-désacetylleurosine- carboxamido en C3) éthyle est actif vis-à-vis de la leucémie P388 chez les souris quand on l'administre à raison de 15 et 30 mg par kg en trois fois, à trois jours d'intervalle. On observe des pourcentages de prolongation du temps de survie de 55 et 462 respectivement. Quand on utilise les nouveaux composés de cette invention comme agents antitumoraux chez les mammifères, on utilise commodément la voie d'administration parentérale. Avec l'administration parentérale, on préfère la voie intraveineuse bien que l'on puisse utilisée la voie intrapéritonéale avec de petits mammifères comme les souris . En administration intraveineuse, on utilise des solutions isotoniques contenant 1 à 10 mg par ml d'un sel d'une base alcaloïde de formule I seul. On administre les composés à raison de 0,01 à 1 mg par kg et de préférence de 0,1 à 1 mg par kg de poids corporel une deux fois par semaine ou toutes les deux semaines selon l'activité et la toxicité du produit. Une autre méthode permettant d'obtenir une dose thérapeutique est basée sur la superficie du corps, avec une dose comprise entre 0,1 et 10 mg/ mètre carré de surface corporelle tous les 7 ou 14 jours. Tableau 1 Activité vis-à-vis du lymhosarcome de Gardner Composé Dose mg/kg % d'inhibition Carboxamide de la 4-lésacétyl- 12 toxique leurosine 6 100 3 23 N-méthylcarboxamide en C3 de la 12 Toxique 4désacétylleurosine 6 100 3 33 N- C -hydroxyéthyl)carboxamide en C3 12 100, 98 de la 4-désacétylleurosine 6 100, 100 3 50, 44 Carboxamide en C de la 12 39 4dé sacétyl leuroriine REVENDICATIONS 1. Composé de formule dans laquelle RI est H, CH3 ou CHO ; R2 est NH2, N3, NH-alk ou NH CH2-(CH2)n-X, où n vaut 1 ou 2, X est OH, O-alk, O-CO-alk ou SY.où Y est H, un groupement alk ou une liaison, ladite liaison réunissant 2 groupements de formule I par l'intermédiaire du groupement carboxamido en C3 (R2) ; alk est un groupement alkyle en C1-C3 ; et R3 est un groupement OH ou acétoxy; et ses sels d'addition d'acide pharmaceutiquement acceptables; 3 l'exclusion de ceux o' R1 est H ou CH3 et R2 est N 2.Composé selon la revendication 1, qui est le carboxamide en C3 de la 4-désacétylleuroformine 3. Composé selon la revendication 1, qui est le carboxamide en C3 de la 4-désacétylleurosine. 4. Composé selon la revendication 1, qui est le N-méthyl carboxamide en C3 de la 4-désacétylleurosine. 5. Composé selon la revendication I, qui est le N-(ss-hydroxy- éthyl)carboxamide en C3 de la 4-désacétylleurosine 6. Composé selon la revendication 1, qui est le disulfure de bis {ss-(4-dcsacétylleurosine carboxamide en C3) éthyle. 7. Intermédiairesnécessairesà la preparation des composés selon la revendication 1, les composés de formule dans laquelle R1 est H ou CH3, R2 est N3 et R3 est un groupement OH ou acétoxy. 8. Composé selon la revendication 7, où R3 est OH. 9. Compose selon la revendication 8, qui est le carboazide en C3 de la 4-désacétylleurosine. 1O. Composition thérapeutiquement active comportant comme ingrédient actif un composé selon la revendication 1, et un support pharmaceutique aprotrié.