Brevet FR2401994A1 — publié le 19790330

L'invention concerne un procédé d'isolement de microorganismes à la surface de milieux nutritifs gélifiés ainsi q'un dispositif pour la mise en oeuvre de ce procédé. L'identification des microorganismes contenus dans un produit nécessite, en une première phase, que le produit soit étalé à la surface d'un milieu nutritif gélifié de manière â ce que les microorganismes soient dispersés et séparés les uns des autres. Le milieu est ensuite placé dans un incubateur pour permettre le développement des microorganismes et obtenir ainsi une mise en évi- dence de leur présence. Selon la technique classique, l'étalement est effectué manuellement à l'aide dtune anse constituée d'une boucle métallique montée sur un manche. Cette anse est déplacée selon un mouvement de va et vient sur le milieu gélifié, à partir de l'endroit où se trouve le produit contenant les microorganismes à isoler. Les figures 1 et 2 du dessin schématique annexé résument les différentes phases de cette technique étalement manuel. En une première phase, (figure 1) le produit est déposé en 2 près du bord de la botte et étalé à l'aide de l'anse 3 sur une surface 4 couvrant environ 1/5 de la circonférence. L'anse est ensuite stérélisée puis refroidie et le même mouvement est effectué, après rotation de la boite de 1/5 de tour de manière a' ce que le trajet 5 de l'anse recouvre en partie celui de ltétalement précédent. Les opérations stérilisation/étalement sont répétées 3 fois, de fanon à couvrir la circonférence totale de la boite selon le schéma présenté à la figure 2. A la fin du dernier étalement, la surface centrale est utilisée pour effectuer une dernière strie 6. Cette technique classique est donc longue et coûteuse, en raison spécialement des opérations successives de stérilisation nécessaires entre chaque phase d'étalement Elle nécessite de plus d'être effectuée avec beaucoup de soin et d'habileté si l'on veut obtenir une dispersion satisfaisante des microorganismes à isoler. La présente invention s'est donné pour but de remédier à ces inconvénients en fournissant un procédé d'isolement qui permet de réaliser un étalement régulier en une seule étape sans que soient donc nécessaires les opérations intermédiaires de stérilisation. C'est ainsi qu'elle a pour objet un procédé d'isolement à la surface d'un milieu nutritif gélifié d'un produit contenant des microorganismes selon lequel l'étalement du produit est effectué en une étape unique selon plusieurs trajectoires se recoupant partiellement, la quantité de produit emporté diminuant progressivement à chaque intersection pour arriver finalement à l'isolement des microorganismes contenus. L'invention concerne également un dispositif permettant la mise en oeuvre de ce procédé. C'est ainsi que ce dispositif est constitué par un support rigide et plat dont la face interne est munie de dents régulièrement espacées, disposées de telle serte que leurs trajectoires respectives le longs la surface du milieu nutritif gélifié se recoupent partiellement. Les dents sont de préférence, disposées sur le support selon une droite formant un angle avec le sens de déplacement du support. Les dents sont donc alignées dans une direction comprise entre la direction de déplacement du support et la perpendiculaire à cette direction. Le milieu nutritif gélifié est placé dans une boite de Pétr rectangulaire et le produit contenant les microorganismes à isoler est disposé sur la surface du milieu nutritif, à l'emplacement initial de la dent placée en position la plus avancée dans la direction de déplacement. Les dents sont alors déplacées le long de la surface du milieu nutritif selon un mouvement de va et vient de chaque côté de la direction générale d'avancement, l'amplitude de ce mouvement étant au moins égale à la longueur de la projec- tion de l'écartement des dents sur la perpendiculaire à la direction générale du déplacement. C'est ainsi que la dent qui se trouve en position la plus avancée dans la direction du déplacement, et à l'emplacement de laquelle a été déposé le produit contenant les microorganismes a isoler, étale ce produit selon une ligne ondulée ou brisée d'un côté à l'autre de la boite. Les trajectoires suivies par les autres dents au cours de ce déplacement recoupent ensuite les trajectoires tant de la pre mière dent que des dents qui les précèdent directement : à chaque recoupement la quantité de produit emporté par une dent ne constitue donc qu'une partie de la quantité emportée par la dent précédente. De dents en dents, et au fur et a' mesure de l'avancement du dispositif, la quantité de produit emporté devient donc de plus en plus faible de sorte que, en fin de parcours, la quantité de microorganismes emportés est telle que ceux-ci se trouvent répar tis sur le milieu nutritif selon un écartement permettant leur isolement. Afin de permettre le déplacement du support des dents selon le mouvement de va et vient décrit ci-dessus, la largeur de ce support est inférieure à la largeur de la botte contenant le milieu nutritif. Dans le but de limiter l'ampleur de ce mouvement de va et vient lors du déplacement du support des dents à la surface du milieu nutritif, et pour assurer à ce mouvement une régularité indépendante de l'habileté de l'opérateur, la face interne du support est avantageusement munie, sur deux de ses côtés opposés, de retours dirigés vers le bas, sensiblement perpendiculaires, susceptibles de buter contre les parois longitudinales de la botte, sur la face intérieure de celle-ci,arretant ainsi la course du déplacement transversal du support et lui servant de guide. Selon une variante d'exécution, les proies latérales de la botte contenant le milieu nutritif ainsi que les retours du support des dents, peuvent recevoir une forme correspondant à la trafectoire que doivent suivre les dents lors de leur déplacement. Le support des dents est avantageusement fabriqué en toute matière plastique transparente convenable (PVC, polystyrène etc...) et les dents viennent de fabrication avec la plaque. On dispose ainsi d'un dispositif d'étalement Jetable. Si l'on désire disposer d'un dispositif d'étalement réutilisable après sterilisation, les dents peuvent être en tout métal convenable, et seront alors fixées au support par tout moyen adapté. La présente invention sera d'ailleurs mieux comprise à l'aide de la description qui va suivre, en référence au dessin schématique annexé représentant, à titre d'exemple non limitatif une forme d'exécution du dispositif d'isolement selon l'invention et dans lequel Figure 3 est une vue en perspective par dessous du support des dents Figure 4 1st une vue en coupe de l'ensemble constitué par la botte contenant le milieu nutritif et le dispositif d'isolement Figure 5 est une vue schématique représentant la disposition des dents et leur trajectoire au -cours du processus d'isolement. Le dispositif selon l'invention est constitué par un support rigide et plat 7 dont la face interne est munie de dents 8a, 8b 8c... régulièrement espacées. Les dents 8a, 8b, 8c... sont dispo sées selon une ligne AA' orientée dans une direction comprise entre la direction OX de déplacement du support (cest-à-dire dans le sens de la longueur de la botte contenant le milieu nutritif) et la perpendiculaire oy à cette direction (figure 5). Le milieu nutritif gélifié 9 est placé dans une botte de Pétri rectangulaire tt Le produit contenant les microorganismes à isoler est disposé en 13 sur la surface du milieu nutritif, à l'emplacement de la dent 8a placée en position la plus avancée dans la direction du déplacement. Dans un but de simplification, la figure 5 ne représente que trois dents. Le déplacement du support des dents se fait dans la direction de plus grande longueur, de O vers X. On y ajoute un mouvement de va et vient de part et d'autre de la direction générale d'avancement OX.L'amplitude UV de ce mouvement est au moins égale à la longueur de la projection de l'écartement des dents sur le perpendiculaire à la direction générale d'avancement, soit 8'a 8'b ou 8'a 8'c. Ainsi, la première dent 8a étale le produit selon une ligne ondulée, représentée en trait plein, d'un côté à l'autre de la botte. Les trajectoires suivies par les autres dents et représen tkes respectivement en traits interrompus et en traits pointillés recoupent les trajectoires des dents qui les précèdent directement. De dent en dent, et au fur et à mesure de l'avancement du dispositif, la quantité de produit emporté devient donc de plus en plus faible, de sorte que, en fin de parcours, la quantité de microorganismes emportés est telle qu'ils se trouvent répartis a la surface du milieu nutritif -selon un écartement permettant leur isolement. Comme on le voit sur la figure 4, la largeur du support des dents est inférieure à la largeur de la botte contenant le milieu nutritif, ceci afin de permettre le déplacement des dents à la surface de ce milieu selon le mouvement de va et vient décrit plus haut. De plus, et dans le but d'assurer à ce mouvement une régularité satisfaisante, la face interne du support 7 comporte, sur deux de ses côtés opposés, des retours 12, dirigés vers le bas, sensiblement perpendiculaires au support et qui, venant buter contre les parois longitudinales de la boite t sur les faces intérieures de celle-ci, arrêtent la course du mouvement de va et vient du support et lui sert**de guide pendant son déplacement. Bien que le dispositif selon l'invention ait été décrit comme convenant à une opération d'étalement manuelle, il est bien évident qu'il peut être adapté à toute installation fonctionnant automatiquement. C'est ainsi que le support rigide peut présenter, sur ses côtés extrêmes, des organes de retenue tels que rainures ou pattes (non représentés) permettant de la maintenir dans un ensemble automatisé, disposé de manière a assurer son déplacement. Comme il va de soi, l'invention ne se limite pas a la seule forme d'esécution décrite ci-dessus à titre d'exemple ; elle en embrasse au contraire toutes les variantes de réalisation, quels que soient, par exemple, la nature, la forme et le nombre de dents, la figure décrite par le déplacement du système, ainsi que la forme du récipient contenant le milieu nutritif. - REVENDICATIONS 1 - Procédé d'isolement à la surface d'un milieu nutritif gélifié d'un produit contenant des microorganismes, caractérisé en ce que l'étalement du produit est effectué en une étape unique, selon plusieurs trajectoires se recoupant partiellement,. la quantité de produit emporté diminuant progressivement à chaque intersection. 2 - Dispositif permettant la mise en oeuvre du procédé selon la revendication 1, caractérisé en ce qu'il est constitué par un support rigide et plat dont la face interne est munie de dents régulierement espacées, disposées de telle sorte que leurs tra jectoires respectives le long de la surface du milieu nutritif gélifié se recoupent partiellement. 3 - Dispositif selon la revendication 2, caractérisé en ce que les dents sont alignées sur le support dans une direction comprise entre le sens de déplacement dudit support et la perpendiculaire à cette direction. 4 - Dispositif selon la revendication 2 ou la revendication 3, caractérisé en ce que le déplacement des dents est effectué selon un mouvement de va et vient de chaque côté de la direction générale d'avancement, l'amplitude de ce mouvement étant au moins égale à la longueur de la projection de l'écartement des dents sur la perpendiculaire a la direction générale du déplacement. 5 - Dispositif selon l'une quelconque des revendications 2 à 4, caractérisé en ce que la largeur du support est inférieure à la largeur du récipient sur lequel il doit se déplacer. 6 - Dispositif selon l'une quelconque des revendications 2 à Si caractérisé en ce que la face interne du support est munie sur deux de ses côtés opposés, de retours dirigés vers le bas, sensiblement perpendiculaires, susceptibles de buter contre les parois longitudinales de la boite, sur la face intérieure de celle-ci arrêtant ainsi la course du déplacement transversal du support et lui servant de guide. 7 - Dispositif selon l'une quelconque des revendications 2 à 6, caractérisé en ce que les parois longitudinales du récipient contenant le milieu nutritif et les retours susceptibles de buter contre ces dites parois longitudinales reçoivent une forme correspondant à la trajectoire que doivent suivre les dents lors de leur déplacement. 8 - Dispositif selon l'une quelconque des revendications 2 à 7, caractérisé en ce qutil est jetable. 9 - Dispositif selon l'une quelconque des revendications 2 à 7,caractérisé en ce qu'il est stérilisable. 10 - Dispositif selon l'une quelconque des revendications 2 à 9, caractérisé en ce qu'il est utilisable manuellement. 11 - Dispositif selon l'une quelconque des revendications 2 à 9, caractérisé en ce qu'il est utilisé conjointement à une installation automatisée.