Brevet FR2396019A1 — publié le 19790126

La présente invention, à la réalisation de laquelle ont participé Monsieur Jean-Claude DROUET, Mademoiselle Marie-Odile MARTIN et Messieurs Dominique BIARD et René ZALISZ, a pour objet de nouveaux glycopeptides acétylés hydrosolubles, extraits de corps microbiens lysés de Pseudomonas Aéruginosa, le procéde de préparation et l'application à titre de medicaments de ces produits. De nombreuses préparations d'origine microbienne, constituées par des corps microbiens lysés sont décrites dans la littérature. Il en est ainsi, par exemple, des produits décrits dans les brevets spéciaux de médicaments 5488 M, 6495 M et 6513 M. Ces lysats présentent généralement l'inconvenient d'être allergeniques. Des extraits hydrosolubles acétyles issus notamment de corps microbiens lysés d'Escherichia Coli ont en outre été décrits dans la littérature. I1 en est ainsi, par exemple, des extraits hydrosolubles acétylés décrits dans la demande de brevet franglais publiée sous le nO 2.269.964. Ces extraits semblent présenter uniquement des propriétés immunostinulantes. La demanderesse a cherché depuis à préparer de nouveaux extraits présentant à la fois certaines propriétés antiinflammatoires, une bonne activité antibactérienne et immunostimulante, notamment dans la prévention ou le traitement des infections à bacille pyocyanique, ainsi qu'une bonne tolérance et elle a trouvé que ce probleme pouvait être résolu en préparant de nouveaux glycopeptides acétylés extraits de corps microbiens lysés de Pseudomonas Aeruginosa. La présente demande a ainsi pour objet de nouveaux glycopeptides acétylés hydrosolubles extraits de corps microbiens lysés, carac terisés en ce que les microorganismes sont constitués par des Pseudomonas Aéruginosa, en ce que lesdits glycopeptides ont un poids moléculaire apparent compris entre 50Q et 200.000, en ce qu'ils renferment au moins 20 % de substances à pouvoir biurétogène et au moins 25 % d'oses neutres, ne renferment pas d'acide diaminopimélique et présentent des maxima d'absorption dans l'ultra~violet à environ 210 m M et 260 Le poids moléculaire apparent est le poids moléculaire déterminé au moyen dlun gel poreux étalonné à l'aide de solutions macromolécu- laires connues. Parmi les gels poreux étalonnés servant à determi- ner le poids moléculaire, on peut retenir les gels commercialisés sous la désignation Sephadex et notamment les gels Sephadex G 200. Par substances à pouvoir biurêtogène, on désigne les protéines donnant la réaction colorée du biuret. Par oses neutres, on désigne notamment des hexoses neutres tels que le glucose, le galactose ou le mannose. L'absence d'acide diaminopimélique dans les glycopeptides acé tylés tels que définis ci-dessus indique l'origine non membranaire de ceux-ci. Parmi les glycopeptides acétyles de l'invention, on retient notamment ceux caractérisés en ce qu'ils renferment de 20 % à 35 % de substances à pouvoir biurétogène et de 25 % à 35 % d'oses neutres. Parmi les glycopeptides acétylés de l'invention, tels que définis ci-dessus, on retient plus particulièrement ceux obtenus à partir de la souche de Pseudomonas Aéruginosa déposée à llInsti- tut Pasteur à Paris sous le nO 5842. Cette souche est également connue sous la référence : W. KOHLER 139 Sérotype G. L'invention a également pour objet un procédé de préparation des glycopeptides acétylés hydrosolubles tels que définis cidessus, ledit procédé étant caractérisé en ce que l'on soumet à une acétolyse des glycoprotéines extraites de corps microbiens lysés de Pseudomonas Aeruginosa, possedant un poids moléculaire apparent d'au moins 300.000, pour obtenir un extrait brut de glycopeptides acétylés, traite ce dernier au moyen d'un solvant organique, recueille la phase aqueuse, effectue une diafiltration de cette dernière sur membrane poreuse calibrée présentant un seuil de rétention de substances dont le poids moléculaire apparent est supérieur ou égal à 500, recueille la solution n'ayant pas traversé la membrane, puis isole de la solution ainsi obtenue le produit recherché. L'acétolyse, c'est-à-dire la coupure en milieu acétique des glycoproteines extraites de corps microbiens lysés de Pseudomonas Aeruginosa est avantageusement effectuée au moyen d'un mélange d'anhydride acétique, d'acide acétique et d'acide sulfurique. Ce mélange est composé de préférence par 10 volumes d'anhydride acétique, 10 volumes d'acide acétique glacial et 1 volume d'acide sulfurique concentré. La réaction est avantageusement effectuée sous agitation pendant au moins 48 heures et de préférence pendant 96 heures à une température voisine de + 40C. La réaction d'acétolyse peut être arrêtée par adjonction de glace pilée au mélange. Le pH du mélange réactionnel peut alors être ajusté à une valeur voisine de 4,5 par addition de carbonate acide de sodium. L'acétolyse des glycoprotéines, possédant un poids moléculaire apparent d'au moins 300.000, extraites de corps microbiens lysés de Pseudomonas Aeruginosa est avantageusement précédée par une dessication prolongée sous vide à une temperature inférieure à 400C, desdites glycoprotéines. Le solvant organique utilisé pour traiter l'extrait brut des glycopeptides acétyles peut avantageusement être constitué par le chloroforme. La phase aqueuse obtenue après traitement par le solvant organique peut avantageusement être débarrassée des particules insolubles par centrifugation, ultracentrifugation ou filtration. La filtration peut être réalisée au moyen de filtres "Millipore AP 20 et AP 04. La membrane poreuse calibrée présentant un seuil de rétention de substances dont le poids moléculaire apparent est supérieur ou égal à 500 peut de préférence être constituée par une membrane commercialisée sous la désignation UM 05 par la Société AMICON (AMICON - Corporation Lexington - Massachusetts 02713 U.S.A.-). Les membranes poreuses calibrées peuvent également se présenter sous la forme de fibres creuses. La phase aqueuse retenue par la membrane poreuse calibrée peut avantageusement être lyophilisée pour donner les glycopeptides acétylés hydrosolubles de l'invention. Dans des conditions préférentielles de mise en oeuvre de l'invention, le procédé de préparation ci-dessus décrit est ainsi caractérisé en ce que : a) - L'acétolyse est effectuée au moyen d'un melange d'anhydride acétique, d'acide acétique et d'acide sulfurique b) - le solvant organique est constitué par le chloroforme, c) - la membrane poreuse calibrée présentant un seuil de rétention de substances dont le poids moléculaire apparent est supérieur ou égal à 500 est une membrane vendue sous la désignation UM 05 par la Société AMICON. La présente demande a aussi pour objet un procédé de préparation tel que'défini ci-dessus, caractérise en ce qu'il est mis en oeuvre au départ de glycoprotéines extraites de la souche de Pseudomonas Aeruginosa déposée â l'Institut Pasteur à Paris sous le nO 5842. La présente demande a également pour objet les glycopeptides acétylés hydrosolubles obtenus par le procédé décrit ci-dessus. Les glycopeptides acétylés hydrosolubles de l'invention se présentent sous la forme de produits beiges, inodores, neutres et beaucoup plus hydrosolubles que les glycoprotéines dont ils dérivent. Ces glycopeptides sont par contre insolubles dans des solvants tels que l'éthanol, le méthanol, l'acétone, l'éther ou le benzène. Par chromatographie sur Sephadex G 200, on a constaté que le poids moléculaire des produits obtenus est inférieur ou égal à 200.zoo. Le spectre d'absorption Ultra-Violet montre une absorption aux courtes longueurs d'onde (maximum aux environs de 210 m caractéristique de la liaison peptidique, ainsi qu'aux environs de 260 à 280 m M, caractéristique des acides nucléiques et des proté- - ines. Le spectre d'absorption Infra-Rouge confirme la nature peptidique du produit et permet de différencier les glycopeptides obtenus par le procédé, objet de la présente demande, des glycoprotéines dont ils dérivent, par la présence de deux bandes d'absorption à 1730-1700 cm 1 et 1270-1200 cl 1, dues aux liaisons esters de l'acide acétique. Les réactions de caractérisation des sucres (réaction à 1 'orci- nol et au carbazole) sont positives. Les réactions de caractérisation des liaisons peptidiques (réaction du biuret, de Lowry et à la ninhydrine} sont également positives. Les glycopeptides acétylés de la presente demande ne sont pas dialysables, ils sont pharmacologiquement stables à la chaleur (une heure à 1059C) et aux pH extrêmes (pH 3 et pH 10, quinze heures à + 4 C) ; l'action d'une enzyme protéolytique telle que la pronase (vingt-quatre heures à + 370C) ne modifie pas l'activité pharmacologique. L'hydrolyse par l'acide chlorhydrique 6 N à 1100C pendant 24 heures, des glycopeptides acétylés, objet de la présente demande, suivie d'une chromatographie sur plaque de cellulose avec l'un des systèmes solvants suivants : n-butanol, acide acétique, eau (60-30-30-), isopropanol, ammoniaque (2/3-1/3) ou méthanol-pyridine acide acétique-eau (18-50-4-28) montre l'absence d'acide diaminopimélique dans ces hydrolysats. Cette absence d'acide diaminopimelique dans les hydrolysats indique l'origine non membranaire des glycopeptides acétylés obtenus selon l'invention. Les produits, objet de la présente invention, possédent de très intéressantes propriétés pharmacologiques ; ils sont doues notamment de remarquables propriétés antiinflammatoires, d'une bonne activité antibactérienne et immunostimulante, notamment dans la prévention ou le traitement des infections à bacille pyocyanique, ainsi que d'une tres bonne tolérance. Ces propriétés sont illuQtrees plusloin dans la partie expérimentale. Ces propriétés justifient l'utilisation des glycopeptides acé typés hydrosolubles, objet de la présente demande, à titre de médicaments. La présente demande a ainsi également pour objet, l'application, à titre de médicaments, des glycopeptides acétylés tels que définis ci-dessus. Parmi les médicaments de l'invention, on retient entre autres ceux caractérisés en ce qu'ils sont constitués par les glycopeptides acétylés tels qu'obtenus par le procédé de l'invention. Les médicaments de l'invention, trouvent, par exemple, leur emploi dans le traitement des inflammations de la peau, des muqueuses et comme anti-prurigineux, en dermatologie, en oto-rhinolaryngologie, en ophtalmologie, en proctologie ou en gynécologie, dans le traitement des infections intestinales chroniques ou aigues, telles que les colibacilloses, dans le traitement des toxiinfections alimentaires à Salmonelles et à Staphylocoques entérotoxiques, dans le traitement des syndromes dysenteriques d'origine microbienne tels que les Shigelloses, dans le traitement des candi-doses digestives et dans le traitement des infections urinaires à Proteus, ainsi que dans le traitement de toutes les infections à Pseudomonas Aeruginosa (bacille pyocyanique).Parmi les infections à Pseudomonas Aeruginosa, on peut notamment citer les supurations de plaies à pus bleu verdâtre, les otites moyennes purulentes, les septicémies puerpérales, les dysentries infantiles à bacille pyocyanique, les méningites hémorragiques et les gangrènes cutanées. La dose usuelle, variable selon le produit utilisé, le sujet traite et 11 affection en cause, peut être, par exemple, de 0,5 mg à 20 mg par jour, par voie orale chez l'homme. En raison de leurs très intéressantes propriétés immunostimulan tes, les glycopeptides de la présente demande peuvent également être utilisés dans la prévention des affections microbiennes et notamment dans la prévention des affections microbiennes à Pseudomonas Aeruginosa. t'est ainsi que les glycopeptides de la présente invention peuvent être administrés sous forme de vaccin, notamment par voie parentérale. La présente demande a ainsi encore pour objet un vaccin destiné à la prévention et au traitement des affections à Bacille pyocyanique, caractérise en ce qu'il renferme, à titre de principe actif, les nouveaux glycopeptides acétylés hydrosolubles tels que définis ci-dessus. L'invention a enfin pour objet les compositions pharmaceutiques qui renferment les glycopeptides acétylés de la présente demande à titre de principe actif. A titre de medicaments, les glycopeptides acétyles de la présente demande peuvent être administré s par les voies digestive, parentérale ou locale. Les compositions pharmaceutiques correspondantes peuvent être, par exemple, solides ou liquides et se présenter sous les formes pharmaceutiques couramment utilisées en médecine humaine, comme, par exemple, les comprimés, simples ou dragéifiés, les gélules, les granulés, les solutions, les sirops, les suppositoires, les préparations injectables, les ovules, les crèmes, les pommades, les lotions, les gouttes, les collyres ; elles sont preparées selon les méthodes usuelles.Le ou les principes actifs peuvent y être incorporés à des excipients habituellement employes dans ces compositions pharmaceutiques, tels que le talc, la gomme arabique, le lactose, l'amidon, le stéarate de magnésium, le beurre de cacao, les véhicules aqueux ou non, les corps gras d'origine animale ou végétale, les dérivés paraffiniques, les glycols, les divers agents mouillants, dispersants ou émulsifiants, les conservateurs. Les glycoprotéines extraites de corps microbiens lysés de Pseudomonas Aeruginosa possédant un poids moléculaire apparent d'au moins 300.000 peuvent être préparées comme indiqué dans la demande française déposée au nom de la demanderesse le 27 Janvier 1977, sous le numero 77-02268 et ayant pour objet de "Nouvelles glycoprotéines isolées de Pseudomonas Aéruginosa, procédé de préparation et application à titre de médicaments". Selon cette demander le procédé de préparation des glycoprotéines extraites de corps microbiens lysés de Pseudomonas Ae'ruginosa possédant un poids moléculaire apparent d'au moins 300.000 est caractérisé en ce que l'on cultive, sur milieu solide ou liquide, une souche microbienne de Pseudomonas Aéruginosa, récolte, apres complet développement, les corps microbiens, procède à une lyse de ces derniers, recueille le lysat, traite ce dernier au moyen d'un ou de plusieurs solvants organiques, recueille le produit brut résultant, le met en solution aqueuse, soumet cette dernière à une diafiltration sur membrane poreuse calibrée présentant un seuil de rétention de substances dont le poids moléculaire est égal ou supérieur à 300.000 et lyophilise la solution ainsi obtenue. Dans des conditions préférentielles de mise en oeuvre de l'invention, objet de la demande française précitée, le procédé de préparation est caractérisé en ce que a) la lyse des corps microbiens est une lyse enzymatique b) le traitement du lysat au moyen d'un ou de plusieurs solvants organiques est effectué successivement au moyen de l'acétone et du méthanol, c) la membrane poreuse calibrée présentant un seuil de rétention de substances dont le poids moléculaire est égal ou supérieur à 300.000 est une membrane vendue sous la désignation XM 300 par les Sociétés AMICON ou ROMICON. Un exemple d'une telle préparation figure ci-après dans la partie expérimentale. I1 va être donné maintenant, a titre non limitatif, des exemples de mise en oeuvre de l'invention. Exemple 1. Stade A : Acetolyses On sèche à l'étuve sous vide à 40 C pendant 24 heures, 4 g de glycoprotéines extraites de corps microbiens lysés de Pseudomonas Aeruginosa (souche Institut Pasteur nO 5842) possédant un poids moléculaire apparent supérieur à 1 million. On agite le produit obtenu pendant 4 jours à la température de + 49C dans 200 ml de mélange acide acétique - anhydride acétique - acide sulfurique (10-10-15. Après 4 jours, on verse la solution obtenue, goutte à goutte sur 600 g de glace pilée. Après fonte totale de la glace, on amene le pH de la solution à 4,5 par addition de 120 g de carbonate acide de sodium. Stade-B ~ Tra~tement Ear~le~solvant~organ~que. On traite la solution obtenue au stade A ci-dessus 8 fois de suite par 600 ml de chloroforme. On recueille la solution aqueuse finale, centrifuge à 90.000 g pendant 30 minutes et récupère le surnageant. Stade C : Diafiltration On filtre la solution obtenue au stade B ci-dessus sur membrane Millipore AP 20 et AP 04 (1 ) et introduit le filtrat dans un appareil à diafiltrer equipé de membranes poreuses dont le seuil de rétention est de 500 (membranes commercialisées par la Société AMICON sous la désignation UM 05). On fait circuler environ 40 volumes d'eau distillée dans l'appareil jusqu'à ce que l'Ultra-filtrat traversant la membrane ne renferme plus de substances de poids moléculaire inférieur à 1000. On recueille la solution n'ayant pas traversé la membrane, centrifuge en continu à 90.000 g avec ur débit de 6 litres/heure recueille le surnageant et lyophilise. On obtient 1,6 g de glycopeptides acétylés, sous forme d'une poudre beige très hygroscopique. Analyses C e 37 H % 6,2 N % 4,1. Teneurs en - eau 10 % - phosphore 0,09 % - chlore 0 % - protéines - biuret 23 % (liaisons peptidiques) - sucres - orcinol 30 % (hexoses neutres) - carbazole 1,5 % (acides uroniques). Spectres - U.V. : maximum d'absorption à environ 210 m - I.R. - bandes à 1730-1700 cm 1 et 1370 cm 1 - bandes à 127Q-1200 cm 1 - absence d'acide diaminopimélique - poids moléculaire sur Sephadex G 200 inférieur ou égal à 200.000. Les glycoprotéines extraites de corps microbiens lysés de Pseudomonas Aeruginosa (souche--Institut Pasteur n 5842) possédant un poids moléculaire apparent supérieur à 1 million, utilisées comme produit de départ, peuvent être préparées comme suit Stade I : Culture On prépare un milieu de culture répondant à la formule suivante: - extrait de viande........................ viande 130 g - chlorure-de sodium...................... sodium 130 g - peptone de caséine ................. 130 g - autolysat de levure........... levure 130 g - phosphate bipotassique .............. 91 g - phosphate monopotassique ............ 39 g - glucose.......................... glucose 780 g - peptone papainique de soja j 520 g - eau distillée q,s.p................................... q.s.p 26 litres. On prépare le milieu de culture en mélangeant successivement l'extrait de viande, le chlorure de sodium, la peptone de caséine, l'autolysat de levure, le phosphate bipotassique, le phosphate monopotassique dans environ 2 litres d'eau distillée. On ajuste le pH aux environs de 7,4 - 7,5. On stérilise le milieu à 1200C pendant 40 minutes. Les solutions de glucose et de peptone papainique de soja sont intro duites dans le milieu de culture au moment de l'ensemencement après avoir été stérilisées au préalable. La souche de Pseudomonas Aeruginosa (souche Institut Pasteur no 5842) cultivée sur milieu gelosé, est ensemencée dans 50 cm3 de milieu de culture. Cette solution, servant d'inoculum est introduite dans le reste du bouillon de culture. On ajuste le volume total du milieu de culture à 26 litres par addition d'eau distillée stérile. Le milieu de culture est maintenu a 370C et le pH est ajuste automatiquement å 7,4 (par addition d'une solution d'ammo niaque ou par addition d'une solution d'acide chlorhydrique). La croissance des germes est appréciée au photométre ; le nombre de germes est calculé en fonction de la densité optique determinée en comparaison avec une courbe étalon. Après complet développement, soit environ après 7 heures, le milieu renferme environ 1 milliard de germes au cm3. Stade Il : lyse A 26 litres de bouillon de culture obtenu au stade I ci dessus, on ajoute une solution aqueuse de chlorhydrate de lyso zyme (stérilisée par filtration sur membrane millipore 0,22 8) afin d'avoir une concentration finale de 160&gamma; de chlorhydrate de lysozyme par cm3 de milieu de culture. On laisse en contact une heure à 56 C en présence de 0,25 g d'Edta par litre de bouillon, de 862,5 mg de'mercurothiolate sodique et de 80 g de polysorbate (commercialisé sous le nom de Tween 80) par litre de bouillon de culture. On poursuit la lyse pendant 7 jours à 370C dans des conditions stériles. On recueille le lysat, homogénéise par agitation puis lyophilise. On obtient 1404 g d'une poudre brune. Stade III : Traitement. a) Par l'acétone. On met en suspension dans 26 litres d'acétone la totalité de la poudre obtenue au stade II ci-dessus puis agite vigoureusement pendant 3 heures à 3500 tours/minute. Après 3 heures, la suspension est filtrée sur verre fritté. On recueille une poudre jaune que l'on essore rapidement. b) Par le méthanol. La poudre obtenue précédemment (650 g) est mise en suspension dans 26 litres de méthanol froid et agitée vigoureusement pendant 3 heures à 1500 tours/minute. Après 3 heures, la suspension obtenue est décantée, la plus grande partie du surnageant est-soutirée par siphonnage, le restant de la solution est filtré sur verre fritté. La poudre essorée est séchée à température ambiante sous vide pendant 24 heures. On obtient alors 201 g d'une poudre beige claire. Stade IV :Diafiltration On met en solution dans 10 litres d'eau distillee contenant 1 g/litre de merthiolate la totalité de la poudre obtenue au stade III ci-dessus. On maintient la solution sous agitation à + 40C pendant 24 heures, centrifuge pendant 2 heures à 4000 tours/minute puis à 90.000 g dans une centrifugeuse en continu avec un débit de 6 litres/heure. On récupère la solution que l'on complète à 10 litres avec de l'eau distillée filtrée (sur membrane millipore 0,22r). On introduit la solution obtenue dans un appareil à diafiltrer équipé de membranes poreuses dont le seuil de rétention est de 300.000 et le diamétre apparent des pores d'approximativement 2 A (membranes commercialisées par la Société AMICON ou par la Société ROMICON sous la désignation XM 300). On fait circuler dans l'appareil 50 volumes d'eau distillée, soit un volume de 500 litres. La durée de l'opération est d'environ 48 heures. La solution diafiltrée est récupérée puis centriZugée en continu à 90.000 g avec un débit de 6 litres/heure. On obtient 9,5 litres de solution que l'on Iyaphilise. On recueille finalement 4,1 g de glycoprotéines sous forme d'une poudre blanc-beige, cotonneuse et très hygroscopique. Exemple 2 : On a prépare des comprimés répondant à la formule : - glycopeptides obtenus à l'exemple 1 ............. 1 5 mg mg - excipient q.s. pour un comprimé terminé à .... 200 mg. (détail de l'excipient : lactose, talc, amidon, stéarate de magnésium). Exemple 3 On a préparé une pommade répondant à la formule - glycopeptides obtenus à l'exemple 1.......... 200 mg - excipient q.s.p ......... 100 g. Exemple 4 On a préparé un vaccin répondant à la formule I. Flacon de poudre stérile - glycopeptides obtenus l'exemple 1.......... 1 50 micro grammes - excipient de lyophilisation (Mannitol)q.s.p 0,50 ml Il. Ampoule de solvant - solute tamponné isotonique e 1 ml. Le vaccin est préparé extemporanément par addition du soluté tanponné isotonique au contenu du flacon de poudre stérile renfermant les glycopeptides. Etude pharmacologique a) Activité anti-inflammatoire L'activité anti-inflammatoire des produits a été déterminée sur des rats mâles par la technique de l'oedème podal à la carraghénine (WINTER Risley, Nuss) Proc. Soc. Exp. Biol. Med. 1963, 111, 544-547). Les animaux reçoivent dans l'articulation tibio-tarsienne d'une patte postérieure 0,05 ml d'une suspension de carraghénine à 1 %. Le produit étudié est administré par voie intrapéritonéale à des doses de 50 #/ kg et de 100 t/kg une heure avant l'injection de la carraghénine. Le volume de la patte traitée est mesuré a l'aide d'un plethys momètre, avant et 3 heures après l'injection de carraghénine. Les résultats sont exprimés en pourcentage de régression de l'oedème par rapport aux témoins. Les glycopeptides acétylés-obtenus à l'exemple 1 entralnent une régression de l'oedème de 58 % à la dose de 50 //kg et de 76 % à la dose de 100 t/kg. b) Etude de l'appel cellulaire Les glycopeptides acétylés obtenus à l'exemple 1 sont administrés par voie intrapéritonéale à des lots de cobayes à des doses de 50 &gamma;/kg et 100 JP/kg. Une numération des cellules péritonéales est effectuée 48 heures après l'injection des glycopeptides. La comparaison de cette numération avec celle effectuée sur des animaux non traités montre qu'il n'y a pas d'appel cellulaire. c) Etude de la tolérance L'administration par voie sous-cutanée à des souris des glycopep tides acétylés obtenus à l'exemple 1, à des doses de 250 250&gamma;/kg et 1000 &gamma;/kg sous un volume de 0,2 ml ne provoque aucune intolérance locale ou générale. Aucun signe d'inflammation dans le tissu sous-cutané n'a été relevé. d) Activité antibactérienne générale préventive. 1) Contre Klebsiella Pneumoniae. Les glycopeptides acétyles obtenus à l'exemple 1 sont administrés a des doses de 1000 JV/kg et 5000 /kg par voie intrapéritonéale, à des lots de 20 souris 6 jours et 48 heures avant l'injection par la même voie de germes d'une souche de Klebsiella Pneumoniae (souche Institut Pasteur no 51245) correspondant respectivement à 100 et 500 fois la DL50 (dose létale 50). La mortalité est suivie pendant les 7 jours qui suivent l'injec- tion des germes de Klebsiella Pneumoniae et comparée à celle d'un lot témoin d'animaux ayant reçu du sérum physiologique à la place du produit étudié. Les résultats exprimés en pourcentage de protection des animaux traités figurent dans le tableau 1 ci-après TABLEAU 1 ( \ germes . POURCENTAGE DE PROTECTION POUR (DL > Doses50 . 100 x : 500 x en 50 : DL50 . DL50 ( - : ) ( 1000 : 80 : 50 5000 90 70 2) Contre Pseudomonas Les glycopeptides acétylés obtenus a l'exemple 1 sont administrés aux doses de 100 Wkg, 1000 /kg et 5000 //kg par voie intrapéritonéale, à des lots de 20 souris, 6 jours et 48 heures avant l'injection par la même voie de 2,5 x 108 germes de Pseudomonas Aeruginosa (souche Institut Pasteur n 5842) (par souris). La mortalité est suivie pendant les 7 jours qui suivent l'injection des germes et comparée a celle d'un lot temoin d'animaux ayant reçu du sérum physiologique à la place du produit étudié. Apres 7 jours, le pourcentage de protection des animaux traités est de 90 % pour les animaux ayant reçu des doses de 100 de glycopeptides et de 100 % pour les animaux ayant reçu des doses de 1000 ot/kg ou de 5000 /kg de glycopeptides. e) Stimulation des défenses non spécifiques Cette stimulation a été étudiée sur le test de la clearance au carbone chez la souris en s'inspirant de la technique d'Halpern (C.R. Soc. Biol. 148, 1954, 431). Cette stimulation se traduit par une augmentation de l'actif vité phagocytaire après l'injection du produit par voie intrapéritonéale, Les glycopeptides acétylés obtenus à l'exemple 1 donnent, 15 minutes après l'injection du carbone colloidal, une augmentation de 59 % et de 77 % de la phagocytose aux doses respectives de 100 t/kg et de 500 &gamma;/kg. f) Evolution du poids de la rate Deux injections par voie intrapéritonéale à des souris, à 48 heures d'intervalle, des glycopeptides acétylés obtenus à l'exemple 1, aux doses de 1O0fr/kg, 250 &gamma;/kg et 500&gamma;/kg, n'augmentent pas de façon significative le poids de la rate. g) Toxicité aigue - détermination de la DL50 La dose létale 50 (DL50) par voie intrapéritonéale, chez la souris a été déterminée par la méthode de Behrens et Karber. Elle est de 50 mg/kg pour les glycopeptides obtenus à l'exemple 1. REVENDICATIONS 1. Nouveaux glycopeptides acétylés hydrosolubles extraits de corps microbiens lysés, caractérisés en ce que les microorganismes sont constitués par des Pseudomonas Aeruginosa, en ce que lesdits glycopeptides ont un poids moléculaire apparent compris entre 500 et 200.000, en ce qu'ils renferment au moins 20 % de substances a pouvoir biurétogêne et au moins 25 % d'oses neutres, ne renferment pas d'acide diaminopimélique et présentent des maxima d'absorption dans l'Ultra-Violet à environ 210 m 2 et 260 m 2. Glycopeptides acétylés tels que définis à la revendication 1, caractérisés en ce qu'ils renferment de 20 % à 35 % de substances a pouvoir biurêtogène et de 25 % à 35 % d'oses neutres. 3. Glycopeptides acétylés tels que définis à la revendication 1 ou 2, caractérisées en ce que la souche de Pseudomonas Aeruginosa est 1 & souche déposée à l'institut Pasteur a Paris sous le nO 5842. 4. Procédé de -préparation des nouveaux glycopeptides acétylés hydrosolubles, tels que définis à la revendication 1, caractérisé en ce que l'on soumet a une acétolyse des glycoprotéines extraites de corps microbiens lysés de Pseudomonas Aeruginosa, possédant un poids moléculaire apparent d'au moins 300.000, pour obtenir un extrait brut de glycopeptides acétylés, traite ce dernier au moyen d'un solvant organique, recueille la phase aqueuse, effectue une diafiltration de cette dernière sur membrane poreuse calibrée présentant un seuil de rétention de substances dont le poids moléculaire apparent est supérieur ou égal à 500, recueille la solution n'ayant pas traversé la membrane, puis isole de la solution ainsi obtenue le produit recherche. 5. Procédé selon la revendication 4, caractérisé en ce que a) l'acétolyse est effectuée au moyen d'un mélange d'anhydride acétique, d'acide acétique et d'acide sulfurique. b) Le solvant organique est constitué par le chloroforme c) La membrane poreuse calibrée présentant un seuil de rétention de substances dont le poids moléculaire apparent est supérieur ou égal à 500 est une membrane vendue sous la désignation UM 05 par la Société AMICON. 6. Procédé selon la revendication 4 ou 5, caractérisé en ce qu'il est mis en oeuvre au départ de glycoprotéines isolées de la souche de Pseudomonas Aeruginosa telle que définie à la revendication 3. 7. Les glycopeptides acétylés hydrosolubles obtenus par le procédé de l'une des revendications 4, 5 ou 6. 8. Médicaments, caractérisés en ce qu'ils sont constitués par les nouveaux glycopeptides acétylés hydrosolubles, tels que définis à la revendication 1, 2 ou 3. 9. Médicaments, caractérisés en ce qu'ils sont constitués par les nouveaux glycopeptides acétylés hydrosolubles tels que définis à la revendication 7. 10. Compositions pharmaceutiques, caractérisées en ce qu'elles renferment, a titre de principe actif, l'un au moins des médicaments tels que définis à la revendication 8. 11. Compositions pharmaceutiques, caractérisées en ce qu'elles renferment, à titre de principe actif, l'un au moins des médicaments tels que définis à la revendication 9. 12. Vaccin destiné à la prévention et au traitement des affections à Bacille pyocyanique, caractérisé en ce qu'il renferme à titre de principe actif, les nouveaux glycopeptides acétylés hydrosolubles tels que définis a l'une quelconque des revendications 1, 2, 3 ou 7.