Brevet FR2382433A1 — publié le 19780929

La présente invention est relative à-des dérivés. peptidiques de somatostatine, à leurs procédés de préparation, aux compositions pharmaceutiques en contenant, ainsi qutà des produits utilisés dans leur préparation. On sait que le facteur inhibant la libération de somatotropine (SRIF), de type cyclique, connu sous le nom de so matostatine,présente suivant Brazeau et col., Science, 179, 77, (1973), la structure ci-après tous les aminoacides étant de la configuration naturelle ou L. On a décrit dans la littérature plusieurs procédés de synthèse de la somatostatine, notamment le procédé en phase solide de Rivier, J. Am. Chem. Soc., 96, 2986 (1974), et les procédés à solution de Sarantakis et col., Biochemical Biophysical Research Communications, 54, 234 (1973), et d'Immer et col., Helv. Chim. Acta, 57, 730 (1974). I1 y a de nombreuses recherches en cours sur les peptides, dont le but est d'améliorer activité pharmacologique de la somatostatine en modifiant sa structure de manière synthétique. ta forme réduite (forme à channe ouverte) de la somatostatine (RS) est le tétradécapeptide linéaire de la formu le La forme réduite (B) a été préparée par synthèse totale [voir Rivier et col., C.R.Acad.Sci.Ser.p.Sci. Natur. (Paris), 276,2737 (1973), et Sarantakis et McKinley, Biochem. and Biophys. Res. Communications, 54, 234 (1973)] et cette forme peut étre convertie en somatostatine (A) par oxydation de manière qu'une liaison de pontage soit formée entre les deux sulfhydryles des deux fragments aminoacides de cystéinyle dans le tétradécapeptide. On a préparé par synthèse divers polypeptides que l'on peut considérer comme étant des modifications structurales de la somatostatine et ces préparations ont été décrites dans la littérature chimique. De tels polypeptides ont certaines caractéristiques structurales en commun avec la somatostatine et diffèrent de celle-ci en ce que des groupes fonctionnels ou des fragments aminoacides spécifiques, présents à l'origine dans la molécule de somatostatine sont ou bien manquants ou bien remplacés par d'autres groupes fonctionnels ou fragments aminoacides, La présente invention est relative à de nouveaux polypeptides synthétiques, biologiquement actifs, que l'on peut considérer comme une modification structurale de la somatostatine.Les polypeptides de l'invention diffèrent de la somatostatine sous les rapports ci-après (a) le segment Alal-Glyl est présent, manquant ou remplacé par GlyWly, Gly-Gly-Gly, Ala-D-Ala, acétyle, ou benzoyle (b) le reste Lys est remplacé par Arg ou His (c) le reste Asn5 est remplacé par His, Glu, ou Asp ; et (d) le reste Trp8 est ou bien présent ou remplacé par D-Trp ou 6-F-D-Trp. Tous les fragments aminoacides et les aminoacides optiquement actifs sont de la configuration L à moins d'indications contraires. En conséquence, la présente invention prévoit des composés chimiques répondant à la formule I dans laquelle A représente de l'hydrogène ou les deux groupes A forment une liaison directe entre les atomes de soufre ; X représente l'hydrogène, Ala-Gly, Gly-Gly, Ala-D-Ala, Gly-Gly-Gly, acétyle ou benzoyle ; X1 représente His ou Arg ; X2 représente His, Glu ou Asp, X3 représente Trp, D-Trp ou 6-F-D-Trp, et X4 représente Cys ou D-Cys, ainsi que les sels acceptables du point de vue pharmacologique des composés cidessus. En outre, l'invention envisage la forme linéaire des composés de la formule I, c'est-à-dire les composés réduits non cycliques de formule Ia ci-après, qui contiennent deux groupes sulfhydryles libres, ainsi que les sels d'addition d'acide acceptables du point de vue pharmaceutique de ces composés. Les symboles identifiant les aminoacides et les fragments aminoacides dans les polypeptides décrits dans le cas présent sont les symboles qui ont été adoptés par le IUPAC-IVB Committee on Biochemical Nomenclature Recommendation (1971), et ont été décrits dans Archives of Biochemistry and Biophy- sics, 150, 1-8 (1972). Le symbole "6-F-D-Trp" désigne le Dtryptophane, où la position 6 est substituée par du fluor. Les matières tangibles obtenues suivant l'invention présentent les propriétés physiques inhérentes d'être des matières solides de couleur blanche à tan clair, qui sont essentiellement insolubles dans le chloroforme, le benzène, etc., mais qui montrent une solubilité dans l'eau et dans des solutions acides aqueuses, par exemple des solutions d'acide chlorhydrique ou d'acide acétique. Les compositions suivant l'invention ne montrent pas de points de fusion pouvant entre discernés de manière nette et elles peuvent astre purifiées, par exemple par des moyens chromatographiques.Une hydrolyse des compositions suivant l'invention, par exemple dans de l'acide méthanesulfonique 4 N, permet la détermination de leur teneur en aminoacides, qui est compatible avec les structures telles que définies précédemment. Les matières tangibles obtenues suivant l'invention présentent une activité pharmaceutique, en particulier la caractéristique de pouvoir en pratique inhiber la libération d'une ou plusieurs des hormones formées par la somatotropine, le glucagon1 l'insuline, ce qui est mis en évidence par des méthodes d'essai pharmacologiques classiques. Grâce à un con trôle du dosage, la sélectivité d'action permet l'inhibition de la libération e la somatotropine et du glucagon, sans influencer les taux de sécrétion d'insuline endogène. En outre, on peut utiliser les matières tangibles obtenues suivant l'invention en mélange avec de l'insuline pour le traitement des animaux à sang chaud souffrant du dia bète sucré. L'invention englobe également, suivant un aspect plus particulier, les composés chimiques de la formule I, dans laquelle X est de l'hydrogène, X3 est-de préférence D-Trp et X4 est de préférence Cys. Suivant un aspect plus particulier, l'invention en globe a) un composé de formule I, dans laquelle X représente lthy- drogène, Ala-Gly, Ala-D-Ala, Gly-Gly ou Gly-Gly-Gly ; X1 est His ; X2 est His ; X3 est Trp ou D-Trp, et X4 est Cys. b) un composé de formule I, dans laquelle X représente l'hy drogène, Ala-Gly, Aia-D-Ala, Glywly ou Gly-Gly-Gly ; X1 est Arg ; X2 est His ; X3 est Trp ou D-Trp, et X4 est Cys ou D-Cys. c) un composé de formule I, dans laquelle X représente l1hy- drogène, X1 est His, X2 est His, X3 est Trp ou D-Trp, et X4 est Cys ou D-Cys. d) un composé de formule I, dans laquelle X représente l'hy drogène, Ala-Gly, Gly-Gly-Gly, Ala-D-Ala, acétyle ou ben zoyle ; X1 est Arg ou His 7 X2 est Glu ou Asp est Trp ou D-Trp, ou 6-F-D-Trp ; et X4 est Cys ou D-Cys 7 X1 et X2 sont de préférence tous deux His, ou bien X1 représente Arg et X2 représente Glu. Des composés tout particulièrement préférés sont : ainsi que leurs formes réduites (channe ouverte). L'invention envisage également des intermédiaires protégés pour les composés de la formule I, notamment des composés répondant à la formule dans laquelle R est un groupe protecteur de carboxyle (par exemple un alcoyle, un aralcoyle) ou un support de résine de polystyrène, lié à l'intervention d'un groupe de méthylène, c'est-à-dire que,. dans ce cas, R représente -CH2-support de résine de polystyrène ;R1 représente un groupe protecteur de a-amino ou un groupe Ala-Gly, Gly-Gly, Ala-D-Ala ou Gly-Gly Glv protégé en a-amino, ou encore l'acétvle ou le benzovle B1 représente - - - où R est un groupe protecteur pour les atomes d'azote de channe latérale de l'arginine et R2 est l'hydrogène ou un groupe protecteur pour l'atome d'azote d'imidazole de l'histidine ;B2 représente tel que défini ci-dessus, où R et R5 sont respectivement des groupes protecteurs pour les groupes carboxy de chaine latérale de l'acide glutamique et de l'acide aspartique ; R6 est un groupe protecteur pour le groupe amino de chaine latérale de la lysine ; R7, R8 et R9 sont chacun des groupes protecteurs pour les groupes hydroxyles de la thréonine et de la sérine X3 représente Trp, D-Trp ou 6-F-D-Trp T X4 représente Cys ou D-Cys, et a et ,ss représentent chacun un groupe protecteur de sulfhydryle ou de l'hydrogène, ou bien a et P représentent une liaison directe entre les atomes de soufre. Des exemples de groupes protecteurs de a-amino pour R1 ou comme partie de R1 sont : (I) des groupes protecteurs du type acyle, illustrés par : formyle, trifluoroacétyle, phtalyle, -toluènesulfonyle (tosyle), nitrophénylsulfényle, etc. (2) des groupes protecteurs du type uréthanne aromatiques, illustrés par le benzyloxycarbonyle et les benzyloxycarbonyles substitués, notamment le E-chlorobenzyloxycarbonyle et le p- nitrobenzyloxycarbonyle , (3) des groupes prctecteurs du type uréthanne aliphatiques, illustrés par :: tert-butyloxycarbonyle, diisopropylméthoxycarbonyle, isopropyloxycarbonyle, allyloxycarbonyle, 2,2,2-trichloroéthoxycarbonyle, amyloxycarbonyle T (4) des groupes protecteurs du type uréthanne cycloalcoyliques, illustrés par le cyclopentyloxycarbonyîe, l'adamantylcarbonyle, le cyclohexyloxycarbonyle ; (5) des groupes protecteurs du type thiouréthanne, tels que le phénylthiocarbonyle ; (6) des groupes protecteurs du type alcoyle1 tels qu'illustrés par le triphénylméthyle (trityle) ; (7) des groupes de trialcoylsilane, par exemple le triméthylsilane. Le groupe protecteur préféré de a-amino est le tert-butyloxycarbonyle. Des exemples de R3 sont : nitro, tosyle, benzyloxycarbonyle, adamantyloxycarbonyle ou tert-butyloxycarbonyle, avec une préférence pour le tosyle. Une protection via le groupe nitro ou tosyle se fait sur l'un ou l'autre des atomes d'azote NS ou Nez de l'arginine, tandis que les groupes protecteurs du type oxycarbonyle protègent l'atome NS et l'un ou l'autre des atomes d'azote N ou wl . Des exemples de R2 sont : tosyle, benzyloxycarbonyle, adamantyloxycarbonyle et tert-butyloxycarbonyle, de préférence le groupe tosyle. Le groupe amino de chaine latérale de la lysine est protégé par R qui peut être exemplifié par : tosyle, t amyloxycarbonyle, t-butyloxycarbonyle, diisopropyloxycarbonyle, benzyloxycarbonyle, halobenzyloxycarbonyle, nitrobenzyloxycarbonyle, etc., le groupe 2-chlorobenzyloxycarbonyle étant préféré. Des exemples de groupes protecteurs R7, R8 et R9 pour le groupe hydroxyle de la thréonine et de la sérine sont l'acétyle, le benzoyle, le butyle tertiaire et le benzyle, avec une préférence pour ce dernier. Des exemples de R4 et R5 sont le benzyle et le tbutyle. Des exemples des groupes protecteurs a et ss pour le groupe sulfhydryle du fragment aminoacide de cystéine sont le benzyle ; les benzyles substitués dans lesquels le substituant est constitué par au moins l'un des radicaux : méthyle, méthoxy, nitro, ou halo (par exemple 3,4-diméthylbenzyle, p- méthoxybenzyle, -chlorobenzyle, p-nitrobenzyle, etc.), trityle, benzyloxycarbonyle, benzhydryle, P-méthoxybenzyloxyear- bonyle, benzylthiométhyle, éthylcarbamoyle, thioéthyle, tétrahydropyrannyle, acétamidométhyle, benzoyle, sel s-sulfonique, avec une préférence pour le groupe -méthoxybenzyle. La présente invention englobe également des procédés de préparation des composés ci-dessus. On peut préparer les composés de la formule I par enlèvement de tous les groupes protecteurs et du support de résine de polystyrène lorsqu'il y en a un, au départ d'un composé de la formule II tel que défini précédemment, avec ensuite, si on le désire, l'oxydation ou la réduction du produit pour donner la forme cyclique ou à chat ne ouverte, et si on le désire également l'isolement sous forme de la base libre ou sous forme d'un sel acceptable en pharmacologie. La séparation des groupes protecteurs peut etre réalisée par des méthodes connues en pratique pour les groupes protecteurs en question. Les groupes protecteurs sont de préférence enlevés au cours d'une seule phase, par exemple en utilisant de l'acide fluorhydrique en présence d'anisole. Le support de résine de polystyrène peut entre séparé en méme temps que l'enlèvement des groupes protecteurs, par exemple en utilisant de l'acide fluorhydrique en présence d'anisole, ou bien il peut Btre scindé par transestérification pour donner un intermédiaire protégé sur le carboxyle de formule Il, dans laquelle R est une fonction ester. A titre d'exemple, une méthanolyse donne un intermédiaire d'ester méthylique de formule II, dans laquelle R représente le méthyle L'hydrolyse de ces esters donne la fonction carboxyle C-terminale requise. Par un choix approprié des groupes protecteurs, les groupes protecteurs a et i peuvent étre séparé s sélectivement des composés de la formule II pour donner les dérivés disulfhy- dryles libres de formule Il, dans laquelle a et (3 représentent de l'hydrogène. A titre d'exemple, lorsque a et (3 sont un radical trityle ou acétamido, ils peuvent être sélectivement séparés par l'action d'un sel mercurique ou d'un sel d'argent pour obtenir le dérivé disulfhydryle correspondant sous la forme de son sel mercurique ou de di-argent correspondant.Ce dernier sel peut étre soumis à l'action d'hydrdgène sulfuré pour obtenir le dérivé disulfhydryle libre correspondant de formule Il. Les dérivés disulfhydryles libres des formules I et II peuvent chacun être cyclisés par oxydation en utilisant un agent oxydant, par exemple de l'iode, de l'oxygène (tel que de l'air), du l,2-diiodoéthane ou du ferricyanure de sodium ou de potassium, pour obtenir le composé correspondant de formule I, dans laquelle les deux groupes A forment une liaison directe, et de formule II, dans laquelle a et a forment une liaison directe. Les produits polypeptides finals et leurs intermédiaires nécessaires peuvent se préparer par le procédé en phase solide bien connu, tel que décrit, par exemple, par Merrifield, J. Am. Chem. Soc. 85 2149 (1963), ou encore par une synthèse classique. La présente invention prévoit donc également un procédé de préparation d'un composé de formule II, dans laquelle a ét p sont des groupes protecteurs et R représente un support de résine de polystyrène, ce procédé comprenant la combinaison séquentielle des aminoacides convenablement protégés et/ou activés requis sous des conditions de synthèse en phase solide pour donner un support de résine chlorométhylé ou hydroxyméthylé.A titre de variante, les composés de la formule II, dans laquelle a et ,B sont des groupes protecteurs et R est un groupe protecteur de carboxyle peuvent se préparer par combinaison des aminoacides convenablement protégés et/ou activés requis ou des groupes d'aminoacides de ce genre par des procédés connus pour la formation de liaisons peptidiques afin d'obtenir la séquence désirée d'aminoacides. Les groupes protecteurs a et ss peuvent ensuite étre séparés sélectivement et le produit peut etre oxydé pour former le disulfure cyclique de formule II, dans laquelle a et 5 forment une liaison directe. Des procédés d'activation des aminoacides avant la combinaison, et les procédés de combinaison eux-memes sont bien connus en pratique et on peut se reporter notamment au manuel de Schroder et Lukke mentionné précédemment. Dans le choix d'un groupe protecteur particulier de channe latérale à utiliser dans la synthèse des peptides suivant l'invention, on devrait suivre les règles suivantes : (a) le groupe protecteur de chaine latérale doit être stable visà-vis du réactif et sous les conditions de réaction choisies pour la séparation du groupe protecteur de a-amino à chaque étape de la synthèse ; (b) le groupe protecteur doit conserver ses propriétés protectrices (c'est-à-dire ne pas se séparer sous les conditions de combinaison), et (c) le groupe protecteur de chaine latérale doit etre séparable à la fin de la synthèse comportant la séquence désirée d'aminoacides sous des conditions de réaction qui ne modifieront pas la chaine peptidique. Dans le procédé classique tel qu'appliqué aux composés suivant la présente invention, le peptide désiré est construit par condensation d'aminoacides ou de groupes d'aminoacides qui sont protégés suivant les nécessités. Les réactions de condensation peuvent etre réalisées en utilisant des procédés connus d'une façon générale pour la formation de liaisons d'amide dans la chimie des peptides et des pénicillines. Pour favoriser une condensation facile des aminoacides, il est préférable d'utiliser un agent de condensation. Des exemples d'agents de condensation sont les carbodiimides, par exemple le N,N' -dicyclohexylcarbodiimide (DCC), le N,N'-diisopropylcarbodiimide. A titre de variante, la condensation peut etre réalisée en activant l'un des groupes terminaux ou les deux. Des exemples de la forme activée du carboxyle terminal sont le chlorure d'acide, l'anhydride d'acide, l'azoture d'acide et l'ester activé. I1 sera évident pour les spécialistes en ce domaine que le procédé proposé de réalisation des réactions de condensation doit etre compatible avec les groupes protecteurs existant sur les aminoacides. Dans la construction de la molécule par l'intermédiaire du procédé classique, il est préférable de condenser un peptide protégé de la formule avec peptide protégé de formule dans laquelle R est un groupe protecteur de carboxyle (de préférence le benzoyle), R11 R61 R, R81 R, B1r B2, X3 et X4 sont tels que définis précédemment, et a et (3 sont des groupes protecteurs, de préférence le p-méthoxybenzyle, afin d'obtenir un composé de formule II qui est débarrassé de sa protection et cyclisé. Dans le procédé en phase solide, tel qu'appliqué aux composés suivant la présente invention, la cystéine protégée en a-amino et en sulhydryle est d'abord attachée à une résine de polystyrène chlorométhylée, avec ensuite séparation du groupe protecteur de a-amino en utilisant de l'acide trifluoroacétique dans du chlorure de méthylène, de l'acide trifluoroacétique seul ou du HCl dans du dioxane. La suppression de la protection est réalisée à une température comprise entre environ OOC et la température ambiante. D'autres réactifs et conditions classiques de séparation pour l2enlèvement des groupes protecteurs de a-amino peuvent s'utiliser comme décrit par Schroeder et Lubke, "The Peptides", 1, 72-75 (Academic Press, 1965). Après enlèvement du groupe protecteur de aamino, les aminoacides protégés désirés suivants sont combi- nés individuellement à la séquence supportée sur la résine, et ce en série. A titre de variante, de petits fragments de peptide peuvent astre préparés, par exemple par le procédé à solution, et introduits dans la réaction en phase solide dans l'ordre désiré. Chaque aminoacide protégé ou chaque séquence d'aminoacides protégés est introduit dans la réaction en phase solide en un excès d'environ quatre fois. La combinaison est réalisée dans du diméthylformamide, du chlorure de méthylène ou un mélange de ces deux solvants. Le succès de chaque réaction de combinaison à chaque stade de la synthèse est déterminé par la réaction à la ninhydrine, telle que décrite par E. Kaiser et col., Analyt. Biochem., 34, 595 (1970). Lorsqu'une combinaison incomplète s'est produite, la réaction est répétée avant que le groupe protecteur de a-amino soit séparé pour l'introduction de l'aminoacide suivant ou de la séquence suivante d'aminoacides. Les réactifs préférés de combinaison sont le l-hydroxybenzotriazole et le diisopropylcarbodiimide mais d'autres réactifs intéressants sont connus des spécialistes. Après que la séquence désirée d'aminoacides a été synthétisée, le polypeptide est séparé du support de résine par traitement, par exemple avec de l'acide fluorhydrique et de l'anisole, afin d'obtenir le polypeptide linéaire totalement débarrassé de ses protections. Le disulfure cyclique peut étre produit par oxydation à l'air ou, par exemple, par oxydation avec du K3Fe(CIZ)6. Les sels d'addition non toxiques des polypeptides linéaires et cycliques sont produits par des procédés bien connus en pratique au départ des acides chlorhydrique, bromhydrique, sulfurique, phosphorique, polyphosphorique, maléique, acétique, citrique, benzoïque, succinique, malonique, ascorbique, etc., le sel d'acide acétique étant préféré. Les groupes protecteurs utilisés dans la totalité de la synthèse en phase solide sont bien connus en pratique. Les groupes protecteurs de a-amino, utilisés avec chaque aminoacide introduit dans la séquence du polypeptide final, sont (1) des groupes protecteurs du type acyle, illustrés par formyle, trifluoroacetyle, phtalyle, p-toluènesulfonyle (tosyle), nitrophénylsulfényle, etc. ; (2) des groupes protecteurs du type uréthanne aromatiques, illustrés par le benzyloxycarbonyle et les benzyloxycarbonyles substitués, tels que le P- chlorobenzyloxycarbonyle, le E-nitrobenzyloxyearbonyle ; (3) des groupes protecteurs du type uréthanne aliphatiques, illus trés par :: tert-butyloxycarbonyle, diisopropylméthoxycarbonyle, isopropyloxycarbonyle, allyloxycarbonyle, 2,2,2-trichloroéthoxycarbonyle, amyloxycarbonyle ; (4) des groupes protecteurs du type uréthanne cycloalcoyliques, illustrés par : cyclopen tyloxycarbonyle, adamantyloxycarbonyle, cyclohexyloxycarbonyle ; (5) des groupes protecteurs du type thiouréthanne, tels que le phénylthiocarbonyle ; (6) des groupes protecteurs du type alcoyle, tels qu'illustrés par le triphénylméthyle (trityle) ; (7) des groupes de trialcoylsilane, par exemple le triméthylsilane. Le groupe protecteur préféré de a-amino est le tert-butyloxycarbonyle. L'atome d'azote d'imidazole de l'histidine, désigné par Nim , est protégé par un groupe qui peut être : tosyle, benzyloxycarbonyle, adamantyloxycarbonyle ou tert-butyloxycarbonyle, de préférence le groupe tosyle. La protection pour le groupe amino de channe latérale de la lysine peut se faire par un groupe pouvant être : tosyle, t-amyîoxycarbonyle, t-butyloxycarbonyle, diisopropyloxycarbonyle, benzyloxycarbonyle, halobenzyloxycarbonyle, nitrobenzyloxycarbonyle, etc., de préférence le groupe 2-chloroben zyloxycarbonyle, Les atomes d'azote de chaine latérale de l'arginine, désignés par Ng, sont protégés par un groupe qui peut être : nitro, tosyle, benzyloxycarbonyle, adamantyloxycarbonyle ou tert-butyloxcarbonyle, de préférence le tosyle.La protection via le groupe nitro ou tosyle se fait sur l'un ou l'autre des atomes d'azote Nu ou NWI , tandis que des groupes protec- teurs du type oxycarbonyle protègent l'atome N et l'un ou l'autre des atomes d'azote N ou NW1. La protection pour le groupe hydroxyle de la thréonine et de la sérine peut se faire par l'acétyle, le benzoyle1 le butyle tertiaire, le benzyle. Le groupe benzyle est préféré à cet effet. Le groupe protecteur pour le groupe sulfhydryle du fragment aminoacide de cystéinyle est un groupe choisi dans la classe comprenant : le benzyle ; et les benzyles substitués, dans lesquels le substituant est constitué par au moins un des radicaux suivants : méthyle, méthode, nitro, ou halo (par exemple 3,4-diméthylbenzyle, E-méthoxybenzyle, E-chlorobenzyle, p-nitrobenzyle, etc.), trityle, benzyloxycarbonyle, benzhydryle, P-méthoxybenzyloxyearbonyle, benzylthiométhyle, éthylcarbamoyle, thioéthyle, tétrahydropyrannyle, acétamidométhyle, benzoyle, sel s-sulfonique, etc., le groupe p-méthoxybenzyle étant préféré. Les compositions suivant la présente invention, comme la somatostatine elle-meme, peuvent exister ou bien sous la forme à chaine ouverte monomère (dite forme "réduite"), ou bien sous la forme cyclique monomère (dite forme "oxydée"). Chacune de ces formes peut etre produite grace à un procédé essentiellement identique à celui utilisé pour obtenir la forme correspondante de la somatostatine elle-même. Ces procédés sont connus des spécialistes en ce domaine. La forme "réduite" est représentée ici par la structure dans laquelle "A" est de l'hydrogène, ; de la sorte, il y a des substituants thiols libres sur les deux fragments aminoacides de Cys. La forme "oxydée" est représentée ici par la même structure lorsque les deux groupes "A" représentent une liaison directe, c'est-àdire qu'il y a une seule liaison entre les atomes de soufre portés par les deux fragments aminoacides de Cys1 de sorte qu'un cycle monomère est formé. En outre, les composés suivant la présente invention peuvent exister sous la forme dite "réduite polymère (voir par exemple le brevet des Etats-Unis d'Amérique nO 3.926.937), cette forme pouvant être obtenue par le procédé décrit en pratique pour l'obtention d'une somatostatine réduite polymère. Cette forme polymère peut être illustrée par la formule dans laquelle- X, X- et X2 ont la définition donnée pour la formule I, M est égal à O ou à 1, et N est un nombre entie-r de 2 à 100 inclusivement. Dans la structure entre parenthèses, lorsque X est différent de H, les liaisons soufre-soufre sont formées au hasard entre Cys3-Cys3 3 14 Cys , et Cys14 14 Cys -Cys , -Cys (où X désigne H, Cys au lieu de Cys3, etc.). La structure est cyclique lorsque M est égal à 1, c'est-à-dire lorsque le composé ne contient pas de groupes SH libres et qu'il y a une liaison entre les atomes de soufre portés par les fragments Cys terminaux.Pour les besoins de la présente invention, les formes réduites polymères sont, du point de vue qualitatif, tout à fait équivalentes des composés revendiqués plus-particu- lièrement. L'activité pharmacologique des peptides suivant la présente invention caractérise les composés comme étant intéressants dans le traitement de l'acromégalie et du diabète de la même manière que dans le cas de la somatostatine elle-même. L'administration des peptides peut se faire par les voies traditionnelles courantes pour la somatostatine et les polypeptides apparentés, d'après les indications d'un médecin, et ce en une quantité dictée par le degré de dysfonctionnement déterminé par le médecin. On peut administrer les composés seuls ou en combinaison avec des supports et des adjuvants traditionnels, acceptables en pharmacie, sous la forme de doses unitaires. Comme on l'a signalé précédemment, les compositic,rs suivant la présente invention sont également intéressantes en mélange avec l'insuline pour le traitement d'animaux à sang chaud souffrant du diabète sucré. On-peut se reporter, par exemple, au brevet des Etats-Unis d'Amérique nO 3.912.807, qui prévoit l'utilisation d'une quantité efficace d'une composition comprenant de la somatostatine en mélange avec de l'insuline pour le traitement d'animaux à sang chaud souffrant du diabète sucré. Dans l'utilisation thérapeutique à titre d'agents pour le traitement de l'acromégalie, du diabète juvénile et du diabète sucré, le traitement est amorcé avec de petites doses qui sont inférieures à la dose optimale du composé. Ensuite, la dose est accrue par petites quantités jusqu'à ce que l'on atteigne l'effet optimal sous les circonstances en cause. D'une façon générale, les composés de l'invention sont administrés à un taux de dosage qui donnera d'une façon générale des résultats efficaces sans provoquer d'effets secondaires nuisibles ou désagréables. Les doses peuvent cependant être modifiées suivant les exigences relatives au patient et suivant le composé que l'on utilise. Pour la commodité, la dose journalière totale peut être- subdivisée et administrée par portions sur la journée, et ce suivant les désirs. En conséquence, l'invention englobe en outre des compositions pharmaceutiques comprenant un composé de la formule I ou un sel acceptable du point de vue pharmacologique de celui-ci, en association avec un support ou véhicule acceptable du point de vue pharmacologique. Ces compositions pharmaceutiques sont de préférence sous la forme de doses unitaires. Les Exemples suivants illustreront plus complètement encore la présente invention sans pour autant limiter le cadre de celle-ci. Exemple 1 tert-Butyloxycarbonyl-S--Méthoxybenzyl-tCysté inyl-Nim -To syl- im L-Histidyl-N -Tosyl-L-Histidyl-L-phénylalanyl-L-Phénylalanyl- D-TryptophylNS-Z-Chlorobenzyloxyearbonyl-L-3;ysyl-O-Benzyl-I.- Thréonyl-L-Phénylalanyl-O-Benzyl-L-Thréonyl-O-Benzyl-L-Séryl- S-p-Méthoxybenzyl-L-Cystéinyl-Hydroxyméthylpolystyrène, ester Une résine de polystyrène chlorométhylée (Lab Systems7 Inc.), réticulée à 1% avec du divinylbenzène, est estérifiée avec du BOC-Cys-(SMBzl)OR suivant Gisin, Helv. Chim. Acto, 56, 1976 (1973). L'ester de résine de polystyrène est traité suivant le Programme A pour l'incorporation de BOC- Ser(Bzl)OH, BOC-Thr (Bzl) OH, BOC-Phe-OH, BOC-Thr(Bzl)OH, BOC- LystClz) OH, BOC-D-Trp-OH, BOC-Phe-OH, BOC-Phe-OH, BOCr His(Tos)OH, BOC-His(Tos)OH, et BOC-Cys(SMBzl)OH afin d'obtenir la peptidorésine citée en rubrique. Programme A 1. Lavage avec du CH2Cî2x3 ; 2. Traitement avec du TFA-CH2C12-EDT (1/1/5%, v/v) pendant 5 minutes T 3. Traitement comme suivant (2) pendant 25 minutes T 4. Lavage avec du CH2C12 x ; 5. Lavage avec du DMF; 6. Traitement avec du TEA à 12% dans du DMF, deux fois, pen dant 3 minutes ; 7. Lavage avec du DMF 8. Lavage trois fois au CH2C12; 9. Traitement avec 4 équivalents du dérivé aminoacide corres pondant dans du CH2C12-DMF et agitation pendant 5 minutes T 10.Addition en deux portions, de 5 équivalents de DIC en dis solution dans du CH2C12 sur une période de 30 minutes, du rée de réaction de 6 heures ; 11. Lavage avec du DMF x 3 12. Lavage avec du CH2C12 x 3 ; 13. Réaction d'essai à la ninhydrine, suivant Kaiser et col., Annal. Biochem., 34, 595 (1970). Dans le cas d'une réaction incomplète, on répète les phases opératoires de 9 à 13 ci dessus. Exemple 2 Disulfure cyclique (1-12) de L-Cystéinyl-L-Histidyl-L-Histi- dyl-L-phénylalanyl-L-Phénylalanyl-D -Tryptophyl-L-Lysyl-t- Thréonvl-t-Phénylalanvl-t-Thréonyl-L-Séryl-t-Cvstéine On mélange la peptidorésine de l'Exemple 1 (9 g) avec 18 mg d'anisole et on traite avec du HF liquide (180 ml) pendant 45 minutes dans un bain de glace. On sépare l'excès de HF sous vide aussi vite que possible (environ 1 heure) et on extrait le reste avec de l'acide acétique glacial 2 M, puis on filtre. Le filtrat est lavé à l'éther et la couche aqueuse est oxydée avec du K3Fe(CN)G à un pH de 7. L'excès d'oxydant est séparé par une résine échangeuse d'ions Bio-Rad AG-3, puis on absorbe le peptide sur- une résine échangeuse d'ions Bio Rex 70 et on élue avec un tampon de pyridine de pH 7 pour obtenir, après lyophilisation, 1,5 g de matière que l'on applique sur une colonne de Sephadex G 15 (2,5 cm x 160 cm) et que l'on élue avec de l'acide acétique aqueux à 15%. Les fractions (5,2 ml chacune) des tubes 88-90 sont rassemblées et lyophilisées pour donner le composé en rubrique, 174 mg. R f (BWA, 4/1/1) 0,45 R f SWAP, 30/24/6/20) 0,64 Analyse des aminoacides Thr(2): 1,87 ; Ser(l): 0,89 ; Cys(2): 1,16 ; Phe(3):3; Lys(1): 1,05 ; His(2): 1,76 ; Trp : non déterminé. Exemple 3 L'activité pharmacologique in vivo du dodécapeptide préparé suivant l'Exemple 2 a été établie par les procédés suivants avec les résultats indiqués. Suppression de l'hormone de croissance Une injection sous-cutanée de peptide solubilisé ou mis en suspension dans une solution saline physiologique est faite à des rats males Charles River CD, qui ne sont pas à jeun. Des rats correspondants ayant subi une injection souscutanée d'une solution saline témoin servent d'animaux témoins de manière que chaque rat expérimental soit accompagné d'un rat témoin. Les rats sont maintenus dans des cages séparées et, 20 minutes avant la fin de la période d'essai, ils recoi- vent une injection dans le péritoine de Nembutal à une dose de 50 mg/kg. On obtient des échantillons de sang par une ponction cardiaque et on sépare le plasma pour la détermination par voie radio-immunologique de la concentration d'hormone de croissance (GH) en ng/ml.On prévoit des périodes de 2 et 4 heures après injection pour vérifier la durée de l'activité du peptide dans la suppression des taux de GH périphérique en circulation. Des comparaisons entre les valeurs de GH obtenues sur les rats témoins et sur les rats expérimentaux à chacun des moments indiqués sont estimées par la méthode d'essai "t" de Student et la signification statistique (p) au taux de 0,05 ou à un taux inférieur est utilisée à titre d'indice d'activité. Composé (dose) 2 hres 4 -hres Témoin 118 t 20 115 t 23 Exemple 2 (1 mg/kg) 32 t 6 62 t 13 p = Suppression de l'hormone de croissance, du glucagon et de l'insuline On répartit des rats males albinos en trois groupes (9 rats par groupe) et on leur injecte dans le péritoine du Nembutal à raison de 50 mg/kg. Quinze minutes après l'injection de Nembutal, on injecte par voie sous-cutanée suivant le groupe : (a) le composé essayé, normalement à raison de 102000 llg/kg; (b) du SRIF à raison de 200 pg/kg, ou (c) une solution saline physiologique.Dix minutes plus tard, on injecte dans le coeur 0,5 ml d'arginine (300 mg/ml, pH de 7,2). Les rats sont décapités 5 minutes après avoir reçu l'arginine et on récolte leur sang dans du Trasylol-EDTA. De petites quantités appropriées sont alors soumises à une détermination quant à l'hormone de croissance, au glucagon et à l'insuline. Un composé actif est un composé qui modifie de façon significative le taux, dans le plasma, de l'une quelconque de ces hormones par rapport aux animaux témoins traités par la solution saline. Des comparaisons entre les valeurs témoins et les valeurs expérimentales sont estimées de manière statistique par l'analyse de variance, et la signification statistique (p) au taux de 0,05 ou moins est utilisée à titre d'indice d'activité. Composé Insuline Glucagon (Dose ijg/kc) GH(nq/ml) (IlU/ml) (w/ml) Témoin 163 t 29 278 t 32 69 + 13 Exemple 2 (100) 20 + 8 202 t 49 20 t 8 p ' 0,05 p = Exemple 4 tert-Butyloxyzarbonyl-S-p-Méthoxybenzyl-L-CyStéinyl-Ng -Tosyl- L-Arginyl-Nim -To syl-L-Histidyl-L-Phénylalanyl-L-Phénylalanyl- D-Tryptophyl- N 2-Chlorobenzyloxycarbonyl-L-Lysyl-O-Benzyl- L-Thréonyl-L-Phénylalanyl-0-Benzyl-L-Thréonyl-O-Benzyl-L-Séryl- S-p-MEthoxybenzyl-L-Cystéinyl-Hydroxyméthylpolystyrène, ester. Une résine de polystyrène chlorométhylée (Lab Systems, Inc.), réticulée à 1% avec du divinylbenzène, est estérifiée avec du Boc-Cys(SMBzl)-OH suivant Gisin, Helv. Chim Acta, 56, 1976 (1973). L'ester de résine de polystyrène est traité suivant le Programme A ci-après pour l'incorporation de Boc-Ser(Bzl)-OH, Boc-Thr(Bzl)-OH, Boc-Phe-OH, Boc-Thr(Bzl) OH, Boc-Lys(ClZ)-OH, Boc-D-Trp-OH, Boc-Phe-OH, Boc-Phe-OH, Boc-His(Tos)-OH, Boc-Arg(Tos)-OH et Boc-Cys(SMBzl)-OH, afin d'obtenir la peptidorésine citée en rubrique. Programme A 1. On lave trois fois avec du CH2C12; 2. On traite avec du TFA-CH2C12-EDT (1/1/5%, v/v) pendant 5 minutes 3. On traite comme suivant (2) pendant 25 minutes ; 4. On lave avec du CH2C12 x 3 5. On lave avec du DMF 6. On traite avec du TEA à 12% dans du DMF, deux fois pendant 3 minutes 7. On lave avec du DMF, 8. On lave avec du CH2C12 x 3 ; 9. On traite avec 4 équivalents du dérivé aminoacide corres pondant dans du CH2C12-DMF et on agite pendant 5 minutes 10. On ajoute en deux portions, 5 équivalents de DIC en disso lution dans du CH2C12 sur une période de 30 minutes, durée de réaction de 6 heures T 11. On lave avec du DMF x 3 12. On lave avec du CH2C12 x 3 ; 13.On procède à un essai par la réaction à la ninhydrine sui vant Kaiser et col., Anal. Biochem., 34, 595 (1970). Dans le cas d'une réaction incomplète, on répète les phases opératoires suivant 9 à 13 ci-dessus. Exemple 5 Disulfure cyclique (1-12) de L-Cystéinyl-L-Arginyl-L-Histidyl L-Phénylalanyl-L-Phénylalanyî-D -Tryptophyl-t-Lysyl-L-Thréonyl- L-Phénvlalanyl-L-Thréonyl-L-Séryl-L-Cyst On mélange la peptidorésine de l'Exemple précédent (8,5 g) avec 16 ml d'anisole et on traite avec du HF liquide (100 ml) pendant 45 minutes. On sépare l'excès de HF sous vide aussi vite que possible et on reprend le reste dans de l'acide acétique aqueux à 25%. Le support polymère est séparé par filtration et on lave le filtrat à l'éther. La couche aqueuse est versée dans 3,5 litres d'eau, on règle le pH avec du NH40H à 7, et on oxyde ensuite le composé sulfhydryle avec du K3Fe(CN)6. Le pH est ajusté à 5 avec de l'acide acétique glacial et on sépare l'oxydant inorganique avec du Bio-Rad AG 3. La matière peptidique est absorbée sur du Bio-Rex 70 et on élue avec un tampon de pyridine de pH 7 pour obtenir le composé brut, 2 g. On fait passer cette matière à travers une colonne de Sephadex G-15 (2,5 x 160 cm) et on élue avec du AcOH aqueux à 15%. La matière des fractions 47 à 93 (5,2 ml pour chaque fraction) (886 mg) est appliquée sur une colonne de CM-Sephadex G-25 et on élue avec un gradient de NH40Ac progressif (NH40Ac 0,1 à 0,3 molaire)pour obtenir le composé cité en rubrique. Cette matière est appliquée sur une colonne de Sephadex LH 20 (2,5 x 92 cm) et on élue avec du AcOH aqueux à 10%. Le composé en rubrique émerge à l'état pur dans les fractions 55 à 63 (4,1 ml chacune). Production : 159 mg. Rf (BWA, 4/1/1): 0,46 R f (SWAP, 30/24/6/20): 0,65 Analyse des aminoacides Thr (2): 1,94 ; Ser ( 0,91 ; Cys (2): L,79 7 Phe (3): 3 ; His (1): 1,02 ; Lys (1): 0,85 Arg (1): 0,95 ; Trp : non déterminé. Exemple 6 L'activité pharmacologique in vivo du composé préparé suivant l'Exemple 5 a été déterminée par le procédé suivant avec les résultats indiqués, Suppression de l'hormone de croissance, du qlucaqon et de l'insuline On répartit des rats molles albinos en deux groupes (9 rats par groupe) et on leur injecte dans le péritoine du Nembutal à raison de 50 mg/kg. Quinze minutes après l'injection de Nembutal, on injecte par voie sous-cutanée le composé d'essai à l'un des groupes et une solution saline physiologique à l'autre groupe. Dix minutes plus tard, on injecte 0,5 ml d'arginine (300 mg/ml, pH de 7,2) dans le coeur des rats. Ceux-ci sont décapités 5 minutes après avoir reçu l'arginine et on récolte le sang dans du Trasylol-EDTA. De petites quantités appropriées sont soumises à détermination pour ce qui concerne l'hormone de croissance (GH), le glucagon (GLUN) et l'insuline (INS). Un composé actif est un composé qui modifie de façon significative le taux, dans le plasma, de l'une quelconque de ces hormones par rapport aux rats traités avec la solution saline. Des comparaisons entre les valeurs témoins et les valeurs expérimentales sont estimées de manière statistique par l'analyse de variance, et on utilise la signification statistique (p) au taux de 0,05 ou moins à titre d'indice d'activité. Résultats Expé- Dose GH INS GLUN rience g/Kq nq/ml N/ml Pq/ml 1 --- 257 + 49 177 + 19 61 + 9 100 61 + 5 52 + 16* o ;t o + 2 --- 131 + 43 262 t 26 42 - 6 10 71 t 21t 238 + 72 4 + 3 * p 0,01 Exemple 7 tert-Butyloxy c arb onyl-S-p-Méthoxybenzyl-L-Cystéinyl-im-Tosyl- L-Histidyl-im-Tosyl-L-Histidyl-L-Phénylalanyl-L-Phénylalanyl- D-Tryptophyl--2-Chlorobenzyloxyearbonyl-LLySyl-O-Benzyl-L- Thréonyl-t-Phénylalanyl-0-Benzyl-L-Thréonyl-O-Benzyl-t-Séryl- S-p-Métoxybenzyl-D-Cystéinyl-Hydroxyméthylpolystorrène, ester Une résine de polystyrène chlorométhylée (Lab Systems, Inc.) réticulée à 1% avec du divinylbenzène, est estérifiée avec du Boc-D-CystSMBzl)OH suivant Gisin, Helv. Chim. Acta, 56 1976 (1973). L'ester de résine de polystyrène est traité suivant le programme A pour l'incorporation de Boc Ser(Bzl)OH, Boc-Thr(Bzl)OH, Boc-Phe-OH, Boc-Thr(Bzl)OH, Boc Lys(ClZ) OH, Boc-D-Trp-OH, Boc-Phe-OH, Boc-Phe-OH, Boc-His(Tos) OH, Boc-His(Tos)OH et Boc-Cys(SMBzl)OH, afin d'obtenir la peptidorésine citée en rubrique. Exemple 8 Disulfure cyclique (1-12) de L-Cystéinyl-L-Histidyl-Histidyl-L- Phénylalanyl-L-Phénylalanyl-D-Tryptophyl-L-Lysyl-L-Thréonyl- L-Phénylaîanyl-t-Thréonyl-L-Séryl-D-Cystéine, sel diacétate La peptidorésine de l'Exemple précédent (10 g) est mélangée avec 20 ml d'anisole et traitée avec du HF liquide (150 ml) dans un bain de glace pendant 45 minutes et à l'ex- clusion de l'air. L'excès de HF liquide est séparé sous vide et le reste est repris dans du AcOH aqueux à 50. Le mélange est filtré et le filtrat est dilué à l'eau jusqu'à 3,5 litres. On ajuste le pH à 7 avec du NaOH dilué et on oxyde le peptide disulfhydryle avec du K3F(Cs)6 pour obtenir le disulfure cyclique. Le pH du mélange est ajusté à 5 avec du AcOH glacial et traité avec du Bio-Rad AG 3. La matière peptidique est absorbée sur du Bio-Rex 70 (forme H ) et éluée avec un tampon de pyridine (Py-H20-AcOH, 30/66/4, v/v). les fractions contenant la matière peptidique sont rassemblées et lyophilisées pour donner 1,6 g de matière brute. Cette dernière est appliquée sur une colonne de Sephadex LH-20 (2,5 x 90 cm) et éluée avec du AcOH aqueux à 10% (fractions de 5,8 ml chacune). La matière qui émerge dans les fractions 97-101 est rassemblée et lyophilisée pour obtenir le dodécapeptide cité en rubrique, 171 mg. Chromatographie en couche mince, plaques de verre préalablement enrobées de Avicel, Rf (BWA, 4/1/1, v/v) : 0,32 ; Rf (BWAP, 30/24/6/20, v/v): 0,56. Analyse des aminoacides: Thr(2): 1,85 ; Ser(l): 0,84 ; Cys(2): 1,29 ; Phe(3): 3 ; Lys(l): 1,05 ; His(2): 1,41 ; Trp(l): 0,75. L'activité pharmacologique in vivo du dodécapeptide préparé suivant l'Exemple 8 a été établie par les méthodes détaillées à la fin de l'Exemple 3. Les résultats obtenus sont les suivants. Suppression de lthormone de croissance Composé (dose) 2 hres 4 hres Témoin 127 + 22 59 + 20 Exemple 8 (1 mg/kg) 20 + 3 107+ 34 n (p 0,001 Suppression de l'hormone de croissance, de qlucaqon et d'insuline Composé Insuline Glucagon (dose, ,lq/kq) GH (nq/ml) ( .U/ml) (pq/ml) Témoin 279 + 53 323 + 30 42 t 6 Exemple 8 (100) 64 + 20* 165 + 21 5 + 2* Témoin 201 + 35 397 + 36 117 + Exemple 8 (100) llo t 22+ 318 t 54 70 + 7* * 3f p (0,01 + p De ce qui précède, on peut voir qu'aux faibles doses, le peptide de l'Exemple 8 est spécifique pour la suppression du glucagon et de l'hormone de croissance, sans influencer la sécrétion d'insuline. Exemple 9 tert-Butyloxycarbonyl-S-p-méthoxybenzyl-L-cystéinyl-Ngn-tosyl- L-arginyl-X-benzyl-L-glutamyl-L-phénylalanyl-L-phénylalanyl-D tryptophyl-N -2-chîoro b en zy loxycarbonyl-l-lysyl-O-benzyl-L- thréonyl-L-phénylalanyl-O-benzyl-L-thréonyl-O-benzyl-L-séryl- S-p-méthoxybenzol-L-costéine-Hydroxyméthylpolystyrène, ester Une résine de polystyrène chlorométhylée est estérifiée avec du Boc-Cys(SMBzl)-OH, suivant le procédé de Gisin, Helv. Chim. Acta., 56, 1976 (1973). L'ester de résine-aminoacides est ensuite traité suivant le Programme A tel que développé ci-après, du Boc-Ser(Bzl)-OH étant utilisé comme aminoacide protégé dans la Phase 9 de ce Programme. Ce Programme A est ensuite répété afin d'incorporer en succession les aminoacides suivants dans la peptidorésine Boc-Thr(Bzl)-OH Boc-Phe-OH Boc-Thr(Bzl)-OH Boc-Lys(C1Z)-OB Boc-D-Trp-OH Boc-Phe-OH Boc-Phe-OH Boc-GlutOBzl)-OH Boc-Arg(Tos) -OH Boc-Cys (SMBzl) -OH Programme A (pour le traitement de l'ester de résine) 1. Lavage avec du chlorure de méthylène (CH2C12), trois fois T 2. Traitement avec de l'acide trifluoroacétique-chlorure de méthylène (1/1, v/v) contenant 5% de 1,2-éthanedithiol, pendant 5 minutes ; 3.Répétition de la Phase (2) pendant 25 minutes 4. Lavage avec du CH2C12, trois fois 7 5. Lavage avec du diméthylformamide (DMF) ; 6. Traitement avec de la triéthylamine à 12% dans du DMF pen dant 3 minutes 7. Lavage avec du DMF 8. Lavage avec du CH2C12, trois fois T 9. Traitement avec 4 équivalents de l'aminoacide protégé appro prié dans du CH2C12-DMF et agitation pendant 5 minutes 10. Addition en deux parties, sur une période de 30 minutes, de 5 équivalents de diisopropylcarbodiimide dissous dans du CH2Cl2. en laissant la réaction se développer pendant 6 heu res ; 11. Lavage avec du DMF, trois fois 12. Lavage avec du CH2C12, trois fois 13. Essai par la réaction à la ninhydrine suivant la méthode de Kaiser el col., Annal.Biochem., 34, 595 (1970). Dans le cas d'une réaction incomplète, on répète les Phases 9 à 13 précédentes. Exemple 10 Disulfure cyclique (1-12) de L-Cystéinyl-L-arginyl-L-glutamyl- L-phénylalanyl-L-phénylalanyl-D-tryptophvt71-L-lysyl-L-thréonyl- L-phénylalanyl-t-thréonyl-L- sérvl-L-cvsté ine La peptidorésine de l'Exemple 9 (8,5 g) est mise en suspension dans 16 ml d'anisole et traitée avec de l'acide fluorhydrique (HF) liquide anhydre pendant 45 minutes dans un bain de glace, puis on sépare l'excès de HF sous vide et on extrait le reste avec de l'acide acétique aqueux à 10% Le filtrat est lavé à l'éther et la couche aqueuse est versée dans 5 litres d'eau, puis le pH est amené à 7 avec de l'hy- droxyde d'ammonium dilué.Le mélange est agité à l'air libre pendant 48 heures, puis on ajuste le pH à 5 avec de l'acide acétique glacial, et le peptide est absorbé sur de l'Amberlite CG-50 (forme H ). La matière peptidique est éluée avec de l'acide acétique aqueux à 50% et lyophilisée pour donner -850 mg de matière solide. Le produit brut est appliqué sur une colonne de Sephadex LH-20 (2,5 x 150 cm) et élué avec de l'acide acétique à 10%. Les fractions 94-130 sont rassemblées et lyophilisées pour donner 483 mg de matière que l'on applique sur une colonne de Sephadex G25 (1,5 x 115 cm) et que l'on élue avec de l'acide acétique aqueux à 10%. Les fractions 43-53 sont rassemblées et lyophilisées pour obtenir le peptide cité en rubrique, 286 mg. Chromatographie en couche mince, plaques de Verre préalablement enrobées de Avicel, Rf (BWA, 4/1/1, v/v): 0,40 Rf (BWAP, 30/24/6/20, v/v): 0,65. Analyse des aminoacides Thr(2l: 1,92 ; Ser(l): 0,89 ; Glu(l): 1,03 Cys(2): 1,49 ; Phe(3): 3 ; Lys(l): 1,05 ; Trp(l): 0,81; Arg(l): 1,02. Exemple 11 tert-Butyîoxycarbonyl-S-p-méthoxybenzyl-L-cystéinyl-Nim -tosyl- L-histidyl-&gamma;-benzyl-L-glutamyl-L-phénylalanyl-L-phénylalanyl- D-tryptophyl-N -2-chlorobenzyloxycarbonyl-L-lysyl-O-benzyl-L- thréonyl-L-phénylalanyl-O-benzyl-L-thréonyl-O-lKnzyl-L-séryl-S-p- méthonzvl-t-cysté ine Hydroxymé thylpolystyrène, ester Une résine de polystyrène chlorométhylée est estérifiée avec du Boc-Cys(SMBzl)-OH, suivant la méthode de Gisin, Helv. Chim. Acta., 56, 1976 (1973). L'ester de résine-aminoacides est ensuite traité suivant le Programme A (voir Exemple 9) , du Boc-Ser(Bzl)-OH étant utilisé comme aminoacide protégé dans la phase 9 de ce Programme.On répète ce Programme A afin d'incorporer successivement les aminoacides suivants dans la peptidorésine Boc-Thr(Bzl) -OH Boc-Phe-OH Boc-Thr(Bzl)-OH Boc-Lys(C1Z)-OK Boc-D-Trp-OH Boc-Phe-OH Boc-Phe-OH Boc-Glu(OBzl)-OH Boc-His (Tos) -OH Boc-Cys (SMBzl) -OH Exemple 12 Disulfure cyclique (1-12) de L-Cystéinyl-L-histidyl-L-gluta myl-L-phénylalanyl-L-phényîalanyl-D -tryptophyl-L-lysyl-L- thréonYl-L-phénylalanyl-L-thréonyl-L-séryl-L-costéine La peptidorésine de l'Exemple 11 (8 g) est traitée avec du HF anhydre liquide de la façon décrite dans l'Exemple 10, et le dodécapeptide disulfhydryle linéaire est cyclisé par oxydation avec du K3Fe(CN)6 au pH de 7,3 et avec forte dilu tion.Le pH est amené à 5 avec de l'acide acétique glacial et on traite le mélange avec la résine échangeuse d'ions Bio-Rad AG3-X4 (forme C1), puis on absorbe sur de 1'Amberlite CG-50 (forme H ). La matière peptidique est diluée avec de l'acide acétique aqueux à 30 et lyophilisée pour donner 500 mg de matière brute. Celle-ci est chromatographiée sur une colonne de Sephadex LH-20 pour donner le dodécapeptide cité en rubrique. Chromatographie en couche mince, plaques de verre préalablement enrobées de Avicel, Rf (BWA, 4/1/1, v/v): 0.43 Rf (tert-AmOH-Py-W, 7/7/6, v/v): 0,74. Analyse des aminoacides Th(2): 1,92 ; Ser(l): 0,93 ; Glu(l): 0,94 ; Cys(2): 1,59 ; Phe(3): 3 ; Lys(l): 1,02 ; His(l): 0,91 ; Trpf 0,81. Exemple 13 L'activité biologique des peptides des Exemples 10 et 12 a été déterminée par la méthode suivante. Des rats males albinos reçoivent une injection de Nembutal dans le péritoine à une dose de 50 mg/kg. Quinze minutes plus tard, on administre une injection sous-cutanée du composé d'essai ou d'une solution saline physiologique. Après 10 minutes, on injecte dans le coeur 0,5 ml d'arginine (300 mg/ ml, pH de 7,2). Cinq minutes après réception de l'arginine, les rats sont décapités et on récolte le sang dans du Trasylol-EDTA. On soumet une petite quantité appropriée à une détermination de l'hormone de croissance, de l'insuline et du glucagon par la voie radio-immunologique. Les résultats de cette détermination se présentent comme suit. Dose GH Insuline Glucagon Nombre Composé (ug/kq) n/k mU/ml Pq/ml d'animaux Témoin -- 277 + 69 301 t 27 46 + 8 10 Exemple 10 200 42 + 6t 115 t 16 1,5 t 1 10 Témoin -- 216 t 35 283 t 28 55 + 5 10 Exemple 10 40 28 t 5 158 + 57 12 t 2 10 Témoin -- 454 t 106 269 t 37 60 t 10 10 Exemple 12 200 107 t 29* 205 + 36 4 t 2 10 Témoin -- 233 t 35 342 t 45 44 + 4 10 Exemple 12 50 84 t 172 322 + 40 10 + 4* 10 X - p Les résultats précédents montrent que les peptides des Exemples 10 et 12, représentatifs des autres peptides suivant l'invention, sont des agents efficaces pour réduire l'hormone de croissance et le glucagon sans influencer fortement les taux d'insuline à une dose de 40 mg/kg et de 50 mg/ kg respectivement. Les peptides des Exemples 10 et 12 ont également été essayés pour déterminer la durée de leur effet sur la sécrétion d'hormone de croissance chez des rats traités au Nembutal. Le peptide de l'Exemple 10 a montré une inhibition significative de l'hormone de croissance pendant au moins 4 heures à une dose de 1000 mg/kg par voie sous-cutanée.Le peptide de l'Exemple 12 n'a pas montré d'inhibition significative d'hormone de croissance après 2 heures et après 4 heures. Les composés décrits ci-dessus peuvent être adminis- trés à des animaux à sang chaud par voie intraveineuse, souscutanée, intramusculaire ou orale, pour contrer le glucose du sérum dans le traitement du diabète. La dose requise variera avec l'état particulier que l'on traite, la sévérité de cet état et la durée du traitement. L'ingrédient actif peut être administré seul ou en combinaison avec des véhicules ou excipients acceptables en pharmacie. Des compositions pharmaceutiques appropriées seront évidentes pour les spécialistes en ce domaine. Exemple 14 Svnthèse classique de disulfure cyclique (1-12) de L Cystéinyl-L-Histidol-L-Histidyl-L-Phénylalanyl-D-Trypto- phyl-L-Lvsyl-L-Thréonyl-L-Phényîalanyl-L-Thréonyl-t- sé- ryl-L-Cystéine (a) N-Benzyloxycarbonyl-im-Benzyîoxycarbonyl-L-Histîdyl-L- Phénylalanyl, Ester méthylique (I) Une suspension de 42,3 g (0,1 mole) de Z-His(Z)-OH et de 21,8 g (0,1 mole) de Phe-OMe-HCl (98%) dans 1000 ml de CH2C12 est refroidie à OOC, puis on ajoute 22 g (0,12 mole) de DCC et 10,1 g (0,10 mole) de triéthylamine. On laisse le mélange atteindre la température ambiante pendant la nuit. La dicyclohexylurée qui se sépare est enlevée par filtration et le filtrat est concentré pour donner une matière gommeuse. On dissout cette matière dans de l'acétate d'éthyle, et la matière insoluble est enlevée par filtration. Le EtOAc est lavé avec de l'acide citrique à 5%, de l'eau, une solution de bicarbonate de sodium à 5% refroidie à la glace et de l'eau. La couche organique est séchée sur du sulfate de soin, concentrée au tiers de son volume- initial, puis on ajoute 500 ml d'éther jusqu'à ce que la solution devienne trouble, cette solution étant ensuite laissée en chambre froide pendant la nuit.Une matière solide blanche qui se forme est séparée et séchée, 32 g, point de fusion de 131-1330C ; chromatographie en couche mince : gel de silice F-254, CH2C12: MeOH (9/1) 7 R f = 0,8. (b) Im-Benzyloxycarbonyî-L-Histîdyl-L-Phényîalanyî, Ester méthylique, sel dibroihydrate (II) On dissout 30 g (0,5 mole) de Z-His(Z)-Phe-OMe (I) dans 300 ml de HBr-HOAc (32%) (la solution devient trouble après 2 minutes), et le mélange est laissé à la température ambiante pendant 30 minutes, puis on ajoute de l'éther pour provoquer une précipitation. La matière solide molle est filtrée et séchée pendant la nuit, 32 g de matière solide, point de fusion de 135-137CC ; chromatographie en couche mince : ne marche pas. (c) EX-BenzylOxycarbonyl-im-Benzyloxycarbonyl-L-Histidyl-im- Benzyloxyearbonyl-L-Histidyl-L-Phénylalanyl, Ester mé thylique (III) Une suspension de 30,5g(0,05 mole) de His(Z)-Phe-OF 2HBr (II) et de 21,7 g (0,05 mole) de Z-His(Z)-OH dans 500 ml de CH2C12 est refroidie à 0 C, puis on ajoute 11 g de DCC et 10,1 g (0,10 mole) de triéthylamine. On laisse le mélange atteindre la température ambiante pendant la nuit. La dicyclohexylurée formée est séparée par filtration et on concentre le filtrat en une matière vitreuse. Le reste est dissous dans de l'acétate d'éthyle et le EtOAc est lavé avec de l'acide citrique à 10%, de l'eau, une solution à 5% de bicarbonate de sodium refroidie à la glace et de l'eau. Le EtOAc est séché sur du sulfate de sodium, concentré jusqu'à environ 1/3 de son volume, puis on ajoute de l'éther pour former une solution trouble qu'on laisse en chambre froide. Une matière solide blanche se sépare, 29,5 g. (d) L-Histidyl-L-Hi stidyl-l-Phénylalany1 , Ester méthylique, sel trichîorhydrate (IV) Le mélange de 29 g de de 10,8 ml de HC1 concentré, de 180 ml de MeOH et de deux spatules pleines de 10% Pd-C est hydrogéné pendant 5 heures en utilisant l'hydrogénateur Parr. Après séparation par filtration, le méthanol est concentré en une huile et on ajoute de l'éther pour former une matière solide. On utilise 18 g de matière brute pour la réaction suivante sans autre purification. (e) tert-Butyloxycarbonyl-S-p-Méthoxybenzyî-L-Cysté inyl-L- Histidyî-L-Histidyl-L-Phénylalanyl, Ester méthylique (v) On agite 13 g de BOC-Cys(MBzl)-OH (0,038 mole), 5,4 g d'hydroxybenzotriazole (0,040 mole) et 8,3 g de cyclohexylcarbodiimide (0,040 mole) dans 1 litre de chlorure de méthylène refroidi à la glace pendant 30 minutes. On ajoute 19,5 g de His-His-Phe-OMe.3HCl (0,0345 mole) et 10,5 g de Nméthylmorpholine (0,096 mole) et on agite le mélange pendant la nuit lorsqu'il atteint la température ambiante. La suspension est filtrée pour séparer la dicyclohexylurée et on lave le filtrat successivement avec de l'eau, du H2C03 à 10% et de l'eau, puis on sèche sur Na2 S04. Après filtration, le solvant est séparé sous vide, ce qui laisse 21,0 g de produit brut. Cette matière est agitée dans 100 ml d'acétonitrile pendant 30 minutes à la température ambiante, puis on filtre. On lave le précipité avec de l'acétonitrile, puis avec de l'éther, et on sèche, production de 11 g ; chromatographie en couche mince: Rf = 0,12, gel de silice 60, CHCl3/CH3/OH-HAc, 9/1/0.5, v/v. Le filtrat provenant de l'extraction à l'acétonitri- le contient le produit et des impuretés et on peut l'utiliser pour l'extraction d'autres lots de matière brute. (f) tert-Butyloxycarbonyl-S-p-Méthoxybenzyl-L-Cystéinyl-L Histidyl-L-Histidyl-L-Phénylalanine (VI) 11,0 g de B0C-Cys(MBzl)HisHis-Phe-OMe (G,0142 mole) sont dissous dans 200 ml de méthanol et on ajoute 30 ml d'hydroxyde de potassium 1N. On agite la solution à la température ambiante pendant 2 heures, puis on sépare le méthanol sous vide. Le reste est dilué avec 200 ml d'eau! puis filtré. Le filtrat est ajusté au pH de 5 avec de l'acide citrique à 10% et on laisse reposer le précipité gommeux tand:s qu'ilcristallise.Le produit est filtré, lavé à l'eau et séché sous vide sur du P205 7 production de 7,3 g (67%) ; chromatographie en couche mince : Rf de 0,52, gel de silice 60, n-butanol-acétate d'éthyle-acide acétique-H20, 1/1/1/1, v/v ; R f de 0,43, gel de silice 60, alcool tert-amylique-pyridine-H2O, 7/6/7, v/v. (g) N-tert-Butyloxyearbonyl-O-Benzyl-L-Thréonyl-L-PhénylAla- nine, Ester méthylique (VII) Une solution de Boc-L-Thr(Bzl)-OH (61,8 g, 0,2 mole) dans du THF est refroidie à -150C. On ajoute par portions 26,2 ml de chloroformiate d'isobutyle (0,2 mole), en maintenant la température entre -15 et -10 C. Après agitation à -150C pendant 15 minutes, on ajoute par portions un mélange froid de L-Phe-OMe HC1 (43,1 g, 0,2 mole) et de N-méthylmorpholine (22,4 ml, 0,2 mole) dans du DMF, tout en maintenant la température entre -10 et -50C. On agite le mélange à OOC pendant 2 heures, puis à la température ambiante pendant la nuit. Le mélange de réaction filtré est concentré sous vide et le reste est repris dans de l'acétate d'éthyle. La solution à l'acétate d'éthyle est lavée successivement avec du KHSO4 à 5%, du KHCO3 à 5% et une solution saline, puis on sèche sur Na2S04. Après concentration sous vide, on obtient une huile qui cristallise au repos. La matière solide est recristallisée dans de l'éther isopropylique-hexane, 74,9 g (80%) ; point de fusion de 78-810C ; E]2D4=+10,75 tc, 1,023, MeOH); Rf (CHC13): 0,35. Analyse Calculé pour C26H34N206 (470,55) : C: 66,36 ,- H: 7,28 7 N: 5,95 Trouvé : C: 66,72 ; H:7,32 ; N: 5,85. (h) N-Tert-Butyloxycarbonyl-O-Benzyl-L-Thréonine-L-Phény alanine. (VIII) On dissout du Boc-Thr(Bzl)-Phe-OMe (23,5 g ; 0,05 mole) dans un mélange de MeOH-dioxane (100 ml, 1/1) et on traite avec du N-NaOH (55 ml) pendant 3 heures jusqu a ce que la matière de départ ne puisse plus être décelée par chromatographie en couche mince. La plus grande partie du solvant est évaporée sous vide et on dilue le reste avec de l'eau, puis on acidifie avec de l'acide citrique à 5%. La gomme qui se sépare-est reprise dans du EtOAc, et on lave à liteau (saumure), puis on évapore jusqu'à siccité.Le reste est cristallisé dans du Et2O-hexane, 19,8 g (87%), point de fusion de 118 119"C ; Rf (chloroforme-méthanol-acide acétique, 85/10/5) 0,80. (i) N-Tert-Butyloxycarbonyl-0-Benzyl-L-Thréonyî-0-Benzyî L-Sérine, Ester méthylique (IX) On dissout de la N-Tert-butyloxycarbonyl-O-benzyl L-thréonine (30,9 g, 0,1 mole) dans du tétrahydrofuranne sec (200 ml), on refroidit à -200C et on traite avec de la N-méthylmorpholine (11 ml), puis avec du chloroformiate d'isobutyle (13,4 ml). Le mélange de réaction froid est agité pendant 5 minutes à -200C, puis traité avec une solution de 0benzyl-L-sérine, ester méthylique, chlorhydrate (25 g, environ 0,1 mole) contenant de la N-méthylmorpholine (11 ml) dans du DEMIE, et on laisse le mélange atteindre la température ambiante pendant la nuit. Le solvant est séparé sous vide et le reste est partagé entre de l'eau et de l'acétate d'éthyle. La phase organique est lavée avec de l'acide citrique à 5%, avec de l'eau, avec du KHC03 aqueux et avec de l'eau, puis on sèche sur MgSO4 et on évapore jusqu a siccité pour obtenir un reste huileux qui cristallise dans de l'éther diéthylique-hexane en une ma tière ressemblant à une gelée (29 g) ; Rf (CHC13-MeOH, 25/1) R f (EtOAc-hexane, 1/1): 0,65. -Tert-Butyloxyearbonyl-O-Benzyl-L-Thréonyl-O-Benzyl- L-sérine (X) On dissout du Boc-Thr(Bzî)-Ser(Bzl)-OMe (28,2 g, 0,0563 mole) dans du méthanol (environ 50 ml) et on traite avec de l'hydroxyde de sodium 1 N (75 ml) pendant 1,5 heure à la température ambiante. La solution alcaline est neutralisée jusqu'au pH de 7 avec de Itacide citrique à 10% et la plus grande partie du méthanol est séparée sous vide. Le reste est dilué avec une certaine quantite d'eau et acidifié avec du KHS04 aqueux à 5%, puis extrait avec du EtOAc. La phase organique est lavée avec de l'eau, puis séchée sur du Na2 S04 et évaporée jusqu'à siccité pour former une huile. Le rendement est quantitatif.Rf (EtOAc-hexane, 1/1): 0,15 (longue tache) (k) N-tert-Butyloxycarbonyl-0-Benzyl-L-Thréonyl-0-Benzyî-L- Séryl-S-p-Méthoxybenzyl-L-Cysté ine. Ester benzylique(XI) On dissout du Boc-Thr(Bzl) -Ser(Bzl) -OH (24,3 g, 50 mmoles) dans de l'acétonitrile et du dichlorométhane (250 ml, 2/3) et on mélange avecduHCys(SMBzl) Bzl-TosOH (25 g, 50 mmoles), puis avec de la triéthylamine (6,8 ml) et du N-hydroxybenzotriazole (6,8 g) et le mélange est refroidi dans un bain de glace. On ajoute une solution de DCC (11 g, 53 mmoles) dans 50 ml d'acétonitrile et on agite le mélange de réaction pendant 2 heures à froid, puis pendant 2 jours à la température ambiente. Le DCU qui se sépare est enlevé par filtration et le filtrat est évaporé jusqu'à siccité. Le reste huileux est partagé entre de l'acétate d'éthyle et de l'eau, et la phase organique est lavée avec de l'acide citrique à 10%, de l'eau, du KHC03 à 5% et de la saumure, puis on sèche sur du Na2 S04. Le solvant est évaporé et le reste huileux est cristallisé dans du Et20-hexane pour donner une matière solide blanche, 24,5 g, point de fusion de 87-900C ; R f (chloroforme-méthanol, 25/1): 0,54 : traces à 0,4 et 0,3 (heptane-EtOAc, 1/1): 0,64 ; traces à 0,25, positif au I2, [&alpha;]D25 =-14,7 (c, 0,98,BMF} D Analyse élémentaire pour C44H52N3 S09 (798,9) Calculé : C: 66,15 ; H: 6,56; N: 5,26 Trouvé :C: 66,22 ; H: 6,95 ; N: 5,29 (1) O-Benzyl-L-Thréonyl-O-Benzyl-L- Séryl-S -p-Méthoxyben zyl- L-Cystéine, Ester benzylique, trifluoroacétate (XII) On mélange du Boc-Thr(Bzl)-Ser(Bzl)-Cys(SMBzl)-OBzl (8 g, 10 mmoles) avec de l'anisole (100 mmoles) et on traite avec du TFA (loo ml) pendant 45minutes. Le solvant est évaporé sous vide et le reste est dissous dans du Et20 sec, puis on évapore jusqu'à siccité sous vide élevé pour obtenir un composé huileux, 7,2 g (90%) ; Rf (n-butanol-eau-acide acétique glacial, 4/1/1): 0,9 ; Rf (heptane-EtOAc): 0,0-0,1 longue tache, positif au I2 et à la ninhydrine. (m) N-tert-Butyloxycarbonyl-0-Benzyî-L-Thréonyl-L-Phényî- alanyl-O-Benzyl-L-'rhréonyl-O-BenZyl-L-Séryl-S-p-Mé- thoxvbenzyl-L-Cystéine, Ester benzoïque (XIII) On dissout du Boc-Thr(Bzl)-Phe-OH (préparé par la méthode de l'Exemple III) (9,2 g, 20 mmoles) dans du DMF (100 ml) et on mélange avec du N-hydroxysuccinimide (3,4 g) et une solution de Thr(Bzl)SertBa s(SMBzl)OB7l, sel trifluoroacétate (20 mmoles) dans du DMF (20 ml), neutralisé avec de la triéthylamine au pH 7. Le mélange est refroidi dans un bain de glace et traité avec du DCC (4,5 g) pendant 2 heures à froid, puis pendant 2 jours à la température ambiante. La DCU est filtrée et le filtrat est évaporé jusqu'à siccité.On triture le reste avec de l'eau pour obtenir un précipité que l'on reprend dans du EtOAc, puis on lave avec de l'acide citrique à 5%, de l'eau, du Na2CO3 à 5% et de l'eau, on sèche sur Na2SO4 et on évapore jusqu'à siccité.Le reste est solidifié à partir de Et2O-hexane, il peut être cristallisé dans du MeOH et il est très soluble dans le CHCl3 ; 17,3 g (70 /0) ; point de fusion de 105-1070C ; Rf (CHC13-MeOH, 10/1): 0,90 ; [&alpha;]D25 = -3,6 (c: 1, D DMF) Analyse Calculé pour C64H75N5S012H20 (1156,2) C: 66,46 ; H: 6,71 ; N: 6,05 Trouvé : C: 66,68 ; H: 6,59 ; N: 6,20. (n) tert-Butyloxyearkonyl-D-Tryptophyl-l46-Benzyloxycarbo- nyl-L-lysyl, Ester méthylique (XIV) On dissout du Boc-D-Trp-OH (30,4 g, 0,1 mole), du Lys(Z)-OMe.HCl (33 g, 0,1 mole) et 13,6 ml de triéthylamine dans 400 ml de DMF et on refroidit dans un bain de glace, puis on ajoute 22 g de dicyclohexylcarbodiimide et on laisse le mélange atteindre la température ambiante pendant la nuit. La dicyclohexylurée qui se sépare est filtrée et le filtrat est concentré à un petit volume, puis on ajoute un excès d'eau pour former une matière gommeuse. Cette matière est reprise dans de l'acétate d'éthyle et lavée avec de l'acide citrique aqueux à 10%, de l'eau, du NaHCO3 saturé et de l'eau, puis on sèche sur Na2 S04 et on évapore jusqu'à siccité. Le reste est trituré à l'éther, puis à lthexane pour donner une matière solide cristalline, 28 g ; chromatographie en couche mince gel de silice G, hexane-EtOAc (1/1, v/v), Rf: 0,3. (o) tert-Butyloxyearbonyl-L-Phénylalanyl-D-Tryptophyl-N4- Benzyloxycarbonyl) -L-lpsine (XV) A. On ajoute du Boc--p-Lys-OMe (22 g, 44 mmoles) à un mélange préalablement refroidi de 220 ml de TFA et de 25 ml d'anisole, puis on agite pendant 30 minutes dans un bain de glace. Le TFA est séparé aussi rapidement que possible à 270C sur un appareil rotatif et l'huile restante est triturée plusieurs fois avec une solution d'hexane-éther, 2/1, puis on décante et finalement on pompe pour obtenir une gomme, production de 21,3 g, 36 mmoles B. On agite du Boc-Phe-OH (9,6 g, 36 mmoles)' du HOBT (5,3 g, 39 mmoles) et du DCC (8 g, 39 mmoles) dans 500 ml de dichlorométhane froid pendant 20 minutes.On ajoute du D-Trp Lys(Z)-OMe.sel trifluoroacétate (21,3 g, 36 mmoles) dans 200 ml de dichlorométhane, puis de la N-méthylmorpholine (4,25 ml, 39 mmoles). Le mélange de réaction est agité pendant la nuit tandis qu'il se réchauffe jusqu'à la température ambiante. Le mélange est filtré pour séparer le DCC et le filtrat est lavé deux fois à l'eau, puis deux fois à l'acide citrique à 10%, deux fois avec du NaHCO3 saturé, deux fois à l'eau, puis on sèche sur Na2 S04. Après filtration et évaporation, le reste pèse 21,4 g (82%) et on l'utilise sans autre purification. Chromatographie en couche mince : gel de silice F-254 (CHCl3 - CH30H-HAc, 9/1/0;5) ; Rf=0,76 plus traces de petites impuretés. C. On dissout du Boc-Phe-D-Trp-Lys(Z)-OMe (22,9 g, 31,4 mmoles) dans 450 ml de p-dioxane et 100 ml de méthanol, et on ajoute 39 ml de KOH aqueux IN et on agite pendant la nuit à la température ambiante. La solution est évaporée à l'évaporateur rotatif. Le reste est dissous dans 500 ml d'eau chaude, acidifié au pH de 3 avec de l'acide citrique à 10%, agité pendant 30 minutes et filtré. Après dessiccation sous vide pendant la nuit, on obtient 21,6 g (96), point de fusion de 85-90", [a]26=+7,09 (c, 0,987, MeOH) ; Rf: 0,63 (CHCl3-CH3OH-HAc, 9/1/0,5), gel de silice F-254. (p) tert-Butyloxycarbonyl-L-Phénylalanyl-D-Tryptophyl-N- BenzylOxyearbonyl-L-Lysyl-O-Benzyl-L-Thréonyl-L-Phé- nylalanyl-O-Benzyl-L-Thréonyl-O-Benzyl-L-Séryl-S-p Méthoxybenzyl-L-Cystéinvl, Ester benzylîque (XVI) A. On ajoute du Boc-Thr(Bzl)-Phe-Thr(Bzl)-Ser(Bzl)- Cys(SMBzl)-OBzl (XIII) (40,5 g, 35 mmoles) à une solution froide de 400 ml de TFA et de 40 ml d'anisole, puis on agite à froid pendant 30 minutes. Le TFA est évaporé à l'évapora- teur rotatif et le reste est trituré avec 1 litre d'étherhexane (1/1) pour former une poudre blanche.Après filtration, lavage avec de l'éther-hexane et dessiccation sous Vide sur du P205 et des pastilles de NaOH, on obtient 34,6 g de matière (82%), point de fusion de 136-139 , ramollissement à 1200, [a:]D6=-9,g3 93 (c, 1,04, MeOH) ; Rf: 0,63, gel de silice CHC13- CH30H-HAc, 9/1/0,5, petite impureté plus polaire Rf: 0,53. B. On agite du Boc-Phe-D-Trp-Lys(Z)-OH (20,0 g, 27,9 mmoles), du HOBT (4,15 g, 30,8 mmoles) et du DCC (6,3 g, 30,8 mmoles) dans 2,0 litres de dichlorométhane froid dans un bain de glace pendant 30 minutes. On ajoute 32,6 g (27,9 mmoles) de sel trifluoroacétate de H-Thr(Bzl)-Phe-Thr(Bzl)-Ser(Bzl) Cys(SMBzl)-OBzl, puis 3,35 ml de N-méthylmorpholine (30,8 mmoles), et on poursuit l'agitation pendant la nuit tandis que le mélange se réchauffe à la température ambiante. La chromatographie en couche mince ne montrait pas de réaction essentiellement complète après 2 heures. Le mélange est filtré et le filtrat est lavé à l'eau, avec de l'acide citrique à 10%, de l'eau, du NaHC03 saturé et de l'eau, puis on sèche. Après filtration et évaporation, la chromatographie en couche mince montre un produit et une impureté plus polaire qui est séparée par dissolution du produit brut dans 200 ml de DMF chaud et addition de 1 litre de NaHC03 aqueux à 2%. Le produit est filtré, lavé avec du NaHC03 dilué et de l'eau, puis on sèche sous vide sur du P2Q5, 3 rendement de 36,5 g (75%), point de fusion de 182-1840C (con 26 traction à 1500), LaJ =0 (c, 0,988, CHCl3). Rf (tache simple) 0,76, gel de silice (CHC13-CH30H-HAc, 9/1/0,5). (q) Préparation de H-Phe-D-Trp-Lys(Z)-Thr(Bzl)-Phe-Thr(Bzl)- Ser(Bzl)-Cys(SMBzl)-OBzl, Sel trifluoroacétate (XVII) On dissout du Boc-Phe-D-Trp-Lys (z) -Thr (Bzl) -Phe- Thr(Bzl)-Ser(Bzl)-Cys(SMBzl)-OBzl (32 g) et de l'anisole (33 ml) dans 50 ml de dichîcrométhane et 100 ml d'acide trifluoroacétique, et on agite pendant 30 minutes à la température ambiante. La solution est évaporée à ltévaporateur rotatif à 300C. Le reste est trituré avec de l'éther anhydre pour former une poudre que l'on filtre, puis qu'on lave à l'éther et qu'on sèche sous vide sur du P205 et des pastilles d'hydroxyde de sodium. Une chromatographie en couche mince sur gel de silice 60 dans du CHC13-CH30H-HAc (9/1/0,5) montre une simple tache, Rf de 0,65 , la résonance magnétique nucléaire ne montre pas de pic pour le t-butyle. (r) Tert-Butyîoxycarbônyî-S-p-Méthoxybenzyl-L-Cystéinyî-L- Histidyl-L-Histidyl-L-Phénylalanyl-L-Phénylalanyl-D Tryptophyl-N-Benzyloxyearbonyl-L-Lysyl-OBenzyl-L- Thréonyl-L-Phénylalanyl-O-Benzyl-L-Thréonyl-O-Benzyl L-Séryl-S-p-Méthoxybenzyl-L-Cystéine, Ester benzylique (xvIII) On agite du Boc-Cys(SMBzl)-His-His-PheOH (5;5 g, 7,2 mmoles), du l-hydroxybenzotriazole monohydraté (1,07 g, 7,9 mmoles) et du dicyclohexylcarbodiimide (1,65 g, 7,9 mmoles) dans 100 ml de diméthylformamide sec dans un bain de glace pendant 30 minutes.On ajoute 12,5 g (7,2 mmoles) de H-Phe -Trp-Lys(z) -Thr (Bzl) -Phe-Thr (Bzl) -Ser(Bzl) -Cys(SMBzl) OBzl, sel trifluoroacétate et 0,855 g de N-méthylmorpholine (7,65 mmoles), et on laisse le mélange atteindre la température ambiante pendant la nuit avec agitation. La suspension-est filtrée pour séparer la dicyclohexylurée et le filtrat est évaporé jusqu'a 50 ml, puis on dilue avec 500 ml d'une solution aqueuse saturée de bicarbonate de sodium. La matière solide résultante est filtrée, lavée à l'eau et redissoute dans 200 ml de DMF. On dilue cette solution avec 1 litre d'acide ci trique aqueux à 5%, puis on filtre.La matière solide est lavée à l'eau, dissoute dans 200 ml de DMF et précipitée avec 1 litre d'une solution saturée de bicarbonate de sodium, puis on filtre, on lave à l'eau et on dessèche sous vide sur du P205 à la température ambiante, production de 15 g ; analyse des aminoacides : His: 1,66(2,0) ; Lys: 1,05(1,0) ; Phe: (3,0) ; Ser: 1,02(1,0) ; Thr: 2,2(2,0). (s) Disulfure cyclique (1-12) de L-Cystéinyl-L-Histidyl-L Histidyl-L-Phénylalanyl-L-Phénylalanyl-D-Tryptophyl-L LySyl-L-Thréonyl-L-Phénylalanyl-L-Thréonyl-L-Séryl-L- Cystéine (XIX) On mélange du Boc-Cys(SMBzl)-His-His-Phe-Phe-D-Trp Lys(z) -Thr(Bzl) -Phe-Thr(Bzl) -Ser(Bzl) -Cys(SMBzl) OBzl (5 g) avec de l'anisole (10 ml > , et on traite avec 100 ml de HF liquide en excluant l'air et dans un bain de glace pendant 60 minutes. On sépare l'excès de HF sous vide et on reprend le reste dans du AcOH aqueux à 10% (200 ml), puis on verse dans 7 litres d'eau désaérée.Le pH est ajusté à 7 avec du NH4OH dilué et on agite à l'air libre pendant 24 heures, puis on amène le pH à 5 avec du AcOH glacial, et on fait passer les solutions à travers une colonne d'Amberlite CG 50 (forme H+). La matiere peptidique qui est absorbée sur la résine échangeuse d'ions est éluée avec de l'acide acétique aqueux à 50 /0 et les fractions contenant la matière peptidique sont rassemblées et lyophilisées pour former 2 g de matière brute. Ce dodécapeptide brut est purifié par chromatographie à travers une colonne de Sephadex G25 en éluant avec du AcOH aqueux à 10% et par une chromatographie de partage à travers du Sephadex G25 avec le système à deux phases N-BuOH-eau-AcOH glacial (4/5/1, v/v). Chromatographie en couche mince, gel de silice Merck A G , [Chîorine peptide spray, D.E. Nitecki et col. Biochem. 5 665 (1966)], Rf (BWAt 4/1/1): 0,45 ; Rf (BWAP, 30/24/6/20): 0,64 ; analyse des aminoacides : Thr(z): 1,85 ; Ser(l): 0,79 Phe(3): 3 ; Lys(l): 1,02 ; His(2): 1,75 ; Cys et Trp, non déterminés. il sera évident pour les spécialistes en ce domaine que d'autres agents de combinaison et d'autres groupes protecteurs pourront être utilisés dans la synthèse classique décrite dans l'Exemple 14. En outre, il sera évident que des sé quences différentes pourront être employées pour l'accumulation des fragments aminoacides afin d'arriver à la molécule désirée. Toutes les méthodes en question sont évidemment comprises également dans le cadre de la présente invention. REVENDICATIONS 1. Composés répondant à la formule dans laquelle A représente l'hydrogène ou les deux groupes A forment une liaison directe entre les atomes de soufre 7 X représente l'hydrogène, Ala-Gly, Gly-Gly, Ala-D-Ala, Gly-Gly-Gly, acétyle ou benzoyle X1 représente His ou Arg X2 représente His, Glu ou Asp ; 2 X3 représente Trp, D-Trp ou 6-F-D-Trp ; et x représente Cys ou D-Cys ainsi que leurs sels acceptables en pharmacie. 2.-Composés suivant la revendication 1, caractérisés en ce qu'il s'agit plus particulièrement du disulfure cyclique (1-12) de L-Cystéinyl-L-Arginyl-L-Histidyl-L-Phénylalanyl-L-Phénylalanyl-D-Tryptophyl-L-Lysyl-L-Thréonyl-L-Phénylalanyl-L-Thréonyl-L-Séryl-L-Cystéine, du disulfure cyclique (1-12) de L-Cystéinyl-L-Histidyl-L-Histidyl-L-Phénylalanyl-L Phénylalanyl-D-Tryptophyl-L-Lysyl-L-Thréonyl-L-Phénylalanyl L-Thréonyl-L-Séryl-D-Cystéine, du disulfure cyclique (1-12) de L-Cysté inyl-L-Arginyl-L-Glutamyl -L-Phénylalanyl-L-Phénylala- nyl-D-Tryptophyî-L-Lysyl-L-Thréonyl-L-Phénylalanyl-L-Thréonyî- L-Séryl-L-Cystéine ou du disulfure cyclique (1-12) de L-Cys téinyl-L-Histidyl-L-Glutamyl-L-phénylalanyl-L-Phénylalanyl-D- Tryptophyl-L-Lysyl-L-Thréonyl-L-Phénylalanyl-L-Thréonyl-L-Sé - ryl-L-Cystéine, 3.Composés répondant à la formule I suivant l'une ou l'autre des revendications 1 et 2, caractérisés en ce qu'ils sont sous la forme de sels d'addition d'acide acceptables en pharmacie, choisis parmi le chlorhydrate, le bromhydrate, le sulfate, le phosphate, le polyphosphate, le maléate, l'acéta te, le citrate, le benzoate, le succinate, le malonate et l'ascorbate. 4. A titre de produits intermédiaires nécessaires à la préparation des composés selon la revendication 1, les composés suivant l'une quelconque des revendications 1 a 3, caractérisés en Ce qu'un ou plusieurs fragments de peptide comportent des chaînes latérales protégées et/ou les groupes amino et carboxy terminaux sont protégés. 5. Composés selon la revendication 4 répondant à la formule dans laquelle R représente un grope protecteur de carboxyle ou un support de résine de polystyrène lié par l'intermédiaire d'un groupe de méthylène ; R R1 représente un groupe protecteur de &alpha;:-amino ou un groupe Ala-Gly, Gly-Gly, ala-D-Ala ou Gly Gly-Gly protégé en o-amino ou l'acétyle ou le benzoyle , B1 représente où R est un groupe protecteur pour les atomes d'azote de channe latérale de l'arginine et R2 est l'hy- drogène ou un groupe protecteur pour l'atome d'azote d'imidazo- le de l'histidine ;B2 représente tel que défini ci-dessus, où R4 et R5 sont respectivement des groupes protecteurs pour le groupe carboxyle de channe latérale de l'acide glutamique et de l'acide aspartique R R6 est un groupe protecteur pour le groupe amino de channe latérale de la lysine 7 7 8 et 9 R , R8 et R9 sont chacun des groupes protecteurs pour les groupes hydroxyles de la thréonine et de la sérine ; X3 re présente Trp, D-Trp ou 6-F-D-Trp ; X4 x4 représente Cys ou D-Cys; et a et ss représentent chacun un groupe protecteur de sulhydryle ou l'hydrogène, ou bien a et ss représentent une liaison directe entre les atomes de soufre. 6 , Composés répondant à la formule II suivant la revendication 5, caractérisés en ce que R représente un groupe protecteur formé par : formyle, trifluoroacétyle, phtalyle, tosyle, nitrophunylsulfényle, benzyloxycarbanyle, p-chlorobenzyloxycarbonyle, p-nitrobenzyloxycarhohyle, tertbutyloxycarbonyle, diisopropylméthoxycarbonyle, isopropyloxy carbonyle, allyloxycarbonyle, 2,2, 2-trichloroétnoxycarbonyle, isopropyloxycarbonyle, amyloxycarbonyle, cyclopentyloxycarbo- nyle, adamantylo\ycarbonyle, cyclohexyloxyzarbonyle, phénylthiocarbonyle, trityle ou triméthylsilyle ou du Ala-Gly, Gly Gly Ala-D-Ala, Gly-Gly-Gly protégé par l'un des groupes protecteurs ci-dessus. 7. Composés répondant à la formule II suivant l'une ou l'autre des revendications 5 et 6 , caractérisés en ce que R représente un groupe : tosyle, benzyloxycarbonyle, ada mantyloxycarbonyle ou tert-butyloxycarbonyle. 8. Composés répondant à la formule II suivant l'une quelconque des revendications 5 à 7 , caractérisés en ce que R3 représente un groupe : nitro, tosyle, benzyloxycarbonyle, adamantyloxycarbonyle ou tert-butyloxycarbonyle. 9. Composés répondant à la formule II suivant l'une quelconque des revendications 5 à 8 , caractérisés en ce que R et/ou 5 représentent le benzyle. 10, Composés répondant à la formule II suivant l'une quelconque des revendications 5 à 9 , caractérisés en ce que R6 représente un groupe : tosyle, t-amyloxycarbonyle, t-butyloxycarbonyle, diisopropyloxycarbonyle, benzyloxycarbonyle, halobenzyloxycarbonyle ou nitrobenzyloxycarbonyle. 11. Composés répondant à la formule II suivant l'une quelconque des revendications 5 à 10, caractérisés en ce qu'au moins l'un des R71 R8 et R9 représente l'acétyle, le benzoyle, le butyle tertiaire ou le benzyle. 12, Composés répondant à la formule II suivant l'une quelconque des revendications 5 à 11, caractérisés en ce que a et v représentent un groupe : benzyle, 3,4-diméthylbenzyle, p-méthoxybenzyle, p-chlorobenzyle, p-nitrobenzyle, trityle, benzyloxycarbonyle, benzhydryle, p-méthoxybenzylcar- bonyle, benzylthiométhyle, éthylcarbamoyle, thioéthyle, tétrahydropyrannyle, acétamidométhyle, benzoyle ou sel s-sulfonique. 13. Composés suivant l'une quelconque des revendications 5 à 12, caractérisés en ce que R représente un alcoyle inférieur, le benzoyle ou un support de résine de polystyrène lié par du méthylène. 14. Composés suivant l'une quelconque des revendica tions 5 à 13, caractérisés en ce qu'il s'agit plus particulièrement d'un des composés : tert-Butyloxyearbonyl-S-P-Méthoxy- im syn- CH2 im benzyl-L-Cystéinyl-N -Tosyl-L-Histidyl-N -Tosyl-L-Histidyl L-PhénylaIanyl-L-Phénylalanyl-D-Tryptophyl-N -2-Chlrobenzyloxy- carbonyl-L-Lysyl-O-Benzyl-L-Thréonyl-L-Phénylalanyl-O-Benzyl- L-Thréonyl-O-Benzyl-L-Séryl-S-P-Méthoxybenzyl-L-Cystéinyl-Hy- droxyméthylpolystyrène ;; tert-Butyloxycarbonyl-S-p-Méthoxyben zyl-L-Cystéinyl-Ng syl-L-Arginyl-N imTo syl-L-Hi stidyl-L- Phénylalanyl-L-Phénylalanyl-D-Tryptophyl-N -2 -Chlorobenzyloxy- car7Donyl-L-Lys-yl-O-Benzyl-L-Thréonyl-L-Phénylalanyl-O-Benzyl- L-Thréonyl-O-Benzyl-L-Séryl-S-p-Méthoxybenzyl-I-Cystéinyl-Hy- droxyméthylpolystyrène, ester ; tert-Butyloxycarbonyl-S-p-Mé- im thoxybenzyl-L-Cysté inyl-N -Tosyl-L-Histidyl-im-Tosyl-L-Histi- dyl-L-Phénylalanyl-L-Phénylalanyl-D -Tryptophyl- C -2 -Chloroben zylOxycarbonyl-L-Lysyl-O-Benzyl-L-Thréonyl-L-Phénylalanyl-O- Benzyl-L-Thréonyl-O-Benzyl-L-Séryl-S-p-Méthoxybenzyl-D-Cystéi- nyl-Hydroxyméthylpolystyrène, ester ;; tert-Butyloxycarbonyl- S-p-méthoxybenzyl-L-cystéinyl-Ng -tosyl-L-arginyl--benzyl-L- glutamyl-L-phenylalanyl-L-phénylalanyl-D-tryptophyl-NE-2-chlo- robenzylOxyzarbonyl-L-lysyl-O-benzyl-L-thréonyl-L-phénylala- nyl-0-benzyl-L-thréonyl-0-benzyl-L-séryl-S-méthoxybenzyl-L- cystéine-Hydroxymétyîpolystyrène, ester ; tert-Butyloxycarbo im nyl-S-p-méthoxybenzyl-L-cystéinyl-N m-tosyl-L-histidyl-S-ben- zyl-L-glutamyl-L-Phénylalanyl-L-Phénylalanyl-D-Tryptophyl-Ng- 2-chlorobenzylOxyearbonyl-L-lysyl-O-benzyl-L-thréonyl-L-phé- nylalanyl-O-benzyl-L-thréonyl-O-benzyl-L-séryl-S-p-méthOxyben- zyl-L-cystéine-Hydroxyméthylpolystyrène, ester ; ou tert-Bu tyloxycarbonyl-S--Méthoxybenzyl-L-Cystéinyl-L-Histidyl-L-His- tidyl-L-Phénylalanyl-L-PhénylalanyI-D-tryptophyl-N-Benzyloxy- carbonyl-L-Lysyl-0-Benzyl-L--Thréonyî-L-Phényla lanyl-0-Benzyl- L-Thréonyl-O-Benzyl-L-Séryl-S-p-Méthoxybenzyl-L-Cystéíne, ester benzylique. 15. Procédé de préparation de composés répondant à la formule I de la revendication 1, caractérisé en ce qu'il comprend la combinaison des aminoacides nécessaires à la formation du polypeptide, ou de leurs dérivés activés, pour former les liaisons peptidiques, et ce dans n t importe quel ordre désiré de succession, les groupes réactifs que l'on ne désire pas voir réagir étant protégés au cours des phases intermédiaires, le polypeptide linéaire résultant étant éventuellement cyclisé, 16.Procédé de préparation de composés répondant à la formule I suivant la revendication 1, caractérisé en ce qu'il comprend l'enlèvement de tous les groupes protecteurs et du support de résine de polystyrène, lorsqu'il y en a un, au départ d'un composé de la formule Il suivant l'une quelconque des revendications 5 à 14, et, si on le désire, l'oxydation ou la réduction du composé de formule I résultant, pour obtenir la forme cyclique ou à chaîne ouverte, et si on le désire en outre l'isolement sous forme de la base libre ou d'un sel acceptable en pharmacie. 17. Procédé suivant la revendication 16, caractérisé en ce que le support de résine de polystyrène et/ou les groupes protecteurs sont enlevés en une seule phase par traitement avec de l'acide fluorhydrique en présence d'anisole. 18. Procédé de préparation de composés répondant à la formule I suivant la revendication 1, dans laquelle les deux groupes A forment une liaison directe entre les atomes de soufre, caractérisé en ce qu'il comprend l'oxydation d'un composé correspondant répondant à la formule I, dans laquelle A représente de l'hydrogène. 19. Procédé de préparation de composés de formule I selon le procédé de la revendication 15 à partir de composés répondant à la formule II suivant la revendication 5, dans laquelle a et P sont des groupes protecteurs et R représente un support de résine de polystyrène, caractérisé en ce qu'il comprend la combinaison en succession des aminoacides convenablement protégés et/ou activés requis sous des conditions de synthèse en phase solide, avec un support de résine chlorométhylé ou hydroxyméthylé. 20. Procédé de préparation de composés de formule I selon le procédé de la revendication 15 à partir de composés répondant à la formule II suivant l'une quelconque des revendications 5 à 14, dans laquelle a et P représentent une liaison directe, caractérisé en ce qu'il comprend l'oxydation d'un composé correspondant de la formule II, dans laquelle a et P représentent chacun de l'hydrogène. 21. Procédé de préparation de composés de formule I selon le procédé de la revendication 15 à partir de composés répondant à la formule II suivant l'une quelconque des revendications 5 à 11 et 14, dans laquelle a et P sont de l'hydro- gène, caractérisé en ce qu'il comprend la séparation sélective des groupes protecteurs de sulfhydryle au départ d'un composé correspondant de formule II, dans laquelle a et 3 représentent un radical trityle ou acétamido. 22. Préparation de composés de formule I selon le procédé de la revendication 15 à partir de composés répondant à la formule II suivant la revendicstion , dans laquelle a et P sont des groupes protecteurs et R représente un groupe protecteur de carboxyle, caractérisé en ce qu'il comprend la combinaison des aminoacides ou des groupes d'aminoacides convenablement protégés et/ou activés recuis par des procédés connus pour la formation de liaisons diamide afin d'obtenir la séquence désirée. 23, Procédé de préparation de composés de formule I selon le procédé de la revendication 15 à partir de composés de la formule II suivant la revendication 5, caractérisé en ce qu'il comprend la condensation d'un peptide de la formule avec un peptide de la formule formules dans lesquelles R est un groupe protecteur de carko- xyle, R1, R6, R7, R8, R9, B1, B2, X3 et X4 sont tels que défi- nis dans la revendication 5, et oc et ss sont des groupes protecteurs de sulhydryle. 24. Composés répondant à la formule I suivant l'une ou l'autre des revendications 1 et 2, caractérisés en ce qu'ils sont sous la forme réduite polymère. 25. Compositions pharmaceutiques, caractérlsées en ce qutelles comprennent au moins un composé répondant à la formule I ou un sel acceptable en pharmacie dtun tel composé, en combinaison avec un support ou véhicule acceptable en pharmacie, ces compositions comprenant éventuellement en outre de l'insuline.