Brevet FR2378283A1 — publié le 19780818

La présente invention concerne un procédé et un appareil pour les réactions de diagnostic in vitro. L'invention est particulièrement utile pour les déterminations radio-immuoologiques et les déterminations utilisant des réactifs à marquage fluorescent ou enzymatique. Dans une forme particulière de détermination radio-immunologique on met un échantillon (par exemple du sérum ou du plasma) contenant un antigène (par exemple l'antigène de surface de l'hépatite B) au contact d'un substrat revetu d'un anticorps correspondant a l'antigène. On incube l'échantillon et le substrat revetu d'anticorps pour que l'antigène présent dans l'échantillon se fixe au substrat revetu d'anticorps. Après l'incubation on lave le substrat auquel l'antigène est uni par l'intermédiaire de l'anticorps et on le met au contact d'un anticorps de type semblable celui revetant le substrat, mais qui comporte un marqueur. radio-actif.Après une nouvelle période d'incubation pendant laquelle l'anticorps à marquage radioactif se fixe au substrat par l'intermédiaire de la chaîne antigène-anticorps, on lave à nouveau le substrat et on mesure la radio-activité qu'il émet. On peut ainsi déterminer la présence de l'antigène dans l'échantillon. De façon évidente on peut opérer de façon semblable pour déterminer la présence d'un anticorps dans un échantillon avec un substrat revetu d'antigène et un antigène a marquage radio-actif. On peut mettre en pratique le mode de détermination ci-dessus avec un substrat constitué de perles de matière plastique portant l'antigène ou l'anticorps. L'invention a pour objet un appareil et un procédé pour la mise en pratique de ce type de détermination, Le procédé et l'appareil sont particulièrement utiles pour mettre en évidence la présence de l'antigène de surface de l'hépatite B dans le sang ou le sérum. L'appareil de détermination radio-immunologique de l'invention comporte un plateau réactionnel constitué d'une base comportant plusieurs puits, un dispositif de support fixé sous la base et un dispositif pour fixer de façon amovible une carte d'identification au dispositif de support. Selon un autre aspect, l'invention concerne un plateau réactionnel constitué d'une base portant plusieurs puits, de pieds fixés sous chaque extrémité de la base et d'un dispositif pour fixer de façon amovible une carte d'identification situé sur un des pieds. L'invention concerne également un système de transfert constitué d'une combinaison d'un plateau réactionnel comportant une base munie de plusieurs puits, d'un dispositif de support fixé soqs la base, et d'un dispositif pour fixer de façon amovible une carte d'identification au dispositif de support ; et d'une plaquette a blisters disposée sur la surface supérieure du plateau réactionnel et comportant des blisters audessus des puits du plateau réactionnel; chaque blister contenant une perle de matière plastique revetue d'un antigène ou d'un anticorps, de telle sorte que chaque perle de matière plastique soit transférée dans le puits correspondant lorsque le blister est rompu. Selon un de ses aspects, l'invention concerne un appareil pour déterminer dans un échantillon la présence d'anticorps ou d'antigènes, constitué d'une plaquette a blisters comportant plusieurs logements ou blisters contenant chacun une perle de matière plastique revetue d'un anticorps ou d'un antigène, les perles étant retenues dans les blisters par une feuille d'une matière pouvant etre rompue, a travers laquelle on peut pousser la perle lorsqu'on exerce une pression sur le blister qui la contient et d'un plateau réactionnel comportant plusieurs puits munis d'ouvertures disposées de façon à cotncider avec les blisters lorsque la matière pouvant etre rompue de la plaquette a blisters est au contact du plateau. Selon un autre de ses aspects, l'invention concerne un procédé d'analyse d'un échantillon pour y déterminer la présence d'anticorps ou d'antigènes, caractérisé en ce qu'il comporte les stades suivants selon lesquels (a) pour transférer plusieurs perles de matière plastique revetues d'anticorps d'une plaquette a blisters dans plusieurs puits d'un plateau réactionnel, on fait cotncider une des parois de la plaquette avec la surface supérieure d'un plateau réactionnel et on exerce une pression sur l'autre face de la plaquette pour pousser les perles de matière plastique à travers la paroi et les faire tomber dans les puits du plateau réactionnel ;; (b) on introduit une quantité connue de chacun des échantillons à étudier dans les puits contenant les perles de matière plastique, a raison d'un échantillon par puits (c) on incube les perles e les échantillons pendant une durée suffisante pour que l'antigène puisse se fixer a la perle par l'intermédiaire de l'anticorps ; (d) on lave les perles pour éliminer la matière non fixée ; (e) on introduit une quantité connue d'un anticorps a marquage radio-actif dans chaque puits ;; (f) on incube les perles de matière plastique et l'anticorps marqué pendant une durée suffisante pour que l'anticorps marqué s'unisse à l'antigène fixé (g) on lave les perles pour éliminer l'anticorps à marquage radioactif libre (h) on place un tube de comptage au-dessus de chaque puits, ces tubes étant disposés sur un support de tubes de comptage de façon qu'ils cotncident avec les puits du plateau réactionnel et que l'extrémité ouverte de chaque puits soit située dans l'extrémité ouverte d'un tube de comptage (i) on fait tourner le plateau réactionnel et le tube de comptage de 1800 de façon que les perles tombent des puits dans les tubes (j) on sépare les puits des tubes (k) on fait passer les tubes de comptage dans un compteur à scintillation gamma pour déterminer le taux de comptage ; et (1) on enregistre la quantité de radiations et on la compare celle de témoins négatifs et positifs L'invention concerne également un ensemble de détermination pour la mise en pratique du procédé précédemment décrit, qui est constitué d'une botte en carton contenant un ensemble de réactifs constitué d'une ou plusieurs plaquettes à blisters, chaque plaquette étant constituée de plusieurs blisters contenant une perle de matière plastique revêtue d'un anticorps ou d'un antigène, d'un réactif constitué d'un anticorps ou d'un antigène marqués et de témoins positifs et négatifs. L'ensemble peut également renfermer un ou plusieurs éléments à usage unique constitués d'un plateau réactionnel, d'une botte de transfert renfermant plusieurs tubes de comptage, de plusieurs pointes de micropipettes et de macropipettes. La plaquette à blisters peut avoir une forme classique et etre constituée d'une matière souple, de préférence transparente, sous forme d'une couche moulée comportant plusieurs blisters contenant chacun une perle unique de matière plastique revetue, l'ensemble étant recouvert d'une feuille métallique mince. Le plateau réactionnel est constitué d'une base, de pieds fixés sous la base, de plusieurs puits disposés dans la base et d'une encoche conçue pour porter une carte d'identification disposée dans un pied. L'ensemble de détermination peut également comporter un support de tubes de comptage constitué d'un chassies traversé de haut en bas de trous circulaires et comportant à une extrémité un support de carte d'identification. Chaque trou reçoit sans serrage un manchon conçu pour saisir de façon amovible un tube de comptage. L'invention va etre décrite plus en détail en regard des dessins annexés dans lesquels - la figure 1 est une coupe d'une partie d'une plaquette à blisters ; - la figure 2 est une coupe verticale agrandie dtune extrémité d'un-plateau réactionnel réalisé selon l'invention - la figure 3 est une vue latérale du plateau - la figure 4 est une vue de dessus du plateau - la figure 5 est une vue de dessous du plateau ; et - la figure 6 est une élévation d'un portoir de tubes de comptage réalisé selon l'invention. Selon un mode de réalisation préféré de l'invention, pour mettre en évidence la présence éventuelle de l'antigène de surface de l'hépatite B dans un plasma ou un sérum, on transfère plusieurs perles de matière plastique revetues d'anticorps d'une plaquette à blisters (illustrée par la figure 1) dans plusieurs puits d'un plateau réactionnel (illustré par les figures2à5) et pour cela on fait coincider la feuille métallique mince d'une des faces de la plaquette à blisters avec la face supérieure du plateau réactionnel et on appuie è la main sur la partie en relief de la plaquette pour pousser les perles de matière plastique à travers la feuille métallique et les faire tomber danslespuits du plateau réactionnel.On dépose ainsi une seule perle de matière plastique dans chaque puits du plateau réactionnel. les puits du plateau réactionnel ont une profondeur et une taille suffisantes pour contenir une perle de matière plastique et l'échantillon à étudier. On introduit avec une pipette une quantité connue de chacun des échantillons à étudier dans les puits contenant les perles de matière plastique à raison d'un échantillon par puits. On utilise un embout de pipette à usage unique neuf par échantillon. On incube ensuite les perles et les échantillons pendant un temps suffisant pour que l'antigène se fixe à la perle par l'intermédiaire de l'anticorps. On lave ensuite les perles pour éliminer les matières non fixées. On introduit dans chaque puits avec une pipette une quantité connue d'anticorps à marquage radio-actif, puis on incube les perles de matière plastique et l'anticorps marqué pendant une durée suffisante pour que l'anticorps marqué se fixe à l'antigène uni aux perles. On lave ensuite les perles pour éliminer l'anticorps à marquage radio-actif libre. On transfère ensuite chacune des perles de matière plastique des puits correspondants dans un tube de comptage (qui peut etre un tube à essai classique) en retournant un portoir de tubes de comptage (figure 6) que l'on met en alignement avec le plateau réactionnel, de telle sorte que l'extrémité ouverte de chaque puits soit située dans l'extrémité ouverte d'un tube de comptage, puis on maintient réunis le plateau réactionnel et le support de tubes de comptage et on fait tourner l'ensemble de 1800. On fait passer le support portant les tubes garnis dans un compteur de scintillation gamma pour déterminer le comptage. On enregistre la quantité de radiations que l'on compare à celle de témoins pour déterminer le comptage du fond. La plaquette à blisters illustrée par la figure 1 comporte une feuille mince d'aluminium 22. Une feuille 23 d'une matière transparente flexible est disposée sur la feuille 22 et comporte plusieurs logements ou blisters 24 contenant chacun une perle de matière plastique 25. Lorsqu'on exerce une pression sur les blisters 24, les perles 25 sont poussées à travers la feuille mince d'aluminium 22. Le plateau réactionnel 1 est illustré par les figures 2 à 5. Il est constitué de polystyrène transparent et il comporte une base rectangulaire 2 comportant deux pieds 3 ayant pratiquement une forme en U fixés en dessous de chaque extrémité de la base 2. Les pieds 3 assurent la stabilité du plateau et empechent qu'il ne soit renversé lorsqu'on le place sur une surface plane. La base 2 comporte plusieurs puits 4. Le nombre des puits 4 peut entre quelconque, mais, de façon pratique, il existe trois rangées de dix puits disposées longitudinalement par rapport au plateau, comme le montre la figure 3. Chaque puits 4 descend en dessous de la base du plateau 1 et est conçu pour recevoir une perle de matière plastique 25 revêtue d'antigène ou d'anticorps (figure 1) provenant de la plaquette à blisters de la figure 1, les perles de la plaquette étant placées de façon qu'elles coïncident avec les puits dont les parois intérieure et extérieure sont évasées et se terminent par un fond arrondi. Chaque puits 4 s'élève également au-dessus de la base 2 du plateau pour former un collet 5 entourant l'ouverture du puits.La taille extérieure du collet 5 de chaque puits est telle qu'il s'adapte à l'intérieur d'un tube de comptage standard pour détermination radio-immunologique, tel qu'un de ceux que l'on dispose dans un portoir de tubes comme celui illustré par la figure 6. Le plateau comporte un coin de mise en place 6 destiné à s'adapter dans un logement complémentaire 17 du support de tubes de comptage illustré par la figure 6. Dans le cas de l'emploi avec une unité de traitement, un des pieds 3 est muni de deux encoches 7 et 8: Les encoches 7 et 8 sont chacune conçues pour recevoir successivement une carte d'identification portant une information codée. L'encoche 7 s'ouvre à la base du pied et l'encoche 8 s 'ouvre à la surface supérieure du plateau.L'encoche 8 porte la carte d'identification lorsque le plateau est chargé et constitue une encoche de rangement et l'encoche 7 porte la carte d'identification lorsque le plateau est traité dans l'unité de traitement et constitue l'encoche de lecture car, lorsque la carte d'identification est dans l'encoche 7, l'information codée sur la carte peut être lue par une tête de lecture de l'unité de traitement, ce qui permet la programmation automatique du traitement pour differentes déterminations. Une extrémité de la surface supérieure du plateau comporte une surface 9 sur laquelle on peut écrire une information. Le plateau 1 porte des lettres d'identification 10 et des nombres d'identification 11, comme le montre la figure 4. Ces marques sont disposées sur la surface supérieure du plateau et on les rend rugueuses par usure par étincelles du moule pour accroître le pouvoir réfléchissant. Le plateau 1 est muni d'une paroi périphérique 12 qui lui permet de flotter dans un bain-marie. On peut facilement empiler plusieurs plateaux car les pieds des plateaux sont conçus de façon qu'ils puissent toujours s'emboîter lorsque les puits 4 sont fermés par un couvercle. Le support de tubes de comptage 13 illustré par la figure 6 est constitué de matière plastique. I1 comporte un bâti rectangulaire 14 sous ILune des extrémités duquel descend un support de carte d'identification 15, l'autre extrémité comportant un dispositif pour placer le support de tubes de comptage dans un compteur de scintillation gamma. Le bati 14 comporte plusieurs trous 16 conçus chacun pour recevoir un manchon 17 (dont un seul est représenté) et un logement 18 conçu pour recevoir le coin de mise en place 6 du plateau de transfert 1. Le nombre de trous 16 est au moins égal au nombre des puits 4 du plateau de transfert 1, mais il peut être supérieur. Le support de tubes de comptage 13 est muni de lettres et de nombres d'identification qui correspondent aux lettres d'identification 10 et aux nombres d'identification ll du plateau réactionnel 1. Les manchons 17 qui s'adaptent sans serrage dans les trous 16 du support de tubes de comptage 13 comportent chacun une bordure 21 qui les empêche de glisser à travers le trou. Un col est réuni à la bordure et a un diamètre extérieur inférieur au diamètre du trou. Un épaulement est réuni au col pour empêcher que le manchon ne glisse à travers le trou dans l'autre sens. Quatre éléments de préhension élastiques 22, inclinés vers l'intérieur, continuent ltépaulement et comportent chacun une saillie intérieure 23. Les éléments de préhension sont conçus de façon à saisir de façon non permanente un tube de comptage. Les trous 16 sont placés de telle sorte que, lorsque le support est chargé de tubes de comptage (non représenté) et qu'on le retourne, ltouverture de chaque tube reçoive la partie supérieure de chaque puits. On peut ensuite faire tourner le support 13 et le plateau 1 de 180 , alors que les puits et les tubes sont en engagement mutuel, de façon à transférer le contenu des puits dans les tubes de comptage. La structure du manchon 17 est telle que, lorsque le support de tubes de comptage contenant les tubes de comptage traverse un compteur de scintillation gamma, les tubes situés de chaque cté du tube en cours de comptage puissent être facilement déplacés vers le cté par la tete de comptage, alors que le tube en cours de comptage est placé dans la tête de comptage. Selon une modification de l'invention, chaque blister de la plaquette à blisters peut contenir plus d'une perle, chaque puits étant conçu pour recevoir toutes les perles d'un blister. Bien entendu, diverses modifications peuvent entre apportées par l'homme de l'art aux dispositifs ou procédés qui viennent d'etre décrits uniquement à titre d'exemples non limitatifs sans sortir du cadre de l'invention. REVENDICATIONS 1. Plateau réactionnel, caractérisé en ce qu'il est constitué de (a) une base comportant plusieurs puits; (b) un dispositif de support fixé sous la base; et (c) un dispositif pour fixer de façon amovible une carte d'identification au dispositif de support. 2. Plateau réactionnel, caractérisé en ce qutil est constitué de (a) une base comportant plusieurs puits; (b) des puits fixés en dessous de chaque extrémité de la base; et (c) un dispositif pour fixer de façon amovible une carte d'identification sur l'un des pieds. 3. Système de transfert, caractérisé en ce qu'il est constitué d'une combinaison de (a) un plateau réactionnel comportant (1) une base munie de plusieurs puits; (2) un dispositif de support fixé à la base; et (3) un dispositif pour fixer de façon amovible une carte d'identification au dispositif de support; et (b) une plaquette a blisters disposée sur la surface supérieure du plateau réactionnel comportant des blisters disposés au-dessus des puits du plateau réactionnel, chaque blister contenant une perle de matière plastique revêtue d'un anticorps ou d'un antigène, de telle sorte que la perle de matière plastique soit transférée dans le puits correspondant lorsqu'on rompt le blister. 4. Procédé d'analyse d'un échantillon pour y déterminer la présence d'anticorps ou d'antigènes, ledit procédé étant caractérisé en ce qu'il comporte les stades suivants (a) pour transférer plusieurs perles e matière plastique revêtues d'anticorps d'une plaquette blisters dans plusieurs puits d'un plateau réactionnel, on fait colncider une des parois de la plaquette avec la surface supérieure d'un plateau réactionnel et on exerce une pression sur l'autre face de la plaquette pour pousser les perles de matière plastique à travers la paroi et les faire tomber dans les puits du plateau réactionnel; (b) on introduit une quantité connue de chacun des échantillons à étudier dans les puits contenant les perles de matière plastique, à raison d'un échantillon par puits;; (c) on incube les perles et les échantillons pendant une durée suffisante pour que l'antigène puisse se fixer à la perle par l'intermédiaire de l'anticorps; (d) on lave les perles pour éliminer la matière non fixée; (e) on introduit une quantité connue d'un anticorps à marquage radio-actif dans chaque puits; (f) on incube les perles de matière plastique et l'anticorps marqué pendant une durée suffisante pour que l'anticorps marqué s'unisse à l'antigène fixé; (g) on lave les perles pour éliminer l'anticorps à marquage radio-actif libre; (h) on place un tube de comptage au-dessus de chaque puits, ces tubes étant disposés sur un support de tubes de comptage, de façon qu'ils covlncident avec les puits du plateau réactionnel et que l'extrémité ouverte de chaque puits soit située dans l'extrémité ouverte d'un tube de comptage; (i) on fait tourner le plateau réactionnel et le tube de comptage de 1800 de façon que les perles tombent des puits dans les tubes; (j) on sépare les puits des tubes; (k) on fait passer les tubes de comptage dans un compteur à scintillation gamma pour déterminer le taux de comptage; et (1) on enregistre la quantité de radiations et on la compare à celle de témoins négatifs et positifs.