Brevet FR2392955A1 — publié le 19781229

La présente invention concerne un nouvel ester &alpha;-bisabolo- lique d'acide farnesyl-carboxylique utilisable comme agent de stabilisation de la muqueuse gastrique et un procédé pour sa fabrication. A l'occasion de recherche sur ltelément actif de l'huile essentielle de la camomille, l'attention des auteurs à été attirée par un alcool sesquiterpénique tertiaire monocyclique, l'or -bisabolol (I) et par un sesquiterpène acyclique, le farnésène (II) Ils ont alors essayé d'introduire un groupe carboxylique dans le farnésene (II) et de combiné par estérification l'acide farnésyl-carboxylique obtenu avec 1' -bisabolol (I) Ils ont découvert que ce composé estérifié (III) de l'acide farnésyl-carboxylique avec l -bisabolol présentait dtexel- lentes activités anti-inflammatoires et anti-ulcere. L'estérification de ce nouveau composé sera décrite en détail ci-apres. Les deux substances, 0 I1 a été découvert que le nouveau composé de l'invention était moins toxique et avait un effet d'inhibition puissant a l'égard de l'ulcère 'provoqué par le stress expérimental et la 5HT chez l'animal, en comparaison de 1' -bisabolol et du farné sène. En outre, ce composé inhibe plus activement que le géfarnate des lésions de la muqueuse gastrique produite par l'administration de médicaments anti-inflammatoires non stéroïdes comme l'aspirine et l'indométhacine. Les résultats d'autres expériences ont montré que le composé possédait des activités anti-inflammatoires cicatricielles de stabilisation des muqueuses. Expérience pharmacologique I Les effets de stabilisation des cellules épithéliales gastriques, produits par ce composé, ont été étudiés sur des rats. Des rats mâles de souche Donryu, pesant 200 g environ, ont été repartis en cinq groupes. Quatre drogues d'essai, à savoir la drogue de l'invention (III), 1' -bisabolol (I), l'acide farnésylcarboxylique (II) et legéfarnate servant d'étalon actif, ont été administrées par voie orale à des doses de 200 mg/kg trois fois par jour pendant 5 jours. Le cinquième jour, les animaux ont été maintenus à jeun pendant 24 h et soumis à une ligature du pylore sous légère anesthésie à l'éther. Les drogues ont été données par voie orale juste après la ligature du pylore. Au bout d'une période de 8 jours après la ligature, les rats ont été sacrifiés et on a recueilli leur suc gastrique. Le volume du suc gastrique a été mesuré et centrifugé à 5000 tr/mn pendant 10 mn à 40C. 2 ml du liquide surnageant résultant ont été soumis à un dosage de l'acide N-acétyl -neuronique'(NANA) d'après la méthode de D. Aminoff (D. Aminoff al., Biochem. J. 181, 384-392, 1961).Les quantités de NANA dans le suc gastrique sont indiquées dans le tableau I Table I Quantités Témoin Nouveau &alpha;- Acide de NANA farnésyl- Gefarnate Carboxylique Libre 20 > 3 l0t2 12,4* 183 20,8 Fixé 90,1 71,8* 136t3 80 > 6 72;8 * total 110,4 88,9 148,7 98,6 93 > 6 * Significativement différent du témoin (P Comme le montre le tableau I, seul le composé (III) de l'invention abaisse dans une mesure significative les taux de NANA libre, fixé et total.Ces résultats indiquent que la substance-de l'invention réduit la vitesse du cycle métabolique des cellules de la muqueuse gastrique et stabilise la menbrane lysozonale ce qui se traduit par une prolifération de la muqueuse de l'estomac et une prévention de la diffusion réactive, selon ce qui a été établi par D.V. Parke (North American Symposium on Carbenoxolone (Montréal), 16 p. (1976)). En ce qui concerne l'érosion gastrique produite par la ligature du pylore pendant 8 jours, seul le groupe auquel avait été administrée-la drogue (III) de l'invention n'a présenté aucun trouble de la muqueuse gastrique, alors que les autres groupes en ont présenté. Expérience pharmacologique II Pour étudier les effets du composé de l'invention sur l'oedème de la patte arrière du rat provoqué par la carragheenine, on a appliqué la méthode de C.A. Winter (J. Pharmacol. 141, 369 (1963)). On a utilisé des rats Wistar, pesant 140g environ. Le composé de l'invention, l'oC -bisabolol et l'acide farnésyl-carboxylique ont été administrés à raison de 300 mg/kg (per os) en utilisant une solution de CMC à 18 comme véhicule. Le pourcentage d'inhibition a été calculé de la manière suivante (Volume des pattes du groupe témoin) - (volume % 'inhibition = des pattes du groupe testé) Volume des pattes d'un rat témoin X 100 Tableau II % maximum Augmentation de d'inhibition ltoedème de la patte (fi) Compose III 39,6 60,4 i -bisabolol 11,9 88,1 Acide farne1syl-carbozylique 23,3 76,7 D'après les résultats du tableau Il, le composé (III) de l'invention présente le pourcentage maximum d'inhibition le plus élevé de l'oedème de la patte du rat produit par la carragheenine parmi les drogues testées.Le taux d'augmentation de l'oedème de la patte des rats traités par le composé (III) (0,604) est inférieur au produit de ceux qu'on observe avec 1' -bisabolol et l'acide farnésyl-carboxylique (0,881 x 0,767 = 0,675), l'effet synerqique entre l' -bisabolol et l'acide farnésyl-carboxylique pouvant donc être obtenu par la combinaison de ces deux substan ces. Expérience pharmacologique III Pour étudier les effets anti-ulcère des drogues testées sur l'animal de laboratoire, on a choisi l'ulcère de stress. Des rats mâles de souche Wistar, pesant 200-250 g, ont été soumis au stress selon la méthode de Takagi et al. (Chem. Pharm. Bull. 12, 465, 1964 > . Les quatre drogues testées, à savoir le composé (III) de l'invention, l1o A la fin du stress, les animaux ont été retirés de la boite de stress, tués par un coup sur la tête et l'estomac a été enlevé. L'estomac a été rempli de solution de formaline à 1%, placé dans la solution de formaline à 1% pendant 15 mn, puis ouvert le long de sa grande courbure et examiné à la recherche des lésions, pour obtenir un indice d'ulcaration.L'indice d'ulcération a été évalué par une cotation en six échelons (O à 5 5 correspondant à la perforation de l'estomac) Les résultats sont présenté dans le tableau suivant Tableau III Drogues Cotation Témoin 4,8 + 0180 Composé de l'invention 1,5 + 0,50 t(-bisabolol 4,0 + 0,25 Acide farnésyl-carboxylique 2,33t 0,84 Géfarnate 3}83+ 0,73 Expérience pharmacologique IV Dans les expériences suivantes, on a étudié les effets de drogues d'essai sur l'ulcère provoqué par le 5 HT. Pour produire la lésion gastrique, des rats ont été mis à jeun pendant 24 h avant l'injection sous-cutanée de 30 mg/kg de 5 HT. Les animaux ont été sacrifiés au bout de 20 h après l'injection de 5 HT et examinés à la recherche de lésions.La dose et la voie d'administration des drogues d'essai ont été les mêmes que dans l'expérience III. Dans cette expérience, la surface des lésions (en mm2) a été mesurée et prise comme indice d'ulcération. Tableau IV Indice d'ulcération Témoin 25,75 Composé (III) de 11 invention 0 Comme le montre le tableau IV le composé (III) de l'invention, administré à raison de 100 mg/kg, inhibe complétement l'apparition de lésions. Expérience pharmacologique V L'action préventive du composé de l'invention à l'égard de la formation de lésions de la muqueuse gastrique produites par les drogues anti-inflammatoires ulcérogènes gastriques, à savoir l'indométhacine et l'aspirine, a été évaluée par la méthode d'Okabe et al. (Jap. J. Pharmacol. 24, 169, p. 1974; Amer J. Dig. Dis. 20, 626, 1975). .Les résultats sont présentés dans le tableau V. Chaque drogue du tableau V, mise en suspension avec du Tween 80 (marque commerciale) et une solution de CMC à 1%, a été administrée, soit par voie intra-duodénale immédiatement après ligature du pylore (ulcère de l'aspirine), soit par voie orale (ulcère de l'indomethacine) à raison de 0,5 ml/100g. L'aspirine a été donnée par voie orale I0mn après la ligature du pylore. L'indomethacine a été donnée par voie orale 10 mn après l'administration de la drogue. Tous les animaux ont été sacrifiés 7 h après l'opération. Table V Dose Indice d'ulcé-Inhibition Ulcères Traitement (mg/kg) ration (mm2) moyenne + e s Témoins 30,5 3,8 100 21,4 4,4 29Z8 Composé de Aspirine l'invention 300 16,9+3,6* 44,6 (100 mg/kg 1000 10,6+2,2* 65,2 per os) 100 23,7+3,2 22,3 Gefarnate 300 16,2+2,9* 46,9 1000 15,4+4,4* 49,5 Indométhacine Témoins 46,0+3,8 (20 mg/kg, 300 26,4 5,4* 42,6 per os) 300 26 > 4t5,4* 42,6 * Significativement différents des témoins (P Comme le montrent les résultats du tableau V, le composé de l'invention inhibe dans une mesure significative les lésions gastriques provoquées, tant par l'aspirine que par l'indometha- cine. En particulier dans la cas de l'aspirine, le composé de l'invention possède une activité préventive plus forte que celle du géfarnate. Expérience pharmacologique VI La DL50du composé de l'invention a été déterminée, sur des souris de souche ddy, par la méthode de haut en bas et de bas en haut, avec une période d'observation de 24 h. Les drogues d'essai, utilisées dans cette expérience, ont été mises en suspension dans la méthylcellulose à 1 % et administrées oralement. Les résultats obtenus sont résumés dans le tableau VI Tableau VI DL50 (per os) (mg/kg de poids corporel) Composé de l'invention 24,080 -bisabolol 3,673 Acide farnésyl-carboxylique 4,262 I1 est apparu que la toxicité du composé de l'invention était inférieure d'environ 6 à 7 fois à celle de 1' -bsabolol et de l'acide farnésyl-carboxylique. I1 convient de souligner cette faible toxicité du composé de l'invention. Le composé de la présente invention est chimiquement stable et peut être administré ou utilisé par voie orale sous forme de capsules dures ou molles, de comprimés, de poudre et de granulés avec des excipients non toxiques, acceptables pharmaceutiquement (par exemple l'amidon de mais, la cellulose cristallisée, la dextrine ou la cyclodestrine). En outre, si l'on utilise des excipients liquides tels qu'huiles comestibles, émulsionnants et suspensions, le composé peut être administré par voie parentérale. Lorsque le composé de l'invention est utilisé pour le traitement de l'ulcère peptique en temps qu'agent de stabilisation de la muqueuse et anti-inflammatoire, la dose thérapeutique efficace sera de l'ordre de 100 à 1000 mg par jour chez l'adulte. I1 est toutefois bien entendu que la dose pour un patient donné dépend de la gravité de son affection, de la voie d'administration de l'age, du sexe, du poids corporel et de la sensibilité aux réactions. Le composé selon l'invention peut être obtenu par estérification du composé de formule (IV) dans laquelle X représente OH, des halogènes ou un groupe ester d'acide sulfurique avec le composé de formule (V) dans laquelle Y représente OH, OAg un anhydride d'acide ou un groupe alcoxy inférieur.On peut procéder de l'une des manières suivantes pour obtenir le nouveau. composé. (A)En utilisant des réactifs de déshydratation (comme le cyclohexylamide, le diphenylphosphorylazide), on peut combiner dans des solvants inertes le composé de formule CIV) dans laquelle X = OH et le composé de formule (V) dans laquelle Y = OH. (B) En présence d'un fixateur d'acide, on peut faire réagir le composé de formule (IV) dans laquelle X = OH ou un halogène et le composé de formule (V) dans laquelle Y = OH ou OAg. (C) On peut combiner le composé de formulé (IV) dans laquelle X = OH et le composé de formule (V) dans laquelle Y = OCOCH3 par le procédé anhydre mixte. (D) I1 y a lieu de mentionner aussi le procédé de tranestérification entre le composé de formule (V) dans laquelle X = OH et le composé de formule (IV) dans laquelle Y = groupe alcoxy inférieur ou ester d'acide sulfurique (par exemple, X = p-toluene-sulònate). D'autre part, l'acide farnésyl-carboxylique peut être obtenu par hydrolyse du dérivé nitrile après bromation du farnésol (M. Julia et al., Bull. Soc. Chim. Fra. 1960,1072-1079). Pour l'halogénation de l'd -bisabolol, le procédé consistant à chauffer le carbure 4-halogéné avec le triphényl-phosphine est à recommander, car il ne se produit pas de déshydratation et de transposition d'allyle. Les détails de ces procédés sont donnés ci-après. Exemple 1 Une solution d'acide farnésyl-carboxylique dans le benzène, avec un léger excès de chlorure de thionyle, a été chauffée pendant 1 h. Le chlorure d'acide fanésyl-carboxylique, obtenu à raison de 42,24 g après élimination du benzène sous pression réduite, a été redissous dans 60ml de benzène puis ajouté à une solution contenant 33,08 g d' -bisabolol dans 60ml de benzène. A la solution résultante, on a ajouté goutte à goutte, en l'espace de 1 h, au bain d'eau glacée 6,63 ml de pyridine anhydre dans 30 ml de benzène, puis on a maintenu au reflux pendant 3 h au bain-marie. Après filtration du précité, suivi d'un lavage avec 30 ml de benzène, la solution benzénique obtenue a été lavée à l'eau et séchée sur le sulfate de sodium. Après élimination du benzène, le résidu huileux résultant a été traité dans une colonne à âme tournante et on a obtenu la fraction recherchée (180-195 C/0,08-0,65 mmHg). Le rendement a été de 60 % N25 = 1,4970; d25 = 0,9337; Spectre IR : 2930 cm- D 24 (ce qui correspond à -CH3, -CH2), 1730 cm-1 1650 cm-1 (C=C) Spectre de résonance magnétique nucléaire : 0,94 - 1,02 A la suite du traitement de cette fraction avec KOH 0,5N - C2H5 OH bouillant pendant 2 h, la substance obtenue à partir de l'extrait benzénique a été identifiée comme étant 1' -bisabolol par chromatographie gazeuse-liquide.En outre, la substance obtenue à partir de l'extrait benzénique était identique, après acidification avec HCl, à l'acide farnésyl-carboxylique authentique. Exemple 2 A une solution de 1,25 g d'acide farnésyl-carboxylique dans l'eau amoniaquée O,5N, on a ajouté 0,845 g de nitrate d'argent dans 3 ml d'eau. Le précipité résultant a été recueilli par filtration et séché. Le sel d'argent a été pulvérisé et mis en suspension dans 120 ml de benzène ; on a distillé jusqu'à 60 ml environ de solution benzénique pour éliminer azéotropiquement l'eau restante. Un chlorure d' -bisabolol a été préparé séparément par addition d'une quantité 1,3 fois plus grande de triphényl-phosphine à une solution d'&alpha; -bisabolol dans le tétrachlorure de carbone (1:8), puis par maintien au reflus au bainmarie pendant 1 h et purification par distillation sous vide.Le chlorure dtX -bisabolol purifié (1,39 g) a été dissous dans 3 ml de benzène et ajouté à la solution précitée de suspension de sel d'argent préparée auparavant. Au bout de 9 h de reflux, le mélange réactionnel a été lavé à l'eau et séché (sulfate de sodium). La fraction recherchée a été obtenue par distillation sous vide (155-156 C/0,1 mmHg) sous un courant de N2 gazeux. 25 25 ND = 1,4981 d27 = 0,9362. Exemple 3 2,50 g d'ester &alpha;-bisabololique d'acide farnésyl carboxilique et 2,2 g d'&alpha;-bisabolol ont été dissous dans 150 ml de xylène. Un condenseur et un décanteur (contenant du sulfate de sodium) ont été raccordés et le mélange réactionnel a été maintenu au reflux pendant 12 h. Aprés élimination du solvant sous vide, le résidu a été soumis à une distillation sous vide sous courant de N2 gazeux. La fraction obtenue (120-1400C/0,03 mmHg) était identique. N25 = 1,4990 d25 = 0,9328 D 23 REVENDICATIONS 1. Ester O(-bisabololique d'acide farnésyl-carboxylique [ester 1 ,5-diméthyl-1- (4-mehyl-3-cyclohexényl)-4-hexénylique de l'acide 3E,7E,4,8,12-triméthyl-3,7,11-tridecatriénolque (R.S)3 représenté par la formule 2. Agent de stabilisation des muqueuses constitue par l'ester -bisabololique d'acide farnésyl-carboxylique. 3. Agent de stabilisation des muqueuses selon la revendication 2, caractérisé en ce qu'il est utilisé comme agent anti-ulcère peptique. 4. Agent de stabilisation des muqueuses selon la revendication 2, caractérisé en ce qu'il est utilisé comme anti inflammatoire. 5. Procédé de fabrication de l'ester o( -bisabololique d'acide farnésyl-carboxylique représenté par la formule caractérisé en ce qu'on fait réagir ltof-bisabolol ou l'un de ses dérivés, représenté par la formule dans laquelle X représente OH ou un radical réactif, et l'acide farnésyl- carboxylique ou l'un de ses dérivés représenté par la fonnule dans laquelle Y représente OH ou un radical réactif. 6. Procédé de fabrication selon la revendication 5, caractérisé en ce que X représente un halogène et Y représente -OH ou -OAg. 7. -Procédé de fabrication selon la revendication 5, caractérisé en ce que X représente OH et Y représente un halogène. 8. Procédé de fabrication selon la revendication 5, caractérisé en ce que X représente OH et Y représente OCOCH3 ou OCOC2H5 9. Procédé de fabrication selon la revendication 5, caractérisé en ce que X représente OH et Y représente un groupe alcoxy inférieur. 10. Procédé de fabrication selon la revendication 5, caractérisé en ce que X représente un radical ester d'acide sulfurique et Y représente OH.