Brevet FR2384019A1 — publié le 19781013

La présente invention est relative aux procédés actuelle ment utilisés d'une manière générale pour obtenir la répartition et l'étalement aussi uniformes que possible de sources de cultures microbiennes en vue soit d'isoler un des individus participant à une de ces cultures, soit d'assurer la répartition la plus uniforme possible de ces individus en vue de les soumettre à l'éta- blissement d'un antibiogramme. L'une des plus anciennes de ces méthodes est celle qui fut utilisée par PASTEUR il y a environ un siècle et connue sous le nom de méthode des dilutions, consistant à procéder à des ensemen cements répétés à partir de dilutions décroissantes des différentes cultures étudiées. Une autre méthode consiste en un procédé par pulvérisa tion des cultures pour en assurer la répartition sur des surfaces étendues, mais la méthode la plus courante actuellement consiste d procéder par isolement manuel des bactéries, en prélevant dans les cultures un échantillon au moyen d'une boucle métallique appellée ose et à étaler cet échantillon sur une plaque de gélose nutritive, par va-et-vient selon une ou plusieurs directions décalées d'un angle de l'ordre de 450 à 90 . Le principal inconvénient reconnu à cette dernière métho de, pourtant très largement utilisée est le temps qu'il est nécessai re de consacrer pour assurer un étalement et une répartition suffi samment uniformes de laculture sur la gélose, avec cependant, dans certains cas, des difficultés et des échecs liés au caractère manuel de l'opération, toujours subordonné à l'habileté de l'opéra- tour. La présente invention vise un perfectionnement à ce procédé et consiste essentiellement à remplacer la répartition par va-et-vient suivant des trajets parallèles par une répartition en spirales à partir du centre d'une zone de répartition plane soumise à un mouvement de rotation. Plus spécialement, le procédé selon l'invention consiste a assurer la répartition uniforme d'une source d'une ou plusieurs cultures microbinnes sur un milieu nutritif plan, en vue de son développement controlé, ce procédé étant caractérisé en ce que, ledit milieu étant constitué à la manière connue par un disque de gélose nutritive, il consiste à imprimer au récipient contenant ce milieu c'est à dire à ce disque, un mouvement de rotation, et à déposer ladite source microbienne suivant un trajet radial parrappott à l'axe de cette rotation, c'est à dire sur la surface de ce disque,de!manière à étaler ladite source microbienne suivant un trajet résultant spiroïdal sur toute la surface du milieu. Selon une première application de ce procédé, dans le cas où la source contient un mélange de plusieurs cultures bactériennes, et qu'il vise l'étalement et la dispersion des différentes souches constituant ces cultures en vue de leur isolement les unes des autres, le procédé consiste à assurer cet étalement par l'allongement du trajet auquel est soumise la source de l1échantillon, suivant une spirale, à partir du centre du disque de gélose vers l'extérieur. Selon un mode de réalisation préférentielle , le mouvement de rotation ainsi imprimé au disque de gélose est légèrement excentré de manière à déterminer , par passages répétés d'une spire sur la préeédente, un-processus d'épuise ment-reenrichissement. Selon une seconde application du procédé selon l'invention, la source bactérienne contient un seul type de culture, et le procédé vise un étalement uniforme de cette culture en vue notamment de l'établissement d'un antibiogramme. Dans ce cas, le processus excentré précité perd son intérêt, puisque le procédé vise essentiellement une répartition aussi uniforme que possible de la culture, en vue d'être soumise ensuite à des essais d'antibiotiques, répartis sous forme de disque chargé de l'antibiotique à tester. On peut donc considérer que le procédé selon l'invention comporte deux variantes , à savoir - l'étalement et la dispersion d'un mélange de cultures bactérien nes en vue de leur isolement les unes des autres et - l'étalement uniforme d'une culture unique en vue del'obtention d'un antibiogramme. Dans le premier cas, une -variante du procédé consiste à substîtuerà la rotation simple conduisant à une spirale à pas variable selon la vitesse radiale de départ,une rotation excentrée,avec épuisement et réenrichissement d'une spire à l'autre. La présente invention présente de nombreux avantages par rapport à la méthode manuelle classique, mais elle vise essentiellement à lí5Obtention, à la fois d'un gain de temps pour un degré d'isolement donné des cultures et d'une qualité supérieure de l'isolement même pour un temps égal. L'invention trouve son application dans tous les cas de prélèvements pathologiques et notamment dans des coprocultures, dans lesquelles on rencontre fréquemment de nombreuses souches bactériennes mélées dont il faut isoler la source pathogène. Toutefois, d'autres possibilités peuvent être envisagées pour la présente invention, notamment dans ledomaine de son automatisation dans le cadre de son exploitation par les laboratoires d'analyses spécialisÉs, procédant à de très nombreuses analyses basées sur la même technique. Ainsi, il est possible d'envisager la standardisation des innoculum, notamment pour les antibiogrammes. Mais surtout, il est possible d'envisager une automatisation-plus ou moins complète de toute l'opération moyennant essentiellement une enceinte stérile pour l'ensemble de l'appareillage et un matériel à usage unique, rendu obligatoire par le fait qu'aucune pollution de la culture ne doit venir d'une expérience précédente. L'invention vise donc, outre le procédé tel qu'il a été decrit précédemment, un appareil pour la mise en oeuvre de ce procédé, caractérisé en ce qu'il se compose d'un support destiné à recevoir une boite de gélose nutritive etvun moteur à vitesse variable pour l'entrainement de cette boîte en rotation autour d'un axe confondu ou voisin de l'axe de la boite. L'invention vise egalement le fait qu'un tel appareil est entièrement automatique et comporte, outre les éléments précités, un bras radial supportant un élément interchangeable, animé d'un mouvement de déplacement radial et uniforme, pour recevoir et déposer la source des cultures, l'ensemble étant maintenu dans une enceinte assurant la stérilité totale des différents organes et éléments intervenant dans leur mise en oeuvre. L'invention est donc susceptible de très nombreuses applications -, et couvre toutes les variantes qu'il sera possible à tout technicien de concevoir à partir des définitions résultant du jeu de revendications ci-après. R E V E N D I C A T I-O N S 1. Procédé ourla répartition uniforme d'une source de cultures mic-rob-iennes et/ou bactériennes sur un milieu nutritif plan, en vue de son développement contrôlé, caractérisé en ce qu'il consiste à imprimer au récipient contenant ce milieu un mouvement de rotation et à déposer ladite source suivant un trajet radial par rapport à l'axe de cette rotation, de manière à étaler ladite source suivant un trajet résultant spiroïdal sur la surface du milieu. 2. Procédé selon la revendication 1,caractérisé en ce que ladite source contient un mélange de cultures bactériennes et qu'il vise 1'4taLement et la dispersion des différentes cultures en vue de leur isolement les unes des autres. 3. Procédé selon les revendications 1 et 2,caractérisé en ce que ledit milieu étant circulaire, le mouvement de rotation est légèrment excentré de manière à déterminer un processus d'épuise- ment-réenrichissement d'une spire à l'autre. 4. Procédé selon la revendication 1,caractérise en ce que ladite source contient un seul type de culture et qu'il vise l'étalement uniforme de cette culture en vue notamment de l'établissement d'un antibiogramme. 5. Appareil pour la mise en oeuvre du procédé selon l'une quelconque des revendications 1-à 4,caractérisé en ce qu'il se compose d'ce suçprt destine à recevoir une boîte de gélose nutritive et d'un moteur à vitesse variable pour l'entraînement de cette boîte en rotation autour d'un axe confondu ou voisin del'axe de la boîte , l'operateur déposant sur cette gélose l'échantillon de la ou des cultures soumises à l'examen suivant un trajet radial par rapport à l'axe en question. 6. Appareil selon la revendication 5,caractérisé en ce qu'il est entièrement automatique et comporte au surplus un bras radial portant un élément animé d'un mouvement radial uniforme, inter changeable, pour recevoir et déposer la source de cultures, l'ensemble étant maintenu sous une enceinte stérile assurant l'aseptie totale des différents organes et éléments au cours de chaque opération d'analyse.