Brevet FR2390419A1 — publié le 19781208

I1 a été rapporté que l'inåection d'extraits thymiques exempts de cellules peut rétablir la fonction immunologi que de souris thymectomisées dans la période néo-natale en ce qui concerne le rejet des greffes de peau. Des informations montrant la reconstituation partielle de souris thymectomasées dans la période néo-natale par des greffes de thymus dans une chambre Millipore ont suggéré que le thymus joue le r81e de glande endocrine et élabore une hormone dans la circulation sanguine. (Voir D. Osoba et autres, Nature 199, 359 (1963)). Cette hormone médicinalement utile a été isolée et on pense que c'est un peptide ayant la séquence suivante d'amino-acides : Comptes Rendes, 283 N 14 1605-1609 (1976)). La présente-invention concerne des peptides ayant la structure Gly ou de la sarcosine et R11 est CE ou NH2. Les présents composés ont une plus longue durée d'action que le composé Lys-Ser-Gln-Gly-Gly-Ser-Asn. Les nouveaux peptides selon la présente invention sont utiles dans le traitement de maladies par auto-immunisation comme la pathologie du genre lupus et spécifiquement pour le traitement de Lupus Erythematosus chez l'homme et pour stimuler sélectivement l'activité des cellules 2 chez les sujets vieillis- sants. la présente invention concerne les nouveaux peptides ayant la structure t R11 est Oit ou et leurs sels non-toxiques pharmaceutiquement acceptables. Des exemples de sels pharmaceutiquement acceptables sont les sels d'addition d'acide non-toxiques comme les chlorhydrates, bromhydrates, sulfates, phosphates, maléates, acétates, citrates, benzoates, succinates, malates, ascorbates, etc.. Dans le cas où R11 est OH, des sels peuvent eAtre formés avec le groupe acide carboxylique sur le carbone terminal. Des exemples de sels du groupe acide carboxylique sont les sels de métaux alcalins et alcalino-terreux coae de sodium, de potassium, de calcium, etc.. Sont comprises dans la présente invention, des compositions contenant des quantités thérapeutiquement efficaces de ces nouveaux peptides et un excipient non-toxique pharmaceutiquement acceptable. Est compris aussi dans la présente invention un procédé pour la préparation chimique du nonapeptide ayant la struc ture pyroglutamyl-Ala-Lys-Ser-Gln-D-Ala-X-Ser-Asn-R11, où X et Rîî sont tels que définis ci-dessus. Le procédé comprend une combinaison dtune synthèse de peptide en phase solide et d'une condensation échelonnée d'amino-acides conduite en solution. Les produits intermédiaires formés dans la préparation des nouveaux peptides représentent un aspect supplémentaire de l'invention. Selon le procédé de la présente invention, les nonapeptides Selon le procédé de la présente invention, on prépare l'heptapeptide ou l'hexapeptide à azote terminal par le procédé en phase solide et le dipeptide ou tripeptide ô carbone terminal correspondant est préparé en solution. Les désignations en abrégé qui sont utilisées ici pour les constituants amino-acides, certains groupes protecteurs préférés, des groupes activant es amino-acides, des agents de condensation, des réactifs et des solvants utilisés dans le procédé selon la présente invention sont les suivantes :: TABLEAU I Désignation en abrégé Amlno-acide Ala L-alanine Lye L-lysine Ser L-serine Gln L-glutamine Gly glycine Asn I~asparagine Sar sarcosine D-Ala D-alanine Asn-NH2 L-asparagine amide Désignation en abrégé Groupes protecteurs INOC isonicotinyloxycarbonyle BOC tert-butyloxycarbonyle OMe méthyl ester t3a tert-butyle CBZ benzyloxycarbonyle Bzl benzyle 2-Cl-CBZ 2-chloroben zyloxycarbonyle TROC trichloréthoxycarbonyle FMOC 9-fluorenylméthoxycarbonyle Désignation en abrégé Groupes protecteurs ONp p-nitrophényl ester HSE N-hydroxysuccinimide ester HBT 1-hydroxybenzotriazole Désignation en abrégé Agents de condensation DCCI dicyclohexylcarbodiimide Désignation en abrégé Réactifs TFA Acide trifluoroacétique TFA triéthylamine DIPEA diisopropyléthylamine IAN nitrite d'isoamyle Désignation en abrégé Solvants EPAW éthyle acétate d'acide pyridi.- ne acétique-eau RAW butanol acide acétique-eau CMW chloroforme-méthanol-eau DMF diméthylformamide THF tétrahydrofuranne Les peptides préférés selon la présente invention sont ceux ayant la structure : Selon le procédé de la présente invention, le nonapeptide Gln-D-Ala-X avec le dipeptide à groupe hydroxy bloqué de manière appropriée on non-bloqué Ser-Asn-R11 et en éliminant les groupes protecteurs. L'heptapeptide bloqué est préparé par synthèse en phase solide et le dipeptide bloqué ou non est préparé en so- lution. En variante, on -prépare le nonapeptide Ser-Gln-D-Ala-X-Ser-Asn-R11 en condensant l'hexapeptide bloqué de manière appropriée, Selon le procédé de la présente invention, la synthèse de ltheptapeptide bloqué par la technique en phase solide est conduite d'une manière échelonnée sur la résine chîorométhyléeg La résine est composée de fines perles (20 à 70 microns de diamètre) d'une résine synthétique préparée par la copolymérisation de styrène avec 1 à 2% de divinylbenzène. Les noyaux benzéniques de la résine sont chlorométhylés dans une réaction de Friedel-Crafts avec de l'oxyde de chlorométhyle et de méthyle et du chlorure stannique. On continue la réaction de Friedel Crafts jusqu'à ce que la résine contienne de 0,5 à 5 mmoles de chlore par gramme de résine. La chlore dans le chlorure de benzyle est réactif et subit une réaction avec les groupes acide carboxylique en présence d'une base pour former l'ester de benzyle correspondant. L1amino-acide, W, correspondant à l'amino-acide à carbone terminal de l'heptapeptide, est transformé en son dérivé à groupe amino protégé. Le groupe carboxyle de X est lié par covalence au support de résine polymère sous la forme de l'ester de benzyle d'acide carboxylique correspondant. Après élimination du groupe protecteur du groupe amino de X, le dérivé à groupe amino protégé de ltamino-acide suivant dans la séquence est ajouté en même temps qu'un agent de couplage, comme du dicyclohexylcarbodiimide. L'amino-acide en réaction peut être utilisé sous la forme d'un amino-acide à groupe carboxyle activé comme lester ONp, un azide d'amino-acide, l'ester de 1-hydroxybenzotriazole, etc. On effectue la déprotection et l'addiction d'amino-acides successifs jusqu'à ce que l'heptapep tide désiré soit formé.L'hexapeptide à carbone terminal peut être préparé d'une manière similaire à partir de D-Ala-O-CH2-#- résine, n z a lieu de comprendre que, dans le procédé selon la présente invention Après que l'heptapeptide a été formé sur la résine en phase solide, il peut en être séparé de diverses manières. Par exemple, le peptide peut être coupé de la résine au moyen d'hydrazine et former ainsi directement l'hydrazine du peptide qui peut être transformé ensuite en l'azide et condensé avec le dipeptide Ser-Asn-E11 à groupe hydroxy bloqué de manière appropriée on non-bloqué0 En variante, le peptide peut être séparé de la résine par traitement avec un alcool inférieur comme du méthanol en présence d'une base organique comme la triéthylamine, avec comme résultat la formation de l'ester d'alcool inférieur correspondant de l'heptapeptide.Les esters sont transformés en l'azide en passant par l'hydrazide et on peut faire réagir l'azide avec le dipeptide Ser-Asn-R11 à groupe hydroxy bloqué de manière appropriée non non-bloqué pour obtenir le nonapeptide bloqué désiré-. On transforme l'hydrazide en l'azide correspondant par réaction avec un réactif qui fournit de l'acide nitreux in situ. Les réactifs utilisables à cet effet comprennent un nitrite d'alcoyle inférieur (par exemple nitrite de t-butyle, nitrite d'isoamyle) ou un sel nitrite de métal alcalin (par exemple nitrite de odium, nitrite de potassium) en présence d'un acide fort comme les acides chlorhydriques phosphorique, sulfonique, etc.. Cette réaction est conduite en présence d'eau et/ou d'un solvant non-aqueux comme du diméthylformamide, du tétrahydrofu- ranne, du dioxanne, du chloroforme, du chlorure de méthylène, etc.., ô une température comprise entre -400C et +200C environ. L'azide qui, de préférence, n'est pas isolé du milieu de réac-tion est ensuite couplé avec un dipeptide Ser-Asn-R11 à groupe hydroxy bloqué de manière appropriée ou non-bloqué pour donner le nonapeptide désirés Ce couplage est effectué à une tempéra- ture comprise entre -50 C et +500C environ, de préférence entre 35 C et +10 C environ. Le choix du groupe protecteur pour le groupe -amino du radical lysyle est dicté en partie par les réactifs utilisés pour-couper llhepta- ou hexapeptide bloqué de la résine. -Le Tableau III indique un procédé pour couper un heptapeptide bloqué de la résine avec MeOH/TEA. En conséquence, les groupes protecteurs pour le groupe E -amino sont choisis parmi ceux qui sont stables au traitement par MeOH/TEA et au traitement ultérieur par NH2-NH2. Dans ces conditions de réaction, des groupes formyle, tosyle et des groupes oxycarbonyle dversement substitués peuvent être utilisés pour protéger le groupe #-amino du radical lysyle. Des groupes protecteurs appropriés pour le groupe -amino sont définis par la définition de R sous le Tableau III. Le Tableau IV indique un procédé pour couper un heptapeptide bloqué de la résine par traitement avec HF ou avec HBr anhydre dans un solvant approprié. Dans ces conditions de réaction, les groupes trifluoroacétyle et phtaloyle en plus de groupes oxycarbonyle diversement substitués peuvent être utilisés pour protéger le groupe (-amino du radical lysyle. Les significations de R3 indiquées sous le Tableau "T représentent des groupes protecteurs appropriés pour le groupe #-amino du radical lysyle utiles dans ces conditions. Le groupe de blocage préféré pour le groupe -amino du radical lysyle est INOC. Dans le Tableau III, Ri et R2 représentent les groupes protecteurs du groupe hydroxy des portions séryle, R1 et R2 sont choisis indépendamment parmi les groupes benzoyle, t-butyle et benzyle. Le groupe benzoyle est labile au traitement par une base, comme NH2-NH2 et l'ion hydroxyde. Après le traitement de l'ester de méthyle d'heptapeptide bloqué avec NH2-NH2, le groupe benzoyle est éliminé. En conséquence, R11 a seulement les significations hydrogène, t-butyle et benzyle. Après achèvement de la synthèse du nonapeptide bloqué, les groupes t-butyle et benzyle peuvent être éliminés avec HF ou le groupe benzyle peut être éliminé sélectivement par traitement avec H2, Pd/C. La référence au Tableau IV indique que la coupure de l'heptapeptide bloqué lié à la résine au moyen de HBr ou HF anhydre entrain l'élimination simultanée de tous les groupes protecteurs de groupes hydroxy de portions séryle, à l'exception des groupes p-nitrobenzyle et benzoyle. Le groupe p-nitrobenzyle est éliminé par H2, N/C durant la dernière étape de la synthèse. L'élimination du groupe benzoyle exige un traitement par une base, comme NH2-NH2. Le dipeptide bloqué de manière appropriée, Ser-Ans-R où R11 est tel que défini ci-dessus, est préparé en solution par des moyens classiques. Par exemple1 Asn-R11 est condensé avec un ester actif de Ser à groupe amino protégé et à groupe hydroxy protégé ou non-protégé. On élimine le groupe prptecteur du groupe amino pour obtenir le dipeptide Ser-Asn-R11 à groupe hydroxy bloqué de manière appropriée ou libre. En variante, on peut éliminer les groupes protecteurs des groupes tant amino qu'hydroxy. La portion séryle dans le dipeptide, Ser-Asn-R11, des Tableaux III et IV et dans le tripeptide, Gly-Ser-Asn-R11, du Tableau VI peut éventuellement rester débloquée. Les groupes protecteurs de groupes amino à azote terminal ordinairement utilisés comprennent ceux qui sont bien connus dans la technique, par exemple des substituants protecteurs pour uréthanes tels que des groupes benzyloxycarbonyle (carbobenzoxy), -méthoxycarbobenzoxy, p-nitrocarbobenzoxy, t-butyloxycarbonyle, etc..On préfere utiliser le groupe t-butyloxy-carbonyle (ROC) pour protéger le groupe &alpha;-amino dans les amino-acides subissant une réaction à l'extrémité carbonyle de l'amino-acideO Le groupe protecteur BOC est éliminé facilement après cette réaction de couplage et avant l'étape suivante par l'action relativement douce d'acides (à savoir d'acide trifluoro-acétique ou d'acide chlorhydrique anhydre dans de l'acétate d'éthyle. Les réactifs nécessaires pour effectuer l'étape finale de déblocage dans les Tableaux III et IV dépendent des groupes protecteurs R, R1', R2, R3 R41 et R5 qui sont présents. Le Tableau II indique le réactif ou les réactifs nécessaires pour éliminer ces groupes protecteurs. suivant les combinaisons de groupes protecteurs et d'étapes de déblocage qu'on utilise, plus d'un réactif peut être nécessaire pour leur élimination complète Par exemple, le traitement d'un nonapeptide bloqué contenant un groupe E-INOC et-un groupe O-Bzl avec HF-anisol entrain l'élimination de seulement le groupe 0-Bzl. Une deuxième étape de déblocage utilisant H2, Pd/C est nécessaire pour éliminer le groupe -INOC.En variante, un traitement initial avec H2, Pd/C élimine les deux groupes. T A B L E A U II R HF- Na/NH3 H2 HBr/ HCl aqueux NH2 Base anisol Pd/C HOAc HCl dilué ou HCl alcoo- NH2 diluée Zn-H+ lique formyle - - - - - D - - toluène sulfonyle - D - - - - - - benzyloxycarbonyle D D D D - - - - 2-chloro- et 2,6-dichlorobenzyloxycarbonyle D D D - - - - - p-nitrobenzyloxycarbonyle - D D - - - - - D 2-bromobenzyloxycarbonyle D D D - - - - - 2,2,2-trichloroéthoxycarbonyle - - - - - - - - D isonicotinyloxycarbonyle - D D - - - - - D R1,$1', R2, R4, R4' et R5 benzyl, o-chlorobenzyl et p-nitrobenzyle D D D D - - - - t-butyle D - - D D - - - benzyle - D - - - - D D R3 isonicotinyloxycarbonyle - D D - - - - - D trifluoroacétyle - D - - - D D D phthaloyle - * - - - D D - toluène sulfonyle - D - - - - - - p-nitrobenzyloxycarbonyle - D D - - - - - D 2,2,2-trichloroéthoxycarbonyle - - - - - - - - D 9-fluoroénylméthoxycarbonyle - D - - - - D D D = débloqué * = détruit. T A B L E A U III Schéma pour préparer Cl-CH2 - # - résine # BOC-Gly Boc-Gly-O-CH2 - # - résine procédé en phase solide 1. BOC-D-Ala 2. BOC-Gln 3. BOC-(O-R1)Ser # 4. BOC-(#-R)Lys 5. Boc-Ala 6. acide pyroglutamique MeOH # TEA # NH2-NH2 Asn # BOC-(O-R2)Ser-HSE 1) nitrite d'isoamyle HCl # 2) (O-R2)Ser-Asn.HCl # BOC-(O-R2)Ser-Asn # *Elimination des groupes de blocage *Des réactifs appropriés pour l'élimination de R, R' et R2 sont indiqués dans le Tableau II. où R est le groupe protecteur pour le groupe -amino de la portion lysyle choisi parmi les groupes formyle, toluène sulfonyle, benzyloxycarbonyle, 2,6-dichlorobenzyloxycarbonyle, p-nitrobenzyloxycarbonyle, 2-bromobenzyloxycarbonyle, 2-chlorobenzyloxycarbonyle, 2,2,2-trichloroéthoxycarbonyle et isonicotinyloxycarbonyle ; R1' est de l'hydrogène ou un groupe t-butyle ou benzyle R2 est de l'hydrogène ou R1 et R2 sont des groupes protecteurs pour le groupe hydroxy des portions séryle, choisis indépendamment parmi les groupes benzoyle, t-butyle et benzyle. Pour préparer des composés ayant la structure Tableau III. T A B L E A U IV Schéma pourn préparer Cl-CH2 - # - résine # BOC-Gly Boc-Gly-O-CH2 - # - résine procédé en phase solide 1. BOC-D-Ala 2. BOC-Gln 3. BOC-(O-R4)Ser # 4. BOC-(#-R3)Lys 5. Boc-Ala 6. acide pyroglutamique # HF ou HBr dans HOAc, CH2Cl2 ou CF3CO2H # DCCI/HBY, HSE ou ONp Asn # BOC-(O-R5)Ser-HSE HCl # (O-R5)Ser-Asn.HCl # BOC-(O-R5)Ser-Asn # *Elimination des groupes protecteurs *Des réactifs appropriés pour l'élimination de R3, R4' et R5 sont indiqués dans le Tableau II. où R3 est le groupe protecteur pour le groupe -amino de la portion lysyle choisi parmi les groupes INOC, trifluoroacétyle, phtaloyle, tosyle, -nitrobenzyloxycarbonyle, TROC et FMOC dans le cas où R3 est FMOC, un traitement avec une base est nécessaire pour son élimination R4 et R5 sont indépendamment de l'hydrogène ou des groupes protecteurs pour le groupe hydroxy des portions séryle, choisis indépendamment parmi les groupes benzyle, benzyle substitué où le substituant est un substituant 0-chloro ou p-nitro ; t-butyle et benzoyle ; R41 est de l'hydrogène ou un groupe P-nitrobenzyle ou benzoyle R6 est un ester actif choisi parmi les groupes 1 hydroxy-benzotraizole, N-hydroxysuccinimide et p-nitrophényle. Pour préparer des composés ayant la structure Tableau IV. T A B L E A U Schéma pour préparer Cl-CH2 - # - résine # BOC-Gly BOC-Gly-O-CH2 - # - résine Procédé en phase solide 1. BOC-D-Ala 2. BOC-Gln 3. BOC-(O-Bzl)Ser # 4. BOC-(#-INOC)Lys 5. Boc-Ala 6. acide pyroglutamique MeOH # TEA # NH2-NH2 Asn # BOC-(O-Bzl)Ser-HSE 1) nitrite d'isoamyle HCl # 2) (O-BzL)Ser-Asn.HCl # BOC-(O-Bzl)Ser-Asn # HF-anisol # H2, Pd/C T A B L E A U VI Schéma pour préparer Cl-CH2 - # - résine # BOC-D-Ala Boc-D-Ala-O-CH2 - # - résine procédé en phase solide 1. BOC-Gln 2. BOC-(O-Bzl)Ser 3. BOC-( -INOC)Lys # 4. BOC-Ala 5. acide pyroglutamique MeOH Asn # TEA #N-BOC-(O-Bzl)Ser-HSE N-BOC-(O-Bzl)Ser-Asn # NH2-NH2 #HCl (O-Bzl)Ser-Asn 1) nitrite d'isoamyle # # 2)Gly-(O-Bzl)Ser-Asn.HCl HCL BOC-Gly-(O-Bzl)Ser-Asn # # HF-anisol # H2, Pd/C Pour préparer des composés ayant la structure BOC-Gly HSE) eat remplécé par BOC-Sar ar et Ase est remplacé par Asn-NH2 dans les Tableaux V et VI. Comme on le voit d'après le Tableau Vi le mode opératoire d'ensemble préféré pour préparer les nonapeptides désirés, pyroglutamyl-Ala-Lys-Ser-Gln-D-Ala-X-Ser-Asn-R11, où X est Gly et R11 est OH, comporte la synthèse échelonnée de ltheptapepti- de bloqué DCCI comme agent de condensation. Dans le cas de la condensation de BOG-Gln et CGlu, on ajoute du 1-hydroxybenzotriazole au mélange réactionnel en plus de DCCI. On peut effectuer deux fois chaque étape de couplage de manière à assurer une réaction complète . Après que l'heptapeptide bloqué désiré a été formé, il est séparé de la résine par traitement avec du méthanol en présence de triéthylamine (TEA) L'heptapeptide bloqué résultant ayant la séquence d'amino-acides Ser-Gln-D-Ala-Gly-OMe est traité avec de l'hydrazine pour former l'hydrazide correspondant. L'hydrazide résultant est traité avec du nitrite d'isoamyle dans un pH acide pour former l'azide correspondant. L'azide d'heptapeptide bloqué est traité avec le dipeptide, (O-Bzl)Ser-Asn-OH.Cl, pour former le nonapeptide bloqué, On prépare le dipeptide, (O-Bzl)Ser-Asn-OH.HCl, en condensant Àsn-OH avec l'ester actif d'amino-acide bloqué, BOC-(O-Bzl)Ser-HSE, pour former le dipeptide bloqué, BOC-(O-Bzl)Ser-Asn-OH. Le groupe protecteur sur l'azote terminal, BOC, est éliminé sélectivement par traitement avec HCl anhydre. Les nonapeptides obtenus par le procédé des Tableaux I à VI sont purifiés par chromatographie, de préférence sur gel de silice, avec élution au moyen de chloroforme-méthanol-eau contenant 1% d'acide acétique. Sont compris dans la présente invention, les composés intermédiaires ayant la structure, Ser-Gln-D-Ala-X-(O-R10)Ser-Asn-R11 où R8 est le groupe protecteur pour le groupe #-amino de la portion lysyle choisi parmi les groupes formyle, toluène sulfonyle, benzyloxycarbonyle, 2,6-dichlorobenzyloxycarbonyle, p-nitrobenzyloxycarbonyle, 2 bromobenzyloxycarbonyle, 2-chlorobenzyloxycarbonyle, 2,2,2-trichloroéthoxycarbonyle, isonicotinyloxycarbonyle, trifluoroacétyle, phtaloyle, TROC et FMOC R9 et R10 sont indépendamment de l'hydrogène ou R9 et R10 sont des groupes protecteurs pour le groupe hydroxy des portions séryle, choisis indépendsmment parmi les groupes benzoyle, t-butyle, benyle et benzoyle substitué où le substituant est un substituant o-chloro ou p-nitro, x est une portion Gly ou sarcosine, R11 est OH ou NH2 et les composés ayant la structure R9 est de l'hydrogène ou le groupe protecteur pour le groupe hydroxy de la portion séryle, choisi parmi les groupes benzoyle, t-butyle, benzyle et benzyle substitué où le substituant est un substituant o-chloro ou p-nitro, R7 est -NH-NH2, OH, 1-oxybenzotriazole, N-oxysuccini mido, p-nitrophénoxy ou OCH3. Sont compris dans la présente invention, les produits intermédiaires liés à la résine ayant la structure D'autres produits intermédiaires envisagés par la présente invention sont les hexapeptides bloqués et les hexapeptides liés à la résine bloqués ayant la structure Les exemples suivants illustrent des modes démise en -oeuvre de l'invention, mais il y a lieu de comprendre que ces exemples sont donnés à des fins d'illustration et non de limitation. - EXEMPLE 1 Préparation de Etape a) - Préparation de De la résine chlorométhylée (résine de Merrifield réticulée à 2%), 1000 g (2,75 moles), ayant 2,75 méq de chlore par gramme et 481,8 g (2,75 moles) 1 équivalent) de BOC-Gly sont ajoutés à 5000 cm3 de tétrahydrofuranne exempt de peroxyde. On agite le mélange dans un bain d'huile à une température du bain de 800C pendant 45 minutes.On ajoute de la triéthylamine, 360 cm3 et on agite le mélange réactionnel à une température du bain de 800C pendant 66 heures, on le refroidit à 250C et on le transfère à une colonne de réaction en phase solide agitée avec 3000 cm3 de tétrahydrofuranne. Après élimination du solvant, on lave la résine en utilisant la colonne agitée avec : 3 Z 2000 cm3 de tétrahydrofuranne 4 x 6000 cm3 d'éthanol 1 x 6000 cm d'acide acétique 3 x 6000 cm3 d'eau 3 x 6000 cm3 de méthanol 3 x 6000 cm3 de chloroforme. Le produit BOC-Gly-O-CH2-#-résine est séché sous vide à 250C à poids constant, donnant 1255 g de BOC-Gly-O-CH2-#-résine contenant 0,937 mmole de glycine par gramme de résine. On traite 2,63 g (2,0 mmoles de résine) comme indiqué dans les Tableaux VII et VIII en utilisant 2 déblocages (2 mi- nutes et 25 minutes) avec 25% de TFA dans du chlorure de méthylène et 2,5 équivalents de BOC-amino-acide dans l'ordre voulu jusqu'à ce qu'on obtienne le produit désiré heptapeptide bloqué -O-CH2-#-résine. On utilise DCCI comme agent de couplage dans chaque étape à l'exception du couplage de BOC-Gln avec D-Ala-Gly-O- CH2-#-résine et du couplage de Le couplage de chaque amino-acide s'effectue d'une manière douce On obtient les meilleurs rendements quand on répète l'opération de couplage dans chaque étape' quand on répète l'opération de couplage, les deux lavages au chloroforme initiaux, l'étape de déblocage et les trois lavages au chloroforme suivants sont tous omis et remplacés par un seul lavage au chloroforme. Les réactions de couplage sont conduites dans du chlorure de méthylène, DMF fraichement dégazé ou un mélange de ces deux solvants, Le groupe amino à azote terminal est bloqué avec un groupe BOC dans chaque oas ; le groupe hydroxy de Ser est bloqué par Bzl et le groupe -amino de Lys par INOC. On indique dans le Tableau VII la séquence des étapes de couplage et les solvants utilisés; T A B L E A U VII Solvant ou 25% TFA NET3- BOC AA 0,5M DCCI DMF (1) CHCl3 (3) dans dans MeOH (1) CH2Cl2(3) réactif dans CH2Cl2 CH2Cl2, CH2Cl2, DMF (1) (nombre CHCl3 CH2Cl2 CHCl3 (3) (1:9) DMF ou MeOH (1) de (2) (2) (2) un mélange CHCl3 (2) lavages) des deux volume ml. 40 40 40 40 25 ml 10 40 40 Temps/min. 5 2 et 25 2 5 et 5 5 5 min. cou- 2 2 plage 30 min. TABLEAU VIII Amino-acide protégé Solvant ml2 BOC-D-Ala (0,95 g) CH2Cl2, 25 ml nouveau couplage BOC-Gln (1,23 g) + HBT.H2O (1,53 g DMF, 25 m; nouveau couplage Boc-(O-Bzl)Ser (1,48 g) CH2Cl2, 25 ml nouveau couplage BOC-(3-INOC)Lys (1,91 g) DMF, 11 ml et CH2Cl2, 14 ml nouveau couplage BOC-Ala (0,95 g) CH2Cl2, 25 ml nouveau couplage (0,65 g) + HBT.H2O (1,53 g) DMF, 25 ml nouveau couplage Une fois terminée la séquence des Tableaux VII et VIII, le produit heptapeptide bloqué-O-CH2-#-résine est séparé par filtration, lavé avec MeOR (3 x 40 cm , 3 minutes par lavage) et séché toute une nuit sous vide0 Etape b) - Préparation de (Glu-Ala-( #-INOC)Lys-(O-Bzl)Ser- Gln-D-Ala-Gly-OMe Le produit heptapeptide bloqué-résine préparé par le procédé décrit dans l'Exemple 1, étape a), est mis en suspension dans 187 cm3 dé MeOH et on ajoute 33 cm3 de EEA. On agite la suspension pendant 51 heures 1/2. À ce mélange, on ajoute 50 cm3 de DMF et 50 cm3 de HOAc à 50%. La résine est séparée par filtration et lavée avec HOAc à 50%. Les liquides de lavage et le filtrat combinés sont concentrés sous vide presqu'à sec.La matière solide humide résiduelle est mise en bouillie avec 25 cm3 d'acétate d'éthyle et recueillie par filtration. La matière solide séparée par filtration est lavée à l'acétate d'éthyle, 2 x 10 cm3, et séchée sous vide toute une nuit. Etape c) - Préparation de Gln-D-Ala-Gly-NH-NH2 Le produit heptapeptide bloqué-OMe, préparé par le procédé décrit dans l'Exemple 1, étape b), est mis en bouillie dans 4 cm3 de MeOH contenant 2 cm3 d'hydrazine* Le mélange est agité à la température ambiante pendant 15 minutes et concentré à sec sous vide', Le résidu résultant est remis en suspension deux fois dans du méthanol et concentré à sec sous vide.Le résidu est trituré avec du méthanol et la matière solide résultante est recueillie par filtration, lavée au méthanol et séchiée On combine les liquides de lavage et les filtrats et on les concentre à sec sous vjdeo On triture le résidu avec de l'éther. et la matière solide rés ultante est recueillie par filtration, lavée à l'éther et séchée pour donner du produit supplémentaire. Les deux fractions d'heptapeptide bloqué-NE-NH2 sont combinées et transformées en l'azide comme indiqué ciaprès. Etape d) - Préparation de Gln-d-Ala-Gly-O-Bzl-Ser-Asn Le produit heptapeptide bloqué-NH-NH2 préparé par le procédé décrit dans l'Exemple 1 étape c), est mis en bouille dans 10 cm3 de DMF fraichement dégazé sous une atmosphère d'azote. Le mélange réactionnel est refroidi à -250C dans un bain de MeOH/H2O (50:50)-carboglace.A cette suspension, on ajoute 1,05 cm3 de 5,24N HCt dans THF (5,52 méq. de HCl). s la solution acide claire résultante d'un pH de 1, on ajoute 148 mg de nitrite d'isoamyle (1,26 mmole) en une période de 2 heures 1/2 et on continue l'agitation pendant 1 heure. Cette solution de DMF contenant 382 mg (1,215 mmole, excès de 10%) de (O-Bzl) Ser-Asn.HCl, préparé par le procédé décrit dans l'Exemple 2.On maintient la solution sous une atmosphère d'azote et on la laisse se réchauffer à -20 C tandis que, pendant cette période, on maintient le pH entre 7,6 et 7,8 par l'addition de N,N- diisopropyléthylamine (DIPEA). La solution est maintenue à -200C pendant 24 heures, on règle le pH entre 7,6 et 7,8 avec DIPEA et ensuite on maintient la solution a' -200C pendant 48 heures supplémentaires La solution est concentrée sous vide et le résidu est trituré avec MeOH pour donner une matière solide. La matière solide est recueillie par filtration et séchée sous vide toute une nuit pour donner du nonapeptide bloqué brut. Etape e) - Préparation de Le nonapeptide bloqué préparé par le procédé décrit dans l'Exemple 1, étape d), est dissous dans 3 cm3 d'anisol et 30 cm3 d'acide fluorhydrique à -700C. La solution est agitée magnétiquement à 0 C pendant 1 heure D'acide fluorhydrique en excès est éliminé sous vide à 0 C, Le résidu résultant est trituré avec 105 cm3 d'acétate d'éthyle pour donner une matière solide0 La matiere solide est recueillie par filtration, lavée à l'acétate d'éthyle et séchée sous vide pour donner un produit brut. Le ( -INOC)-nonapeptide brut est remis en suspension dans une solution de 6,5 cm3 de H20, 30 cm3 de MeOH et 40 cm3 de CHCl3. Toute portion insoluble est éliminée par centrifugation. le liquide surnageant est appliqué à une colonne garnie de 171 g de gel de silice dans CHCl3-MeOH-H2O (50:40:10) et élué avec le même système de solvants. On recueille des fractions de 5 cm .Les fractions contenant le produit sont combinées et concentrées sous vide et le résidu est séché par conge lation pour donner du produit pue Etape f) - Préparation de Le (#-INOC)-nonapeptide, préparé par le procédé décrit dans l'Exemple 1, étape e), est dissous dans 10 cm3 de HOAc à 5% dans H20. À cette solution, on ajoute 2oe mg de 10% Pd/C et le récipient à réaction est purgé avec N2. On fait barboter de l'hydrogène gazeux à travers le mélange réactionnel avec refroidissement au bain de glace pendant une période de 30 minutes.On ajoute une quantité supplémentaire de 20 cm3 de HOAc à 5% dans H20 pour entraîner par lavage la matière se trouvant sur les parois du récipient à réaction. On filtre le mélange de réaction pour éliminer le catalyseur. Le catalyseur séparé par filtration est lavé avec 50 cm de HOAc à 5% dans H2O. Les filtrats et les liquides de lavage sont concentrés à un petit volume et le résidu est séché par congélation pour donner le produit brut0 On dissout le nonapeptide débloqué dans 2 cm3 du système de solvants CHCl3-MeOH-H2O-HOAc (40:47:13:1) en ajoutant assez d'eau et de méthanol pour compléter la dissolution. On applique la solution à une colonne garnie de 5,0 g de gel de silice dans le système de solvants CHCl3-MeOH-H2O-HOAc (40:47-13:1) et on élue la colonne avec le même système de solvants. On recueille des fractions de 1 cm . Les fractions contenant le produit sont combinées et concentrées sous vide pour donner du nonapeptide débloqué. Des peptides ayant la structure : Asn.HCl dans l'étape d) est remplacé par (O-Bzl)Ser-Asn-NH2.Cl. - EXEMPLE 2 Préparation de (O-Bzl)Ser-Asn Etape a) - Préparation de BOC-(O-Bzl)Ser-Asn À une solution de 12 cm3 d'eau et de 3 cm3 de DMF contenant 600 mg (4 mmoles) de L-asparagine et 672 mg (18 mmoles) de NaHC03, on ajoute 1,88 g (4,8 mmoles) de BOC-(9-Bzl)Ser- HSE dissous dans 5 cm3 de DMF. Le mélange réactionnel est agité à la température ambiante pendant R heures et concentré sous vide à une huile (température du bain maintenue au-dessous de 25 C). L'huile est dissoute dans de l'eau et acidifiée avec HCl dilué à un pu de 2,5. Le produit précipite sous la forme d'une huile. On décante le liquide surnageant et le produit est extrait dans de l'acétate d'éthyle.Les couches acétate d'éthyle combinées sont lavées a' l'eau et séchées avec Na2SO4 anhydre toute une nuit, La solution à l'acétate d'éthyle est concentrée sous vide et le résidu est maintenant sous vide jusqu'à poids constant. Poids de produit brut : 1,68 g. On dissout le produit brut dans un volume minimal de CHCl3-MeOH-H2O (70950:3) et on applique la solution à une colonne garnie de 260 g de gel de silice dans le même mélange de solvants. On élue la colonne avec le même mélange de solvants et on recueille des fractions de 10 cm . Les fractions 135 à 200 sont combinées et concentrées sous vide à sec pour donner 1,26 g de produit. Etape b) - PréParation de (0-Bzl)Ser-Àsn.HCl Le dipeptide bloqué (1,0 g) préparé par le procédé décrit dans l'Exemple 1, étape a) ; est mis en bouillie dans 10 cm3 d'acétate d'éthyle et refroidi à 0 C. On~fait barboter énergiquement un courant de HOl gazeux anhydre dans le mélange réactionnel pendant une période de dix minutes et il en résulte une dissolution complète. On purge le récipient à réaction avec N2 à 0 C pendant 42 minutes et le produit apparaît sous la forme d'un précipité. Le précipité est recueilli par filtration, lavé avec de l'acétate d'éthyle froid et séché sous vide pour donner 0,887 g de (O-Bzl)Ser-Asn.HCl. On peut préparer le peptide Ser-Asn-NH2.HCl par le procédé de l'Exemple 2 en remplaçant la L-asparagine par une quantité équivalente de L-asparagine amide. Les nouveaux peptides et leurs sels non-toxiques pharmaceutiquement acceptables selon la présente invention peuvent être administrés par voie intraveineuse ou intramusculaire. Des véhicules utilisables dans la composition comprennent, par exemple, des liquides stériles comme de l'eau ou une solution saline. Egalement, en plus d'un véhicule, les présentes compositions peuvent comprendre aussi d'autres ingrédients tels que des stabilisants, des anti-oxydants, des agents de suspension ou des préservateurs comme du phénol, du chlorobutanol, etc.. La solution finie peut être facilement stérilisée par des techniques classiques de filtration. Les compositions utilisées dans la présente invention contiennent, en solution aqueuse, une quantité suffisante de l'agent thérapeutique pour être médicinalement utile. Les doses à administrer dépendent dans une large mesure de l'état et du poids du sujet qui est traité. La voie parentérale est préférée. En général, les doses journalières utiles sont comprises entre environ 0,0001 et environ 1,0 mg d'ingrédient actif par kg de poids du corps du sujet en une seule ou plusieurs applications par jour. Des doses journalières préférées sont comprises entre 0s0001 et 0,01 mg environ d'ingrédient actif par kg de poids du corps: Une dose injectable particulièrement intéressante est de 0,1 mg de matière active chaque jour. Pour administration parentérale, la présentation en doses unitaires est habituelleuent le composé pur dans une solution aqueuse stérile ou sous la forme d'une poudre soluble prévue pour dissolution-e Les exemples suivants décrivent une composition pour administration parentérale conditionnée en ampoules, en fioles ou en fioles à doses multiples. - EXEMPLE 3 Solution parentérale contenant 0,1 mg de Glu-Ala-Lys-Ser-Gln-D-Ala-Gly-Ser-Asn 0,1 mg Eau distillée stérile exempte de pyrogènes 1,0 cm3 Solution stérilisée par filtration et conditionnée en ampoules, fioles ou fioles à doses multiples. - EXEMPLE 4 Ampoules contenant 0,1 mg de Gly-Ser-Asn lyophilisé Ampoule : Ampoule : Diluant : Eau stérile pour injection 1 cm3 Des multiples appropriés des quantités ci-dessus sont utilisés suivant le besoin0 REVENDICATIONS 1) Des composés ayant la structure Glu-Ala-Lys-Ser-Gln-D-Ala-X-Ser-Asn-R11 dans laquelle x est une portion Gly ou sarcosine et Rlî est -OH ou et leurs sels non-toxiques pharmaceutiquement acceptables. 2) Des composés selon la revendication 1, caractéri- sés en ce qu'ils ont la structure : estlH ou-NH2 et leurs sels non-toxiques pharmaceutiquement acceptables. 3) Un composé selon la revendication 1, caractérisé en ce qu'il a la structure : -OH ou NH2 et ses sels pharnaceutiquement acceptables. 4) Un procédé pour la préparation des peptides ayant la structure : transforme- l'hydrazide d'heptapeptide bloqué ayant la structure : (O-R2)Ser-Asn-R11 de manière à obtenir le nonapeptide bloqué ayant la structure :: 2-bromobenzyîoxycarbonyle, 2-chlorobenzyloxycarbonyle, 2,2,2-trichloroéthoxycarbonyle et isonicotinyloxycarbonyle, R2 est de l'hydrogène ou un groupe protecteur pour le groupe hydroxy de la portion séryle, choisi parmi les groupes benzoyle, t-butyle, benzyle, R1' est de l'hydrogène ou un groupe protecteur pour le groupe hydroxy de la portion séryle choisi parmi les groupes t-butyle et benzyle, X est une portion Gly ou sarcosine, R11 est OH ou NH@ et on élimine ces groupes protecteurs. 5) Un procédé pour la préparation des peptides ayant la structure : peptide à groupe hydroxy bloqué ou non-bloqué (O-R5)Ser-Asn-R11 où R3 est le groupe protecteur pour le groupe E-amino de la portion lysyle choisi parmi les groupes INOC, trifluoroacétyle, phtaloyle, tosyle, p-nitrobenzyloxycarbonyle, TROC et FMOC R4t est de l'hydrogène ou un groupe rnitrobenzyle ou benzoyle, R5 est de l'hydrogène ou un groupe protecteur pour le groupe hydroxy de la portion séryle, choisi parmi les groupes benzyle, benzyle substitué où le substituant est un substituant o-chloro ou p-nitro ;; t-butyle et benzoyle, R6 est un ester actif choisi parmi l'ester de 1-hydroxy-benzotriazole, l'ester de N-hydroxysuccinimide et l'ester de p-nitrophényle, I est une portion Gly ou sarcosine, R11 est OH ou NH2 de manière a' obtenir le nonapeptide bloqué ayant la structure : 6) Un procédé selon la revendication 4 pour la préparation des peptides ayant la structure l'hydrazide d'heptapeptide bloqué ayant la structure ltazide correspondant par l'action de nitrile d'isoamyle et on condense cet azide avec le dipeptide bloqué (O-Bzl)Ser-Asn-R11.HCl pour obtenir le nonapeptide bloqué ayant la structure : R11 est OH ou NH2 et on élimine le groupe benzyle avec de l'acide fluorhydrique et de l'anisol et on élimine le groupe INOC avec de l'hydiogène et un catalyseur Pd/C. 7) Une composition comprenant une quantité thérapeutiquement efficace des composés selon la revendication 1- et un excipient non-toxique pharmaceutiquement acceptable. 8) A titre de médicaments. nouveaux, les composés selon la revendication 1.