Brevet FR2368280A1 — publié le 19780519

La présente invention est relative à une nouvelle composition thérapeutique douée d'une activité puissante d'inhibition et de diminution de l'agrégabilité des plaquettes sanguines. Elle est également relative à un procédé de préparation de cette nouvelle composition thérapeutique. Il y a environ 120 ans, Rudolf WIRCHOW (Die Cellularpathologie, 1858) soulignait déjà que les modifications des trois facteurs suivants sont prédisposantes à la thrombose : - les structures du vaisseau sanguin - les facteurs circulants du sang (protéines du plasma et pla quettes) - la stase circulatoire. Ce sont surtout les travaux des dix dernières années qui ont permis de reconnattre l'importance de ces différents facteurs et en particulier le rôle joué par les plaquettes dans la formation des thromboses. L'agrégation plaquettaire constitue très probablement la phase initiale des thromboses et la possibilité de contrôler cette phase initiale permettrait de réduire considérablement le nombre et l'incidence des thromboses vasculaires. Il a été démontré que les plaquettes qui contiennent une quantité importante d' ATP subissent des modifications 1' ATP disparatt en se transformant en ADP qui est le principal agent de l'agrégation. D'ailleurs la stabilité de la masse plaquettaire initiale est déterminée non seulement par la vitesse à laquelle 1' ADP est formé et libéré mais également par la vitesse à laquelle il est déphosphorylé en AMP , puis en adénosine. D'autres substances que 1' ADP provoquent également l'agrégation : citons par exemple l'adrénaline, le collagène, la thrombine et certains acides gras. De très nombreuses substances ont été étudiées afin de diminuer ou, mieux, d'inhiber l'action agrégante de I' ADP : parmi celles-ci, le dipyridamole s'est avéré comme un très bon inhibiteur de l'agrégation plaquettaire, probablement en raison du fait qu'il retarde la disparition de l'adénosine exogène, du sang total. Récemment, GRAY a démontré qu'en plus de son pouvoir inhibiteur de l'action de I' ADP , le dipyridamole réduit l'adhésivité des plaquettes aux billes de verre. L'action sanguine de l'acide acétylsalycilique (et de ses dérivés) est également connue : ils diminuent l'agrégation pla quettaire, ce qui d'ailleurs est observable en clinique par l'allongement du temps de saignement. Il était donc tentant d'associer ces deux inhibiteurs afin de potentialiser leur pouvoir anti-agrégant plaquettaire, comme en témoigne le compte-rendu pharmacologique, dont les résultats sont décrits plus loin. Mais un grand écueil restait à surmonter : les deux produits, le dipyridamole et l'acide acétylsalicylique, mélangés à lrétat de poudres ne sont pas stables et présentent une incompati bilite chimique très prononcée; après stockage de quatre jours seulement à 500 C environ des deux poudres mélangées, l'analyse par chromatoqraphie sur couche mince a donné les résultats suivants - Solvant de développement : CHCl3iMeOH 9/t - Migration : 18 cm - Révélateurs . lodoplatinate de potassium pour les dérivés du dipyridamole Chlorure ferrique pour les dérivés salicylés. Après révélation, on obtient 6 taches principales correspondant aux Rf - Acide salicylique 0,1t - Dipyridamole 0,36 - Mono-ester acétique du dipyridamole 0,52 - Di-ester acétique du dipyridamole 0,61 - Tri-ester acétique du dipyridamole 0,71 - Tetra-ester acétique du dipyridamole 0,82 Les taches ont été identifiées par - Leurs Rf reapectife à à cet effet, on a préalablement synthétisé les différents esters acétiques du dipyridamole qui ont servi de référence. - Spectrométrie IR : on a séparé les produits sur colonne de silice et effectué leurs spectres IR qui ont permis de les iden tifie. Il apparaît une totale incompatibilité de l'acide acétylsalicylique et du dipyridamole mélangés à l'état de poudres. Il y a d'abord formation d'acétylsalicylate de dipyridamole qui se liquéfie et ensuite a lieu la transestérification; l'acide acétique libéré de l'acide acétylsalicylique estérifie les alcools du dipyridamole avec formation des quatre esters possibles. La présente invention s'est par conséquent donné pour but de pourvoir à une nouvelle composition thérapeutique douée d'un puissant pouvoir de diminution et dlinhibition de l'adhésion et de l'agrégation des plaquettes sanguines, qui répond mieux aux nécessités de la pratique que les compositions antérieurement connues, notamment en ce qu' elle est d'un emploi commode et facile et qu'elle est parfaitement stable chimiquement pendant de très longues durées. La présente invention a pour objet une nouvelle composition thérapeutique à fort pouvoir anti-agrégant plaquettaire caractérisée en ce qu'elle comprend essentiellement une association d'acide acétylsalicylique et/ou de ses dérivés, avec un sel d'acide fort du dipyridamole. Suivant un mode de réalisation avantageux du médicament objet de la présente invention, le rapport acide acétylsalicylique et/ou ses dérivés sel d'acide fort du dipyridamole est compris entre 10 et 40 en poids. 70 Suivant un autre mode de réalisation avantageux du medicament objet de la présente invention, l'acide fort utilisé pour la salification du dipyridamole, est un acide minéral et/ou organique, dont le pKa, ou le pKa1 s'il s'agit drun polyacide, est inférieur à 3. Suivant une disposition particulièrement avantageuse de ce mode de réalisation, l'acide utilisé pour la salification du dipyridamole est pris dans le groupe qui comprend l'acide bromhydrique, 1' acide chlorhydrique, l'acide sulfurique, l'acide phosphorique et l'acide p-toluène-sulfonique et des acides équivalents. La présente invention a également pour objet un procédé de préparation de la composition conforme à l'invention, caractérisé en ce qu'au cours d'une première étape on prépare le sel désiré du dipyridamole et en ce qu'on le mélange ensuite avec l'acide acétylsalicyliqueet/ou ses dérivés et avec un excipient ou des excipients pharmaceutiquement compatibles. Suivant un mode de réalisation avantageux du procédé objet de la présente invention, le sel d'acide fort du dipyridamole est préparé par dissolution du dipyridamole dans un alcool,suivie d'une addition progressive de l'acide fort choisi en quantité suffisante afin de salifier les quatre fonctions basiques du dipyridamole. Outre les dispositions qui précèdent, l'invention comprend encore d'autres dispositions, qui ressortiront de la description qui va suivre. La présente invention pourra être mieux comprise à l'aide du complément de description qui va suivre, dans lequel on trouvera des exemples de préparation de sels d'acides forts du dipyramidole, des exemples de préparation de la composition objet de la présente invention ainsi qu'un compte-rendu d'expérimenta- tion pharmacologique comprenant notamment l'étude toxicologique, les examens hîstopathologiques, ainsi que l'étude du pouvoir anti-agrégant du nouveau médicament conforme à l'inven- tion. Il doit être bien entendu, toutefois, que ces exemples ainsi que le compte-rendu d'expérimentation pharmacologique sont donnés uniquement à titre d'illustration de l'objet de l'invention, dont ils ne constituent en aucune manière une limitation. EXEMPLES A. Préparation de sels d'acides forts du dipyridamole Exemple 1 : Préparation du bromhydrate de dipyridamole - On dissout à 600C 5 g de dipyridamole (1/100 mole) dans 50 ml d'éthanol absolu et on ajoute,en agitant,4,5 ml d'une solution aqueuse d'acide bromhydrique à 48 p.cent (4/100 mole); - On refroidit en agitant lentement à 5 C et on laisse cristalliser 18 H à cette température. - On filtre, lave avec de l'éthanol absolu à 50C et sèche 4 H sous vide à 600C On obtient 5,9 g de-produit. - Rendement : 88 % - Point de fusion : 1850C .- Spectre IR : conforme - Spectre W ^ : Uv : conforme - Titre HBr : 99,3 % de la théorie - Titre en dipyridamole : 99,7 % de la theorie (potenticmetrie en milieu anhydre en présence d'acétate mercurrque). Exemple 2 : Préparation du chlorhydrate de dipyridamole - On dissout 5 g de dipyridamole (1/100 mole) dans 100 ml d'isopropanol et on ajoute,en agitant,3,2 ml d'une solution aqueuse d'acide chlorhydrique à 37 % (4/100 mole). - On refroidit en agitant à OOC et laisse cristalliser 18 H à cette température. - On filtre, lave avec de l'isopropanol à OOC et l'on sèche 10 H sous vide à 600C. On obtient 5,2 g de produit. - Rendement : 89 % - Point de fusion : 1610C - Spectre IR : conforme - Spectre W : conforme - Titre HCl : 99,7 % de la théorie - Titre.dipyridamole : 99,6 % de la théorie (potentiométrie en milieu anhydre en présence d'acétate mercurique). Exemple 3 : Préparation du sulfate de dipyridamole - On dissout 50,4 g de dipyridamole (1/10 mole) dans 200 ml d'éthanol absolu et on ajoute,en agitant, il ml d'acide sulfurique concentré (2/10 mole). - On refroidit,en agitant,à 50C et on laisse cristalliser 24 heures à cette température. - On filtre, lave avec de l'éthanol absolu à 50C et sèche 4 H sous vide à 600C. On obtient 54,3 g de produit. - Rendement : 90 % - Point de fusion : 1550C - Spectre IR : conforme - Spectre W : conforme - Titre H2SQ4 : 99,2 % de la théorie - Titre dipyridamole : 99,8 % de la théorie (Dosage W) Exemple 4 : Préparation du diphosphate de dipyridamole - On dissout 50,46 g de dipyridamole (1/tu mole) dans 200 ml d'éthanol absolu et on ajoute,en agitant,16 ml d'une solution aqueuse à 85 % d'acide phosphorique (2/10 mole). - On refroidit en agitant à OOC, on ensemence avec quelques cristaux de phosphate de dipyridamole pur, et on laisse cristalliser 18 heures à OOC. On filtre, lave avec de l'éthanol absolu à 0 C et sèche 6 H sous vide à 600C. On obtient 67,3 g de produit. - Rendement : 96,8 % - Point de fusion : 17O0C - Spectre IR : conforme - Spectre W : conforme - Titre H3P04 : 99,7 % de la théorie - Titre dipyridamole : 99,9 % de la théorie Exemple 5 Préparation de tetra-p-sulfonate de dipyridamole - On dissout 50,4 g-de dipyridamole (1/10 mole) dans 200 ml d'éthanol absolu à 650 C jusqu'à dissolution totale. - On ajoute sous agitation 76 g (4/10 mole) d'acide ptoluène- sulfonique monohydrate. - On refroidit, on laisse cristalliser, on filtre et sèche sous vide à 500 C. - On obtient 121 g de tetra-p-sulfonate de dipyridamole, soit un rendement de 95,6 %. Point de fusion : 1990C Titre en acide : 99,4 % de la théorie Titre dipyridamole : 99,7 % de la théorie. B. Exemples de Préparations pharmaceutiaues de la composition sels de dipvridamole - acide acétylsalicylique Exemple 6 Sulfate de dipyridamole - Acide acétylsalicylique en gélules Formule unitaire Sulfate de dipyridamole : 100 mg Acide acétylsalicylique : 60 mg Talc de Venise : 2 mg Procédé de fabrication : On mélange les trois poudres et on répartit en gélules de 162 mg. Exemple 7 Phosphate de dipyridamole - acide acétylsalicylique en gélules Formule unitaire : Phosphate de dipyridamole : 100 mg Acide acétylsalicylique : 75 mg Talc de Venise : 2 mg Stéarate de magnesium : 2 mg Procédé de fabrication On mélange les quatre poudres et on répartit en gélules de 179 mg. Exemple 8 Bromhydrate de dipyridamole - acide acétylsalicylique en comprimés Formule unitaire Bromhydrate de dipyridamole : 80 mg Acide acétylsalicylique : 80 mg Lactose :250 mg "Avicel" (cellulose sous forme cristalline) : 87 mg Stéarate de magnesium : 3 mg Procédé de fabrication - Dans un mélangeur de taille convenable, on introduit la totalité des produits entrant dans la imposition des comprimés (principes actifs et excipients), on mélange. - On réalise une première compression qui a pour but de densifier la masse. - On broie les briquettes obtenues et l'on comprime le grain ainsi préparé, au poids unitaire de 500 mcr. Exemple 9 Chlorhydrate de dipyridamole - acide acétylsalicylique Formule unitaire Chlorhydrate de dipyridamole : 90 mg Acide acétylsalicylique : 70 mg Lactose : 150 mg Silold : 86 mg Amidon de mais : 100 mg Stéarate de magnesium : 2 mg Talc de Venise : 2 mg Procédé de fabrication : - On mélange les sept poudres et l'on comprime au poids unitaire de 500 mg. COMPTE-RENDU D'EXPERIMENTATIONS PHARMCOLOGIQUES A. ETUDE TOXICOLOGIQUE Durée du traitement : trois semaines Les solutions administrées ont été préparées extemporanément, de façon à administrer 0,3 mol/100 g de poids corporel, des produits soumis à l'expérimentation. Les témoins reçoivent 0.3 ml/100 g d'excipient Les animaux sont pesés deux fois par semaine et les volumes de traitement ajustés au cours de l'expérimentation. - Matériel animal Rats maies IOPS OFA d'un poids moyen de 150 grammes au début du traitement (agés de six semaines). Les animaux ont été maintenus en milieu climatisé (23 + 1 C., degré hygrométrique voisin de 50) pendant toute la durée du traitement, alimentés avec des biscuite de ration d'entretien UkR 113 et recevant de l'eau de boisson ad libitum. Constitution des lots Traitement Nbre d'animaux N des lots N des animaux Témoins 20 1 i à 20 20 2 21 à 40 300 mg/kg/j. DIPYRINDAMOLE 20 3 41 à 60 300 mg/kg/j. Composition 20 4 61 à 80 conforme & BR l'invention 600 mg/kg/j. - Examens pratiqués a) Examens hématologiques Ils sont pratiqués au bout de 22 jours de traitement et ils comprennent - la numération globulaire : . hématies . loucocytes - la formule leucocytaire - le taux d'hémoglobine (méthode de Drabkin - réactifs Biotrol), en grammes/100 ml, - le taux globulaire moyen d'Hb en ng/hématie, - 1'hématocrite en tubes capillaires et lecture sur l'échelle de Hasley. b) Examens biochimiques - du sang (glycémie, urée, cholestérol, triglycérides, s.G.O.T., s.G.P.T., lipidesbDtaux, créatinine, salicylates) - des urines (volume, pH, nitrites, protéines, glucose, cétones, urobilinogène, bilirubine, sang, créatinine, acide urique, salicylates, chlorures, sodium). c) Examens nécropsiques A l'autopsie, les animaux ont été examinés quant à l'état des grandes cavités et à l'aspect macroscopiqua des différents organes. Ont été prélevés et pesés à l'état frais, les organes suivants : foie, coeur, thymus, rate, rein (droit), surrénale (droite), testicule (droit), prostate ventrale, vésicules séminales. c) Examens anatomopathologiques L'examen anatomopathologique a porté sur les organes suivants : estomac, duodénum, ileon, colon, pancréas, foie, rate, thymus, rein (gauche), surrénale (gauche), coeur, poumon, aorte, testicule (gauche), epididyme. Les organes ont été fixés pendant quelques heures dans le liquide de Bouin, inclus à la paraffine, coupés à cet et colorés à 1' hémalun-éosine-safran. - Résultats résultats cliniques Il n'a été constaté aucune mortalité imputable au traitement. On constate un léger ralentissement de la prise de poids avec l'acide acétylsalicylique, ce qui est classique à ce niveau de dose,et ne s'aggravant pas lors de l'utilisation de 1' association. 2-Examens biochimiques On ne constate pas de différence entre les lots en ce qui concerne la glycémie, l'urée sanguine et le taux de créatinine, Les transaminases SGOT et SGPT ne sont pas perturbées. Au niveau des lipides totaux, on n'enregistre pas de variation signifgicative à l'inverse de ce qui se passe pour le le cholestérol et les triglycérides. Il est intéressant de noter un abaissement notable du cholestérol lors de l'utilisation de la composition conforme à l'invention, cohérent avec l'abaissement plus discret enregistré avec l'acide acétylsalicylique seul et déjà signalé dans la littérature. Les triglycérides sont légèrement augmentés avec l'acide acétylsalicylique et la composition conforme à l'invention, mais il apparait bien que cet effet correspond à l'administration de la seule aspirine. Au niveau urinaire, la composition conforme à 1' invention entraine une augmentation importante de la diurèse hydrique. D'une façon.générale, les concentrations urinaires (acide urique, chlorure, sodium) sont diminuées mais l'élimination de 24 heures n'est pas perturbée. Ceci correspond bien à une simple dilution. L'élimination des salicylates n'est pas significativement différente dans les lots traités par l'aspirine seule ou par la composition conforme à l'invention. 3 examen hématologique Il n'apparait pas de variation évidente des paramètres considérés. On sait la difficulté à produire chez le rat des anomalies sanguines avec les salicylés Cette difficulté se vérifie ici et l'utilisation de la composition conforme à l'invention n'apparat pas comme un facteur de sensibilisation. 4-Examens anatomopathologiques A l'ouverture des grandes cavités on note un état d'engraissement et un développement musculaire normaux. Tous les organes ont dans la très grande majorité des cas un aspect normal. Seuls faits remarquables 1) la présence de petites hémorragies ponctiformes superficielles au niveau du thymus chez les animaux NO 24, 26, 36, 37 du lot AAS 2) le contenu très hémorragique de tout le tractus digestif du rat nO 71. a) Rats males témoins Les lésions sont rares. Chez,les animaux nO 1 et 14 on observe au niveau de la muqueuse gastrique des zones où les cellules de la portion apicale apparaissent vacuolisées, leur noyau est parfois picnotique. Ces zones sont recouvertes d'une épaisse couche muqueuse riche en débris cellulaires. Aucune lesion n'est à signaler dans les autres portions du tractus digestif. On note de petits foyers de cellules inflammatoires dans le parenchyme hépatique du rat nO 16. Le rein du rat nO 1 est le siège d'une lésion épithéliale tubulaire importante qui siège dans la medullaire profonde et qui ne s'accompagne pas d'une réaction inflammatoire. b) Rats males AAS 302mg /Kg j Au niveau de 'estomac, trois animaux sur six sont porteurs de lésions. Chez deux d'entre eux, nO 28 et 33, elles sont benignes et tout à fait comparables à celles observées chez les témoins : on observe par zones, une légère érosion de la zone apicale de la muqueuse qui est alors recouverte d'une épaisse couche muqueuse. Par contre chez l'animal nO 37, il y a des zones de régénération épithéliale avec formation d'une couche superficielle de cellules cubiques et -ongestion des capillaires sous- jacents; c'est un processus de réparation tissulaire qui signe une atteinte plus grave. Aucune lésion l'est observée dans l'intestin.Chez l'animal n0 37 on note une importante zone de nécrose hépatique avec envahissement. par les polynucléaires, les macrophages et présence d'oedème; c'est une lésion récente. Chez le rat nO 33 on observe une légère atteinte de l'épithélium des tuDes rénaux dont certaines cellules subissent une dégénérescence ballonnisante en même temps que l'on observe un épaississement des capsules de Bowman et une hypertrophie de la media des artérioles rénales. c) Rats mâles DIPYRIDAMOLE 300 mg/kg/j. Les seules lésions observées sont très bénignes et consistent en des zones d'érosion très superficielles de la muqueuse gastrique chez le rat nO 50 et en une légère congestion veineuse et glomérulaire dans le rein du rat nO 60. Chez la plupart des animaux du lot le coagulum présent dans les veines et veinules est coloré en jaune vif , ce qui selon toute vraisemblance, signe la présence du dipyridamole. d) Rats mâles Composition conforme à l'invention : 600 mg/Kg/j Les seules lésions observées siègent dans l'estomac et elles sont toujours bénignes et de -même nature que celles observées chez les témoins : érosion superficielle de la muqueuse, présence de quantités importantes de mucus riche en débris cellulaires. Chez le rat n 71 la couleur noirâtre du contenu du trac tus digestif signifie la présence de quantités importantes de sang, probablement d'origine gastrique. Les différentes coupes n'ont pas permis d'observer la présence d'ulcères véritables pouvant entrainer une hémorragie mais il faut admettre leur présence pour expliquer les pertes de sang importantes. - Conclusion Les organes ayant fait l'objet d'un examen ne sont jamais porteurs de lésions importantes malgré les très fortes posologies administrées. D'ailleurs le sondage gastrique quotidien à lui seul peut entraîner parfois l'apparition de lésions bénignes de la muqueuse de l'estomac. Les très fortes doses de l'AAs ont certainement entraîné une augmentation de la fréquence de ces lésions et parfois de leur gravité mais sans que cela ne prenne jamais un aspect dramatique. Le dipyridamole se révèle tout à fait atoxique,du moins au niveau des organes considérés et en ce qui concerne la composition conforme à l'invention, on retrouve des lésions gastriques du même type que dans le lot AAS. Les très rares lésions hépatiques et rénales sont rencontrées avec la même gravité chez les témoins que chez les traités des différents lots et ne sont certainement pas liées à la toxicité de llun des deux principes actifs étudiés. L'administration quotidienne de 600 mg/Kg de la composition conforme à l'invention ne fait pas apparaître d'aggravation de la toxicité de l'aspirine. Celle-ci se manifeste, comme il est classique à cette dose et pour cette espèce,par des signes gastro-intestinaux, par une augmentation de la diurèse hydrique avec simple dilution des constituants, et par quelques perturbations de certains paramètres lipidiques. B. ETUDE DE L'ACTIVITE SUR L'AGREGATION PLAQUETTAIRE 1) Activité in vitro L'étude a été entreprise sur le plasma du cobaye à l'agrégomètre,selon la méthode de BORN,pour determiner l'action des produits étudiés a l'égard de l'effet agrégeant de l'ADP(0,8 SO4M) et de collagène (4, g/ml). Une première série d'expériences comportait l'étude de l'action du dipyridamole à des concentrations de 0,5,10 M, 1.10-5 5 M; 1,5,10-5 5 M et de 2.10 M sur l'effet propre de l'aspirine (1.10-5 M). Une deuxième serie d'expériences comportait l'étude de l'action de 1' AAS à des concentrations de 0,5.10 5 M; 1.10-5 M; 1,5,10-5 M et 2.10-5 M sur l'effet propre du dipyri damole (1.10-5 M). Les deux séries d'expériences ont été effectuées par mise en incubation pendant dix minutes à la température ambiante sans agitation. Résultats : synergie (de 8 à 36 % > entre les deux agents antiagrégants vis-à-vis des deux agents agrégats. 2) Activité in vivo a) Etude sur la microcirculation dans la bajoue d'hamster L'étude comparative du degré d'inhibition du taux de la croissance du thrombus a été étudiée pour a- A.S seul b- Dipyridamole seul et pour c- La composition conforme à 10 invention Les résultats sont résumés dans le tableau I ci-aessous. TABLEAU I % d'inhibltion de la croissance aprés aominis OMPOSE t= tration au bout de tminutes Maximum 45 50 55 60 65 70 75 80 85 90 Inhibition SPIRINE 9 24 8 12 23 26 30 25 34 38 38 IPFRIDAMOLE 8 20 22 22 28 34 43 35 43 39 43 composition CONFORME A L'INVENTION O 15 16 22 29 41 44 44 32 47 35 47 L'expérience démontre d'une façon très nette, la potentialisation des deux principes actifs (le maximum de potentialisation avoisine 50 %). b) Etude sur l'oeil de veau perfusé en circulation extracorporelle Elle est effectuée selon la technique de Seaman, les yeux étant prélevés immédiatement après l'abattage. Un catheter est introduit dans l'artère ciliaire et le réseau chorio-rétinien- est débarrassé de son sang natif par lavage à l'aide d'une solution de Krebs modifiée (pour supprimer le calcium) et tiédie à 37 C. L'oeil est ensuite perfuse avec du sang homologue oxygéné et anticoagulé par une solution de citrate à 5 % à raison de une partie de solution citratée pour neuf parties de sang. L'oeil est maintenu sous perfusion constante jusqu'à la fin de l'expérimentation gr ce à une pompe proportionnante permettant de maintenir la pression sanguine à 12 cm de Hg. Au laboratoire, une fenêtre scléro-choroidienne est découpée un peu en avant du nerf optique et l'oeil est posé dans une cupule contenant la solution de Krebs portée à 370C. L'ensemble est placé sur la platine chauffante d'un microscope Orthoplan, la circulation rétinienne étant alors observée par transparence. L'adénosine diphosphate diluée dans une solution de Krebs dépourvue de calcium est mélangée au sang immédiatement avant son entrée dans l'oeil. L'action du dipyridamole seul, de 1' AAS seul et de la composition conforme à l'invention sont observées en mélangeant les produits étudiés dans le flacon de sang. L'observation de la circulation rétinienne permet le repérage et l'étude des agrégats plaquettaires. A la dose de 10 gamma/ml, l'ADP entraîne I'apparition d'agrégats dans les vaisseaux rétiniens en 60 à 90 secondes et le blocage de la circulation survient secondairement au bout de 1 200 secondes. Le tableau Il présente l'action composée des trois produits sousmis à l'expérimentation. REACTIFS Nombre Délai d'arrêt de Interv d'expé- la circulation confiance de la riences rétinienne moyenne en secondes ADP 10 gamma/ml 15 1 200 # 98 960 - 1 440 Sérum physiologique 5 > 10 000 ADP 10 gemma/ml + adénosine 100 gamma/ml 5 2 320 # 320 1 430 - 3 210 ADP 10 gamma/ml + dipyridamole 8.2 10-5M 5 6 300 # 180 5 200 - 7 400 ADP 10 gamma/ml + dipyridamole 4.6 10-4M 5 6 300 # 90 5 500 - 7 100 ADP 10 gamma/ml + dipyridamole 2.3 10-4M 5 6 820 # 140 5 920 - 7 720 ADP 10 gama/ml acide acétylsalcylique 5 2 840 t 220 1 ri 920 - 3 760 250 gamma/ml j ---~---~~ -~~ 10 gamma/ml + canposition conforme à l'invention |(dipyridamole 8.2 10 5 M acide acétylsalicylique 250 gamma/ml 9 > 10 000 ADP 10 gamma/ml composition conforme à l'invention i t (dipyridamole 4.6 10-4 M acide acétylsalicylique 250 gamma/ml) 5 > 10 000 ACP 10 gamma/ml composition conforme à l'invention (Dipyridamole 2.3 10-4 M acide acétylsalicylique 250 gamma/ml 5 > 10 000 Le mélange de 10 gamma/ml d'ADP dans le sang perfuseur aboutit rapidement à la formation d'agrégats qui vont obstruer la totalité du réseau capillaire rétinien et arrêter la circulation rétinienne en 1 200 secondes. Lorsque le sang contient 100 gamma/ml d'adénosine, on n'observe aucune modification de l'aspect des agrégats qui restent compacts. Cependant, le délai d'arrêt de la circulation rétinienne est prolongé à 2 320 secondes. La présence dans le sang perfuseur de dipyridamole seul prolonge les délais d'arrêt de la circulation à 6 300 et 6 820 secondes, tandis que l'AAS seul ne le prolonge qu'à 2 840 secondes. Par contre, la présence de la composition conforme à l'invention arrête totalement le blocage. Utilisés isolément, l'AAS et le dipyridamole modifient l'agrégation plaquettaire sans empêcher l'arrêt de la circulation rétinienne. Leur association fait perdre toute solidité aux agrégats plaquettaires, qui s'effritent à l'entrée du réseau capillaire et ne peuvent plus obstruer les capillaires rétiniens. C.- ETUDE DE LA BIODISPONIBILITE DU MEDICAMENT CONFORME A L'INVENTION Cette étude a consisté à comparer la biodisponibilité (par la mesure des concentrations plasmatiques en fonction du temps) du dipyridamole seul (75 mg) désigné ci-après comme étant le produit "A" et du médicament conforme à 1' invention (75 mg d'AAS et 75 mg de dipyridamole sous forme de phosphate), désigné ci-apres comme étant le produit "B", chez trois sujets sains ayant des fonctions rénales et hépatiques normales. 1 - PROTOCOLE Chaque sujet a absorbé, le matin à 8h, avec un petit déjeuner à base d'hydrates de carbone, un comprimé "A" le premier jour, un comprimé "B" solide n'a été abscrbée pendant l'épreuve. Des prélèvements sanguins veineux de 3 ml, recueillis sur héparine sèche, ont été effectués 1h, 2h, 3h, 4h, 6h, 8h après la prise orale. Le plasma a été aussitôt séparé par centrituga tion à + 40 et conservé à - 200 jusqu'à l'analyse qui a été effectuée en double exemplaire. Le dipyridamole et l'acide salicylique ont été aosés par spectrofluorimètrie. 2 - RESULTATS Les concentrations plasmatiques observées en fonction du temps sont indiquées dans le tableau III. Les surfaces AUC (initiales de l'expression anglaise "Area undercurve") sous les courbes des concentrations plasmatiques en fonction du temps ont été calculées entre les temps O et 12h par la méthode des trapèzes. La biodisponibilité de B a été calculée par le pourcentage de l'AUC observée par rapport à l'AUC de la persantine prise comme base 100. 3 - CONCLUSION On constate que la forme B est résorbée à 110 %. De plus, l'allure graphique des courbes des concentrations plasmatiques en fonction du temps démontre que pour la forme B, le pic serait atteint plus tardivement que pour la forme A. TABLEAU III : CONCENTRATIONS PLASMATIQUES ( ng/ml ) DU DIPYRIDAMOLE APRES ADMINISTRATION DE DEUX FORMES GALENIQUES DIFFERENTES I eni I 1% heure InwmiO1 I AI8 I IISU;et ~^ 1 2 3 4 6 8 ---mi- - t -,- ---- 425 255 250 185 3482 1 I 1 11230 760 425 I I I I i A 2 11275 940 390 150 60 65! 3015 1100 I J-I" I I I I I I 3 11110 815 540 285 250 150 3612 1100 I I X 11205 838 452 230 187 133 | I I ' i1205 838 452 230 187 I I IX I I I I I I I I r ~I I I I I '1490 1295 810 430 295 225 146 2 01005 1 360 175 60 ,5089 2728 , 90 I j2 11160 810 360 175 60 2051 2728 | 93 j lB I i I ,sI I X !1218 938 543 305 190 205 3368 93 I I -I i i X 1218 938 543 303 182 178 109,8' I Il ressort des propriétés pharmacologiques dont il vient d'être rendu compte, que le nouveau médicament conforme à l'inven tion doit être considéré comme un anti-agrégant plaquettaire remar quable, facile à administrer, présentant une bonne tolérance, une stabilité parfaite et dont la biodisponibilité est supérieure à celle du dipyridamole seul. Le nouveau médicament conforme à l'invention peut être ad ministré seul ou en association avec d'autres médicaments. Ainsi que cela ressort de ce qui précède, l'invention ne se limite nullement à ceux de ses modes de réalisation et d'applica tion qui viennent d'etre décrits de façon plus explicite; elle en embrasse, au contraire, toutes les variantes qui peuvent venir à l'esprit du technicien en la matière, sans s'écarter du cadre, ni de la portée, de la présente invention. REVENDICATIONS 10- Nouvelle composition thérapeutique, caractérisée en ce qu'elle comprend essentiellement une association d'acide acétylsalicylique et/ou de ses dérivés,avec un sel d'acide fort du dipyridamole. 2 - Nouvelle composition suivant la revendication i, caractérisée en ce que le rapport acide acetylsalicvlique et/ou ses dérivés sel d'acide fort de dipyridamole mpris entre 20/80 et 80/20 en poids. 3 - Nouvelle composition suivant l'une quelconque des revendications i et 2, caractérisée en ce que 11 acide fort utilisé pour la salification du dipyridamole est un acide minéral et/ou organique, dont le pKa,ou le pKa1 s'il s'agit d'un polyacide,est inférieur à 3. 40 Nouvelle composition suivant la revendication 3, caractérisée en ce que l'acide utilisé pour la salification du dipyridamole est pris dans le groupe qui comprend l'acide bromhydrique, l'acide chlorhydrique, .1' acide sulfurique, l'acide phosphorique et l'acide p-toluène-sulfonique et.des acides équivalents. 5 - Procédé de préparation des nouvelles compositions suivant les revendications 1 à 4, caractérisé en ce qu'au cours d'une première étape on prépare le sel désiré de dipyridamole et en ce qu'on le mélange ensuite avec l'acide acétylsalicylique et/ou ses dérivés et avec un excipient ou des excipients pharmaceutiquement compatibles. 60- Procédé selon la revendication 5, caractérisé en ce que le sel d'acide fort du dipyridamole est préparé par dissolution du dipyridamole dans un alcool,suivie d'une addition progressive de l'acide fort choisi en quantité suffisante afin de salifier les quatre fonctions basiques du dipyridamole. 70- Compositions selon l'une quelconque des revendications 1 à 4, caractérisées en ce qu'elles sont mises sous une forme administrable par voie orale, telle que comprimés, comprimés à double noyau, gélules, capsules, dragées. 80- Application des médicaments sèlon l'une quelconque des revendications 1 à 4 en tant qu'agents anti-agrégants plaquettaires.