Brevet FR2360310A1 — publié le 19780303

La présente invention concerne une solution antitumorale aqueuse renfermant un polysaccharide antitumoral et un haut polymère soluble dans lleau avec ou sans monosaccharide, qu'on peut utiliser par exemple pour une injection intraveineuse à lthomme et son procédé de prépa- ration. La plupart des polysaccharides antitumoraux ont de façon générale une faible solubilité dans l'eau en raison de leur poids molécu- laire élevé et ont tendance à former un précipité insoluble par repos après solubilisation dans l'eau. Donc, on ne peut utiliser ces solutions aqueuses pour l'injection intraveineuse à l'homme. Comme le montre le brevet japonais publié n0 484/1974, le lentinane, qui est un -(l 3)glucane, a une activité antitumorale et une activité remarquable de restauration des réponses immunitaires qui sont généralement abaissées chez l'h8te porteur de la tumeur. Cependant, ce lentinane a une faible solubilité dans l'eau de 38 mg/dl et la solution aqueuse delentinane tend généralement à former un précipité insoluble par repos pendant 1 ou 2 jours, ou plus. On peut facilement dissoudre le lentinane dans une solution alcaline aqueuse, mais le lentinane est rapidement hydrolysé dans la solution et transformé en matières dégrades inactives. De façon générale, il est bien connu que activité physiologique diminue ou disparait lorsqu'on dissout une substance à activité physiologique avec d'autres substances additionnelles-pour accroître sa solubilité. Les recherches de la demanderesse ont montré que c'est en particulier le cas lorsque les actions des polysaccharides à activité physiologique dépendent en grande mesure de la structure supérieure des polysaccharides en solution. Lorsqu'on dissout dans liteau un polysaccharide antitumoral avec un autre agent, les activités physiologiques de beaucoup de polysaccharides sont réduites ou supprimées par suite des changements importants des structures supérieures des polysaccharides dans la solution aqueuse en présence des agents additionnels. La demanderesse a découvert qu'une solution aqueuse renfermant un polysaccharide antitumoral et un haut polymère soluble dans I'eau, avec ou sans monosaccharide, ne perd pas son activité antitumorale désirée et ne présente pas de diminution de l'activité. Cette solution aqueuse est très stable, sans formation de traces de précipité et convient particulierement bien à l'injection intraveineuse à l'homme. De plus, la solubilité d'un tel polysaccharide antitumoral dans un milieu aqueux est considérablement accrue. Les polysaccharides antitumoraux utilisés dans l'invention ont une faible solubilité dans l'eau Par exemple, on ne peut dissoudre que moins d'environ 100 mg d'un tel polysaccharide pour 100 ml d'eau et il se forme un précipité y indesirable après 2 à 3 mois de repos à la température ordinaire, sans aucune exception. Les polysaccharides antitumoraux utilisés dans l'invention sont des glucanes antitumoraux ou des complexes polysaccharide-protéine. Un tel glucane antitumoral est par exemple un ss-(1 3) glucane, un ss-(1 # 6) glucane, un ss-(l 3 3)(1 -+ 6) glucane ou un ss-(1# 4) (1# 6) glucane.Le ss-(1 # 3) glucane antitumoral est par exemple un glucane constitué uniquement de liaisons p-Cl ,r 3) glucosides ou un glucane dont la channe principale est constituée essentiellement de liaisons ss-(1 -- 3) glucosides) avec une teneur plus faible en autres liaisons glucosides dans la chaine principale ou dans la chaine latérale, telles que des liaisons ss-(1 # 2), ss-(1 # 4) et ss-(1 # 6) glucosides. De plus, le polysaccharide antitumoral de l'invention est par exemple un glucane- qu'on peut obtenir selon des modifications chimiques connues d'un polysaccharide telles que la carboxyalkylation, l'hydroxyalkylation, la mercaptoalkylation, l'oxydation, la réduction, l'hydrolyse ou une combinaison appropriée de ces modifications et un polysaccharide antitumoral ou un complexe polysaccharide-protéine qu'on peut obtenir en les extrayant des fructifications ou des sclérotes de basidiomycètes, ou en les récupérant à partir du mycélium ou des -bouillons de culture filtrés de basidiomycètes ou de levures, ou un scléroglucane provenant du bouillon de culture de fungi imperfecti.On peut citer comme exemples de polysaccharides antitumoraux, le lentinane extrait des fructifications de Lentinus edodes Sing, le ss-pachymane extrait de Poria cocos Wolf, le pachymarane obtenu par modification chimique du p-pachymane, le schizophyllane qu'on rencontre dans les bouillons de culture filtrés de Schizophyllum commune et les glucanes qu'on.peut obtenir par extraction des fructifications de Flammulina velutipes > Pholiota nameko, Pleurotus ostreatus et Tricholoma matsutake. Le haut polymère soluble dans liteau utilisé dans l'invention provient de préférence de sources naturelles ou de leurs dérivés. On peut citer comme exemples de hauts polymères solubles dans l'eau des polysaccharides tels que le dextrane, l'hydroxyéthylamidon, la carboxyméthylcellulose (désignée ci-après par l'abréviation CMC) et ses sels et leurs dérivés. Dans l'invention, les poids moléculaires de ces polymères ne sont pas limités. La solution de l'invention renferme de preférence 0,1 1% de ce haut polymère soluble dans l'eau. En raison de l'effet de stabilisation et de la viscosité de la solution, on utilise de préférence le dextrane ou l'hydroxyéthylamidon,par exemple à une concentration de 0v5 à 1% et le sel de sodium de la C à la concentration de 0 > 1 à 1%. On choisit le monosaccharide utilisé dans l'invention parmi le D-glucose ou des sucres-alcools. Pour obtenir une solution isotonique et une bonne stabilité, la solution de l'invention renferme de préférence 1 à 10% d'un tel monosaccharide. On peut obtenir la solution de l'invention en ajoutant uniquement le polymère soluble dans l'eau à la solution renfermant le polysaccharide antitumoral ou en ajoutant à la fois le polymère soluble dans l'eau et le monosaccharide à la solution renfermant le polysaccharide antitumoral. En ajoutant à la fois le polymère soluble dans l'eau et le monosaccharide, on obtient un effet remarquable sur la stabilité et la solubilité par suite de l'interaction de ces deux matières. Comme le montrent les résultats de l'expérience suivante, la solution de l'invention constitue une solution antitumorale très stable convenant à l'injection intraveineuse, ayant une concentration élevée en ingrédient actif. On disperse tout d'abord soigneusement le polysaccharide dans l'eau en utilisant un melangeur-homogéneiseur et on le dissout en chauffant autant que possible. A la solution obtenue, on ajoute du dextrane, de l'hydroxyéthylamidon, du polyéthylèneglycol ou de la CMC comme polymère soluble dans l'eau et du D-glucose, du xylitol, du sorbitol ou un sucrealcool comme monosaccharide et du chlorure de sodium pour obtenir une solution isotonique. On ajuste le volume de la solution obtenue à 100 ml en ajoutant de l'eau distillée injectable. On filtre la solution avec un filtre Hillipore puis on en remplit une ampoule qu'on stérilise par la vapeur pendant 30 mn à 1100C. On recherche l'existence de précipités dans l'échantillon ainsi obtenu. L'échantillon ne présente pas de précipités et on recherche à nouveau la formation de précipités après 2 mois d'incubation à diverses températures. Les résultats obtenus figurent dans le tableau I ci-axes Comme le montre le tableau I, on peut stabiliser la solution de lentinane, qui est un polysaccharide antitumoral, en ajoutant le polymère soluble dans l'eau ou le polymère soluble dans l'eau et un monosaccharide. On étudie l'activité antitumorale de la solution obtenue selon l'invention de la façon suivante On injecte par voie sous-cutanée à des souris ICR-JCL, 3 x 106 cellules du sarcome 180 à ascite dans l'eine droite. 24 h après l'injection, on injecte par voie intrapéritonéale, chaque jour pendant au total 10 jours, aux souris d'un groupe, la solution l'invention. On injecte, par jour, 1 mg de lentinane par kg de poids corporel. Après 5 semaines, on extirpe les tumeurs que l'on pèse. On compare le poids des tumeurs à celles des souris des groupes témoins. On calcule les taux d'inhibition. En mEme temps, on détermine le nombre de régressions tumorales complètes. Les résultats obtenus figurent dans le tableau II ci-après. Les échantillons n 1 à 10 du tableau II correspondent respectivement aux échantillons n 1 à 10 du tableau I. Comme le montre le tableau II, la solution aqueuse de lentinane renfermant un polymère soluble dans l'eau ou un polymère soluble dans l'eau et un monosaceharide ne perd pas son activité antitumorale. On effectue des essais semblables avec des polysaccharides antitumoraux autres que le lentinane. Les résultats obtenus figurent dans le tableau III ci-après. Comme le montre le tableau III, on obtient selon l'invention des solutions aqueuses antitumorales plus stables des polysaccharides antitumoraux comme dans le cas de la solution aqueuse de lentinane. L'invention est illustrée par les exemples non limitatifs suivants. EXEMPLE 1 On disperse 0,1 g d'un polysaccharide antitumoral choisi parmi le lentinane et les polysaccharides A > B, C, C, D, D, E, F > G, H, I, J, K, L et M, dans 80 ml d'eau distillde, en utilisant un mélangeur-homogénéiseur et on dissout en chauffant. On ajoute à la solution 1 g d'un polymère soluble dans l'eau choisi parmi le Dextran 70 (Pharmacia Co.), l'hydroxyéthylamidon (P.M = 200 000), le sel de sodium de la CMC ou le polyéthylène glycol et on dissout. On ajuste le volume total du mélange ainsi obtenu à lOO ml en ajoutant de l'eau distillée injectable.On filtre le mélange à travers ùn filtre Millipore et on remplit de la solution une ampoule qu'on stérilise à 1100C pendant 30 mn. Les solutions aqueuses antitumorales stables des polysaccharides ainsi obtenues ne présentent pas de traces de matières insolubles. EXEMPLE 2 On disperse dans 80 ml d'eau distillée} en utilisant un mélangeur-homogénéiseur, 0,1 g d'un polysaccharide antitumoral choisi parmi le lentinane et les polysaccharides A, B, C, D, E, F, G, H, I J, K, L et M, et on dissout en chauffant. On ajoute à la solution 1 g d'un polymère soluble dans l'eau choisi parmi le Dextran 70, l'hydroxyéthyl- amidon (P.M = 200 000), le sel de-sodium de la CMC ou le polyéthylèneglycol et de plus 5 g de D-glucose ou de xylitol. On ajuste le volume total du mélange ainsi obtenu A:100 ml en ajoutant de l'eau distillée injectable. on filtre le mélange sur un filtre Millipore et on remplit de la solution une ampoule qu'on stérilise à 1100C pendant 30 mn.Les solutions aqueuses antitumorales stables des polysaccharides obtenues -ne présentent pas de traces de matières insolubles. Sur des parties des solutions antitumorales aqueuses obtenues dans les exemples 1 et 2, on confirme (échantillons n 1 à 36 des tableaux I à III) qu'elles constituent des solutions antitumorales aqueuses stables - de polysaccharides. Sur d'autres parties des solutions aqueuses antitumorales stables obtenues dans les exemples 1 et 2, on effectue des essais comme précédemment indiqué. Toutes les solutions aqueuses de polysaccharides ainsi obtenues ne forment pas de traces de précipité après 2 mois de repos à 400C, ce qui montre qu'elles sont totalement stables. De plus toutes les solutions, juste après la sterilisation, donnent des rapports d'inhibition tumorale de 90 à 95 %. Le nombre des régressions tumorales complètes est de 7 à 9/10 et de 6 à 8/10 respectivement et il est donc certain que dans les solutions de l'invention l'activité antitumorale n'est pas réduite. EXEMPLE 3 On établit les DL50 suivantes Lentinane > 4.000 mg/kg Polysaccharide > 4.000 mg/kg " B > 4.000 mg/kg 't C > 4. 4.000 mg/kg D > 4.000 mg/kg E > 4.000 mg/kg F F > 4.000 mg/kg G 7 4.000 mg/kg Polysaccharide H > 4.000 mg/kg I > 4.000 mg/kg J > 5.000 mg/kg K > 5.000 mg/kg L > 4.000 mg/kg N M 7 4.000 mg/kg (per os; souris). On prépare de la façon suivante les polysaccharides antitumoraux quton peut utiliser dans l'invention CLentinane] On lave 500 g de fructifications frarches de Lentinus edodes, on homogénéise dans 4 à 5 volumes d'eau avec un mélangeur Waring et on porte à ébullition pendant 16 heures en agitant. On élimine les substances insolubles par centrifugation on concentre 1 litre du surnageant obtenu au tiers du volume initial sous pression réduite. On ajoute la solution obtenue à 1,2 fois son volume d'éthanol, on recueille le précipité fibreux gris avec une toile et on le lave à l'éthanol. On homogénéise 50 g du précipité dans 2 litres d'eau avec un mélangeur Waring pendant 5 mn, on ajoute 20 litres d'eau à la solution homogénéisée et on agite le mélange jusqu'à formation d'une solution limpide. On ajoute goutte à goutte une solution aqueuse 0,2 M d'hydroxyde de cétyltriméthyl-ammonium pour former un précipité incolore jusqu'd ce qu'il n'y ait plus de précipitation. On recueille le précipité par centrifugation, on le met en suspension dans l'éthanol pour le laver et on l'ajoute à 1,2 litre d'acide acétique à 20 %. On agite le mélange pendant 5 mn à la température ordinaire, on centrifuge et on fractionne le précipité. On ajoute à nouveau le précipité à 1,2 litre diacide acétique à 50 % et on agite pendant 5 mn à OOC, on centrifuge et on dissout le précipité fractionné dans une solution aqueuse 0,5 N d'hydroxyde de sodium. On déproLeinise la solution selon la méthode de Sevage. Après déprotéinisation, on recueille le lentinane pur de la solution selon des techniques classiques de précipitation et de lavage. On sépare le précipité et on le sèche pour obtenir le lentinane. (Polysaccharide A]. On oxyde, on réduit, puis on hydrolyse comme décrit dans "Saishin Igaku Zasshi", vol. 25, 1043, Japon (1970), du pachymane obtenu par extraction de Poria cocos Wolf avec une solution alcaline aqueuse et on prépare le pachymarane (polysaccharide antitumoral A). [Polysaccharide B à H] On prépare un milieu de culture constitué de 50 g de glucose, 1 g de sulfate d'ammonium et 3 g d'extrait de levure dans 1 litre d'eau distillée, on ajuste le pH à 5,5 et on introduit des portions de 50 ml de milieu dans des flacons à agitation de 500 ml. Après stérilisation à 1200C pendant 15 mn, on ensemence les milieux avec 10 ml d'une culture d'ensemencement des souches indiquées ci-après et on cultive à 250C pendant 120 heures en agitant (120 va-et-vient par mn). On centrifuge le bouillon de culture pour éliminer le mycélium et on ajoute aux 80 ml de surnageant de l'méthanol pour former une solution à 40 7. d'éthanol, puis on isole par centrifugation le précipité formé.On purifie trois fois le précipité par dissolution dans l'eau et précipitation par l'méthanol et on obtient 2 g de glucane cristallin brut. On dissout le Glucane brut dans 200 ml d'une solution 0,5 N dthydroxyde de sodium et on ajoute à la solution de l'éthanol pour former un précipité qu'on recueille par centrifugation. On lave deux fois le précipité à l'méthanol à 80 % et deux fois à l'méthanol à 100 %, on sèche sous vide et on obtient les glucanes suivants sous une forme cristalline pure. Souche Polysaccharide antitumoral. Rendement obtenu Coriolus hirsutus FERM P- 1021 B 1,2 g Deadoleopsis FERM P-1023 C 0,7 g Phellinus nobustus NRRL 3993 D 0,35 g Fomes mcgregorii FERM P-1030 E 0,51 g Phlebia strigozo-zonata FERM P-1027 F 0,15 g Polyporus mollis FERM P-1032 G 0,34 g Inonotus cuticuloris NRRL 3991 H 0,52 g [Polysaccharide I] On extrait les fructifications de Pholiota nameko. On soumet le produit obtenu à une purification fractionnée par l'alcool pour obtenir le polysaccharide antitumoral I dont la chaine principale comporte une liaison ss-(1#3) glucoside. On détermine l'activité antitumorale figurant dans le tableau III en étudiant la solution antitumorale après 2 mois de séjour à 4O0C après stérilisation de la solution. [Polysaccharide J] On dissout 60 g de p-pachymane dans 2 litres d'une solution aqueuse d'hydroxyde de sodium à 1,2 %. On agite le mélange à 270 tr/mn à 400C dans un récipient de 3 litres. On purge à l'azote puis on ajoute au mélange 75 ml (1,5 mole) d'oxyde d'éthylène et on agite le mélange obtenu pendant 24 heures. Le mélange réactionnel devient gélatineux. On neutralise le mélange réactionnel à pH 7,0-en ajoutant de l'acide chlorhydrique concentré. On centrifuge le produit désiré, on le lave avec 5 litres d'une solution aqueuse à 70 % de méthanol en agitant, puis on sépare par centrifugation. On lave le produit avec 3 litres d'une solution aqueuse à 80 % de méthanol, puis 2 litres d'une solution aqueuse 90 Z de méthanol et enfin 2 litres de méthanol absolu. On filtre le précipité puis on le lave avec 2 litres d'acétone, on filtre a nouveau et on shcheasous vide à la température ordinaire. On obtient une poudre blanche de polysaccharide J. Le rendement est de 59,4 g et le degré de substitution de 0,43. Dose Taux d'inhibition Régression complète (mg/kg) x 10 5 100 % 5/5 Polysaccharide K] On prépare du pachymarane en oxydant, réduisant, puis hydrolysant, comme décrit dans "Saishin Igaku-shi" (Recent Medicine), volume 25, page 1043, 1970, du pachymane,qu'on a obtenu en traitant du Poria cocos Wolf avec une solution alcaline aqueuse. On agite énergiquement 3 g de pachymarane dans 80 ml d'isopropanol à la température ordinaire, on ajoute à la solution obtenue 8 ml d'une solution d'hydroxyde de sodium à 30 %, puis 3 g d'acide monochloroacétique solide. On agite la solution obtenue pendant 3 heures au bain-marie entre 40 et 450C et on refroidit a la température ordinaire en agitant.On filtre le mélange réactionnel avec un filtre de verre, on. ajoute le précipité obtenu à 100 ml de méthanol à 70 % renfermant 5 ml d'acide acétique glacial, on agite pendant 10 mn, puis on lave avec 3 portions de 100 ml de méthanol absolu puis de l'éther. On sèche le précipité obtenu sous vide et on obtient 2,2 g d'une poudre incolore constituée de carboxyméthyl-ss-(1# 3) glucane qu'on appelle ci-après produit (I). On dissout 1 g du produit (I) dans 10 ml d'une solution 1 N d'hydroxyde de sodium et on ajoute 50 ml de méthanol à la solution. On recueille par filtration le précipité formé, on le lave avec du méthanol aqueux à 70 %, du méthanol aqueux à 90 %, du méthanol absolu, puis de l'acétone et on sèche pour obtenir 0,8 g du carboxyméthyl-ss-(1# 3) glucane sous la forme totalement sodique, qu'on appelle produit (III) (polysaccharide K). Les résultats des essais antitumoraux figurent dans le tableau IV ci-après On détermine les dosoeîétaîesdu produit (I) et du pachimarane qui sont respectivement supérieures à 4 g/kg et 1,5 g/kg. [Polysaccharide L]. On prépare du mycélium de bouillon de culture de Conolus hirsutus FERM P 1021, selon le procédé indiqué pour le polysaccharide B. On met en suspension 10 g de mycélium sec dans 200 ml d'une solution 0,2 N d'hydroxyde de sodium, on agite énergiquement à la température ordinaire pendant 2 jours puis on centrifuge. On neutralise le surnageant à pH 6,5 avec de l'acide acétique puis on ajoute 600 ml d'éthanol. On isole le précipité formé par centrifugation et on le lave avec des solutions aqueuses de méthanol à 70 Z, 80 % et 90 %, de méthanol, de l'acétone, puis de l'éther. On sèche finalement sous vide pour obtenir 810 mg de complexe polysaccharide-protéine. [Polysaccharide M]. On obtient 740 mg de complexe polysaccharide-protéine comme précédemment décrit à partir du mycélium du bouillon de culture de Coriolus versicolor FERM P 1022. Bien entendu diverses modifications peuvent être apportées par l'homme de l'art aux dispositifs ou procédés qui viennent d'etre décrits uniquement à titre d'exemples non limitatifs sans sortir du cadre de l'invention. TABLEAU I Echantillon n 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 leutinene (g) 0,1 0,1 0,1 0,1 0,1 0,1 0,1 0,1 0,1 0,1 Dextran 70 (g) - - - - - - - - - Hydroxyéthyismidon (P.M = 200.000) (g) - - - - 1 - - - 1 CMC - Na (g) - - - - - 1 - - - 1 Glucose- (g) - 5 - - - - - 5 5 5 NaCl (g) - - 0,9 - - - 0,9 - - Juste après la stérilisation 80 70 100 20 10 20 10 0 0 0 (%) Précipités Apres 2 mois 40 C 100 50 - 0 0 0 20 0 0 0 de 25 C 60 50 - 0 0 0 10 0 0 0 repos 0 C 50 50 - 0 0 0 10 0 0 0 * "80 %" indique que l'on observe un précipité dans 80 Z des échantillons. Les autres pourcentages ont une signification semblable. TABLEAU Il Teux d'inhibition des tumeurs Nombre de régressions complètes Echan tillon Juste après la Après 2 mois à Juste après la Après 2 mois à n stérilisation 40 C stérilisation 40 C 1 85,3 - 6/10 2 89,4 87,9 7/9 5/8 3 - - - 4 92,5 88,5 7/10 6/10 5 92,5 90,1 7/10 6/10 6 91,7 82,3 7/10 6/10 7 93,0 81,1 8/10 4/10 8 94,1 92,9 8/10 5/10 9 93,4 92,9 8/10 7/10 10 92,8 83,1 8/10 7/10 T A B L E A U I I I Echantillon n 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 21 22 23 A 0,1 0,1 - - - - - - - - - - B - - 0,1 0,1 - - - - - - - - C - - - - 0,1 0,1 - - - - - - D - - - - - - 0,1 0,1 - - - - Polysaccharide E - - - - - - - - 0,1 0,1 - - antitummoral F - - - - - - - - - - 0,1 0,1 G - - - - - - - - - - - - 0,1 H - - - - - - - - - - - - I - - - - - - - - - - - - J - - - - - - - - - - - - K - - - - - - - - - - - - L - - - - - - - - - - - - M - - - - - - - - - - - - TABLEAU III (suite 1) Echantillon n 24 25 26 27 28 29 30 31 32 33 34 35 36 A - - - - - - - - - - - - B - - - - - - - - - - - - C - - - - - - - - - - - - D - - - - - - - - - - - - E - - - - - - - - - - - - Polysaccharide antitumoral F - - - - - - - - - - - - G 0,1 - - - - - - - - - - - H - 0,1 0,1 - - - - - - - - - I - - - 0,1 0,1 - - - - - - - J - - - - - 0,1 0,1 - - - - - K - - - - - - - 0,1 0,1 - - - L - - - - - - - - - 0,1 0,1 - M - - - - - - - - - - - 0,1 0,1 T A B L E A U I I I (suite 2) Echantillon n 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 21 22 23 Dextran 70 (g) 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 Clucose (g) 0 5 0 5 0 5 0 5 0 5 0 5 0 Juste après la stérilisation (%) 10 0 20 0 10 0 20 0 10 0 20 0 10 précipités Après 2 mois à 40 C (%) 0 0 10 0 20 0 10 0 10 0 10 0 10 Dose (mg/kg) x 10 5 5 5 5 5 5 5 5 10 10 10 10 10 Taux d'inhibition Activité des tumeurs 93 94 92 93 95 94 100 99 92 91 94 92 93 antitumorale Nombre de régres sions complètes 8/10 7/10 6/10 6/10 7/10 8/10 5/5 4/5 4/5 4/5 4/5 5/5 4/5 T A B L E A U I I I (suite 3) Echantillon n 24 25 26 27 28 29 30 31 32 33 34 35 36 Dextrau 70 (g) 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 Glucosa (g) 5 0 5 0 5 0 5 0 5 0 5 0 5 Juste après le stérilisation (%) 0 20 0 10 0 10 0 10 0 20 0 20 0 précipités Après 2 mois à 40 C (%) 0 10 0 20 0 20 0 10 0 20 0 20 0 Dose (mg/kg) z 10 10 2,5 2,5 10 10 5 5 5 5 10 10 10 20 Taux d'inhibition Activité des tumaurs 93 92 92 90 92 98 96 92 93 92 91 90 90 antitumorale Nombre de régres sions complètes 5/5 8/10 9/10 6/10 7/10 8/10 9/10 7/10 8/10 7/10 7/10 8/10 8/10 T A B L E A U IV Echantillon étudié Dose (mg/kg.jour) Taux d'inhibition (%) Régression complète Pachymarane 5 x 10 93 4/9 Produit (III) 5 x 10 95 8/10 Nota : On administre à des souris albinos Swiss des injections sous-cutanées de 0,05 ml d'ascite du sarcome 180 dans l'aine droite. Ving-quatre heures après l'injection et chaque jour pendant au total 10 jours on administre des injections intrapéritonéales de l'échantillon à un groupe de 10 souris. Un groupe témoin ne reçoit pas dtinjections. Après 5 semaines, on-tue les souris, on excise les tumeurs et on les pèse et on évalue l'effet d'inhibition du produit sur les tumeurs à partir de la différence du poids moyen des tumeurs recueillies sur les souris traitées et les souris non traitées et on détermine le taux d'inhibition et la régression totale. REVENDICATIONS 1. Composition thérapeutique antitumorale caractérisée en ce qu'elle consiste en une solution stabilisée composée essentiellement de a) eau; b) un composé ayant une activité antitumorale et un squelette glucane; c) un agent solubilisant primaire, soluble dans I'eau, choisi parmi le dextrane, l'hydroxyéthyl-amidon, la carboxy méthylcellulose et le polyéthylèneglycol, la quantité de cet agent solubilisant étant suffisante pour accroitre la solubilité du composé antitumoral; et d) un agent solubilisant secondaire soluble dans l'eau présent à la concentration de O à 10 g/dl, cet a agent solubilisant secondaire étant un pentose, un hexose ou un sucre-alcool comportant 5 ou 6 atomes de carbone. 2. Composition thérapeutique selon la revendication 1, carac térisée en ce que la concentration de l'agent solubilisant primaire est comprise entre 0,1 et 1,0 g/dl. 3. Composition thérapeutique selon la revendication 2, caractérisée en ce que l'agent solubilisant primaire est le dextrane ou 1 'hydroxyéthyl-amidon. 4. Composition thérapeutique selon la revendication 3, caractérisée en ce que la concentration de l'agent solubilisant secondaire est dtau moins 1 g/dl. 5. Composition thérapeutique selon la revendication 4, caractérisée en ce que l'agent solubilisant secondaire est le glucose, le xylitol ou le sorbitol. 6. Composition thérapeutique selon la revendication 1, caractérisée en ce que l'agent solubilisant primaire est la carboxyméthylcellulose à la concentration de 0,5 à 1,0 g/dl. 7. Composition thérapeutique selon la revendication 6, caractérisée en ce que l'agent solubilisant secondaire est le glucose, le xylitol ou le sorbitol à une concentration d'au.moins 1 g/dl. 8. Composition thérapeutique selon la revendication 1, caractérisée en ce que le composé antitumoral est un glucane. 9. Procédé pour préparer une composition thérapeutique selon l'une quelconque des revendications précédentes, caractérisé en ce qu'il consiste à former la solution stabilisée en mélangeant (a) de 1'eau, (b) un composé ayant une activité antitumorale et un squelette lucane, (c) un agent solubilisant primaire soluble dans l'eau choisi parmi le dextrane, l'hydroxyéthyl-amidon, la carboxyméthylcellulose et le polyéthylèneglycol, la concentration de cet agent solubilisant étant suffisante pour accroitre la solubilité du composé antitumoral et (d) un agent solubilisant secondaire soluble dans l'eau à raison de O à 10 g/dl, cet agent solubilisant secondaire étant un pentose, un hexose ou un sucrealcool comportant 5 ou 6 atomes de carbone.