Brevet FR2388275A1 — publié le 19781117

La présente invention concerne des réactifs ou parties de réactifs stabilisés améliorés, notamment utiles pour la réalisation de dosages enzymatiques, et un procédé pour leur obtention. Dans le présent contexte, on entend par dosages enzymatiques des dosages mettant en jeu au moins une réaction enzymatique, en vue de la détermination, dans le milieu à doser, soit de l'activité té catalytique d'une enzyme soit de la concentration ou quantité d'un métabolite intervenant alors comme substrats. Les dosages enzymatiques, réalisés le plus souvent en vue de l'établissement dlun diagnostic, nécessitent en règle générale des réactifs tels que : substrats, enzymes, coenzymes, tampons et autres ; or, ces substances sont plus ou moins stables et présentent de ce fait une diminution d'activité et/ou de concentration dans le temps. Ce manque de stabilité est particulièrement net, et d'ailleurs connu de l'homme de l'art, dans le cas de préparations pour dosages enzymatiques contenant du nicotinamide-adénine dinucléotide ou du phosphate de nicotinamide-adénine dinucléotide (NADP+/NADPH), sous forme oxydée ou sous-formeréduite, ainsi que dTautres coenzymes. En outre, de nos jours, on s'attache de plus en plus à mettre en oeuvre, pour les dosages enzymatiques, des préparations déjà prêtes pour lTemploi, qui renferment toutes ou pratiquement toutes les substances nécessaires pour les dosages et permettent de faire réaliser ceux-ci facilement et sûrement, même par des praticiels d'attention moyenne. Mais, jusqu a présent, tant la fabrication que l'utilisa- tion de telles préparations combinées déjà prêtes à lTemploi se sont heurtées à des difficultés non négligeables et souvent rédhibitoires. En effet, les constituants de ces préparations, qui sont pourtant aux-mémes relativement stables à l'état pur, deviennent souvent instables en raison de la présence des autres constituants desdites préparations, et ces dernières subissent alors, durant leur conservation avant utilisation, des variations-de concentration, dthomogénéité et/ou d'activité, qui ne peuvent que nuire aux résultats des analyses effectuées au moyen de telles compositions. On a déjà proposé de stabiliser les réactifs.enzymatiques combinés pour analyses contenant du NAD ZNADH et/ou du NADP+/NASPH, au moyen dTune a addition à ces réactifs combinés de substances renfermant des groupes -SH, notamment du glutathion; Cependant, cette addition de substances à groupes -SH nTa pas donné entière satis faction, car elle s'est avérée propice à inhiber certaines enzymes ; de plus, les substances à groupes -SH proposées, et notamment le glutathion, sont sensibles à ltoxydation. On a d'autre part suggéré, dans le brevet FR susdit, de stabiliser plus efficacement des réactifs enzymatiques combinés pour analyses contenant du nicotinamide-adénine dinucléotide et/ou du phosphate de- nicotinamide-adénine dinucléotide, sous forme oxydée ou sous forme réduite, au moyen d'une addition de polyvinylpyrrolidone (PVP); I1 était dTailleurs aussi déjà connu auparavant d'utiliser de la PVP pour empêcher la séparation par sublimation de constituants minéraux au cours de la lyophilisation de susbstances sensibles à ce traitement. Maintenant,dans le cadre des essais et des travaux qui ont conduit à la présente invention, la demanderesse a pu établir que, parmi les substances stabilisantes envisageables et/ou les supports pour la lyophilisation auxquels lThomme de lTart aurait pu penser de prime abord, nombre des substances testées se sont avérées présenter des inconvénients notables et même, pour certaines, se sont révélées inefficaces, comme on le montrera plus loin.Or, la plupart des substances ainsi testées auraient pu être a priori considérées comme des équivalents techniques susceptibles d'être efficaces les uns comme les autres, même à des degrés divers, dans 1 T application considérée, et il nTétait donc pas évident pour lthomme de lrart de trouver ainsi une substance réalisant tout aussi bien une matrice servant de support de lyophilisation pour réactifs enzymatiques combinés ou parties de réactifs enzymatiques qu un agent stabilisant des préparations liquides séparées ou combinées,pour dosages enzymatiques, et ainsi apte à stabiliser des réactifs enzymatiques combinés ou des parties de réactifs enzymatiques, lyophilisés ou non, ain- si que d'ailleurs le produit reconstitué obtenu après remise en solution du lyophilisat. On a maintenant trouvé de façon inattendue que certains polysaccharides- synthétiques, et plus spécialement les copolymères de sucrose et dTépihalohydrine ayant un poids moléculaire moyen de 60.000 à 500.000, permettent de réaliser, en combinaison a v e c le s constituants classiques des réactifs prêtes à ltemploi, des réactifs ou des parties de réactifs stabilisés, utiles pour les dosages enzymatiques ét qui, lyophilisés ou non, restent parfaitement homogènes et stables et présentent une activité plus élevée et surtout plus durable que celle des réactifs stabilisés classiquement. On avait certes déjà proposé d'utiliser des copolymères synthétiques de sucrose et d'épichlorhydrine pour fournir à des solutions de perfusion artificielles une pression osmotique de col bide appropriée, ainsi que pour stabiliser des solutions de protéines, pour favoriser les concentrations par dialyse, et surtout pour aider à la séparation et à l'isolement de eellules et de parties sub-cellulaires par centrifugation en milieu dense. Dans toutes ces applications, le polysaccharide utilisé a été choisi pour la viscosité quril apportait au milieu. I1 est clair que lthomme de l'art ne pouvait pas déduire de tous ces résultats antérieurement connus que certains polysaccharides synthétiques, tels que définis plus haut, auraient pu constituer un agent stabilisant hautement efficace pour les réactifs ou les parties de réactifs pour dosages enzymatiques, lyophilisés ou non, et cela avec une efficacité telle que lesdits réactifs se sont avérés Autre nettement plus stables et présenter simultanément une absence pratiquement totale d'atténuation de leur activité enzymatique et une meilleure persistance de celle-ci > comme on le montrera dans la suite.Aucun des agents stabilisants antérieurement proposés pour cette application ne permettait d'obtenir un tel ensemble de qualités, alors que. c'est précisément l'ensemble des qualités recherchées, et non pas seulement 1 un e e- d'entre elleS qutil im- portait de préserver ou même de renforcer, si l'on voulait pouvoir présenter sur le marché des réactifs enzymatiques combinés, ou des parties de réactifs enzymatiques, satisfaisant aux normes requises. L'invention a pour premier objet un produit constitué par un réactif combiné pour dosages enzymatiques, prêt pour analyses, ou par une partie de réactif pour dosages enzymatiques, et lyophilisé ou nnn, caractérisé en ce qu'il comprend, à titre de matrice servant de support pour la lyophilisation et/ou d'agent stabilisant, au moins un polysaccharide synthétique, plus particulièrement un polysaccharide synthétique choisi parmi les copolymères de sucrose et d'épihalohydrine ayant un poids moléculaire moyen de 60.000 à 500.000. En variante, l'invention a pour objet le produit stabili- sé reconstitué, obtenu après remise en solution du produit de ladite lyophilisation et comprenant au moins un polysaccharide synthétique tel que défini ci-dessus. L'invention a également pourobjet un procédé pour l'obtention dudit produit, caractérisé en ce qutil comprend, dans l'ordre, les étapes de (I) dissolution dans l'eau dudit polysaecharide ou mélange de polysaccharides, dans les quantités et les proportions requises, avec addition si nécessaire d'un tampon approprié et éventuellement d'au moins un substrat, (2) ajustement éventuel du pH, (3) addition des enzymes et/ou coenzymes, (4) ajustement éventuels du volume et/ ou du pH, et (5), si on le désire, lyophilisation de la solution ainsi ajustée. Les réactifs ou parties de réactifs pour dosages enzyme tiques préparés et stabilisés selon l'invention contiennent donc en général, et selon les analyses auxquelles on les destine, au moins un polysaccharide synthétique, ainsi que certaines au moins des autres substances qui sont nécessaires à l'élaboration desdits réactifs, ou parties de réactifs, et qui sont les enzymes, les coenzymes, les substrats, les substances-tampons, les adjuvants, et éventuellement les charges, appropriés. I1 est entendu, et on ne fait que le rappeler ici, quTon peut également selon ITinvention préparer et stabiliser séparément des parties de ces réactifs. Les polysaccharides mis en oeuvre selon l'invention sont des polysaccharides synthétiques, avantageusement des polysaccharides synthétiques choisis parmi les copolymères de sucrose et d'épihalohydrine (de préférence d'épichlorhydrine) ayant un poids moléculaire moyen de 60.000 à 500.000 . En p a r t i c u l i e r, on peut citer les produits commercialisés sous la dénomination de "Ficoll" par Pharmacia Fine Chemicals AB. En ce qui concerne les-enzymes susceptibles autre utilisées dans le cadre de la présente invention, on peut citer, notam ment : ltalcool déshyurogénase, Taspartate aminotransférase, la catalase, la galactose déshydrogéna se, la glucose-6-phosphate déshydrogénase, la glycéraldéhyde-D-phosphate déshydrogéna se, la glycérol-3-phosphate déshydrogénase, I'hexokinase, la lactate déshydro génase, la malate déshydrogénase, la myokinase, la peroxyda se, la pyruvate kinase, la triose-phosphate isomérase, l'uréase, et l'uricase ; de nombreuses autres enzymes pourraient cependant être utilisées aussi. De plus, on peut mettre en-oeuvre des mélanges de ces enzymes, entre elles ou avec d'autres. Comme exemples de coenzymes appropriés on peut citer, entre autres, le nicotinamide-adénine dinucléotide oxydé ou réduit (NAD+ ou NADH), le phosphate de nicotinamide-adénine dinucléotide oxydé ou réduit (NADi+ ou-NADPH), le flavine-adénine dinucléotide oxydé ou réduit (FAD ou FADH2) et le pyridoxal phosphate-5'(PLP). Les substrats des réactions enzymatiques qui peuvent être présents dans les réactifs améliorés selon l'invention sont notamment choisis parmi acide L-aspartique et ses sels, l'acide le L-&gamma;; -glutamyl-4-nitroanilide, le glycéraldéhyde-3phosphate, le p-nitrophénylphosphate, et l'ornfthine carbamylphosphate, En ce qui concerne les tampons susceptibles d'être incorporés, si nécessaire, dans les réactifs ou parties de réactifs améliorés selon l'invention, on peut citer les sels de acide acétique, les sels de l'acide borique, les sels de l'acide citrique, les sels de l'acide phosphorique, l'amino-2 methyl-2 propanol-l, la collidine, la diéthanolamine le glycocolle, la triéthanolamine, et le tris (hydroxyméthyl) aminométhane. Les charges envisagées plus haut sont un autre type de support de lyophilisation, tout à fait classique pour 1.'homme de l'art ; parmi elles, on peut citer la gélatine, les albumines et autres composés analogues. Les adjuvants susceptibles d'être incorporés dans les réactifs stabilisés selon l'invention sont des substances dont la présence est faborable-au bon déroulement des réactions biochimiques à effectuer. Ce sont par exemple des agents d'activation (tels que la N-acétylcystéine, le dithiothréitol, le dodécyl sulfate de sodium, et le glutathiôn), des sels comportant des ions définis, comme le sulfate de magnésium, etc L'homme de lTart est à même de déterminer les quantités et les proportions nécessaires pour chacun des réactifs ou composants de réactifs stabilisés selon l'invention, dans chaque cas d'espèce. La détermination de la quantité de polysaccharide ou de mélange de polysaccharides approprié dans chaque cas concret de réactif ou de partie de réactif pour dosages enzymatiques peut être effectuée aisément à l'aide d'un simple essai préliminaire de routi ne.Le degré et la durée de stabilisation des réactifs sunt des facteurs de pure cunvenance et il est à noter que la stabilisation est marquée, au moins dans certaines limites dictées par des considérations pratiques. A titre purement indicatif, on peut préciser qu une quantité de polysaceharide ou de mélange de polysaccharides de 10 à 50 g/l, et plus précisément d'environ 20 g/l de solution de réactif ou de partie de réactif est tout à fait appropriée. your réaliser les réactifs ou parties de réactifs stabilisés selon l'invention, on opère comme suit - on dissout dans l'eau la quantité voulue de polysaccharide ou de mélange de polysaccharides, et éventuellement le ou lBs tampons.et le ou les substrats ; - on ajuste éventuellement le pH, - on ajoute à cette solution la ou les enzymes et/ou le ou les coenzymes ; - on ajuste éventuellement le volume et/ou le pH ; - on répartit la solution ainsi ajustée en autant de récipients appropriés qu'on le désire, chacun de ces récipients contenant alors la quantité unitaire désirée ; et, si on le désire, - on lyophilise le contenu de ces récipients et on bouche ces derniers. Les réactifs stabilisés selon l invention se psésentent, lorsqu'ils sont lyophilisés, swus la forme de poudres poreuses celles-ci se redissolvent très aisément dans leai et, conservées dans les récipients bouchés, elles gardent toutes leurs propriétés pendans de longues périodes et son ainsi aptes à satisfaire notamment aux recommandations -de la Société Française de Biologie Clinique (S.F.B.C.). De meme que les réactifs, ou parties de réactifs, non lyophilisés stabilisés selon I'fnvention, ces réactifs lyophilisés peuvent, une fois qu'ils sont remis en solution, être conservés sous cette forme liquide sur des périodes de temps assez longues qui en facilitent l'utilisation. Pour reconstituer ces réactifs ou parties de réactifs lyophilisés, il suffit de dissoudre le contenu du ou des récipients concernés dans une quantité appropriée d'eau ou d'une autre partie de réactif. Pour réaliser le dosage enzymatique, il suffit ensuite de combiner le réactif ou les différentes parties de réactif avec la substance à analyser, daus l'ordre et selon le protocole approprié. Dans le cas où l'on n'a pas réalisé de lyophilisation, les réactifs ou parties de réactifs sunt combinés et utilisés de la même manière. Les réactifs stabilisés selon l'invention s'appliquent à tous les dosages enzymatiques tels que définis plus haut , et notamment - les msures des activités catalytiques des enzymes suivantes amylase, alanine aminotransférase, aspartate aminotransférase, créatine kinase, glucose-6-phosphate déshydrogénase, glutamate déshy drogéna se, &gamma;-glutamyltransférase, hydroxybutyrate déshydrogéna se, isocitrate déshydrogéna se, lactate déshydrogénase, leucine arylamidase, malate déshydrogénase, 5'-nucléotidase, ornithine carbamyl transférase, phosphatases acides, phosphatase alcalinc, pyruvate kinase, sorbitol déshydrogéna se. - les dosages, par voies enzymatiques,-des subStances suivantes acide lactique et ses sels, acide pyruvique et ses sels, acide urique, adénosine monophosphate, adénosine diphosphate, adénosine triphosphate, éthanol, ga0actose, urée. L'invention est décrite plus en détail dans les exemples illustratifs ci-après, qui ne la limitent aucunement. Exemple 1. Stabilisation d'une partie de réactif pour la mesure de l'activité (aspartate aminotransférase) (TGO) dans le sérum selon les recommandations de la S.F.B.C. On a préparé les réactifs en deux parties - solution 1 (tampon, enzyme, coenzyme, aspartate) sous forme lyo philisées préparée selon l'invention. - solution 2 (oxoglutarate), sous forme liquide. On a calculé l'activité TGO à partir des variations de densité optique (DO) à 340nm du mélange réactionnel ainsi préparé. Pour la préparation de la solution 1 susdite, on a opéré de la façon suivante Dans envirun 600 ml d'eau distillée, on a dissous Support éventuel 20 g Tris-(hydroxyméthyl) aminométhane 23,26 g L-aspartate de sodium ss3,1 g On a ajusté le volume à 1 litre par de l'eau distillée et on a ajusté le pH à 7,80 (à 300C) par HCl fumant dilué-au 1/10. On a ajouté à ce mélange Lactate déshydrogénase (dans le glycérol à 50%) 2160 UI Malate déshydrogénase (dans le glycérol à 50%) 1440 UI Pyridoxal phosphate -5' 63,6 mg NADH disodique (pureté : 80%) 360 mg On a réparti la solution ainsi préparée dans des flacons, par fractions de 2 ml, puis lyophilisé. la stabilité de la solution 1 reconstituée, à partir de sa forme lyophilisée, par 4 ml d'eau distillée peut être suivie par la diminution de la DO à 340 nm (ou à 334 nm), qui traduit l'oxydation du NADH et s'accompagne de la formation diinhibiteurs de certaines réaction mettant en jeu ce coenzyme. Les résultats obtenus sont les suivants Variation de la DO à 334 nm après 24 h après 48 h solution sans support - 0,660 solution + Dextraue - 0,080 - 0,080 solution + PVP - 0,040 - 0,060 solution + Ficoll 70 * 0, 000 0,000 x polysaccharide synthétique commercialisé sous cette dénomina tion par Pharmacia Fine Chemicals AB Exemple 2. Préparation de réactifs stabilisés pour la mesure de l activité alanine aminotransférase (TGP) dans le sérum selon les recommandations de la S.F.B.C. On a préparé les réactifs en 5 parties - solution 1 (tampon, alanine) sous forme liquide. - solution 2 (NADH) sous forme lyophilisée, préparée selon l'in- vention. - solution 3 (tampon, pyridoxal phosphate) sous forme lyophilisée, préparée selon l'invention - solution 4 (enzyme) sous forme liquide. - solution 5 (oxoglutarate) sous forme' liquide. En vue de les utiliser, on a reconstitué, à partir de leur forme lyophilisée, les solutions 2 et 3, chacune par 2,2 ml deau distillée et on a mélangé ces solutions aux autres solutions et au sérum à tester, dans des proportions et dans un ordre tels que les recommandations de la S.F.B.C. pour la mesure de l'activité TGP soient satisfaites. Préparation de la solution 2 Dans environ 80 ml d'eau distillée, on a dissous Ficoll 70 ............................ 4 g bicarbonate de sodium .................. 0,5 g On a ajusté le volume à 100 ml et on a ajouté NADH disodique (pureté 80 %) .......... 1,436 g On a réparti la solution ainsi préparée dans des flacons, par fractions de 1,1 ml, puis on l'a- lyophilisée. Préparation de la solution 3 Dans environ 80 ml d'eau distillée, on a dissous Ficoll 70 ............................. 4 g Tris-(hydroxyméthyl) aminométhane .......... 1,224 g On a ajusté le volume à 100 ml avec de l'eau distillée et le pH à 7,96 (à 20 C) avec de l'acide chlorhydrique fumant dilué au 1/10. Dans cette solution,on a dissous : pyridoxal phosphate-5' ................. 255 mg On a réparti la solution ainsi préparée dans des flacons, par fractions de 1,1 ml, puis on a lyophilisé. Exemple 3. Préparation de réactifs stabilisés pour la mesure de activité aspartate aminotransférae (TGO) dans le sérum selon les recommandations de la S.F.B.C. On a prépare les réactifs en deux parties -solution 1 (tampon, enzymes, coenzymes, aspartate) sous forme lyo philisée, préparée selon l'invention. -solution 2 (oxoglutarate) sous forme liquide. La mesure de l'activité TGO du sérum 5T effectue comme suit 1 lyophilisat de solution 1 est repris par 4 ml d'eau distillée. On y ajoute 0,4 ml sérum à tester puis, après 10 minutes d'incubation à 30 C, 0,4 ml de solution 2. L'activité TGO est calculée à partir des variations de densité optique à 340 nm du mélange réactionnel ainsi constitué. Préparation de la solution 1 Dans environ 600 ml d'eau distillée, on a dissous Ficoll 70 . t 20 g tris-(hydroxyméthyl) aminométhane .......... 23,26-g L-aspartate de sodium .................... 83,1 g On a ajusté le volume.à 1 litre par de l'eau distillée et le pH à 7,80 (à 30 C) par HC1 fumant dilué au 1/10. A ce mélange, on a ajouté lactate déshydrogéna se (dans le gycérol à 50%) ....... 2160 UI malate déshydrogénase (dans le glycérol à 50%)..... 1440 UI pyridoxal phosphate-5' 63,6 mg N A D H disodique (pureté : 80%)................... 360 mg On a réparti la solution ainsi préparée dans des flacons par fractions de 2 ml, puis on a lyophilisé. Exemple 4. Obtention et utilisation de lyophilisats de réactifs en zymatiques stabilisés sur différents supports. On a mis en oeuvre successivement, comme support, de l'al- bumine, un mélange de carboxyméthylcellulose et de manni- tol (en des proportions variables), du dextrane, de la PVP, et du Ficoll 70, ainsi que du Ficoll 400, ces deux derniers étant des produits commercialisés par Pharmacia Fine Chemicals AB. Support Solubilisation Aspect du Facilité de mise du support lyophilisat an solution du -- t Albumine + ++ Carboxyméthyl cellulose + man- nitol Dextrane ++ ++ P V P + ++ Ficoll 70 ou Ficoll 400 ++ ++ ++ Avec l'albumine et la PVP, ainsi qu'il ressort clairement du tableau ci-dessus, les solutions présentaient des inconvénients (moussage ou trop grande viscosité) nuisibles à leur bonne réparti tion. be plus l'albumine est un produit coûteux. Exemple 5. Influence de la lyophilisation en présence de différents supports sur l'activité des réactifs. Au moyen des mêmes réactifs que ceux décrits dans l'exem ple 1, on a mesuré l'activité TGO selon les reeommanda- tions de la S.F.B.C., sur un sérum ayant une activité théorique de 260 UI/l. Activité mesurée à- l'aide des réactifs Support : avant lyophilisation apres lyophilisation DEXTRANE 255 UI/l 214 UI/1 PVP 230 UI/1 217 UI/1 FICOLL 70 261 UI/l 243 UI/l Pour tester les réactifs avant lyophilisation, on a utilisé pour chaque mesure 2 ml de solution 1 et 2 ml d'eau distillée, au lieu dTun lyophilisat repris par 4 ml d'eau distillée comme c'était le cas après lyophilisation. Exemple 6. Essai comparatif des polysaccharides synthétiques du type "Ficoll" et de la PVP comme support de lyophilisa tion et agent de stabilisation de solutions de NADH. On a testé du NADH lyophilisé en l'utilisant pour la me sure de activité lactate déshydrogéna se (LDH) d'un sé rum, conformément aux recommandations de la Sociéte Alle mande de Chimie Clinique (D.G.K.C.). On a préparé le réactif contenant le NADH comme suit Dans environ 80 ml d'eau distillée, on a dissous K2HPO4, 3 H2O .................................... 0,377 g KH2PO4 ........................................... 0,056 g Support (Ficoll 70 ou PVP) ....................... 2 g On a ajusté le volume à 100 ml et on a ajouté NADH disodique (pureté 80%) ...................... 309,4 m g On a réparti la solution ainsi préparée-dans des flacons par fractions de 1,5 ml, puis on a lyophilisé. On a réalisé le vieillissement accéléré des lyophilisats en pla çant ces derniers à 11 étuve à 37 C pendant un temps plus ou moins long. Résultat de activité LDH d'un sérum en utilisant en utilisant un réactif NADH un réactif NADH lyophilisé en lyophilisé en présence de PVP présence de Ficoll 70 Vieillissement accéléré aucun 1440 UI/l 1480 UI/l 90 heures à 37 C 1335 UI/l 1480 UI/l 9 jours 7 37 C 790 UI/l 1060 UI/l Le NADH lyophilisé en présence de Ficoll 70 résiste de façon exceptionnelle à l'épreuve du vieillissement accéléré, alors que ce n'était pas le cas de celui lyophilisé en présence de PVP. Par ailleurs, on a pu établir que l'addition de tampon phosphate (KH2PO4 et K2HP04) était indispensable pour assurer une eertaine stabilité au réactif NADIR contenant la PVP (en absence de tampon phosphate, le NADH s'oxyde très rapidement, dès la préparation). Le réactif NADH contenant du Ficoll 7G donne, par contre, des résultats identiques, que l'on ait ou non incorporé du tampon phosphate dans le réactif. Exemple 7. Application alternativement de Ficoll et de PVP dans le but de stabiliser des solutions contenant du NADH. Dans environ 600 ml dteau distillée, on a dissous PVP ou Ficoll 70 ................................. 20 g tris-(hydroxyméthyl) aminométhane ................. 23,26 g On a ajusté le volume à 1 litre par de l'eau distillée et le pH à 7,44 (à 20 C) par HCl fumant dilué au 1/10. A ce mélange, on a ajouté - NADH disodique (pureté : 80%) .................... 70 mg DO 260 nm / DO 340 nm -temps 0 temps 24 h Solution contenant PVP 2,36 2,55 Solution contenant Ficoll 70 2,35 2,43 Solution contenant Ficoll 400 2,40 2,48 L'augmentation du rapport DO 260 nm/DO 340 nm traduit la formation d inhibiteurs. Le Ficoll 70 et le Ficoll 400 s'avèrent être de meilleurs agents de stabilisation que la PVP. Exemple 8. Performances des réactifs lyophilisés en présence de Ficoll par rapport aux réactifs fratchement préparés sans support. Mesure de l'activité aspartate aminotransférase (TGO) selon les recommandations de la S.F.B.C. On a mis en oeuvre les mêmes réactifs que ceux de l'exemple 5. Activités obtenues avec Activités obtenues avec réactifs extemporanés réactifs lyophilisés Sérums 1 11,5 UI/l 10,2 UI/l 2 218 UI/l 230 UI/l 3 210 UI/l 200 UI/l 4 208 UI/l 218 UI/l I1 n'y a pas de différence significative entre les 2 types de réactifs. Exemple 9. Influence de la concentration en Ficoll sur la stabilité d'une partie de réactif contenant du NADH. Mesure de l'activité aspartate aminotransférase (TGO) selon les recommandation de la S.F.B.C. On a mis en oeuvre les mimes réactifs que ceux décrits dans l'ex- xemple 1. On a testé la stabilité par la mesure de la DO à 340 nm de la solution 1 reconstituée. Evolution de la DO à 340 nm Concentration en Ficoll 70 temps O temps 24 h variation sur 24 h 10 g/l 1,512 1,464 50 g/l 1s532 1,493 - 0,039 L'effet stabilisateur est semblable à ces 2 concentrations en Ficoll 70. REVENDICATIONS 1.Produit constitué par un réactif combiné pour dosages enzymatiques, prêt pour analyses, ou par une partie de réactif pour dosages enzymatiques, et lyophilisé ou non, caractérisé en ce qu'il comprend, à titre de matrice servant de support pour la lyophilisation et/ou d'agent stabilisant, au moins un polysaccharide synthé tique. 2. Produit selon la revendication 1, caractérisé en ce qu'il comprend au moins un polysaccharide synthétique choisi parmi les copolymères de sucrose et d'épihalohydrine, notamment d'épichlor- hydrine, ayant un poids moléculaire moyen de 60.000 à 500.000. 3. Produit selon l'une des revendicatiorsl ou 2, caractérisé en ce qu'il est constitué par le produit stabilisé reconstitué, obtenu après remise en solution du produit de ladite lyophilisation. 4. Produit selon l'une quelconque des revendications là 3 > caractérisé en ce qu'il comprend au moins une enzyme, ainsi qulé- ventuellement au moins un coenzyme, un substrat, un tampon,une charge et/ou un adjuvant. 5. Produit selon l'une quelconque des revendications 1 à 4, caractérisé en ce qu7il comporte de 10 à 50 grammes, et avantageusement environ 20 grammes, dudit polysaccharide ou mélange de polysaccharides par litre de solution de réactif ou de partie de réactif. 6. Procédé pour l'obtention d'un produit selon l'une quelconque des revendicatiorsl à 5, caractérisé en ce qu'il comprend, dans l'ordre, les étapes de (1) dissolution dans l'eau dudit polysaccharide ou mélange de polysaccharides, dans les quantités et les proportions requises, avec addition si nécessaire d'un tampon approprié et éventuellement d'au moins un substrat, (2) ajustement éventuel du pH > (3) addition des enzymes et/ou coenzymes, (4) ajuster mentséventuel du volume et/ou du pH, et (5), si on le désire, lyo-philisation de la solution ainsi ajustée.