Brevet FR2391994A1 — publié le 19781222

La présente invention concerne de nouveaux composés peptidiques dont la structure chimique est apparentée à celle de l'hormone polypeptidique possédant une activité thymique isolée à partir du sérum sanguin de porc, des procédés de préparation de ces nouveaux composés par voie de synthèse chimique et l'application de ces nouveaux composés en thérapeutique. I1 est bien établi que les Lymphocytes T acquièrent leur immunocompétence sous l'influence du thymus. Cette action différenciatrice du thymus a fait l'objet de nombreuses recherches depuis la découverte des effets immunosuppresseurs de la thymectomie néonatale. Des expériences montrant la restauration de la compétence immunitaire de souris thymectomisées à la naissance par des greffes de thymus placées dans des chambres de diffusion imperméables aux cellules ou par des extraits thymiques a-cellulaires ont suggéré que le thymus joue un rôle de glande endocrine et élabore une hormone introduite dans la circulation sanguine. L'isolement et la caractérisation d'une hormone appelée "facteur thymique sérique" (FTS) présente dans le sérum de plusieurs espèces de mammifères, en particulier de porc, ont fait l'objet de publications récentes. I1 a été ainsi montré que le facteur thymique sérique est un nonapeptide caractérisé par la séquence d'acides aminés suivantes Pyro Glu-Ala-Lys-Ser-Gln-Gly-Gly-Ser-Asn (I) Or, la synthèse chimique du facteur thymique sérique de la structure (I) ci-dessus vient d'être réalisée ainsi que celle d'une famille de composés peptidiques de structure apparentée, y compris celle drune autre forme active du facteur thymique sérique correspondant à la structure suivante Gln-Ala-Lys-Ser-Gln-Gly-Gly-Ser-Asn (II) Ces synthèses ont permis soit d'obtenir des polypeptides possédant une activité thymique égale ou supérieure à celle de l'hormone naturelle mais ayant un effet plus prolongé par leur résistance à l'action des enzymes qui dégradent l'hormone thymique dans l'organisme, soit d'effectuer la transformation partielle de la structure chimique de l'hormone naturelle conduisant à des composés manifestant éventuellement une action antagoniste ou inhibitrice vis-à-vis de l'hormone thymique. Etant donné que l'action de l'hormone thymique permet le développement de réactions de défense immunitaire conduisant au rejet des greffes, une action antagoniste ou inhibitrice exercée par de tels composés peut éventuellement jouer un rôle important dans la prévention d'un rejet des greffes. L'invention concerne les composés polypeptidiques répondant à la séquence Glx-Ala-Lys-Ser-Gln-Gly-Gly-Ser-Asn dans laquelle Gîx représente PyroGlu ou Gîn, leurs dérivés comportant 1 ou 2 acides aminés modifiés, et les hexa-, hepta- et octa-peptides de ces composés qui conservent leur séquence C-terminale ou N-terminale, à l'exception du nonapeptide PyroGlu-Ala-Lys-Ser-Gln-Gly-Gly-Ser-Asn non modifié. L'invention concerne également les procédés de synthèse de ces composés y compris du nonapeptide PyroGlu-Ala-Lys-Ser Gln-Gly-Gly-Ser-Asn non modifié. L'expression "acide aminé modifié" entend signifier que l'acide aminé considéré est remplacé par son antipode optique ou par un autre acide aminé ou bien est protégé par un groupe de protection temporaire utilisé dans la synthèse des peptides selon l'invention. En tant qu'acides aminés de remplacement pour les acides aminés modifiés, on peut citer, à titre d'exemples non limitatifs Ala, Cyano-Ala, Asn, Thio-Asn, Asp, D-Lys, Orn, Lys (N6acétyl), Glu, D-Gln, Glu(X-cyano), Glu(s-CS-NH), les radicaux 2-aminohexanoyle, 2, 6-diamino-hexynoyle et 2,6-diamino-hexenoyle, D-Ser, N-méthyl-Ser, Thr, Sar. En tant que groupes de protection temporaire ou de groupements d'activation des carboxyles des acides aminés, on peut citer à titre d'exemples non limitatifs : Z, BOC, Mbh, But, OBut, OTcp, ONp et OSu, dont les abréviations seront explicitées plus loin. L'expression séquence N-terminale" entend désigner toute séquence partielle de la séquence Glx-Ala-Lys-Ser-Gln-Gly Gly-Ser-Asn dont le premier résidu d'acide aminé est "Glx" et ltexpression "séquence C-terminalen entend désigner toute séquence partielle de la séquence Glx-Ala-Lys-Ser-Gln-Gly-Gly-Ser-Asn dont le dernier résidu d'acide aminé est "Asn". On peut donc définir les composés de l'invention comme étant les composés polypeptidiques de séquence X-Gln-Gly-Gly-Y dans laquelle Y représente -Ser-Asn et X représente Ser-, Lys-Ser-, Ala-Lys-Ser-, Glx-Ala-Lys-Ser- ; et lorsque X représente Glx-Ala-Lys-Ser-, Y peut représenter en outre -Ser ainsi que leurs dérivés comportant 1 ou 2 acides aminés modifiés, à l'exception du composé PyroGlu-Ala-Lys-Ser-Gln-Gly-Gly-Ser-Asn non modifié. Les abréviations présentement utilisées pour les acides aminés de meme que pour les groupements de protection temporaire des fonctions réactives et les réactifs et solvants utilisés pour la synthèse des peptides de l'invention sont les suivantes Pour les acides aminés PyroGlu = acide-L-pyroglutamique, Ala = L-alanine, D-Ala = D-alanine, Lys = L-lysine, Ser = L-serine, Gln = L-glutamine, Asn = L-asparagine, Asp = acide L-aspartique, Glu = acide L-glutamique, Orn = L-ornithine, Thr = L-Thréonine, Sar = L-Sarcosine Pour les groupements de Protection temporaire des fonctions réactives :: Z = benzyloxycarbonyle, BOC = ter-butyloxycarbonyle, Mbh = 4,4'-diméthoxybenzhydrvle, But = ter-butyle, OMe = méthylester, OBut = ter-butylester, OTcp = 2,4,5-tri-chlorophénylester, ONp = 4-nitrophénylester, OSu = N-hydroxysuccinimide ester. Réactifs et solvants : NMM = N-méthylmorpholine, DCH, = Dicyclo-hexylamine, DMF = diméthylformamide, THE = tétrahydrofuranne, AcOEt = acétate d'éthyle, MeOH = méthanol, ButOH = n-butanol. Les peptides contenant de 6 à 8 résidus d'acides aminés (hexa-, hepta- ou octa-peptides), dont la séquence en acides aminés correspond à la séquence C-terminale ou N-terminale de l'hormone polypeptide naturelle de structure (I), synthétisés selon l'invention sont les suivants. l1hexapeptide : Ser-Gln-Gly-Gly-Ser-Asn (36) l'heptapeptide : Lys-Ser-Gln-Gly-Gly-Ser-Asn (37) les octapeptides : Ala-Lys-Ser-Gln-Gly-Gly-Ser-Asn (38) PyroGlu-Ala-Lys-Ser-Gln-Gly-Gly- Ser (42) A titre d'exemples de peptides qui ont été synthétisés en modifiant partiellement la structure de l'hormone polypeptidique naturelle par remplacement d'un ou de deux acides aminés de configuration L soit par son antipode optique de configuration D soit par un autre acide aminé de structure plus ou moins analogue, soit par le mee acide aminé protégé par un groupe de protection temporaire dans la fonction de sa channe latérale, on peut citer les suivants, dans lesquels l'acide aminé modifié est souligné : : PyroGlu-D-Ala-Lys-Ser-Gln-Gly-Gly-Ser-Asn (47) D-Ala-Lys-Ser-Gln-Gly-Gly-Ser-Asn (45) PyroGlu-Ala-Lys-Ser-Gln-Gly-Gly-Ser-Asp (53) PyroGlu-Ala-Lys-Ser-Gln-Gly-Gly-Ala-Asn (59) PyroGlu-Ala-Lys-Ala-Gln-Gly-Gly-Ser-Asn (60) Z Gln-Ala-Lys-Ser-Gln-Gly-Gly-Ser-Asn (34) Pyro Glu-Ala- ( -Ser-Gln-Gly -Gly-Ser-Asn (61) PyroGlu-Ala-Lys(N acétYl)-Ser-Gln-Gly-Gly-Ser-Asn (62) PyroGlu-Ala-Orn-Ser-Gln-Gly-Gly-Ser-Asn (63) PyroGlu-Ala-Lys-(N-méthyl)Ser-Gln-Gly-Gly-Ser-Asn (64) PyroGlu-Ala-Lys-Ala-Gln-Gly-Gly-Ser-Asn (65) PyroGlu-Ala-Lys-D-Ser-Gln-Gly-Gly-Ser-Asn (66) PyroGlu-Ala-Lys-Thr-Gln-Gly-Gly-Ser-Asn (67) PyroGlu-Ala-Lys-Ser-Glu-Gly-Gly-Ser-Asn (68) PyroGlu-Ala-Lys-Ser-Glu(-cyano)-Gly-Gly-Ser-Asn (69) PyroGlu-Ala-Lys-Ser-Glu(Y CS-NH2l-Gly-Gly-Ser-Asn(70) PyroGlu-Ala-Lys-Ser-D-Gln-Gly-Gly- Ser-Asn (71) PyroGlu-Ala-Lys-Ser-Gln-Ala-Gly-Ser-Asn (72) PyroGlu-Ala-Lys-Ser-Gln-Gly-Ala-Ser-Asn (73) PyroGlu-Ala-Lys-Ser-Gln-Ala-Ala-Ser-Asn (74) PyroGlu-Ala-Lys-Ser-Gln-Sar- Sar-Ser-Asn (75) PyroGlu-Ala- (2-amino-hexanovl > -Ser-Gln-Gly-Gly- Ser-Asn (76) PyroGlu-Ala- (2. 6-diamino-hexvnovl ) -Ser-Gln-Gly-Gly- Ser-Asn (77) PyroGlu-Ala-(2 . 6-diamino-hexenovl)-Ser-Gln-Gly-Gly-Ser-Asn (78) PyroGlu-Ala-Lys-Ser-Gln-Gly-Gly Ser-Gln (79) PyroGlu-Ala-Lys-Ser-Gln-Gly-Gly Ser-CyanoAla (80) PyroGlu-Ala-Lys-Ser-Gln-Gly-Giy-Ser-ThioAsn (81) SYNTHESE DU FACTEUR THYMIQUE (FTS) ET DE SE3 DERIVES La synthèse des deux formes du FTS PyroGlu-Ala-Lys-Ser-Gln-Gly-Gly-Ser-Asn (I) Gln-Ala-Lys-Ser-Gln-Gly-Gly-Ser-Asn (II) est effectuée selon l'invention par deux voies différentes. Dans la première voie on utilise un dérivé de la glutamine protégée sur sa fonction-amide par le groupe 4,4'-diméthoxybenzyhydryle (Mbh), alors que dans la seconde voie la synthese est effectuée sans la protection du groupement f-amide des résidus glutamine. Dans la première et la seconde voies, le dipeptide C-terminal protégé est couplé respectivement au tétrapeptide Ser-Gln-Gly-Gly protégé et à l'hexapeptide Ala-Lys-Ser-Gln-Gly Gly protégé. Ainsi, la préparation des polypeptides de séquence X-Gln-Gly-Gly-Y où Y représente -Ser-Asn et X représente Ser- ou Ala-Lys-Serest effectuée par couplage du dipeptide Ser-Asn protégé avec le peptide X-Gln-Gly-Gly protégé et par élimination éventuelle subséquente des groupements protecteurs. Dans la seconde voie, on obtient ainsi l'octapeptide Ala-Lys-Ser-Gln-Gly-Gly-Ser-Asn alors que dans la première voie, ce meme octapeptide est préparé à partir de l'hexapeptide Ser-Gln-Gly-Gly-Ser-Asn en passant par l'heptapeptide Lys-Ser Gln-Gly-Gl-y-Ser-Asn. L'octapeptide Ala-Lys-Ser-Gln-Gly-Gly-Ser-Asn permet alors de préparer les deux formes du FTS par couplage du premier résidu PyroGlu ou Gln. Le procédé utilisé pour le couplage du résidu PyroGlu sur la séquence Ala-Lys-Ser-Gln-Gly-Gly-Y est le même pour les différentes significations possibles de Y à savoir -Ser, et -Ser-Asn, et les significations possibles qui en dérivent par modification d'un acide aminé, par exemple pour -Ser-Asp, -Ala-Asn. Ce couplage est réalisé de façon avantageuse au moyen du dérivé PyroGlu- OTcp sur la séquence Ala-Lys-Ser-Gln-Gly-Gly-Y dans laquelle certains acides aminés sont éventuellement protégés dans leur fonction de la chaste latérale. Description des étapes de la synthèse du FTS par la 1ère voie A1) Synthèse du dipeptide C-terminal protégé : Z-Ser(But) Asn-OBut (1), par couplage du Z-Ser(But) (obtenu chez Fluka, Buchs sous forme de sel de DCHA) et du Asn-OBut (préparé selon E.Schnabel et H. Schussler, Liebigs Ann, Chern, 1965, 686, p. 229), transformé par la suite en acétate de Ser(ButAsn-OBut (2) par élimination sélective du groupement de protection temporaire. B1) Synthèse du dipeptide Z-Gly-Gly-OMe (3), transformé par la suite en acétate de Gly-Gly-OMe (4) par élimination du groupement Z. C1) ) Synthèse du dérivé tripeptidique : Z-Gln(Mbh)-Gly-Gly-OMe (5) par couplage du dérivé Z-Gln(Mbh), (obtenu selon W.K6ning et R.Geiger, Chem. Ber, 1970, 103, p. 2041.) avec le dérivé Gly-Gly OMe (4) précédemment obtenu, et transformation du dérivé tripeptidique (5) en son acétate (6). D1) Synthèse du dérivé tétrapeptidique : Z-Ser(But)-Gln(1bh) -Gly-Gly-OMe (7) par couplage du dérivé Z-Ser(But) (obtenu sous forme de Z-Ser(But)-DCHA chez Fluka, Buchs), avec le dérivé tripeptidique (6). E1) Préparation du dérivé Z-Ser(But)-Gln(Mbh)-Gly-Gly-OH (8) par saponification du dérivé (7). F1) Synthèse du dérivé hexapeptidique Z-Ser(But)-Gln(Mbh)-Gly-Gly-Ser(But)-Asn-OBut (9) par couplage du dérivé dipeptidique C-terminal (2) et du dérivé tétrapeptidique (8). Transformation du dérivé hexapeptidique (9) en son acétate (10) par élimination sélective du groupement Z. G1) Synthèse du dérivé heptapeptidique Z-Lys(BOC)-Ser(But)-Gln(Mbh)-Gly-Gly-Ser(But)- Asn-OBut (11) par couplage du dérivé Z-Lys(BOC) (obtenu sous forme de Z-Lys(BOC) DCHA, chez Fluka, Buchs), et du dérivé hexapeptidique (10). Transformation du dérivé heptapeptidique (11) en son acétate (12) par élimination sélective du groupement Z. H1) Synthèse du dérivé octapeptidique : Z-Ala-Lys(BOC)-Ser(But)-Gln(Mbh)-Gly-Gly-Ser(But)-Asn-OBut (13) par couplage du dérivé Z-Ala et du dérivé heptapeptidique (12). Transformation du dérivé octapeptidique (13) en son acétate (14) par élimination du groupe Z. I1) Synthèse du dérivé nonapeptidique PyroGlu-Ala-Lys (BOC)-Ser(But)-Gln(Mbh)-Gly-Gly-Ser(But) Asn-OBut (15) par couplage du dérivé PyroGlu-OTcp (préparé selon J.C. Anderson, M.A. Barton, D.M. Hardy, G.W. Kenner, J. Preston et R.C. Scheppard, J. Chem. Soc. C. 1967, p. 108), et du dérivé octapeptidique (14). J1) Obtention du nonapeptide libre : PyroGlu-Ala-Lys-Ser-Gln-Gls-Gly-Ser-Asn (16) par élimination de tous les groupes de protection temporaire en une seule étape. Le nonapeptide libre ainsi obtenu correspond à la structure (I) du F.T.S. K1) Synthèse du dérivé nonapeptidique z-Gln(Mbh)-Ala-Lys(BoC)-ser(But)-Gln(Mbh)-Gly-Gly-Ser(But)- Asn-OBut (17) par couplage du dérivé Z-Gln(Mbh) (obtenu selon W. Köning et R. Geiger, Chem. Ber, 1970, p. 2041), et celui du dérivé octapeptidique (14) précédemment obtenu (voir paragraphe H1). L1) Obtention du nonapeptide libre Gln-Ala-Lys-Ser-Gln-Gly-Gly-Ser-Asn (i 8) par élimination, en premier de tous les groupements de protection temporaire des fonctions de la channe latérale des acides aminés et celui du carboxyle C-terminal, puis du groupement Z de la fonction amine N-terminale. Le nonapeptide libre (18) correspond à la structure (II) du F.T.S. Description des étapes de la synthèse du FTS par la seconde voie A2) Synthèse du dérivé tripeptidique : BOC-Gln-Gly-Gly-OMe (19) par couplage du dérivé BOC-Gln-OMp (obtenu chez Serva, Heidelberg) et du dérivé Gly-Gly-OMe (4) précédemment obtenu (voir paragraphe B1). Transformation du dérivé (19) en son trifluoroacétate (20) par élimination du groupe BOC. B2) Synthèse du dérivé tétrapeptidique : Z-Ser(But)-Gln-Gly-Gly-OMe (21) par couplage du dérivé Z-Ser(But) et du dérivé (20) Gln-Gly-Gly OMe. Transformation du dérivé tétrapeptidique (21) en son acétate (22) par élimination du groupe Z. C2) Synthèse du dérivé pentapeptidique : Z-Lys(BOC)-Ser(But)-Gln-Gly-Gly-OMe (23) par couplage du dérivé Z-Lys(BOC) et du dérivé tétrapeptidique (22). Transformation du dérivé (23) en son acétate (24). D2) Synthèse du dérivé hexapeptidique Z-Ala-Lys(BOC)-Ser(But)-Gln-Gly-Gly-OMe (25) par couplage du dérivé Z-Ala et du dérivé pentapeptidique (24). E2) Préparation du dérivé : Z-Ala-Lys (BOC)-Ser(But)-Gln-Gly-Gly-NHNH2 (26) par hydrazinolyse de l'ester méthylique du dérivé précédent (25). F2) Synthèse du dérivé octapeptidique Z-Ala-Lys (BOC) -Ser(But) -Gln-Gly-Gly-Ser(But)-Asn-OBut (27) par couplage de 1 'azide L'avide Z-Ala-T-ys(BOC)-Ser(But)-Gln-Gly-Gly-N3, obtenu à partir du dérivé (26) et du dérivé (26) et du dérivé Ser(But)-Asn-OBut (2) (voir-paragraphe A1). Transformation du dérivé octapeptidique (27) en son acétate (28) par élimination du groupement Z. G2) Synthèse du dérivé nonapeptidique : PyroGlu-Ala-Lys (B0C)-Ser(But ) -Gln-Gly-Gly-Ser(But) -Asn-OBut (29) par couplage du dérivé PyroGlu O Tcp. (préparé selon J.C. Anderson, M.A. Barton, O.M. Hardy, G.W. Kenner, J. Preston et R.C. Sheppard, J. Chem. Soc, C. 1967 p. 108), et du dérivé octapeptidique (28). H2) Obtention du nonapeptide libre : PvroGlu-Ala-Lys-Ser-Gln-Gly-Gly-Ser-Asn (30) par élimination en une seule étape des groupements de protection temporaire. Le nonapeptide libre (30) ainsi obtenu est identique au nonapeptide (16) précédemment obtenu selon la 1ère voie (voir paragraphe J1) et correspond à la structure (I) du F.T.S. 12) Synthèse du dérivé nonapeptidique BOC-Gln-Ala-Lys(BOC)-Ser(But)-Gln-Gly-Gly-Ser(But)-Asn-OBut (31) par couplage du dérivé BOC-Gln ONp (obtenu chez Serva, Heidelberg) et du dérivé octapeptidique (27) (voir paragraphe F2). J2) Obtention du nonapeptide libre : Gln-Ala-T.ys-Ser-Gln-Gly-Glv-Ser-Asn (32) par élimination en une seule étape des groupements de protection temporaire. Le nonapeptide ainsi obtenu est identique au nonapeptide (18) préparé précédemment selon la 1ère voie (voir paragraphe L1) et correspond à la structure (II) du F.T.S. K2) Synthèse du dérivé nonapeptidique Z-Gln-Ala-Lys(BOC)-ser(But)- & n-Gly-Gly-Ser(But)-Asn OBut (33) par couplage du dérivé Z-Gln OSu (préparé selon J. Beacham, J. Dupuis, G. Finn, F.M. Storey, H.T. Yanaihara, C. Yanaihara et K. Hofmann, J Amer. Chem. Soc. 1971, i5, p. 5526) et du dérivé octapeptidique (28) (voir paragraphe F2). L2) Obtention du dérivé nonapeptidique Z-Gln-Ala-Lys-Ser-Gln-Glv-Glv-Ser-Asn (34) par élimination des groupements de protection temporaire des fonctions de la chaine latérale des acides aminés et celui du carboxyle C-terminal du dérivé (33). M2) Obtention du nonapeptide libre : Gln-Ala-Lys-Ser-Gln-Gly-Gly-Ser-Asn (35) par élimination de tous les groupements de protection temporaire du dérivé nonapeptidique (33). Ce nonapeptide est identique au nonapeptide (18) obtenu par la 1ère voie (voir paragraphe L1). Description des étapes de la synthèse des fragments pePtidiques du FTS et des analogues de structure" de ce facteur A3) Obtention de lthexapeptide libre : Ser-Gln-Gly-Glv-Ser-Âsn (36) par élimination des groupements de protection temporaire du dérivé hexapeptidique Z-Ser(But) -Gln(Nbh) -Gly-Gly-Ser(But)-Asn-0But (9) synthétisé selon la 1ère voie (voir paragraphe F1). B3) Obtention de l'heptapeptide libre Lys-Ser-Gln-Gly-Gly-Ser-Asn (37) par élimination des groupements de protection temporaire du dérivé heptapeptidique Z-Lys(BOC)-Ser(But)-Gln(Mbh)-Gly-Gly-Ser(But)-Asn-OBut (i i) synthétisé selon la 1ère voie (voir paragraphe G1). C3) Obtention de l'octapeptide libre : Ala-Lys-Ser-Gln-Gly-Gly-Ser-Asn (38) par élimination des groupements de protection temporaire des dérivés octapeptidiques correspondants (13) et (27) synthétisés respectivement selon la 1ère voie et la 2ème voie (voir paragraphes H1 et F2). Ce mdme octapeptide libre a été obtenu par l'action de l'enzyme pyroglutamyl-aminopeptidase (obtenu chez Boehringer Mannheim) sur le nonapeptide synthétique Pyro -Glu-Ala-Lys-Ser-GIn-Gly-Gly-Ser-A sn et séparation des produits d'hydrolyse enzymatique par rhéophorèse préparative sur papier. D3) Synthèse du dérivé heptapeptidique : Z-Ala-Lys(BOC)-Ser(But)-Gln-Gly-Gly-Ser(But)-OBut (39) par couplage du dérivé azide de l'hexapeptide Z-Ala-Lys(BOC) Ser(But)-Gln-Gly-Gly-NHNH2 (26) obtenu selon la 2ème voie (voir paragraphe E2) et du dérivé : Ser(But)-OBut (préparé selon E.Schroeder, Liebigs. Ann. Chem. 1963, 127 p. 670). Transformation du dérivé heptapeptidique (39) en son acétate (40) par élimination du groupe Z. E3) Synthèse du dérivé octapeptidique PyroGlu-Ala-Lys(BOC)-Ser(But)-Gln-Gly-Gly-Ser(But)-OBut (41) par couplage du Pyro Glu OTcp. (voir paragraphe li) et du dérivé heptapeptidique (40). F3) Obtention de l'octapeptide libre : PyroGlu-Ala-Lys-Ser-Gln-Gly-Gly-Ser (42) par élimination des groupements de protection temporaire du dérivé octapeptidique (41) G3 > Synthèse du dérivé octapeptidique : Z-D-Ala-Lys(BOC)-Ser(But)-Gln(Mbh)-Gly-Gly-Ser(But) Asn-OBut (43) par couplage du dérivé Z-D-Ala (préparé selon M. Bergmann et L. Zervas, Ber. 1932, 65 p. 1192) et du dérivé heptapeptidique Lys(BOC)-Ser(But)-Gln(Mbh)-Gly-Gly-Ser(But)-Asn-OBut (12) préparé selon la 1ère voie (voir paragraphe G1). Transformation du dérivé octapeptidique (43) en son acétate (44) par élimination du groupe Z. H3) Obtention de l'octapeptide libre D-Ala-Lys-Ser-Gln-Gly-Gly-Ser-Asn (45) par élimination des groupes de protection temporaire du dérivé octapeptidique (43) 13) Synthèse du dérivé nonapeptidique : PyroGlu-D-Ala-Lys(BQC)-Ser(But)-Gln(Mbh)-Gly-Gly-Ser(But)- Asn-OBut (46) par couplage du dérivé PyroGlu-OTcp (voir paragraphe li) et du dérivé octapeptidique D-Ala-Lys(BOC)-Ser(But) Gln(Mbh)-Gly-Gly-Ser(But)-Asn-OBut (43) obtenu précédemment. J3) Obtention du nonapeptide libre PyroGlu-D-Ala-Lys-Ser-Gln-Gly-Gly-Ser-Asn (47) par élimination des groupements de protection temporaire. K3) Synthèse du dérivé dipeptidique : Z-Ser(But)-Asp-(OBut) OBut (48) obtenu par couplage du Z-Ser(But) (obtenu chez Fluka, Buchs) et du Asp-di(OBut) (obtenu chez Fluka sous forme de sel de dibenzolsulfimide). Transformation du dérivé dipeptidique (48) en son acétate (49) par élimination du groupe Z. L3) Synthèse du dérivé octapeptidique Z-Ala-Lys(BOC)-Ser(But)-Gln-Gly-Gly-Ser(But)-Asp-di(OBut) (50) obtenu par couplage de l'azide de l'hexapeptide hydrazide (26) (voir paragraphe E2), et du dérivé dipeptidique (49) obtenu précédemment. Transformation du dérivé octapeptidique (50) en son acétate (51) par élimination du groupe Z. M3) Synthèse du dérivé nonapeptidique Pyro-Glu-Ala-Lys (BOC) -Ser(But) -Gln-Gly-Gly-Ser( But)-Asp-di(0But) (52), obtenu par couplage du dérivé Pyro-Glu-OTcp (voir paragraphe I1) et du dérivé octapeptidique (51) préparé précédemment. N3) Obtention du nonapeptide libre : Pyro-Glu-Ala-Lys-Ser-Gln-Giy-Gly-Ser-As (53) par élimination des groupements de protection temporaire. 03) Synthèse du dérivé dipeptidique : Z-Ala-Asn-OBut (54) par couplage du dérivé Z-Ala(préparé selon M. Bergmann et L. Zervas, Ber. 1932, 65 p. 1192), et du dérivé Asn-OBut (voir paragraphe A1). Transformation du dérivé dipeptidique (54) en son acétate (55) par élimination du groupe Z. P3) Synthèse du dérivé octapeptidique Z-Àla-Lys (BOC)-Ser(But) -Gln-Gly-Gly-Ala-Asn-OBut (56) par couplage de l'azide du dérivé hexapeptidique Z-Ala-Lys(BOC) Ser(But)-Gln-Gly-Gly-NHNH2 (26) (voir paragraphe E2) et du dérivé dipeptidique (55) préparé précédemment. Transformation du dérivé octapeptidique (56) en son acétate (57) par élimination du groupe Z. Q3) Synthèse du dérivé nonapeptidique Pyro-Glu-Ala-Lys(BOC)-Ser(But)-Gln-Gly-Gly-Ala-Asn-OBut (58) obtenu par couplage du dérivé Pyro-Glu OTcp (voir paragraphe li) et du dérivé (57) préparé précédemment. R3) Obtention du nonapeptide libre Pyro-Glu-Ala-Lvs-Gln-Glv-Gly-Ala-Asn (59) par élimination des groupements de protection temporaire du dérivé nonapeptidique (58). La synthèse des composés peptidiques de l'invention sera mieux comprise à l'aide des exemples suivants donnés à titre purement illustratif et nullement limitatif des moyens de mise en oeuvre de l'invention. Dans ces exemples, l'abréviation CCM désigne la chromatographie sur couche mince et les abréviations utilisées pour les mélanges de solvants sont les suivantes : A : Acétate d'éthyle/Méthanol 5 : 1 (v/v) B : Acétonitrile/Benzène 1 : 1 (v/v) C : n-Butanol/Acide acétique/Eau 3 : 1 : 1 (v/v/v) D : n-Butanol/Pyridine/Acide acétique/H20 60 : 40 : 12 : 48 (v/v/v) E : n-Butanol saturé d'eau F : chloroforme/Méthanol 10 : 1 (v/v) G : Méthanol/Chloroforme/NH40H concentré 2 : 2 : 1 (v/v/v) M : Acétate d'ammonium N/Ethanol 3 : 7 (v/v) I : Chloroforme/Méthanol 3 : 1 (v/v) J :Acétate d'éthyle/Méthanol 2 : 1 (v/v) EXEMPLE 1 Prénaration du nonapeptide PyroGlu-Ala-Lys-Ser-Gln-Gly-Gly-Ser-Asn Etape a) Préparation de l'acétate de Gly-GlY.ONe (4) A 20,92 g de Z.Gly OH, produit commercial vendu par la société FLUKA en solution dans 50 ml de DMF, on ajoute 14 ml de triéthylamine en refroidissant à -200C et par la suite 9,54 ml de chlorocarbonate d'éthyle, vendu par la société FLUKA. On laisse le mélange sous agitation pendant une nuit à température ambiante. On filtre la partie insoluble et on évapore le solvant sous le vide de la pompe à palettes. On extrait le résidu par 100 ml d'acétate d'éthyle et on lave la solution successivement par 20 ml de solution N de KHS04, par 20 ml d'eau, par 20 ml de solution de KHCO3 et par 2 x 20 ml d'eau. Après séchage sur NgS04, on évapore le solvant sous vide de la trompe à eau. On cristallise le produit obtenu dans le mélange AcOEt/éther de pétrole entre chaud et froid. On obtient ainsi 22,4 g de Z.Gly-Gly.OMe (3) (Rdt 80 %) F = 67-680C. Par chromatographie sur couche mince de gel de silice dans le mélange de solvants J, le produit est homogène et il est utilisé directement pour l'étape suivante. A 8,9 g du Z.Gly-Gly.OMe (3) ainsi obtenu, en solution dans 400 ml de méthanol contenant 8 ml d'acide acétique, 8 ml d'eau et 0,9 g de Pd/C à 5 *, on passe un courant d'hydrogène pendant 4 heures. On filtre sur Celite et verre fritté le catalyseur et on évapore les solvants sous le vide de la trompe à eau. On reprend le résidu alternativement par du benzène et du méthanol et à la fin par de l'éther. Par trituration du résidu dans l'éther après évaporation des solvants, le produit se solidifie. Par recristallisation dans le mélange méthanol/éther, on obtient 5,6 g d'acétate de Gly-Gly.OMe (4) sous forme d'aiguilles (Rdt 85 %) F = 95-98Oc. Par chromatographie sur couche mince de gel de silice dans le mélange de solvants C, le produit est homogène. Etape b) PréParation de l'acétate de Gln(Mbh)-Gly-Gly.OMe (6) A 7,4 g de Z.Gln(Mbh) préparé selon le procédé décrit par W. Koning et R. Geiger, Chem. Ber. 103, (1970), 20417 en solution dans 100 ml de DMF refroidi à -200C, on ajoute 1,7 ml de NMM et 1,4 ml de chlorocarbonate d'éthyle (vendu par la société FLUKA). Après 5 min. on ajoute 3,29 g d'acétate de Gly-Gly.OHe (4) dissous dans 100 ml de DMF contenant 2 ml de NMM. Après 1/2 heure à froid on laisse revenir à la température ambiante pendant une nuit. On évapore le solvant sous le vide de la pompe à palettes jusqu'à 50 ml et on filtre.En ajoutant lentement de l'eau dans le filtrat et en agitant on obtient la précipitation du tripeptide Z.Gln (Mbh)-Gly-Gly.OMe (5) sous forme de poudre blanche. On filtre et on lave le précipité par 2 x 100 ml de solution N de KHCO3, par 2 x 100 ml d'eau, par 2 x 100 ml de KHSO4, par 2 x 100 mi d'eau, puis par 2 x 100 ml d'acétate d'éthyle et par de l'éther. Après séchage au dessicateur, on obtient 8,6 g de Z.Gln(Mbh)-Gly-Gly.ONe(5) (Rdt 90 %).Très peu de produit est dissous dans i'ÂcOEt. Recristallisation dans le mélange DMF/H20, F = 189-1910C, r7D = + 1,85 (C = 1, DMF). Produit homogène en chromatographie sur couche mince de gel de silice dans les mélanges A et B. Le produit est utilisé directement pour l'étape suivante. A 8,3 g du Z.Gln(Mbh)-Gly-Gly.OMe (5) ainsi obtenu, en solution dans 500 ml de méthanol chaud contenant 5 mi de CH3COOH, 5 ml d'eau et 1 g de Pd/C à 5 %, on passe un courant d'hydrogène jusqu'à ce que l'on n1 ait plus de produit de départ (révélé par chromatographie sur couche mince), ce qui demande d'environ 6 heures d'hydrogénolyse. On filtre sur Celite et verre fritté le catalyseur et on rince par MeOH. On évapore le filtrat sous le vide de la trompe à eau et on reprend pluseurs fois par MeOH que l'on évapore par la suite. Lorsque le produit est bien sec, on le fait dissoudre dans 50 ml de méthanol et on le précipite par l'éther.On obtient l'acétate de Gln(Mbh)- Gly-Gly*OMe (6) avec un rendement de 90 * sous la forme de poudre blanche. Le produit est utilisé directement pour l'étape suivante. Etape c > Préxaration du Z.Ser(But)-Gln(Mbh)-Gly-Gly.OH (8) A 2,95 g de Z.Ser(But) (produit vendu par la société FLUKA), en solution dans 100 ml de DMF contenant 1,1 ml de NMM et 1 ml de chlorocarbonate d'éthyle (vendu par la société FLUKA), on ajoute après refroidissement 5,6 g d'acétate de Gln(Mbh) Gly-Gly.OMe (6) en solution dans 50 ml de DMF contenant 1,2 ml de NMM. La suite des opérations est identique à celle employée précédemment pour isoler le tripeptide Z.Gln(Mbh)-Gly-Gly.OMe. On obtient 6,5 g de Z.Ser(But)-Gln(Mbh)-Gly-Gly,OMe (7) (Rdt 85 %) F = 199-202 C, déc. j 2D = + 3,20 (C = i, DMF). Le produit est homogène par chromatographie, dans les mélanges A et B, et il est utilisé directement pour l'étape suivante. A 5 g de Z.Ser(But)-Gln(Mbh)-Gly-Gly.OMe (8) ainsi obtenu, en solution dans 350 ml de MeOH à 90 % agitée vigoureusement, on ajoute 10 ml de solution N de NaOH. La solution trouble s'éclaircit graduellement. La saponification est terminée après 2 heures. On ajoute 1 000 ml d'eau et on acidifie par CH3COOH. On obtient un précipité solvaté après avoir laissé 2 heures à froid. On filtre le précipité et on le rince à lteau. On met en suspension le produit dans 300 ml d'AcOEt et on filtre. On rince plusieurs fois à l'éther, on obtient un premier précipité de 3,4 g de Z.Ser(But)-Gln(Mbh)-Gly-Gly.OH (8). Après avoir concentré le filtrait, on obtient un second précipité de 0,8 g. Les deux fractions sont identiques. (Rdt 85 %). Recristallisation dans le mélange MeOH/éther (produit solvaté). F = 170-1720C, jo7D = + 2,60 (o = 1, DMF). Produit homogène par chromatographie dans les mélanges C et D. Etape d) PréParation du Z.Ser(But)-Gln(Mbh)- Gly-Gly-Ser(But)-Asn.OBut (9) 1. Préparation du frament dipeptidique ~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~ Ser(But) Asn OBut (2) (2) A 2,95 g de 2.Ser(But) commercial, vendu par la société FLUTA, en solution dans 50 ml de THF et refroidi à -15 C ou -200C, on ajoute 1 ml de chlorocarbonate d'éthyle et 1,1 ml de NMM, vendus par la société FLUXA. Après 15 min. on ajoute 2,6 g d'acétate de Asn.OBut [préparé selon le procédé décrit par E. Schnabel et H. Schussler, Liebigs Ann. Chem. 685 (1965), 2297 en solution dans 50 ml de THF contenant 2 ml de NMM. Après 1/2 heure à froid, on laisse 16 heures à la température ambiante. On évapore le solvant à l'aide d'un évaporateur rotatif sous le vide de la trompe à eau. On extrait le résidu par 100 ml d'AcOEt et on lave la solution organique successivement par 20 ml de solution N de KHS04, par 20 ml d'eau, par 20 ml de solution N de KHCOD et par 2 x 20 ml d'eau. Après séchage sur MgS04, on évapore le solvant à l'aide d'un évaporateur rotatif sous le vide de la trompe à eau. On obtient une huile incolore qui se solidifie par trituration avec de l'éther de pétrole. On obtient ainsi 4,2 g de dipeptide protégé Z.Ser(But)-Asn.OBut (1). Après recristallisation dans le mélange AcOEt/éther de pétrole, les constantes physiques de ce produit sont : F = 117-119 C, S%JD = + 2,0 (C = 1, DMF). Par chromatographie sur couche'mince de gel de silice dans les mélanges des solvants A et 3, ce produit est homogène. A 4 g du Z.Ser(But)- Asn.OBut, ainsi obtenu, en solution dans 60 ml de MeOH, on ajoute 2 ml d'eau, 2 ml de CH3COOH et 0,4 g de Pd/C a 5 %. On hydrogénolyse jusqu'à la disparition du produit initial (environ 4 heures).On filtre et on concentre à ltévaporateur rotatif, on reprend plusieurs fois par du méthanol et on concentre jusqu'à l'obtention d'un produit sec. On déssèche au dessicateur. Rendement quantitatif de l'acétate de Ser(But)-Asn.OBut (2). Par chromatographie sur couche mince de gel de silice dans les mélanges des solvants C et E le produit obtenu est homogène et il est utilisé directement pour la synthèse de l'hexapeptide Ser-Gln-Gly-Gly-Ser-Asn. 2. Préparation du fragment hexapeptidique (9) A 1,68 g du Z,Ser(But)-Gln(Mbh)-Gly-Gly,OH (8) préparé à l'étape c) en solution dans 20 ml de DMF contenant 0,25 ml de NMM et 0,28 ml de chlorocarbonate d'isobutyle (vendu par FLUKA) on ajoute après refroidissement pendant 5 min. 0,98 g d'acétate de Ser(But)-Asn.OBut (2) dont la préparation est décrite ci-dessus (étape d) 1), en solution dans 10 mi de DMF contenant 0,5 ml de NMM. Les opérations qui suivent sont identiques à celles décrites pour la préparation du tripeptide Z.Gln(Mbh)-Gly- Gly.OMe (5). On obtient 2,07 g de Z.Ser(But)-Gln(Mbh)-Gly Gly-Ser(But)-Asn.OBut (9) (Rdt 87 %). Recristallisation dans DMF/H20. F = 210-2150C, déc. 2D = 3,20 (C = 0,75, DMF). Etape e) Préparation de l'acétate de Ser(But) Gln(Mbh)-Gly-Gly-Ser(But)-Asn.OBut (10) A 1,74 g de l'hexapeptide ester (9) préparé à l'étape d), en solution dans 80 ml de MeOH chaud contenant 1 ml d'eau, 0,8 ml de CH3COOH et 0,25 g de Pd/C à 5 , on passe un courant dthydrogène jusqu'à ce que l'on n'ait plus de produit de départ. Par la suite on opère comme pour le produit (6), Rdt 90 %. Produit homogène dans les solvants C et E, utilisé sans autre purification pour l'étape suivante. Etape f) PréParation de Z.Lys(BOG)-Ser(But)- Gln(Mbh)-Gly-Gly-Ser(But)-Asn.OBut (11) A 0,6 g de Z.Lys(BOC).I)CHA, en solution dans 10 ml de DMP, on ajoute après refroidissement à -200C 0,165 ml de NMM et 0,185 ml de chlorocarbonate d'isobutyle. Par la suite, on ajoute 1,41 g de l'acétate de l'hexapeptide (10) préparé à l'étape e) en solution dans 10 ml de DMF contenant 0,20 ml de NMM et on opère comme précédemment pour le tripeptide (5). Rendement 90 *. Recristallisation dans le mélange MeOH/éther. Produit homogène dans les mélanges C, E et F. F = 208-2110C, déc., D = 3,20 (C = 0,75, DMF). Etape g) Préparation de l'acétate de Lys(BOC)-Ser(But)- Gln(Mbh)-Gly-Gly-Ser(But)-Asn.OBut (12) A 1,21 g de l'heptapeptide ester (ii) préparé à l'étape f) en solution dans 30 ml de MeOH contenant 0,3 ml d'eau , 0,3 ml de CH3COOH et 0,1 g de Pd/C & 5 % on passe un courant d'hydrogène et on procède comme précédemment pour le produit (6). On obtient 1,05 g (Rdt 90 %) de produit sous la forme de poudre blanche utilisé directement pour l'étape suivante. Etape h) Préparation du Z.Ala-Bys(BOC)-Ser(But)- Gln(Mbh)-Gly-Gly-Ser(But)-Asn.OBut (13) A 0,2 g de Z.Ala (de provenance FLUKA) en solution dans 10 ml de DMP, contenant 0,10 ml de NMM et 0,117 ml de chlorocarbonate d'isobutyle, on ajoute 1,16 g de l'acétate de ltheptapeptide (12) préparé à l'étape g) en solution dans 10 ml de D contenant 0,200 ml de NMM et on opère de la même manière que pour le dérivé (5). Par recristallisation dans le mélange DMF/H20 on obtient 0,961 g de produit homogène dans les mélanges des solvants C, E et F. F = 210-215 C, déc., j7D = - 5,4 (C = 0,5, DMF). Etape i) Préparation de l'acétate de Ala-Xys(BOC)- Ser(But)-Gln(Pbh)-Gly-Gly-Ser(but)-Asn.OBut (14) On obtient ce dérivé avec un rendement de 90 % en opérant comme précédemment pour le produit (6). Le produit obtenu, homogène dans les mélanges des solvants C et E, est utilisé directement pour l'étape suivante. Etape j) PréParation du PyroGlu-Ala-Lys(BOC)-Ser(But) Gln(Mbh)-Gly-Glv-Ser(But)-Asn.OBut (15) A 0,162 g de PyroGlu.O2cp (préparé selon le procédé décrit par J.C. Anderson, M.A. Barton, D.M. Hardy, G.W. Kenner, J. Preston et R.C. Sheppard, J. Chem. Soc. Série C. 1967, p. 108), en solution dans 10 ml de DMF et après refroidissement à OOC, on ajoute 0,650 g d'acétate d'octapeptide ester (14), préparé à l'étape i, en solution dans 10 ml de DMF contenant 0,11 ml de NMM. Après 1 heure au bain de glace, on laisse pendant 20 heures à la température ambiante.On évapore le solvant sous le vide de la pompe à palettes jusqu'à la moitié de son volume et on précipite le produit en ajoutant lentement de liteau. Après filtration du précipité, on le lave par 20 ml d'eau, puis par 20 ml d'acétate d'éthyle et par 4 x 20 ml d'éther. On obtient le produit sous forme de poudre blanche avec un rendement de 70 *. Recristallisation dans un mélange DMF/E20, F = 224-2280C déc., D = - 4,80 (C = 1,45, DMF). Produit homogène dans les mélanges C, D et E, utilisé directement pour l'étape suivante. Etane k) Obtention du nonaPentide libre PyroGlu-Ala-Lys-Ser-Gln-Gly-Gly-Ser-Asn (16) 0,10 g de ltoctapeptide ester protégé (14) sont dissous dans 5 ml d'un mélange de l'acide trifluoroacétique/anisole (10:1 v/v). Après 3 heures, on concentre au dessicateur et à la température ambiante en présence de P205 et de KOH. On reprend le résidu par 30 ml d'eau et on extrait la solution aqueuse par 10 ml d'AcOEt puis par 2 x 10 ml d'éther. On obtient le produit par lyophilisation de la phase aqueuse, avec un rendement de 80 à 90 %. Le produit obtenu est homogène dans les mélanges G et H. Après une heure de migration par électrorhéophorèse dans un tampon de pH 2,3 (acide formique 0,1 M) sur papier filtre Whatman n 3 MM et sous tension de 1 000 V (15-30 mA) on révèle une seule tache positive à la ninnydrine à -3,2 cm. Analyse en acides aminés après hydrolyse acide : Asp 1,07 ; Ser 1,95 ; Glu 2 ; Gly 2 ; Ala 0,92. EXEMPLE 2 Préparation du nonapeptide Gln-Ala-Lys-Ser-Gln-Gly-Gly-Ser-Asn (18) Etape a) PréParation du Z.Gln(Mbh)-Ala-Lys(BOC)- Ser(But)-Gln(Mbh)-Glv-Gly-Ser(But)-Asn.OBut (17) A 0,121 g du Z.Gln(Mbh) préparé selon le procédé décrit par W. Koning et R. Geiger, Chem. Ber. 103 (1960), 20417 en solution dans 10 ml de DMF après refroidissement à -200C, on ajoute 0,027 ml de NMM et 0,031 ml de chlorocarbonate d'isobutyle. Par la suite on ajoute à ce mélange 0,270 g de l'acétate d'octapeptide (14) préparé à l'étape i) de l'exemple 1, en solution refroidie de 10 ml de DMF contenant 0,027 ml de NMM. Après 30 min. à froid, on laisse 14 heures à la température ambiante. On évapore le solvant jusqu'à environ 5 ml et on ajoute 50 ml d'eau, lentement, on obtient un précipité fin que l'on filtre et qu'on lave par 2 x 10 ml de solution N de XHCO3, par 2 x 10 ml d'eau, par 2 x 10 ml de solution N de EHS04, par 2 x 10 ml d'eau puis par 20 ml d'AcOEt et par de l'éther. On reprend le produit obtenu par du méthanol à chaud. Le produit qui reste insoluble est le nonapeptide ester protégé. Après filtration et rinçage à l'éther, on obtient 0,200 g (Rdt 50 %) du produit. F = 221-2250C, D = - 5,8 (C = 0,6, DMF). Homogène dans le mélange E. Etape b) Préparation du nonapeptide libre Gln-Ala-Lys-Ser-Gln-Gly-Gly-Ser-Asn (18) 100 mg du nonapeptide ester protégé (17) préparé à l'étape a) sont dissous dans 5 ml du mélange acide trifluoroacétique/anisole (10:1 v/v). Après 3 heures, on concentre le mélange au dessicateur sous vide en présence de P205 et de KOH. On reprend le résidu par 20 ml d'eau et on lave la solution aqueuse par 10 ml d'AcOEt et par 2 x 10 ml d'éther. On concentre la phase aqueuse jusqu'à environ 1 ml. La solution aqueuse du peptide Z.Gln-Ala-Lys-Ser-Gln-Gly-Gly-Ser-Asn donne une tache unique dans les mélanges G et H et, par rhéophorèse dans les mêmes conditions que celles utilisées précédemment pour le produit (16) à l'étape k) de l'exemple 1, on révèle à la ninhydrine une seule tache qui migre à -2,7 cm dans le tampon de pH 2,5. On ajoute à cette solution 10 ml de MeOH, 0,1 ml d'acide acétique et 10 mg de Pd/C à 5 fo et on fait passer un courant d'hydrogène pendant 4 heures. On filtre le catalyseur eb on concentre sous le vide de la trompe à eau. On reprend le reste par 20 ml d'eau et on lave la solution aqueuse par 2 x 10 ml d'éther. Le produit est obtenu par iyophilisation de la phase aqueuse. Il est homogène dans les mélanges G et H et, à la rhéophorèse dans les conditions décrites précédemment, donne une seule tache qui migre à -5,8 cm à pH 2,5. Analyse en acides aminés après hydrolyse acide totale Asp 0,98 ; Ser 1,62 ; Glu 1,95 ; Gly 2,00 ; Ala 1,02. EXEMPLE 3 PréParation de I'hexapeptide libre Ser-Gln-Gly-Gly-Ser-Asn Ce fragment peptidique correspondant à l'hexapeptide C-terminal du facteur thymique du sérum est obtenu à partir du dérivé Z.Ser(But)-Gln(Mbh)-Gly-Gly-Ser(But)-Asn.OBut, préparé à l'étape d) de l'exemple 1, par élimination des groupements de protection temporaire dans des conditions décrites précédemment pour le peptide (16) à l'étape k) de l'exemple 1. Le produit obtenu est homogène dans les mélanges G et H. Analyse en acides aminés après hydrolyse acide totale : Asp 1,02 ; Ser 1,75 ; Glu 1,0 ; Gly 2,00. EXEMPLE 4 PréParation de ltheptapePtide libre Bys-Ser-Gln-Gly-Gly-Ser-Asn Ce fragment peptidique correspond à l'heptapeptide C-terminal du facteur thymique du sérum. Il est obtenu à partir du dérivé Z.Lys(BOC)-Ser(But)-Gln(Mbh)-Gly-Gly-Ser(But)-Asn.OBut (il) préparé à l'étape f) de l'exemple 1, par élimination des groupements de protection temporaire dans les conditions décrites précédemment pour le peptide (16) à l'étape k) de l'exemple 1. Le produit obtenu est homogène dans les solvants G et H et par rhéophorèse dans les conditions décrites pour les produits (16) et (18) donne une seule tache qui migre à -6,25 cm à pH 2,5. Analyse en acides aminés après hydrolyse acide totale Asp 1,04 ; Ser 1,73 ; Glu 1,03 ; Gly 2,00. EXEMPLE 5 PréParation de l'octaPeptide libre Ala-Lys-Ser-Gln-Gly-Gly-Ser-Asn (38) Ce fragment correspond à l'octapeptide C-terminal du facteur thymique du sérum. Il est obtenu comme les fragments précédents à partir du dérivé protégé correspondant (13) obtenu à l'étape h) de l'exemple 1. Le produit ainsi obtenu est homogène dans les mélanges G et H et par rhéophorèse donne une unique tache qui migre à -4,65 cm à pH 2,5, dans les conditions précédemment décrites. Analyse en acides aminés après hydrolyse acide totale Asp 1,0 ; Ser 0,94 ; Glu 1,02 ; Gly 2,00 ; Ala O, 96. Ce même octapeptide libre peut être obtenu également par l'action de ltenzyme pyroglutamyl aminopeptidase, d'origine commerciale, sur le nonapeptide synthétique PyroGlu-Ala-Lys Ser-Gln-Gly-Gly-Ser-Asn et séparation des produits de l'hydrolyse enzymatique par rhéophorèse préparative sur papier Whatman n0 3 MM. EXEMPLE 6 Préparation de l'octaPeptide libre PyroGlu-Ala-Lys-Ser-Gln-Gly-Gly-Ser (42) Ce fragment correspond à 1'octapeptide N-terminal du F.T.S. Il est obtenu par synthèse en suivant les étapes suivantes Etape a) PréParation du dérivé tripentidique 3OC.Gln-Glv-Glv.ONe (19) A 10,96 g de BOC.Gln.ONp commercial vendu par la société SERVA, en solution dans 10 ml de DMF contenant 4,18 ml de triéthylamine, on ajoute 6,15 g d'acétate de Gly-Gly.OMe (4), préparé à étape a) de l'exemple 1. Après agitation du mélange pendant une nuit à température ardinaire, on évapore le DMF sous le vide de la pompe à palettes et on dissout le résidu dans 125 ml d'eau. On lave la solution aqueuse 4 fois par l'éther, puis on sature la solution au NaCl, puis on extrait le produit par 2,5 litres d'acétate d'éthyle au total. On évapore à sec la solution d'acétate d'éthyle et on sèche le résidu au dessicateur sur H2SO4. Après trituration du résidu à 11 éther, on obtient 8,65 g (Rdt 78 ) du BOC.Gln-Gly-Gly.OMe sous forme de poudre hygroscopique utilisée directement pour l'étape suivante. Le produit est homogène par C.C.M. dans le mélange J (MeOH/AcOEt, 1:2). Etape b) Préparation du trifluoracétate de Gln-Gly-Gly.QMe (20) On prépare le dérivé (20) à partir de 8,65 g du dérivé (19) préparé à étape a) par l'action de 125 ml d'acide trifluoroacétique à 95 % à la température ambiante pendant 15 min. et évaporation sous vide de l'acide. Après trituration dans l'éther le produit se solidifie. On recristallise dans le mélange méthanol/acétate d'éthyle. On obtient 7,25 g de produit (Rdt 81 k). Produit homogène par C.C.M. dans le mélange c ButOH/CH3COOH/H20 (3:1:1). F = 165-167 C, [&alpha;]D = + 13,8 (c = 1, MeOH). Etape c) PréParation du dérivé tétrapeptidique Z.Ser(But)-Gln-Gly-Gly.OMe (21) 12,57 g de Z.Ser(3ut)1)OHA (provenance FLUKA) sont désalifiés selon le procédé de Spagenberg et al. (Hoppe Seyler, Zts. Physiol. Chem. 1971, 352, 655). Au résidu obtenu dissous dans 100 ml de EHF, on ajoute 3,7 ml de triéthylamine et après refroidissement de la solution à - 1500 on ajoute 2,3 mi de chlorocarbonate d'éthyle. Après 5 min. on ajoute 8,54 g de trifluoracétate de Gln-Gly-Gly.OMe (20) préparé à l'étape b) et 3,1 ml de triéthylamine dissous préalablemen-t dans un mélange de DMF et de THF. On laisse sous agitation à la température ambiante. Après filtration du chlorhydrate de triéthylamine formé on évapore sons le vide de la trompe à eau le THF, puis on ajoute à la solution qui reste 200 ml de KHCO3, 1 M. Par extraction du mélange par 1 litre de chloroforme, on obtient une solution chloroformique que l'on lave par de l'eau saturée au NaCl, par KHSO4 1 N puis par de l'eau jusqu'à la neutralité. Après évaporation à sec de la solution chloroformique, on sèche le résidu au dessicateur sur H2S04. Par cristallisation du résidu dans le mélange méthanol/éther, le produit est homogène par CCM dans le mélange MeOH 1/AcOEt 2. On obtient 9,1 g de produit (Rdt 75 %). Après recristallisation dans le mélange DMF/éther, F = 163-167 C, r 2D = + 3,40 (C = 1,16, DMF). Etape d) Préparation de l'acétate de Ser(But)-Gln-Gly-Gly.OMe (22) 3,3 g de Z.Ser(But)-Gln-Gly-Gly.OMe (21) préparé à l'étape c) en solution dans 150 ml de MeOH contenant 1,5 ml d'eau et 1,5 ml de CH3COOH sont hydrogénés en présence de Pd/C à 5 % pendant 5 heures. Par la suite on opère comme il est décrit pour le produit (6) à l'étape b) de l'exemple 1. Le produit bien sec est rincé plusieurs fois à l'éther (Rdt. 2,8 g). Produit homogène par CCM dans les mélanges de solvants C et E. Etape e) Préparation du dérivé Z,Lys(BOC)-Ser(But)-Gln-Gly-Gly.OMe (23) A une solution de 1,9 g de Z.Lys(BOC) dans 30 ml de DMF refroidie à - 1500 on ajoute 0,55 ml de NMM et 0,65 ml de chlorocarbonate itisobutyle. Après 5 min. on ajoute une solution froide dans 30 ml de DMP contenant 2,4 g d'acétate de Ser(But)-Gln-Gly-Gly.OMe (22) préparé à l'étape d) et 1 ml de NMM. Après 30 min. à - 1500 et une nuit à la température ambiante, on ajoute 1 litre de chloroforme et 200 ml de KHCO3 1 N.Après agitation, on laisse décanter et on sépare la couche chloroformique qu'on lave par 2 x 100 ml d'eau. Les phases aqueuses sont réextraites par 1 litre de chloroforme. On réunit les phases organiques et on lés sèche sur MgS04. La solution chloroformique est concentrée sous vide et le résidu est trituré dans l'éther. On obtient 2,9 g d'une poudre blanche (Rdt. 75 %). Le produit obtenu est homogène par CCM dans les mélanges de solvants E et J. F = 194-198 C déc., [&alpha;]D = - 1,90 (C = 2, DMF). Etape f) Préparation de l'acétate de Lys(BOC)-Ser(But)-Gln-Gly-Gly.OMe (24) 2,9 g du dérivé (23) obtenu à l'étape e) sont hydrogénés comme il est décrit précédemment dans 50 ml de MeOH, 0,5 ml de CH3COOH et 0,5 ml d'eau, en présence de 50 mg de Pd/C à 5 pendant 5 heures. On obtient 2,8 g d'un produit homogène par CCM dans les solvants C et E, utilisé directement pour l'étape suivante. Etape g) Préparation du Z.Ala-Lys(BOC)-Ser(But)- Gln-Gly-Gly.OMe (25) A une solution de 0,892 g de Z.Ala dans 30 ml de DMF refroidie à - 15 C, on ajoute 0,522 ml de chlorocarbonate dtisobutyle et 0,44 ml de NMM. Après 5 min., on ajoute une solution de 70 ml de DMF contenant 2,8 g d'acétate de Lys(300)-Ser(But)-Gln-Gly-Gly.OMe (24) préparé à l'étape f) et 0,8 ml de NYM. Après 30 min. à froid on laisse une 5nuit à la température ambiante et on concentre la solution jusqu'à un volume de 50 ml sous le vide de la pompe à palettes. Puis on ajoute lentement 450 ml d'eau.Le précipité formé est filtré, lavé à l'eau, puis par une solution N de KHOO3 et de nouveau par l'eau. On rince, à l'éther, et on sèche au dessicateur. On obtient 2,7 g (Rdt 80 %) d'un produit homogène par CCM dans les solvants F et J. F = 210-220 C déc., jK7D = 1,70 (C = 2,2, DMF). Etape h) Préparation du Z.Ala-Lys(BOC)-Ser(But)- Gln-Gly-Gly-MNNH2 (26) 2,3 g du dérivé (25) préparé à 11 étape g) sont dissous dans 150 ml de méthanol en chauffant. Après refroidissement, on ajoute 2,6 ml d'hydrazine hydrate à 98 % et on agite vigoureusement la solution. On laisse une nuit à la température ambiante, puis on refroidit à - 20 C et on filtre le précipité obtenu. Ce premier précipité est lavé à l'éther. Les eaux-mères sont concentrées : le second précipité est trituré dans l'éther. Les deux produits ainsi obtenus sont identiques : séchés sous vide au dessicateur sur H2S04, ils donnent 2,2 g d'un produit homogène par 0CM dans les mélanges de solvants I et J. Z = 191-t95 C déc., Ê;iJ) = - 3,80 (C = 2,2, DMF). Etape i) Préparation du Z.ala-Ls (BOC)-Ser(But)- Gln-Gly-Gly-Ser(But).OBut (39) A une solution de 0,85 g du dérivé (26) préparé à 1 t étape h) dans 30 ml de DMF refroidie à - 40 C on ajoute 0,63 ml (5 équivalents) d'une solution anhydre de HCl/TH? 8 N et 0,16 ml de nitrile d'isoamyle. On maintient la solution sous agitation à - 40 C pendant 30 minutes puis on ajoute 1,4 ml de triéthylamine et 0,366 g du chlorhydrate de Ser(But).OBut préparé selon E. Schroeder. (Liebigs Ann. Chem. 1963. 127 p. 670). Après 1 heure à - 1000 on laisse au congélateur pendant 48 heures. On concentre sous le vide de la pompe à palettes jusqu'à un volume de 10 ml et on ajoute lentement 200 ml d'eau. Après 4 heures à froid, on filtre le précipité que l'on rince à l'eau puis à l'éther. On obtient une poudre blanche homogène par CCM dans les mélanges de solvants E, F et J. Recristallisation dans le mélange méthanol/éther. F = 225-2300C déc., j 3D = -4,00 (C = 1, DMF). Etape ) Préparation de l'acétate de Ala-Lys(BOC) Ser(But)-Gln-Gly-Gly-Ser(But),OBut (40) Ce dérivé est obtenu à partir de 0,50 g du dérivé (39) préparé à l'étape i) dans les conditions décrites précédemment pour les dérivés (22) et (24) (étapes d) et f). Rendement quantitatif. Produit homogène par CCM dans les mélanges de solvants C et E, utilisé directement pour l'étape suivante. Etape k) Préparation du PyroGlu-Lys(BOC)-Ser(But)- Gln-Gly-Gly-Ser(But) OBut (41) A une solution de 0,25 g du produit (40) préparé à l'étape j) dans 10 ml de DMF refroidie à OOC on ajoute 0,03 ml de NMM puis après 5 min. 0,088 g de PyroGlu.OTcp (préparé selon J.c. Anderson et al. J. Chem. Soc. C. 1967 p. 108). Après 30 minutes à froid on laisse 18 heures à la température ambiante. On concentre la solution sous vide (pompe à palettes). Le résidu est trituré dans l'acétate d'éthyle à chaud, puis dans l'éther. On obtient 0,195 g (Rdt 70 *). Recristallisation dans le mélange méthanol/éther : produit homogène par CON dans les mélanges de solvants E, F et J. F = 219-2220C, jv D = -3,0 (C = 0,9, DMP). Etape 1) Préparation de lfoctaPeptide libre PyroGlu-Ala-Lys-Ser-Gln-Gly-Gly-Ser (42) 0,020 g du dérivé (41) préparé à l'étape k) sont dissous dans 5 ml d'un mélange de CF3COOH/anisole 10:1 (v/v). Après 3 heures à la température ambiante on concentre au dessicateur sous vide. On reprend le résidu dans 40 ml d'eau. On extrait par 20 ml d'acétate d'éthyle et par 20 ml d'éther. La phase aqueuse est lyophilisée. Le produit obtenu est homogène par CCM dans les mélanges de solvants G et H. Par rhéophorèse dans un tampon de pH 2,3 (acide formique 0,1 M) sur papier Whatman n 3 MM et sous tension de 1 000 V (15-30 mA) on révèle une seule tache à -2,9 cm. Analyse en acides aminés après hydrolyse acide totale Ser 1,87 ; Glu 1,92 ; Gly 2,00 ; Ala 1,01. EXEMPLE 7 Préparation de l'analogue octapeptidique D-Ala-iys-Ser-Gln- Giy-Glv-Ser-Asn (45) Cet analogue de structure correspond à l'octapeptide C-terminal (38) précédemment décrit (exemple 5) à la seule différence que le résidu L-Ala est remplacé par le résidu D-Ala. Il est obtenu par synthèse selon les étapes suivantes : Etape a) Préparation du dérivé Z,D-Ala-Lys (BOC)-Ser(But) Gln(Mbh) -Gly-Glv-Ser(But) -Asn. OBut (43 > A une solution de 0,03 g de Z.D-Ala (préparé selon M.Bergmann et L.Zervas, Ber. 1432,65,1192) en solution dans 1 ml de DMF refroidie à -15 C, on ajoute sous agitation 0,015 ml de NMM et 0,018 ml de chlorocarbonate dtisobutyle, puis, après 5 minutes, une solution de 0,172 g de l'acétate de Lys(BOC)-Ser (But)-Gln(Mbh)-Gly-Gly-Ser(But)-Asn.OBut (12) dont la préparation est décrite à ltétape g) de l'exemple 1 et de 0,03 ml de NMM dans 5 ml de DMF.Après 30 minutes à -15 C on laisse à la température ambiante toute une nuit. On concentre la solution jusqu'à un volume de 1 ml et on ajoute lentement 20 m1 d'une solution d'acide citrique à 10 %. il se forme un précipité sous forme d'une poudre fine que l'on filtre et que l'on rince plusieurs fois à l'eau, puis par une solution N de KHCO3 et encore à l'eau. On rince plusieurs fois à l'éther et on sèche dans le dessicateur sous vide. On obtient 0,165 g du produit sous forme d'une poudre fine (Rdt 85 %). Recristallisation dans le mélange méthanol/éther Produit homogène par CCM dans les mélanges de solvants C, E et F ; F = 21I2150C déc., [&alpha;]D = -3,3t (C = 0,45, DMF). Etape b) Préparation de l'acétate de D-Ala-LystBOC)-Ser (But)-Gln(Mbh)-Gly-Gly-Ser(But)-Asn.OBut (44) 0,11 g du dérivé (43) préparé à l'étape a) sont hydrogénés dans les conditions décrites précédemment, dans 10 ml de MeOH, 0,1 ml de CH3COOH et 0,1 ml d'eau et en présence de 10 mi de Pd/C à 5 % pendant 4 heures. On obtient un produit homogène que l'on utilise directement pour étape suivante. Etape c) Préparation de l'octapeptide libre D-Ala-Lys-Ser-Gln-Gly-Gly-Ser-Asn (45) A partir du dérivé (44) préparé à l'étape b) on obtient l'octapeptide libre en opérant selon le procédé décrit pour l'obtention du nonapeptide PyroGlu-Ala-Lys-Ser-Gln-Gly-Gly-Asn (i6)à l'étape k) de l'exemple 1. On obtient un produit homogène par CCM dans les mélanges G et H. Par rhéophorèse dans les mêmes conditions décrites précédemment pour le peptide (42) à l'étape 1) de l'exemple 6)on obtient une seule tache qui migre à -4,65 cm. Analyse en acides aminés après hydrolyse acide totale Asp 1,02 , Ser 1,77, Glu 1,0, Gly 2,00, Ala 0,91. EXEMPLE 8 Préparation de l'analogue nonapeptidique PyroGlu-D-Ala-Lys-Ser Gln-Gly-Gly-Ser-Asn (47) Cet analogue de structure correspondant au nonapeptide (16) de l'exemple 1 ayant la structure de l'hormone thymique sérique à la seule différence que le résidu L-Ala est remplacé par le résidu DAla. il est obtenu par synthèse à partir du dérivé (44) décrit précédemment (étape b) de l'exemple 7)selon les étapes suivantes :: Etape a) Préparation du PsroGlu-D.Ala-Lys(BOC)-Ser(But)- Gln(Mbh)-Gly-Gly-Ser(But)-Asn.OBut (46) A une solution de 0,104 g d'acétate de Lys(BOC)-Ser(But) Gln(Mhh)-Gly-Gly-Ser(But)-Asn.OBut (44) décrit précédemment (étape b) de l'exemple 7) dans 3 ml de DMF refroidie à OOC, on ajoute 30 pl de NMM puis après 5 minutes, une solution de 29 mg de PyroGlu OTcp (préparé selon J.C. Anderson et al, J.Chem. Soc., C, 1at7 p.108) dans 5 ml de DMF. On laisse 24 heures à température ambiante, puis on concentre la solution jusqu'à un volume de 1 ml et on ajoute lentement 20 ml d'eau jusqu'à l'obtention d'un précipité fin que l'on filtre. On rince à l'acétate d'éthyle et à l'éther, on obtient 0,078 g (Rdt 70 96) d'un produit homogène par CON dans les mélanges de solvants C, D et E. F = 210-2150C, LJ'D [&alpha;]D =,oo (C = 0,4, DMF). Etape b) Préparation du nonapeptide libre (47) A partir du dérivé précédent (46) on obtient le nonapeptide libre en opérant selon le procédé employé pour 1'ob- tention de l'octapeptide (45) et le nonapeptide (16). On obtient un produit homogène par CON dans les solvants G et H. Par rhéophorèse à pH 2,3 on révèle une seule tache migrant à -3,2 cm. Analyse en acide aminés après hydrolyse acide totale Asp 0,97, Ser 1,67, Glu 1,84, Gly 2,00, Ala 0,98. EXEMPLE 9 Préparation de l'analogue de structure nonapeptidique PyroGlu- Ala-Lys-Ser-Gln-G Gly-Ser-Asp (53) Cet analogue correspond aux nonapeptides (16) et (30) ayant la structure de l'hormone thymique sérique à la seule différence du résidu L-asparagine (Asn) C-terminal remplacé par le résidu L-aspartique (Asp). Il est obtenu par synthèse selon les étapes suivantes Etape a) Préparation du dérivé Z-Ser(But)-Asp-di.OBut (48) A une solution de 0,295 g de Z-Ser(But) (provenance FLUKA) dans 10 ml de DMF, refroidie à -15 C, on ajoute 0,12 ml de NMM et 0,13 ml de chlorocarbonate d'îsobutyle. Après 5 minutes on ajoute une solution froide de 10 ml de DMF contenant 0,54 g de di-ter-butyle aspartate sous forme de sel de dibenzo-sulfimide (provenance FLUKA) et 0,15 mI de NMM. On laisse sous agi- tation 30 minutes à froid et une nuit à température ambiante. Puis on concentre la solution, sous vide et on reprend le résidu dans 100 ml d'acétate d'éthyle. On lave avec 50 ml de solution N de KHSO4, d'eau, de sel N de KHCO) et de nouveau d'eau. La phase organique est séchée sur NgSO4 puis concentrée sous vide. On obtient une huile qui cristallise par addition d'éther de pétrole. Par recristallisation dans l'éther de pétrole, on obtient 0,43 g (Rdt 80 %) d'un produit homogène par CCM dans le mélange éther/éther de pétrole 1:1 v/v. F = 83-85 C 9 3D = -4,90 (C : 1,25, DMF). Etape b) Préparation de-l'acétate de Ser(But) -Asp-di .0But (49) 0,26 g du dérivé (48) préparé à l'étape a) dissous dans 10 ml de méthanol contenant 0,1 ml de CH3COOH et 0,1 ml d'eau sont hydrogénés en présence de 0,1 g de Pd/C à 5 ffi pendant 2 heures.L'acétate de Ser(But)-Asp-di.OBut obtenu avec un rendement quantitatif est homogène par 0CM dans les mélanges de solvants C et E et il est utilisé directement pour l'étape suivante Etape c) Préparation du Z-Ala-Lys(BOC)-Ser(But)-Gln-Gly- Gly-Ser(But)-Asp-di.OBut (50) A une solution du dérivé Z-Ala-Lys(BOC)-Ser(But)-Gln-Gly Gly-NHNH2 (26) (obtenu a l'étape h) de l'exemple 6) dans 10 ml de DMF on ajoute 0,175 ml d'une solution 8 N de HCl/THF et on refroidit à -400C. Puis on ajoute 0,045 ml de nitrite d'isoamyle et on laisse la solution sous agitation à -40 C pendant 30 minutes.On ajoute alors une solution refroidie de 10 mi de DMF contenant 0,18 g de l'acétate de Ser(But)-Asp-di.OBut (49) préparé à l'étape b), et 0,1 ml de triéthylamine. On laisse à -40 C pendant 30 minutes et pendant 48 heures au congélateur. Puis on concentre la solution sous vide et on triture le résidu dans 20 mi d'eau. On filtre le précipité et on rince à l'éther. On reprend le précipité dans 5 ml de méthanol, on reprécipite par 11 éther, et on filtre la poudre obtenue. Par recristallisation dans le méthanol entre chaud et froid, on obtient 0,25 g (Rdt 75 56) d'un produit homogène par CCM dans les mélanges de solvants I et J. F = 220 C déc., t0D = 8,00 (C = 0,6, DMF). Etape d) Préparation de l'acétate de Ala-Lys(BOC)-Ser(But) Gin-Glv-Gly-Ser(But)-Asp di.OBut (51) L'hydrogénation catalytique de 0,15 g du dérivé (50) de l'étape c) dans 10 ml de méthanol contenant 0,1 ml de CH3COOH et 0,1 ml d'eau et 10 mg de Pd/C à 5 56 donne après 3 heures un produit homogène par CCM dans les solvants C etI, avec un rendement quantitatif. Ce produit est utilisé directement pour l'éta- pe suivante. Etape e) Préparation du PyroGlu-Ala-Lys(BOC)-Ser(But)-Gln- Gly-Gly-Ser(But)-Asp di .OBut (52) A une solution de 0,126 g du dérivé précédent (51) dissous dans 4 ml de DMF, refroidie à 0 G, on ajoute 0,038 ml de NMM, puis, après 5 minutes 0,038 g de PyroGlu O Tcp (préparé selon J.C. Anderson et al. J.Chem.Soc., C, 1967 p.108). On laisse 30 minutes à froid puis 24 heures à la température ambiante, puis on concentre sous vide la solution et on triture le résidu dans l'eau, dans l'acétate d'éthyle et dans l'éther. On filtre le précipité que l'on dissout dans le minimum de méthanol chaud et on reprécipite par l'éther.Par recristallisation dans le méthanol entre chaud et froid, on obtient 0,085 g (Rdt 65 56) d'un produit homogène dans les mélanges de solvants C et I. F = 225 C déc. fine [&alpha;]D = 5,8o (C = 0,4, DMF). Etape f) Préparation du PyroGlu-Ala-Lys-Ser-Gln-Gly-Gly- Ser-Asp (53) 0,02 g du dérive (52) de l'étape e) dissous dans 5 ml d'un mélange de CF3COOH/anisole 10/1 v/v sont laissés pendant 3 heures à température ambiante. On concentre au dessicateur la solution et on reprend le résidu dans 40 ml d'eau, on extrait par 20 ml d'acétate d'éthyle et 20 ml d'éther et on lyophilise la phase aqueuse. Le produit obtenu est homogène par 0CM dans les solvants G et H. Par rhéophorèse dans les conditions décrites précédemment pour le peptide (42) à l'exemple 6, on obtient une seule tache qui migre à -2,8 cm. Analyse en acides aminés après hydrolyse acide totale Asp 1,05, Ser 1,73, Glu 1,97, Gly 2,00, Ala 1,02. EXEMPLE 10 Préparation de 1 t analogue nonapeptidique PyroGlu-Ala-Lys-Ser Gln-Gly-Gly-Ala-Âsn (5g) Cet analogue correspond au nonapeptide ayant la structure de l'hormone thymique sérique à la seule différence du résidu Ser8 en position penultième qui est remplacé par le résidu Ala. il est obtenu par synthèse selon les étapes suivantes Etape a) Preparation du dérivé Z-Ala-Asn OBut (54) 0,461 g de Z-Ala (provenance FLUKA) en solution dans du THF on ajoute 0,23 ml de NMM puis on refroidit à -15 C et on ajoute 0,25 ml de chlorocarbonate d'isobutyle. Après minutes on ajoute une solution dans du THF d'acétate d'Asn OBut (pré paré selon E. Schnabel et H. Schussler, Liebig's Ann. Chem. 1965, 685, 229) et 0,38 ml de NMM. Après une nuit à température ambiante sous agitation on évapore le solvant et on reprend le résidu par l'acétate d'éthyle. La solution organique est lavée par une solution M de KHSO4, par de 11 eau, par une solution M de KHCO3 et de nouveau par de l'eau. La phase organique est séchée sur MgS04. Par évaporation de l'acétate d'éthyle, on obtient un résidu qui cristallise par addition d'éther de pétrole. On recristallise dans le mélange acétate d'éthyle/éther de pétrole. On obtient 0,635 g (Rdt 94 56) d'un produit homogène dans le mélange de solvants A. F = 156-158 C[&alpha;]D = - -9,0 (C = 1,13, DMF) Etape b) Préparation de l'acétate de Ala-Asn OBut (55) Une solution de 0,25 g du dérivé (54) de l'étape a) dans 15 ml de méthanol, de 0,5 ml de CH3COOH et de 0,5 ml d'eau contenant 20 mg de Pd/C à 5 56 est hydrogénée pendant 5 heures. On filtre sur verre fritté et Celite, on évapore à sec et on reprend le résidu successivement par du benzène et du méthanol. Rendement quantitatif d'un produit homogène par CCM dans les mélanges de solvants C et E. Le produit obtenu est utilisé directement pour l'étape suivante. Etape c) Préparation de Z-Ala-Lvs(BOC)-Ser(But)-Gln- Gly-Gly-Ala-Asn OBut (56) A une solution de 0,28 g du dérivé Z-Ala-Lys(BOC)-Ser (But)-Gln-Gly-Gly-NHNH2 (26) (obtenu à l'étape h) de l'exemple 6) dans 10 ml de DMF on ajoute après refroidissement à -400C 0,208 ml d'une solution 8 N de HCl/THF, puis 0,058 ml de nitrite d'isoamyle. Après 30 minutes à -400C, on ajoute 0,50 ml de triéthylamine et une solution de 0,14 g d'acétate de Ala-Asn OBut (55) préparé à l'étape b) dans 5 ml de DMF. Après 1 heure à -400C sous agitation on laisse 48 heures dans le congélateur.On concentre la solution sous vide et on triture le résidu dans 20 ml d'eau puis dans 20 ml d'acétate d'éthyle et dans 30 ml d'éther. Après filtration on obtient une poudre blanche que l'on recristallise dans le méthanol entre chaud et froid. Le produit est homogène par CMM dans les mélanges de solvants C et I. F = 21000 déc.E zD = -12,90 (C = 0,9, DMF). Etape d) Préparation de l'acétate de Ala-Lxs(BOC)-Ser (But) -Gln-Giv-Giy-Ala-Asn OBut (57) 0,115 g du dérivé (56) de l'étape c) en solution dans 10 ml de méthanol, 0,1 ml de CH3COOH et 0,5 ml d'eau contenant 10 ml de Pd/C à 5 56 sont hydrogénés pendant 4 heures. On obtient un produit, avec un rendement quantitatif, homogène par CCM dans les mélanges de solvants C et E que l'on utilise pour l'étape suivante. Etape e) Préparation du Pvroglu-Aia-Lvs(BOC)-Ser(But)- Gln-Gly-Gly-Ala-Asn OBut (58) A une solution de 0,10 g du dérivé (57) de l'étape d) dans 5 ml de DMF, après refroidissement à OOC, on ajoute 0,02 ml de NMM et après 10 minutes 0,033 g de PyroGlu OTcp (préparé selon J.C. Anderson et ai. J. Cheit. Soc., C, 1967 p. 108). Après 24 heures à la température ambiante sous agitation on évapore sous vide le solvant et on triture le résidu dans le chloroforme chaud. On filtre la poudre obtenue que l'on rince à l'éther. Par recris tallisation dans le méthanol entre chaud et froid on obtient 0,065 g d'un produit homogène par 0CM dans les mélanges de solvants C et E. F = 21000 déc. [&alpha;] D = -13,7 (C = 0,95, DMF). Etape f) Préparation du nonapeptide (59) libre Une solution de 0,020 g du dérivé (58) de l'étape e) dans 5 ml d'un mélange de CF3COOH/anisole 10:1 (v/v) après 3 heures à la température ambiante sous agitation est concentrée dans le dessicateur sous vide. Le résidu est repris dans 40 ml d'eau. La solution aqueuse est extraite par 20 ml acétate d'éthyle et par 20 mi d'éther. La phase aqueuse est lyophilisée. Le produit obtenu est homogène par CCM dans les mélanges de solvants G et H. Par rhéophorèse dans les conditions décrites précédemment (pour les peptides (16), (36), (37), (38) etc.) on obtient une seule tache qui migre à -3,15 cm. Analyse en acides aminés après hydrolyse acide totale : Asp 0,98; Ser 0,87; Glu 1,95; Gly 2,00; Ala 1,99. EXEMPLE Il Préparation du nonapeptide Gln-Ala-Lys-Ser-Gln-Gly-Gly-Ser- Asn (32) et des dérivés de ce peptide Le nonapeptide (32) est équivalent de l'hormone thymique sérique à la seule différence du résidu N-terminal Glutaminyle qui remplace le résidu pyroglutamyle. il est obtenu par synthèse selon les étapes suivantes Etape a) Préparation du Z-Ala-Lys(BOC)-Ser(But)-Gln- Gly-Gly-Ser(But )-Asn OBut (27) Ce dérivé est équivalent du dérivé (13) dont la synthèse est décrite précédemment (étape h) de l'exemple i) le résidu Gln n'étant pas masqué par le groupement 4,4-diméthoxy-benzhydryle (Mbh) et sa préparation suit une gWie différente de celle employée pour la synthèse du dérivé (13). A une solution de 0,080 g de Z-Ala-Lys(BOC)-Ser(But)-Gln-Gly-Gly-NHNH2 (26) obtenu à l'étape h) de l'exemple 6, dans 2 ml de DMF, refroidie à -400C on ajoute 0,056 ml d'une solution 8,3 N de HCl/THF puis 0,016 ml de nitrite d'isoamyle.On laisse 20 minutes sous agitation à -400C puis on ajoute 0,13 ml de triéthylamine et 0,0445 g de l'acétate de Ser (But)-Asn OBut (2) (préparé à l'étape d) 10 de l'exemple 1). On laisse sous agitation pendant 2 heures à -400C et pendant 48 heures à -200C. On évapore le solvant sous vide et on triture le résidu dans de l'eau. On filtre et on sèche dans le dessicateur la poudre obtenue. Le produit (69 mg, Rdt 64 56) est pratiquement homogène par CCM dans les mélanges de solvants C et J. P = 21000 décomposition sans fusion. Ce produit est utilisé directement pour l'étape suivante. Etape b) Préparation de l'acétate de Ala-LYs(BOC)-Ser (But) Gln-Gly-Glv-Ser( But )-Asn OBut (28) Une solution de 0,0322 g du dérivé (27) de l'étape a) en solution dans 4 ml de méthanol 0,1 ml de CH3COOH et 0,1 ml d'eau est soumise à une hydrogénation en présence de Pd/C à 5 56. Après la fin de la réaction (contrôle par CCM) on filtre et on concentre à sec le filtrat. Le résidu est séché dans le dessicateur sur P205. Rendement quantitatif d'un produit pratiquement homogène dans le mélange de solvants J. Le produit est utilisé directement pour les étapes suivantes. Etape c) Préparation du BOC Gln-Aia-Lys(BOC)-Ser(But)- Gln-Gly-Gly-Ser(But)-Asn OBut (31) A une solution de 0,0278 g du dérivé (28) de l'étape b) dans 2 ml de DMF on ajoute 0,016 g de BOC Gln-ONp (provenance SERVA) et 6 jil de triéthylamine. On laisse sous agitation une nuit à la température ambiante. On évapore sous vide le solvant et on triture le résidu dans l'éther. on obtient 28 mg (Rdt 78 56) d'un produit qui présente de faibles impuretés par CCM. 13 mg de ce produit sont recristallisés dans le méthanol/eau. On obtient un produit homogène par 0CM dans les mélanges de solvants C et J. F = 21800 déc. Etape d) Préparation du nonapeptide (32) libre 2 mg du dérivé (31) purifié sont traités pendant 3 heures par 0,5 ml d'acide trifluoracétique. On évapore l'acide à la température ambiante au dessicateur et on sèche le résidu sur P205 et KOH. Le produit obtenu est'redissous dans l'eau et lavé 3 fois par l'acétate d'éthyle, puis lyophilisé. Par 0CM dans les mélanges de solvants H et G on révèle en plus du nonapeptide (32) une très faible tache de meme valeur de Rf que le nonapeptide PyroGlu-Ala-Lys-Ser-Gln-Giy-Giy-Ser-Asn(16) et (30). Par rhéophorèse sur papier Whatman 3 MM sous tension de 600 volts pendant 45 minutes dans le tampon eau/pyridine/acide acétique : 1000/2,5/9, de pH 4,0 le Glutaminyle-nonapeptide (32) migre à -0,5 cm et l'impureté (Pyroglutamyl-nonapeptide) à + 0,7 cm. Dans le tampon acide formique 0,01 N de pH 2,3 le Gln-nonapeptide migre à -4,9 cm et l'impureté (pyroGlu-nonapeptide) à -2,2 cm. Analyse en acides aminés après hydrolyse acide totale : Asp 1,12 , Ser 1,99, Glu 2,00, Gly 2,10, Ala 1,06, Lys 3,82, NH3 3,45. EXEMPLE 12 Préparation du PyroGlu-Ala-LYs-ser-Gln-Gly-Gly-ser-Asn t30) a partir du dérivé (28) de l'étape b) de l'exemple 11 A une solution de 0,0213 g du dérivé (28) dans 2 ml de DMF on ajoute 10 mg de PyroGlu OTcp (préparé selon J.C. Anderson et al. J. Chem. Soc., C, 1967 p. 108) et 5 pl de triéthylamine. On laisse sous agitation à la température ambiante 24 heures. On filtre le précipité formé, on évapore le DMF sous vide et on triture le résidu dans l'acétate d'éthyle. On obtient 14,2 mg (Rdt 57 96) d'un produit qui par CON présente une très faible impureté négative à la ninhydrine, révélée par la méthode au chlore dans les mélanges de solvants A et C.5 mg de ce produit sont purifiés par chromatographie préparative sur couche mince (plaque de silice Merck de 2 mm d'épaisseur) dans le mélange de solvants C. Le produit ainsi obtenu est chromatographiquement pur dans les solvants C et A et correspond au dérivé PyroGlu-Lys(BOC) Ser(But)-Gln-Gly-Gly-Ser(But)-Asn OBut (29). A partir de ce produit purifié on obtient le nonapeptide libre PyroGlu-Lys-Ser-Gln-Gly-Gly-Ser-Asn (30) par traitement avec une solution 4N de HCl/acétate d'éthyle. Après évaporation des solvants et séchage sur P205 et KOH, le résidu est redissous dans l'eau et après lavage 3 fois avec l'acétate d'éthyle de la solution aqueuse le peptide libre (30) est obtenu par lyophilisation. Le produit est homogène par CON dans les mélanges de solvants H et G. Analyse en acides aminés après hydrolyse acide totale : Asp 1,00; Ser 1,72; Glu 1,89; Gly 1,94; Ala 0,96. EXEMPLE 13 Préparation du dérivé Z-Gln-Ala-Lys-Ser-Gln-Gly-Gly-Ser-Asn (34) Ce dérivé est obtenu à partir du dérivé (28) obtenu à l'étape b) de l'exemple 11. A une solution de 0,107 g du dérivé (28) dans 5 ml de DMF, après refroidissement à 0 , on ajoute 0,03 ml de NMM puis, après 5 minutes 0,04 mg de Z-Gln OSu (préparé selon J. Beacham et al. J. Amer. Chem. Soc. 1971, 93, 5526) et on laisse à la température ambiante. Le mélange réactionnel se prend en masse. On concentre sous vide et on reprend le résidu par le minimum de méthanol à chaud. Après refroidissement à OOC, on filtre le précipité et on le rince à l'éther. Le produit obtenu est homogène par 0CM dans les mélanges de solvants C, E et I. Ce produit correspond au dérivé Z-Gln-Ala-Lys(BOC)-Ser (But)-Gln-Gly-Gly-Ser(But)-Asn OBut (33). A partir de ce dérivé et par élimination des groupements de protection temporaire BOC et But par CF3COOH/anisole 10/1 (v/v.) dans les mêmes conditions que pour le dérivé homologue (18) de l'exemple 2, on obtient le dérivé nonapeptidique Z.Gln-Ala-Lys-Ser-Gln-Gly-Gly-Ser-Asn (34). Le produit ainsi obtenu est homogène par 0CM dans les mélanges de solvants G et H. Par rhéophorese dans les conditions utilisées pour les autres nonapeptides libres, on obtient une seule tache qui migre à -2,7 om. Analyse en acides amines après hydrolyse acide totale Asp 1,02; Ser 1,89; Glu 1,92; Gly 2,00; Ala 0,94. Par hydrogénation catalytique du dérivé nonapeptidique (34) dans les conditions décrites pour l'obtention du nonapeptide (18) (Etape b) de l'exemple 2), on obtient un produit homogène par CCM dans les mélanges de solvants G et H et identique au nonapeptide (18) obtenu par synthèse par une voie différente. Le produit ainsi obtenu correspond au nonapeptide Gln-Ala-Lys-Ser-Gln-dly-Gly-Ser-Asn (35). Analyse en acides aminés après hydrolyse acide totale : Asp 1,01; Ser 1,83; Glu 1,85; Gly 2,00; Ala 0,97. EXEMPLE 14 Préparation des analogues nonapeptiques de structure PyroGlu-Ala-Lys-Ala-Gln-Giy-Gly-Ser-Asn (65) PyroGiu-Aia-Lys-D-Ser-Gln-Giy-Giy-Ser-Asn (66) PyroGlu-Ala-Lys-Thr Gln-Gly-Gly-Ser-Asn (67) PyroGlu-Ala-Lys- (N-méthyi-Ser) Gln-Giy-Giy-Ser-Asn, (64) qui correspondent au nonapeptide ayant la structure de l'hormone thymique sérique à la seule différence que le résidu serine de la 4ème position est remplacé par les résidus L-alanine, D-serine, L-thréonine, ou N-méthwJl-serine. Ces analogues sont obtenus par synthèse selon les mêmes étapes décrites précédemment pour la synthèse du nonapeptide PyroGlu-Ala-Lys-Ser-Gln-Gly-Gly-Ser-Asn (16) (cf. exemple 1) à la seule différence qutà i1 étape c) au lieu de Z.Ser(But) on utilise les dérivés 7.Ala, Z.D.-Ser(But), Z.L-Thr(Lut) et Z-(N méthyl)-Ser Les nonapeptides libres ainsi obtenus sont homogènes par 0CM dans les mélanges de solvants G et H et par rhéophorèse dans les mêmes conditions utilisées pour le nonapeptide (16) (cf. exemple 1) donnent une seule tache. L'obtention des analogues de structure par remplacement du résidu L-lysine par des résidus D-Lysine, N6-acétyl-L-lysine, L-ornithine est réalisée également selon les memes étapes décrites précédemment pour la synthèse du nonapeptide (16) (exemple 1) à la seule différence qu'à l'étape (e) au lieu du Z-Lys(BOC) on utilise les dérivés Z-D-Lys(BOC), Z-Lys(Acet), Z-Orn(BOC). il en est de mdme pour les analogues de structure nonapeptidique préparés par synthèse par remplacement du résidu Glutaminyle en 5ème position par un résidu Glutamyle ou Dglutaminyle, du résidu Gly-Gly en 6ème et 7ème position par des résidus L-alanine ou D-alanine et du résidu Asn en position C-terminale par les résidus L-glutamine ou D-asparagine. Afin de mettre à l'épreuve la validité et l'efficacité des procédés de la synthèse peptidique utilisés pour préparer les nouveaux polypeptides de l'invention, qui sont des fragments ou des analogues de structure de hormone thymique sérique, on a également synthétisé en parallèle, en utilisant ces mêmes procédés, le nonapeptide Pyro Glu-Ala-Lys-Ser-Gln-Gly-Gly-Ser-Asn (16) et (30) correspondant à l'hormone thymique sérique. Les caractéristiques physicochimiques et les propriétés biologiques in vitro et in vivo de l'hormone thymique sérique et du nonapeptide ainsi obtenu par synthèse se sont révélées identiques. Propriétés pharmacologiques et applications thérapeutiques Comme indiqué précédemment, les polypeptides de l'in- vention soit possèdent une activité thymique égale ou supérieure à celle de l'hormone thymique naturelle, soit manifestent une action antagoniste ou inhibitrice vis-à-vis de 1'hormone thymique. Des essais in vivo et in vitro ont été effectués sur les polypeptides de l'invention. Pour les essais in vitro, on fait appel à l'vessai des rosettes décrit ci-dessous : Détermination de l'activité thymique des polypeptides par l'essai des rosettes L'essai des rosettes a été décrit antérieurement par J.F. Bach et M. Dardenne dans Immunology, 22, 353 (197 > ) le contenu de cet article étant incorporé ici par référence. On détermine l'activité thymique du polypeptide en le mettant en incubation dans un tube à hémolyse avec 3 x 106 cellules de la rate provenant de souris C 57/Bd 6 adultes (fourniespar le Centre d'élevage des Animaux de Laboratoire du C.N.R.S. (45 Orléans, La Source) thymectomisées 10 à 20 jours plus tôt. La méthode de thgmectomie est décrite par M. Dardenne et J.F. Bach dans Immunology, 25, 343 (1973) à la page 344. Le contenu de cet article est incorporé ici par référence. L'incubation est effectuée pendant 90 minutes à 370C en présence d'azathioprine (As) à une concentration de 10 sg/ml. Cette concentration est intermédiaire entre la concentration minimale de Az inhibant 50 ffi des cellules de la rate formant des rosettes (RFC) provenant de souris normales (1 pg/ml) et provenant de souris thymectomisées adultes (25-10 g/ml). A la fin de l'incubation, 12 x 106 cellules rouges de sang de mouton (SRBC) sont ajoutées aux cellules dans l'échantillon d'essai. Les cellules dans l'échantillon sont centrifugées pendant 6 minutes à 200 g et remises en suspension doucement et avec précaution par rotation sur un rouleau (10 cm de diamètre) à petite vitesse (10 tours par minute). On compte les RFC dans un hématocytomètre. En l'absence d'activité thymique, le nombre de RFC est de 1210/106 cellules + 120 (écart type, SD). En présence d'activité thymique, la quantité de RFC est réduite à un niveau de 200 à 400/106 cellules. En l'absence de Az, les peptides ne provoquent pas d'inhibition des RFC. L'activité thymique est définie comme l'inhibition de plus de 50 % des cellules formant des rosettes. Les peptides ont été testés in vitro dans l'essai des rosettes décrit ci-dessus où certains se sont montrés actifs à des concentrations inférieures à 1 pg/ml. Cet effet est spécifique puisque des peptides témoins de poids moléculaire analogue, comme ltangiotensine et la substance P, sont inactifs. Les peptides actifs in vitro ont également été éprouvés dans des expériences in vivo. Injectés à des souris thymectomisées à l'age de 6 semaines et utilisées 8 semaines après la thymectomie, les peptides entraient l'apparition à la 15ème minute dans le sérum d'une activité biologique conférant la sensibilité à l'Azathioprine des cellules spléniques formant des rosettes. Cette activité, qui est également observée avec le peptide initial, est retrouvée pour des dilutions de peptide supérieures à 1/1000. Parallèlement, les cellules spléniques de souris traitées par les peptides voient se corriger la sensibilité des cellules formant des rosettes vis-à-vis de l'Azathioprine et du sérum anti-thta, ce qui indique que ces cellules ont acquis l'expression de marqueurs de cellules T qu'elles n'avaient pas auparavant. Ces expériences ont été répétées à différentes doses de peptide : 10 et 100 pg, 1 et 10 ng, ce qui a permis de démontrer une relation dose-effet et montrer l'absence de toxicité aiguë, que le produit soit injecté seul (dans du sérum physiologique) ou adsorbé sur de la carboxyméthyl cellulose. Dans les tests biologiques ainsi utilisés, certains de ces polypeptides ont montré une activité du même ordre ou supérieure à celle de l'hormone thymique naturelle. C'est le cas en particulier des polypeptides suivants Pyro Glu-Ala-Lys-Ser-Gln-Gly-Gly-Ser-Asn (16) (42) Gln-Ala-Lys-Ser-Gln-Gly-Gly-Ser-Asn (18) (32) (35) Z Gln-Ala-Lys-Ser-Gln-Gly-Gly-Ser-Asn (34) Ala-Lys-Ser-Gln-Gly-Gly-Ser-Asn (38) Lys-Ser-Gln-Gly-Gly-Ser-Asn (37) D Ala-Lys-Ser-Gln-Gly-Gly-Ser-Asn (45) Ces polypeptides sont donc utilisables à la place de l'hormone thymique dans un but thérapeutique en raison de leur meilleure résistance aux agents de dégradation. Ces polypeptides possèdent par conséquent les mimes applications thérapeutiques que l'hor- mone thymique naturelle et sont utiles dans le traitement de maladies d'auto-immunisation comme les maladies du genre Lupus et spécifiquement pour le traitement du Lupus érythémateux disséminé chez l'homme. Ces polypeptides sont utiles également pour stimuler sélectivement l'activité des cellules T au cours de certaines infections bactériennes et virales, aiguës et chroniques, et chez les sujets vieillissants. Ces polypeptides pourraient également trouver une indication dans le traitement de certains états néoplasiques. Dans les tests biologiques utilisés certains polypeptides se sont avérés inactifs ou très peu actifs. C'est le cas en particulier des polypeptides suivants : Pyro Glu-D-Aia-Lys-Ser-Gin-Gly-Giy-Ser-Asn (47) Pyro Giu-Aia-Lys-Ser-Gln-Giy-Gly-Ser-Asp (53) Pyro Glu-Ala-Lys-Ser-Gln-Gly-Gly-Ala-Asn (59) Pyro Glu-Ala-Lys-Ser-Gln-Gly-Gly-Ser (42) Ser-Gln-Gly-Gly-Ser-Asn (36) Ces polypeptides inactifs ou très peu actifs manifestent une action inhibitrice ou antagoniste de l'activité thymique et agissent sur les cellules T en leur empochant de jouer leur rôle de défense immunitaire. Ces polypeptides peuvent etre utilisés pour déprimer certaines réactions immunitaires, comme dans la prévention du rejet des greffes. Les nouveaux polypeptides de la présente invention peuvent être administrés par voie intraveineuse ou intramusculaire. Des véhicules appropriés qui peuvent être utilisés dans la composition comprennent, par exemple, des liquides stériles comme l'eau ou un soluté physiologique ou des substances prolongeant la "durée de vie" des peptides. En plus d'un véhicule, les présentes compositions peuvent aussi comprendre d'autres ingrédients tels que des stabilisateurs, des anti-oxydants, des agents de suspension ou des agents de conservation comme du phénol ou du chlorobutanol et les agents du même genre. La solution finie peut être stérilisée facilement par des techniques classiques de filtration. La composition utilisée dans la présente invention contient en solution aqueuse une quantité suffisante de l'agent thérapeutique pour être médicalement utile. Les doses à administrer dépendent dans une large mesure de l'état du sujet que l'on traite et du poids de lthtte. La voie parentérale est préférée. En général, les doses journalières utiles sont comprises entre 0,00001 mg environ et 0,1 mg environ d'ingrédient actif par kg de poids du corps du sujet en une seule ou plusieurs applications par jour. Des doses journalières préférées sont comprises entre environ 0,0001 et 0,001 mg environ d'ingrédient actif par kg de poids du corps. Une dose injectable particulièrement intéressante est de 0,01 mg de matière active administré chaque jour. Dans l'administration parentérale, la forme de dosage unitaire est habituellement le composé pur dans une solution aqueuse stérile ou sous la forme d'une poudre soluble prévue pour dissolution. Les exemples suivants décrivent une composition pour administration parentérale présentée en ampoules, en flacons et en flacons à doses multiples. EXEMPLE 15 Solution parentérale contenant 0.1 mg de polypeptide Polypeptide 0,1 mg Eau distillée stérile exempte de pyrogènes 1,0 ml Stérilisée par filtration et conditionnée en ampoules, flacons ou flacons à doses multiples. EXEMPLE 16 Ampoules contenant 0.1 mg de polypeptide lyophilisé Ampoule Polypeptide 0,1 mg Ampoule Diluant : Eau stérile pour injection 1 ml Des multiples appropriés des quantités ci-dessus sont utilisés suivant le besoin. REVENDICATIONS 1. Composés polypeptidiques de séquence X-Gln-Gly-Gly-Y dans laquelle Y représente -Ser-Asn et X représente Ser-, Lys-Serr Ala-Lys-Ser-, Glx-Ala-Lys-Ser- ; Gix représentant PyroGlu ou Gln ; et lorsque X représente Glx-Ala-Lys-Ser-, Y peut représenter en outre -Ser ; ainsi que leurs dérivés comportant 1 ou 2 acides aminés modifiés, à l'exception du composé PyroGlu-Ala-Lys-Ser-Gln-Gly-Gly-Ser-Asn non modifié. 2. Un composé polypeptidique selon la revendication 1, caractérisé en ce qu'il est choisi parmi les polypeptides de séquences : Gln-Ala-Lys-Ser-Gln-Gly-ly-Ser-Asn Z Gln-Ala-Lys-Ser-Gln-Gly-Gly-Ser-Asn Ala-Lys-Ser-Gln-Gly-Gly-Ser-Asn Lys-5er-Gln-Gly-Gly-Ser-Asn D-Ala-Lys-Ser-Gln-Gly-Gly-Ser-Asn 3. Un composé polypeptidique selon la revendication 1, caractérisé en ce qu'il est choisi parmi les polypeptides de séquences. PyroGlu-D-Aia-Lys-Ser-Gin-Gly-Giy-Ser-Asn PyroGlu-Ala-Lys-Ser-Gln-Gly-Gly- Ser-Asp PyroGlu-Ala-Lys-Ser-Gln-Gly-Gly-Ala-Asn PyroGlu-Ala-Lys-Ser-Gln-Gly-Gly-Ser Ser-Gln-Gly-Gly-Ser-Asn 4. Un composé polypeptidique selon la revendication 1, caractérisé en ce qutil est choisi parmi les polypeptides de séquences :: PyroGlu-Ala-Lys-Ala-GIn-Gly-Gly-Ser-Asn PyroGlu-Ala-D-Lys-Ser-Gln-Gly-Gly-Ser-Asn PyroGlu-Ala-Lys (N6acétyi) -Ser-Gin-Gly-Gly-Ser-Asn PyroGlu-Ala-Orn- Ser-Gin-Giy-Giy- Ser-Asn PyroGlu-Ala-Lys-(N~methyl)Ser-Gln-Gly-Gly-Ser-Asn PyroGlu-Ala-Lys-Ala-Gln-Gly- & y-Ser-Asn PyroGlu-Ala-Lys-D-Ser-Gln-Gly-Gly-Ser-Asn PyroGlu-Ala-Lys-Thr-Gln-Gly-Gly-Ser-Asn PyroGlu-Ala-Lys-Ser-Glu-Gly-Gly-Ser-Asn PyroGlu-Ala-Lys-Ser-Glu(Y-cyano)-Gly-Gly-Ser-Asn PyroGlu-Ala-Lys-Ser-Glu(#CS-NH2)-Gly-Gly-Ser-Asn PyroGlu-Ala-Lys-Ser-D-Gln-Gly-Gly-Ser-Asn PyroGlu-Ala-Lys-Ser-Gln-Ala-Gly-Ser-Asn PyroGlu-Ala-Lys-Ser-Gln-Gly-Ala-Ser-Asn PyroGlu-Ala-Lys-Ser-Gln-Ala-Ala-Ser-Asn PyroGiu-Ala-Lys-Ser-Gln- Sar- Sar-Ser-Asn PyroGlu-Ala-(2-amino-hexanoyl)-Ser-Gln-Gly-Gly-Ser-Asn PyroGlu-Ala-(2,6-diamino-hexynoyl)-Ser-Gln-Gly-Gly-Ser-Asn PyroGlu-Ala-(2.6-diamino-hexenoyl)-Ser-Gln-Gly-Gly-Ser-Asn PyroGlu-Ala-Lys-Ser-Gln-Gly-Gly-Ser-Gln PyroGlu-Ala-Lys- Ser-Gin-Giy-Giy-Ser-CvanoAla PyroGlu-Ala-Lys-Ser-Gln-Gly-Gly-Ser-Thio Asn 5. Procédé de préparation de polypeptides de séquence X-Gln-Gly-Gly-Y dans laquelle Y représente -Ser-Asn et X représente Ser- ou Ala-Lys-Ser-, et de leurs dérivés comportant 1 ou 2 acides aminés modifiés, caractérisé en ce qu'on effectue le couplage du composé dipeptidique Ser-Asn protégé avec le composé peptidique X-Gln-Gly-Gly protégé et qu'on élimine ensuite éventuellement les groupements protecteurs. 6. Procédé de préparation de polypeptides de séquence X-Gln-Gly-Gly-Y dans laquelle Y représente -Ser, -Ser-Asn et X représente PyroGlu-Ala-Lys-Ser-, et de leurs dérivés comportant 1 ou 2 acides aminés modifiés, caractérisé en ce qu'on effectue le couplage de PyroGlu protégé avec i rt composé peptidique Ala-Lys-Ser-Gln-Gly-Gly-Y et qu'on élimine ensuite éventuellement les groupements protecteurs. 7. A titre de médicament, un composé polypeptidique selon l'une des revendications î à 4. 8. A titre de médicament convenant notamment au traitement de maladies d'auto-immunisation et à la stimulation sélective des cellules T, un composé polypeptidique selon la revendication 2. 9. A titre de médicament convenant notamment pour déprimer certaines réactions immunitaires, en particulier pour prévenir le rejet des greffes, un composé polypeptidique selon la revendication 3. 10. Une composition pharmaceutique contenant un composé polypeptidique selon l'une des revendications 1 à 4, ainsi qu'un véhicule pharmaceutiquement acceptable.