Brevet FR2365343A1 — publié le 19780421

La présente invention est relative à de nouveaux dérivés de l'acide L-(thienyl-2)2-thiazolidine-carboxylique-4, à leur procédé de pr6paration et aux médicaments et compositions thdra- peutiques contenant ces produits. La présente invention a pour but de pourvoir à un nouveau mucolytique puissant, fluidifiant les bouchons de sécrétions bronchiques qui obstruent les bronches, par la lyse des mucus constitués principalement par des mucopolysaccharides, permettant ainsi l'expulsion de ces s4crêtions ; de plus, le mucolytique conforme & la présente invention ne présente aucune des réactions allergiques qui sont fréquemment provoquées par les mucolytiques du commerce, actuellement connus. La présente invention a pour objet l'acide de L-(diméthyl 1-3 dioxo 2-6 tétrahydro 1-2-3-6 purinyl 7)2-acétyl 3 (thienyl-2) 2-thiazolidine-carboxylique-4 représenté par la formule générale I dans laquelle R représente un groupe hydroxy-, métalloxy-, alcoxy-, amino-, alcoylamino- ou dialcoylamino-. La présente invention a également pour objet un procédé de préparation de l'acide L-(diméthyl 1-3 dioxo 2-6 tétrahydro 1-2-3-6 purinyl 7) 2-acétyl 3 (thienyl-;2 > 2 thiazolidine-carboxy- lique-4, de formule générale I ci-dessus, lequel procédé est caractérisé en ce que l'on condense l'acide L-(thienyl-2)2thiazolidine-carboxylique-4 (de formule III) ou l'un de ses déri vies, avec le chlorure de l'acide théophylline-éthanoique (de formule II), suivant la réaction:: composé de for mule I Suivant un mode de réalisation avantageux du procédé conforme à la présente invention, l'acide L-(thienyl-2)2-thiazolidine-carboxylique-4 est introduit dans le milieu réactionnel en suspension dans du chlorure de méthylène auquel on a préalablement ajouté de la triéthylamine. Suivant un autre mode de réalisation avantageux du procédé conforme à la présente invention, le chlorure d'acide théophylline-éthanoSque est introduit dans le milieu réactionnel sous la forme d'une solution dans du chlorure de méthylène. Suivant un autre mode de réalisation avantageux du procédé conforme à la présente invention, les solvants utilisés lors de la condensation sont anhydres. Suivant encore un autre mode de réalisation avantageux du procédé conforme à la presente invention, le produit brut obtenu est purifié dans de l'méthanol en présence d'eau. La présente invention a en outre pour objet des médicaments et compositions thérapeutiques caractérisés en ce qu'ils contiennent comme constituant actif l'acide t-(diméthyl 1-3 dio xo 2-6 tétrahydro 1-2-3-6 purinyl 7)2-acétyl 3-(thienyl-2)2 thia zolidine-carboxylique4, représenté par la formule générale I et/ou au moins l'un de ses dérivés, Outre les dispositions qui précèdent, l'invention comprend encore d'autres dispositions, qui ressortiront de la description qui va suivre, dans laquelle on trouvera un exemple de mise en oeuvre du procédé de préparation conforme à la présente invention,ainsi qu'un compte-rendu d'activité pharmacologique mettant particulièrement en évidence les propriétés mucolytiques du produit conforme à l'invention.Il doit être bien entendu, toutefois, que cet exemple et les parties descriptive, correspondantesainsi que le compte-rendu pharmacologique sont donnés uniquement à titre d'illustration de l'objet de l'invention, dont ils ne constituent en aucune manière une limitation. Exemple de Préparation A une suspension de 21,5 g (0,1 mole) d'acide L-(thie- nyl-2)2 thiazolidine-carboxylique-4 dans 300 ml de CH2C12 anhydre, laquelle on a préalablement ajouté 7 ml de triéthylamine anhydre, on ajoute goutte à goutte, sous agitation, une solution de 26 g (0,1 mole) de chlorure d'acide theophylline-éthanoSque dans 250 ml de chlorure de méthylène anhydre, à la températureambiante et en l'espace d'une heure. A la fin de l'addition, la suspension devenue limpide est filtrée et lavée à trois reprises avec 2 à 3 fois son volume d'eau. On opère rapidement et le mélange précipite au 3ème lavage. On laisse reposer une heure, on essore, on lave avec 80-100 mld' thanol, puis lton procède à la purification. Le produit brut obtenu est dissous dans 300 ml d' éthanol tiède, puis on ajoute à cette solution 300 ml d'eau distillée froide par petites portions et en agitant. Au bout de quelque temps, le mélange précipite lentement en très sinues aiguilles qui s'agglomèrent en masses floconneuses. On laisse reposer 24 h au réfrigérateur. Le produit forme alors une masse spongieuse et volumineuse. On essore le mieux possible, puis on sèche à l'étuve sous vide, à la température ambiante, jusqu'à poids constant. On obtient 20 g environ de substance blanche et cotonneuse, fondant avec décomposition vers 150-160 C, en répandant une odeur soufrée. Le produit cristallise avec une molécule d'eau. Le rendement obtenu est de l'ordre de 40 à 60 c. Analyse élémentaire pour C17 H17 N5 O5 S2, H20 = 453 4532 C H N Calculé : 45,07 4,23 15,46 Trouve : 45 3,9 15,2 COMPTE-RENDU PHARMACOLOGIQUE A. Etude Toxicologique a) toxicité aigre chez la souris. Un lot homogène de souris Swiss NMRI Han EOPS, de sexe mâle, pesant 22 à 24 g est divisé en groupes de 5 animaux auxquels il est administré des doses croissantes de produit conforme à l'invention, jusqu'à 1 g/kg de poids corporel par voie intra-péritonéale et jusqu'à 5 g/kg par voie digestive. Pour ce faire, le produit est mis en suspension gommeuse et administré, à concentrations croissantes,sous le volume uniforme de 0,50 ml/ 20 g de poids corporel. L'observation des animaux pendant une semaine n'a permis de déceler aucune léthalité mais une simple excitation avecaccélération de la fréquence des mouvements respiratoires chez les animaux ayant reçu 4 ou 5 g/kg de produit par voie digestive. Administré à des doses croissantes, jusqu'à 1 gfkg par voie intrapéritonéale et jusqu'à 5 g/kg par voie digestive, à la souris, le produit conforme à l'invention ne s'est pas montré toxique, n'entraînant pas de mort mais une simple excitation aux doses les plus élevées b) Toxicité sub-chronique chez le rat. Un lot homogène de 20 rats Wistar, de sexe mâle, pesant près de 280 g en moyenne, a été divisé en deux groupes auxquels il était administré, par voie digestive, à l'aide d'une sonde oesophagienne r un placebo constitué par une solution pseudo-colloi- dale de gomme arabique, - une suspension gommeuse du produit conforme à l'invention à raison de 500 mg/kg par jour, sous un volume de 0,50 ml/100 g de poids corporel. Be traitement étant poursuivi quotidiennement pendant un mois, il n'a pas été relevé de signes cliniques d'intolérance mais, simplement, une légère agressivité. Les déterminations pondérales effectuées en cours de traitement montrent que l'administration du produit conforme à l'invention n'entrave pas la croissance des animaux. En fin de traitement, après un jeune de 18 heures, des prélèvements sanguins sont effectués et les animaux sont sacrifiés; il est alors procédé au prélèvement du foie, des reins, des surrénales, du thymus et de l'estomac qui sont l'objet de divers examens, - Bléments SigXurés du sang Il n'y a pas de différences dans le nombre des hématies et des leucocytes entre témoins et traités. Le traitement n'affecte pas les éléments figurés du sang et ne modifie pas la formule leucocytaire. - Organes L'examen macroscopique des organes ne révèle aucune anomalie : la paroi gastrique, en particulier, ne présente aucun signe d'irritation ou d'ulcération. La détermination du poids du foie, des reins, des surrénales et du thymus ayant permis de calculer le poids relatif moyen de ces organes, on ne constate pas de différences notables entre témoins et traités. L'examen histologique, enfin, n'a pas révélé d'altérations structurales. En conclusion, l'administration quotidienne du produit conforme à l'invention à raison de 500 mg/kg/j, pendant un mois semble avoir été parfaitement bien tolérée par le rat Wistar. B. Effets broncho-dilatateurs Les variations du volume bronchique étant enregistrées par la méthode de KONZETT chez le cobaye, on administre, par voie intrapéritonéale (i.p.) des doses croissantes du produit conforme à l'invention : 50, 100, 150, 200 et 250 mg/kg,en cherchant à réduire l'amplitude de la bronchoconstriction produite expérimentalement par injection d'histamine (5yg/kg en intra-veineuse). L'importance de la-bronchoconstriction étant reproductible, on a constaté qu'à la dose de 250 mg/kg en i.p. le produit conforme à l'invention s'oppose aux effets bronchoconstricteurs de l'histamine : cette action revêt son maximum d'intensité 30 minutes après l'administration du produit conforme à l'invention. C. Activité mucolytique L'inhalation répétée, dans certaines conditions expé rimentales,d'anhydride sulfureux, provoque, chez le rat, une hypersécrétion de mucus intra-bronchique susceptible d'obstruer plus ou moins complètement les bronches primaires et secondaires. Cette atteinte respiratoire, perceptible cliniquement, est confirmée par coloration au Bleu Alcian et la découpe le long des bronches principales suivie d'un examen à la loupe binoculaire et d'un examen histologique. L'administration curative d'un agent mucolytique diminue cette réaction muqueuse. Le protocole d'installation de la bronchite chronique est inspiré de celui décrit par A. QUEVAUVILLER et coll. (héra- pie, 1967, 22, 485 Poumon et coeur, 1970, 26, 71). Les animaux d'expérience sont des rats Wistar conventionnels (Le Genest), de sexe femelle, âgés de 8-10 semaines, pesant 210 g en moyenne au début des essais, L'exposition chronique des rats est réalisée dans une enceinte hermétique alimentée de façon continue par un mélange d'anhydride sulfureux et d'air à la concentration de 400 ppm. La chambre d'inhalation d'une contenance de 200 litres possède les dimensions suivantes : longueur 120 cm, hauteur 50cm profondeur 40 cm . Elle est construite en PVC "ARMODUR" avec une façade en plexiglass. Pour obtenir une arrivée uniforme du mélange S02/air, on adopte le principe de la rampe à gaz alimentée en son milieu et disposée à la partie supérieure de la chambre d'inhalation. Le contrôle de l'atmosphère gazeuse est réalisé par dosage iodométrique à l'aide d'un dispositif DMAGER. lies animaux sont exposés pendant 2 à 4 heures, à 5 ou 6 reprises par semaine. Après quatre semaines d'exposition, le 29ème Jour, c'est-à-dire après 65 heures d'inhalation d'air chargé de S02, les animaux sont répartis en différents lots présentant le même poids moyen, après élimination de quelques animaux gravement atteints. Divers traitements sont alors mis en oeuvre : - 15 rats ne recevant qu'un placebo (solution pseudocolloïdale de gomme arabique), - 15 rats sont traités quotidiennement par voie digestive (intubation individuelle) par 500 mg/kg de S-carboxyméthylcystéine (SCMC) (mucolytique du commerce), - 15 rats recevant par voie digestive 500 mg/kg/jour, de produit conforme à l'invention en suspension gommeuse. A noter qu'un groupe de 10 rats de même provenance et du même arrivage que les animaux rendus bronchitiques a servi de lot témoin sain, ces animaux étant hébergés dans les mêmes conditions que les autres mais n'ayant Jamais été placés en atmosphère d'SO. Tous les traitements sont administrés sous forme de suspensions gommeuses (3 % de gomme arabique) sous le volume uniforme de 1 ml/100 g de poids corporel, les deux lots témoins ne recevant que la solution de gomme arabique à 3 . Signalons, enfin, que pendant toute la durée du traitement, les expositions en atmosphère d'S02 sont poursuivies selon l'horaire qui figure dans le tableau I ci-aprds TABLEAU I SEQUENCE DES EXPOSITIONS AU S 2 PENDANT TRAITENT Durée des Durée Joure Expositions cumulée 29 4 heures 65 heures 30 2 - 67 31 2 - 69 32 2 - 71 33 - - 71 34 2 - 73 35 2 - 75 36 3 heures 78 heures 37 2 - 80 38 2 - 82 39 - - 82 40 - - 82 41 3 - 85 42 2 - 87 43 3 heures 90 heures 44 2 - 92 45 2 - 94 46 2 - 96 47 - - 96 48 3 - 99 49 1 - 100- 50 2 heures 102 heures 51 2 - 104 - 52 2 - 106 53 - - 106 - 54 - - 106 55 3 - 109 56 1 - 110 57 - - 110 heures 5ème semaine 14 heures en 6 expositions 6ème semaine r 12 heures en 5 expositions 7ème semaine 13 heures en 6 expositions 8ème semaine 10 heures en 5 expositions Sacrifice le 57ème Jour après 110 heures d'expo- sition Les critères suivants permettent de juger la gravité de la bronchite expérimentale au SO2 : - ralentissement de 11 évolution pondérale représentée au Tableau II ci-dessous ou chute de poids : le rat bronchitique présente un aspect cachectique ; son amaigrissement est spectaculaire TABLEAU II Poids Moyen des Rats après Lot de Rats 5ème Sem. 6ème Sem. 7ème Sem. 8ème Sem. Témoins non 207 202 204 214 traités (2 morts (3 morts (4 morts sur 15) sur 15) sur 15) Rats traités 213,5 224 229 240 à la SOMC Rats traités su produit 217 224 227 246 conforme à l'invention Rats témoins 240 250 260 263 - aspect maiadir, prostratlon, nerissement des poils, opacification corméenne, chute des poils au niveau du museau et des yeux; - léthalité survenant le plus souvent lorsque le poids oscille entre 140 et 160 g, les animaux étant en hypothermie;; - sécrétions nasales, respiration stertoreuse avec tirage, palpation thoracique douloureuse. L'examen des rats fait ressortir nettement que 1 ) La léthalité est supprimée : alors que chez les témoins bronchitiques 4 morts (rat 27 %) surviennent entre le 29ème et le 57ème jour d'exposition,iln'est relevé aucune mort dans les groupes traités aussi bien dla SGMC qu'avec le produit conforme à l'invention (cf. le tableau II ci-dessous). 20) L'état général des témoins bronchitiques s'aggrave, tandis qu'au contraire on note une très nette amélioration dans les deux groupes d'animaux touJours exposés au S02 mais recevant de la SONO ou le produit conforme à l'invention. 30) L'amélioration la plus spectaculaire concerne la fonction respiratoire : on note, en effet, chez les seuls ani maux traités, la disparition de toute gêne respiratoire et l'absence de toute réaction douloureuse à la palpation thoracique, ainsi que la diminution ou le tarissement de la sécrétion nasale. 40) L'examen des courbes de croissance montre 11 effet des traitements. L'examen macroscopique, à la loupe binoculaire (x10) de la coupe frontale des poumons droit et gauche, confirme la réalité de cette efficacité des traitements par la SONO et surtout par le produit conforme à l'invention 24 heures après l'arrêt du traitement (le 57ème Jour de l'expérimentation, après 110 h. d'exposition en atmosphère d'S02), les organes thoraciques, coeur et poumons, sont prélevés en un seul bloc après anesthésie des animaux (5V mg/kg en i.p. de pentobarbital sodique) qui sont alors vidés de leur sang par ponction au niveau de l'aorte abdominale. Le mucus intra-bronchique est fixé en injectant dans la trachée 7 à 2 ml de formol à 10 pu 100 (injection réalisée en 120 secondes pour ne pas décoller les éventuels amas muquoux). L'ensemble coeur-poumon est alors plongé dans cette solution de formol pendant 24 heures et la fixation est parache-vée dans un bain d'alcool absolu pendant 2 heures. La coloration est effectuée par inj.ection de bleu Alcian à 1 p. 100 dans chacune des bronches principales à raison de 0,05 ml par poumon. Lors de Examen à la loupe binoculaire, les paramètres suivants sont étudiés pour établir la gravité de llatteinte- bronchique dans les divers groupes de rats - volume pulmonaire - diamètre bronchique - hyperplasie péribronchique - présence ou non d'un voile muqueux, d'amas nodulaires ou de bouchon compact, entraînant l'obstruction partielle ou totale des bronches primaires ou secondaires~ On remarque alors que, par rapport à ce que l'on observe chez les témoins bronchitiques, le traitement par le produit conforme à l'invention entraîne :: - une réduction de l'hypertrophie pulmonaire plus marquée que sous l'effet de la SCMCt - une faible diminution du diamètre bronchique, moins marquée que sous l'influence de la SONO, - une hyperplasie péribronchique plus importante, demeurant toutefois moindre que celle qui est observée dans le groupe traité par la SCMC,, - un pourcentage moindre de voile muqueux et d'amas nodulaires et l'absence de tout bouchon compact, d'oû il résulte moins d'obstruction partielle et l'absence de toute obstruction totale au niveau des bronches primaires, - un nombre moins élevé de voile muqueux et d'amas nodulaires, l'absence de tout bouchon compact, entraînant un pourcentage moindre d'obstructions partielles ou complètes au niveau des bronches secondaires. Il est à noter que, dans l'ensemble, la protection conférée par le produit conforme à l'invention est supérieure à celle qui résulte de l'administration de S-carboxyméthylcystéine. Il résulte des propriétés pharmacologiques dont il vient d'être rendu compte, que le nouveau médicament conforme à la présente invention doit être considéne comme un mucolytique remarquable aussi bien par son action mucolytique que muco-régulatrice et qu'il constitue de ce fait un médicament de choix en pneumologie et pour le traitement de toutes les affections de l'appareil broncho-respiratoire(surtout pour les affections du tractus respiratoire accompagnees d'une altération de la production du mucus)et en O.R.L. (pharyngite,sinusite,otite, etc...) lie nouveau médicament conforme à l'invention peut être administré seul ou en association avec d'autres médicaments. Ainsi que cela ressort de ce qui précède, l'invention ne se limite nullement à ceux de ses modes de réalisation et d'application qui viennent d'etre décrits de façon plus explicite;- elle en embrasse, au contraire, toutes les variantes qui peuvent venir à l'esprit du technicien en la matière, sans s'écarter du cadre, ni de la porte de la présente invention. REVENDICATIONS 1 - Nouveaux dérivés de l'acide L-(thienyl-2)2 thiazolidinecarboxylique-4, caractérisés en ce outils répondent a la formule générale I dans laquelle R représente un groupe hydroxy-, métalloxy, alcoxy-, amino-, alcoylamino- ou dialcoylamino-. 20- Procédé de préparation de nouveaux dérivés de formule générale I selon la Revendication 1, caractérisé en ce que l'on condense l'acide L-(thienyl-2)2-thiazolidine-carboxylique-4 de formule III, ou l'un de ses derivés, avec le chlorure de l'acide théophylline-éthanoSque de formule II, suivant la réaction composé de for mule I 30- Procédé de préparation selon la Revendication 2, caractérisé en ce que l'acide L-(thienyl-2)2-thiazolidine-carboxylique-4 est introduit dans le milieu réactionnel en suspension dans du chlorure de méthylène auquel on a préalablement ajouté de la triéthylamine. 40- Procédé de préparation selon la Revendication 2, caractérisé en ce que le chlorure d'acide théophylline-éthanoique est introduit dans le milieu réactionnel sous la forme d'une solution dans du chlorure de méthylène. 5 - Procédé de préparation selon lune quelconque des Revendications 2 à 4, caractérisé en ce que les solvants utilisés lors de la condensation sont anhydres. 6 - Médicaments et compositions thérapeutiques caractérisés en ce qu'ils eontiennent comme constituant actif, l'acide L-(diméthyl 1-3 dioxo 2-6 tétrahydro 1-2-3-6 purinyl 7)2-acetyl 3 (thienyl-2)2 thiazolidine-carboxylique-4, représenté par la formule générale I, selon la Revendication 1, et/ou au moins l'un de ses dérivés.