Brevet FR2329644A1 — publié le 19770527

La présente invention concerne un procédé pour produire des L-aminoacides et plus particulièrement un procédé pour pr..iuire la L-phénylalanine, le L-tryptophane at lours dérivés partir de la benayl-5-hydantoîne, de l'indolylméthyl-5- hydantoine at de leurs déritvés. On prépare les composés d'hydantoîne prézités par réaction de Strecker à partir de l'aldéhyde e ils constituent des intermédiaires utiles pour prodduire les L-amdncacides. Par exemple, on hydrcyse les composés d'hydantoîne en L-amdncacides aven de enzymes produites par Plavobacterium proteus ATCC 12848 (brevet japonais publié n 13850/1967) La demanderesse a découvert que la nouvelle souche Plavobaeterium aminogenes nov . sp. prodeit essentiellement dans ses cellutes une enzyme ayant une activité remarquablement élevée de transformation des composés dthydantotne de formule où r représente un radit@@ @@ényle, phényle substitué, @@@@@@ ou @ndolyle substitué, en un L-aminoacide de formnle où R a la méme définition que dans la formule 1, avec un rendement très élevé de production des L-amincacides, lorspu'on maintient le scomposés d'hydentoine eu solution aqueuse, en présence de l'enzyme de Flavobacterium aminogenes nov. sp. L'invention es déerite plus en détail ci-après. Les caractéristiques taxonomiques de Flavobacterium aminogenes nov. Sp. AJ-3912 (FERM-F 3133) sort les suivantes 1. Caractéristiques morphologidues. Bâtonnets mesurant 0,3-0,5 x 0,7 -0,9 mioron, non pléomorphes, immbiles, à gram négatif, non sporulants et non acido-résistants. 2. Caractéristiques de culture. gélose nutritive : culture médiocre, colonies circulaires, convexes ou en relief, entières et jaune paille; strie sur gélose ; culture modérée, lisse, filiforme, ambrée, translucide et brillante ; bouillon nutritif : culture moderés, trouble, pas de développement en surface, sédiment visq. eux : culture en piûres sur @@@atine : liquéfaction stratifiée : lait tournesolé : @@@ meaif é : lait au pourpro de @@@@@@@@@ : légèremenn @@ idi@@é : pas de @iquéfaction. 3. Caractéristinoes @@@@@@@@@@. Production de nitridte a partir de nitrstes, on n'obsetve pas de dénitrification, pas de production d'indol, test au rouge de méthyle négatif, test de Voges-Proskater négatif, production d'acide sulfhydrique, pas d'hydrolyse de l'emidan, pas d'@tillsation de l'acide citrique dans le milien de Koser, mais utilisation dans le milieu de Christensen, pas d'utilisation des nitrates ni de l'ammoniac, pas de production de pigment soluble dans l'eau, uréase négative, oxydase fégèrement positive, catslase positive, culture à pH 6-9, fesmentation montro que @es germes sout oxydants, predaction d'acide mais non de gaz à Par@ir da D-Gi@@@@ et pas de prodection d'acide ni de gaz à partir du L-arabinose, D-@vlase, D-@annose, D-fructose, D-galactose, maltose, lactose, tréhalose, D-sorritoi, D-@ennitol, D-inositol, glycéxol, amidon, D-ribose, L-chamnose, L-reffinose, érythritol, dulcitol, cellobiose, mélibiose , adonitol, salicine et esculine. Assimilation de l'acide acétique, de l'acide lactique du D-glucose, du D-xylose, du D-msnnitol et de l'acide protocatéchique, mais aps d'assimilation de l'acide p-hydroxybenzoîque, de l'acide gluconique et du lactose Hydrolyse de la caséine, désoxyribonucléase positive, culture sur NaCl à 2% mais non à 5% , 1'acide désoxyribonucléique est constitué de 69,0% de guanine-cytosine. Selon le "Manual of Determinative Bacteriology" 8e édition (1974) de Bergey, la souche AJ 3912 appartient au genre Flavobacterium car elle est constituée de batonnets à gras négatif, immobiles, aérobies, -oxydasepositifs (faiblementj, catalase-positif s, formant un pigment jaune et ne décomposant que lentement le glucose et uniquement par oxydation. L'espèce Flavobacterium est divisée en deux sections, la première (section I) dont la désoxyribonucléase renferme 26 à 43% de guaninecytosine et la seconde section-(section II) dont la teneur en guanine-cytosine est de 63-70%. La souche 3912 appartiant donc à la section II par suite de sa teneur de 69% en guanine-cytosine. Quatre espèces mobiles et deux espèces immobiles appartiennent à 12 section Il. La souche AJ 3912 est immobile, cependant, elle diffère de F. eapsulatum par les points suivants . F. capsulatum est halophile, ne liquéfie pas la gélatine, ne produit pas d'acides à partir du lactose, du saccharose, du maltose, du xylose, du sorbitol et du raffinose. La souche AJ 3912 diffère également de F. lutescens par les points suivants F. lutescens est halophile, pousse à 37 C et hydrolyse l'amidon tandis que la souche AJ 3912 n'est pas halophile, ne pousse pas a 370C et n'hydrolyse pas l'amidon. Pour les raisons précitées, la souche AJ 3912 est considérée comme une espece nouvelle appartenant au genre Flavobacterium. Lorsqu'on cultive Flavobacterium aminogenes nov. sp. dans les milieux classiques, enzyme transformant les composés d'hydantùtne en L-aminoacides est essentiellement produite dans les cellules et faiblement dans le bouillon de culture Les milieux de culture utilisés renferment une source de carbone, une source d'azote des ions minéraux et, lorsqu'il est nécessaire, des substances untritives organiques.Lorsque le milieu de culture reuferme un composé d'hydautoîne de formule 1, (ei que l'lndolylméthyl-5 hydantoîne, l'activité enzymatique est généralement bien supérieure tes sources de carbone sont par exemple des hydrates de carbone comme le glucos,e le sylose, le saccharose, un hydrolysat d'amidon, l'amidon ou des mélasses, des acides organiques tels que l'acide acétique ou l'acide lactique, des alcools tels que l'alccol éthylique, l'alcool méthylique ou le glycérol. Les sources d'azote sont par exemple l'ammoniac, des ions azotés et l'urée On peut citer comme exemples d ions minéraux les ions phosphate, magnésium ferreux calcium, potassium, manganèse et les autres ions classiques. On peut citer comme substances nupritives secondaires des vitamines, des aminoacides et des matières brutes renfermant ces substances telles que les extraits de levure, les peptones, le bouillon, l'infusion de maSs et les hydrolysats de caséine. On effecture la culture à pu 6 à 9 et de préférence entre 20 et 409C en aérobiose. Après 1 à 5 jours de culture, l'enzyme est produite dans les cellules Comme source d'enzymes, on utilise de préférence un bouillon de culture renfermant les cellules, des cellules intactes, des cellules homogéneisées, des cellules traitées aux ultrasons, des nellules lyophill sées ou des cellules déshydratées par des solvants etc.On peut égaiement utiliser comme source d'enzymes des fractions protéiques séparées par exemple de l'homogénéisat de cellules ou du produit de traitement des -cel lules par les ultrasons selon un procédé classique, par exemple la filtration sur gel ou le relargage On suppose que les enzymes qui participent a la réaction de transformation des composés d'hydantofne en L-amino-acides sont multiples. On peut citer comme exemples de composés d'hydan- totne utiles dans l'invention : la benzyl-5 hydantotne, la (hydroxy-4' benzyl)-5 hydantotne, la (dihydroxy-31,4' benzyl)-3 hydantoine, la (dihydroxy-2',4J benzyl)-5 hydantoîne, la (méthylènedioxy-3',4' benzyl)-5 hydantoïne, la (diméthoxy-3',4' benzyl)-5 hydantvtne, la (méthoxy-3' (ou -4') hydroxy-4 ( ou -3') benzyl)-5 hydantoîne , la (lsopropylidènedioxy-3',4' benzyl)-5 hydantoïne , la (cyclohexylidènedioxy-3',4'-benzyl)-5 hydantoîne, l'indolylméthyl-5 hydantotne, la (hydroxy-57 indolylméthyl)-5 hydantoïne, la (méthyl-5' indolylméthyl)-5 hydantotne et la (trihydroxy-3',4', 5' benzyl)-5 hydantotue. A partir des composés dthydantotne correspondants, on prépare les aminoacides suivants sous la forme L . la phénylalanine, la tyrosine, la dihydroxy-3,4 phénylalanine, la dihydroxy-2,4 phénylalanine, la méthylènedioxy-3,4 phénylalanine, la diméthoxy-3,4 phénylalanine, la méthoxy-3 (ou -4) hydroxy-4 (ou -3) phénylalanine, l'isopropylidènedioxy-3,4 phénylalanine, la cycîohexylidènedioxy-3,4. phenylalauine, le tryptophane, I 'hydroxy-5 tryptophane, le méthyl-5 tryptophane et la trihydroxy-3,4,5 phénylalanine. Le mélange réactionnel renferme le composé d'hydan- totne et enzyme ou la zource d'enzyme de Flavobacterium aminogenes nov. sp. Les composés d'hydantoïne sont présents généralement dans le mélange réaction- nel à une concentration inférieure à 50 g/dl et de préférence inférieure @ 10 g/dl. On utilise généralement comme solvant une solution aqueuse. On utilise avec l'eau des solvants hydrophiles ou hydrophobes pour accrottre la solubilité des composés d'hydantotne. Particulièrement, pour former le L-tryptophane à partir de l'indolylméthyl-5 hydantotne, il est préférable d'ajouter au mélange réactionnel, pour empêcher une décomposition ultérieure du L-trypto- phane, les agents suivants : cyanure de sodium, chlorhydrate d'hydroxylamine, chlorhydrate de phénylhydrazine, chlorhydrate de semicarbazide, ferricyanure de potassium, D-cyclosérine, azide de sodium, phénol, etc. On ajoute au mélange réactionnel, renfermant la dihydroxy- benzyl-5 hydantoîne, la trihydroxybenzyl-5 hydantoine et la (hydroxy-5' indolylméthyl)-5 hydantoïne , des agents réducteurs tels que le sulfite de sodium, pour empêcher l'oxdation des composés d'hydantoïne. On maintient le mélange réactionnel à un pH compris entre 4 et 11 et, de préférence, 7 et 10, et à une température comprise entre 15 et 700C, de préférence 30 à 500C. Après 5 à 150 h, le l-aminoacide est accumulé dans ie mélange réactionnel. On peut récupérer le L-aminoacide accumulé selon un procédé classique, tel que la chromatographique ionique. L'invention est illustrée par les exemples non limitatifs suivants. EXEMPLE T On prépare un milieu ae culture aqueux renfermant 0,5 g/dl de glucose, 1,0 g/dl d'extrait de levure, 1,0 g/dl de paptone, 0,5 g/dl de chlorure de sodium et 0,2 g/dl de DL-indolylméthyl-5 hydantoïne. On place des portions de 50 ml du milieu de culture aqueux dans des flacons à agitation de 500 ml, on stérilise à la vapeur et on ensemence avec Flavobacterium aminogenes nov. sp. AJ 3912. On agite chaque flacon à 300C pendant 16 h. On sépare les cellules de 500 ml de bouillon de culture par cantrifugation, on les lave à l'eau salée physiologique et on les met en suspension dans 500 mi de tampon phosphate 0,1 M (pH 8,0). On ajoute à des portions de 5 ml de suspension, 50 mg des composés d'hydantoîne figurant dans le tableau I et 15 mg de sulfite de sodium dans le cas de la Dl-(dihydroxy-3',4' benzyl)-5 hydantotne et de la D-(hydroxy-5' indolylméthyl)-5 hydantoïne et on maintient à 37 c pendant 24 h Les quantités de L-aminoacides indiquées dans le tableau I ci-dessous s'accumulent dans le milieu réactionnel. TABLEAU I Composés d'hydantoïne L-aminoacides accumulés mg/ml DL-benzyl-5 hydantoîne L-phénylalanine 8,7 DL-(dihydrox-3',4' benayl)-5 L-dihydroxy-3,4 phényl hydantoïne alanine 8,9 TABLEAU I (suite 1) Composesd'hydantoîne L-aminoacides accumuiés mg/ml DL-(méthylènedioxy-3',4' L-méthylènedioxy-3,4 benzyl)-5 hydantoîne phénylalanine 9,0 Dl-(diméthoxy-3',4' beazyl)-3 L-diméthoxy-3,4 phénylalanine 0,5 hydantoîne DL-(méthoxy-3' hydroxy-4' L-méthoxy-3 hydroxy-4 benzyl)-5 hydantoîne phénylalanine 8,7 DL-indolylméthyl-5 hydantoîne L-tryptophane 2,6 DL-(hydroxy-5' injdolylméthyl)-5 L-hydroxy-5 tryptophane 0,72 hydantoîne D-(hydroxy-5' indolylméthyl)-5 L-hydroxy-5 tryptophane 0,73 hydantoîne EXEMPLE 2 On expose Flavotaaierium aminogenes AJ 3912 à l'action de la N-nitro N'-méthyl N-nitrosoguanidine et on isole, à partir de la souche parente traitée, par répitcation, deux mutants AJ 3939 (FERM-P 3134) et AJ 3940 (FERM-P 3135) qui sont incapables de se développer dans un milieu renfermant du L-tryptophane comme seule source d'azote. On cultive les souches AJ 3912, AJ 3939 et AJ 3940 dans 3 mi des milieux I et II ci-apres placés dans des tubes à essai de 30 mI > à 30 C pendant 24 h. TABLEAU IT Milieu I Milieu II Glucose 5 g/l 5 g/l KH2PO4 1 g/l 1 g/l K2HPO4 3 g/l 3 g/l MgSO4, 7H2O 0,1 g/l 0,1 g/l MgCl2 10 mg/l 10 mg/l CaCl2, 2H2O 1 mg/l 1 mg/l TABLEAU II (suite) Milieu I Milieu II Solution d'ions métalliques * 1 ml/l 1 ml/l (NH4)2SO4 1,5 g/l Urée 1,5 g/l L-tryptophane - 7,3 g/l * Solution d'ions nétalltques : 8 800 mg de sulfate de zine heptahydraté (ZnSO4, 7H2O), 970 mg de chlorure ferrique hexahydraté (FeC13,6H-20), 393 mg de sulfate cuivrique pentahydraté (CuSO4, SH2O), 72 mg de chlorure de manga nèse tétrahydraté (MnCl2, 4H2O), 37 mg de molybdate d'ammonium tétrahydraté (NH4)6MO7O24, 4H2O) et 88 mg de tétraborate de sodium monohydraté (Na2B4O7, H2O) dans 1 litre d'eau. On détermine le développement en mesurant la densité optique à 562 nm du bouillon de culture. Les résultats figurent dans le tableau III ci-dessous. TABLEAU III Développement relatif Souctie Milieu I Milieu il AJ 3912 100 100 AJ 3939 98,6 10,1 AJ 3940 100 12,6 On obtient les cellules des souches AJ 3939 et AJ 3940 en opérant comme dans l'exemple 1 et on effectue la réaction de conversion comme dans l'exemple 1. les couches AJ 3939 et AJ 3940 produisent respectivement5,4 mg/ml et 5,6 mg/ml de L-tryptophane. EXEMPLE 3 On cultive Flavobacterium aminogenes AJ 3940 en opérant comme dans l'exemple 1 et on centrifuge le bouillon de culture obtenu pour séparer les cellules. On lave les cellules à l'eau salée physiologique. On met en suspension 10 g de cellules dans 200 ml de tampon phosphate 0,1 M (pH 8,0) renfermant 2 g de DL-indolylméthyl-5 hydantoîne, On maintient le mélange réactionnel à 43 C pendant 27 h. Le mélange réantion- nel renferme 1r75 g de L-tryptophane. On centrifuge le mélange réactionnel pour séparer les cellules, on filtre avec une membrane d'ultrafiltration et on évapore à 30 ml. On obtient des cristaux par refroidissement et on les recristallise dans une solution aqueuse d'éthanol. Les cristaux pèsent 1,30 g. On identifie les cristaux en les comparant a un échantillon connu de L-tryptophane par spectroscopie en résonance magnétique nucléaire, diffraction des rayons X, détermination du Rf par chromatographie sur papier et mesure du pouvoir rotatoire optique. La pureté optique des cristaux est de 99,r/. EXEMPLE 4 On prépare des cellules de Flavobacterium aminogenes M 3912 en opérant comme dans l'exemple 1. On met en suspension 50 g de cellules dans 1 litre de tampon phosphate 0,1 M (pH 8,0) renfermant 3 g de sulfite de sodium et 10 g de D-(hydroxy-5' indolylméthyl)-5 hydantotne. On maintient le mélange réactionnel à 370C pendant 24 h; il contient alors 0,73 g de L-hydroxy-5 tryptophane. On obtient 0,53 g de cristaux de l-hydroxy-5 tryptophane en opérant comme dans l'exemple 3 On identifie les cristaux en les comparant à un échantillon connu de L-hydroxy-5 tryptophane en opérant comme dans l'exemple 3. La pureté optique des cristaux est de 99,2% EXEMPLE 5 On reprend l'exemple 4 en utilisant la DL-benzylhydantoîne au lieu de la D-(hydroxy-5' indolylméthyl)-5 hydantoîne Le mélange réactionnel renferme 1,73 g de L-phénylalanine.On obtient 1,41 g de cristaux en opérant comme dans l'exemple 3. On identifie les cristaux en les comparant à un échantillon connu de L-phéjnylalanine par spectroscopie en résonance magnétique nuéclaire, diffraction des rayons X, détermination du Rf par chromatographie sur papier et mesure du pouvoir rotatoire optique. La pureté optique est de 98,4%. EXEMPLE 6 On prépare un milieu de culture aqueux renfermant, par dl, 0,5 g de glucose, 0,5 g de sulfate d'ammonium, 0,1 g de phosphate monopotassique, 0,3 g de phosphate dipotassique, 0,01 g de sulfate de magnésium heptahydrate, 0,001 g de chlorure de calcium dihydraté et 5 mi d'infusion de maîs, on ajuste le pH à 7,0 et on introduit des portions ae 50 ml de milieu dans des flacons de 500 ml. Après stérilisation à 120 C pendant 15 mn, on ensemence le milieu avec la souche AT, 3940 et on maintient à 304C pendant 12 h en agitant. On ajoute au milieu de culture ci-dessus 0,35 g/dl de DL-indolylméthyl-5 hydantofne et on ensemence avec 2,5 ml du bouillon de culture précédemment indiqué et on maintient à 30 C pendant 20 h en agitant On ajoute à 5 ml de bouillon de culture, 250 mg des composés d'hydantotne indiqués dans le tab-leauIVet on maintient à 400C pendant 90 h. Dans le cas de la (hydroxy-5' indolylméthyl)-5 hydantotne et de la (dihydroxy3',4' benzyl)-5 hydantoîne, on ajoute de plus à la suspension 15 mg de sulfite de sodium. Les mélanges résctionnels renferment les quantités des L-aminoacides indiquées dans le tableau IV ci-dessous, TABLEAU IV Composés d'hydantoîne L-aminoacides accum mg/ml DL-(dihydroxy-3',4' benzyl)-5 L-dihydroxy-3,4 phényl hydantoîne alanine 27,0 DL-(méthylènedioxy-3',4' L-méthylènedioxy-3,4 benzyl)-5 hydantotne phénylalanine 44,5 Dl-(diméthoxy-3',4' benzyl)-5 L-diméthoxy-3,4 benzyl hydantotne phénylalanine 3,1 DL-(méthoxy-3' hydroxy-4' benzyl)-5 L-méthoxy-3 hydroxy-4 hydantotne phény lalanine 12,4 DL-benzyl-5 hydantotne L-phenylalanine 42,6 DL-(hydroxy-5' indolylméthyl)-5 L-hydroxy-5 tryptophane 8,9 hydantotne EXEMPLE 7 Aux suspensions cellulaires décrites dans l'exemple 6, on ajoute 250 mg de DL-indolylméthyl-5 hydantoîne, 290 mg d'inosine et 50 mg de phosphate monopotassique, on ajuste à pH 8,1 et on maintient à 40 C pendant 110 h. On dissout les sels de L-tryptophane et d'inosine précipités dans le mélange réactionnel en ajoutant au mélange réactionnel 5 ml d'hydroxyde de sodium 1N. Le mélange réactionnel renferme 44,5 mg/ml de L-tryptophane. EXEMPLE 8 On met en suspension 15 g de cellules de Flavobacterium aminogenes AJ 3912 préparées comme dans l'exemple 1 dans 300 ml de tampon phosphate 0,1 M (pH 8,0). On ajoute à la suspension 3 g de (méthylènedioxy3',4' benzyl)-5 hydantotne (mélange réactionnel I) ou 3 g de (dihydroxy-3',4' benzyl)-5 hydantoîne et 0,9 g de sulfite de sodium (mélange réactionnel II) ou 3-g de (méthoxy-3' hydroxy-4' benzyl)-5 hydantotne et 0,9 g de sulfite de sodium (mélange réactionnel III). On maintient. le mélange réactionnel a 370C pendant 30 h et le mélange réactionnel I renferme 2,73 g de L-méthylène- dioxy-3,4 phénylalanine, le mélange réactionnel II renferme 2,65 g de L-dihydroxy-3,4 phénylalanine et le mélange III renferma 2,78 g de L-méthoxy-3- hydroxy-4 phénylalanine. En opérant comme décrit dans l'exemple 4, on récupère 1,54 g de cristaux de L-méthylénedioxy-3,4 phénylalanine, 1,92 g de cristaux de L-dihydroxy-3, 4 phénylalanine et 1,71 g de cristaux de L-méthoxy-3 hydroxy-4 phénylalanine. EXEMPLE 9 On reprend le procédé de l'exemple 1 avec. un mélange réaction- nel renfermant, en plus des 25 mg de DL-indolylméthyl-5 hydantotne, un des additifs indiqués dans le tableau V. On maintiens le mélange réactionnel à 37 C pendant 16 h. Les quantités de L-tryptophane accumulées dans le mélange réactionnel figurent dans le tableau V. TABLEAU V Additif Concentration L-tryptophane accu mulé (mg/ml) Néant - 1,93 NH2OH, HCl 50 4,14 Phénylhydrazine, HCl 50 4,32 NaCN 5 2,58 Semicarbazide, HCl 5 2,48 Ferricyanure de potassium 5 2,64 D-cyèlosérine 5 2,59 Avide de sodium 50 3,33 Phénol 5 2,31 Les numéros FERM-P de Flavobacterium aminogenes nov. Sp. sont les numéros matricules attribues par l'institut de Recherche sur les Fermentations, Ministère des Sciences et Technologies Industrielles, d'Inage, Chiba-shi, Japon. On peut se procurer toutes les souches portant un numéro FELM-P en s'adressant à cet Institut. Bien entendu, diverses modifications peuvent étre apportés par l'homme de l'art aux dispositifs ou procédés qui viennent d'être décrits uniquement à titre d'exemples non limitatifs, sans sortir du cadre de l'invention. R E V E N D I C A T I O N S 1 - Procédé pour preparer un l-aminoacide de formule tu R représente un radical phényle, phényle substitué, indolyle ou indolyle substitue, caractérisé en ce qu'il consiste à (a) maintenir un composé d'hydantoîne de formule à un pH de 4 à ll dans une solution aqueuse, en présence d'une quantité efficace d'enzyme produite par Flavobacterium aminogenes nov. sp., cette enzyme étant capable de transformer le composé d'hydantotne en le L-aminoacide correspondant, et (b) récupérer le L-aminoacide formé dans la solution aqueuse. 2 - Procédé selon la revendication 1, caractérisé en ce que le composé d'hydantotne est la benzyl-5 hydantotne. 3 - Procédé selon la revendication 1, caractérisé en ce que le composé d1hydantotn,e est l'indolylméthyl-5 hydantotne. 4 - Procédé selon la revendication 1, caractérisé en ce que le composé d'hydantoïne est la (dihydroxy-3J,4' benzyl)-5 hydantotne. 5 - Procédé selon la revendication 1, caractérisé en ce que l'hydantoïne est la (méthoxy-3' (ou -4') hydroxy-4' (ou -3') benzyl)-5 hydantotne. 6 - Procedé selon la revendication 1, caractérise en ce que le composé dlhydantotne est la (méthylènedioxy-3',4' benzyl)-5 hydantotne. 7 - Procédé selon la revendication 1, caractérisé en ce que le composé d'hydantoïne est la (isopropylidènedioxy-3',4' benzyl)-5 hydantoïne. 8 - Procédé selon la revendication 1, caractérisé en ce que le composé d'hydantoïne est la (hydroxy-5' indolylmethyl)-5 hydantotne. 9 - Procédé selon la revendication 1, caractérisé en ce que le composé d'hydantotne est la (diméthoxy-3',4' benzyl)-5 hydantoiae. 10 - Procédé selon la revendication 1, caractérisé en ce que ltenzyme est produite par un mutant de Flavobacterium aminogenes nov. sp., ce mutant étant incapable de se développer dans un milieu contenant du L-tryptophane comme seule source dtazote. ll - Procédé selon la revendication 1, caractérisé en ce que l'enzyme est produite par Flavobacterium aminogenes nov. sp. FERM-P 3133, 3134 ou 3135. 12 - Procédé selon la revendication 1, caractérisé en ce qu'on produit l'enzyme en cultivant Flavobacterium aminogenes nov. sp. dans un milieu de culture aqueux contenant le composé d 'hydantotne. 13 - Procédé selon la revendication I, caractérisé en ce que la solution aqueuse renferme du chlorhydrate d'hydroxylamine, du chlorhydrate de phénylhydrazine, du cyanure de sodium, du chlorhydrate de semicarbazide, du ferricyanure de potassium, de la D-cyclosérine, de l'azide de sodium ou du phénol. 14 - Procéde selon la revendicaion 1, caractérisé en ce qu'on utilise comme source d'enzyme des cellules intactes de Flavobacterium aminogenes nov. sp., un homogénéisat de ces cellules, un produit de traitement de ces cellules par les ultrasons ou un lyophilisat de ces cellules