Brevet FR2337879A1 — publié le 19770805

La présente invention concerne la détermination de la densité ou de la molarité osmotique d'un liquide. L'invention permet notamment des déterminations précises de la densité ou de la molarité osmotique dtun liquide, lorsque des solutés non ioni sés tels que l'urée et le glucose sont présents dans l'échantillon de liquide. Il existe de nombreux domaines de la technique dans lesquels il est intéressant de connaître la molarité osmotique ou la densité d'un liquide. Ces branches de la technique comprennent la brasserie, l'analyse médicale (analyse de l'urine), la purification de eaux, etc. Il va sans dire qu'une méthode rapide et pratique de dét mination de ces paramètres ferait grandement progresser de nombreuses disciplines scientifiques, ainsi que toute technologie pour laquelle une détermination rapide et pré cise de ces caractéristiques d'un liquide peut être bénéfique. Ainsi, par exemple, si un technicien de laboratoirf- médical pouvait mesurer avec précision cs paramètres en quelques secondes sur des échantillons d'urine, non seulement le médecin serait adé dans son diagnostic par la raprndité des résultats obtenus pour un patient, mais l'efficacité du laboratoire atteindrait aussi un degré tel qu'il pourrait effectuer beaucoup plus d'analyses que cela n1 était possible jusqu1à présent. Bien que la présente invention offre une large gamme d'applications, la description qui suit sera axée principalement siir la détermination de la molarité osmotique ou de la densité de l'urine. L'extension à d'autres disciplines est évidente lo-s- que la manière dont l'invention s'applique à l'analyse de l'urine a été comprise. La détermination de la molarité osmotique de l'urine revêt une importance considérable dans le diagnostic et le traitement clinique des troubles impliquant des électrolytes aqueux. Par conséquent, pour etie complète, tme analyse d'urine doit comporter, et comporte ordinairement, une détermination de a molarité osmotique. La molarité csmotique est une propriété dépendant de la concentration d'une sclution donnée et elle est don en relation avec le point de congélation, ae point de fusion, le point d'ébullition la tension de vapeur et la pression osmotique, toutes ces propriétés dépendant également de la concentration. C'est une fonction du nombre de particules en solution par opposition à leur masse ou à leur poids spécifique. lia molarité osmotique est définie mathématiquement par la relation suivante Osm = dans laquelle "Osm"désigne la molarité osmotique d'une solution # est la constante de dissociation des substances dissoutes ou solutés, n est le nombre d'ions dissociés par molécule soluté dissocié et m est la concentration molaire de la solution. Par conséquent, à mesure que les solutés se rapprochent de la dissociation totale, # tend vers l'unité et l'équation se réduit à l'expression Osm = nm, c'est-à-dire l'équation d'un électrolyte idéal. Tendis qu1il existe une corrélation étroite entre la molarité osmotique et la densité d'une solution contenant un seul soluté, la corrélation diminue remarquablement dans des solutions complexes contenant des corps non ioniques. L'urine est un très bon exemple d'une solution du type qui s'écarte des électrolytes idéaux. Par exemple, dans une étude donnée, des densi- tés dourine de 1,016 correspondent à de s molarités osmotiques de 550 à 910 m Osm/kg (voir T. Rodman et Collaborateurs, "Journal of the American Medical Association", 167 : 172, 1958). lies méthodes cornues de détermination de la mclarité osmotique impliquent l'utilisation de divers osmomètres du com- merce dont la commande va de manl7ielle à entièrement automatique. Pour des applications cliniques, on choisit ordinairement la mesure du point de congélation, à cause de sa relative simplicité. Toutefcis, ces méthodes présentent de nombreux inconvénients. Elles sont longues, elles requièrent des étapes de centrifuga- tion pour éliminer les ma@ières solides, elles exiggent un aur r@f@@@@@@@ement @@-de@@@u@ @ @nt de @@ugélation, une crieta l@sation et une @ériode d'@@@@ te afin que @@ @empérature a@@@ le point de congéla1ion réelle. - lies méthodes antérieures de détermination de la densité utilisent des hydromètres, des urinomètres, des pycnomètres, des gravimètres, etc. Bien que ces méthodes connues aient une sensibilité satisfaisante, elles nécessitent toutes des instruments fragiles et volumineux qui doivent constamment être nettoyés, entretenus et étalonnés pour que leur fiabilité soit continuellement garantie. En outre, elles présentent de nombreux inconvénients associés avec la manipulation de ces instruments. Le ménisque peut être difficile à apprécier. La présence d'une écume ou de bulles à la surface du liquide peut gêner la lecture. Dans le cas des urinomètres, on observe une tendance à l'adhérence aux côtés du récipient contenant l'échantillon liquide.Dans le cas de l'urine, le volume de l'échanti@lon est souvent inadapté à la flottaison d'un urinomètre. On vient de réussir à franchir tous les obstacles indiqués ci-desùs et à les éliminer pratiquement, par une méthode de détermination exl;r8mement rapide de la molarité osrotique. Dans cette méthode, qui est 11 objet de la présente invention, un support est incorporé à des microcapsules fragiles du point de vue osmotique dont les parois sont formées d'une membrane polymère semi-perméable. Une solution contenant une substance colorée est encapsulée à l'intérieur des parois. Lorsque les capsules se trouvent au contact d'une solution dont la molarité osmotique diffère de la leur, un gradient osmotique est créé au travers les parois d'encapsulage. Ce gradient a pour effet que le solvant se diffuse à travers lesdites parois dans la direction de la plus grande molarité osmotique. Par conséquent, si le liquide interne contient un plus grand nombre de particules par unité de volume que l'échantillon, le solvant s'écoule dans les capsules en tendant à diluer leur contenu. Par suite de ce phénomène, la pression hydrostatique dans les capsules augmente en entraînant un gonflement et/cu une rupture, avec la libération concomitante de substances colorantes. La vitesse et le degré de libération du contenu des microcapsules sont fonction du gradient osmotique initial au travers des parois des capsules et, par conséquent, de la molarité osmotique cu de la densité du liquide extérieurement à la capsule. La technique des microcapsules permet au technicien de laboratoire de plonger simplement; un support dans un échantillon dourine, de le retirer et d'observer tout changement de couleur. On peut donc constater que des microcapsules constituent un net progrès technique. D'invention concerne en outre une méthode, une com- position et un réactif pour la détermination de la densité ou de la molarité osmotique d'un liquide contenant un soluté non ionique, mais ionisable. La méthode consiste à ioniser te soluté par contact du liquide avec un agent ionisant, puis à faire entrer le liquide en contact avec un réactif apte à produire une réaction décelable, par exemple une réaction colorée, en fonction de la densité ou de la molarité osmotique d'un liquide contenant le soluté sous la forme ionisée. L'intensité de la réaction décelable qui est produite est une fonction mathématique de la propriété en cours de détermination et peut etre lue par le technicien de laboratoire.Dans le cas d'une réaction colorée, ce technicien observe simplement la couleur et la compare avec une gamme colorée, l'intensité de la couleur étant fonction de la densité ou de la molarité osmotique. lie réactif préféré est formé d'un support auquel est incorporée une composition comprenant au moins un agent dont le contact avec in liquide contenant un soluté ionisable non ionique a pour effet d' ioniser ledit soluté, et une substance d'essai capable, par contact avec un liquide contenant le soluté sous la forme ionisée, de produire une réaction colorée décelable qui est fonction de a densité ou de la molarité osmotique du liquide en question. D'autres caractéristiques et avantages de la présente invention ressortfront de la description détaillée qui va suivre, faite en regard des dessins annexés sur lesquels la figure 1 est une courbe illustrant la variation de l'effet de l'uréase (temps en minutes portés en abscisses) sur la libération de matière colorante de microcapsules dans des solutions aqueuses d'urée en fonction de llabsorption (axe des ordonnées), pour diverses concentrations (faible concentration d'urée = 0,5 g %; concentration moyenne d'urée = 2,0 g%; forte concentration durée = 8,0 g %); et la figure 2 est un graphique illustrant les variations de la réflectance (%) de réactifs d'essai par rapport à la concentration en urée, cette concentration étant portée en abscisses et le pourcentage de réflectance étant porté en ordonnées. lies microcapsules qui se sont montrées avantageuses a' utiliser dans la présente invention ont une membrane polymère semi-perméable fragile du point de vue osmotique capable de retenir par encapsulage une phase interne contenant un soluté et une substance colorante convenable, par exemple un colorant ou son précurseur. Un soluté convenable est tffévu en quantité suffisante pour définir une densité ou molarité osmotique interne désirée. L'expression fragile du point de vue osmotique" fait allusion à l'aptitude de la paroi de la capsule à réagir à une pression hydrostatique interne en roman. ou en modifiant d'une autre façon les caractéristiques physiques de la paroi pour permettre la libération de la phase interne. lie terme "semi-perméable" fait allusion à l'aptitude de la membrane à être perméable à la portion de solvant du liquide externe à tester et à etre imperméable à la portion de substance dissoute ou soluté de la phase interne. lia densité d'un liquide est définie par le rapport du poids spécifique de ce liquide à celui. d'un liquide de référence, par exemple l'eau.Au sens du présent mémoire, le liquide dont la densité ou la molarité osmotique doit être détermines est un solvant pur ou un mélange de substances en solution dont l'ensemble se trouve dans un état liquide homogène. La molarité osmotique est définie par le nombre d'osmolet d d'un soluté par kilograrnme d'un solvant. TJne "osmole" est une unité de pression osmotique basée sur la concentration de particules de soluté en solution. L'invention offre une grande amélioration de la sensibilité dans 11 ionisation de solutés qui peuvent gener la détermination.Par conséquent, dans le cas de l'urine, qui peut renfermer des solutés non ioniques tels que l'urée et/ou le glucose, ces substances peuvent etre ionisées en sorte que lorsque le li quide entre en contact avec le réactif d'essai, la réponse de ce réactif reflète la concentration du soluté dans l'échantillon, y compris le soluté non ionisé qui s'y trouve initialement. L'ionisation de ces solutés est effectuée au moyen d'un agent ionisant. En termes généraux, il peut s'agir de tout moyen de transformation du soluté non ionique en composés ioniques, mais on utilise ordinairement un agent chimique ou catalytique, par exemple un enzyme hydrolysant dans le cas de l'urée. On mentionne à titre d'exemples l'uréase et l'urée-carboxylase (hydrolysante). Dans le cas du glucose, on peut utiliser un agent ionisant tel que la glucose-oxydase. Un réactif d'essai avantageux comprend au moins un nombre efficace de microcapsules renfermant une substance colorante qui est libérée lorsque les microcapsules sont exposées à un certain gradient osmotique en travers de leurs parois. lies parois des mierocapsules sont des membranes semi-perméables fragiles du point de vue osmotique et ces parois retiennent un sclu- té et une substance tinctoriale ou son précurseur, comme substance coloraljte. Ainsi, lorsque les microcapsules sont soumises à un gradient osmotique prédéterminé en travers de leurs parois, elles libèrent la substance colorante ou son précurseur. Les microcapsules peuvent etre préparées par divers procédés bien connus. On mentionne à titre d'exemple le composé décrit par "Agnew. Chem. Internat. Edit.", 14, 539 (1975) et dans les références bibliographiques qui s'y trouvent. Des techniques telles qu'une polycondensation interfaciale, une coacervation, etc., produisent des microcapsules. D'autres techniques telles que la centrifugation, le séchage par pulvérisation et d'autres moyens physio-mécaniques, peuvent de même être utilises dans la prépuration des microcapsules. lia polycondensation interfaciale est un procédé avan tageux de préparation-des microcapsules, en raison de la facilité relative de sa mise en oeuvre. Dans cette technique, deux corps réactifs tcomonomèrgs ou oligemeras) font amenés à réagir l'interface d'un système à plusieurs phas@s. Il s'y produit une polycondensation, formant une @ince pellicule polymère qui est insoluble dans les milieux contenant les monomères. Des microcapsules convenables ont été préparées en dissolvant un premier comonomère tel qu'une amine polyfonctionnelle dans une phase aqueuse contenant la substance colorée.Cette phase aqueuse est de préférence une solution d'une substance t-nctoriale ou de son précurseur et d'un soluté, en sorte que la solution a une grande densité ou une grande osmolarité par rapport à la gåmae présumée d'osmolarités du liquide à analyser Cette phase aqueuse est ensuite dispersée ou émulsifiée dans une phase non miscible à l'eau, par exemple une huile minérale. Un second comonomère tel qu'un halogénure d'acyle polyfonctionnel est ensuite ajouté C la suspension ou émulsion.Lorsque les comonomères sont des amines polyfonctionnellas et des halogénures d'acyle, des microcapsules de polyamide sont formées, chacune d'elles renfermant une portion de la phase aqueuse, c'est-à-dire la substance colorante. Outre LU7 polyamide, on peut aussi utiliser un polyester, un polyuréthanne, une polyurée, etc., comme polymère convenable pour former la membrane semi-perméable, fragile du point de vue osmotique, des microcapsules. lies propriétés physiques et mécaniques des capsules qui définissent la fragilité osmotique et la perméabilité de la paroi de a capsule sont sujettes à de nombreuses variations en fonction de la densité ou de l'osmolarité et du type de liquide à analyser. Il est connu d'utiliser des agents de réticulation pour accroître l'imperméabilité, la sensibilité et la résistance mécanique de polymères. Des agents tensio-actifs tels que des détergents peuvent être ajoutés pour réduire le diamètre des capsules. lies durées de réaction des monomères peuvent être prolongées pour accroître l'épaisseur de la paroi des capsules.D'autres moyens bien connus résidant dans l'influence exercée sur les conditions réactionnelles ou dans le choix du polymère, celui du solvant, etc., peuvent aussi être ut-ilisés pour agir sur la fra- gilité osmotique et/ou sur la perméabilité de la paroi-des capsules de manière à satisfaire aux applica-tions particulières de l'invention. On a trouvé que la stabilité à l'emmagasinage de microcapsules qui contiennent une phase liquide interne peut être améliorée de façon surprenante par une dessiccation des microcapsules. Cette dernière peut être réalisée par des moyens pratiques tels qu'une déshydratation sous vide, une déshydratation dans un dassicateur à vide, une lyophilisation, une déshydratation au point critique, etc.Par exemple, des microcapsules en polyamide contenant une phase aqueuse interne-de soluté et d'une substance tinctoriale ou de son précurseur peuvent être déshydratées en une période de 2 à 30 heures -sous pression réduite, par exemple de 10- à 10-4 4 mm de mercure. lias microcapsules déshydratées de cette façon se sont montrées stables pendant des périodes prolongées dans des conditions rigoureuses d'emmagasinage. Des substances dissoutes avantageuses à utiliser dans la phase aqueuse pour définir sa molarité osmotique doivent être solubles dans le liquide à analyser. Par conséquent, si ce liquide est de nature aqueuse, comble c'est le cas de l'urine, on peut utiliser touL sel hydrosoluble convenable. Il pourra t s'agir de Eels organiques et minéraux. lia chlorure de sodium s'est montré particulièrement avantageux à utiliser On peut largement -faire varier la concentration du soluté pour-satisfaire à l'analysa désirée.Il suffit que la phase interne de la microcapsule ait une densité ou une osmolarité suff@samment supérieure à celle du liquide à analyser pour qu'un gradient osmotique initial s'établisse en travers de la paroi de la capsule par contact avec 17 échantillon liquide. il est évident pour un spécialiste en ce domaine que la densité ou l'osmolarité de la phase interne doit etre assez grande pour que les capsules se rompent au moins en un certain nombre par contact avec la solution de l'échantil- loin, en libérant ainsi la substance colorante. Des exemples de substances colorantes que l'on peut utiliser comprennent ltalizarine, le bleu de bromothymol, le violet cristal, le bleu Evans, le vert malachite, 11 orangé de méthyle, le bleu de Prusse et des colcrants similaires. Il est également intéressant d'utiliser comme substance colorante un précurseur de matière tinctoriale qui peut réagir avec des substances complémentaires contenues dans l'échantillon à analyseur; Par exemple, des couleurs peuvent Être engendrées par des copulations du type diazonium, une oxydation, une réduction, une variation du pH et d'autres moyens similaires. Un précurseur très avantageux est l'acide chromotroplque qui, lorsqu'il est libéré des microcapsules, peut se combiner avec des sels de diaxonium tels que la 2,4-dichloraniline diazotée pour produire une couleur rouge. Dans une variante avantageuse de l'invention, les rnicrocapsules décrites ci-dessus sont fixées sur un support ou incorporées à ce support et utilisées à la manière d'un papier indicateur qu'il suffit d'immerger. Le réactif fixé sur son support peut être prépare par des procédés bien connus, qui consistant à imprégner un support absorbant avec les microcapsules définies ci-dessus, en formant ainsi un mélange intime, finement divisé, du support avec les microcapsules. Des liants se sont montrés avantageux à utiliser pour fixer les microcapsules au support. Parmi ceux qui se sont mcntrés particulièrement efficaces, on mentionne l'acétate de cellulose, l'acéto-butyrate de cellulese, l'hydroxypropylcellulose et la polyvinylpyrrolidone. lias liants que l'on pe'-t utiliser ne sont pas miscibles à l'échantillon à analyser et permettant l'absorp- tion de cet échantillon dans le support. Des supports absorbants que l'on peut utiliser avanta- geusement comprennent le papier, la cellulose, le bois, des nappes de résine synthétique, du papier à le fibre de erre, un feutre au polypropylène, des étoffes non tissées, des tissus, etc. La matière absorbante imprégnée est avantageusement fixée par tous moyens convenables à un support tel qu'une banda en matière polymère pour faciliter son utilisation. Dans une autre forme de réalisation de l'invention, les microcapsules décrites ci-dessus, en association avec un agent ionisant, sont incorporées à un support et l'ensemble a-s+ utilisé à la manière d'-un réactif d'immersion puis lecture. On peut préparer ce réactif par diverses ératlon bien connues qui consis- tent à imprégner une matière absorbante des microcapsules et d'un agent ionisant capable d'ioniser des solutés non ioniques contenus dans l'échantillon à analyser. Lorsque cet échantillon est un échantillon d'urine, l ' l'agent ionisant peut être l'uréase ou une urée-carboxylase (hydrolysante) et/ou la glucose-oxydase. Ce dernier enzyme hydrolyse le glucose tandis que les autres hydrolysent l'urée. Pour utiliser le réactif d'essai, on plonge la matière imprégnée dans le liquide à analyser et on le retire immédiatement. Si le liquide à analyser a une densité ou une osmolarité plus faible que la phase interne des microcapsules, une partie du solvant de l'échantillon se diffuse à travers les parois des capsules et l'élévation de la pression interne qui en résulte a pour effet de libérer la phase interne en produisant ainsi une couleur dans la matière imprégnée. La couleur ainsi produite est ensuil;e comparée avec des couleurs de référence pré-étalonnées, afin de déterminer la densité ou l'osmolarité de l'échantillon. Les étalons de couleur sont préparés en utilisant des liquides d'essai de densité ou d'osmolarité connue et un réactif d'essai identique à celui qui est utilisé dans l'analysa. Outre la compa- raison visuelle, on peut aussi utiliser diverses méthodes instrumentales pour déterminer la nature de la couleur développée, afin d'éviter ainsi toute détermination subjective de la couleur associée avec l'observation humaine. On a constaté que les réactifs conformes à l'invention sont très sensibles. Ceux qui sont préparés comme on vient de le décrire sont sensibles a ure différence de 0,010 unité de densité dans la gamme d'environ 1,000 à 1,050. Ils sont particulièrement utiles dans la détermination de la densité et de l'osmolarité de liquides tels que des solutions de sel et l'urine. D'autres gammes de densité peuvent être déterminées en utilisant res microcapsules ayant une fragilité osmotique et une perméabi- r té convenables et renfermant une phas dont la densité et 1' os- @olarité conrTrnennent. Par conséquent, os paramètres des microcapsule auvent être aisément adaptés ar l'homme de l'art pour couvrir plusieurs gammes de densité et d'osmclarité. L'invention est ill@strée @er les exemples suivants, donnés à titre non limitatif. A. Préparation du réactif d'essai Exemple 1 Préparation de microcapsules en vue d'études préliminaires de suspensions liquides ~ ~ Cet exemple illustre un procédé caractéristique de préparation de microcapsules de polyamide destinées à atra utilisées comme système colorant de la présente invention. On introduit dans un ballon 55 m d'huile minérale 25 ml de CCl4 1 g de bentonite 7 l de trioléate de sorbitanne("Span 85") On charge dans un premier bécher 3 ml de NaCl 1M 0,4 g de NaOH 0,75 ml d'éthylène-diamine 0,75 ml de diéthylène-triamine 0,5 g de bleu Evans On charge dans un second bécher 6 ml de CCl4 6 m7 de n-pentane 3 ml de chlorure de sébacyie La solution aqueuse contenue dans la premier bécher est ajoutée au contenu du ballon sous agitation à l'aide d'un agitateur magnétique à vitesse maximale, pendant environ 20 secondes.La vitesse d'agitation est ensuite réduite à une valeur juste suffisante pour empêcher la sédimentation de la phase dispersée. Ensuite, le contenu du second bécher est rapidement ajouté au ballon. On continue d'agiter pendant environ 1 heure, puis on sépare les microcapsules solides du milieu réactionnel par filtration du contenu du ballon. lies capsules isolées sont ensuite lavées à l'éther de pétrole et séchées à l'air. Parmi les capsules résultantes, 20 % ont un diamètre supérieur à 500 4, 60 % ont un diamètre compris entre 250 et 500 et 20 % ont un diamètre inférieur à 250 p. Exemple 2 Procédé avantageux de préparation des capsules On suit le mode opératoire de l'exemple 1 à la différence que le ballon contient les ingrédients suivants 550 ml d'huile minérale 400 rDl de CC14 25 ul de "Span 85" (trioléate de sorbitanne) de la firme Atlas Chemical Co. 11 g de bentonite 2.5 g de "Syloid 65" de la firme W.R.- Glace & Co. On agite le contenu du ballon au moyen d1un agitateur magnétique à vitesse relativement grande, pour maintenir l'état de dispersion. On charge dans un premier bécher 50 ml de solution d'acide chromotropique* 12 ml de diéthylène-triamine 12 ml d'éthylène-diamine 10 g de WaCl On charge dans un second bécher : 60 ml de CC14 60 ml de n-pentane 30 ml de chlorure de sébacyle 0,15 g de chlorure de trimésoyle *On prépare 1 a solution d'acide chromotropique en ajoutant assez d'eau à 65 g de NaOH et 10 e d'acide chromotropîque pour que le volume soit régal à 500 ml. La solution aqueuse contenue dans le premier bécher est ajoutée au contenu du ballon sous agitation à l'aide d'un agitateur magnétique réglé à vitesse maximale, pendant environ 20 secondes. La vitesse d'agitation est ensuite réduite à une valeur juste suffisante pour empêcher la sédimentation de la phase dispersée. Ensuite, le contenu du second bécher est rapidement ajouté au ballon. On continue d'agiter pendant environ 1 heure, puis on sépare les microcapsules solides du milieu réactionnel par filtration du contenu du. ballon. Les capsules isolées sont ensuite lavées à l'éther de pétrole et séchées à l'air. lies capsula':' résultantes sont tamisées et celles dont les diamètres sont compris entre 90 et 125 microns sont recueillies. Exemple 5 Association de la composition préférée avec un support Cet exemple illustre l'association des microcapsules de l'exemple 2, d'un agent ionisant (uréase) et d'un support. On utilise comme support du papier de marque déposée "lCTOSTIX" contenant de la 2,4-dichloraniline diazotée, de la firme Miles Laboratories Inc., Elkhart, Indiana. On découpe le papier en rectangles de 5,08 1 1C,16 rr. On prépare une solution à 2 % en poids/volume d'hydroxypropylcellulose dans le chloroforme. On met de l'uréase en suspension dans la solution, en quantité d'environ 20 mg/ml (2000 unités internationales/ml) et on homogénéise la suspension résultante en la faisant passer de force entre un tube de verre et un piston à frottement dur en "Teflon" (marque déposée d'une résine flucrocabonée de la firme E.I. duPont de Nemours, Inc.).L'uréase, extraite de Canavalia ensiformis séché, est un produit du départanent de recherche de la firme Miles Laboratories Limited, Goodwood, South Africa. On ajoute 1 g des capsules de l'exemple 2 à 10 ml de la suspension d'uréase et on applique la suspension résultante sur le papier contenant le sel de åiazonium en utilisant une l-a- clette réglée pour déposer une pellicule humide de 0,30 mm dXépaisseur. lie papier enduit est ensuite séché dans une étuve à 570C pendant environ 3 minutes et il reste ainsi l'uréase et les microcapsulas incorporées au support et à l1hydroxypropylcellulose. Exemple 4 Association d'une forme avantageuse des microcapsules avec un support absorbant ~ ~ Une solution aqueuse de chlorure de sodium est formée in situ en utilisant de l'hydroxyde de sodium pour neutraliser le gaz chlorhydrique libéré par fcrmation du polymère et cette solution est capsule avec l'acide chromotropique utilisé comme précurseur tinctorial, dan une membrane en polyamide. On charge dans un ballon 55 ml d'huile minérale 25 ml de tétrachlorure de carbone 1,0 g de bentonite On introduit dans un premier bécher 3,0 ml d'eau 0,4 g de NaOH 0,75 ml dléthylène-diamine 0,75 ml de diéthylène-diamine 0,1 g d'acide 4,5-dihydroxynaphtalène-2,7 disulfoniqua (acide chromotropique) On charge dans un second bécher 6,0 ml de tétrachlorure de carbone 6,0 ml ce pentane 3,0 ml de chlorure de sébacyle 25,0 l de chlorure de trimésoyle En ut lisant les mélanges ci-dessus, on prépare des mîcrocapsules par le mode opératoire décrit dans l'exemple 1. lie composant tinctorial complémentaire de acide chromotropique, c'est-à-dire la 2,4-dichloraniline diazotée, est formé dans une solution d'imprégnation préparée par le procédé décrit dans le brevet des Etats-Unis d'Amérique N 3 585 001, par association des constituants suivants, dans l'ordre indiqué, sous agi@ation continue Composé Quant-te Méthanol 20,0 ml 2,4-dichloraniline 0,20 g Eau distillée 20,0 ml Nitrite de sodium 0,10 g Sel disodique de l'acide 1,5-naphtalènedisulfonique 0,60 g Laurylsulfate de sodium 1,50 g cide sulfosalicylique 2,0 g Méthanol 50,0 ml On immerge du papier-filtre "Whatmann" 3MM dans la sclution ci-dessus et @n le @etire immédiatement.On laisse ensuite le papier im@régné sé@@er l'air et @@ le découpe en carrés de 5 mm x 5 nm. Chaque support imprégné ainsi produit est placé à 11 extrémité d'une bande découpée dans une feuille de polystyrène, au moyen d'un ruban rendu adhésif sur les deux faces. Les microcapsules préparées comme décrit ci-dessus sont associées avec le support renfermant le composant complémen ta-re, par le mode opératoire suivant : on applique environ 50 pl d'une solution à 2 % en poids/volume d'hydroxypropylcellulose dans le chloroforme au support imprégné puis on disperse uniformément les microcapsules à la surface du support. En quelques minutes, le chloroforme s'évapore, et les microcapsules sont ainsi fixées à la surface et dans la masse de la matière imprégnée et de l'hydroxypropylcellulose utilisée comme liant, en formant le réactif d'essai pr8t à l'emploi. Pour déterminer la sensibilité des réactifs d'essai ainsi préparés, les substrats des différents réactifs d'essai prêts à l'emploi sont plongés (et immédiatement retirés) dans des solutions aqueuses d'essai contenant du chlorure de sodium à des concentrations de 0, 0,4 M, 0,8 M, 1,2 M et 1,6 M. Ces concentrations en sel correspondent respectivement à des densités de 1,000, 1,010, 1,020, 1,030 et 1,040. Une couleur rouge ou lie de vin intense se développe et se stabilise sur le support en une période d'environ 6 minutes après son immersion dans la solution d'essai, la variation de l'intensité de la couleur étant inversement proportionnelle à la concent-ration en NaCl dans la solution d'essai et,par conséquent, à la densité de cette dernière. La couleur est produite par réaction de l'acide chromotropique libéré des microcapsules et du composant tinctorial complémentaire fixé par imprégnation dan le support. Par une comparaison vi- susîJa, il est possible d'apprécier des différences de couleur, résultant du contact avec les solutions d'essai, de 0,01 unité de densité seulement. Des résultats similaires sont obtenus lors quton utilise diverses autres solutions aqueuses de sel, y compris l'urine, à la place des solutions salines d'essai indiquées ci-dessus. B. Effet de l'uréase sur la sensibilité à des concentrations variables d'urée Exemple 5 Capsules témoins On prépare des microcapsules conformément à l'exemple 1 et on les soumet à un essai pour déterminer la vitesse et le degré de libération du colorant dans les conditions expérimentales. On place environ 25 mg de microcapsules séchées dans trois cuves spectrophotométriques normalisées. On prépare ensuite trois solutions aqueuses d'urina simulée ayant les concentrations physiologiques normales en NaCl et P04 , mais renfermant des concentrations variables d'urée. Les concentrations en NaCl et P04 uont respectivement égales à 10 g/l et 2 g/l dans chaque solution. Les concentrations d'urée sont de 0,5, 2 (valeur normale) et 8 g On introduit environ 3 ml de solution d'essai dans une cuve contenant les microcapsules et on laisse la solution reposer pendant 15 secondas. Chaque cuve est ensuite brièvement agitée et placée dans un spectlcphotomètre "Beckman" modèle DE-2a. Ensuite, à des intervalles de 30 secondas, on mesure Itabsorptîon (%) de la cuve à 575 nm en fonction du temps. lies résultats sont portés ur un graphique et on constate que la variation de la concentration d'urée n'affe@te pas sensiblement les résultats. Dn obtient ainsi la courbe A de la figure 1. ExempLe 6 Effet de l'uréase lies solutions d'essai sont ensuite examinées de la marne manière que dans l'exemple 5,à la différence que ces solutions contiennent 10 mg/ml d'uréase (1000 unités internaticnales/ ml). On fait incuber chaque soluton pendant 10 minutes pour permettre l'hydrolyse de l'urée. Chaque échantillon d'essai est ensuite placé dans un spectrophotomètre "Beckman" et le pourcentage d'absorption à 575 nm est noté en fonction du temps. La figure 1 donne une représentation graphique des résultats et les courbe B, C et D représentent respectivement les concentrations faible (0,5 g %), moyenne (2,0 g %) et forte (8,0 g %) d'urée.Comme le fait apparaître la figure 1, la présence d'uréase (10 mg/ml) entraîne des différences appréciables d'absorption pour les différentes concentrations d'urée, tandis qu'on n'observe pas de différence en l'absence d'uréase. C. Effet de l'uréese dans un réactif d'essai Exemple 7 Bande pour essai témoin On prépare des réactifs d! ' essai comme dans l'exemple 3 à la différence qu'on n'incorpore pas d'uréase aux microcapsules et au support. On prépare trois solutions contena@@t des concentrations variables d'urée (0,5, 2 et 8 g %) et on humecte à chaque fois un réactif d'essai avec une solution en déposant à la pipette 40 @l de cette @olution su r le support. Chaque bande est ensuite placée dans un photomètre de éflectance à sphère d'intégration et le pourcentage de réflec- te@ce est mesuré à 580 nm 1 minute après l'imprégnetion. La va- riation du pourcentage de r6flectance est ensuite tracée en fonction de la concentration d'urée (figure 2, courbe A). L'effet xercé sur le pourcentage de réflectance est fa@ble, ce qui traduit l'iraptitude d. réactif è décaler avec précision la présence d'urée dana la solution à analyser. Exemple 8 Réactifs d'essai renfermant de l'uréase Les réa@@ifs préparés conf@rmément à l'exemple 3 (c'est-à-dire, contenant de l'uréase) est été éprcuvés de la rême manière et avec les mêmes colutions d'essai que dans l'exemple 6. La variation du pourcentage d@ @éflectance a été tracée en fonction de la concentration d'urée sur la figure 2 (courbe B, avec urease ; courbe A sans uréase). Il y a lies ce re@@rquer que la présence d'uréase améliore grande@ r la sensibilité des réactifs d'essai à l'urée n @clution. Par con@équent, les résultats illustrent de façon spectaculaire la très grande amélicration de la précision dans la détermination de la densité et de l'osmolarité par la méthode de 11 invention. Il ve de s@@ que la présente invention n'a été décrite qu'à tit@@ explicatif mais nullement limitatif et que de @@@@euses modifications peuvent @ être apportées @ans @@@@ir de son cadre. REVENDICATIONS Réactif d'essai pour la détermination de la densité ou de l'osmolarité d'un échantillon liquide, caractérisé pas la fait qu'il comprend un support auquel est incorporée au moins une quantité efficace de microcapsules à parois formées d'une membrane polymère semi-perméable, fragile du point de vue osmoti- que, renfermant une substance colorante, lesdites microcapsules étant capables de libérer leur contenu pour produire un changement de couleur sous 11 effet d'un gradient osmotique prédéterminé. 2. Réactif suivant la revendication 1, caractérisé par le fait que les microcapsules renferment également une solution aqueuse contenant ladite substance colorante et- un soluté qui confère à la solution une densité prédétermrnee supérieure à celle dudit échantillon liquide. 3. Réactif suivant la revendication 1, caractérisé par le fait que la substance colorante comprend une matière tinctoriale ourson précurseur. 4. Réactif suivant la revendication 3, caractérisé car le fait que le support renferma en outra un composant tinctorial complémentaire lorsque ladite substance colorante est le précurseur d'une matière tinctoriale. 5. Réactif suivant la revendication 3, caractérisé par le fait que la substance colorante est le bleu Evans. 6. Réactif suivant la revendication 4, caractérisé par le fait que la substance colorante est acide chromotropiqua et le composant tinctorial complémentaire est la 2.4-dichloraniline diazotée. 7. Réactif suivant la revendication 1, caractérisé par le fait que les parois desdites microcapsules sont en un polyamide. 8. Composition destinée à la détermination de la densité @u de l'osmolarité d'un échantillon liquide, caractérisée par le fait qu'elle est fcrmée d'au moins un rombre efficace de microcapsules dont les parois formées d'une membrane polymère semiperméable fragile du @@i@@ de @ osmotique renferment une substance colorante, lesdite@ mi@r@@@p@@les étant @a@ables de libérer leur contenu pour produire un changement de couleur sous l'effet d'un gradient osmotique prédéterminé en travers de leurs parois. 9. Composition suivant la revendication 8, caractérisée par le fait que les microcapsules renferment une solution aqueuse contenant ladite substance colorante et un soluté qui confère à ladite solution une densité prédéterminée supérieure à celle de l'échantillon liquide. 10. Composition suivant la revendication 8, caractérisée par le fait que la substance colorante est une matière tinctoriale ou son précurseur. 11. Composition suivant la revendication 8, caractérisée par le fait que la substance colorante est lebleu Evans. 12. Composition suivant ~a revendication 10, caractérisée par le fait que la substance colorante est 11 acide chromotropique. 17. Composition suivant la revendication 8, caractérisée par le fait que les parois des microcapsules sont en un poly- amide. 14. Composition destinée à la détermination de la densité ou de l'osmolarité dtun liquide contenant un soluté non ionique ionisable, caractérisée par le fait qu'elle comprend en as sociation au moins un agent ionisant capable, par contact avec un liquide contenant le soluté non ionique, d'ioniser ledit soluté et une substance réactiva capable, par contact avec un liquide renfermant ledit soluté sous la forme ionisée, de produire une réponse décelable qui est une fonction de la densité de l'osmolarité dudit liquide. 15. Composition suivant la revendication 14, caractérisée par le fait que la réponse produite par la substance réactive est une réaction colorée. 16. Réactif destiné à la détermination de la densité ou de llosnolarité d'un liquide contenant un soluté non ionique ionisable, caractérisé par le fait qu'il comprend un support associé avec au moins un agent ionisant capable, par contact avec un liquide contenant ledit soluté non ionique, d'ioniser ce solu té et une substance réactive capable, par contact avec un. liquide contenant le soluté sous la forme ionisée, de produire une réponse décelable qui est une fonction de la densité ou-de ltosmolarité dudit liquide. 17. Réactif suivant la revendication 16, caractérisa par le fait que la réaction de la substance réactive est une réaction colorée. 18. Réactif suivant la revendication 16, caractérisé par le fait que la substance réactive est formée d'au moins un nombre eff ccoce de microcapsules contenant une substance colorante, lesdites microcapsules étant capables de libérer au moins partiellement la substance colorante pour produire une réaction colorée visible sous l'effet d'un certain gradient osmotique en travers des parois des microcapsules. 19. Réactif suivant la revendication 18, caractérisé par le fait que l'agent ionisant est l'uréase ou l'urécarboxylase (hydrolyzante) et le soluté est l'urée, ou bien l'agent ionisant est la glucose-oxydase et le soluté et le glucose. 20. Réactif de détermination de la densité ou de l'osmolarité dtun liquide contenant de l9urée, caractérisé par le fait qu'il comprend un support en association avec un agent hydrolysant capable, par contact avec un liquide contenant de l'urée, d'hydrolyser l'urée de ce liquide et une substance réactive capable, par contact avec Lui liquide contenant de 11 urée sous la forme ionisée, de produire une couleur décelable qui est une fonction de la densité de ce liquide. 21. Réactif de détermination de la densité ou de l'osmolarité d'un liquide contenant; de l'urée, caractérisé.par le fait qu'il comprend un support en association avec au moins un nombre efficace de microcapsules contenant une substance colorante, lesdites microcapsules étant capables de libérer au moins partiellement la substance colorante pour produire une réaction colorée visible sous l'effet d'un certain gradient osmotique en travers des parois des micro capsules et un agent hydrolysant capable d'hydrolyser l'urée en présence des microcapsules. 22 Réactif de détermination de la densité ou de llosmolarité d'un liquide contenant de l'urée, caractérisé par le fait qu'il comprend un support en association avec un agent hydro lysant capable d'hydrolyser l'urée et au moins un nombre efficace de microcapsules à panois formées d'une membrane semi-perméable fragile du point de vue osmotique, les parois enveloppant un soluté et une substance colorante, lesdites microcapsules étant capables de libérer leur contenu encapsulé pour produire un change- ment de couleur sous l'effet d'un gradient osmotique prédéterminé en travers des parois. 23. Réactif suivant la revendication 22, , caractérisé le le fait que les microcapsules contiennent chacune une phase terne de densité prédéterminée, ladite phase interne étant formée d'un soluté et d'une substance colorante, et sa densité étant supérieure à celle du liquide contenant de l'urée en sorte que, par contact avec ledit liquide, une pression hydrostatique est produite dans les microcapsules, en entraînant ainsi ia libération de le phase interne des microcapsules, la densité de la couleur produite par la lIbération étant Inversement proportion- nelle à la densité dudit lIquide. 24. Réactif suivant l'une quelconque des revendications 20 à 23, caractérisé par le fait; que l'agent hydrolysant est un enzyme capable d'hydrolyser l'urée, de référence l'uréase ou une urécarboxylase (hydrolysante).