Brevet FR2355508A1 — publié le 19780120

La présente invention a pour objet un nouveau médicament dont les indications thérapeutiques préférentielles sont celles de la prévention et du traitement des caries dentaires et des parodontopathies; l'invention s'étend également au procédé de préparation du médicament. Conformément à l'invention le procédé de-préparation de solution de lysats filtrés à partir de cultures de microorganismes intervenant à la formation de la plaque dentaire se caractérise par le fait que les espèces bactériennes considérées sont cultivées dans des milieux choisis jusqu a une certaine maturité, à une température comprise entre 200 et 50 C pendant un temps suffisant et en utilisant un tampon réglant le pH afin de les lyser par une solution de Fna (fluorure de sodium). Suivant une autre caractéristique de l'invention, le médicament contient une solution lyophilisée ou non de lysats fluorés, de substances antigéniques avec un excipient convenable. 1) PROCEDE Les sels fluorés et notamment le fluorure de sodium possèdent un effet lytique à l'égard des suspensions microbiennes non proliférantes, telles que bactéries, levures et champignons. Le tableau IF indique les résultats obtenus avec un grand nombre d'espèces microbiennes après séjour à l'étuve à 37 C. Dans ce tableau I).O. indique la densité optique. On a déterminé les conditions optimales de lyse et notamment la concentration en fluorure de sodium, la température, l'age de la culture et le pR final. A) MATERIEL ET NETHODES Naîgré le fait que l'effet lytique s'exerce sur de nombreuses espèces, on a retenu trois espèces bactériennes pour une étude approfondie t - Coque gram positif ........ Streptococcns Faecalis ; - Bactérie gram positif ..... Lactobacillus Acidophilus ; - Bactérie gram négatif ..... Escherichia Coli. Les suspensions microbiennes ont été préparées à partir des souches conservées par lyopbilisation.-Àprès culture, les bactéries sont récupérées par centrifugation, puis diluées dans des solutions aqueuses de fluorure de- sodium, -- afin de mesurer au-photocolorimètre "LABOSPAC" une densité optique égale à 1,1 avec une dilution 1/5, (écran 620 nm, cuve 1 cm). L'activité lytique a été appréciée par turbidimétrie en fonction de la concentration, de la température, de l'age de la culture, du pH final. A1) EFFET DE LA CONCENTRATION DU Fna Les concentrations étudiées ont été 0,125 - 0,25 - 0,5 1 - 2 - 3 ,ó. Température 37 C. Temps de séjour = 8 jours. L'effet lytique s'observe avec les concentrations les plus faibles, mais il n'y a pas de proportionnalité entre la concentration et l'effet lytique. Les meilleurs résultats sont obtenus avec des concentrations de 1 %. Au-delà de 3 % les solutions sont saturées et n'ont pu entre étudiées. Les fig. 1 à 6 sont des courbes donnant les résultats concernant - la fig. 1 concerne le Lactobacillus Acidophilus S 210 - la fig. 2 concerne le Streptococcus Faecalis gr D S 19 - la fig. 3 concerne l'Eschérichia Colis S 7 ; - la fig. 4 concerne le Lactobacillus Acidophilus s 210 - la fig. 5 concerne le Streptococcus Faecalis gr D S 19 - la fig. 6 concerne l'Eschérichia Coli S 7. Les diverses concentrations pour les fig. 1, 2 et 3 en fluorure de sodium sont représentées de la façon suivante a) suspension témoin (eau distillée) - traits discontinus séparés par des petits o b) concentration de 0,125 % de Fna - traits discontinus séparés par des petits carrés ; c) concentration de 0,25 % de Fna - traits discontinus séparés par des petits triangles d) concentration de 0,5 % de Fna - traits discontinus séparés par des petits x e) concentration de 1 % de Fna - traits discontinus séparés par des petits carrés barrés. Tes fig. 4, 5 et 6 montrent les concentrations suivantes: a) suspension témoin (eau distillés) - traits discontinus séparés par des petits o b) concentration de 1 % de Fna - traits discontinus séparés par des grands 0 ; c) concentration de 2 %' de Fne - traits discontinus séparés par des petits triangles d) concentration de 3 % de Fna - traits discontinus séparés par des petits x. L'examen microscopique après coloration montre une perte des affinités tinctoriales à l'égard de la coloration de gram, et une tendance à fournir des amas bactériens plus ou moins lysés, ce qui a été constaté par photographie. A2) EFFET DE LA TEMPERATURE A l'aide des suspensions bactériennes préparées comme précédemment contenant une solution à 1 % de fluorure de sodium on a étudié l'influence de différentes températures, à savoir : a) 22%C b) 370C c) 45 C. La température semble jouer un rôle : les différences sont plus nettes pour les suspensions laissées à 22 C qu'à 37 C ou 45 C. Cependant il faut noter une légère supériorité pour les temperatures de l'ordre de 37 C. Les fig. 7, 8 et 9 donnent les résultats obtenus : - en ce qui concerne pour la fig. 7 le Lactobacillus Acidophilus S 210 ; - en ce qui concerne pour la fig 8 le Streptococcus Faecalis gr D S 19 - en ce qui concerne pour la fig. 9 l'Eschérichia Coli S 7. Dans ces figures le témoin à 22 C apparat sous la forme d'une ligne discontinue séparée par des petits o, le témoin à 37 C apparat sous la forme d'une ligne discontinue séparée par des grands 0, tandis que pour le témoin à 45 C, la courbe est donnée par des traits discontinus séparés par des petits triangles. lors de l'emploi d'une solution de fluorure de sodium à 1 est et à 22 C, la courbe apparat sous la forme d'une ligne discontinue séparée par des petits x. Pour la meme solution mais à 37 C, la courbe apparat sous la forme de traits discontinus séparés par des petits carrés barrés. Finalement pour une même solution à 7 % de fluorure de sodium à 45 C. la courbe apparat sous la forme de traits discontinus séparés par des grands 0, comportant un point central. 43) EFFET du pH les suspensions bactériennes ont été diluées dans trois solutions tamponnées à pH 6 - pH 7 - pH 8 et l'effet lytique du Fna à 7 % a été étudié pendant 8 jours à 3700. Il apparat quelle pH de la solution intervient dans l'action lytique du fluorure de sodium. La fig. 10 se rapporte au Lactobacillus Acidophilus S 210. La fig. Il se rapporte au Streptococcus Faecalis gr D S 19. La fig. 12 se rapporte à l'Escherichia Coli S 7. les courbes sont réalisées de la façon suivante - traits discontinus séparés par des petits o = eau distillée - traits discontinus séparés par des grands 0 = solution à 1 % de fluorure de sodium tampon pH 6 ; - courbe en traits discontinus séparés par des petits triangles = solution à 1 % de fluorure de sodium tampon pH 7 ; - courbe en traits discontinus séparés par des petits x = solution à 1 % de fluorure de sodium tampon pH 8. Finalement la solution à 1 % de fluorure de sodium tamponnée par de l'eau distillée donne la-courbe représentée par des traits discontinus séparés par des grands 0 comportant un point central. A4) EFFET SUR LES SUSPENSIONS D'AGE VARIABLE On a étudié l'action lytique du Pna à 1 % sur des suspensions d'âge différent de trois germes - Streptococcus gr D S 19; - Eschérichia Coli S 7; - Lactobacillus Acidophilus S 210. Les cultures ont été obtenues comme précédemment au bout de 6 - 9 - 24 - 48 - 72 heures. Deux suspensions identiques ont été préparées pour chaque temps et pour chaque bactérie, l'une contenant le Fna à 1 %, l'autre est une suspension aqueuse servant de témoin. Après séjour à 37 c pendant sept jours, on a comparé la densité optique de deux suspensions, et établi le pourcentage de lyse. Il apparaît nettement que l'action lytique est plus importante pour les suspensions jeunes, quelque soit le germe en cause. La fig. 13 nontre l'action lytique du Fna à I % sur une suspension bactérienne d'Age différent concernant le Streptococcus Faecalis D s 19. En ordonnée le pourcentage de lyse et en abscisse le temps en heures, c'est-à-dire 6 heures - 9 heures - 24 heures 48 heures et 72 heures. La fig. 14 donne le même graphique comme précédemment le Lactobacillus Acidophilus S 210 et finalement la fig. 15 donne le résultat pour l'Eschérichia Coli S 7. 15) EFFET SUR DES SUSPENSIONS TUEES Les suspensions bactériennes obtenues après culture de 24 heures ont e été chauffées à 65 C pendant une heure. La fig. 16 montre une nette diminution du pouvoir lytique réalisé sur le Streptococcus S 19. La fig. 17 sur l'Eschéricia Coli S 7. la fig. 18 sur le Lactobacillus Acidophilus ss 210. B) COMPOSITION CHIMIQUE les lysats ainsi obtenus sont analysés du point de vue chimique après dialyse. On a trouvé des produits complexes gluco-proteiniques, riches en polysaccharides, en pentoses et méthyl pentoses. Une étude comparative a été effectuée sur des lysats obtenus par action lytique du glycocolle, sur des suspensions de la méme richesse microbienne. Te tableau II résume les résultats obtenus. Cette comparaison montre que l'action lytique du Fna aboutit à des complexes antigéniques deux fois plus riches en polysaccharides et deux à quatre fois plus riches en méthyl pentoses. Par contre, ils sont moins riches en protéines et en héxose de 20 à 50 %. C) CONCLUSIONS Le fluorure de sodium en solution aqueuse, exerce un pouvoir lytique à l'égard des suspensions non proliférantes de divers microorganismes : bactéries, levures et champignons. Cette action est influencée par certains facteurs tels que la concentration du Fna, le pH de la solution, la tempe- rature et L'âGE des bactéries. La nature chimique des lysats étudiés sont des complexes gluco-protélques, riches en polysaccharides, pentoses et méthyl pentoses. II - APPLICATION A la suite des différentes constatations faites sur l'action lytique du Fna à l'égard des suspensions bactériennes dans les meilleures conditions de pH de concentration et de température, il est apparu que l'on pouvait obtenir un médicament à partir de la solution résultant d'une filtration stérilisante sur membrane millipore de 0,2 . Cette solution stérilisante possède des propriétés pharmacologiques liées à la présence de différentes substances : Fluorure de Na, Phosphates de sodium, Antigènes glucido-protéïques. Les indications thérapeutiques préférentielles sont celles de la prévention et du traitement des caries dentaires et parodontopathies. PREPARATION DES LYSATS FLUORES A) CHOIX DES BACTERIES Ce choix a été dicté par le souci-d-'obtenir les antigènes des microorganismes intervenant à la formation de la plaque dentaire, cariogène, comme ceux de la plaque aboutissant à une parodontopathie. 1. STREPTOCOCCUS gr A ................................ S 107 2. STREPTOCOCCUS gr D................................. S 19 3. STREPTOCOCCUS gr H ............................... S 2i8 4. STREPTOCOCCUS MITES ............................. S 325 5. STREPTOCOCCUS SALIVARIUS .......................... S 174 6. STREPTOCOCCUS MUTANS .............................. S 428 7. MICROCOCOUS PYOGENES .............................. S 108 8. LACTOBACILLUS ACIDOPMILUS ......................... S 210 9. LACTOBACILLUS FERMENTATUM ......................... S 191 10. LACTOBACILLUS HELVITICUS ......................... S 135 11. ACTINOMYCES ONDONTOLYTIOUS ....................... S 323 12. FUSIFORMIS FUSIFORMIS ............................ S 221 13. NEISSERIA PERFLAVA ........ C. .... ... S 103 14.ESCHERICHIA COLI ...................................... S 7 15. CANDIDA ALBICANS . . . e C ... ..... ..... ... S 119 B) PREPARATION DES SUSPENSIONS Les milieux de culture choisis sont ceux qui conviennent a une production industrielle d'une biomasse respectant les caractères antigéniques. Les différentes opérations d'ensemencement, de culture et de contrôle sont celles utilisées clessiquement en bactériologie. On a retenu six différents milieux de culture: - le bouillon glucosé tamponné (BGT) convenant à la culture de la plupart des Streptocoques, du Staphylococcus aureus, d'Escherichia Coli; - le milien au Thioglycollate, pour la culture du Fusiformis Fusiformis ; - le milieu de Sabouraud pour la culture du Candica Âlbicans; - lebouillon glucosé ordinaire pour la culture du Neisse- ria Perflava; - le milieu à base de peptone de caséine, Autolysat de levure pour les Lactobacillus; - le milieu Inoculum Broth Difco pour la culture d'Acti- nomyces Odontolyticus. C) CULTURES Chaque germe est cultivé séparément, dans des fermentateurs, permettant une agitationet une aération efficaces. Généralement, après séjour à 37 C pendant 24 heures, le nombre de bactéries est suffisant pour procéder aux opérations de récoltes. D) RECOLLE - LYSE Généralement, la récolte des bactéries, est obtenue en continu à l'aide des centrifugeuses. Chaque culot est mis en suspension dans une solution contenant du Fna à raison de 1%, tamponné au pH le plus favorable à ltaction lytique. Chaque suspension séjourne ainsi à 370C pendant sept jours. Le tableau III indique, pour chaque germe le nombre de bactéries contenues dans la suspension et la densité optique au départ, et au 7ème jour le pH optimal de lyse. E) OBTENTION DE LA SUBSTANCE ACTIVE LYSATS FLUORÉS. 1) Mélenga Celui-ci est préparé à partir de chaque lysat contenant du Nerthiolate au 1/40 OOO,en mélangeant à parties égales les 15 lysats ainsi obtenus. 2) Enrichissement Selon l'usage, la solution de base peut être enrichie en substrats antigéniques en additionnant le concentrat obtenu après dialyse de la solution mère a 3) Filtration Le mélange terminé est filtré sur membrane cellulosique SEITZ C7, puis sur membrane millipore de porosité 1,2 puis 0,45 , puis 0,22 4) Lyophilisation Cette solution peut également être lyophilisée. F) IDENTIFICATION-CONTROLES Les contrôles sont effectués en cours de fabrication afin de vérifier l'absence des contaminants et l'action lytique par la mesure de la densité optique de la suspension. L'identification des antigène. est effectuée selon la technique de déviation du complément et par la technique de diffusion sur gélose. III - EUUDE TOXICOLOGIQUE TOXICITE AIGU# La toxicité aiguë a été étudlée sur trois espèces animales : souris, rats, hamsters. Souris mAles - voie orale . DL 50 = 258 mg/Kg (188 - 353) - Voie veineuse = DL 50 = 102 mg/Kg (75,4-138) - Voie sous cutanée r DL 50 = 160 mg/Bg (122 - 210) Rats miles - Voie orale = DL 50 = 680 mg/Kg (465 - 999) - Voie sous cutanée n DL 50 r 275 mg/Kg (221 - 342) Hamsters mules - voie orale = DL 50 = 204 (152 - 274) IV - ETUDE PHARMACODYNAMIQUE A) IDENTIFICATION DES ANTIGèNES "IN VITRO" À l'aide des sérums obtenus chez le lapin en injectant les suspensions bactériennes chauffées par voie veineuse, on a procédé à l'identification de différents antigènes par les réactions de précipitation par Immuno-diffusion et de déviation du complément. 1) REACTIONS D'IMMUNO-DIFFUSION Le tableau IV résume les résultats obtenus. 2) REACTION DE DEVIATION DU COMPLEMENT Une solution aqueuse contènant les principes actifs à la concentration de 0,2 * est utilisée pour cette réaction. Le tableau V montre les résultats obtenus. B) POUVOIR IMMUNCGENE Le pouvoir immunogène in vivo a été étudié à l'aide d'une préparation extraite d'un produit fini tel qu'un dentifrice. La solution antîgénique a été administrée chez le lapin domestique par voie intradermique, intragingivale, et par voie permuqueuse à l'aide d'un pulvérisateur. Cette administration a été réalisée selon le schéma suivant t 1) VOIE ENTRA DERMIQUE injection de 1 mi, sur quatre sites du dos du lapin à raison de 0,25 ml. Trois injections par semaine, pendant trois semaines soit au total neuf injections. Après repos de 18 jours, une nouvelle série de neuf injections est pratiquée. Les prélèvements sanguins ont été effectués aux différents temps1 correspondant = Jour O - Jour 26 - Jour 63. 2) VOIE INFRA GINGIVALE Injections de 0,8 ml. sur quatre sites gingivaux du lapin à raison de 0,2 ml. Le rythme et le mode des prélèvements ent été identiquesà ceux réalisés par voie intradermique. 3) VOIE MOQUEUSE À laide d'un pulvérisateur contenant comme gaz propellant l'azote, on a administré deux fois par jour, cinq jours par semaine, 0,30 ml de la solution extraite. Cette immunisation s'est poursuivie pendant huit semaines. Les prélèvements sanguins ont été effectués comme précédemment = Jour O - Jour 26 - Jour 63. La recherche des anticorps a été effectuée à l'aide de deux réactions - Hémaglutination - Réaction de Kolmer (déviation du complément). Les résultats figurent dans les tableaux VI à xî: L'inverse des dilutions a été noté dans chaque colonne correspondant aux trois prélèvements sanguins Jour O - Jour 26 Jour 63. -C) ACTIVITE A L'EGARD DES CARIES ET PARODONTOPATHIES EXPERIMENTALES Le protocole suivi pour tous les essais a été le suivant Différents lots de hamsters dorés (ME10) ont été traités selon la technique originale de KEYES en soumettant les animaux à un régime hyperglucidique (régime 2000 de Keyes). Les animaux présentent des lésions qui débutent après le deuxième mois du régime. A la fin du troisième mois les animaux sont sacrifiés et les lésions de l'ondonte (caries) et du parodonte sont observées macroscopiquement et après examen histologique. -1es critères objectifs choisis-sont - CARIES P estimation des lésions carieuses selon le protocole de geyes - PESIONS PARODONTALES = Méthode inspirée de celles de Mitchell et de Keyes avec de légères modifications. Des travaux précédents dans un laboratoire, ayant démontré le rôle curatif des différentes compositions antigéniques, on a procédé à une étude comparative de l'action du médicament et du fluorure de sodium. On a étudié sur six lots composés chacun de six mâles de 130 - 140 g, et de six femelles de 150 -160 g, soumis au régime hyperglucidique de Keyes pendant trois mois, l'effet du fluorure de sodium comparativement aux lysats fluorés obtenus par le médicament de la présente invention. La composition des différents lots est la suivante - lot No- 1 s animaux témoins, soumis à un régime normal - lot No 2 s animaux témoins, soumis au régime hyperglucidique de Keyes; - lot No 3 : animaux soumis au régime hyperglucidique de Xeyes et traités par une solution de Fna à 1 Xs par pulvérisation buccale de U,3 ml par jour - lot No 4 : animaux soumis au régime comme précédemment et traités par le lysat fluoré (Fna à 1 %), pulvérisation de 0,3 ml par jour - lot No 5 : animaux soumis au régime et traités par le Fna à 0,5 %, pulvérisation de ,3 ml par jour - lot No 6 t animaux soumis au régime et traités par le lysat fluoré (Fna à 0,5%), pulvérisation de 0,3 ml par jour. RESULTATS A) EFFET SUR LES CARIES Les résultats représentés à la fig- 19 montrent l'effet sur le nombre de caries, appréciées par l'index de Keyes. Surface détruite x Profondeur x 100 282 L'analyse statistique des résultats selon FISCHER, permettant la comparaison des variantes de différentes moyennes montre que - le lot No 1 est significativement différent du lot No 2 (p lots Nos 1 - 2 - 3 - 5 (p ( 0,05) (p Il y a une différence significative (p B) EFFET SUR LES PARODONTOPATHIES Les résultats qui sont représentés à la fig. 20 sont appréciés par les index parodontales selon la formule générale : Nombre de lésions x Coefficient de gravité 12 (nombre de deux) NOTATIONS DU COEFFICIENT DE GRAVITE - Gencive normale e = O - Décollement gingival = = 1 - Décollement et rétraction ............... = 2 - Destruction du tissu mou ................ = 3 T'analyse statistique par la méthode de Student, montre que - le lot No 1 est hautement significatif du lot No 2 (p - le lot No 6 est significativement différent du lot No 2 (p - et des lots Nos 3 - 4 - 5 (p40,05) ;; - aucune différenee avec le lot No 1 - le lot No 4 présente une différence significative avec le lot No 2 ( p - le lot No 5 n'est pas significativement différent du lot No 2. CONCLUSION Cette étude montre très nettement que le lysat fluoré preparé selon le procédé conforme à la présente invention possède un pouvoir supérieur à celui d'une solution simple de Fna. Cet effet se constate aussi bien à l'égard du pouvoir cariogène que des lésions parodontopathiques. V - FORNES PHARMA CEOTIQUE Le médicament peut être présenté sous forme de - comprimés à délitement buccal - spray gingival - dentifrice pâte ou liquide - gomme à mâcher - etc... On donne, à titre d'exemples, quelques formules Comprimés: - lysats fluorés .................... 0,001 g - Excipient ....... q.s.p........... un comprimé Excipient. - lactose - Xylitol - Polyvinylpyrrolidone - Saccharinate de sodium - Stdarate de magnésium - Précirol - Acide citrique - Arôme citron Spray: - lysats fluorés ................. 0,200 g - Excipient ..... q.s.p. ........ 100 ml Excipient. - Glycérine - Menthol - Saccharinate de sodium - Essence de menthe - Azote Dentifrice pâte= - lysats fluorés ............... 20 mg - Excipient ..... q.s.p......... 100 g Excipient. - Métsaphosphate de sodium - Carraghénate de sodium - Laurylsulfate de sodium - Glycérine - Sorbitol - Aérosil - Saccharinate de sodium - Essence de menthe - Nipagine sodée - Nipasol sodé. Ces diverses formules peuvent comporter en outre du fluorure de sodium en quantité suffisante pour obtenir la dose thérapeutique de fluor. VI - ETUDE CLINIQUE le médicament est utilisé chez l'homme, à titre de traitement préventif ou curatif immunisant des affections stomatologiques. Le médicament a été utilisé sous forme de comprimés à délitement buccal dont la composition a été précisée au ss Va Dix malades attein-ts d'affections variées de. la bouche ont été traités à-raison de 6 à S comprimés par jour pendant une durée de 6 à 15 jours. 'analyse des cas traités montre : - une action rapide sur les phénomènes douloureux, - une action anti-inflammatoire donnant une amélio- ration dans les 48 heures de signes cliniques : disparition des gingivorragies spontanées, diminution et souvent, en fin de traitement, disparition des gingivorragies provoquées, diminution de l'oedème, e disparition des ulcérations - une action anti-infectieuse, dans les cas de parodontite, diminution ou suppression de la suppuration. - la fétidité de l'haleine disparait. Exemples d'observations cliniques. - Madame B.I;,,,., Employée de bureau, 32 ans. Bonne santé, grossesse de 5 mois. Gingivite gravidique avec importante hyperplasie des papilles interdentaires. Erythème, gingivorragies spontanées et provoquées, douleurs, pas de mobilité. 6 comprimés par jour pendant 15 jours (comprimés enrichis en antigènes 10 fois). Disparition des phénomènes douloureux et diminution assez rapide des symptômes notamment de l'hyperplasie et des gingivorragies. Très bon résultat, surtout si l'on tient compte du fait que la gingivite gravidique régresse difficilement avec les traitements locaux. - Monsieur G.C..., Partisan 29 ans. Très bonne santé. Parodontite complexe avec importante monoalvéolyse au niveau de 21 qui a subi une migration. Poches parodontales profondes, suppuration, gingivorragies, mobilité surtout de 21, peu de douleurs. 6 comprimés par jour pendant 15 jours (comprimés enrichis en antigènes 10 fois). Diminution de l'inflammation et de la suppuration, ainsi qué de la mobilité. Bon résultat qui semble se maintenir au bout de deux mois. - Monsieur M.V..., Employé de bureau, 28 ans Bon état général. Parodontite chronique habituelle. Gencives peu érythémateuses, mais oedématiées. Poches paro dontales peu profondes, sensation de cuisson de la gencive. Pas de mobilité. 6 comprimés par jour pendant 10 douros (comprimés avec antigènes enrichis 10 fois). Disparition de la sensation de cuisson, diminution très nette de l'ocdème gingival. Très bon résultat. - Melle H.C , Employée de bureau, 21 ans. Bon état général Gingivite érythémato-pultacée liée à l'évolution de la dent de sagesse inférieure gauche. Gencive ulcérez du côté gauche, gingivorragies spontanées, douleurs assez vives. 8 comprimés par jour pendant 6 jours (comprimés avec antigènes enrichis 10 fois). Amélioration très rapide de la symptomatologie tant au point de vue de la douleur que de l'inflammation et de l'nlcération- Très bon résultat. TABLEAU I D.O. X 100 DES SUSPENSIONS MICROBIENNES EN PRESENCE DE Fna à 1 % TEMPS TEMPS TEMPS TEMPS O HEORE 5 JOURS 8 JOURS 10 JOURS STAPHYLOCOQUE DORE S 108 90 26 22 21 STREPTOCOCCUS gr. A S 107 105 57 49 49 STREPTOCOCCUS gr. D S 19 80 14 6 6 STREPTOCOCCUS gr. H S 218 106 77 72 72 STREPTOCOCCUS SALIVARIUS 100 70 64 61 S 174 NEISSERIA PERFLAVA S 103 111 35 32 30 CTOBACILLUS ACIDOPHILUS 98 30 25 25 S 210 CTORACILLUS LACPIS S 178 115 68 63 62 PROTEUS VULGARIS S 28 100 48 47 47 PYOCYANIQUE S 76 109 20 18 19 ESCEERICHIA COLI 7 bis 110 30 29 27 FUSIFORMIS FUSIFORMIS S 220 103 54 52 53 CANDIDA ALBICANS 106 64 58 59 TABLEAU II EN % DE LA MATIERE OBTENUE PAR LYOPHILISATION ESCHEPICHIA STREPTOCOQUE COLI L. ACIDOPHILUS FAECALIS 1 2 1 2 1 2 PROTEINES 47,2 58,6 45,7 55,5 17,2 28 PENTOSES 18,2 4 27,2 7,7 16,6 4,8 METHYL PENTOSES 5,8 2,7 5,5 4,3 11,3 4,9 HEXOSES 0,7 26,9 17,3 29,9 10,7 46,1 POLYSACCHARIDES 33,2 16,6 31,7 25,5 43 22,5 OSAMINES 2,1 0,8 0 1,7 3,3 7,7 (1) LYSE AU FLUORURE DE SODIUM (2) LYSE AU GLYCOCOLLE TAMPON pH6(A) TAMPON pH 7 (B) Phosphate monopotassique....... 9 g Phosphate disodique...... 14,28 g Phosphate bipotassique ........ 1,5 g Phosphate monopotassique 3,64 g Eau distillée q.s.p. .......... 1000 ml Eau distillé q.s.p. .. 1000 ml TAMPON pH 8 (C) Phosphate monopotassique .......... 0,523 g Phosphat bipotassique ............. 16,73 g Eau distillée q.s.p. .............. 1000 ml D.O. suspension pH optimal obtenu MICRCORGANISMES Nombre/ml dilution 1/5 par le D.O. (JO) D.O. (J7) temnon Phosphate STREPTOCOCCUS gr A 107 1.109 1.10 0.62 pH 8 tampon C STREPTOCOCCUS SALIVARIUS 174 100.106 1.06 0.63 pH 6 tampon A STREPTOCOCCUS gr H 218 100 X 109 1.07 0.51 pH 7 tampon B STREPTOCOCCUS MITIS 325 10 X 109 1.00 0.40 pH 7 tampon B STREPTOCOCCUS gr D 19 1 X 109 1.05 0.10 pH 6 tampon A STREPTOCOCCUS MUTANS 428 10 X 109 1.16 0.80 pH 8 tampon C STREPTOCOCCUS AUREUS 108 100 X 109 1.18 0.09 pH 6 tampon A LACTORACILLUS ACIDOPNIMUS 210 10 X 109 1.12 0.15 pH 6 tampon A LACTOBACILLUS HELVETICCS 135 1 X 109 1.04 0.50 pH 6 tampon A LACTORACILLUS FERMENTATUM 191 10 X 109 1.05 0.10 pH 6 tampon A ACTINCMYCES ODONTOLKTICUS 323 1 X 109 1.06 0.50 pH 7 tampon B NEISSERLA PERFLAVA 103 100 X 109 1.15 0.10 pH 7 tampon B ESCHERICHIA COLI 7 100 X 109 1.16 0.37 pH 8 tampon C CANDIDA ALBICANS 119 10 X 109 1.15 0.65 pH 6 tampon A FUSIFORMIS FUSIFORMIS 221 1 X 109 1.12 0.42 pH 8 tampon C TABLEAU III TABLEAU IV REACTIONS-DE PRECIPITATION Solution Solution Antigénique Antigénique Lonc. 10 fois Ionc. 50 fois ANTISTREPTOCOGGUS........... S 107 I arc 1 arc ISTREPIOCOCCUS............ S 19 2 arcs 2arcs ANTISTREPTOCOCCUS........... S 218 1 arc 2 arcs ANTISTREPTOCOCCUS.......... .. S 325 2 arcs 2 arcs ANTISTREPTOCOCCUS........... S 174 2 arcs 2 arcs I MICROCUS PYOGENES.... S 108 2 arcs 2 arcs I LAOTOBACILLUS ACIDOPHILUS 1 arc 1 arc S 210 I LACTOBACILLUS FERMENTATUM 2 arcs 2 arcs S 191 I LACTOBACILLUS HELVITICUS 2 arcs 2 arcs S 135 I ACTINOMYCES ODONTOLONTIOUS 1 arc 2 arcs ss 323 NTI PUSIFORMIS FUSIFORMIS S 221 2 arcs 2 arcs NTI NEISSERIA PERNLAVA... S 103 1 arc 1 arc NTI ESCHKRICHIA COLI..... S 7 1 arc 1 arc ANTI CANDIDA ALBICANS..... S 119 1 arc 2 arcs 'PABLEAU V Solution Solution témoin contenant IRS 630 à 0,2% Fna + PO4 0,2 % ANTISTREFTOCOCCUS............ S 107 O + + + ISTREPTOCOCCUS.............. S 19 0 +++ ANTISTREPTOCOCOUS............. S 218 O + + + NTISTREPIOCOCCUS............. S 325 0 +++ NTISTREPTOCOCCUS............. S 174 0 +++ NTI MICROCOCCUS PYOGENES S 108 0 +++ NTI LACTOBACILLUS ACIDOPHILUS S 210 0 + + + ANTI LACTOBACILLUS FERMENTATUM S191 0 +++ ANTI LACTOBACILLUS HELVETICUS S 135 0 + + + ANTI ACTINOMYCES ONDONTOLONTICUS S 323 O + + + ANTI FUSIFORMIS FUSIFORMIS S 221 0 +++ ANTI NEISSERIA PERFLAVA S 103 0 +++ ANTI ESCHERICHIA COLI..... S 7 0 + ANTI CANDIRA ALBICANS..... S 119 0 + + + Neisseria Escheri- Lactoba- Lactoba- Strepto- Strepto- Strepto- Fusifor Perflava chia cillus cillus coccus coccus coccus misus 103 Coli Acido- Fermen- gr A gr D Aureus Fusifor 7 philus tatum 107 19 108 mis 210 191 221 Lapin n 1 1 4 1 2 4 16 1 1 1 1 2 1 1 1 1 2 2 2 8 8 4 1 1 2 Lapin n 2 2 4 2 4 4 16 1 2 0 0 2 1 0 1 1 2 4 2 2 2 1 1 1 2 Lapin n 3 1 2 2 2 2 32 1 1 1 1 1 0 0 2 1 4 4 8 4 4 2 2 2 4 Lapin n 4 0 2 1 4 8 32 1 1 1 0 0 0 0 2 1 1 2 2 2 4 2 1 1 2 Lapin n 5 1 4 4 8 8 15 0 0 1 1 1 0 0 1 1 2 2 4 2 4 8 1 1 4 Lapin n 6 1 2 1 2 4 32 1 2 0 1 2 0 1 2 2 4 4 2 4 16 8 1 1 2 Lapin n 7 TABLEAU VI HEMAGGLUTINATION VOIE INTRA DERMIQUE Neisseria Escheri- Lactoba- Lactoba- Strepto- Strepto- Strepto- Fusifor Perflava chia cillus cillus coccus coccus coccus misus 103 Coli Acido- Fermen- gr A gr D Aureus Fusifor 7 philus tatum 107 19 108 mis 210 191 221 Lapin n 1 2 4 2 4 4 128 1 1 1 1 1 1 1 8 8 2 4 2 2 4 4 0 1 2 Lapin n 2 1 4 4 1 2 128 0 1 0 0 1 1 0 4 4 0 2 2 2 4 4 0 1 2 Lapin n 3 2 2 2 1 2 128 1 1 0 0 0 0 2 4 4 1 2 1 2 4 4 1 1 2 Lapin n 4 2 4 2 4 8 64 2 2 2 1 2 1 8 16 8 1 4 2 4 8 8 2 2 2 Lapin n 5 2 2 4 1 1 128 1 1 1 0 0 0 1 4 4 0 0 1 1 4 4 1 1 1 Lapin n 6 1 8 8 2 4 512 0 1 1 0 1 1 1 4 2 0 2 4 0 8 8 0 0 4 Lapin n 7 2 4 2 2 2 4 1 2 2 4 4 8 4 8 2 2 TABLEAU VII HEMAGGLUTINATION VOIE INTRA GINGIVALE Neisseria Escheri- Lactoba- Lactoba- Strepto- Strepto- Strepto- Fusifor Perflava chia cillus cillus coccus coccus coccus misus 103 Coli Acido- Fermen- gr A gr D Aureus Fusifor 7 philus tatum 107 19 108 mis 210 191 221 Lapin n 1 1 4 2 1 2 4 0 0 1 0 1 1 0 2 1 1 2 2 2 4 2 0 0 2 Lapin n 2 1 2 2 2 2 8 1 1 1 0 2 1 0 1 1 1 2 2 1 2 2 1 1 4 Lapin n 3 1 4 2 2 2 4 1 1 1 1 1 1 0 1 1 1 2 4 2 4 16 1 1 1 Lapin n 4 2 4 2 8 8 4 1 1 1 0 1 1 0 1 1 2 4 4 2 4 1 1 1 2 Lapin n 5 4 4 8 8 8 16 1 4 0 4 4 2 2 2 2 8 8 8 16 16 8 4 4 4 Lapin n 6 2 2 2 2 2 2 1 1 1 0 0 1 0 1 1 2 2 4 2 4 16 1 1 1 Lapin n 7 TABLEAU VIII HEMAGGLUTINATION VOIE MUQUEUSE Neisseria Escheri- Lactoba- Lactoba- Strepto- Strepto- Strepto- Fusifor Perflava chia cillus cillus coccus coccus coccus misus 103 Coli Acido- Fermen- gr A gr D Aureus Fusifor 7 philus tatum 107 19 108 mis 210 191 221 Lapin n 1 8 8 8 2 4 4 0 4 4 0 4 4 0 1 0 0 4 2 2 8 4 0 1 0 Lapin n 2 4 4 8 0 4 8 0 2 2 0 4 4 0 0 0 0 1 2 0 8 8 0 1 0 Lapin n 3 8 4 4 1 4 2 0 1 2 0 4 2 0 0 0 0 1 1 2 8 4 0 0 0 Lapin n 4 8 4 4 0 4 2 0 2 2 0 2 4 0 0 0 0 2 2 2 8 4 0 1 0 Lapin n 5 4 8 8 2 4 2 0 2 2 0 4 4 0 0 0 0 1 1 2 8 16 0 1 0 Lapin n 6 8 16 16 1 8 4 0 4 4 0 8 4 0 0 0 0 4 4 2 16 24 0 0 2 Lapin n 7 TABLEAV IK READTION DE DEVIATION DU COMPLEMENT VOTE INTRA DERHIQUE Neisseria Escheri- Lactoba- Lactoba- Strepto- Strepto- Strepto- Fusifor Perflava chia cillus cillus coccus coccus coccus misus 103 Coli Acido- Fermen- gr A gr D Aureus Fusifor 7 philus tatum 107 19 108 mis 210 191 221 Lapin n 1 2 4 8 1 4 8 0 2 4 0 4 8 0 0 0 0 2 8 0 16 16 0 1 1 Lapin n 2 4 4 8 0 8 8 0 2 2 0 2 4 0 0 0 0 2 4 2 8 8 0 0 0 Lapin n 3 8 8 8 4 8 16 0 1 2 0 7 4 0 0 0 0 1 2 0 8 16 0 0 0 Lapin n 4 4 8 8 0 4 4 0 2 4 0 4 4 0 4 0 0 2 4 0 8 16 0 1 0 Lapin n 5 4 4 8 0 4 8 0 2 4 0 2 4 0 0 0 0 1 4 0 8 24 0 0 0 Lapin n 6 8 4 8 0 2 4 0 1 2 0 1 2 0 0 0 0 1 8 2 4 16 0 0 0 Lapin n 7 4 8 0 16 0 1 0 2 0 1 0 8 0 8 0 0 TABLEAUK REAOTION DE DEVIATION DU COMPLEMENT VOIE INTRA GINGIVALZ Neisseria Escheri- Lactoba- Lactoba- Strepto- Strepto- Strepto- Fusifor Perflava chia cillus cillus coccus coccus coccus misus 103 Coli Acido- Fermen- gr A gr D Aureus Fusifor 7 philus tatum 107 19 108 mis 210 191 221 Lapin n 1 0 2 2 0 0 1 0 0 0 0 0 1 0 0 0 0 0 1 0 1 1 0 0 0 Lapin n 2 0 2 2 0 1 2 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 1 2 0 0 1 Lapin n 3 0 2 2 0 1 1 0 0 0 0 0 1 0 0 0 0 0 0 0 1 4 0 0 0 Lapin n 4 8 2 2 1 1 2 0 0 0 0 0 1 0 1 0 0 0 0 0 1 4 0 0 0 Lapin n 5 8 16 16 0 1 2 0 0 1 0 0 1 0 0 0 0 0 1 0 1 4 0 0 0 Lapin n 6 4 4 2 0 1 1 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 1 1 0 0 1 Lapin n 7 TABLEZU XI REACTION DE DEVIATION DU COMPLEMENT VOIE MUQUEUSE REVENDICATIONS 1 - Procédé de préparation de solutions de lysats filtrés à partir de cultures de microorganismes intervenant à la formation de la plaque dentaire cariogène, caractérisé en ce que les espèces bactériennes considérées sont cultivées dans des milieux choisis jusqu'à une certaine maturité, à une température comprise entre 20 et 50 C pendant un temps suffisant et en utilisant un tampon réglant le pH afin de les lyser par une solution de Fna (fluorure de sodium). 2 - Procédé suivant la revendication 1, caractérisé en ce que les micro organismes sont des : - coques gram positif - bactéries gram positif @ - bactéries gram négatif. 3 - Procédé suivant l'une des revendications 1 et 2, caractérisé en ce que les micrcorganiames sont 1. STREPTOCOCCUS gr A............................. S 107 2. STREPIOCOCCUS gr D............................. S 19 3. STREPTOCOCCUS gr H............................. S 218 4. STREPTOCOCCUS NIAIS * S S 325 5. STREPTOCOCCUS SALIVARIUS...................... S 174 6. STREPTOCOCCUS MUTANS........................ S 428 7. MICROCOCCUS PYOGENES........................... S 108 8. LACTOBACILLUS ACIDOPHILUS...................... S 210 9. LACTOBACILLUS FERMENTATUM...................... S 191 10.LACTOBACILLUS HELVITICUS....................... S 135 11.ACTINOMYCES ONDONTOLYTICUS..................... S 323 12. FUSIFCRMIS FUSIFORMIS......................... S 221 13.NEISSERIA PERFLAVA............................ S 103 14. ESCHERICHIA COLI.............................. 2 7 15. CANDINA ALBICANS............................... S 119 4 - Procédé suivant la revendication 1, caractérisé en ce que les tampons sont des solutions aqueuses de phosphate potassique et sodique pour obtenir des pH égaux à 6, 7 et 8. 5 - Procédé suivant la revendication 4, caractérisé en ce que le tampon pH 6 est constitué par -Phosphate monopotassique 9 g -Phosphate bipotassique ....................... 1,5 g -Eau distillée q.s.p . 1 000 ml. 6 - Procédé suivant la revendication 4, caractérisé en ce que le tampon pH 7 est constitué par: - Phosphate disodique ................................... 14,28 g - Phosphate monopotassique............................... 3,64 g - Eau distillée 1.s.p.................................... 1 000 ml 7 - Procédé suivant la revendication 4, caractérisé en ce que le tampon pH 8 est constitué par - Phosphate monopotassique.............................. 0,523 g - Phosphate bipotassique.. * c.. 16,73 g - Eau distillée q.s.p................................... 1 00 ml 8 - Médicament obtenu suivant le procédé de l'une des revendications 1 à 7, caractérisé en ce qu'il est constitué par une solution aqueuse de lysats fluorés antigéniques tamponnés lyo phylisés des microorganismes suivants 1.STREPTOCOCCUS gr A......................... S 107 2. STREPTOCOCCUS gr D * S 19 3. STREPTOCOCCUS gr H.......................... S 218 4. STREPTOCOCCUS MITIS......................... S 325 5. STREPTOCOCCUS SALIVARIUS.................... S 174 6. STREPTOCOCCUS MUTANS........................ S 428 7. MICROCOCCUS PYOGENES........................ S 108 8. LACTOBACILLUS ACIDOPHILUS................... S 210 9. LACTOBACILLUS FERMENTATUM................... S 191 10. LACTOBACILLUS HELVITICUS * S 135 11. ACTINOMYCES ONDONTOLYTICUS................. S 325 12. FUSIFORMIS FUSTFORMIS...................... S 221 13. NEISSERIA PERFLAVA............................ S 103 14. ESCHERICHTA COLT........................... S 7 15. CANDIDA ALBICANS........................... S 119 9 ~ Médicament suivant la revendication 8, caractérisé en ce qu'on utilise une solutionpouvent ête lyophilisée de 0,1 à 1 % de lysats fluorés de substances antigéniques avec un excipient convenable pour l'obtention de dentifrices sous toutes formes convenables.