Brevet FR2321285A1 — publié le 19770318

La présente invention concerne des compositions qui inhibent la réaction fibrinolytique chez les mammifères. Une recherche considérable a été réalisée dans les dernières annees pour obtenir l'inhibition de la fibrinolyse, à la fois in vitro et in vivo. En conséquence, durant un certain temps de nouveaux inhibiteurs ont été utilisés pour arreter le saignement fibrinolytique qui se produit en chirurgie cardiaque, et durant la chirurgie d'un foie cirrhotique. Des agents antifibrinolytiques ont également té utiles lors des saignements gynécologiques et obstétriques. De plus, il a récemment été montré que de tels agents antifibrinolytiques sont utiles, non seulement pour le traitement des hémorragies locales, mais également pour le traitement des inflammations allergiques. Ils sont particulièrement utiles dans le traitement interne de certains types d'hemophiles.Les agents antifibrinolytiques sont donc utilisés avec de nombreuses formes d'hyperplasminémie. Recemm.ent en conséquence, la recherche a te stimulée jusqu' un degré supérieur à cause de ces utilisations accrues des agents antifibrinolytiques Parmi les nombreux inhibiteurs de la plasmine, deux séries d'inhibiteurs ont été developpées et utilises en thérapie: les inhibiteurs synthétiques et les inhibieurs naturels. Ces inhibiteurs, semblent avoir certaines propriétés communes. Pour la plus grande partie, les produits chimiques reconnus pour inverser l'état hyperplasminique sont les composés aminées. Le Trasylol, l'un des inhibiteurs naturels purifiés avait été découvert par Max et Terse. I1 avait été obtenu à partir de la glande parotide et des poumons bovins, et diffère de l'antifibrinolysine obtenue à partir du sang. I1 est très stable aux hautes températures et aux acides, et possède un poids moleculaire de 6513. Essentiellement, c'est un polypeptide basique composé de seize acides amines différents. L'un des agents synthétivues les plus puissants ayant une action inhibitrice sur la fibrinolysineest l'acide epsilon-aminocaproxpe(EACA). Cet inhibiteur synthétique de la nEsmine avait été trouvé lors d'une étude pour déterminer le rapport entre la structure chimique et l'action inhibitrice résultant de l'examination d'environ 300 composés chimiques par Okamoto et ses assistants. Le rapport entre la structure chimique et l'effet inhibiteur de ce composé a également été étudié Un effort consiésable a donc tc fait pour le développement des inhibiteurs de la plasmine. Selon la présente invention, une nouvelle classe d'agents antifibrinolytiques synthétiques a été découverte. Certains acides omega-aminoalkylsulfonivues ont montrcrs qu'ils possédaient des activités antifibrinolytiques très puissantes. En fait, l'un des éléments de ce groupe possède une activité antifibrinolytique égale ou supérieure a celle de EACA. De nombreuses études de l'application clinique de 1'EACA ont été réalisées par de nombreux chercheurs dans de nombreux pays. Ces recherches cliniques ont indiqué une nécessicité très nette pour la réalisation d'agents antifibrinolytiques supplémentaires. Selon la présente invention en conséquence, un procédé supplémentaire pour le contrôle des conditions hyperplasminiques est réaliste. Certains acides oméga-aminoalkylsulfoniques sont administrés aux mammifères qui ont besoin d'un agent antifibrinolytique efficace pour le contrôle des conditions hyperplasminiques. Ces acides sulfoniques administrés en quantité inhibant la fibrinolyse, sont des composés ayant la formule 112N (CH2)n-S03H où n est un nombre entier de 1 à 4, c'est-à-dire un nombre entier inférieur à 5.Parmi ces composés se bDuve l'acide aminométhylsulfonique (Ame-S03H), l'acide béta-aminoethylsulfonique (/5 Aet-S03H), l'acide gammaaminopropylsulfonique (tApr-S03H) et l'acide deta-aminobutyl- sulfonique (# Abu-SO3H). ( Abu-S03H). Les activités fibrinolytiques de ces acides omégaaminoalkylsulfoniques apparaîtront à partir des résultats des essais suivants. Bien que la litérature décrit plusieurs méthodespour la mesure des activités fibrinolytiques et antifibrinolytiques, de nombreuses méthodes ne sont toujours pas entièrement satisfaisantes.Par nécessicité, les procédées doivent etre tout à fait complexes parce qu'ils comportent trois réactions enzymatiques différentes: (1) la formation de la fibrinolysine; (2) la formation d'un caillot de fibrine; et (3) la fibrinolyse. Meme le contrôle, qui comporte la fibrinolyse d'un caillot de fibrine bovine formée à partir de fibrinogène bovin et de thrombine au moyen de fibrinolysine humaine activée par streptokinase, a donné un grand intervalle de temps de lyse. I1 est admis que la méthode la plus satisfaisante pour mesurer les activités antifibrinolytiques est en conséquence celle qui comporte l'utilisation de deux procédés expérimentaux, les méthodes de la durée de lyse et la méthode de la surface de lyse. Dans le premier procéde, un caillot de fibrine est formé en présence d'un système serum-streptokinase. Dans le dernier procédé, un caillot de fibrine est formé en l'absence du système serum-streptokinase. Dans un but de comparaison, les deux méthodes étaient employées pour tester les acides sulfoniques utilisés ici. En conséquence ces deux méthodes sont maintenant décrites en détail. Méthode de la durée de la lyse: Cette méthode était légèrement modifiée par rapport à celle qui a été décrite par Okamoto et Okamoto, Keio J. met., 11, 105 (1962) Dans une série de tubes à essai (8 mm de diamètre x 75 min), 0,1 ml de sérum humain standard, 0,4 ml de solution d'échantillon dans 1/20 de micron d'une solution saline de tampons phosphate et 0,1 ml d'une sdkition saline contentant 100 unités de streptokinase étaient melangés à 0 C. Ensuite 0,05 ml d'une solution saline contenant 5 unités de thrombine et 0,3 ml de fibrinogène bovin à 0,338 dans une solution saline étaient ajouts.Après le mélange a ét incubé à 250C durant 5 minutes, et les tubes à essai étaient inclinés à un angle de -200 par rapport à l'horizontaleet étaient fait vibrer rapidement (70 vibrations par minute, amplitude 15 mm) pour minimiser l'influence des tubes à essai et des autres facteurs. Avec ce système de ViEration, 83,3% des caillots étaient dissous en 7 à 9 minutes, alors que sans vibration un intervalle plus grand de durée de lyse avait été trouvé, c.à.d. 85,0% des caillots étaient dissous en une période de 8 à 13 minutes. La vibration du tube était une tentative pour minimiser l'influence des légères différences des inclinaisons des tubes et des tensions superficielles. Des résultats plus consistants étaient obtenus avec ce procédé. La durée de la lyse est le nombre-de minutes necessaires pour que le caillot s'écoule. Méthode de la surface de lyse: La méthode utilisée est une modification d'une méthode décrite par Astrup et Mùllertz, Arch. Biochem. BioDhVs., 40, 346 (1952) et elle etait similaire à celle décrite par Okamoto, Rinsho-Kensa, 8, 966 (1964). Dans un disque de pétri ayant une dimension de 10 cm de diamètre, 10 ml de fibrinogène bon c 0,4% dans un tampon-de Palitzsch à FH 7,4 étaient versés au moyen d'une pipette. Le disque était maintenu horizontal. Dans la solution, 5 ml de 10 unités par ml de thrombine bovine dans un tampon de Palitzsch à pH 7,4 étaient ajoutés, alors que ledisqueest fait tourner durant 3 secondes pour mélanger les ingrédients. Une plaque de fibrine boane était formée juste après avoir fait le mélange et était maintenue à température ambiante durant 30 minutes pour durcir. La surface de la plaque était séchée dans un incubateur à 370C durant 30 minutes sans couvercle (plaque standard). On laissait égoutter l'échantillon sur la plaque au moyen d'une pipette, ou on le laissait égoutter sur un disque en papier placé sur la plaque. La plaque était alors incubée à 37 C durant 2 heures à 20 heures. La zone de lyse était obtenue en mesurant la distance la plus grande et la plus courte de la zone claire. Les adivités antifibrinolytiques des acides oméga aminoalkylsulfoniques concernés dans la présente invention sont données dans la table suivante. L'EACA était un contrôle positif, et une solution saline de tampon de phosphate 0,05 M, le solvant pour le compose, était utilisé comme contrôle-négatif. La concentration de chaque échantillon etait 106M. Activité antifibrinolytique des acides W -amino alkylsulfoniques Composé Durée de la lyse, Min. Zone de lyse, % inhib. moyenne SD moyenne SD Ame-S03H 9 3 1 4 ss Aet-S03H 10 2 8 3 W Apr-S03H 14 4 28 8 s Abu-S03H 23 2 62 7 contrôle négatif 7 1 EACA 22 4 42 12 Ainsi qu'on peut le voir dans les valeurs exprimées dans la table précédente, les acides omega-aminoalkylsulfoniques étaient très actifs contre la fibrinolyse. Particulièrement significatif est le fait que l'acide delta-aminobutylsulfonique est aussi efficace que, et les indications sont plus efficaces que pour 1'EACA, cité comme l'agent antifibrinolytique le plus puissant d'une scorie d'acides omega-amines à chaîne droite. Le composé deta est également plus puissant que l'Àpe-S03li, le compose No.5. Les acides aminométhylsulfoniques étaient préparés selon la réaction suivante décrite par Reinking et al dans Chem.Ber., 38, 1069 (1905) (Procédé A). Ce qui suit est un exemple de cette préparation: A un mélange de 111 g de NaHS03 dans 139 g de H20 et 85,2 g d'une solution HCH0 à 36%, 61,5 g de NH40H à 28% taient ajoutés goutte à goutte a travers un entonnoir à décantation à 75 C en agitant. Après l'addition de NH40H, on permet au mélange de reposer la même température durant 1 heure et ensuite on le refroidit. Le mélange de réaction refroidi est traité avec du H2S04 concentré (pH 1,0) pour obtenir des fins cristaux blancs. Apres la filtration, les cristaux étaient lavés avec une petite partie de H20 froid. Ensuite on recristallise à partir de H2 chaud: Rendement, 20,4 g (32,5%); Point de fusion, 184-1850C, dosage analytique - calculé pour CH5N03S (pourcent): C, 10,8i; H, 4,54; , 12,61; S 28,85. Pourcentage trouvé: C, 10,92; H, 4,51; N, 12,70; S, 28,90 (analyse par Calbraith Laboratories, Inc.). Les autres acides oméga-aminoalkylsulfoniques étaient préparés selon les réactions suivantes décrites par Marvel et al dans J. Amer. Chem. Soc. 49, 1883 (1927). (Procédé B). Comme exemple de ces méthodes de préparation, l'acide delta-aminobutylsulfonique était préparé comme suit: Dans un flacon à fond rond de 500 ml auquel on a adapté un réfrigérant à reflux, un agitateur mécanique, et un entonnoir a décanter sont placés 100,0 g de Br(CH2)4Er, 194 ml de EtOH à 95%, et 2n mi de H20. Au mélange bouillant bien agité, une solution de 3ci,0 g de Na2SO3 anhvdre dans 60 ml d'eau est ajoutée à travers l'entonnoir à decanter en une période de 2 heures. Le mélange de la réaction est alors concentré sous vide Le Br(CH2)4SO3Na est extrait du réaidu sec avec 150 ml de EtOR à 95% en utilisant un extracteur Soxhiet.En refroidissant l'extrait, des cristaux blancs sont obtenus. Le produit est purifié adavantage par une recristallisation à partir de EtOH chaud: Rendement, 30,6 g (91,0%), le Br(CH2)4S03Na brut (30,0 g) est traité avec 600 ml de NHOH concentré. Le produit brut est purifié en utilisant la chromatographie par échange ionique sur AG l-x8, 0,14-0,07 mm, colonne 2,0 x 40 cm, forme OH . Les quantités -de solution d'effluent sont 600 ml et 1000 ml de H20 et HCl 0,02 N respectivement. Les fractions pures sont rassemblées et concentrées à sec sous vide. Cristallisation à partir de H29-EtOH chaud: Rendement, 13,3 g (69,0%); Point de fusion 250-2510C, Analyse - calculé pour C4H11NO3S (pourcent): C, 35,91; H, 7,84; N, 8,38; S, 19,17. Pourcentage trouvé: C, 35,82; H, 7,75; N, 8,06; S, 18,97 (analyse par Galbraith Laboratoties Inc.). Les points de fusion, les rendements et les valeurs de Rf pour chacun des ces acides omega-aminoalkylsulfoniques sont comme suit: Acides oméga-aminoalkylsulfoniques H2N- (CH2) S03H n Composé Précédé Rendement%, Point de Solvant Formule fusion C 1 Ame-S03H A 32,5 184-185, dec H20 CH5NO3S 2 t Aet-S03H B 61,8 264-266 H20-EtOH C2E7N03S 3, &gamma;Apr-SO3H B 81,0 269-271, dec sa C3H9N03S 4 &gamma; ; Abu-S03H B 62,8 250-251, dec sa C4H11NO3S Valeurs Rf des acides omega-aminoalkylsulfoniques sur TLC* (Rf x 100) Compose Solvant-l Solvant-2 Solvant-3 Solvant-4 Solvant-5 Ame-S03H 15 44 50 75 89 3Aet-SO3H 32 41 49 66 84 gApr-S03H 34 35 46 46 71 &alpha;-Abu-SO3H 35 31 45 33 69 L-Ala 35 41 46 44 80 * silica-gel G, plaques de 250 Solvant-l; PhOH: H20 (75:25 rapport pondéral), pH 2,0 Solvant-2; nBuOH: AcOH: H20(60:20:20), pH 2,4 Solvant-3; iPrOH: acide formique : H20 (77:4;l9), pH 2,7 Solvant-4; secBuOH: MeCOEt: dicyclohexylamine:H2O(55:15:10:20), pH 10,3 Solvant-S; CHC13: Me OH: NH4OHà 17% (40:40:20), pH 11,6 La présente invention donc rend disponible une nouvelle classe de drogues pour le contrôle dehyperpasminémie par inhibition de l'activation du plasminogène. La drogue peut être utilisée pour la prévention ou le traitement des conditions chez les mammifères si elle est administrée à un mammifère hyperplasminique en une quantité inhibant la plasmine sous forme de tablettes pour un usage oral ou dans un support salin pour injection intraveineuse. Des quantités normales variant de 10 à 500 mg/kg de corps seront employées. Des variations de ces quantités ainsi que des modes d'utilisation et d'administration seront apparentes pour ces spécialistes en la matière. D'après la description pre,cedente, il sera evident pour les techniciens que de nombreuses modifications au mode de réalisation préféré et décrit sont possibles. ar suite il doit être bien entendu que ladite description est seulement indicative et non limitative. Revendications 1. Procédé pour le contrôle de lthyperplasminemie chez les mammifères caractérisé en ce qu il comprend l'administration à un mammifère hyperpiasminique d'une quantité inhibant la plasmine d'un acide oméga-aminoalkylsulfonique et a la formule H2N - (CH2)n - S03H où n est un nombre entier inférieur à 5. 2. Méthode selon la revendication 1, caractérisée en ce que n vaut 1, l'acide étant l'acide aminométhylsulfonique. 3. Méthode selon la revendication 1, caractérisoeen ce que n vaut 2, l'acide étant l'acide béta-aminoÉthylsulfonique. 4. Méthode selon la revendication 1, caractériseeen ce que n vaut 3, l'acide étant l'acide gamma-aminopropylsulfonique. 5. Méthode selon la revendication 1, caractérisée en ce. que n vaut 4, l'acide étant l'acide delta-aminobutylsulfonique.