Brevet FR2353058A1 — publié le 19771223

présente invention concerne une botte destinée tout particulièrement aux dosages immunochimiques par diffusion radiale. Le principe de ce dosage consiste à couler une couche d'un milieu gélosé contenant un immunosérum déterminé. On creuse des godets dans le milieu gélosé et on y introduit les solutions d'une protéine dont on veut mesurer la concentration, la protéine à doser correspondant à l'immunosérum. On laisse diffuser un certain temps et on mesure les diamètres des auréoles de précipitation obtenues. Diverses relations permettent de déterminer la concentration de la solution de protéine à doser en fonction des diamètres des auréoles obtenues. Le but de la présente invention est de réaliser des boîtes spécialement conçues pour ce type de dosage. On connaît déjà des bottes destinées à cet usage mais qui ne donnent pas toutes satisfaction, notamment en ce qui concerne ltélimination des effets de rétraction par dessication de la gélose. Dans ces bottes, habituellement réalisée en "plexiglass", on observe en effet une rétraction par dessication de la gélose provenant de la non adhérence de celle-ci sur le plexiglass de la botte et également de l'évaporation progressive de l'eau contenue dans la gélose dues à la fermeture non hermétique de la botte. Pendant le stockage, la botte est refermée dans une pochette d'aluminium qui empêche la dessication. Mais, une fois la botte sortie de son enveloppe, la dessication est tres rapide à toapérature ordinaire : 60 mg par jour, si bien qu'en 10 à 15 jours la botte est inutilisable sauf pour celles qui ont 12 titrages ou plus à faire en une fois. L'invention a donc plus particulièrement pour but de pallier ces inconvénients. A cet effet, l'invention a pour objet une botte pour dosages immunochimiques par diffusion radiale comprenant un corps et un couvercle emboîté sur le corps, caractérisée en ce que le couvercle est percé de trous susceptibles de se trouver à l'aplomb oha- cun d'un puits ménagé dans une couche de gélose ou d'un milieu gé lose analogue déposée dans le corps de la botte, ces trous étant destinés à permettre l'introduction d'une micropipette et recouverts d'un ruban adhésif transparent ou métallisé étanches le rebord du couvercle étant fixé par sa tranche au corps de la botte par soudage ou collage. Avantageusement, dans le cas où la gélose est déposée suivant une couche s'étendant sur toute la surface du fond du corps de la botte, le rebord interne de ce dernier est chanfreiné et dépoli de manière que la gélose affleure au niveau du dépoli et s'ancre efficacement. Suivant un autre mode de réalisation, le corps de la botte est muni de logements cylindriques dont le diamètre correspond sensiblement au diamètre maximal des auréoles susceptibles autre obtenues, chacun de ces logements recevant une couche de gélose elle-même pourvue en son centre d'un puits. D'autres caractéristiques et avantages ressortiront de la description qui va suivre de modes de réalisation de bottes selon l'invention, description donnée à titre d'exemple uniquement et en regard du dessin annexé sur lequel Fig. 1 représente une vue en coupe verticale d'une boite selon l'invention, et Fig. 2 représente une vue en coupe verticale d'un autre mode de réalisation d'une botte conforme à l'invention. La botte représentée sur la figure 1 comprend un corps de botte 1 et un couvercle réalisés de préférence en une matière plas tique transparente telle que le "plexiglass". Le corps de botte 1 comprend un fond plat 5 entouré d'un rebord 4 et prolongé, au-delà du rebord 4, tout autour du corps 1, par un méplat 5. Le bord interne du rebord 4 est chanfreiné en 6 et la partie inclinée ainsi obtenue est dépolie. Le corps de botte 1 est rempli d'une couche de gélose 7 ou d'un milieu gélosé analogue dans laquelle ont été creusés un certain nombre de puits cylindriques 8 destinés à recevoir, à la manière connue, une solution d'une protéine dont on veut mesurer la concentration. La surface de la gélose 7 affleure le dépoli des faces in clinées 6, ce qui fixe la gélose et 1 t empêche de glisser. Le couvercle 2 comprend autant de trous 9 que de puits 8, les trous étant situés à l'aplomb de ces derniers. Ils permettent l'introduction d'une micropipette pour le remplissage sélectif des puits 8. En période de non utilisation de la botte, le couvercle 2 est recouvert d'un ruban 10 adhésif transparent ou métallisé. Ce ruban 10 est provisoirement décollé à chaque fois que l'on veut verser une solution dans l'un des puits 8. Enfin, le couvercle 2 est collé (ou soudé) par sa tranche contre le méplat 5 du corps de botte 1. La fixation de la couche de gélose 7 par le dépoli en 6 est très efficace puisque l'eau contenue dans la gélose peut s'évaporer à 80 pour cent sans que la gélose se décroche. Le film de gélose s 'amincira sans rétraction. Du fait de cette stabilité, les puits 8 demeurent constarment en regard des trous 9 du couvercle. Ceci permet à l'utilisateur, en introduisant la micropipette dans les trous 9, d'entre guidé et, ainsi, d'être sûr de ne pas écorcher la gélose 7. L'ouverture de la botte n'est plus nécessaire et l'évapora- tion à l'intérieur est notablement évitée grtce au collage ou soudage du couvercle 2-et à l'application du ruban adhésif transparent ou métallisé 10. La boite est ainsi colaplétenent close, ne dessèche plus et peut servir plusieurs fois jusqu'à épuisement de ses logettes (puits 8). Par ailleurs, l'effet de miroir procuré par le ruban, lors- qu'il est métallisé,rend très nets les anneaux de diffusion et facilite leur mesure. La figure 2 représente- une variante suivant laquelle la rétraction de la couche de gélose est limitée par d'autres moyens. A cet effets le corps de boite 11 est percé d'un certain nombre de logements cylindriques 12 dont le diamètre correspond sensiblement au diamètre des plus grandes auréoles susceptibles autre rencontrées. Ces logements 12 sont remplis de méiose 13 dont la surface affleure la face supérieure 14 du corps de botte. Dans la partie centrale des disques de gélose 13, sont réalisés des puita l5 analogues aux puits 8 de la figure 1. Le corps de la botte est recouvert d'un couvercle 16 pourvu de trous 17 en regard de chaque puits 15. La face interne du couvercle 16 est en contact avec la face 14 et la face supérieure des disques de -gélose 13. Enfin le couvercle 16 est collé ou soudé par sa tranche sur un épaulement 18 du corps 11 et reçoit également un ruban (non représenté) adhésif transparent ou métallisé masquant les orifices des trous 17. L'éventuelle condensation de buées à l'intérieur de la boite est ainsi évitée du fait de la quasi suppression du volume d'air renfermé à l'intérieur de la boite. REVENDICATIONS 1. boite pour dosages immunochimiques par diffusion radiale comprenant un corps et un couvercle embotté sur le corps, caractérisée en ce que le couvercle est percé de trous susceptibles de se trouver à l'aplomb chacun d'un puits ménagé dans une couche de gélose ou d'un milieu gélosé analogue déposée dans le corps de la boîte, ces trous étant destinés à permettre l'introduction d'une micropipette et recouverts d'un ruban adhésif transparent ou metalli- sé étanche, le rebord du couvercle étant fixé par sa tranche au corps de la boite par soudage ou collage. 2. Botte suivant la revendication 1 caractérisée en ce que la gélose est déposée suivant une couche s'étendant sur toute la surface du fond du corps de la botte et le rebord interne de ce dernier est chanfreiné et dépoli de manière que la gélose affleure au niveau du dépoli et'ancre efficacement. 3. Botte suivant la revendication 1, caractérisée en ce que le corps de la bote est muni de logements cylindriques dont le diamètre correspond sensiblement au diamètre maximal des auréoles susceptibles dtetre obtenues, chacun de ces logements recevant une couche de gélose elle-mEme pourvue en son centre d'un puits. 4. Botte suivant la revendication 3, caractérisée en ce que la face supérieure des disques de gélose affleure la face supérieure du corps de la botte, la face interne du couvercle venant s'appliquer contre celle-ci.