Brevet FR2349650A1 — publié le 19771125

La présente invention concerne un procédé pour préparer une nouvelle source de carbone pour les fermentations; l'invention concerne également une source de fructose très bon marché d'un intérêt économique qui est comparable à celui du saccharose. Le fructose a une saveur sucrée agréable et il est environ 1,5 à 2 fois plus sucré que le saccharose. On connaft de nombreux procédés de préparation du fructose, cependant les colts de fabrication sont trop élevés et les débouchés sont donc limités à des utilisations particulières telles que les aliments pour diabétiques. On utilise couramment le saccharose comme matière première de la préparation du fructose. Cependant il est difficile de traiter la liqueur mère après récupération du fructose. On a étudié de nombreux procédés pour traiter la liqueur mère, par exemple par la glucose-isomérase > mais à ce jour on n'a pas mis au point de procédé satisfaisant du point de vue économique. Le brevet des Etats-Unis d'Amérique nO 3 793 146 décrit la récupération de fructose à partir d'un hydrolysat de saccharose, sous forme d'un produit d'addition avec le chlorure de calcium et l'utilisation de- la liqueur mère comme source de carbone principale pour la production par fermentation de l'acide citrique. Cependant le fructose préparé selon ce brevet est comateux car le traitement par le chlorure de calcium nécessite que le saccharose soit pur. De plus, la nature de la fermentation est limitée car des quantités importantes d'ions calcium et d'ions chlorure demeurent dans la liqueur mère et inhibent la fermentation. La demanderesse a découvert que l'on peut récupérer le fructose à partir d'un hydrolysat de mélasses sous forme d'un produit d'addition avec l'hydroxyde de calcium et que, lorsqu'on neutralise la liqueur mère dont on a éliminé les ions calcium, elle convient comme source de carbone pour la production par fermentation de l'acide glutamique ou de la lysine. Malgré la diminution de la pureté de la source de carbone; les rendements en acide glutamique et en lysine ne sont pas réduits. La demanderesse a de plus découvert que les rendements de la préparation de ces amino-acides à partir du fructose sont bien inférieurs à ceux que l'on obtient à partir du glucose, ce qui indique que la production de l'acide glutamique et de la lysine ne dépend pas de la présence du fructose. Dans l'invention on peut utiliser comme mélasses des mélasses de canne à sucre et des mélasses de betterave. On peut effectuer l'hydrolyse du saccharose des mélasses selon des procédés connus en utilisant par exemple un acide minéral ou une enzyme. Par exemple si on ajuste le pH des mélasses entre 1,5 et 2 avec de l'acide chlorhydrique, puis qu'on chauffe entre 60 et 100C pendant 0,5 à 4 heures, on peut hydrolyser la majeure partie du saccharose des mélasses en hexoses, c'est-8-dire en glucose et en fructose. Lorsqu'on hydrolyse les mélasses avec un acide minéral, on neutralise l'hydrolysat avec une base telle que lthydroxyde de calcium ou l'hydroxyde de sodium. On mélange ensuite l'hydrolysat neutre avec l'hydroxyde de calcium, de préférence en une quantité égale à 0,7 à 1,5 fois la quantité molaire de l'hexose. Au lieu d'hydroxyde de calcium on peut utiliser l'oxyde de calcium. Dans ce cas l'oxyde de calcium est tout d'abord transformé dans l'hydrolysat en hydroxyde de calcium qui réagit ensuite avec le fructose. On doit effectuer le mélange avec précaution. On refroidit tout d'abord l'hydrolysat neutre à une température inférieure à 10 C, de préférence inférieure à 5"C, et on ajoute l'hydroxyde de calcium à l'hydro- lysat froid à raison de 1,2 à 1,6 fois la quantité molaire de fructose. On ajoute alors de préférence des germes constitués de produits d'addition du fructose et de l'hydroxyde de calcium et on laisse mûrir le mélange ensemencé pendant 15 à 60 mn-en agitant modérément. Les cristaux du produit d'addition peuvent également se former sans ensemencement. On ajoute le reste d'hydroxyde de calcium progressivement en environ 1à 2 heures. Pendant la réaction de l'hydroxyde de calcium et du fructose on maintient de préférence la température des composés réagissants en dessous de 50C pour réduire la décomposition du fructose et du glucose. Le mode opératoire ci-dessus donne de gros cristaux du produit d'addition se prêtant très bien à la séparation industrielle. Si on n'effectue pas le mélange avec précaution on obtient une suspension crèmeuse constituée essentiellement de petits cristaux. Par conséquent, la séparation industrielle des cristaux est difficile. Si l'on mélange l'hydrolysat neutre avec du chlorure de calcium et non de l'hydroxyte de calcium, on ne peut pas séparer les cristaux du produit d'addition car les cristaux précipités sont fins et la suspension est très visqueuse. On récupéré les cristaux ainsi produits par filtration ou centrifugation. On lave de préférence les cristaux récupérés avec de l'eau refroidie. On peut préparer à partir des cristaux récupérés, en opérant selon des procédés connus, des cristaux de fructose ou une solution de fructose renfermant une petite quantité de glucose. On préfere particulièrement le dioxyde de carbone comme agent de neutralisation de l'hydroxyde de calcium du produit d'addition. Dans ce cas on place les cristaux dans L'eaux puis on fait barboter du dioxyde de carbone gazeux dans la suspension. Après barbotage on sépare le précipité pour obtenir une solution brute de fructose. Si on le désire, on peut soumettre la solution de fructose à une purification complémentaire selon des procédés connus tels qu'unie cristallisation, un traitement par les résines échangeuses d'ions et une décoloration pour préparer les cristaux finals de fructose. Le rendement du fructose à partir de l'hydrolysat dans la solution ci-dessus peut atteindre 70 Z et il est généralement de 50 à 65 7. On neutralise la liqueur mère et on en élimine les ions calcium. Des agents de neutralisation appropriés sont le dioxyde de carbone, l'acide sulfurique, l'acide phosphorique, les résines échangeuses de cations et similaires. Lorsqu'on effectue la neutralisation en utilisant un de ces agents on peut éliminer simultanément les ions calcium. Parmi les agents ci-dessus on préfère tout particulièrement le dioxyde de carbone car on peut réutiliser le carbonate de calcium récupéré en le calcinant. Une autre supériorité du dioxyde de carbone est qu'il a un effet décolorant lors de la neutralisation. Comme le fructose et le glucose ne sont pas stables en solution alcaline, il est nécessaire de les maintenir à froid pendant le traitement ci-dessus. Il est également nécessaire de neutraliser rapidement le produit d'addition et la liqueur mère après séparation du produit d'addition du fructose. La liqueur mère dont on a éliminé le calcium convient comme source de carbone pour la préparation par fermentation de l'acide glutamique et de la lysine. La plupart des souches permettant d'obtenir l'acide glutamique par fermentation conviennent également à l'obtention de la lysine. Les souches des micro-organismes qu'on peut utiliser dans l'invention sont des souches appartenant aux genres BrevibacteriumJ Coryne bacterium, Micrococcus ou Microbacterium, capables de produire de l'acide glutamique ou de la lysine. On peut citer Pour la production par fermentation de l'acide glutamique Brevibacterium lactofermentum ATCC 13869 B. divaricatum NRRL-B-2311 Corynebacterium glutamicum ATCC 21543 C. lilium NRRL-B-22-43 C. herculis ATCC 13868 Micrococcus glutamicus ATCC 13032 Microbacterium ammoniaphilum ATCC 15354 Pour la production par fermentation de la lysine Brevibacterium lactofermentum FERM-P 2654 Corynebacterium glutamicum ATCC 21543 C. acetoglutamicum FERM-P 2655 Micrococcus glutamicus ATCC 13286 Les micro-organismes identifiés par des numéros FERM-P sont fournis sur demande par l'institut de Recherches sur les Fermentations, Service des Sciences et Technologies Industrielles du Ministère du Commerce et de l'industrie du Japon. On effectue la fermentation comme dans le procédé classique où on utilise des mélasses comme source principale de carbone. Malgré la diminution de la pureté en carbone des mélasses, due à l'extraction du fructose, les rendements des fermentations ne sont pas réduits. Comme le montrent les expériences 1 et 2, les rendements des fermentations, lorsqu'on utilise le glucose, sont supérieurs à ceux obtenus lorsqu'on utilise le fructose. L'invention permet donc d'utiliser le glucose pour la fermentation et d'obtenir du fructose utile par sa saveur sucrée. D'autres caractéristiques et avantages de l'invention seront mieux compris la lecture de la description qui va suivre d'expériences et d'exemples de réalisation donnés à titre illustratif et nullement limi tat-if. zxpErience 1 Production d'acide glutamique par fermentation On effectue 5 expériences en modifiant le rapport du fructose au glucose. On prépare des fractions de 20 ml du milieu de culture ayant la composition suivante Hexose (défini dans le tableau I) 10 g/dl KH2PO4 0,1 g/dl MgS04, 7H20 0,05 g/dl FeSO4, 7H20 0,001 g/dl NnSO4,4H2O 0,001 g/dl Vitamine B1 200 g/l Biotine 3 g/l Hydrolysat de paillettes de soja 0,2 ml/dl Teneur en azote : 7 g/dl) pH 7,0 qu'on introduit dans des flacons à agitation de 500 ml et qu'on stérilise à 110 C pendant 10 mn. On ensemence chaque milieu avec Brevibacterium lactofermentum ATCC 13869 et on cultive à 31,50C pendant 40 heures en agitant. Pendant la culture on maintient le pH du milieu entre 7,0 et 8,0 avec une solution aqueuse stérilisée d'urée à 45 g/dl. Les résultats obtenus figurent dans le tableau I ci-dessous TABLEAU I Hexose Croissance Acide fructose glucose bactérienne glutamique Rendement (g/dl) (g/dl) (D.O) (g/dl) (%) 10 - 0,30 2,43 24,3 7,5 2,5 0,38 2,77 27,7 5,0 5,0 0,47 3,38 33,8 2,5 7,5 0,49 4,91 49,1 - 10 0,50 4,86 48,6 Expérience 2 On effectue 5 expériences en utilisant des fractions de milieu de culture de 20 ml ayant la composition suivante Hexose (défini dans le tableau II) 10 g/dl (NH4)2SO4 4,5 g/dl KH2PO4 0,1 g/dl MgSO4,7H2O 0,04 g/dl FeSO4,7H2O 0,001 g/dl MnSO4,4H2O 0,001 g/dl Vitamine B1 200 g/l Biotine 50 ug/l Hydrolysat de paillettes de soja 1,5 ml/dl Teneur en azote 7 g/dl) CaCO3 5 g/dl pH 7,0 qu'on introduit dans des flacons à agitation de 500 ml et qu'on stérilise à 110 C pendant 10 mn. On ensemence chaque milieu avec Brevibacterium lactofermentum AJ 3796 (FERM-P 2654) et on cultive å 31,5"C pendant 72 heures en agitant. Les résultats figurent dans le tableau II ci-dessous. TABLEAU II Hexose Croissance Chlorhydrate fructose glucose bactérienne de L-lysine Rendement (g/dl) (g/dl (D.O) (g/dl) (Z) 10 - 1,15 1,81 18,1 7,5 2,5 1,16 2,13 21,3 5,0 5,0 1,14 2,34 23,4 2,5 7,5 1,04 3,59 35,9 - 10 1,03 3,62 36,2 Exemple 1 On dilue des mélasses de canne à sucre avec 2,3 litres d'eau par kg de mélasses, on ajuste à pH 1,5 avec de l'acide sulfurique et on hydrolyse A 600C pendant 4 heures. On neutralise l'hydrolysat avec de l'hydroxyde de calcium et on sépare par filtration le précipité de sulfate de calcium. On obtient ainsi une solution de sucre interverti renfermant 9,95 g/dl de glucose et 11,25 g/dl de fructose. On refroidit 3 litres de cette solution de sucre interverti b 0 C et on ajoute progressivement à la solution de l'hydroxyde de calcium a 30 Z renfermant 262 g de Ca(OH)2 (quantité équimoléculaire par rapport aux hexoses) en maintenant la température en dessous de 5"C. Lorsqu'on a ajouté 70 % de la quantité totale d'hydroxyde de calcium, on arrete l'addition et on ajoute une petite quantité de germes cristallins constitués du produit d'addition. Pour réduire la sursaturation, on agite la solution ensemencée pendant 30 aman. Pendant l'agitation une quantité importante de cristaux de produit d'addition se forme. On ajoute ensuite progressivement les 30 % restants d'hydroxyde de calcium en 1 heure et on agite encore la suspension produite pendant 30 mn. On sépare par filtration les cristaux du produit d'addition et on lave à l'eau refroidie On met les cristaux récupérés en suspension dans l'eau refroidie on neutralise la suspension par l'acide sulfurique et on sépare le précipité formé. La solution de fructose ainsi obtenue renferme 168 g de fructose et 6,4 g de glucose. Le rendement en fructose est de 50 X. On neutralise également la liqueur mère à l'acide sulfurique et on sépare le précipité. La liqueur mère dont on a éliminé le calcium renferme 284 g de glucose et 159 g de fructose. Dans un essai comparatif on dilue 1 kg des mêmes mélasses de canne à sucre avec I litre d'eau, on ajuste à pH 1,5 avec de l'acide sulfurique et on hydrolyse a 600C pendant 3 heures. On dissout 250 g de chlorure de calcium dihydraté dans 250 ml d'eau et on les ajoute à I'hydrolysat. On concentre la solution pour cristalliser le produit d'addition du fructose et du chlorure de calcium. Cependant on peut très difficilement séparer les cristaux du produit d'addition par suite de la viscosité élevée de la suspension et de la finesse des cristaux. On effectue 6 essais de production par fermentation de l'acide glutamique en utilisant les mélasses de canne à sucre, la solution de sucre interverti neutralisée par l'hydroxyde de calcium et la liqueur mère concentrée dont on a éliminé le calcium (renfermant 23,16 % de glucose et 12,97 X de fructose) comme sources principales de carbone. On prépare des portions de 20 ml de milieu de culture renfermant Une des sources principales de carbone ci-dessus 100 gll Cen hexosè) RE2P04 1 g/l (en hexose) MgSO4 > 7H20 1 g/l (en hexose) Vitamine B1 100 ug/l Hydrolysat de paillettes de soja 4 ml/l Teneur en azote : 70 g/l pH 7,0 on les introduit dans des flacons à agitation de 500 ml et on stérilise ê 115"C pendant 10 mn. On ensemence le milieu avec Brevibacterium Iactofermentum ATCC 13869 et on cultive å 31,50C pendant 40 heures en agitant. Pour mainte- nir le pH du milieu entre 6,5 et 8,0, on ajoute a la demande une solution aqueuse d'urée 8-450 g/l. Après l'ensemencement, lorsque la densité optique du bouillon de culture dilué 26 fois atteint 0,3 a 562 nm, on ajoute au bouillon 3 mg/ml d'un agent tensioactif constitué essentiellement de monopalmitate de polyoxyéthylènesorbitane. Les rendements en acide glutamique sont respectivement de 48,2 g/l pour les mélasses de canne A sucre, 47,9 g/l pour la solution de sucre interverti et 48,1 g/l pour la liqueur mère dont on a éliminé le calcium. En utilisant les mêmes sources de carbone que ci-dessus > a l'exception de la solution de sucre interverti, on étudie la production par fermentation de l'acide glutamique avec 6 autres souches de microorganismes. La technique de fermentation est la même que dans le cas de B. lactofermentum, si ce n'est que la concentration en vitamine B1 est de 200,us/1, qu'on n'ajoute pas d'hydrolysat de soja en paillettes et que la durée de culture est de 30 heures. Les souches utilisées dans ces essais et les rendements en acide glutamique figurent dans le tableau III ci-dessous TABLEAU III Rendement Liqueur mère Souche Mélasses de canne à sucre débarrassée du Ca Corynebacterium lilum 48,3 49,0 (NRRL-B-22-43) Corynebacterium herculis 45,2 46,5 (ATCC 13868) Brevibacterium divaricatum 46,6 47,2 (NRRL-B-2311) Micrococcus glutamicus 48,5 49,3 (ATCC 13032) M6crobacterium ammoniaphilum 48,3 49,0 (ATCC 15354) Brevibacterium lactofermentum 52,1 52,9 (ATCC 13869) Exemple 2 En utilisant les mimes sources de carbone que dans l'exemple 1 on étudie la production par fermentation de la lysine. On prépare des portions de 20 ml de milieu de culture ayant la composition suivante Une des sources principales de carbone ci-dessus 100 g/l (en hexose) (NH4)2S04 45 g/l (en hexose) KH2P04 1 g/l (en hexose) MgS04,7H20 0,4 g/l (en hexose) FeS04t7H20 0,01 g/l (en hexose) MhS 4,4H2 0,01 g/l (en hexose) Vitamine B1 200 ug/l Biotine 50,ug/1 Hydrolysat de paillettes de soja 15 m1/l (Teneur en azote 70 g/l) Carbonate de calcium 50 g/l pH 7,0 on les introduit dans un ballon à agitation de 500 ml et on stérilise à 1150C pendant 10 mn. On ensemence chaque milieu avec Brevibacterium lactofermentum FERM-P 2654 ou Corynebacterium acetoglutamicum FERM-P 2655 et on cultive 30,5 C pendant 72 heures en agitant. Lorsque la culture est achevée, on détermine la concentration en lysine du bouillon; les résultats obtenus figurent dans le tableau IV ci-dessous TABLEAU IV Chlorhydrate de L-lysine Source de carbone B. lactofermentum C. acetoglutamicum FERM-P 2654 FERK-P 2655 Mélasses de canne a sucre 40,7 g/l 29,2 g/l Solution de sucre interverti 38,5 26,9 Liqueur mère débarrassée du Ca 41,2 30,3 En utilisant les mimes sources de carbone que ci-dessus, å l'exception de la solution de sucre interverti, on étudie la production par fermentation de la lysine avec deux autres souches.Le mode de fermentation est le meme que dans le cas de B,lactofermentum et de C. acetoglu tamicum, si ce n'est que la concentration en hydrolysat de soja en paillettes est de 10 ml/l, le pH du milieu est de 8,0 et la température de culture de 31,5OC. Les souches utilisées dans ces essais ainsi que les rendements en lysine figurent dans le tableau V ci-dessous TABLEAU V Rendement Souche Mêlas ses de Liqueur mère canne å sucre débarrassée du Ca Micrococcus glutamicus (ATCC 13286) 30,5 X 30,9 % Corynebacterium glutamicum (ATCC 21543) 30,1 30,5 Exemple 3 On dilue des mélasses de betterave avec 2,5 litres d'eau par kg de mélasses, on ajuste le pH à 1,5 avec de l'acide sulfurique et on hydrolyse 600C pendant 4 heures. On neutralise l'hydrolysat avec de l'hydroxyde de calcium et on sépare par filtration le précipité formé. On obtient ainsi une solution de sucre interverti renfermant 7,80 g/dl de glucose et 8,81 g/dl de fructose. On refroidit OOC, trois litres de la solution de sucre interverti et on ajoute progressivement à la solution de l'hydroxyde de calcium 30 X renfermant 205 g de Ca(OH)2 (quantité équimoléculaire par rapport aux hexoses) en maintenant la température en dessous de 50C. Lorsqu'on a ajoute 70 % de la quantité totale d'hydroxyde de calcium on arrête l'addition et on ajoute une petite quantité de germes constitués de cristaux du produit d'addition. Pour diminuer la sursaturation on agite la solution ensemencée pendant 30 mn. Pendant l'agitation de nombreux cristaux du produit d'addition precipitent. On ajoute progressivement les 30 % restants d'hydroxyde de calcium en 1 heure et on agite encore pendant 30 mon la suspension ainsi formée. On sépare par filtration les cristaux du produit addition et on lave à l'eau refroidie.On met les cristaux récupérés en suspension dans l'eau refroidie, on-neutralise la suspension A l'acide sulfurique et on sépare le précipité formé. La solution de fructose ainsi obtenue renferme 169 g de fructose (rendement 64 70) at 6,3 g de glucose. On neutralise la liqueur mère avec de l'acide sulfurique et on sépare le précipité. La liqueur mère débarrassée du calcium renferme 220 g de glucose et 87 g de fructose. On effectue 12 essais de production d'acide glutamique par fermentation en utilisant les mélasses de betterave ou la liqueur mère concentrée dont on a éliminé le calcium, comme sources principales de carbone. On prépare des portions de 20 ml de culture ayant la composition suivante : une des sources principales de carbone ci-dessus 100 g (en hexoses) Rydrolysat de soja en paillettes ("Mieki"; teneur en azote 2,4 Z) 10 ml/l pH 7 O on les introduit dans des flacons à agitation de 500 ml et on stériles. A 1159C pendant 10 mn. On ensemence le milieu avec une des souches indiquées dans le tableau VI et on cultive à 3l,50C pendant 30 heures en agitant. On maintient le pH du milieu entre 6,5 et 8,0 en ajoutant à la demande une solution aqueuse d'urée à 400 g/1, Après l'ensemencement, lorsque la densité optique a 562 nm du bouillon de culture dilué 26 fois atteint 0,3, on ajoute 0,4 mg/ml d'un agent tensioactif constitué essentiellement de monopalmitate de polyoxyéthylènes orbitane. Les souches utilisées dans ces essais et les rendements en acide glutamique figurent dans le tableau VI ci-dessous. TABLEAU VI Rendement Souche Mélasses de Liqueur mère débar betterave rassée du Ca Corynebacteriumlilium (NRRL-B-22-43) 54,2 7. 55,0 Z Corynebacterium herculis (ATCC 13868) 50,3 52,0 Brevibacterium divaricatum 52,4 52,9 (NRRL-B-2311) Micrococcus glutamicus 54,4 55,1 (ATCC 13032) Microbacterium ammoniaphilum t (ATCC 15354) 54,3 55,0 Brevibacteriurn lactofermentum 58,4 59,8 (ATcc 13869) Exemple 4 En utilisant les mêmes sources de carbone que dans l'exemple 3 on étudie la production de la lysine par fermentation. On prépare des portions de milieu de culture de 20 nil ayant la composition suivante Une des sources principales de carbone ci-dessus 100 g/l ( en hexose) (NH )2S04 45 g/l (en hexose) 42 4 KH2P04 1 g/l (en hexose) MgS 4X7R2 71120 0,4 g/l (en hexose) Vitamine B1 200 > ig/l Biotine 500 ;ug/l Hydrolysat de paillettes de soja 15 ml/l (Teneur en azote 70 g/l) Carbonate de calcium 50 g/l pH 7,0 on les introduit dans des flacons à agitation de 500 ml et on stérilise 1150C pendant 10 mn. On ensemence chaque milieu avec Brevibacterium lactofermentum FERM-P 2654 et on cultive à 33"C pendant 72 heures en agitant. Les rendements en lysine sont respectivement de 46,2 g/dl pour les mélasses de betterave et de 46,5 g/dl pour la liqueur mère débarrassée du calcium. En utilisant les mêmes sources de carbone que ci-dessus, on étudie la production de la lysine par fermentation avec deux autres souches. Le mode de fermentation est le même que dans le cas de B. lactofermentum, si ce n'est qu'on rajoute au milieu de culture 0,01 g/l de sulfate ferreux heptahydraté et 0,01- g/l de sulfate de manganèse tétrahydraté, la concentration en biotine est de 50 ug/l, la concentration en hydrolysat de soja en paillettes de 10 ml/l et le pH du milieu de 8,0. Pendant la culture on maintient la température à 31, 50C. Les souches utilisées dans ces essais et les rendements en lysine figurent dans le tableau VII ci-dessous. TABLEAU VII Rendement Mélasses de Liqueur mère débar betterave rassée du Ca Micrococcus glutamicus (ATCC 13286) 30,2 Z 30,8 Z Corynebacterium glutamicum (ATCC 21543) 30,0 30,7 Bien entendu diverses modifications peuvent être apportées par l'homme de l'art aux dispositifs ou procédés qui viennent d'être décrits uniquement à titre d'exemples non limitatifs sans sortir du cadre de l'inven- tion. REVENDICATIONS 1. Procédé pour préparer une source de carbone convenant à la production par fermentation de l'acide glutamique ou de la lysine, en utilisant un micro-organisme appartenant aux genres Brevibacterium, Corynebacterium, Micrococcus ou Microbacterium, caractérisé en ce qu'il consiste à (a) mélanger un hydrolysa t de mélasses renfermant du glucose et du fructose à de l'hydroxyde de calcium, (b) récupérer un précipité du produit d'addition du fructose et de l'hydroxyde de calcium, et (c) neutraliser la liqueur mère et en éliminer les ions calcium. 2. Procédé selon la revendication 1, caractérisé en ce que les micro-organismes utilisés pour la fermentation sont Brevibacterium lactofermentum, Brevibacterium divaricatum, Corynebacterium glutaaicum, Corynebacterium lilium, Corynebacterium herculis, Corynebacterium acetoglutamicum, Micrococcus glutamicus ou Microbacterium amnoniaphilum. 3. Procédé de préparation par fermentation de l'acide glutamique ou de la lysine, en utilisant un micro-organisme appartenant aux genres Brevibacterium, Corynebacterium, Micrococcus ou Microbacterium, caractérisé en ce qu'on mélange un hydrolysat de melasses renfermant du glucose et du fructose 9 de l'hydroxyde de calcium pour former un précipité de produit d'addition du fructose, on neutralise la liqueur mère restante pour en éliminer les ions calcium et on utilise la liqueur restante comme source de carbone pour la fermentation.