Brevet FR2320760A1 — publié le 19770311

L'invention concerne l'utilisation des gangliosides en thérapeutique humaine, dans les pathologies telles que celles qui ont trait aux troubles de la conduction des stinuli nerveux, dans le système nerveux central (SNC) et périphérique (SNP), ainsi qu'un procédé pour les extraire des tissus nerveux de mammifères. Les gangliosides sont des glycolipides dont la molécule comprend, en plus de la sphingosine (amino-alcool), des acides gras (principalement les acides stéarique, palmitique, arachidonique et béhénique), d'oses (glucose et galactose), du N-acét glucosamine, un nombre allant de l à 4 de restes acide N-acétylneuraminique (acide sialique) par molécule. Les gangliosides furent découverts par Landsteiner et - Leveuene et Klenk en traita en 1942. En ce qui concerne la nomenclature des gangliosides, celle proposée par Svennerholm est la plus utilisée de nos jours; dans cette nomenclature, les lettres "M", "D", "T" ou "Q" affixées à l'abréviation G correspondent respectivement aux mono-, di-, tri-, ou tétrasialo-gangliosides. Dans cette nomenclature, on place apres ces lettres des. indices numériques qui marquent les composés contenant une même quantité d'acide sialique mais ayant une mobilité chromatographique différente-, Cette nomenclature sera utilisée dans la présente description. On notera, en outre, qu'il doit etre entendu que les glycosyl-céramides contenant de l'acide sialique sont aussi inclus dans le terme "gangliosides", mais qu'il n'en est pas de meme pour les sialyllactosylcéramides (Ematosides), qui sont aussi habituellement compris dans la vaste classe des glycosphingolipides. Dans cette invention d'une nouvelle utilisation thérapeutique des gangliosides, comme principe actif, on se propose d'utiliser un mélange de gangliosides extrait de tissus nerveux de mammiferes, contenant des mono-, di-, tri- et tétrasialo gangliosides, ou des fractions mieux purifiées contenant un plus petit nombre de catégories de gangliosides. Suivant l'invention, pour l'utilisation thérapeutique, on administre les gangliosides par injections intramusculaire ou intraveineuse, dans un milieu aqueux tamponné convenable. Le conditionnement pharmaceutique peut être des ampoules contenant le produit liquide, ou le produit lyophilise, ou des ampoules pour injection intraveineuse. A simple titre d'indication non limitative, selon l'invention, les gangliosides peuvent être extraits des tissus nerveux de mammifères par le procédé utilisé dans l'exemple suivant. EXEMPLE Le tissu nerveux, prélevé sur l'animal, est homogénéisé dans un tampon phosphaté à pH : 6,8; on ajoute alors 6 volumes de tétrahydrofuranne et centrifuge le mélange résultat4. Ce qui surnage ou la fraction supérieure est repris deux fois au tétrahydrofuranne. Après centrifugation, les matières non polaires ou apolaires sont éliminées par fractionnemen- avec de l'éther éthylique et la phase aqueuse tétrahydrofurannique est envoyée dans une colonne échangeuse d'ions équilibrée vec de l'éthanol à 50 %. Comme éluant, on utilise toujours de l'6thanol à 50 %. On ajoute à l'effluent de la colonne de l'hydroxyde de baryum et 4 volumes d'éthanol glacé. Après dix-huit heures de séjour au froid, on recueille un précipité que l'on acidifie légé- rement à l'acide chlorhydrique après dissolution dans l'eau. Cette solution est ensuite dialysee et lyophilisée. Le rendement est alors de 0 > 6 mg environ de gangliosides bruts par gramme de tissu nerveux utilisé. La poudre lyophilisée est dispersée dans 20 volumes d'un mélange chloroforme-éthanol (2:I); on filtre la solution pour la rendre complètement limpide et la fractionne en ajoutant 0,2 volumes d'une solution aqueuse de chlorure de potassium (0,88 %). La phase supérieure est recueillie, dialysée et lyophilisée. Le rendement finai est de 0,3 mg environ de gangliosides par gramme de tissu nerveux. Lors de la séparation des fractions individuelles de gangliosides, on doit utiliser des colonnes d'acide silicique éluées par des mélanges de méthanol-chloroforme.Avant de les utiliser en thérapeutique humaine, on doit procéder à des essais sur les matières obtenues en ce qui concerne l'absence d'activité pyrogène, de protéines, d'activité anaphyllactogénique et d'histamine. Pour les nouvelles applications thérapeutiques suivant l'invention la formulation pourrait être, par exemple, la suivante : Chaque ampoule (2 ml), en verre neutre, contient - Gangliosides extraits de tissus nerveux de mammifères, titrés en acide N acétyl-neuraminique ... X mg; - Tampon phosphate à pH 7,6, M/100 dans l'eau stérile bidistillée apyrogène, Q.S. pour ....,., 2 ml. X représente ici la quantité de gangliosides qui peut aller de 5 à 50 mg selon le titre en acide N-acétyl-neuraminique , qui lui-même peut osciller entre 20 et 35 % par partie de gangliosides utilisés, et selon le trouble pathologique que l'on se propose de traiter. Bien que les nouvelles applications thérapeuticues de l'invention puissent être utilisées en général dans tous les troubles pathologiques de la conduction du stimulus nerveux, dans les systèmes nerveux central et périphérique, les cas suivants peuvent être mentionnés Névrites rétrobulbaires - Paralysie des nerfs oculomoteurs - Névralgie du triJumeau - Paralysie du nerf facial ou paralysie de Bell - Syndrome de Garcin - Polyradiculonévrites aiguës (syndrome de Giullain Barrè) - Radiculites - Lésions traumatiques des nerfs périphériques - Lésions toxiques des nerfs périphériques - Polynévrites diabétique et alcoolique Paralysie obstétrique - Sciatique paralysante - Atteinte des motoneurones - Sclérose amyothrophique latérale - Atrophie myélopathique musculaire - Paralysie bulbaire progressive Myasthénie grave ou syndrome de Lambert Eaton - Dystrophie musculaire - Altérations dans la transmission synaptique nerveuse au niveau des systèmes nerveux central et périphérique Troubles de conscience sous la forme d'état second - Commotion cérébrale - Suites de traumatismes .crâniens - Desordres vasculaires cérébraux ~Thromboses - Embolies. Si l'on se base sur l'augmentation continuelle des recherches dans les domaines, d'une part, de la composition chimique dipolaire des gangliosides et, d'autre part, de leur localisation qui en dérive, sur la membrane cellulaire au niveau des terminaisons nerveuses, on comprendra que ces composés non seulement participent à la composition chimique mais aussi à la dynamique fonctionnelle du système récepteur de la cellule nerveuse. Ainsi, une importance remarquable peut être attribuée aux gangliosides en physiologie cérébrale, importance qui devient bien plus nette quand on prend en considération que, dans beaucoup de maladies du système nerveux central, on a trouvé précisément des altérations quantitatives dans les gangliosides du cortex. Une vaste expérimentation pharmacologique et clinique a été réalisée avec des gangliosides obtenus selon le procédé de l'invention. De nombreux essais sur des animaux ont été réalisés, tels que développement de paralysie par la protamine, de narcose par les barbituriques, convulsions obténues par électrochoc et cardiazol, et tous ces essais ont absolument confirmé les hypothèses des chercheurs. Des expériences ont été réalisées pour évaluer les effets des gangliosides cérébraux, obtenus selon le procédé de l'invention > dans la récupération fonctionnelle obtenue dans la régénération et la réinnervation. Des études ont été faites sur l'homme à propos de l'effet protecteur de gangliosides du cortex cérébral de bovin, obtenus selon la méthode de l'invention, sur la déficience de l'acuité auditive. Chez des sujets volontaires que l'on avait traités et exposés à d'étroites bandes de son, centrées sur 2 KHz pendant une durée de 30 mn, on n'observe aucun déplacement appréciable du seuil auditif, contrairement à ce qui se passe dans le groupe témoin : ainsi, un effet de protection est assuré à l'homme en cas de déficience auditive temporaire due à un bruit extrêmement intense. L'expérience clinique a été réalisée successivement sur des groupes de patients affectés de différents états neuropathologiques; en effet, le mécanisme d'action des produits obtenus selon le procédé de l'invention permettait de penser qu'une amélioration pourrait se produire dans tous les syndrômes morbides, à la base desquels on trouve une altération de la stimulation en raison d'une inadaptation du message biochimique ou encore d'une modification du seuil d'excitabilité. Ainsi, on a pris en considération et soumis à une thérapeutique utilisant les produits obtenus selon le procédé de l'invention, des états pathologiques comprenant des alterations dans les transmissions nerveuses au niveau central ou au niveau des neuroeffecteurs périphériques, des eziopathogenèses les plus variées. Particulièrement, le traitement fut appliqué à des patients affectés de : intoxication alcoolique chronique, maladie de Parkinson, vasculopathies cérébrales, syndromes démyélinisants. La réponse clinique fut totalement positive aussi bien sur le plan des estimations statistiques que par comparaison avec les résultats obtenus chez les patients soumis à la thérapeutique habituelle. L'expérimentation clinique fut réalisée sur de nombreux patients affectés d'états morbides variés, tous caractérisés par des altérations des transmissions nerveuses tant au niveau central que périphérique : lsefficacité du composé ou de la préparation a été evaluée en se basant, en plus du jugement clinique subjectif des expérimentateurs, sur les variations induites par le traitement sur quelques paramètres. Bien que l'on ait donné seulement quelques indications thérapeutiques pour les produits obtenus selon le procédé de l'invention et seulement un mode opératoire pour obtenir de tels produits, les personnes compétentes pourront apporter de nombreuses modifications et changements qui rentreront tous dans l'idée de l'invention. Particulièrement, on doit noter que les produits de l'invention peuvent aussi être utilisés en association avec d'autres drogues ou médicaments. Bien entendu, l'invention n'est pas limitée a' l'exemple de réalisation ci-dessus décrit, à partir duquel on pourra prévoir d'autres formes et d'autres modes de réalisation, sans pour cela sortir du cadre de l'invention. R E V E N D I C A T I O N S 10) Produit médicamentaux nouveau caractérisé en ce qu'on administre à l'homme dans un but thérapeutique des mélanges de gangliosides contenant des mono-, di-, tri-, tétrasialogangliosides (GM-GD-GT-GZ). 20) Produit suivant la revendication 1, caractérisé en ce qu'on administre à l'homme, dans un but thérapeutique, des gangliosides, dans des troubles pathologiques relatifs a la conduction de stimulus nerveux dans les systèmes nerveux central et périphérique. 30) Utilisation. thérapeutique des gangliosides suivant l'une des revendications 1 et 2, caractérisée en ce qu'on administre ces produits dans les troubles pathologiques suivants : névrites rétrobulbaires, paralysie des nerfs oculomoteurs, névralgie du trijumeau, paralysie du nerf facial ou de Bell, syndrôme de Garcin, polyradiculonévrites aiguës (syndrôme de Guillain Barré), radiculites, lésions traumatiques des nerfs périphériques, lésions par des toxiques des nerfs périphériques, polynévrites diabetiques et alcooliques, paralysie obstétrique, sciatique paralysante, troubles de motoneurones, sclérose amyotrophique latérale, atrophie myélopathiqut musculaire, paralysie bulbaire progressive, myasthénie grave ou syndrôme de Lambert Eaton, dystrophie musculaire, altérations de la transmission synaptique nerveuse au niveau du SNC et SNP, troubles de conscience sous la forme d'état second, commotion cérébrale, suites de traumatismes crâniens, désordres vasculaires cérébraux, thromboses, embolies. 40) Utilisation thérapeutique caractérisée en ce qu'on administre & l'homme les gangliosides isolés et titrés. 50) Produits médicamenteux suivant l'une quelconque des revendications 1 à 4, caractérisés en ce que la substance ou matière active peut être administrée, par injection intramusculaire, intra-veineuse ou sous-cutanée, particulièrement en solution aqueuse tamponnée. 60) Produits médicamenteux suivant l'une quelconque des revendications 1 à 50 caractérisés en ce que la substance ou matière active peut être administrée par perfusion intraveineuse, particulièrement en solution aqueuse glucosée ou physiologique ou solution similaire. 70) Produits médicamenteux suivant l'une quelconque des revendications I à 6, caractérisés en ce que la substance ou matière active peut être administrée en application .iontophorétique. 80) Procédé pour 11 obtention des gangliosides suivant l'une quelconque des revendications 1 à 7, caractérisé en ce que l'on homogénéise le tissu nerveux prélevé sur l'animal dans un tampon phosphaté avec addition de tétrahydrofuranne puis centrifuge, la matière surnageante ou la phase supérieure étant reprise de nombreuses fois par le tétrahydrofuranne > on élimine après centrifugation les matières non polaires et apolaires par fractionnement avec de l'éther éthylique, envoie la phase aqueuse tétrahydrofurannique dans une colonne échangeuse dotions équilibrée avec de l'éthanol à 50 %, l'éthanol à 50 % étant utilisé comme éluent, on ajoute de 1 t hydroxyde de baryum et quatre volumes d'éthanol glacé à l'éluat de la colonne, puis après un séjour de nombreuses heures au f > id on recueille un précipité que l'on acidifie à l'acide chlorhydrique après dissolution dans l'eau, on dialyse et lyophilise la solution obtenue puis la disperse dans un mélange méthanol-chloroforme, enfin on fractionne la solution par addition d'une solution de chlorure de potassium et sépare la phase supérieure que l'on dialyse et lyophilise pour la séparation ultérieure de fractions déterminées de gangliosides, ce qui rend possible l'emploi de colonnes d'acide silicique éluées avec des mélanges méthanolchloroforme.