Brevet FR2315946A1 — publié le 19770128

La présente invention est relative a un procédé d'obtention d'un mélange complet de flavonoides a partir de matière végétale, et en particulier des feuilles et des fleurs de Crataegus monogyna Jacq.; ce mélange possède d'intéressantes propriétés physiologiques pour le domaine médical. I1 est connu d'isoler les flavonoides par précipitation avec des sels de métal lourd, partage de réactions en retour, chromatographie sur colonne en utilisant des adsorbants variés, électropharèse,chromatographie opératoire, et autres. La méthode de chromatographie sur colonne de poudre de polyamide est largement utilisée. Cependant, cette méthode n'a pas une produc tivité permettant une utilisation à des fins industrielles. Il existe en outre, un procédé à plusieurs étapes qui entraîne des pertes condidérables de flavo noies au cours des différentes étapes et plus particulièrement lors de l'adsorption et la désorpstion sur la poudre de polyamide.Par exemple, lors de l'élimination par lavage à l'eau des suctes et autres substances de la poudre de polyamide qui a adsorbé lesflavonoïdes, une quantité considérable des flavonoides les plus polaires se perd dans la boue, tandis qu'une autre quantité est précipitée par purification à l'ether, avec les autres substances présentes. De plus, la désorption des flavonoides avec des mélanges eau-alcool n'est pas complète et une partie d'entre eux est retenue par la poudre de polyamide en excès. La présente invention met en oeuvre un procédé d'obtention d'un mélange complet de flavonoides à partir de matière végétale et en particulier des feuilles et fleurs de Crataegus monogyna Jacq. La demanderesse a trouvé qu'il est possible d'obtenir avec un rendement élevé un mélange complet de flavonoides d'une haute pureté et cela avec des quantités minimales de polyamides, en dissolvant dans l'eau les flavonoides extraits de la solution aqueuse avec de l'alcool ayant de 4 à 8 atomes de carbone et en procédant à une seconde extraction avec de l'alcool possédant de 4 à 8 atomes de carbone. On obtient ensuite directement le produit final de l'extrait d'alcool en le dissolvant dans liteau. Tout d'abord, on soumet à l'extraction l'herbe avec de ltethanol à 95 Z et on purifie l'extrait obtenu de la chlorophylle et des autres substances présentes par des méthodes conventionnelles : centrifugation du concentrat dilué dans l'eau et extraction au chloroforme . On traite la solution aqueuse avec de l'alcool ayant de 4 à 8 atomes de carbone, pour extraire les flavonoides aglucones, monoglycosides, biosides et autres (un total d'environ 95-96 Z de la quantité totale de flavonoides ). On dissout dans l'eau l'extrait obtenu et on extrait une fois de plus les flavonoides avec de l'alcool ayant de 4 à 8 atomes de carbones. On dissout dans l'eau ce second extrait d'alcool après concentration , on le purifie de ses composés polyphénols non-flavonoides et de certaine autres substances présentes par filtration sur de faibles quantités de poudre de polyamide.On obtient un mélange de flavonoides suffisamment pur pour qu'il ne soit pas nécessaire d'effectuer une purification supplémentaire à I'éther;La solution aqueuse de flavonoides purifiés est séchée après filtration sur polyamide dans un dessicateur-atomiseur, sans autre traitement supplémentaire. Selon la présente invention, ce nouveau procédé permet d'obtenir un mélange de flavonoides avec un rendement d'environ 85 % par rapport aux flavo noies contenus dans l'herbe. Le mélange de flavonoIdes obtenu après séchage à pads constant contient jusqu'à 94 Z de flavonoides avec les 19 composés flavonoldes découverts dans les extraits d'alcool naturel. On évite des quantités excessives de poudre de polyamide pour réduire les pertes de flavonoides au cours de leur adsorption et désorption sur la poudre de polyamide. Le mélange de flavo noises obtenu est assez pur et il n'est pas nécessaire d'effectuer une purification à l'éther, facteur qui permet de réduire les pertes. L'investigation chimique du mélange de flavonoides permet d'isoler et d'identifier 5 nouveaux flavonoides naturels : crataeside, monoacétyliso-orientine rhamnosylorientine, rhamnosylvitexine et monoacétylrhamnosylvitexine(les deux derniers composés different des autres substances similaires par la liaison des composés d'hydrocarbure). CEn plus des 5 nouvelles substances ci-dessus, isovetixine, rhamnosylisovitexine, rhamnosyliso-orientine et deux dérivés 6,8 di - C - glucosyl de l'apigénine, sont nouveaux pour le genre Crataegus L. Les tests pharmacologiques du mélange complet de flavonoides des feuilles et fleurs de Crataegus monogyna Jacq. ont établi une haute activité phy biologique , exprimée par un effet favorable sur la circulation sanguine myocardique. Dans les troubles aigüs de circulation coronaire, le mélange normalise rapidement l'alimentation du sang dans le coeur. I1 est bien toléré et ne produit pas d'effets secondaires. Les tests cliniques du mélange de flavonoides montrent ses bons effets sur l'insuffisance coronaire. On peut très bien appliquer le procédé selon la présente invention pour obtenir des mélanges complets de flavonoides -à d'autres matières végétales similaires, telles que la partie épigéous de Agrimonia eupatoria L., les feuilles de Prunus spinosa L. les feuilles de Rosa damascena Mile., et d'autres représentants de la famille des Rosaceae. L'invention se comprendra mieux à la lumière de l'exemple suivant on soumet à une extraction 50 kg finement broyés de feuilles et de fleurs de Crataegus monogyna Jacq., contenant 3,2 Z de flavonoides, dans une batterie de diffusion ou un extracteur à action continue avec de l'éthanol à 95 Z, à 60-700C pour un degré d'extraction des flavonoides de l'herbe aussi élevé que 90 à 92 Z. Après concentration sous vide des extraits d'alcool, on dilue le résidu de distillation avec 45 l. d'eau, on chauffe à 800C. et on agite pendant 30 minutes à cette température. On ramène ensuite la masse à température ambiante on laisse reposer pendant 5 à 6 heures, après quoi on centrifuge. On dilue le précipité dans 20 1. d'eau, on agite pendant 30 minutes a 800C. et on eentrifuge à chaud. On utilise l'eau résultant de cette centrifugation pour diluer le résidu de distillation de la portion suivante à traiter, tandis qu'on décharge le précipité de la deuxième centrifugation.La quantité d'eau de centrifugation des deux portions (environ 100 Kg d'herbe) d'environ 100 1., est soumise à extraction quatre fois dans une ampoule graduée, avec chaque fois 40 1. de n-butanol. Agitation 10 minutes, stratification : 1 heure. On distille les trois premiers extraits de butanol sous vide à une température allant jusqu'à 700C., jusqu a ce quton ait une masse résineuse épaisse, et on utilise la quatrième pour une première extraction de la portion suivante. On dissout le résidu de distillation obtenu des extraits de butanol distillés , dans 30 l. d'eau et on chauffe jusqu a 50-600C, On soumet deux fois à l'extraction la solution aqueuse refroidie avec IO L. de chloroforme chaque fois. Ensuite on extrait les flavonoides quatre fois avec 15 1. de n-butanol chaque fois. On distille les extraits de butanol réunis, sous vide à une température allant jusqu'à 700C. On distille les résidus de butanol sous la forme d'un mélange azéotropique avec l'eau. On dissout le résidu résineux épais obtenu dans 15 l. d'eau , tandis qu'on chauffe a 50-600C. On ajoute 0,600 kg de poudre de polyamide (100 Z), on agite pendant 30 minutes à cette température, après quoi, on filtre la masse chaude. On lave la poudre de polyamide avec 2 1. d'eau chaude (50-60 C.) sur un filtre.L'eau du filtrat est séchée avec liteau de lavage dans un dessicateur-atomiseur(atomiseur Niro). Le rendement du mélange de flavonoides purifié est 2,850 - 2,900 Kg. d'une poudre amorphe jaune-brun. On verse 50 1. d'eau sur la poudre de polyamide (6kg à 100 ;b) utilisée pour la purification de 10 portions , soit 1.000 kg d'herbe, on agite pendant 30 minutes à 50-609C. et on centrifuge, On soumet trois fois a l'extration la solution aqueuse, résultant de la centrifugation, avec 10 1. de n-butanol chaque fois, et on collecte les extraits de butanol obtenu avec le second extrait de butanol de la portion régulière suivante, ou on les traite individuellement comme décrit ci-dessus. Le rendement total d'un mélange de flavonoldes purifié obtenu à partir de 100 kg d'herbe est 3,000 - 3,050 Kg. Un mélange séché à l'air contient environ 90 Z de flavonoides (5- 6 Z d'humidité) et pas moins de 94 Z de substances séchées à poids constant. On obtient un rendement technologique d'environ 85 X de mélange de flavonoides purifiés (100 Z), comparé à la teneur de flavo nordets de l'herbe. REVENDICATION Procédé d'obtention d'un mélange complet de flavonoides à partir de matière végétale, en particulier les feuilles et fleurs de Crataegus monogyna Jacq. par extraction à l'alcool, purification de la solution aqueuse de flavonoides avec du chloroforme et extraction consécutive avec un alcool possédant de 4 à 8 atomes de carbone, caractérisé en ce que des flavonoldes extraits de la solution aqueuse avec un alcool possédant de 4 à 8 atomes de carbones sont dissous dans l'eau, soumis une fois de plus à une extraction avec un alcool possédant de 4 à 8 atomes de carbone, l'extrait d'alcool étant à nouveau dissous dans l'eau d'où le produit final est directement obtenu.