Brevet FR2303544A1 — publié le 19761008

La presente invention concerne un nouvel alcalose que la -demanderesse a appelé "cuanzine", les sels convenant en pharmacie correspondants, ainsi qu'un procédé de préparation de cet alcalotde et de ses sels, et des compositions pharmaceutiques les renfermant. L'invention concerne un nouvel alcaloïde indolique que l'on a appels cuanzine et qu'on peut isoler des tissus t'espèces du genre Voacanga et, en particulier, des tissus de V. chalotiana. Les végétaux dont les tissus ont permis l'isolement de la cuanzine faisaient initialement partie de l'espèce Tabernaemontana, cependant, par suite d1un changement récent de cIassification, le nom botanique de ces végétaux est maintenant Voacanga chalotiana. L'alcaïde, après purification1 peut tre cristallisé sous forme de particules microcristallines blanches ayant un point de fusion de 196 C. L'alcalotde a un pouvoir rotatoire spécifique La 7 = + 300 dans la pyridine et une formule brute (déterminée par spectrométrie de masse è réso- lution élevée) C22H26N205 correspondant b un poids moleculaire de 398,1842. Le Rf de l'alcaloïde, mesuré par chromatographie en couche mince sur une plaque de gel de silice en utilisant comme phase mobile un mélange 5/4/1 d'acétate d'éthyle, d'hexane et de méthanol, est de 0,25. L'invention concerne egaleaent des sels convenant en pharma- cologie de la cuanzine, par exemple les sels formés par réaction de l'alca- loide libre avec des acides à anions convenant en phareacologie, tels que L'acide Chlorhydrique. L'étude du spectre de résonance magnétique nucléaire, du spectre infrarouge, du spectre ultraviolet et l'étude spectrophotométrique du dichrotsie circulaire permettent d'attribuer a la cuanzine la formule développée suivante La cuanzine et ses sels convenant en pharmacologie ont une activité pharmacologique utile, ces substances avant en particulier des effets utiles sur le système cardiovasculaire. Plus particulièrement, ces substances sont utiles comme antiarythmiques, vasodilatateurs et antihyper- tenseurs. Donc, selon un autre aspect, l'invention concerne des compositions pharmaceutiques renfermant de la cuanzine ou un sel correspondant convenant en pharmacologie et un excipient pharmaceutique. L'invention concerne également des préparations pharmaceutiques renfermant de la cuanzine ou un sel convenant en pharmacie correspondant. Ces préparations peuvent, par exemple, etre constituées d'un mélange des ingrédients actifs et d'un excipient ou de préparations telles que des capsules renfermant ltingrédient actif à l'état pur. On peut citer comme exemples d'excipients appropriés le lactose, l'amidon, le propylâneglycol et le stéarate de magnésium. On peut administrer les compositions par voie digestive, par exemple per os, sous des formes classiques, par exemple des comprimés ou des capsules ou par voie parentérale sous forme d'une solution aqueuse. En pratique, les compositions pharmaceutiques sont sous forme de doses unitaires renfermant de 10 à environ 100 mg d'ingrédient actif. Par exemple, on peut préparer des comprimes renfermant 10 à. 100 mg de cuanzine ou d d'un sel convenant en pharmacie correspondant en utilisant du lactose, de l'amidon et du stéarate de magnésium comme excipiments, ou préparer des ampoules injectables en dissolvant la cuanzine ou un sel convenant en pharmacie correspoedant dens de l'eau ou dans un mélange d'eau et de propylèneglycol. On ajuste le pH de la solution, de préférence entre 3 et 4. En pratique, les ampoules renferment de 10 à 100 mg dsingredient actif (les ampoules à fortes doses convenant particulièrement pour la perfusion intraveineuse lente). L'invention concerneégalement un procédé de préparation de la cuanzine ou d'un de ses sels convenant en pharmacologie, qui consiste à extraire lcs tissus d'une espèce du genre Voacanga, en particulier l'écorce et tout particulièrement i'dcorce des raclages, avec un solvant organique, par exemple un hydrocarbure aromatique ou un hydrocarbure chloré, pour obtenir une solution renfermant des alcaloides, à isoler la cuanzine de l'extrait et, si on le désire, à transformer la cuanzine en un sel convenant en pharmacologie. On peut isoler la cuanzine en mettant l'extrait au contact d'un acide aqueux, par exemple l'acide phosphorique dilué, en séparant la phase aqueuse, en ajustant le pH de la phase aqueuse dans la gamme de 4 à 6, en extrayant la phase aqueuse avec un solvant constitué d'un hydrocarbure chloré tel que le chlorure de méthylène ou le chloroformes en séparant la phase organique et en fractionnant la phase organique de façon à récupérer la cuanzine.On peut profiter, pour réaliser le fractionnement, de la solubilité relativement plus importante de la cuanzine, dans certains solvants organiques par rapport aux autresalcalozdes présents dans extrait. Ainsi, on peut fractionner la phase organique en l'évaporant à sec pour obtenir une fraction "d'alcalotdes totaux", dissoudre la fraction d'alcalotdes totaux dans l'acétate d'ethyle, cristalliser les alcalotdes autres que la cuanzine à partir de la solution, séparer la liqueur ere de cristallisation, et soumettre la liqueur mere séparée à un fractionnement chromatographique. On peut effectuer le fractionnement chromatographique en utilisant du gel de silice ou de l'alumine couine adsorbant solide et en utilisant par exemple comme éluant un mélange 100/13,5/10 d'acétate d'4thyle, de méthanol et d'eau ou un mélange 4/5/1 d'hexane, d'acétate d'éthyle et d'eau. Le fractionnement chromatographique peut donner plus d'une fraction renfermant de la cuanzine et, en combinant et concentrant ces fractions, on peut obtenir la cuanzine sous une forme purifiée qu'on peut soumettre à une purification complèmentaire par recristallisation, par exemple dans le méthanol QU le benzène, en obtenant un produit présentant les caractéristiques chimiques et physiques précédemment décrites, La figure annexée illustre une plaque chromatographique, développée par le sulfate de cérium et dlaumonium,rdalisée par chromatographie en couche mince sur gel de silice avec1 comme éluant, un mélange 5/4/1 d'acétate d'-ethyle, d'hexane et de méthanol, la cuanzine (4) étant séparée des autres alcalotdes présents dans l'extrait tels que l'amatatne (l), la voachalotine (2) et la vobtusine (3). Les Rf des alcaloïdes sont les suivants, Alcaloïde Rf Amataïne - 0,68 Voachalotine 0,63 Vobtusine 0,44 Cuangine 0,25 L'exemple suivant illustre la préparation de la cuanzine selon le procédé de llinvention. EXEMPLe On broie finement 10 kg d'écorce de racines de Voacanga chalotiana et on les extrait par du benzene saturé d'eau à 600C en éliminant pratiquement totalement les alcaloïdes de l'écorce. On évapore l'extrait benzénique sous pression réduite à une température ne dépassant pas 400C, jusqu' un volume de 10 1. On filtre le concentré et on extrait par 20 1 d'acide phosphorique à 7% dans liteau. On porte le pH de la solution acide à 5 avec de l'hydroxyde de sodium à 5% et on extrait par 5 1 de chlorure de méthylène. On évapore la phase organique à sec en obtenant 510 g d'alcaloides totaux. On dissout les alcaloïdes totaux dans 3 1 d'acétate d'éthyle et on place au réfrigérateur à 40C pendant 2 jours pour provoquer la cristallisation des alcaloïdes,autres que la cuanzine,présents dans l'extrait. On filtre et on évapore sous vide la liqueur mère de cristallisation à une tempe rature ne dépassant pas 400C, puis on chromatographie sur 3 kg -de "Kieselgel" (Merck), en utilisant comme éluant un mélange 100/13,5/10 d'acétate d'éthyle, de méthanol et d'eau. On combine les fractions renfermant la cuanzine et on les évapore à un faible volume. La cuanzine brute cristallise et on la recristallise dans l'alcool méthylique. La cuanzine purifiée ainsi obtenue a un point de fusion de 1960C et un pouvoir rotatoire spécifique [&alpha;]D ^ +300 dans la pyridine. Les essais suivants illustrent l'activité pharmaceutique de la cuanzine. 1 Activité antihypertensive On administre per oe, 4 mglkg de cuanzine à un groupe de rats hypertendus. 24 h après le traitement, on constate une diminution moyenne de la pression sanguine de 31 mm (-31). L'administration de 16 mg/kg de cuanzine per os à un autre groupe de rats hypertendus provoque, 2 h après le traitement, une baisse de la pression sanguine de 31 'uin-. 2. Toxicité La toxicité de la cuanzine chez la souris, par administration intrapéritonéale ou intraveineuse, est la suivante Administration intrapéritonéale DL50 3 480 mg/kg (508-452) Administration intraveineuse DL50 = 195 mg/kg (243-156). Bien entendu, diverses modifications peuvent etre apportees par l'homme de l'art aux dispositifs ou procedés qui viennent d'etre décrits uniquement à titre d'exemple non limitatif sans sortir du cadre de l'invention REVENDICATIONS 1 - Nouveau médicament utile notamment comme anti-arythmique, vasodilatateur et anti-hypertenseur,qui est un alcaloïde appelé cuanzine, de formule développée suivante et ses sels convenant en pharmacie. 2 - Noweau médicament selon la revendication 1, caractérisé en ce qu'apures purification, la cuanzine a un point de fusion de 1960C, un pouvoir rotatoire spécifique tale = +30 dans la pyridine, sa formule brute est C22H26N2O5, et son Rf, mesuré par chromatographie en couche mince sur une plaque de gel de silice en utilisant comme phase mobile un mélange 5/4/1 d'acétate d'éthyle, d'hexane et de méthanol, est de 0,25. 3 - Procédé de préparation du médicament, selon l'une quelconque des revendications précédentes, caractérisé en ce qu'il consiste à extraire un tissu d'une espèce appartenant au genre Voacanga avec un solvant organique, pour obtenir une solution renfermant des alcaloYdes, à isoler la cuanzine de l'extrait et, ai on le désire, à transformer la cuanzine en un sel convenant en pharmacie. 4 - Procédé selon la revendication 3, caractérisé en ce que l'espèce est Voacanga chalotiana. 5 - ProcEdF selon l'une des revendIcations 3 ou 4, caractérisé en ce que le tissu est l'écorce. 6 - Procédé se30n la revendication 5, caractérisé en ce que le tissu est l'écorce des racines. 7 - Procédé selon l'une quelconque des revendications 3 à 6, caractérisé en ce que le solvant organique est un hydrocarbure aromatique ou chloré. 8 - Procédé selon l'une quelconque des revendications 3 à 7, caractérisé en ce qu'on isole la cuanzine en mettant l'extrait au contact d'un acide aqueux en séparant la phase aqueuse, en ajustant le pH de la phase aqueuse entre 4 et 6 et en extrayant la phase aqueuse avec un solvant constitue d'un hydrocarbure chloré et on fractionnant la phase organique pour récupérer la uan:ine. 9 - Procédé selon la revendication 8, caractérisé en ce qu'on effectue le fractionnement en utilisant des techniques de cristallisation fractionnée et/ou de chromatographie. 10 - Compositions thérapeutiques, caractérisées en ce qu'elles renferment comme ingrédient actif l'un au moins des médicaments selon l'une des revendications 1 et 2. 11 - Formes pharmaceutiques d'administration par voie orale des compositions thérapêutiques selon la revendication 10, caractrisées en ce que chaque dose unItaire renferme de 10 à 100 mg dShgredient actif. 12 - Formes pharmaceutiques d'administration par voie parentérale des compositions thérapeutiques selon la revendication 10, caractérisées en ce que chaque dose unitaire renferme de 10 à 100 mg d'ingrédient actif