Brevet FR2314488A1 — publié le 19770107

L'invention concerne un dispositif pour dosages en milieu gélosé. L'expression milieu gélosé désignant dans la suite de la description un gel pouvant être notamment de la gélose ou de l'agarose. L'invention trouve plus particulièrement son application dans le domaine des dosages par diffusion en gélose ou agarose, notamment par la méthode immunoenzymatique pour la mesure de faibles concentrations d'antigènes ou d'anticorps décrite dans la demande de brevet français nO 74 19.100 Selon ce procédé immunoenzymatique, on coule un gel qui peut être de la gélose ou de l'agarose sur une face dune plaque support, en général une plaque en verre, ledit gel contenant des enzymes couplées à des anticorps- ou l'immunosérum non marqué et, pour mesurer quantitativement les antigènes présents dans un milieu donné, on provoque la révélation de l'activité enzymatique notamment par coloration histochimique. Ces gels sont évidemment fragiles et très délicats à manipuler; de plussil est nécessaire de les conserver à 11 abri de toute impureté et de pouvoir les stocker isolés. les uns des autres dans un encombrement réduit f d'autre part,il il est également indis- pensable de les protéger contre les ehts néfastes de la déshydra station: enfin, il importe que le nombre de manipulations auquel on les soumet notamment au cours de dosages soit le plus réduit possible. L'invention se propose donc de réaliser un dispositif destiné à recevoir ces gels, à les protéger des impuretés et à limiter au maximum les manipulations au cours des dosages. Le dispositif pour dosages en milieu gélifié selon l'invention comporte une plaque-support, un bottier muni de moyens de positionnement de ladite plaque par rapport à ses parois latérales et à son fond et un couvercle de fermeture adaptable sur ledit bottier, lesdits moyens étant destinés à ménager d'une part un es pace libre entre la plaque et le fond et d'autre part un passage entre les bords respectifs de la plaque et les parois du bottier. L'invention va maintenant Autre décrite plus en détail en se référant à un mode de réalisation particulier donné à titre d'exemple non limitatif et représenté par les dessins annexés, La fig. 1 représente une vue en plan d'un bottier selon l'invention, La fig. 2 représente une coupe selon II-II dudit bottier, La fig. 3 représente une coupe selon la ligne III-III de la figure 1. La fig. 4 représente une vue en plan du couvercle, La fig. 5 représente une coupe selon la ligne V-V de la figure 4. Le bottier plat représenté à la figure 1 comporte un fond rectangulaire 1 à coins arrondis et des parois latérales 2 et 3, ltensemble étant en matière plastique moulée rigide soit transparente ou translucide soit opaque. Le long des parois 3 s'étendent des saillies formant des rebords 4 en retrait par rapport à la face supérieure du bottier et comportant à leurs extrémités,aux quatre coins du bottier, des redans 5 en saillie qui affleurent le bord supérieur des parois. Contre les faces internes des parois 2 sont prévus des plots 6 en gradins sur deux niveaux 7 et 8, le niveau d'appui 7 étant sur le mAeme plan que les rebords 4 et le niveau 8 affleurant le bord supérieur des parois 2 lequel comporte un chanfrein 10 incliné vers l'intérieur du bottier. Sur les figures 2 et 3 on remarque la présence de pieds hémisphériques 11 prévus sur la face inférieure du fond 1 et destinés à ltisoler du support sur lequel il sera posé et lui éviter ainsi d'trie rayé. Une paque support 13 rectangulaire,constituée notamment par une lame de verre et destinée à recevoir la couche de gel, est encastrée entre les parois opposées 3 du bottier, les redans 5 et les surfaces verticales 9 reliant les niveaux 7 et 8 des plots 6, ladite plaque reposant latéralement sur les rebords 4 et sur les appuis 7 qui la maintiennent écartée du fond 1 et ménagent ainsi un espace libre. Entre les bords de la plaque 13 et les parois 2 de part et d'autre des plots 6, des passages 12 font communiquer avec l'e térieur l'espace compris entre 1- fond et la plaque 13. Le couvercle représenté sur les figures 4 et 5 est de préférence en matière plastique moulée souple transparente ou translucide ou opaque et comporte un fond 14 et des parois latérales 15 de contour identique à celui des parois du boltier, de manière à s'embêter sur celles-ci. Les faces internes des parois 15 sont munies d'une nervure 16 continue sur tout leur pourtour destinée à renforcer les parois du couvercle et à assurer l'étanché - té grâce à un embottement parfait sur le bottier, la boîte devant être étanche au moins pendant plusieurs Jours (minimum 3 jours). Une languette 17 est prévue sur un coin du couvercle pour facili- ter son ouverture. Le dispositif est utilisé de la façon suivante. Après une stérilisation préalable éventuelle du dispositif à l'autoclave à 1200C, ce qui ntest pas indispensable, le matériel pouvant être utilisé non stérile, on coule un gel qui peut être de la gélose ou de l'agarose sur l'une des faces de la plaque de verre 13 sur une épaisseur d'environ 1,5 mm en prenant soin que la couche dqFel couvre totalement ou partiellement la plaque sans Jamais toucher ses bords. La plaque est ensuite retournée et disposée de telle sorte que la couche de gel soit face au fond I du boîtier, ladite plaque prenant appui sur les rebords 4 et les niveaux 7 des plots 6 et s'encastrant entre les parois 3, les redans 5 et les surfaces 9 des plots 6. Au cours d'un dosage, l'extrémité d'une pipette remplie d'un réactif est introduite par un passage 12 ménagé entre les bords de la plaque support et ltune des parois 2 du bottier et positionnée par le chanfrein 10; le réactif remplit la cavité ménagée entre le fond 1 et la plaque 13 3usqu'à venir au contact du gel dans laquelle il diffuse par capillarité. Le volume de réactif non utilisé lors de la réaction peut entre repris par le manipulateur en enlevant la plaque support ou simplement être aspiré par les ouvertures 12. Le gel contenant ou non un réactif incorporé peut être conservé et stocké sous un faible encombrement après embottement du couvercle de fermeture sur le bottier, ce qui assure une étanchéité suffisante et le maintien de la plaque support contre les rebords 4 et les plots 6 du fait que le fond du couvercle vient s'appliquer sur la face supérieure de la plaque non recouverte par le gel qui affleure la face supérieure du bottier. Si le bottier est en matière plastique transparente, on peut examiner le gel par simple retournement du bottier maintenu feri'é, sans avoir à sortir la plaque support, ce qui évite des manipulations délicates'et des détériorations toujours possibles de la couche gélosée. Bien entendu,la portée de l'invention n'est pas limitée au seul mode de réalisation donné à titre d'exemple non limitatif mais couvre toutes les variantes qui ne différeraient que par des détails. C'estainsi qu'une forme différente du bottier du couvercle et de la plaque peut être adoptée; de mEmeson peut envisager de réaliser le couvercle en ratière plastique rigide de façon à mieux protéger la plaque support contre un choc éventuel. On peut également réaliser le bottier et le couvercle en tôle mince emboutie au lieu de matiere plastique, mais dans ce cas la visualisation de la couche de gel par retournement du bottier n'est plus possible. Toute autre matière suffisamment rigide supportant ou non le passage en autoclave à 1200C peut également être utilisée, la stérilisation du dispositif n1 étant pas une condition indispensable pour son emploi. Au lieu de rebords 4 on peut également prévoir de simples saillies espacées, similaires aux plots 6 et réparties le long des parois 3, leur nombre pouvant 8trie quelconque dans la mesure où elles assurent un appui convenable à la plaque-support 13. Enfin, le couvercle peut être rabattable et articulé sur le bottier à l'aide de charnières. REVENDICATIONS 1. Dispositif pour dosages en milieu gélosé,caractérisé en ce qu'il comporte une plaque-support, un boitiez muni de moyens de positionnement de ladite plaque par rapport à ses parois latérales et à son fond et un couvercle de fermeture adaptable sur ledit bottier, lesdits moyens étant destinés a ménager d'une part un espace libre entre la plaque et le fond et d'autre part un passage entre les bords respectifs de la plaque et les parois du boe- tier. 2. Dispositif selon la revendication 7, caractérisé en ce que les moyens de positionnement sont constitués par des sail- lies d'appui prévues sur les faces internes d'au moins deux parois latérales opposées du bottier et par des saillies de butée prévues sur au moins une des faces internes des autres parois, les sail- lies d'appui destinées à supporter la plaque et à la aiter;;r Cr- tée du fond étant en retrait par rapport au bord supérieur des pa- rois latérales opposées pour permettre 1 encastrement de ladite plaque entre celles-ci et les saillies de butée 'élevant au-dessus du niveau supérieur desdites saillies d'appui pour maintenir au moins un bord de la plaque éloigné des parois du boîtier et ménager aussi un passage entre l'extérieur et le dessous de la plaque. 3. Dispositif selon l'une des revendications 1 et 2, caractérisé en ce que les moyens de positionnement de la plaquesupport sont constitués par deux rebords latéraux s'étendant le long des faces internes de deux parois opposées du boiter, par deux plots disposés contre les deux autres parois opposées et dont la face supérieure servant d'appui à la plaque est située au mGme niveau que celle des rebords en retrait par rapport au bord supérieur des parois et par des redans disposés contre les parois aux extrémités des rebords et sur les plots et s'élevant du niveau de ceux-ci Jusqu'au bord supérieur des parois de telle sorte que lorsque la plaque repose sur les rebords et sur les plots en affleurant ledit bord supérieur, les redans la maintiennent écartée des parois comportant les plots, ménageant ainsi un passage entre l'extérieur et le volume compris entre la plaque et le fond du bottier. 4. Dispositif selonl'une des revendications 2 et 3, caractérisé en ce que le bord supérieur des parois éloignées de la plaque-support comporte un chanfrein dirigé vers l'intérieur du bottier pour faciliter l'introduction et le positionnement d'un corps étranger, tel que l'extrémité d'une pipette. 5. Dispositif selon l'une quelconque des revendications 1 à 4, caractérisé en ce que le couvercle de fermeture comporte un fond et des parois latérales venant s'embotter sur les parois du bottier dont elles épousent exactement le contour, lesdites parois du couvercle comportant une nervure périphérique renfor çant celles-ci et destinée à assurer l'étanchéité de la botte forée par ledit boîtier et son couvercle de fermeture. 6. Dispositif selon la revendication 5, caractérisé en ce que le couvercle de fermeture comporte au moins une languette prévue sur le bord du contour de ses paros ladite ianguette étant destinée à faciliter l'ouverture du boîtier. 7. Dispositif selon l'une quelconque des revendications 1 à 6, caractérisé en ce que le fond du bottier comporte sur sa race externe une pluralité de pieds destinés à isoler ledit fond d'un support sur lequel il repose. 8. Dispositif selon lune quelconque des revendications 1 à 7, caractérisé en ce que la plaque-support est une lame de verre, en ce que le boîtier est en matière plastique moulée rigide et en ce que le couvercle est en matière plastique moulée souple, lesdites matières plastiques pouvant store transparentes, translueiders ou opaques. 9. Dispositif selon l'une quelconque des revendications 1 à 7, caractérisé en ce que le boîtier et le couvercle de fermeture sont en tôle minci emboutie. 10. Dispositif selon une quelconque des revendications à 3 a, caractérisé en ce sue le boîtier, le couvercle de fermetu- re et la plaque support cnt réalisés en des matières supportant un traitement à l'autoclave à une température d'au moins 120 C.