Brevet FR2293488A1 — publié le 19760702

'invention concerne un procédé contimi de culture de microorganismes, dans le cadre duquel il est procédé à des mesures relatives au degré des échanges organiques, ainsi que des dispo sitifs pour l'exécution de ce procédé. Lors de la culture de mioroorganismes dans des "systèmes fermés" ("procédés par charges sucessives"), les conditions de culture varient constamment avec l'accroissement du nombre des organismes et la diminution des matières nutritives offertes. Pour la culture de microorganismes dans des conditions constantes, il y a un certain temps-déjà qu'on applique deux procédés continus. D'après le procédé "chimiostatique", une culture est alimentée en substrat frais avec un débit d'adduction constant et la suspension d'organismes est prélevée dans la mArne mesure, il s établit un équilibre d'écoulement qui dépend des conditions extérieures et du débit d'adduction prédéterminé.Dans le procédé "turbidostatique", le nombre présent d'organisme par unité de volume est surveillé sous forme de densité optique de la culture et' lorsqu'il augmente, une densité prédéterminée -d1organismes est maintenue par addition de substrat frais.Tandis que dans le premier procédé, une intervention régulatrice n'est ras' possible, il n'est pas fait la distinction, -dans le cas de la mesure de la densité optique, encre les organismes vivants et morts et/ou d'autres facteurs de trouble, ce qui rend impossible une telle régulation exacte de la densité, en particulier dans des plages limites des conditions de culture qui sont caracté risees par des taui de mortalité accrus.Un procédé dans lequel le déroulement du processus serait réglé par des données de mesure d'analyse des gaz n a manifestement pas été introduit dans la pratique des cultures continues. Aucun des procédés mentionnés ci-dessus -ne fait inter vents des dispositifs spéeifiques pour 1' élevage sélectif visé de de- microorganismes ou pour la surveillance directe et ltenregis- triment du pouvoir métabolique dans le cas d'une culture à long terme. Le but de l'invention est de fournir un procédé et des dispositifs pour son exécution, avec lesquels des cultures à long terme, susceptibles d'entre surveillées et dirigées, peuvent etre exécutées, m8me dans des plages limites des conditions de culture, et qui rendent possibles, d'une part un enrichissement sélectif en microorganismes et, d'autre part, une analyse des caractéristiques métaboliques de ceux-ci dans des conditions variables. D'après l'invention, ce but est atteint par un procédé qui est caractérisé par le fait qu'au moins un paramètre choisi parmi les conditions de culture et/ou les additions de matières étrangères et/ou les caractéristiques des organismes est soumis à un gradient dans le sens de la variation vers une valeur prédéterminée et le pouvoir métabolique de la culture est déterminé de façon continue. De la sorte, on peut procéder à des cultures à long terme à gradient dirigé, qui permettent d'envisager sous de nouveaux aspects un élevage sélectif et les possibilités d'étude au sujet de microorganismes. Pour la sélection visée et l'enrichissement en organismes mieux adaptés ou meme en mutants, on procède selon l'invention de sorte que le paramètre sur-lequel doit porter la sélection ou l'adaptation soit approché asymptotiquement de la valeur à atteindre. Dans ces conditions, l'accroissement du gradient du paramètre est constamment adapté au pouvoir métabolique de la culture qui est mesuré de façon continue. La modification progressive résultante d'une condition en fonction croissante du pouvoir métalolique de la culture à chaque instant rend possible l'enrichissement dirigé de la culture en organismes mieux adaptés. Pour l'analyse du comportement métabolique de cultures, dans le cas par exemple de 1' effet produit par des substances, il est procédé d'après l'invention à une modification de la grandeur intéressante avec enregistrement permanent du pouvoir métabolique de la culture tandis que tous les autres paramètres sont maintenus constants. Par exemple, une quantité de substance est ajoutée en une seule fois. De la sorte, il est également possible, en cas de périodes de culture prolongées, de détecter la phase de rétablissement dans le cas par exemple de substances toxiques ou la phase de retour à la normale dans le cas de substances activantes, après que l'effet s'est produit.Par le contrôle de la variation du pouvoir métabolique lors du déroulement d'un gradient prédéterminé - qui n'est donc pas commandé en retour, contrairement à la sélection - on peut obtenir, en fonction par exemple de la température ou de la concentration d'éléments individuels du substrat, des informations portant par exemple sur des concentrations optimales ou sur des valeurs relatives à une optimisation intéressante du processus metabolique. Autant que possible, la mesure du pouvoir niétabolique est effectuée de préférence au moyen de données manométriques ou volumétriques des gaz. La mesure en phase gazeuse offre des avantages particuliers liés à la plus grande simplicité de prélèvement des valeurs de mesure. En portant les valeurs de mesure en fonction du temps, on obtient le pouvoir métabolique de la - culture. D'autres valeurs de mesure, comma le pE ou des données provenant d'appareils d'analyse rapides relativement à des snbs- tances caractéristiques du métabolisme, peuvent être également utilises pour la détermination du pouvoir metabolique. D'après l'invention, on procede de préférence dans ce cas en relevant la grandeur de mesure nnmérlquement sous forme de signaux et en ltenregistrant en continu sur une échelle analogique, de préférence une échelle de temps, après quoi on effectue toujours un retour à la valeur initiale. Dans ces conditions, les signaux enregistrés ou leur écart dans le temps sont utilisés pour le déclenchement de phénomènes qui influent sur le paramètre. Si les volumes de culture sont augmentés en conséquence, la mesure peut etre aussi effectuée analogiquement - par exemple au moyen d'appareils de mesure de l'écoulement, de mesure IR ou sirnHires, en cas de prise des valeurs de mesure en phase gazeuse. L'invention est expliquée de façon plus détaillée à l'aide du complément de la description qui suit et en référence aux dessins annexés. La figure 1 est un schéma de la disposition des éléments fondamentaux au moyen desquels le procédé de l'invention peut être exécuté. La figuré 2 est le schéma d'un appareil enregistreur pour l'indication du pouvoir métabolique, couplé à un régulateur automatique d'accroissement du gradient. Le dispositif représenté sur la figure 1 se compose d'un récipient de culture 10 sous la forme dlune enceinte étanche aux gaz, munie dtune chemise Il de régulation thermique dont la température est réglée au moyen d1un thermostat de circula- tion 12. Du milieu de culture frais est pompé à partir du reservoir 15 dans le récipient de culture 10, au moyen de la pompe d'alimentation 14 et par la conduite 13. Le milieu de culture en excès et les gaz formés sont extraits au moyen de la pompe d'évacuation 16.Une cloison ouverte vers le 'aasdaas le récit nit de culture 10, entre les tubulures d' admission et d'évacuation, garantit la circulation du milieu frais ajouté à travers la tota- lité du récipient de culture.Une tubulure obturable 17 sert à l'ensemencement initial - et au prélèvement d'échantillons. Un autre organe d'addition sert en commun, alternativement ou en parallèle, à l'addition 18 de matières étrangères, au raccordement d'une pompe d'addition 19 pour le gradient d'une substance d'étude en solution et/ou d1une pompe 20 de retour en l'état initial, par exemple pour addition de l'électrolyte en cas de commande du pE L'homogénéité nécessaire de la culture est obtenue par un agitateur magnétique 21. 'appareil 22 de relevé des valeurs de mesure délivre des signaux de mesure à l'appareil de commande 24, directement ou par l'intermédiaire d'un régulateur 23 d'accrois- sement de gradient. L'appareil de commande retransmet les signaux de mesure à l'appareil enregistreur 25 qui, à l'aide du ou des commutateurs à effleurement 26, peut agir sur l'appareil de commande 24, soit directement, soit par l'intermédiaire du régulateur 23 d'accroissement de gradient. L'appareil de commande 24 maintient la constance réglée de l'agitateur, actionne les 'pompes d'alimentation et diévacuation 14 et 16 et la pompe de remise en 1 '.état initial 20 sur la base des signaux de mesure et actionne la pompe d'addition 19 ou le thermostat 12 sur la base des signaux du régulateur 23 d'accroissement de gradient. Selon la tache envisagée et le volume de la culture, le récipient de culture 10 et son système de circulation forcés peuvent être en verre ou en d'autres matériaux et, selon l'appareil de relevé des valeurs de mesure, ils peuvent autre réalisés sous forme étanche aux gaz, étanche à la pression ou seulement avec une simple fermeture stérile. Lorsqu'vil s'agit en particulier de petits volumes de culture, le récipient de culture 10 sera de préférence agencé, en vue de la constance du volume de la culture, de sorte que la hauteur de la tubulure d'évacuation au-dessus du fond détermine ce volume. On peut faire varier librement la régulation thermique nécessaire il et 12.La pompe d'alimentation 14, la pompe 19 d'admission pour le gradient et, selon la tanche envisagée, la pompe 20 de remise en l'état initial doivent permettre des dosages parfaitement déterminés; en outre, 19 et 20 doivent permettre un dosage de gradient. En cas de mesure en phase gazeuse, la pompe d'évacuation t6 remplit opportunément la fonction de la pompe 20 de remise en état initial. De même, il peut être judicieux, notamment en cas de petits volumes, d'ajouter le paramètre de gradient (substance en solution) au milieu de culture et de I'introduire par la pompe d'alimentation 14.Selon le mode de construction du récipient de culture, le volume de la culture et l'appareil de relevé des valeurs de mesure, on peut se passer de la pompe d'évacuation 16 ou remplacer la pompe d'alimentation 14 et, le cas échéant, la pompe d'évacuation 16 par des soupapes de réglagé regpectives, et cela en particulier dans le cas de grands volumes de culture et par exemple d'appareils de mesure de l'écoulement ou similaires en tant qu'appareils de relevé des valeurs de mesure. Pour de petits volumes de culture, la pompe 20 de remise en l'état initial peut titre remplacée par une soupape électromagnétique, par exemple lors de l'addition de 11 électrolyte en cas de régulation du pH. On peut faire varier à volonté et adapter au volume de la culture l'homogénéisation nécessaire de celle-ci.Selon la tache envisagée, les données et les possibilités en ce qui concerne le processus métabolique, l'appareil 22 de relevé des valeurs-de mesure sera réalisé par exemple sous forme de manomètre 8 contact, d'appareil de mesure du volume des gaz, de pH-mètre, dtélectrodes sélectives aux ions, d'analyzateur rapide, de dispositif spectroscopique et h:ême, en cas de grands volumes, sous forme d'appareil de mesure de l'écoulement ou similaires. Le régulateur 23 d'accroissement de gradient détermine, à partir de la comparaison des signaux de mesure et/ou de leur écart dans le temps, le pouvoir métabolique de la culture et il retransmet ce résultat transformé à l'appareil de commande 24 sous forme de signaux' pour l'accroissement du gradient.Ce régulateur d'accroissement de gradient peut être- réalisé indépendamment ou en combinaison avec l'appareil enregistreur 25 et le commutateur à effleurement 26 de celui-ci. Il sera question de sa fonction et de sa réalisation technique possible en même temps que de l'appareil enregistreur 25, en référence à la figure 2. L'appareil de commande 24 comprend les commandes de gradient pour la pompe d'addition 19 et le thermostat 12, il maintient la constance d'agitation réglée et, pour d'autres tEchee envisagées et d'autres dispositifs, il comprendra aussi, selon les nécessités, les unités assurant par exemple une aération, une régulation anti-mousse et d'autres dispositifs de contrôle et de régulation déjà connus. Par la régulation relativement à des valeurs de mesure qui sont représentatives du pouvoir métabolique de la culture, celle-ci présente constamment le m8me pouvoir métabolique par unité de volume lorsque les conditions extérieures restent les mêmes. De la sorte, il peut etre prélevé pendant une période prolongée, dans une installation de culture ainsi régulée, un matériel à activité métabolique constante pour l'e semencement de cultures successives. Si l'on modifie une condition de la culture avec une lenteur suffisante dans le temps, la culture s'enrichira en organismes qui se trouvent en position avantagée pour la sélection dans les conditions données à chaque instant. Il se produit donc une sélection d'organismes mieux adaptés ou de mutants dans la culture. Si l'accroissement du gradient de variation est adapté au pouvoir métabolique, le gradient devient égal à zéro dans le cas extrême, mais la culture ne peut pas etre tuée par dépassement d'une valeur limite.Des gradients de variation sont intéressants, par exemple relativement à la température, au pH ou en particulier pour des concentrations de substances en vue de sélections telles que : résistance à l'accunlation de certains produits du 6ta- bolisme et aptitude accrue à les décomposer, modification de substances qui paraissaient inertes jusqun (protection contre l'environnement), etc.On peut s'attendre à des résultats parti culièrement favorables lorsqu'il est offert la possibilité de doser la substance de référence considérée ou des dérivés de celle-ci, directement avec un appareil de relevé des valeurs de mesure ou Par une méthode d'analyse automatique rapide, et d' uti- liser les résultats pour la régulation de l'accroissement de gradient.Des irradiations dans le récipient de réaction, par exemple par des sources punctiformes, ou l'addition de substances chimiques qui déclenchent des mutations pensent éventuellement produire une augmentation du tanx de mutation parallèlement au gradient pour la sélection. n va de soi que cela s'applique de façon correspondante à des sélections à partir de populations mixtes. Lorsque les conditions de la culture sont maintenues constantes, il en résulte un pouvoir métabolique constant de la culture (steady state) relativement à la valeur de mesure pour la régulation, par exemple la formation de C02 par unité de temps. De la sorte, des effets de conditions extérieures telles que la température, le pE ou meme de substances sur le steady state d'une culture peuvent etre étudiés. Dans ce cas, d'après l'invention, on fait varier la grandeur intéressante, par exemple avec un gradient à forte pente (contrairement à la sélection, où l'on procède avec des gradients aussi plats que possible), en enregistrant en permanence le pouvoir; métabolique de la culture et en maintenant constants tous les autres paramètres. Par lavage tandis que se poursuit l'activité métabolique, cette concentration de substance est alors soumise à un gradient proportionnel au pouvoir métabolique.De la sorte, il est possible, avec des durées prolongées de culture, de détecter la phase de rétablissement, par exemple dans le cas de substances toxiques, et la phase de retour au repos dans le cas de substances activantes. Dans ces conditions, on mesure 1-' l';nfluence de la substance sur le pouvoir métabolique défini selon l-'appareil de relevé des valeurs de mesure. Par contre de l'allure du pouvoir métabo lique au cours d'un gradient prédéterminé (contrairement à la sélection sans commande de l'accroissement de gradient), on peut obtenir, par exemple par rapport à la température ou à la concentration d'éléments individuels du substrat, des informations portant par exemple sur des concentrations optimales ou des valeurs en ce qui concerne une optimisation intéressante du processus métabolique. Â titre exemple, on considèrera la sélection de levures dé fermentation relativement à une compatibilité plus grande à l'égard d'une substance X, avec mesure manométrique de la formation de C02 par unité de temps : accroissement de la pression au niveau du manomètre 22 du fait de la formation de C02 jusqu'à un maximum choisi préalablement, retransmission du signal de maxirnata par l'unité de commande 24 à la pompe d'évacuation 16 qui, dans ce cas, sert en même temps de pompe de remise en l'état initial et prélève dans le récipient de culture 10 un peu de milieu de culture et le C02, jusqu'à ce que la valeur minimale réglée sur le manomètre 22 soit atteinte et que ce signal de minimum arr8te la pompe d'évacuation 16. Entre-temps, le régulateur 23 d'accroissement de gradient a déterminé, à partir de l'activité métabolique effective, qui a été déterminée par les écarts de signaux de maximum précédents, l'accroissement de gradient qui s' y rapporte et l'a retransmis à l'unité de commande 24.Celleci délivre à la pompe addition 19 le signal pour l'addition d'une quantité déterminée de X : en effet, le gradient représente au total l'augmentation de X dans le milieu de culture par unité de temps par une quantité égale d'addition de X pour chaque signal de maximum, son accroissement est modifié par une quantité d'addition chaque fois plus petite (ou plus grande) lors d'un signal de maximum qui indique un pouvoir métabolique réduit (ou accru) (comme on le décrira ci-après en détail lors de la description de l'appareil enregistreur et du régulateur d'accroissement de gradient en référence à la figure 2).Ainsi, la concentration de X dans la culture augmente en fonction du pouvoir métabolique et la sélection et la multiplication d'organismes mieux adaptés augmentent lentement au cours de la culture jusqu'à une limite qui est à rechercher dans les organismes. Âvec an semblable procédé, on peut donc déterminer également la limite supérieure en ce qui concerne 1' aptitude d'adaptation dans une période donnée (durée de la culture) pour les organismes. Dans le cas de l'analyse de l'effet de concentrations croissantes de la substance X sur des levures de fermentation, avec mesure manométrique de la formation de CO2 par unité de temps, le régulateur 23 d' accroissement de gradient est exclu, avec mesure continue et enregistrement du pouvoir métabolique, et la concentration de x est augmentée par l'unité de commande 24 pour chaque signal de maxim'm, de fanon constante ou dans une mesure donnée par une courbe. Dans le cas d'une valeur limite prédéterminée de l'activité métabolique, l'addition de x est définitivement interrompue et on suit, en tant que période de rétablissement, la variation ultérieure du pouvoir métabolique jusqu'à ce que le pouvoir métabolique primitif soit atteint.Dans ces conditions, le gradient sera choisi le plus souvent avec une pente plus forte que dans le cas d'un procédé de sélection. Si par contre on détecte par exemple la formation d'acide comme valeur de mesure, il faut certes que le récipient de culture 10 soit réalisé sous forme stérile, mais il ne faut pas qu'il soit étanche aux gaz. L'intervalle de mesure est déterminé par la différence des valeurs de pH entre celle du substrat stérile et la valeur d'écart du pH établie par réglage au niveau du PH- mètre 22. La remise en l'état initial s'effectue sous forme de titrage en retour et elle sera exécutée, selon le volume de la culture, au moyen d'une pompe de remise en l'état initial ou d'une soupape électromagnétique 20. Dans ces conditions, dans ce cas d'une commande du pH, une pompe d'évacuation n'est pas nécessaire lorsqu'on utilise un récipient de culture à constance de volume sur la base de la hauteur de la tubulure d'évacuation, ce qui s'applique de façon correspondante à tous les appareils de relevé de valeurs de mesure qui n' impliquent pas une étanchéité aux gaz ou à' la pression du récipient de culture. De façon générale, il convient d'opérer, dans toutes les possibilités de procédé mentionnées, de sorte que les quantités d'addition soient aussi petites que possible par rapport au:volume total de la culture (milieu, grandeur de remise en l'état initial comme par exemple un électrolyte et paramètre représenté par une substance), ce qui peut etre obtenu par des concentrations accrues,- en particulier des grandeurs de remise en l'état initial et des substances du paramètre. En cas de petits volumes de la culture et de fortes oscillations de la température, il peut être à conseiller d'employer des manomètres à pression différentielle dans une mesure en comparaison avec un récipient stérile de référence de la taille du récipient de culture.Dans ce cas, il ne faut utiliser, pour l'alimentation et l'évacuation, que des ;* pompes qui isolent complètement et constamment le récipient de culture de la pression barométrique extérieure - comme par exemple des pompes à tuyau souple. La détermination et l'enregistrement du pouvoir ou activité métabolique de la culture, nécessaire pour l'exécution du procédé, relativement à la valeur de mesure déterminée chaque fois s'effectuent de préférence - dans toute la mesure des possibilités en cas de grands volumes de culture - de la manière suivante : pour la régulation, la quantité formée d'un produit du métabolisme ou la variation d'une grandeur de mesure entre deux états de commutation sur un appareil à contacts de relevé des valeurs de mesure ou similaire est mesurée de façon continue et les taux de variation ou les états de commutation "supérieurs" sont enregistrés avant la remise en l'état initial sur une échelle de temps analogique. le pouvoir métabolique est défini avec cette production ou variation par rapport aux valeurs de mesure dans le temps. A cet effet, selon le mode de réalisation de l'invention illustré par la figure 2, une pointe enregistreuse 30 à vitesse constante peut être déplacée à partir d'une position de départ 31 perpendiculairement à la direction d'avance (flèche) d'une bande 32 de papier d'enregistrement qui progresse uniformément, sans entrer en contact avec celle-ci. Lors de l'arrivée d1un signal, elle imprime un point, saute dans sa position de départ et redémarre aussitôt, prête à imprimer à l'arrivée d'un autre signal, puis à sauter en position de départ, et ainsi de suite.On obtient dans ces conditions une succession de points, caractéristique du pouvoir métabolique, à une distance de la position de départ qui correspond d'une part à l'unité de temps et d'autre part aux processus constants à l'arrivée de chaque signal (quantité de formation d'un produit et, par suite, consommation de substrat, quantité d'alimentation et d'évacuation de substrat ou de milieu de culture, grandeur de remise en l'état initial, paramètre de modification, etc.). De cette manière, la bande d'enregistrement peut être étalonnée, soit en unité de temps, soit dans la mesure de l'une des grandeurs constantes lors de l'arrivée d'un signal. Etant donné que, dans le cadre du procédé de l'invention, le pouvoir métabolique, c'est-à-dire le temps pour un taux de production prédéterminé mesurable d'un produit du métabolisme ou le taux de modification d'une grandeur de mesure, doit être détecté, il convient, pour des raisons d'adaptation à différentes tâches, de prévoir, pour le déplacement uniforme de la pointe enregistreuse 30 sur toute la largeur de 1 bande 32 de papier d'enregistrement, différents temps de parcours réglables au niveau de la commande d'avance 36 de l'enregistreur.Dans ce cas, un interrupteur de fin de course 33 agit de sorte qu'en cas de grands écarts entre signaux, par exemple d'une phase de démarrage, la pointe retourne dans sa position de départ 31 sans imprimer lorsqu'elle atteint cet interrupteur de fin de course 33 et redémarre aussitôt, de telle manière que dans-un cas semblable, l'écart effectif entre signaux puisse autre lu également d'après la distance entre points dans la direction d'avance de la bande d'enregistrement. La commande d'avance 34 de l'enregistreur doit aussi permettre différentes vitesses d'avance. En outre, pour augmenter la sensibilité, il y a lieu de prévoir une suppression du début du démarrage après qu'a été effectuée la remise en l'état initial de la pointe enregistreuse, par une minuterie de contact à retardement 35.Si l'on doit par exemple s'attendre à des successions de signaux de 150 s, on peut lire 0,3 mm/s pour une durée de parcours de 180 s et une largeur d'écriture de 60 mm; par contre, avec une période de suppression de 120 s, on pourrait choisir une durée dé parcours de 60 s et parvenir à une lecture de 1 mm/s. Des appareils qui existent déjà dans le commerce, appelés plotters, présentent de semblables caractéristiques. Par ailleurs, ceu -ci sont commandés dans les deux coordonnées de sorte qu'ils transforment des signaux provenant de machines à calculer en courbes ou en dessins, c' est-à-dire en direction + et - sur les deux coordonnées. En outre, ces appareils traitent des séquences de signaux très élevées par unité de temps et, par suite, ils sont conçus avec des spécifications beaucoup plus sévères, l'enregistrement s'effectuant sur un support au repos.Par contre, dans le cas de l'appareil ici décrit, il n'est détecté que des successions de signaux très lentes (2/mn au maximum) dans une seule direction des coordonnées par rapport à une échelle analogique, le plus souvent une échelle de temps, avec une bande de papier d'enregistrement qui est mobile. L'appareil enregistreur selon l'invention peut etre également construit en vue de sa commande par des signaux dans les deux directions avec un support au repos, ce qui permet l'enregistrement de deux processus relativement lents l'un par rapport à l'autre. Des processus périodiques ou meme des évolutions à long terme peuvent être bien surveillés Si l'échelle de temps analogique est réalisée sous forme circulaire, c' est-à-dire à la manière d'enregistreurs de vitesse. En particulier, cela s'applique par exemple à des courbes de croissance de cultures par charges successives, la quantité maximale de C02 théoriquement possible étant prise comme limite extrême de butée et la longueur d'écriture de la pointe enregistreuse sans retour après chaque signal de maximum étant adaptée à cette butée théorique de maximum. Outre la tache spécifique décrite, c'est-à-dire la surveillance de cultures à long terme, l'appareil enregistreur selon l'invention peut être utilisé à de multiples fins, puisqu'il peut assurer toutes les surveillances dans le temps dans le cor;trSle de l'uniformité de tous genres de production de pièces en nombre. L'universalité de l'appareil enregistreur selon l'invention résulte avant tout du fait que ce ne sont pas des valeurs de mesure, mais des états de commutation qui sont détectés, ce qui rend superflue une adaptation spéciale à cet égard aux systèmes à surveiller. Par la disposition de commutateurs à effleurement mobiles 37 dans le trajet de la pointe enregistreuse 30, on peut aussi utiliser l'appareil pour la régulation de l'accroissement de gradient. Etant donné qu'avec le pouvoir métabolique, il est toujours détecté la formation d'un produit du métabolisme ou le taux de variation d'une grandeur de mesure, l'écart de la succession de points par rapport à la position de départ 31 de la pointe enregistreuse 30 indique en même temps écart temporel pour les taux de variation.Si, dans des conditions normales constantes pour la culture, on fixe donc cet écart entre points dans l'unité de temps à 100 % du pouvoir métabolique, le demi-écart correspond à 200 *, le double écart correspond à 50 % de ce pouvoir métabolique, car il a fallu respectivement la moitié et le double de I' intervalle de temps pour le meme taux de variation. La commande de gradient peut etre effectuée dans le cas le plus simple en modifiant par exemple le volume d'une pompe à déplacement au moyen d'un disque à came ou en faisant varier la vitesse de rotation d'un mateur de pompe par réglage d'un potentiomètre. Le servomoteur servant à ltentratnement du disque à came ou d'un potentiomètre est réglé au moyen d'une minuterie de contact 38 de sorte que le programme se déroule de O à 100 % en un temps qui peut être fixé au préalable. Si un écart entre signaux de 150 s est donné pour 100 ffi de pouvoir métabolique selon la définition ci-dessus et si l'on admet pour la sécurité de la culture un retour de ce pouvoir à 50 , cela correspond à un temps possible d'écart -entre signaux de 225 s. Pour une largeur d'écriture de 60 mm et une période de suppression de120 s, une durée de parcours de 120 s est alors possible, ce qui correspond à 0,5 mm/s. Pour une addition de 100 à 0 % d'une substance qui doit être ajoutée dans le gradient, on dispose donc de 225 - 150 = 75 s, qui sont réglées sur la minutérie à contact 38. S'il arrive un signal de maxirnani au bout de 150 s, 100 % de la quantité de substance correspondante sont ajoutés. Si le signal n'arrive qu'au bout de 225 s en raison d'un abaissement du pouvoir métabolique, aucune addition n'est effectuée, tandis que pour 187,5 s, 50 % de la quantité de substance correspondante sont ajoutés. La-régulation de l'accroissement de gradient est donc effectuée dans ce cas par les commutateurs à effleurement 37 de l'appareil enregistreur. En ce qui concerne la forme des gradients, on peut par exemple bobiner linéairement ou logarithmiquement des potentiomètres employés, utiliser des disques à came de toute forme voulue, de même que rendre le gradient proportionnel, inversement proportionnel ou dépendant d'une autre manière du pouvoir métabolique. La réalisation technique admet dans ces conditions des formes d'exécution, même purement électroniques. Elle n'est pas liée à l'appareil enregistreur, mais peut aussi 6'effectuer au moyen d'un compteur de signaux à extraction en comparaison avec un compteur de temps. -REVENDIC ÂT I 0N - 1. Procédé continu pour la culture de microorganismes, dans le cadre duquel il est procédé à des mesures relativement au degré des échanges organiques, caractérisé en ce qu'au moins l'un des paramètres qui résultent de conditions de culture et/ou d'additions de matières étrangères et/ou de caractéristiques des orgasmes, est soumis de manière continue à un gradient dans le sens de la variation vers une valeur prédéterminée et le pouvoir métabolique de la culture est déterminé de façon continue. 2. Procédé selon la revendication 1, caractérisé en ce qu'en vue d'une sélection et/ou d'nn enrichissement d'organismes ou de mutants mieux adaptés aux conditions intéressentes, le paramètre se rapportant à la sélection est approché asymptotiquement d'une valeur limite du pouvoir métabolique et la valeur de mesure du pouvoir métabolique est utilisée pour la commande de l'accrois- sement du gradient du paramètre. 9. Procédé selon la revendication 1, caractérisé en ce qu'en vue de l'analyse du comportement à long terme d'organismes, en particulier après une modification plus ou moins prolongée des conditions de culture et/où après addition de matières étrangères, le paramètre intéressant est soumis à un gradient tandis que tous les autres paramètres sont maintenus constants et il est procédé à un enregistrement automatique continu du pouvoir métabolique. 4. Procédé selon l'une quelconque des revendications 1 à 3, caractérisé en ce que la mesure du pouvoir métabolique est effectuée par une technique manométrique ou volumétrique des gaz. 5. Procédé selon l'une quelconque des revendications 1 à 4, caractérisé en ce que les valeurs de mesure pour la détermination du pouvoir métabolique sont détectées numériquement sous forme de signaux et les signaux sont enregistrés de façon continue sur une échelle analogique, de préférence une échelle de temps. 6. Procédé selon la revendication 5, caractérisé en ce que les signaux sont comptés et, le cas échéant, sont mis en rapport avec une comptage de temps comme quotient. 7. Procédé selon la revendication 5 ou 6, caractérisé en ce que les signaux enregistrés ou leur écart dans le temps sont utinisés-pour le déclenchement de processus de commutation qui agissent sur le paramètre ou pour la commande de l'accroissement de gradient. 8. Procédé selon l'une quelconque des revendications 5 à 7, caractérisé en ces que pour l'enregistrement des signaux, la pointe enregistreuse est déplacée à partir d'une position extrême, à une vitesse constante réglable, perpendiculairement à la direction d'avance du papier d'enregistrement et, en cas de réception d'un signal, imprime un point et est ramenée brusquement dans sa position extrême, à partir de laquelle elle redémarre aussit8t. 9. Procédé selon la revendication 8, caractérisé en ce que la pointe enregistreuse ne redémarre à partir de sa position extrême qu'après une période de suppression qui peut être choisie à volonté. 10. Procédé selon la revendication 8 ou 9, caractérisé en ce que la course de la pointe enregistreuse est limitée par des interrupteurs de fin de course réglables de manière variable ou passe en regard de commutateurs à effleurement réglables à partir desquels des signaux de commutation peuvent être prélevés. 11. Procédé selon la revendication 10, caractérisé en ce que des signaux de commande pour la régulation de l'accroissement de gradient de paramètre ou d'autres influences sur le paramètre sont déclenchés nar les interrupteurs de fin de course ou commutateurs à effleurement. 12. - Procédé selon l'une quelconque des revendications 8 à 11, caractérisé en ce que l'échelle de temps est portée sur un disque circulaire. 13. Dispositif pour l?exécution du procédé selon l'une quelconque des revendications 1 à 12, caractérisé par un récipient de culture 10 qui présente un dispositif pour la circulation forcée de milieu frais à travers tout le volume de la culture, et dont la tubulure d'évacuation se trouve, au-dessus du fond du récipient, à une hauteur telle que le volume de la culture soit constant. 14. Dispositif selon la revendication 13, caractérisé par une unité de commande 24 pour faire varier progressivement et constamment 1' addition de matières étrangères et/ou d'éléments du milieu, ainsi que la température dans le récipient de culture. 15. Appareil enregistreur pour l'exécution du procédé selon l'une quelconque des revendications 1 à 12, caractérisé par un dispositif réglable d'avance du papier 30, une pointe enregistreuse 34 dont la durée de parcours sur la largeur du papier d'enregistrement est constante et réglable, et des interrupteurs de fin de course 33 et/ou des commutateurs à effleurement 37 réglables. 16. Appareil selon la revendication 15,' caractérisé par un compteur 98 accouplé à un compteur de temps pour déterminer le pouvoir métabolique et pour réguler l'accroissement du gradient en fonction de ce pouvoir.