Brevet FR2303537A1 — publié le 19761008

La présente invention est relative à un nouveau médicament dont le constituant actif est un monométhylester de l'acide cm- borique, qui répond à la formule Les monométhylesters de l'acide cXmphorique ainsi que leurs sels de sodium sont des composés connus de longue date rcf. entre autres : Chem. Ber. 25, 1803-1809 (1892) ; Chem. Ber. 26, 286-289 (1893) ; J. Chem. Soc. 61, 1088-1096 (1892)0 : toutefois on ne leur connaissait jusqu'à présent aucune propriété pharmacologique, ni d'activité thérapeutique. La Demanderessè a trouvé à présent, à sa grande surprise, que les monométhylesters de l'acide camphorique ainsi que leurs sels pharmacologiquement compatibles, et notamment leurs sels alcalins, présentent des propriétés thérapeutiques de grande valeur, en particulier des propriétés cholérétiques, des propriétés de stimulation de la digestion, et des propriétés d'activation des processus enzymatiques qui ont le foie pour siège. Dans le cadre de la présente invention, l'on englobe sous le nom de "monométhylesters de l'acide camphorique" aussi bien le 1-monométhylester de l'acide camphorique que le 3-monométhylester de l'acide camphorique, et les mélanges de ces deux esters, que les antipodes optiques de ces esters et toutes leurs formes stéréoisomères possibles, les mélanges d'antipodes actifs et de formes stéréoisomères, et les sels pharmacologiquement compatibles, notamment les sels alcalins, des monométhylesters de l'acide camphorique, de leurs antipodes optiques et de leurs formes stérioisomères. Conformément à l'invention, dans le cas où les médicaments conformes à la présente invention sont constitués par des mélanges de l-monométhylester et de 3-monométhylester de l'acide camphorique, ou de sels de ces composés, notamment de sels alcalins, le rapport dans lequel le l-monométhylester et le 3-monométhylester ou leurs sels sont présents dans le mélange est, de préférence, de l'ordre de I à 1,5-2,5 environ. Les monométhylesters de l'acide camphorique sont préparés d'une manière connue, comme décrit dans les publications citées plus haut, ainsi que dans SYST. No 965, pages 749-750, et, en particulier, en faisant réagir entre elles des quantités équi molaires d'anhydride camphorique et d'un méthylate alcalin, dans un solvant inerte, à des températures comprises entre + 300C et + 1000C, permettant l'obtention directe des sels alcalins, qui sont ensuite, si on le désire, transformés par des méthodes connues en elles-mêmes, par acidification, par exemple, en les semiesters libres correspondants. En cas de besoin, les monométhylesters libres de l'acide camphorique sont transformés en les sels physiologiquement compatibles correspondants, à l'aide de méthodes connues en elles-mEmes. La séparation des mélanges en leurs constituants et la séparation des racémates en leurs antipodes optiques sont réalisées, si on le souhaite, à l'aide de méthodes connues en ellesmêmes. Les nouveaux médicaments conformes à la présente invention, qui contiennent; en tant que constituants actifs, un ou des monométhylesters de l'acide camphorique soit à l'état libre, soit sous la forme de l'un de leurs sels pharmacologiquement compatibles, peuvent être préparés à la manière usuelle, en combinant le ou les constituants actifs avec un véhicule pharmaceutique approprié permettant l'obtention de médicaments à l'état solide, sous forme de comprimés, de dragées, de capsules, par exemple, ou à l'état liquide, sous forme de solutions ou de suspensions. Les nouveaux médicaments conformes à l'invention peuvent être associés, dans des compositions thérapeutiques, à d'autres substances pharmacologiquement actives. Les préparations pharmaceutiques obtenues conformément à la présente Invention contiennent avantageusement de 0,5 à 95 % en poids environ de constituant actif. L'administration de ces préparations pharmaceutiques peut avoir lieu par voie entérale, orale, par exemple, ou par voie parentérale, les doses unitaires étant comprises entre 50 mg et 600 mg de constituant actif. Les doses unitaires indiquées peuvent être administrées de 1 à 4 fois par jour, le choix de la quantité de constituant actif par dose unitaire, la fréquence d'administration et la durée du traitement étant fonction de la nature et de la gravité de la maladie, ainsi que de l'age du malade. Outre les dSspositions qui précèdent, 11 invention comprend encore d'autres dispositions, qui ressortiront de la description qui va suivre. La préparation des composés utilisés en tant que consti tuants actifs dans les médicaments conformes à la présente invention sera décrite dans les exemples qui vont suivre et la préparation de médicaments conformes à l'invention contenant lesdits composés, sous forme de doses unitaires, sera également décrite dans le complément de description qui va suivre, qui est donné uniquement à titre d'illustration de l'objet de 1' invention, dont il ne constitue en aucune manière une limitation. Exemple 1 - Préaration du sel de sodium du monoiéthvlester de l'acide camphorique et du monométhylester à l'état libre L'on chauffe 27 g (0,5 mole) de méthylate de sodium dans 370 m1 de toluène à 50-600C, dans un réacteur muni d'un agitateur, d'un thermomètre et d'un réfrigérant à reflux. L'on ajoute ensuite progressivement dans le réacteur, 91 g (0,5 mole) d'anhydride camphorique par petites fractions. Le sel de sodium du monométhylester de l'acide camphorique se sépare progressivement. Après refroidissement on verse le produit de la réaction dans un litre d'eau dans lequel le sel de sodium se dissout. Il se forme deux couches, une couche aqueuse et une couche de toluène. La couche aqueuse est extraite à deux reprises par du toluène, puis acidifiée à l'aide d'un acide minéral, jusqu'à pH 2. Le monoester se sépare sous la forme d'une huile incolore que l'on extrait par du dichlorométhane ou du chloroforme. Après séchage et filtration, l'on élimine le solvant par distillation sous pression réduite. Le résidu subsistant est une huile incolore qui cristallise à partir d'acide sulfurique concentré ou par traitement par de l'éther de pétrole. L'on obtient 99,5 g de produit, soit un rendement de 93 % de la théorie. Exemple 2 - PréParation du sel de sodium du monométhylester de l'acide camphorique et du monométhylester à l'état libre L'on dissout 90 g (0,5 mole) d'une solution à 30 % de méthylate de sodium dans 650 g de diméthylformamide, dans un ballon. L'on élimine ensuite la majeure partie du méthanol en excès, par distillation sous pression réduite, à une température de 300C. L'on ajoute alors 91 g (0,5 mole) d'anhydride camphorique dans le ballon et l'on chauffe le mélange réactionnel durant 7 heures à 80-900 C. L'on élimine ensuite le solvant par distillation sous vide et le résidu est dissous dans 250 ml d'eau. La solution aqueuse est extraite à 3 reprises par 50 ml d'éther chaque fois, puis acidifiée à pH2à l'aide d'un acide minéral. Le monoester qui se sépare sous la forme d'une huile est extrait, sous agitation, par du dichlorométhane. Après séchage de la solution dans le dichlorométhane, sur du sulfate de sodium, et filtration, on élimine le solvant par distillation sous vide. Le monoester qui subsiste en tant que résidu est une huile incolore que l'on cristallise à partir d'acide sulfurique concentré ou d'éther de pétrole. Exemple 3 - PréParation du sel de sodium du monométhvlester de l'acide camPhoriaue. Dans un réacteur équipé d'un agitateur, d'un réfrigérant à reflux et d'une boule à brome, et contenant 90 g (0,5 mole) de méthylate de sodium à 30 % dans 500 ml d'éther de pétrole, on ajoute goutte à goutte, en l'espace de 10 minutes, une solution de 91 g (0,5 mole) d'anhydride camphorique dans 800 gd'acé tone. On chauffe ensuite le mélange réactionnel durant 6 heures, sous agitation et reflux. Au bout de peu de temps,le sel de sodium du monoester se sépare sous la forme d'un précipité cristallin qui est séparé par essorage, après refroidissement, puis lavé à l'aide d'un mélange 4:6 d'acétone et d'éther de pétrole. Après séchage on obtient 111 g (soit 94 % de la théorie) du sel de sodium du monométhylester de l'acide camphorique. ExemPle de PréParation du nouveau médicament confor me à l'invention contenant le monométhylester de 1'acide camphoriaue en tant que constituant actif Le monométhylester de l'acide camphorique obtenu sous la forme de son sel de sodium, en mettant en oeuvre les modalités décrites dans l'un des exemples 1 à 3 ci-dessus, se présente sous la forme d'une poudre microcristalline blanche, inodore, de faible saveur, très soluble dans l'eau. Conformément à un exemple de réalisation du médicament conforme à la présente invention, donné uniquement à titre d'illustration de l'objet de l'invention, mais sans aucun caractère limitatif, le constituant thérapeutiquement actif conforme à la présente invention, est mis sous la forme d'une solution buvable qui présente la composition centésimale suivante sel de sodium du monométhylester de l'acide camphorique 2 g sirop simple 95 g Glycérine 5 g Benzoate de sodium 0,15 g Arôme 2 ml Eau purifiée ml Coccine nouvelle q.s.p. coloration La préparation ci-dessus est mise sous forme de doses unitaires constituées par des ampoules buvables de 5 et de 10 ml, de coloration rouge et d'odeur aromatique contenant respectivement 100 et 200 mg de constituant actif par ampoule, qui sont administrées à raison d'une à trois ampoules par jour. L'activité thérapeutique du nouveau médicament conforme à la présente invention a été mise en évidence au cours d'expérimentations pharmacologiques dont il sera rendu compte ciaprès, et au cours desquelles ont été démontrées les propriétés cholorétiques exceptionnelles du nouveau médicament conforme à l'invention, ainsi que le r81e d'activation qu'il exerce sur les processus métaboliques de l'hépatocyte, qui résulte, semblet-il, d'une modification qu'introduirait le nouveau médicament conforme à l'invention,au niveau des activités enzymatiques cellulaires. Mise en évidence des Propriétés pharmacoloviaues du nouveau médicament conforme à l'invention. I.- TOXICITE 1 - Détermination de la toxicité aiguë La toxicité aiguë du monométhylester de l'acide camphorique a éte déterminée en calculant la DL50 chez la souris et chez le rat, en procédant comme suit Le constituant thérapeutiquement actif conforme à la présente invention a été administré sous la forme d'une solution dans l'eau distillée, à des souris Swiss des deux sexes d'un poids compris entre 18 et 20 g, et à des rats de souche Wistar d'un poids compris entre 150 et 200 g. Les animaux sont répartis par lots de 5, après avoir subi un jeane non hydrique de 18 heures. Une semaine avant et une semaine après les administrations, les animaux ont été gardés dans des conditions identiques de température (20 + 10C) et d' hygro- métrie (50 + 10) dans une pièce climatisée et alimentés avec de la nourriture U.A.R., avec en plus, pour les rats, un complément de ratigène. La DL50 par voie intrapéritonéale a été calculée après administration du constituant actif en solution à 5 % aux souris, en solution à 20 % aux rats. La DL50 par voie orale a été calculée après administration du constituant actif en solution à 10 % aux souris, en solution à 20 % aux rats. La DL50 par voie intraveineuse a été calculée sur les souris uniquement,auxquelles le constituant actif a été administré en solution à 10 %. Les résultats obtenus sont résumés dans le Tableau I ci-après : TABLEAU I Voie d'administration ≈ DL50 en mg/kg I I I I I SOURIS I MALES FEMELLES MALES FEMELLES r I i I I Orale g 2950 1 2630 1 3430 1 3255 Intrapéritonéale 2740 2270 1790 1820 Intraveineuse 2320 2200 Conclusions La détermination de la toxicité aiguë chez le rat et la souris par différentes voies d'administration, a montré que le constituant thérapeutiquement actif conforme à la présente invention est particulièrement peu toxique puisque les DL50 par voie intraveineuse et par voie orale sont respectivement supérieures à 2 g et à 3 g par kg. 2 - Détermination de la toxicité chronique La toxicité chronique a été étudiée chez des rats Wistar des deux sexes répartis en 4 lots homogènes de 12 animaux auxquels les doses suivantes de constituant actif ont été administrées pendant 12 semaines LOT 1 100 mg/kg Croit 10 fois la dose humaine (qui correspond à 3 ampoules dosées à 200 mg de constituant actif) - 1/32 DL50 per os chez le rat] LOT 2 200 mg/kg croit 20 fois la dose humaine 1/16 DL50 per os chez le Ratj LOT 3 400 mg/kg soit 40 fois la dose humaine 1/8 DL50 per os chez le Ratu sous forme d'une solution aqueuse à 5 % pour les doses de 100 et 200 mg et à 10 % pour la dose de 400 mg/kg LOT 4 témoin recevant la mme quantité d'eau que les animaux des lots 2 et 3 proportionnelle ment à leur poids. Résultats - Croissance pondérale : pas d'incidence - Numération globulaire : aucune modification - Autopsie : aucun signe particulier d'alté ration à l'autopsie macroscopique - Examen histopathologique : aucune altération décelée sur le foie, le rein, l'estomac prélevés chez les Rats autopsiés. Il.- ETUDE DE L'ACTIVITE TERATOGENE W CONSTITUANT THERAPEUTI- OUEMENT ACTIF CONFORME A L'INVENTION L'expérimentation a été réalisée sur des souris Swiss et des rats Wistar, Le médicament conforme à l'invention a été administré aux doses suivantes, par voie orale, aussi bien chez le rat que chez la souris. ler Lot - 300 mg/kg, administrée les 6ème et 7ème jour de la gestation, soit pendant 2 jours, sous la forme du sel de sodium du monométhylester de l'acide camphorique pur 2ème Lot - 50 mg/kg de la composition en ampoules buvables de 10 inl, administrée du 6ème au 14ème jour de la gestation, soit pendant 9 jours ; 3ème Lot - 10 mg/kg sous la forme du constituant actif à l'état pur, du ler au 14ème jour de la gestation, soit pendant 14 jours ; 4ème Lot - témoin 0,5 ml/20 g du véhicule pharmaceutique associé au constituant actif dans la composition en ampoules buvables mentionnée plus haut, du 6ème au 14ème jour de la gestation 5ème Lot - témoin 0,5 ml/20 g d'eau distillée administrée du ler au 14ème jour de la gestation. Après sacrifice des mères la veille de la mise-bas, l'activité teratogène a été évaluée d'après les critères suivants - coloration des utérus au Bleu de Turnbull - examen macroscopique et pesée des foetus - coloration des squelettes à l'alizarine - examen des organes internes par- coupes de Wilson Conclusions Chez la Souris - Aucune activité embryotoxique (antinidatoire, blastotoxique, lyse foetale) n'a été décelée - sur 1199 foetus examinés, une seule anomalie repré sentant 0,1 % de l'ensemble des foetus traités par le constituant actif conforme à l'invention, a été observée à la dose de 50 mg/kg. Chez le Rat - aucun effet embryotoxique n'a pu être mis en évi dence - le taux de malformations observées représente 0,4 % des foetus traités, soit le pourcentage spontané ment observé chez cette espèce animale. III.- ETUDE DES PROPRIETES CHOLERETIQUES ET DES PROPRIETES D ' INDUCTEUR ENZYMATIQUE HEPATOCYTAIRE DU CONSTITUANT THERAPEUTIQUEMENT ACTIF CONFORME A L' INVENTION. A/ L'activité cholérétique du monométhylester de l'acide camphorique sous la forme de son sel de sodium, a été étudiée chez le Rat, le Chien et le mini-Porc, compa rativement à celle de l'acide déhydrocholique ou de son sel de sodium. 1.- Chez le Rat a) Mesure de l'effet cholérétique On utilise des lots de 6 animaux de souche Wistar d'un poids moyen de 280 g, placés en contention conformément à la Méthode de BOUCARD et ABELAR (Ann*Pharm. Franç., 1963, 21, N 7-8, 551), en régulant soigneusement la température des animaux en expérience. Le sel de sodium du monométhylester de l'acide campho rique est administré à une dose de 100 mg/kg d'une so lution aqueuse à 5 % t la dose de déhydrocholate de sodium utilisée est identique. Les résultats, exprimés en rapports de variation du débit, comparativement à la cholérèse de base, par période de 30 minutes,sont consignés dans le Tableau II ci-dessous TABLEAU Il : Rapport d'activité du sel de sodium du monométhyl ester de l'acide camphorique Temps en minutes ! 30 ! 60 1 90 ! 120 Témoins .................. 1 1 0,9 0,93 Sel de Na du monométhyl ester de l'acide campho rique 100 mg/kg .......... 2,1 2,33 2,28 1,93 Déhydrocholate de Na 100 mg/kg ................ 1,7 1,63 1,23 1,08 b) Mesure de la concentration biliaire après adminis tration du sel de sodium du monométhvlester de -l'aci de camphorique chez le rat en expérimentation aiquë L'animal est en fistulation aiguë sous anesthésie. Le sel de sodium du monométhylester de l'acide camphorique est administré par voie intraveineuse à la dose de 25 mg/kg. La bile est recueillie toutes les 30 minutes pendant 2 heures après l'administration. Sur les divers échantillons, on détermine la valeur de l'extrait sec. RESULTATS Avant Après administration 90 mn. 120 mn. administration 30 mn. 60 mn. I i f I 36 32 30 30 30 Concentration Extrait sec q/litre Avant Après administration 90 mn. 120 mn. i i i Administration a 30 mn. j 60 mn. i i 8 11,8 11,1 9,6 6,6 Elimination Extrait sec. mq/30 min. 2.- Chez le Chien et le Mini-Porc L'influence du sel de sodium du monométhylester de l'acide camphorique sur la concentration biliaire chez le chien et le mini-porc en expérimentation chronique, a également été étudiée. Les animaux sont en fistule permanente. Ils reçoivent le sel de sodium du monométhylester de l'acide camphorique à la dose de 100 mg/kg par voie orale. La bile est prélevée 3, 6, 9 et 24 heures après l'administration. L'extrait sec est déterminé sur les divers échantillons. RESULTATS Avant Après administration Administration 3h. 6h. 9 h. 24h. 27,5 30 30 32 31 Chien, concentration extrait sec. q/litre Avant j Après administration Administration 3 h. 6 h. 9 h. 24 h. 28 28 32 31 30 Mini-Porc. Concentration Extrait sec. q/litre CONCLUSIONS Chez le Rat, en administration unique par voie intraveineuse, le sel de sodium du monométhylester de l'acide camphorique entrasse une légère diminution de la concentration biliaire, mais, en raison de la forte augmentation du volume, l'élimination totale est au contraire accrue. Chez le Chien et le mini-porc en administration unique, par voie orale, le sel de sodium du monométhylester de l'acide camphorique ne provoque pas de dilution biliaire, malgré 1' aug- mentation du volume. Il résulte de 1' expérimentation dont il est rendu compte dans ce qui précède que le sel de sodium du monométhylester de l'acide camphorique est un cholérétique vrai puisque, pour un rapport d'activité doublé, la concentration de la bile en ses éléments organiques est pratiquement maintenue. B.- ETUDE DES PROPRIETES D'INDUCTEUR ENZYMATIQUE HEPATOCTAIRE DU MONOMETHYLESTER DE L'ACIDE CAMPHORIQUE 1. - Rémanence de I'effet cholérétique obtenu u après administra- tion du monométhylester de l'acide camphorique. Une étude a été réalisée chez le Rat dans le but de tester, au niveau de la sécrétion biliaire, l'éventuel effet de somation que pourrait entratner 1' administration de doses répétées du monométhylester de l'acide camphorique comparativement à l'effet exercé par le déhydrocholate de sodium. MatOriel et méthode 35 Rats Wistar, males d'un poids moyen de 150 g, répartis en 5 lots, ont reçu per os , quotidiennement, pendant un mois, soit le monométhylester de l'acide camphorique, sous la forme de son sel de sodium, aux doses respectives de 100 mg/kg et 200 mg/kg, soit le déhydrocholate de sodium, aux mimes doses ; le lot "A", ou lot témoin, a reçu, dans les mêmes conditions, le véhicule pharmaceutique seul. Vingt quatre heures après la cessation du traitement, les animaux ont été anesthésiés et on a déterminé leur cholérèse de base suivant la technique habituellement utilisée en expérimentation aiguë (BOUCARD, "La fistule biliaire, Méthodes expérimentales d' Etude", Thèse Doc. Pharm. Montpellier, 1957). Au cours du traitement, la croissance pondérale des animaux a été contrôlée, afin d'ajuster les doses administrées, et en fin de traitement, les animaux accusaient un poids moyen identique d'un lot à l'autre. Résultats et discussion Les valeurs moyennes des cholérèses de base exprimées en ml/h/kg d'animal, sont consignées dans le tableau suivant (Tableau III): TABLEAU III Cholérèse de base après 30 jours de traitement Lot Traitement Cholérèse de % variation par Produit Dose base ml/h/kg rapport aux té mg/kg moins A Témoins 0 3 # 0,10 B Sel de Na du monométhyl- 100 3,6 # 0,07 20 ester de l'a acide campho- i I rique C Sel de Na du 200 4 # 0,10 33 monométhyl I i I ester de l'a cide campho rique D Déhydrocholate de Na 100 3,3 # 0,10 10 E Déhydrocholate de Na 200 3,4 # 0,10 13 Ainsi, chez le Rat, en administration chronique, le sel de sodium du monométhylester de l'acide camphorique provoque une stimulation de l'excrétion biliaire, proportionnelle à la dose administrée, et plus importante que le déhydrochol@te de sodium.Vingt-quatre heures apres la cessation du traitement,on se trouve en présence d'une élévation notable de la sécrétion biliaire de base, ce qui traduit une activation permanente des processus métaboliques de l'hépatocyte. 2.- Mécanisme de cette action : l'induction enzymatique. La responsabilité de cette activation permanente des processus métaboliques de l'hépatocyte semble Btre imputable à une modification siégeant au niveau des activités enzymatiques cellulaires. Cette modification pourrait s'expliquer : soit par l'augmentation de la concentration des protéines enzymatiques, soit par l'activation de ces structures enzymatiques. Dans le but de vérifier cette hypothèse, divers critères qui caractérisent les activités enzymatiques susceptibles d'in tervenir à ce niveau, ont été étudiés in vitro et in vivo a/ - Essais in vitro L'action du monométhylester de l'acide camphorique a été étudiée sur les tests suivants : Déméthylation de l'aminopyrine, Réduction du 4 nitro-benzoate, Uridine-diphosphoglucose-déshydrogénase, Glutamate-déshydrogénase, Glucose- 6-phosphatas e, Phosphatase acide non sédimentable. b/ - Essais in vivo L'effet du monométhylester de l'acide camphorique sur la durée de l'effet hypnotique de l'hexobarbital, la détoxication du 4 nitro-benzoate, l'élimination de l'urée urinaire, la variation du poids relatif du foie, a été étudié. Matériel et Méthode Cette étude a été réalisée sur des Rats Wistar et Chartes River, males, adultes, répartis en lots de 6 animaux. Les différentes méthodes utilisées ont été les suivantes La déméthylation de l'aminopyrine a été réalisée d'après DEWAIDE et HENDERSON (Bioch. Pharmacol. 1968, 17 p. 1901) ; la réduction du 4 nitro-benzoate d'après PETERS et FOUTS (Toxicol. Applied Pharmacol., 1968, 12, p. 242) ; le dosage du 4 aminobenzoate formé a été effectué selon la méthode BRATTON et MARSHALL (J. Biol. Chem., 1939, 128,p. 537) ; l'activité de l'uridine diphosphoglucose-déshydrogénase d'après STROMINGER et Coll. (J. Biol. Chem., 1957, 224, p. 79) ; l'activité de la glutamatedéshydrogénase,d'après NIFHIKAWARA et BRICKER (Amer. J. Physiol. 1966, 210, p. 586) ; l'activité de la glucose-6-phosphatase, d'après RICKETTS (Clin. Chim. Acta, 1963, 8, p. 160) ; l'activité de la phosphatase acide non sédimentable, d'après la méthode de LINHARDT et WALTER ("Methods of enzymatic analysis." BERGMEYER, édit. Acad. Press, 1963, p. 783),sur le surnageant d'un homogénat de foie à 2,5 % dans le sucrose 0,25 M, centrifugé à 25 000 g pendant 20 minutes à + 40C. Le substrat utilisé a été le paranitro-phényl-phosphate. Les phosphates urinaires ont été dosés par la méthode de BRIGGS (J. Biol.Chem., 1922, 53, p. 13) et l'urée urinaire à l'aide de l'hypobromite. La méthode de BRATTON et ERSHALL a été utilisée pour doser le 4-amino-benzoate urinaire total, après hydrolyse acide, et le 4-nitro-benzoate urinaire, après réduction à l'aide du chlorure stanneux, selon la méthode utilisée par GILLETTE (J. Biol. Chem., 1959, 234, p. 139). Les foies sont prélevés après décapitation des rats et les homogénats sont préparés à l'aide de l'homogénéiseur de POTTER. Toutes les activités enzymatiques sont déterminées vingtquatre heures après la cessation du traitement chez les Rats soumis au jeune vingt-quatre heures avant le sacrifice, sauf dans le cas de la glutamate-déshydrogénase et de l'U.D.P.G. déshydrogénase. La mesure du temps de sommeil à l'hexobarbital a été effectuée vingt-quatre heures après cessation du traitement au monométhylester de l'acide camphorique, par administration intrapéritonéale de 75 mg/kg d'hexobarbital, en considérant comme critère le réflexe de retournement. L'élimination urinaire du 4-amino-et du 4-nitro-benzoate a été suivie chez des animaux soumis au jeflne pendant seize heures après injection intrapéritonéale de 4-nitro-benzoate de sodium (25 mg/kg). La dernière administration de monométhylester de l'acide camphorique a eu lieu huit heures avant l'a & nistra- tion du 4-nitro-benzoate, et l'élimination de l'urée urinaire a été mesurée sur les urines recueillies pendant vingt-quatre heures de jean. Résultats et discussion Les résultats de cette étude sont résumés dans le Tableau IV ci-dessous. A partir de l'hypothèse de travail fondée sur la capacité du monométhylester de l'acide camphorique d'entrainer des modifications durables de certaines activités enzymatiques, l'examen des résultats obtenus révèle une action positive pour les critères suints - Glutamate-déshydrogénase, - Glucose-6-phosphatase, - Phosphatase acide non sédimentable, - Diminution du temps de sommeil à l'hexobarbital, - Détoxification du 4-nitro-benzoate, - Elimination de l'urée urinaire. TABLEAU IV Activités mesurées chez le Rat après administration orale répétée de monométhylester de 1' acide camphoricue Pendant 7 iours. EPREUVE DOSE RESULTATS 100 g = 100 g poids corporel mg/kg Témoins Traités Déméthylation de l'amino pyrine M. HCHO/h/100 g 400 27,1#1,93 27,1#2,1 Réduction du 4-nitro-benzoate M/mn/100 g 400 305#29,9 244#14,8 Glucose-6-phosphatase MP/mn/100 g 400 101#4,6 112#5,9 Phosphatase acide non sédi mentable MP/mn/100 g 400 24,4#1,9 18,6#0,8 UDPG déshydrogénase mM/1/mn/100 g 200 4,10#0,4 4#0,3 Glutamate-déshydrogénase mM/1/mn/100 g 200 3,45#0,10 4,05#0,13 Temps de sommeil à l'hexobar bital en mn 100 9,25 #1,35 5,75#0,55 4 amino-benzoate total I I I mg/100 g 400 0,33#0,02 0,47#0,07 I I I 4 amino+4 nitro-benzoate mg/100 g 400 1,08#0,03 1,27#0,04 TABLEAU IV (suite) Urée urinaire mg/24 h/100 g 400 148 # 10 205 # 8 t t I I I po@ds le@at@@ du @@@e g/100 g 400 4,15 # 0,20 3,95 # 0,10 Le monométhylester de l'acide camphorique s'est révélé sans action sur les autres tests étudiés.En particulier, il n'entrasse pas de synthèse systèmes enzymatiques d'hydroxy lation des microsomes, qui sont activés lors de l'administra tion de substances chimiques variées, ainsi que le prouvent les résultats in vitro obtenus avec : la déméthylation de l'amino pyrine, la réduction du 4-nitro-benzoate, l'activité de 1'U.D.P.G. déshydrogénase et le poids relatif du foie. 3.- Propriétés détoxicantes du monométhylester de l'acide camphorigue Si, in vitro , le monométhylester de l'acide camphorique ne provoque pas d'augmentation au niveau de la synthèse des systèmes enzymatiques des microsomes hépatiques, par contre, in vivo , il augmente l'activité des processus de détoxifi cation. C'est ainsi que le traitement par le monométhylester de l'acide camphorique diminue le temps de sommeil à l'hexobarbi- tal. En ce qui concerne ce test, il a été démontré qu'il existe une corrélation entre la durée d'action de l'hexobarbital et son temps de demi-vie in vivo . De plus, il a été constaté que ce temps de demi-vie était lui-même lié à l'activité des systèmes enzymatiques qui catalysent son oxydation au niveau des microsomes. a diminution du temps de sommeil provoquée par le mono méthylester de l'acide camphorique est en accord avec llhypo- thèse d'une activation in vivo des systèmes qui oxydent l1hexo- barbital. Comme il a été constaté au cours de l'expérimentation dont il est présentement rendu compte, qu'il n'entratnait pas, in vitro , d'augmentation de la synthèse des enzymes microsomales, l'augmentation de de leur activité pourrait s'expliquer par une plus grande disponibilité en coenzymes (NADPH). Cette inter prétation est exprimée par l'augmentation de la réduction du 4-nitro-benzoate, qui est également catalysée en présence de -NADPH par une enzyme microsomale dont la concentration n'est pas non plus modifiée sous l'action du monométhylester de l'acide camphorique. 4.- Action stabilisatrice sur la membrane des lysosomes Si l'on admet une plus grande disponibilité en NaDPH, celui-ci, par son pouvoir réducteur, est capable de maintenir l'in- tégrité membranaire des lysosomes, et empêche la diffusion des enzymes qu'ils contiennent. La plus faible activité de la phosphatase acide non sédimentable chez les animaux traités et soumis au jette vingt-quatre heures, montre bien une protection au niveau de la membrane des lysosomes. La stabilisation de la membrane lysosomale peut être assurée également par des stéroïdes du type de l'hydrocortisone. On sait que 1' hydrocortisone augmente la production d'urée, et stimule l'activité de la glutamate-déshydrogénase et de la glucose6-phosphatase. Or, de tels résultats sont observés sous l'action du traitement par le monométhylester de l'acide camphorique. CONCLUSIONS 1/ L'ester méthylique de l'acide camphorique à l'état libre ou sous la forme de son sel de sodium, est un cholérétique vrai, qui entratrie une augmentation notable du débit biliaire, tout en maintenant la concentration des éléments organiques de la bile ainsi sécrétée. En outre, il y a rémanence de l'effet cholérétique obtenu. 2/ Cette rémanence s'explique par une augmentation des fonctions métaboliques de 1' hépatocyte, qui entrasse, également, une activation des capacités de détoxification du foie. Cette détoxification accrue est prouvée par la diminution du temps de sommeil à l'hexobarbital, chez le Rat, après administration du constituant thérapeutiquement actif étudié. L'action analeptique sur les fonctions hépatiques et biliaires du monométhylester de l'acide camphorique, avec rémanence des effets obtenus après cessation du traitement, est imputable à une induction des structures enzymatiques de l'hépatocyte, avec augmentation de la disponibilité en co-facteurs (EDPH). Cette plus grande disponibilité en coenzymes est également responsable de l'action stabilisatrice du monométhylester de l'acide camphorique sur la membrane des lysosomes. REVENDICATIONS 10- Nouveau médicament, utilisable notamment en tant que cholérétique et qu'inducteur enzymatique hépatocytaire, caractérisé en ce qu'il comprend comme constituant actif au moins un monométhylester de l'acide camphorique répondant à la formule dans laquelle, M représente un atome d'hydrogène ou un ion métallique monovalent, à l'état libre et/ou sous la forme de l'un de ses sels, en particulier de l'un de ses sels pharmacologiquement compatibles. 2 - Nouveau médicament selon la Revendication 1, caractérisé en ce qu'il comprend comme constituant actif un mélange de l-monométhylester et de 3-monométhylester de l'acide camphorique. 3 - Nouveau médicament selon la Revendication 1, caractérisé en ce qu'il comprend comme constituant actif le l-monométhylester de l'acide camphorique. 40- Nouveau médicament selon la Revendication 1, caractérisé en ce qu'il comprend comme constituant actif le 3-monométhylester de l'acide camphorique. 5 - Nouveau médicament selon la Revendication 1, caractérisé en ce qu'il comprend comme constituant actif un sel alcalin du monométhylester de l'acide camphorique. 60- Nouveau médicament selon la Revendication 5, caractérisé en ce qu'il comprend comme constituant actif le sel de sodium du monométhylester de l'acide camphorique. 7 - Nouveau médicament selon la Revendication 1, caractérisé en ce qu'il comprend comme constituant actif au moins un antipode optique du monométhylester de l'acide camphorique. 8 - Nouveau médicament selon la Revendication 1, caractérisé en ce qu'il comprend comme constituant actif, au moins une forme stéréoisomère du monométhylester de l'acide camphorique. 9 - Nouveau médicament selon la Revendication 2, caractérisé en ce que dans le cas où il est constitué par des mélanges de 1-monométhylester et de 3-monométhylester de l'acide camphorique, ou de sels de ces composés, notamment de sels alcalins, le rapport dans lequel le l-monométhylester et le 3-monométhylester ou leurs sels sont présents dans le mélange est, de préférence, de l'ordre de 1 à 1,5-2,5 environ. 10 - Nouveau médicament selon l'une quelconque des Revendications 1 à 9, caractérisé en ce qu'il présente une teneur de 50 mg à 600 mg de constituant actif par dose unitaire d'admi- nistration.