Brevet FR2315942A1 — publié le 19770128

La présente invention est relative à de nouveaux médicaments à base d'extraits de tissus et/ou d'organes animaux ainsi qu'à leur procédé de préparation. Elle est plus parti- culièrement relative à des médicaments présentant une action anti-stéatogène remarquable et une puissante action inhibitri ce de la croissance anormale du collagène et d'une manière générale innibitrice de la prolifération des tissus conjonc tivo-vasculaires du foie (action anti-cirrhotique). La stéatose et la cirrhose, qu'elles soient nrovoquées ar l'intoxication, par la dénutrition ou, surtout, par l'alcoolisme, sont encore de ncs jours des fléaux redoutables. La théraneutique actuelle, qui consiste en des exp o- rations biologiques multiples comportant une surveillance de l'équilibre électrolytique, une surveillance de la fonction rénale, une surveillance de la fonction hénatique, associées à une médicaticn extrtmement conteuse (antibiotiques, Dlasma, corticoïdes, albumine humaine, etc...) est de Dlus assez dangereuse, en raison des nombreuses actions secondaires que les médicaments mis en oeuvre peuvent provoquer. La présente invention a en conséquence pour but de pour- voir à de nouveaux médicaments destinés à combattre la stéatose et la cirrhose, qui répondent mieux aux nécessités de la pratique que les médicaments précédemment connus, notamment en raison de leur parfaite innocuité et de l'absence d'effets secondaires, permettant ainsi des traitements de longue durée dans des conditions de sécurité parfaites, ainsi qu'en raison de leur prix de revient bien plus fable. La Drésente invention a pour objet des nouveaux médicaments à action anti-stéatogène et anti-cirrhotique, caractérisés en ce qu'ils sont essentiellement composés d'extraits de tissus et/ou d'organes d'animaux obtenus Dar voie enzymati que. La présente invention a également pour objet un pro- cédé pour la préparation de ces médicaments, caractérisé en ce que lton traite au cours d'une première étape, le tissu et/ou l'organe animal par une enzyme protéolytique, dans une solution saline à un PH voisin de la neutralité, et à une température voisine de + 40C, la suspension obtenue étant traitée par des moyens physiques appropriée pour donner lieu à un surnageant clair, en ce qu'au cours d'une deuxième étape l'on traite le surnageant clair obtenu, par l'alcool absolu à un pH inférieur à 7 et en ce qu'au cours d'une troisième étape l'on précipite la substance extraite des tissus et/ou des organes animaux par l'addition d'un sel de calcium à un pH voisin de 7,5, pour obtenir un produit qui peut être utilisé tel quel ou lyophilisé (par exemple dans la solution saline), puis stérilisé, seul ou en mélange avec d'autres produits. Suivant un mode de réalisation avantageux du procédé objet de la présente invention, on réalise le traitement enzymatique da.a la solution saline à deux reprises consécutives. Suivant un autre mod de réalisation du procédé objet de l'invention, la solution saline se compose de 6 à 10 g de NaCl, de 0,5 à 2 g de NaHCO3, de 0,1 à 0,3 g de KCl, de 0,04 à 0,08 y de NaH2PO4 et de 1 à 3 g de glucose par litre d'eau. Suivant encore un autre mode de réalisation du procédé objet de l'invention, la quantité d'enzyme mise en oeuvre est comprise entre 0,1 et 0,5 g pour 100 g de tissu et/ou d' oryane. Si on le désire l'extrait total de tissus et/ou organes d'animaux peut être fractionné pour obtenir un produit thermostable et une fraction lipidique. La présente invention a par conséquent également pour objet un procédé de purification de l'extrait total de tissus et/ou d'organes d'animaux. Suivant l'un de ses mcdes de réalisation, la purification est réalisée par dissolution de l'extrait dans une solution saline, rhaulfage pendant 10 minutes à 1000C, refroidissement à la température ambiante, filtration du précipité, stérilisation et lyophilisation du surnageant. Suivant un autre mode de réalisation, la purifie ion est réalisée en traitant l'extrait total par une solution alcool-éther 2:1 à 600C pendant 30 minutes. Le solvant riche est filtré, centrifugé jusqu'à la clarté parfaite, puis le solvant évaporé. L'extrait sec de cette fraction dite lipidique se dissout facilement dans du DroDylène-glycol. Outre les dispositions qui précèdent, l'invention com prend encore autres dispositions, qui ressortiront de la description qui va suivre. La présente invention vise particulièrement les médicaments à action anti-stéatogène et anti-cirrhotique, les compositions thérapeutiques et pharmaceutiques comprenant ces médicaments, l'application de ces médicaments aux traitements de la stéatose et de la cirrhose ainsi que les procédés de préparation et de purification de ces médicaments. La présente invention pourra être mieux comprise à l'aide du complément de description qui va suivre dans lequel on trouvera un exemple de mise en oeuvre du procédé de préparation conforme à l'invention, un compte-rendu d'étude analytique ainsi qu'un compte rendu d'expérimentation pharmacologique mettant en évidence l'innocuité de ces nouveaux médicaments ainsi que leur action inhibitrice de la prolifération de tissus conjonctifs tels que le collagène. Il doit êtr bien entendu, toutefois, que cet exemple et ces études sont donnés uniquements à titre d'illustration de l'objet de l'invention, mais n'en constituent en aucune manière une limitation. EXEMPLE DE PREPARATION DE L'EXTRAIT TOTAL 100 g de muscle strié de boeuf sont finement cou- et hachés en petits morceaux ne dépassant pas I mm d'épaisseur. On introduit ces morceaux dans 147 mi d'une solution aqueuse contenant 1,2 g de NaCl, 0,3 g de glucose, 0,15 g de NaHCO3, 0,15 g de tryDsine, 0,03 g de KCl et 0,007 g de NaH2PO4.On ajuste le pH de la susDension à 7,2 à laide de soude puis on laisse le tout pendant 24 heures à 4 C. Le pH est contrôlé pendant les trois premières heures afin de le stabiliser à 7,2. Au bout de ce temps on filtre et on centrifuge dans une centrifugeuse réfrigérée à + 2 C,pendant une heure à 3000 tours/min. Le surnageant riche est récolté et le précipité de nouveau extrait par 150 ml de solution saline que l'on centrifuge de nouveau pendant une heure à 40C à 3000 tours. On réunit les deux surnageants et l'on ajoute 75 ml d'éthanol absolu. On laisse au repos pendant 24 heures à 4 C et l'on rajuste le pH, si besoin est,à des valeurs inférieures à 7 Il se forme un précipité blanc . On filtre alors à travers de la gaze puis on centrifuge à 20C pendant une heure à 3000 tours. Au surnageant ainsi obtenu l'on ajoute 0,02 % de CaCl2 à 5 % et une quantité suffisante de soude pour porter le pH à 7,6. L'extrait précipite lentement. On laisse parfaire la précipitation pendant 24 heures à 40C.L'on sépare le précipité p a r centrifugation, l'on dissout dans la solution saline, on filtre stérilement à travers une membrane dont le diamètre de pores est de O > 45 y environ, puis on lyophilise. ETUDE ANALYTIQUE A/ FRACTIONNEMENT 1 g d'extrait total lyophilisé donne (sur sec) - par la purification aboutissant à une fraction thermostable : 666,5 mg - par la purification aboutissant à une fraction lipidique 67,7 mg - fraction thermolabile 82,8 mg - sels minéraux 183,0 mg B/ DOSAGE DES PROTEINES Ce dosage ne peut être effectué que si lton prend la précaution de mélanger l'extrait total ou la fraction thermostable de l'extrait total avec 1 gel de polyacrylamide (par exemple le "LYPHOGEL" de Gelman) qui absorbe de l'eau jusqu'à 5,5 fois son propre poids,ainsi que des molécules dont le poids moléculaire est inférieur à 20 000, tandis que les substances dont le poids moléculaire est supérieur à 20 000, c'est-à-dire la totalité des Protéines, demeurent en solution.Pour un tel dosage, l'on dissout 250 mg d'extrait total dans 25 ml d'eau. L'on ajoute à 10 ml de cette solution, une quantité de "LYPHOGEL" suffisante pour obtenir un volume final de 1 1,5 ml. Le dosage des protéines totales par la méthode de Folin est réalisé sur 0,1 ml de l'extrait concentré. On trouve que 1 g d'extrait total contient 50 à 70 mg de protéines. c/ ELECTROPHORESE Le tracé électrophorétique de. l'extrait total présente essentiellement deux fractions ; une qui migre en correspondance avec l'albumine et la seconde qui migre en correspondance avec les ss-globulines. On réalise l'électrophorèse dans une cellule Gelman sur du polyacétate de cellulose dans du tampon tris-barbital 0,05 M à oH 8,8 et à une tension de 350 V pendant 35 minutes ; on colore les bandes d'acétate à l'aide d'une solution qui contient 500 mg de rouge Ponceau S dans 100 mi d'acide trichloracétique à 5 % > pendant 10 minutes ; on décolore les bandes par de l'acide acétique à 5 est et on clarifie par une solution à 12 % d'acide acétique dans du méthanol ; on sèche à 900C pendant 30 minutes.La densité optique et les surfaces d'intégration sont mesurées à l'aide d'un appareil, par exemple Digiscreen-R. On trouve : Albumine environ 13 % -Globulines environ 87 % D/ DOSAGE DE L'ACTIVITE ANTI-COLLAGENE IN VITRO -L'on procède de la manière suivante : l'on découpe dans un foie de rat normal, à l'aide d'un rasoir, des morceaux au nombre de 10 c 15, d'environ 0,5 mm d'épaisseur, corres pondant à 120 à 150 mg de poids frais, Durs on les met à incuber dans des Detites vasques contenant 3 ml de solution bicarbonatée de Krebs-Ringer contenant 6microcuries de proline radioactive et des quantité exactement pesées et croissantes de l'extrait total La phase gazeuse est constituée par 95 % d'oxygène et 5 % de C02. On laisse incuber pendant 60 à 120 minutes dans un appa- reil de Dubnoff comportant un dispositif d'agitation. A la fin de l'incubation, les morceaux sont prélevés, essuyés sur du papier filtre et homogénéisés dans 1 ml de solution de Ringer. On ajoute 1 ml d'acide trichloracétique (TCA) à 30 % après quoi on centrifuge le tout. Le précipité est lavé à deux reprises avec 2 ml et 1 ml de TCA à 10 %. Les surnageants sont écartés et le Précipité est mis en suspension dans 1 ml de TCA à 5 % puis porté à 900C pendant 30 minutes, après quoi on centrifuge. La fraction soluble dans le TCA contient le collagène.On le dose en l'hydrolysant tout d'abord par HCI 6N pendant 16 heures à 1050C dans des tubes centrifuges fermés par un bouchon fileté ; on le traite par le charbon pour éliminer les acides nucléiques, on neutralise à la soude, enfin on dose l'azote tar la méthode à laninhydrine. On lit la densité optique des différentes éprouvettes à 570 m , ainsi que la radioactivité à l'aide de liquide de scintillation,par exemple "Onnifluor" fabriqué par Nen Chemicals dans un appareil "Tri-carb" par exemple . En traçant la courbe des teneurs en azote des différentes éprouvettes obtenues avec des taux croissants d'extrait total, lson trouve que la quantité d'extrait rapportée à la teneur en protéines qui inhibe de 50 % la synthèse du collagène est de 136 mcg.Comme la teneur en protéines est d'environ 60 mg/g d'extrait total, l'on peut conclure que la prépara- tion standard du complexe extrait, contient 441 unités anti-collagène (UAC), COMPTE-RENDU DES EXPERIMENTATIONS ET PROPRIETES PHARMACOLOGIQUES Matériaux et méthodes L'on a utilisé comme animaux d'expérimentation des rats albinos des deux sexes, de souche WISTAR, dont le poids était de l'ordre de 100, 150 et 200 g et des porcs mâles castrés pesant de 20 à 30 kg, atteints d'une hépatopathie chronique. 10/ Traitement des animaux La cirrhose chez le rat a été induite par injection sous-cutanée de 0,25 ml Dar 100 g du poids d'animal, d'une solution 1:1 de CCl4 - huile de grains. Les injections ont été réalisées trois fois par semaine, un jour sur deux, Dendant 3 à 4 mois. L'extrait total (E.T.) a été administré soit en même temps que le tétrachlorure de carbone, soit le lendemain, à raison de 25 mg de lyophiiisat dissous dans 0,5 ml d'eau par 100 g de poids de rat. Aux rats témoins on a administré par voie sous-cutanée des quantités correspondantes d'huile de grains ou de solution saline. Pour le traitement per os, l'E.T. a été dissous dans l'eau de boisson à raison de 800 mg de lyophilisat pour 30C ml d'eau, qui était la quantité mise à la disposition de 10 rats pour 24- heures. La diète stéatogène était composée comme suit - caséine 5 , - lard 2G % - glucose 15 V0 - tapioca 48,3 % - 1-cystine 0,50 % - huile de foie de morue 2 % - huile végétale 3 % - mélange de sels 4 % - mélange de vitamines 2,2 % L'administration de cette diète a commencé en même temps que le traitement des rats Dar le CC14 et a remDlacé la diète liormale administrée aux rats témoins. Aux porcs, l'injection de l'E.T. à des doses de 1 g de lyophilisat par 20 kg de poids, dissous dans 5 ml d'eau a été effectuée dans la région sous-cutanée cervicale. Aux animaux témoins on a administré,selon les mêmes modalités, des quantités équivalentes de solution saline. 20/ Méthodes d'analyse a) dosage du collagène Le dosage a été basé sur la teneur en hydroxyproline. Conne on le sait cet aminoacide est présent-dans le collagène à raison de 13 %. L'extraction du collagène hépatique a été effectuée suivant la méthode décrite par PATEC et alia et l'hydroxyproline a été dosée suivant la méthode de LOGAN. Le mode opératoire a été le suivant : environ 3 g de foie ont été triturés dans un mortier et après des Dassages successifs dans l'acétone et dans l'éther, pour éliminer l'eau et les lipides, la Doudre obtenue a été desséchée dans une étuve jusqu'à poids constant. Environ 50 mg de cette Dou- dre ont été Desés dans une éprouvette de centrifugation à bouchon fileté, et lavés Dar deux fois à l'urée à 20 , pour éliminer les protéines solubles. La Doudre a ensuite été hydrolysée. pendant 16 heures à 1100C.Les échantillons obtenus ont été neutralisés par la soude, dilués à 10 ml à l'aide d'eau et filtrés. La teneur en hydroxyproline a été dosée sur 1 ou 2 ml du filtrat et suivant la méthode de LOGAN pré- citée. La teneur en hydroxyproline a été calculée sur la base -dtun échantillon standard obtenu à partir de solution d'hydroxyproline pure du commerce. La teneur en collagène est obtenue en multipliant la teneur en hydroxyproline par 7,46. b) dosage des triglycérides Les triglycérides du foie ont été extraits selon la méthode de FOLCH et déterminés par la méthode de ZILVERSMIT modifiée par VAN HANDEL. c) dosage des protéines Ce dosage est réalisé par la méthode du biuret, décrite par COLOWICK et KAPLAN. d) synthèse du collagène Elle a été réalisée suivant lo méthode préconisée par HIRAYAMA et colle e) activité collagènolytique L'activité collagènolytique est étudiée in vitro sur un homogénéisat de foie ; le processus est le suivant : l'on place 1,5 ml de tampon acétate de soude à DH 5,5 et 1,0 ml d'homogénéisat de foie à 15 % dans du tampon acétate, ainsi que des quantités croissantes de l'E.T., dans des éprouvettes de centrifugation en nitrate de cellulose. La quantité finale du mélange est de 2,5 ml et pour maintenir cette quantité constante à chaque addition dlE.T., l'on enlève une quantité équivalente de tampon acétate.L'on ajoute à ce mélange 15 ml de collagène marqué à l'aide de proline C14. L'on prépare aussi des échantillons dans lesquels on ajoute à la place d'1 ml d'homogénéisat de foie, 1 ml de tampon acétate pour vérifier si pendant l'incubation, il se produit une hydrolyse spontanée du collagène. Les échantillons ainsi préparés sont mis à incuber à 370Cpendant 3 heures dans une atmosphère d'air. A la fin de l'incubation, les échantillons sont centrifugés à 35 QOO tours pendant 30 minutes, et la radioactivité est déterminée sur des aliquotes du surnageant liquide. La collagènolyse est calculée sur la différence entre l'activité vérifiée en présence et en l'absence d'homogénéisat de foie et elle est rapportée à 1 g de foie frais. L'action de l'E.T. a été étudiée sur le foie de rats auxquels il a été administre par voie sous-cutanée, en même temps que ces rats ont reçu du CC14, également par voie sous cutanéetet soit une diète normale soit une diète stéatogène. A/ DIETE NORMALE ; INJECTION SOUS-CUTANNEE DU CCl4 Résultats : (Durée du traitement 105 jours) a) Mortalité Le quotient de mortalité Qm est déterminé de la manière suivante = -2m/N+S où : m = nombre de sujets morts N = nombre de population initiale S = nombre de survivants On obtient - Groupe de rats mâles Témoins : Qm = 0,033 Traités au CCl4 : Qm = 0,666 CCl4 + E.T. : Qm = 0,142 - Groupe de rats femelles Témoins : Qm = O Traités au CCi4 : Q = 0,50G CCl4 + E.T. :Qm = 0,162 b) Rapport/poids du foie (g) poids du rat (g) En prenant comme rapport foie/poids total des témoins : 1,00 on obtient : groupe traité au CCl4 : 1,14 groupe traité au CCl4 + E.T. : 1,00 c) Teneur en collagène du foie Si on pose que la teneur en collagène des témoins est égale à 100, on obtient - Groupe des rats mâles : traitement au CCl4 : 200 traitement au CCl4 + E.T. : 137 - Groupe des rats femelles traitement au CCl4 : 226 traitement au CCl4 + E.T. : 148 d) Teneur en triglycérides du foie Si on pose que la teneur en triglycérides des témoins est égale à 100, on obtient -Groupe des rats mâles : traitement au CCl4 : 156 traitement au CCl4 + E.T. : 102 -Groupe des rats femelles traitement au CCl4 : 140 traitement au CCl4 + E.T. : 101 B/ DIETE STEATOGENE a) mortalité Qm témoins : 0,162 Qm diète : 0,500 Qm diète + E.T. : 0,285 b) Teneur en triglycérides du foie Si on pose que la teneur en triglycérides des témoins est égale 100, on obtient - Rats traités uniquement à la diète : 800 - Rats traités à la diète + E.T. : 300 COMPARAISON DES EFFETS DE L'EXTRAIT TOTAL (E.T.), DE LA FRACTION THERMOSTABLE DE L'EXTRAIT TOTAL (F.T.) ET DE LA FRACTION LIPIDIQUE DE L'EXTRAIT TOTAL (F.L.) Le tableau I compare les activités anti-stéatogènes de l'E.T., de la F.T. et de la F.L. TABLEAU I 45 JOURS DE TRAITEMENT 5 GROUPES DE 20 RATS Groupe de rats I Teneur en collagène I Teneur en tri i du foie l glycérides du foie Témoins 100 100 CCl4 176 284 I J CCl4 + E.T. 101 146 CCl4 + F.T. 108 130 CCl4 + F.L. 108 107 C/ EFFET DE L'E.T. SUR LES PORCS ATTEINTS D'HEPATOPATHIE CHRONIQUE Dans le but de vérifier Si l'E.T. est également efficace conte les hépatopathies autres qu'expérimentales, quelques dizaines de jeunes porcs de la même race et du même âge, atteints d'hépatopathie chronique ont été répartis en deux groupes : un premier groupe qui a été utilisé comme témoin, l'autre ayant été traité par l'extrait total. A la fin du traitement, qui a du-ré 60 Jours, les animaux ont été sacrifiés et les paramètres suivants étudiés - mortalité et évolution du poids - rapport : poids du foie/poids du torc - évaluation macroscopique du foie - teneur en collagène du foie - teneur en glycéride du foie Les résultats obtenus concordent sensiblement avec ceux effectués-sur les rats, rapportés plus haut. D/ ETUDE DE LA TOXICITE AlGUE ET CHRONIQUE a) toxicité aigué Les rats ont été répartis en 4 groupes de 10 rats chacun (5 mâles et 5 femelles) auxquels on a injecté par voie sous-cutanée : - 2 ml de solution contenant 150 mg d'E.T. - 2,5 ml de solution contenant 200 mg d'E.T. - 3 ml de solution contenant 300 mg d'E.T. - 4 ml de solution contenant 400 mg d'E.T. Il n'a été observé aucune mortalité. b) toxicité chronique On a étudié l'effet du médicament conforme à l'inven- tion sur les rats sains mules et femelles après administration pendant une longue durée (311 jours) par voie sous-cutanée et par voie orale. Aucune anomalie n1a été constatée sur tous les paramètres étudiés, à savoir entre autres : - évolution du poids - analyse d'urine - nombre de globules rouges, de globules blancs, et quantité d'hémoglobine - l'azote urique et la glycémie - la transaminase GPT et Gar - le cholestérol libre, le cholestérol estérifié et les triglycérides du plasma - le poids des principaux organes et leur examen histologique. c) activité terratogène Aucune anomalie et aucune différence-par rapport aux témoins n'ont été constatées aussi bien pour l'administration sous-cutanée que pour l'administration orale. E/ CONCLUSIONS Les résultats obtenus au cours des diverses exDérimentations démontrent la remarquable activité anti-stéatogène et anti-cirrhotique des nouveaux médicaments conformes à l'invention, aussi bien à l'égard des altérations hépatiques induites expérimentalement, que spontanées. Les nouveaux médicaments conformes à l'invention réduisent l'accu- mulation anormale du collagène dû à un traitement par le CC14 non seulement quand ils sont administrés en méme temps que le produit toxique, mais également quand l'accumulation de collagène a déjà été constatée.En outre les nouveaux médicaments conformes à l'invention se sont avérés efficaces pour prévenir ou réduire les autres dommages dont le foie est le siège,déterminés par le CC14, comme l'accu- mulation des triglycérides, les modifications de la teneur en protéines et en eau, ainsi que les tableaux nécrotiques observés par la voie histologique. Il a été démontré également que l'extrait total, ainsi d'ailleurs que les frac tions thermostables et liposolubles, exercent un effet sur les dommages induits par la diète hypoprotéique, comme la régression de la stéatose hépatique. Il résulte de ce qui précède que les nouveaux médicaments conformes à l'invention exercent une grande variété d'actions directes de prévention ou de régression des diverses altérations induites, que ce soit expérimentalement ou spontanément. Un certain nombre de résultats cliniques déjà obtenus chez l'homme atteint de diverses formes d'hépatopathies chroniques, généralement d'origine alcoolique,-mettent en évidence la propriété anti-cirrhotique des nouveaux médicaments. L'administration chez l'homme a été réalisée en comprimés gastrorésistants contenant 0,300 g de principe actif, à raison de 6 comprimés par jour. Les nouveaux médicaments conformes à l'invention peuvent être administrés seuls ou en association avec d'autres médicaments et sous différentes formes d'administration appropriées. REVENDICATIONS 10. Procédé de préparation de médicaments à actions anti-stéatogène et anti-cirrhotique caractérisé en ce que l'on traite au cours d'une première étape, un tissu et/ou un organe d'animal par une enzyme protéolytique, dans une solution saline à un pH voisin de la neutralité, et à une température voisine de +40C, la suspension obtenue étant traitée par des moyens physiques appropriés pour donner lieu à un surnageant clair, en ce qu'au cours d'une deuxième étape -l'on traite le surnageant clair obtenu, par l'alcool absolu à un pH inférieur à 7 et en ce qu'au cours d'une troisième étape, l'on précipite la substance extraite des tissus et/ou des organes d'animaux, par addition d'un sel de calcium à un pH voisin de 7,5, pour obtenir un produit qui peut être utilisé tel quel ou lyophilisé puis stérilisé, seul ou en mélange avec d'autres produits. 2", Procédé de préparation selon la Revendication 1, caractérisé en ce que l'on réalise le traitement enzymatique dans la solution saline à deux reprises consécutives. 30 Procédé selon la Revendication 1, caractérisé en ce que l'on lyophilise le produit dans une solution saline qui comprend de 6 à 10 g de NaC1, de 0,5 à 2 g de NaN0031 de 0,1 à 0,3 g de Kcl, de 0,04 à 0,08 g de NaH2P04 et de 1 à 3 g de glucose par litre d'eau. 40. Procédé selon la Revendication 1, caractérisé en ce que la quantité d'enzyme mise en oeuvre est comprise entre 0,1 et 0,5 g pour 100 de tissu et/ou d'organe. 5". Procédé selon l'une quelconque des Revendications 1 à 4, caractérisé en ce que l'extrait total de tissus et/ou d'organes d'animaux peut être fractionné pour obtenir un produit thermostable et une fraction lipidique. 60. Procédé selon l'une quelconque des Revendications 1 à 5, caractérisé en ce que la purification est réalisée par dissolution de l'extrait dans une solution saline, chauffage pendant 10 minutes à 1000C, refroidissement à la température ambiante, filtration du précipité, stérilisation et lyophilisation du surnageant. 7". Procédé selon l'une quelconque des Revendications 1 à 6, caractérisé en ce que la purification est réalisée en traitant l'extrait total par une solution alcool-éther à 600c, en filtrant le solvant riche, en le-centrifugeant et en l'évaporant, puis en dissolvant le produit obtenu dans du propylène-glycol. 80. Nouveaux médicaments à actions anti-stéatogène et anti-cirrhotique, caractérisés en ce qu'ils sont essentiellement composés d'extraits de tissus et/ou d'organes d'animaux, obtenus par voie enzymatique en mettant en oeuvre le procédé selon l'une quelconque des Revendications 1 à 7. 90. Compositions nouvelles à actions anti-stéatogène et anti-cirrhotique, caractérisées en ce qu'elles contiennent comme principe actif les médicaments selon la Revendication 8. I00.Application des médicaments selon les Revendications 8 et 9, aux traitements anti-stéatogène et anti-cirrhotique.