Brevet FR2301232A1 — publié le 19760917

la présente invention est relative à une composition thérapeutique permettant de lutter contre la fasciolose du bétail, notamment des ovins, -les bovins et des caprins. La lutte contre la fasciolose des ovirs, des bovins et des caprins est un problème économique d'importance mondiale, qui n'a reçu jusqu'à présent de solution satisfaisante. Dans sa forme aiguë, la fasciolose peut provoquer une mortalité dépassant 50 % des troupeaux et sous sa forme chronique, la mortalité peut atteindre de 5 à 20 % des troupeaux, et même davantage, selon les cas. Même en l'absence de mortalité, la fasciolose entraîne une diminution de la prise de poids et du rendement en viande, une baisse de production laitière, une diminution de la qualité des laines, qui peut représenter de 20 à 40 % de perte. Les moyens actuels de prophylaxie et de traitement de la fasciolose sont d'efficacité variable et leurs coûts sont loin d'être négligeables. L'un des douvicides le plus anciennement connu est le tétrachlorure de carbone, utilisé des le début du XXe siècle pour lutter contre Fasciola hepaties. Il s'agit lè d'un produit très économique. Malheureusement il a da entre abandonné dans les pays développés tout au moins, en raison de sa toxicité pour le foie des animaux traités. De nombreux travaux ont été entrepris en vue dè diminuer la toxicité du CCL4 et notannnent r les effets protecteurs de certains antioxydants et en particulier de la N N' diphényl-p-phénylène diamine, (par la suite dénommée DppD). la DppD a déjà été utilisée chez l'agneau pour lutter contre une carencé en vitamine E, par administration per os (DRAPER et Colt. J. Animal Sci, 14,1200,1955). Dans les travaux de GALLAGER (Austral. J exp. Biol. 1962,40, p241 254), DI LUZIO (Fédération proceedings Aug, 1973 Vol. 32 Ne 8), CAWTHORNE (Br. J/ Nutr. 1970,24,357), l'utilisation de la DppD comme détoxifiant du CCl4 est décrite, mais selon divers protocoles et avec des résultats contradictoires. Notamment, les voies d'administration, les doses utilisées, le moyen de l'administration par rapport à l'intoxiation CCl4 utilisé ans tous les cas administré separément par voie orale), sont variables. Ces auteurs ne mentiennent pas l'utilisation de l'é@e@cia@q@ CCl14 et DppD dans une seule forme galénique utilisable chez l'animal. La présente invention a pour but de fournir une composition pour lutter contre la faisciolose du bétail qui présente une toxicite nettement plus faible que le tétrachlorure de carbone utilisé seul, qui permette une administration unique et surtout qui permette une bonne résorption. Ces buts sont atteines selon la présente invention grace à une association de tétrachlorure de carbone et de N,N'-diphéyl-p-phénylène diamine en solution dans le diméthylformamide. Cette composition contient avantageusement de 65 à 80 % en poids de tétrachlorure de carbone, de à 16 % en poids de N N'-diphényl-p-phénylène diamine, le reste étant cons- titue par le diméthylformamide present en une proportion pondérale telle que le rapport diméthylformamide/N,N' -diphényl-p-phénylène diamine soit égal ou supérieur à 0,5. On a en effet trouvé que la DppD qui ect pratiquement insoluble dans le tétrachlorure de carbone formait une solution avec le tétrachlorure de carbone et le diméthylformamide dans certaines proportions et que cette solution pouvait être utilisée pour lutter contre la fasciolose du bétail en présentant une toxicité plus faible que le tétrachlorure de carbone Cela est d'autant plus surprenant que l'on a observé avec un solvant assez proche, le diméthylsulfoxyde, une augmentation de la toxicité aiguë du tétrachiorure de carbone (Maneini, Toxicology and applied Pharmacology 27,206-209,1974). La composition selon l'invention peut être mise sous forme de doses unitaires de 5 ou de 10 ml par exemple ou en récipients multidoses de 100 ml à 1 litre par exemple. La composition selon l'invention peut être adminstrée par voie buccale, sous-cutanée ou intramusculaire notamment sous forme de dose unique ou de deux doses à 10 jours d'intervalle. La dose utilisés à chaque administration peut varieur de 60 à 3000 mg/kg (exprimée en tétrachlorure de cartone). Les résultats des essais comparatifs suivants mettent en évidence les avantages présentés par la composition selon l'invention. 1) Comparaison de la diminution de l létalité du tétrachlorure de carbone par l'adjonction de DppD en fonction du solvant utilisé. Des souris sont intoxiquées à des doses différentes, croissantes, régulièrement mortelles, de CCI4. La toxicité du CCl4 est diminuée par la DppD, mais ee phénomène peut entre inhibé en fonction de l'excipient utilisé. Le tableau ci-dessous illustre cette expérience. Les produits administrés peP os contiennent 65 ml de CCl4 et 17,30 g de DppD pour 100 ml de préparation prête à l'emploi. Influence de différents excipients sur la toxicité du mélange CCL4 + Dpp0 comparée au CCl4 Excipient utilisé % de morts en fonction de la dose de Produits CCl4 pur administrée et forme galénique 9,45 ml/kg 11,06 ml/kg 12,9 ml/kg 1 - huile de paraffine CCl4 70 80 100 (solution) 2 - huile de paraffine CCl4+ DppD 70 90 100 + Span 85 (emulsion nant) (suspension) 3 - DMP + huile de paraf- CCl4 + DppD # 70 100 100 fine (solution) 4 - N-Méthyl-pyrolidone CCl4 + DppD 100 100 100 (solution) - DMSO CCl4 + DppD 80 100 100 (solution) 6 - DMF CCl4 + DppD 20 40 50 (solution) Certains excipients aboutissent à la suppression des effets favorables de la DppD, que le produit obtenu soit sous forme de solution, soit sous forme de suspension. Cn constate meme une augmentation de la toxicité aiguë du CCl4 avec certains solvants. La solution selon l'invention présente par contre une faible toxicité.Par rapport à une suspension elle présente en outre une bien meilleure résorption tors d'une administration parentérale. 2) Pour démontrer l'effet protecteur exerué par la DppD vis-a-vIs de la toxicité hépatique du tétrachlorure de carbons, on a recours à un test classique : le test du sommeil induit au pentobarbital chez la souris. Ce test permet d'apprécier la capacité du foie à sétaboliser certaines substances toxiques Le principe en est ie suivant chez la souris normale, une certaine dose de pentobarbital induit un sommeil qui a une certaine durée ; chez des souris ayant reçu 24 heures auparavant une substance toxique pour le foie, la même dose de pentobarbital induit un sommeil plus longs car le foie lésé aura plus de mal à métaboliser le pentobarbital ; en administrant en meme temps que la substance toxique une autre substartce supposée hépatoprotectrice, cn examine si la durée du sommeil est raccourcie ou non et l'on peut ainsi quantifier la protection hépatoprotectrice obtenue On réalise ce test avec le tétrachlorure de carbone comme substance hépatotoxique, à la dose de C,22 ml/kg, sait trois fois plus que la dose douvicide, et la DppD comme substance hépatoprotectrice, on obtient les résultats suivants: Traitement (s. e.) dose / kg # Temps de sommeil (en secondes) 0,22 ml de CCl4 7434 (lot intoxique non protégé) 0,22 ml de CCl4 + 10 mg de DppD + 12 mg de DMF 7166 (lot intoxiqué et 1ère dose de protection) 0,22 ml de CCl4 + 15 mg de DppD + 17 mg de DMF 5862 (lot intoxiqué et 2ième dose de protection) 0,22 ml de CCl4 + 22,5 mg de DppD + 24 mg de DMF 4567 (lot intoxiqué et 3ième dose de protection) 0,22 ml de CCl4 + 33,8 mg de DppD + 35 mg de DMF 4158 (lot intoxiqué et 4ième dose de protection) 0,22 mi de CC1 + 50,7 mg de DppD + 52mg de DMF 5965 (lot intoxiqué et 5ème dose de protection) Cesi résultats démontrent bien un raccourcissement du temps de sommeil, dû b l'administration de DppD, qui augmente avec la dose. 3) Activité douvicide On a comparé l'activité douvicide du mélange CC14 + DppD + DMF par rapport à celle du CCl4 chez le mouton. la dose employée est de 100 mg/kg de CC14 administrée par voie sous cutanée. La composition CCl4 + DppD + DMF utilisée contenait 65 ml de CC14 et 17,30 g de DppD pour 100 ml. témoins infestés CCl4 CCl4 + DDpD + DMF Nombre moyen de douves 155 72 55 trouvées à l'autopsie. Efficacité du traitement 0 53 % 64 % la composition selon l'invention possède donc une efficacité supérieure à celle du CC14. 4) La présente invention, grace à sa toxicité plus faible, permet d'augmenter les doses utilisées de CC14 et d'atteindre ainsi les formes immatures de fasciola hepatica, ce qui ne pouvait être fait avec le CC14 utilisé seul. les douves immatures sont en effet beaucoup plus résistantes aux douvicides que les formes adultes de ce parasite chez le mouton. Pour atteindre ces formes immatures, il faut habituellement augmenter de manière considérable la dose thérapeutique du produit utilisé, Ceci est possible avec des douvicides tels que le RAFOXANIDE et le BITHIONOL SULFOXYDE, mais ne se révèle pas économique -et est à la limite de la toxicité. En ce qui concerne le CCl4, la dose considérée comme étant la dose maximale tolérée est de 800 mg/kg de poids vif, selon BORAY, A cette dose, l'efficacite du CCl4 @@@ les forme @@@@ @@@ cet @@di@re @@ @@@ Grace à la composition selon l'invention, on peut @@@mme. @@ manière considérable les doses utilisées (entre 1200 mg/kg et 2400 mg/kg), afin d'attaindre les formes immatieres du parasite, a ces doses, aucun trouble n'est apparent chez ces animaux. L'efficacité d'une solution contenant 65 ml de CCl4 et 17,30 g de DppD pour 100 ml est indiquée dans le tableau ci-dessous: Efficacité de la soulution CCl4 + DppD + DMF sur les formes immatures de Fasciola hepatica Dozes (en CCl4)* Age des douves 4 semaines 6 semaines 8 semaines 1 ml/kg 87 % 90 % 100 % 1,5 ml/kg 92 % 98 % 100 % 2 ml/kg 94 % 100 % 100 % Administration par injection sous-cutanée. REVENDICATIONS 1. Composition pour lutter contre la Fasciolose du bétail caraeté- risée en ce qu'elle comprend une association de tétrachlorure de carbone et de N,N' diphényl-p-phénylène diamine en solution dans le diméthylformamide. 21 Composition selon la revendication 1 caractérisée en ce qu elle contient de 65 a' 80 % en poids de tétrachlorure de carbone. de 5 à. 16 % en poids de N > N' diphényl-p-phénylène diamine, le reste étant constitué de diméthylformamide présent en une proportion pondérale telle que le rapport diméthylformamide / N,N' diphényl-p-phénylène diamine soit égal ou supérieur à avec