Brevet FR2290495A1 — publié le 19760604

La présente invention se rapporte à un procédé microbiologique d'obtention ce la substance connue sou le nom de zérenol. Le trihydroxy-7,14,16 méthyl-3 oxa-2 oxo-1 benzo [c] té tradécéne-12a, 16a (formule I), connu sous le no de zéranol pos sède des propriétés anabolisantes particulièrement utiles cour le développement des animaux d'embouche. Il est connu de produire ce composé par l'action du micro organisme NRRL 2830 sur un milieu nutritif approprié (brevet amé rican n 3196019) de façon à former un déhydrozéranol qui est ensuite transformé en zéranol par réduction. Il a maintenant été trouvé par la Demanderesse que ce procédé pouvait être considérablement amélioré en rendement et en qua- lité du produit formé lorsque ledit microorganisme étant remplacé par le microorganisme RSA 901. L'invention vise donc un procédé de fabrication du déhydro zéranol suivant lequel on fait agir le microorganisme RSA 901 sur un milieu nutritif contenant un sucre, un composé vecteur d'azote et de l'eau. Parmi les sucres convenables, il peut être cité, par exem ple, le saccharose, le glucose, le maltose, le lévulose, le galactose et le lactose. Parmi les vecteurs d'azote, il peut être cité, par exemple, le chlorure d'ammonium, le sulfate d'ammonium, le nitrate d'am- monium, le citrate d'ammonium, le tartrate d'ammonium et l'urée. Le sucre est présent dans le milieu nutritif dans une pro portion comprise entre 10 et 50 % en poids; de preference, cette proportion est comprise entre 25~et 40 %. La quantité de vecteur d'azote présent est préférablement calculée-de façon à correspondre à une proportion en azote disponible comprise entre 0,5 et 5 % en poids de la quantité de sucre; De préférence, cette proportion est comprise entre 1 et 2 %. Le milieu nutritif peut en outre contenir avec profit des petites quantités de sels de potassium, de meganésium, de fer et de manganèse, de sels phosphoriques. Le milieu nutritif peut etre aussi renfermer des petites quantités de vitamines, en particulier de vitamines B qui peuvent être apportées par addition de levure de bière. L'eau utilisée peut etre de toutes provenances telles que l'eau de pluie, l'eau de source, l'eau de rivière, l'eau urbaine. Toutefois l'eau distillée ou deminéralisée est préférable. Le milieu nutritif peut etre mélangé avantageusement à un support inerte comme, par exemple, du sable, du-gravier fin, des scories, aes os concassés, des coquilles de noix concassées, de la pierre ponce concassée et la vermiculite expansée. te pE du milieu nutritif est préférablement réglé à 5,5 (plus ou moins un). Lorsqu'on utilise un support inerte, celui-ci est préférablement présent dans une proportion comprise entre 20 et 200 % en poids de milieu nutritif; de préférence, cette proportion est comprise entre 30 et 60 %. L'opération est conduite, de préférence, dans des plateaux munis de bords permettant de oser une couche d'un à dix centimètres d'épaisseur. Plus la proportion de support inerte et plus épaisse peut être la couche. L'opération est conduite à une température, préférablement, vers 17 C, une marge de p'us ou moins 5 C étant acceptable. De préférence, le microorganisme est introduit dans le milieu nutritif sous la forme d'une dilution préparée dans de l'eau ou dans un milieu licuide stérile. Quelques exemples sont donnés ci-après dans le seul but d'il- lustrer l'invention et sans qu'il en résulte de limitation. Exemple 1 On transfère, dans 500 millilitres d'eau distillée stérile, le contenu d'un tube contenant une culture du microorganismè RSA 901 sur agar-agar. On agite pendant deux heures, pour homogénéiser, en maintenant stérile suivant les précautions habituelles en la matière. On prepare, d'autre part, 9 Kg de milieu nutritif comme suit: glucose 30 % nitrate d'ammonium 1 % (0,34 % d'azote) Sulfate de magnésium 0,05 % Chlorure ferrique 0,01 % Nitrate de manganèse 0,01 % Levure de bière 0,2 % Phosphate bipotassique 0,15 % Eau distillée QSP 100 Après stérélisation de ce milieu nutritif en autoclave et refroidissement vers 17 C, on lui ajoute les 500 millilitres de cultura diluée préparée précédemment et on agite le tout. On verse, dans des conditions stériles, sur un plateau con tenant 3 kg de vermiculite expansée (5 cm) et précédement stéré lisé en autoclave. On place le plateau dans une étuve d'incuba- tion à 16 C (plus ou moins un) et maintient ainsi pendant six semaines. Au bout de cette durée, on retire le plateau de l'étuve et verte non contenu dans 25 litres d'eau et nasse le tout au nalaxeur Werner. Le filtrat est placé dans un évaporateur à palettes rotatives chauffé à la vapeur èt l'eau est éliminée par évapera- tion. On reprend le residu avec 80 litres de méthanol et agite énergiquement; on essore et lave le gâteau avec 25 millilitres de méthanol. Le méthanol est éliminé par évaporation jusqu'à siccité et on obtient une matière solide qu'on reprend par 2 litres de chlo roforme. On traite 6 fois la solution chloroformique par 20 litres d'une sulution aqueuse contenant 1 Kg de carbonate de sodium anhydre. Après élimination de la couche chloroformique, les solu tions carbonatées sont réunies et amenées progressivement pX 6,2 par addition d'acide chlorhydrique concentré. On extrait trois fois avec 50 millilitres d'éther éthylique, sèche sur sulfate de calcium anhydre puis élimine l'éther par évaporation pour obtenir 166 grammes de déhydrozéranol. Exemple 2 Dans 4 litres d'éthanol, on dissout 10 grammes de déhydrozé ranol et ajoute 40 grammes de nickel Raney. On maintient la solu tion à 700C sous 70 bars d'hydrogène pendant 3 heures. On filtre et évapore l'éthanol sous pression réduite pour obtenir 9,7 gram mes de zéranol qu'on peut recristalliser dans le nitrométhane. Cn le caractérise par son point de fusion (143 C) et sa teneur en carbone (67,1 %) et en hydrogène (8,14 %) R E V E N D I C A T I O N S 1. Procédé de fabrication du zéranol suivant lequel on fait agir le microorganisme RSA 901 sur un milieu nutritif contenant un sucre, un composé vecteur d'azote et de l'eau, le composé formé etant ensuite extrait puis hydrogéné suivant un procédé connu. 2. Procédé conforme a la revendication il caractérisé en ce que le sucre es-t choisi parmi le saccharose, le glucose, le maltose, le lévulose, le galactose et le lactose. 3. Procédé conforme a la revendication 2 caractérisé en ce que le sucre est le glucose. 4. Procédé conforme à la revencication 1 caractérisé en ce que le vecteur d'azote est choisi parmi les sels d'ammonium- et l'urée. 5. Procédé conforme à la revendication 1 caractérisé en ce oue le sucre est présent dans le milieu nutritif dans une Proportion comprise entre 10 et 50 % en poids. 6. Procédé conforme â ia revendication 5 caractérisé en ce que le sucre est présent dans une proportion comprise entre 25 et 40 %. 7. Procédé conforme à la revendication 1 caractérise en ce que le vecteur d'azote est présent dans une proportion en azote disponible comprise entre 0,5 et 5 % en poids de la quantité de sucre .8. Procédé conforme à la revendication 7 caractérise en ce que la. proportion d'azote est comprise entre 1 et 2 % de la quantité de sucre. 9. Procédé confondre a la revendication 1 caractérisé -en ce que le milieu nutritif continent une petite quantité d'au moins une substance choisie parmi les sels de potassium, de fer, de magnésium et de manganèse, les sels phosphoriques et les vitamines. 10. Procédé conforme P la revendication 1 caractérisé en ce que le milieu nutritif est mélangé à un support inerte choisi parmi le sable, le gravier fin, les scories, les os concassés, les coquilles de noix concassées, la pierre ponce concassee et la vermiculite expansée.