Brevet FR2311539A1 — publié le 19761217

la présente invention concerne les préparations médicamenteuses et a plus particulièrement pour objet une préparation à action antibactérienne destinée à être utilisée dans la pratique médicale en tant qu'antibiotique pour le traitement des infections d crobiennes, par exemple des infections dues au staphylocoque. Des préparations antibactériennes connues, telles que les antibiotiques tant naturelle s que semi-synthétiques, notanant les pénicillines semi-synthétiquess ont trouvé une large utilisation dans la pratique médicale. Les préparations telles que la méthicilline, l'ampicilli- ne, l'oxacilline, ne possèdent pas le complexe de propriétés indispensables, à savoir s spectre d'action élargi, acido résistance et pénicillinasrésistance. Par exemple, la méthicilline, étant pénicillinasorésistante, est dépourvue d'acido-résistance et lors de son utilisation de longue durée provoque des modifications dans divers tissus et organes (notamment dans les reins). L'ampicilline possède un large spectre d'action, mais n'est pas douée d'acido-résistance et de pénicillinaso-résistance. L'oxacilline est une préparation à spectre d'action étroit. En outre, la technologie de préparation de la méthicilline ainsi que des autres préparations iédicaienteuses ndiquées est complexes et s'effectue en plusieurs stades. la présente invention a pour but de supprimer les inconvénients précités. Conformément à ce but, l'invention vise à mettre au point une préparation médicamenteuse appartenant au groupe des pénicilline. et qui serait simultanément acido-résistante et pénicillinaso-résistance. La solution consiste en une préparation nedicaienteuse à action antibactérienne qui, conforiément à l'invention, contient cosse principe actif une quantité thérapeutiquement effective de t - phénylcyclopentyl - 1 - pénicilline sous forme d'un sel de métal alcalin, ou bien dudit principe actif en conbinaison avec un excipient pharmaceutique. On peut utiliser en tant qu'excipient pharmaceutique un solvant pharmaceutique, par exemple, l'eau distillée ou un soluté physiologique. La concentration en principe actif de la solution pour injections est de 25 à 50% en poids. La 1 - phénylcyclopentyl - 1 - pénicilline (PhCP) est un sel sodique de l'acide 6 - (1 - phénylcyclopentyl - 1 carbamido) pénicillanique et a pour formule brute C20 3N2NaO4S. La préparation se présente sous la forme d'une poudre blanche à saveur amère, facilement soluble dans l'eau, l'éthanole à 95%, l'acétone, peu soluble dans le benzène, et pratiquement insoluble dans l'éther. L'activité iodométrique de la PhCP est de 1200 à 1300 unités/milligramme. Les essais de la PhCp ont porté sur 1. Son action antibactérienne in vitro 2. Sa résistance vis-à-vis de l'action de la pénicillinase. 3. Son activité d'induction. 4. Son acido-résistance. 5. Sa toxicité. 6. Son activité chimiothérapique. 7. La résorption et la localisation lors de l'adminis tration par voie intramusculaire. Action antibactérienne de la PhCP in vitro L'action antibactérienne de la MhCp a été étudiée par une méthode de doubles dilutions en série sous une charge microbienne de 20 millions de corps bactériens par millilitre de milieu. Le spectre d'action de la PhCp ne distingue pas de celui de la benzylpénicilline et de la méthicilline. Les données de ces spectres sont indiquées dans le Tableau I. Tableau I Test-microbes CMB1), g/ml2) benzylpé- PhC p Méthicilline nicilline Strept. pyogenes 0,003 0,012 0,012 Staph. aureus 209 p 0,012 0,048 1,56 Staph albus 0,006 0,048 0,78 B. subtilis ATCC 6633 0,048 0,09 0,19 B. megaterium 0,19 0,9 0,9 E. typhi 0,39 62,5 250 Sh. dysenteriae Flexneri 3,12 125 500 E. coli 0-55 31,2 500 7500 Prot. vulgaris 1,56 250 125 Ps. aeruginosa > 500 > 500 > 500 Vibrio Netschnicoff 0,78 0,24 0,9 Myco amagnatis > 500 > 500 > 500 1) CMB = concentration minimale bactériostatique des corps indiqués 2) On a indiqué les données doyennes des 7 essais. 3)La PhCP et la méthicilline sont prises en quantités équivalentes par rapport à la benzylpénicilline. Cependant, la croissance du vibrion de Metschnikov est inhibée par la PhCP à une concentration quelque peu inférieure comparativement à la benzylpénicilline et la méthicilline. Quant au niveau de son activité antibactérienne vis-à-vis du staphylocoque, la PhCP est plus active que la méthicilline (de 15 à 30 fois), pais moins active que la benzylpénicilline (de 4 à 8 fois). Les cultures de staphylocoques récemment isolées et hautement sensibles à la benzylpénicilline on une sensibilité plus grande à la PhCP qu'à la méthicilline (tableau II) Tableau II Staphylocoques CMB, ,g/cm3 CMB de méthi Benzylpé Ph CP Méthi- cilline : CMB nicilline cilline de PhCP 21 0,03 0,49 1,56 3,2 31 0,03 0,24 3,12 13 45 0,007 0,9 6,25 7 4-0 0,003 0,024 1,56 65 456 0,008 0,03 0,78 26 "CMB de méthicilline : CMB de PhCP" signifie le rapport entre les concentrations minimales bactériostatiques de méthicilline et de PhCP. La sensibilité à la PhCP des souches de staphylocoques (à raison 107 souches) résistantes à la benzylpénicilline et isolées chez les malades avec diverses affections d'étiologie staphylococcique est indiquée dans le Tableau III. Tableau III CMB, g/cm3 CMB de CMB de Nombre benzyl- PhCP/CMB de benzylpé- PhCP méthicilline pénicil- de méthicisouches nicilline line/CMB lline de PhCP 1 31,2 1,9 6,25 16 0,3 1 500 3,9 6,25 128 0,6 10 125-1000 1,56-125 1,56-100 4-160 1 14 125-1000 7,8-250 3,12-100 8-64 2,5 12 125-1000 15,6-31,2 3,12-6,25 8-64 5 24 250-1000 31,2-250 3,t2-25,0 4-3? 10 22 250-2000 31,2-250 1,56-6,25 4-16 20 17 500-2000 62,5-125 1,56-3,12 8-32 40 6 500-2000 62,5-250 1,56-3,12 4-16 80 La charge microbienne est de 20 millions de corps bactéri@@ par millilitre. Il résulte du Tableau III que toutes les souches sont principalement de 8 à 64 fois plus sensibles à la PhCP qu'à la benzylpénicilline. La comparaison du produit avec la méthicilline fait ressortir que 10% des cultures essayées sont douées d'une sensibilité égale à celle de la méthicilline : 46% sont de 2 à 10 fois plus sensibles à la méthicilline qu'à la PhCP. L'étude de l'activité de la PhCP sur 6 souches de staphylocoques cliniques résistantes avec utilisation de différentes doses d'ensemencement a montré que son activité, ainsi que celle de la méthicilline, sont peu modifiées avec l'augmentation de la donc d'ensemencement de la culure (Tableau IV) Tableau IV We de Benzylpénicilline PhCP léthicilline souches de sta- Valeur de charge microbienne/corps microbiens par ml phylocoques 10 104 106 10 104 106 10 104 106 CMB, m/CMB 39 0,8 1,9 125 1,9 3,9 7,8 1,56 1,56 3,12 18b 0,48 7,8 125 1,9 1,9 7,8 1,56 3,12 3,12 88 0,9 3,9 31,2 1,9 1.9 3,9 1,56 1,56 1,56 1 1,9 3,9 62,5 3,9 3,9 7,8 3,12 3,12 3,12 9p 3,9 7,8 125 1,9 1,9 7,6 1,56 3,12 3,12 1,9 1,g 1,9 125 1,9 1,9 7,8 1,56 1,56 1,56 Stabilité de la PhCP à l'action de la pénicillinase Le degré de stabilité de la PhCP a été étudié à l'égard de l'action des pénicillinases de diverses origines : staphylococcique, Bac. cereus 5/B, 3ac. licheniformis 749/c, E. coli 871, Kl. aerogenes 556. Pendant la première heure de l'hydrolyse la PhCP n'est absolument pas inactivée. Après incubation pendant 4 heures la PhCP est seulement hydrolysée à 7,2%. Le bas pourcentage de l'hydrolyse après l'inactivation pendant 4 heures permet de considérer que la pénicilline essayée sous l'action de la pénicillinase staphylocoque n'est pratiquement pas inactivée. Contrairement à la benzylpénicilline, la PhCP possède différents degrés de stabilité à l'action des pénicillinases de diverses origines. La PhCP est hautement stable tant à la pénicillinase staphylocoque qu'aux bactéries gram-négativee E. Coli 871, gl. aerogenes 556. Elle est quelque peu sensible à l'action des pénicillinases des bactéries gram-positives. Pendant la première heure de l'hydrolyse la PhCP sous leur action est inactivée à 8%, et après l'inactivation pendant 4 heures, à 14-15%. Aucune dépendance directement proportionnelle entre la quantité de produit inactivé et la durée de l'action de l'enzyme chez la PhCP n'a pas été observée. En tant que modèle on a pris une culture pénicillinasoproductrice de staphylocoque qui est coagulum-positive et isolée d'une substance pathologique. On ajoute cette culture simultanément avec la PhCP en concentration optimale pour assurer le degré maximal d'induction de 5.108 corps bactérien. par cm3. L'activité de la pénicillinase a été déterminée par la méthode iodométrique. D'après le standard (référence) de trouble on a jugé de la croissance de la culture au cours du processus d'induction. Pour la comparaison, la capacité d'induction de la benzylpénicilline et l'activité de l'inducteur de la méthieilli- ne en concentrations optimales ont été déterminées dans chaque essai. Le pouvoir d'induction est caractérisé selon les indices généralement connus. Is PhCP est un inducteur actif de la synthèse de la pénicillinase staphylocoque. Sous l'action de la PhCP la synthèse de la pénicillinase augmente et sa concentration atteint 2900 unités/cm3 lors de la détermination dans le contrôle de 116 unités. La concentration optimale de PhCP favorisant l'induction maximale est égale à 50 unités/cm3. D'autres concentrations de PhCP provoquent l'augmentation de la synthèse de pénicillinase, mais à un moindre degré. Le taux maximal d'induction est observé sous l'action de la concentration optimale de PhCP 4 heures après son addition. D'après l'accroissement absolu de la pénicillinase induite sous l'action des concentrations optimales d'inducteurs, la PhCP dépasse considérablemert la benzylpénicilline et est légèrement inférieure à la méthiciAline. Le taux d'induction de la PhCP s'élève considérablement avec l'augmentation de sa concentration, mais jusqu'à une limite déterminée (100 unités/cm3), elle manifeste une action bactériostatique et l'induction diminue. Le taux maximal d'induction de la PhCP est égal à 25, ce qui est quelque peu plus bas que pour la méthicilline (31). Cette différence s'est révélée plus concrètement lors de la détermination de la constante d'induction qui permet de mettre en évidence l'inducteur le plus effectue, tous les autres indices d'inductions étant égaux. Ia "constante d'induction" de la PhCP est égale'à 9 unités, tandis que chez la méthicilline, elle est de 30 fois moindre, à savoir 0,3 unité, c'est-à-dire que la PhCP est un inducteur plus faible que la méthicilline, ce qui la distingue avantageusement de celle-ci. Acido-résistance L'acido-résîstance de PhCP est déterminée au sein d'un milieu alcoolique aqueuse à pH de 1,3 et à une température de 37 . La teneur en PhCP est déterminée par la méthode iodométrique. Le processus d'inactivation de la PhCP, ainsi que de la méthicilline, l'oxacilline, la benzylpénicilline, peut être bien exprimé par l'équation du premier ordre. Une dépendance directe de lgC/C rapport à a été observée. Cela a permis de calculer les coRstantes de vitesses de l'inactivation d'après l'équation : K = 2,3 . lg o , où L désigne le temps en C minutes, Co désigne la concentration initiale, C désigne la concentration au moment de la détermination. Le processus de l'hydrolyse des pénicillines est indiqué dans les Tableaux Va, Vb, Vc, Vd. Tableau Va PhCP 1 2 3 4 Temps à partir du Concentration Activité en début de l'essai, en unités par par rapport C en minutes cm3 à l'activité initiale 0 468,7 - 100 30 218,0 46,5 0,0255 60 87,2 18,6 0,02803 Cm (concentration moyenne) = 0,0267 Tableau Vb. Méthicilline t 2 3 4 0 871,0 100 2 351,0 40,3 0,4531 4 130,0 14,8 0,4759 6 65,0 7,5 0,4288 Cm = 0,4526 Tableau Vc. Oxacilline 1 2 3 4 0 1080,4 100 20 843,6 78,1 0,01T305 40 651,2 60 0,012480 60 503,2 46,6 0,1t292 Cm = 0,01267 Tableau Vd.Benzylpénicilline 1 2 3 4 O 1313,2 100 2 682,9 52,0 0,3269 4 361,5 27,5 0,32449 6 187,5 14,3 0,32248 Cm r 0,32462 Ia période de demi-vie de la PhCP est égale à 26 minutes, celle de la méthicilline, à 1,5 minute, celle de l'oxacilline à 59,9 minutes, celle de la benzylpénicilline, à 2,1 minutes, c'est-à-dire que l'acido-résistance de la PhCP est de 2,3 fois inférieure à celle de l'oxacilline et de 17 fois supérieure à celle de la méthicilline. Toxicité de la PhCP La toxicité aigué de la PhCP a été déterminée sur des souris blanches par voie intraveineuse, intramusculaire et pérorale. Les essais ont porté sur 100 souris pesant de 18 à 20 grammes, qui ont reçu per os des doses de 1500, 1750, 2000, 2250, 2500, 2750 mg/kg de PhCP. Les doses létales ont entrîné la mort des animaux, dans la plupart des cas, 3 ou 4 heures après l'administration du produit et au cours des 24 heures suivantes. La PhCP administrée per os à une dose de 1500 mg/kg n'a pas provoqué de modifications visibles dans l'état général des animaux ; sa DL50 était égale à 2364,75 + 84,55 mg/kg. Ia dose létale moyenne provoquant la mortalité de 50% des souris (DL50) en en cas d'introduction par voie intramusculaire est de 1438 + 67,1 mg/kg. La dose maximale tolérée est de 800 mg/kg. C'est la dose de 1700 mgZkg qui s'est révélée absolument mortelle. La PhCP a été administrée à des rats pesant de 100 à 120 grammes, par voie intraveineuse et à des doses de 300, 350, 400, 450, 500 mg/kg. Les doses plus élevées ont provoqué une mort instantanée. La dose maximale tolérée par les rats par voie intraveineuse est de 300 mg/kg. La DL50 étant de 394 + 22,97 mg/kg. Activité chimiothérapique L'activité chimiothérbpique de la PhCP a été étudiée chez les souris blanches avec staphylococcie expérimentale. Les animaux ont été infectés par voie endopéritonéale par une dose létale de souche virulente de staphylocoque doré dans l'agar stérile" à 0,4%. La pénicilline a été administrée par voie sous-cutanée ou per os une fois, simultanément avec l'infection. Les animaux sont restés en observation pendant 10 jours. Les résultats ont été évalués d'après la survie et la durée de vie totale des souris pendant tout le temps d'observation, exprimée en souris-jours et en pourcentage par rapport à la durée de vie maximale possible dans ce groupe d'animaux. L'authenticité des différences dans la durée de vie des animaux traités comparativement aux témoins a été déterminée selon la forme alternative du compte de la réaction avec calcul du critère /2 La DE50 a été calculée par la méthode de Litchfield et de Wilcoxon. Le tableau VI résume les résultats de l'étude comparativement de l'action thérapeutique de la PhCP, de la méthicilline et de la benzylpénicilline sur l'infection provoquée par la souche Staph. aureus 18 b, résistante à la benzylpénicilline. Tableau VI Micro- CMB Dose Nombre Ont Ont Durée de vie totale Evaluation de organisme Produit /cm3 uni d'ani- sur- péri valeur % P l'activité de et dose que maux vécu absolue la dose infectante en mg/kg 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 50 25 3 22 46/250 18,4 > 0,05 faiblement active 100 40 15 25 174/400 43,5 150 35 24 11 247/350 70,6 idem Active PhCP 62,5 200 40 24 16 245/400 61,2 " Active 300 35 21 14 228/350 65,1 " Active 400 35 21 14 216/350 61,7 " Active 50 40 21 19 230/400 57,5 0,001 Active 100 30 21 9 221/300 73,6 " Active 150 30 25 5 254/300 84,7 " Hautement active Staph.Méthiaureus 18 cilline 1,56 200 5 3 2 44/50 88 " Hauptment active 300 10 9 1 91/100 91 " hautement active 400 5 4 1 41/50 82 " hautement active 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 50 20 1 19 10/200 5 > 0,1 Inac tive 100 20 0 20 1/200 0,5 > 0,1 " Benzylpénicilline 2000 150 25 0 25 3/250 1,2 > 0,1 " 200 25 0 25 3/250 1,2 > 0,1 " 300 30 4 26 49/300 16,3 > 0,1 " 400 25 9 16 98/250 39,2 ment active Témoin - 55 5 50 74/550 13,4 - DE50 de PhCP 123,1 (99,3#152,6) DE50 de mérhicilline - 50,1 (37,4#67,1). Ainsi qu'il ressort du tableau VI, la benzylpénicilline n'exerce pas d'effet thérapeutique, même à des doses élevées. Pendant le traitement par la PhCP ainsi que par la méthicilline, on observe un bon effet thérapeutique donnant dans certains cas jusqu'à 70% de survie des animaux infectés. La dose maximum curative de la PhCP est de 150 mg/kg. L'augmentation ultérieure de la dose ne renforce pas l'effet thérapeutique. Ia dose de PhCP prévenant la mort de 50% des animaux (DE50) est d'environ 2,5 fois supérieure à celle de la méthicilline, ce qui est statistiquement vrai. Dans le cas de la staphyloccie spetique provoquée par un autre staphylocoque résistant à la pénicillinase (souche 1), l'effet thérapeutique de la PhCP dépasse celui de la méthicilline (Tableau VII). Tableau VII Micro- Produit CMB, Dose Nombre ont ont Durée de vie totale Evaluation organisme m/cm3 unique d'ani- sur- péri d'animaux de l'activité et dose en maux vécu valeur de la dose infectante mg/kg absolue % P 50 15 5 10 54/150 36 > 0,1 faiblement active 100 15 8 7 83/150 55,5 PhCP 62,5 200 15 5 10 60/150 40 > 0,05 active 400 15 10 5 116/150 77,3 500 5 4 1 40/50 80 > 0,001 active 50 15 3 12 44/150 29,3 > 0,1 faiblement active 100 15 6 9 61/150 40,6 Staph.Méthicilaureus 1 line 3,12 200 15 6 9 68/150 45,3 400 15 8 7 91/150 60,7 0,1 faiblement active de corps 100 10 2 8 20/100 20 > 0,1 faiblement bactériens active Benzylpéni cilline 1000 200 10 2 8 35/100 35 > 0,1 faiblement active 400 10 2 8 41/100 41 > 0,05 active Témoin - 15 4 1 43/150 22,6 Ia DE50 de la PhCP est de 97,5 (60,9 . 156) Ia DE50 de la méthicilline est de 251,2 (207,6 @ 303,9). La DE50 de la PhCP est de 2,5 fois inférieure à celle de la méthicilline, ce qui est attesté par les statistiques. La PhCP est également active pour le traitement des souris infectées par la souche 70 fraîchement isolée et résistante à la pénicillinase (Tableau VIII). Tableau VIII Micro- Produit CMB, Dose Nombre Ont Ont Durée de vie totale Evaluation de organisme m/kg unique d'ani- sur- péri d'animaux l'activité de et dose mg/kg maux vécu valeur % P la dose infectante absolue 100 5 2 3 23/50 45 100 15 7 8 82/150 54,7 " active PhCP 62,5 200 15 5 10 66/150 44 " active 400 10 8 2 80/150 80 " active 500 5 3 2 34/50 68 " active Stap. aureus 50 5 0 5 2/50 4 > 0,1 inactive 70, 800 mil- 100 5 2 3 26/50 52 line active Benzylpé- 1000 150 10 0 10 10/100 10 > 0,1 inactive nicilline 300 10 6 4 63/100 63 Témoin - 15 0 15 5/150 3,3 La PhCP conserve son effet thérapeutique lors de l'administration per os. En effet, la PhCP administrée per os à des doses de 300 à 600 mg/kg est hautement active.Des doses inférieures exercent également une action curative (tableau IX) Tableau IX Micro- Produit CMB, Dose Nombre Ont Ont Durée de vie totale Evaluation de organisme m/kg unique d'ani- sur- péri d'animaux l'activité de et dose en maux vécu valeur % P la dose infectante mg/kg absolue 50 10 5 5 54/85 63,5 150 15 7 8 81/125 64,8 " active PhCP 125 300 15 13 2 113/125 90,4 " hautement active 500 15 13 2 112/125 88,8 " hautement active 600 10 9 1 78/85 91,7 " active 800 millions 50 10 7 3 64/85 75,2 300 10 7 3 66/85 77,6 " active Benzylpé nicilline 1000 500 10 6 4 66/85 76,4 " active Témoin 15 2 13 25/125 20 - Lors de l'administration par voie sous-cutanée, la PhCP est efficace vis-à-vis de cette souche à des doses inférieures à celles administrées per os (Tableau X) Tableau X Micro- Produit CMB, Dose Nombre ont ont Durée de vie totale Evaluation de organisme mg/kg unique d'ani- sur- péri d'animaux l'activité de la et dose en maux vécu valeur % P dose infectante mg/kg absolue 50 10 8 2 78/85 91,7 150 15 11 4 106/125 84,8 " " PhCP 125 300 15 12 3 112/125 88,8 " " 500 15 5 5 61/85 71,7 " " Stap. 100 10 6 4 55/85 64/7 150 10 5 5 59/85 69,4 Benzylpé- 1000 300 10 7 3 76/85 89,4 " hautement active nicilline 400 10 2 8 42/85 49,4 " active Témoin 15 2 13 25/125 20 - L'étude de l'effet thérapeutique de la PhCP au cours du traitement de lastaphylococcie provoquée par une souche de staphylocoque sensible à la benzylpénicilline (souche 4-0) a montré que la pénicilline essayée est aussi hautement active que la benzylpénicilline (Tableau XI). Tableau XI Micro- Produit CMB, Dose Nombre ont ont Durée de vie totale Evaluation de organisme mg/kg unique d'ani- sur- péri d'animaux l'activité de la et dose mg/kg maux vécu valeur % P dose infectante absolue 50 15 12 3 131/150 87,3 PhCP 0,024 150 15 10 5 107/150 71,3 " " Stap. 300 15 11 4 121/150 80,6 " " aureus 4-0, 800 millions 50 15 7 8 92/150 61,3 300 10 8 2 88/100 88 " hautement active 50 15 5 10 106/150 70,6 Benzylpé- 0,024 150 15 10 5 122/150 81,3 " hautement active nicilline 300 10 5 5 67/100 63 " active Témoin - - 15 0 15 0/150 - - Résorption et localisation la dynamique de répartition de la PhCP dans le sérum sanguin, les organes et les tissus a été déterminée par la mathode de diffusion en agar avec la test-culture de Staph. aureus 209 p. Les essais ont porté sur des rats bâtards pesant de 160 à 200 grammes. la PhCP a été introduite chez les animaux testés à une dose de 64 mg/kg par voie sous-cutanée et intramusculaire. la teneur en PECP du liquide surnageant obtenu après centrifugation des homogénats d'organes et de sérum sanguin a été exprimée en unités par millilitre ou par gramme. Les résultats sont représentés dans le tableau XII. Tableau XII Désigna- 10 30 1 2 4 tion minutes minutes heure heures heures Sang 28,5+3,45 13,8+0,9 5,4+0,82 4,5+1,65 0 Cerveau 5,0+2,83 1,3+1,3 0,53+0,53 0,38+0,38 1,09+1,09 Coeur 14,4+2,14 6,0+3,05 2,6+0,35 1,1+1,2 1,06+1,06 Poumons 14,5+2,75 9,4+1,61 1,6+0,63 0,6+0,58 0,92+0,92 Foie 3,3+0,72 4,1+0,72 1,5+0,91 0,44+0,4 0 Reins 19,3+4,14 20,4+1,89 3,7+0,87 1,9+0,80 0 Rate 7+0,83 1,9+0,75 4,4+2,25 2,5+1,23 1,04+1,04 Les données du tableau XII montrent que la PhCP est rapidement résorbée à partir des endroits d'introduction et se retrouve au bout de 10 minutes dans le sérum et les organes. Ia concentration maximale de PhCP a été déterminée au bout de 10 minutes lorsque le taux du produit révélé après l'injection intramusculaire a atteint 28,5 unités/millilitre. le taux sanguin du produit diminue au bout de 30 minutes à 48,5%, au bout de 2 heures il est de 16,4% de la quantité maximum. Quatre heures après l'injection, la présence de PhCP n'est pas observée dans le sérum sanguin. Les résultats de la détermination de la concentration de PhCP dans les organes ont montré que la quantité maximum s'est accumulé dans les reins. Le gradient de concentration pour les reins, calculé 30 minutes après l'introduction du produit, est de 147,70. Ce fait montre que les reins sont les organes principaux de l'excrétion pour la pénicilline essayée. Le fait que la présence de PhCP soit observée dans le tissu du cerveau mérite de retenir l'attention. Ia quantité maximum se révèle au bout de 10 minutes et est égale à 5 unités/gramme. Comme il fallait s'y attendre, l'administration de la PhCP par voie sous-cutanée ne change pas la dynamique de localisation de la PhCP dans les organes et le sérum sanguin. Dans ce cas, la concentration de PhCP dans le tissu du cerveau est moindre qu'après l'injection intramusculaire. Détermination de la toxicité "chronique" L'essai a été réalisé sur 11 lapins pesant de 1,37 à 2,5 kg la PhCP étant administrée par voie intramusculaire à des doses de 30 mg/kg (4 lapins) et 100 mg/kg (3 lapins) quotidiennement pendant 29 jours. Quatre lapins de contrôle ont reçu le soluté physiologique. Avant l'administration de la k'hCP et au cours du traitement, le poids et la température des animaux ont été enregistrés, des analyses du sang et i l'urine ont été réalisées, l'état général des animaux était noté. L'analyse du sang a porté sur la détermination du taux d'hémoglobine, du nombre d'érythrqcytes-et de leucocytes de la réaction de sédimentation des érythrocytes (RSE) et de la leucoformule. On a déterminé dans l'urine la présence de protéine, d'urobilines, de bilirubine, de sang, de sucre. Modifications dans le comportement et le poids des animaux Il n'y a pas eu, pendant tout l'essai, de modifications visibles quelconques dans le comportement et l'état général des lapins recevant la PhCP. L'administration de la PhCP à des doses de 30 et 100 mg/kg pendant plusieurs jours n'a pas exercé d'influence notable sur le poids des animaux. Au bout de l'essai un gain de poids à raison de 240 à 300 gramme a été noté tant dans le groupe témoin que dans les groupes testés (Tableau XIII). Tableau XIII Groupe Traitement Avant Au cours du traitement (jours) de le 7 20 2 lapins traite ment PhCP 1,937 2,055 2,235 2,24 30 mg/kg (1,42 2,45) (1,533 (1,661 (1,75# 2,537 2,809) 2,728) PhCP 1,777 1,730 2,04 2,017 II 100mg/kg (0,664 (0,806 (1,27 (1,135 2,89) 2,65) 2,809) 2,898) Soluté 2,0625 2,12 2,337 2,36 physio- (1,472 (1,712 (1,54 (1,725 logique 2,651) 2,527) 2,12) 2,995) Modification de la température. La PhCP n'a exercé aucune influence sur la température du corps. De faibles variations identiques de la température ont été observées dans les groupes testés et les témoins par rapport à la température initiale (+ 0,140,3 C) (Tableau XIV). Tableau XIV Groupe fraitement Avant le Au coure du traitement de traitement (jours) lapin. 10 20 28 PhCP 39,625 39,725 39,6 39,475 I 30 mg/kg (39,23 (39,57 (39,13 (38,875 40,01) 39,377) (40,06) (40,07) PhCP 39,6 39,5 39,94 39,8 II 100 mg/kg (39,1 (39,26 (39,42 (39,15 (40,09) (39,74) 40,457) 40,45) III soluté 39,425 39,45 39,57 39,275 physiologique (39,224; (39,26; (39,09; (39,175; 39,626) 39,64) 40,05) 39,375) Note : Entre parenthèses sont indiquées les limites pour P = 0,05 Modification de l'image sanguine L'administration de la PhCP pendant plusieurs jours à des doses de 30 et 100 mg/kg n'exerce aucune influence importante sur la teneur en hémoglobine, en érythrocytes et sur l'indice calorimétrique.On doit toutefois noter que le nombre d'hémoglobine et le nombre d'érythrocytes chez 5 des 8 lapins essayés augmente graduellement, mais se trouve dans des limites admissibles pour les lapins normaux. Chez deux des lapins témoins on a également constaté une augmentation du nombre d'érythrocytes. Chez l'un des lapins essayés le nombre d'hémoglobine et d'érythrocytes était relativement bas en comparaison de celui de l'étude initiale, mais il se trouvait dans des limites inférieures à la norme. Des variations notables du c8té des leucocytes ou de la leucopénie n'ont pas été observées. L'accélération de laRSE n'a eu lieu chez aucun des lapins essayés. Aucune lymphocytose modérée et aucune neutrophilie n'ont été observées dans un prélèvement quelconque. On n'a observé aucune augmentation du nombre de leucocytes à noyaux en forme de ruban, de neutrophiles éosinophiles et de monocytes ou basophiles. On n'a également trouvé de myélocytes et de formes juvéniles de neutrophiles dans aucun des prélèvements. Dansaxsn prélèvement on n'a observé d'anisocytose, de poiXilocytose, de cellules d'irritation de Tffrk, de cellules de Humbrecht. Des tronbocytes ont été trouvées dans tous les prélèvement. Leur nombre n1a pas subi de variations considérable et est resté dans des limites de la norme. Les résultats sont représentés dans les Tableaux XV et XVI. Tableau XV Lapin Traitement Teneur en hémoglobine (%) Nombre d'érythrocytes (millions) N Avant Au cours du traite- Avant Au cours du traitement (jours) le ment (jours) le trai- trai tement 9 20 27 tement 9 20 27 1 PhCP 30 mg/kg 52,8 56,4 60,8 67,2 3,87 3,99 5,06 5,0 2 64,8 64,8 63,6 72,0 4,78 4,64 4,71 5,65 3 52,8 55,2 62,4 72,0 3,66 3,8 3,19 4,51 4 60,0 60,0 58,8 68,4 3,23 4,26 4,94 4,82 5 PhCP 100 mg/kg 64,8 54,0 62,4 68,4 4,75 4,66 3,87 5,14 6 78,0 69,6 64,8 73,2 4,51 4,12 5,12 5,43 7 84,0 68,4 64,8 67,2 5,76 4,61 4,05 3,97 8 Soluté 71,4 70,8 62,4 67,2 3,16 4,8 4,25 4,72 9 physiologique 64,8 68,4 70,8 67,2 3,88 4,95 4,22 5,16 10 51,6 56,4 62,4 64,8 3,2 2,75 4,00 3,49 11 60,0 69,6 63,6 67,2 4,03 3,49 4,15 4,11 Suite de tableau XV Nombre d'leucocytes (milliers) RSE (mn/h) Avant le Au cours du traitement (jours) Avant le Au cours du traitement (jours) traitement 9 20 27 traitement 9 20 27 12,6 11,2 7,2 8,2 2,0 2,0 2,0 1,0 10,0 15,8 12,4 13,8 6,0 2,0 1,0 1,0 9,2 8,4 5,6 14,6 1,0 1,0 1,0 4,0 9,0 9,2 11,4 12,2 2,0 2,0 3,0 2,0 11,4 13,2 4,8 9,6 2,0 1,5 2,0 2,0 8,4 11,4 15,0 13,8 2,0 1,0 2,0 4,0 10,0 11,0 11,8 13,8 1,0 2,0 1,0 1,0 11,2 10,6 14,4 11,6 1,0 2,0 1,0 1,0 10,6 8,4 4,8 10,4 2,0 4,0 1,5 2,0 12,6 11,6 11,6 14,8 3,0 4,0 1,0 4,0 12,0 8,0 8,2 9,4 2,0 4,0 1,0 1,0 Tableau XVI Lapin Traitement A noyaux en forme de ruban A noyaux segmentés N Avant le Au cours du traitement Avant le Au cours du traitement traitement (jours) traitement (jours) 9 20 27 9 20 27 1 0,5 0 0 0 63,5 33 67 41 2 1,0 0 1,0 0 67,5 22 28 20 3 PhCP 30 mg/kg 0 1,0 0,5 1,0 38,0 23 37 55 4 2,0 0 2,0 0 43,0 39 34 63 5 0 2,0 2,0 0 29,5 68 72 64 6 PhCP 100 mg/kg 0,5 0,5 1,0 2,0 45,5 31,5 58 47 7 0 0 0 0 55,5 34 50 61 8 1,0 1,5 0 0 69,5 59,5 38 45 9 Soluté 0 0 0 0 30,0 57 41 56 10 physicologique 1,0 0,2 2,0 0 44,0 53 36 60 11 2,0 1,0 1,0 1,0 57 48 48 56 Suite de tableau XVI Eesinophiles Monocytes Lymphocytes Avant le Au cours du traitement Avant le Au cours du traitement Avant le Au cours du traitement traitement (jours) traitement (jours) traitement traitement (jours) 9 20 27 9 20 27 9 20 27 1,5 1,0 0 1,0 1,0 7 2 5 33,5 59 31 53 0 1,0 0 0 1,0 7 1 10 30,5 70 70 70 2 1,0 0,5 1 2,0 7 0,5 5 58 68 68 38 0 0 0 2 4,0 1,0 3 3 51 60 60 32 0,5 2,5 0 0 0,5 0 0 1 69,5 27,5 28 35 1,0 1,5 0 2 1,0 3 7 6 52 63,5 34 43 1,0 0 1 1 1,0 9 10 5 42,5 57 39 33 2 0 1 3 1,5 6 1 3 26 32,5 56 49 1 1 0 0 2,5 7,5 2 0,5 65,5 34,5 57 43,5 3 0 1 0 8 3 4 6 44 44 57 34 4 1 1 2 5 2 9 3 3 48 41 38 Le produit étudié (PhCP) n'exerce pas d'action toxique sur le système hématopoïétique. Analyse de l'urine. Pendant l'administration de la PhCP à des doses de 30 et 100 mg/kg l'urobiline et la bilirubine ne se sont pas révélées dans l'urine. Dans aucun cas on n'a observé la présence de sang dans l'urine. Dans certains cas, des basses concentrations de protéine et de sucre ont été trouvées tant dans les groupes essayés que dans le groupe témoin, à raison de 0,03 à 0,5% respectivement. Létalité. Aucune mortalité n'a été observée chez le lapin pendant le traitement par la PhCP à des doses de 30 et 100 mg/kg. Le 30 ou le 31ème jour tous les animaux ont été sacrifiés et leurs organes ont été remis à l'étude pathomorphologique. Détermination de l'action irritante locale La PhCP a été administré chez 2 cobayes et 1 lapin (albinos) par voie sous-cutanée à des doses de 0,25 et 0,5 cm3 sous la forme d'une solution à 3,5% 7% et 17,5,'. A titre de comparaison on a administré simultanément les mimes volumes de soluté physiologique. Après l'introduction de la PhCP chez les cobayes et chez le lapin en concentrations indiquées, aucunes modifications visibles dans les endroits de l'introduction n'ont été notées au bout de 24, 48 et 72 heures. Ia préparation de la 1- phénylcyclopentyl - 1 pénicilline a été mise en oeuvre selon la méthode suivante. On ajoutez pendant 1 heure, une solution de 21,6 g (0,1 mole) d'acide 6 - aminopénicillanique et de 25 g de bicarbonate de sodium dans un mélange de 450 em3 d'eau et 200 cm3 d'acétone à une solution de 20,8 g (0,1 mole) de chloranhydride d'acide phénylcyclopentane - 1 - carbonique dans 200 cm3 d'acétone absolue, sous agitation et refroidissement jusqu'à 00. On agite de nouveau le mage réactionnel pendant 1 heure sous refroidissement et pendant 4 heures à la température ambiante, on extrait ensuite deux fois à l'éther. On rejette l'extrait éthéré, on refroidit la couche aqueuse jusqu'à 5-7 , on ajoute 100 cm3 d'éther et on acidifie sous agitation par une solution 1N d'acide chlorhydrique, jsqu'à pH = 2,0. On sépare la couche éthérée, on extrait supplémentairement la couche aqueuse acidulée par l'éther. On lave les extraits éthérés réunis à l'eau glacée et on secoue en présence de sulfate de sodium anhydre. On reprend la pénicilline à partir de l'extrait éthéré par addition fractionnée d'une solution aqueuse à 8% de bicarbonate de sodium jusqu'à pH = 6,5-7 dans la couche aqueuse. On sépare cette dernière, on extrait par l'éther et on soumet au séchage par lyophilisation. On dissout le résidu cristallin dans l'éther absolu. Ige rendement en sel de sodium est de 29,7 à 72,5 du rendement théorique. Une faible quantité de sel sodique passe en acide pénicillanique, le point de fusion étant de 114 à 116 C. Pendant le traitement de la solution éthérée par le bicarbonate de potassium on obtient le produit sous forme d'un sel de potassium. I1 s'ensuit de ce qui précède que la 1 - phénylcyclopentyl - 1 - pénicilline (Ph & est une pénicilline semisynthétique pénicillinaso-résistante et acido-résistante, active à l'égard des staphylocoques gram-posififs, résistants et sensibles à la benzylpénicilline. Elle possède un pouvoir d'induction moindre que la mithicilline. Elle se résorbe bien des endroits de l'in',roduction, en pénétrant dans tous les tissus et organes. Elle manifeste une action curative sur la staphylococcie expérimentale provoquée par les staphylocoques résistants à la benzylpénicilline par voie intra-musculaire et per os. L'administration de la PhCP pendant plusieurs jours à des doses de 30 et 100 mg/kg n'a pas provoqué de modifications de poids et de température chez les animaux, on n'a pas observé d'écarts phatologiques dans le sang et dans l'urine. Les organes n'ont en outre manifesté aucune modification pathomorphologique. Bien entendu, l'invention n'est nullement limitée aux modes de réalisation décrits et représentés qui n'ont été donnés qu'à titre d'exemple. En particulier, elle comprend tous les moyens constituant des équivalents techniques des moyens décrits ainsi que leurs combinaisons, si celles-ci sont exécutées suivant son esprit et mises en oeuvre dans le cadre des revendications qui suivent. REVENDICATIONS 1. Préparation médicamenteuse à action antibactérienne, caractérisée en ce qu'elle contient en tant que principe actif une quantité thérapeutiquement effective de 1 -phénylcyclopentyl - 1 - pénicilline sous la forme d'un sel de métal alcalin, ou bien dudit principe actif en association avec un excipient pharmaceutique. 2. Préparation médicamenteuse à action antibactérienne suivant la revendication 1, caractérisée en ce qu'en tant qu'excipient pharmaceutique il contient un solvant pharmaceutique. 3. Préparation médicamenteuse suivant la revendication 2, caractérisée en ce que ledit solvant pharmaceutique est de l'eau distillée ou un soluté physiologique. 4. Préparation médicamenteuse suivant la revendication 3, caractérisée en ce que la concentration de la solution en principe actif est de 25 à 50% en poids pour les injections.