Brevet FR2307817A1 — publié le 19761112

La présente invention concerne une isomérase insoluble du glucose, et plus particulièrement une isomérase du glucose, reliée par adsorption sur une résine échangeuse d'ions,le produit étant sous forme insoluble. On sait déjà que le glucose est converti en fructose par l'isomérase du glucose, qui est une enzyme pouvant convertir le glucose en fructose et inversement. De telles isomérases ont été observées dans de nombreux microorganismes, comprenant les suivants Streptomyces flavovirens, Streptomyces achromogenes, Streptomyces echinatus, Streptomyces Albus, Aerobacter cloacae,Bacillus megaterium, cetobacter suboxydans, Bacillus fructose et Lactobacillus fermenti, et, dans des buts pratiques, une enzyme obtenue à partir des Streptomyces.L'isomérase du glucose est soluble dans liteau et par conséquent, lorsque la conversion du glucose en fructose est entreprise enzymatiquement, il est pratique que cette enzyme soit soumise à un traitement approprié pour obtenir une isomérase insoluble du glucose, pouvant éventuellement être utilisée comme un catalyseur sous forme solide. Divers procédés pour un tel traitement ont déjà été proposés.Par exemple, on traite, à une température spécifiée, des cellules mocrobiennes, contenant de l'isomérase du glucose, pour effectuer une fixation intracellulaire de l'isomérase, comme cela est révélé dans le brevet américain ni694314, l'isomérase du glucose isolée des cellules, est adsorbée sur un échangeur d'anions comme "DEAE-Sephadex"tJournal de la Société "Japan Foodstuff Industry"14-12 p.539 & 40(1967) "3et "DEAE-cellulose" (Brevet américain n03708397).Cependant, ces procédés mettent en cause les inconvénients inhérents tels que les suivants : l'isomérase insoluble du glucose selon le premier procédé nécessite un temps important pour effectuer la conversion du glucose en fructose, et la solution du produit est fortement colorée, ce qui nécessite un traitement compliqué d'épuration et de décoloration, ainsi ce procédé est désavantageux commercialement. Par ailleurs, dans le dernier procédé, le "DEAE-Sephadex" et la "DEAE-cellulose", sont des supports insolubles, mais gonflent dans l'eau pour devenir plus volumineux, ainsi, non seulement l'adsorption d'isomérase par unité de volume du support est plus faible, mais cela produit de plus une chute de pression importante pendant le passage de la solution de glucose dans une colonne garnie; ainsi, ce procédé est également désavantageux. Une autre tentative consiste à utiliser une résine synthétique échangeuse d'anions, comme support, sur lequel l'isomérase du glucose est adsorbée, pour devenir insoluble, par exemple, on révèle, dans le brevet américain n03788945, une résine poreuse échangeuse d'anions, comme l'Amberlite IRA938, sur laquelle est adsorbée une isomérase du glucose, par laquelle le glucose est isomérisé. Bien qu'une résine échangeuse d'ions ait moins tendance à gonfler dans lteau,cependant, si on l'utilise comme support de l'isomérase, on peut s'attendre à ce que la réaction d'isomérisation soit effet tuée. Cependant, la quantité d'isomérase à adsorber sur une résine échangeuse d'ions classique, est faible, et le degré de rétention d'isomérase sur la résine est faible. On peut donc en conclure que le procédé selon l'art antérieur par lequel l'isomérase est rendue insoluble par l'adsorption, sur une résine échangeuse d'ions, n'est pas satisfaisant dans des buts commerciaux. En conséquence, c'est un objet de la présente invention de procurer une isomérase insolite du glucose, adsorbée et liée à une résine échangeuse d'ions, cette isomérase insoluble ayant un cer tailn nombre d'avantages par exemple (1) la résine échangeuse d'ions en adsorbe plus, (2) l'activité enzymatique du produit, pendant l'isomérisation, est plus élevée, (3) la résistance à l'écrasement et à la déformation est plus forte et (4) il y a moins de perte de pression tandis que la solution de glucose traverse la colonne contenant l'isomérase insoluble. Un autre objet de la présente invention est de créer une isomérase insoluble du glucose, se composant d'une isomérase adsorbée et liée sur une résine poreuse échangeuse d'anions, ayant une porosité supérieure à 4,5% , en particulier de 7 à 50% et de préférence de 7 à 20%, mesurée selon le procédé de la solution aqueuse de dextrane, et une capacité d'échange d'ions supérieure à 0,035 à 0,3 mt/ml de résine et de préférence supérieure à 0,05 meq/ml de résine, en particulier entre 0,05 et 0,1 meÇ2/ml de résine, en mesurant selon le procédé de décomposition d'un sel polyanionique. Les procédures pour effectuer le procédé de solution aqueuse de dextrane, et le procédé de décomposition d'un sel polyanionique, indiquées dans la spécification, sont définies ci-dessous. L'invention sera mieux comprise et d'autres buts, caractéristiques, détails et avantages de celle-ci apparaîtront mieux au cours de la description explicative qui va suivre en se reportant au dessin schématique annexé donné uniquement à titre d'exemple illustrant un mode de réalisation de l'invention dans lequel - la figure unique donne des courbes obtenues par le procédé en solution aqueuse de dextrane. Procédé de solution aqueuse de dextrane On introduit, dans une colonne à double paroi ayant 11 mm de diamètre interne, 67 ml d'une résine échangeuse d'anions du type St)4 ayant un taux de porosité de 33% à l'état humide, pour former un lit de résine maintenu à une température de 50"C, pour enlever toute l'eau en excès; on fait passer, dans le lit de résine, à une vitesse spatiale (SV) de 0,4 h-1 une solution aqueuse à 1,5% en poids de dextrane, ayant pour poids moléculaire moyens 2.000.000, déterminé par un procédé de diffusion à la lumière, et on forme des fractions de 2g des effluents. La concentration de chaque fraction d'effluent est mesurée par un réfractomètre.Les quotients obtenus en divisant le volume de l'effluent (Vf) par le volume du lit de résine (Vb), et les quotients obtenus en divisant la concentration en dextrane de chaque fraction d'effluent (C) par la concentration en dextrane d'origine de 1,5% en poids (Co) sont représentés, respectivement, sur l'axe des abscisses et sur l'axe des ordonnées, pour obtenir une courbe. On répète les mêmes procédures que ci-dessus, en utilisant une solution aqueuse à 1,5% en poids de dextrane, ayant un poids moléculaire moyen de 10.000, déterminé par un procédé de diffusion à la lumière, pour obtenir une courbe. On détermine alors a porosité en divisant, par le facteur de 0,67, la différence entre les valeurs de Vf/Vb, aux points où C/Co est de 0,5 pour chaque solution aqueuse de dextrane, le poids moléculaire étant de 10.000 et 2.000.000; habituellement, la porosité est exprimée par un pourcentage, si bien que la valeur déterminée comme ci-dessus, est multipliée par le facteur de 100. La porosité de la résine selon la présente invention, est mesurée en utilisant une colonne Kiriyama commercialisée par la firme Kyriyama Seisakusho, Japon, du DextraneT2000, ayant pour poids mo léculaire moyen 2.000.000, mesuré par un procédé de diffusion à la lumière, et du DextraneT10 ayant un poids moléculaire moyen de 10.500, mesuré par un procédéde diffusion à la lumière, commercialisés par la firme Pharmacia Fine Chemicals AB, Uppsala, Suède, et un réfractomètre par immersion dans le liquide, du type T commercialisé par la firme Karl Zweiss A.G. En mesurant la porosité de la résine, il faut remarquer que la variation du poids moléculaire de dextrane de i 10% par rapport aux étendues ci-dessus mentionnées, n'affecte pas essentiellement le résultat; plus la distribution de poids moléculaire est étroite, meilleur est le résultat, mais on n'observe pas ou peu d'effet de cette variation de distribution. Procédé de décomposition de sel polyanionique On soumet une quantité donnée de polystyrène ayant un poids moléculaire moyen (Mn) de 10.000,mesuré par un procédé de pression de vapeur, et une valeur inférieure à 1,06 obtenue en divisant un poids moléculaire moyen pondéral mesuré par un procédé de diffusion à la lumière, par un numéro de poids moléculaire moyen, à une sulfonation, avec une quantité de 10 fois en poids d'acide sulfurique à 98t, et de 0,01 fois de sulfate d'argent,comme catalyseur, à une température de 100"C pendant cinq heures. Le produit de réaction est rendu neutre par addition d'ammoniac aqueux, et l'eau est enlevée sous vide pour obtenir un produit solide qui est ensuite extrait avec du méthanol.Le méthanol est enlevé, sous vide, de l'extrait, pour obtenir du poly(stylènesulfonate) d'ammonium. On dissout un gramme de poly(stylènesulfonate) d'ammonium, dans de 1 ' eau déminéralisée pour obtenir 1 litre d'une solution aqueuse. La solution passe pendant cinq heures dans une colonne à double paroi ayantpour-diaitrefnterne 8mmet garnie de 10 ml d'une résine échangeuse d'anions du type OH, maintenue à une température de 25"C à un débit de 100 ml/h. L'effluent de la colonne, en une quantité de 500 ml, est titré avec de l'acide chlorhydrique 1/10N, en utilisant comme indicateur du méthylorange. Le quotient obtenu en divisant la quantité d'acide chlorhydrique requis, pour la titration (ml), par le facteur 100, est la capacité d'échange d'ions (meq/ml de résine). La résine employée pour mesurer la capacité d'échange d'ions, est 'D1ono-Disperse polystyrène Standard (Mw=10.000 et Mw/Mn Bien que le mécanisme par lequel l'isomérase du glucose est adsorbée sur une résine échangeuse d'ions macroporeuse, et la fa çon dont l'activité enzymique est conservée, n'ont pas été clarifiés en détail, on pense qu'il y a une adsorption physique dans les macropores de la résine, et une certaine force de liaison chimique entre les groupes échangeurs d'anions et l'enzyme employée, qui donne un effet synergistique. Cela semble être vrai, car l'isomérase du glucose est à peine adsorbée sur une résine échangeuse d'ions classique du type gel qui n'a pas de macropores, et par ailleurs, une résine qui a des macropores mais n'a pas de groupe échangeur d'ions, ne peut adsorber qu'une faible quantité d'enzymeD, et l'activité de l'enzyme est également faible.Ainsi, on pense que la quantité d'isomérase de glucose adsorbée sur une résine échangeuse d'anions, et le degré de conservation d'activité de l'isomérase adsorbée, dépendent du volume de macropores qui déterminent l'adsorption de l'isomérase et le nombre de groupes échangeurs d' ions dans les macropores. La porosité mesurée par la solution aqueuse de dextrane correspond au volume total de macropores, ayant une dimension spécifiée dans laquelle du dextrane ayant pour poids moléculaire Mw de 10,000 peut passer, mais du dextrane ayant pour poids moléculaire Mw de 2.000.000 ne peut pas passeur, et cette porosité est en très proche relation avec la quantité d'isomérase de glucose pouvant être asorbée sur la résine échangeuse d'ions, par conséquent, on pense que l'adsorption de l'isomérase de glucose se produira ou du moins se produira principalement dans ces macropores de dimension spécifiée. On pense de plus que la capacité d'échange d'ions mesurée selon le procédé de décomposition de sel polyanionique correspond à la capacité d'échange d'ions sur les surfaces complètes de ces macropores spécifiques. Une résine échangeuse d'anions classique , préparée en copolymérisant un monomère vinylique, comme le styrène, avec un monomè- re réticulable, comme le divinylbenzène, puis en introduisant un groupe échangeur d'anions, a quelques micropores et par conséquent, on pense qutun polymère ne peut venir en contact qu'avec la surface externe, mais pas avec la surface interne des micropores. De ce point de vue, la porosité et la capacité d'échange d'ions spécifiées ci-dessus, d'une telle résine échangeuse d'anions classique, qui est du type en gel, sont bien moindres que celles de la résine selon la présente invention. Au contraire, la résine échangeuse d'anions employée selon la présente invention, est une résine macroporeuse, et a une surface effective interne importante. Une telle résine échangeuse d'anions macroporeuse, est préparée de façon pratique par tous procédés déjà connus, par exemple, on copolymèrise un monomère monovinylique et un monomère réticulable,en présence de tous matériaux pouvant être enlevés par un solvant, et qui ne prend pas part à la réaction comme le polytstyrène, à la fin de la polymérisation, la résine obtenue est traitée avec un solvant pour extraire le matériau, ctest-à-dire le polystyrène, puis on introduit le groupe échangeur d'anions.La résine échangeuse d'anions ainsi produite a, en général, des macropores dont le rayon est situé entre 101 et 104Angstroms ( ). Cependant, on notera que parmi les pores, les pores plus petits ne peuvent adsorber l'isomérase de glucose, tandis que les pores bien plus grands, dont la surface interne est similaire à la surface de la résine échangeuse d'anions du type gel, ne prennent pas non plus part à l'adsorption. Cela est vrai car une certaine résine échangeuse d'anions, dont la porosité,mesurée par un procédé de pénétration de mercure, est assez élevée, n'indique pas nécessairement une capacité plus importante d'adsorption de l'isomérase. En général, bien que la dimension des pores et le volume total des pores des macropores dans une résine échangeuse d'anions, puissent varier selon les conditions dans lesquelles la résine est préparée, comme la quantité du monomère réticulable et la quantité et le poids moléculaire d'un polymère qui est ajouté initialement dans le mélange de polymérisation, il est difficile de déterminer la relation définie de la dimension des pores et du volume total des pores avec les conditions de préparation. Il est souhaitable de choisir des conditions optimales dans lesquelles la résine la mieux appropriée est produite,par des pro cédures expérimentales, dans lesquelles diverses résines sont produites, en faisant varier les conditions de préparation, et la porosité et la capacité d'échange d'anions sont mesurées selon les procédés ci-dessus mentionnés. Pour introduire des groupes échangeurs d'anions dans une matrice de résine, il est préférable que la matrice de résine soit soumise à un traitement pour introduire un groupe chlorométhyle puis en traitant avec divers composés d'amine, par exemple, une amine aliphatique comme la triméthylamine, la diméthyléthanolamine, l'éthylènediamine, la diéthylènetriamine et la triéthylènetétramine, et une amine cyclique, comme la pyrrilidine, la morphorine et pipéridine. Cependant il faut remarquer que si l'on emploie une amine basique faible, on observe une tendance à une faible libération de l'isomérase adsorbée de la résine, ainsi il est souhaitable d'utiliser une amine tertiaire, comme la triméthylamine et la diméthyléthanolamine, pour convertir la résine en un type ammonium quaternaire. L'isomérase du glucose, pouvant être employée selon la présente invention, est l'une des isomérases classiques produites dans les cellules d'un actinomycète appartenant aux Streptomyces, corne St. phaeochromogenus,St.fradiae,St.roseochrcanogenes,St. olivaceus wSt californicus St.vinaceus et St.albus ;L'extraction de l-lisomerase de glucose à partir des ceflu- lesmicrobiennespeut être effectuée par tous procédés connus appropries, comme un traitement ultrasonique, un traitement sous pression, un traitement mécanique, une autolyse et par un traitement enzymatique, avec de la lysozyme, en particulier, l'extraction par lysozyme est recommandée car elle donne une extraction plus élevée d'isomérase du glucose à partir de la cellule, un temps d'extraction plus court et une quantité plus faible d'impuretés dans la solution extraite. L'isomérase du glucose est adsorbée sur la résine échangeuse d'ions macroporeuse, par tout procédé classique, employé pour le traitement d'une résine échangeuse d'ions. La façon la plus simple consiste à immerger une résine échangeuse d'anions dans une solution aqueuse d'isomérase de glucose, extraite des cellules microbiennes, pendant une période suffisante pour effectuer l'adsorption de l'isomérase (éventuellement en agitant), puis à laver avec de liteau, cependant, il est préférable de faire passer et de recy cler la solution aqueuse d'isomérase du glucose,vers le haut,à travers ;une colonne garnie d'une résine échangeuse d'anions, pour fluidiser les particules de résine pour effectuer l'adsorption. Selon la présente invention, on peut employer toute condition dans laquelle l'isomérase du glucose n'est pas inactivée re marquablement,en général, à un pH situé entre 5,5 et 9,5, à une température située entre 0 et 600C pendant 2 à 18 heures, lequel temps, cependant, peut varier selon la concentration de la bouillie de résine, la concentration de l'isomérase de glucose et la quantité de la solutiond'isomérase employée. La résine échangeuse d'anions sur laquelle l'isomérase doit être adsorbée peut être de tout type comme un type libre ou un sel et la résine est prétraitée avec une solution aqueuse, par exemple, d'acide sulfurique, d'acide chlorhydrique, d'acide phosphorique et d'acide acétique, pour la convertir en un type sel pouvant effectivement adsorber l'isomérase. La résine échangeuse d'anions selon la présente invention possède une forte capacité d'adsorption de l'isomérase du glucose. La quantité d'isomérase adsorbée sur la résine est supérieure à 400 U, en particulier entre 700 et 3000U, et de préférence de 1000 à 2000U d'isomérase pour 1 ml de la résine humide et dans certains cas plus. En général, plus la quantité d'isomérase adsorbée est importante, plus est élevée l'activité de l'isomérase insoluble, et on observe une tendance à la diminution du degré de liaison de I'isomérase, tandis que la quantité de l'isomérase adsorbée augmente. Par conséquent, la quantité optimale d'isomérase adsorbée est déterminée en considérant le degré de liaison, le degré de conservation d'activité et de durée utile du produit. L'isomérase insoluble du glucose ainsi produite possède un certain nombre d'avantages permettant d'effectuer effectivement l'isomérisation du glucose en fructose sur une base commerciale, par exemple, elle possède une activité plus élevée pour 1 'isomé- risation du glucose, peu ou pas de perte d'activité pendant une longue période de temps, pas de libération appréciable de l'isomérase de la résine de support, et pas ou peu de coloration du produit résultant. L'isomérisation est, de façon pratique, effectuée par un système à lit fixe, mais comme l'isomérase insoluble selon la présente invention, a une forte résistance mécanique, et est facile à séparer d'une bouillie, on peut l'employer dans des systèmes à lit fluidité, des systèmes à lit de transfert, et des systèmesdiscontinus avec agitation. Si l'activité de l'isomérase insoluble du glucose selon la présente invention diminue après une longue utilisation, il est facile de la régénérer en libérant l'isomérase de la résine, par traitement avec une solution aqueuse d'un sel, comme du chlorure de sodium aqueux, puis en adsorbant une isomérase fraîche sur la résine, pour obtenir une isomérase insoluble du glucose sans perte d'activité. L'isomérase selon la présente invention contient une quantité importante d'isomérase adsorbée et reliée à la résine, et elle peut avoir une forte activité, par conséquent, l'utilisation de cette isomérase pour l'isomérisation du glucose donne de noreux avantages parmi lesquels (1) il faut moins de résine échangeuse d'anions pour une quantité donnée de fructose, (2) on obtient un rendement espace/temps plus élevé, (3) étant donné le temps de séjour plus court de la solution de glucose dans la colonne, on obtient une coloration et un abaissement du pH du produit moindres, et (4) la chute de pression dans la colonne est diminuée. Ainsi, l'isomérase insoluble du glucose selon la présente invention peut être utilisée pour la conversion du glucose en fructose. La présente invention sera expliquée en détailensereportant aux exemples suivants, sans en limiter le cadre. Dans les exemples,les titres d'activité de l'isomérase extraite et de l'isomérase insoluble, le degré de conservation de l'activité et le degré d'isomérase liée sont déterminés comme suit: 1. Titre d'activité d'isomérase extraite On mélange 0,2ml d'une solution aqueuse 1M de Glucose, 0,2ml d'une solution aqueuse 0,05M de MgS04.7H20, 0,2ml d'une solution aqueuse tampon de phosphate à 0,5M (pH=7,2), et une solution aqueuse d'isomérase extraite, pour préparer une solution aqueuse qui est diluée avec de l'eau pour obtenir 2ml. Le mélange est maintenu à une température de 70"C pendant 60 minutes, pour effectuer la conversion qui est terminée par l'addition de 2ml d'acide perchlorique 0,5M. La quantité de fructose produite est déterminée par le procédé de cystéine carbazole. La valeur obtenue en divisant la quantité de fructose produite par la quantité de solution d'isomérase extraite, est le titre d'activité dont l'unité est exprimée par la lettre "U". 2. Titre d'activité d'isomérase insoluble A 10 ml d'une solution aqueuse contentant, en concentration, 0,1M de glucose, on ajoute 0,005 M de MgS04.7H20 et 0,05 M de phosphate tampon. On agite lentement une quantité donnée d'uneisoméra- se insoluble et du mélange ainsi obtenu, à une température de 70"C pendant 60 minutes, pour effectuer la conversion. Ensuite, l'isomérase insoluble est séparée de la solution ayant réagi" eut on détermine la quantité de fructose ainsi produit selon le procédé de cystéine carbazole. Le titre d'activité est calculé comme ci-dessus en 1. L'unité "U" signifie la quantité d'isomérase pouvant produire un milligramme de fructose dans les conditions définies. 3. Degré d'isomérase liée On mesure le titre total d'une solution d'isomérase du glucouse, à utiliser pour l'adsorptionstirune résine échangeuse d'anions et cette valeur est désignée par "A". Après adsorption de l'isomérase sur une résine échangeuse d'anions, la résine est séparée par filtration et lavée avec de liteau, puis le titre total du filtrat combiné et de l'eau de lavage est mesuré et cette valeur est désignée par "B". Le degré d'isomérase liée (D.B.G.), est donné par l'équation suivante : A - B DBG = ----- x 100 (t) A 4. Degré de conservation d'activité de l'isomérase insoluble On divise le titre d'activité de l'isomérase insoluble du glucose, mesuré selon 3 ci-dessus, par le titre d'activité de la solution d'isomérase extraite à adsorber sur la résine, et le quotient multiplié par 100 est le degré de conservation d'activité exprimé sous forme d'un pourcentage. Exemples 1 à 12 On met en suspension 100g d'isomérase du glucose "NAGASE", commercialisée par la firme Nagase Sangyo Kabushiki Kaisin , Osaka, Japon, et produite à partir de St. phaeochromogenus, dans 700ml d'eau déminéralisée et, après addition de 80 mg de cristaux de lysozyme de blanc d'oeuf, la suspension est agitée à 400C pendant 45 heures, et centrifugée pour obtenir une solution extraite d'isomérase du glucose. On trouve que le titre d'activité de la solution extraite est de 200 U/ml.Ensuite, on mélange des portions de 50 ml de la solution extraite (le titre total d'activité étant de 10.000 U), avec chaque résine échangeuse d'anions indiquée dans le Tableau 1, dont le volume de lit est de 10 ml en condition hu mi de, et le mélange est agité à 50"C pendant 6 heures pour effectuer l'adsorption de l'isomérase sur la résine, pour obtenir une isomérase insoluble du glucose. Les caractéristiques de l'isomérase insoluble sont également données dans le Tableau 1. Le Tableau 1 traite également des exemples de comparaison indiqués par des lettres. Dans les Exemples 7 et 8 et les Exemples de comparaison A à E, les résines échangeuses d'anions employées sont disponibles dans le commerce. Les résines échangeuses d'anions employées dans les Exemples autres que l'Exemple 4, sont produites par une technique de polymérisation en suspension, en utilisant une suspension de styrène, de divinylbenzène, de polystyrène et de toluène dans l'eau, avec du peroxyde de benzoyle comme catalyseur, puis en soumettant des particules d'un copolymère styrène-divinylbenzène à une chlorométhylation et en introduisant chaque groupe échangeur d'anions indiqué dans le Tableau 1. La résine de l'Exemple 4 est produite en polymérisant un mélange de styrène, de divinylbenzène et de n-heptane, en utilisant du peroxyde de benzoyle comme catalyseur, pour obtenir des par ticules d'un copolymère de styrène-divinylbenzène, puis en chlorométhylant et en introduisant un groupe échangeur d'anions. Les résines des types S04 , P04 , OH-, Cl et CH3COO indiquées dans le Tableau 1, signifient que les résines échangeuses d'anions ont été traitées avec de l'acide sulfurique 2 N, de l'acide phosphorique 1 N, de l'hydroxyde de sodium 2N, de l'acide chlorhydrique 2 N et de l'acide acétique 7N, respectivement. Selon le procédé de solution aqueuse de dextrane, la porosité de la résine échangeuse d'anions employée dans l'Exemple 1 est mesurée. Les courbes montrant les relations entre C/Co et Vf/Vb des dextranes ayant pour poids moléculaire 10.000 et 2.000.000, sont illustrées sur le dessin joint. TABLEAU 1 N d'Exemple Caractéristiques de la résine échangeuse et d'Exemple d'ions de comparaison Degré de Capacité réticula- Groupe échangeur d'anions totale Porosité tion (1) d'échan- (%) ge d'ions (meq/ml) 1 10 Type triméthyl-ammonium 0,79 10,4 2 10 " 0,95 10,0 3 10 " 0,79 19,4 4 15 " 0,57 19,4 5 25 .. 0,67 7,5 6 25 Type diméthyléthanol- 0,60 13,0 ammonium 7 - Type triméthyl-ammonium 1,03 16,4 8 - Type diméthyléthanol - 16,4 ammonium 9 10 Type triméthyl-ammonium 0,79 10,4 10 - " li T, 11 - " " " 12 - " T, A - Type diméthyléthanol- 1,01 8,7 ammonium B - " 0,91 15,7 C - Type triméthyl-ammonium 0,53 0,7 D 8 " > 1,3 E 10 " > 1,3 3,0 Note (1) : Le pourcentage du poids du monomère de divinyle par rapport au poids total du monomère de monovinyle et du monomère de divinyle. Isomérase inso luble du glucose capacité Degré Conservation Note d'échanges Type de de de d'ions matrice Liaison l'activité (meq/ml) (%) (%) 0,074 Type SO42- 99,9 91,0 0,088 " 99,7 92,1 0,039 " 93,7 88,2 0,061 " 99,8 91,5 0,070 " 96,3 91,1 0,096 " 99,9 88,5 0,038 " 46,7 78,9 Amberlite IRA-900 0,042 " 72,3 61,7 Amberlite IRA-93 3 0,074 Type PO43- 99,5 88,0 Type OH 95,0 80,2 Type Cl 100,0 90,3 Type Type CH3COO- 82,4 84,7 0,028 Type S042 O - Amberlite IRA-910 0,027 " O - Amberlite IRA-911 0,034 " 10 45 Amberlite IRA-938 0,028 " O - Diaion SA-n 100 0,030 " 7 - Diaion PA-320 Exemple 13 Une souche produisant de l'isomérase du glucose de Streptomyces albus YT-N 5, qui a été dépos par l'Institut de Recherche de Fermentation du Japon, sous la référence FERM-P-NO 463, est inoculée sur 80 ml d'un milieu de culture se composant d'une solution aqueuse contenant 1% en poids de polypeptone, 0,3 % en poids de K2HP04 > 01 % en poids de MgS04 et 1% en poids de xylose et une culture est effectuée à un pH de 7 et une température de 300C pendant 3 heures.Ensuite, on transfère 25 ml du milieu cultivé, à 50 ml d'un milieu de culture se composant d'une solution aqueuse contenant 3% de son de blé, 2t de solution de trempage de malus, 0,1t de MgS04. 7H20 et 0,0245 en poids de CoCl2.6H20 , et on continue la culture à une température de 30"C pendant 30 heures. Subséquemment, la culture cultivée est centrifugée pour recueillir les cellules dont on extraits après lavage avec de l'eau, de l'isomérase du glucose, selon les procédures de l'Exemple 1. L'isomérase extraite est adsorbée sur la résine de l'Exemple 1, en suivant les procédures de cet Exemple. On trouve que dans 1 'i- somérase insoluble, le degré d'isomérase liée est de 99,25 et la conservation d'activité est de 88,85. Exemple 14 On soumet des cellules de Streptomyces olivaceus à un traitement ultra-sonique à des ondes de 10 kilocycles par seconde pendant 10 minutes, en utilisant un générateur ultra-sonique du Type N-50-3 commercialisé par la Firme Toyo Riko Seisakusho, Tokyo, Japon, pour obtenir une solution dtisomérase extraite. On mélange 100 millilitres de cet extrait, dont le titre total d'activité est de 500 U, à 4 ml de la résine employée dans l'Exemple 4, et le mélange est agité à une température de 500C pendant 15 heures. On trouve que l'isomérase insoluble ainsi obtenue, a un degré d'isomérase liée et une conservation de l'activité de 90% et 87t, respectivement. Exemple 15 On mélange une solution d'isomérase extraite obtenue en suivant les procédures de l'Exemple 1, dont le titre d'activité est de 200 U/ml et dont le volume est de 120ml, à 10 ml de la résine échangeuse d'anions employée dans l'Exemple 3, et on agite à une température de 25"C pendant 6 heures. L'isomérase insoluble ainsi obtenue a un degré d'isomérase liée de 91% et un titre d'activité de 2026 U/ml, sa conservation d'activité etant de 948. Exemple 16 On répète les procédures de l'Exemple 1, à l'exception que l'on mélange 190 ml d'une solution d'isomérase extraite (260 U/ml) et 10 ml de résine, et on agite le mélange à 500C pendant 18 heures. Le degré d'isomérase liée et le titre d'activité de l'isomérase insoluble sont de 95,4% et de 2400 U/ml avec une conservation d'activité de 66,2%. Bien entendu, l'invention n'est nullement limitée aux modes de réalisation décrits et représentés qui n'ont été donnés qu'à titre d'exemple. En particulier, elle comprend tous les moyens constituant des équivalents techniques des moyens décrits ainsi que leurs combinaisons, si celles-ci sont exécutées suivant son esprit et mises en oeuvre dans le cadre des revendications qui suivent. R E V E N D I C A T I O N S 1. Isomerase insoluble du glucose se coriposant d'iso:-oerase du glucose adsorbée et liée sur une résine échanguse d'anions, du type poreux, caractérisée en ce que ladite résine a une porosité supérieure à 4,5 mesurée selon le procédé de solution aqueuse de dextrane, et une capacité d'échange d'ions supérieure à 0,05 meq/ml de résine, mesurée selon le procédé de décomposition de sel yanioniqueO 2 Isomérase selon la revendication 1, caractérisée en ce qu'une isomérase du glucose ayant de 700 à 3000 U/ml de résine est adsorbée sur ladite résine 3.Isomérase selon la revendication 9, caractérisée en ce qu'une isomérase du glucose ayant de 1000 à 2000 U/ml de résine est adsorbée sur ladite résine. 4. Isomérase selon l'une quelconque des revendications pré édentes, caractérisée en ce que la résine échangeuse d'anions précitée a une porosité située entre 7 et 50%. 50 Isomérase selon l'une quelconque des revendications pré cédentes, caractérisée en ce que la résine échangeuse d'anions précitée a une porosité située entre 7 et 20% et une capacité d'échange d'ions située entre 0,05 et 0,1 meq/ml de résine. 6 Isomérase selon l'une quelconque des revendications précédentes, caractérisée en ce que la résine échangeuse d'anions précitée contient un groupe d'ammonium quaternaire comme groupe échangeur d'anions. 7. Isomérase selon l'une quelconque des revendications pré édentes, caractérisée en ce que la matrice de la résine échangeuse d'anions précitée est un copolymère de styrène-divinylbenozène 8. Isomérase selon la revendication 4, caractérisée en ce que le groupe échangeur d'anions précité est du triméthylammonium ou du triméthyléthanol-ammonium. 9. Isomérase insoluble du glucose caractérisée en ce quelle se compose d'isomérase adsorbée et liée sur une résine échangeuse d'anions du type poreux, en une quantité située entre 700 et 3000 U/ml de résine, ladite résine échangeuse d'anions étant une matrice d'un copolymère de styrène-divinylbenzène et d'un groupe èchangeur d'anions di type ammonium quaternaire, et ayn+ une porosité située entre 7 et 50%, mesurée selon le procédé de solution aqueuse de dextrane, et une capacité d'échange d'ions supérieure à 0,05 meq/ml de résine, mesurée sc'or le procédé de décomposition de sel polyanionique. ICc isomérase selon la revendication 9, caractérisée ce que la résine précitée a une porosité située entre 7 et 20% et une capacité d'échange d'ions située entre 0,05 et 0,1 meq/ml de résine, Il Isomérase selon la revendicaton 9, caractz risée er. ce que le groupe d'ammonium quaternaire précité est du type triméthyl-ammonium et ou type diméthyléthanol-ammonium. 12. Procédé pour l'isomérisation de glucose en fructose caractérisé en ce qu'on utilise une isomérase insoluble du glucose selon l'une quelconque des revendications 1 à Il