Brevet FR2306684A1 — publié le 19761105

La présente invention concerne une nouvelle composition immunostimulante et son application pour le traitement des mammifères, y compris lthomme. On a trouvé que la composition selon l'invention possède des propriétés immunostimulantes excellentes lorsqu'elle est administrée par voie orale, nasale, respiratoire, rectale ou parenté- rale. Ainsi, la présente invention a pour objet une composition immunostimulante contenant du propylène-glycol, un agent tensio-actif, de la glycérine, un agent conservateur, un tampon p H et de l'eau. La composition selon l'invention se pressente avantageusement sous la forme liquide ; le propylène-glycol est avantageusement utilisé à une concentration comprise entre 50 et 200 g/l et la glycérine à une concentration comprise entre 200 et 500 g/l. Selon une variante de l'invention, la composition peut contenir en outre de la vitamine A, de la vitamine E ou un mélange de celles-ci. Selon une autre variante, la composition selon l'invention peu également contenir des antigènes, notamment des antigènes vac- cipaux ou microbiens ; dans ce cas, la composition est administrable par une voie quelconque. Une composition particulièrement préférée selon l'invention contient environ 7,5 à 15 g de propylène-glycol, environ 30 g de glycérine, environ 5 à 15 g de dérivés polyoxyéthylénés de radicaux d'acides gras, un agent tampon de p H pour régler le p H de la composition à une valeur comprise entre 4,5 et 6,5, une quantité convenable d'un agent conservateur, le complément à 100 ml étant constitué par de liteau. A titre d'agents conservateurs utilisables dans la composition selon l'invention, on peut citer l'acide sorbique, les produits connus sous les dénominations commerciales "PROGALINE P ou La" (gallate de propyle ou gallate de lauryle). Comme agents tampons de p H,or, peut utiliser, aux fins de l'invention, par exemple le mélange phosphate de sodium/acide citrique La composition préférée ci-dessus peut en outre contenir également de la vitamine A, de la vitamine E, un mélange de celles- ci, ou bien un ou plusieurs antigènes. La composition selon l'invention présente des propriétés immunostimulantes surprenantes : on a constaté qu'elle peut être utilisée à des doses Journalières allant de 0,01 g à 0,5 g par kg de poids du corps humain, ladite composition étant dans ce cas ad ministrée par voie orale, nasale, respiratoire, rectale ou parentale. L'invention va être maintenant décrite plus en détail par les exemples non limitatifs donnés ci-après. EXEMPLE I On a préparé une composition selon l'invention dénommée ciaprès "composition &alpha;" en mélangeant les ingrédients ci-après dans les proportions indiquées dans le tableau I ci-dessous pour 100 ml de composition : TABLEAU I Ingrédients Quantité glycérine 30 g propylène-glycol 9,83 g "Tween 80" * 6,66 g acide sorbique 0,18 g tampon de pH** pour un pH de 5,5 eau qsp 100 ml * "Tween 80" dénomination commerciale d'un dérivé de polyoxyéthy lène de radicaux d'acides gras. le tampon de pH utilisé était un mélange phosphate trisodique/ acide citrique. EXEMPLE II On a préparé une autre composition selon l'invention dénommée ci-après "composition ss" en mélangeant les ingrédients suivants dans les proprotions indiquées dans le tableau II ci-après pour 100 ml de composition TABLEAU II Ingrédients Quantité glycérine 30 g TABLEAU II (suite) Ingrédients Quantité propylène-glycol 9,83 g "Tween 80" 6,66 g acide sorbique 0,18 g Vitamine A 0,33 g tampon de pH * pour un pH de 5 eau qsp 100 ml le tampon de pH utilisé était un mélange phosphate trisodique/ acide citrique. EXEMPLE III On a opéré comme dans l'exemple II en mettant en oeuvre à la place de la vitamine A une quantité égale en poids de vitamine E; cette composition sera dénommée dans la suite de la description "composition &gamma;". EXEMPLE IV On a opéré comme dans l'exemple Il en ajoutant une quantité de vitamine E gale à la quantité de vitamine A de la composition, cette composition sera dénommée dans la suite de la description "composition #". Essais pharmacologiques 1) Protocole d'essais On a testé les compositions selon l'invention en trai tant des souris de souche homogène (race CD de l'élevage Charles RIVER), toutes les souris étant âgées de 3 semaines environ ; seules les femelles ont été utilisées. Les souris ont toutes fait l'objet dune double étude de l'immunité humorale 1) dune part, par l'examen des plaques d'hémolyse selon la technique de JERNE et al tA.A. Plaque forming in agar by simple anti- body producing celle - Science 1963 140,p. 405] 2) d'autre part, par l'étude des anticorps hémagglutinants vis-à- vis des globules rouges de mouton selon une technique bien connue de l'home de l'art. On a testé les compositions a, ss, &gamma; et # préparées selon les exemples I à 4 ci-dessus. Les souris ont été séparées en lots identifiés de la façon suivante - Groupe A1 : les 12 souris du groupe A1 n'ont reçu aucun traite ment ni aucune immunisation. - Groupe Aa 4 les 12 souris du groupe A2 n'ont reçu aucune immu nisation mais ont été traitées pendant 8 jours consécutifs par une injection sous-cutanée de 0,1 ml de la composition # selon l'exemple 4. - Groupe A3 : les 12 souris du groupe A3 n'ont reçu aucune immu nisation mais ont reçu pendant 8 jours consécutifs une injec tion sous-cutanée de 0,1 ml de la composition a selon l'exemple 1. - Groupe B : les 22 souris du groupe B n1 ont reçu aucun traite ment mais ont été immunisées par une injection intra-péritoné ale de 0,5 ml de suspension à 10 % d'hématies de mouton (prove nant de l'institut Pasteur de Paris) en suspension dans du sérum physiologique. Groupe C : les souris du groupe C (27 souris) ont reçu pendant 8 jours consécutifs une injection par voie sous-cutanée de 0,1 ml de la composition &alpha; et au 3ème jour de ce traitement les souris ont été immunisées selon le mode opératoire décrit pour le groupe B ci-dessus. - Groupe F : les souris du groupe F (10 souris) ont reçu pendant 8 jours consécutif s une injection par voie sous-cutanée de 0,1 ml de composition &gamma; et ont été immunisées au 3ème jour de ce traitement selon le mode opératoire décrit pour le groupe B. - Groupe G : les souris du groupe G (10 souris) ont reçu pends 8 jours consécutifs une injection par voie sous-cutané de 0,1 ml de la composition ss et ont été immunisées selon le opératoire que pour les groupes C ou F. Groupe H : les souris du groupe H (18 souris) ont reçu pendant 8 jours consécutifs une injection par voie sous-cutanée de 0,1 ml de la composition ( et ont été immunisées selon le même mode opératoire que les groupes C ou F ou G. On a résumé dans le tableau III les conditions de traitement ci-dessus. TABLEAU III : Groupe : Nombre de : Traitement : Dose jour- : Durée du : Immunisa : : souris : avec : nalière :traitement: tion A1 : 12 : néant : - : - : néant A2 : 12 : composition # : 0,1 ml : 8 jours : néant A3 : 12 : composition &alpha; : 0,1 ml : 8 jours : néant : B : 22 : néant : - : - : oui : C : 27 :composition : 0,1 nil : 8 jours : oui : F : 10 :composition: 0,1 ml : 8 jours : oui G : 10 : composition # : 0,1 ml : 8 jours : oui H : 18 : composition # : 0,1 ml : 8 jours : oui Tous les prélèvements on eu lieu au 5ème jour après l'immunisation : chez les animaux traités avec une composition selon l'invention, les prélèvements ont donc eu lieu 8 jours après le début du traitement. 2. Résultats On a indiqué dans le tableau IV ci-après le nombre de cellules formant des plaques d'hémolyse sur 106 cellules pour chaque souris traitée selon les modes opératoires ci-dessus. Les résultats du tableau IV montrent tout d'abord que les groupes A1 A2 et A3 de souris non traitées constituent un lot homogène sans aucune différence significative dont la moyenne des plaques d'hémolyse est de 22,9 ce qui constitue en quelque sorte le bruit de fond de la méthode. L'immunisation seule (groupe B) dans ces conditions provoque 133,5 plaques d'hémolyse ce qui, déduction faite du bruit de fond, correspond à 110,6 plaques, taux de base moyen de l'immunisation dans les conditions expérimentales utilisées. Avec la composition a (groupe C), on a obtenu un taux moyen de plaques d'hémolyse de 491 > 3 (514,2 plaques d'hémolyse moins les 22,9 plaques du bruit de fond), ce qui correspond à une valeur environ 4,44 fois supérieure à celle obtenue par la seule immunisation (groure B). Avec la composition # (groupe H), on a obtenu un taux moyen de plaques d'hémolyse de 662,4 (645,3 plaques d'hémolyse moins les 22,9 plaques du bruit de fond) , ce qui correspond à une valeur 5,63 fois supérieure au taux de base de l'immunisation (groupe B). Les taux moyens de plaques d'hémolyse obtenus avec les composltions ss et ont été respectivement de Groupe F : 543,2 - 22,9 = 520,3 Groupe G : 567,7 - 22,9 = 544,8 TABLEAU IV NOMBRE DE CELLULES FORMANT DES PLAQUES D'HEMOLYSE SUR 106 CELLULES : Groupe A1 : Groupe A2 : Groupe A3 : Groupe B : Groupe C : Groupe F : Groupe G : Groupe H : : 4 : 9 : 6 : 69 : 227 : 473 : 440 : 473 : : 13 : 11 : 9 : 80 : 323 : 482 : 451 : 495 : : 13 : 12 : 11 : 95 : 345 : 491 : 514 : 510 : : : : : : 353 : : : : : 14 : 13 : 21 : 98 : 372 : 513 : 529 : 513 : : : : : : 385 : : : : : 17 : 13 : 22 : 102 : 425 : 513 : 531 : 525 : : : : : : 454 : : : : : 23 : 16 : 22 : 104 : 466 : 527 : 579 : 526 : : : : : : 481 : : : : : 27 : 19 : 24 : 107 : 482 : 555 : 583 : 548 : : : : : 110 : 491 : : : : : 28 : 20 : 29 : 118 : 491 : 565 : 630 : 588 : : : : : 121 : 501 : : : : : 31 : 20 : 31 : 127 : 503 : 629 : 688 : 655 : : : : : 132 : 510 : : : : : 37 : 21 : 31 : 133 : 512 : 684 : 732 : 671 : : : : : 136 : 514 : : : : : 43 : 40 : 36 : 139 : 530 : : : 676 : : : : : 146 : 539 : : : : : 47 : 51 : 42 : 149 : 565 : : : 685 : : : : : 160 : 574 : : : 689 : : : : : 163 : 633 : : : 703 : : : : : 163 : 722 : : : 742 : : : : : 170 : 750 : : : 781 : : : : : 315 : 823 : : : 893 : : : : : : 862 : : : 942 : REVENDICATIONS à action 1. Composition à action immunostimulante, caracterisée en ce qu'elle continent du propylène-glycol, un agent tensio-actif, de la glycérine, un agent conservateur, un tampon pH et de l'eau. à action 2. Composition à action immunostimulante selon la revendication 1, Ca- ractérisée en ce qu'elle se présente sous forme liquide et en ce que le propylène-glycol est présent à la concentration de 50 à 200 g/l et la glycérine à la concentration de 200 à 500 g/l. 3. Composition à action immunostimulante selon l'une des revendications 1 ou 2, caractérisée en ce qu'elle est administrable par voie orale, nasale, respiratoire, rectale on parentérale. 4. Composition à action immunostimulante selon l'une quelconque des revendications 1 à 3, caractérisée en ce qutelle contient, pour 100 ml de composition, environ: 7,5 à 15 g de propylène-glycol 30 g de glycérine 5 à 15 g d'un dérivé polyoxyéthyléné de radicaux d'acides gras, une quantité efficace d'un agent conservateur, un agent tampon de pH pour obtenir un pR compris entre 4,5 et 6,5 le complément à 100 ml étant constitué par de l'eau. 5. Composition/immunostimulante selon l'une quelconque des revendications 1 à 4, caractérisée en ce qu'elle continent en outre une quantité efficace de vitamine A, de vitamine E ou d'un mélange desdites vitamines. à action 6. Composffltion/immunostimulante selon lune quelconque des revendications 1 à 4, caractérisée en ce qu'elle contient un ou plusieurs antigènes microbiens ou vaccinaux.