Brevet FR2319373A1 — publié le 19770225

La présente invention est relative à un nouveau procédé d'estérification sélective des fonctions alcool primaire de diholosides, ainsi qu'aux produits obtenus en mettant ce procédé en oeuvre et à leurs utilisations en thérapeutique. Les propriétés biologiques de certains esters de diholosides, et notamment du "Cord Factor", glycolipide toxique isolé des souches de mycobactéries et considéré comme un des principaux facteurs tesponsables de la virulence des mycobactéries, et dont la structure a été élucidée par E. LEDERER [cf. Biochim. Biophys. Acta 20, (1956), 299-309 et "FESTSCHRIFT ARTHUR STOLL" (1957) p. 384-3943 comme étant celle du 6,6'dimycolate de tréhalose, sont à l'origine des nombreux travaux de recherches qui ont été consacrés au "Cord Factor", à sa synthèse et à celle de quelques-uns de ses homolgues inférieurs. Le "Cord Factor" se distingue par la propriété caractéristique d'augmenter la virulence de souches atténuées de bacilles tuberculeux : c'est ainsi, par exemple, que des animaux infectés par le 3. C. G. peuvent etre tués par des doses subléthales de ',Cord Factor" ; de plus, le "Cord Factor" se caractérise par le fait que c'est la seule fraction lipidique du bacille tuberculeux qui soit toxique. Il a tout d'abord été proposé de synthétiser le 6,6'-dimycolate de tréhalose par estérification du tréhalose par un acide hydroxy-3-méthoxy-x-mycolanoSque préalablement acétylé , une telle synthèse conduit, toutefois, à un mélange de 6-mono-,6,6'-di- et 6,6',2'-trimycolates de tréhalose, dans lequel le 6-mono- et le 6,6',2'-trimycolates sont beaucoup moins actifs que le 6,6'-dimycolate ; l'on obtient donc un mélange dont 11 activité est très inférieure à celle du ',Cord Factor" et, dans la mesure où l'on isole le 6,6'dinycolate du mélange par chromatographie, les rendements obtenus sont très faibles. L'on a donc cherché à synthétiser de façon plus spécifique le 6,6'-dimycolate de tréhalose, en faisant réagir un mycolate de potassium avec le ditosyl-6,6'-t r é h a l o s e, m a i s 1 e s r e n d e m e n t s en 6,6'-mycolate d e tréhalose étaient très faibles (de l'ordre de 1 %), en raison du fait que la faible quantité de produit obtenue était toujours contaminée par des stéréoisomères et par la présence d'une substitution nucléophile intramoléculaire compétitive ; un autre procédé a, de ce fait, été proposé, qui consiste à traiter le diiodo-6,6'-hexacétyl-2,3,4,2',3',4'-tréhalose par un mycolate d'argent, et qui donne du 6,6'-dimycolate de tréhalose avec d'aussi mauvais rendements que précédemment. Par ailleurs, deux des Inventeurs (Monsieur Raoul TOUBIANA et Madame Marie-Josèphe TOUBIANA) ont mis au point un procédé de synthèse par transestérification d'un homologue inférieur du 6,6'-dimycolate de tréhalose, à savoir le 6,6'-dipalmitate de tréhalose, présentant une activité biologique caractéristique analogue à celle du 6,6'-dimycolate de tréhalose : ce procédé, qui consiste à chauffer du palmitate de méthyle et du tréhalose pendant 6 heures à 1000C, en présence de carbonate de potassium, soit à pression réduite, soit en présence de tamis moléculaires, conduit à un mélange de tétra-, tri-,di- et monopalmitates de tréhalose, à cté de tréhalose non réagi ; dans la mesure où les dipalmitates de tréhalose peuvent être isolés du mélange, ils se présentent sous la forme d'un mélange d'isomères, à savoir de 6,6'-, de 6,2- et de 2,2'-dipalmitates de tréhalose, dont le 6,6'dipalmitate, qui seul présente une activité biologique analogue à celle du 6,6'-dimycolate, est pratiquement indissociable des autres constituants du mélange en raison de l'absence de sélectivité du procédé de transestérification. D'autres Chercheurs [D.T. HURST et A.G. Mc INNES, Canadian Journal of Chemistry, vol. 43 (1965) 2004-2011] dont les travaux étaient axés sur l'hydrolyse partielle de groupements hydroxyle bloqués par des groupes triméthylsilyle, ont décrit la préparation de méthyl-2,3,4-tri-0-triméthylsilyl-o Toutefois, bien que ces Auteurs aient formulé, à 11 époque de leur Publication, l'hypothèse - d'ailleurs non vérifiée depuis que le procédé préconisé par eux, qui consistait à estérifier la fonction alcool primaire du monoholoside précité, dont toutes les fonctions alcool primaire et secondaire avaient été préalablement bloquées par un groupe triméthylsilyle, devait pouvoir s'appliquer à n'importe quel composé polyhydroxylé. En fait, il s'est avéré que la présence de plus d'une fonction alcool primaire, par exemple la multiplication par deux ou plus, des alcools primaires, rend difficile l'application de cette méthode, et plus encore si l'on met en jeu des acides à longues chaînes, connues pour leur réactivité médiocre. En conséquence, si l'on a pu attribuer au "Cord Factor" - ou 6,6'-dimycolate de tréhalose - contenu dans des fractions spécifiques de mycobactéries tuberculeuses, une activité thérapeutique, et en particulier une activité de régression des tumeurs cancéreuses, [cf. A. BEKIERKUNST, L. WANG, R. TOUBIANA et E. LEDERERE - "INFECTION and IMUNITY" vol. 10, n 5 (1974) p. 1044-10503 et s'il a été reconnu que certains analogues synthétiques du "Cord Factor" naturel exercent une action de suppression de la croissance de cellules tumorales chez des souris Ecf. E. YARKONI, A. BIEKERKUNST, J. ASSELINEAU, R. TOUBIANA, M.J. TOUBIANA et E.LEDERER - JOURNAL OF THE NATIONAL CANCER INSTITUTE, Si, nt 2 (1973) 717-720]. l'impossibilité dans laquelle on a été jusqu'à présent d'obtenir, par synthèse, le 6,61-dimycolate de tréhalose autrement que contaminé par des impuretés constituées par ses isomères totalement inactifs (tels que le 2,2'-dimycolate) et par des 6-mono-mycolates et des 6,6',2-trimycolates peu actifs, n'a pas permis de vérifier l'activité thérapeutique d'un 6,6' dimycolate de tréhalose synthétique pur, pas plus d'ailleurs que celle d'un 6,6'-dipalmitate de tréhalose synthétique pur. La présente invention s'est en conséquence donné pour but de pourvoir à un procédé d'estérification sélective des fonctions aloool primaire de diholosides, qui permet d'obtenir, en particulier, des esters, notamment à longue chatoie, de ces diholosides, à l'état pur, avec d'excellents rendements qui permettent de réaliser la synthèse des esters de diholosides recherchés, à l'échelle industrielle, dans des conditions économiques satisfaisantes. La présente invention a pour objet un procédé d'estéri fication sélective des fonctions alcool primaire de diholosides, caractérisé en ce que l'on fait réagir un acide gras, substitué ou non, sous la forme de l'un de ses halogénures ou de l'un de ses sels alcalins, sur un diholoside dont les six groupements -OH secondaires sont silylés et dont les deux groupements -OH primaires sont libres ou substitués par un groupement réactif tel qu'un atome d'halogène ou analogue, en ce que l'on désilyle ensuite les groupements -OH secondaires du produit estérifié et en ce qu'on purifie le produit obtenu, par chromatographie. Selon un mode de réalisation avantageux du procédé qui fait l'objet de la présente invention, le stade d'estérification est opéré à température élevée, de préférence comprise entre 650C et 900C. Selon un autre mode de réalisation avantageux du procédé qui fait l'objet de la présente invention, le processus d'estérification est réalisé en présence d'une quantité catalytique de pyridine. Conformément à l'invention, les réactifs mis en oeuvre dans le processus d'estérification sont introduits en quantités stoechiométriques. Conformément à l'invention, lorsque l'acide gras mis en oeuvre pour estérifier les groupements hydroxyle primaires du tréhalose est un acide substitué, il est avantageusement choisi parmi les acides gras portant un ou plusieurs groupements hydroxyle. Selon une disposition avantageuse de l'invention, un tel acide gras substitué est choisi parmi les acides gras * -hydroxylés. Selon un mode de réalisation avantageux du procédé qui fait l'objet de la présente invention, le stade d'estérification est précédé d'une purification par chromatographie sur colonne, du diholoside hexasilylé, ultérieurement soumis au processus d'estérification. Selon une disposition avantageuse de ce mode de réalisation, la colonne de chromatographie est remplie de gel de silice modifié par neutralisation par lavage à l'eau, puis réactivation par chauffage à 1200C pendant Oh30 à 1h. Selon une autre disposition avantageuse de ce mode de réalisation, le gel de silice est mis en oeuvre à raison d'une quantité qui n'est pas supérieure à 20 fois le poids du produit à chromatographier. Selon un autre mode de réalisation du procédé qui fait l'objet de la présente invention, le diholoside hexaméthylsilylé, dihalogéné en 6,6'- soumis au processus d'estérification, est obtenu par désacétylation de l'hexacétyl-2,2',3,3', 4,4'-dihalogéno-6,6'-diholoside utilisé comme matière première, puis méthylsilylation de l'hexahydroxy-2,2'-3,3'-4,4'-dihalogéno- 6,6'-didéoxy-6,6'-diholoside obtenu par désacétylation du composé de départ. En mettant en oeuvre le procédé qui fait l'objet de la présente invention, l'on obtient des esters de diholosides purs, et, en particulier, des esters symétriques en 6,6'- de diholosides, et notamment le 6,6'-dipalmitate d' La mise en oeuvre du procédé qui fait l'objet de la présente invention, comprend avantageusement les stades suivants I.- HEXATRIMETHYLSILYLATION D'UN DIHOLOSIDE Conformément à la présente invention, lthexatriméthyl- silylation d'un diholoside peut être réalisée suivant l'un ou l'autre des deux processus suivants : A/ Préparation d'un hexa(triméthylsilyl) 2,2',3,3',4,4'- ol 6,6'-&alpha;,&alpha;-diholoside Par silylation directe d'un diholoside. 1. - Préparation d'un octa (triméthylsilyl) 2,2',3,3',4,4',6,6' &alpha;,&alpha;-diholoside. L'on fait réagir un diholoside du commerce, avantageuse ment mis en solution dans de la pyridine, avec du chlorure de triméthylsilyle et de l'hexaméthyl-disilazane, pendant 12 heures à la température ambiante, après quoi l'on élimine le solvant sous vide, l'on abaisse la température à OOC, puis lton extrait, en présence de glace, le produit obtenu par un solvant approprié, tel que de l'hexane, par exemple, et on le sèche. 2. - Préparation d'un octa (triméthylsilyl) 2,2',3,3',4,4'-&alpha;,&alpha; diholoside. L'octa (triméthylsilyl)-2,2',3,3',4,4',6,6'-&alpha;,&alpha;- diholoside obtenu au cours de l'étape 1) précédente est alors désilylé de façon sélective sur les groupements -0 primaires par action du carbonate de potassium, en solution méthanolique, pendant plusieurs heures à une température voisine de OOC, suivie d'une neutralisation par l'acide acétique. Après extraction par un solvant approprié, tel que l'hexane, par exemple, le composé sélectivement désilylé sur les fonctions alcool primaire est séché, par exemple, sur du sulfate de magnésium. 3.- Purification par chromatographie Avant d'estérifier le diholoside dont on a bloqué, par silylation, les groupements réactifs, à l'exception de ceux que l'on cherche à estérifier, on le purifie pour améliorer encore la spécificité du produit final ; cette purification s'opère par chromatographie sur une colonne remplie d'un adsorbant spécialement traité, tel qu'un gel de silice (Merck à 0,063 mm, par exemple) amené à neutra lité totale par lavages à l'eau (suivis d'essorages), puis réactivé une heure à 1200C. L'adsorbant est présent dans la colonne en quantité calculée, équivalant au maximum à 20 fois le poids du produit à chromatographier, et la durée de la chromatographie est réduite. Alors que l'on considérait comme impossible de chromatographier des composés portant des groupements silylés protecteurs car, dans les conditions opératoires habituelles, les groupements -OH sont régénérés, le trai tement appliqué à l'adsorbant, allié aux quantités d'ad sorbant mises en oeuvre et à la limitation de durée de la chromatographie, ont pour conséquence de permettre de réaliser la purification par chromatographie du composé hexaméthylsilylé, sans qu'il se produise de désilylation. B/ Préparation d'un hexa (triméthylsilyl) 2,2',3,3' 4,4'-&alpha;-&alpha;-diholoside halogéné en 6,6'- par silyla tion d'un hexaacyl-2,2',3,3',4,4'-dihalogéno-6,6' didéoxv-6, 6'- --diholoside. 1. - Désacylation d'un hexaacyl-2,2',3,3',4,4'-dihalogéno 6,6'-didéoxy-6,6'-&alpha;-&alpha;-diholoside Un hexaacyl-2,2',3,3',4,4'-dihalogéno-6,6'-didéoxy 6,6'-&alpha;-&alpha;-diholoside [la préparation de l'hexacétyl 2,2',3,3',4,4' dibromo 6,6' didéoxy-6,6'-&alpha;-&alpha;-tréhalose a été décrite par S. HANESSIAN, M.M. POMPIDQM et P. LAVALLEE dans Carbohy. Res. 24 (1972) 45] dissous dans du méthanol, par exemple, est traité par du méthanolate de sodium pendant 2 heures environ, à la température ambiante, puis la solution est neutralisée à l'aide d'une résine échangeuse d'ions, anionique, basique (telle que celle vendue par DOW CHEMICAL sous le nom de "DOWEX" 50 W x 4200.400 mesh, et concentrée jusqu'à siccité. L'hexahydroxy-2,2',3,3',4,4'-dihalogéno-6,6'-didéoxy 6,6'-&alpha;-&alpha;-diholoside obtenu est un solide pulvérulent. 2. - Silylation de l'hexahydroxy-2,2',3,3',4,4'-dihalogéno 6,6'-didéoxy-6,6'-&alpha;-&alpha;-diholoside L'on obtient l'hexatriméthylsilyl-2,2',3,3',4,4' dihalogéno-6,6'-didéoxy-6,6'-&alpha;-&alpha;-diholoside, en traitant l'hexahydroxy-2,2',3,3',4,4'-dihalogéno-6,6'-didéoxy 6,6'-&alpha;-&alpha;-diholoside pendant environ 12 heures à la tem pérature ambiante, par du chlorure de triméthylsilyle en solution dans la pyridine, en présence d'hexaméthyl silazane. II. - ESTERIFICATION DE L'HEXATRIMETHYL-DIHOLOSIDE EVENTUELLE MENT HALOGENE La réaction de l'acide gras, sous la forme de son chlorure ou sous la forme de l'un de ses sels alcalins, avec l'hexatriméthylsilyl-2,2',3,3',4,4'-diholoside comportant deux groupements hydroxyle primaires libres ou deux atomes d'halogène, en 6,6'-, a lieu par chauffage pendant 2 à 5 heures à une température comprise entre 650C et 90 C, dans un solvant tel que benzène ou hexaméthylphosphotriamide, depréférence en présence d'une quantité catalytique de pyridine, qui, dans le cas où l'on réalise l'estérification à l'aide d'un chlorure d'acide gras, piège le chlorure pour libérer le groupement -CO du radical acide gras. L'acide gras et le diholoside sont mis en oeuvre en quantités stoechiométriques. Il y a lieu de mentionner qu'une estérification sélective directe d'un diholoside par un-chlorure d'acide était jusqu a présent considérée comme impossible, car l'estérification par un chlorure d'acide n'assurait aucune sélectivité, alors que l'introduction préalable de groupements protecteurs triméthylsilyle, permet de réaliser l'estérification sélective en 6,61que l'on recherche. Toutefois, lorsque l'acide gras mis en oeuvre est substitué par un groupement réactif, tel qu'un groupement hydroxyle, par exemple, l'on a avantage à l'utiliser sous la forme de l'un de ses sels alcalins, notamment sous la forme de son sel de sodium, que l'on fait réagir sur le diholoside hexatriméthylsilylé et dihalogéné en 6,6'-, la réaction d'estérification sélective en 6,6su s'accompagnant de la formation d'halogénure alcalin. III. - DESILYLATION DU DIESTER HEXATRIMETHYLSILYLE DU DIHOLOSIDE La désilylation est réalisée par chauffage pendant 2 heures environ à reflux, en présence d'un mélange de méthanol et d'eau ou de méthanol benzène-eau. IV.- PURIFICATION PAR CHROMATOGRAPHIE Le composé obtenu est purifié par chromatographie sur une colonne d'adsorbant tel que le gel de silice Merck 0,063 mm, par exemple, la chromatographie étant éventuellement précédée par une filtration sur un agent d'absorption approprié. L'on obtient ainsi un produit pur, ne contenant aucune contamination par desi s o m è r e s, avec des rendements satisfaisants, de 11 ordre de 50 à 70 %,et dont les activités biologiques et thérapeutiques ne sont pas altérées par la présence d'agents contaminants. Outre les dispositions qui précèdent, l'invention comprend encore d'autres dispositions, qui ressortiront de la description qui va suivre. La présente invention vise plus particulièrement les nouveaux procédés d'estérification sélective des fonctions alcool-primaire des diholosides, conformes aux dispositions qui précèdent, ainsi que les moyens propres à leur mise en oeuvre, et les produits obtenus par ces procédés, de même que les moyens propres à l'utilisation desdits produits. L'invention sera mieux comprise à l'aide du complément de description qui va suivre, dans lequel on trouvera des exemples de mise en oeuvre du procédé conforme à l'invention. Il doit être bien entendu, toutefois, que ces exemples et les parties descriptives correspondantes sont donnés uniquement à titre d'illustration de l'objet de 11 invention, dont ils ne constituent en aucune manière une limitation. EXEMPLES Exemple 1 - Préparation du dipalmitoyl-6,6'-&alpha;-D-tréhalose 1.- Préparation de l'octa (triméthylsilyl) 2,3,4,6, 2', 3', 41, 6' -oi tréhalose A 1 g de tréhalose dihydrate commercial C12H22011,2H20 vendu par la Société PLUKA, en solution dans 100 cc de pyridine fraîchement distillée, sont ajoutés 20 cc de chlorure de triméthylsilyle et 40 cc d'hexaméthyldisilazane vendus par la Société PIERCE. Après une nuit à température ambiante, le solvant est éliminé sous le vide de la pompe à palette , de la glace est ensuite ajoutée et le produit extrait 2 fois à l'hexane. Après séchage sur sulfate de magnésium, le solvant est évaporé et les dernières traces de pyridine éliminées sous le vide de la pompe à palette. 2,1 g de substance, qui cristallisent sponta nément, sont alors obtenus. Après cristallisation dans le méthanol, les constantes physiques du composé (rendement) sont les suivantes C36 H86 011 Si8 F : 80 - 820C = + 95 (c = 1 CHCl3) Spectre de masse : (M+) m/e 918 ion oxonium : m/e 451 Analyse centésimale Calculé pour C 47,01 % Trouvé 46,91 % C36 H86 11 Si8 ( H 9,43 Trouvé % 9,29 % 2.- Préparation (de l'hexa (triméthylsilyl) 2, 3, 4, 2', 3', 4', ol 6,6'-&alpha;-&alpha;-tréhalose A 660 mg du composé précédent, en solution dans 22 cc de méthanol, sont ajoutés 22 cc d'une solution méthanolique de carbonate de potassium (4,5 g/litre). Le mélange réactionnel est maintenu pendant deux heures à OQC (à l'aide d'un mélange glace-sel), puis neutralisé par 2 cc d'acide acétique.Le méthanol est éliminé sous le vide de la trompe à eau, de la glace est ajoutée et le produit extrait 2 fois à l'hexane, après séchage sur sulfate de magnésium. Le solvant est évaporé et 550 mg de substance, qui cristallisent spontanément, sont obtenus. 3.- Purification du composé hexatriméthylsilylé, par chromatographie La chromatographie est accomplie sur gel de silice Merck 0,063 mm, préalablement lavé à l'eau distillée, afin d'éliminer toute trace d'acide commercial résiduel, et ensuite réactivé une heure à 1200. Dans le même sens et compte tenu des risques d'hydrolyse pouvant survenir par un contact prolongé avec l'adsorbant, la chromatographie est conduite rapidement. Elle s'effectue sur une colonne de gel de silice traité, à raison de 300 mg de produit pour 6 g de gel de silice (20 fois le poids de produit à chromatographier). Les prélèvements sont effectués tous les 20 cc. Le produit sort dans les fractions 10, 11 et 12. Les fractions 10, 11 et 12 (253 mg, rendement 90 %) homogènes sur couche mince (solvant de développement : hexaneéther, 70/30) sont réunies et cristallisées dans le méthanol. Les constantes physiques sont les suivantes C30 H70 011 Si6 F : 1150 - 1180 C Cn. = + 1000 (c = 1 CHCl3) D + Spectre de masse : (M ) m/e 774 ion oxonium : m/e 379 Analyse centésimale Calculé pour C30H70O11Si6 C 46,47 % Trouvé H 9,10 % 46,52 % 9,03 % 4 - Obtention du dipalmitoyl 6,6'-&alpha;-&alpha;,tréhalose La réaction du chlorure de palmitoyle sur le composé précédent conduit à l'hexa (triméthylsilyl ) 2, 3, 4, 2', 3', 4' dipalmitoyl 6,6'&alpha;-&alpha;-tréhalose qui n'est pas caractérisé. La réaction d ' h y d r o 1 y s e des groupements triméthylsilyles résiduels est accomplie immédiatement après, dans les conditions suivantes : à 270 mg du composé précédent, en solution dans 5 cc de benzène et 0,5 cc de pyridine, sont ajoutés 216 mg de chlorure de palmitoyle commercial (Fluka) en solution dans 2 cc de benzène anhydre. La solution est ensuite chauffée à 800C pendant deux heures et demie. Après élimination du solvant sous vide, la solution du produit, dans 0,30 cc de méthanol auxquels on a ajouté 3 cc d'eau, est portée à ébullition pendant deux heures. Le méthanol aqueux est éliminé sous vide et le produit obtenu est purifié par chromatographie sur colonne de gel de silice Davison 100/200 (vendu par la Société TOUZART et MATIGNON). La chromatographie s'effectue sur une colonne de gel de silice à raison de 290 mg de produit pour 7,5 g de gel de silice. Les prélèvements sont effectués tous les 20 cc. Le produit sort dans les fractions 17 à 31. Les fractions 17 à 31 homogènes sur couche mince (solvant de développement : méthanol, CHCl3, benzène, O - 6/20/20/6 gouttes) sont réunies, soit 170 mg (rendement 58 %), et cristallisées dans le méthanol absolu. Constantes du dipalmitoyl 6,6'-oQ,tréhalose C44 H82 013 F : 1540 - 1580C [&alpha;]D = + 80 (c = 1 CHCl3) Spectre de masse du composé hexaacétylé: (M+) m/e 1070 ion oxonium m/e 527 Analyse centésimale : Calculé pour : l'hexaacétate C56H94O19 C 62,76 % Trouvé H 8,85 % 62,87 % 8,87 % La fraction 32, qui présente un mélange de dipalmitoylet de monopalmitoyl-(80 mg), peut être rechromatographiée et fournir 30 mg de dipalmitoyl-supplémentaires. Exemple 2 - Préparation du dimycoloyl-6,6'-&alpha; -tréhalose 1.- Extraction et purification de l'acide mycologue (souche Brévanne) L'extraction et la purification de l'acide mycolique sont décrites dans la littérature, comme décrit brièvement ci-après L'acide mycolique est obtenu par saponification des cires C du bacille tuberculeux. (Pour la nomenclature des cires du bacille tuberculeux et pour le protocole de saponification, voir A.H. Ethémadi, Thèse 1965). Une série de trois chromatographies est nécessaire pour obtenir un acide homogène sur couche mince. L'analyse en spectrométrie de masse montre que c'est un mélange d'homologues vraisemblablement en C70 à C90, dont le plus important semble être le composé en C84, mais qui comportent tous trois atomes d'oxygène, l'homologue prépondérant présentant la formule suivante 84 H164 03 F : 55 - 570 C [ & 20 - + 208 (CHCl3) D 2.- Préparation du mycolate de-sodium A une solution de 150 mg d'acide mycolique dans 2 cc de chloroforme et d'une goutte de phénolphtaléine, sont ajoutés 1,35 cc d'une solution méthanolique de soude 0,85N (virage de la phénolphtaléine). Après une nuit au frigidaire, le précipité formé est essoré, soit 80 mg de mycolate de sodium. 3 - Préparation de l'hexatriméthvlsilvl -2,2', 3.3', 4,4' -dibromo 6,6' didéoxy 6,6'-o-tréhalose La préparation de ce composé est accomplie en 3 étapes, comme décrit ci-après 3.1 Obtention de l'hexacétyl-2,2',3,3', 4,4' dibromo-6,6' didéoxy-6,6'-&alpha;-tréhalose La préparation de ce composé, qui répond à la formule I ci-après est décrite dans la littérature [S. Hanessian, M.M. Pompidom et P. Lavallée - Carbohyd.Res 24 (1972) 45]. 3.2 Désacétylation du composé de formule I Obtention de l'hexahydroxy-2,2',3,3',4,4' dibromo-6,6' didéoxy-6,6'-&alpha;-tréhalose de formule II ci-après: A 100 mg du composé de formule I en solution dans 10 cc de méthanol anhydre, on ajoute 10 gouttes d'une solution de méthanolate de sodium (140 mg de sodium dans 10 cc de méthanol anhydre) et on abandonne 2 heures à température ambiante. La solution est ensuite neutralisée à l'aide de "Dowex'l 50 W x 4 200.400 mesh (80 mg), filtrée et le filtrat évaporé jusqu'à siccité. 80 mg d'un solide pulvérulent sont obtenus, solide qui est traité tel quel sans autre purification. 3.3 Silylation du composé de formule II Obtention de l'hexatriméthylsilyl-2,2',3,3',4,4' dibromo 6,6' didéoxy 6,6'=j-tréhalose de formule III ci-apres : Le composé de formule II (80 mg) dissous dans 5 cc d'une solution de chlorure de triméthylsilyle et d'hexadiméthylsilazane dans de la pyridine est abandomé une nuit à température ambiante. Après addition de glace, le produit est extrait par de l'hexane. Après séchage sur sulfate de magnésium, le solvant est évaporé et les dernières traces de pyridine éliminées sous le vide de la pompe à palette. 110 mg de substance qui cristallise spontanément, sont ainsi obtenus. Après cristallisation dans le méthanol, les constantes physiques du composé (rendement quantitatif) sont les suivantes C30 H66 09 Br2 Si6 F : 140 - 1420 C [&alpha;]D = + 95 (c = 1 CHCl3) Spectre de masse : (M+O) m/e 998 ion oxonium : m/e 441 Analyse centésimale : Calculé pour C30H66O9Br2Si6 C 40,07 % H 7,40 % Trouvé Br 17,77 % 3g,90 % 7,35 % 17,50 % 4.- Estérification du composé de formule III Une solution de 80 mg de mycolate de sodium dans 1 cc d'hexaméthylphosphotriamide (HMPA) distillé sur hydrure de lithium et l'aluminium (LiAlH4) est porté à 70 C dans un bain d'huile. A cette solution devenue rapidement limpide, on ajoute goutte à goutte 30 mg du composé III en solution dans 0,5 cc de HMPA. Après l'addition du composé III, qui dure une heure environ, le chauffage est poursuivi, pendant 3 heures. L'on réalise l'extraction à ltéther, après ajout de glace. 5. - Désilylation de l'hexatriméthylsilyl-2,2',3,3', 4,4'-dimycoloyl-6, 6' -tréhalose L'extrait éthéré est ensuite désilylé (deux heures à reflux en présence de 10 cc de méthanol,10 cc de benzène et 0,5 cc d'eau). Le solvant est ensuite éliminé sous vide 6.- Purification du dimvcolate de tréhalose On filtre sur 2 g de gel de silice Davison 100/200 (Touzart et Matignon). La première solution de l'hexane,soit 70 mg,est purifiée à nouveau. On chromatographie sur 3 g de gel de silice Merck 0,063 mm. Le produit est élué au chloroforme additionné de 0,6 % de méthanol. On obtient 35 mg d'un produit amorphe (rendement 33 %) homogène sur couche mince et de même Rf que le "Cord Factor" naturel. Après dissolution dans l'éther, et ajout de méthanol, un précipité est formé, qui est centrifugé, puis décanté de son eau-mère. Après séchage au dessicateur, le "Cord Factor" synthétique obtenu, se présente sous forme d'une poudre blanche. C180 H346 015 F : 409C ]D10 = + 28 Analyse centésimale : Calculé pour : ( C 78,59 % 78,05 % C180H346O15 Trouvé H 12,68 % 12,50 % (# 10 CH2) Il résulte de-la description qui précède que, quels que soient les modes de mise en oeuvre et de réalisation adoptés, les diesters de diholosides obtenus en mettant en oeuvre le procédé objet de la présente invention, sont des produits purs qui présentent une activité adjuvante et une activité immunothérapeutiques notablement plus prononcées que ne l'étaient celles des produits de synthèse obtenus par les procédés antérieurement connus Ainsi que cela ressort de ce qui précède, l'invention ne se limite nullement à ceux de ses modes de mise en oeuvre et de réalisation qui viennent titre décrits de façon plus explicite ; elle en embrasse au contraire toutes les variantes qui peuvent venir à l'esprit du technicien en la matière, sans s'écarter du cadre, ni de la portée, de la présente invention. REVENDICATIONS 1 - Procédé d'estérification sélective des fonctions alcool primaire de diholosides, caractérisé en ce que l'on fait réagir un acide gras, substitué ou non, sous la forme d e 1 ' u n de ses halogénures ou de l'un de ses sels alcalins, sur un diholoside dont les six groupements -OH secondaires sont silylés et dont les deux groupements -OH primaires sont libres ou substitués par un groupement réactif tel qu'un atome d'halogène ou analogue, en ce que l'on désilyle ensuite les groupements -OH secondaires du produit estérifié et en ce qu'on purifie le produit obtenu, par chromatographie. 20- Procédé selon la Revendication 1, caractérisé en ce que le stade d'estérification est opéré à température élevée, de préférence comprise entre 650C et 900 C. 30- Procédé selon l'une quelconque des Revendications 1 et 2, caractérisé en ce que le processus d'estérification est réalisé en présence d'une quantité catalytique de pyridine. 40- Procédé selon l'une quelconque des Revendications 1 à 3, caractérisé en ce que les réactifs mis en oeuvre dans le processus d'estérification sont introduits en quantités stoechiométriques. 5 - Procédé selon la Revendication 1, caractérisé en ce que lorsque l'acide gras mis en oeuvre pour estérifier les groupements hydroxyle primaires du diholoside est un acide substitu6, il est choisi parmi les acides gras portant un ou plusieurs groupements hydroxyle. 60 Procédé selon la Revendication 5, caractérisé en ce que l'acide gras substitué est choisi parmi les acides gras P -hydroxylés. 70- Procédé selon la Revendication 1, caractérisé en ce que le stade d'estérification est précédé d'une purification par chromatographie sur colonne, du diholoside hexasilylé, ultérieurement soumis au processus d'estérification. 8 - Procédé selon la Revendication 7, caractérisé en ce que la colonne de chromatographie est remplie de gel de silice modifié par neutralisation par lavage à l'eau, puis réactivation par chauffage à 12O0C pendant Oh30 à 1h, éventuellement suivie d'une désactivation partielle par réhydratation. 90- Procédé selon la Revendication 8, caractérisé en ce que le gel de silice est mis en oeuvre à raison d'une quantité qui n'est pas supérieure à 20 fois le poids du produit à chromatographier 100 Procédé selon la Revendication i, caractérisé en ce que le diholoside héxaméthylsilylé, dihalogéné en 6,6'soumis au processus d'estérification1 est obtenu par désacéty- lation de l'hexaalcoyl-2,2',3,3',4,4'-dihalogéno-6,6'-diholoside utilisé comme matière première. puis méthylsilylation de l'hexahydroxy-2,2'-3,3'-4,4'-dihalogéno-6,6'-didéoxy-6,6'diholoside obtenu par désalcoylation du composé de départ. 11 - Diholosides estérifiés par un acide gras, purs, obtenus en mettant en oeuvre le procédé selon l'une quelconque des Revendications 1 à 10. 12 - Composé selon la Revendication 11, caractérisé en ce qu'il est constitué par du dipalmitoyl-6,6'-&alpha;-D-tréhalose pur dont le point de fusion est égal à 54-1580C. 13 - Composé selon la Revendication 11, caractérisé en ce qu'il est constitué par du dimycoloyl-6,6'-cuD-tréhalose de synthèse, pur, dont le point de fusion est égal à 40-44 C. 14 - A titre de produit nécessaire dans la synthèse de 6,6'-diesters d'&alpha;-&alpha;-diholosides, selon la Revendication il. un hexatriméthylsilyl-2,2',3,3',4,4'-dihalogéno-6,6'-didéoxy 6,6'-&alpha;,&alpha;-diholoside. 150- A titre de produit nécessaire dans la synthèse de 6,6'-diesters d'&alpha;,&alpha;-diholosides selon la Revendication 11, un hexatriméthylsilyî-2,2', 3,3', 4,4'-dialcoyl-6,6'-didéoxy- 6,6'-&alpha;,&alpha;-diholoside. 160- A titre de produit nécessaire dans la synthèse de 6,6'-diesters d'&alpha;,&alpha;-diholosides selon la Revendication 11, un hexamtriméthylsilyl-2,2', 3.3', 4, 4'-diol-6, 6'-- diholoside. 17 - A titre de produit nécessaire dans la synthèse de 6.6'-diesters d'&alpha;-&alpha;-diholosides selon la Revendication 11. un octa (triméthylsilyl),2,2',3,3',4,4',6,6'-&alpha;-&alpha;-diholoside. 18 - A titre de produit nécessaire dans la synthèse du dipalmitoyl-6,6- > (-D-tréhalose, selon la Revendication 12, l'octa (triméthylsilyl),2,2',3,3',4,4'-6,6'-&alpha;-&alpha;-tréhalose. 19 - A titre de produit nécessaire dans la synthèse du dipalmitoyl-6,6'-&alpha;-D-tréhalose, selon la Revendication 12, l'hexa (triméthylsilyl)-2,2',3,3',4,4'-diol-6,6'-&alpha;-&alpha; tréhalose. 20 - A titre de produit nécessaire dans la synthèse du dimycoloyl-6,6'-&alpha;-D-tréhalose, selon la Revendication 13, l'hexa (triméthylsilyl)-2,2',3,3',4,4'-dibromo-6,6'-didéoxy 6,6'-&alpha;-tréhalose. 21 - A titre de produit nécessaire dans la synthèse du dipalmitoyl-6,6'-&alpha;-D-tréhalose, selon la Revendication 12, l'hexa (triméthylsilyl)-2,2',3,3',4,4'-dipalmitoyl-6,6'-&alpha;- tréhalose. 220- A titre de produit nécessaire dans la synthèse du dimycoloyl-6,6'-&alpha;-D-tréhalose, selon la Revendication 13. l'hexa (triméthylsilyl)-2,2',3,3',4,4'-dimycoloyl-6,6'-&alpha; tréhalose. 23 -A titre de médicament nouveau, le dipalmitoyl 6,6'-&alpha;-D-tréhalose pur, selon la Revendication 12. 240- A titre de médicament nouveau, le dimycoloyl- 6,6'-&alpha;-D-tréhalose de synthèse. pur, selon la Revendication 13. 250 Produits thérapeutiques caractérisés en ce qu'ils contiennent comme constituants actifs au moins l'un des composés selon l'une quelconque des Revendications il à 13.