Brevet FR2273009A1 — publié le 19751226

La présente invention concerne un procédé nouveau et très efficace pour la préparation de 1-N-[-(-)-gamma-amino alpha-hydroxybutyryjl-kanamycine A (IV) de formule La kanamycine A porte quatre fonctions amino primaires dans les positions 1, 3, 6' et 3" de sa molécule. Il a été établi que la fonction 6'-amino est la plus réactive et qu'elle est immédiatement suivie de la fonction 1-amino dans l'ordre de réactivité, en cas de traitement avec un agent électrophile. Bes deux fonctions amino en positions 3 et 3" sont moins réactives que les fonctions 1-amino et or-amino, mais elles réagissent, en fait, en donnant de faibles pourcentages de produits acylés indésirables. En conséquence, la présente invention a été basée sur la recherche d'un procédé plus satisfaisant que celui qui a été utilisé jusqutà présent dans la demande de brevet français No l2 25 323 déposée le 12 Juillet 1972 par la Demanderesse, ce procédé étant plus sélectivement axé sur l'acylation de la fonction 1-amino que sur les autres fonctions amino contenues dans la molécule. La présente invention a pour objet un procédé de préparation du composé de formule procédé qui comporte les étapes successives de A) traitement du composé de formule avec un aldéhyde choisi entre le benzaldéhyde, le salicylaldéhyde, le p-nitrobenzaldéhyde, le p-méthoxybenzaldéhyde et le pivaldéhyde dans la proportion d'une mole de composé II pour au moins trois moles d'aldéhyde, de manière à produire le composé - de formule (dans laquelle Z est un radical de formule et B) traitement du composé III in situ avec le composé de formule : dans la proportion d'une mole de composé III pour au moins 0,5 mole du composé XX, puis hydrogénation du résidu in situ pour produire un composé de formule IV. En particulier l'opération A est avantageusement conduite dans un solvant miscible à l'eau tel qu'un solvant alcoolique, par exemple l'éthanol absolu, le méthanol, le n-propanol, l'åsopropanol, le n-butanol, le sec.-butanol, le tertiobutanol et un solvant du type d'un éther tel que le tétrahydrofuranne, le dioxanne ou d'autres solvants polaires aprotiques ou non aprotiques, par exemple le diméthylformamide et l'acétone ou des mélanges de ces solvants ou leurs mélanges avec de l'eau dans une gamme de températures allant à peu près de SOC à la température de reflux, pendant une période d'environ 30 minutes à environ 5 heures. L'opération B est de préférence conduite en utilisant le composé III et le composé XX dans un rapport d'environ 1:1, dans une gamme de température d'environ -10 à +35OC, notamment dans la gamme de +5 à -environ 25 Oc pendant une période suffisante de temps pour que l'acylation soit terminée, mais pendant au moins une à trois heures; le solvant organique est ensuite chassé avant l'hydrogénation.L'hydrogénation in situ est effectuée avec de l'hydrogène en présence d'un catalyseur métallique choisi entre le palladium, le platine, le nickel de Raney, le rhodium, le ruthénium et le nickel, de préférence le palladium, notamment le palladium fixé sur du charbon, dans l'eau ou dans un mélange d'eau et d'un solvant miscible à l'eau, par exemple un mélange d'eau et de dioxanne, de tétrahydrofuranne, d'éther diméthylique d' éthylene- glycol ou d'éther diméthylique de propylène-glycol, etc., notam- ment l'eau à un pH compris entre 3 et 5 et très avantageusement égal à 4. Selon une forme très avantageuse de mise en oeuvre, le procédé de préparation du composé IV comprend les opérations successives de A) traitement du composé de formule avec un aldéhyde choisi entre le benzaldéhyde, le salicylaldéhyde, le p-nitrobenzaldéhyde et le p-méthoxybenzaldéhyde dans une proportion d'une mole de composé II pour au moins trois moles d'aldéhyde, dans l'éthanol absolu, le méthanol, le n-propanol, le sec.-butanol, le tertiobutanol, le chlorure de méthylène, le té trahydrofuranne, le dioxanne, le diméthylformamide ou l'acétone ouleurs mélanges avec de l'eau, à une température de 5 à 400C pendant environ 30 minutes à environ 5 heures pour produire le composé de formule:: dans laquelle Z est un radical de formule et B) traitement du composé III in situ ou après séparation, avec le composé de formule dans une proportion d'une mole de composé III pour environ 0,5 à 1,0 mole du composé XX, dans une gamme de +5 à 35OC pendant une à trois heures, dans un solvant comme défini dans l'opération A puis élimination du solvant organique et hydrogénation du résidu in situ avec de l'hydrogène en présence d'un catalyseur métallique choisi de préférence entre le palladium, le platine, le nickel de Raney, le rhodium, le ruthénium et le nickel, de préférence le palladium, notamment le palladium fixé sur du charbon, dans l'eau ou dans un mélange d'eau et d'un solvant miscible à l'eau, par exemple un mélange d'eau et de dioxanne, de tétrahydrofuranne, d'éther diméthylique dtéthylèneglycol ou d'éther diméthylique de propylène-glycol, de préférence l'eau à un pH de 3 à 5, de préférence égal à 4, pour produire le composé de formule IV. Une forme très avantageuse de mise en oeuvre du procédé de préparation du composé de formule comprend les opérations successives de A) traitement du composé de formule : avec un aldéhyde choisi entre le benzaldéhyde, le salicylaldéhyde et le p-nitrobenzaldéhyde dans la proportion d'une mole de composé II pour environ 9 moles d'aldéhyde, dans l'éthanol absolu, le méthanol, le n-propanol, l'isopropanol, le n-butanol, le sec.-butanol, le tertiobutanol, le tétrahydrofuranne, le chlorure de méthylène, le dioxanne, le diméthylformamide ou l'acétone ou leurs mélanges avec de l'eau à environ 5-40 C pendant environ 30 minutes à environ 5 heures, pour produire le composé de formule dans laquelle Z est un radical de formule et 3) traitement du composé III in situ ou après isolement, avec le composé de formule dans une proportion d'une mole de composé III pour environ 0,5 à environ 0,85 mole du composé XX, dans une gamme de +15 à 30 C, pendant une à trois heures dans un solvant comme défini pour l'opération A, puis élimination du solvant organique et hydrogénation du résidu in situ avec de l'hydrogène en présence d'un catalyseur métallique choisi de préférence entre le palladium, le platine, le nickel de Raney, le rhodium, le ruthénium et le nickel, de préférence le palladium et notamment le palladium fixé sur du charbon, dans l'eau soudans un mélange d'eau et d'un solvant miscible à l'eau, choisi de préférence entre l'eau et le diozanne, le tétrahydrofuranne, l'éther diméthylique de ltéthylè- ne-glycol ou ltéther diméthylique du propylène-glycol, de préférence l'eau, à un pH d'environ 4 pour produire le composé de formule IV. Une forme très avantageuse de mise en oeuvre du procédé de l'invention pour la préparation du composé de formule comprend les étapes successives de A) traitement du composé de formule avec le benzaldéhyde, dans une proportion d'une mole de composé Il pour trois moles de benzaldéhyde, dans un mélange à environ 1::1 d'eau et de tétrahydrofuranne, à environ 20-30 C à un pH d'environ 10 pendant environ 2 à 4 h eures pour produire le composé de formule et 3) traitement du composé IIIa in situ ou après séparation avec le composé de formule dans une proportion d'une mole du composé IIIa pour 0,6 à 0,75 mole de composé XX, à une température comprise entre environ 20 et environ 300C pendant une période d'une à trois heures, dans un solvant du type défini dans l'opération A, un mélange de chlorure de méthylène, de méthanol et d'eau ou un mélange de diméthyl- formamide, d'acétone et d'eau ; puis élimination du solvant organique sous vide, réglage du pH à 4 avec de l?hydroxyde d'ammonium et hydrogénation du résidu in situ avec de l'hydrogène à la pres sion atmosphérique en présence de palladium fixé sur du carbone pour produire le composé de formule IV. La forme la plus avantageuse de réalisation de la présente invention est le procédé de préparation du composé de formule qui comprend les opérations successives de A) traitement du composé de formule avec le salicylaldéhyde dans une proportion d'une mole de composé II pour trois moles de salicylaldéhyde dans un mélange à environ 1::1 d'eau et de tétrahydrofuranne à environ 20-30 C à un pH d'en viron 8 pendant environ deux à quatre heures pour produire le composé de formule et B) traitement du composé IIIb in situ ou après isolement avec le composé de formule dans une proportion d'une mole de composé IIIb pour environ 0,6 à environ 0,75 mole du composé XX, à une température d'environ 20 à environ 30OC pendant une période d'une trois heures, dans un solvant du type défini dans 1' opération A ou un mélange de diméthylformamide, d'acétone et d'eau ; puis élimination du solvant organique sous vide, réglage du pH à 4 avec de l'hydroxy- de d' ammonium et hydrogénation du résidu in situ avec de lrhy- drogène à la pression atmosphérique en présence de palladium fixé sur du carbone pour produire le composé de formule IV. Aux fins du présent mémoire, l'expression "alkyle in férieur" désigne un résidu alkyle à channe droite ou ramifiée en C1 à C6. Un "alcanol inférieur est un alcool saturé à chatne droite ou ramifiée en C1 à C6 contenant une fonction OH. Selon un autre de ses aspects, l'invention concerne une version modifiée du procédé décrit ci-dessus,qui utilise un processus se déroulant encore plus in situ tout en donnant d'aussi bons rendements en composé de formule IV, dans des conditions moins conteuses. Par exemple, le composé de formule XX peut être préparé avec in situ et amené à réagir/le composé de formule III en une seule étape pratique. Ainsi, le composé de formule IV peut être préparé comme décrit ci-dessus dans l'étape B, la réaction consistant à traiter le composé III obtenu dans l'étape A comme décrit ci-dessus in situ ou après isolement, avec les composés de formules ce traitement etant suivi de l'addition de dicyclohexylcarbodiimide dans une proportion d'une mole de composé III pour environ 0,5 à 1,0 mole de composé VI, ainsi que de dicyclohexylcarbodiimide et environ O,Op5 à0,25 mole de composé XIX, dans une gamme de température' environ -10 à environ +4TOC, mais de préférence de +5 à environ 250C pendant au moins dix heures dans un solvant du type défini dans l'étape A ; puis élimination du solvant organique et hydrogénation du résidu in situ comme décrit ci-dessus pour produire lé composé de formule IV. Une forme avantageuse de mise en oeuvre de la variante décrite ci-dessus implique l'utilisation d'une proportion d'une mole de composé III pour environ 0,5 à environ 0,85 mole de composé VI ainsi que de dicyclohexylcarbodiimide et environ 0,05 à 0,425 mole du composé XIX, dans une gamme de +5 à 250C pendant une à trois heures dans un solvant du type défini dans l'étape A, ou bien, à titre de variante, une proportion d'une mole du composé III pour environ 0,5 à environ 0,8 mole de composé VI ainsi que de dicyclohexylcarbodiimide et environ 0,05 à environ 0,425 mole du composé XIX dans une gamme de +15 à +30 C pendant 15 à 25 heures. les conditions utilisées sont très avantageusement une proportion d'une mole de composé III pour environ 0,6 à environ 0,75 mole de composé VI, ainsi que de dicycîohexyl carbodiimide et environ 0,06 à environ 0,375 mole de composé XIX dans une gamme de 20 à +30tu pendant 15 à 25 heures. L'invention concerne également un procédé nouveau de préparation de la matière première, à savoir le composé de formule Ce procédé consiste à traiter la kanamycine base libre avec le N-benzyloxycarbonyloxy-5-norbornène-2, 3-dicarboximide dans un rapport d'environ 0,5 à environ 1,5 mole de N-benzyloxyearbonyl- oxy-5-norbornène-2,3-dicarboximide par mole de kanamycine A, ou en particulier dans un rapport d'environ 1:1, le traitement étant suivi d'une purification par exemple par extraction dans un solvant organique tel que le n-butanol, et chromatographie de la phase aqueuse. La réaction définie ci-dessus est de préférence conduite dans un mélange d'eau et d'un solvant organique miscible à l'eau, par exemple un mélange de tétrahydrofuranne et d'eau, notamment à une concentration en tétrahydrofuranne d'environ 40 à 60 %,. dans une gamme de températures d'environ 0 à environ 250C ou notamment d'environ 5 5 à envirpn 1000 pendant une durée maximale de 6 heures, mais notamment pendant environ 4 heures. Le composé IV, c'est-à-dire la 1-N-[L-(-)-gamma-amino- alpha-hydroxy-butyryl]-kanamycine A (BB-K8), à une excellente activité antibactérienne qui semble être supérieure à celle de la kanamycine A elle-même. On donne ci-après deux tableaux qui illustrent les concentrations inhibitrices minimales de la kanamycine A et du composé IV (BB-K8) à l'égard de diverses bactéries Gram-positives et Gram-négatives, d'après la méthode de dilution -à la gélose de Steers (tableau I) et la méthode de dilution d'un facteur deux (tableau II). On utilise le milieu gélosé de Muller Hinton dans l'étude du tableau I et le bouillon d'infusion de coeur dans l'étude du tableau II. TABLEAU I (Concentration inhibitrice minimale en mg/ml) Organisme Kanamycine Composé IV A (6-8198) (BB-K8), lot ~~~~~~~~~~~~~ BD 4 Alk. faecalis A-9423 16 8 Il " A-20648 > 125 > 125 Ent. cloacae A-0656 4 4 species A-20364 > 125 2 hafniae 1 A-20674 1 E. coli A-0636 2 1 " " A-20664 16 4 A-20665 > 125 1 " " A-20507 32 2 " " A-20520 > 125 4 TABLEEAU I (suite) Organisme anamycine Composé IV A (6-8198) (BB-K8) lot ~~~~~~~~~~~ lot N0 4) E. coli A-20365 > 125 1 A-20684 2 2 " " A-20682 > 125 2 " A-20683 > 125 8 " A-20681 > 125 2 " A-15119 4 4 K. pneumoniae A-0967 4 4 " species A-20328 > 125 2 " " A-20330 32 32 " " A-20634 > 125 4 pneumoniae A-20680 > 125 4 A-0077 1 1 Pr. mirabilis A-9900 2 2 " morganii A-15153 2 2 " vulgaris A-9555 2 1 " rettgeri A-9636 0,25 0,25 mirabilis A-20645 4 4 Alk. faecalis A-9423 16 8 " " A-206478 > 125 > 125 Ent. cloacae A-0656 4 4 species A-20364 > 125 2 hafniae 1 A-20674 1 1 E. coli A-0636 2 1 " A-20664 16 8 " A-20665 > 125 1 " A-20507 32 2 " A-20520 > 125 4 " A-20365 > 125 1 " " A-20684 2 2 " " A-20682 > 125 2 " " A-20683 > 125 8 " t! A-2068 > 125 TABLEAU I (suite) Organisme Kanamycine Composé IV A (6-8198) (BB-K8) lot N 4 E. coli A-15119 4 4 K. pneumoniae A-0967 4 4 Species A-20328 > 125 2 " A-20330 32 32 Il t? A-20634 > 125 4 " pneumoniae A-20680 > 125 4 " " A-0077 1 1 Pr. mirabilis A-9900 2 2 Pr. morganii A-i 5153 2 2 vulgaris A-9555 2 1 rettgeri A-9636 0,25 0,25 mirabilis A-20645 4 4 PrO mirabilis A-20454 2 2 Providencia stuartii A-20615 2 1 alkalifaciens A-20676 1 1 Ps. aeruginosa A-20229 32 2 " " A-0943A 125 16 " " A-20653 > 125 32 species A-20601 125,63 16 " " A-20621 > 125 > 125 " maltophilia A-20620 32 z > 125 Sal. enteritidis A-0531 1 0,5 derby A-20087 > 125 1 Ser. marcescens A-20019 2 4 " " A-9933 4 8 " " A-20460 > 125 4,2 " " A-20459 4 16 Shig. flexneri A-9684 4 4 Aeromonas sp. A-20670 2 2 Arizona sp. A-20671 2 1 Citrobacter sp. A-20673 4 4 Edwardsiella sp. A-20678 4 4 Staph. aureus A-9606 1 TABLEAU I (suite) Organisme Kanamycine Composé IV A (6-8198) (BB-K8) lot N 4 Staph. aureus A-4749 0,5 1 n " A-9537 2 1 " " A-20610 > 125 2 n " A-20240 > 125 8 " " A-15197 1 2 Milieu Mueller-Hinton + 4 % de sang de mouton Str. faecalis A-9854 63 63 " " A-9575 125 > 125 Str. pyogenes A-20200 32,t6 32 " A-9604 125 125 n " A-15040 125 125 " " A-20065 125 125 D. pneumoniae A-9585 63,32 63 tr n A-20159 125 > 125 TABLEAU II Concentration inhibitrice minimale, mg/ml Organisme Kanamycine Composé IV A (6-8196) (BB-K8) lot N 4 D. pneumoniae A-0585 + 5% de sérum 63 63 Str. pyogenes A-9004 + 5% de sérum 125 125 Staph. aureus Smith A-9537 0,5 0,5 Staph. aureus A-9497 0,5 0,5 Staph. aureus A-20239 125 4 Staph. aureus A-20240 125 4 Enter. cloacae A-0656 2 2 Enter. species A-20364 125 2 K. pneumoniae A-9867 2 4 E. coli E-12 ML 1410 A-20361 2 4 E. coli K-12 ML 1630 A-20363 125 2 E. coli K-12 A-9632 2 1 E. coli A-20664 32 8 E. coli A-20665 125 8 TABlEAU II (suite) Organisme Kanamycne A Composé IV (6-8196) (BB-K8) lot lot NO 4 Pr. mirabilis A-99C0 2 16 Pr. morganii A-15153 4 16 Pr. vulgaris A-9436 1 2 Ps. aeruginosa A-20227 4 1 Ps. species A-20499 67 4 Ps. aeruginosa A-20653 125 4 Ps. species A-20621 125 125 Ser. marcescens A-20019 2 4 Ser. marcescens A-20141 16 16 Les données de concentration inhibitrice minimale présentées ci-dessus montrent que le composé IV (EB-K8) est supérieur à la kanamycine A par son activité, notamment contre les organismes qui résistent à la kanamycine A. les données de concentration inhibitrice minimale sont également en très bonne corrélation avec les résultats in vivo pour les trois organismes contre lesquels la kanamycine A et le composé IV ont été expérimentés. le composé IV et la kanamycine A sont tout aussi efficaces dans les infections causées chez la souris par les souches sensibles à la kanamycine de E. coli A-15119 et Staph. aureus A-9537. Bien que les valeurs DC50 (dose curative pour 50 % des souris atteintes d'infection léthale) envers Staph. aureus A-9537 semblent indiquer que le composé IV est légèrement moins actif que ne ltest la kanamycine A, cette petite différence est vraisemblablement insignifiante, parce que les taux de doses sont très écartés (dilution d'un facteur 53. Contre la souche résistant à la kanamycine de E. coli A-20520, la kanamycine A, comme on doit s'y attendre, n'est pas très efficace in vivo, tandis que le composé IV déploie une nette activité protectrice. Le composé IV est à peu près dix fois plus actif contre cette souche de E. coli, lorsqu'il est administré selon un schéma impliquant quatre traitements, qu'il ne l'est lorsqu'on l'administre selon un schéma impliquant deux traitements. TABLEAU III comparaison des activités en vitro et en vivo du composé IV et de la kanamycine A Composés N de Staphylococcus Escherichia coli Escherichia coli l'essai aureus A-9537 A-15119 A-20520 CIMa DC50b CIM DC50 CIM DC50 Composé IV 1 1 2,0 x 2 2 2 x 2 2 66 x 2 2 -c - - - - 5 x 4 Kanamycine A 1 2 0,5 x 2 4 4 x 2 125 200x2 2 - - - - - 200x4 (a) CIM = concentration inhibitrice minimale ( g/ml). Les tests ont été effectués d'après la méthode de Chisholm et Collaborateurs ("Antimicrob. Agents and Chemotherapy-1969)", page 244, 1970) en utilisant comme milieu d'essai la gélose de Mueller-Hinton. (b) DC50 = Dose curative, 50 % (mg/Kg traité x nombre de traitements). Des souris sont traitées par voie sous-cutanée une et quatre heures après l'infection lorsque deux traitements sont administrés et 0, 2, 4 et 6 heures après l'infection lorsque quatre traitements sont administrés. On trouvera d'autres aspects de ce test dans Price et Collaborateurs "J. of Antibiotics" 22:1, 1969). (c) = non traité le composé IV est intéressant à utiliser comme abent antibactérien, supplément nutritionnel pour l'alimentation des animaux, agent thérapeutique pour les oiseaux et les mammifères, y compris l'homme, et il est particulièrement intéressant à utiliser dans le traitement de maladies infectieuses dues à des bactéries Gram-positives et Gram-négatives. Le composé IV administré par voie orale est intéressant à utiliser comme traitement auxiliaire pour la stérilisation pré-opératoire des voies intestinales. La flore tant aérobie qutanaérobie qui est sensible à ce médicament est réduite dans le colon. Accompagné d'un nettoyage mécanique convenable, ce composé est intéressant à utiliser dans la préparation de la chirurgie du colon. le composé IV est efficace dans le traitement d'affections bactériennes généralisées chez lthomme lorsqutil est administré par voie parentérale à la dose d'environ 250 à environ 3000 mg par jour en plusieurs prises, trois ou quatre fois par jour. Généralement, le compos est efficace lorsqu'il est administré à une dose d'environ 5,0 à 7,5 mg/kg de poids corporel, toutes les douze heures. Exemple t Anhydride 5-norbornène-endo-2,3-dicarboxylique (XVIII) On effectue la préparation d'après le procédé décrit par 0. Diels et K. Alder dans "Ann." 460, 98 (1928). On ajoute goutte à goutte 66,1. g (1 mole) de cyclopentadiène, en refroidissant, à une suspension sous agitation de 98,1 g (1 mole) dranhydride maléique dans 500 ml de benzène anhydre. On agite le mélange pour obtenir un précipité cristallin qu'on recueille par filtration et qu'on fait recristalliser dans de la ligroïne (essentiellement n-hexane) en mélange à 1:1 avec du benzène, ce qui donne 116 g (71 %) du produit indiqué dans le titre, fondant à 164-1660C. (La littérature indique un point de fusion de 164165 C). Exemple 2 N-hydroxy-5-norbornène-endo-2,3-dicarboximide (HONB) (XIX) On effectue cette préparation d'aprèSte procédé dé crit par B. Bauer et S.V. Miarka dans "J. Org. Chem." 24, 1293 (1959). L'anhydride de norbornène (XVIII) (115 g, 0,7 mole) est ajouté à une solution dthydroxylamine préparée en ajoutant 47,5 g (0,45 mole) de carbonate de sodium à une solution de 60,5 g (0,87 mole) de chlorhydrate dtllydroxylamine dans 140 ml d'eau. On chauffe le mélange à 60-7O0C pendant une heure et on le maintient au repos pendant environ 16 heures dans un réfrigérateur.On recueille les cristaux par filtration, on les lave avec 120 ml d'acide chlorhydrique 5N froid et on les sèche pour obtenir 84,9 g (70 %) de composé XIX fondant à 1720C. On acidifie la liqueur-mère à un pH égal à 2 et on ltextrait au chloroforme ~(70 ml x 10). Par évaporation des extraits chloroformiques, on obtient la seconde récolte de composé XIX (7,2 g ; 6 %), point de fusion 170-172 C. Exemple 3 Ester de N-hydroxy-5-norbornène-2,3-dicarboximide de l'acide L-gamma-benzyloxycarbonylamino-alpha hydroxybutyrique (XX) En opérant à 100O,on ajoute 2,06 g (0,01 mole) de dicyclohexylcarbodiimide (DDC) à une solution sous agitation de 2,53 g (0,01 mole) d'acide L-gamma-benzyloxycarbonylamino- alpha-hydroxybutyrique et de 1,79 g (0,01 mole) de composé XIX dans 50 ml de tétrahydrofuranne anhydre. On agite le mélange pendant environ 16 heures à la température ambiante. On sépare par filtration le précipité de dicyclohexylurée et on le lave au tétrahydrofuranne, On rassemble le filtrat et les liqueurs de lavage et on évapore le tout sous vide.On fait passer le résidu huileux (4,5 g) sur une colonne de gel de silice que l'on élue à l'acétate d'éthyle pour obtenir 4,0 g (96 %) de l'ester actif XX sous la forme d'une huile incolore. Spectre infrarouge (IR, sans dilution) : 3300, 1820, 1780, 1735, 1720, 1695 cm-1 Spectre de résonance magnétique nucléaire [RMN DU13 + 1 goutte de D2O)] : g (en ppm) 1,63 (2H, quadruplet, J = 9Hz), 2,15 (2H, multiplet), 3,40 (6H, multiplet), 4,60 (1H, doublet de doublets, J=7 et 5 Hz), 5,13 (2H, singulet), 6,20 (2H, large), 7,40 (5H, singulet). Exemple 4 N-benzyloxycarbonyloxy-5-norbornène-2,3-dicarboxy mide (XVII) On ajoute 3,58 g (0,02 mole) de N-hydroxy-5-norbor- nène-2,3-dicarboximide (XIX) à 1000 à une solution sous agitation de 2,64 g (0,066 mole) d'hydroxyde de sodium dans 50 ml d'eau. On ajoute goutte à goutte à la solution 6,82 g (0,04 mole) de chlorure de benzyloxycarbonyle en 40 minutes à 0-50C et on agite le mélange pendant quatre heures à la température ambiante. On ajoute au mélange réactionnel 20-ml de n-hexane pour obtenir un précipité blanc que l'on recueille par filtration et que l'on fait sécher à l'air. On fait cristalliser le produit brut dans un mélange de benzène et de n-hexane et on obtient ainsi 5,1 g (81,0 %0) de prismes incolores du composé XVII, fondant à 1211220C. Spectre infrarouge (KBr) : 1810, 1780, 1740, 1630 cm-1. Résonance magnétique nucléaire (acétone-d6): d & (en ppm), 1,66 (2H, large singulet), 3,45 (411, multiplet), 5,37 (2H, singulet), 6,12 (2H, triplet, J = 1,5 Hz), 7,48 (5H, singulet). Analyse: 0% E % N% Calculé pour C17H15N05 : 65,17 4,83 4,47 Trouvé : 65,50 4,43 4,44 Exemple 5 6'-N-bebnzyloxycarbonylkanamycine A (II) r6'-Cbz- kanamycine A] On ajoute en plusieurs portions 3,14 g (0,1 mole) de composé XVII, en une heure à 70C,à une solution sous agitation de 4,84 g (0,01 mole) de kanamycine A base libre, dans 50 ml de tétrahydrofuranne en solution aqueuse à 50 %0. On continue d'agiter ce mélange pendant quatre heures puis on évapore sous vide pour éliminer le solvant organique. la solution aqueuse résultante est diluée avec 150 ml d'eau et extraite avec deux portions de 100 ml de butanol saturé d'eau. La phase butanolique est lavée avec 100 ml d'eau et évaporée sous vide; on obtient ainsi 1,78 g de poly-Cbz-kanamycine A.La phase aqueuse et les eaux de lavage sont rassemblées et concentrées sous vide à un volume d'environ 50 ml. On fait passer la solution aqueuse sur une colonne de résine d'échange ionique CG-50 (NH4 +,140 ml)qu'on élue successivement avec 200 ml d'eau, 1,9 litre d'hydroxyde d'ammonium 0,05 N, 1,9 litre d'hydroxyde d'ammonium 0,1 N et finalement un litre d'hydroxyde d'ammonium 0,3 N. On recueille l'éluat en fractions de 20 ml et on le divise enjeux fractions, comme indiqué ci-après, sur la base de la valeur Rf de la chromatographie en couche mince [chromatographie en couche mince (S-114 ; Rf de la 6'-Cbz-kanamycine = 0,23 ; Rf de la kanamycine = 0,07)~7. On évapore chaque fraction sous vide et on sèche le résidu sous vide sur du pentoxyde de phosphore. Fraction N des tubes Eluant Quantité Identité 1 106-144 NH4OH 0,1 N 3,44 g 6'-Cbz (56 %) kanamycine (II) 2 203-212 NH40H 0,3 N 0,54 g Kanamycine (11 0 recueillie La 6'-Cbz-kanamycine (II) ainsi préparée est très pure et homogène d'après la chromatographie en couche mince sur plaque dégel de silice ; P.F. 2172i9OC. les propriétés physicochimiques concordent avec celles de l'échantillon authentique. Exemple 6 Préparation de la 1-N-[L-(-)-gamma-amino-alpha- hydroxybutyryl-kanamycine A (BB-K8, IV) par ltintermédiaire de la base de Schiff benzaldéhy digue On ajoute 3 ml (0,03 mole) de benzaldéhyde à une solution sous agitation de 6,19 g (0,01 mole) de 62-Cbz-kanamy- cine (II) dans 50 ml de tétrahydrofuranne à 50 %. On agite le mélange pendait trois heures à la température ambiante2 on le refroidit à 5 C puis on le traite avec une solution de 4 g (0,01 mole) de composé XX dans 50 ml de tétrahydrofuranne. On agite le mélange pendant une heure à SOC, on ajuste son pH à 2 avec de 1 l'acide chlorhydrique' 6N, on agite pendant encore une heure à la température ambiante, puiq6n l'évapore sous vide pour éliminer le solvant organique. On lave la solution aqueuse résultante avec 20 ml de chlorure de méthylène, on ajuste son pH à 4 avec de l'hydroxyde d'ammonium à 10 % et on l'hydrogène pendant environ 16 heures avec 1,25 g de palladium à 10 % fixé sur du carbone, à la pression atmosphérique et à la température ambiante. On sépare le catalyseur par filtration et on le lave avec 20ml d'eau. On rassemble le filtrat et les eaux de lavage, on ajuste le pH à 8 avec de l'hydroxyde d'ammonium à 10 % et on fait passer le mélange sur une colonne de CG-50 (NH4+, 200 ml), que l'on élue avec 0,4 litre d'eau, 1,2 litre d'hydroxyde d'am- monium 0,1 N, 2,06 litres d'hydroxyde d'ammonium 0,3 N, 0,92 litre d'hydroxyde d'ammonium 0,5 N et,finalement, 1,2 litre d'hydroxyde d'ammonium 1,0 N.On recueille l'éluat en fractions de 20 ml et on le divise en les fractions indiquées ci-après sur la base de la valeur Rf obtenue en chromatographie en couche mince sur plaque de gel de silice (S-110, ninhydrine) et dans l'essai en botte, en utilisant B. subtilis PCI 219 et P. aeruginosa A 9843.On évapore chaque fraction sous vide et on la lyophilise. Fraction Numérotation Concentration de Rendement en Rendement des tubes la solution aqueuse poids biologique ammoniacale d'élution 1 90-99 0,3 N 1603 mg (33 %) 1490 mg (30 %)*1 Kanamycine recueillie 2 152-161 0,3 N 483 mg (8 %) BB-K29 3 162-169 0,3 N 376 mg(6%) 196 mg (3 %)*2 BB-K29+ BB-K 8 4 170-197 0,3 N-0,5 N 1877 mg (30%) 1350 mg (23%)*2 BB-K 8 + BB-K 11 5 198-203 0,5 N 100 mg (2 %) BB-K 11 6 238-257 1,0 N 146 N 146 mg (2 %) Composé diacyclé *1 Titrage par rapport à B. subtilis PCI 219 *2 Titrage par rapport à K. pneumoniae A 20680 sensible à BB-K 8 et de grande résistance à la kanamycine, à BB-K 11 et à BB-K 29 On dissout la fraction 4 (1,877 g) dans 10 ml d'eau désionisée.On ajuste le pH de la solution à 6 avec de l'acide chlorhydrique à 10 % et on l'adsorbe sur une colonne CG-50 (NH4+, 15 ml) que l'on élue avec 100 ml d'hydroxyde d'ammonium 0,) M et 200 ml d'hydroxyde d'ammonium 0,5 N. On recueille l'éluat en fractions de 20 ml. Les tubes N 6 et N0 8 à 17 réagissent positivement à la ninhydrine. On rassemble les contenus des tubes N 8 à 17 et on concentre le mélange sous vide à un volume d'environ 1 ml. On traite le concentré avec 3 ml de méthanol et on le filtre. On lave le filtre avec 0,5 ml de solution aqueuse à 75 % de méthanol.On rassemble le filtrat et les liqueurs de lavage, on dilue le mélange avec un volume supplémentaire de 10-ml de méthanol et on le laisse reposer pendant environ 16 heures à la température ambiante. Après avoir filtré le précipité amorphe, on ensemence le filtrat pour obtenir des cristaux incolores du composé IV qui est identique à un échantillon authentique. le filtrat est évaporé sous vide et lyophilisé. le rendement et le titre de chaque fraction sont indiqués sur le tableau suivant IV Quantitéd Titre Rendement B. subtilis K.Pneu- B. sub- K.pneumoniae tilis moniae Poudre amorphe 70 mg 737 U/mg 927 U/mg 0,9 % 1,1 % Cristaux 1098 mg 1163 U/mg 1087 U/mg 19 % 19 % Poudre lyophilisée 180 mg 608 U/mg 504 U/mg 1,9% 1,6% le composé BB-K 11 est la 3"-N-[L-(-)-gamma-amino- alpha-hydroxybutyryl]-kanamycine A, le composé 33-K 29 est la 3-N-[-L-(-)-gamma-amino- alpha-hydroxybutyryl]-kanamycine A. Exemple 7 Préparation de l'acide l-(-)-gamma-benzyloxycarbonyl- amino-alpha-hydroxybutyrique (VI) On ajoute 7,4 g (0,062 mole) d'acide L-(-)-gamma- amino-alpha-hydroxybutyrique à une solution de 5,2 g (0,13 mole) d'hydroxyde de sodium dans 50 ml d'eau. On ajoute goutte à goutte à la solution sous agitation, à 0-5 C en une période de 0,5 heure, 11,7 g (0,068 mole) de chlorure de carbobenzoxy et on continue d'agiter pendant encore une heure à la même température.On lave le mélange réactionnel avec 50 ml d'éther, on ajuste son pH à 2 avec de l'acide chlorhydrique dilué et on ltextrait avec quatre portions de 80 ml d'éther. On rassemble les phasesd2extraction à l'éther, on les lave avec une petite quantité de solution saturée de chlorure de sodium, on les déshydrate avec du sulfate anhydre de sodium et on les filtre. On évapore le filtrat sous vide et on fait cristalliser le résidu dans du benzène pour obtenir 11,6 g (74 %) de lamelles incolores qui fondent à 78,5-79,5 C; [&alpha;]D-4,5 (c = 2, CH3OH). Spectre infrarouge (KBr): &gamma; c=O 1740, 1690 cm-1.Résonance magnétique nucléaire (RMN) (acétone-d6) Jr (en ppm par rapport à TMS) 2,0 (2H, multiplet), 3,29 (2H, double doublet, J = 6,7 et 12 Hz), 4,16 (1H, double doublet, J = 4,5 et 8. Hz), 4,99 (2H, singulet) 6,2 (2H, large), 7,21 (5H, singulet). Analyse: C% H% N% Calculé pour C12H15NO5: 56,91 5,97 5,53 Trouvé : 56,66 5,97 5,47 Exemple 8 Ester de N-hydroxysuccinimide de l'acide L-(-) gamma-benzyloxycarbonylamino-alpha-hydroxybuty rioue (VII) On refroidit à OOC une solution de 10,6 g (0,042 mole) de composé VI et de 4,8 g (0,042 mole) de N-hydroxysuccinimide G.W. Anderson et Collaborateurs, "J. Am. Chem. Soc." 86, 1839 (1964) dans 200 ml d'acétate d'éthyle, puis on ajoute 8,6 g (0,042 mole) de dicyclohexylcarbodiimide. On maintient le mélange pendant environ 16 heures dans un réfrigérateur.La dicyclohexyl- urée qui précipite est séparée par filtration et le filtrat est concentré à environ 50 ml sous pression réduite en donnant-des cristaux incolores du composé VII, que lion recueille par filtration ; on en obtient 6,4 g fondant à 121-122,5 C.On évapore le filtrat à sec sous vide et on lave le résidu cristallin avec 20 ml d'un mélange de benzène et de n-hexane pour/obtenir une récolte supplémentaire de composé VII. le rendement total est de 13,4 g (92 k ). [&alpha;]D = 1,5 (c=2, CHCL3 ) ; spectre infrarouge (KBr)Yc=o 1810, 1755, 1740, 1680 cm . Résonance magnétique nucléaire (acétone-d6) je (en ppm par rapport à TMS) 2,0 (2H, multiplet), 2,83 (4H, singulet), 3,37 (2H, doublet de doublets), J = 6,5 et 12,5 Hz), 4,56 (1H, multiplet), 4,99 (2H, singulet), 6,3 (2H, large), 7,23 (5H, singulet). Analyse: C% H% N% Calculé pour C16H18N2O7: 54,85 5,18 8,00 Trouvé : 54,79 5,21 8,14 54,70 5,20 8,12 Exemple 9 Préparation du N-(benzyloxyearbonyloxy)succini- mide On dissout 23 g (0,2 mole) de N-hydroxysuccinimide dans une solution de 9 g (0,22 mole) d'hydroxyde de sodium dans 200 ml d'eau. On ajoute goutte à goutte à la solution sous agitation 34 g (0,2 mole) de chlorure de carbobenzoxy en refroidissant à l'eau, puis on agite le mélange à la température ambiante pendant environ 16 heures pour séparer le dérivé carbobenzoxy que l'on recueille par filtration, dugon lave à l'eau et qu'on fait sécher à l'air. Rendement = 41,1 g (82 %). Par recristallisation dans un mélange de benzène et de n-hexane à 10:1, on obtient des prismes incolores fondant à 78-79 C. Exemple 10 Préparation de la 6'-carbobenzoxy-kanamycine A (II) On refroidit au-dessous de 90C et on agite énergiquement une solution de 42,5 g (90 mmoles) de kanamycine A base libre dans 450 ml d'eau et 500 ml de diméthylformamide. On ajoute goutte à goutte à la solution en deux heures environ, une solution de 22,4 g (90 mmoles) de N-(benzyloxycarbonyloxy) succinimide dans 500 ml de diméthylformamide. On agite le mélange entre -10 et OOC pendant environ 16 heures, puis à la température ambiante pendant 24 heures. On évapore le mélange réactionnel sous pression réduite au-dessous d'environ 50 OC. On dissout le résidu huileux dans un mélange de 500 ml d'eau et 500 ml de butanol, le mélange étant filtré pour éliminer la matière in soluble et divisé en deux phases.La phase butanolîque et la phase aqueuse sont traitées avec deux fois 500 ml d'eau saturée de butanol et respectivement deux fois 500 ml de butanol saturé d'eau, en utilisant une technique semblable à la distribution à contre-courant Les trois phases aqueuses sont rassemblées et évaporées à sec- sous pression réduite en donnant un résidu hui leux dont une partie cristallise au repos à la température ambiante. On ajoute au résidu contenant les cristaux environ 100 ml de méthanol qui dissolvent l'huile et la séparent des cristaux. Après avoir ajouté environ 300 mi d2éthanol, on maintient le mélange à la température ambiante pendant environ 16 heures pour obtenir une masse cristalline que lton recueille par filtration. Cette masse pèse 44 g. le produit contient une petite quantité de kanamycine A, comme indiqué par la chromatographie en couche mince effectuée en utilisant un mélange de n-propanol, de pyridine, d'acide acétique et d'eau à 15:10:3:12, comme solvant, et la ninhydrine comme réactif pulvérisable. le produit brut est dissous dans 300 ml d'eau et la solution est chromatographiée sur une colonne de 30 mm de diamètre, de résine d'échange ionique CG-50 (type Mt4+, 500 ml). On fait passer sur la colonne une solution dthydroxyde d'ammonium décinormale et on recueille ltéluat en fractions de 10 ml. le produit désiré est contenu dans les tubes N 10-100, tandis que la kanamycine A est recueillie dans les fractions se déplaçant plus lentement et que 11 isomère ou les isomères de position du produit semblent entre contenus dans les fracticns se déplaçant rapidement.Les fractions 10 à 110 sont rassemblées et évaporées à sec sous pression réduite en donnant 24,6 g (45 %) d'un produit incolore consistant en 6-carbobenzoxy-kanamycine A (II) t6'- Cbz-kanamycine A7, qui commence à fondre et à se colorer à 204 C et qui se décompose à 2120C avec dégagement de gaz ; [&alpha;]D = +1060 (c=2, H2O). Chromatographie en couche mince (gel de silice "F254't; ninhydrine) Valeur de Rf Système de solvant 6'-Cbz-kanamycine A Kanamycine A n-PrOH-pyridine-AcOH H20 0,42 0,33 0,15 0,04 (15: 10: 3: 12) (principale) (secondaire) Acétone-AcOEAE20 0,24 0,14 (20:6:74) CHCl3-MeOH-NH4OH concentré-H2O 0,76 0,50 (1:4:2:1) AcOMe-n-Pr-OH-NH4OH concentré 4 0,22* 0,04* (45:105:60) * Valeurs déterminées par la méthode à l'anthrone et à l'acide sulfurique On a constaté que le produit final s'accompagnait de deux composants secondaires, d'après la chromatographie en couche mince, avec l'un des systèmes de solvants expérimentés. Toutefois, le produit final a été utilisé sans autre purification pour la préparation de BB-K8 (IV). Exemple t1 Préparation de l'acide L-(-)-gamma-amino-alpha hydroxybutyrique à partir de l'ambutyrosine (A et/ou B) On chauffe au reflux pendant une heure 5,0 g d'ambutyrosine A (brevet des Etats-Unis d'Amérique N 3 541 078), avec 160 ml dthydroxyde de sodium 0,5 N. On neutralise lthydro- lysat avec de l'acide chlorhydrique 6N et on le chromatographie sur une colonne de "CG-50"(type NH4+). On isole l'acide L-(-) gamma-amino-alpha-hydroxybutyrique désiré par développement de la colonne avec de l'eau puis élimination de l'eau par lyophilistation.L'acide It- (-) -gamma-amino-alpha-hydroxybutyrique est une matière cristalline qui fond à 212,5-214,5 C (brevet des Etats Unis d'Amérique N 3 541 07a précité , colonne 2, lignes 31-38). Exemple 12 Préparation de l'acide L-(-)-gamma-amino-alpha- hydroxybutyrique à partir de l'acide DL-alpha hydroxy-gamma-phtalimidobutyrique A. L-alpha-hydroxy-gamma-phtalimidobutyrate de géhydroabiéthylammonium On ajoute une solution de 29 g (0,1 mole) de déhy- droabiéthylamine dans 130 ml d'éthanol à une solution de 25 g (0,1 mole) d'acide 2-hydroxy-gamma-phtalimido-butyrique (Y. Saito et Collaborateurs, "Tetrahedron Letters" 1970, 4863) dans 200 ml d'éthanol. On agite énergiquement la solution par secousses pendant une minute et on la laisse reposer à la température ambiante pendant 5 heures, période pendant laquelle de fines aiguilles se séparent par cristallisation.On recueille les cristaux par filtration, on les lave avec 50 ml d'éthanol et on les fait sécher à l'air, pour obtenir 30,1 g (56 %) d'un diastéréoisomère du sel de déhydroabiéthylamine fondant à 93-94 C ; [&alpha;]D24 = +150 (c, 2,5, MeOH). Par recristallisation dans 300 ml d'éthanol, on obtient 23,2 g (43 %) du produit pur fondant à 94-95 C ; [&alpha;]D24 = +10,80 (c, 2,5, méthanol). Une autre recristallisation ne modifie pas le point de fusion ni la rotation spécifique. Analyse: C% H% N% Calculé pour C32H42N2O5.H2O: 69,54 8,02 5,07 Trouvé : 69,58 8,08 5,07 B. Acide L-(-)-gamma-amino-alpha-hydroxybuty risque On ajoute 5,3 g (0,01 mole) de l-alpha-hydroxy- gamma-phtalimido-butyrate de déhydroabiétyhlammonium et 60 ml d'ether à une solution de 1,5 g (0,014 mole) de carbonate de sodium dans 40 ml d'eau On agite énergiquement le mélange par secousses jusqu'à ce que toute la matière solide se soit dissoute. On sépare la phase d'éther. On lave deux fois la solution aqueuse avec des portions de 20 ml d'éther et on l'évapore à un volume de 15ml sous pression réduite. On ajoute au concentré 10 ml d'acide chlorhydrique concentré et on fait refluer le mélange pendant dix heures Après refrodissement, on élimine par filtration l'acide phtalique qui s'est séparé. le filtrat est évaporé sous pression réduite. Le résidu est dissout dans 10 ml d'eau et la solution est évaporée à sec. On répète cette opération deux fois pour éliminer l'acide chlorhydrique en excès. le résidu sirupeux est dissous dans 10 ml d'eau et la solution est filtrée pour éliminer une petite quantité d'acide phtalique insoluble. le filtrat est adsorbé sur une colonne de "IR-120" (H+, 1 cmx 35 cm),cette colonne est lavée avec 300 ml d'eau, puis elle est éluée avec une solution normale d'hydroxyde d'ammonium. L'éluat est recueilli en fractions de 15 ml. Les fractions 10 à 16 qui réagissent positivement à la ninhydrine sont rassemblées et évaporées sous pression réduite en donnant un sirop qui cristallise progressivement. les cristaux sont triturés avec de l'éthanol, filtrés et séchés-dans un dessiccateur à vide en donnant 0,78 g (66 %) d'acide L-(-)-gamma-amino-alpha-hydroxybutyrique fondant à 206-2070C ; [&alpha;]D24 = -290 (c, 2,5, H20). Le spectre infrarouge est identique à celui de l'échantillon authentique qui a été obtenu à partir d'ambutyrosine. Exemple 13 Préparation de la 6'-carboxybenzoxy-1,3,3"-tri-p- nitrobenzalkanamycine A (IIIc) On met en suspension 9,0 g (14,5 mmoles) de 6carbobenzoxykanamycine A dans 500 ml d'éthanol absolu à 240C et on ajoute 8,7945 g (58,2 mmoles) de p-nitrobenzaldéhyde. On chauffe le mélange au reflux. Pendant ce temps, le mélange devient une solution jaune limpide, mais au reflux, une substance solide blanche commence rapidement à se former. On chauffe le mélange au reflux pendant trois heures, puis on le refroidit et on recueille le produit par filtration et on le lave avec un peu d'éthanol absolu. On obtient 14,0 g (94,5 %) d'une substance solide cristalline blanche fondant à 233-234 (valeurs non corrigées),cette substance étant le produit IIIc indiqué dans le titre. Analyse: C% H% N% Calculé pour C47H51N7O19: 55,46 5,05 9,63 Trouvé : 55,39 5,08 9,60 Exemple 14 Préparation de la 1-N-r I-(-)-gamma-amino-alpha- hydroxybutyryl]-kanamycine A(IV) On dissout 5,0 g (4,91 mmoles) de 6'-carbobenzoxy ,3,3 "-tri-p-nitrobenzalkanamycine A dans 50 ml de diméthylformamide à 24 C. On dissout 2,064 g (5,895 mmoles) d'ester de N-hy droxysuccinimide d'acide E (-)-gamma-benzyloxycarbonylaminoalpha- hydroxybutyrique dans 20 ml de diméthylformamide à 240C et on ajoute la solution lentement (75 minutes), en agitant énergiquement, à une solution de la base de Schiff IIIc. On agite la solution à 240 pendant environ 16 heures.En utilisant le vide créé par un appareil à jet de vapeur, on sèche rapidement la solution à environ 4000. Ensuite, on la soumet à une vaporisation instantanée plusieurs fois avec 100 ml de méthanol pour obtenir une huile visqueuse. On dissout l'huile dans 100 ml de mélange à 1:1 de dioxanne et d'eau et on ajoute 10 ml d'acide acétique cristallisable. On place la solution dans une bouteille de Parr de 500 ml, qui contient 2,5 g de palladium à 5 % fixé sur du carbone (Engelhard) et on effectue une réduction sous pression d'hydrogène de 3,15 bars pendant 4 heures à 24 C. La chute totale de pression dans cet intervalle de temps (bouteille fermée) est de 6,1 bars, y compris les rétablissements périodiques de la pression.On filtre le mélange sur une couche de terre de diatomées qu'on lave ensuite avec trois fois 50 ml de dioxanne en solution aqueuse à 50 %. Les filtrats rassemblés sont séchés sous courant d'air et soumis à une distillation azéotropique avec du n-butanol (100 ml) et ils sont finalement soumis à plusieurs évaporations instantanées avec du méthanol, ce qui donne une huile visqueuse. On dissout cette huile dans 30 ml de méthanol et on verse lentement la solution dans 1000 mi d'éther diéthylique froid (5-10 C) en agitant énergiquement. Après agitation de la suspension résultante pendant une demi-heure au bain de glace, on recueille le précipité par filtration et on le sèche immédiatement au dessiccateur à vide sur du pentoxyde de phosphore. le mélange obtenu comme produit pèse 4,9620 g.La chromatographie en couche mince montre que le produit est essentiellement la kanamycine A (composé IV) avec quelques traces de kanamycine A di- et tri-substituée et renferme de l'acide 4-amino-2-hydroxybutyrique. On sépare les diverses fractions en utilisant une colonne de verre de 40 x 100 mm garnie de résine "Amberlite" IRC-50 (forme NH4 +, type I, particules de 0,074 à 0,149 mm) formant une couche de résine environ 980 mm. On charge sur la colonne 4,600 g du mélange brut dissous dans 1 ml d'eau. On élue la colonne avec un gradient allant de liteau à lthydroxyde d'ammonium 2N, l'éluat étant recueilli en fractions de 15 ml. On recuéille 295 fractions puis on lave la colonne avec 1,5 litre d'ammoniaque 3N. On recueille les fractions sur la base des rotations optiques et on en isole les matières solides par lyophi- lisation. Numéro des Composition Poids Poids to- Titre bio- Rendement, fractions (grammes) tal brut logique corrigé (grammes) 120-150 Kana A 1,1654 1,257 809 42,6 201-224 BB-K29 0,40 0,43 228-241 BB-K8 0,6523 0,7036 786+101* 19,2* * Moyenne de quatre essais en boîte, plus ou moins écart type ** Si l'on tient compte de la kanamycine A recueillie, le taux de transformation en BB-K8 (IV) est de 33,5 %. Dans cet essai, le rapport BB-K8 kanamycine A est égal à 0,45. le composé IV, tel qu'on le recueille dans ce procédé, est identique au produit authentique obtenu par le procédé décrit dans la demande de brevet français N 72 25 323 précitée, fondant à 1940 en se décomposant ; [&alpha;]D21 = +850 (c=2) H2O). L'activité relative contre B. subtilis (plaque de gélose) est de 960 Wg/mg (étalon : kanamycine A base libre). Analyse C% H% N% Calculé pour C22H43N5O13.2H2CO3: 40,62 6,68 9,87 Trouvé : 40,21 6,96 9,37 39,79 6;87 9,49 Exemple 15 Préparation du monosulfate de 1-N-[L-(-)-gamma- amino-alpha-hydroxybutyryl]-kanamycine A On dissout une mole de 1-N-[L-(-)-gamma-amino-alpha- hydroxybutyry7-kanamycine A dans un à trois litres d d'eau. On filtre la solution pour éliminer toutes les matières solides non dissoutes. On ajoute tala solution refroidie, sous agitation, une mole d'acide sulfurique dissous dans 500 mi d'eau. On continue d'agiter le mélange pendant 30 minutes, puis on y ajoute de l'é- thanol froid jusqu'à ce qu'une précipitation ait lieu.On recueille les matières solides par filtration et ltanalyse montre qutil s'a git du monosulfate désiré, Exemple 16 Préparation du disulfate de 1-N-l-(-)-gamma-amino- alpha-hydroxybutyryl]-kanamycine A (BB-K8.2H2SO4) On dissout 35 g de i-N-l-(-)-gamma-amino-alpha hydroxybutyryjl-kanamycine A (sous la forme du monobicarbonate trihydraté) dans 125 ml d'eau désionisée. On note un pH d'environ 9,0.On abaisse le pH à 7-7,5 avec une solution à 50 % en volume d'acide sulfurique On ajoute 8,5 g de charbon activé "Darco S-60"et et on délaie le mélange à la température ambiante pendant 0,5 heure On enlève le carbone par une filtration convenable et on procède à un lavage avec 40 ml d'eau. l'eau de lavage est ajoutée au fil trat. Après avoir rassemblé le filtrat et l'eau de lavage, on ajuste le pH à 2-2,6 avec une solution à 50 % en volume d'acide sulfurique. Une grande quantité d'anhydride carbonique se dégage. On maintient la solution sous le vide du laboratoire en agitant pendant 20 minutes pour chasser davantage d'anhydride carbonique. On ajoute 8,5 g de "Darco G-60" à la solution dégazée. On délaie le mélange pendant 5 heures à la température ambiante. On élimine le carbone par filtration convenable et on effectue un lavage avec 35 ml d'eau désionisée. On ajoute de l'eau au filtrat. On ajuste le pH du mélange de filtrat et d'eau de lavage à 1-1,3 avec une solution à 50 % en volume d'acide sulfurique. On ajoute cette solution sous agitation rapide en 10 minutes à 600-800 ml de méthanol (3-4 volumes de méthanol). On agite le mélange pendant 5 minutes à un pH de 1-t,3, on le fait passer sur un tamis de 0,149 mm d'ouverture de mailles, on l'agite pendant deux minutes et on le laisse se sédimenter pendant 5 minutes. On verse par décantation la majeure partie de la liqueur surnageante. La suspension restante est convenablement-filtre, lavée avec 200 ml de méthanol et séchée sous vide à 500C pendant 24 heures. le rendement en disulfate diacide de BB-K8 amorphe est de 32-34 g [&alpha;]D22H2O = + 74,750 ; décomposition à 220230oC. Analyse élémentaire (sur base sèche* Trouvé Théorie c % 32,7 33,5 32,3 33,5 N % 8,78 8,7 8,2 8,8 8,97 S % 8,75 8,9 7,8 8,85 8,2 Cendres, % Néant * Teneur en eau (méthode de Karl Fisher): 2,33, 1,79, 2,87 % (la valeur théorique pour le monohydrate est de 2,25 % d'eau). Ce sel est hygroscopique, mais non dé liquescent. Lorsqu'on laisse un échantillon à l2air libre à la température ambiante pendant 18 heures, sa teneur en eau augmente (9,55, 9,89 %);(la valeur théorique pour le pentahydrate est de 10,33 % d'eau). Exemple 17 Préparation de la 1-N-[L-(-)-gamma-amino-alpha-hy- droxybutyryl]-kanamycine A (IV) en l'absence de la base de Schiff intermédiaire. On ajoute goutte à goutte 930 mg (2 mmoles) de l'ester actif XX dans 10 ml de tétrahydrofuranne en 30 minutes à la température ambiante à une solution sous agitation de 1,36 g (2,2 mmoles de 6t-N-Cbz-kanamycine (II) dans 60 ml de solution aqueuse à 50 % de tétrahydrofuranne. On agite le mélange pendant environ 16 heures puis on l'hydrogène avec 1,0 g de palladium à 10 % fixé sur du carbone à la pression atmosphérique et à la température ambiante. On sépare le catalyseur et on le lave à l'eau. On rassemble le filtrat et les eaux de lavage et on évapore le tout sous vide pour éliminer le solvant organique. On fait passer la solution aqueuse résultante sur une colonne de "CG-50" (NH4 , 70 ml) que l'on élue successivement avec 0,4 litre d'eau, 0,5 litre d'ammoniaque décinormale, 0,5 litre d'ammoniaque 0,3 N, 1 litre d'ammoniaque 0,5 N et finalement 0,5 litre d'ammoniaque normale. On recueille l'élut en fractions de 20 ml que l'on di vise en d'autres fractions sur la base de la valeur de Rf trouvée par chromatographie en couche mince sur plaque de gel de silice (S-110, ninhydrine) et sur la base du titrage en bote, en utilisant B. subtilis PCI 219 et E. pneumcniae type 22 N 3038 A 20680. Chaque fraction est évaporée sous vide et lyophilisée. Exemple 18 6'-carbobenzoxy-1,3,3"-trisalicylalkanamycine A On met en suspension 9,0 g (14,5 mmoles) de 6'carbobenzoxykanamycine A dans 500 ml d'éthanol absolu à 240C et on ajoute 58,2 mmoles de salicylaldéhyde. On chauffe le mélange au reflux. Pendant cette période, le mélange se transforme enune solution jaune limpide, mais au reflux, une substance solide blanche commence rapidement à se former. On chauffe le mélange au reflux pendant trois heures puis on le refroidit et on recueille le produit par filtration et on le lave avec un peu d'éthanol absolu. le point de fusion, après recristallisation dans un mélange de tétrahydrofuranne, de méthanol etd'heptane à 4:1:5, après séchage, est égal à 196-198 C. Analyse : C % H % N % Calculé pour C47H54N4O16 : 60,62 5,86 6,02 Trouvé : 58,67 5,73 73 5,98 Eau (Karî Fischer) = 2,45 % Analyse (valeurs corrigées pour tenir compte de la présence d'eau): Trouvé : C, 60,14 ; H, 5,60 ; N, 6,13 Exemple 19 Préparation de la 1-N-[L-(-)-gamma-amino-alpha- hydroxybutyryjl-kanamycine A par le procédé in situ On met en suspension dans un appareillage convenable, 1000 g (1,074 mole) de 6'-carbobenzoxy-1,3,3"-trisalicylalkanamycine A dans 11400 ml de tétrahydrofuranne à 22-25 C. On ajoute 600 ml d'eau en agitant. la dissolution s'effectue en 10 minutes environ. On ajoute, sur base sèche, 181,5 g (0,716 mole) d'acide 4-benzyloxycarbonylamino-2-hydroxybutyrique et 0,12 mole de N-hydroxy-5-norbornène-2,3-dicarboximide à la solution. Le pH est compris entre 5,5 et 6,0. En maintenant la température entre 22 et 250C, on ajoute 162,3 g (0,787 mcle) de dicyclohexylcarbodiimide dissous dans 3000 ml de tétrahydrofuranne anhydre. On agite la suspension pendant 24 heures à 22-25CC puis on la refroidit à 0-15 C pour cristalliser la dicyclohexylurée, pendant deux heures. L'urée est séparée par filtration et le résidu est lavé avec 800 ml d'un mélange à 95:5 de tétrahydrofuranne et dteau. Le filtrat et les liqueurs de lavage sont rassemblées et leur volume est réduit à 3000 ml sous vide. On ajoute 4000 ml de méthanol et on réduit de nouveau le volume à 3000 ml sous vide. On ajoute à la solution ainsi obtenue 200C ml de méthanol absolu à 400C puis on ensemence la solution avec de la 6'carbobenzoxy-1,3"-trisalicylalkanamycine A et on laisse refroidir et cristalliser pendant 0,5 à 1 heure. Ensuite, on ajoute 20CC mi deau en une demi-heure en agitant correctement à environ 22-25 C pendant deux heures. On réduifensuite la température à 0-50 pendant une heure. On élimine les matières solides par filtration et on les lave avec 900 ml d'un mélange froid de méthanol et d'eau à 2:1 puis 800 ml de méthanol. On garde les filtrats et les liqueurs de lavage. le résidu consiste essentiellement en 6'-carbobenzoxy1,3,3"-trisalicylalkanamycine A récupérée. Les filtrats indiqués ci-dessus sont dilués avec 1000 ml d'eau. On ajoute 2000 ml de chlorure de méthylène. A 25 C, on abaisse le pH à 1,8-2,0 avec de l'acide chlorhydrique-6N. On le maintient à cette - valeur pendant une demi-heure. On sépare la phase chlorométhylénique et on lave la phase aqueuse avec une quantité supplémentaire de 2000 ml de chlorure de méthylène. les phases organiques rassemblées sont gardées en vue d'une récupération éventuelle du salicylaldéhyde. On élève le pH de la phase aqueuse à 3,5-4,0 avec de l'hydroxyde d'ammonium concentré. On hydrogène ensuite cette solution à la température ambiante, sous pression d'hydrogène gazeux de 3,5 bars, en présence de palladium à 5 % fixé sur du carbone. le rendement biologique du produit désiré en solution est de 30 à 45 % de la théorie. Exemple 20 Préparation du composé IV en utilisant divers pourcen tages molaires de N-hydroxy-5-norbornène-2,3-dicarboxy- mide tout en maintenant constants les autres pourcen tages molaires En remplaçant, dans le mode opératoire de l'exemple 20, la quantité de 0,12 mole de N-hydroxy-5-norbornène-2,3-dicar- boximide (HONB) qui y est utilisée par les divers pourcentages molaires suivants, on obtient les pourcentages de composé IV indiqués ci-après N de l'expé- Moles de HONB, % Rendement en rience ~~~~~~~~~~~~~~~~~~ composé IV. % 1 0 9,33 2 2 20,07 3 10 31,72 4 50 36,52 5 100 36,01 Il ressort des résultats donnés ci-dessus que la réaction donne le composé IV en l'absence totale de HONB.Toute fois, on peut constater également que les meilleurs rendements en composé IV sont obtenus lorsque le pourcentage molaire de HONB atteint 10 à 50 % de la quantité molaire d'acide 4-benzyloxy carbonylamino-2-hydroxybutyrique que l'on utilise dans la réac tion d'acylation. On ignore le mécanisme précis par lequel l'acy lation de la kanamycine A protégée s'effectue, Toutefois, on observe que la présence de HONB assure en quelque sorte-l'obten- tion de meilleurs rendements que ceux que l'on obtenait jusqu'ici. Exemple 21 Préparation de la i -N-El- (-Y -gamma-amino-alpha hydroxybutyryjl-kanamycine A (IV) On dissout dans 55 ml de diméthylformamide à 45 C, 18,6 g (20,0 mmoles) de 6'-carbobenzoxy-1,3,3"-trisalicylal- kanamycine A préparée comme décrit dans l'exemple 18. On ajoute à la solution obtenue 7,3 millilitres d'eau et 102 millilitres d'acé tone. On laisse refroidir cette solution à environ 250C et on y ajoute en une seule fois une solution de 50 ml d'acétone et de 9,9 mmoles d'ester de N-hydroxysuccinimide de l'acide L-(-)gamma- benzyloxy-carbonylamino-alpha-hydroxybutyrique. On agite le mélange réactionnel à environ 250C pendant 40 heures.Ensuite, on ajoute 150 ml d'eau et quelques cristaux de 6'-carbobenzoxy-1,3,3'trisalicylalkanamycine A et on agite le mélange à environ 250 pendant une heure puis à 0-5OC pendant trois heures. L'excès de base de Schiff du salicyalaldéhyde qui n'a pas réagi cristallise et est recueilli sur un filtre0 Be résidu est lavé avec 60 ml d'acétone en solution aqueuse à 50 %. On fait sécher le résidu et on le pèse ; on récupère ainsi 9,4 g de base de Schiff fondant (à l'état brut) à 170185oC. Le filtrat de l'opération décrite ci-dessus est traité avec 40 ml de chlorure de méthylène et le pH en est ajusté entre 6,2 et 2,0 pour éliminer une quantité supplémentaire de matière première. les phases sont séparées et la phase aqueuse est extraite avec deux fois 40 ml de chlorure de méthylène. Le pH de la phase aqueuse est ajusté à 3,7 et un faible volume d'acétone et de chlorure de méthylène est éliminé sous vide. La solution aqueuse est ensuite hydrogénée avec 3,0 g de catalyseur à 5 % de palladium fixé sur du carbone à 240C pendant 15 heures sous pression d'hydrogène de 3,15 bars. le mélange réactionnel est filtré sur de la terre de diatomées pour éliminer le catalyseur. On ajuste le volume du filtrat à 100 ml. On prélève un échantillon d'un millilitre de cette solution en vue du titrage sur plaque et du titrage en botte.Le titrage sur plaque donne 1936 Wg/ml de composé IV et le titrage en botte donne 2325 g/ml, ce qui correspond à un rendement de 33,4 ffi du produit final. Les 99 ml restants de solution sont concentrés jus qucà un volume d'environ 30 ml et traités par chromatographie sur colonne, comme décrit, précédemment, dans l'exemple 14. les fractions rassemblées contenant le composé IV (500 ml) sont concentrées à un volume d'environ 20 ml, auquel on ajoute 45 ml de méthanol, puis, goutte à goutte, environ 25 ml d'isopropanol pour faire cristalliser le produit. La matière cristalline est recueillie sur un filtre, lavée avec un mélange à 50/50 de méthanol et d'isopropanol et séchée en donnant 2,31 g de composé 33-K8 de formule IV. le titrage sur plaque des matières solides donne 836 g/mg, ce qui indique une pureté de 83,6 % et un rendement réel en composé pur de formule IV de 33,3 % sur la-base des 9,9 mmoles de matière première. REVENDICATIONS 1. Procédé de préparation du composé de formule : caractérisé par le fait qu'il comprend les opérations successives de A) traitement du composé de formule avec un aldéhyde choisi entre le benzaldéhyde, le salicyl aldéhyde, le p-nitrobenzaldéhyde, le p-méthoxybenzaldéhyde et le pivaldéhyde dans une proportion d'une mole de composé II pour au moins trois moles d'aldéhyde,pour produire le composé de formule Sans laquelle Z est un radical de formule B) traitement du composé III in situ avec le composé de formule : dans une proportion d'une mole de composé III pour au moins 0,5 mole de composé XX, puis hydrogénation du résidu in situ pour produire le composé de formule IV. 2. Procédé suivant la revendication 1 caractérisé par le fait qu'il consiste A) à traiter le composé de formule II avec un aldéhyde choisi entre le benzaldéhyde, le p-nitrobenzaldéhyde, le salicylaldéhyde, le p-méthoxybenzaldéhyde et le pivaldéhyde, dans une proportion dtune mole de composé II pour au moins trois moles d'aldéhyde, dans l'éthanol absolu, le méthanol, le npropanol, le chlorure de méthylène, ltisopropanol, le n-butanol, le sec.-butanol, le tertiobutanol, le tétrahydrofuranne, le dioxanne, lediméthylformamide ou l'acétone ou leurs mélanges ou un mélange avec de l'eau, dans une gamme approximative de températures allant de SOC à la température de reflux, pendant environ 30 minutes à environ 5 heures pour produire le composé de formule III, dans laquelle Z est un radical de formule B) traitement du composé III avec le composé de formule XX dans une proprotion d'une mole de composé III pour au moins 0,5 mole de composé XX, dans une gamme de températures d'environ -10 à environ +3SoC pendant au moins une heure, dans un système de solvants comme défini pour l'opération h ; puis élimination du solvant organique et hydrogénation du résidu in situ avec de l'hydrogène en présence d'un catalyseur métallique choisi entre le palladium, le platine, le nickel de Raney, le rhodium, le ruthénium et le nickel dans l'eau ou un mélange d'eau et d'un solvant miscible à l'eau choisi entre l'eau et le dioxanne, le tétrahydrofuranne, l'éther diméthylique de l'éthylène- glycol et l'éther diméthylique du propylène-glycol à un pH de 3 à 5, pour produire le composé de formule IV. 3. Procédé suivant l'une des revendications 1 et 2, caractérisé par le fait qu'il consiste A) à traiter le composé de formule II avec un aldéhyde choisi entre le benzaldéhyde, le salicylaldéhyde, le pnitrobenzaldéhyde et le p-méthoxybenzaldéhyde dans une proportion d'une mole de composé II pour au moins trois moles d'aldéhyde, dans l'éthanol absolu, le méthanol, le n-propanol, l'isopropanol, le chlorure de méthylène, le n-butanol, le sec.-butanol, le tertiobutanol, le tétrahydrofuranne, le dioxanne, le diméthylformamide ou l'acétone ou un mélange de ces solvants ou leur mélange avec de Igeau, dans une'gamme de températures de +5 à 400C pendant environ 30 minutes à environ 5 heures pour produire le composé de formule III, dans laquelle Z est un radical de formule B) traitement du composé III in situ ou après séparation avec le composé de formule XX dans une proportion d'une mole de composé III pour environ 0,5 à environ 1,0 mole du composé XX dans une gamme de +5 à 3SOC pendant une à trois heures, dans un mélange de solvants comme défini dans l'opération A, puis élimination du solvant et hydrogénation du résidu in situ avec de l'hydrogène en présence d'un catalyseur métallique choisi entre le palladium, le platine, le nickel de Raney, le rhodium, le ruthénium et le nickel, dans l'eau ou un mélange d'eau et d'un solvant miscible à l'eau choisi entre l'eau et le dioxanne, le tétrahydrofuranne, l'éther diméthylique de l'éthylène-glycol et l'éther diméthylique du propylène-glycol à un pH de 3 à 5, pour produire le composé de formule IV. 4. Procédé suivant l'une quelconque des revendications 1 à 3, caractérisé par le fait qu'il consiste A) à traiter le composé de formule II avec un aldéhyde choisi entre le benzaldéhyde, le salicylaldéhyde et le p-nitrobenzaldéhyde dans une proportion d'une mole de composé II pour environ trois moles d'aldéhyde dans l'éthanol absolu, le méthanol, le n-propanol, l'isopropanol, le n-butanol, le sec.butanol, le tertiobutanol, le tétrahydrofuranne, le dioxanne, le chlorure de méthylène, le diméthylformamide ou l'acétone ou un mélange de ces solvants ou leurs mélanges avec de l'eau dans une gamme de température de SOC à 40 :: pendant environ 30 minutes à environ 5 heures pour produire le composé de formule III dans laquelle Z est un radical de formule B) à traiter le composé III in situ ou après séparation avec le composé de formule XX dans une proportion d'une mole de composé III pour 0,5 à 0,85 mole de composé XX, dans une gamme de températures de +5 à 300G pendant une à trois heures dans un mélange de solvants du type défini dans l'étape A ; puis à éliminer le solvant et à hydrogéner le résidu in situ avec de l'hydrogène en présence d'un catalyseur métallique choisi entre le palladium, le platine, le nickel de Raney, le rhodium, le ruthénium et le nickel, dans l'eau ou dans un mélange d'eau et d'un solvant miscible à l'eau, choisi entre l'eau et le dioxanne, le t étrahydrofuranne, l'éther diméthylique de ltéthylène-glycol ou l'éther diméthylique du propylène-glycol à un pH d'environ 4 pour produire le composé de formule IV. 5. Procédé suivant l'une quelconque des revendications 1 à 4, caractérisé par le fait qu'il consiste A) à traiter le composé de formule II avec du benzaldéhyde dans une proportion d'une mole de composé II pour environ trois moles de benzaldéhyde, dans un mélange à environ 1::1 d'eau et de tétrahydrofuranne, à une température d'environ 20 à 300C pendant environ deux à quatre heures à un pH d'environ 10 pour produire le composé de formule et B) à traiter le composé IIIa in situ ou après séparation avec le composé de formule XX dans une proportion d'une mole de composé IIIa pour 0,6 à 0,75 mole de composé XX à une température comprise entre environ 20 et environ 300C pendant une à trois heures dans un mélange de solvants du type défini dans l'opération A, un mélange de chlorure de méthylène, de méthanol et d'eau ou un mélange de diméthylformamide, d'acétone et d'eau ; puis à éliminer le solvant organique sous vide, à ajuster le pH à 4 avec de l'hydroxyde d'ammonium et à hydrogéner le résidu in situ avec de l'hydrogène à la pression atmosphérique en présence de palladium fixé sur du carbone pour produire le composé de formule IV. 6. Procédé suivant l'une quelconque des revendications 1 à 4, caractérisé par le fait qu'il consiste A) à traiter le composé de formule II avec du salicylaldéhyde dans une proportion dtune mole de composé II pour environ 7 moles de salicylaldéhyde dans un mélange à environ 1::1 d'eau et de tétrahydrofuranne à une température d'environ 1 à 300C pendant environ 2 à 4 heures à un pH d'environ 8, pour produire le composé de formule B) à traiter le composé IIIb in situ ou après sépation avec le composé de formule XX dans une proportion d'une mole de composé IIIb pour environ 0,6 à 0,75 mole de composé XX à une température d'environ 20 à environ 300C pendant une à trois heures dans un mélange de solvants du type défini dans l'opéra- tion A ou un mélange de diméthylformamide,d'acétone et d'eau, puis à éliminer le solvant organique sous vide, à ajuster le pH à 4 avec de l'hydroxyde d'ammonium et à hydrogéner le résidu in situ avec de l'hydrogène à la pression atmosphérique en présence de palladium fixé sur du carbone pour produire le composé de formule IV. 7. procédé suivant lune quelconque des revendications i à 4, caractérisé par le fait que l'étape B consiste à traiter un composé de formule III in situ ou après séparation avec les composés répondant aux formules puis à ajouter du dicyclohexylcarbodiimide dans un rapport d'une mole de composé III à environ 0,5 à 1,0 mole de composé VI ainsi que de dicyclohexylcarbodiimide et environ 0,005 à 0,25 mole de composé XIX dans une gamme de températures d'environ -10 à environ +35 OC pendant au moins dix heures dans un mélange de solvants comme défini dans l'étape A, puis à éliminer le solvant organique et à hydrqgéner le résidu in situ, comme décrit dans l'une quelconque des revendications 1 à 4 pour produire le composé de formule IV. 8. Procédé suivant la revendication 7, caractérisé par le fait que dans l'étape B, un composé de formule III est traité in situ ou après séparation avec les composés de formule puis du dicyclohexylcarbodiimide est ajouté, dans un rapport d'une mole du composé III à environ 0,5-0,85 mole de composé VI ainsi que de dicyclohexylcarbodiimide, et environ 0,05 à 0,425 mole de composé XIX, dans une gamme de +5 à 250C pendant une à trois heures dans un mélange de solvants comme défini pour l'étape A. 9. Procédé suivant l'une quelconque des revendications 7 et 8, caractérisé par le fait que dans 1' étampe B, un composé de formule III est traité in situ avec les composés de formules puis du dicyclohexylcarbodiimide est ajouté, dans un rapport d'une mole de composé III à environ 0,5-0,8 mole de composé VIII ainsi que de dicyclohexylcarbodiimide et environ 0,05 à environ 0,425 mole de composé XIX, dans une gamme de +15 à +300C pendant 15 à 25 heures. 10. Procédé suivant la revendication-5, caractérisé par le fait que dans l'étape B, un composé de formule IIIa est traité in sitù ou après séparation avec les composés de formules sous agitation, suivie de l'addition de dicyclohexylcarbodiimide, dans un rapport d'une mole de composé III pour environ 0,6 à 0,75 mole de composé VI, ainsi que de dicyclohexylcarbodiimide et environ 0,06 à O,375 mole de composé XIX, dans une gamme de +25 à +350C pendant 15 à 25 heures dans un mélange à 1:1 de tétrahydrofuranne et d'eau. 11. Procédé suivant la revendication 6, caractérisé par le fait que dans ltétape B, un composé de formule IIIb est traité in situ ou après séparation avec les composés de formules sous agitation, puis du dicyclohexylcarbodiimide est ajouté, dans un rapport d'une mole de oomposéîîîb pour environ 0,6 à 0,75 mole de composé VI ainsi que de dicyclohexylcarbodiimide et environ 0,06 à 0,375 mole de composé XIX dans une gamme de +20 à 3O0C pendant 15 à 25 heures, dans un mélange à 9:1 de tétrahydrofuranne et d'eau. 12. Procédé de préparation du composé de formule destiné à être utilisé comme produit de départ dans le procédé suivant l'une quelconque des revendications 1 à 11, caractérisé par le fait qu'il consiste à traiter de la kanamycine A base libre avec du N-benzyloxycarbonyloxy-5-norbornène-2,3- dicarboximide dans un rapport d'environ 0,5 à environ 1,5 mole de N-benzyloxyearbonyloxy-5-no-rbornène-2,3-dicarbogimide par mole de kanamycine A, puis à purifier le produit. 13. Procédé suivant la revendication 12, caractérisé par le fait que le rapport de la kanamycine au N-benzyloxy carbonyloxy-5-norbornène-2,3-dicarboximide est environ 1:1, et la réaction est conduite dans un mélange d'eau et d'un solvant organique miscible à l'eau, à une température d'environ O à 2SOC pendant une durée maximale de 6 heures, le produit étant ensuite purifié par extraction au solvant organique et chromatographie. 14. Procédé suivant l'une des revendications 12 3t 13, caractérisé par le fait que le rapport de la kanamycine au N-benzyloxyearbonyloxy-5-norbornene-2,3-dicarboximide est égal à 1:1 et la réaction est conduite dans une solution aqueuse à 50-60 % de tétrahydrofuranne dans une gamme de températures d'environ 5 à environ IOOC pendant environ quatre heures, sous agitation, la réaction étant suivie de 1' élimination du tétrahydrofuranne sous vide, d'une extraction du résidu aqueux avec du n-butanol et d'une purification de la phase aqueuse par chromatographie.