Brevet FR2256760A1 — publié le 19750801

La présente invention a pour objet un procédé de purification de l'acide 7-[D-&alpha;-amino-&alpha;-p-hydroxyphényl)acétamido]-3-(1,2,3-triazol-5-ylthiométhyl)- 3-cephem-4-carboxylique, agent antibacterien connu, dans lequel cet acide est transformé en un solvat cristallin tout particulièrement convenable pour etre administré par voie orale ou parenterale. L'acide 7-[D-&alpha;-amino-&alpha;-(p-hydroxyphényl)acétamidol-3-(1,2,3-triazol-5-yl- thiométhyl)-3-céphem-4-carboxylique correspond à une cêphalosporine, egalement appelée BL-S640, qui est décrite et revendiquee dans la demande de brevet dé- posee aux Etats-Unis d'Amerique le 26 Decembre 1972 sous le No. 318 340 par David Willner et Leonard Bruce Crast; cette demande de brevet,~qui est citée ici à titre de référence, décrit un procédé d'isolement d'un méthanolate de l'acide 7-[D-&alpha;-amino-&alpha;-(p-hydroxyphényl)acétamido]-3-(1,2,3-triazol-5-ylthio- méthyl)-3-céphem-4-carboxylique. En fait, Tes déposants se sont trouvés confrontés au double problème suivant: d'une part, disposer d'une méthode pratique de purification de l'acide 7-[D-&alpha;-amino-&alpha;-(p-hydroxyphényl)acétamido]-3-(1,2,3-triazol-5-ylthiométhyl)- 3-cephem-4-carboxylique, qui. permette de l'obtenir-à la pureté élevée que l'emploi pour les etres humains necessite. et, d'autre part, disposer de ce medicament sous une forme convenable pour etre administré par voie orale, ou par voie parentérale lorsqu'il est dans une suspension aqueuse, sans que sa conservation n'entraine de perte de l'activité biologique ou d'inconvé- nients tels que par exemple perte de cristallinité, formation de caillots, précipitation ou formation d'un produit gras ou collant.Ces problèmes sont d'autant plus compliqués à résoudre que dans l'eau et à un pH alcalin, c'està-dire de l'ordre de 7,0 ou supérieur, ce compose se dégrade très rapidement par perte de son entité thiolée. En outre, le produit brutobtenu al'aide des procédés chimiques est en général fortement contamine par des résidus des -réactifs initiaux et par divers produits de décomposition dont il est difficile de le séparer par recristallisation ou autres techniques usuelles telles que lavage à l'aide de solvants, pour les obtenir avec des rendements suffisants. Les efforts qui ont été faits pour obtenir la cristallisation du zwitterion ou d'un hydrate ont permis ni d'obtenir un produit cristallin ni d'en effectuer une purification substantielle. Il n'a pas été possible d'éliminer les solvants contenus dans les-solvats et, par conséquent, d'obtenir le composé à l'état pur et pratiquement anhydre, les produits ainsi obtenus ayant l'inconve- nient d'être collants. Le méthanolate s'est révélé ne pas convenir aux humains du fait de la toxicite de cet alcool et, en outre, son emploi necessite une certaine purification qui entraîne: augmentation de l'activité biologique ou bioactivité, diminution de couleur et réduction de sa teneur en impuretés. On a préparé un éthanolate et on a constaté qu'il ne permet pas d'obtenir les buts que-l'on recherche.Sa formation n'implique pas une obtention à l'état pur, quoiqu'il soit obtenu sous forme cristalline. En outre, lorsqu'il est mis en suspension dans l'eau, cet éthanolate perd graduellement son ethanol -pour se transformer en un solide ayant une consistance collante qui perd sa cristallinité, ne reste même pas sous forme de suspension et se transforme lentement en gomme. Les buts de la presente invention sont atteints grâce à l'emploi du 1,2-propylène glycolate de l'acide 7-[D-&alpha;-amino-&alpha;-(p-hydroxyphényl)acétamido]-3-(1,2,3- tri azol -5-ylthiomethyl )-3-céphem-4-carboxy1 ique, sous forme cristallisée et, de préférence, du 1,2-propylène glycolate de l'acide 7-CDir-aminoa-(p-hydroxyphényl)- acétamido]-3-(1,2,3-triazol-5-ylthiométhyl)-3-céphem-4-carboxylique, sous forme cristallisee, comprenant de 1,0 à 1,6 mole de 1,2-propylene glycol par mole du zwitterion de la céphalosporine,quoique le mono-propylène glycolate de l'acide 7-[D-&alpha;-amino-&alpha;;-(p-hydroxyphényl)-acétamido]-3-(1,2,3-triazol-5-ylthiométhyl)- 3-céphem-4-carboxylique, sous forme cristallisée et plus particuliérement contenant une mole de 1,2-propylène glycol par mole du zwitterion de la céphalosporine,soit encore plus convenable. La présente invention a également pour objet un procédé de préparation du 1,2-propylène glycolate de l'acide 7-[D-&alpha;-amino-&alpha;-(p-hydroxyphényl)acétamido]- 3 - (1,2,3-triazol-5-ylthiométhyl)-3-céphem-4-carboxylique, sous forme cnstal lisée, dans lequel le pH, inférieur à environ 2,0 d'une solution d'acide 7-[D-&alpha;-amino-&alpha;;-(p-hydroxyphényl)acétamido]-3-((1,2,3-triazol-5-ylthiométhyl)- 3-céphem-4-carboxylique est porté dans une solution aqueuse de 1,2-propylène glycol, à une valeur supérieure par addition d'une base, ce qui permet d'obtenir un pH d'au moins 4,0 et, de préférence, compris entre 4,0 et 5,0, de sorte que le propylène glycolate produit se cristallise et puisse être séparé de la solution résultante par des methodes conventionnelles telles que filtration ou centrifugation. La solution acide de l'acide 7-[D-&alpha;-amino-&alpha;-(p-hydroxyphényl)acétamido]- 3-(1,2,3-triazol-5-ylthiométhyl)-3-céphem-4-carboxylique, obtenue 'dans le procédé précité peut être préparée par addition-d'une quantite suffisante d'acide à une suspension aqueuse de 1,2-propylene glycol et- du zwitterion de la céphalosporine, de son hydrate ou de son solvat, de façon à ce que le pH du mélange réactionnel soit amené à une valeur inférieure a 2,0 et, de préférence, comprise entre 0,9 et 1,5 et que l'on obtienne ainsi une solution de l'acide céphalosporanique. La forme sous laquelle la cephalosporine doit être de préférence adoptee pour 1-a mise en oeuvre de ce procédé est celle du méthanolate. Le pH de la solution est alors augmenté par addition d'une quantité de base suffisante pour produire la cristallisation du propylène glycolate. La méthode que l'on emploie de préférence consiste à additionner lentement la base à une solution ayant un pH de 1,5 ou inférieur, jusqu'à ce que ce pH atteigne 1,7, pH auquel les impuretés insolubles se separent de la solution par précipitation. Le mélange réactionnel peut alors être traite par une masse carbonée, ce qui est d'ailleurs effectue de préférence, et les produits inso- lubies sont alors séparés par une méthode telle que par exemple une filtration. Grâce a l'addition de la base, le pH de la solution acide est amené à une valeur superieure à 4, et de préférence comprise entre 4,0 et 5,0,-pH auquel le produit reçherché se sépare de la solution par cristallisation. Le produit est récupéré par des procédés conventionnels, de préférence par filtration, puis il est lavé et séché; on obtient ainsi le propylène glycolate sous forme cristalliséécomprenant de 1,0 à 1,6 mole de 1,2-propylène glycol par mole du zwitterion de la céphalosporine. Ainsi qu1il est montré ci-dessous, le propylène glycolate produit, selon la présente invention, sous une forme cristallisée est substantiellement exempt des impuretés que l'on trouve dans les échantillons d'acide 7-[D-&alpha;-amino-&alpha;-(p-hydro- xyphényl)acétamido]-3-(1,2,3-triazol-5-ylthiométhyl)-3-céphem-4-carboxylique que l'on obtient par les procédés employés jusqu'à présent. Lorsque ce produit est mis en suspension dans de l'eau, il ne perd pas son activité biologique, ne perd pas sacristallinité, ne forme pas de suspension-irrégu-lière, ne se transforme pas en masse huileuse ou collante, ne forme pas de caillots ni ne precipite. Sous la forme solide, il- ne perd pas plus de 10% de son activite biologique ou bioactivité lorsqu'il est conserve durant un mois à 56 C dans les conditions les plus rigoureuses. A cette température et, également, à une température de l'ordre de 100 C, il est de loin plus stable sous la forme solide que ne l'est l'éthanolate. L'excès de propylène glycol contenu dans le produit obtenu selon la présente invention peut être éliminé par lavage à l'aide d'acétone, de méthanol ou d'acétate d'éthyle, ce qui n'est pas possible avec les autres solvats, et notamment avec ceux contenant de l'acétone ou de l'acétate d'éthyle. Dans des essais effectués in vitre, le 1,2-propylène glycolate de l'acide 7-[D-&alpha;-amino-&alpha;-(p-hydroxyphényl)acétamido]-3-(1,2,3-triazol-5-triazo]-5-ylthiométhyl)- 3-céphem-4-carboxylique, sous forme cristallisée, presentela puissance et les spectres d'activité comparables à ceux du produit selon la demande de brevet des Etats Unis No. 318 340 dont il est question ci-dessus, tant sous l'angle qualitatif que, en général, sous l'angle quantitatif, quoique T'on puisse observer une légère diminution d'acti-vité due à sa teneur en propylène glycol biologiquement inerte.Dans les essais in vivo, 7es résultats sont pratiquement les mêmes (aux erreurs d'expérimentation près inhérents à de tels essais), du fait que le produit est dosé sur la base desa puissance sous la forme de zwitterion, ainsi que le montrent les exemples. Dans le traitement de maladies bacteriennes chez l'homme, le 1,2-propylene glycolate de l'acide 7-[D-&alpha;-amino-&alpha;-(p-hydroxyphényl)acétamido]-3-(1,2,3-triazol- 5-ylthiométhyl)-3-céphem-4-carboxylique est administré sous forme orale ou sous forme parenterale, selon les prescriptions du médecin, en une quantité comprise entre environ 5 et 200 mg/kg/jour et, de préférence, comprise entre 5 et 20 mg/kg/jour, par doses multiples, par exemple trois ou quatre doses par jour. Ce produit est administré sous la forme de doses contenant par exemple 125, 250 ou 500 mg d'ingrédient actif, en mélange avec des supports ou excipients convenables du point de vue physiologique. Les doses sont sous la forme de capsules ou de tablettes contenant le produit solide lorsqu'il est destiné à un usage oral ou sous la forme de préparations liquides telles que suspensions, qui conviennent à un usage oral ou encore à une administration par voie parentérale. La présente invention a également pour objet un procedé de préparation d'un mono-propylène glycolate de l'acide 7-[D-&alpha;-amino-&alpha;-(p-hydroxyphényl)- acétamido]-3-(1,2,3-triazol-5-ylthiométhyl)-3-céphem-4-carboxylique, sous forme cristallisée, lequel procédé consiste:: 1 - à preparer une solution aqueuse d'acide 7-[D-&alpha;-amino-&alpha;-(p-hydroxyphényl)- acétamido]-3-(1,2,3-triazol-5-yl-thiométhyl)-3-céphem-4-carboxylique et d'un compose organique hydrosoluble contenant un groupe présentant une fonction cétone; 2- à porter le pH de la solution à une valeur de l'ordre de 4,5; 3 - à diluer a solution avec une quantité d'eau suffisante pour provoquer la précipitation des impuretés insolubles, 4 - à séparer de la solution aqueuse les impuretes insolubles; 5 - à ajouter à la solution aqueuse une quantité suffisante de 1,2-pro-pylène glycol pour provoquer la cristallisation du mono-propylene glycolate re cherché; et 6 - à récupérer le produit, sous forme cristallisée, obtenu. La presente invention a plus particulièrement pour objet un procédé de préparation de monopropylène glycolate de l'acide 7-[D-&alpha;-amino-&alpha;-(p-hydroxy- phényl)acétamido]-3-(1,2,3-triazol-5-ylthiométhyl)-3-céphem-4-carboxylique, sous forme cristallisée, lequel procédé consiste:: 1 - préparer une solution aqueuse acide d'acide 7-ED-a-amino-a-(p-hydroxy- phényl)acétamido]-3-(1,2,3-triazol-5-ylthiométhyl)-3-céphem-4-carboxy lique et d'un cétoacide hydrosoluble qui peut consister en acide pyruvique ou acide lévulinique, ladite solution présentant un pH de 1 tordre de 2,0 ou inférieur; 2 - à ajuster le pH de la solution de façon à ce que l'on atteigne une valeur de l'ordre de 4,5; 3 - à diluer la solution à l'aide d'une quantite d'eau suffisante pour pro voquer la précipitation des impuretés insolubles; 4 - à séparer de la solution aqueuse les impuretés insolubles; 5 - à ajouter â la solution aqueuse une quantité suffisante de 1,2-propylène glycol pour provoquer la cristallisation du mono-propylêne glycolate recherché; et 6 - a récupérer le produit, sous forme cristallisée, obtenu. Le monopropylène glycolate cristallisé peut être préparé, conformément au procédé précite, à partir d'une suspension aqueuse diacide 7-[D-a-amino-o- (p-hydroxyphényl)-acétamido]-3-(1,2,3-triazol-5-ylthiométhyl)-3-céphem-4carboxylique, d'un hydrate ou d'un solvat d'un tel acide, de préférence un solvat methanolé, que l'on traite à l'aide d'une quantité suffisante d'un composé organique hydrosoluble contenant un groupe à fonction cetone, de façon à obtenir une solution aqueuse d'acide céphalosporanique. En général, n'importe quel composé organique hydrosoluble contenant une fonction cétone peut être employé et, notamment, des composés tels que des cétones hydrosolubles, par exemple l'acétone; des cétoacides, par exemple l'acide pyruvique, acide levu- linique, acide acétylacétique, acide cétoglutarique, ou sels de ces cétoacides; des hydroxy-cetones, par exemple dihydroxy-acétone ou fructose. Les composés que l'on emploie de préférence sont les cêtoacides hydrosolubles. Pour des raisons de disponibilité et de coût, les cétoacides que l'on emploie de pré- férence, conformément à la présente invention, sont l'acide pyruvique et l'acide lévulinique. La céphalosporine employée en tant que matière de départ peut être l'acide exempt de zwitterion, un de ses hydrates ou un de ses solvats, mais est de préférence le méthanolate, du fait du taux supérieur de dissolution de ce dernier. Si on n'obtient pas une solution complet après addition du composé organique comprenant une fonction cétone, le pH peut être réglé par addition d'acide ou de base, afin de provoquer la mise en solution. Selon un mode préfére de réalisation de la présente invention, on emploie un cétoacide hydrosoluble pour réduire le pH de la solution aqueuse de mélange réactionnel à une valeur de l'ordre de 2,0 ou inférieure, valeur à laquelle l'acide céphalosporanique passe en genéral en solution. Si la solution complet n'est pas obtenue après emploi du cétoacide lui-même, le pH du mélange réactionnel peut être réglé par exemple par addition d'un acide minéral, pour que la solubilité soit rendue maximum.La solution aqueuse voit alors son pH porté à une valeur de l'ordure de 4,5 par addition d'une quantité convenable d'acide ou de base. Lorsque l'on emploie les cétoacides qui conviennent le mieux, le pH de la sol-ution acide est porté à la valeur de 4,5 par addition d'une base, par exemple NaOH, de préférence sous agitation rapide. La-solution est alors diluée à l'aide d'eau, de sorte que les impuretés insolubles dans l'eau puisse se séparer par précipitation. Le taux de dilution n'est pas critique, mais une dilution d'environ 1/1 dans cette étape s'est avérée conduire à un produit ayant une purete élevée. La température du melange-reactionnel durant les étapes mentionnées cidessus n'est pas critique. Il est préféré, cependant, que ces étapes - notamment l'étape d'amenée du pH a une valeur de 4,5 ainsi que l'étape de dilution soient effectuées à une température de l'ordre de la température ambiante ou même inférieure et, de préférence, a une température comprise entre 5 et 20"C, de façon à ce que la quantite d'impuretés insolubles qui se forme au cours de l'étape de dissolution soit maximum. Après cet étape de dilution, les impuretés solides peuvent être séparées par des méthodes conventionnelles, telles que par exemple filtration, de la solution aqueuse qui contient l'acide céphalosporanique et le composé présentant une fonction cétone. La nature precise du produit qui se trouve en solution n'est pas connue, mais il semble qu'elle soit du type d'un complexe physique soluble à liaison lâche du zwitterion de la céphalosporine et du composé à fonction cétone. Dans tous les cas, l'emploi du compose à fonction cétone permet au zwitterion de la céphalosporine de rester en solution à un pH de l'ordre de 4,5 alors que les impuretés insolubles (et notamment presque la totalité des impuretés colorées) se séparent par précipitation. Après élimination de toute trace d'impuretés solides, la solution aqueuse est de préférence traitee à l'aide de charbon, en principe du charbon actif, puis elle est filtrée avant d'être soumise à l'étape d'addition du propylène glycol. La solution aqueuse est alors traitée à l'aide d'une quantité suffisante de 1,2-propylène glycol pour provoquer la cristallisation du mono-propylène glycolate que l'on récupère alors, par exemple par filtration, puis lave et sèche. Le mono-propylène glycolate préparé conformément au procédé précédemment décrit est une matière cristallisée a forte puissance et qui est pratiquement incolore, présentant une excellente stabilite thermique. Il est tout particulièrement avantageux de-llemployer sous la forme de suspensions aqueuses, car dans de telles suspensions, il ne se produit de réduction ni de son activite biologique ni de-sa cristallinité et il ne donne pas lieu à la formation de caillots, de précipites, de suspensions irrégulières, de produits huileux ou de produits collants.Lorsque le propylène glycol biologiquement inerte est convenablement toléré, le mono-propylène glycolate présente pratiquement la même puissance ainsi que le méme spectre que celui obtenu à la suite d'essai in vivo et in vitre pour le zwitterion décrit dans la det mande de brevet aux Etats-Unis No. 318 340 précédemment décrite. Dans le traitement des infections bactériennes de l'homne, le monopropylene glycolate, sous forme cristallisée, est administré sous forme orale ou sous forme parentérale, selon les prescriptions du médecin, en une quantité comprise entre 5 et 200 mg/kg/jour, et de préférence comprise entre 5 et 20 mg/kg/jour, par doses multiples, par exemple trais ou quatre-fois par jour. Ce produit est administré sous la forme de doses, contenant par exemple, 125, 250 ou 500 mg d1ingrédient actif en melange avec un support ou excipient physiologique convenable.Les doses sont sous la forme decapsules outre pastilles contenant le produit solide lorsqu'il est destiné à un usage-par voie orale, ou sous -la formeide préparations liquides telles que suspensions aqueuses qui conviennent à une administration orale ou parentérale. La présente invention a également pour objet l'usage pharmacologique du 1,2-propylène glycolate de l'acide 7-[D-&alpha;-amino-&alpha;-(p-hydroxyphényl)acétamido]- 3-(1,2,3)-triazol-5-ylthiométhyl)-3-céphem-4-carboxylique, sous forme cristallisée, ainsi que des méthodes pour purifier l'acide 7-[D-&alpha;-amino-&alpha;-(p-hydroxy- phényl)acétamido]-3-(1,2,3-triazol-5-ylthiométhyl)-3-céphem-4-carboxylique car celui-ci, ainsi qu'il est mentionné ci-dessus, ne peut être purifié avec des rendements convenables à laide des techniques de purification conventionnelles.Si, dans les procédés décrits ci-dessus, on emploie un acide 7-[D-&alpha;-amino-&alpha;-(p-hydroxyphényl)acétamido]-3-(1,2,3-triazol-5-ylthio- méthyl)-3-céphem-4-carboxylique, ne présentant pas la purete requise, la céphalosporine. peut être récuperée sous la forme du 1,2-propyêne glycolate cristallisé pratiquement pour, ledit propylène glycolate contenant de 1,0 à 1,6 mole de 1,2-propylène glycol par mole du zwitterion de la céphalosporine et, de préférence, 1,0 mole de 1,2-propylène glycol par mole du zwitterion de céphalosporine.La substitution du méthanol dans les procédés décrits ci-dessus au 1,2-propylène glycol utilisé, conduit à un mono-méthanolate cristallin qui peut être utilisé en tant que matière de départ de la préparation de propylène glycolate cristallise, selon la présente invention La présente invention a également pòur objet une suspension aqueuse stable, destinée à être employée pour le traitement d'infections bactériennes chez les mammifères, cette suspension contenant au moins 30 mg/ml, et de préférence au moins 125 ms/ml de 1,2-propylène-glycolate de l'acide 7-tD-a-amino-a- (p-hydroxyphényl)acétamido]-3-(1,2,3-triazol-5-ylthiométhyl)-3-céphem-4-carboxylique, sous forme cristallisée, lequel propylène glycolate contient de pré- ference 1,0 à 1,6 mole de 1,2-propylène glycol par mole du zwitterion de la céphalosporine et, plus particulièrement, 1,0 mole de 1,2-propylene glycol par mole du zwitterion de la cephalosporine, le pH de ladite suspension étant de préférence compris entre 2,8 et 5, et -plus. particulièrement compris entre 2,8 et 3,5. ESSAIS BIOLOGIQUES On effectue des essais biologiques de turbidométrie pour la s. axPeus 209P (A.T.C.C. 6538P) en employant en tant que témoin un échantillon de 1,2-propylène glycolate de l'acide 7-[D-&alpha;-amino-&alpha;-(p-hydroxyphényl)acétamido]-3-(1,2,3- triazol-5-ylthiométhyl)-3-céphem-4-carboxylique, qui présente une puissance de 820 mcg/mg; par analyse chimique, on constate que l'échantillon contient 1Ç,7CC de 1,2-propylene glycol et 0,3% d'eau.On assigne au zwitterion anhydre de l'acide 7-[D-&alpha;-amino-&alpha;-(p-hydroxyphényl)acétamido]-3-(1,2,3-triazol-5-ylthio- méthyl)-3-céphem-4-carboxylique une puissance de l'ordre de 1000 mcg/mg et par consequent un échantillon contenant 16,7% de- 1,2--propylène glycol et aucune autre impureté (et notamment, ni eau ni exces de 1,2-propylène non liés) aurait par conséquent une puissance déterminée par calcul, de 833 mcg/mg. La teneur calculez en 1,2 propylène glycol est de 14,1% pour 1,0 mole et de 20,8%'pour 1,6 mole de glycol par mole de zwitterion. Le poids moléculaire du zwitterion est de 462,38. Les spectres IR et RMN sont réalisés sur les mêmes echantillons témoins et les donnees relatives.aux groupes fonctionnels de ces spectres sont consi gnées ci-dessous: IR (KBr) 2400-3600 cm-1 (larges pics se chevauchant)-amide NH, NH3+, OH 1780 ss-lactame C=0 1700 amide 1570 COO 1515 C=C aromatique RMN (DMSO, DCl dilue) 7,96 ppm 6 singulet, 1H, H 6,7-7,6 multiplet, 4H, Hb@ 5,7 doublet, 1H, H c 4,9-5,2 multiplet, 2H, Hd, Me 3,2-4,2 multiplet, 8Hx,Hf, Hg, Hj, Hk 1,1 doublet, 4Hx,Hn Les valeurs réelles sont de 1,33 moles de propylène glycol par mole de switterion BL-S640 (18,3% en poids sans correction pour humidité). Un échantillon de monopropylene glycolate de l'acide 7-[D-&alpha;-amino-&alpha;- (p-hydroxyphényl)acétamido]-3-(1,2,3-triazol-5-ylthiométhyl)-3-céphem-4carboxylique, préparé selon la méthode de l'Exemple 5, présente une efficacité calculée de 865 mcg/mg; à l'analyse chimique, on constate que cet échantillon contient 15,6% de 1,2-propylène glycol et 0,3% d'eau. Les spectres IR et RMN sont réalisés sur les mêmes échantillons témoins et les donnees relatives au groupe fonctionnel de ces spectres sont consi gonzes ci-dessous: IR(KBr) 2400-3600 cm-1 (larges pics se chevauchant)-amide NH, NH3+, OH 1780 6-lactame C=0 1705 amide C=D 1570 COO 1515 C=C aromatique . RMN (DMSO, DCl dilué) 7,98 ppm # singulet, 1H, Ha 6,7-7,6 multiplet, 4H, H8 5,68 doublet, 1H, Hc 4,9-5,2 multiplet, 2H, Hd, He 3,2-4,2 multiplet, 7H, Hf, Hg, H., Hk 1,1 doublet, 3H, Hn Les valeurs réelles montrent que l'on se trouve en présence de 1 mole de propylène glycol par mole du zwitterion BL-S640. MATIERES DE DEPART On prépare.un chlorhydrate du chlorure de D-(-)-2-(p-hydroxyphényl)glycyle présentant un état de pureté élevé, de façon très efficace par le.procédé suivant: 10,09 (environ 0,06 mole) de D-(-)-2-(p-hydroxyphényl)glycine (selon le brevet des Etats-Unis d'Amerique No. 3 489 752) sont mis en suspension dans 100 ml de dioxine. On agite la suspension et y fait passer un courant de COCl2 (phos gene) tout en maintenant la température de cette suspension à une valeur de 50 à 58 C. Le phosgène est passé dans cette suspension pendant une durée totale de 3,5 heures. On obtient une solution jaune. Cette solution est alors purgée à l'aide d'azote en vue d'en exprimer l'excès de COCl2 qu'elle contient. On fait barboter dans cette solution durant 2,5 heures un courant d'acide chlorhydrique gazeux. La solution est alors agitée et une petite quantité en est diluée avec un peu d'éther de façon à obtenir quelques cristaux qui sont alors ajoutés à la solution restante pour former les germes. La solution est alors agitée à 20-25 C durant 16 heures. La suspension résultante consistant en chlorhydrate de chlorure de D-(-)-2-(p-hydroxyphényl)glycyle, sous forme cristallisée, est filtrée, ce qui permet de recueillir le produit recherché. Le gâteau de filtration est alors lave au dioxane et au CH2Cl2, puis il est séché dans un appareil de.dessiccation sous vide contenant P205. Le rendement en chlorhydrate de chlorure de D-(-)-2-(p-hydroxyphényl)glycyle est de 7,39. Le spectre IR est excellent. A l'analyse élémentaire, on trouve les teneurs suivantes: Cl C H N Théoriques 31,93 43,14 4,09 6,37 -Calculées 31,96 42,46 4,22 6,56 A l essai au chlorure d'acide, on constate la présence de: Chlorure d'acide .... 98,6% COH libre Nuant HCl libre .... Néant. - Acide D-a-t-butoxycarbonyl amino-a-(p-hydroxyphényl )acétique Dan's un ballon tri cols pourvu d'un condenseur à reflux, d'un agitateur en tete et d'un thermometre, on introduit un mélange bien agité forme de 8,36g (0,05 mole) de D-(-)-p-hydroxyphénylglycine et 3,02g (0,075 mole) dioxyde de magnésium dans 120 ml d'une solution aqueuse de 50% de dioxane. Le melange est agité durant 1 heure puis il est additionné de 10,74g (0,075 mole) de t-butoxycarbonylazide. Le mélange est alors agité et chauffé à 45-50 C durant 17 heures sous courant d'azote.La solution est diluée par addition de 400 mi d'eau et on lui fait subir deux extractions successives à l'aide de chaque fois 300 mi d'acétate d'ethyle. La phase aqueuse est rendue acide par addition d'une solution d'acide citrique à 10% jusqu'à obtention d'un pH de l'ordre de 4, puis elle est saturée de NaCl. Le mélange aqueux résultant subit alors 3 extractions à l'aide de 400 mi d'acétate d'ethyle. La solution résultante est séchée sur Na2SO4 et on én separe le solvant par évaporation. Le résidu est trituré en présence de "Skellysolve B", ce qui permet obtenir 10,4g d'un solide consistant en acide D-&alpha;-t-butyoxycarbonylamino-2-(p-hydroxyphényl)acétique (rendement 78,5%). - Acide 7-[D-&alpha;-t-butoxycarbonylamino-&alpha;-(p-hydroxphényl)acétamido]- 3-(1,2,3-triazel-5-ylthiométhyl)-3-céphem-4-carboxylique A une suspension de 6,0g (19,0 mmole) d'acide 7-amino-3-(1,2,3-triazol5-ylthiométhyl)-3-céphem-4-carboxylique dans 100 ml de chlorure de méthylène sec, on ajoute 8,5 mi de 1,1,1,3,3,3-hexaméthyldisilazane (40,9 mmole). Le mélange est agité et chauffé sous reflux dura-nt 4 heures; on obtient alors une solution limpide. Le solvant est évaporé et le résidu huileux résultant est soumis à un vide relevé durant une quinzaine d'heures à température ambiante.Le résidu,qui se présente sous forme d'une mousse que l'on recueille, est dissous dans 85 ml de THF sec et refroidi a environ -15oC avant d'être introduit dans le mélange réacti:onnel obtenu ci-dessous. 4,4g (-16,5 mmole) d'acide D-&alpha;-t-butoxycarbonylamino-&alpha;-(4-hydroxyphényl)- acétique sont dissous dans 145 ml de THF sec. La solution est agitee et refroidie à -200C. On lui ajoute alors 1,6g (16 mmoles) de N-methylmorpholine et 2,3g (16,8 mmoles) d'isobutylchlo-roformiate, ces deux produits étant ajoutés dans cet ordre à une vitesse telle que la température du mélange ne dépasse pas une valeur de l'ordre de -10 C. Le mélange résultant est alors agité durant 20 mn à une température de l'ordre de -12 à -15 C. Il est ensuite refroidi à -200C et la solution dans le THF de l'acide 7-amino-3-(1,2,3-triazol5-ylthiométhyl)-3-céphem-4-carboxylique silylée est ajoutée en une fois. La température s'élève jusq'à -12 C. Le refroidissement externe est arrêté jusqu'à ce que la température s'élève à 0 C. A cette température, on plonge le mélange dans un bain d'eau et de glace et l'agite durant trois heures à 2-3 C. Ensuite, le mélange est conservé pendant une heure sans réfrigération externe, de sorte que la température s'élève jusqu'à 20 C. On ajoute alors au total 30 ml de méthanol et poursuit l'agitation durant 15 mn à température ambiante. Apures évaporation des solvants sous pression réduite, le résidu est mis en suspension dans 300 ml d'acétate d'éthyle. Le solide de la suspension est séparé par filtration, ce qui produit 11,8g d'une masse solide.- La solution dans l'acétate d'éthyle subit trois extractions successives à l'aide d'une solution de NaHCO3 à 5%.Les extraits de la solution de bicarbonate de sodium sont combinés; l'ensemble est alors refroidi à l'aide d'un bain de glace, etendu à l'aide d'acétate d'éthyle et porté à un pFI acide de l'ordre de 2,5 par addition d'H3PO4 à 42,5%. On melange l'ensemble, puis on sépare les phases. La solution d'acétate d'éthyle est alors séchée par passage sur sulfate de sodium puis ell.e est évaporée à un volume de l'ordre de 15 à 20 ml. La solution ainsi obtenue est alors ajoutée goutte à goutte à 400 ml environ de cyclohexane, maintenu sous agitation, contenu dans un Erlenmeyer. Après 1 heure d'agitation, le solide qui se sépare par précipitation est recueilli par filtration. Le solide recueilli consiste en 1,759 d'acide 7-[D-a-t-butoxy carbonylamino-&alpha;-(p-hydroxyphényl)acétamido]-3-(1,2,3-triazol-5-ylthiométhyl)- 3-céphem-4-carboxylique et séché dans un courant d'air. 3,5g d'acide 7-[D-&alpha;-t-butoxycarbonylamino-&alpha;-(p-hydroxyphényl)acétamido]- 3-(1,2,3-triazol-5-ylthiomethyl)-3-cephemw4-carboxylique sont dissous dans 80 ml de HCOOH, à 98-100%, et l'ensemble est agité durant 2 heures à température ambiante. Le HCOOH est évaporé sous pression réduite (à une température du bain d'aspiration non inferieure à 40 C) et enfin subit 3 entrainements azéotropiques avec 30 ml de toluène. Le solide recueilli est alors séché durant une quinzaine d'heures sous un vide élevé sur P205. On obtient au total 3,5g d'une mousse dont 2g sont agités avec 300 ml d'un mélange H20/CH30H (8/2). On sépare le solvant du solide par filtration et recueille ainsi 0,3g, puis on traite sur 700 ml de charbon actif "Darko KB", et filtre sur terre de diatomée ("Celite") et enfin lyophilise de façon à obtenir 0,9g d'acide 7-[D-&alpha;-amino-&alpha;-(p-hydroxyphényl)acétamido]-3-(1,2,3-triazol-5-ylthiométhyl- 3-céphem-4-carboxylique brut Pour la cristallisation, on procède selon la méthode suivante. Une suspension de 0,2g de la matière brute dans 6 ml de methanol à 99% est chauffée dans une éprouvette jusqu'à l'ébullition On interrompt alors le chauffage et la masse fondue est trituree après que lui ont été ajouté des germes. L'ensemble se solidifie en formant une masse cristalline.On obtient de cette façon au total 0,211 g d'acide 7-LD-a-amino- &alpha;-(p-hydroxyphényl)acétamido]-3-(1,2,3-triazol-5-ylthiométhyl)-3-céphem- 4-carboxylique à partir de 0,400g de matiere brute, Cette matière est alors séchée à 56 C sous 0,1 mm de mercure sur P2O5 durant 20 heures; le produit obtenu présente un point de fusion supérieur à 200 C, avec décomposition. Les spectres IR et RMN sont en accord avec les structures obtenues. Le spectre RMN indique également la présence de 1/3 mole de CH30H. Pour la formule C18H18N6O5S2,N20,1/3CH3OH on obtient les teneurs suivantes: C H N S Calculées 44,83 4,38 17,10 13,09 Trouvées e-- 43,97 4,36 15,84 6,18 On dissout un total de 6,5g (11,55 mmole) d'acide 7-[D -t-butoxycarbonyl- amino-&alpha;-(p-hydroxyphényl)acétamido]-3-(1,2,3-triazol-5-ylthiométhyl)-3-céphem- 4-carboxylique dans 175 ml d'acide formique à 98-100% dans des conditions anhydres. Le mélange est agité à température ambiante durant 2,5 heures. Une partie de la solution (de l'ordre de 125 ml) est évaporée sous pression réduite jusqu'à l'obtention d'une huile ambrée. Cette huile subit alors 3 évaporations azeotropiques avec 70 mi de toluène, sous pression reduite.Le résidu est mis en suspension dans une solution H2O/CH3OH 80/20 (700 ml) et l'ensemble est agite durant heure jusqu'à ce que la plus grande partie du solide soit dissoute; on filtre alors et le filtrat est traité par 1,5g de charbon actif ("Darko") durant environ 20 mn. Le charbon actif est alors sépare par filtration sur un bouchon de "Célite". La solution résultante est alors lyophilisée dans 9 flacons à fond rond de 100 ml. La matière lyophilisée obtenue pèse à peu pres 2,415g. On recristallise dans un récipient 0,200g de cette matiere lyophilisée selon la méthode décrite ci-dessus, ce qui permet d'obtenir au total 0,923g d'acide 7-[D-&alpha;-amino-&alpha;-(p-hydroxyphényl)- acétamido]-3-(1,2,3-triazol-5-ylthiométhyl)-3-céphem-4-carboxylique. Le spectre RMN est en accord avec la structure obtenue et signale la présence de 1/3 mole de CH30H. Pour la formule C18H18N605S,H20, 1/3CH3OH on obtient les teneurs suivantes: C H N S Calculées 44,83 4,38 17,10 13,09 Trouvées 45,77 4,44 16,61 13,01 44,36 4,34 16,52 13,01 L'acylation de l'acide 7-amino-3-(1,2,3-triazol-5-yl-thiométhyl)-3-céphem- 4-carboxylique (7-TACA) en BL-S640 a été effectuée dans le chlorure de methy- lène à l'aide du chlorhydrate du chlorure de D-(-)-p-hydroxyphénylglycyle. Le rendement en solvat méthanolé de BL-S640 est d'environ 45%,exprimé en puissance biologique. Il y a environ 15% d'activité dans la liqueur mere et environ 25% de solides insolubles qui consistent en 7-TACA n'ayant pas réagi et en produits de décomposition du 7-TACA avec des ss-lactames dégradés. Le procédé implique essentiellement une silylation avec HMDS du 7-TACA dans le chlorure de méthylène puis ensuite une acylation à l'aide de chlorhy drate de chlorure d'acide à 0-5SC, suivie d'une trempe dans le methanol. La masse reactionnelle subit alors un entraînement à l'aide de chlorure de méthylène et la solution méthanolique est traitée sur du charbon actif "Darco KB". Le filtrat est alors concentre sous vide et son pH est porté à une valeur de 4,8 à 5,0 à l'aide de NH40H concentré, puis on lui ajoute des germes et laisse cristalliser. @EQUATIONS Hot (CH3)3-SiNH-Si-(CH3)3 N o*N J^CH2SAN/N - o reflux MeCl2 COOH 313,3 7-TACA (U.S. 3 759 904) H (CH3)3Si-N S (CH3)3Si-N ss CH2-S S ) (I) + NH3 d 'N* I COOSi(CH3)3 Si(CH3)3 @ MATIERES (basées sur 1,0 kg de 7-TACA) Réactif g ml moles . 7-TACA ............................. 1000,0 #3,20 . Chlorhydrate de chlorure de D-(-)-hydroxyphényl-glycyle ........ 797,0 #3,60 . HMDS (hexaméthyldisilazane) ........ 965,0 1245,0 #5,95 .DMA,HCl (30% dans MeCl2) ........... 320,0 . DMA (diméthylaniline) ............. 480,0 #3,78 . Chlorure de méthylène (sec KF) comme requis . Méthanol (sec 0,01% KF) ............. # " . Hydroxyde d'ammonium ................ " . "Darco KB" (charbon actif) ......... . Imidazole ......................... 21,8 0,32 PROCEDE OPERATOIRE 1. 10009 (3,20 moles) de 7-TACA sont additionnés à 25# de chlorure de méthylène sec (K.F. H20 2. La suspension est chauffée au reflux et on y fait barboter de azote sec dans sa masse. Le reflux est poursuivi jusqu'à complète dissolution des solides et on ne constate pas la présence de matière solide. On porte alors la solution de 7-TACA au reflux durant 12 à 22 heures pour obtenir une solution qui est trouble. 3. Lorsque l'étape de sylylation est achevée, la solution est refroidi.e à environ 15-20 C et on lui ajoute d'abord 320 ml de DMA,HCl (306 dans MeCl2) puis ensuite 480 ml de DMA (diméthylaniline) et enfin 21,8g d'imidazole. Le mélange réactionnel est refroidi à 0-50C et on lui ajoute 797g (3,60 moles) de chlorhydrate de chlorure de D-(-)-p-hydroxyphénylglycyle en 5 doses sur une periode d'une heure. La suspension est agitée à 0-50C durant 10-12 heures ou jusqu'à ce que l'ensemble du chlorure d'acide soit en solution. 4. Le melange réaction est lentement chauffé durant 3 heures jusqu'à 20 C et maintenu durant 2 heures à cette température. Il convient de noter une complète dissolution du chlorure d'acide. 5. 8,3# de méthanol sec (KF On ne sait pas si ces solides sont du produit (éventuellement des chlorhydrates). Il est possible qu'il se produise une réaction avec le méthanol ou,du fait de la prise d'humidité dans le laboratoire,qu'une hydrolyse de l'ester silylique se produise et que du produit commence à se former. Les solides sombres séparés par filtration dans cette etape contiennent une certaine proportion de produit, de 7-TACA et de 7-TACA dégradé. L'étape de lavage du gâteau exige environ 10Q de MeCl2-MeOH (2/1). 6. Le filtrat et les eaux de lavage sont concentres sous vide pour éliminer le MeCl2 et on ajoute le cas échéant du méthanol sec en quantité convenable. La solution est concentrée à environ 15-18# et 6009 de charbon actif "Darco KB" lui sont ajoutes. La suspension est agitee durant 20-25 mn puis elle est filtrée sur terre de diatomée ("Dicalite") prérevêtue, et le gâteau est soigneusement lavé à l'aide de 8,0Q de méthanol. Ce traitement généralement conduit à un filtrat de coloration jaune-orange. 7. Le filtrat est concentre sous vide jusqu'à un volume. de 12,0 à 13,0 et 480 ml d'eau déionisée sont ajoutés à la solution. Le pH est de l'ordre de 2,4 à 3,2. La solution est lentement titrée en 30 mn au pH 4,8-5,0 à l'aide d'hydroxyde d'ammonium concentré. Des essais effectués en laboratoire nécessitent environ 420 à 440 ml d'hydroxyde d'ammonium. La solution est alors ensemencée lorsque le pH a été porté à 4,0. L'ajustement du pH est effectué à 20 C après quoi la suspension est agitée durant une heure à 20 C, puis elle est refroidie à 0 C durant 16 heures. Dans le laboratoire, après 3 heures d'agitation dans un bain de glace, le bécher est entouré de glace et maintenu dans un réfrigérateur pendant une quinzaine d'heures.On sait que la croissance de cristaux Isur les parois du bécher est toujours constatée apres maintien d'une telle solution dans un réfrigérateur. On ne sait pas actuellement si une période de repos inférieure peut être convenable. Cependant, on sait d'observations qui ont été faites que 3 heures ne sont pas suffisantes. Le produit qui précipite est recueilli par filtration, lavé à l'aide de MeOH (environ le volume du filtrat) et séché à 45 C. Le rendement généralement obtenu est de l'ordre de 750 à 7709 de solvat methanole de l'acide 7-[D-&alpha;-amino-&alpha;-(p-hydroxyphényl)- acétamido]-3-(1,2,3-triazol-5-yl-thiométhyl)-3-céphem-4-carboxylique. Ce procédé est un procédé anhydre et toutes les précautions doivent être prises pour eviter la contamination de la masse réactionnelle par de l'eau ou tout autre phénomène qui peut provoquer l'hydrolyse de l'ester sylylique et, par conséquent, une faible acylation. D'autres buts et avantages de la présente invention apparaîtront à la lecture de la description suivante et des exemples donnés à titre non limitatif. Dans ces exemples, toutes les températures sont exprimées en degrés centrigrades. La matiere appelée "Tween 80" qui est en faitconnue sous la dénomination de "Polysorbate 80" estun mélange complexe de polyoxyéthylène éthers et d'esters oléiques partiels d'anhydrides de sorbitol.Le 1,2-propylène glycol employe est egalement appelé propylène glycol U.S.P. Le tétrahydrofuranne est cite sous la dénomination de THF, tandis que la "Skellysolve B" est une fraction d'ether de pétrole de point d'ébullition de l'ordre de 60 à 68 C essentiellement formé de n-hexane. EXEMPLE 1 -. Preparation du méthanolate de l'acide 7-[D-&alpha;-amino-&alpha;-(p-hydroxyphényl)acéta- mido]-3-(1,2,3-triazol-5-ylthiométhyl)-3-céphem-4-carboxylique, sous forme cristallisee. 1. 50g d'acide 7-[D-&alpha;-amino-&alpha;-(p-hydroxyphényl)acétamido]-3-((1,2,3-triazol- 5-ylthiométhyl)-3-céphem-4-carboxylique sont mis en suspension dans 250 ml d'un mélange méthanol/eau à 95% volume/volume (dont le méthanol est à 95%), à une température de 22 à 250C. 2. De l'acide chlorhydrique concentré est ajouté, tandis que la suspension est rapidement agitée,jusqu'à l'obtention d'un pH de l'ordre de 1,3 à 1,5. On obtient une solution ou une suspension qui est fort proche d'une solution. 3. Le pH est ajusté à une valeur de 1,7 à l'aide de la triéthylamine. 4. On ajoute 7,59 de charbon actif ("Darco G-60") et met en suspension durant 0,5 heure. 5. Le carbone est éliminé par filtration et lavé à l'aide de 75 ml de méthanol que l'on ajoute au filtrat. Les tapes 2, 3 et 4 doivent être effectuées en 5 heures environ. 6. Le filtrat et les eaux de lavage combines de l'Etape 5 sont rapidement agités. On leur ajoute de la triéthylamine en environ 5 mn au pH de 4,5. La -cristallisation commence environ 1 à 3 mn après. Le mélange est maintenu sous agitation durant une heure. 7.- Les cristaux sont recueillis par filtration, lavés à l'aide de 100 ml de méthanol et séchés sous vide à 56 C durant 24 heures. Rendement biologique- 75-90%; essai biologique = 850-900 mcg/mg; spectres RMN et IR = en accord avec ceux de la formule obtenue pour 1 mole de méthanol; % H, KF= 2-4,0. - Preparation du 1,2-propylene glycolate de BL-S640 cristallise 1. 359 du méthanolate de l'acide 7-[D-&alpha;-amino-&alpha;-(p-hydroxyphényl)acétamido]- 3-(1,2,3-triazol-5-ylthiométhyl)-3-céphem-4-carboxylique préparé ci-dessus sont mis en suspension dans 150-200 ml d'une solution propylène glycol/eau à 75% en volume, à une température de l'ordre de 20 à 25 C. 2. De l'acide chlorhydrique concentré est ajouté de façon à obtenir un pH de l'ordre de 1 à 1,2, ce qui conduit à une solution ou à une suspension proche d'une solution. 3. On ajoute lentement de la triéthylamine (TEA), en maintenant la solution sous agitation rapide, de sorte que l'on obtienne un pH de l'ordre de 1,7 à 1,8. 4. 59 de charbon actif "Darco G-60" sont additionnés et le mélange est maintenu sous agitation durant 0,5 heure. Le charbon est éliminé par filtration (la filtration est lente, et l'on suggère l'emploi d'un papier de 18,5 cm SS No. 576). Le gâteau de filtration carboné est lavé à l'aide de 40 ml d'une solution propylène glycol/eau à 75% en volume et les eaux de lavage sont ajoutees au filtrat. Les Etapes 2, 3 et 4 ci-dessus doivent être achevées en 5 heures. 5.- On ajoute de la triethylamine à un pH de 4,5 durant 10 mn,tout en agitant rapidement le mélange filtrat/eau de lavage de l'Etape 4. Il se forme des cristaux en environ 1 à 3 mn. Le mélange est maintenu sous agitation durant 1h. 6. Les cristaux du propylène glycolate de l'acide 7-[D-&alpha;-amino-&alpha;-(p-hydroxy- phényl)acétamido]-3-(1,2,3-triazol-5-ylthiométhyl)3-céphem-4-carboxylique sont recueillis par filtration. La filtration est lente (on suggere l'emploi d'un papier 12,5-15,0 cm SS No. 576). Les cristaux sont ultérieurement laves à l'ai- de de 50 ml de propylène glycol à 75%, 50 nil de méthanol, 50 ml d'acétone et séchés sous vide à 56 C durant 24 heures. Rendement biologique=8O-950C. - Propriétés du propylène glycolate de l'acide 7-[D-&alpha;-amino-&alpha;-(p-hydroxyphényl)- acétamido]-3-(1,2,3-triazol-5-ylthiométhyl)-3-céphem-4-carboxylique a - Essai biologique = 750-790 mcg/mg b - Spectres IR-RMN = En accord avec la structure contenant 1,3 - 1,5 mole de propylène glycol (17 a 19% de propylène glycol). Aucune perte d'une chaîne latérale 3-triazolee ne semble s'être produite. c - X d'eau, K.F. = 1-3,0. d- Morphologie cristalline = Microcristaux a 100% cristallisés, de forme triangulaire. e - Point de fusion = 182-184 C (D, stage chaud). f- [&alpha;]d25 = (C = 1%; 1N-HCl) = +53 g- Solubilité dans l'eau = Environ 10 mg/ml dans l'eau à 23 C. h- Perte de bioactivite au stockage à température élevée = 100 C : 24h: EXEMPLE 2 . MATIERES Poids, g Volume, ml Moles . Méthanolate de l'acide 7-[D-&alpha;-amino- &alpha;-(p-hydroxyphényl)acétamido]- 3-(1,2,3-triazo]-5-ylthiométhyl) 3-céphem-4-carboxylique (Note 1) .. 1,000 2,02 . HCl 6N .......................... 425-460 . Triéthylamine ................... #330 . Carbone ......................... 50 . Propylène glycol (1,2-propanediol) . 5 650 . Acétate d'éthyle ............... 3 400 . Chlorure de méthylène .......... 800 PROCEDE OPERATOIRE 1. Dans un récipient convenable pourvu de moyen d'agitation et de moyen de controle du pH, on introduit 1,5Q de propylène glycol et 1,5t d'eau déionisee. 2. On ajoute dans ce mélange propylène glycol/eau (1/1) environ 1000g de méthanol de l'acide 7-[D-&alpha;-amino-&alpha;-(p-hydroxyphényl)acétamido]-3-(1,2,3-tri- azol-5-ylthiométhyl)-3-céphem-4-carboxylique. 3. Sous bonne agitation, la suspension est acidifiée par addition de 425 ml de HCl 6 X, de sorte que le pH soit porté a une valeur de l'ordre de 0,9 a 1,3 en environ 15 mn à 25 C. On obtient une solution limpide sombre. 4. Le pH de la solution est immédiatement porté à une valeur de 1,4 à 1,7 par addition de triéthylamine (TEA), ce qui nécessite que 20 à 30 ml de TEA. Une petite quantité de solide blanc se sépare par précipitation. On présume que ce précipité consiste en p-hydroxyphényl glycine ou un de ses dérivés. 5. La solution subit un traitement à l'aide de 50g de charbon actif "Darco KB". La suspension ainsi obtenue est agitée à 250C durant 15 mn. 6. On sépare le charbon par filtration sur terre de diatomée prêrevêtue ("Dicalite") formant un filtre. La zone de filtration est d'environ 1,3 cm2/g. Les filtrations en laboratoire font emploi de vide, sont lentes et exigent souvent que l'on gratte la surface du gâteau. La filtration sous pression devrait aider a augmenter la vitesse de filtration. Le gâteau de carbone est lave à l'aide de 1400 ml d'un melange propylène glycol/eau 7/3. Les eaux de lavage sont maintenues distinctes. 7. Le filtrat de l'Etape 6 passe sur un filtre stérile convenable et est introduit dans un récipient stérile. La zone de filtration est d'environ 1,3 cm2/g. Le gâteau de filtration ainsi obtenu est lavé à l'aide des eaux de lavage de l'Etape 6, puis ensuite lavé à l'aide de 1000 ml d'un mélange propylène glycol/eau (7/3) stérile. 8. On ajoute 1,75# de propylène glycol stérile dans la solution stérile de l'Etape 7. 9. Sous agitation vigoureuse, le pH de la solution est porté à une valeur de 4,1 à 4,3 par addition d'environ 300 ml de TEA stérile pendant une période de l'ordre de 20 à 30 mn. 10. La suspension étant maintenue constamment sous agitation à 25 C durant 4 à 5 heures, elle est ensuite maintenue au repos durant une quinzaine d'heures. 11. Les cristaux stériles formés sont séparés par filtration et le gâteau résultant est lavé à l'aide de 1000 ml d'un mélange propylène glycol/eau- (7/3)stérile, puis de 1000ml d'acetate d'éthyle stérile. 12. Les cristaux stérilessont remis en suspension dans 2000 ml d'acetate d'éthyle stérile pour éliminer l'excès de propylène glycol. 13. Le solide est recueilli par filtration puis le gâteau est ensuitelavé a l'aide de I,2Q d'un melange acétate d'éthyle/chlorure de méthylène (1/2) sterile. 14. Le produit est séché à 50 C dans un four sous vide durant 15 heures. Le rendement est d'environ 820 à 910g de 1,2-propylène glycolate de l'acide 7-[D-&alpha;-amino-&alpha;-(p-hydroxyphényl)acétamido]-3-(1,2,3-triazol-5-ylthiométhyl)- 3-cephem-4-carboxylique, sous forme cristallisé. 15. On procède à l'analyse du produit: Propylene glycol: 1,2-1,3 mole par mole d'acide 7-[D-&alpha;-amino-&alpha;-(p-hydroxyphényl)acétamido]-3-(1,2,3-triazol- 5-ylthiométhyl)-3-céphem-4-carboxylique, ainsi que le détermine la RMN. Pyridine: Essai biologique: 800 à 850 mcg/mg. NOTES Il convient de remarquer: 1. Le méthanolate de BL-S640 primaire contient de 0,4 à 0,6% de pyridine. 2. Le précipite blanc de l'Etape 4 peut être préfiltré sur un filtre de verre fritte grossier rempli de terre de diatomée (Dicalite"). La filtration au carbone qui est faite ultérieurement est rendue plus aisee. 3, Si l'on emploie un méthanolate d'acide 7-[D-&alpha;-amino-&alpha;-(p-hydroxyphényl)- acétamido]-3-(1,2,3-triazol-5-ylthiométhyl)-3-céphem-4-carboxylique de coloration sombre, une plus grande proportion de charbon est requise pour le procédé de decoloration. On peut s'attendre à davantage de difficulté au cours de la filtration. 4. Les Etapes 6 et 7 doivent être réalisées aussi rapidement que possible. Le filtrat stérilene doit pas être conservé plus de 5 heures. Si ceci s'avère nécessaire, une partie de la TEA stérile peut être ajoutée dans le filtrat avant qué l'opération de- lavage spit effectué. 5. Le propylène glycol stérile de l'Etape 8 est stérilise de préférence par chauffage à 80 C durant 30mm puis subit une filtration stérile. On refroidit à 25 C avant de l'ajouter dans la solution d'acide 7-[D-&alpha;-amino-&alpha;-(p-hydroxy- phényl)acétamido]-3-(1,2,3-triazol-5-ylthiométhyl)-3-céphem-4-carboxylique, ensuite le propylène glycol stérile est versé dans le récipient de la filtration stérile de l'Etape 7. EXEMPLE 3 - Préparation du propylène glycolate de l'acide 7-[D-a-amino-a-(p-hydroxy- phényl)acétamido]-3-(1,2,3-triazol-5-ylthiométhyl)-3-céphem-4-carboxylique stérile et à l'état cristallisé convenant à une administration parentérale. 1. 259 de méthanolate de l'acide 7-[D-&alpha;-amino-&alpha;-(p-hydroxyphényl)acéta- mido]-3-(1,2,3-triazol-5-ylthiométhyl)-3-céphem-4-carboxylique ou de propylène glycolate de l'acide 7-LD-a-amino-a-(p-hydroxyphényl )acétamidol-3-(1,2,3-tri- azol-5-ylthiométhyl)-3-céphem-4-carboxylique recristallisé sont mis en suspension dans 150-200 ml d'une solution propylène glycol/eau à 75% en volume à 20-25 C. 2. De l'acide chlorhydrique concentré est ajouté jusqu'à ce que le pH soit de 1-1,2 et que l'on obtienne une solution ou une suspension proche d'une solution. 3. On ajoute lentement la triéthylamine (TEA) tout en agitant rapidement la solution de façon que le pH ait une valeur de 1,6 à 1,8. 4. 5g de charbon actif "Darco G-60" sont ajoutés et le melange est mis en suspension durant 30 mn. Le charbon est séparé par filtration (la filtration est lente et l'on suggère l'emploi d'un papier 18,5 cm SS No. 576). Le gâteau de filtration carbone est lave à l'aide de 40 ml d'une solution propylène glycol/eau à 75% en volume. Les eaux de lavage sont ajoutées au filtrat. 5. Le filtrat combine et les eaux de lavage de l'Etape 4 sont passés sur un filtre Nillipore de 0,22 micron et introduits dans un récipient stérile convenable ou réservoir dispose dans une zone stérile. Les Etapes 2, 3, 4 et 5 ci-dessus doivent être achevées en environ 6 heures. 6. De la triéthylamine stérile est ajoutée jusqu'à ce que l'on atteigne un pH de l'ordre de 4,5 en une période de l'ordre de 10 mn à la solution stérile de l'Etape 5 maintenue sous agitation rapide. Il se forme des cristaux en environ 1 à 3 mn. Le mélange est agite durant une heure. 7. Les cristaux stériles sont recueillis par filtration stérile. La filtration est lente (on suggère l'emploi d'un papier 12,5-15,0'cm SS No. 576). Les cristaux sont lavés à l'aide de 50 ml d'une solution de propylène glycol à 75% stérile, 50 ml de méthanol stérile, 50 ml d'acétone stérile, etséches sous vide à 560C durant 24 heures. Rendement biologique: 80-95%. 8. Les cristaux stériles peuvent être micropulvérises dans des conditions stériles jusqu'a une dimension de l'ordre de 200 mesh ou micronisês de façon stérile. - Propriétés du propylène glycolate de l'acide 7-[D-&alpha;-amino-&alpha;-(p-hydroxy- phényl)acétamido]-3-(1,2,3-triazol-5-ylthiométhyl)-3-céphem-4-carboxylique a - Essai biologique = 800-860 mcg/mg b - Spectres IR-RMN = En accord avec la structure contenant 1,3 - 1,5 mole de propylène glycol (17 à 19Z de propylène glycol). Aucune perte d'une chaîne latérale 3-triazolée ne semble s'etre produite. c - X d'eau, K.F. = 1-3,0. d - Morphologie du cristal = Microcristaux a 100Z cristallises, de forme triangulaire. e - Point de fusion = 182-184 C (D,stage chaud). f - [&alpha;]D25 = (C = 1%; 1N-HCl) = +53 g - Solubilité dans l'eau = Environ 10 mg/ml dans l'eau a 23 C. h - Stabilité thermique = 100 C: 24h: 100 C : 48h: 56 C: 1 mois: activite. EXEMPLE 4 - Préparation du mono-méthanolate de BL-S640 purifie 1. 100g de méthanolate de BL-S640 ou 1,2-propylène glycolate de BL-S640 sont rapidement agités dans 300 mi d'eau. 2. 90g d'acide lévulinique sont ajoutés. 3. De l'acide chlorhydrique concentré est lentement ajouté, tout en assurant l'agitation rapide de la suspension, jusqu'à ce que le pH soit de 0,81,2 et que l'on obtienne une solution ou une suspension proche d'une solution. On refroidit ensuite à 20-25 C si ceci s'avère necessaire. 4. De l'hydroxyde de sodium à 40X est ajouté en une période d'environ 5 mn à la solution maintenue sous agitation extrêmement rapide de l'Etape 3, jusqu'a l'obtention d'un pH de 4,5 (il est possible qu'un précipité se forme aux environs d'un pH de l'ordre de 2,0 à 3,0 et puis qu'il repasse dans la solution pour un pH de l'ordre de 4 à 4,5). I1 ne faut pas que la température depasse une valeur de l'ordre de 27 C. 5. La solution ou la suspension proche d'une solution obtenue est refroidie à une temperaturede l'ordre de 4 a 10 C, puis additionnee tout en étant maintenue, sous agitation rapide, de 500 midieau à 4-10 C. Il se ferme un précipité. 6. Le melange est agite à 4-100C durant cinq minutes. Le précipité (X) qui contient la plus grande partie de la couleur et des impuretés,notamment dues au des-triazole BL-S640, est sépare par filtration. Le précipité est lavé à l'aide de 50 ml d'eau (il ne faut pas ajouter les eaux de lavage au filtrat du solide X), 75 ml de méthanol (il ne faut pas ajouter le méthanol au filtrat du solide X) et le précipité est alors séché sous vide a 50 C durant 25 heures. On obtient ainsi 5-159 d'un solide brun foncé(0-500 unites/mg). 7. 15g de charbon actif "Darco G60" ou de charbon activé KB sont ajoutés au filtrat du précipité (X) de l'Etape 6. Le mélange est agite à temperature ambiante durant 30 mn. 8. Le charbon est élimine par filtration et lavé à l'aide de 40 mi d'eau. L'eau de lavage est ajoutee au filtrat. 9. Le filtrat est filtré de façon stérile sur un filtre Millipore de 0,22 microns. Les Etapes 4 à 9 doivent être achevées en environ quatre heures. -10. Un volume égal (environ 1#) de méthanol stérile exempt de pyrogène est ajoute à la solution de pH 4,5 de l'Etape 9, l'agitation etant modérée. Des cristaux se forment en environ une minute. On maintient le pH à 4,5. 11. Le mélange est agité à 18-23 C durant une heure. 12. Les cristaux blancs brillants sont séparés par filtration, lavés à l'aide de 175 ml de méthanol stérile à 50%, 300 mi de méthanol stérile, puis séchés sous vide à 56 C durant 24 heures. On obtient ainsi 65-759 de produit (rendement biologique: 70-80%). EXEMPLE 5 - Préparation du mono-propylène glycolate de 1. 100g de méthanolate ou de 1,2-propylene glycolate de BL-S640 sont rapidement agités dans 300 ml d'eau. 2. 80g d'acide lévulinique sont ajoutés. 3. L'acide chlorhydrique concentré est ajouté à la suspension étant maintenue sous agitation rapide, jusqu'à le pH soit de l'ordre de 0,8 à 1,2 et que l'on obtienne une solution ou une suspension qui soit proche d'une solution. Cette solution est alors refroidie à 20-250C si ceci s'avère nécessaire. 4. L'hydroxyde de sodium à 40% est ajoutéen une periode d'environ 5 mn à la solution maintenue sous agitation rapide- de l'Etape 3 jusqu'à ce que le pH atteigne 4,5 (il est possible qu'un précipite se forme aux environs d'un pH de l'ordre de 2,0 à 3,0 et puis qu'il repasse dans la solution pour un pH de l'ordre de 4 à 4,5). Il ne faut pas que la température dépasse une valeur de l'ordre de 27 C. 5. La solution ou la suspension proche d'une solution obtenue est refroidie à une température de l'ordre de 4 à 10 C, puis additionnée tout en étant maintenue, sous agitation rapide, de 500 ml d'eau à 4-10 C. Il se forme un précipité. 6. Le mélange est agité à 5-10 C durant cinq minutes. Le précipité (X) qui contient la plus grande partie de la couleur et des impuretés, notamment dues au des-triazole BL-S640, est séparé par filtration. Le précipité est lavé à l'aide de 50 ml d'eau (il ne faut pas ajouter les eaux de lavage au filtrat du solide X), 75 mi de méthanol (il ne faut pas ajouter le méthanol au filtrat du solide X) et le précipité est alors séché sous vide à 50 C durant 25 heures. On obtient ainsi 5-15g d'un solide brun foncé(0-500 unités/mg). 7. 15g de charbon actif "Darco G60" ou de charbon activé KB sont ajoutés au filtrat du précipité (X) de l'étape 6. Le mélange est agité à température ambiante durant 30 mn. 8. Le charbon est éliminé par filtration et lavé à l'aide de 40 ml d'eau. L'eau de lavage est ajoutée au filtrat. 9. Le filtrat est filtré de façon stérile sur un filtre Millipore de 0,22 microns Les Etapes 4 à 9 doivent être achevées en environ quatre heures. 10. Un volume égal (environ 1#) de méthanol stérile exempt de pyrogène est ajouté à la solution de pH 4,5 de l'Etape 9, l'agitation étant modérée. Des cristaux se forment en environ une minute. On maintient le pH à 4,5. 11. Le mélange est agité à 18-230C durant une heure. 12. Les cristaux blancs sont séparés par filtration, lavés a l'aide de 175 ml d'une solution propylène glycol/eau stérile à 50%, 450 ml de méthanol stérile puis séchés à 56 C durant 24 heures 13. Rendement 70-80g - (rendement biologique: 75-85% du mono-propylène glycolate de BL-S640. Un échantillon du mono-propylène glycolate obtenu selon la méthode de l'Exemple 5 est soumis à l'analyse, ce qui conduit aux résultats suivants: a - Essai biologique = 865 mcg/mg b - Spectres IR-RMN - = En accord avec 1 a structure contenant I mole de propylène glycol par mole de zwitterion de céphalosporine. c - X d'eau, K.F. = 0,3. d - Morphologie du cristal = Cristaux ayant l'aspect de tiges bien définies e - [&alpha;]D23 = (C = 1%; 1N-HCl) = +55,9 f - % propylène glycol par analyse chimique = 15,6 g - Autres solvants = 0,1%. h - Spectre d'absorption UV (dans HCl 0,1N) - #max - 227 nm (a = 28,4) et 272 nm (a = 16,6). Un échantillon de mono-propylène glycolate est examiné par la technique de diffraction de poudre aux rayons X selon la méthode décrite ci-dessous. Résultats Les échantillons sont fortement cristallins et présentent 35 lignes de diffraction déterminables. Les données sous la forme d'espacement d et d'intensités relatives sont les suivantes: Ligne de diffraction Espacement d ( ) Intensité relative 1 10,11 65 2 9,26 32 3 7,83 18 4 7,33 51 5 6,88 82 6 6,28 56 7 5,71 42 8 5,27 3 9 5,02 41 10 4,68 62 11 4,46 99 12 4,30 59 13 4,13 35 14 3,91 90 15 3,80 100 16 3,63 -37 17 3,47 49 18 3,35 13 19 3,24 11 20 3,13 14 21 3,02 18 22 2,95 17 23 2,85 25 24 2,78 55 25 2,72 23 26 2,61 18 27 2,53 20 28 2,49 6 29 2,35 8 30 2,31 14 31 2,27 14 32 2,24 14 33 2,19 10 34 2,14 14 35 2,10 15 La méthode de détermination des propriétés de diffraction aux rayons X que l'on emploie est la suivante:: Une petite quantite d'un échantillon est scellée dans un tube capillaire en verre de faible dispersion de 0,2 mm de diamètre qui est disposé en vue de subir une exposition dans un appareil de prise de vue pour spectre de diffraction de poudre Debye-Scherrer de 114,6 mm de diamètre. La durée d'exposition est de 4 heures due à un générateur de rayons X de type Norel co, fonctionnant à 35 KV-20 mA et comprenant un tube à rayons X présentant une cible en cuivre située au centre du tube (CuK de longueur d'onde X - 1,5418A). Une pellicule Kodak pour rayons X sans écran est employée et développée en 3 mn a 20 C dans un liquide de développement de rayons X Kodak. Une très petite quantité de fluorure de sodium cristallin est mélangée à quelques echantillons pour assurer le calibrage interne. En outre, un échantillon de NaF pur subit l'ensemble des opérations à titre témoin. Le film est lu grâce à un lecteur de film Debye-Scherrer Norelco et l'on enregistre les positions des différents anneaux de diffraction qui sont plus proches de 0,05 mm. Les données sont corrigées pour tenir compte du ré trécissement du film et l'espacement interplanaire (espacement d) est déterminé à partir de ces valeurs corrigées. Un programme de comptage (celui dit de rayons X, de P. Zugenmaier) est utilisé pour effectuer ces calculs. L'erreur sur les résultats de l'espacement d obtenus n'est que de l'ordre de 1%. On enregistre l'intensité pour chacun des films à l'aide-d'un microdensi tomette d'enregistrement de Joyce-Loeble Mark IIIC (rapport de balayage 5J1; 0,1 O.D coefficient optique). Les intensités relatives sont exprimées sur une échelle de 1 à 100 pour tous les anneaux de diffraction.que l'on rencontre, en utilisant les intensités de pics après correction pour tenir compte du support de lecture. EXEMPLE 6 - Préparation du monométhanolate de BL-S640 purifie 1. Une centaine de grammes d'acide pyruvique sont dissous dans 250 à 300 mi d'eau. 2. Une centaine de grammes de propylène glycolate de BL-S640 ou de méthanolate de BL-S640 sont verses très rapidement sous forte agitation de la solution obtenue précédemment en environ cinq minutes de temps. On obtient ainsi une solution dont le pH est de l'ordre de 2,0 (ou suspension proche) 3. La solution est refroidie à 10 C. 4. 40% d'hydroxyde de sodium sont ajoutés en une période d'environ cinq minutes à la solution sous très rapide agitation de l'Etape (3) jusqu'à l'obtention d'un pH de 4,5 (un précipité peut se former pour le pH de l'ordre de 2,0 à 3,0, lequel précipité passe ensuite en solution lorsque l'on atteint un pH de l'ordre de 4 à 4,5. Il ne faut pas que 7a température s'élève à une valeur supérieure à 27 C. 5. La solution ou la suspension proche de l'état de solution est refroidie à 8-12 C et on lui ajoute, tandis qu'elle est maintenue sous agitation rapi-de, 500 à 600-ml d'eau à 8-12 C. il se forme un précipité. 6. Le melange est agité à une température de l'ordre de 8 à 12 C durant trois minutes. Le précipité (appelé 6X) que l'on recueille et qui contient la plus grande partie des impuretés colorees, notamment dues au des-triazole. BL-S640, est traite par filtration sous vide. La filtration est lente. Il n'est pas possible par aspiration d'obtenir l'assèchement total du gâteau de filtration. Le papier filtre ainsi que le gâteau de filtration sont alors séchès dans un courant d'air ou les solides sont recueillis et séchés sous vide à 50 C durant 24 heures. On obtient ainsi de 5 à 25g d'un solide foncé (puissance200 à 700 unités/mg). L'excédent doit etre recyclé. 7. 15g de charbon actif Darco G60 ou KB sont ajoutés au filtrat du pré cipité (6X) de l'Etape 6. Le mélange est agité. à temperature ambiante durant 0,5 heure. 8. Le carbone est éliminé par filtration et lave à l'aide de 40 ml d'eau. Les eaux de lavage sont ajoutées au filtrat. 9. Le filtrat est filtre -de façon stérile sur un filtre Millipore de 0,22 micron. les Etapes 4 à 9 doivent être effectuées en environ quatre heures. La température des Etapes 7 à 9 doit être maintenue à une valeur inférieure à 24 C. 10. Un volume egal (approximativement un litre) de méthanol stérile exempt de pyrogene est ajouté à la solution de pH 4,5 de l'Etape 9 que l'on agite modérément. Les cristaux se forment en environ une minute. Le pH est maintenu à 4,5. 11. Le mélange est agité à 10-200C durant une heure. 12. Les cristaux blancs brillants obtenus sont recueillis par filtration, lavés à l'aide de 175 ml de méthanol stérile à 50% dans de l'eau, de 450 ml de méthanol stérile, et séchés sous vide à 56 C durant 24 heures. 13. On obtient ainsi 55-60g (rendement biologique: 60-75% de mono-méthanolate BL-S640, sous forme cristallisée (Essai biologique 930-960 unités/mg). EXEMPLE 7 - Préparation du mono-propylène glycolate de BL-S640 1. 100g d'acide pyruvique sont dissous dans 250 à 300 ml d'eau. 2. 100g de propylène glycolate de BL-S640 ou de méthanolate de BL-S640 sont versés en une période de l'ordre de 5 mn dans la solution précédemment obtenue que l'on agite rapidement. On obtient une solution ou une suspension proche de l'étant de solution dont le pH est de l'ordre de 2,0. 3. La solution est refroidie à 10 C. 4. 40% d'hydroxyde de sodium sont ajoutés en environ 5 mn à la solution, maintenue sous agitation rapide, de l'Etape 3 jusqu'à l'obtention d'un-pH 4,5 (il est possible que se forme un précipite lorsque le pH est de l'ordre de 2,0 à 3,0 et que ce précipité passe dans la solution lorsque le pH atteint une valeur de l'ordre de 4 à 4,5). il ne faut pas que la temperature depasse 27 C. 5. La solution oulasuspension proche de l'état de solution est refroidie à 8-12 C et additionnée, sous agitation rapide à 500-600 ml d'eau à 8-12 C. Il se forme un précipité. 6. Le mélange est agite à 8-12 C durant 3 mn. Le précipité (6X) contenant la plus grande partie des impuretés colorées, notamment dues au des-triazole BL-S640, est traite par filtration sous vide. La filtration est lente. Il n'est pas possible de sécher le gâteau de filtration par aspiration. Le papier filtre et le gâteau de filtration sont alors versés dans 300 ml de methanol et maintenus dans cette solution durant 4 heures. Le papier filtre et le gâteau de filtration sont séchés dans un courant d'air, les solides sont recueillis et séchés sous vide à 50 C durant 24 heures. On obtient ainsi 5-25g de solides foncés (puissance20Q-700 unités/mg). L'excédent doit être recyclé. 7. 15g de charbon actif Darco G60 ou KB sont ajoutés au filtrat du précipité (6X) de l'Etape 6. Le mélange est agité à température ambiante durant 0,5 heure. 8. Le charbon est éliminé par filtration et lavé a l'aide de 40 ml d'eau. L'eau de lavage est ajoutée au filtrat. 9. Le filtrat est filtre de façon stérile sur un filtre Millipore de 0,22 micron. Les Etapes 4 à 9 doivent être effectuees en environ 4 heures, la température devant être maintenue à une valeur inferieure a 24 C pour les Etapes 7 à 9. 10. Un volume égal (environ un litre) du propylène glycol stérile exempt de pyrogène est ajouté à la solution à pH 4,5 obtenue dans l'Etape 9 qui est maintenue sous agitation modérée. Il se forme des cristaux enenviron 1 mn. On maintient le pH à une valeur de 4,5. 11. Le mélange est agité à 10-200C durant une heure. 12. Les cristaux blancs brillants obtenus sont séparés par filtration1 lavés à l'aide de 175 ml de propylène glycol dans une solution aqueuse à 50%, 450 ml de méthanol stérile, etséchés sous vide à 56 C durant 24 heures. 13. On obtient ainsi 55-609 (rendement biologique: 60-70%) dumono-propy lène glycolate BL-S640 à l'état cristallisé. EXEMPLE 8 - Propylène glycolate de l'acide 7-[D-&alpha;-amino-&alpha;-(p-hydroxyphényl)acétamido]- 3-(1,2,3-triazol-5-ylthiométhyl)-3-céphem-4-carboxylique (appelé BL-S640), destiné à une administration intramusculaire (à l'état micronisé); le seuil nominal d'activité de BL-S640, exprimé sous la forme du propylène glycolate de BL-S640, est de 250 mg/ml FORMULE pour 1 Dose pour 5 Doses pour 10 Doses pour 76 Doses #Propylène glycolate de l'acide 7-CD-a-amino- a- (p-hydroxyphényl )- acétamido]-3-(1,2,3 triazol-5-ylthiométhyl)- * 0,250 g 1,250 g 2,50 g 4,00 g 3-céphem-4-carboxylique d'activité d'activité d'activité d'activité stérile micronisé. #Propyl parabène ........ 0,0001g 0,0005g 0,001g 0,0016g #Méthyl parabène ........ 0,0009g 0,0045g 0,009g 0,0144g Chlorure de sodium (stérile, micropulvérisé 0,002 g 0,010 g 0,02 g 0,032 g #Tween-80 ............... 0,001 g 0,05 g 0,01 g 0,016 g #Lécithine .............. 0,002 g 0,01 g 0,02 g 0,032 g #Polyvinylpyrrolidone (Povidone) ............. 0,005 g 0,025 g 0,05 g 0,08 g Le seuil nominal de l'activité de BL-S640, exprimé sous la forme du propylène glycolate est de 250 mg/ml. Le propylène glycolate nécessaire est calculé à l'aide de la formule suivante: 0,250g x 1000 = Poids en grammes de propylène glycolate Activité du propylène glycolate de BL-S640 nécessaire de BL-S640 en mcg/mg Ce poids peut égaZement etre augmenté queZque peu pour tenir compte des facteurs suivants: 1) Excédent requis pour améliorer la durée de vie (stabilité). 2) Koeoedent requis du fait de la manipulation des récipients, seringues et aiguilles. 3) Variations dues au fonctionnement de la machine. e - Propylène glycolate de BL-S640 destiné à une administration intramusculaire (micronise); seuil nominal de l'activité du BL-S640, exprime sous la forme du propylène glycolate de BL-S640est de 250 mgSml 1. Le propylène glycolate de BL-S640 à employer doit être stérile, exempt de pyrogène et être manipulé de façon aseptique durant tout le procédé. 2. Le propylène glycolate de BL-S640 est micronisé de façon stérile dans un appareil de micronisation dans des conditions stériles. 3. Le propylène glycolate de BL-S640 micronisé et stérile et le chlorure de sodium stérile sont alors introduits dans un appareillage de mélange de type Patterson Kelly V convenant à une utilisation stérile avec une barre d'intensification convenant à l'addition de liquide. Le mélangeur a été rendu stérile par pulvérisation d'acide peracetique et exposition à de l'oxyde (gazeux) d'éthylène durant 16 heures préalablement à son emploi. il faut prendre soin, avant de charger le mélangeur, qu'il ne se soit pas produit de condensation de gaz à l'intérieur du mélangeur Cette condensation peut être empêchée grâce au choix d'une température ambiante convenable. Le mélangeur est alors mis en fonctionnement durant 30 mn avec une action d'intensification pour assurer le mélange initiai de la matière. 4t La lécithine, les méthyl et propyl parabènes, Tween-80 et Povidone sont dissous dans un volume de chlorure de méthylène égal à approximativement 1/5 du poids de propylène glycolate BL-S640 requis. 5. En opérant dans des conditions aseptiques, la solution obtenue dans l'Etape 4 est passée sous une pression positive sur un filtre Millipore de 0,22 micron stérile situé dans un récipient qui a été convenablement stérilisé et disposé dans une enceinte stérile. 6. En employant l'appareil d'addition liquide du mélange, on ajoute le -volume requis de solution de chlorure de méthylène stérile exempt de pyrogène obtenue dans l'Etape 5,sous la forme de cinq portions égales. Après chaque addition d'une portion de la solution, la barre d'intensification est utilisée pour un maximum de 2 mn; elle est en fait mise sur la position 4 d'agitation durant les 15 mn de mélange requises pour chaque addition.A la fin de chaque période de mélange, la pression développée durant le procédé de mélange doit être réduite par mise à l'air (cette pression étant indiquée sur l'appareil de mesure disposé sur l'enceinte du mélangeur) et on applique alors le vide pour éliminer les vapeurs de chlorure de méthyle qui sont formées. il convient de répéter cette opération pour assurer l'élimination complète des vapeurs. Pour contribuer à l'évaporation et à l'élimination des vapeurs, il faut chauffer à une température de l'ordre de 46 C, cette température étant exercée à l'extérieur de l'enceinte de mélange, par circulation d'un courant d'eau dans une chemise externe. 7. Quand toute la solution a été ajoutée et que le mélange a été convenablement libéré des traces de vapeur, la matière est retirée du mélangeur et mise sous forme de plaques pour en permettre le séchage. Cette matiere est placée sur des plateaux couverts, lesquels sont mis dans un four à chauffage par de l'air chaud atmosphérique dans lequel ils sont séchés durant 6 h. La température de l'air chaud ne doit pas dépasser 55 C. On interrompt ce chauffage après six heures et fait circulerun courant d'air sur les plateaux durant une dizaine d'heures pour assurer un séchage total. 8. La matière revetue est repulvérisée grave au procédé utilisé dans l'Etape 2, de sorte que l'on obtienne les résultats suivants: matière retenue sur un réseau de 200 mesh 0,1% maximum 9. Le produit est recueilli dans des récipients stériles sous la forme d'une matière brute qui peut être mise à disposition. 10. La quantite convenable de propylène glycolate de BL-S640 revêtu est introduite à l'aide de techniquesaseptiques connues dans des ampoules de dimensions connues revêtues de silicone, généralement utilisées. EXEMPLE 9 - Formule des capsules de propylène glycolate de BL-S640 (Activité du BL-S640 de 250 mg par capsule) par capsule # Propylène glycolate BL-S640 x 0,3148g Lactose U.S.P. ........................................ 0,0087g Stéarate de magnésium U.S,P........................ o,OOl5g Poids total de la capsule ...................... 0,3250g Ces poids combinés représentent au total 262,5 mg d'activité, celle-ci étant de 5% supérieure à celle du seuil nominal de 250 mg d'activite que l'on exprime par rapport à une puissance de 834 mcg/mg pour le mélange composite propylène glycolate de BL-S640. La quantité de propylène glycolate de BL-S640 con tenue dans une capsule est déterminée par la formule suivante: 0,2625 x 1000 = 0,3148g de mélange par capsule. 834 NOTE: Chaque lot de propylène glycolate de BL-S640 est passé sur un tamis de 60 mesh préalablement à son mélange avec les autres ingrédients et à son introduction dans une capsule de dimension No.1. EXEMPLE 10 - Propylène glycolate de BL-S640 pour suspensions destinées à l'administration I. M. 300 mg FORMULE par ampoule - Propylène glycolate de BL-S640, stérile,micronisé .................................. x0,359 g - Chlorure de sodium, stérile, micropulvérisé ....................................... 0,0024g # Tween 80 ........................................... 0,0012g - Lécithine .......................................... 0,0024g - Polyvinylpyrrolidone (Povidone) 0,0060g - Mélange et charge; Poids total pour 10 mi d'ampoule ............................... 0,3710g Ce poids est équivalent â une activité de 300 mg de BL-S640. L'addition de 9,7 ml d'eau permet d'obtenir des suspensions pouvant être utilisées pour les injections comprenant une activité de 30 mg de BL-S640 par ml. EXEMPLE 11 - Propylène glycolate de BL-S640 pour former des suspensions destinées à être administrées par voie intramusculaire, 1,09 FORMULE par ampoule # Propylène glycolate de BL-S640, stérile, micronisé .................................. x 1,196g # Chlorure de sodium, stérile, micropulvérisé ...................................... 0,008g # Tween 80 .......................................... 0,004g # Lécithine ......................................... 0,008g # Polyvinylpyrrolidone (Povidone) ................... 0,020g # Mélange et charge (Poids total) ................... 1,236g # Addionné de ....................................... 0,349g (pour tenir compte des VNS) # Poids total pour ampoule de 5 ml .................. 1,585g x Ce poids est équivalent à une activité de 1,0g de BL-S640. xx VNS signifie ampoule, aiguille et seringue. L'addition de 3,7 ml d'eau permet d'obtenir des suspensions (pouvant être utilisées pour les injections).présentant une activité de 250 mg de BL-S640 par ml. Les suspensions donnees à titre d'exemple ci-dessus peuvent etre améliorées par addition d'une petite quantité d'un acide polycarboxylique pharmaceutiquement acceptable non toxique tel que par exemple l'acide citrique. La quantité d'acide utilisée qui,, bien entendu,doit être ajoutée sous une forme séche au melange des autres ingrédients solides, est celle qui suffit pour assurer un pH de l'ordre de 2,8 à 3,5, apres reconstitution du mélange lyophylisé. Sans addition de cet acide, les formules presentent un pH de l'ordre de 4,4 à 5. L'amélioration consiste à obtenir une meilleure coloration, c'est-à-dire un moindre développement de coloration indésirable au spectre et, également, une vitesse inférieure de perte de bioactivité au stockage. - Biodisponibilité orale pour des chiens de race beagle A trois chiens de race beagle (poids moyen 8,2 + 0,4 kg), on administre du propylène glycolate de l'acide 7-[D-&alpha;-amino-&alpha;-(p-hydroxyphényl)acétamido]- 3-(1,2,3-triazol-5-ylthiométhyl)-3-céphem-4-carboxylique, de dimension particu laire de l'ordre de 200 mesh (essai biologique 820 mcg/mg), par voie orale, à des doses de 30 mg d'activite/kg, sous forme de capsules de gélatine dure. Toutes les doses et concentrations indiquées ci-dessus sont exprimées par rapport à la matière amphotère et peuvent être corrigées pour les différences en puissance biologique. Dans le Tableau I ci-dessous, sont résumées les concentrations principales en plasma des chiens beagle auxquels ont éte administres 30 mg/kg de dose par voie orale de propylène glycolate de l'acide 7[- D -&alpha;-amino-&alpha;-(p-hydroxyphényl)- acétamido]-3-(1,2,3-triazol-5-ylthiométhyl)-3-céphem-4-carboxylique. Environ 40% de la dose est excrétée dans les urines dans les 8 heures succédant I 'ad- ministration du medicament. La demi-duree de vie du plasma est d'environ 1,36h. TABLEAU I Concentration du plasma (pgiml + S. E.) Durée Propylène glycolate de l'acide 7-[D-&alpha;-amino-&alpha;-(p-hydroxy- en phényl)-3-(1,2,3-triasol-5-ylthiométhyl)-3-céphem-4-car heures boxylique 0,08 0,04 # - 0,25 0,3 # 0,1 0,50 5,9 # 2,0 0,75 8,4 # - 1,0 15,8 # 3,2 1,5 17,7 # 2,0 2,0 18,7 # 0,9 3,0 13,7 # 1,2 4,0 8,4 # 1,3 6,0 3,2 # 0,4 8,0 1,6 # 0,2 Bien entendu, la présente invention n'est nullement limitée aux exemples et modes de mise en oeuvre mentionnés ci-dessus, qui peuvent faire l'objet de nombreuses variantes. La stabilité au stockage est déterminée sur des suspensions destinées à l'administration intramusculaire de propylène glycolate de BL-S640 ayant une activité de 250 mg/ml préparé selon la méthode décrite ci-dessus % de perte de bioactivité à 23 C Durée en jours Lot 1 Lot 2 3 7 2,0 2,1 14 2,0 1,1 21 +8,1 +6,3 30 1,0 5,3 42 0,0 +1,1 60 5,1 4,2 90 1,0 9,5 % de perte de bioactivité à 4 C Durée en jours Lot 1 Lot 2 30 +1,0 1,1 45 +1,0 1,1 60 3,0 2,1 90 1,0 5,3 120 180 Les poudres sèches s-ont stables durant au moins 4 mois à 560C. REVENDICATIONS 1.- Procédé de préparation de 1,2-propylène glycolate de l'acide 7-[D-&alpha;-amino-&alpha;-(p-hydroxyphényl)acétamido]-3-(1,2,3-triazol-5-ylthiométhyl)- 3-céphem-4-carboxylique, ce procédé étant caractérisé en ce que l'on augmente le pH d'une solution acide,dont le pH est inférieur à 2,0,de l'acide 7-[D-&alpha;-amino-&alpha;-(p-hydroxyphényl)acétmido]-3-(1,2,3-triazol-5-ylthiométhyl) 3-céphem-4-carboxylique, d'un hydrate ou d'un solvat de cet acide dans une solution aqueuse de 1,2-propylene glycol,par addition d'une base de sorte que b pH ait une valeur de 4,0 et que le propylène glycolate formé puisse precipiter et par conséquent être récupéré. 2.- Procédé selon la revendication 1, caractérisé en ce qu'une quantité de base suffisante est ajoutée pour que le pH atteigne une valeur de l'ordre de 4,0 à 5,0. 3.- Procédé selon la revendication 1 ou 2, caractérisé en ce que le 1,2-propylène glycolate de l'acide 7-[D-&alpha;-amino-&alpha;-(p-hydroxyphényl)acétamido]- 3-(1,2,3-triazol-5-ylthiométhyl)-3-céphem-4-carboxylique contient 1,0 à 1,6 mole de 1,2-propylène glycol par mole du zwitterion de la céphalosporine 4.- Procédé de préparation du mono-propylène glycolate de l'acide 7-[D-&alpha;-amino-&alpha;-(p-hydroxyphényl)acétamido]-3-(1,2,3-triazol-5-ylthiométhyl)- 3-céphem-4-carboxyl ique, lequel procédé consiste à:: (a) préparer une solution aqueuse de l'acide 7-[D-&alpha;-amino-&alpha;-(p-hydroxy- phényl)acétamido]-3-(1,2,3-triazol-5-ylthiométhyl)-3-céphem-4-carbo xyliquem d'un hydrate ou d'un de ses solvats, et d'un composé or ganique hydrosoluble contenant une fonction cétone; (b) ajuster le pH de la solution à une valeur de 4,5; (d) diluer la solution à l'aide d'une quantite d'eau suffisante pour provoquer la précipitation des impuretés insolubles; (d) séparer la solution aqueuse des impuretes insolubles; (e) ajouter à la solution aqueuse suffisamment de 1,2-propylène glycol pour effectuer la cristallisation du mono-propylène recherché; et (f) récupérer le produit cristallin. 5.- Procédé selon la revendication 4, caractérisé en ce que le composé organique contenant la fonction cetone est un cétoacide hydrosoluble. 6.- Procédé selon la revendication 4 ou 5, caractérisé en ce que le compose organique contenant la fonction cétone est l'acide pyruvique ou l'acide lêvulinique. 7.- Procédé selon l'une quelconque des revendications 4 6, caractérisé en ce que les Etapes réactionnelles (b) et (c) sont effectuées à une température de l'ordre de la température ambiante ou inférieure. 8.- Procédé selon l'une quelconque des revendications 4 à 7, caractérisé en ce que dans l'Etape (c) suffisamment d'eau est ajoutée pour que l'on ait une dilution 1/1. 9.- Procédé selon l'une quelconque des -revendications 4 à 8, caractérisé en ce que la solution aqueuse obtenue dans l'Etape (d) est traitée à l'aide de charbon actif, puis subit une filtration préalablement à la mise en route de l'Etape (e). 10.- Procedé selon l'une quelconque des revendications 4 à 9, caractérisé en ce que la matière de départ est le mono-methanolate de l'acide 7-[D-a-amino- &alpha;-(p-hydroxyphényl)acétamido]-3-(1,2,3-triazol-5-ylthiométhyl)-3-céphem-4carboxylique. 11.- A titre de produit industriel nouveau, le 1,2-propylène glycolate de l'acide 7-[D-&alpha;-amino-&alpha;-(p-hydroxyphényl)acétamido]-3-(1,2,3-triazol-5-ylthio- méthyl)-3-céphem-4-carboxylique. 12.- A titre de produit industriel nouveau selon la revendication 11, le 1,2-propylène glycolate de l'acide 7-[D-&alpha;-amino-&alpha;-(p-hydroxyphényl)acétamidol- 3-(1,2,3-triazol-5-ylthiomethyl-3-cephem-4carboxylique, contenant 1,0 à 1,6 mole de 1,2-propylène glycol par mole du zwitterion de la céphalosporine. 13.- A titre de produit industriel nouveau, le mono-propylène glycolate de l'acide 7-[D-&alpha;-amino-&alpha;-(p-hydroxyphényl)acétamido]-3-(1,2,3-triazol-5-ylthio- méthyl)-3-céphem-4-carboxylique. 14.- A titre de produit industriel nouveau, le 1-,2-propylène glycolate de l'acide 7-[D-&alpha;-amino-&alpha;-(p-hydroxyphènyl)acétamido]-3-(1,2,3-triazol-5-ylthio- méthyl)-3-céphem-4-carboxylique, obtenu à l'aide du procédé selon l'une quelconque des revendications 1 à 10. 15.- Composition pharmaceutique convenant à l'administration orale ou pa rentérale chez les mammifères, caractérisée en ce qu'elle contient à titre de constituant actif le 1,2-propylène glycolate de l'acide 7-LD-a-amino- &alpha;-(p-hydroxyphényl)acétamido]-3-(1,2,3-triazol-5-ylthiométhyl)-3-céphem- 4-carboxylique. 16.- Composition pharmaceutique selon la revendication 15, caractérisée en ce que le 1,2-propylêne glycolate de l'acide 7-[D-&alpha;-amino-&alpha;-(p-hydroxyphényl)- acétamido]-3-(1,2,3-triazol-5-ylthiométhyl)-3-céphem-4-carboxylique contient de 1,2 à 1,6 mole de 1,2-propylène glycol par mole de zwitterion de la cépha losporine. 17.- Composition selon la revendication 15, caractérisée en ce que le 1 ,2-propyl ène glycolate de l'acide 7-[D-&alpha;-amino-&alpha;-(p-hydroxyphényl)acétamido]- 3-(1,2,3-triazol-5-ylthiométhyl)-3-céphem-4-carboxylique est le mono-propylène glycolate. 18.- Composition pharmaceutique, caractérisée en ce qu'elle contient un ou plusieurs des composés selon l'une quelconque des revendications 11 à 14, eventuellement combinés à un support ou excipient ou à une solution. 19.- Composition pharmaceutique, et de préférence suspension aqueuse, convenant au traitement des infections bactériennes chez les mammifères, caractérisée en ce qu'elle contient de 30 mg/ml à environ 125 mg/ml de 1,2-propylène glycolate de l'acide 7-[D-&alpha;-amino-&alpha;-(p-hydroxyphényl)-acétamido]- 3-(1,2,3-triazol-5-ylthiométhyl)-3-céphem-4-carboxylique, et en ce que son pH est compris entre 2,8 et 5, ledit composé ayant été obtenu à l'aide du procedé selon l'une quelconque des revendications 1 à 10.