Brevet FR2276316A1 — publié le 19760123

La présente invention concerne un procédé de préparation d'une peptone, et plus particulièrement d'une peptone bactériologique, à partir de déchets de placentas humains. Depuis la fin du siècle dernier on utilise des peptones pour la-confection de milieux de culture en bactériologie ces peptones sont obtenues, en général, soit par hydrolyse acide, soit par digestion sous l'influence de ferments protéolytiques, de diverses matières organiques. Une peptone est un mélange de peptidesde poids molé culairesvariable d'acides aminés et de facteurs de croissance. Suivant le type de préparation, on obtient des peptones ayant des propriétés variées, ainsi, les peptones pepsiques (fermentées par la pepsine) sont riches en albumoses, les peptones pancréatiques (fermentées par la pancréatine) contiennent plus d'acides aminés et les hydrolysats ne comportent pratiquement que des acides aminés. Les propriétés des peptones varient également en fonction de la matière traitée et des conditions de traitement. Les matières premières utilisées dans la préparation des peptones sont très nombreuses, bien que leur nombre ait beaucoup diminué au cours des dernières années. Â l'heure actuelle, on ne fait plus appel qu'à certains tissus (muscles, os), organes animaux (foie, coeur, cervelle) et quelques matières végétales (soja, levures). Or, on a découvert que l'on pouvait obtenir, à partir d'un sous-produit de l'industrie des dérivés sanguins, des peptones dont le prix de revient est très faible et présentant, notamment, en tant que milieux de culture des microorganismes, des qualités égales et la plupart du temps supérieures aux produits commerciaux du même type existant actuellement sur le marché. En effet, dans la préparation d'immunoglobuline, l'industrie des dérivés sanguins produit en grande quantité un résidu organique qui résulte de l'extraction par le sérum physiologique et l'alcool du sang placentaire provenant de placentas humains. Ce résidu organique solide n'a actuellement aucune utilité et est détruit ou utilisé pour la fabrication d'engrais. Or, il s'agit là de déchets riches en protéines et en facteurs de croissance tout à fait intéressants dans la fabrication de peptones. C'est pourquoi, la présente invention propose un procédé pour la préparation de peptones bactériologiques dans lequel on utilise comme produit de départ les déchets de placentas humains, provenant de l'industrie des dérivés sanguins et obtenus par broyage des placentas en présence de cellulose, extraction du broyat par de l'eau physiologique et de l'alcool et compression du résidu obtenu après décantation, compression dont la phase solide constitue lesdits déchets ; on ajoute à ces déchets de l'eau et de la papaïne hydrosoluble ; on incube aux environs de pH 7 à une température comprise entre 70 et 800C pendant 2 à 4 heures ; on porte ensuite le mélange environ 1 heure à 1050C puis on filtre et dessèche la liqueur pour obtenir la peptone. Dans le mode de mise en oeuvre préféré du procédé selon la présente invention, on ajoute aux déchets l'eau en quantité en poids à peu près équivalente au poids de déchets traités et la papaine hydrosoluble est ajoutée à raison d'environ 1 400 unités Balls et Hoover par kilogramme de déchets traités. Il est à remarquer que ce procédé est assez rapide puisqu'il ne dure qu'environ 4 heures alors que les procédés de préparation de peptones sont en général beaucoup plus longs et durent au moins 12 heures et que l'utilisation de paparne dont le pouvoir protéolytique est à mi-chemin de la pepsine et de la pancréatine permet d'obtenir une peptone très complète. Un exemple de mise en oeuvre du procédé selon la présente invention va être décrit ci-après afin de mettre en évidence certaines autres caractéristiques du procédé mais sans que cela limite la présente invention. EXEMPLE Les déchets traités proviennent de placentas humains recueillis dans les maternités et congelés après la délivrance. Ces placentas sont décongelés, broyés en présence de cellulose, puis le sang est extrait par l'eau physiologique et l'alcool. La phase solide de décantation est alors compressée afin de fournir un produit contenant très peu d'eau qui constitue les déchets utilisés comme matière de départ dans le procédé selon l'invention. A 20 kg de ces déchets, on ajoute 25 1 d'eau et 4 g par kilogramme de papaine hydrosoluble titrant 350 unités Balls et Hoover par gramme. Après 3 heures d'incubation à 750C et à pH 7, le mélange est porté 1 heure à 1050C afin de coaguler les protéines et dtassurer la dénaturation de l'enzyme puis le liquide est filtré et desséché par lyophilisation. On obtient ainsi une poudre blanc crème entièrement soluble dans l'eau ne précipitant plus par la chaleur et répondant aux essais de la pharmacopée française et aux essais de l'hydrolysat de caséine de la pharmacopée des Etats-Unis d'Amérique. Le rendement de l'opération est environ 75 g de peptones lyophilisées par litre de filtrat. Cette préparation renferme en moyenne 4 % d'azote aminé et 12 % d'azote total et présente la composition suivante Essais généraux Azote total : 12,1 % Azote aminé : 3,3 % Azote aminé . 0,27 % Azote total Taux d'humidité : 4 Taux de cendres : 4,5 % Dosage des acides aminés Acides aminés libres Acides aminés totaux Tyrosine : 0,408 % 2,63 % Méthionine : 0,105 % 1,24 * Total : 9,63 % 77,9 ffi Tryptophane : 0,11 ffi Les essais généraux ont été pratiqués selon les méthodes proposées par la pharmacopée française (1968, 80 Ed. 787). Les acides aminés ont été dosés par réaction à la nihydrine après séparation chromatographique. Pour les acides aminés totaux, le dosage a été précédé d'une hydrolyse de la peptone par HCl 6N pendant 48 heures à 1050C. Enfin, le dosage du tryptophane a utilisé la méthode de Puech et Duru (Ann. Pharm. Franc., 1971, 29, 493). La peptone ainsi obtenue a été étudiée sur le plan microbiologique, c'est-à-dire étude du pouvoir nutritionnel vis à vis des principaux germes pathogènes, dosage des facteurs de croissance, étude des réactions microbiologiques utilisées dans l'identification des bactéries en comparaison avec certaines peptones commerciales choisies pour leur aptitude à la croissance microbienne. On l'a également utilisée dans la confection de milieux de culture destinés à la production de toxines eut d'enzymes bactériens. Il ressort de tous ces essais que cette peptone présente des qualités égales et la plupart du temps supérieures aux produits commerciaux du même type existant actuellement sur le marché. Bien que la peptone selon la présente invention soit destinée plus particulièrement à l'élaboration de milieux de culture bactériologiques, elle peut être utilisée en thérapeutique pour l'alimentation parentérale et en dermatologie pour la fabrication de produits cosmétiques. REVENDICATIONS 1) Procédé pour la préparation d'une peptone bactériologique à partir des déchets de placentas humains obtenus par broyage des placentas en présence de cellulose, extraction du broyat par de l'eau physiologique et de l'alcool et compression du résidu de décantation dont la phase solide constitue lesdits déchets, dans lequel on ajoute à ces déchets de l'eau et de la papaïne hydrosoluble, on incube à environ pH 7 et à 70-800C pendant 2 à 4 heures, on porte le mélange environ 1 heure à 1050C puis on filtre et desséche la liqueur pour obtenir la peptone. 2) Procédé selon la revendication 1, caractérisé en ce que l'eau est ajoutée aux déchets en quantité en poids environ égale au poids de déchets traités. 3) Procédé selon l'une des revendications 1 et 2, caractérisé en ce que la papaine hydrosoluble est ajoutée à raison d'environ 1 400 unités Balls et Hoover par kilogramme de déchets traités.