Brevet FR2276380A1 — publié le 19760123

La présent. invention concerne un procédé de préparation de Tétracycline par fermentation. Plus particulièrement elle con- cerne un procédé qui consiste a cultiver un microorganisme du type de Streptomyces auréofaciens dans des conditions spécifiques de fermentation en présence de matière première spécifique t moût d'igname Habituellement la tétracycline est préparée soit en utilisant une matière première spécifique, extrait de malt, farine de soja. Soit On faisant appel à U milieu de culture contenant de. inhibiteurs de chloruration, soit enfin en utilisant des souches mutantes de streptomyces auréofaciens indifférentes aux ions chlo rures dans un milieu nutritif donné susceptible de contenir des ions chlorures. La présente invention concerne la mise au point d'un procédé de fermentation utilisant une matière première spécifique, abondante, bon marché et économiquement rentable. L'utilisation du moût d'igname est facile et sa mise en oeuvre ne nécessite pas d'installations spéciales. La demanderesse a mie au pont; un procédé de production de tétracycline, par fermentation de moût d'igname. La présente invention fourmit désormais une biosynthèse de tétracycline par utilisation dune matière première spécifique et v l'échelle industrielle. En utilisant comme agents d'inoculation diverses souches originales ou mutantes de streptomyces auréofaciens qui sont capables d'accumuler la tétracycline* le procédé de la présente invention permet de produire par fermentation du moût d1 igname une quantité importante de tétracycline accumulée dans le bouillon. Dans la présente invention la source principale de car- bone est le moût d'igname. D'autres sources de carbone peuvent être glucose, saccharose, dextrine, amidon, mélasse....etc. La source de carbone n'est pas limitée à une seule sube- tance mais elle peut comprendre un mélange de deux ou de plus de deux substances. Toutefois la source principale et parfois unique de carbone est le moût dtigname. Comme source d'azote on peut utiliser divers types de sels ou composés minéraux ou organiques tels par exemple 1 urée, sels d'ammonium, chlorures, sulfates, nitrate, acétates, phosphates etc... ou des substances naturelles contenant l'asote telles que s liqueur de macération de mate, extrait de viande, une peptone, de la farine de poisson, les matières solubles de poisson, un hydroly eat de caséine, un amino-acide... etc. Le milieu de culture comportera des sels minéraux et au tres produits nutritifs usuels. Da plus dans le cas où l'on utilise des souches ayant des exigences particulières de nutrition, des substances qui peuvent satisfaire à ces exigences de nutrition doivant être ajoutées au milieu de culture. Ces substances comprennent des amino-acides, des vitamines... etc. La dose de l'additif efficaoe à ajouter ne doit pas nuire à la quantité du produit recherché ni détruire le microorganieme. il doit être tenu compte du microorganisme, de la compoeition du milieu, des conditions d'incubation. Après la culture la tétracycline est récupérée du milieu de fermentation par les procédés physico-chimiques classiques (préoipitation, adsorption, extraction par solvants organiques etc...). La méthode selon l'invention est en outre illustrée par les exemples qui suivent gui ne doivent en aucun cas limiter la portée de l'invention. Préparation du moût Triage des tubercules, puis lavage pour les débarasser de terre et autres débris indésirables. Epluchez ensuite les tubercules puis les soumettre à un blanchiment, c'est-à-dire à une cuisson durant 8 â 10 minutes (dans environ 10 8 20 litres d'eau pour 100 kg de tubercules). Broyer ensuite les tubercules cuites en présence de 10 à 15 % d'eau de manière à obtenir une purée. Soumettre à une hydrolyse acide sous pression 3 à 4 kg. Le traitement par l'acide sulfurique donne un pE final de 1,5. Ajouter ensuite un lait de chaux (neutralisation). Le sulfate de calcium précipité. Clarifier par filtration (filtre presse). Centrifugation ou décantation puis soutirage du Jus clair. Le jus soutiré (environ 15-20 % du poids des tubercules) sera soumis à la fermentation et constitue la source de carbone. Le schéma du protocole opératoire est le suivant (exemple d'illustration) : PREPARATION DU MOUT D'IGNAME dnr tseexsuees esipsea a-at 8 8 & 10 M 10 offvireia 10 & BR 5 jiturr, B'&num;r. poir 100 4 de frrkrilr* rqedes reles "aites en présence de 10 % irea d'esu (en poids > de lanière wot btnLr q ptP.Be. IJc & 'i- h'froIrAs ao14a aoi- ruainn 3-4 k, p frr2fua+nii.rr ltiiriq > e de lanière & aveir n irS 1,5 dans les oo dlSlos préois'es). Clarifier par ( (filtre presse), nentrifugation ou pain seztirqet a.rtatis. (soit t-roa i o % du poids BOttiryr r~'...Pts+irlC (rroio artroP 13-29 du poias Bs tuberuSse] ,ptionipar exemple par traitesent par q alcali t lait de chsix ssw qu pH 6}8, Piliration Liqueur neutre ou filtrat ;PrBoipitB de C4 Utiliser le filtrat come source de sucre. Eventuellement concentrer par évaporation sous pression B une tmpEratur ne d* passant pae 0* C. 'I Stérilisation o 'est-è-dire pasteurisation (Q 85 C pendant 40 minutes) Permentetion au mo** at-t ostesv. Le procédé fait appel à diverses souches de Streptomyces Auréofaciens capables d'assimiler le moût considéré et d'accumuler dans le bouillon la Tétracycline. REVENDICATIONS 1 - Procédé de préparation de la tétracycline par fermenta- tation de moflt par utilisation de microorganismes du type Streptomyces auréofaciens, caractérisé en ce que l'on prépare un moût à partir de tubercules d'igname épluchés, blanchis, broyés et soumis à une hydrolyse acide sous pression 3 à 4 kg le jus ainsi obtenu étant neutralisé après tiltration, centrifugation ou décantation et soutirage. 2 - Procédé selon la revendication i, caractérisé par le fait qu'il est réalisé en continu ou discontinu. 3 - Procédé selon la revendication 2 caractérisé par le tait que le mott est utilisé comme source principale de carbone assimilable, l'utilisation comme inoculum de termentation d'une culture de streptomyces auréotaciens en cours de croissance active. 4 - La tétracycline obtenue par un procédé selon ies revendications 1 à 3. 5 - Matière première pour la biosynthese de la tétracycline obtenue selon les revendications 1 à 2.