Brevet FR2264558A1 — publié le 19751017

La présente invention a pour objet, à titre de produits indus triels nouveaux, les nouveaux sels de polymyxineméthyltétracycli nes de formule caractéristique (A): Formule (ê) (7 -ao-a:2 & )-, nk- ?3-, dans laquelle: m et n représentent des nombres entiers positifs inférieurs à 6, A et B représentent des anions minéraux ou organiques, T représente un reste d'antibiotique tétracyclique de la famille des tétracyclines de formule T-CO-MH2 tel que la tétracycline, l'oxytétracycline, la déméthylchlortétracycline, le méthacycline, la rolitétracycline, la doxycycline, la minocycline, P représente un reste d'antibiotique polypeptidique de la famille des polymyxines tel que les polymyxines A,B ou E ou colistine. Les trichlorures de tritétracyclineméthylpolymyxines ont déjà été décrits, mais ils ne sont pas utilisables industriellement en raison de leur instabilité tant à l'état sec qu'en solution. La stabilité des sels de l'invention est d'autant plus remar quable que celle-ci subsiste à l'état sec et même en solution neutre ou légèrement alcaline, par exemple à pH 8,5. La présente invention a également pour objet, à titre de produit industriel nouveau répondant à la formule (A) ci-dessus, le trichlorure-sulfate de trioxytétracyclineméthylcolistine, appelé dans ce qui suit Négafongine. La présente invention a aussi pour objet les méthodes de prépa ration de nouveaux sels de l'invention caractérisées par ce que l'on commence par fabriquer le méthylol d'un s.el d'un attibîo- tique de la famille des tétracyclines et que l'on fait réagir une polymyxine sous forme de sel dans un milieu convenable t Suivant 11 invention, on choisit un milieu réactionnel, tant pour s addition initiale que pour la condensation finale, non réactif avec le formol, et bien que cette température ne soit pas carac téristique de l'invention, on opère généralement entre l'ambiante et 60 C. Au delà ce cette température, les substrats antibiotiques en effet commensentà se dégrader. Ta presente- invention a en outre pour objet les médicaments utilisables en médecine humaine ou vétérinaire caractérisés par ce: qu'ils contiennent à titre de principe actif principal ou secondaire, un ou plusieurs sels de l'invention de formule (A) ci-dessus Tes produite de 11 invention sont en effet de puissants antibiotiques caractérises par leur très large spectre antibactérien. es composés sont en effet, à des doses variables, bactériosta- tiques, puis bactéricides sur les bactéries Gramt et Gram-, ainsi que sur les gros virus, les protozoaires et certains et certains flagelles. L'intérêt des sels de formule (A) de l'invention tient tout spésialement au fait que la toxicité des polymyxines est considérablement diminuée dans ce type de composés et que l'activité antibactérienne des nouveaux composés de 11 invention est supérieure in vitro et in vivo a7) simple mélange des antibiotiques ayant servi de substrats pour la synthèse des nouveaux sels de l'invention.In vivo en particulier il a été surprenant de constater que les nouveaux sels de 11 invention passaient intégralement la barière gastro-intestinale, passait en ainsi dans le milieu intérieur et permettaient ainsi de traiter des affections à Gram- en dehors du tube digestif telles sue des affections urinaires, alors qu'il est bien- connu que les tétracyclines qui passent,bien que mal, la barrière gastro-intestinale sont inactives et que les polymyxines ne passent pas laci'Jte barrière et ne peuvent donc agir en dehors du tube digestif si elles sont administrées par voie orale. La présente invention a plus particulièrement rour objet les médicaments pour la thérapeutique humaine ou vétérinaire ea.rac- trissés par ce que leur activité est antibiotique et qu'ils contiennent au moins un sel de 11 invention de formule (A) ci-dessus à titre de principe actif principal ou secondaire. Ta présente invention a encore pour objet les compositions pharmaceutiques contenant au moins un sel de l'invention de formule (A) ci-dessus. Ta présente invention a de plus pour objet les formes pharmaceutiques telles que cachets, poudres, gélulês,comprimés, dragées, sirop pour l'administration par vote orale, les formes pour l'administration en ophtalmologie, ot#orhinolaryngologie telles que gouttes, pommades, cônes, les formes d'administration par voit rectale telles que suppositoires, lavements, les formes imjectables prêtes à l'emploi ou à préparer au moment de l'emploi. Ta présente invention sera mieux comprise à la lecture de l' exemple suivant donné à titre non limitatif et décrivant la préparation et les propriétés db 'un des sels de l'invention défini ci-dessus sous le nom de Négafongine. PREPARATION DE LA NEGAFONGINE Mettre en suspension 56 g d'oxytétracycline chlorhydrate dans 6 litres d'alcool pur anhydre. Porter à 50 C et introduire en agitant 20 ml de formol préalablement concentré d'un tiers et filtré pour éliminer l'insoluble. La disssolution est complète en 15 à 20 minutes. Evaporer alors à sec sous pression réduite. Les cristaux obtenus sont repris par 50 ml de méthanol absolu après avoir été étendus à l'air pendant quelques heures pour éliminer l'odeur de formol. A eette solution ajouter directement. 50g de sulfate de colistine de façon a éviter la formation de grumeaux. Chauffer à 45-50 c en agitant. La dissolution est totale en 10 à 15 minutes. Quelques flocons insolubles sont filtrés et le filtrat est abandonné une nuit à -10 C. La Négafongine obtenue est essorée à froid. On retouve encore 15 à 20% de produit dans les eaux-mères. Ta négafongine est soluble dan l'eau de façon stable, mais ne possède pas de point de fusion bien déterminé en raison de sa décomposition à chaud. Analyses spectroscopiques, faites essentiellement en comparaison avec ceux des substrats ayant servi au cours de la synthèse, à savoir le chlorhydrate d'oxytétracycline et le sul@ate de colistine. Analyse infra-rouge, par dispersion dans le nujol. Différences sensibles entre la tTégafongine et le chlorhydrate d'oxytétracycline dans la région 3500-3000 cm-1. En particulier, la bande tétracyclinique à 3400 cm-1 n'apparaît plus dans la Négafongine, ce aui prouve que le groupe -NH2 de la fonction amlde de l'oxytétracycline a réagit, ce qui est encore confirmé bien que cette région soit chargée par des différences observées dans la région 1700-1600 cm-1. Analyse par résonance magnétique nucléaire: par dissolution dans le diméthylsulfoxyde deutérié. Le spectre de la Négafongine possède un massif dans les champs fort qui est bisent dans chacun des substrats de départ. Il correspond à des hydrogènes de radicaux alcovles, ce qui prouve la réalité de la nouvelle structure de la Négafongine. Dans la région des protons aromatiques, la Négafongine conserve l'hydroxyle phénolique de l'oxytétracycline inchangé, ce qui implique que l'eddition du phéne formol ne s'est pas faite dans cette région. TOXICITE DE LA NEGAFONGINE DL 50 per os Souris mâîes: 1900 mg/kg DL 50 intra-veinause Souris mâles: 22,5 mg/kg DL 50 intra-musculaire Souris mâ@@es: 125 mg/kg Ces études toxicologiques ont été complétées par des travaux sur différentes formes galéniques: "dry-fill" pour injection intra-musculaire, "dry-fill" pour injection intra-veineuse, solution injeotable prête à l'emploi, gélules pour usage @ocal, allant de la toxicité aigue et la toxicité chronique chez la souris, le rat, le lapin et le chien.A des doses 2,5 fois supérieures à celles prévues par l'homme, la tolérance a toujours été parfaite, mais à des doses encore 10 fois supérieures, donc 25 fois plus élevées que celles prévues chez l'homme, on observe une forte mortalité (40% chez le rat après 63 jours de traitement), une diminution relativement importanbe du nombre des hématies et des atteintes gastriques assez séveres. ACTIVITE ANTIMICROBIENNE IN VITRO DE LA NEGAFONGINE Sur des bactéries Bram + et Gram- d'origine hospitalière, des essais ont été effectués suivant a technioue du puit et du disaue (milieu gélifié). On retrouve les activités de la colistine et de l'oxytétracycline avec une activité synergisante qui se manifeste en particulier sur le P.S. aeruginosa(Gram-) Resultats d'essais cliniques: Les premiers essais cliniques concernant le Négafongine ont été effectués soit par voie orale ( gélules à 250 mg), soit par injection intramusculaire prote à l'emploi ou "dry-fill", soit par injection intra-veineuse. Ces résultats sont tout-à-fait satisfaisants, tout particulièrement en ce qui concerne la vote orale par laquelle, on le sait, la colistine le peut passer la barrière gastro-intestinale. La négafongine, en effet, s'est révélée active par voie orale sur des affections à Gram- de l'arbre respiratoire, de l'arbre urinairs et gynécologique et bien entendu de l'arbre digestif. REVENDICATIONS l).A titre de produits industriels nouveaux, nouveaux sels de polymyxineméthyltétracyclines caractérisés en ce que la formole est: (TH±CO-NH-CH2-NH)n-P, nA-, mHB, dans laquelle M et n représentent des nombres entiers positifs inférieurs à 6, A- et B représentent des anions minéraux ou organiques, T représente un reste d'antibiotique de la famille des tétracyclines possédant une fonction amide primaire et de formule T-CONH2, P représente une reste d'antibiotique polypeptidique de la famille des poly- myxines et en tarticulier de la colistine et de formule 2). A titre de produit industriel nouveau le trichlorure-sulfate de tri-(oxytétracyclineméthyl)colistine, ou Négafongine. 3). Procédés de préparation des produits nouveaux suivant les @e@endications 1 et 2 caractérisés par ce que lfon commence psr faire réagir le formol sur un antibiotique de la famille des tétracyclines sous forme de son sel, puis que l'on fait réagir le produit obtenu, avec ou sans isolement, sur un sel d'un antibiotique de la famille des polymyxines. 4). Les médicaments, utilisables pour la médecine humaine ou vétérinaires caractérisés en ce qu'ils contiennent à titre de principe actif principal ou secondaire an moins l'un des produits suivant les revendications 1 et/ou 2 éventuellement en association avec d'autres principes actifs et excipients susceptibles d'éléver éventuellement le pH d'une solution jusqu'à 8,5. 5). Tes compositions pharmaceutiques et les formes pharmaceu- tiques pour l'administration par voie orale, parentale, rectale, ophtalmologique, otorhinolaryngologique telles que cachets, pilules gélules, comprimés, dragées, poudres, pommades, gouttes, sirops, cones, suppositoires, lavements, solutés à boire ou à injecter prestes à l'emploi ou à préparer au moment de l'emploi, caractérisées en ce qu'elles contiennent à titre de principe actif principal ou secondaire au moins l'un des produits suivant les revendications 7 et/ou 2 en association éventuelle avec d'autres principes actifs ou excipients susceptibles d'élever jusqu'à 8,5 le pR d1une solution éventuelle.