Brevet FR2265854A1 — publié le 19751024

La présente invention a pour objet un procédé perfectionné pour l'extraction des acides nucléiques contenus dans les levures destinées à l'alimentation des etres humains, Le perfectionnement apporté par 11 invention consiste à rendre homogène l'hydrolyse des acides nucléiques d'une masse de levures. Cette hydrolyse est necessaire-afin d'éliminer les acides nucléiques eux-mEmes,-car la présence de ceux-ci dans une levure à usage alimentaire donne lieu à la formation d'acide urique, composé nuisible pour llorganisme humain et peu soluble en raison du métabolisme typique.Il faut cependant faire en sorte que la dégradation hydrolytique ait lieu uniformément pour éviter l'extraction des acides nucléiques, localisée en un point plutôt qu'en un autre, ce qui entraînerait un appauvrissement conséquent-et plus poussé du contenu protéique local. Les expériences effectuées et les essais réalisés pour la mise au point de l'invention sur des parties de levure de bière ont conduit à la définition exacte du rapport cellules/solution chlorhydrique afin d'obtenir une masse bien fluidifiée. Pour une masse de cellules de levure de bière humide et pressée, on a déterminé que ce rapport est de 7 tordre de grandeur de 1,10) kg de cellules (environ 1016 cellules)/1.103 kg de solution chlorhydrique. Dans ces conditions, on a constaté que la pâte cellulaire prend une consistance appropriée à un pétrissage mécanique homogène. Ainsi,-le schéma du procédé de l'invention est le suivant a) mise en suspension des cellules dans du HCI 0,5 N ou 1 N; b) durée d'incubation 10 à 20 minutes; c) température d'incubation 100 C; d) récupération du produit surnageant et du précipité par centrifugation; dilution de la suspension avec du HC1 0,12 N à la température ambiante selon un rapport en volume de la suspension de cellules/acide chlorhydrique égal à 1/2 du précipité récupéré; e) analyse des produits extraits. Les données qui suivent se rapportent à des essais effectués en respectant les rapports minimes optimaux mentionnés ci-dessus (exemple 2) en comparaison avec les résultats obtenus avec des rapports sous-optimaux (exemple l). Le schéma indiqué a été respecté dans l'un ou l'autre cas. EXEMPLE 1 Après préparation de l'échantillon, on a réparti une quantité de 20g de pâte de cellules de levure de bière humide et pressée dans des coupelles de 100 ml. Cette quantité a été acidifiée avec 15 ml de HCl ayant une normalité de 0,69 N et 0,385 N.Ensuite, on a ajouté un volume égal d'eau distillée (0,33 N et 0,16 N final respectivement). La suspension a été agitée et mise en incubation dans un bain thermostatique à lOO0C; elle a ensuite été immergée dans un bain d'eau courante froide. On a ajouté 40 ml de HCl 0,12 N à la température ambiante et,après centrifugation, on a mis de nouveau en suspension la levure dans 40 autres ml de HCl. 0,12 N à la température ambiante. On a analysé finalement le précipité en dosant les acides nucléiques selon le procédé à l'orcinol et l'azote total suivant la méthode de Kjeldahl. Le tableau 1 donne les résultats obtenus au moyen des traitements effectués avec des rapports en poids cellules/H20 - HCl égaux à 1/0,75. TABLEAU 1 Hydrolyse acide avec du HCl à 100 C Q : 0,15 N 0,3 N : Acide Azote : Acide Azote Acide Azote : nucléi- nucléique :nucléique que : 10mn 72,02% 96,7% :53,88% 97,?9% . 37,82% 94,58% : 20 mn 39,63% 93,88% 50% 92,52% : 35,49% 89,29% : 30mn 30,02% 97,52% 40,67% 96% : 16,o6% 87,88% Les valeurs sont exprimées en % par rapport à un témoin non traite et non lavé. Aucun traitement n'est efficace, en ce sens que l'hydrolyse des acides nucléiques ne descend pas au-dessous de la valeur minimale de 16%, EXEMPLE 2 30 g de cellules de levure ont été mises en suspension dans de l'eau distillée et ont été acidifiées avec 20 ml de HCl à concentration diverse chaque fois.La suspension a été mise en incuba tion dans un bain thermostatique à 1000C et a été ensuite immergée dans un bain d'eau froide. On a ajouté une quantité de HCl égale à 40 ml et, après centrifugation, on a mis la levure en suspension dans une quantité égale d'acide réactif à la température ambiante. Finalement, on a soumis le précipité à une analyse dosimétrique des acides nucléiques sZon le procédé à l'orcinol et de l'azote total selon la méthode de Kjeldahl. Le tableau 2 rassemble les résultats obtenus en traitant les suspensions formées avec le rapport en poids 1 (cellules)/l H20 -HC1. Comme on peut l'observer, aucun traitement mentionné au ta bJeau 2 ne se révèle efficace au sens de la réduction de la concentration endocellulaire des acides nucléiques aux niveaux acceptables et détectablesà.l'aide de la méthode de dosage incise en oeuvre. Les traitements correspondant à des concentrations en KC1 0,5 N pendant une durée de 10 minutes et de 1 N pendant une durée de 20 minutes se révèlent particulièrement efficaces au sens de l'hydrolyse maximale des acides nucléiques et de l'hydrolyse minimale des protéines. Gracie à l'analyse ainsi réalisée, on peut donc conclure que les résultats obtenus permettent de définir comme optimale la condition d'hydrolyse atteinte lorsque les cellules sont mises en suspension dans la solution de HCl-selon un rapport en poids unitaire. Le procédé conforme à 1 t invention se prête à une réalisation en continu à l'échelle industrielle selon les phases suivantes 1) introduction de la patte de cellules de levure humide, non pressée, lavée aux hydrocarbures, dans un récipient ; 2) injection de vapeur d'eau à la base du récipient; 3) extraction, à partir de la base du récipient, de la pâ- te fluidifiée dans une chambre d'acidification, avec agitation au moyen de dispositifs à hélice; 4) injection de la solution de HCI à une concentration préférée dans la chambre d'acidification et pétrissage de la masse au moyen-de deux séries d'hélices à axe vertical par rapport à 1'hélice mentionnée ci-dessus. 5) extrusion à partir de la cuve d'acidification dans une cuve d t incubation à 100 C; 6) extrusion à partir de la cuve d'incubation dans une cu-ve de lavage; 7) récupération de la pSte cellulaire hydrolysée-et pesage; 8) récupération de la solution de lavage et concentration de l'hydrolysat. Tous les dispositifs utilisés pour les étapes indiquees aux points 3), 4) et 5) doivent être maintenus à 100 C en utilisant éventuellement des spirales enroulées, dirigeant les vapeurs provenant du point 2).1'opération 5) est facultative et dépend de la duree.d'exécution des opérations 4) et 5). TABLEAU 2 Hydrolyse acide avec du HCl à 100 C 0 0,25 N 0,5 N 1 N Acide Acide Azote Acide Azote Acide Azote nucléique Azote nucleique nucleique nucleique 10mn 53,7% 98,84% 30% 80,94% 0 86,84% 2% 96,21% 20mn 58,4% 98,94% 5% 83,05% 2,2% 97,36% 0 97,78% Les valeurs sont exprimées en % par rapport à un témoin non traité et non lavé. Les échantillons ont été obtenus par la mise en suspension de 30 g de cellules de levure de bière humide et pressée dans 20 ml de HCl 2 N, 1 N, 0,5 N (1 N, 0,5 N et 0,25 N, respectivement). REVENDICATIONS 1. Procédé perfectionné pour l'extraction des acides nucléiques de levures destinées à l'alimentation des etres humains, au moyen å'une hydrolyse acide, caractérisé en ce que le rapport cellules/solution chlorhydrique est d'environ 1/1. 2. Procédé selon la revendication 1, caractérisé en ce que la concentration en acide chlorhydrique est comprise entre 0,15 N et 1 N. ).--Procéde selon l'une des revendications 1 ou 2, caractér-isé en ce qu t on met en oeuvre une température thermostatique de 100 C. 4. Procédé selon l'une quelconque des revendications 1 à 3, caractérisé en ce que le traitement acide est réalisé pendant une durée comprise entre 10 et 30 minutes. 5. Procédé selon l'une quelconque des revendications 1 à 4, caractérisé en ce qu'il comprend les étapes suivantes 1) introduction de la pâte de cellules de levure humide, non pressée, lavée aux hydrocarbures, dans un récipient; 2) injection de vapeur d'eau à la base du récipient; 3) extrusion, à partir de la base du récipient, de la pâte fluidifiée dans une chambre d'acidification avec agitation au moyen de dispositifs à hélice; 4) injection de la solution de HC1 à une concentration préférée dans la chambre d'acidification et pétrissage de la masse avec deux séries d'hélices à axe vertical par rapport à l'hélice précitée; 5) extrusion à partir de la cuve d'acidification dans la cuve d'incubation à 100 C; 6) extrusion à partir de la cuve d'incubation dans la cuve de lavage; 7)- récupération de la pâte cellulaire hydrolysée et pesage; et 8) récupération de la solution de lavage et concentration de lthydrolysat.