Brevet FR2221517A1 — publié le 19741011

La pressente invention concerne un procédé pour l'extraction et l'isolement des Rifamycines des lessives de fermentation. Les méthodes connues jusqu'à ce jour pour l'extraction et l'isolement des Rifamycines des lessives de fermentation visent, après le filtrage de la lessive, un procédé d'extraction assez complexe, long et coûteux pour obtenir un produit présentant un degré de pureté suffisant. En effet, suivant l'art connu, après le filtrage la lessive est acidifiée et extraite avec du chloroforme pour éliminer, outre certaines impuretés, l'acide diéthyl-barbiturique ; la phase organique est extraite à nouveau par une solution tamponnée ayant un pH d'environ 7,5 et après l'acidification, elle est extraite à nouveau avec de l'acétate d'éthyle. Un procédé du type précité est décrit dans le brevet américain US N 2 988 490 selon lequel par concentration de l'acé- tate d'éthyle on obtient la Rifamycine B. Suivant un procédé industriel décrit par contre dans "Progress in Industrial MicrobiologylVolume VI, 1967, aux pages 2360, on exploite également le procédé décrit ci-dessus où l'on extrait encore au moyen de tampon la phase aqueuse tamponnée qui est traitée avec un produit oxydant par lequel la Rifamycine B est transformée en Rifamycine o laquelle précipite lentement. Le but principal de la présente invention est d'obtenir un procédé par lequel il soit possible d'extraire et d'isoler la Rifamycine de ses lessives de fermentation dans un seul passage, d'une manière rapide et d'une façon économique remarqfiable et avec des rendements très élevés (environ 90%). Un autre but de l'invention est la réalisation d'un procédé au moyen duquel il soit possible d'isoler la Rifamycine de la lessive de fermentation comme Rifamycine B sans l'emploi de solvants. Les buts précités et d'autres encore sont obtenus par un procédé suivant lequel une lessive de fermentation de la Rifamycine B est filtrée et le liquide limpide est porté à environ 150C à 250C à un pH compris entre 4 et 7, 5 environ et traité avec un agent oxydant choisi entre le nitrite de sodium, le per sulfatde sodium et l'eau oxygénée, pour transformer la Rifamycine B en Rifamicyne o insoluble dans la lessive filtrée, de laquelle elle précipite. Par le dit procédé il y a précipitation quantitative d'une Rifamycine O brute présentant un titre sur sec non inférieur à 70% et dans lequel sont absents soit l'acide diéthyl-barbiturique soit la Rifamycine Y. I1 convient d 'attirer l'attention sur le fait que parole procédé suivant la présente invention, en maintenant la température et le pH dans les intervalles précités, au moment de l'oxydation et uniquement par l'effet de la dite oxydation, on précipite seulement les produits pouvant être oxygénés et dont les produits d'oxydation sont insolubles ; ceci permet en pratique d'isoler la Rifamycine O des lessives de fermentation, dans lesquelles elle se trouve très diluée, et d'une manière presque complète. En effet, les solutions tout en étant très étendues (diluées), dans les eaux-mères de précipitation il y a seulement une perte de 2% environ de Rifamycine o. Pour rendre plus claire la compréhension des caractéristiques et de l'exploitation du procédé, on en décrira ci-après quelques exemples de réalisation donnés simplement à titre d' exemple non limitatifs. EXEMPLE 1 10 litres de lessive de fermentation ayant un titre en Rifamycine B de 2.800 ml sont portés au pH 7 par de lthydrate de sodium à 10 % . On ajoute 400 grs de farine de diatomite et après 30 minutes d'agitation la lessive est filtrée, le mycélium est lavé avec 2 litres de solution aqueuse à un pH de 7. Au produit filtré limpide recueilli ayant un volume de 10,8Q litres etUn titre de 2450 /ml on ajoute 26,5 grs de nitrite de sodium dissous dans l'eau. Ensuite on ajoute très lentement une solution à 10 % d'acide sulfurique jusqu'à porter au pH de 4,6. On laisse la lessive pendant 4 heures et à 250C sous agitation lente, en maintenant le pH à 4,6, par l'addition continue d'acide sulfurique dilué ; ensuite on filtre le solide précipité, en lavant enfin avec de l'eau désionisée. Le titre des eaux-mères est de 19 t/ml. Le produit après le sèchage pèse 30,5 gr et présente une humidité de 2,8 % et un titre en Rifamycine O de 84 %. Par cristallisation il est possible d'obtenir, avec des rendements quantitatifs un produit ayant un titre supérieur à 95 %. EXEMPLE 2 A 10 litres de lessive filtrée limpide obtenue suivant l'exemple 1, ayant un titre de Rifamycine B de 2450 & ml, on ajoute sous agitation lente et pendant 3 heures une solution de Persulfate de sodium dissoute dans 500 ml d'eau, en corrigeant le pH à 5,6. Une fois terminée l'addition de la solution précitée on maintient l'agitation pendant 2 heures à 150C et ensuite le produit précipité est filtré et lavé par de l'eau. Le titre des eaux-mères est de 54 Le produit , après le sèchage, pèse 31,4 grs, et présente une humidité de 3,8 % et un titre en Rifamycine O des75 %. Substantiellement les mêmes résultats sont obtenus si le pH est compris entre 4 et 7,5 environ. EXEMPLE '3 A 10 litres de lessive filtrée limpide, obtenue suivant l'exemple 1, ayant le titre de 2450 / ml , on ajoute, sous agitation lente, 60 ml d'eau oxygénée à 130.volumes dans le temps de 3 heures, en maintenant le pH environ à 7. A la fin, on agite encore pendant 2 heures à 200C et ensuite on filtre et on lave avec de l'eau. Le titre des eaux-mères est de 37 /mol. Le produit , après le sèchage , pèse 31,2 grs, et il a une humidité de 2,4 % et un titre de 76,1 % en Rifamycine 0. Pratiquement les mêmes résultats sont obtenus en maintenant le pH de réaction entre 4 et 7,5. -REVENDICATIONS 1- Procédé pour.i'extraction et l'isolement des Rifamycines des lessives de fermentation de la Rifamycine B, caractérisé en ce qu'une des dites lessives est filtrée et le liquide limpide est porté à une température de 150C à 250C à un pH compris entre 4 et 7,5 et traité par un agent oxydant déterminé, pour transformer la Rifacymine B en Rifacymine O insoluble dans la lessive filtrée de laquelle elle précipite. 2- Procédé suivant la revendication 1, caractérisé en ce que le dit pH est de 4,6 et que le dit agent oxydant est du nitrite de sodium. 3- Procédé suivant la revendication 1, caractérisé en ce que le dit pH est compris entre 4 et 7,5 et que le dit agent d'oxydation est du persulfate de sodium. 4- Procédé suivant la revendication 1, caractérisé en ce que le pH de la lessive filtrée est compris entre 4 et 7,5et que l'agent oxydant est de l'eau oxygénée.