Brevet FR2230345A1 — publié le 19741220

La présente invention concerne un procédé d'aiinistration de substances immunologiques injectables, c'est-à-dire de vaccins, lesdites substances contenant un adjuvant spéclique afin d'accroître le potentiel immunogénique de celles-ci. les vaccins sont des préparations de substance antigénique destinées à être administrées pour induire chez le receveur une immunité vis-à-vis de l'infection ou de l'intoxication par un agent infectant donné. les vaccins peuvent être préparés à partir de virus, de rickettsies, de bactéries, de protozoaires et de métazoaires.Les vaccins inactivés peuvent être des suspensions stériles de l'organisme tué ou de toxoldes ou d'une autre substance antigénique dérivant d'organismes, et ils sont généralement administrés par injection0 Les vaccins peuvent etre soit de simples vaccins préparés à partir d'une espèce ou de divers organismeF,soit des vaccins composites contenant deux ou plusieurs vaccins simples, Il sont préparés de manière à ne pas détruire la substance antigénique, quoique les méthodes de préparation varient en finition du vaccin. les produits finals sont distribués, dans des conditions aseptiques, dans des récipients stériles, qui sont ensuite fermés de manière étanche pour empêcher l'introduction de microorganismes contaminants.Un agent bactériostatique peut être ajouté aux vaccins stériles et inactivés, en particulier si de tels vaccins provennent des récipients fermés de façon étanche de façon à permettre le soutirage de doses successives à différents moments. les adjuvants de vaccins ont été utilisés pour favoriser ou augmenter l'aptitude de la substance antigénique d'un vaccin à induire ou provoquer la réponse immunologique désirée et, dans le cas de nombreuses substances faiblement antigéniques, le succès de la vaccination dépend de l'utilisation d'un adjuvant approprié dans le vaccin.L'adjuvant peut être incorporé, d'une manière appropriée, dans le vaccin, avant que ce dernier soit réparti dans des récipients, quoiqu'il puisse être placé dans un récipient séparé en vue de son mélange avec la substance antigénique lorsque l'on a besoin d'utiliser le vaccin pour immuniser un receveur, ou bien, comme il sera montré ci-après, cet adjuvant peut être administré séparément, par exemple en un endroit différent ou par une voie différente de c eux relatifs à la substance antigénique, soit en même temps, soit dans un intervalle de durée appropriée avant ou après l'administration du vaccin dépourvu d'adjuvant. Des travaux considérables ont été rapportés dans la liftérature en ce qui concerne les adjuvants de vaccins. A titre exemple, on peut citer l'addition de tapioca ou de chlorure de calcium pour intensifier 1' immunisation par antitoxines ; l'utilisation de phosphate de calcium, particulièrement pour augmenter la production des anticorps de la grippe ; l'utilisation de staphylotoxinepour améliorer la réponse des anticorps à certains antigènes ; l'utilisation d'alun dans la toxoide de la diphtérie ou dans les vaccins bactériens, tels que ceux contenant H. -pertussis ainsi que d'autres. l'adjuvant sert à provoquer un accroissement de la teneur en anticorps et/ou à augmenter la protection de llh8te sans accroître le titre en anticorps au-delà de l'accroissement qui serait normalement atteint sans utiliser l'adjuvant. La demanderesse a maintenant trouvé qutune classe particulière de composés chimiques possède d'une manière surprenante, des propriétés remarquables de stimulation immunologique, lorsque lesdits composés sont utilisés comme adjuvants de vaccins. Cette classe de composés est constituée par les imidazo L2,1-b) thiazoles décrits et revendiqués dans le brevet américain 3.274.209. Pour l'utilisation dans la présente invention, ces composés peuvent être utilisés sous forme de racémate ou sous la forme de leurs énantiomorphes résolus, soit à l'état de sel d'addition d'acide ou à l'état de base. Ces composés, qui sont décrits pour leur activité anti-helminthique, répondent à la formule générale où la ligne discontinue entre les positions 2- et 3- du noyau imidazo 02,1-b z thiazole représente une liaison supplémentaire éventuellle et où Ar est choisi dans le groupe formé par les radicaux thiényle, furyle, phényle, halogénophényle, microphényle, aminophényle, trifluorométhylphényle, naphtyle et benzyle, avec la condition que, lorsque Ar est le radical benzyle, une liaison saturée existe entre les positions 2- et 3du noyau imidazo [2,1-bqthiazole. Parmi les espèces que l'on préfère dans le cadre de la présente invention, on peut citer le dl-2,3,5,6-tétrahydro 6-phényl-imidazo C2,1-b] thiazole et son isomère lévogyre résolu ainsi que les sels d'addition d'acide thérapautiquement actifs de ceux-ci, ndamment le chlorhydrate. les chlorhydrates de ce composé sont des anti-helmintiques commerciaux bien connus, le racémate ayant reçu la inomination générique "tétramisole" et le sel isomère lévogyre la dénomination "lévamisole". te mécanisme de l'action immunostimulante se produisant par administration des adjuvants précités avec des vaccins n'est pas clairement établi. Dans certains cas, on observe une production accrue d'anticorps et, dans d'autres cas, une augmentation de la protection de l'hôte sans accroissement de la teneur en anticorps.Sans qu'il y ait lieu, en conséquence, de lier leur mode d'action à une théorie particulière, les adjuvants précités peuvent être administrés avec succès avec des substances immunologiques, de préférence celles qui sont connues comme étant relativement faiblement immunogéniques, afin d'accrottre ou rendreplus puissante la protection désirée de lth8te par exemple dans le domaine de la vaccination contre des agents de maladies infectieuses, contre divers toxines , et analogues. Les quantités relatives nécessaires desdits adjuvants, relsivement à un vaccin particulier, dépendent des caractéristiques immunologiques de l'antigène du vaccin, et les quantités totales de chaque adjuvant qui sont nécessaires pour chaque dose de vaccin peuvent aussi dépendre, dans une certaine mesure, de l'adjuvant particulier choisi, des dimensions du récipient et de la nature de l'infection ou de l'intoxication vis-à-vis de laquelle on désire une immunisation. Chez les petits animaux, tels que la souris et le cobaye, la quantité d'adjuvant est de préférence comprise entre 0,01 et 2,0 mg/kg de poids du corps. Dans tous les c-as, la dose à utiliser ne doit pas être toxique relativement au receveur.En raison de l'activité antielminthiquerapportée plus haut pour les présents adjuvants, une dose d'environ 0,01 mg/kg de poids ducorps jusqu'à une dose anti-helminthique non-toxique vis-àvis de l'rate considéré peut être généralement utilisée. Par exemple, la dose orale antihelminthique non toxique qui est recommandée pour le tétramisole est d'environ 5 mg/kg de poids du corps chez l'homme, d'environ 15 mg/kg chez les moutons, d'environ 10 mg/kg pour le bétail et d'environ 40 mg/kg chez les poussins, tandis que pour le lévamisole cette dose est d'environ 2,5 mg/kg chez l'homme, d'environ 8 mg/kg chez le mouton et d'environ 8 mg/kg pour le bétail. Dans le procédé d'obtention d'une immunisation par administration d'unvaccin,par conséquent, l'invention apporte le perfectionnement consistant à administrer conjointement une quantité immunostimulante efficace dtimidazo-[2,1-b3thiazoles. Par l'expression "administration conjointe, on veut dire l'administration desdits adjuvants à un ho te substantiellement en même temps que le vaccin considéré, sous -la. forme d'un produit cpmbiné ou sous la forme de produits administrés séparément, ou dans un délai approprié avant ou après l'administration du vaccin lui-même.En général, les adjuvants précités sont administrés dans une période de deux jours précédent immédiatement l'administration Fu vaccin ou dans unepériode de deux semaines suivant immédiatement l'administration du vaccin, de préférence substantiellement simultanément à l'administration du vaccin ou au cours d'une période de deux semaines consécutives à ladite administration0 Une quantité immuno-stimulante efficace des adjuvants de vaccins décrits ci-dessus peut être rapidement mélangée selon des processus en soi classiques dans cette technique,avec la substance antigénique d'un vaccin particulier pour former un produit composite, ou bien on peut prévoir un petit nécessaire ou équipement d'immnnisation qui comprend des préparations de substance antigénique et une quantité immuno-stimulante efficace de l'adjuvant précité, lesquels peuvent etre dans des récipients séparés en vue d'administrations séparées ou en vue d'un mélange préalable avant administration, sous la forme d'un produit composite. La forme que l'on préfère pour lesdits adjuvants est celle d'un sel d'addition d'acide, en raison de sa solubilité dans des préparatinns aqueuses. Dans un produit composite, la quantité d'adjuvant est de préférence la quantité suffisante pour donner d'environ 0,01 mg/kg de poids corps de l'hôte jusqu'à la dose anti-helmwr,thique non-toxique pour le poids dudit hôte, par dose unitaire de vaccin. L'effet, en tant qu'adjuvants, des imidazo [2,1-bl- thiazoles de formule (I) est illustré par les exemples ci-après. Exemple 1 Chacun des individus d'une groupe de souris femelles, CD1 (Ch. Rivers) et pesant ?1 + 2 grammes reçoit une injection souscutanée d'un vaccin vivant contre la brucellose, dénommé "B 19", soit 1 x 109 bactéries par souris. Chacun des individus d'un autre groupe similaire reçoit une injection sous-cutanée avec un vaccin non vivant contre la brucellose, dénommé "H38" dans un adjuvant incomplet (voir J. Renoux, Aun. Inst. Pasteur, 103,1962 page 786), soit 15 x 109 cellules par souris. On injecte aussi par voie sous-cutanée, soit deux jours avant, soit deux jours après l'injection de vaccin, soit simultanément à cette injection, 25 microgrammes de chlorhydrate de d1-2,3,5,6-tétrahydro-6- phényl-imidazo [2,1-b] thiazole (PIT). On laisse s'écouler une durée de 42 jours entre la vaccination et l'infection que l'on provoque.Cette infection est provoquée par une injection souscutanée de 2 x 104 cellules vivantes de Brucella abortus, souche 554, c'est-à-dire approximativement 10 doses d'une activité infectieuse de 50%. les souris sont tuées 11 jours après l'infection provoquée. leszates, prélevées aseptiquement, sont disposées en dEux Sogroupes de 5 pour chaque groupe de 10, un sous-groupe étant désigné par "A" et l'autre par "B". Chaque sous-groupe de 5 est pesé, broyé et dilué à 1/10, 1/100 et 1/1000 (poids/volume) dans une solution saline stérile. Au moyen de micropipettes calibrées, 10 gouttes de chaque dilution sont recueillies et maintenues séparées les unes des autres. Elles sont incubées à dans une atmosphère contenant 10% de C02. Entre le troisième et le cinquième jour d'incubation, on compte sous un cystoscope binoculaire, le nombre total de colonies de Brucella du sous-groupe "A" et du sous groupe "B". le tableau suivant résume les résultats obtenus. TABLEAU I Effet du 6-phényl-imidazo [2,1,-b] thiazole (PIT) sur l'immunisation des souris vis-à-vis de la brucellose Traitment : :Poids moyen:Colonies de B.abortus : :de la rate :par grammes de rate : :(mg) (# :écart par rapport : : :à la valeur moyenne) : : : Vaccin "H-38" seule : A : 164 : 0 ment : B : 427 : 0 PIT 2 jours avant le: A . 432 : O vaccin 38" : B : 651 0 PIT simultanément au: A : 627 : 0 vaccin 38" : B : 268 : 0 PIT 2 jours après le : A . 604 0 vaccin "H-38" : B : 459 : 0 Vaccin B 19 seulement A 181 : 200#32 B : 140 : 1700#77 PIT 2 jours avant le: A : 187 : 0 vaccin B 19 : B : 235 : 332 + 48 PIT simultanément au : A : 268 : 0 vaccin "B 19" : B : 145 : 830#211 PIT 2 jours après le: A : 185 : 0 vaccins 19" B : 220 : 0 Témoins pour infection A : 125 : 87980 + 7936 par B. abortus : B : 185 . 67920 + 7252 L'activité du ."PIT entant qu'adjuvant, n'est pas montré par vaccin non vivant "H-38" dans un adjuvant incomplet, en raison du fait, que dans les conditions expérimentales, ce vaccin lui-même immunise complètement les souris.Cependant, l'activité immuno-stimulante du PIT est démontrée dans le cas du vaccin vivant "B19", qui n'immunise pas complètement les souris par lui-m8me. Quoiqu'il existe une diminution marquée du nombre de Brucella lorsque le PIT est administré deux jours avant la vaccination au "B19" ou simultanément à celle-ci, les souris sont complètement immunisées lorsque le PIT est administré deux jours après la vaccination au"B19", une telle immunisation totale n'ayant pas été observée jusqu'ici avec le vaccin "B19". L'effet immuno-stimulant du tétramisole, selon le processus d'essai précité, est aussi observé dans le cas de l'administration simultanée d'adjuvants et deFaccins au moyen de produits composites constitués par 25 microgrammes de tétramisole mélangés avec le vaccin "B-19". EXEMPLE II Chacun des individus d'ungroupe d'hommes adultes, âgés de 33 à 67 ans (age moyen: 53 ans) reçoit une injection souscutanée de 300 unités internationales du vaccin contre le virus de la grippe A2/Aichi/2/1968, dans la partie-supérieure du bras. La moitié de ces individus sont traités aralement pendant deux semaines à partir du jour de la vaccination au moyen de g mg de tétramisole deux fois par jour tandis-que l'autre moitié sert de témoins. Chez ceux des sujets où on trous une absence de teneur en anticorps dans le sérum avant vaccination (au nombre de 11), les titres en anticorps du sérum, d'après l'essai classique d'inhibition d4'hémo-agglutination (essai HI) (voir Hirst, J.. J.Exp.Med. 15, 49,1962) étaient nettement plus élevés chez les sujets traités au tétramisole que chez les témoins, 2 et4 semaines après vaccination et restaient plus élevés 15 semaines après vaccination. les résultats de ces 11 sujets, soit 4 témoins et 7 sujets traités au"tétramisole" sont donnés dans sur la figure 1 des dessins ci-joint4. Chez les- sujets ayant un sérum positif avant vaccination (au nombre de 19), les titres en anticorps n'étaient pas sensiblement différents chez les sujets traités au tétramisole et chez les témoins. EXEMPLE III 71 sujets humains (19 sujets mâles et 12 sujets femelles, âgés de 20 à 57 ans) ont été divisés en trois groupes, approximativement équilibrés, en ce qui concerne le sexe et l'âge. Chacun de ces sujets présentait au départ un sérum négatif (teneurs en anticorps), selon l'essai HI précité dans le cas d'une souche de virus de la grippe A2/Aichi/2/1968. Un groupe a servi à déterminer deux témoins, les deux autres groupes étant traités oralement soit avec 25 mg 2 fois/j de lévamisole, soit avec 50 mg 2 fois/j de tétramisole, respectivement, pendant deux semaines à compter du jour de la vaccination (360 U.I. de vaccin contre le virus de la grippe.Deux semaines, après vaccination, les titres en anticorps du sérum comme déterminés par l'essai HI, étaient nettement plus élevés, d'après l'essai Mann-Whitney U, chez les sujets traités au lévamisole (p:0,017) et au tétramisole (p:0,029) que chez les témoins au troisième mois après vaccination, les titres pour ces deux types de sujets n'étaient pas sensiblement ou significativement différents (p > 0,1) de ceux des témoins. Les résultats sont illustrés dans la figure 2 des dessins ci-joints EXEMPLE IV On suit la technique de l'exemple I en utilisant le vaccin non vivant contre la brucellose "H-58" seul dans une étude comparative de 10, 25,250 et 2500 doses d'une activité infectieuse de 50 % (ID = doses infectieuses), conformément au schéma d'administration donné dans le tableau 2. TABLEAU II Traitment Colonies de B. absortus par gramme de rate à la suite d'une inoculation par ce bacille. 2500 I D 50% 250 I D 50% 25 I D 50% 10 I D 50% A. Simultanément...... 19355#2010 133#15 0 N D B. T 48 h avant et 2èm dose simultanément.... 3034#289 2075#322 0 N D C. T simultanément, et 2éme dose 48 h après.. 1556#133 41#5 0 N D D. T48 h avant 2ème... dose simultanément et. 3 ème dose 48 h après. 11354#1721 598#43 532#44 N D E. Vaccin "H-38" seul. 38548#4350 183#15 5 N D F. Pas de traitment... N D N D N D 628150#47000 T=tétramisole (dose=25 g) ND=essai non effectué tes résultats obtenus montrent que l'administration conjointe de tétramisole 48 heures avant, en môme temps que, et 48 heures après vaccination, produit une protection accrue de l'hote comme il est démontré par la réduction importante du nombre de bactéries comptées surles animaux traités, par comparaison aux animaux vaccinés mais non traités les résultats obtenus indiquent aussi que le moment préféré d'administration du tétramisole est le même que celui de la vaccination, avec un second traitement au moyen de tétramisole 48 heures après vaccination. Bien entendu, la présente invention n'est nullement limitée aux modes d'exécution décrits et représentés qui n'ont été donnés qu'à titre d'exemple. En particulier, elle comprend tous les moyens constituant des équivalents techniques des moyens décrits ainsi que leurs combinaisons, si celles-ci sont exécutées suivant son esprit et mises en oeuvre dans le cadre des revendications qui suivent. REVEND ICATI0N 1.- Procédé d'application d'un vaccin ou substance antigénique pour l'obtention d'une réponse immunologique stimulée dans un hôte, caractérisé en ce qu'il consiste en l'administration conjointe audit hte dudit vaccin ou substance antigénique et d'une quantité immuno-stimulante efficace d'un imidazo [2, 1 - 1 thiazole de formule où la ligne discontinue entre les positions 2- et 3- du noyau imidazo p2, 1 - b] thiazole représente une liaison supplémentaire éventuelle et où Ar est- choisi dans le groupe formé par les radicaux phényle, furyle, phényle, halogénophényle, nitrophényle, aminophényle, trifluorométhylphényle, naphtyle et benzyle, avec la condition que, lorsque Ar est le radical benzyle, une liaison saturée existe entre les positions 2- et 3- du noyau imidazo [2, 1 - b] thiazole, ou d'un sel d'addition d'acide thérapeutiquement actif de cet imidazo [2, 1 - b] thiazole. 2.- Procédé selon la revendication 1, caractérisé en ce que ledit vaccin ou substance antigénique et ledit imidazo [2, 1- b thiazole sont administrés sous la forme d'un mélange. 3.- Procédé selon la revendication 1, caractérisé en ce que ledit vaccin ou substance antigénique et ledit imidazo 1 1 - b] thiazole sont administrés séparément et simultanément. 4.- Procédé selon la revendication 1, caractérisé en ce que ledit imidazo 02, 1 - b3 thiazole est administré dans une période de deux jours précédant immédiatement l'administration dudit vaccin ou substance antigénique. 5.- Procédé selon la revendication t, caractérisé en ce que ledit imidazo [2, 1 - b] thiazole est administré dans une période de deux semaines suivant immédiatement l'administration dudit vaccin ou substance antigénique. 6.- Procédé selon la revendication 1, caractérisé en ce que l'imidazo F2,1 - b] thiazole précité est choisi dans le groupe formé par le d1-2,3,5,6-tétrahydro-6-phényl-imidazo t2,1 - b] thiazole et les sels d'addition d'acide tiérapeutique- ment actifs de celui-ci.- 7.- Procédé selon la revendication 6, caractérisé en ce que le sel d'addition d'acide thérapeutiquement actif est le chlorhydrate. 8.- Procédé selon la revendication 1, caractérisé en ce que ledit vaccin est un vaccin contre la brucellose. 9.- Procédé selon la revendication 6 ou 7, caractérisé en ce que ledit vaccin est un vaccin contre la brucellose. 10.- Procédé selon la revendication 1, caractérisé en ce que ledit imidazo [2,1 - bJ thiazole est choisi dans le groupe formé par le lévo-2,3,5,6-tétrahydro-6-phényl-imidazo r2,1 - b thiazole et ses sels d'addition d'acide thérapeutiquement actifs. 11Q Procédé selon la revendication o, caractérisé en ce que ledit sel d'addition d'aciae thérapeutiquement actif est le chlorhydrate. 12w- Vaccin caractérisé en ce qu'il comprend une substance antigénique et une quantité immuno-stimulante efficace d'un adjuvant choisi parni les imidazo 2,1 - b] thiazoles de formule où la lie discontinue entre les positions 2- et 3- du noyau imidazo [2,1 - b] thiazole représente une liaison supplémentaire éventuelle et où Ar est choisi dans le groupe formé par les radicaux phényle furyle, phényle, halogénophényle, nitrophényle, aminophényle, trifluorométhylphényle, naphtyle et benzyle, avec la condition que, lorsque Ar est le radical benzyle, une liaison saturée existe entre les positions 2- et 3- du noyau imidazo 2,1 - b] thiazole, ou d'un sel d'addition d'acide thérapeutiquement actif de cet imidazo 02,1 - b thiazole.