Brevet FR2235702A1 — publié le 19750131

La présente invention qui a été réalisée dans les laboratoires de l'Organotechnie de la Coopération Pharmaceutique Française, a pour objet un procédé de préparation de la chymopapaïne du genre de ceux suivant lesquels on sépare la chymopapanne de la papaïne au cours d'un traitement d'extraction du latex de carica papaya. Elle vise également l'application de la chymopapaine ainsi obtenue comme agent protéolytique et comme médicament. Le procédé conforme à l'invention est caractérisé par le fait qu'un jus brut d'extraction aqueuse du latex de carica papaya est mis au contact d'une résine cationique faible préalablement amenée au point isoélectrique de la papaïne. Le médicament, notamment anti-inflammatoire, conforme à l'invention est caractérisé par le fait qu'il contient, en tant que substance active, une quantité efficace de chymopapaine. L'invention vise également un certain nombre d'autres caractéristiques dont il va etre question dans ce qui suit. Elle pourra, de toute façon, etre bien comprise à l'aide du complément de description qui suit et qui est relatif à des modes de réalisation avantageux. On rappelle tout d'abord que la chymopapalne est une enzyme protéolytique de masse moléculaire 45.000 qui se rencontre à l'état naturel dans le latex du carica papaya à côté de la pa paine dont elle diffère notamment du point de vue des propriétés électrophorétiques. La chymopapalne est identifiée par le nO EC.3.4.4.11 qui lui a été attribué par l'organisme dit Enzymes Commission de l'Union Internationale de Biochimie, la papalne étant affectée du n" EC. 3.4.4.10. En dehors de l'application, conforme à l'invention, de la chymopapalne en tant que médicament, elle peut être utilisée comme agent protéolytique par exemple pour la réalisation de protéolysats ou pour la clarification des jus de brasserie. Pour préparer la chymopapaine à une échelle industrielle, on utilise un jus brut d'extraction aqueuse du latex de carica papaya. Ce jus peut être obtenu en traitant du suc de papaya broyé par du tampon Tris-HCl 0,lM pH 8,4 additionné de préférence dTun agent permettant de limiter la dénaturation des enzymes par oxydation, tel que le thiosulfate de sodium. I1 est mis au contact d'une résine cationique faible, par exemple en le faisant passer sur une colonne d'une telle résine, après avoir amené celle-ci au point isoélectrique de la papaïne (à savoir pH 8,4) qui,de ce fait,n'est pas retenue alors que la chymopapaine dont le point isoélectrique (à savoir pH 9,5) est très supérieur à celui de la papaïne se trouve fixée sur la résine. En tant qu'exemples de résines cationiques faibles pouvant être utilisées conformément à l'invention, on peut citer celles qui sont connues sous les marques AMBERLITE IRC-50 et AMBERLITE IRC-72 de la Société Rohm et Haas. On réalise ainsi ltextraction de la chymopapaine du mélange de papaine et de chymopapalne contenu dans le jus de départ. On procède ensuite au rinçage de la colonne avec une solution saline tamponnée au point isoélectrique de la papaïne (pH 8,4), ce qui permet d'éliminer les traces de papaine encore présentes dans la résine. Ce rinçage effectué, on procède à l'élution de l'enzyme fixée au moyen d'une solution de chlorure de sodium additionnée de thiosulfate de sodium généralement à la concentration de 0,5% ; dans la pratique des concentrations de NaCl de l'ordre de 3 à 12t donnent de bons résultats. L'éluat contenant l'enzyme est ensuite amene, si nécessaire, c'est-à-dire si son Volume est très important, sous la forme d'une solution aqueuse de volume compatible avec une dialyse. Pour ce faire, on peut avoir recours soit à une ultrafiltration, soit à une atomisation ou à une lyophilisation suivies d'une redissolution. Grâce à la concentration ainsi réalisée, on diminue les pertes d'activité enzymatique au cours de la dialyse. On procède ensuite à une purification par dialyse, puis à une concentration jusqu'à un volume compatible avec la lyophilisation finale, si cela s' avère nécessaire. De bons résultats ont été obtenus en soumettant l'éluat à une ultrafiltration sur un matériel de porosité 10.000 qui ne laisse passer que les composés de poidsmoléculaire inférieur à ce chiffre. Une fois amené au volume désiré, l'éluat est dialysé longuement contre un tampon phosphate 0,013 M de pH 5,5,de façon à éliminer la plus grande partie des sels minéraux présents. Après la dialyse,le produit est soumis à une concentration par ultrafiltration, puis lyophilisé. L'ensemble des opérations qui viennent d'être décrites est réalisé à une température de 4 à 60C. On met généralement en oeuvre 4 volumes de jus d'extraction de latex de carica papaya par volume de résine. Le rinçage de la colonne ayant fixé la chymopapaine est effectué avec 4 volumes de solution saline par volume de résine. L'élution de la chymopapaine est effectuée à l'aide dtun volume de-la susdite solution suffisant pour éluer la fraction active. On indique qu'il peut etre intéressant de récupérer la pa paine dans le jus d'extraction ayant été passé sur la résine en début de procédé. L'invention vise donc également l'obtention de la papaïne contenue dans le jus d'extraction servant de matière première. Pour illustrer ce qui précède, on donne ci-après un exemple numérique détaillé relatif à la mise en oeuvre de l'invention. EXEMPLE. On met en oeuvre 10 litres de résine de la marque AMBERLITE fRC-50 sous forme H+, que l'on régénère, de façon à l'amener sous sa forme d'utilisation qui est la forme sodique. Pour ce faire, on la traite par une solution de régénération répondant à la formule suivante Lessive de soude 450 ml Eau permutée q.s.p. 10-litres. On met en oeuvre 4 "bed-volume" (le "bed-volume" est le volume de résine mise en oeuvre sous sa forme acide), soit 40 litres de cette solution, que. l'on passe sur la colonne de résine en élution descendante, à un débit de-40 litres/heure. On soumet ensuite la résine ainsi traitée à un rinçage lent, tout d'abord avec 20 litres d'eau permutée à un débit de 4 bed-volume/he;ure, soit 40 litres/heure, puis avec 20 litres de tampon Tris-HCl 0,1 N due pH 8,4 (Tris = tris-hydroxy-aminométhane), contenant de préférence 5 g par litre de thiosulfate de sodium (à un débit de 4 bed-volume/heure, soit 40 litres/ heure), de façon à parfaire l'élimination de la soude excédentaire, et à commencer leprocessus de-tamponnage de la résine au point isoélectrique de la papaïne. Le thiosulfate de sodium a pour but de limiter la dénaturation des enzymes par oxydation. L'opération suivante consiste en un rinçage rapide, qui est destiné à terminer l'élimination de la soude éventuellement présente et à compléter le tamponnage de la résine à pH 8,4. Ce rinçage rapide est effectué avec 80 litres du tampon Tris-HCl 0,1 M pH 8,4, additionné de 5 grammes par litre de thiosulfate de sodium (débit : 1 bed-volume/heure, soit 10 litres/heure). En fin de rinçage, on vérifie que l'effluent se trouve bien à pH 8,4, et que le tampon n'absorbe plus au spectrophotomètre à 280 nm. On poursuit éventuellement le rinçage si le pH et la densité optique n'étaient pas conformes. On procède parallèlement à l'extraction du suc de papayer en introduisant 600 grammes de suc de papayer broyé dans 9 litres de tampon Tris-HCl 0,1 M, additionnés de 5 grammes par litre de thiosulfate de sodium. On agite une heure, de façon à faciliter la diffusion des enzymes dans la phase aqueuse, puis on filtre ou centrifuge j':squ'à obtenir un jus'clair. L'insoluble est écarté. , l'activité enzymatique d'un tel extrait dépend béaucoup de la qualité de la matière première. Les rendements successifs sont néanmoins peu touchés par cette qualité. Pour fixer les idées, une telle solution titre en moyenne 74,500 unités BAEE totales le dosage pratiqué util-ise l'ester éthylique de la N-benzoyl-arginine (BAEE) comme substrat, et est réalisé à l'ai- d 'un appareil du type combititrateur METRCHM]. L'extrait précédent est passé sur la résine à un débit de 1 hed-volume/heure, soit 10 litres/heure ; l'échantillon est "poussé" a l'aide du meme tampon Tris-HCl pH 8,4 que plus haut. On récupère l'éluat primauíre que l'on dose en activité. ainsi que les éluats provenant du lavage de la résine avec le tampon ph 8,4. On lave avec environ 1 bed-volume, soit 10 litres, de tampon. On obtient ainsi un volume d'éluat de 30 litres1 ti trahi 30,O0 unités BAEE. -On en déduit la quantité d'enzyme fixée, soit 44.500 unités, ce qui représente un rendement de fixation de 60 % par rapport à l'activité totale, mais de 100 % par rapport à l'activité de la chymopapaine présente dans l'extrait. En effet, les électro phorèses pratiquées sur les eaux de lavage et dont il sera question plus loin ne montrent pas les bandes caractéristiques de la chymopapaïne, mais laissent apparaitre une bande migrant très peu, en tous points comparable aux autres papaïnes purifiées du commerce. Pour éluer l'enzyme fixée, on a recours à une solution de chlorure de sodium à 5 % ajustée à 5 grammes -par litre de thiosulfate de sodium. On met en oeuvre 20 litres de cette solution, que l'on fait passer à un débit de 2 bed-volume/heure, soit 20 litres/heure. On récupère ainsi 11 litres d'éluat contenant les fractions actives qui représentent 32.000 unités BAEE totales. Le rendement d'élution par rapport à la quantité fixée est de 72 %. I1 est donc de 43 % par rapport à l'activité totale mise en oeuvre. L'éluat ainsi obtenu est concentré d'environ 50 % sur un système à cartouche du type Diaflo de "cut-off" 10.000. Le rendement de cette concentration est toujours très proche de 100 %. La concentration ainsi récupérée titre 32.000 unités BAEE, soit un rendement de 72 % par rapport à la quantité fixée. L'éluat concentré est dialysé. Pour ce faire, on ajoute au concentrat 6 grammes par litre de cystéine, de façon à augmenter la résistance de l'enzyme à la dénaturation par oxydation. On met le mélange obtenu en dialyse contre un tampon phosphate 0,013 M de pH 5,5 et on laisse la dialyse se poursuivre pendant au moins 1 20 heures. On récupère en fin de dialyse une fraction active contenant 26.000 unités BAEE, soit un rendement de 58 par rapport à la quantité fixée. On concentre le dialysat de la même manière que la concentration précédente, par ultrafiltration. On réduit ainsi le volume du dialysat au tiers de sa valeur. On récupère 24,000 unités BAEE, soit un rendement de 54,3 % par rapport à la quantité fixée. Grâce à cette concentration, le volume à mettre en lyophilisation est aussi réduit que possible, ce qui a pour effet d'augmenter la rapidité de la lyophilisation, et de diminuer le taux de sels minéraux présents dans le lyophilisat. La lyophilisation proprement dite à laquelle est soumis le concentrat a un rendement variant entre 85 et 95 %. On récupère ainsi un lyophilisat de 60 grammes, titrant 21.900 unités BAEE totales, soit une activité au gramme de 347 unités. Le rendement total de l'extraction de la chymopapaine par rapport à la quantité d'enzyme fixée sur la résine est donc de 49 %. L'étude du produit lyophilisé a permis de lui attribuer les caractéristiques suivantes. Teneur en protéines Le lyophilisat titre 14,95 grammes d'azote pour 100 grammes de produit, ce qui correspond à une teneur en protéines de 93,5 %. Cendres sulfuriques : La teneur est voisine de 5 %. Teneur en chlorures Elle est égale à 0,183 gramme pour 100 grammes, exprimée en chlorure de sodium. Absorption ultraviolette Une solution de 1% de chymopapaine placée dans une cuve en quartz de 1 cm de chemin optique donne les absorptions suivantes A 280 nm : 17 A 225 nm : 93,5. Electrophorèse Pratiquée sur acétate de cellulose en milieu tamponné Véronal Veronal sodique de pH 8,6 et de force ionique 0,075, elle montre, après 20 minutes de migration, sous une différence de potentiel de 100 Volts, 3 bandes de migration importantes tout à fait comparables à celles des chymopapaines purifiées du commerce. La bande centrale est vraisemblablement due à la présence de lysozyme, qui se trouve normalement dans le latex de carica papaya. On signale que l'analyse d'autres échantillons préparés à l'aide du procédé conforme à l'invention montre que la teneur en cendres sulfuriques peut être tres largement inférieure à 3% et que l'activité spécifique peut varier dans d'assez larges proportions. De même, les rendements totaux observés se situent dans une fourchette couvrant le domaine situe a + 15% autour de la valeur trouvée dans le susdit exemple. Des essais de stabilité des produits obtenus ont été concluants (séjourne 250 jours sans altération). Comme on l'a déjà indiqué plus haut, l'invention vise l'application de la chymopapaine en tant que médicament, notamment mais non exclusivement lorsqu'elle a été préparée par mise en oeuvre du procédé conforme à l'invention. Ce sont-des échantillons de chymopapaine préparée par ce procédé qui ont servi aux essais effectués au Laboratoire de Pharmacologie de la Coopération Pharmaceutique Française et relatifs à la démonstration des propriétés pharmacologiques de ce produit. Les essais en question comprennent une étude toxicologique effectuée sur la souris et le rat ainsi qu'une étude sur l'activité anti-inflammatoire de la chymopapalne lorsqu'elle est administrée localement ou par la voie générale. Des essais comparatifs ont été effectués sur la phénylbutazone et l'alphachymotrypsine. En ce qui concerne l'étude toxicologique, on indique-ci- après les expériences qui ont permis de déterminer la toxicité aiguë sur des souris mâles et des rat malles, indemnes d'orga nismes pathogènes spécifiques, respectivement de souche 0F 1 et OFA, par - la voie sous-cutanée (méthode de Litchfield et Wilcoxon), ce qui a permis de trouver que la DL50 est de DL50 = 115 mg/kg pour la souris et DL50 = 750 mg/kg pour le rat - la voie buccale, ce qui a permis de déterminer que la DL50 est supérieure à 5 g/kg, - perfusion intraveineuse lente, ce qui a permis de trouver pour la DL50 la valeur suivante DL50 = 1693 mg/kg. L'étude de l'activité anti-inflammatoire a été effectuée comme suit. L'activité anti-inflammatoire locale a été déterminée par la méthode de Tonelli reprise par J.C. Le Douarec et M. Visalli (J. Pharmacol. (Paris) 1970 - 1, 3, 395-405), les animaux d'expérience étant 160 rats mâles d'un poids de 180 + 10 g répartis en séries de huit. Dans le tableau I, on a réuni les résultats obtenus et dans le tableau II ceux enregistrés avec la phénylbutazone et l'a- chymotrypsine. TABLEAU I Action anti-inflammatoire du L.R. 210 Action locale préventive Nombre Poids (mg) Poids (mg) Augmentation de poids Pourcentage Concentration de oreille oreille inhibition Significatif mg/ml rats gauche droite mg % 4 h.30 0 08 95 236 141 148 - 0,5 08 94 224 130 138 8 % N. Sign. 0 16 92 239 147 159 - 1 16 94 215 121 128 17,6 % Sign. p = 0,05 0 16 95 204 109 114 2 16 98 180 82 83 24 % Sign. p = 0,05 0 16 91 193 102 112 4 16 96 170 74 77 27 % Sign. p = 0,05 0 16 93 199 106 113 8 16 92 157 65 70 38 % Sign. p = 0,05 0 08 100 220 120 120 12 08 96 170 74 77 38 % Sign. p = 0.05 TABLEAU II Action anti-inflammatoire de la phénylbutazone Action locale préventive Nombre Poids (mg) Poids (mg) Augmentation de poids Pourcentage Concentration de oreille oreille inhibition Significatif mg/ml rats gauche droite mg % 4 h.30 0 08 102 259 157 154 - Significatif 20 08 98 229 131 134 16,5 p = 0,05 0 08 100 273 173 173 - Significatif 32 08 100 225 125 125 27,7 p = 0,05 Action anti-inflammatoire de l'alphachymotrypsine Action locale préventive Nombre Poids (mg) Poids (mg) Augmentation de poids Pourcentage Concentration de oreille oreille inhibition Significatif mg/ml rats gauche droite mg % 4 h.30 0 16 87 208 121 139 - Significatif 4 16 92 190 98 106 19 p = 0,05 0 16 97 218 121 125 - Significatif 8 16 95 181 86 90 29 p = 0,05 L'examen de ces résultats montre que la chymopapaine est vingt fois plus active que la phénylbutazone et, à dose égale, un peu plus active que l(x-chymotrypsine. Les valeurs de l'activité anti-inflammatoire générale ont été déterminées par l'expérience de l'oedème au kaolin chez le rat (technique utilisée : S. Garcet - Thérapie - 1958, XIII, 549-555) ; on a déterminé pour la chymopapaine et l'a-chymotryp- sine le pourcentage d'activité et la DL50 (différence d'au moins 30 % entre le poids des pattes traitées (droites) et celles non traitées (gauches) par rapport à la différence moyenne des pattes témoins, droites et gauches). Les résultats obtenus sont réunis dans les tableaux-III et IV et montrent que les DE50 des deux produits ne diffèrent pas significativement. TABLEAU III Action du L.R. 210 par voie sous-cutanée Technique de l'oedème au kaolin Nbre de rats dont la différence Poids Poids entre le poids Produit Dose Nbre patte patte Différence Pour- Pour- des pattes droite C.E. 50 mg/kg de droite gauche # erreur centage centage et gauche est avec Rats # erreur # erreur type d'accrois- d'acti- inférieure d'au limites type type sement vité moins 30 % à la fiducielles différence mo- p = 0,05 yenne des pattes témoins droites et gauches Témoins - 10 2190#23 1389#23 804#54 58,0 -- -- - (eau distillée) L.R. 210 3 10 2190#63 1476#17 714#45 48,3 16,7 0 5 10 2031#38 1385#17 *646#42 46,6 19,7 2 12,5 10 2002#63 1498#17 **504#61 33,6 42,0 6 11,5 mg/kg Témoins (eau - 20 2522#65 1502#27 1020#65 68,1 -- -- (6,3-20,7) distillée) L.R. 210 25 10 2174#52 1594#16 **580#45 36,4 46,5 7 50 10 2087#57 1553#17 **534#38 34,3 49,6 9 75 10 2051#78 1538#27 **513#72 33,3 51,1 9 * Significatif pour p Action de l'alphachymotrypsine par voie S.C. Technique de l'oedème au kaolin Nbre de rats dont la différence Poids Poids entre le poids Produit Dose Nbre patte patte Différence Pour- Pour- des pattes droite C.E. 50 mg/kg de droite gauche # erreur centage centage et gauche est avec Rats # erreur # erreur type d'accrois- d'acti- inférieure d'au limites type sement vité moins 30 % à la fiducielles différence mo- p = 0,05 yenne des pattes témoins droites et gauches Témoins (eau distillée) 0 20 1466#35 1466#13 840#30 57,2 -- - Alphachymotrypsine 5 10 2136#15 1436#15 700#45 48,7 14,8 1 " 12,5 10 2122#49 1493#15 629#46** 42,0 26,6 6 13,5 mg/kg 25 10 2054#31 1469#16 585#27** 39,8 30,4 6 (9,0-20,2) * Significatif pour p On a également étudié l'activité anti-inflammatoire pour la méthode de l'abcès à la carraghénine chez le rat (technique de Benitz et Hall : Arch. Int. Pharmacodyn. 1963. 144, 185-195 reprise par Julou et Coll.: J. Pharmacol. Paris 1971 , 2, 3, 259-286). On a ainsi déterminé pour la chymopapaïne et l'a-chymotryp- sine la DE50, c'est-à-dire la dose du produit qui provoque chez 50 % des rats une diminution de l'abcès d'au moins 30 % par rapport au poids moyen des abcès chez les témoins. Les résultats sont réunis dans les tableaux V et VI ciaprès. TABLEAU V Action du L.R. 210 par voie sous-cutanée dans la technique de "l'abcès à la carraghénine" 0 = 25 C Nombre de Rats dont Pourcentage de diminution le poids de l'abcès D.E. 50 Dose Nbre Poids moyen des poids moyen des abcès par est inférieur d'au et limites Produit mg/kg de abcès en mg rapport au poids moyen moins 30 % au poids fiducielles S.C. Rats (# erreur type) des abcès des témoins moyen des abcès p = 0,05 témoins Témoins (eau 0 10 3946#186 -- -distillée) L.R. 210 3 10 3300#218* 16 1 " 5 10 3254#162** 17,5 2 Témoins 0 10 3622#230 -- -- 8,75 mg/kg L.R. 210 6,25 10 2658#135** 26 4 (6,0-12,8) " 12,5 10 2573#99** 29 6 " 25 10 2071#60** 10 * Significatif pour p Action de l'alphachymotrypsine par voie sous-cutanée dans la technique de l'abcès à la carraghénine 0 = 23 C Nombre de Rats dont Pourcentage de diminution le poids de l'abcès D.E. 50 Dose Nbre Poids moyen des poids moyen des abcès par est inférieur d'au et limites Produit mg/kg de abcès en mg rapport au poids moyen moins 30 % au poids fiducielles S.C. Rats (# erreur type) des abcès des témoins moyen des abcès p = 0,05 témoins Témoins (eau 0 10 3439#177 -- -distillée) Alphachymotrypsine 6,25 09 2841#130* 17,3 3 " 12,5 09 2645#101** 23,0 4 11,9 mg/kg " 25 10 2242#159** 34,8 8 (6,8-20,8) * Significatif pour p Ces résultats permettent de dire que 1' activité de la chy mopapaine ne diffère pas significativement de celle de l'a-chy motrypsine (les DE50 étant respectivement de 8,75 mg/kg et de 11,9 mg/kg). Les conclusions générales qu'il est permis de tirer des études qui viennent litre décrites sont que - la chymopapaïne est peu toxique quelle que soit la voie d'administration utilisée, - la chymopapaine présente une activité anti-inflammatoire supérieure à celle de la phénylbutazone et sensiblement égale ou légèrement supérieure à celle de l' -chymotrypsine. L'emploi de la chymopapalne lyophilisée est donc indiqué - à titre curatif, pour agir rapidement sur un état inflammatoire, par exemple pour obtenir la résorption d'un hématome ou pour rétablir une circulation sanguine ou lymphatique locale normale, - à titre préventif, pour éviter l'apparition d'hématomes ou d'oedèmes. Elle est alors administrée par injection soit par voie générale intramusculaire,- soit par voie locale peri- ou intraarticulaire. Elle peut être présentée dans des flacons de 5 ml contenant 5 mg de produit lyophilisé titrant 1,25 unités BAEE. La dose posologique quotidienne est généralement de l'ordre de : flacon- en une ou deux injections jusqu'à disparition des signes cliniques. Comme il va de soi et comme il résulte d'tailleurs déjà de ce qui précède, l'invention ne se limite nullement à ceux de ses modes d'application, non plus qu'à ceux des modes de réalisation de ses diverses parties qui ont été pius spécialement indiques elle en embrasse, au contraire, toutes les variantes. REVENDICATIONS 1. Procédé de préparation de la chymopapaine, caractérisé par le fait que l'on sépare la chymopapaine de la papaïne en mettant un jus brut d'extraction aqueuse du latex du carica papaya en contact d'une résine cationique faible préalablement amenée au point isoélectrique de la papalne. 2. Procédé selon la revendication 1, caractérisé par le fait que le jus brut d'extraction aqueuse du latex de carica papaya est obtenu en traitant du suc de papayer par du tampon Tris-HCl 0,1 M contenant de préférence une quantité efficace d'agent propre à éviter la dénaturation des enzymes par oxydation. 3. Procédé selon la revendication 2, caractérisé par le fait que le tampon Tris-HCl 0,1 M contient du thiosulfate de sodium, de préférence en une quantité de 5 g par litre. 4. Procédé selon l'une quelconque des revendications l à 3, caractérisé par le fait que l'on fait passer le jus brut d'extraction aqueuse du latex de carica papaya sur une colonne de résine cationique faible préalablement amenée au point isoélectrique de la papalne, cette colonne étant ensuite rincée avec une solution alcaline tamponnée au point isoélectrique de la papalne avant que l'on procède à l'élution de la chymopapane au moyen d'une solution de chlorure de sodium additionnée d'une quantité efficace d'agent de protection contre l'oxydation de l'enzyme, l'enzyme éluée obtenue étant amenée, si nécessaire, sous la forme d'une solution aqueuse de volume compatible avec une dialyse, puis dialysée contre un tampon phosphate 0,013 M de pH 5,5 pendant une durée suffisante pour amener le taux de NaCl à un niveau compatible avec l'utilisation envisagée, le dialysat étant soumis, si nécessaire, à une concentration avant d'être lyophilisé. 5. Procédé selon la revendication 4, caractérisé par le fait que l'élution est effectuée par mise en oeuvre d'une solution de NaCI à 5% additionnée de 0,5% de thiosulfate de sodium, l'enzyme éluoeétant concentrée par ultrafiltration jusqu'à un volume compatible avec la dialyse subséquente. 6. Procédé selon la revendication 4, caractérisé par le fait que l'élution est effectuée par mise en oeuvre d'une -solution de NaCl à 5% additionnée de 0,5% de thiosulfate de sodium, l'enzy- me é.luée étant atomisée puis remise en solution aqueuse avant la dialyse subséquente. 7. Procédé selon la revendication 4, caractérisé par le fait que l'élution est effectuée par mise en oeuvre d'une solution de NaCl à 5% additionnée de 0,5% de thiosulfate de sodium, l'enzyme éluée entant lyophilisée puis remise en solution aqueuse avant la dialyse subséquente. 8. Procédé selon l'une quelconque des revendications 1 à 7, caractérisé par le fait que la résine cationique faible utilisée est constituée par celles qui sont connues sous les marques AMBERLITE IRC-50 et AMBERLITE IRC-72 de la Société Rohm et Haas. 9. Medicament caractérisé par le fait qu'il contient, en tant que substance active, une quantité efficace de chymopapaine. 10. Médicament anti-inflammatoire caractérisé par le fait qu'il contient, en tant que substance active, une quantité efficace de chymopapaine. 11. Médicament selon l'une quelconque des revendications 6 et 7, caractérisé par le fait que la chymopapaine constituant la substance active présente les caractéristiques de celle qui est obtenue par mise en oeuvre du procédé selon l'une quelconque des revendications 1 à 8. 12. Médicament selon l'une quelconque des revendications 9 et 10, caractérisé par le fait que la chymopapalne qui constitue la substance active a été obtenue par mise en oeuvre du procédé de préparation selon llune quelconque des revendications 1 à 5. 13. Médicament anti-inflammatoire caractérisé par le fait qu'il est constitué par de la chymopapaine lyophilisée presentée en dose posologique unitaire quotidienne de 5 mg d'une activité de 1,25 unites BAEE. 14. Procédé de préparation de la papaine, caractérisé par le fait que l'on isole cette derniere dans un jus d'extraction aqueuse du latex de- carica papaya, ce jus ayant été soumis au passage sur résine cationique faible conformément au procédé selon l'une quelconque des revendications 1 à 8. 15. Agent protéolytique, notamment pour la réalisatinn de peotéolysats ou pour la clarification de jus de brasserie caractérisé par le fait qu'il comprend de la chymopapaine, notamment celle préparée par la mise en oeuvre du procédé selon l'une quelconque des revendications l à 8 ou présentant les caractéristiques d'une chymopapaine obtenue par la mise en oeuvre dudit procédé.