Brevet FR2232594A1 — publié le 19750103

Cette invention concerne un procédé pour transformer en fructose, par voie enzymatique, une partie du glucose qui se trouve dans une solution contenant du glucose. Il existe bien des procédés connus dans la technique pour produire des solutions contenant du fructose. Ces procédés peuvent être regroupés en trois grandes catégories. Dans les procédés de la première catégorie, on provoque l'inversion du saccharose en glucose et en fructose à l'aide d'un acide ou de l'invertase. Dans les procédés de la deuxième catégorie, on transforme le glucose en fructose à I aide de catalyseurs alcalins. Il existe une littérature abondante et. de nombreux brevets qui décrivent différents catalyseurs alcalins ainsi que leur emploi dans la transformation du glucose en fructose. Comme exemples de procédés utilisant des catalyseurs alcalins mentionnons par exemple ceux qui sont décrits dans les brevets E.U.A. N 2.487.121. 2.746.889, 2.354.665, 3.285.776, 3.383.245 et 3.305.395. Il existe pourtant un certain nombre d'inconvénients marqués qui sont liés à l'insomérisation alcaline. Par exemple, en raison du caractère non sélectif des catalyseurs alcalins, il se forme divers sous prodùits gênants, par exemple de grandes quantités de corps colorés et de substances acides. L'affinage des liqueurs obtenues par isomerisation alcaline pour en éliminer les sous-produits gênants et former un produit acceptable nécessite des opérations assez copliquées et coûteuses. La troisième catégorie de procédés de production de solutions contenant du fructose met en jeu La transformation enzymatique en fructose du glucose d'une solution contenant du glucose, sirop de mais par exemple. Divers micro-organismes sont connus dans la technique qui produisent I isomérase du glucose. Par exemple, dans un article paru dans "Science, Vol. 125, pp. 648-9 (1957)", il est révélé qui une enzyme dérivant de Pseudomonas hvdrophila isomérise le glucose en fructose. Le brevet britannique NO 1.103.394 et le brevet japonais N0 7.428 (1966) de Takasaki et al. révèlent également que des micro-organismes classés comme appartenant au genre Streptomyce, par exemple Streptomyces flavovîrens, Streptomyces achromoqenes, Streptoryces echinatus et Streptomyces albus, produisent l'isomérase du glucose. Il existe bien d'autres micro-organismes qui sont révélés dans la technique comme produisant l'isomérase du glucose. Quelques-uns des autres micro-organismes connus sont, par exemple, Aerobacter cloacae, Bacilles megaterium, Acetobacter suboxydans, Acetobacter melanoqunus, Acetobacter roseus, Acetobacter oxydans, Bacillus fructose et Lacto-bacillus fermenti. En raison de l'aspect économique de production de l'isomErase du glucose, lest d'importance primordiale d'utiliser l'isomérase dans des conditions telles que l'on obtienne des rendements maximaux de fructose en utilisant des quantités minimales d'isomérase du glucose. D'ailleurs, les conditions de l'isomérisa- tion doivent être telles qu'il se forme des quantités minimales de sous-produits gênants. L'isomérase du glucose est produite surtout à l'intérieur des cellules par les micro-organismes ci-dessus. Ainsi, la majeure partie de l'isomérase du glucose se trouve à l'intérieur et, ou bien, sur les parois cellulaires des micro-organismes. Normalement, quand on utilise ces cellules pour isomériser le glucose en fructose, l'isoméraseenest libéréeou extraite au cours de l'isomérisation. Quand l'isomérase est libérée ou extraite des cellules elle est pratiquement solubilisée. La récupération de l'isomérase solubilisée pour pouvoir l'utiliser dans une autre réaction d'isomérisation impliquerait un processus assez coûteux et compliqué. Selon un article intitulé "A Continuous Glucose Isomerization Method by an-Adsorbed Enzyme Column" (Procédé continu d'isomérisation du glucose à l'aide d'une colonne à enzyme adsorbée) de Tsumura et al., publié dans "Nippon Shokubin Kogyo Gakkaishi, 14 (12) 1967", I'isomérase du glucose dissuade Streptomvces phaechromosenes est liée à du DEAE-Sephadex. Cette enzyme liée est placeedans une colonne et on fait passer au travers, en continu, une solution de glucose. Au fur et à mesure du contact du glucose avec l'enzyme liée, il se forme du fructose en continu.Si le procédé qui est décrit dans cet article représente apparemment une solution partielle du problème posé par la réutilisation de l'isomérase du glucose, il a été mis en oeuvre à si petite échelle que les paramètres de traitement ne sont pas applicables à la pratique industrielle. I1 serait donc difficile, sinon pratiquement impossible; d'étendre ce procédé à l'échelle industrielle et de produire une solution contenant du glucose et du fructose de qualité acceptable. On a donc besoin d'procédé continu permettant d'isomériser par voie enzymatique le glucose en fructose, à l'échelle industrielle. L'apport de la présente invention consiste en un procédé de transformation enzymatique du glucose en fructose, qui consiste à former une solution contenant du glucose dont la viscosité est de 0,5 à 100 centipoises et le pH de 6 à 9, et qui contient de 5 à 80% en poids de glucose;;Et à maintenir cette solution à une température de 20 à 80 Oc, tout en la faisant passer à travers un lit d'isomérase de glucose liée dont l'activité est au moins égale à 3"IGIU"par centimètre cube de lit et dont l"'indice de stabilité" est au moins de 50 heures un débit tel que jusqu'à 54 pour cent environ du glucose sont transformés en fructose, la coloration de la solution transformée est augmentée de moins de deux unités, et il nty a pas de production notable de psicoac. Différents termes et expressions utilisés ci-dessus ainsi que dans la discussion et les exemples suivants, sont définis comme suit INDICE DE STABILITE On détermine l'indice de stabilité en plaçant une quantité suffisante de l'isomérase de glucose liée dans une colonne pour y obtenir de 1000 à 4000 IGIU. On fait passer dans la colonne, à la cadence de 10 à environ 200 ml/h, une solution qui est 3 fois molaire en glucose, à un pH de 6,5, 0,001 fois molaire en chlorure de cobalt et 0,005 fois molaire en sulfite de magnésium. On maintient la colonne à une température de 60 C. Au bout de 4 heures on détermine la fraction de glucose transformé en fructose dans lteffluent pour s'assurer que le lit d'isomérase de glucose liée est en état d'équilibre.On calcule l'indice d'activité de l'isomérase de glucose liée à l'aide de la formule suivante: indice d'activité = (R/E) log [0,504/(0,504-i)] oû I est la fraction de glucose transformée en fructose, R est le débit en (mlgh) et E est le nombre d'IGIU initialement dans la colonne. Cn détermine périodiquement l'indice d'activité, et le temps nécessaire pour que 11 indice d'activité atteigne la moitié de sa valeur initiale (valeur au bout de 4 heures) est l'indice de stabilité en heures. UNITES DE COLORATION On détermine la coloration par spectrophotométrie en mesurant I' absorbance, à 450 m et à 600 myti, d'une liqueur convenablement diluée, dans une cellule de 1 cm, par rapport à celle de 11 eau servant de référence. Le spectrophotomètre est un appareil Beckman DK-2A, fabriqué par Beckman Instrument Company. On calcule la coloration en utilisant la formule suivante Unités de coloration = (109) (A450-A600) C A450 = absorbance à 450 mu A600 = absorbance à 600 mu C = concentration (g/loo-ml). TENEUR EN FRUCTOSE DE LA LIQUEUR D'ISOMERISATION On détermine la teneur en fructose de la liqueur isomérisée en mesurant la variation de rotation spécifique qui s'est produite au cours de l'isomérisation. On mesure les rotations spécifiques à l'aide d'un polarimètre automatique Bendix Corporation NPL Modèle 969. On détermine les rotations pour une concentration de 2,5 g /100 ml dans une cellule en verre dont la température est maintenue à 250C à l'aide d'un thermostat. Le trajet parcouru dans la cellule est de 50 mm.On détermine les rotations spécifiques au début des réactions d'isomérisation après avoir combiné tous les ingrédients dans les solutions contenant le glucose Pour déterminer la variation de la teneur en fructose, on détermine la rotation spécifique de la liqueur isomérisée. On calcule la variation de la teneur en fructose à l'aide de la formule suivante Pourcentage de fructose = 100 (A1 - Ao) - 138,9 dans laquelle A1 est la rotation spécifique de la liqueur isomérisée est la rotation spécifique de la solution contenant le glucose, avant isomérisation. Dans la formule, le facteur -138,9 est la variation de rotation spécifique lui se produit quand le glucose est complètement transformé en fructose. IGIU IGIU est l'abréviation de "International Glucose Isomerase Unit" (Unité Internationnale d'Isomérase du Glucose, et c'est la quantité d'enzyme qui transforme en fructose une micromole de glucose par minute dans une solution contenant initialement 2 moles de glucose par litre, 0,02 mole de sulfite de magnésium par litre et 0,001 mole de chlorure de cobalt par litre, à un pH de 6,84 à 6,85 (maléate de sodium 0,2M) et à une température de 60 C. Le procédé de- la présente invention offre un certain nombre d'avantages marqués. Par exemple, il fournit un procédé que l'on peut aisément et économiquement mettre en oeuvre dans une opération industrielle. De plus, il est extrêmement rentable quant à l'utilisation de l'isomérase du glucose et quant à la production d'un sirop de glncose-Eructose ayant une coloration minimale et contenant un minimum de cendres et de psicose. D'ailleurs, on peut réaliser la réaction d'isomérisation en continu, ce qui est bien entendu un net avantage dans n'importe quelle opération de fabrication. Les caractéristiques de la solution contenant le glucose sont assez importantes pour déterminer les conditions exactes dans lesquelles ia réaction d'isomérisation s' effectue. Il existe bien des méthodes connues dans la technique pour la production de solutions contenant du glucose. Par exemple, les procédés qui sont actuellement utilisés dans la pratique industrielle mettent en jeu principalement la saccharification de l'amidon de mais en glucose. Ces procédés peuvent être regroupés en trois catégories. Le premier est un procédé acide dans lequel on utilise une solution d'acide diluée pour hydrolyser l'amidon en glucose.Le second est un procédé acide-enzyme dans lequel on liquéfie l'amidon par traitement avec un acide faible puis on utilise une enzyme pour transformer l'amidon liquéfié en glucose. Le troisième est un procédé enzyme-enzyme dans lequel on utilise deux traitements par des enzymes, le premier pour liquéfier l'amidon et le second pour transformer l'amidon liquéfié en glucose. Dans le procédé de la présente invention, il est préférable d'utiliser une solution contenant du glucose qui a été obtenue par l'un des deux derniers procédés,car une telle solution contient en généras une plus grande quantité de dextrose (pesée à sec), une moins grande quantité d'acide, et une moins grande quantité d'oligosaccharides, et est moins colorée.Si on le désire; on peut affiner la solution contenant le glucose, par des moyens classiques, avant de la traiter selon le procédé de la présente invention La viscosité de la solution qui contient le glucose doit être comprise entre 0,5 et 100 centipoises environ, et de préférence comprise entre 2 et 20 centipoises environ. Si la viscosité de la solution est trop grande, la pression nécessaire pour faire passer la solution à travers le lit devient excessivement élevée. La réduction de la pression se traduit par une réduction des débits, si bien que le temps pendant lequel la solution est en contact avec l'isomérase liée risque d'être trop long pour que l'utilisation de l'enzyme soit efficace.De plus, comme la longueur du temps pendant lequel la solution est maintenue dans les-conditions d'isomérisation, par exemple température, pH , etc..., risque d'être excessive, il est probable qu'une quantité indésirable de matière colorante et de psicose serait- produite. La concentration du glucose dans la solution contenant le glucose doit etre comprise entre 5 Cet 80 pour cent en poids environ, et de préférence entre 40 et 60 pour cent en poids environ. Le pH de la solution contenant le glucose doit être compris entre 6 et 9 environ, de préférence entre 6,5 et 8 environ, et au mieux entre 7 et 7,5 environ. Il est important de maintenir le pH de la solution contenant le glucose à l'intérieur de ces limites pendant la réaction d'isomérisation, car si la solution avait un pH situté en dehors de ces limites, l'isomérase serait rapidement inactivi et, ou bien, de grandes quantités de sousproduits indésirés, tels que matières colorantes et psicose, seraient produites. Dans la solution contenant le glucose il peut y avoir divers ions métalliques servant d'activateurs et/ou de stabilisateurs pour l'isomérase, par exemplé des sels solubles de cobalt, de magnésium,-ètc... Les caractéristiques du lit de l'isomérase de glucose liée sont extrêmement importantes pour la qualité de la solution de fructose-glucose produite et pour l'utilisation industrielle du procédé de l'invention. Le lit doit avoir une activité d'isomérase du glucose au moins égale à 3 IGIU par centimètre cube et de préférence au moins égale à 20 IGIU par centimètre cube. Si le lit a une activité d'isomérase du glucose inférieure à 3 IGIU par centimètre cube, un plus grand volume de lit risque d'être nécessaire pour l'isomérisation de quantités équivalentes de dextrose. Ceci risque de présenter différénts problèmes connexes tels que plus grande perte de charge dans le lit, temps de contact plus long entre la solution contenant le glucose et l'isomérase pour ormer le fructose recherché, et investissements plus importants en -raison de la taille du matériel nécessaire pour contenir le lit d'isomérase-lide.En outre, à mesure que la profondeur du lit augmente, le lit a de plus en plus tendance à se tasser en raison des hautes pressions qu'il faut utiliser pour faire passer la solution contenant le glucose à travers le lit. Par exemple,un lit rblativementpeu-profond ne peut se tasser que dans une faible mesure, tandis que dans un lit plus profond le tassement peut être beaucoup plus important. Quand ceci se produit, la perte de charge dans le lit s1 accroît dans une telle mesure -que la pression nécessaire pour faire passer la solution de glucose à travers le lit risque d'être extraordinairement élevée, et même si élevée qu'on ne peut utiliser de matériel de construction classique pour contenir le lit. L'indice de stabilité de l'isomérase de glucose liée doit être d'au moins 50 heures, de préférence d'au moins 300 heures environ, et au mieux d'au moins 400 heures. Pour former l'isomérase de glucose liée, on peut procéder de n' importe quelle manière commode tant que l'isomérase de glucose liée conserve les caractéristiques indiquées ci-dessus on considère que l'isomérase du glucose peut être lié à un support inerte, Par exemple, l'isomérase du glucose peut être liéeà de la DEAE-cellulose (diéthylaminoéthyl cellulose) ou à une matière semblable, et on obtient alors d'excellents résultats. Bien entendu, pour réaliser la liaison, il faut séparer l'isomérase de glucose des cellules et il ne doit pas y avoir de substances gênantes pendant la liaison. On peut réaliser la liaison dans un milieu aqueux ou bien dans une solution de sucre, par exemple dans un sirop de mais.L'isomérase du glucose peut aussi être liteau sein de supports inertes soit en compagnie d'une matière cellulaire soit à l'état relativement pur. Diverses matières polymères peuvent convenir pour cela, mais bien entendu la porosité de ces matières doit être suffisante pour permettre au glucose de venir en contact avec 1' isomérase du glucose. Quand l'isomérase est lioeà un support finement divisé tel que la DEE-ceIluIose, il vaut mieux mettre en oeuvre le procédé de l'invention en faisant passer la solution contenant le glucose à travers un lit relativement peu profond de la DEAE-cellulose. Par exemple, on considère que la profondeur du lit de l'isomérase de glucose liS doit être dc quelques millimètres à une dizaine de centimètres environ. lia section transversale du lit doit pourtant être grande. Il est préférable que le rapport de la profondeur du lit à sa largeur soit compris entre 0,01. et 0,1 environ, ou mieux entre 0,02 et 0,05 environ. Ceci offre les avantages suivants : la perte de charge dans le lit est faible, et le tassement du lit' est minime. Cependant, comme le lit est relativement peu profond, on observe une plus forte tendance à la création de cheminements. La création de tels cheminements se traduit par une utilisation inefficace de l'isomérase du glucose. Si au moins deux lits, de préférence au moins six lits, d'isomérase de glucose liée sont disposés en série et s'il est prévu un moyen pour brasser l'effluent du lit précédent avant qu'il traverse le lit suivant, tous cheminements qui pourraient se créer n'auraient pas d'effet sérieux sur le rendement du procédé de l'invention. Un appareil connu dans la technique que l'on peut utiliser pour cela est un filtre-presse "à feuilles" Un tel filtre-presse comprend un ensemble d'Qlémentsfiltrants plats("les feuilles") qui sont montés verticalement au horizontalement dans un. réservoir cylindrique. Les feuilles peuvent être circulaires ou rectangulaires et possèdent des surfaces filtrantes sur leurs deux faces. Le grand axe du réservoir cylindrique peut etre horizontal ou vertical Chaque feuille du filtre-presse peut se composer d'un écran épais ou d'une plaque rainurée sur lequel ou laquelle est adapté un milieu filtrant tel qu'une étoffe tissée ou une fine toile métallique.On peut mettre 1 'isomérase du glucose, liée à un support inerte, en suspension dans une solution contenant le glucose, et pomper cette suspension à travers le filtre-presse à feuilles de manière à recouvrir également chaque feuille avec l'enzyme liée. La pression appliquée à la solution maintiendra sur les feuilles, dans le cas d'un filtre-presse à feuilles vertical, l'isomérase du glucose liée. On peut ensuite pomper une solution contenant du glucose à travers le filtre-presse à feuilles et, pendant que cette solution traverse chaque lit d'isomérase de glucose liée, l'isomérisation se produit. La quantité de fructose formée dépendra du laps de temps pendant lequel la solution de glucose aura été en contact avec l'enzyme liée. La composition exacte de la solution contenant le glucose après isomérisation, variera suivant les conditions dans lesquelles le procédé aura été mis en oeuvre. Dans le Tableau I ci-dessous sont données les caractéristiques essentielles de solutions contenant du glucose, isomérisées, obtenues selon le procédé de la présente invention. TABLEAU I CARACTERISTIQUES DE SOLUTIONS CONTENANT DU FRUCTOSE NON RAFFINEES (POURCENTAGES MESURES A SEC) Glucosex Fructosex Polysaccharidex Psicosex Candresxx Unités de coloration Interval- 30 à 60 10 à 54 0 à 50 0 à 1 0,1 à 0,5 0 à 2,0 le type Interval- 30 à 60 10 à 54 0 à 30 0 à 0,5 0,1 à 0,2 0 à 0,05 le préférential Moilleur 30 à 60 10 à 54 0 à 30 0 à 0,1 0,05 à 0,1 0 à 0,03 intervalle xLa quantité de saccharide dépend principalement du produit recherché. xxComposées principalement de sels métalliques qui sont présents pendant l'isomêrisation pour stabiliser et/ou activer l'isomérase du glucose. Afin de décrire plus clairement la nature de la présente invention, des exemples spécifiques vont en être donnés ci-dessous. il faut cependant comprendre que ceci est fait exclusivement à titre d'exemple et n'est destiné ni à délimiter le champ d'application de l'invention ni à limiter l'étendue des revendications annexées. EXEMPLE I Cet exemple illustre l'utilisation de l'isomérase du glucose liée à la DEAE-cellulose pour la transformation continue du glucose en fructose. On cultive Streptomyces Sp ATCC 21175 en aérobiose et en immersion, puis on sépare ce micro-organisme du bouillon du fermenteur par filtration. On met un kilogramme du gâteau de filtration en suspension dans 5 litres d'eau déminéralisée à laquelle on a ajouté 50 ml de chlorure de cobalt O,lM et 8 g d'un détergent cationique (Arquad 18-50, Armour Industrial Chemical Co.). On maintient à 600C la température de la suspension, et on maintient le pH à 6,7 - 6,8. Après 3 heures 3/4 d'agitation, on filtre la suspension sous vide sur du papier filtre Whatman n 1. On concentre le filtrat à 30 IGIU/ml, par évaporation sous vide. On dilue à1500 millilitres, à l'aide d'eau déminéralisée, 500 millilitres du filtrat concentré. Au filtrat on-ajoute cinq grammes de DEAE-cellulose (" Celiex-D" fabriqué par Bio-Rad Laboratories), on agite pendant une demi-heure et on filtre sur papier filtre Whatman Nal à l'aida d'un filtre à vide. On lave à l'eau le-g teau de filtration alors qu'il est encore sur le filtre, et on recueille les eaux de lavage avec le filtrat.Le gâteau de filtration contient une proportion mineure d'isomérase. Le filtrat purifié contient 9,2 IGIU/ml. On- met trente grammes de DEAE-cellulose en suspension dans 1500 ml d'eau, on agite énergiquement et on laisse reposer la suspension pendant 30 à 45 minutes. On décante la suspension surnageante pour séparer les" fines " de DEAE-cellulose. On répète cette opération quatre fpis puis on filtre la suspension sous vide. On ajoute vingt grammes (pesés à sec) du gâteau de filtration de la DEAE-cellulose, au filtrat purifié contenant 9,2 IGIU/ml, et on agite pendant une demi-heure à température ambiante. On filtre la suspension et on récupère un gâteau de filtration humide comprenant la DEAE-cellulose sur laquelle est adsorbée l'isomérase. lie gâteau de filtration humide contient 215 IGIU/g.On met 6,25 g du gâteau de filtration humide en suspension dans 50 ml d'une solution aqueuse contenant 0,001 mole de chlorure de cobalt par litre, 0,005 mole de sulfite de magnésium par litre et 0,1 mole de chlorure de sodium par litre. on verse cette suspension dans une colonne de 1 cm de diamètre et on laisse décanter.La partie inférieure de la colonne contient une couche peu épaisse de laine de verre pour retenir la DEhE-cellulose. On ouvre l'orifice inférieur de la colonne et, quand la hauteur du lit de DEAE-cellulose atteint 25 cm, on fait passer à travers le lit 350 ml d'une solution aqueuse contenant 0,001 mole de chlorure de cobalt par litre, 0,005 mole dc sulfite de magnésium par litre et 0,1 mole de chlorure de sodium par litre, pour éliminer les matières colorées et les autres impuretés de la DEAE-cellulose. On fait passer dans la colonne, à la cadence de 0,2 ml/mn, une solution de glucose de pH 6,5 contenant 3 moles de glucose par litre, 0,001 mole de chlorure de cobalt par litre et 0,005 mole de sulfite de magnésium par litre. On maintient à 60 C la température de la colonne. Le taux de conversion du glucose en fructose est de 49,6 pour cent au bout de 6 heures et de 45,0 pour cent au bout de 186 heures. L'indice de stabilité est de 198 heures. EXEMPLE II Cet exemple illustre l'utilisation a'isomérase de glucose liée à une résine synthétique poreuse d'échange d'anions pour transformer en continu le glucose en fructose. On sépare l'isomérase du glucose des cellules1 de Streptomyces Sp ATCC 21175 et on la purifie de la manière décrite à l'Exemple I. On place cent grammes d'Adberlite IRA-938 (Rohm & Haas) dans une colonne de 2,6 cm de diamètre. La hauteur du lit d'Amberlita IRA-938 est de 37 cm. On maintient la colonne à 60 C. On traite la colonne en y faisant passer, successivement, 500 ml de soude 1,5N, 1000 ml d'eau déminéralisée, 1000 ml d'acide chlorhydrique 2M, et 1000 ml d'eau déminéralisée. A 1480 ml d'une solution partiellement purifiée d'isomérase de glucose purifiéc selon l'Exempie I, à une température de 500C, on ajoute 100 g d'Amberlite IRA-938. On agite la solution pendant deux heures puis on filtre. On fait passer le filtrat à travers le lit d'Amberlite IRA-938 à la cadence de 3 ml/mn. On lavc ensuite le lit avec 100 ml d'eau déminéralisée. Le lit contient 3430 IGIU. On fait passer à travers le lit, à la cadence de 3,6 ml/mn, une solution contenant du glucose, de pH 6,5, contenant 3 moles de glucose par~litre, 0,001 mole da chlorure de cobalt par litre et 0,005 mole de sulfite de magnésium par litre. On maintient à 60 C environ la température de la colonne. Le taux de conversion du glucose en fructose est de 21,9 pour cent après que la colonne a fonctionné pendant 41 heures, et de 19,5 pour cent au bout de 210 heures. On estime à environ 600 heures l'indice de stabilité. REVENDICATIONS 1. Procédé de transformation enzymatique du glucose en fructose, caractérisé en ce que : on forme une solution contenant du glucose dont la viscosité est de 0,5 à 100 centipoises et le pH de 6 à 9 et qui contient de 5 à 80 pour cent en poids de glucose / et on maintient ladite solution à une température de 20 à 80 C, pendant qu'on fait passer ladite solution à travers un lit d'isomérase de glucose liée dont l'activité est au moins égale à 3 IGIU par centimètre cube de lit et dont l'indice de stabilité est au moins de 50 heures, à un ébit tel que jusqu'à 54 pour cent environ du glucose sont transformés en fructose, la coloration dela solution transformée est augmentée de moins de deux unités de coloration, et il n'y a pas de production notable de psicose 2.Procédé selon la revendication 1, caractérisé en ce que la viscosité de a solution contenant le glucose est de 2 à 20 centipoises- et son pH de 6,5 à 8. 3. Procédé selon la revendication 1 ou 2, caractérisé en ce que la solution contenant le glucose contient de 40 à 60 pour cent en poids de glucose et a un pH de 7 à 8. 4. Procédé selon l'une quelconque des revendications 1 à 3, caractérisé en ce que lit d'isomérase de glucose liée contient au moins 20 IGIU par centimètre cube de lit. 5. Procédé selon l'une quelconque des revendications 1 à 4, caractérisé entre que l'indice de stabilité de l'isomérase de glucose liée est au moins de 300 heures. 6. Procédé selon la revendication 5, caractérisé en ce que l'indice de stabilité de l'isomérase de glucose liée est au moins de 400 heures. 7. Procédé selon Prune quelconque des revendications 1 à 6, caractérisé en ce que l'isomérase du glucose est liée à de la DEAE-cellulose. 8. Procédé selon l'une quelconque des revendications 1 à 7, caractérisé en ce que le lit présente un rapport profondeur/largeur de 0,01 à 0,1. 9. Procédé selon la revendication 8, caractérisé en ce que le lit présente un rapport profondèur/largeur de 0,02 à O, 05. lo. Procédé selon l'une quelconque des revendications 1 à 9, caractérisé en ce-qu'on fait passer la solution contenant le glucose à travers au moins deux lits, disposés en série, de l'isomérase de glucose liée. 11 Procédé selon l'une quelconque des revendications 1 à 6 ou 8 à lo, caractérisé en ce que l'isomérase de glucose est liée à une résine synthétique d'échange d'anions.