Brevet FR2218881A1 — publié le 19740920

La présente invention concerne un nouvel acide (diméthoxy-2,4 phényl)-3 crotonique et ses sels et leurs applica tions en thérapeutique. On sait qu'en faisant réagir du m-diméthoxybenzène avec de l'acétyl-acétate d'éthyle en présence d'acide pyrophosphorique, on peut obtenir un mélange de méthoxy-7 méthyl4 coumarine et de trans-(diméthoy-2,4 phényl)-3 crotonate de méthyle ; ce dernier produit répond à la formule D'après la littérature, l'acide obtenu par saponification de cet ester méthylique a un point de fusion de 148 - 149 (Narayana et colt., J. Org. Chem, vol. 27, 4704, 1962) ou, selon des auteurs plus anciens, 1450 (von Pechmann & BR J.B. Cohen, Ber. 16, 2, 179, 1884). Dans-le brevet spécial de médicament NO 7401 M, on a décrit, sous le nom diacide (diméthoxy-2,4 phényl)-3 crotonique, un produit que l'on obtient à partir d'hydroxy-7 méthyl-4 coumarine par action de sulfate diméthylique en milieu éthanolique. Or, la Demanderesse a trouvé que ce produit était en fait constitué de deux isomères un acide (diméthoxy-2,4 phényl)-3 crotonique ou les groupes phényle et carboxy sont en position cis par rapport à la double liaison de la channe et que l'on appellera acide cis (diméthoxy-2,4 phényl)-) crotonique et un acide où les groupes phényle et carboxy sont en position trans et que l'on appellera acide trans(diméthoxy-2,4 phényl)-3 crotonique cis trans La présente invention a pour obJet l'acide cis-(diméthoxy-2,4-phényl)-3 crotonique pur, ses sels d'addition à des bases minérales ou organiques pharmaceutiquement acceptables, son procédé de préparation et ses applications en thérapeutique. Cet acide n a encore jamais été décrit. Selon l'invention, pour produire l'acide cis-(diméthoxy-2,4 phényl)-3 crotonique, on soumet la méthyl-4 méthoxy-7 coumarine à une méthylation au moyen de sulfate de méthyle en grand excès, en milieu nettement et constamment basique et à une température ne dépassant pas 60bu. L'exemple suivant, non limitatif, illustre la préparation de 11 acide cis (diméthoxy-2,4) phényl-3 crotonique EXEMPLE: - Dans un réacteur de 4 litres, on mélange 190 g (1 mole) de méthyl-4 méthoxy-7 coumarine pure (F = 1600) dissoute dans 1 litre de méthanol et 280 g (7 moles) d'hydroxyde de sodium dissous dans 1 litre d'eau. On ajoute lentement, en 4 ou 5 heures et en une seule fois, 757 g (6 moles) de sulfate de méthyle en vérifiant constamment que le pH reste au moins égal-à 10 et que la température ne dépasse par 400C. On laisse quelques heures au repos et on termine par un reflux de 30 minutes, le milieu devant toujours rester basique (pH > 10). - On acidifie la solution par HCl et on élimine du précipité obtenu la méthyl-4 méthoxy-7 coumarine qui n'aurait pas réagi par un lavage énergique du précipité avec une solution à 2 % de Na2CO3 pendant 3 heures à 300C. On filtre la solution carbonatée et on fait précipiter l'acide cis-(diméthoxy-2,4 phényl)-3 crotonique que l'on recristallise dans de l'éthanol. F=1588G Rdt : 70 % environ. L'étude en résonance magnétique nucléaire (RMN) de cet acide a été faite. Les spectres RMN sont déterminés au moyen d'un appareil VARIAS modèle A60 ; les signaux décrits sont exprimés en unité de S par rapport au tétraméthylsilane. Le solvant utilisé pour cette étude est le chloroforme au deutérium (CDCl3). Les pics earactéristiques sont les suivants - les groupes diméthoxy se présentent sous la forme d'un doublet centré à 3,77 ppm, - ie CH3 a-éthylénique se présente sous la forme d'un doublet centré à 2,13 ppm. Si l1on compare le spectre de RMN de l'acide cis (diméthoxy-2,4 phényl)-3 crotonique à celui de l'acide trans (diméthoxy-3,4 phényl)-3 crotonique on constate que les mêmes pics caractéristiques apparaissent niais que certains sont décalés entre eux. Ainsi le CHj a éthylénique se présente sous la forme d'un doublet centré à 2 > 53 ppm et les groupes diméthoxy sous la forme d'un pic unique à 3,86 ppm pour l'isomère trans qui fond à 148dC. On prépare les sels alcalins et alcalinoterreux de l'acide cis-(diméthoxy-2,4 phényl)-3 crotonique selon la méthode suivante A 1 mole d'acide cis-(diméthoxy-2,4 phényl)-3 crotonique en solution dans de l'alcool éthylique, on ajoute la quantité stoechiométrique d'hydroxyde ou de carbonate alcalin ou alcalino-terreux dissous dans de 11 eau. On chauffe la solution jusqu'à dissolution complète des constituants puis on concentre sous vide afin de faire précipiter le sel que l'on recueille par filtration. Les sels suivants ont été préparés a) Sel de sodium cristaux blancs F : 2580C environ b) Sel de potassium cristaux blancs F : 110 - 13000 (fusion pâteuse) c) Sel de magnésium cristaux blancs F : 1200- 13000 d) Sel de lithium cristaux blancs F. 1750C environs e) Sel de calcium cristaux blancs F : 120 - 1300C (fusion pâteuse) On peut également préparer les esters de l'acide cis-(diméthoxy-2,4 phényl)-3 crotonique ; par exemple l'ester méthylique a été obtenu ainsi A 22,2 g (0,1 mole) d'acide dissous dans du méthanol, on ajoute 17 g (0,12 mole) d'iodure de méthyle ; on laisse au reflux 5 heures puis on ajoute de l'eau, on extrait l'acide qui n' a pas réagi avec du bi bicarbonate de sodium, puis on extrait l'ester par du benzène. On lave ensuite, sèche et distille. L'ester méthylique se présente sous la forme d'un liquide incolore Eb 14 mm : 180 C nD20 = 1,5446 On prépare les sels d'addition de l'acide cis-(diméthoxy-2,4 phényl)-3 crotonique à des bases organiques de la manière suivante A 1 mole d'acide en solution alcoolique on ajoute la quantité stoechiométrique du composé organique correspondant dissous dans une solution hydro-alcoolique. On chauffe le mélange obtenu jusqu'à obtenir une solubilisation complète et on concentre la solution sous vide pour faire précipiter le sel désiré. A titre d'exemple, les sels suivants ont été préparés a) Sel d'addition à la méthionine cristaux blancs F : 1540C b) Sel d'addition à la l-eystéine cristaux blancs F : piteux à partir de 170 OC c) Sel d'addition à la choline le produit se présente sous forme d'une gomme pâteuse. L'acide cis(diméthoxy-2,4 phényl)-3 crotonique et ses sels ont été soumis à des essais pharmacologiques. Toxicité La toxicité a été déterminée chez la souris par voie orale et par voie intrapéritonéale par la méthode des 1,Log-probits". Les DL 50 sont indiquées dans le tableau I suivant TABLEAU I Composé DL50 (mg/kg) DL 50 (mg/ki voie orale voie intrapéritonéale acide 1500 1250 sel de 3000 1300 magnésium Activité cholérétique L'activité cholérétique de l'acide et de ses sels a été recherchée. Cette étude a été faite chez des rats mules de 300 g anesthésiés à l'uréthane (l g/kg), après une laparotomie le canal cholédoque est cathétérisé et la bile est recueillie dans une éprouvette graduée ; le composé à étudier en suspension dans une solution à 1/100 de carboxyméthylcellulose a été administré par voie intraduodénale à des lots de 20 à 40 rats. Un lot témoin ne reçoit que la carboxy-méthylcellulose. Le débit biliaire de base a été mesuré pendant 1 heure avant l'administration du composé puis pendant des périodes consécutives d'une heure. Les coefficients d'activité (C) sont les rapports entre le débit horaire après administration du composé et le débit horaire avant administration (témoins). Les résultats sont rassemblés dans le tableau II suivant. T A B L E A U II Composé C (1ère heure) C (2ème heure) C (3ème heure) Acide 2,06 1,70 1,28 Témoin l,O9 1,04 1,18 Sel de magnésium 2,52 198 1,38 Témoin 0,87 0,90 0,87 Sel de sodium 2,25 1,59 1,07 Témoin 1,18 1,11 1 Sel de lithium 2,24 1,37 1,02 Témoin 1,18 1,11 1 Sel de potassium 2,35 1,50 1,24 Témoin 1,18 1,11 1 Ester méthylique 1,33 1,28 1,13 Témoin 0,80 0,77 0,74 Sel d'addition à la méthionine 1,75 1,31 1,00 Témoin 0,9 0,87 0,84 Sel d'addition à la choline 1,89 1,40 1,24 Témoin 1,00 1,03 1,03 Sel d'addition à la cystéine 2,00 1,48 1,23 1,00 1,03 1,03 A titre de comparaison, l'activité cholérétique de l'acide trans-(diméthoxy-2,4 phényl)-3 crotonique est la suivante: C (1ère heure) C (2ème heure) C (3ème heure) Acide trans 1,30 l,25 1,06 Témoin 1,09 1,04 1,18 Activité spasmolytique in vitro Seuls les sels de l'acide cis-(diméthoxy-2,4 phényl)-3 crotonique qui sont solubles ont été étudiés. Cette activité est recherchée a) sur la vésicule biliaire isolée du cobaye Après sacrifice de deux cobayes de 350 à 400 g, on prélève les vésicules biliaires et on les monte en channe dans une cuve à organe isolé dans un bain de tyrode à 370C oxygéné. Les contractions sont provoquées par le chlorhydrate de pilocarpine a la concentration de lO 6 g/ml. On enregistre les contractions à l'aide d'un stylet inscripteur. L'intensité de la contraction témoin provoquée par le chlorhydrate de pilocarpine est comparée à celle qui est obtenue apres imprégnation des organes avec le produit à tester. On détermine les doses efficaces 50 qui diminuent de moitié les contractions. b) sur le duodénum isolé de rat ou de lapin Après sacrifice de l'animal, un fragment de duodénum est monté dans une cuve à organe isolé et immergé dans du liquide de tgrode à 38 et oxygéné. L'intensité de la contraction témoin provoquée par de l'acétylcholine à la concentration de 10 -g/ml est coin- parée à l'intensité de la contraction obtenue après imprégnation de l'organe avec le produit à étudier. On détermine les doses efficaces~50 qui diminuent de moitié les contractions. Les résultats sont indiqués dans le tableau III ci-après. T A B L E A U III Composé DE50 (g) DE50 (g) vésicule biliaire duodénum isolé sel de -3 magnésium lO 3 lO-) (rat) sel de lithium # lO ) 10-3 (rat) Activité spasrnolytiue in vivo Cette étude est faite chez le chien. L t animal est anesthésié au chîoralose > après laparo- tomie une perfusion des voies biliaires est établie. Une sonde est fixée au fend de la vésicule, les canaux hépatiques sont ligaturés de même que le pylore ; un cathéter en polyéthylène est placé dans le duodénum à quelques centimètres en aval de l'embouchure du cholédoque. Un flacon de Mariotte renfermant du liquide de Tyrode destiné à la perfusion est placé en charge sur la sonde qui pénètre dans la vésicule, un dispositif de réchauffement permet de tiédir le liquide avant son arrivée à la vésicule. Le liquide de perfusion traverse la vésicule biliaire, le canal cholédoque et le sphincter dtOddi, et il s'échappe par le duodénum.Son écoulement provoque l'aspiration de bulles d'air par le tube du vase de Mariotte ; nous mesurons le débit de liquide en comptant le nombre de bulles produites pendant un temps déterminé. Le chlorhydrate de pilocarpine bloque l'écou- lement de liquide à la dose de 100 à 200 Y /kg. Les résultats sont exprimés en nombre de bulles d'air émises dans le flacon de Mariotte. Les résultats sont les suivants pour le sel de magnésium de l'acide cis-(diméthoxy-2,4 phényl)-3 crotonique. Nombre de bulles avant pilocarpine = 24/mn Nombre de bulles après pilocarpine = 2/mn Nombre de bulles après pilocarpine et sel de magnésium = 26/mn Le spasme induit par le chlorhydrate de pilocarpine est levé par l'injection de 100 mg/kg de sel de magnésium -par voie veineuse -. Il ressort des résultats indiqués dans les différents tableaux que l'acide cisXdiméthoxy-2ss4 phényl)-D crotonique et ses sels sont peu toxiques et possèdent une activité cholérétique et une activité spasmolytique. Ils peuvent donc tre utilisés en thérapeutique humaine et en thérapeutique vétérinaire pour le traitement - de troubles liés à une insuffisance hépatique: - hépatites inflammatoires ou infectieuses - petites insuffisances hépatiques et leurs manifestations: migraines digestives nausées dispepsie - intoxications alimentaires ou médicamenteuses - de troubles liés à un dis fonctionnement du tractus biliaire - cholestases - diskynésies biliaires - coliques vésiculaires - troubles hépatiques liés aux lithiases biliaires - migraines vésiculaires - cholecystites non lithiasiques - suites de cholecystectomie Ils peuvent être présentés sous la forme de comprimés, de comprimés dragéifiés, de gélules ou de granulés. Des exemples de compositions pharmaceutiques sont les suivants Comprimé dragéifié sel de magnésium de l'acide cis-(diméthoxy-2,4 phényl)-3 crotonique 50 mg lactose 52 mg sucre glace o8 mg amidon mais 25 mg autres excipients q.s.p. 150 mg excipients de dragéification qsp 1 dragée La posologie quotidienne peut tre de 3 à 4 comprimés dragéifiés. Gélule sel de magnésium de l'acide cis-(diméthoxy-2,4 phényl)-3 crotonique 50 mg amidon de blé 200 mg excipients astres q.s.p. 1 gélule N" 2 La posologie quotidienne peut aller de 3à 4 gélules. Granulé sel de magnésium de l'acide cis-(diméthoxy-2,4 phényl)-3 crotonique 1 g sucre glace et cristallisé 89 g acide citrique 2J5 g citrate de sodium 3,5 g arme "orange sangria" 3g autres excipients pour 100 g de granulés La posologie quotidienne peut être de 2 mesures de 2,5 g. REVENDICATIONS 1.- Acide cis-(diméthoxy-2,4 phényl)-3 crotonique répondant à la formule et fondant à t58 C, ses sels alcalins et alcalino-terreux, ses sels d'addition à des bases organiques et ses esters. 2.- Sel de magnésium de l'acide cis-(diméthoxy2,4 phényl)-3 crotonique. 3.- Sel de l'acide cis-(diméthoxy-2,4 phényl)-3 crotonique choisi dans le groupe constitué par les sels de sodium, de lithium, de calcium et de potassium. 4.- Sel addition de l'acide cis-(diméthoxy-2,4 phényl)-3scrotonique choisi dans le groupe constitué par les sels d'addition à la méthionine, à la 1-cystéine et à la choline. 5.- Procédé de préparation de l'acide cis (diméthoxy-2,4 phényl)-3 crotonique, procédé caractérisé en ce qu'on fait réagir la méthyl-4 méthoxy-7 coumarine avec du sulfate de méthyle en excès, en milieu nettement et constazzent basique et à une température ne dépassant pas 60 C. 6.- Médicament caractérisé en ce qu'il contient comme principe actif l'un des composés spécifiés dans l'une quelconque des revendications i à 4. 7.- Médicament selon la revendication 6, caractérisé en ce qu'il contient le sel de magnésium de l'acide cis-(diméthoxy- 2,4 phényl)-3 crotonique.