Brevet FR2248028A1 — publié le 19750516

La présente invention concerne des médicaments pour le traitement des affections hépatiques liées à la détérioration des membranes biologiques sous 11 effet de processus de peroxydation. Ce sont les phospholipides qui constituent les éléments essentiels structuraux des membranes biologiques assurant les fonctiolzr indispensables à la vie du foie et d'autres organes. Cependant, les phospholipides sont sensibles aux processus de peroxydation dans la cellule, ces processus augmentant particulièrement dans des conditions défavorables. Il se forme alors aussi bien des radicaux libres, des hydroperoxydes, que des produits secondaires. De ce fait, la couche de phospholipides perd.sa compacité structurale et la membrane biologique n'est pas capable de remplir plusieurs de ses fonctions. Une teneur insuffisante en anti-oxydants naturels provoque des processus pathologiques, à savoir la maladie des irradiations (mal des rayons), la dystrophie hépatique, les conditions inflammatoires. Cela peut aussi conduire à un vieillissement de l'organisme. On connais l'action protectrice de certains composés synthétiques, à savoir le diphénylphénylenediamîne, le butyloxytoluol, dibunol et la vitamine E, sur la peroxydation dans les membranes biologiques et les eellules. Cependant, ces corps ont une toxicité élevée et des effets secondaires indésirables (diphénylphénylènediamine), ou sont des. substances conteuses (vitamine E). L'invention vise à éliminer les inconvénients indiqués. On s'est donc proposé de créer un nouveau médicament pour le traitement des affections hépatiques qui, de pair avec une activité élevée, ne donne pas des effets secondaires. Ce problème a été résolu gràce à un produit médicamenteux qui, conformément à l'invention, contient comme principe actif les 2, 6-diméthyl-3, 5-dicarbonyl (ou 3,5-dicyano)-1,4dihydropyridines de formule générale suivante dans laquelle R est un acyle, un carbalcoxy, des carbalcoxy substitués, un carbaryloxy, des groupes carbamoyle ou cyano substitues ;R1 est l'hydrogène, un alcoyle, un aryle ou le j-pyridyle. Il est avantageux d'utiliser le produit médicamenteux indiqué, contenan + e principe actif à raison de 0,1 à 0,6 g, en combinaison avec un excipient pharmaceutique. Il est recommandé d'employer le médicament pour le traitement des affections hépatiques qui contient comme principe actif la 2,6-diméthyl-3,5-dicarbéthoxy-1,4dihydropyridine de formule générale ci-dessous La 2,6-diméthyl-3,5-dicarbéthoxy-l,4-dihydropyri- dine se présente sous la forme dune poudre de- cristaux très fins, de couleur jaune, peu soluble dans l'eau : la solubilité à la température de 200C est égale à 1.10-5M. lie point de fusion est de 176 à l830C. On peut introduire le produit de l'invention par voie orale sous la forme d'une poudre de 2,6-diméthyl-3,5- dicarbéthoxy-1,4-dihydropyridine. En outre, on peut administrer le produit de l'invention sous forme de comprimés, de dragées, de tablettes contenant le principe actif en association avec un excipient pharmaceutique. Il est recommandé alors d'utiliser le produit médicamenteux sous forme de comprimés contenant 0,1 à 0,6 g de 2,6-diméthyl-3,5-dicarbéthoxy-1,4-dihydropyridine associée à un excipient pour comprimés. 1'étude expérimentale sur les animaux a montré que le produit de l'invention, en dose unitaire de 32.000 mg par kg de poids des souris blanches (per os) est bien toléré par l'animal. Des doses de 20 mg par kg de poids des rats blancs, quotidiennement pendant 6 mois, et de 300 mg par kg de poids des poulets pendant 1 mois, n'ont manifesté aucune toxicité dans les expériences chroniques. L'inhibition des processus de peroxydation par les médicaments en question a été démontrée dans un modèle de membranes-liposomes phospholipidiques bimoléculaires, largement répandues en tant que modèles de biomembranes. On prépare les membranes-liposomes phospholipidiques bimoléculaires à partir de la lécithine pure. On provoque l'initiation de la peroxydation du phospholipide par l'hémoglobine en concentration de 2.10-6 M. On juge de la réaction de peroxydation dans la cuvette expérimentale et la cuvette témoin d'après la diminution de la concentration en oxygène du mélange rzactionnel. On détermine la variation de la concentration en oxygène par la méthode polarographique et on effectue 11 enregistrement sur un appareil inscripteur. l'inhibition de l'oxydation est exprimée par le temps indispensable à la consommation de 35 ffi d'oxygène dans l'essai avec le composé à tester (5.10 5 M) et dans l'essai témoin. Les résultats obtenus sont présentés dans le tableau 1. Action inhibitrice des 3,5-dicarbonyl- (ou 3,5 dicyano)-1,4-dihydropyridines sur la consommation d'oxygène par les membranes-liposomes bimoléculaires phospholipidiques R Ri Inhibition d oxydation 1 COOCH3 H 2,3 2 COOC2H5 H 2,5 3 COOC5Hll H 2,4 4 COO/CH2/2Oc6H13 H 2,0 5 COOCH2C6H5 H 1,4 6 COOC2H5 O6H4/CH3/2(p) 1,2 7 COOC6H4CH3(p) H 1,6 8 COOC6H40H (P) H 2,0 9 COCH3 H 2,4 10 COCH3 CH3 1,1 11 COCH C6H5 1,7 12 CONHC6H5 H 1,2 13 CONHC5H4N (&alpha;;) C5H4N (?) 1,2 14 CN H 1,5 Tous les composés indiqués dans le tableau 1 ralentissent la consommation d'oxygène par les liposomes. La protection contre la peroxydation concerne aussi des membranes biologiques dans lesquelles l'effet thérapeutique positif se révèle. En tant que modèle des processus pathologiques dans le foie, l'organe le plus sensible à la peroxydation lipidique des biomembranes, on choisit ie modèle du toxique hépatotrope, à savoir le sulfate d'hydrazine, qui permet de reproduire chez les animaux l'image de la dégénérescence graisseuse du foie. Les essais ont été effectués sur des rats blancs bâtards, mâles, d'un poids compris entre 200 et 300 g. Le sulfate d'hydrazine a été injecté sous forme d'une solution aqueuse à 6 %, à raison de 0,15 ml par 100 g de poids corporel, une seule fois, ou à raison de 0,30 ml par 100 g de poids corporel deux fois, à un intervalle de vingt-quatre heures. le produit de l'invention est introduit par voie intra-péritonéale ou orale à raison de 200 mg par kg de poids corporel, sous forme d'une suspension aqueuse additionnée de tween. les animaux sont tués par décapitation immédiatement avant les recherches biochimiques.L'homogénéisation du foie est effectuée à une température de 0 C dans un homogénéisateur en téflon vitreux à 1500 tr/mn, pendant 1,5 minutes, dans 0,25 mole d'une solution aqueuse de sacchàrose, contenant 1 mole d'acide éthylènediamine-tétra-acétique (pour déterminer l'enzyme glucose-6-phosphatase) et dans 0,15 mole d'une solution tampon phosphatique à un pH de 7,5 (pour déterminer les peroxydes de lipides) L'activité de la glucose-6-phosphatase (3.1.3.9.) selon Svensen a été déterminée sur l'homogénat de foie. Les peroxydes de lipides ont été déterminés au moyen d'acide thiobarbiturique. On calcule une quantité conventionnelle de peroxydes de lipides selon la formule suivante : A =4E-xB x 100, dans laquelle A désigne le nombre de peroxydes des lipides en unités de densité optique ; B désigne la dilution de l'homogénat de foie ; E = E de l'analyse - E du contrôle - densité optique. les résultats obtenus ont été soumis à un traitement statistique et sont résumés dans le tableau 2. Tableau 2 Variations des peroxydes des lipides et de l'activité de la glucose-6-phosphatase dans les homogénats du foie des rats, atteints de sulfate d'hydrazine,\après l'administration du produit de l'invention. NN Substance Durée Nombre Peroxydes Glucose-6 adminis- d'action d'ani- de lipides phosphatase trée du sul- maux (unités unités fate convention- conventionnel dthydra- nelles) les) zine M # R 1 Norme - 18 82 + 19 21,7 + 1,7 2 N2H4.H2SO4 24 h 7 87#19 > 0,05 16,6 + 3,3 3 ~"~"~"~ 3 j 6 133#16 4 ~"~"~"~ 7-10 j 8 79#20 > 0,05 19,9#3,6 > 0,05 Injection intra-péritonéale du produit de l'invention 5 N2H4.H2SO4+ produit de l'in- 24 h 5 86+7 > 0,05 15,8#1,0 > 0,05 vention 6 ~"~"~"~ 3 j 4 123#13 > 0,05 24,0#4,0 > 0,05 7 ~"~"~"~ 7-10 j 8 77#21 > 0,05 22,0#2,2 > 0,05 Introduction orale du produit de l'invention 8 ~"~"~"~ 24 h 7 89#22 > 0,05 24,3#4,1 0,05 20,4#6,4 > 0,05 10 N2H4.H2S04 + 3 j 8 74#2,0 0,05 produit de l'invention (2 fois) Dégénérescence graisseuse du foie 11 N2H4.H2SO4 4 j 6 120+19 12,8+2,3 (2 fois) 12 N2H4.H2SO4+ 4 j 6 78#18 produit de l'invention (2 fois) La première partie du tableau 2 montre les résultats- ae l'évolution des processus de peroxydation, 1' aug- mentation de la teneur en peroxydes de lipides et l'altération du réticulum endoplasmique (l'abaissement de l'activité de la glucose-6-phosphatase) au cours des 3 premiers jours après l'introduction du sulfate d'hydrazine. l'action pro-oxydante du sulfate d'hydrazine rend ce modèle de lésion hépatique applicable à l'étude des propriétés anti-oxydantes des médicaments en question. Des expériences préalables ont montré que le produit de l'invention lui-même ne provoque pas d'écart entre les tests susmentionnés : la teneur en peroxydes de lipides est de 95+22 unités et l'activité de la glucose-6phosphatase est de 20,8 +2,5 unités (parmi les 6 cas). L'introduction du sulfate d'hydrazine entraîne l'augmentation de la teneur en peroxydes de lipides jusqu'à 150 ffi et l'abaissement de la teneur en glucose-6-phosphatase jusqu'à 59 % de la norme. Le produit de l'invention prévient la peroxydation des lipides ; cet effet est plus marqué en cas d'introduction double du médicament par voie orale, quand le taux de peroxydes de lipides est réduit à 162 % de controle jusqu'au niveau normal. La prévention de la peroxydation entraîne la normalisation fonctionnelle-du rzticulum endoplasmique qui se manifeste par l'augmentation de l'activité de la glucose-6phosphatase jusqu a la valeur témoin. L'action protectrice positive du produit de l'invention se manifeste également dans les cas de dégénérescence graisseuse grave, provoque par l'introduction double d'une dose élevée de sulfate d'hydrazine. La teneur en peroxydes de lipides, étant alors de 150 % de la norme, diminue jusqu'à 95 % après l'introduction double du médicament par voie orale. Ltactivité de la glucose-6-phosphatase croît de 59 % å~88 %. les exemples cités illustrent, toutefois à titre non limitatif, l'effet positif dans le cas de dégénérescence graisseuse, qui est fondé sur l'inhibition des processus de peroxydation dans les membranes biologiques- artificiels. En cas d'utilisation du médicament proposé pour le traitement des affections hépatiques (lésions nécrosiques du foie, dégénérescence graisseuse, hépatite infectieuse épidémique, etc.), il est recommandé d'administrer le produit de l'invention sous forme de poudre ou de comprimés en doses de 3 comprimés contenant de 0,1 à 0,6 g, de préférence 0,5 g, de principe actif, 3 fois par jour. Le médicament objet de l'invention est un inhibiteur des processus de peroxydation dans les modèles, à savoir les membranes biologiques ; il protège les cellules hépatiques lors d'une dégénérescence graisseuse. Le produit de l'invention possède une activité anti-oxydante (diminue le niveau de peroxydes de lipides, provoqué par le sulfate d'hydrazine) et peut servir comme stabilisateur non seulement des membranes biologiques du foie, mais aussi d'autres tissus de l'organisme. La haute activité spécifique du médicament en question et l'absence dtincidents secondaires permet de considérer ce médicament comme remède efficace pour le traitement des affections hépatiques dues aux troubles fonctionnels des membranes biologiques. le médicament de l'invention sous forme de poudre et de comprimés peut entre conservé pendant une longue durée dans des flacons en verre de couleur orange, bien bouchés. Bien entendu, l'invention n'est nullement limitée aux modes de réalisation décrits et représentés qui n'ont été donnes qu a titre d'exemple. En particulier, elle comprend tous les moyens constituants des équivalents techniques des moyens décrits ainsi que leurs combinaisons, si celles-ci sont exécutées suivant son esprit et mises en oeuvre dans le cadre des revendications qui suivent. REVRNDICATIONS 1 - Produit médicamenteux pour le traitement des affections hépatiques, caractérisé en ce qu'il contient, comme principe actif, des 2,6-diméthyl-3,5-dicarbonyl (ou 3,5 dicyano)-1,4-dihydro-pyridines de formule générale suivante : dans laquelle R est un acyle, un carbalcoxy, des carbalcoxy substitués, un carbaryloxy, des groupes carbamoyîe ou cyano substitués ; R1 est l'hydrogène, un alcoyle, un aryle ou le tA -pyrîdyle. 2 - Produit médicamenteux suivant la revendication 1, caractérisé en ce qu'il contient, comme principe actif, la 2,6-diméthyl-3,5-dicarbéthoxy-1,4-dihydropyriaine de formule ci-dessous : 3 - Produits médicamenteux suivant la revendication 1, caractérisé en ce qu'il contient ledit principe actif en association avec un excipient pharmaceutique. 4 - Produit médicamenteux suivant la revendication 3, caractérisé en ce qu'il contient ledit principe actif en quantités de 0,1 à 0,6 g 5 - Produit médicamenteux suivant la revendication 2, caractérisé en ce qu'il contient ledit principe actif en association avec un excipient pharmaceutique. 6 - Produit médicamenteux suivant la revendication 5, caractérisé en ce qu'il contient ledit principe actif en quantités de 0,1 à 0,6 g.