Brevet FR2216274A1 — publié le 19740830

L'invention a pour objet de nouveaux dans laquelle R représente le reste acyle d'un acide carboxylique ayant de 2 à 8 atomes de carbone. Le reste R est, de préférence, le reste acyle d'un acide alcane-carboxylique à chaîne droite ou ramifiée ou le reste acyle d'un acide carboxylique aromatique. On citera, comme exemples de restes acyles, les radicaux acétyle, propionyle, butyryle, triméthyl-acétyle, pentanoyle, hexanoyle, heptanoyle, benzoyle et octanoyle. L'invention concerne, en outre, un procédé la formule I, procédé caractérisé en ce que l'on fait fermenter un composé répondant à la formule générale II dans laquelle R a la même signification que dans la formule I, avec une culture mycétienne de l'espèce Calons tria decora. La fermentation avec Calonectria decora utilisées pour les fermentations de stércides avec des cultures de mycètes. C'est ainsi, par exemple, que l'on détermine, grâce aux essais préalables couramment effectués, les conditions réactionnelles les plus favorables pour une fermentation submergée en aérobiose. Après une préculture de la souche mycétienne dans un milieu nutritif couramment utilisé dans ce but, on ajoute le substrat ; celui-ci peut être sous la ferme d'une suspension, ou bien en solution dans un solvant, acétamide. Dans les conditions habituelles de fermentation, on peut faire réagir d'à peu près 100 mg à 1000 mg de substrat pour chaque litre de bouillon. La durée de la fermentation dépend de la concentration du substrat et des conditions de la fermentation ; on peut la déterminer au moyen des méthodes d'analyse classiques, par exemple au moyen de l'analyse de prises d'essai par chromatographie en couches minces. La fermentation terminée, on peut extraire du bouillon de culture le produit de la réaction à l'aide d'un solvant approprié non miscible à l'eau, par exemple le chlorure de méthylène, le tétrachloréthane, la méthyl-isobutylcétone, le benzène ou le toluène. Après concentration de l'extrait par évaporation, on peut purifier de la manière habituelle le produit brut obtenu, par exemple par chromatographie et/ou par recristallisation. Il était absolument imprévisible que l'on pût préparer à l'aide du procédé de l'invention, de manière simple et avec de bons rendements, les dihydroxy-12B,15a rale I, qui ne peuvent être .réparées que difficilement par des procédés purement chimiques. On a certes déjà décrit, dans le brevet allemand N[deg] 1 067 020, la possibilité d'hydroxyler des stéroides, en fonction de leur structure, par fermentation avec une culture mycétienne de Calonectria decora, soit en position 12beta , soit en position 15a , soit simultanément aux positions 126 et 15a.Il ressort cependant de l'exemple 3 du brevet en question que cette souche mycétienne est, Etant donné cet état antérieur de la technique, les spécialistes ne pouvaient prévoir que, dans les conditions du procédé de l'invention, les composés répondant à la formule générale II seraient dihydroxylés en position 12beta et 15a , sans qu'il y ait élimination du groupe acyloxy se trouvant en position 3beta ' prégnanones-20 répondant à la formule générale I constituent de précieuses substances intermédiaires pour la synthèse de stéroides,pharmacologiquement actifs, qui conviennent en particulier pour la préparation d'hétérosides du type di i̇talique. La synthèse d'hétérosides digitaliques peut s'effectuer selon des méthodes opératoires bien connues. C'est ainsi, par exemple, qu'il est possible d'estérifier partiellement les composés de formule I, étant donné qu'ils ne portent pas de groupe hydroxy libre en position 3beta , au moyen d'une quantité équivalente du chlorure de l'acide p-toluène-sulfonique dans la pyridine. On obtient prégnanones-20. On peut faire réagir celles-ci avec l'anhydride acétique dans la pyridine, ce qui donne les acyloxy-3g En faisant réagir ces composés avec le tétra-acétate de plomb, dans un mélange de benzène et de méthanol, on peut alors introduire un groupe acétoxy en 21. En chauffant ces composés diacétoxy-12 ,21 avec du carbonate de lithium dans le diméthylformamide, on peut les transformer en les acyloxy-3beta diacétoxy-128 ,21 (5beta )prégnéne-14 ones-20. On peut transformer ces composés 14 dans le dioxanne aqueux, avec le N-bromo-acétamide en présence On peut éliminer de ces bromhydrines l'atome de brome, en solution alcoolique, par hydrogénation à l'aide d'hydrogène, en présence de nickel de Raney. Il est possible de saponifier les hydroxy-14 prégnanone-20. En faisant réagir ce composé tétrahydroxylique, dans l'acide acétique glacial, avec le bromure de bromacétyle bromacétoxy-21 (5B )-prégnanone-20. Ce composé bromacétoxy peut être transformé en la di ȯxigénine dans les conditions décrites dans les premiers fascicules imprimés des demandes de brevets de la République Fédérale d'Allemagne Nos 1 643 012 et 1 643 055. La synthèse d'hétérosides digitaliques à partir de la digoxigénine est bien connue. L'exemple qui suit a pour but d'illustrer la présente invention. Les températures sont indiquées en degrés Celsius. EXEMPLE : On ensemence 500 ml d'une solution nutritive contenant : avec une culture sur gélose en couche penchée, vieille de deux semaines, de Calonectria decora (ATCC 14.767), puis on secoue pendant cinq jours à 30[deg]. La préculture ainsi obtenue sert à ensemencer un préfermenteur d'une capacité de 20 litres, qui est garni de 15 litres d'un milieu stérile contenant . ' 5,0 % de sucre d'amidon, 0,25 % de liqueur de macération du mais, 0,1 % de nitrate de sodium, 0,05 % de dihydrogéno-phosphate de potassium, 0,025 % de chlorure de potassium, 0,025 % de sulfate de magnésium et 0,001 % de sulfate de fer. On laisse croître la préculture pendant 72 heures à 29[deg], sous agitation (220 t.p.m) et avec aération (15 litres d'air par minute). On transfère 900 ml de cette préculture dans un fermenteur principal d'une capacité de 20 litres, qui est garni de 14,1 litres d'un milieu identique à celui du préfernenteur. On laisse croître la culture sous agitation et avec aération, pendant 24 heures à 29[deg], on y ajoute une solution stérilisée par filtration, de 3,0 g d'acétoxy-3beta (5beta )prégnanone-20 dans 150 ml de diméthylformamide, puis on fait fermenter pendant encore 40 heures. On filtre ensuite le produit de fermentation, puis on extrait le filtrat et le mycélium par la méthylisobutyl-cétone. On réunit les extraits et on les concentre sous pression réduite. On lave à deux reprises la fraction restante ainsi obtenue avec, à chaque fois, 100 ml d'hexane et on la recristallise dans un mélange acétone/hexane. On prégnanone-20, qui fond à 228-230[deg]. REVENDICATIONS la formule générale I dans laquelle R représente le radical acyle d'un acide carboxylique ayant de 2 à 8 atomes de carbone. 2.- Dihydroxy-12B,15a stéroïde selon la prégnanone-20. 3.- Procédé de préparation de dihydroxy-120,15a stéroides selon la revendication 1, procédé caractérisé en ce que l'on fait fermenter un composé répondant à la formule générale II dans laquelle R a la signification donnée à la revendication 1, avec une culture mycétienne de l'espèce Calonectria decora.