Brevet FR2209553A1 — publié le 19740705

La présente invention concerne de nouveaux dérivésphosphorylés de la choline et de l'homocholine, leur préparation et leurs applications en thérapeutique. De nombreux esters phosphoriques de la choline d'origine naturelle, par exemple des dérivés de lécithines, sphingomyélines et des esters synthétiques sont déjà connus. En revanche les esters phosphoriques de l'homocholine sont peu connus. De plus la préparation des esters phosphoriques de la choline ou de l'homocholine présentait des difficultés. Les composés de l'invention répondent à la formule suivante dans laquelle n est égal à 2 ou 3 et A est choisi dans le groupe constitué par les radicaux morpholino, (p-méthyl-phényl)-l éthoxy, phényl-l propoxy et acétamidocarbonyl-2 phénoxy. Le procédé de l'invention permettant d'obtenir les composés décrits ci-dessus consiste à faire réagir la triméthylamine N(CH3)3 avec un composé répondant à la formule dans laquelle n et A ont les significations données ci-dessus. Au cours de la réaction il y a ouverture du cycle de l'oxo-2 dioxaphospholanne-l,3,2 (n = 2) ou de l'oxo-2 dioxaphosphorinanne -1,3,2 (n = 3). La réaction est effectuée à une température allant de 70 à 100 C environ, dans un solvant organique tel que l'acétone ou l'acétonitrile. Les composés de formule II sont obtenus par réaction du chlorure du phosphate d'éthylène ou du chlorure du phosphate de Propylène avec le composé correspondant de formule AH. les composés de formule II dans lesquels n est égal 3 sont nouveaux. Les composés de l'invention sont utilisables en thérapeutique en considération de leurs propriétés lipotropes, antistéatosiques, antitoxiques et protectrices de la cellule hépatique et, pour certains d'entre eux également en considération de leurs propriétés cholérétiques. Les exemples suivants illustrent la présente invention. EXEMPLE 1 : Morpholino-phosphorylcholine. Ce composé est obtenu en deux étapes on prépare d'abord le morpholino-2 oxo-2 dioxaphospholanne-1,3,2 que l'on fait réagir ensuite avec la triméthylamine. a) a) .orpholino-2 oxo-2 dioxaphospholanne-l,3,2 A une solution de 174 parties en poids de morpholine dans 1500 parties de benzène, on ajoute goutte à goutte en agitant et maintenant la température du milieu réactionnel vers 5 C, une solution de 143 parties de chlorure de phosphate d'éthylène (préparé selon la technique de R.S. EDINUNDSON, Chem. and Ind. 1962, 1828) dans 250 parties de benzène. L'addition terminée en agite une heure à la température ambiante, puis une heure vers 5000. On filtre le chlorhydrate formé et on le lave avec du benzène. On évapore la solution benzénique et on obtient 155 parties d'un solide blanc. Rendement : 80 % F. = 112 C. b) iTorpholino-phosphorylcholine On introauit dans un flacon à réaction en verre épais pouvant supporter la pression, 19,3 parties en poids de morpholino-2 oxo-2 dioxaphospholanne-1,3,2 et 50 parties en poids d'une solution de triméthylamine à 30 % en poids dans l'acétonitrile. Le flacon étant fermé hermétiquement, on le chauffe pendant 48 heures vers 70 . On isole le produit formé par filtration, on le lave à l'éther et on le sèche sous vide sur P205. On obtient 19 parties de morpholino-phosphoryl- choline sous la forme d'un solide blanc, bien cristallisé, très soluble dans l'eau, soluble dans méthanol, insoluble dans ltétherJ l'acétone.... Rendement : 75 % F. (après recristallisation dans du nitro méthane) 2500C avec décomposition. Analyse : C H N P Calculé : 42,8 8,33 11,11 12,3 Trouvé : 42,51 8,69 10,94 12,3 EXEMPLE 2 Morpholino-phosphorylhomocholine (SAB 6979). Ce composé est préparé selon le procédé décrit dans l'exemple 1. a) Morpholino-2 oxo-2 dioxaphosphorinanne-f,3,2 A une solution de 174 parties en poids de morpholine dans 600 parties de chloroforme rectifié, on ajoute goutte à goutte, en agitant et en maintenant la température du mélange réactionnel vers 50 une solution de 156,5 parties de chloro-2 oxo-2 dioxaphosphorinanne-1,3,2 dans 300 parties de chloroforme. On abandonne la préparation une nuit à la température ambiante, on filtre le chlorhydrate de morpholine et on le lave avec du chloroforme. On lave la solution chloroformique avec de 1'eau, on la sèche sur du sulfate de sodium ; on filtre et chasse le solvant et on obtient 145 parties d'un solide blanc fondant à 10200. Rendement : 70 jb. b) Morpholino-phosphorylhomocholine On opère comme dans l'exemple 1 b) en remplaçant les 19,3 parties en poids de morpholino-2 oxo-2 dioxaphospholanne-l,3,2 par 20,7 parties de morpholino-2 oxo-2 dioxaphosphorinanne-1,3,2 et en chauffant le mélange réactionel 4 jours vers 100 C, on obtient 25,7 parties d'un solide blanc bien cristallisé. Rendement : 95 ,o F. : 26500 avec décomposition Solubilités : très soluble dans l'eau, le métha nol, l'éthanol insoluble dans l'éther et l'acé tone. EXEMPLE 3 Phosphate d'O-[(p-méthyl-phényl)-1 éthyle et d'O-(ss-triméthylammonio- éthyle) (SAB 9 103) Ce composé est obtenu en deux étapes selon le procédé de l'exemple 1 a) [(p-méthyl-phényl)-1 éthoxy-2 oxo-2 dioxaphospholanne-1,3,2 A une solution de 14 parties en poids d'hydroxy-l (p-méthyl-phényl)-l éthane, de 10,6 parties de triéthylamine et de 150 parties de benzène, on ajoute goutte à goutte, en agitant et en maintenant la température du milieu réactionnel vers 5 C, une solution de 14,3 parties de chlorure de phosphate d'éthylène dans 25 parties de benzène. L'addition terminée, on agite une heure à la température ambiante, puis une heure vers 4000. On filtre le chlorhydrate de triéthylamine puis on chasse le benzène sous vide, on obtient 19,4 parties d'une huile jaune. Rendement : 80 . b) Phosphate d'O-[(p-méthyl-phényl)-1 éthyle et d'O-(ss-triméthylammonio-éthyle) (SAB 69 103) On fait réagir dans un autoclave pendant 48 heures à 7O0C une solution de 12,1 parties de phospholanne 3a et de 6 parties de triméthylamine dans 25 parties d'acétonitrile. On isole le solide formé par filtration, on le lave à l'acétonitrile et on le sèche sous vide sur P205 Le produit peut être purifié par recristallisation dans du nitrométhane. Rendement : 75 % F. : 2420C Analyse : C H P N Calculé : % 55,81 7,97 10,29 4,65 Trouvé : 54,23 8,00 10,20 4,51 Solubilités : soluble dans l'eau et les alcools mé thylique et éthylique, insoluble dans l'éther et l'acétone. EXEMPLE 4 Phosphate d'0-(phényl-l propyle) et d'O-(ss- triméthylammonio-éthyle) (SAB 69 104). a) (Phényl-l propyloxy)-2 oxo-2 dioxaphospho lanne-1,3,2. On opère comme dans l'exemple 3 a) en rempla çant l'hydroxy-1 (p-méthyl-phényl)-l éthane par lthydroxy-l phényl-l propane; on obtient 18,5 parties d'une huile jaunâtre. Rendement : 75 % b) Phosphate d'0-(phényl-l propyle) et d'O-(ss- triméthylammonio-éthyle (SAB 69 104) En faisant réagir 12,1 parties de phospholanne 4 a) avec la triméthylamine comme dans l'exemple 3 b), on obtient 10,5 parties d'un solide blanc. Très soluble dans l'eau et l'éthanol. Insoluble dans l'acétone et l'acétonitrile. Rendement : 70 ss F. : 257 - 2580C. Analyse : C H N P Calculé : % 55,81 7,97 4,65 10,29 Trouvé : 54,06 7,78 4,66 9,82 EXEMPLE 5 Phosphate d'O-(phényl-1 propyle) et d'O-(&gamma;- triméthylammonio-propyle) (SAB 6974). a) (Phényl-l propoxy)-2 oxo-2 dioxaphospho rinanne-1,3,2. A une suspension de 2,4 parties d'hydrure de sodium dans 30 parties de tétrahydrofuranne, on ajoute goutte à goutte à SOC et en agitant 14 parties d'hydroxy-l phényl-l propane. L'addition terminée, on agite une heure à la température ambiante puis une heure à 45 C. On refroidit le mélange réactionnel à 00, puis on y ajoute ensuite dans les mêmes conditions que précédemment une solution de 15,65 parties de chloro-oxo-2 dioxaphosphorinanne1,3,2 dans 20 parties de tétrahydrofuranne. On filtre le chlorure de sodium formé, on chasse le solvant sous vide puis on reprend le résidu avec du chloroforme. On lave la solution chloroformique avec une solution aqueuse dthydrogénocarbonate de sodium, puis avec de l'eau. On sèche la solution chloroformique sur Na2SO4, on chasse le solvant et on obtient 20 parties d'un résidu blanc visqueux qui cristallise dans le cyclohexane. Rendement : 78 ss F. : b) Phosphate d'O-(phényl-l propyle)et d'O-(y triméthylammonio-propyle) (SAB 6974). En faisant réagir 12,8 parties de phosphorinanne 5a avec la triméthylamine comme dans l'exemple 3 b), on obtient 13 > 4 parties d'un solide blanc qu'on peut purifier par recristallisation dans du nitrométhane. Rendement : 85 , F : 269 - 2700C. Analyse : Calculé : 4,44 9,84 trouvé : 4,4 9,96 Solubilités : soluble dans veau, le méthanol et l'éthanol, insoluble dans l'éther et l'acétone. EXEMPLE 6 : Phosphate d'O-(acétamido-carbonyl-phènyle) et d'O-(&gamma;-triméthylammonio-propyle) (SAB 69 80) a) (Acétamidocarbonyl-2 phénoxy)-2 oxo-2 dioxaphos phorinanne-1 ,3 ,2. Â une solution de 17,9 parties en poids de N-acétylsalicylamide et de 12 parties de triéthylamine dans 50 parties de diméthyl-formamide, on ajoute lentement à la température ambiante et sous agitation 17 parties de chlorure de phosphate de propylène-1,3. L'addition terminée, on continue à agiter 1 heure à la température ambiante puis 1 heure à 5000. On chasse le solvant sous vide puis on reprend le résidu avec du chloroforme.La solution chloroformique est lavée avec de l'eau, séchée et évaporée on obtient 25 parties d'un solide amorphe qui se cristallise par grattage dans l'éther de pétrole (F#130 C). b) Phosphate d'O-(acétamido-carbonyl-phényl) et d'O (&gamma;-triméthylammonio-propyle). On fait réagir dans un autoclave pendant quelques jours à 80 C un mélange de 15 parties du phosphorinanne 6a et de 6 parties de triméthylamine dans 25 parties d'acétonitrile. On isole le produite formé par filtration puis on le purifie par recristallisation dans du nitrométhane. (Rendement 70 %). F = 229 C Soluble dans l'eau et l'éthanol. Insoluble dans l'éther et l'acétone Analyse C H N P Calculé % : 50,27 6,4 7,8 8,6 Trouvé: 48,95 6,41 7,78 8,71 Les composés de l'invention ont été soumis à des essais pharmacologiques. TOXICITE La toxicité aiguë des composés a été déterminée par voie intraveineuse chez la souris selon la méthode de KARBER et BEHRENS (Arch. Exp. Pathos Pharm., 177, 1935, p. 379). Les résultats sont indiqués dans le tableau suivantt T A B L E A U I Composé DL50 (MG/kg) (exemple) SAB 69 101 (1) SAB 69 79 (2) 682 SAB 69 103 (3) > 3000 SAB 69 104 (+) ) 2000 RAB 69 74 (5) 1337 SAB 69 80 (6) > 2000 A titre de comparaison la toxicité du chlorure de choline dans les mêmes conditions est de 42 mg/kg. Les composés de l'invention administrés par voie intraveineuse sont donc moins toxiques que la substance de comparaison. ACTIVITE ANTISTEATOSIQUE L'activité lipotropique des différents dérivés de l'invention sur la stéatose expérimentale provoquée par un régime hyperlipidique chez le Rat blanc femelle SPF de race Wistar, d'un poids moyen de 160 g, a été comparée à celle du chlorure de choline. L'alimentation habituelle des animaux est remplacée par un régime stéatogène pendant toute la durée de l'essai, sauf pour les rats témoins absolus. - Formule du régime stéatogène : Acide cholique s 25 g Cholestérol : 100 g Suppocire de Gattefossé 5 5 kg Aliment U A R pour souris : 5 kg Les produits sont administrés par sonde gastrique, tous les jours, pendant 8 jours consécutifs à la dose équimoléculaire correspondant à 125 mg de chlorure de choline, et le poids corporel est contrôlé au début et à la fin de l'expérimen- tation. Les animaux sont sacrifiés après anesthésie au nembutal, et le foie est pesé. L'évaluation histologique de la stéatose hépatique est effectuée sur des coupes en congélation à 15 d'épaisseur, et colorées par l'huile rouge (oil red 0), qui est reconnue comme le colorant histochimique le plus spécifique des lipides. Les valeurs numériques de O à 6 ont été attribuées de façon arbitraire aux différents degrés de la surchage lipidique intracytoplasmique de manière à apprécier l'intensité de la stéatose dans chacune des trois zones du lobule : périlobule, médiolobule et centrolobule. Valeur numérique Intensité et aspect de arbitraire la surchage lipidique O Pas de surchage 1 Granulation en petit nombre 2 Granulation en grand nombre 3 Microvacuoles en petit nombre 4 Microvacuoles en grand nombre 5 Macrovacuoles 6 3-lacrovacuoles remplissant tout le cytoplasme et déformant l'hépatocyte Dans chaque lot d'animaux-on calcule 10) - La moyenne de l'intensité stéatosique correspondant aux trois zones lobulaires séparément, pour pouvoir différencier une éventuelle activité antistéatosique, d'ordre topographique. 20) - La moyenne de l'intensité stéatosique dans les trois zones réunies, pour juger de l'effet antistéatosique global du produit. 30) - L'activité antistéatosique en pourcentage par rapport à la stéatose observée chez les animaux soumis au régime hyperlipidique seul. Activité antistéatosique = Stéatose régime - stéatose traitée % Stéatose régime Les résultats sont donnés dans le tableau suivant. T A B L E A U II Composé Dose en Poids corporel (g) Poids du foie (g) Intensité de la surchage lipidique Activité (ex.) mg/kg Début Fin Absolu En % du Zone péri- Zone Zone moyenne anti per os poids corporel lobulaire médiol. centrol. stéatosique (%) SAB 69101(1) 226 160 164 7,59 4,63 5 2,45 1,3 2,9 17,1 SAB 6979(2) 238 160 150 6,34 4,23 4,1 1,9 1,3 2,4 31,4 SAB 69104(4) 270 160 160 7,0 4,37 4,4 2,0 1,0 2,4 31,4 SAB 6974(5) 282 160 158 6,8 4,30 4,3 1,9 1,1 2,4 31,4 SAB 6980(6) 321 160 158 6,97 4,40 4,7 1,75 0,75 2,3 34,2 Chlorure de 125 159 159 7,18 4,53 4,5 2,2 1,5 2,7 22,8 choline Régime seul - 160 165 7,89 4,77 5,4 3,2 2,05 3,5 Témoins - 159 178 6,76 3,78 - - - - - Il ressort de ce tableau que les composés phosphorylés de la choline et de l'homocholine de l'invention ont une activité lipotrope intéressante, supérieure à celle du chlorure de choline, à l'exception du SAB 69 101. Le fait qu'ils ne sont pas toxiques leur confère un bon indice thérapeutique oui est très nettement supérieur à celui du chlorure de choline. 2. ACTIVITE CHOLERETIQUE Les composés SAB 69 103, 69 104, 6974 et 6980 ont également été étudiés du point de vue cholérétique. L'activité cholérétique est déterminée chez le Rat mâle SPF de 300 g environ, à jeun depuis 18 heures. Les animaux sont anesthésiés au carbamate d'éthyle (900 mg/kg). On introduit un fin catheter dans le canal cholé- doque pour permettre l'écoulement de la bile. On en mesure le volume toutes les heures pendant 5 heures. Les animaux sont maintenus dans une pièce à 250 et on utilise 10 animaux par dose. Les produits sont administrés par voie intraduodénale. On détermine également ltextrait sec sur 1 ml. Seul le composé SAB 69 103 présente une activité cholé- rétique notable et significative à partir de la 4ème heure. Les résultats sont indiqués dans le tableau III cides sous : TABLEAU III Les significations des symboles sont les suivants : H.S. hautement significatif S significatif pratiquement égal aux témoins augmentation par rapport aux témoins. Volume de bile en ml Extrait sec (1ml) en mg Mesure pré- 1ère 2ème 3ème 4ème 5ème liminaire heure heure heure heure heure Témoins 0,66 0,65 0,61 0,55 0,42 0,53 26,6 Acide déhy- 1,75 1,57 1,42 0,89 1,07 dorcholique 0,70 #169 % #157 % #158 % #112 % #102 % 27,7 500 mg/kg H.S. H.S. H.S. H.S.H.S. = S.A.B. 0,68 0,53 0,54 0,55 0,66 24,9 69 103 0,73 #31 % #24 % = 500 mg/kg = = = S 0,02 S 0,05 = Le composé SAB 69 103 se révèle très intéressant car il possède à la fois des propriétés cholérétiques et antistéatosiques tout en n'ayant aucune activité ni sur le système nerveux central, ni sur le système nerveux autonome ni sur le système cardiovasculaire. Les composés de I'invention, en considération de leurs propriétés, peuvent être utilisés pour le traitement des insuffisances hépatiques, des infections hépatobiliaires, des hépatites chroniques, des cirrhoses, des constipatinons, stéatoses diverses, etc... Des exemples de compositions pharmaceutiques sont les suivants Granulé SAB 6979 15 g suore aromatisé qsp 100 g Le granulé peut être présenté en sachet dose contenant SAB 6979 0,5 g excipient aromatise 4,5 g Comprimé effervescent SAB 69 103 0,50 g excipient qsp 1 comprimé effervescent de 3 g La posologie moyenne est de 2 à 4 sachets ou comprimés effervescents par jour, est-à-dire de 1 à 2 g de principe actif. Les composés de 1' invention peuvent entre associés dans des compositions pharmaceutiques avec des composés modificateurs des sécrétions biliaires, protecteurs de lthépatocyte, inducteurs enzymatiques, spasmolytiques, etc... A titre exemple l'association suivante est proposée Solution buvable SAB 6979 0,50 g Sorbitol 2 g Conservateur et excipient aromatisé qsp 10 ml R E V E N D I C A T I O N S 1,- Dérivés phosphorylés de la choline et de l'homocholine répondant à la formule I dans laquelle n est égal à 2 ou 3 et A est choisi dans le groupe constitué par les radicaux morpholino, (p-méthyl-phényl)-l éthoxy, phényl-l propoxy et acétamidocarbonyl-2 phénoxy. 2.- La morpholino-phosphoryl-choline. -3. - La morpholino-phosphoryl-homocholine. 4.- Phosphate d'O-/ (p-méthyl-phényl)-l éthyle7 et d'O-(ss-timéthylammonio-éthyle). 5.- Phosphate d'0-(phényl-l propyle) et d'O -(ss- triméthylammonio-éthyle). 6.- Phosphate d'0-(phényl-l propyle) et d'-O-(y triméthylammonio-propyle), 7.- Phosphate d'O-(acétamidocarbonyl-2 phényle) et d'O-(&gamma;-triméthylammonio-propyle). 8.- Procédé de préparation des dérivés spécifiés dans la revendication 1, procédé caractérisé en ce qu'on fait réagir la triméthylamine avec un composé répondant à la formule II dans laquelle n et A ont les significations données dans la revendication 1. 9.-Procédé selon la revendication 8, caractérisé en ce qu'on effectue la réaction à une température allant de 70 a 1000C, dans un solvant organique tel que l'acétone ou l'acétonitrile. 10.- Médicament caractérisé en ce qu'il contient comme groupe actif un dérivé tel que spécifié dans l'une quelconque des revendications 1 à 7. 11.- Médicament caractérisé en ce qu'il contient le phosphate d'o (p-méthyl-phényl)-l éthyle et d'O-(ss-triméthyl- ammonio-éthylej. 12.- Composition pharmaceutique contenant un dérivé tel que spécifié dans l'une quelconque des revendications 1 à 7 en association avec une substance ayant la même activité ou une activité complémentaire.