Brevet FR2241557A1 — publié le 19750321

La présente invention est relative à un nouveau procédé de préparation de l'acide 7-amino-désacétoxycéphalosporanique, qui répond à la formule I ci-après Cet acide (7-ADCA) constitue la matière première principale pour la préparation de la céphalexine qui est pratiquement le seul membre du groupe des céphalosporines thérapeutiquement actif par la voie orale La eéphalosporine C est un composé que I 1on obtient facilement par fermentation et qui a été abondamment décrit dans la Littérature : cf.Newton et Abraham dans "NATURE" 175,548 (1955) , Brevet Allemand 1 014 711 ; Brevet Britannique 810 196 ; Brevet U.S. 3082155, etc... etc... De nombreuses tentatives de transformation de la céphalosporine en acide 7-amino-désacétoxycéphalosporanique (7-ADClA) ont été décrites. Toutes ces tentatives font appel à de multiples étapes (désacylation en position 7, réduction de la fonction acétoxy- en position 3), chacune de ces étapes nécessitant la séparation du produit intermédiaire obtenu, donc consommation importante de travail et d'énergie, qui s'accompagne de pertes du produit séparé au cours de ces manipulations, d'où baisse du rendement et son corollaire, augmentation du prix de revient. La présente invention a en conséquence pour but de pourvoir à un nouveau procédé de préparation de 7-ADCA à partir de la céphalosporine qui répond mieux aux nécessités de la pratique que les procédés visant au meme but antérieurement connus, notamment en ce que l'on obtient le 7-ADCA en une seule étape avec un rendement pratiquement quantitatif. La présente invention a pour objet un procédé de préparation de 7-ADCA qui répond à la formule I ci-dessus,à partir de la céphalosporine C qui répond à la formule II ci-après, ou de l'un de ses esters caractérisé en ce que l'on fait tout d'abord agir sur la céphalosporine une enzyme du type des amido-hydrolases, connue dans la classification internationale sous le numéro 3-5-2, ce qui permet la désacylation en position 7, puis l'on procède à la réduction de la fonction acétoxy- en position 3 pour obtenir le 3-méthyl-3-cephem. Suivant un mode de réalisation avantageux du procédé qui fait l'objet de la présente invention, la céphalosporine de départ est mise en oeuvre sous forme brute, non purifiée. Suivant un autre mode de réalisation avantageux du procédé qui fait l'objet de la présente invention, l'on fait réagir sur la céphalosporine un extrait enzymatique très impur, c'est-à-dire n'ayant pas subi d'opérations de purification préalable, coûteuses. Suivant un autre mode de réalisation avantageux du procédé qui fait l'objet de la présente invention, les enzymes mises en oeuvre sont d'origine exocellulaire. Suivant une autre disposition de l'invention, les enzymes mises en oeuvre sont d'origine endocellulaire. Suivant une disposition particulièrement avantageuse du procédé qui fait l'objet de la présente invention, le réducteur utilisé est constitué par le Borohydrure de sodium NaBH4. L~'action des enzymes du type des amido-hydrolases mises en oeuvre conformément à l'invention, présente la caractéristique essentielle d'être une action préférentielle qui ne s'exerce que sur la liaison NH-CO (en position 7) tout en laissant intacte la liaison N-CO (anneau de t-lactame). Cette action préférentielle qu'exercent les enzymes mises en oeuvre conformément à la présente invention est de la plus haute importance, car dans l'hypothèse d'une destruction de la liaison N-CO dans l'anneau der -lactame, la conséquence en serait la perte de l'activité biologique. Outre les dispositions qui précèdent, l'invention comprend encore d'autres dispositions qui ressortent de la description qui va suivre. La présente invention vise particulièrement les procédés de préparation de 1 t acide 7 'acide 7-aminoaésacétoxycéphalosporanique conformes aux dispositions qui précèdent, les processus de traitement dans lesquels sont inclus ces procédés, les appareilsages propres à permettre la mise en oeuvre et la réalisation des procédés conformes à la présente invention, ainsi que les installations d'ensemble dans lesquelles sont inclus les procédés conformes à la présente invention et les appareillages destinés à la mise en oeuvre de ces derniers. L 'invention pourra être mieux comprise à 1 'aide du complément de description qui va suivre, qui se réfère à un exemple de mise en oeuvre du Procédé objet de la présente invention. Il doit être bien entendu, toutefois, que 1 exemple décrit dans ce qui va suivre est donné uniquement à titre d'illustration de 1 'objet de l'invention, dont il ne constitue en aucune manière une limitation. Expmnle de Préparation de l'acide 7-amino-désacétoxvcEpEaloE;pora nicme. On ajoute à une solution aqueuse de céphalosporine C dont le pH a été ajusté aux environs de 7, un relargat au sulfate d'ammonium d tun filtrat de culture de Bacillus Cereus var.fluorescens nOATCC 13824. On agite pendant 5 heures à une température comprise entre 30 et 340C. Au bout de ce temps et tout en maintenant la température aux environs de 300; on ajoute, sous agitation et par petites quantités à la fois, du borohydrure de sodium. L'on prélève un échantillon toutes les 15 minutes environ en vue d'effectuer une chromatographie en couche mince. L'addition de borobydrure prend fin avec la disparition de 1 'acide 7-amino- céphal osporanique L'acide 7-amino-désacétoxycéphaloslpranique - est alors extrait, après filtration de la solution, par les méthodes usuelles. Il résulte de la description qui précède que quels que soient les modes de mise en oeuvre et de réalisation adoptés, l'on obtient des procédés de préparation de l'acide 7-amino désacétoxycépbalosranique qui présentent, par rapport aux procédés visant au même but antérieurement connus, des avantages importants qui ont déjà été mentionnés dans ce qui précède, et notamment l'avantage particulièrement important de permettre 1 'obtention de 7-ADCA en une étape unique à partir de la céphalosporine C, ceci avec un très haut rendement. L'invention ne se limite nullement à ceux de ses modes de mise en oeuvre et de réalisation qui viennent d'être décrits de façon plus explicite ; elle en embrasse au contraire toutes les variantes qui peuvent venir à l'esprit du technicien en la matière, sans s'écarter du cadre ni de la portée de la présente invention REVEND CATIONS 1 - Procédé de préparation de l'acide 7-amino-désacétoxycéphalosporanique qui répond à la formule I ci-après à partir de la céphalosporine C, caractérisé en ce que l'on fait tout d'abord agir sur la céphalosporine une enzyme du type des amido-bydrolases, connue dans la classification internationale sous le numéro 3-5-2, ce qui permet la désacylation en position 7, puis l'on procède à la réduction de la fonction acétoxy en position 3 pour obtenir le 3-méthyl-3 cephem. 20- Procédé selon la Revendication 1, caractérisé en ce que la céphalosporine de départ est mise en oeuvre sous forme brute, non purifiée 3 - Procédé selon l'une quelconque des Revendications 1 et 2, caractérisé en ce que 1 'on fait agir sur la céphalosporine un extrait enzymatique très impur, c'est-à-dire n 'ayant pas subi d'opérations de purification préalable, coûteuses. 40- Procédé selon l'une quelconque des Revendications 1 à 3, caractérisé en ce que les enzymes mises en oeuvre sont d'origine exocellulaire. 5 - Procédé selon l'une quelconque des Revendications 1 à 3, caractérisé en ce que les enzymes mises en oeuvre sont d'origine endocellulaire. 6 - Procédé selon l'une quelconque des Revendications 1 à 5, caractérisé en ce que le réducteur utilisé est constitué par le Borohyodure de sodium NABI4