Brevet FR2224164A1 — publié le 19741031

La présente invention concerne un procédé pour prolonger l'action de substances pharmaceutiques contenant des groupes amino ou amido. La présente invention concerne plus particulièrement un procédé de production d'un dérivé présentant une action prolongée d'une substance pharmacologiquement ou thérapeutiquement active qui contient un groupe amino ou amido, ce procédé consistant à faire réagir cette substance avec un polysaccharide de façon à former entre eux des liaisons de covalence au moyen du groupe amino ou du groupe amido, de la première et des groupes hydroxyle du second. Le polysaccharide peut tre par exemple le dextrane, la cellulose, ou l'acide alginique, dont les groupes hydroxyle ont été activés par exemple par du bromure du cyanogène, un carbo-diimide ou un réactif de Woodward. On obtient des résultats particulièrement bons par activation des groupes hydroxyle du dextrane avec le bromure de cyanogène. Les composés macromoléculaires obtenus ont la mme action pharmacologique que la substance pharmaceutiquement apparentée utilisée, mais présentent une durée prolongée de cette action. Donc, par application de la présente invention, des substances qui sont pharmacologiquement intéressantes mais qui ne présentent qu'une brève durée d'action peuvent tre transformées en des composés stables qui sont plus lentement éliminés. En termes généraux, on peut mettre en oeuvre la présente invention comme suit : Le polysaccharide d'un poids moléculaire prédéterminé, dissous dans l'eau à un pH alcalin, est activé par exemple avec la quantité calculée de bromure de cyanogène, en maintenant constant le pH alcalin par addition d'une solution diluée d'hydroxyde de sodium. On sépare le bromure de cyanogène qui n'a pas réagi du polysaccharide activé par filtration à travers un gel de dextrane par élution avec une solution tampon par exemple de borax de bicarbonate de sodium, de carbonate de sodium ou de triméthylolaminométhane dont le pH est compris entre 9 et 10. On ajoute la solution de la substance pharmacologiquement ou thérapeutiquement active à la solution du polysaccharide activé, et on laisse au repos à température de 0 à 7 C pendant une durée de 24 à 48 heures. On pput ensuite séparer facilement le composé désiré du polysaccharide qui n'a pas réagi, par chro matographie, par exemple sur du dextrane, comme celui qui est vendu sous la marque de fabrique"Sephadex". On obtient le produit final sous forme solide à partir de la solution aqueuse par concentration sous vide poussé ou par lyophilisation. Le poids moléculaire du polysaccharide et sa proportion relativement à la substance pharmaceutique règlent la proportion moléculaire entre la substance pharmaceutique et le polysaccharide dans le produit obtenu. En conséquence, on peut obtenir une prolongation plus ou moins marquée dans l'action pharmacologique du produit final. Les exemples suivants illustrent la présente invention. Exemple 1"Diméthofrine-Dextrane 70". La"diméthofrine"est une amine sympathomimétique, le chlorhydrate de 1- (3, 5-diméthoxy-4-hydroxyphényl)-2-méthylamino- 1-éthanol qui a des propriétés hypertensives. On ajoute à 2,5 g de dextrane"70", dissous dans l'eau à pH 11,1,25 g de bromure de cyanogène par petites portions, en maintenant le pH à 11 par addition d'une solution normale d'hydroxyde de sodium. On effectue la chromatographie de la solution ainsi obtenue sur"Sephadex G-25"pour éliminer le bromure de cyanogène qui n'a pas réagi en utilisant comme éluant une solution G, 1 ld de NaHC03 (pH 9). On recueille la fraction dextrogyre qui contient le dextrane activé. On ajoute à cette solution 100 mg de"diméthofrine"et on abandonne le tout à 5 C pendant 24 heures pour achever la réaction. On chromatographie la solution ainsi obtenue sur colonne de"Sephadex G-50"et on recueille des fractions de 20 cm3. La chromatographie en couche mince des diverses fractions (gel de silice, feuille F 254) éluant : n-butanol, acide acétique, eau, 80 : 20 : 100) indique une séparation nette entre le dextrane qui n'a pas réagi (Rf-0), la"dimethofrine"qui n'a pas réagi (Rf = 0,33) et la diméthofrine-dextrane (Rf = 0,85). Par réunion et lyophilisation des fractions qui contiennent le complexe de diméthofrine-dextrane, on obtient 50G mg d'un produit blanc qui se décompose à 55-260 C. D'après l'ana- lyse en pourcentage du produit, on trouve que 120 à 125 moles de diméthofrine basique sont fixées à chaque mole de dextrane. Poids moléculaire 90 000 Teneur théorique'Teneur Su C = 48, 47 48,31 H = 6, 31 6, 25 N = 1,76 1, 66 La durée de l'effet hypertenseur du produit obtenu, comparativement à celui provoqué par des doses équivalentes de diméthofrine pure, après administration intramusculaire chez diverses espèces animales est prolongée de 25 à 30 W. Cet effet hypertenseur a été déterminé chez le lapin roux de Bourgogne (Tawny Burgundy) et chez des chiens"Beagle"anesthésiés, la tension sanguine à la carotide étant mesurée à l'aide d'un transducteur de pression du type Statham relié à un polygraphe. Exemple 2 :"Unsuline-Dextrane 70. On ajoute à 4 g de dextrane"70"dissous dans 130 ml d'une solution normale d'hydroxyde de sodium maintenue à pH 11,2 g de bromure de cyanogène par petites portions, en maintenant le pH à 11 par addition d'une solution normale d'hydroxyde de sodium. On effectue la chormatographie de la solution résultante sur "Sephadex G-25"pour séparer le bromure de cyanogène qui n'a pas été fixé sur le dextrane, en utilisant comme éluant une solution 0,1 M de carbonate de sodium. On ajoute aux fraction éluées optiquement actives (environ 400 ml), 500 mg d'insuline. On achève la réaction en laissant le mélange résultant reposer pendant 48 heures à 4 C. On effectue la chromatographie du produit sur "Sephadex G-50"en utilisant une solution de carbonate de sodium 0,1 M comme éluant et on recueille des fractions de 20 ml chacune. Par analyse chromatographique en couche mince de ces fractions, (gel de silice, feuilles F 254, éluant : chloroforme, méthane 20, ammoniaque à 17S., 4 : 4 : 2), on sépare facilement les fractions de ttes contenant l'excès de dextrane qui n'a pas réagi de celles qui contiennent le produit de réaction d'insuline et de dextrane. Par lyophilisation de ces dernières fraction, on obtient 4, 650 g du complexe de dextrane-insuline sous forme de poudre blanche très soluble dans l'eau. Par titration de l'azote dans ce produit, on en déduit que 3 moles d'insuline sont fixées sur chaque mole de dextrane. Teneur théorique % Teneur trouvée eo C = 46, 10 46, 05 H = 6, 25 6,17 N = 3,13 3,06 Cette valeur est confirmée par titration du produit de synthèse en unités internationales d'insuline conformément à la Pharmacopée française, 8e édition. Titre 4,5 U. I/mg. L'action hypoglycémique retardée de cette substance nouvelle est démontrée par le procédé de la Pharmacopée Britannique Appendice XV C p. 938. Le retard de l'effet hypoglycémique de dextrane-insuline est évalué par comparaison avec l'hypoglycémie provoquée par une préparation étalon d'insuline chez le lapin et le Cochon d'Inde. On n'utilise pas moins de dix animaux d'une colonie saine distribués au hasard en deux groupes égaux. Les animaux sont hébergés individuellement et sont privés de nourriture pendant 18 heures avant le début de l'expérience. Au début de l'expérience, on détermine le taux moyen du sucre dans le sang dans chaque groupe. Les animaux d'un groupe sont traités par voie sous-cutanée avec la préparation en question, et les animaux de l'autre groupe sont traités avec une solution étalon d'insuline en solution aqueuse saline acidifiée par HC1 à pH 2,5 qui présente le mme pouvoir nominal que le composé sous expérience. Cn injecte les deux préparations sans autre dilution, en quantités correspondant aux poids du corps de l'animal. On détermine le taux moyen du sucre dans le sang de chaque groupe, , 2, 4 et 6 heures après l'injection. Les taux ainsi obtenus démontrent sans équivoque qu'après 4 et 6 heures, il y a un abaissement du titre de glucose nettement différent de celui obtenu pour des doses équivalentes d'insuline étalon. Cet effet de retard est de l'ordre de 20 à 30. Dans une autre demande de brevet i-titu'ée t'cérivés de Vitamine B12 à activité prolongée", la Demanderesse a décrit et revendiqué des dérivés de la vitamine B qui présentent une activité prolongée, dans lesquels le cobamide est fixé en covalence au dextrane au moyen du groupe amido du premier avec les groupes hydroxyle du second et un procédé de production de ces dérivés par réaction de dextrane avec le bromure de cyanogène et réaction du produit avec le cobamide. Les dérivés obtenus par la mise en oeuvre du procédé de l'invention sont utiles comme médicaments et peuvent tre mis sous forme de compositions pharmaceutiques en combinaison avec un véhicule approprié pharmaceutiquement acceptable. REVENDICATIONS 1) Procédé de production d'un dérivé présentant une action prolongée d'une substance pharmacologiquement ou thérapeutiquement active contenant un groupe amino ou amido, caractérisé en ce qu'on fait réagir cette substance avec un polysaccharide de façon à former entre eux une liaison covalente au moyen du groupe amino ou amido de la première et des groupes hydroxyle du second. 2-) Procédé selon la revendication 1, caractérisé en ce qu'on fait d'abord réagir le polysaccharide avec du bromure de cyanogène et qu'on fait ensuite réagir le polysaccharide activé ainsi obtenu avec la substance pharmacologiquement ou thérapeutiquement active. 3) Procédé selon l'une des revendications 1 et 2, caractérisé en ce que le polysaccharide est le dextrane. 4) Procédé selon l'une des revendications 1 à 3, caractérisé en ce que la substance pharmacologiquement ou thérapeutiquement active est de"diméthofrine"ou l'insuline. 5) Dérivé d'une substance pharmacologiquement ou thérapeutiquement active contenant un groupe amino ou amido, caractérisé en ce que cette substance est liée en covalence avec un polysaccharide au moyen du groupe amino ou amido de la première et des groupes hydroxyle du second. 6) Dérivé selon la revendication 5, caractérisé en ce que le polysaccharide est le dextrane. 7) Le diméthofrine-dextrane. 8) L'insuline-dextrane. 9) Dérivé selon la revendication 5, caractérisé en ce qu'il est préparé conformément au procédé de l'une des reven- dications 1 à 5. 10) li titre de médicament nouveau, un dérivé selon l'une des revendications 5 à 9. 11) Les compositions pharmaceutiques contenant comme principe actif un dérivé selon l'une des revendications 5 à c.