Brevet FR2206953A1 — publié le 19740614

La présente invention concerne les compositions germicides à base d'agents germicides au bisphénol Il est connu que le 5-chloro-2-(2,4-dichlorophénoxy)-phénol est un bactéricide utile , notamment en tant qu'agent bactériostatique résiduel sur le tissu vivant comme produit préventif d'infections cliniques provoquées de corps à corps. Bien que le composé mentionné ci-dessus ait une plus grande gamme d'activité désinfectante que le 2,2' métbylène-bis-4, 6-dichlorophénol (-hexachlorophène) plus classique, il est limité dans sont utilité clinique par le fait qu'il ne possède pratiquement pas d'activité vis à-vis des espèces microbiennes Pseudomonas résistantes aux antibiotiques et cliniquement importantes. Aucun des savons antiseptiques disponibles dans le commerce, pour autant qu'on le sache, n'est capable d'arreter la croissance de Pseudomonas sur le tissu vivant ou par des techniques microbiologiques in vitro. On a maintenant trouvé que le 5-chloro-2-(2,4-di dichlorophénoxy)-phénol, peut être rendu très efficace visà-vis d'une large gamme de bactéries, y compris Pseudomonas aeruginosa, par addition de 2-bromo-2-nitro-propane-1,3-diol. Cet alcanol bromé exerce un effet synergétique sur le bisphénol chloré en regard de ses propriétés bactéricides, comme cela est démontré dans des essais in vitro avec des compositions diluées car ni le bisphénol ni l'alcanol bromé ne sont efficaces seuls vis-à-vis de Pseudomonos aeruginosa dans de tels essais. Un synergisme est également montré par les compositions de l'invention sous une forme diluée par rapport à leur activité favorisée vis-è-vis des bactéries des types Escherichia Coli et Staphylococcus Aureus. L'invention crée une composition bactéricide renfermant du 5-chloro-2-(2,4-dichlorophénoxy)-phénol et du 2-bro mo-2-nitro-propane-?,3-diol. Le 2 -bromo-2-nitropropane-I,3-diol répond à la formule La quantité d'alcanol bromé oui est mélangée au 5-chloro-2-(2,4-dichlorophénoxy)-phénol, peut varier selon une grande mesure. L'effet de l'alcanol bromé peut être observé dans des compositions renfermant aussi peu que 0,001 partie en poids d'alcanol bromé par partie en poids de 5chioro-2- (2,4-dichlorophénoxy)-phénol. On préfère utiliser de 0,0 partie à environ 2 parties en poids d'alcanol bromé par partie en poids de bisphénol chloré, la gamme que l'on préfère plus particulièrement étant de 0,05 partie à environ 0,5 partie en poids par partie de bisphénol chloré.De plus grandes quantités d'alcanol bromé peuvent être utilisées, on obtient ainsi l'effet envisagée mais on ne trouve pas d'avantages techniques particuliers et il existe un inconvénient économique considérable lorsqu'on emploie de très grandes quantités. Les compositions de l'invention peuvent être utilisées en mblKnSeavec de grandes quantités d'eau, comme produits purificateurs liquides appropriés en combinaison avec des agents tensio-actifs. Les compositions sont, de préférence, de nature acide ou neutre et on un pli compris notamment entre environ 2 et 8. Le 2-bromo-2-nitropropane -diol est plus stable sous les conditions acides si bien que des compositions ayant un pH compris entre 2 et 7 sont préférées. Les solutions d'agents tensio-actifs qui sont des dispersions contenant ces compositions, peuvent être utilisées par des lavages de gants, instruments et vêtements chirurgicaux et pour le lavage du tissu vivant.A titre de variante, elles peuvent être traitées par des moyens bien connus pour une application topictlle sous la forme de crèmes, pommades, gelées, lotions et analogues pour le traitement de blessures ou de brûlures ou dans des applications orales sous la forme de pastilles , de tablettes, de collutoires ou de pâtes dentifrices pour le traitement ou la prophylaxie d'infections orales, ou de savons désodorisants en barres, de pulvérisations désodorisantes, de pulvérisations vaginales, de douches, de préparations anti-pelliculaires, de pulvérisations de produits fongicides, etc... Dans de telles préparations, les compositions comportent un véhicule inerte, le véhicule étant n'importe lequel des véhicules bien connus normalement utilisés dans de telles applications et qui n'est pas réactif du point de vue chimique avec les ingrédients actifs de l'invention. Dans les compositions solides comme les barres de savon, la quantité combinée de 2-bromo-2-nitropropane-1,3-diol et de 5-chloro-2-(2 ,4-dichlorophénoxy)-phénol, est avantageusement de 0,15 % en poids à 20 % en poids, notamment de 0,5 à 10 % en poids de la composition totale. Dans les compositions tensio-actives liquides qui sont habituellement préparées et commercialisées sous la forme de concentrés pour la dilution immédiatement avant l'utilisation sur des surfaces, la quantité combinée de 2-bromo-2-nitro propane-î , 3-diol et de 5-chloro-2-(2 ,4-dichlorophénoxy)- phénol est avantageusement de 0,15 à 30 * en poids, notamment de 0,5 à 10 * en poids de la composition de concentré totale. Dans une telle formulation, les compositions de l'in Invention peuvent être mélangées avec des matières tensioactives anioniques, cationiques, non ioniques et/ou amphotères. Dans d'autres formulations liquides et semi-solides pour l'application topique (crèmes, gelées, pommages, lotions, etc...) la quantité combinée de 2-bromo-2-nitro-propane-1 ,3-diol et de 5-chloro-2-(2,4-dichlorophénoxy)-phénol, est avantageusement de 0h-15 % en poids à 20 ffi en poids, notamment de 0,5 à 10 * en poids de la formulation totale. Des exemples de véhicules de base appropriés de type pommade, comprennent les paraffines molles, les alcools gras à faible point de fusion, les solutions aqueuses épaissies utilisant, par exemple, de la gomme adragante comme agent épaississant, une émulsion aqueuse et alcoolique, etc.... Les compositions de l'invention sont particulièrement utiles dans les applications en tant que germicides où le germicide bien connu à savoir le 2,2'-méthylène-bis-(3,4,6- trichlorophénol), connu sous le nom d'exachlorophène a été utilisé au préalable. Cependant, les compositions de l'invention ne montrent pas d'effets secondaires dangereux du point de vue biologigue, comme on le suppose avec l'hexachlorophène. Des essais comparatifs indiquent que les compositions de l'invention ontmême une gamme plus large d'effet antibactérien que l'exachlorophène. L'invention est représente, à titre d'exemple non limitatif aux dessins annexes. La fig. 1 représente les résultats d'essais utilisant le procédé aux plaques de gélose décrit de façon détaillée dans l'exemple 1 ci-après, dans cette figure SA signifie Staphylococcus Aureus ATCC 6538, EC Escherichia Coli ATCC 11229, PA Pseudomonas aeruginosa ÂTCC 15442, PF4 formulation P4, FE4 formulation E4, FF4 formulation F4, FG4 formulation 94 les fig. 2, 3 et 4 sont des graphiques illustrant les résultats des essais de l'exemple 3, dans ces figures APA signifie augmentation de pourcentage dans l'antisepsie, NJE nombre de jours d'essais, ELMCP études de lavage des mains composé P, ELMCD études de lavage des mains composé D, ELMCG études de lavage des mains composé G. E X E M P L E 1 Pour démontrer les propriétés bactéricides des com positiom de de l'invention, des solutions aqueuses diluées des compositions dans des formations tensio-actives, sont réalisées et éprouvées pour l'inhibition de la croissance de diverses bactéries représentatives. Le procédé utilisé est le "Agar Cup Plate Method for Bactérios tatic Activity " , procédé aux plaques de gélose pour l'activité bactériostatique qui est un essai classique dans ce domaine et qui est décrit par Lawrence et Block dans "Désinfection, stérilization and preservation " publié par lea et Febiger, 1968 page 174. Les essais sont d'une nature visuelle et qualitative. Sur une botte de Pétri circulaire, on place une couche de gel de gé losé nutritif stérile. Sur cette couche, on introduit une couche de milieu de gel nutritif contenant des bactéries1 (la couche d'ensemencement) et celle-ci est entoure par deux bouchons amovibles en acier inoxydable placés sur la couche stérile. Les bouchons en acier inoxydable sont ensuite retirés et la solution d'essai est introduite dans les cavités résultates. Les botes sont laissées à 350C pendant 24 heures. Les boites de Pétri sont ensuite inspectées pour les zones de croissance ou sanscrois- sance entourant les cavités d'essai. Sur les boîtes de Pétri où la solution d'essai est efficace vis-à-vis de la souche bactérienne dans le milieu nutritif, une zone d'inhibition où les bactéries ne se sont pas développées est observée, celle-ci entourant chaque cavité d'essai. De plus, la croissance de la bactérie et la coloration attenante, sont évidentes. Sur les boîtes de Pétri où la solution d'essai ne montre pas une telle activité, on n'observe pas de zone d'inhi bition. Les compositions de l'invention pour les essais sont mélangées avec une formulation tensio-active émolliente désignée par S ayant la composition suivante S agent solubilisant et stabilisant (glycol) 6,00 * en poids tensio-actif à base d'amide (alcanolamide lauryque de noix de coco) 4,00 % en poids composition d'alcoyl-aryl-sulfonate (lauryl-sulfate de diéthanolamine modifié, actif à 32 %) 50,00 * en poids agent opacifiant (copolymère acryliaue) 0,5 % en poids parfums 0,14 % en poids agents colorants traces agent tampon (acide citrique) 1,86 * en poids eau le reste. A ce composé S, on ajoute diverses quantités de 5-chloro-2-(2 ,4-di chlorophénoxy)-phénol et de 2-bromo-2-nitropropane- 1,3-diol pour réaliser divers désinfectants bactéricides. On prépare une septième formulation qui se compose du composé S avec 0,2 k en poids de 5-chloro-2-(2s4-dichlorophénoxy) - phénol et 0,1 % en poids de 2-bromo-2-nitropropane-1,3-diol. Cette formulation est désignée par la formule G. Les détails des compositions sont les suivants (les chiffres sont en parties en poids ) A B C D E F G Composé/S 100 100 100 100 100 100 100 5-chloro-2-(2,4-dichlorophénoxy)-phénol 1 1 1,5 1,5 2 2 0,2 2-bromo-2-nitropropane 1,3-diol 0, 0,1 G 0,1 O 0,1 0,1 On utilise également à des fins de référence, une émulsion de nettoyage de la peau antibactérienne du commerce contenant 3% d'hexachlorophène en tant que bactéricide désigné dans l'invention par formulation P. Deux dilutions de chaque composition avec de-l'eau stérile sont préparées et éprouvées, la première renfermant une partie en poids de composition dans quatre parties totales de composition et d'eau (désignée par A4, B4, etc...) et la deuxième renfer mant une tartie dans dix parties totales (désignée par D os B10, etc). Elles sont chacune éprouvées comme indiqué plus haut vis-à vis des bactéries Staphylococcus aureus ATCC 6538, Escherichia Coli ATCC 11229 et Pseudomonas aeruginosa ATCC 15442. Les résultats obtenus sont indiqués au tableau I ci-après. La fig. 1 illustre schématiquement l'aspect de certaines des boltes de Pétri éprouvées après la mise en oeuvre de cet essai. En ce qui concerne les botes de Pétri éprouvées dans la partie supérieure de la fig. 1, les boltes de Pétri sont celles dans lesquelles la formulation P4 est éprouvée. La première case à gauche se rapporte à l'essai vis-à-vis de Staphylococcus aureus et , dans cet essai, la boite de Pétri 10 renfermant le milieu de gel nutritif Il montre des zones d'inhibition 12 entourant les cavités éprouvées 13 où aucune coloration due à la croissance des bactéries n'est observée. Ceci indique que la formulation éprouvée est efficace vis-à-vis de cette souche bactérienne. La deuxième case de la ligne supérieure de la fig. 1, se rapporte à l'essai vis-à-vis des Escherichia Coli ATCC 11229. Dans eet essai, on constate qu'il n'y a pas de zone d'inhibition si bien cue la formulation trouvée se révèle être inefficace vis-à-vis de cette souche bactérienne. Le reste des boîtes de Pétri éprouvées est analogue en montrant soit de l'efficacité, soit aucune efficacité. (Voir tableau I page 10) E X E P L E 2 (témoin) On met en oeuvre dans cet exemple, le procédé aux plaques de gélose comme décrit dans l'exemple 1 sur des solutions aqueuses diluées du savon de l'exemple 1 seul et du savon de l'exem- ple 1 en mélange avec du 2-bromo-2-nitropropane-î,3-diol mais en l'absence de bisphénol. Le savon S est dilué avec dix fois son propre poids d'eau pour le premier essai témoin et le procédé aux plaques de géloise est effectué comme décrit vis-à-vis des bactéries Pseudomonas aeruginosa ATCC 15442. Il n'y a pas de zone d'inhibition formée après la culture pendant 24 heures à 350C. Pour le deuxième essai témoin, on mélange 100 parties en poids de savon standard S avec 0,1 partie en poids de 2-bromo 2-nitropropane-1,3-diol. Cette composition est ensuite diluée avec 10 fois son propre poids d'eau et la composition diluée est éprouvée vis-à-vis de Pseudomonas aeruginosa AECC 15442 par le procédé aux plaques de gélose mentionné plus haut. Aucune zone d'inhibition n'est formée après la culture pendant 24 heures à 350C. Une comparaison des résultats de ces deux essais témoins avec les essais des compositions B1o, D10, F10 et G10 et avec les compositions témoins k10, C10 et E10 de l'éxemple 1, montre que la combinaison de 5-chloro-2-(2,4-dichlorophénoxy)-phénol et de 2-bromo-2-nitropropane-1,3-diol est synergétique par rapport à son activité vis-à-vis des Pseudomonas aeruginosa ATCC 15442. EXEMPLE 3 L'aptitude d'un antiseptique à obtenir et à maintenir l'antisepsie sur du tissu vivant, peut être déterminée par l1uti- lisation réelle sur du tissu vivant. a conséquence, les composés D,P et G de l'exemple 1 sont examinés dans des études de lavage des mains réelles. Ires études de lavage des mains sont effectuées à l'aide de douze personnes choisies au hasarde Les personnes en question lavent leurs mains trois fois par jour pendant une période de 5 jours par un processus d'épuration chirurgical classique. Le processus implique l'emploi d'une quantité référencée de produit d'épuration en utilisant une quantité référencée du composé éprouvé avec une quantité référencée d'eau de lavage stérile. Le résidu de lavage de chacune des eaux de lavage, est éprouvé pour déterminer sa teneur en bactéries en fonction de la quantité de bactéries retirées de la peau Les résultats obtenus sont indiqués au graphique des fig. 2 à 4. L'ordonnée (axe vertical) de chaque graphique représente la quantité de bactéries éliminée par le procédé de lavage qui diminue progressivement en montrant une antisepsie accrue sur la peau avec une utilisation accrue de la formulation. Les formula- tions D et G selon l'invention sont des sujets des fig. 3 et respectivement 4. Les résultats montrent que les compositions de l'invention obtiennent au moins le niveau d'antisepsie sur le tissu vivant qui est efficace vis-à-vis de toute la large gamme de bactéries rencontrées sur le tissu vivant comme pour les formulations bien connues à l'hexachlorophène en plus d'avoir l'aptitude d'ar rêter la croissance des espèces microbiennes génantes Pseudomonas. EXEMPLE 4 On réalise des études d'inhibition de disques de papier avec des compositions selon l'invention afin de démontrer leurs propriétés bactéricides. Dans ce processus, on ajoute une couche de base stérile de gélose nutritive A.O.A.C. à chacune d'une série de botes de Pétri d'une dimension de 150 mm x 15 mm et on permet le durcis servent. Une couche d'ensemencement de gélose nutritive contenant des micro-organismes dispersés devant être éprouvée, est ensuite introduite sur la couche de base et est amenée à durcir. Un disque de papier d'un diamètre de 12,7 mm chauffé au préalable afin d'être stérilisé puis refroidi, est mis sur la couche d'ensemencement et on ajoute au disque de papier 0,05 ml de la solution germicide à éprouver.Les boîtes de Pétri sont mise en circulation toute une nuit et chacune est inspectée pour la zone d'inhibition autour du disquedepapier. La présence d'une telle zone indique l'activité de la solution germicide vis-à-vis du microorganisme éprouvé. Les diamètres de ces zones sont mesurés. Les formulations éprouvées et les résultats obtenus dans cet essai, sont Indiqués au tableau II ci-apres. (Voir tableau II pageîî ) référence de la formulation H J K (témoin) (témoin) savon S (comme dans l'exemple 1) (parties en poids) 100 100 100 5-chloro-2-(2,4-dichlorophénoxy phénol) (parties en poids) 1,5 1,5 2-bromo-2-nitropropane-1,3- diol (parties en poids) 0,1 - 0,1 eau quantité suffisante pour 1000 parties en poids. zone du diamètre d'inhibition (mm) Staphylococcus aureus ATCC 6538 41,08 39,66 25,20 Escherichia Coli ATCC 11 229 36,83 31,75 O EXEMPLE 5 Les compositions de l'invention sont éprouvées pour l'activité vis-à-vis de diverses bactéries au moyen de l'essai quantitatif de réduction de cellules reconnu officiellement. Cet essai est détaillé dans "Official Methods of Analysis of the association of official analytical Chemists", procédés officiels d'analyse de l'association des chimistes analytiques officiels, 11ème édition 1970 publié par "Association of Official Analytical Chemists", Washington D.C. L'essai apparaît sous le chapitre "Produits d'hygiène germicides et détergents (6)-action finale officielle", aux pages 66 à 68. En résumé, l'essai est conçu pour établir le taux selon lequel une composition germicide agit contre une bactérie. Une solution d'essai de référence de bactéries est réalisée et le nombre de colonies de bactéries est compté par un moyen connu. Cette solution d'essai de référence est ensuite mélangée avec la formulation germicide et des parties des mélanges sont retirées après une période de temps allant de 15 secondes à 5 minu- tes. La partie est neutralisée pour rendre la formulation inef ficace vis-à-vis des bactéries. Le pH de la solution est standardisé et une quantité aliquote est introduite dans des boîtes de Pétri auxquelles on a ajouté du gel de gélose nutritif A.0. A.C. renfermant des agents de neutralisation supplémentaires. Les boîtes de Pétri sont amenées a incuber à 350C si bien que toutes les bactéries restant dans la partie aliquote, c'est-à- dire qui n'ont pas été tuées par exposition à la composition germicide pour la période de temps choisie, crossent. Ensuite, le nombre de colonies de bactéries sur la boîte de Pétri est compté et le résultat est fonction du nombre de colonies de bactéries dans la solution d'essai de référence utilisée initialement. Une composition germicide efficace conformément à cet essai est une composition qui effectue une réduction à 99,999 % du nombre des bactéries lors d'un contact de 30 secondes. Les formulations germicides éprouvées dans cet exemple renferment le savon S comme décrit à l'exemple 1. Pour les essais, ce savon S est mélangé avec 0,1 ,h de 2-bromo-2-nitropropane-î,3-diol. Certaines formulations sont également mélangées avec 1,5 % de 5-chloro-2-(2,4-dichlorophénoxy)phénol. Cn éprouve diverses dilutions de la composition. Les solutions de référence des micro-organismes, des agents neutralisant, etc... et les plaques de gélose sont réalisées comme décrit en liaison avec le procédé d'essai mentionne plus haut. Les résultats des essais sont indiqués au tableau III suivant. La notation T.li.T.C. signifie "trop nombreux à compter".Les résultats montrent ltefficacité des compositions de l'invention vis-à-vis de diverses bactéries conformément à ce processus d'essai classigue, comparativement à d'autres compositions ne comportant pas de bisphénol. T A B L E A U 1 B a c t é r i e s Formulation Staph. ATCC 6538 E. coli ATCC 11229 Pseudomonas ATCC 15442 A4 efficace efficace non efficace A10 " " " B4 " " efficace B10 " " " C4 " " non efficace C10 " " " D4 " " efficace D10 " " " E4 " " non efficace E10 " " " F4 " " efficace F10 " " " G4 " " " G10 " " " P4 " non efficace non efficace P10 " " " T A B L E A U III FORMULATION EPROUVEEE Micro Cellules Partie Durée Durée Cellu- % dé Référen- Parties Parties Parties Partie orga- à l'origi- aliquote de d'in- les comp- réd. ce de savon Bisphé- bromé eau nisme ne par ml de for- Con- cuba- tées s/la des l'essai. S nol. Alcanol éprouvé de solu- mulation tact tion plaque. cel tion éprou- éprouvée sec. de la lules vée. (ml) gélose (heu res) 10 100 1,5 0,1 - Staphy- 4,4x107 1,0 30 72 0 100 lococ- 0,1 30 72 0 100 cus aureus 11 100 1,5 0,1 100 ATCC 4,4x107 1,0 30 72 0 100 6358 0,1 30 72 0 100 12 100 1,5 0,1 1000 4,4x107 1,0 30 72 0 100 0,1 30 72 0 100 13 100 - 0,1 - 4,4x107 1,0 30 72 T.N.T.C. 0 0,1 30 72 T.N.T.C. 0 14 100 1,5 0,1 - E. Coli 3,7x107 1,0 30 72 0 100 ATCC 0,1 30 72 0 100 15 100 - 0,1 - 11229 3,7x107 1,0 30 72 T.N.T.C. 0 0,1 30 72 T.N.T.C. 0 16 100 1,5 0,1 - Pseu- 5,6x108 1,0 30 72 0 100 domo- 0,1 30 72 0 100 nas 17 100 1,5 0,1 100 aeru- 5,6x108 1,0 30 72 225 99,999 gino- 0,1 30 72 11 100 sa ATCC R E V E N D I C A T I O X S 1 - Composition bactéricide caractérisée en ce qu'elle comprend un mélange de 5-chloro-2-(2,4-dichlorophénoxy)-phénol et de 2-bromo-2-nitro-propane-1,3-diol. 2 - Composition suivant la revendication 1, caractérisée en ce qu'elle renferme de 0,01 à 2 parties en poids de 2-bromo2-nitro-propane- 1,3-diol par partie en poids de 5-chloro-2 (2,4-dichlorophénoxy)-phénol.