Brevet FR2226167A1 — publié le 19741115

La présente invention concerne une substance nouvelle, la diméthylamino-2-diéthylène-imidophosphamido-6 méthyl-7 purine, un procédé de préparation de celle-ci et un produit médicinal à base de cette substance. La substance faisant l'objet de l'invention répond à la formule suivante La substance nouvelle proposée est un corps cristallin, incolore, partiellement soluble dans l'eau, facilement soluble dans le chloroforme ainsi que dans les cops en ébullition suivants : alcool éthylique (1:5), toluène (1:70), benzène (1:70); dichîcréthane (1:6). Cette substance n?a pas de point de fusion net et se décompose graduellement à des températures au-dessus de 2500 C. La diméthylamino-2 diéthylène-imidophosphamido-6 méthyl-7 purine présente une activité cancérolytique et peut trouver des applications ai médecine pour le traitement des néoformations malignes du système hémopolétique. On connaît djà des produits médicaux destinés à combattre les affections indiquées, notamment le thiophosphamide, la dipine, etc.., dont les propriétés cancérolytiques sont dues à la présence de groupements éthylène-imine. Ces produits présentent une sélectivité insuffisante dans leur action sur les tissus tumoraux. Leurs effets antitumoraux sont temporaires et ne s'obtiennent d'ailleurs que lorsque ces produits sont administrés en doses qui provoquent certains phénomènes secondaires Suivant l'invention,le procédé de préparation de la diméthylamino-2 diéthylène- imidophosphamido-6 méthyl-7 purine consiste à porter la théobromine à ébullition et à la traiter successivement à cette température par l'oxychlorure de phosphore et par le pentachlorure de phosphore, à porter la dichloro-2,6 méthyl-7 purine formée à 50 -60 C en présence d'ammoniaque, à faire agir en chauffant sur la chloro-2 amino-6 méthyl-7'purine formée une solution aqueuse de diméthylamine, à faire réagir la diméthylamino-2 amino-6 méthyl-7 purine sur l'oxychlorure de phosphore ou sur le pentachlorure de phosphore et l'acide formique en ébullition, à traiter le bichlorure d'acide diméthylamino-2 méthylpurinyl-7 amido-6 phosphorique formé par l'éthylène-imine au sein d'un solvant organique en présence d'un accepteur de chlorure d'hydrogène, et à séparer le produit final. On utilise en tant que solvant organique pour la préparation du produit fial le chloroforme, le benzène, le dichloréthane, le chlorure d'éthylène. Comme cela a été indiqué plus haut, la diméthylamino-2 diéthylène-imidophosphamido-6 méthyl-7 purine est la substance active d'un produit médicinal qui trouve des applications pour le traitement des néoformations malignes du système hémopoiétique. Be produit médicinal faisant l'objet de l'invention peut être utilisé en poudre (lyophilisée par 5 % de polyvinylpyrrolidone). Pour les injections intramusculaires et intraveineuses, il est recommandé d'utiliser un produit contenant ladite substance associée à un solvant pharmaceutique. On utilise en tant que solvant pharmaceutique une solution isotonique de chlorure de sodium, ou de l'eau distillée. Il est avantageux d'employer une solution à 0,1 à 1 % de substance active dans le solvant pharmaceutique. On prépare la solution pour injections immédiatement avant remploi en dissolvant une poudre stérile de diméthylamino-2 diéthylène-imidophosphamido- 6 méthyl-7 purine dans de l'eau distillée ou dans une solution isotonique de chlorure de sodium. les études par essais sur animaux de l'activité antitumorale du produit médicinal proposé, ont permis d'établir que ce produit était capable d'inhiber sensiblement la croissance de nombreuses tumeurs ré-inoculées chez les souris et chez les rats. La souche de tumeur la plus sensible à l'action du produit proposé est le sarcome du rat Jensen. On a observé qu'un retard considérable dans la croissance de la tumeur (de 95 %) se produisait lorsque le produit était administré en une dose unique de 60 mg/kg. On a observé une activité antileucémique considérable du produit proposé sur des souris de la lignée C57 à leucose ré-inoluée La. Dans tous les essais,la durée de vie des animaux qui avaient reçu le produit proposé par voie intrapéritonéale a été de 2 à 3 fois supérieure à la durée de vie des souris témoins qui n'avaient pas été soumis à ce traitement. Par son activité antileucomique le produit proposé est supérieur à de nombreux dérivés de l'éthylène-imine utilisée dans la pratique médicale, comme le thiophosphamide, la dipine, etc. Les renseignements sur l'action du produit proposé, du thiophosphamide et de la dipine, au point de vue de la durée de vie des souris affectées de leucose La, sont résumés dans le tablealsuivant. Produit Durée de vie maximale, % par rapport aux souris témoins. Thiophoshamide 20 Dipine 56 Produit proposé 204 'les indices hématologiques témoignent eux-aussi d'une évolution plus favorable de la leucose La ré-inoculé chez les souris qui avaient subi le traitement. Chez les souris atteintes de leucose 'la et soumises à l'action du produit proposé, le nombre total de leucocytes à la fin de 11 essai ne diffère pratiquement pas du nombre initial, alors que chez les animaux - témoins se développe, à la fin de leur vie une leucocytose marquée. La proportion des formes immaturées dans le groupe témoin à la fin de l'essai augmente rapidement, alors que chez les animaux du groupe d'essai cet accroissement n'est pas très important. Chez les animaux ayant subi le traitement, le produit proposé n'entraîne pas de leucopénie profonde, comme on l'observe pour les autres dérivés de ltéthylène-imine. Les études sur la toxicité ont montré que le produit proposé était moins toxique que le thiophosphamide et la dipine. 'les propriétés cumulatives du produit proposé sont moins marquées : l'indice de cumulation du produit, est 4 fois moins élevé que celui du thiophosphamide et 67 fois moins élevé que celui de la dipine. Par le caractère de son action sur les systèmes biologiques, le prodit proposé se classe dans les moyens alcoylants cytostatiques. Adiinis en doses modérées, le produit est capable d'inhiber sdlect-ivement les processus proliférateurs dans les tissus, notamment dans les tissus tumoraux. Comme les autres substances alcoylantes, ce produit réagit avec les centres nucléiques des molécules des acides nucléiques et des protides, en entraînant des modifications des diverses fonctions des cellules. l'emploi du produit en-doses tolérables élevées entraîne des effets de désintégration plus marquées sur les cellules-tumorales que sur les cellules normales. C'est cet effet qui est à la base de l'action anticancéreuse du produit. Le produit a été étudié en clinique sur 80 malades atteints de myéloleucoses chroniques et-de leucoses aigües. Il s'est révélé comme étant très efficace dans les myéloleucoses chroniques réfractaires aux agents anticancéreux connus, comme le myélosan, le myélobromol. Pour traiter les malades atteints de myéloleucose chronique, il faut commencer par administrer une dose de 40 mg(en solutions à 0,1 - 1 de substance active dans un solvant pharmaceutique) tous les jours. Si la tolérance après 6 à 7 injections intraveineuses ou intramusculaires est bonne, on peut porter graduellement la dose à 60 - 80 mg. I1 convient alors de contrôler soigneusement le sang du malade. La dose globale est de 1,5 à 7 grammes. Sous l'effet du produit proposé on a observé chez les personnes atteintes de myéloleucose chronique une diminution des dimensions de la rate, un abaissement de 30 à 80 % du nombre de leucocytes, allant de pair avec une réduction du nombre de formes immaturées de la série myéloide. L'efficacité du traitement de la myéloleucose dépend du degré de déficience des organes hémopoiétiques. Elle est fonction de la dose employée au cours du traitement. Généralement, le produit est bien toléré par les malades. Une complication éventuelle due à un sur-dosage ou bien à l'hypersensibilité du malade est la leucopénie. I1 est donc indispensable d'effectuer un contrôle régulier du sang, aussi bien pendant toute la durée du traitement que durant la quinzaine qui suit. L'emploi du produit est contre-indiqué en cas d'affections graves du foie et des reins. I1 ne doit pas être administré dans des états terminaux , ainsi que dans les cas de leucopénie avancée. Be produit proposé est conditionné en flacons stériles de 0,04 g. I1 convient de le conserver dans un endroit frais, à l'abri de la lumière. Be produit peut être conservé pendant un an et davantage sans perdre son activité. Le procédé d'obtention du diméthylamino-2 diéthylèneimido-phosphamido-6 méthyl-7 purine, qui est le principe actif du produit médicinal proposé, est mis en oeuvre de préférence de la manière suivante On fait bouillir la théobromine en présence d'un excèsd'oxychlorure de phosphore, jusqu'à formation d'une solution. On ajoute à cette solution du pentachlorure de phosphore et on fait bouillir 10 à 12 heures jusqu'à ce'que celui-ci se dissolve. On filtre la masse réactionnelle refroidie, on place le dépôt, sans le sécher ni le purifier au préalable, dans de l'ammoniaque refroidie à 5 - 100C, on agite et on porte ce mélange à 50-60 C en présence de n-butanol pour éviter la formation de mousse pendant 10 à 12 heures. On sépare le produit formé et on le chauffe sans le purfier en présence d'un excès d'une solution aqueuse à 33% de diméthylamine, ensuite on refrodit et on filtre. On purifie la diméthylamino-2 amino-6 méthyl-7 purine par cristallisation dans l'alcool hydraté et on soumet le produit purifié à une phosphorylation par l'un des deux procédés suivants : soit par l'oxychlorure de phosphore, soit par le pentachlorure de phosphore et l'acide formique. Dans le premier cas, on le fait bouillir avec un excès d'oxychlorure de phosphore pendant 8 heures, ensuite on chasse l'oxychlorure de phosphore par distillation sous vib à 45-50 C, tandis quson agite soigneusement le résidu cristallisé avec du toluène anhydre en et on chasse ce dernier et le résidu POIL3 par distillation sous vide. Dans le second cas, on fait bouillir la diméthylamino-2 amino-6 méthyl-7 purine dans du chloroforme avec une quantité calculée de pentachlorure de phosphore pendant 5 heures environ, jusqu'à cessation du dégagement de chlorure d'hydrogène on refroidit lentement la solution, on y ajoute lentement, en agitant et à une température de 200C, une quantita calculée d'acide formique. On fait bouillir la solution pendant une heure, on chasse le chloroforme et le chlorure d'hydrogène par distillation sous vide. On ajoute au produit obtenu patte premier ou par le second procédé un solvant organique, de préférence le chloroforme, et on verse lentement dans cette suspension un mélange d'éthylène-imine et d'une solution de carbonate de potassium dans l'eau, on agite pendant une demi-heure à 20C C, on sépare la couche de chloroforme, on la déshydrai et on réduit son volume par évaporation dans le vide à une température d'environ 350C. On purifie le résidu par cristallisation subséquente dans l'alcool et dans le toluène, et l'ôn obtient la diméthylamino-2 diéthylène-imido-phosphnmido-6 méthyl-7 purine. Au Beu du carbonate de potassium, qui est un accepteur de chlorure d'hydrogène, onpeut utiliser l'hydrogénocarbonate de sodium, la triéthylamine, etc. D'autres caractéristiques et avantages de l'invention ressortiront à la lecture de la description qui va suivre de plusieurs exemples non limitatifs de préparation de la diméthylamino-2 diéthtGne-imidophosphamido-6 méthyl-7 purine. Exemple 1. a) On fait bouillir 200 grammes de théobromine avec 1000 grammes d'oxychlorure de phosphore pendant 9 à 10 heures , on refroidit et on fait bouillir la solution obtenue avec 464 grammes de pentachlorure de phosphore pendant 10 à 12 heures. On sépare le dépôt formé au cours du refroidissement et on le transfère immédiatement dans un mélange de 2 litres d'ammoniaque à 25 % et de 1 kilogramme de glace. On chauffe la masse en présence de 60 cm3 de n-butanol à 500 - 600 C pendant 10 à 12 heures, on filtre, on lave le dépôt à l'eau et on obtient 218 grammes de chloro-2 amino-6 méthyl-7 purine (146,5 grammes de ce même produit sec). On chasse par distillation l'oxychlorure de phosphore de la liqueur-mère et on réutilise cet oxychlorure de phosphore dans la charge-suivante sans le soumettre à une purification complémentaire, et on obtient à partir de ce résidu une quantité additionnelle (environ 5%) de chloro-2 amino-6 méthyl-7 purine. On agite la chloro-2 amino-6 méthyl-7 purine humide (218 g) à une température de 65 à 750 C avec 1500 cm3 d'une solution aqueuse à 33 % de diméthylamine pendant 5 à 6 heures, on chasse la solution de diméthylamine par distillation (600 cm3 environ), on refradit le résidu, on le filtre et on le cristallise dans lt00 cm3 d'alcool à 80 %. On obtient 96,5 grammes de diméthylamino-2 amino-6 méthyl-7 purine à point de fusion de 280 - 2840C. Calculé, % : C 50,0 ; H 6,25; N 43,75 ; 08H12N. Trouvé, % : C 49,65; H 6,01; N 43,78. b) On fait bouillir 96,5 grammes de diméthylamino-2 amino-6 méthyl-7 purine avec 500 cm3 d'oxychlorure de phosphore en agitant pendant 8 heures. On chasse l'o2yehlo- rure par distillation, on agite le résidu avec 600 cm7 de toluène anhydre, on chas8e-le toluène par distillation sous vide, on ajoute au résidu 2 litres de chloroforme.On agite le mélange et on ajoute à la suspension, en refroidissant 100C), un mélange de 57,9 cm3 (5 à d'éthylène-imine et d'une solution de 104 grammes de carbonate de potassium dans 520 cm3 d'eau, on agite ensuite à 200C pendant une demi-heure, on sépare la couche de chloroforme, on la sèche, on réduit son volume par évaporation et on cristallise le résidu d'abord dans l'alcool (1:5) et ensuite dans le toluène (1:70). le rendement en diméthylamino-2 diéthylèneimidophosphamido-6 méthyl-7 purine est de 31 à 32 %. C12HgN80P. Calcule, % : C 44,72 ; H 5,90; N 34,78; -r 9,62. Trouvé, % : C 44,69; H 5,78; N 34,69; P 9,57. Exemple 2. On fait bouillir pendant 5 heures 96,5 grammes de diméthylamino-2 amino-6 méthyl-7 purine, obtenue d'une façon analogue à celle de l'exemple 1 (a),avec 104 grammes de pentachlorure de phosphore dans 1000 cm3 de chloroforme anhydre ne contenant pas d'alcool. On ajoute graduellement à la solution (à 2O0C) 19,3 cm3 d'acide formique, on fait bouillir pendant 1 heure, après quoi on réduit son volume par évaporation sous vide (à 30400C). On ajoute au résidu 2 litres de chloroforme, à une température de 5 à 100C et en agitant vigoureusement, on ajoute un mélange contenant 57,9 cm3 d'éthylène-imine et une solution de 104 grammes de carbonate de potassium dans 520 cm3 d'eau, on agite pendant une demi-heure, on sépare la couche de chloroforme, on déshydrate et on chasse le chloroforme par distillation à environ 350C. On cristallise le résidu dans l'alcool (1:5) et ensuite dans le toluène (l:70).-Le rendement en diméthylamino-2-diéthylène imidophosphamido-6 méthyl-7 purine recristallisée deux fois est de 31 à 32 %. Bien entendu, l'invention n'est nullement limitée aux modes de réalisation décrits et représentés qui n'ont été donnés qu'à titre d'exemple. En particulier, elle comprend tous les moyens constituant des équivalents techniques des moyens décrits ainsi que leurs combinaisons, si celies-ci sont exécutées suivant son esprit et mises en oeuvre dans le cadre des revendications qui-sivent. REVENDICATIONS 1.- Diméthylamino-2 diéthylène-imidophosphamido-6 méthyl-7 purine répondant à la formule 2.- Produit médicamenteux pour le traitement des néoformations malignes du système hémoporetique, caractérisé en ce qu'il contient en tant que principe actif la diméthylamino-2 diéthylène-imidophosphamido-6 méthyl-7 purine faisant l'objet de la revendication ?. 3.- Produit médicamenteux suivant la revendication 2, caractérisé en ce qu'il contient ledit principe actif associé à un solvant pharmaceutique. 4.- Produit médicamenteux suivant la revendication 2 ou 3, caractérisé en ce qu'il contient en qualité de solvant pharma ceutique une solution isotonique de chlorure de sodium, ou bien de l'eau distillée. 5.- Produit médicamenteux suivant l'une des revendications 2 à 4, caractérisé en ce qu'il est constitué par une solution à 0,1-1 % de principe actif dans un solvant pharmaceutique.