Brevet FR2240238A1 — publié le 19750307

La présente invention concerne des enzymes li@@@@ un polymére et, plus particulièrement, des enzymes liés à un polymère contenant des fonctions carbonyl,(qui serontappelées-polymères carbonyle- dans la suite de la description) lequel est réticulé avec un dialdéhyde. La liaison des enzymes avec des supports convenables de façon à rendre insolubles les dits enzymes et, de ce frit, les r@@@re de façon répétée, ou continue , utile spour la transformationdes substrats transformables enzymatiquement, à été d'un grand interêt ces derrières années.Spécifiquement, Silman et al., "Water Insoluble Derivatives of Enzymes", "Antigens and Antibodies", "Annual Review of Biochemestry", vol. 35, part II, P.I. Rayer, Editor ; "Annual Revievi Inc.", Palo Alto California, pages 873-908, 1966, font état de nombreusse méthodes pour lier les enzymes aux supports, y compris ltadsorption, ltinclusion à l'intérieur du réseau du support, les liaison et réticulation cava- lentes. L'invention met en évidence qu'une quantité plus importante d'en zyme peut être liée par covalence aux polymères carbonyle, tels, que les polymères d'aldéhyde et de cétone, si le palymere-carbonyle est réticulé, c'est-à-dire rendu insoluble avec un dialdéhyde plutôt qu'avec d'autres agents réticulants connus. De cette façon, le nombre de groupements aldéhyde convenant à la liaison de l'enzyme n'est pas diminué.C'est-à-dire qu'en faisant réagir le polymère carbonyle avec l'aldéhyde, via un aldol, la réaction par condensation n'engendre pas une diminution du nombre-des groupements aldéhyde -grace auxquels se forme la réticulation- disponibles dans le polymère carbonyle, comme il résulterait de l'emploi d'autres réticulants, car les groupements - aldéhyde de l'agent réticulant dialdéhyde remplacent ceux du polymère carbonyle prélevés par la réaction de réticulation. De ce fait le polymère est réticulé et le nombre de groupements aldéhyde disponibles sur le polymère réticulé reste identique, permettant ainsi, à un nom bre plus important d'enzymes, de se lier au polymère. Les compositions de l'invention, comme mentionné brièvement ci dessus, comprennent les polymères carbonyle qui sont réticulés avec les dialdéhydes, de formule dans laquelle R est un groupement (CH2) , x est un nombre entier pouvant -orendre toutes les valeurs de O à 15 inclus, un groune@@@ cycloaliphatique contenant de 4 à 8 (inclus) atomes de carbone, ou groupement arylène contenant de 6 à 10 (inclus) atomes de carbone. La réaction de réticulation est du type condensation d'un aldol elle a lieu entre les groupements réactifs du polymère carbonyle et les atomes o(-carbonés du dialdéhyde. La réaction s'effectue dans les conditions typiques de réaction d'un aldol, telles qu'établies dans "The Aldol Condensation", Nielson et al. ; t'Organic Reactions", vol 16, pages 1-85, John Wiley & Sons, New-York, 1968.En général, la réaction est réalisée à une température comprise entre O et 8 C. Le milieu réactionnel est maintenu basique, c'est-à-dire à un pH supérieur à 7, par addition de produits bien connus1 tels que par exemple, l'hydroxyde de sodium dans l'éthanol, l'hydroxyde de calcium ou de barium, lthydroxyde de magnésium, l'hydroxyde d'aluminium ; des amines primaires ou secondaires, telles que la pyrrolidone, morpholine, piperidine, diéthylamine ; des acides, tels que l'acide acétique, l'acide sulfurique ; des sels, tels que le carbonate de calcium, le phosphate de sodium, les acétates de pyrrolidinium et de piperidinium et autres produits similaires. Le polymère réticule, formé selon le procédé, est insoluble et, de ce fait, précipite dans la solution. La récupération du polymère peut s'effectuer par filtration, centrifugation etc.. Les polymères réticulés de l'invention sont, de préférence, prépa rés pour être par la suite liés catalytiquement à des enzymes actifs. Dans ce but, le polymère carbonyle doit, généralement, devenir apte à réagir avec l'enzyme qui lui sera ensuite lié. Ceci est réalisé, pour la plupart des polymères aldéhyde, par réaction- du polymère avec un agent solubilisant convenable tel qu'un bisulfite, spécifiquement un bisulfite de métal alcalin ou alcalino-terreux, tel qu'un bisulfite de sodium, de potassium, de calcium etc.. La réaction s'effectue à une température comprise entre environ 250 et environ gOOC, sous pression atmosphérique ou, éventuellement, à une pression supérieure ou inférieure à la pression atmosphérique. Le procédé est décrit plus en détail dans le brevet américain no 2.657.192. Après le traitement au bisulfite, les polymères d'aldéhyde sont rendus hydrophiles par réticulation, ainsi qu'énoncé cisdessus. Le terme "hydrophile, utilisé dans le texte, signifie que le polymère est mouillable ou gonflable, mais n'est pas très soluble, dans l'eau. Les compositions peuvent contenir des éléments ou parties hydrophobes pourvu qu'elles aient aussi des parties hydrophiles fonctionnant comme telles, lorsqu'elles sont mises en contact avec l'eau. Si on le désire, la phase de réticulation peut être réalisée en premier et la réaction-au bisulfite en second, lorsque le polymère réticulé doit titre employé pour relier un enzyme, le seul critère étant que le produit résultant doit se trouver dans un état permettant sa réaction avec enzyme. L'enzyme réagit avec le polymère hydrophile à une température inférieure à celle où l'enzyme est désactivé.Les teepératuresde-désac- tivation des enzymes sont bien connues de l'homme de l'art et ne nécessitent pas, de ce fait, d'heure rappelées. I1 suffit de dire cue l'on doit utiliser des températures inférieures à environ 750C et, de préférence, comprises entre-environ 50 et 550 C. La réaction a lieu, de préférence, en présence de tampons pour contrôler le pH du mélange réactionnel à un niveau désiré, et sous agitation, le pH particulier étant fonction de l'enzyme particulier qui est lié selon les techniques connues. En ce qui concerne les polymères de cétone, on peut utiliser le même procédé que ci-dessus concernant les polymères d'aldéhyde. Il en résulte un polymère de cétone réticulé. Lorsque l'on utilise les polymères de cétone comme supnorts pour les enzymes, si les polymères eux-memes ne sont pas suffisamment hydrophiles pour leur permettre de réagir avec l'enzyme, les mêmes techniques de solubilisation peuvent etre également utilisées.C'est-à-dire que certains polymères de cétone, ainsi que les polymères d'aldéhyde, ne sont pas, per se, solubles dans l'eau et,puisque la-plugart des enzymes sont dénaturés par des solvants organiques et qu'ainsi toute réaction avec eux doit Astre effectuée en milieu aqueux, les polymères de cétone doivent également Astre rendus hydrophiles avant d'entrer en contact avec l'enzyme. Les réactions de ce genre sont décrites dans le brevet américain 3.271.334. Lorsque le polymère d'aldéhyde ou de cétone est, per se, soluble dans l'eau, la réaction du bisulfite n'a pas besoin d'avoir lieu et l'enzyme peut être mis en contact avec le polymère immédiatement après l'avoir rendu insoluble1 par réticulation avec l'aldéhyde ainsi que précédemment mentionné. Le point essentiel, lorsque la liaison de l'enzyme doit être réalisée, est que le produit d'addition final enzyme-polymère doit être hydrophile de façon à pouvoir Astre utilisé pour la transformation enzymatique des substrats en leurs produits de transformation. Par exemple, dans un mode de réalisation spécifique, la polyacroléine, polymère insoluble dans l'eau, doit être dtabord -fiise en contact avec un bisulfite, tel que le bisulfite de sodium, de façon à rendre le polymère soluble dans l'eau. Dans cette condition, cependant, le polymère ne peut pas réagir avec un enzyme, car il est pratiquement in ossible de récupérer un produit quel qu'il soit. La réticulation du produit alymère-bisulfite avec un dialdéhyde lui donne, cependant, une consistance de gel et le rend effcacement hydrophile lui permet- tant, ainsi, de réagir avec l'enzyme.Le résultat de ces deux réactions est que le bisulfite brise certains des cycles hétéro-cycliques de la polyacroléine aus-entant ainsi, sur ce-tte dernière, le nombre de grounements aldéhyde réctifs vis-a-vis des enzymes, en plus de nombreux groupements bisulfite. Le dialdéhyde réait avec certains de ces groupements bisulfite et aldéhyde avec la formation de liaisons -CH=C- entre deux molécules de polymère réticulant de ce fait la poly CHO acroléine. La réaction de l'enzyme, par exemple, l'invertase, forme un produit d'addition ou une liaison covalente entre l'enzyme, les groupements aldéhyde disponibles et également avec les groupements bisulfite. Des exemples de polymères carbonyle pouvant être utilisés ici comprennent ceux obtenus selon tout procédé connu à partir de monomères d'aldéhyde tels que acroléine ; crotonaldéhyde ; ?-méthyl-2-butenal 2,3-diméthyl-2-butenal ; 2-éthyl-2-hexenal ; 2-decenal ; 2-dodecenal 2-méthyl-2-pentenal ; 2-tetradecenal et autres composés semblables. Ils peuvent être utilisés seuls, ou en mélanges, en quantités pouvant aller jusqu'à 95%, en poids, par rapport au poids total de copolymère, de chacun d'entre eux et/ou de tout autre monomère copolymérisable connu pouvant réagir tels que les esters d'alcool non saturés, par exemple les esters allylique, crotylique, vrnylique, butenylique etc.., les esters d'acides polybasiques et monobasiques, aliphatiques et aromatiques, saturés et non saturés tels que les acides acétique, ronionique, butyrique, valérique, adipique, maléique, fumarique, benzol que, phtalique, terephtalique etc.., les composés cycliques de vinyle (y compris les hydrocarbures aromatiques monovinyliques) par exemple le styrène, l'o-, m-, et p-chlorostyrènes, -bromostyrènes, -fluorostyrènes, -méthylstyrèn es, -éthylstyrènes ; de nombreux styrènes polysubstitués, par exemple le di-, tri-, et tetra-chlorostyrènes, -bromostyrènes etc.. ; vinyl naphtalène, chlorure de vinyle, divnyl benzène, allyl benzène, vinyl pyridine, di-allyl benzène, différents styrènes à cycle substitué, i-substitué et substitué sur le noyau tels que -méthyl styrène, o(-méthyl-p-méthyl styrène etc.. ; les éthers non saturés, tel que l'éthylvinyléther etc.. ; les arnides non saturés tels que acrylamide, méthacrylamide etc.. ; les acrylanides N-substitués tels que N-méthyl-acrylamide, N-allyl-acrylamide, N-mebhylol acrylamide etc.. ; les acrylates tels que les acrylates et méthacrylates de méthyle, éthyle, propyle, butyle etc.. et autres comonomères mentionnés par exemple dans le brevet américain 2.657.192. On peut également utiliser dans le procédé des polymères tels que les copolymères d'éthylène et de l'oxyde -de carbone et de nombreux produits d'addition du glyoxal. Des exemples d'autres polymères carbonyle pouvant etre utilisés comprennent ceux obtenus selon tout procédé connu et en des quantités semblables à celles indiquées ci-dessus en ce qui concerne les polymères d'aldéhyde provenant des monomères de cétone suivants : méthyl vinyl cétone, méthyl allyl cétone, méthyl isoprényl cétone, éthyl allyl cétone, phényl vinyl cétone, p-tolyl-vinyl cétone. On peut, également, utiliser des polymères tels que les polytvinylpyridiniurn cétones) et halocétones; des copolymères; copolymères d'aldéhyde ci-dessus mentionnés et les monomères de cétone avec ou sans les comonomères copolymérisables ci-dessus mentionnés ; le polyacétal et autres composés semblables. Le poids moléculaire des polymères utilisés n'est pas critique c'est pourquoi lton peut utiliser des polymères ayant des poids moléculaires aussi faibles que 1000. En ce qui concerne les dialdéhydes utilisables dans ce procédé, on peut utiliser des produits tels que les aldéhydes succinique, glutarique, adipique, pimélique, subérique, azélique, sébacique, oxalique, octadecanedial, 1,2- ou 1,3-cyclopentadiacétaldéhyde, 1,2- ou 1,3-cyclobutanèdiacétaldéhyde, 1,2- ou 1,3- ou 1,4-cyclohexanediacétaldéhyde, 1,2- ou 1,3- ou 1,4-cyclopentanediacétaldéhyde,1,2ou 1,3-ou 1,4- ou 1,5-dicyclooctanediacétaldéhyde, o-benzènediacétaldéhyde, m-benzènediacétaldéhyde, p-benzênediacétaldéhyde, 1,2naphtalènediacétaldéhyde et autres produits similaires comportant une chaîne ramifiée ces dialdéhydes étant également satisfaisants. Des enzymes pouvant être utilisés pour fournir les nouveaux produits liés comprennent les enzymes proteolytiques, hydrolases, amylases, dehydrogenases, kinases, oxidases, deaminases, amidases, antigènes, anticorps, etc.. comprenant la dehydrogenase lactique, créatine, phosphokinase, trypsine, papalne, ribonuclease, alk. phosphatase, amiloglucosidase, dextranase, glucose oxidase, amidase, penicilline amidase, chymotrypsine, -galactosidase7 pyruvate kinase, ficine, pepsine, carboxypeptidase, streptokinase, plasminogène, urease, amylase, invertase, alcool dehydrogenase diastase, ss- glycosidase, maltase, glucose isomerase lactase, amygdalase, lipase, steapsine, erepsine, rennine, zymase, catalase, -elibiase, pectolase, protease, tyrosinase, cytase, cellulase, adenase, guanidase, carboxylase, inulase, erythricyte bovine, cholinesterase du serum de cheval, oxidase du vinaigre, pectinase, aldehydase, rharnnase, myrosinase, phytase, tannase, carbamase, nuclease, guanase, adenase., thrombase, chymase, cozyrase et autres produits similaires. Comme mentionné brièvement ci-dessus, les produits réticulés de l'invention sont utilisables dans la préparation d'enzymes liés qui, à leur tour, peuvent être utilisés pour transformer les substrats transformables enzymatiquement en leurs produits de conversion. Plus spécifiquement, on sait que les enzymes fonctionnent catalytiquement de façon à transformer-de nombreux produits. connus par l'homme de l'art en tant que substrats, en produits autres. Par exemple, la kipase transforme une matière grasse en glycérol et acide gras, l'invertase transforme le sucrose en sucre inverti, la lactase agit sur le lactose etc... Les enzymes liés au polymère, étant insolubles dans 1' eau, permettent au substrat d'être transformé lorsqu'il se trouve en solution aqueuse, tout en conservant l'activité catalytique de l'enzyme. Ainsi, par exemple, une solution aqueuse de suc rose peut être en contact permanent avec l'invertase liée au polymère pour transformer le sucrose en sucre inverti. L'activité catalytique de l'invertase demeure élevée pendant longtemps. Les termes "catalytiquement actif" ou "activité catalytique active", utilisés ici, signifient : capacité ou disponibilité de l'enzyme lié à transformer un substrat particulier en son produit de convdrsion. Les exemples suivants sont donnés à seule fin d'illustrer le procédé de l'invention et sont nullement limitatifs. Toutes les parties et pourcentages -sont en poids sauf précision contraire. Exemple 1 On ajoute lentement sous agitation, à 40 parties d'une solution à 100/4 de produit d'addition bisulfite de sodium-polyacroléine (poids moléculaire 80.000) ajustée préalablement au pH 10 par une solution de soude à 102S, 4 parties d'une solution d'aldéhyde glutarique à 20%. Le mélange est agité à 230 C pendant une heure et le produit hydrophile d'un blanc légèrement sale qui se forme ensuite est filtré, puis lavé jusqu'à neutralité. Le produit d'addition hydrophile humide ainsi obtenu est mis en suspension dans 50 parties d'eau et mis à réagir avec 0,104 parties d'invertase (deux fois recristallisée) qui a, d'abord, été dissoute dans 4 parties d'eau. Le mélange réactionel à base d'enzyme (pH 6,5) est doucement agité pendant 18 heures à 10 C et le produit d'addition polymère-enzyme lié par covalence hydrophile résultant est ensuite lavé pour être libéré de l'enzyme ayant pas réagi. Un essai du produit d'addition polymère-enzyme hydrophile révèle une haute activité avec une solution de sucrose, du fait que 4% en poids du gâteau humide isolé transforme 100 ml de solution de sucrose à 10%, à un pH de 4,8, en 83% de sucre inverti, l'opération s'effectuant en 15 minutes, à 42 C. Les procédés (polarimétriques) utilisés dans cet essai sont basés sur l'ouvrage de H.U Bergmeyer, "Methods of Rnzymatic Analysis", Academic Press, New-York (1963), pages 902-3. Exemple 2 On met en suspension dans 40 parties d'eau contenant 4,3 parties de metabisulfite de sodium (pH 5,7), 5 parties d'un copolymère acroléinestyrène (rapport pondéral 93,8/6,2). Le mélange est agité, sous azote, à 650 C pendant 5 heures. L'on obtient un produit parfaitement soluble dans l'eau. A ce produit d'addition de bisulfite, on ajoute doucement tout en maintenant l'agitation 4 parties d'une solution d'aldéhyde adipique à 20%; le pH du mélange réactionnel est ajusté à 10,5 par une solution de soude à 10%. Le mélange réactionnel est agité à 20 C pendant 2 heures.Le copolymère hydrophile réticulé obtenu est filtré, lavé jusqu'à neutralité, mis en suspension dans 2Q parties d'eau et mis à réagir avec 4 ml d'invertase de qualité industrielle (k =o6), à - 180 C pendant 15 heures. Le produit d'addition polymère--enzyme lié par covalence résultant est lavé jusqu'à élimination de enzyme n'ayant pas réagi par de l'eau distillée puis filtré (t,4 parties humides). Un essai de 10% en poids du produit humide avec 100 ml de solution de sucrose à 10% (mêmes conditions expérimentales que dans l'exemple 1) donne une transformatipn de 46% en sucre inverti. Exemple 3 On met en suspension dans 8-2 parties d'eau contenant 8,6 parties de metabisulfite de sodium (pH 5,6), 10 parties d'un copolymère acroléine acrilonitrile (rapport pondéral 93,1/6,9). Le mélange est agite à une température comprise entre 60 et 70 C, sous atmosphère d'azote jusqu'à solubilité. 22 parties du produit d'addition de bisulfite ci-dessus sont alors mises à réagir avec 4 parties d'une solution d'aldéhyde glutarique à 20% contenant 3 parties de pyrrolidine et 2,5 parties d'acide acétique à 23 C pendant 4 heures. Le copolymère hydrophile réticulé résultant est filtré et lavé continuellement - jusqu'à neutralité. Le résidu sous forme de o-el est -is en suspension dans 25 parties d'eau et :is à réagir avec 4 9-nl d'une solution d'invertase de qualité industrielle (k = 3,6), à 150 c vendant 16 heures sous agitation. Le produit d'addition invertase-polymère lié par covalence est lavé plusieurs fois avec de l'eau distillée jusqu'à élimination de l'enzyme n'ayant pas réagi (poids total du produit humide après distillation : 14,2 parties). Un essai de 10% en poids du produit d'addition avec 100 ml de sucrose à 10%, en utilisant les mêmes conditions expérimentales que dans l'exem le 1, donne une transformation de 81,2% en sucre inverti. Exemple 4 On met en suspension dans. 81 parties d'eau contenant 8,6 parties de metabisulfite de sodium (pH 5,6), 10 parties d'un copolymère acroléine-acide acrylique (rapport nondéral 65/15). On chauffe pendant 24 heures, à 750 C, sous atmosphère d'azote. On ajoute lentement à 22 parties du produit d'addition de bisulfite soluble résultant, 2 parties de 1,2-cyclohexaneacétaldéhyde dans 10 parties d'eau. Le mélange réactionnel (pH 10,3 par NaOH) est agité à 250C pendant 2 heures, puis le produit hydrophile obtenu est filtré puis lavé avec de l'eau jusqu'à neutralité. Le solide résultant est mis en suspension avec 3 ml d'in- vertase de qualité industrielle (k = 0,6), à 100C pendant 17 heures. Le produit d'addition d'enzyme lié par covalence résultant est lavé avec de l'eau distillée jusqu'à élimination de l'invertase n'ayant pas réagi, puis il est filtré (29,2 parties humides). Un essai de 5* en poids du produit humide avec 100 ml de solution de sucrose à 10% (mêmes conditions expérimentales que dans l'exemple 1) donne une transformation de 51,2% en sucre inverti. Exemple 5 On traite 15 parties de polymethacroléine avec 100 parties d'eau contenant 11 parties de metabisulfite (pH 5,7) à 650C pendant 20 heures sous atmosphère d'azote. Le produit d'addition de bisulfite résultant est ensuite traité avec 5 parties d'aldéhyde subérique dans 20 parties d'eau pendant 1 heure 30, à 22?C, à un pH 10,6 ajusté par de la soude. Le polymère réticulé hydrophile résultant est ensuite lavé avec de l'eau jusqu'à neutralité, puis filtré. Le gâteau humide est mis en suspension dans 100 parties d'eau puis mis à réagir avec 6 ml d'invertase de qualité industrielle (k = 0,6) à 16 C pendant 18 heures. L'en- zyme lié par covalence résultant est lavé avec de l'eau distillée jusqu élimination de l'invertase n'ayant pas réagi, puis filtré. Un essai de 5% en poids gâteau humide avec 100 ml d'une solution de sucrose à 10% (mêmes conditions expérimentales que dans l'exemple 1) donne une transformation de 58% en sucre inverti. Exemple 6 On utilise le procédé de l'exemple 5 mais, dans cet exemple 5, on utilise,comme polymère, un copolymère methacroléine-styrène (50/50) (brevet américain 2.945.006) et, comme aldéhyde, de l'octanedial. Après formation du produit, réticulation et lavage, on obtient un système de polymère lié à l'invertase qui réalise une transformation à 70 Exemple 7 On traite 10 parties de poly(methylvinyl cétone) avec 80 parties d'eau contenant 8 parties de bisulfite de sodium (pH 5,8) à 650C pendant 18 heures sous atmosphère d'azote. Le produit d'addition de bisulfite résultant est ensuite traité par 7 parties d'une solution de p-benzènediacétaldáhyde à 20% dissoutes dans 16 parties d'eau, sous agitation pendant 1 heure 30 à 150 C à un pH égal à Il. Le polymère hydrophile est ensuite lavé jusqu'à neutralité et filtré. Le gâteau humide est mis en suspension dans 55 parties d'eau, puis mis à réagir avec 4 ml d'invertase de qualité industrielle (k - 0,6) à 180 C pendant 16 heures.Le produit d'addition polymère-enzyme lié par covalence résultant est lavé avec de l'eau distillé jusqu'à Flimination de l'invertase n'ayant pas réagi, puis filtré (22 g humide). Un essai de 10% en poids du produit humide avec 100 ml d'une solution de sucrose à 20% (mêmes conditions expérimentales que dans l'exemple 1) donne une transformation de 46% en sucre inverti Rn utilisant les procédés de l'exemple 1 ou de l'exemple 7, à l'exception que des copolymères différents, d'autres homopolymères et dialdéhydes sont substitués aux polymères précédents, on prépare des compositions dtinvertase liée pour transformer les solutions de sucre en sucre inverti. Les résultats apparaissant dans le tableau 1 cidessous. Tableau 1 Transformation Exemple Polymère carbonyle en sucre inverti % 8 Acroléine-acryllate d'éthyle-styrène (25-20-55) avec l'aldéhyde succinique 61 9 Acroléine-méthylvinyl cétone (45-55) (pds mol 1400) avec l'aldéhyde sébacique 74 10 Acroléine-vinyl acétate (60-40) avec le 1,2-cyclobutanediacétaldéhyde 68 11 -méthyl acroléine-méthacrylate de méthyle (50-50) avec l'aldéhyde glutarique 47 12 Acroléine-glycolate d'allyle (0-20) avec le l,5-dicyclooctanediacétaldéhyde ò4 13 Poly(isopropenylméthyl cétone) avec l'aldéhyde azélique 14 Acroléine-méthacrylate de glycidyle (40-60) avec le 1,2-naphtalènediacétaldéhyde 41 15 Méthylvinyl cétone-methacrylate de méthyle (70-30) avec l'aldéhyde glutarique 61 16 Méthylvinyl cétone-acétate de vinyle (5-95) avec l'aldéhyde glutarique 50 Exemple 17 On met en suspension, dans 40 parties d'eau (pH 7), 10 parties d'un comolexe (préparé selon l'exemple 1) d'addition, bisulfite de sodium-polyacroléine, réticulé humide (environ 10% de solides), puis on met à réagir avec 0,110 partie de trypsine cristalline dissoute dans 4 parties d'eau. Le mélange réactionnel est agité pendant 18 heures à 10 C puis le produit d'addition de trypsine lié par covalence résultant est lavé jusqu'à Flimination de ltenzyme n'ayant pas réagi. L'analyse des produits de lava e à 280 microns indique que 81,3% de l'enzyme sont liés au polymère. Le gâteau enzyme-polymère humide est séché par évaporation de la glace et l'on obtient un produit ayant 0,091 partie de trypsine par partie de solides. Le produit à essai présente 18,4 unités d'activité par mg d'enzyme (enzyme pure 66 unités/ mg) possédant, de ce fait, 28 , de son activité initiale. Le procédé analytique utilisé est la méthode standard de pH stat (pH 7,9) utilisant, comme substrat, l'ester éthylique de la benzoylarginine (BAEE). Exemple 18 On place sous agitation 2,5 parties de poly(isopropenylmethyl cétone) avec 25 parties d'eau contenant 2,1 parties de metabisulfite de potassium (pH-5,8) pendant 16 heures à 750C sous atmosphère d'azote. Puis, l'an ajoute 1,5 parties d'une solution d'aldéhyde glutarique à 20% au mélange réactionnel ci-dessus et l'on agite à 250C pendant 1 heure. Le produit d'addition hydrophile résultant est lavé jusqu'à neutralité puis filtré. Le gâteau humide est mis en suspension dans 30 parties d'eau et mis à réagir avec 0,025 partie de glucose oxydase dissout dans 2 parties d'eau, à 100 C pendant 18 heures. L'enzyme lié par covalence résultant est lavé avec de l'eau distillée froide jusqu'à élimination du glucose oxydase n'ayant pas réagi, puis filtré.Un essai de o,5^' du gâteau humide total, en utilisant la méthode standard de pH stat (pH 6,3) (substrat : 50 ml d'une solution de glucose à 1/3 avec un excès d'oxygène) dans lequel l'acide gluconique libéré est titré par NaOH standard 0,01 N, indique que l'activité du produit d'addition est de 18,6 unités/mg/min. (glucose oxydase pur- 20,5 unités/mg/min.). En suivant les techniques des exemples précédents, de nombreux autres enzymes sont liés par covalence aux produits de polymère réticulés mentionnés ici, pour produire une composition hydrophile. Les résultats apparaissent dans le tableau 2 ci-dessous. Tableau 2 Exemple Procédé de Enzyme lié Résultats I rexemple 19 2 glucose isomerase transformation du glucose en fructose 20 9 d -anylase hydrolyse continuellement les polysaccharides en glusose et maltose 21 18 tyrosinase tyrosine transformée conti nuellement en dihydroxy- phenylalanine 22 17 pectinase agit continuellement sur la pectine pour donner de l'acide pectique 23 17 glucoamylase transformeles polysacchari des en glucose Exemple 24 -Le procédé de l'exemple 18 est de nouveau utilisé mais l'on n'emploie pas ici de metabisulfite de sodium Lorsque le polymère récupéré est utilisé dans la transformation du sucrose en sucre inverti, on observe les mimes résultats. Revendications 1 - A titre de produit industriel nouveau, des polymères caractérisés en ce qu'ils constituent le produit réactionnel d'un polsmère carbonyle et d'un aldéhyde, de formule dans laquelle R est un radical (GH2)x, X pouvant prendre toutes les valeurs de 0 à 16 inclus, un groupement cycloaliphatique contenant de 4 a' 8 (inclus) atomes de carbone, ou un groupement arylène contenant de 6 à 10 (inclus) atomes de carbone. 2 - Polymère selon la revendication li caractérisé en ce que x est égal à 1. 3 - Polymère selon la revendication 1, caractérisé en ce que le dit polymère carbonyle est la polyacroléine. 4 - Polymère selon la revendication 1, caractérisé en ce que R est un gropement phénylène. 5 - Polymère selon la revendication 1, caractérisé en ce que le dit polymère carbonyle est un produit d'addition polyacroléine- bisulfite. 6 - Procédé caractérisé en ce que l'on fait réagir un polymère carbonyle avec un dialdéhyde de formule dans laquelle R est un radical (CH ) , x pouvant prendre toutes les 2x valeurs de O à 16 inclus, un groupement cycloaliphatique contenant de 4 à (inclus) atomes de carbone, ou un groupement arylène contenant de 6 à 10 (inclus) atomes de carbone, dans des conditions alcalines et en ce que l'on récupère le polymère résultant. 7 - Procédé selon la revendication 6, caracté-isé en ce que x est égal à 1. 8- - Procédé selon la revendication 6, caractérisé en ce que le dit polymère carbonyle est la polyacroléine. 9 - Procédé selon la revendication 6, caractérisé en ce que le dit polymère carbonyle est un produit d'addition polyacroléine-bisulfite. 10 - Polymère selon la revendication 1, caracté- isé en ce qu'il est lié par covalence à un enzyme catalytiquement actif. 11 - Polymère son la revendication 5 caractérisé en ce qu'il est lié nar covalence à un enzyme catalytiquement actif.