Brevet FR2235700A1 — publié le 19750131

La présente invention concerne un nouvel antibiotique anthracyclique et son procédé de préparation. Conformément à l'invention, le composé indiqué est un produit de culture de souches d'Actinomadura carminata Sp. nov.et présenté sous forme dlune poudre cristalline de couleur rouge, ayant un poids moléculaire de 545,5 et un point de fusion de 185 à 1870 (décomposition), bien soluble dans l'eau, les alcools inférieurs, la diméthylformamide et la pyridine; insoluble dans l'acétate d'éthyle, le benzi- ne, l'éther diéthylique et l'éther de pétrole.La coloration de ses solutions aqueuses varie selon le milieu; elle est jaune dans un milieu acide et vire au violet dans un milieu alcalin; sa solution dans l'acide sulfurique est d'une coloration violette; ses spectres ultraviolet et visible sont caractérisés par les maxima suivants k (dans l'éthanol) 236, 256, 293, 464, 478, 492, 512, 525 nm max 1% #1 cm (dans la pyridine) 468, 500, 520, 535, 592 mm max X 1% 105, 150, 120, 110, 30 respectivement; g lem son spectre infrarouge a les bandes d'absorption suivantes 990, 1020, 1100, 1120, 1200, 1300, 1420, 1450, 1540, -l 1610, 1710, 3000, 3400, 3600 cm ; lorsqu'on effectue l'hydrolyse dans une solution aqueuse à 0,2 N d'acide chlorhydrique il se forme une aglycone de nature anthracyclique et une fraction d'hydrate de carbone. L'antibiotique peut servir de substance active dans des préparations anti-tumorales et peut être utilisé dans des recherches enbiologie lors de l'étude des procédés moléculaires intracellulaires. l'invention vise également un procédé de préparation du nouvel antibiotique anthracyclique. I)ans ce procédé on cultive, conformément à l'invention, des souches productrices d'Actinomadura carminata sp. nov. dans des conditions submergés sur des milieux de fermentation, contenant des sources de carbone, d'azote et de sels minéraux, par accumulation de l'antibiotique dans le mycélium de la souche productrice, et on isole l'antibiotique indiqué. Nous dispo sons de la souche no 4281 de culture d'Actinomadura carminata Sp. nov. dans la collection de l'institut po izyskaniu novych antibiotikov Académii médizynskych nauk SSSR sous no 4281 INA. La souche n 1 4281 forme un mycélium aérien congru blanchâtre sur la grande maJorité des milieux synthétiques. Les spores se trouvent dans des formations serrées, bien résistantes à la destruction, constituées par une channe de spores, s'enroulant sous forme de gâteau plat (baranka) ou de peloton compact. Les channes de spores sont disposées monopodialement. Les spores sont lisses et sont de 1,5 à 2 fois plus grandes que la hyphe végétative. La sporulation n'a pas été décélée sur le mycélium-substrat. On a trouvé de l'acide méso-diaminopimélique dans les hydrolysats des membranes cellulaires de la souche n 4281. La coloration du mycélium-substrat sur des milieux synthétiques passe d'incolore au rouge-lilas ou tanné. La coloration est due à la formation de pigments du groupe anthracyclique. On n'a pas noté de formation de pigments mélaniques. On donne ci-dessous la caractéristique de la souche nQ 4281 lors de la croissance sur divers milieux diagnostiques. Morphologie : Les channes de spores se forment monopodiale ment sur un mycélium aérien à sporophores avec filaments sporifères courts ou assez longs. Le plus souvent ces channes sont enroulées sous forme de gâteau plat (baranka) ou serrées en peloton compact mais parfois elles restent droites. Le nombre de spores dans la charge est de 6 à 14; les spores sont lisses, ovales. Lilieu minéral de Gauze n 1 (composition : amidon soluble 20 g, K2HPO4 - 0,5 g, MgSO4 - 0,5 g, KNO3 - 1 g, NaCl - 0,5 g, FeSO4 10 ring, agar-agar - 30g, eau - 1 1). La croissance est faible ou modérée, le mycélium aérien est assez pauvre, parfois il manque; le mycelium-substrat est incolore virant au lilas-pâle; le pigment est faiblement formé; le milieu n'est pas coloré. Milieu de Czapek (composition : saccharose - 30 g, NaN03 2 g K2HPO4 -1 g, Mg SO4 - 7H2O - 0,5 g, FeSO4 0,01 g, agar-agar -30 g, eau distillée - 1 1). Le mycélium aérien est pauvre ou modéré, de couleur blanche, le mycélium du substrat est incolore virant au lilas, dans le dernier cas le milieu est faiblement coloré en lilas. Milieu de lindenbein (composition : glycérine - 30 ml, NaNO3 2, K2HPO4$ - 1 g, MgSO4 - 0,5 g, KCL - 0,5 g, FeSO4 - 10 mg agaragar - 30 g. eau distillée - 1 1). La croissance est assez pauvre, le mycélium aérien manque ou est sous forme d'un dépôt mince blanchâtre; le mycélium du substrat est brunâtre ou rougeâtre, le milieu n'est pas coloré. Milieu de Krassilnikov SR-l - (composition : glucose-20 g, K2HPO4 - 0,5 g, KNO3 - 1 g, NaCl - 0,2g-MgCO5 - 0,3 g, CaCQ3 0,5g, PeSO4 - 0,1 g, agar-agar - 30 g, eau du robinet 1 1). La croissance est identique à celle sur milieu de lindenbein. Milieu glucose-asparaginique (composition : glucose - 10 g, asparagine - 0,5 g, X2HPO4 - 0,5 g, agar-agar - 30 g, eau distillée 1 1). croissance est assez pauvre, le mycélium aérien manque ou il se trouve sous forme d'un dépôt mince blanchâtre; le mycélium de substrat est brûnatre ou rougeâtre. Agar d'avoine (composition : flocons d'avoine - 20 g, agaragar - 30 g, eau du robinet - 1 1). La croissance est bonne; le mycélium aérien est bien développé, de couleur rosâtre virant au rose, le mycélium de substrat est coloré de lilas-pâle à lilas-rouge. Le milieu n'est pas coloré ou faiblement coloré. Milieu organique de Gauze n22 (composition bouillon de Hottin- ger/700 mg % d'azote aminé - 30 ml, peptone - 5 g, WaCl - 5 g, glucosa - 10 g, agar-agar - 70 g, eau du robinet - 1 15. Le mycélium aérien manque, le mycélium de substrat est de couleur brun - violet ou de prune-noire, le milieu n'est pas coloré. Milieu d'3merson (extrait de viande - 50 ml, peptone - 4 g, NaCl - 2,5 g, extrait de levure 5 ml, glucose - 10 g, agar-agar 30 g, eau du robinet - 1 1). Le mycélium aérien manque, le mycélium de substrat est de couleur prune-noire, le milieu n'est pas coloré. Milieu additionné de L'extrait de levure et de malt (extrait bacto-levure / "Difoc", la Société de USA/ - 4 g, extrait bactomalt - 10 g, bacto-dextrose - 4 g, eau distillée 1 1, bacto- agar20g) le mycélium arien est bien développé, peluche, de couleur rosâtre; le mlr calcium du substrat est de couleur lilas-brunâtre, le milieu n'est pas coloré, Les pigments mélaniques manquent. Utilisation de sources de carbone : on utilise modérément la fructose, le xylose, le rhamnose, l'arabinose et faiblement le raf finose, le mannitol, la glycérine, l'inositol et le saccharose. Les effets antagonistiques : inhibent la croissance de St. aureus 209, de son mutant UP-2, de Sarcina lutea, Bac. mycoldes, Bac. paracoli 5099, agissent faiblement sur E. Coli E-13. En raison des indices de sporulation et de 11 existence d'acide méso-diaminopimélique dans les membranes cellulaires, nous avons considéré la souche étudiée comme appartenant à Actinomadura le chevalier et lechev 1970. les membres de cette famille ne forment pas de pigments de nature anthracyclique ce qui permet de considérer la souche ne 4281 comme une espèce nouvelle d'Actinomadura carminata sp.. nov. La culture de l'antibiotique peut être réalisée sur des milieux, contenant comme source de carbone le glucose, la glycérine, le galactose, le fructose, amidon, e rhamnose. En tant que sources or organiques d1azote on peut employer de la farine de soja et de pois, les tourteaux de coton, d'arachide et de tournesol. Comme sels minéraux on utilise le chlorure de sodium, le sulfate d'ammonium, le chlorure d'ammonium, le carbonate de calcium, le phosphate dipotas sique. On recommande de conduire la culture des souches productrices sur un m eu de fermentation de composition suivante (en % en poids) : farine de soja 1 à 5, glucose 0,5-3, amidon 1-3, sulfate d'ammonium 0,05-0,5, chlorure de sodium 0,2-0,5, carbonate de calcium 0,2-0,6. Il est rationnel de mettreenoeuvre le procédé, dans lequel on iscie l'antibiotique àntracyclique par séparation du mycélium de souche productrice à partir de la liqueur de culture, par extrac- tlon de l'antibiotique à partir SU mycélium par un solvant organique miscible à l'eau, par concentration de -la solution qui en résulte, par extraction de l'anticipation a partir de la solution concentrée par- un solvant organique non miscible à 11 eau, par concentration de la solution obtenue, par purification de cette dernière sur l'acide silicique, avec élution consécutive et concentration de ltéluat qui se forme et par prépicitation de l'antibiotique dans l'éther diéthylique, l'éther de pétrole ou de l'hexane, par extraction de l'antibiotique à l'eau, et lypphilisation consécutive de la solution aqueuse. Il est recommandé de-mettre en oeuvre un procédé, dans lequel on effectue l'isolement de l#antibiotique anthracyclique en maintenant la liqueur de culture à un pH de 3,0 à 5,0 et une température de 40 à 55 C, en séparant le mycélium de la souche-productrice à partir de la liqueur de culture, en extrayant l'antibiotique à partir de la liqueur native obtenue par un solvant organique non miscible à l'eau, en concentrant la solution d'antibiotique obtenue, en la purifiant sur l'acide silicique avec élution et concentration consécutive de l'éluat obtenu et en précipitant l'antibiotique dans l'éther diéthylique, l'éther de pétrole ou l'hexane, en extrayant l'antibiotique à l'eau, avec lyophilisation consécutive de la solution aqueuse. Des essais sur animal ont montré que l'antibiotique anthracyclique est doué d'une activité anti-tumorale marquée. l'antibiotique anthracyclique a été injecté par voie intraveineuse à des souris ayant des tumeurs transplantables, sous forme d'~ une solution aqueuse à 1,5 mg d'antibiotique indiqué par mi d'eau distillée. Il a été montré, que l'antibiotique inhibe de 8Q à 100 % la croissance du lymphosarcome de la souche lio-1, du cancer prégastrique de la souche OJ5, du cancer bronchogénique du poumon de la souche 131. L'antibiotique anthracyclique inhibe plus faiblement la croissance du sarcome 180, et également de la lymphadénose NK/lY-et est dépourvu pratiquement d'activité sur le carcinome d'Ehrlich. La DL5Q de l'antibiotique anthracyclique en cas dsadministra- tion par voie intraveineuse sous forme d'une solution aqueuse, de concentration sus-indiquée à des souris- est de 3,7 (3,4 à 4,0) mg/kg, en cas d'administration sous-cutanée elle est de 3,8 (3,2 à 4,6) mgZkg et lors de l'administration pérorale elle est égale à 7,3 (5,8 à 9,0) mg/kg. L'antibiotique est relativement bien absorbé par l'appareil gastro-intestinal. l'antibiotique possède des propriétés cumulatives. Son action ne disparaît que 72- heures après injection intraveineuse à la dose maximale tolérée. les indices de l'état fonctionnel des reins et du foie, le -taux de sucre et d'électrolytes dans le sang, ainsi que les indices d'électrocardiographie ne se modifient pas essentiellement après l'introduction de l'antibiotique anthracycli que même à des doses toxiques. Dans des essais sur le chien on a été constaté que l'action to xique de l'antibiotique anthracyclique est due à son action inhibitrice sur lthématopoSèse. les animaux périssent de la panhémocytophtisie après administration de l'antibiotique aux doses létales sous forme d'une solution aqueuse. Le degré d'inhibition de l'hématopoïè- se dépend de la dose administrée et de la durée d'administration de l'antibiotique. le procédé de préparation du nouvel antibiotique anthracyclique est mis en oeuvre de la manière suivante. La culture de la souche productrice d'Actinomadura carminata sp. nov. est stockée et maintenue à l'état actif sur un milieu nutritif d'agar-agar de composition suivante (en ffi en poids) Farine d'avoine 1,0-5,0 agar-agar 1,0-3,0 après stérilisation 7,0 pH La culture d'Actinomadura carminata sp. nov. est effectuée pendant 7 jours à une température de 37 . la culture de la souche productrice obtenue est effectuée par fermentation submergée pendant 3 jours, à une température de 37 C, dans des flacons d'ensemencement installés sur une secoueuse rotative à 200-220 tours par minute. Chacun des flacons d'ensemencement contient 200 m1 de milieu de fermentation de composition suivante (en % en poids) farine de soja 1,0-5,0 NaCl 0,2-0,5 glucose 1,05-5,0 Ca2C03 0,2-0,5 pH après stérilisation 7,0 On introduit 2 1 de culture de la souche productrice contenue dans les flacons dfensemencement en fermenteur-inoculateur. On charge dans le fermenteur-inoculateur 80 1 de milieu de fermentation de la composition suivante (en % en poids) Farine de soja 1,0-5,0 glucose 1,0-5,0 NaCl 0,2-0,5 phosphate dipotassique CaCO3 0,2-0,5 pH après stérilisation 7,0 On réalise la stérilisation pendant 45 minutes à une température de 120OC, On utilise comme extincteur d'écume la graisse de cachalot. La culture de la souche-productrice est opérée dans le fermenteur-inoculateur pendant 3 jours à une température de 37 C. La pression dans l'appareil est de 0,3 à 0,5 atm. L'intensité de distribution d'air est de 1 1 d'air par litre du milieu de fermentation et par minute. On conduit le processus sous agitation constante. La vitesse de rotation du mélangeur est de 240 tours par minute. On place dans un fermenteur en acier 80 1 de la culture d'ensemencement contenue dans le fermenteur-inoculateur. Le procédé de culture est effectué à une température de 2700 le premier jour de culture et de 372C les fours suivants. La pression dans l'appareil est de 0,5 atm., l'intensité de distribution d'air est de 1 1 de 2 par litre du milieu de fermentation et par minute. On conduit le processus sous agitation constante. La vitesse de rotation du mélangeur est de 220 tours par minute. La fermentation dure 120 heures. La culture de 1' antibiotique est réalisée en fermenteur dans des conditions submergées sur un milieu de composition suivante (en % en poids farine de soja 1,0-5,0 glucose 0,5-3,0 amidon 1,0-3,0 sulfate d'ammonium 0,05-0,5 chlorure de sodium 0,2-0,5 carbonate de calcium 0,2-0,6 pH après stérilisation 7,0 On effectue la stérilisation pendant 45 minutes à une température de 120Q Au cours de la culture d'Actinomadura carminata sp. nov. dans les conditions de fermentation submergée sur un milieu liquide, 1'antibiotique anthracyclique s'accumule dans le mycélium de la souche productrice.La liqueur de culture de la souche productrice est séparée par filtration sur un filtre-presse à cadres (le matériel filtrant-belting et toile de coton). l'isolement ultérieur de l'antibiotique anthracyclique est effectué à partir du mycélium, et on rejette la liqueur native, ne contenant pas l'antibiotique. L'antibiotique est extrait à partir du mycélium de la souche productrice obtenu par solvants organiques miscibles à l'eau, par exemple,par l'acétone.L'extraction peut également être réalisée avec des alcools inférieurs, notamment le méthanol, l'éthanol. La solution obtenue est concentrée sous vide et l'antibiotique est extrait par des solvants organiques non miscibles à l'eau, par exemple, par le chloroforme, le chlorure de méthylène ou l'acétate d'éthyle, à un pH égal à 6,8-7,2. la solution d'antibiotique obtenue est concentrée et ensuite purifiée par chromatographie de la solution concentrée d'antibiotique sur une solution aqueuse d'acide silicique. L'éluat obtenu, contenant l'antibiotique, est concentré sous vide et l'antibiotique est précipité dans l'éther de pétrole, l'é- ther diéthylique ou le n-hexane. Le précipité obtenu est séparé et séché sous vide à une température de 40 C. L'antibiotique est extrait à l'eau à partir du précipité sec. La solution aqueuse est lyophilisée. L'isolement de l'antibiotique anthracyclique peut également être réalisé à partir de la solution native. On maintient la liqueue de culture pendant une heure à un pH égal à 3,0-5,0 et une temperature ùe 40 à 55oC. Dans ces conditions l'antibiotique passe du mycélium dans la phase aqueuse à la solution native. On sépare par filtraticn a liqueur de culture. Le mycélium ne co-ntenant pas l'antibiotique est rejeté. L'antibiotique est extrait à partir de la solution native par un solvant organique, non miscible à l'eau, à un pH égal à 6,8-7,2. le traitement ultérieur de la solution obtenue est opéra par le procédé susmentionné. D'autres caractéristiques et avantages-de l'invention seront mieux compris à la lecture de la description qui ira suivre des exemples de réalisation; EXEMPLE 1 La culture productrice d'Actinomadura carminata sp. nov. est stockée et maintenue à ldétat actif sur un milieu nutritif d'agar agar contenant les ingrédients suivants en ffi en poids et en g : farine d'avoine 20 g (2%) agar-agar 18 g (1,8%) eau 1 1 pH après stérilisation 7,0 La culture de la matière d'ensemencement est réalisée pendant 7 jours à une température de 37 C. Pour la culture de la souche-productrice dans des conditions submergées on utilise un milieu de fermentation liquide présentant la composition suivante (en g et en % en poids) farine de soja 10 g (lao) glucose 10 g (1%) chlorure de sodium 5 g (0,5%) carbonate de calcium 3 g (0,3%) eau de robinet 1 1 pH après stérilisation 7,0 On ensemence par la culture d'ensemencement susdite 200 ml de milieu de fermentation de composition indiquée contenus dans des flacons de 750 ml. La culture est cultivée dans les flacons pendant 3 jours à une température de 3700. Les flacons sont placés sur les secoueuses rotatives à 200-220 tours par minute. 2 1 de culture d'ensemencement provenant des flacons indiqués sont introduits dans un fermenteur-inoculateur. On charge dans un fermenteur-inoculateur de 150 1, 80 1 de milieu de fermentation (en g et en % en poids) farine de soja 10 g (1%) glucose 10 g (1%) chlorure de sodium 3 g (0,5%) phosphate dipotassique 0,25 g (-0,025%) eau de robinet 1 1 pH après stérilisation 6,7 régime de stérilisation : 45 minutes, 12000. La culture dans le fermenteur-inoculateur dure 3 jours à une température de 37 C. La pression dans l'appareil est de 0,3 à 0,5 atm. L'intensité de -distribution d'air est 1 1 d'air par litre du milieu de fermentation et par minute. Le mélange est effectué par rotation de l'agitateur à une vitesse de 240 tours par minute. La culture de l'antibiotique est effectuée dans des fermenteurs en acier inoxydable de 2000 1, contenant 800 1 de milieu de milieu de fermentation de composition suivante (en g et en % poids): farine de soja 10 g (1%) glucose - 7 g (0,07%) amidon 15 g (0,1%) sulfate d'ammonium 1 g (0,1%) chlorure de sodium 1 g (0,1%) carbonate de calcium 1 g (Oslfo) eau de robinet 1 1 pH après stérilisation 6,5 régime de stérilisation 45 minutes, 120 C. Dans un fermenteur, on charge 80 1 de la culture d'ensemencement provenant du fermenteur-inoculateur. Le processus de culture est mis en oeuvre à une température de 37OC le premier jour et de 28 C pendant les jours suivants, la pression dans l'appareil étant de 0,5 atm, l'intensité de distribution d'air étant 1 1 d'air par litre du milieu et par minute. le mélange se fait par rotation de l'agitateur à une vitesse de 220 tours par minute. Au cours de la culture on introduit de la graisse de cachalot - stérile à raison de 0,5% en volume. La fermentation dure 120 heures. EXEMPLE 2 On ensemence avec la culture d'ensemencement des flacons de 750 ml, contenant 200 ml de milieu de fermentation de composition suivante (en g et en % en poids) (bouillon de Hottinger, contenant jusqu'à 28 % mg d'azote aminé) glucose 10 g (1%) chlorure de sodium 5 g (0,5 %) peptone 5 g (0,5 %0) carbonate de calcium 5 g (0,5 %0) eau de robinet 1 1 pH après stérilisation 7,0 La croissance de la culture se fait à une température de 379C pendant 2 jours dans des flacons d'ensemencement installés sur des secoueuses rotatives à 200-220 t/m. On charge dans un fermenteur-inoculateur en acier inoxydable de 150 litres, 80 1 de milieu de fermentation (en g et en % en poids): glycérine 20 g (2%) extrait de mais 10 g (1%) chlorure d'ammonium 2 g (0,2%) chlorure de sodium 3 g (0,3%) carbonate de calcium 5 g (0,5%) eau de robinet 1 I pH après stérilisation 6,5 régime de stérilisation : 45 minutes, 120 C. On ensemence le fermenteur-inoculateur avec la culture provenant des flacons d'ensemencement à raison de 2 litres. la culture dure 3 jours à une température de 30 à 32 C, la pression dans l'appareil étant de 0,3 à 0,5 atm. la vitesse d'aération est de 1 1 d'air par litre du milieu et par minute. Le mélange se fait à l'aide d'un agitateur à 200-240 t/m. la culture de l'antibiotique anthracyclique se fait dans un fermenteur de 2.000 litres de capacité. On charge dans le fermenteur .C'00 litres de milieu de fermentation suivant (en g et en % en poids: farine de soja 10 g. (1%) amidon 20 g (2%) sulfate d'ammonium 2 g (0,2%) chlorure de sodium 2 g (0,2%) carbonate de calcium 2 g (0,2%) eau de robinet 1 X pH après stérilisation 6,5 régime de stérilisation 45 minutes, 120 C l'ensemencement du fermenteur se fait avec 80 litres de la culture d'ensemencement provenant du fermenteur-inoculateur. La culture s'opère à une température de 28 à 30 C, la pression dans l'appareil étant de 0,5 atm. L'aération s'effectue à une vitesse d'un litre d'air par litre du milieu et par minute. le mélange est réalisé à l'aide d'un agitateur à 220 t/m. La fermentation dure 120 heures. EXEMPLE 3 Pour une culture submergée de la souche-productrice dans des flacons on utilise un milieu de fermentation de composition suivante (en g et en % en poids) farine de soja lOg (1%) glucose 10g (1%) chlorure de sodium 3g (0,3 %) carbonate de calcium 3g (0,3%) eau de robinet 1 1 pH après stérilisation 7,0 La croissance de la culture se fait à une température de 37QC pendant 3 jours dans des flacons d'ensemencement placés sur des secoueuses rotatives. On introduit dans le fermenteur-inoculateur de 150 1 2 litres de culture provenant des flacons d'ensemencement et on ajoute 80 1 de milieu nutritif-de composition suivante (en g et en % en poids) glycérine 20 g (2%) extrait de mais 10 g chlorure d'ammonium 2 g (0,2%) chlorure de sodium 3 g (0,3%) carbonate de calcium 5 g (0,3%) eau de robinet 1 ~5 pH après stérilisation 6,5 régime de stérilisation : 45 minutes, 120 C. a culture d'ensemencement est conduite dans un fermenteurinoculateur à une température de 30 à 32 C pendant 3 jours. La pression dans l'appareil est de 0,5 atm. La vitesse d'aération lorsqu'on utilise un agitateur de 240 t/m est de 1 litre d'air par litre du milieu et par minute.La culture de l'antibiotique est réalisée dans un fermenteur de 2000 l (sous une charge de 1000 1) sur un milieu de fermentation de composition suivante (en g et en % en poids): farine de soja 10 g (1%) glycérine 15 g (1,5%) glucose 4 g (0,4%) sulfate d'ammonium 1 g (0,1%) chlorure d'ammonium 1 g (0,1%) carbonate de calcium 1 l g (0,1%) eau de robinet 1 1 pH après stérilisation 7,2 On ensemence le-fermenteur avec 80 1. de matière d'ensemencement provenant du fermenteur-inoculateur. La culture est conduite à une température de 28 à 30 C, la pression dans l'appareil étant de 0,5 atm., la distribution d'air étant de I litre d'air par litre du milieu nutritif et par minute. le mélange est réalisé à l'aide d'un agitateur tournant à une vitesse de 220 t/m. Le processus dure 120 heures. EXEMPLE 4 On fait passer sur un filtre 700 1 de liqueur de culture obtenue au cours de la culture de la souche d'Actinomadura carminata sp. nov. n 4281. On extrait 17 kg de mycélium humide par 85 1 d'acétone. On concentre.sous vide 80 1 de solution d'acétone, contenant l'antibiotique. On traite la solution aqueuse d'antibiotique qui reste après distillation, par 5 1 de tétrachlorure de carbone à un pli de 4,5, après quoi on extrait l'antibiotique par du chloroforme à un pli de 6,8. L'extraction se fait trois fois. On prend pour chaque extraction 5,5 1 de chloroforme. On réunit les extraits de chloroforme. Le volume total de l'extrait est de 16 litres. On concentre l'ex trait sous vide jusqu'à 0-,6 litre. On conduit la purification ultérieure de la solution d'antibiotique concentrée dans une colonne remplie d'acide silicique aqueux. On charge dans la colonne 300 g d'acide silicique dans le chloroforme . Après l'a & orption de l'antibiotique à partir de la solution dlantibiotique concentrée dans le chloroforme, on lave la colonne d' abord avec 2 1 de tétrachlorure de carbone, puis avec 1,5 1 de mélange de chloroforme et d'acétone pris en proportion de 11 : 4 et par 1,5 1 de mélange de chloroforme, d'acétone et de méthanol pris en proportion de Il : 1 : 0.5. On procède à l'élution de l'antibiotique par un mélange de chlo roforme, d'acétone et- de méthanol pris en proportion de Il 1 l : 1. On concentre 2,5 1 de fraction, contenant l'antibiotique, jusqu'à un volume de 50 ml et on précipite l'antibiotique par l'hexane normal. On obtient 17 g de résidu contenant 30% de l'antibiotique. On sèche le résidu à une température ne dépassant pas 40 C. On triture dans un mortier 8,5 de résidu en ajoutant par petites portions 0,7 1 d'eau. On sépare la solution obtenue à partir du résidu et on procède à la lyophilisation. On obtient 2,6 g de poudre rouge. L'antibiotique anthracyclique obtenu présente une activité de 1.200 unités par milligrammé après avoir subi un titrage sur Bac. Subtilis. EXEMPLE 5 On acidifie 700 1 de liqueur de culture obtenue au cours de la croissance de la souche d'Actinomadura caritimata sp.nov.N04281, par une solution aqueuse à 18% d'acide chlorhydrique jusqu'à un pH de 4,5 et on l'abandonne sous agitation pendant une heure à une température de 50 C. On fait passer la liqueur de culture à travers un filtre-presse à cadre (le matériel filtrant étant le belting et la toile de coton). On rejette le mycélium. On extrait l'antibiotique par 600 1 de chlorure de méthylène à un pH de 7,2 à partir de 600 1 de solution native obtenue. On concentre 55 1 de solution d'antibiotique dans le chlorure de méthylène jusqu'a un volume de 0,5 1 et on procède à la chromatographie de la solution obtenue sur une colonne remplie d'acide si- licique aqueux. On charge dans la colonne 300 g d'acide silicique aqueux dans du chlorure de méthylène. Après l'adsorption de l'antibiotique à partir de 0,5 1 de la solution concentrée dans le chlorure de méthylène, on lave la colonne avec 1,5 1 de tétrachlorure de carbone-, puis avec 1,2 1 de mélange de chloroforme et d'acetone pris dans un rapport de 1 à 4 et avec 1,2 1 de mélange de chloroforme, d'acétone et de méthanol pris dans un rapport de 11 : 1 : 0,5. On conduit l'solution de l'antibiotique par un mélange de chloroforme, d'acétone et de méthanol pris en proportion de 11 : 1 2,0 1, de la fraction contenant l'antibiotique, on concentre sous vide, jusqu'a un volume de 60 ml et on précipite l'antibiotique dans l'éther de pétrole. On sépare le résidu obtenu et on sèche sous vide à une température ne dépassant pas 40oC. On obtint 9,6 g de substance sèche. On triture dans un mortier 9,6 g. de produit obtenu, en ajoutant par petites quantités 0,8 1 d'eau distillée. On sépare la solution aqueuse du résidu et on procède à la lyophilisation. On obtient 2,85 de poudre rouge. L'antibiotique anthracyclique obtenu présente une activité de 1100 unités par milligramme après avoir subi un titrage sur Bac. subtilis. EXEMPLE 6 On fait passer sur le filtre 800 1 de liqueur de culture obtenue par culture de la souche d'Actinomadura carminata sp. nov. nQ 4281, et on extrait 38 kg de mycélium humide par 60 1 d'acAtone. On concentre sous vide 55 1 de solution d'acétone contenant l'antibioti- que. On traite la solution aqueuse d'antibiotique obtenue par 4 1 do- de tetrachlorure de carbone à un pH de 4,0-5,0, après quoi on extrait l'antibiotique par le chlorure de méthylène à un pH de 7,2. L'extraction se fait 3 foia. On prend pour chaque extraction 4 1 de chlorure de méthylène. les solutions obtenues sont réunies et lavées avec de 1t eau, puis concentrées jusqu'á un volume de 0,50 1. La purification ult6- rieure se fait par chromatographie dans une colonne remplie d'acide silicique. On charge dans la colonne 300 g d'acide silicique aqueux dans le chloroforme. Après l'adsorption de l'antibiotique à partir de 0,5 1 de sa solution concentrée dans le chlorure de méthylène, on lave la colonne avec le 1,5 1 de chloroforme d'abord et ensuite par 1,2 l de mélange de chloroforme et d' acétone pris en proportion de ll : 4@ et avec 1,2 1 de mélange de chloroforme, d'acétone et de méthanol pris dans un rapport de 11:1:0,5. On procède à l'solution de l'antibiotique par un mélange de chloroforme, d'acétone et de méthanol pris dans un rapport de 11:1:1. On concentre 1,5 1 de fraction contenant l'antibiotique, jusqu'à un volume de 50 ml et on précipite l'antibiotique dans Itéther diéthylique. On obtient 12 g de résidu, contenant 30 % d'antibiotique. On sèche sous vide le résidu à une température ne dépassant pas 40 C. On triture dans un mortier 6 g de résidu obtenu, en ajoutant par petites portions 0,5 1 d'eau distillée. On sépare la solution obtenue du résidu et on procède à la lyophilisation. On obtient 2 g de poudre rouge. L'antibiotique anthracyclique obtenu présente une activité de 1200 unftés par milligramme après avoir subi un titrage sur Bac. subtilis. - REVENDICATIONS 1 - Antibiotique anthracyclique, caractérisé en de qu'il est obtenu par culture de souches d'Antinomadura carminata sp. nov. et se présente sous forme d'une poudre cristalline rouge, ayant un poids moléculaire de 545,5 et un point de fusion de 185 à 187PC (avec décomposition), bien soluble dans l'eau, les alcools inférieurs, la diméthylformamide et la pyridine, insoluble dans l'acétate d'éthyle, le benzène, le chloroforme, l'éther diéthylique et l'éther de pétrole; la coloration de ses solutions acqueuses varie du jaune en milieu acide au violet en milieu alcalin, sa solution dans l'acide sulfurique a une couleur violette; ses spectres ultraviolet et visible sont Ca- ractérisés par les maxima suivants ; maux = 236, 256, 293, 464, 478, 492, 512, 525 mm(dans l'éthanol) 1 1 % = 221, 542, 471, 150, 214, 246, 280, 200 respectivement; #l on @ max = 468, 5GO, 520, 535, 592 mm (dans la pyridine) 1 % = 505, 150, 120, 110, 30 respectivement; 1 cm Le spectre infrarouge de l'antibiotique présente les bandes d' absorption suivantes : 990, 1020, hlOO, 1120, 1200, 1300, 1420, 1450, 1540, 1610, 1710, 3000, 3400, 3600 cm 1; l'hydrolyse dans une solution aqueuse à O2 N acide chlorhydrique donne l'anglycene de nature anthracyclique et un fragment d'hydrate de carbone. 2 - Procédé de préparation de l' antibiotique anthracyclique suivant la revendication 1, caractérisé en ce qu'on cultive des souches productrices d'Actinomadura carminata sp. nov. dans des conditions submergées, sur des milieux de fermentation contenant des sources de carbone, d'azote et de sels minéraux, en accumulant l'antibiotique dans le mycélium de la souche-productrice, et qu'on isole l'antibiotique indiqué. 3 - Procédé suivant-la-revendieation 2, caractérisé en ce qu'on effectue la culture des souches-productrices d'antibiotique sur un milieu de fermentation, contenant (en % en poids) : farine de soja 1-5, glucose 0,5-3, amidon 1-3, sulfate d'ammonium 0,05-0,5, chlorure de sodium 0,2-0,5, carbonate de calcium 0,2-0,6. 4 - Procédé suivant l'une quelconque des revendications 2 et 3, caractérisé en ce que l'isolement de l'antibiotique anthracyclique se fait par séparation du mycélium de la souche-productrice à partir de la liqueur de culture, par extraction de l'antibiotique à partir du mycélium par un solvant organique miscible à l'eau, par concentration de la solution obtenue, par extraction de l'antibiotique à partir de la solution concentre par un solvant organique non miscible à l'eau par concentration de la solution obtenue, par sa purification par l'acide silicique avec l'élution et la concentration consécutive de l'éluat obtenue et par précipitation de l'antibiotique dans l'éther diéthylique, l'éther de pétrole ou 1'hexane normal, par extraction de l'antibiotique par l'eau avec lyophilisation ultérieure de la solution aqueuse. 5 - Procédé suivant l'une quelconque des revendications 2 et 7, caractérisé en ce qu'on effectue ltisolement de l'antibiotique anthracyclique en maintenant la liqueur de culture à un pH de 3,0 à 5,0 et à une température de 40 à 55OC1 en séparant le mycélium de la souche-productrice à partir de la liqueur de culture en extrayant l'antibiotique dans la solution native obtenue par un solvant organique non miscible à l'eau, en concentrant la solution d'antibiotique obtenue et en la purifiant par l'acide silicique avec l'élution et la concentration consécutive de l'élut obtenu et la précipitation de l'antibiotique dans l'éther diéthylique, l'éther de pétrole ou 1'hexane normal, en extrayant l'antibiotique par l'eau avec lyophilisation ultérieure de la solution aqueuse. 6 - Médicament ayant notamment une activité antitumorale, caractérisé en ce qu'il contient à titre de principe actif un composé suivant la revendication 1.